(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-25
(54)【発明の名称】改善されたＴ細胞製造プロセス
(51)【国際特許分類】
C12N 5/10 20060101AFI20230518BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20230518BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230518BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20230518BHJP
【ＦＩ】
C12N5/10 ZNA
A61K35/17
A61P35/00
C12N15/12
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022562606
(86)(22)【出願日】2021-04-16
(85)【翻訳文提出日】2022-12-13
(86)【国際出願番号】 GB2021050909
(87)【国際公開番号】W WO2021209759
(87)【国際公開日】2021-10-21
(31)【優先権主張番号】2005617.2
(32)【優先日】2020-04-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517122578
【氏名又は名称】アダプティミューン・リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100153693
【弁理士】
【氏名又は名称】岩田 耕一
(72)【発明者】
【氏名】マーディロヴィッチ，カテリーナ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C087
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA01
4B065BD25
4B065CA44
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB64
4C087DA32
4C087NA14
4C087ZB26
(57)【要約】
本発明は、Ｔ細胞を製造するための改善された方法およびそこから生じる改善されたＴ細胞組成物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）Ｔ細胞の単離された集団を活性化するステップ、（ｂ）前記Ｔ細胞を培養するステップ、
（ｃ）好ましくは少なくとも１種の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸またはベクターを用いて前記Ｔ細胞を形質導入することにより、少なくとも１種の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように前記Ｔ細胞を改変するステップ、
（ｄ）前記改変されたＴ細胞にＡＫＴの阻害剤（ＡＫＴ阻害剤）を添加するステップ、
（ｅ）前記細胞または細胞集団を拡大および／または増殖させるために、前記改変されたＴ細胞集団を培養するステップ、
（ｆ）任意により、前記改変されたＴ細胞集団を回収および／または凍結保存するステップ
を含む、改変されたＴ細胞を製造する方法。
【請求項2】
前記Ｔ細胞がＣＤ３＋画分に関して富化される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記活性化が、増殖するように前記Ｔ細胞の集団を刺激する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記活性化が、任意により取り出し可能なビーズに付着させた、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片および／または抗ＣＤ２８抗体もしくはその抗原結合性断片の添加による、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
改変が、活性化に先立って、または活性化と同時に行われる、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
改変が、活性化後に、好ましくは活性化の１８～２６時間後に行われる、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記ＡＫＴ阻害剤が、改変後に、好ましくは改変の１７～２４時間後に添加される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記ＡＫＴ阻害剤が、アロステリック阻害剤、競合的ＡＴＰ阻害剤、ＡＫＴとリン脂質との間の相互作用の阻害剤、ＡＫＴの下流の分子のリン酸化の、好ましくはＰＲＡＳ４０、リボソームＳ６、ＴＳＣ２のリン酸化の阻害剤からなる群から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記アロステリック阻害剤が、ＡＲＱ０９２、ＡＲＱ７５１、ＢＡＹ１１２５９７６、またはＭＫ－２２０６から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記競合的ＡＴＰ阻害剤が、アフレセルチブ（ＧＳＫ２１１０１８３）、ＧＳＫ２１４１７９５、ＧＳＫ６９０６９３、イパタセルチブ（ＧＤＣ－００６８）、ＬＹ２７８０３０１、トリシリビン（ＴＣＮ－ＰＭ；ＶＤ－０００２）、ＡＺＤ５３６３、またはＣＣＴ１２８９３０から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項11】
前記ＡＫＴとリン脂質との間の相互作用の阻害剤が、ペリフォシン（Ｄ－２１２６６、ＫＲＸ０４０１）である、請求項８に記載の方法。
【請求項12】
前記ＡＫＴ阻害剤が、０．１０μＭ～１０μＭ、好ましくは０．５μＭの濃度で添加される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生される前記改変されたＴ細胞またはＴ細胞の集団が、（ｉ）ＡＫＴ阻害剤の非存在下で産生されるＴ細胞の集団もしくは改変されたＴ細胞、または
（ｉｉ）ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生されるＴ細胞の集団もしくは改変されたＴ細胞であって、前記ＡＫＴ阻害剤が改変前かつ／または活性化の２４時間以下後に添加される、Ｔ細胞の集団もしくは改変されたＴ細胞
と比較して、
（ａ）ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋の両方を発現するＴ細胞、
（ｂ）ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ－セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋およびＩＬ－７Ｒα＋であるＴ細胞、
（ｃ）ＴＳＣＭ細胞（幹メモリーＴ細胞）であるＴ細胞、
（ｄ）メモリー表現型、好ましくはＣＤ８メモリー表現型を有するＴ細胞
のうちのいずれか１つまたは複数の増大したまたは高い相対的割合を有する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生される前記Ｔ細胞の改変された集団が、（ｉ）ＡＫＴ阻害剤の非存在下で産生されるＴ細胞の集団もしくは改変されたＴ細胞、または
（ｉｉ）ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生されるＴ細胞の集団もしくは改変されたＴ細胞であって、前記ＡＫＴ阻害剤が形質導入前かつ／または刺激の２４時間以下後に添加される、Ｔ細胞の集団もしくは改変されたＴ細胞
と比較して、
（ａ）ｉｎ ｖｉｖｏでの持続性、好ましくはｉｎ ｖｉｖｏでの注入の８～１４日間後にわたって測定される持続性、
（ｂ）播種から回収までの拡大、
（ｃ）奏効の永続性または永続的奏効率（ＤＲＲ）、
（ｄ）抗原に誘導されるインターフェロンγ産生、
（ｅ）Ｔ細胞生存率または寿命または生存能パーセンテージ、
（ｆ）Ｔ細胞エフェクター機能、好ましくは細胞傷害性
のうちのいずれか１つまたは複数の改善または増大したレベルを有する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法に従って産生される改変されたＴ細胞の集団。
【請求項16】
請求項１５に記載の改変されたＴ細胞の集団、および生理的に許容される賦形剤を含む組成物。
【請求項17】
養子療法における使用のための、請求項１５に記載の改変されたＴ細胞の集団または請求項１６に記載の組成物。
【請求項18】
癌および／または腫瘍の治療における使用のための、請求項１５に記載の改変されたＴ細胞の集団または請求項１６に記載の組成物。
【請求項19】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法に従って産生される改変されたＴ細胞の集団、ならびに被験体において癌および／または腫瘍を治療するかまたはその進行を遅延させるために前記Ｔ細胞を用いるための説明書を含む添付文書を含むキット。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、Ｔ細胞を製造するための改善された方法およびそこから生じる改善されたＴ細胞組成物に関する。本発明はさらに、改善されたＴ細胞拡大を提供しかつ改善された持続性、メモリー機能、および抗原刺激生存を有するＴ細胞集団を生じるＴ細胞製造のための方法に関する。本発明はさらに、腫瘍および癌の治療のための養子療法を含む養子Ｔ細胞免疫療法における改善されたＴ細胞集団の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
養子細胞療法（ＡＣＴ）は、抗腫瘍機能を媒介するための癌患者への腫瘍常在性末梢血改変免疫細胞の静脈内移入を含み得、それにより、癌、感染性疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、および免疫不全を含む疾患を治療する機会を提示する。ＡＣＴはまた、癌の細胞療法に対する基礎として、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）またはナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）の移入を含む場合がある。加えて、新規Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する遺伝子改変Ｔ細胞を用いるＡＣＴは、特異的な腫瘍発現抗原を認識する改善されかつ標的化された臨床応答に対する特異的かつ強力な抗腫瘍活性を有して生成することができる、腫瘍特異的Ｔ細胞の大型プールを提供する機会を提示する。
【0003】
ＡＣＴプロセスは、典型的には、ドナーの血液が、血液のサンプルから白血球を分離する装置を通過する、ドナー被験体白血球除去のステップを含む。続いて、単離されたＴ細胞集団が、活性化および拡大ステップ、ならびに任意により特異的ＣＡＲまたはＴＣＲ分子を導入して、臨床的に有効となるように治療用量のために必要な活性Ｔ細胞数を生じさせるための遺伝子改変を含むプロセスに供される。
【0004】
現行のＴ細胞製造プロセスは、多くの場合、治療用量のために十分に大きなＴ細胞集団を達成するために、複数ラウンドの活性化および拡大を必要とする。集団の拡大は、限定的ステップであり、かつＴ細胞活性化および拡大方法は、多くの場合、比較的分化した細胞のサブセットが多い細胞集団を生じ；これらの細胞は、それらの性質として、生存が限定されて短寿命であり、それゆえ、短寿命かつあまり強力でない抗腫瘍活性およびメモリー機能を提供する。そのようなＴ細胞集団は、消耗およびエフェクター免疫細胞機能の喪失を起こしやすく、移入されたＴ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ拡大に対する不利益を被り、かつ患者への注入後の持続性を欠損する。
【0005】
本発明は、Ｔ細胞製造および治療用Ｔ細胞の現行のプロセスの上記の制限に対処し、かつ改善された拡大、持続性および生存を有する治療用Ｔ細胞組成物の方法を提供する。
【発明の概要】
【0006】
本発明は、一般的に、Ｔ細胞および／またはＴ細胞の集団を産生する改善された方法を提供し、それにより、該方法により作製される改善されたＴ細胞の集団および／またはＴ細胞の組成物を提供し、本発明はさらに、癌、感染性疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、および免疫不全を含む疾患の治療のための養子療法における改善されたＴ細胞の集団および／またはＴ細胞の組成物の使用を提供する。本発明に従う方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏでの、改善されたＴ細胞拡大、生存期間、エフェクターおよびメモリー機能を提供する。
【0007】
本発明によれば、以下のステップ：
（ａ）Ｔ細胞の単離された集団を活性化するステップ、
（ｂ）Ｔ細胞を培養するステップ、
（ｃ）異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するようにＴ細胞を改変するステップ、
（ｄ）改変されたＴ細胞にＡＫＴの阻害剤（ＡＫＴ阻害剤）を添加するステップ、
（ｅ）細胞を拡大および／または増殖させるために、改変されたＴ細胞またはＴ細胞集団を培養するステップ、
（ｆ）任意により、改変されたＴ細胞またはＴ細胞集団を回収および／または凍結保存するステップであって、任意により、異種ＴＣＲまたはＣＡＲが癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に結合または特異的に結合し；任意により、Ｔ細胞は、例えば、１種もしくは複数の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または１種もしくは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含む核酸またはベクターを用いてＴ細胞を形質導入することにより、異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変される、ステップ
を含む、改変されたＴ細胞および／または改変されたＴ細胞の集団を製造する方法が提供される。
（ａ）Ｔ細胞の単離された集団を活性化するステップ、
（ｂ）Ｔ細胞を培養するステップ、
（ｃ）異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するようにＴ細胞を改変するステップ、
（ｄ）改変されたＴ細胞にＡＫＴの阻害剤（ＡＫＴ阻害剤）を添加するステップ、
（ｅ）細胞を拡大および／または増殖させるために、改変されたＴ細胞またはＴ細胞集団を培養するステップ、
（ｆ）任意により、改変されたＴ細胞またはＴ細胞集団を回収および／または凍結保存するステップであって、任意により、異種ＴＣＲまたはＣＡＲが癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に結合または特異的に結合し；任意により、Ｔ細胞は、例えば、１種もしくは複数の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または１種もしくは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含む核酸またはベクターを用いてＴ細胞を形質導入することにより、異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変される、ステップ
を含む、改変されたＴ細胞および／または改変されたＴ細胞の集団を製造する方法が提供される。
【0008】
Ｔ細胞養子療法
単離されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＴＩＬ）、またはナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）であり得る。Ｔ細胞は、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、または胚性幹細胞、および多能性幹細胞（例えば、そこからリンパ系細胞が分化することができるもの）を含むその前駆体であり得る。Ｔ細胞は、胸腺において成熟し、かつ細胞媒介免疫を主に担うリンパ球であり、かつ適応免疫系にも関与することができる。本発明によれば、Ｔ細胞としては、限定するものではないが、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（または幹様メモリーＴ細胞）を含む）、またはメモリーＴ細胞：例えば、ＴＥＭ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞、調節Ｔ細胞（サプレッサーＴ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連不変Ｔ細胞、またはガンマ－デルタＴ細胞が挙げられ得る。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染した体細胞または腫瘍細胞の死滅を誘導することが可能なＴリンパ球のサブセットである。本明細書中に本発明に従って提供されるＴ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞；またはＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞であり得る。例えば、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の混合集団であり得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｔヘルパー細胞（ＴＨ細胞）として知られ、ＣＤ４表面糖タンパク質を発現し、適応免疫系において重要な役割を果たし、Ｔ細胞サイトカインを放出することにより他の免疫細胞の活動を助け、かつ免疫応答の抑制または調節を助ける。それらは、細胞傷害性Ｔ細胞の活性化および生育に対して必須である。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ細胞、ＣＴＬ、キラーＴ細胞）として知られ、ＣＤ８表面糖タンパク質を発現する。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞および腫瘍細胞を破壊するために作用する。大多数のＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＴＣＲを発現し、ＴＣＲは、クラスＩ ＭＨＣ分子により感染または損傷細胞の表面上に提示される特異的抗原を認識することができる。抗原およびＭＨＣ分子に対するＴＣＲおよび任意によりＣＤ８糖タンパク質の特異的結合は、感染または損傷細胞のＴ細胞媒介破壊をもたらす。
単離されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＴＩＬ）、またはナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）であり得る。Ｔ細胞は、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、または胚性幹細胞、および多能性幹細胞（例えば、そこからリンパ系細胞が分化することができるもの）を含むその前駆体であり得る。Ｔ細胞は、胸腺において成熟し、かつ細胞媒介免疫を主に担うリンパ球であり、かつ適応免疫系にも関与することができる。本発明によれば、Ｔ細胞としては、限定するものではないが、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（または幹様メモリーＴ細胞）を含む）、またはメモリーＴ細胞：例えば、ＴＥＭ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞、調節Ｔ細胞（サプレッサーＴ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連不変Ｔ細胞、またはガンマ－デルタＴ細胞が挙げられ得る。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染した体細胞または腫瘍細胞の死滅を誘導することが可能なＴリンパ球のサブセットである。本明細書中に本発明に従って提供されるＴ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞；またはＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞であり得る。例えば、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の混合集団であり得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｔヘルパー細胞（ＴＨ細胞）として知られ、ＣＤ４表面糖タンパク質を発現し、適応免疫系において重要な役割を果たし、Ｔ細胞サイトカインを放出することにより他の免疫細胞の活動を助け、かつ免疫応答の抑制または調節を助ける。それらは、細胞傷害性Ｔ細胞の活性化および生育に対して必須である。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ細胞、ＣＴＬ、キラーＴ細胞）として知られ、ＣＤ８表面糖タンパク質を発現する。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞および腫瘍細胞を破壊するために作用する。大多数のＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＴＣＲを発現し、ＴＣＲは、クラスＩ ＭＨＣ分子により感染または損傷細胞の表面上に提示される特異的抗原を認識することができる。抗原およびＭＨＣ分子に対するＴＣＲおよび任意によりＣＤ８糖タンパク質の特異的結合は、感染または損傷細胞のＴ細胞媒介破壊をもたらす。
【0009】
Ｔ細胞の単離された集団は、ドナー被験体から単離することができる。本発明によれば、本発明の方法により産生されるＴ細胞は、養子細胞療法または養子免疫療法のために用いることができる。ドナー被験体およびレシピエント個体（養子細胞療法または養子免疫療法を受ける）は、同じである場合があり（すなわち、自家治療；Ｔ細胞が、改変されたＴ細胞を用いてその後に治療される個体から取得される）またはドナー個体とレシピエント個体とが異なる場合がある（すなわち、同種治療；Ｔ細胞が１人の個体から取得され、その後に異なる個体を治療するために用いられる）。自家とは、後に同じ被験体へと再導入される被験体由来のいずれかの材料を意味する。
【0010】
したがって、本発明の文脈における養子細胞療法または養子免疫療法とは、表面抗原、抗原ペプチドまたは標的細胞上に発現され、任意によりＭＨＣ複合体として標的細胞上に発現される抗原ペプチドに対して特異的な、遺伝的に改変されたＴＣＲもしくはＣＡＲおよび／または共受容体（例えば、ＣＤ８）を発現するように遺伝子移入により遺伝子操作されている、単離されたＴ細胞またはＴ細胞の集団の養子移入を意味する。これは、選択される標的、例えば、それにより癌または腫瘍を治療するための、腫瘍もしくは癌特異的抗原または抗原ペプチドに応じて、広範囲の疾患を治療するために用いることができる。簡潔には、養子細胞療法は、白血球除去と称されるプロセスを用いてドナーまたは患者の白血球の一部分を取り出すステップを含む。続いて、Ｔ細胞、ＴＩＬまたはＮＫ細胞を拡大し、Ｔ細胞、ＴＩＬまたはＮＫ細胞へとＴＣＲ／ＣＡＲおよび／または共受容体（例えば、ＣＤ８）を移入するために、ＴＣＲ／ＣＡＲポリヌクレオチドおよび／または共受容体（例えば、ＣＤ８）を含む発現ベクターと混合することができる。Ｔ細胞、ＴＩＬまたはＮＫ細胞を再度拡大し、拡大の終了時に、遺伝子操作されたＴ細胞またはＮＫ細胞を洗浄し、濃縮し、かつ続いて、試験、輸送および患者が遺伝子操作細胞の注入を受ける準備が整うまでの保存のための時間を与えるために凍結することができる。
【0011】
細胞培養
改変されたＴ細胞は、拡大された集団を産生するために、いずれかの都合のよい手段、技術、容器、入れ物またはシステムを用いて培養することができる。好適な培養システムとしては、撹拌槽発酵器、エアリフト発酵器、ローラーボトル、培養バッグまたはディッシュ、および他のバイオリアクター、特に中空繊維バイオリアクターが挙げられる。好ましくは、そのようなシステムの使用は当技術分野で周知である。好ましくは、培養手段は、気体透過性迅速拡大培養、例えば、非接着細胞などの細胞の拡大または静止拡大のためのデバイスであるＧ－Ｒｅｘ（商標）である。およびまたは本発明の方法に従う細胞。
改変されたＴ細胞は、拡大された集団を産生するために、いずれかの都合のよい手段、技術、容器、入れ物またはシステムを用いて培養することができる。好適な培養システムとしては、撹拌槽発酵器、エアリフト発酵器、ローラーボトル、培養バッグまたはディッシュ、および他のバイオリアクター、特に中空繊維バイオリアクターが挙げられる。好ましくは、そのようなシステムの使用は当技術分野で周知である。好ましくは、培養手段は、気体透過性迅速拡大培養、例えば、非接着細胞などの細胞の拡大または静止拡大のためのデバイスであるＧ－Ｒｅｘ（商標）である。およびまたは本発明の方法に従う細胞。
【0012】
細胞改変
本発明によれば、Ｔ細胞は、１種もしくは複数の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または１種もしくは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するために改変され、改変は、１種もしくは複数の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または１種もしくは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含む核酸またはベクターを用いてＴ細胞を形質導入するステップによるものであってもよい。Ｔ細胞はまた、Ｔ細胞のゲノムへの、例えば、Ｔ細胞の前駆体、例えば、誘導された多能性幹細胞またはそれに由来するリンパ系統細胞、例えば、それに由来する成熟Ｔ細胞のゲノムへの、１種もしくは複数の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または１種もしくは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸の組み込みにより改変することもできる。
本発明によれば、Ｔ細胞は、１種もしくは複数の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または１種もしくは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するために改変され、改変は、１種もしくは複数の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または１種もしくは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含む核酸またはベクターを用いてＴ細胞を形質導入するステップによるものであってもよい。Ｔ細胞はまた、Ｔ細胞のゲノムへの、例えば、Ｔ細胞の前駆体、例えば、誘導された多能性幹細胞またはそれに由来するリンパ系統細胞、例えば、それに由来する成熟Ｔ細胞のゲノムへの、１種もしくは複数の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または１種もしくは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸の組み込みにより改変することもできる。
【0013】
本発明によれば、改変されたＴ細胞は、異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）または異種キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする異種核酸もしくは核酸構築物または核酸もしくは構築物を含むベクターを含むように改変することができる。任意により、ＴＣＲは、親和性強化型ＴＣＲ、例えば、特異的ペプチド強化型親和性受容体（ＳＰＥＡＲ）ＴＣＲであり得る。
【0014】
本発明によれば、方法は、プロセス内のいずれかの段階またはステップでの、好ましくは、任意により、細胞濃度に対するウイルスの感染多重度（ＭＯＩ）の最大半分または約半分（すなわち、細胞当たり０．５個のウイルス）、任意により０．１～０．２、０．３～０．４、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、０．９～１．０、１．０～１．１、１．１～１．２、１．２～１．３、１．３～１．４、１．４～１．５、１．５～１．６、１．６～１．７、１．７～１．８、１．８～１．９、１．９～２．０．ＭＯＩのうちのいずれか１種のレベルでの、改変および／または形質導入を目的として、好ましくは、Ｔ細胞またはＴ細胞集団の改変または形質導入の時点での、ポロキサマーの包含を含み得る。
【0015】
異種ＴＣＲ／ＣＡＲ
本発明に従えは、改変されたＴ細胞は、癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に結合または特異的に結合する、少なくとも１種の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または異種キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現することができ、好ましくは、ペプチド抗原は、癌性状態、癌および／もしくは腫瘍に関連し、かつ／または癌細胞または組織の腫瘍により提示され、任意によりＨＬＡ／ＭＨＣにより提示される。抗原の結合に際して、改変されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、抗原を担持する細胞に対するＴ細胞エフェクター機能および／または細胞溶解作用を示すことができ、かつ／または増殖および／もしくは細胞分裂を受けることができる。特定の実施形態では、ＴＣＲを含む改変されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、同じ癌および／もしくは腫瘍抗原および／またはペプチド（抗原性ペプチド）を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞と比較して、同等または良好な治療的効力を示す。異種ＴＣＲもしくはＣＡＲを含む活性化された改変Ｔ細胞またはＴ細胞の集団は、限定するものではないが、ＴＮＦα、ＩＦＮγおよびＩＬ２を含み得る抗腫瘍サイトカインを分泌することができる。
本発明に従えは、改変されたＴ細胞は、癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に結合または特異的に結合する、少なくとも１種の異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または異種キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現することができ、好ましくは、ペプチド抗原は、癌性状態、癌および／もしくは腫瘍に関連し、かつ／または癌細胞または組織の腫瘍により提示され、任意によりＨＬＡ／ＭＨＣにより提示される。抗原の結合に際して、改変されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、抗原を担持する細胞に対するＴ細胞エフェクター機能および／または細胞溶解作用を示すことができ、かつ／または増殖および／もしくは細胞分裂を受けることができる。特定の実施形態では、ＴＣＲを含む改変されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、同じ癌および／もしくは腫瘍抗原および／またはペプチド（抗原性ペプチド）を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞と比較して、同等または良好な治療的効力を示す。異種ＴＣＲもしくはＣＡＲを含む活性化された改変Ｔ細胞またはＴ細胞の集団は、限定するものではないが、ＴＮＦα、ＩＦＮγおよびＩＬ２を含み得る抗腫瘍サイトカインを分泌することができる。
【0016】
用語「異種」または「外因性」とは、細胞または宿主細胞などの特定の生物学的系に対して外来性であり、かつその系には天然に存在せず、人工的または組み換え的手段により系へと導入することができる、ポリペプチドまたは核酸を意味する。したがって、異種であるＴＣＲまたはＣＡＲの発現は、それによりＴ細胞の免疫学的特異性を変化させることができ、それにより、それらが、癌を有する個体の癌細胞の表面上に存在する１種もしくは複数の癌および／または腫瘍抗原またはそのペプチド抗原を認識するか、またはそれに対する改善された認識を示すようになる。Ｔ細胞の改変およびそれらの引き続く拡大は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｅｘ ｖｉｖｏで行うことができる。
【0017】
本発明によれば、癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原は、癌精巣抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ－１（Ｔ細胞により認識される黒色腫抗原）、ＷＴ１（ウィルムス腫瘍１）、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、チロシナーゼ、ＰＲＡＭＥ（黒色腫において優先的に発現される抗原）、ｐ５３、ＨＰＶ－Ｅ６／ＨＰＶ－Ｅ７（ヒトパピローマウイルス）、ＨＢＶ、ＴＲＡＩＬ、ＤＲ４、チログロビン、ＴＧＦＢＩＩフレームシフト抗原、ＬＡＧＥ－１Ａ、ＫＲＡＳ、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ＡＦＰ（α－フェトプロテイン）、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ８、およびＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、もしくはＭＡＧＥ－Ａ１２、またはそのペプチド抗原であり得る。好ましくは、腫瘍抗原は、ＭＡＧＥ－Ａ４もしくはＡＦＰまたはそのペプチド抗原である。好ましくは、癌および／もしくは腫瘍抗原ペプチドは、ＭＡＧＥ－Ａ４のペプチド抗原であり、かつ／またはアミノ酸配列ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、配列番号１（ＭＡＧＥ－Ａ４）を含むか、あるいはα－フェトプロテイン（ＡＦＰ）のペプチド抗原であり、かつ／または配列ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号２）またはα－フェトプロテイン（ＡＦＰ）（配列番号３）に由来する残基１５８～１６６を含む。
【0018】
本発明によれば、異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、腫瘍もしくは癌性状態に関連する癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に結合または特異的に結合し、かつ／あるいは腫瘍もしくは癌細胞または組織により提示され、かつ／あるいは被験体、患者または疾患状態もしくは癌性状態に罹患している癌患者の腫瘍細胞および／もしくは組織および／または癌細胞および／もしくは組織に結合または特異的に結合する。被験体、患者または癌患者は、その後、本発明に従う改変されたＴ細胞またはその集団を用いて治療することができる。改変されたＴ細胞を用いる本発明に従う治療に対して好適な癌患者は、腫瘍および／もしくは癌を有する個体または被験体から腫瘍および／または癌細胞のサンプルを取得するステップ、および；発現される異種ＴＣＲまたはＣＡＲに対して結合するとして癌細胞を特定するステップを含む方法により特定することができる。
【0019】
特異性とは、異種ＴＣＲまたはＣＡＲと特異的標的癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原との間の結合性の強度を説明し、かつ解離定数、Ｋｄ、すなわち、受容体リガンド系に対する結合状態と未結合状態との比率により記載することができる。加えて、異種ＴＣＲまたはＣＡＲが結合できる異なる癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原が少ないほど、その結合特異性が大きくなる。本発明によれば、異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、１０種、９種、８種、７種、６種、５種、４種、３種、２種未満の異なる癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に結合することができる。
【0020】
本発明によれば、異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、任意により表面プラズモン共鳴を用いて、任意により２５℃、任意により６．５～６．９または７．０～７．５のｐＨで測定される、０．０１μＭ～１００μＭ、０．０１μＭ～５０μＭ、０．０１μＭ～２０μＭ、０．０５μＭ～２０μＭもしくは０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１μＭ、０．１５μＭ、０．２μＭ、０．２５μＭ、０．３μＭ、０．３５μＭ、０．４μＭ、０．４５μＭ、０．５μＭ、０．５５μＭ、０．６μＭ、０．６５μＭ、０．７μＭ、０．７５μＭ、０．８μＭ、０．８５μＭ、０．９μＭ、０．９５μＭ、１．０μＭ、１．５μＭ、２．０μＭ、２．５μＭ、３．０μＭ、３．５μＭ、４．０μＭ、４．５μＭ、５．０μＭ、５．５μＭ、６．０μＭ、６．５μＭ、７．０μＭ、７．５μＭ、８．０μＭ、８．５μＭ、９．０μＭ、９．５μＭ、１０．０μＭ；または１０μＭ～１０００μＭ、１０μＭ～５００μＭ、５０μＭ～５００μＭもしくは１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００μＭ、１５０μＭ、２００μＭ、２５０μＭ、３００μＭ、３５０μＭ、４００μＭ、４５０μＭ、５００μＭの解離定数を有して結合することができる。解離定数、ＫＤまたはｋｏｆｆ／ｋｏｎは、解離速度定数ｋｏｆｆ、および結合速度定数ｋｏｎを実験的に測定することにより、決定することができる。ＴＣＲ解離定数は、可溶性形態のＴＣＲを用いて測定することができ、ＴＣＲは、ＴＣＲα鎖可変ドメインおよびＴＣＲβ鎖可変ドメインを含む。
【0021】
したがって、本発明に従う使用のための異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、任意によりペプチド提示分子、例えば、ＨＬＡとの、例えば、ＨＬＡ－Ａ＊０２との、任意によりＨＬＡ－Ａ＊０２：０１、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０２、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０３、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０４、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０５、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０６、ＨＬＡ－Ａ＊０２：６４２またはＨＬＡ－Ａ＊０２：０７から選択される、好ましくはＨＬＡ－Ａ＊０２：０１またはＨＬＡ－Ａ＊０２：６４２との複合体中での、あるいは、ペプチド提示分子、例えば、ＨＬＡとの複合体中での提示を有さずに、例えば、０．０１μＭ～１００μＭ、例えば、５０μＭ、１００μＭ、２００μＭ、５００μＭ、好ましくは０．０５μＭ～２０．０μＭの解離定数を伴って、癌および／もしくは腫瘍抗原またはＭＡＧＥ－Ａ４もしくはＡＦＰのペプチド抗原、好ましくはＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、配列番号１（ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド）またはＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（ＡＦＰペプチド）配列番号２を含むペプチドに、効率的にかつ／または高親和性を有して、結合することが可能である。例えば、異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、内因的に発現される腫瘍細胞表面癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に対する結合特性を有し得、任意により、結合性は、ペプチド提示または抗原提示分子、例えば、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）またはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）または主要組織適合性複合体クラス関連タンパク質（ＭＲ）１との複合体としての細胞表面抗原の提示とは独立している。
【0022】
本発明によれば、ＴＣＲまたはＣＡＲ結合性は、任意により、近縁の癌および／もしくは腫瘍抗原またはペプチド抗原配列と比較して、１種の癌および／または腫瘍抗原、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４などのＭＡＧＥタンパク質もしくはＡＦＰ、またはそのペプチド抗原に対して特異的であり得る。近縁の癌および／もしくは腫瘍抗原またはペプチド抗原配列は、類似もしくは同一の長さを有し得、かつ／または類似の個数もしくは同一の個数のアミノ酸残基を有し得る。近縁のペプチド抗原配列は、５０もしくは６０もしくは７０もしくは８０～９０％の同一性、好ましくは８０～９０％の同一性を共有し得、かつ／または１、２、３もしくは４個のアミノ酸残基分、異なることができる。近縁のペプチド配列は、配列ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ（配列番号１）またはＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号２）のポリペプチド配列を含む配列に由来することができる。結合親和性は、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または放射免疫アッセイ（ＲＩＡ））、または動力学（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析）により決定することができる。結合力は、例えば、相互作用の価数を考慮した、複数部位での２つの分子相互の結合性の強度の合計である。本発明によれば、免疫応答性細胞は、異種ＴＣＲもしくはＣＡＲを欠損するかまたは別の異種ＴＣＲもしくはＣＡＲを有するＴ細胞と比較して、癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原、あるいは癌細胞もしくは組織の腫瘍により提示されかつ異種ＴＣＲもしくはＣＡＲにより認識される癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に対して改善された親和性および／または結合力を示すことができる。
【0023】
本発明によれば、異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、任意により、癌性状態に関連し、かつ／または癌細胞もしくは組織の腫瘍により提示される、本明細書中で上記の通りの癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に選択的に結合することができ；任意により、癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原は、任意により、好ましくは腫瘍細胞または癌細胞もしくは組織により発現される、ペプチド提示分子、例えば、ＨＬＡとの複合体中で、あるいは、ペプチド提示分子またはＨＬＡとの複合体中での提示を伴わずに、異種ＴＣＲまたはＣＡＲにより認識される。選択的結合性とは、異種ＴＣＲまたはＣＡＲが、別の抗原と比較して、ある癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に対して大きな親和性を有して結合することを意味する。選択的結合性は、異種ＴＣＲまたはＣＡＲとの複合体中での、あるリガンド抗原による別のリガンド抗原の置換に対する平衡定数により表される。
【0024】
本発明によれば、異種ＴＣＲまたはＣＡＲ結合性は、本明細書中に記載される通りの癌および／もしくは腫瘍抗原またはペプチド抗原に対して選択的かつ／または特異的である。本発明によれば、異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原、すなわち、癌および／または腫瘍抗原のペプチド断片（ｐＨＬＡ）を提示または表示する、ペプチド提示分子、例えば、ＨＬＡに、結合および／または特異的に結合および／または選択的に結合することができ、ＨＬＡは、全部がＨＬＡクラス１であるＭＨＣクラスＩ（Ａ、Ｂ、およびＣ）もしくはその特異的対立遺伝子に対応するか、またはＨＬＡはＭＨＣクラスＩＩ（ＤＰ、ＤＭ、ＤＯ、ＤＱ、およびＤＲ）もしくはその特異的対立遺伝子に対応し、好ましくは、ＨＬＡはクラス１であり、好ましくは、対立遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ２もしくはＨＬＡ－Ａ＊０２またはＨＬＡ－Ａ２＋もしくはＨＬＡ－Ａ＊０２陽性ＨＬＡであり、任意によりＨＬＡ－Ａ＊０２：０１、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０２、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０３、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０４、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０５、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０６、ＨＬＡ－Ａ＊０２：６４２またはＨＬＡ－Ａ＊０２：０７、好ましくはＨＬＡ－Ａ＊０２：０１またはＨＬＡ－Ａ＊０２：６４２から選択される。あるいは、異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、ペプチド提示分子、例えば、ＨＬＡにより提示または表示されていない、癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に結合および／または特異的に結合および／または選択的に結合することができる。
【0025】
異種ＴＣＲ
好ましくは、異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、免疫応答性細胞により天然に発現されない（すなわち、ＴＣＲまたはＣＡＲは外因性または異種である）。異種ＴＣＲは、αβＴＣＲヘテロ二量体を含み得る。異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、組み換えもしくは合成もしくは人工ＴＣＲまたはＣＡＲ、すなわち、天然に存在しないＴＣＲであり得る。例えば、異種ＴＣＲは、特異的癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に対するその親和性または結合力を増大させるために遺伝子操作することができる（すなわち、親和性強化型ＴＣＲまたは特異的ペプチド強化型親和性受容体（ＳＰＥＡＲ）ＴＣＲ）。親和性強化型ＴＣＲまたは（ＳＰＥＡＲ）ＴＣＲは、天然に存在するＴＣＲに対して１箇所または複数の突然変異、例えば、ＴＣＲα鎖およびβ鎖の可変領域の超可変相補性決定領域（ＣＤＲ）中の１箇所または複数の突然変異を含み得る。これらの突然変異は、任意により、腫瘍および／または癌細胞により発現される場合に、腫瘍抗原のペプチド断片を表示するＭＨＣに対するＴＣＲの親和性を増大させることができる。親和性強化型または成熟型ＴＣＲを生成する好適な方法としては、ファージまたは酵母ディスプレイを用いるＴＣＲ突然変異体のライブラリーのスクリーニングが挙げられ、当技術分野で周知である（例えば、Robbins et al J Immunol (2008) 180(9):6116；San Miguel et al (2015) Cancer Cell 28 (3) 281-283；Schmitt et al (2013) Blood 122 348-256；Jiang et al (2015) Cancer Discovery 5 901を参照されたい）。好ましい親和性強化型ＴＣＲは、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４またはそのペプチド抗原、例えば、配列ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、配列番号１またはα－フェトプロテイン（ＡＦＰ）のペプチド抗原および／または配列ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号２）もしくはα－フェトプロテイン（ＡＦＰ）（配列番号３）に由来する残基１５８～１６６を含む腫瘍抗原を発現する腫瘍または癌細胞に結合することができる。
好ましくは、異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、免疫応答性細胞により天然に発現されない（すなわち、ＴＣＲまたはＣＡＲは外因性または異種である）。異種ＴＣＲは、αβＴＣＲヘテロ二量体を含み得る。異種ＴＣＲまたはＣＡＲは、組み換えもしくは合成もしくは人工ＴＣＲまたはＣＡＲ、すなわち、天然に存在しないＴＣＲであり得る。例えば、異種ＴＣＲは、特異的癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に対するその親和性または結合力を増大させるために遺伝子操作することができる（すなわち、親和性強化型ＴＣＲまたは特異的ペプチド強化型親和性受容体（ＳＰＥＡＲ）ＴＣＲ）。親和性強化型ＴＣＲまたは（ＳＰＥＡＲ）ＴＣＲは、天然に存在するＴＣＲに対して１箇所または複数の突然変異、例えば、ＴＣＲα鎖およびβ鎖の可変領域の超可変相補性決定領域（ＣＤＲ）中の１箇所または複数の突然変異を含み得る。これらの突然変異は、任意により、腫瘍および／または癌細胞により発現される場合に、腫瘍抗原のペプチド断片を表示するＭＨＣに対するＴＣＲの親和性を増大させることができる。親和性強化型または成熟型ＴＣＲを生成する好適な方法としては、ファージまたは酵母ディスプレイを用いるＴＣＲ突然変異体のライブラリーのスクリーニングが挙げられ、当技術分野で周知である（例えば、Robbins et al J Immunol (2008) 180(9):6116；San Miguel et al (2015) Cancer Cell 28 (3) 281-283；Schmitt et al (2013) Blood 122 348-256；Jiang et al (2015) Cancer Discovery 5 901を参照されたい）。好ましい親和性強化型ＴＣＲは、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４またはそのペプチド抗原、例えば、配列ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、配列番号１またはα－フェトプロテイン（ＡＦＰ）のペプチド抗原および／または配列ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号２）もしくはα－フェトプロテイン（ＡＦＰ）（配列番号３）に由来する残基１５８～１６６を含む腫瘍抗原を発現する腫瘍または癌細胞に結合することができる。
【0026】
本発明によれば、異種ＴＣＲは、配列番号４のα鎖参照アミノ酸配列またはその変異体および配列番号６のβ鎖参照アミノ酸配列またはその変異体を含み得るＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲであり得る。
【0027】
代替的な実施形態によれば、異種ＴＣＲは、配列番号１６のα鎖参照アミノ酸配列またはその変異体および配列番号１８のβ鎖参照アミノ酸配列またはその変異体を含み得るＡＦＰ ＴＣＲであり得る。
【0028】
変異体は、参照アミノ酸配列に対して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し得る。
【0029】
ＴＣＲは、配列番号５のα鎖参照ヌクレオチド配列またはその変異体および配列番号７のβ鎖参照ヌクレオチド配列またはその変異体によりコードされ得る。
【0030】
代替的な実施形態によれば、ＴＣＲは、配列番号１７のα鎖参照ヌクレオチド配列またはその変異体および配列番号１９のβ鎖参照ヌクレオチド配列またはその変異体によりコードされ得る。
【0031】
変異体は、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有し得る。
【0032】
本発明によれば、ＴＣＲ（ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ）は、ＴＣＲα鎖可変ドメインおよびＴＣＲβ鎖可変ドメインを含み得、
（ｉ）α鎖可変ドメインは、配列
ＶＳＰＦＳＮ（αＣＤＲ１）、配列番号１０または配列番号４のアミノ酸４８～５３、
ＬＴＦＳＥＮ（αＣＤＲ２）、配列番号１１または配列番号４のアミノ酸７１～７６、および
ＣＶＶＳＧＧＴＤＳＷＧＫＬＱＦ（αＣＤＲ３）、配列番号１２または配列番号４のアミノ酸１１１～１２５
を有するＣＤＲを含み、かつ
（ｉｉ）β鎖可変ドメインは、配列
ＫＧＨＤＲ（βＣＤＲ１）、配列番号１３または配列番号６のアミノ酸４６～５０、
ＳＦＤＶＫＤ（βＣＤＲ２）、配列番号１４または配列番号６のアミノ酸６８～７３、および
ＣＡＴＳＧＱＧＡＹＥＥＱＦＦ（βＣＤＲ３）、配列番号１５または配列番号６のアミノ酸１１０～１２３
を有するＣＤＲを含むか；または
それらに対して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性、任意によりそれらに対して１００％の配列同一性を有する配列を含む。
（ｉ）α鎖可変ドメインは、配列
ＶＳＰＦＳＮ（αＣＤＲ１）、配列番号１０または配列番号４のアミノ酸４８～５３、
ＬＴＦＳＥＮ（αＣＤＲ２）、配列番号１１または配列番号４のアミノ酸７１～７６、および
ＣＶＶＳＧＧＴＤＳＷＧＫＬＱＦ（αＣＤＲ３）、配列番号１２または配列番号４のアミノ酸１１１～１２５
を有するＣＤＲを含み、かつ
（ｉｉ）β鎖可変ドメインは、配列
ＫＧＨＤＲ（βＣＤＲ１）、配列番号１３または配列番号６のアミノ酸４６～５０、
ＳＦＤＶＫＤ（βＣＤＲ２）、配列番号１４または配列番号６のアミノ酸６８～７３、および
ＣＡＴＳＧＱＧＡＹＥＥＱＦＦ（βＣＤＲ３）、配列番号１５または配列番号６のアミノ酸１１０～１２３
を有するＣＤＲを含むか；または
それらに対して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性、任意によりそれらに対して１００％の配列同一性を有する配列を含む。
【0033】
代替的な実施形態によれば、ＴＣＲ（ＡＦＰ ＴＣＲ）は、ＴＣＲα鎖可変ドメインおよびＴＣＲβ鎖可変ドメインを含み得、
（ｉ）α鎖可変ドメインは、配列
ＤＲＧＳＱＳ（αＣＤＲ１）、配列番号２２または配列番号１６のアミノ酸２７～３２、
ＩＹＳＮＧＤ（αＣＤＲ２）、配列番号２３または配列番号１６のアミノ酸５０～５５、および
ＡＶＮＳＤＳＧＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ３）、配列番号２４または配列番号１６のアミノ酸９０～１０１
を有するＣＤＲを含み、かつ
（ｉｉ）β鎖可変ドメインは、配列
ＳＧＤＬＳ（βＣＤＲ１）、配列番号２５または配列番号１８のアミノ酸２７～３１、
ＹＹＮＧＥＥ（βＣＤＲ２）、配列番号２６または配列番号１８のアミノ酸４９～５４、および
ＡＳＳＬＧＧＥＳＥＱＹ（βＣＤＲ３）、配列番号２７または配列番号１８のアミノ酸９２～１０２
を有するＣＤＲを含むか；または
それらに対して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性、任意によりそれらに対して１００％の配列同一性を有する配列を含む。
（ｉ）α鎖可変ドメインは、配列
ＤＲＧＳＱＳ（αＣＤＲ１）、配列番号２２または配列番号１６のアミノ酸２７～３２、
ＩＹＳＮＧＤ（αＣＤＲ２）、配列番号２３または配列番号１６のアミノ酸５０～５５、および
ＡＶＮＳＤＳＧＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ３）、配列番号２４または配列番号１６のアミノ酸９０～１０１
を有するＣＤＲを含み、かつ
（ｉｉ）β鎖可変ドメインは、配列
ＳＧＤＬＳ（βＣＤＲ１）、配列番号２５または配列番号１８のアミノ酸２７～３１、
ＹＹＮＧＥＥ（βＣＤＲ２）、配列番号２６または配列番号１８のアミノ酸４９～５４、および
ＡＳＳＬＧＧＥＳＥＱＹ（βＣＤＲ３）、配列番号２７または配列番号１８のアミノ酸９２～１０２
を有するＣＤＲを含むか；または
それらに対して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性、任意によりそれらに対して１００％の配列同一性を有する配列を含む。
【0034】
代替的な実施形態によれば、ＴＣＲは置換されていることができる：
ａ．配列ＤＲＧＳＱＡ、配列番号２８を有するαＣＤＲ１、
ｂ．配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦ、配列番号２９を有するαＣＤＲ２、
ｃ．配列ＡＶＮＳＤＳＧＶＡＬＮＦ、配列番号３０を有するαＣＤＲ２、
ｄ．配列ＤＲＧＳＱＡ、配列番号２８を有するαＣＤＲ１および配列ＡＶＮＳＤＳＧＶＡＬＮＦ、配列番号３０を有するαＣＤＲ２、
ｅ．配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦ、配列番号３１を有するαＣＤＲ２、
ｆ．配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＳＬＮＦ、配列番号３２を有するαＣＤＲ２、
ｇ．配列ＡＶＮＳＱＳＳＹＡＬＮＦ、配列番号３６を有するαＣＤＲ２、
ｈ．配列ＤＲＧＳＱＡ、配列番号２８を有するαＣＤＲ１および配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦ、配列番号３１を有するαＣＤＲ２、
ｉ．配列ＡＶＮＳＱＳＧＶＡＬＮＦ、配列番号３２を有するαＣＤＲ２、
ｊ．配列ＡＶＮＳＱＮＧＹＡＬＮＦ、配列番号３３を有するαＣＤＲ２、
ｋ．配列ＤＲＧＳＦＳ、配列番号３４を有するαＣＤＲ１、
ｌ．配列ＤＲＧＳＹＳ、配列番号３５を有するαＣＤＲ１、
ｍ．配列ＤＲＧＳＹＳ、配列番号３５を有するαＣＤＲ１および配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦ、配列番号２９を有するαＣＤＲ２、
ｎ．配列ＤＲＧＳＹＳ、配列番号３５を有するαＣＤＲ１および配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦ、配列番号２９を有するαＣＤＲ２、
ｏ．配列ＤＲＧＳＹＳ、配列番号３５を有するαＣＤＲ１および配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦ、配列番号３１を有するαＣＤＲ２。
ａ．配列ＤＲＧＳＱＡ、配列番号２８を有するαＣＤＲ１、
ｂ．配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦ、配列番号２９を有するαＣＤＲ２、
ｃ．配列ＡＶＮＳＤＳＧＶＡＬＮＦ、配列番号３０を有するαＣＤＲ２、
ｄ．配列ＤＲＧＳＱＡ、配列番号２８を有するαＣＤＲ１および配列ＡＶＮＳＤＳＧＶＡＬＮＦ、配列番号３０を有するαＣＤＲ２、
ｅ．配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦ、配列番号３１を有するαＣＤＲ２、
ｆ．配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＳＬＮＦ、配列番号３２を有するαＣＤＲ２、
ｇ．配列ＡＶＮＳＱＳＳＹＡＬＮＦ、配列番号３６を有するαＣＤＲ２、
ｈ．配列ＤＲＧＳＱＡ、配列番号２８を有するαＣＤＲ１および配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦ、配列番号３１を有するαＣＤＲ２、
ｉ．配列ＡＶＮＳＱＳＧＶＡＬＮＦ、配列番号３２を有するαＣＤＲ２、
ｊ．配列ＡＶＮＳＱＮＧＹＡＬＮＦ、配列番号３３を有するαＣＤＲ２、
ｋ．配列ＤＲＧＳＦＳ、配列番号３４を有するαＣＤＲ１、
ｌ．配列ＤＲＧＳＹＳ、配列番号３５を有するαＣＤＲ１、
ｍ．配列ＤＲＧＳＹＳ、配列番号３５を有するαＣＤＲ１および配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦ、配列番号２９を有するαＣＤＲ２、
ｎ．配列ＤＲＧＳＹＳ、配列番号３５を有するαＣＤＲ１および配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦ、配列番号２９を有するαＣＤＲ２、
ｏ．配列ＤＲＧＳＹＳ、配列番号３５を有するαＣＤＲ１および配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦ、配列番号３１を有するαＣＤＲ２。
【0035】
したがって、ＴＣＲ（ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ）は、α鎖可変ドメインが配列番号８もしくは配列番号４のアミノ酸残基１～１３６の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／あるいはβ鎖可変ドメインが配列番号９もしくは配列番号６のアミノ酸残基１～１３３の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＣＲを含み得る。
【0036】
あるいは、ＴＣＲ（ＡＦＰ ＴＣＲ）は、α鎖可変ドメインが配列番号２０もしくは配列番号１６のアミノ酸残基１～１１２の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／あるいはβ鎖可変ドメインが配列番号２１もしくは配列番号１８のアミノ酸残基１～１１２の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＣＲを含み得る。
【0037】
用語「前駆体ＴＣＲ」または「親ＴＣＲ」は、それぞれ配列番号４および６のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲα鎖およびＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲβ鎖を含むＴＣＲあるいはそれぞれ配列番号１６および１８のＡＦＰ ＴＣＲα鎖およびＡＦＰ ＴＣＲβ鎖を含むＴＣＲを意味するために本明細書中で用いられる。前駆体ＴＣＲと等しいか、等価であるかもしくは前駆体ＴＣＲよりも高い親和性および／またはペプチド－ＨＬＡ複合体に関する前駆体ＴＣＲと等しいか、等価であるかもしくは前駆体ＴＣＲよりも遅いｏｆｆ速度を有する、前駆体ＴＣＲに対して突然変異または改変されているＴＣＲを提供することが望ましい。本発明によれば、異種ＴＣＲは、前駆体ＴＣＲに対してα鎖可変ドメインおよび／またはβ鎖可変ドメイン中に存在する２箇所以上の突然変異を有し得、かつ「遺伝子操作型ＴＣＲ」または「突然変異体ＴＣＲ」と表すことができる。これらの突然変異は、ＭＡＧＥ－Ａ４またはそのペプチド抗原に対する結合親和性および／または特異性および／または選択性および／または結合力を改善することができる。特定の実施形態では、α鎖可変ドメイン中に１箇所、２箇所、３箇所、４箇所、５箇所、６箇所、７箇所もしくは８箇所の突然変異、例えば、４箇所もしくは８箇所の突然変異、および／またはβ鎖可変ドメイン中に１箇所、２箇所、３箇所、４箇所もしくは５箇所の突然変異、例えば、５箇所の突然変異がある。一部の実施形態では、本発明のＴＣＲのα鎖可変ドメインは、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲに関して配列番号８、ＡＦＰ ＴＣＲに関して配列番号２０のアミノ酸残基の配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。一部の実施形態では、本発明のＴＣＲのβ鎖可変ドメインは、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲに関して配列番号９もしくはＡＦＰ ＴＣＲに関して配列番号２１のアミノ酸残基の配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【0038】
本発明によれば、ＴＣＲは、α鎖可変ドメインが、配列番号８もしくは配列番号４のアミノ酸残基１～１３６のアミノ酸配列、あるいはそのアミノ酸残基１～４７、５４～７０、７７～１１０および１２６～１３６がそれぞれ配列番号８のアミノ酸残基１～４７、５４～７０、７７～１１０および１２６～１３６の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有し、かつ／またはアミノ酸残基４８～５３、７１～７６および１１１～１２５、それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３が配列番号８のアミノ酸残基４８～５３、７１～７６および１１１～１２５、それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＣＲ（ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ）を含み得る。
【0039】
本発明によれば、ＴＣＲ（ＭＡＧＥ－Ａ４）は、α鎖可変ドメインにおいて、
（ｉ）そのアミノ酸残基１～４７が、（ａ）配列番号８のアミノ酸残基１～４７の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号８の残基１～４７に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｉ）アミノ酸残基４８～５３が、ＶＳＰＦＳＮ、ＣＤＲ１、配列番号１０または配列番号８のアミノ酸４８～５３であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基５４～７０が、（ａ）配列番号２５のアミノ酸残基５４～７０の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号８のアミノ酸残基５４～７０の配列に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｖ）アミノ酸残基７１～７６が、ＬＴＦＳＥＮ、ＣＤＲ２、配列番号１１または配列番号８のアミノ酸７１～７６であり得、
（ｖ）そのアミノ酸残基７７～１１０が、配列番号８のアミノ酸残基７７～１１０の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号８のアミノ酸残基７７～１１０の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得、
（ｖｉ）アミノ酸１１１～１２５が、ＣＶＶＳＧＧＴＤＳＷＧＫＬＱＦ、ＣＤＲ３、配列番号１２または配列番号８のアミノ酸１１１～１２５であり得、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１２６～１３６が、配列番号８のアミノ酸残基１２６～１３６の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号８のアミノ酸残基１２６～１３６の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得る、
の配列のＴＣＲを含み得る。
（ｉ）そのアミノ酸残基１～４７が、（ａ）配列番号８のアミノ酸残基１～４７の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号８の残基１～４７に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｉ）アミノ酸残基４８～５３が、ＶＳＰＦＳＮ、ＣＤＲ１、配列番号１０または配列番号８のアミノ酸４８～５３であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基５４～７０が、（ａ）配列番号２５のアミノ酸残基５４～７０の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号８のアミノ酸残基５４～７０の配列に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｖ）アミノ酸残基７１～７６が、ＬＴＦＳＥＮ、ＣＤＲ２、配列番号１１または配列番号８のアミノ酸７１～７６であり得、
（ｖ）そのアミノ酸残基７７～１１０が、配列番号８のアミノ酸残基７７～１１０の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号８のアミノ酸残基７７～１１０の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得、
（ｖｉ）アミノ酸１１１～１２５が、ＣＶＶＳＧＧＴＤＳＷＧＫＬＱＦ、ＣＤＲ３、配列番号１２または配列番号８のアミノ酸１１１～１２５であり得、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１２６～１３６が、配列番号８のアミノ酸残基１２６～１３６の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号８のアミノ酸残基１２６～１３６の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得る、
の配列のＴＣＲを含み得る。
【0040】
本発明によれば、ＴＣＲは、β鎖可変ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列、またはそのアミノ酸残基１～４５、５１～６７、７４～１０９、１２４～１３３がそれぞれ配列番号９のアミノ酸残基１～４５、５１～６７、７４～１０９、１２４～１３３の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し、かつアミノ酸残基４６～５０、６８～７３および１１０～１２３が配列番号９のアミノ酸残基４６～５０、６８～７３および１１０～１２３、それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＣＲ、またはＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲを含み得る。
【0041】
本発明によれば、ＴＣＲは、β鎖可変ドメインにおいて、
（ｉ）そのアミノ酸残基１～４５が、（ａ）配列番号９のアミノ酸残基１～４５の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号９の残基１～４５に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｉ）アミノ酸残基４６～５０が、ＫＧＨＤＲ、ＣＤＲ１、配列番号１３または配列番号９のアミノ酸４６～５０であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基５１～６７が、（ａ）配列番号９のアミノ酸残基５１～６７の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号９のアミノ酸残基５１～６７の配列に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｖ）アミノ酸残基６８～７３が、ＳＦＤＶＫＤ、ＣＤＲ２、配列番号１４または配列番号９のアミノ酸６８～７３であり得、
（ｖ）そのアミノ酸残基７４～１０９が、配列番号９のアミノ酸残基７４～１０９の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号９のアミノ酸残基７４～１０９の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得、
（ｖｉ）アミノ酸１１０～１２３が、ＣＡＴＳＧＱＧＡＹＥＥＱＦＦ、ＣＤＲ３、配列番号１５または配列番号９のアミノ酸１１０～１２３であり得、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１２４～１３３が、配列番号９のアミノ酸残基１２４～１３３の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号９のアミノ酸残基１２４～１３３の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得る、
の配列のＴＣＲを含み得る。
（ｉ）そのアミノ酸残基１～４５が、（ａ）配列番号９のアミノ酸残基１～４５の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号９の残基１～４５に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｉ）アミノ酸残基４６～５０が、ＫＧＨＤＲ、ＣＤＲ１、配列番号１３または配列番号９のアミノ酸４６～５０であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基５１～６７が、（ａ）配列番号９のアミノ酸残基５１～６７の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号９のアミノ酸残基５１～６７の配列に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｖ）アミノ酸残基６８～７３が、ＳＦＤＶＫＤ、ＣＤＲ２、配列番号１４または配列番号９のアミノ酸６８～７３であり得、
（ｖ）そのアミノ酸残基７４～１０９が、配列番号９のアミノ酸残基７４～１０９の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号９のアミノ酸残基７４～１０９の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得、
（ｖｉ）アミノ酸１１０～１２３が、ＣＡＴＳＧＱＧＡＹＥＥＱＦＦ、ＣＤＲ３、配列番号１５または配列番号９のアミノ酸１１０～１２３であり得、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１２４～１３３が、配列番号９のアミノ酸残基１２４～１３３の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号９のアミノ酸残基１２４～１３３の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得る、
の配列のＴＣＲを含み得る。
【0042】
代替的には、ＴＣＲは、α鎖可変ドメインが、配列番号１６のアミノ酸残基１～１１２のアミノ酸配列、あるいはそのアミノ酸残基１～２６、３３～４９、５６～８９および１０２～１１２がそれぞれ配列番号１６のアミノ酸残基１～２６、３３～４９、５６～８９および１０２～１１２の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有し、かつ／またはアミノ酸残基２７～３２、５０～５５、９０～１０１、それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３が配列番号１６のアミノ酸残基２７～３２、５０～５５、９０～１０１、それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＣＲ、またはＡＦＰ ＴＣＲを含み得る。
【0043】
本発明によれば、ＴＣＲは、α鎖可変ドメインにおいて、
（ｉ）そのアミノ酸残基１～２６が、（ａ）配列番号１６のアミノ酸残基１～２６の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号１６の残基１～２６に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｉ）アミノ酸残基２７～３２が、ＤＲＧＳＱＳ、αＣＤＲ１、配列番号２２または配列番号１６のアミノ酸２７～３２であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基３３～４９が、（ａ）配列番号１６のアミノ酸残基３３～４９の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号１６のアミノ酸残基３３～４９の配列に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｖ）アミノ酸残基５０～５５が、ＩＹＳＮＧＤ、αＣＤＲ２、配列番号２３または配列番号１６のアミノ酸５０～５５であり得、
（ｖ）そのアミノ酸残基５６～８９が、配列番号１６のアミノ酸残基５６～８９の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号１６のアミノ酸残基５６～８９の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得、
（ｖｉ）アミノ酸９０～１０１が、ＡＶＮＳＤＳＧＹＡＬＮＦ、αＣＤＲ３、配列番号２４または配列番号１６のアミノ酸９０～１０１であり得、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１０２～１１２が、配列番号１６のアミノ酸残基１０２～１１２の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号１６のアミノ酸残基１０２～１１２の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得る、
の配列のＴＣＲを含み得る。
（ｉ）そのアミノ酸残基１～２６が、（ａ）配列番号１６のアミノ酸残基１～２６の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号１６の残基１～２６に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｉ）アミノ酸残基２７～３２が、ＤＲＧＳＱＳ、αＣＤＲ１、配列番号２２または配列番号１６のアミノ酸２７～３２であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基３３～４９が、（ａ）配列番号１６のアミノ酸残基３３～４９の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号１６のアミノ酸残基３３～４９の配列に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｖ）アミノ酸残基５０～５５が、ＩＹＳＮＧＤ、αＣＤＲ２、配列番号２３または配列番号１６のアミノ酸５０～５５であり得、
（ｖ）そのアミノ酸残基５６～８９が、配列番号１６のアミノ酸残基５６～８９の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号１６のアミノ酸残基５６～８９の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得、
（ｖｉ）アミノ酸９０～１０１が、ＡＶＮＳＤＳＧＹＡＬＮＦ、αＣＤＲ３、配列番号２４または配列番号１６のアミノ酸９０～１０１であり得、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１０２～１１２が、配列番号１６のアミノ酸残基１０２～１１２の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号１６のアミノ酸残基１０２～１１２の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得る、
の配列のＴＣＲを含み得る。
【0044】
本発明によれば、ＴＣＲ、またはＡＦＰ ＴＣＲは、β鎖可変ドメインが、配列番号１８のアミノ酸残基１～１１２のアミノ酸配列、またはそのアミノ酸残基１～２６、３２～４８、５５～９１、１０３～１１２がそれぞれ配列番号１８のアミノ酸残基１～２６、３２～４８、５５～９１、１０３～１１２の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し、かつアミノ酸残基２７～３１、４９～５４および９２～１０２が配列番号１８のアミノ酸残基２７～３１、４９～５４および９２～１０２、それぞれ、βＣＤＲ１、βＣＤＲ２、βＣＤＲ３の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＣＲを含み得る。
【0045】
本発明によれば、ＴＣＲは、β鎖可変ドメインにおいて、
（ｉ）そのアミノ酸残基１～２６が、（ａ）配列番号１８のアミノ酸残基１～２６の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号１８の残基１～２６に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｉ）アミノ酸残基２７～３１が、ＳＧＤＬＳ、βＣＤＲ１、配列番号２５または配列番号１８のアミノ酸２７～３１であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基３２～４８が、（ａ）配列番号１８のアミノ酸残基３２～４８の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号１８のアミノ酸残基３２～４８の配列に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｖ）アミノ酸残基４９～５４が、ＹＹＮＧＥＥ、βＣＤＲ２、配列番号２６または配列番号１８のアミノ酸４９～５４であり得、
（ｖ）そのアミノ酸残基５５～９１が、配列番号１８のアミノ酸残基５５～９１の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号１８のアミノ酸残基５５～９１の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得、
（ｖｉ）アミノ酸９２～１０２が、ＡＳＳＬＧＧＥＳＥＱＹ、βＣＤＲ３、配列番号２７または配列番号１８のアミノ酸９２～１０２であり得、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１０３～１１２が、配列番号１８のアミノ酸残基１０３～１１２の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号１８のアミノ酸残基１０３～１１２の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得る、
の配列のＴＣＲを含み得る。
（ｉ）そのアミノ酸残基１～２６が、（ａ）配列番号１８のアミノ酸残基１～２６の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号１８の残基１～２６に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｉ）アミノ酸残基２７～３１が、ＳＧＤＬＳ、βＣＤＲ１、配列番号２５または配列番号１８のアミノ酸２７～３１であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基３２～４８が、（ａ）配列番号１８のアミノ酸残基３２～４８の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号１８のアミノ酸残基３２～４８の配列に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｖ）アミノ酸残基４９～５４が、ＹＹＮＧＥＥ、βＣＤＲ２、配列番号２６または配列番号１８のアミノ酸４９～５４であり得、
（ｖ）そのアミノ酸残基５５～９１が、配列番号１８のアミノ酸残基５５～９１の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号１８のアミノ酸残基５５～９１の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得、
（ｖｉ）アミノ酸９２～１０２が、ＡＳＳＬＧＧＥＳＥＱＹ、βＣＤＲ３、配列番号２７または配列番号１８のアミノ酸９２～１０２であり得、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１０３～１１２が、配列番号１８のアミノ酸残基１０３～１１２の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号１８のアミノ酸残基１０３～１１２の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得る、
の配列のＴＣＲを含み得る。
【0046】
したがって、異種ＴＣＲは、α鎖が配列番号２０のアミノ酸残基を含み、かつβ鎖可変ドメインが配列番号２１または配列番号４２のアミノ酸残基を含む、ＴＣＲを含み得る。
【0047】
共受容体改変Ｔ細胞
本発明によれば、異種ＴＣＲもしくはＣＡＲを発現または提示する改変されたＴ細胞の集団は、異種共受容体をさらに発現または提示することができる。異種共受容体は、ＣＤ８共受容体であり得る。ＣＤ８共受容体は、ＣＤ８－αおよびＣＤ８－β鎖またはＣＤ８－αおよびＣＤ８－α鎖を含むＣＤ８鎖の二量体または対を含み得る。好ましくは、ＣＤ８共受容体は、ＣＤ８－αおよびＣＤ８－α鎖を含むＣＤ８αα共受容体である。ＣＤ８α共受容体は、配列番号３７に対して少なくとも８０％の同一性のアミノ酸配列、配列番号３７またはその変異体を含み得る。ＣＤ８α共受容体は、ホモ二量体であり得る。
本発明によれば、異種ＴＣＲもしくはＣＡＲを発現または提示する改変されたＴ細胞の集団は、異種共受容体をさらに発現または提示することができる。異種共受容体は、ＣＤ８共受容体であり得る。ＣＤ８共受容体は、ＣＤ８－αおよびＣＤ８－β鎖またはＣＤ８－αおよびＣＤ８－α鎖を含むＣＤ８鎖の二量体または対を含み得る。好ましくは、ＣＤ８共受容体は、ＣＤ８－αおよびＣＤ８－α鎖を含むＣＤ８αα共受容体である。ＣＤ８α共受容体は、配列番号３７に対して少なくとも８０％の同一性のアミノ酸配列、配列番号３７またはその変異体を含み得る。ＣＤ８α共受容体は、ホモ二量体であり得る。
【0048】
ＣＤ８共受容体は、クラス１ＭＨＣに結合し、ＴＣＲシグナル伝達を増強する。本発明によれば、ＣＤ８共受容体は、配列番号３７の参照アミノ酸配列を有し得るか、またはその変異体であり得る。変異体は、参照アミノ酸配列である配列番号３７に対して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し得る。ＣＤ８共受容体は、配列番号３８の参照ヌクレオチド配列によりコードされることができるか、またはその変異体であり得る。変異体は、参照ヌクレオチド配列である配列番号３８に対して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有し得る。
【0049】
本発明によれば、異種ＣＤ８共受容体は、Ｉｇ様Ｖ型ドメインにおいて、配列；
（ｉ）ＶＬＬＳＮＰＴＳＧ、ＣＤＲ１、配列番号３９、または配列番号３７のアミノ酸４５～５３、
（ｉｉ）ＹＬＳＱＮＫＰＫ、ＣＤＲ２、配列番号４０または配列番号３７のアミノ酸７２～７９、
（ｉｉｉ）ＬＳＮＳＩＭ、ＣＤＲ３、配列番号４１または配列番号３７のアミノ酸８０～１１７、
またはそれに対して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列
を有するＣＤＲを含む、ＣＤ８共受容体を含み得る。
（ｉ）ＶＬＬＳＮＰＴＳＧ、ＣＤＲ１、配列番号３９、または配列番号３７のアミノ酸４５～５３、
（ｉｉ）ＹＬＳＱＮＫＰＫ、ＣＤＲ２、配列番号４０または配列番号３７のアミノ酸７２～７９、
（ｉｉｉ）ＬＳＮＳＩＭ、ＣＤＲ３、配列番号４１または配列番号３７のアミノ酸８０～１１７、
またはそれに対して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列
を有するＣＤＲを含む、ＣＤ８共受容体を含み得る。
【0050】
本発明によれば、異種ＣＤ８共受容体は、配列番号３７のアミノ酸配列の残基２２～１３５、またはそのアミノ酸残基２２～４４、５４～７１、８０～１１７、１２４～１３５が配列番号３７のアミノ酸残基２２～４４、５４～７１、８０～１１７、１２４～１３５、それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し、かつアミノ酸残基４５～５３、７２～７９および１１８～１２３がそれぞれ配列番号３７のアミノ酸残基４５～５３、７２～７９および１１８～１２３の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはＩｇ様Ｖ型ドメインにおいて含む、ＣＤ８共受容体を含み得る。
【0051】
本発明によれば、ＣＤ８共受容体は、
（ｉ）そのアミノ酸残基２２～４４が、（ａ）配列番号３７のアミノ酸残基２２～４４の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号３７の残基２２～４４に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｉ）アミノ酸残基４５～５３が、ＶＬＬＳＮＰＴＳＧ、配列番号３９、ＣＤＲ１または配列番号３７のアミノ酸４５～５３であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基５４～７１が、（ａ）配列番号３７のアミノ酸残基５４～７１の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号３７のアミノ酸残基５４～７１の配列に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｖ）アミノ酸残基７２～７９が、ＹＬＳＱＮＫＰＫ、ＣＤＲ２、配列番号４０または配列番号３７のアミノ酸７２～７９であり得、
（ｖ）そのアミノ酸残基８０～１１７が、配列番号３７のアミノ酸残基８０～１１７の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号３７のアミノ酸残基８０～１１７の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得、
（ｖｉ）アミノ酸１１８～１２３が、ＬＳＮＳＩＭ、ＣＤＲ３、配列番号４１または配列番号３７のアミノ酸８０～１１７であり得、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１２４～１３５が、配列番号３７のアミノ酸残基１２４～１３５の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号３７のアミノ酸残基１２４～１３５の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得る、
の配列の、またはＩｇ様Ｖ型ドメインにおいて上記の配列の、ＣＤ８共受容体を含み得る。
（ｉ）そのアミノ酸残基２２～４４が、（ａ）配列番号３７のアミノ酸残基２２～４４の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号３７の残基２２～４４に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｉ）アミノ酸残基４５～５３が、ＶＬＬＳＮＰＴＳＧ、配列番号３９、ＣＤＲ１または配列番号３７のアミノ酸４５～５３であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基５４～７１が、（ａ）配列番号３７のアミノ酸残基５４～７１の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号３７のアミノ酸残基５４～７１の配列に対して挿入または欠失された１個、２個もしくは３個のアミノ酸残基を有し得、
（ｉｖ）アミノ酸残基７２～７９が、ＹＬＳＱＮＫＰＫ、ＣＤＲ２、配列番号４０または配列番号３７のアミノ酸７２～７９であり得、
（ｖ）そのアミノ酸残基８０～１１７が、配列番号３７のアミノ酸残基８０～１１７の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号３７のアミノ酸残基８０～１１７の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得、
（ｖｉ）アミノ酸１１８～１２３が、ＬＳＮＳＩＭ、ＣＤＲ３、配列番号４１または配列番号３７のアミノ酸８０～１１７であり得、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１２４～１３５が、配列番号３７のアミノ酸残基１２４～１３５の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号３７のアミノ酸残基１２４～１３５の配列に対して１箇所、２箇所もしくは３箇所の挿入、欠失または置換を有し得る、
の配列の、またはＩｇ様Ｖ型ドメインにおいて上記の配列の、ＣＤ８共受容体を含み得る。
【0052】
異種ＣＤ８共受容体を発現する改変されたＴ細胞は、異種ＣＤ８共受容体を発現しない改変されたＴ細胞と比較して、任意によりＨＬＡ上に提示される場合に、抗原性ペプチド、腫瘍もしくは癌抗原による刺激に対して、または刺激に際して、本明細書中に開示されるアッセイにより決定可能である通りの、改善された親和性および／または結合力および／または改善されたＴ細胞活性化を示すことができる。改変されたＴ細胞の異種ＣＤ８は、ＭＨＣと相互作用するかまたはＭＨＣに特異的に結合することができ、ＭＨＣは、クラスＩもしくはクラスＩＩ、好ましくはクラスＩ主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）、ＨＬＡ－Ｉ分子であるか、またはＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ－Ａ／Ｂ２Ｍ二量体を伴い得、好ましくは、ＣＤ８－αは、好ましくはＣＤ８のＩｇＶ様ドメインを介して、クラスＩ ＭＨＣのα３部分（残基２２３～２２９）と相互作用する。したがって、異種ＣＤ８は、異種ＣＤ８を欠損するＴ細胞と比較して、任意により抗原提示細胞、樹状細胞および／または腫瘍もしくは癌細胞、腫瘍もしくは癌組織の表面上に、ＨＬＡ ｐＭＨＣＩもしくはｐＨＬＡに結合するかまたはこれらにより提示されるＨＬＡおよび／または抗原性ペプチドに対するＴ細胞のＴＣＲ結合性を改善する。
【0053】
したがって、異種ＣＤ８は、異種ＣＤ８を欠損する細胞と比較して、任意により抗原提示細胞、樹状細胞および／または腫瘍もしくは癌細胞、または腫瘍もしくは癌組織の表面上での、免疫応答性細胞の細胞（ＴＣＲ）／ペプチド－主要組織適合性複合体クラスＩ（ｐＭＨＣＩ）相互作用のｏｆｆ速度（ｋｏｆｆ）、およびそれゆえ、その半減期を改善または増大させることができ、それにより、改善されたライゲーション親和性および／または結合力もまた提供することができる。異種ＣＤ８は、免疫応答性細胞表面上でのＴＣＲの組織化を改善することができ、それによりｐＨＬＡ結合性における協調性を可能にし、かつ改善された治療的結合力を提供することができる。したがって、異種ＣＤ８共受容体改変Ｔ細胞は、亜鉛依存的様式でＬＣＫ（リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ）と結合または相互作用することができ、それにより、ＮＦＡＴ、ＮＦ－κＢ、およびＡＰ－１などの転写因子の活性化をもたらす。異種ＣＤ８改変Ｔ細胞は、異種ＣＤ８共受容体を欠損するＴ細胞と比較して、任意により癌細胞または組織の腫瘍により提示される場合、任意により癌および／もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド抗原に応答した、改善または増大したＣＤ４０Ｌの発現、サイトカイン産生、細胞傷害活性、樹状細胞成熟の誘導または樹状細胞サイトカイン産生の誘導を有し得る。
【0054】
共刺激リガンド改変Ｔ細胞
本発明によれば、改変されたＴ細胞または改変されたＴ細胞の集団は、少なくとも１種、任意により１種、２種、３種または４種の、外因性および／または組み換え共刺激リガンドをさらに含みかつ／または発現することができる。ＴＣＲと少なくとも１種の外因性共刺激リガンドとの間の相互作用は、非抗原特異的シグナルおよび細胞の活性化をもたらし得る。共刺激リガンドとしては、限定するものではないが、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、および免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーリガンドが挙げられる。ＴＮＦは、全身性炎症に関与するサイトカインであり、かつ急性期反応を刺激する。その主要な役割は、免疫細胞の調節におけるものである。ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーは、多数の共通の特徴を共有する。ＴＮＦスーパーファミリーメンバーのうちの大多数が、短い細胞質セグメントおよび比較的長い細胞外領域を含むＩＩ型膜貫通タンパク質（細胞外Ｃ末端）として合成される。ＴＮＦスーパーファミリーメンバーとしては、限定するものではないが、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０Ｌ）／ＣＤｌ５４、ＣＤ１３７Ｌ／４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ－α、ＣＤ１３４Ｌ／ＯＸ４０Ｌ／ＣＤ２５２、ＣＤ２７Ｌ／ＣＤ７０、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３０Ｌ／ＣＤ１５３、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦＰ）／リンホトキシン－α（ＬＴａ）、リンホトキシン－β（ＴＴｂ）、ＣＤ２５７／Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）／Ｂｌｙｓ／ＴＨＡＮＫ／Ｔａｌｌ－１、グルココルチコイド誘導型ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）、およびＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４）が挙げられる。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーは、細胞の認識、結合または接着プロセスに関与する細胞表面タンパク質および可溶性タンパク質の大きな群である。これらのタンパク質は、免疫グロブリンと構造的特徴を共有し、免疫グロブリンドメイン（折り畳み）を保有する。免疫グロブリンスーパーファミリーリガンドとしては、限定するものではないが、両方ともＣＤ２８に対するリガンドであるＣＤ８０およびＣＤ８６が挙げられる。特定の実施形態では、少なくとも１種の共刺激リガンドは、４－１ＢＢＬ、ＣＤ２７５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。本発明によれば、改変されたＴ細胞または改変されたＴ細胞の集団は、４－１ＢＢＬまたはＣＤ８０、好ましくは４－１ＢＢＬ、代替的に４－１ＢＢＬおよびＣＤ８０であり得る少なくとも１種の外因性および／または組み換え共刺激リガンドをさらに含み得る。
本発明によれば、改変されたＴ細胞または改変されたＴ細胞の集団は、少なくとも１種、任意により１種、２種、３種または４種の、外因性および／または組み換え共刺激リガンドをさらに含みかつ／または発現することができる。ＴＣＲと少なくとも１種の外因性共刺激リガンドとの間の相互作用は、非抗原特異的シグナルおよび細胞の活性化をもたらし得る。共刺激リガンドとしては、限定するものではないが、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、および免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーリガンドが挙げられる。ＴＮＦは、全身性炎症に関与するサイトカインであり、かつ急性期反応を刺激する。その主要な役割は、免疫細胞の調節におけるものである。ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーは、多数の共通の特徴を共有する。ＴＮＦスーパーファミリーメンバーのうちの大多数が、短い細胞質セグメントおよび比較的長い細胞外領域を含むＩＩ型膜貫通タンパク質（細胞外Ｃ末端）として合成される。ＴＮＦスーパーファミリーメンバーとしては、限定するものではないが、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０Ｌ）／ＣＤｌ５４、ＣＤ１３７Ｌ／４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ－α、ＣＤ１３４Ｌ／ＯＸ４０Ｌ／ＣＤ２５２、ＣＤ２７Ｌ／ＣＤ７０、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３０Ｌ／ＣＤ１５３、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦＰ）／リンホトキシン－α（ＬＴａ）、リンホトキシン－β（ＴＴｂ）、ＣＤ２５７／Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）／Ｂｌｙｓ／ＴＨＡＮＫ／Ｔａｌｌ－１、グルココルチコイド誘導型ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）、およびＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４）が挙げられる。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーは、細胞の認識、結合または接着プロセスに関与する細胞表面タンパク質および可溶性タンパク質の大きな群である。これらのタンパク質は、免疫グロブリンと構造的特徴を共有し、免疫グロブリンドメイン（折り畳み）を保有する。免疫グロブリンスーパーファミリーリガンドとしては、限定するものではないが、両方ともＣＤ２８に対するリガンドであるＣＤ８０およびＣＤ８６が挙げられる。特定の実施形態では、少なくとも１種の共刺激リガンドは、４－１ＢＢＬ、ＣＤ２７５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。本発明によれば、改変されたＴ細胞または改変されたＴ細胞の集団は、４－１ＢＢＬまたはＣＤ８０、好ましくは４－１ＢＢＬ、代替的に４－１ＢＢＬおよびＣＤ８０であり得る少なくとも１種の外因性および／または組み換え共刺激リガンドをさらに含み得る。
【0055】
ＣＤ３＋富化
本発明によれば、方法は、Ｔ細胞が、ＣＤ３＋画分に関して、抗原、分化タンパク質のクラスターおよび成熟Ｔリンパ球上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の一部分であるＣＤ３を発現するＴ細胞に関して富化されるステップをさらに含み得る。富化は、Ｔ細胞の改変前に行うことができる。富化は、Ｔ細胞の活性化前に行うことができる。あるいは、かつ好ましくは、富化は、Ｔ細胞の活性化中または活性化後、好ましくはＴ細胞の活性化中または活性化後のいずれかかつ改変前に行われる。任意により、富化は、例えば、任意により改変前の活性化中に、任意により取り出し可能なビーズに付着させた、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片および／または抗ＣＤ２８抗体もしくはその抗原結合性断片に対して、含まれるＴ細胞に関して行われる。
本発明によれば、方法は、Ｔ細胞が、ＣＤ３＋画分に関して、抗原、分化タンパク質のクラスターおよび成熟Ｔリンパ球上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の一部分であるＣＤ３を発現するＴ細胞に関して富化されるステップをさらに含み得る。富化は、Ｔ細胞の改変前に行うことができる。富化は、Ｔ細胞の活性化前に行うことができる。あるいは、かつ好ましくは、富化は、Ｔ細胞の活性化中または活性化後、好ましくはＴ細胞の活性化中または活性化後のいずれかかつ改変前に行われる。任意により、富化は、例えば、任意により改変前の活性化中に、任意により取り出し可能なビーズに付着させた、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片および／または抗ＣＤ２８抗体もしくはその抗原結合性断片に対して、含まれるＴ細胞に関して行われる。
【0056】
Ｔ細胞活性化
本発明の方法によれば、Ｔ細胞もしくはＴ細胞の集団の活性化または活性化ステップは、Ｔ細胞が増殖および／または拡大するのを刺激する。
本発明の方法によれば、Ｔ細胞もしくはＴ細胞の集団の活性化または活性化ステップは、Ｔ細胞が増殖および／または拡大するのを刺激する。
【0057】
Ｔ細胞の単離された集団の活性化は、様々な方法により、例えば、Ｔ細胞を抗ＣＤ３抗体もしくはそのＣＤ３結合性断片と接触させることにより、またはＴ細胞を抗ＣＤ２８抗体もしくはそのＣＤ２８結合性断片と接触させることにより、またはＴ細胞をＢ７タンパク質（Ｂ７は、活性化された抗原提示細胞上に見出される末梢膜タンパク質のうちの１つのタイプであり、Ｔ細胞上でＣＤ２８またはＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）表面タンパク質と対になった場合に、共刺激シグナルを生じることができる）もしくはそのＣＤ２８結合性断片、例えば、そのＢ７－１もしくはＢ７－２もしくはＣＤ２８結合性断片と接触させることにより、達成することができる。活性化手段は、ビーズまたは磁性ビーズなどの固相かつ任意により取り出し可能な表面または基材、例えば、抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８を用いてコーティングされた磁性ビーズに付着させることができる。好ましくは、活性化は、例えば、磁性ビーズであり得、したがって細胞培養培地からの単離が可能であるビーズ、任意により取り出し可能なビーズに任意により付着させた、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片および／または抗ＣＤ２８抗体もしくはその抗原結合性断片の添加による。Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞改変と同時またはその後に、ＡＫＴｉ添加と同時またはその後に、Ｔ細胞改変およびＡＫＴｉ添加の両方と同時またはその後に行うことができる。好ましくは、Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞改変に先立ち、好ましくはＡＫＴｉ添加に先立ち、好ましくはＴ細胞改変およびＡＫＴｉ添加の両方に先立つ。
【0058】
ＡＫＴ阻害剤ステップ
本発明の方法によれば、Ｔ細胞改変または形質導入は、活性化に先立ってまたはそれと同時に、例えば、活性化の約０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０時間またはそれ以上前のうちのいずれか１つにおいて行うことができる。
本発明の方法によれば、Ｔ細胞改変または形質導入は、活性化に先立ってまたはそれと同時に、例えば、活性化の約０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０時間またはそれ以上前のうちのいずれか１つにおいて行うことができる。
【0059】
本発明の方法によれば、Ｔ細胞改変または形質導入は、活性化後、好ましくは活性化の１８～２６時間後、好ましくは活性化の１２～４０、１３～３８、１４～３６、１５～３４、１６～３２、１７～３０、１８～２８、１８～２６もしくは１８～２４時間後のうちのいずれかまたは活性化の約１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１もしくは４２時間後のうちのいずれか１つにおいて行うことができる。
【0060】
本発明の方法によれば、ＡＫＴ阻害剤をＴ細胞改変または形質導入後に添加することができ、好ましくは、ＡＫＴ阻害剤を、改変もしくは形質導入の８～４２、９～４１、１０～４０、１１～３９、１２～３８、１３～３７、１４～３６、１５～３５、１６～３４、１７～３３、１８～３２、１９～３１、２０～３０、２１～２９、２２～２８、２３～２７、２４～２６または２４～２５時間後のうちのいずれか１つ、好ましくはＴ細胞改変もしくは形質導入の１５～２６、１６～２５、１７～２４、１８～２３、１９～２２、または２０～２１時間後のうちのいずれか１つ、好ましくは１７～２４時間後に、添加することができる。
【0061】
本発明の方法によれば、ＡＫＴ阻害剤は、Ｔ細胞活性化後に添加することができ、好ましくは、ＡＫＴ阻害剤は、Ｔ細胞活性化の３５～５０、３６～４９、３７～４８、３８～４７、３９～４６、４０～４５、４１～４４、４２～４３時間後のうちのいずれか１つ、好ましくはＴ細胞改変または形質導入の、３５～５０時間後に添加することができる。
【0062】
ＡＫＴ阻害剤
本発明の方法によれば、ＡＫＴ阻害剤は、アロステリック阻害剤またはアロステリックＡＫＴ阻害剤、競合的ＡＴＰ阻害剤、ＡＫＴとリン脂質との間の相互作用の阻害剤、ＡＫＴの下流の分子のリン酸化の、好ましくはＰＲＡＳ４０、リボソームＳ６、またはＴＳＣ２のリン酸化の阻害剤からなる群から選択することができる。ＡＫＴ阻害剤はまた、ＡＫＴのＤＮＡ－ＰＫ活性化の阻害剤、ＡＫＴのＰＤＫ－１活性化の阻害剤、ＡＫＴのｍＴＯＲＣ２活性化の阻害剤、ＡＫＴのＨＳＰ活性化の阻害剤からなる群から選択することもできる。
本発明の方法によれば、ＡＫＴ阻害剤は、アロステリック阻害剤またはアロステリックＡＫＴ阻害剤、競合的ＡＴＰ阻害剤、ＡＫＴとリン脂質との間の相互作用の阻害剤、ＡＫＴの下流の分子のリン酸化の、好ましくはＰＲＡＳ４０、リボソームＳ６、またはＴＳＣ２のリン酸化の阻害剤からなる群から選択することができる。ＡＫＴ阻害剤はまた、ＡＫＴのＤＮＡ－ＰＫ活性化の阻害剤、ＡＫＴのＰＤＫ－１活性化の阻害剤、ＡＫＴのｍＴＯＲＣ２活性化の阻害剤、ＡＫＴのＨＳＰ活性化の阻害剤からなる群から選択することもできる。
【0063】
したがって、アロステリック阻害剤またはアロステリックＡＫＴ阻害剤は、
（ａ）ＡＲＱ０９２、ミランセルチブ（Miransertib）、ＣＡＳ番号：１３１３８８１－７０－７、式Ｃ２７Ｈ２４Ｎ６、もしくは構造
（ａ）ＡＲＱ０９２、ミランセルチブ（Miransertib）、ＣＡＳ番号：１３１３８８１－７０－７、式Ｃ２７Ｈ２４Ｎ６、もしくは構造
【0064】
【化1】
（ｂ）ＡＲＱ７５１、もしくは構造
【0065】
【化2】
（ｃ）ＢＡＹ１１２５９７６、（ＣＡＳ番号１４０２６０８－０２－９）、式Ｃ２３Ｈ２１Ｎ５Ｏ、もしくは構造
【0066】
【化3】
（ｄ）ＭＫ－２２０６、（ＣＡＳ番号１０３２３５０－１３－２）、式Ｃ２５Ｈ２１Ｎ５Ｏ、もしくは構造
【0067】
【化4】
のうちのいずれか１つから選択することができる。
【0068】
したがって、競合的ＡＴＰ阻害剤は、
（ａ）アフレセルチブ（Afuresertib）（ＧＳＫ２１１０１８３）、（ＣＡＳ番号：１０４７６４５－８２－８）、式Ｃ１８Ｈ１７Ｃｌ２ＦＮ４ＯＳ・ＨＣｌ、もしくは構造
（ａ）アフレセルチブ（Afuresertib）（ＧＳＫ２１１０１８３）、（ＣＡＳ番号：１０４７６４５－８２－８）、式Ｃ１８Ｈ１７Ｃｌ２ＦＮ４ＯＳ・ＨＣｌ、もしくは構造
【0069】
【化5】
（ｂ）ウプロセルチブ（Uprosertib）、ＧＳＫ２１４１７９５、（ＣＡＳ番号：１０４７６３４－６５－０）、式Ｃ１８Ｈ１６Ｃｌ２Ｆ２Ｎ４Ｏ２、もしくは構造
【0070】
【化6】
（ｃ）ＧＳＫ６９０６９３、（ＣＡＳ番号：９３７１７４－７６－０）、式Ｃ２１Ｈ２７Ｎ７Ｏ３、もしくは構造
【0071】
【化7】
（ｄ）イパタセルチブ（ＧＤＣ－００６８）、（ＣＡＳ番号：１００１２６４－８９－６）、式Ｃ２４Ｈ３２ＣｌＮ５Ｏ２、もしくは構造
【0072】
【化8】
（ｅ）ＬＹ２７８０３０１、もしくは構造
【0073】
【化9】
（ｆ）トリシリビン（ＴＣＮ－ＰＭ；ＶＤ－０００２）、（ＣＡＳ番号：３５９４３－３５－２）、式Ｃ１３Ｈ１６Ｎ６Ｏ４、もしくは構造
【0074】
【化10】
（ｇ）ＡＺＤ５３６３、（ＣＡＳ１１４３５３２－３９－１）、式Ｃ２１Ｈ２５ＣｌＮ６Ｏ２、もしくは構造
【0075】
【化11】
（ｇ）ＣＣＴ１２８９３０、（ＣＡＳ８８５４９９－６１－６）、式Ｃ１８Ｈ２０ＣｌＮ５、もしくは構造
【0076】
【化12】
のうちのいずれか１つから選択することができる。
【0077】
したがって、ＡＫＴとリン脂質との間の相互作用の阻害剤は、ペリフォシン（Ｄ－２１２６６、ＫＲＸ０４０１）、（ＣＡＳ１５７７１６－５２－４）、式Ｃ２５Ｈ５２ＮＯ４Ｐ、または構造
【0078】
【化13】
【0079】
好ましくは、ＡＫＴ阻害剤は、ＭＫ－２２０６またはＧＳＫ６９０６９３である。
【0080】
本発明によれば、ＡＫＴ阻害剤は、ＡＫＴに関するＡＫＴ阻害剤の阻害のＩＣ５０、任意によりＡＫＴ１、ＡＫＴ２、もしくはＡＫＴ３の阻害のＩＣ５０よりも１０～１０００倍以上の濃度で、好ましくは、ＩＣ５０の１０、２５、２０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００倍のうちのいずれか以上の濃度で、添加することができる。好ましくは、ＡＫＴ阻害剤は、０．０１μＭ～１０μＭまたは２０μＭ～１００μＭの濃度で、好ましくは０．０１、０．０２５、０．０５、０．０７５、０．１、０．２５、０．５、０．７５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００μＭ、好ましくは０．５μＭ以上の濃度で、添加することができる。
【0081】
プロセスのＴ細胞
本発明によれば、ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生される活性化および改変および／もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、
（ｉ）ＡＫＴ阻害剤の非存在下で産生されるＴ細胞の集団、または活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞の集団（例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団）、あるいは
（ｉｉ）ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生されるＴ細胞の集団または活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞の集団であって、ＡＫＴ阻害剤が、改変もしくは形質導入前に、かつ／または活性化もしくは刺激の２４時間以下後に、例えば、活性化もしくは刺激の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間のうちのいずれか１つ以下後に添加される、集団と比較して、
（ａ）ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋の両方を発現するＴ細胞、
（ｂ）ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ－セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋およびＩＬ－７Ｒα＋であるＴ細胞、
（ｃ）ＴＳＣＭ細胞（幹メモリーＴ細胞）であるＴ細胞、
（ｄ）メモリー表現型、好ましくはＣＤ８メモリー表現型を有するＴ細胞
のうちのいずれか１つまたは複数の増加したまたは高い相対的割合を有し得る。
本発明によれば、ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生される活性化および改変および／もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、
（ｉ）ＡＫＴ阻害剤の非存在下で産生されるＴ細胞の集団、または活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞の集団（例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団）、あるいは
（ｉｉ）ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生されるＴ細胞の集団または活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞の集団であって、ＡＫＴ阻害剤が、改変もしくは形質導入前に、かつ／または活性化もしくは刺激の２４時間以下後に、例えば、活性化もしくは刺激の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間のうちのいずれか１つ以下後に添加される、集団と比較して、
（ａ）ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋の両方を発現するＴ細胞、
（ｂ）ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ－セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋およびＩＬ－７Ｒα＋であるＴ細胞、
（ｃ）ＴＳＣＭ細胞（幹メモリーＴ細胞）であるＴ細胞、
（ｄ）メモリー表現型、好ましくはＣＤ８メモリー表現型を有するＴ細胞
のうちのいずれか１つまたは複数の増加したまたは高い相対的割合を有し得る。
【0082】
本発明によれば、ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生される活性化および改変および／もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、好ましくは、
（ｉ）ＡＫＴ阻害剤の非存在下で産生されるＴ細胞の集団、または活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞の集団（例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団）、あるいは
（ｉｉ）ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生されるＴ細胞の集団または活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞の集団であって、ＡＫＴ阻害剤が、形質導入前に、かつ／または活性化もしくは刺激の２４時間以下後に、例えば、活性化もしくは刺激の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間のうちのいずれか１つ以下後に添加される、集団と比較して、
（ａ）ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性、
（ｂ）播種から回収までの拡大、
（ｃ）奏効の永続性、
（ｄ）抗原に誘導されるサイトカイン産生、任意によりインターフェロンγ産生
（ｅ）Ｔ細胞生存率または寿命または生存能パーセンテージ、
（ｆ）Ｔ細胞エフェクター機能、好ましくは細胞傷害性
のうちのいずれか１つまたは複数の改善されたレベルを有する。
（ｉ）ＡＫＴ阻害剤の非存在下で産生されるＴ細胞の集団、または活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞の集団（例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団）、あるいは
（ｉｉ）ＡＫＴ阻害剤の存在下で産生されるＴ細胞の集団または活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞の集団であって、ＡＫＴ阻害剤が、形質導入前に、かつ／または活性化もしくは刺激の２４時間以下後に、例えば、活性化もしくは刺激の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間のうちのいずれか１つ以下後に添加される、集団と比較して、
（ａ）ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性、
（ｂ）播種から回収までの拡大、
（ｃ）奏効の永続性、
（ｄ）抗原に誘導されるサイトカイン産生、任意によりインターフェロンγ産生
（ｅ）Ｔ細胞生存率または寿命または生存能パーセンテージ、
（ｆ）Ｔ細胞エフェクター機能、好ましくは細胞傷害性
のうちのいずれか１つまたは複数の改善されたレベルを有する。
【0083】
Ｔ細胞持続性
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、改善された持続性を示し、かつ、好ましくは機能的ＣＤ８＋集団内で、比較的最終分化していないＴ細胞の増加した割合、好ましくはＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋の両方を発現する、好ましくは二重陽性ＳＣＭ細胞の増加した割合を有する。好ましくは、Ｔ細胞は、改善された持続性およびメモリー形成、生存、および／またはｉｎ ｖｉｖｏでのおよび／もしくはｉｎ ｖｉｔｒｏで試験される場合の抗原刺激生存を有する。
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、改善された持続性を示し、かつ、好ましくは機能的ＣＤ８＋集団内で、比較的最終分化していないＴ細胞の増加した割合、好ましくはＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋の両方を発現する、好ましくは二重陽性ＳＣＭ細胞の増加した割合を有する。好ましくは、Ｔ細胞は、改善された持続性およびメモリー形成、生存、および／またはｉｎ ｖｉｖｏでのおよび／もしくはｉｎ ｖｉｔｒｏで試験される場合の抗原刺激生存を有する。
【0084】
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、任意により参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して改善されている、一定期間にわたってｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏで実証される改善された持続性を示す。
【0085】
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、異種ＴＣＲもしくはＣＡＲを発現し、かつ／またはＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７の両方を発現するＴ細胞またはＴ細胞の割合を特定するためのフローサイトメトリーにより、任意により参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、定量化され、かつ／または遺伝子改変Ｔ細胞を特定するためのｑＰＣＲにより決定される通り、ｉｎ ｖｉｖｏ拡大の増大したレベルおよび／または二重陽性ＳＣＭ細胞の増加した割合の測定により決定される場合に、改善された持続性を示す。
【0086】
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、異種ＴＣＲもしくはＣＡＲのｑＰＣＲによるコピー／μｇの尺度としての改善されたピーク拡大またはその中央値により、あるいは、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のサンプルにおける、異種ＴＣＲまたはＣＡＲに対して陽性であるＣＤ３＋細胞のピークパーセンテージ、またはその中央値の測定により決定される場合に、改善された持続性を示す。好ましくは、これらの値は、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、少なくとも１０％、代替的には２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％以上まで改善される。拡大の程度および持続性の持続期間は、腫瘍原性応答に相関する。
【0087】
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、任意により参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、サイトカインアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡにより定量化されるかまたは本明細書中に記載される通りの、サイトカイン産生の、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏでのインターフェロンγ産生の改善されたレベルにより決定される場合に、改善された持続性を示す。
【0088】
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、本明細書中に提示されるアッセイにより決定される通りに、任意により参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して改善された、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／もしくはｉｎ ｖｉｖｏでの機能的消耗を比較的被らずかつ／またはその低減を実証し、したがって、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／もしくはｉｎ ｖｉｖｏにおいてより長期の生存期間を伴って持続することおよびより長期間持続しかつより永続的な免疫応答を提供することが比較的可能であることにより決定される場合に、改善された持続性を示す。好ましくは、Ｔ細胞機能は、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞からのγ－インターフェロンの増大した分泌、例えば細胞計数に従って増大したＴ細胞増殖、例えば細胞シグナル伝達アッセイに従って増大した内部シグナル伝達、増大した抗原応答性、サイトカインおよび／またはインターフェロンの増大した分泌、増大した標的細胞殺傷、増大したＴ細胞活性化、増大したＣＤ２８シグナル伝達、腫瘍に浸潤するＴ細胞の増大した能力、樹状細胞提示抗原を認識しかつそれに結合する増大した能力により判断される場合に、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、少なくとも１０％、代替的には２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％以上まで強化される。
【0089】
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、任意により参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して決定される、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏでの、腫瘍浸潤、腫瘍結合性、腫瘍収縮および／または腫瘍クリアランスのアッセイまたはその程度の決定により測定される通り、改善された抗腫瘍活性の効力、およびしたがって、改善された腫瘍免疫の低減または免疫認識の回避を有することにより決定される場合に、改善された持続性を示す。好ましくは、抗腫瘍活性の効力は、例えば、腫瘍結合性アッセイ、腫瘍収縮および／または腫瘍クリアランスにより測定される場合に、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、少なくとも１０％、代替的には２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％以上まで強化または改善される。
【0090】
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、サイトカインおよび／もしくはインターフェロンの増大した分泌、増大したＴ細胞増殖、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイによる、増大した抗原応答性、標的細胞殺傷、Ｔ細胞活性化、ＣＤ２８シグナル伝達、腫瘍に浸潤するＴ細胞の能力、樹状細胞提示抗原を認識しかつこれに結合する能力により判断される場合に、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、例えば、少なくとも５％または１０％、代替的には２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％以上まで強化された、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏでの、腫瘍または腫瘍抗原に応答して免疫応答を引き起こす能力により測定される通り、改善または強化された腫瘍免疫原性により決定される場合に、改善された持続性を示す。
【0091】
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、好ましくは参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、ｉｎ ｖｉｖｏでの注入後、またはｉｎ ｖｉｔｒｏでの培養の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６日間、および／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９カ月間のうちのいずれか１つまたは複数の時期、期間または時間経過にわたって、改善された持続性を示す。好ましくは、細胞は、比較される時間経過にわたって、消耗を伴わずに、機能的活性の改善されたレベルを示す。好ましくは、改善された持続性は、ｉｎ ｖｉｖｏでの注入後、８～１４日間にわたって決定される。
【0092】
Ｔ細胞拡大
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、播種および回収の時点の間でプロセスまたは培養中に測定される場合に、改善および／または増大したＴ細胞拡大のレベルを示す。好ましくは、ＡＫＴ阻害剤の非存在下で産生されるＴ細胞の集団または活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞の集団（例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団）と比較して、例えば、Ｔ細胞活性化後に、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、増大したレベルのＴ細胞拡大、分裂または増殖が見られる。例えば、拡大、分裂もしくは増殖のアッセイまたは決定は、本発明のプロセスもしくは培養プロセスもしくはプロセス中に、またはそれに由来するサンプル中で測定される、細胞生存能および濃度ならびに増殖および拡大の速度の測定を提供する自動化細胞計数機を用いて行うことができる。好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、等価なサンプルまたは本発明のプロセスもしくは培養プロセスもしくはプロセス中に取得されるサンプルの時点から測定されるか、またはそれに由来するサンプル中で測定される場合に、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、拡大、分裂または増殖に関して改善された能力を示し、改善は、Ｔ細胞活性化を含むアッセイにおいて決定することができる。活性化は、本明細書中に上記で記載される通りに、サイトカイン、インターロイキン、抗体、ペプチドまたは抗原性ペプチドの存在下で開始することができ、例えば、活性化は、癌もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド、異種ＴＣＲにより認識される癌もしくは腫瘍抗原のペプチド断片、または細胞もしくは組織、例えば、ペプチドもしくは抗原性ペプチド、またはペプチド断片を提示する腫瘍もしくは癌細胞または組織の使用を介することができる。好ましくは、参照と比較した改善または同等な改善は、本明細書中で上記に記載される通り、期間または時間経過にわたって実証される。
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、播種および回収の時点の間でプロセスまたは培養中に測定される場合に、改善および／または増大したＴ細胞拡大のレベルを示す。好ましくは、ＡＫＴ阻害剤の非存在下で産生されるＴ細胞の集団または活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞の集団（例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団）と比較して、例えば、Ｔ細胞活性化後に、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、増大したレベルのＴ細胞拡大、分裂または増殖が見られる。例えば、拡大、分裂もしくは増殖のアッセイまたは決定は、本発明のプロセスもしくは培養プロセスもしくはプロセス中に、またはそれに由来するサンプル中で測定される、細胞生存能および濃度ならびに増殖および拡大の速度の測定を提供する自動化細胞計数機を用いて行うことができる。好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、等価なサンプルまたは本発明のプロセスもしくは培養プロセスもしくはプロセス中に取得されるサンプルの時点から測定されるか、またはそれに由来するサンプル中で測定される場合に、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、拡大、分裂または増殖に関して改善された能力を示し、改善は、Ｔ細胞活性化を含むアッセイにおいて決定することができる。活性化は、本明細書中に上記で記載される通りに、サイトカイン、インターロイキン、抗体、ペプチドまたは抗原性ペプチドの存在下で開始することができ、例えば、活性化は、癌もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド、異種ＴＣＲにより認識される癌もしくは腫瘍抗原のペプチド断片、または細胞もしくは組織、例えば、ペプチドもしくは抗原性ペプチド、またはペプチド断片を提示する腫瘍もしくは癌細胞または組織の使用を介することができる。好ましくは、参照と比較した改善または同等な改善は、本明細書中で上記に記載される通り、期間または時間経過にわたって実証される。
【0093】
Ｔ細胞永続性
したがって、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、ｉｎ ｖｉｖｏでの改善された永続的奏効および／または永続的奏効率を示す。好ましくは、Ｔ細胞またはＴ細胞の集団は、注入もしくは治療もしくは介入前のそのようなレベルと比較して、または参照Ｔ細胞もしくはＴ細胞の集団を用いる注入もしくは治療と比較して、好ましくは、少なくとも１０％、代替的には２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％以上まで強化された、例えば、腫瘍サイズまたは腫瘍数の測定により決定される場合の、腫瘍生育もしくは腫瘍生育速度を低減するかまたは治療の停止後／ｉｎ ｖｉｖｏでの注入後に腫瘍サイズを維持する、改善された持続的奏効を提供する。好ましくは、参照と比較した改善または同等の改善は、本明細書中で上記に記載される通り、期間または時間経過にわたって実証される。
したがって、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、ｉｎ ｖｉｖｏでの改善された永続的奏効および／または永続的奏効率を示す。好ましくは、Ｔ細胞またはＴ細胞の集団は、注入もしくは治療もしくは介入前のそのようなレベルと比較して、または参照Ｔ細胞もしくはＴ細胞の集団を用いる注入もしくは治療と比較して、好ましくは、少なくとも１０％、代替的には２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％以上まで強化された、例えば、腫瘍サイズまたは腫瘍数の測定により決定される場合の、腫瘍生育もしくは腫瘍生育速度を低減するかまたは治療の停止後／ｉｎ ｖｉｖｏでの注入後に腫瘍サイズを維持する、改善された持続的奏効を提供する。好ましくは、参照と比較した改善または同等の改善は、本明細書中で上記に記載される通り、期間または時間経過にわたって実証される。
【0094】
Ｔ細胞サイトカイン産生
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、癌もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド、あるいは癌細胞もしくは組織の腫瘍の、またはそれにより提示され；かつ異種ＴＣＲまたはＣＡＲにより認識される、癌もしくは腫瘍抗原のペプチド、抗原性ペプチド、ペプチド断片に応答した、例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、改善および／または増大したレベルのサイトカイン産生を示す。サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、ＭＩＰ－１β（ＣＣＬ４）、ＩＬ－１７、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－１２、またはＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）；好ましくはＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、またはＭＩＰ１β；好ましくは、ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＭＩＰ１βであり得る。加えてまたは代替的に、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、癌もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド、あるいは癌細胞もしくは組織の腫瘍の、またはそれにより提示され；かつ異種ＴＣＲまたはＣＡＲにより認識される癌もしくは腫瘍抗原のペプチド、抗原性ペプチド、ペプチド断片に応答した、樹状細胞における増大したレベルのサイトカイン産生の誘導を示すことができる。サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、ＭＩＰ－１β（ＣＣＬ４）、ＩＬ－１７、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－１２、またはＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）；好ましくはＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、またはＭＩＧ；あるいはＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、およびＭＩＧであり得る。サイトカイン産生の決定のための好適なアッセイは、当技術分野で公知である。好ましくは、参照と比較した改善または同等な改善は、本明細書中で上記に記載される通り、期間または時間経過にわたって実証される。
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、癌もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド、あるいは癌細胞もしくは組織の腫瘍の、またはそれにより提示され；かつ異種ＴＣＲまたはＣＡＲにより認識される、癌もしくは腫瘍抗原のペプチド、抗原性ペプチド、ペプチド断片に応答した、例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、改善および／または増大したレベルのサイトカイン産生を示す。サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、ＭＩＰ－１β（ＣＣＬ４）、ＩＬ－１７、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－１２、またはＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）；好ましくはＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、またはＭＩＰ１β；好ましくは、ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＭＩＰ１βであり得る。加えてまたは代替的に、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、癌もしくは腫瘍抗原またはそのペプチド、あるいは癌細胞もしくは組織の腫瘍の、またはそれにより提示され；かつ異種ＴＣＲまたはＣＡＲにより認識される癌もしくは腫瘍抗原のペプチド、抗原性ペプチド、ペプチド断片に応答した、樹状細胞における増大したレベルのサイトカイン産生の誘導を示すことができる。サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、ＭＩＰ－１β（ＣＣＬ４）、ＩＬ－１７、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－１２、またはＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）；好ましくはＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、またはＭＩＧ；あるいはＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、およびＭＩＧであり得る。サイトカイン産生の決定のための好適なアッセイは、当技術分野で公知である。好ましくは、参照と比較した改善または同等な改善は、本明細書中で上記に記載される通り、期間または時間経過にわたって実証される。
【0095】
Ｔ細胞生存率、寿命、生存能
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、改善および／もしくは増大した生存率または寿命または生存能パーセンテージを示す。好ましくは、参照と比較した改善または同等な改善は、本明細書中で上記に記載される通り、期間または時間経過にわたって実証される。好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、色素に基づく増殖アッセイまたは３Ｈ－チミジン取り込み増殖アッセイを用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏサンプルにおいて、抗原性刺激、例えば、異種ＴＣＲまたはＣＡＲに対して特異的な抗原に応答したＴ細胞増殖のレベルを測定することにより決定される場合に、改善されたＴ細胞生存能を示す。加えてまたは代替的に、Ｔ細胞生存能は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または酵素結合免疫スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）を用いて、抗原応答性Ｔ細胞のサイトカイン産生に関して、Ｔ細胞の抗原特異的応答のレベルを測定することにより決定することができる。これは、物理的細胞生育に関する呈色アッセイおよび生存能のあるＴ細胞数に関連するマーカー活性の測定と組み合わせることができる。好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、異種ＴＣＲもしくはＣＡＲを発現しかつ／またはＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７の両方を発現するＴ細胞またはＴ細胞の割合を特定するためのフローサイトメトリーにより定量化され、かつ／または遺伝子改変Ｔ細胞を特定するためのｑＰＣＲにより決定される通り、増大した生存率または寿命の測定により決定される場合、改善された持続性を示す。
好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、改善および／もしくは増大した生存率または寿命または生存能パーセンテージを示す。好ましくは、参照と比較した改善または同等な改善は、本明細書中で上記に記載される通り、期間または時間経過にわたって実証される。好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、色素に基づく増殖アッセイまたは３Ｈ－チミジン取り込み増殖アッセイを用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏサンプルにおいて、抗原性刺激、例えば、異種ＴＣＲまたはＣＡＲに対して特異的な抗原に応答したＴ細胞増殖のレベルを測定することにより決定される場合に、改善されたＴ細胞生存能を示す。加えてまたは代替的に、Ｔ細胞生存能は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または酵素結合免疫スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）を用いて、抗原応答性Ｔ細胞のサイトカイン産生に関して、Ｔ細胞の抗原特異的応答のレベルを測定することにより決定することができる。これは、物理的細胞生育に関する呈色アッセイおよび生存能のあるＴ細胞数に関連するマーカー活性の測定と組み合わせることができる。好ましくは、活性化および改変もしくは形質導入されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、異種ＴＣＲもしくはＣＡＲを発現しかつ／またはＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７の両方を発現するＴ細胞またはＴ細胞の割合を特定するためのフローサイトメトリーにより定量化され、かつ／または遺伝子改変Ｔ細胞を特定するためのｑＰＣＲにより決定される通り、増大した生存率または寿命の測定により決定される場合、改善された持続性を示す。
【0096】
Ｔ細胞エフェクター機能
本発明に従うＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、改善された抗原応答またはクラスＩ抗原応答を示すことができる。好ましくは、参照と比較した改善または同等な改善は、本明細書中で上記に記載される通り、期間または時間経過にわたって実証される。本発明に従うＴ細胞またはＴ細胞の集団は、任意により、癌もしくは腫瘍抗原またはペプチドあるいは癌もしくは腫瘍抗原の、または癌細胞もしくは組織の腫瘍により提示され、かつＴ細胞または異種ＴＣＲもしくはＣＡＲにより認識または結合される癌ペプチド、抗原性ペプチド、ペプチド断片に応答した、改善または増大したＣＤ４０Ｌの発現、抗原提示細胞に対する親和性、および／または、サイトカイン産生、例えばＴ細胞認識抗原、腫瘍もしくは癌抗原を発現する細胞の細胞殺傷アッセイにより決定される通りの細胞傷害活性、樹状細胞成熟の誘導または樹状細胞サイトカイン産生の誘導を示すことができる。
本発明に従うＴ細胞またはＴ細胞の集団は、例えば、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、改善された抗原応答またはクラスＩ抗原応答を示すことができる。好ましくは、参照と比較した改善または同等な改善は、本明細書中で上記に記載される通り、期間または時間経過にわたって実証される。本発明に従うＴ細胞またはＴ細胞の集団は、任意により、癌もしくは腫瘍抗原またはペプチドあるいは癌もしくは腫瘍抗原の、または癌細胞もしくは組織の腫瘍により提示され、かつＴ細胞または異種ＴＣＲもしくはＣＡＲにより認識または結合される癌ペプチド、抗原性ペプチド、ペプチド断片に応答した、改善または増大したＣＤ４０Ｌの発現、抗原提示細胞に対する親和性、および／または、サイトカイン産生、例えばＴ細胞認識抗原、腫瘍もしくは癌抗原を発現する細胞の細胞殺傷アッセイにより決定される通りの細胞傷害活性、樹状細胞成熟の誘導または樹状細胞サイトカイン産生の誘導を示すことができる。
【0097】
組成物および療法
本発明は、本発明の方法に従って産生されるＴ細胞またはＴ細胞の集団を提供する。
本発明は、本発明の方法に従って産生されるＴ細胞またはＴ細胞の集団を提供する。
【0098】
本発明はさらに、本発明の方法に従って産生されるＴ細胞またはＴ細胞の集団、および生理的に許容される賦形剤を含む組成物を提供する。
【0099】
本発明に従うＴ細胞または改変されたＴ細胞の集団は、緩衝剤、担体、希釈剤、保存料および／または薬学的に許容される賦形剤などの他の試薬と混合することができる。投与（例えば、注入による）のために好適な医薬組成物としては、抗酸化剤、緩衝剤、保存料、安定化剤、静菌剤、および意図されるレシピエントの血液に対して製剤を等張にする溶質を含み得る、水性および非水性等張性パイロジェン不含滅菌注射溶液；ならびに懸濁剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁物が挙げられる。そのような製剤中での使用のための好適な等張性ビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注、リンゲル液、または乳酸加リンゲル注が挙げられる。好適なビヒクルは、標準的な製剤学の教科書、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990に見出すことができる。一部の好ましい実施形態では、本発明に従う改変されたＴ細胞、またはＴ細胞の集団は、個体への静脈内注入のために好適な医薬組成物へと製剤化することができる。
【0100】
用語「薬学的に許容される」は、本明細書中で用いる場合、合理的な損益比に見合う、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を伴わない、被験体（例えば、ヒト）の組織との接触する使用のために好適な、正当な医学的判断の範囲内である、化合物、材料、組成物、および／または剤形に関連する。各担体、賦形剤などはまた、製剤の他の成分と適合するという意味で、「許容可能」でなければならない。
【0101】
本発明は、養子療法における使用のための、本発明の方法に従って産生されるＴ細胞もしくはＴ細胞の集団またはその組成物を提供する。したがって、改変されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、静脈内的に、筋内的に、皮下的に、局所的に、経口的に、経皮的に、腹腔内的に、眼窩内的に、移植により、吸入により、髄腔内的に、脳室内的に、または鼻内的にまたは静脈内注入により、投与することができる。好ましくは、改変された免疫応答性細胞は、静脈内的に、または静脈内注入により投与することができる。したがって、改変されたＴ細胞またはＴ細胞の集団は、単回用量としてまたは２回以上の用量（複数用量）として投与することができ、かつ約５億個～約１０億個の細胞、約２０億個の細胞、約３０億個の細胞、約４０億個の細胞、約５０億個の細胞、約６０億個の細胞、約７０億個の細胞、約８０億個の細胞、約９０億個の細胞、約１００億個の細胞、約１１０億個の細胞、約１２０億個の細胞、約１３０億個の細胞、約１４０億個の細胞、約１５０億個の細胞、約１６０億個の細胞、約１７０億個の細胞、約１８０億個の細胞、約１９０億個の細胞、約２００億個の細胞、または約２１０億個の細胞のうちのいずれか１つの用量で投与することができる。
【0102】
本発明は、腫瘍および／または癌の治療における使用のための、本発明の方法に従って産生されるＴ細胞もしくはＴ細胞の集団またはその組成物を提供する。腫瘍および／または癌は、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、転移性または進行型ＮＳＣＬＣ、扁平上皮ＮＳＣＬＣ、腺癌ＮＳＣＬＣ、腺扁平上皮ＮＳＣＬＣ、大細胞ＮＳＣＬＣ、卵巣癌、胃癌、尿路上皮癌、食道癌、食道胃接合部癌（ＥＧＪ）、黒色腫、膀胱癌、頭頚部癌、頭頚部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）、口腔癌、中咽頭癌、下咽頭癌、咽喉癌、喉頭癌、扁桃腺癌、舌癌、軟口蓋癌、咽頭癌、滑膜肉腫、粘液円形細胞脂肪肉腫（ＭＲＣＬＳ）から選択することができる。本発明によれば、癌は、乳癌、転移性乳癌、肝臓癌、腎細胞癌、滑膜肉腫、尿路上皮癌または腫瘍、膵臓癌、結腸直腸癌、転移性胃癌（metastatic stomach cancer）、転移性胃癌（metastatic gastric cancer）、転移性肝臓癌、転移性卵巣癌、転移性膵臓癌、転移性結腸直腸癌、転移性肺癌、結腸直腸癌または腺癌、肺癌または腺癌、膵臓癌または腺癌、粘液腺腫、膵管癌、血液悪性腫瘍のうちのいずれか１種から選択することができる。任意により、癌および／または腫瘍は、ＭＡＧＥ－Ａ４もしくはＡＦＰあるいはＭＡＧＥ－Ａ４の、かつ／またはアミノ酸配列ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、配列番号１（ＭＡＧＥ－Ａ４）を含む抗原ペプチドもしくはペプチド抗原あるいはα－フェトプロテイン（ＡＦＰ）の、かつ／または配列ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号２）もしくはα－フェトプロテイン（ＡＦＰ）（配列番号３）由来の残基１５８～１６６を含む抗原ペプチドもしくはペプチド抗原を発現することができる。
【0103】
治療
好ましくは、治療は、本明細書中で上記に記載される通り、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団を含む治療と比較して、
（ａ）無増悪生存期間、
（ｂ）無増悪期間、
（ｃ）奏効持続期間、
（ｄ）全生存率、
（ｅ）客観的奏効または客観的奏効率、
（ｆ）全奏効または全奏効率、
（ｇ）部分奏効または部分奏効率、
（ｈ）完全奏効または完全奏効率；
（ｉ）疾患安定率または疾患安定中央値
（ｊ）無増悪生存期間中央値、
（ｋ）無増悪期間中央値、
（ｌ）奏効持続期間中央値、または
（ｍ）全生存率中央値；
（ｎ）客観的奏効中央値または客観的奏効率中央値、
（о）全奏効中央値または全奏効率中央値、
（ｐ）部分奏効中央値または部分奏効率中央値、
（ｑ）完全奏効中央値または完全奏効中央値、
（ｒ）疾患安定率中央値または疾患安定中央値
を延長もしくは改善または効果的に延長もしくは効果的に改善する。
好ましくは、治療は、本明細書中で上記に記載される通り、参照Ｔ細胞またはＴ細胞の集団を含む治療と比較して、
（ａ）無増悪生存期間、
（ｂ）無増悪期間、
（ｃ）奏効持続期間、
（ｄ）全生存率、
（ｅ）客観的奏効または客観的奏効率、
（ｆ）全奏効または全奏効率、
（ｇ）部分奏効または部分奏効率、
（ｈ）完全奏効または完全奏効率；
（ｉ）疾患安定率または疾患安定中央値
（ｊ）無増悪生存期間中央値、
（ｋ）無増悪期間中央値、
（ｌ）奏効持続期間中央値、または
（ｍ）全生存率中央値；
（ｎ）客観的奏効中央値または客観的奏効率中央値、
（о）全奏効中央値または全奏効率中央値、
（ｐ）部分奏効中央値または部分奏効率中央値、
（ｑ）完全奏効中央値または完全奏効中央値、
（ｒ）疾患安定率中央値または疾患安定中央値
を延長もしくは改善または効果的に延長もしくは効果的に改善する。
【0104】
「全生存率」とは、規定された期間にわたって生存したままである被験体を意味する。
【0105】
「客観的奏効率」（ＯｂＲＲ）は、任意により標的病変または腫瘍の最長径（ＳＬＤ）の合計により決定され、かつ最小期間にわたる、予め規定された量の腫瘍サイズ減少を有する被験体の割合である。「全奏効率」（ＯＲＲ）は、療法に対する部分奏効または完全奏効を有する被験体の割合として定義され；安定疾患は含まない。ＯＲＲは、一般的に、特定された期間にわたる完全奏効（ＣＲ）および部分奏効（ＰＲ）の合計として定義される。「無増悪生存期間」（ＰＦＳ）とは、治療（または無作為化）から最初の疾患進行または死亡までの時間を意味する。「無増悪期間」（ＴＴＰ）は、治療対象の癌または腫瘍以外の原因により死亡する患者をカウントしないが、それ以外はＰＦＳと等価である。「奏効持続期間」（ＤｏＲ）は、癌、腫瘍または病変が、生長または播種を伴わずに治療に対して応答し続ける時間の長さである。本発明によれば、ＤｏＲ、ＴＴＰおよびＰＦＳは、固形腫瘍における奏効評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）により評価することができるか、または進行の決定因子としてのＣＡ－１２５レベルにより評価することができる。
【0106】
本発明によれば、「完全奏効」（ＣＲ）は、すべての標的病変または腫瘍が、消失していると評価または測定されている場合に決定される。「部分奏効」（ＰＲ）は、例えば、対照または治療前比較物を参照した場合に、標的病変または腫瘍の最長径（ＳＬＤ）の合計における少なくとも３０％の減少の測定が見られる場合に決定される。「疾患進行」（ＰＤ）は、治療開始または１箇所もしくは複数の新たな病変の存在以後での、例えば、対照または治療前比較物を参照した場合に、標的病変または腫瘍の最長径（ＳＬＤ）の合計における少なくとも２０％の増加の測定が見られる場合に決定される。「疾患安定」（ＳＤ）は、治療開始以後の最小ＳＬＤを参照として用いて、ＰＲに該当するための標的病変または腫瘍の最長径（ＳＬＤ）の合計における十分な低減または減少が見られず、かつＰＤに該当するための十分な増加も見られないと決定される場合に決定される。
【0107】
本発明によれば、
（ａ）本発明の方法に従って産生される有効量のＴ細胞またはＴ細胞の集団、ならびに被験体において癌および／または腫瘍を治療するかまたはその進行を遅延させるためにＴ細胞を用いるための説明書を含む添付文書を含むキット
が提供される。
（ａ）本発明の方法に従って産生される有効量のＴ細胞またはＴ細胞の集団、ならびに被験体において癌および／または腫瘍を治療するかまたはその進行を遅延させるためにＴ細胞を用いるための説明書を含む添付文書を含むキット
が提供される。
【0108】
本発明が、以下の図面および実施例を参照することによりさらに説明される。
【図面の簡単な説明】
【0109】
【図1】ＡＫＴｉの添加のための時点を示す図である。ＭＫ－２２０６がＴ細胞拡大培養に添加された時点を示す模式図、０日目＋２日目添加と２日目のみでの培養間で比較を行った。０日目添加は、ビーズ添加、Ｔ細胞活性化後であるが、形質導入／拡大前に行われる。２日目添加は、形質導入後であるが拡大前に行われる。Ｇ－Ｒｅｘ補充において用いた培地への添加は、プロセスを中断させない。
【図2】健康ドナー材料（ＨＤＭ）に関するＭＫ－２２０６に対する応答におけるＴ細胞総有核細胞（ＴＮＣ）数を示す図である。ＨＤＭを、１０日間にわたって１０Ｍ Ｇ－Ｒｅｘ中で拡大させた。３つの異なる時点で添加された様々な濃度のＭＫ－２２０６を用いて培養物を処理した；０日目（＋Ｄ２）、２日目。総有核細胞（ＴＮＣ）数を、自動細胞計数機ＶｉＣＥＬＬ上で回収後１０日目に取得した。
【図3】ＭＫ－２２０６化合物添加後の１０日目の回収での複数の健康ドナー拡大を示す図である。６種類の健康ドナー材料を、記載されるプロセスに従って、１０Ｍ Ｇ－Ｒｅｘ中で１０日間にわたって拡大させた。１０μＭから０．０５μＭまで漸減する濃度でＭＫ－２２０６を用いて培養物を処理した。グラフＡは、０日目に添加された化合物（＋２日目培地添加）を詳細に示し、グラフＢは２日目のみに添加された化合物を詳細に示す。回収された細胞を、ＶｉＣＥＬＬを用いて計数した。結果を、未処理対照に対する拡大における変化倍率として表示した。反復培養が拡大された場合、２回の反復の平均±ＳＥＭをデータ点に対して示した。
【図4】形質導入されたＣＤ８＋区画における健康ドナーメモリー表現型分布を示す図である。健康ドナー材料を、記載されるプロセスに従って、１０Ｍ Ｇ－Ｒｅｘ中で１０日間にわたって拡大させた。Ｘ軸上に示される複数の濃度（μＭ）でＡＫＴｉ ＭＫ－２２０６を用いて培養物を処理した。化合物は、０日目＋２日目または２日目のみに添加した。回収された細胞を、メモリー表現型マーカー（ＣＣＲ７＋／－、ＣＤ４５ＲＡ＋／－）に関してＣＤ３＋／デキストラマー＋／ＣＤ８＋区画をゲーティングするフローサイトメトリーにより分析した。
【図5】ＭＫ－２２０６の存在下で拡大されたＴ細胞による抗原刺激されたＩＦＮγ分泌を示す図である。拡大されたＴ細胞を凍結から解凍し、２時間休ませ、続いて、抗原陽性細胞株（Ａ３７５、前日に播種）と４８時間共培養した。刺激されたＴ細胞培養物からの上清を、ＩＦＮγＥＬＩＳＡを用いてサイトカイン放出に関して分析した。各データ点は、３回の反復の平均±ＳＥＭを示す。ＭＫ－２２０６は、０日目＋２日目、２日目に添加した。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【0110】
[実施例１]
１．１．目的
以下の研究の目的は、Ｔ細胞拡大に対する不利益を伴わずに改善されたＴ細胞機能をもたらすことができ、それにより、産生されるＴ細胞集団が、養子療法および癌の治療において改善された機能的有効性を有するであろう、培養中のＴ細胞を産生する新規プロセスを調べることであった。特に、最終集団においてＴ細胞拡大、Ｔ細胞生存能、形質導入、ＣＤ８頻度に対して最小限の負の影響を有するかまたは負の影響を有さず、かつ抗原特異的活性化に応答した改善されたサイトカイン分泌をも有する、機能的ＣＤ８＋区画内の比較的分化していないＴ細胞集団の割合を増大させることが、プロセスに対して特に望ましかった。そのような細胞集団は、抗原に応答したエフェクター機能により判断される場合に改善された抗腫瘍活性（細胞傷害性細胞殺傷活性およびサイトカイン産生）を有し、かつ抗原刺激生存に応答した延長した生存により判断される場合に改善された持続性を示し、加えて、Ｔ細胞は、改善された持続性およびメモリー形成、生存、および抗原刺激生存を有するであろうことが予期された。プロセスは、ＡＫＴ阻害剤の使用を組み込み、解糖経路の上流で作用するタンパク質キナーゼＢ（ＡＫＴ）の小分子阻害剤であるＭＫ－２２０６がここで例示される。改善されたＴ細胞拡大は、ＭＫ－２２０６が０日目でのＴ細胞の活性化および１日目での形質導入後２日目に添加された場合に達成され、分析は、以下に説明される通り、得られるＴ細胞集団の改善された機能性を示した。
１．１．目的
以下の研究の目的は、Ｔ細胞拡大に対する不利益を伴わずに改善されたＴ細胞機能をもたらすことができ、それにより、産生されるＴ細胞集団が、養子療法および癌の治療において改善された機能的有効性を有するであろう、培養中のＴ細胞を産生する新規プロセスを調べることであった。特に、最終集団においてＴ細胞拡大、Ｔ細胞生存能、形質導入、ＣＤ８頻度に対して最小限の負の影響を有するかまたは負の影響を有さず、かつ抗原特異的活性化に応答した改善されたサイトカイン分泌をも有する、機能的ＣＤ８＋区画内の比較的分化していないＴ細胞集団の割合を増大させることが、プロセスに対して特に望ましかった。そのような細胞集団は、抗原に応答したエフェクター機能により判断される場合に改善された抗腫瘍活性（細胞傷害性細胞殺傷活性およびサイトカイン産生）を有し、かつ抗原刺激生存に応答した延長した生存により判断される場合に改善された持続性を示し、加えて、Ｔ細胞は、改善された持続性およびメモリー形成、生存、および抗原刺激生存を有するであろうことが予期された。プロセスは、ＡＫＴ阻害剤の使用を組み込み、解糖経路の上流で作用するタンパク質キナーゼＢ（ＡＫＴ）の小分子阻害剤であるＭＫ－２２０６がここで例示される。改善されたＴ細胞拡大は、ＭＫ－２２０６が０日目でのＴ細胞の活性化および１日目での形質導入後２日目に添加された場合に達成され、分析は、以下に説明される通り、得られるＴ細胞集団の改善された機能性を示した。
【0111】
１．２．Ｔ細胞単離拡大および培養
すべての細胞を、静止拡大システム（拡張可能Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標））を用いて、拡大および形質導入した。健康ドナーまたは癌患者由来の凍結保存された白血球除去出発材料を解凍し、洗浄し、ＣＤ３／ＣＤ２８磁性Ｄｙｎａｂｅａｄｓを用いて活性化し、ＣＤ３＋陽性画分を、磁気的に分離した。出発白血球除去材料は、健康ドナー間で似通っていた。ＣＤ３＋細胞は４４～６４％の範囲であり、全部が、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓを用いる正の単離後に７９～８７％の増加した純度を有した。ＣＤ３＋表現型決定は、個体間でＣＤ８＋区画において１１．６～５７％の範囲である一定範囲の幹細胞メモリー（ＳＣＭ）マーカー（ＣＣＲ７＋／ＣＤ４５ＲＡ＋）を特定した。富化されたＣＤ３＋Ｔ細胞を、１００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２を添加したＴｅｘＭＡＣＳ＋５％ヒトＡＢ血清（ＨＡＢＳ）を用いて１０％の最終培養体積において、Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）静止細胞拡大システムデバイス中で１．５×１０６ＴＮＣ／ｃｍ２密度で総有核細胞（ＴＮＣ）数に基づいて播種した。異種ＴＣＲ（ＭＡＧＥ－Ａ４を認識する）を発現するベクターを用いる形質導入を、ＭＯＩ０．４５でレンチウイルス（ＬＶ）ベクターを用いて、細胞へのＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓの添加の１８～２６時間後に行った。続いて、最終培養体積へと満杯まで培地を添加し、これを、ＴｅｘＭＡＣＳ＋５％ＨＡＢＳ＋５００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２を用いる形質導入の１７～２４時間後に行った。続いて、細胞を、３７℃、５％ＣＯ２においてさらに８日間インキュベートした。ＭＫ－２２０６を、所定の間隔で培地に添加した；０日目に播種培地および２日目培地添加のために用いた培地での補充、または２日目培地添加のための培地での補充のみ。化合物の濃度は各実験に対して異なり、以下の実施例において示される通り、１０μＭ、７．５μＭ、５μＭ、２．５μＭ、２μＭ、１．５μＭ、１μＭ、０．５μＭ、０．２５μＭ、０．１μＭ、０．０５μＭであった。播種から１０日間後にＴ細胞を回収した。ビーズを取り出した後、Ｔ細胞を、自動化細胞分析（ＶｉＣＥＬＬを用いる）により計数した。続いて、回収された細胞を、記載される通りのその後の表現型決定および機能的分析のために凍結した。プロセスの概要を、図１に示す。
すべての細胞を、静止拡大システム（拡張可能Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標））を用いて、拡大および形質導入した。健康ドナーまたは癌患者由来の凍結保存された白血球除去出発材料を解凍し、洗浄し、ＣＤ３／ＣＤ２８磁性Ｄｙｎａｂｅａｄｓを用いて活性化し、ＣＤ３＋陽性画分を、磁気的に分離した。出発白血球除去材料は、健康ドナー間で似通っていた。ＣＤ３＋細胞は４４～６４％の範囲であり、全部が、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓを用いる正の単離後に７９～８７％の増加した純度を有した。ＣＤ３＋表現型決定は、個体間でＣＤ８＋区画において１１．６～５７％の範囲である一定範囲の幹細胞メモリー（ＳＣＭ）マーカー（ＣＣＲ７＋／ＣＤ４５ＲＡ＋）を特定した。富化されたＣＤ３＋Ｔ細胞を、１００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２を添加したＴｅｘＭＡＣＳ＋５％ヒトＡＢ血清（ＨＡＢＳ）を用いて１０％の最終培養体積において、Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）静止細胞拡大システムデバイス中で１．５×１０６ＴＮＣ／ｃｍ２密度で総有核細胞（ＴＮＣ）数に基づいて播種した。異種ＴＣＲ（ＭＡＧＥ－Ａ４を認識する）を発現するベクターを用いる形質導入を、ＭＯＩ０．４５でレンチウイルス（ＬＶ）ベクターを用いて、細胞へのＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓの添加の１８～２６時間後に行った。続いて、最終培養体積へと満杯まで培地を添加し、これを、ＴｅｘＭＡＣＳ＋５％ＨＡＢＳ＋５００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２を用いる形質導入の１７～２４時間後に行った。続いて、細胞を、３７℃、５％ＣＯ２においてさらに８日間インキュベートした。ＭＫ－２２０６を、所定の間隔で培地に添加した；０日目に播種培地および２日目培地添加のために用いた培地での補充、または２日目培地添加のための培地での補充のみ。化合物の濃度は各実験に対して異なり、以下の実施例において示される通り、１０μＭ、７．５μＭ、５μＭ、２．５μＭ、２μＭ、１．５μＭ、１μＭ、０．５μＭ、０．２５μＭ、０．１μＭ、０．０５μＭであった。播種から１０日間後にＴ細胞を回収した。ビーズを取り出した後、Ｔ細胞を、自動化細胞分析（ＶｉＣＥＬＬを用いる）により計数した。続いて、回収された細胞を、記載される通りのその後の表現型決定および機能的分析のために凍結した。プロセスの概要を、図１に示す。
【0112】
１．３ 抗原刺激およびサイトカイン放出分析（ＩＦＮγ）
拡大されたＴ細胞の機能を、ＭＡＧＥ－Ａ４発現細胞株であるＡ３７５を用いる抗原刺激後の、拡大されたＴ細胞によるサイトカイン放出のレベルに基づいて評価した。Ａ３７５ ＭＡＧＥ－Ａ４陽性標的細胞を、自動化細胞計数機を用いて計数し、ウェル当たり１００μＬ体積で、ウェル当たり３０，０００個の生存有核細胞（ＶＮＣ）にて９６ウェルＵ底プレート中に播種し、１日間後、Ｔ細胞刺激を行い、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。「Ｔ細胞単独」対照として用いたウェルには、１００μＬ Ｒ１０培地（１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ培地）のみを加えた。標的細胞の一晩インキュベーション後、回収および凍結したＴ細胞を、水浴中、３７℃で解凍し、Ｒ１０培地を用いて洗浄した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で２時間、２×１０６ＶＮＣ／ｍＬの密度で、Ｒ１０培地中で休ませた。２時間の休息後、自動化細胞計数機を用いてＴ細胞を計数し、培養物を、各条件に対して形質導入ＶＮＣおよび非形質導入ＶＮＣの算出された量を組み合わせて、すべてのドナーに対して３５％の形質導入効率に対して正規化した。正規化されたＴ細胞を、前日に播種されたＡ３７５標的細胞を含有するプレートへと、１００μＬ体積中の１５０，０００ＶＮＣ／ウェルで播種した。プレートを、４８時間、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに戻し、Ｔ細胞刺激を可能にした。４８時間の刺激後、プレートを、４００Ｇで５分間遠心分離し、上清を、新たな９６ウェルプレートに移した。上清を－２０℃で保存した。
拡大されたＴ細胞の機能を、ＭＡＧＥ－Ａ４発現細胞株であるＡ３７５を用いる抗原刺激後の、拡大されたＴ細胞によるサイトカイン放出のレベルに基づいて評価した。Ａ３７５ ＭＡＧＥ－Ａ４陽性標的細胞を、自動化細胞計数機を用いて計数し、ウェル当たり１００μＬ体積で、ウェル当たり３０，０００個の生存有核細胞（ＶＮＣ）にて９６ウェルＵ底プレート中に播種し、１日間後、Ｔ細胞刺激を行い、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。「Ｔ細胞単独」対照として用いたウェルには、１００μＬ Ｒ１０培地（１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ培地）のみを加えた。標的細胞の一晩インキュベーション後、回収および凍結したＴ細胞を、水浴中、３７℃で解凍し、Ｒ１０培地を用いて洗浄した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で２時間、２×１０６ＶＮＣ／ｍＬの密度で、Ｒ１０培地中で休ませた。２時間の休息後、自動化細胞計数機を用いてＴ細胞を計数し、培養物を、各条件に対して形質導入ＶＮＣおよび非形質導入ＶＮＣの算出された量を組み合わせて、すべてのドナーに対して３５％の形質導入効率に対して正規化した。正規化されたＴ細胞を、前日に播種されたＡ３７５標的細胞を含有するプレートへと、１００μＬ体積中の１５０，０００ＶＮＣ／ウェルで播種した。プレートを、４８時間、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに戻し、Ｔ細胞刺激を可能にした。４８時間の刺激後、プレートを、４００Ｇで５分間遠心分離し、上清を、新たな９６ウェルプレートに移した。上清を－２０℃で保存した。
【0113】
ＥＬＩＳＡによるヒトＩＦＮγを用いて、ＥＬＩＳＡを行った。標準対照を、ＩＦＮγに関して１００００ｐｇ／ｍＬの最大濃度までプレートに対して調製し、１：２で連続希釈し、各アッセイに対して標準曲線を作成した。呈色読み出し値を、ＯＤ４５０で分析した（ＢＭＧ ＬＡＢＴＥＣＨ ＦＬＵＯｓｔａｒ Ｏｍｅｇａプレートリーダー）。
【0114】
[実施例２]
２．１．Ｔ細胞拡大分析
健康ドナー材料（血液のドナーサンプルから分離された白血球を含む白血球除去材料）を、１０日間の持続期間にわたる上述のプロセス後に、静止拡大（Ｇ－Ｒｅｘデバイス）において培養のために処理した。細胞を、０日目＋２日目または２日目のみ（２日目の培地添加を伴う）で培養物にＭＫ－２２０６（１．２５、２．５、５．０、１０μＭ）を添加して培養した。回収時、拡大データを提供するために、総有核細胞（ＴＮＣ）計数を、自動化細胞計数機（ＶｉＣＥＬＬ）を用いて行い、表現型を決定するためにフローサイトメトリーを行った。回収した培養物を凍結し、機能的評価、抗原刺激サイトカイン放出アッセイ（上記の１．３）のためにその後に解凍した。
２．１．Ｔ細胞拡大分析
健康ドナー材料（血液のドナーサンプルから分離された白血球を含む白血球除去材料）を、１０日間の持続期間にわたる上述のプロセス後に、静止拡大（Ｇ－Ｒｅｘデバイス）において培養のために処理した。細胞を、０日目＋２日目または２日目のみ（２日目の培地添加を伴う）で培養物にＭＫ－２２０６（１．２５、２．５、５．０、１０μＭ）を添加して培養した。回収時、拡大データを提供するために、総有核細胞（ＴＮＣ）計数を、自動化細胞計数機（ＶｉＣＥＬＬ）を用いて行い、表現型を決定するためにフローサイトメトリーを行った。回収した培養物を凍結し、機能的評価、抗原刺激サイトカイン放出アッセイ（上記の１．３）のためにその後に解凍した。
【0115】
データ（図２）は、未処理対照と比較した場合に、比較的低い濃度のＭＫ－２２０６の存在下で増大した拡大を示した。ＭＫ－２２０６の添加に関してすべての時点が、１０μＭで低減した拡大を示した。１０μＭを除いて、２日目のみの添加は、改善されたＴＮＣ収量をもたらした。０（＋２）日目は、一貫して低収量をもたらした。
【0116】
[実施例３]
３．１．拡張された滴定および拡大分析
ＭＫ－２２０６の濃度を、０．０５～１０μＭでのさらなる滴定において試験し、至適用量を完全に決定し、０（＋２）日目および２日目のみの両方を、添加の至適時間を決定するために評価する。再び、拡大、表現型およびサイトカイン産生データを評価した。追加の４名のドナーを、本研究において完全滴定範囲を提供するために、１０μＭ～０．０５μＭの様々な濃度で試験した。すべてのドナーを、記載されたプロセスに従って、１０Ｍ Ｇ－Ｒｅｘにおいて試験し、１０日目に回収した。拡大データは、ＭＫ－２２０６の添加の時点を検討した；０＋２日目および２日目のみ。
３．１．拡張された滴定および拡大分析
ＭＫ－２２０６の濃度を、０．０５～１０μＭでのさらなる滴定において試験し、至適用量を完全に決定し、０（＋２）日目および２日目のみの両方を、添加の至適時間を決定するために評価する。再び、拡大、表現型およびサイトカイン産生データを評価した。追加の４名のドナーを、本研究において完全滴定範囲を提供するために、１０μＭ～０．０５μＭの様々な濃度で試験した。すべてのドナーを、記載されたプロセスに従って、１０Ｍ Ｇ－Ｒｅｘにおいて試験し、１０日目に回収した。拡大データは、ＭＫ－２２０６の添加の時点を検討した；０＋２日目および２日目のみ。
【0117】
ＭＫ－２２０６添加時点は、拡大に対する影響を有する。０＋２日目は一貫した応答を示さなかった。１．５倍の拡大増加および０．１５倍の拡大減少の限界を伴って、試験したすべての濃度にわたって、ドナー変動が見られた。ピーク拡大は、最低濃度（０．０５および０．１μＭ）でのものであり、このとき、すべてのドナーが、未処理対照と同様またはそれよりも０．５倍良好に応答した（図３Ａ）。２日目添加は、拡大に対して負の影響を有しなかった。ドナー変動が存在したが；しかしながら、すべての条件が、対照と同様またはより良好な応答をもたらした（≧１～２倍）。２日目添加は、０．５μＭで３名のドナーに関してピーク拡大をもたらし、拡大前に、用量依存的応答で減少し始めた（０．０５～０．２５μＭ）。拡大応答は、幾分かのドナー変動を伴って、０．５μＭ超でプラトーに達するように見える（図３Ｂ）。全体として、２日目添加は、０＋２日目のものよりも、拡大に対して明らかに良好な応答をもたらした。
【0118】
[実施例４]
３．４．Ｔ細胞表現型分析
ＣＣＲ７およびＣＤ４５ＲＡ染色を用いて培養された細胞のメモリー表現型マーカーを決定するために、記載されたプロセスから１０日目に回収された健康ドナー材料に対して、フローサイトメトリーを行った。
３．４．Ｔ細胞表現型分析
ＣＣＲ７およびＣＤ４５ＲＡ染色を用いて培養された細胞のメモリー表現型マーカーを決定するために、記載されたプロセスから１０日目に回収された健康ドナー材料に対して、フローサイトメトリーを行った。
【0119】
図４のデータは、ＭＫ－２２０６を用いて培養された細胞が、未処理対照と比較して、０＋２日目および２日目のみに添加された場合に、回収時に増大したＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ＋集団を示したことを示す。添加の濃度は、ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ＋を増加させる上での顕著な作用を有しなかった。これらの幹細胞様マーカーでの増大は、０日目出発白血球除去材料をより反映し（図４ Ｄ０）、このことは、添加が、分化を減速させることにより、この集団を維持することをおそらく示唆した。
【0120】
示される通り（図４）、ＭＫ－２２０６は、メモリー表現型マーカー（ＣＣＲ７／ＣＤ４５ＲＡ）に対する影響を有し、ＣＤ６２Ｌ発現での増大もまた観察され、それにより、機能的消耗を比較的被らず、かつｉｎ ｖｉｖｏでのより長い生存期間を伴って持続することがより可能であり、より長く持続しかつより永続的な免疫応答をもたらす、比較的最終分化していないこれらの二重陽性ＳＣＭ様細胞の集団が増加する。ＣＣＲ７＋集団でのこの増大は、幹細胞様およびセントラルメモリーマーカーでの増加、ならびに結果的なＣＣＲ７－ＣＤ４５ＲＡ－、すなわち、より最終分化したエフェクターメモリー（ＥＭ）集団での減少を示し、この細胞部分集団は、消耗および低減したＴ細胞生存およびｉｎ ｖｉｖｏでの増殖に対する可能性を有する。ＥＭＲＡ集団は、一般的に、試験したすべての濃度にわたって、未処理対照と同様のままである。ＣＣＲ７＋集団での増大は、ＭＫ－２２０６を用いる細胞培養が、生存および持続に対する能力を有する「より適合した」Ｔ細胞を生じていることを表し、これは、特に養子療法および癌の治療の文脈において、Ｔ細胞集団に対する機能的利益を有する。
【0121】
ＳＣＭ Ｔ細胞は、ＣＣＲ７＋／ＣＤ４５ＲＡ＋である「幹メモリー細胞」（ＴＳＣＭ細胞）であり、ナイーブＴ細胞に対する類似性を有し、これらはまた多量のＣＤ９５、ＩＬ－２Ｒβ、ＣＸＣＲ３、およびＬＦＡ－１も発現し、メモリー細胞に特徴的な多数の機能的属性を示す。ＳＣＭ Ｔ細胞は、長期的応答ならびに自己再生および生存に対する高い能力を有する、比較的最終分化していないＴ細胞である。ＣＭ Ｔ細胞は、「セントラルメモリーＴ細胞」（ＴＣＭ細胞）であり、ＣＣＲ７＋／ＣＤ４５ＲＡ－を発現し、かつＣＤ４４の高発現に対する中間体をも有する。ＣＭ Ｔ細胞は、リンパ節中および末梢循環中に共通して見出されるメモリー部分集団である。ＥＭ Ｔ細胞は、「エフェクターメモリーＴ細胞」（ＴＥＭ細胞）であり、ＣＣＲ７－／ＣＤ４５ＲＡ－であるが、すなわち、ＣＣＲ７およびＣＤ４５ＲＡの発現を欠損する。これらはまた、ＣＤ４４の高発現に対する中間体も有する。これらのメモリーＴ細胞は、リンパ節ホーミング受容体を欠損し、したがって、末梢循環および組織中で見出され、これらは、即時応答エフェクター細胞であり、それらの最終分化状態に起因する機能の消耗を被る。ＥＭＲＡ細胞（ＴＥＭＲＡ）は、ナイーブＴ細胞上で通常見出されるマーカーであるＣＤ４５ＲＡを再発現する最終分化したエフェクターメモリー細胞（ＣＣＲ７－／ＣＤ４５ＲＡ＋）である。
【0122】
[実施例５]
５．１．サイトカイン産生
上述のＴ細胞培養プロセスに由来する拡大されたＴ細胞を解凍し、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性細胞株であるＡ３７５の存在下で播種した。サイトカイン放出アッセイのために、標的細胞およびエフェクター細胞を、４８時間にわたって共培養し、続いて、上清を回収し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮγレベルに関して分析した。非形質導入対照もまた、追加の対照基準としてアッセイに含めた。すべてのサンプルを、３５％形質導入率に対して正規化した。
５．１．サイトカイン産生
上述のＴ細胞培養プロセスに由来する拡大されたＴ細胞を解凍し、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性細胞株であるＡ３７５の存在下で播種した。サイトカイン放出アッセイのために、標的細胞およびエフェクター細胞を、４８時間にわたって共培養し、続いて、上清を回収し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮγレベルに関して分析した。非形質導入対照もまた、追加の対照基準としてアッセイに含めた。すべてのサンプルを、３５％形質導入率に対して正規化した。
【0123】
抗原刺激されたＴ細胞により産生されるＩＦＮγのレベルを、Ｔ細胞集団機能性を示すものとして調べた。ＭＫ－２２０６を、各ドナーに関して未処理対照に対して評価した。抗原刺激後のＩＦＮγ産生での応答は、ある程度までドナー依存的であった。ＭＫ－２２０６濃度の増加はまた、細胞のサイトカイン産生を減少させるようであった（＞５μＭ）。最高の増大は、ＭＫ－２２０６の２日目添加で見られた（図５）。
【0124】
配列
ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、（配列番号１）、ＭＡＧＥ Ａ４ペプチド
ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、（配列番号１）、ＭＡＧＥ Ａ４ペプチド
【0125】
ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号２）α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）ペプチドまたは配列番号３由来の残基１５８～１６６
【0126】
ヒトα－フェトプロテイン配列番号３
【0127】
【化14】
【0128】
配列番号４；ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲα鎖、ＣＤＲは太字下線
【0129】
【化15】
【0130】
配列番号５；ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲα鎖コード配列
【0131】
【化16】
【0132】
配列番号６；（ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲβ鎖）ＣＤＲは太字下線
【0133】
【化17】
【0134】
配列番号７；（ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲβ鎖コード配列）
【0135】
【化18】
【0136】
配列番号８；（ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲα鎖可変領域）１３６ＡＡ－ＣＤＲは太字下線
ＭＫＫＨＬＴＴＦＬＶＩＬＷＬＹＦＹＲＧＮＧＫＮＱＶＥＱＳＰＱＳＬＩＩＬＥＧＫＮＣＴＬＱＣＮＹＴＶＳＰＦＳＮＬＲＷＹＫＱＤＴＧＲＧＰＶＳＬＴＩＬＴＦＳＥＮＴＫＳＮＧＲＹＴＡＴＬＤＡＤＴＫＱＳＳＬＨＩＴＡＳＱＬＳＤＳＡＳＹＩＣＶＶＳＧＧＴＤＳＷＧＫＬＱＦＧＡＧＴＱＶＶＶＴＰＤ
ＭＫＫＨＬＴＴＦＬＶＩＬＷＬＹＦＹＲＧＮＧＫＮＱＶＥＱＳＰＱＳＬＩＩＬＥＧＫＮＣＴＬＱＣＮＹＴＶＳＰＦＳＮＬＲＷＹＫＱＤＴＧＲＧＰＶＳＬＴＩＬＴＦＳＥＮＴＫＳＮＧＲＹＴＡＴＬＤＡＤＴＫＱＳＳＬＨＩＴＡＳＱＬＳＤＳＡＳＹＩＣＶＶＳＧＧＴＤＳＷＧＫＬＱＦＧＡＧＴＱＶＶＶＴＰＤ
【0137】
配列番号９；（ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲβ鎖可変領域）１３３ＡＡ－ＣＤＲは太字下線
ＭＡＳＬＬＦＦＣＧＡＦＹＬＬＧＴＧＳＭＤＡＤＶＴＱＴＰＲＮＲＩＴＫＴＧＫＲＩＭＬＥＣＳＱＴＫＧＨＤＲＭＹＷＹＲＱＤＰＧＬＧＬＲＬＩＹＹＳＦＤＶＫＤＩＮＫＧＥＩＳＤＧＹＳＶＳＲＱＡＱＡＫＦＳＬＳＬＥＳＡＩＰＮＱＴＡＬＹＦＣＡＴＳＧＱＧＡＹＥＥＱＦＦＧＰＧＴＲＬＴＶＬＥ
ＭＡＳＬＬＦＦＣＧＡＦＹＬＬＧＴＧＳＭＤＡＤＶＴＱＴＰＲＮＲＩＴＫＴＧＫＲＩＭＬＥＣＳＱＴＫＧＨＤＲＭＹＷＹＲＱＤＰＧＬＧＬＲＬＩＹＹＳＦＤＶＫＤＩＮＫＧＥＩＳＤＧＹＳＶＳＲＱＡＱＡＫＦＳＬＳＬＥＳＡＩＰＮＱＴＡＬＹＦＣＡＴＳＧＱＧＡＹＥＥＱＦＦＧＰＧＴＲＬＴＶＬＥ
【0138】
配列番号１０；ＣＤＲ１ ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲα鎖
ＶＳＰＦＳＮ
ＶＳＰＦＳＮ
【0139】
配列番号１１；ＣＤＲ２ ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲα鎖
ＬＴＦＳＥＮ
ＬＴＦＳＥＮ
【0140】
配列番号１２；ＣＤＲ３ ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲα鎖
ＣＶＶＳＧＧＴＤＳＷＧＫＬＱＦ
ＣＶＶＳＧＧＴＤＳＷＧＫＬＱＦ
【0141】
配列番号１３；ＣＤＲ１ ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲβ鎖
ＫＧＨＤＲ
ＫＧＨＤＲ
【0142】
配列番号１４；ＣＤＲ２ ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲβ鎖
ＳＦＤＶＫＤ
ＳＦＤＶＫＤ
【0143】
配列番号１５；ＣＤＲ３ ＭＡＧＥ Ａ４ ＴＣＲβ鎖、
ＣＡＴＳＧＱＧＡＹＥＥＱＦＦ
ＣＡＴＳＧＱＧＡＹＥＥＱＦＦ
【0144】
親ＡＦＰ ＴＣＲ ＴＲＡＶ１２－２＊０２／ＴＲＡＪ４１＊０１／ＴＲＡＣα鎖アミノ酸細胞外配列（配列番号１６）
【0145】
【化19】
【0146】
親ＡＦＰ ＴＣＲα鎖ＤＮＡ配列（配列番号１７）
【0147】
【化20】
【0148】
親ＡＦＰ ＴＣＲ ＴＲＢＶ９＊０１／ＴＲＢＤ２／ＴＲＢＪ２－７＊０１／ＴＲＢＣ２β鎖アミノ酸細胞外配列（配列番号１８）
【0149】
【化21】
【0150】
親ＡＦＰ ＴＣＲβ鎖ＤＮＡ配列（配列番号１９）
【0151】
【化22】
【0152】
変異体ＡＦＰ ＴＣＲ（ＡＦＰ ＴＲＡＶ１２－２＊０２／ＴＲＡＪ４１＊０１／ＴＲＡＣα鎖アミノ酸細胞外配列（配列番号２０）
【0153】
【化23】
【0154】
変異体ＡＦＰ ＴＣＲ ＴＲＢＶ９＊０１／ＴＲＢＤ２／ＴＲＢＪ２－７＊０１／ＴＲＢＣ２β鎖アミノ酸細胞外配列（配列番号２１）
【0155】
【化24】
【0156】
ＤＲＧＳＱＳ（αＣＤＲ１）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号２２
【0157】
ＩＹＳＮＧＤ（αＣＤＲ２）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号２３
【0158】
ＡＶＮＳＤＳＧＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ３）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号２４
【0159】
ＳＧＤＬＳ（βＣＤＲ１）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号２５
【0160】
ＹＹＮＧＥＥ（βＣＤＲ２）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号２６
【0161】
ＡＳＳＬＧＧＥＳＥＱＹ（βＣＤＲ３）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号２７
【0162】
ＤＲＧＳＱＡ（αＣＤＲ１）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号２８
【0163】
ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ２）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号２９
【0164】
ＡＶＮＳＤＳＧＶＡＬＮＦ（αＣＤＲ２）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号３０
【0165】
ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ２）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号３１
【0166】
ＡＶＮＳＱＳＧＹＳＬＮＦ（αＣＤＲ２）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号３２
【0167】
ＡＶＮＳＱＮＧＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ２）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号３３
【0168】
ＤＲＧＳＦＳ（αＣＤＲ１）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号３４
【0169】
ＤＲＧＳＹＳ（αＣＤＲ１）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号３５
【0170】
ＡＶＮＳＱＳＳＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ２）、ＡＦＰ ＴＣＲ、配列番号３６
【0171】
【化25】
【0172】
【化26】
【0173】
ＶＬＬＳＮＰＴＳＧ、ＣＤ８α ＣＤＲ１、配列番号３９
【0174】
ＹＬＳＱＮＫＰＫ、ＣＤ８α ＣＤＲ２、配列番号４０
【0175】
ＬＳＮＳＩＭ、ＣＤ８α ＣＤＲ３、配列番号４１
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【配列表】
【国際調査報告】