▶ アメリミューン リミテッド ライアビリティ カンパニーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-30
(54)【発明の名称】ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患の処置
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20230523BHJP
A61P 7/00 20060101ALI20230523BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20230523BHJP
A61P 7/02 20060101ALI20230523BHJP
A61K 49/00 20060101ALI20230523BHJP
A61K 45/06 20060101ALI20230523BHJP
A61K 38/55 20060101ALI20230523BHJP
G01N 33/573 20060101ALI20230523BHJP
A61K 38/05 20060101ALN20230523BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00
A61P7/00
A61P31/14
A61P7/02
A61K49/00
A61K45/06
A61K38/55
G01N33/573 A
A61K38/05
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022562750
(86)(22)【出願日】2021-04-14
(85)【翻訳文提出日】2022-12-09
(86)【国際出願番号】 US2021027195
(87)【国際公開番号】W WO2021211659
(87)【国際公開日】2021-10-21
(31)【優先権主張番号】63/009,786
(32)【優先日】2020-04-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/014,109
(32)【優先日】2020-04-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/047,888
(32)【優先日】2020-07-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/055,310
(32)【優先日】2020-07-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/109,320
(32)【優先日】2020-11-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/109,867
(32)【優先日】2020-11-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/161,905
(32)【優先日】2021-03-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521437976
【氏名又は名称】アメリミューン リミテッド ライアビリティ カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100102118
【弁理士】
【氏名又は名称】春名 雅夫
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100188433
【弁理士】
【氏名又は名称】梅村 幸輔
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100214396
【弁理士】
【氏名又は名称】塩田 真紀
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(72)【発明者】
【氏名】アルパン オーラル
(72)【発明者】
【氏名】プラスマイヤー マシュー
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA17
4C084AA24
4C084BA01
4C084BA14
4C084BA23
4C084BA25
4C084BA31
4C084BA32
4C084DC32
4C084MA02
4C084MA52
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA511
4C084ZB331
4C084ZC202
4C084ZC412
4C084ZC751
4C085HH11
4C085KA27
4C085KB82
4C085LL20
(57)【要約】
カスパーゼの上方制御は、ＣＯＶＩＤ－１９患者において見出されており、また、糖尿病、高血圧、メタボリックシンドローム、及び他の状態に罹患している患者においても発生する。そのような上方制御は、免疫系細胞、特に特定のタイプのリンパ球の死及び機能不全であるパイロトーシスと呼ばれるプロセスをもたらすため、上記の疾患又は障害を有する患者における不良な臨床転帰の原因となり得る。カスパーゼ１阻害剤などのカスパーゼ阻害剤、又は「汎カスパーゼ」阻害剤（すなわち、カスパーゼ－１を含む複数のカスパーゼ型の阻害剤）を使用して、免疫系の機能不全を制限することによって、ＣＯＶＩＤ－１９患者又は感染のリスクがある個体を処置することができる。カスパーゼ－１又は汎カスパーゼ阻害剤は、有利には、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２などのポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによる感染の前又は非常に初期に投与される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の工程を含む、Ｔ細胞リンパ球減少症又はＴ細胞のパイロトーシスを予防又は低減するためにヒト対象を処置する方法：有効量の、少なくともカスパーゼ１のカスパーゼ阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程であって、前記ヒト対象が、
（ａ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患に罹患するリスクがあり、前記対象が罹患した場合、前記疾患からの負の転帰に関連する１つ以上の共存症を有するか、又は
（ｂ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染しており、
前記投与によりＴ細胞リンパ球減少症又はＴ細胞のパイロトーシスを低減する、工程。
【請求項2】
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
前記ヒト対象が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染している、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
前記ヒト対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ１の活性が上昇している状態を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
前記ヒト対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ１の発現が上昇している状態を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項7】
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサン、ＣＴＳ－２０９０、ベルナカサン（ＶＸ－７６５）、プラルナカサン（ＶＸ－７４０）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－０４３１９８）からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
前記阻害剤が、ペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項9】
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ３、４、５、７、８、９、及び１１のうちの１つ以上を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項10】
前記阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項11】
前記阻害剤が、エムリカサンである、請求項１に記載の方法。
【請求項12】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に関連する罹患リスク及び死亡リスクを低減するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のリスクがあるヒト対象又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２に感染したヒト対象を処置する方法であって、有効量の、少なくともカスパーゼ１のカスパーゼ阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程
を含む、方法。
【請求項13】
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ３、４、５、７、８、９、及び１１のうちの１つ以上を阻害する、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記ヒト対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項15】
前記対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ１の活性が上昇している状態を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項16】
前記対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ１の発現が上昇している状態を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項17】
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサン、ＣＴＳ－２０９０、ベルナカサン（ＶＸ－７６５）、プラルナカサン（ＶＸ－７４０）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－０４３１９８）からなる群より選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項18】
前記カスパーゼ阻害剤が、ペプチドである、請求項１２に記載の方法。
【請求項19】
前記カスパーゼ阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、請求項１２に記載の方法。
【請求項20】
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項21】
以下の工程を含む、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２に感染したか又は感染した疑いのあるヒト対象を処置する方法：有効量の、ＣＯＶＩＤ－１９を治療するのに有用なカスパーゼ阻害剤を投与する工程であって、前記投与が、任意選択で、ＣＯＶＩＤ－１９症状の発症前、又は前記対象が軽度若しくは中等度の重症度のＣＯＶＩＤ－１９を有している間に行われる、工程。
【請求項22】
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ１及びカスパーゼ３を阻害する、請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
以下の工程を含む、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２に感染したヒト対象を処置する方法：有効量の、ａ）カスパーゼを阻害する化合物、（ｂ）ＡＣＥ－２受容体に結合する化合物、及び（ｃ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の主プロテアーゼに結合する化合物を投与する工程であって、前記投与する工程が、ＣＯＶＩＤ－１９症状の発症前、又は軽度若しくは中等度のＣＯＶＩＤ－１９症状を超えて進行している間に行われる、工程。
【請求項24】
デキサメタゾン、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する抗体又は抗体カクテル、ＩＬ－６に対する抗体、及びレムデシビルからなる群より選択される化合物を投与する工程を更に含む、請求項１２、２１、又は２３に記載の方法。
【請求項25】
ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２疾患の重症度を予測するための試験方法であって、対象の血液試料を試験してカスパーゼ１の量を確認し、検出された前記カスパーゼ１の量を健常個体の１つ以上の対照試料中のカスパーゼ１の量と比較する工程と、
前記対象の血液試料中のカスパーゼ１の量が、前記１つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ１の量よりも統計的に有意に多い場合、前記対象が重症型の前記疾患を経験するリスクが高いと判定する工程と
を含む、方法。
【請求項26】
複数のヒト対象におけるＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２疾患の重症度を予測するための試験方法であって、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２に感染した複数の対象の複数の血液試料を試験して、各血液試料中のカスパーゼ１の量を確認し、少なくとも１つの対象血液試料由来のカスパーゼ１の量を、健常個体の１つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ１の量と比較する工程と、
前記対象の試料中のカスパーゼ１の量が、前記１つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ１の量よりも統計的に有意に多い場合に、前記対象が重症型の疾患を経験するリスクが高いと判定し、前記対象の試料中のカスパーゼ１の量が、前記１つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ１の量よりも統計的に有意に多くはない場合に、対象が重症型の前記疾患を経験するリスクが低いと判定する、工程と
を含む、方法。
【請求項27】
前記試験が、抗体試験を用いる、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項28】
前記試験が、フローサイトメトリーを用いる、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項29】
前記試験が、カスパーゼ１の１つ以上の蛍光標識された阻害剤を用いる、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項30】
前記試験が、カスパーゼ１の１つ以上の蛍光標識された基質を用いる、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項31】
重症の疾患のリスクが高いと判定された患者をカスパーゼ１の阻害剤で処置する工程を更に含む、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項32】
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を更に有する、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項33】
前記阻害剤が、エムリカサン、ベルナカサン（ＶＸ－７６５）、プラルナカサン（ＶＸ－７４０）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－０４３１９８）からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項34】
前記阻害剤が、ペプチドである、請求項３１に記載の方法。
【請求項35】
前記阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、請求項３１に記載の方法。
【請求項36】
前記阻害剤が、エムリカサンである、請求項３１に記載の方法。
【請求項37】
以下の工程を含む、異常な赤血球凝集又は血栓症を有するか又は有するリスクがあるヒト対象を処置する方法：有効量のカスパーゼ－３阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程であって、前記ヒト対象が、（ａ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患に罹患するリスクがあるか、又は（ｂ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染しており、前記投与により異常な赤血球凝集又は血栓症を予防又は低減する、工程。
【請求項38】
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、βコロナウイルスである、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２からなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項40】
前記ヒト対象が、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに関して無症候である、請求項３７記載の方法。
【請求項41】
前記ヒト対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、請求項３７に記載の方法。
【請求項42】
前記対象が、前記対象における１つ以上の細胞型でカスパーゼ－３の活性が上昇している状態を有する、請求項３７に記載の方法。
【請求項43】
前記対象が、前記対象における１つ以上の細胞型でカスパーゼ－３の発現が上昇している状態を有する、請求項３７に記載の方法。
【請求項44】
前記カスパーゼ阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、請求項３７に記載の方法。
【請求項45】
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、請求項３７に記載の方法。
【請求項46】
以下の工程を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に関連する罹患リスク及び死亡リスクを低減するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のリスクがあるヒト対象又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２に感染した対象を処置する方法：有効量のカスパーゼ－３阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程であって、前記投与により、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２に関連する有害転帰のリスクを低減する、工程。
【請求項47】
前記有効量の阻害剤の投与が、赤血球のパイロトーシスを低減させる、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、請求項４６に記載の方法。
【請求項49】
前記カスパーゼ－３阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、請求項４６に記載の方法。
【請求項50】
前記カスパーゼ－３阻害剤が、エムリカサンである、請求項４６に記載の方法。
【請求項51】
Ｃｏｖｉｄ－１９感染の後期後遺症を有する、又は後期後遺症を発症するリスクがあるヒト対象を処置する方法であって、有効量の、少なくともカスパーゼ１のカスパーゼ阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程
を含む、方法。
【請求項52】
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ３、４、５、７、８、９、及び１１のうちの１つ以上を阻害する、請求項５１に記載の方法。
【請求項53】
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、請求項５１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
本出願及び本明細書中に記載される発明は、２０２０年４月１４日、２０２０年４月２２日、２０２０年７月２日、２０２０年７月２２日、２０２０年１１月３日、２０２０年１１月４日、及び２０２１年３月１６日にそれぞれ出願された米国仮特許出願第６３／００９，７８６号、同第６３／０１４，１０９号、同第６３／０４７，８８８号、同第６３／０５５，３１０号、同第６３／１０９，３２０号、同第６３／１０９，８６７号、及び同第６３／１６１，９０５号、並びにそれらに記載される発明に関連し、これらの出願の各々は、任意及び全ての目的のためにその全体を本明細書中に参考として組み込む。
本出願及び本明細書中に記載される発明は、２０２０年４月１４日、２０２０年４月２２日、２０２０年７月２日、２０２０年７月２２日、２０２０年１１月３日、２０２０年１１月４日、及び２０２１年３月１６日にそれぞれ出願された米国仮特許出願第６３／００９，７８６号、同第６３／０１４，１０９号、同第６３／０４７，８８８号、同第６３／０５５，３１０号、同第６３／１０９，３２０号、同第６３／１０９，８６７号、及び同第６３／１６１，９０５号、並びにそれらに記載される発明に関連し、これらの出願の各々は、任意及び全ての目的のためにその全体を本明細書中に参考として組み込む。
【0002】
発明の分野
本発明は、ウイルス感染の分野に関する。特に、本発明は、ウイルス感染、特にポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされるウイルス感染の予防及び治療に関する。
本発明は、ウイルス感染の分野に関する。特に、本発明は、ウイルス感染、特にポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされるウイルス感染の予防及び治療に関する。
【背景技術】
【0003】
新型コロナウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の大発生は、２０１９年１２月に中国の武漢で最初に確認された。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ヒトにおいて伝染性であり、ＣＯＶＩＤ－１９（コロナウイルス感染症、２０１９）と呼ばれる呼吸器疾患を引き起こす。世界保健機関は、中国のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の流行が世界の多くの国に広がったときにそれをパンデミックと指定し、ＣＯＶＩＤ－１９は現在、世界的な公衆衛生、研究、医学、経済、及び社会全体にとって重大な課題を提起している。ヒトからヒトへの拡散は、典型的には呼吸の飛沫を介する。これは、重篤な上気道感染及び下気道感染を引き起こし得、特に高齢者及び基礎疾患を有する者において、死に至る可能性がある。症状は時に遅延するか又は気づかれず、その間にヒトからヒトへの拡散が起こり得る。
【0004】
米国食品医薬品局は、入院患者のＣＯＶＩＤ－１９回復時間を短縮するのに有効になり得る抗ウイルス化合物である薬物候補レムデシビル（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）の緊急使用許可を付与しているが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を予防又は治療するための特定の治療薬は、政府規制当局によってまだ承認されていない。感染の重大性を低減させ得るように、創薬可能な標的を同定することが当技術分野において引き続き必要とされている。
【0005】
現在、ＣＯＶＩＤ－１９の可能性のある療法は、レムデシビル及びデキサメタゾンを含めていくつかしかない。ＣＯＶＩＤ－１９に関連する過度の炎症及び組織損傷は、急性の健康問題（例えば、呼吸不全、敗血症、及び究極的には死亡）又は慢性の健康問題（例えば、倦怠感、呼吸困難、咳、関節の痛み、嗅覚消失）を引き起こす可能性があり、これらの合併症のリスクは、高齢者集団、特定の民族群、並びに他の共存症を有する人々の間でより高くなる。細胞カスパーゼは、ＣＯＶＩＤ－１９の病理生理学においてある役割を果たす。
【0006】
コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）は、最新の世界的な健康脅威であり、コロナウイルス呼吸疾患の出現に先立つ２つの例である重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）及び中東呼吸症候群（ＭＥＲＳ）と同様に、公衆衛生、研究、及び医学界にとって重大な課題を提起する。ＣＯＶＩＤ－１９の病原であるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するワクチンを開発するために、活発な研究努力が現在進行中であるが、様々な治験治療アプローチも研究されている。ＣＯＶＩＤ－１９の病理は現在十分に説明されているが、病気の進行のメカニズムはまだ明らかではない。臨床試験において、デキサメタゾンは、炎症機構を示唆する、危篤状態の患者における重篤な結果を減少させた。しかしながら、特異的抗インターロイキン－６抗体（抗ＩＬ－６ Ａｂ）処置の使用は、ＣＯＶＩＤ－１９に関連するいわゆる「サイトカインストーム」を弱めることが報告されており、エクリズマブは、中等度から重度のＣＯＶＩＤ－１９において炎症マーカー及びＣ反応性タンパク（ＣＲＰ）を減少させたが、そのようなより標的化された療法からの臨床上の恩恵はわずかであった。これらの知見は、病気の進行に関与するエフェクター分子の理解不足、又は病気の過程におけるより早期の介入が必要であることを示唆する。
【0007】
呼吸器系及び胃腸系はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の最初の標的であるが、この疾患は明らかに一部の人々にとっては全身性であり、微小塞栓及び炎症によって引き起こされるようであるが、病因及び臨床症状の完全な影響は依然として不明である。Ｉ型インターフェロン応答における顕著な障害及び急速なリンパ球減少は、明らかに疾患重症度において役割を果たす。自然な進展の研究における良好な追跡調査は、更なる感染後の後遺症を明らかにする可能性が高い。ＣＯＶＩＤ－１９の重篤度の範囲は、インフルエンザ様症状を全く示さないか、又は軽微なインフルエンザ様症状を示し、急速に回復する患者から、持続的な発熱を経験し、ウイルス後症候群を伴う持続的な倦怠感を有する患者、入院するか又は挿管の必要及び集中治療をもたらす重篤な肺合併症を有する人々、死に至る人々まで非常に幅広い。これは、感染、ウイルス複製、及びＣＯＶＩＤ－１９関連病理をもたらすエフェクター経路の機構（複数可）を考慮に入れた新規治療薬の必要性を明確に強調するものである。
【0008】
パイロトーシスは、カスパーゼ－１依存性細胞死としても知られており、本質的に炎症性であり、様々な病理学的刺激（例えば、脳卒中、心臓発作、癌）によって引き起こされ、微生物感染を制御するのに重要である。パイロトーシスは、アポトーシスの制御された死プロセスとは著しく対照的に、急速な原形質膜破壊及び炎症誘発性細胞内内容物の放出によって特徴付けられる細胞死である。
【0009】
ＣＯＶＩＤ－１９は主に呼吸器症状を呈するが、まだ完全には知られていない広範囲の影響及び感染後後遺症を有する、実際には全身性の疾患である。ある範囲の症状がＣＯＶＩＤ－１９について明らかであり、一部の人々は血餅及び神経学的症状を有する。少数の小児が自己免疫症候群に罹患しており、これは既に一部の人々にとって全身性疾患であることを示唆している。病因の含意及び臨床症状の影響はまだ完全には認識されていない。感染後の後遺症のいくつかは、自然な進展の研究における良好な追跡調査が行われる場合にのみ理解される。ＣＯＶＩＤ－１９の重篤度の範囲は非常に幅広く、多くの点で前例がない。
【0010】
カスパーゼの役割：アポトーシス
誘導型カスパーゼは、内因性及び外因性アポトーシス経路によって活性化される。誘導型カスパーゼは、細胞成分を切断することによってアポトーシスを実行する実行型カスパーゼを含む他のカスパーゼの活性化をもたらす。
誘導型カスパーゼは、内因性及び外因性アポトーシス経路によって活性化される。誘導型カスパーゼは、細胞成分を切断することによってアポトーシスを実行する実行型カスパーゼを含む他のカスパーゼの活性化をもたらす。
【0011】
アポトーシスは、プログラムされた細胞死の一形態であり、細胞が形態学的変化を受けて、周囲の細胞に対するその影響を最小限に抑え、免疫応答の誘導を回避する。細胞は収縮及び凝縮し、細胞骨格は崩壊し、核膜は分解し、ゲノムＤＮＡは断片に切断される。この結果、細胞は「ブレブ」と呼ばれる自己封入体を形成して、細胞外培地への細胞成分の放出を回避する。更に、細胞膜リン脂質含量が変化し、これにより、死にかけている細胞が食細胞攻撃及び除去を受けやすくなる。
【0012】
アポトーシスカスパーゼは、誘導型カスパーゼ（カスパーゼ２、８、９、及び１０）及び実行型カスパーゼ（カスパーゼ３、６、及び７）として下位分類される。いったん誘導型カスパーゼが活性化されると、それらは連鎖反応を生じ、いくつかの実行型カスパーゼを活性化する。実行型カスパーゼは、アポトーシスの形態学的変化を誘導するために、６００を超える細胞成分を分解する。
【0013】
アポトーシス中のカスパーゼカスケードの例
内因性アポトーシス経路：細胞ストレス時に、ミトコンドリアシトクロムｃがサイトゾルに放出される。この分子は、（ＣＡＲＤ－ＣＡＲＤ相互作用を介して）誘導型カスパーゼ－９を動員するアダプタータンパク質（ＡＰＡＦ－１）に結合する。これにより、「アポトソーム」と呼ばれるカスパーゼ活性化多タンパク質複合体が形成される。いったん活性化されると、カスパーゼ９などの誘導型カスパーゼは、他の実行型カスパーゼを切断し、活性化する。これは、アポトーシスに特徴的な細胞成分の分解をもたらす。
内因性アポトーシス経路：細胞ストレス時に、ミトコンドリアシトクロムｃがサイトゾルに放出される。この分子は、（ＣＡＲＤ－ＣＡＲＤ相互作用を介して）誘導型カスパーゼ－９を動員するアダプタータンパク質（ＡＰＡＦ－１）に結合する。これにより、「アポトソーム」と呼ばれるカスパーゼ活性化多タンパク質複合体が形成される。いったん活性化されると、カスパーゼ９などの誘導型カスパーゼは、他の実行型カスパーゼを切断し、活性化する。これは、アポトーシスに特徴的な細胞成分の分解をもたらす。
【0014】
外因性アポトーシス経路：カスパーゼカスケードはまた、細胞表面死受容体を介して、細胞外リガンドによって活性化される。これは、プロカスパーゼを動員して活性化する多タンパク質死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）の形成によって行われる。例えば、Ｆａｓリガンドは、受容体の細胞外表面でＦａｓＲ受容体に結合する。これは、受容体の細胞質尾部でデスドメインを活性化する。アダプタータンパク質ＦＡＤＤは、ＤＥＤドメインを介して（デスドメインーデスドメイン相互作用によって）プロカスパーゼ８を動員する。このＦａｓＲ、ＦＡＤＤ、及びプロカスパーゼ８は、死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）を形成し、ここでカスパーゼ８が活性化される。これは、ミトコンドリアストレスを誘導することによる内因性経路の下流活性化、又は細胞成分を分解するための実行型カスパーゼ（カスパーゼ３、カスパーゼ６、及び／又はカスパーゼ７）の直接活性化のいずれかをもたらし得る。
【0015】
パイロトーシス
パイロトーシスは、免疫応答を本質的に誘導するプログラム細胞死の形態である。これは、他の種類の細胞死とは形態学的に異なり、細胞が膨張し、破裂し、炎症誘発性細胞内容物を放出する。これは、微生物感染並びに心臓発作（心筋梗塞）を含む様々な刺激に応答して行われる。ヒトにおけるカスパーゼ－１、カスパーゼ－４及びカスパーゼ－５は、パイロトーシスによる細胞死の誘導において重要な役割を果たす。これにより、細胞内及び細胞外病原体の寿命及び増殖時間が制限される。
パイロトーシスは、免疫応答を本質的に誘導するプログラム細胞死の形態である。これは、他の種類の細胞死とは形態学的に異なり、細胞が膨張し、破裂し、炎症誘発性細胞内容物を放出する。これは、微生物感染並びに心臓発作（心筋梗塞）を含む様々な刺激に応答して行われる。ヒトにおけるカスパーゼ－１、カスパーゼ－４及びカスパーゼ－５は、パイロトーシスによる細胞死の誘導において重要な役割を果たす。これにより、細胞内及び細胞外病原体の寿命及び増殖時間が制限される。
【0016】
カスパーゼ－１によるパイロトーシス
カスパーゼ－１活性化は、タンパク質のレパートリーによって媒介され、様々な病原性リガンドの検出を可能にする。カスパーゼ－１活性化のいくつかの伝達物質は、ＮＯＤ様ロイシンリッチリピート（ＮＬＲ）、ＡＩＭ２様受容体（ＡＬＲ）、パイリン、及びＩＦＩ１６である。
カスパーゼ－１活性化は、タンパク質のレパートリーによって媒介され、様々な病原性リガンドの検出を可能にする。カスパーゼ－１活性化のいくつかの伝達物質は、ＮＯＤ様ロイシンリッチリピート（ＮＬＲ）、ＡＩＭ２様受容体（ＡＬＲ）、パイリン、及びＩＦＩ１６である。
【0017】
これらのタンパク質は、インフラマソームと呼ばれる多タンパク質活性化複合体を形成することによって、カスパーゼ－１活性化を可能にする。例えば、ＮＯＤ様ロイシンリッチリピートＮＬＲＰ３は、細胞からのカリウムイオンの流出を感知する。この細胞イオン不均衡は、ＮＬＲＰ３分子のオリゴマー化をもたらして、ＮＬＲＰ３インフラマソームと呼ばれる多タンパク質複合体を形成する。プロカスパーゼ－１は、二量体化し、自己タンパク質分解切断を受けるために、他のプロカスパーゼ分子に近接させられる。
【0018】
カスパーゼ－１によるパイロトーシスをもたらすいくつかの病原性シグナルは、以下の通りである：パイロトーシスを誘導するＡＩＭ２様受容体に結合する宿主サイトゾル中のＤＮＡ；及び細菌由来のＩＩＩ型分泌系装置は、ＮＡＩＰと呼ばれるＮＯＤ様ロイシンリッチリピート受容体に結合する（ヒトで１つ、マウスで４つ）。
【0019】
ヒトにおけるカスパーゼ－４及びカスパーゼ－５によるパイロトーシス
カスパーゼ４及び５は、（グラム陰性細菌の細胞壁に見出される）リポ多糖（ＬＰＳ）分子が宿主細胞の細胞質に見出される場合に、直接的なパイロトーシスを誘導する能力を有する。例えば、カスパーゼ４は受容体として作用し、インフラマソーム複合体又はカスパーゼ－１活性化を必要とせずにタンパク質分解的に活性化される。
カスパーゼ４及び５は、（グラム陰性細菌の細胞壁に見出される）リポ多糖（ＬＰＳ）分子が宿主細胞の細胞質に見出される場合に、直接的なパイロトーシスを誘導する能力を有する。例えば、カスパーゼ４は受容体として作用し、インフラマソーム複合体又はカスパーゼ－１活性化を必要とせずにタンパク質分解的に活性化される。
【0020】
パイロトーシスを起こすカスパーゼの重要な下流基質は、ガスダーミンＤ（ＧＳＤＭＤ）である。
【0021】
炎症における役割
炎症は、組織損傷又は細菌感染などの有害な刺激からの破壊後に、恒常性状態を回復させるための生物による防御的試みである。カスパーゼ－１、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、及びカスパーゼ－１１は、「炎症性カスパーゼ」と考えられる。
炎症は、組織損傷又は細菌感染などの有害な刺激からの破壊後に、恒常性状態を回復させるための生物による防御的試みである。カスパーゼ－１、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、及びカスパーゼ－１１は、「炎症性カスパーゼ」と考えられる。
【0022】
カスパーゼ－１は、ＩＬ－１β及びＩＬ－１８を含む炎症促進性サイトカインの活性化において重要である。これらは、免疫細胞へのシグナルとして作用し、損傷部位への免疫細胞動員にとって好ましい環境を作る。したがって、カスパーゼ－１は、自然免疫系において基本的な役割を果たす。この酵素は、プロＩＬ－１β及びプロＩＬ １８などのサイトカインのプロセシング並びにそれらの分泌に関与する。
【0023】
ヒトにおけるカスパーゼ－４及び－５は、それらがグラム陰性細菌に豊富な分子であるＬＰＳに結合する受容体として独特の役割を有する。この結果、カスパーゼ－１を活性化することによって、ＩＬ－１β及びＩＬ－１８サイトカインのプロセシング及び分泌が生じ得る。この下流効果は、上記と同様である。それはまた、プロセシングされない別の炎症性サイトカインの分泌をもたらす。これはプロＩＬ１αと呼ばれる。サイトカイン分泌を補助する炎症性カスパーゼであるカスパーゼ－１１の証拠もある。これは、ＩＬ－１β分泌を遮断する膜チャネルを不活性化することによって行われる。
【0024】
カスパーゼはまた、転写レベルで炎症反応を誘導することができる。ＩＦＮ、ＴＮＦ、ＩＬ－６、及びＩＬ－８などの炎症性サイトカインの転写を補助する転写因子である核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ）の転写を促進するという証拠がある。例えば、カスパーゼ－１はカスパーゼ－７を活性化し、これは次にポリ（ＡＤＰ）リボースを切断し、ＮＦ－κＢ制御遺伝子の転写を活性化する。
【発明の概要】
【0025】
本発明の１つの態様に従って、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ、及びＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２（これは、ＣＯＶＩＤ－１９を引き起こす））による感染に関連する罹患率及び死亡率を低下させるために、ヒト対象又は患者を予防的に処置する方法が提供される。予防的又は治療的処置は、有効量のカスパーゼ阻害剤、有利には少なくともカスパーゼ１の阻害剤、すなわち、カスパーゼ１のみ、又はカスパーゼ１及び１つ以上の他のカスパーゼ（例えば、カスパーゼ３、４、５、７、８、９、及び１１）の阻害剤を、特定のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染していることが分かっている若しくはその疑いがあるか又はその感染のリスクがある患者又は対象に投与することによって達成される。有利なことに、そのような処置は、患者のＴ細胞のパイロトーシスを低減させる。
【0026】
本発明の別の態様によると、特定のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに関連する罹患率及び死亡率を低下させるために、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ、及びＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２に感染した患者を処置する方法が提供される。この態様の特定の好ましい実施形態において、有効量のカスパーゼ１の（又は複数のカスパーゼの）阻害剤が、特定のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染していることが分かっている又は感染している疑いのある患者に投与される。有利なことに、そのような処置は、患者のＴ細胞のパイロトーシスを低減させる。
【0027】
本発明の別の態様によると、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ、及びＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２によって引き起こされる疾患の重症度を予測する試験のための方法が提供される。そのような方法では、特定のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染していることが分かっている又は感染している疑いのある患者の血液試料を試験して、試料中に存在するカスパーゼ活性、有利にはカスパーゼ１活性のレベルを確認する。得られたカスパーゼ活性レベルは、健常個体の１つ以上の対照試料におけるカスパーゼ活性レベルと比較される。特定のカスパーゼ（複数可）、例えば、カスパーゼ１及び／又はカスパーゼ３の活性レベルが、１つ以上の対照試料中のカスパーゼ１及び／又はカスパーゼ３活性レベルよりも統計的に有意に高い場合、患者は、特定のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－Ｃ０Ｖ－２の場合、ＣＯＶＩＤ－１９）に関連する疾患の重症型を経験するリスクが高いと判定される。
【0028】
本発明の更に別の態様によると、複数の患者において、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ、及びＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２）によって引き起こされる疾患の重症度を予測する試験のための方法が提供される。特定のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２）に感染していることが分かっている、又はその疑いがある複数の患者の複数の血液試料を試験して、各血液試料中のカスパーゼ１活性のレベルを確認する。各血液試料において確認された量を、健常個体の１つ以上の対照試料におけるカスパーゼ１活性のレベルと比較する。患者は、カスパーゼ１活性のレベルが、１つ以上の対照試料におけるカスパーゼ１のレベルよりも統計学的に有意に高い場合に、重篤な形態の疾患を経験リスクが高いと判定される。逆に、患者は、カスパーゼ１のレベルが１つ以上の対照試料中のカスパーゼ１のレベルよりも統計的に有意に高くはない場合、重症型の疾患を経験するリスクが低いと判定される。よりリスクの高い個体は、カスパーゼ阻害剤で処置することができる。
【0029】
本明細書を読んだ当業者に明らかであるこれらの実施形態及び他の実施形態は、感染のリスクがある者及び感染した者、特に重大な罹患率及び死亡率を経験するリスクが最も高い者を処置する方法を当技術分野に提供する。
【図面の簡単な説明】
【0030】
【図1】先天性免疫応答。ＣＤ１６＋単球はＣＤ１１ｂの有意な上方制御を示し、炎症促進性ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球はＣＤ３８の上方制御を示す。約１５％のＢ細胞が、表面のテセリン染色を示す。
【図2】体液性免疫応答。Ｂ細胞は、ＣＤ２７＋メモリー、並びに表面ＩｇＧ及びＩｇＡの著しい喪失を示す。
【図3】Ｔ細胞反応。ＣＤ３８発現の上昇にも関わらず、ほとんどのＣＤ８Ｔ細胞はナイーブであり、ＩＬ－１２刺激に対してＳＴＡＴ－４のリン酸化が遅く不十分であった。Ｔ細胞ＣＤ３８上方制御は、末梢血におけるＨＩＶ残存とＴ細胞活性化との間の関係と同様に、ウイルス残存の指標であり得る。比較的正常なＣＤ２５＋Ｔ細胞カウントにもかかわらず、Ｔ濾胞性ヘルパー細胞が減少し、Ｔ－ｒｅｇ細胞が完全に存在しない。
【図4】細胞傷害性応答。ＣＤ８ Ｔ細胞は、パーフォリン陽性細胞の％の減少を示す。ＮＫ細胞パーフォリン／グランザイム染色では変化は観察されない。単球細胞質ＩＬ６、ＭＩＰ１α、β、及びＴＮＦαのレベルは、対照と比較して全体的に正常であった（表２も参照）。
【図5】パイロトーシス。ＣＤ３＋Ｔ細胞並びにＣＤ４５＋ＣＤ３－細胞のカスパーゼ－１染色の増加が観察される。カスパーゼ－３染色は対照と異ならなかった（データは示さず）。
【図6A】Ｂ細胞の測定値及びカスパーゼ－１の量を示す。
【図6B】Ｂ細胞の測定値及びカスパーゼ－１の量を示す。
【図6C】Ｂ細胞の測定値及びカスパーゼ－１の量を示す。
【図6D】Ｂ細胞の測定値及びカスパーゼ－１の量を示す。
【図7】健常対Ｃｏｖｉｄ－１９（＋）試料中のＣＤ２０＋ＣＤ３１７＋細胞のパーセント。Ｂ細胞上のＣＤ３１７（テザリン）発現の上昇は、ＩＦＮ－α応答の指標である。
【図8】ＣＤ３陰性（Ｂ細胞及びＮＫ細胞）、ＣＤ３＋、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞における陽性パーセント（％）及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）としてのカスパーゼ－１の発現。
【図9】（集中治療室（ＩＣＵ）において）重篤である患者は、ＣＤ３陰性細胞、ＣＤ３＋細胞、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞において上昇した活性カスパーゼ－１の発現を有し、この発現は、重症でない患者（非ＩＣＵ）よりも低い。
【図10】ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞内のカスパーゼ－１活性（以下の実施例４を参照）。
【図11】Ａは、ＣＤ３＋Ｔ細胞カスパーゼ－１活性（以下の実施例５を参照）。Ｂは、ＣＤ４＋Ｔ細胞カスパーゼ－１活性（以下の実施例５を参照）。
【図12】「レッドリング」実験結果（以下の実施例６を参照）。
【図13】「レッドリング」実験結果（以下の実施例６を参照）。
【図14】「レッドリング」実験結果（以下の実施例６を参照）。
【図15】「レッドリング」実験結果（以下の実施例６を参照）。
【図16】「レッドリング」実験結果（以下の実施例６を参照）。
【図17】エムリカサンに応答したＣＯＶＩＤ－１９（＋）患者試料におけるカスパーゼ－１活性（以下の実施例７を参照）。
【図18】ＣＯＶＩＤ－１９陽性患者試料における分泌ヒトＩＬ－１８（ｈＩＬ－１８）とＣＤ３＋（Ａ）及びＣＤ４＋（Ｂ）活性カスパーゼ１＋ＭＦＩとの相関。（以下の実施例８を参照）。
【図20】パネルＡ～Ｇ：患者の人口統計（以下の実施例９及び表１～３を参照）。図２０Ａ～２０Ｄ健常対象並びに非ＩＣＵ及びＩＣＵ ＣＯＶＩＤ－１９患者由来の異なる細胞種におけるカスパーゼ１活性。図２０Ｅ～２０Ｇ他の細胞型と相関したＣＤ４＋Ｔ細胞におけるカスパーゼ１。
【図21】成人及び小児患者におけるカスパーゼ１のレベルの比較（以下の実施例９を参照）。
【発明を実施するための形態】
【0031】
発明の詳細な説明
本発明は、ウイルス感染、特にポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされるウイルス感染の予防及び治療に関する。
本発明は、ウイルス感染、特にポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされるウイルス感染の予防及び治療に関する。
【0032】
本発明の方法は、ヒト集団の間を循環する任意の形態若しくは株のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む、ヒトに感染する、又は季節性バージョン、変異バージョン、遺伝的浮動に起因するバージョンなどの出現する、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる感染の治療に関する。このようなポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスは全て、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ウイルスがカスパーゼ１活性を上方制御し、その場合、本発明に従って治療することができる限り、本発明の範囲内に包含される。
【0033】
本発明の方法はまた、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）及び高炎症性障害（例えば、二次血球貪食症候群、マクロファージ活性化症候群、敗血症のマクロファージ活性化様症候群、及びサイトカイン放出症候群）を処理することに関する。これらの障害は、サイトカインストーム症候群として知られることもある。
【0034】
タンパク質分解酵素カスパーゼ－１は、ＣＯＶＩＤ－１９患者のリンパ球において過剰発現されることが発見されている。特定の理論に束縛されるものではないが、この発見は、ＣＯＶＩＤ－１９患者における、並びにポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる他の疾患における、Ｔ細胞枯渇及び他のリンパ細胞型の機能異常の可能な機構の中のパイロトーシスを意味する。
【0035】
本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などのポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによる感染前又は感染中に患者を処置する方法を開発した。具体的には、カスパーゼ１は、そのようなウイルスによる感染に関連する罹患率及び死亡率を低下させるための創薬可能な標的として同定されている。以下の実施例１及び２に記載されるように、免疫力の低下したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２犠牲者におけるＣＤ４５＋細胞は、カスパーゼ１の発現の上昇を有することが発見された。ＣＤ４５抗原（白血球共通抗原）は、成熟赤血球を除くほぼ全ての造血細胞上で発現される。カスパーゼ１（以前はインターロイキン－１変換酵素（ＩＣＥ）として知られていた）は、炎症性サイトカインインターロイキン１β（ＩＬ－１β）及びインターロイキン１８（ＩＬ－１８）の前駆体並びにパイロトーシス誘導因子ガスダーミンＤを活性成熟ペプチドへとタンパク質分解的に切断する。
【0036】
本発明は、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１（ＳＡＲＳを引き起こす）、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（ＭＥＲＳを引き起こす）、及びＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２（ＣＯＶＩＤ－１９を引き起こす）に感染したヒト対象又は患者を処置する方法に関する。予防的又は治療的処置は、有効量の、少なくとも１つのカスパーゼの阻害剤を、特定のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染している、又は感染のリスクがあると分かっている、又はその疑いがある患者又は対象に投与することによって達成される。本明細書中で使用される場合、「有効量」は、感染に関連する罹患率及び死亡率を低下させるために必要とされる量である。カスパーゼ阻害剤の「有効量」はまた、カスパーゼ活性のインビトロアッセイにおいて、特定のカスパーゼの１つ以上の生化学的活性を減少させる量である。カスパーゼ阻害剤の「有効量」はまた、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２）に感染していることが分かっている又は感染している疑いのある患者又は対象の集団に投与される場合、阻害剤が投与されていない同様の患者又は対象の集団と比較して、このような集団における入院及び／又は症状の減少を引き起こす量である。有利なことに、そのような処置は、患者のＴ細胞のパイロトーシスを低減させる。
【0037】
ここに提示されたデータは、カスパーゼ－１とＣＯＶＩＤ－１９とを関連付け、有意な治療上の意味を伴う。炎症反応の阻害よりもむしろ、炎症を刺激する壊死性リンパ球死の防止がより重要になる。ＣＯＶＩＤ－１９の後期段階は、非常に高い死亡率を有するウイルス性敗血症様臨床像によって特徴付けられる。本発明の方法は、ウイルス、パイロトーシス、又はその両方を標的化することによって、この末期疾患への進行を予防する。
【0038】
実際に、本明細書に記載されるカスパーゼの関与の証拠は、疾患の全身性の性質だけでなく、「ロングホーラー」と呼ばれる患者において観察される慢性度にも更なる光を当てる。
【0039】
ＣＯＶＩＤ－１９に見られる病気の進行におけるアポトーシス及びパイロトーシスの両方の細胞死の役割についての証拠も蓄積されている。パイロトーシスは、インフラマソーム活性化カスパーゼ－１によるそれらの前駆体の切断の結果として、成熟ＩＬ－１８及びＩＬ－１βの産生をもたらす。パイロトーシス細胞から放出されると、ＩＬ－１８がＩＦＮ－γ応答を誘導する一方、ＩＬ－１βは好中球の流入及び活性化、Ｔ及びＢ細胞の活性化、サイトカイン及び抗体の産生を誘導し、Ｔｈ１７の分化を促進する。高レベルのＩＬ－１８、ＩＬ－１β、及び他の炎症性サイトカインが、ＣＯＶＩＤ－１９患者の肺及び血清から観察された。
【0040】
インフラマソームの活性化の最終的な結果は、病原体に対する免疫性を増強するためのＩＬ－１β及びＩＬ－１８の放出であるが、このプロセスは、免疫細胞のパイロトーシスではなく免疫系に危険シグナルを送出する、死滅する感染細胞によって駆動されると予想される。特定の理論に拘束されることを望まないが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の特徴的な特徴であるＴ細胞死は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が、免疫細胞及び非免疫細胞の両方の細胞内容物の放出による制御されない炎症反応を促進すると共に適応免疫欠損を作り出すことによってヒト免疫を回避する機構であると考えられる。更に、メモリーＴヘルパー細胞において主に観察されるカスパーゼ－１の上方制御は、なぜ高齢者が、若年者と比較して、より重症で複雑な疾患プロセスを経やすいかを説明することができるであろう。
【0041】
インフラマソームの活性化は、免疫応答を構築する際の病原体に対する正常な応答の一部であるが、調節不全である又は誤った細胞型において起こるプロセスは、有害な影響を及ぼす可能性がある。再び特定の理論に拘束されることを望まないが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の特徴的な特徴であるＴ細胞死は、このウイルスが、危険シグナルとして機能し得る細胞内容物の放出による制御されない炎症反応を促進すると共に、適応免疫欠損を作り出すことによってヒト宿主を回避する方法であると考えられる。最終的な結果は、ウイルス感染によって引き起こされる炎症を更に刺激する免疫系の自己損傷性遮断であり、急性ウイルス誘導性免疫不全（ＡＶＩＤ）をもたらす。カスパーゼ－１とＣＯＶＩＤ－１９との間のこの関係は、炎症反応の阻害よりもむしろパイロトーシス性リンパ球死を予防することがより望ましい目標であるため、有意な治療上の意味を有する。サイトカイン標的療法の失敗は、炎症反応に対する適応免疫機能不全の疾患進行における相対的重要性に起因し得る。
【0042】
これらの知見は、ＣＯＶＩＤ－１９における難解な観察のいくつかの解明を助けた。例えば、小児が全体として成人よりも良好に機能することは、はるかに低いカスパーゼ－１発現プロファイルによって説明することができる。カスパーゼ－１発現は、メモリーＴ細胞により標的化され、このことは、高齢の集団（メモリーＴ細胞の割合がより高い）がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によってはるかに深刻な影響を受ける理由の説明となる。
【0043】
デキサメタゾン、レムデシビル、及び抗体カクテル療法の使用は、少なくともいくつかの患者群において初期の期待を示したが、いずれも、ＣＯＶＩＤ－１９に関連する急性合併症又は後遺症をもたらす根本的な疾患機構に対処していない。先天性及び適応免疫細胞の増強された活性化状態が重症のＣＯＶＩＤ－１９の危険因子であるという証拠が蓄積されており、その経過は、疾病管理センターによって広範に詳述されている多数の共存症状によって影響され得る。
【0044】
ウイルス性疾患は、典型的には、リンパ球増加症（例えば、ＣＭＶ、インフルエンザ、水痘）又はより稀にはリンパ球減少症（例えば、Ｈ５Ｎ１、Ｈ１Ｎ１、ＨＩＶ）のいずれかを呈するリンパ球の機能又はライフサイクルに影響を及ぼすが、ＣＯＶＩＤ－１９の状況における好中球増加の所見は、一般的であるが興味深い所見であった。本明細書中に記載されるように、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する好中球応答における活性化のタイミングと相まって、炎症及びアポトーシスカスパーゼ上方制御の独特な組み合わせは、ＣＯＶＩＤ－１９におけるこの独特な検査所見をもたらし得る。
【0045】
まとめると、本明細書中に記載される知見は、リンパ球の壊死細胞死から生じる誘導された急性免疫不全が、ＣＯＶＩＤ－１９進行において重要な因子を果たすことを示す。特定の理論に束縛されるものではないが、炎症反応は、免疫系細胞の壊死性細胞死からの「危険シグナル」に対して二次的であり、死滅しつつある組織細胞によって誘導される炎症よりも激しい炎症をもたらすと考えられる。最終的な結果は、自己損傷性細胞死及びその後のサイトカインストームであり、これはウイルス感染によって引き起こされる炎症を更に刺激し、ＡＶＩＤをもたらす。サイトカイン標的療法の失敗は、適応免疫機能不全が疾患進行における炎症反応よりも大きな影響を及ぼすためであり得る。カスパーゼ－１とＣＯＶＩＤ－１９との間のこの関係は、炎症反応の阻害よりもむしろパイロトーシス性リンパ球死を予防することがより望ましい治療オプションであるため、有意な治療上の意味を有する。理想的なアプローチは、ウイルス、パイロトーシス、又はその両方を標的とする治療薬の使用によって、この末期疾患への進行を予防することである。
【0046】
本発明者らは、ＲＢＣ（赤血球（red blood cell）、又は赤血球（erythrocyte））における変化がカスパーゼ－３経路に更に関与することを示すので、ＣＯＶＩＤ－１９におけるカスパーゼ媒介疾患プロセスは、カスパーゼ－１及びＴ細胞に限定されない。
【0047】
炎症性微小血管血栓は、肺、腎臓、及び心臓に存在し、ＲＢＣ形態の変化と共に血小板及びフィブリンに関連する好中球細胞外トラップを含む。したがって、現在、ＲＢＣはＣＯＶＩＤ－１９患者で観察される凝固障害に関与していると考えられている。ＣＯＶＩＤ－１９血液試料中のＰＢＭＣを汚染するＲＢＣ層は、インフルエンザなどの他の感染においても時折観察されるが、ＣＯＶＩＤ－１９に関連するカスパーゼ－３の上方制御は、ＲＢＣをこの疾病の合併症に機構的に関連付けるＲＢＣの変化をもたらし得る。本発明の１つの実施形態において、カスパーゼ阻害剤（例えば、カスパーゼ１及び／又は３の阻害剤のような１つ以上のカスパーゼ阻害剤）は、血栓塞栓性事象を有するか、又はそのリスクが高い患者を処置するために使用される。
【0048】
本明細書に記載される知見は、病気の進行、特にＣＯＶＩＤ－１９の進行を緩和又は予防するために、ウイルス感染の過程の初期にカスパーゼ阻害を使用する処置アプローチを示す。
【0049】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、免疫系細胞に感染しないようであるが（マクロファージ及び／又は樹枝細胞の可能な例外を伴う）、重症型のＣＯＶＩＤ－１９におけるＴ細胞枯渇の結果は、ＨＩ：カスパーゼ－１活性化にも見られるものと類似の機構によるようである。また、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２への曝露前のベースラインにおけるＴ細胞カスパーゼ発現に及ぼす異なる共存状態の影響をよりよく理解することは、重症疾患の発症において重要であり得る。重症のＣＯＶＩＤ－１９の高リスク状態と重複する多種多様な障害における活性化インフラマソームを指摘する多くの証拠がある。
【0050】
したがって、エフェクターサイトカインの産生の上流にあるインフラマソーム／パイロトーシス経路を標的とする戦略は、ＣＯＶＩＤ－１９誘導性免疫摂動を逆転させる有効なアプローチである。
【0051】
本発明は、様々なウイルス疾患、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ、及びＭＥＲＳを含むβコロナウイルスなどのプラス鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患の疾患進行を軽減又は予防するために、有利には感染の過程の初期にカスパーゼ阻害剤を使用する処置アプローチに関する。
【0052】
ＲＮＡウイルス
ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスは、そのゲノムがポジティブセンス一本鎖ＲＮＡ分子によってコードされるものであり、これは、ウイルスゲノム自体が、感染した宿主細胞においてコードされたタンパク質を産生するように翻訳され得るメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）として機能し得ることを意味する。複製時に（二本鎖ＲＮＡ中間体を介して）、そのようなＲＮＡ分子は、ｍＲＮＡとして、及び新しいウイルス粒子のゲノムとして働くことができる。ポジティブセンスＲＮＡウイルスは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、西ナイルウイルス（ＷＮＶ）、デングウイルス、及び種々のコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、ピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルス）、レトロウイルス（例えば、ＨＩＶ）、並びにヒトに感染し得るライノウイルス（感冒を引き起こす）のような多くのヒト病原体を含む、多数の既知のウイルスの原因である。
ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスは、そのゲノムがポジティブセンス一本鎖ＲＮＡ分子によってコードされるものであり、これは、ウイルスゲノム自体が、感染した宿主細胞においてコードされたタンパク質を産生するように翻訳され得るメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）として機能し得ることを意味する。複製時に（二本鎖ＲＮＡ中間体を介して）、そのようなＲＮＡ分子は、ｍＲＮＡとして、及び新しいウイルス粒子のゲノムとして働くことができる。ポジティブセンスＲＮＡウイルスは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、西ナイルウイルス（ＷＮＶ）、デングウイルス、及び種々のコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、ピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルス）、レトロウイルス（例えば、ＨＩＶ）、並びにヒトに感染し得るライノウイルス（感冒を引き起こす）のような多くのヒト病原体を含む、多数の既知のウイルスの原因である。
【0053】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２
現在まで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、（２００９年にＭＥＲＳ（中東呼吸器症候群）流行を引き起こした）２２９Ｅ、ＮＬ６３、ＯＣ４３、ＨＫＵ１、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及び（２００３年に初期ＳＡＲＳ（重症後天性呼吸器症候群）流行を引き起こした）元のＳＡＲＳ－ＣｏＶに次いで、ヒトに感染することが知られている７番目のコロナウイルスである。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ及びＭＥＲＳ－ＣｏＶと同様に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２はβコロナウイルスである。
現在まで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、（２００９年にＭＥＲＳ（中東呼吸器症候群）流行を引き起こした）２２９Ｅ、ＮＬ６３、ＯＣ４３、ＨＫＵ１、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及び（２００３年に初期ＳＡＲＳ（重症後天性呼吸器症候群）流行を引き起こした）元のＳＡＲＳ－ＣｏＶに次いで、ヒトに感染することが知られている７番目のコロナウイルスである。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ及びＭＥＲＳ－ＣｏＶと同様に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２はβコロナウイルスである。
【0054】
カスパーゼ阻害剤
カスパーゼ１のいくつかの阻害剤が開発されており、これには、ベンルナサン（ＶＸ－７６５）及びプラルナサン（ＶＸ－７４０）、並びに０－デスエチル－ベンルナサン（ＶＲＴ－０４３１９８）が含まれる。米国特許第７，８０７，６，５９号を参照されたく、その開示は、カスパーゼ阻害剤を説明するために本明細書に明示的に組み込まれる。更に、ペプチド阻害剤がカスパーゼ１のために開発されている。そのようなペプチド阻害剤の１つは、Ａｃ－ＹＶＡＤ－ｃｍｋ（アセチルチロシル－バリル－アラニル－アスパルチルクロロメチルケトン）である。別のペプチド阻害剤は、カルボベンゾキシ－バリル－アラニル－アスパルチル－［０－メチル］－フルオロメチルケトン（Ｚ－ＶＡＤ－ＦＭＫ）である。Ｚ－ＶＡＤ－ＦＭＫは、カスパーゼプロテアーゼの触媒部位に不可逆的に結合する細胞透過性汎カスパーゼ阻害剤である。これらは、カスパーゼ１を効果的に阻害する用量で使用することができる。カスパーゼ阻害剤は、カスパーゼ－１に特異的であり得るか、又はより無差別であり得、更なるカスパーゼを阻害し、例えば、阻害剤は、汎カスパーゼ阻害剤（すなわち、２つ以上の異なるタイプのカスパーゼの１つ以上の活性を阻害する阻害剤、例えば、カスパーゼ１及び３を阻害する阻害剤であり得る。別段の指定がない限り、「カスパーゼ阻害剤」は、単一のカスパーゼ種を阻害するカスパーゼ阻害剤、並びに２つ以上のカスパーゼ種を阻害するカスパーゼ阻害剤を含む任意のカスパーゼ阻害剤を指すが、１つの種の阻害の程度は、１つ以上の他のカスパーゼ種の阻害の程度とは異なっている場合がある。更に別のカスパーゼ－１阻害剤は、ＣＴＳ－２０９０である。これらの阻害剤の投与は、経口、静脈内、皮内、気管内、又は薬物若しくはプロドラッグの適切なプロセシング及び取り込みに適合する他の手段であり得る。
カスパーゼ１のいくつかの阻害剤が開発されており、これには、ベンルナサン（ＶＸ－７６５）及びプラルナサン（ＶＸ－７４０）、並びに０－デスエチル－ベンルナサン（ＶＲＴ－０４３１９８）が含まれる。米国特許第７，８０７，６，５９号を参照されたく、その開示は、カスパーゼ阻害剤を説明するために本明細書に明示的に組み込まれる。更に、ペプチド阻害剤がカスパーゼ１のために開発されている。そのようなペプチド阻害剤の１つは、Ａｃ－ＹＶＡＤ－ｃｍｋ（アセチルチロシル－バリル－アラニル－アスパルチルクロロメチルケトン）である。別のペプチド阻害剤は、カルボベンゾキシ－バリル－アラニル－アスパルチル－［０－メチル］－フルオロメチルケトン（Ｚ－ＶＡＤ－ＦＭＫ）である。Ｚ－ＶＡＤ－ＦＭＫは、カスパーゼプロテアーゼの触媒部位に不可逆的に結合する細胞透過性汎カスパーゼ阻害剤である。これらは、カスパーゼ１を効果的に阻害する用量で使用することができる。カスパーゼ阻害剤は、カスパーゼ－１に特異的であり得るか、又はより無差別であり得、更なるカスパーゼを阻害し、例えば、阻害剤は、汎カスパーゼ阻害剤（すなわち、２つ以上の異なるタイプのカスパーゼの１つ以上の活性を阻害する阻害剤、例えば、カスパーゼ１及び３を阻害する阻害剤であり得る。別段の指定がない限り、「カスパーゼ阻害剤」は、単一のカスパーゼ種を阻害するカスパーゼ阻害剤、並びに２つ以上のカスパーゼ種を阻害するカスパーゼ阻害剤を含む任意のカスパーゼ阻害剤を指すが、１つの種の阻害の程度は、１つ以上の他のカスパーゼ種の阻害の程度とは異なっている場合がある。更に別のカスパーゼ－１阻害剤は、ＣＴＳ－２０９０である。これらの阻害剤の投与は、経口、静脈内、皮内、気管内、又は薬物若しくはプロドラッグの適切なプロセシング及び取り込みに適合する他の手段であり得る。
【0055】
小分子カスパーゼ阻害剤の大半は、開発の初期段階にある。マイクロモル濃度範囲でカスパーゼ－３、－８及び－９を選択的に阻害する小分子阻害剤であるＮＣＸ－１０００は、慢性肝疾患の治療のための第ＩＩ相臨床試験中であった。ＮＣＸ－１０００は、おそらくＳ－ニトロシル化を介してカスパーゼの触媒システインを含むチオール含有部分に共有結合し、それによって酵素の阻害を引き起こすステロイドベースのＮＯ供与体である。肝硬変及び門脈圧亢進症の患者における第ＩＩ相無作為化二重盲検用量漸増試験の結果は、ＮＣＸ－１０００投与が安全であることを明らかにした。（ＭａｃＫｅｎｚｉｅ ＳＨ１，Ｓｃｈｉｐｐｅｒ ＪＬ，Ｃｌａｒｋ ＡＣ．Ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｃａｓｐａｓｅｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｄｅｖｅｌ．２０１０ Ｓｅｐ；１３（５）：５６８－７６．）。
【0056】
エムリカサン
本発明の方法において使用することができる１つの汎カスパーゼ阻害剤は、エムリカサン（ＩＤＮ－６５５６、ＰＦ－０３４９１３９０；ＩＵＰＡＣ名（３Ｓ）－３－｛［（２Ｓ）－２－｛［２－（２－ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌａｎｉｌｉｎｏ）－２－ｏｘｏａｃｅｔｙｌ］ａｍｉｎｏ｝ｐｒｏｐａｎｏｙｌ］ａｍｉｎｏ｝－４－ｏｘｏ－５－（２，３，５，６－ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｏｘｙ）ｐｅｎｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）である。これは、慢性ＨＣＶ感染及び肝臓移植拒絶の治療のために研究されている不可逆的な経口活性汎カスパーゼ阻害剤である。（ＭａｃＫｅｎｚｉｅ ＳＨ１，Ｓｃｈｉｐｐｅｒ ＪＬ，Ｃｌａｒｋ ＡＣ．Ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｃａｓｐａｓｅｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｄｅｖｅｌ．２０１０ Ｓｅｐ；１３（５）：５６８－７６．）。米国特許第６，１９７，７５０号、同第６，５４４，９５１号、同第７，０５３，０５６号、同第７，１８３，２６０号、同第７，６９２，０３８号、及び公開された国際公開第２０１７１１７４７８（Ａ１）号（これらの各々は、カスパーゼ阻害剤を例示するために本明細書中に明示的に組み込む）も参照されたい。エムリカサンは、例えば、１日当たり５ｍｇ～１００ｍｇ、１０ｍｇ～７５ｍｇ、又は２５ｍｇ～５０ｍｇの範囲の用量で投与することができる。１日用量は、単回投与として、又は１日を通じて分割した用量で投与することができる。他のカスパーゼ阻害剤と同様に、エムリカサンは、重篤な疾患症状のリスクを予防又は低下させるために予防的に投与することができる。エムリカサンは、６０歳を超える人々、免疫力の低下した個体、糖尿病患者などの高リスク群の人々に特に有用である。他のカスパーゼ阻害剤と同様に、エムリカサンは、ＣＯＶＩＤ－１９（又は季節性形態のＣＯＶＩＤ－１９）の症状の発症時に、又は感染の経過中の後期に投与することができる。エムリカサンは、カスパーゼ－１（及び他のカスパーゼ）を阻害するだけでなく、その後の報告は、エムリカサンがまた、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の主要プロテアーゼの活性を阻害するだけでなく、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するＡＣＥ－２受容体の結合活性を阻害し得ることを示した。このような多因子活性は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などのプラス鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる感染症の治療において有用であることが証明される。エムリカサン又は他のカスパーゼ阻害剤を、ＡＣＥ－２受容体結合及び／又は必須ウイルスコードタンパク質活性（例えば、ウイルスコードプロテアーゼ、核酸ポリメラーゼなど）の阻害剤である他の化合物と組み合わせることが望ましい場合がある。このような組み合わせは、ＣＯＶＩＤ－１９、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳなどの疾病を治療するための有効な「カクテル」を形成することができる。ここで、「カクテル」とは、複数（すなわち、２つ以上）の化学的に異なる分子、例えば、２つの異なる薬物を含む組成物又は治療であって、単一の組成物（又は剤形、例えば、患者への投与前に再構成されることが意図された丸薬若しくはカプセル又は凍結乾燥粉末）中に一緒に混合されるか、又は異なる組成物として別々に投与されるが、同じ治療レジメンの一部として投与される組成物又は治療を指す。異なる組成物を含むカクテルについては、異なる組成物を同時に又は逐次的に投与することができる。同様に、異なる組成物を異なる経路で投与することができる。薬物「カクテル」の例は、当分野において既知である。例えば、ＣＯＶＩＤ－１９に関連して、既知の薬物カクテルは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパクの受容体結合ドメインに結合することによってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染性を遮断するように特異的に設計された２つの異なるウイルス中和非競合モノクローナル抗体種（ＲＥＧＮ１０９３３及びＲＥＧＮ１０９８７）を含む治験用「抗体カクテル」ＲＥＧＮ－ＣＯＶ２（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ，Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ，ＮＹ）である。本発明の文脈において、「薬物カクテル」は、カスパーゼ阻害剤（有利にはカスパーゼ１阻害剤）及び少なくとも１つの他の薬物（例えば、プロテアーゼ阻害剤及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によるＡＣＥ－２受容体結合を阻害する薬物）を含む。理解されるように、いくつかの文脈において、薬物「カクテル」は、併用療法とも呼ばれる。
本発明の方法において使用することができる１つの汎カスパーゼ阻害剤は、エムリカサン（ＩＤＮ－６５５６、ＰＦ－０３４９１３９０；ＩＵＰＡＣ名（３Ｓ）－３－｛［（２Ｓ）－２－｛［２－（２－ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌａｎｉｌｉｎｏ）－２－ｏｘｏａｃｅｔｙｌ］ａｍｉｎｏ｝ｐｒｏｐａｎｏｙｌ］ａｍｉｎｏ｝－４－ｏｘｏ－５－（２，３，５，６－ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｏｘｙ）ｐｅｎｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）である。これは、慢性ＨＣＶ感染及び肝臓移植拒絶の治療のために研究されている不可逆的な経口活性汎カスパーゼ阻害剤である。（ＭａｃＫｅｎｚｉｅ ＳＨ１，Ｓｃｈｉｐｐｅｒ ＪＬ，Ｃｌａｒｋ ＡＣ．Ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｃａｓｐａｓｅｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｄｅｖｅｌ．２０１０ Ｓｅｐ；１３（５）：５６８－７６．）。米国特許第６，１９７，７５０号、同第６，５４４，９５１号、同第７，０５３，０５６号、同第７，１８３，２６０号、同第７，６９２，０３８号、及び公開された国際公開第２０１７１１７４７８（Ａ１）号（これらの各々は、カスパーゼ阻害剤を例示するために本明細書中に明示的に組み込む）も参照されたい。エムリカサンは、例えば、１日当たり５ｍｇ～１００ｍｇ、１０ｍｇ～７５ｍｇ、又は２５ｍｇ～５０ｍｇの範囲の用量で投与することができる。１日用量は、単回投与として、又は１日を通じて分割した用量で投与することができる。他のカスパーゼ阻害剤と同様に、エムリカサンは、重篤な疾患症状のリスクを予防又は低下させるために予防的に投与することができる。エムリカサンは、６０歳を超える人々、免疫力の低下した個体、糖尿病患者などの高リスク群の人々に特に有用である。他のカスパーゼ阻害剤と同様に、エムリカサンは、ＣＯＶＩＤ－１９（又は季節性形態のＣＯＶＩＤ－１９）の症状の発症時に、又は感染の経過中の後期に投与することができる。エムリカサンは、カスパーゼ－１（及び他のカスパーゼ）を阻害するだけでなく、その後の報告は、エムリカサンがまた、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の主要プロテアーゼの活性を阻害するだけでなく、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するＡＣＥ－２受容体の結合活性を阻害し得ることを示した。このような多因子活性は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などのプラス鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる感染症の治療において有用であることが証明される。エムリカサン又は他のカスパーゼ阻害剤を、ＡＣＥ－２受容体結合及び／又は必須ウイルスコードタンパク質活性（例えば、ウイルスコードプロテアーゼ、核酸ポリメラーゼなど）の阻害剤である他の化合物と組み合わせることが望ましい場合がある。このような組み合わせは、ＣＯＶＩＤ－１９、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳなどの疾病を治療するための有効な「カクテル」を形成することができる。ここで、「カクテル」とは、複数（すなわち、２つ以上）の化学的に異なる分子、例えば、２つの異なる薬物を含む組成物又は治療であって、単一の組成物（又は剤形、例えば、患者への投与前に再構成されることが意図された丸薬若しくはカプセル又は凍結乾燥粉末）中に一緒に混合されるか、又は異なる組成物として別々に投与されるが、同じ治療レジメンの一部として投与される組成物又は治療を指す。異なる組成物を含むカクテルについては、異なる組成物を同時に又は逐次的に投与することができる。同様に、異なる組成物を異なる経路で投与することができる。薬物「カクテル」の例は、当分野において既知である。例えば、ＣＯＶＩＤ－１９に関連して、既知の薬物カクテルは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパクの受容体結合ドメインに結合することによってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染性を遮断するように特異的に設計された２つの異なるウイルス中和非競合モノクローナル抗体種（ＲＥＧＮ１０９３３及びＲＥＧＮ１０９８７）を含む治験用「抗体カクテル」ＲＥＧＮ－ＣＯＶ２（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ，Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ，ＮＹ）である。本発明の文脈において、「薬物カクテル」は、カスパーゼ阻害剤（有利にはカスパーゼ１阻害剤）及び少なくとも１つの他の薬物（例えば、プロテアーゼ阻害剤及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によるＡＣＥ－２受容体結合を阻害する薬物）を含む。理解されるように、いくつかの文脈において、薬物「カクテル」は、併用療法とも呼ばれる。
【0057】
医薬組成物の製剤化
本発明の薬学的組成物は、カスパーゼに関連するか若しくはそれらによって調節される１つ以上の状態、又はカスパーゼ、例えば、本明細書中の他の場所に記載されるようなカスパーゼ及び薬学的に許容される担体に関連するか若しくはそれらによって調節される１つ以上の症状の予防、治療、又は改善において有用である、治療有効量の１つ以上のカスパーゼ阻害剤を含む。有利な実施形態では、カスパーゼ阻害剤は、単回投与用に製剤化される。組成物を製剤化するために、化合物の重量分率は、治療される状態が軽減又は改善されるような有効濃度で、選択されたビヒクル中に溶解、懸濁、分散、又は他の方法で混合される。本明細書で提供される化合物の投与に適した薬学的担体又はビヒクルとしては、特定の投与様式に適していることが当業者にとって既知である任意のそのような担体が挙げられる。
本発明の薬学的組成物は、カスパーゼに関連するか若しくはそれらによって調節される１つ以上の状態、又はカスパーゼ、例えば、本明細書中の他の場所に記載されるようなカスパーゼ及び薬学的に許容される担体に関連するか若しくはそれらによって調節される１つ以上の症状の予防、治療、又は改善において有用である、治療有効量の１つ以上のカスパーゼ阻害剤を含む。有利な実施形態では、カスパーゼ阻害剤は、単回投与用に製剤化される。組成物を製剤化するために、化合物の重量分率は、治療される状態が軽減又は改善されるような有効濃度で、選択されたビヒクル中に溶解、懸濁、分散、又は他の方法で混合される。本明細書で提供される化合物の投与に適した薬学的担体又はビヒクルとしては、特定の投与様式に適していることが当業者にとって既知である任意のそのような担体が挙げられる。
【0058】
更に、カスパーゼ阻害剤は、組成物中の唯一の薬学的活性成分として処方することができる、又は他の活性成分と組み合わせることができる。カスパーゼ阻害剤は、薬学的に許容される担体中に、治療される患者に対する所望されない副作用が存在することなく治療的に有用な効果を発揮するのに十分な量で含まれる。治療有効濃度は、当該分野で既知のインビトロ及びインビボ系において化合物を試験することによって経験的に決定することができ、次いで、ヒトのための用量についてそこから推定することができる。
【0059】
医薬組成物中のカスパーゼ阻害剤の濃度は、化合物の吸収、不活性化、及び排出速度、その物理化学的特性、投与スケジュール、及び投与量、並びに当業者に既知の他の因子に依存する。
【0060】
いくつかの実施形態において、治療有効量又は用量は、約０．１ｎｇ／ｍｌ～約５０μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌ、約０．５ｎｇ／ｍｌ～約８０μｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ～約６０μｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ～約５０μｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ～約４０μｇ／ｍｌ、約１０ｎｇ／ｍｌ～約３５μｇ／ｍｌ、約１０ｎｇ／ｍｌ～約２５μｇ／ｍｌ、約１０ｎｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約２５ｎｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約５０ｎｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約５０ｎｇ／ｍｌ～約５μｇ／ｍｌ、約１００ｎｇ／ｍｌ～約５μｇ／ｍｌ、約２００ｎｇ／ｍｌ～約５μｇ／ｍｌ、約２５０ｎｇ／ｍｌ～約５μｇ／ｍｌ、約５００ｎｇ／ｍｌ～約５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ～約５０μｇ／ｍｌ、約０．１ｎｇ／ｍｌ～約５ｎｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ～約１０ｎｇ／ｍｌ、又は約１μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌのカスパーゼ阻害剤の血清濃度を有するべきである。医薬組成物は、特定の実施形態では、１日に体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約２０００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．００２ｍｇ～約１０００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．００５ｍｇ～約５００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．００５ｍｇ～約２５０ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．００５ｍｇ～約２００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．００５ｍｇ～約１００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約０．００５ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．０２ｍｇ～約１００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約１００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ～約１００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．７５ｍｇ～約１００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ～約１００ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ～約１０ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約５ｍｇの化合物、１日に体重１ｋｇ当たり約２００ｍｇ～約２０００ｍｇの化合物、又は１日に体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇ～約１００ｍｇの化合物の用量を提供すべきである。医薬単位剤形は、投与単位形態当たり約１ｍｇ～約１０００ｍｇ、約１ｍｇ～約８００ｍｇ、約５ｍｇ～約８００ｍｇ、約１ｍｇ～約１００ｍｇ、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、約５ｍｇ～約１００ｍｇ、約１０ｍｇ～約５０ｍｇ、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ、約２５ｍｇ～約５０ｍｇ、及び約１０ｍｇ～約５００ｍｇの必須活性成分又は必須成分の組合せを提供するように調製される。
【0061】
カスパーゼ阻害剤を含む薬学的組成物は、一度に投与され得るか、又は時間間隔をおいて投与されるいくつかのより少ない用量に分割され得る。正確な用量及び治療期間は、治療される疾患の関数であり、既知の試験プロトコルを使用して経験的に、又はインビボ若しくはインビトロ試験データからの推定によって決定することができると理解される。濃度及び用量の値はまた、緩和されるべき状態の重症度によって変化し得ることに留意されたい。任意の特定の対象について、特定の投薬レジメンは、個体の必要性及び組成物の投与を管理又は監督する人物の専門的判断に従って経時的に調整されるべきであること、並びに本明細書に記載される濃度範囲は例示的なものにすぎず、特許請求される組成物の範囲又は実施を限定することを意図しないことが更に理解されるべきである。
【0062】
カスパーゼ阻害剤を含む組成物は、適切な経路によって、例えば、経口、非経口、直腸、局所（topically）、局所的（locally）、吸入スプレー、経鼻、口腔、経膣、移植リザーバー又は経鼻胃管若しくは経口胃管を介して投与されることが意図される。いくつかの実施形態では、投与は経口経路によることが有利である。経口投与には、カプセル及び錠剤が好ましい。
【0063】
医薬組成物は、適切な量の化合物又はその薬学的に許容される誘導体を含有する錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、滅菌非経口液剤又は懸濁剤、及び経口液剤又は懸濁剤、及び油／水乳剤などの単位剤形でヒト及び動物に投与するために提供される。薬学的治療活性化合物及びその誘導体は、単位剤形又は複数剤形で製剤化され、投与される。本明細書で使用される単位剤形は、ヒト及び動物対象に適し、当技術分野で知られているように個別に包装された物理的に別個の単位を指す。各単位剤形は、必要とされる薬学的担体、ビヒクル、又は希釈剤と共に、所望の治療効果を生じるのに十分な所定量の治療活性化合物を含有する。単位剤形の例としては、アンプル及びシリンジ並びに個々に包装された錠剤又はカプセルが挙げられる。単位剤形は、その一部又は複数で投与することができる。複数の剤形は、分離された単位剤形で投与される単一容器に包装された複数の同一の単位剤形である。複数の剤形の例としては、包装において分離されていない錠剤又はカプセルのバイアル及びボトルが挙げられる。
【0064】
活性成分を、０．００１％～１００％活性成分、０．００２％～１００％活性成分、０．００５％～９０％活性成分、０．０１％～１００％活性成分、０．０５％～１００％活性成分、０．０５％～９０％活性成分、０．１％～１００％活性成分、０．１％～１％活性成分、０．１％～０．５％活性成分、０．１％～１００％活性成分、１％～９９％活性成分、１％～９８％活性成分、１％～９７％活性成分、１％～９６％活性成分、１％～９５％活性成分、５％～９５％活性成分、１０％～１００％活性成分、１０％～９５％活性成分、１５％～９５％活性成分、２０％～９５％活性成分、２５％～１００％活性成分、５０％～１００％活性成分、５０％～９５％活性成分、６０％～９５％活性成分又は７５％～１００％活性成分の範囲で含み、残りが非毒性担体から構成される剤形又は組成物を調製することができる。経口投与のために、薬学的に許容される非毒性組成物は、任意の通常使用される賦形剤、例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、セルロース誘導体、クロスカルメロースナトリウム、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム又はサッカリンナトリウムのいずれか組み込みによって形成される。このような組成物としては、溶液、懸濁液、錠剤、カプセル、粉末、及び徐放性処方物、例えば、移植物及びマイクロカプセル化送達系、並びに生分解性生体適合性ポリマー（例えば、コラーゲン、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、ポリオルトエステル、ポリ乳酸など）が挙げられるが、これらに限定されない。これらの組成物の調製方法は、当業者にとって既知である。企図される組成物は、０．００１％～１００％の活性成分、一実施形態では７５～９５％の活性成分を含有することができる。
【0065】
カスパーゼ阻害剤又はそれらを含む組成物は、身体からの迅速な排除に対して化合物を保護する担体、例えば、徐放性処方物又はコーティングを用いて調製することができる。このような組成物はまた、特性の所望の組み合わせを得るために、他の活性化合物を含むことができる。本明細書に提供される化合物、又は本明細書に記載されるようなその薬学的に許容される誘導体はまた、治療又は予防目的のために、１つ以上のカスパーゼによって調節される状態を有する対象に、同じ状態を治療する際に有益であることが一般的な技術分野において既知の別の薬理学的薬剤と一緒に有利に投与することができる。そのような併用療法は、本明細書で提供される組成物及び処置方法の更なる態様を構成することが理解されるべきである。
【0066】
経口投与用組成物
経口医薬剤形は、固体、ゲル、又は液体のいずれかである。固体剤形は、錠剤、カプセル、顆粒、及びバルク粉末である。経口錠剤のタイプとしては、腸溶コーティング、糖コーティング、又はフィルムコーティングされ得る、圧縮されたチュアブルロゼンジ及び錠剤が挙げられる。カプセル剤は、硬質又は軟質ゼラチンカプセル剤であり得るが、顆粒及び粉末は、当業者にとって既知の他の成分と組み合わせて、非発泡性又は発泡性形態で提供され得る。
経口医薬剤形は、固体、ゲル、又は液体のいずれかである。固体剤形は、錠剤、カプセル、顆粒、及びバルク粉末である。経口錠剤のタイプとしては、腸溶コーティング、糖コーティング、又はフィルムコーティングされ得る、圧縮されたチュアブルロゼンジ及び錠剤が挙げられる。カプセル剤は、硬質又は軟質ゼラチンカプセル剤であり得るが、顆粒及び粉末は、当業者にとって既知の他の成分と組み合わせて、非発泡性又は発泡性形態で提供され得る。
【0067】
特定の実施形態では、製剤は、カプセル剤又は錠剤などの固体剤形である。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分又は同様の性質の化合物のいずれかを含有することができる。希釈剤、崩壊剤、潤滑剤、滑剤、甘味剤、及び香味剤。
【0068】
経口投与のために、カスパーゼ阻害剤は、胃の酸性環境からそれを保護する組成物中で提供することができる。例えば、組成物は、胃においてその完全性を維持し、腸において活性化合物を放出する腸溶コーティングで製剤化することができる。この組成物はまた、制酸剤又は他のこのような成分と組み合わせて処方することができる。
【0069】
単位剤形がカプセルである場合、上記タイプの材料に加えて、脂肪油などの液体担体を含有することができる。更に、単位剤形は、投薬単位の物理的形態を改変する種々の他の物質（例えば、糖のコーティング及び他の腸溶剤）を含むことができる。化合物はまた、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウエハ、スプリンクル、チューインガムなどの成分として投与することもできる。シロップ剤は、活性化合物に加えて、甘味剤としてのスクロース及びある種の保存剤、染料及び着色剤及び香味剤を含有することができる。
【0070】
活性物質はまた、所望の作用を損なわない他の活性物質、又は例えば、制酸薬、Ｈ２遮断薬、及び利尿薬などの所望の作用を補う物質と混合することができる。有効成分は、本明細書に記載の化合物又はその薬学的に許容される誘導体である。最大約９８重量％までの高濃度の活性成分を含むことができる。
【0071】
錠剤に含まれる薬学的に許容される担体は、結合剤、滑沢剤、希釈剤、崩壊剤、着色剤、香味剤、及び湿潤剤である。
【0072】
腸溶性錠剤は、腸溶性コーティングのために、胃酸の作用に抵抗し、中性又はアルカリ性の腸内で溶解又は崩壊する。糖衣錠は、薬学的に許容される物質の異なる層が適用される圧縮錠剤である。フィルムコーティング錠は、ポリマー又は他の適切なコーティングでコーティングされた圧縮錠剤である。多重圧縮錠剤は、前述の薬学的に許容される物質を利用して２回以上の圧縮サイクルによって作製された圧縮錠剤である。着色剤も上記剤形に使用することができる。香味剤及び甘味剤は、圧縮錠剤、糖衣錠剤、多重圧縮錠剤、及びチュアブル錠において使用される。
【0073】
用量及び単位剤形
ヒトの治療のために、医師は、予防的又は治療的処置に従って、並びに年齢、体重、疾患の段階及び処置される対象に特異的な他の因子に従って、適切な用量を決定する。一般に、用量は、成人に対して約１～約１０００ｍｇ／日、又は約５～約２５０ｍｇ／日、又は約１０～５０ｍｇ／日である。特定の実施形態では、用量は、成人に対して約５～約４００ｍｇ／日又は２５～２００ｍｇ／日である。約５０～約５００ｍｇ／日の用量も企図される。
ヒトの治療のために、医師は、予防的又は治療的処置に従って、並びに年齢、体重、疾患の段階及び処置される対象に特異的な他の因子に従って、適切な用量を決定する。一般に、用量は、成人に対して約１～約１０００ｍｇ／日、又は約５～約２５０ｍｇ／日、又は約１０～５０ｍｇ／日である。特定の実施形態では、用量は、成人に対して約５～約４００ｍｇ／日又は２５～２００ｍｇ／日である。約５０～約５００ｍｇ／日の用量も企図される。
【0074】
ある特定の実施形態では、治療に有効であるカスパーゼ阻害剤又は組成物の量は、疾患又は症状の性質及び重症度、並びに活性成分が投与される経路によって変化する。頻度及び用量はまた、投与される特定の処置（例えば、治療剤又は予防剤）、障害、疾病、又は状態の重症度、投与経路、並びに対象の年齢、体重、応答、及び過去の病歴に応じて、各対象に特異的な因子に従って変化する。有効量は、インビトロ又は動物モデル試験システムから得られた用量反応曲線から推定することができる。
【0075】
組成物の例示的な用量は、対象又は試料重量のキログラム当たりのカスパーゼ阻害剤のミリグラム又はマイクログラム量（例えば、約０．００１～１０００ｍｇ／Ｋｇ、約０．０１～１００ｍｇ／Ｋｇ、約０．０１～５０ｍｇ／Ｋｇ、約０．１～２５ｍｇ／Ｋｇ、又は約０．１～１０ｍｇ／Ｋｇ）を含む。特定の実施形態において、対象に投与される投与量は、対象の体重の０．２０ｍｇ／ｋｇ～２．００ｍｇ／ｋｇ、又は０．３０ｍｇ／ｋｇ～１．５０ｍｇ／ｋｇである。
【0076】
ある特定の実施形態では、カスパーゼ阻害剤の推奨される１日用量範囲は、単回１日１回用量として、又は１日を通して分割用量として与えられる、１日当たり約０．１ｍｇ～約１０００ｍｇである。いくつかの実施形態において、１日用量は、等しく分割された用量で１日２回投与される。具体的には、１日用量範囲は、約１０ｍｇ～約２００ｍｇ／日、より具体的には約１０ｍｇ～約１５０ｍｇ／日、又は更により具体的には約２５～約１００ｍｇ／日であるべきである。当業者に明らかであるように、場合によっては、本明細書に開示された範囲外の活性成分の投与量を使用することが必要な場合がある。更に、臨床医又は処置する医師は、対象の反応に関連して処置をどのように及びいつ中断、調整、又は終了するかを知っていることに留意されたい。
【0077】
当業者によって容易に理解されるように、異なる治療有効量が異なる疾患及び状態に適用可能であり得る。同様に、そのような障害を予防、管理、治療、又は改善するのに十分であるが、本明細書に記載の化合物に関連する副作用を引き起こすには不十分であるか、又は副作用を低減するのに十分な量も、上記の投与量及び投与頻度スケジュールに包含される。更に、対象に複数回用量の本明細書に記載の化合物を投与する場合、全ての用量が同じである必要はない。例えば、対象に投与される用量は、化合物の予防効果若しくは治療効果を改善するために増加させることができる、又は特定の対象が経験している１つ以上の副作用を低減するために減少させることができる。
【0078】
一部の実施形態では、対象における疾患、又はその１つ以上の症状を予防、治療、管理、又は改善するために投与されるカスパーゼ阻害剤の用量は、対象の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、若しくは１５ｍｇ／ｋｇ又はそれ超である。他の実施形態では、対象における疾患若しくは障害、又はその１つ以上の症状を予防、治療、管理、又は改善するために投与される投与量は、０．１ｍｇ～２００ｍｇ、０．１ｍｇ～１００ｍｇ、０．１ｍｇ～５０ｍｇ、０．１ｍｇ～２５ｍｇ、０．１ｍｇ～２０ｍｇ、０．１ｍｇ～１５ｍｇ、０．１ｍｇ～１０ｍｇ、０．１ｍｇ～７．５ｍｇ、０．１ｍｇ～５ｍｇ、０．１～２．５ｍｇ、０．２５ｍｇ～２０ｍｇ、０．２５～１５ｍｇ、０．２５～１２ｍｇ、０．２５～１０ｍｇ、０．２５ｍｇ～７．５ｍｇ、０．２５ｍｇ～５ｍｇ、０．５ｍｇ～２．５ｍｇ、１ｍｇ～２０ｍｇ、１ｍｇ～１５ｍｇ、１ｍｇ～１２ｍｇ、１ｍｇ～１０ｍｇ、１ｍｇ～７．５ｍｇ、１ｍｇ～５ｍｇ、又は１ｍｇ～２．５ｍｇの単位用量である。
【0079】
ある特定の実施形態では、治療又は予防は、カスパーゼ阻害剤の１回以上の負荷用量、続いて１回以上の維持用量で開始することができる。そのような実施形態では、負荷用量は、例えば、１日～５週間にわたって、約６０～約４００ｍｇ／日、又は約１００～約２００ｍｇ／日とすることができる。負荷用量の後に、１回又は複数回の維持用量を投与することができる。各維持用量は、独立して、約１０ｍｇ～約２００ｍｇ／日、より具体的には、約２５ｍｇ～約１５０ｍｇ／日、又は更により具体的には、約２５ｍｇ～約８０ｍｇ／日又は約２５ｍｇ～約５０ｍｇ／日とすることができる。維持用量は、毎日投与することができ、単回用量として、又は分割用量として投与することができる。
【0080】
ある特定の実施形態において、カスパーゼ阻害剤の用量は、対象の血液又は血清中の活性成分の定常状態濃度を達成するように投与することができる。定常状態濃度は、当業者に利用可能な技術に従う測定によって決定することができる、又は対象の身体的特徴（例えば、身長、体重、及び年齢）に基づくことができる。特定の実施態様において、本明細書に提供される化合物の十分な量は、約３００～約４０００ｎｇ／ｍＬ、約４００～約１６００ｎｇ／ｍＬ、又は約６００～約１２００ｎｇ／ｍＬの対象の血液又は血清中の定常状態濃度を達成するように投与される。負荷用量は、１～５日間、約１２００～約８０００ｎｇ／ｍＬ又は約２０００～約４０００ｎｇ／ｍＬの血液若しくは血清中の定常状態濃度を達成するように投与することができる。
【0081】
維持用量は、約３００～約４０００ｎｇ／ｍＬ、約４００～約１６００ｎｇ／ｍＬ、又は約６００～約１２００ｎｇ／ｍＬの対象の血液又は血清中の定常状態濃度を達成するように投与することができる。
【0082】
ある特定の実施形態では、同じ化合物の投与を繰り返すことができ、投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２カ月、７５日、３カ月、又は６カ月間隔を空けることができる。他の実施形態では、同じ予防剤又は治療剤の投与を繰り返すことができ、投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２カ月、７５日、３カ月、又は６カ月間隔を空けることができる。
【0083】
ある特定の好ましい実施形態において、化合物又はその薬学的に許容される誘導体を含む単位用量は、投与に適切な形態で提供される。このような形態は、上に詳細に記載されている。特定の実施形態において、単位用量は、１～１０００ｍｇ、５～２５０ｍｇ、又は１０～５０ｍｇの活性成分を含む。特定の実施形態において、単位用量は、約１、５、１０、２５、５０、１００、１２５、２５０、５００、又は１０００ｍｇの活性成分を含む。このような単位用量は、当業者によく知られている技術に従って調製することができる。
【0084】
製造物品
本発明の実施において有用なカスパーゼ阻害剤又は薬学的に受容可能な組成物は、包装材料、カスパーゼによって調節される疾病若しくは状態又はこの疾病若しくは状態に関連する１つ以上の症状の治療、予防又は改善における使用のためのカスパーゼ阻害剤又はカスパーゼ阻害剤を含む薬学的に許容される組成物、及びこのカスパーゼ阻害剤又は組成物が特定の疾患若しくは状態又は１つ以上のその症状の治療、予防又は改善のために使用されることを示すラベルを含む製品として包装することができる。医薬包装材料の例としては、ブリスターパック、ボトル、チューブ、吸入器、ポンプ、バッグ、バイアル、容器、シリンジ、ボトル、並びに選択された製剤及び意図された投与様式及び処置に適した任意の包装材料が挙げられる。
本発明の実施において有用なカスパーゼ阻害剤又は薬学的に受容可能な組成物は、包装材料、カスパーゼによって調節される疾病若しくは状態又はこの疾病若しくは状態に関連する１つ以上の症状の治療、予防又は改善における使用のためのカスパーゼ阻害剤又はカスパーゼ阻害剤を含む薬学的に許容される組成物、及びこのカスパーゼ阻害剤又は組成物が特定の疾患若しくは状態又は１つ以上のその症状の治療、予防又は改善のために使用されることを示すラベルを含む製品として包装することができる。医薬包装材料の例としては、ブリスターパック、ボトル、チューブ、吸入器、ポンプ、バッグ、バイアル、容器、シリンジ、ボトル、並びに選択された製剤及び意図された投与様式及び処置に適した任意の包装材料が挙げられる。
【0085】
キット
所望の処置を達成するために、１つ以上のカスパーゼ阻害剤を単独で又は他の治療剤と組み合わせて使用するためのキットが提供される。キットは、カスパーゼ阻害剤又はカスパーゼ阻害剤（複数可）を含有する組成物、及び１つ以上のカスパーゼによって調節される疾患又は状態を治療又は予防するための使用に関する情報を医療提供者に提供する説明書を含むことができる。説明書は、印刷された形態で、又はＣＤ若しくはＤＶＤなどの電子媒体の形態で、又はそのような説明書を取得することができるウェブサイトアドレスの形態で提供することができる。単位用量は、対象に投与された場合、化合物又は組成物の治療的又は予防的に有効な血漿レベルが対象において少なくとも１日間維持され得るような用量を含むことができる。典型的には、キットの構成要素は別々に包装される。例えば、固体製剤及び希釈剤は、別個の容器又は区画に提供することができる。同様に、カクテルの異なる成分は、投与の直前に混合のために別々に提供することができる。あるいは、薬物及び送達デバイスは、予め充填されるか、又は別々に包装されて提供することができる。
所望の処置を達成するために、１つ以上のカスパーゼ阻害剤を単独で又は他の治療剤と組み合わせて使用するためのキットが提供される。キットは、カスパーゼ阻害剤又はカスパーゼ阻害剤（複数可）を含有する組成物、及び１つ以上のカスパーゼによって調節される疾患又は状態を治療又は予防するための使用に関する情報を医療提供者に提供する説明書を含むことができる。説明書は、印刷された形態で、又はＣＤ若しくはＤＶＤなどの電子媒体の形態で、又はそのような説明書を取得することができるウェブサイトアドレスの形態で提供することができる。単位用量は、対象に投与された場合、化合物又は組成物の治療的又は予防的に有効な血漿レベルが対象において少なくとも１日間維持され得るような用量を含むことができる。典型的には、キットの構成要素は別々に包装される。例えば、固体製剤及び希釈剤は、別個の容器又は区画に提供することができる。同様に、カクテルの異なる成分は、投与の直前に混合のために別々に提供することができる。あるいは、薬物及び送達デバイスは、予め充填されるか、又は別々に包装されて提供することができる。
【0086】
併用療法
カスパーゼ阻害剤を含む併用療法は、２つの薬剤が互いに関連して同じ患者に投与されるレジメンとすることができる。例えば、この２つは、互いに時間的な関係で（例えば、同時に、又は特定の期間内に連続して）投与することができる。あるいは、２つの薬剤は、互いに生化学的又は臨床的関係で投与することができる。例えば、一方の薬剤は、他方の薬剤の血清レベルがあるレベルに低下したときに投与することができる。あるいは、酸素飽和度などの特定の臨床測定が達成されたときに、１つの薬剤を投与することができる。共通のレジメンが使用される場合、２つの薬剤は、異なる経路によって投与することができる。
カスパーゼ阻害剤を含む併用療法は、２つの薬剤が互いに関連して同じ患者に投与されるレジメンとすることができる。例えば、この２つは、互いに時間的な関係で（例えば、同時に、又は特定の期間内に連続して）投与することができる。あるいは、２つの薬剤は、互いに生化学的又は臨床的関係で投与することができる。例えば、一方の薬剤は、他方の薬剤の血清レベルがあるレベルに低下したときに投与することができる。あるいは、酸素飽和度などの特定の臨床測定が達成されたときに、１つの薬剤を投与することができる。共通のレジメンが使用される場合、２つの薬剤は、異なる経路によって投与することができる。
【0087】
あるいは、カスパーゼ阻害剤を含む併用療法は、２つの異なるカスパーゼ阻害剤を含む化合組成物を使用することができる。これらは、投与のための実際の濃度で、又は使用のために希釈することができる濃縮形態で組み合わせることができる。化合組成物は、単回用量形態で包装することができる、又は複数回用量ように包装することができる。
【0088】
他のカスパーゼ阻害剤と同様に、エムリカサンは、経口投与されるか、静脈内投与されるか、又は他の形態で投与されるかにかかわらず、単独で、又は１つ以上の抗ウイルス剤、例えば、レムデシビルとの併用処置において投与することができる。
【0089】
他のカスパーゼ阻害剤と同様に、エムリカサンはまた、ＣＯＶＩＤ－１９について使用される標準的な投薬レジメンで、回復期患者血漿との併用療法において投与することができる。
【0090】
加えて、他のカスパーゼ阻害剤と同様に、エムリカサンは、ＩＬ－６炎症経路を標的とする、又は別の炎症経路を標的とする別の生物学的薬剤との併用療法で投与することができる。
【0091】
ＩＬ－６炎症経路の任意の阻害剤を、カスパーゼ１阻害剤と組み合わせて使用することができる。使用することができるＩＬ－６炎症経路阻害剤としては、ＩＬ－６ Ｒ中和ｍＡｂトシリズマブ（アクテムラ）、抗ＩＬ－６抗体、可溶性形態のｇｐ１３０（ｓｇｐ１３０）及びｓｇｐ１３０Ｆｃタンパク質が挙げられる。
【0092】
更に、他のカスパーゼ１阻害剤と同様に、エムリカサンは、デキサメタゾンなどのステロイドとの併用療法、及び／又はＣｏｖｉｄ－１９抗体カクテル療法で投与することができる。
【0093】
処置のタイミング
少なくともカスパーゼ－１（又は汎カスパーゼ）の阻害剤を（特に、βコロナウイルス（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ）によって引き起こされる）疾患の経過の初期に投与することは、その処置が炎症反応及び／又は「サイトカインストーム」を阻害することよりもむしろ急性免疫不全を予防することによって機能するので、有益であろう。リンパ球におけるカスパーゼ－１の活性化は、おそらくリンパ球の死をもたらし、これは、免疫表現型検査と呼ばれる血液検査によって測定することができる。リンパ球の死は、リンパ球減少（リンパ球数が正常範囲未満）を引き起こす。リンパ球減少症は、ＣＯＶＩＤ－１９患者における重症度及び入院の有効かつ信頼できる指標である。リンパ球についての２０％未満の限界点が、重度の疾患について提案されている。症状の発症後１０～１２日目に、リンパ球％が２０％超の患者は中等度タイプとして分類され、迅速に回復することができる。リンパ球％が２０％未満の患者は、最初に重症型として分類される。発症後１７～１９日の第２の時点で、リンパ球％が２０％超の患者は回復しつつある。リンパ球％が５％超かつ２０％未満の患者は依然として危険であり、監視を必要とする。リンパ球％が５％未満の患者は、高い死亡率で重篤になり、集中治療を必要とする。理想的には、患者は、リンパ球値が２０％未満に達する前に、カスパーゼ－１阻害剤を開始すべきである。（Ｔａｎ Ｌ ｅｔ ａｌ．，“Ｌｙｍｐｈｏｐｅｎｉａ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｏｆ ＣＯＶＩＤ－１９：ａ ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ ａｎｄ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ，”Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０２０）５：３３を参照）。
少なくともカスパーゼ－１（又は汎カスパーゼ）の阻害剤を（特に、βコロナウイルス（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ）によって引き起こされる）疾患の経過の初期に投与することは、その処置が炎症反応及び／又は「サイトカインストーム」を阻害することよりもむしろ急性免疫不全を予防することによって機能するので、有益であろう。リンパ球におけるカスパーゼ－１の活性化は、おそらくリンパ球の死をもたらし、これは、免疫表現型検査と呼ばれる血液検査によって測定することができる。リンパ球の死は、リンパ球減少（リンパ球数が正常範囲未満）を引き起こす。リンパ球減少症は、ＣＯＶＩＤ－１９患者における重症度及び入院の有効かつ信頼できる指標である。リンパ球についての２０％未満の限界点が、重度の疾患について提案されている。症状の発症後１０～１２日目に、リンパ球％が２０％超の患者は中等度タイプとして分類され、迅速に回復することができる。リンパ球％が２０％未満の患者は、最初に重症型として分類される。発症後１７～１９日の第２の時点で、リンパ球％が２０％超の患者は回復しつつある。リンパ球％が５％超かつ２０％未満の患者は依然として危険であり、監視を必要とする。リンパ球％が５％未満の患者は、高い死亡率で重篤になり、集中治療を必要とする。理想的には、患者は、リンパ球値が２０％未満に達する前に、カスパーゼ－１阻害剤を開始すべきである。（Ｔａｎ Ｌ ｅｔ ａｌ．，“Ｌｙｍｐｈｏｐｅｎｉａ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｏｆ ＣＯＶＩＤ－１９：ａ ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ ａｎｄ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ，”Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０２０）５：３３を参照）。
【0094】
カスパーゼ１阻害剤による処置は、ＣＤ４ Ｔ細胞が３００細胞／ｍｃｌ未満になる、ＣＤ８細胞が１００細胞／ｍｃｌ未満になる、Ｂ細胞が２０細胞／ｍｃｌ未満になる、ＮＫ細胞が１５細胞／ｍｃｌ未満になる前、及びこれらの個々の細胞の任意の機能的欠損が明らかになる前に開始されることが有利である。賢明な事項として、診断時に、又は感染した個体への曝露時などのＣＯＶＩＤ－１９の診断の疑いがある場合に、カスパーゼ－１遮断薬（又は汎カスパーゼ阻害剤）による処置を開始することができる。抵抗力のない集団において、処置は、確定診断の前に、特に感染した人との接触が疑われる場合に開始することができる。カスパーゼ１阻害剤は抗ウイルス剤として作用しない、すなわち、それらはウイルス量を減少させないので、それらは、処置の開始後数日内に行われるウイルス試験に影響を及ぼさないはずである。
【0095】
いったんリンパ球減少症が発生すると、身体は、ウイルスに対する防御免疫応答（抗体及び／又は細胞ベースのいずれか）を得ることができず、これは患者の死につながる。したがって、カスパーゼ－１阻害剤の投与は、有利には、ウイルスに対する免疫応答を得ることができないほど免疫系が損なわれる前に行われるべきである。最大の利益を得るには、カスパーゼ－１阻害剤は、パンデミック若しくはエピデミック間に予防的に、又は疾患の診断から数時間以内、又は免疫表現型検査で測定されるリンパ球減少症が始まる前に投与される。この機構を考慮すると、ＣＯＶＩＤ－１９感染による患者の死は、ＩＬ－１、ＩＬ－１８、ＩＬ－６、並びに他のサイトカイン及びケモカインなどのサイトカインの放出によるのではなく、ウイルスによって引き起こされる免疫不全に続発する。
【0096】
ウイルスからの合併症のリスクが高い人は、高齢者、基礎的な心臓血管若しくは呼吸疾患、糖尿病、慢性腎疾患、又は他の共存症を有する人、及び免疫力が低下した人（例えば、ＨＩＶ感染患者、移植を受けた人、又は癌化学療法を受けている患者）である。重度の疾患のリスクが高いと判定された任意のヒト又は群は、予防的に又は重度の疾患症状の発症前に好都合に処置することができる。
【0097】
ＣＯＶＩＤ－１９は軽度から重度の範囲の病気であり得、後者は肺炎、重度急性呼吸器症候群、多臓器不全、及び死亡を含む。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の潜伏期間は、１４日もの長さであると考えられ、曝露から症状発症までの時間の中央値は４～５日である。現在、ＣＯＶＩＤ－１９を治療するためにＦＤＡによって承認された承認薬はない。臨床管理には、必要に応じて、酸素補給、機械呼吸、及び体外膜型人工肺（ＥＣＭＯ）などの対症療法及び支持療法が含まれる。ＦＤＡは、ＣＯＶＩＤ－１９重症度に関する５段階の分類系を公表した（例えば、Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｒ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ＦＤＡ，Ｍａｙ ２０２０を参照）。ＣＯＶＩＤ－１９分類が本明細書において使用される場合、それらは以下の表に提供されるように定義される。
【0098】
（表Ａ）ＣＯＶＩＤ－１９重症度分類
【0099】
本発明によるＣＯＶＩＤ－１９の治療は、カスパーゼ阻害剤（カスパーゼ１、３、４、５、７、８、９、及び１１のうちの少なくとも１つ以上の阻害剤）を、ＣＯＶＩＤ－１９重篤度の上記段階／レベルのいずれかにある対象に投与することを含む。
【0100】
カスパーゼレベルのアッセイ
ＣＯＶＩＤ－１９感染又は重度のＣＯＶＩＤ－１９のリスクが高い患者について、カスパーゼ、例えばカスパーゼ－１についての試験を行うことができる。（例えば、図６Ｂ～Ｄを参照）。上昇したカスパーゼ－１が検出される場合、カスパーゼ－１の阻害剤は、特にＣＯＶＩＤ－１９の疑いがある場合、熱性疾患の発症時に予防又は治療のいずれかとして投与することができる。他のカスパーゼについての測定も、同様に、ＣＯＶＩＤ－１９の重度な形態を示すことができる。高リスク群は、ＣＤＣによって、喘息及び慢性肺疾患、高血圧、肥満、糖尿病、免疫力の低下した患者、６５歳を超える成人、養護ホーム及び介護施設における高齢者、重篤な心臓状態、透析を受けている慢性腎疾患、並びに肝疾患を有する人々として定義される。
ＣＯＶＩＤ－１９感染又は重度のＣＯＶＩＤ－１９のリスクが高い患者について、カスパーゼ、例えばカスパーゼ－１についての試験を行うことができる。（例えば、図６Ｂ～Ｄを参照）。上昇したカスパーゼ－１が検出される場合、カスパーゼ－１の阻害剤は、特にＣＯＶＩＤ－１９の疑いがある場合、熱性疾患の発症時に予防又は治療のいずれかとして投与することができる。他のカスパーゼについての測定も、同様に、ＣＯＶＩＤ－１９の重度な形態を示すことができる。高リスク群は、ＣＤＣによって、喘息及び慢性肺疾患、高血圧、肥満、糖尿病、免疫力の低下した患者、６５歳を超える成人、養護ホーム及び介護施設における高齢者、重篤な心臓状態、透析を受けている慢性腎疾患、並びに肝疾患を有する人々として定義される。
【0101】
後期後遺症
特定のＣＯＶＩＤ－１９患者は、感染の急性期の後に長く持続する、ＣＯＶＩＤ－１９からの後遺症及び／又は合併症を発症する。本明細書中で使用される場合、「ロングホーラー」は、症状の発症の２週間を超えて疾患の合併症を有する患者である。このことは、これらのロングホーラー患者が本疾患のこの慢性期ではウイルスについて陽性と判定されないために、免疫学的事象であると考えられる。血球（リンパ球及び赤血球）におけるカスパーゼ過剰活性は、感染が終わってから数ヶ月後に存在し得ることが判定されており、これは、カスパーゼがＣＯＶＩＤ１９の後期後遺症に関与することを示している。後期後遺症の病因及び病態生理学は、急性感染期からの臓器損傷若しくは臓器炎症、持続的な過剰炎症状態の発現、宿主ウイルス母体に関連する進行中のウイルス活性、又は不十分な抗体若しくは細胞性免疫応答を反映すると考えられている。急性の病気に加えて、状況を更に複雑にし得る要因としては、ベースライン又は長期の病気経過後の身体的な体調不良、前ＣＯＶＩＤ－１９共存症、及び長期又は困難な病気経過後の心理的な後遺症、並びに世界的流行による生活様式の変化に関連するものが挙げられる。おそらく、ＣＯＶＩＤ－１９の持続的な後遺症は、病気の範囲に沿った異なる病理生理学的プロセスから生じる複数の症候群を表す。
特定のＣＯＶＩＤ－１９患者は、感染の急性期の後に長く持続する、ＣＯＶＩＤ－１９からの後遺症及び／又は合併症を発症する。本明細書中で使用される場合、「ロングホーラー」は、症状の発症の２週間を超えて疾患の合併症を有する患者である。このことは、これらのロングホーラー患者が本疾患のこの慢性期ではウイルスについて陽性と判定されないために、免疫学的事象であると考えられる。血球（リンパ球及び赤血球）におけるカスパーゼ過剰活性は、感染が終わってから数ヶ月後に存在し得ることが判定されており、これは、カスパーゼがＣＯＶＩＤ１９の後期後遺症に関与することを示している。後期後遺症の病因及び病態生理学は、急性感染期からの臓器損傷若しくは臓器炎症、持続的な過剰炎症状態の発現、宿主ウイルス母体に関連する進行中のウイルス活性、又は不十分な抗体若しくは細胞性免疫応答を反映すると考えられている。急性の病気に加えて、状況を更に複雑にし得る要因としては、ベースライン又は長期の病気経過後の身体的な体調不良、前ＣＯＶＩＤ－１９共存症、及び長期又は困難な病気経過後の心理的な後遺症、並びに世界的流行による生活様式の変化に関連するものが挙げられる。おそらく、ＣＯＶＩＤ－１９の持続的な後遺症は、病気の範囲に沿った異なる病理生理学的プロセスから生じる複数の症候群を表す。
【0102】
ＣＯＶＩＤ－１９の後期後遺症に関する情報は限られているが、急性ＣＯＶＩＤ－１９疾患から回復した人における持続的な症状の報告が出現している。最も一般的に報告されている症状には、倦怠感、呼吸困難、咳、関節痛、及び胸痛が含まれる。他の報告された症状としては、認知障害、うつ病、筋肉痛、頭痛、発熱、及び動悸が挙げられる。より重篤な合併症は、あまり一般的ではないものの、報告されている。これらの合併症には、心筋炎症、心室機能不全などの心血管異常、肺機能異常などの呼吸異常、急性腎損傷などの腎異常、発疹及び脱毛症などの皮膚異常、嗅覚及び味覚機能不全、睡眠調節不全、認知変化、及び記憶障害などの神経異常、並びにうつ病、不安、及び気分の変化などの精神的異常が挙げられる。
【0103】
（「ロングホーラー」に発生する）後期後遺症の治療又は予防は、感染の開始時、感染の急性期中、又は感染の急性期後のカスパーゼ阻害剤の投与を含むことができる。カスパーゼ阻害剤（カスパーゼ１、３、４、５、７、８、９、及び１１のうちの少なくとも１つ以上の阻害剤）は、長期後遺症を予防又は治療するために、１日１回又は２回に分割された用量のいずれかで与えられる１日用量１０～８０ｍｇのステロイドと組み合わせることができる。後期後遺症の予防のために、薬剤は、ｃｏｖｉｄ－１９の重症度（例えば、軽度（１４日）、中等度（２１日）、重度（１ヶ月）に応じて、短期間（１４日）又は長期間（１ヶ月）投与することができる。
【0104】
上記の開示は、本発明を広義に記述するものである。本明細書中に開示される全ての参考文献は、参照により明示的に組み込まれる。以下の具体的な実施例を参照することにより、より完全な理解を得ることができるが、これらの実施例は、例示のみを目的として本明細書に提供されるのであって、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【0105】
実施例１：免疫学的表現型検査
本実施例では、ＣＯＶＩＤ－１９ですぐに死亡した免疫反応の抑制された患者の免疫表現型を示し、免疫抑制集団の独自性を例示する。
本実施例では、ＣＯＶＩＤ－１９ですぐに死亡した免疫反応の抑制された患者の免疫表現型を示し、免疫抑制集団の独自性を例示する。
【0106】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染が確認された一人の患者が、ＣＯＶＩＤ－１９で死亡した。
【0107】
血液試料の自然免疫表現型検査は、単球上のＣＤ１１ｂ及びＣＤ３８並びにＢ細胞上のＴｅｔｈｅｒｉｎの上方制御によって示されるように、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化及び１型インターフェロン応答の関与についてのいくつかの証拠を示したが、更なる免疫表現型検査は、急性適応免疫調節不全を示した（図１～５）。注目すべきことに、メモリーＢ細胞は見出されず、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２特異的ＩｇＧ及びＩｇＭが存在しなかった。また、この患者は、深刻なＴ細胞リンパ球減少を示し、更に、Ｔ調節性細胞の不在、低Ｔ濾胞性ヘルパー細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞中のＣＤ３８の過剰発現、及びＩＬ－１２刺激時のＣＤ４ Ｔ細胞の不十分なＳＴＡＴ－４リン酸化をはっきりと示した。最後に、リンパ球におけるカスパーゼ－１染色の全体的な増加は、パイロトーシスを示唆しており、これは患者の不十分な免疫応答の説明となり得る（６，７）。まとめると、この免疫抑制患者のＣＯＶＩＤ－１９での経験は、急性ウイルス誘導性免疫不全（ＡＶＩＤ）の形態として特徴付けることができる（８、９）。
【0108】
実施例２．方法
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検体採取及び試験
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２試験のための鼻咽頭の臨床検体を、以前に報告されたように（１）、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応アッセイを介して取得し、取り扱い、処理した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検体採取及び試験
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２試験のための鼻咽頭の臨床検体を、以前に報告されたように（１）、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応アッセイを介して取得し、取り扱い、処理した。
【0109】
細胞調製及び免疫蛍光染色
静脈穿刺からの末梢血を、免疫表現型検査のためにＥＤＴＡ及びヘパリンコーティングされたバキュテーナーチューブ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に引き込んだ。ＥＤＴＡチューブに採取した全血を、臨床標準免疫表現型検査プロトコル（Ａｍｅｒｉｍｍｕｎｅ ＬＬＣ，Ｆａｉｒｆａｘ，ＶＡ）に従って免疫染色した。試料を４℃で３０分間、表１に示されるような抗体の組み合わせで染色した。赤血球を、ＢＤ ＦＡＣＳ溶解液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を製造指示書に従って使用して溶解させた。
静脈穿刺からの末梢血を、免疫表現型検査のためにＥＤＴＡ及びヘパリンコーティングされたバキュテーナーチューブ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に引き込んだ。ＥＤＴＡチューブに採取した全血を、臨床標準免疫表現型検査プロトコル（Ａｍｅｒｉｍｍｕｎｅ ＬＬＣ，Ｆａｉｒｆａｘ，ＶＡ）に従って免疫染色した。試料を４℃で３０分間、表１に示されるような抗体の組み合わせで染色した。赤血球を、ＢＤ ＦＡＣＳ溶解液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を製造指示書に従って使用して溶解させた。
【0110】
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を２ｍＬの全血から分離し、製造業者の指示に従って、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）及びＡｃｃｕｓｐｉｎチューブ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して、ｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で１：１に希釈した。ＰＢＭＣをＰＢＳで洗浄し、０．４ｍＬのＰＢＳに再懸濁した。１００μＬのＰＢＭＣを、表１に示す抗体の混合物を用いて４℃で１時間免疫染色した。細胞を洗浄し、取得前にＰＢＳ中に再懸濁した。
【0111】
（表１）患者の免疫学的データ
免疫学的分析の詳細な説明については方法を参照されたい。赤色で強調表示された項目は基準範囲外である。
【0112】
Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃからの利用した抗体は、ＣＤ５６ ＳＢ４３６、ＣＤ４５ ｅＦ５０６、ＣＤ３ ＦＩＴＣ、ＣＤ１６ ＰＥ、ＣＤ８ ＰｅｒＣＰ－ｅＦ７１０、ＣＤ１４ ＰＥ－ＣＹ７、ＣＤ４ ＡＰＣ、ＣＤ２０ ＡＰＣ－ｅＦ７８０、Ｃｄ２５ ＥＦ４５０、ＣＤ５７ ＦＩＴＣ、ＴＣＲγ－δＰＥ、ＣＤ４ ＰｅｒＣＰ－ｅＦ７１０、ＣＤ３ ＰＥ－ＣＹ７、ＴＣＲ αβＡＰＣ、ＨＬＡ－ＤＲ ＡＦ７００、ＣＤ８ ＡＰＣ－ｅＦ７８０、ＩｇＤ ＳＢ４３６、ＩｇＡ ＦＩＴＣ、ＩｇＧ ＰＥ、ＩｇＭ ＰｅｒＣＰ－ｅＦ７１０、ＣＤ１９ ＰＥ－ＣＹ７、ＣＤ２７ ＡＰＣ、ＣＤ５ ＦＩＴＣ、ＣＤ２１ ＰＥ、ＣＤ２７ ＰｅｒＣＰ－ｅＦ７１０、ＣＤ４５ＲＡ ＦＩＴＣ、ＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ｅＦ７１０、ＣＤ２９４ ＡＰＣ、ＣＤ４ ＡＦ７００、ＣＤ３ ＦＩＴＣ、ＣＤ１４ ＦＩＴＣ、ＣＤ１６ ＦＩＴＣ、ＣＤ１９ ＦＩＴＣ、ＣＤ２０ ＦＩＴＣ、ＣＤ５６ ＦＩＴＣ、ＣＤ３４、ＦＩＴＣ、ＣＤ１１ｃ ＰＥ、ＨＬＡ－ＤＲ ＰｅｒＣＰ－ＥＦ７１０、ＣＤ３０３ａ ＡＰＣ、ＣＤ４ ＳＢ６００、ＣＤ４５ＲＡ ＦＩＴＣ、ＣＤ３ ＰＥ－ＣＹ７、ＣＤ８ ＡＦ７００、ＣＣＲ５ ＡＰＣ、ＣＤ２５ ＡＰＣ、ＣＤ３１７ ＰＥ、ＩＬ－６ ＰＥ－ＣＹ７、ＭＩＰ１－β ＡＰＣであった。
【0113】
ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅからの利用した抗体は、ＨＬＡＤＲ ＢＶ４８０、ＣＤ３８ ＰｅｒＣＰ－ＣＹ５．５、ＣＤ２８ ＡＰＣ、ＣＤ４５ ＡＰＣ Ｈ７、ＣＤ２７８ ＢＶ４２１、ＣＸＣＲ５ ＰｅｒＣＰ－ＣＹ５．５、ＣＤ１２７ ＢＶ４８０、ＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ＣＹ５．５ ＣＤ２０ ＡＰＣ－Ｈ７、ＣＤ１１ｂ ＢＶ４２１、ＣＤ１６ ＦＩＴＣ、ＭＩＰ１－αＰＥ、ＨＬＡ－ＤＲ ＰｅｒＰＣ－Ｃｙ５．５、Ｐｅｒｆｏｒｉｎ Ａｌｅｘａ４８８、及びグランザイムＢ ＰＥであった。ＴＮＦ－α ＢＶ４２１は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。
【0114】
試料をＡｍｅｒｉｍｍｕｎｅの臨床安全ＳＯＰに従って処理した。試料を処理する際には適切なＰＰＥを使用した。
【0115】
フローサイトメトリーによるアポトーシス及びパイロトーシス測定
アポトーシス及びパイロトーシスを、プロトコル（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）に従って、カスパーゼプローブアッセイの蛍光標識された阻害剤ＦＬＩＣＡを使用してフローサイトメトリーによって測定した。カスパーゼ１及びカスパーゼ３／７に特異的なＦＡＭ－ＦＬＩＣＡプローブを１００μｌのＰＢＭＣに直接添加し、３７℃で１時間インキュベートした。細胞を洗浄緩衝液で３回洗浄して、未結合のＦＬＩＣＡプローブを除去した。細胞を、ＣＤ４５ ＰＥ－ＣＹ７、ＣＤ３ ＡＦ７００、ＣＤ４ ＰＥ、及びＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ＥＦ７１０で染色した。
アポトーシス及びパイロトーシスを、プロトコル（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）に従って、カスパーゼプローブアッセイの蛍光標識された阻害剤ＦＬＩＣＡを使用してフローサイトメトリーによって測定した。カスパーゼ１及びカスパーゼ３／７に特異的なＦＡＭ－ＦＬＩＣＡプローブを１００μｌのＰＢＭＣに直接添加し、３７℃で１時間インキュベートした。細胞を洗浄緩衝液で３回洗浄して、未結合のＦＬＩＣＡプローブを除去した。細胞を、ＣＤ４５ ＰＥ－ＣＹ７、ＣＤ３ ＡＦ７００、ＣＤ４ ＰＥ、及びＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ＥＦ７１０で染色した。
【0116】
計測及びフローサイトメトリー取得
試料を３レーザーＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ １０で取得した。ＣＳ＆Ｔビーズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を毎日取得して、Ｃａｎｔｏ １０の一貫した性能を確実にした。試料の取得後、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ １０を１０％漂白剤及び水で１０分間洗浄した。この研究のために利用されたＣＡＮＴＯ １０は、Ｔ、Ｂ、ＮＫ、及び樹状細胞免疫表現型検査の臨床診断試験に有効であると検証された。
試料を３レーザーＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ １０で取得した。ＣＳ＆Ｔビーズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を毎日取得して、Ｃａｎｔｏ １０の一貫した性能を確実にした。試料の取得後、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ １０を１０％漂白剤及び水で１０分間洗浄した。この研究のために利用されたＣＡＮＴＯ １０は、Ｔ、Ｂ、ＮＫ、及び樹状細胞免疫表現型検査の臨床診断試験に有効であると検証された。
【0117】
実施例３
免疫抑制されていないＣＯＶＩＤ－１９患者中のカスパーゼ－１は、対照よりもＣＤ３陰性細胞、ＣＤ３＋細胞、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞中でより高い
過剰な免疫応答及び「サイトカインストーム」は、ＣＯＶＩＤ－１９から見られる合併症の可能性のある理由として仮定されているが、困惑させられる所見もある。例えば、低レベルのＩＦＮ－α産生及びエフェクター応答（以下の図７を参照）、より高い抗体産生を有する重症患者、エフェクターサイトカイン及びケモカイン分子を遮断する試みを研究する臨床試験の失敗、並びにＴ細胞リンパ球減少の特徴的な知見は全て、免疫細胞の細胞死及びその後の関連する合併症に関係する別の機序を指し示している。
免疫抑制されていないＣＯＶＩＤ－１９患者中のカスパーゼ－１は、対照よりもＣＤ３陰性細胞、ＣＤ３＋細胞、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞中でより高い
過剰な免疫応答及び「サイトカインストーム」は、ＣＯＶＩＤ－１９から見られる合併症の可能性のある理由として仮定されているが、困惑させられる所見もある。例えば、低レベルのＩＦＮ－α産生及びエフェクター応答（以下の図７を参照）、より高い抗体産生を有する重症患者、エフェクターサイトカイン及びケモカイン分子を遮断する試みを研究する臨床試験の失敗、並びにＴ細胞リンパ球減少の特徴的な知見は全て、免疫細胞の細胞死及びその後の関連する合併症に関係する別の機序を指し示している。
【0118】
ＨＩＶにおける最近の研究は、Ｔヘルパー細胞死の機序としてカスパーゼ－１の上方制御を実証した（３）。これに続いて、ＣＯＶＩＤ－１９の入院患者においてカスパーゼ－１のレベルを測定した。これらの患者は、健常対照と比較して、有意に高いベースライン並びにニゲリシン誘導性カスパーゼ－１の発現を有することが見出された。ＣＤ３陰性（Ｂ細胞及びＮＫ細胞）、ＣＤ３＋、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞におけるカスパーゼ－１の発現を陽性パーセント（％）及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示す図８を参照されたい。
【0119】
図８から、ＣＯＶＩＤ－１９患者は、ベースライン並びにニゲリシン刺激後の両方で、カスパーゼ－１の発現が上昇していることが明らかである。
【0120】
個々の患者からの連続試料に差はなかったが、重症であった患者は、非重症患者と比較してより低いベースラインカスパーゼ－１レベルを有していた。ニゲリシン誘導性カスパーゼ－１の発現において、２つの群（重篤及び非重篤）の間に統計的差異はなく、細胞の機能的劣化を示した。これらのカスパーゼ－１の知見は、非Ｔ細胞（Ｂ細胞及びＮＫ細胞）においても見られた。
【0121】
患者を疾患重症度（ＩＣＵ対非ＩＣＵ）によって分類した場合、ＩＣＵ患者と非ＩＣＵ患者との間に明確な統計的差異が観察され、カスパーゼ－１の発現の上昇は、重症ＩＣＵ患者において一貫してより低い（図９）。
【0122】
全ての場合において、健常対照患者からの試料と、ＩＣＵ及び非ＩＣＵ患者の両方からの試料との間の統計的差異は、依然として維持されている。
【0123】
実施例４
高齢の患者は、ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞においてより高い上昇したカスパーゼ－１の発現を有する
年齢は、ＣＯＶＩＤ－１９重症度及び合併症の重大な危険要因である。図１０に示すように、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞において年齢とカスパーゼ－１活性との間に相関関係があることが発見された。
高齢の患者は、ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞においてより高い上昇したカスパーゼ－１の発現を有する
年齢は、ＣＯＶＩＤ－１９重症度及び合併症の重大な危険要因である。図１０に示すように、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞において年齢とカスパーゼ－１活性との間に相関関係があることが発見された。
【0124】
実施例５
ＣＤ４＋メモリーＴ細胞は、カスパーゼ－１活性の上昇と相関する（Ｂ）
年齢は、ＣＯＶＩＤ－１９重症度及び合併症の重大な危険要因である。図１１Ａ及び１１Ｂに示されるように、ＣＤ３＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞において年齢とカスパーゼ－１活性との間に相関があることが発見された。
ＣＤ４＋メモリーＴ細胞は、カスパーゼ－１活性の上昇と相関する（Ｂ）
年齢は、ＣＯＶＩＤ－１９重症度及び合併症の重大な危険要因である。図１１Ａ及び１１Ｂに示されるように、ＣＤ３＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞において年齢とカスパーゼ－１活性との間に相関があることが発見された。
【0125】
ＣＤ４＋Ｔ細胞カスパーゼ－１活性の上昇は、メモリーＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団と相関した（図１１Ｂ参照）。これはまた、高齢患者における加齢に関連したカスパーゼ－１活性の上昇を説明し、高齢患者はより高いメモリーＣＤ４Ｔ細胞集団を有する傾向がある。
【0126】
実施例６
レッドリング
本明細書に記載されるいくつかの実験のための末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の調製の間になされた観察の１つは、ＰＢＭＣ層中の汚染赤血球（ＲＢＣ）層の存在であり、これは「レッドリング」と呼ばれた。この「レッドリング」は、全てのＣＯＶＩＤ－１９患者試料に存在し、重篤患者とＩＣＵ環境外で支持療法のみを受けていた患者との間に差はなかった（図１２Ａ参照）。
レッドリング
本明細書に記載されるいくつかの実験のための末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の調製の間になされた観察の１つは、ＰＢＭＣ層中の汚染赤血球（ＲＢＣ）層の存在であり、これは「レッドリング」と呼ばれた。この「レッドリング」は、全てのＣＯＶＩＤ－１９患者試料に存在し、重篤患者とＩＣＵ環境外で支持療法のみを受けていた患者との間に差はなかった（図１２Ａ参照）。
【0127】
顕微鏡下で検査した場合、「レッドリング」中のＲＢＣは、血液がヘパリン処理又はＥＤＴＡ処理されたチューブに収集されているにもかかわらず、集塊及び凝集を示した。また、全ての患者をヘパリンで処置した（図１３を参照）。
【0128】
ＣＯＶＩＤ－１９患者試料で観察された「レッドリング」は、非ＣＯＶＩＤ－１９患者試料には存在しなかった。図１４及び１５を参照。
【0129】
ＣＯＶＩＤ－１９患者試料から単離されたＰＢＭＣを、室温で１７時間、エムリカサン（１マイクロモル）と共にインキュベートした場合、「レッドリング」の減少が観察された。図１６を参照。
【0130】
エムリカサンがＲＢＣの凝集を低減し、おそらくは防止するため、この結果は、ＣＯＶＩＤ－１９を治療するためのエムリカサンの使用を裏付ける。
【0131】
実施例７
カスパーゼ活性のエムリカサン媒介阻害
ＣＯＶＩＤ－１９（＋）患者からの全血を、（Ａ）エムリカサンを添加せずに（未処理）、又は（Ｂ）エムリカサン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＯ，ＳＭＬ２２２７－５ＭＧ）と共に（処理）、１μＭ最終濃度で、室温で３．５時間インキュベートした。エムリカサンの存在下又は非存在下でインキュベートした後、製造業者の指示に従って、Ａｃｃｕｓｐｉｎ Ｓｙｓｔｅｍ－Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＯ，Ａ６９２９）を使用してＰＢＭＣを精製した。精製した処理ＰＢＭＣ及び未処理ＰＢＭＣを、製造業者の指示に従って、ニゲリシン（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＮ）と共に２時間インキュベートした。カスパーゼ１に特異的なＦａｍ－ＦＬＩＣＡプローブを５０μｌのＰＢＭＣに直接添加し、次いで、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＭＢＣを細胞洗浄緩衝液（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＮ）で洗浄して、未結合のＦＬＩＣＡプローブを除去した。洗浄したＰＢＭＣを、ＣＤ４５ ＰＥ－ＣＹ７［ＨＩ３０］、ＣＤ３ ＡＦ７００［ＵＣＨＴ１］、ＣＤ４ ＰＥ［ＲＰＡ－Ｔ４］、ＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ＥＦ７１０［ＵＣＨＬ１］、及びＶｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ７８０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用してＦＡＣＳ選別して、生存ＣＤ３－細胞並びにＣＤ３＋細胞及びＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞を同定した。ＦＳＣ／ＳＳＣプロット上のリンパ球及びＦＳＣ－Ａ／ＦＳＣ－Ｈプロット上のシングレットのゲーティングを組み込んだ標準ゲーティング図を使用して、リンパ球を同定した。リンパ球をＣＤ４５／ＳＳＣプロット上でＣＤ４５＋として更に同定し、次いで、ＣＤ３－、ＣＤ３＋、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞をＣＤ４５＋ＣＤ３／ＣＤ４プロット上で同定した。図１７は、示された３つの細胞集団についての活性カスパーゼ－１ ＭＦＩ及び陽性％データを示す。エムリカサン処理ＣＯＶＩＤ－１９陽性（ＣＯＶＩＤ－１９（＋））全血は、活性カスパーゼ－１ ＭＦＩ及び活性カスパーゼ－１％陽性細胞の両方において、未処理ＣＯＶＩＤ－１９陽性全血と比較して有意な減少があった（ｐ≦０．００５）（プリズム、対応ｔ検定）。
カスパーゼ活性のエムリカサン媒介阻害
ＣＯＶＩＤ－１９（＋）患者からの全血を、（Ａ）エムリカサンを添加せずに（未処理）、又は（Ｂ）エムリカサン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＯ，ＳＭＬ２２２７－５ＭＧ）と共に（処理）、１μＭ最終濃度で、室温で３．５時間インキュベートした。エムリカサンの存在下又は非存在下でインキュベートした後、製造業者の指示に従って、Ａｃｃｕｓｐｉｎ Ｓｙｓｔｅｍ－Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＯ，Ａ６９２９）を使用してＰＢＭＣを精製した。精製した処理ＰＢＭＣ及び未処理ＰＢＭＣを、製造業者の指示に従って、ニゲリシン（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＮ）と共に２時間インキュベートした。カスパーゼ１に特異的なＦａｍ－ＦＬＩＣＡプローブを５０μｌのＰＢＭＣに直接添加し、次いで、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＭＢＣを細胞洗浄緩衝液（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＮ）で洗浄して、未結合のＦＬＩＣＡプローブを除去した。洗浄したＰＢＭＣを、ＣＤ４５ ＰＥ－ＣＹ７［ＨＩ３０］、ＣＤ３ ＡＦ７００［ＵＣＨＴ１］、ＣＤ４ ＰＥ［ＲＰＡ－Ｔ４］、ＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ＥＦ７１０［ＵＣＨＬ１］、及びＶｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ７８０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用してＦＡＣＳ選別して、生存ＣＤ３－細胞並びにＣＤ３＋細胞及びＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞を同定した。ＦＳＣ／ＳＳＣプロット上のリンパ球及びＦＳＣ－Ａ／ＦＳＣ－Ｈプロット上のシングレットのゲーティングを組み込んだ標準ゲーティング図を使用して、リンパ球を同定した。リンパ球をＣＤ４５／ＳＳＣプロット上でＣＤ４５＋として更に同定し、次いで、ＣＤ３－、ＣＤ３＋、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞をＣＤ４５＋ＣＤ３／ＣＤ４プロット上で同定した。図１７は、示された３つの細胞集団についての活性カスパーゼ－１ ＭＦＩ及び陽性％データを示す。エムリカサン処理ＣＯＶＩＤ－１９陽性（ＣＯＶＩＤ－１９（＋））全血は、活性カスパーゼ－１ ＭＦＩ及び活性カスパーゼ－１％陽性細胞の両方において、未処理ＣＯＶＩＤ－１９陽性全血と比較して有意な減少があった（ｐ≦０．００５）（プリズム、対応ｔ検定）。
【0132】
別の実験では、全血を１μＭのエムリカサンと共に室温で１７時間（午後５時から午前１０時の一晩）、ロッカー上でインキュベートした。ＰＢＭＣ中の活性カスパーゼ１を調べるために、上記と同じ実験を行った。ＣＯＶＩＤ－１９患者由来の３つの試料において、ニゲリシン誘導性カスパーゼ－１活性の阻害は、１／３の試料のみで見られた。
【0133】
実施例８
ＩＬ－１８とカスパーゼ－１活性との相関
全血を９６０ｒｃｆで遠心分離して、血漿をＲＢＣ及びＷＢＣから分離した。血漿を取り出し、試験するまで気相液体窒素中で凍結した。残りの試料を、製造業者の指示に従って、Ａｃｃｕｓｐｉｎ Ｓｙｓｔｅｍ－Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＯ，Ａ６９２９）を使用して、ＰＢＭＣについて処理した。活性カスパーゼ－１に特異的なＦａｍ－ＦＬＩＣＡプローブ（上記の実施例７を参照）を５０μｌのＰＢＭＣに直接添加し、続いて３７℃で１時間インキュベートした。ＰＭＢＣを細胞洗浄緩衝液（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＮ）で洗浄して、未結合のＦＬＩＣＡプローブを除去した。洗浄したＰＢＭＣを、ＣＤ４５ ＰＥ－ＣＹ７［ＨＩ３０］、ＣＤ３ ＡＦ７００［ＵＣＨＴ１］、ＣＤ４ ＰＥ［ＲＰＡ－Ｔ４］、ＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ＥＦ７１０［ＵＣＨＬ１］、及びＶｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ７８０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用してＦＡＣＳ選別して、生存ＣＤ３－細胞並びにＣＤ３＋細胞及びＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞を同定した。ＦＳＣ／ＳＳＣプロット上のリンパ球及びＦＳＣ－Ａ／ＦＳＣ－Ｈプロット上のシングレットのゲーティングを組み込んだ標準ゲーティング図を使用して、リンパ球を同定した。リンパ球をＣＤ４５／ＳＳＣプロット上でＣＤ４５＋として更に同定し、次いで、ＣＤ３－、ＣＤ３＋、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞をＣＤ４５＋ＣＤ３／ＣＤ４プロット上で同定した。
ＩＬ－１８とカスパーゼ－１活性との相関
全血を９６０ｒｃｆで遠心分離して、血漿をＲＢＣ及びＷＢＣから分離した。血漿を取り出し、試験するまで気相液体窒素中で凍結した。残りの試料を、製造業者の指示に従って、Ａｃｃｕｓｐｉｎ Ｓｙｓｔｅｍ－Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＯ，Ａ６９２９）を使用して、ＰＢＭＣについて処理した。活性カスパーゼ－１に特異的なＦａｍ－ＦＬＩＣＡプローブ（上記の実施例７を参照）を５０μｌのＰＢＭＣに直接添加し、続いて３７℃で１時間インキュベートした。ＰＭＢＣを細胞洗浄緩衝液（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＮ）で洗浄して、未結合のＦＬＩＣＡプローブを除去した。洗浄したＰＢＭＣを、ＣＤ４５ ＰＥ－ＣＹ７［ＨＩ３０］、ＣＤ３ ＡＦ７００［ＵＣＨＴ１］、ＣＤ４ ＰＥ［ＲＰＡ－Ｔ４］、ＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ＥＦ７１０［ＵＣＨＬ１］、及びＶｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ７８０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用してＦＡＣＳ選別して、生存ＣＤ３－細胞並びにＣＤ３＋細胞及びＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞を同定した。ＦＳＣ／ＳＳＣプロット上のリンパ球及びＦＳＣ－Ａ／ＦＳＣ－Ｈプロット上のシングレットのゲーティングを組み込んだ標準ゲーティング図を使用して、リンパ球を同定した。リンパ球をＣＤ４５／ＳＳＣプロット上でＣＤ４５＋として更に同定し、次いで、ＣＤ３－、ＣＤ３＋、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞をＣＤ４５＋ＣＤ３／ＣＤ４プロット上で同定した。
【0134】
製造業者の指示に従って、ヒトＩＬ－１８ ＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ、ａｂ２１５５３９）を利用して、分泌されたＩＬ－１８をアッセイした。十分な試料が利用可能である場合には、試料を二重及び三重に試験した。結果を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ８を用いて分析した。４パラメータ曲線適合を行い、Ｐｒｉｓｍ補間関数を使用してＩＬ－１８濃度を補間した。図１８Ａ及び１８Ｂを参照されたい。
【0135】
図１８Ａ及び１８Ｂは、分泌されたｈＩＬ－１８と相関するＣＤ３＋及びＣＤ４＋細胞集団の両方についての活性カスパーゼ－１ ＭＦＩを示す。スピアマン相関アルゴリズムを使用してＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ８で分析を行った。Ｐ値をグラフ上に示す。
【0136】
ＣＯＶＩＤ－１９患者は、標的化及び非標的化免疫抑制剤の使用を促した急性免疫過剰活性化を示すが、Ｔ細胞の喪失及び他のリンパ細胞区画のパイロトーシスを伴う深刻な適応免疫機能不全の証拠がある。本明細書に提示されるデータが示すように、リンパ球及びＲＢＣのパイロトーシスが、それぞれ免疫機能不全及び凝固障害をもたらす。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した患者における他の細胞型（例えば、内皮細胞）もまた、パイロトーシスを受ける可能性があり、これは、文献に記載される「サイトカインストーム」に更に寄与し得る。
【0137】
これらの知見は、全体として、リンパ球の壊死性細胞死に起因するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２誘導性急性免疫不全に注目を集める。特定の理論に束縛されるものではないが、ＣＯＶＩＤ－１９患者において観察される炎症反応は、免疫系細胞の壊死細胞死からの危険シグナルに対して二次的であり、組織細胞の死滅によって誘導されるプロセスよりも激しい炎症をもたらす。最終的な結果は、ウイルス感染によって引き起こされる炎症を更に刺激する免疫系の自己損傷性遮断であり、急性ウイルス誘導性免疫不全をもたらす。
【0138】
実施例１～８の参考文献
引用された各参考文献の開示は、明示的に本明細書に組み込まれる。
引用された各参考文献の開示は、明示的に本明細書に組み込まれる。
【0139】
実施例９
ＣＯＶＩＤ－１９疾患及び後遺症におけるカスパーゼ並びにカスパーゼ阻害剤の治療可能性
この研究では、ＣＯＶＩＤ－１９患者由来の免疫細胞においてカスパーゼの転写状態を評価し、細胞カスパーゼのフローサイトメトリープロファイリングを使用して、急性疾患で入院した又は回復期の一連のＣＯＶＩＤ－１９患者に由来する免疫細胞及び赤血球を調べた。いくつかのカスパーゼの遺伝子発現レベルは、インビトロＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染モデルにおいて上昇し、ＣＯＶＩＤ－１９患者由来の抹消血の単細胞ＲＮＡ－Ｓｅｑデータは、Ｔ細胞、好中球、及び樹枝細胞におけるカスパーゼ発現の異なるパターンを示した。ＣＤ４ Ｔ細胞のフローサイトメトリー評価は、喘息及び慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）を有する患者のサブセットを除いて、非曝露対照と比較して、入院ＣＯＶＩＤ－１９患者においてカスパーゼ－１のアップレギュレーションを示した。長引く症状を有する回復期のＣＯＶＩＤ－１９患者（「ロングホーラー」）は、選択された汎カスパーゼ阻害剤との共培養後にエクスビボで減弱されたＣＤ４ Ｔ細胞におけるカスパーゼ－１の持続的なアップレギュレーションを示した。更に、カスパーゼ阻害に応答する対照と比較して、ＣＯＶＩＤ－１９患者からの赤血球中で、カスパーゼ３レベルの上昇が観察された。総合すると、これらの結果は、重篤な転帰をもたらす免疫関連の病理学的プロセスを促進するＣＯＶＩＤ－１９における有意なカスパーゼ応答を明らかにする。汎カスパーゼ阻害は、重度のＣＯＶＩＤ－１９転帰を改善、低減、又は予防するための処置戦略である。
ＣＯＶＩＤ－１９疾患及び後遺症におけるカスパーゼ並びにカスパーゼ阻害剤の治療可能性
この研究では、ＣＯＶＩＤ－１９患者由来の免疫細胞においてカスパーゼの転写状態を評価し、細胞カスパーゼのフローサイトメトリープロファイリングを使用して、急性疾患で入院した又は回復期の一連のＣＯＶＩＤ－１９患者に由来する免疫細胞及び赤血球を調べた。いくつかのカスパーゼの遺伝子発現レベルは、インビトロＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染モデルにおいて上昇し、ＣＯＶＩＤ－１９患者由来の抹消血の単細胞ＲＮＡ－Ｓｅｑデータは、Ｔ細胞、好中球、及び樹枝細胞におけるカスパーゼ発現の異なるパターンを示した。ＣＤ４ Ｔ細胞のフローサイトメトリー評価は、喘息及び慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）を有する患者のサブセットを除いて、非曝露対照と比較して、入院ＣＯＶＩＤ－１９患者においてカスパーゼ－１のアップレギュレーションを示した。長引く症状を有する回復期のＣＯＶＩＤ－１９患者（「ロングホーラー」）は、選択された汎カスパーゼ阻害剤との共培養後にエクスビボで減弱されたＣＤ４ Ｔ細胞におけるカスパーゼ－１の持続的なアップレギュレーションを示した。更に、カスパーゼ阻害に応答する対照と比較して、ＣＯＶＩＤ－１９患者からの赤血球中で、カスパーゼ３レベルの上昇が観察された。総合すると、これらの結果は、重篤な転帰をもたらす免疫関連の病理学的プロセスを促進するＣＯＶＩＤ－１９における有意なカスパーゼ応答を明らかにする。汎カスパーゼ阻害は、重度のＣＯＶＩＤ－１９転帰を改善、低減、又は予防するための処置戦略である。
【0140】
本明細書に記載される研究は、複数の免疫細胞種におけるＣＯＶＩＤ－１９病の範囲にわたって、炎症カスパーゼだけでなく、誘導型及び実行型カスパーゼの発現を調査するための分析に関する。赤血球中のカスパーゼ－３（ＲＢＣ）など、カスパーゼ－１を超えるカスパーゼ分子の増加の発見は、免疫系細胞の完全なカスパーゼ発現プロファイルの更なる定義をもたらした。所与の癌細胞集団における独特のカスパーゼ発現プロファイルの影響は、ＣＯＶＩＤ－１９感染症における凝固障害へのＲＢＣの関与などの特定の転帰に影響を与え、病気進行のパラメータとの関係を決定し得る。
【0141】
材料及び方法
患者集団
免疫表現型検査のための患者試料は、患者の来院又は入院中に取得した。患者は、１）入院しておらず、ＣＯＶＩＤ－１９症状を示さない、又は２）ＣＯＶＩＤ－１９症状を示して入院していると定義した。静脈穿刺からの末梢血を、免疫表現型検査のためにＥＤＴＡ及びヘパリンコーティングされたバキュテーナー（vacutainer）チューブに採取し、採血から４８時間以内に処理した。
患者集団
免疫表現型検査のための患者試料は、患者の来院又は入院中に取得した。患者は、１）入院しておらず、ＣＯＶＩＤ－１９症状を示さない、又は２）ＣＯＶＩＤ－１９症状を示して入院していると定義した。静脈穿刺からの末梢血を、免疫表現型検査のためにＥＤＴＡ及びヘパリンコーティングされたバキュテーナー（vacutainer）チューブに採取し、採血から４８時間以内に処理した。
【0142】
フローサイトメトリー
臨床標準免疫表現型検査プロトコル（Ａｍｅｒｉｍｍｕｎｅ ＬＬＣ，Ｆａｉｒｆａｘ，ＶＡ）に従って全血を染色した。試料を、４℃で３０分間、複数の抗体の組み合わせで染色した。ＲＢＣを、ＢＤ ＦＡＣＳ溶解液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を製造指示書に従って使用して溶解させた。簡潔に述べると、新たに取得された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、採取から２４時間以内に２ｍＬの全血から分離し、製造業者の指示に従ってＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）及びＡｃｃｕｓｐｉｎチューブ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して、ｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で１：１に希釈した。ＰＢＭＣをＰＢＳで洗浄し、０．５ｍＬのＰＢＳに再懸濁した。１００μＬのＰＢＭＣを、４℃で１時間、抗体の混合物で免疫染色した。細胞を洗浄し、取得前にＰＢＳ中に再懸濁した。
臨床標準免疫表現型検査プロトコル（Ａｍｅｒｉｍｍｕｎｅ ＬＬＣ，Ｆａｉｒｆａｘ，ＶＡ）に従って全血を染色した。試料を、４℃で３０分間、複数の抗体の組み合わせで染色した。ＲＢＣを、ＢＤ ＦＡＣＳ溶解液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を製造指示書に従って使用して溶解させた。簡潔に述べると、新たに取得された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、採取から２４時間以内に２ｍＬの全血から分離し、製造業者の指示に従ってＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）及びＡｃｃｕｓｐｉｎチューブ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して、ｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で１：１に希釈した。ＰＢＭＣをＰＢＳで洗浄し、０．５ｍＬのＰＢＳに再懸濁した。１００μＬのＰＢＭＣを、４℃で１時間、抗体の混合物で免疫染色した。細胞を洗浄し、取得前にＰＢＳ中に再懸濁した。
【0143】
アポトーシス及びパイロトーシスを、カスパーゼプローブアッセイの蛍光標識された阻害剤（ＦＬＩＣＡ；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いてフローサイトメトリーによって測定した。対照として、ＰＢＭＣをニゲリシンで２時間刺激した。カスパーゼ－１に特異的なＦＡＭ－ＦＬＩＣＡプローブを５０μｌのＰＢＭＣに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。続いて、細胞を洗浄し、ＣＤ４５ ＰＥ－ＣＹ７［ＨＩ３０］、ＣＤ３ ＡＦ７００［ＵＣＨＴ１］、ＣＤ４ ＰＥ［ＲＰＡ－Ｔ４］、ＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ＥＦ７１０［ＵＣＨＬ１］、及びＶｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ７８０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で染色した。試料を３レーザーＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ １０で取得した。ＣＳ＆Ｔビーズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を毎日取得して、Ｃａｎｔｏ １０の一貫した性能を確実にした。この研究のために利用されたＣＡＮＴＯ １０は、Ｔ、Ｂ、ＮＫ、及び樹状細胞免疫表現型検査の臨床診断試験に有効であると検証された。Ｄｅｎｏｖｏ ＦＣＳ Ｅｘｐｒｅｓｓ ｖ６臨床版（Ｄｅ Ｎｏｖｏ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｐａｓａｄｅｎａ，ＣＡ）をフローサイトメトリー分析に使用した。
【0144】
Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞のためのゲーティング戦略
単球を、ＣＤ１４、ＣＤ１６、及びＨＬＡ－ＤＲを利用する標準的なゲーティング戦略によって同定して、古典的単球、中間単球、及び非古典的単球を同定した。ＣＤ３８及びＣＤ１１ｂ ＭＦＩ及び陽性パーセントを、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋中間単球から調べた。リンパ球は、以下のゲーティング図を用いて同定した：シングレット（ＦＳＣ－Ａ／ＦＳＣ－Ｈ）；ＣＤ４５＋（ＣＤ４５／ＳＳＣプロット）；ＣＤ４５＋ＣＤ３＋（ＣＤ３／ＳＳＣプロット）；及びＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４／ＣＤ８ ＣＤ３＋ゲーティング）。示されるようなその後のＴ細胞亜集団は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋又はＣＤ８＋細胞から同定された。リンパ球ゲーティングプロットから、Ｂ細胞は、ＣＤ４５＋；ＣＤ２０＋（ＣＤ２０／ＳＳＣプロット）として同定された。ＣＤ４５＋ＣＤ２０＋集団から全てのＢ細胞亜集団を同定した。
単球を、ＣＤ１４、ＣＤ１６、及びＨＬＡ－ＤＲを利用する標準的なゲーティング戦略によって同定して、古典的単球、中間単球、及び非古典的単球を同定した。ＣＤ３８及びＣＤ１１ｂ ＭＦＩ及び陽性パーセントを、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋中間単球から調べた。リンパ球は、以下のゲーティング図を用いて同定した：シングレット（ＦＳＣ－Ａ／ＦＳＣ－Ｈ）；ＣＤ４５＋（ＣＤ４５／ＳＳＣプロット）；ＣＤ４５＋ＣＤ３＋（ＣＤ３／ＳＳＣプロット）；及びＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４／ＣＤ８ ＣＤ３＋ゲーティング）。示されるようなその後のＴ細胞亜集団は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋又はＣＤ８＋細胞から同定された。リンパ球ゲーティングプロットから、Ｂ細胞は、ＣＤ４５＋；ＣＤ２０＋（ＣＤ２０／ＳＳＣプロット）として同定された。ＣＤ４５＋ＣＤ２０＋集団から全てのＢ細胞亜集団を同定した。
【0145】
ＩＬ－１８ ＥＬＩＳＡ
製造業者の指示に従って、ヒトＩＬ－１８ ＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ、ａｂ２１５５３９）を利用して、血漿ＩＬ－１８をアッセイした。十分な試料が利用可能である場合には、試料を最小限に二重及び三重に試験した。４パラメータ曲線適合を行い、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８．０（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，ＣＡ，ＵＳＡ）補間関数を使用してＩＬ－１８濃度を補間した。
製造業者の指示に従って、ヒトＩＬ－１８ ＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ、ａｂ２１５５３９）を利用して、血漿ＩＬ－１８をアッセイした。十分な試料が利用可能である場合には、試料を最小限に二重及び三重に試験した。４パラメータ曲線適合を行い、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８．０（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，ＣＡ，ＵＳＡ）補間関数を使用してＩＬ－１８濃度を補間した。
【0146】
血漿実験
９６０ ＲＣＦで遠心分離した後、血漿を全血から分離した。細胞（ＲＢＣ及びＷＢＣ）を、３７℃で単独で、又はトリプシンの存在下で１時間インキュベートし、次いで１０パック細胞容量のＲＰＭＩ １６４０不完全培地で洗浄した。血漿を室温（１８～２５℃）で保持するか、又は５６℃で１時間熱不活化した。血漿をＲＢＣ／ＷＢＣに１：１の比で添加し戻し、室温で振盪しながら一晩インキュベートした。
９６０ ＲＣＦで遠心分離した後、血漿を全血から分離した。細胞（ＲＢＣ及びＷＢＣ）を、３７℃で単独で、又はトリプシンの存在下で１時間インキュベートし、次いで１０パック細胞容量のＲＰＭＩ １６４０不完全培地で洗浄した。血漿を室温（１８～２５℃）で保持するか、又は５６℃で１時間熱不活化した。血漿をＲＢＣ／ＷＢＣに１：１の比で添加し戻し、室温で振盪しながら一晩インキュベートした。
【0147】
公的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及びＣＯＶＩＤ－１９のトランスクリプトーム解析：
換気され、症状発症後２～１６日目に急性呼吸窮迫症候群と診断された３人のＣＯＶＩＤ－１９参加者及び６人の健常対照からの単細胞ＲＮＡシーケンスデータは、ＧＥＯ（２７）からアクセスされた。インビトロでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した細胞株からのＲＮＡシーケンスデータは、ＧＥＯ：ＧＳＥ１４７５０７から入手した。カスパーゼ遺伝子の発現値を、ＤＥＳｅｑ２によって正規化した。
換気され、症状発症後２～１６日目に急性呼吸窮迫症候群と診断された３人のＣＯＶＩＤ－１９参加者及び６人の健常対照からの単細胞ＲＮＡシーケンスデータは、ＧＥＯ（２７）からアクセスされた。インビトロでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した細胞株からのＲＮＡシーケンスデータは、ＧＥＯ：ＧＳＥ１４７５０７から入手した。カスパーゼ遺伝子の発現値を、ＤＥＳｅｑ２によって正規化した。
【0148】
エクスビボ刺激試験
ＣＯＶＩＤ－１９＋患者試料中の活性カスパーゼ－１。ＣＯＶＩＤ－１９陽性患者からの全血を、（Ａ）未処理とした、又は（Ｂ）エムリカサン（１μＭ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ＭＯ、ＳＭＬ２２２７－５ＭＧ）若しくは選択的カスパーゼ－１阻害剤ＶＸ７６５を用いて、水浴中３７℃で一晩処理した。その後、ＰＢＭＣを精製し（Ａｃｃｕｓｐｉｎ Ｓｙｓｔｅｍ－Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＯ，Ａ６９２９）、ニゲリシン（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＮ）と共に２時間インキュベートした。活性カスパーゼ－１に特異的なＦａｍ－ＦＬＩＣＡプローブを５０μｌのＰＢＭＣに添加し、次いで３７℃で１時間インキュベートした。ＰＭＢＣを細胞洗浄緩衝液（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＮ）で洗浄し、ＣＤ４５ ＰＥ－ＣＹ７［ＨＩ３０］、ＣＤ３ ＡＦ７００［ＵＣＨＴ１］、ＣＤ４ ＰＥ［ＲＰＡ－Ｔ４］、ＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ＥＦ７１０［ＵＣＨＬ１］、及びＶｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ７８０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で染色した。ＦＳＣ／ＳＳＣプロット上のリンパ球及びＦＳＣ－Ａ／ＦＳＣ－Ｈプロット上のシングレットのゲーティングを組み込んだ標準ゲーティング図を使用して、リンパ球を同定した。リンパ球をＣＤ４５／ＳＳＣプロット上でＣＤ４５＋として更に同定し、次いで、ＣＤ３－、ＣＤ３＋、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞をＣＤ４５＋ＣＤ３／ＣＤ４プロット上で同定した。示された３つの細胞集団についての活性カスパーゼ－１ ＭＦＩ及び陽性％を示す。
ＣＯＶＩＤ－１９＋患者試料中の活性カスパーゼ－１。ＣＯＶＩＤ－１９陽性患者からの全血を、（Ａ）未処理とした、又は（Ｂ）エムリカサン（１μＭ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ＭＯ、ＳＭＬ２２２７－５ＭＧ）若しくは選択的カスパーゼ－１阻害剤ＶＸ７６５を用いて、水浴中３７℃で一晩処理した。その後、ＰＢＭＣを精製し（Ａｃｃｕｓｐｉｎ Ｓｙｓｔｅｍ－Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＯ，Ａ６９２９）、ニゲリシン（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＮ）と共に２時間インキュベートした。活性カスパーゼ－１に特異的なＦａｍ－ＦＬＩＣＡプローブを５０μｌのＰＢＭＣに添加し、次いで３７℃で１時間インキュベートした。ＰＭＢＣを細胞洗浄緩衝液（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＮ）で洗浄し、ＣＤ４５ ＰＥ－ＣＹ７［ＨＩ３０］、ＣＤ３ ＡＦ７００［ＵＣＨＴ１］、ＣＤ４ ＰＥ［ＲＰＡ－Ｔ４］、ＣＤ４５ＲＯ ＰｅｒＣＰ－ＥＦ７１０［ＵＣＨＬ１］、及びＶｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ７８０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で染色した。ＦＳＣ／ＳＳＣプロット上のリンパ球及びＦＳＣ－Ａ／ＦＳＣ－Ｈプロット上のシングレットのゲーティングを組み込んだ標準ゲーティング図を使用して、リンパ球を同定した。リンパ球をＣＤ４５／ＳＳＣプロット上でＣＤ４５＋として更に同定し、次いで、ＣＤ３－、ＣＤ３＋、及びＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞をＣＤ４５＋ＣＤ３／ＣＤ４プロット上で同定した。示された３つの細胞集団についての活性カスパーゼ－１ ＭＦＩ及び陽性％を示す。
【0149】
統計分析
連続変数については中央値、第１四分位数（Ｑ１）、及び第３四分位数（Ｑ３）を使用し、カテゴリー変数については頻度を使用して、人口統計及びＣＯＶＩＤ関連の特徴を説明した。連続変数間の差は、マン－ホイットニー検定又はダンの多重比較によるクラスタル－ウォリス検定のいずれかによって評価した。パラメータ間の関係を、連続変数についてピアソン相関によって調べた。全ての統計的検定は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８．０（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて行った。統計的有意性は、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１として示される。Ｐ値≦０．１００は、有意ではないが、統計的傾向として記録する。
連続変数については中央値、第１四分位数（Ｑ１）、及び第３四分位数（Ｑ３）を使用し、カテゴリー変数については頻度を使用して、人口統計及びＣＯＶＩＤ関連の特徴を説明した。連続変数間の差は、マン－ホイットニー検定又はダンの多重比較によるクラスタル－ウォリス検定のいずれかによって評価した。パラメータ間の関係を、連続変数についてピアソン相関によって調べた。全ての統計的検定は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８．０（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて行った。統計的有意性は、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１として示される。Ｐ値≦０．１００は、有意ではないが、統計的傾向として記録する。
【0150】
結果
１．ＣＯＶＩＤ－１９感染症中の免疫細胞における複数のカスパーゼの転写プロファイル
ＣＯＶＩＤ－１９を有する患者由来のＴ細胞におけるカスパーゼ－１発現の上昇の所見を追跡調査するために、中等度～重度のＣＯＶＩＤ－１９を有する患者の血液試料からの異なる免疫細胞種において、複数のカスパーゼをアッセイした。カスパーゼ遺伝子発現レベルを、インビトロＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の公開トランスクリプトームプロファイリングデータセット及びＣＯＶＩＤ－１９を有する個体由来の免疫細胞の単細胞ＲＮＡシーケンスにおいて検査した（図１）。予想通り、カスパーゼ－１は、ＣＤ４ Ｔヘルパー細胞内で上方制御されることが見出された。ナチュラルキラー細胞におけるカスパーゼ遺伝子のトランスクリプトームレベルの変化、及び好中球の非常に劇的な増加についての証拠も見出された。興味深いことに、形質細胞様ＤＣは、カスパーゼ－９の上方制御を示した唯一の免疫細胞型であった。好中球は、上方制御されたカスパーゼ－５である炎症性カスパーゼを有する独特のプロファイルを示したが、同時にカスパーゼ－７であるアポトーシス促進性分子）の同様の増加も示した。ＩＦＮ刺激されたＣＤ４ Ｔヘルパー細胞は、カスパーゼ－７及び－９の有意な上方制御を示し、これは、複数の細胞死機構が、カスパーゼ－１経路に加えてある役割を果たすことを示す。
１．ＣＯＶＩＤ－１９感染症中の免疫細胞における複数のカスパーゼの転写プロファイル
ＣＯＶＩＤ－１９を有する患者由来のＴ細胞におけるカスパーゼ－１発現の上昇の所見を追跡調査するために、中等度～重度のＣＯＶＩＤ－１９を有する患者の血液試料からの異なる免疫細胞種において、複数のカスパーゼをアッセイした。カスパーゼ遺伝子発現レベルを、インビトロＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の公開トランスクリプトームプロファイリングデータセット及びＣＯＶＩＤ－１９を有する個体由来の免疫細胞の単細胞ＲＮＡシーケンスにおいて検査した（図１）。予想通り、カスパーゼ－１は、ＣＤ４ Ｔヘルパー細胞内で上方制御されることが見出された。ナチュラルキラー細胞におけるカスパーゼ遺伝子のトランスクリプトームレベルの変化、及び好中球の非常に劇的な増加についての証拠も見出された。興味深いことに、形質細胞様ＤＣは、カスパーゼ－９の上方制御を示した唯一の免疫細胞型であった。好中球は、上方制御されたカスパーゼ－５である炎症性カスパーゼを有する独特のプロファイルを示したが、同時にカスパーゼ－７であるアポトーシス促進性分子）の同様の増加も示した。ＩＦＮ刺激されたＣＤ４ Ｔヘルパー細胞は、カスパーゼ－７及び－９の有意な上方制御を示し、これは、複数の細胞死機構が、カスパーゼ－１経路に加えてある役割を果たすことを示す。
【0151】
比較のために、ＣＯＶＩＤ－１９参加者（非ＩＣＵ及びＩＣＵ）及び健常者のＴ細胞における活性カスパーゼ－１の細胞内レベルを分析した（図２Ａ；参加者の人口統計を補足表１に詳述する）。細胞内カスパーゼ－１陽性のＣＤ４ Ｔ細胞の頻度は、ベースライン時及びニゲリシン刺激を受けた健常参加者と比較して、非ＩＣＵ及びＩＣＵ ＣＯＶＩＤ－１９患者においてベースライン時に有意に上昇した（全てｐ値＜０．０００１）。
【0152】
ＲＮＡ分析においてＩＬ－１８及びＩＬ－１βの増加は見られなかったが、ＩＬ－１８の血清レベルは中等度～重度のＣＯＶＩＤ－１９個体において増加し、ヘルパーＴ細胞カスパーゼ－１の発現との正の相関を示した（図２Ｂ）。カスパーゼ－１の発現は、主にメモリーＣＤ４５ＲＯ集団に存在し、高齢との弱い相関を示し、これは、ＣＯＶＩＤ－１９における転帰不良の最大リスクファクターの１つとして高齢を潜在的に説明し得る知見である（図２Ｃ及びＤ）。更に、ＣＯＶＩＤ－１９患者におけるヘルパーＴ細胞カスパーゼ－１レベルは、ＣＲＴＨ２＋Ｔ細胞、γ／δ Ｔ細胞及び形質細胞様樹状細胞と相関していた（補足表２）。このような相関は、ＣＯＶＩＤ－１９に関与する複雑な細胞相互作用を指し示す。Ｔヘルパー細胞上のＦａｓ受容体の発現に統計的な差がなかったことに留意することも重要であり（図２Ｆ）、Ｆａｓ依存性細胞死はＣＯＶＩＤ－１９におけるＴ細胞枯渇の要因ではないことを示唆する。
【0153】
２．Ｔヘルパー細胞におけるカスパーゼ－１の増加は、臨床アレルギー免疫診療を受けている患者のサブセットにおいて見られる
アレルギー／免疫クリニックに来院した患者におけるカスパーゼ－１レベルをアッセイするために、Ｔヘルパー細胞における細胞内活性カスパーゼ－１を染色し、ＣＬＩＡ認定及びＣＡＰ認定フローサイトメトリー実験室において分析的に検証するようにラボ開発検査（ＬＤＴ）を設計した。アッセイの正常範囲を灰色の網掛け領域で示す（図３）。慢性副鼻腔炎、中等度から重度の喘息、慢性特発性蕁麻疹、及び免疫不全を呈する患者について、１０２人の成人及び小児対象からのデータを示す。試験はＣＬＩＡ／ＣＡＰ承認試験であるので、免疫学的検査における患者ケアの一部としてアッセイを実施した。参加者の人口統計を補足表３に示す。疾病対策センターによって定義された共存状態と高いカスパーゼ－１発現との相関は有意ではなかった。しかしながら、この患者コホートにおけるそれらの頻度が低いことを考えると、決定的な結論を引き出すことは困難である。しかしながら、喘息患者は、カスパーゼ－１のベースライン上昇を示した。
アレルギー／免疫クリニックに来院した患者におけるカスパーゼ－１レベルをアッセイするために、Ｔヘルパー細胞における細胞内活性カスパーゼ－１を染色し、ＣＬＩＡ認定及びＣＡＰ認定フローサイトメトリー実験室において分析的に検証するようにラボ開発検査（ＬＤＴ）を設計した。アッセイの正常範囲を灰色の網掛け領域で示す（図３）。慢性副鼻腔炎、中等度から重度の喘息、慢性特発性蕁麻疹、及び免疫不全を呈する患者について、１０２人の成人及び小児対象からのデータを示す。試験はＣＬＩＡ／ＣＡＰ承認試験であるので、免疫学的検査における患者ケアの一部としてアッセイを実施した。参加者の人口統計を補足表３に示す。疾病対策センターによって定義された共存状態と高いカスパーゼ－１発現との相関は有意ではなかった。しかしながら、この患者コホートにおけるそれらの頻度が低いことを考えると、決定的な結論を引き出すことは困難である。しかしながら、喘息患者は、カスパーゼ－１のベースライン上昇を示した。
【0154】
３．カスパーゼ－１の上方制御は、ＣＯＶＩＤ－１９の急性期に限定されない
ＣＯＶＩＤ－１９から回復した入院患者の８７％及び外来患者の３５％までが、少なくとも１つの症状、特に倦怠感及び呼吸困難の持続を報告している［２６、２７］。予備報告は、この新しい特徴を「ＣＯＶＩＤ後症候群」として記載しているが、その機序及び自然経過は未知のままである。カスパーゼ－１の発現を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染後少なくとも９０日間持続的な症状を有する医療従事者（ＨＣＷ）のＴヘルパー細胞において分析した（補足表４）。ロングホーラーとしても知られる症候性「ＣＯＶＩＤ－１９後」ＨＣＷにおいてのみ、ベースライン並びにニゲリシン刺激ヘルパーＴ細胞カスパーゼ－１のレベルの有意な上方調節があった（図４）。興味深いことに、２０２０年初期にインフルエンザ様疾患の病歴を有するＰＣＲ陰性のＨＣＷ、並びにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して陽性ＩｇＧを有するＨＣＷもまた、カスパーゼ－１発現の上昇を呈した。ニゲリシン刺激カスパーゼ－１の発現レベルは、活性感染を有する患者と同等であったが、ベースラインカスパーゼ－１のレベルは、これらのロングホーラーではより低かった（図２）。非曝露対照対象は、Ｔ細胞カスパーゼ－１の過剰発現を示さなかった。
ＣＯＶＩＤ－１９から回復した入院患者の８７％及び外来患者の３５％までが、少なくとも１つの症状、特に倦怠感及び呼吸困難の持続を報告している［２６、２７］。予備報告は、この新しい特徴を「ＣＯＶＩＤ後症候群」として記載しているが、その機序及び自然経過は未知のままである。カスパーゼ－１の発現を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染後少なくとも９０日間持続的な症状を有する医療従事者（ＨＣＷ）のＴヘルパー細胞において分析した（補足表４）。ロングホーラーとしても知られる症候性「ＣＯＶＩＤ－１９後」ＨＣＷにおいてのみ、ベースライン並びにニゲリシン刺激ヘルパーＴ細胞カスパーゼ－１のレベルの有意な上方調節があった（図４）。興味深いことに、２０２０年初期にインフルエンザ様疾患の病歴を有するＰＣＲ陰性のＨＣＷ、並びにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して陽性ＩｇＧを有するＨＣＷもまた、カスパーゼ－１発現の上昇を呈した。ニゲリシン刺激カスパーゼ－１の発現レベルは、活性感染を有する患者と同等であったが、ベースラインカスパーゼ－１のレベルは、これらのロングホーラーではより低かった（図２）。非曝露対照対象は、Ｔ細胞カスパーゼ－１の過剰発現を示さなかった。
【0155】
４．汎カスパーゼ阻害剤は、中等度～重度のＣＯＶＩＤ－１９患者のＣＤ４ Ｔ細胞におけるカスパーゼ－１の活性の上昇を抑制する。
Ｔ細胞カスパーゼ－１の活性がカスパーゼ阻害剤によって抑制され得るか否かを評価するために、全血試料を、汎カスパーゼ阻害剤であるエムリカサン（ＥＭＲ）又は選択的カスパーゼ－１阻害剤であるＶＸ７６５のいずれかと共にインキュベートし、続いて２４時間後に、ニゲリシン刺激あり又はなしでインキュベートした。ＥＭＲが、ＣＯＶＩＤ－１９試料においてヘルパーＴ細胞カスパーゼ－１の発現を抑制した、又は健常対象においてその上方制御を防止した一方（図５）、ＶＸ７６５は、強い同様の抑制効果を示さなかった。
Ｔ細胞カスパーゼ－１の活性がカスパーゼ阻害剤によって抑制され得るか否かを評価するために、全血試料を、汎カスパーゼ阻害剤であるエムリカサン（ＥＭＲ）又は選択的カスパーゼ－１阻害剤であるＶＸ７６５のいずれかと共にインキュベートし、続いて２４時間後に、ニゲリシン刺激あり又はなしでインキュベートした。ＥＭＲが、ＣＯＶＩＤ－１９試料においてヘルパーＴ細胞カスパーゼ－１の発現を抑制した、又は健常対象においてその上方制御を防止した一方（図５）、ＶＸ７６５は、強い同様の抑制効果を示さなかった。
【0156】
５．赤血球は、ＣＯＶＩＤ－１９感染症におけるカスパーゼ－３の増加を示し、汎カスパーゼ阻害剤によって抑制される。
細胞カスパーゼは、免疫細胞に限定されない。最近の報告は、ＣＯＶＩＤ－１９患者におけるＲＢＣの異常を示唆している［２８～３０］。フィコール分離のプロセスにおいて、ＰＢＭＣ層を汚染するＲＢＣの層が観察され、この層はＣＯＶＩＤ－１９個体由来の全ての試料中に普遍的に存在していた（図６Ａ）。この所見はまた、ＣＯＶＩＤ－１９回復期の対象の最大８０％に存在した。急性感染した対象からの血漿は、健常患者の血漿除去全血と共に一晩インキュベートしたときに同様の所見を誘導した。トリプシン、ＤＮＡｓｅ、又は熱不活性化による血漿試料の処理は、この効果を無効にしなかった。ＲＢＣはカスパーゼ－１を発現しないが、様々な障害で増加する検出可能なカスパーゼ－３を有することが示されている。急性ＣＯＶＩＤ－１９対象由来のＲＢＣは、健常対照と比較して、有意に上方制御されたカスパーゼ－３を有することが見出された（図６Ｂ）。これらの患者由来の血漿もまた、健常対象のＲＢＣにおいてカスパーゼ－３を上方制御した。この効果は、健常対象のＲＢＣをインフルエンザ感染患者からの血漿と共にインキュベートした場合には観察されなかったが、フィコール分離後のこれらの試料において同様のＲＢＣ汚染が観察された。更に、ＥＭＲは、ＣＯＶＩＤ－１９血漿中でインキュベートした試料におけるカスパーゼ－３の上方制御を抑制したが、インフルエンザ血漿中でインキュベートした試料におけるベースライン発現レベルを変化させなかった。
細胞カスパーゼは、免疫細胞に限定されない。最近の報告は、ＣＯＶＩＤ－１９患者におけるＲＢＣの異常を示唆している［２８～３０］。フィコール分離のプロセスにおいて、ＰＢＭＣ層を汚染するＲＢＣの層が観察され、この層はＣＯＶＩＤ－１９個体由来の全ての試料中に普遍的に存在していた（図６Ａ）。この所見はまた、ＣＯＶＩＤ－１９回復期の対象の最大８０％に存在した。急性感染した対象からの血漿は、健常患者の血漿除去全血と共に一晩インキュベートしたときに同様の所見を誘導した。トリプシン、ＤＮＡｓｅ、又は熱不活性化による血漿試料の処理は、この効果を無効にしなかった。ＲＢＣはカスパーゼ－１を発現しないが、様々な障害で増加する検出可能なカスパーゼ－３を有することが示されている。急性ＣＯＶＩＤ－１９対象由来のＲＢＣは、健常対照と比較して、有意に上方制御されたカスパーゼ－３を有することが見出された（図６Ｂ）。これらの患者由来の血漿もまた、健常対象のＲＢＣにおいてカスパーゼ－３を上方制御した。この効果は、健常対象のＲＢＣをインフルエンザ感染患者からの血漿と共にインキュベートした場合には観察されなかったが、フィコール分離後のこれらの試料において同様のＲＢＣ汚染が観察された。更に、ＥＭＲは、ＣＯＶＩＤ－１９血漿中でインキュベートした試料におけるカスパーゼ－３の上方制御を抑制したが、インフルエンザ血漿中でインキュベートした試料におけるベースライン発現レベルを変化させなかった。
【0157】
実施例９の参考文献
引用された各参考文献の開示は、明示的に本明細書に組み込まれる。
引用された各参考文献の開示は、明示的に本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【手続補正書】
【提出日】2023-01-23
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
有効量の、少なくともカスパーゼ１のカスパーゼ阻害剤を含む、Ｔ細胞リンパ球減少症又はＴ細胞のパイロトーシスを予防又は低減するためにヒト対象を処置し、Ｔ細胞リンパ球減少症又はＴ細胞のパイロトーシスを低減するための薬学的組成物であって、前記ヒト対象が、（ａ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患に罹患するリスクがあり、前記対象が罹患した場合、前記疾患からの負の転帰に関連する１つ以上の共存症を有するか、又は
（ｂ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染している、
薬学的組成物。
【請求項2】
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項3】
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２からなる群から選択される、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項4】
前記ヒト対象が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染している、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項5】
前記ヒト対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ１の活性が上昇している状態を有する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項6】
前記ヒト対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ１の発現が上昇している状態を有する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項7】
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサン、ＣＴＳ－２０９０、ベルナカサン（ＶＸ－７６５）、プラルナカサン（ＶＸ－７４０）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－０４３１９８）からなる群より選択される、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項8】
前記阻害剤が、ペプチドである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項9】
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ３、４、５、７、８、９、及び１１のうちの１つ以上を阻害する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項10】
前記阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項11】
前記阻害剤が、エムリカサンである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項12】
有効量の、少なくともカスパーゼ１のカスパーゼ阻害剤を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に関連する罹患リスク及び死亡リスクを低減するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のリスクがあるヒト対象又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２に感染したヒト対象を処置するための薬学的組成物。
【請求項13】
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ３、４、５、７、８、９、及び１１のうちの１つ以上を阻害する、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項14】
前記ヒト対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項15】
前記対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ１の活性が上昇している状態を有する、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項16】
前記対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ１の発現が上昇している状態を有する、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項17】
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサン、ＣＴＳ－２０９０、ベルナカサン（ＶＸ－７６５）、プラルナカサン（ＶＸ－７４０）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－０４３１９８）からなる群より選択される、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項18】
前記カスパーゼ阻害剤が、ペプチドである、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項19】
前記カスパーゼ阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項20】
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項21】
有効量の、ＣＯＶＩＤ－１９を治療するのに有用なカスパーゼ阻害剤を含む、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２に感染したか又は感染した疑いのあるヒト対象を処置するための薬学的組成物であって、任意選択で、ＣＯＶＩＤ－１９症状の発症前、又は前記対象が軽度若しくは中等度の重症度のＣＯＶＩＤ－１９を有している間に投与される、薬学的組成物。
【請求項22】
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ１及びカスパーゼ３を阻害する、請求項２１に記載の薬学的組成物。
【請求項23】
有効量の、（ａ）カスパーゼを阻害する化合物、（ｂ）ＡＣＥ－２受容体に結合する化合物、及び（ｃ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の主プロテアーゼに結合する化合物を含む、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２に感染したヒト対象を処置するための薬学的組成物であって、ＣＯＶＩＤ－１９症状の発症前、又は軽度若しくは中等度のＣＯＶＩＤ－１９症状を超えて進行している間に投与される、薬学的組成物。
【請求項24】
デキサメタゾン、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する抗体又は抗体カクテル、ＩＬ－６に対する抗体、及びレムデシビルからなる群より選択される化合物とともに投与される、請求項１２、２１、又は２３に記載の薬学的組成物。
【請求項25】
ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２疾患の重症度を予測するための試験方法であって、対象の血液試料を試験してカスパーゼ１の量を確認し、検出された前記カスパーゼ１の量を健常個体の１つ以上の対照試料中のカスパーゼ１の量と比較する工程を含み、
前記対象の血液試料中のカスパーゼ１の量が、前記１つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ１の量よりも統計的に有意に多い場合、前記対象が重症型の前記疾患を経験するリスクが高いと示される、方法。
【請求項26】
複数のヒト対象におけるＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２疾患の重症度を予測するための試験方法であって、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２に感染した複数の対象の複数の血液試料を試験して、各血液試料中のカスパーゼ１の量を確認し、少なくとも１つの対象血液試料由来のカスパーゼ１の量を、健常個体の１つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ１の量と比較する工程を含み、
前記対象の試料中のカスパーゼ１の量が、前記１つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ１の量よりも統計的に有意に多い場合に、前記対象が重症型の前記疾患を経験するリスクが高いと示され、前記対象の試料中のカスパーゼ１の量が、前記１つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ１の量よりも統計的に有意に多くはない場合に、対象が重症型の前記疾患を経験するリスクが低いと示される、方法。
【請求項27】
前記試験が、抗体試験を用いる、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項28】
前記試験が、フローサイトメトリーを用いる、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項29】
前記試験が、カスパーゼ１の１つ以上の蛍光標識された阻害剤を用いる、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項30】
前記試験が、カスパーゼ１の１つ以上の蛍光標識された基質を用いる、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項31】
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を更に有する、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項32】
有効量のカスパーゼ－３阻害剤を含む、異常な赤血球凝集又は血栓症を有するか又は有するリスクがあるヒト対象を処置し、異常な赤血球凝集又は血栓症を予防又は低減するための薬学的組成物であって、前記ヒト対象が、（ａ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患に罹患するリスクがあるか、又は（ｂ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染している、薬学的組成物。
【請求項33】
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、βコロナウイルスである、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項34】
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２からなる群から選択される、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項35】
前記ヒト対象が、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに関して無症候である、請求項３２記載の薬学的組成物。
【請求項36】
前記ヒト対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項37】
前記対象が、前記対象における１つ以上の細胞型でカスパーゼ－３の活性が上昇している状態を有する、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項38】
前記対象が、前記対象における１つ以上の細胞型でカスパーゼ－３の発現が上昇している状態を有する、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項39】
前記カスパーゼ阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項40】
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項41】
有効量のカスパーゼ－３阻害剤を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に関連する罹患リスク及び死亡リスクを低減するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のリスクがあるヒト対象又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２に感染した対象を処置し、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２に関連する有害転帰のリスクを低減するための薬学的組成物。
【請求項42】
赤血球のパイロトーシスを低減させるための、請求項４１に記載の薬学的組成物。
【請求項43】
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、請求項４１に記載の薬学的組成物。
【請求項44】
前記カスパーゼ－３阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、請求項４１に記載の薬学的組成物。
【請求項45】
前記カスパーゼ－３阻害剤が、エムリカサンである、請求項４１に記載の薬学的組成物。
【請求項46】
有効量の、少なくともカスパーゼ１のカスパーゼ阻害剤を含む、Ｃｏｖｉｄ－１９感染の後期後遺症を有する、又は後期後遺症を発症するリスクがあるヒト対象を処置するための薬学的組成物。
【請求項47】
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ３、４、５、７、８、９、及び１１のうちの１つ以上を阻害する、請求項４６に記載の薬学的組成物。
【請求項48】
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、請求項４６に記載の薬学的組成物。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0029】
本明細書を読んだ当業者に明らかであるこれらの実施形態及び他の実施形態は、感染のリスクがある者及び感染した者、特に重大な罹患率及び死亡率を経験するリスクが最も高い者を処置する方法を当技術分野に提供する。
[本発明1001]
以下の工程を含む、Ｔ細胞リンパ球減少症又はＴ細胞のパイロトーシスを予防又は低減するためにヒト対象を処置する方法：
有効量の、少なくともカスパーゼ1のカスパーゼ阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程であって、前記ヒト対象が、
（ａ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患に罹患するリスクがあり、前記対象が罹患した場合、前記疾患からの負の転帰に関連する1つ以上の共存症を有するか、又は
（ｂ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染しており、
前記投与によりＴ細胞リンパ球減少症又はＴ細胞のパイロトーシスを低減する、工程。
[本発明1002]
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2からなる群から選択される、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記ヒト対象が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2に感染している、本発明1001の方法。
[本発明1005]
前記ヒト対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ1の活性が上昇している状態を有する、本発明1001の方法。
[本発明1006]
前記ヒト対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ1の発現が上昇している状態を有する、本発明1001の方法。
[本発明1007]
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサン、ＣＴＳ－2090、ベルナカサン（ＶＸ－765）、プラルナカサン（ＶＸ－740）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－043198）からなる群より選択される、本発明1001の方法。
[本発明1008]
前記阻害剤が、ペプチドである、本発明1001の方法。
[本発明1009]
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ3、4、5、7、8、9、及び11のうちの1つ以上を阻害する、本発明1001の方法。
[本発明1010]
前記阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、本発明1001の方法。
[本発明1011]
前記阻害剤が、エムリカサンである、本発明1001の方法。
[本発明1012]
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2に関連する罹患リスク及び死亡リスクを低減するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2感染のリスクがあるヒト対象又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ2に感染したヒト対象を処置する方法であって、
有効量の、少なくともカスパーゼ1のカスパーゼ阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程
を含む、方法。
[本発明1013]
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ3、4、5、7、8、9、及び11のうちの1つ以上を阻害する、本発明1012の方法。
[本発明1014]
前記ヒト対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、本発明1012の方法。
[本発明1015]
前記対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ1の活性が上昇している状態を有する、本発明1012の方法。
[本発明1016]
前記対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ1の発現が上昇している状態を有する、本発明1012の方法。
[本発明1017]
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサン、ＣＴＳ－2090、ベルナカサン（ＶＸ－765）、プラルナカサン（ＶＸ－740）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－043198）からなる群より選択される、本発明1012の方法。
[本発明1018]
前記カスパーゼ阻害剤が、ペプチドである、本発明1012の方法。
[本発明1019]
前記カスパーゼ阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、本発明1012の方法。
[本発明1020]
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、本発明1012の方法。
[本発明1021]
以下の工程を含む、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ2に感染したか又は感染した疑いのあるヒト対象を処置する方法：
有効量の、ＣＯＶＩＤ－19を治療するのに有用なカスパーゼ阻害剤を投与する工程であって、前記投与が、任意選択で、ＣＯＶＩＤ－19症状の発症前、又は前記対象が軽度若しくは中等度の重症度のＣＯＶＩＤ－19を有している間に行われる、工程。
[本発明1022]
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ1及びカスパーゼ3を阻害する、本発明1021の方法。
[本発明1023]
以下の工程を含む、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ2に感染したヒト対象を処置する方法：
有効量の、ａ）カスパーゼを阻害する化合物、（ｂ）ＡＣＥ－2受容体に結合する化合物、及び（ｃ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2の主プロテアーゼに結合する化合物を投与する工程であって、前記投与する工程が、ＣＯＶＩＤ－19症状の発症前、又は軽度若しくは中等度のＣＯＶＩＤ－19症状を超えて進行している間に行われる、工程。
[本発明1024]
デキサメタゾン、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2に特異的に結合する抗体又は抗体カクテル、ＩＬ－6に対する抗体、及びレムデシビルからなる群より選択される化合物を投与する工程を更に含む、本発明1012、1021、又は1023の方法。
[本発明1025]
ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－2疾患の重症度を予測するための試験方法であって、
対象の血液試料を試験してカスパーゼ1の量を確認し、検出された前記カスパーゼ1の量を健常個体の1つ以上の対照試料中のカスパーゼ1の量と比較する工程と、
前記対象の血液試料中のカスパーゼ1の量が、前記1つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ1の量よりも統計的に有意に多い場合、前記対象が重症型の前記疾患を経験するリスクが高いと判定する工程と
を含む、方法。
[本発明1026]
複数のヒト対象におけるＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－2疾患の重症度を予測するための試験方法であって、
ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－2に感染した複数の対象の複数の血液試料を試験して、各血液試料中のカスパーゼ1の量を確認し、少なくとも1つの対象血液試料由来のカスパーゼ1の量を、健常個体の1つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ1の量と比較する工程と、
前記対象の試料中のカスパーゼ1の量が、前記1つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ1の量よりも統計的に有意に多い場合に、前記対象が重症型の疾患を経験するリスクが高いと判定し、前記対象の試料中のカスパーゼ1の量が、前記1つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ1の量よりも統計的に有意に多くはない場合に、対象が重症型の前記疾患を経験するリスクが低いと判定する、工程と
を含む、方法。
[本発明1027]
前記試験が、抗体試験を用いる、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1028]
前記試験が、フローサイトメトリーを用いる、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1029]
前記試験が、カスパーゼ1の1つ以上の蛍光標識された阻害剤を用いる、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1030]
前記試験が、カスパーゼ1の1つ以上の蛍光標識された基質を用いる、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1031]
重症の疾患のリスクが高いと判定された患者をカスパーゼ1の阻害剤で処置する工程を更に含む、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1032]
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を更に有する、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1033]
前記阻害剤が、エムリカサン、ベルナカサン（ＶＸ－765）、プラルナカサン（ＶＸ－740）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－043198）からなる群から選択される、本発明1031の方法。
[本発明1034]
前記阻害剤が、ペプチドである、本発明1031の方法。
[本発明1035]
前記阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、本発明1031の方法。
[本発明1036]
前記阻害剤が、エムリカサンである、本発明1031の方法。
[本発明1037]
以下の工程を含む、異常な赤血球凝集又は血栓症を有するか又は有するリスクがあるヒト対象を処置する方法：
有効量のカスパーゼ－3阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程であって、前記ヒト対象が、（ａ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患に罹患するリスクがあるか、又は（ｂ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染しており、前記投与により異常な赤血球凝集又は血栓症を予防又は低減する、工程。
[本発明1038]
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、βコロナウイルスである、本発明1037の方法。
[本発明1039]
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2からなる群から選択される、本発明1037の方法。
[本発明1040]
前記ヒト対象が、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに関して無症候である、本発明1037の方法。
[本発明1041]
前記ヒト対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、本発明1037の方法。
[本発明1042]
前記対象が、前記対象における1つ以上の細胞型でカスパーゼ－3の活性が上昇している状態を有する、本発明1037の方法。
[本発明1043]
前記対象が、前記対象における1つ以上の細胞型でカスパーゼ－3の発現が上昇している状態を有する、本発明1037の方法。
[本発明1044]
前記カスパーゼ阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、本発明1037の方法。
[本発明1045]
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、本発明1037の方法。
[本発明1046]
以下の工程を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2に関連する罹患リスク及び死亡リスクを低減するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2感染のリスクがあるヒト対象又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ2に感染した対象を処置する方法：
有効量のカスパーゼ－3阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程であって、前記投与により、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－2に関連する有害転帰のリスクを低減する、工程。
[本発明1047]
前記有効量の阻害剤の投与が、赤血球のパイロトーシスを低減させる、本発明1046の方法。
[本発明1048]
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、本発明1046の方法。
[本発明1049]
前記カスパーゼ－3阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、本発明1046の方法。
[本発明1050]
前記カスパーゼ－3阻害剤が、エムリカサンである、本発明1046の方法。
[本発明1051]
Ｃｏｖｉｄ－19感染の後期後遺症を有する、又は後期後遺症を発症するリスクがあるヒト対象を処置する方法であって、
有効量の、少なくともカスパーゼ1のカスパーゼ阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程
を含む、方法。
[本発明1052]
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ3、4、5、7、8、9、及び11のうちの1つ以上を阻害する、本発明1051の方法。
[本発明1053]
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、本発明1051の方法。
[本発明1001]
以下の工程を含む、Ｔ細胞リンパ球減少症又はＴ細胞のパイロトーシスを予防又は低減するためにヒト対象を処置する方法：
有効量の、少なくともカスパーゼ1のカスパーゼ阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程であって、前記ヒト対象が、
（ａ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患に罹患するリスクがあり、前記対象が罹患した場合、前記疾患からの負の転帰に関連する1つ以上の共存症を有するか、又は
（ｂ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染しており、
前記投与によりＴ細胞リンパ球減少症又はＴ細胞のパイロトーシスを低減する、工程。
[本発明1002]
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2からなる群から選択される、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記ヒト対象が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2に感染している、本発明1001の方法。
[本発明1005]
前記ヒト対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ1の活性が上昇している状態を有する、本発明1001の方法。
[本発明1006]
前記ヒト対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ1の発現が上昇している状態を有する、本発明1001の方法。
[本発明1007]
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサン、ＣＴＳ－2090、ベルナカサン（ＶＸ－765）、プラルナカサン（ＶＸ－740）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－043198）からなる群より選択される、本発明1001の方法。
[本発明1008]
前記阻害剤が、ペプチドである、本発明1001の方法。
[本発明1009]
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ3、4、5、7、8、9、及び11のうちの1つ以上を阻害する、本発明1001の方法。
[本発明1010]
前記阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、本発明1001の方法。
[本発明1011]
前記阻害剤が、エムリカサンである、本発明1001の方法。
[本発明1012]
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2に関連する罹患リスク及び死亡リスクを低減するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2感染のリスクがあるヒト対象又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ2に感染したヒト対象を処置する方法であって、
有効量の、少なくともカスパーゼ1のカスパーゼ阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程
を含む、方法。
[本発明1013]
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ3、4、5、7、8、9、及び11のうちの1つ以上を阻害する、本発明1012の方法。
[本発明1014]
前記ヒト対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、本発明1012の方法。
[本発明1015]
前記対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ1の活性が上昇している状態を有する、本発明1012の方法。
[本発明1016]
前記対象が、その免疫細胞においてカスパーゼ1の発現が上昇している状態を有する、本発明1012の方法。
[本発明1017]
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサン、ＣＴＳ－2090、ベルナカサン（ＶＸ－765）、プラルナカサン（ＶＸ－740）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－043198）からなる群より選択される、本発明1012の方法。
[本発明1018]
前記カスパーゼ阻害剤が、ペプチドである、本発明1012の方法。
[本発明1019]
前記カスパーゼ阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、本発明1012の方法。
[本発明1020]
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、本発明1012の方法。
[本発明1021]
以下の工程を含む、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ2に感染したか又は感染した疑いのあるヒト対象を処置する方法：
有効量の、ＣＯＶＩＤ－19を治療するのに有用なカスパーゼ阻害剤を投与する工程であって、前記投与が、任意選択で、ＣＯＶＩＤ－19症状の発症前、又は前記対象が軽度若しくは中等度の重症度のＣＯＶＩＤ－19を有している間に行われる、工程。
[本発明1022]
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ1及びカスパーゼ3を阻害する、本発明1021の方法。
[本発明1023]
以下の工程を含む、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ2に感染したヒト対象を処置する方法：
有効量の、ａ）カスパーゼを阻害する化合物、（ｂ）ＡＣＥ－2受容体に結合する化合物、及び（ｃ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2の主プロテアーゼに結合する化合物を投与する工程であって、前記投与する工程が、ＣＯＶＩＤ－19症状の発症前、又は軽度若しくは中等度のＣＯＶＩＤ－19症状を超えて進行している間に行われる、工程。
[本発明1024]
デキサメタゾン、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2に特異的に結合する抗体又は抗体カクテル、ＩＬ－6に対する抗体、及びレムデシビルからなる群より選択される化合物を投与する工程を更に含む、本発明1012、1021、又は1023の方法。
[本発明1025]
ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－2疾患の重症度を予測するための試験方法であって、
対象の血液試料を試験してカスパーゼ1の量を確認し、検出された前記カスパーゼ1の量を健常個体の1つ以上の対照試料中のカスパーゼ1の量と比較する工程と、
前記対象の血液試料中のカスパーゼ1の量が、前記1つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ1の量よりも統計的に有意に多い場合、前記対象が重症型の前記疾患を経験するリスクが高いと判定する工程と
を含む、方法。
[本発明1026]
複数のヒト対象におけるＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－2疾患の重症度を予測するための試験方法であって、
ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－2に感染した複数の対象の複数の血液試料を試験して、各血液試料中のカスパーゼ1の量を確認し、少なくとも1つの対象血液試料由来のカスパーゼ1の量を、健常個体の1つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ1の量と比較する工程と、
前記対象の試料中のカスパーゼ1の量が、前記1つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ1の量よりも統計的に有意に多い場合に、前記対象が重症型の疾患を経験するリスクが高いと判定し、前記対象の試料中のカスパーゼ1の量が、前記1つ以上の対照試料中で検出されたカスパーゼ1の量よりも統計的に有意に多くはない場合に、対象が重症型の前記疾患を経験するリスクが低いと判定する、工程と
を含む、方法。
[本発明1027]
前記試験が、抗体試験を用いる、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1028]
前記試験が、フローサイトメトリーを用いる、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1029]
前記試験が、カスパーゼ1の1つ以上の蛍光標識された阻害剤を用いる、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1030]
前記試験が、カスパーゼ1の1つ以上の蛍光標識された基質を用いる、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1031]
重症の疾患のリスクが高いと判定された患者をカスパーゼ1の阻害剤で処置する工程を更に含む、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1032]
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を更に有する、本発明1025又は1026の方法。
[本発明1033]
前記阻害剤が、エムリカサン、ベルナカサン（ＶＸ－765）、プラルナカサン（ＶＸ－740）、及びＯ－デスエチル－ベルナカサン（ＶＲＴ－043198）からなる群から選択される、本発明1031の方法。
[本発明1034]
前記阻害剤が、ペプチドである、本発明1031の方法。
[本発明1035]
前記阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、本発明1031の方法。
[本発明1036]
前記阻害剤が、エムリカサンである、本発明1031の方法。
[本発明1037]
以下の工程を含む、異常な赤血球凝集又は血栓症を有するか又は有するリスクがあるヒト対象を処置する方法：
有効量のカスパーゼ－3阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程であって、前記ヒト対象が、（ａ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患に罹患するリスクがあるか、又は（ｂ）ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに感染しており、前記投与により異常な赤血球凝集又は血栓症を予防又は低減する、工程。
[本発明1038]
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、βコロナウイルスである、本発明1037の方法。
[本発明1039]
前記ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2からなる群から選択される、本発明1037の方法。
[本発明1040]
前記ヒト対象が、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスに関して無症候である、本発明1037の方法。
[本発明1041]
前記ヒト対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、本発明1037の方法。
[本発明1042]
前記対象が、前記対象における1つ以上の細胞型でカスパーゼ－3の活性が上昇している状態を有する、本発明1037の方法。
[本発明1043]
前記対象が、前記対象における1つ以上の細胞型でカスパーゼ－3の発現が上昇している状態を有する、本発明1037の方法。
[本発明1044]
前記カスパーゼ阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、本発明1037の方法。
[本発明1045]
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、本発明1037の方法。
[本発明1046]
以下の工程を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2に関連する罹患リスク及び死亡リスクを低減するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－2感染のリスクがあるヒト対象又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ2に感染した対象を処置する方法：
有効量のカスパーゼ－3阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程であって、前記投与により、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－2に関連する有害転帰のリスクを低減する、工程。
[本発明1047]
前記有効量の阻害剤の投与が、赤血球のパイロトーシスを低減させる、本発明1046の方法。
[本発明1048]
前記対象が、高血圧、乾癬、心疾患、痛風、関節炎、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、白斑、自己免疫性アジソン病、クライオピリノパチー、並びにメタボリックシンドロームからなる群から選択される状態を有する、本発明1046の方法。
[本発明1049]
前記カスパーゼ－3阻害剤が、汎カスパーゼ阻害剤である、本発明1046の方法。
[本発明1050]
前記カスパーゼ－3阻害剤が、エムリカサンである、本発明1046の方法。
[本発明1051]
Ｃｏｖｉｄ－19感染の後期後遺症を有する、又は後期後遺症を発症するリスクがあるヒト対象を処置する方法であって、
有効量の、少なくともカスパーゼ1のカスパーゼ阻害剤を前記ヒト対象に投与する工程
を含む、方法。
[本発明1052]
前記カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ3、4、5、7、8、9、及び11のうちの1つ以上を阻害する、本発明1051の方法。
[本発明1053]
前記カスパーゼ阻害剤が、エムリカサンである、本発明1051の方法。
【国際調査報告】