(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-31
(54)【発明の名称】血漿／細胞濃縮器装置および方法
(51)【国際特許分類】
A61M 1/02 20060101AFI20230524BHJP
【ＦＩ】
A61M1/02 140
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022559443
(86)(22)【出願日】2021-02-19
(85)【翻訳文提出日】2022-09-28
(86)【国際出願番号】 US2021018702
(87)【国際公開番号】W WO2021216177
(87)【国際公開日】2021-10-28
(31)【優先権主張番号】63/014,291
(32)【優先日】2020-04-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516353294
【氏名又は名称】ハヌマン ペリカン，インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002516
【氏名又は名称】弁理士法人白坂
(72)【発明者】
【氏名】ドリアン，ランディー
(72)【発明者】
【氏名】リーチ，マイケル，デー．
(72)【発明者】
【氏名】ストーズ，リチャード，ダブリュー．
【テーマコード（参考）】
4C077
【Ｆターム（参考）】
4C077AA12
4C077BB05
4C077CC04
4C077DD12
4C077DD22
4C077DD26
4C077EE01
4C077KK23
4C077NN03
4C077PP07
(57)【要約】
流体から成分を濃縮するための血漿／細胞濃縮装置および方法について説明する。一般に、所定量の流体が、流体チャネルを介して第１のリザーバーから第２のリザーバーに押し流され、流体と混合するための所定量の乾燥剤が、混合物を生成するために導入可能である。この流体と乾燥剤との混合物に、流体から１つ以上の成分が乾燥剤に吸収されるまで、第１のリザーバーと第２のリザーバーとの間を通過させることができる。混合後、乾燥剤が取り出しチャネル内に移動することを防止するとともに、流体チャネルと流体連通する取り出しチャネルから流体を取り出してもよい。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
流体チャネルを介して接続された第１のポートおよび第２のポートを有するコネクターと、前記第１のポートに取り付け可能な可変圧力を有する第１のリザーバーと、
前記第２のポートに取り付け可能な可変圧力を有する第２のリザーバーと、
前記流体チャネルと流体連通している取り出しチャネルと、
前記流体チャネルから前記取り出しチャネルへの乾燥剤の通過を防止するように位置決めされたフィルターと、
を備える、流体から成分を濃縮する装置。
【請求項2】
前記コネクターがマニホールド本体からなる、請求項１に記載の装置。
【請求項3】
前記第１のリザーバーおよび前記第２のリザーバーがそれぞれ、プランジャーを有するシリンジからなる、請求項１に記載の装置。
【請求項4】
前記取り出しチャネルと連通する弁をさらに備える、請求項１に記載の装置。
【請求項5】
前記フィルターがフリットからなる、請求項１に記載の装置。
【請求項6】
前記第１のリザーバーまたは前記第２のリザーバー内に導入するための所定量の乾燥剤ビーズをさらに備える、請求項１に記載の装置。
【請求項7】
前記第２のリザーバーが、前記第２のリザーバー内のプランジャーに対して圧力を加えるように配置された付勢要素をさらに含む、請求項１に記載の装置。
【請求項8】
前記第１のリザーバーが、真空力を生成するために前記第１のリザーバー内のプランジャーの位置を維持するように構成されたロック機構をさらに含む、請求項１に記載の装置。
【請求項9】
流体チャネルを通して第１のリザーバーから第２のリザーバーに所定量の流体を送り込むステップと、前記流体からの１つ以上の成分が乾燥剤に吸収されるまで、前記流体および所定量の前記乾燥剤を前記第１のリザーバーと前記第２のリザーバーとの間で通過させるステップと、
前記流体チャネルと流体連通している取り出しチャネル内に前記乾燥剤が移動することを防止するとともに前記取り出しチャネルから前記流体を取り出すステップと、
を含む、流体から成分を濃縮する方法。
【請求項10】
前記所定量の流体が血漿またはＰＲＰからなる、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
前記所定量の流体を送り込むステップが、マニホールドを介して形成された前記流体チャネルを介して第１のシリンジから第２のシリンジに前記所定量の流体を移動させるステップを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項12】
前記流体および前記所定量の乾燥剤を通過させるステップが、乾燥剤ビーズを導入するステップを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項13】
前記流体および前記所定量の乾燥剤を通過させるステップが、３０秒乃至２分の間、流体を通過させるステップを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項14】
前記流体を取り出すステップが、前記取り出しチャネルが前記流体チャネルと流体連通するように弁を解放するステップを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項15】
前記乾燥剤の移動を防止するステップが、前記乾燥剤が前記取り出しチャネル内に入ることを抑制するように、流体にフィルターまたはフリットを通過させるステップを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
回収シリンジを介して前記取り出しチャネルから前記流体を収集するステップをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項17】
前記流体を取り出すステップが、前記流体および前記乾燥剤が前記第１のリザーバーと前記第２のリザーバーとの間を通過している間に、前記取り出しチャネルから取り出すステップを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項18】
前記流体を取り出すステップが、前記第１のリザーバーおよび前記第２のリザーバーの各々に圧力を誘導することによって、前記取り出しチャネルから取り出すステップを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項19】
前記第２のリザーバーが、前記第２のリザーバー内のプランジャーに対して付勢力を加える、内部に含まれる付勢部材を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項20】
前記所定量の流体を送り出すステップが、前記第２のリザーバー内に真空を誘導して前記所定量の流体を前記第１のリザーバー内に引き込むステップを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項21】
前記所定量の流体を送り出すステップが、前記第１のリザーバーと前記第２のリザーバーとの間で前記流体および前記所定量の乾燥剤を移動させるに先だって、前記第１のリザーバーと前記第２のリザーバーとの間に設けられるマニホールド内に前記乾燥剤を保持するステップをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項22】
前記所定量の流体を送り出すステップが、前記第１のリザーバーと前記第２のリザーバーとの間で前記流体および前記所定量の乾燥剤を移動させるに先だって、前記第１のリザーバーまたは前記第２のリザーバー内に前記乾燥剤を保持するステップをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項23】
内部に第１の部分および第２の部分が設けられたハウジングと、前記ハウジング内に配置されるとともに前記第１の部分と前記第２の部分とを分離するフィルターと、
前記第１の部分と流体連通している第１のポートと、
前記第２の部分と流体連通している第２のポートと、
を備え、
前記第１の部分が、流体および乾燥剤からなる混合物を前記第１のポートを通して受承するように構成され、これにより、前記ハウジングに遠心力を加えることで、前記混合物が前記フィルターを通って前記第２の部分に押し流され、
前記流体から吸収された１つ以上の成分を有する前記乾燥剤が前記フィルターによって保持され、濃縮された流体が前記第２の部分に押し流される、流体から成分を濃縮する装置。
【請求項24】
前記第１の部分は、前記ハウジング内の上部からなり、前記第２の部分は、前記ハウジング内の下部からなる、請求項２３に記載の装置。
【請求項25】
前記フィルターが前記乾燥剤を保持するように構成されたフリットからなる、請求項２３に記載の装置。
【請求項26】
流体および乾燥剤からなる混合物をハウジングの第１の部分に導入するステップと、前記混合物が前記ハウジングの前記第１の部分と第２の部分との間に配置されたフィルターを押し流されて通過するように、前記ハウジングに遠心力を加えるステップと、
濃縮された流体を前記第２の部分内に受承するステップであって、前記流体から吸収された１つ以上の成分を有する前記乾燥剤が前記フィルターによって保持される、受承ステップと、
を含む、流体から成分を濃縮する方法。
【請求項27】
前記第２の部分と流体連通している取り出しポートを介して前記濃縮された流体を取り出すステップをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
前記混合物を導入するステップが、前記第１の部分と流体連通している入口ポートを介して前記混合物を導入するステップを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項29】
前記混合物が、フリットからなるフィルターを通過するように押し流される、請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、血液成分を濃縮する装置および方法に関するものである。より詳細には、本発明は、白血球を含むまたは含まない血漿または血小板に富む血漿から、遠心分離を必要とすることなく高分子血漿成分および／または細胞を効率的に濃縮する装置および方法に関する。
【背景技術】
【0002】
血液は分画され、異なる医療ニーズに対して血液の異なる分画が使用され得る。例えば、貧血（赤血球の量が少ない）は、赤血球の輸液で治療することができる。血小板減少症（血小板濃度の低下）は、血小板濃縮液の輸液で治療することができる。
【0003】
様々な血球および血漿の堆積は、細胞の比重および媒体の粘性の違いに基づいて行われる。堆積して平衡状態になると、比重（濃度）のもっとも大きいものが最終的に底部に堆積し、もっとも軽いものが上に上がってくる。重力や遠心力の影響を受けて、血液は自然に３つの層に堆積する。平衡状態では、一番上の低密度の層は血漿と呼ばれる麦わら色の透明な流体である。血漿は、塩類、代謝物、ペプチド、および小さなもの（インスリン）から非常に大きなもの（補体成分）までの多くのタンパク質が含まれる水溶液である。血漿自体は医療での使用が制限されるが、さらに分画されて、例えば血友病の治療（第ＶＩＩＩ因子）または止血剤（フィブリノーゲン）として使用されるタンパク質が得られる。全血中の血漿タンパク質および血小板のほとんどが、緩慢に遠心分離した後の血漿中にあるため、血漿中の血小板の濃度が上昇し、上澄みの血漿中に浮遊していることから、この成分を多血小板血漿ＰＲＰ（Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｒｉｃｈ Ｐｌａｓｍａ）と呼んでいる。遠心分離後の最上層は、一般的に血漿タンパク質のみを含み、「ハードスピン」の結果として血小板が存在しない、または数が少ないことから、一般的に乏血小板血漿ＰＰＰ（Ｐｌａｔｅｌｅｔ－Ｐｏｏｒ Ｐｌａｓｍａ）と呼ばれている。
【0004】
最下層の高濃度層は、酸素運搬に特化した核赤血球（ＲＢＣ）からなる深紅の粘性流体である。赤色は、赤血球の高比重の原因となる高濃度のキレート鉄またはヘムによるものである。血液型に適合したパックされた赤血球は、出血などによる貧血の治療に有用である。全血中の赤血球の相対的な量をヘマトクリット値と呼び、正常なヒトでは約３８％乃至約５４％となっている。
【0005】
中間層は最も小さい層で、赤血球層の上と血漿の下に薄い白色の帯状に現れ、バフィーコートと呼ばれている。バフィーコート自体は、核を有する白血球、および血小板と呼ばれる無核小体の２つの主要な成分を有する。白血球は免疫力を付与し、デブリーの回収にも貢献する。血小板は、血管の破れ目をシールして止血し、成長因子および創傷治癒因子を創傷部位に送り込む。バフィーコートは、血液を「ハードスピン」することで全血から分離することができる。「ハードスピン」では、全血を十分に強く、長く回転させることで、血漿から赤血球パックに血小板が堆積し、白血球が赤血球パックを通って赤血球と血漿との界面まで浸透していく。
【0006】
所定量の血液を構成する成分に分離するためには、一般的に遠心分離装置を用いて成分を分離および濃縮することが必要である。血液成分、特に血漿高分子成分、および／または血小板、および／または白血球を濃縮する他の方法として、血漿またはＰＲＰから水および低分子量溶質を除去する清掃中空糸ろ過を採用した装置がある。また、乾燥したサイズ排除クロマトグラフィービーズを使用して、遠心分離管内で水および低分子量溶質を吸着させる装置もある。これらの装置は、濃縮中に血漿／ビーズ混合物を撹拌するためのパドルまたはレーキを含み、次いで、濃縮生成物を通過させながら膨潤したビーズを保持するフリット（例えば、ガラス、セラミック等の焼結粒子からなる周知の多孔性を有するフィルター）を通して遠心分離管（またはドラム）の下部または遠位区画内に遠心分離でビーズの除去が行われる。
【0007】
さらなる別の方法として、シリンジ内に含まれるビーズと、ビーズと血漿との混合を促進するための１つ以上の金属ＢＢなどの撹拌機とを併用する装置が挙げられ、混合に次いで、ビーズ保持フリットを通した濃縮生成物の圧搾またはビーズ保持フリットを通した遠心分離が行われる。
【0008】
これらの方法のいずれにおいても、ビーズや繊維の表面上にゲル分極膜が形成されることを防止するために、通常、何らかの掃引や撹拌の手段が必要である。中空糸の場合、ろ過時に中空糸を通して血漿を循環させ、膜面を掃除する。遠心分離機の場合は、パドルやレーキで攪拌する。ビーズ装填シリンジの場合に、ＢＢがビーズ／血漿懸濁液を撹拌できるようにシリンジを振ることで撹拌を実現する。
【0009】
中空糸膜カートリッジは一般的に高価であり、中空糸膜カートリッジを使用する方法では、循環ポンプおよびチューブ回路が必要となる。クロマトグラフィービーズを使用する場合に、ビーズ表面上に大きな分子を堆積させるとともにビーズの孔を詰まらせる可能性のあるゲル分極を防止するために、また、ビーズ表面上に高濃度のタンパク質が蓄積することによりビーズが凝集することを防止するために、ビーズは血漿と接触した後に迅速に混合する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
したがって、遠心分離を必要とすることなく、白血球を含むまたは含まない血漿またはＰＲＰから高分子血漿成分および／または細胞を効果的に濃縮する単純かつ効果的な方法および装置に対するニーズが依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【0011】
本発明は、白血球を含むかまたは含まない血漿またはＰＲＰから、遠心分離を必要とすることなく高分子血漿成分および細胞のうちの少なくともいずれか一方を効率的に濃縮する装置および方法に関するものである。本装置の一態様として、マニホールドを介して第２のシリンジと流体的に結合された第１のシリンジを利用することができる。マニホールドには、それぞれのシリンジの先端を一時的または永久的に固定するための受承チャネルも設けられている。各シリンジはマニホールドと直接一体的に設けられるか、任意により非標準の結合部を取り付け、シリンジの一方または両者が不用意に不適切なポートに確実に脱着できないようにすることができる。
【0012】
流体チャネルはマニホールドを貫通して延びて、第１のシリンジの開口部と第２のシリンジの開口部とを流体的に結合し、取り出しチャネルはマニホールドを貫通して延び、流体チャネルに流体的に結合してもよい。流体チャネルからの流体の放出を防止するために、開放形態と閉鎖形態との間で構成可能な、例えば、自動でまたはコックの栓を介して手動で構成可能な作動可能な弁を、取り出しチャネルに組み込んでもよい。また、フィルターまたはフリットを取り出しチャネルの入口でマニホールドに組み込み、流体チャネルから取り出しチャネルへの通過の選択成分をろ過することもできる。
【0013】
流体チャネルには、流体が流体チャネルを通過する際に効果的に混合されることが促進されるように、ベーン、スパイク、十字線などの複数の突起または要素を任意に組み込むことができる。加えて、所定量の乾燥ビーズまたは要素も、流体チャネル内またはシリンジの一方または両者に直接加えることができる。
【0014】
濃縮される所定量の血漿またはＰＲＰは、第１のシリンジまたは第２のシリンジ（またはその両者）内に導入されてもよく、シリンジは、それらの開口部が流体チャネルの各端部に配置されるように、マニホールド内の対応する端部に結合されてもよい。所定量の乾燥ビーズを、流体チャネル内に保持し、かつ／またはシリンジの一方または両者内に保持した状態で、それぞれのプランジャーを交互に作動させ、血漿またはＰＲＰを流体チャネルを通してシリンジ間で押圧して往復させることができる。血漿またはＰＲＰをシリンジ間で循環させる際に、流体チャネルからの漏れを防止するために、取り出しチャネルを閉鎖した状態に保持しておくことができる。血漿またはＰＲＰが流体チャネルを介してシリンジ間を循環する際に、所定量のビーズが血漿またはＰＲＰと十分に混合し、水、電解質、および小さなタンパク質などの血漿またはＰＲＰ内の様々な成分を吸収するため、血漿またはＰＲＰは濃縮され、血小板の豊富な血漿の濃縮物を残すことができる。ビーズと血漿またはＰＲＰとの混合物はシリンジ間で往復するように循環するので、マニホールドへのシリンジ接続は、液密な接続を確保するために一体的であってもよく、シリンジ結合部の内径は、ゲル分極によって形成される可能性があるビーズの塊による詰まりの可能性を低減するために結合部の近位端で内部に先端ほど細くなっていてもよい。
【0015】
一旦血漿またはＰＲＰが十分に濃縮されたら、取り出しチャネルに沿った弁を開放して、流体チャネルを通過する濃縮生成物を取り出すことができるようにしてもよい。フィルターまたはフリットは、ビーズや他の成分が取り出しチャネルに入ることを防止するので、濃縮生成物のみが取り出しチャネルを通り、回収シリンジなどのリザーバーに入るようにすることができる。ビーズと血漿またはＰＲＰとの混合物が流体チャネルによる循環を継続するので、濃縮生成物の除去を可能にするために、取り出しチャネルを開放することができる。これにより、確実に混合物から濃縮生成物を一様に採取することができる。また、生成物抽出時にビーズ表面を掃引することで、ビーズがまだ完全に飽和していない場合に、残留する吸水がゲルの分極および高分子成分の損失、または凝集をさらに確実に引き起こさないようにすることができる。
【0016】
これに代えて、それぞれのシリンジにおけるプランジャーの両者を同時に押圧して圧力を発生させ、シリンジの両者から濃縮生成物を強制的に排出し、弁を開放した状態で回収するための取り出しチャネルを通してもよい。いずれの場合も、フィルターまたはフリットは、ビーズが取り出しチャネル内に移動することを防止し、濃縮生成物のみが通過できるようにしてもよい。
【0017】
代替案として、フィルターまたはフリットを通さずに材料を導入できるように、追加の取り出しチャネルおよびポートを設けてもよい。材料がマニホールドから導入されると、マニホールド内のビーズと混合し、ビーズがシリンジの一方または両者に掃き寄せられ、それぞれのプランジャーが部分的に延びるようにしてもよい。
【0018】
これらのビーズは、血漿またはＰＲＰと接触し混合する際に濃縮器として機能し、水、電解質、小さなタンパク質などの特定の成分を選択的に吸収するように構成された任意の数の材料からなり、回収のために濃縮生成物を残すことができる。ビーズを形成可能な様々な材料の例としては、様々なポリマー、金属、鉱物、多糖類、シリカゲル、セラミック、ガラスなど、生体材料を処理するのに適した任意の材料が挙げられ得る。
【0019】
別の態様では、マニホールドはマニホールド本体を含み、マニホールド本体は、マニホールド本体の対向する両端部に配置されたポートを含み、それぞれのポートは、マニホールド本体を通ってポート間に延びる流体チャネルを介して互いに流体的に接続することができる。取り出しチャネルは、ビーズや他の成分が取り出しチャネルを通過するのを防止または抑制するように配置されたフィルターまたはフリットを通して流体チャネルから延びることができる。
【0020】
例えば、２つのインラインシリンジの一方にバネのような付勢要素を取り付け、一方のシリンジのみに交互に圧力を加えたり解放したりすることで混合を行うなど、複数の任意の構成が可能である。２つのシリンジは平行である必要はなく、任意の角度をなすように、隣接する接続マニホールドを介して互いに接続されてもよい。第２の改良型シリンジは、プランジャーを有するのではなく、マニホールド本体の対向するポートに結合されてもよく、第２のシリンジは、可動プランジャーとシリンジの本体に対して堅固に配置され得るアンカープラットフォームとの間にアンカー固定された付勢要素を内部に含んでもよい。
【0021】
さらなる別例では、所定量の血漿またはＰＲＰは、フィルターまたはフリットを含むマニホールドを介して第１のシリンジを第２のシリンジに接続することによって濃縮されてもよく、第１のシリンジは任意で所定量のビーズを予め装填してもよく、第２のシリンジは濃縮されるべき所定量の血漿またはＰＲＰを含んでもよい。別の態様において、これに代えて、所定量のビーズをマニホールド自体内に予め充填しておくことも可能である。マニホールドまたは第２のシリンジは、マニホールドに最初に結合されたときに、第１のシリンジと第２のシリンジとの間の連通を防止するために最初に閉鎖されるストップコックのような弁を含んでもよい。
【0022】
第１のシリンジのプランジャーが最初に完全に押された状態で、弁が閉じた状態でプランジャーを近位側に引き寄せ、第１のプランジャー内に真空力を発生させることができる。これにより、第２のシリンジ内に含まれる流体と接触する前に、内包された所定量のビーズをシリンジ内で分散させることもできる。第１のプランジャーはロック機構によりその格納位置にロックされ、弁は第１のシリンジ内の真空が第２のシリンジからマニホールドを介して流体を引き込むように開放されてもよい。このように流体が突然第１のシリンジ内に拡散することで、最初の流体接触時に第１のシリンジ内でビーズが凝集する可能性を最小限に抑えることが支援され、また弁開放後の流体の急速な導入を促進することも可能である。一旦第１のシリンジに流体が導入されると、ロック機構が解除され（例えば、プランジャーロッドをシリンジ本体に対してひねることにより）、２つのシリンジ間でスラリーの循環が行われることになる。
【0023】
代替的なマニホールド本体は、第１のポートおよび第２のポートを有し、その両者が互いに近接し、湾曲したまたは角度をなす流体チャネルを介して流体的に接続されるように、マニホールドの第１の表面に沿って配置されてもよい。任意のチャンバーを、シリンジ間の初期混合段階において所定量のビーズを保持するために流体チャネルの間に組み込むことができる。加えて、チャンバー内のフリットを保持し、また、マニホールド本体に取り出しシリンジを結合できるようにするために、チャンバーから延びるようにフィルターまたはフリットウェルをさらに構成してもよい。ポートがマニホールド本体の共通面に沿って配置されているため、シリンジは互いに対して、またマニホールド本体に対して、任意の数の角度をなすことができる。さらに、本態様は、本明細書に記載された装置および方法のいずれにも利用することができる。
【0024】
所定量の濃縮生成物を回収するためのさらなる別の態様では、マニホールドから直接濃縮生成物を取り出すのではなく、結合部を遠心分離機と組み合わせて使用することができる。結合部は、混合スラリーが導入される導入ポートがハウジングの上部に配置されたハウジングを有することができる。取り出しポートはハウジングの下部に配置され、フリットはハウジング内に配置され、内部容積を上部と下部とに分離することができる。
【0025】
混合スラリーがポートを通ってハウジングの上部に導入されると、両方のポートがキャップされるか閉じられ、結合部全体が遠心分離を受け、流体が上部からフリットを通り、ハウジングの下部に駆動されてもよい。一旦全ての濃縮生成物が下部と、フリットの上の上部内に残っているビーズとに分離されたら、濃縮生成物をハウジングから取り出すために、取り出しポートを開放してもよい。
【0026】
流体から成分を濃縮するための方法の一態様では、方法は、概して、所定量の流体を第１のリザーバーから流体チャネルを通して第２のリザーバーに押し流すことと、流体と混合するために所定量の乾燥剤を導入することとを含むことができる。この流体と乾燥剤との混合物に、流体から１つ以上の成分が乾燥剤に吸収されるまで、第１のリザーバーと第２のリザーバーとの間を通過させることができる。混合後、乾燥剤が取り出しチャネル内に移動することを防止しながら、流体チャネルと流体連通している取り出しチャネルを介して流体を取り出すことができる。
【0027】
流体から成分を濃縮するための装置の一態様では、装置は一般に、流体チャネルを介して接続された第１のポートおよび第２のポートを有するコネクターと、第１のポートに取り付け可能な可変圧力を有する第１のリザーバーと、第２のポートに取り付け可能な可変圧力を有する第２のリザーバーとを備えることができる。取り出しチャネルは、流体チャネルと流体連通していてもよく、フィルターは、流体チャネルから取り出しチャネルへの乾燥剤の通過を防止するように配置されていてもよい。
【図面の簡単な説明】
【0028】
【発明を実施するための形態】
【0029】
図１の斜視図に一態様による装置を示し、遠心分離を必要とすることなく血漿またはＰＲＰから１つ以上の血漿成分および細胞のうちの少なくともいずれか一方を効果的に濃縮するために使用することができるアセンブリー１０を示す。アセンブリー１０は、白血球を含むかまたは含まない成分および細胞のうちの少なくともいずれか一方を濃縮してもよい。図示のように、第１のリザーバーまたはシリンジ２２は、マニホールド１２を介して第２のリザーバーまたはシリンジ２６に流体的に結合され、マニホールド１２には、マニホールド１２に対応するシリンジ２２、２６の先端を一時的または恒久的に固定する受承チャネルも設けられる。シリンジが示され、説明されているが、これに代えて代替的な流体容器またはリザーバー構造体が使用されてもよい。各シリンジ２２、２６は、マニホールド１２と直接一体的に設けられるか、または任意により非標準の結合部に装着され、シリンジ２２、２６の一方または両者が不用意に誤ったポートに脱着できないようにする。
【0030】
流体チャネル１６は、マニホールド１２を通って延びて、第１のシリンジ２２および第２のシリンジ２６の開口部を流体的に結合してもよく、取り出しチャネル１８は、マニホールド１２を通って延びて、例えば５ｍｍの直径を有してよいが例えば３乃至１０ｍｍの範囲であってもよい流体チャネル１６に流体的に結合してもよい。開閉可能な弁２０は、例えば、自動またはストップコックを介して手動で開閉形態に構成可能であり、流体チャネル１６からの流体の放出を防止するために、取り出しチャネル１８と一体的に組み込んでよい。フィルターまたはフリット１４を、流体チャネル１６から取り出しチャネル１８に通過する選択成分をフィルタリングするために、取り出しチャネル１８の入口でマニホールド１２に組み込むこともできる。
【0031】
流体チャネル１６には、流体が流体チャネル１６を通過する際に効果的に混合されることが促進されるように、ベーン、スパイク、十字線などの複数の突起または要素を任意に組み込むことができる。加えて、所定量の乾燥ビーズまたは要素も、流体チャネル１６内またはシリンジ２２、２６の一方または両者に直接加えることができる。所定量の乾燥ビーズまたは要素が流体チャネル１６内またはシリンジの一方または両者内に直接含まれる状態で、濃縮される材料を導入する前に、接続チャネル１６の底部上またはシリンジ２２、２６内の所定量の乾燥ビーズの分散を促進するために、水平形態に保持しながら装置を任意に叩いたり振ったりなどして動かすことができる。そうすることで、血漿やＰＲＰをビーズに接触させるように導入する直後に塊が形成される可能性を低減することができる。
【0032】
濃縮される所定量の血漿またはＰＲＰは、第１のシリンジ２２または第２のシリンジ２６（またはその両者）内に導入されてもよく、シリンジ２２、２６は、それらの開口部が流体チャネル１６の各端部に配置されるように、マニホールド１２内の対応する端部に結合されてもよい。所定量の乾燥ビーズを、流体チャネル１６内に保持し、かつ／またはシリンジ２２、２６の一方または両者内に保持した状態で、それぞれのプランジャー２４、２８を交互に作動させ、血漿またはＰＲＰを流体チャネル１６を通してシリンジ２２とシリンジ２６との間で押圧して往復させることができる。血漿またはＰＲＰがシリンジ２２とシリンジ２６との間で循環されるとき、取り出しチャネル１８は、流体チャネル１６からの漏出を防止するために閉鎖した状態に保持しておくことができる。血漿またはＰＲＰが流体チャネル１６を介してシリンジ２２とシリンジ２６との間を循環する際に、所定量のビーズが血漿またはＰＲＰと十分に混合し、水、電解質、および小さなタンパク質などの血漿またはＰＲＰ内の様々な成分を吸収するため、血漿またはＰＲＰは濃縮され、血小板の豊富な血漿の濃縮物を残すことができる。ビーズと血漿またはＰＲＰとの混合物はシリンジ２２とシリンジ２６との間で往復するように循環するので、マニホールド１２へのシリンジ接続は、液密な接続を確保するために一体的であってもよく、シリンジ結合部の内径は、ゲル分極によって形成される可能性があるビーズの塊による詰まりの可能性を低減するために、結合部の近位端で内部に先端ほど細くなっていてもよく、例えば、シリンジ内径よりも比較的小さいが標準シリンジ内径よりも比較的大きい直径（２乃至６ｍｍ）にすることができる。
【0033】
一旦血漿またはＰＲＰが十分に濃縮されたら、取り出しチャネル１８に沿った弁２０を開放して、流体チャネル１６を通過する濃縮生成物を取り出すことができるようにしてもよい。フィルターまたはフリット１２は、ビーズや他の成分が取り出しチャネル１８に入ることを防止するので、濃縮生成物のみが取り出しチャネル１８を通り、回収シリンジなどのリザーバーに入るようにすることができる。ビーズと血漿またはＰＲＰとの混合物が流体チャネル１６による循環を継続するので、濃縮生成物の除去を可能にするために、取り出しチャネル１８を開放することができる。これにより、確実に混合物から濃縮生成物を一様に採取することができる。また、生成物抽出時にビーズ表面を掃引することで、ビーズがまだ完全に飽和していない場合に、残留する吸水がゲルの分極および高分子成分の損失、または凝集をさらに確実に引き起こさないようにすることができる。
【0034】
これに代えて、各シリンジ２２、２６の両者の対応するプランジャー２４、２８を同時に押圧して圧力を発生させ、弁２０を開放した状態で、濃縮生成物をシリンジ２２、２６の両者から、回収のために取り出しチャネル１８を通して強制的に取り出すようにしてもよい。いずれの場合も、フィルターまたはフリット１４は、ビーズが取り出しチャネル１８内に移動することを防止し、濃縮生成物のみが通過できるようにしてもよい。
【0035】
代替案として、フィルターまたはフリット１４を通さずに材料を導入できるように、追加の取り出しチャネルおよびポートを設けてもよい。材料がマニホールド１２を通って導入されると、中に含まれるビーズと混合し、対応するプランジャー２４、２８を強制的に部分的に拡張させるためにシリンジ２２、２６の一方または両者に掃き入れることができる。
【0036】
これらのビーズは、血漿またはＰＲＰと接触し混合する際に濃縮器として機能し、水、電解質、小さなタンパク質などの特定の成分を選択的に吸収するように構成された任意の数の材料からなり、回収のために濃縮生成物を残すことができる。ビーズを形成可能な様々な材料の例としては、様々なポリマー、金属、鉱物、多糖類、シリカゲル、セラミック、ガラスなど、生体材料を処理するのに適した任意の材料が挙げられ得る。
【0037】
ポリマーの様々な例としては、例えば、デキストラノマー、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリアクリルアミド等を挙げることができる。金属の様々な例としては、例えば、チタンなどを挙げることができ、鉱物の様々な例としては、例えば、ゼオライト、コランダム、クォーツなどを挙げることができる。多糖類の様々な例としては、例えば、アルギン酸ゲル、デンプン、デキストラン、アガロースなどを挙げることができる。
【0038】
いくつかの変形例では、ビーズは、免疫グロブリンｇなどの抗体などの活性化物質と共役にされていてもよい。
【0039】
ビーズは生体物質の変化を誘発して血漿またはＰＲＰを濃縮するために使用されるものであるため、使用するビーズの材質および濃縮する生体物質に応じて、ビーズの大きさおよび組成を変えることができる。一例では、ビーズは、ポリアクリルアミド材料（例えば、１０００乃至６０００の公称分画分子量（ＮＭＷＬ）を有するバイオラッドＰ６クロマトグラフィービーズ）で構成されてもよく、それぞれが、例えば、４５乃至９０マイクロメートルの乾燥ビーズ直径を有する大きさとすることができる。したがって、濃縮される約１０ｍｌなどの所定量の血漿またはＰＲＰに関して、容量は、例えば、５乃至３０ｍｌまでの任意の範囲であってもよく、使用されるビーズの重量は、約２００乃至５，０００ｍｇの範囲のうち任意のものであり得るが、例えば、約１，０００ｍｇであってもよく、ビーズと血漿またはＰＲＰとの比率は例えば０．０４乃至０．１５の範囲のうち任意のものであり得るが、約０．１であってもよく、所望の成分を効果的に分離することができる。
【0040】
さらに、ビーズおよび濃縮する生体物質に応じて、シリンジ２２とシリンジ２６との間の往復回数を変えることができる。一態様では、血漿またはＰＲＰは、ビーズを血漿またはＰＲＰと十分に混合するために、例えば、１０乃至５０サイクル、循環させることができる。これに代えて、循環は十分な混合を可能にするために時間を設定してもよく、例えば、３０秒乃至２分またはそれ以上の範囲とすることができる。加えて、流体チャネル１６の直径がビーズの大きさに比べて比較的小さいため、不完全な混合によって形成された塊は、塊が流体チャネル１６を通る際に乱流および剪断によってばらばらに破壊され得る。さらに、シリンジ２２とシリンジ２６との間を往復するように循環させることで、ビーズと血漿またはＰＲＰとを効率的に混合することが促進され、泡立ちが比較的少なく、より一様なスラリーを生成することができる。
【0041】
図２Ａ乃至２Ｄは、それぞれ、従来のシリンジまたは改良型シリンジと組み合わせて使用され得る別の態様によるマニホールドを示す斜視図、側面図、底面図、および頂面図である。マニホールド３０はマニホールド本体３２を含み、マニホールド本体３２は、マニホールド本体３２の対向する両端部に配置されたポート３４、３６を含み、それぞれのポート３４、３６は、マニホールド本体３２を通ってポート３４とポート３６との間に延びる流体チャネル３８を介して互いに流体的に接続することができる。取り出しチャネル４０は、流体チャネル３８から、ビーズまたは他の成分が取り出しチャネル４０を通過し、取り出しチャネル４０に入ることを防止または抑制するように配置されたフィルターまたはフリット４２を通って延びてもよい。
【0042】
取り出しチャネル４０は、流体チャネル３８に対して横方向に延びるように示されているが、これに代えて取り出しチャネル４０が流体チャネル３８に対して非標準の角度で傾斜していてもよい。さらに、アセンブリー３０は従来のシリンジと組み合わせて使用することができるが、他の態様ではポート３４、３６は特殊な構成のシリンジと一時的または恒久的に係合するように調整または修正が可能である。
【0043】
実施例１
【0044】
実施された試験の一例では、図３Ａの斜視図に示すように、第１の容量５０Ａのクエン酸化したウシＰＲＰが、ポート３６に結合された第１のシリンジ２２に直接導入され、取り出しチャネル４０の出口はキャップにより密閉された。そのプランジャー２８が完全に押し下げられた第２のシリンジ２６がポート３４に結合され、ＰＲＰが装填された第１のシリンジ２２を取り付ける前に、所定量の濃縮ビーズ５２が、マニホールド本体３２内に含まれる流体チャネル３８に予め装填された。
【0045】
第１のプランジャー２４が押し下げられることにより、第１の容量５０ＡのＰＲＰが流体チャネル３８内に強制的に押し込まれ、中に含まれるビーズ５２と接触させられた。第１の容量５０Ａがさらに導入されると、図３Ｂの斜視図に示すように、ＰＲＰおよびビーズは、対向する第２のシリンジ２６に押し流されることで混合を開始し、第２のプランジャー２８を強制的に拡張させながら第２の容量５０Ｂを取り込むことができる。
【0046】
マニホールド本体３２を介してシリンジ２２とシリンジ２６との間でＰＲＰを緩やかに往復させる工程は、ビーズ５２が血漿から水分を十分に吸収できるように、一定時間、例えば、約３０秒間維持することができる。一旦混合が完了すると、濃縮された混合物は、ビーズの塊が視認できない、一様なスラリーとして現出し得る。図３Ｃの斜視図に示すように、キャップ（ある場合は弁）を外し、回収シリンジ５４を、そのプランジャーを完全に押し込んだ状態で取り出しポート４０に装着してもよい。この循環は、第１のシリンジ２２と第２のシリンジ２６との間で継続されてもよく、その間、濃縮生成物５６は、ビーズの通過を妨げるフィルターまたはフリット４２を、シリンジ２２、２６の流量制限および抵抗によって発生する適度な圧力によって強制的に通過させられる。この圧力により、図３Ｄの斜視図に示すように、濃縮されたＰＲＰを、ビーズ保持フィルターまたはフリット４２を通して、回収シリンジ５４内に強制的に押し込むことができる。
【0047】
濃縮流体５６の大部分がフィルターまたはフリット４２を通って回収シリンジ５４内に圧搾されていたときに、残りのビーズパック５２は、図３Ｅの斜視図に示すように、一様かつ白色に現れ、これは、混合および採取によりスラリーの一様性が維持されたこと、および濃縮流体５６が略完全に回収シリンジ５４に移されたことを示す。
【0048】
実施例２
【0049】
実施された試験の別例では、血漿、血小板、白血球、および少量の赤血球からなる所定量のバフィーコート６０Ａが、図４Ａの斜視図に示すように、そのプランジャー２８が完全に押し下げられた状態でポート３４に結合された第２のシリンジ２６と反対側のポート３６に結合された第１のシリンジ２２内に導入された。
【0050】
所定量のビーズ５２が、所定量のバフィーコート６０Ａとともに第１のシリンジ２２に予め装填されたが、ビーズ５２は、代替的にマニホールド本体３２の流体チャネル３８内に予め装填されてもよい。図４Ｂの斜視図に示すように、続いて所定量のバフィーコートを、流体チャネル３８を介してシリンジ２２、２６間で循環させ、所定量の容量６０Ａ、６０Ｂ間でビーズ５２を十分に混合させることができた。ビーズ５２の塊化（例えば、流体と最初に接触したときなど）を防止するために、特にビーズ５２がシリンジのうちの１つの中に直接予め装填されるときに、シリンジ２２とシリンジ２６との間で容量を迅速に循環させることができる。
【0051】
シリンジ２２とシリンジ２６との間で混合スラリーを往復するように循環させる時間、例えば約３０秒の後に、回収シリンジ６２を出口ポート４０に取り付け、図４Ｃの斜視図に示すように、インラインシリンジ２２とインラインシリンジ２６との間でスラリーを往復させ続けることによって、ビーズ保持フィルターまたはフリット４２を経て回収シリンジ６２内に濃縮生成物６４が圧搾された。
【0052】
濃縮生成物６４が回収された後に、残りのビーズパック５２は、パックされたビーズ５２の間の僅かな残量の間質液の中の赤血球の痕跡から、一様かつ僅かにピンク色に現れ得る。図４Ｄは、ビーズ５２が第１のシリンジ２２および／または第２のシリンジ２６内に保持されるとともに、濃縮生成物６４がどのように回収されるかを示す斜視図である。
【0053】
上記両実施例で示したように、ＰＲＰおよびバフィーコートの濃縮において、初期投入量に対する回収量の比率は、採用した量のビーズ５２によって吸収されると考えられる水分量と一致した。これは、細胞および高分子が効果的に濃縮されていることを示している。また、別の予備の試験では、セルのカウントを行い、比較的高いセル回収率を確認した。
【0054】
別例による形態
【0055】
例えば、２つのインラインシリンジの一方にバネのような付勢要素を取り付け、一方のシリンジのみに交互に圧力を加えたり解放したりすることで混合を行うなど、複数の任意の構成が可能である。２つのシリンジは平行である必要はなく、任意の角度をなすように、隣接する接続マニホールドを介して互いに接続されてもよい。図５の斜視図は、フィルターまたはフリット７２を含むマニホールド本体７０に結合されたシリンジ２２を示している。第２の改良型シリンジ７８は、プランジャーを有するのではなく、マニホールド本体７０の対向するポートに結合されてもよく、第２のシリンジ７８は、可動プランジャーとシリンジ７８の本体に対して堅固に配置され得るアンカープラットフォーム８２との間にアンカー固定された付勢要素８０を内部に含んでもよい。
【0056】
付勢要素８０は、プランジャーがアンカープラットフォーム８０から離間する方向に押圧するように付勢されるように、プランジャーを圧縮状態に維持してもよい。この構成では、図示のように、第１のシリンジ２２にビーズ５２を収納してもよいし、マニホールド本体７０にビーズ５２を収納してもよい。いずれの場合も、血漿またはＰＲＰを第１のシリンジ２２内に導入し、プランジャー２４を押し下げて、ビーズ５２と血漿またはＰＲＰとの混合物をマニホールド本体７０の流体チャネルを通して、第２のシリンジ７８内に強制的に導入してもよい。第１のシリンジ２２のプランジャー２４は、付勢要素８０が第２のシリンジ７８内のプランジャーを自動的に押圧して、混合物をマニホールド本体７０を通って第１のシリンジ２２内に戻すようにするために解放されてもよい。この工程は、本明細書で説明するように、流体が十分に濃縮されるまで繰り返すことができる。ストップコック７６または弁（設けられる場合）は、濃縮生成物がフィルターまたはフリット７２を通過し、取り出しチャネル７４を通って、取り付けられた回収シリンジ８６に入ることができるように開放されてもよい。
【0057】
図６の斜視図に示すように、さらなる別の実施形態では、上述したように、第１のシリンジ２２を、フィルターまたはフリット７２を含むマニホールド７０を通して第２のシリンジ８８に接続することによって、所定量の血漿またはＰＲＰを濃縮してもよい。第１のシリンジ２２には任意により所定量のビーズ５２を予め装填しておき、第２のシリンジ８８には濃縮する所定量の血漿またはＰＲＰ８９を入れることができる。別の態様において、これに代えて、所定量のビーズ５２をマニホールド７０自体内に予め充填しておくことも可能である。マニホールド７０または第２のシリンジ８８は、マニホールド７０に最初に結合されたときに第１のシリンジ２２と第２のシリンジ８８との間の連通を防止するために最初に閉鎖されるストップコックなどの弁９１を含んでもよい。
【0058】
第１のシリンジ２２のプランジャーが最初に完全に押し下げられた状態で、第１のプランジャー２２内に真空力が生じるように、弁９１を閉じた状態でプランジャーを近位側に引いてもよい。これにより、第２のシリンジ８８内に含まれる流体と接触する前に、内包された所定量のビーズ５２をシリンジ２２内で分散させることもできる。第１のプランジャーはロック機構９３によりその格納位置にロックされ、弁９１は第１のシリンジ２２内の真空が第２のシリンジ８８からマニホールド７０を介して流体８９を引き込むように開放されてもよい。このように流体８９が突然第１のシリンジ２２内に拡散することで、最初の流体接触時に第１のシリンジ２２内でビーズ５２が凝集する可能性を最小限に抑えることが支援され、また弁９１開放後の流体８９の急速な導入を促進することも可能である。
【0059】
一旦第１のシリンジ２２内に流体８９が導入されると、ロック機構９３が解除され（例えば、プランジャーロッドをシリンジ本体に対してひねることにより）、２つのシリンジ２２、８８の間でスラリーの循環が行われることになる。上述したように、続いて回収シリンジをマニホールド７０に結合して、採取することができる。同様に、シリンジ２２、８８は、直線的なコネクター、または２つのシリンジを互いに任意の角度をなすように隣接させるコネクターを介して取り付けることができる。
【0060】
図７Ａおよび図７Ｂは、２つのシリンジを様々な角度で互いに流体的に結合させることができるマニホールド９０を示す部分断面側面図および斜視図である。図示のように、マニホールド本体９２は、第１のポート９６および第２のポート９８を有し、その両者が互いに近接し、湾曲したまたは角度をなす流体チャネル１００、１０２を介して流体的に接続されるように、マニホールド９２の第１の表面に沿って配置されてもよい。任意のチャンバー９４を、シリンジ間の初期混合段階において所定量のビーズ５２を保持するために流体チャネル１００と流体チャネル１０２との間に組み込むことができる。加えて、チャンバー９４内のフリットを保持し、また、マニホールド本体９２に取り出しシリンジを結合できるようにするために、チャンバー９４から延びるようにフィルターまたはフリットウェル１０４をさらに構成してもよい。
【0061】
ポート９６、９８は、マニホールド本体９２の共通の表面に沿って配置されているため、シリンジは、互いに対して、またマニホールド本体９２に対して、任意の数の角度をなすことができる。さらに、本態様は、本明細書に記載された装置および方法のいずれにも利用することができる。
【0062】
加えて、本明細書に記載されるこれらの態様のいずれにおいても、生成物回収シリンジ（または、受承空間の遠位側の上でフリットと一体的に設けられる遠心分離管などの他の回収容器）は、遠心分離に供されて、フリットを介して濃縮物を遠心分離し、ビーズパックから分離し得る。これは、ビーズ間の間質液をすべてビーズパックから追い出すことで、容量回収率を向上させることができるという利点がある可能性があるが、そのためには余分な移送ステップおよび遠心分離が必要になる。
【0063】
濃縮生成物を回収するためにスラリーに加える圧力に代わるさらなる別の方法として、例えば、空気の蒸気でフリットを介してビーズパックから濃縮生成物を吹き出すことができる。このため、良好な容量回収を行うには、加圧された空気源が必要である。さらに、注意深く行わないと泡立ちが起こり、細胞および血漿タンパク質に損傷を与える可能性もある。
【0064】
量回復に関しては、ビーズを密に充填した場合、パック全体の体積の約１／３が間質性空間であることに留意する必要がある。濃縮液を加圧して絞り出すと、この量が回収できない場合がある。濃縮液の回収に用いる方法（圧力または遠心分離）にかかわらず、（完全に膨潤した）ビーズと残留間質液の容積比が２よりも大きいスラリーを効果的に混合することが困難であるため、倍率は約３倍までに制限され得る。圧力によって採取される生成物の合理的な容積回収率は、例えば１．５倍乃至２倍の順になり得る。
【0065】
所定量の濃縮生成物を回収するためのさらなる別の態様では、マニホールドから直接濃縮生成物を取り出すのではなく、図８に示す結合部１１０を遠心分離機と組み合わせて使用することができる。結合部１１０は、混合スラリーが導入されるルアーコネクターなどの導入ポート１１４がハウジング１１２の上部に配置されたハウジング１１２を有することができる。ルアーコネクタなどの取り出しポート１１６は、ハウジング１１２の下部に配置されてもよく、フリット１１８は、内部容積を上部１２０と下部１２２とに分離するようにハウジング１１２内に配置されてもよい。
【0066】
混合スラリーがポート１１４を通ってハウジング１１２の上部１２０内に導入されると、両方のポート１１４、１１６がキャップされるか閉じられ、結合部１１０全体が遠心分離を受け、流体が上部１２０からフリット１１８を通り、ハウジング１１２の下部１２２に駆動されてもよい。一旦全ての濃縮生成物が下部１２２と、フリット１１８の上の上部１２０内に残っているビーズとに分離されたら、濃縮生成物をハウジング１１２から取り出すために、取り出しポートを開放してもよい。
【0067】
ハウジング１２０の一使用例では、マニホールド１２を各シリンジ ２２、２６に結合し、所定量の血漿またはＰＲＰを所定量の乾燥ビーズと初期混合してもよく、この乾燥ビーズは、上述のように、また図９Ａに示すように、シリンジ２２とシリンジ２６との間を通過するときに所定量の血漿またはＰＲＰと自由に相互混合し得る。得られた血漿またはＰＲＰおよび乾燥ビーズのスラリーまたは混合物１３０は、マニホールド１２から切り離すことができ、続いて導入ポート１１４に流体的に結合させることできる１つのシリンジ２６に移送されてもよい。図９Ｂに示すように、シリンジ２６からのスラリーまたは混合物１３０は、続いて導入ポート１１４を通って、ハウジング１１２の上部１２０内に移送することができる。
【0068】
一旦スラリーまたは混合物１３０が十分に移動したら、シリンジ２６を導入ポートから切り離し、ハウジング１１２を遠心分離してスラリーまたは混合物１３０を上部１２０から駆動し、フリット１１８を通して、ハウジング１１２の下部１２２に入るようにしてもよい。フリット１１８は、血漿またはＰＲＰから１つ以上の成分を吸収した乾燥ビーズを保持することができ、これにより、得られた濃縮生成物１３４を下部１２２内に保持することができる。追加シリンジ１３２は、図９Ｃに示すように、濃縮生成物１３４を下部１２２から追加シリンジ１３２内に取り出すための取り出しポート１１６と流体的に結合することができる。
【0069】
上記に開示されている装置および方法は、図示または説明されている個別の実施形態に限定されるものではなく、異なる変形の間で個別の特徴を取り入れた組み合わせを含むことができる。本発明を実施するための上述したアセンブリおよび方法の変更、実行可能な異なる態様間の組み合わせ、および当業者にとって明白な本発明の態様の変形例は、特許請求の範囲内にあることが意図されている。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図3E】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【国際調査報告】