特表 2023-520941 ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２感染リスク評価方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-05-22

(54)【発明の名称】ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２感染リスク評価方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/53 20060101AFI20230515BHJP

   G01N 33/569 20060101ALI20230515BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20230515BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20230515BHJP

   C07K 16/10 20060101ALN20230515BHJP

【ＦＩ】

G01N33/53 D

G01N33/569 Z

C07K14/705

C12N15/13

C07K16/10

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022562103

(86)(22)【出願日】2021-04-07

(85)【翻訳文提出日】2022-10-07

(86)【国際出願番号】 EP2021059107

(87)【国際公開番号】W WO2021204902

(87)【国際公開日】2021-10-14

(31)【優先権主張番号】2005232.0

(32)【優先日】2020-04-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】2005977.0

(32)【優先日】2020-04-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】520315176

【氏名又は名称】ヴィロゲーツ エー／エス

【氏名又は名称原語表記】ＶＩＲＯＧＡＴＥＳ Ａ／Ｓ

(71)【出願人】

【識別番号】522396399

【氏名又は名称】コペンハーゲン ユニヴァーシティ ホスピタル アマー アンド ヴィズオウア

(74)【代理人】

【識別番号】110001416

【氏名又は名称】弁理士法人信栄事務所

(72)【発明者】

【氏名】オイゲン－オルセン，イェスパー

(72)【発明者】

【氏名】アンダーソン，オーヴェ

【テーマコード（参考）】

4H045

【Ｆターム（参考）】

4H045AA11

4H045AA30

4H045DA50

4H045EA54

(57)【要約】

可溶性ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（ｓｕＰＡＲ）のレベルの上昇、特に４．７５ｎｇ／ｍｌまたは６ｎｇ／ｎｌ超の血漿レベルは、ＣＯＶＩＤ－１９の症状および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を有する対象が酸素補給を必要とするかどうかの予測因子であることが見出されている。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣＯＶＩＤ－１９の症状および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を有する対象が、酸素補給、特に侵襲的換気（人工呼吸器）を必要とするかどうか、または必要とする可能性が高いかどうかを評価する方法であって、前記対象が、４．７５ｎｇ／ｍｌ超、好ましくは６ｎｇ／ｍｌ超のｓｕＰＡＲ血漿レベルを有するかどうかを判定することを含む、方法。

【請求項2】

前記ＣＯＶＩＤ－１９の症状が、発熱および新たな連続的な咳のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を、上記の表１に開示されているもののうちのいずれか、好ましくはＡｌｔｏｎａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）製のＲｅａｌＳｔａｒ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＴ－ＰＣＲキットＲＵＯを含む方法によって診断する、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記血漿レベルを、血漿サンプルをアッセイすることによって直接的に、または血清もしくは尿レベルをアッセイすることによって間接的に判定する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記ｓｕＰＡＲレベルを、免疫診断法によって判定する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

ＣＯＶＩＤ－１９の症状および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を有し、かつ補助呼吸による治療を受けているか、またはそれによる治療が検討されている対象の一定期間内の死亡の可能性を判定する方法であって、前記対象が、４．７５ｎｇ／ｍｌ超、好ましくは６ｎｇ／ｍｌ超のｓｕＰＡＲ血漿レベルを有するかどうかを判定することを含む、方法。

【請求項7】

前記補助呼吸が、侵襲的換気である、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

ＣＯＶＩＤ－１９の症状および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を有する対象を、退院させてもよいか、または入院させなくてもよいかを評価する方法であって、前記対象のｓｕＰＡＲレベルを判定し、それによって、
（ｉ）４．７５ｎｇ／ｍｌ未満のｓｕＰＡＲ血漿レベルを有する対象を退院させるか、または入院させず、かつ
（ｉｉ）６ｎｇ／ｍｌ以上のｓｕＰＡＲ血漿レベルを有する対象を退院させないか、または入院させることを含む、方法。

【請求項9】

６ｎｇ／ｍｌ以上のｓｕＰＡＲ血漿レベルを有する対象が、酸素補給、特に侵襲的換気（人工呼吸器）を必要とする可能性が高いとさらにみなされる、請求項８に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＣＯＶＩＤ－１９の症状を有する対象の検査に関する。

【背景技術】

【0002】

コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされたＣＯＶＩＤ－１９パンデミックは、病院のリソースおよびキャパシティに多大な圧力をかけている。リスクトリアージは、重度の疾患を発症しない患者を迅速に退院させて自宅隔離させ、より重篤な疾患を発症する患者を病棟または集中治療室（ＩＣＵ）に入院させるのに重要である。

【0003】

デンマークでは、感染率が急速に増加しているが、この特許の提出時点では、病院のリソースおよびキャパシティは、重度の感染の兆候がある者に対応することができた。しかしながら、家に帰された軽度の症状を有する者は、より重度の疾患に進行し、呼吸器補助が必要になり、最悪の場合、自宅で死亡する可能性がある。さらに、イタリアなどの他の国では、病院のリソースに無理がかかっているため、特にＩＣＵへの入院を最も必要とする者を改善された精度で特定することは非常に有用であろう。

【0004】

したがって、さらなる進行のリスクが低く、患者を自宅検疫のために安全に解放することができる場合、病気の進行を予測することができるバイオマーカーは、患者の退院に、また中等度の疾患を有する者の退院に有用である。

【0005】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による重篤な疾患の発症および死亡についてのいくつかのリスクマーカー、例えば、年齢および性別は、すでに知られている。合併症および死亡のリスクは、年齢とともに上昇し、特に６５歳以上の場合、女性よりも男性の方が高くなる。特定の潜在的な健康状態、特に、がん、重度の肥満、免疫抑制（例えば、抗がん化学療法または低いＣＤ４細胞数に起因するもの）、糖尿病、高血圧、心臓病、肺病（喘息など）、肝臓病、腎臓病、および場合によっては運動ニューロン疾患などの特定の神経学的病態もリスクを高めると知られている。ＡＩに基づく分析では、肝酵素アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルの上昇、報告されている筋痛症（深い筋肉痛）、およびヘモグロビンレベルの上昇の組み合わせを有することがリスク因子であることも提示されている。

【0006】

現在、ｓｕＰＡＲと呼ばれるタンパク質のレベルの上昇が、疾患の重症度および死亡についてのリスク因子であることが見出されている。タンパク質ｓｕＰＡＲ（ＮＣＢＩアクセッション番号ＡＡＫ３１７９５および受容体のアイソフォーム、ＮＰ＿００２６５０、００３４０５、ＮＰ＿００２６５０、ＮＰ＿ＯＯ１００５３７６）は、膜結合型ｕＰＡＲのＧＰＩアンカーの切断によって放出されるウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）の可溶性部分である。ｓｕＰＡＲは、全長ｓｕＰＡＲ（２７７アミノ酸（１－２７７））とｓｕＰＡＲフラグメントＤ１（１－８３）、およびウロキナーゼ切断またはヒト気道トリプシン様プロテアーゼによって生成されたＤ２Ｄ３（８４－２７７）、Ｄ１（１－８７）とＭＭＰ切断によって生成されたＤ２Ｄ３（８８－２７７）、Ｄ１（１－８９）とウロキナーゼ切断またはヒト気道トリプシン様プロテアーゼによって同様に生成されたＤ２Ｄ３（９０－２７７）、Ｄ１（１－９１）とプラスミンによる切断によって生成されたＤ２Ｄ３（９２－２７７）からなるグリコシル化タンパク質のファミリーである。タンパク質ｓｕＰＡＲおよびその切断産物に存在する連続および不連続エピトープを使用して、モノまたはポリクローナル抗体での免疫検出により、体液中のそれらの存在および存在量を監視することができる。ｓｕＰＡＲおよびその切断産物（例えば、Ｄ２Ｄ３）に共通のアクセス可能なエピトープに対する抗体を使用して、体液中のｓｕＰＡＲおよびその切断産物の両方を検出することができる。ｓｕＰＡＲとその切断産物の間には１対１の関係があるため、完全長ｓｕＰＡＲ、および例えばＤ２Ｄ３切断産物の両方に共通するエピトープに対する抗体は、直接的および間接的に同時にｓｕＰＡＲレベルを測定する。つまり、検出されたタンパク質の一部がＤ２Ｄ３切断産物であったとしても、アッセイで測定された例えば３ｎｇ／ｍｌの値は、ｓｕＰＡＲレベルが３ｎｇ／ｍｌであるとみなされる。したがって、アッセイの文脈では、「ｓｕＰＡＲ」は、完全長のｓｕＰＡＲおよびその切断産物Ｄ２Ｄ３を指す。用語Ｄ２Ｄ３は、ｓｕＰＡＲの８４～２７７領域に対応し、ｓｕＰＡＲの８４～９２アミノ酸領域にあるＮ末端と、ｓｕＰＡＲ（アミノ酸２７７）、例えば、８４～２７７、８８～２７７、９０～２７７、および９２～２７７のＣ末端に対応するＣ末端と、を有する任意のｓｕＰＡＲ由来断片を示すために使用される。

【0007】

ＷＯ２００８／０７７９５８（Ｈｖｉｄｏｖｒｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）は、軽度の炎症（ＬＧＩ）、ＬＧＩに関連する疾患、およびメタボリックシンドロームについてのバイオマーカーとしてのｓｕＰＡＲの使用を開示する。また、疾患（心血管疾患など）を発症するリスク、および１０年以内の全体的な死亡リスクを評価する手段として、主にそれらのリスクを低減するために生活習慣を変えることができるように、見かけ上は健康な対象のｓｕＰＡＲレベルの測定についても開示する。見かけ上は健康な対象において、疾患を発症するリスク（疾患を有することとは対照的に）、および１０年以内の死亡リスクを判定することは、ＥＤで必要とされる種類の評価とは関係がない。

【0008】

ｓｕＰＡＲは、急性期医療患者の再入院および死亡率のバイオマーカーであることもすでに示されている（ＷＯ２０１９／１６２３３４）。しかしながら、ｓｕＰＡＲは、ＣＯＶＩＤ－１９の症状がある、またはそれと確認された患者で調査されたことも、呼吸器補助（例えば、非侵襲的換気（ＮＩＶ）または持続気道陽圧（ＣＰＡＰ）または人工呼吸器）を必要とするエンドポイントで調査されたこともない。

【発明の概要】

【0009】

本発明は、医療関係者が、（任意選択的に他の臨床観察および病歴などと併せて）対象の状態、特に非侵襲的換気（ＮＩＶ）または持続気道陽圧（ＣＰＡＰ）または人工呼吸器を必要とする対象のリスクを評価することができる新規の手段を提供することを目的とする。これにより、対象を入院させるべきか、または退院させるべきかどうかについての、より正確な評価を行うことができる。

【0010】

特に、この検査は、患者が酸素補給を必要とするかどうかを判定する目的での、体液、特に血液サンプル中の（ｓｕＰＡＲ）と呼ばれるタンパク質の測定に関する。

【0011】

対象の体温が３７℃超の場合（例えば、口腔、直腸もしくは脇の下の体温計によって、または例えば額もしくは耳の内部に向けられる非接触体温計によって評価される場合）、または対象の額もしくは背中が熱く感じられる場合、対象は、熱があるとみなされる。

【0012】

新たな連続的な咳とは、１時間超にわたる咳、または２４時間で３回以上の咳の発作を伴うものである。

【0013】

我々は、以下のことを見出した：
１．増加したｓｕＰＡＲ（４．７５ｎｇ／ｍｌ超、特に６ｎｇ／ｍｌ超）を有するＣＯＶＩＤ－１９患者の症状を示す患者が、それぞれ４．７５ｎｇ／ｍｌまたは６ｎｇ／ｍｌ未満のｓｕＰＡＲを有するＣＯＶＩＤ－１９患者と比較して、近い将来（１４日以内）に呼吸器補助が必要になるリスクが大幅に高くなること。
２．持続気道陽圧が必要な患者（持続気道陽圧（ＣＰＡＰ）を受けている患者または人工呼吸器で侵襲的換気を受けている患者（侵襲的換気とは、気管内または気管切開チューブを介して適用される陽圧換気である）では、ｓｕＰＡＲ動態を使用して、患者が生存するかどうかを判断することができる。

【0014】

したがって、本発明はまた、ＣＯＶＩＤ－１９の症状および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を有し、かつ補助呼吸による治療を受けているか、またはそれによる治療が検討されている対象の一定期間内の死亡の可能性を判定する方法であって、対象が、４．７５ｎｇ／ｍｌ超、特に６ｎｇ／ｍｌ超のｓｕＰＡＲ血中レベルを有するかどうかを判定することを含む、方法を提供する。リソースが不十分な病院では、これにより、医療スタッフが、補助換気の恩恵を受ける可能性が最も高いのは誰なのかを判定することができるようになる。

【0015】

６ｎｇ／ｍｌの値は、１つの有効数字で表されているため、５．５ｎｇ／ｍｌからの値を含む場合がある。あるいは、「６ｎｇ／ｍｌ」は、６．０ｎｇ／ｍｌを意味する。

【0016】

一定期間は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４日であり得る。

【0017】

補助換気は、非侵襲的換気（ＮＩＶ）、持続気道陽圧（ＣＰＡＰ）、または侵襲的機械換気を含み得る。

【0018】

対象のｓｕＰＡＲレベルが２０ｎｇ／ｍｌ超である場合、緊急の補助換気が必要であり、すなわち、次の３０分、１時間、２時間、３時間、または４時間以内に必要である。

【0019】

非侵襲的換気は、例えば、気道陽圧の一種である持続気道陽圧（ＣＰＡＰ）であり得、その場合、自発呼吸をしている者において、空気流を気道に導入して連続的圧力を維持して、気道を常にステントで空けておく。呼気終末陽圧（ＰＥＥＰ）とは、呼気終末時における大気圧超の肺胞内の圧力である。ＣＰＡＰは、ＰＥＥＰを送達する手法であるが、吸気および呼気の両方の呼吸サイクル全体にわたって設定圧力を維持する。これは、水圧のセンチメートル（ｃｍＨ_２Ｏ）で測定される。あるいは、非侵襲的換気は、バイレベル気道陽圧（ＢｉＰＡＰ）であってもよく、その場合、送達される圧力は、患者が吸気しているか呼気しているかによって異なる。これらの圧力は、吸気気道陽圧（ＩＰＡＰ）および呼気気道陽圧（ＥＰＡＰ）として知られている。ＣＰＡＰでは、設定レベル超の追加の圧力は提供されず、患者は、呼吸すべてを開始する必要がある。

【0020】

侵襲的機械換気は、呼吸器および呼吸の困難のある患者の命を救う介入になり得る。「侵襲的」という用語は、これが、人工気道としての役割を果たす、口（気管内チューブなど）、鼻、または皮膚（ストーマ、気管に外科的に作製された穴を通る気管切開チューブなど）を貫通する器具を伴う場合に、使用される。

【実施例】

【0021】

実施例１－発熱の判定
発熱は、口腔、直腸もしくは脇の下の体温計もしくは非接触額体温計によって評価して３７℃超の温度として、または対象の額もしくは背中が熱く感じられる場合に、判定され得る。

【0022】

実施例２－咳の測定
新たな連続的な咳とは、１時間超にわたって持続する咳、または２４時間で３回より多く咳の発作と定義される。

【0023】

実施例３－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の診断
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の診断は、例えば、以下の表にあるような任意の試験によって達成することができる（２０２０年４月８日の米国ＦＤＡに見られるもの）。

【表1-1】

【表1-2】

【0024】

実施例４－ｓｕＰＡＲレベルの測定
ｓｕＰＡＲレベルは、その目的のために本明細書に組み込まれるＷＯ２００８／０７７９５８に教示されている方法により、体液において測定され得る。

【0025】

より具体的には、ｓｕＰＡＲレベルは、ＥＬＩＳＡアッセイによって以下のとおりに判定され得る：Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ、Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を、４℃で一晩、モノクローナルラット抗ｓｕＰＡＲ抗体（ＶＧ－１、ＶｉｒｏＧａｔｅｓ Ａ／Ｓ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ、３μｇ／ｍｌ、１００μＩ／ウェル）でコーティングする。プレートを、ＰＢＳ緩衝液＋１％のＢＳＡおよび０．１％のＴｗｅｅｎ２０で室温にて１時間ブロックし、０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ緩衝液で３回洗浄した。１．５μｇ／ｍｌのＨＲＰ標識されたマウス抗ｓｕＰＡＲ抗体（ＶＧ－２－ＨＲＰ、ＶｉｒｏＧａｔｅｓ）および１５μｌの血漿（または血清もしくは尿）サンプルを含有する８５μｌの希釈緩衝液（１００ｍｍのリン酸、９７．５ｍｍのＮａＣｌ、１０ｇＬ^－１のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、画分Ｖ、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ Ｐｅｎｚｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、５０ＵｍＬ^－１のヘパリンナトリウム塩（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、０．１％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）を、ＥＬＩＳＡプレートに２つ組で添加する。３７℃で１時間インキュベートした後、プレートを、ＰＢＳ緩衝液＋０．１％のＴｗｅｅｎ２０で１０回洗浄し、１００μＩ／ウェルのＨＲＰ基質を添加する（Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐａｃｋ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）。呈色反応を、ウェルあたり５０μｌの１ＭのＨ_２ＳＯ_４を使用して３０分後に停止し、４５０ｎｍで測定する。

【0026】

さらに、製造者の指示に従って、ｓｕＰＡＲｎｏｓｔｉｃ（登録商標）製品ラインなどの市販のＣＥ／ＩＶＤ承認アッセイを使用して、体液中のｓｕＰＡＲを測定することができる。ＴＲＩＡＧＥ ＩＩＩ試験では、ｓｕＰＡＲｎｏｓｔｉｃ Ｑｕｉｃｋ Ｔｒｉａｇｅラテラルフローアッセイを使用して、ｓｕＰＡＲが定量化された。

【0027】

ｓｕＰＡＲレベルは、例えば、ＶｉｒｏＧａｔｅｓ Ａ／Ｓ、Ｂａｎｅｖａｅｎｇｅｔ １３、ＤＫ－３４６０

【数1】

，Ｄｅｎｍａｒｋによって販売されているｓｕＰＡＲｎｏｓｔｉｃ（登録商標）Ａｕｔｏｆｌｅｘ ＥＬＩＳＡ試験を使用してアッセイされ得る。あるいは、ｓｕＰＡＲレベルは、ウエスタンブロット、Ｌｕｍｉｎｅｘ、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ、ＨＰＬＣ、もしくはＧｅｎｓｐｅｅｄデバイスなどのプロテオミクス手法、ならびにＢａｙｅｒ Ｃｅｎｔａｕｒ、Ａｂｂｏｔｔ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ、Ａｂｂｏｔｔ ＡｘＳｙｍ、Ｒｏｃｈｅ ＣＯＢＡＳ、およびＡｘｉｓ Ｓｈｉｅｌｄ Ａｆｉｎｉｏｎなどの自動免疫分析プラットフォームによって、またはＲｏｃｈｅのＣｏｂａｓ ｃ１１１、Ｃｏｂａｓ ｃ５０１／２＋ｃ７０１／２もしくはＳｉｅｍｅｎｓのＡＤＶＩＡ ＸＰＴもしくはＣｅｎｔａｕｒもしくはＡｂｂｏｔｔ ＡｒｃｈｉｔｅｃｔにおいてｓｕＰＡＲｎｏｓｔｉｃ（登録商標）Ｔｕｒｂｉｌａｔｅｘなどの比濁アッセイを使用することによって測定することができる。

【0028】

本発明の方法で使用される該受容体または受容体ペプチドに対するモノクローナル抗体は、培養中の連続細胞株による抗体分子の産生を提供する任意の技術を使用して調製され得る。これらは、限定されないが、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術、およびＥＢＶ－ハイブリドーマ技術を含む。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ，ｅｔ ａｌ，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７、Ｋｏｚｂｏｒ，ｅｔ ａｌ，１９８５，Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ８１：３１－４２、Ｃｏｔｅ，ｅｔ ａｌ，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８０：２０２６－２０３０、Ｃｏｌｅ，ｅｔ ａｌ，１９８４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６２：１０９－１２０を参照されたい。具体的には、この方法は、以下のステップを含む：（ａ）免疫原性受容体ペプチドで動物を免疫化する、（ｂ）動物から抗体産生細胞を単離する、（ｃ）抗体産生細胞を培養中の不死化細胞と融合させて、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ細胞を形成する、（ｄ）ハイブリドーマ細胞を培養する、および（ｅ）該ポリペプチドに結合するモノクローナル抗体を培養物から単離する。

【0029】

血液中のｓｕＰＡＲレベルは、血液サンプル中、または血清、血漿もしくは尿中で直接測定することができる。抗凝固血漿、例えばＥＤＴＡまたはクエン酸血漿が好ましい。４．７５ｎｇ／ｍｌ超（特に、６ｎｇ／ｍｌ超）の血漿レベルは、対象が特に侵襲的換気による酸素補給を必要とすること、または必要とする可能性が高いことを示すとみなされる。

【0030】

生体サンプルが尿である場合、測定値は、この値が同じ対象由来の血漿サンプル中のｓｕＰＡＲの濃度と高い相関があることが知られているため、対象からの尿のｓｕＰＡＲ／クレアチニン値に基づく場合がある。したがって、尿サンプルはまた、測定された尿中のレベルが、タンパク質含有量に対して正規化される（例えば、クレアチニンを使用して）場合、ｓｕＰＡＲの測定に用いられてもよい。これらの正規化された値は、本発明の目的のためのマーカーとして用いることができる。ＷＯ２０１９／１６２３３４の例２および図１を参照されたい。

【0031】

実施例５－臨床結果
方法：
患者におけるｓｕＰＡＲの測定は、Ｄａｎｉｓｈ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ（参照３－３０１３－１０６１／２）およびＤａｎｉｓｈ Ｄａｔａ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ａｇｅｎｃｙ（参照ＨＶＨ－２０１４－０１８、０２７６７）によって承認された。

【0032】

この前向き研究は、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｈｖｉｄｏｖｒｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）で実施された。ＣＯＶＩＤ－１９が疑われる患者が含まれていた。

【0033】

Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、ＣＯＢＡＳ ６０００分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙを使用して測定された。

【0034】

ｓｕＰＡＲ測定：ＣＯＶＩＤが疑われる患者の到着時に血液（ＥＤＴＡ、４ｍｌ）を採取し、２分間遠心分離し、ｓｕＰＡＲを、ポイントオブケア試験（ｓｕＰＡＲｎｏｓｔｉｃ Ｑｕｉｃｋ Ｔｒｉａｇｅ、ＶｉｒｏＧａｔｅｓ、

【数2】

，Ｄｅｎｍａｒｋ）を使用して血漿において測定した。試験は、２０分で結果を提供し、ｓｕＰＡＲは、週７日、１日２４時間、リアルタイムで測定した。最初の患者は２０２０年３月１９日に、最後は４月３日に含めた。

【0035】

ＣＯＶＩＤ－１９を呈している４４２人の患者を研究に含めた。これらのうち、１７９人は男性、２５０人は女性であり、３人は性別に関する情報がなかった。

【0036】

ｓｕＰＡＲは、急性期医療部門での最初の受診時に測定し、患者を最大１８日間追跡した。追跡調査中に、１４人の患者が、非侵襲的換気（ＮＩＶ）、例えばＣＰＡＰ、または人工呼吸器ケアのために、ＩＣＵに入院した。平均ｓｕＰＡＲレベルは、最終的にＩＣＵに入った患者では、そうならなかった患者と比較して、有意に高かった（それぞれ、平均８．７ｎｇ／ｍｌ対４．６ｎｇ／ｍｌ、ｐ＜０．００１）。この違いは、ｓｕＰＡＲの中央値の違いにも反映された（それぞれ、７．８５ｎｇ／ｍｌ対４．０ｎｇ／ｍｌ、ｐ＜０．００１）。

【0037】

ＩＣＵ内の患者のモニタリング：ＩＣＵ内の患者を、３月１９日から４月３日までの期間で、それらのｓｕＰＡＲレベルについて毎日測定した。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図2】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図3】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図4】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図5】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図6】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図7】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図8】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図9】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図10】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図11】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図12】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図13】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図14】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【図15】個々の患者におけるｓｕＰＡＲ濃度である。

【0039】

図において、Ｙ軸は、ｎｇ／ｍｌでのｓｕＰＡＲ濃度を示す。異なる軸の値に留意されたい。

【0040】

Ｘ軸は、最初の測定からの日数を示し、数字は、測定後の日数を指す。いくつかの場合では、ｓｕＰＡＲは、１日２回（朝および夕方）に測定したため、同じ日に２つのデータ測定が示されている。患者ごとに性別および生年月日が示されており、例えば、「Ｍ１９９１」は、１９９１年生まれの男性を表す。ＥＤは、ＣＯＶＩＤ救急部門を指す。ＩＣＵは、集中治療室を指す。

【0041】

ベースラインでの併存症の以下の一覧に注目した：なし（７１、１７．３％）、ＣＯＰＤ（７５、１８．２％）、喘息（６４、１５．６％）、糖尿病－１型（５、１．２％）、糖尿病－２型（７３、１７．８％）、高血圧（１６３、３９．７％）、心不全（５２、１２．７％）、診断された冠動脈疾患（３６、８．８％）、がん－活性（２８、６．８％）、がん－不活性（３２、７．８％）、慢性腎不全（２１、５．１％）、慢性肝疾患（５、１．２％）、他の肺疾患（２１、５．１％）、他の心臓病（６０、１４．６％）、他の慢性感染症（５、１．２％）、他の炎症性疾患（１７、４．１％）、アルコール乱用（１９、４．６％）。併存症の中央値を以下の表２に示す。

【表2】

【0042】

喫煙に関する情報は、４０５人の患者で得られ、分布は、以下のとおりであった：現喫煙者（８６、２１．２％）、元喫煙者（１５０、３７．０％）、喫煙経験なし（１６９、４１．７％）
過去１４日間の旅行について、４０４人がインタビューを受け、４．２％が「はい」と報告し、９５．８％は旅行していなかった。１０．４％は、別のＣＯＶＩＤ－１９患者との接触を知っていたが、残りの３６２人はどのように感染したかを知らなかった。

【0043】

患者の受診では、以下の症状が報告された：喉の痛み（８５、１９．９％）、咳－喀痰あり（１０２、２３．８％）、咳－喀痰なし（１７４、４０．７％）、体の痛み（１１７、２７．３％）、疲れ（６７、１５．７％）、頭痛（５６、１３．１％）、めまい（３６、８．４％）、吐き気／嘔吐（５３、１２．４％）、発熱（２１７、５０．７％）、腹痛（１８、４．２％）、便秘（０、０．０％）、下痢（４０、９．３％）、排尿障害（６、１．４％）、呼吸困難（２６６、６２．１％）、胸痛（５５、１２．９％）、関節痛（８、１．９％）、けいれん（０、０．０％）、悪寒（２１、４．９％）、喀血（２、０．５％）、および他（２６、６．１％）。症状の持続時間：０～１日（７９、１９．５％）、２～３日（８６、２１．２％）、４～５日（５１、１２．６％）、６～７日（５６、１３．８％）、８～１０日（３２、７．９％）、１１～１３日（１６、４．０％）、１４～１５日（３９、９．６％）、１５日以上（４６、１１．４％）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ試験に関しては、喀痰、鼻咽頭吸引、気管分泌物、ＢＡＬ、または咽頭からの移植片から得られた材料を、Ｒｏｃｈｅのフローシステムに適合したＡｌｔｏｎａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）のＲｅａｌＳｔａｒ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＴ－ＰＣＲキットＲＵＯを使用して増幅させた。検出限界は、ＲＮＡのコピー５０個であった。患者のうちの２４人は、病院に到着する前に診断された。

【0044】

ｓｕＰＡＲ試験．ｓｕＰＡＲｎｏｓｔｉｃ ＱＴ試験（ＶｉｒｏＧａｔｅｓ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を使用してｓｕＰＡＲを試験した。ほとんどの試験は入院初日に行ったが、一部は、２４時間後（０～２４時間（３５５、９３．４％）、２４～４８時間（３、０．８％）、２～４日（５、１．３％）、４日以上（１７、４．５％））に行われた。

【0045】

結果
ｓｕＰＡＲレベルは、以下の表３に示すとおりであった。

【0046】

【表3】

【0047】

１４日間の追跡調査後に、以下のことが見出された：依然として入院中（４２、１０．１％）、退院して生存（３３１、７９．８％）、退院して自宅で死亡（９、２．２％）、病院で死亡（３３、８．０％）、臓器障害に関して、これは、３９２人の患者について報告され、以下のことが観察された：臓器機能障害なし（３３７、８６．０％）、腎臓（１４、３．６％）、肝臓（９、２．３％）、肺（４９、１２．５％）、心臓（１０、２．６％）。臓器不全を発症しなかった患者と臓器不全を発症した患者とを比較すると、臓器不全を発症した患者のベースラインｓｕＰＡＲレベルが有意に高いことが明らかになった（ｐ＜０．００１）。

【0048】

入院時のｓｕＰＡＲレベルによって、患者が挿管および機械換気（人工呼吸器）を使用することになるかどうかを予測できるかを判断することを目的とした。ベースラインにおいて、追跡調査中に必要に応じて患者が挿管に適しているかどうかを評価するように医師に指示した。適応外の患者は、挿管および機械換気に耐えられないほど弱いと考えられた患者、例えば、非常に高齢の患者またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前に進行がんもしくは慢性閉塞性肺疾患を有していた患者であった。適応外の患者のうちの３２人は緩和ケアを受けた。３１６人の患者は、集中治療を受けることが可能であるとみなされ、７６人は、そうとはみなされなかった。追跡調査中に、適切な患者のうちの２６人の患者が人工呼吸器を必要とすることになった。

【0049】

１４日間の追跡調査中の適切な患者における人工呼吸器の必要性の予測因子としての、ベースラインにおけるｓｕＰＡＲ
追跡調査中に人工呼吸器に至る結果に対するベースラインｓｕＰＡＲのＲＯＣ曲線は、図の一部を形成するＲＯＣ曲線に示されている。曲線下面積は、０．８９５（ｐ＜０．００１）であった。

【0050】

Ｙｏｕｄｅｎインデックスは、ｓｕＰＡＲのものであった（最適な感度および特異度は４．７５ｎｇ／ｍｌであった。これにより、０．９９５という非常に高い負の予測値が得られた。

【0051】

表４は、感度、特異度、陽性適中率（ｐｐｖ）、および陰性適中率（ｎｐｖ）を示す

【表4】

表５は、４．７５ｎｇ／ｍｌ未満のｓｕＰＡＲを有する１／２０５の患者が人工呼吸器に至り、それを上回るｓｕＰＡＲを有する２５／１１１が人工呼吸器に至ったことを示す。この差は、非常に有意である（ｐ＜０．００１）。

【表5】

６ｎｇ／ｍｌのカットオフで、以下の結果が得られる。

【表6】

したがって、ベースラインにおける６ｎｇ／ｍｌ未満のｓｕＰＡＲを有する患者は、人工呼吸器に至る可能性が２．５％であり、６ｎｇ／ｍｌ超のｓｕＰＡＲを有する患者は、人工呼吸器に至る可能性が２７％である。この差は、非常に有意である（ｐ＜０．００１）。

【表7】

結論として、ベースラインｓｕＰＡＲレベルは、挿管および機械換気（人工呼吸器）が必要となるリスクを予測するものであることが分かる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【国際調査報告】