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特表2023-522520抗ヒトＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４）抗体およびそれらの使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-31
(54)【発明の名称】抗ヒトＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４）抗体およびそれらの使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230524BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20230524BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230524BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230524BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230524BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230524BHJP
C12N 5/071 20100101ALI20230524BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230524BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230524BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20230524BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20230524BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/28 ZNA
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12N5/071
A61K39/395 U
A61P35/00
A61P37/02
A61K39/395 D
A61K48/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022538834
(86)(22)【出願日】2020-12-24
(85)【翻訳文提出日】2022-08-09
(86)【国際出願番号】 NL2020050817
(87)【国際公開番号】W WO2021133170
(87)【国際公開日】2021-07-01
(31)【優先権主張番号】19219684.8
(32)【優先日】2019-12-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】522249268
【氏名又は名称】ジェイジェイピー バイオロジクス エスピー．ゼット オー．オー．
(74)【代理人】
【識別番号】100085545
【弁理士】
【氏名又は名称】松井 光夫
(74)【代理人】
【識別番号】100118599
【弁理士】
【氏名又は名称】村上 博司
(72)【発明者】
【氏名】ブーン，ルイ
(72)【発明者】
【氏名】シモンズ，ペトルス ヨハネス
(72)【発明者】
【氏名】デン，ハルトフ マルセル テオドロス
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA92X
4B065AB05
4B065AC14
4B065BA08
4B065CA25
4B065CA44
4C084AA13
4C084NA14
4C084ZB07
4C084ZB26
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB11
4C085CC03
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、抗体であって、ヒトＨＶＥＭ発現細胞上のヒトＨＶＥＭの細胞外部分に結合し、抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＢＴＬＡのＨＶＥＭへの結合を防止し、当該抗体が、ＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合したＢＴＬＡを取り換える、抗体を開示する。本発明はまた、特定の疾患との闘いにおけるかかる抗体の使用を開示する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗体であって、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外システインリッチドメイン－１（ＣＲＤ１）に結合し、前記抗体がＨＶＥＭの前記細胞外部分に結合されるときに、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）のＨＶＥＭへの結合を防止し、ＨＶＥＭの前記細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換える、抗体。
【請求項2】
前記抗体は、前記抗体がＨＶＥＭの前記細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭの前記細胞外部分に結合されたＬＩＧＨＴを取り換えない、請求項１に記載の抗体。
【請求項3】
前記抗体は、前記抗体がＨＶＥＭの前記細胞外部分に結合されるときに、ＣＤ１６０のＨＶＥＭへの結合を部分的に防止し、ＨＶＥＭの前記細胞外部分に結合されたＣＤ１６０を部分的に取り換える、請求項１に記載の抗体。
【請求項4】
０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２６～２８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２９～３１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項5】
０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２４のアミノ酸配列を有する重鎖領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項6】
０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４２～４４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４５～４７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体。
【請求項7】
０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４０のアミノ酸配列を有する重鎖領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体。
【請求項8】
０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号１８～２０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２１～２３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体。
【請求項9】
０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号１６のアミノ酸配列を有する重鎖領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体。
【請求項10】
前記抗体は、前記抗体がＨＶＥＭの前記細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭの前記細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を防止しない、請求項１～３、６、７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項11】
前記抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、およびそれらの抗原結合断片から選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項12】
請求項４～１０および１１のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、１つ以上の核酸分子。
【請求項13】
前記１つ以上の核酸が、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体に組み立てることができる、請求項１２に記載の１つ以上の核酸を含む、細胞。
【請求項14】
疾患の治療における使用のための、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項15】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または核酸分子、ならびに薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項16】
がんおよび／もしくは免疫関連障害の予防として、またはその治療における使用のための、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項17】
ＨＶＥＭ発現細胞を、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または核酸分子と接触させることを含む、ＨＶＥＭシグナル伝達活性を調節するための、方法。
【請求項18】
医学的適応症に罹患しているヒトまたは動物の治療のための方法であって、前記方法が、前記ヒトまたは動物に、治療有効量の請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または核酸分子を投与することを含む、方法。
【請求項19】
対象における腫瘍成長を低減するための方法であって、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または核酸分子を含む、治療有効量の組成物を必要とする前記対象に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、抗体の分野およびかかる抗体の使用に関する。本発明は、特に、ＨＶＥＭに結合する抗体を提供する。本発明はまた、抗ＨＶＥＭ抗体を含むキットおよび組成物ならびに本明細書に記載の抗体を使用する治療方法を提供する。
【背景技術】
【0002】
Ｔ細胞の活性化は、少なくとも２つのシグナル、Ｔ細胞受容体の係合および共刺激分子によって送達される追加のシグナルの同時の活性化を必要とする。いくつかの共刺激分子は、Ｂ７／ＣＤ２８およびＴＮＦ／ＴＮＦＲファミリーに属し、免疫応答の調節および抗腫瘍免疫の改善において重要な役割を果たす。腫瘍は、免疫抑制性微小環境を生成することによって、免疫監視から逃れることができ、抗腫瘍Ｔ細胞応答は、がん細胞の表面上のＰＤ－Ｌ１／Ｌ２などの共刺激分子の欠如および／または共阻害分子の過剰発現によって減衰する。共刺激および共阻害経路を標的化することは、いくつかのヒトがんにおける抗腫瘍免疫を増強するための魅力的な治療方針を表している。共阻害Ｉｇ分子ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１を標的とする臨床試験は、すでに、黒色腫、腎細胞および前立腺がん、ならびに非ホジキンリンパ腫を有する患者において有望な結果をもたらし、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）およびＯｐｄｉｖｏ（登録商標）などの薬物承認をもたらした。
【0003】
他の共刺激および共阻害受容体／リガンド相互作用の潜在的な役割を評価することに関心がある。そのような分子の１つは、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ／ＣＤ２７０／ＴＮＦＲＳＦ１４）およびそのリガンドである。ＨＶＥＭとそのリガンドとの間の相互作用は、双方向シグナル伝達の証拠があるため、例えばＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１よりも複雑である。ＨＶＥＭは、そのリガンドとの相互作用時の刺激シグナル伝達と阻害シグナル伝達との間の分子スイッチであり、ＢＴＬＡ（ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター）、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ（リンフォトキシン様、誘導発現を示し、Ｔリンパ球によって発現された受容体であるＨＶＥＭに対して単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄと競合する）およびＴＮＦβ／ＬＴα（腫瘍壊死因子β／リンフォトキシンα）を含む。ＨＶＥＭおよびそのリガンドは、免疫調節の生理病理学において役割を果たす。本発明において、このネットワークの調節不全が様々な疾患に寄与することが示された。
【0004】
ＨＶＥＭは、細胞内へのウイルスの侵入を可能にする、単純ヘルペスウイルス１の糖タンパク質Ｄの共受容体として最初に発見された。ＨＶＥＭは、組織において広く発現し、肺、腎臓、および肝臓において最も発現レベルが高いことが見出されている。ＨＶＥＭはまた、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄細胞上で発現されることが見出されている。注目すべきことに、ＨＶＥＭ発現はいくつかのがんにおいて上方調節されている。ＨＶＥＭは、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβと相互作用することが既知である。リガンドのほとんど、およびＨＶＥＭ自体は、免疫シナプスのいずれかの側で発現され得る。ＣＤ１６０は、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞およびＴ細胞において発現されることが見出されており、ＢＴＬＡは、活性化Ｔ細胞および静止Ｂ細胞において高度に発現され、ならびにナイーブＴ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージにおいては発現が少ない。ＬＩＧＨＴは、未成熟ＤＣ、顆粒球、単球および活性化Ｔ細胞によって発現されることが見出されており、ＴＮＦβは、Ｂ細胞およびＴ細胞およびＮＫ細胞において発現される。
【0005】
理論によって拘束されることなく、ＨＶＥＭによるＴリンパ球上のＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の係合は、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０を介してＴリンパ球に共阻害シグナルを提供し、Ｔリンパ球上のＨＶＥＭのＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβによるライゲーションは、ＨＶＥＭを介して共刺激シグナルを送達すると考えられている。これらの相互作用は双方向である。ＨＶＥＭは、Ｔ細胞上でＢＴＬＡおよびＣＤ１６０との相互作用後にＴ細胞において阻害シグナルを誘導するが、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の両方は、ＨＶＥＭの活性化リガンドとして作用し、ＮＦκＢ活性化をもたらす。さらに、ＬＩＧＨＴは、Ｔ細胞上に発現されたＨＶＥＭと相互作用する場合、Ｔ細胞に共刺激シグナルを送達し、ＨＶＥＭもまた、Ｔ細胞によって発現されたＬＩＧＨＴと相互作用する場合、Ｔ細胞に共刺激シグナルを伝達することに関与している。しかしながら、ＬＩＧＨＴは明らかなシグナル伝達モチーフを含有しておらず、そのシグナル伝達のメカニズムは完全には定義されていない。
【0006】
ＬＩＧＨＴおよび／またはＴＮＦβ、ＢＴＬＡおよび／またはＣＤ１６０がＨＶＥＭと同時に相互作用する場合、正味の効果は、Ｔ細胞活性化の阻害シグナルである。多くの腫瘍（例えば、黒色腫、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、および結腸直腸がん）は、ＨＶＥＭを過剰発現する。したがって、がん細胞上のＨＶＥＭとＴ細胞上のＢＴＬＡ／ＣＤ１６０との間の抑制性相互作用の治療的遮断は、ＨＶＥＭ発現Ｔ細胞におけるＬＩＧＨＴ媒介シグナル伝達を完全なままにしながら、抗腫瘍Ｔ細胞応答を増強する可能性がある。ＢＴＬＡのＨＶＥＭへの結合を干渉することができる抗体が記載されている（ＷＯ２０１４／１８４３６０Ａ１）。一実施形態では、本発明は、ＢＴＬＡのＨＶＥＭへの結合を遮断し、ＨＶＥＭに結合されたＢＴＬＡを取り換えることができる抗体を提供する。これらおよび他の抗体は、本発明の開示の主題である。
【発明の概要】
【0007】
一態様では、本開示は、抗体であって、ＨＶＥＭ発現細胞上のヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）の細胞外部分に結合し、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときにＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）のＨＶＥＭへの結合を防止する、抗体を提供する。一態様では、抗体は、ＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合したＢＴＬＡを取り換え得る。
【0008】
一態様では、本開示は、０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２６～２８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２９～３１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。
【0009】
一態様では、本開示は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２４のアミノ酸配列を有する重鎖領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。
【0010】
一態様では、本開示は、０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４２～４４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４５～４７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。
【0011】
一態様では、本開示は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４０のアミノ酸配列を有する重鎖領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。
【0012】
一態様では、本開示は、０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号１８～２０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２１～２３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。
【0013】
一態様では、本開示は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号１６のアミノ酸配列を有する重鎖領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。
【0014】
一態様では、本開示は、０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号３４～３６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号３７～３９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。
【0015】
一態様では、本開示は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号３２のアミノ酸配列を有する重鎖領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。
【0016】
一態様では、本開示は、０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号５０～５２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号５３～５５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。
【0017】
一態様では、本開示は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４８のアミノ酸配列を有する重鎖領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。
【0018】
一態様では、本開示は、本明細書で開示の抗体または本明細書で開示の抗原結合断片をコードする核酸分子（複数可）を提供する。本明細書で開示の可変領域をコードする核酸がさらに提供される。
【0019】
一態様では、本開示は、本明細書に記載の核酸分子を含むベクターを提供する。一態様では、本明細書で開示の抗体、核酸分子、および／またはベクターを含む細胞を提供する。好ましくは、宿主細胞は哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、細菌細胞または酵母細胞である。より好ましくは、細胞はヒト細胞である。好ましくは、宿主細胞は、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ細胞、またはＰＥＲ－Ｃ６（商標）細胞である。
【0020】
一態様では、本開示は、本明細書で開示の抗体の産生方法を提供する。本方法は、抗体の採取を含む。好ましくは、抗体は、細胞を使用して産生され、当該細胞から採取される。好ましくは、当該細胞は、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ細胞、またはＰＥＲ－Ｃ６（商標）細胞である。好ましくは、抗体は、合成的に産生される。
【0021】
一態様では、本開示は、開示の抗体もしくはその抗原結合断片、核酸、および／または細胞を含む、医薬組成物を提供する。好ましくは、本明細書で開示の組成物または抗体もしくはその抗原結合断片は、薬剤の製造において使用するためのものである。好ましくは、薬剤は、がんおよび免疫関連障害の治療および／または予防のためのものである。
【0022】
一態様にでは、本開示は、がんおよび免疫関連障害の治療を必要とする対象に、治療有効量の本明細書で開示の抗体もしくはその抗原結合断片、核酸分子またはベクターを投与することを含む、対象におけるがんおよび免疫関連障害の治療のための方法を提供する。
【0023】
一態様では、本開示は、がんおよび免疫関連障害の治療における使用のための抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【0024】
一態様では、本開示は、ＨＶＥＭ発現細胞を、本明細書で開示の抗体もしくはその抗原結合断片、核酸分子、またはベクターと接触させることを含む、ＨＶＥＭシグナル伝達活性の調節するための方法を提供する。
【0025】
一態様では、本開示は、免疫応答の増加を必要とする対象に、本明細書で開示の抗体もしくはその抗原結合断片、核酸分子またはベクターを含む、治療有効量の組成物を投与することを含む、対象における免疫応答を増加させるための方法を提供する。
【0026】
一態様では、本開示は、腫瘍成長の低減を必要とする対象に、本明細書で開示の抗体もしくはその抗原結合断片、核酸分子またはベクターを含む、治療有効量の組成物を投与することを含む、対象における腫瘍成長を低減するための方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【0027】
本開示は、ＨＶＥＭ発現細胞上のヒトＨＶＥＭの細胞外部分および可溶性ＨＶＥＭに結合する抗体を記載する。本明細書に記載の抗体は、抗体がヒトＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０のＨＶＥＭへの結合を防止するのに有用である。ＨＶＥＭに結合するいくつかの抗体が生成されている。ＨＶＥＭに特異的に結合する抗体は当該技術分野において既知である。例えば、抗体ｅＢｉｏ ＨＶＥＭ－１２２（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）は市販されており、実施例２において参照されている。ＢＴＬＡのＨＶＥＭへの結合を干渉することができる抗体が記載されている（ＷＯ２０１４／１８４３６０Ａ１）。本発明は、ＢＴＬＡのＨＶＥＭへの結合を遮断し、ＨＶＥＭに一度結合されたＢＴＬＡを取り換える抗体を提供する。
【0028】
一態様では、本開示は、抗体であって、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合し、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときにＢＴＬＡのＨＶＥＭへの結合を防止し、ＨＶＥＭの当該細胞外部分に一度結合されたＢＴＬＡを取り換える、抗体を提供する。
【0029】
「抗体」という用語は、典型的には、２つの同一のポリペプチド鎖対からなる免疫グロブリン分子を指し、各対は、１つの「重」（Ｈ）鎖、および１つの「軽」（Ｌ）鎖を有する。ヒト軽鎖は、カッパ（κ）およびラムダ（λ）として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、抗体のアイソタイプは、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして定義される。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域からなる。ＩｇＤ、ＩｇＧ、およびＩｇＡの重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３からなり、ＩｇＭおよびＩｇＥの重鎖定常領域は、４つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域へとさらに細分することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存された領域が点在する。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。軽鎖および重鎖の可変領域は、一緒に抗体結合部位を形成し、エピトープに対する特異性を定義する。抗体における領域またはドメインにアミノ酸を割り当てるための様々な方法が当該技術分野で既知である。周知の方法としては、Ｋａｂａｔ法およびＣｈｏｔｈｉａ法が挙げられる（Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７ ａｎｄ １９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｉｎ Ｎａｔｕｒｅ １９８９；３４２（６２５２）：８７７－８３）。本開示の各領域またはドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔの定義に従う。
【0030】
「抗体」という用語は、マウス、ヒト化、脱免疫化ヒトおよびキメラ抗体、ならびに単量体抗体の二量体、三量体、またはより高次の多量体などの抗体の多量体形態である抗体を包含する。抗体はまた、単一特異性、二重特異性または多重特異性抗体、および必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構成を包含する。また、非抗体部分に連結または取り付けられている抗体も包含する。さらに、「抗体」という用語は、抗体を産生する任意の特定の方法によって限定されない。例えば、モノクローナル抗体、組換え抗体、およびポリクローナル抗体を含む。本発明は、本明細書に記載の抗体を提供する。さらに、本発明は、本明細書で開示の抗体の一部、誘導体、および／または類似体を提供する。部分、誘導体および／または類似体は、必ずしも量ではなく、同種のもので抗体の抗原結合特性を保持する。部分および／または誘導体の非限定的な例としては、抗原結合部分であり、典型的には抗体の１つ以上の可変ドメインを含有する抗体の一部が挙げられる。非限定的な例は、様々なＦａｂ断片である。部分はまた、いわゆる単一ドメイン抗体断片であり得る。単一ドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ、開発者であるＡｂｌｙｎｘによってナノボディと呼ばれる）は、単一モノマー可変抗体ドメインを有する抗体断片である。抗体全体と同様に、特異的抗原に選択的に結合することができる。１２～１５ｋＤａの分子量しかない単一ドメイン抗体断片は、２つの重タンパク質鎖および２つの軽鎖からなる一般的な抗体（１５０～１６０ｋＤａ）よりもはるかに小さく、Ｆａｂ断片（約５０ｋＤａ、１つの軽鎖および半分の重鎖）および一本鎖可変断片（約２５ｋＤａ、１つの軽鎖および１つの重鎖である２つの可変領域）よりもさらに小さい。単一ドメイン抗体自体は、通常の抗体よりもはるかに小さくはない（典型的には９０～１００ｋＤａである）。単一ドメイン抗体断片は、主にラクダ科に見られる重鎖抗体から操作され、これらはＶＨＨ断片（Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））と呼ばれる。一部の魚類はまた、重鎖のみの抗体（ＩｇＮＡＲ、「免疫グロブリン新抗原受容体」）を有し、ＶＮＡＲ断片と呼ばれる単一ドメイン抗体断片を得ることができる。代替アプローチは、ヒトまたはマウス由来の一般的な免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）由来の二量体可変ドメインをモノマーに分割することである。単一ドメイン抗体の研究のほとんどは現在、重鎖可変ドメインに基づいているが、軽鎖に由来するナノボディが標的エピトープに特異的に結合することも示されている。抗体部分の非限定的な例は、抗体またはその等価物の重鎖および／または軽鎖の可変ドメインを含有する。そのような部分の非限定的な例は、ＶＨＨ、ヒトドメイン抗体（ｄＡｂ）およびユニボディである。好ましい抗体部分または誘導体は、少なくとも本明細書に記載の抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメインを有する。誘導体または部分である非限定的な例は、Ｆ（ａｂ）断片および単鎖Ｆｖ断片である。二重特異性抗体の機能部分は、二重特異性抗体の抗原結合部分、または結合部分の誘導体および／もしくは類似体を含む。
【0031】
「単鎖抗体」（ｓｃＦｖ）は、ＶＨドメインに連結されたＶＬドメインを含む単一のポリペプチド鎖を有し、ＶＬドメインおよびＶＨドメインは、一価分子を形成するように対形成される。単鎖抗体は、当該技術分野において既知の方法に従って調製され得る（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照されたい）。「ダイアボディ」は、２つの鎖を有し、各鎖は、短いペプチドリンカーによって接続された同じポリペプチド鎖上の軽鎖可変領域に接続された重鎖可変領域を含み、同じ鎖上の２つの領域は、互いに対形成しないが、他方の鎖上の相補ドメインと対形成して二重特異性分子を形成する。ダイアボディの調製方法は、当該技術分野において既知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８、およびＰｏｌｊａｋ Ｒ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照されたい）。ドメイン抗体（ｄＡｂ）は、抗体の重鎖または軽鎖のいずれかの可変領域に対応する、抗体の小さい機能的結合単位である。ドメイン抗体は、細菌、酵母、および哺乳動物細胞系において良好に発現される。ドメイン抗体のさらなる詳細およびその産生方法は、当該技術分野で既知である（例えば、米国特許第６，２９１，１５８号、同第６，５８２，９１５号、同第６，５９３，０８１号、ＷＯ０４／００３０１９およびＷＯ０３／００２６０９を参照されたい）。ナノボディは、抗体の重鎖に由来する。ナノボディは、典型的には、単一の可変ドメインおよび２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含み、元の抗体の抗原結合能力を保持する。ナノボディは、当該技術分野で既知の方法によって調製され得る（例えば、米国特許第６，７６５，０８７号、米国特許第６，８３８，２５４号、ＷＯ０６／０７９３７２を参照されたい）。ユニボディは、ＩｇＧ４抗体の１つの軽鎖および１つの重鎖を有する。ユニボディは、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域を除去することによって作製され得る。ユニボディのさらなる詳細およびそれらの調製方法は、ＷＯ２００７／０５９７８２に見出され得る。抗体に対する類似体のリストは毎年増加している。可変ドメインの配列および多くの異なる抗体の３Ｄ構造に関する現在の広範な知識により、当業者は、本発明の抗体を、１つまたは他の抗体類似体、部分または誘導体に変換することができる。
【0032】
結合分子に加えて、本発明の分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒト血清アルブミン、グリコシル化基、脂肪酸およびデキストランなどの、分子のインビボ半減期を増加させるための部分をさらに含み得る。かかるさらなる部分は、当該技術分野で周知の方法を使用して結合部分とコンジュゲートされてもよく、またはそうでなければ結合部分と組み合わされてもよい。
【0033】
本明細書に記載の抗体の可変ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供される。ＣＡＲは、新しい特異性（典型的には、抗体の抗原結合部分またはその誘導体）と、標的細胞に対する免疫細胞とを組み合わせる、操作された受容体である。受容体は、異なる供給源（１つ以上のキメラ抗原受容体を発現するように遺伝子改変されたＴリンパ球（ＣＡＲ、例えば、Ｅｓｈｈａｒ、米国特許第７，７４１，４６５号、Ｅｓｈｈａｒ、米国特許出願公開第２０１２／００９３８４２号を参照されたい）由来の部分の融合であるため、キメラと呼ばれる。いくつかの実施形態では、本明細書で開示の抗体は、活性化合物、例えば、毒素にカップリングされ得る。さらに、開示の抗体または抗原結合断片は、標識、例えば、蛍光タンパク質、化学標識、有機色素、着色粒子または酵素にカップリングされ得る。本明細書で開示の抗体は、薬物にカップリングされて、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成し得る。本発明は、抗体類似体、抗体部分、および抗体誘導体の分子が他の分子にカップリングまたは組み込まれる場合も、抗体類似体、抗体部分、および抗体誘導体を提供する。
【0034】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示の抗体は、キメラ抗体である。
【0035】
「キメラ抗体」という用語は、ヒトおよびマウスなどの２つの異なる種に由来するアミノ酸配列、典型的には、マウス可変領域（重鎖および軽鎖由来）およびヒト定常領域（重鎖および軽鎖）の組み合わせを含む抗体を指す。かかるキメラ抗体を生成する非限定的な例は、実施例（例えば、実施例５）に記載される。このキメラ抗体において、マウスＩｇＧ１／カッパ定常領域は、ヒトＩｇＧ／カッパ定常ドメインと交換される。いくつかの実施形態では、本明細書で開示の抗体は、ヒト化抗体である。「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト動物抗体からのＣＤＲの一部またはすべてを含有し、一方で抗体のフレームワークおよび定常領域がヒト抗体配列に由来するアミノ酸残基を含有する抗体を指す。ヒト化抗体は、典型的には、マウス抗体由来のＣＤＲをヒトフレームワーク配列に移植し、続いて、供給源抗体由来の対応するマウス残基に対する特定のヒトフレームワーク残基の逆置換によって産生される。「脱免疫化抗体」という用語はまた、典型的には、１つ以上の可変領域において、免疫原性を低減させる目的で、ヒトＴ細胞および／またはＢ細胞エピトープを構成する高い傾向を有する１つ以上のエピトープが除去されている非ヒト起源の抗体を指す。エピトープのアミノ酸配列は、完全にまたは部分的に除去され得る。しかしながら、典型的には、アミノ酸配列は、エピトープを構成するアミノ酸のうちの１つ以上を１つ以上の他のアミノ酸に置換することによって改変され、それによってアミノ酸配列をヒトＴ細胞および／またはＢ細胞エピトープを構成しない配列に変化させる。アミノ酸は、場合によっては、対応するヒト可変重鎖または可変軽鎖における対応する位置に存在するアミノ酸によって置換される。
【0036】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示の抗体は、ヒト抗体である。「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列のみのアミノ酸配列からなる抗体を指す。ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、またはマウス細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生される場合、マウスの炭水化物鎖を含有してもよい。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な方式で調製され得る。キメラ、ヒト化、脱免疫化、およびヒト抗体は、本発明の範囲内である。
【0037】
ヒトＨＶＥＭに結合する抗体は、通常抗体結合に使用される条件下でＨＶＥＭに結合する。抗体およびヒトＨＶＥＭを、抗体結合に好適な条件下で互いに接触させる場合、抗体はヒトＨＶＥＭに結合する。抗体は、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞上に発現した膜結合ヒトＨＶＥＭに結合するが、一方で抗体は、細胞膜上にヒトＨＶＥＭを発現しないＨＥＫ２９３Ｆ細胞に顕著に結合しない。抗体のヒトＨＶＥＭ発現細胞への結合は、当業者に既知の方法によって検出され得る。例えば、蛍光標識を担持する二次抗体を使用することにより、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）を使用して標識された細胞を測定する。
【0038】
腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）およびＣＤ２７０としても知られるＨＶＥＭは、ＴＮＦ受容体（腫瘍壊死因子）スーパーファミリーのヒト細胞表面受容体である。ヒトでは、該タンパク質は、ＴＮＦＲＳＦ１４遺伝子によってコードされる。ＨＶＥＭは、少なくとも４つの異なるリガンド、ＴＮＦＳＦメンバーＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４）およびＴＮＦβ／ＬＴα（腫瘍壊死因子β／リンフォトキシンα）ならびに免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）およびＣＤ１６０と係合することができる。ヒトＨＶＥＭの参照配列については、配列番号１（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３、ａａ１－２８３）を参照する。参照は、ＨＶＥＭ遺伝子／タンパク質を同定するためだけに行われる。本明細書に記載のＨＶＥＭをデータベースエントリの特定の配列に限定することを意図するものではない。ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβに結合することができ、本明細書に記載の抗体に結合することができるＨＶＥＭの天然バリアントは、本発明の範囲内である。組換えヒトＨＶＥＭが、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβに結合することができ、本明細書に記載される抗体に結合することができる場合、本発明の範囲内でもある。
【0039】
ＨＶＥＭは、組織において広く発現され、肺、腎、および肝臓において最も高い発現レベルを有し、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄細胞において発現されることが見出されている。ＨＶＥＭの発現はいくつかのがんにおいて上方調節されていることが見出されている。用語「ＨＶＥＭ発現細胞」は、ＨＶＥＭを発現する細胞を指す。例示的な細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄細胞である。ＢＴＬＡおよび／またはＣＤ１６０のＨＶＥＭへの結合は、阻害効果を有し得るが、ＬＩＧＨＴおよび／またはＴＮＦβのＨＶＥＭへの結合は、刺激効果を有し得る。
【0040】
「細胞外」という用語は、文字通り、細胞の外側を意味する。「細胞外部分」という用語は、細胞膜の外側にある分子の部分を指す。分子のこの部分は、細胞の外側の他の分子との相互作用に利用可能であり得る。ＨＶＥＭは、システインリッチの特徴によって定義される細胞外部分を有する。ＨＶＥＭの細胞外ドメインは、４つのシステインリッチドメイン、すなわち、ＣＲＤ１－ＣＲＤ４、およびリンカーを含有する。理論によって拘束されることなく、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０とＨＶＥＭとの間の相互作用は、ＨＶＥＭのＣＲＤ１を介して生じ、一方、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβとＨＶＥＭとの間の相互作用は、ＨＶＥＭのＣＲＤ２およびＣＲＤ３を介して生じると考えられている。
【0041】
一実施形態では、本発明の抗体は、ＨＶＥＭのＣＲＤ１に結合する。
【0042】
ＨＶＥＭは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄細胞のうち、ほとんどの造血細胞系統の細胞表面上に存在する。ＨＶＥＭの発現は、活性化時にＴ細胞およびＢ細胞において下方調節され、いくつかのがんにおいては上方調節されることが見出されている。非限定的な例としては、黒色腫、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、および結腸直腸がんが挙げられる。「ヒトＨＶＥＭ発現細胞」という用語は、ヒトＨＶＥＭを発現する細胞を指す。例示的な細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄細胞である。
【0043】
「結合を防止すること」という用語は、タンパク質が抗体によって結合されるときに、当該タンパク質へのリガンドの結合を防止する当該抗体またはその抗原結合断片の能力を指す。「結合を防止する」ことに言及される場合、これは「遮断する」と解釈することもできる。抗体のふ在下でのリガンドの結合と比較して、リガンドの結合が７０％超（＞）で防止される場合、当該リガンドの結合は防止されると言う。抗体の不在下でのリガンドの結合と比較して、リガンドの結合が３０％以上（≧）、７０％以下（≦）で防止される場合、当該リガンドの結合は部分的に防止されると言う。リガンドの結合は、抗体の不在下でのリガンドの結合と比較して、リガンドの結合が３０％未満（＜）で防止される場合、影響を受けていないと言う。抗体の不在下でのリガンドの結合と比較して、リガンドの結合が３０％超（＞）で増加する場合、当該リガンドの結合は増強されていると言う。
【0044】
本明細書で開示の抗体または抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止する。例示的な抗体は、４５Ｈ６、１１Ｈ７、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0045】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を防止しないか、または部分的に防止する。例示的な抗体は、４５Ｈ６、１１Ｈ７、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0046】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を部分的に防止する。例示的な抗体は、４５Ｈ６、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0047】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を防止しない。例示的な抗体は、１１Ｈ７である。
【0048】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＣＤ１６０の結合を部分的に防止する。例示的な抗体は、４５Ｈ６、１１Ｈ７、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0049】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＣＤ１６０およびＬＩＧＨＴの結合を部分的に防止する。例示的な抗体は、４５Ｈ６、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0050】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＣＤ１６０の結合を部分的に防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を防止しない。例示的な抗体は、１１Ｈ７である。
【0051】
典型的には、上述の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、ＨＶＥＭタンパク質のＣＲＤ１ドメインに結合する。
【0052】
ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０およびＬＩＧＨＴのＨＶＥＭへの結合は、好ましくは、実施例に記載の方法で測定される。例示的な方法が、例えば、実施例６ｂに記載されており、その結果が図６Ａ～Ｄに示されている。好ましくは、全長ＨＶＥＭでトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞が使用される。好ましくは、当該細胞は、形質膜上で全長ＨＶＥＭを安定に発現する。ＨＶＥＭ発現ＨＥＫ２９３Ｆ細胞を使用して試験抗体を検査する。細胞を、目的の抗ＨＶＥＭ抗体とともにインキュベーションする。洗浄後、細胞を、ビオチン標識またはＨｉｓタグ化されたヒトＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、またはＬＩＧＨＴとともにインキュベーションする。洗浄後、蛍光標識されたストレプトアビジンまたは抗Ｈｉｓ抗体で標識またはタグを検出する。細胞上に発現するＨＶＥＭへのＢＴＬＡ、ＣＤ１６０またはＬＩＧＨＴの結合を、フローサイトメーター（ＦＡＣＳ）を使用して蛍光を検出することによって測定することができる。次いで、結合を防止する能力は、抗ＨＶＥＭ抗体の存在下でＨＶＥＭに結合したＢＴＬＡ、ＣＤ１６０またはＬＩＧＨＴの割合を、ＨＶＥＭに結合しない対照抗体の存在下で結合した割合と比較することによって決定される。ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０またはＬＩＧＨＴのＨＶＥＭへの結合が少ないことは、抗体の強力な遮断能力を示す。
【0053】
「取り換える」という用語は、第２の実体をその位置から除去する第１のエンティティの能力を指し、それによって、第２のエンティティは、第１のエンティティによって交換される。ＨＶＥＭの細胞外部分に結合したリガンドの７０％超（＞）が、抗体の不在下でのリガンドの存在と比較して取り換えられる場合、当該リガンドは取り換えられると言う。ＨＶＥＭの細胞外部分に結合したリガンドの３０％以上（≧）、７０％以下（≦）が、抗体の不在下でのリガンドの存在と比較して取り換えられる場合、当該リガンドは部分的に取り換えられると言う。ＨＶＥＭの細胞外部分に結合したリガンドの３０％未満（＜）が、抗体の不在下でのリガンドの存在と比較して取り換えられる場合、リガンドは取り換えられないと言う。抗体の不在下でのリガンドの存在と比較して、リガンドの結合が３０％超（＞）で増加する場合、当該リガンドの結合は増強されている。
【0054】
本明細書で開示の抗体または抗原結合断片は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止する。当該抗体は、好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換える。例示的な抗体は、４５Ｈ６、１１Ｈ７、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0055】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を防止しないか、または部分的に防止する。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＬＩＧＨＴを取り換えない。例示的な抗体は、４５Ｈ６、１１Ｈ７、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0056】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を部分的に防止する。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＬＩＧＨＴを取り換えない。例示的な抗体は、４５Ｈ６、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0057】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を防止しない。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＬＩＧＨＴを取り換えない。例示的な抗体は、１１Ｈ７である。
【0058】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＣＤ１６０の結合を部分的に防止する。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＣＤ１６０を部分的に取り換える。例示的な抗体は、４５Ｈ６、１１Ｈ７、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0059】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＣＤ１６０およびＬＩＧＨＴの結合を部分的に防止する。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＣＤ１６０を部分的に取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＬＩＧＨＴを取り換えない。例示的な抗体は、４５Ｈ６、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0060】
さらなる実施形態において、本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＣＤ１６０の結合を部分的に防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を防止しない。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＣＤ１６０を部分的に取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＬＩＧＨＴを取り換えない。例示的な抗体は、１１Ｈ７である。
【0061】
典型的には、上述の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、ＨＶＥＭタンパク質のＣＲＤ１ドメインに結合する。
【0062】
本明細書で開示の抗ＨＶＥＭ抗体が、ＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたリガンドを取り換える能力を有するかどうかを分析するために、当業者は、いくつかの既知の好適なアッセイを使用することができる。好適な方法のうちの１つは、実施例のセクションに開示される。アッセイについては、例えば、実施例６ｃに詳細に記載されている。好ましくは、全長ＨＶＥＭでトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞を使用する。好ましくは、当該細胞は、細胞膜上で全長ＨＶＥＭを安定に発現している。細胞を可溶性リガンド（例えば、ビオチン標識またはＨｉｓタグ化されたＢＴＬＡ、ＣＤ１６０またはＬＩＧＨＴ）とともにインキュベーションする。続いて、細胞を、ＨＶＥＭの細胞外部分に結合する本発明の抗体とともにインキュベーションする。洗浄後、蛍光標識されたストレプトアビジンまたは抗Ｈｉｓ抗体を使用して細胞に結合したリガンドを検出し、洗浄後、リガンドに結合した抗体の蛍光シグナルを、フローサイトメーター（ＦＡＣＳ）を使用して検出することができる。ＨＶＥＭの細胞外部分に結合したリガンドの量は、抗体のＨＶＥＭの細胞外部分に結合したリガンドを置き換える抗ＨＶＥＭ抗体の能力を示す。リガンドのより低い蛍光シグナルは、より強力な抗ＨＶＥＭ抗体の置き換える能力を示す。好ましい方法は、結果が、例えば、図７Ａ～Ｄに示される実施例に記載される。取り換えの割合は、典型的には、非特異的抗体の存在下でのＨＶＥＭへのリガンドの結合と比較した割合として、そうでなければ同一の条件下で与えられる。取り換えは、代謝活性細胞を使用して（例えば、３７℃で一晩インキュベーションした）、または代謝不活性細胞を使用して（例えば、アジ化ナトリウムの存在下で４℃でインキュベーションした）、測定され得る。
【0063】
理論によって拘束されることなく、Ｔ細胞の活性化は、ＬＩＧＨＴおよび／またはＴＮＦβの存在下であっても、ＢＴＬＡおよび／またはＣＤ１６０とＨＶＥＭとの相互作用時に阻害されると考えられている。本明細書で開示の抗体は、ＨＶＥＭを発現する標的細胞に有用である。本明細書で開示の抗体の結合は、ＢＴＬＡを取り換え、好ましくはＨＶＥＭの細胞外部分に結合したＣＤ１６０を少なくとも部分的に取り換えるが、ＨＶＥＭの細胞外部分に結合したＬＩＧＨＴを取り換えない。その結果、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の結合を防止する能力、ならびにＢＴＬＡを取り換え、好ましくはＣＤ１６０を部分的に取り換える能力により、Ｔ細胞活性化に対するＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の阻害効果が抑制される。本明細書で開示の抗体に結合した細胞は、ＬＩＧＨＴまたはＴＮＦβのＨＶＥＭへの結合などの他の刺激に応答に対して利用可能である。
【0064】
全長カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉ）サルＨＶＥＭタンパク質（Ｍｅｔ１－Ｓｅｒ２８０、ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿００５５４５０６１．１、配列番号５を参照されたい）は、ヒトＨＶＥＭと同様のアミノ酸配列を有し、ヒトＨＶＥＭタンパク質（Ｍｅｔ１－Ｈｉｓ２８３、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３、配列番号１を参照されたい）に対して８２％の相同性を示す。カニクイザルＨＶＥＭの細胞外ドメインの予測されるアミノ酸配列（すなわち、Ｌｅｕ３９－Ｖａｌ２０３、ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿００５５４５０６１．１）は、ヒトＨＶＥＭタンパク質の細胞外ドメインのアミノ酸配列（すなわち、Ｌｅｕ３９－Ｖａｌ２０２、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３）と８７％の相同性を示す。カニクイザルＨＶＥＭの対応するアミノ酸とのヒトＨＶＥＭのアミノ酸の置換を使用して、抗体の特異性および交差特異性を試験することができる。一実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＨＶＥＭに結合し、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）サルＨＶＥＭに対して交差特異的である。例示的な抗体は、４５Ｈ６、１１Ｈ７、４８Ｈ６および４９Ｇ４である。理論によって拘束されることなく、かかる抗体は、変異を担持するヒトＨＶＥＭへの結合に特に好適であると考えられている。さらに、かかる抗体は毒性試験に好適である。
【0065】
本開示の一態様は、０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２６～２８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２９～３１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する抗体は、配列番号２６～２８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに配列番号２９～３１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0066】
さらなる態様では、本開示は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２５のアミノ酸配列を有する軽鎖領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。好ましい実施形態では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換または付加は、軽鎖および／または重鎖可変領域のフレームワーク領域に位置する。好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。これらの特徴を有する例示的な抗体は、４５Ｈ６である。
【0067】
本開示の一態様は、０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４２～４４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４５～４７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する抗体は、配列番号４２～４４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに配列番号４５～４７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0068】
さらなる態様では、本開示は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４１のアミノ酸配列を有する軽鎖領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。好ましい実施形態では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換または付加は、軽鎖および／または重鎖可変領域のフレームワーク領域に位置する。好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。これらの特徴を有する例示的な抗体は、１１Ｈ７である。
【0069】
本開示の一態様は、０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号１８～２０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号２１～２３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する抗体は、配列番号１８～２０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに配列番号２１～２３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0070】
さらなる態様では、本開示は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号１６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。好ましい実施形態では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換または付加は、軽鎖および／または重鎖可変領域のフレームワーク領域に位置する。好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。これらの特徴を有する例示的な抗体は、３６Ｈ１２である。
【0071】
本開示の一態様は、０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号３４～３６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号３７～３９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する抗体は、配列番号３４～３６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに配列番号３７～３９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0072】
さらなる態様では、本開示は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号３２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。好ましい実施形態では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換または付加は、軽鎖および／または重鎖可変領域のフレームワーク領域に位置する。好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。これらの特徴を有する例示的な抗体は、４８Ｈ６である。
【0073】
本開示の一態様は、０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号５０～５２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、または２個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号５３～５５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する抗体は、配列番号５０～５２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域、ならびに配列番号５３～５５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0074】
さらなる態様では、本開示は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、ならびに０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、または付加を有する配列番号４９のアミノ酸配列を有する軽鎖領域を含む、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する、抗体を提供する。好ましい実施形態では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換または付加は、軽鎖および／または重鎖可変領域のフレームワーク領域に位置する。好ましくは、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合する抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。これらの特徴を有する例示的な抗体は、４９Ｇ４である。
【0075】
一態様では、配列によって本明細書に言及される抗ＨＶＥＭ抗体または抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止する。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り替える。例示的な抗体は、４５Ｈ６、１１Ｈ７、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0076】
さらなる態様において、配列によって本明細書で言及される抗ＨＶＥＭ抗体または抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を部分的に防止する。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＬＩＧＨＴを取り換えない。例示的な抗体は、４５Ｈ６、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0077】
さらなる態様において、配列によって本明細書で言及される抗ＨＶＥＭ抗体または抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を防止しない。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＬＩＧＨＴを取り換えない。例示的な抗体は、１１Ｈ７である。
【0078】
さらなる態様において、配列によって本明細書で言及される抗ＨＶＥＭ抗体または抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＣＤ１６０の結合を部分的に防止する。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＣＤ１６０を部分的に取り換える。例示的な抗体は、４５Ｈ６、１１Ｈ７、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0079】
さらなる態様において、配列によって本明細書で言及される抗ＨＶＥＭ抗体または抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＣＤ１６０およびＬＩＧＨＴの結合を部分的に防止する。好ましくは、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＣＤ１６０を部分的に取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合されたＬＩＧＨＴを取り換えない。例示的な抗体は、４５Ｈ６、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および４９Ｇ４である。
【0080】
さらなる態様では、配列によって本明細書で言及される抗ＨＶＥＭ抗体または抗原結合断片は、当該抗体がＨＶＥＭの当該細胞外部分に結合されるときに、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＢＴＬＡの結合を防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＣＤ１６０の結合を部分的に防止し、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分へのＬＩＧＨＴの結合を防止せず、当該抗体は、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合したＢＴＬＡを取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合したＣＤ１６０を部分的に取り換え、ＨＶＥＭ発現細胞上のＨＶＥＭの細胞外部分に結合したＬＩＧＨＴを取り換えない。例示的な抗体は、１１Ｈ７である。
【0081】
典型的には、配列によって本明細書で言及される抗ＨＶＥＭ抗体または抗原結合断片は、ＨＶＥＭタンパク質のＣＲＤ１ドメインに結合する。
【0082】
本開示の抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは、本明細書に記載の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。かかる抗体は、良好な特徴を有する。もちろん、その中の１つ以上のアミノ酸を修飾することによって、かかる元の抗体のバリアントを生成することが可能である。かかるバリアントの多くは、当該元と比較した場合に、多かれ少なかれ同様に挙動するであろう。かかるバリアントもまた、本開示の範囲に含まれる。
【0083】
バリアントは、元の抗体の配列に関してアミノ酸置換、挿入、欠失、または付加を有し得る。アミノ酸置換は、別のアミノ酸とのアミノ酸の交換である。好ましくは、アミノ酸は、同様の化学的特性を有するアミノ酸によって予め配置されており、これは多くの場合、保存的置換と呼ばれる。アミノ酸欠失は、配列を形成する１つ以上のアミノ酸の欠失をもたらす。アミノ酸挿入は、配列中に１つ以上の追加のアミノ酸をもたらす。アミノ酸付加は、アミノ酸配列の開始または終了時に１つ以上のアミノ酸をもたらす。
【0084】
かかる修飾の非限定的な例は、グルタメートの代わりにピログルタメートを含む抗体である。かかる修飾の他の非限定的な例は、当該元の抗体と比較した場合に１つ以上のアミノ酸の挿入、欠失、反転および／または置換である。好ましくは、アミノ酸置換、挿入、欠失、または付加は、可変ドメインのＣＤＲの外側である。好ましくは、アミノ酸の置換、挿入、欠失、または付加は、可変領域のフレームワーク領域内および／または抗体の定常領域においてである。バリアントのＨＶＥＭ結合は、本明細書に記載されるように試験され得る。
【0085】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体の定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４抗体などのＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体の定常領域である。定常領域は、定常領域に特異的な特性を付与するためのアミノ酸置換などの修飾を含み得る。例えば、半分子の交換に対して抗体をより安定にするためのＩｇＧ４ヒンジ領域の変異。他の修飾は、抗体の半減期に影響を及ぼし、グリコシル化部位を追加または除去し、産生を改善し、大規模発酵槽で産生される抗体産物の均質性を改善するなどである。
【0086】
本発明の抗体は、好ましくは、マウスＩｇＧ１、補体活性化もしくはＦｃ受容体相互作用を低減もしくは防止するために定常領域で変異されたヒトＩｇＧ１、またはヒトＩｇＧ４、もしくは他のＩｇＧ４分子との半分子の交換を防止するために変異されたヒトＩｇＧ４である。
【0087】
本明細書で開示の抗体のＣＤＲ（ＣＤＲ１－ＣＤＲ２－ＣＤＲ３）におけるいくつかのバリエーションが許容される。典型的には、約０～２個のアミノ酸置換、挿入、欠失、または付加が、１つのＣＤＲにおいて許容される。多くの場合、２個超のアミノ酸変化が許容される。
【0088】
本発明の抗体は、天然に生じる重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３に関して、０～５個、好ましくは０～２個、より好ましくは２、１、または０個のアミノ酸置換、挿入、欠失、または付加を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を有し得る。
【0089】
かかる抗体は、天然に生じる軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３に関して、０～５個、好ましくは０～２個、より好ましくは０～１個、より好ましくは０個のアミノ酸置換、挿入、欠失、または付加を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を有し得る。
【0090】
本明細書で開示の抗体の可変領域におけるいくつかのバリエーションが許容される。典型的には、約０～１０個のアミノ酸置換が可変鎖において許容される。多くの場合、１０個超のアミノ酸変化が許容される。
【0091】
本発明の抗体は、天然に生じる可変重鎖に関して、０～１５個、好ましくは０～１０個、より好ましくは０～５個、より好ましくは５、４、３、２、１、または０個のアミノ酸置換、挿入、欠失、または付加を有する重鎖可変領域を有し得る。
【0092】
かかる抗体は、天然に生じる軽鎖可変領域に関して、０～１５個、好ましくは０～１０個、より好ましくは０～５個、より好ましくは５、４、３、２、１、または０個のアミノ酸置換、挿入、欠失、または付加を有する軽鎖可変領域を有し得る。
【0093】
本明細書で開示の抗体の定常領域におけるいくつかのバリエーションが許容される。典型的には、約０～１０個のアミノ酸置換が定常領域において許容される。多くの場合、１０個超のアミノ酸変化が許容される。本発明の抗体は、天然に生じる重鎖定常領域（ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）に関して、０～１５個、好ましくは０～１０個、より好ましくは０～５個、より好ましくは５、４、３、２、１、または０個のアミノ酸置換を有する重鎖定常領域（ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）を有し得る。かかる抗体は、天然に生じる軽鎖定常領域に対して、０～５個、好ましくは５、４、３、２、１、または０個のアミノ酸置換を有する軽鎖定常領域を有し得る。
【0094】
ＩｇＧ４におけるいくつかのバリエーションは、天然に生じ、および／または得られる抗体の免疫学的特性を変更することなく許容される。ＩｇＧ４定常領域または変異ＩｇＧ１定常領域を有する抗体は、抗体の薬理学的特性の少なくともほとんどを有するが、補体には結合せず、したがって、その結合する細胞のインビボでの枯渇を誘発しないであろう。好ましくは、当該定常領域は、ヒト抗体の定常領域（キメラ）である。
【0095】
好ましくは、当該定常領域は、補体活性化が欠損している領域であり、好ましくは、ヒトＩｇＧ４定常領域または変異ヒトＩｇＧ１定常領域である。
【0096】
本明細書に開示される抗体およびその抗原結合断片によるＨＶＥＭ結合は、当業者に既知のいくつかの好適なアッセイで確認され得る。かかるアッセイは、例えば、親和性アッセイ、例えば、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＦＡＣＳ、およびＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）を含む。実施例（例えば、実施例２ｃおよび６ａ）は、ＨＶＥＭ結合を測定するために使用され得る多くのアッセイのうちのいくつか、およびヒトＨＶＥＭに対する抗体の相対的結合親和性を決定する方法を詳細に説明する。
【0097】
さらなる態様では、本開示は、本明細書で開示の抗体または本明細書で開示の抗原結合断片をコードする核酸分子（複数可）を提供する。本明細書で開示の可変領域をコードする核酸分子がさらに提供される。本開示において使用される核酸は、典型的には、リボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）であるが、排他的ではない。遺伝コードに基づいて、当業者は、本明細書で開示の抗体バリアントをコードする核酸配列を決定することができる。遺伝コードの縮退に基づいて、６４個のコドンを使用して、２０個のアミノ酸および翻訳末端シグナルをコードし得る。当業者に既知であるように、異なる生物におけるコドン使用バイアスは、遺伝子発現レベルに影響を及ぼす可能性がある。所望の核酸が発現される生物に応じて、コドン使用を最適化するために、様々な計算ツールが当業者に利用可能である。
【0098】
さらなる態様では、本開示は、本明細書に記載の核酸配列分子を含むベクターを提供する。本明細書で使用される「ベクター」という用語は、異種核酸配列を宿主細胞に導入することができるプラスミド、バクテリオファージ、または動物ウイルスなどの核酸分子を指す。本発明によるベクターは、宿主細胞において異種核酸配列によってコードされる本発明の抗体の発現または産生を可能にする。本発明によって使用されるベクターは、例えば、動物ウイルスに由来し、その例としては、ワクシニアウイルス（修飾ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ、ＭＶＡなどの減衰誘導体を含む）、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、アデノウイルスまたはレトロウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。本発明によるベクターは、好ましくは、選択された宿主細胞における本発明による抗体の転写の開始に好適なプロモーターを含む発現カセットを含む。真核宿主細胞における本発明によるポリペプチドの発現に好適なプロモーターの例としては、βアクチンプロモーター、免疫グロビンプロモーター、５ＳＲＮＡプロモーター、または哺乳動物宿主のためのサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）およびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーターなどのウイルス由来プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。
【0099】
本明細書で開示の核酸分子（複数可）が細胞内で発現される場合、細胞は、本開示に従って抗体を産生し得る。したがって、一実施形態では、本開示による抗体、核酸分子（複数可）、および／またはベクターを含む細胞が提供される。宿主細胞は、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、細菌細胞または酵母細胞であり得る。当該細胞は、好ましくは動物細胞、好ましくは哺乳動物細胞、最も好ましくはヒト細胞である。宿主細胞として好適な哺乳動物細胞株の例としては、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ細胞、またはＰＥＲ－Ｃ６（商標）細胞が挙げられる。本開示の目的のための好適な細胞は、当該抗体および／または当該核酸を含むことができ、好ましくは産生することができる任意の細胞である。本開示は、当該細胞を含む細胞培養物をさらに包含する。
【0100】
「宿主細胞」という用語は、発現ベクターが導入された細胞を指す。該用語は、特定の対象細胞のみならず、かかる細胞の子孫も包含する。環境影響または変異のいずれかにより特定の修飾が連続した世代で生じ得るため、かかる子孫は親細胞と同一ではない場合があるが、依然として「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。
【0101】
本明細書で開示の抗体は、当業者に既知の任意の方法によって産生され得る。好ましい実施形態において、抗体は、細胞を使用して産生され、好ましくは、細胞は、ハイブリドーマ細胞、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、またはＰＥＲ－Ｃ６（商標）細胞である。特定の好ましい実施形態において、当該細胞はＣＨＯ細胞であり、好ましくは、当該細胞は無血清培地中で培養される。これは、当該抗体を当該培養物から採取することを含む。抗体は、好ましくは培地から精製され、好ましくは、当該抗体は、親和性精製される。代替的に、当該抗体は、合成的に生成され得る。
【0102】
様々な機関および企業が、例えば臨床使用のための抗体の大規模産生のための細胞株を開発してきた。これらの細胞はまた、タンパク質の産生などの他の目的にも使用される。タンパク質および抗体の工業的規模の産生のために開発された細胞株は、本明細書ではさらに、工業的細胞株と称される。したがって、本開示の好ましい実施形態は、当該抗体の大規模な産生のために開発された細胞株の使用を提供する。
【0103】
本発明による抗体は、治療的使用および非治療的使用において有利に使用され得るいくつかの活性を示す。特に、本発明による抗体は、個体の治療に有用である。好ましくは、本発明の抗体は、免疫関連疾患の治療または免疫関連疾患に対する予防に有用である。好ましい実施形態において、本発明による抗体は、がんの治療に有用である。いくつかの実施形態において、本発明による抗体は、好ましくは療法、好ましくはヒト療法において使用される。いくつかの実施形態において、本明細書で開示の抗体は、研究目的のために使用され得る。例えば、インビトロ実験、細胞培養、有機型培養およびインビボモデルにおいて。
【0104】
がんの治療のための方法も記載されている。がんの例としては、黒色腫、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、および結腸直腸がんが挙げられる。
【0105】
本発明は、がんに罹患している対象の治療のための方法であって、当該対象に、治療有効量の本明細書で開示の抗体を投与することを含む、方法を提供する。がんに罹患している対象の治療のための薬剤の調製のための方法がさらに提供される。本開示は、ＢＴＬＡおよびＨＶＥＭ、ならびにＣＤ１６０およびＨＶＥＭの結合を防止することによって、Ｔ細胞活性化の阻害を防止する方法を記載する。
【0106】
本発明は、炎症性疾患に罹患している対象の治療のための方法であって、当該対象に、治療有効量の本明細書で開示の抗体を投与することを含む、方法を提供する。炎症性疾患に罹患している対象の治療のための薬剤の調製のための方法がさらに提供される。本開示は、ＢＴＬＡおよびＨＶＥＭ、ならびにＣＤ１６０およびＨＶＥＭの結合を防止することによって、Ｔ細胞活性化の阻害を防止する方法を記載する。
【0107】
本開示は、本明細書で開示の抗体もしくはその抗原結合断片、もしくはそれらをコードする核酸を含む医薬組成物、または本明細書で開示の抗体もしくはその抗原結合断片、もしくはそれらをコードする核酸を含む細胞をさらに含む。本発明によるポリペプチドまたはその薬学的に許容される塩、ならびに少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤、および／もしくは賦形剤を含む、医薬組成物が提供される。かかる組成物は、薬剤としての使用に特に好適である。組成物は、液体、半固体および固体剤形などの任意の好適な形態であり得る。選択される製剤の用量およびスケジュールは、当業者によって周知である標準的な手順によって決定され得る。かかる手順は、動物モデルを形成する投薬スケジュールを外挿および推定すること、ならびに、次いでヒト臨床用量範囲研究における最適投薬量を決定することを含む。医薬組成物における投薬量は、所望の放出および薬理学的特徴などのいくつかの因子に応じて変化する。
【0108】
本開示の一実施形態は、がんおよび／または免疫関連障害の予防として、またはその治療における使用のための、本明細書に記載の医薬組成物を提供する。
【0109】
ＨＶＥＭシグナル伝達活性を調節するための方法がさらに提供される。「調節すること」という用語は、系の出力シグナルを調整する活性を指す。出力シグナルまたは出力は、抑制出力シグナルが刺激性になるように、またはその逆になるように調整され得る。本発明は、治療有効量の本明細書で開示の抗体を当該対象に投与することを含む、ＨＶＥＭシグナル伝達の調節のための方法を提供する。理論によって拘束されることなく、ＨＶＥＭは、ＢＴＬＡまたはＣＤ１６０を発現するＴ細胞に共阻害シグナルを送達すると考えられている。一方、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβは、Ｔ細胞上で発現されたＨＶＥＭと相互作用する場合、Ｔ細胞に共刺激シグナルを送達する。ＬＩＧＨＴおよび／またはＴＮＦβ、ＢＴＬＡおよび／またはＣＤ１６０がＨＶＥＭと同時に相互作用する場合、正味の結果は、Ｔ細胞活性化の阻害シグナルである。この相互作用は双方向である。ＨＶＥＭは、Ｔ細胞上でＢＴＬＡおよびＣＤ１６０との相互作用後にＴ細胞において阻害シグナルを誘導するが、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の両方は、ＨＶＥＭの活性化リガンドとして作用し、ＮＦκＢ活性化をもたらす。さらに、ＬＩＧＨＴは、Ｔ細胞上に発現されたＨＶＥＭと相互作用する場合、Ｔ細胞に共刺激シグナルを送達し、ＨＶＥＭもまた、Ｔ細胞によって発現されたＬＩＧＨＴと相互作用する場合、Ｔ細胞に共刺激シグナルを伝達することに関与している。しかしながら、ＬＩＧＨＴは明らかなシグナル伝達モチーフを含有しておらず、そのシグナル伝達のメカニズムは完全には定義されていない。
【0110】
Ｔ細胞におけるＨＶＥＭおよびＢＴＬＡによって中継される共刺激および共抑制シグナル伝達は、ＮＦκＢまたはＮＦＡＴのレベル、ならびにＩＬ－２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγの放出で測定され得る。ＮＦＡＴのレベルを測定する方法は当該技術分野において既知である。例示的な方法が、例えば、実施例３ｃに記載されており、その結果が図４Ａ～Ｂに示されている。ＮＦκＢのレベルを測定する方法は、当該技術分野で既知である。例示的な方法が、例えば、実施例６ｆに記載されており、その結果が図８Ａ～Ｃに示されている。ＩＬ－２、ＴＮＦα、およびＩＦＮγのレベルを測定する方法は、当該技術分野で既知である。例示的な方法が、例えば、実施例６ｋに記載されており、その結果が、図１１Ａ～Ｃに示されている。
【0111】
一態様では、本開示は、ＨＶＥＭ発現細胞を、本明細書で開示の抗体もしくはその抗原結合断片、核酸分子、またはベクターと接触させることを含む、ＨＶＥＭシグナル伝達活性の調節するための方法を提供する。
【0112】
一態様では、本開示は、免疫応答の増加を必要とする対象に、本明細書で開示の抗体もしくはその抗原結合断片、核酸分子またはベクターを含む、治療有効量の組成物を投与することを含む、対象における免疫応答を増加させるための方法を提供する。
【0113】
一態様では、本開示は、腫瘍成長の低減を必要とする対象に、本明細書で開示の抗体もしくはその抗原結合断片、核酸分子またはベクターを含む、治療有効量の組成物を投与することを含む、対象における腫瘍成長を低減するための方法を提供する。
【0114】
本明細書で使用される場合、「対象」は、ヒトまたは動物である。対象には、ヒト、ブタ、フェレット、アザラシ、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、およびウマなどの哺乳動物、ならびにニワトリ、アヒル、ガチョウ、およびシチメンチョウなどの鳥類が含まれるが、これらに限定されない。本発明の好ましい実施形態では、対象は、哺乳動物である。特に好ましい実施形態では、対象は、ヒトである。
【0115】
抗体の「抗原結合断片」という用語は、抗体が結合する同じ抗原（すなわち、ヒトＨＶＥＭ）に結合する能力を保持する全長抗体の１つ以上の部分を指す。「抗原結合断片」という用語はまた、非共有会合もしくは共有会合によって形成されるより大きな分子の一部分である抗体の部分、または１つ以上の追加の分子実体を有する抗体部分のものも包含する。追加の分子実体の例は、四量体ｓｃＦｖ分子を作製するために使用され得る、ストレプトアビジンコア領域などのアミノ酸、ペプチド、またはタンパク質を含む（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ １９９５；６（３）：９３－１０１）。例示的な抗原結合断片は、抗体のＶＨおよび／またはＶＬである。抗原結合断片には、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、二価単鎖抗体、および他の抗原認識免疫グロブリン断片が含まれる。いくつかの例では、本明細書中で使用される「抗体」という用語は、その抗原結合断片も含むと理解され得る。
【0116】
「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列のみのアミノ酸配列からなる抗体を指す。ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、またはマウス細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生される場合、マウスの炭水化物鎖を含有してもよい。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な方式で調製され得る。
【0117】
「エピトープ」という用語は、抗体もしくはＴ細胞受容体に特異的に結合することができるか、またはそうでなければ分子と相互作用することができる抗原の部分を指す。「エピトープ」は、当該技術分野では「抗原決定基」とも称される。エピトープは、概して、アミノ酸、炭水化物、または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基からなる。エピトープは、「線形」または「非線形／立体配座」であり得る。所望のエピトープが決定されると（例えば、エピトープマッピングによって）、そのエピトープに対する抗体が生成され得る。抗体の生成および特徴付けはまた、所望のエピトープについての情報を提供し得る。この情報から、次いで、例えば、交差競合研究を実施して、互いに競合的に結合する抗体、すなわち、抗原への結合を競合する抗体を見出すことによって、同じエピトープに結合するものについて抗体をスクリーニングすることが可能である。
【0118】
本明細書で使用される場合、「含む」およびその活用は、その非限定的な意味で使用され、単語に続く項目が含まれることを意味するが、具体的に言及されない項目は除外されない。加えて、「～からなる」という動詞は、「～から本質的になる」に置き換えられてもよい。これは、本明細書に定義される化合物または補助化合物が、具体的に同定された構成要素以外の追加の構成要素を含み得ることを意味し、当該追加の構成要素は、本発明の固有の特徴を変更しない。
【0119】
「ａ」および「ａｎ」という冠詞は、本明細書では、冠詞の文法的目的語の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または２つ以上の要素を意味する。
【0120】
「およそ」または「約」という単語は、数値と関連して使用される場合（およそ１０、約１０）、好ましくは、値が、値の１％より多い、または少ない１０の所与の値であり得ることを意味する。
【0121】
本明細書で使用される場合、「治療」、「治療する」、および「治療すること」という用語は、本明細書に記載の疾患もしくは障害、またはそれらの１つ以上の症状の逆転、緩和、発症の遅延、または進行の阻害を指す。いくつかの実施形態において、治療は、１つ以上の症状が発症した後に施され得る。他の実施形態では、治療は、症状の不在下で施され得る。例えば、治療は、症状の発症前に（例えば、症状の履歴に照らして、および／または遺伝子もしくは他の感受性因子に照らして）感染しやすい個体に施され得る。症状が解消した後も、例えば、それらの再発を予防または遅延させるために、治療を継続することもできる。
【0122】
明確さおよび簡潔な説明の目的のために、同一または別個の実施形態の一部として特徴が本明細書に記載される。しかしながら、本発明の範囲は、記載された特徴のすべてまたはいくつかの組み合わせを有する実施形態を含み得ることが理解されるであろう。
【0123】
本明細書において引用されているすべての特許および参考文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【0124】
本発明は、以下の実施例においてさらに説明される。これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではなく、単に本発明を明確にするために役立つ。
【図面の簡単な説明】
【0125】
【図1】膜結合全長ヒトＨＶＥＭ、ＣＲＤ１が欠失した膜結合ヒトＨＶＥＭ、またはＨＥＫ２９３Ｆ細胞上の膜結合全長カニクイザルＨＶＥＭに対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体のフローサイトメトリー結合特性。破線はバックグラウンド（すなわち、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の結合なし）を表す。
【図2】ＨＥＫ２９３Ｆ細胞上の膜結合全長ヒトＨＶＥＭへの（Ａ）可溶性ヒトＢＴＬＡおよび（Ｂ）可溶性ヒトＬＩＧＨＴの結合に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果。破線は、陰性対照（すなわち、マウス抗ヒト抗体を添加しないか、またはマウスＩｇＧ１陰性アイソタイプ対照を添加したリガンド／受容体結合＝ＨＶＥＭ受容体へのリガンドの１００％結合）を表す。
【図3】（Ａ）膜結合ヒトＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果。可溶性ヒトＬＩＧＨＴリガンドを参照として含めた。（Ｂ）膜結合ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ
【数1】
【図4】（Ａ）ＮＦＡＴ応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＢＴＬＡ／ＨＶＥＭの遮断バイオアッセイのアッセイ原理：（１）膜ヒトＨＶＥＭおよび独自の膜ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化因子を発現するＣＨＯ－Ｋ１活性化因子細胞（すなわち、人工の抗原提示細胞（ａＡＰＣ））の組み合わせ、ならびに（２）膜ヒトＢＴＬＡおよび膜ヒトＴＣＲ複合体を発現するＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞の組み合わせを使用して、ＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を遮断するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力を検査する。（Ｂ）膜結合ヒトＢＴＬＡ／ヒトＴＣＲを発現するＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞におけるＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達の膜結合ヒトＢＴＬＡ／ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果。平均±ＳＤ（ｎ＝２）を示す。
【図5】ＨＥＫ２９３Ｆ細胞上の膜結合（全長）ヒトＨＶＥＭに対する、精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス対キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体のフローサイトメトリー結合特性。平均±ＳＤ（ｎ＝２）を示す。
【図6】ＨＥＫ２９３Ｆ細胞上の膜結合全長ヒトＨＶＥＭへの（Ａ）可溶性ヒトＢＴＬＡ、（Ｂ）可溶性ヒトＣＤ１６０、（Ｃ）可溶性ヒトＬＩＧＨＴ、および（Ｄ）可溶性ヒトＴＮＦβの結合に対する、精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス対キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果。破線は、陰性対照（すなわち、マウスＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４陰性アイソタイプ対照を添加したリガンド／受容体結合＝ＨＶＥＭ受容体へのリガンドの１００％結合）を表す。平均±ＳＤ（ｎ＝２～３）は、１つ（Ｄ）、２つ（ＡおよびＢ）、または３つ（Ｃ）の独立して実施された実験から示される。
【図7】ＨＥＫ２９３Ｆ細胞上の膜結合全長ヒトＨＶＥＭからの事前に結合された（Ａ）可溶性ヒトＢＴＬＡ、（Ｂ）可溶性ヒトＣＤ１６０、（Ｃ）可溶性ヒトＬＩＧＨＴ、および（Ｄ）可溶性ヒトＴＮＦβの取り換えに対する、精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果。破線は、陰性対照（すなわち、ヒトＩｇＧ４陰性アイソタイプ対照を添加したリガンド／受容体結合＝ＨＶＥＭ受容体へのリガンドの１００％結合）を表す。平均±ＳＤ（ｎ＝２）を示す。
【図8】（Ａ）膜結合ヒトＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達に対する、精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果。可溶性ヒトＬＩＧＨＴリガンドを参照として含めた。（Ｂ）膜結合ヒトＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達に対する、非架橋対架橋の精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果。可溶性ヒトＬＩＧＨＴリガンドを参照として含めた。（Ｃ）膜結合ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ
【数2】
【図9】（Ａ）膜結合ヒトＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達に対する可溶性ヒトＴＮＦβリガンドの効果。（Ｂ）膜結合ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＴＮＦβ
【数3】
【図10】膜結合ヒトＢＴＬＡ／ヒトＴＣＲ発現ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞におけるＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達の膜結合ヒトＢＴＬＡ／ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対する精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果。平均±ＳＤ（ｎ＝２）は、２つの独立して実施された実験から示されている。
【図11】６人の健康なドナー（ドナーＡ、Ｃ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、およびＫ）由来の濃縮された膜結合ヒトＢＴＬＡ／ヒトＴＣＲ発現初代ナイーブヒトＴ細胞からのＴＣＲ誘導（図上段）およびＴＣＲ／ＣＤ２８誘導（図下段）のＩＬ－２（Ａ）、ＴＮＦα（Ｂ）、またはＩＦＮγ（Ｃ）放出の膜結合ヒトＢＴＬＡ／ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対する精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果。破線は、基底サイトカイン放出（すなわち、ヒトＩｇＧ４／κ陰性アイソタイプ対照への曝露）を表す。平均±ＳＤ（ｎ＝５）を示す。
【実施例】
【0126】
実施例１．マウス抗ヒトＨＶＥＭモノクローナル抗体の生成
（ａ）．表面ヒトＨＶＥＭを発現するＳｆ９昆虫細胞およびＨＥＫ２９３Ｆ細胞の生成
ヒトＨＶＥＭタンパク質（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３、配列番号１を参照されたい）をコードするｃＤＮＡを、哺乳動物発現のために最適化し、ＧＥＮＥＡＲＴ、Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙによって合成した（配列番号２を参照されたい）。このｃＤＮＡを、バキュロウイルス転写プラスミドｐＶＬ１３９３（ＢＤトランスフェクションキット、カタログ番号５６０１２９、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中にサブクローニングした。その後、ｂａｃｕｌｏＣＯＭＰＬＥＴＥオールインワンキット（Ｏｘｆｏｒｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ヒトＨＶＥＭをコードするｃＤＮＡを含有する転写プラスミドｐＶＬ１３９３をＳｆ９昆虫細胞（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）にトランスフェクションし、２７℃で４～５日間インキュベーションした。このトランスフェクションステップ後、上清を収集し、４℃で保管し、ウイルス増幅のためにより多くのＳｆ９昆虫細胞に感染させるために使用した。この目的のために、Ｓｆ９昆虫細胞を増幅した組換えバキュロウイルスでトランスフェクションし、次いで２７℃で３～５日間インキュベーションした。これらのＳｆ９昆虫細胞を採取し、滅菌ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中２０．０×１０６細胞／ｍＬで等分し、－８０℃で保管して、細胞溶解物を得た。保管前に、１：２０希釈フィコエリトリン（ＰＥ）コンジュゲートマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（クローンｅＢｉｏＨＶＥＭ－１２２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）およびフローサイトメトリーを使用して、トランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞上でのヒトＨＶＥＭ表面発現を確認した。
（ａ）．表面ヒトＨＶＥＭを発現するＳｆ９昆虫細胞およびＨＥＫ２９３Ｆ細胞の生成
ヒトＨＶＥＭタンパク質（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３、配列番号１を参照されたい）をコードするｃＤＮＡを、哺乳動物発現のために最適化し、ＧＥＮＥＡＲＴ、Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙによって合成した（配列番号２を参照されたい）。このｃＤＮＡを、バキュロウイルス転写プラスミドｐＶＬ１３９３（ＢＤトランスフェクションキット、カタログ番号５６０１２９、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中にサブクローニングした。その後、ｂａｃｕｌｏＣＯＭＰＬＥＴＥオールインワンキット（Ｏｘｆｏｒｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ヒトＨＶＥＭをコードするｃＤＮＡを含有する転写プラスミドｐＶＬ１３９３をＳｆ９昆虫細胞（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）にトランスフェクションし、２７℃で４～５日間インキュベーションした。このトランスフェクションステップ後、上清を収集し、４℃で保管し、ウイルス増幅のためにより多くのＳｆ９昆虫細胞に感染させるために使用した。この目的のために、Ｓｆ９昆虫細胞を増幅した組換えバキュロウイルスでトランスフェクションし、次いで２７℃で３～５日間インキュベーションした。これらのＳｆ９昆虫細胞を採取し、滅菌ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中２０．０×１０６細胞／ｍＬで等分し、－８０℃で保管して、細胞溶解物を得た。保管前に、１：２０希釈フィコエリトリン（ＰＥ）コンジュゲートマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（クローンｅＢｉｏＨＶＥＭ－１２２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）およびフローサイトメトリーを使用して、トランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞上でのヒトＨＶＥＭ表面発現を確認した。
【0127】
ヒトＨＶＥＭタンパク質（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３、配列番号１を参照されたい）をコードするｃＤＮＡを、哺乳動物発現のために最適化し、ＧＥＮＥＡＲＴ、Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙによって合成した（配列番号２を参照されたい）。このｃＤＮＡを、ｐｃＤＮＡ３．１由来の発現プラスミド中でサブクローニングした。この全長ヒトＨＶＥＭプラスミドを、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現システム（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３Ｆ細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にトランスフェクションした。１２５μｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ）を使用して、安定したヒト全長ＨＶＥＭがトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８）を選択した。これらのＨＥＫ２９３Ｆ細胞を採取し、滅菌ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中１９．０×１０６細胞／ｍＬで等分し、－８０℃で保管して、細胞溶解物を得た。保管前に、１：２０希釈フィコエリトリン（ＰＥ）コンジュゲートマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（クローンｅＢｉｏＨＶＥＭ－１２２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）およびフローサイトメトリーを使用して、トランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞上でのヒトＨＶＥＭ表面発現を確認した。
【0128】
（ｂ）．マウス抗ヒトＨＶＥＭモノクローナル抗体の免疫化および生成
２つの免疫化プロトコルを適用した。
第１の免疫化プロトコル中、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６～８週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、
の油中水型乳化フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ、Ｓｉｇｍａ）または水中油型乳化Ｓｉｇｍａ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ＳＡＳ、Ｓｉｇｍａ）中の可溶性組換えＣ末端ポリヒスチジンタグ化ヒト細胞外ＨＶＥＭドメイン（ＮＣＢＩ Ｒｅｆ ＳＥＱ：ＮＰ＿００３８１１．２、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）を、０日目に皮下注射し、各マウスに、２５０μＬのＣＦＡまたはＳＡＳと混合した２５０μＬのＰＢＳ中の２５μｇの組換えヒトＨＶＥＭを注射した。２１日目に、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ、Ｓｉｇｍａ）またはＳＡＳ中の組換えヒトＨＶＥＭでの皮下注射によって抗体応答を強化し、各マウスに、２５０μＬのＩＦＡまたはＳＡＳと混合した２５０μＬのＰＢＳ中の２５μｇの組換えヒトＨＶＥＭを注射した。４２日目および８７日目に、ＩＦＡまたはＳＡＳ中の組換えヒトＨＶＥＭおよびヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞溶解物での皮下注射によって、マウスを再び強化し、各マウスに、２５０μＬのＩＦＡまたはＳＡＳと混合した２５０μＬのＰＢＳ中の２５μｇの組換えヒトＨＶＥＭおよびヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞溶解物（１．８×１０６個の生存および膜結合ＨＶＥＭ発現細胞から調製された）を注射した。最後に、マウスに、９８日目および９９日目にアジュバントなしの組換えヒトＨＶＥＭおよびヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞溶解物を腹腔内注射し、各マウスに、２５０μＬのＰＢＳ中の２５μｇの組換えヒトＨＶＥＭおよびヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞溶解物（１．８×１０６個の生存および膜結合ＨＶＥＭ発現細胞から調製された）を注射した。１０２日目に、免疫化マウス由来の脾細胞を、以下に記述するようにＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ １９７５，２５６：４９５）によって最初に記載された標準的なハイブリドーマ技術を使用して、ＳＰ２／０－Ａｇ１４骨髄腫細胞（ＤＳＭＺ）と融合させた。
２つの免疫化プロトコルを適用した。
第１の免疫化プロトコル中、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６～８週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、
【数4】
【0129】
第２の免疫化プロトコル中、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６～８週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、
のＣＦＡもしくはＳＡＳ中、またはアジュバントなしの可溶性組換えＣ末端ポリヒスチジンタグ化ヒト細胞外ＨＶＥＭドメイン（ＮＣＢＩ Ｒｅｆ ＳＥＱ：ＮＰ＿００３８１１．２、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）およびヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞溶解物またはヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞溶解物を、０日目に皮下注射し、各マウスに、２５０μＬのＣＦＡもしくはＳＡＳと混合した、またはそれらを含まない、２５０μＬのＰＢＳ中の１０～２０μｇの組換えヒトＨＶＥＭおよびヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞またはＨＥＫ２９３Ｆ細胞溶解物（両方とも５．０×１０６個の生存および膜結合ＨＶＥＭ発現細胞から調製された）を注射した。２１日目および４２日目に、ＩＦＡもしくはＳＡＳ中またはジュバントなしの組換えヒトＨＶＥＭおよびヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞溶解物、またはヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞溶解物での皮下注射によって抗体応答を強化し、各マウスに、２５０μＬのＩＦＡもしくはＳＡＳと混合した、またはそれらを含まない、２５０μＬのＰＢＳ中の１０～２０μｇの組換えヒトＨＶＥＭおよびヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞またはＨＥＫ２９３Ｆ細胞溶解物（両方とも５．０×１０６個の生存および膜結合ＨＶＥＭ発現細胞から調製された）を注射した。最後に、マウスに、５９日目および６４日目にアジュバントなしの組換えヒトＨＶＥＭおよびヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞溶解物またはヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞溶解物を腹腔内注射し、各マウスに、２５０μＬのＰＢＳ中の１０～２０μｇの組換えヒトＨＶＥＭおよびヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされたＳｆ９昆虫細胞またはＨＥＫ２９３Ｆ細胞溶解物（両方とも５．０×１０６個の生存および膜結合ＨＶＥＭ発現細胞から調製された）を注射した。６７日目に、免疫化マウス由来の脾細胞を、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ １９７５，２５６：４９５）によって最初に記載された標準的なハイブリドーマ技術を使用して、ＳＰ２／０－Ａｇ１４骨髄腫細胞（ＤＳＭＺ）と融合させた。簡潔に述べると、免疫化されたマウスを屠殺した。脾臓から脾細胞を摘出し、ＧｌｕｔａＭａｘ培地（ＳＦ培地、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む無血清ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）Ｉで洗浄した。対数増殖するＳＰ２／０－Ａｇ１４骨髄腫細胞をＳＦ培地で洗浄し、脾細胞に添加して、５：１の脾細胞対骨髄腫細胞の比を得た。次いで、細胞をペレット化し、上清を除去した。次いで、１ｍｌのポリエチレングリコール４０００（Ｍｅｒｃｋ）の３７％（ｖ／ｖ）溶液を６０秒間にわたって滴下し、その後、細胞を３７℃でさらに６０秒間インキュベーションした。次いで、８ｍｌのＳＦ培地、続いて、５ｍｌのＧｌｕｔａＭａｘ／１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＣＳ、Ｂｏｄｉｎｃｏ）を含むｏｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）Ｉを穏やかに撹拌しながらゆっくりと添加した。室温（ＲＴ）で３０分後、細胞をペレット化し、ＧｌｕｔａＭａｘ／１０％ＦＣＳを含むｏｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）Ｉで洗浄して残留ポリエチレングリコールを除去し、最後にアミノプテリン選択培地、すなわち、５０×Ｈｙｂｒｉ－Ｍａｘ（商標）アミノプテリン（デノボＤＮＡ合成阻害剤、Ｓｉｇｍａ）を補充したＧｌｕｔａＭａｘ／１０％ＦＣＳを含むｏｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）Ｉ中、１ウェル当たり０．１×１０６細胞／２００μＬの濃度で播種した。７日目からアミノプテリン選択培地を２～３日ごとに補給し、１３～１４日目にＧｌｕｔａＭａｘ／１０％ＦＣＳを含むｏｐｔｉ－ＭＥＭ Ｉに置き換えた。
【数5】
【0130】
（ｃ）．マウス抗ヒトＨＶＥＭモノクローナル抗体の存在についてのスクリーニング
融合後１３日目から、増殖するハイブリドーマ由来の上清を、標的タンパク質として可溶性組換えＣ末端ポリヒスチジンタグ化ヒトＨＶＥＭ（ｒｈｕＨＶＥＭ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を用いるＥＬＩＳＡを使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（すなわち、「低親和性」ＩｇＭとは対照的な「高親和性」ＩｇＧ）の存在についてスクリーニングした。この目的のために、ｒｈｕＨＶＥＭを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬ（５０ｎｇ／５０μＬ／ウェル）で、半区域平底９６ウェルＥＩＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を使用して、４～８℃で１６～２４時間の間コーティングした。ＰＢＳ／０．０５％、ｗ／ｖのＴｗｅｅｎ２０で十分に洗浄した後、プレートをＰＢＳ／０．０５％のＴｗｅｅｎ２０／１％、ｗ／ｖのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｒｏｃｈｅ）で、室温で１時間ブロッキングした。続いて、プレートを５０μＬの未希釈ハイブリドーマ上清／ウェルで、室温で１時間インキュベーションした。ＰＢＳ／０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で十分に洗浄した後、抗体の結合を、室温で１時間、１：５０００に希釈されたホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）、続いて比色検出のためのＴＭＢ基質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のすぐに使用可能な溶液を用いて決定した。１ＭのＨ２ＳＯ４を添加した後、マイクロプレートリーダー（モデルｉＭａｒｋ、ＢｉｏＲａｄ）を使用して、４５０ｎｍの波長（６５５ｎｍの参照波長）で抗体の結合を測定した。
融合後１３日目から、増殖するハイブリドーマ由来の上清を、標的タンパク質として可溶性組換えＣ末端ポリヒスチジンタグ化ヒトＨＶＥＭ（ｒｈｕＨＶＥＭ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を用いるＥＬＩＳＡを使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（すなわち、「低親和性」ＩｇＭとは対照的な「高親和性」ＩｇＧ）の存在についてスクリーニングした。この目的のために、ｒｈｕＨＶＥＭを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬ（５０ｎｇ／５０μＬ／ウェル）で、半区域平底９６ウェルＥＩＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を使用して、４～８℃で１６～２４時間の間コーティングした。ＰＢＳ／０．０５％、ｗ／ｖのＴｗｅｅｎ２０で十分に洗浄した後、プレートをＰＢＳ／０．０５％のＴｗｅｅｎ２０／１％、ｗ／ｖのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｒｏｃｈｅ）で、室温で１時間ブロッキングした。続いて、プレートを５０μＬの未希釈ハイブリドーマ上清／ウェルで、室温で１時間インキュベーションした。ＰＢＳ／０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で十分に洗浄した後、抗体の結合を、室温で１時間、１：５０００に希釈されたホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）、続いて比色検出のためのＴＭＢ基質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のすぐに使用可能な溶液を用いて決定した。１ＭのＨ２ＳＯ４を添加した後、マイクロプレートリーダー（モデルｉＭａｒｋ、ＢｉｏＲａｄ）を使用して、４５０ｎｍの波長（６５５ｎｍの参照波長）で抗体の結合を測定した。
【0131】
融合後１３日目から、増殖するハイブリドーマ由来の上清もスクリーニングし、標的タンパク質として膜結合ヒトＨＶＥＭを用いる細胞ベースのＥＬＩＳＡを使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（すなわち、「低親和性」ＩｇＭとは対照的な「高親和性」ＩｇＧ）産生について確認した。この目的のために、安定したヒト全長ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８、上記実施例１ａを参照されたい）を、ＰＢＳ中の２×１０６生存細胞／ｍＬ（０．１×１０６生存細胞／５０μＬ／ウェル）で、半区域平底９６ウェルＥＩＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を使用して、４～８℃で１６～２４時間の間コーティングした。トランスフェクションされていない（すなわち、膜結合ヒトＨＶＥＭ発現に対して陰性）野生型（ＷＴ）ＨＥＫ２９３Ｆコーティング細胞を陰性対照として並行して実行した。ＰＢＳ／０．０５％、ｗ／ｖのＴｗｅｅｎ２０で十分に洗浄した後、プレートをＰＢＳ／０．０５％のＴｗｅｅｎ２０／１％、ｗ／ｖのＢＳＡ（Ｒｏｃｈｅ）で、室温で１時間ブロッキングした。続いて、プレートを５０μＬの未希釈ハイブリドーマ上清／ウェルで、室温で１時間インキュベーションした。ＰＢＳ／０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で十分に洗浄した後、抗体の結合を、室温で１時間、１：５０００に希釈されたホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）、続いて比色検出のためのＴＭＢ基質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のすぐに使用可能な溶液を用いて決定した。１ＭのＨ２ＳＯ４を添加した後、マイクロプレートリーダー（モデルｉＭａｒｋ、ＢｉｏＲａｄ）を使用して、４５０ｎｍの波長（６５５ｎｍの参照波長）で抗体の結合を測定した。
【0132】
融合後１３日目から、増殖するハイブリドーマ由来の上清もスクリーニングし、標的タンパク質として膜結合ヒトＨＶＥＭを用いるＦＡＣＳを使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（すなわち、「低親和性」ＩｇＭとは対照的な「高親和性」ＩｇＧ）産生について確認した。この目的のために、安定したヒト全長ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８、上記実施例１ａを参照されたい）を、５０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ（可能なＦｃγ受容体を遮断する、Ｓｉｇｍａ）を補充した０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）／０．０５％のＮａＮ３を含有する氷冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３）中に１０×１０６細胞／ｍＬで、４℃で１０分間置いた。次いで、１０μＬ／チューブ（すなわち０．１×１０６細胞）のこれらの細胞を１００μＬの未希釈ハイブリドーマ上清／チューブとともに、４℃で３０分間インキュベーションした。トランスフェクションされていない（すなわち、膜結合ヒトＨＶＥＭ発現に対して陰性）ＷＴ ＨＥＫ２９３Ｆ細胞を陰性対照として並行して実行し、抗体特異性を決定した。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、続いて細胞を１：２００に希釈したＰＥコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とともに４℃で３０分間インキュベーションした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中の２％ホルムアルデヒド中で、４℃で３０分間固定した。抗体の結合をフローサイトメーター（モデルＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定した。
【0133】
トリプルＨＶＥＭ陽性（すなわち、ＥＬＩＳＡでｒｈｕＨＶＥＭ＋、ＥＬＩＳＡで膜ＨＶＥＭ＋ＨＥＫ２９３Ｆ細胞、およびＦＡＣＳで膜ＨＶＥＭ＋ＨＥＫ２９３Ｆ細胞）ハイブリドーマを増殖させ、凍結保存した。これらのトリプルＨＶＥＭ陽性ハイブリドーマ由来の上清は、トランスフェクションされていない（すなわち、膜結合ヒトＨＶＥＭ発現に対して陰性）ＷＴ ＨＥＫ２９３Ｆ細胞との反応性を示さなかった。このアプローチを使用して、１８個の抗ヒトＨＶＥＭ特異的抗体産生ハイブリドーマを得た。プロテインＧカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、これらの抗ヒトＨＶＥＭ特異的抗体産生ハイブリドーマ上清からマウス抗体を精製した。ＩｓｏＳｔｒｉｐ（商標）マウスモノクローナル抗体アイソタイピングキット（Ｒｏｃｈｅ）を使用して、重鎖および軽鎖をアイソタイプクラスについてタイピングした。続いて、これらの抗ヒトＨＶＥＭ特異的抗体産生ハイブリドーマ由来の上清および／または精製された抗体を、実施例２に記載されるように、膜結合ヒトＨＶＥＭへのヒトＨＶＥＭリガンド（すなわち、ヒトＢＴＬＡおよびヒトＬＩＧＨＴ）結合に対する効果について、システインリッチドメイン１（ＣＲＤ１）が欠失した膜結合ヒトＨＶＥＭへの結合について、および膜結合カニクイザルＨＶＥＭへの交差反応性について試験した。加えて、これらの抗ヒトＨＶＥＭ特異的抗体産生ハイブリドーマ由来のこれらの精製された抗体の選択を、実施例３に記載されるように、膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達に対する効果、膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ誘導ＮＦκＢシグナル伝達に対する効果、および膜ヒトＢＴＬＡ／ヒトＴＣＲ発現細胞におけるＴＣＲ誘導性ＮＦＡＴシグナル伝達の膜ヒトＢＴＬＡ／ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対する効果について試験した。
【0134】
実施例２．マウス抗ヒトＨＶＥＭモノクローナル抗体のフローサイトメトリーの特徴付け
（ａ）．膜結合全長ヒトＨＶＥＭおよびＣＲＤ１を欠失した膜結合ヒトＨＶＥＭへのマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の結合
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の微細な特異性を分析するために、生成されたマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体によって認識されるエピトープの位置をドメインマッピングによって決定した。（ＨＥＫ由来の）２９３Ｆ細胞の表面上で発現された、ＣＲＤ１切断ヒトＨＶＥＭに結合するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力を、ＦＡＣＳ分析によって決定した。
（ａ）．膜結合全長ヒトＨＶＥＭおよびＣＲＤ１を欠失した膜結合ヒトＨＶＥＭへのマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の結合
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の微細な特異性を分析するために、生成されたマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体によって認識されるエピトープの位置をドメインマッピングによって決定した。（ＨＥＫ由来の）２９３Ｆ細胞の表面上で発現された、ＣＲＤ１切断ヒトＨＶＥＭに結合するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力を、ＦＡＣＳ分析によって決定した。
【0135】
文献（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３、Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ １９９６；８７：４２７－４３６、Ｈｓｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｈｅｍ １９９７、２７２：１３４７１－１３４７４、Ｎａｉｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ １９９８；２３：７４－７９、Ｃａｒｆｉ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌ Ｃｅｌｌ ２００１；８：１６９－１７９、Ｂｏｄｍｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ ２００２；２７：１９－２６、Ｃｏｍｐａａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｈｅｍ ２００５；２８０：３９５５３－３９５６１）に基づいて、ヒトＨＶＥＭの細胞外領域におけるシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）が同定され、ＣＲＤ１、ＣＲＤ２、ＣＲＤ３、および（切断された）ＣＲＤ４とコード化されている。ＣＲＤには、ＡモジュールおよびＢモジュールと呼ばれる、トポロジー的に異なるタイプのモジュールを含有している。Ａ－モジュールはＣ型構造であり、Ｂ－モジュールはＳ型構造である。典型的なＣＲＤは、通常、６つの保存されたシステイン残基を有するＡ１－Ｂ２モジュールまたはＡ２－Ｂ１モジュール（または、Ａ１－Ｂ１のような異なる一対のモジュール）で構成され、数字は、各モジュール内のジスルフィド架橋の数を示す。ヒトＨＶＥＭ－ＣＲＤ１は、Ａ１－Ｂ２モジュール（４２～７５、配列番号１を参照されたい）を含み、ヒトＨＶＥＭ－ＣＲＤ２は、Ａ１－Ｂ２モジュール（７８～１１９、配列番号１を参照されたい）を含み、ヒトＨＶＥＭ－ＣＲＤ３は、Ａ２モジュールおよび非正準（Ｂ１－モジュールを連想させる）Ｂ０モジュール（１２１～１６２、配列番号１を参照されたい）を含み、ヒト切断ＨＶＥＭ－ＣＲＤ４は、Ａ１モジュール（１６５～１７９、配列番号１を参照されたい）のみを含む。２つの異なるヒトＨＶＥＭ構築物を生成し、発現させた。（１）Ｎ末端ＣＲＤ１から始まり（すなわち、ＣＲＤ１Ａ１－Ｂ２モジュールは、アミノ酸４２～７５をカバーし、配列番号１を参照されたい）、したがって「全長」として表され、アミノ酸１－２８３を含む（配列番号１を参照されたい）、全長ヒトＨＶＥＭ構築物、ならびに（２）Ｎ末端ＣＲＤ２から始まり（すなわち、ＣＲＤ２ Ａ１－Ｂ２モジュールは、アミノ酸２２～６３をカバーし、配列番号３を参照されたい）、マウスＩｇシグナルペプチドアミノ酸１～１９に連結されたアミノ酸２０～２２７を含む（配列番号３を参照されたい）、「ＣＲＤ１切断」構築物。ＣＲＤ１切断ヒトＨＶＥＭタンパク質をコードするｃＤＮＡ（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３）を、哺乳動物の発現のために最適化し、ＧＥＮＥＡＲＴ、Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙにより合成した（配列番号４を参照されたい）。このｃＤＮＡを、ｐｃＤＮＡ３．１由来の発現プラスミド中でサブクローニングした。
【0136】
ヒト「全長」ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８）の生成について、実施例１ａに記載する。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に、ヒトＨＶＥＭの「ＣＲＤ１切断」バリアントを一過性にトランスフェクションした。７２時間後、トランスフェクションされた細胞上の表面ヒトＨＶＥＭ発現をＦＡＣＳ分析によって分析した。この目的のために、安定したヒト全長ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞および一過性にヒト「ＣＲＤ１切断」ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞を、５０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ（可能なＦｃγ受容体を遮断する、Ｓｉｇｍａ）を補充した０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）／０．０５％のＮａＮ３を含有する氷冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３）中に１０×１０６細胞／ｍＬで、４℃で１０分間置いた。次いで、１０μＬ／チューブ（すなわち０．１×１０６細胞）のこれらの細胞を１００μＬの未希釈ハイブリドーマ上清／チューブとともに、４℃で３０分間インキュベーションした。１：２０のフィコエリスリン（ＰＥ）コンジュゲートマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（クローン ｅＢｉｏＨＶＥＭ－１２２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を陽性対照抗体として実行した。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、続いて細胞を１：２００に希釈したＰＥコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とともに４℃で３０分間インキュベーションした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中の２％ホルムアルデヒド中で、４℃で３０分間固定した。抗体の結合をフローサイトメーター（モデルＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定した。
【0137】
図１に示すように、１８個の検査したマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体はすべて、トランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞上の全長ヒトＨＶＥＭを認識したが、これらのマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の大部分（１５／１８）は、トランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞上の「ＣＲＤ１切断」ヒトＨＶＥＭ上での結合を示さなかった。対照的に、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３８Ｇ１０、３９Ｂ９、および４７Ｅ１０は、トランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞上の「ＣＲＤ１切断」ヒトＨＶＥＭを認識した。
【0138】
これらの結果により、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３８Ｇ１０、３９Ｂ９、および４７Ｅ１０は、ヒトＨＶＥＭの細胞外ドメインのＣＲＤ２、ＣＲＤ３、ＣＲＤ４、および／または「リンカー」断片（ａａ配列１２４～１４６、配列番号３を参照されたい）における線形および／または非線形／立体配座エピトープを認識するようであるが、一方で、他の生成されたマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体すべて（１５／１８）は、ヒトＨＶＥＭの細胞外ドメインのＣＲＤ１における線形および／または非線形／立体配座エピトープを認識するようであることが実証された。
【0139】
（ｂ）．マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の膜結合カニクイザルＨＶＥＭへの結合
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の多種交差反応性を分析するために、（ＨＥＫ由来）２９３Ｆ細胞の表面上に発現するカニクイザルＨＶＥＭへ結合するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力をＦＡＣＳ分析によって決定した。
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の多種交差反応性を分析するために、（ＨＥＫ由来）２９３Ｆ細胞の表面上に発現するカニクイザルＨＶＥＭへ結合するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力をＦＡＣＳ分析によって決定した。
【0140】
カニクイザルＨＶＥＭタンパク質（配列番号５、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿００５５４５０６１．１を参照されたい）をコードするｃＤＮＡを、哺乳動物発現のために最適化し、ＧＥＮＥＡＲＴ、Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙによって合成した（配列番号６を参照されたい）。このｃＤＮＡを、ｐｃＤＮＡ３．１由来の発現プラスミド中でサブクローニングした。
【0141】
ヒト「全長」ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８）の生成について、実施例１ａに記載する。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にカニクイザル（全長）ＨＶＥＭを一過性にトランスフェクションした。７２時間後、トランスフェクションされた細胞上の表面カニクイザルＨＶＥＭ発現をＦＡＣＳ分析によって分析した。この目的のために、安定したヒト全長ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞および一過性にカニクイザル全長ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞を、５０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ（可能なＦｃγ受容体を遮断する、Ｓｉｇｍａ）を補充した０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）／０．０５％のＮａＮ３を含有する氷冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３）中に１０×１０６細胞／ｍＬで、４℃で１０分間置いた。次いで、１０μＬ／チューブ（すなわち０．１×１０６細胞）のこれらの細胞を１００μＬの未希釈ハイブリドーマ上清／チューブとともに、４℃で３０分間インキュベーションした。１：２０のフィコエリスリン（ＰＥ）コンジュゲートマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（クローン ｅＢｉｏＨＶＥＭ－１２２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を陽性対照抗体として実行した。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、続いて細胞を１：２００に希釈したＰＥコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とともに４℃で３０分間インキュベーションした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中の２％ホルムアルデヒド中で、４℃で３０分間固定した。抗体の結合をフローサイトメーター（モデルＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定した。
【0142】
図１に示すように、１８個の検査したマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体はすべて、トランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞上の全長ヒトＨＶＥＭを認識し、これらのマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の大部分（１４／１８）は、トランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞上のカニクイザル全長ＨＶＥＭに対して様々な程度の交差反応性を示した。対照的に、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、３７Ｄ１１、４１Ｆ１１、および４９Ａ１１は、トランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞上のカニクイザル全長ＨＶＥＭを認識しなかった。
【0143】
これらの結果により、生成されたマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の大部分（１４／１８）が、カニクイザル全長ＨＶＥＭの細胞外ドメインのＣＲＤ１、ＣＲＤ２、ＣＲＤ３、ＣＲＤ４、および／または「リンカー」断片（ａａ配列１８０～２０３、配列番号５を参照されたい）における線形および／または非線形／立体配座エピトープを認識するようであることが実証された。
【0144】
全長カニクイザルＨＶＥＭタンパク質の予測アミノ酸配列（Ｍｅｔ１－Ｓｅｒ２８０、ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿００５５４５０６１．１）は、ヒトＨＶＥＭタンパク質のアミノ酸配列（Ｍｅｔ１－Ｈｉｓ２８３、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３）と８２％の相同性を示し、カニクイザルＨＶＥＭの細胞外領域の予測アミノ酸配列（すなわち、Ｌｅｕ３９－Ｖａｌ２０３、ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿００５５４５０６１．１）は、細胞外領域ヒトＨＶＥＭタンパク質のアミノ酸配列（すなわち、Ｌｅｕ３９－Ｖａｌ２０２、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３）と８７％の相同性を示す。これらの結果により、産生されたマウス抗ヒトＨＶＥＭモノクローナル抗体の大部分（１４／１８）が、トランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞上の相同なカニクイザルＨＶＥＭと交差反応したことが実証された。
【0145】
（ｃ）．膜結合ヒトＨＶＥＭへのヒトＢＴＬＡおよびヒトＬＩＧＨＴの結合に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
細胞外ＨＶＥＭは、２つの空間的リガンド結合領域（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２００９；２２９：２４４－２５８、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２０１１；２４４：１６９－１８７、Ｐａｓｅｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２０１２；１２：４７８－４８５）、ＴＮＦスーパーファミリーに属する正準リガンド（すなわち、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβ）のための１つの領域、およびＩｇスーパーファミリーに属する非正準リガンド（すなわち、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０）のための別の領域を有する。変異分析および分子モデリングにより、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０がＣＲＤ１と相互作用するのに対し、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβ結合は、ＨＶＥＭの反対側の面のＣＲＤ２およびＣＲＤ３に存在することが明らかになった。
細胞外ＨＶＥＭは、２つの空間的リガンド結合領域（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２００９；２２９：２４４－２５８、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２０１１；２４４：１６９－１８７、Ｐａｓｅｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２０１２；１２：４７８－４８５）、ＴＮＦスーパーファミリーに属する正準リガンド（すなわち、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβ）のための１つの領域、およびＩｇスーパーファミリーに属する非正準リガンド（すなわち、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０）のための別の領域を有する。変異分析および分子モデリングにより、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０がＣＲＤ１と相互作用するのに対し、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβ結合は、ＨＶＥＭの反対側の面のＣＲＤ２およびＣＲＤ３に存在することが明らかになった。
【0146】
膜結合ヒトＨＶＥＭへのヒトＢＴＬＡおよびヒトＬＩＧＨＴの結合に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果を分析するために、（ＨＥＫ由来の）２９３Ｆ細胞の表面上に発現されたヒト全長ＨＶＥＭに対するヒトＢＴＬＡおよびヒトＬＩＧＨＴの相互作用を立体的に妨げるマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力をＦＡＣＳ分析によって決定した。
【0147】
ヒト「全長」ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８）の生成について、実施例１ａに記載する。表面ヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされた細胞上の可溶性ヒトＢＴＬＡ、可溶性ヒトＣＤ１６０、および可溶性ヒトＬＩＧＨＴの結合をＦＡＣＳ分析によって分析した。この目的のために、安定したヒト全長ＨＶＥＭトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞を、５０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ（可能なＦｃγ受容体を遮断する、Ｓｉｇｍａ）を補充した０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）／０．０５％のＮａＮ３を含有する氷冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３）中に１０×１０６細胞／ｍＬで、４℃で１０分間置いた。次いで、１０μＬ／チューブ（すなわち、０．１×１０６細胞）のこれらの細胞を、１００μＬの１０μｇ／ｍＬ／チューブのプロテインＧ精製された抗ＨＶＥＭ抗体もしくは１０μｇ／ｍＬ／チューブの陰性対照マウスＩｇＧ１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とともに、またはそれらを含まず４℃で３０分間インキュベーションした。この後（すなわち、洗浄せずに）、細胞を、１μｇ／ｍＬの可溶性ヒトＢＴＬＡ－ヒトＦｃγ融合タンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）または０．１μｇ／ｍＬの可溶性Ｈｉｓタグ化ヒトＬＩＧＨＴ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）とともに、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中で、４℃で３０分間インキュベーションした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を１０μｇ／ｍＬのビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧＦｃγ特異的抗体（ＢＴＬＡ検出、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）とともに、または５μｇ／ｍＬのビオチン化マウス抗Ｈｉｓ抗体（ＬＩＧＨＴ検出、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）とともに、４℃で３０分間インキュベーションした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を１：２００希釈ＰＥコンジュゲートストレプトアビジン（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とともに、４℃で３０分間インキュベーションした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞をＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中の２％のホルムアルデヒド中で４℃で３０分間固定した。膜ヒトＨＶＥＭに対するリガンドＢＴＬＡおよびＬＩＧＨＴの結合を、フローサイトメーター（モデルＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定した。
【0148】
図２および表１に示すように、４つの型のマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体が見出された。（１型の抗体、６／１８）ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭおよびＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ相互作用を遮断しない、（２型の抗体、３／１８）ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ相互作用を遮断し、ＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ相互作用を遮断しない、（３型の抗体、４／１８）ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ相互作用を遮断せず、ＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ相互作用を遮断する、ならびに（４型の抗体、５／１８）ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭおよびＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ相互作用を遮断する。
【0149】
【表1】
【0150】
これらの結果により、複数の特徴（すなわち、１～４型マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（上記参照））を有するヒトリガンド遮断およびリガンド非遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体のパネルが生成されたことが実証された。注目すべきことに、（３６Ｈ１２、４５Ｈ６）のようなＣＲＤ１に結合する抗体は、ｓＢＴＬＡまたはｓＣＤ１６０の結合を遮断しても（５２Ｄ３）しなくてもよい。ＣＲＤ１抗体５２Ｄ３は、実際にはリガンドの結合を増強するように見える。加えて、それは、ＣＲＤ１標的化抗体の異なる機能活性を明確に示す。
【0151】
実施例３．マウス抗ヒトＨＶＥＭモノクローナル抗体の生物学的特徴付け
（ａ）．ヒトＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
ＨＶＥＭシグナル伝達は、ＴおよびＢリンパ球ならびに樹状細胞のような免疫系由来の複数ＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢの活性化を誘導することができ、それらの細胞機能に重要ないくつかの遺伝子をオンにする。ＬＩＧＨＴによるＴリンパ球上のＨＶＥＭのライゲーションは、正の共刺激シグナルを提供し、これは、Ｔリンパ球の生存、増殖、および分化、ならびにＩＦＮγ分泌をもたらす（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。ＬＩＧＨＴによるＢリンパ球上のＨＶＥＭのライゲーションは、ＣＤ４０Ｌ媒介増殖および抗体分泌を共刺激し、それによって体液性応答を増強する（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。ＬＩＧＨＴによる未成熟樹状細胞上のＨＶＥＭのライゲーションは、ＣＤ４０Ｌ媒介成熟、サイトカイン分泌（ＩＬ－１２、ＩＬ－６、およびＴＮＦ－α）、ならびに特異的抗腫瘍ＣＴＬのプライミングおよびＩＦＮ－γの産生を共刺激する（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。
（ａ）．ヒトＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
ＨＶＥＭシグナル伝達は、ＴおよびＢリンパ球ならびに樹状細胞のような免疫系由来の複数ＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢの活性化を誘導することができ、それらの細胞機能に重要ないくつかの遺伝子をオンにする。ＬＩＧＨＴによるＴリンパ球上のＨＶＥＭのライゲーションは、正の共刺激シグナルを提供し、これは、Ｔリンパ球の生存、増殖、および分化、ならびにＩＦＮγ分泌をもたらす（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。ＬＩＧＨＴによるＢリンパ球上のＨＶＥＭのライゲーションは、ＣＤ４０Ｌ媒介増殖および抗体分泌を共刺激し、それによって体液性応答を増強する（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。ＬＩＧＨＴによる未成熟樹状細胞上のＨＶＥＭのライゲーションは、ＣＤ４０Ｌ媒介成熟、サイトカイン分泌（ＩＬ－１２、ＩＬ－６、およびＴＮＦ－α）、ならびに特異的抗腫瘍ＣＴＬのプライミングおよびＩＦＮ－γの産生を共刺激する（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。
【0152】
膜結合ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果を分析するために、ＮＦκＢ応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞（ＨＥＫ２９３、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体のＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達を活性化する能力を検査した。
【0153】
簡潔に述べると、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞を、平底ＴＣ処理白色固体９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に３５，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベーションした。翌日、これらの細胞を洗浄し、続いて、０．００１５～１０μｇ／ｍＬ（３倍希釈ステップ）のマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体とともに、またはそれらを含まずにインキュベーションした。滴定された（すなわち、０、０．００１５～１０μｇ／ｍＬ（３倍希釈ステップ））可溶性Ｈｉｓタグ化ヒトＬＩＧＨＴ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、参照目的のために並行して実行した。３７℃／５％ＣＯ２で６時間インキュベーションした後、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞におけるルシフェラーゼ産生を、ルミノメーターでＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。
【0154】
図３Ａおよび表２に示すように、いくつかの検査された（７／１２）マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体は、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞において（すなわち、可溶性ＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ誘導と比較して）、様々な程度に（ランク順序、番号４８Ｈ６＞３６Ｈ１２＞２９Ｃ２＞８Ｈ５＝４５Ｈ６＝４９Ｇ４＞５２Ｄ３）用量依存的なＮＦκＢ活性化を誘導し、これは、それらのアゴニスト活性を実証した。対照可溶性ヒトＬＩＧＨＴはまた、これらのヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞において用量依存的なＮＦκＢ活性化を示した。対照的に、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号１１Ｈ７、４１Ｆ１１、４３Ｅ１０、４７Ｅ１０、および４９Ａ１１は、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞において（すなわち、可溶性ＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ誘導と比較して）アゴニスト活性を示さなかった。興味深いことに、これらの検査したマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ相互作用を立体的に遮断する能力（実施例２ｃを参照されたい）と、膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞に対するそれらのアゴニスト活性（すなわち、ＮＦκＢ誘導）との間には、関係があるようであった（表２を参照されたい）。
【0155】
【表2】
【0156】
これらの結果から、ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ相互作用を遮断したマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（実施例２ｃを参照されたい）が、可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＫκＢシグナル伝達を模倣することができたことが実証された。注目すべきことに、可溶性ヒトＬＩＧＨＴは、細胞上で発現されたヒトＨＶＥＭを活性化することについて膜結合ＬＩＧＨＴ発現細胞よりもはるかに強力でないことが示されている（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ２００９；１０６：６２４４－６２４９）。
【0157】
（ｂ）．膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ誘導ＮＦκＢシグナル伝達に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ誘導ＮＦκＢシグナル伝達に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果を分析するために、ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞（ＨＥＫ２９３、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／膜ＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達を干渉する（例えば、遮断する、相加効果または相乗効果）する能力を検査した。
膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ誘導ＮＦκＢシグナル伝達に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果を分析するために、ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞（ＨＥＫ２９３、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／膜ＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達を干渉する（例えば、遮断する、相加効果または相乗効果）する能力を検査した。
【0158】
簡潔に述べると、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞を、平底ＴＣ処理白色固体９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に３５，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベーションした。翌日、これらの細胞を洗浄し、続いて、０．３μｇ／ｍＬの可溶性Ｈｉｓタグ化ヒトＬＩＧＨＴ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と組み合わせて、０．００１５～１０μｇ／ｍＬ（３倍希釈ステップ）のマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体とともに、またはそれらを含まずにインキュベーションした（
、実施例２ａおよび図３Ａを参照されたい）。３７℃／５％ＣＯ２で６時間インキュベーションした後、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞におけるルシフェラーゼ産生を、ルミノメーターでＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。
【数6】
【0159】
図３Ｂおよび表３に示すように、非常に弱いアゴニストであるが、中程度のＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ相互作用遮断因子（表２を参照されたい）マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号５２Ｄ３は、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ活性化を弱いが用量依存的に阻害することができた。驚くべきことに、非アゴニストおよびＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ相互作用非遮断因子（表２を参照されたい）マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号４９Ａ１１はまた、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ活性化を弱いが用量依存的に阻害することができた。加えて、非アゴニストおよびＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ相互作用非遮断因子（表２を参照されたい）マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号１１Ｈ７、４１Ｆ１１、４３Ｅ１０、および４７Ｅ１０は、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ活性化に対する効果を示さなかったが、一方で、弱い／中程度／強いアゴニストおよび弱い／中程度／強いＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ相互作用遮断因子（表２を参照されたい）マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号８Ｈ５、２９Ｃ２、３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４は、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ活性化に対する相加効果の可能性を示したが、相乗効果は示さなかった。
【0160】
【表3】
【0161】
これらの結果から、ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ相互作用を遮断するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（ＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ相互作用非遮断因子マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号４９Ａ１１を除く、実施例２ｃも参照されたい）が、可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＫκＢシグナル伝達を遮断または模倣のいずれかを行うことができたことが実証された。
【0162】
（ｃ）．膜ヒトＢＴＬＡ／膜ヒトＴＣＲを発現するＴ細胞におけるＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達の膜ヒトＢＴＬＡ／膜ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
上述のように、ＬＩＧＨＴによるＴリンパ球上のＨＶＥＭのライゲーションは、ＨＶＥＭを介して正の共刺激シグナルを送達するが、ＨＶＥＭによるＴリンパ球上のＢＴＬＡの係合は、ＢＴＬＡを介してＴリンパ球に負の共阻害シグナルを提供する（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。このＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ経路は、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔリンパ球の両方におけるＴＣＲ媒介シグナル伝達を下方調節し、Ｔリンパ球増殖およびサイトカイン産生の減少をもたらす。ＨＶＥＭによるＢＴＬＡのＢリンパ球上の係合は、ＢＣＲの下流のシグナル伝達分子の活性化を低減し、Ｂ細胞増殖を減衰させる（Ｖｅｎｄｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２００９；１８２：１５０９－１５１７）。ＰＤ－１およびＣＴＬＡ４とは異なり、ＢＴＬＡは、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）リンパ球上で発現されない（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。
上述のように、ＬＩＧＨＴによるＴリンパ球上のＨＶＥＭのライゲーションは、ＨＶＥＭを介して正の共刺激シグナルを送達するが、ＨＶＥＭによるＴリンパ球上のＢＴＬＡの係合は、ＢＴＬＡを介してＴリンパ球に負の共阻害シグナルを提供する（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。このＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ経路は、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔリンパ球の両方におけるＴＣＲ媒介シグナル伝達を下方調節し、Ｔリンパ球増殖およびサイトカイン産生の減少をもたらす。ＨＶＥＭによるＢＴＬＡのＢリンパ球上の係合は、ＢＣＲの下流のシグナル伝達分子の活性化を低減し、Ｂ細胞増殖を減衰させる（Ｖｅｎｄｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２００９；１８２：１５０９－１５１７）。ＰＤ－１およびＣＴＬＡ４とは異なり、ＢＴＬＡは、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）リンパ球上で発現されない（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。
【0163】
膜ヒトＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達の膜ヒトＢＴＬＡ／膜ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果を分析するために、ＮＦＡＴ－応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断バイオアッセイ（（１）膜ヒトＨＶＥＭおよび所有の膜ヒトＴＣＲ活性化因子を発現するＣＨＯ－Ｋ１活性化因子細胞（人工抗原提示細胞）の組み合わせ、ならびに（２）膜ヒトＢＴＬＡおよび膜ヒトＴＣＲを発現するＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞、Ｐｒｏｍｅｇａの組み合わせを含む）を使用して、ＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を遮断するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力を検査した。
【0164】
このＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断バイオアッセイでは、膜ヒトＢＴＬＡおよび膜ヒトＴＣＲを発現するＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞をエフェクター細胞として使用し、所有の膜ヒトＨＶＥＭおよび膜ヒトＴＣＲ活性化因子を発現するＣＨＯ－Ｋ１活性化因子細胞を人工抗原提示細胞として使用する。これらの２つの細胞を共培養する場合、エフェクター細胞上のＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ活性化因子を発現する人工抗原提示細胞によって活性化され、ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターの発現がもたらされる。しかしながら、ＢＴＬＡおよびＨＶＥＭライゲーションは、ＴＣＲ活性化を防止し、ＮＦＡＴ応答性ルシフェラーゼ活性を抑制する。この阻害は、遮断抗ＨＶＥＭ抗体への曝露によって特異的に逆転され得る。中和抗ＨＶＥＭ抗体は、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ相互作用を遮断し、Ｔ細胞活性化を促進し（すなわち、「ブレーキを放出する」）、ＮＦＡＴ応答性ルシフェラーゼレポーターの再活性化をもたらす（図４Ａを参照されたい）。
【0165】
簡潔に述べると、ヒトＨＶＥＭおよびヒトＴＣＲ活性化因子を発現するＣＨＯ－Ｋ１活性化因子細胞を、平底ＴＣ処理白色固体９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に４０，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベーションした。翌日、これらの細胞を洗浄し、続いて、０．００１５～１０μｇ／ｍＬ（３倍希釈ステップ）のマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体とともに、またはそれらを含まずにインキュベーションした。次いで、ヒトＢＴＬＡおよびヒトＴＣＲを発現するＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞を５０，０００細胞／ウェルで添加した。３７℃／５％ＣＯ２で６時間インキュベーションした後、ヒトＢＴＬＡおよびヒトＴＣＲを発現するＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞におけるルシフェラーゼ産生を、ルミノメーターでＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。
【0166】
図４Ｂおよび表４に示すように、いくつかの検査された（８／１２）マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体は、ヒトＢＴＬＡおよびヒトＴＣＲを発現するＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞におけるＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を、様々な程度に用量依存的に遮断した（ランク順序、番号４５Ｈ６＞４９Ｇ４＞３６Ｈ１２＞１１Ｈ７＞８Ｈ５＝４１Ｆ１１＝４８Ｈ６＝４９Ａ１１）。対照的に、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号２９Ｃ２、４３Ｅ１０、４７Ｅ１０、および５２Ｄ３は、ヒトＢＴＬＡおよびヒトＴＣＲを発現するＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞におけるＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害に対して効果を示さなかった。興味深いことに、これらの検査されたマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の可溶性ヒトＢＴＬＡ／ヒトＨＶＥＭ相互作用を立体的に遮断する能力（実施例２ｃを参照されたい）と、ＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃヒトＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断バイオアッセイにおけるそれらの遮断能（すなわち、ＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害の廃止）との間に関係があるようであった（表４を参照されたい）。
【0167】
【表4】
【0168】
これらの結果から、ヒトＢＴＬＡ／ヒトＨＶＥＭ相互作用を遮断したマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（実施例２ｃを参照されたい）が、ＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達のヒトＢＴＬＡ／ヒトＨＶＥＭ媒介阻害を遮断することができたことが実証された。
【0169】
実施例４．ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭモノクローナル抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の分子遺伝学的特徴付け
ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４を産生するハイブリドーマ細胞をＰＢＳで洗浄し、５×１０６細胞を含有するマイクロバイアルに等分し、－８０℃でペレットとして保管した。これらの細胞ペレットを使用して、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用することによってＲＮＡを単離した。ＲＮＡ濃度を決定し（Ａ２６０ｎｍ）、ＲＮＡを－８０℃で保管した。逆転写酵素によって、ｃＤＮＡを、ＲｅｖｅｒｔＡｉｄ（商標）Ｈ Ｍｉｎｕｓ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）を使用して１μｇのＲＮＡから合成し、－８０℃で保管した。アイソタイプマウスＩｇＧ１／カッパに基づいて、表５に示すようなプライマーを、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の可変（Ｖ）領域を増幅するように設計した。
ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４を産生するハイブリドーマ細胞をＰＢＳで洗浄し、５×１０６細胞を含有するマイクロバイアルに等分し、－８０℃でペレットとして保管した。これらの細胞ペレットを使用して、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用することによってＲＮＡを単離した。ＲＮＡ濃度を決定し（Ａ２６０ｎｍ）、ＲＮＡを－８０℃で保管した。逆転写酵素によって、ｃＤＮＡを、ＲｅｖｅｒｔＡｉｄ（商標）Ｈ Ｍｉｎｕｓ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）を使用して１μｇのＲＮＡから合成し、－８０℃で保管した。アイソタイプマウスＩｇＧ１／カッパに基づいて、表５に示すようなプライマーを、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の可変（Ｖ）領域を増幅するように設計した。
【0170】
【表5】
【0171】
プライマー３８３、３８７、および３８９は、マウス抗体の軽鎖のシグナルペプチドとアニーリングするように設計されたセンスプライマーであり、プライマー３９４は、マウスκ軽鎖の定常領域とアニーリングするアンチセンスプライマーである。プライマー４０４、４０７、４０８、および４０９は、マウス抗体の重鎖のシグナルペプチドとアニーリングするセンスプライマーであり、プライマー４１６は、マウスＩｇＧ１重鎖の定常領域とアニーリングするように設計されたアンチセンスプライマーである。様々なＰＣＲを、表５に示すプライマーの組み合わせを使用して行った。生成されたＰＣＲ産物を、ｐＣＲ（商標）－Ｂｌｕｎｔ ＩＩ－ＴＯＰＯ（登録商標）ベクター中にサブクローニングした。続いて、クローニングされた挿入物を配列決定した。
【0172】
重鎖および軽鎖の配列反応から、それぞれ、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体３６Ｈ１２のアミノ酸配列の合計８および４個の情報配列を得た。この情報に基づいて、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体３６Ｈ１２のＶＨおよびＶＬ領域のコンセンサスアミノ酸配列を決定し、それぞれ、配列番号１６および１７に記載されている。マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体３６Ｈ１２のＶＨおよびＶＬ領域のＣＤＲのアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１８～２０および２１～２３に記載されている。
【0173】
重鎖および軽鎖の両方の配列反応から、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４５Ｈ６の合計４つの情報源配列を得た。この情報に基づいて、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４５Ｈ６のＶＨおよびＶＬ領域のコンセンサスアミノ酸配列を決定し、それぞれ、配列番号２４および２５に記載されている。マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４５Ｈ６のＶＨおよびＶＬ領域のＣＤＲのアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号２６～２８および２９～３１に記載されている。
【0174】
重鎖および軽鎖の配列反応から、それぞれ、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４８Ｈ６の合計５および４個の情報配列を得た。この情報に基づいて、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４８Ｈ６のＶＨおよびＶＬ領域のコンセンサスアミノ酸配列を決定し、それぞれ、配列番号３２および３３に記載されている。マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４８Ｈ６のＶＨおよびＶＬ領域のＣＤＲのアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３４～３６および３７～３９に記載されている。
【0175】
重鎖および軽鎖の配列反応から、それぞれ、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体１１Ｈ７の合計９および３個の情報配列を得た。この情報に基づいて、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体１１Ｈ７のＶＨおよびＶＬ領域のコンセンサスアミノ酸配列を決定し、それぞれ、配列番号４０および４１に記載されている。マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体１１Ｈ７のＶＨおよびＶＬ領域のＣＤＲのアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号４２～４４および４５～４７に記載されている。
【0176】
重鎖および軽鎖の配列反応から、それぞれ、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４９Ｇ４の合計５および３個の情報配列を得た。この情報に基づいて、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４９Ｇ４のＶＨおよびＶＬ領域のコンセンサスアミノ酸配列を決定し、それぞれ、配列番号４８および４９に記載されている。マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４９Ｇ４のＶＨおよびＶＬ領域のＣＤＲのアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号５０～５２および５３～５５に記載されている。
【0177】
実施例５．ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒトＩｇＧ４／カッパ（すなわち、マウス定常ＩｇＧ１／カッパ領域をヒト定常ＩｇＧ４／カッパ領域と交換する）抗ヒトＨＶＥＭモノクローナル抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の生成
ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の決定されたマウスＶ領域（上記実施例４を参照されたい）に基づいて、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体バージョンを生成するように設計が作成された。この目的のために、哺乳動物の発現に最適化されたｃＤＮＡ配列について、配列番号５６（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖３６Ｈ１２をコードする）、配列番号５７（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖４５Ｈ６をコードする）、配列番号５８（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖４８Ｈ６をコードする）、配列番号５９（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖１１Ｈ７をコードする）、および配列番号６０（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖４９Ｇ４をコードする）、ならびに配列番号６１（キメラマウス／ヒト軽κ鎖３６Ｈ１２をコードする）、配列番号６２（キメラマウス／ヒト軽κ鎖４５Ｈ６をコードする）、配列番号６３（キメラマウス／ヒト軽κ鎖４８Ｈ６をコードする）、および配列番号６４（キメラマウス／ヒト軽κ鎖１１Ｈ７をコードする）、および配列番号６５（キメラマウス／ヒト軽κ鎖４９Ｇ４をコードする）をＧＥＮＥＡＲＴ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で注文し、これはヒトシグナルペプチド、それに続くヒト安定化ＩｇＧ４定常領域に連結されたマウスＶＨ鎖（すなわち、Ｓ２３９Ｐ、Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ ｉｎ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．１，ｐｐ．１０５－１０８，１９９３による）、またはそれに続くヒトカッパ定常領域に連結されたマウスＶＬ鎖のいずれかをコードした。好適な制限酵素を使用して、生成されたｃＤＮＡをｐｃＤＮＡ３．１由来発現プラスミド中にサブクローニングした。続いて、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、キメラ抗体を２９３－Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において一過性に発現させた。発現されたキメラ抗ヒトＨＶＥＭ抗体を、従来の親和性クロマトグラフィープロテインＡカラムを使用して、上清から精製した。その後、ＬＡＬ発色エンドポイントアッセイ（Ｈｙｃｕｌｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用してＬＰＳレベルを測定し、発明者らの精製したすべてのキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体（すなわち、３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４）は、＜０．０００５ＥＵ ＬＰＳ／μｇキメラＩｇＧを含有した。
ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の決定されたマウスＶ領域（上記実施例４を参照されたい）に基づいて、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体バージョンを生成するように設計が作成された。この目的のために、哺乳動物の発現に最適化されたｃＤＮＡ配列について、配列番号５６（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖３６Ｈ１２をコードする）、配列番号５７（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖４５Ｈ６をコードする）、配列番号５８（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖４８Ｈ６をコードする）、配列番号５９（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖１１Ｈ７をコードする）、および配列番号６０（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖４９Ｇ４をコードする）、ならびに配列番号６１（キメラマウス／ヒト軽κ鎖３６Ｈ１２をコードする）、配列番号６２（キメラマウス／ヒト軽κ鎖４５Ｈ６をコードする）、配列番号６３（キメラマウス／ヒト軽κ鎖４８Ｈ６をコードする）、および配列番号６４（キメラマウス／ヒト軽κ鎖１１Ｈ７をコードする）、および配列番号６５（キメラマウス／ヒト軽κ鎖４９Ｇ４をコードする）をＧＥＮＥＡＲＴ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で注文し、これはヒトシグナルペプチド、それに続くヒト安定化ＩｇＧ４定常領域に連結されたマウスＶＨ鎖（すなわち、Ｓ２３９Ｐ、Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ ｉｎ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．１，ｐｐ．１０５－１０８，１９９３による）、またはそれに続くヒトカッパ定常領域に連結されたマウスＶＬ鎖のいずれかをコードした。好適な制限酵素を使用して、生成されたｃＤＮＡをｐｃＤＮＡ３．１由来発現プラスミド中にサブクローニングした。続いて、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、キメラ抗体を２９３－Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において一過性に発現させた。発現されたキメラ抗ヒトＨＶＥＭ抗体を、従来の親和性クロマトグラフィープロテインＡカラムを使用して、上清から精製した。その後、ＬＡＬ発色エンドポイントアッセイ（Ｈｙｃｕｌｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用してＬＰＳレベルを測定し、発明者らの精製したすべてのキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体（すなわち、３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４）は、＜０．０００５ＥＵ ＬＰＳ／μｇキメラＩｇＧを含有した。
【0178】
キメラアミノ酸配列については、配列番号６６（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖３６Ｈ１２）、配列番号６７（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖４５Ｈ６）、配列番号６８（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖４８Ｈ６）、配列番号６９（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖１１Ｈ７）、および配列番号７０（キメラマウス／ヒト重ＩｇＧ４鎖４９Ｇ４）、ならびに配列番号７１（キメラマウス／ヒト軽κ鎖３６Ｈ１２）、配列番号７２（キメラマウス／ヒト軽κ鎖４５Ｈ６）、配列番号７３（キメラマウス／ヒト軽κ鎖４８Ｈ６）、配列番号７４（キメラマウス／ヒト軽κ鎖１１Ｈ７）、および配列番号７５（キメラマウス／ヒト軽κ鎖４９Ｇ４）を参照されたい。
【0179】
実施例６．ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の結合および生物学的特徴付け
（ａ）．膜結合ヒトＨＶＥＭに対するＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の相対的結合親和性
ヒトＨＶＥＭに対する精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の相対的結合親和性を決定するために、ＦＡＣＳ分析を使用した。
（ａ）．膜結合ヒトＨＶＥＭに対するＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の相対的結合親和性
ヒトＨＶＥＭに対する精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の相対的結合親和性を決定するために、ＦＡＣＳ分析を使用した。
【0180】
この目的のために、安定したヒト全長ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８、上記実施例１（ａ）を参照されたい）を、５０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ（可能なＦｃγ受容体を遮断する、Ｓｉｇｍａ）を補充した０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）／０．０５％のＮａＮ３を含有する氷冷ＰＢＳ（ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３）中に１０×１０６細胞／ｍＬで、４℃で１０分間置いた。次いで、１０μＬ／チューブ（すなわち、０．１×１０６細胞）のこれらの細胞を、１００μＬの滴定された（ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中）精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体／チューブとともに、またはそれらを含まず４℃で３０分間インキュベーションした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、１：２００希釈ＰＥコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とともに４℃で３０分間インキュベーションした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞をＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中の４％ホルムアルデヒド中で４℃で３０分間固定した。膜ヒトＨＶＥＭ上のキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の結合（ジオ平均蛍光強度）を、フローサイトメーター（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定した。比較のために、精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体対応物番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７および４９Ｇ４を並行して実行し、それらの結合を実施例２（ａ）に記載されるように監視した。
【0181】
図５に示すように、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、膜ヒトＨＶＥＭへ用量依存的に結合した。それらの結合プロファイルに基づいて、以下の相対的親和性ランキングが見出された（高い親和性から低い親和性まで）：４５Ｈ６＝４９Ｇ４＞３６Ｈ１２＝４８Ｈ６＞１１Ｈ７。比較のために、それらのＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体対応物番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４もまた、膜ヒトＨＶＥＭへの用量依存的結合を示し、非常に同様の相対的親和性ランキング、すなわち、４５Ｈ６＝４９Ｇ４＞３６Ｈ１２＝４８Ｈ６＞１１Ｈ７を実証した。より具体的には、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号４５Ｈ６、４９Ｇ４、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および１１Ｈ７は、それぞれ３０６、３１２、４３３、４７２、および６３０ｎｇ／ｍＬの以下の相対的親和性（すなわち、最大半量結合ＥＣ５０）をもたらし、対応するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号４５Ｈ６、４９Ｇ４、３６Ｈ１２、４８Ｈ６、および１１Ｈ７は、それぞれ２６０、２６６、４３０、３５６、および５３２ｎｇ／ｍＬの相対的親和性をもたらし、これは、キメラ化プロセス中に、膜結合ＨＶＥＭに対するＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４が変化しないままであるようであることを示した。
【0182】
ｂ）．膜結合ヒトＨＶＥＭへのヒトＢＴＬＡ、ヒトＣＤ１６０、ヒトＬＩＧＨＴ、およびヒトＴＮＦβの結合に対するＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
細胞外ＨＶＥＭは、２つの空間的リガンド結合領域（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２００９；２２９：２４４－２５８、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２０１１；２４４：１６９－１８７、Ｐａｓｅｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２０１２；１２：４７８－４８５）、ＴＮＦスーパーファミリーに属する正準リガンド（すなわち、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβ）のための１つの領域、およびＩｇスーパーファミリーに属する非正準リガンド（すなわち、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０）のための別の領域を有する。変異分析および分子モデリングにより、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０がＣＲＤ１と相互作用するのに対し、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβ結合は、ＨＶＥＭの反対側の面のＣＲＤ２およびＣＲＤ３に存在することが明らかになった。
細胞外ＨＶＥＭは、２つの空間的リガンド結合領域（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２００９；２２９：２４４－２５８、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２０１１；２４４：１６９－１８７、Ｐａｓｅｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２０１２；１２：４７８－４８５）、ＴＮＦスーパーファミリーに属する正準リガンド（すなわち、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβ）のための１つの領域、およびＩｇスーパーファミリーに属する非正準リガンド（すなわち、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０）のための別の領域を有する。変異分析および分子モデリングにより、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０がＣＲＤ１と相互作用するのに対し、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβ結合は、ＨＶＥＭの反対側の面のＣＲＤ２およびＣＲＤ３に存在することが明らかになった。
【0183】
膜結合ヒトＨＶＥＭへのヒトＢＴＬＡ、ヒトＣＤ１６０、ヒトＬＩＧＨＴ、およびヒトＴＮＦβの結合に対する精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の効果を分析するために、（ＨＥＫ由来の）２９３Ｆ細胞の表面上に発現されたヒト全長ＨＶＥＭに対する、ヒトＢＴＬＡ、ヒトＣＤ１６０、ヒトＬＩＧＨＴ、およびヒトＴＮＦβ（またはＬＴαとも呼ばれる）の相互作用を立体的に妨げるキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力を、ＦＡＣＳ分析によって決定した。
【0184】
ヒト「全長」ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８）の生成について、実施例１ａに記載する。表面ヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされた細胞上の可溶性ヒトＢＴＬＡ、可溶性ヒトＣＤ１６０、可溶性ヒトＬＩＧＨＴ、および可溶性ヒトＴＮＦβの結合をＦＡＣＳ分析によって分析した。この目的のために、安定したヒト全長ＨＶＥＭトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞を、５０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ（可能なＦｃγ受容体を遮断する、Ｓｉｇｍａ）を補充した０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）／０．０５％のＮａＮ３を含有する氷冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３）中に１０×１０６細胞／ｍＬで、４℃で１０分間置いた。次いで、１０μＬ／チューブ（すなわち、０．１×１０６細胞）のこれらの細胞を、１００μＬの１０μｇ／ｍＬ／チューブの精製されたキメラマウス／ヒト抗ＨＶＥＭ抗体もしくは１０μｇ／ｍＬ／チューブのヒトＩｇＧ４／κ（Ｓｉｇｍａ）陰性アイソタイプ対照とともに、またはそれらを含まず４℃で３０分間インキュベーションした。この後（すなわち、洗浄せずに）、続いて細胞を、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中で１μｇ／ｍＬの可溶性ビオチン化ヒトＢＴＬＡ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）、１０μｇ／ｍＬの可溶性Ｈｉｓタグ化ヒトＣＤ１６０（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）、１μｇ／ｍＬ可溶性Ｈｉｓタグ化ヒトＬＩＧＨＴ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）、または０．１μｇ／ ｍＬの可溶性ビオチン化ヒトＴＮＦβ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）とともに４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、１：２００希釈ＰＥ結合ストレプトアビジン（ＢＴＬＡおよびＴＮＦβを検出、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）またはビオチン化マウス抗Ｈｉｓ抗体（ＣＤ１６０およびＬＩＧＨＴを検出、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）とともに１０μｇ／ｍＬで、４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、１：２００希釈ＰＥ結合ストレプトアビジン（ＣＤ１６０およびＬＩＧＨＴを検出、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とともに４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中の４％ホルムアルデヒド中で、４℃で３０分間固定した。膜ヒトＨＶＥＭ上のリガンドＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβの結合を、フローサイトメーター（モデルＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定した。比較のために、１０μｇ／ｍＬ／チューブでの精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体対応物番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４ならびに１０μｇ／ｍＬ／チューブでのマウスＩｇＧ１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）陰性アイソタイプ対照を並行して実行した。
【0185】
図６Ａに示すように、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、膜ヒトＨＶＥＭへのヒトＢＴＬＡの結合を防止し（すなわち、＞９５％の遮断）、それらのＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体対応物番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４と相当であった（すなわち、＞９５％の遮断）。
【0186】
図６Ｂに示すように、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、膜ヒトＨＶＥＭへのヒトＣＤ１６０の結合を部分的に防止し（すなわち、
の遮断）、それらのＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体対応物番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４と相当であった（すなわち、
の遮断）。
【数7】
【数8】
【0187】
図６Ｃに示すように、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４は、膜ヒトＨＶＥＭへのヒトＬＩＧＨＴの結合を部分的に防止し（すなわち、
の遮断）、それらのＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体対応物番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４と相当であった（すなわち、
の遮断）。対照的に、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号１１Ｈ７は、膜ヒトＨＶＥＭへのヒトＬＩＧＨＴの結合を防止せず、驚くべきことに、増強するか、または安定化するようであり（すなわち、
増強）、それらのＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体対応物番号１１Ｈ７と相当であった（すなわち、
増強）。
【数9】
【数10】
【数11】
【数12】
【0188】
図６Ｄに示すように、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、膜ヒトＨＶＥＭへのヒトＴＮＦβの結合を様々な程度に（順序、番号３６Ｈ１２＝４５Ｈ６＝４８Ｈ６（すなわち、＞９４％遮断）＞４９Ｇ４（すなわち、＞８０％遮断）＞１１Ｈ７（すなわち、＞５５％遮断））（部分的に）防止し、これは、それらのＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体対応物番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４（ランク順序、番号３６Ｈ１２＝４５Ｈ６＝４８Ｈ６（すなわち、＞９５％遮断）＞４９Ｇ４（すなわち、＞８５％遮断）＞１１Ｈ７（すなわち、＞６０％遮断）と相当であった。
【0189】
ｃ）．膜結合ヒトＨＶＥＭからの事前に結合されたヒトＢＴＬＡ、ヒトＣＤ１６０、ヒトＬＩＧＨＴ、およびヒトＴＮＦβの取り換えに対するＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４が、膜結合ヒトＨＶＥＭから事前に結合されたヒトＢＴＬＡ、ヒトＣＤ１６０、ヒトＬＩＧＨＴ、およびヒトＴＮＦβを取り替えることができるかどうかを分析するために、（ＨＥＫ由来の）２９３Ｆ細胞の表面上に発現されたヒト全長ＨＶＥＭからのヒトＢＴＬＡ、ヒトＣＤ１６０、ヒトＬＩＧＨＴ、およびヒトＴＮＦβ（またはＬＴαとも呼ばれる）の取り換えに対するキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果を、ＦＡＣＳ分析によって決定した。
精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４が、膜結合ヒトＨＶＥＭから事前に結合されたヒトＢＴＬＡ、ヒトＣＤ１６０、ヒトＬＩＧＨＴ、およびヒトＴＮＦβを取り替えることができるかどうかを分析するために、（ＨＥＫ由来の）２９３Ｆ細胞の表面上に発現されたヒト全長ＨＶＥＭからのヒトＢＴＬＡ、ヒトＣＤ１６０、ヒトＬＩＧＨＴ、およびヒトＴＮＦβ（またはＬＴαとも呼ばれる）の取り換えに対するキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果を、ＦＡＣＳ分析によって決定した。
【0190】
ヒト「全長」ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８）の生成について、実施例１ａに記載する。表面ヒトＨＶＥＭをトランスフェクションされた細胞上からの事前に結合された可溶性ヒトＢＴＬＡ、可溶性ヒトＣＤ１６０、可溶性ヒトＬＩＧＨＴ、および可溶性ヒトＴＮＦβの取り換えをＦＡＣＳ分析によって分析した。この目的のために、安定したヒト全長ＨＶＥＭトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞を、５０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ（可能なＦｃγ受容体を遮断する、Ｓｉｇｍａ）を補充した０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）／０．０５％のＮａＮ３を含有する氷冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３）中に１０×１０６細胞／ｍＬで、４℃で１０分間置いた。次いで、１０μＬ／チューブ（すなわち、０．１×１０６細胞）のこれらの細胞を、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中で、５０μＬの２μｇ／ｍＬ／チューブの可溶性ビオチン化ヒトＢＴＬＡ－ヒトＦｃγ融合タンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）とともに、もしくはそれを含まずに、２０μｇ／ｍＬ／チューブの可溶性Ｈｉｓタグ化ヒトＣＤ１６０（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）とともに、２μｇ／ｍＬ／チューブの可溶性Ｈｉｓタグ化ヒトＬＩＧＨＴ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）とともに、または０．２μｇ／ｍＬ／チューブの可溶性ビオチン化ヒトＴＮＦβ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）とともに、４℃で３０分間インキュベーションした。この後（すなわち、洗浄せずに）、続いて細胞を、５０μＬの２０μｇ／ｍＬ／チューブの精製されたキメラマウス／ヒト抗ＨＶＥＭ抗体または２０μｇ／ｍＬ／チューブのヒトＩｇＧ４／κ（Ｓｉｇｍａ）陰性アイソタイプ対照とともに４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、１：２００希釈ＰＥ結合ストレプトアビジン（ＢＴＬＡおよびＴＮＦβを検出、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）またはビオチン化マウス抗Ｈｉｓ抗体（ＣＤ１６０およびＬＩＧＨＴを検出、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）とともに１０μｇ／ｍＬで、４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、１：２００希釈ＰＥ結合ストレプトアビジン（ＢＴＬＡおよびＴＮＦβを検出、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）またはビオチン化マウス抗Ｈｉｓ抗体（ＣＤ１６０およびＬＩＧＨＴを検出、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）とともに１０μｇ／ｍＬで、４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、１：２００希釈ＰＥ結合ストレプトアビジン（ＣＤ１６０およびＬＩＧＨＴを検出、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とともに４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で十分に洗浄した後、細胞を、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３中の４％ホルムアルデヒド中で、４℃で３０分間固定した。膜ヒトＨＶＥＭ上のリガンドＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴおよびＴＮＦβの残留結合を、フローサイトメーター（モデルＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定した。比較のために、１０μｇ／ｍＬ／チューブでの精製されたＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体対応物番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４ならびに１０μｇ／ｍＬ／チューブでのマウスＩｇＧ１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）陰性アイソタイプ対照を並行して実行した。
【0191】
図７Ａに示すように、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、膜ヒトＨＶＥＭから事前に結合されたヒトＢＴＬＡを取り替えた（すなわち、＞９５％の取り換え）。
【0192】
図７Ｂに示すように、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、膜ヒトＨＶＥＭから事前に結合されたヒトＣＤ１６０を部分的に取り替えた（すなわち、
の取り換え）。
【数13】
【0193】
図７Ｃに示すように、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４は、膜ヒトＨＶＥＭから事前に結合されたヒトＬＩＧＨＴを取り換えなかった（すなわち、＜２０％の取り換え）。対照的に、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号１１Ｈ７は、膜ヒトＨＶＥＭから事前に結合されたヒトＬＩＧＨＴを取り換えなかったが、驚くべきことに、膜ヒトＨＶＥＭへの事前に結合されたヒトＬＩＧＨＴを増強または安定化するようであった（すなわち、
の増強）。
【数14】
【0194】
図７Ｄに示すように、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４は、様々な程度に（ランク順序、番号３６Ｈ１２＝４５Ｈ６＝４８Ｈ６（すなわち、＞９０％の取り換え）＞４９Ｇ４（すなわち、＞５５％の取り換え））膜ヒトＨＶＥＭから事前に結合されたヒトＴＮＦβを（部分的に）取り替えた。対照的に、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号１１Ｈ７は、膜ヒトＨＶＥＭから事前に結合されたヒトＴＮＦβを取り替えないようであった（すなわち、＜２０％の置換）。
【0195】
（ｄ）．膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達に対する、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
膜結合ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達に対するキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の効果を分析するために、ＮＦκＢ－応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞（ＨＥＫ２９３、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体のＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達を活性化する能力を検査した。
膜結合ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達に対するキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の効果を分析するために、ＮＦκＢ－応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞（ＨＥＫ２９３、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体のＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達を活性化する能力を検査した。
【0196】
簡潔に述べると、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞を、平底ＴＣ処理白色固体９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に３５，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベーションした。翌日、これらの細胞を洗浄し、続いて、０．００１５～１０μｇ／ｍＬ（３倍希釈ステップ）のキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４とともに、またはそれらを含まずにインキュベーションした。滴定された（すなわち、０、０．００１５～１０μｇ／ｍＬ（３倍希釈ステップ））可溶性Ｈｉｓタグ化ヒトＬＩＧＨＴ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、参照目的のために並行して実行した。３７℃／５％ＣＯ２で６時間インキュベーションした後、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞におけるルシフェラーゼ産生を、ルミノメーターでＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。
【0197】
図８Ａに示すように、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号４８Ｈ６のみが、ヒトＨＶＥＭを発現するＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞において、弱い用量依存的なＮＦκＢ活性化を誘導した（すなわち、可溶性ＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ誘導と比較して）が、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、ヒトＨＶＥＭを発現するＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞において、アゴニスト活性を示さなかったか、非常に弱いアゴニスト活性を示した（すなわち、可溶性ＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ誘導と比較して）。対照可溶性ヒトＬＩＧＨＴはまた、これらのヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞において用量依存的なＮＦκＢ活性化を示した。注目すべきことに、可溶性ヒトＬＩＧＨＴは、細胞上で発現されたヒトＨＶＥＭを活性化することについて膜結合ＬＩＧＨＴ発現細胞よりもはるかに強力でないことが示されている（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ２００９；１０６：６２４４－６２４９）。
【0198】
膜結合ＨＶＥＭに対するＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の結合親和性は、キメラ化プロセス中に変化しないままであるようであったが（実施例６ａを参照されたい）、それらのヒト定常ＩｇＧ４ Ｆｃ尾部を有するＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４は、明らかにＮＦκＢシグナル伝達活性を示したそれらのマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体ＩｇＧ１対応物（実施例３ａを参照されたい）とは対照的に、可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＫκＢシグナル伝達を模倣しなかったか、または弱くしか模倣することができなかったことは驚くべきことであった。
【0199】
（ｅ）．膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達に対する、架橋ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
ヒトＣＤ４０およびＯＸ４０／ＣＤ１３４（両方ともヒトＨＶＥＭ／ＣＤ２７０のようなＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー）に対する抗体の架橋は、膜結合ＣＤ４０およびＯＸ４０発現細胞への結合時に、それらのアゴニスト活性を増強し得る（すなわち、それぞれ、ＣＯ４０ＬおよびＯＸ４０Ｌの媒介効果を模倣する）ことは周知である（Ｘｕ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０１８；３３：６６４－６７５、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２０１６；２９１：２７１３４－２７１４６）。ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４での上記の驚くべき結果（すなわち、ＮＦκＢシグナル伝達活性を明確に示したマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の対応物とは対照的に、可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＫκＢシグナル伝達を模倣しなかったか、または弱くしか模倣することができなかった（それぞれ実施例６ｂおよび３ａを参照されたい））のために、（１）キメラマウス／ヒト、および（２）完全マウスバージョンの抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の抗体凝集の程度を、サイズ排除クロマトグラフィー分析を使用して決定し、以下を実証した。（１）キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４について、それぞれ、２．３％、０．７％、１．２％、１．６％、および９．４％の凝集、および（２）完全マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４について、それぞれ３６．３％、２５．８％、１９．９％、１２．４％、および１４．８％の凝集。マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４調製物における比較的高い抗体凝集度は、ＮＦκＢ応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞におけるマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４のアゴニスト活性が、抗体凝集によって引き起こされる人為的効果（すなわち、抗体架橋効果を模倣する）であることを強く示唆した。この仮説を立証するために、非架橋および架橋ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４（抗体凝集度が比較的低い）を、ＮＦκＢ－応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞を使用して調べた。
ヒトＣＤ４０およびＯＸ４０／ＣＤ１３４（両方ともヒトＨＶＥＭ／ＣＤ２７０のようなＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー）に対する抗体の架橋は、膜結合ＣＤ４０およびＯＸ４０発現細胞への結合時に、それらのアゴニスト活性を増強し得る（すなわち、それぞれ、ＣＯ４０ＬおよびＯＸ４０Ｌの媒介効果を模倣する）ことは周知である（Ｘｕ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０１８；３３：６６４－６７５、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２０１６；２９１：２７１３４－２７１４６）。ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４での上記の驚くべき結果（すなわち、ＮＦκＢシグナル伝達活性を明確に示したマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の対応物とは対照的に、可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＫκＢシグナル伝達を模倣しなかったか、または弱くしか模倣することができなかった（それぞれ実施例６ｂおよび３ａを参照されたい））のために、（１）キメラマウス／ヒト、および（２）完全マウスバージョンの抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の抗体凝集の程度を、サイズ排除クロマトグラフィー分析を使用して決定し、以下を実証した。（１）キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４について、それぞれ、２．３％、０．７％、１．２％、１．６％、および９．４％の凝集、および（２）完全マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４について、それぞれ３６．３％、２５．８％、１９．９％、１２．４％、および１４．８％の凝集。マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４調製物における比較的高い抗体凝集度は、ＮＦκＢ応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞におけるマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、および４９Ｇ４のアゴニスト活性が、抗体凝集によって引き起こされる人為的効果（すなわち、抗体架橋効果を模倣する）であることを強く示唆した。この仮説を立証するために、非架橋および架橋ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４（抗体凝集度が比較的低い）を、ＮＦκＢ－応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞を使用して調べた。
【0200】
簡潔に述べると、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞を、平底ＴＣ処理白色固体９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に３５，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベーションした。翌日、これらの細胞を洗浄し、続いて、０．０１６～１０μｇ／ｍＬ（５倍希釈ステップ）のキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４とともに、またはそれらを含まずにインキュベーションし、それは１０μｇ／ｍＬの架橋ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とともに、またはそれを含まずに、室温で１５～３０分間前処理された。滴定された（すなわち、０、０．０１６～１０μｇ／ｍＬ（５倍希釈ステップ））可溶性Ｈｉｓタグ化ヒトＬＩＧＨＴ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）を、参照目的のために並行して実行した。３７℃／５％ＣＯ２で６時間インキュベーションした後、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞におけるルシフェラーゼ産生を、ルミノメーターでＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。
【0201】
図８Ｂに示すように、非架橋キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号４８Ｈ６のみが、ヒトＨＶＥＭを発現するＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞において、弱い用量依存的なＮＦκＢ活性化を誘導した（すなわち、可溶性ＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ誘導と比較して）が、非架橋キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、ヒトＨＶＥＭを発現するＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞において、アゴニスト活性を示さなかったか、非常に弱いアゴニスト活性を示した（すなわち、可溶性ＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ誘導と比較して）。対照的に、すべての検査した架橋キメラマウス／ヒトマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体は、ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞を発現するヒトＨＶＥＭにおいて用量依存的なＮＦκＢ活性化を誘導した（すなわち、可溶性ＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ誘導と比較して）。対照可溶性ヒトＬＩＧＨＴはまた、これらのヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞において用量依存的なＮＦκＢ活性化を示した。注目すべきことに、可溶性ヒトＬＩＧＨＴは、細胞上で発現されたヒトＨＶＥＭを活性化することについて膜結合ＬＩＧＨＴ発現細胞よりもはるかに強力でないことが示されている（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ２００９；１０６：６２４４－６２４９）。
【0202】
これらの結果から、非架橋キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４（抗体凝集度が比較的低い）が、可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＫκＢシグナル伝達を模倣しなかったか、または弱くしか模倣することができなかった一方で、架橋すると、これらのキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４が、可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＫκＢシグナル伝達を模倣することができたことが実証された。注目すべきことに、可溶性ヒトＬＩＧＨＴは、細胞上で発現されたヒトＨＶＥＭを活性化することについて膜結合ＬＩＧＨＴ発現細胞よりもはるかに強力でないことが示されている（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ２００９；１０６：６２４４－６２４９）。
【0203】
（ｆ）．膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ誘導ＮＦκＢシグナル伝達に対する、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ誘導ＮＦκＢシグナル伝達に対するキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の効果を分析するために、ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞（ＨＥＫ２９３、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／膜ＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達を干渉する（例えば、遮断する、相加効果または相乗効果）する能力を検査した。
膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ誘導ＮＦκＢシグナル伝達に対するキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の効果を分析するために、ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞（ＨＥＫ２９３、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／膜ＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達を干渉する（例えば、遮断する、相加効果または相乗効果）する能力を検査した。
【0204】
簡潔に述べると、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞を、平底ＴＣ処理白色固体９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に３５，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベーションした。翌日、これらの細胞を洗浄し、続いて、０．３μｇ／ｍＬの可溶性Ｈｉｓタグ化ヒトＬＩＧＨＴ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）とともに０．００１５～１０μｇ／ｍＬ（３倍希釈ステップ）のキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４とともに、またはそれらを含まずにインキュベーションした（
、実施例２ａおよび図３Ａを参照されたい）。３７℃／５％ＣＯ２で６時間インキュベーションした後、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞におけるルシフェラーゼ産生を、ルミノメーターでＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。
【数15】
【0205】
図８Ｃに示すように、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、ヒトＨＶＥＭを発現するＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞における可溶性ヒトＬＩＧＨＴ媒介ＮＦκＢ活性化に対する効果を示さなかった。
【0206】
これらの結果から、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４が、可溶性ヒトＬＩＧＨＴ／ヒトＨＶＥＭ媒介ＮＫκＢシグナル伝達に影響を与えることができなかったことが実証された。
【0207】
（ｇ）．膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＴＮＦβ誘導ＮＦκＢシグナル伝達に対する、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
ＴＮＦβ／ＬＴαは、ＨＶＥＭへの弱い結合を有することが報告されており、ＨＶＥＭ経路におけるその正確な機能的役割は依然として不明である（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２００９；２２９：２４４－２５８）が、ＴＮＦβ／ＨＶＥＭ経路が（ＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ経路とともに）共刺激シグナルを提供し、それが免疫応答の増強をもたらすという一般的な意見の一致が存在する（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２００９；２２９：２４４－２５８、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２０１１；２４４：１６９－１８７、Ｐａｓｅｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２０１２；１２：４７８－４８５、Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１３；１３：５４１－５５１、Ｓｃｈａｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ ２０１４；２：７）。
ＴＮＦβ／ＬＴαは、ＨＶＥＭへの弱い結合を有することが報告されており、ＨＶＥＭ経路におけるその正確な機能的役割は依然として不明である（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２００９；２２９：２４４－２５８）が、ＴＮＦβ／ＨＶＥＭ経路が（ＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ経路とともに）共刺激シグナルを提供し、それが免疫応答の増強をもたらすという一般的な意見の一致が存在する（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２００９；２２９：２４４－２５８、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２０１１；２４４：１６９－１８７、Ｐａｓｅｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２０１２；１２：４７８－４８５、Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１３；１３：５４１－５５１、Ｓｃｈａｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ ２０１４；２：７）。
【0208】
膜ヒトＨＶＥＭ発現細胞における可溶性ヒトＴＮＦβ誘導ＮＦκＢシグナル伝達に対するキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の効果を分析するために、ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃヒトＨＶＥＭバイオアッセイレポーター細胞（ＨＥＫ２９３、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の可溶性ヒトＴＮＦβ／膜ＨＶＥＭ媒介ＮＦκＢシグナル伝達を干渉する（例えば、遮断する、相加効果または相乗効果）する能力を検査した。
【0209】
簡潔に述べると、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞を、平底ＴＣ処理白色固体９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に３２，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベーションした。翌日、これらの細胞を洗浄し、続いて、０．０５μｇ／ｍＬの可溶性組換えヒトＴＮＦβ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）とともに、０．００１５～１０μｇ／ｍＬ（３倍希釈ステップ）のキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４とともに、またはそれらを含まずにインキュベーションした（
、図９Ａを参照されたい）。滴定された（すなわち、０、０．００００２６～２μｇ／ｍＬ（５倍希釈ステップ））可溶性組換えヒトＴＮＦβを、参照目的のために並行して実行した。３７℃／５％ＣＯ２で６時間インキュベーションした後、ヒトＨＶＥＭ発現ＮＦκＢ－ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞におけるルシフェラーゼ産生を、ルミノメーターでＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。
【数16】
【0210】
図９Ｂに示すように、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、ＮＦκＢ－ＲＥ－ｌｕｃ細胞における可溶性ヒトＴＮＦβ媒介ＮＦκＢ活性化に対する効果を示さず、これは、比較的低レベルの膜結合ヒトＨＶＥＭを発現した（すなわち、ＰＥコンジュゲートマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（クローンｅＢｉｏＨＶＥＭ－１２２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、１：２０で、＜５のシグナル対ノイズ比）。キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４が、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞クローン番号１２８への可溶性ヒトＴＮＦβの結合を防止し、および／またはそれからの事前に結合された可溶性ヒトＴＮＦβを取り替えたため（それぞれ、実施例５（ｂ）および実施例５（ｃ）を参照されたい）、この観察は、驚くべきことであり、これは比較的高いレベルの膜結合ヒトＨＶＥＭを発現した（すなわち、過剰発現、１：２０でのＰＥコンジュゲートマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体（クローンｅＢｉｏＨＶＥＭ－１２２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して
のシグナル対ノイズ比）、図１を参照されたい）。しかしながら、ヒトＴＮＦβは、ヒトＴＮＦＲ１／ＣＤ１２０ａおよびヒトＴＮＦＲ２／ＣＤ１２０ｂへの高い親和性結合を有することが報告されている（Ｍｅｄｖｅｄｅｖ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９６；１６：９７７８－９７８４）。興味深いことに、ＨＥＫ２９３細胞は、低レベルのヒトＴＮＦＲ１／ＣＤ１２０ａを内因的に発現する（Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．１９９８；５：４９７－５０５、ＭｃＦａｒｌａｎｅ ｅｔ ａｌ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２００２；５１５：１１９－１２６、Ｒａｚｏｎａｂｌｅ ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ ２００５；４９：１６１７－１６２１）。最も可能性が高いのは、ヒトＴＮＦβが、これらの低ＨＶＥＭ＋／ＴＮＦＲ１＋共発現細胞上でこれらの「高親和性」ヒトＴＮＦＲ１（「低／弱親和性」ヒトＨＶＥＭとは対照的）に優先的に結合し、それによって優先的に可溶性ヒトＴＮＦβ／ヒトＴＮＦＲ１媒介（可溶性ヒトＴＮＦβ／ヒトＨＶＥＭ媒介と葉対照的に）ＮＦκＢ活性化を引き起こす。かかる条件下では、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体は、効果がないであろう。
【数17】
【0211】
これらの結果から、膜結合ヒトＨＶＥＭおよび膜結合ヒトＴＮＦＲ１が細胞上で比較的低レベルで共発現される場合、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、可溶性ヒトＴＮＦβ媒介ＮＫκＢシグナル伝達に影響を与えることができなかったことが実証された。
【0212】
（ｈ）．膜ヒトＢＴＬＡ／膜ヒトＴＣＲを発現するＴ細胞におけるＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達の膜ヒトＢＴＬＡ／膜ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対するＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
膜ヒトＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達の膜ヒトＢＴＬＡ／膜ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対するキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の効果を分析するために、ＮＦＡＴ－応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断バイオアッセイ（上記実施例３（ｃ）を参照されたい）を使用して、ＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を遮断するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力を検査した。
膜ヒトＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達の膜ヒトＢＴＬＡ／膜ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対するキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の効果を分析するために、ＮＦＡＴ－応答要素－ルシフェラーゼ（ＲＥ－ｌｕｃ）ヒトＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断バイオアッセイ（上記実施例３（ｃ）を参照されたい）を使用して、ＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を遮断するマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力を検査した。
【0213】
簡潔に述べると、ヒトＨＶＥＭおよびヒトＴＣＲ活性化因子を発現するＣＨＯ－Ｋ１活性化因子細胞を、平底ＴＣ処理白色固体９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に４０，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベーションした。翌日、これらの細胞を洗浄し、続いて、０．００１５～１０μｇ／ｍＬ（３倍希釈ステップ）のキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４とともに、またはそれらを含まずにインキュベーションした。次いで、ヒトＢＴＬＡおよびヒトＴＣＲを発現するＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞を５０，０００細胞／ウェルで添加した。３７℃／５％ＣＯ２で６時間インキュベーションした後、ヒトＢＴＬＡおよびヒトＴＣＲを発現するＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞におけるルシフェラーゼ産生を、ルミノメーターでＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。
【0214】
図１０に示すように、すべての検査したキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体は、ヒトＢＴＬＡおよびヒトＴＣＲを発現するＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ ＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞におけるＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を様々な程度に（この順序で、番号４５Ｈ６＞４９Ｇ４＞１１Ｈ７＞３６Ｈ１２＞＞４８Ｈ６）用量依存的に遮断した。
【0215】
これらの結果により、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４が、ＴＣＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達のヒトＢＴＬＡ／ヒトＨＶＥＭ媒介阻害を遮断することができたことが実証された。
【0216】
（ｋ）．膜ヒトＢＴＬＡ／膜ヒトＴＣＲを発現する初代ナイーブヒトＴ細胞からのＴＣＲ誘導サイトカイン放出の膜ヒトＢＴＬＡ／膜ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対するＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ遮断キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体の効果
上述のように、ＬＩＧＨＴによるＴリンパ球上のＨＶＥＭのライゲーションは、ＨＶＥＭを介して正の共刺激シグナルを送達するが、ＨＶＥＭによるＴリンパ球上のＢＴＬＡの係合は、ＢＴＬＡを介してＴリンパ球に負の共阻害シグナルを提供する（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。このＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ経路は、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔリンパ球の両方におけるＴＣＲ媒介シグナル伝達を下方調節し、Ｔリンパ球増殖およびサイトカイン産生の減少をもたらす。
上述のように、ＬＩＧＨＴによるＴリンパ球上のＨＶＥＭのライゲーションは、ＨＶＥＭを介して正の共刺激シグナルを送達するが、ＨＶＥＭによるＴリンパ球上のＢＴＬＡの係合は、ＢＴＬＡを介してＴリンパ球に負の共阻害シグナルを提供する（Ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０；８７：２２３－２３５）。このＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ経路は、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔリンパ球の両方におけるＴＣＲ媒介シグナル伝達を下方調節し、Ｔリンパ球増殖およびサイトカイン産生の減少をもたらす。
【0217】
膜ヒトＴＣＲ誘導サイトカイン放出の膜ＢＴＬＡ／膜ヒトＨＶＥＭ媒介阻害に対するキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４の効果を分析するために、（１）以前に記載されたように（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１７；８：７９３、人工抗原提示細胞）わずかな改変を有する膜結合抗ヒトＣＤ３（ＯＫＴ３）単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ＴＣＲ活性化因子を一過性にトランスフェクトされた、安定したヒト全長ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８、上記の実施例１ａを参照されたい）、および（２）膜ヒトＢＴＬＡおよび膜ヒトＴＣＲ複合体を発現する初代ヒトナイーブＴ細胞（レスポンダー細胞）の共培養を使用して、ＴＣＲ誘導サイトカイン放出のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を減衰させる／逆転させるマウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体の能力を検査した（アッセイの原理については、ヒトＨＶＥＭを発現するＣＨＯ－Ｋ１人工抗原提示細胞およびヒトＢＴＬＡを発現するＪｕｒｋａｔエフェクターＴ細胞を、それぞれ、ヒトＨＶＥＭを発現するＨＥＫ２９３Ｆ人工抗原提示細胞およびヒトＢＴＬＡを発現する初代ヒトナイーブＴ細胞と交換したことを除いて、図４Ａも参照されたい）。
【0218】
簡潔に述べると、膜結合抗ヒトＣＤ３（ＯＫＴ３）ｓｃＦｖＴＣＲ活性化因子タンパク質（配列番号７６）をコードするｃＤＮＡを哺乳動物発現のために最適化し、ＧＥＮＥＡＲＴ、Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙによって合成した（配列番号７７を参照されたい）。このｃＤＮＡを、ｐｃＤＮＡ３．１由来の発現プラスミド中でサブクローニングした。この抗ヒトＣＤ３（ＯＫＴ３）ｓｃＦｖＴＣＲ活性因子タンパク質プラスミドを、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現系（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、安定したヒト全長ＨＶＥＭをトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞（クローン番号１２８、上記実施例１ａを参照されたい）中にトランスフェクションした。２日後、これらのＨＥＫ２９３Ｆ細胞を採取し、１０％のウシ胎仔血清（Ｃａｐｒｉｃｏｒｎ）および５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＲＰＭＩ－１６４０培養培地（Ｇｉｂｃｏ）中で１．０×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。共培養する前に、一過性トランスフェクションされたヒトＨＶＥＭを発現するＨＥＫ２９３Ｆ細胞上での抗ヒトＣＤ３（ＯＫＴ３）ｓｃＦｖＴＣＲ活性化因子タンパク質表面発現（すなわち、人工抗原提示細胞として使用される）を、１：２００希釈ＰＥコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）およびフローサイトメトリーを使用して確認した。
【0219】
健康なドナー由来のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（インフォームドコンセント）を、リンホプレップ（商標）での密度遠心分離によって単離した（１．０７７ｇ／ｍＬ、Ｎｙｃｏｍｅｄ）。続いて、ヒトＴリンパ球（すなわち、ＣＤ４およびＣＤ８）を、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）Ｕｎｔｏｕｃｈｅｄ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｔ Ｃｅｌｌｓ Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してこのＰＢＭＣ画分から濃縮し、１０％のウシ胎仔血清（Ｃａｐｒｉｃｏｒｎ）および５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＲＰＭＩ－１６４０培養培地（Ｇｉｂｃｏ）中に１．０×１０６細胞／ｍＬで再懸濁させた。共培養する前に、濃縮されたヒトナイーブＴリンパ球上でのヒトＢＴＬＡ表面発現（すなわち、応答細胞として使用される）を、１：２０希釈ＰＥコンジュゲートマウス抗ヒトＢＴＬＡ特異的抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびフローサイトメトリーを使用して確認した。
【0220】
１．０×１０６細胞／ｍＬでヒトＨＶＥＭを発現する人工抗原提示ＨＥＫ２９３Ｆ細胞を、４０μｇ／ｍＬキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４で、室温で１５～３０分間前処理した。並行して、４０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ４／κ（Ｓｉｇｍａ）を陰性アイソタイプ対照として実行した。この後（すなわち、洗浄せずに）、これらのキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体で前処理された人工抗原提示ＨＥＫ２９３Ｆ細胞および濃縮されたヒトナイーブＴリンパ球を、平底ＴＣ処理透明９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中で１：１の割合（すなわち、５０，０００Ｔ細胞／５０，０００人工抗原提示細胞／２００μＬ／ウェル）で、２０μｇ／ｍＬのキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、４８Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４または２０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ４／κ（Ｓｉｇｍａ）陰性アイソタイプ対照の存在下で、３７℃／５％ＣＯ２で２日間、０．５μｇ／ｍＬの共刺激マウス抗ＣＤ２８抗体（クローンＣＤ２８．２、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とともに、またはそれを含まずに共培養した。２日間の培養後、上清を採取し、使用まで－８０℃で冷凍した。
【0221】
初代ヒトナイーブＴリンパ球からのこれらの上清中のヒトＩＬ－２、ヒトＴＮＦα、およびヒトＩＦＮγの放出を、自社開発の従来のサンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、すなわち、（Ｉ）ＩＬ－２ＥＬＩＳＡの場合、ラット抗ヒトＩＬ－２モノクローナルコーティング抗体（クローンＭＱ１－１７Ｈ１２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、滴定されたｒｈｕＩＬ－２標準物質（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）、およびビオチン化ウサギ抗ヒトＩＬ－２ポリクローナル検出抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の組み合わせを使用し、（ＩＩ）ＴＮＦαＥＬＩＳＡの場合、マウス抗ヒトＴＮＦαモノクローナル抗体コーティング（クローンＭＡｂ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、滴定されたｒｈｕＴＮＦα標準物質（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）、およびビオチン化マウス抗ヒトＴＮＦαモノクローナル検出抗体（クローンＭＡｂ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の組み合わせを使用し、および（ＩＩＩ）ＩＦＮγＥＬＩＳＡの場合、マウス抗ヒトＩＦＮγモノクローナルコーティング抗体（クローンＮＩＢ４２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、滴定されたｒｈｕＩＦＮγ標準（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）、およびビオチン化マウス抗ヒトＩＦＮγモノクローナル検出抗体（クローン４Ｓ．Ｂ３、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の組み合わせを使用して決定された。
【0222】
人工抗原提示ＨＥＫ２９３Ｆ細胞または濃縮されたヒトナイーブＴリンパ球からの上清は、共培養ではなく、２日間別々に培養され（すなわち、５０，０００人工抗原提示細胞／２００μＬ／ウェルまたは５０，０００Ｔ細胞／／２００μＬ／ウェル）、測定可能なヒトＩＬ－２、ヒトＴＮＦα、またはヒトＩＦＮγレベルを示さない。
【0223】
図１１Ａに示すように、すべての検査したキメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体は、すべての６人の健康なドナー由来の濃縮された共培養ヒトＢＴＬＡ発現初代ヒトナイーブＴリンパ球からのＴＣＲ／ＣＤ２８誘導ＩＬ－２放出のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を様々な程度に（ランク順序、番号４５Ｈ６＞１１Ｈ７＞３６Ｈ１２＞４９Ｇ４＞＞４８Ｈ６）減衰／逆転させた。加えて、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、１１Ｈ７、および４９Ｇ４は、２／６の健康なドナー（すなわち、ドナーＡおよびＨ）由来の濃縮された共培養ヒトＢＴＬＡ発現初代ヒトナイーブＴリンパ球からのＴＣＲ誘導ＩＬ－２放出（もしあれば）のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を様々な程度に（ランク順序、番号４５Ｈ６＞１１Ｈ７＞３６Ｈ１２＞４９Ｇ４）減衰／逆転させた。
【0224】
図１１Ｂに示すように、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、および１１Ｈ７は、すべての６人の健康なドナー由来の濃縮された共培養ヒトＢＴＬＡ発現初代ヒトナイーブＴリンパ球からのＴＣＲ／ＣＤ２８誘導ＴＮＦα放出のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を様々な程度に（ランク順序、番号４５Ｈ６＞１１Ｈ７＞３６Ｈ１２）減衰／逆転させた。加えて、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、および１１Ｈ７は、４／６の健康なドナー（すなわち、ドナーＡ、Ｄ、ＨおよびＫ）由来の濃縮された共培養ヒトＢＴＬＡ発現初代ヒトナイーブＴリンパ球からのＴＣＲ誘導ＴＮＦα放出（もしあれば）のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を様々な程度に（ランク順序、番号４５Ｈ６＞１１Ｈ７＝３６Ｈ１２）減衰／逆転させた。
【0225】
図１１Ｃに示すように、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、および１１Ｈ７は、すべての６人の健康なドナー由来の濃縮された共培養ヒトＢＴＬＡ発現初代ヒトナイーブＴリンパ球からのＴＣＲ／ＣＤ２８誘導ＩＦＮγ放出のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を様々な程度に（ランク順序、番号４５Ｈ６＞１１Ｈ７＞３６Ｈ１２）減衰／逆転させた。加えて、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、および１１Ｈ７は、４／６の健康なドナー（すなわち、ドナーＡ、Ｄ、ＨおよびＫ）由来の濃縮された共培養ヒトＢＴＬＡ発現初代ヒトナイーブＴリンパ球からのＴＣＲ誘導ＩＦＮγ放出（もしあれば）のＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ媒介阻害を様々な程度に（ランク順序、番号４５Ｈ６＝１１Ｈ７＞３６Ｈ１２）減衰／逆転させた。
【0226】
これらの結果より、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、および１１Ｈ７が、ヒトＢＴＬＡ発現初代ナイーブヒトＴ細胞からのＴＣＲ／ＣＤ２８誘導ＩＬ－２、ＴＮＦα、およびＩＦＮγ放出のヒトＢＴＬＡ／ヒトＨＶＥＭ媒介阻害を減衰／逆転させることができたことが実証された。加えて、これらの結果より、キメラマウス／ヒト抗ヒトＨＶＥＭ抗体番号３６Ｈ１２、４５Ｈ６、および１１Ｈ７が、ヒトＢＴＬＡ発現初代ナイーブヒトＴ細胞からのＴＣＲ誘導ＩＬ－２、ＴＮＦα、およびＩＦＮγ放出（もしあれば）のヒトＢＴＬＡ／ヒトＨＶＥＭ媒介阻害を減衰／逆転させることができたことが実証された。
配列の説明
配列番号１
アミノ酸配列ヒトＨＶＥＭ（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３、ａａ１～２８３）
１ ＭＥＰＰＧＤＷＧＰＰ ＰＷＲＳＴＰＫＴＤＶ ＬＲＬＶＬＹＬＴＦＬ ＧＡＰＣＹＡＰＡＬＰ ＳＣＫＥＤＥＹＰＶＧ ＳＥＣＣＰＫＣＳＰＧ
６１ ＹＲＶＫＥＡＣＧＥＬ ＴＧＴＶＣＥＰＣＰＰ ＧＴＹＩＡＨＬＮＧＬ ＳＫＣＬＱＣＱＭＣＤ ＰＡＭＧＬＲＡＳＲＮ ＣＳＲＴＥＮＡＶＣＧ
１２１ ＣＳＰＧＨＦＣＩＶＱ ＤＧＤＨＣＡＡＣＲＡ ＹＡＴＳＳＰＧＱＲＶ ＱＫＧＧＴＥＳＱＤＴ ＬＣＱＮＣＰＰＧＴＦ ＳＰＮＧＴＬＥＥＣＱ
１８１ ＨＱＴＫＣＳＷＬＶＴ ＫＡＧＡＧＴＳＳＳＨ ＷＶＷＷＦＬＳＧＳＬ ＶＩＶＩＶＣＳＴＶＧ ＬＩＩＣＶＫＲＲＫＰ ＲＧＤＶＶＫＶＩＶＳ
２４１ ＶＱＲＫＲＱＥＡＥＧ ＥＡＴＶＩＥＡＬＱＡ ＰＰＤＶＴＴＶＡＶＥ ＥＴＩＰＳＦＴＧＲＳ ＰＮＨ
シグナルペプチド（ａａ配列１～３８）、細胞外ドメイン（ａａ配列３９～２０２、ＣＲＤ１（ａａ配列４２～７５）、ＣＲＤ２（ａａ配列７８～１１９）、ＣＲＤ３（ａａ配列１２１～１６２）、および切断ＣＲＤ４（ａａ配列１６５～１７９）、「リンカー」（ａａ配列１８０～２０２）を含む）、膜貫通ドメイン（ａａ配列２０３～２２３）、および細胞質ドメイン（ａａ配列２２４～２８３）
配列番号２
ヒトＨＶＥＭタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列（哺乳動物発現のために最適化）
１ ＡＴＧＧＡＧＣＣＣＣ ＣＴＧＧＣＧＡＴＴＧ ＧＧＧＡＣＣＴＣＣＡ ＣＣＴＴＧＧＡＧＡＡ ＧＣＡＣＣＣＣＣＡＡ ＧＡＣＣＧＡＣＧＴＧ
６１ ＣＴＧＣＧＧＣＴＧＧ ＴＧＣＴＧＴＡＣＣＴ ＧＡＣＣＴＴＴＣＴＧ ＧＧＣＧＣＴＣＣＣＴ ＧＴＴＡＣＧＣＣＣＣ ＴＧＣＣＣＴＧＣＣＴ
１２１ ＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧ ＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡ ＣＣＣＴＧＴＧＧＧＣ ＡＧＣＧＡＧＴＧＣＴ ＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧ ＣＡＧＣＣＣＴＧＧＣ
１８１ ＴＡＣＡＧＡＧＴＧＡ ＡＡＧＡＧＧＣＣＴＧ ＣＧＧＣＧＡＧＣＴＧ ＡＣＣＧＧＣＡＣＣＧ ＴＧＴＧＴＧＡＡＣＣ ＴＴＧＴＣＣＣＣＣＴ
２４１ ＧＧＣＡＣＣＴＡＴＡ ＴＣＧＣＣＣＡＣＣＴ ＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧ ＡＧＣＡＡＧＴＧＣＣ ＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡ ＧＡＴＧＴＧＣＧＡＣ
３０１ ＣＣＣＧＣＴＡＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣ ＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣ ＴＧＣＡＧＣＣＧＧＡ ＣＣＧＡＧＡＡＴＧＣ ＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣ
３６１ ＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧ ＧＣＣＡＣＴＴＣＴＧ ＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧ ＧＡＣＧＧＣＧＡＴＣ ＡＣＴＧＣＧＣＣＧＣ ＣＴＧＴＡＧＡＧＣＣ
４２１ ＴＡＣＧＣＣＡＣＡＴ ＣＴＡＧＣＣＣＡＧＧ ＣＣＡＧＡＧＡＧＴＧ ＣＡＧＡＡＧＧＧＣＧ ＧＣＡＣＣＧＡＧＡＧ ＣＣＡＧＧＡＴＡＣＣ
４８１ ＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡ ＡＴＴＧＣＣＣＴＣＣ ＣＧＧＣＡＣＣＴＴＣ ＡＧＣＣＣＣＡＡＣＧ ＧＣＡＣＡＣＴＧＧＡ ＡＧＡＧＴＧＣＣＡＧ
５４１ ＣＡＣＣＡＧＡＣＣＡ ＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧ ＧＣＴＣＧＴＧＡＣＣ ＡＡＡＧＣＣＧＧＣＧ ＣＴＧＧＣＡＣＡＡＧ ＣＡＧＣＴＣＴＣＡＣ
６０１ ＴＧＧＧＴＧＴＧＧＴ ＧＧＴＴＴＣＴＧＡＧ ＣＧＧＣＡＧＣＣＴＣ ＧＴＧＡＴＣＧＴＧＡ ＴＴＧＴＧＴＧＣＡＧ ＣＡＣＣＧＴＧＧＧＣ
６６１ ＣＴＧＡＴＣＡＴＣＴ ＧＣＧＴＧＡＡＧＣＧ ＧＡＧＡＡＡＧＣＣＣ ＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧ ＴＣＧＴＧＡＡＡＧＴ ＧＡＴＣＧＴＧＴＣＣ
７２１ ＧＴＧＣＡＧＣＧＧＡ ＡＧＣＧＧＣＡＧＧＡ ＡＧＣＣＧＡＡＧＧＣ ＧＡＧＧＣＣＡＣＡＧ ＴＧＡＴＴＧＡＧＧＣ ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＴ
７８１ ＣＣＣＣＣＴＧＡＣＧ ＴＧＡＣＡＡＣＡＧＴ ＧＧＣＣＧＴＧＧＡＡ ＧＡＧＡＣＡＡＴＣＣ ＣＣＡＧＣＴＴＣＡＣ ＣＧＧＣＡＧＡＴＣＣ
８４１ ＣＣＣＡＡＣＣＡＣ
配列番号３
アミノ酸配列ＣＲＤ１切断ヒトＨＶＥＭ
１ ＭＥＷＳＧＶＦＭＦＬ ＬＳＶＴＡＧＶＨＳＥ ＰＣＰＰＧＴＹＩＡＨ ＬＮＧＬＳＫＣＬＱＣ ＱＭＣＤＰＡＭＧＬＲ ＡＳＲＮＣＳＲＴＥＮ
６１ ＡＶＣＧＣＳＰＧＨＦ ＣＩＶＱＤＧＤＨＣＡ ＡＣＲＡＹＡＴＳＳＰ ＧＱＲＶＱＫＧＧＴＥ ＳＱＤＴＬＣＱＮＣＰ ＰＧＴＦＳＰＮＧＴＬ
１２１ ＥＥＣＱＨＱＴＫＣＳ ＷＬＶＴＫＡＧＡＧＴ ＳＳＳＨＷＶＷＷＦＬ ＳＧＳＬＶＩＶＩＶＣ ＳＴＶＧＬＩＩＣＶＫ ＲＲＫＰＲＧＤＶＶＫ
１８１ ＶＩＶＳＶＱＲＫＲＱ ＥＡＥＧＥＡＴＶＩＥ ＡＬＱＡＰＰＤＶＴＴ ＶＡＶＥＥＴＩＰＳＦ ＴＧＲＳＰＮＨ
マウスＩｇシグナルペプチド（ａａ配列１～１９）、細胞外ドメイン（ａａ配列２０～１４６、ＣＲＤ２（ａａ配列２２～６３）、ＣＲＤ３（ａａ配列６５～１０６）、および切断ＣＲＤ４（ａａ配列１０９～１２３）、「リンカー」断片（ａａ配列１２４～１４６）を含む）、膜貫通ドメイン（ａａ配列１４７～１６７）、および細胞質ドメイン（ａａ配列１６８～２２７）
配列番号４
ＣＲＤ１切断ヒトＨＶＥＭタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列（哺乳動物発現のために最適化）
１ ＡＴＧＧＡＧＴＧＧＡ ＧＣＧＧＣＧＴＧＴＴ ＣＡＴＧＴＴＣＣＴＧ ＣＴＧＡＧＣＧＴＧＡ ＣＡＧＣＣＧＧＣＧＴ ＧＣＡＣＡＧＣＧＡＡ
６１ ＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣ ＣＴＧＧＣＡＣＣＴＡ ＴＡＴＣＧＣＣＣＡＣ ＣＴＧＡＡＣＧＧＣＣ ＴＧＡＧＣＡＡＧＴＧ ＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣ
１２１ ＣＡＧＡＴＧＴＧＣＧ ＡＣＣＣＣＧＣＴＡＴ ＧＧＧＣＣＴＧＡＧＡ ＧＣＣＡＧＣＡＧＡＡ ＡＣＴＧＣＡＧＣＣＧ ＧＡＣＣＧＡＧＡＡＴ
１８１ ＧＣＣＧＴＧＴＧＣＧ ＧＣＴＧＴＴＣＴＣＣ ＴＧＧＣＣＡＣＴＴＣ ＴＧＣＡＴＣＧＴＧＣ ＡＧＧＡＣＧＧＣＧＡ ＴＣＡＣＴＧＣＧＣＣ
２４１ ＧＣＣＴＧＴＡＧＡＧ ＣＣＴＡＣＧＣＣＡＣ ＡＴＣＴＡＧＣＣＣＴ ＧＧＣＣＡＧＡＧＡＧ ＴＧＣＡＧＡＡＧＧＧ ＣＧＧＣＡＣＣＧＡＧ
３０１ ＡＧＣＣＡＧＧＡＴＡ ＣＣＣＴＧＴＧＣＣＡ ＧＡＡＴＴＧＣＣＣＴ ＣＣＣＧＧＣＡＣＣＴ ＴＣＡＧＣＣＣＣＡＡ ＣＧＧＣＡＣＡＣＴＧ
３６１ ＧＡＡＧＡＧＴＧＣＣ ＡＧＣＡＣＣＡＧＡＣ ＣＡＡＧＴＧＣＡＧＣ ＴＧＧＣＴＣＧＴＧＡ ＣＣＡＡＡＧＣＣＧＧ ＣＧＣＴＧＧＣＡＣＡ
４２１ ＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣ ＡＣＴＧＧＧＴＧＴＧ ＧＴＧＧＴＴＴＣＴＧ ＡＧＣＧＧＣＡＧＣＣ ＴＣＧＴＧＡＴＣＧＴ ＧＡＴＴＧＴＧＴＧＣ
４８１ ＡＧＣＡＣＣＧＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＴＣＡＴ ＣＴＧＣＧＴＧＡＡＧ ＣＧＧＡＧＡＡＡＧＣ ＣＣＡＧＡＧＧＣＧＡ ＣＧＴＣＧＴＧＡＡＡ
５４１ ＧＴＧＡＴＣＧＴＧＴ ＣＣＧＴＧＣＡＧＣＧ ＧＡＡＧＣＧＧＣＡＧ ＧＡＡＧＣＣＧＡＡＧ ＧＣＧＡＧＧＣＣＡＣ ＡＧＴＧＡＴＴＧＡＧ
６０１ ＧＣＣＣＴＧＣＡＧＧ ＣＴＣＣＣＣＣＴＧＡ ＣＧＴＧＡＣＡＡＣＡ ＧＴＧＧＣＣＧＴＧＧ ＡＡＧＡＧＡＣＡＡＴ ＣＣＣＣＡＧＣＴＴＣ
６６１ ＡＣＣＧＧＣＡＧＡＴ ＣＣＣＣＣＡＡＣＣＡ Ｃ
配列番号５
アミノ酸配列カニクイザルＨＶＥＭ（ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿００５５４５０６１．１、ａａ１～２８０）
１ ＭＥＰＰＧＧＷＧＳＰ ＰＲＲＰＡＰＫＡＤＩ ＬＴＬＶＬＹＬＴＦＬ ＧＳＰＣＹＡＰＡＬＰ ＳＣＫＥＤＥＹＰＶＧ ＳＥＣＣＰＫＣＧＰＧ
６１ ＦＨＶＲＱＡＣＧＥＱ ＴＧＴＶＣＥＰＣＳＰ ＧＴＹＩＡＨＦＮＧＬ ＳＫＣＬＱＣＱＭＣＤ ＰＡＭＧＬＲＴＳＲＮ ＣＳＴＴＡＮＡＬＣＧ
１２１ ＣＳＰＧＨＦＣＩＩＱ ＤＧＤＨＣＡＡＣＲＡ ＹＡＴＳＳＰＧＱＲＶ ＱＫＧＧＴＥＳＱＤＴ ＬＣＱＮＣＰＰＧＴＦ ＳＳＮＧＴＬＥＥＣＱ
１８１ ＨＧＴＫＣＳＫＷＬＶ ＴＥＡＧＰＧＴＳＳＦ ＲＷＶＷＷＬＬＳＧＴ ＬＩＶＩＩＶＧＬＩＬ ＧＬＩＹＶＫＲＲＫＳ ＲＧＤＶＶＫＶＩＶＳ
２４１ ＶＱＲＫＲＱＥＡＥＧ ＥＡＩＶＴＥＡＬＱＡ ＰＰＤＩＴＴＶＡＶＥ ＥＴＥＰＡＦＴＧＲＳ
配列番号６
カニクイザルＨＶＥＭタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列（哺乳動物発現のために最適化）
１ ＡＴＧＧＡＧＣＣＴＣ ＣＡＧＧＣＧＧＡＴＧ ＧＧＧＡＴＣＴＣＣＣ ＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣ ＣＴＧＣＣＣＣＣＡＡ ＧＧＣＣＧＡＴＡＴＣ
６１ ＣＴＧＡＣＣＣＴＧＧ ＴＧＣＴＧＴＡＣＣＴ ＧＡＣＣＴＴＣＣＴＧ ＧＧＣＡＧＣＣＣＴＴ ＧＴＴＡＣＧＣＣＣＣ ＴＧＣＣＣＴＧＣＣＴ
１２１ ＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧ ＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡ ＣＣＣＴＧＴＧＧＧＣ ＡＧＣＧＡＧＴＧＣＴ ＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧ ＣＧＧＣＣＣＴＧＧＡ
１８１ ＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣ ＧＧＣＡＧＧＣＣＴＧ ＴＧＧＣＧＡＧＣＡＧ ＡＣＣＧＧＣＡＣＡＧ ＴＧＴＧＣＧＡＧＣＣ ＴＴＧＴＡＧＣＣＣＣ
２４１ ＧＧＣＡＣＣＴＡＴＡ ＴＣＧＣＣＣＡＣＴＴ ＣＡＡＣＧＧＣＣＴＧ ＡＧＣＡＡＧＴＧＣＣ ＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡ ＧＡＴＧＴＧＣＧＡＣ
３０１ ＣＣＣＧＣＴＡＴＧＧ ＧＣＣＴＧＣＧＧＡＣ ＣＡＧＣＡＧＡＡＡＴ ＴＧＣＡＧＣＡＣＣＡ ＣＣＧＣＣＡＡＴＧＣ ＣＣＴＧＴＧＣＧＧＣ
３６１ ＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧ ＧＣＣＡＣＴＴＣＴＧ ＣＡＴＴＡＴＴＣＡＧ ＧＡＣＧＧＣＧＡＣＣ ＡＣＴＧＣＧＣＣＧＣ ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣ
４２１ ＴＡＴＧＣＣＡＣＡＴ ＣＴＡＧＣＣＣＴＧＧ ＣＣＡＧＣＧＧＧＴＧ ＣＡＧＡＡＧＧＧＣＧ ＧＡＡＣＡＧＡＧＴＣ ＴＣＡＧＧＡＣＡＣＣ
４８１ ＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡ ＡＣＴＧＣＣＣＣＣＣ ＴＧＧＣＡＣＣＴＴＣ ＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧ ＧＣＡＣＣＣＴＧＧＡ ＡＧＡＧＴＧＣＣＡＧ
５４１ ＣＡＣＧＧＣＡＣＣＡ ＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡ ＧＴＧＧＣＴＣＧＴＧ ＡＣＡＧＡＧＧＣＣＧ ＧＡＣＣＴＧＧＣＡＣ ＣＡＧＣＡＧＣＴＴＣ
６０１ ＡＧＡＴＧＧＧＴＧＴ ＧＧＴＧＧＣＴＧＣＴ ＧＡＧＣＧＧＣＡＣＡ ＣＴＧＡＴＣＧＴＧＡ ＴＣＡＴＣＧＴＧＧＧ ＣＣＴＧＡＴＣＣＴＧ
６６１ ＧＧＡＣＴＧＡＴＣＴ ＡＣＧＴＧＡＡＧＣＧ ＧＣＧＧＡＡＧＴＣＣ ＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧ ＴＣＧＴＧＡＡＡＧＴ ＧＡＴＣＧＴＧＴＣＣ
７２１ ＧＴＧＣＡＧＣＧＧＡ ＡＧＡＧＡＣＡＧＧＡ ＡＧＣＣＧＡＧＧＧＣ ＧＡＧＧＣＣＡＴＴＧ ＴＧＡＣＣＧＡＡＧＣ ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣ
７８１ ＣＣＴＣＣＣＧＡＣＡ ＴＴＡＣＡＡＣＣＧＴ ＧＧＣＣＧＴＧＧＡＡ ＧＡＡＡＣＣＧＡＧＣ ＣＣＧＣＣＴＴＴＡＣ ＣＧＧＣＡＧＡＴＣＣ
配列番号７
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＡＡＧＴＴＧＣＣＴＧＴＴＡＧＧＣＴＧＴＴＧＧＴＧＣＴＧ
配列番号８
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＧＡＴＴＴＷＣＡＧＧＴＧＣＡＧＡＴＴＷＴＣＡＧＣＴＴＣ
配列番号９
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＧＧＣＷＴＣＡＡＡＧＡＴＧＧＡＧＴＣＡＣＡ
配列番号１０
ＰＣＲプライマー
ＡＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧ
配列番号１１
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＡＡＡＴＧＣＡＧＣＴＧＧＧＧＣＡＴＳＴＴＣＴＴＣ
配列番号１２
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＲＡＣＴＴＴＧＧＧＹＴＣＡＧＣＴＴＧＲＴＴＴ
配列番号１３
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＧＧＡＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＴＴＴＡＧＴＴＴＴＣＣＴＴ
配列番号１４
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＧＣＴＴＧＴＣＹＴＴＲＧＳＧＣＴＲＣＴＣＴＴＣＴＧＣ
配列番号１５
ＰＣＲプライマー
ＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＣＡＧＡＴＧＧＧＧＧ
配列番号１６
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体３６Ｈ１２の重鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＧ ＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬ ＳＣＴＡＳＧＦＮＩＫ ＤＴＹＭＨＷＶＲＱＲ ＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲ ＩＤＰＡＴＡＮＴＫＹ
６１ ＤＰＫＦＱＧＫＡＴＬ ＴＴＤＴＳＳＮＴＡＹ ＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤ ＴＡＶＹＹＣＶＴＹＧ ＹＤＶＳＷＦＡＹＷＧ ＬＧＡＬＶＴＶＳＡ
配列番号１７
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体３６Ｈ１２の軽鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳ ＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳ ＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶ ＨＳＮＧＩＴＹＬＥＷ ＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫ ＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ
６１ ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩ ＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶ ＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰ ＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥ ＬＫ
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体３６Ｈ１２の相補性決定領域（ＣＤＲ）：配列番号１８～２３
配列番号１８
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の重鎖ＣＤＲ１
ＤＴＹＭＨ
配列番号１９
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の重鎖ＣＤＲ２
ＲＩＤＰＡＴＡＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ
配列番号２０
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の重鎖ＣＤＲ３
ＹＧＹＤＶＳＷＦＡＹ
配列番号２１
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の軽鎖ＣＤＲ１
ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＩＴＹＬＥ
配列番号２２
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の軽鎖ＣＤＲ２
ＫＶＳＮＲＦＳ
配列番号２３
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の軽鎖ＣＤＲ３
ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ
配列番号２４
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４５Ｈ６の重鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＬＶＱＰＧＧＳＲＫＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＦＧＭＨＷＶＲＱＡ ＰＥＫＧＬＥＷＶＡＹ ＩＳＳＧＮＳＮＩＹＹ
６１ ＶＤＴＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＰＫＮＴＬＦ ＬＱＭＴＳＬＲＳＥＤ ＴＡＭＹＹＣＡＲＫＲ ＡＹＧＤＹＳＧＦＳＭ ＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴ
１２１ ＶＳＳ
配列番号２５
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４５Ｈ６の軽鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦ ＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳ ＶＴＣＫＡＳＱＮＶＤ ＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰ ＧＱＳＰＫＡＬＩＹＳ ＡＳＹＲＹＳＧＶＰＤ
６１ ＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳ ＥＤＬＡＥＹＦＣＱＱ ＹＮＫＦＰＬＴＦＧＧ ＧＴＫＬＥＩＫ
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４５Ｈ６の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
配列番号２６～３１
配列番号２６
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の重鎖ＣＤＲ１
ＳＦＧＭＨ
配列番号２７
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の重鎖ＣＤＲ２
ＹＩＳＳＧＮＳＮＩＹＹＶＤＴＶＫＧ
配列番号２８
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の重鎖ＣＤＲ３
ＫＲＡＹＧＤＹＳＧＦＳＭＤＹ
配列番号２９
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ１
ＫＡＳＱＮＶＤＴＮＶＡ
配列番号３０
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ２
ＳＡＳＹＲＹＳ
配列番号３１
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ３
ＱＱＹＮＫＦＰＬＴ
配列番号３２
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４８Ｈ６の重鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧ ＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＧＹＡＭＳＷＶＲＱＴ ＰＥＫＲＬＥＷＶＡＳ ＩＳＳＧＧＳＴＹＹＰ
６１ ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＰ ＲＤＤＡＲＮＩＬＹＬ ＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴ ＡＩＹＹＣＡＲＧＧＨ ＧＳＳＹＶＹＷＧＱＧ ＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号３３
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４８Ｈ６の軽鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳ ＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴ ＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬ ＹＳＳＮＱＫＮＹＬＡ ＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰ ＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
６１ ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧ ＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴ ＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡ ＶＹＹＣＨＱＹＹＳＹ ＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬ ＥＬＮ
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４８Ｈ６の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
配列番号３４～３９
配列番号３４
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の重鎖ＣＤＲ１
ＧＹＡＭＳ
配列番号３５
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の重鎖ＣＤＲ２
ＳＩＳＳＧＧＳＴＹＹＰＤＳＶＫＧ
配列番号３６
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の重鎖ＣＤＲ３
ＧＧＨＧＳＳＹＶＹ
配列番号３７
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ１
ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹＬＡ
配列番号３８
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ２
ＷＡＳＴＲＥＳ
配列番号３９
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ３
ＨＱＹＹＳＹＰＬＴ
配列番号４０
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体１１Ｈ７の重鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧ ＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩ ＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴ ＩＹＧＶＨＷＶＲＱＳ ＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶ ＩＷＳＧＧＳＴＤＹＮ
６１ ＡＡＦＩＳＲＬＳＩＳ ＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦ ＫＭＮＳＬＱＡＮＤＴ ＡＩＹＹＣＡＲＲＤＹ ＧＳＲＳＦＹＹＡＭＤ ＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶ
１２１ ＳＳ
配列番号４１
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体１１Ｈ７の軽鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＬ ＭＡＡＳＰＧＥＫＶＴ ＩＴＣＳＶＳＳＳＩＳ ＳＳＮＬＨＷＹＱＱＫ ＳＥＴＳＰＫＰＷＩＹ ＧＴＳＮＬＡＳＧＶＰ
６１ ＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴ ＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥ ＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱ ＱＷＳＳＹＰＬＴＦＧ ＧＧＴＫＬＥＩＫ
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体１１Ｈ７の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
配列番号４２～４７
配列番号４２
アミノ酸配列 １１Ｈ７の重鎖ＣＤＲ１
ＩＹＧＶＨ
配列番号４３
アミノ酸配列 １１Ｈ７の重鎖ＣＤＲ２
ＶＩＷＳＧＧＳＴＤＹＮＡＡＦＩＳ
配列番号４４
アミノ酸配列 １１Ｈ７の重鎖ＣＤＲ３
ＲＤＹＧＳＲＳＦＹＹＡＭＤＹ
配列番号４５
アミノ酸配列 １１Ｈ７の軽鎖ＣＤＲ１
ＳＶＳＳＳＩＳＳＳＮＬＨ
配列番号４６
アミノ酸配列 １１Ｈ７の軽鎖ＣＤＲ２
ＧＴＳＮＬＡＳ
配列番号４７
アミノ酸配列 １１Ｈ７の軽鎖ＣＤＲ３
ＱＱＷＳＳＹＰＬＴ
配列番号４８
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４９Ｇ４の重鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥ ＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬ ＳＣＲＡＳＧＦＮＩＫ ＤＴＹＭＨＷＶＫＱＲ ＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲ ＩＤＰＡＲＧＮＴＫＹ
６１ ＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩ ＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹ ＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＳＡＭ ＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴ ＶＳＳ
配列番号４９
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４９Ｇ４の軽鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳ ＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳ ＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶ ＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷ ＦＬＱＫＰＧＱＳＰＫ ＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ
６１ ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩ ＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶ ＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰ ＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥ ＬＫ
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４９Ｇ４の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
配列番号５０～５５
配列番号５０
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の重鎖ＣＤＲ１
ＤＴＹＭＨ
配列番号５１
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の重鎖ＣＤＲ２
ＲＩＤＰＡＲＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ
配列番号５２
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の重鎖ＣＤＲ３
ＡＭＤＹ
配列番号５３
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の軽鎖ＣＤＲ１
ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ
配列番号５４
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の軽鎖ＣＤＲ２
ＫＶＳＮＲＦＳ
配列番号５５
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の軽鎖ＣＤＲ３
ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ
配列番号５６
キメラマウスＶＨ ３６Ｈ１２およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧ ＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣ ＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴ ＧＣＡＧＴＧＣＧＡＡ
６１ ＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣ ＡＧＣＡＡＴＣＴＧＧ ＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧ ＧＴＴＡＡＧＣＣＴＧ ＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴ ＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣ
１２１ ＴＧＴＡＣＣＧＣＣＡ ＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡ ＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣ ＡＣＣＴＡＣＡＴＧＣ ＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧ ＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴ
１８１ ＧＡＧＣＡＧＧＧＡＣ ＴＣＧＡＡＴＧＧＡＴ ＣＧＧＣＡＧＡＡＴＣ ＧＡＴＣＣＣＧＣＣＡ ＣＣＧＣＣＡＡＣＡＣ ＣＡＡＡＴＡＣＧＡＣ
２４１ ＣＣＣＡＡＧＴＴＣＣ ＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣ ＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣ ＡＣＣＧＡＣＡＣＣＡ ＧＣＡＧＣＡＡＣＡＣ ＡＧＣＣＴＡＣＣＴＧ
３０１ ＣＡＧＣＴＧＴＣＴＡ ＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧ ＣＧＡＡＧＡＴＡＣＣ ＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴ ＡＣＴＧＣＧＴＧＡＣ ＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣ
３６１ ＧＡＴＧＴＧＴＣＴＴ ＧＧＴＴＴＧＣＣＴＡ ＣＴＧＧＧＧＡＣＴＧ ＧＧＣＧＣＣＣＴＧＧ ＴＴＡＣＡＧＴＴＴＣ ＴＧＣＣＧＣＣＴＣＴ
４２１ ＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣ ＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴ ＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴ ＣＣＣＴＧＴＡＧＣＡ ＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧ ＣＧＡＡＴＣＴＡＣＡ
４８１ ＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧ ＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴ ＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣ ＴＴＴＣＣＴＧＡＧＣ ＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴ ＧＴＣＣＴＧＧＡＡＣ
５４１ ＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣ ＴＧＡＣＡＴＣＴＧＧ ＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣ ＴＴＴＣＣＡＧＣＣＧ ＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧ ＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧ
６０１ ＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡ ＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴ ＣＡＣＡＧＴＧＣＣＴ ＡＧＣＴＣＴＡＧＣＣ ＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡ ＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣ
６６１ ＴＧＴＡＡＴＧＴＧＧ ＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣ ＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣ ＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡ ＡＧＣＧＣＧＴＧＧＡ ＡＴＣＴＡＡＧＴＡＣ
７２１ ＧＧＣＣＣＴＣＣＴＴ ＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧ ＴＣＣＴＧＣＡＣＣＴ ＧＡＧＴＴＴＣＴＣＧ ＧＣＧＧＡＣＣＣＴＣ ＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧ
７８１ ＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡ ＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡ ＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧ ＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡ ＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴ ＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧ
８４１ ＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧ ＴＴＴＣＣＣＡＡＧＡ ＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧ ＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡ ＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴ ＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧ
９０１ ＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡ ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣ ＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡ ＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴ ＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣ ＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧ
９６１ ＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣ ＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴ ＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴ ＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧ ＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡ ＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧ
１０２１ ＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡ ＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣ ＴＡＧＣＡＧＣＡＴＣ ＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡ ＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣ ＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧ
１０８１ ＣＣＡＡＧＡＧＡＡＣ ＣＣＣＡＧＧＴＧＴＡ ＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴ ＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧ ＡＧＧＡＡＡＴＧＡＣ ＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧ
１１４１ ＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡ ＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴ ＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣ ＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧ ＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴ ＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧ
１２０１ ＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣ ＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡ ＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧ ＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣ ＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡ ＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣ
１２６１ ＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣ ＴＧＴＡＣＡＧＣＡＧ ＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧ ＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡ ＧＡＴＧＧＣＡＡＧＡ ＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧ
１３２１ ＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡ ＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡ ＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧ ＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴ ＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡ ＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣ
１３８１ ＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧ ＧＣＡＡＧ
配列番号５７
キメラマウスＶＨ ４５Ｈ６およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧ ＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣ ＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴ ＧＣＡＧＴＧＴＧＡＴ
６１ ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧ ＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧ ＣＧＧＡＧＧＡＣＴＧ ＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧ ＧＣＧＧＣＡＧＣＡＧ ＡＡＡＧＣＴＧＴＣＴ
１２１ ＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡ ＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣ ＣＴＴＣＡＧＣＡＧＣ ＴＴＴＧＧＡＡＴＧＣ ＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧ ＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴ
１８１ ＧＡＧＡＡＡＧＧＣＣ ＴＴＧＡＧＴＧＧＧＴ ＣＧＣＣＴＡＣＡＴＣ ＡＧＣＡＧＣＧＧＣＡ ＡＣＡＧＣＡＡＣＡＴ ＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧ
２４１ ＧＡＣＡＣＣＧＴＧＡ ＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴ ＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣ ＡＧＡＧＡＣＡＡＣＣ ＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣ ＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧ
３０１ ＣＡＧＡＴＧＡＣＣＡ ＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧ ＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣ ＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴ ＡＣＴＧＣＧＣＣＣＧ ＧＡＡＡＡＧＡＧＣＣ
３６１ ＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴ ＡＣＡＧＣＧＧＣＴＴ ＴＡＧＣＡＴＧＧＡＴ ＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣ ＡＧＧＧＣＡＣＣＡＧ ＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧ
４２１ ＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴ ＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧ ＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧ ＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧ ＣＴＣＣＴＴＧＴＡＧ ＣＡＧＡＡＧＣＡＣＣ
４８１ ＡＧＣＧＡＧＴＣＴＡ ＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴ ＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧ ＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴ ＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡ ＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣ
５４１ ＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡ ＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣ ＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣ ＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡ ＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣ ＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡ
６０１ ＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣ ＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴ ＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧ ＧＴＣＡＣＡＧＴＧＣ ＣＴＡＧＣＴＣＴＡＧ ＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣ
６６１ ＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡ ＣＣＴＧＴＡＡＴＧＴ ＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧ ＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡ ＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡ ＣＡＡＧＣＧＣＧＴＧ
７２１ ＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴ ＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣ ＴＴＧＴＣＣＴＣＣＡ ＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣ ＣＡＧＡＧＴＴＴＣＴ ＣＧＧＣＧＧＡＣＣＣ
７８１ ＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣ ＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣ ＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧ ＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡ ＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧ ＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡ
８４１ ＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧ ＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡ ＣＧＴＴＴＣＣＣＡＡ ＧＡＧＧＡＣＣＣＴＧ ＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴ ＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣ
９０１ ＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡ ＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧ ＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡ ＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡ ＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣ
９６１ ＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧ ＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴ ＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧ ＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧ ＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡ ＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧ
１０２１ ＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡ ＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡ ＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧ ＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡ ＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣ ＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧ
１０８１ ＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣ ＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡ ＡＣＣＣＣＡＧＧＴＧ ＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣ ＣＴＣＣＡＡＧＣＣＡ ＡＧＡＧＧＡＡＡＴＧ
１１４１ ＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣ ＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴ ＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧ ＧＴＴＡＡＧＧＧＣＴ ＴＣＴＡＣＣＣＣＴＣ ＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣ
１２０１ ＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧ ＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧ ＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧ ＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡ ＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣ ＡＣＣＴＧＴＧＣＴＧ
１２６１ ＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧ ＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴ ＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣ ＡＧＡＣＴＧＡＣＣＧ ＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧ ＣＡＧＡＴＧＧＣＡＡ
１３２１ ＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧ ＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧ ＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧ ＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣ ＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡ ＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧ
１３８１ ＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡ ＧＣＣＴＧＴＣＴＣＴ ＧＧＧＣＡＡＧ
配列番号５８
キメラマウスＶＨ ４８Ｈ６およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧ ＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣ ＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴ ＧＣＡＧＴＧＣＧＡＡ
６１ ＧＴＧＡＡＧＣＴＧＧ ＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧ ＣＧＧＣＧＧＡＣＴＧ ＧＴＴＡＡＧＣＣＴＧ ＧＣＧＧＡＴＣＴＣＴ ＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣ
１２１ ＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡ ＧＣＧＧＣＴＴＴＡＣ ＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣ ＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡ ＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧ ＡＣＡＧＡＣＡＣＣＣ
１８１ ＧＡＧＡＡＧＡＧＡＣ ＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴ ＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣ ＡＧＣＡＧＣＧＧＣＧ ＧＣＡＧＣＡＣＡＴＡ ＴＴＡＣＣＣＣＧＡＣ
２４１ ＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧ ＧＣＣＧＣＴＴＴＡＣ ＡＡＴＣＣＣＣＡＧＡ ＧＡＴＧＡＣＧＣＣＣ ＧＧＡＡＣＡＴＣＣＴ ＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧ
３０１ ＡＴＧＡＧＣＡＧＣＣ ＴＧＣＧＧＡＧＣＧＡ ＧＧＡＴＡＣＣＧＣＣ ＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴ ＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧ ＣＧＧＣＣＡＣＧＧＣ
３６１ ＡＧＣＡＧＣＴＡＴＧ ＴＴＴＡＴＴＧＧＧＧ ＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣ ＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧ ＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣ ＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧ
４２１ ＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧ ＴＧＴＴＣＣＣＴＣＴ ＧＧＣＴＣＣＴＴＧＴ ＡＧＣＡＧＡＡＧＣＡ ＣＣＡＧＣＧＡＧＴＣ ＴＡＣＡＧＣＣＧＣＴ
４８１ ＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣ ＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡ ＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣ ＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡ ＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧ ＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣ
５４１ ＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡ ＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡ ＣＡＣＡＴＴＴＣＣＡ ＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣ ＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧ ＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴ
６０１ ＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧ ＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴ ＧＣＣＴＡＧＣＴＣＴ ＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡ ＣＣＡＡＧＡＣＣＴＡ ＣＡＣＣＴＧＴＡＡＴ
６６１ ＧＴＧＧＡＣＣＡＣＡ ＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡ ＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧ ＧＡＣＡＡＧＣＧＣＧ ＴＧＧＡＡＴＣＴＡＡ ＧＴＡＣＧＧＣＣＣＴ
７２１ ＣＣＴＴＧＴＣＣＴＣ ＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣ ＡＣＣＴＧＡＧＴＴＴ ＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣ ＣＣＴＣＣＧＴＧＴＴ ＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴ
７８１ ＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡ ＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴ ＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣ ＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧ ＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧ ＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧ
８４１ ＧＡＣＧＴＴＴＣＣＣ ＡＡＧＡＧＧＡＣＣＣ ＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧ ＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴ ＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧ ＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧ
９０１ ＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡ ＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣ ＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡ ＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡ ＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧ ＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣ
９６１ ＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧ ＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡ ＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧ ＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧ ＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧ ＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣ
１０２１ ＡＡＣＡＡＧＧＧＣＣ ＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧ ＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡ ＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡ ＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧ ＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡ
１０８１ ＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧ ＴＧＴＡＣＡＣＡＣＴ ＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣ ＣＡＡＧＡＧＧＡＡＡ ＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡ ＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣ
１１４１ ＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣ ＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧ ＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴ ＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧ ＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧ ＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴ
１２０１ ＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧ ＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡ ＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣ ＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣ ＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡ ＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣ
１２６１ ＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡ ＧＣＡＧＧＣＴＧＡＣ ＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧ ＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣ ＡＡＧＡＧＧＧＣＡＡ ＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣ
１３２１ ＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡ ＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣ ＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣ ＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣ ＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴ ＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴ
１３８１ ＣＴＧＧＧＣＡＡＧ
配列番号５９
キメラマウスＶＨ １１Ｈ７およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧ ＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣ ＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴ ＧＣＡＧＴＧＴＣＡＧ
６１ ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡ ＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧ ＡＣＣＴＧＧＡＣＴＧ ＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡ ＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴ ＧＡＧＣＡＴＣＡＣＣ
１２１ ＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴ ＣＣＧＧＣＴＴＣＡＧ ＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣ ＴＡＴＧＧＣＧＴＧＣ ＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧ ＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴ
１８１ ＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣ ＴＧＧＡＡＴＧＧＣＴ ＧＧＧＡＧＴＧＡＴＴ ＴＧＧＡＧＣＧＧＣＧ ＧＣＡＧＣＡＣＣＧＡ ＴＴＡＣＡＡＣＧＣＣ
２４１ ＧＣＣＴＴＴＡＴＣＡ ＧＣＡＧＡＣＴＧＡＧ ＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧ ＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡ ＡＧＡＧＣＣＡＧＧＴ ＧＴＴＣＴＴＣＡＡＧ
３０１ ＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣ ＴＧＣＡＧＧＣＣＡＡ ＣＧＡＣＡＣＣＧＣＣ ＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴ ＧＣＧＣＣＡＧＡＡＧ ＡＧＡＣＴＡＣＧＧＣ
３６１ ＡＧＣＣＧＧＴＣＣＴ ＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣ ＴＡＴＧＧＡＣＴＡＴ ＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧ ＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴ ＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴ
４２１ ＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡ ＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣ ＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣ ＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣ ＣＴＴＧＴＡＧＣＡＧ ＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣ
４８１ ＧＡＧＴＣＴＡＣＡＧ ＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧ ＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣ ＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴ ＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣ ＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧ
５４１ ＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴ ＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴ ＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣ ＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴ ＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴ ＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣ
６０１ ＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴ ＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧ ＣＡＧＣＧＴＧＧＴＣ ＡＣＡＧＴＧＣＣＴＡ ＧＣＴＣＴＡＧＣＣＴ ＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧ
６６１ ＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴ ＧＴＡＡＴＧＴＧＧＡ ＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴ ＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡ ＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡ ＧＣＧＣＧＴＧＧＡＡ
７２１ ＴＣＴＡＡＧＴＡＣＧ ＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧ ＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴ ＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧ ＡＧＴＴＴＣＴＣＧＧ ＣＧＧＡＣＣＣＴＣＣ
７８１ ＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴ ＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡ ＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣ ＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡ ＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣ ＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧ
８４１ ＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧ ＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴ ＴＴＣＣＣＡＡＧＡＧ ＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧ ＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡ ＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧ
９０１ ＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧ ＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡ ＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣ ＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧ ＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴ ＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣ
９６１ ＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧ ＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴ ＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧ ＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴ ＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧ ＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣ
１０２１ ＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧ ＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡ ＧＧＧＣＣＴＧＣＣＴ ＡＧＣＡＧＣＡＴＣＧ ＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴ ＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣ
１０８１ ＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣ ＣＡＡＧＡＧＡＡＣＣ ＣＣＡＧＧＴＧＴＡＣ ＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣ ＣＡＡＧＣＣＡＡＧＡ ＧＧＡＡＡＴＧＡＣＣ
１１４１ ＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧ ＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣ ＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧ ＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴ ＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡ ＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧ
１２０１ ＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡ ＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡ ＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣ ＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡ ＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣ ＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣ
１２６１ ＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴ ＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴ ＧＴＡＣＴＣＣＡＧＡ ＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧ ＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧ ＡＴＧＧＣＡＡＧＡＧ
１３２１ ＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＣ ＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣ ＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣ ＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡ ＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧ
１３８１ ＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣ ＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧ ＣＡＡＡ
配列番号６０
キメラマウスＶＨ ４９Ｇ４およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧ ＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣ ＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴ ＧＣＡＧＴＧＣＧＡＡ
６１ ＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣ ＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧ ＣＧＣＣＧＡＧＣＴＴ ＧＴＧＡＡＡＣＣＴＧ ＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴ ＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣ
１２１ ＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡ ＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡ ＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣ ＡＣＣＴＡＣＡＴＧＣ ＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡ ＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴ
１８１ ＧＡＧＣＡＧＧＧＣＣ ＴＣＧＡＡＴＧＧＡＴ ＣＧＧＣＡＧＡＡＴＣ ＧＡＴＣＣＣＧＣＣＡ ＧＡＧＧＣＡＡＣＡＣ ＣＡＡＡＴＡＣＧＡＣ
２４１ ＣＣＣＡＡＧＴＴＣＣ ＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣ ＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣ ＧＣＣＧＡＣＡＣＣＴ ＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣ ＡＧＣＣＴＡＣＣＴＧ
３０１ ＣＡＧＣＴＧＴＣＣＡ ＧＣＣＴＧＡＣＣＴＣ ＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣ ＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴ ＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧ ＣＧＣＴＡＴＧＧＡＴ
３６１ ＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣ ＡＧＧＧＣＡＣＡＡＧ ＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧ ＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴ ＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧ ＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧ
４２１ ＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧ ＣＴＣＣＣＴＧＴＡＧ ＣＡＧＡＡＧＣＡＣＣ ＡＧＣＧＡＡＴＣＴＡ ＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴ ＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧ
４８１ ＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴ ＡＣＴＴＴＣＣＴＧＡ ＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡ ＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡ ＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣ ＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣ
５４１ ＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡ ＣＡＴＴＴＣＣＡＧＣ ＣＧＴＧＣＴＧＣＡＡ ＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣ ＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴ ＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧ
６０１ ＧＴＣＡＣＡＧＴＧＣ ＣＴＡＧＣＴＣＴＡＧ ＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣ ＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡ ＣＣＴＧＴＡＡＴＧＴ ＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧ
６６１ ＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡ ＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡ ＣＡＡＧＣＧＣＧＴＧ ＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴ ＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣ ＴＴＧＴＣＣＴＣＣＡ
７２１ ＴＧＴＣＣＴＧＣＡＣ ＣＴＧＡＧＴＴＴＣＴ ＣＧＧＣＧＧＡＣＣＣ ＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣ ＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣ ＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧ
７８１ ＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡ ＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧ ＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡ ＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧ ＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡ ＣＧＴＴＴＣＣＣＡＡ
８４１ ＧＡＧＧＡＣＣＣＴＧ ＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴ ＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣ ＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡ ＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧ
９０１ ＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡ ＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡ ＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣ ＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧ ＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴ ＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧ
９６１ ＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧ ＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡ ＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧ ＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡ ＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡ ＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧ
１０２１ ＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡ ＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣ ＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧ ＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣ ＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡ ＡＣＣＣＣＡＧＧＴＧ
１０８１ ＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣ ＣＴＣＣＡＡＧＣＣＡ ＡＧＡＧＧＡＡＡＴＧ ＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣ ＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴ ＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣ
１１４１ ＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴ ＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣ ＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣ ＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧ ＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧ ＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧ
１２０１ ＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡ ＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣ ＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧ ＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧ ＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴ ＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣ
１２６１ ＡＧＡＣＴＧＡＣＣＧ ＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧ ＣＡＧＡＴＧＧＣＡＡ ＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧ ＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧ ＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧ
１３２１ ＣＡＣＧＡＡＧＣＣＣ ＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡ ＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧ ＡＡＧＴＣＴＣＴＧＴ ＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴ ＧＧＧＣＡＡＧ
配列番号６１
キメラマウスＶＬ ３６Ｈ１２およびヒト定常軽κ鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡ ＧＡＧＴＴＣＣＣＧＣ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴ ＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴ
６１ ＡＧＡＴＧＣＧＡＣＧ ＴＧＣＴＧＡＴＧＡＣ ＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴ ＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣ ＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴ ＧＧＧＡＧＡＴＣＡＧ
１２１ ＧＣＣＡＧＣＡＴＣＡ ＧＣＴＧＣＡＧＡＴＣ ＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣ ＡＴＣＧＴＧＣＡＣＡ ＧＣＡＡＣＧＧＣＡＴ ＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧ
１８１ ＧＡＡＴＧＧＴＡＴＣ ＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣ ＣＧＧＡＣＡＧＡＧＣ ＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣ ＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡ ＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣ
２４１ ＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧ ＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡ ＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴ ＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴ ＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡ ＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧ
３０１ ＡＡＧＡＴＣＴＣＣＡ ＧＡＧＴＧＧＡＡＧＣ ＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧ ＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴ ＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡ ＡＧＧＣＴＣＴＣＡＣ
３６１ ＧＴＧＣＣＣＣＴＧＡ ＣＡＴＴＴＧＧＡＧＣ ＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧ ＣＴＧＧＡＡＣＴＧＡ ＡＧＡＧＡＡＣＡＧＴ ＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴ
４２１ ＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡ ＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣ ＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧ ＣＡＧＣＴＧＡＡＡＡ ＧＣＧＧＣＡＣＡＧＣ ＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧ
４８１ ＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡ ＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡ ＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡ ＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣ ＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴ ＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣ
５４１ ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧ ＧＣＡＡＴＡＧＣＣＡ ＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧ ＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧ ＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡ ＣＴＣＴＡＣＣＴＡＣ
６０１ ＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡ ＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣ ＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧ ＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧ ＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡ ＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣ
６６１ ＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡ ＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧ ＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣ ＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡ ＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡ ＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡ
７２１ ＴＧＴ
配列番号６２
キメラマウスＶＬ ４５Ｈ６およびヒト定常軽κ鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡ ＧＡＧＴＴＣＣＣＧＣ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴ ＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴ
６１ ＡＧＡＴＧＣＧＡＣＡ ＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣ ＣＣＡＧＡＧＣＣＡＧ ＡＡＡＴＴＣＡＴＧＡ ＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴ ＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡ
１２１ ＧＴＧＴＣＣＧＴＧＡ ＣＡＴＧＴＡＡＡＧＣ ＣＡＧＣＣＡＧＡＡＣ ＧＴＧＧＡＣＡＣＣＡ ＡＣＧＴＧＧＣＣＴＧ ＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧ
１８１ ＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣ ＡＧＡＧＣＣＣＣＡＡ ＧＧＣＴＣＴＧＡＴＣ ＴＡＣＡＧＣＧＣＣＡ ＧＣＴＡＣＡＧＡＴＡ ＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧ
２４１ ＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴ ＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧ ＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣ ＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡ ＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴ ＣＡＧＣＡＡＣＧＴＧ
３０１ ＣＡＧＡＧＣＧＡＧＧ ＡＣＣＴＧＧＣＣＧＡ ＧＴＡＴＴＴＣＴＧＣ ＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡ ＡＣＡＡＧＴＴＣＣＣ ＴＣＴＧＡＣＣＴＴＣ
３６１ ＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡ ＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡ ＡＡＴＣＡＡＧＡＧＡ ＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧ ＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴ ＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣ
４２１ ＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧ ＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴ ＧＡＡＡＡＧＣＧＧＣ ＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧ ＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴ ＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣ
４８１ ＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡ ＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡ ＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧ ＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡ ＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡ ＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴ
５４１ ＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡ ＧＣＧＴＧＡＣＣＧＡ ＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣ ＡＡＧＧＡＣＴＣＴＡ ＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴ ＧＡＧＣＡＧＣＡＣＡ
６０１ ＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡ ＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡ ＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧ ＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴ ＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡ ＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣ
６６１ ＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴ ＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴ ＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣ ＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧ ＧＣＧＡＡＴＧＴ
配列番号６３
キメラマウスＶＬ ４８Ｈ６およびヒト定常軽κ鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡ ＧＡＧＴＴＣＣＣＧＣ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴ ＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴ
６１ ＡＧＡＴＧＣＧＡＣＡ ＴＣＧＴＧＡＴＧＴＣ ＴＣＡＧＡＧＣＣＣＴ ＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧ ＣＣＧＴＧＴＣＴＧＴ ＧＧＧＡＧＡＧＡＡＡ
１２１ ＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡ ＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧ ＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣ ＣＴＧＣＴＧＴＡＣＴ ＣＣＡＧＣＡＡＣＣＡ ＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣ
１８１ ＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴ ＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡ ＧＣＣＣＧＧＡＣＡＧ ＴＣＴＣＣＣＡＡＧＣ ＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡ ＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣ
２４１ ＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡ ＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣ ＣＧＡＴＡＧＡＴＴＣ ＡＣＡＧＧＣＡＧＣＧ ＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣ ＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣ
３０１ ＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡ ＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡ ＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣ ＣＴＧＧＣＴＧＴＧＴ ＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡ ＣＣＡＧＴＡＴＴＡＣ
３６１ ＡＧＣＴＡＣＣＣＴＣ ＴＧＡＣＣＴＴＣＧＧ ＡＧＣＣＧＧＣＡＣＣ ＡＡＧＣＴＧＧＡＡＣ ＴＧＡＡＣＡＧＡＡＣ ＡＧＴＧＧＣＣＧＣＴ
４２１ ＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴ ＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣ ＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣ ＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡ ＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣ ＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣ
４８１ ＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣ ＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴ ＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡ ＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧ ＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡ ＧＧＴＧＧＡＣＡＡＣ
５４１ ＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡ ＧＣＧＧＣＡＡＴＡＧ ＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣ ＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣ ＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡ ＧＧＡＣＴＣＴＡＣＣ
６０１ ＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡ ＧＣＡＧＣＡＣＡＣＴ ＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣ ＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴ ＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡ ＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣ
６６１ ＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧ ＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡ ＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴ ＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡ ＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴ ＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣ
７２１ ＧＡＡＴＧＴ
配列番号６４
キメラマウスＶＬ １１Ｈ７およびヒト定常軽κ鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡ ＧＡＧＴＴＣＣＣＧＣ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴ ＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴ
６１ ＡＧＡＴＧＣＧＡＧＡ ＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣ ＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴ ＧＣＴＣＴＧＡＴＧＧ ＣＴＧＣＴＴＣＣＣＣ ＴＧＧＣＧＡＧＡＡＡ
１２１ ＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡ ＣＣＴＧＴＡＧＣＧＴ ＧＴＣＣＡＧＣＡＧＣ ＡＴＣＡＧＣＡＧＣＴ ＣＣＡＡＣＣＴＧＣＡ ＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧ
１８１ ＣＡＧＡＡＧＴＣＣＧ ＡＧＡＣＡＡＧＣＣＣ ＣＡＡＧＣＣＴＴＧＧ ＡＴＣＴＡＣＧＧＣＡ ＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴ ＧＧＣＣＡＧＣＧＧＡ
２４１ ＧＴＧＣＣＴＧＴＣＡ ＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧ ＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴ ＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴ ＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣ ＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣ
３０１ ＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧ ＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣ ＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣ ＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴ ＧＧＴＣＴＡＧＣＴＡ ＣＣＣＴＣＴＧＡＣＣ
３６１ ＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧ ＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴ ＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ ＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧ ＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧ ＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣ
４２１ ＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡ ＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡ ＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴ ＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴ ＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧ ＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣ
４８１ ＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣ ＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣ ＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧ ＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧ ＡＣＡＡＣＧＣＣＣＴ ＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣ
５４１ ＡＡＴＡＧＣＣＡＡＧ ＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣ ＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣ ＡＧＣＡＡＧＧＡＣＴ ＣＣＡＣＣＴＡＴＡＧ ＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣ
６０１ ＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣ ＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣ ＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧ ＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧ ＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧ ＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣ
６６１ ＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣ ＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣ ＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧ ＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣ ＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧ Ｔ
配列番号６５
キメラマウスＶＬおよび４９Ｇ４ヒト定常軽κ鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡ ＧＡＧＴＴＣＣＣＧＣ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴ ＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴ
６１ ＡＧＡＴＧＣＧＡＣＧ ＴＧＣＴＧＡＴＧＡＣ ＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴ ＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣ ＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴ ＧＧＧＡＧＡＴＣＡＧ
１２１ ＧＣＣＡＧＣＡＴＣＡ ＧＣＴＧＣＡＧＡＴＣ ＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣ ＡＴＣＧＴＧＣＡＣＡ ＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡ ＴＡＣＣＴＡＣＣＴＧ
１８１ ＧＡＡＴＧＧＴＴＣＣ ＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣ ＣＧＧＡＣＡＧＡＧＣ ＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣ ＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡ ＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣ
２４１ ＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧ ＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡ ＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴ ＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴ ＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡ ＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧ
３０１ ＡＡＧＡＴＣＴＣＣＡ ＧＡＧＴＧＧＡＡＧＣ ＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧ ＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴ ＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡ ＡＧＧＣＴＣＴＣＡＣ
３６１ ＧＴＧＣＣＣＣＴＧＡ ＣＡＴＴＴＧＧＡＧＣ ＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧ ＣＴＧＧＡＡＣＴＧＡ ＡＧＡＧＡＡＣＡＧＴ ＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴ
４２１ ＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡ ＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣ ＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧ ＣＡＧＣＴＧＡＡＡＡ ＧＣＧＧＣＡＣＡＧＣ ＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧ
４８１ ＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡ ＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡ ＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡ ＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣ ＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴ ＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣ
５４１ ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧ ＧＣＡＡＴＡＧＣＣＡ ＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧ ＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧ ＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡ ＣＴＣＴＡＣＣＴＡＣ
６０１ ＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡ ＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣ ＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧ ＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧ ＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡ ＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣ
６６１ ＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡ ＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧ ＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣ ＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡ ＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡ ＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡ
７２１ ＴＧＴ
配列番号６６
キメラマウスＶＨ ３６Ｈ１２およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖のアミノ酸配列
１ ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬ ＬＡＩＬＫＧＶＱＣＥ ＶＱＬＱＱＳＧＡＧＬ ＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳ ＣＴＡＳＧＦＮＩＫＤ ＴＹＭＨＷＶＲＱＲＰ
６１ ＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩ ＤＰＡＴＡＮＴＫＹＤ ＰＫＦＱＧＫＡＴＬＴ ＴＤＴＳＳＮＴＡＹＬ ＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴ ＡＶＹＹＣＶＴＹＧＹ
１２１ ＤＶＳＷＦＡＹＷＧＬ ＧＡＬＶＴＶＳＡＡＳ ＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡ ＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴ ＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹ ＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮ
１８１ ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬ ＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰ ＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴ ＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴ ＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹ
２４１ ＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰ ＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬ ＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭ ＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶ ＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥ ＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶ
３０１ ＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ ＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶ ＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤ ＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫ ＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩ ＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱ
３６１ ＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰ ＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱ ＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦ ＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥ ＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫ ＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧ
４２１ ＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶ ＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶ ＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬ ＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳ ＬＳＬＧＫ
配列番号６７
キメラマウスＶＨ ４５Ｈ６およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖のアミノ酸配列
１ ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬ ＬＡＩＬＫＧＶＱＣＤ ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬ ＶＱＰＧＧＳＲＫＬＳ ＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳ ＦＧＭＨＷＶＲＱＡＰ
６１ ＥＫＧＬＥＷＶＡＹＩ ＳＳＧＮＳＮＩＹＹＶ ＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳ ＲＤＮＰＫＮＴＬＦＬ ＱＭＴＳＬＲＳＥＤＴ ＡＭＹＹＣＡＲＫＲＡ
１２１ ＹＧＤＹＳＧＦＳＭＤ ＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶ ＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶ ＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴ ＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬ ＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴ
１８１ ＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳ ＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱ ＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶ ＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴ ＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫ ＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ
２４１ ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰ ＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰ ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫ ＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥ ＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱ ＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹ
３０１ ＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫ ＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳ ＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶ ＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥ ＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬ ＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫ
３６１ ＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶ ＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭ ＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬ ＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡ ＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥ ＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬ
４２１ ＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳ ＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱ ＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭ ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ ＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号６８
キメラマウスＶＨ ４８Ｈ６およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖のアミノ酸配列
１ ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬ ＬＡＩＬＫＧＶＱＣＥ ＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬ ＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳ ＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧ ＹＡＭＳＷＶＲＱＴＰ
６１ ＥＫＲＬＥＷＶＡＳＩ ＳＳＧＧＳＴＹＹＰＤ ＳＶＫＧＲＦＴＩＰＲ ＤＤＡＲＮＩＬＹＬＱ ＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡ ＩＹＹＣＡＲＧＧＨＧ
１２１ ＳＳＹＶＹＷＧＱＧＴ ＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫ ＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣ ＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡ ＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰ ＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧ
１８１ ＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰ ＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳ ＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳ ＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮ ＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶ ＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰ
２４１ ＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦ ＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰ ＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳ ＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶ ＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱ ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶ
３０１ ＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥ ＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳ ＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬ ＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳ ＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫ ＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲ
３６１ ＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳ ＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳ ＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰ ＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮ ＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴ ＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦ
４２１ ＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫ ＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳ ＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮ ＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳ ＬＧＫ
配列番号６９
キメラマウスＶＨ １１Ｈ７およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖のアミノ酸配列
１ ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬ ＬＡＩＬＫＧＶＱＣＱ ＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬ ＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴ ＣＴＶＳＧＦＳＬＴＩ ＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰ
６１ ＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩ ＷＳＧＧＳＴＤＹＮＡ ＡＦＩＳＲＬＳＩＳＫ ＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫ ＭＮＳＬＱＡＮＤＴＡ ＩＹＹＣＡＲＲＤＹＧ
１２１ ＳＲＳＦＹＹＡＭＤＹ ＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳ ＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦ ＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳ ＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶ ＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶ
１８１ ＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧ ＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳ ＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶ ＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫ ＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰ ＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥ
２４１ ＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣ ＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳ ＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤ ＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶ ＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥ ＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶ
３０１ ＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴ ＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴ ＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬ ＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹ ＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰ ＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡ
３６１ ＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹ ＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴ ＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶ ＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶ ＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮ ＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤ
４２１ ＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲ ＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥ ＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨ ＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫ ＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号７０
キメラマウスＶＨ ４９Ｇ４およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖のアミノ酸配列
１ ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬ ＬＡＩＬＫＧＶＱＣＥ ＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬ ＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳ ＣＲＡＳＧＦＮＩＫＤ ＴＹＭＨＷＶＫＱＲＰ
６１ ＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩ ＤＰＡＲＧＮＴＫＹＤ ＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴ ＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬ ＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴ ＡＶＹＹＣＡＳＡＭＤ
１２１ ＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶ ＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶ ＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴ ＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬ ＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴ ＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳ
１８１ ＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱ ＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶ ＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴ ＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫ ＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰ
２４１ ＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰ ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫ ＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥ ＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱ ＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹ ＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫ
３０１ ＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳ ＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶ ＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥ ＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬ ＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫ ＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶ
３６１ ＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭ ＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬ ＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡ ＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥ ＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬ ＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳ
４２１ ＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱ ＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭ ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ ＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号７１
キメラマウスＶＬ ３６Ｈ１２およびヒト定常軽κ鎖のアミノ酸配列
１ ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ ＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡ ＲＣＤＶＬＭＴＱＴＰ ＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱ ＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳ ＩＶＨＳＮＧＩＴＹＬ
６１ ＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳ ＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮ ＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳ ＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬ ＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬ ＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨ
１２１ ＶＰＬＴＦＧＡＧＴＫ ＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰ ＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥ ＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶ ＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥ ＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡ
１８１ ＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶ ＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹ ＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫ ＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡ ＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳ ＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥ
２４１ Ｃ
配列番号７２
キメラマウスＶＬ ４５Ｈ６およびヒト定常軽κ鎖のアミノ酸配列
１ ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ ＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡ ＲＣＤＩＶＭＴＱＳＱ ＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲ ＶＳＶＴＣＫＡＳＱＮ ＶＤＴＮＶＡＷＹＱＱ
６１ ＫＰＧＱＳＰＫＡＬＩ ＹＳＡＳＹＲＹＳＧＶ ＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧ ＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶ ＱＳＥＤＬＡＥＹＦＣ ＱＱＹＮＫＦＰＬＴＦ
１２１ ＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦ ＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧ ＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮ ＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷ ＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮ
１８１ ＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳ ＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴ ＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫ ＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨ ＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳ ＦＮＲＧＥＣ
配列番号７３
キメラマウスＶＬ ４８Ｈ６およびヒト定常軽κ鎖のアミノ酸配列
１ ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ ＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡ ＲＣＤＩＶＭＳＱＳＰ ＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫ ＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳ ＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹ
６１ ＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱ ＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳ ＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦ ＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴ ＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤ ＬＡＶＹＹＣＨＱＹＹ
１２１ ＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴ ＫＬＥＬＮＲＴＶＡＡ ＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤ ＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶ ＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲ ＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮ
１８１ ＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳ ＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴ ＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳ ＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹ ＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳ ＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧ
２４１ ＥＣ
配列番号７４
キメラマウスＶＬ １１Ｈ７およびヒト定常軽κ鎖のアミノ酸配列
１ ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ ＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡ ＲＣＥＩＶＬＴＱＳＰ ＡＬＭＡＡＳＰＧＥＫ ＶＴＩＴＣＳＶＳＳＳ ＩＳＳＳＮＬＨＷＹＱ
６１ ＱＫＳＥＴＳＰＫＰＷ ＩＹＧＴＳＮＬＡＳＧ ＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳ ＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳ ＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹ ＣＱＱＷＳＳＹＰＬＴ
１２１ ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩ ＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳ ＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮ ＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱ ＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧ
１８１ ＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤ ＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳ ＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥ ＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴ ＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫ ＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号７５
キメラマウスＶＬ ４９Ｇ４およびヒト定常軽κ鎖のアミノ酸配列
１ ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ ＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡ ＲＣＤＶＬＭＴＱＴＰ ＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱ ＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳ ＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬ
６１ ＥＷＦＬＱＫＰＧＱＳ ＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮ ＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳ ＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬ ＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬ ＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨ
１２１ ＶＰＬＴＦＧＡＧＴＫ ＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰ ＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥ ＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶ ＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥ ＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡ
１８１ ＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶ ＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹ ＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫ ＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡ ＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳ ＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥ
２４１ Ｃ
配列番号７６
膜結合抗ヒトＣＤ３ｓｃＦｖ（シグナルペプチド、続くヒトＩｇＧ１のＣＨ２－ＣＨ３ドメインおよびヒトＣＤ８０細胞質尾部に連結されたＯＫＴ ３ｓｃＦｖ）のアミノ酸配列
１ ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬ ＦＬＦＳＳＡＹＳＱＶ ＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡ ＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣ ＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹ ＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧ
６１ ＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮ ＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱ ＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴ ＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱ ＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡ ＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤ
１２１ ＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧ ＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧ ＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧ ＧＳＱＩＶＬＴＱＳＰ ＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫ ＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳ
１８１ ＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫ ＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹ ＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰ ＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴ ＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥ ＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱ
２４１ ＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧ ＳＧＴＫＬＥＩＮＲＡ ＡＡＰＳＶＦＬＦＰＰ ＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ ＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤ ＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦ
３０１ ＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨ ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱ ＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶ ＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮ ＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮ ＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴ
３６１ ＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥ ＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲ ＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬ ＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳ ＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧ ＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰ
４２１ ＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦ ＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳ ＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣ ＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨ ＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰ ＧＷＡＩＴＬＩＳＶＮ
４８１ ＧＩＦＶＩＣＣＬＴＹ ＣＦＡＰＲＣＲＥＲＲ ＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶ ＲＰＶ
配列番号７７
膜結合抗ヒトＣＤ３ｓｃＦｖをコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＡＡＡＴＧＧＧ ＴＣＡＣＣＴＴＴＡＴ ＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧ ＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴ ＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡ ＣＴＣＴＣＡＧＧＴＣ
６１ ＣＡＧＴＴＧＣＡＧＣ ＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣ ＣＧＡＡＴＴＧＧＣＴ ＡＧＡＣＣＴＧＧＣＧ ＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡ ＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣ
１２１ ＡＡＧＧＣＴＴＣＣＧ ＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴ ＣＡＣＣＡＧＡＴＡＣ ＡＣＣＡＴＧＣＡＣＴ ＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡ ＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡ
１８１ ＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧ ＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧ ＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣ ＣＣＴＴＣＴＣＧＧＧ ＧＣＴＡＣＡＣＣＡＡ ＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧ
２４１ ＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧ ＡＣＡＡＧＧＣＴＡＣ ＣＣＴＧＡＣＡＡＣＣ ＧＡＣＡＡＧＴＣＣＴ ＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣ ＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧ
３０１ ＣＴＧＴＣＣＡＧＣＣ ＴＧＡＣＣＴＣＴＧＡ ＧＧＡＣＴＣＣＧＣＣ ＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴ ＧＴＧＣＣＣＧＧＴＡ ＣＴＡＣＧＡＣＧＡＣ
３６１ ＣＡＣＴＡＣＴＧＣＣ ＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧ ＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣ ＡＣＣＡＣＡＣＴＧＡ ＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧ ＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡ
４２１ ＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧ ＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣ ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ ＧＧＴＴＣＴＣＡＧＡ ＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣ ＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴ
４８１ ＧＣＣＡＴＣＡＴＧＴ ＣＣＧＣＴＴＣＴＣＣ ＣＧＧＣＧＡＧＡＡＡ ＧＴＧＡＣＡＡＴＧＡ ＣＣＴＧＣＴＣＣＧＣ ＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣ
５４１ ＧＴＧＴＣＣＴＡＣＡ ＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡ ＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧ ＴＣＣＧＧＣＡＣＣＴ ＣＴＣＣＴＡＡＧＣＧ ＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣ
６０１ ＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡ ＡＧＣＴＧＧＣＡＴＣ ＴＧＧＣＧＴＧＣＣＣ ＧＣＴＣＡＣＴＴＴＡ ＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧ ＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣ
６６１ ＡＧＣＴＡＣＴＣＣＣ ＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣ ＴＧＧＣＡＴＧＧＡＡ ＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧ ＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡ ＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧ
７２１ ＣＡＧＴＧＧＴＣＴＡ ＧＣＡＡＣＣＣＣＴＴ ＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣ ＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡ ＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴ ＣＡＡＣＡＧＡＧＣＣ
７８１ ＧＣＣＧＣＴＣＣＴＴ ＣＣＧＴＧＴＴＴＣＴ ＧＴＴＣＣＣＴＣＣＡ ＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧ ＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴ ＧＡＴＣＴＣＴＣＧＧ
８４１ ＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧ ＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴ ＧＧＴＧＧＴＣＧＡＴ ＧＴＧＴＣＴＣＡＣＧ ＡＧＧＡＣＣＣＡＧＡ ＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣ
９０１ ＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧ ＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴ ＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣ ＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡ ＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧ ＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧ
９６１ ＴＡＣＡＡＣＴＣＣＡ ＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴ ＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧ ＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣ ＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡ ＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣ
１０２１ ＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴ ＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡ ＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣ ＡＡＧＧＣＴＣＴＧＣ ＣＣＧＣＴＣＣＴＡＴ ＣＧＡＡＡＡＧＡＣＣ
１０８１ ＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧ ＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡ ＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡ ＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴ ＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣ ＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧ
１１４１ ＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡ ＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡ ＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧ ＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧ ＴＣＡＡＧＧＧＣＴＴ ＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣ
１２０１ ＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧ ＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡ ＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣ ＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡ ＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡ ＧＡＣＣＡＣＡＣＣＴ
１２６１ ＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧ ＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧ ＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣ ＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡ ＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴ ＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣ
１３２１ ＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣ ＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴ ＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣ ＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣ ＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴ ＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣ
１３８１ ＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡ ＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣ ＴＣＴＧＴＣＣＣＣＴ ＧＧＣＴＧＧＧＣＴＡ ＴＣＡＣＣＣＴＧＡＴ ＣＴＣＴＧＴＧＡＡＣ
１４４１ ＧＧＣＡＴＣＴＴＣＧ ＴＧＡＴＣＴＧＣＴＧ ＣＣＴＧＡＣＣＴＡＣ ＴＧＣＴＴＣＧＣＣＣ ＣＴＡＧＡＴＧＣＡＧ ＡＧＡＧＣＧＧＣＧＧ
１５０１ ＡＧＡＡＡＣＧＡＡＣ ＧＧＣＴＧＣＧＧＡＧ ＡＧＡＡＴＣＴＧＴＣ ＣＧＧＣＣＴＧＴＧ
配列の説明
配列番号１
アミノ酸配列ヒトＨＶＥＭ（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３、ａａ１～２８３）
１ ＭＥＰＰＧＤＷＧＰＰ ＰＷＲＳＴＰＫＴＤＶ ＬＲＬＶＬＹＬＴＦＬ ＧＡＰＣＹＡＰＡＬＰ ＳＣＫＥＤＥＹＰＶＧ ＳＥＣＣＰＫＣＳＰＧ
６１ ＹＲＶＫＥＡＣＧＥＬ ＴＧＴＶＣＥＰＣＰＰ ＧＴＹＩＡＨＬＮＧＬ ＳＫＣＬＱＣＱＭＣＤ ＰＡＭＧＬＲＡＳＲＮ ＣＳＲＴＥＮＡＶＣＧ
１２１ ＣＳＰＧＨＦＣＩＶＱ ＤＧＤＨＣＡＡＣＲＡ ＹＡＴＳＳＰＧＱＲＶ ＱＫＧＧＴＥＳＱＤＴ ＬＣＱＮＣＰＰＧＴＦ ＳＰＮＧＴＬＥＥＣＱ
１８１ ＨＱＴＫＣＳＷＬＶＴ ＫＡＧＡＧＴＳＳＳＨ ＷＶＷＷＦＬＳＧＳＬ ＶＩＶＩＶＣＳＴＶＧ ＬＩＩＣＶＫＲＲＫＰ ＲＧＤＶＶＫＶＩＶＳ
２４１ ＶＱＲＫＲＱＥＡＥＧ ＥＡＴＶＩＥＡＬＱＡ ＰＰＤＶＴＴＶＡＶＥ ＥＴＩＰＳＦＴＧＲＳ ＰＮＨ
シグナルペプチド（ａａ配列１～３８）、細胞外ドメイン（ａａ配列３９～２０２、ＣＲＤ１（ａａ配列４２～７５）、ＣＲＤ２（ａａ配列７８～１１９）、ＣＲＤ３（ａａ配列１２１～１６２）、および切断ＣＲＤ４（ａａ配列１６５～１７９）、「リンカー」（ａａ配列１８０～２０２）を含む）、膜貫通ドメイン（ａａ配列２０３～２２３）、および細胞質ドメイン（ａａ配列２２４～２８３）
配列番号２
ヒトＨＶＥＭタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列（哺乳動物発現のために最適化）
１ ＡＴＧＧＡＧＣＣＣＣ ＣＴＧＧＣＧＡＴＴＧ ＧＧＧＡＣＣＴＣＣＡ ＣＣＴＴＧＧＡＧＡＡ ＧＣＡＣＣＣＣＣＡＡ ＧＡＣＣＧＡＣＧＴＧ
６１ ＣＴＧＣＧＧＣＴＧＧ ＴＧＣＴＧＴＡＣＣＴ ＧＡＣＣＴＴＴＣＴＧ ＧＧＣＧＣＴＣＣＣＴ ＧＴＴＡＣＧＣＣＣＣ ＴＧＣＣＣＴＧＣＣＴ
１２１ ＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧ ＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡ ＣＣＣＴＧＴＧＧＧＣ ＡＧＣＧＡＧＴＧＣＴ ＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧ ＣＡＧＣＣＣＴＧＧＣ
１８１ ＴＡＣＡＧＡＧＴＧＡ ＡＡＧＡＧＧＣＣＴＧ ＣＧＧＣＧＡＧＣＴＧ ＡＣＣＧＧＣＡＣＣＧ ＴＧＴＧＴＧＡＡＣＣ ＴＴＧＴＣＣＣＣＣＴ
２４１ ＧＧＣＡＣＣＴＡＴＡ ＴＣＧＣＣＣＡＣＣＴ ＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧ ＡＧＣＡＡＧＴＧＣＣ ＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡ ＧＡＴＧＴＧＣＧＡＣ
３０１ ＣＣＣＧＣＴＡＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣ ＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣ ＴＧＣＡＧＣＣＧＧＡ ＣＣＧＡＧＡＡＴＧＣ ＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣ
３６１ ＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧ ＧＣＣＡＣＴＴＣＴＧ ＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧ ＧＡＣＧＧＣＧＡＴＣ ＡＣＴＧＣＧＣＣＧＣ ＣＴＧＴＡＧＡＧＣＣ
４２１ ＴＡＣＧＣＣＡＣＡＴ ＣＴＡＧＣＣＣＡＧＧ ＣＣＡＧＡＧＡＧＴＧ ＣＡＧＡＡＧＧＧＣＧ ＧＣＡＣＣＧＡＧＡＧ ＣＣＡＧＧＡＴＡＣＣ
４８１ ＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡ ＡＴＴＧＣＣＣＴＣＣ ＣＧＧＣＡＣＣＴＴＣ ＡＧＣＣＣＣＡＡＣＧ ＧＣＡＣＡＣＴＧＧＡ ＡＧＡＧＴＧＣＣＡＧ
５４１ ＣＡＣＣＡＧＡＣＣＡ ＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧ ＧＣＴＣＧＴＧＡＣＣ ＡＡＡＧＣＣＧＧＣＧ ＣＴＧＧＣＡＣＡＡＧ ＣＡＧＣＴＣＴＣＡＣ
６０１ ＴＧＧＧＴＧＴＧＧＴ ＧＧＴＴＴＣＴＧＡＧ ＣＧＧＣＡＧＣＣＴＣ ＧＴＧＡＴＣＧＴＧＡ ＴＴＧＴＧＴＧＣＡＧ ＣＡＣＣＧＴＧＧＧＣ
６６１ ＣＴＧＡＴＣＡＴＣＴ ＧＣＧＴＧＡＡＧＣＧ ＧＡＧＡＡＡＧＣＣＣ ＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧ ＴＣＧＴＧＡＡＡＧＴ ＧＡＴＣＧＴＧＴＣＣ
７２１ ＧＴＧＣＡＧＣＧＧＡ ＡＧＣＧＧＣＡＧＧＡ ＡＧＣＣＧＡＡＧＧＣ ＧＡＧＧＣＣＡＣＡＧ ＴＧＡＴＴＧＡＧＧＣ ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＴ
７８１ ＣＣＣＣＣＴＧＡＣＧ ＴＧＡＣＡＡＣＡＧＴ ＧＧＣＣＧＴＧＧＡＡ ＧＡＧＡＣＡＡＴＣＣ ＣＣＡＧＣＴＴＣＡＣ ＣＧＧＣＡＧＡＴＣＣ
８４１ ＣＣＣＡＡＣＣＡＣ
配列番号３
アミノ酸配列ＣＲＤ１切断ヒトＨＶＥＭ
１ ＭＥＷＳＧＶＦＭＦＬ ＬＳＶＴＡＧＶＨＳＥ ＰＣＰＰＧＴＹＩＡＨ ＬＮＧＬＳＫＣＬＱＣ ＱＭＣＤＰＡＭＧＬＲ ＡＳＲＮＣＳＲＴＥＮ
６１ ＡＶＣＧＣＳＰＧＨＦ ＣＩＶＱＤＧＤＨＣＡ ＡＣＲＡＹＡＴＳＳＰ ＧＱＲＶＱＫＧＧＴＥ ＳＱＤＴＬＣＱＮＣＰ ＰＧＴＦＳＰＮＧＴＬ
１２１ ＥＥＣＱＨＱＴＫＣＳ ＷＬＶＴＫＡＧＡＧＴ ＳＳＳＨＷＶＷＷＦＬ ＳＧＳＬＶＩＶＩＶＣ ＳＴＶＧＬＩＩＣＶＫ ＲＲＫＰＲＧＤＶＶＫ
１８１ ＶＩＶＳＶＱＲＫＲＱ ＥＡＥＧＥＡＴＶＩＥ ＡＬＱＡＰＰＤＶＴＴ ＶＡＶＥＥＴＩＰＳＦ ＴＧＲＳＰＮＨ
マウスＩｇシグナルペプチド（ａａ配列１～１９）、細胞外ドメイン（ａａ配列２０～１４６、ＣＲＤ２（ａａ配列２２～６３）、ＣＲＤ３（ａａ配列６５～１０６）、および切断ＣＲＤ４（ａａ配列１０９～１２３）、「リンカー」断片（ａａ配列１２４～１４６）を含む）、膜貫通ドメイン（ａａ配列１４７～１６７）、および細胞質ドメイン（ａａ配列１６８～２２７）
配列番号４
ＣＲＤ１切断ヒトＨＶＥＭタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列（哺乳動物発現のために最適化）
１ ＡＴＧＧＡＧＴＧＧＡ ＧＣＧＧＣＧＴＧＴＴ ＣＡＴＧＴＴＣＣＴＧ ＣＴＧＡＧＣＧＴＧＡ ＣＡＧＣＣＧＧＣＧＴ ＧＣＡＣＡＧＣＧＡＡ
６１ ＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣ ＣＴＧＧＣＡＣＣＴＡ ＴＡＴＣＧＣＣＣＡＣ ＣＴＧＡＡＣＧＧＣＣ ＴＧＡＧＣＡＡＧＴＧ ＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣ
１２１ ＣＡＧＡＴＧＴＧＣＧ ＡＣＣＣＣＧＣＴＡＴ ＧＧＧＣＣＴＧＡＧＡ ＧＣＣＡＧＣＡＧＡＡ ＡＣＴＧＣＡＧＣＣＧ ＧＡＣＣＧＡＧＡＡＴ
１８１ ＧＣＣＧＴＧＴＧＣＧ ＧＣＴＧＴＴＣＴＣＣ ＴＧＧＣＣＡＣＴＴＣ ＴＧＣＡＴＣＧＴＧＣ ＡＧＧＡＣＧＧＣＧＡ ＴＣＡＣＴＧＣＧＣＣ
２４１ ＧＣＣＴＧＴＡＧＡＧ ＣＣＴＡＣＧＣＣＡＣ ＡＴＣＴＡＧＣＣＣＴ ＧＧＣＣＡＧＡＧＡＧ ＴＧＣＡＧＡＡＧＧＧ ＣＧＧＣＡＣＣＧＡＧ
３０１ ＡＧＣＣＡＧＧＡＴＡ ＣＣＣＴＧＴＧＣＣＡ ＧＡＡＴＴＧＣＣＣＴ ＣＣＣＧＧＣＡＣＣＴ ＴＣＡＧＣＣＣＣＡＡ ＣＧＧＣＡＣＡＣＴＧ
３６１ ＧＡＡＧＡＧＴＧＣＣ ＡＧＣＡＣＣＡＧＡＣ ＣＡＡＧＴＧＣＡＧＣ ＴＧＧＣＴＣＧＴＧＡ ＣＣＡＡＡＧＣＣＧＧ ＣＧＣＴＧＧＣＡＣＡ
４２１ ＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣ ＡＣＴＧＧＧＴＧＴＧ ＧＴＧＧＴＴＴＣＴＧ ＡＧＣＧＧＣＡＧＣＣ ＴＣＧＴＧＡＴＣＧＴ ＧＡＴＴＧＴＧＴＧＣ
４８１ ＡＧＣＡＣＣＧＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＴＣＡＴ ＣＴＧＣＧＴＧＡＡＧ ＣＧＧＡＧＡＡＡＧＣ ＣＣＡＧＡＧＧＣＧＡ ＣＧＴＣＧＴＧＡＡＡ
５４１ ＧＴＧＡＴＣＧＴＧＴ ＣＣＧＴＧＣＡＧＣＧ ＧＡＡＧＣＧＧＣＡＧ ＧＡＡＧＣＣＧＡＡＧ ＧＣＧＡＧＧＣＣＡＣ ＡＧＴＧＡＴＴＧＡＧ
６０１ ＧＣＣＣＴＧＣＡＧＧ ＣＴＣＣＣＣＣＴＧＡ ＣＧＴＧＡＣＡＡＣＡ ＧＴＧＧＣＣＧＴＧＧ ＡＡＧＡＧＡＣＡＡＴ ＣＣＣＣＡＧＣＴＴＣ
６６１ ＡＣＣＧＧＣＡＧＡＴ ＣＣＣＣＣＡＡＣＣＡ Ｃ
配列番号５
アミノ酸配列カニクイザルＨＶＥＭ（ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿００５５４５０６１．１、ａａ１～２８０）
１ ＭＥＰＰＧＧＷＧＳＰ ＰＲＲＰＡＰＫＡＤＩ ＬＴＬＶＬＹＬＴＦＬ ＧＳＰＣＹＡＰＡＬＰ ＳＣＫＥＤＥＹＰＶＧ ＳＥＣＣＰＫＣＧＰＧ
６１ ＦＨＶＲＱＡＣＧＥＱ ＴＧＴＶＣＥＰＣＳＰ ＧＴＹＩＡＨＦＮＧＬ ＳＫＣＬＱＣＱＭＣＤ ＰＡＭＧＬＲＴＳＲＮ ＣＳＴＴＡＮＡＬＣＧ
１２１ ＣＳＰＧＨＦＣＩＩＱ ＤＧＤＨＣＡＡＣＲＡ ＹＡＴＳＳＰＧＱＲＶ ＱＫＧＧＴＥＳＱＤＴ ＬＣＱＮＣＰＰＧＴＦ ＳＳＮＧＴＬＥＥＣＱ
１８１ ＨＧＴＫＣＳＫＷＬＶ ＴＥＡＧＰＧＴＳＳＦ ＲＷＶＷＷＬＬＳＧＴ ＬＩＶＩＩＶＧＬＩＬ ＧＬＩＹＶＫＲＲＫＳ ＲＧＤＶＶＫＶＩＶＳ
２４１ ＶＱＲＫＲＱＥＡＥＧ ＥＡＩＶＴＥＡＬＱＡ ＰＰＤＩＴＴＶＡＶＥ ＥＴＥＰＡＦＴＧＲＳ
配列番号６
カニクイザルＨＶＥＭタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列（哺乳動物発現のために最適化）
１ ＡＴＧＧＡＧＣＣＴＣ ＣＡＧＧＣＧＧＡＴＧ ＧＧＧＡＴＣＴＣＣＣ ＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣ ＣＴＧＣＣＣＣＣＡＡ ＧＧＣＣＧＡＴＡＴＣ
６１ ＣＴＧＡＣＣＣＴＧＧ ＴＧＣＴＧＴＡＣＣＴ ＧＡＣＣＴＴＣＣＴＧ ＧＧＣＡＧＣＣＣＴＴ ＧＴＴＡＣＧＣＣＣＣ ＴＧＣＣＣＴＧＣＣＴ
１２１ ＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧ ＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡ ＣＣＣＴＧＴＧＧＧＣ ＡＧＣＧＡＧＴＧＣＴ ＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧ ＣＧＧＣＣＣＴＧＧＡ
１８１ ＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣ ＧＧＣＡＧＧＣＣＴＧ ＴＧＧＣＧＡＧＣＡＧ ＡＣＣＧＧＣＡＣＡＧ ＴＧＴＧＣＧＡＧＣＣ ＴＴＧＴＡＧＣＣＣＣ
２４１ ＧＧＣＡＣＣＴＡＴＡ ＴＣＧＣＣＣＡＣＴＴ ＣＡＡＣＧＧＣＣＴＧ ＡＧＣＡＡＧＴＧＣＣ ＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡ ＧＡＴＧＴＧＣＧＡＣ
３０１ ＣＣＣＧＣＴＡＴＧＧ ＧＣＣＴＧＣＧＧＡＣ ＣＡＧＣＡＧＡＡＡＴ ＴＧＣＡＧＣＡＣＣＡ ＣＣＧＣＣＡＡＴＧＣ ＣＣＴＧＴＧＣＧＧＣ
３６１ ＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧ ＧＣＣＡＣＴＴＣＴＧ ＣＡＴＴＡＴＴＣＡＧ ＧＡＣＧＧＣＧＡＣＣ ＡＣＴＧＣＧＣＣＧＣ ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣ
４２１ ＴＡＴＧＣＣＡＣＡＴ ＣＴＡＧＣＣＣＴＧＧ ＣＣＡＧＣＧＧＧＴＧ ＣＡＧＡＡＧＧＧＣＧ ＧＡＡＣＡＧＡＧＴＣ ＴＣＡＧＧＡＣＡＣＣ
４８１ ＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡ ＡＣＴＧＣＣＣＣＣＣ ＴＧＧＣＡＣＣＴＴＣ ＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧ ＧＣＡＣＣＣＴＧＧＡ ＡＧＡＧＴＧＣＣＡＧ
５４１ ＣＡＣＧＧＣＡＣＣＡ ＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡ ＧＴＧＧＣＴＣＧＴＧ ＡＣＡＧＡＧＧＣＣＧ ＧＡＣＣＴＧＧＣＡＣ ＣＡＧＣＡＧＣＴＴＣ
６０１ ＡＧＡＴＧＧＧＴＧＴ ＧＧＴＧＧＣＴＧＣＴ ＧＡＧＣＧＧＣＡＣＡ ＣＴＧＡＴＣＧＴＧＡ ＴＣＡＴＣＧＴＧＧＧ ＣＣＴＧＡＴＣＣＴＧ
６６１ ＧＧＡＣＴＧＡＴＣＴ ＡＣＧＴＧＡＡＧＣＧ ＧＣＧＧＡＡＧＴＣＣ ＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧ ＴＣＧＴＧＡＡＡＧＴ ＧＡＴＣＧＴＧＴＣＣ
７２１ ＧＴＧＣＡＧＣＧＧＡ ＡＧＡＧＡＣＡＧＧＡ ＡＧＣＣＧＡＧＧＧＣ ＧＡＧＧＣＣＡＴＴＧ ＴＧＡＣＣＧＡＡＧＣ ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣ
７８１ ＣＣＴＣＣＣＧＡＣＡ ＴＴＡＣＡＡＣＣＧＴ ＧＧＣＣＧＴＧＧＡＡ ＧＡＡＡＣＣＧＡＧＣ ＣＣＧＣＣＴＴＴＡＣ ＣＧＧＣＡＧＡＴＣＣ
配列番号７
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＡＡＧＴＴＧＣＣＴＧＴＴＡＧＧＣＴＧＴＴＧＧＴＧＣＴＧ
配列番号８
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＧＡＴＴＴＷＣＡＧＧＴＧＣＡＧＡＴＴＷＴＣＡＧＣＴＴＣ
配列番号９
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＧＧＣＷＴＣＡＡＡＧＡＴＧＧＡＧＴＣＡＣＡ
配列番号１０
ＰＣＲプライマー
ＡＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧ
配列番号１１
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＡＡＡＴＧＣＡＧＣＴＧＧＧＧＣＡＴＳＴＴＣＴＴＣ
配列番号１２
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＲＡＣＴＴＴＧＧＧＹＴＣＡＧＣＴＴＧＲＴＴＴ
配列番号１３
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＧＧＡＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＴＴＴＡＧＴＴＴＴＣＣＴＴ
配列番号１４
ＰＣＲプライマー
ＡＴＧＧＣＴＴＧＴＣＹＴＴＲＧＳＧＣＴＲＣＴＣＴＴＣＴＧＣ
配列番号１５
ＰＣＲプライマー
ＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＣＡＧＡＴＧＧＧＧＧ
配列番号１６
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体３６Ｈ１２の重鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＧ ＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬ ＳＣＴＡＳＧＦＮＩＫ ＤＴＹＭＨＷＶＲＱＲ ＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲ ＩＤＰＡＴＡＮＴＫＹ
６１ ＤＰＫＦＱＧＫＡＴＬ ＴＴＤＴＳＳＮＴＡＹ ＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤ ＴＡＶＹＹＣＶＴＹＧ ＹＤＶＳＷＦＡＹＷＧ ＬＧＡＬＶＴＶＳＡ
配列番号１７
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体３６Ｈ１２の軽鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳ ＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳ ＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶ ＨＳＮＧＩＴＹＬＥＷ ＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫ ＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ
６１ ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩ ＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶ ＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰ ＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥ ＬＫ
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体３６Ｈ１２の相補性決定領域（ＣＤＲ）：配列番号１８～２３
配列番号１８
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の重鎖ＣＤＲ１
ＤＴＹＭＨ
配列番号１９
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の重鎖ＣＤＲ２
ＲＩＤＰＡＴＡＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ
配列番号２０
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の重鎖ＣＤＲ３
ＹＧＹＤＶＳＷＦＡＹ
配列番号２１
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の軽鎖ＣＤＲ１
ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＩＴＹＬＥ
配列番号２２
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の軽鎖ＣＤＲ２
ＫＶＳＮＲＦＳ
配列番号２３
アミノ酸配列 ３６Ｈ１２の軽鎖ＣＤＲ３
ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ
配列番号２４
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４５Ｈ６の重鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＬＶＱＰＧＧＳＲＫＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＦＧＭＨＷＶＲＱＡ ＰＥＫＧＬＥＷＶＡＹ ＩＳＳＧＮＳＮＩＹＹ
６１ ＶＤＴＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＰＫＮＴＬＦ ＬＱＭＴＳＬＲＳＥＤ ＴＡＭＹＹＣＡＲＫＲ ＡＹＧＤＹＳＧＦＳＭ ＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴ
１２１ ＶＳＳ
配列番号２５
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４５Ｈ６の軽鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦ ＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳ ＶＴＣＫＡＳＱＮＶＤ ＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰ ＧＱＳＰＫＡＬＩＹＳ ＡＳＹＲＹＳＧＶＰＤ
６１ ＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳ ＥＤＬＡＥＹＦＣＱＱ ＹＮＫＦＰＬＴＦＧＧ ＧＴＫＬＥＩＫ
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４５Ｈ６の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
配列番号２６～３１
配列番号２６
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の重鎖ＣＤＲ１
ＳＦＧＭＨ
配列番号２７
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の重鎖ＣＤＲ２
ＹＩＳＳＧＮＳＮＩＹＹＶＤＴＶＫＧ
配列番号２８
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の重鎖ＣＤＲ３
ＫＲＡＹＧＤＹＳＧＦＳＭＤＹ
配列番号２９
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ１
ＫＡＳＱＮＶＤＴＮＶＡ
配列番号３０
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ２
ＳＡＳＹＲＹＳ
配列番号３１
アミノ酸配列 ４５Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ３
ＱＱＹＮＫＦＰＬＴ
配列番号３２
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４８Ｈ６の重鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧ ＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＧＹＡＭＳＷＶＲＱＴ ＰＥＫＲＬＥＷＶＡＳ ＩＳＳＧＧＳＴＹＹＰ
６１ ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＰ ＲＤＤＡＲＮＩＬＹＬ ＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴ ＡＩＹＹＣＡＲＧＧＨ ＧＳＳＹＶＹＷＧＱＧ ＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号３３
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４８Ｈ６の軽鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳ ＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴ ＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬ ＹＳＳＮＱＫＮＹＬＡ ＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰ ＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
６１ ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧ ＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴ ＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡ ＶＹＹＣＨＱＹＹＳＹ ＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬ ＥＬＮ
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４８Ｈ６の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
配列番号３４～３９
配列番号３４
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の重鎖ＣＤＲ１
ＧＹＡＭＳ
配列番号３５
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の重鎖ＣＤＲ２
ＳＩＳＳＧＧＳＴＹＹＰＤＳＶＫＧ
配列番号３６
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の重鎖ＣＤＲ３
ＧＧＨＧＳＳＹＶＹ
配列番号３７
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ１
ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹＬＡ
配列番号３８
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ２
ＷＡＳＴＲＥＳ
配列番号３９
アミノ酸配列 ４８Ｈ６の軽鎖ＣＤＲ３
ＨＱＹＹＳＹＰＬＴ
配列番号４０
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体１１Ｈ７の重鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧ ＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩ ＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴ ＩＹＧＶＨＷＶＲＱＳ ＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶ ＩＷＳＧＧＳＴＤＹＮ
６１ ＡＡＦＩＳＲＬＳＩＳ ＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦ ＫＭＮＳＬＱＡＮＤＴ ＡＩＹＹＣＡＲＲＤＹ ＧＳＲＳＦＹＹＡＭＤ ＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶ
１２１ ＳＳ
配列番号４１
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体１１Ｈ７の軽鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＬ ＭＡＡＳＰＧＥＫＶＴ ＩＴＣＳＶＳＳＳＩＳ ＳＳＮＬＨＷＹＱＱＫ ＳＥＴＳＰＫＰＷＩＹ ＧＴＳＮＬＡＳＧＶＰ
６１ ＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴ ＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥ ＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱ ＱＷＳＳＹＰＬＴＦＧ ＧＧＴＫＬＥＩＫ
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体１１Ｈ７の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
配列番号４２～４７
配列番号４２
アミノ酸配列 １１Ｈ７の重鎖ＣＤＲ１
ＩＹＧＶＨ
配列番号４３
アミノ酸配列 １１Ｈ７の重鎖ＣＤＲ２
ＶＩＷＳＧＧＳＴＤＹＮＡＡＦＩＳ
配列番号４４
アミノ酸配列 １１Ｈ７の重鎖ＣＤＲ３
ＲＤＹＧＳＲＳＦＹＹＡＭＤＹ
配列番号４５
アミノ酸配列 １１Ｈ７の軽鎖ＣＤＲ１
ＳＶＳＳＳＩＳＳＳＮＬＨ
配列番号４６
アミノ酸配列 １１Ｈ７の軽鎖ＣＤＲ２
ＧＴＳＮＬＡＳ
配列番号４７
アミノ酸配列 １１Ｈ７の軽鎖ＣＤＲ３
ＱＱＷＳＳＹＰＬＴ
配列番号４８
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４９Ｇ４の重鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥ ＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬ ＳＣＲＡＳＧＦＮＩＫ ＤＴＹＭＨＷＶＫＱＲ ＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲ ＩＤＰＡＲＧＮＴＫＹ
６１ ＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩ ＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹ ＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＳＡＭ ＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴ ＶＳＳ
配列番号４９
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４９Ｇ４の軽鎖可変領域のコンセンサスアミノ酸配列
１ ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳ ＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳ ＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶ ＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷ ＦＬＱＫＰＧＱＳＰＫ ＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ
６１ ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩ ＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶ ＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰ ＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥ ＬＫ
マウス抗ヒトＨＶＥＭ抗体４９Ｇ４の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
配列番号５０～５５
配列番号５０
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の重鎖ＣＤＲ１
ＤＴＹＭＨ
配列番号５１
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の重鎖ＣＤＲ２
ＲＩＤＰＡＲＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ
配列番号５２
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の重鎖ＣＤＲ３
ＡＭＤＹ
配列番号５３
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の軽鎖ＣＤＲ１
ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ
配列番号５４
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の軽鎖ＣＤＲ２
ＫＶＳＮＲＦＳ
配列番号５５
アミノ酸配列 ４９Ｇ４の軽鎖ＣＤＲ３
ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ
配列番号５６
キメラマウスＶＨ ３６Ｈ１２およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧ ＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣ ＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴ ＧＣＡＧＴＧＣＧＡＡ
６１ ＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣ ＡＧＣＡＡＴＣＴＧＧ ＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧ ＧＴＴＡＡＧＣＣＴＧ ＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴ ＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣ
１２１ ＴＧＴＡＣＣＧＣＣＡ ＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡ ＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣ ＡＣＣＴＡＣＡＴＧＣ ＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧ ＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴ
１８１ ＧＡＧＣＡＧＧＧＡＣ ＴＣＧＡＡＴＧＧＡＴ ＣＧＧＣＡＧＡＡＴＣ ＧＡＴＣＣＣＧＣＣＡ ＣＣＧＣＣＡＡＣＡＣ ＣＡＡＡＴＡＣＧＡＣ
２４１ ＣＣＣＡＡＧＴＴＣＣ ＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣ ＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣ ＡＣＣＧＡＣＡＣＣＡ ＧＣＡＧＣＡＡＣＡＣ ＡＧＣＣＴＡＣＣＴＧ
３０１ ＣＡＧＣＴＧＴＣＴＡ ＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧ ＣＧＡＡＧＡＴＡＣＣ ＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴ ＡＣＴＧＣＧＴＧＡＣ ＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣ
３６１ ＧＡＴＧＴＧＴＣＴＴ ＧＧＴＴＴＧＣＣＴＡ ＣＴＧＧＧＧＡＣＴＧ ＧＧＣＧＣＣＣＴＧＧ ＴＴＡＣＡＧＴＴＴＣ ＴＧＣＣＧＣＣＴＣＴ
４２１ ＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣ ＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴ ＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴ ＣＣＣＴＧＴＡＧＣＡ ＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧ ＣＧＡＡＴＣＴＡＣＡ
４８１ ＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧ ＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴ ＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣ ＴＴＴＣＣＴＧＡＧＣ ＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴ ＧＴＣＣＴＧＧＡＡＣ
５４１ ＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣ ＴＧＡＣＡＴＣＴＧＧ ＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣ ＴＴＴＣＣＡＧＣＣＧ ＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧ ＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧ
６０１ ＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡ ＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴ ＣＡＣＡＧＴＧＣＣＴ ＡＧＣＴＣＴＡＧＣＣ ＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡ ＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣ
６６１ ＴＧＴＡＡＴＧＴＧＧ ＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣ ＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣ ＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡ ＡＧＣＧＣＧＴＧＧＡ ＡＴＣＴＡＡＧＴＡＣ
７２１ ＧＧＣＣＣＴＣＣＴＴ ＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧ ＴＣＣＴＧＣＡＣＣＴ ＧＡＧＴＴＴＣＴＣＧ ＧＣＧＧＡＣＣＣＴＣ ＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧ
７８１ ＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡ ＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡ ＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧ ＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡ ＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴ ＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧ
８４１ ＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧ ＴＴＴＣＣＣＡＡＧＡ ＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧ ＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡ ＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴ ＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧ
９０１ ＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡ ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣ ＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡ ＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴ ＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣ ＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧ
９６１ ＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣ ＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴ ＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴ ＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧ ＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡ ＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧ
１０２１ ＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡ ＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣ ＴＡＧＣＡＧＣＡＴＣ ＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡ ＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣ ＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧ
１０８１ ＣＣＡＡＧＡＧＡＡＣ ＣＣＣＡＧＧＴＧＴＡ ＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴ ＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧ ＡＧＧＡＡＡＴＧＡＣ ＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧ
１１４１ ＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡ ＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴ ＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣ ＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧ ＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴ ＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧ
１２０１ ＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣ ＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡ ＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧ ＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣ ＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡ ＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣ
１２６１ ＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣ ＴＧＴＡＣＡＧＣＡＧ ＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧ ＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡ ＧＡＴＧＧＣＡＡＧＡ ＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧ
１３２１ ＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡ ＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡ ＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧ ＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴ ＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡ ＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣ
１３８１ ＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧ ＧＣＡＡＧ
配列番号５７
キメラマウスＶＨ ４５Ｈ６およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧ ＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣ ＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴ ＧＣＡＧＴＧＴＧＡＴ
６１ ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧ ＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧ ＣＧＧＡＧＧＡＣＴＧ ＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧ ＧＣＧＧＣＡＧＣＡＧ ＡＡＡＧＣＴＧＴＣＴ
１２１ ＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡ ＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣ ＣＴＴＣＡＧＣＡＧＣ ＴＴＴＧＧＡＡＴＧＣ ＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧ ＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴ
１８１ ＧＡＧＡＡＡＧＧＣＣ ＴＴＧＡＧＴＧＧＧＴ ＣＧＣＣＴＡＣＡＴＣ ＡＧＣＡＧＣＧＧＣＡ ＡＣＡＧＣＡＡＣＡＴ ＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧ
２４１ ＧＡＣＡＣＣＧＴＧＡ ＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴ ＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣ ＡＧＡＧＡＣＡＡＣＣ ＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣ ＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧ
３０１ ＣＡＧＡＴＧＡＣＣＡ ＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧ ＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣ ＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴ ＡＣＴＧＣＧＣＣＣＧ ＧＡＡＡＡＧＡＧＣＣ
３６１ ＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴ ＡＣＡＧＣＧＧＣＴＴ ＴＡＧＣＡＴＧＧＡＴ ＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣ ＡＧＧＧＣＡＣＣＡＧ ＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧ
４２１ ＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴ ＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧ ＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧ ＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧ ＣＴＣＣＴＴＧＴＡＧ ＣＡＧＡＡＧＣＡＣＣ
４８１ ＡＧＣＧＡＧＴＣＴＡ ＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴ ＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧ ＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴ ＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡ ＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣ
５４１ ＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡ ＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣ ＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣ ＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡ ＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣ ＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡ
６０１ ＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣ ＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴ ＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧ ＧＴＣＡＣＡＧＴＧＣ ＣＴＡＧＣＴＣＴＡＧ ＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣ
６６１ ＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡ ＣＣＴＧＴＡＡＴＧＴ ＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧ ＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡ ＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡ ＣＡＡＧＣＧＣＧＴＧ
７２１ ＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴ ＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣ ＴＴＧＴＣＣＴＣＣＡ ＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣ ＣＡＧＡＧＴＴＴＣＴ ＣＧＧＣＧＧＡＣＣＣ
７８１ ＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣ ＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣ ＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧ ＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡ ＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧ ＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡ
８４１ ＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧ ＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡ ＣＧＴＴＴＣＣＣＡＡ ＧＡＧＧＡＣＣＣＴＧ ＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴ ＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣ
９０１ ＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡ ＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧ ＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡ ＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡ ＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣ
９６１ ＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧ ＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴ ＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧ ＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧ ＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡ ＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧ
１０２１ ＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡ ＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡ ＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧ ＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡ ＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣ ＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧ
１０８１ ＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣ ＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡ ＡＣＣＣＣＡＧＧＴＧ ＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣ ＣＴＣＣＡＡＧＣＣＡ ＡＧＡＧＧＡＡＡＴＧ
１１４１ ＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣ ＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴ ＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧ ＧＴＴＡＡＧＧＧＣＴ ＴＣＴＡＣＣＣＣＴＣ ＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣ
１２０１ ＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧ ＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧ ＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧ ＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡ ＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣ ＡＣＣＴＧＴＧＣＴＧ
１２６１ ＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧ ＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴ ＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣ ＡＧＡＣＴＧＡＣＣＧ ＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧ ＣＡＧＡＴＧＧＣＡＡ
１３２１ ＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧ ＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧ ＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧ ＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣ ＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡ ＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧ
１３８１ ＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡ ＧＣＣＴＧＴＣＴＣＴ ＧＧＧＣＡＡＧ
配列番号５８
キメラマウスＶＨ ４８Ｈ６およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧ ＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣ ＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴ ＧＣＡＧＴＧＣＧＡＡ
６１ ＧＴＧＡＡＧＣＴＧＧ ＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧ ＣＧＧＣＧＧＡＣＴＧ ＧＴＴＡＡＧＣＣＴＧ ＧＣＧＧＡＴＣＴＣＴ ＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣ
１２１ ＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡ ＧＣＧＧＣＴＴＴＡＣ ＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣ ＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡ ＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧ ＡＣＡＧＡＣＡＣＣＣ
１８１ ＧＡＧＡＡＧＡＧＡＣ ＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴ ＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣ ＡＧＣＡＧＣＧＧＣＧ ＧＣＡＧＣＡＣＡＴＡ ＴＴＡＣＣＣＣＧＡＣ
２４１ ＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧ ＧＣＣＧＣＴＴＴＡＣ ＡＡＴＣＣＣＣＡＧＡ ＧＡＴＧＡＣＧＣＣＣ ＧＧＡＡＣＡＴＣＣＴ ＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧ
３０１ ＡＴＧＡＧＣＡＧＣＣ ＴＧＣＧＧＡＧＣＧＡ ＧＧＡＴＡＣＣＧＣＣ ＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴ ＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧ ＣＧＧＣＣＡＣＧＧＣ
３６１ ＡＧＣＡＧＣＴＡＴＧ ＴＴＴＡＴＴＧＧＧＧ ＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣ ＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧ ＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣ ＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧ
４２１ ＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧ ＴＧＴＴＣＣＣＴＣＴ ＧＧＣＴＣＣＴＴＧＴ ＡＧＣＡＧＡＡＧＣＡ ＣＣＡＧＣＧＡＧＴＣ ＴＡＣＡＧＣＣＧＣＴ
４８１ ＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣ ＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡ ＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣ ＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡ ＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧ ＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣ
５４１ ＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡ ＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡ ＣＡＣＡＴＴＴＣＣＡ ＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣ ＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧ ＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴ
６０１ ＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧ ＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴ ＧＣＣＴＡＧＣＴＣＴ ＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡ ＣＣＡＡＧＡＣＣＴＡ ＣＡＣＣＴＧＴＡＡＴ
６６１ ＧＴＧＧＡＣＣＡＣＡ ＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡ ＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧ ＧＡＣＡＡＧＣＧＣＧ ＴＧＧＡＡＴＣＴＡＡ ＧＴＡＣＧＧＣＣＣＴ
７２１ ＣＣＴＴＧＴＣＣＴＣ ＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣ ＡＣＣＴＧＡＧＴＴＴ ＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣ ＣＣＴＣＣＧＴＧＴＴ ＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴ
７８１ ＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡ ＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴ ＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣ ＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧ ＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧ ＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧ
８４１ ＧＡＣＧＴＴＴＣＣＣ ＡＡＧＡＧＧＡＣＣＣ ＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧ ＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴ ＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧ ＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧ
９０１ ＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡ ＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣ ＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡ ＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡ ＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧ ＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣ
９６１ ＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧ ＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡ ＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧ ＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧ ＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧ ＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣ
１０２１ ＡＡＣＡＡＧＧＧＣＣ ＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧ ＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡ ＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡ ＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧ ＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡ
１０８１ ＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧ ＴＧＴＡＣＡＣＡＣＴ ＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣ ＣＡＡＧＡＧＧＡＡＡ ＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡ ＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣ
１１４１ ＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣ ＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧ ＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴ ＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧ ＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧ ＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴ
１２０１ ＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧ ＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡ ＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣ ＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣ ＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡ ＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣ
１２６１ ＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡ ＧＣＡＧＧＣＴＧＡＣ ＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧ ＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣ ＡＡＧＡＧＧＧＣＡＡ ＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣ
１３２１ ＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡ ＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣ ＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣ ＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣ ＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴ ＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴ
１３８１ ＣＴＧＧＧＣＡＡＧ
配列番号５９
キメラマウスＶＨ １１Ｈ７およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧ ＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣ ＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴ ＧＣＡＧＴＧＴＣＡＧ
６１ ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡ ＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧ ＡＣＣＴＧＧＡＣＴＧ ＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡ ＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴ ＧＡＧＣＡＴＣＡＣＣ
１２１ ＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴ ＣＣＧＧＣＴＴＣＡＧ ＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣ ＴＡＴＧＧＣＧＴＧＣ ＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧ ＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴ
１８１ ＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣ ＴＧＧＡＡＴＧＧＣＴ ＧＧＧＡＧＴＧＡＴＴ ＴＧＧＡＧＣＧＧＣＧ ＧＣＡＧＣＡＣＣＧＡ ＴＴＡＣＡＡＣＧＣＣ
２４１ ＧＣＣＴＴＴＡＴＣＡ ＧＣＡＧＡＣＴＧＡＧ ＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧ ＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡ ＡＧＡＧＣＣＡＧＧＴ ＧＴＴＣＴＴＣＡＡＧ
３０１ ＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣ ＴＧＣＡＧＧＣＣＡＡ ＣＧＡＣＡＣＣＧＣＣ ＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴ ＧＣＧＣＣＡＧＡＡＧ ＡＧＡＣＴＡＣＧＧＣ
３６１ ＡＧＣＣＧＧＴＣＣＴ ＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣ ＴＡＴＧＧＡＣＴＡＴ ＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧ ＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴ ＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴ
４２１ ＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡ ＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣ ＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣ ＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣ ＣＴＴＧＴＡＧＣＡＧ ＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣ
４８１ ＧＡＧＴＣＴＡＣＡＧ ＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧ ＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣ ＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴ ＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣ ＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧ
５４１ ＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴ ＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴ ＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣ ＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴ ＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴ ＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣ
６０１ ＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴ ＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧ ＣＡＧＣＧＴＧＧＴＣ ＡＣＡＧＴＧＣＣＴＡ ＧＣＴＣＴＡＧＣＣＴ ＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧ
６６１ ＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴ ＧＴＡＡＴＧＴＧＧＡ ＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴ ＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡ ＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡ ＧＣＧＣＧＴＧＧＡＡ
７２１ ＴＣＴＡＡＧＴＡＣＧ ＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧ ＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴ ＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧ ＡＧＴＴＴＣＴＣＧＧ ＣＧＧＡＣＣＣＴＣＣ
７８１ ＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴ ＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡ ＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣ ＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡ ＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣ ＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧ
８４１ ＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧ ＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴ ＴＴＣＣＣＡＡＧＡＧ ＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧ ＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡ ＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧ
９０１ ＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧ ＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡ ＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣ ＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧ ＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴ ＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣ
９６１ ＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧ ＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴ ＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧ ＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴ ＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧ ＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣ
１０２１ ＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧ ＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡ ＧＧＧＣＣＴＧＣＣＴ ＡＧＣＡＧＣＡＴＣＧ ＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴ ＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣ
１０８１ ＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣ ＣＡＡＧＡＧＡＡＣＣ ＣＣＡＧＧＴＧＴＡＣ ＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣ ＣＡＡＧＣＣＡＡＧＡ ＧＧＡＡＡＴＧＡＣＣ
１１４１ ＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧ ＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣ ＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧ ＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴ ＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡ ＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧ
１２０１ ＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡ ＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡ ＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣ ＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡ ＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣ ＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣ
１２６１ ＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴ ＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴ ＧＴＡＣＴＣＣＡＧＡ ＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧ ＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧ ＡＴＧＧＣＡＡＧＡＧ
１３２１ ＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＣ ＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣ ＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣ ＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡ ＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧ
１３８１ ＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣ ＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧ ＣＡＡＡ
配列番号６０
キメラマウスＶＨ ４９Ｇ４およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ ＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧ ＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣ ＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴ ＧＣＡＧＴＧＣＧＡＡ
６１ ＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣ ＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧ ＣＧＣＣＧＡＧＣＴＴ ＧＴＧＡＡＡＣＣＴＧ ＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴ ＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣ
１２１ ＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡ ＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡ ＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣ ＡＣＣＴＡＣＡＴＧＣ ＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡ ＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴ
１８１ ＧＡＧＣＡＧＧＧＣＣ ＴＣＧＡＡＴＧＧＡＴ ＣＧＧＣＡＧＡＡＴＣ ＧＡＴＣＣＣＧＣＣＡ ＧＡＧＧＣＡＡＣＡＣ ＣＡＡＡＴＡＣＧＡＣ
２４１ ＣＣＣＡＡＧＴＴＣＣ ＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣ ＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣ ＧＣＣＧＡＣＡＣＣＴ ＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣ ＡＧＣＣＴＡＣＣＴＧ
３０１ ＣＡＧＣＴＧＴＣＣＡ ＧＣＣＴＧＡＣＣＴＣ ＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣ ＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴ ＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧ ＣＧＣＴＡＴＧＧＡＴ
３６１ ＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣ ＡＧＧＧＣＡＣＡＡＧ ＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧ ＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴ ＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧ ＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧ
４２１ ＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧ ＣＴＣＣＣＴＧＴＡＧ ＣＡＧＡＡＧＣＡＣＣ ＡＧＣＧＡＡＴＣＴＡ ＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴ ＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧ
４８１ ＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴ ＡＣＴＴＴＣＣＴＧＡ ＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡ ＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡ ＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣ ＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣ
５４１ ＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡ ＣＡＴＴＴＣＣＡＧＣ ＣＧＴＧＣＴＧＣＡＡ ＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣ ＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴ ＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧ
６０１ ＧＴＣＡＣＡＧＴＧＣ ＣＴＡＧＣＴＣＴＡＧ ＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣ ＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡ ＣＣＴＧＴＡＡＴＧＴ ＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧ
６６１ ＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡ ＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡ ＣＡＡＧＣＧＣＧＴＧ ＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴ ＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣ ＴＴＧＴＣＣＴＣＣＡ
７２１ ＴＧＴＣＣＴＧＣＡＣ ＣＴＧＡＧＴＴＴＣＴ ＣＧＧＣＧＧＡＣＣＣ ＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣ ＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣ ＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧ
７８１ ＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡ ＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧ ＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡ ＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧ ＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡ ＣＧＴＴＴＣＣＣＡＡ
８４１ ＧＡＧＧＡＣＣＣＴＧ ＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴ ＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣ ＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡ ＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧ
９０１ ＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡ ＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡ ＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣ ＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧ ＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴ ＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧ
９６１ ＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧ ＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡ ＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧ ＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡ ＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡ ＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧ
１０２１ ＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡ ＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣ ＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧ ＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣ ＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡ ＡＣＣＣＣＡＧＧＴＧ
１０８１ ＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣ ＣＴＣＣＡＡＧＣＣＡ ＡＧＡＧＧＡＡＡＴＧ ＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣ ＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴ ＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣ
１１４１ ＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴ ＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣ ＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣ ＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧ ＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧ ＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧ
１２０１ ＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡ ＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣ ＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧ ＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧ ＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴ ＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣ
１２６１ ＡＧＡＣＴＧＡＣＣＧ ＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧ ＣＡＧＡＴＧＧＣＡＡ ＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧ ＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧ ＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧ
１３２１ ＣＡＣＧＡＡＧＣＣＣ ＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡ ＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧ ＡＡＧＴＣＴＣＴＧＴ ＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴ ＧＧＧＣＡＡＧ
配列番号６１
キメラマウスＶＬ ３６Ｈ１２およびヒト定常軽κ鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡ ＧＡＧＴＴＣＣＣＧＣ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴ ＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴ
６１ ＡＧＡＴＧＣＧＡＣＧ ＴＧＣＴＧＡＴＧＡＣ ＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴ ＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣ ＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴ ＧＧＧＡＧＡＴＣＡＧ
１２１ ＧＣＣＡＧＣＡＴＣＡ ＧＣＴＧＣＡＧＡＴＣ ＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣ ＡＴＣＧＴＧＣＡＣＡ ＧＣＡＡＣＧＧＣＡＴ ＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧ
１８１ ＧＡＡＴＧＧＴＡＴＣ ＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣ ＣＧＧＡＣＡＧＡＧＣ ＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣ ＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡ ＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣ
２４１ ＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧ ＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡ ＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴ ＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴ ＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡ ＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧ
３０１ ＡＡＧＡＴＣＴＣＣＡ ＧＡＧＴＧＧＡＡＧＣ ＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧ ＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴ ＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡ ＡＧＧＣＴＣＴＣＡＣ
３６１ ＧＴＧＣＣＣＣＴＧＡ ＣＡＴＴＴＧＧＡＧＣ ＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧ ＣＴＧＧＡＡＣＴＧＡ ＡＧＡＧＡＡＣＡＧＴ ＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴ
４２１ ＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡ ＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣ ＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧ ＣＡＧＣＴＧＡＡＡＡ ＧＣＧＧＣＡＣＡＧＣ ＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧ
４８１ ＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡ ＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡ ＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡ ＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣ ＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴ ＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣ
５４１ ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧ ＧＣＡＡＴＡＧＣＣＡ ＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧ ＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧ ＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡ ＣＴＣＴＡＣＣＴＡＣ
６０１ ＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡ ＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣ ＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧ ＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧ ＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡ ＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣ
６６１ ＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡ ＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧ ＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣ ＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡ ＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡ ＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡ
７２１ ＴＧＴ
配列番号６２
キメラマウスＶＬ ４５Ｈ６およびヒト定常軽κ鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡ ＧＡＧＴＴＣＣＣＧＣ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴ ＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴ
６１ ＡＧＡＴＧＣＧＡＣＡ ＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣ ＣＣＡＧＡＧＣＣＡＧ ＡＡＡＴＴＣＡＴＧＡ ＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴ ＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡ
１２１ ＧＴＧＴＣＣＧＴＧＡ ＣＡＴＧＴＡＡＡＧＣ ＣＡＧＣＣＡＧＡＡＣ ＧＴＧＧＡＣＡＣＣＡ ＡＣＧＴＧＧＣＣＴＧ ＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧ
１８１ ＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣ ＡＧＡＧＣＣＣＣＡＡ ＧＧＣＴＣＴＧＡＴＣ ＴＡＣＡＧＣＧＣＣＡ ＧＣＴＡＣＡＧＡＴＡ ＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧ
２４１ ＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴ ＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧ ＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣ ＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡ ＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴ ＣＡＧＣＡＡＣＧＴＧ
３０１ ＣＡＧＡＧＣＧＡＧＧ ＡＣＣＴＧＧＣＣＧＡ ＧＴＡＴＴＴＣＴＧＣ ＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡ ＡＣＡＡＧＴＴＣＣＣ ＴＣＴＧＡＣＣＴＴＣ
３６１ ＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡ ＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡ ＡＡＴＣＡＡＧＡＧＡ ＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧ ＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴ ＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣ
４２１ ＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧ ＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴ ＧＡＡＡＡＧＣＧＧＣ ＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧ ＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴ ＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣ
４８１ ＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡ ＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡ ＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧ ＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡ ＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡ ＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴ
５４１ ＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡ ＧＣＧＴＧＡＣＣＧＡ ＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣ ＡＡＧＧＡＣＴＣＴＡ ＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴ ＧＡＧＣＡＧＣＡＣＡ
６０１ ＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡ ＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡ ＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧ ＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴ ＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡ ＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣ
６６１ ＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴ ＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴ ＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣ ＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧ ＧＣＧＡＡＴＧＴ
配列番号６３
キメラマウスＶＬ ４８Ｈ６およびヒト定常軽κ鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡ ＧＡＧＴＴＣＣＣＧＣ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴ ＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴ
６１ ＡＧＡＴＧＣＧＡＣＡ ＴＣＧＴＧＡＴＧＴＣ ＴＣＡＧＡＧＣＣＣＴ ＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧ ＣＣＧＴＧＴＣＴＧＴ ＧＧＧＡＧＡＧＡＡＡ
１２１ ＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡ ＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧ ＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣ ＣＴＧＣＴＧＴＡＣＴ ＣＣＡＧＣＡＡＣＣＡ ＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣ
１８１ ＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴ ＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡ ＧＣＣＣＧＧＡＣＡＧ ＴＣＴＣＣＣＡＡＧＣ ＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡ ＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣ
２４１ ＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡ ＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣ ＣＧＡＴＡＧＡＴＴＣ ＡＣＡＧＧＣＡＧＣＧ ＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣ ＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣ
３０１ ＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡ ＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡ ＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣ ＣＴＧＧＣＴＧＴＧＴ ＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡ ＣＣＡＧＴＡＴＴＡＣ
３６１ ＡＧＣＴＡＣＣＣＴＣ ＴＧＡＣＣＴＴＣＧＧ ＡＧＣＣＧＧＣＡＣＣ ＡＡＧＣＴＧＧＡＡＣ ＴＧＡＡＣＡＧＡＡＣ ＡＧＴＧＧＣＣＧＣＴ
４２１ ＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴ ＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣ ＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣ ＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡ ＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣ ＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣ
４８１ ＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣ ＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴ ＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡ ＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧ ＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡ ＧＧＴＧＧＡＣＡＡＣ
５４１ ＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡ ＧＣＧＧＣＡＡＴＡＧ ＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣ ＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣ ＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡ ＧＧＡＣＴＣＴＡＣＣ
６０１ ＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡ ＧＣＡＧＣＡＣＡＣＴ ＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣ ＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴ ＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡ ＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣ
６６１ ＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧ ＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡ ＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴ ＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡ ＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴ ＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣ
７２１ ＧＡＡＴＧＴ
配列番号６４
キメラマウスＶＬ １１Ｈ７およびヒト定常軽κ鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡ ＧＡＧＴＴＣＣＣＧＣ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴ ＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴ
６１ ＡＧＡＴＧＣＧＡＧＡ ＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣ ＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴ ＧＣＴＣＴＧＡＴＧＧ ＣＴＧＣＴＴＣＣＣＣ ＴＧＧＣＧＡＧＡＡＡ
１２１ ＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡ ＣＣＴＧＴＡＧＣＧＴ ＧＴＣＣＡＧＣＡＧＣ ＡＴＣＡＧＣＡＧＣＴ ＣＣＡＡＣＣＴＧＣＡ ＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧ
１８１ ＣＡＧＡＡＧＴＣＣＧ ＡＧＡＣＡＡＧＣＣＣ ＣＡＡＧＣＣＴＴＧＧ ＡＴＣＴＡＣＧＧＣＡ ＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴ ＧＧＣＣＡＧＣＧＧＡ
２４１ ＧＴＧＣＣＴＧＴＣＡ ＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧ ＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴ ＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴ ＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣ ＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣ
３０１ ＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧ ＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣ ＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣ ＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴ ＧＧＴＣＴＡＧＣＴＡ ＣＣＣＴＣＴＧＡＣＣ
３６１ ＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧ ＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴ ＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ ＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧ ＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧ ＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣ
４２１ ＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡ ＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡ ＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴ ＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴ ＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧ ＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣ
４８１ ＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣ ＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣ ＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧ ＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧ ＡＣＡＡＣＧＣＣＣＴ ＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣ
５４１ ＡＡＴＡＧＣＣＡＡＧ ＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣ ＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣ ＡＧＣＡＡＧＧＡＣＴ ＣＣＡＣＣＴＡＴＡＧ ＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣ
６０１ ＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣ ＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣ ＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧ ＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧ ＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧ ＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣ
６６１ ＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣ ＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣ ＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧ ＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣ ＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧ Ｔ
配列番号６５
キメラマウスＶＬおよび４９Ｇ４ヒト定常軽κ鎖をコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡ ＧＡＧＴＴＣＣＣＧＣ ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴ ＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴ
６１ ＡＧＡＴＧＣＧＡＣＧ ＴＧＣＴＧＡＴＧＡＣ ＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴ ＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣ ＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴ ＧＧＧＡＧＡＴＣＡＧ
１２１ ＧＣＣＡＧＣＡＴＣＡ ＧＣＴＧＣＡＧＡＴＣ ＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣ ＡＴＣＧＴＧＣＡＣＡ ＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡ ＴＡＣＣＴＡＣＣＴＧ
１８１ ＧＡＡＴＧＧＴＴＣＣ ＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣ ＣＧＧＡＣＡＧＡＧＣ ＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣ ＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡ ＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣ
２４１ ＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧ ＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡ ＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴ ＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴ ＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡ ＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧ
３０１ ＡＡＧＡＴＣＴＣＣＡ ＧＡＧＴＧＧＡＡＧＣ ＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧ ＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴ ＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡ ＡＧＧＣＴＣＴＣＡＣ
３６１ ＧＴＧＣＣＣＣＴＧＡ ＣＡＴＴＴＧＧＡＧＣ ＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧ ＣＴＧＧＡＡＣＴＧＡ ＡＧＡＧＡＡＣＡＧＴ ＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴ
４２１ ＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡ ＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣ ＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧ ＣＡＧＣＴＧＡＡＡＡ ＧＣＧＧＣＡＣＡＧＣ ＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧ
４８１ ＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡ ＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡ ＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡ ＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣ ＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴ ＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣ
５４１ ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧ ＧＣＡＡＴＡＧＣＣＡ ＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧ ＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧ ＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡ ＣＴＣＴＡＣＣＴＡＣ
６０１ ＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡ ＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣ ＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧ ＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧ ＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡ ＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣ
６６１ ＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡ ＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧ ＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣ ＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡ ＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡ ＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡ
７２１ ＴＧＴ
配列番号６６
キメラマウスＶＨ ３６Ｈ１２およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖のアミノ酸配列
１ ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬ ＬＡＩＬＫＧＶＱＣＥ ＶＱＬＱＱＳＧＡＧＬ ＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳ ＣＴＡＳＧＦＮＩＫＤ ＴＹＭＨＷＶＲＱＲＰ
６１ ＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩ ＤＰＡＴＡＮＴＫＹＤ ＰＫＦＱＧＫＡＴＬＴ ＴＤＴＳＳＮＴＡＹＬ ＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴ ＡＶＹＹＣＶＴＹＧＹ
１２１ ＤＶＳＷＦＡＹＷＧＬ ＧＡＬＶＴＶＳＡＡＳ ＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡ ＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴ ＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹ ＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮ
１８１ ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬ ＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰ ＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴ ＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴ ＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹ
２４１ ＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰ ＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬ ＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭ ＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶ ＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥ ＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶ
３０１ ＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ ＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶ ＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤ ＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫ ＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩ ＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱ
３６１ ＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰ ＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱ ＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦ ＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥ ＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫ ＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧ
４２１ ＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶ ＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶ ＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬ ＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳ ＬＳＬＧＫ
配列番号６７
キメラマウスＶＨ ４５Ｈ６およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖のアミノ酸配列
１ ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬ ＬＡＩＬＫＧＶＱＣＤ ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬ ＶＱＰＧＧＳＲＫＬＳ ＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳ ＦＧＭＨＷＶＲＱＡＰ
６１ ＥＫＧＬＥＷＶＡＹＩ ＳＳＧＮＳＮＩＹＹＶ ＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳ ＲＤＮＰＫＮＴＬＦＬ ＱＭＴＳＬＲＳＥＤＴ ＡＭＹＹＣＡＲＫＲＡ
１２１ ＹＧＤＹＳＧＦＳＭＤ ＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶ ＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶ ＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴ ＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬ ＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴ
１８１ ＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳ ＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱ ＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶ ＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴ ＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫ ＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ
２４１ ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰ ＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰ ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫ ＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥ ＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱ ＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹ
３０１ ＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫ ＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳ ＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶ ＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥ ＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬ ＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫ
３６１ ＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶ ＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭ ＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬ ＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡ ＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥ ＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬ
４２１ ＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳ ＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱ ＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭ ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ ＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号６８
キメラマウスＶＨ ４８Ｈ６およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖のアミノ酸配列
１ ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬ ＬＡＩＬＫＧＶＱＣＥ ＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬ ＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳ ＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧ ＹＡＭＳＷＶＲＱＴＰ
６１ ＥＫＲＬＥＷＶＡＳＩ ＳＳＧＧＳＴＹＹＰＤ ＳＶＫＧＲＦＴＩＰＲ ＤＤＡＲＮＩＬＹＬＱ ＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡ ＩＹＹＣＡＲＧＧＨＧ
１２１ ＳＳＹＶＹＷＧＱＧＴ ＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫ ＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣ ＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡ ＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰ ＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧ
１８１ ＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰ ＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳ ＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳ ＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮ ＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶ ＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰ
２４１ ＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦ ＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰ ＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳ ＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶ ＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱ ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶ
３０１ ＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥ ＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳ ＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬ ＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳ ＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫ ＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲ
３６１ ＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳ ＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳ ＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰ ＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮ ＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴ ＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦ
４２１ ＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫ ＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳ ＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮ ＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳ ＬＧＫ
配列番号６９
キメラマウスＶＨ １１Ｈ７およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖のアミノ酸配列
１ ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬ ＬＡＩＬＫＧＶＱＣＱ ＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬ ＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴ ＣＴＶＳＧＦＳＬＴＩ ＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰ
６１ ＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩ ＷＳＧＧＳＴＤＹＮＡ ＡＦＩＳＲＬＳＩＳＫ ＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫ ＭＮＳＬＱＡＮＤＴＡ ＩＹＹＣＡＲＲＤＹＧ
１２１ ＳＲＳＦＹＹＡＭＤＹ ＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳ ＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦ ＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳ ＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶ ＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶ
１８１ ＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧ ＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳ ＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶ ＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫ ＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰ ＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥ
２４１ ＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣ ＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳ ＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤ ＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶ ＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥ ＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶ
３０１ ＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴ ＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴ ＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬ ＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹ ＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰ ＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡ
３６１ ＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹ ＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴ ＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶ ＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶ ＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮ ＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤ
４２１ ＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲ ＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥ ＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨ ＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫ ＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号７０
キメラマウスＶＨ ４９Ｇ４およびヒト定常重ＩｇＧ４鎖のアミノ酸配列
１ ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬ ＬＡＩＬＫＧＶＱＣＥ ＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬ ＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳ ＣＲＡＳＧＦＮＩＫＤ ＴＹＭＨＷＶＫＱＲＰ
６１ ＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩ ＤＰＡＲＧＮＴＫＹＤ ＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴ ＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬ ＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴ ＡＶＹＹＣＡＳＡＭＤ
１２１ ＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶ ＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶ ＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴ ＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬ ＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴ ＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳ
１８１ ＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱ ＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶ ＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴ ＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫ ＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰ
２４１ ＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰ ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫ ＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥ ＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱ ＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹ ＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫ
３０１ ＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳ ＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶ ＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥ ＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬ ＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫ ＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶ
３６１ ＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭ ＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬ ＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡ ＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥ ＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬ ＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳ
４２１ ＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱ ＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭ ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ ＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号７１
キメラマウスＶＬ ３６Ｈ１２およびヒト定常軽κ鎖のアミノ酸配列
１ ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ ＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡ ＲＣＤＶＬＭＴＱＴＰ ＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱ ＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳ ＩＶＨＳＮＧＩＴＹＬ
６１ ＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳ ＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮ ＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳ ＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬ ＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬ ＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨ
１２１ ＶＰＬＴＦＧＡＧＴＫ ＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰ ＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥ ＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶ ＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥ ＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡ
１８１ ＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶ ＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹ ＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫ ＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡ ＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳ ＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥ
２４１ Ｃ
配列番号７２
キメラマウスＶＬ ４５Ｈ６およびヒト定常軽κ鎖のアミノ酸配列
１ ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ ＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡ ＲＣＤＩＶＭＴＱＳＱ ＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲ ＶＳＶＴＣＫＡＳＱＮ ＶＤＴＮＶＡＷＹＱＱ
６１ ＫＰＧＱＳＰＫＡＬＩ ＹＳＡＳＹＲＹＳＧＶ ＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧ ＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶ ＱＳＥＤＬＡＥＹＦＣ ＱＱＹＮＫＦＰＬＴＦ
１２１ ＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦ ＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧ ＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮ ＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷ ＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮ
１８１ ＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳ ＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴ ＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫ ＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨ ＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳ ＦＮＲＧＥＣ
配列番号７３
キメラマウスＶＬ ４８Ｈ６およびヒト定常軽κ鎖のアミノ酸配列
１ ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ ＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡ ＲＣＤＩＶＭＳＱＳＰ ＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫ ＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳ ＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹ
６１ ＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱ ＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳ ＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦ ＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴ ＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤ ＬＡＶＹＹＣＨＱＹＹ
１２１ ＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴ ＫＬＥＬＮＲＴＶＡＡ ＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤ ＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶ ＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲ ＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮ
１８１ ＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳ ＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴ ＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳ ＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹ ＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳ ＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧ
２４１ ＥＣ
配列番号７４
キメラマウスＶＬ １１Ｈ７およびヒト定常軽κ鎖のアミノ酸配列
１ ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ ＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡ ＲＣＥＩＶＬＴＱＳＰ ＡＬＭＡＡＳＰＧＥＫ ＶＴＩＴＣＳＶＳＳＳ ＩＳＳＳＮＬＨＷＹＱ
６１ ＱＫＳＥＴＳＰＫＰＷ ＩＹＧＴＳＮＬＡＳＧ ＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳ ＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳ ＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹ ＣＱＱＷＳＳＹＰＬＴ
１２１ ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩ ＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳ ＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮ ＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱ ＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧ
１８１ ＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤ ＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳ ＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥ ＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴ ＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫ ＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号７５
キメラマウスＶＬ ４９Ｇ４およびヒト定常軽κ鎖のアミノ酸配列
１ ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ ＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡ ＲＣＤＶＬＭＴＱＴＰ ＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱ ＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳ ＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬ
６１ ＥＷＦＬＱＫＰＧＱＳ ＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮ ＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳ ＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬ ＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬ ＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨ
１２１ ＶＰＬＴＦＧＡＧＴＫ ＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰ ＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥ ＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶ ＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥ ＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡ
１８１ ＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶ ＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹ ＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫ ＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡ ＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳ ＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥ
２４１ Ｃ
配列番号７６
膜結合抗ヒトＣＤ３ｓｃＦｖ（シグナルペプチド、続くヒトＩｇＧ１のＣＨ２－ＣＨ３ドメインおよびヒトＣＤ８０細胞質尾部に連結されたＯＫＴ ３ｓｃＦｖ）のアミノ酸配列
１ ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬ ＦＬＦＳＳＡＹＳＱＶ ＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡ ＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣ ＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹ ＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧ
６１ ＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮ ＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱ ＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴ ＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱ ＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡ ＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤ
１２１ ＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧ ＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧ ＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧ ＧＳＱＩＶＬＴＱＳＰ ＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫ ＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳ
１８１ ＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫ ＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹ ＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰ ＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴ ＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥ ＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱ
２４１ ＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧ ＳＧＴＫＬＥＩＮＲＡ ＡＡＰＳＶＦＬＦＰＰ ＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ ＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤ ＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦ
３０１ ＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨ ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱ ＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶ ＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮ ＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮ ＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴ
３６１ ＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥ ＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲ ＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬ ＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳ ＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧ ＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰ
４２１ ＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦ ＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳ ＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣ ＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨ ＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰ ＧＷＡＩＴＬＩＳＶＮ
４８１ ＧＩＦＶＩＣＣＬＴＹ ＣＦＡＰＲＣＲＥＲＲ ＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶ ＲＰＶ
配列番号７７
膜結合抗ヒトＣＤ３ｓｃＦｖをコードするｃＤＮＡ配列
１ ＡＴＧＡＡＡＴＧＧＧ ＴＣＡＣＣＴＴＴＡＴ ＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧ ＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴ ＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡ ＣＴＣＴＣＡＧＧＴＣ
６１ ＣＡＧＴＴＧＣＡＧＣ ＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣ ＣＧＡＡＴＴＧＧＣＴ ＡＧＡＣＣＴＧＧＣＧ ＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡ ＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣ
１２１ ＡＡＧＧＣＴＴＣＣＧ ＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴ ＣＡＣＣＡＧＡＴＡＣ ＡＣＣＡＴＧＣＡＣＴ ＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡ ＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡ
１８１ ＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧ ＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧ ＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣ ＣＣＴＴＣＴＣＧＧＧ ＧＣＴＡＣＡＣＣＡＡ ＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧ
２４１ ＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧ ＡＣＡＡＧＧＣＴＡＣ ＣＣＴＧＡＣＡＡＣＣ ＧＡＣＡＡＧＴＣＣＴ ＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣ ＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧ
３０１ ＣＴＧＴＣＣＡＧＣＣ ＴＧＡＣＣＴＣＴＧＡ ＧＧＡＣＴＣＣＧＣＣ ＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴ ＧＴＧＣＣＣＧＧＴＡ ＣＴＡＣＧＡＣＧＡＣ
３６１ ＣＡＣＴＡＣＴＧＣＣ ＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧ ＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣ ＡＣＣＡＣＡＣＴＧＡ ＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧ ＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡ
４２１ ＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧ ＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣ ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ ＧＧＴＴＣＴＣＡＧＡ ＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣ ＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴ
４８１ ＧＣＣＡＴＣＡＴＧＴ ＣＣＧＣＴＴＣＴＣＣ ＣＧＧＣＧＡＧＡＡＡ ＧＴＧＡＣＡＡＴＧＡ ＣＣＴＧＣＴＣＣＧＣ ＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣ
５４１ ＧＴＧＴＣＣＴＡＣＡ ＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡ ＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧ ＴＣＣＧＧＣＡＣＣＴ ＣＴＣＣＴＡＡＧＣＧ ＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣ
６０１ ＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡ ＡＧＣＴＧＧＣＡＴＣ ＴＧＧＣＧＴＧＣＣＣ ＧＣＴＣＡＣＴＴＴＡ ＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧ ＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣ
６６１ ＡＧＣＴＡＣＴＣＣＣ ＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣ ＴＧＧＣＡＴＧＧＡＡ ＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧ ＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡ ＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧ
７２１ ＣＡＧＴＧＧＴＣＴＡ ＧＣＡＡＣＣＣＣＴＴ ＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣ ＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡ ＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴ ＣＡＡＣＡＧＡＧＣＣ
７８１ ＧＣＣＧＣＴＣＣＴＴ ＣＣＧＴＧＴＴＴＣＴ ＧＴＴＣＣＣＴＣＣＡ ＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧ ＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴ ＧＡＴＣＴＣＴＣＧＧ
８４１ ＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧ ＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴ ＧＧＴＧＧＴＣＧＡＴ ＧＴＧＴＣＴＣＡＣＧ ＡＧＧＡＣＣＣＡＧＡ ＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣ
９０１ ＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧ ＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴ ＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣ ＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡ ＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧ ＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧ
９６１ ＴＡＣＡＡＣＴＣＣＡ ＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴ ＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧ ＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣ ＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡ ＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣ
１０２１ ＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴ ＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡ ＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣ ＡＡＧＧＣＴＣＴＧＣ ＣＣＧＣＴＣＣＴＡＴ ＣＧＡＡＡＡＧＡＣＣ
１０８１ ＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧ ＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡ ＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡ ＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴ ＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣ ＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧ
１１４１ ＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡ ＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡ ＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧ ＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧ ＴＣＡＡＧＧＧＣＴＴ ＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣ
１２０１ ＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧ ＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡ ＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣ ＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡ ＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡ ＧＡＣＣＡＣＡＣＣＴ
１２６１ ＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧ ＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧ ＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣ ＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡ ＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴ ＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣ
１３２１ ＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣ ＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴ ＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣ ＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣ ＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴ ＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣ
１３８１ ＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡ ＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣ ＴＣＴＧＴＣＣＣＣＴ ＧＧＣＴＧＧＧＣＴＡ ＴＣＡＣＣＣＴＧＡＴ ＣＴＣＴＧＴＧＡＡＣ
１４４１ ＧＧＣＡＴＣＴＴＣＧ ＴＧＡＴＣＴＧＣＴＧ ＣＣＴＧＡＣＣＴＡＣ ＴＧＣＴＴＣＧＣＣＣ ＣＴＡＧＡＴＧＣＡＧ ＡＧＡＧＣＧＧＣＧＧ
１５０１ ＡＧＡＡＡＣＧＡＡＣ ＧＧＣＴＧＣＧＧＡＧ ＡＧＡＡＴＣＴＧＴＣ ＣＧＧＣＣＴＧＴＧ
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C-1】
【図8C-2】
【図9】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図11C】
【配列表】
【国際調査報告】