特表 2023-522205 老化した血液血管系の機能的能力及び系列組成を回復させる方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-05-29

(54)【発明の名称】老化した血液血管系の機能的能力及び系列組成を回復させる方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20230522BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20230522BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20230522BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230522BHJP

   A61K 35/28 20150101ALI20230522BHJP

   A61L 27/38 20060101ALI20230522BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20230522BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20230522BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230522BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230522BHJP

   C12N 5/0789 20100101ALI20230522BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20230522BHJP

   C07K 16/18 20060101ALN20230522BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20230522BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P9/00 ZNA

A61P7/00

A61P29/00

A61K35/28

A61L27/38 100

A61K31/713

A61K31/7105

A61K48/00

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61L27/38 300

C12N5/0789

C12N15/12

C07K16/18

C12N15/09 100

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022562960

(86)(22)【出願日】2021-04-15

(85)【翻訳文提出日】2022-12-19

(86)【国際出願番号】 US2021027551

(87)【国際公開番号】W WO2021211893

(87)【国際公開日】2021-10-21

(31)【優先権主張番号】63/011,815

(32)【優先日】2020-04-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＢＲＩＪ

(71)【出願人】

【識別番号】522212398

【氏名又は名称】ハッケンサック メリディアン ヘルス センター フォー ディスカバリー アンド イノベーション

(74)【代理人】

【識別番号】100094569

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 伸一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100109070

【弁理士】

【氏名又は名称】須田 洋之

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100123777

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 さつき

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(74)【代理人】

【識別番号】100123766

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 七重

(74)【代理人】

【識別番号】100183379

【弁理士】

【氏名又は名称】藤代 昌彦

(72)【発明者】

【氏名】バトラー ジェイソン マシュー

(72)【発明者】

【氏名】ラマリンガム プラディープ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C081

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA91X

4B065AA93X

4B065AC20

4B065BB19

4B065CA44

4C081AB01

4C081CD34

4C084AA13

4C084AA17

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA36

4C084ZA51

4C084ZB11

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG01

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA65

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA36

4C086ZA51

4C086ZB11

4C086ZC75

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB44

4C087MA02

4C087MA65

4C087MA66

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZA36

4C087ZA51

4C087ZB11

4C087ZC75

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA75

4H045EA20

(57)【要約】

記載する本発明は、血管の完全性の悪化、造血幹細胞機能の低下、またはその両方を含む、骨髄の老化した造血微小環境における老化関連造血障害を含む、老化した血液及び血管系を若返らせる方法を提供する。この方法は、老化促進アンジオクライン因子、スプライスバリアント、またはそのフラグメントの阻害剤と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。記載する本発明は、トロンボスポンジン－１を老化促進因子の候補として同定した。
【選択図】図１Ｃ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

血管の完全性の悪化、造血幹細胞機能の低下、またはその両方を含む、骨髄の老化した造血微小環境における老化関連造血障害を含む、老化した血液系及び血管系の若返り方法であって、
アンジオクライン因子、スプライスバリアント、またはそのフラグメントの阻害剤と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を対象に投与することを含み、前記アンジオクライン因子が、トロンボスポンジン１（ＴＳＰ１）であり、
任意選択で、前記血液系を再生し、前記骨髄の造血再構成を促進するのに有効な治療量の多能性自己複製造血幹細胞（ＨＳＣ）を移植することを含む幹細胞併用治療を実施し、
任意選択で、前記血液系を再生し、前記骨髄の造血再構成を促進するのに有効な治療量の内皮細胞（ＥＣ）を移植することを含む血管内皮併用治療を実施し：
前記骨髄の前記造血微小環境における炎症を軽減するか；
前記骨髄の前記造血微小環境における血管の完全性を維持するか、または
前記造血コンパートメント内の細胞型の出現頻度及び数を増加させて、多系列の再構成を実施する
ことの１つ以上により、造血骨髄微小環境における造血回復を増強することを含む、
前記若返り方法。

【請求項2】

前記ＴＳＰ１の阻害剤が、抗体、ｓｉＲＮＡ、または合成シングルガイドＲＮＡを含むＣＲＩＳＰＲによるＴＳＰ１遺伝子ノックアウトである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記抗体が、ＴＳＰ１に対する非中和抗体である、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記抗体が、ＴＳＰ１に対する中和抗体である、請求項２に記載の方法。

【請求項5】

前記中和抗体が、クローンＡ４．１（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＲＲＩＤ ＡＢ＿１０９８８６６９））として市販されている、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

ａ． ＨＳＣニッチが、造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血前駆細胞（ＨＰＣ）、造血中に幹細胞プールサイズを調節する骨芽細胞を含む常在ニッチ細胞、ならびにケモカインを含む分泌及び膜結合因子を含み、定常状態では、前記ＨＳＣが、ほとんどは静止しており、一方、ＨＰＣが活発に増殖し、毎日の造血に寄与し；
ｂ． 血管ニッチが、骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）を含む内皮細胞を含む内皮マイクロニッチを含み、前記内皮細胞が、活性化されると、アンジオクライン因子の分化産生をもたらす細胞クロストーク系を調整する前記アンジオクライン因子を産生する、
請求項１に記載の方法。

【請求項7】

高齢ＢＭＥＣを含む前記ＨＳＣニッチの前記老化した骨髄造血微小環境内の前記老化した内皮微小環境が、
ｍＴＯＲシグナル伝達の減少、
ｍＴＯＲサブユニットの存在量の減少、
ｍＴＯＲ触媒サブユニットのリン酸化の減少、
ｍＴＯＲ転写標的遺伝子の発現低下；または
ｍＴＯＲ触媒サブユニット ｍＴＯＲ複合体１及びｍＴＯＲ複合体２のタンパク質レベルの低下
のうちの１つ以上を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

ＢＭＥＣによる前記ｍＴＯＲシグナル伝達の減少が、高齢ＨＳＣにおける老化に関連する機能的欠損を引き起こす、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ１）の発現レベルが、若齢対照と比較した場合に、高齢ＢＭＥＣにおいてアップレギュレートされる、請求項７に記載の方法。

【請求項10】

ＳＴＡＴ３経路、ＴＧＦ－ｂシグナル伝達、ＩＧＦ－１シグナル伝達またはＨＭＧＢ１シグナル伝達における変化を含む、若齢対照と比較した、高齢ＢＭＥＣにおける遺伝子発現の変化によって表される、最もアップレギュレートされる生物学的プロセスが、ＴＳＰ１によって調節される、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記血管の完全性の悪化が、内皮透過性の増加、内皮炎症の増加、またはその両方を含む血管透過性の増加を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

骨髄造血微小環境のＨＳＣニッチにおける老化関連造血障害が：
持続的な炎症；
ＨＳＣ細胞性の増加
幹細胞プールサイズの増加；
ＨＳＣ静止の喪失；
ＨＳＣアポトーシスの増加
ＨＳＣの自己再生能力の喪失；
前記ＨＳＣの骨髄性に偏った分化の増加、
骨髄破壊戦略の失敗のリスクの増加；または
若齢対照と比較して、移植後の骨髄ニッチの生着及び再生の減少
のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

前記持続的な炎症が、骨髄抑制性刺激に由来する、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記骨髄抑制性刺激が、放射線、化学療法、またはその両方への曝露を含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記骨髄抑制性刺激が、化学療法を含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項16】

前記骨髄抑制性刺激が、骨髄破壊的である、請求項１３に記載の方法。

【請求項17】

前記ＨＳＣの前記骨髄性に偏った分化の増加が、リンパ新生を犠牲にしている、請求項１２に記載の方法。

【請求項18】

前記ＨＳＣの静止の喪失が、ＨＳＣの一時的な増加、ＨＳＣの長期的な枯渇、及びＨＳＣの長期的な再増殖能力の欠損をもたらす、請求項１２に記載の方法。

【請求項19】

ｍＴＯＲの過剰活性化が、ＨＳＣを静止状態からより活発な細胞周期へ駆動する、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記骨髄造血微小環境の前記ＨＳＣニッチにおける老化関連造血障害が、ＨＳＣ遺伝子発現の変化を含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項21】

高齢ＨＳＣにおける老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化が、ＳＥＬＰ、ＮＥＯ１、ＪＡＭ２、ＳＬＡＭＦ１、ＰＬＳＣＲ２、ＣＬＵ、ＳＤＰＲ、ＦＹＢ、ＩＴＧＡ６のうちの１つ以上のアップレギュレーション、及びＲＡＳＳＦ４、ＦＧＦ１１、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＨＳＰＡ１Ａ、またはＮＦＫＢＩＡのうちの１つ以上のダウンレギュレーションのダウンレギュレーションを含む、請求項１９に記載の方法。

【請求項22】

造血幹細胞移植のための造血幹細胞生成物の調製方法であって、
（ａ）造血幹細胞のｅｘ ｖｉｖｏ培養物を調製し；
（ｂ）抗ＴＳＰ１抗体を含む抗体を、（ａ）の前記造血幹細胞の培養物に投与して、処置された造血幹細胞集団を形成し；
（ｃ）前記処置された造血幹細胞集団をｉｎ ｖｉｔｒｏで増殖させて、治療量の処置された造血幹細胞を含む造血幹細胞移植生成物を形成することを含み、前記造血幹細胞移植生成物の生着能が、未処置の対照と比較して増強されている、前記調製方法。

【請求項23】

工程（ａ）の前記造血幹細胞が、ヒト対象に由来する、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

工程（ａ）の前記造血幹細胞が、マウス対象に由来する、請求項２２に記載の方法。

【請求項25】

前記抗ＴＳＰ１抗体を含む前記抗体が、中和抗体である、請求項２２に記載の方法。

【請求項26】

前記抗ＴＳＰ１抗体が、ＣＤ３６、ＣＤ４７またはその両方に対する抗体をさらに含む、請求項２２に記載の方法。

【請求項27】

前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項２２に記載の方法。

【請求項28】

前記移植が、自家である、請求項２２に記載の方法。

【請求項29】

前記造血幹細胞移植が、同種異系である、請求項２２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

政府資金の記載
本発明は国立衛生研究所によって授与された契約ＨＬ１３３０２１のもとでの政府の支援により為された。政府は本発明に特定の権利を有する。

【0002】

関連出願への相互参照
本出願は「老化した血液血管系の機能的能力及び系列組成を回復させる方法」と題する２０２０年４月１７日に出願された米国仮特許出願番号６３／０１１，８１５に対する優先権の利益を主張する。前述の出願の内容全体は参照によって全体として本明細書に組み込まれる。

【0003】

配列表
本出願はＡＳＣＩＩ形式で電子的に出願され、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる配列表を含有する。前記ＡＳＣＩＩコピーは２０２１年４月１５日に作成され、１２８５３３－０２６２０＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、２，８３３バイトの大きさである。

【0004】

発明の分野
記載されている本発明は造血における加齢関連の欠損症を元に戻す組成物及び方法に関する。

【背景技術】

【0005】

恒常性
恒常性は、適切な生体機能に必要とされる安定性及び一貫性の維持及び調節を可能にする細胞、組織及び生物の特性である。環境、位置及び活動レベルの変化にかかわらず、それは生化学的な及び生理的な経路の普遍の調整によって維持される。体内の生理的な系のこの調整は恒常性制御と呼ばれる。生体組織の恒常性制御は、骨形成、血管形成／脈管形成及び造血の間での調整された相互作用を必要とし、それには内皮細胞（ＥＣ）が介在すると考えられている（Ｋｅｎｓｗｉｌ，Ｋ．Ｊ．Ｇ．，ｅｔ．ａｌ．，（２０１８）． Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｎｉｃｈｅ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ＩＬ－３３ Ａｓ ａｎ Ａｎａｂｏｌｉｃ Ｆａｃｔｏｒ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２２（３），６６６－６７８；Ｒａｆｉｉ，Ｓ．，Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．，＆ Ｄｉｎｇ，Ｂ．－Ｓ．（２０１６）．Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ，５２９（７５８６），３１６－３２５）。

【0006】

内皮細胞が内張りする血管の毛細血管は、血液、酸素及び栄養を送達する、血液の凝固を調節する、炎症細胞の輸送を調節するならびに細胞代謝の門番として役立つことに対する責任を負う受動的な導管として検討された。しかしながら、これらの細胞は、例えば、常在幹細胞の恒常性を持続すること、ならびに成人の骨／骨髄（骨形成）、血液系（造血）及び脈管構造（血管形成／脈管形成）の再生または修復を導くことのような他の必要な生理的課題も実行する（Ｒａｆｉｉ，Ｓ．，Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．，＆ Ｄｉｎｇ，Ｂ．－Ｓ．（２０１６）．Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ，５２９（７５８６），３１６－３２５）。

【0007】

血管の完全性
血管の完全性は血管の恒常性に極めて重要である（Ｍｕｒａｋａｍｉ，Ｍ．，ａｎｄ Ｓｉｍｏｎｓ，Ｍ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（Ｂｅｒｌ），（２００９）８７（６）：５７１－８２）。脈管構造の維持は連続する基本的な細胞シグナル伝達を必要とする能動的な生体プロセスである。この系の不具合は、例えば、出血、浮腫、炎症、及び組織虚血のような重篤な結末をもたらす。

【0008】

種々の動物モデルにおける研究と同様にマウス及びヒトでの遺伝子研究は、胎児の血管発生の間にて及び成人の脈管構造にて血管の完全性を能動的に維持することに極めて重要な役割を担う多数の因子を同定している。これらの因子は血管の安定化及び維持の多数の段階にわたって調整性に協調して機能する。血管形成のプロセスの間に、初期の血管が集合した後、内皮細胞が細胞・細胞結合を発達させ効果的なバリアを確立するが、これはＡｎｇｌ－Ｔｉｅ２及びＦＧＦの系が極めて重要な役割を担うプロセスである（Ｆｉｅｄｌｅｒ，Ｕ，Ａｕｇｕｓｔｉｎ，ＨＧ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００６）２７：５５２－５８；Ｍｕｒａｋａｍｉ，Ｍ．，Ｓｉｍｏｎｓ，Ｍ．；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．（２００８）１５：２１５－２２０を引用して同上）。付随して、間葉前駆細胞がＴＧＦ－βの作用を介して周皮細胞または平滑筋細胞に分化する一方で、内皮先端細胞に由来するＰＤＧＦ－ＢＢは周皮細胞の動員及び増殖を促進する（Ｐｅｐｐｅｒ，ＭＳ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．（１９９７）８：２１－４３）；Ｂｅｔｓｈｏｌｔｚ，Ｃ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．（２００４）１５：２１５－２２８；Ａｎｄｒｒａｅ，Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．（２００８）２２：１２７６－１３１２を引用して同上）。このプロセスの全体を通して、血管の安定化をさらに指図する細胞外マトリックス（ＥＣＭ）・細胞のシグナル伝達にインテグリンが介在する（Ｈｙｎｅｓ，ＲＯ，Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．（２００７）５（Ｓｕｐｐｌ．１）：３２－４０を引用して同上）。

【0009】

血管の完全性は血管壁の種々の構成成分の適切な機能を保証する多数の因子によって強固に調節されている。血管の完全性を劣化させる初期の特質の１つは透過性の上昇であり、それは内皮結合の安定性によって主に制御される。血管透過性の選択的な調節は細胞傍間隙のサイズと状態の調節及び細胞間輸送の制御によって達成される。正常な血管構造は血管床ごとに異なる一定レベルの基礎的な透過性を示す。早期の研究は血管床のサブセットにて構成的に開放した接合部を明らかにしている（Ｓｉｍｉｏｎｅｓｃｕ，Ｎ．ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９７８）７９：２７－４４を引用して同上）。正常な条件下で、能動的な透過性調節が生じている後毛細血管細静脈における内皮細胞－細胞間結合の約３０％が開いており、約６０Åの分子に対して透過性である（同上）。ヒスタミンまたは５－ＨＴ（５－ヒドロキシトリプタミン）のいずれかで刺激すると、後毛細血管細静脈における細胞間結合は選択的に開き、大型分子の通過を可能にするが、血管接合部を介して流出は血管周囲腔に限定され、制約され（Ｓｉｍｉｏｎｅｓｃｕ，Ｎ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９７８）７９：２７－４４を引用して同上）、それは血管周囲腔における外部バリアの存在を示唆している（同上）。

【0010】

生理的な及び病理的な刺激によって誘発される内皮透過性の上昇はふつう、可逆性であり、血管の完全性を永続的に劣化させるわけではない。しかしながら、内皮接合部構成成分の障害は血管の完全性の深刻な損傷につながることができる。このシナリオでは、接合部の崩壊はふつう、血管壁からの最終的な内皮の脱落とその後に続く血栓形成を伴う。このプロセスの事象の順序はよく理解されていないが、透過性誘導刺激の持続時間が結果に影響を及ぼしてもよいことは可能である（同上）。内皮細胞がＶＥ－カドヘリンに基づく接合部を再確立することによってバリア機能を急速に修復することができる血管透過性の一時的な上昇とは異なって、長く続く刺激は反応性酸素種（ＲＯＳ）の蓄積のようなさらに顕著な影響につながってもよい。内皮機能に対して多数の有害効果を発揮することが知られている過剰量のＲＯＳはそのようなシナリオに介在してもよい。実際、ＲＯＳは活性部位にてＣｙｓ残基を酸化することによってタンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰ）を不可逆的に不活化し、それによってチロシンのリン酸化に依存するシグナル伝達事象に影響を及ぼすことができる（Ｔｏｎｋｓ，ＮＫ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．ＣＶｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００６）７：８３３－８４６を引用して同上）。

【0011】

内皮接合部
内皮細胞では、３種の細胞間結合、すなわち、接着結合、密着結合及びギャップ結合の間で、接着結合及び密着結合は内皮の構造的な完全性に寄与する（Ｄｅｊａｎａ，Ｅ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００４）５：２６１－２７０を引用して同上）。これら２種の結合の間で機能的な差異を正確に説明するのは難しいが、密着結合の集合は接着結合の以前の形成に依存することが知られており、接着結合が内皮の透過性の制御に主として重要であるのに対して、密着結合は細胞の頂端面と側底面との間の脂質と内在性膜タンパク質の移動を阻止すること（分子フェンス）に関与する（Ｄｅｊａｎａ，Ｅ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００４），５：２６１－２７０；Ｔａｄｄｅｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００８），１０：９２３－３４を引用して同上）。

【0012】

結合の各種類はタンパク質のはっきり異なるセットを持つ。カドヘリンは、接着結合を構成し、トランス同種親和性の相互作用を介したカルシウム依存性の細胞・細胞接触に介在する膜貫通タンパク質のファミリーである。内皮細胞では、ＶＥ－カドヘリンは細胞接触の部位に位置し、接着結合の形成を調節し、結合の部位をアクチン細胞骨格に接続する。

【0013】

カテニン、特にｐ１２０－カテニンへの結合によって制御される接着結合でのＶＥ－カドヘリンの安定性は内皮の透過性及び完全性の維持に極めて重要である。Ｓｒｃファミリーキナーゼは、内皮透過性のＶＥＧＦが誘導する上昇に重要な役割を担うことが知られており、Ｓｒｃを介したＶＥ－カドヘリンのリン酸化は細胞・細胞接触の崩壊を誘発し、ＶＥ－カドヘリンの内部移行につながる（Ｗｅｉｓ，ＳＭ，Ｃｈｅｓｈ，ＤＡ，Ｎａｔｕｒｅ，（２００５），４３７：４９７－５０４を引用して同上）。このプロセスは内皮の運動性及び「活性化された」内皮細胞の抗原性表現型の確立に重要であると考えられる。したがって、内皮接合部は静止単層においてさえ能動的に集合し、解体する動的構造であるということは、作用が制御する正味のＶＥ－カドヘリンの動態の均衡は内皮の挙動を決定することを示唆している。

【0014】

幹細胞ニッチ
生体の組織及び臓器の効果的な機能は、適切な細胞数を維持する（恒常性）及び傷害の後損傷した細胞を置き換える（修復）生来の再生プロセスに依存する。すべてではないが、多くの組織では、再生潜在力は外因性の指示に応答し、必要に応じて代替細胞を作り出す幹細胞及び前駆細胞の特化した集団の存在及び機能性によって決定される（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ １０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。これらの細胞は、その周囲とのコミュニケーションを維持して細胞の代替と修復についての生理的な指示に対する適切な応答を保証する一方で損傷または喪失から細胞を保護するのに十分な空間的な、時間的な及び構造的な境界を提供する「幹細胞ニッチ」と呼ばれる特殊化された環境に存在する（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。

【0015】

幹細胞ニッチは、生殖細胞系列、骨髄、消化器系及び呼吸器系、骨格筋、皮膚、毛包、乳腺、及び中枢神経系及び末梢神経系を含む多数の組織で同定され、特徴付けられている（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。

【0016】

幹細胞ニッチの環境は、その機能及び維持にとって極めて重要である細胞成分及び環境成分で構成される。細胞・細胞相互作用は構造的サポートを提供し、接着相互作用を調節し、幹細胞機能を制御する可溶性シグナルを生成する。環境成分には、圧力、構造、及び化学シグナル、及び温度のような物理的な力、と同様に細胞外マトリックス（ＥＣＭ）との相互作用のような生理的パラメーターが挙げられる（同上）。

【0017】

幹細胞ニッチにおける異種の細胞・細胞相互作用は密着調節及び多くは細胞・細胞接触に依存する複雑な、双方向性のシグナル伝達を示す。幹細胞ニッチは組織特異的な及び一般的な細胞集団を含有し、そのそれぞれが特殊化された役割を有する（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆ Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

【0018】

造血微小環境は成人の骨における骨髄空間に位置し、骨芽細胞、血管細胞及び神経細胞、巨核球、マクロファージ、及び免疫細胞を含む造血幹細胞（ＨＳＣ）ニッチを明瞭に定義する種々の異なる細胞種を含む。Ｗｎｔ、ＳＣＦ、Ｎｏｔｃｈ、及びケモカインを含む分泌因子及び膜結合因子は幹細胞上の表面受容体を直接結合して細胞の運命、自己再生及び極性を調節する（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆ Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

【0019】

脈管構造及び神経系との多数の幹細胞種の密接な関連は代謝指示及び概日リズムによる幹細胞応答の調節を可能にし、それを介して炎症細胞及び免疫細胞と同様に液性因子がニッチに送達され得る導管を提供する（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。免疫的な細胞は、炎症及び組織損傷の間にニッチの動的な調節を提供し、それは「免疫特権」（脳及び眼を含む特定の解剖学的部位に配置された組織移植片が長い時間生存できるという観察を指す）の存在及びこの特権からの回避を介して強固に調節される（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆ Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

【0020】

細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質及び幹細胞のＥＣＭとの相互作用は部分的には基体の剛性に基づいて保持指示と同様に機械的シグナルを提供し、それは幹細胞が外部の物理的力に応答するのを可能にする。ＥＣＭタンパク質はニッチの配向及び構造的維持に極めて重要であり、幹細胞上に発現されるインテグリンとのリガンドの相互作用を介して指令シグナルを提供する（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆ Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。加えて、ＥＣＭは、ニッチ内で局所的に及び全身性に産生された因子双方を結合することによって増殖因子、ケモカイン及び他の幹細胞調節分子を隔離する、または濃縮することができる（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。

【0021】

例えば、トポグラフィ、剛性／弾性、剪断力、温度、酸素、張力、及び血流のような物理的パラメーターは幹細胞の維持及び分化を指図する。さらに、多数の幹細胞ニッチは環境的特徴を変更し、強固な代謝調節を必要として幹細胞集団の長期の休止及び自己再生を維持する（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆ Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

【0022】

特定の幹細胞ニッチを構成する具体的な構成成分は異なる生理的背景のもと異なる組織で変化してもよい一方で、どんな場合でも、これらの細胞性及び無細胞性の構成成分によって提供されるシグナルは幹細胞によって統合されて、静止または増殖、自己再生または分化、移動または保持、及び細胞死または生存の間の選択を含む、その運命決定に情報提供すると思われる（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。

【0023】

ＨＳＣニッチの発達
造血系は、例えば、酸素輸送、免疫、及び組織リモデリングのような機能を実施する１０００憶個を超える成熟血液細胞を毎日人体に供給する。それは、酸素輸送や免疫防御のような独特の機能を有する高度に特殊化された細胞の種々の集団から成る。成人は１日あたり約４～５×１０¹¹個の造血細胞を生成すると推定される。多数の血液細胞種の連続した産生は高度に調節された、さらに高度に反応性の系を必要とする。哺乳類の造血機構内では、稀な造血幹細胞（ＨＳＣ）はヒエラルキーの頂点にある（Ｐｉｎｈｏ，Ｓ．，Ｆｒｅｎｅｔｔｅ，Ｐ．Ｓ．Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎｉｃｈｅ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２０，３０３－３２０（２０１９）ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５８０－０１９－０１０３－９）。

【0024】

発生の間、造血を確立するためにＨＳＣはニッチ間を行き来する。原始的な造血は胚齢およそ７．０日（Ｅ７．０）にて卵黄嚢で行われ、その時、未成熟の前駆体は発生している胚に酸素を供給する赤血球を生じる。移植の際、造血系を完全に再構成できることが知られている最初の明確なＨＳＣはマウス及びヒトにおける大動脈・性腺・中腎領域で見いだされている。しかしながら、一部の研究は、Ｅ９．０～Ｅ１０．０の卵黄嚢の細胞は成熟マウスではなく新生仔に移植されると明瞭なＨＳＣに成熟することができることを示唆している。加えて、胎盤は発生中のＨＳＣの重要な貯留庫を表す。いったん脈管構造が発生すると、Ｅ１２．０にてまたはＥ１２．０の頃にＨＳＣは胎児肝臓に移動し、そこで増殖し、分化する。胎児肝臓のＨＳＣはその骨髄の対応ＨＳＣとは対照的に活発に循環し、照射したレシピエントに移植すると成人骨髄のＨＳＣを打ち負かす。胎児肝臓におけるＨＳＣ増殖の間に、間充織の凝集内にて軟骨細胞及び骨芽細胞が産生され、軟骨及び骨を作り出す。骨格リモデリングは骨脈管化に関連し、Ｅ１７.５までにＨＳＣのホーミング及び胎児骨髄のコロニー形成を可能にする。このプロセスには、骨髄内皮上に発現されるＣＸＣＲ４及び特異的な接着分子を発現しているＨＳＣを引き付ける骨髄間質細胞によるＣＸＣＬ１２産生が介在する（Ｂｏｕｌａｉｓ，Ｐ．Ｅ．，＆ Ｆｒｅｎｅｔｔｅ，Ｐ．Ｓ．（２０１５）．Ｍａｋｉｎｇ ｓｅｎｓｅ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅｓ．Ｂｌｏｏｄ，１２５（１７），２６２１－２６２９．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１４－０９－５７０１９２）。

【0025】

ＨＳＣニッチ及び骨髄の微小環境
成人の骨では、ＨＳＣは代謝的な休止または静止の段階で細胞周期のＧ０期にて本質的に保持され、それは細胞複製に関連する損傷を限定することによってその機能を保護する。しかしながら、静止ＨＳＣは細胞周期に入り、増殖することによって広い範囲のニッチシグナルまたは全身性シグナルに迅速に応答することができる。したがって、これらの指令的指示はＨＳＣの分化を個別化し、血液産生を生物のニーズに合わせるのに必須である。ＨＳＣはまた、動員シグナルを受け取るとＢＭニッチから離れ、血流に入り、末梢組織の免疫監視を確保し、遠隔のＢＭ部位に生着することもできる。したがって、ＨＳＣは、静止／増殖及び係留／動員のスイッチの動的調節に起因して、細胞周期及び輸送活性を含むその生物学の多数の局面についてのＢＭニッチからの短期及び長期の指令的指示に決定的に依存する。

【0026】

常在ニッチ細胞
ＨＳＣ幹細胞ニッチはそれぞれ異なる機能を持つ種々の細胞種を含有し、例えば、骨芽細胞、血管細胞及び神経細胞、巨核球、マクロファージ及び免疫細胞はそれぞれ重要な役割を有し、異なるＨＳＣニッチを定義すると見なすことができる。それはさらに、他の特殊化したニッチ、例えば、骨芽ニッチ及び血管周囲ニッチを含む。研究は、これら２つのニッチが異なる特殊化された役割を有するかどうか、またはＨＳＣの協調した調節があるので機能的重複があるのかどうかについて対立している。例えば、ＮＧ２＋細動脈周囲細胞は長期のＨＳＣ内で静止を調節し、この静止はＨＳＣの機能に必須であると思われる。他の細胞、例えば、骨内膜マクロファージはニッチ内でＨＳＣを保持し、これらの細胞の喪失はその支持的微小環境の外でＨＳＣの動員を引き起こす（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆ Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３２，７９５－８０３， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

【0027】

直接細胞接触
直接細胞接触には、例えば、細胞・細胞接着分子及び膜結合リガンドの受容体のような多数の受容体が介在することができる。例えば、骨髄では、類洞細胞によって発現されるＮｏｔｃｈリガンドは骨髄破壊損傷からの回復の間でのＨＳＣの自己再生に必須である（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆ Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

【0028】

分泌因子
幹細胞とニッチ細胞の間での間接的なコミュニケーションには分泌因子が介在する。例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）のようなサイトカインを使用することによるニッチからのＨＳＣの動員は、血液悪性腫瘍、骨髄機能不全及び稀な遺伝性障害の治療を支えるのに広く使用されている。これらの因子は、ＨＳＣの増殖及びＨＳＣ・ニッチの接着の解放を促進すること含む種々の方法で作用する（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆ Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。具体的には、幹細胞因子（ＳＣＦ）、形質転換増殖因子β－１（ＴＧＦ－ｂ１）、血小板因子４（ＰＦ４またはＣＸＣＬ４）、アンジオポエチン１（ＡＮＧＰＴ１）、及びトロンボポエチン（ＴＰＯ）のような分泌因子はすべてＨＳＣの静止を執行するのに極めて重要である。並行して、必須のケモカイン、間質由来因子１（ＳＤＦ１ａまたはＣＸＣＬ１２）及びそのＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、接着分子、例えば、血管細胞接着タンパク質１（ＶＣＡＭ－１）、種々のセレクチン、及びフィブロネクチンまたはヒアルロン酸のような細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質はすべてＨＳＣのホーミング及びニッチにおける係留の必須の調節因子である。

【0029】

静止状態のままであるまたは活発な増殖状態に入る決定は細胞内在性の及び外来性のメカニズム双方を介して多数の因子によって制御される。外来性の可溶性因子：炎症性サイトカイン、例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）－α及びＩＦＮ－γ；増殖因子、例えば、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）及びトロンボポエチン（ＴＰＯ）；サイトカイン、例えば、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）－β及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、及びケモカイン、例えば、間質細胞由来因子（ＳＤＦ）－１に応答して、ＨＳＣは休止状態または細胞周期に入ることができる。ＨＳＣの静止を調節する固有の因子には、細胞周期阻害剤、例えば、ｐ２１及びｐ５７；転写因子（ＴＦ）、例えば、Ｇｆｉ１、Ｅｇｒ１、ＦＯＸＯ、及びＰＢＸ１；ならびに、ユビキチンリガーゼ、例えば、ｃ－Ｃｂｌ、Ｉｔｃｈ、Ｆｂｘｗ７、及びＡ２０が挙げられる。骨髄ニッチにおけるＨＳＣの適切な維持には、内因性因子及び外因性因子の間の調和が不可欠である。（Ｎａｋａｇａｗａ，Ｍ．Ｍ．，Ｃｈｅｎ，Ｈ．，＆ Ｒａｔｈｉｎａｍ，Ｃ．Ｖ．（２０１８）．Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦ－κＢ Ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｃａｕｓｅｓ Ｌｏｓｓ ｏｆ Ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｄｅｒｅｇｕｌａｔｅｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ｎｅｔｗｏｒｋｓ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｂｉｏｌｏｇｙ，６，１４３）。

【0030】

骨髄微小環境
骨髄は、造血細胞区画（柔組織）、ならびに、主に、線維芽細胞、脂肪細胞、神経、及び骨髄の血管系で構成される間質に細分化することができる。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“Ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｉｃｈｅ：Ｈｏｍｅ ｏｆ ＨＳＣ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

【0031】

動脈血管は、孔栄養を介して骨髄に入り、次に、いくつかの細動脈に分かれる。これらの血管の小さな細動脈及び毛細血管は、骨髄全体に及び、類洞間毛細血管により相互接続されている類洞を供給する。類洞は、流出する中央静脈洞の周りに放射状に分布し、これは、直径が約１００μｍである。骨髄類洞は、独特であり、通常の静脈と比較されるべきではない。類洞壁は、内皮細胞の単層から成り、支持細胞がない。内皮細胞は結合組織の被覆はないが、むしろ、実質細胞と直接接触している。周囲の造血骨髄は類洞微小循環の再構築及びリモデリングをサポートする主要な細胞部分である。

【0032】

細胞傷害剤または放射線による骨髄低細胞性の急速な誘導に、類洞及び中心静脈洞の顕著な拡張及び崩壊が続く。類洞に通常の血管壁がないことは、高レベルの透過性に反映される。骨髄微小環境は、ＨＳＣ及び造血前駆細胞（ＨＰＣ）を収容し、隣接する間質細胞で構成される骨の微小解剖学的環境が幹細胞をサポートし、指導する。間質環境自体が造血の質を決定し得ることが仮定されている。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“Ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｉｃｈｅ：Ｈｏｍｅ ｏｆ ＨＳＣ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

【0033】

ＨＳＣ及びＨＰＣ ＨＳＣ及びＨＰＣはその生存期間全体にわたって血管内皮に直接接触してまたは非常に近接して存在し、血管周囲ニッチと呼ばれる。ホモ接合性の内皮からのＨＳＣの胚性特定化の瞬間から、内皮細胞は、その生存期間全体にわたるＨＳＣ維持のために決定的な生体プロセスの膨大なレパートリーを調節する極めて重要な細胞拠点として作用する（Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ Ｐ，Ｐｏｕｌｏｓ ＭＧ，Ｂｕｔｌｅｒ ＪＭ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｌｉｆｅｃｙｃｌｅ ｂｙ ｔｈｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｎｉｃｈｅ． Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１７；２４（４）：２８９－９９．ｄｏｉ：１０．１０９７／ＭＯＨ．０００００００００００００３５０．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２８５９４６６０；ＰＭＣＩＤ：５５５４９３７）。

【0034】

骨髄微小環境は細胞周囲ＨＳＣニッチを収容するだけでなく、骨芽細胞ニッチも収容し、その際、それぞれは幹細胞の局在化にて担う役割によって定義される。骨髄における骨芽細胞ニッチはリンパ球産生の維持のためのシグナルを提供するのに対して、細胞周囲ニッチはＨＳＣ及びその子孫の静止及び維持を調節する。造血組織におけるこれらの空間的差異はかくまわれる幹細胞自体の特性に反映せず、それに変換しない。さらなる研究は骨髄類洞血管のような間質構造は造血細胞が存在し、成熟し得る際の代わりの細胞性足場として役立ってもよい。

【0035】

骨内膜ゾーンから離れた解剖的及び機能的な実体としての骨髄の類洞及び細動脈ネットワークを説明するために、「血管ニッチ」という名称が採用される。細動脈ニッチはＨＳＣの分化に有利に働くと考えられるのに対して、中央に位置する血管ニッチはＨＳＣの静止、維持及び分化と、最終的には末梢循環への動員を可能にする場所として役立つ。生体内での遺伝的機能の研究はＨＳＣが血管ニッチにて骨髄脈管構造と密接な関連を有することを実証している。さらに、成熟巨核球のほぼすべてが薄壁類洞に隣接して位置することが見いだされ、巨核球全体がインタクトな内皮細胞を介して遊出できることが示された。この観察は血小板生成に限定されないが、赤血球系及びＢリンパ球系の前駆細胞に適用することができ、これらの系列が骨髄内で定義されたニッチに存在することも報告されているからである。成熟過程における極めて重要な決定要因としてのＨＳＰＣ・内皮細胞の相互作用に対するこれらの所見要点は、幹細胞の維持及び分化について許容的であり且つ指導的である微小解剖構造としての幹細胞ニッチのアイデアをさらに強化する。さらに、骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）は接着性を有して血管形成因子及びケモキネシス因子と相互作用し、ＨＳＣの自己再生及び分化をサポートし、それによって骨髄柔組織と血管ニッチの相互依存を実証することに寄与することが見いだされた（Ｃｒａｎｅ，ＧＭ，ｅｔ ａｌ，“Ａｄｕｌｔ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅｓ，”Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１７）１７（９）：５７３－９０；Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ，Ｐ．ｅｔ ａｌ，“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｌｉｆｅｃｙｃｌｅ ｂｙ ｔｈｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｎｉｃｈｅ，” Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１７）２４（４）：２８９－９９；Ｙｕ，ＶＷ，ａｎｄ Ｓｃａｄｄｅｎ，ＤＴ，“Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１６）２３（４）：３３１－３８）。

【0036】

骨組織の細胞シグナル伝達におけるアンジオクライン因子
骨微小環境にて骨組織の細胞シグナル伝達で複数の役割を担う多数のアンジオクライン増殖因子がある。以下の表１はそのようなアンジオクライン因子及び骨における組織細胞とのそのクロストークを記載している（Ｓｉｖａｎ Ｕ，Ｄｅ Ａｎｇｅｌｉｓ Ｊ，Ｋｕｓｕｍｂｅ ＡＰ．２０１９ Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｓ ｉｎ ｂｏｎｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｏｐｅｎ Ｂｉｏｌ．９：１９０１４４．ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９８／ｒｓｏｂ．１９０１４４）。

【0037】

【表1-1】

【表1-2】

【0038】

造血細胞と内皮細胞との間の連鎖は内皮細胞と造血細胞の共通する前駆細胞である血管芽細胞であることが見いだされた。発生学的にＨＳＣ／ＨＰＣと内皮細胞の強い相互依存があり、それは成人まで延長する（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．”Ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｉｃｈｅ： Ｈｏｍｅ ｏｆ ＨＳＣ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．”ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５；Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ Ｐ，Ｐｏｕｌｏｓ ＭＧ，Ｂｕｔｌｅｒ ＪＭ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｌｉｆｅｃｙｃｌｅ ｂｙ ｔｈｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｎｉｃｈｅ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１７）２４（４）：２８９－９９．ｄｏｉ：１０．１０９７／ＭＯＨ．０００００００００００００３５０．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２８５９４６６０；ＰＭＣＩＤ：５５５４９３７）。

【0039】

骨髄血管ニッチ
骨髄（ＢＭ）の類洞及び細動脈ネットワークは骨内膜ゾーンから離れた解剖学的且つ機能的な実体である。それは、その完全性が周囲の造血細胞によって維持され、サポートされる薄壁で且つ有窓の類洞血管のネットワークから成る。しかしながら、この依存性は、骨髄の脈管構造が成熟造血細胞から末梢循環までの導管を提供するだけでなく、ＨＳＣプールが静止状態で維持される部位も提供するという点で相互関係があり、造血前駆細胞、特に巨核球は分化し、造血の完全な再構成のための段階を設定する（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．”Ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｉｃｈｅ：Ｈｏｍｅ ｏｆ ＨＳＣ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．”Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，（２００５）２０：３４９－３５６．１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

【0040】

ＢＭの血管は造血区画を末梢循環から分離する壁を構成するだけでなく、造血及び幹細胞の動員及びホーミングを調節することができる。同上。

【0041】

類洞内皮細胞とＨＳＣとの間の密接性はそれらの維持及び系列特異的な分化に非常に重要である［Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ Ｐ，Ｐｏｕｌｏｓ ＭＧ，Ｂｕｔｌｅｒ ＪＭ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｌｉｆｅｃｙｃｌｅ ｂｙ ｔｈｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｎｉｃｈｅ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１７；２４（４）：２８９－９９．ｄｏｉ：１０．１０９７／ＭＯＨ．０００００００００００００３５０．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２８５９４６６０；ＰＭＣＩＤ：５５５４９３７］］。造血とＴＨＰＯ／ｃＭｐｌ系の間の連鎖、及び特に巨核球前駆細胞の増殖を促進することでのその役割は周知である［Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．”Ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｉｃｈｅ：Ｈｏｍｅ ｏｆ ＨＳＣ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．”Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，（２００５），２０：３４９－３５６．１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５，下記を引用：Ｎａｇａｓａｗａ，Ｔ．，Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｎｉｃｈｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ Ｂ－ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００６）６：１０７－１１６］。ＴＨＰＯ／ｃＭｐ１の非存在下にもかかわらず、巨核球前駆細胞がＢＭ類洞に近接すれば巨核球の成熟及び血小板の産生が生じてもよい［Ａｖｅｃｉｌｌａ，ＳＴ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２００３）１０：６４－７１を引用して同上］。血小板産生が損なわれるＴＨＰＯ及びｃＭｐ１のノックアウトマウスでは、ＣＸＣＬ１２及び線維芽細胞増殖因子４（ＦＧＦ－４）は、巨核球上の最晩期抗原（ＶＬＡ）－４及び内皮細胞上のＶＣＡＭ－１を含む接着分子の発現を誘導するメカニズムを介して正常な血小板を回復させる［Ｙｏｏｎ，ＣＨ ｅｔ ａｌ，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ（ＥＰＣ）．Ｋｏｒｅａｎ Ｃｉｒｃ．Ｊ．（２００４），３４：３０４－３１３；Ｍａｈｅｒ，ＰＡ，Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｙ ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９３）１５４：３５０－３５８を引用して同上］。ＦＧＦは血管ニッチと骨内膜ニッチの間のクロストークに介在することにて重要な因子と見なされてもよい［Ｄｅ Ｈａａｎ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－１．Ｄｅｖ．Ｃｅｌｌ．（２００３）４：２４１－２５１を引用して同上］。線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）はＨＳＣ及びその前駆細胞の血管ニッチへの動員に重要な、そこでＦＧＦ受容体の高い発現が見いだされている２つのＢＭニッチ間に勾配を形成すると考えられている［Ｗｒｉｇｈｔ，ＤＥ，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．（２００１）２９４：１９３３－１９３６を引用して同上］。

【0042】

内皮細胞（ＥＣ）及び内皮微小ニッチ
各臓器は特殊化された毛細血管の広範なネットワークによって樹枝状にされている。各臓器内では、毛細血管は独特の構造的な、表現型の機能的な及びアンジオクラインの特質を担う。骨髄のような造血臓器では、幹細胞及び前駆細胞はＶＥＧＦＲ３⁺ＶＥＧＦＲ２⁺ＶＥｃａｄ⁺ＣＤ３１⁺ＥＣによって境界を定められた動脈の及び有窓の特殊化した類洞血管との直接細胞接触にある。組織特異的な幹細胞及び前駆細胞はホモ接合性毛細血管ＥＣに密接に近接して戦略上配置される。この親密な細胞性相互作用は、血管の側底面に位置するレシピエント細胞への特殊化されたＥＣからの膜結合の及び可溶性のアンジオクライン因子の送達を促進する。さらに、ＥＣの管腔面は循環を介してかじ取りする幹細胞及び免疫細胞のためのシグナル伝達プラットフォームとして役立つことができる。組織に存在する柔組織及び幹細胞は活性化状態、及び例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）－Ａ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）－２、間質細胞由来因子（ＳＤＦ-１：ＣＸＣＬ１２としても知られる）、アンジオポイエチン及びトロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）のような血管形成因子の産生を介した再生刺激に対するＥＣの応答を調節する。したがって、毛細血管のネットワークは―周皮細胞及び間葉細胞の影響を受けない―休止している及び再生している臓器の双方に対するこれらの血管内及び血管外の指示を統合し、中継する機能的可塑性を有する適応可能なプラットフォームを提供する（Ｒａｆｉｉ，Ｓ．，Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．，＆ Ｄｉｎｇ，Ｂ．－Ｓ．（２０１６）．Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ，５２９（７５８６），３１６－３２５）。

【0043】

蓄積している証拠は、病態生理学的ストレス（例えば、電離放射線への曝露、化学的損傷、または低酸素状態）または組織塊の喪失の際、活性化ＥＣは静止した組織特異的な幹細胞への炎症及び損傷が誘導するアンジオクラインシグナルを中継し、それは再生を駆動し、発達の設定点を強化して恒常性状態を再確立する。したがって、微小血管のＥＣは、生理的レベルでの且つ適切な化学量論のアンジオクライン因子によって幹細胞を育て、養育することによって組織再生を演出するプロフェッショナルなニッチ細胞の基準を満たす（Ｒａｆｉｉ，Ｓ．，Ｂｕｔｌｅｒ，ＪＭ．， ＆ Ｄｉｎｇ，Ｂ．－Ｓ．（２０１６）．Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ，５２９（７５８６），３１６－３２５）。

【0044】

ＥＣはＨＳＣ及びＨＳＰＣの静止及び増殖を調節する阻害性及び刺激性のアンジオクライン因子を発現する。ＶＥＧＦＲ－３、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥ－カドヘリン及びＣＤ３１が陽性である骨髄類洞ＥＣが、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）２及びＢＭＰ４、インスリン増殖因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）２、ＳＤＦ－１、エチオピアアリネズミ（Ｄｈｈ）タンパク質、Ｎｏｔｃｈリガンド、ウイングレス型ＭＭＴＶ統合部位（Ｗｎｔ）５ａ、及びＫｉｔリガンドを含む可溶性及び膜結合性のアンジオクライン因子（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ，Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２０１０）１２：１０４６－５６；Ｂｕｔｌｅｒ，ＪＭ，ｅｔ ａｌ，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．ＣｅｌｌＳｔｅｍ Ｃｅｌｌ（２０１０）６：２５１－６４；Ｈｏｏｐｅｒ，ＡＴ，ｅｔ ａｌ，Ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ＶＥＧＦＲ２－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ（２００９）４：２６３－７４を引用して同上）を発現することによってＨＳＰＣの自己再生を刺激することを実証するのに共培養試験が使用されている。骨髄類洞ＥＣはまた顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）－６、ＩＬ－８、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、ＩＬ－１、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ケモカイン及びメタロプロテイナーゼを産生することによってＨＳＰＣの系列特異的な分化を駆動する（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ．（２０１０）１２：１０４６－１０５６を引用して同上）。種々の活性化状態を介して推移しているＥＣもまた、例えば、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）－β１（Ｂｒｅｎｅｔ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．，ＴＧＦｂｅｔａ ｒｅｓｔｏｒｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２０１３），２１０：６２３－６３９を引用して同上）、ＷＮＴシグナル伝達を阻止するｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質（ＤＫＫ）１及びＤＫＫ３、及びＢＭＰシグナル伝達を妨害するＮｏｇｇｉｎ（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ．（２０１０）１２：１０４６－１０５６を引用して同上）のような阻害性因子を産生する。

【0045】

無血清条件下で培養したＥＣは、正真正銘のマウス造血幹細胞を再配置させる自己再生を１５０倍高める（Ｂｕｔｌｅｒ，ＪＭ ｅｔ ａｌ，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ．（２０１０）６：２５１－２６４を引用して同上）及びヒト臍帯血の重症複合型免疫不全症を再配置する細胞の自己再生を８倍高める（Ｂｕｔｌｅｒ，ＪＭ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．（２０１２）１２０：１３４４－１３４７を引用して同上）生理的レベルでアンジオクライン因子を供給することが示された。研究は、造血細胞とＥＣの間での直接接触はＨＳＰＣの自己再生及び分化に必須であることを示している（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２０１０）１２：１０４６－５６；Ｂｕｔｌｅｒ，ＪＭ，ｅｔ ａｌ，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ．（２０１０）６：２５１－６４；Ｈｏｏｐｅｒ，ＡＴｅｔ ａｌ，Ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ＶＥＧＦＲ２－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ．（２００９）４：２６３－７４を引用して同上）。間葉細胞と比べて、ＥＣは臍帯血由来のＨＳＰＣを増殖させる点でさらに効率的である（Ｒａｙｎａｕｄ，ＣＭ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｂｒｏａｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ．（２０１３）１１：１０７４－１０９０）を引用して同上）。例えば、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）（Ｎｏｒｔｈ，ＴＥ，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ，（２００７）４４７：１００７－１０１１；Ｈｏｇｇａｔｔ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｔｅｍ－ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ－ｃｅｌｌ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ｂｙ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２．Ｎａｔｕｒｅ．（２０１３）４９５：３６５－３６９）、プレイオトロフィン（同上、下記を引用：Ｈｉｍｂｕｒｇ，ＨＡ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅ．Ｃｅｌｌ ｒｅｐｏｒｔｓ．（２０１２）２：９６４－９７５を引用して同上）及び表皮増殖因子（ＥＧＦ）（Ｄｏａｎ，ＰＬ ｅｔ ａｌ，Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２０１３）１９：２９５－３０４を引用して同上）のような他のアンジオクライン因子はＨＳＰＣサポート因子の生理的リポジトリとしてＥＣを確立する造血再構成を駆動する。

【0046】

内皮ニッチはＨＳＣの自己再生を持続することのみならず、多重系列の再構成にも必須である。造血における内皮ニッチの役割を支持する最初の生体内での証拠は、造血幹細胞の生物学の必須の調節因子である可溶性Ｋｉｔリガンドを産生できないマウスの研究に由来する。それは、区画に分けられたが、相互作用する間質ニッチ及び内皮ニッチの細胞がＨＳＰＣの再生を調節することを実証した。生理的ストレスに応答して、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）－９の活性化は細胞からの可溶性Ｋｉｔリガンドの放出をもたらし、それはＨＳＰＣの再生及び適切な輸送を刺激する。追跡試験は表現型が顕著な幹細胞は内皮ニッチに密接に近接して存在することを示した（Ｋｉｅｌ，ＭＪ ｅｔａｌ．，ＳＬＡＭ Ｆａｍｉｌｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ Ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ ａｎｄ Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｒｅｖｅａｌ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｎｉｃｈｅｓ ｆｏｒ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ．（２００５）１２１：１１０９－１１２１を引用して同上）。さらなる証拠は、化学療法または放射線照射の後の造血再生及び血小板産生が成熟マウスのＥＣにおけるＶＥＧＦＲ－２の条件付き枯渇（Ｈｏｏｐｅｒ，ＡＴ ｅｔ ａｌ，Ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ＶＥＧＦＲ２－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ．（２００９）４：２６３－２７４を引用して同上）によって及び内皮ニッチの再構成を破壊するＶＥ－カドヘリンの標的指向化（Ａｖｅｃｉｌｌａ， ＳＴ， ｅｔ ａｌ． Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｎａｔ Ｍｅｄ． （２００４） １０：６４－７１；Ｈａｍａｄａ， Ｔ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆａｃｔｏｒ １ （ＳＤＦ－１） ｅｎｈａｎｃｅｓ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ． （１９９８） １８８：５３９－５４８を引用して同上）によって損傷されることを示した。

【0047】

ＡＫＴ及びＭＡＰＫの活性化の間での均衡は多重系列の造血の回復を調節する。造血の再生はＥＣ内で活性化されるシグナル伝達経路によって誘導されるアンジオクライン因子の差次的産生によって調整される（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ，Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ．（２０１０）１２：１０４６－１０５６を引用して同上）。骨髄破壊のストレスの後、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＦＧＦ－２及びアンジオポイエチンのような血管由来因子はＡＫＴ（タンパク質キナーゼＢとしても知られる）の活性化を介してＪａｇｇｅｄ－１を含む他のアンジオクライン因子を上方調節する。ＥＣにおけるＪａｇｇｅｄ－１の条件付き枯渇は造血の回復を損傷し（Ｐｏｏｕｌｏｓ，ＭＧ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｊａｇｇｅｄ－１ ｉｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｆｏｒ ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌ ｒｅｐｏｒｔｓ．（２０１３）４：１０２２－１０３４を引用して同上）、それはＮｏｔｃｈの活性化がＨＳＰＣの疲弊を阻止することを示唆していると解釈されている。再生の血管由来フェーズの間に、ＡＫＴのリン酸化にはｐ４２／ｐ４４マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）の活性化を伴う。これは、Ｇ－ＣＳＦ、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－６の分泌を誘発して骨髄系、巨核球、及びリンパ系の前駆細胞の集団を増殖させ、造血の再構成を助ける（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ，Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ．（２０１０）１２：１０４６－１０５６を引用して同上）。同様に、成熟している造血細胞は再生している類洞血管の過剰な出現を阻止する阻害性血管新生因子を産生する。例えば、成熟巨核球は、血管形成を減速し、活性化しているアンジオクライン因子の産生を止めて恒常性を回復させるＴＳＰ－１を産生する（Ｎｏｌａｎ，ＤＪ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｏｌａｎ ＤＪ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｉｎ ｏｒｇａｎ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｄｅｖ Ｃｅｌｌ．（２０１３）２６：２０４－２１９；Ｋｏｐｐ，ＨＧ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎｓ ｄｅｐｌｏｙｅｄ ｂｙ ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｓｗｉｔｃｈ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｔ ｏｆ ｒｅｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２００６），１１６：３２７７－３２９１を引用して同上）。生体内の血管形成ＥＣの機能のいくつかを模倣するＡＫＴが活性化された骨髄ＥＣは無血清培地の条件下で長期に再配置する造血幹細胞を増やすのに対して骨髄由来の間質細胞は幹細胞の消耗を指示する（Ｐｏｕｌｏｓ，ＭＧ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ｔｏ Ｄｅｆｉｎｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｅｎｈａｎｃｅ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｒｅｐｏｒｔｓ．（２０１５）８（５）：８８１－９４．を引用して同上）。さらに、間葉のものではないＡＫＴが活性化された骨髄ＥＣの移植を介した造血微小環境の保護は致命的な放射線照射後の造血の回復を加速する（Ｐｏｕｌｏｓ，ＭＧ，ｅｔ ａｌ．Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ｔｏ Ｄｅｆｉｎｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｅｎｈａｎｃｅ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｒｅｐｏｒｔｓ．（２０１５）８（５）：８８１－９４を引用して同上）。

【0048】

定常状態の造血に対する内皮ニッチの寄与はＳＤＦ－１、ＫｉｔリガンドまたはＪａｇｇｅｄ－１のＥＣにおける選択的欠失がＨＳＣ及びＨＳＰＣの維持を損傷した研究によって解明された（Ｐｏｕｌｏｓ，ＭＧ ｅｔ ａｌ，Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ｔｏ Ｄｅｆｉｎｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｅｎｈａｎｃｅ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ.Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｒｅｐｏｒｔｓ．（２０１５），Ｄｉｎｇ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ａｎｄ ｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌｓ ｍａｉｎｔａｉｎ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ．（２０１２）４８１：４５７－４６２；Ｄｉｎｇ，Ｌ．，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ＳＪ，Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｅａｒｌｙ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｏｃｃｕｐｙ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ，（２０１３）４９５（７４４０）：２３１－２３６；Ｉｎｒａ，ＣＮ，ｅｔ ａｌ．，Ａ ｐｅｒｉｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｍｅｄｕｌｌａｒｙ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｌｅｅｎＮａｔｕｒｅ． （２０１５），Ｋｉｍｕｒａ，Ｙ．ｅｔ． ａｌ．，ｃ－Ｋｉｔ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｇ ｏｆ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ｔｏ Ｔｈｅｉｒ Ｎｉｃｈｅｓ Ｉｓ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ａｎｄ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｄｕｌｔ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．（２０１１）６：ｅ２６９１８を引用して同上）。

【0049】

幾つかの研究はＨＳＰＣの恒常性に対する骨髄血管周囲細胞の相対的寄与も精査している（Ｋｕｎｉｓａｋｉ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｌａｒ ｎｉｃｈｅｓ ｍａｉｎｔａｉｎ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ．（２０１３）５０２：６３７－６４３，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ＳＪ，Ｓｃａｄｄｅｎ，ＤＴ．Ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ．（２０１４）５０５：３２７－３３４．Ａｃａｒ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｅｐ ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｈｏｗｓ ｎｏｎ－ｄｉｖｉｄｉｎｇ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｐｅｒｉｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．（２０１５）５２６：１２６－１３０を引用して同上）。内皮細胞及び非血管細胞の機能及び構造的安定性は相互に依存するので、一方のニッチにおける因子の欠失は近隣のものの構成要素を混乱させる潜在性を有する。したがって、密接に関連する内皮ニッチ及び付随する血管周囲細胞の範囲内での遺伝子操作は、考慮に入れる必要がある的外れな効果を有し得る。それにもかかわらず、生体内でのこれらの知見及び試験管内での還元主義者は、ＨＳＰＣの局在化にかかわらず、細動脈または類洞の内皮ニッチのいずれかによって提示されるアンジオクライン因子は実行機能を有し、造血抑制後の恒常性及び回復の間に造血幹細胞の自己再生及び分化を演出する「レオスタット」として作用することを示唆している。さらに、これらの研究は、全部ではないが一部のヘテロ接合性ＥＣがＨＳＰＣの増殖をサポートすることができることを明らかにし、それは、各器官型血管床が幹細胞の恒常性及び再構成に好適である独特のアンジオクライン特質に恵まれていることを裏付けている（Ｎｏｌａｎ，ＤＪ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｉｎ ｏｒｇａｎ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｄｅｖ．Ｃｅｌｌ．（２０１３）２６：２０４－２１９；Ｐｏｕｌｏｓ，ＭＧ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｔｓ，（２０１５）８（５）：８８１－９４；Ｂｕｔｌｅｒ，ＪＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ．（２０１０）６：２５１－６４；Ｈｏｏｐｅｒ，ＡＴ，ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ．（２００９）４：２６３－７４を引用して同上）。

【0050】

胎児発達の間に、ＥＣからの誘導性シグナルは造血性ＥＣの発達を特定化する（Ｎｇｕｙｅｎ，ＰＤ ｅｔ ａｌ，”Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｓｏｍｉｔｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｂｙ ｍｅｏｘ１．Ｎａｔｕｒｅ，（２０１４）５１２：３１４－１８；Ｍｅｄｖｉｎｓｋｙ，ａ．，Ｄｚｉｅｒｚａｋ，Ｅ．Ｅｆｉｎｉｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｉｓ ａｕｔｏｍｏｕｓｌｙ ｉｎｉｔｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ＡＧＭ ｒｅｇｉｏｎ．Ｃｅｌｌ，（１９９６）８６：８９７－９０６；Ｃｈｅｎ，ＭＪ ｅｔ ａｌ．Ｒｕｎｘ１ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｔｏ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｂｕｔ ｎｏｔ ｔｈｅｒｅａｆｔｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ，（２００９）４５７：８８７－９１を引用して同上）。したがって、内皮ニッチはすべてのＥＣの造血性ＥＣへの直接変換を誘導してもよく、それは明確な造血幹細胞を生じる。成人ＥＣは転写因子ＦｏｓＢ、Ｇｆｉ１、Ｒｕｎｘ１及びＳｐｉ１（まとめてＦＧＲＳと呼ばれる）によって変換された。しかしながら、ＦＧＲＳが変換したＥＣは、それらがＥＣとの直接接触で共培養されなければ生着可能な造血細胞に変換できなかった（Ｓａｎｄｌｅｒ，ＶＭ，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｖａｓｃｕｌａｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ．（２０１４）５１１：３１２－３１８．を引用して同上）。さらに、マウス及び非ヒト霊長類の多能性幹細胞に由来する造血細胞と内皮ニッチの共培養は、部分的にはＮｏｔｃｈリガンドの配置を介して推定上の造血細胞の生着を増強した（Ｇｏｒｉ，ＪＬ，ｅｔ ａｌ．，Ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１５）１２５：１２４３－１２５４；Ｈａｄｌａｎｄ，ＢＫ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ａｎｄ ＮＯＴＣＨ ｓｐｅｃｉｆｙ ａｎｄ ａｍｐｌｉｆｙ ａｏｒｔａ－ｇｏｎａｄ－ｍｅｓｏｎｅｐｈｒｏｓ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１５）１２５：２０３２－２０４５．を引用して同上）。したがって、ＥＣ由来のアンジオクラインのシグナルは造血幹細胞の特殊化、発達、恒常性、自己再生及び分化に関与する。

【0051】

脈管形成／血管形成
造血プロセスにおけるその役割に加えて、骨髄は脈管形成のプロセスに関与する。脈管形成（新しい血管の形成のプロセスを意味する）は新しい血管を形成するための内皮前駆細胞の移動、増殖及び分化とそれに続く安定化及び血管成熟段階を介して発生する。それは、器官再生、創傷治癒、炎症と同様に腫瘍増殖にて必須の段階である［Ｒｏｈｂａｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｏｓｓｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉａｌ ｅｍｐｈａｓｉｓ ｏｎ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓ．Ｍｅｄ．Ｈｅｍｏｔｈｅｒ．（２０１７）４４（３）；１７４－８２；下記を引用：Ｓｅｇｕｒａ，Ｉ．ｅｔ ａｌ，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｍｐａｉｒｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｖａｓｃｕｌａｒ－ｌｉｋｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＦＡＳＥＢ Ｊ．（２００２）１６：８３３－８４１；Ｅｌｍｏｒｅ，Ｓ．，Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ．（２００７）３５：４９５－５１６；Ｋｒｙｓｋｏ，ＤＶ，Ｖａｎｄｅｎａｂｅｅｌｅ，Ｐ．Ｆｒｏｍ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｙｉｎｇ ｃｅｌｌ ｅｎｇｕｌｆｍｅｎｔ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．（２００８）１５：２９－３８］。

【0052】

脈管形成は、新しく形成される血管の骨格としての内皮前駆細胞または内皮コロニー形成細胞（ＥＣＦＣ）と、血管支持物として役立ち、微小血管の安定性を維持する周皮細胞としての間葉幹細胞及び前駆細胞（ＭＳＰＣ）との移動及び複製から成る[Ｒｅｉｎｉｓｃｈ，Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｐｒｏｐａｇａｔｅ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｒｅｇｅｎ Ｍｅｄ．（２００７）２：３７１－３８２；Ｓｃｈａｌｌｍｏｓｅｒ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ ｃａｎ ｒｅｐｌａｃｅ ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ－ｓｃａｌｅ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．（２００７）４７：１４３６－１４４６；Ｒｅｉｎｉｓｃｈ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｏｌｏｎｙ－ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｂｌｏｏｄ．（２００９）１１３：６７１６－６７２５；Ｈｏｆｍａｎｎ，ＮＡ， ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｏｌｏｎｙ－ｆｏｒｍｉｎｇ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０１２）８７９：３８１－３８７を引用して同上］。研究は、ＨＳＣが新しく形成される血管へのＥＰＣの寄与を促進する特定の脈管形成因子を送達することができることを示している［Ｒａｆｉｉ，Ｓ．，Ｌｙｄｅｎ，Ｄ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｏｒｇａｎ ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２００３）９：７０２－７１２を引用して同上］。骨髄（ＢＭ）のような成人の組織に由来するＥＰＣ及び造血幹細胞（ＨＳＣ）は胎児期及び出生後の生理的プロセスの間での脈管形成に寄与することが示されている。

【0053】

ＢＭ由来の内皮細胞（ＢＭＥＣ）は、脈管新生が発生する部位での血管新生因子の発現を介して血管の増殖を間接的に促進すること（Ｔａｍｍａ，Ｒ．，＆ Ｒｉｂａｔｔｉ，Ｄ．（２０１７）．Ｂｏｎｅ Ｎｉｃｈｅｓ，Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ Ｖｅｓｓｅｌ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８（１），１５１），下記を引用：Ｙａｎｇ Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ ｉｍｍｕｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｇｒ＋ＣＤ１１ｂ＋ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇ ｈｏｓｔ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．（２００４）６：４０９－４２１）に関与する（Ｚｉｅｇｅｌｈｏｅｆｆｅｒ Ｔ．Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｅｌｌｓ ｄｏ ｎｏｔ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ａｄｕｌｔ ｇｒｏｗｉｎｇ ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ．Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．（２００４）９４：２３０－２３８を引用して同上）。ＣＸＣＲ４はＢＭＥＣによって高度に発現され、その動員及びホーミングに関与する（Ｂｕｒｇｅｒ Ｊ．Ａ．ＣＸＣＲ４：Ａ ｋｅｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｂｌｏｏｄ．（２００６）１０７：１７６１－１７６７；Ｒｕｉｚ ｄｅ Ａｌｍｏｄｏｖａｒ Ｃ．，Ｌｕｔｔｕｎ Ａ．，Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ Ｐ．Ａｎ ＳＤＦ－１ ｔｒａｐ ｆｏｒ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌ．（２００６）１２４：１８－２１を引用して同上）。ＣＸＣＬ１２の発現もまた血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）によって直接調節される。ＢＭＥＣの動員におけるＶＥＧＦの役割が研究されており、低酸素のような他の刺激なしにトランスジェニックの系でその発現を誘導する。ＶＥＧＦは血管周囲細胞にてＣＸＣＬ１２の発現を刺激し、後者はＣＸＣＲ４＋循環細胞を引き付ける。ＶＥＧＦ受容体－１（ＶＥＧＦＲ－１）を遮断することが腫瘍にて動員された血管周囲細胞の数を減らす（Ｈａｔｔｏｒｉ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｂｙ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｏｆ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２００１）１９３：１００５－１０１４を引用して同上）ということはＶＥＧＦの効果にはＶＥＧＦＲ－１が含まれ得ることを示唆している。全般的に見れば、これらのデータはＶＥＧＦが血管周囲細胞の動員及びＶＥＧＦＲ－１の活性化を介してＢＭＥＣを刺激する血管新生を促す増殖因子であることを裏付けている。

【0054】

ＢＭからのＢＭＥＣの放出について提案されたメカニズムにはマトリックスメタロプロテイナーゼ－９（ＭＭＰ－９）が関与する。低酸素条件では、ＶＥＧＦ－Ａ及びＣＸＣＬ１２は上方調節され、ＢＭ細胞ニッチ内で活性化されたＭＭＰ－９の放出を誘導し、可溶性Ｋｉｔリガンドを活性化し、末梢血へのＢＭＥＣの放出をもたらす（Ｓｅａｎｄｅｌ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．Ａ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｐｒｏａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．（２００８）１３：１８１－１８３を引用して同上）。β３リン酸化部位（ＤｉＹＦ）についてのマウス変異型に関する研究は、多数の循環しているＣＸＣＲ４＋ＢＭＥＣの存在及び内皮単層を介して遊出するＤｉＹＦマウス由来のＢＭＥＣの能力の喪失を示した（Ｆｅｎｇ Ｗ．，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｓ ｄｉｃｔａｔｅｄ ｂｙ β ３ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｏｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００８）１８３：１１４５－１１５７を引用して同上）ということは、完全なβ３インテグリン活性の存在が循環から標的組織へのＢＭＥＣの動員に極めて重要であることを示唆している。

【0055】

ＥＰＣは、成熟内皮細胞とは機能的に且つ表現型で異なり、試験管内で内皮細胞にて分化する能力を持つ骨髄由来細胞であり、新しい血管の形成に寄与する（Ｔｈｉｊｓｓｅｎ Ｄ．Ｈ．Ｊ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ａｎｄ ｃａｒｄｉａｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｄａｐｔａｔｉｏｎｓ ｔｏ ａｇｅ ａｎｄ ｅｘｅｒｃｉｓｅ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．（２００９）１４：４６８５－４７０２，Ｋｈａｋｏｏ Ａ．Ｙ．，Ｆｉｎｋｅｌ Ｔ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．（２００５）５６：７９－１０１を引用して同上）。ＥＰＣは新しい血管を直接形成し、血管新生を促す因子の豊かな供給源である（Ｒｅｈｍａｎ Ｊ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ”ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ”ａｒｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｍｏｎｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．（２００３）１０７：１１６４－１１６９を引用して同上）。ＣＤ１３３、ＣＤ３４及びＶＥＧＦＲ－２を発現している未発達のＥＰＣはＣＤ１３３の発現を失う成熟形態に分化する（Ｙｏｏｎ Ｃ．Ｈ．，Ｓｅｏ Ｊ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ（ＥＰＣ） Ｋｏｒｅａｎ Ｃｉｒｃ．Ｊ．（２００４）３４：３０４－３１３を引用して同上）。ＶＥＧＦは試験管内及び生体内の双方でＥＰＣ動員の強力な誘導因子であり（Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ Ｐ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ａｒｔｅｒｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２０００）６：３８９－３９５を引用して同上）、ＥＰＣの末梢循環への動員は生体内でのヒト組換えＶＥＧＦ投与の後、増える（Ａｓａｈａｒａ Ｔ．，ｅｔ ａｌ．ＶＥＧＦ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｂｉｌｉｚｉｎｇ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．ＥＭＢＯ Ｊ．（１９９９）１８：３９６４－３９７２を引用して同上）。また、ＧＭ－ＣＳＦはＢＭからのＥＰＣの動員に関与し（Ｔａｋａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｓｃｈｅｍｉａ－ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｎａｔ． Ｍｅｄ． （１９９９） ５：４３４－４３８を引用して同上）、骨芽前駆細胞は低酸素状態またはインスリン様増殖因子－１（ＩＧＦ－１）に応答し、赤血球系列の選択的増殖に関連するＨＳＣニッチの増殖をもたらす低酸素誘導因子（ＨＩＦ）を増強する（Ａｋｅｎｏ Ｎ．，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｙ ＩＧＦ－Ｉ ｉｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ＰＩ３Ｋ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ－２α Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．（２００２）１４３：４２０－４２５を引用して同上）。赤血球系列の影響は骨芽細胞におけるエリスロポエチン（ＥＰＯ）の発現と直接関係すると思われる（Ｒａｎｋｉｎ Ｅ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ＨＩＦ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｓｉｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＥＰＯ．Ｃｅｌｌ．（２０１２）１４９：６３－７４を引用して同上）。ＥＰＯは血管修復及び血管新生のプロセスで重要な分子であり、可動性を高め、管を形成する能力を増強することによってＥＰＣ活性に影響を及ぼす（Ｓａｕｔｉｎａ Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｂｙ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｃｏｍｍｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＶＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２．Ｂｌｏｏｄ．（２００９）１１５：８９６－９０５；Ｂａｈｌｍａｎｎ Ｆ．Ｈ．Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．（２００３）１０３：９２１－９２６；Ａｉｃｈｅｒ Ａ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｆｏｒ ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２００３）９：１３７０－１３７６を引用して同上）。

【0056】

脈管形成及び血管形成の双方では、ＥＣと周囲の間葉細胞の間での双方向のシグナル伝達が極めて重要である（Ｓｕｄａ，Ｔ．，＆ Ｔａｋａｋｕｒａｂ，Ｎ．（２００１）．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，７４（３），２６６－７１），下記を引用：Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ：ｗｈａｔ ｉｓ ｉｔｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ？，Ｃｅｌｌ，（１９９６）８７：１１５３－５５）。脈管形成のプロセスを調節する多数の分子が単離されており、内皮周囲層（成人血管にてＥＣを封入する周皮細胞の層）の動員及び形成によって、または動脈と静脈の間の相互作用に介在することによって血管の完全性の維持に関与する（Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ：ｗｈａｔ ｉｓ ｉｔｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ？，Ｃｅｌｌ，（１９９６）８７：１１５３－５５；Ｈａｎａｈａｎ，Ｄ．Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｖａｓｃｕｌａｒ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９７）２７７：４８－５０；Ｗａｎｇ，ＨＵ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｒｔｅｒｉｅｓ ａｎｄ ｖｅｉｎｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｅｐｈｒｉｎ－Ｂ２ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｅｐｈ－Ｂ４．Ｃｅｌｌ，（１９９８）９３：７４１－５３；Ｇａｌｅ，ＮＷ，Ｙａｎｃｏｐｏｕｌｏｓ，ＧＤ．Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ａｃｔｉｎｇ ｖｉａ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ：ＶＥＧＦｓ，Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎｓ，ａｎｄ ｅｐｈｒｉｎｓ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．（１９９９）１３：１０５５－６６を引用して同上）。それらの間で、２つの受容体チロシンキナーゼのサブファミリーはその大きな内皮特異的な発現を特徴とする。一方のファミリーにはＦｌｔ－１／ＶＥＧＦＲ１、Ｆｌｋ－１／ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ２、及びＦｌｔ－４／ＶＥＧＦＲ３が含まれ、そのすべてが血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体ファミリーのメンバーである（Ｓｈａｌａｂｙ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｆａｉｌｕｒｅ ｏｆ ｂｌｏｏｄ－ｉｓｌａｎｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｆｌｋ－１ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ，（１９９５）３７６：６２－６；Ｆｏｎｇ，Ｇ－Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｌｔ－１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ．Ｎａｔｕｒｅ，（１９９５）３７６：６６－７０；Ｄｕｍｏｎｔ，ＤＪ，ｅｔ ａｌ，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｆａｉｌｕｒｅ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｅｍｂｒｙｏｓ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎ ＶＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－３．Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９８）２８２：９４６－４９；Ｆｅｒｒａｒａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．Ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｌｅｔｈａｌｉｔｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＶＥＧＦ ｇｅｎｅ．Ｎａｔｕｒｅ，（１９９６）３８０：４３９－４４２を引用して同上）。他方のファミリーにはＴＩＥ１／ＴＩＥ及びＴＩＥ２／ＴＥＫが含まれ；これらの受容体の胚性発現の開始はＶＥＲＧＦ受容体のそれに続くと思われる（Ｄｕｍｏｎｔ，ＤＪ，ｅｔ ａｌ．Ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｅｍｂｒｙｏ：ａ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｆｌｋ－１， ｔｅｋ， ｔｉｅ， ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．（１９９５）２０３：８０－９２を引用して同上）。ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲの胎児での欠損は脈管形成での早期の欠損症を示す一方で、ＴＩＥ２またはＴＩＥ１を欠いているマウスは血管形成及び血管リモデリングと同様に血管の完全性にて晩期の欠損症を示す。

【0057】

成人では、ＥＣは正常な血管にて周皮細胞にすでに封入されている。成人の血管での血管形成における必要な最初の段階はＥＣに強固に接着している周皮細胞の分離である。ＥＣと周皮細胞の間の接着と分離の均衡はＴＩＥ２のリガンドであるアンジオポエチンに依存する（Ｄａｖｉｓ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１，ａ ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ＴＩＥ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｂｙ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ－ｔｒａｐ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｌｏｎｉｎｇ．Ｃｅｌｌ，（１９９６）８７：１１７１－８０を引用して同上）。血管の発生はＡｎｇ１シグナル伝達の不活化が介在するプロセスである、ＥＣからの周皮細胞の分離で開始する。それに続いて、ＥＣはＡｎｇ１産生組織に向かって伸びてもよい。周皮細胞の動員にＥＣの移動が続くにつれて、Ａｎｇ１産生細胞は少し離れた血管の伸長を促進してもよい。

【0058】

ＥＣがＡｎｇ１産生ＨＳＣに向かって移動することが示されている一方で、ＨＳＣが血管の制約されたポイントで管腔内空洞から実質細胞にどのように移動するかの基本的なメカニズムは不明である。同上。末梢ＣＤ３４＋造血前駆細胞は高レベルのマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）－２及び－９を発現していることが報告されている（Ｊａｎｏｗｓｋａ－Ｗｉｅｃｚｏｒｅｋ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ＣＤ３４＋ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｔｒａｎｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｂｌｏｏｄ，（１９９９）９３：３３７９－９０を引用して同上）。さらに、胎児のＨＳＣ（ＣＤ４５＋ｃ－Ｋｉｔ＋ＣＤ３４＋細胞）はＭＭＰ－９を強く発現している。その上、これらのＨＳＣはＡｎｇ１による刺激の後、ＴＩＥ２を発現し、フィブロネクチン（ＦＮ）に接着する（Ｔａｌａｋｕｒａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ＴＩＥ２ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，（１９９８）９：６７７－８６を引用して同上）。まとめると、これらの知見はＨＳＣが虚血領域近傍のＥＣ上のＦＮに接着し、マトリックスを消化し、毛細血管ＥＣの基底膜を介して実質細胞に遊出することを示唆している。したがって、ＥＣの管腔内面でのＦＮの産生はＨＳＣ及びＥＣの移動における最初の段階であると仮定されている。（同上）

【0059】

骨化／骨形成
軟骨内骨化の間での血管形成を介して形成される新しい血管は、正しい骨格の発達と成長を保証するモデリング及びリモデリングのプロセスに重要な血管周囲の骨前駆細胞の供給源である（Ｔａｍｍａ，Ｒ．，＆ Ｒｉｂａｔｔｉ，Ｄ．（２０１７）．Ｂｏｎｅ Ｎｉｃｈｅｓ，Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ Ｖｅｓｓｅｌ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８（１），１５１，下記を引用：Ｂｒａｎｄｉ Ｍ．Ｌ．，Ｃｏｌｌｉｎ－Ｏｓｄｏｂｙ Ｐ．Ｖａｓｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄｔｈｅ ｓｋｅｌｅｔｏｎ．Ｊ． Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．（２００６）２１：１８３－１９２）。骨細胞は、内皮細胞、軟骨細胞、骨芽細胞及び破骨細胞を含むＶＥＧＦＲ発現細胞と相互作用するＶＥＧＦのような血管新生を促す因子を分泌する。同じ方法で、内皮細胞は軟骨細胞及び骨芽細胞系列の細胞を調節する因子を放出する（Ｋｕｓｕｍｂｅ Ａ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ｂｙ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｖｅｓｓｅｌ ｓｕｂｔｙｐｅ ｉｎ ｂｏｎｅ．Ｎａｔｕｒｅ．（２０１４）５０７：３２３－３２８を引用して同上）。軟骨内骨化にて発生する血管形成の間に、進行毛細血管の内皮細胞はプロテアーゼ及び調節分子を産生することによって、ならびに循環から破骨前駆細胞を動員することによってマトリックス再吸収に直接及び間接的に影響を及ぼす。さらに、内皮細胞は低酸素軟骨細胞によるＨＩＦ１－αの分泌に応答してＶＥＧＦを放出し［Ｍａｎａｌｏ Ｄ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｈｙｐｏｘｉａ ｂｙ ＨＩＦ－１．Ｂｌｏｏｄ．（２００５）１０５：６５９－６６９を引用して同上］、骨芽細胞分化の刺激因子であるＢＭＰ－２及びＢＭＰ－４を産生する（Ｓｏｒｅｓｃｕ Ｇ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ４ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｙ ｓｈｅａｒ ｓｔｒｅｓｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ａｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００３）２７８：３１１２８－３１１３５）を引用して同上）。

【0060】

内皮細胞によって発現されるエンドセリン－１（ＥＴ－１）は内皮細胞の移動、増殖及び分化を促進することによって直接、または内皮細胞にてＶＥＧＦ産生を誘導することによって間接的に血管形成を調節する。骨芽細胞におけるＥＴ－１受容体の刺激はその分化及びＶＥＧＦ発現の双方を誘導する（Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｆ．Ｈ．，Ｌｅｖｉｎ Ｅ．Ｒ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｓ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（１９９５）３３３：３５６－３６３を引用して同上）。

【0061】

破骨細胞も血管形成のプロセスに関与する。一部の著者はＶＥＧＦが破骨前駆細胞のための化学誘引因子を構成することを示し（Ｈｅｎｒｉｋｓｅｎ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．ＲＡＮＫＬ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ （ＶＥＧＦ） ｉｎｄｕｃｅ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ＥＲＫ１／２－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００３）２７８：４８７４５－４８７５３を引用して同上）、破骨細胞におけるＶＥＧＦの自己分泌／傍分泌の作用が見いだされている。破骨細胞は、破骨細胞の分化の間にＲＡＮＫＬの活性化によって上昇するＨＩＦ１αに応答してＶＥＧＦを発現する（Ｔｒｅｂｅｃ－Ｒｅｙｎｏｌｄｓ Ｄ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．ＶＥＧＦ－Ａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＮＦ－κＢ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＨＩＦ－１α．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（２０１０）１１０：３４３－３５１を引用して同上）。骨再吸収の間に、骨マトリックスから放出されるＴＧＦβ１は骨再吸収区画にてＶＥＧＦの発現を誘導し、それは結果的に内皮活性を刺激し、血管形成をサポートする。

【0062】

また、骨細胞も血管形成に寄与する。骨損傷の間にアポトーシスを受けている骨細胞はＶＥＧＦを発現すると考えられている（Ｃｈｅｕｎｇ Ｗ．－Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ｏｓｔｅｏｃｙｔｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｓ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｊ．Ｏｒｔｈｏｐ．Ｒｅｓ．（２０１０）２９：５２３－５３０を引用して同上）。さらに、ＭＬＯＹ４骨細胞の拍動液剪断ストレス刺激はＶＥＧＦの分泌を誘導することが見いだされている（Ｊｕｆｆｅｒ Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｕｓｃｌｅ ａｎａｂｏｌｉｃ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌｌｙ ｌｏａｄｅｄ ＭＬＯ－Ｙ４ ｏｓｔｅｏｃｙｔｅｓ．ＡＪＰ．（２０１１）３０２：Ｅ３８９－Ｅ３９５を引用して同上）。

【0063】

Ｎｏｔｃｈ／Ｄｌｌ４シグナル伝達は成人の長骨にて血管形成に関与する。動脈は、Ｄｌｌ４及びＪＡＧ１を発現し、後者は血管周囲の骨前駆細胞においても発現する。Ｎｏｔｃｈ／Ｄｌｌ４系の役割はＶＥＧＦＲの発現を調節することによって血管の増殖及び内皮の増殖を刺激することである。さらに、Ｎｏｔｃｈ／Ｄｌｌ４経路を損傷したマウスは長骨発達の低下及び未熟骨芽細胞の数の増加を示した（Ｒａｍａｓａｍｙ Ｓ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｎｏｔｃｈ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｂｏｎｅ．Ｎａｔｕｒｅ．（２０１４）５０７：３７６－３８０を引用して同上）。

【0064】

ヘパリン結合増殖因子であるプレイオトロフィン（ＰＴＮ）（Ｈｉｍｂｕｒｇ Ｈ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．（２０１２）２：１７７４を引用して同上）は生体内及び試験管内の血管形成に関与する血管ニッチ内でＢＭ類洞内皮細胞によって差別的に発現され、分泌されるもう１つの局所骨因子である（Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ Ｅ．，ｅｔ ａｌ．Ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ（２００９） ２０：１８０－１９０を引用して同上）。ＰＴＮは血管形成を促す早期ＥＰＣの走化性をＮＯＳ依存性に発揮し（Ｈｅｉｓｓ Ｃ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ ｉｎｄｕｃｅｓ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（２００８）２１５：３６６－３７３を引用して同上）、骨芽細胞の増殖及び骨マトリックスの沈着を刺激する（Ｔａｒｅ Ｒ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ／ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ １：Ｄｉｓｓｅｃｔｉｎｇ ｉｔｓ ｄｉｖｅｒｓｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｂｏｎｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．（２００２）１７：２００９－２０２０を引用して同上）。

【0065】

脈管形成及び血管成熟を支配するアンジオクライン因子
脈管形成及び血管成熟を支配する分子メディエーターは３つのカテゴリー：１）壁細胞・内皮細胞及び内皮細胞・内皮細胞の相互作用に介在する分子；２）細胞・マトリックスの相互作用に関与する分子；ならびに３）シグナル伝達経路に関与する分子に分けることができる（Ｒｏｈｂａｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｏｓｓｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉａｌ ｅｍｐｈａｓｉｓ ｏｎ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓ．ＭｅｄＨｅｍｏｔｈｅｒ．（２０１７）４４（３）；１７４－８２）。

【0066】

カテゴリー１：壁細胞・内皮細胞及び内皮細胞・内皮細胞の相互作用に介在する分子

【0067】

ＶＥ－カドヘリンは内皮細胞・内皮細胞の結合についての重要なメディエーターであるのに対して神経カドヘリン（Ｎ－カドヘリン）は脈管形成のプロセスにてＥＣ・壁細胞の結合に主に介在する［Ｒｏｈｂａｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｏｓｓｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉａｌ ｅｍｐｈａｓｉｓ ｏｎ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓ．Ｍｅｄ．Ｈｅｍｏｔｈｅｒ．（２０１７）４４（３）；１７４－８２，下記を引用：Ｄｅｊａｎａ，Ｅ．ｅｔ ａｌ，Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｂｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｄｅｖ．Ｃｅｌｌ（２００９）１６：２０９－２２１］。支持間質細胞間の細胞コミュニケーションもＮ－カドヘリン分子を介して促進することができる。ギャップ結合の構成成分であるコネキシン（Ｃｘ３７、Ｃｘ４０及びＣｘ４３）は内皮細胞と血管周囲細胞の間のコミュニケーションを促進する。さらに、内皮／白血球の表面マーカーであるＣＤ３１は内皮細胞・内皮細胞の結合に透過性を提供することが示されている［Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ，Ｐ．，Ｊａｉｎ，ＲＫ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ．（２０１１）４７３：２９８－３０７を引用して同上］。オクルディン、クローディン、小帯オクルデンの分子（ＺＯ－１、２、３）のような密着結合分子及び内皮表面分子ＣＤ１４８は、これらの部位での内皮細胞・壁細胞の相互作用を調節するために血液脳関門（ＢＢＢ）及び網膜微小血管にて密着結合を形成することに関与する。

【0068】

血管ネットワークの成長及び増殖の間での機械的な力は、脈管形成及び血管成熟のプロセスにおける細胞及び分子の相互作用の多くに対して刺激因子として役立つ一方で［Ｊａｉｎ，ＲＫ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｅｓｓｅｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２００３）９：６８５－６９３を引用して同上］、簡潔な脈管形成パターンをもたらす細胞結合を調節する機械的なパラメーターを考察する研究は限られた数しか利用できない。

【0069】

カテゴリーＩＩ：細胞・マトリックスの相互作用に関与する分子

【0070】

細胞外マトリックス（ＥＣＭ）は脈管形成に寄与するさまざまな増殖因子及び酵素について濃縮されたプールとして役立つ。インテグリンに関する研究は内皮細胞の生存及び移動に対する種々の細胞外マトリックス成分の効果についての情報を提供している。受容体α５β１フィブロネクチン、コラーゲンＩ及びコラーゲン受容体α１β１及びα２β１は脈管形成を促進すること及び内皮細胞のアポトーシスを抑制することに関与することが示されているのに対して、トロンボスポンジン１及び２（Ｔｓｐ１及びＴｓｐ２）はインテグリン及びプロテアーゼを介して脈管形成を阻止することが示されている［Ｌａｗｌｅｒ，Ｊ．，Ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ａｎｄ－２．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２０００）１２：６３４－６４０を引用して同上］。逆説的に、一部の研究はインテグリンαｖβ３及びインテグリンαｖβ５（フィブロネクチン、フィブリノーゲン、及びフォン・ヴィレブラント因子を結合するインテグリン）をコードする遺伝子を抑制することは脈管形成を阻害しないことを報告している［Ｈｙｎｅｓ，ＲＯ，Ａ ｒｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ａｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２００２）８：９１８－９２１；Ｓｔｕｐａｃｋ，ＤＧ，Ｃｈｅｒｅｓｈ，ＤＡ，Ｇｅｔ ａ ｌｉｇａｎｄ，ｇｅｔ ａ ｌｉｆｅ：ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ，ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．（２００２）１１５：３７２９－３７３８を引用して同上］。他方では、内皮細胞及び壁細胞から放出されるプロテアーゼはマトリックス及び血漿タンパク質を、内皮細胞アポトーシスに介在する成分（プラスミノーゲンの切断から生じるアンジオスタチン）に切断することができるのに対してマトリックスにおけるプロテアーゼ阻害剤は血管の安定性を持続させる［Ｊａｉｎ，ＲＫ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｅｓｓｅｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２００３）９：６８５－６９３を引用して同上］。脈管形成及び血管の安定性プロセスにおける細胞・マトリックス相互作用の正確な役割は理解されていない。

【0071】

カテゴリーＩＩＩ：シグナル伝達経路に関与する分子

【0072】

細胞の活性は細胞のクロストークをもたらす一連の分子事象によって支配される。この調節性細胞シグナル伝達はタンパク質・タンパク質相互作用を主要な細胞プロセス調節因子、と同様に細胞・微小環境の相互作用と関連づける［Ｋｏｌｃｈ，Ｗ．，Ｐｉｔｔ，Ａ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ｔｏ ｄｉｓｓｅｃｔ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ．（２０１０）；１０：６１８－６２９；Ｇａｄｂｏｉｓ，ＤＭ，ｅｔ ａｌ，Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｋｉｎａｓｅ ａｒｒｅｓｔ ｐｏｉｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｇ１ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｎｏｎｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ａｂｓｅｎｔ ｉｎ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．（１９９２）８９：８６２６－８６３０を引用して同上］。異常な細胞シグナル伝達は細胞の機能不全またはがんや糖尿病のような疾患をもたらしてもよい［Ｋｏｌｃｈ Ｗ，Ｐｉｔｔ Ａ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ｔｏ ｄｉｓｓｅｃｔ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ（Ｃａｎｃｅｒ）．２０１０；１０：６１８－６２９を引用して同上］。

【0073】

細胞のシグナル伝達は単一の細胞型の中で集中的に研究されているが、それは２つの異なる細胞種の間、例えば、外見上の胎児細胞が付着され、胎児が子宮内膜組織に移植される場合にも発生してもよい。このプロセスはウイングレス（ＷＮＴ）シグナル伝達のプロセスにてβ－カテニンシグナル伝達分子が介在することが知られている［Ｍｏｈａｍｅｄ，ＯＡ，ｅｔ ａｌ．，Ｕｔｅｒｉｎｅ Ｗｎｔ／ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．（２００５）；１０２：８５７９－８５８４を引用して同上］。

【0074】

脈管形成に関与する細胞成分は、さまざまなクラスのシグナル伝達分子によって触媒される細胞のクロストークの強力な、上手く調整された及び調節されたシステムに依存する。例えば、カルシウムカルモジュリンシグナル伝達経路及び焦点接着タンパク質キナーゼシグナル伝達経路のような幾つかのシグナル伝達経路は、脈管形成の間に内皮前駆細胞・間葉幹細胞及び前駆細胞のクロストークを調節することが同定されている［Ｒｏｈｂａｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｅａｒｌｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｄｕｒｉｎｇ ｎｅｏ－ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ｂｙ ｅｘ ｖｉｖｏ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，（２０１３）８：ｅ６６９０９を引用して同上］。血管微小環境内でそれを介して造血幹細胞及び内皮前駆細胞がコミュニケーションする他のシグナル伝達事象、例えば、ＳＤＦ－１（ＣＸＣＬ１２）／ＣＸＣＲ４シグナル伝達［ＨＯ，ＴＫｅｔ ａｌ， Ｓｔｒｏｍａｌ－ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆａｃｔｏｒ－１（ＳＤＦ－１）／ＣＸＣＬ１２ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｌｅｇ ｉｓｃｈａｅｍｉａ．Ｃａｒｄｉｏｌ Ｒｅｓ．Ｐｒａｃｔ．（２０１２）２０１２：７；Ｐｅｔｉｔ，Ｉ．ｅｔ ａｌ，Ｔｈｅ ＳＤＦ－１－ＣＸＣＲ４ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ： ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｈｕｂ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｎｅｏ－ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００７）２８：２９９－３０７；Ｂｕｒｇｅｒ，ＪＡ，ｅｔ ａｌ，ＣＸＣＲ４ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ （ＣＤ１８４） ａｎｄ ａｌｐｈａ４ｂｅｔａ１ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ｍｅｄｉａｔｅ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＣＤ３４＋ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ａｎｄ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ ｂｅｎｅａｔｈ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ （ｐｓｅｕｄｏｅｍｐｅｒｉｐｏｌｅｓｉｓ）．Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．（２００３）１２２：５７９－５８９；Ｄｅ Ｃｌｅｒｃｑ，Ｅ．，Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ＣＸＣＲ４ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｂｉｃｙｃｌａｍ ＡＭＤ３１００．Ｍｉｎｉ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００５）５：８０５－８２４を引用して同上］、血管内皮増殖因子シグナル伝達（ＶＥＧＦ）［Ｆｅｒｒａｒａ，Ｎ．，ＶＥＧＦ－Ａ：ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌ ｇｒｏｗｔｈ．Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．（２００９）２０：１５８－１６３；Ｎａｇｙ，ＪＡ ｅｔ ａｌ，ＶＥＧＦ－Ａ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐａｔｈｏｌ．（２００７）２：２５１－２７５；Ｐｈａｎｇ，ＬＫ，Ｇｅｒｈａｒｄｔ，Ｈ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：ａ ｔｅａｍ ｅｆｆｏｒｔ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ ｂｙ ｎｏｔｃｈ．Ｄｅｖ．Ｃｅｌｌ．（２００９）１６：１９６－２０８；Ｔｖｏｒｏｇｏｖ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｅｔｗｏｒｋ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ＶＥＧＦＲ ｌｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．（２０１０）；１８：６３０－６４０］、Ｔｉｅ２／Ａｎｇ－１シグナル伝達［同上、下記を引用：Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ，Ｐ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２，ａ ｎａｔｕｒａｌ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｆｏｒ Ｔｉｅ２ ｔｈａｔ ｄｉｓｒｕｐｔｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．（１９９７）２７７：５５－６０，Ｕｅｍｕｒａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１ ｒｅｓｔｏｒｅｓ ｈｉｇｈｅｒ－ｏｒｄｅｒ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ ｏｆ ｇｒｏｗｉｎｇ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｍｕｒａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２００２）１１０：１６１９－１６２８］、ヘッジホッグ［同上、下記を引用：Ｇｕｏ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＨＨ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｐｏｓｔ－ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ．（２０１５）８：１２４６４－１２４７２；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｈｅｄｇｅｈｏｇ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｒｔｅｒｉａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ ｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ ｖｅｎｏｕｓ ｃｅｌｌ ｆａｔｅ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．（２０１０）３４１：１９６－２０４；Ｌａｗｓｏｎ，ＮＤ，ｅｔ ａｌ．，ｓｏｎｉｃ ｈｅｄｇｅｈｏｇ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｃｔ ｕｐｓｔｒｅａｍ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ ｐａｔｈｗａｙ ｄｕｒｉｎｇ ａｒｔｅｒｉａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｄｅｖ．Ｃｅｌｌ．（２００２）３：１２７－１３６を引用して同上］、及びＮｏｔｃｈシグナル伝達［同上、Ｌａｗｓｏｎ，ＮＤ ｅｔ ａｌ．，Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ａｒｔｅｒｉａｌ－ｖｅｎｏｕｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．（２００１）１２８：３６７５－３６８３；Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ Ｈｅｙ１ ａｎｄ Ｈｅｙ２ ａｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．（２００４）１８：９０１－９１１］、と同様にウイングレス（Ｗｎｔ）シグナル伝達［Ｇｏｒｅ，ＡＶ，ｅｔ ａｌ，Ｒｓｐｏ１／Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｖｉａ Ｖｅｇｆｃ／Ｖｅｇｆｒ３．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．（２０１１）１３８：４８７５－４８８６；Ｌｉ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｈｅａｒ ｓｔｒｅｓｓ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｗｎｔ－ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｃａｐｉｔｕｌａｔｅｓ ｖａｓｃｕｌａｒ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ｅｍｂｒｙｏｓ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．（２０１４）３４：２２６８－２２７５；Ｃｈｅｎ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｗｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ １ ｕｎｄｅｒ ｈｙｐｏｘｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｖｅｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｓｃｉ．（２０１６）２３：１３４８－１３５８；Ｚｈａｎｇ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｗｎｔ／ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｉｃ ｆａｔｅ ｏｆ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ．（２０１６）３４：１５７６－１５８７を引用して同上］が研究されている。

【0075】

脈管形成の間に効果的な細胞クロストークを作り出す造血幹細胞と内皮前駆細胞の間でのコミュニケーション経路には以下が挙げられる。

【0076】

ＳＤＦ－１－ＣＸＣＲ４シグナル伝達経路

【0077】

研究は、ＳＤＦ－１（ＣＸＣＬ１２としても知られる）が血管微小環境へのＣＸＣＲ４＋ＢＭの動員に対して極めて重要な影響を有し、損傷した組織及び腫瘍増殖の血管再生をもたらすことを明らかにしている［Ｈｏ，ＴＫ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｏｍａｌ－ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆａｃｔｏｒ－１（ＳＤＦ－１）／ＣＸＣＬ１２ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｌｅｇ ｉｓｃｈａｅｍｉａ．Ｃａｒｄｉｏｌ．Ｒｅｓ．Ｐｒａｃｔ．（２０１２）２０１２：７；Ｐｅｔｉｔ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ＳＤＦ－１－ＣＸＣＲ４ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ：ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｈｕｂ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｎｅｏ－ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００７）２８：２９９－３０７を引用して同上］。ＣＸＣＲ４の活性化が脈管形成を調節する正確なメカニズムは未だ解明されていない。ＳＤＦ－１はまた、血管新生を促すＣＸＣＲ４＋ＶＥＧＦＲ－１＋造血細胞の動員を促進し、それによって損傷した及び虚血の臓器の血管再生をサポートすることが示されている［Ｐｅｔｉｔ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ＳＤＦ－１－ＣＸＣＲ４ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ：ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｈｕｂ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｎｅｏ－ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００７）２８：２９９－３０７を引用して同上］。移動の間にＨＳＣは、ケモカインＳＤＦ－１の受容体であるＣＸＣＲ４、及びインテグリンα４β１を発現することが見いだされている。ＢＭの間質微小環境では、骨芽細胞及び内皮細胞がＳＤＦ－１を放出する一方で、ＣＸＣＲ４は造血前駆細胞によって発現されるので、生体内でのＢＭ生着の成功をサポートしている［同上、Ｂｕｒｇｅｒ，ＪＡ ｅｔ ａｌ．，ＣＸＣＲ４ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ（ＣＤ１８４） ａｎｄ ａｌｐｈａ４ｂｅｔａ１ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ｍｅｄｉａｔｅ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＣＤ３４＋ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ａｎｄ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋａｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ ｂｅｎｅａｔｈ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ（ｐｓｅｕｄｏｅｍｐｅｒｉｐｏｌｅｓｉｓ）．Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．（２００３）１２２：５７９－５８９；Ｄｅ Ｃｌｅｒｃｑ，Ｅ．，Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ＣＸＣＲ４ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｂｉｃｙｃｌａｍ ＡＭＤ３１００．Ｍｉｎｉ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００５）５：８０５－８２４］。

【0078】

ＶＥＧＦシグナル伝達

【0079】

ＶＥＧＦ－ＡなどのＶＥＧＦファミリーの媒介物質は、ＶＥＧＦＲ－２（ＦＬＫ－１）を通して血管形成を開始する間のみならず、最終的に動脈の確立に繋がる管の熟成（動脈形成）の間も、重要な役割を果たす［同上、下記を引用：Ｆｅｒｒａｒａ， Ｎ．， ＶＥＧＦ－Ａ： ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌ ｇｒｏｗｔｈ． Ｅｕｒ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ． （２００９） ２０：１５８－１６３；Ｎａｇｙ， ＪＡ， ， ＶＥＧＦ－Ａ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐａｔｈｏｌ． （２００７） ２：２５１－２７５］。ニューロピリン（ＮＲＰ１及びＮＲＰ２）は、ＶＥＧＦＲ－２の動作を増大させる独立したＶＥＧＦ受容体として作用する。ＶＥＧＦＲ－２の欠乏及びＶＥＧＦ発現の重大な低減が、導管の成長を妨げる［同上、下記を引用：Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ， Ｐ． Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｎａｔ Ｍｅｄ． （２００３） ９：６５３－６６０］。ＶＥＧＦＲ－２の遺伝子エンコーディングにおける突然変異及び多形は、導管の腫瘍の形成、ならびに、異常及び／または病気による血管形成パターンに繋がる［同上、下記を引用：Ｊａｉｎ， ＲＫ， ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ． （２００９） ６：３２７－３３８］。

【0080】

灌流された管では、内皮端細胞がＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦＲ－２及びＶＥＧＦＲ－３に関するリガンドによって活性化されて、ＶＥＧＦ受容体ならびに、ＤＬＬ４及びＪＡＧＧＥＤ１などのＮｏｔｃｈリガンドの存在する中での管の成長に向ける。ＤＬＬ４のアップレギュレーション及び柄細胞内のＮｏｔｃｈシグナリングの活性化は、ＶＥＧＦＲ－２のダウンレギュレーションに繋がり、柄細胞をＶＥＧＦに対して反応しにくくする。こうして、導管の成長が存在する中で端細胞に関するガイドする役割を確実にする［同上、下記を引用：Ｐｈｎｇ， ＬＫ， Ｇｅｒｈａｒｄｔ， Ｈ．， Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ： ａ ｔｅａｍ ｅｆｆｏｒｔ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ ｂｙ ｎｏｔｃｈ． Ｄｅｖ Ｃｅｌｌ． （２００９） １６：１９６－２０８．；Ｔｖｏｒｏｇｏｖ， Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｅｔｗｏｒｋ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ＶＥＧＦＲ ｌｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ． （２０１０） １８：６３０－６４０］。癌細胞、骨髄性細胞、または周皮細胞から分泌されたパラ分泌ＶＥＧＦは、導管の分岐を促し、一方、脈管構造ホメオスタシスが、オートクリンＶＥＧＦ分泌によって維持される［同上、下記を引用：Ｓｔｏｃｋｍａｎｎ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ． Ｎａｔｕｒｅ． （２００８） ４５６：８１４－８１８；Ｌｅｅ， Ｓ． ｅｔ ａｌ．， Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ＶＥＧＦ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｖａｓｃｕｌａｒ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ． Ｃｅｌｌ． （２００７） １３０：６９１－７０３］。

【0081】

ＶＥＧＦＲ－３シグナリングは、出生前の静脈由来の血管形成、及び、前もって存在するものからのリンパ管の再モデリングにおいて重要な役割を果たす。ミノカサゴの研究により、静脈内皮細胞の出現を通しての管の形成が、ＶＥＧＦ－２によって妨げられ、一方で、ＶＥＧＦ－３が、静脈運命の内皮細胞の出現を促進し、静脈の成長に繋がることが明らかになった。［同上、下記を引用：Ｈｅｒｂｅｒｔ， ＳＰ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｔｅｒｉａｌ－ｖｅｎｏｕｓ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｂｙ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃｅｌｌ ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ： ａｎ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍｏｄｅ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｓｃｉｅｎｃｅ． （２００９） ３２６：２９４－２９８］。

【0082】

ＶＥＧＦ－Ｂは、心臓細胞のようないくつかの特定の組織においてのみ血管遺伝子のポテンシャルを示すＶＥＧＦファミリーの別のメンバーであり、管の浸透性に追加の影響を与えることなく、心臓の導管の成長を促す［Ｂｒｙ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－Ｂ ａｃｔｓ ａｓ ａ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｒａｔｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ， ｖａｓｃｕｌａｒ ｌｅａｋ， ｏｒ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ． （２０１０） １２２：１７２５－１７３３］。

【0083】

ＦＬＴ－１としても知られているＶＥＧＦＲ－１は、弱いチロシンキナーゼの作用を有するが、フリーＶＥＧＦのさらなる量をトラップして、ＶＥＧＦＲ－２の作用を正常な状態に維持することができる。ＶＥＧＦＲ－１のブロック及び／または欠乏は、管の過度な成長に繋がる［Ｆｉｓｃｈｅｒ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， ＦＬＴ１ ａｎｄ ｉｔｓ ｌｉｇａｎｄｓ ＶＥＧＦＢ ａｎｄ ＰｌＧＦ： ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔｓ ｆｏｒ ａｎｔｉ－ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ？ Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ． （２００８） ８：９４２－９５６］。対照的に、内皮及び間質のＶＥＧＦＲ－１シグナリングカスケードは、ＶＥＧＦＲ－１＋の癌細胞に関するより高い成長率を提供すること、及び、転移性の状態での内皮細胞におけるマトリックス金属タンパク分解酵素９の発現を増大させることにより、病理学的血管形成を促進することが示されている［同上、下記を引用：Ｓｃｈｗａｒｔｚ， ＪＤ ｅｔ ａｌ．， Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－１ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ： ｃｏｎｃｉｓｅ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＩＭＣ－１８Ｆ１ （ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－１） Ｃａｎｃｅｒ． （２０１０） １１６：１０２７－１０３２］。

【0084】

マウスの単一のＶＥＧＦ対立因子の損失が、ＨＳＣの明確化の前の重大な導管の損傷及び死滅に繋がることが報告されている［同上、下記を引用：Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ， Ｐ．， Ａｂｎｏｒｍａｌ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｌｅｔｈａｌｉｔｙ ｉｎ ｅｍｂｒｙｏｓ ｌａｃｋｉｎｇ ａ ｓｉｎｇｌｅ ＶＥＧＦ ａｌｌｅｌｅ． Ｎａｔｕｒｅ． （１９９６） ３８０：４３５－４３９］。他の研究により、ＶＥＧＦ－ＡがＨＳＣの形成に重要であることが報告されている。より長いＶＥＧＦ－Ａのアイソフォームが、ＨＳＣの明確化に必須である［同上、下記を引用：Ｋｉｍ， ＡＤ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ． Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ． （２０１４） ３２９：２２７－２３３］。同様に、ＶＥＧＦシグナリングが、内皮前駆体からのＨＳＣの形成において重要な影響を有することが示されている［Ｋｉｍ， ＡＤ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ． Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ． （２０１４） ３２９：２２７－２３３］。

【0085】

Ｎｏｔｃｈシグナリング

【0086】

Ｎｏｔｃｈシグナリング経路が、内皮細胞と平滑筋細胞との両方の動脈のプログラムを判定するために必要である。しかし、ＨＳＣの生成に同時に含まれる。このことは、造血細胞を発生させることになる。Ｎｏｔｃｈシグナリングは、ＥＰＣの機能を制御もする。このことは、血管芽細胞の成体の相関物と解釈することができる内皮細胞に分化させることが可能なＢＭ由来の細胞である。さらに、Ｎｏｔｃｈシグナリングは、成体の血管の形成の間に出現する血管形成を制御することが報告されている［同上、下記を引用：Ｃａｏｌｏ， Ｖ． ｅｔ ａｌ．， Ｎｏｔｃｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ， ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ： ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ． Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｔ． （２０１２） ２０１２：８０５６０２］。

【0087】

Ｎｏｔｃｈシグナリングは、ネズミの導管の成長及びＢＭ微環境内の造血の間の細胞運命の決定に関わる。ＢＭニッシェ内のＨＳＣとヒトのＥＰＣとの間の関係を解明するために、ヒトのＣＤ１３３＋ ＥＰＣの増殖及び分化へのＮｏｔｃｈシグナル（Ｊａｇｇｅｄ－１及びｄｅｌｔａ－ｌｉｋｅ ｌｉｇａｎｄ １（Ｄｌｌ－１））の影響を研究する必要がある［同上、下記を引用：Ｃａｏｌｏ， Ｖ． ｅｔ ａｌ．， Ｎｏｔｃｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ， ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ： ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ． Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｔ． （２０１２） ２０１２：８０５６０２］。

【0088】

ヒトのＪａｇｇｅｄ－１－励起性及びヒトのＤｌｌ－１－励起性のＥＰＣの血管遺伝子の特性を生体内で調査するために、これら細胞を、ヌードマウスの虚血性の四肢に移植した。結果により、ＥＰＣの移植がヒトＪａｇｇｅｄ－１によって励起されるが、ヒトＤｌｌ－１によっては励起されず、虚血性の四肢の筋肉の微細管の密度が向上したことが示され、ヒトＮｏｔｃｈシグナリングがＢＭニッシェにおけるＥＰＣの増殖及び分化に影響することを示唆している。ヒトＪａｇｇｅｄ－１は、ヒトＤｌｌ－１に比べ、ＣＤ１３３＋臍帯血始原細胞の増殖及び分化を誘発することが示されている。したがって、ＢＭ微環境内のヒトＪａｇｇｅｄ－１シグナリングが、治療効果のある、及び再生力のある血管遺伝子の干渉に関してＥＰＣを膨張させるために使用することができる。さらに、ＢＭ微環境内のＪａｇｇｅｄ－１シグナリングが、ＥＰＣの増殖及び膨張をサポートし、血管形成の間のＣＤ１３３＋ヒト臍帯血球のコミットメントを促進することが明らかになっている［同上、下記を引用：Ｉｓｈｉｇｅ－Ｗａｄａ， ｅｔ ａｌ．， Ｊａｇｇｅｄ－１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ ｏｆ ＣＤ１３３＋ ｈｕｍａｎ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ． （２０１６） １１：ｅ０１６６６６０］。

【0089】

管の分岐モデルでは、柄細胞が増殖する間、管の端細胞が移動することが示されている。このことが、このモデルにおけるＮｏｔｃｈシグナリングの結果である場合があるという仮説が立てられている［同上、下記を引用：Ｐｈｎｇ， ＬＫ， Ｇｅｒｈａｒｄｔ， Ｈ．， Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ： ａ ｔｅａｍ ｅｆｆｏｒｔ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ ｂｙ ｎｏｔｃｈ． Ｄｅｖ Ｃｅｌｌ． （２００９）１６：１９６－２０８］。ＶＥＧＦＲ－２は、ＶＥＧＦに反応して活性化され、端細胞内のＤＬＬ４の発現を生じる。したがって、ＤＬＬ４は、ＶＥＧＦＲ－２を抑制する柄細胞のＮｏｔｃｈを活性化させ、一方でＶＥＧＦＲ－１をアップレギュレーションし、出現及び分岐が少なくなるが、管の形成が多くなる。ＪＡＧＧＥＤ１は、端細胞を選択するために、柄細胞によって主に発現され、ＤＬＬ４に寄与する別のＮｏｔｃｈリガンドである［同上、下記を引用：Ｂｅｎｅｄｉｔｏ， Ｒ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ ｎｏｔｃｈ ｌｉｇａｎｄｓ Ｄｌｌ４ ａｎｄ Ｊａｇｇｅｄ１ ｈａｖｅ ｏｐｐｏｓｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｃｅｌｌ． （２００９） １３７：１１２４－１１３５］。しかし、Ｎｏｔｃｈシグナリング自体がその阻害物質のＮｏｔｃｈ－制御アンキリンタンパク質を経時的に活性化させると、このシグナリングカスケードが導管微環境を変化させる［同上、下記を引用：Ｐｈｎｇ， ＬＫ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｒａｒｐ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｎｏｔｃｈ ａｎｄ Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｅｓｓｅｌ ｄｅｎｓｉｔｙ ｉｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｄｅｖ Ｃｅｌｌ． （２００９）１６：７０－８２］。

【0090】

Ｎｏｔｃｈシグナリング媒介物質は、確立している管において、動静脈の、及び静脈の内皮構造の成長において重要な役割を果たす［同上、下記を引用：Ｌａｗｓｏｎ， ＮＤ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ａｒｔｅｒｉａｌ－ｖｅｎｏｕｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． （２００１） １２８：３６７５－３６８３；Ｓｈａｗｂｅｒ， ＣＪ， Ｋｉｔａｊｅｗｓｋｉ， Ｊ．， Ｎｏｔｃｈ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ： ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｆｒｏｍ ｚｅｂｒａｆｉｓｈ， ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｍａｎ． Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ． （２００４） ２６：２２５－２３４］。内皮細胞では、Ｎｏｔｃｈシグナリングの活性化が、エフリンＢ２及びＣＤ４４を含む多くの動脈のマーカーの誘導、及び、エフリンＢ型受容体４などの静脈のマーカーの抑制に繋がる［同上、下記を引用：Ｌａｗｓｏｎ， ＮＤ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ａｒｔｅｒｉａｌ－ｖｅｎｏｕｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． （２００１） １２８：３６７５－３６８３；Ｆｉｓｃｈｅｒ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． ， Ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ Ｈｅｙ１ ａｎｄ Ｈｅｙ２ ａｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ． （２００４） １８：９０１－９１１］。

【0091】

ヘッジホッグシグナリング

【0092】

ソニックヘッジホッグ（ｓｈｈ）及びインディアンヘッジホッグ（ｉｈｈ）を含むヘッジホッグ（ｈｈ）ファミリー分子によるシグナリングは、Ｎｏｔｃｈ発現における調整の役割を有し、このため、胚子における導管構造及び動脈の形成に寄与する［同上、下記を引用：Ｓｗｉｆｔ． ＭＲ， Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ， ＢＭ．， Ａｒｔｅｒｉａｌ－ｖｅｎｏｕｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ． （２００９） １０４：５７６－５８８］。ｈｈシグナリングがＶＥＧＦカスケードの遺伝学的に上流であり、このことは、内皮のＮｏｔｃｈ作用を制御することが明らかになっている［同上、下記を引用：Ｌａｗｓｏｎ， ＮＤ ｅｔ ａｌ．， ｓｏｎｉｃ ｈｅｄｇｅｈｏｇ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｃｔ ｕｐｓｔｒｅａｍ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ ｐａｔｈｗａｙ ｄｕｒｉｎｇ ａｒｔｅｒｉａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ． Ｄｅｖ Ｃｅｌｌ． （２００２） ３：１２７－１３６］。ｈｈシグナリングが、導管形成及び内皮生成の正確なパターンを制御する決定的なクロストークの重要なレギュレータであることで締めくくることができる［同上、下記を引用：Ｌａｗｓｏｎ， ＮＤ ｅｔ ａｌ．， ｓｏｎｉｃ ｈｅｄｇｅｈｏｇ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｃｔ ｕｐｓｔｒｅａｍ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ ｐａｔｈｗａｙ ｄｕｒｉｎｇ ａｒｔｅｒｉａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ． Ｄｅｖ Ｃｅｌｌ． （２００２） ３：１２７－１３６；Ｋｉｍ， ＡＤ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ． Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ． （２０１４） ３２９：２２７－２３３］。心筋損傷の行程における血管形成のｓｈｈ発現の影響を調査することを目的とする研究により、ｓｈｈが適用されると、ＶＥＧＦなどの血管遺伝子の構成要素及び線維芽細胞増殖因子が顕著にアップレギュレーションされたことが明らかとされた［同上、下記を引用：Ｇｕｏ， Ｗ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＨＨ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｐｏｓｔ－ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ． Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ． （２０１５） ８：１２４６４－１２４７２］。

【0093】

動脈の内皮細胞の形成が、ミノカサゴモデルにおける静脈細胞運命の抑制を通してのｈｈシグナリングによって誘導されることが示されている。ｈｈシグナリングのアップレギュレーションにより、動脈の細胞集団が高められ、血管形成の間の静脈の細胞運命を妨げる［同上、下記を引用：Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｈｅｄｇｅｈｏｇ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｒｔｅｒｉａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ ｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ ｖｅｎｏｕｓ ｃｅｌｌ ｆａｔｅ． Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ． （２０１０） ３４１：１９６－２０４］。この証拠は、乳癌の腫瘍などの腫瘍の脈管質内のｈｈシグナリングの役割のいくつかの報告［同上、下記を引用：Ｈａｒｒｉｓ， ＬＧ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｖａｓｃｕｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｈｅｄｇｅｈｏｇ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｒ６１． Ｏｎｃｏｇｅｎｅ． （２０１２） ３１：３３７０－３３８０］とともに、導管の形成及び成長におけるｈｈシグナリングの関わりを解明している。

【0094】

Ｗｎｔシグナリング

【0095】

Ｗｎｔシグナリングが、いくつかの組織の明確化及びホメオスタシスを管理することが示されている。Ｗｎｔシグナリング経路は、いくつかの細胞のタイプの表面上のＦｒｉｚｚｌｅｄ（ＦＺＤ）受容体に関連する１９のリガンドで構成されている［同上、下記を引用：Ｂｈａｎｏｔ， Ｐ． ｅｔ ａｌ， Ａ ｎｅｗ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｆｒｉｚｚｌｅｄ ｆａｍｉｌｙ ｆｒｏｍ Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｓ ａ Ｗｉｎｇｌｅｓｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ． Ｎａｔｕｒｅ． （１９９６） ３８２：２２５－２３０；Ｙａｎｇ－ｓｎｙｄｅｒ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ａ ｆｒｉｚｚｌｅｄ ｈｏｍｏｌｏｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ａ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ． Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ． （１９９６） ６：１３０２－１３０６］。リガンド結合が存在しない場合、β－カテニンが減損される［同上、下記を引用：Ｇａｏ， ＺＨ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｓｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｉ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｓ ａｎｄ ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｅｓ ｔｈｅ ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｌｅｘ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． （２００２） ９９：１１８２－１１８７］。しかし、リガンドの誘導を通してのＷｎｔ受容体の作動は、β－カテニンの減損をブロックし、こうして、この分子が細胞核に転移すること、及び、ターゲットとなる遺伝子転写の活性化を可能にする［同上、下記を引用：Ａｎｇｅｒｓ， Ｓ．， Ｍｏｏｎ， ＲＴ， Ｐｒｏｘｉｍａｌ ｅｖｅｎｔｓ ｉｎ Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． （２００９） １０：４６８－４７７］。内皮内のβ－カテニンの欠失が、血球の欠乏に繋がることが明らかになっている［同上、下記を引用：Ｋｉｍ， ＡＤ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒａｖｅｒ Ｄ． Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ． Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ． （２０１４）３２９：２２７－２３３］。これら発見は、Ｗｎｔシグナリングが、ＨＳＣ及び動脈の運命における重要な役割を果たすことを示している。

【0096】

内皮細胞がＷｎｔリガンド及び、内皮細胞の増殖を制御するＦＺＤ受容体を表現することも示されている。管の分岐が発生すると、Ｗｎｔシグナリングが柄細胞内のＮｏｔｃｈによって活性化される［同上、下記を引用：Ｐｈｎｇ， ＬＫ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｒａｒｐ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｎｏｔｃｈ ａｎｄ Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｅｓｓｅｌ ｄｅｎｓｉｔｙ ｉｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｄｅｖ Ｃｅｌｌ． （２００９）；１６：７０－８２９］。マウス内のＷｎｔ及びＦＺＤの遺伝子（Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ５ａ、ＦＺＤ４、及びＦＺＤ５）のいくつかの抑制が、欠陥のある導管構造に繋がった。ＷＮＴ７ａ及びＷＮＴ７ｂの不活性化が、悪化されたＢＢＢ管の形成に繋がることが示されている［同上、下記を引用：Ｄｅｊａｎａ， Ｅ．， Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ． （２０１０） １０７：９４３－９５２］。

【0097】

造血
「造血」との用語は、本明細書で使用される場合、血液の細胞成分が、血液幹細胞（ＨＳＣ）から熟成した、血液の血統の機能的細胞タイプに分化することにより、有機体の寿命を通して継続的に補充されるプロセスに言及する。

【0098】

造血細胞の血統は、ＨＳＣをヒエラルキーのトップに置き、委任始原細胞を発生させるように、組織化される。このことは、次いで、成熟した、分化細胞を発生させる。２つの主要な差異がＨＳＣと委任原種との間に存在する。ＨＳＣは、多能性であり、漠然と自己再生する能力を有している。ＬＴ－ＨＳＣは、まれな、骨髄内の不活性な集団であり、全体の長期間（３ヶ月から４ヶ月より長い）の再編成容量を有している。一方、ＳＴ－ＨＳＣは、短期間（ほとんどが１ヶ月未満）の再生する容量を有するのみである［Ｃｈａｎｇ， Ｈ． ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｔｅｉｎ ＆ Ｃｅｌｌ （２０２０） １１： ３４－４４］。ＬＴ－ＨＳＣはＳＴ－ＨＳＣへと分化し、次いで、ＳＴ－ＨＳＣは、多能性前駆細胞へと分化する。これは、検出可能な自己再生能力を有していない［同上、下記を引用：Ｙａｎｇ， Ｌ． ｅｔ ａｌ． Ｂｌｏｏｄ （２００５） １０５： ２７１７－２３］。自己再生しにくい短期間のＨＳＣ（ＳＴ－ＨＳＣ）及び他の多能性前駆細胞（ＭＰＰ）は、それにも関わらず、単一の細胞のレベルでは完全に多能性である［Ｗｅｉｓｋｏｐｆ， Ｋ． ｅｔ ａｌ， Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｓｐｅｃｔｒ． （２０１６） ４ （５）： ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｓｐｅｃ．ＭＣＨＤ－００３１－２０１６，下記を引用：Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， ＳＪ ｅｔ ａｌ． Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ （１９９７） １２４ （１０）： １９２９－３９］。ＭＰＰの下流には委任前駆体がある。委任された前駆体は、少能性であり（すなわち、これらは、その分化する能力においてＭＰＰよりもさらに制限されている）、自己再生する能力が制限されている。したがって、細胞が造血を通して進行する場合、これらはより分化されることになり、数がより頻繁になる。これらは、同様に、自己再生するそれらの容量を失い、その分化するポテンシャルがさらに制限されることになり、機能的な特殊化のために必要な分子の発現を生じる。分化は、特定の血統に向かう制限を伴って１つの方向に発生し、正常な状況下では、造血系間に分化転換の顕著な証拠はない。

【0099】

造血系は、２つの主要な枝、骨髄系アームとリンパ系アームとに分けられる。Ｃｏｍｍｏｎ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ（ＣＭＰ）は、骨髄系アームを発生させ、このことは、すべての骨髄性細胞を発生させることができる。Ｃｏｍｍｏｎ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ（ＣＬＰ）は、リンパ系アームを発生させ、このことは、すべてのリンパ系細胞を発生させることができる。

【0100】

血液幹細胞（ＨＳＣ）は、骨髄内に存在し、血液系及び免疫系の細胞すべてを形成する能力を有する多能性幹細胞である。この細胞は、自己複製し、複数の血統の子孫に分化する能力を有する。ヒトＨＳＣの作用は、ＣＤ３４Ｔｈｙ－１－集団内に存在する［Ｗｅｉｓｋｏｐｆ， Ｋ． ｅｔ ａｌ．， “Ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌ ｏｒｉｇｉｎｓ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，” Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｓｐｅｃｔｒ． （２０１６） ４（５）： １０．１１２８／ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｓｐｅｃ． ＭＣＨＤ－００３１－２０１６］。ＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ－集団は、ヒト内の真の長期のＨＳＣ（「ＬＴ－ＨＳＣ」）を包含し、一方、ＣＤ９０－ＣＤ４５ＲＡ－集団は、中間の下流の多能性前駆細胞（ＭＰＰ）を表す［同上］。ヒトの骨髄内のｌｉｎ－ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋集団は、自己再生する能力が制限されており、骨髄系にバイアスされた分化の高い割合を示す［同上、下記を引用：Ｍａｎｚ， ＭＧ， ｅｔ ａｌ， “Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ ｃｏｍｍｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ．” Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ （２００２） ９９ （１８）： １１８７２－７７］。ＣＤ４５ＲＡ及びＩＬ－３Ｒαの発現は、この集団をさらに分割し、ＩＬ－３ＲαｌｏＣＤ４５ＲＡ－細胞、ＩＬ－３ＲαｌｏＣＤ４５ＲＡ＋細胞、及びＩＬ－３Ｒα－ＣＤ４５ＲＡ－細胞の、３つの別個のサブ集団を生じる。試験管内で、ＩＬ－３ＲαｌｏＣＤ４５ＲＡ－集団は、混合されたコロニーを含む骨髄系の血統の全領域を発生させ、この集団がヒトの骨髄性共通前駆細胞（ＣＭＰ）を示したことが示唆された［同上、下記を引用：Ｍａｎｚ， ＭＧ， ｅｔ ａｌ， “Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ ｃｏｍｍｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ．” Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ （２００２） ９９ （１８）： １１８７２－７７］。一方、ＩＬ－３ＲαｌｏＣＤ４５ＲＡ＋集団は、顆粒細胞及びマクロファージの血統の細胞を発生させるのみであり、ＩＬ－３Ｒα－ＣＤ４５ＲＡ－集団は、赤血球の、及び巨大核細胞の血統の細胞を優勢的に発生させる。それにより、これら集団が、顆粒細胞／マクロファージの血統に制限された前駆体（ＧＭＰ）及び巨大核細胞／赤血球の系統に制限された前駆体（ＭＥＰ）をそれぞれ表したことを示している［同上、下記を引用：Ｍａｎｚ， ＭＧ， ｅｔ ａｌ， “Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ ｃｏｍｍｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ．” Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ （２００２） ９９ （１８）： １１８７２－７７］。

【0101】

ヒトのＭＥＰの集団内では、分別の研究が、単能性のヒトの赤血球前駆体（ＥＰ）を、ＣＤ７１ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ（ｉｎｔ）／＋ＣＤ１０５＋として規定することを補助し、清浄のために分類されると、試験管内で、巨大核細胞のポテンシャルなしで排他的に赤血球を生じた［同上、下記を引用：Ｍｏｒｉ， Ｙ． ｅｔ ａｌ．， “Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ ｌｉｎｅａｇｅ－ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ，” Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ （２０１５） １１２ （３１）： ９６３８－４３］。さらに、赤血球にバイアスされたＭＥＰ（Ｅ－ＭＥＰ）は、ＭＥＰとＥＰとの間の中間であった、ＣＤ７１＋ＣＤ１０５として識別された［同上］。ヒトの赤血球生成の下流段階も、清浄に隔離されており、原初の赤血球の始原細胞（バースト形成単位赤血球またはＢＦＵ－Ｅ）及び後の段階のコロニー形成単位赤血球（ＣＦＵ－Ｅ）を含んでいる。これら集団は、主として、それぞれＩＬ－３Ｒ－ＣＤ３４＋ＣＤ３６－及びＩＬ－３Ｒ－ＣＤ３４－ＣＤ３６＋として識別した［同上、下記を引用：Ｌｉ， Ｊ． ｅｔ ａｌ， “Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ： ＢＦＵ－Ｅ ａｎｄ ＣＦＵ－Ｅ．” Ｂｌｏｏｄ （２０１４） １２４ （２４）： ３６３６－４５］。

【0102】

骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）は、骨髄の、血球を生成する能力（すなわち、造血）のメカニズムの理解のために重要である。ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）などの他の内皮細胞のタイプの研究により、経内皮遊走が、表面の受容体または粘着作用分子の発現に依存しており、このことは、炎症性サイトカインによって誘発され得るものであったことが示された。したがって、成熟した血球の開放、ならびに、ＨＳＣ／ＨＰＣの流動及びホーミングが、類似のメカニズムによって制御されていると考えられた。ＢＭＥＣは、様々なサイトカインの生成を介して、及び、同様に、場合によっては物理的接触を介して、試験管内で、造血前駆細胞の増殖及び分化をサポートすることが分かった。巨大核細胞とＢＭＥＣとを同一の培養器内で同時に培養することが、ＢＭＥＣの生存の延長に繋がったが、この理由は、おそらく、巨大核細胞が、内皮細胞の生存因子のＶＥＧＦ－Ａを分泌したためである［Ｋｏｐｐ， ｅｔ． ａｌ． ”Ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｉｃｈｅ： Ｈｏｍｅ ｏｆ ＨＳＣ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．” ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ ２０： ３４９－３５６， ２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５］。

【0103】

骨髄微環境の脈管構造の充足も、造血に重要である。むしろ、ＢＭＥＣとの、導管ニッシェの相互作用の機能は、ＨＳＣのサポートを促す細胞性プラットフォームを提供するものである。しかし、内皮細胞の適切な構造的完全性がこの成長に繋がる分子のメカニズムは、依然として不明確である［Ｋｏｐｐ， ｅｔ． ａｌ． ”Ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｉｃｈｅ： Ｈｏｍｅ ｏｆ ＨＳＣ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．” ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ ２０： ３４９－３５６， ２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５］。
造血におけるｍＴＯＲシグナリング

【0104】

ＨＳＣは、増殖及び分化を、その利用可能な必須の栄養素及び代謝の需要と調和させる必要がある［Ｗａｎｇ， Ｘ．， Ｃｈｕ， Ｙ．， Ｗａｎｇ， Ｗ．， ＆ Ｙｕａｎ， Ｗ． （２０１６）． ｍＴＯＲＣ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ， １０３（５）， ５１０－５１８］。ほ乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）のシグナリングは、代謝に関する栄養素検知経路の重要な統合器として作用し、胚に関する成長及び成熟の間の造血を制御することにおける必須の役割を果たす［同上］。

【0105】

ｍＴＯＲは、セリン／トレオニン（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）タンパク質キナーゼのホスファチジルイノシトール－３キナーゼ関連－ｋｉｎａｓｅ（ＰＩ３ＫＫ）ファミリーに属する。これは、栄養素及びホルモンの刺激に応じた、細胞の成長及び代謝のセンサーとして作用する［同上］。ｍＴＯＲは、ｍＴＯＲ ｃｏｍｐｌｅｘ １（ｍＴＯＲＣ１）とｍＴＯＲ ｃｏｍｐｌｅｘ ２（ｍＴＯＲＣ２）との２つの複合体を形成する。これらは、同じ触媒のｍＴＯＲサブユニットと、ｍＬＳＴ８、ＤＥＰＴＯＲ、及びＴｔｉ１／ Ｔｅｌ２の、別の３つの既知の複合体成分とを共有する［同上、下記を引用：Ｋｉｍ， ＤＨ， ｅｔ ａｌ．， ｍＴＯＲ ｉｎｔｅｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ｒａｐｔｏｒ ｔｏ ｆｏｒｍ ａ ｎｕｔｒｉｅｎｔ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ｔｈａｔ ｓｉｇｎａｌｓ ｔｏ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｍａｃｈｉｎｅｒｙ． Ｃｅｌｌ． （２００２） １１０（２）：１６３－７５；Ｊａｃｉｎｔｏ， Ｅ． ｅｔ ａｌ．， Ｍａｍｍａｌｉａｎ ＴＯＲ ｃｏｍｐｌｅｘ ２ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ａｃｔｉｎ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ａｎｄ ｉｓ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ． Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． （２００４） ６（１１）：１１２２－８；Ｐｅｔｅｒｓｏｎ， ＴＲ， ｅｔ ａｌ．， ＤＥＰＴＯＲ ｉｓ ａｎ ｍＴＯＲ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅｉｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ． Ｃｅｌｌ． （２００９） １３７（５）：８７３－８６；Ｋａｉｚｕｋａ， Ｔ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｔｉ１ ａｎｄ Ｔｅｌ２ ａｒｅ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ａｓｓｅｍｂｌｙ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． （２０１０） ２８５（２６）：２０１０９－１６］。さらに、ｍＴＯＲＣ１は、調整に関連するほ乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｒａｐｔｏｒ）及びＰＲＡＳ４０の特有のサブユニットを有している。ｍＴＯＲＣ２は、ラパマイシン比感受性ｍＴＯＲコンパニオン（ｒｉｃｔｏｒ）、ｍＳｉｎ１、及びｐｒｏｔｏｒ１／２を、その特有の成分として有している［Ｗａｎｇ， Ｘ．， ｅｔ ａｌ． （２０１６）． ｍＴＯＲＣ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ， １０３（５）， ５１０－５１８；下記を引用：Ｈａｒａ， Ｋ． ｅｔ ａｌ．， Ｒａｐｔｏｒ， ａ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐａｒｔｎｅｒ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ （ＴＯＲ）， ｍｅｄｉａｔｅｓ ＴＯＲ ａｃｔｉｏｎ． Ｃｅｌｌ． （２００２）１１０（２）：１７７－８９；Ｊａｃｉｎｔｏ， Ｅ． ｅｔ ａｌ．， ＳＩＮ１／ＭＩＰ１ ｍａｉｎｔａｉｎｓ ｒｉｃｔｏｒ－ｍＴＯＲ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ａｋｔ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ． Ｃｅｌｌ． （２００６）１２７（１）：１２５－３７ｌ；Ｐｅａｒｓｅ， ＬＲ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｏｒ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｒｉｃｔｏｒ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ｍＴＯＲ ｃｏｍｐｌｅｘ－２． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ． （２００７） ４０５（３）：５１３－２２ ．Ｓａｎｃａｋ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ．， ＰＲＡＳ４０ ｉｓ ａｎ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｍＴＯＲＣ１ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ． Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ． （２００７） ２５（６）：９０３－１５］。

【0106】

ｍＴＯＲシグナリングに関連する重要な制御分子の遺伝子の研究により、胚と成体との両方の造血のｍＴＯＲの経路の中心的役割が証明されている。ｍＴＯＲ、ならびに、Ｒａｐｔｏｒ、Ｒｉｃｔｏｒ、及びｍＳｉｎ１などの、その複合体成分は、胚子の成長の間に重要な役割を果たす。ｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、またはＲａｐｔｏｒが欠如したマウスは、成長の中で早死にし、様々な臓器に機能的な異常を示した［同上、下記を引用：Ｇｕｅｒｔｉｎ， ＤＡ， ｅｔ ａｌ．， Ａｂｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍＴＯＲＣ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｒａｐｔｏｒ， ｒｉｃｔｏｒ， ｏｒ ｍＬＳＴ８ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｈａｔ ｍＴＯＲＣ２ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｏ Ａｋｔ－ＦＯＸＯ ａｎｄ ＰＫＣａｌｐｈａ， ｂｕｔ ｎｏｔ Ｓ６Ｋ１． Ｄｅｖ Ｃｅｌｌ． （２００６） １１（６）：８５９－７１；Ｇａｎｇｌｏｆｆ ＹＧ， ｅｔ ａｌ．， Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｍＴＯＲ ｇｅｎｅ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｅａｒｌｙ ｐｏｓｔ－ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｌｅｔｈａｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｈｉｂｉｔｓ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． （２００４） ２４（２１）：９５０８－１６；Ｍｕｒａｋａｍｉ Ｍ， ｅｔ ａｌ． ｍＴＯＲ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｍｏｕｓｅ ｅｍｂｒｙｏｓ ａｎｄ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． （２００４） ２４（１５）：６７１０－８；Ｓｈｉｏｔａ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｍｕｌｔｉａｌｌｅｌｉｃ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｉｃｔｏｒ ｇｅｎｅ ｉｎ ｍｉｃｅ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｈａｔ ｍＴＯＲ ｃｏｍｐｌｅｘ ２ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｆｅｔａｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ． Ｄｅｖ Ｃｅｌｌ． （２００６） １１（４）：５８３－９］。暫定的なｍＴＯＲ欠失は、血液幹細胞に関する休止の損失の結果となり、過渡応答の増大に繋がるが、致死的な放射線を浴びた受領体のマウスの、ＨＳＣの長期間の枯渇及びＨＳＣの不完全な移植に繋がる［同上、下記を引用：Ｇｕｏ， Ｆ． ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｕｓｅ ｇｅｎｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｒｅｖｅａｌｓ ａｎ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｍＴＯＲ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ． （２０１３） ９８（９）：１３５３－８］。これら結果は、ｍＴＯＲが血液幹細胞の移植及び複数血統の造血に必須であることを照明している［Ｗａｎｇ， Ｘ．， ｅｔ ａｌ． （２０１６）． ｍＴＯＲＣ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ， １０３（５）， ５１０－５１８）］。

【0107】

同様に、ｍＴＯＲの過度な活性化は、ＨＳＣを、休止から、よりアクティブな細胞サイクルに移行させる。たとえば、ｍＴＯＲの過度な活性化が、ミトコンドリア生合成を増大させ、かなり高いレベルの活性酸素種（ＲＯＳ）の蓄積を生じた［同上、下記を引用：Ｃｈｅｎ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ ａｘｉｓ ｏｆ ｍＴＯＲ－ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ－ＲＯＳ ａｎｄ ｓｔｅｍｎｅｓｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ． ２００９；８（８）：１１５８－６０；Ｃｈｅｎ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， ＴＳＣ－ｍＴＯＲ ｍａｉｎｔａｉｎｓ ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ． ２００８；２０５（１０）：２３９７－４０８］。ＲＯＳの除去により、異常なほど活性化されたｍＴＯＲに関連するＨＳＣの欠陥を救助した［同上、下記を引用：Ｃｈｅｎ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ （２００９） ８（８）：１１５８－６０］。さらに、ＴＳＣ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｓｕｂｕｎｉｔ １（ＴＳＣ１、ｍＴＯＲＣ１シグナリングを消極的に制御するＴＳＣ２を有するｈａｍａｒｔｉｎ－ｔｕｂｅｒｉｎ複合体の一部）の造血系の欠失が、連続した競争的な骨髄の移植によって明らかにされるように、ＨＳＣの自己再生を低減させた。ＲＯＳ拮抗剤での生体内の治療は、ＨＳＣの数及び機能を回復させた。これらデータは、ＴＳＣ－ｍＴＯＲの経路が、ＨＳＣの休止に重要であり、ＲＯＳの生成を抑制することによってＨＳＣの休止を維持することを証明した［Ｃｈｅｎ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， ＴＳＣ－ｍＴＯＲ ｍａｉｎｔａｉｎｓ ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ． （２００８） ２０５（１０）：２３９７－４０８；Ｇａｎ Ｂ， ｅｔ ａｌ． ｍＴＯＲＣ１－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｄ －ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｒｅｎｅｗａｌ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ． （２００８） １０５（４９）：１９３８４－９］。

【0108】

さらに、他の研究により、若いマウスからのものに比べ、年老いたマウスから、ＨＳＣの増大したｍＴＯＲの活動が示された。暫定的なＴＳＣ１欠失が、ｍＴＯＲＣ１の活動を低減させ、ＨＳＣの再生容量を阻害した。ＴＳＣ１が欠けているＨＳＣの表現型は、野生型の年老いたマウスから得られたＨＳＣのものといくつかの方法で類似である。データは、ｍＴＯＲシグナリングがＨＳＣの老化に重要であることを示している［同上、下記を引用：Ｃｈｅｎ Ｃ， ｅｔ ａｌ． ｍＴＯＲ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｇｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ． （２００９） ２（９８）：ｒａ７５］。

【0109】

Ｒａｐｔｏｒ、ｍＴＯＲＣ１の必須の構成要素の欠乏は、ＣＤ４８＋ＣＤ１５０－及びＣＤ４８＋ＣＤ１５０＋のＬＳＫの集団の拡大に繋がり、より多くのＳＴ－ＨＳＣの、Ｇ０フェイズからＧ１フェイズへの移行を促進する［同上］。さらに、Ｒａｐｔｏｒが欠乏したＢＭ細胞は、致死的な放射線を浴びた受容体のマウスの造血を再構築できない［同上、下記を引用：Ｋａｌａｉｔｚｉｄｉｓ， Ｄ． ｅｔ ａｌ．， ｍＴＯＲ ｃｏｍｐｌｅｘ １ ｐｌａｙｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｔｅｎ－ｌｏｓｓ－ｅｖｏｋｅｄ ｌｅｕｋｅｍｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ． （２０１２） １１（３）：４２９－３９］。Ｒｉｃｔｏｒ、造血系のｍＴＯＲＣ２の調整に関連するタンパク質のけ欠失は、ＨＳＣの数及びその機能に影響しなかった。Ｒｉｃｔｏｒが不足している骨髄細胞は、移植の後に少なくとも１６週間、すべての受容体のマウスの、長期の多系統の再構築を達成した。しかし、未成熟の段階でのＢ細胞のブロックに起因してＢ細胞の成長が低減された［同上、下記を引用：Ｋｅｎｔｓｉｓ， Ａ．， Ｌｏｏｋ， ＡＴ， Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｎｄ ｄｙｎａｍｉｃ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｍＴＯＲ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ． （２０１２） １１（３）：２８１－２；Ｍａｇｅｅ， ＪＡ， ｅｔ． ａｌ．， Ｔｅｍｐｏｒａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ＰＴＥＮ ａｎｄ ｍＴＯＲＣ２ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ． （２０１２） １１（３）：４１５－２８；Ｚｈａｎｇ， Ｙ． ｅｔ ａｌ．， Ｒｉｃｔｏｒ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ Ｂ ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ． （２０１４） ９（８）：ｅ１０３９７０］。

【0110】

ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２も、ＨＳＣホメオスタシスの役割を果たす。証拠により、ＨＳＣが、低い灌流及び低い栄養素のニッシェに存在するが、細胞の代謝が幹細胞の機能をどのように制御するかはあまり理解されていない。いくつかの研究により、いくつかの栄養素を検知する経路がＨＳＣホメオスタシスに寄与することが証明されている。たとえば、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．は、ｍＴＯＲの経路の抑制、確立された栄養素センサーが、通常のＷｎｔ－β－カテニンシグナリングの作用と合わせて、サイトカインの無い条件下で、生体外でのヒト及びマウスの長期のＨＳＣの維持を可能にすることを報告した［同上、下記を引用：Ｈｕａｎｇ， Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｗｎｔ ａｎｄ ｍＴＯＲ ｐａｔｈｗａｙｓ． Ｎａｔ Ｍｅｄ． （２０１２） １８（１２）：１７７８－８５］。彼らは、ＣＨＩＲ９９０２１（ＧＳＫ－３防止剤）とラパマイシン（ｍＴＯＲ防止剤）との組合せが、Ｗｎｔ－β－カテニンを活性化させ、ｍＴＯＲシグナリングを防止し、生体内の長期間のＨＳＣ（ＬＴ－ＨＳＣ）の絶対数を増加させることをも示した［同上、下記を引用：Ｈｕａｎｇ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｍｅｄ． （２０１２） １８（１２）：１７７８－８５］。さらに、ＧＳＫ－３は、マウス内のＨＳＣ ＷｎｔとｍＴＯＲシグナリングとの両方を制御し、こうして、ＨＳＣの自己再生及び系統のコミットメントを促進する。ラパマイシンが存在する中でのＧＳＫ－３の防止は、生体内のＨＳＣプールを拡大した［同上、下記を引用：Ｈｕａｎｇ， Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｐｉｖｏｔａｌ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｇｌｙｃｏｇｅｎ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｋｉｎａｓｅ－３ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． （２００９） １１９（１２）：３５１９－２９］。さらに、ｍＴＯＲ及びｐ３８の分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナリング経路が、高いＲＯＳレベルで、ＨＳＣ集団内で常に活性化された。しかし、この集団は、より低いＲＯＳレベルでのＨＳＣ集団に比べて迅速に枯渇した。ｍＴＯＲ防止剤またはｐ３８防止剤での治療は、生体内でのＨＳＣの機能を回復させることができる［同上、下記を引用：Ｊａｎｇ， ＹＹ， Ｓｈａｒｋｉｓ， ＳＪ， Ａ ｌｏｗ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ｅｌｅｃｔｓ ｆｏｒ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｍａｙ ｒｅｓｉｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｌｏｗ－ｏｘｙｇｅｎｉｃ ｎｉｃｈｅ． Ｂｌｏｏｄ． ２００７；１１０（８）：３０５６－６３］。

【0111】

ＨＳＣ及び造血の課題

【0112】

すべての造血及び免疫細胞は、ＨＳＣ及びＨＰＣにより、ステップ毎の血統のコミットメントの高度に組織化されたプロセスを通して継続的に生成される［Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ， Ｌ． Ｖ．， Ｆｒｉｔｓｃｈ， Ｋ．， Ｆｅｎｇ， Ｘ．， Ｍａｎｚ， Ｍ． Ｇ．， ＆ Ｔａｋｉｚａｗａ， Ｈ． （２０１６）． Ｉｎｆｌａｍｍ－Ａｇｉｎｇ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ， Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ７］。定常状態では、ＨＳＣは、ほとんど不活性な状態であるが、ＨＰＣは能動的に増殖しており、日々の造血に寄与している。

【0113】

たとえば、生命を危険にさらす血液の消失、感染、及び炎症など、造血の課題に応じて、ＨＳＣは、増殖し、血液の形成に関わるように活性化させることができる（（同上））。
炎症

【0114】

炎症性シグナルは、発達中の造血幹細胞（ＨＳＣ）の胚性特定、感染時の緊急顆粒球形成、及び移植後の造血再生を含む様々なプロセスで重要な役割を果たす［Ｂａｌｄｒｉｄｇｅ， Ｍ． Ｔ．， Ｋｉｎｇ， Ｋ． Ｙ． ＆ Ｇｏｏｄｅｌｌ， Ｍ． Ａ． Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｉｇｎａｌｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１１） ３２， ５７－６５， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｔ．２０１０．１２．００３；Ｚｈａｏ， Ｊ． Ｌ． ＆ Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， Ｄ． Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｅｓｓ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｃｕｒｒｅｎｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ （２０１５） ２２， ２８６－２９２， ｄｏｉ：１０．１０９７／ｍｏｈ．０００００００００００００１４９；Ｂｏｅｔｔｃｈｅｒ， Ｓ． ＆ Ｍａｎｚ， Ｍ． Ｇ． Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ－ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ－Ｄｒｉｖｅｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１７）３８， ３４５－３５７， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｔ．２０１７．０１．００４；Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ， Ｒ．， Ｗｅｉｊｔｓ， Ｂ．， Ｍｕｌｅｒｏ， Ｖ． ＆ Ｔｒａｖｅｒ， Ｄ． Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｓｉｇｎａｌｓ ａｓ Ｆｕｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｆｉｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１８） ２８， ５８－６６， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔｃｂ．２０１７．０８．００３；Ｂｏｗｅｒｓ， Ｅ． ｅｔ ａｌ． Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ＴＮＦａｌｐｈａ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｖａｓｃｕｌａｒ ａｎｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ． Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２０１８） ２４， ９５－１０２， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．４４４８参照］。

【0115】

全ての幹細胞ニッチが、動的であり、細胞ターンオーバーを示すが、『永続的な居住者』であるニッチ細胞（例えば、内皮細胞、神経細胞、及び結合組織線維芽細胞）と一時的にニッチを占める細胞（例えば、免疫細胞、及び、例えば、病原体から保護するか、または治癒を促進するために組織損傷に応答する細胞）を区別することは有用である。常在ニッチ細胞とは対照的に、自然及び適応免疫系の多くの細胞は、組織に出入りする。免疫細胞の機能は、幹細胞の機能を促進するように調節することができる。［Ｌａｎｅ， Ｓ． Ｗ．， ｅｔ ａｌ． Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （２０１４）３２， ７９５－８０３］。

【0116】

ＨＳＣの発達を調節する前炎症性メディエーターは、トール様受容体（ＴＬＲ）、サイトカイン、及びエイコサノイドを含み、これらのそれぞれは、傷害と戦う免疫系を活性化する。傷害または病原体による組織破壊は、典型的な炎症を引き起こす前炎症性サイトカインの放出につながる。要約すると、骨髄細胞（例えば、マクロファージ及び好中球）は、トール様受容体（ＴＬＲ）及びヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様受容体（ＮＬＲ）を備え、これは、ダメージ関連分子パターン（ＤＡＭＰ）及び病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）の認識時に、前炎症性サイトカイン及びエイコサノイドの増殖を誘導する。ＴＬＲは、マスター炎症／免疫転写因子核因子カッパＢ（ＮＦ－κＢ）を介して、遺伝子発現の誘導及び主要な前炎症性サイトカインであるインターロイキン（ＩＬ）－１β及びＩＬ－１８の細胞内蓄積を促進する。続いて、ＮＬＲによる細胞質区画内のＰＡＭＰ／ＤＡＭＰの認識は、カスパーゼ１媒介性タンパク質分解切断ならびに前炎症性サイトカイン及びサイトゾルホスホリパーゼＡ２媒介性エイコサノイド生合成の放出を促進する。次に、前炎症性サイトカイン及びエイコサノイドが免疫細胞を活性化して、感染の原因を取り除き、健康な組織を回復させる。［Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｓｉｇｎａｌｓ ａｓ Ｆｕｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｆｉｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１８） ２８， ５８－６６］。

【0117】

ＨＳＣは、細胞の内因性機序及び外因性機序の両方による免疫または組織の傷害を感知すると考えられる。ＨＳＣは、前炎症性サイトカイン、ケモカイン、及びＰＡＭＰＳを含む、局所的に産生されたサイトカイン（ニッチ／微小環境）及び末端（損傷または感染）で産生されたサイトカインに動的に応答する。ＨＳＣ及び造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）は、間接的に（前炎症性サイトカインもしくはＤＡＭＰを介して）または直接（ＰＡＭＰを介して）免疫または組織の傷害を感知する。通常、ＨＳＣは、多くの場合、リンパ球産生及び赤血球形成を犠牲して、正常な造血を骨髄造血に偏らせることにより、前炎症性シグナルに応答し、これは、既存の細胞が感染部位に動員されているので、骨髄細胞数を満たすように生じると考えられる。［Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｓｉｇｎａｌｓ ａｓ Ｆｕｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｆｉｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１８） ２８， ５８－６６］。

【0118】

分化した免疫細胞と同様に、ＨＳＣは、ＴＬＲの発現を通じて傷害を認識する。ＨＳＣにおけるＴＬＲシグナルのライゲーションは、増殖及び分化につながる。ＨＳＣによる組織または免疫傷害の細胞外因性認識モードは、前炎症性サイトカインの受容体を介したシグナル伝達を含む。［Ｎａｋａｇａｗａ， Ｍ． Ｍ．， ｅｔ ａｌ． Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦ－κＢ Ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｃａｕｓｅｓ Ｌｏｓｓ ｏｆ Ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｄｅｒｅｇｕｌａｔｅｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ｎｅｔｗｏｒｋｓ． Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１８） ６： １４３］。

【0119】

ＩＬ１、ＩＬ６、ＩＬ８、ＴＮＦ、ＣＣ－ケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＩＦＮ－α、及びＩＦＮ－γを含む様々な前炎症性サイトカイン及びケモカインは、ＨＳＣに影響を与えることが示される。実に、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＴＬＲ２、ＴＬＲ７、及びＴＬＲ８のアゴニストの刺激は、サイトカイン産生、例えば、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、及びＧＭ－ＣＳＦ、ならびに骨髄系列の細胞分化を誘導することが示されている［Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ， Ｌ． Ｖ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｆｌａｍｍ－Ａｇｉｎｇ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ， Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１６） ７： ５０２， ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０２，下記を引用：Ｓｉｏｕｄ Ｍ， ｅｔ ａｌ． Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７／８ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ＣＤ３４＋ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｌｏｎｇ ｔｈｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｉｎｅａｇｅ． Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ （２００６） ３６４：９４５－５４；Ｓｉｏｕｄ Ｍ， Ｆｌｏｉｓａｎｄ Ｙ． ＴＬＲ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ＣＤ３４＋ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｉｎｔｏ ＣＤ１１ｃ＋ ＣＤ８０／８６＋ ＤＣ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ａ Ｔｈ１－ｔｙｐｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ． Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００７） ３７：２８３４－４６］。ヒトＣＤ３４＋ＨＳＰＣをＩＦＮ－γに曝露すると、生細胞数の増加をもたらすプロアポトーシスプロセス、免疫応答、及び骨髄増殖に関与する遺伝子に劇的な転写変化を生じることが示されている［同上、下記を引用：Ｃａｕｘ Ｃ， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｆａｃｔｏｒ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＣＤ３４＋ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． Ｂｌｏｏｄ （１９９２） ７９：２６２８－３５， Ｚｅｎｇ Ｗ， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＣＤ３４ ｃｅｌｌｓ： ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｐｒｏｆｉｌｅｓ． Ｂｌｏｏｄ （２００６） １０７：１６７－７５］。ＨＳＰＣに特異的である転写変化もあれば、一般にＩＦＮ－γと共にインキュベートされた間質細胞で生じる転写変化、例えば、細胞成長及びシグナル伝達もある［同上、下記を引用：Ｚｅｎｇ Ｗ， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＣＤ３４ ｃｅｌｌｓ： ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｐｒｏｆｉｌｅｓ． Ｂｌｏｏｄ （２００６） １０７：１６７－７５］。対照的に、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦによるｉｎ ｖｉｔｒｏ刺激は、異種移植マウスで多系列再構成を受けるＨＳＰＣの能力を著しく損なうことを、研究は示している。［同上、下記を引用：Ｄｙｂｅｄａｌ Ｉ， ｅｔ ａｌ． Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ （ＴＮＦ）－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐ５５ ＴＮＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｃｙｃｌｉｎｇ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｂｌｏｏｄ （２００１） ９８：１７８２－９１， Ｙａｎｇ Ｌ， ｅｔ ａｌ． ＩＦＮ－ｇａｍｍａ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ｏｆ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００５） １７４：７５２－７］。膜固定型ＴＮＦ－αは、同種及び同系のレシピエントにおける精製ＨＳＣの生着を高めることが判明している。［Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１８） ２８： ５８－６６］。

【0120】

前炎症性サイトカインへのＨＳＣの長期曝露は、自己複製及び静止の低下を引き起こす。前炎症性応答を生じるための静止状態のＥＣの活性化は、通常、転写因子核因子κＢ（ＮＦ－κΒ）により引き起こされ、これは、ＴＮＦ－α、インターロイキン－１（ＩＬ－１）、Ｅ－セレクチン、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ－１）、及び細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ－１）を含む前炎症性遺伝子の転写を活性化するだけでなく、ＥＣをアポトーシスに対してより感受性があるようにする［Ｊｉｎ， Ｚ．， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｓｃｉ． （２０１９） ２０（１）： １７２；下記を引用：Ｐｏｂｅｒ， ＪＳ， Ｓｅｓｓａ， ＷＣ， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （２００７） ７： ８０３－８１５；Ａｏｋｉ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ （２００１） ３８： ４８－５５；Ｋｅｍｐｅ， Ｓ． ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． （２００５） ３３： ５３０８－５３１９］。

【0121】

前炎症性免疫調節因子の役割は、成体ＨＳＣ機能に限定されない。研究によると、前炎症性経路、例えば、典型的な前炎症性転写因子ＮＦ－κＢは、脊椎動物及び無脊椎動物の両方で胚形成時の造血系の形成に関連することが判明している。他の免疫調節剤も、ＨＳＣ仕様（同一性）、造血系形成中の出現及び維持に影響を及ぼす。例えば、免疫細胞の機能、増殖、及び分化を調節するサイトカインであるＩＬ－３は、ＨＳＣ仕様の必須の転写因子であるＲｕｎｘ１の下流で作用することにより、ＨＳＣ仕様の部位であるマウス大動脈－性腺－中腎（ＡＧＭ）領域におけるＨＳＣの生存期間を促進することが判明している。別の例では、炎症の調節因子であるＩＬ－１が、ＨＳＣ増殖を促進することにより、ＨＳＣの発生に積極的な役割を果たす。炎症の主要な調節因子であるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）は、ｃＡＭＰ／ＰＫＡ媒介性安定化リン酸化イベントを介してベータ－カテニン分解のレベルで、ＨＳＣのＷｎｔを自律的に制御することにより、ＨＳＣの出現または増殖の強力な誘導因子であることも示されている。［Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１８） ２８， ５８－６６］。

【0122】

ＨＳＣの運命決定は、前炎症性サイトカインＴＮＦα、ＩＦＮγ、及びＩＬ－１βに関連しており、ＴＬＲ４シグナル伝達に加えて、これらのサイトカインは、それぞれＨＳＣ仕様の重要な決定要因である。ＴＮＦαは、造血能を獲得し、例えば、胚外卵黄嚢及び胚性大動脈－性腺－中腎において、狭い発達ウィンドウの間に、多系列の造血幹細胞及び前駆細胞を生じさせ得る発達中の血管内皮細胞の特殊なサブセットである造血内皮細胞（ＨＥ）からＨＳＣを特定するために、ＴＮＦ受容体２（ＴＮＦＲ２）を介して作用する。［Ｇｒｉｚ，Ｅ．“Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍｏｇｅｎｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｄｕｒｉｎｇ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ，”Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．（２０１６）７３：１５４７－６７］。ＴＮＦＲ２の作用は、背側大動脈のＨＳＣ仕様に不可欠なＮｏｔｃｈリガンドであるｊａｇ１ａの発現に必要とされる。Ｊａｇ１シグナルの発現は、ＨＳＣの運命を確立するのを助けるために、隣接する造血内皮細胞（すなわち、ＨＳＰＣが由来する特殊な内皮細胞）上のＮｏｔｃｈ１ａ受容体にシグナル伝達する。前炎症性転写因子ＮＦ－κＢは、新生ＨＳＣで活性があることが判明している。ＴＮＦＲ２、ＮＦ－κＢメンバーｐ６５、及びＴＬＲ４は全て、ＨＳＣで上方調節される。さらに、ＴＬＲ４、ＩＬ－１β、及びＴＮＦαは、ＮＦ－κＢ及びＮｏｔｃｈの上流で作用することにより、ＨＳＣ仕様に必要とされる。内皮細胞ではなくＨＳＣが、ＩＦＮに迅速に応答することが実証された。ＩＦＮ－α４及びＩＦＮ－γは、それぞれ、ＩＦＮαＲ１及びＩＦＮγＲ１を介した脊椎動物全体のＨＳＣ仕様にも必要とされる。ＴＮＦ－α及びＴＬＲ４シグナル伝達とは異なり、ＩＦＮ－γは、Ｓｔａｔ３を活性化することにより、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達及び血流の下流で作用する。ＩＦＮ－γシグナル伝達は、ＨＥで自律的に作用する。［Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１８） ２８， ５８－６６， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔｃｂ．２０１７．０８．００３］。

【0123】

造血系形成中の前炎症性サイトカインの細胞源は周知でない。そのようなサイトカインは、ＨＳＣの分化に影響を与えることが既知である。定常状態では、血小板バイアスＨＳＣは、造血階層の最上位にあり、骨髄バイアスＨＳＣ及びリンパバイアスＨＳＣを生成することができる［Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ， Ｌ． Ｖ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｆｌａｍｍ－Ａｇｉｎｇ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ， Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１６） ７： ５０２， ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０２］。骨髄バイアスＨＳＣは、平衡バイアスＨＳＣ及びリンパバイアスＨＳＣの両方を生成し得るが、リンパバイアスＨＳＣは、骨髄バイアス対応物を生成しない［同上］。血小板バイアスＨＳＣは、他のＨＳＣサブセットよりも速く血小板集団を再増殖させる可能性を有する。骨髄バイアスＨＳＣは、骨髄にコミットされた前駆細胞を介して骨髄系細胞を優先的に生じさせる。バランスＨＳＣは、骨髄系とリンパ系の両方に等しく貢献する［同上］。リンパ球バイアスＨＳＣは、主に、リンパ球にコミットされた前駆細胞を介して骨髄系細胞よりもリンパ球を生成する。炎症、特に、慢性炎症は、骨髄前駆細胞及び成熟骨髄細胞を含む骨髄系列の産生を増強し、これにより、造血における骨髄バイアスがもたらされる。［同上］。

【0124】

成長する証拠は、造血細胞及びそれらの支持性ニッチ細胞の間のクロストークが、骨髄（ＢＭ）内の慢性炎症を開始及び維持することを示すが、このプロセスにおけるそれらの正確な寄与は不明のままである。［Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ， Ｐ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｒｏｎｉｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ＭＡＰＫ ｄｉｓｒｕｐｔｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｖｉａ ＮＦＫＢ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｂｙ ＳＣＧＦ． Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃ． （２０２０） １１： ６６６，下記を引用：Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ， Ｌ． Ｖ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｆｌａｍｍ－Ａｇｉｎｇ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ， Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１６） ７， ５０２， ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０）；Ｐｉｅｔｒａｓ， Ｅ． Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｄｒｉｖｅｓ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｏｗａｒｄｓ ｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓ ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｅｎｓｅ ｏｆ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ． Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１６） １８， ６０７－６１８，；Ｌｕｓｓａｎａ， Ｆ． ＆ Ｒａｍｂａｌｄｉ， Ａ． Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ （２０１７） ８５， ５８－６３；Ｐｉｅｔｒａｓ， Ｅ． Ｍ． Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ： ａ ｋｅｙ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｔｅ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｂｌｏｏｄ （２０１７） １３０， １６９３－１６９８］。

【0125】

ＢＭ微小環境内では、内皮細胞（ＥＣ）は、ＨＳＣ調節パラクリン因子の多様な配列の発現により示されるように、ＨＳＣを支持する血管周囲ニッチの不可欠な構成要素として確立されている［同上、下記を引用：Ｈｏｏｐｅｒ， Ａ． Ｔ． ｅｔ ａｌ． Ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ＶＥＧＦＲ２－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ （２００９） ４， ２６３－２７４， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２００９．０１．００６；Ｂｕｔｌｅｒ， Ｊ． Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ （２０１０） ６， ２５１－２６４， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１０．０２．００１；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｈ． ｅｔ ａｌ． Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１０） １２， １０４６－１０５６， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ２１０８；Ｗｉｎｋｌｅｒ， Ｉ． Ｇ． ｅｔ ａｌ． Ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅ Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｄｏｒｍａｎｃｙ， ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ． Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２０１２） １８， １６５１－１６５７， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．２９６９；Ｄｉｎｇ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ．， Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ａｎｄ ｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌｓ ｍａｉｎｔａｉｎ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１２） ４８１， ４５７－４６２， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１０７８３；Ｐｏｕｌｏｓ， Ｍ． Ｇ． ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｊａｇｇｅｄ－１ ｉｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｆｏｒ ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ９４７ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｃｅｌｌ ｒｅｐｏｒｔｓ （２０１３） ４， １０２２－１０３４， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１３．０７．０４８；Ｇｒｅｅｎｂａｕｍ， Ａ． ｅｔ ａｌ． ＣＸＣＬ１２ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ－ｃｅｌｌ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１３） ４９５， ２２７－２３０， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１１９２６；Ｄｏａｎ， Ｐ． Ｌ． ｅｔ ａｌ． Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ． Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２０１３） １９， ２９５－３０４， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．３０７０；Ｐｏｕｌｏｓ， Ｍ． Ｇ． ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ （２０１６） ７， １３８２９， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３８２９；Ｋｕｓｕｍｂｅ， Ａ． Ｐ． ｅｔ ａｌ． Ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅｓ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１６） ５３２， ３８０－３８４， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１７６３８；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓ． Ｊ． ＆ Ｓｃａｄｄｅｎ， Ｄ． Ｔ． Ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１４） ５０５， ３２７－３３４， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１２９８４；Ｒａｆｉｉ， Ｓ．， Ｂｕｔｌｅｒ， Ｊ． Ｍ． ＆ Ｄｉｎｇ， Ｂ． Ｓ． Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１６） ５２９， ３１６－３２５， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１７０４０］。内皮内のシグナル伝達経路の調節はまた、ニッチ活性に直接影響を及ぼし、それによりＨＳＣ自己複製及び系列のコミットメントの決定を調節することが示されている［同上、下記を引用：Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｈ． ｅｔ ａｌ． Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１０） １２， １０４６－１０５６， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ２１０８ （２０１０）；Ｐｏｕｌｏｓ， Ｍ． Ｇ． ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ （２０１６） ７， １３８２９， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３８２９；Ｋｕｓｕｍｂｅ， Ａ． Ｐ． ｅｔ ａｌ． Ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅｓ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１６） ５３２， ３８０－３８４， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１７６３８］。組織特異的なニッチ細胞として機能することに加えて、内皮は、慢性炎症の重要な決定因子であり［同上、下記を引用：Ｒａｆｉｉ， Ｓ．， Ｂｕｔｌｅｒ， Ｊ． Ｍ． ＆ Ｄｉｎｇ， Ｂ． Ｓ． Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１６） ５２９， ３１６－３２５， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１７０４０；Ｐｏｂｅｒ， Ｊ． Ｓ． ＆ Ｓｅｓｓａ， Ｗ． Ｃ． Ｅｖｏｌｖｉｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２００７） ７， ８０３－８１５， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｉ２１７１］、ＩＬ－１及びＧ－ＣＳＦを含むＢＭ内のニッチ由来の炎症シグナルの重要な源として現れ、これは、急な要求に応じて骨髄造血を促進する［同上、下記を引用：Ｐｉｅｔｒａｓ， Ｅ． Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｄｒｉｖｅｓ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｏｗａｒｄｓ ｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓ ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｅｎｓｅ ｏｆ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ． Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１６） １８， ６０７－６１８， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ３３４６；Ｂｏｅｔｔｃｈｅｒ， Ｓ． ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｌａｔｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｓｉｇｎａｌｓ ｉｎｔｏ Ｇ－ＣＳＦ－ｄｒｉｖｅｎ ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ ｇｒａｎｕｌｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｂｌｏｏｄ （２０１４） １２４， １３９３－１４０３， ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１４－０４－５７０７６２］。持続的な内皮炎症は、Ｇ－ＣＳＦ及びＴＮＦαの発現を介した骨髄増殖性疾患の開始に関係している［同上、下記を引用：Ｗａｎｇ， Ｌ． ｅｔ ａｌ． Ｎｏｔｃｈ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ－１５５ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｉｎ ａｎ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ． Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ （２０１４） １５， ５１－６５， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１４．０４．０２１］。しかし、ニッチ活性及びＨＳＣ機能に影響を与えるＢＭ微小環境内の慢性内皮炎症を媒介するシグナル伝達経路は、依然として、よく理解されていない。

【0126】

ＮＦ－κＢ及びＭＡＰＫは、内皮細胞内の慢性炎症性応答を調節する主要なシグナル伝達経路である［同上、下記を引用：Ｐｏｂｅｒ， Ｊ． Ｓ． ＆ Ｓｅｓｓａ， Ｗ． Ｃ． Ｅｖｏｌｖｉｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２００７） ７， ８０３－８１５， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｉ２１７１］。しかし、ＢＭ内皮ニッチ内の炎症の調節及びＨＳＣ機能への付随する影響におけるそれらの役割は、依然として、調査されていない。内皮内のＮＦ－κＢシグナル伝達の抑制が、部分的に、前炎症性サイトカインを減少させることにより、骨髄抑制後の定常状態の造血及び再生を促進することを、以前の研究は示している［同上、下記を引用：Ｐｏｕｌｏｓ， Ｍ． Ｇ． ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ （２０１６） ７， １３８２９， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３８２９］。内皮ＭＡＰＫが、ＬＰＳ誘導性顆粒球形成及びアテローム性動脈硬化症に関連する慢性血管炎症を含む炎症プロセスにおいて重要な役割を果たすことを、最近の報告は示唆する［同上、下記を引用：Ｓａｎｃｈｅｚ， Ａ． ｅｔ ａｌ． Ｍａｐ３ｋ８ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ ｇｒａｎｕｌｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｓｃｉ Ｒｅｐ （２０１７） ７， ５０１０， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１７－０４５３８－３；Ｒｏｔｈ Ｆｌａｃｈ， Ｒ． Ｊ． ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ＭＡＰ４Ｋ４ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｖａｓｃｕｌａｒ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ． Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ （２０１５） ６， ８９９５， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ９９９５］。ｅｘ ｖｉｖｏニッチモデルシステムを利用して、内皮ＭＡＰＫ活性化が、炎症性ストレスを示唆する特徴である自己複製を犠牲にして、共培養されたＨＳＣの骨髄バイアス分化を引き起こすことが実証されている［同上、下記を引用：Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｈ． ｅｔ ａｌ． Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１０） １２， １０４６－１０５６， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ２１０８］。

【0127】

老化の間の造血の課題

【0128】

造血系の老化は、適応性のあるものと、固有のものとの両方の免疫系における機能低下、感染にかかる可能性が高くなる免疫老化、ワクチン接種の低い効能、ならびに、自己免疫病及び血液系腫瘍の進展に対する脆弱性の高まりによって示される［Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ， ＬＶ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｆｌａｍｍ－Ａｇｉｎｇ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ， Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｆｒｏｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （２０１６） ７： ５０２． Ｄｏｉ： １０／３３８９／Ｉｍｍｕ．２０１６．００５０２，下記を引用：Ｄｏｒｓｈｋｉｎｄ， Ｋ． ｅｔ ａｌ， Ｔｈｅ ａｇｅｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ： ｉｓ ｉｔ ｅｖｅｒ ｔｏｏ ｏｌｄ ｔｏ ｂｅｃｏｍｅ ｙｏｕｎｇ ａｇａｉｎ？ Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００９） ９：５７－６２．１０．１０３８／ｎｒｉ２４７１；Ｈａｑ Ｋ， ＭｃＥｌｈａｎｅｙ ＪＥ． Ａｇｅｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ： ｔｈｅ ａｉｒｗａｙ ｏｆ ａｇｅｉｎｇ． Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ （２０１４） １６２：３２３－８．１０．１０１６／ｊ．ｉｍｌｅｔ．２０１４．０６．００９ ５］。Ｂ細胞の生成は、老化の進行とともに著しく減少する、すなわち、ナイーブＢ細胞プールは減少するが、一方、メモリーＢ細胞プールは拡大する。Ｂ細胞のレパートリーの多様性も、低減された抗体親和性及び妨げられたクラススイッチに関係して低減される。Ｂ細胞は、自然に起こる自己免疫病の発生を増大させる自己抗体を生成する傾向にある［同上、下記を引用：Ｆｒａｓｃａ Ｄ， ｅｔ ａｌ． Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｆｏｒ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａｇｅｄ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎｓ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００８） １８０：２７４１－６， Ｌｉｎｔｏｎ ＰＪ， Ｄｏｒｓｈｋｉｎｄ Ｋ． Ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００４） ５：１３３－９］。Ｄｅ ｎｏｖｏ Ｔ細胞の生成も、部分的に胸腺退縮に起因して、老化とともに低下する。ＣＤ８＋のＴ細胞は、オリゴクローナル拡大を受け、そのレパートリーが、周囲のリンパ系組織のナイーブＴ細胞に関するニッシェが末期的に分化された細胞によって占められるようになるにつれて、前に遭遇したアンチゲンに向かって偏る［同上、下記を引用：Ａｋｂａｒ ＡＮ， Ｆｌｅｔｃｈｅｒ ＪＭ． Ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ｄｕｒｉｎｇ ａｇｉｎｇ． Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００５） １７：４８０－５］。ＮＫ細胞は、減少された細胞傷害性及びサイトカイン分泌を示す。骨髄性細胞の数が増大するが、その機能性は低減される。たとえば、好中球が刺激に応じて移動しにくくなり、マクロファージの食細胞作用が低減され、酸化バーストが低減される［同上、下記を引用：Ｋｕｒａｎｄａ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ （２０１１） １０：５４２－６；Ｏｇａｔａ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｔｅ ｄｅｃａｄｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｉｆｅ． Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ （１９９７） ８４：２６９－７５；Ｐｌｏｗｄｅｎ Ｊ， Ｒｅｎｓｈａｗ－Ｈｏｅｌｓｃｈｅｒ Ｍ， Ｅｎｇｌｅｍａｎ Ｃ， Ｋａｔｚ Ｊ， Ｓａｍｂｈａｒａ Ｓ． Ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｉｎ ａｇｉｎｇ： ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ （２００４） ３：１６１－７］。最後に、赤血球生成も老齢では低減され、頻繁な貧血を生じる［同上、下記を引用：Ｂｅｒｌｉｎｅｒ Ｎ． Ａｎｅｍｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｅｌｄｅｒｌｙ． Ｔｒａｎｓ Ａｍ Ｃｌｉｎ Ｃｌｉｍａｔｏｌ Ａｓｓｏｃ （２０１３） １２４：２３０－７］。血栓を壊す（小板）血統は、現在まで、老化によって顕著な影響を受けることは報告されていない。

【0129】

老化の間のＨＳＣの機能の変更
持続した炎症が、ＨＳＣの自己再生能力、骨髄系にバイアスされた分化、及び白血病の素養を含む、老化に関連する造血の欠陥の重要なドライバとして提示されている［Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ， Ｐ． ｅｔ ａｌ．， “Ｃｈｒｏｎｉｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ＭＡＰＫ ｄｉｓｒｕｐｔｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｖｉａ ＮＦＫＢ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｂｙ ＳＣＧＦ． Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃ． （２０２０） １１： ６６６，下記を引用：Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ， Ｌ． Ｖ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｆｌａｍｍ－Ａｇｉｎｇ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ， Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１６） ７， ５０２， ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０）；Ｐｉｅｔｒａｓ， Ｅ． Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｄｒｉｖｅｓ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｏｗａｒｄｓ ｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓ ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｅｎｓｅ ｏｆ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ． Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ （２０１６） １８， ６０７－６１８， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ３３４６；Ｌｕｓｓａｎａ， Ｆ． ＆ Ｒａｍｂａｌｄｉ， Ａ． Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ （２０１７） ８５， ５８－６３， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｕｔ．２０１７．０６．０１０；Ｐｉｅｔｒａｓ， Ｅ． Ｍ． Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ： ａ ｋｅｙ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｔｅ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｂｌｏｏｄ （２０１７） １３０， １６９３－１６９８， ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１７－０６－７８０８８２］。

【0130】

複数の血液の血統が老化プロセスの間に変化することから、造血の老化が部分的に、ＨＳＣを含む、影響された血統を再び増殖させる、早期の造血の区画の機能性の変化に起因することが可能である［Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ， Ｌ． Ｖ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｆｌａｍｍ－Ａｇｉｎｇ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ， Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１６） ７， ５０２， ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０］。単一細胞及び限界希釈の移植により、ＨＳＣの自己再生能力が、老化の間に細胞毎のベースで外見上低減されることが証明されている。この理由は、表現型的に規定されたＨＳＣの頻度が、老化したＢＭにおける機能的に規定されたＨＳＣの頻度と相関しないためである［同上、下記を引用：Ｙａｍａｍｏｔｏ， Ｒ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｕｎｖｅｉｌｓ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗｉｎｇ ｌｉｎｅａｇｅ－ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｆｒｏｍ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｃｅｌｌ （２０１３） １５４：１１１２－２６．１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１３．０８．００７， Ｃｈａｍｂｅｒｓ， ＳＭ ｅｔ ａｌ．， Ａｇｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｈｉｂｉｔ ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ． ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ （２００７） ５：ｅ２０１．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｂｉｏ．００５０２０１；Ｄｙｋｓｔｒａ， Ｂ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｅｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｇｅｄ ｍｕｒｉｎｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （２０１１） ２０８：２６９１－７０３．１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１１１４９０；Ｈａｒｒｉｓｏｎ， ＤＥ， Ａｓｔｌｅ， ＣＭ， Ｌｏｓｓ ｏｆ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｕｐｏｎ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｏｎｏｒ ａｇｅ， ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ， ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （１９８２） １５６：１７６７－７９；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， ＳＪ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ ａｇｉｎｇ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔ Ｍｅｄ （１９９６） ２：１０１１－６；Ｒｏｓｓｉ， ＤＪ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｕｎｄｅｒｌｉｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２００５） １０２：９１９４－９；Ｓｕｄｏ， Ｋ． ｅｔ ａｌ．， Ａｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （２０００） １９２：１２７３－８０］。ＨＳＣ表現型のＨＳＣ（ＬＫＳ ＣＤ３４－Ｆｌｔ３－）が、ＣＤ１５０発現をアップレギュレーションすることも示され［同上、下記を引用：Ｃｈａｌｌｅｎ， ＧＡ ｅｔ ａｌ．， Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｓｕｂｔｙｐｅｓ ａｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＴＧＦ－ｂｅｔａ１． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ （２０１０） ６：２６５－７８， Ｒｏｓｓｉ， ＤＪ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｕｎｄｅｒｌｉｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２００５） １０２：９１９４－９， Ｂｅｅｒｍａｎ， Ｉ ｅｔ ａｌ．， Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｌｉｎｅａｇｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｄｕｒｉｎｇ ａｇｉｎｇ ｂｙ ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｃｌｏｎａｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２０１０） １０７：５４６５－７０］、老化の進行とともに、骨髄系にバイアスされたＨＳＣの集団と、老化したＨＳＣプール全体にわたるこの断片の抑制とに繋がった［同上、下記を引用：Ｂｅｅｒｍａｎ， Ｉ ｅｔ ａｌ．， Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｌｉｎｅａｇｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｄｕｒｉｎｇ ａｇｉｎｇ ｂｙ ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｃｌｏｎａｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２０１０） １０７：５４６５－７０］。表現型の特徴付けと一致して、移植の後の造血の再増殖が、骨髄性細胞の生成に向けてバイアスされており、この分化のポテンシャルにおける変化が、連続した移植の過程にわたって存続し、ＨＳＣの、老化に関連する細胞自立型の変化を示す。これら観測に基づき、老化に関連する骨髄系のバイアスに関する、以下の２つの可能性のある理論を提案することができる。（ａ）老化したＨＳＣ集団の中でのクローン進化であり、この中で、リンパ系にバイアスされたＨＳＣクローンが、骨髄系にバイアスされたか、または小板にバイアスされたＨＳＣのクローンに、細胞に固有の変化を介して変わる［同上、下記を引用：Ｗａｔｅｒｓｔｒａｔ Ａ， Ｖａｎ Ｚａｎｔ Ｇ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｇｉｎｇ ｏｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００９） ２１：４０８－１３］。（ｂ）クローナル構成のシフトであり、この中で、骨髄系にバイアスされたか、または小板にバイアスされたＨＳＣクローンが、ＨＳＣプール全体を、クローンの拡大及び／または選択を介して支配する［同上、下記を引用：Ｍｏｒｉｔａ Ｙ， ｅｔ ａｌ． Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ａｎｄ ｈｉｅｒａｒｃｈｙ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （２０１０） ２０７：１１７３－８２， Ｃｈａｌｌｅｎ， ＧＡ ｅｔ ａｌ．， Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｓｕｂｔｙｐｅｓ ａｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＴＧＦ－ｂｅｔａ１． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ （２０１０） ６：２６５－７８， Ｄｙｋｓｔｒａ， Ｂ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｅｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｇｅｄ ｍｕｒｉｎｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （２０１１） ２０８：２６９１－７０３， Ｂｅｅｒｍａｎ， Ｉ ｅｔ ａｌ．， Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｌｉｎｅａｇｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｄｕｒｉｎｇ ａｇｉｎｇ ｂｙ ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｃｌｏｎａｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２０１０） １０７：５４６５－７０， Ｃｈｏ， ＲＨ ｅｔ ａｌ．， Ａ ｎｅｗ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｇｉｎｇ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ： ａｇｉｎｇ ｃｈａｎｇｅｓ ｔｈｅ ｃｌｏｎａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｂｌｏｏｄ （２００８） １１１：５５５３－６１；Ｇｏｔｏ Ｍ． Ｉｎｆｌａｍｍａｇｉｎｇ （ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ＋ ａｇｉｎｇ）： ａ ｄｒｉｖｉｎｇ ｆｏｒｃｅ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ａｇｉｎｇ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａｎ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｉｌｙ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｙ ｔｈｅｏｒｙ？ Ｂｉｏｓｃｉ Ｔｒｅｎｄｓ （２００８） ２：２１８－３０；Ｍｕｌｌｅｒ－Ｓｉｅｂｕｒｇ ＣＥ， Ｓｉｅｂｕｒｇ ＨＢ． Ｃｌｏｎａｌ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ． Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ （２００６） １３：２４３－８］。老化に関連する骨髄系の血統の歪曲も、コミットされた前駆体の組成において撹乱を伴う場合がある。老化したマウスは、共通のリンパ系前駆体の頻度の低減を示したが、ＧＭＰの頻度は向上した［同上、下記を引用：Ｒｏｓｓｉ， ＤＪ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｕｎｄｅｒｌｉｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２００５） １０２：９１９４－９］。これら発見には、低減されたＢ細胞のリンパ球産生及びリンパ系前駆体の低減されたフィットネスが伴い、変更された、受容体に関連するキナーゼのシグナリングと同時に起こる［同上、下記を引用：Ｈｅｎｒｙ， ＣＪ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｃｌｉｎｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｆｉｔｎｅｓｓ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ａｇｉｎｇ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｅｕｋｅｍｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２０１０） １０７：２１７１３－８］。造血のヒエラルキーのどのレベルが老化によって影響されるかは分かっていない。

【0131】

老化したＨＳＣのＢＭホーミング効率は、照射された受容体内へ、静脈内に移植された場合に顕著に低減される［同上、下記を引用：Ｄｙｋｓｔｒａ， Ｂ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ （２００７） １：２１８－２９］。しかし、類似の変動の効能が、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）の治療に応じて、循環の中に放出された、老化された、及び若いＨＳＣ内に観測された［同上、下記を引用：Ｖｅｒｏｖｓｋａｙａ， Ｅ． ｅｔ ａｌ．， Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｃｌｏｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｅｑｕｉｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｂｉｌｉｚｉｎｇ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （２０１４） ２１１：４８７－９７］。若いＨＳＣに対する老化したＨＳＣのトランスクリプトームプロファイリングが、ＨＳＣの老化の潜在的なメカニズムの分子の洞察を提供している［同上、下記を引用：Ｃｈａｍｂｅｒｓ， ＳＭ ｅｔ ａｌ．， Ａｇｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｈｉｂｉｔ ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ． ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ （２００７） ５：ｅ２０１．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｂｉｏ．００５０２０１；Ｔｒｅｍａｒｏｌｉ Ｖ， Ｂａｃｋｈｅｄ Ｆ． Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ａｎｄ ｈｏｓｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１２） ４８９：２４２－９．１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１１５５２］。老化したＨＳＣは、細胞内ホメオスタシスの調節不全、たとえば、アップレギュレーションされたストレス反応、増大された炎症促進性シグナリング、タンパク質の誤った折りたたみ、ダウンレギュレーションされたＤＮＡ修復設備、及び異常なクロマチン修飾を示している［同上、下記を引用：Ｃｈａｌｌｅｎ， ＧＡ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ （２０１０） ６：２６５－７８， Ｃｈａｍｂｅｒｓ， ＳＭ ｅｔ ａｌ．， Ａｇｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｈｉｂｉｔ ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ． ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ （２００７） ５：ｅ２０１．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｂｉｏ．００５０２０１， Ｒｏｓｓｉ， ＤＪ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２００５） １０２：９１９４－９］。さらなる調査により、老化したＨＳＣが、場合によっては、より高いレベルの細胞内活性酸素種（ＲＯＳ）及び自然の生成された遺伝毒性代謝物に起因して、より多くのＤＮＡのダメージを蓄積させることが証明されている［同上、下記を引用：Ｉｔｏ， Ｋ． ｅｔ ａｌ．， Ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｃｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｐ３８ ＭＡＰＫ ｔｏ ｌｉｍｉｔ ｔｈｅ ｌｉｆｅｓｐａｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔ Ｍｅｄ （２００６） １２：４４６－５１；Ｒｏｓｓｉ， ＤＪ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔｕｒｅ （２００７） ４４７：７２５－９；Ｒｕｂｅ， ＣＥ ｅｔ ａｌ．， Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｄｕｒｉｎｇ ｈｕｍａｎ ａｇｉｎｇ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ （２０１１） ６：ｅ１７４８７．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００１７４８７］。しかし、これら細胞は、依然として、細胞の循環の遊動に対するダメージを効率的に修復することが可能である［同上、下記を引用：Ｂｅｅｒｍａｎ， Ｉ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ （２０１４） １５：３７－５０］。他の研究により、老化したＨＳＣ内の増殖ストレスの蓄積が、非効率なＤＮＡの複製及び転写阻害を発生させることが示唆されている［同上、下記を引用：Ｆｌａｃｈ， Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｓｔｒｅｓｓ ｉｓ ａ ｐｏｔｅｎｔ ｄｒｉｖｅｒ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ａｇｅｉｎｇ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１４） ５１２：１９８－２０２］。老化したＨＳＣは、ほ乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）の活性化［同上、下記を引用：Ｃｈｅｎ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， ｍＴＯＲ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｇｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ （２００９） ２：ｒａ７５．１０．１１２６／ｓｃｉｓｉｇｎａｌ．２０００５５９３］、オートファジー依存性の生存［同上、下記を引用：Ｗａｒｒ， ＭＲ， ｅｔ ａｌ． ＦＯＸＯ３Ａ ｄｉｒｅｃｔｓ ａ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｐｒｏｇｒａｍ ｉｎ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１３） ４９４：３２３－７］、特に骨髄系及びリンパ系のバランスを制御する遺伝子の場所における、調整不全のＤＮＡのメチル化［同上、下記を引用：Ｂｅｅｒｍａｎ， Ｉ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ （２０１４） １５：３７－５０］、減じられたヒストン修飾［同上、下記を引用：Ｓｕｎ， Ｄ． ｅｔ ａｌ． Ｅｐｉｇｅｎｏｍｉｃ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ ｙｏｕｎｇ ａｎｄ ａｇｅｄ ＨＳＣｓ ｒｅｖｅａｌｓ ｃｏｎｃｅｒｔｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｇｉｎｇ ｔｈａｔ ｒｅｉｎｆｏｒｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ （２０１４） １４：６７３－８８５５］、及び、乱された細胞の極性［同上、下記を引用：Ｆｌｏｒｉａｎ， ＭＣ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｄｃ４２ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ （２０１２） １０：５２０－３０］をも示した。ＨＳＣの老化のこれら特性は、ＨＳＣの増殖の履歴の増大、または、骨髄破壊的な化学療法的処方計画の複数の注入に伴うこれらのストレスの付加［同上、下記を引用：Ｂｅｅｒｍａｎ， Ｉ． ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｌａｎｄｓｃａｐｅ ｕｎｄｅｒｌｉｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ （２０１３） １２：４１３－２５］によって、または、連続した移植を行うこと（「実験的老化」）［同上、下記を引用：Ｄｙｋｓｔｒａ， Ｂ． ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （２０１１） ２０８：２６９１－７０３；Ｈａｒｒｉｓｏｎ， ＤＥ， Ａｓｔｌｅ， ＣＭ， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （１９８２） １５６：１７６７－７９］によって、部分的に、実験的に要約することができる。このことが、増殖の履歴が老化プロセスと関連し得ることを示唆していることから、いくつかのグループは、若いＨＳＣと老化したＨＳＣとで循環動作を比較している。しかし、結果は議論の的になっている。いくつかのデータは、老化したＨＳＣが循環動作を増大させていることを示唆している［同上、下記を引用：Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， ＳＪ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｍｅｄ （１９９６） ２：１０１１－６］。一方、他のものは、細胞の循環のステータスには差異がないこと［同上、下記を引用：Ｃｈａｍｂｅｒｓ， ＳＭ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ （２００７） ５：ｅ２０１．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｂｉｏ．００５０２０１；Ｓｕｄｏ， Ｋ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （２０００） １９２：１２７３－８０．１０．１０８４／ｊｅｍ．１９２．９．１２７３］、または、若いＢＭに比べ、老化したものにおいてＨＳＣがより不活性であること［同上、下記を引用：Ｔａｋｉｚａｗａ， Ｈ． ｅｔ ａｌ．， Ｄｙｎａｍｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｙｃｌｉｎｇ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｓｔｅａｄｙ ｓｔａｔｅ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （２０１１） ２０８：２７３－８４；Ｃｈｅｎ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， ｍＴＯＲ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｇｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ （２００９） ２：ｒａ７５．１０．１１２６／ｓｃｉｓｉｇｎａｌ．２０００５５９］を提唱している。

【0132】

ＢＭニッシェ内の老化に関連する変化。血液幹細胞ホメオスタシスは、ＢＭ微環境、いわゆる、これら細胞に、それら自体の維持のために中枢因子を提供するＨＳＣニッシェ内に保持される［同上、下記を引用：Ｎａｋａｍｕｒａ－Ｉｓｈｉｚｕ， Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ （２０１４） １４１：４６５６－６６， Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＪ， Ｓｃａｄｄｅｎ ＤＴ． Ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１４） ５０５：３２７－３４］。ＢＭニッシェの近年の調査により、血管周囲のＨＳＣニッシェが、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）及び内皮細胞（ＥＣ）を、主要な細胞成分として含んでいたことが明らかにされており、階層的なＨＳＣの機能及び老化によって及ぼされる影響を反映する［同上、下記を引用：Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＪ， Ｓｃａｄｄｅｎ ＤＴ． Ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１４） ５０５：３２７－３４；Ｋｕｓｕｍｂｅ， ＡＰ ｅｔ ａｌ． Ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅｓ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１６） ５３２：３８０－４．１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１７６３８］。ＭＳＣは、プラスチック粘着性、高い成長ポテンシャル、及び間葉性免疫表現型、ならびに、骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、線維母細胞、及び上皮組織細胞などの間葉性血統への分化によって特徴付けられる［同上、下記を引用：Ｄｏｍｉｎｉｃｉ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｍｉｎｉｍａｌ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ｐｏｓｉｔｉｏｎ ｓｔａｔｅｍｅｎｔ． Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ （２００６） ８：３１５－７；Ｌｉｎ， Ｚ－Ｊ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ （２００９） １０６：９８４－９１１］。老化したＭＳＣは、低減されたクローン原性、及び増殖する容量を示し、分化のポテンシャルが、骨形成の損失で、脂質生成に向かって偏る［同上、下記を引用：Ｓｉｎｇｈ， Ｌ． ｅｔ ａｌ． Ａｇｉｎｇ ａｌｔｅｒｓ ｂｏｎｅ－ｆａｔ ｒｅｃｉｐｒｏｃｉｔｙ ｂｙ ｓｈｉｆｔｉｎｇ ｉｎ ｖｉｖｏ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｃｅｌｌ ｆａｔｅ ｔｏｗａｒｄｓ ａｎ ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ ｌｉｎｅａｇｅ． Ｂｏｎｅ （２０１６） ８５：２９－３６；Ｔｕｌｊａｐｕｒｋａｒ， ＳＲ ｅｔ ａｌ． Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｆａｔ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒｓ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｗｉｔｈ ａｇｉｎｇ． Ｊ Ａｎａｔ （２０１１） ２１９：５７４－８１；Ｗａｌｅｎｄａ， Ｔ． ｅｔ ａｌ． Ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅ ｗｉｔｈ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｍｅｄ （２０１０） １４：３３７－５０）］。これら細胞は、拡大、テロメアの短縮、またはｐ５３／ｐ２１の媒介ＤＮＡ損傷の蓄積、害されたＤＮＡのメチル化またはヒストンのアセチル化、ならびに、ＲＯＳ及び一酸化窒素（ＮＯ）の増大したレベルをも示す［同上、下記を引用：Ｂｅｈｒｅｎｓ， Ａ． ｅｔ ａｌ． Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ｄａｍａｇｅ ａｎｄ ａｇｅｉｎｇ ｏｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ （２０１４） １６：２０１－７；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ， Ｌ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｕｌａｔｅ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｄｕｒｉｎｇ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ． Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ （２００８） ３６：５４５－５８；Ｋｏｒｎｉｃｋａ， Ｋ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｇｅ ｏｎ ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｄｉｐｏｓｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｒｏｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ （ｈＡＳＣｓ） ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｓｔｒｅｓｓ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ． Ｏｘｉｄ Ｍｅｄ Ｃｅｌｌ Ｌｏｎｇｅｖ （２０１５） ２０１５：３０９１６９．１０．１１５５／２０１５／３０９１６９；Ｚｈａｎｇ， Ｄ－Ｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｗｎｔ／β－ｃａｔｅｎｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ａｇｉｎｇ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｐ５３／ｐ２１ ｐａｔｈｗａｙ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ （２０１１） ６：ｅ２１３９７．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２１３９７；Ｚｈｅｎｇ， Ｙ． ｅｔ ａｌ．， Ｈ３Ｋ９ｍｅ－ｅｎｈａｎｃｅｄ ＤＮＡ ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐ１６ＩＮＫ４ａ ｇｅｎｅ： ａｎ ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｆｏｒ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｔ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｖ （２０１３） ２２：２５６－６７６５－６９］。脂質生成に好都合なＭＳＣ分化の下にある老化に依存するメカニズムは、完全には理解されていないが、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ２（ＰＰＰＡＲγ２）及びＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質の活性化を含む、可能性のある分子の変化が報告されている［同上、下記を引用：Ｓｈｏｃｋｌｅｙ， ＫＲ， ｅ ａｌ．， ＰＰＡＲｇａｍｍａ２ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｆ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ （２００９） １０６：２３２－４６；Ｔａｋｅｓｈｉｔａ， Ｓ． ｅｔ ａｌ． Ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｒｒｏｗ ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｓ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＮＫＬ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ （２０１４） ２８９：１６６９９－７１０］。脂肪細胞が、ＨＳＣの機能及びＢ－リンパ球産生を消極的に制御することが示されていることから［同上、下記を引用：Ｋｅｎｎｅｄｙ ＤＥ， Ｋｎｉｇｈｔ ＫＬ． Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｓｉｓ ｂｙ ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ＩＬ－１－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１５） １９５：２６６６－７４．１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１５００９５７；Ｎａｖｅｉｒａｓ， Ｏ． ｅｔ ａｌ．， Ｂｏｎｅ－ｍａｒｒｏｗ ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ ａｓ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｎａｔｕｒｅ （２００９） ４６０：２５９－６３］、老化したＢＭ内で向上された脂質生成が、リンパ球産生にわたって骨髄造血を促進するとともに、ＨＳＣの機能を害することの理由付けと、老化した環境内の若いＨＳＣが、報告によれば、若い環境におけるよりもわずかに多い骨髄性細胞を生成する傾向にあること［同上、下記を引用：Ｒｏｓｓｉ， ＤＪ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２００５） １０２：９１９４－９７；Ｅｒｇｅｎ， ＡＶ ｅｔ ａｌ．， Ｒａｎｔｅｓ／Ｃｃｌ５ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｓｕｂｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｃａｕｓｅｓ ｍｙｅｌｏｉｄ ｓｋｅｗｉｎｇ． Ｂｌｏｏｄ （２０１２） １１９：２５００－９）］の観測に基づき、老化したＢＭ内の脂質生成増進［同上、下記を引用：Ｊｕｓｔｅｓｅｎ， Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｔｉｓｓｕｅ ｖｏｌｕｍｅ ｉｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｗｉｔｈ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ． Ｂｉｏｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ （２００１） ２：１６５－７１］が、インスリン成長因子シグナリングの調節不全［同上、下記を引用：Ｌｉｎｔｏｎ ＰＪ， Ｄｏｒｓｈｋｉｎｄ Ｋ． Ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００４） ５：１３３－９］、細胞外マトリックス組成の変化、及び骨の形成の低減［同上、下記を引用：Ｂｅｌｌａｎｔｕｏｎｏ， Ｉ． ｅｔ ａｌ．， Ａｇｉｎｇ ｏｆ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ （ｓｋｅｌｅｔａｌ） ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｔｏ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｂｏｎｅ ｌｏｓｓ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ （２００９） １７９２：３６４－７０， Ｗａｇｎｅｒ， Ｗ． ｅｔ ａｌ．， Ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ｈａｖｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ （２００９） ４：ｅ５８４６．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０００５８４６］にリンクしている場合があることが提唱されている。

【0133】

内皮細胞は、幹細胞因子及びＣＸＣモチーフリガンド（ＣＸＣＬ）１２などの、ＨＳＣメンテナンス因子及び保持因子を分泌する別のニッシェ細胞要素である［同上、下記を引用：Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＪ， Ｓｃａｄｄｅｎ ＤＴ． Ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１４） ５０５：３２７－３４， Ｎｏｍｂｅｌａ－Ａｒｒｉｅｔａ Ｃ， ｅｔ ａｌ．， Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｙｐｏｘｉｃ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ （２０１３） １５：５３３－４３］。老化は、ＣＤ３１^hiＥｍｃｎ^hiＥＣに関連する骨芽前駆体の減少［同上、下記を引用：Ｋｕｓｕｍｂｅ ＡＰ， ｅｔ ａｌ． Ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ｂｙ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｖｅｓｓｅｌ ｓｕｂｔｙｐｅ ｉｎ ｂｏｎｅ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１４） ５０７：３２３－８］、より少ないＰＤＧＦＲβ＋／ＮＧ２＋の血管周囲の細胞、細動脈、及びＥＣを伴い、それにより、幹細胞因子の生成の低減に繋がる［同上、下記を引用：Ｋｕｓｕｍｂｅ ＡＰ， ｅｔ ａｌ． Ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅｓ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ （２０１６） ５３２：３８０－４］。内皮Ｎｏｔｃｈシグナリングの活性化は、これら老化に依存する導管ニッシェの変化を、老化したＨＳＣの機能に影響を与えることなく、反転させることができる。さらに、導管の内皮の機能は、ＮＯの減少に起因して、老化とともに低下する。このことは、次いで、血管拡張、ゲノムの不安定化を生じる高められた酸化的ストレス、及び、損なわれたＥＣの血管新生促進機能に関連する増大されたＲＯＳレベルを引き起こす［同上、下記を引用：Ｇｒｏｌｅａｕ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｏｐｐｅｒ－ｚｉｎｃ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ ｆｏｒ ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｖｉａ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ （２０１０） ３０：２１７３－８１］。ＮＯ生成が、ＣＸＣＬ１２が媒介するＨＳＣの流動を制御することが提唱されていることから［同上、下記を引用：Ｇｕｒ－Ｃｏｈｅｎ Ｓ， ｅｔ ａｌ． ＰＡＲ１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｏｆ ＥＰＣＲ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔ Ｍｅｄ （２０１５） ２１：１３０７－１７］、老化に関連するＥＣ由来のＮＯの低減、及び、ＢＭニッシェにおける血管形成機能の向上が、老化したＢＭにおける異常なＨＳＣのメンテナンス及び／または保持に含まれる場合があることの仮説が立てられている［同上］。

【0134】

ヒトの造血の老化
造血系の老化のデータの多くは、マウスの系を採用して得られた。しかし、いくつかの先駆け的な研究により、ヒトの造血系における類似の傾向が示唆されている。Ｌｉｎ－ＣＤ３４＋ＣＤ３８－［同上、下記を引用：Ｋｕｒａｎｄａ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ （２０１１） １０：５４２－６］、Ｌｉｎ－ＣＤ３４＋ＣＤ３８－ＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ－［同上、下記を引用：Ｐａｎｇ ＷＷ， ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｂｉａｓｅｄ ｗｉｔｈ ａｇｅ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２０１１） １０８：２００１２－７］、またはＬｉｎ－ＣＤ３４＋ＣＤ １０－ＣＤ１２３－ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ９０＋［同上、下記を引用：Ｒｕｎｄｂｅｒｇ Ｎｉｌｓｓｏｎ Ａ， ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｕｒｉｎｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｉｃ／ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ ｂｉａｓ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ （２０１６） １１：ｅ０１５８３６９．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１５８３６９］などの断片を含むＨＳＣは、老化とともに増大する。顆粒細胞－単核白血球前駆体（ＧＭＰ）が同じ頻度で保持されるように見えるが［同上、下記を引用：Ｋｕｒａｎｄａ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ （２０１１） １０：５４２－６， Ｐａｎｇ ＷＷ， ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｂｉａｓｅｄ ｗｉｔｈ ａｇｅ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２０１１） １０８：２００１２－７， Ｒｕｎｄｂｅｒｇ Ｎｉｌｓｓｏｎ Ａ， Ｓｏｎｅｊｉ Ｓ， Ａｄｏｌｆｓｓｏｎ Ｓ， Ｂｒｙｄｅｒ Ｄ， Ｐｒｏｎｋ ＣＪ． Ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｕｒｉｎｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｉｃ／ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ ｂｉａｓ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ （２０１６） １１：ｅ０１５８３６９．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１５８３６９］、早期のＢ細胞前駆体及び共通のリンパ系前駆体（ＣＬＰ）は、老化の進行とともに低下する［同上、下記を引用：Ｐａｎｇ ＷＷ， ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｂｉａｓｅｄ ｗｉｔｈ ａｇｅ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２０１１） １０８：２００１２－７， Ｒｕｎｄｂｅｒｇ Ｎｉｌｓｓｏｎ Ａ， Ｓｏｎｅｊｉ Ｓ， Ａｄｏｌｆｓｓｏｎ Ｓ， Ｂｒｙｄｅｒ Ｄ， Ｐｒｏｎｋ ＣＪ． Ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｕｒｉｎｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｉｃ／ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ ｂｉａｓ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ （２０１６） １１：ｅ０１５８３６９．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１５８３６９］。ＨＳＣの機能及び分化のバイアスは不明確なままである。異種移植マウスモデルを使用した１つの研究は、免疫不全のＮＳＧ再集団化細胞の頻度に変化がなく、老化したＨＳＣの骨髄系の血統の再増殖が低下したことを示唆した［同上、下記を引用：Ｋｕｒａｎｄａ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ （２０１１） １０：５４２－６］。一方、別の研究［同上、下記を引用：Ｐａｎｇ ＷＷ， ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｂｉａｓｅｄ ｗｉｔｈ ａｇｅ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２０１１） １０８：２００１２－７］は、骨髄系の血統が顕著に優性な状況で、２つに折りたたまれた、低減された移植を示した。さらなる分子の分析により、骨髄系及び巨大核細胞に関連する遺伝子のアップレギュレーション、ならびに、リンパ系の分化遺伝子のダウンレギュレーションが示唆された［同上、下記を引用：Ｐａｎｇ ＷＷ， ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｂｉａｓｅｄ ｗｉｔｈ ａｇｅ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２０１１） １０８：２００１２－７， Ｒｕｎｄｂｅｒｇ Ｎｉｌｓｓｏｎ Ａ， Ｓｏｎｅｊｉ Ｓ， Ａｄｏｌｆｓｓｏｎ Ｓ， Ｂｒｙｄｅｒ Ｄ， Ｐｒｏｎｋ ＣＪ． Ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｕｒｉｎｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｉｃ／ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ ｂｉａｓ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ （２０１６） １１：ｅ０１５８３６９．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１５８３６９］。これら発見は、造血における主要な老化に関連する変化が、種の間で維持されることを示唆している。

【0135】

骨髄破壊的治療
造血系の再構成が必要な患者では、調製レジメンまたはコンディショニングレジメンは、２つの目標：宿主拒絶を防ぐのに十分な免疫切除の提供及び腫瘍細胞減少／疾患根絶の提供を達成するために、手順の一部として実施される。強度は、診断及び寛解状態などの疾患関連要因、ならびに年齢、ドナーの利用可能性、及び併発状態の存在などの患者関連要因に基づいて変動し得るので、コンディショニングレジメンには様々な変形形態がある。コンディショニングレジメンは、高用量（骨髄破壊的）、強度の低減、及び非骨髄破壊的療法に分類されている。［Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ， Ｂｏｇｌａｒｋａ， ａｎｄ Ｂｒｅｎｄａ Ｍ Ｓａｎｄｍａｉｅｒ． “Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｒｅｇｉｍｅｎｓ ｆｏｒ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ： ｏｎｅ ｓｉｚｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｆｉｔ ａｌｌ．” Ｂｌｏｏｄ （２０１４） ｖｏｌ． １２４，３： ３４４－５３］。骨髄破壊的治療（ＭＢＴ）は、免疫系及び造血系、ならびに体内の全ての悪性細胞を根絶するための、大量化学療法（ＨＤＣ）または全身照射（ＴＢＩ）を伴うＨＤＣでの患者の処置を指す。通常、ＭＢＴを受ける患者は、骨髄移植、幹細胞移植、または造血細胞移植（本明細書では「幹細胞レスキュー」または「ＳＣＲ」と呼ばれる）の調製としてそれを行っており；しかし、以下の表２に示されるように、ＭＢＴは、ＳＣＲが有益であることが示されていない様々なタイプの悪性腫瘍の処置タイプとしても使用することができる。［Ｒｉｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， ”Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ （２００５）１９：４７－７９］。

【0136】

【表2-1】

【表2-2】

【0137】

一般に、ＭＢＴレジメンは、アルキル化剤（単剤タイプまたは、複数）を含むＨＤＣで構成され、ＴＢＩの有無にかかわらず提供される。そのようなレジメンは、骨髄造血を切除し、それにより、自家血液学的回復を可能にしないことが予想される。［Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄ Ｂｒｅｎｄａ Ｍ Ｓａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｒｅｇｉｍｅｎｓ ｆｏｒ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅ ｓｉｚｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｆｉｔ ａｌｌ．” Ｂｌｏｏｄ（２０１４）ｖｏｌ．１２４，３：３４４－５３）、特定のＭＢＴレジメンの例は、Ａｔｉｌｌａ，Ｅ．，Ａｔａｃａ Ａｔｉｌｌａ，Ｐ．，＆ Ｄｅｍｉｒｅｒ，Ｔ．Ａ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ ｖｓ Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ／Ｎｏｎ－Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｒｅｇｉｍｅｎｓ ｉｎ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓ．Ｂａｌｋａｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｊｏｕｒｎａｌ，（２０１７）３４（１），１－９が挙げられる］。

【0138】

【表3-1】

【表3-2】

【0139】

全身照射（ＴＢＩ）。ＴＢＩおよび高線量ＴＢＩは、その免疫抑制特性、ほとんどの白血病およびリンパ腫に対する有効性、ならびに保護部位への透過能力により、コンディショニングレジメンの一部として広く使用される。レジメンの大部分は、通常分割される（放射線の総線量が数日間にわたっていくつかのより少ない線量に分割される場合を意味する）１２～１６ＧｙのＴＢＩを、他の化学療法剤、最も一般的には、シクロホスファミドと、その抗悪性腫瘍および免疫調節特性に基づいて組み合わせた。一般に、高線量のＴＢＩは、再発リスクを低減するが、増加した、多くの場合、致命的な胃腸毒性、肝臓毒性、および肺毒性、続発性悪性腫瘍、ならびに子供の成長および発達の障害をもたらした。照射線量に加えて、線量率、分割、分割の間隔、および放射線源（例えば、コバルト６０対線形加速器）などの他の要因は、また、ＴＢＩの抗悪性腫瘍および毒性作用の両方に影響を与え得る。分割は、白血病細胞とは、対照的に、正常組織に保持される完全な修復機序の割合が高いことによる、臓器毒性の低下をもたらしたが、抗腫瘍効果も持続した。肺シールドを伴う過分割（１日当たり複数の分割）により、間質性肺炎の発病率が４％減少し、肺シールドを伴わない単一分割ＴＢＩで観察された５０％から減少した。現在使用されているＴＢＩスケジュールの大部分は、分割または、過分割される。シクロホスファミドに加えて、シタラビン（ＡｒａＣ）、エトポシド、メルファラン、およびブスルファンなどの様々な薬剤が、コンディショニングレジメンとして高線量ＴＢＩと組み合わされる。（Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄ Ｂｒｅｎｄａ Ｍ Ｓａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｒｅｇｉｍｅｎｓ ｆｏｒ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅ ｓｉｚｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｆｉｔ ａｌｌ．”Ｂｌｏｏｄ（２０１４）ｖｏｌ．１２４，３：３４４－５３）。

【0140】

コンディショニングレジメンのどの構成要素が所与のあらゆる毒性の原因であるかを必ずしも区別することができないが、高線量ＴＢＩの施行は、即時および遅延毒性に関連する。悪心、嘔吐、一過性の急性耳下腺炎、口内乾燥症、粘膜炎、および下痢は、一般的に、観察される急性合併症である。間質性肺炎、特発性肺線維症、および肺の肺機能の低下も、高線量ＴＢＩに関連し得る。さらに、高線量ＴＢＩ後に、腎障害が発症し得、遅延し得る（すなわち、最大約２年）。類洞閉塞症候群（ＳＯＳ；以前は、肝臓の静脈閉塞症として既知）の発症は、以下に記載の化学療法ベースのレジメンにおいてより一般的である。高線量ＴＢＩの長期的な副作用は、不妊症、白内障の形成、甲状腺機能亢進症および甲状腺炎、ならびに続発性悪性腫瘍を含む。（Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄ Ｂｒｅｎｄａ Ｍ Ｓａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｒｅｇｉｍｅｎｓ ｆｏｒ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅ ｓｉｚｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｆｉｔ ａｌｌ．”Ｂｌｏｏｄ（２０１４）ｖｏｌ．１２４，３：３４４－５３）。

【0141】

大量化学療法（ＨＤＣ）。ＨＤＣの主要構成要素は、好ましい毒性プロファイル（用量制限毒性としての骨髄毒性）および非分裂腫瘍または、悪性細胞に対するそれらの効果による、アルキル化剤の送達である。使用することができる他の薬剤としては、アントラサイクリンおよびタキサンが挙げられる。特に、以前に放射線療法を受けた患者において、高用量のＴＢＩに関連する短期および長期の毒性を回避するために、大量化学療法ベースのレジメンは、ＴＢＩが追加の化学療法剤に置き換えられる自家および同種異系の設定の両方で開発されている。アルカリ化剤（Ａｌｋａｌｙａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）は、多くの場合、免疫抑制剤と共に送達され、処置は、ブスルファン、シクロホスファミド、または、フルダラビン、メルファラン、チオテパ、エトポシド、およびトレオスルファンなど、ならびにそのような治療薬の組み合わせを含み得る。（Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄ Ｂｒｅｎｄａ Ｍ Ｓａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｒｅｇｉｍｅｎｓ ｆｏｒ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅ ｓｉｚｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｆｉｔ ａｌｌ．”Ｂｌｏｏｄ（２０１４）ｖｏｌ．１２４，３：３４４－５３）。

【0142】

ＭＢＴの形態学的影響。ＭＢＴを受けている患者の骨髄の形態学的特徴は、細胞死および造血再構成の重複するプロセスにより決定される。積極的な化学療法は、単独でまたは、ＴＢＩと共に、数日間でほぼ全ての造血細胞および免疫細胞の除去をもたらす。この期間の終わりに、骨髄は、非常に低細胞性であり、インタクトな間質は、フィブリノイド壊死に似た均質な過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）陽性のタンパク性漏出液を含有する。ごく少ない残存形質細胞およびマクロファージが通常存在し、血管の鬱血、非特異的出血の領域、小さな非乾酪性肉芽腫、間質浮腫、好酸球増加症、軽度のレチクリン線維症、副鼻腔拡張症、骨細胞壊死、および他の異常が見られることがある。幹細胞レスキューの有無にかかわらず、ＭＢＴ後の赤血球、血小板、および顆粒球の正常なレベルの回復に数週間の期間が必要とされるが、造血系の完全な機能的再構成が数年にわたって行われる。さらに、骨髄破壊的化学療法または、骨髄移植後の、末梢血細胞数の相対的に急速な回復にもかかわらず、数ヶ月～数年間、連続する重度の細胞性および体液性免疫不全がある。［Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄ Ｂｒｅｎｄａ Ｍ Ｓａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｒｅｇｉｍｅｎｓ ｆｏｒ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅ ｓｉｚｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｆｉｔ ａｌｌ．”Ｂｌｏｏｄ ｖｏｌ．１２４，３（２０１４）：３４４－５３］。

【0143】

骨髄から悪性前駆細胞をパージする骨髄破壊的およびコンディショニングレジメンは、また、非悪性の造血および間質前駆細胞を除去または、損傷する場合もあり、これにより、移植および天然の幹細胞の再生能力の低下がもたらされる場合がある。この欠陥は、移植後の末梢血塗抹標本または、骨髄生検の検査から、必ずしも明らかであるとは、限らない。末梢血細胞数および骨髄細胞性が移植前のレベルに達し得るものの、骨髄移植後も赤芽球および巨核球の骨髄前駆細胞の重度の長期にわたる欠陥が、何年にわたり続き得る。骨形成系統の細胞の前駆間質区画であるコロニー形成単位－線維芽細胞（ＣＦＵ－ｆ）は、造血細胞の生存、増殖、および分化に重要である。ＣＦＵ－ｆの再構成は、移植前の数に達するまでに１２年もかかることがあり、宿主由来のみである。

【0144】

幹細胞レスキュー（ＳＣＲ）療法
幹細胞レスキュー（または、レスキュー移植）は、高用量の抗がん剤または、放射線療法による処置により破壊された造血幹細胞を置き換える方法である。これは、通常、処置前に保存された患者自身の幹細胞を使用して行われる。幹細胞は、骨髄が回復し、健康な血球を生成するのを助ける。幹細胞のレスキューは、また、より多くのがん細胞が死滅するように、より多くの化学療法または、放射線療法を与えることを可能にし得る。

【0145】

通常、ＭＢＴ後に、患者は、全身性悪性腫瘍、遺伝性代謝性疾患、または、造血系もしくは、免疫系の潜在的に致命的な疾患を治癒する目的で、骨髄または、末梢血のいずれかから分離された造血幹細胞の注入を受けるであろう。骨髄不全、悪性腫瘍、ならびに先天性造血および免疫不全状態の患者における骨髄移植の根本的理由は、罹患骨髄の除去後の骨髄再増殖のために正常な幹細胞を供給するためである。新しい骨髄の再生（「骨髄再構成」）は、幹細胞前駆細胞から、または、頻度は、低いものの、残存宿主前駆細胞から、骨髄破壊的治療からの回復中に生じる。［Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９］。

【0146】

幹細胞レスキューの形態学的特徴。化学療法直後または、移植後の期間に、通常、１～２週間の顕著な骨髄形成不全（発生の不完全、遅延、または、欠陥を意味する）が続く。脂肪細胞の再生は、骨髄再生の最初の形態学的証拠を提供し、続いて、６～１４日目に、徐々に成熟して拡大する未成熟な単型造血細胞の微細なクラスターの出現が続く。これらのコロニーは、単一の造血系列（「単系」）の細胞、通常は、骨髄または、赤血球で構成され、おそらく骨髄移植患者のコミットされた幹細胞から生じる。再生コロニーは、骨髄移植のみを受けている患者の傍小柱であり、幹細胞移植後に間質性である傾向がある。移植後の非常に初期の造血は、通常、ポリクローナルであるが、モノクローナルであってよい。初期の赤血球生成島は、通常、赤血球異形成の特徴を示し得る大きな好塩基性正赤芽球の影響を受ける。造血再構成が続くにつれて、骨髄中の造血細胞の分布は、多くの場合、非定型であり、その結果、骨髄前駆体のクラスターは、小柱間領域に異常に局在し、赤血球前駆体は、骨内膜の近くで生じる。巨核球は、通常、最後に生着する。それらは、通常、小柱間領域の中央部分に局在しており、通常の散乱分布では、なく、クラスターで現れることがある。マクロファージ、偽ゴーシェ細胞、および再生中の前骨髄球のシートも現れることがある。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0147】

正常な骨髄細胞性への段階的な回復は、浮腫の解消、レチクリン線維症（レチクリン染色の増加を意味する）、およびフィブリノイド壊死（ピンク色であり、フィブリン（従ってフィブリノイド）に似ている小動脈または、動脈の壁に生ずる壊死の一種を意味する）を伴い；それは、細胞壁の実際の死または、壊死を表す）。骨髄は、移植後３週目までに約５０％の正常細胞であり、８～１２週までに正常細胞でなければならない。初期の造血から正常な骨髄細胞性への進行の経時変化は、非常に変動的であり；わずか１４日で正常な細胞性を達成し得る患者もいれば、数ヶ月を要する患者もいる。しかし、２８日が典型的である。生着の動態は、ドナー細胞の供給源（例えば、末梢血幹細胞、臍帯血、骨髄）、注入されたＣＤ３４＋細胞の用量、外因性造血増殖因子の種類および用量（すなわち、Ｇ－ＣＳＦ、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、エリスロポエチン）、ならびにＨＬＡクロスマッチングにより決まる。骨髄の回復率は、移植された細胞のホーミング効率およびクローン原性能により、ならびに、注入された細胞が、注入前にｉｎ ｖｉｔｒｏで増殖したかどうかにより、影響を受ける。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0148】

末梢血では、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）により、総白血球数、ならびに好中球、単球、および好酸球の絶対数の増加を引き起こす。骨髄に対するそれらの影響は、好酸球過形成、および細胞性および骨髄：赤血球（Ｍ：Ｅ）比の増加を含む。さらに、顕著に顆粒化および／または、空胞化した好中球および好中球前駆体が末梢血および骨髄の両方に現れる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0149】

ＭＢＴおよびＳＣＲの血液学的影響

【0150】

骨髄移植による幹細胞のレスキューは、多くの場合、固形臓器移植と比較されるが、いくつかの点で独特である。骨髄が、液体の「臓器」であるので、互換性のある臓器のサイズ、胆管、および尿管の閉塞、および他の外科的問題は、見られない。骨髄が正常な個体によって急速に補充されるので、死体の臓器は、必要とされず、生きているドナーは、永続的な臓器の機能不全を維持しない。患者は、後の輸血（自家ＳＣＲ）のために自らの骨髄を提供し得る。しかし、別の個体から骨髄提供を受けている移植レシピエント（同種異系ＳＣＲ）は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）として既知の移植片拒絶反応および移植片による宿主拒絶反応の問題に直面する。さらに、骨髄移植レシピエントは、骨髄再構成が生じるまで、非常に免疫抑制され、それらは、この期間中は、日和見感染および他の障害に極めてかかりやすい。それ故、骨髄移植によるＳＣＲは、非常に費用のかかる仕事であり、大きな罹患率および死亡率を有する。従って、この手順の適応は、限られており、潜在的なレシピエントは、徹底的で、潜在的に長いスクリーニングプロセスを受ける。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。以下の表は、ＭＢＴおよび／または、ＳＣＲの有害な血液学的結果の概要を簡潔に示す。

【0151】

【表4】

【0152】

多くの要因が、骨髄移植によるＳＣＲ後の転帰不良（「移植片不全」）または、直近に生着した骨髄組織の喪失（「移植片拒絶」）を引き起こし得る。一般に、最初の生着の不全（一次移植片不全）は、ドナーおよびレシピエント間の遺伝的差異、損傷した幹細胞または、不十分な数の幹細胞、不十分な免疫抑制または、移植前コンディショニング、以前の複数回の血液輸血による同種免疫処置、生着材料の過剰なＴ細胞枯渇、宿主の骨髄における異常な微小環境、異常なドナー骨髄、薬物毒性、または、ウイルス感染によるものである。生着後の移植片不全（二次移植片不全）は、薬物毒性、感染症、線維症、または、細胞媒介性免疫反応の結果として生じる。［Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ （２００５）１９：４７－７９）］。

【0153】

免疫学的に媒介された骨髄急性移植片拒絶反応は、３つの状況：１）多重輸血された再生不良性貧血患者、２）主要な組織適合性不一致ドナー由来の骨髄を受けた患者、および、３）Ｔ細胞枯渇骨髄を受けた患者で特に一般的である。急性拒絶反応の発生率は、兄弟から免疫学的に操作されていないＨＬＡ適合移植を受けた患者では、わずか約１％であるが、Ｔ細胞枯渇表現型適合移植を受けた患者では、８～１５％に増加する。

【0154】

移植片拒絶反応は、主に、移植前のコンディショニングレジメンを生き残り、同種移植された骨髄で増殖し、次に、ドナー細胞の成長を抑制し、ドナー標的に対する細胞媒介性応答を開始する宿主Ｔリンパ球によって引き起こされる。拒絶のわずかに異なる機序は、異なる患者集団内で含まれる場合がある。これは、サプレッサーＴリンパ球（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＣＤ５７＋）が、同種移植片拒絶反応を受けているＨＬＡ適合兄弟で優勢であるが、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＣＤ５７－）は、無関係のドナーからＨＬＡ適合同種移植片を受ける骨髄移植患者の拒絶で判明するためである。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0155】

血小板の一次移植後の回復後の重度の血小板減少症（「二次血小板回復不全」または「ＳＦＰＲ」）は、重篤な合併症、不十分な臨床転帰、またはさらに死に関連する。血小板減少症は、同種異系移植を受けた患者のうち２０％もの多くの患者に生じるが、自家移植では発病率がはるかに低く（８％）なる。サイトメガロウイルス感染は、いくつかの研究者群によりＳＦＰＲの発症の重大な危険因子として関係するとされている。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0156】

形態学的には、生着不全または生着遅延患者由来の骨髄穿刺塗抹標本は、著しく低細胞性であり、間質細胞が優勢であるが、コア生検および血餅切片は、多くの場合、組織球（結合組織に存在する定常食細胞）のびまん性増殖を示す。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0157】

臨床的には、初期の移植片不全（移植の５０日後を超えて）は、宿主Ｔリンパ球増加症（ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＤＲ＋）により現れるが、後期の移植片不全（移植の５０日以降）は、遅発性顆粒球形成再生、不明熱、および腹部の総合的症状の症候群と関連する。移植片拒絶反応は、多くの場合、進行性リンパ球増加症（リンパ球数の増加）および絶対好中球数の突然の低下の後に生じる。継続的に良好な生着の場合の予後は、リンパ球増加症が生じると不良となるが、ドナーリンパ球の注入は、少ない患者で良好であった。高リスク患者の予防療法は、プレコンディショニングレジメンに全身照射、全リンパ節照射、または免疫抑制剤の増加が含まれることに向けられる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0158】

微小残存病変（ＭＲＤ）
ＭＲＤは、寛解誘導療法（抗がん剤を用いる初期の処置を意味する）後の骨髄における白血病細胞の持続性であり、従来の形態学的評価による検出限界を下回る。これらの残存白血病細胞は、様々な形態の白血病からの「完全な」形態学的寛解を達成し、それにより、残存または再発骨髄疾患がもたらされる多くの患者において疾患再発の起こりうる原因であると考えられる。臨床的に適切なレベルのＭＲＤ検出の感度は確立されておらず、非常に少数の残存細胞を根絶する追加の治療法が、臨床および形態学的寛解の患者の生存率を改善することも証明されていない。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0159】

移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）
ＧＶＨＤは、同種骨髄移植後の罹患率および死亡率の主な原因である。それは、組織適合性骨髄輸血の症例の約５０％で生じ、ＨＬＡ不適合骨髄を用いた骨髄移植のほぼ全ての症例で生じる。中等度～重度の場合、ＧＶＨＤは、大きな死亡率を有する（４０～８０％）。ＧＶＨＤは、十分に理解されない複雑な免疫学的現象であるが、それは、通常、リンパ球サブセットの不均衡、同種抗原提示、およびサイトカインに対する異常な産生または応答性の増加の環境で生じるＴ細胞媒介性プロセスである。ＧＶＨＤの急性型および慢性型の両方が認識される。

【0160】

急性ＧＶＨＤ（ａＧＶＨＤ）は、皮膚、胃腸管、および肝臓の「マイナー」組織適合性抗原の不一致に対するリンパ球の反応性を追跡する。ＧＶＨＤの可能性の増加は、ドナーおよびホスト間のＨＬＡ格差、ドナーおよびホストの加齢、ドナーの同種感作、ドナーおよびレシピエント間の性別の不一致、調製レジメンの強度の増加、ならびにドナーＴ細胞の用量に関連する。臨床症状は、軽度の皮膚発疹、胃腸（ＧＩ）障害（悪心、嘔吐、下痢）、および肝機能検査の障害から、皮膚破壊、肝不全、血性下痢、および重度の免疫抑制を伴う生命を脅かす疾患まで様々である。骨髄輸血患者の約５～１０％が、ＧＶＨＤで死亡する。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0161】

慢性ＧＶＨＤ（ｃＧＶＨＤ）は、急性プロセスに従うことも、ｄｅ ｎｏｖｏ発症することもある。それは、骨髄移植レシピエントの２５～６５％に生じる。血小板数は、生存の予測因子であり；１００，０００／ｍＬ未満の血小板数は、５０％を超える全体的な死亡率に関連する。ｃＧＶＨＤは、自己免疫現象を特徴とする免疫調節不全状態を表すと考えられ、臨床像は、皮膚、ＧＩ管、および肝臓が関与する自己免疫疾患に似ている。循環する自己抗体が存在し、補体および免疫グロブリンの沈着物が真皮－表皮接合部で同定されている。ｃＧＶＨＤのリスク要因は、以前のａＧＶＨＤ、より高齢のドナーまたはレシピエントの年齢、ＨＬＡミスマッチ、無関係のドナーの使用、ウイルス感染、脾臓摘出、ドナーリンパ球注入（ＤＬＩ）、およびｃＧＶＨＤを処置するための末梢血幹細胞の使用を含む。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0162】

骨髄線維症
軽度の一過性レチクリン線維症は、化学療法後では珍しくないが、重度のコラーゲン線維症は、慢性骨髄性白血病に特有である。骨髄線維症は、レチクリン線維密度の増加、重症の場合、ＣＤ６１＋巨核球形成の数の増加、ＣＤ６８＋マクロファージの増加、赤血球前駆体の数の減少、および血小板数の増加を特徴とする。通常、移植後の骨髄線維症の初期退行があるが、それは、多くの場合、造血の再生領域で再発し、非定型の矮性巨核球の存在、重度の急性ＧＶＨＤ、および輸血の独立を達成するための時間の大幅な遅延に関連する。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0163】

治療関連の急性白血病
治療に関連する急性骨髄性白血病（ｔ－ＡＭＬ）は、細胞毒性化学療法および／または放射線療法から生じる続発性白血病の一形態である。以前の悪性腫瘍に対する大量化学療法後のｔ－ＡＭＬの発病率は徐々に増加しており、ｔ－ＡＭＬは、小児および成人の両方の集団で最も一般的な続発性悪性腫瘍の１つである。グルタチオンＳ－トランスフェラーゼＰ１、Ｍ１、およびＴ１の多型またはホモ接合型遺伝子欠損は、化学療法薬の解毒が不十分なために、ｔ－ＡＭＬの発生率の増加に関与することがある。ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、骨髄腫、多発性赤血球増加症、乳癌、卵巣癌、精巣癌、またはｄｅ ｎｏｖｏ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）が処置された患者は、ｔ－ＡＭＬを発症するリスクが最も高くなり、続発性ＡＭＬ患者の５０％超が乳癌、ＮＨＬ、およびホジキンリンパ腫を有する。示されるように、ｔ－ＡＭＬとは対照的に、治療関連ＡＬＬの発病はまれであり、ＭＢＴで使用されるような以前の薬剤の使用の適応症は限られる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0164】

移植後のリンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）
ＰＴＬＤは、骨髄または固形臓器移植を受けた患者の免疫抑制療法の結果として発症するリンパ系新生物である。移植後のリンパ増殖性疾患の範囲は、良性から悪性のモノクローナルまたはポリクローナルリンパ増殖までにおよび、それは、固形臓器移植レシピエントの約２％、自家骨髄移植レシピエントの約１％、ならびにＨＬＡ不適合同種骨髄移植、ならびに抗ＣＤ３モノクローナルＯＫＴ３、シクロスポリンＡ、およびＦＫ５０６などのＧＶＨＤの免疫抑制療法を受けることを含む複数の危険因子を有する患者の最大２０％で生じる。エプスタイン・バールウイルスは、原発性または再活性化のいずれかで、ＰＴＬＤの発症と強く関連する。免疫監視の障害、同種移植片からの慢性的な抗原刺激、および免疫抑制療法の発がん効果は、ＰＴＬＤをもたらす追加の要因である。ＰＴＬＤを伴う固形臓器移植レシピエントの典型的な結節外病変とは対照的に、ＰＴＬＤを伴う骨髄同種移植レシピエントは、多くの場合、結節および結節外の両方の部位を含む広範な疾患を有する。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0165】

有毒な脊髄症
有毒な脊髄症は、骨髄の間質および間葉系構成要素への毒性損傷によって引き起こされるまれな骨髄病変である。持続性血球減少症は、中毒性脊髄症の臨床的特徴であり；骨髄は、浮腫、血管周囲形質細胞症、好中球顆粒球の壊死症、および細胞破片を含む、顕著な間質損傷を伴う低細胞性である。有毒な脊髄症は、化学療法または放射線療法を受ける患者の１％未満で生ずる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

【0166】

これらの状態の、全てではないが、多くは、不十分なＭＢＴ療法を介した疾患／悪性細胞の不完全な除去、不適切な幹細胞レスキュー、ＭＢＴ後に通常必要とされる免疫抑制剤の使用、または骨髄環境の損傷から生ずる。良好なＳＣＲおよび／または関連状態の阻止は、ＭＢＴを受ける患者の造血システムとの関連することがある。組織特異的微小環境内の慢性炎症が、支持ニッチ細胞がそれらの同族幹細胞を適切に育成する能力を損ない、それにより、ＳＣＲおよび造血再構成を妨げると仮定されている。（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ（２０１２）１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８；Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆ Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１４）３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８；Ｓｃｈｅｐｅｒｓ，Ｋ．，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｔ．Ｂ．＆ Ｐａｓｓｅｇｕｅ，Ｅ．Ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅｓ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ（２０１５）１６，２５４－２６７，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１５．０２．０１４ ９１１）。

【0167】

骨髄抑制からの回復
免疫再構築は、未成熟から成熟した免疫機能まで発達する一般的なパターンに従う。［Ｃａｒｓｏｎ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３５－Ｒｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，”ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２００９）；Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ（２０１０）６，２５１－２６４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１０．０２．００１；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１０）１２，１０４６－１０５６，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ２１０８；Ｗｉｎｋｌｅｒ，Ｉ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅ Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｄｏｒｍａｎｃｙ，ｓｅｌｆ ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１２）１８，１６５１－１６５７，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．２９６９；Ｄｉｎｇ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ａｎｄ ｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌｓ ｍａｉｎｔａｉｎ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１２）４８１，４５７－４６２，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１０７８３；Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｊａｇｇｅｄ－１ ｉｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｆｏｒ ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ９４７ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌ ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１３）４，１０２２－１０３４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１３．０７．０４８；Ｇｒｅｅｎｂａｕｍ，Ａ．ｅｔ ａｌ．ＣＸＣＬ１２ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ－ｃｅｌｌ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１３）４９５，２２７－２３０，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１１９２６；Ｄｏａｎ，Ｐ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ．Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１３）１９，２９５－３０４，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．３０７０］。移植後の最初の１か月間の免疫反応性は、非常に低く、自然免疫が最初に機能を回復する。［Ｏｇｏｎｅｋ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１６）７：５０７．ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０７］。造血系列の再現は、再現可能な順序に従い、単球様細胞が末梢血中で最初に出現し、続いて顆粒球、次にＮＫ細胞が続く。ＮＫ細胞の回復は、細胞数および機能的成熟の両方に関して、Ｔ細胞およびＢ細胞よりも大幅に優先される［Ｇｒｚｙｗａｃｚ，Ｂ．ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒａｌ Ｋｉｌｌｅｒ Ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ，Ｂｌｏｏｄ（２０１１）１１７（１３）：３５４８－５８］。細胞毒性および食作用機能は、１００日目までに回復するが、Ｔリンパ球およびＢリンパ球のより特殊な機能は、依然として、１年以上にわたって損なわれたままである場合がある。ある期間後、ほとんどの健康な骨髄レシピエントの免疫系の様々な構成要素が、同期して作用し始めるが、慢性移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の患者の免疫系は、依然として、抑制される。免疫再構築の遅延および不完全性により、患者は、同種ＨＣＴ後の高い罹患率および死亡率に関連する感染症にかかりやすくなる。

【0168】

放射線曝露後の骨髄腔の造血再生および血管再生は、時間的に関連し、骨髄の血管再構成なしには造血再生はないことが、長い間知られている。現在、細胞毒性薬または全身照射による骨髄抑制後の造血再生は、骨髄類洞ネットワークおよび造血細胞、ならびに巨核球の成熟に相互依存していることが認識される。［Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“Ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｉｃｈｅ：Ｈｏｍｅ ｏｆ ＨＳＣ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５］。

【0169】

骨髄抑制は、循環する造血細胞のアポトーシスだけでなく、骨髄血管系の破壊にもつながる。類洞の複雑なネットワークは、規則的な血管壁がないので、特に、電離放射線の影響を受け、壊死、著しい拡張、ならびに血漿および血球の漏出を伴う明白な破壊の超微細構造の兆候を示す。骨髄類洞は、隣接する造血細胞自体によりサポートされているようである。このサポートを失うことは、安定性を失うことを意味し、これにより、放射線療法または、骨髄抑制化学療法後の骨髄腔内の出血がもたらされる。造血再生のプロセスでは、類洞が、再構築される。従って、造血および血管形成／血管新生のプロセスは、密接に関連する。［同上］。

【0170】

血管系は、化学療法後のＨＳＣに保護ニッチを提供し、これにより、骨および造血の再生が促進される。［Ｓｉｖａｎ Ｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｓ ｉｎ ｂｏｎｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｏｐｅｎ Ｂｉｏｌ．（２０１９） ９： １９０１４４．ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９８／ｒｓｏｂ．１９０１４４］。長期の静止状態のＨＳＣ（ＬＴ－ＨＳＣ）は、類洞およびＨ型血管の両方に関連する。［同上、下記を引用：Ｋｉｅｌ ＭＪ，ｅｔ ａｌ．（２００５）．ＳＬＡＭ ｆａｍｉｌｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｒｅｖｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｎｉｃｈｅｓ ｆｏｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ １２１，１１０９－１１２１；Ｋｕｎｉｓａｋｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）．Ａｒｔｅｒｉｏｌａｒ ｎｉｃｈｅｓ ｍａｉｎｔａｉｎ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ ５０２，６３７－６４３］。血管ニッチは、照射後にＨＳＣ集団を再生するために不可欠である。［同上、下記を引用：Ｈｏｏｐｅｒ ＡＴ，ｅｔ ａｌ．（２００９）．Ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ＶＥＧＦＲ２ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ４，２６３－２７４］。照射後の骨髄ＥＣの移植は、造血を促進し、放射線感受性組織を保護する［同上、下記を引用：Ｐｏｕｌｏｓ ＭＧ，ｅｔ ａｌ，（２０１５） Ｖａｓｃｕｌａｒ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｔｏ ｄｅｆｉｎｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．５，８８１－８９４，Ｃｈｕｔｅ ＪＰ，ｅｔ ａｌ．（２００７）．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｌｅｔｈａｌｌｙ ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ ｍｉｃｅ．Ｂｌｏｏｄ １０９，２３６５－２３７２］。骨髄ＥＣ培養馴化培地を移植した照射マウスは、生存率の増加を示した。これにより、アンジオクライン因子が生存率を高め得るが、ＨＳＣの完全な喪失を補うことは、ないことが示される。ＮｏｔｃｈリガンドＪＡＧ－１の内皮特異的欠失は、ＨＳＣ再生の障害を引き起こし、照射後の致死率を増加させる。［同上、下記を引用：Ｐｏｕｌｏｓ ＭＧ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｊａｇｇｅｄ－１ ｉｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｆｏｒ ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．４，１０２２－１０３４］。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達に加えて、ＥＣは、Ｆｇｆ－２、Ｂｍｐ４、Ｉｇｆｂｐ２、およびアンジオポエチン１を上方調節して、造血幹前駆細胞（ＨＳＰＣ）を増殖させ［同上、下記を引用：Ａｒａｉ Ｆ，ｅｔ ａｌ （２００４） Ｔｉｅ２／ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ．Ｃｅｌｌ １１８，１４９－１６１，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｈ，ｅｔ ａｌ．（２０１０） Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１２，１０４６－１０５６］、これにより、これらのアンジオクライン因子が照射後のＨＳＣの保護に有用であり得ることが示される。（同上）。

【0171】

高齢骨髄ＥＳは、高齢化したマウスの骨髄からレシピエントへのＥＳの移植により示されるように、ＨＳＣを損ね、骨髄の偏りを促進する［同上、下記を引用：Ｃｈｕｔｅ ＪＰ，ｅｔ ａｌ （２００７） Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｌｅｔｈａｌｌｙ ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ ｍｉｃｅ．Ｂｌｏｏｄ １０９，２３６５－２３７２］。高齢骨髄におけるＰＤＧＦＲ－β発現周細胞の減少は、播種性腫瘍細胞（ＤＴＣ）の拡張に関連する。また、高齢骨髄分泌体は、骨中の乳癌細胞の増殖を促進する。Ｈ型ＥＣは、放射線と化学療法に応答して拡張し、血流媒介のＰＤＧＦ－Ｂ分泌を介して骨における再生血管生成を媒介し、これにより周細胞拡張を促進する［同上、下記を引用：Ｓｉｎｇｈ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２０１９） Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｂｏｎｅ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ ４，１２５６７９ （１０．１１７２／ｊｃｉ．ｉｎｓｉｇｈｔ．１２５６７９］。

【0172】

世界の高齢者の人数は、未曾有のスピードで増加している。高齢化過程は、心血管と造血系の生命に危害を及ぼす疾患に対する感受性の増加に関連する。

【0173】

非アブレーション性と調節性移植の低下の進展によりＢＭ移植を受ける高齢者の人数を著しく増加させたが、高齢化は、負の予後／失敗のリスク増加に関連する。これは、高齢者患者がＨＳＣ移植の成功に必要な骨髄機能破壊戦略に応答せず、かつ（通常に造血性悪性疾患や他の癌の治療に用いられる骨髄抑制療法の後に持続的な血球減少症も発症するからである。

【0174】

現在、造血系の高齢化、特にＢＭの高齢化がＢＭニッチの植え込みや再生にどのように影響するかについては、ほとんど深く理解されていない。血液系の高齢化は、血管完全性の喪失とＨＳＣ機能の顕著な変化に関連する。人数の増加と自己再生能力の喪失に加え、老年ＨＳＣは、骨髄の偏りと血液系悪性腫瘍の発症傾向の増加を示す。これらの変化の一部は、細胞固有の変化を反映するが、新しい証拠は、これらの欠陥の一部がＢＭマイクロエンバイロメント、特にＢＭ血管ニッチによっても規制される可能性があることを示す。

【0175】

記載された発明は、トロンボスポンジン－１を高齢化促進要因の候補として同定した。実験は、進行中であり、この候補要因が高齢化した血液と血管系の機能能力を回復でき、骨髄血管の潜在力を利用して高齢化した血液系を若返らせることができることを示すか否かを決定する。高齢化促進因子の遮断は、高齢者の多器官床における血管機能と完全性を維持し、移植に用いられる老年ＨＳＣのインビトロ増幅を増強し、高齢者の骨再生を促進し、血管周囲の基質小生境細胞機能を維持し、血管周囲の基質小生境細胞機能を回復させ、あるいは、その両方、造血と血管系の早期高齢化を防止そ、高齢化した造血と血管系を回復させ、多器官の幹細胞機能を維持し、多臓器または、両方の幹細胞機能を回復させる、という利点を有する可能性がある。理論的に制限されない場合、血液と血管系を回復させることは、年齢に関連する造血欠陥を逆転させ全体の健康を回復させることに重要である。

【発明の概要】

【0176】

一態様によれば、本発明は、血管完全性の低下、造血幹細胞機能の低下またはその両方を含む骨髄の高齢化の造血微小環境における高齢化関連の造血障害を含む高齢化血液および血管系を若返らせる方法を提供し、前記方法は、トロンボスポンジン１（ＴＳＰ１）であるアンギオクリン因子、スプライスバリアントまたはそれらのフラグメントの阻害剤と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を対象に投与するステップ、前記血管系を再生し、骨髄の造血再構成を促進するのに有効な治療量の多能性自己再生造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植を含む幹細胞共治療を選択的に実行するするステップ、および前記血液系を再生し、前記骨髄の造血再構成を促進するのに有効な治療量の内皮細胞（ＥＣ）の移植を含む血管内皮共治療を選択的に実行し、かつ前記骨髄の造血微小環境における炎症を軽減し、前記骨髄の造血微小環境における前記血管完全性を維持し、または造血コンパートメント内の細胞タイプの頻度と数量を増やして多系統の再構成を実行することのうちの一つまたは複数により、前記造血骨髄微小環境における造血回復を増強するステップを含む。

【0177】

いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、抗体、ｓｉＲＮＡまたは合成シングルガイドＲＮＡを含むＣＲＩＳＰＲ－によるＴＳＰ１遺伝子ノックアウトによって行われる。いくつかの実施形態によれば、前記抗体は、ＴＳＰ１に対する非中和抗体である。いくつかの実施形態によれば、前記抗体は、ＴＳＰ１に対する中和抗体である。いくつかの実施形態によれば、前記中和抗体は、クローンＡ４．１（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＲＲＩＤ ＡＢ＿１０９８８６６９）として市販される。前記ＨＳＣニッチは、造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血前駆細胞（ＨＰＣ）、造血中に幹細胞プールサイズを調節する骨芽細胞を含む常在ニッチ細胞およびケモカインを含む分泌および膜結合因子を含み、ここで定常状態では、前記ＨＳＣは、ほとんど静止状態であるが、前記ＨＰＣは、活発に増殖し、毎日の造血に寄与し、前記血管ニッチは、骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）を含む内皮細胞を含む内皮微小ニッチを含み、前記ＢＭＥＣは、活性化される場合、アンギオクリン因子の差別的産生をもたらす細胞クロストークのシステムを調整するアンギオクリン因子を産生する。

【0178】

いくつかの実施形態によれば、高齢ＢＭＥＣを含む前記ＨＳＣニッチの前記高齢骨髄造血微小環境内の前記高齢内皮微小環境は、ｍＴＯＲシグナル伝達の減少、ｍＴＯＲサブユニットの量の減少、ｍＴＯＲ触媒サブユニットのリン酸化の減少、ｍＴＯＲ転写標的遺伝子の発現の減少、またはｍＴＯＲ触媒サブユニットのｍＴＯＲ複合体１およびｍＴＯＲ複合体２のタンパク質レベルの低下のうちの一つまたは複数を含む。いくつかの実施形態によれば、前記ＢＭＥＣによるｍＴＯＲシグナル伝達の減少は、高齢ＨＳＣの高齢化に関連する機能障害を引き起こす。いくつかの実施形態によれば、トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ１）の発現レベルは、若い対照と比較する場合に高齢ＢＭＥＣで上方調節される。いくつかの実施形態によれば、ＳＴＡＴ３経路、ＴＧＦ－ｂシグナル伝達、ＩＧＦ－１シグナル伝達またはＨＭＧＢ１シグナル伝達の変化を含む、若いコントロールと比較する高齢ＢＭＥＣにおける遺伝子発現の変化によって表される上方調節された生物学的プロセスは、ＴＳＰ１によって調節される。いくつかの実施形態によれば、前記血管完全性の低下は、内皮透過性の増加、内皮炎症の増加またはその両方を含む血管透過性の増加を含む。前記骨髄造血微小環境のＨＳＣニッチにおける高齢化に関連する造血欠陥は、持続性炎症、ＨＳＣ細胞性の増加、幹細胞プールサイズの増加、ＨＳＣ静止の喪失、ＨＳＣアポトーシスの増加、ＨＳＣ自己再生能力の喪失、前記ＨＳＣの骨髄性偏り分化の増加、骨髄機能破壊戦略の失敗のリスクの増加、または若い対照と比較する、移植後の骨髄ニッチの生着と再生の低減のうちの一つまたは複数を含む。いくつかの実施形態によれば、前記持続性炎症は、骨髄抑制性傷害に由来する。いくつかの実施形態によれば、前記骨髄抑制性傷害は、放射線、化学療法またはその両方への曝露を含む。いくつかの実施形態によれば、前記骨髄抑制性傷害は、化学療法を含む。いくつかの実施形態によれば、前記骨髄抑制性傷害は、骨髄破壊的である。いくつかの実施形態によれば、前記ＨＳＣの前記骨髄性偏り分化の増加は、リンパ球生成を犠牲にする。いくつかの実施形態によれば、前記ＨＳＣ静止の喪失は、ＨＳＣの一時的な増加、ＨＳＣの長期的な枯渇およびＨＳＣの長期的な再増殖能力の欠陥につながる。いくつかの実施形態によれば、内皮細胞ｍＴＯＲの過剰活性化は、ＨＳＣを静止からより活性な細胞周期に追い込む。いくつかの実施形態によれば、前記骨髄造血微小環境の前記ＨＳＣニッチにおける高齢化関連の造血障害は、ＨＳＣ遺伝子発現の変化を含む。いくつかの実施形態によれば、高齢ＨＳＣにおける高齢化関連のＨＳＣ遺伝子発現の前記変化は、ＳＥＬＰ、ＮＥＯ１、ＪＡＭ２、ＳＬＡＭＦ１、ＰＬＳＣＲ２、ＣＬＵ、ＳＤＰＲ、ＦＹＢ、ＩＴＧＡ６のうちの一つまたは複数の上方調節、およびＲＡＳＳＦ４、ＦＧＦ１１、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＨＳＰＡ１ＡまたはＮＦＫＢＩＡのうちの一つまたは複数の下方調節を含む。

【0179】

いくつかの実施形態によれば、本発明は、造血幹細胞移植用の造血幹細胞製品を調製する方法を提供し、前記方法は、（ａ）造血幹細胞の体外培養物を準備するステップ、（ｂ）抗ＴＳＰ１抗体を含む抗体を（ａ）の造血幹細胞の前記培養物に投与して、処理された造血幹細胞集団を形成するステップ、（ｃ）前記処理された造血幹細胞集団を体内で増殖させて、治療量の処理された造血幹細胞を含む造血幹細胞移植製品を形成するステップを含み、前記造血幹細胞移植製品の生着可能性は、未処理の対照と比較して増強される。

【0180】

いくつかの実施形態によれば、ステップ（ａ）の前記造血幹細胞は、ヒト対象に由来する。いくつかの実施形態によれば、ステップ（ａ）の前記造血幹細胞は、マウス対象に由来する。いくつかの実施形態によれば、前記抗ＴＳＰ１抗体を含む前記抗体は、中和抗体である。いくつかの実施形態によれば、前記抗ＴＳＰ１抗体は、ＣＤ３６、ＣＤ４７またはその両方に対する抗体をさらに含む。いくつかの実施形態によれば、前記抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態によれば、前記移植は、自己移植である。いくつかの実施形態によれば、前記造血幹細胞移植は、同種異系である。

【0181】

特許または出願ファイルは、カラーで実行された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面（複数可）を有する本特許または、特許出願の出版物のコピーは、要求に応じて、必要な料金の支払い時に、官庁により提供されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0182】

【図1A】ｍＴＯＲＣ１およびＭＴｏｒＣ２を調節する重要なシグナル伝達ノードを示すｍＴＯＲシグナル伝達経路の概略図である。

【図1B】ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２経路の主要な出力を示す概略図である。（ＦＩＧ．１Ａ，１Ｂ，ｔａｋｅｎ ｆｒｏｍ Ｌａｐｌａｎｔｅ，Ｍ．，Ｓａｂａｔｉｎｉ，ＤＭ，Ｃｅｌｌ（２０１２）１４９（２）：２７４－２９３）。

【図1C】ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路の模式図である。（Ｔａｋｅｎ ｆｒｏｍ Ｐｏｒｔａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌ．（２０１４）ｄｏｉ １０．３３８９／ｆｏｎｃ．２０１４．０００６４）。

【図2A】高齢骨髄内皮細胞がｍＴＯＲシグナル伝達の障害を示すことを示す。２Ａは、若いマウスおよび高齢マウスにおけるＰＩＫ３ＣＡ／ＰＩＫ３Ｒ１複合体の存在量を示す。データは、高齢マウスのＢＭＥＣにおいてｍＴＯＲサブユニットの存在量が減少することを示す。

【図2B】高齢骨髄内皮細胞がｍＴＯＲシグナル伝達の障害を示すことを示す。２Ｂは、若いマウスおよび高齢マウスにおける新たに単離したＢＭＥＣの平均蛍光強度の定量化を示す。データは、ｍＴＯＲ蛍光体－Ｓｅｒ２４４８の減少を示す。

【図2C】高齢骨髄内皮細胞がｍＴＯＲシグナル伝達の障害を示すことを示す。２Ｃは、ＲＴ－ＰＣＲによるｍＴＯＲ下流転写標的遺伝子の発現分析である。遺伝子発現は、ベータアクチンをコードするＡｃｔｂ遺伝子に対して正規化された。

【図2D】高齢骨髄内皮細胞がｍＴＯＲシグナル伝達の障害を示すことを示す。２Ｄは、プールされた若いマウスおよび高齢マウスのサンプル（Ｎ＝５）のウェスタンブロット分析を示す。高齢マウスにおいて、ｍＴＯＲ触媒サブユニット（ｐ－ｍＴＯＲ Ｓ２４４８）、ｍＴＯＲ複合体１（ｐ－Ｓ６Ｋ Ｔ３８９）、およびｍＴＯＲ複合体２（ｐ－ＡＫＴ Ｓ４７３）におけるタンパク質レベルの低下を観察した。

【図3A】ｍＴＯＲのＥＣ特異的欠失（ｍＴＯＲ^(ECKO)）が高齢に関連するものを連想させるＨＳＣの変化を引き起こしたことを示す。ｍＴＯＲは、ｍＴＯＲ^fl/flマウスを成体ＥＣ特異的ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎプロモーター（ｍＴＯＲ^(ECKO)）によって駆動されるタモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配することにより、成体ＥＣから特異的に除去された。フローサイトメトリー分析は、若い（１２－１６週）ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスと若い（１２－１６週）対照マウスに対して実施されてＨＳＣとその子孫の調節に対するＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失の影響を決定し、２２～２４か月齢の野生型マウスは、高齢対照群とされた。ｍＴＯＲ^(ECKO) ３Ａは、全造血細胞／大腿骨のプロットであり、３Ｂは、表現型ＬＴ－ＨＳＣ／１０⁶全骨髄のプロットであり、３Ｃは、末梢血からの系統＋細胞％のプロットであり、３Ｄは、ＣＦＵ／２５０００の全骨髄細胞のプロットであり、３Ｅは、偏光ＬＴ－ＨＳＣ％のプロットであり、３Ｆは、細胞極性を区別するためのαＴＵＢＵＬＩＮ染色の代表的な画像を示す。３Ｇは、細胞当たりのγＨ２ＡＸ病巣の数（ｘ軸）対スコア化細胞のパーセンテージ（ｙ軸）のプロットを示し、３Ｈは、γＨ２ＡＸ病巣の増加を示す代表的な画像を示し、および３Ｉは、転写プロファイルを示す。

【図3B】ｍＴＯＲのＥＣ特異的欠失（ｍＴＯＲ^(ECKO)）が高齢に関連するものを連想させるＨＳＣの変化を引き起こしたことを示す。ｍＴＯＲは、ｍＴＯＲ^fl/flマウスを成体ＥＣ特異的ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎプロモーター（ｍＴＯＲ^(ECKO)）によって駆動されるタモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配することにより、成体ＥＣから特異的に除去された。フローサイトメトリー分析は、若い（１２－１６週）ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスと若い（１２－１６週）対照マウスに対して実施されてＨＳＣとその子孫の調節に対するＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失の影響を決定し、２２～２４か月齢の野生型マウスは、高齢対照群とされた。ｍＴＯＲ^(ECKO) ３Ａは、全造血細胞／大腿骨のプロットであり、３Ｂは、表現型ＬＴ－ＨＳＣ／１０⁶全骨髄のプロットであり、３Ｃは、末梢血からの系統＋細胞％のプロットであり、３Ｄは、ＣＦＵ／２５０００の全骨髄細胞のプロットであり、３Ｅは、偏光ＬＴ－ＨＳＣ％のプロットであり、３Ｆは、細胞極性を区別するためのαＴＵＢＵＬＩＮ染色の代表的な画像を示す。３Ｇは、細胞当たりのγＨ２ＡＸ病巣の数（ｘ軸）対スコア化細胞のパーセンテージ（ｙ軸）のプロットを示し、３Ｈは、γＨ２ＡＸ病巣の増加を示す代表的な画像を示し、および３Ｉは、転写プロファイルを示す。

【図3C】ｍＴＯＲのＥＣ特異的欠失（ｍＴＯＲ^(ECKO)）が高齢に関連するものを連想させるＨＳＣの変化を引き起こしたことを示す。ｍＴＯＲは、ｍＴＯＲ^fl/flマウスを成体ＥＣ特異的ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎプロモーター（ｍＴＯＲ^(ECKO)）によって駆動されるタモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配することにより、成体ＥＣから特異的に除去された。フローサイトメトリー分析は、若い（１２－１６週）ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスと若い（１２－１６週）対照マウスに対して実施されてＨＳＣとその子孫の調節に対するＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失の影響を決定し、２２～２４か月齢の野生型マウスは、高齢対照群とされた。ｍＴＯＲ^(ECKO) ３Ａは、全造血細胞／大腿骨のプロットであり、３Ｂは、表現型ＬＴ－ＨＳＣ／１０⁶全骨髄のプロットであり、３Ｃは、末梢血からの系統＋細胞％のプロットであり、３Ｄは、ＣＦＵ／２５０００の全骨髄細胞のプロットであり、３Ｅは、偏光ＬＴ－ＨＳＣ％のプロットであり、３Ｆは、細胞極性を区別するためのαＴＵＢＵＬＩＮ染色の代表的な画像を示す。３Ｇは、細胞当たりのγＨ２ＡＸ病巣の数（ｘ軸）対スコア化細胞のパーセンテージ（ｙ軸）のプロットを示し、３Ｈは、γＨ２ＡＸ病巣の増加を示す代表的な画像を示し、および３Ｉは、転写プロファイルを示す。

【図3D】ｍＴＯＲのＥＣ特異的欠失（ｍＴＯＲ^(ECKO)）が高齢に関連するものを連想させるＨＳＣの変化を引き起こしたことを示す。ｍＴＯＲは、ｍＴＯＲ^fl/flマウスを成体ＥＣ特異的ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎプロモーター（ｍＴＯＲ^(ECKO)）によって駆動されるタモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配することにより、成体ＥＣから特異的に除去された。フローサイトメトリー分析は、若い（１２－１６週）ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスと若い（１２－１６週）対照マウスに対して実施されてＨＳＣとその子孫の調節に対するＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失の影響を決定し、２２～２４か月齢の野生型マウスは、高齢対照群とされた。ｍＴＯＲ^(ECKO) ３Ａは、全造血細胞／大腿骨のプロットであり、３Ｂは、表現型ＬＴ－ＨＳＣ／１０⁶全骨髄のプロットであり、３Ｃは、末梢血からの系統＋細胞％のプロットであり、３Ｄは、ＣＦＵ／２５０００の全骨髄細胞のプロットであり、３Ｅは、偏光ＬＴ－ＨＳＣ％のプロットであり、３Ｆは、細胞極性を区別するためのαＴＵＢＵＬＩＮ染色の代表的な画像を示す。３Ｇは、細胞当たりのγＨ２ＡＸ病巣の数（ｘ軸）対スコア化細胞のパーセンテージ（ｙ軸）のプロットを示し、３Ｈは、γＨ２ＡＸ病巣の増加を示す代表的な画像を示し、および３Ｉは、転写プロファイルを示す。

【図3E】ｍＴＯＲのＥＣ特異的欠失（ｍＴＯＲ^(ECKO)）が高齢に関連するものを連想させるＨＳＣの変化を引き起こしたことを示す。ｍＴＯＲは、ｍＴＯＲ^fl/flマウスを成体ＥＣ特異的ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎプロモーター（ｍＴＯＲ^(ECKO)）によって駆動されるタモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配することにより、成体ＥＣから特異的に除去された。フローサイトメトリー分析は、若い（１２－１６週）ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスと若い（１２－１６週）対照マウスに対して実施されてＨＳＣとその子孫の調節に対するＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失の影響を決定し、２２～２４か月齢の野生型マウスは、高齢対照群とされた。ｍＴＯＲ^(ECKO) ３Ａは、全造血細胞／大腿骨のプロットであり、３Ｂは、表現型ＬＴ－ＨＳＣ／１０⁶全骨髄のプロットであり、３Ｃは、末梢血からの系統＋細胞％のプロットであり、３Ｄは、ＣＦＵ／２５０００の全骨髄細胞のプロットであり、３Ｅは、偏光ＬＴ－ＨＳＣ％のプロットであり、３Ｆは、細胞極性を区別するためのαＴＵＢＵＬＩＮ染色の代表的な画像を示す。３Ｇは、細胞当たりのγＨ２ＡＸ病巣の数（ｘ軸）対スコア化細胞のパーセンテージ（ｙ軸）のプロットを示し、３Ｈは、γＨ２ＡＸ病巣の増加を示す代表的な画像を示し、および３Ｉは、転写プロファイルを示す。

【図3F】ｍＴＯＲのＥＣ特異的欠失（ｍＴＯＲ^(ECKO)）が高齢に関連するものを連想させるＨＳＣの変化を引き起こしたことを示す。ｍＴＯＲは、ｍＴＯＲ^fl/flマウスを成体ＥＣ特異的ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎプロモーター（ｍＴＯＲ^(ECKO)）によって駆動されるタモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配することにより、成体ＥＣから特異的に除去された。フローサイトメトリー分析は、若い（１２－１６週）ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスと若い（１２－１６週）対照マウスに対して実施されてＨＳＣとその子孫の調節に対するＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失の影響を決定し、２２～２４か月齢の野生型マウスは、高齢対照群とされた。ｍＴＯＲ^(ECKO) ３Ａは、全造血細胞／大腿骨のプロットであり、３Ｂは、表現型ＬＴ－ＨＳＣ／１０⁶全骨髄のプロットであり、３Ｃは、末梢血からの系統＋細胞％のプロットであり、３Ｄは、ＣＦＵ／２５０００の全骨髄細胞のプロットであり、３Ｅは、偏光ＬＴ－ＨＳＣ％のプロットであり、３Ｆは、細胞極性を区別するためのαＴＵＢＵＬＩＮ染色の代表的な画像を示す。３Ｇは、細胞当たりのγＨ２ＡＸ病巣の数（ｘ軸）対スコア化細胞のパーセンテージ（ｙ軸）のプロットを示し、３Ｈは、γＨ２ＡＸ病巣の増加を示す代表的な画像を示し、および３Ｉは、転写プロファイルを示す。

【図3G】ｍＴＯＲのＥＣ特異的欠失（ｍＴＯＲ^(ECKO)）が高齢に関連するものを連想させるＨＳＣの変化を引き起こしたことを示す。ｍＴＯＲは、ｍＴＯＲ^fl/flマウスを成体ＥＣ特異的ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎプロモーター（ｍＴＯＲ^(ECKO)）によって駆動されるタモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配することにより、成体ＥＣから特異的に除去された。フローサイトメトリー分析は、若い（１２－１６週）ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスと若い（１２－１６週）対照マウスに対して実施されてＨＳＣとその子孫の調節に対するＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失の影響を決定し、２２～２４か月齢の野生型マウスは、高齢対照群とされた。ｍＴＯＲ^(ECKO) ３Ａは、全造血細胞／大腿骨のプロットであり、３Ｂは、表現型ＬＴ－ＨＳＣ／１０⁶全骨髄のプロットであり、３Ｃは、末梢血からの系統＋細胞％のプロットであり、３Ｄは、ＣＦＵ／２５０００の全骨髄細胞のプロットであり、３Ｅは、偏光ＬＴ－ＨＳＣ％のプロットであり、３Ｆは、細胞極性を区別するためのαＴＵＢＵＬＩＮ染色の代表的な画像を示す。３Ｇは、細胞当たりのγＨ２ＡＸ病巣の数（ｘ軸）対スコア化細胞のパーセンテージ（ｙ軸）のプロットを示し、３Ｈは、γＨ２ＡＸ病巣の増加を示す代表的な画像を示し、および３Ｉは、転写プロファイルを示す。

【図3H】ｍＴＯＲのＥＣ特異的欠失（ｍＴＯＲ^(ECKO)）が高齢に関連するものを連想させるＨＳＣの変化を引き起こしたことを示す。ｍＴＯＲは、ｍＴＯＲ^fl/flマウスを成体ＥＣ特異的ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎプロモーター（ｍＴＯＲ^(ECKO)）によって駆動されるタモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配することにより、成体ＥＣから特異的に除去された。フローサイトメトリー分析は、若い（１２－１６週）ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスと若い（１２－１６週）対照マウスに対して実施されてＨＳＣとその子孫の調節に対するＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失の影響を決定し、２２～２４か月齢の野生型マウスは、高齢対照群とされた。ｍＴＯＲ^(ECKO) ３Ａは、全造血細胞／大腿骨のプロットであり、３Ｂは、表現型ＬＴ－ＨＳＣ／１０⁶全骨髄のプロットであり、３Ｃは、末梢血からの系統＋細胞％のプロットであり、３Ｄは、ＣＦＵ／２５０００の全骨髄細胞のプロットであり、３Ｅは、偏光ＬＴ－ＨＳＣ％のプロットであり、３Ｆは、細胞極性を区別するためのαＴＵＢＵＬＩＮ染色の代表的な画像を示す。３Ｇは、細胞当たりのγＨ２ＡＸ病巣の数（ｘ軸）対スコア化細胞のパーセンテージ（ｙ軸）のプロットを示し、３Ｈは、γＨ２ＡＸ病巣の増加を示す代表的な画像を示し、および３Ｉは、転写プロファイルを示す。

【図3I】ｍＴＯＲのＥＣ特異的欠失（ｍＴＯＲ^(ECKO)）が高齢に関連するものを連想させるＨＳＣの変化を引き起こしたことを示す。ｍＴＯＲは、ｍＴＯＲ^fl/flマウスを成体ＥＣ特異的ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎプロモーター（ｍＴＯＲ^(ECKO)）によって駆動されるタモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配することにより、成体ＥＣから特異的に除去された。フローサイトメトリー分析は、若い（１２－１６週）ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスと若い（１２－１６週）対照マウスに対して実施されてＨＳＣとその子孫の調節に対するＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失の影響を決定し、２２～２４か月齢の野生型マウスは、高齢対照群とされた。ｍＴＯＲ^(ECKO) ３Ａは、全造血細胞／大腿骨のプロットであり、３Ｂは、表現型ＬＴ－ＨＳＣ／１０⁶全骨髄のプロットであり、３Ｃは、末梢血からの系統＋細胞％のプロットであり、３Ｄは、ＣＦＵ／２５０００の全骨髄細胞のプロットであり、３Ｅは、偏光ＬＴ－ＨＳＣ％のプロットであり、３Ｆは、細胞極性を区別するためのαＴＵＢＵＬＩＮ染色の代表的な画像を示す。３Ｇは、細胞当たりのγＨ２ＡＸ病巣の数（ｘ軸）対スコア化細胞のパーセンテージ（ｙ軸）のプロットを示し、３Ｈは、γＨ２ＡＸ病巣の増加を示す代表的な画像を示し、および３Ｉは、転写プロファイルを示す。

【図4】ｍＴＯＲ^(ECKO)ＨＳＣが高齢ＨＳＣ遺伝子シグネチャーを発現することを示す。４Ａは、若いＨＳＣ転写データセットと高齢ＨＳＣ転写データセットとの間の顕著な変化を比較するベン図である。４Ｂは、共通の高齢ＨＳＣ遺伝子発現の変化を示す。リストされた遺伝子は、現在の研究と、ＨＳＣにおいて発現が確認された公開のデータセットとの間の発現の共有変化を示す（赤－高齢ＨＳＣで上方調節され、緑－高齢ＨＳＣで下方調節され）。太字の遺伝子は、すべてのデータセット間の一致した発現変化を含み、かつ高齢ＨＳＣ発現シグネチャーを表す。高齢化に伴う発現の顕著な上方調節を示す十（１０）個の遺伝子は、同定され、そのうちの９つがＲＴ－ｑＰＣＲ分析によって確認された。ｍＴＯＲ^(ECKO) ４Ｃは、ｍＴＯＲ^(ECKO)および高齢マウスにおけるマイクロアレイ同定の高齢ＨＳＣ遺伝子発現シグネチャーのＲＴ－ｑＰＣＲ確認を示す。ｍＴＯＲ^(ECKO)からのＨＳＣが高齢ＨＳＣ遺伝子発現シグネチャーを共有することに注意する。

【図5】若いｍＴＯＲ^(ECKO)マウス、若い対照マウスおよび老齢対照マウスからのＣＤ４５．２＋ＨＳＣを致死的に照射されたＣＤ４５．１マウスに競合的に移植した後、ｍＴＯＲ^(ECKO)ＨＳＣが高齢造血欠陥を示すことを示す。Ｘ軸は、移植後数週間を示す。５Ａは、全体的な生着ＣＤ４５．２（ｙ軸は、ＣＤ４５．２＋生着％を示す）を示し、５Ｂは、骨髄生着（ｙ軸は、ＣＤ４５．２＋ＧＲ１＋（ＣＤ１１Ｂ＋）生着％を示す）を示し、５Ｃは、Ｂ細胞生着（ｙ軸は、ＣＤ４５．２＋Ｂ２２０＋生着％を示す）を示し、５Ｄは、Ｔ細胞生着（ｙ軸は、ＣＤ４５．２＋ＣＤ３＋生着％を示す）を示す。

【図6A】若い、ｍＴＯＲ^(ECKO)、高齢マウスのＢＭＥＣに対するプロテオミクス分析を示す。６Ａは、若いマウスと比較する場合の、ｍＴＯＲ^(ECKO)および高齢マウスから単離されたＢＭＥＣにおける保存された遺伝子変化を示すヒートマップである。

【図6B】若い、ｍＴＯＲ^(ECKO)、高齢マウスのＢＭＥＣに対するプロテオミクス分析を示す。６Ｂは、トロンボスポンジンー１（ＴＳＰ１）が最も顕著に上方調節された遺伝子であり、かつ若い対照ＢＭＥＣと比較する場合、ｍＴＯＲ^(ECKO)および高齢ＢＭＥＣの両方において最大の倍数変化を有することを実証するボルケーノプロットを示す。

【図6C】若い、ｍＴＯＲ^(ECKO)、高齢マウスのＢＭＥＣに対するプロテオミクス分析を示す。６Ｃは、ＴＳＰ１による血管新生の阻害が上方調節の生物学的プロセスのトップであることを実証する高齢およびｍＴＯＲ^(ECKO)ＢＭＥＣのインジェニュイティー経路分析を示す。

【図6D】若い、ｍＴＯＲ^(ECKO)、高齢マウスのＢＭＥＣに対するプロテオミクス分析を示す。６Ｄは、若い＝Ｙ、高齢＝Ｏ、ｍＴＯＲ^(ECKO)＝ＭのＢＭＥＣにおける相対的なＴＳＰ１遺伝子発現を示す。

【図6E】若い、ｍＴＯＲ^(ECKO)、高齢マウスのＢＭＥＣに対するプロテオミクス分析を示す。６Ｅは、若い＝Ｙ、高齢＝Ｏ、ｍＴＯＲ^(ECKO)＝ＭのＢＭＥＣにおけるＴＳＰ１タンパク質レベルを示す。

【図7】若いマウスにおけるＴＳＰ１の阻害がＨＳＣの数量および機能を増加させることを示す。７Ａは、対照、ＴＳＰ１－／－マウスおよびＴＳＰ－１に対する中和抗体（Ａ４．１）の注入を受けた対照マウスにおける表現型ＬＴ－ＨＳＣの定常状態分析を示す。７Ｂは、前述のコホートから単離されたＷＢＭを使用する前駆細胞コロニー形成アッセイの結果を示す。７Ｃは、前述のコホートからの競合的移植アッセイにおいて１００個のＬＴ－ＨＳＣが注入された場合の結果を示す。ＴＳＰ１－／－マウスまたは、ＴＳＰ－１阻害剤で処理されたマウスは、ＨＳＣ機能の増加をもたらしたことに注意する。

【図8】高齢ＴＳＰ１－／－マウスがＨＳＣ機能を保持することを示す。８Ａは、マウスを１２ヶ月高齢化させた実験プロトコルの概略図を示す。合計３つのコホートで決定された表現型ＬＴ－ＨＳＣの定常状態分析をさらに示す。８Ｂは、前述のコホートから単離されたＷＢＭを使用する前駆細胞コロニー形成アッセイの結果を示す。８Ｃは、１００個のＬＴ－ＨＳＣが前述のコホートからの競合的移植アッセイに注入された場合の結果を示す。高齢ＴＳＰ１－／－マウスからのＨＳＣが若い対照から単離されたＨＳＣに似ていることに注意する。

【図9】高齢ＴＳＰ１－／－マウスがＨＳＣ機能を保持することを示す。９Ａは、ＨＳＣ移植およびＲＮＡ配列決定に使用する３つのコホート（若い対照、高齢対照および高齢ＴＳＰ１マウス）を示す。９Ｂは、正規化されたｍＲＮＡ発現（ｙ軸）対ＨＳＣ高齢化に関連する遺伝子（ｘ軸）のバーグラフである。ＨＳＣは、９Ａに示される３つのコホートから単離され、かつＲＮＡ配列決定に使用された。ＨＳＣ高齢化に関連する遺伝子は、ＴＳＰ１－／－マウスの高齢化ＨＳＣで減少した。９Ｃは、９Ａの３つのコホート（ｘ軸）におけるＣＤ４５．２生着％（ｙ軸）のバーグラフである。９Ｄは、３つのコホートにおける、系統＋細胞（ＣＤ４５．２）％（ｙ軸）対骨髄性末梢血細胞型（ＣＤ１１ｂ＋／ＧＲ１＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）およびＴ細胞（ＣＤ３＋）集団（ｘ軸）のバーグラフである。１００個のＬＴ－ＨＳＣは、３つのコホートからの競合的移植アッセイに注入された。高齢ＴＳＰ１－／－マウスからのＨＳＣが強化の長期にわたる多系統生着で若い対照から単離されたＨＳＣに似ていることに注意する。

【図10】ＴＳＰ１が若いＨＳＣの増殖に直接影響を与えることを示す。１０Ａは、外因性ＴＳＰ１がＨＳＣの増殖および機能に影響を与えることができるかどうかを試験するための体外増殖プロトコルを示す概略図である。１０Ｂは、ｒＴＳＰ１（５００ｎｇ／ｍｌ）、αＴＳＰ１中和抗体クローン１［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３９８］、αＴＳＰ１中和抗体クローン２［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３８５；Ｍｓ ＩｇＧ１ｋ ＩｇＧ対照［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３８５］、αＴＳＰ中和抗体クローン３ ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３７７、およびＭｓ ＩｇＭ ＣＯＮＴＲＯＬ（ｘ軸）［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１４－４７５２－８２］で（左から右へ）処理された細胞のＣＤ４５．２移植％（ｙ軸）のバーグラフである。１１日間の増殖に続いて、ＨＳＣを競合的に移植し、移植後２４ヶ月で生着を評価した。発明者らは、外因性ＴＳＰ１がＨＳＣの生着に深刻な悪影響を与えること、およびＴＳＰ１に対する中和抗体（クローン＃３）が外因性ＴＳＰの欠陥を無効にし、かつ増殖のＨＳＣの機能的出力を高めることができることを発見した。１０Ｃは、骨髄系（ＣＤ１１ｂ／ＧＲ１＋）、リンパ系［Ｂ２２０、Ｂ細胞；ＣＤ３ Ｔ細胞］の移植後２４週間の系統分布を示す系統＋細胞％（ＣＤ４５．２、ｙ軸）のバーグラフをである。

【図11】ＴＳＰ１が若いＨＳＣの増殖に直接影響を与えることを示す。体外増殖の若いＨＳＣは、ＰＶＡプロトコルにおいて対照およびＴＳＰ１グローバルノックアウト（ＫＯ）マウスから単離され、かつＨＳＣは、競合的に移植された。１１Ａ（ＣＤ４５．２生着％（ｙ軸）対対照、ＴＳＰ１－／－、αＴＳＰ１抗体処理［［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３７７］（ｘ軸））のバーグラフ）に示すように、長期間の多系統生着は、ＴＳＰ１中和抗体で処理したＨＳＣがＴＳＰ１ノックアウトＨＳＣと同様に生着したことを示し、両方の条件は、対照ＨＳＣよりも優れる。１１日間の増殖に続いて、ＨＳＣを競合的に移植し、かつ移植後２４ヶ月で生着を評価した。１１Ｂは、若い（対照、αＴＳＰ１処理）および高齢（対照、αＴＳＰ１処理）ＨＳＣ（ｘ軸）におけるＣＤ４５．２生着％（ｙ軸）のバーグラフである。発明者らは、外因性ＴＳＰ１がＨＳＣの生着に深刻な悪影響を与えること、およびＴＳＰに対する中和抗体（クローン＃３）が外因性ＴＳＰの欠陥を無効にするだけでなく、増殖のＨＳＣの機能的出力を高めることができることを発見した。１１Ｃは、系統組成（ＣＤ４５．２＋％、ｙ軸）対移植後２４週間の骨髄系（ＣＤ１１Ｂ＋ＧＲ１＋）、リンパ系（Ｂ細胞、Ｂ２２０＋、Ｔ細胞、ＣＤ３＋）、若い（対照、αＴＳＰ１処理）および高齢（対照、α－ＴＳＰ１処理）（ｘ軸）ＨＳＣのバーグラフである。

【図12A】ＴＳＰ１の阻害が健康的な高齢化を促進することを示す。１２Ａは、若い対照および高齢対照と並んで高齢ＴＳＰ１マウスの代表的な画像を示す。高齢対照の毛髪が喪失および白髪化する一方、高齢ＴＳＰ１マウスが若い対照と同様であることを注意する。

【図12B】ＴＳＰ１の阻害が健康的な高齢化を促進することを示す。１２Ｂは、体重（ｇ）（ｙ軸）対若い対照、高齢対照および高齢ＴＳＰ１ ＫＯマウス（ｘ軸）を示すバーグラフである。

【図12C】ＴＳＰ１の阻害が健康的な高齢化を促進することを示す。１２Ｃは、若い対照、老齢対照および高齢ＴＳＰ１ ＫＯマウス（ｘ軸）の骨髄微小環境におけるＶＥカドヘリン（赤）／ペリリピン（緑）／ＤＡＰＩ（青）染色を示す。

【図12D】ＴＳＰ１の阻害が健康的な高齢化を促進することを示す。１２Ｄは、脂肪／体重比対対照およびＴＳＰ１ ＫＯマウス（ＤＥＸＡＳｃａｎ、ｙ軸）を示す。

【図12E】ＴＳＰ１の阻害が健康的な高齢化を促進することを示す。１２Ｅ、１２Ｆおよび１２Ｇは、対照およびＴＳＰ１ ＫＯマウスの、コレステロール（１２Ｅ）、インスリン（１２Ｆ）および空腹時グルコースレベル（１２Ｇ）の血液化学を示す。

【図12F】ＴＳＰ１の阻害が健康的な高齢化を促進することを示す。１２Ｅ、１２Ｆおよび１２Ｇは、対照およびＴＳＰ１ ＫＯマウスの、コレステロール（１２Ｅ）、インスリン（１２Ｆ）および空腹時グルコースレベル（１２Ｇ）の血液化学を示す。

【図12G】ＴＳＰ１の阻害が健康的な高齢化を促進することを示す。１２Ｅ、１２Ｆおよび１２Ｇは、対照およびＴＳＰ１ ＫＯマウスの、コレステロール（１２Ｅ）、インスリン（１２Ｆ）および空腹時グルコースレベル（１２Ｇ）の血液化学を示す。

【図12H】ＴＳＰ１の阻害が健康的な高齢化を促進することを示す。１２Ｈは、対照およびＴＳＰ１ ＫＯマウスにおける重量比に対する骨石灰化を決定するために使用されたＤＥＸＡＳｃａｎを示す。

【図12I】ＴＳＰ１の阻害が健康的な高齢化を促進することを示す。１２Ｉは、対照およびＴＳＰ１ ＫＯマウスの前肢／後肢の握力を示す。

【図13】内皮細胞におけるｓｉＲＮＡ送達を介するＴＳＰ１遺伝子発現のダウンレギュレーションを示す。

【発明を実施するための形態】

【0183】

定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈に別途明示のない限り、複数形の指示対象を含む。従って、例えば、「ペプチド」への言及は、当業者に既知の１つ以上のペプチド及びその等価物への言及である。

【0184】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、使用されている数の数値の±２０％を意味する。従って、約５０％は、４０％～６０％の範囲（両端を含む）を意味する。

【0185】

本明細書で使用される「適応免疫」という用語は、Ｂ細胞及びＴ細胞により媒介され、免疫記憶により特徴付けられる病原体または毒素からの宿主生物の保護を指す。適応免疫は、所与の抗原に非常に特異的であり、非常に適応性がある。

【0186】

治療手段と組み合わせて使用される場合の「投与すること」は、直接的に標的臓器、組織、もしくは細胞の中または上に、治療薬を与えるか、もしくは適用し、または対象に治療薬を投与し、それにより、治療薬が、標的とされる臓器、組織、細胞、または対象に正の影響を与えることを意味する。従って、本明細書で使用される場合、「投与すること」という用語は、アンジオクライン因子を含む組成物と組み合わせて使用される場合、標的臓器、組織、もしくは細胞内もしくは上に組成物を提供すること、または、治療薬が標的臓器、組織、もしくは細胞に到達するように、例えば、静脈内注射により患者に全身的に組成物を提供することを含み得るが、これらに限定されない。「投与すること」は、非経口、経口、または局所投与により、吸入により、または他の既知の手法と組み合わせたそのような方法により達成されてもよい。

【0187】

本明細書で使用される「老化」という用語は、成長すること、または老けて見えるとうになる過程を指す。本明細書で使用される「生理的老化」という用語及びその様々な文法形式は、生物学的機能及び代謝ストレスへの適応能力に影響を与える変化に関連する生物学的年齢の程度のことである。生理的老化を決定付ける要因には、暦年齢、遺伝、生活習慣、栄養、疾患、及びその他の状態が含まれるが、これらに限定されない。

【0188】

本明細書で使用される「血管新生」という用語は、新しい血管が、内皮細胞の「発芽」により既存の血管から形成され、それにより、血管樹が増殖するプロセスを指す。

【0189】

「アミノ酸」という用語は、アミノ基及びカルボキシル基の両方を含有する有機分子を指すために使用される。天然に存在するタンパク質の構成単位として機能するものは、アルファアミノ酸であり、アミノ基及びカルボキシル基の両方が同じ炭素原子に結合している。「アミノ酸残基」または「残基」という用語は、限定されないが、天然に存在するアミノ酸及び天然に存在するアミノ酸と同じように機能し得る天然アミノ酸の既知のアナログを含む、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドに組み込まれるアミノ酸を指すために互換的に使用される。

【0190】

本明細書で、アミノ酸に使用される略語は、従来使用される以下の略語である：Ａ＝Ａｌａ＝アラニン；Ｒ＝Ａｒｇ＝アルギニン；Ｎ＝Ａｓｎ＝アスパラギン；Ｄ＝Ａｓｐ＝アスパラギン酸；Ｃ＝Ｃｙｓ＝システイン；Ｑ＝Ｇ１ｎ＝グルタミン；Ｅ＝Ｇｌｕ＝グルタミン酸；Ｇ＝Ｇｌｙ＝グリシン；Ｈ＝Ｈｉｓ＝ヒスチジン；Ｉ＝Ｉｌｅ＝イソロイシン；Ｌ＝Ｌｅｕ＝ロイシン；Ｋ＝Ｌｙｓ＝リジン；Ｍ＝Ｍｅｔ＝メチオニン；Ｆ＝Ｐｈｅ＝フェニルアラニン；Ｐ＝Ｐｒｏ＝プロリン；Ｓ＝Ｓｅｒ＝セリン；Ｔ＝Ｔｈｒ＝スレオニン；Ｗ＝Ｔｒｐ＝トリプトファン；Ｙ＝Ｔｙｒ＝チロシン；Ｖ＝Ｖａｌ＝バリン。アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸またはＤ－アミノ酸であってよい。アミノ酸は、ペプチドの半減期を増加させるために、またはペプチドの効力を増加させるために、またはペプチドの生物学的利用能を増加させるために、変更される合成アミノ酸により置き換えられてもよい。

【0191】

以下は、互いに保存的に置換されているアミノ酸のグループを表す：

【0192】

アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、

【0193】

アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、

【0194】

アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、

【0195】

アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、

【0196】

イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、及び

【0197】

フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。

【0198】

本明細書で使用される「アゴニスト」という用語は、受容体を活性化して完全または部分的な薬理学的応答を誘導することが可能な化学物質を指す。受容体は、内因性または外因性のアゴニスト及びアンタゴニストのいずれかにより活性化または不活性化することができ、これにより、生物学的応答の刺激または阻害がもたらされる。生理学的アゴニストは、同じ身体的応答を生じる物質であるが、同じ受容体には結合しない。特定の受容体の内因性アゴニストは、その受容体に結合して活性化する、身体により自然に生成される化合物である。スーパーアゴニストは、標的受容体の内因性アゴニストよりも大きな最大応答を生じさせることが可能な化合物であり、従って、効率は１００％を超える。これは必ずしも内因性アゴニストよりも強力であることを意味するのではなく、むしろ、受容体結合後に細胞内で生成することができる最大の可能な応答の比較である。完全アゴニストは、受容体に結合して活性化し、これにより、その受容体で完全な有効性が示される。部分アゴニストもまた、所与の受容体に結合して活性化するが、完全アゴニストと比較して、受容体において部分的な有効性しか有さない。インバースアゴニストは、その受容体のアゴニストと同じ受容体結合部位に結合し、受容体の構成的活性を逆転させる薬剤である。インバースアゴニストは、受容体アゴニストとは逆の薬理効果を発揮する。不可逆的アゴニストは、受容体が恒久的に活性化されるような方法で、受容体に恒久的に結合するアゴニストの一種である。アゴニストの受容体への会合が可逆的であるが、不可逆的アゴニストの受容体への会合が不可逆的であると考えられるという点で、それは、単なるアゴニストとは異なる。これにより、化合物がアゴニスト活性の短いバーストを生じ、続いて、脱感作及び受容体の内在化が引き起こされ、これは、長期処置と共に、よりアンタゴニストのような効果を生じる。選択的アゴニストは、ある特定タイプの受容体に特異的である。

【0199】

本明細書で使用される「血管新生」という用語は、新しい血管が、内皮細胞の「発芽」により既存の血管から形成され、それにより、血管樹が増殖するプロセスを指す。

【0200】

本明細書で使用される「アンジオクライン因子」という用語は、臓器の恒常性を維持し、幹細胞の自己複製及び分化のバランスをとり、臓器の再生及び腫瘍成長を調整する内皮細胞により産生された血管ニッチ由来のパラクリン因子を指す。アンジオクライン因子は、分泌型及び膜結合型の抑制性及び刺激性成長因子、トロフォゲン、ケモカイン、サイトカイン、細胞外マトリックス構成要素、エクソソーム、及びパラクリンまたはジャクスタクリン様式で恒常性及び再生プロセスの調節を助ける組織特異的ＥＣにより供給される他の細胞産物を含む。これらの因子は、適応治癒及び線維性リモデリングにも関与する。アンジオクライン因子のサブセットは、再生臓器の形状、構造、サイズ、及びパターンを決定するために、モルフォゲンとして機能し得る。ＥＣの各組織特異的ベッドのアンジオクラインプロファイルは異なり、臓器のＥＣに隣接して見られる細胞型の多様性を反映する。アンジオクライン因子のサブセットが、構成的に産生されるが、いくつかの血管新生因子は、他の組織特異的アンジオクライン因子の産生を調節し得る。例えば、ＶＥＧＦ－Ａは、ＶＥＧＦＲ－１及びＶＥＧＦＲ－２との相互作用を通じて、定義されたアンジオクライン因子の発現を誘導する。同様に、（ＦＧＦＲ－１の活性化を介する）ＦＧＦ－２及び（受容体Ｔｉｅ２との相互作用を介する）アンジオポエチンは、アンジオクライン因子の固有のクラスターの発現を引き起こす。ＴＳＰ－１は、複雑な方法で機能し、幹細胞及び前駆細胞の分化に直接影響を与えるだけでなく、抑制性血管新生因子として機能し得る。臓器特異的ＥＣからの文脈依存性アンジオクライン因子の産生を支配する分子プログラムは、未定義のままである。Ｒａｆｉｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ，“Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ，”Ｎａｔｕｒｅ（２０１６）５２９（７５８６）：３１６－３２５）。

【0201】

表５は、例示的なアンジオクライン因子の用語集を、報告されている細胞源、細胞標的及び機能と共に提供する。

【0202】

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【0203】

本明細書で使用される「動物」、「患者」、及び「対象」という用語は、ヒトならびに野生動物、飼育動物、及び家畜などの非ヒト脊椎動物を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、「動物」、「患者」、及び「対象」という用語は、ヒトを含む哺乳類を指すことがある。

【0204】

本明細書で使用される「アンタゴニスト」という用語は、別の物質の効果の影響を弱める物質を指す。

【0205】

本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原の抗原決定基の特徴と相補的である内部表面形状及び電荷分布を有する３次元結合空間を有するポリペプチド鎖のフォールディングから形成される少なくとも１つの結合ドメインから構成されるポリペプチドまたはポリペプチドの群を指す。

【0206】

抗体分子全体の基本的な構造単位は、４つのポリペプチド鎖、２つの同一の軽（Ｌ）鎖（それぞれ、約２２０アミノ酸を含有）及び２つの同一の重（Ｈ）鎖（それぞれ、通常、約４４０アミノ酸を含有）から構成される。２本の重鎖及び２本の軽鎖は、非共有結合及び共有（ジスルフィド）結合の組み合わせにより結合している。分子は、２つの同一の半分で構成され、それぞれが、軽鎖のＮ末端領域及び重鎖のＮ末端領域で構成される同一の抗原結合部位を有する。通常、軽鎖及び重鎖の両方が協働して、抗原結合表面を形成する。ヒト抗体は、κ及びλの２種類の軽鎖を示し、免疫グロブリンの個々の分子は、一般に、一方または他方のみである。

【0207】

抗体は、単独で、または既知の手法により提供される他のアミノ酸配列と組み合わせたオリゴクローナル抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、触媒抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、抗イディオタイプ抗体、及び可溶性または結合形態で標識することができる抗体、ならびにそれらのフラグメント、バリアントまたは誘導体であってよい。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、免疫されたドナー由来のマウス脾臓細胞をマウス骨髄腫細胞株と融合させて、選択培地で成長する確立されたマウスハイブリドーマクローンを得ることにより生成することができる。ハイブリドーマ細胞は、抗体分泌Ｂ細胞と骨髄腫細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ融合から生じる不死化ハイブリッド細胞である。培養中の抗原特異的Ｂ細胞の一次活性化を指すｉｎ ｖｉｔｒｏ免疫化は、マウスモノクローナル抗体を産生するもう１つの確立された手段である。末梢血リンパ球由来の免疫グロブリン重（ＶＨ）鎖及び軽（Ｖκ及びＶλ）鎖可変遺伝子の多様なライブラリーも、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅により増幅することができる。重鎖及び軽鎖の可変ドメインがポリペプチドスペーサー（単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ）で連結されている単一ポリペプチド鎖をコードする遺伝子は、ＰＣＲを使用して重鎖及び軽鎖のＶ遺伝子をランダムに組み合わせることにより作成することができる。次に、コンビナトリアルライブラリーを、ファージの先端にあるマイナーコートタンパク質に融合させることにより、糸状バクテリオファージの表面にディスプレイするためにクローニングすることができる。ガイド選択の手法は、齧歯類の免疫グロブリンＶ遺伝子とのヒト免疫グロブリンＶ遺伝子のシャッフリングに基づく。方法は、（ｉ）目的の抗原と反応するマウスモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインでヒトλ軽鎖のレパートリーをシャッフルすること；（ｉｉ）その抗原上の半ヒトＦａｂを選択すること；（ｉｉｉ）選択されたλ軽鎖遺伝子を２回目のシャッフリングでヒト重鎖のライブラリーの「ドッキングドメイン」として使用して、ヒト軽鎖遺伝子を有するクローンＦａｂフラグメントを単離すること；（ｖ）遺伝子を含有する哺乳類細胞発現ベクターを用いたエレクトロポレーションによるマウス骨髄腫細胞をトランスフェクトすること；及び（ｖｉ）マウス骨髄腫において完全なＩｇＧ１、λ抗体分子として抗原と反応するＦａｂのＶ遺伝子を発現させること、を必要とする。抗体は、いかなる種のものであってよい。抗体という用語はまた、本発明の抗体の結合フラグメントを含み；例示的なフラグメントには、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、一本鎖抗体（ｓｖＦＣ）、二量体可変領域（ダイアボディ）、及びジスルフィド安定化可変領域（ｄｓＦｖ）が挙げられる。構造的及び機能的ドメインは、ヌクレオチド及び／またはアミノ酸配列データを、公的または独自の配列データベースと比較することにより同定することができる。例えば、コンピューター化された比較方法は、既知の構造及び／または機能の他のタンパク質で発生する配列モチーフまたは予測されるタンパク質コンフォメーションドメインを同定するために使用することができる。既知の３次元構造にフォールディングされるタンパク質配列を同定する方法が、既知である。例えば、Ｂｏｗｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：１６４（１９９１）（全体が参照により組み込まれる）を参照のこと。

【0208】

本明細書で使用される「抗体構築物」という用語は、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインに連結された本発明の１つ以上の抗原結合部分を含むポリペプチドを指す。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合によって連結された２つ以上のアミノ酸残基を含み、１つ以上の抗原結合部分を連結するために使用される。このようなリンカーポリペプチドは、当該技術分野で既知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２：１１２１－１１２３を参照のこと）。免疫グロブリン定常ドメインとは、重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖及び軽鎖定常ドメインアミノ酸配列が、当該技術分野で既知である。抗体全体のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）₂フラグメントなどの抗体部分は、それぞれ、抗体全体のパパインまたはペプシン消化などの従来技術を使用して抗体全体から作製可能である。さらに、抗体、抗体部分及び免疫付着分子は、標準的な組み換えＤＮＡ手法を使用して得ることができる。

【0209】

本明細書で使用される場合、「抗原」または「免疫原」という用語は、免疫応答を誘発する物質を指すために互換的に使用される。「抗原決定基」または「エピトープ」は、分子上の抗原部位である。連続的な抗原決定基／エピトープは、本質的に線状鎖である。らせん状のポリマーまたはタンパク質などの整然とした構造では、抗原決定基／エピトープは、本質的に、互いに接近し得る分子の異なる部分のアミノ酸側鎖を含む構造内または構造の表面上の限定された領域またはパッチであるであろう。これらは、立体配座決定因子である。

【0210】

アポトーシス経路。アポトーシス細胞死は、多くの異なる要因により誘導され、多くのシグナル伝達経路を含み、カスパーゼプロテアーゼ（システインプロテアーゼのクラス）に依存するものもあれば、カスパーゼ非依存性のものもある。それは、細胞表面受容体、ストレスに対するミトコンドリア応答、及び細胞傷害性Ｔ細胞を含む、多くの様々な細胞刺激によって引き起こすことができ、これにより、アポトーシスシグナル伝達経路の活性化がもたらされる。

【0211】

アポトーシスに関与するカスパーゼは、タンパク質分解カスケードでアポトーシスシグナルを伝達し、カスパーゼが、他のカスパーゼを切断して活性化し、次に、細胞死を引き起こす他の細胞標的を分解する。カスケードの上端にあるカスパーゼは、カスパーゼ８及びカスパーゼ９を含む。カスパーゼ８は、Ｆａｓのようなデスドメイン（ＤＤ）を有する受容体に応答して関与する最初のカスパーゼである。

【0212】

ＴＮＦ受容体ファミリーの受容体は、アポトーシスの誘導及び炎症性シグナル伝達に関連する。Ｆａｓ受容体（ＣＤ９５）は、他の細胞の表面に発現されるＦａｓリガンドによるアポトーシスシグナル伝達を媒介する。Ｆａｓ－ＦａｓＬ相互作用は、免疫系で重要な役割を果たし、このシステムの欠如は、自己免疫につながり、これにより、Ｆａｓ媒介性アポトーシスが自己反応性リンパ球を除去することが示される。Ｆａｓシグナル伝達は、形質転換細胞及びウイルス感染細胞を除去するための免疫監視にも関与する。別の細胞上のオリゴマー化ＦａｓＬへのＦａｓの結合は、ＦＡＦ、ＦＡＤＤ、及びＤＡＸを含むシグナル伝達アダプターと相互作用して、カスパーゼタンパク質分解カスケードを活性化するデスドメイン（ＤＤ）と呼ばれる細胞質ドメインを介してアポトーシスシグナル伝達を活性化する。カスパーゼ８及びカスパーゼ１０は、最初に活性化され、次に、下流のカスパーゼ及び細胞死につながる様々な細胞基質を切断して活性化する。

【0213】

ミトコンドリアは、ミトコンドリアタンパク質の細胞質への放出を介してアポトーシスシグナル伝達経路に関与する。電子輸送の重要なタンパク質であるシトクロムｃは、アポトーシスシグナルに応答してミトコンドリアから放出され、ミトコンドリアから放出されるプロテアーゼであるＡｐａｆ－１を活性化する。活性化されたＡｐａｆ－１は、カスパーゼ９及び残りのカスパーゼ経路を活性化する。Ｓｍａｃ／ＤＩＡＢＬＯは、ミトコンドリアから放出され、通常は、カスパーゼ９と相互作用してアポトーシスを阻害するＩＡＰタンパク質を阻害する。Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質によるアポトーシス調節は、ファミリーメンバーがミトコンドリア膜に入る複合体を形成する時に行われ、これにより、シトクロムｃ及び他のタンパク質の放出が調節される。アポトーシスを引き起こすＴＮＦファミリー受容体は、カスパーゼカスケードを直接活性化するが、ミトコンドリア媒介性アポトーシスを活性化するＢｃｌ－２ファミリーメンバーであるＢｉｄも活性化し得る。別のＢｃｌ－２ファミリーメンバーであるＢａｘは、この経路により活性化されて、ミトコンドリア膜に局在し、透過性を高め、これにより、シトクロムｃ及び他のミトコンドリアタンパク質が放出される。Ｂｃｌ－２及びＢｃｌ－ｘＬは、細孔形成を防ぎ、アポトーシスをブロックする。シトクロムｃと同様に、ＡＩＦ（アポトーシス誘導因子）は、ミトコンドリアに見られるタンパク質であり、これは、アポトーシス刺激によりミトコンドリアから放出される。シトクロムＣは、カスパーゼ依存性アポトーシスシグナル伝達に関連するが、ＡＩＦ放出は、カスパーゼ非依存性アポトーシスを刺激し、核に移動して、ＤＮＡに結合する。ＡＩＦによるＤＮＡ結合は、おそらく、ヌクレアーゼの動員を通じて、クロマチン凝縮及びＤＮＡ断片化を刺激する。

【0214】

ミトコンドリアストレス経路は、ミトコンドリアからのシトクロムｃの放出から始まり、次に、シトクロムｃが、Ａｐａｆ－１と相互作用して、これにより、カスパーゼ９の自己切断及び活性化が引き起こされる。カスパーゼ３、６、及び７は、上流のプロテアーゼにより活性化され、細胞標的を切断するように作用する下流のカスパーゼである。

【0215】

細胞傷害性Ｔ細胞により放出されるグランザイムＢ及びパーフォリンタンパク質は、標的細胞をアポトーシスに導き、これにより、膜貫通孔が形成され、おそらくカスパーゼの切断を介してアポトーシスが誘導されるが、グランザイムＢ媒介性アポトーシスのカスパーゼ非依存性機序が示唆されている。

【0216】

アポトーシスシグナル伝達経路により活性化されて、ヌクレオソームラダーを作成する複数のヌクレアーゼによる核ゲノムの断片化は、アポトーシスに特徴的な細胞応答である。アポトーシスに関与する１つのヌクレアーゼは、カスパーゼ活性化ＤＮＡｓｅ（ＣＡＤ）であるＤＮＡフラグメント化因子（ＤＦＦ）である。ＤＦＦ／ＣＡＤは、アポトーシス中にカスパーゼプロテアーゼによる関連阻害剤ＩＣＡＤの切断により活性化される。ＤＦＦ／ＣＡＤは、トポイソメラーゼＩＩ及びヒストンＨ１などのクロマチン構成要素と相互作用して、クロマチン構造を凝縮し、おそらくＣＡＤをクロマチンに動員する。別のアポトーシス活性化プロテアーゼは、エンドヌクレアーゼＧ（ＥｎｄｏＧ）である。ＥｎｄｏＧは、核ゲノムにコードされるが、正常細胞のミトコンドリアに局在する。ＥｎｄｏＧは、ミトコンドリアゲノムの複製及びアポトーシスにおいて役割を果たすことがある。アポトーシスシグナル伝達は、ミトコンドリアからのＥｎｄｏＧの放出を引き起こす。ＥｎｄｏＧ経路が、依然として、ＤＦＦを欠く細胞で生じるので、ＥｎｄｏＧ及びＤＦＦ／ＣＡＤ経路は独立している。

【0217】

低酸素症、及び低酸素症とそれに続く再酸素化は、シトクロムｃの放出及びアポトーシスを引き起こし得る。ほとんどの細胞型で遍在的に発現されるセリン－スレオニンキナーゼであるグリコーゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ－３）は、ミトコンドリアの細胞死経路を活性化する多くの刺激により、アポトーシスを媒介または増強するように見える。Ｌｏｂｅｒｇ，ＲＤ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（４４）：４１６６７－６７３（２００２）。カスパーゼ３の活性化を誘導し、アポトーシス促進性腫瘍抑制遺伝子ｐ５３を活性化することが実証されている。また、ＧＳＫ－３は、アポトーシス促進性のＢｃｌ－２ファミリーメンバーであるＢａｘの活性化及び転座を促進し、凝集及びミトコンドリアの局在化時に、シトクロムｃの放出を誘導することも示唆されている。Ａｋｔは、ＧＳＫ－３の重要な調節因子であり、ＧＳＫ－３のリン酸化及び不活性化は、Ａｋｔの抗アポトーシス効果の一部を媒介することがある。

【0218】

本明細書で使用される「オートクリンシグナル伝達」という用語は、細胞が、それ自体または同じタイプの他の隣接する細胞に作用するシグナル分子を分泌する、細胞シグナル伝達のタイプを指す。

【0219】

本明細書で互換的に使用される「自家」または「自己」という用語は、同じ生物に由来することを意味する。

【0220】

本明細書で使用される「オートファジー」という用語は、発達の重要な時期にエネルギー源のバランスをとり、栄養ストレスに対応するために重要であり、かつミスフォールドタンパク質または凝集タンパク質の除去、ミトコンドリア、小胞体、及びペルオキシソームなどの損傷を受けた細胞小器官の除去、ならびに細胞内病原体の除去の際にハウスキーピングの役割を果たす、自己分解的プロセスを指す。Ｇｌｉｃｋ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｔｈｏｌ（２０１０）２２１（１）：３－１２）。オートファジーには３つの既定の種類、すなわち、マクロオートファジー、マイクロオートファジー、及びシャペロン介在性オートファジーがあり、その全ては、リソソームでの細胞質ゾル成分のタンパク質分解を促進する。マクロオートファジーは、オートファゴソームと呼ばれる二重膜結合小胞の媒介を介して細胞質カーゴをリソソームに送り、これにより、細胞質カーゴがリソソームと融合し、オートリソソームが形成される。対照的に、マイクロオートファジーでは、細胞質ゾル成分は、リソソーム膜の陥入を介してリソソーム自体によって直接取り込まれる。マクロオートファジー及びマイクロオートファジーの両方は、選択的機序及び非選択的機序の両方を介して大きな構造体を包み込むことができる。シャペロン介在性オートファジー（ＣＭＡ）では、標的のタンパク質は、シャペロンタンパク質（Ｈｓｃ－７０など）との複合体で、リソソーム膜受容体のリソソーム関連膜タンパク質２Ａ（ＬＡＭＰ－２Ａ）によって認識され、リソソーム膜を通して移動され、それにより、アンフォールディングされ、分解される。

【0221】

本明細書で使用される「結合」という用語及び他の文法形式は、化学物質間の永続的な引力を意味する。

【0222】

抗体の「結合フラグメント」は、組み換えＤＮＡ手法により、またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断により生成することができる。結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及び一本鎖抗体を含む。

【0223】

「二重特異性」または「二官能性抗体」は、結合部位のそれぞれが同一ではない抗体である。ゆえに、「二重特異性」抗体構築物または免疫グロブリンは、異なる特異性を伴う少なくとも２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体または免疫グロブリンである。二重特異性抗体構築物は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を含む様々な方法によって作製することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１（１９９０）を参照のこと。

【0224】

「二重特異性」または「二官能性」抗体以外の抗体は、その結合部位のそれぞれが同一であると理解される。

【0225】

本明細書で使用される「結合特異性」という用語は、特定のパートナーに結合すること、及び他の分子に結合しないことの両方を含む。機能的に重要な結合は、低～高の親和性の範囲で生じ得、設計要素は、望ましくない相互作用を抑制し得る。翻訳後修飾も、相互作用の化学的性質及び構造も変更し得る。「無差別結合」は、ある程度の構造的可塑性を伴ってもよく、これにより、異なるパートナーへの結合に重要な残基の異なるサブセットが生じ得る。「相対的結合特異性」は、生化学的システムにおいて、分子がその標的またはパートナーと差次的に相互作用し、それにより、個々の標的またはパートナーの同定に応じて、それらに明確に影響を与えるという特徴である。

【0226】

本明細書で使用される「バイオマーカー」（または「バイオシグネチャー」）という用語は、ペプチド、タンパク質、核酸、抗体、遺伝子、代謝産物、または生物学的状態の指標として使用される他の任意の物質を指す。これは、客観的に測定され、正常な生物学的プロセス、病原性プロセス、または治療的介入に対する薬理学的応答の細胞または分子の指標として評価される特性である。本明細書で使用される「指標」という用語は、時間の関数としての相対的変化；または、その実在もしくは存在が目に見えるか、もしくは証拠となるシグナル、サイン、マーク、ノート、もしくは徴候を明らかにし得る一連の観察された事実から導き出された任意の物質、数、または比率を指す。提案されたバイオマーカーが検証されていると、それは、個体における疾患リスク、疾患の存在を診断するために、または、個体の疾患の処置を調整（薬物処置または投与レジームの選択）するために、使用されてもよい。潜在的な薬物療法を評価する際に、バイオマーカーは、生存または不可逆的な罹患率などの自然な評価項目の代用物として使用されてもよい。処置によりバイオマーカーが変更され、その変更が健康の改善に直接関係する場合、バイオマーカーは、臨床的利益を評価するための代用評価項目として機能し得る。臨床評価項目は、患者がどのように感じるか、機能するか、または生存するかを測定するために使用することができる変数である。代用評価項目は、臨床評価項目の代わりとなることが意図されるバイオマーカーであり、これらのバイオマーカーは、規制当局及び臨床コミュニティに受け入れられる信頼水準で臨床評価項目を予測することが実証される。

【0227】

本明細書で使用される「骨髄由来内皮細胞」または「ＢＭＥＣ」という用語は、骨髄間質の機能的構成成分を指し、これは、造血制御因子を放出するだけではなく、ＣＤ３４＋造血前駆細胞に選択的に接着して、その増殖及び分化を助力することが明らかとなっている。

【0228】

骨細胞。骨の４つの細胞型が、その形成及び維持に関与する。これらは、１）骨前駆細胞、２）骨芽細胞、３）骨細胞、及び、４）破骨細胞である。

【0229】

骨前駆細胞。骨前駆細胞は、間葉系細胞から生じ、骨膜の内部及び成熟した骨の骨内膜に生じる。それらは、骨形成が始まっている胚性間葉区画の領域、及び成長中の骨の表面近くの領域に見られる。構造的に、骨前駆細胞は、それらが生じた間葉系細胞とは異なる。それらは、薄い染色の細胞質及び薄い染色の核を有する不規則な形で細長い細胞である。有糸分裂により増殖する骨前駆細胞は、主に、それらの位置及び骨芽細胞との関連により同定される。いくつかの骨前駆細胞は、骨細胞に分化する。骨芽細胞及び骨細胞は、もはや有糸分裂ではないが、骨前駆細胞の集団は、寿命全体にわたって存続することが示されている。

【0230】

骨芽細胞。類骨の継ぎ目の表面（まだミネラル化されていない新しく形成された有機マトリックスの骨の表面の狭い領域）に位置する骨芽細胞は、骨前駆細胞に由来する。それらは、コラーゲンを合成し、ミネラル化を制御する未成熟な単核の骨形成細胞である。骨芽細胞は、形態学的に骨前駆細胞と区別することができ、一般に、骨前駆細胞よりも大きく、より丸みを帯びた核、より顕著な核小体、及びはるかに好塩基性である細胞質を有する。骨芽細胞は、主にＩ型コラーゲンで構成され、類骨として知られるタンパク質混合物を生成する。これは、ミネラル化して骨になる。骨芽細胞は、プロスタグランジン、アルカリホスファターゼ、骨のミネラル化に関与する酵素、及びマトリックスタンパク質などのホルモンも製造する。

【0231】

骨細胞。骨細胞は、骨芽細胞に由来する星型の成熟した骨細胞であり、緻密骨に見られる最も豊富な細胞であるが、骨の構造を維持する。骨芽細胞のような骨細胞は、有糸分裂ができない。それらは、骨基質の日常的なターンオーバーに積極的に関与し、小腔と呼ばれる骨基質の小さな空間、空洞、隙間、またはくぼみに存在する。骨細胞は、骨基質を維持し、カルシウム恒常性を調節し、最も必要とされる場所に骨が形成されるように指示する細胞フィードバック機序の一部であると考えられる。骨は、加えられた力に耐えるために強くなることにより、それに適応し、骨細胞は、機械的変形を検出し、骨芽細胞による骨形成を媒介し得る。

【0232】

破骨細胞。破骨細胞は、単球幹細胞系列に由来し、マクロファージと同様の食作用様機序を有し、ハウシップ窩と呼ばれる骨のくぼみによく見られる。それらは、骨吸収に特化した大きな多核細胞である。吸収中、破骨細胞は、骨表面の領域を密封し、次に、活性化される時、水素イオンを排出して非常に酸性の環境を作り出し、これは、ヒドロキシアパタイト成分を溶解する。破骨細胞の数及び活性は、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の注射によりカルシウム吸収が刺激される時に増加するが、破骨細胞活性は、甲状腺濾胞傍細胞により産生されるホルモンであるカルシトニンの注射により抑制される。

【0233】

骨基質。骨基質は、緻密骨の総重量の約９０％を占め、ヒドロキシアパタイト（６０％）及び繊維状Ｉ型コラーゲン（２７％）に似た微結晶性リン酸カルシウムで構成される。残りの３％は、マイナーなコラーゲンタイプと、他のタンパク質、例えば、オステオカルシン、オステオネクチン、オステオポンチン、骨シアロタンパク質、ならびにプロテオグリカン、グリコサミノグリカン、及び脂質で構成される。骨の細胞外マトリックス糖タンパク質及びプロテオグリカンは、様々な成長因子及びサイトカインに結合し、骨芽細胞及び破骨細胞に作用する保存されたシグナルのリポジトリとして機能する。骨基質に見られる成長因子及びサイトカインの例には、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、骨由来成長因子（ＢＤＧＦ）、軟骨由来成長因子（ＣＤＧＦ）、骨格成長因子（ｈＳＧＦ）、インターロイキン１（ＩＬ－１）、及びマクロファージ由来の因子が挙げられるが、これらに限定されない。細胞外マトリックス分子自体が調節の役割を果たし得、これにより、細胞への直接的な生物学的効果ならびに重要な空間及び文脈の情報の両方が提供されるという新たな理解がある。

【0234】

骨膜及び骨内膜。骨膜は、骨の関節面を除いて、骨の線維性結合組織外層である。それの骨への接着は、場所及び年齢によって異なる。幼児の骨では、骨膜が簡単に剥がれる。成人の骨では、それは、特に、腱及び靭帯の挿入時に、よりしっかりと接着し、より多くの骨膜繊維が、シャーピーの穿孔繊維（骨の外周ラメラに入るコラーゲン繊維の束）として骨を貫いている。骨膜は、２つの層で構成され、この外側は、細胞はほとんど含有されず、血管及び神経が多数含有される粗い繊維状の結合組織で構成される。血管が少ないが、細胞が多い内層は、多くの弾性繊維を含有する。成長中、原始的な結合組織の骨形成層が、骨膜の内層を形成する。成人では、これは、骨に密接に適用された散在する平らな細胞の列によってのみ表される。骨膜は、骨に向かう血管及び神経、ならびに、腱及び靭帯の固定のための支持床として機能する。骨膜の一部と考えられる骨形成層は、成長及び修復のために骨芽細胞を供給することが知られており、骨形成の広がりを制御及び制限する重要な制限層として機能する。骨膜及びそれに含有される骨の両方は、結合組織区画の領域であるので、基底層状物質または基底膜で、互いにまたは他の結合組織から分離されていない。骨周囲幹細胞は、骨の再生及び修復に重要であることが示されている。（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔ．Ｎｅｕｒｏｎａｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ．５（４）：３６０－３６２）。

【0235】

骨内膜は、骨内の空洞（骨髄腔及び中央管）の表面と、さらには、骨髄腔の小柱の表面を覆う。成長中の骨では、それは、骨髄性細網結合組織の繊細な線条体で構成され、その下には、骨芽細胞の層がある。成人では、骨形成細胞は、平らになり、別の層として区別できない。それらは、骨折後のように、骨形成への刺激がある時に、骨形成細胞に変化することができる。

【0236】

骨の構成要素。骨は、細胞及び有機及び無機物質の細胞間マトリックスで構成される。有機分画は、コラーゲン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、及び糖タンパク質で構成される。骨のタンパク質マトリックスは、主に、不溶性で剛性のある繊維を形成する能力を有する繊維状タンパク質のファミリーであるコラーゲンで構成される。骨の主なコラーゲンは、Ｉ型コラーゲンである。骨の無機構成成分は、剛性に関与し、無脂肪乾燥重量の最大３分の２を占め得るが、主に、ヒドロキシアパタイトカルシウムの形態の、少量の水酸化マグネシウム、フッ化マグネシウム、及び硫酸マグネシウムを含む、リン酸カルシウム及び炭酸カルシウムで構成される。組成は、年齢及び複数の食事の要因により変動する。骨のミネラルは、コラーゲン繊維に強度及び剛性を加える長い微細な結晶を形成し；それが置かれるプロセスは、ミネラル化と呼ばれる。

【0237】

本明細書で使用される「骨髄」という用語は、骨の空洞を満たし、白血細胞、赤血球、及び血小板を含む脂肪及び未成熟及び成熟血液細胞を含有する軟造血組織を指す。骨髄は、様々な前駆細胞及び成熟細胞型、例えば、造血細胞を含有し、これらは、広範囲の結合組織細胞の前駆細胞である、成熟血液細胞及び間葉系幹細胞（別途間質細胞とも呼ばれる）の前駆細胞であり、これらの両方が、他の細胞型に分化することが可能である。骨髄の造血幹細胞（ＨＳＣ）は、２つの主要な型の細胞：骨髄系列（単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、樹状細胞、及び巨核球または血小板を含む）、ならびに、リンパ系列（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びナチュラルキラー細胞を含む）を生じさせる。

【0238】

骨リモデリング。骨は、常に、成人では、破骨細胞により分解され、骨芽細胞により再形成される。骨の剛性を維持する骨リモデリングとして既知の再生のプロセスを介して、毎年１８％もの骨がリサイクルされると報告されている。この動的なプロセスのバランスは、人々が老いるにつれて変化する。若年では、それは、骨の形成に有利に働くが、老年では、再吸収に有利に働く。新しい骨物質が骨膜の内面から末梢に加えられる時、骨髄腔を形成する内部領域の空洞化がある。この骨組織の破壊は、血管を通って骨に入る破骨細胞によるものである。破骨細胞は、骨基質の無機部分及びタンパク質部分の両方を溶解させる。各破骨細胞は、多数の細胞プロセスをマトリックスに拡張し、水素イオンを周囲の物質に送り出し、それにより、それを酸性化及び可溶化する。血管は、また、生物の寿命にわたって骨髄に存在する造血細胞を移入する。

【0239】

破骨細胞の数及び活性は、厳しく調節されなければならない。活性破骨細胞が多すぎる場合、骨が溶けすぎて、骨粗鬆症がもたらされるであろう。逆に、破骨細胞が十分に生成されない場合、骨髄のために骨が空洞化せず、大理石骨病（骨が硬化して高密度になる障害である石のような骨疾患（ｓｔｏｎｅ ｂｏｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ）として既知）がもたらされるであろう。

【0240】

「骨髄移植」（ＢＭＴ）または「造血幹細胞移植」（ＨＳＣＴ）という用語は、骨髄幹細胞がある個体（ドナー）から採取され、別の個体（レシピエント）に投与される手順を指すために互換的に使用される。幹細胞は、骨髄から直接採取することも、白血球除去により血液から採取することができる。骨髄移植は、自家（骨髄から採取され、処置前に保存された患者自身の幹細胞を使用）、同種異系（一卵性双生児ではない者から提供された幹細胞を使用）、または同系（一卵性双生児により提供された幹細胞を使用）であってよい。

【0241】

「海綿骨組織」という用語は、骨小柱または海綿骨とも呼ばれる開いた細胞多孔性ネットワークを指し、これは、骨の内部を満たし、全体の構造を軽くする棒状及び板状要素のネットワークで構成され、血液供給が骨を取り囲むように、血管及び骨髄のための余地を与える。海綿骨は、総骨量の２０％を占めるが、皮質骨の表面積のほぼ１０倍である。それは、ハバース部位及びオステオンを含有せず、約３０％～約９０％の気孔率を有する。海綿骨では、骨髄腔は、比較的大きく、不規則に配置されており、骨物質は、細長い吻合する骨小柱及び尖った針状体の形態をとる。骨端と呼ばれる骨の頭は、海綿状の外観を有し、細長い不規則な骨梁または棒で構成され、これらは、格子状を形成するように吻合し、この隙間には骨髄が含有されるが、薄い外殻は密に見える。骨端の不規則な骨髄腔は、骨幹（ｄｉａｐｈｙｓｉｓ）と呼ばれる骨幹（ｂｏｎｅ ｓｈａｆｔ）の中央骨髄腔と連続的になり、その壁は、皮質骨の薄いプレートによって形成される。

【0242】

本明細書で使用される「ＣＤ３１」という用語は、血小板内皮細胞分子（ＰＥＣＡＭ－１）を指す。これは、６つのドメインを有し、白血球及び血小板／内皮細胞接着ならびに経内皮移動の両方を媒介する。ＣＤ３１は、血小板、及び大部分の白血球で発現し、ｉｎ ｖｉｖｏで構成的に内皮の表面に存在する。

【0243】

本明細書で使用される「ＣＤ３４」という用語は、骨髄幹細胞の表面で見られるマーカーである。

【0244】

本明細書で使用される「ＣＤ４５」という用語は、リンパ球共通抗原を意味する。

【0245】

本明細書で使用される「相補的」という用語は、互いに完全な塩基対二重らせんを形成することができる２つの核酸配列または鎖を指す。

【0246】

本明細書で使用される「相補的ＤＮＡ」または「ｃＤＮＡ」という用語は、ＲＮＡ分子（一般に、ｍＲＮＡ）の逆転写によって得られ、ゆえに、ゲノムＤＮＡを提示している介在配列を欠くＤＮＡ分子を指す。

【0247】

【表6-1】

【表6-2】

【0248】

「細胞周期」という用語は、Ｇ１（間期）、Ｓ（ＤＮＡ合成期）、Ｇ２（間期）、及びＭ（有糸分裂期）の４つの段階を経る細胞の進行を指す。Ｎａｋａｍｕｒａ－Ｉｓｈｉｚｕ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１４）１４１：４６５６－４６６６；Ｓｉｓｋｅｎ，ＪＥ ａｎｄ Ｍｏｒａｓｃａ，Ｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９６５）２５：１７９－１８９を引用）。Ｇ１期の制限点を超えて進行する細胞は、Ｓ期に入るが、制限点を超えない細胞は分割されないままである。これらの分割されていない細胞は、細胞周期から離脱し、細胞が静止状態または休止状態と呼ばれる状態であるＧ０期に入り得る。（同上、Ｐａｒｄｅｅ，ＡＢ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７４）７１：１２８６－９０を引用）。Ｇ０期のそのような非周期細胞は、細胞周期に可逆的に再び入り、分割するか（同上、Ｃｈｅｕｎｇ，ＴＨ ａｎｄ Ｒａｎｄｏ，ＴＡ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２０１３）１４：３２９－３４０を引用）または休止のままであり、サイクリングの可能性を失い、いくつかの場合では、老化し得る（同上、Ｃａｍｐｉｓｉ，Ｊ．Ｃｅｌｌ（２００５）１２０：５１３－２２を引用）。

【0249】

本明細書で使用される「細胞系列」または「系列」という用語は、それが生じる細胞にまで遡る場合の、分化した細胞の発生履歴を指す。

【0250】

本明細書で使用される「ケモカイン」という用語は、保存されたシステイン残基の相対位置に基づいた４つのサブファミリー（Ｃ、ＣＣ、ＣＸＣ、及びＣＸ３Ｃ）（Ｒｏｓｓｉ Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０００）１８：２１７－２４２）に分類することができる多様な免疫及び神経機能を有する低分子量（８～１１ｋＤａ）の構造的に関連するタンパク質のファミリー（Ｍａｃｋａｙ Ｃ．Ｒ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．２：９５－１０１，（２００１）；Ｙｏｕｎ Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．（２０００）Ｖｏｌ．１７７：１５０－１７４）を指す。ケモカインは、血液、リンパ節、及び組織の間で白血球の移動を誘導するのに不可欠な分子である。それらは、常に１つのタイプの受容体に制限されているわけではないので、複雑なシグナル伝達ネットワークを構成する（Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）．２７６：２９８６－２９９１）。ケモカインは、７回膜貫通型ドメインのＧタンパク質共役型受容体である表面受容体を活性化することにより細胞に影響を与える。特定のケモカインに対する白血球の応答は、ケモカイン受容体の発現により決定される。ケモカインの受容体への結合は、生物学的応答の活性化を達成するサイトカインの作用と同様に、様々なシグナル伝達カスケードを活性化する。ＣＣＲ５受容体のリガンドの分泌は、活性化時に、発現及び分泌された正常なＴ細胞（ＲＡＮＴＥＳ）、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）－１α／及びＭＩＰ－１βを調節し（Ｓｃｈｒｕｍ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９６）１５７：３５９８－３６０４）、ＣＸＣケモカイン受容体３（ＣＸＣＲ３）のリガンド、誘導タンパク質（ＩＰ）－１０（Ｔａｕｂ Ｄ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．（１９９３）１７７：１８０９－１８１４）は、望ましくない高められたＴＨ１応答に関連付けられている。さらに、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γの有害な前炎症性サイトカインレベルの上昇は、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と相関する（Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．（２００７）４８（２－３）：１５９－６３）。ケモカインは、ＴＨ１膵臓浸潤及びＴ細胞浸潤を特徴とする他の炎症性病変で観察されている（Ｂｒａｄｌｅｙ Ｌ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）．１６２：２５１１－２５２０）。

【0251】

本明細書で使用される「化学療法」という用語は、薬物を使用してがん細胞を破壊する処置を指すが、生着の成功を確実にするために、がんを有さない骨髄移植患者にも使用される。

【0252】

本明細書で使用される「暦年齢」という用語は、出生から一定の日までの経過時間を指す。暦年齢は、一般に、発育及び加齢の主要な段階を反映して、大まかな年齢範囲に分類される。Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｕｂｊｅｃｔ Ｈｅａｄｉｎｇ（ＭｅＳＨ）によると、ヒトに関する年齢の分類は以下の通りである。若年：乳児から若年成人、すなわち乳児期：０～２歳；幼児期：２～５歳；小児期：５～１２歳；青年期：１２～１９歳；若年成人期：１９～２４歳；成人期：２４～４４歳；中年期：４４～６５歳；及び老年期：６５歳以上。マウスの場合、コンセンサスによる分類される暦年齢は、若年期（３か月）；中年期（８～１４か月）及び老年期（１８～２４か月）である。

【0253】

「競合的骨髄移植」という用語は、造血幹及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）のｉｎ ｖｉｖｏでの機能を測定するために日常的に使用されるアッセイを指す。この方法の原理は、Ｃ５７ＢＬ６背景のトランスジェニックマウスに由来する骨髄ドナー細胞を、競合骨髄と共に移植することである。放射線を照射した移植レシピエントマウスの血液及び骨髄の両方で、生着能率が評価される。

【0254】

本明細書で使用される「コンディショニング」という用語は、移植の数日前に与え、移植のために体を集合的に整える化学療法薬、及び場合により、放射線の組み合わせを指す。

【0255】

本明細書で使用される「接触」という用語及びその様々な文法形式は、接触の状態もしくは状況、または即時もしくは局所的な近接の状態もしくは状況を指す。

【0256】

「皮質骨組織」（緻密骨または緻密質とも呼ばれる）という用語は、いわゆる、隙間及び空間が最小のために、骨の硬い外層の組織を指す。この組織は、滑らかで白く、しっかりとした外観を骨に与える。皮質骨は、ハバース部位（血管及び結合組織が骨を通過する管）ならびにオステオン（ハバース管及びその同心円状に配置されたラメラを含む皮質骨の構造の基本単位）で構成され、従って、皮質骨では、骨が血液供給を囲んでいる。皮質骨は、気孔率約５％～約３０％（両端を含む）を有し、成体の骨格の総骨量の約８０％を占める。皮質骨では、空間またはチャネルが狭く、骨物質が密に詰まっている。

【0257】

本明細書で使用される「サイトカイン」という用語は、細胞が分泌する小さな可溶性タンパク質物質を指し、これは、他の細胞に様々な影響を与える。サイトカインは、成長、発達、創傷治癒、及び免疫応答を含む多くの重要な生理学的機能を媒介する。それらは、細胞膜にある細胞特異的受容体に結合することにより作用する。これは、異なるシグナル伝達カスケードを細胞内で開始させ、これは、最終的には標的細胞の生化学的及び表現型の変化につながるであろう。一般的に、サイトカインは、局所的に作用する。それらは、多くのインターロイキンを包含するＩ型サイトカイン、ならびに、いくつかの造血成長因子；インターフェロン及びインターロイキン－１０を含むＩＩ型サイトカイン；ＴＮＦα及びリンホトキシンを含む腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）関連分子；インターロイキン１（ＩＬ－１）を含む免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー；ならびに、様々な免疫及び炎症の機能に重要な役割を果たす分子のファミリーであるケモカインを含む。同じサイトカインは、細胞の状態に応じて細胞に異なる影響を与え得る。サイトカインは、多くの場合、他のサイトカインの発現を調節し、そのカスケードを誘発する。

【0258】

本明細書で使用される「ダメージ関連分子パターン」（ＤＡＭＰ）という用語は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）と相互作用することにより自然免疫系を活性化する、損傷または瀕死の細胞から放出される内因性危険分子を指す。

【0259】

本明細書で使用される場合、「由来する」という用語は、起源の供給源から何かを受け、それを得、またはそれを改変するための任意の方法を包含することを意味する。

【0260】

本明細書で使用される場合、「検出すること」、「決定すること」という用語、及びそれらの他の文法形式は、バイオマーカーの同定または定量化、例えば、ｍｉＲＮＡの存在またはレベル、または生物学的試料の状態の有無について実施される方法を指すために使用される。試料で検出されたバイオマーカーの発現または活性の量は、アッセイまたは方法の検出レベルがないか、またはそれ未満であり得る。

【0261】

本明細書で使用される「分化」という用語は、より特殊な機能を伴う、細胞または組織の組織化または複雑さのレベルの増加を伴う発達のプロセスを指す。

【0262】

本明細書で使用される「差異的」という用語は、差に関するもの、または差を構成するものを指す。本明細書で使用されるアンジオクライン因子に関する「差異的産生」という用語は、アンジオクライン因子間の産生の差を指す。

【0263】

本明細書で使用される「疾患」または「障害」という用語は、健康の障害または異常な機能の状態を指す。

【0264】

本明細書で使用される「内因性」という用語は、天然に存在するか、内に組み込まれるか、内に収容されるか、接着するか、付着するか、または内に存在するものを指す。

【0265】

「骨内膜ニッチ」及び「骨芽細胞ニッチ」という用語は、同じ意味で用いられ、組織損傷に対応して動員され得る静止状態のＨＳＣまたは長期ＨＳＣ（ＬＴ－ＨＳＣ）を含んでいる複雑な微小環境を表す。（Ｇｕｅｒｒｏｕａｈｅｎ，Ｂ．Ｓ．，Ａｌ－Ｈｉｊｊｉ，Ｉ．，＆ Ｔａｂｒｉｚｉ，Ａ．Ｒ．（２０１１）．Ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃ ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｎｉｃｈｅｓ，Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１１，１－８）．

【0266】

本明細書で使用される「生着」という用語は、移植された（ドナー）幹細胞の正常な成長及び患者（レシピエント）の骨髄空間における血液細胞の産生が移植後に再開するプロセスを指す。

【0267】

本明細書で使用される場合、「濃縮する」という用語は、例えば、細胞集団におけるその自然の頻度と比較して、細胞または細胞構成要素のサブタイプの相対頻度を増加させるために、所望の物質の割合を増加させることを指すことを意味する。正の選択、負の選択、またはその両方は、一般に、あらゆる濃縮スキームに必要であると考えられる。選択方法には、磁気分離及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を含むが、これらに限定されない。

【0268】

本明細書で使用される「赤血球形成」という用語は、造血組織における赤血球の形成を指す。胎児の初期の発達では、赤血球形成は、卵黄嚢、脾臓、及び肝臓で生じる。出生後、全ての赤血球形成は、骨髄で生じる。骨髄及び脾臓の赤血球分化系統は、多能性幹細胞に由来する初期前駆細胞の前赤芽球で開始される。成人の骨髄では、ＨＳＣ由来の骨髄系共通前駆細胞（多能性幹細胞）が赤血球系列にコミットする場合、最終の赤血球形成が開始される。前赤芽球（ｐｒｏｎｏｒｍｏｂｌａｓｔ）（前赤芽球（ｐｒｏｅｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔ）または前赤芽球（ｒｉｂｒｉｂｌａｓｔ）とも呼ばれる）の出現は、最初の分化段階を示す。これに、初期、中期、及び後期の正常芽球（赤芽球）段階が続き、その時点で、核が排出され、細胞が網状赤血球になる。骨髄を出ると、網状赤血球は、血液循環に入り、完全に成熟したＲＢＣになる。

【0269】

本明細書で使用される「外因性」という用語は、天然に存在しないもの、または特定の細胞、生物、もしくは種の外部で発生または生成するものを指す。

【0270】

本明細書で使用される「増殖する」という用語及びその様々な文法的形態は、分散した生細胞が、生細胞の数または量の増加をもたらす培養培地中でｉｎ ｖｉｔｒｏで増殖するプロセスを指す。

【0271】

本明細書で使用される場合、「発現」という用語及びその様々な文法的形態は、ポリヌクレオチドがＤＮＡテンプレートから（例えば、ｍＲＮＡもしくは他のＲＮＡ転写物に）転写されるプロセス、及び／または、転写されたｍＲＮＡが、その後、ペプチド、ポリヌクレオチド、またはタンパク質に翻訳されるプロセスを指す。転写物及びコードされたポリペプチドは、「遺伝子産物」と総称されることがある。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合、発現には、真核細胞でのｍＲＮＡのスプライシングが含まれてもよい。発現は、また、ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾を指すことがある。

【0272】

本明細書で使用される「細胞外マトリックス」（または「ＥＣＭ」）という用語は、細胞が特定の細胞表面受容体を介して相互作用する細胞の外部環境における足場を指す。細胞外マトリックスは、限定されないが、細胞の支持及び固定を提供すること、ある組織を別の組織から分離すること、ならびに細胞内コミュニケーションを調節すること、を含む多くの機能に役立つ。細胞外マトリックスは、繊維状タンパク質及びグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のインターロッキングメッシュで構成される。細胞外マトリックスに見られる繊維状タンパク質の例には、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、及びラミニンが挙げられる。細胞外マトリックスに見られるＧＡＧの例には、プロテオグリカン（例えば、ヘパリン硫酸）、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、及び非プロテオグリカン多糖（例えば、ヒアルロン酸）が挙げられる。「プロテオグリカン」という用語は、１つ以上のグリコサミノグリカンに結合しているコアタンパク質を含有する糖タンパク質の群を指す。

【0273】

本明細書で使用される「フラグメント」または「ペプチドフラグメント」という用語は、より大きな抗体ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質から切り離されるか、または砕かれて派生するが、より大きな抗体ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質の所望の生物学的活性を維持している小さい部分である。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって行われ得ることが明らかとなっている。このような抗体の実施形態はまた、二重特異性、重複特異性、または多重特異性であってもよく、２つ以上の異なる抗原に特異的に結合する。抗体の「抗原結合フラグメント」または「抗原結合部分」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインで構成される一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結した２つのＦａｂ断片を含む二価のフラグメントであるＦ（ａｂ’）₂フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインで構成されるＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体のシングルアームのＶＬ及びＶＨドメインで構成されるＦｖフラグメント、（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６，Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．、ＰＣＴ出願第ＷＯ９０／０５１４４ Ａ１号）（参照により本明細書に組み込まれる）、ならびに（ｖｉ）単離している相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、それらを、組み換え法を使用して合成リンカーによって連結させて、ＶＬ領域とＶＨ領域とのペアが一価の分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている）を形成する単一のタンパク質鎖にすることができる（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照のこと）。このような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合フラグメント」という用語の範囲に包含されることが意図される。ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態もまた包含される。ダイアボディは、単一のポリペプチド鎖でＶＨドメイン及びＶＬドメインが発現している二価の二重特異性抗体である。ただし、同じ鎖上の２つのドメインをペアにするためには短すぎるため、それらのドメインを別の鎖の相補的なドメインとペアにして、２つの抗原結合部位を作成するリンカーを使用する（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照のこと）。このような抗体結合部分は、当技術分野において既知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．７９０ ｐｐ（ＩＳＢＮ ３－５４０－４１３５４－５））。

【0274】

本明細書で使用される「遺伝子」という用語は、機能的タンパク質またはＲＮＡの生成に必要な、エクソン、イントロン、及び非コーディング転写制御領域を含む全ＤＮＡ配列である。

【0275】

「遺伝子発現」または「発現」という用語は、同じ意味で用いられ、遺伝子にコードされた情報が観察可能な表現型に変換されるプロセスを指す。

【0276】

本明細書で使用される「移植片」という用語は、ドナーからレシピエントに注入または移植された組織または臓器を指す。それは、同じ個体のある身体部位から別の身体部位に移植された自己組織（「自家移植片」）、遺伝的に同一の個体間で移植された組織、または組織移植を可能にするのに十分に免疫学的に適合性のある組織（「同系移植片」）、同じ種の遺伝的に異なるメンバー間で移植された組織（「同種異系移植片」または「同種移植片」）、及び異なる種間で移植された組織（「異種移植片」）を含むが、これらに限定されない。

【0277】

本明細書で使用される「成長因子」という用語は、例えば、合成速度を増加させるか、分解速度を減少させるか、またはその両方により、細胞表面受容体に結合して細胞内シグナル伝達経路を誘発し、タンパク質及び他の高分子の蓄積を刺激する増殖、分化、または他の細胞応答をもたらす細胞外ポリペプチド分子を指す。例示的な成長因子には、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）、トランスフォーミング成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）、及び血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）が挙げられる。

【0278】

線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）。線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリーは、現在、１２を超える構造的に関連するメンバーを有する。ＦＧＦ１は、酸性ＦＧＦとしても既知であり；ＦＧＦ２は、場合により、塩基性ＦＧＦ（ｂＦＧＦ）と呼ばれ；ＦＧＦ７は、場合により、ケラチノサイト成長因子という名称で通っている。脊椎動物では、１２を超える異なるＦＧＦ遺伝子が既知であり；それらは、様々な組織でＲＮＡスプライシングまたは開始コドンを変動することにより、何百ものタンパク質アイソフォームを生成し得る。ＦＧＦは、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）と呼ばれる一連の受容体型チロシンキナーゼを活性化し得る。受容体型チロシンキナーゼは、細胞膜を通って伸びるタンパク質である。パラクリン因子に結合するタンパク質の部分は、細胞外側にあるが、休止状態のチロシンキナーゼ（すなわち、ＡＴＰを分離することにより別のタンパク質をリン酸化し得るタンパク質）は、細胞内側にある。ＦＧＦ受容体がＦＧＦに結合すると（かつＦＧＦに結合する場合のみ）、休止状態のキナーゼが活性化され、応答細胞内の特定のタンパク質をリン酸化して、それらのタンパク質を活性化する。

【0279】

ＦＧＦは、血管新生（血管形成）、中胚葉形成、及び軸索伸長を含む、いくつかの発達機能に関連する。ＦＧＦが、多くの場合、互いに代用し得るが、それらの発現パターンは、それらに別々の機能を与える。例えば、ＦＧＦ２は、特に、血管新生に重要であるが、ＦＧＦ８は、中脳及び四肢の発達に関与する。

【0280】

インスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）。インスリンと分子構造が似ているホルモンであるＩＧＦ－１は、体のほぼ全ての細胞、特に、骨格筋、軟骨、骨、肝臓、腎臓、神経、皮膚、造血細胞、及び肺に成長促進効果を有する。それは、子供の成長に重要な役割を果たし、成人に同化作用を有し続ける。ＩＧＦ－１は、主に肝臓により内分泌ホルモンとして、及び標的組織でパラクリン／オートクリン方式で産生される。生成は、成長ホルモン（ＧＨ）により刺激され、栄養不足、成長ホルモン非感受性、成長ホルモン受容体の欠如、またはチロシンタンパク質ホスファターゼ非受容体１１型（ヒトのＰＴＰＮ１１遺伝子にコードされるＳＨＰ２としても既知）を含む下流のシグナル伝達分子の障害、及び転写因子のＳＴＡＴファミリーのメンバーであるシグナル伝達兼転写活性化因子５Ｂ（ＳＴＡＴ５Ｂ）により遅延することができる。その主な作用は、多くの組織の多くの細胞型に存在する、その特定の受容体であるインスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）への結合により媒介される。受容体型チロシンキナーゼであるＩＧＦ１Ｒに結合すると、細胞内シグナル伝達が開始され；ＩＧＦ－１は、ＡＫＴシグナル伝達経路の最も強力な天然活性化因子、細胞の成長及び増殖の刺激因子、ならびにプログラム細胞死の強力な阻害因子のうちの１つである。ＩＧＦ－１は、成長ホルモン（ＧＨ）の効果の主要なメディエーターである。成長ホルモンは、下垂体で作られ、血流に放出され、続いて、肝臓を刺激してＩＧＦ－１を産生する。次に、ＩＧＦ－１は、全身の成長を刺激する。インスリン様効果に加えて、ＩＧＦ－１は、また、特に、神経細胞における、細胞の成長及び発達、ならびに細胞のＤＮＡ合成を調節し得る。

【0281】

ＩＧＦ－１は、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ４（間質細胞由来因子－１、ＳＤＦ－１の受容体）の発現レベルを増加させ、ＳＤＦ－１に対するＭＳＣの遊走応答を著しく増加させることが示された（Ｌｉ，Ｙ，ｅｔ ａｌ．２００７ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎｉｃ．３５６（３）：７８０－７８４）。ＳＤＦ－１に応答したＩＧＦ－１誘導性のＭＳＣ遊走の増加は、ＰＩ３キナーゼ阻害剤（ＬＹ２９４００２及びワートマニン）で減弱されたが、マイトジェン活性化プロテイン／ＥＲＫキナーゼ阻害剤ＰＤ９８０５９で減弱されなかった。特定の理論に制限されることなく、ＩＧＦ－１がＰＩ３／Ａｋｔ依存性であるＣＸＣＲ４ケモカイン受容体シグナル伝達を介してＭＳＣの遊走応答を増加させることを、データは示す。

【0282】

トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ－β）。ＴＧＦ－βスーパーファミリーには３０を超える構造的に関連するメンバーがあり、それらは、発達における最も重要な相互作用のいくつかを調節する。ＴＧＦ－βスーパーファミリー遺伝子にコードされるタンパク質は、カルボキシ末端領域が成熟ペプチドを含有するように処理される。これらのペプチドは、ホモ二量体（それ自体と）またはヘテロ二量体（他のＴＧＦ－βペプチドと）に二量体化され、細胞から分泌される。ＴＧＦ－βスーパーファミリーは、ＴＧＦ－βファミリー、アクチビンファミリー、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、Ｖｇ－１ファミリー、ならびにグリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ、腎臓及び腸内ニューロンの分化に必要）を含むその他のタンパク質、ならびに哺乳類の性決定に関与するミュラー阻害因子を含む。ＴＧＦ－βファミリーのメンバーであるＴＧＦ－β１、２、３、及び５は、細胞間の細胞外マトリックスの形成を調節することにおいて、及び細胞分裂を（正及び負の両方で）調節することにおいて重要である。ＴＧＦ－β１は、コラーゲン及びフィブロネクチンの合成を刺激すること、ならびにマトリックスの分解を阻害することにより、細胞外マトリックス上皮細胞が作る量を増加させる。ＴＧＦ－βは、上皮が、腎臓、肺、及び唾液腺の管を形成するために分岐し得る場所及び時期を制御する上で重要であり得る。

【0283】

血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）。ＶＥＧＦは、増殖、遊走、浸潤、生存、及び透過性を含む内皮細胞の多くの機能を媒介する成長因子である。ＶＥＧＦ及びそれらの対応する受容体は、脈管形成、血管新生、またはリンパ血管系の形成のいずれかにより、最終的に血管系の発達につながる分子及び細胞イベントのカスケードにおける重要な調節因子である。ＶＥＧＦは、生理学的血管新生における重要な調節因子であり、骨格の成長及び修復においても重要な役割を果たす。

【0284】

ＶＥＧＦの正常な機能は、胚発生中、損傷後、及び閉塞した血管を迂回するために新しい血管を作成する。確立された成熟血管系において、内皮は、必要に応じて要件に応答するために隣接する組織に通信ネットワークを提供することにより、周囲の組織の恒常性の維持において重要な役割を果たす。さらに、血管系は、周囲の組織が必要とする成長因子、ホルモン、サイトカイン、ケモカイン、及び代謝物などを提供し、分子及び細胞の動きを制限するバリアとして機能する。

【0285】

ＶＥＧＦファミリーは、いくつかの分泌性タンパク質：ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＶＥＧＦ－Ｅ、及び胎盤成長因子（ＰＩＧＦ）で構成され、ＶＥＧＦ－Ａは、このグループの中で最も幅広く研究が行われている。（Ｂａｚｚａｚｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＳＰ１ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ－Ａｋｔ－ｅＮＯＳ：Ａｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｔｒｉｐｌｅ ｔｈｒｅａｔ．Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（２０１８）９：６４４）。ＶＥＧＦは、脈管形成及び血管新生の発達において（同上、Ｓｈａｌａｂｙ Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｆａｉｌｕｒｅ ｏｆ ｂｌｏｏｄ－ｉｓｌａｎｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｆｌｋ－１－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ（１９９５）３７６：６２－６６；Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ａｂｎｏｒｍａｌ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｌｅｔｈａｌｉｔｙ ｉｎ ｅｍｂｒｙｏｓ ｌａｃｋｉｎｇ ａ ｓｉｎｇｌｅ ＶＥＧＦ ａｌｌｅｌｅ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３８０：４３５－４３９を引用）、ならびに成人血管透過性及び恒常性において非常に重要な役割を果たす（同上、Ｋｕ ＤＤ，ｅｔ ａｌ．Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｅｓ ＥＤＲＦ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉｅｓ．Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９３）２６５：Ｈ５８６－Ｈ５９２；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ，Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｅｓ ＥＤＲＦ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉｅｓ．Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９３）２６５：Ｈ５８６－Ｈ５９２；Ｃｕｒｗｅｎ Ｊ．Ｏ．，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ａ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：ｅｘａｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｅｄｉｒａｎｉｂ（ｒｅｃｅｎｔｉｎ；ＡＺＤ２１７１）ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎ ｒａｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００８）１４：３１２４－３１３１を引用）。ＶＥＧＦシグナル伝達の調節異常は、がん（同上、Ｋｉｅｒａｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｔｈｅ ＶＥＧＦ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ：ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｔｈ ｆｏｒｗａｒｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｍｅｄ．（２０１２）２：ａ００６５９３．１０．１１０１／ｃｓｈｐｅｒｓｐｅｃｔ．ａ００６５９３；Ｃｌａｅｓｓｏｎ－Ｗｅｌｓｈ Ｌ．，Ｗｅｌｓｈ Ｍ．ＶＥＧＦＡ ａｎｄ ｔｕｍｏｕｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｊ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．（２０１３）２７３：１１４－１２７を引用）、創傷治癒（同上、Ｂａｏ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．（２００９）１５３：３４７－３５８を引用）、加齢関連黄斑変性症（同上、Ｆｅｒｒａｒａ，Ｎ，Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ｆｒｏｍ ｂａｓｉｃ ｓｃｉｅｎｃｅ ｔｏ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２０１０）１６：１１０７－１１１１を引用）、及び抹消動脈疾患（ＰＡＤ）（同上、ＭａｃＧａｂｈａａｎ，Ｆ．ｅｔ ａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｐｒｏ－ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ＶＥＧＦ ｓｙｓｔｅｍ．Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐ．Ｒｅｖ．Ｓｙｓｔ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．（２０１０）２：６９４－７０７；Ｂｏｕｃｈｅｒ Ｊ．Ｍ．，Ｂａｕｔｃｈ Ｖ．Ｌ．Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ＶＥＧＦ－Ａ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２０１４）２０：１３８３－１３８５；Ｃｌｅｇｇ Ｌ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．Ｓｙｓｔｅｍｓ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ＶＥＧＦ１６５ｂ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．ＣＰＴ Ｐｈａｒｍａｃｏｍｅｔｒｉｃｓ Ｓｙｓｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２０１７）６：８３３－８４４；Ｃｌｅｇｇ Ｌ．Ｅ．，Ｍａｃ Ｇａｂｈａｎｎ Ｆ．Ａ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏ－ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｆｏｒ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｎｔｅｇｒ．Ｂｉｏｌ．（２０１８）１０：１８－３３を引用）を含む様々な疾患の一因となる。ＶＥＧＦの応答は、内皮細胞の複数の受容体及び共受容体、例えば、ＶＥＧＦ受容体２（ＶＥＧＦＲ２）及びニューロピリン１（ＮＲＰ１）へのそれ自体の結合によって媒介される。

【0286】

受容体チロシンキナーゼＶＥＧＦＲ２へのＶＥＧＦの結合は、生後の血管新生における主要な経路である、ＥＲＫ１／２及びＰＩ３Ｋ／Ａｋｔを含む下流シグナル伝達経路の活性化をもたらし、それにより、細胞増殖、生存、運動性、及び血管透過性の強化が誘導される（同上、Ｏｌｓｓｏｎ Ａ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ． ＶＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ － ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００６）７：３５９－３７１；Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ Ｍ．Ｔ．，Ｂｒｅｋｋｅｎ Ｒ．Ａ．Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｋｔ ａｎｄ ＥＲＫ１／２ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ＶＥＧＦ－Ａ／ＶＥＧＦＲ２－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ（２０１１）６：ｅ２８９４７；Ｓｉｍｏｎｓ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ＶＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２０１６）１７：６１１－６２５を引用）。ＶＥＧＦ－ＶＥＧＦＲ２活性化はまた、内皮一酸化窒素シンターゼ（ｅＮＯＳ）の活性化の結果として一酸化窒素（ＮＯ）放出を誘導し、実質的に血管新生応答に寄与する。（同上、Ｐａｐａｐｅｔｒｏｐｏｕｌｏｓ，Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９７）１００：３１３１－３１３９；Ｆｕｋｕｍｕｒａ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２００１）９８：２６０４－２６０９を引用）。

【0287】

生理学的ＶＥＧＦシグナル伝達は、血管新生の促進因子及び阻害因子のバランスによって厳密に調節される。（同上、Ｆｏｌｋｍａｎ Ｊ．Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．ＡＰＭＩＳ（２００４）１１２：４９６－５０７を引用）。マトリックス細胞タンパク質トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ１）は、最初に同定された血管新生の内因性阻害因子の１つであった。（同上、Ｂａｇａｖａｎｄｏｓｓ Ｐ．，Ｗｉｌｋｓ Ｊ．Ｗ．Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９９０）．１７０： ８６７－８７２）；Ｇｏｏｄ， ＤＪ ｅｔ ａｌ．Ａ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｓ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｉｎｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈａｂｌｅ ｆｒｏｍ ａ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９０）８７：６６２４－６６２８；Ｔａｒａｂｏｌｅｔｔｉ，Ｇ ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｔｅｌｅｔ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ，ｍｏｔｉｌｉｔｙ，ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ：ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９９０）１１１ ７６５－７７２を引用）。ＴＳＰ１は、複数のレベルでＶＥＧＦシグナル伝達を強力に阻害する。ナノモル濃度で、ＴＳＰ１は、ＶＥＧＦに直接結合して、ＶＥＧＦを隔離するか（同上、Ｇｕｐｔａ， Ｋ ｅｔ ａｌ Ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ｂｙ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ： ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ（１９９９）３：１４７－１５８９を引用）、またはＴＳＰ１受容体ＬＤＬ関連受容タンパク質１（ＬＲＰ１）への結合を介してＴＳＰ１－ＶＥＧＦ複合体の内在化をもたらす。（同上、Ｇｒｅｅｎａｗａｙ，Ｊ．ｅｔ ａｌ －１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＶＥＧＦ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｏｖａｒｙ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｂｙ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ ｖｉａ ｔｈｅ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ－１（ＬＲＰ－１）．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（２００７）２１０：８０７－８１８を引用）。これらの濃度で、ＴＳＰ１はまた、細胞表面受容体ＣＤ３６に結合することによって、Ａｋｔ／ｅＮＯＳ／ＮＯシグナル伝達も阻害する場合がある。（同上、Ｉｓｅｎｂｅｒｇ，ＪＳ ｅｔ ａｌ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｖｉａ ＣＤ３６ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｍｙｒｉｓｔｉｃ ａｃｉｄ ｕｐｔａｋｅ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００７）２８２：１５４０４－１５４１５を引用）。また、脂肪酸トランスロカーゼであるＣＤ３６へのＴＳＰ１の結合により、内皮細胞にミリスチン酸を取り込む能力が阻害され、Ｓｒｃキナーゼ及びｃＧＭＰシグナル伝達の活性化が阻害される。（同上、Ｉｓｅｎｂｅｒｇ，ＪＳ ｅｔ ａｌ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｖｉａ ＣＤ３６ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｍｙｒｉｓｔｉｃ ａｃｉｄ ｕｐｔａｋｅ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００７）２８２：１５４０４－１５４１５を引用）。ピコモル濃度では、ＴＳＰ１は、インテグリン関連糖タンパク質膜受容体であるＣＤ４７に結合することによって、血管新生を強力に阻害する。（同上、Ｋａｕｒ，Ｓ．ｅｔ ａｌ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＶＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＣＤ４７．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２０１０）２８５：３８９２３－３８９３２を引用）。ＣＤ４７は、ＮＯ下流シグナルすなわち可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）及びｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼの阻害に必須のＴＳＰ１受容体である。同上、Ｉｓｅｎｂｅｒｇ，ＪＳ，ｅｔ ａｌ ＣＤ４７ ｉｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｆｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：２６０６９－２６０８０．；Ｉｓｅｎｂｅｒｇ，ＪＳ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｂｙ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｔｈｅ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ／ｃＧＭＰ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｂｌｏｏｄ（２００８）１１１：６１３－６２３を引用。ＴＳＰ１－ＣＤ４７相互作用はまた、ｅＮＯＳ活性化及びｅＮＯＳ依存性内皮細胞血管緊張低下を阻害する。（同上、Ｂａｕｅｒ ＥＭ ｅｔ ａｌ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｓｕｐｐｏｒｔｓ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｂｙ ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｅＮＯＳ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｖａｓｏｒｅｌａｘａｔｉｏｎ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．（２０１０）８８：４７１－４８１を引用）。ＣＤ４７またはＴＳＰ１欠損マウスは、創傷治癒モデルで血管新生の増強を示す。（同上、Ｉｓｅｎｂｅｒｇ，ＪＳ，ｅｔ ａｌ Ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１－ＣＤ４７ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｏｆ ｆｕｌｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｓｋｉｎ ｇｒａｆｔｓ．（２００８）Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．２４７：１８０－１９０を引用）。

【0288】

さらに、ＴＳＰ１－ＣＤ４７相互作用は、ＶＥＧＦＲ２リン酸化及びＡｋｔ活性化を強力に阻害することが判明している。（同上、Ｋａｕｒ，Ｓ．ｅｔ ａｌ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｓｕｐｐｏｒｔｓ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｂｙ ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｅＮＯＳ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｖａｓｏｒｅｌａｘａｔｉｏｎ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．（２０１０）８８：４７１－４８１を引用）。ＣＤ４７の抑制またはその発現の下方調節によりＶＥＧＦＲ２リン酸化が救出されたが、これは、ＴＳＰ１－ＣＤ４７相互作用によって開始される抗血管新生表現型が単なるＮＯシグナル伝達の阻害を超えていることを意味し、より包括的な阻害作用の役割を示唆している。（同上、Ｋａｕｒ，Ｓ．ｅｔ ａｌ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｓｕｐｐｏｒｔｓ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｂｙ ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｅＮＯＳ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｖａｓｏｒｅｌａｘａｔｉｏｎ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．（２０１０）８８：４７１－４８１を引用）。

【0289】

本明細書で使用される「健康寿命」という用語は、個人がある程度健康である生涯の期間を指す。

【0290】

本明細書で使用される「ＨＰＣ」という用語は、造血前駆細胞を指す。

【0291】

本明細書で使用される「ＨＳＰＣ」という用語は、自己複製及び多系列分化の能力を有する前駆細胞の珍しい集団である造血幹及び前駆細胞を指す。

【0292】

本明細書で使用される「異型」という用語は、２つの異なる細胞型を指す。本明細書で使用される「異型シグナル伝達」という用語は、異種細胞型間のコミュニケーションを指す。

【0293】

本明細書で使用される「同型」という用語は、同一の細胞型を指す。

【0294】

本明細書で使用される「免疫再構成」または「再構成」という用語は、ＨＳＣＴ後に移植されたＨＳＣから免疫系を再構築するプロセスを指す。

【0295】

「免疫応答」及び「免疫媒介性」という用語は、これらの反応の結果が対象に有益であるか、または有害であるかにかかわらず、外来または自己抗原のいずれかに対する対象の免疫系の任意の機能的発現を指すために本明細書で互換的に使用される。

【0296】

本明細書で使用される「免疫系」という用語は、疾患に対する身体の防御システムを指す。自然免疫系は、病原体に対する非特異的な第一線の防御を提供する。それは、物理的なバリア（例えば、皮膚）、ならびに、細胞（顆粒球、ナチュラルキラー細胞）及び体液性（補体系）の両方の防御機構を含む。自然免疫系の反応は即時であるが、適応免疫系とは異なり、病原体に対する永続的な免疫を提供しない。

【0297】

本明細書で使用される「自然免疫」という用語は、本明細書では、病原体に最初に遭遇した後、適応免疫が誘導される様々な自然耐性機構、例えば、解剖学的バリア、抗菌ペプチド、補体系、ならびに非特異的病原体認識受容体を含有するマクロファージ及び好中球を指す。自然免疫は、常に全ての個体に存在し、所与の病原体への曝露を繰り返しながら増加せず、特定の病原体に応答するよりもむしろ、類似の病原体の群間を区別する。

【0298】

「免疫調節」、「免疫調節薬」、及び「免疫調節」という用語は、例えば、ケモカイン、サイトカイン、及び免疫応答の他のメディエーターを発現することにより、直接的または間接的に免疫応答を増強または低下させることを可能にする物質、薬剤、または細胞を指すために本明細書では互換的に使用される。

【0299】

本明細書で使用される「免疫抑制剤」という用語は、体の免疫応答を減少させる薬剤を指す。

【0300】

本明細書で使用される「免疫抑制」という用語は、免疫の減少または体の免疫応答の低下の状態を指す。本明細書で使用される「免疫抑制療法」という用語は、体の免疫系の活性を低下させる処置を指す。

【0301】

本明細書で使用される「炎症」という用語は、血管新生された組織が損傷に応答する生理学的プロセスを指す。例えば、ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，４ｔｈ Ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍ Ｅ．Ｐａｕｌ，ｅｄ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）ａｔ １０５１－１０５３（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。炎症プロセスの間に、解毒及び修復に関与する細胞は、炎症性メディエーターにより損なわれる部位に動員される。炎症は、多くの場合、炎症部位での白血球、特に、好中球（多形核細胞）の強い浸潤を特徴とする。これらの細胞は、血管壁または無傷の組織で有毒物質を放出することにより、組織の損傷を促進する。伝統的に、炎症は、急性応答及び慢性応答に分けられている。本明細書で使用される「急性炎症」という用語は、体液、血漿タンパク質、及び好中球白血球の蓄積を特徴とする急性損傷に応答する迅速で一時的な（数分～数日）比較的均一な応答を指す。本明細書で使用される「慢性炎症」という用語は、より長期的であり、曖昧で無期限の終結を有する炎症を指す。慢性炎症は、最初の炎症剤の不完全なクリアランスによって、または同じ場所で発生する複数の急性事象の結果として、急性炎症が持続する場合に、引き継がれる。リンパ球及びマクロファージの流入ならびに線維芽細胞の成長を含む慢性炎症は、炎症活動が長期化または繰り返される部位で組織の瘢痕化をもたらすことがある。

【0302】

本明細書で使用される「炎症性メディエーター」または「炎症性サイトカイン」という用語は、炎症プロセスの分子メディエーターを指す。これらの可溶性で拡散性の分子は、組織の損傷及び感染の部位ならびにより離れた部位の両方で局所的に作用する。炎症プロセスによって活性化される炎症性メディエーターもあれば、急性炎症に応答して、または他の可溶性炎症性メディエーターによって合成及び／または細胞源から放出される炎症性メディエーターもある。炎症性応答の炎症性メディエーターの例には、限定されないが、ヒスタミン、セロトニン、及び神経ペプチド、限定されないが、インターロイキン－１－ベータ（ＩＬ－１β）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）、腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦ－α）、インターフェロン－ガンマ（ＩＦ－γ）、及びインターロイキン－１２（ＩＬ－１２）を含む前炎症性サイトカインを含む、血漿プロテアーゼ、補体、キニン、凝固及び線維素溶解性タンパク質、脂質メディエーター、プロスタグランジン、ロイコトリエン、血小板活性化因子（ＰＡＦ）、ペプチド及びアミンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0303】

本明細書で使用される「注入」という用語及び他の文法的形態は、血液以外の流体の静脈への導入を指す。

【0304】

「阻害すること」、「阻害する」、または「阻害する」という用語は、本明細書では、プロセスの量もしくは速度を低減すること、プロセスを完全に停止すること、またはその作用もしくは機能を減少、制限、もしくは遮断することを指すために使用される。阻害は、物質の量、速度、作用機能、またはプロセスの、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の低減または減少を含んでもよい。

【0305】

本明細書で使用される「阻害剤」という用語は、第１の分子に結合するか、それに接触するか、または別の方法で、その活性を妨害し、それにより、第１の分子の活性を減少させる第２の分子を指す。

【0306】

本明細書で使用される「傷害」という用語は、物理的もしくは化学的、または内部状態であり得る外部の作用物質または力により引き起こされる身体の構造または機能への損傷または危害を指す。

【0307】

「単離された」という用語は、限定されないが、核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質などの材料を指すために本明細書で使用され、これらは、（１）天然に存在する環境で見られるように、通常は、付随するかまたは相互作用する構成成分を実質的または本質的に含まない。「実質的に含まない」または「本質的に含まない」という用語は、本明細書では、実質的もしくは有意に含まない、または約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％超含まないことを指すために使用される。分離された材料は、任意に、自然環境において材料と共に見出されない材料を含むか、あるいは、（２）材料がその自然環境にある場合、材料は、組成物への意図的なヒトの介入により合成的に（非自然に）変更されている、及び／またはその環境で見出された材料に固有ではない細胞内の場所（例えば、ゲノムもしくは細胞内小臓器）に配置されている。合成材料を生成するための変更は、自然状態の材料に対して実施されても、自然状態から除去されてもよい。

【0308】

本明細書で使用される「ノックイン」という用語は、標的生物の染色体の特定の位置にｃＤＮＡ配列をコードするタンパク質を挿入することによって行われる遺伝子工学的手法を指す（Ｇｉｂｓｏｎ，Ｇｒｅｇ（２００９）．Ａ Ｐｒｉｍｅｒ ｏｆ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３ｒｄ ｅｄ．Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．：Ｓｉｎａｕｅｒ．ｐｐ．３０１－３０２）。

【0309】

「ノックアウト」または「ＫＯ」という用語は、本明細書では同じ意味で用いられ、対応する遺伝子産物（複数可）が活性型で合成されないか、または存在しないように特定の遺伝子（複数可）を破壊または欠失させる、遺伝子工学手法を指す。

【0310】

本明細書で使用される「Ｌｉｎｅａｇｅ陽性（Ｌｉｎ＋）」という用語は、成熟細胞系列マーカーを発現する全細胞の混合物を指す。残りの細胞は、系列陰性（Ｌｉｎ－）であり、これは、系列抗体で染色されないことを意味する。全てのステップ及び前駆細胞の活性は、Ｌｉｎ－集団内で同定された。

【0311】

「リンパ球共通抗原」またはＣＤ４５という用語は、全ての白血球で発現する受容体結合タンパク質チロシンホスファターゼを意味する。

【0312】

本明細書で使用される「リンパ球系列細胞」という用語は、骨髄造血幹細胞から分化した一般的なリンパ系前駆細胞（ＣＬＰ）に由来する全ての細胞を指す。これらには、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。

【0313】

「主要組織適合遺伝子複合体」及び「ＭＨＣ」という用語は、本明細書では、エピトープまたは抗原として既知の分子分画を示し、他の白血球または体細胞との白血球の相互作用を媒介する細胞表面分子を指すために使用される。ＭＨＣは、大きな遺伝子群にコードされ、クラスＩ、クラスＩＩ、及びクラスＩＩＩの３つのサブグループに編成することができる。ヒトでは、ＭＨＣ遺伝子複合体は、ＨＬＡ（「ヒト白血球抗原」）と呼ばれ、マウスでは、Ｈ－２（「組織適合性」の場合）と呼ばれる。双方の種は、３つの主要なＭＨＣクラスＩ遺伝子を有し、これは、ヒトでは、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃと呼ばれ、マウスでは、Ｈ２－Ｋ、Ｈ２－Ｄ、及びＨ２－Ｌと呼ばれる。これらは、それぞれのＭＨＣクラスＩタンパク質のα鎖をコードする。ＭＨＣクラスＩ分子の他のサブユニットは、β２－ミクログロブリンである。クラスＩＩ領域は、ヒトのＭＨＣクラスＩＩ分子ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＰ、及びＨＬＡ－ＤＱのα鎖及びβ鎖（Ａ及びＢと指定）の遺伝子を含む。また、ＭＨＣクラスＩＩ領域には、ＴＡＰ１：ＴＡＰ２ペプチドトランスポーターの遺伝子、プロテアソームサブユニットをコードするＰＳＭＢ（またはＬＭＰ）遺伝子、ＤＭα及びＢＭβ鎖（ＤＭＡ及びＤＭＢ）をコードする遺伝子、ＤＯ分子のα及びβ鎖（それぞれ、ＤＯＡ及びＤＯＢ）をコードする遺伝子、ならびにタパシンをコードする遺伝子（ＴＡＰＢＰ）がある。クラスＩＩ遺伝子は、免疫機能を持つ他の様々なタンパク質をコードする。ＭＨＣクラスＩＩ分子へのペプチド結合を触媒するＨＬＡ－ＤＭ分子のサブユニットをコードするＤＭＡ及びＤＭＢ遺伝子は、調節ＨＬＡ－ＤＯ分子のサブユニットをコードするＤＯＡ及びＤＯＢ遺伝子と同様に、ＭＨＣクラスＩＩ遺伝子に関連する。Ｊａｎｅｗａｙｓ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．９ｔｈ ｅｄ．，ＧＳ，Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ Ｇｒｏｕｐ，２０１７．ｐｐｓ．２３２－２３３。

【0314】

本明細書で使用される略語「ＭＡＰＫ」は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達を指し、これは、ＭＡＰＫキナーゼ（ＭＡＰ３Ｋ）で３層カスケードを活性化し、これにより、ＭＡＰＡＫキナーゼ（ＭＡＰ２Ｋ）が活性化され、最後にＭＡＰＫが活性化される。ＭＡＰＫは、細胞外刺激を広範囲の細胞応答に変換するタンパク質Ｓｅｒ／Ｔｈｒキナーゼである。（Ｃａｒｇｎｅｌｌｏ，Ｍ．ａｎｄ Ｒｏｕｘ，ＰＰ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２０１１）７５（１）：５０－８３）。炎症性疾患に関与する主要なＭＡＰＫ経路は、細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ｐ３８ ＭＡＰＫ、及びｃ－Ｊｕｎ ＮＨ２末端キナーゼ（ＪＮＫ）である。上流のキナーゼは、ＴＧＦβ活性化キナーゼ１（ＴＡＫ１）及びアポトーシスシグナル調節キナーゼ１（ＡＳＫ１）を含む。ｐ３８ ＭＡＰＫの下流は、ＭＡＰＫ活性化プロテインキナーゼ２（ＭＡＰＫＡＰＫ２またはＭＫ２）である。（Ｂａｒｎｅｓ，ＰＪ（２０１６）Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｓ．６８：７８８－８１５の図１１を参照のこと）。

【0315】

本明細書で使用される「マトリックスメタロプロテイナーゼ」という用語は、細胞外マトリックス構成成分の分解及びリモデリングに関与する亜鉛依存性プロテアーゼのコレクションを指す（Ｇｕｉｏｔ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｌｕｎｇ（２０１７）１９５（３）：２７３－２８０，Ｏｉｋｏｎｏｍｉｄｉ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２００９；１６（１０）：１２１４－１２２８を引用）。例えば、ＭＭＰ２遺伝子は、マトリックスメタロペプチダーゼ２を作成するための指示を提供する。この酵素は、体全体の細胞で生成され、細胞間の空間に形成されるタンパク質及び他の分子の複雑な格子である細胞外マトリックスの一部になる。ＭＭＰ－２の主な既知の機能の１つは、基底膜の主要な構造成分であるＩＶ型コラーゲンを切断することである。基底膜は、細胞外マトリックスの一部として細胞を分離及び支持する薄いシート状の構造である。

【0316】

本明細書で使用される「模倣物」という用語は、親化合物または物質に化学的に類似し、親化合物または物質の少なくともある程度の所望の機能を保持する化合物または物質を指す。「模倣物」という用語は、ペプチドの機能を模倣する化学部分を含有する化学物質を指す「模倣物」と互換的に使用される。例えば、ペプチドが機能的活性を有する２つの荷電化学部分を含有する場合、模倣物は、２つの荷電化学部分を空間配向及び拘束構造に配置し、従って、荷電化学機能が、３次元空間で維持される。

【0317】

本明細書で使用される「改変する」または「調節する」という用語は、特定の尺度または比率に調節、変更、適応、または調整することを意味する。本明細書において細胞型の文脈で使用される「改変された」または「調節された」という用語は、細胞型の形態または特徴を変更することを指す。

【0318】

「骨髄系列細胞」という用語は、骨髄の造血幹細胞に由来する一般的な骨髄前駆細胞（ＣＭＰ）から分化した子孫である顆粒球及び単球を総称して指す。骨髄細胞のいずれかの系列へのコミットメントは、特定のコロニー刺激因子に応答した、別個の転写因子とそれに続く最終分化及び血液循環への放出により調節される。［Ｋａｗａｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｍｉｎａｔｏ，Ｎ．Ｉｎｔｌ Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００４）３６（８）：１３７４－７０］。

【0319】

本明細書で使用される「骨髄破壊的療法」という用語は、がん細胞を含む、骨髄で生存する細胞を死滅させるために使用される治療レジメン（例えば、大量化学療法または高線量照射）を指し、これは、骨髄中の正常な造血細胞数を低下させ、これにより、赤血球、白血球、及び血小板の低下がもたらされる。本明細書で使用される「非骨髄破壊的」という用語は、レシピエントの骨髄を破壊することなく、ドナー骨髄幹細胞の拒絶を防ぐために限られた量の化学療法が施行される移植前のコンディショニングレジメンを指す。

【0320】

本明細書で使用される「骨髄抑制」という用語は、骨髄活性が減少し、それにより、赤血球、白血球、及び血小板の低下がもたらされる状態を指す。骨髄抑制が重度の場合、それは、骨髄破壊と呼ばれる。骨髄抑制は、周期性造血細胞のアポトーシスだけでなく、骨髄の血管系の破壊にもつながる。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“Ｔｈｅ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｉｃｈｅ：Ｈｏｍｅ ｏｆ ＨＳＣ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

【0321】

本明細書で使用される「中和抗体」という用語は、その標的の生物学的活性を低下させる抗体を指す。本明細書で使用される「非中和抗体」という用語は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの中和活性が低いかまたは中和活性がない機能的抗体を指す。非中和結合抗体は、限定はされないが、タンパク質に結合して立体的にその活性を阻害することなどを含む、複数の異なる方法で機能する。

【0322】

本明細書で使用される略語「ＮＦκＢ」は、前炎症性転写因子であるものを指す。それは、サイトカイン、ケモカイン、プロテアーゼ、及びアポトーシス阻害剤を含む複数の炎症遺伝子のスイッチをオンにし、炎症性応答の増幅がもたらされる（Ｂａｒｎｅｓ，ＰＪ，（２０１６）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．６８：７８８－８１５）。ＮＦ－κＢの活性化に関与する分子経路は、いくつかのキナーゼを含む。炎症性刺激及び感染がＮＦ－κＢシグナル伝達を活性化する典型的な（標準的な）経路は、ＩＫＫ（κＢキナーゼの阻害剤）複合体を含み、これは、２つの触媒サブユニット、ＩＫＫ－α及びＩＫＫ－β、ならびに調節サブユニットＩＫＫ－γ（またはＮＦκＢ必須モジュレーターで構成される。（同上。Ｈａｙｄｅｎ，ＭＳ ａｎｄ Ｇｈｏｓｈ，Ｓ（２０１２）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．２６：２０３－２３４を引用）。ＩＫＫ複合体は、Ｎｆ－κＢ結合ＩκＢ（プロテアソームによる分解のためにそれらを標的とし、それにより、ｐ６５及びｐ５０サブユニットで構成されるＮｆ－κＢ二量体を放出する）をリン酸化し、これは、核に移行し、それらは、プロモーター領域ｏ炎症性及び免疫遺伝子のκＢ認識部位に結合し、これにより、転写活性化がもたらされる（図１２）。この応答は、主に、ＩκＢリン酸化を実行する触媒サブユニットＩＫＫ－β（ＩＫＫ２としても既知）に依存する。非標準（代替）経路は、ＴＮＦファミリーの特定のメンバー、例えば、リンホトキシンβに応答して、ＩＫＫ－αホモ二量体をリン酸化してＲｅｌＢを放出させ、ｐ１００～ｐ５２を処理する上流キナーゼＮＦ－κＢ誘導性キナーゼ（ＮＩＫ）を含む（同上、Ｓｕｎ，ＳＣ．（２０１２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２４６：１２５－１４０を引用）。この経路は、様々な遺伝子セットのスイッチをオンにし、標準的な経路とは異なる免疫機能を媒介し得る。ドミナントネガティブＩＫＫ－βは、ＮＦ－κＢの前炎症性機能のほとんどを阻害するが、ＩＫＫ－αを阻害することは、限られた刺激に応答して、及びＢリンパ球などの特定の細胞でのみ役割を果たす。非標準的な経路は、免疫系の発達及び適応免疫応答に関与する。樹状細胞及びマクロファージなどの抗原提示細胞で発現されるコアクチベータ分子ＣＤ４０は、リンパ球で発現されたＣＤ４０Ｌと相互作用する時、非標準経路を活性化する（同上、Ｌｏｍｂａｒｄｉ，Ｖ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｎｏｌ．１５１：１７９－８９を引用）。

【0323】

「核酸」という用語は、本明細書では、一本鎖または二本鎖形態のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドポリマーを指すために使用され、別途限定されない限り、天然に存在するヌクレオチドと同様の様式で一本鎖核酸（例えば、ペプチド核酸）にハイブリダイズするという点で天然ヌクレオチドの本質的な性質を有する既知のアナログを包含する。

【0324】

「ヌクレオチド」という用語は、本明細書では、複素環式塩基、糖、及び１つ以上のリン酸基からなる化学化合物を指すために使用される。最も一般的なヌクレオチドでは、塩基は、プリンまたはピリミジンの誘導体であり、糖は、ペントースデオキシリボースまたはリボースである。ヌクレオチドは、核酸を形成するために一体となった３つ以上の結合を有する核酸のモノマーである。ヌクレオチドは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ならびに、限定されないが、ＣｏＡ、ＦＡＤ、ＤＭＮ、ＮＡＤ、及びＮＡＤＰを含むいくつかの補因子の構造単位である。プリンは、アデニン（Ａ）、及びグアニン（Ｇ）を含み、ピリミジンは、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、及びウラシル（Ｕ）を含む。

【0325】

本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」という用語は、比較的短い（１３～２５ヌクレオチド）、未修飾の、または化学修飾した一本鎖ＤＮＡ分子を指す。

【0326】

本明細書で使用される「臓器」という用語は、細胞及び組織からなり、生物においていくつかの特定の機能を実施する分化した構造を指す。

【0327】

本明細書で使用される「器官型」という用語は、臓器または組織の種類の、典型的または特徴的なものを指す。

【0328】

本明細書で使用される「骨形成」という用語は、骨または骨性組織が形成されるプロセスを指す。骨組織は、明確な構造である骨に通常組織化された結合組織の剛性のある形態である。骨形成には２つの主要なモードがあり、これらの両方は、骨組織への既存の間葉組織の転換を含む。間葉組織の骨への直接変換は、膜内骨化と呼ばれる。本プロセスは、主に、頭蓋骨の骨で生じる。他の場合では、間葉細胞は、軟骨に分化し、これは、後に骨に置き換わる。軟骨中間体が形成され、骨細胞に置き換わるプロセスは、軟骨内骨化と呼ばれる。

【0329】

膜内骨化は、肩甲骨、頭蓋骨、及び亀の甲羅の扁平骨が形成される特徴的な方法である。膜内骨化では、骨は、線維性結合組織のシートを発達させる。頭蓋骨の膜内骨化中に、神経堤由来の間葉系細胞は増殖し、凝縮して緻密な小結節になる。これらの細胞のうち毛管に進展するものもあれば、形を変化させ骨芽細胞になり、骨前駆細胞になることがコミットされるものもある。骨芽細胞は、カルシウム塩に結合できるコラーゲン－プロテオグリカンマトリックスを分泌する。この結合により、プレボネ（ｐｒｅｂｏｎｅ）（類骨）マトリックスは、石灰化するようになる。ほとんどの場合、骨芽細胞は、分泌する類骨基質の層で石灰化の領域から分離される。時折、骨芽細胞は、石灰化したマトリックスに閉じ込められ、骨細胞になる。石灰化が進む時、骨化が始まった領域から骨の棘が放射状に広がり、石灰化した棘の全領域が、骨膜を形成する緻密な間葉細胞に囲まれ、骨膜の内面の細胞も骨芽細胞になり、既存の針骨のものと平行した類骨基質を沈着させる。このように、骨の多くの層が形成される。

【0330】

膜内骨化は、間葉帯への毛細血管の侵入、ならびに間葉細胞の成熟骨芽細胞への出現及び分化を特徴とし、これは、骨基質を構成的に沈着させ、骨の棘状突起の形成をもたらし、これは、成長及び発達して、最終的に他の棘状突起と融合して小柱を形成する。小柱のサイズ及び数が増えるにつれて、それらは相互接続されて織骨（骨細胞の割合が高い無秩序な弱い構造）を形成し、最終的にはより組織化された、より強い、層状の骨に置き換わる。

【0331】

膜内骨化の分子機序は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）及びＣＢＦＡ１と呼ばれる転写因子の活性化を含む。頭の表皮由来の骨形成タンパク質、例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、及びＢＭＰ７は、神経堤由来の間葉系細胞が直接骨細胞になるように指示すると考えられる。ＢＭＰは、間葉系細胞のＣｂｆａ１遺伝子を活性化する。ＣＢＦＡ１転写因子は、間葉系細胞を骨芽細胞に変換することが知られている。マウスＣＢＦＡ１のｍＲＮＡは、主に骨を形成する間葉凝縮に限定されており、骨芽細胞系列に限定されることを、研究は示している。ＣＢＦＡ１は、オステオカルシン、オステオポンチン、及び他の骨特異的な細胞外マトリックスタンパク質の遺伝子を活性化することが知られている。

【0332】

軟骨内骨化（ｅｎｄｏｃｈｏｎｄｒａｌ Ｏｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（軟骨内骨化（Ｉｎｔｒａｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ Ｏｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ））。凝集した間葉系細胞からの軟骨組織のｉｎ ｖｉｖｏ形成を含む軟骨内骨化、及びその後の、骨による軟骨組織の置換は、５つの段階に分けることができる。脊柱、骨盤、及び四肢の骨格構成要素は、最初に軟骨で形成され、後で骨になる。

【0333】

まず、間葉系細胞は、軟骨細胞になることがコミットされる。このコミットメントは、近くの中胚葉細胞に２つの転写因子、Ｐａｘ１及びＳｃｌｅｒａｘｉｓを発現させるパラクリン因子により引き起こされる。これらの転写因子は、軟骨特異的遺伝子を活性化することが知られている。例えば、Ｓｃｌｅｒａｘｉｓは、硬節からの間充織、骨への軟骨前駆体を形成する顔面間葉、及び四肢の間葉で発現される。

【0334】

軟骨内骨化の第２段階では、コミットされた間葉細胞が凝縮して緻密な小結節になり、軟骨細胞（主にコラーゲン及びプロテオグリカンからなる軟骨基質を生成及び維持する軟骨細胞）に分化する。Ｎ－カドヘリンが、これらの凝縮の開始に重要であり、Ｎ－ＣＡＭが、それらを維持するために重要であることを、研究は示している。ヒトでは、ＤＮＡ結合タンパク質をコードするＳＯＸ９遺伝子は、軟骨前凝縮で発現される。

【0335】

軟骨内骨化の第３段階では、軟骨細胞が急速に増殖して骨のモデルを形成する。それらが分裂するにつれて、軟骨細胞は、軟骨特異的な細胞外マトリックスを分泌する。

【0336】

第４段階では、軟骨細胞は、分裂を停止し、体積を劇的に増加させて、肥大型軟骨細胞になる。これらの大きな軟骨細胞は、（コラーゲンＸ及びより多くのフィブロネクチンを追加することにより）生成するマトリックスを変化させて、炭酸カルシウムでミネラル化されるようにする。

【0337】

第５段階は、血管による軟骨モデルへの侵入を含む。肥大型軟骨細胞は、アポトーシスによって死滅し、この空間が骨髄になる。軟骨細胞が死滅する時、軟骨モデルを取り囲んでいた細胞のグループが、骨芽細胞に分化し、これにより、部分的に分解された軟骨上に骨基質が形成し始める。最終的に、全ての軟骨が、骨に置き換えられる。従って、軟骨組織は、続く骨のモデルとして機能する。

【0338】

軟骨細胞の骨細胞による置換は、細胞外マトリックスのミネラル化に依存している。好気性呼吸から嫌気性呼吸への最初の切り替えを含む多くのイベントは、軟骨細胞の肥大及びミネラル化につながる。これにより、細胞代謝及びミトコンドリアのエネルギーポテンシャルが変化する。肥大軟骨細胞は、細胞外マトリックスに多数の小さな膜結合小胞を分泌する。これらの小胞は、カルシウムイオン及びリン酸イオンの生成に活性があり、軟骨基質内でミネラル化プロセスを開始する酵素を含有する。肥大型軟骨細胞、それらの代謝及びミトコンドリア膜は変化し、次に、アポトーシスにより死滅する。

【0339】

多くの哺乳類（ヒトを含む）の長骨では、軟骨内骨化は、骨の中心から両方向に外側に広がる。骨化前線が軟骨モデルの端に近づくにつれて、骨化前線の近くの軟骨細胞が肥大する前に増殖し、骨の軟骨端を押し出す。長骨の端の軟骨領域は、骨端成長板と呼ばれる。これらのプレートは、３つの領域：軟骨細胞増殖の領域、成熟軟骨細胞の領域、及び肥大型軟骨細胞の領域を含有する。内側の軟骨肥大及び骨化前線がさらに外側に伸びるにつれて、骨端成長板に残っている軟骨が増殖する。骨端成長板が軟骨細胞を生成できる限り、骨は、成長し続ける。

【0340】

本明細書で使用される「骨減少症」という用語は、骨粗鬆症よりも重症度が低い骨量の減少を指す。それは、骨密度測定で、－１～－２．５のＴスコアとして定義される。

【0341】

本明細書で使用される「骨粗鬆症」という用語は、骨密度の低下を指し、骨は、より多孔性で壊れやすくなり、骨折のリスクが高まる。これは、－２．５以下のＴスコアとして定義される。

【0342】

ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／／ｍＴＯＲシグナル伝達経路。ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴｏｒ経路の概略図を図１に示す。

【0343】

ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔ及び哺乳類のラパマイシン標的（ｍＴｏｒ）シグナル伝達経路は、細胞増殖及び生存の多くの状況に非常に重要なものである。（Ｐｏｒｔａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＰＩ２Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ （２０１４）ｄｏｉ．１０．３３８９／ｆｐｍｃ．２０１４．０００６４）。これらは、相互に関連しているため、単一の経路と見なされる場合があり、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）の経路を含む多くの他の経路と強く相互作用する。

【0344】

ＰＩ３Ｋは、イノシトールリン脂質のイノシトール環３’－ＯＨ基をリン酸化する能力を特徴とする脂質キナーゼファミリーを構成する。（同上、Ｆｒｕｍａｎ，ＤＡ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ ｋｉｎａｓｅｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９８）６７：４８１－５０７を引用）。クラスＩ ＰＩ３Ｋは、触媒（ＣＡＴ）サブユニット（すなわち、ｐ１１０）及びアダプター／調節サブユニット（すなわち、ｐ８５）で構成されるヘテロ二量体である。このクラスはさらに、２つのサブクラス、すなわち、タンパク質チロシンキナーゼ活性を伴う受容体によって活性化されるサブクラスＩＡ（ＰＩ３Ｋα、β、及びδ）、及びＧタンパク質と結合した受容体によって活性化されるサブクラスＩＢ（ＰＩ３Ｋγ）に分けられる（同上、Ｆｒｕｍａｎ，ＤＡ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ ｋｉｎａｓｅｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９８）６７：４８１－５０７を引用）。

【0345】

成長因子受容タンパク質チロシンキナーゼの活性化によって、チロシン残基の自己リン酸化がもたらされる。次にＰ１３Ｋは、アダプターサブユニットの２つのＳＨ２ドメインのうち１つを介して、成長因子受容体もしくはアダプターのホスホチロシンコンセンサス残基に直接結合することによって細胞膜に動員される。これにより、ＣＡＴサブユニットのアロステリックな活性化がもらたされる。ＰＩ３Ｋの活性化により、基質ホスファチジルイノシトール－４，４－二リン酸（ＰＩ－４，５－Ｐ２）からの二次メッセンジャーホスファチジルイノシトール－４，４－二リン酸（ＰＩ３，４，５－Ｐ３）の産生がもたらされる。次に、ＰＩ３，４，５－Ｐ３は、プロテインセリン／スレオニンキナーゼ－３’ホスホイノシチド依存性キナーゼＩ（ＰＤＫ１）及びＡｋｔ／プロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ）を含むプレクストリン相同（ＰＨ）ドメインを含むシグナル伝達タンパク質のサブセットを細胞膜に動員する（同上、Ｆｒｕｍａｎ，ＤＡ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ ｋｉｎａｓｅｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９８）６７：４８１－５０７，Ｆｒｅｓｎｏ－Ｖａｒａ，ＪＡ，ｅｔ ａｌ．，ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．（２００４）３０：１９３－２０４を引用）。Ａｋｔ／ＰＫＢは、それ自体で、細胞生存及び細胞周期の進行に関与するいくつかの細胞プロセスを調節する。

【0346】

Ａｋｔ。Ａｋｔ（プロテインキナーゼＢとしても知られている）は、６０ｋＤａのセリン／スレオニンキナーゼである。これは、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様成長因子及び神経成長因子など、チロシンキナーゼ受容体の刺激に応答して活性化される（Ｓｈｉｍａｍｕｒａ，Ｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１４：１４２７－１４３４，２００３；Ｄａｔｔａ Ｋ，Ｆｒａｎｋｅ Ｔ Ｆ，Ｃｈａｎ Ｔ Ｏ，Ｍａｋｒｉｓ Ａ，Ｙａｎｇ Ｓ Ｉ，Ｋａｐｌａｎ Ｄ Ｒ，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ Ｄ Ｋ，Ｇｏｌｅｍｉｓ Ｅ Ａ，Ｔｓｉｃｈｌｉｓ Ｐ Ｎ，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １５：２３０４－２３１０，１９９５；Ｋｕｌｉｋ Ｇ，Ｋｌｉｐｐｅｌ Ａ，Ｗｅｂｅｒ Ｍ Ｊ，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １７：１５９５－１６０６，１９９７；Ｙａｏ Ｒ，Ｃｏｏｐｅｒ Ｇ Ｍ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６７：２００３－２００６，１９９５）。Ａｋｔの刺激は、ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ（ＰＩ３キナーゼ）活性に依存することが明らかとなっている（Ｆｒｕｍａｎ Ｄ Ａ，Ｍｅｙｅｒｓ Ｒ Ｅ，Ｃａｎｔｌｅｙ Ｌ Ｃ，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６７：４８１－５０７，１９９８；Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙ Ｇ Ｇ，Ｋａｒａｍｉｔｓｏｓ Ｃ，Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ Ｊ，Ｇｅｎｔｉｌｉｎｉ Ａ，Ｂａｒｄｇｅｔｔｅ Ｊ，Ａｂｂｏｕｄ Ｈ Ｅ，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２７３：Ｆ９３１－９３８，１９９７，Ｆｒａｎｋｅ Ｔ Ｆ，Ｙａｎｇ Ｓ Ｉ，Ｃｈａｎ Ｔ Ｏ，Ｄａｔｔａ Ｋ，Ｋａｚｌａｕｓｋａｓ Ａ，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ Ｄ Ｋ，Ｋａｐｌａｎ Ｄ Ｒ，Ｔｓｉｃｈｌｉｓ Ｐ Ｎ，Ｃｅｌｌ ８１：７２７－７３６，１９９５；Ｆｒａｎｋｅ Ｔ Ｆ，Ｋａｐｌａｎ Ｄ Ｒ，Ｃａｎｔｌｅｙ Ｌ Ｃ，Ｃｅｌｌ ８８：４３５－４３７，１９９７）。

【0347】

Ａｋｔは、複数の細胞株のアポトーシスから細胞を保護する生存シグナルのメディエーターとして作用することが明らかとなっている（Ｂｒｕｎｅｔ Ａ，Ｂｏｎｎｉ Ａ，Ｚｉｇｍｏｎｄ Ｍ Ｊ，Ｌｉｎ Ｍ Ｚ，Ｊｕｏ Ｐ，Ｈｕ Ｌ Ｓ， Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｍ Ｊ，Ａｒｄｅｎ Ｋ Ｃ，Ｂｌｅｎｉｓ Ｊ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ Ｍ Ｅ，Ｃｅｌｌ ９６：８５７－８６８，１９９９；Ｄｏｗｎｗａｒｄ Ｊ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １０：２６２－２６７，１９９８）。例えば、Ａｋｔによるアポトーシス促進Ｂａｄタンパク質のリン酸化が、Ｂａｄのアポトーシスタンパク質Ｂｃｌ－ＸＬへの結合を阻止してアポトーシスを低下させることが判明している（Ｄｕｄｅｋ Ｈ，Ｄａｔｔａ Ｓ Ｒ，Ｆｒａｎｋｅ Ｔ Ｆ，Ｂｉｒｎｂａｕｍ Ｍ Ｊ，Ｙａｏ Ｒ，Ｃｏｏｐｅｒ Ｇ Ｍ，Ｓｅｇａｌ Ｒ Ａ，Ｋａｐｌａｎ Ｄ Ｒ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ Ｍ Ｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：６６１－６６５，１９９７；Ｄａｔｔａ Ｓ Ｒ，Ｄｕｄｅｋ Ｈ，Ｔａｏ Ｘ，Ｍａｓｔｅｒｓ Ｓ，Ｆｕ Ｈ，Ｇｏｔｏｈ Ｙ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ Ｍ Ｅ，Ｃｅｌｌ ９１：２３１－２４１，１９９７）。Ａｋｔはまた、核因子ｋＢ（ＮＦ－ｋＢ）を活性化することで細胞生存を促進すること（Ｃａｒｄｏｎｅ Ｍ Ｈ，Ｒｏｙ Ｎ，Ｓｔｅｎｎｉｃｋｅ Ｈ Ｒ，Ｓａｌｖｅｓｅｎ Ｇ Ｓ，Ｆｒａｎｋｅ Ｔ Ｆ，Ｓｔａｎｂｒｉｄｇｅ Ｅ，Ｆｒｉｓｃｈ Ｓ，Ｒｅｅｄ Ｊ Ｃ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８２：１３１８－１３２１，１９９８；Ｋｈｗａｊａ Ａ，Ｎａｔｕｒｅ４０１：３３－３４，１９９９）、及び細胞死プロテアーゼカスパーゼ－９の活性を阻害すること（Ｋｅｎｎｅｄｙ Ｓ Ｇ，Ｋａｎｄｅｌ Ｅ Ｓ，Ｃｒｏｓｓ Ｔ Ｋ，Ｈａｙ Ｎ，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９：５８００－５８１０，１９９９）が明らかとなっている。

【0348】

ｍＴＯＲシグナル伝達経路。ｍＴＯＲシグナル伝達経路を図１Ａ及び図１Ｂに示す（Ｌａｐｌａｎｔｅ，Ｍ．，Ｓａｂａｔｉｎｉ，ＤＭ，Ｃｅｌｌ（２０１２）１４９（２）：２７４－２９３を引用）。機構的ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）は、２つの異なる複合体に存在する異型のセリン／スレオニンキナーゼである。１つ目の、ｍＴＯＲ複合体１（ｍＴＯＲＣ１）は、ｍＴＯＲ、Ｒａｐｔｏｒ、ＧβＬ、及びＤＥＰＴＯＲで構成され、かつラパマイシンによって阻害される。これは、成長因子、エネルギーレベル、細胞ストレス、及びアミノ酸を含む、多様な栄養情報及び環境情報を感知して、それらを統合する主要な成長調節因子である。これは、ｍＲＮＡ翻訳及び脂質合成などの同化作用プロセスを増強するか、またはオートファジーなどの異化作用プロセスを制限する基質をリン酸化することで、これらのシグナルを細胞成長の促進に結び付けている。低分子量ＧＴＰアーゼＲｈｅｂは、ＧＴＰ結合状態で、ｍＴＯＲＣ１キナーゼ活性の必要かつ強力な刺激因子であり、そのＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）である結節硬化ヘテロ二量体ＴＳＣ１／２によって負の調節を受ける。ＴＳＣ１及びＴＳＣ２は、腫瘍症候群ＴＳＣ（結節硬化複合体）で変異した腫瘍抑制遺伝子である。これらの遺伝子産物は、複合体（ＴＳＣ１－ＴＳＣ２（ハマルチン－ツベリン）複合体）を形成し、低分子量Ｇタンパク質Ｒｈｅｂ（脳に豊富に存在するＲａｓ相同体）に対するＧＡＰ活性を介して、ｍＴＯＲＣ１（哺乳類ラパマイシン標的タンパク質複合体１）の重要な負の調節因子となる。（Ｈｕａｎｇ，Ｊ．Ｍａｎｎｉｎｇ ＢＤ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．（２００８）４１２（２）：１７９－９０）。もとんどの上流の入力は、Ａｋｔ及びＴＳＣ１／２を介して注入され、Ｒｈｅｂのヌクレオチド負荷状態が調節される。対照的に、アミノ酸は、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ軸線とは独立してｍＴＯＲＣ１にシグナリングし、リソソーム表面へのｍＴＯＲＣ１の移行を促進し、そこで、Ｒｈｅｂと接触するとｍＴＯＲＣ１は活性化することができる。このプロセスは、Ｖ型ＡＴＰアーゼ、Ｒａｇｕｌａｔｏｒ、Ｒａｇ、ＧＴＰアーゼ、及びＧＡＴＯＲ１／２を含む複数の複合体の調整作用によって媒介される。２つ目のｍＴＯＲ複合体２（ｍＴＯＲＣ２）は、ｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ＧβＬ、Ｓｉｎ１、ＰＲＲ５／Ｐｒｏｔｏｒ－１及びＤＥＰＴＯＲで構成される。ｍＴＯＲＣ２は、Ａｋｔを活性化することによって細胞生存を促進し、ＰＫＣαを活性化することによって細胞骨格動態を調節し、かつＳＧＫ１のリン酸化を介して、イオン輸送及び成長を制御する。ｍＴＯＲシグナル伝達の異常は、多くの疾患状態に関与している。

【0349】

本明細書で使用される場合、「パラクリンシグナル伝達」という用語は、隣接する細胞に作用する分泌されたシグナル分子を介した短距離の細胞間コミュニケーションを指す。

【0350】

本明細書で使用される「病原体関連分子パターン」（ＰＡＭＰ）という用語は、自然免疫系の細胞により認識される病原体のグループに特異的に関連する分子を指す。

【0351】

本明細書で使用される「表現型」という用語は、細胞の観察可能な特性、例えば、タンパク質の発現を指す。

【0352】

「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書では、それらの最も広い意味で、サブユニットアミノ酸、アミノ酸アナログ、またはペプチド模倣物の配列を指すために使用される。記載された場合を除き、サブユニットは、ペプチド結合で連結されている。これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学アナログであるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーにも適用される。これらの用語はまた、限定されないが、グリコシル化、脂質付着、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマカルボキシル化、ヒドロキシル化、及びＡＤＰリボシル化を含む改変を含んでいる。よく知られているように、及び上記のように、ポリペプチドが完全に線状ではない場合があることは、理解されるであろう。例えば、ポリペプチドは、一般に、翻訳後イベントの結果として、自然なプロセシングによるものであれ、自然には起こらないヒトの操作でもたらされるイベントによるものであれ、ユビキチン化の結果として分岐されても、または、分岐の有無にかかわらず環状であってもよい。環状、分岐、及び分岐環状ポリペプチドは、完全に合成方法で合成されてもよい。

【0353】

「医薬組成物」という用語は、本明細書では、標的の状態または疾患を予防するか、強度を低減させるか、治癒するか、または他の方法で処置するために用いられる組成物を指すために使用される。「製剤」及び「組成物」という用語は、本明細書では、全ての活性及び不活性成分を含む、記載された本発明の製品を指すために互換的に使用される。

【0354】

「薬学的に許容される」という用語は、製剤または組成物の他の成分と適合性があり（通常の使用条件下で、組成物の有効性を実質的に低減する相互作用がないような方法で、互いに組み合わせることができることを意味する）、かつ、そのレシピエントに有害ではない担体、希釈剤、または賦形剤を指すために使用される。担体は、処置される対象への投与に適するようにするために、十分に高い純度及び十分に低い毒性のものでなければならない。担体は、さらに、活性剤の安定性及び生物学的利用能を維持しなければならない。例えば、「薬学的に許容される」という用語は、連邦もしくは州政府の規制機関により承認されているか、または、使用のために米国薬局方もしくは他の一般的に認められている薬局方に記載されることを意味し得る。

【0355】

分極能力。指向性の軸を特定することは、ほとんどの生細胞にとって必要不可欠である。個々に動く才能のレパートリーでは、細胞の前後を決定することは、細胞運動性を強化する機構を組織化するための必要条件である。従来の顕微鏡法を使用した単一の細胞の初期の観察で、細長い細胞の細胞形状が円形の細胞よりも分極しているとして分極が定義された。動く細胞の場合、移動の方向は、典型的に分極軸の方向であり、細胞の長軸として定義付けられている［Ｒａｐｐｅｌ，ＷＪ，Ｅｄｅｌｓｔｅｉｎ－Ｋｅｓｈｅｔ，Ｌ．，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｙｓｔ．Ｂｉｏｌ．（２０１７）３：４３－５３］。

【0356】

「プライマー」という用語は、ＤＮＡ鎖にハイブリダイズされると、適切な重合剤の存在下で伸長生成物の合成を開始することができる核酸を指す。プライマーは、ＤＮＡ鎖の特定の領域を独自にハイブリダイズするのに十分な長さである。プライマーはまた、ＲＮＡで、例えば、ｃＤＮＡの最初の鎖を合成するために使用することができる。

【0357】

本明細書で使用される「前駆細胞」という用語は、成長因子が加えられた培養皿中で骨髄細胞の懸濁液を成長させることにより単離され得る骨髄中の未成熟細胞を指す。前駆細胞は、血液細胞に成熟する前駆細胞に成熟する。前駆細胞は、コロニー形成単位（ＣＦＵ）またはコロニー形成細胞（ＣＦＣ）と呼ばれる。前駆細胞の特定の系列は、限定されないが、ＣＦＵ－Ｅ（赤血球）、ＣＦＵ－ＧＭ（顆粒球／マクロファージ）、及びＣＦＵ－ＧＥＭＭ（多能性造血前駆細胞）などの接尾辞で示される。

【0358】

本明細書で使用される「精製」という用語及びその様々な文法形式は、外来の、無関係な、または好ましくない要素を分離または除去するプロセスを指す。

【0359】

「定量的リアルタイム逆転写ＰＣＲ」または「リアルタイム定量的逆転写ＰＣＲ」（リアルタイムｑＲＴ－ＰＣＲ）という用語は、ＰＣＲプロセスの各サイクルの間に生成される生成物の信頼性の高い検出及び測定を可能にするＰＣＲ技法を指す。ＲＮＡは、出発物質として使用され、逆転写酵素によって相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に転写され、ｃＤＮＡは、定量ＰＣＲ反応のテンプレートとして使用される。

【0360】

本明細書で使用される「静止」という用語は、多くの場合、組織に存在する幹細胞を特性決定し、恒常性の間に組織を補充し得る休眠予備として、それらを機能させることを可能にする特性である。静止は、造血幹細胞（ＨＳＣ）の基本的な特徴であると考えられ、これは、多系列の分化及び自己複製の可能性を有し、血液系列内の全ての細胞型を生じさせることができる（Ｎａｋａｍｕｒａ－Ｉｓｃｈｉｚｕ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１４）１４１：４６５６－６６，Ｐｉｅｔｒａｓ，ＥＭ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２０１１）１９５：７０９－７２０を引用）。静止状態のＨＳＣの細胞周期の正確な調節は、幹細胞の消耗を最小限に抑えた成熟造血細胞の効果的な産生に必要とされる（同上、Ｏｒｆｏｒｄ，ＫＷ ａｎｄ Ｓｃａｄｄｅｎ，ＤＴ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．（２００８）９：１１５－１２８を引用）。増殖中の細胞が、遺伝子変異の影響をより受けやすく、ターンオーバーが最大（ヘイフリック限界として知られる限界）に達すると、老化するので、（同上、Ｈａｙｆｌｉｃｋ，Ｌ．ａｎｄ Ｍｏｏｒｈｅａｄ，ＰＳ，Ｅｘｐｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．，（１９６１）２５：５８５－６２１を引用）、静止は、おそらく、悪性形質転換及び機能不全からＨＳＣを保護する（同上、Ｗａｎｇ，ＪＣＹ ａｎｄ Ｄｉｃｋ，ＪＥ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００５）１５：４９４－５０１を引用）。炎症または失血などの様々なストレスに応答して誘導される細胞内因性及び外因性シグナルの両方により、静止状態のＨＳＣが細胞周期に再び入り、増殖及び分化することが可能になる（同上、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ＳＪ ａｎｄ Ｗｅｉｓｓｍａｎ，ＩＬ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９４）１：６６１－６７３；Ｓｕｄａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８３）８０：６６８９－９３を引用）。

【0361】

「参照配列」という用語は、配列比較の基準として使用される配列を指す。参照配列は、指定された配列のサブセットまたは全体であってよい。

【0362】

「再生」、「回復」、及び「若返らせる」という用語は、本明細書では同じ意味で用いられ、以前の若々しい機能的状態に戻すこと、再度新しくすることを指す。

【0363】

ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）または転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）は、内因性寄生核酸及び外因性病原核酸の両方の対する抵抗力を媒介し、タンパク質コード遺伝子の発現を調節する二本鎖ＲＮＡに対する保存生物学的応答である。それは、二本鎖ＲＮＡが相同ＲＮＡの分解を開始する天然のプロセスであり、研究者は、遺伝子発現を研究するためにこのプロセスを利用することが可能である。ＲＮＡｉ経路の簡略化されたモデルは、２つの工程に基づき、その工程のそれぞれは、ＲＮＡ分解酵素が関与する。最初の工程では、トリガーＲＮＡ（ｄｓＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ一次転写物）が、ＲＮアーゼＩＩ酵素Ｄｉｃｅｒ及びＤｒｏｓｈａによってプロセシングを受けて低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）となる。次の工程では、ｓｉＲＮＡが、エフェクター複合体であるＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）にロードされる。ｓｉＲＮＡは、ＲＩＳＣの組み立ての間に巻き戻され、一本鎖ＲＮＡは、ｍＲＮＡ標的とハイブリダイズする。遺伝子サイレンシングは、ＲＮアーゼＨ酵素Ａｒｇｏｎａｕｔｅ（スライサー）によって標的とされたｍＲＮＡが核酸分解された結果である。

【0364】

しかし、遺伝子サイレンシングは、標的とされたｍＲＮＡのｓｉＲＮＡ媒介性切断ではなく、翻訳阻害を介しても起こり得る。ｓｉＲＮＡ／ｍＲＮＡ二重鎖に不一致がある場合、ｍＲＮＡは、切断されず、このようなケースでは、特に高濃度のｓｉＲＮＡが存在する場合に直接的な翻訳阻害が起こる場合がある。この翻訳阻害のメカニズムは未知である。

【0365】

その結果、ｓｉＲＮＡは、転写抑制後の２つの異なるモードを誘発し得る。直接的な翻訳阻害に対する標的相補性の要件が標的ｍＲＮＡの切断に対するものよりも厳しくないため、後者のために設計されたｓｉＲＮＡは、別の遺伝子で意図せずに前者を誘発する可能性がある。従って、ある遺伝子に対して設計されたｓｉＲＮＡは、関連のない遺伝子のサイレンシングを誘発する可能性がある。

【0366】

ｓｈＲＮＡ（短ヘアピンＲＮＡ）配列は、延長された遺伝子サイレンシングの実現性を提供する。ｓｈＲＮＡは、通常、ＤＮＡベクターにコードされ、それにより、プラスミドトランスフェクションまたはウイルス形質導入を介して細胞に導入され得る。その設計に基づいてｓｈＲＮＡ分子は、主に、シンプルなステム－ループｓｈＲＮＡ及びｍｉｃｒｏＲＮＡ適合ｓｈＲＮＡの２つに分類される。シンプルなステム－ループｓｈＲＮＡは、多くの場合、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ（Ｐｏｌ ＩＩＩ）プロモーターの制御下で転写される［Ｂａｒｔｅｌ，ＤＰ，ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ：ｇｅｎｏｍｉｃｓ，ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ １１６（２）：２８１－２９７（２００４），Ｋｉｍ，Ｖ．Ｎ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ ｃｒｏｐｐｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｃｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６（５）：３７６－３８５ （２００５）］。５０～７０のヌクレオチド転写物が、主に一本鎖ＲＮＡ（ループ）領域及びジヌクレオチド３’オーバーハングによって架橋された二本鎖ＲＮＡ（ステム）の１９～２９ｂｐ領域からなるステム－ループ構造を形成する［Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ，Ｔ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ａ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｓｔａｂｌｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｈｏｒｔ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９６（５５６７）：５５０－５５３；Ｐａｄｄｉｓｏｎ，Ｐ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｓｔａｂｌｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ＲＮＡｉ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ．ＰＮＡＳ ９９（３）：１４４３－１４４８；Ｐａｕｌ，Ｃ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０（５）：５０５－５０８］。シンプルなステム－ループｓｈＲＮＡは、核に転写され、ｐｒｅ－ｍｉｃｒｏＲＮＡと類似するＲＮＡｉ経路に入る。より長い（２５０を超えるヌクレオチド）ｍｉｃｒｏＲＮＡ適合ｓｈＲＮＡは、天然のｐｒｉ－ｍｉｃｒｏＲＮＡ分子により詳細に似ているデザインであり、ｍｉｃｒｏＲＮＡのような不一致を含む可能性があるｓｈＲＮＡステム構造で構成され、ループによって架橋され、かつ５’及び３’内因性ｍｉｃｒｏＲＮＡ配列によって挟まれる［Ｓｉｌｖａ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｓｅｃｏｎｄ－ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｈＲＮＡ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ｃｏｖｅｒｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ３７（１１）：１２８１－１２８８．］。シンプルなステム－ループヘアピンのようなｍｉｃｒｏＲＮＡ適合ｓｈＲＮＡもまた、核に転写されるが、内因性のｐｒｉ－ｍｉｃｒｏＲＮＡと同様に早期にＲＮＡｉ経路に入ると考えられている。

【0367】

ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）及び低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の両方を含む「低分子干渉ＲＮＡ」という用語は、小型の非コードＲＮＡ分子であり、ＲＮＡ干渉において役割を果たす。ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを介して、一致するｍＲＮＡの二本鎖セグメントから合成され、ｓｉＲＮＡは、対応するｓｉＲＮＡと配列が同一のｍＲＮＡ分子の分解を調節し、それにより、対応する遺伝子のサイレンシング及びタンパク質合成の停止がもたらされる。ｓｉＲＮＡの主な作用機序は、ｍＲＮＡ切断機能である。ｓｉＲＮＡをコードする遺伝子は存在しない。ｓｉＲＮＡはまた、プロモーター遺伝子のメチル化及びクロマチン凝縮を誘導することによって、遺伝子発現を抑制することもできる。ｍｉＲＮＡは、ヘアピンターンを特徴とするＲＮＡ前駆体の不一致のセグメントから合成され、ｍｉＲＮＡは、特定のｍｉＲＮＡ遺伝子によって短ヘアピンｐｒｉ－ｍｉＲＮＡとして核にコードされる。ｍｉＲＮＡはまた、低分子非コードＲＮＡであるが、ｍｉＲＮＡの５’領域と標的の３’ＵＴＲとの間の７から８塩基対「シード」の一致のみを必要とするようである。ｍｉＲＮＡ標的の大部分は、翻訳抑制されるが、標的ｍＲＮＡの分解も発生し得る。ｍｉＲＮＡの主な作用機序は、ｍＲＮＡ翻訳の阻害であり得るが、ｍＲＮＡの切断もまた重要な役割である（Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．２００７；１２８（５）：８３０－３６）。

【0368】

本明細書で使用される「特異的にハイブリダイズする」という用語は、それによって、核酸が元々は核酸と対ではなかった核酸標的配列の少なくとも１つの鎖の相補的な領域と共にはっきりとまたはより確実に塩基対を形成するプロセスを指す。選択的にハイブリダイズした核酸は、厳密なハイブリダイゼーション条件下で、非標的核酸配列へのハイブリダイゼーションよりも検出可能な程度以上（例えば、少なくともバックグラウンドの２倍）に、かつ非標的核酸を実質的に排除するように、核酸配列の特定の核酸標的配列へのハイブリダイゼーションを受ける。選択的なハイブリダイゼーション配列は、通常、互いに、少なくとも約８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも１００％の配列同一性（すなわち、相補性）を有する。

【0369】

本明細書で使用される「スプライス部位バリアント」という用語は、タンパク質コード配列の変化をもたらし得るエクソン及びイントロン（スプライス部位）の境界で生じるＤＮＡ配列の遺伝的変化を指す。

【0370】

本明細書で使用される「定常状態」という用語は、損失率が利得率と等しい動的平衡状態を指す。

【0371】

本明細書で使用される「幹細胞」という用語は、複数の別個の細胞表現型への最終分化を受け得る娘細胞を生成し得る自己複製能力を有する高い増殖能を有する未分化細胞を指す。幹細胞は、２つの特徴で他の細胞型と区別される。まず、それらは、場合により、長期間の不活動後に、細胞分裂により自己を再生することが可能な未分化細胞である。次に、特定の生理学的または実験的条件下で、それらは、特別な機能を備えた組織または臓器に特異的な細胞になるように誘導することができる。腸及び骨髄などの一部の臓器では、幹細胞が定期的に分裂して、摩耗または損傷した組織を修復及び置き換える。しかし、膵臓及び心臓などの他の臓器では、幹細胞は、特別な条件下でのみ分裂する。

【0372】

成体（体性）幹細胞は、組織または臓器の分化した細胞の中に見られる未分化の細胞である。ｉｎ ｖｉｖｏでのそれらの主要な役割は、それらが見出される組織を維持及び修復することである。成体幹細胞は、脳、骨髄、末梢血、血管、骨格筋、皮膚、歯、胃腸管、肝臓、卵巣上皮、及び精巣を含む、多くの臓器及び組織で同定されている。成体幹細胞は、幹細胞ニッチとして既知の各組織の特定の領域に存在すると考えられ、それらは、より多くの細胞が組織を維持する通常の必要性により、または病気もしくは組織損傷により活性化されるまで、長期間静止（非分裂）したままであってよい。

【0373】

骨髄幹細胞。本明細書で使用される「骨髄幹細胞」という用語は、骨髄に由来する幹細胞を指し、ＨＳＣ及びＭＳＣを含む。骨髄の単核分画は、間質細胞、造血前駆体、及び内皮前駆体を含有する。

【0374】

末梢血幹細胞。本明細書で使用される「末梢血幹細胞」という用語は、末梢血に由来する幹細胞を指す。末梢血は、組織または臓器の分化細胞の中に見られる未分化細胞である成体（体細胞）幹細胞を収容する。末梢血幹細胞の例には、造血幹細胞、及び間葉系幹細胞が挙げられるが、これらに限定されない［Ｄｚｉｅｒｚａｋ Ｅ．ｅｔ ａｌ．，“Ｏｆ ｌｉｎｅａｇｅ ａｎｄ ｌｅｇａｃｙ：ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ”，Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．９（２）：１２９－１３６，（２００８）］。

【0375】

造血幹細胞。本明細書で使用される場合、「造血幹細胞」（骨髄及びリンパ系細胞（ＣＦＵ－Ｍ、Ｌ）のコロニー形成ユニット、またはＣＤ３４⁺細胞としても既知）という用語は、生涯にわたり血液細胞の継続的な産生に関与している造血臓器内のまれな多能性細胞である［Ｌｉ Ｙ．ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，Ｖｏｌ．２８（２３）：２５９６－２６１２，（２０１４）］。ＨＳＣは、赤血球、好中球、好塩基球、好酸球、血小板、肥満細胞、単球、組織マクロファージ、破骨細胞、ならびに、Ｔ及びＢリンパ球を含む、様々な細胞型を生成し得る。造血幹細胞の調節は、自己複製、生存及び増殖、系列の関与及び分化を含む複雑なプロセスであり、内因性細胞プログラミングならびに微小環境間質との接着相互作用及びサイトカインの作用などの外部刺激を含む多様な機序により調整される。

【0376】

造血幹細胞を特定の経路に沿って分化させる際には、種々のパラクリン因子（サイトカイン）が重要である。サイトカインは、いくつかの細胞型で作成することができるが、造血部位の間質（間葉系）細胞の細胞外マトリックスにより収集及び濃縮される。例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及び多系列成長因子ＩＬ－３は、双方ともに、骨髄間質のヘパラン硫酸グリコサミノグリカンに結合する。次に、細胞外マトリックスは、これらの因子を受容体に結合するのに十分に高い濃度で幹細胞に提示する［Ａｌｖａｒｅｚ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，“ＧＭ－ＣＳＦ ａｎｄ ＩＬ－３ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｌ ｌｉｖｅｒ ｇｒａｎｕｌｏｍａｓ ａｒｅ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｂｙ ｓｔｒｏｍａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｈｅｐａｒａｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ”，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．５９（３）：４３５－４４１，（１９９６）］。

【0377】

間葉系幹細胞。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）（骨髄間葉系幹細胞または骨格幹細胞としても既知）は、様々な組織に見られる非血液の成人幹細胞である。それらは、以下を特徴とする：紡錘形の形態学的、細胞表面上の特定のマーカーの発現、ならびに適切な条件下で、最低３つの系列（骨形成、軟骨形成、及び脂肪生成）に沿って分化する能力［Ｎａｊａｒ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，“Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ：Ａ ｇａｔｈｅｒｉｎｇ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌｓ”，Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．１８（２）：１６０－１７１，（２０１６）］。ｉｎ ｖｉｖｏでＭＳＣを明確に描写する単一のマーカーは、ＭＳＣ表現型に関するコンセンサスがないので同定されていないが、ＭＳＣは細胞表面マーカーＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ９０、及びＣＤ４４に対して陽性であり、ＭＳＣは、代表的な造血抗原、例えば、ＣＤ４５、ＣＤ３４、及びＣＤ１４に陰性であることが一般的である。ＭＳＣの分化の可能性については、骨髄由来のＭＳＣの集団が、骨、軟骨、腱、筋肉、脂肪組織、及び間質をサポートする造血を含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方で最終分化した間葉系表現型に発達する能力を有することが研究で報告されている。トランスジェニック及びノックアウトマウス及びヒト筋骨格障害を使用した研究では、胚発生及び成体恒常性の間に、ＭＳＣが複数の系列に分化することが報告されている。［Ｎａｊａｒ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，“Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ：Ａ ｇａｔｈｅｒｉｎｇ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌｓ”，Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．１８（２）：１６０－１７１，（２０１６）］。

【0378】

Ｉｎ ｖｉｖｏプロセスを再現する適切な条件下でのＭＳＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ分化の分析は、幹細胞のコミットメントに不可欠な様々な要因の同定につながっている。それらの中で、分泌された分子及びそれらの受容体（例えば、トランスフォーミング成長因子－（β）、細胞外マトリックス分子（例えば、コラーゲン及びプロテオグリカン）、アクチン細胞骨格、ならびに細胞内転写因子（例えば、Ｃｂｆａｌ／Ｒｕｎｘ２、ＰＰＡＲｙ、Ｓｏｘ９、及びＭＥＦ２）は、多能性ＭＳＣの特定の系列へのコミットメントを引き起こすこと、ならびに、それらの分化した表現型を維持することに重要な役割を果たすことが示されている［Ｄａｖｉｓ Ｌ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，“Ｍｅｓｏｄｅｒｍａｌ ｆａｔｅ ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ ｏｆ ａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ：ｔｈｅ Ｗｎｔ ｓｗｉｔｃｈ”，Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．６５（１７）：２５６８－２５７４，（２００８）］。

【0379】

本明細書で使用される「幹細胞ニッチ」という用語は、成体幹細胞が存在する各組織の特定の領域を指し、それらは、より多くの細胞が組織を維持する通常の必要性により、または病気もしくは組織損傷により活性化されるまで、長期間静止（非分裂）したままであってよい。幹細胞ニッチの細胞は、幹細胞と相互作用して、幹細胞を維持するか、または幹細胞の分化を促進する。

【0380】

本明細書で使用される「幹細胞レスキュー」または「レスキュー移植」という用語は、高用量の抗がん剤または放射線療法による処置により破壊された造血幹細胞を置き換える方法を指す。これは通常、処置前に保存された患者自身の幹細胞を使用して行われる。幹細胞は、骨髄が回復し、健康な血球を生成するのを助ける。幹細胞レスキューは、より多くのがん細胞が死滅するように、より多くの化学療法または放射線療法が投与されることを可能にし得る。

【0381】

本明細書で使用される場合、特定の状態の処置について「必要とする対象」という表現は、その状態を有する対象、その状態を有すると診断された対象、またはその状態を発症するリスクがある対象である。いくつかの実施形態によると、そのような処置を「必要とする対象」という表現は、また、別途文脈及び使用法の表現により示されない限り、（ｉ）記載の発明の組成物を投与されることになる患者；（ｉｉ）記載の発明の組成物を受けている患者；または、（ｉｉｉ）記載の発明の組成物を少なくとも１つ受けた患者を指すために使用される。

【0382】

本明細書で使用される「懸濁液」という用語は、細かく分割された種が別の種と組み合わされ、前者が細かく分割されて混合されるので、急速に沈降しない分散液（混合物）を指す。

【0383】

本明細書で使用される「標的」という用語は、例えば、限定されないが、タンパク質、細胞、臓器、または核酸などの生物学的実体を指し、その活性は、外部刺激によって改変され得る。刺激の性質に応じて、標的に直接的な変化がなくても、または標的の立体配座変化が誘導されてもよい。

【0384】

本明細書で使用される場合、「治療薬」または「活性薬」という用語は、意図された治療効果に関与する記載された発明の組成物の成分、構成成分、または構成要素を指す。

【0385】

本明細書で使用される「治療構成成分」という用語は、あるパーセンテージの集団における特定の疾患症状の進行を排除、低減、または防止する治療上有効な投薬量（すなわち、投与の用量及び頻度）を指す。

【0386】

本明細書で使用される「治療効果」という用語は、処置の結果を指し、その結果は、望ましくかつ有益であると判断される。治療効果は、直接的または間接的に、疾患の症状の阻止、軽減、または排除を含んでもよい。治療効果は、直接的または間接的に、疾患症状の進行の阻止、軽減、または排除も含んでもよい。

【0387】

本明細書で使用される場合、「組織」という用語は、類似の細胞及びそれらを取り巻く細胞間物質の集合を指す。例えば、結合組織は、様々な種類の多数の細胞を含む繊維状及び粉砕された物質で形成された体の支持またはフレームワーク組織である。それは、間葉に由来し、これもまた、中胚葉に由来する。結合組織の種類は、疎性（ａｒｅｏｌａｒ）または疎性（ｌｏｏｓｅ）；脂肪；センス、規則的または不規則的な、白い繊維；弾性；粘液性；リンパ組織；軟骨；及び骨を含むが、これらに限定されない。

【0388】

トロンボスポンジン。トロンボスポンジン（ＴＳＰ）は、を含む、発症、炎症、血管新生、及び腫瘍形成を含む広範囲の生理学的及び病理学的プロセスの間に機能する５つのマトリックス細胞タンパク質のファミリーである（Ｄｕｑｕｅｔｔｅ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，“Ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｂｉｎｄ ｓｔｒｏｍａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ １ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ，”Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ．（２０１４）３７：１５－２４，下記を引用：Ａｄａｍｓ ＪＣ，Ｌａｗｌｅｒ Ｊ．Ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎｓ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．２０１１；３：ａ００９７１２）。それらは、一時的に細胞表面に結合し、そこでプロテオグリカン、インテグリン、ＣＤ３６、及びＣＤ４７を含む様々な膜タンパク質と相互作用する。（同上、Ａｄａｍｓ ＪＣ，Ｌａｗｌｅｒ Ｊ．Ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎｓ． Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．（２０１１）３：ａ００９７１２を引用）。これらの相互作用は変化するが、ＴＳＰは、組織発達及びリモデリングの間に細胞外マトリックス構造及び細胞表現型を調節する。例えば、ＴＳＰ－１は、内皮細胞において、ＣＤ３６と血管内皮成長因子受容体－２（ＶＥＧＦＲ－２）の会合を増加させる一方で、ＣＤ４７とＶＥＧＦＲ－２との会合を減少させる（同上、Ｋａｕｒ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＶＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＣＤ４７．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２０１０）２８５：３８９２３－３８９３２；Ｋａｚｅｒｏｕｎｉａｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｉｍｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｂｙ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１，ＣＤ３６，ａｎｄ ｓｐｌｅｅｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ．Ｂｌｏｏｄ．（２０１１）１１７：４６５８－４６６６を引用）。その結果、ＴＳＰ－１は、内皮細胞がＶＥＧＦに反応する方法の根本的な変化を調整する（同上、Ｋａｕｒ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＶＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＣＤ４７．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２０１０）２８５：３８９２３－３８９３２；Ｋａｚｅｒｏｕｎｉａｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｉｍｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｂｙ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１，ＣＤ３６，ａｎｄ ｓｐｌｅｅｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ．Ｂｌｏｏｄ．（２０１１）１１７：４６５８－４６６６；Ｃｈｕ，ＹＦ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ＶＥＧＦ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｖｉａ ＣＤ３６ ｂｙ ｒｅｃｒｕｉｔｉｎｇ ＳＨＰ－１ ｔｏ ＶＥＧＦＲ２ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．（２０１３）１２２：１８２２－１８３２を引用）。

【0389】

ＴＳＰ－１三量体の各サブユニットは、複数のドメイン、すなわち、アミノ及びカルボキシ端末球状ドメイン、プロコラーゲンと相同の配列領域（ＰＨＲ）、ならびに１型、２型、及び３型反復と呼ばれる、３つのタイプの反復配列モチーフで構成される（同上、Ｌａｗｌｅｒ Ｊ，Ｈｙｎｅｓ ＲＯ．Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ，ａｎ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃａｌｃｉｕｍ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ ａｎｄ ｈｏｍｏｌｏｇｉｅｓ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９８６）１０３：１６３５－１６４８を引用）。１型反復は、異なる構造モチーフとして、初めてＴＳＰ－１で同定されて以来、トロンボスポンジン反復またはＴＳＲと呼ばれている。（同上、Ｌａｗｌｅｒ Ｊ，Ｈｙｎｅｓ ＲＯ．Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ，ａｎ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃａｌｃｉｕｍ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ ａｎｄ ｈｏｍｏｌｏｇｉｅｓ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９８６）１０３：１６３５－１６４８；Ｔｕｃｋｅｒ ＲＰ．Ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｔｙｐｅ １ ｒｅｐｅａｔ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００４）３６：９６９－９７４を引用）。トロンボスポンジン遺伝子ファミリーの５つのメンバーは、それらの構造に基づいて２つのサブグループに分類することができる（Ｂｏｒｎｓｔｅｉｎ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ａ ｓｅｃｏｎｄ，ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｇｅｎｅ（Ｔｈｂｓ２）ｅｘｉｓｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｇｅｎｏｍｅ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９１）２６６：１２８２１－１２８２４１；Ｏｌｄｂｅｒｇ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，ＣＯＭＰ ｉｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９２）２６７：２２３４６－２２３５０２；Ｖｏｓ，ＨＬ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－３（Ｔｈｂｓ３），ａ ｎｅｗ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９２）２６７：１２１９２－１２１９６２；Ｌａｗｌｅｒ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．（１９９３ａ）３６：５０９－５１６；Ｌａｗｌｅｒ，Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－４，ａ ｎｅｗ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９９３ｂ）１２０：１０５９－１０６７；Ｅｆｉｍｏｖ，ＶＰ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－ｌｉｋｅ ｃｈａｉｎｓ ｏｆ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｒｅ ａｓｓｅｍｂｌｅｄ ｂｙ ａ ｆｉｖｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄ ａ－ｈｅｌｉｃａｌ ｂｕｎｄｌｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ２０ ａｎｄ ８３．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．（１９９４） ３４１：５４－５８；Ｎｅｗｔｏｎ，Ｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｏｕｓｅ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．（１９９４）２４：４３５－４３９）。ＴＳＰ－１及びＴＳＰ－２（サブグループＡ）は、前述の構造ドメインの完全なセットを有し、かつ三量体である。対照的に、サブグループＢのＴＳＰである、ＴＳＰ－３、及びＴＳＰ－４、ならびに軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質（ＣＯＭＰ）は、ＴＳＲ及びＰＨＲの両方を欠くが、別の２型反復を含有する（同上、Ｏｌｄｂｅｒｇ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９２）２６７：２２３４６－２２３５０２；Ｖｏｓ，ＨＬ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９２）２６７：１２１９２－１２１９６；Ｌａｗｌｅｒ，Ｊ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９９３ｂ）１２０：１０５９－１０６７を引用）。サブグループＢのタンパク質はまた、三量体ではなく五量体を形成するという点でサブグループＡのメンバーと異なる（同上、Ｖｏｓ，ＨＬ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９２）２６７：１２１９２－１２１９６；Ｅｆｉｍｏｖ，ＶＰ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．（１９９４）３４１：５４－５８を引用）。２型反復、３型反復、及びカルボキシ端末ドメインは、ＴＳＰの中で最も保存レベルが高く、まとめてシグネチャードメインとして知られている。ＴＳＰ－１及びＴＳＰ－２ならびにＣＯＭＰのシグネチャードメインの全てまたは一部の構造は、Ｘ線結晶構造解析によってこれまでに同定されており、Ｃ末端ドメインがβサンドイッチを形成し、かつ３型反復と２型反復の部分が、βサンドイッチの表面と密接に会合していることが明らかとなっている（同上、Ｋｖａｎｓａｋｕｌ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｒｅｖｅａｌｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｏｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｙｐｅ ３ ｒｅｐｅａｔｓ．ＥＭＢＯ Ｊ．（２００４）２３：１２２３－１２３３４；Ｃａｒｌｓｏｎ，ＣＢ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｌｃｉｕｍ－ｒｉｃｈ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－２．Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００５）１２：９１０－９１４；Ｔａｎ，Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｅｉｎ： ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃｏｌｌａｇｅｎ，ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ ａｎｄ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ．ＦＡＳＥＢ Ｊ．（２００９）２３：２４９０－２５０１を引用）。約３０個のカルシウムイオンの結合部位が、この構造に含まれる。これらの部位は、主に３型反復に位置し、折りたたまれて連続した一連のカルシウム結合部位を形成するが、２型反復及びＣ末端のβサンドイッチにもカルシウム結合部位が存在する。

【0390】

本明細書で使用される「移植」という用語及びその様々な文法的形態は、組織または臓器が、ヒトの体のある領域から別の領域へ、またはあるヒト（ドナー）から別のヒト（レシピエント）へ移動される外科処置を指す。

【0391】

本明細書で使用される「処置する」、「処置される」、または「処置すること」という用語は、治療的処置及び／または予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）もしくは予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方を指し、目的は、望ましくない生理学的状態、障害もしくは疾患を予防もしくは減速（軽減）すること、または有益なもしくは所望の臨床結果を得ることである。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果は、症状の軽減；状態、障害、または疾患の程度の減少；状態、障害、または疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しないこと）；状態、障害、または疾患の発症の遅延または進行の遅延；状態、障害、または疾患状態の改善；及び検出可能または検出不可能にかかわらない、寛解（部分的もしくは全体的にかかわらず）、または状態、障害、もしくは疾患の改善もしくは好転を含むが、これに限定されない。処置は、過剰なレベルの副作用なしに臨床的に有意な応答を誘発することを含む。処置は、処置を受けていない場合に予想される生存期間と比較して生存期間を延長することも含む。

【0392】

本明細書で使用される「Ｈ型血管」という用語は、高発現のＣＤ３１（ＣＤ３１^hi及びエンドムシン（ｅｍｃｎ^hi））を特徴とする血管を指し、これは、細動脈に繋がっており、骨前駆細胞に取り囲まれており、かつ骨形成を促進する因子を放出する。本明細書で使用される「Ｌ血管」という用語は、ＣＤ３１^loＥｍｃｎ^loである血管を指し、これは、ＢＭ洞様血管に相当し、細動脈接続及び骨前駆細胞会合を欠く［Ｋｕｓｕｍｂｅ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅｓ ｆｏｒ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１６）５３２（７５９９）：３８０－８４］．

【0393】

本明細書で使用される「脈管形成」という用語は、新しい血管形成のプロセスを指す。

【0394】

「体積／体積パーセント」という用語は、溶液中の物質の濃度の尺度である。これは、溶質の体積対溶液の総体積×１００の割合として表される。純粋な液体溶液を混合することにより溶液を調製する時はいつでも、体積パーセント（ｖｏｌ／ｖｏｌ％またはｖ／ｖ％）が使用されるべきである。

【0395】

略語「ＷＢＭ」は、全骨髄を表す。

【0396】

「重量パーセントによる重量」または重量／重量％という用語は、本明細書では、溶質の重量対溶液の総重量の割合を指すために使用される。

【0397】

本明細書で使用される場合、「野生型」、「天然に存在する」という用語、またはそれらの文法的同等物は、天然に見出され、対立遺伝子変異を含むアミノ酸配列またはヌクレオチド配列、つまり、通常は意図的に改変されていないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を指すことを意味する。従って、「天然に存在しない」、「合成の」、「組み換え」という用語、またはそれらの文法的同等物は、天然に見出されないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列、つまり、通常は意図的に改変されているアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を指すために互換的に使用される。組み換え核酸が作製され、宿主細胞または生物に再導入されると、それは非組み換え的に、すなわち、ｉｎ ｖｉｔｒｏ操作ではなく、宿主細胞のｉｎ ｖｉｖｏ細胞機序を使用して複製することになると理解される。ただし、そのような核酸は、一度組み換え的に産生されると、その後、非組み換え的に複製されるが、依然として、記載の発明のための組み換え体と考えられる。

【0398】

方法
一態様によると、記載された発明は、骨髄の造血微小環境における、血管完全性の悪化、造血幹細胞機能の低下またはそれらの両方を含む老化関連造血障害を含む老化した血液及び血管系を若返らせる方法を提供し、方法は、
アンジオクライン因子の阻害剤、スプライスバリアント、またはそれらのフラグメント、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を対象に投与することと、
必要に応じて、血液系を再生し、骨髄の造血再構成を促進するのに有効な治療量の多能性の自己再生造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植を含む幹細胞併用療法を施行することと、
必要に応じて、血液系を再生し、骨髄の造血再構成を促進するのに有効な治療量の内皮細胞（ＥＣ）の移植を含む血管内皮併用療法を施行することと、
骨髄の造血微小環境内の炎症を低減することと、骨髄の造血微小環境における血管完全性を維持することと、または造血区画における細胞型の頻度及び数を増加させて、多系列の再構成を行うことのうち１つ以上により、造血骨髄微小環境における造血回復を増強することと、を含む。

【0399】

いくつかの実施形態によると、骨髄微小環境は、造血幹細胞（ＨＳＣ）ニッチ、及び内皮マイクロニッチを含むＨＳＣ関連血管ニッチ、ならびに間葉細胞を含む血管周囲ニッチを含む造血微小環境を含む。

【0400】

いくつかの実施形態によると、骨髄（ＢＭ）微小環境は、ＢＭＥＣ、ＢＭ間質細胞、ＢＭ Ｌｅｐｒ＋細胞、及びＢＭ骨芽細胞を含む。いくつかの実施形態によると、ＢＭＥＣは、類洞及び細動脈ＢＭＥＣである。いくつかの実施形態によると、ＢＭＥＣの免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１＋ＶＥカドヘリン＋である。いくつかの実施形態によると、ＢＭ間質細胞の免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－である。いくつかの実施形態によると、ＢＭ間質集団内のＢＭ Ｌｅｐｒ＋細胞の免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－Ｌｅｐｒ＋である。いくつかの実施形態によると、マウスＨＳＣの免疫表現型は、ｌｉｎ－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ１１ｂ－ＧＲ１－Ｂ２２０－ＣＤ３－ＣＤ４１－ｃｋｉｔ＋ＳＣＡ１＋ＣＤ４８－ＣＤ１５０＋を含む。いくつかの実施形態によると、ヒトＨＳＣの免疫表現型は、系列－ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ３８－ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋を含む。

【0401】

いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣニッチは、造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血幹及び前駆細胞（ＨＰＳＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、及び造血前駆細胞サブセットのうちの１つ以上を含む。

【0402】

いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣニッチは細胞成分をさらに含む。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣニッチの細胞成分は、造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血前駆細胞（ＨＰＣ）、及びＨＳＣニッチの常在細胞を含む。いくつかの実施形態によれば、定常状態では、ＨＳＣはほとんど静止状態であるが、ＨＰＣは活発に増殖しており、毎日の造血に寄与している。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣニッチは、分泌因子及び膜結合因子を含む。いくつかの実施形態によれば、分泌因子及び膜因子は、ＨＳＣ及びＨＰＣ上の表面受容体に結合する。いくつかの実施形態によれば、表面受容体に結合する分泌因子及び膜結合因子はケモカインである。いくつかの実施形態によれば、分泌因子及び膜結合因子は、Ｗｎｔ、ＳＣＦ、Ｃｘｃｌ１２及びＪａｇｇｅｄ－１を含む。いくつかの実施形態によれば、アンジオクライン因子は、ＨＳＣ及びＨＰＣの自己複製及び分化のバランスをとるアンジオクラインシグナルを発生する。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣニッチの常在ニッチ細胞は、内皮及び血管周囲間質細胞を含む。

【0403】

いくつかの実施形態によれば、内皮微小ニッチは内皮細胞を含む。いくつかの実施形態によれば、内皮微小ニッチの内皮細胞は、骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄の造血微小環境の血管ニッチのＢＭＥＣは、活性化されると、アンジオクライン因子を産生する。いくつかの実施形態によれば、ＢＭＥＣによって産生されるアンジオクライン因子は、ＣＸＣＬ－１２、ＣＸＣＲ－４；骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）及び骨形成タンパク質４（ＢＭＰ４）、Ｅ－セレクチン、線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ１）線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ２）、インスリン増殖因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、ジャギド１（Ｊａｇ１）、ジャギド２（Ｊａｇｇｅｄ２）、インターロイキン７（ＩＬ－７）、ＩＬ３３、Ｎｏｇｇｉｎ、間質由来因子１（ＳＤＦ１）、ＳＥＭＡ－ＩＩＩ、テネイシンＣ、ＴＧＦ、トロンボスポンジン１（ＴＳＰ１）、または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）のうちの少なくとも１つを含む。

【0404】

いくつかの実施形態によれば、骨髄の造血微小環境の血管ニッチにおける脈管形成は、有効な細胞クロストークを生み出すＨＳＣとＢＭＥＣとの間の通信経路を含む。いくつかの実施形態によれば、通信経路は、ＳＤＦ－１－ＣＸＣＲ－４シグナル伝達、ＶＥＧＦシグナル伝達、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達、Ｈｅｄｇｅｈｏｇシグナル伝達、またはＷｎｔシグナル伝達のうちの１つ以上を含む。

【0405】

いくつかの実施形態によれば、内皮ニッチ中のＢＭＥＣ内で活性化された通信経路は、アンジオクライン因子の差次的産生をもたらす細胞クロストークのシステムを調整する。いくつかの実施形態によれば、脈管形成中に細胞クロストークを作り出すＨＳＣと内皮前駆細胞との間の通信経路は、ＳＤＦ－１（ＣＸＣＬ１２）－ＣＸＣＲ－４シグナル伝達；ＶＥＧＦシグナル伝達、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達、Ｈｅｄｇｅｈｏｇシグナル伝達、またはＷｎｔシグナル伝達のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態によれば、脈管形成中に細胞クロストークを作り出すＨＳＣと内皮前駆細胞との間の通信経路は、ＳＤＦ－１（ＣＸＣＬ１２）－ＣＸＣＲ－４シグナル伝達を含む。いくつかの実施形態によれば、脈管形成中に細胞クロストークを作り出すＨＳＣと内皮前駆細胞との間の通信経路は、ＶＥＧＦシグナル伝達を含む。いくつかの実施形態によれば、脈管形成中に細胞クロストークを作り出すＨＳＣと内皮前駆細胞との間の通信経路は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を含む。いくつかの実施形態によれば、脈管形成中に細胞クロストークを作り出すＨＳＣと内皮前駆細胞との間の通信経路は、Ｈｅｄｇｅｈｏｇシグナル伝達を含む。いくつかの実施形態によれば、脈管形成中に細胞クロストークを作り出すＨＳＣと内皮前駆細胞との間の通信経路は、Ｗｎｔシグナル伝達を含む。いくつかの実施形態によれば、造血微小環境は、骨芽細胞ニッチまたは骨内膜ニッチ及び骨芽細胞ニッチ関連血管ニッチを含む。いくつかの実施形態によれば、骨芽細胞ニッチまたは骨内膜ニッチは、細胞成分及び増殖因子を含む。

【0406】

いくつかの実施形態によれば、老化過程は自然老化である。いくつかの実施形態によれば、老化過程は生理的老化である。いくつかの実施形態によれば、対象はヒト対象である。いくつかの実施形態によれば、対象はマウスである。

【0407】

いくつかの実施形態によれば、造血微小環境の老化は、持続性炎症；幹細胞プールサイズの増加；ＨＳＣの骨髄バイアス分化、または骨髄ニッチの生着と再生の減少のうちの１つ以上を含む。

【0408】

いくつかの実施形態によれば、造血微小環境の老化は、持続性炎症を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄の造血微小環境における持続性炎症は血管炎症を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄の造血微小環境における持続性炎症は、ＢＭ間質細胞の炎症を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄の造血微小環境における持続性炎症は、造血細胞の炎症を含む。いくつかの実施形態によれば、持続性炎症は骨髄抑制性傷害に由来する。いくつかの実施形態によれば、骨髄抑制性傷害は、放射線、化学療法、またはその両方への曝露を含む。いくつかの実施形態によれば、放射線は、亜致死放射線、全身照射、または全リンパ節照射である。いくつかの実施形態によれば、骨髄抑制性傷害は化学療法を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄抑制性傷害は骨髄破壊的である。

【0409】

いくつかの実施形態によれば、造血微小環境の老化は、幹細胞プールサイズの増加を含む。いくつかの実施形態によれば、造血微小環境の老化は、ＨＳＣの骨髄バイアス分化を含む。

【0410】

いくつかの実施形態によれば、造血微小環境の老化は、老化した造血環境への移植後の骨髄ニッチの生着及び再生の減少を含む。いくつかの実施形態によれば、老化した造血環境への移植後の生着の減少は、骨髄細胞の産生に偏った造血再増殖を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄細胞の偏った産生は、リンパ球形成を犠牲にしている。

【0411】

いくつかの実施形態によれば、血管完全性の悪化は、血管透過性の増加を含む。いくつかの実施形態によれば、血管完全性の悪化は、内皮透過性の増加、内皮炎症の増加、またはその両方を含む。

【0412】

いくつかの実施形態によれば、ＢＭ造血微小環境のＨＳＣニッチにおける老化関連造血障害は、ＨＳＣ細胞型の増加、ＨＳＣプールサイズの変化、ＨＳＣの自己複製能の喪失；ＨＳＣ骨髄バイアス分化の増加、骨髄破壊的方針の失敗のリスクの増加；または移植後の生着の減少のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態によれば、ＢＭ造血微小環境のＨＳＣニッチにおける老化関連造血障害は、ＨＳＣ細胞型の増加を含む。いくつかの実施形態によれば、ＢＭ造血微小環境のＨＳＣニッチにおける老化関連造血障害は、ＨＳＣプールサイズの変化を含む。いくつかの実施形態によれば、ＢＭ造血微小環境のＨＳＣニッチにおける老化関連造血障害は、ＨＳＣ自己複製能の喪失を含む。いくつかの実施形態によれば、ＢＭ造血微小環境のＨＳＣニッチにおける老化関連造血障害は、ＨＳＣ骨髄バイアス分化の拡大を含む。いくつかの実施形態によれば、ＢＭ造血微小環境のＨＳＣニッチにおける老化関連造血障害は、骨髄破壊的方針の失敗のリスクの増加を含む。いくつかの実施形態によれば、ＢＭ造血微小環境のＨＳＣニッチにおける老化関連造血障害は、移植後の生着の減少を含む。

【0413】

いくつかの実施形態によれば、ＢＭ造血微小環境のＨＳＣ微小環境における老化関連造血障害は、ＨＳＣ静止状態の障害、ＨＳＣアポトーシスの増加、またはその両方を含む。いくつかの実施形態によれば、ＢＭ造血微小環境のＨＳＣ微小環境における老化関連造血障害は、ＨＳＣ静止状態の障害を含む。いくつかの実施形態によれば、ＢＭ造血微小環境のＨＳＣ微小環境における老化関連造血障害は、ＨＳＣアポトーシスの増加を含む。

【0414】

いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣの老化は、ｍＴＯＲの活性化、オートファジー依存の生存、ＤＮＡメチル化の調節不全、ヒストン修飾の障害、または細胞極性の乱れのうちの１つ以上を示す。いくつかの実施形態によれば、ｍＴＯＲの過剰活性化は、ＨＳＣを静止状態からより活性な細胞周期へと駆動する。

【0415】

いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＳＥＬＰ、ＮＥＯ１、ＪＡＭ２、ＳＬＡＭＦ１、ＰＬＳＣＲ２、ＣＬＵ、ＳＤＰＲ、ＦＹＢ、ＩＴＧＡ６のうちの１つ以上の上方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＳＥＬＰの上方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＮＥＯ１の上方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＪＡＭ２の上方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＳＬＡＭＦ１の上方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＰＬＳＣＲ２の上方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＣＬＵの上方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＳＤＰＲの上方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＦＹＢの上方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＩＴＧＡ６の上方調節を含む。

【0416】

いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＲＡＳＳＦ４、ＦＧＦ１１、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＨＳＰＡ１Ａ、またはＮＦＫＢＩＡのうちの１つ以上の下方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＲＡＳＳＦ４の下方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＦＧＦ１１の下方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＨＳＰＡ１Ｂの下方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＨＳＰＡ１Ａの下方調節を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＨＳＣでの老化に関連するＨＳＣ遺伝子発現における変化は、ＮＦＫＢ１Ａの下方調節を含む。

【0417】

ＳＥＬＰは、血小板の活性化及び脱顆粒中に細胞膜に再分布し、活性化された内皮細胞または血小板と白血球との相互作用を媒介するセレクチンＰをコードする遺伝子である。

【0418】

ＮＥＯ１は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである細胞表面タンパク質であるネオゲニン１をコードする遺伝子である。コードされたタンパク質は、細胞の増殖と分化、及び細胞間接着に関与している可能性がある。この遺伝子での欠損は、特定のがんでの細胞増殖に関連付けられる。選択的スプライシングにより、複数の転写バリアントが生じる。

【0419】

ＪＡＭ２は、接合部接着分子２をコードする遺伝子であり、免疫グロブリンスーパーファミリー及び接合部接着分子（ＪＡＭ）ファミリーに属する。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、上皮細胞と内皮細胞の両方の密着接合部に局在するＩ型膜タンパク質である。これは、様々な免疫細胞タイプと相互作用するための接着リガンドとして機能し、二次リンパ器官へのリンパ球ホーミングでの役割を果たす可能性がある。この遺伝子には、選択的スプライシングされた転写バリアントが見いだされている。

【0420】

ＳＬＡＭＦ１は、シグナル伝達リンパ球活性化分子ファミリーの自己リガンド受容体をコードする遺伝子である。ＳＬＡＭ受容体がホモまたはヘテロの細胞間相互作用によって誘導されると、多種多様な免疫細胞の活性化と分化を調節するため、自然免疫応答と適応免疫応答の両方の制御と相互接続に関与する。活性は、小さい細胞質アダプタータンパク質、ＳＨ２Ｄ１Ａ／ＳＡＰ及び／またはＳＨ２Ｄ１Ｂ／ＥＡＴ－２の有無によって制御される。

【0421】

ＰＬＳＣＲ２はリン脂質スクランブラーゼ２をコードする遺伝子であり、カルシウムイオンと結合すると、ＡＴＰ非依存性リン脂質の二重層間の双方向性移動の加速を媒介し得ることで、細胞膜でのリン脂質の非対称性の喪失がもたらされる。

【0422】

ＣＬＵは、あるストレス条件下では細胞サイトゾルにも見いだされ得る分泌型シャペロンであるクラスタリンをコードする遺伝子である。

【0423】

ＳＤＰＲは、カベオラ（ｃａｖｅｅｏｌａｅ）関連タンパク質１をコードする遺伝子であり、カルシウム非依存性リン脂質結合タンパク質であり、その発現は血清飢餓細胞で増加する。このタンパク質は、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）リン酸化の基質であり、ポリメラーゼＩと転写物放出因子（ＰＴＲＦ）をカベオラに補充する。

【0424】

ＦＹＢ（ＦＹＮ結合タンパク質１）は、Ｔ細胞中のＦＹＮタンパク質及びＬＣＰ２シグナル伝達カスケードのアダプターであるＦＹＮ結合タンパク質１をコードする遺伝子である。コードされたタンパク質は血小板の活性化に関与し、インターロイキン２の発現を制御する。この遺伝子には、異なるアイソフォームをコードする３つの転写バリアントが見いだされている。

【0425】

ＩＴＧＡ６は、タンパク質のインテグリンアルファ鎖ファミリーのメンバーであるインテグリンサブユニットアルファ６をコードする遺伝子である。インテグリンは、細胞表面の接着とシグナル伝達で機能するアルファ鎖とベータ鎖から構成されるヘテロ二量体の内在性膜タンパク質である。

【0426】

ＲＡＳＳＦ４は、潜在的な腫瘍抑制因子をコードする遺伝子であり、アポトーシス及び細胞周期停止を促進し得る。

【0427】

ＦＧＦ１１は、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーのメンバーをコードする遺伝子である。ＦＧＦファミリーのメンバーは、広範な分裂促進因子及び細胞生存の活性を有し、胚発生、細胞増殖、形態形成、組織修復、腫瘍増殖及び浸潤を含む様々な生物学的過程に関与する。この遺伝子の機能はまだ決定されていない。マウス相同体の発現パターンは、神経系の発達における役割を黙示する。選択的スプライシングにより、複数の転写バリアントが生じる。

【0428】

ＨＳＰＡ１Ｂ及びＨＳＰＡ１Ａは、ストレスからのプロテオームの保護、新たに合成されたポリペプチドのフォールディング及び輸送、ミスフォールドしたタンパク質のタンパク質分解の活性化、ならびにタンパク質複合体の形成及び解離を含む、多種多様な細胞の過程に関係付けられる分子シャペロンをコードする遺伝子である。それらは、熱ショックタンパク質７０ファミリーのメンバーである７０ｋＤａの熱ショックタンパク質をコードする。

【0429】

ＮＦＫＢＩＡは、核因子カッパＢサブユニット１をコードする遺伝子である。ＮＦ－カッパ－Ｂは、ほぼすべての細胞型に存在する多面的転写因子であり、炎症、免疫、分化、細胞増殖、腫瘍発生及びアポトーシスなどの多くの生物学的過程に関連する膨大な数の刺激によって開始される一連のシグナル伝達現象の終点である。ＮＦ－カッパ－Ｂは、Ｒｅｌ様ドメイン含有タンパク質ＲＥＬＡ／ｐ６５、ＲＥＬＢ、ＮＦＫＢ１／ｐ１０５、ＮＦＫＢ１／ｐ５０、ＲＥＬ及びＮＦＫＢ２／ｐ５２によって形成されるホモまたはヘテロ二量体の複合体であり、ヘテロ二量体ｐ６５－ｐ５０の複合体は、最も大量に存在するものであるように見える。二量体は、それらの標的遺伝子のＤＮＡ中のカッパＢ部位に結合し、個々の二量体は、識別可能な親和性と特異性で結合できる様々なカッパＢ部位に対して明確な優先度を有する。異なる二量体の組み合わせは、それぞれ転写活性化因子または抑制因子として機能する。

【0430】

いくつかの実施形態によれば、老化したＢＭＥＣを含有する老化した骨髄造血微小環境内の内皮微小環境の老化は、ｍＴＯＲシグナル伝達の減少、ｍＴＯＲサブユニットの存在量の減少、ｍＴＯＲ触媒サブユニットのリン酸化の減少、もしくはｍＴＯＲ転写標的遺伝子の発現の現象；またはｍＴＯＲ触媒サブユニットｍＴＯＲ複合体１及びｍＴＯＲ複合体２のタンパク質レベルの低下のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態によれば、老化した骨髄造血微小環境内の内皮微小環境の老化は、ｍＴＯＲシグナル伝達の減少を有するＢＭＥＣを含む。いくつかの実施形態によれば、ｍＴＯＲシグナル伝達の減少は、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ／ラパマイシン（ＰＩ３ｋ－ｍＴＯＲ）経路シグナル伝達のレベル低下；ＰＩ３ｋ－ｍＴＯＲサブユニット存在量のレベル低下；ｍＴＯＲ転写標的遺伝子の発現減少；またはｍＴＯＲサブユニットのタンパク質レベルの低下のうちの少なくとも１つを含む。

【0431】

いくつかの実施形態によれば、老化した骨髄造血微小環境内の内皮微小環境の老化は、ｍＴＯＲサブユニットの存在量の減少を有するＢＭＥＣを含む。

【0432】

いくつかの実施形態によれば、老化した骨髄造血微小環境内の内皮微小環境の老化は、ｍＴＯＲシグナル伝達が低下したＢＭＥＣの老化を含む。いくつかの実施形態によれば、ｍＴＯＲシグナル伝達のｍＴＯＲ触媒ユニットのリン酸化状態は、若い対象と比較して、高齢の対象のＢＭＥＣにおいて減少する。いくつかの実施形態によれば、老化したＢＭＥＣでのｍＴＯＲ下流の転写標的遺伝子の発現は、若いＢＭＥＣ対照と比較して減少する。いくつかの実施形態によれば、ｍＴＯＲ触媒サブユニットｍＴＯＲ複合体１及びｍＴＯＲ複合体２におけるタンパク質レベルは、高齢の対象では低下する。

【0433】

いくつかの実施形態によれば、ＢＭＥＣによるｍＴＯＲシグナル伝達の低下は、老化したＨＳＣでの老化に関連する機能障害を引き起こす。いくつかの実施形態によれば、老化に関連する機能障害は、造血細胞の総量での有意な増加、表現型ＬＴ－ＨＳＣの頻度の増加、有意な骨髄球系への分化偏向性；ＨＰＣ活性の低下；分極能の減少；二本鎖ＤＮＡ切断の増加；または老化対照と同様のＨＳＣ遺伝子発現における変化のうちの１つ以上を含む。

【0434】

いくつかの実施形態によれば、老化に関連する機能障害は、若い対照と比較して造血細胞の総量での有意な増加を含む。いくつかの実施形態によれば、老化に関連する機能障害は、若い対照と比較して、表現型ＬＴ－ＨＳＣの頻度の増加を含む。いくつかの実施形態によれば、老化に関連する機能障害は、若い対照と比較して有意な骨髄球系への分化偏向を含む。いくつかの実施形態によれば、老化に関連する機能障害は、若い対照と比較してＨＰＣ活性の低下を含む。いくつかの実施形態によれば、老化に関連する機能障害は、若い対照と比較して分極能の低下を含む。いくつかの実施形態によれば、老化に関連する機能障害は、若い対照と比較して、二本鎖ＤＮＡ切断の増加を含む。いくつかの実施形態によれば、老化に関連する機能障害は、若い対照と比較して、高齢の対照と同様のＨＳＣ遺伝子発現における変化を含む。

【0435】

いくつかの実施形態によれば、障害された（ｍＴＯＲ）シグナル伝達は、ＨＳＣの静止状態の喪失をもたらす。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣの静止状態の喪失は、ＨＳＣの一時的な増加につながる。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣの静止状態の喪失は、ＨＳＣの長期的な疲弊につながる。いくつかの実施形態によれば、障害されたｍＴＯＲシグナル伝達は、ＨＳＣの長期的な再増殖能の障害につながる。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣの長期的な再増殖能の障害は、長期的な生着能の低下を含む。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣの長期的な再増殖能の障害は、多系列再増殖能の低下を含む。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣの長期的な再増殖能の障害は、長期的な生着能の可能性の低下、多系列再増殖能の低下、及びＨＳＣの生着不全を含む。

【0436】

いくつかの実施形態によれば、若い対照と比較して、老化したＢＭＥＣでの遺伝子発現における変化によって表される上方調節された生物学的過程の上位は、ＴＳＰ１、ＳＴＡＴ３経路、ＴＧＦ－ｂシグナル伝達、ＩＧＦ－１シグナル伝達またはＨＭＧＢ１シグナル伝達による血管新生の阻害のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＢＭＥＣでの遺伝子発現における変化によって表される上方調節された生物学的過程の上位は、ＳＴＡＴ３経路シグナル伝達を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＢＭＥＣでの遺伝子発現における変化によって表される上方調節された生物学的過程の上位は、ＴＧＦ－ｂシグナル伝達を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＢＭＥＣでの遺伝子発現における変化によって表される上方調節された生物学的過程の上位は、ＩＧＦ－１シグナル伝達を含む。いくつかの実施形態によれば、老化したＢＭＥＣでの遺伝子発現における変化によって表される上方調節された生物学的過程の上位は、ＨＢＧＢ１シグナル伝達を含む。いくつかの実施形態によれば、ＳＴＡＴ３経路シグナル伝達、ＴＧＦ－ｂシグナル伝達、ＩＧＦ－１シグナル伝達及びＨＭＧＢ１シグナル伝達のそれぞれは、トロンボスポンジン１によって制御される。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１による血管新生の阻害は、若い対照と比較して、高齢の対照での遺伝子発現における変化によって表される上方調節された生物学的過程の上位である。

【0437】

いくつかの実施形態によれば、トロンボスポンジン１（ＴＳＰ１）の発現レベルは、若い対照の対象と比較した場合、老化したＢＭＥＣにおいて上方調節される。

【0438】

いくつかの実施形態によれば、老化したＢＭＥＣは、ｍＴＯＲシグナル伝達の障害を示す。いくつかの実施形態によれば、障害されたｍＴＯＲシグナル伝達は、若い対照と比較して、哺乳類のラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）の過剰活性化を含む。

【0439】

いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１活性は、血小板凝集及び抗血管新生の活性の制御を含む。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１は、巨核球を含む成熟造血細胞によって発現する。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１はＢＭＥＣによって発現する。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１活性は、血管ニッチにおける血小板凝集及び抗血管新生の活性の制御を含む。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１活性は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）への結合及び中和を含む。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１活性は、内皮微小ニッチにおけるＣＤ４７の関与及びＶＥＧＦ受容体２（ＶＥＧＦＲ２）シグナル伝達の遮断を含む。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１活性は、内皮微小ニッチにおける接着接触の不安定化を含む。

【0440】

いくつかの実施形態によれば、アンジオクライン阻害剤は、トロンボスポンジン１（ＴＳＰ１）の阻害剤である。いくつかの実施形態によれば、トロンボスポンジン１（ＴＳＰ１）の阻害は、老化した造血微小環境を若返らせる。いくつかの実施形態によれば、生着能は、高齢の対象でのＢＭＥＣにおけるＴＳＰ１の阻害によって増加する。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣ機能の系列構成は、高齢の対象でのＢＭＥＣにおけるＴＳＰ１の阻害によって増加する。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣ機能の生着能及び系列構成の両方は、高齢の対象でのＢＭＥＣにおけるＴＳＰ１の阻害によって増加する。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＣ生着能は、競合的移植アッセイでのＣＤ４５．２生着におけるパーセント変化を含む。

【0441】

いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、ＴＳＰ１に特異的な抗体、例えば、限定ではなく、αＴＳＰ１中和抗体クローン１［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３９８］；αＴＳＰ１中和抗体クローン２［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３８５］；Ｍｓ ＩｇＧ１ｋ ＩｇＧ対照［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１６－４７１４－８２］；αＴＳＰ中和抗体クローン３［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３７７］；及びＭｓ ＩｇＭ対照（ｘ軸）［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１４－４７５２－８２］の結合によるものである。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、ＴＳＰ１への非中和抗体の結合によるものである。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、ＴＳＰ１への中和抗体の結合によるものである。いくつかの実施形態によれば、中和抗体は、クローンＡ４．１（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＲＲＩＤ ＡＢ＿１０９８８６６９）として市販されている。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、注入によってＴＳＰ１に対する中和抗体（αＴＳＰ１）を投与することを含む。いくつかの実施形態によれば、１種（例えば、マウス）由来の可変領域及びもう１種（例えば、ヒト）由来の定常領域を有するキメラ免疫グロブリンは、１種由来の軽鎖及び重鎖の可変領域をコードするＤＮＡ配列を、異なる種由来の軽鎖及び重鎖のそれぞれの定常領域に連結することによって調製され得る。参照により本明細書に援用されている米国特許第５，８０７，７１５号に記載されている発現条件下で得られた遺伝子を哺乳類宿主細胞に導入することにより、マウス由来の可変領域の特異性とヒト由来の定常領域の生理学的機能を有するキメラ免疫グロブリンの産生がもたらされる。いくつかの実施形態によれば、完全ヒトモノクローナル抗体を産生することができる。１つのアプローチでは、通常の過免疫ＢＡＬＢ／ｃマウスから従来のマウスハイブリドーマを作製してから、抗体をコードする遺伝子を操作することで、定常領域はマウス由来ではなくヒトのものになる。さらなる改変は、マウス由来のＣＤＲ（相補性決定領域）のみを残して、マウス抗体のフレームワーク領域も「ヒト化」することである。それらのような抗体は、ヒトにおいて免疫応答をほとんど、またはまったく誘発しない。別のアプローチでは、いくつかの実施形態によれば、高度免疫不全ＮＳＧ（商標）マウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）をヒト免疫系で再構成し、過免疫することができる。そのようなマウスは、ヒト抗体を作製するマウスＢリンパ球を産生し、これを通常のマウス融合に使用して、ヒト抗体を作製するマウスハイブリドーマを得ることができる。

【0442】

遺伝子発現をノックダウンするための他の技術が知られている。これらは、ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡベースのＲＮＡｉ^1-4、アンチセンスオリゴヌクレオチド⁵、及びＣＲＩＳＰＲ／ＴＡＬＥＮ／ジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ^6-10ベースの遺伝子編集を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害剤は、インビトロ及びインビボの両方で遺伝子発現をノックダウンする核酸阻害剤である。

【0443】

いくつかの実施形態によれば、核酸阻害剤はｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態によれば、ｓｉＲＮＡを修飾してＲＮＡの安定性を高めることができる。いくつかの実施形態によれば、ｓｉＲＮＡは、その熱安定性を高めるためにＬＮＡ（商標）修飾ｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態によれば、核酸阻害剤はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、Ｗａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋ塩基対を介して配列特異的な方法で相補的なｍＲＮＡとハイブリダイズするデオキシリボヌクレオチド類似体の短鎖である。ＡＳＯ－ｍＲＮＡヘテロ二本鎖の形成は、ＲＮａｓｅ Ｈ活性を誘発することでｍＲＮＡを分解し、リボソーム活性の立体障害によって翻訳停止を誘導し、スプライシングを阻害することでｍＲＮＡの成熟を妨害するか、核内のプレｍＲＮＡを不安定化することで標的タンパク質発現を下方調節するかいずれかである。Ｃｈａｎ，Ｊ Ｈ，Ｗｏｎｇ，Ｌ Ｓ，“Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００６，３３（５－６）：５３３－４０。

【0444】

いくつかの実施形態によれば、アンチセンスオリゴヌクレオチドはＤＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、アンチセンスオリゴヌクレオチドはＲＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドは、その安定性及び半減期を増加させるためにホスホロチオエート修飾される。

【0445】

いくつかの実施形態によれば、核酸阻害剤はオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）デコイである。デコイオリゴヌクレオチドは、転写因子が着地する遺伝子のプロモーター領域の一部に見られる配列と同じ配列を有する、合成された短いＤＮＡ配列である。通常、転写因子が遺伝子のプロモーター領域に着地すると、遺伝子の転写のスイッチがオンになり、その遺伝子が発現する。ただし、デコイオリゴヌクレオチドはプロモーターの「ルアー」として働き、細胞内の特異的な転写因子と結合するため、転写因子がゲノムに着地できず、遺伝子発現が抑制される。

【0446】

いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、造血系の回復を促進する。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、対象の骨髄における造血系の回復を促進する。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、骨髄抑制性傷害を受けた対象の骨髄における造血系の回復を促進する。いくつかの実施形態によれば、骨髄抑制性傷害は、亜致死放射線、化学療法、またはその両方を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄抑制性傷害は、亜致死照射を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄抑制性傷害は、全身照射を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄抑制性傷害は、全リンパ節照射を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄抑制性傷害は化学療法を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄抑制性傷害は大量化学療法を含む。いくつかの実施形態によれば、骨髄抑制性傷害は、骨髄破壊的である。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、ＢＭ微小環境における炎症を軽減させる。

【0447】

いくつかの実施形態によれば、造血系の回復は、ＢＭ血管ニッチの血管再生を含む。いくつかの実施形態によれば、ＢＭ血管ニッチの血管再生は、ＢＭ血管ニッチの再生、ＢＭ血管ニッチの再安定化、またはその両方を確立するのに有効である。いくつかの実施形態によれば、造血系の回復は、ＢＭ血管ニッチの再安定化を含む。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、ＢＭ血管ニッチを再生する、ＢＭ血管ニッチを再安定化する、またはその両方に有効である。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、ＢＭ血管ニッチを再生するのに有効である。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、ＢＭ血管ニッチを再安定化するのに有効である。いくつかの実施形態によれば、対象の内皮微小ニッチにおけるＴＳＰ１の阻害は、ＢＭ血管ニッチの再生及びＢＭ血管ニッチの再安定化、またはその両方に有効である。

【0448】

いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、若い対照と比較して、高齢の対象のＢＭ造血微小環境におけるＨＳＣニッチ機能を増加させるのに有効である。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、若い対照と比較して、高齢の対象のＢＭ造血微小環境におけるＨＳＣ機能を回復するのに有効である。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、若い対照と比較して、高齢の対象のＢＭ造血微小環境におけるＨＳＣニッチの多系列能を回復するのに有効である。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、若い対照と比較して、高齢の対象のＢＭ造血微小環境における血管ニッチの血管完全性を回復するのに有効である。いくつかの実施形態によれば、ＴＳＰ１の阻害は、若い対照と比較して、高齢の対象のＢＭ造血微小環境におけるＨＳＣニッチの長期的な生着能を回復するのに有効である。

【0449】

別の態様によれば、記載された発明は、造血幹細胞移植のための造血幹細胞産物を調製する方法を提供し、この方法は、（ａ）造血幹細胞のエクスビボ培養物を調製することと、（ｂ）処理された造血幹細胞集団を形成する（ａ）の培養物に抗ＴＳＰ１抗体を含む抗体を投与することと、（ｃ）処理された造血幹細胞集団をインビトロで増やし、治療量の処理された造血幹細胞を含む造血幹細胞移植産物を形成することとを含み、造血幹細胞移植産物の生着能は、未処理の対照と比較して増強されている。いくつかの実施形態によれば、ステップ（ｂ）を投与することは、処理された造血幹細胞集団においてＴＳＰ１を阻害する。いくつかの実施形態によれば、ステップ（ａ）の造血幹細胞は、ヒト対象に由来する。いくつかの実施形態によれば、ステップ（ａ）の造血幹細胞は、マウス対象に由来する。いくつかの実施形態によれば、抗ＴＳＰ１抗体は中和抗体である。いくつかの実施形態によれば、抗ＴＳＰ１抗体は、ＣＤ３６、ＣＤ４７またはその両方に対する抗体、例えば、αＴＳＰ１中和抗体クローン１［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３９８］；αＴＳＰ１中和抗体クローン２［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３８５］；Ｍｓ ＩｇＧ１ｋ ＩｇＧ対照［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１６－４７１４－８２］；αＴＳＰ中和抗体クローン３［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３７７］；及びＭｓ ＩｇＭ対照（ｘ軸）［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１４－４７５２－８２］をさらに含む。いくつかの実施形態によれば、抗体はヒト化抗体である。いくつかの実施形態によれば、抗ＴＳＰ１中和抗体は、クローンＡ４．１（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＲＲＩＤ ＡＢ＿１０９８８６６９）として市販されている。いくつかの実施形態によれば、移植は自家移植である。いくつかの実施形態によれば、造血幹細胞移植は同種異系である。

【0450】

いくつかの実施形態によれば、記載された方法は、老化したＨＳＣニッチにおけるＨＳＣ機能を高めるのに有効である。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の方法は、老化したＨＳＣニッチにおけるＨＳＣ機能を未処理の老化対照と比較して、少なくとも１％まで、少なくとも２％まで、少なくとも３％まで、少なくとも４％まで、少なくとも５％まで、少なくとも６％まで、少なくとも７％まで、少なくとも８％まで、少なくとも９％まで、少なくとも１０％まで、少なくとも１１％まで、少なくとも１２％まで、少なくとも１３％まで、少なくとも１４％まで、少なくとも１５％まで、少なくとも１６％まで、少なくとも１７％まで、少なくとも１８％まで、少なくとも１９％まで、少なくとも２０％まで、少なくとも２１％まで、少なくとも２２％まで、少なくとも２３％まで、少なくとも２４％まで、少なくとも２５％まで、少なくとも２６％まで、少なくとも２７％まで、少なくとも２８％まで、少なくとも２９％まで、少なくとも３０％まで、少なくとも３１％まで、少なくとも３２％まで、少なくとも３３％まで、少なくとも３４％まで、少なくとも３５％まで、少なくとも３６％まで、少なくとも３７％まで、少なくとも３８％まで、少なくとも３９％まで、少なくとも４０％まで、少なくとも４１％まで、少なくとも４２％まで、少なくとも４３％まで、少なくとも４４％まで、少なくとも４５％まで、少なくとも４６％まで、少なくとも４７％まで、少なくとも４８％まで、少なくとも４９％まで、少なくとも５０％まで、％、少なくとも５１％まで、少なくとも５２％まで、少なくとも５３％まで、少なくとも５４％まで、少なくとも５５％まで、少なくとも５６％まで、少なくとも５７％まで、少なくとも５８％まで、少なくとも５９％まで、少なくとも６０％まで、少なくとも６１％まで、少なくとも６２％まで、少なくとも６３％まで、少なくとも６４％まで、少なくとも６５％まで、少なくとも６６％まで、少なくとも６７％まで、少なくとも６８％まで、少なくとも６９％まで、少なくとも７０％まで、少なくとも７１％まで、少なくとも７２％まで、少なくとも７３％まで、少なくとも７４％まで、少なくとも７５％まで、少なくとも７６％まで、少なくとも７７％まで、少なくとも７８％まで、少なくとも７９％まで、少なくとも８０％まで、少なくとも８１％まで、少なくとも８２％まで、少なくとも８３％まで、少なくとも８４％まで、少なくとも８５％まで、少なくとも８６％まで、少なくとも８７％まで、少なくとも８８％まで、少なくとも８９％まで、少なくとも９０％まで、少なくとも９１％まで、少なくとも９２％まで、少なくとも９３％まで、少なくとも９４％まで、少なくとも９５％まで、少なくとも９６％まで、少なくとも９７％まで、少なくとも９８％まで、少なくとも９９％まで、または少なくとも１００％まで増加させるのに有効である。

【0451】

いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の方法は、老化した造血微小環境における老化したＨＳＣの長期的な生着能を高めるのに有効である。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の方法は、老化した造血微小環境における老化したＨＳＣの長期的な生着能を未処理の老化対照と比較して、少なくとも１％まで、少なくとも２％まで、少なくとも３％まで、少なくとも４％まで、少なくとも５％まで、少なくとも６％まで、少なくとも７％まで、少なくとも８％まで、少なくとも９％まで、少なくとも１０％まで、少なくとも１１％まで、少なくとも１２％まで、少なくとも１３％まで、少なくとも１４％まで、少なくとも１５％まで、少なくとも１６％まで、少なくとも１７％まで、少なくとも１８％まで、少なくとも１９％まで、少なくとも２０％まで、少なくとも２１％まで、少なくとも２２％まで、少なくとも２３％まで、少なくとも２４％まで、少なくとも２５％まで、少なくとも２６％まで、少なくとも２７％まで、少なくとも２８％まで、少なくとも２９％まで、少なくとも３０％まで、少なくとも３１％まで、少なくとも３２％まで、少なくとも３３％まで、少なくとも３４％まで、少なくとも３５％まで、少なくとも３６％まで、少なくとも３７％まで、少なくとも３８％まで、少なくとも３９％まで、少なくとも４０％まで、少なくとも４１％まで、少なくとも４２％まで、少なくとも４３％まで、少なくとも４４％まで、少なくとも４５％まで、少なくとも４６％まで、少なくとも４７％まで、少なくとも４８％まで、少なくとも４９％まで、少なくとも５０％まで、％、少なくとも５１％まで、少なくとも５２％まで、少なくとも５３％まで、少なくとも５４％まで、少なくとも５５％まで、少なくとも５６％まで、少なくとも５７％まで、少なくとも５８％まで、少なくとも５９％まで、少なくとも６０％まで、少なくとも６１％まで、少なくとも６２％まで、少なくとも６３％まで、少なくとも６４％まで、少なくとも６５％まで、少なくとも６６％まで、少なくとも６７％まで、少なくとも６８％まで、少なくとも６９％まで、少なくとも７０％まで、少なくとも７１％まで、少なくとも７２％まで、少なくとも７３％まで、少なくとも７４％まで、少なくとも７５％まで、少なくとも７６％まで、少なくとも７７％まで、少なくとも７８％まで、少なくとも７９％まで、少なくとも８０％まで、少なくとも８１％まで、少なくとも８２％まで、少なくとも８３％まで、少なくとも８４％まで、少なくとも８５％まで、少なくとも８６％まで、少なくとも８７％まで、少なくとも８８％まで、少なくとも８９％まで、少なくとも９０％まで、少なくとも９１％まで、少なくとも９２％まで、少なくとも９３％まで、少なくとも９４％まで、少なくとも９５％まで、少なくとも９６％まで、少なくとも９７％まで、少なくとも９８％まで、少なくとも９９％まで、または少なくとも１００％まで高めるのに有効である。

【0452】

いくつかの実施形態によれば、記載された方法は、老化した造血微小環境の多系列再構成をもたらすのに有効である。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の方法は、老化した造血微小環境の多系列再構成を未処理の老化対照と比較して、少なくとも１％まで、少なくとも２％まで、少なくとも３％まで、少なくとも４％まで、少なくとも５％まで、少なくとも６％まで、少なくとも７％まで、少なくとも８％まで、少なくとも９％まで、少なくとも１０％まで、少なくとも１１％まで、少なくとも１２％まで、少なくとも１３％まで、少なくとも１４％まで、少なくとも１５％まで、少なくとも１６％まで、少なくとも１７％まで、少なくとも１８％まで、少なくとも１９％まで、少なくとも２０％まで、少なくとも２１％まで、少なくとも２２％まで、少なくとも２３％まで、少なくとも２４％まで、少なくとも２５％まで、少なくとも２６％まで、少なくとも２７％まで、少なくとも２８％まで、少なくとも２９％まで、少なくとも３０％まで、少なくとも３１％まで、少なくとも３２％まで、少なくとも３３％まで、少なくとも３４％まで、少なくとも３５％まで、少なくとも３６％まで、少なくとも３７％まで、少なくとも３８％まで、少なくとも３９％まで、少なくとも４０％まで、少なくとも４１％まで、少なくとも４２％まで、少なくとも４３％まで、少なくとも４４％まで、少なくとも４５％まで、少なくとも４６％まで、少なくとも４７％まで、少なくとも４８％まで、少なくとも４９％まで、少なくとも５０％まで、少なくとも５１％まで、少なくとも５２％まで、少なくとも５３％まで、少なくとも５４％まで、少なくとも５５％まで、少なくとも５６％まで、少なくとも５７％まで、少なくとも５８％まで、少なくとも５９％まで、少なくとも６０％まで、少なくとも６１％まで、少なくとも６２％まで、少なくとも６３％まで、少なくとも６４％まで、少なくとも６５％まで、少なくとも６６％まで、少なくとも６７％まで、少なくとも６８％まで、少なくとも６９％まで、少なくとも７０％まで、少なくとも７１％まで、少なくとも７２％まで、少なくとも７３％まで、少なくとも７４％まで、少なくとも７５％まで、少なくとも７６％まで、少なくとも７７％まで、少なくとも７８％まで、少なくとも７９％まで、少なくとも８０％まで、少なくとも８１％まで、少なくとも８２％まで、少なくとも８３％まで、少なくとも８４％まで、少なくとも８５％まで、少なくとも８６％まで、少なくとも８７％まで、少なくとも８８％まで、少なくとも８９％まで、少なくとも９０％まで、少なくとも９１％まで、少なくとも９２％まで、少なくとも９３％まで、少なくとも９４％まで、少なくとも９５％まで、少なくとも９６％まで、少なくとも９７％まで、少なくとも９８％まで、少なくとも９９％まで、または少なくとも１００％までもたらすのに有効である。

【0453】

いくつかの実施形態によれば、アンジオクライン因子、スプライスバリアント、またはフラグメントの阻害剤は、組成物として製剤され得る。いくつかの実施形態によれば、アンジオクライン因子はＴＳＰ１である。いくつかの実施形態によれば、阻害剤は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。記載された発明の抗体及び抗原結合フラグメントは、非経口投与に適した医薬組成物として製剤されることができる。注射可能な溶液は、液体か凍結乾燥剤形かいずれかから構成されることができる。

【0454】

いくつかの実施形態によれば、医薬組成物が水溶液中で非経口投与用に製剤される場合、溶液は必要に応じて適切に緩衝され、液体希釈剤は最初に十分な生理食塩水またはグルコースで等張にした。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、及び腹腔内投与に特に適している。いくつかの実施形態によれば、用いられることができる滅菌水性媒体は、本開示に照らして当業者に知られている。いくつかの実施形態によれば、製剤は、必要に応じて適切な滅菌性、発熱性、一般的な安全性及び純度の基準を満たす必要がある。緩衝液は、ｐＨ５．０～７．０（至適にはｐＨ６．０）のＬ－ヒスチジン（１～５０ｍＭ）、至適には５～１０ｍＭであることができる。本明細書で使用される「緩衝液」という用語は、その化学構造がｐＨでの有意な変化なしに酸または塩基を中和する溶液または液体を指す。他の適切な緩衝液は、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムを含むが、これらに限定されない。塩化ナトリウムを使用して、溶液の毒性を０～３００ｍＭの濃度で変更することができる（液体剤形の場合には１５０ｍＭが至適である）。いくつかの実施形態によれば、輸液は対象組織に対して等張性である。いくつかの実施形態によれば、輸液は対象組織に対して高張性である。

【0455】

凍結乾燥剤形には、抗凍結剤、主に０～１０％スクロース（最適には０．５～１．０％）を含めることができる。他の好適な抗凍結剤として、トレハロース及びラクトースが挙げられる。凍結乾燥剤形には、増量剤、例えば１～１０％のマンニトール（最適には２～４％）を含めることができる。安定剤は、液体及び凍結乾燥剤形の両方で使用することができ、例えば、１～５０ｍＭのＬ－メチオニン（最適には５～１０ｍＭ）である。他の好適な増量剤として、グリシン、アルギニンが挙げられ、０～０．０５％のポリソルベート－８０（最適には０．００５～０．０１％）として含めることができる。追加の界面活性剤として、ポリソルベート２０及びＢＲＩＪ界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。非経口投与用の注射溶液として調製される、記載する本発明の抗体及び抗体部分を含む医薬組成物は、治療用タンパク質（例えば、抗体）の吸収、または分散を増加させるために使用するアジュバントとして有用な薬剤をさらに含む。例示的なアジュバントは、ヒアルロニダーゼ、例えば、ＨＹＬＥＮＥＸ（組換えヒトヒアルロニダーゼ）である。注射溶液にヒアルロニダーゼを添加すると、非経口投与、特に皮下投与後のヒトのバイオアベイラビリティが向上する。ヒアルロニダーゼの添加はまた、痛みや不快感を軽減し、注射部位の反応の発生を最小限に抑えながら、より大きな注射部位の容積（すなわち１ｍｌ超）を可能にする（参照により本明細書に援用されるＷＯ２００４０７８１４０、ＵＳ２００６１０４９６８を参照のこと）。

【0456】

記載する本発明の組成物は、様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体の溶液（例えば、注射溶液及び注入溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム及び坐剤などの液体、半固体及び固体剤形が含まれる。形態は、意図する投与様式及び治療用途に依存する。一般的な例示的な組成物は、注射溶液または注入溶液の形態、例えば、他の抗体によるヒトの受動免疫に使用する組成物と同様の組成物である。例示的な投与様式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。一実施形態によると、抗体を、静脈内注入または静脈内注射によって投与する。別の実施形態によると、抗体を、筋肉内注射または皮下注射によって投与する。

【0457】

治療用組成物は、通常、無菌であり、製造及び保管条件下で安定でなければならない。いくつかの実施形態によると、組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、または高い薬物濃度に適した他の秩序構造として製剤化され得る。無菌の注射溶液は、必要に応じて、上に列挙した成分の１つまたは組み合わせを含む適切な溶媒に必要量の活性化合物（すなわち、抗体または抗体部分）を組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒及び上に列挙したものからの必要な他の成分を含有する無菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌注射溶液を調製するための無菌凍結乾燥粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及び噴霧乾燥であり、活性成分の粉末に加えて、事前に無菌濾過したその溶液に由来する任意の追加の所望の成分が得られる。例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合は必要な粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって、溶液の適切な流動性を維持することができる。吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアレート塩及びゼラチンを組成物に含めることによって、注射用組成物の持続的な吸収をもたらすことができる。

【0458】

記載する本発明の抗体及び抗原結合フラグメントは、当技術分野で公知の様々な方法、例えば、皮下注射、静脈内注射または静脈内注入によって投与することができる。当業者によって理解されるように、投与の経路及び／または様式は、所望の結果に応じて様々に異なる。

【0459】

いくつかの実施形態によると、組成物は、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。いくつかの実施形態によると、活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達系を含む、徐放性製剤など、急速な放出から活性化合物を保護する担体と共に調製され得る。いくつかの実施形態によると、本発明の組成物の担体は、徐放性担体または遅延放出担体などの放出剤を含み得る。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。いくつかのそのような実施形態によると、担体は、活性成分の徐放または遅延放出が可能な任意の物質であり、より効率的な投与を提供し、例えば、組成物の投与頻度を減らし、及び／または用量を減少させ、取り扱いの容易さを改善し、治療、予防、または促進しようとする疾患、障害、病態、症候群などへの影響を、延長または遅延させることができる。そのような担体の非限定的な例として、リポソーム、マイクロスポンジ、ミクロスフェア、または天然及び合成ポリマーのマイクロカプセルなどが挙げられる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの様々なリン脂質から形成され得る。そのような製剤を調製するための多くの方法が特許を取得しているか、当業者に一般的に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。

【0460】

他の実施形態によると、記載する本発明の抗体または抗体部分をポリマー系種に複合体化してもよく、それにより、ポリマー系種は、記載する本発明の前記抗体または抗原結合抗体フラグメントに十分なサイズを付与し得、その結果、記載する本発明の抗体または抗原結合部分は、透過性及び保持効果（ＥＰＲ効果）の増強の恩恵を享受する（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／０４２１４６Ａ２号及び米国公開第２００４／００２８６８７Ａ１号、第２００９／０２８５７５７Ａ１号、及び第２０１１／０２１７３６３Ａ１号、ならびに米国特許第７，６９５，７１９号も参照のこと（これらのそれぞれは、あらゆる目的でその全体が参照により本明細書に援用される）。

【0461】

補助活性化合物を組成物に組み込むこともできる。特定の実施形態では、記載する本発明の抗体または抗体フラグメントを、１つ以上の追加の治療剤と共に製剤化し、及び／または同時投与する。例えば、抗体または抗体フラグメントを、他の標的に結合する１つ以上の追加の抗体（例えば、サイトカインに結合する抗体または細胞表面分子に結合する抗体）と共に製剤化し、及び／または同時投与してもよい。さらに、記載する本発明の抗体または抗体フラグメントを、２つ以上の治療剤と併用してもよい。そのような併用療法は、投与する治療剤の用量を低下させるうえで有利であり、したがって、様々な単剤療法に関連する可能性のある毒性または合併症を回避させ得る。

【0462】

いくつかの実施形態によると、抗体、またはそのフラグメントを、当技術分野で公知の半減期延長ビヒクルに連結する。そのようなビヒクルとして、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール、及びデキストランが挙げられるが、これらに限定されない。そのようなビヒクルは、例えば、米国特許出願第０９／４２８，０８２号及びＰＣＴ公開出願第ＷＯ９９／２５０４４号に記載されており、それらはあらゆる目的のために参照により本明細書に援用される。

【0463】

いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、併用療法と共に投与される。いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、治療量の併用療法と共に投与される。いくつかの実施形態によると、本明細書の医薬組成物は、併用療法の前に投与される。いくつかの実施形態によると、本明細書の医薬組成物は、併用療法の後に投与される。いくつかの実施形態によると、本明細書の医薬組成物は、併用療法と同時に投与される。

【0464】

いくつかの実施形態によると、補助療法は、幹細胞療法である。いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、治療量の幹細胞治療と共に投与され、治療量は、幹細胞レスキューを促進または誘導するのに有効である。

【0465】

いくつかの実施形態によると、幹細胞移植は、任意の適切な方法により製剤化されてもよい。簡単に言うと、幹細胞療法は、組織源から単離された単核細胞の集団から造血幹細胞を単離するステップ、正または負の選択により造血幹細胞の単核細胞の単離集団を濃縮するステップ、及び対象に造血幹細胞の濃縮された単離集団を注入するステップ、を含む。いくつかの実施形態によると、組織源は、自家である。いくつかの実施形態によると、組織源は、同種異系である。上記の方法の特異性は、幹細胞の組織源に依存する。

【0466】

自家組織。いくつかの実施形態によると、組織源は、自家組織を含む。いくつかの実施形態によると、自家組織は、骨髄破壊的傷害の前に採取される。いくつかの実施形態によると、幹細胞を含む採取された自家組織は、汚染腫瘍細胞を枯渇させるためにさらにパージングを受ける。いくつかの実施形態によると、悪性細胞が採取された組織に存在する場合、幹細胞は、抗ＣＤ３４特異的モノクローナル抗体及び免疫ビーズの使用により濃縮され（「正の選択」）、及び／または、悪性細胞は、抗腫瘍モノクローナル抗体の使用により除去される（「負の選択」）。

【0467】

同種異系組織。いくつかの実施形態によると、組織源は、同種異系組織を含む。いくつかの実施形態によると、ドナー同種異系組織は、レシピエント対象との組織適合性についてスクリーニングされる。いくつかの実施形態によると、組織適合性は、ドナー及びレシピエント対象が、同一もしくはほぼ同一または類似のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）である組織適合性マッチングによりスクリーニングされる。いくつかの実施形態によると、悪性細胞が採取された組織に存在する場合、採取された組織は、上記のようにパージされる。いくつかの実施形態によると、組織適合性のない材料は、採取された材料から除去されてもよい。いくつかの実施形態によると、同種異系で採取された組織は、また、ｅｘ－ｖｉｖｏＴ細胞枯渇（ＴＣＤ）を経験することがある。

【0468】

骨髄組織。いくつかの実施形態によると、組織源は、組織が同種異系または自家のいずれかである骨髄を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄組織を採取するための任意の既知の方法が使用されてもよい。例えば、移植用の骨髄は、全身麻酔または脊髄麻酔下で２～３時間にわたって腸骨稜を複数回吸引することにより得られる（「採取される」）ことがある。約１０～４０ｘ１０⁹の有核細胞（２ｘ１０⁸／ｋｇのレシピエント体重）、最大２０ｍＬ／ｋｇのドナー体重が得られるであろう。骨髄吸引液は、主に、間質細胞、未分化幹細胞、初期にコミットされた前駆細胞、Ｔリンパ球、及び赤血球、骨髄、単球、巨核球、ならびに様々な発達段階のリンパ系細胞株で構成される。骨髄中の粒子状物質は、濾過により除去されるであろう。ＡＢＯ式血液型の不適合性が存在する場合、血漿交換は、イソヘマグルチニンを除去するために利用されてもよいが、分画遠心分離は、不適合な赤血球を除去するために利用することができる。特別な処理（「パージング」）は、腫瘍細胞、Ｔリンパ球、またはレシピエント対象に有害な影響を与え得る他の特定の構成成分の骨髄負荷を低減するために実施されてもよい。処理後、幹細胞を含む採取され処理された組織は、静脈内注入を介してレシピエントに直ちに投与されるか、または凍結保存され、後の輸血のために保存される。

【0469】

末梢血。いくつかの実施形態によると、組織源は、組織が同種異系または自家のいずれかである末梢血である。いくつかの実施形態によると、末梢血を採取するための任意の既知の方法が使用されてもよい。いくつかの実施形態によると、単核細胞の集団は、造血幹細胞動員剤での処置後に得られる。そのようないくつかの実施形態によると、造血幹細胞動員剤は、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ（例えば、サルグラモスチム（ＬＥＵＫＩＮＥ（登録商標）））、またはそれらの薬学的に許容されるアナログもしくは誘導体を含む。いくつかの実施形態によると、造血幹細胞動員剤は、コロニー刺激因子の組み換えアナログまたは誘導体である。いくつかの実施形態によると、造血幹細胞動員剤は、フィルグラスチム（ＮＥＵＰＯＧＥＮ（登録商標））である。いくつかの実施形態によると、造血幹細胞動員剤は、プレリキサフォル（ＭＯＺＯＢＩＬ（登録商標））、エルトロンボパグ（ＰＲＯＭＡＣＴＡ（登録商標））、ロミプロスチム（ＮＰＬＡＴＥ（登録商標））、ペグフィルグラスチム（ＮＥＵＬＡＳＴＡ（登録商標））、ダルベポイエチンアルファ（ＡＲＡＮＥＳＰ（登録商標））のうちの１つ以上である。次に、幹細胞を含むドナーのバフィーコートは、白血球除去により単離されてもよい。処理後、造血幹細胞の濃縮された集団は、静脈内注入を介してレシピエントに直ちに投与されるか、または凍結保存されて凍結され、後の輸血のために保存される。

【0470】

用量／投与レジメン
いくつかの実施形態によると、抗体または抗原結合抗体フラグメントの量を、好適な用量が医薬組成物の単位用量に含有されるように調製することができる。溶解性、バイオアベイラビリティ、生物学的半減期、投与経路、製品の貯蔵寿命、及び他の薬理学的考察などの要因は、そのような医薬製剤を調製する当業者により企図されることになり、従って、様々な投薬量及び処置レジメンが望ましいことがある。

【0471】

いくつかの実施形態によると、対象に投与される本開示の組成物の実際の投薬量は、物理的及び生理学的要因、例えば、体重、状態の重症度、処置されている疾患のタイプ、以前または同時の治療的介入、患者の特発性疾患、及び投与経路により決定することができる。投薬量及び投与経路に応じて、好ましい投薬量及び／または有効量の投与回数は、対象の応答に応じて変動することがある。

【0472】

対象
本明細書に記載の組成物及び方法は、記載された利点を経験し得る任意の対象での使用が意図される。従って、「対象」、「患者」、及び「個体」（互換的に使用）は、ヒトならびに非ヒト対象、特に、飼育動物が含まれる。

【0473】

いくつかの実施形態によると、対象及び／または動物は、哺乳類、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ウサギ、ヒツジ、または非ヒト霊長類、例えば、サル、チンパンジー、もしくはヒヒである。他の実施形態によると、対象及び／または動物は、例えば、ゼブラフィッシュなどの非哺乳類である。いくつかの実施形態において、対象及び／または動物は、蛍光標識された細胞（例えば、ＧＦＰを伴う）を含んでもよい。いくつかの実施形態において、対象及び／または動物は、蛍光細胞を含むトランスジェニック動物である。

【0474】

いくつかの実施形態によると、対象及び／または動物は、ヒトである。いくつかの実施形態によると、ヒトは、成人ヒトである。いくつかの実施形態によると、ヒトは、高齢者ヒトである。他の実施形態によると、ヒトは、患者と呼ばれてもよい。

【0475】

いくつかの実施形態によると、対象は、非ヒト動物であり、それ故、記載の発明は、獣医学的使用に関する。いくつかの実施形態によると、非ヒト動物は、家庭用ペットである。いくつかの実施形態によると、非ヒト動物は、家畜動物である。

【0476】

値の範囲が提供される場合、文脈に別途明示のない限り、その範囲の上限と下限との間の下限の単位の１０分の１までの各介在値、ならびに他の任意の記載値またはその記載範囲の介在値が発明に含まれると理解される。より小さな範囲に独立して含まれ得るこれらのより小さな範囲の上限及び下限もまた、本発明に含まれ、記載の範囲において任意の特に除外された限界に従う。記載の範囲が、限界の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界の両方を除外する範囲も本発明に含まれる。

【0477】

別途定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または同等の任意の方法及び材料も、本発明の実施または試験に使用することができるが、例示的な方法及び材料が記載されている。本明細書で言及される全ての刊行物は、刊行物が引用されることに関連する方法及び／または材料を開示及び説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。

【0478】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈に別途明示のない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。

【0479】

本明細書で考察される刊行物は、本出願の出願日の前に、それらの開示のためにのみ提供され、それぞれは、全体が参照により組み込まれる。本明細書に記載のいずれも、本発明が、先行発明によって、そのような刊行物に先行する権利がないことを認めるものと解釈されるべきではない。さらに、提供される発行日は、個別に確認する必要があり得る実際の発行日とは異なることがある。

【実施例】

【0480】

以下の実施例は、当業者に、本発明の製造及び使用方法の完全な開示及び説明を提供するために記載され、発明者らが自らの発明と見なす範囲を制限することを意図するものもなく、以下の実験が実施された全てまたは唯一の実験であることを表すことを意図するものでもない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関して正確さを保証するための努力がなされているが、いくつかの実験誤差及び偏差を考慮に入れなければならない。別途指示のない限り、部は、重量部であり、分子量は、重量平均分子量であり、温度は、セ氏温度であり、圧力は、大気圧または大気圧付近である。

【0481】

実施例１：内皮ｍＴＯＲの喪失が造血幹細胞の老化を促進する
実施例１Ａ：老化はＢＭＥＣのｍＴＯＲシグナル伝達の減少をもたらす。
生理学的老化が、造血系で観察される機能的欠損をどのようにもたらし得るかをよりよく理解するために、若齢（１２週）及び高齢（２４か月）マウスから単離した骨髄微小血管内皮細胞（ＢＭＥＣ）に対してプロテオミクス分析（Ｓｏｍａｌｏｇｉｃ）を行った。ｑ＝０．０２及びｐ値０．０５での偽陽性率（ＦＤＲ）のカットオフを使用して、１５４の候補因子を同定し、若齢対照と比較した場合の高齢のＢＭＥＣのタンパク質の変化をスクリーニングした。低い信頼度で発見されたタンパク質を除外することにより、リストを８６の候補タンパク質にさらに絞り込んだ。データセット内の多くのタンパク質は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲシグナル伝達系に関連付けられることがわかっている。図２Ａは、若齢及び高齢のマウスにおけるＰＩＫ３ＣＡ／ＰＩＫ３Ｒ１複合体の存在量を示す。データは、高齢マウスのＢＭＥＣでは、ｍＴＯＲサブユニットの存在量が減少していることを示している。これらのデータと一致して、ｍＴＯＲ経路を介したＢＭＥＣシグナル伝達がＨＳＣの増殖に重要であることが示されている［Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２０１０．１２（１１）：ｐ．１０４６－５６］

【0482】

次に、ＢＭＥＣ内のｍＴＯＲシグナル伝達に対する生理学的老化の影響を調べた。Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｆｌｏｗサイトメトリーにより、ｍＴＯＲ触媒サブユニットのリン酸化状態を測定した。ｍＴＯＲのリン酸化を評価するために、若齢（１２～１６週）及び高齢（２４か月）のＣ５７ＢＬ６マウスに、殺処分の１５分前にＶＥ－カドヘリン（ＢＶ１３；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対して生じさせた２５μｇのフルオロフォア結合抗体を眼窩後方に注射した。長骨を単離し、破砕し、３７℃で１５分間、消化緩衝液中で酵素的に分離させた。得られた細胞懸濁液を濾過し（４０μｍ）、ＭＡＣＳ緩衝液を使用して洗浄した。Ｌｉｎｅａｇｅ Ｃｅｌｌ Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎキット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、製造元の提案に従って、単細胞ＷＢＭ懸濁液から系列決定された造血細胞を枯渇させた。得られた系列細胞を、ＣＤ３１（３９０；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びＣＤ４５（３０－Ｆ１１；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対して生じさせたフルオロフォア結合抗体で染色した。染色した細胞を、製造元の推奨に従って、ＭＡＣＳ緩衝液を使用して洗浄し、固定し、Ｐｈｏｓｐｈｏｆｌｏｗ Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ１及びＰｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して透過処理し、リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６３４８９）、リン酸化ＡＫＴ（Ｓ４７３）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６０４０４）及びリン酸化Ｓ６（Ｓ２３５／２３６）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６０４３４）に対する抗体で、室温にて３０分間染色した。細胞をＭＡＣＳ緩衝液で洗浄した。フローサイトメトリーによるゲーティング及び分析には、適切な濃度に一致するアイソタイプ対照を使用した。ｍＴＯＲシグナル伝達は、若齢（１２週）マウスと比較して、高齢（２２か月）マウスのＢＭＥＣで有意に減少することがわかった。図２Ｂは、若齢及び高齢マウスにおける新たに単離したＢＭＥＣの平均蛍光強度の定量化を示す。データは、ｍＲＯＴ蛍光体－Ｓｅｒ２４４８．Ａの減少を示している。データはまた、ｍＴＯＲ転写標的の発現の減少も示している。図２Ｃは、ＲＴ－ＰＣＲによるｍＴＯＲ下流転写標的遺伝子の発現分析結果である。βアクチンをコードするＡｃｔｂ遺伝子に対して、遺伝子発現を正規化した。この結果は、若齢ＢＭＣ対照と比較した、高齢ＢＭＥＣにおけるｍＴＯＲ依存性遺伝子発現の減少を示しており［Ｐｒａｄｅｅｐ Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ， ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍＴＯＲ ｍａｉｎｔａｉｎｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｇｉｎｇ．（２０２０）ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１９１２１２］、老化した内皮ニッチ内でのｍＴＯＲシグナル伝達の低下をさらに示している。これらの発見をさらに確認するために、若齢マウスと高齢マウスのサンプル（Ｎ＝５）をプールし、２つの独立したコホート；Ａ及びＢでのウエスタン分析のためにＢＭＥＣを単離した。長骨（大腿骨及び脛骨）由来のＷＢＭを、２６．５ゲージの針を使用して、２ｍＭのＥＤＴＡを含有する氷冷ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で洗い流した。製造元の推奨に従って、ＷＢＭから赤血球を枯渇させた（ＲＢＣ溶解緩衝液；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）。簡潔に述べると、洗い流した骨髄細胞を遠心分離（５００ｇ、４０℃で５分間）によってペレット化し、細胞を３ｍＬの氷冷１×ＲＢＣ溶解緩衝液に再懸濁し、短時間ボルテックスし、氷上で５分間インキュベートした。遠心分離（５００ｇ、４０℃で５分間）によって細胞をペレット化し、上清を捨て、細胞を３ｍＬの氷冷ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で洗浄した。細胞ペレットを、２×ホスファターゼ阻害剤（Ｔｈｅｒｍｏ カタログ番号７８４２８）及び２×プロテアーゼ阻害剤Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｔｈｅｒｍｏ カタログ番号７８４３０）を含有するＲＩＰＡ緩衝液（０．５ｍＬのＲＩＰＡ緩衝液中に１０７個の細胞；Ｔｈｅｒｍｏ カタログ番号８９９００）中に、穏やかに攪拌しながら４℃で１時間溶解し、超音波処理し、４℃で２１，０００×ｇで１０分間遠心分離して、不溶性破片を除去した。ＤＣタンパク質アッセイ（ＢｉｏＲａｄ ５０００１１１）を使用してタンパク質濃度を決定し、２０μｇの全タンパク質を１×Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液（Ｓｉｇｍａ カタログ番号Ｓ３４０１－１０ＶＬ）中で７０℃にて５分間変性させ、ＳＤＳ－アクリルアミドゲルで分離し、ニトロセルロースにエレクトロブロットした。転写されたブロットを、１×ＴＢＳＴ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ カタログ番号９９９７）中の５％ｗ／ｖ脱脂粉乳で１時間ブロッキングした。ブロットを１×ＴＢＳＴ中で５分間、３回洗浄し、ホスホ－Ｓ６（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ４８５８）、Ｓ６（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ２２１７）、ホスホ４ＥＢＰ－１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ２８５５）、４ＥＢＰ－１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ９６４４）、及びＡｃｔｂ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ４９７０）に対する一次抗体（製造元が推奨する希釈率）と共に、１×ＴＢＳＴ中の５％ＢＳＡ ｗ／ｖで４℃にて一晩インキュベートした。ブロットを１×ＴＢＳＴで３×５分間洗浄し、抗ウサギ（Ｈ＋Ｌ）西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）二次抗体を１：２０，０００の希釈率で含有する１×ＴＢＳＴ中の５％脱脂粉乳と共に室温で１時間インキュベートした。ブロットを２回リンスし、１×ＴＢＳＴ中で４×５分間洗浄し、メーカーの推奨に従って、Ａｍｅｒｓｈａｍ ＥＣＬ Ｐｒｉｍｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＲＰＮ２２３２）を使用して展開した。すべてのブロットを、Ｃａｒｅｓｔｒｅａｍ Ｋｏｄａｋ ＢｉｏＭａｘ Ｌｉｇｈｔ Ｆｉｌｍ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して現像した。図２Ｄは、ＢＭＥＣサンプルのウエスタンブロット分析の結果を示す。高齢マウスでは、ｍＴＯＲ触媒サブユニット（ｐ－ｍＴＯＲ Ｓ２４４８）、ｍＴＯＲ複合体１（ｐ－Ｓ６Ｋ Ｔ３８９）、及びｍＴＯＲ複合体２（ｐ－ＡＫＴ Ｓ４７３）のタンパク質レベルの低下が観察された。

【0483】

まとめると、データは、老化がＢＭＥＣにおけるｍＴＯＲシグナル伝達の強力な減少と関連しているという結論を支持する。

【0484】

実施例１Ｂ：ｍＴＯＲの内皮特異的欠失はＨＳＣの早期老化をもたらす：
以前に、ＥＣ特異的ＡＫＴ／ｍＴＯＲ活性化がＨＳＣの維持及びｅｘ ｖｉｖｏでの自己複製を支持することを報告した［Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ａｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂａｌａｎｃｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２０１０．１２（１１）：ｐ．１０４６－５６］。高齢のＢＭＥＣ内で観察されたｍＴＯＲシグナル伝達の減少（図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、２Ｄ）は、ｉｎ ｖｉｖｏでの老化に関連するＨＳＣ機能欠損の原因である可能性がある。

【0485】

この仮説を検証するために、ｍＴＯＲ^fl/flマウスを、成体ＥＣ特異的ＶＥカドヘリンプロモーター（ｍＴＯＲ^(ECKO)）によって駆動されるタモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交雑することにより、ｍＴＯＲを成体ＥＣから特異的に欠失させた［Ｐｒａｄｅｅｐ Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ，ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍＴＯＲ ｍａｉｎｔａｉｎｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｇｉｎｇ．（２０２０）ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１９１２１２］。フローサイトメトリー分析を、若齢（１２～１６週）ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスと若齢（１２～１６週）対照マウスで実施し、ＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失がＨＳＣとその子孫の調節に及ぼす影響を判定した；２２～２４か月齢の野生型マウスは、高齢対照として機能した。

【0486】

図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ、３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ、３Ｈ、及び３Ｉは、ｍＴＯＲのＥＣ特異的欠失（ｍＴＯＲ（ＥＣＫＯ））が、老化に関連する変化を想起させるＨＳＣの変化を引き起こしたことを示す。ｍＴＯＲ^(ECKO)は、図３Ａ）全造血細胞の有意な増加；図３Ｂ、大腿骨あたりの表現型ＬＴ－ＨＳＣの出現頻度の増加。；図３Ｃ、有意な骨髄性バイアス；図３Ｄ、コロニー形成単位の定量化によって評価される造血前駆細胞活性の低下；図３Ｆ、極性化能力の減少（定量化）；図３Ｆ、極性化能力の減少（細胞極性を区別するためのαチューブリン染色の代表的な画像を示す；図３Ｇ、γＨ２ＡＸフォーカスの増加（定量化）；図３Ｈ、γＨ２ＡＸフォーカスの増加（代表的な画像）；及び図３Ｉ、高齢対照の転写特性と類似した転写特性をもたらした。

【0487】

図３Ａ及び図３Ｂに示すように、ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスは、高齢対照と同様に、全ＢＭ造血細胞と表現型ＨＳＣの出現頻度の両方で有意な増加を示した。図３Ｃに示すように、系列組成物の末梢血分析により、若齢ｍＴＯＲ^(ECKO)マウス及び高齢対照において骨髄細胞が有意に増加し、若齢対照マウスと比較してＢ細胞及びＴ細胞のレベルが低下していることが明らかになった（図３Ｄは、メチルセルロースコロニー形成単位（ＣＦＵ）アッセイ、ｍＴＯＲ^(ECKO)及び高齢マウスから分離した全骨髄（ＷＢＭ）は、前駆細胞活性の劇的な喪失を示した。

【0488】

ｍＴＯＲ^(ECKO)マウス由来のＨＳＣを、γＨ２ＡＸフォーカスのレベルについてさらに分析した［Ｆｌａｃｈ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｓｔｒｅｓｓ ｉｓ ａ ｐｏｔｅｎｔ ｄｒｉｖｅｒ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ａｇｅｉｎｇ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ，２０１４．５１２（７５１３）：ｐ．１９８－２０２．］及びそれらの極性状態［Ｆｌｏｒｉａｎ，ＭＣ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｄｃ４２ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ，２０１２．１０（５）：ｐ．５２０－３０］。γＨ２ＡＸフォーカスアッセイは、二本鎖ＤＮＡ切断（ＤＳＢ）を検出するための高速かつ高感度なアプローチであり；ＤＮＡ二本鎖切断の誘導に応答した、ヒストンバリアントＨ２ＡＸ（γＨ２ＡＸを生じる）のリン酸化を利用する。リン酸化はＤＳＢの部位で開始されるが、隣接するクロマチン領域にまで及ぶ。この事象は、γＨ２ＡＸに特異的な蛍光抗体を使用して、細胞内の明確なフォーカスとして顕微鏡で視覚化することができる。（Ｉｖａｓｈｋｅｖｉｃｈ，ＡＮ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ．（２０１１）７１１（１－２）：４９－６０）。

【0489】

図３Ｅ、図３Ｆ、図３Ｇ、及び図３Ｈに示すように、ｍＴＯＲ^(ECKO)マウス及び高齢の対照由来のＨＳＣは、若齢対照マウスと比較して、γＨ２ＡＸフォーカスの有意な増加及びαチューブリン極性の有意な喪失を示した。

【0490】

図３Ｉに示すように、転写解析により、ＥＣ特異的なｍＴＯＲ欠失が、高齢ＨＳＣとクラスター化されるＨＳＣ遺伝子発現の変化につながることが明らかになった。

【0491】

次に、高齢ＨＳＣを特徴付ける特定の遺伝子発現シグネチャーを定義し、ｍＴＯＲ^(ECKO)モデルにおけるその存在を試験した。現在のマイクロアレイデータを、Ｒｏｓｓｉら［Ｒｏｓｓｉ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｕｎｄｅｒｌｉｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｇｉｎｇ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００５．１０２（２６）：ｐ．９１９４－９］及びＣｈａｍｂｅｒｓら［Ｃｈａｍｂｅｒｓ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｇｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｈｉｂｉｔ ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ． ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ，２００７．５（８）：ｐ．ｅ２０１］によって以前に公開されたデータセットと比較した。

【0492】

図４Ａ、４Ｂ、４Ｃは、ｍＴＯＲ^(ECKO)ＨＳＣが高齢ＨＳＣ遺伝子シグネチャーを発現することを示す。図４Ａは、若齢ＨＳＣ転写データセットと高齢ＨＳＣ転写データセットとの間の有意な変化を比較するベン図である。図４Ｂは、一般的な高齢ＨＳＣ遺伝子発現変化を示す。リストされている遺伝子は、ＨＳＣにおいて発現が確認された、本研究と公開データセットの間の発現における共有される変化を示している（赤－高齢ＨＳＣでアップレギュレート、緑－高齢ＨＳＣでダウンレギュレート）。太字の遺伝子は、すべてのデータセット間の一致した発現変化を含み、高齢ＨＳＣ発現シグネチャーを表す。老化に伴う発現の有意なアップレギュレーションを示す１０個の遺伝子が同定され、そのうちの９個はＲＴ－ｑＰＣＲ分析によって確認された。ＳＥＬＰ、ＮＥＯ１、ＪＡＭ２、ＳＬＡＭＦ１、ＰＬＳＣＲ２、ＣＬＵ、ＳＤＰＲ、ＦＹＢ、ＩＴＧＡ６、ＲＡＳＳＦ４、ＦＧＦ１１、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＨＳＰＡ１Ａ、及びＮＦＫＢＩＡを含むｍＴＯＲ^(ECKO)がダウンレギュレートされた。図４Ｃは、ｍＴＯＲ^(ECKO)及び高齢マウスにおけるマイクロアレイで同定された高齢ＨＳＣ遺伝子発現シグネチャーのＲＴ－ｑＰＣＲによる確認を示す。ｍＴＯＲ^(ECKO)由来のＨＳＣは、高齢ＨＳＣ遺伝子発現シグネチャーを共有していることに留意されたい。ＨＳＣはまた、高齢ＨＳＣで観察されるように、「高齢シグネチャー」遺伝子の同様のアップレギュレーションも示した。

【0493】

これらの老化に伴う変化がＨＳＣに対する直接的な影響によるものかどうかを判定するために、ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスから単離したＨＳＣの長期再増殖能力をＢＭ移植アッセイで調べた。若齢 ｍＴＯＲ^(ECKO)マウス、若齢対照マウス、及び高齢対照マウス由来の１００個のＣＤ４５．２＋ＨＳＣを、致死量を照射したＣＤ４５．１マウスに競合的に移植した。図５のデータは、ｍＴＯＲ^(ECKO)ＨＳＣが、移植後に高齢造血欠損を示すことを示している。ｘ軸は、移植後の経過週数である。図５Ａ、全体的なＣＤ４５．２の生着率（ｙ軸、ＣＤ４５．２＋生着率（％））；図５Ｂ、骨髄の生着率（ｙ軸、ＣＤ４５．２＋ＧＲ１＋（ＣＤ１１Ｂ＋）生着率）；図５Ｃ、Ｂ細胞の生着率（ｙ軸、ＣＤ４５．２＋Ｂ２２０＋の生着率（％））；図５Ｄ、Ｔ細胞の生着率（ｙ軸 ＣＤ４５．２＋ＣＤ３＋の生着率（％）））。結果は、高齢ＨＳＣと同様に、若齢ｍＴＯＲ^(ECKO)マウスのＨＳＣは、若齢対照マウスのＨＳＣと比較して、リンパ球新生を犠牲にして生着の減少と有意な骨髄性バイアスを示すことを示した。

【0494】

まとめると、これらの観察は、マウスにおけるＥＣ特異的ｍＴＯＲ欠失が、定常状態でＨＳＣの転写、表現型、及び機能的早期老化を誘発するのに十分であることを示している。

【0495】

実施例２ 候補のｐｒｏ－ＨＳＣ老化因子の発見
実施例２Ａ：ｍＴＯＲの内皮特異的欠失または生理学的老化は、トロンボスポンジン－１の増加と関連している
ＨＳＣ老化を促進するＢＭＥＣ因子を同定するために、若齢ｍＴＯＲ（ＥＣＫＯ）及び高齢野生型マウスのトランスクリプトームを分析し、若齢野生型対照と比較した。フォーカスは、若齢対照と比較して、ｍＴＯＲ（ＥＣＫＯ）及び高齢マウスの両方に共通する遺伝子発現の有意な変化であった。図６は、若齢、ｍＴＯＲ^(ECKO)、及び高齢マウスのＢＭＥＣに関するプロテオミクス分析を示す。図６Ａは、若齢マウスと比較した場合の、ｍＴＯＲ^(ECKO)及び高齢マウスから単離したＢＭＥＣにおける保存された遺伝子変化のヒートマップであり、サンプル全体で上位５００個の最も可変性の高い遺伝子を示している。図６Ｂは、ｍＴＯＲ^(ECKO)及び高齢マウスの両方から単離したＢＭＥＣのボルケーノプロットを示し、若齢対照ＢＭＥＣと比較した場合、トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ１）が最も有意にアップレギュレートされた遺伝子であり、両方のコホートで最大の倍率変化を有していたことを示している。図６Ｃは、ＴＳＰ１による血管新生の阻害が、転写変化によって表されるアップレギュレートされた生物学的プロセスの最上位であることを示したｉｎｇｅｎｕｉｔｙ ｐａｔｈｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓの結果を示す。他の４つの上位プロセス（ＳＴＡＴ３経路；ＴＧＦ－ｂシグナル伝達；ＩＧＦ－１シグナル伝達；及びＨＭＧＢ１シグナル伝達）はすべて、トロンボスポンジン－１によって調節される。

【0496】

次に、高齢及びｍＴＯＲ（ＥＣＫＯ）ＢＭＥＣにおけるＴＳＰ１の発現変化を、転写解析及びタンパク質解析によって確認した。新鮮なＢＭＥＣを、若齢（１２週間；「Ｙ」）、若齢ｍＴＯＲ（ＥＣＫＯ）（１２週間’「Ｍ」）、及び高齢（２４か月；「Ｏ」）マウス（ｎ＝３；約１，５００ＢＭＥＣ／マウス）から単離した。図６Ｄは、Ｙ、Ｏ、及びＭ ＢＭＥＣにおける相対的なＴＳＰ１遺伝子発現を示す。データからは、ＴＳＰ１の相対的な遺伝子発現が実際にｍＴＯＲ（ＥＣＫＯ）及び高齢ＢＭＥＣでアップレギュレートされていたことが確認された。次に、若齢（１２週、「Ｙ」）、若齢ｍＴＯＲ（ＥＣＫＯ）（１２週、「Ｍ」）、及び高齢（２４か月、「Ｏ」）マウスから、ＢＭＥＣを再び単離した（ｎ＝３；各Ｎは、最適なタンパク質濃度を達成するためにプールされた５匹のマウスであった）。図６Ｅは、アプタマーベースのプロテオミクス系（Ｓｏｍａｌｏｇｉｃ）を使用したＹ、Ｏ、及びＭ ＢＭＥＣにおけるＴＳＰ－１タンパク質レベルを示す。結果は、ＴＳＰ１タンパク質レベルがＭ（ｍＴＯＲ（ＥＣＫＯ）及びＯ（高齢）マウスで上昇したことを示している。したがって、トランスクリプトーム及びタンパク質分析により、トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ１）がｐｒｏ－ＨＳＣ老化因子として同定された。

【0497】

ＴＳＰ１は、細胞と周囲のマトリックス（すなわち、ラミニン、フィブロネクチン、及びフィブリノゲン）との間の細胞相互作用の調節において主要な役割を果たす、分泌型マトリックス結合糖タンパク質である。ＴＳＰ１は、ＶＥＧＦに結合して中和し、ＥＣ上のＶＥＧＦＲ２シグナル伝達を遮断し、ＥＣ間の接着的接触を不安定化する［Ｇｕｐｔａ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ｂｙ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ：ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，（１９９９）３（２）：ｐ．１４７－５８；Ｋａｕｒ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＶＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＣＤ４７． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，（２０１０）２８５（５０）：ｐ．３８９２３－３２；Ｇａｒｇ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１ ｏｐｅｎｓ ｔｈｅ ｐａｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａ ｔｈｒｏｕｇｈ ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ２ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ． Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，（２０１１）３０１（１）：ｐ．Ｌ７９－９０．］。ＴＳＰ１は、血小板凝集を調節することも示されており、また、ＢＭ微小環境で発現する強力な抗血管新生因子である［Ａｇａｈ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｌａｃｋ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１（ＴＳＰ１）ｄｉｃｔａｔｅｓ ｔｈｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ｉｎ ｄｏｕｂｌｅ－ＴＳＰ１／ＴＳＰ２－ｎｕｌｌ ｍｉｃｅ． Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，（２００２）１６１（３）：ｐ．８３１－９；Ａｇａｈ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ２ ｌｅｖｅｌｓ ａｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ａｇｅｄ ｍｉｃｅ：ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ，（２００４）２２（７）：ｐ．５３９－４７；Ｉｒｕｅｌａ－Ａｒｉｓｐｅ，Ｍ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１，ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９６）９７（２）：ｐ．４０３－１２］。ＴＳＰ１は、成熟造血細胞、例えば、巨核球［Ｌｏｎｇ，Ｍ．Ｗ．ａｎｄ Ｖ．Ｍ． Ｄｉｘｉｔ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｓ ａ ｃｙｔｏａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ（１９９０）７５（１２）：ｐ．２３１１－８；Ｋｙｒｉａｋｉｄｅｓ，Ｔ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｅ ｔｈａｔ ｌａｃｋ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ２ ｄｉｓｐｌａｙ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｔｈａｔ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｉｂｒｉｌｌｏｇｅｎｅｓｉｓ，ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｎｓｉｔｙ， ａｎｄ ａ ｂｌｅｅｄｉｎｇ ｄｉａｔｈｅｓｉｓ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９９８）１４０（２）：ｐ．４１９－３０］、及びＢＭＥＣ（図６、パネルＢ）［Ｒｅｅｄ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎｓ ｂｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｊｕｒｙ ｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＳＰ－１．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，１９９５．１４７（４）：ｐ．１０６８－８０；ＤｉＰｉｅｔｒｏ，Ｌ．Ａ．，Ｄ．Ｒ．Ｎｅｂｇｅｎ，ａｎｄ Ｐ．Ｊ．Ｐｏｌｖｅｒｉｎｉ，Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ １ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｊ Ｖａｓｃ Ｒｅｓ，１９９４．３１（３）：ｐ．１７８－８５］で発現する。ＴＳＰ１ノックアウトマウス（ＴＳＰ１－／－）では、骨髄抑制後の造血回復が促進されることが示されている［Ｋｏｐｐ，Ｈ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎｓ ｄｅｐｌｏｙｅｄ ｂｙ ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｓｗｉｔｃｈ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｔ ｏｆ ｒｅｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，（２００６）１１６（１２）：ｐ．３２７７－９１．］。理論に縛られるものではないが、これらのデータは、ＢＭ血管再生の回復が調節されるメカニズムの１つが、ＢＭＥＣによるＴＳＰ１の阻害によるものであり、それによってＢＭ血管ニッチの再生と再安定化が可能になることを示唆している［Ａｇａｈ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ２ ｌｅｖｅｌｓ ａｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ａｇｅｄ ｍｉｃｅ：ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ，（２００４）２２（７）：ｐ．５３９－４７；，Ｋｙｒｉａｋｉｄｅｓ，Ｔ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅｓ ｒｅｑｕｉｒｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－２ ｆｏｒ ｎｏｒｍａｌ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ｂｌｏｏｄ，（２００３）１０１（１０）：ｐ．３９１５－２３；Ｈｕｈ，Ｈ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，ＣＤ３６ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｕｐｏｎ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｔｏ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．（１９９５）２７０（１１）：ｐ．６２６７－７１；Ｂｏｒｎｓｔｅｉｎ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ． Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ２，ａ ｍａｔｒｉｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ｄｉｖｅｒｓｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ． Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ，（２０００）１９（７）：ｐ．５５７－６８；Ｂｏｒｎｓｔｅｉｎ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ２ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｉｂｒｉｌｌｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｓｙｍｐ Ｐｒｏｃ，（２０００）５（１）：ｐ．６１－６．］。

【0498】

実施例２Ｂ：ＴＳＰ１ノックアウトマウスでは、ＨＳＣ及び前駆細胞の機能が増加する
今日まで、ＴＳＰ１－／－マウスで生成されたほとんどのデータは、損傷及び再生に関して行われてきた。定常状態の造血におけるＴＳＰ１の役割についてはほとんど知られていない。この知識のギャップに対処するために、ＴＳＰ１－／－（Ｊａｘ Ｌａｂ：００６１４１）マウスから造血細胞を単離し、ＨＳＣの出現頻度と機能を評価した。図７は、若齢マウスにおけるＴＳＰ１の阻害が、ＨＳＣの数及び機能を増加させることを示す。図７Ａは、対照、ＴＳＰ－１－／－マウス、及びＴＳＰ－１に対する中和抗体の注入を受けた対照マウスにおける表現型ＬＴ－ＨＳＣの定常状態分析である。若齢ＴＳＰ１－／－マウスでは、表現型ＨＳＣの数に差異はなかった。次に、全ＢＭをＴＳＰ１－／－マウスから単離し、メチルセルロースベースの前駆細胞コロニー形成コロニーアッセイを実施した。データを図７Ｂに示し；ＴＳＰ１－／－マウスは、有意により原始的なＣＦＵ－ＧＥＭＭと全体的により多くの全ＣＦＵを有し；他のコロニータイプは変化がなかった）。さらに、対照、ＴＳＰ－１－／－マウス、及びＴＳＰ－１に対する中和抗体の注入を受けた対照マウス由来の１００の表現型ＨＳＣを競合移植アッセイで注入した。結果からは、ＴＳＰ１－／－マウスが、系列特異的な再構成の変更を伴わずに、生着能においてよりロバストなＨＳＣを保有していることが示された（データは示さず）。さらに、ＴＳＰ１に対する市販の中和抗体（クローンＡ４．１，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＲＲＩＤ ＡＢ＿１０９８８６６９））の活性を、対照を処置することによって、すなわち、若齢Ｃ５７ＢＬ６マウスを毎日４μｇのαＴＳＰ１で３日間処置することによって測定した。この投与濃度とレジメンは、用量反応実験を行うことによって決定し、この実験からは、ＨＳＣ数を増加させるための最大濃度が４μｇであり、３日後には追加の有用性がないことが示された。抗体処置は、図７Ａ、７Ｂ及び７Ｃに示すように、抗体処置は、ＴＳＰ１ノックアウトマウスで認められる応答と同様の応答を誘発した。結果からは、ＴＳＰ１－／－マウスまたはＴＳＰ１阻害剤で処置したマウスではＨＳＣ機能が増加することが示された。これらのデータは、治療法としてのＴＳＰ１阻害の可能性を裏付けるものである。

【0499】

中和抗体に加えて、遺伝子発現をノックダウンするための他の技術が知られている。これらには、ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡベースのＲＮＡｉ^1-4、アンチセンスオリゴヌクレオチド⁵、及びＣＲＩＳＰＲ／ＴＡＬＥＮ／ジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ^6-10ベースの遺伝子編集が含まれるが、これらに限定されない。したがって、これらの追加の技術を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方でＴＳＰ１遺伝子発現をノックダウンすることができる。

【0500】

ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系は、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）及びＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ヌクレアーゼの２つの主要な構成要素に依存する。

【0501】

ガイドＲＮＡは、目的の標的ＤＮＡ領域を認識し、編集のためにそこにＣａｓヌクレアーゼを誘導する特定のＲＮＡ配列である。ｇＲＮＡは、標的ＤＮＡに相補的な１７～２０のヌクレオチド配列であるＣｒｉｓｐｒ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）と、Ｃａｓヌクレアーゼの結合足場として機能するｔｒａｃｒ ＲＮＡの２つの部分から構成される。

【0502】

ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、非特異的エンドヌクレアーゼである。ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、ｇＲＮＡによって特定のＤＮＡ遺伝子座に指向され、そこで二本鎖切断を行う。Ｃａｓヌクレアーゼには、様々な細菌から単離されたいくつかのバージョンがある。最も一般的に使用されるのは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のＣａｓ９ヌクレアーゼである。シングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）は、足場ｔｒａｃｒＲＮＡ配列に融合させたカスタムデザインの短いｃｒＲＮＡ配列の両方を含む単一のＲＮＡ分子である。ｓｇＲＮＡは、ＤＮＡ鋳型からｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで合成的に生成または作成され得る。

【0503】

ｓｉＲＮＡ送達によるＴＳＰ１遺伝子発現の効率的なノックダウン。図１３は、正規化されたＴＳＰ発現（ｙ軸）対サンプル（対照ｓｉＲＮＡ、ＴＳＰ ｓｉＲＮＡ１）の棒グラフである。１０ｎＭ ｓｉＲＮＡ［Ｔｈｂｓ１ ｓｉＲＮＡ ＃１，ＩＤ Ｓ７５０９５，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ］をＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘを使用してトランスフェクトし、トランスフェクションの４８時間後にＴＲＩＺＯＬ試薬を使用して全ＲＮＡを精製した。精製されたＲＮＡからｃＤＮＡを合成し（上付き文字３）、Ｔｈｂｓ１を標的とするプライマーを利用してｑＰＣＴ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を実施した。発現をβアクチンに正規化した。データは、ＴＳＰ１を標的とするｓｉＲＮＡのトランスフェクション後の内皮細胞におけるＴＳＰ１ ｍＲＮＡの発現の減少を示している。

【0504】

市販の配列は以下の通りである：

【0505】

Ｔｈｂｓ１ ｓｉＲＮＡ＃１
ｓｉＲＮＡ ＩＤ ｓ７５０９５
カタログ番号 ４３９０７７１ （ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ）
配列 （５’－３’）
センス鎖：ＧＡＡＣＵＵＧＵＣＣＡＧＡＣＵＧＵＡＡｔｔ（配列番号１）
アンチセンス鎖：ＵＵＡＣＡＧＵＣＵＧＧＡＣＡＡＧＵＵＣｔｔ（配列番号２）

【0506】

Ｔｈｂｓ１ ｓｉＲＮＡ＃２
ｓｉＲＮＡ ＩＤ ｓ７５０９６
カタログ番号 ４３９０７７１
シーケンス （５’－３’）
センス鎖：ＣＡＡＣＧＡＧＧＡＧＵＧＧＡＣＵＧＵＡｔｔ（配列番号３）
アンチセンス鎖：ＵＡＣＡＧＵＣＣＡＣＵＣＣＵＣＧＵＵＧｔｔ（配列番号４）

【0507】

陰性対照ｓｉＲＮＡ：
センス鎖：ＵＵＣＵＣＣＧＡＡＣＧＵＧＵＣＡＣＧＵｔｔ（配列番号５）
アンチセンス鎖：ｔｔＡＡＧＡＧＧＣＵＵＧＣＡＣＡＧＵＧＣＡ（配列番号６）

【0508】

ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ／ｃｒｉｓｐｒ／ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ｑｕｅｒｙ／ｔｈｂｓ１：

【0509】

ＴｒｕｅＧｕｉｄｅ（商標）合成ｓｇＲＮＡ
１． カタログ番号 Ａ３５５３３ ＩＤ： ＣＲＩＳＰＲ５７３５７１＿ＳＧＭ
標的ＤＮＡ配列：ＧＧＣＡＴＴＣＴＣＡＡＴＧＣＧＧＡＡＧＧ（配列番号７）
標的遺伝子座 Ｃｈｒ．２： ＧＲＣｍ３８上の１１８１１３０７２～１１８１１３０９４
鎖 フォワード
用途 遺伝子ノックアウト
２． カタログ番号 Ａ３５５３３ ＩＤ： ＣＲＩＳＰＲ５７３５７４＿ＳＧＭ
標的ＤＮＡ配列 ＡＡＣＴＣＡＴＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＧＡ（配列番号８）
標的遺伝子座 Ｃｈｒ．２： ＧＲＣｍ３８上の１１８１１３００６～１１８１１３０２８
鎖 フォワード
用途 遺伝子ノックアウト

【0510】

陰性対照ｇＲＮＡ（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）
ｇＲＮＡ配列 ＧＣＧＡＧＧＴＡＴＴＣＧＧＣＴＣＣＧＣＧ（配列番号９）
情報源：
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｄｄｇｅｎｅ．ｏｒｇ／６６８９５／
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ４４８６２４５／
引用文献
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７ Ｚｉｐｋｉｎ，Ｍ． ＣＲＩＳＰＲ’ｓ “ｍａｇｎｉｆｉｃｅｎｔ ｍｏｍｅｎｔ” ｉｎ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃ． Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｄ４１５８７－０１９－０００３５－２（２０１９）．
８ ＣＲＩＳＰＲ’ｓ ｐｏｗｅｒｓ ｕｎｌｅａｓｈｅｄ ｆｏｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ ５５４，４０６，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｄ４１５８６－０１８－０２２００－０（２０１８）．
９ Ｊｏｕｎｇ，Ｊ．Ｋ．＆ Ｓａｎｄｅｒ，Ｊ．Ｄ． ＴＡＬＥＮｓ：ａ ｗｉｄｅｌｙ ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １４，４９－５５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｍ３４８６（２０１３）．
１０ Ｕｒｎｏｖ，Ｆ．Ｄ．，Ｒｅｂａｒ，Ｅ．Ｊ．，Ｈｏｌｍｅｓ，Ｍ．Ｃ．，Ｚｈａｎｇ，Ｈ．Ｓ．＆ Ｇｒｅｇｏｒｙ，Ｐ．Ｄ． Ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｚｉｎｃ ｆｉｎｇｅｒ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇｅｎｅｔ １１，６３６－６４６，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｇ２８４２（２０１０）．

【0511】

実施例２Ｃ：ＴＳＰ１の阻害は高齢マウスのＨＳＣ機能を保持する：
ＴＳＰ１の損失／阻害が造血系で観察される老化表現型を予防／抑制することができるかどうかを判定するために、対照及びＴＳＰ１－／－マウスを１８か月齢とし、若い３か月齢のマウスを対照とした。図８Ａは、プロトコルの概略図であり、３つのコホートすべてにおける表現型ＬＴ－ＨＳＣの定常状態分析を提供する。１８か月齢の対照マウスは、表現型ＨＳＣの出現頻度において有意かつロバストな増加を示したのに対し、ＴＳＰ－／－マウスは、若齢対照マウスと同様のＨＳＣ数を有した（図８Ａ）。さらに、ＷＢＭを３つのコホートから単離し、前駆細胞コロニー形成アッセイに供した。結果を図８Ｂに示す。高齢ＴＳＰ－／－マウス由来のＷＢＭは、メチルセルロースに入れてもコロニー形成能を保持していた。最後に、３つのコホートに由来する１００の表現型ＨＳＣを、競合移植アッセイで注入した。結果を図８Ｃに示す。結果は、高齢ＴＳＰ１－／－マウス由来のＨＳＣが、若齢対照から単離したＨＳＣと類似していることを示した。３か月齢の若齢対照ＨＳＣの生着能と系列組成は、高齢ＴＳＰ－／－マウスから移植したＨＳＣと区別がつかなかったのに対し、高齢対照ＨＳＣは生着レベルが低下し、リンパ球新生を犠牲にして骨髄性バイアスが生じていた。まとめると、データは、ＴＳＰ１の喪失が造血系に若返り効果をもたらすことを示唆している。

【0512】

実施例３Ａ．トロンボスポンジン１（ＴＳＰ１）の阻害は、高齢マウスの造血幹細胞（ＨＳＣ）機能を保持する。

【0513】

図９は、高齢ＴＳＰ１－／－マウスがＨＳＣ機能を保持していることを示す。ＴＳＰ１の損失／阻害が造血系で観察される老化表現型を予防／抑制することができるかどうかを判定するために、対照及びグローバルＴＳＰ１ノックアウトマウス（ＴＳＰ１－／－）を１８か月間生理学的に老化させ；図９Ａは、ＨＳＣ移植及びＲＮＡ配列決定に使用される３つのコホート（若齢対照、高齢対照、及び高齢ＴＳＰ１マウス）の描写である。若い３か月齢のマウスは、対照として機能した。

【0514】

ＴＳＰ１－／－マウス由来の高齢ＨＳＣの機能的効力を調べるために、若齢対照及び高齢対照及び高齢ＴＳＰ１－／－マウス由来の１００の表現型ＨＳＣを移植し、若い３か月齢の対照ＨＳＣの生着能及び系列組成が、高齢ＴＳＰ１－／－マウスから移植したＨＳＣと区別がつかないことを発見した。図９Ｃは、図９Ａの３つのコホート（ｘ軸）におけるＣＤ４５．２生着率（％）（ｙ軸）の棒グラフである。図９Ｄは、３つのコホートにおける、系列＋細胞（ＣＤ４５．２）（ｙ軸）と、骨髄性末梢血細胞型（ＣＤ１１ｂ＋／ＧＲ１＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）及びＴ細胞（ＣＤ３＋）集団（ｘ軸）の棒グラフである。図９Ｃ及び図９Ｄに示すように、高齢対照ＨＳＣは、生着レベルが低下し、リンパ球新生を犠牲にして骨髄性バイアスを生じていた。移植に使用したのと同じＨＳＣプールを利用して、ＨＳＣをＲＮＡ配列決定に供し、高齢ＴＳＰ１－／－マウスから分離したＨＳＣが若齢ＨＳＣと転写的に同一であることを確認した。図９Ｂは、正規化されたｍＲＮＡ発現（ｙ軸）と、ＨＳＣ老化関連遺伝子（ｘ軸）の棒グラフである。図９Ａに示す３つのコホートからＨＳＣを単離し、ＲＮＡ配列決定に供した。ＨＳＣの老化関連遺伝子は、ＴＳＰ１－／－マウス由来の高齢ＨＳＣで減少していた。まとめると、これらのデータは、ＴＳＰ１の喪失が造血系に若返り効果をもたらすことを示唆している。

【0515】

実施例３Ｂ．ＴＳＰ１は、若齢ＨＳＣの増殖に直接影響を及ぼす。

【0516】

骨髄抑制は、新規血球産生の緊急の必要性を満たすためにＨＳＣ静止を犠牲にして、造血における顕著な適応を開始する。これらの条件下で、ＨＳＣは、自己再生、増殖、及び系列指向的分化が有意に増加する。このプロセスは、ｅｘ ｖｉｖｏの設定では再現することが困難であり、現在のｅｘ ｖｉｖｏ ＨＳＣ増殖戦略では、必然的にＨＳＣの枯渇をもたらし、長期的な生着ができない前駆細胞への分化が誘導される。ＨＳＣの安全かつ効果的な増殖に対するもう１つの主要な障害は、造血の複雑さをｅｘ ｖｉｖｏで再現する方法論の欠如である。ＨＳＣの真のｅｘ ｖｉｖｏ増殖戦略の開発は、長期の血球減少症骨髄（ＢＭ）移植に関連する罹患率と死亡率を軽減し、同種異系ＢＭ移植の潜在的なドナーのプールを拡大するのに役立つ。最近では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ系を利用して化合物（例えば、中和抗体及び組換えタンパク質）を送達することに成功しており、この系は、ＨＳＣの自己複製能力を維持し、系列分布のバランスをとって、生着可能なＨＳＣを増殖させ得る方法で、ＨＳＣ恒常性を調整するために必要な生理学的シグナルを提供する［１－４］。この系を利用して、ＨＳＣの増殖と維持に必要な重要なシグナル伝達分子の検証に成功している［１－６］。この系を利用して、ＴＳＰ１シグナル伝達の阻害がＨＳＣの増殖と機能的出力を直接促進することができるかどうかを試験し、造血回復を加速するための戦略の開発を大幅に進めた。Ｔ

【0517】

この目的のために、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）［７］をＢＳＡフリーの低用量ＫｉｔＬ（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＴＰＯ（１００ｎｇ／ｍｌ）中で利用して、ｅｘ ｖｉｖｏでＨＳＣを増殖させ、外来性ＴＳＰ１によるＨＳＣ機能のサポートが、直接的であるか間接的であるかを判定した。まず、外来性ＴＳＰ１が若齢ＨＳＣの機能に直接影響を与えるかどうかを試験することに着手した。ＰＶＡ増殖プロトコルを使用して、５００ｎｇ／ｍｌのＴＳＰ１の存在下または非存在下で、３００のソーティングされた表現型ＨＳＣを、フィブロネクチンでコーティングされた９６ウェル形式で培養した。さらに、３つの独立したＴＳＰ１中和抗体とそのＩｇＧ対照を投与したコホートを含めた。

【0518】

図１０は、ＴＳＰ１が若齢ＨＳＣの増殖に直接影響を及ぼすことを示す。図１０Ａは、外来性ＴＳＰ１がＨＳＣの増殖及び機能に影響を与え得るかどうかを試験するためのｅｘ ｖｉｖｏ増殖プロトコルを示す概略図である。図１０Ｂは、ｒＴＳＰ１（５００ｎｇ／ｍｌ）；αＴＳＰ１中和抗体クローン１［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３９８］；αＴＳＰ１中和抗体クローン２［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３８５］；Ｍｓ ＩｇＧ１ｋ ＩｇＧ対照［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１６－４７１４－８２］；αＴＳＰ中和抗体クローン３；及びＭｓ ＩｇＭ対照［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１４－４７５２－８２］（ｘ軸）で処置した（左から右へ）細胞のＣＤ４５．２生着率（％）（ｙ軸）の棒グラフである。図１０Ｃは、移植後２４週の骨髄系統（ＣＤ１１ｂ／ＧＲ１＋）、リンパ系［Ｂ２２０、Ｂ細胞；ＣＤ３ Ｔ細胞］系列分布を示す系列＋細胞（ＣＤ４５．２，ｙ軸）の棒グラフである。

【0519】

１１日間の増殖後、ＨＳＣを競合的に移植し、移植の２４か月後に生着率を評価した。表現型ＨＳＣの増殖頻度に有意差は認められなかったが、１０⁶個のＣＤ４５．１競合細胞を含む合計１０⁴個の増殖細胞を移植すると、ＴＳＰ１で処置した造血細胞は、系列の再構成にほとんど差異を生じさせることなく、生着能を有意に低下させることがわかった（図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ）。３つの中和抗体のうちの２つ（クローン１及び２）は、増殖したＨＳＣの機能的アウトプットに対する外来性ＴＳＰ１の有害な影響を遮断しなかった。しかしながら、クローン３は、ＨＳＣの増殖をもたらし、バランスの取れた系列分布を伴うロバストな造血生着を引き起こした（図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ）。

【0520】

実施例３Ｃ．ＴＳＰ１に対する中和抗体は、高齢ＨＳＣを若返らせ、ｅｘ ｖｉｖｏで増殖させることができる。

【0521】

最初に、中和抗体が、処置したＨＳＣにおいてＴＳＰ１シグナル伝達を阻害するのにどの程度効率的であったかを試験することに着手した。対照及びＴＳＰ１グローバルノックアウトマウスから単離した若齢ＨＳＣを、ＰＶＡプロトコルでｅｘ ｖｉｖｏで増殖させ、ＨＳＣを競合的に移植した。

【0522】

図１１は、ＴＳＰ１が若いＨＳＣの増殖に直接影響を及ぼすことを示している。Ｅｘ－ｖｉｖｏで増殖させた若齢ＨＳＣは、対照及びＴＳＰ１グローバルノックアウト（ＫＯ）マウスからＰＶＡプロトコルで単離し、ＨＳＣを競合的に移植した。１１日間の増殖に続いて、ＨＳＣを競合的に移植し、移植後２４か月で生着を評価した。

【0523】

図１１Ａ（対照、ＴＳＰ１－／－、αＴＳＰ１抗体処置［［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＡ５－１３３７７］（ｘ軸）におけるＣＤ４５．２生着率（％）（ｙ軸）の棒グラフ）に示すように、長期の多系列生着は、ＴＳＰ１中和抗体で処置したＨＳＣをＴＳＰ１ノックアウトＨＳＣと同様に生着し；両方の条件で、対照ＨＳＣよりも優れていた。

【0524】

次に、高齢ＨＳＣにおけるＴＳＰ１シグナル伝達を阻害することがそれらの機能を若返らせることができるかどうかを試験することに着手した。若齢マウスと高齢（１８か月齢）マウスからＨＳＣを単離し、ＴＳＰ１中和抗体の存在下または非存在下で、ｅｘ ｖｉｖｏ増殖プロトコルに供した。図１１Ｂは、若齢（対照、αＴＳＰ１処置）、及び高齢（対照、αＴＳＰ１処置）ＨＳＣ（ｘ軸）におけるＣＤ４５．２生着率（ｙ軸）の棒グラフである。図１１Ｃは、移植の２４週後の、骨髄系（ＣＤ１１Ｂ＋ＧＲ１＋）、リンパ系（Ｂ細胞、Ｂ２２０＋、Ｔ細胞、ＣＤ３＋）、若齢（対照、αＴＳＰ１処置）及び高齢（対照、α－ＴＳＰ１処置）（ｘ軸）ＨＳＣに対する系統組成（ＣＤ４５．２＋の％、ｙ軸）の棒グラフである。

【0525】

抗体で処置した高齢ＨＳＣが、抗体で処置していない若齢及び高齢ＨＳＣの両方に比べて優れた、長期間の生着を達成することができることを見出した（図１１Ｂ、１１Ｃ）。さらに、中和抗体で処置した高齢ＨＳＣは、リンパ球新生を犠牲にして骨髄性バイアスを示した対照の対応物とは異なり、バランスの取れた系列生着を提供することができた（図１１Ｂ、Ｃ）。

【0526】

図１２に示すように、高齢ＨＳＣの機能的出力を維持し、若返らせることに加えて、ＴＳＰ１の阻害により、老化と虚弱の多くの指標が改善される。

【0527】

図１２Ａは、若齢対照及び高齢対照と共に高齢ＴＳＰ１マウスの代表的な画像を示す。高齢対照の毛髪の喪失及び白髪化の一方で、高齢ＴＳＰ１マウスが若齢対照に類似している点に留意されたい。図１２Ｂは、若齢対照、高齢対照及び高齢ＴＳＰ１ ＫＯマウス（ｘ軸）の体重（ｇ）（ｙ軸）を示す棒グラフである。高齢（１８か月）ＴＳＰ１マウスの毛色と体の大きさを若齢対照及び高齢対照と比較すると、高齢ＴＳＰ１マウスは、滑らかで光沢のある被毛を有し、体重が低く、若齢対照と同様であることがわかった（図１２Ａ、１２Ｂ）。

【0528】

図１２Ｃは、若齢対照、高齢対照及び高齢ＴＳＰ１ ＫＯマウス（ｘ軸）の、骨髄微小環境におけるＶＥカドヘリン（赤）／ペリリピン（緑）／ＤＡＰＩ（青）染色を示す。ＢＭ微小環境内のペリリピン＋脂肪細胞の浸潤と蓄積は、高齢マウスでは一般的である。しかしながら、高齢ＴＳＰ１は、脂肪細胞の増加を示さず、若齢対照と同様に見える（図１２Ｃ）。

【0529】

高齢ＴＳＰ１における体重増加の欠如がＢＭに特異的ではなく全身性であることを確認するために、ＴＳＰ１マウス及び対照をＤＥＸＡスキャンに供した。図１２Ｄは、対照及びＴＳＰ１ ＫＯマウスに対する脂肪／体重比（ＤＥＸＡスキャン、ｙ軸）を示す。図１２Ｈは、対照及びＴＳＰ１ ＫＯマウスにおける骨石灰化の体重比を決定するために使用したＤＥＸＡスキャンを示す。実際、ＴＳＰ１マウスは、脂肪の蓄積が有意に少ないことがわかった。さらに、ＴＳＰ１マウスでは骨石灰化が増加していることがわかったが、これは、ＴＳＰ１マウスが骨量または強度の低下を示さないことを示唆している（図１２Ｄ、１２Ｈ）。

【0530】

高齢ＴＳＰ１マウスにおける体重増加の欠如に基づいて、血液化学分析を行った。図１２Ｅ、１２Ｆ、及び１２Ｇは、対照及びＴＳＰ１ＫＯマウスのコレステロール（図１２Ｅ）、インスリン（図１２Ｆ）、及び空腹時グルコースレベル（図１２Ｇ）の血液化学を示す。ＴＳＰ１マウスでは、総コレステロールとトリグリセリドが減少し、善玉ＨＤＬコレステロールが増加したことがわかった（図１２Ｅ）。さらに、ＴＳＰ１マウスでは、インスリンレベルが低く、空腹時血糖値が低下していた（図１２Ｆ、Ｇ）。

【0531】

最後に、ＴＳＰ１マウスを握力試験に供した。図１２Ｉは、対照及びＴＳＰ１ＫＯマウスにおける前肢／後肢の握力を示す。ＴＳＰ１マウスでは、前肢／後肢の握力が増加していることがわかった（図１２Ｉ）。

【0532】

まとめると、これらのデータは、ＴＳＰ１の阻害が心血管疾患及び肥満のリスクを低減すること、ならびに虚弱の指標を維持することによって全体的な健康寿命を向上させることができることを示している。

【0533】

実施例３の参考文献。

【0534】

１． Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｉｃｈｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． Ｂｌｏｏｄ，２０１２．１２０（６）：ｐ．１３４４－７．

【0535】

２． Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ｔｏ Ｄｅｆｉｎｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｅｎｈａｎｃｅ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１５．５（５）：ｐ．８８１－９４．

【0536】

３． Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ，２０１６．７：ｐ．１３８２９．

【0537】

４． Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｅｓ ａｇｅｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，２０１７．１２７（１１）：ｐ．４１６３－４１７８．

【0538】

５． Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ，２０１０．６（３）：ｐ．２５１－６４．

【0539】

６． Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｊａｇｇｅｄ－１ ｉｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｆｏｒ ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ，２０１３．４（５）：ｐ．１０２２－３４．

【0540】

７． Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ，Ａ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｅｘ ｖｉｖｏ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ，２０２０．１５（２）：ｐ．６２８－６４８．

【0541】

本発明が、その特定の実施形態を参照して説明されているが、様々な変更がなされ得ること、ならびに、均等物が、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく置き換えられ得ることを、当業者は理解すべきである。加えて、本発明の目的の趣旨及び範囲に、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、プロセスステップ（複数可）を採用する多くの改変がなされてもよい。そのような全ての変更は、本明細書に添付された特許請求の範囲内にあることが意図される。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図3G】

【図3H】

【図3I】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図12D】

【図12E】

【図12F】

【図12G】

【図12H】

【図12I】

【図13】

【配列表】

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【国際調査報告】