(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-31
(54)【発明の名称】抗ＦＬＴ３抗体及び組成物
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230524BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20230524BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230524BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230524BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230524BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230524BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230524BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20230524BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20230524BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230524BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230524BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230524BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230524BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20230524BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230524BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20230524BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/28 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
C07K16/46
A61P35/00
A61P35/02
A61K45/00
A61P43/00 121
A61P37/02
A61K39/395 T
A61K39/395 N
A61K39/395 E
A61K39/395 D
A61P37/04
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022562446
(86)(22)【出願日】2021-04-14
(85)【翻訳文提出日】2022-12-02
(86)【国際出願番号】 EP2021059646
(87)【国際公開番号】W WO2021209495
(87)【国際公開日】2021-10-21
(31)【優先権主張番号】63/009,578
(32)【優先日】2020-04-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】500287019
【氏名又は名称】レ ラボラトワール セルヴィエ
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】弁理士法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】リンドステット，トリーネ
(72)【発明者】
【氏名】メランデル，エヴァ・マリア・カールセン
(72)【発明者】
【氏名】リーヴァ，マッテオ
(72)【発明者】
【氏名】ペデルセン，ミッケル・ワンダール
(72)【発明者】
【氏名】ハンセン，ランディ・ウェスト
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
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4B064CA05
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4B064CA08
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4B065AA01X
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4C084AA19
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4C084MA55
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4C084NA05
4C084ZA021
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4C084ZB071
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4C084ZC751
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4C085GG01
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4C085GG04
4C085GG06
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、抗ＦＬＴ３抗体、ならびにそれを必要とする患者において免疫を増強する際において、及びがんを処置する際においてそれらの使用する方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分であって、前記抗体が、ａ）配列番号３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ならびに配列番号４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）；
ｂ）配列番号１３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号１４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｃ）配列番号２３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号２４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｄ）配列番号３３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号３４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｅ）配列番号４３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号４４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｆ）配列番号５３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号５４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｇ）配列番号６３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号６４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；又は
ｈ）配列番号７３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号７４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣを含む抗体と同じヒトＦＬＴ３のエピトープに結合する
抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分。
【請求項2】
請求項１に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、ａ）前記抗ＦＬＴ３抗体の重鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号５～７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（Ｈ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；
ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含み；ならびに
ｂ）前記抗ＦＬＴ３抗体の軽鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号８～１０のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（Ｌ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｉｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項3】
請求項１に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、ａ）前記抗ＦＬＴ３抗体の重鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号１５～１７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（Ｈ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；
ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号１３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含み；ならびに
ｂ）前記抗ＦＬＴ３抗体の軽鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号１８～２０のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（Ｌ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号１４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項4】
請求項１に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、ａ）前記抗ＦＬＴ３抗体の重鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号２５～２７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（Ｈ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；
ｉｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号２３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含み；ならびに
ｂ）前記抗ＦＬＴ３抗体の軽鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号２８～３０のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（Ｌ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｉｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号２４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項5】
請求項１に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、ａ）前記抗ＦＬＴ３抗体の重鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号３５～３７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（Ｈ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；
ｉｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号３３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含み；ならびに
ｂ）前記抗ＦＬＴ３抗体の軽鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号３８～４０のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（Ｌ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号３４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項6】
請求項１に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、ａ）前記抗ＦＬＴ３抗体の重鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号４５～４７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（Ｈ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；
ｉｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号４３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含み；ならびに
ｂ）前記抗ＦＬＴ３抗体の軽鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号４８～５０のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（Ｌ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号４４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項7】
請求項１に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、ａ）前記抗ＦＬＴ３抗体の重鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号５５～５７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（Ｈ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；
ｉｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号５３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含み；ならびに
ｂ）前記抗ＦＬＴ３抗体の軽鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号５８～６０のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（Ｌ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号５４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項8】
請求項１に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、ａ）前記抗ＦＬＴ３抗体の重鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号６５～６７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（Ｈ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；
ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号６３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含み；ならびに
ｂ）前記抗ＦＬＴ３抗体の軽鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号６８～７０のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（Ｌ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｉｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号６４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項9】
請求項１に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、ａ）前記抗ＦＬＴ３抗体の重鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号２５～２７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（Ｈ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；
ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号７３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含み；ならびに
ｂ）前記抗ＦＬＴ３抗体の軽鎖が、
ｉ）それぞれ配列番号２８～３０のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（Ｌ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｉｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号７４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項10】
抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分であって、前記抗体が、ａ）それぞれ配列番号５～１０；
ｂ）それぞれ配列番号１５～２０；
ｃ）それぞれ配列番号２５～３０；
ｄ）それぞれ配列番号３５－４０；
ｅ）それぞれ配列番号４５－５０；
ｆ）それぞれ配列番号５５～６０；又は
ｇ）それぞれ配列番号６５～７０のＨ－ＣＤＲ１～３及びＬ－ＣＤＲ１～３アミノ酸配列を含む
抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分。
【請求項11】
請求項１０に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、前記抗体が、ａ）それぞれ配列番号３及び４；
ｂ）それぞれ配列番号１３及び１４；
ｃ）それぞれ配列番号２３及び２４；
ｄ）それぞれ配列番号３３及び３４；
ｅ）それぞれ配列番号４３及び４４；
ｆ）それぞれ配列番号５３及び５４；
ｇ）それぞれ配列番号６３及び６４；又は
ｈ）それぞれ配列番号７３及び７４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列及び軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項12】
請求項１０に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、前記抗体が、ａ）それぞれ配列番号３及び４；
ｂ）それぞれ配列番号１３及び１４；
ｃ）それぞれ配列番号２３及び２４；
ｄ）それぞれ配列番号３３及び３４；
ｅ）それぞれ配列番号４３及び４４；
ｆ）それぞれ配列番号５３及び５４；
ｇ）それぞれ配列番号６３及び６４；又は
ｈ）それぞれ配列番号７３及び７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項13】
ＩｇＧである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体。
【請求項14】
ＩｇＧ１である、請求項１３に記載の抗ＦＬＴ３抗体。
【請求項15】
Ｆｃ領域中に少なくとも１つの変異を含む、請求項１～１４のいずれか一項記載の抗ＦＬＴ３抗体。
【請求項16】
ＩｇＧ１であり、ＩＭＧＴ（登録商標）ナンバリングスキームに従って番号付けされた重鎖アミノ酸２３４位及び２３５位の１つ以上において変異を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体。
【請求項17】
２３４位及び２３５位のアミノ酸残基の一方又は両方がＬｅｕからＡｌａに変異している、請求項１６に記載の抗ＦＬＴ３抗体。
【請求項18】
ａ）配列番号３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ならびに配列番号４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）；ｂ）配列番号１３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号１４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｃ）配列番号２３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号２４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｄ）配列番号３３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号３４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｅ）配列番号４３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号４４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｆ）配列番号５３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号５４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｇ）配列番号６３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号６４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；又は
ｈ）配列番号７３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号７４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ
を含む抗ＦＬＴ３抗体。
【請求項19】
請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分であって、前記抗体又は抗原結合部分が、ａ）インビトロでＥＯＬ－１細胞の増殖を刺激する；
ｂ）インビトロでＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞の増殖を刺激する；
ｃ）２０ｎＭ以下のＫＤでヒトＦＬＴ３に結合する；
ｄ）カニクイザルＦＬＴ３に特異的に結合する；
ｅ）マウスＦＬＴ３に特異的に結合する；
ｆ）インビトロでヒトＦＬＴ３に結合するＦＬＴ３リガンドを遮断しない；
ｇ）インビトロで、細胞に提示されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質へのＦＬＴ３Ｌ－Ｆｃの結合を遮断しない；
ｈ）初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を刺激する；
ｉ）初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の分化を刺激する；
ｊ）Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてインビボで樹状細胞動員を誘導する；及び
ｋ）ヒトＣＤ３４＋幹細胞で再構成された免疫不全マウスにおいてインビボで樹状細胞動員を誘導する、より選択される少なくとも１つの特性を有する
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項20】
前記特性の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は全てを有する、請求項１９に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分。
【請求項21】
請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分及び医薬的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項22】
免疫刺激剤、ワクチン、化学療法剤、抗悪性腫瘍剤、抗血管新生剤、又はチロシンキナーゼ阻害剤をさらに含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項23】
請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体の重鎖もしくはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、又は軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、あるいはそれらの両方を含む、単離された核酸分子。
【請求項24】
配列番号１、２、１１、１２、２１、２２、３１、３２、４１、４２、５１、５２、６１、６２、７１、及び７２のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項２３に記載の単離された核酸分子。
【請求項25】
発現制御配列をさらに含む、請求項２３又は２４に記載の単離された核酸分子を含むベクター。
【請求項26】
請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体の、重鎖又はその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、及び軽鎖又はその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む宿主細胞。
【請求項27】
請求項２６に記載の宿主細胞を提供すること、抗体又は部分の発現のために適切な条件下で前記宿主細胞を培養すること、及び結果として得られた抗体又は部分を単離することを含む、抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を産生するための方法。
【請求項28】
請求項１～２０のいずれか一項に記載の１つ又は２つの別の抗ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインを含む二重特異性結合分子。
【請求項29】
請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分、請求項２１又は２２に記載の医薬組成物、あるいは請求項２８に記載の二重特異性結合分子を診断過程において使用する方法。
【請求項30】
それを必要とする患者において免疫活性を増強するための方法であって、前記患者に、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分、請求項２１又は２２に記載の医薬組成物、あるいは請求項２８に記載の二重特異性結合分子の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項31】
患者においてがんを処置するための方法であって、前記患者に、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分、請求項２１又は２２に記載の医薬組成物、あるいは請求項２８に記載の二重特異性結合分子の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項32】
がんが、皮膚、肺、腸、結腸、卵巣、脳、前立腺、腎臓、軟部組織、造血系、頭頸部、肝臓、骨、膀胱、乳房、胃、子宮、子宮頸部、及び膵臓からなる群より選択される組織中にある、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
患者が、黒色腫、神経膠腫、多形性神経膠芽腫、頭頸部扁平上皮がん、乳がん、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、腎臓がん、リンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、形質細胞新生物、骨髄異形成疾患、又は骨髄増殖性疾患を有する、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
患者に、免疫刺激剤、ワクチン、化学療法剤、抗悪性腫瘍剤、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤、又は放射線治療を投与することをさらに含む、請求項３０～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
それを必要とする患者において免疫障害を処置するための方法であって、前記患者に、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分、請求項２１又は２２に記載の医薬組成物、あるいは請求項２８に記載の二重特異的結合分子の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項36】
請求項３０～３５のいずれか一項に記載の方法に従って、ａ）患者において免疫活性を増強する；
ｂ）患者においてがんを処置する；又は
ｃ）患者において免疫障害を処置するための医薬の製造のための、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分、請求項２１又は２２に記載の医薬組成物、あるいは請求項２８に記載の二重特異性結合分子の使用。
【請求項37】
請求項３０～３５のいずれか一項に記載の方法に従って、ａ）患者において免疫活性を増強する；
ｂ）患者においてがんを処置する；又は
ｃ）患者において免疫障害を処置する際における使用のための、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分、請求項２１又は２２に記載の医薬組成物、あるいは請求項２８に記載の二重特異性結合分子。
【請求項38】
患者がヒトである、請求項３０～３５のいずれか一項に記載の方法、請求項３６に記載の使用、あるいは請求項３７に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、使用のための医薬組成物、又は使用のための二重特異性結合分子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本願は、２０２０年４月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／００９，５７８号からの優先権を主張する。その優先権出願の開示は、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。
本願は、２０２０年４月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／００９，５７８号からの優先権を主張する。その優先権出願の開示は、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。
【0002】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ書式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。配列表の電子コピーは、２０２１年４月９日に作成されており、０２２６７５＿ＷＯ０４７＿ＳＬ．ｔｘｔという名称で、サイズは５３，２９３バイトである。
本願は、ＡＳＣＩＩ書式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。配列表の電子コピーは、２０２１年４月９日に作成されており、０２２６７５＿ＷＯ０４７＿ＳＬ．ｔｘｔという名称で、サイズは５３，２９３バイトである。
【0003】
発明の背景
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、又はＣＤ１３５は、免疫系の発生において重要な役割を果たす初期造血前駆細胞の表面上に発現されるクラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼである。サイトカインＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）への結合時に、ＦＬＴ３は二量体化し、細胞の分化、増殖、及び生存を制御する複数のシグナル伝達経路を活性化する。
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、又はＣＤ１３５は、免疫系の発生において重要な役割を果たす初期造血前駆細胞の表面上に発現されるクラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼである。サイトカインＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）への結合時に、ＦＬＴ３は二量体化し、細胞の分化、増殖、及び生存を制御する複数のシグナル伝達経路を活性化する。
【0004】
ＦＬＴ３はまた、樹状細胞（ＤＣ）（専門の抗原提示細胞のクラス）により発現されることが見出されている。抗原との接触時に、樹状細胞は抗原を内在化して処理し、それをＭＨＣクラスＩＩ複合体との会合においてＴ細胞に提示し、Ｔ細胞の活性化に導く。ＦＬＴ３シグナル伝達は、樹状細胞の分化及び増殖において主要な役割を果たす。ＦＬＴ３又はＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）における欠損を伴うマウスは、低下したＤＣ数を示す一方で、ＦＬＴ３Ｌで処置されたマウスは増加したＤＣ数を示す。これらの観察は、定常状態のＤＣ発生におけるＦＬＴ３の重要な役割を示す。
【0005】
発明の概要
本開示は、樹状細胞の活性を刺激することができる抗ＦＴＬ３抗体を提供する。抗体は、それを必要とする患者、例えば、がん又は免疫不全を有する患者の免疫応答を増強するために使用することができる。また、提供するのは、これらの抗体の１つ以上を含む医薬組成物、ならびにがんの処置のための抗体及び医薬組成物の使用である。本明細書中に記載する抗体及び組成物は、患者においてがんを処置のための方法において使用してもよい；患者においてがんを処置するための医薬品の製造において使用してもよい；又は患者においてがんを処置する際における使用のためでありうる。そのようながんのための現在利用可能な処置（抗体処置を含む）と比較し、本明細書中に記載する抗体及び組成物は、単独、又は別のがん治療薬との組み合わせのいずれかで、優れた臨床応答を提供しうることが企図される。
本開示は、樹状細胞の活性を刺激することができる抗ＦＴＬ３抗体を提供する。抗体は、それを必要とする患者、例えば、がん又は免疫不全を有する患者の免疫応答を増強するために使用することができる。また、提供するのは、これらの抗体の１つ以上を含む医薬組成物、ならびにがんの処置のための抗体及び医薬組成物の使用である。本明細書中に記載する抗体及び組成物は、患者においてがんを処置のための方法において使用してもよい；患者においてがんを処置するための医薬品の製造において使用してもよい；又は患者においてがんを処置する際における使用のためでありうる。そのようながんのための現在利用可能な処置（抗体処置を含む）と比較し、本明細書中に記載する抗体及び組成物は、単独、又は別のがん治療薬との組み合わせのいずれかで、優れた臨床応答を提供しうることが企図される。
【0006】
一部の実施形態では、本開示は、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、又は１７４９７と同じヒトＦＬＴ３のエピトープとの結合について競合又は交差競合する、あるいはそれに結合する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を提供する。特定の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、前記抗体の６つのＣＤＲ、重鎖及び軽鎖可変ドメイン、又は重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列により定義される。
【0007】
一部の実施形態では、本開示は、抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を提供し：
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号５～７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（Ｈ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；
ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号８～１０のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（Ｌ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｉｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）。
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号５～７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（Ｈ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；
ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号８～１０のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（Ｌ－ＣＤＲ）－１～３；
ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｉｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）。
【0008】
一部の実施形態では、本開示は、抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を提供し：
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号１５～１７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号１３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号１８～２０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号１４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号１５～１７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号１３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号１８～２０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号１４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
【0009】
一部の実施形態では、本開示は、抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を提供し：
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号２５～２７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号２３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号２８～３０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号２４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号２５～２７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号２３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号２８～３０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号２４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
【0010】
一部の実施形態では、本開示は、抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を提供し：
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号３５～３７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号３３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号３８～４０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号３４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号３５～３７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号３３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号３８～４０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号３４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
【0011】
一部の実施形態では、本開示は、抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を提供し：
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号４５～４７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号４３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号４８～５０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号４４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号４５～４７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号４３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号４８～５０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号４４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
【0012】
一部の実施形態では、本開示は、抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を提供し：
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号５５～５７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号５３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号５８～６０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号５４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号５５～５７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号５３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号５８～６０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号５４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
【0013】
一部の実施形態では、本開示は、抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を提供し：
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号６５～６７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号６３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号６８～７０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号６４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号６５～６７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号６３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号６８～７０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号６４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
【0014】
一部の実施形態では、本開示は、抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を提供し：
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号２５～２７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号７３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号２８～３０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号７４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
ａ）前記抗体の重鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号２５～２７のアミノ酸配列を含むＨ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；
ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ；又は
ｉｖ）配列番号７３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ；ならびに
ｂ）前記抗体の軽鎖は以下を含む：
ｉ）それぞれ配列番号２８～３０のアミノ酸配列を含むＬ－ＣＤＲ－１～３；
ｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｉｖ）配列番号７４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
【0015】
本開示はまた、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分の重鎖又はその抗原結合部分、軽鎖又はその抗原結合部分、あるいは両方をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子、ベクター、及び宿主細胞を提供する。さらに、本開示は、前記宿主細胞を培養することにより本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分を産生するための方法、ならびに本明細書中に記載する抗体又は抗原結合部分を混合することにより抗体組成物を産生するための方法を提供する。
【0016】
本発明の他の特徴、目的、及び利点は、続く詳細な説明において明らかである。しかし、詳細な説明は、本発明の実施形態及び態様を示している一方で、限定ではなく、例証としてだけ与えられていることを理解すべきである。本発明の範囲内での種々の変更及び修正が、詳細な説明から当業者に明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図2】図２は、ＣＨＯ－Ｓ細胞上に発現されたヒト（左上）、カニクイザル（左下）、又はマウス（右上）ＦＬＴ３に対する、示した抗ＦＬＴ３抗体又はコントロールの結合を示す一連のグラフである。モックトランスフェクトＣＨＯ－Ｓ細胞（右下）を陰性コントロールとして使用した。データを平均値±ＳＥＭとして提示する。
【図3】図３は、示した抗ＦＬＴ３抗体のＦＬＴ３Ｌ遮断特性を示すセンサーグラムである。Ｈｉｓタグ付きＦＬＴ３（ＦＬＴ３－ｈｉｓ）をｐｅｎｔａ－ｈｉｓバイオセンサー（配列番号７９として開示する「ｐｅｎｔａ－ｈｉｓ」）上に固定し、ＦＬＴ３Ｌ及び抗体（ＦＬＴ３Ｌ＋ｍＡｂ）の結合の前に、抗ＦＬＴ３抗体（ｍＡｂ）を関連付けた。ＦＬＴ３への総ＦＬＴ３Ｌ結合を並行して測定した（ＦＬＴ３Ｌのみ）。
【図4】図４は、ＣＨＯ－Ｓ細胞上に発現されたヒト（左上）、カニクイザル（右上）、又はマウス（下）ＦＬＴ３へのＦＬＴ３Ｌ－Ｆｃの結合を遮断する、示した抗ＦＬＴ３抗体の能力を示す一連のグラフである。データを平均値±ＳＥＭとして提示する。
【図5】図５は、示した抗体又はＦＬＴ３リガンドで処理されたＥＯＬ－１細胞の増殖を示すグラフである。「コントロールｍＡｂ」は、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡフォーマットにおける無関係なタンパク質に対する抗体である。データを未処理コントロールに対して標準化し、曲線上の各々のデータポイントは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）を表す。
【図6A】図６Ａ及び６Ｂは、示した抗体で処理されたＥＯＬ－１細胞（図６Ａ）又はＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞（図６Ｂ）の増殖を示すグラフである。データを未処理コントロールに対して標準化し、曲線上の各々のデータポイントは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）を表す。
【図6B】図６Ａ及び６Ｂは、示した抗体で処理されたＥＯＬ－１細胞（図６Ａ）又はＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞（図６Ｂ）の増殖を示すグラフである。データを未処理コントロールに対して標準化し、曲線上の各々のデータポイントは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）を表す。
【図7】図７は、示した抗体又はＦＬＴ３リガンドで処理されたヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞の増殖を示すグラフである。左パネルは、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡフォーマットにおける示した抗体の効果を示し、右パネルは、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットにおける示した抗体の効果を示す。「コントロールｍＡｂ」は、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡフォーマットにおける無関係なタンパク質に対する抗体である。データを平均値±ＳＥＭ（ｎ＝４）として提示する。
【図8A】図８Ａ～８Ｃは、示した抗体又はＦＬＴ３リガンドで処理された２人のドナーからのヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞の分化を示す一連のグラフである。データを、未処理コントロールと比較した、ＣＤ１４＋細胞（図８Ａ）及びＣＤ１ｃ＋細胞（図８Ｂ）ならびに樹状細胞亜集団（図８Ｃ）の頻度として提示する。
【図8B】図８Ａ～８Ｃは、示した抗体又はＦＬＴ３リガンドで処理された２人のドナーからのヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞の分化を示す一連のグラフである。データを、未処理コントロールと比較した、ＣＤ１４＋細胞（図８Ａ）及びＣＤ１ｃ＋細胞（図８Ｂ）ならびに樹状細胞亜集団（図８Ｃ）の頻度として提示する。
【図8C】図８Ａ～８Ｃは、示した抗体又はＦＬＴ３リガンドで処理された２人のドナーからのヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞の分化を示す一連のグラフである。データを、未処理コントロールと比較した、ＣＤ１４＋細胞（図８Ａ）及びＣＤ１ｃ＋細胞（図８Ｂ）ならびに樹状細胞亜集団（図８Ｃ）の頻度として提示する。
【図9A】図９Ａ及び９Ｂは、ビヒクルと比較した、示した抗体又はＦＬＴ３Ｌでの処置後のＢａｌｂ／ｃマウスにおける脾臓樹状細胞サブセットの絶対細胞数における倍数増加を示す一連のグラフである。図９Ａ、左パネル：ｃＤＣ；右パネル：ｃＤＣ１。図９Ｂ、左パネル：ｃＤＣ２；右パネル：ｐＤＣ。抗体処理は、各々の抗体について０．１mg/kg、１mg/kg、又は１０mg/kgの用量で投与した（ｎ＝５／群）。Ｄｕｎｎの多重比較検定を用いたＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓを適用した。データを平均値±ＳＥＭ（＊ｐ＜０．０５）として提示する。
【図9B】図９Ａ及び９Ｂは、ビヒクルと比較した、示した抗体又はＦＬＴ３Ｌでの処置後のＢａｌｂ／ｃマウスにおける脾臓樹状細胞サブセットの絶対細胞数における倍数増加を示す一連のグラフである。図９Ａ、左パネル：ｃＤＣ；右パネル：ｃＤＣ１。図９Ｂ、左パネル：ｃＤＣ２；右パネル：ｐＤＣ。抗体処理は、各々の抗体について０．１mg/kg、１mg/kg、又は１０mg/kgの用量で投与した（ｎ＝５／群）。Ｄｕｎｎの多重比較検定を用いたＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓを適用した。データを平均値±ＳＥＭ（＊ｐ＜０．０５）として提示する。
【図10A】図１０Ａ～１０Ｄは、ＣＤ３４ヒト化ＮＣＧマウスにおける、ビヒクルと比較した、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡもしくはＩｇＧ２フォーマット又はＦＬＴ３Ｌにおける抗ＦＬＴ３抗体での処理後の絶対細胞数における増加倍率として、脾臓（図１０Ａ及び１０Ｂ）及び骨髄（図１０Ｃ及び１０Ｄ）ＤＣサブセットに対する効果を示す一連のグラフである。抗体処置を、各々の抗体について１mg/kg又は１０mg/kgの用量で投与した（ｎ＝５～６／群）。
【図10B】図１０Ａ～１０Ｄは、ＣＤ３４ヒト化ＮＣＧマウスにおける、ビヒクルと比較した、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡもしくはＩｇＧ２フォーマット又はＦＬＴ３Ｌにおける抗ＦＬＴ３抗体での処理後の絶対細胞数における増加倍率として、脾臓（図１０Ａ及び１０Ｂ）及び骨髄（図１０Ｃ及び１０Ｄ）ＤＣサブセットに対する効果を示す一連のグラフである。抗体処置を、各々の抗体について１mg/kg又は１０mg/kgの用量で投与した（ｎ＝５～６／群）。
【図10C】図１０Ａ～１０Ｄは、ＣＤ３４ヒト化ＮＣＧマウスにおける、ビヒクルと比較した、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡもしくはＩｇＧ２フォーマット又はＦＬＴ３Ｌにおける抗ＦＬＴ３抗体での処理後の絶対細胞数における増加倍率として、脾臓（図１０Ａ及び１０Ｂ）及び骨髄（図１０Ｃ及び１０Ｄ）ＤＣサブセットに対する効果を示す一連のグラフである。抗体処置を、各々の抗体について１mg/kg又は１０mg/kgの用量で投与した（ｎ＝５～６／群）。
【図10D】図１０Ａ～１０Ｄは、ＣＤ３４ヒト化ＮＣＧマウスにおける、ビヒクルと比較した、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡもしくはＩｇＧ２フォーマット又はＦＬＴ３Ｌにおける抗ＦＬＴ３抗体での処理後の絶対細胞数における増加倍率として、脾臓（図１０Ａ及び１０Ｂ）及び骨髄（図１０Ｃ及び１０Ｄ）ＤＣサブセットに対する効果を示す一連のグラフである。抗体処置を、各々の抗体について１mg/kg又は１０mg/kgの用量で投与した（ｎ＝５～６／群）。
【図11】図１１は、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡフォーマット（左パネル）又はＩｇＧ２フォーマット（右パネル）における示した抗体、又はＦＬＴ３リガンドで処理されたヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞における遺伝子発現における変化の間の相関を示す一対のグラフである。データを、陰性コントロール抗体と比較した遺伝子発現におけるｌｏｇ２倍変化として提示する。
【0018】
発明の詳細な説明
本開示は、患者、例えばがん患者などにおいてＦＬＴ３活性を刺激するために使用することができる新たなアゴニスト抗ヒトＦＬＴ３抗体を提供する。他に明記しない限り、本明細書中で使用するように、「ＦＬＴ３」はヒトＦＬＴ３を指す。ヒトＦＬＴ３ポリペプチド配列は、以下に示すように、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ３６８８８（ＦＬＴ３＿ＨＵＭＡＮ）（配列番号７７）の下で入手可能である：
本開示は、患者、例えばがん患者などにおいてＦＬＴ３活性を刺激するために使用することができる新たなアゴニスト抗ヒトＦＬＴ３抗体を提供する。他に明記しない限り、本明細書中で使用するように、「ＦＬＴ３」はヒトＦＬＴ３を指す。ヒトＦＬＴ３ポリペプチド配列は、以下に示すように、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ３６８８８（ＦＬＴ３＿ＨＵＭＡＮ）（配列番号７７）の下で入手可能である：
【化1】
【0019】
用語「抗体」（Ａｂ）又は「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書中で使用するように、ジスルフィド結合により相互接続された、２つの重（Ｈ）鎖（約５０～７０kDa）及び２つの軽（Ｌ）鎖（約２５kDa）を含む四量体を指す。各々の重鎖は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常領域（ＣＨ）で構成される。各々の軽鎖は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）で構成される。ＶＨ及びＶＬドメインは、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域に散在する、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分化することができる。各々のＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ（本明細書中のＨ－ＣＤＲは重鎖からのＣＤＲを示す；及びＬ－ＣＤＲは軽鎖からのＣＤＲを示す）及び４つのＦＲで構成され、以下の順序で、アミノ末端からカルボキシル末端まで配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖又は軽鎖におけるアミノ酸番号、ならびにＦＲ及びＣＤＲ領域の割り当ては、ＩＭＧＴ（登録商標）の定義（Ｅｕナンバリング；Lefranc et al., Dev Comp Immunol (2003) 27(1):55-77);又はKabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987 and 1991));Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. (1987) 196:901-17；Chothia et al., Nature (1989) 342:878-83；MacCallum et al., J. Mol. Biol. (1996) 262:732-45;又はHonegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. (2001) 309(3):657-70の定義に従いうる。
【0020】
用語「組換え抗体」は、抗体をコードするヌクレオチド配列を含む細胞又は細胞株から発現される抗体を指し、前記ヌクレオチド配列は天然では細胞に関連付けられない。
【0021】
用語「単離されたタンパク質」、「単離されたポリペプチド」、又は「単離された抗体」は、その起源又は派生源により、（１）その天然状態でそれに付随する天然に関連する成分に関連付けられない、（２）同じ種からの他のタンパク質を含まない、（３）異なる種からの細胞により発現される、及び／又は（４）自然において生じないタンパク質、ポリペプチド、又は抗体を指す。このように、化学的に合成される、又はそれが天然に由来する細胞とは異なる細胞系において合成されるポリペプチドは、その天然に関連付けられる成分から「単離」される。タンパク質はまた、当技術分野において周知のタンパク質精製技術を使用して、単離により、天然に関連付けられる成分を実質的に含まないようにしてもよい。
【0022】
用語「親和性」は、抗原と抗体の間での引力の尺度を指す。抗原についての抗体の固有の引力は、典型的には、特定の抗体－抗原相互作用の結合親和性平衡定数（ＫＤ）として表現される。抗体は、ＫＤが≦１mM、例えば、≦１μM、≦１００nM、又は≦１０nMである場合、抗原に特異的に結合すると言われる。ＫＤ結合親和性定数を、例えば、IBIS TechnologiesからのIBIS MX96 SPRシステム又はCarterra LSA SPRプラットフォームを使用した、例えば、表面プラズモン共鳴（例えば、BIAcore（商標））により、あるいは、例えば、ForteBioのOctet（商標）システムを使用した、例えば、生体層干渉法により測定することができる。
【0023】
本明細書中で使用する用語「エピトープ」は、抗体、又は関連分子、例えば二重特異性結合分子などに特異的に結合する抗原の部分（決定基）を指す。エピトープ決定基は、一般的に、分子、例えばアミノ酸又は炭水化物又は糖側鎖などの化学的に活性な表面グループで構成され、一般的に特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有する。エピトープは「線状」又は「立体構造」でありうる。線状エピトープでは、タンパク質（例、抗原）と、相互作用する分子（例、抗体）の間での相互作用の点の全てが、タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って線状に生じる。立体構造エピトープでは、相互作用の点が、一次アミノ酸配列において互いに分離されているタンパク質上のアミノ酸残基にわたって生じる。一度、抗原上の所望のエピトープが決定されると、当技術分野において周知の技術を使用して、そのエピトープに対する抗体を生成することが可能である。例えば、線状エピトープに対する抗体が、例えば、線状エピトープのアミノ酸残基を有するペプチドで動物を免疫化することにより生成されうる。立体構造エピトープに対する抗体が、例えば、立体構造エピトープの関連アミノ酸残基を含むミニドメインで動物を免疫化することにより生成されうる。特定のエピトープに対する抗体はまた、例えば、対象の標的分子（例、ＦＬＴ３）又はその関連部分で動物を免疫化し、次にエピトープへの結合についてスクリーニングすることにより生成することができる。
【0024】
抗体が、本開示の抗ＦＬＴ３抗体と同じエピトープに結合するか、又はそれとの結合について競合するかを、当技術分野において公知の方法（競合アッセイ、エピトープビニング、及びアラニンスキャニングを含むが、これらに限定されない）を使用することにより決定することができる。一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体が飽和条件下でＦＬＴ３に結合することを可能にし、次にＦＬＴ３に結合するテスト抗体の能力を測定する。テスト抗体が参照抗ＦＬＴ３抗体と同時にＦＬＴ３に結合できる場合、次にテスト抗体は参照抗ＦＬＴ３抗体とは異なるエピトープに結合する。しかし、テスト抗体がＦＬＴ３に同時に結合できない場合、次にテスト抗体は、同じエピトープ、重複するエピトープ、又は本開示の抗ＦＬＴ３抗体により結合されるエピトープに近接しているエピトープに結合する。この実験は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、BIACORE（商標）、ＳＰＲ、生体層干渉法、又はフローサイトメトリーを使用して実施することができる。抗ＦＬＴ３抗体が別の抗ＦＬＴ３抗体と交差競合するか否かをテストするために、上に記載する競合方法を２方向で使用してもよく、即ち、公知の抗体がテスト抗体を遮断するか否か、及びその逆を決定してもよい。そのような交差競合実験は、例えば、IBIS MX96又はCarterra LSA SPR機器又はOctet（商標）システムを使用して実施してもよい。
【0025】
用語「ヒト抗体」は、可変ドメイン配列及び定常領域配列がヒト配列から由来する抗体を指す。この用語は、ヒト遺伝子から由来するが、しかし、例えば、免疫原性を減少させ、親和性を増加させ、及び／又は安定性を増加させるために改変された配列を伴う抗体を包含する。さらに、この用語は、非ヒト細胞において組換え的に産生された抗体を包含し、それによって、ヒト細胞に典型的ではないグリコシル化が付与されうる。この用語はまた、ヒト抗体遺伝子を伴うトランスジェニック非ヒト生物（例、OmniRat（登録商標）ラット）において産生された抗体を包含する。
【0026】
用語 抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）は、本明細書中で使用するように、抗原（例、ヒトＦＬＴ３、又はその一部）に特異的に結合するための能力を保持した抗体の１つ以上の部分又はフラグメントを指す。全長抗体の特定のフラグメントは、抗体の抗原結合機能を実施することができることが示されている。用語「抗原結合部分」内に包含される結合フラグメントの例は、（ｉ）Ｆａｂフラグメント：ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント：ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント；ならびに（ｖｉ）抗原に特異的に結合することが可能な単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によりコードされているが、それらは、組換え方法を使用して、それらを単一のタンパク質鎖（それにおいてＶＬ及びＶＨドメインは対合して一価分子を形成する（単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知である）として作製することを可能にする合成リンカーにより結合することができる。また、本開示内には、ＶＨ及び／又はＶＬを含む抗原結合分子がある。ＶＨの場合では、分子はまた、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、又はＣＨ３領域の１つ以上を含みうる。そのような一本鎖抗体はまた、用語 抗体の「抗原結合部分」内に包含されることを意図している。一本鎖抗体の他の形態、例えばダイアボディなども包含される。ダイアボディは、二価の二重特異性抗体であり、該抗体において、ＶＨ及びＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上で発現されるが、しかし、短すぎて同じ鎖上の２つのドメイン間での対合を可能にすることができないリンカーを使用し、それにより、ドメインが別の鎖の相補的ドメインと対合することを強制することで、２つの抗原結合部位を作成する。
【0027】
抗体部分、例えばＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントなどは、従来の技術、例えば全抗体のパパイン又はペプシン消化などを使用して、全抗体から調製することができる。さらに、抗体、抗体部分、及びイムノアドヘシン分子は、例えば本明細書中に記載されているように、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して得ることができる。
【0028】
抗ＦＬＴ３抗体のクラス（アイソタイプ）及びサブクラスは、当技術分野において公知の任意の方法により決定することができる。一般的に、抗体のクラス及びサブクラスは、抗体の特定のクラス及びサブクラスについて特異的である抗体を使用して決定されうる。そのような抗体は商業的に入手可能である。クラス及びサブクラスは、ＥＬＩＳＡ又はウェスタンブロットならびに他の技術により決定することができる。あるいは、クラス及びサブクラスは、抗体の重鎖及び／又は軽鎖の定常領域の全部又は一部を配列決定し、それらのアミノ酸配列を、免疫グロブリンの種々のクラス及びサブクラスの公知のアミノ酸配列と比較し、抗体のクラスとサブクラスを決定することにより決定されうる。
【0029】
他に示さない限り、本開示中で言及する全ての抗体アミノ酸残基番号は、IMGT（登録商標）ナンバリングスキーム（Ｅｕナンバリング）下のものである。
【0030】
抗ＦＬＴ３抗体
本開示は、ＦＬＴ３に対して向けられた抗体、及びその抗原結合部分を提供する。特定の実施形態では、本明細書中に開示する抗体は、再構成されたヒト抗体遺伝子によりコードされる抗体を産生することができるトランスジェニック動物（例、ラット）から生成されるヒト抗体である。特定の実施形態では、ヒト抗体は、例えば、プライマー由来の変異を生殖系列配列に戻して変化させるために、特定の変異を含んでもよい（例、表１中の「シンプレックス修正」バリアント配列を参照のこと）。
本開示は、ＦＬＴ３に対して向けられた抗体、及びその抗原結合部分を提供する。特定の実施形態では、本明細書中に開示する抗体は、再構成されたヒト抗体遺伝子によりコードされる抗体を産生することができるトランスジェニック動物（例、ラット）から生成されるヒト抗体である。特定の実施形態では、ヒト抗体は、例えば、プライマー由来の変異を生殖系列配列に戻して変化させるために、特定の変異を含んでもよい（例、表１中の「シンプレックス修正」バリアント配列を参照のこと）。
【0031】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体は、Ｆｃ領域に「ＬＡＬＡ」変異（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）を有する。これらの変異は、ヒトＦｃγＲ（Ｆｃガンマ受容体）への抗体の結合を妨げる。そのような抗体は有利である。なぜなら、それらは、二次エフェクター機能の低いレベルを有し、それ故に、エフェクターＴ細胞を枯渇させない、又は他の非悪性細胞を標的化しないためである。
【0032】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、ヒトＦＬＴ３への結合について、以下を含む抗体と競合又は交差競合する、あるいはそれと同じヒトＦＬＴ３のエピトープに結合する：
ａ）配列番号３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ならびに配列番号４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）；
ｂ）配列番号１３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号１４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｃ）配列番号２３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号２４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｄ）配列番号３３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号３４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｅ）配列番号４３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号４４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｆ）配列番号５３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号５４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｇ）配列番号６３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号６４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；又は
ｈ）配列番号７３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号７４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
ａ）配列番号３及び７５のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ならびに配列番号４及び７６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）；
ｂ）配列番号１３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号１４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｃ）配列番号２３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号２４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｄ）配列番号３３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号３４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｅ）配列番号４３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号４４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｆ）配列番号５３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号５４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｇ）配列番号６３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号６４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；又は
ｈ）配列番号７３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号７４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
【0033】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、配列番号７、１７、２７、３７、４７、５７、又は６７の重鎖ＣＤＲ３（Ｈ－ＣＤＲ３）アミノ酸配列を有する。
【0034】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、配列番号５～７、１５～１７、２５～２７、３５～３７、４５～４７、５５～５７、又は６５～６７のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３（Ｈ－ＣＤＲ１～３）を有する。
【0035】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、又は７３のアミノ酸配列と、少なくとも８０%、８５%、９０%、９１%、９２%、９３%、９４%、９５%、９６%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例、少なくとも９０%同一である）重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。
【0036】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、又は７３のアミノ酸配列を含むＶＨを有する。
【0037】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、又は７３のアミノ酸配列と少なくとも８０%、８５%、９０%、９１%、９２%、９３%、９４%、９５%、９６%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例、少なくとも９０%同一である）ＶＨアミノ酸配列；及び配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも８０%、８５%、９０%、９１%、９２%、９３%、９４%、９５%、９６%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例、少なくとも９０%同一である）重鎖定常領域アミノ酸配列を有する。
【0038】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、又は７３のＶＨアミノ酸配列及び配列番号７５の重鎖定常領域アミノ酸配列を含む。
【0039】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、配列番号１０、２０、３０、４０、５０、６０、又は７０の軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ－ＣＤＲ３）アミノ酸配列を有する。
【0040】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、配列番号８～１０、１８～２０、２８～３０、３８～４０、４８～５０、５８～６０、又は６８～７０のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３（Ｌ－ＣＤＲ１～３）を有する。
【0041】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、又は７４のアミノ酸配列と少なくとも８０%、８５%、９０%、９１%、９２%、９３%、９４%、９５%、９６%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例、少なくとも９０%同一である）軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。
【0042】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、又は７４のアミノ酸配列を含むＶＬを有する。
【0043】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体は、配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、又は７４のアミノ酸配列と少なくとも８０%、８５%、９０%、９１%、９２%、９３%、９４%、９５%、９６%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例えば、少なくとも９０%同一である）ＶＬアミノ酸配列；及び配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも８０%、８５%、９０%、９１%、９２%、９３%、９４%、９５%、９６%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例、少なくとも９０%同一である）軽鎖定常領域アミノ酸配列を有する。
【0044】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体は、配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、又は７４のＶＬアミノ酸配列及び配列番号７６の軽鎖定常領域アミノ酸配列を含む。
【0045】
特定の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体は、上に記載する重鎖のいずれか１つ及び上に記載する軽鎖のいずれか１つを含む。
【0046】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、以下のＨ－ＣＤＲ１～３及びＬ－ＣＤＲ１～３アミノ酸配列を含む：
ａ）それぞれ配列番号５～１０；
ｂ）それぞれ配列番号１５～２０；
ｃ）それぞれ配列番号２５～３０；
ｄ）それぞれ配列番号３５～４０；
ｅ）それぞれ配列番号４５～５０；
ｆ）それぞれ配列番号５５～６０；又は
ｇ）それぞれ配列番号６５～７０。
ａ）それぞれ配列番号５～１０；
ｂ）それぞれ配列番号１５～２０；
ｃ）それぞれ配列番号２５～３０；
ｄ）それぞれ配列番号３５～４０；
ｅ）それぞれ配列番号４５～５０；
ｆ）それぞれ配列番号５５～６０；又は
ｇ）それぞれ配列番号６５～７０。
【0047】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、以下のアミノ酸配列と少なくとも８０%、８５%、９０%、９１%、９２%、９３%、９４%、９５%、９６%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例、少なくとも９０%同一である）ＶＨ及びＶＬを含む：
ａ）それぞれ配列番号３及び４；
ｂ）それぞれ配列番号１３及び１４；
ｃ）それぞれ配列番号２３及び２４；
ｄ）それぞれ配列番号３３及び３４；
ｅ）それぞれ配列番号４３及び４４；
ｆ）それぞれ配列番号５３及び５４；
ｇ）それぞれ配列番号６３及び６４；又は
ｈ）それぞれ配列番号７３及び７４。
ａ）それぞれ配列番号３及び４；
ｂ）それぞれ配列番号１３及び１４；
ｃ）それぞれ配列番号２３及び２４；
ｄ）それぞれ配列番号３３及び３４；
ｅ）それぞれ配列番号４３及び４４；
ｆ）それぞれ配列番号５３及び５４；
ｇ）それぞれ配列番号６３及び６４；又は
ｈ）それぞれ配列番号７３及び７４。
【0048】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、以下のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含む：
ａ）それぞれ配列番号３及び４；
ｂ）それぞれ配列番号１３及び１４；
ｃ）それぞれ配列番号２３及び２４；
ｄ）それぞれ配列番号３３及び３４；
ｅ）それぞれ配列番号４３及び４４；
ｆ）それぞれ配列番号５３及び５４；
ｇ）それぞれ配列番号６３及び６４；又は
ｈ）それぞれ配列番号７３及び７４。
ａ）それぞれ配列番号３及び４；
ｂ）それぞれ配列番号１３及び１４；
ｃ）それぞれ配列番号２３及び２４；
ｄ）それぞれ配列番号３３及び３４；
ｅ）それぞれ配列番号４３及び４４；
ｆ）それぞれ配列番号５３及び５４；
ｇ）それぞれ配列番号６３及び６４；又は
ｈ）それぞれ配列番号７３及び７４。
【0049】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体は以下を含む：
ａ）配列番号３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｂ）配列番号１３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号１４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｃ）配列番号２３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号２４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｄ）配列番号３３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号３４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｅ）配列番号４３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号４４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｆ）配列番号５３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号５４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｇ）配列番号６３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ、ならびに配列番号６４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；又は
ｈ）配列番号７３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ、ならびに配列番号７４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
ａ）配列番号３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｂ）配列番号１３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号１４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｃ）配列番号２３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号２４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｄ）配列番号３３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号３４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｅ）配列番号４３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号４４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｆ）配列番号５３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣならびに配列番号５４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；
ｇ）配列番号６３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ、ならびに配列番号６４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ；又は
ｈ）配列番号７３及び７５のアミノ酸配列を含むＨＣ、ならびに配列番号７４及び７６のアミノ酸配列を含むＬＣ。
【0050】
本開示はまた、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、又は１７４９７と結合について競合又は交差競合する、あるいはそれと同じエピトープに結合する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を提供する。
【0051】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、又は１７４９７のＨ－ＣＤＲ１～３及びＬ－ＣＤＲ１～３アミノ酸配列を含む。
【0052】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、又は１７４９７のＶＨ及びＶＬとそれぞれアミノ酸配列において少なくとも８０%、８５%、９０%、９１%、９２%、９３%、９４%、９５%、９６%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例、少なくとも９０%同一である）ＶＨ及びＶＬを含む。
【0053】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、又は１７４９７のそれぞれＶＨ及びＶＬであるＶＨ及びＶＬを含む。
【0054】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体は、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、又は１７４９７であるか、あるいは前記抗体と同じアミノ酸配列を伴う抗体である。
【0055】
本明細書中に記載する方法により得られる抗ＦＬＴ３抗体のクラスは、別のクラス又はサブクラスに変化又はスイッチさせてもよい。本開示の一部の実施形態では、ＶＬ又はＶＨをコードする核酸分子は、ＣＬ又はＣＨをそれぞれコードする核酸配列を含まないように、当技術分野において周知の方法を使用して単離される。ＶＬ又はＶＨをコードする核酸分子を次に、異なるクラスの免疫グロブリン分子からのＣＬ又はＣＨをそれぞれコードする核酸配列に操作的に連結させる。これは、上に記載するように、ＣＬ又はＣＨ配列を含むベクター又は核酸分子を使用して達成することができる。例えば、本来はＩｇＭであった抗ＦＬＴ３抗体はＩｇＧにクラススイッチされうる。さらに、クラススイッチングを使用し、１つのＩｇＧサブクラスを別のものに、例えばＩｇＧ１からＩｇＧ２に変換してもよい。κ軽鎖定常領域は、例えば、λ軽鎖定常領域に変化させることができ、又はその逆も同じである。所望のＩｇアイソタイプを伴う、本開示の抗体を産生するための例示的な方法は、抗ＦＬＴ３抗体の重鎖をコードする核酸分子及び抗ＦＬＴ３抗体の軽鎖をコードする核酸分子を単離する工程、重鎖の可変ドメインを得る工程、重鎖の可変ドメインについてのコード配列を、所望のアイソタイプの重鎖の定常領域についてコード配列とライゲーションする工程、細胞中のライゲーションされた配列によりコードされる軽鎖及び重鎖を発現させる工程、ならびに所望のアイソタイプを伴う抗ＦＬＴ３抗体を収集する工程を含む。
【0056】
本開示の抗ＦＬＴ３抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、又はＩｇＤ分子でありうるが、しかし、典型的には、ＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａもしくはＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。一部の実施形態では、抗体はアイソタイプサブクラスＩｇＧ１である。
【0057】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体は、Ｆｃ領域中に少なくとも１つの変異を含みうる。多くの異なるＦｃ変異が公知であり、これらの変異は抗体のエフェクター機能を変化させる。例えば、一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体は、エフェクター機能を低下させる、Ｆｃ領域中の少なくとも１つの変異、例えば、２２８位、２３３位、２３４位、及び２３５位の１つ以上での変異を含み、ここで、アミノ酸位置は、IMGT（登録商標）ナンバリングスキームに従って番号付けされる。
【0058】
一部の実施形態では、例えば、抗体がＩｇＧ１サブクラスである場合、２３４位及び２３５位でのアミノ酸残基の１つ又は両方が、例えばＬｅｕからＡｌａ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）に変異されうる。これらの変異は、ＩｇＧ１抗体のＦｃ領域のエフェクター機能を低下させる。アミノ酸位置は、IMGT（登録商標）ナンバリングスキームに従って番号付けされる。
【0059】
一部の実施形態では、例えば、抗体がＩｇＧ４サブクラスである場合、それは変異Ｓ２２８Ｐを含みうるが、このアミノ酸位置はIMGT（登録商標）ナンバリングスキームに従って番号付けされる。この変異は、望ましくないＦａｂアーム交換を低下させることが公知である。
【0060】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分はアゴニストである。
【0061】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、インビトロでＥＯＬ－１細胞の増殖を刺激する（例、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、あるいは５０μg/mL以下の濃度で、例えば２５μg/mL以下の濃度などで）。
【0062】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、インビトロでＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞の増殖を刺激する（例、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、あるいは５０μg/mL以下の濃度で、例えば２５μg/mL以下の濃度などで）。
【0063】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、ヒトＦＬＴ３に及びカニクイザルＦＬＴ３（例、ＣＨＯ－Ｓ細胞上で発現される）に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、ヒトＦＬＴ３、カニクイザルＦＬＴ３、及びマウスＦＬＴ３（例、ＣＨＯ－Ｓ細胞上で発現される）に特異的に結合する。
【0064】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、インビトロでヒトＦＬＴ３へのＦＬＴ３Ｌ結合を遮断しない。特定の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、飽和条件で固定化ＦＬＴ３へのＦＬＴ３Ｌ結合を遮断しない。
【0065】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、インビトロで、細胞に提示されたヒト、カニクイザル、及び／又はマウスＦＬＴ３タンパク質へのＦＬＴ３Ｌ－Ｆｃの結合を遮断しない（例、少なくとも０．１、０．５、１、５、１０、３０、５０、又は１００μg/mLの濃度で、例えば少なくとも３０μg/mLの濃度などで）。
【0066】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を刺激する（例、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、あるいは５０μg/mL以下の濃度で、例えば２５μg/mL以下の濃度などで）。
【0067】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の分化を刺激する（例、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、あるいは５０μg/mL以下の濃度で、例えば２５μg/mL以下の濃度などで）。
【0068】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、樹状細胞亜集団、例えばＣＤ１４＋細胞、ＣＤ１ｃ＋細胞、ｐＤＣ細胞、ｃＤＣ細胞、ｃＤＣ１細胞、もしくはｃＤＣ２細胞、又はそれらの任意の組み合わせなどを増加させる（例、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、あるいは５０μg/mL以下の濃度で、例えば２５μg/mL以下の濃度などで）。
【0069】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、免疫適格性マウス、例えばＢａｌｂ／ｃマウスなどにおいて樹状細胞の増殖及び／又は動員を誘導する（例、０．１、１、あるいは１０mg/kg以下の用量で週２回以下）。
【0070】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、ヒトＣＤ３４＋幹細胞で再構成された免疫不全マウスにおいて樹状細胞の増殖及び／又は動員を誘導する（例、１あるいは１０mg/kg以下の用量で週２回）。特定の実施形態では、樹状細胞の増殖及び／又は動員は、マウスの脾臓、骨髄、又はその両方において誘導される。
【0071】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、約２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、あるいは３nM以下（例、９nM以下）のＫＤでヒトＦＬＴ３に結合する。
【0072】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、ヒトＦＬＴ３の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のドメイン１（Ｄ１）に結合する。特定の実施形態では、抗体又は部分は、Ｄ１のＣ末端（例、ＦＬＴ３リガンドに対するＤ１の内面上）の残基に結合する。特定の実施形態では、抗体又は部分は、ＦＬＴ３リガンドに対するＤ１の外表面上の残基に結合する。特定の実施形態では、ＦＬＴ３リガンド／受容体複合体における各々のＤ１上の２つのエピトープ間の距離は、９０～１２０Åである。
【0073】
一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、ヒトＦＬＴ３アミノ酸配列の残基７８～８７、７８～９７、又は１３８～１４７を含む線状エピトープに結合する。一部の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、ヒトＦＬＴ３アミノ酸配列の残基Ａ８０及び／又はＶ８１との組み合わせにおいて、残基Ａ７９を含むエピトープに結合する。特定の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、ヒトＦＬＴ３アミノ酸配列の以下の残基を含むエピトープに結合する：
ａ）Ａ７９、Ａ８０、Ｖ８１、Ｔ１５７、Ｒ１６１；
ｂ）Ａ７９、Ａ８０、Ｖ８１、Ｉ８９、Ｔ９０、Ｒ１６１；
ｃ）Ａ７９、Ｖ８１；
ｄ）Ａ７９、Ｖ８１、Ｖ８３、Ａ８７、Ｉ８９、Ｖ１２５、Ｔ１５７；又は
ｅ）Ｎ１００、Ｌ１０４－Ｖ１０６、Ｈ１０９－Ｓ１１１、Ｅ１４０、Ｌ１４２、Ｎ１５１、Ｔ１５３。
抗体又は抗原結合部分は、例えば、表８中の抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、又は１７４９７について示すエピトープに結合しうる。特定の実施形態では、抗体又は結合部分は、抗体ＩＭＣ－ＥＢ１０と同じエピトープには結合しない。
ａ）Ａ７９、Ａ８０、Ｖ８１、Ｔ１５７、Ｒ１６１；
ｂ）Ａ７９、Ａ８０、Ｖ８１、Ｉ８９、Ｔ９０、Ｒ１６１；
ｃ）Ａ７９、Ｖ８１；
ｄ）Ａ７９、Ｖ８１、Ｖ８３、Ａ８７、Ｉ８９、Ｖ１２５、Ｔ１５７；又は
ｅ）Ｎ１００、Ｌ１０４－Ｖ１０６、Ｈ１０９－Ｓ１１１、Ｅ１４０、Ｌ１４２、Ｎ１５１、Ｔ１５３。
抗体又は抗原結合部分は、例えば、表８中の抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、又は１７４９７について示すエピトープに結合しうる。特定の実施形態では、抗体又は結合部分は、抗体ＩＭＣ－ＥＢ１０と同じエピトープには結合しない。
【0074】
本開示では、また、上の特性の任意の組み合わせを伴う、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分が企図される。
【0075】
一部の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、以下の特性の少なくとも１つ（例、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１１全て）を有する：
ａ）インビトロでＥＯＬ－１細胞の増殖を刺激する；
ｂ）インビトロでＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞の増殖を刺激する；
ｃ）２０nM以下のＫＤでヒトＦＬＴ３に結合する；
ｄ）カニクイザルＦＬＴ３に特異的に結合する；
ｅ）マウスＦＬＴ３に特異的に結合する；
ｆ）インビトロでヒトＦＬＴ３へのＦＬＴ３リガンド結合を遮断しない；
ｇ）インビトロで、細胞に提示されたヒト、カニクイザル、又はマウスのＦＬＴ３タンパク質へのＦＬＴ３Ｌ－Ｆｃの結合を遮断しない；
ｈ）初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を刺激する；
ｉ）初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の分化を刺激する；
ｊ）Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてインビボで樹状細胞動員を誘導する；及び
ｋ）ヒトＣＤ３４＋幹細胞で再構成された免疫不全マウスにおいて、インビボで樹状細胞動員を誘導する。
例えば、特定の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、特性ａ）及びｃ）～ｈ）；ａ）、ｃ）、ｄ）、及びｆ）～ｉ）；ａ）、ｃ）、ｄ）、及びｆ）～ｈ）；ａ）、ｃ）、及びｆ）～ｈ）；ａ）～ｃ）、ｈ）、ｉ）、及びｋ）；ａ）～ｃ）、ｈ）、及びｉ）；又はａ）～ｃ）及びｊ）を有しうる。
ａ）インビトロでＥＯＬ－１細胞の増殖を刺激する；
ｂ）インビトロでＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞の増殖を刺激する；
ｃ）２０nM以下のＫＤでヒトＦＬＴ３に結合する；
ｄ）カニクイザルＦＬＴ３に特異的に結合する；
ｅ）マウスＦＬＴ３に特異的に結合する；
ｆ）インビトロでヒトＦＬＴ３へのＦＬＴ３リガンド結合を遮断しない；
ｇ）インビトロで、細胞に提示されたヒト、カニクイザル、又はマウスのＦＬＴ３タンパク質へのＦＬＴ３Ｌ－Ｆｃの結合を遮断しない；
ｈ）初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を刺激する；
ｉ）初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の分化を刺激する；
ｊ）Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてインビボで樹状細胞動員を誘導する；及び
ｋ）ヒトＣＤ３４＋幹細胞で再構成された免疫不全マウスにおいて、インビボで樹状細胞動員を誘導する。
例えば、特定の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、特性ａ）及びｃ）～ｈ）；ａ）、ｃ）、ｄ）、及びｆ）～ｉ）；ａ）、ｃ）、ｄ）、及びｆ）～ｈ）；ａ）、ｃ）、及びｆ）～ｈ）；ａ）～ｃ）、ｈ）、ｉ）、及びｋ）；ａ）～ｃ）、ｈ）、及びｉ）；又はａ）～ｃ）及びｊ）を有しうる。
【0076】
一部の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、患者における樹状細胞の増殖及び／又は活性化を増加させうる。一部の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、腫瘍抗原を取り込む樹状細胞の能力を増強する。
【0077】
一部の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、インビボで腫瘍成長を阻害しうる及び／又は腫瘍成長退縮を誘導しうる。一部の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、がん患者における転移を遅らせうる又は逆転させうる。一部の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分は、がん患者の生存を延長しうる。上の特性の任意の組み合わせも企図される。
【0078】
特定の実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合部分は、抗体又は抗体部分と１つ以上の他のタンパク質又はペプチドとの共有結合的な又は非共有結合的な会合により形成される、より大きなイムノアドヘシン分子の一部でありうる。そのようなイムノアドヘシン分子の例は、四量体ｓｃＦｖ分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Kipriyanov et al., Human Antibodies and Hybridomas (1995) 6:93-101）、ならびに二価のビオチン化ｓｃＦｖ分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチド、及びＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Kipriyanov et al., Mol. Immunol. (1994) 31:1047-58）を含む。他の例は、抗体からの１つ以上のＣＤＲが、共有結合的又は非共有結合的のいずれかで分子中に組み込まれ、それを、目的の抗原に特異的に結合するイムノアドヘシンを作製する場合が含まれる。そのような実施形態では、ＣＤＲは、より大きなポリペプチド鎖の一部として組み込まれうる、別のポリペプチド鎖に共有結合的に連結されうる、又は非共有結合的に組み込まれうる。
【0079】
別の実施形態では、別のポリペプチドに連結された、本開示の抗ＦＬＴ３抗体の全部又は一部を含む融合抗体又はイムノアドヘシンを作製してもよい。特定の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体の可変ドメインだけがポリペプチドに連結される。特定の実施形態では、抗ＦＬＴ３抗体のＶＨドメインは第１のポリペプチドに連結される一方で、抗ＦＬＴ３抗体のＶＬドメインは、ＶＨ及びＶＬドメインが互いに相互作用し、抗原結合部位を形成することができる様式において第１のポリペプチドに会合する第２のポリペプチドに連結される。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、ＶＨ及びＶＬドメインが互いに相互作用できるように、リンカーによりＶＬドメインから分離される（例、一本鎖抗体）。ＶＨ－リンカー－ＶＬ抗体を次に、目的のポリペプチドに連結させる。また、２つ（又はそれ以上）の一本鎖抗体が互いに連結された融合抗体を作製することができる。これは、単一のポリペプチド鎖上で二価又は多価抗体を作製したい場合に、又は二重特異性抗体を作製したい場合に有用である。
【0080】
一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を作製するために、ＶＨ及びＶＬをコードするＤＮＡフラグメントを、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）３（配列番号７８）をコードする可動性リンカーをコードする別のフラグメントに操作的に連結し、ＶＬ及びＶＨドメインが可動性リンカーにより連結され、ＶＨ及びＶＬ配列を連続した単鎖タンパク質として発現できるようにする。例えば、Bird et al., Science (1988) 242:423-6；Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1988) 85:5879 83；及びMcCafferty et al., Nature (1990) 348:552 4を参照のこと。一本鎖抗体は、１つのＶＨ及びＶＬだけが使用される場合には一価；２つのＶＨ及びＶＬが使用される場合は二価；又は、２を上回るＶＨ及びＶＬが使用される場合は多価でありうる。例えば、ヒトＦＬＴ３及び別の分子に特異的に結合する二重特異性又は多価抗体を生成してもよい。
【0081】
他の実施形態では、他の修飾抗体を、抗ＦＬＴ３抗体をコードする核酸分子を使用して調製してもよい。例えば、「カッパボディ」（Ill et al., Protein Eng. (1997) 10:949-57）、「ミニボディ」（Martin et al., EMBO J. (1994) 13:5303-9）、「ダイアボディ」（Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993) 90:6444-8）、又は「ヤヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎｓ）」（Traunecker et al., EMBO J. (1991) 10:3655-9及びTraunecker et al., Int. J. Cancer (Suppl.) (1992) 7:51-2）を、本明細書の教示に従って標準的な分子生物学的技術を使用して調製してもよい。
【0082】
本開示の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分を誘導体化する、又は別の分子（例、別のペプチド又はタンパク質）に連結することができる。一般的に、抗体又はその部分は、ＦＬＴ３結合が誘導体化又は標識により有害な影響を受けないように誘導体化される。したがって、本開示の抗体及び抗体部分は、本明細書中に記載するヒト抗ＦＬＴ３抗体のインタクトな形態及び改変された形態の両方を含むことを意図する。例えば、本開示の抗体又は抗体部分は、１つ以上の他の分子実体、例えば別の抗体（例、二重特異性抗体又はダイアボディ）、検出薬剤、医薬的薬剤、及び／又は抗体もしくは抗体部分と別の分子との会合を媒介することができるタンパク質もしくはペプチド（例えばストレプトアビジンコア領域又はポリヒスチジンタグなど）に（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合又は他により）機能的に連結することができる。
【0083】
誘導体化抗体の１つの型は、（例えば、二重特異性抗体を作製するための、同じ型又は異なる型の）２つ又はそれ以上の抗体を架橋することにより産生される。適切なクロスリンカーは、ヘテロ二官能性であり、適したスペーサーにより分離された２つの明確な反応性の基を有するもの（例、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）又はホモ二官能性のもの（例、スベリン酸ジスクシンイミジル）を含む。そのようなリンカーは、例えば、Pierce Chemical Company（イリノイ州ロックフィールド）から入手可能である。
【0084】
抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分はまた、化学基、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メチル基もしくはエチル基、又は炭水化物基などで誘導体化することができる。これらの基は、抗体の生物学的特徴を改善するために、例えば、血清半減期を増加させるために有用でありうる。
【0085】
本開示に従った抗体又は抗原結合部分も標識されうる。本明細書中で使用するように、用語「標識」又は「標識された」は、抗体中での別の分子の組み込みを指す。一部の実施形態では、この標識は検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識アミノ酸の組み込み、又はマークされたアビジン（例、光学方法又は比色方法により検出することができる蛍光マーカー又は酵素活性を含むストレプトアビジン）により検出することができるビオチニル部分のポリペプチドへの付加である。一部の実施形態では、標識又はマーカーは、治療薬、例えば、薬物コンジュゲート又は毒素でありうる。ポリペプチド及び糖タンパク質を標識する種々の方法が当技術分野において公知であり、これらを使用してもよい。ポリペプチドについての標識の例は、以下を含むが、これらに限定されない：放射性同位体又は放射性核種（例、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（西洋ワサビペルオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターにより認識される所定のポリペプチドエピトープ（例、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体についての結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）、磁性薬剤、例えばガドリニウムキレートなど、毒素、例えば百日咳毒素など、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシンならびにそれらの類似体又は同族体。一部の実施形態では、標識は、潜在的な立体障害を低下させるために、種々の長さのスペーサーアームにより付加される。
【0086】
一部の実施形態では、本開示に従った抗体又は抗原結合部分は、イムノコンジュゲートを形成するために細胞毒性薬剤にコンジュゲートされうる。一部の実施形態では、本開示に従った抗体又は抗原結合部分は、放射性同位体にコンジュゲートされうる。
【0087】
特定の実施形態では、本開示の抗体は、中性形態（両性イオン形態を含む）において、又は正もしくは負荷電種として存在しうる。一部の実施形態では、抗体は、対イオンと複合体化し、医薬的に許容可能な塩を形成しうる。
【0088】
抗ＦＬＴ３抗体組成物
本開示はまた、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分の１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上を含む併用治療（例、組成物）を提供する。特定の実施形態では、併用治療（例、組成物）は、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分の２つを含む。併用治療は、例えば、前記の抗体又は抗原結合部分、あるいは前記の抗体又は抗原結合部分を含む医薬組成物を使用した処置の方法の形態をとりうる。
本開示はまた、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分の１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上を含む併用治療（例、組成物）を提供する。特定の実施形態では、併用治療（例、組成物）は、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分の２つを含む。併用治療は、例えば、前記の抗体又は抗原結合部分、あるいは前記の抗体又は抗原結合部分を含む医薬組成物を使用した処置の方法の形態をとりうる。
【0089】
一部の実施形態では、本開示は、第１の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分及び第２の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を含む組成物を提供し、第１及び第２の抗体は以下である：
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７５２６；
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７６６７（又は１７６６７－０）；
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７６７９；
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７４９４；
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７５４３；
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７４９７；
－ それぞれ抗体１７５２６及び１７６６７（又は１７６６７－０）；
－ それぞれ抗体１７５２６及び１７６７９；
－ それぞれ抗体１７５２６及び１７４９４；
－ それぞれ抗体１７５２６及び１７５４３；
－ それぞれ抗体１７５２６及び１７４９７；
－ それぞれ抗体１７６６７（又は１７６６７－０）及び１７６７９；
－ それぞれ抗体１７６６７（又は１７６６７－０）及び１７４９４；
－ それぞれ抗体１７６６７（又は１７６６７－０）及び１７５４３；
－ それぞれ抗体１７６６７（又は１７６６７－０）及び１７４９７；
－ それぞれ抗体１７６７９及び１７４９４；
－ それぞれ抗体１７６７９及び１７５４３；
－ それぞれ抗体１７６７９及び１７４９７；
－ それぞれ抗体１７４９４及び１７５４３；
－ それぞれ抗体１７４９４及び１７４９７；
－ それぞれ抗体１７５４３及び１７４９７；又は
－ それぞれ抗体１７６６７及び１７６６７－０。
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７５２６；
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７６６７（又は１７６６７－０）；
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７６７９；
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７４９４；
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７５４３；
－ それぞれ抗体１７５６６及び１７４９７；
－ それぞれ抗体１７５２６及び１７６６７（又は１７６６７－０）；
－ それぞれ抗体１７５２６及び１７６７９；
－ それぞれ抗体１７５２６及び１７４９４；
－ それぞれ抗体１７５２６及び１７５４３；
－ それぞれ抗体１７５２６及び１７４９７；
－ それぞれ抗体１７６６７（又は１７６６７－０）及び１７６７９；
－ それぞれ抗体１７６６７（又は１７６６７－０）及び１７４９４；
－ それぞれ抗体１７６６７（又は１７６６７－０）及び１７５４３；
－ それぞれ抗体１７６６７（又は１７６６７－０）及び１７４９７；
－ それぞれ抗体１７６７９及び１７４９４；
－ それぞれ抗体１７６７９及び１７５４３；
－ それぞれ抗体１７６７９及び１７４９７；
－ それぞれ抗体１７４９４及び１７５４３；
－ それぞれ抗体１７４９４及び１７４９７；
－ それぞれ抗体１７５４３及び１７４９７；又は
－ それぞれ抗体１７６６７及び１７６６７－０。
【0090】
一部の実施形態では、組成物は、前記第１及び第２の抗体と同じエピトープに結合する、又はそれと結合について競合する抗体又はその抗原結合部分を含む。
【0091】
一部の実施形態では、この組成物は、前記第１抗体のＨ－ＣＤＲ１～３及びＬ－ＣＤＲ１～３アミノ酸配列を含む抗体又はその抗原結合部分、ならびに前記第２抗体のＨ－ＣＤＲ１～３及びＬ－ＣＤＲ１～３アミノ酸配列を含む抗体又はその抗原結合部分を含む。
【0092】
一部の実施形態では、この組成物は、前記第１抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列とそれぞれ少なくとも８０%、８５%、９０%、９１%、９２%、９３%、９４%、９５%、９６%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例、少なくとも９０%同一である）アミノ酸配列を伴うＶＨ及びＶＬを含む抗体又はその抗原結合部分、ならびに前記第２抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列とそれぞれ少なくとも８０%、８５%、９０%、９１%、９２%、９３%、９４%、９５%、９６%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例、少なくとも９０%同一である）アミノ酸配列を伴うＶＨ及びＶＬを含む抗体又はその抗原結合部分を含む。
【0093】
一部の実施形態では、この組成物は、前記第１抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体又はその抗原結合部分、ならびに前記第２抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体又はその抗原結合部分を含む。
【0094】
一部の実施形態では、この組成物は、前記第１抗体のＨＣ及びＬＣアミノ酸配列を含む抗体又はその抗原結合部分、ならびに前記第２抗体のＨＣ及びＬＣアミノ酸配列を含む抗体又はその抗原結合部分を含む。
【0095】
特定の実施形態では、前記組成物は、以下からなる群より選択される１、２、又はそれ以上の抗体又はその抗原結合部分を含みうる：
ａ）配列番号５～７、１５～１７、２５～２７、３５～３７、４５～４７、５５～５７、又は６５～６７のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨ－ＣＤＲ１～３を含む抗体；
ｂ）ＶＨが配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、又は７３のアミノ酸配列と配列において少なくとも９０%同一である抗体；
ｃ）ＶＨが配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、又は７３のアミノ酸配列を含む抗体；
ｄ）ＨＣが配列番号３及び７５、１３及び７５、２３及び７５、３３及び７５、４３及び７５、５３及び７５、６３及び７５、又は７３及び７５のアミノ酸配列を含む抗体；
ｅ）配列番号８～１０、１８～２０、２８～３０、３８～４０、４８～５０、５８～６０、又は６８～７０のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬ－ＣＤＲ１～３を含む抗体；
ｆ）ＶＬが配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、又は７４のアミノ酸配列と配列において少なくとも９０%同一である抗体；
ｇ）ＶＬが配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、又は７４のアミノ酸配列を含む抗体；
ｈ）ＬＣが配列番号４及び７６、１４及び７６、２４及び７６、３４及び７６、４４及び７６、５４及び７６、６４及び７６、又は７４及び７６のアミノ酸配列を含む抗体；
ｉ）Ｈ－ＣＤＲ１～３及びＬ－ＣＤＲ１～３が配列番号５～１０、１５～２０、２５～３０、３５～４０、４５～５０、５５～６０、又は６５～７０のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体；
ｊ）配列番号３及び４、１３及び１４、２３及び２４、３３及び３４、４３及び４４、５３及び５４、６３及び６４、又は７３及び７４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ及びＶＬを含む抗体；
ｋ）配列番号３及び４、１３及び１４、２３及び２４、３３及び３４、４３及び４４、５３及び５４、６３及び６４、又は７３及び７４のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ及びＶＬを含む抗体；
ｌ）３及び７５、ならびに４及び７６；１３及び７５、ならびに１４及び７６；２３及び７５、ならびに２４及び７６；３３及び７５、ならびに３４及び７６；４３及び７５、ならびに４４及び７６；５３及び７５、ならびに５４及び７６；６３及び７５、ならびに６４及び７６；又は７３及び７５、ならびに７４及び７６のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む抗体。
ａ）配列番号５～７、１５～１７、２５～２７、３５～３７、４５～４７、５５～５７、又は６５～６７のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨ－ＣＤＲ１～３を含む抗体；
ｂ）ＶＨが配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、又は７３のアミノ酸配列と配列において少なくとも９０%同一である抗体；
ｃ）ＶＨが配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、又は７３のアミノ酸配列を含む抗体；
ｄ）ＨＣが配列番号３及び７５、１３及び７５、２３及び７５、３３及び７５、４３及び７５、５３及び７５、６３及び７５、又は７３及び７５のアミノ酸配列を含む抗体；
ｅ）配列番号８～１０、１８～２０、２８～３０、３８～４０、４８～５０、５８～６０、又は６８～７０のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬ－ＣＤＲ１～３を含む抗体；
ｆ）ＶＬが配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、又は７４のアミノ酸配列と配列において少なくとも９０%同一である抗体；
ｇ）ＶＬが配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、又は７４のアミノ酸配列を含む抗体；
ｈ）ＬＣが配列番号４及び７６、１４及び７６、２４及び７６、３４及び７６、４４及び７６、５４及び７６、６４及び７６、又は７４及び７６のアミノ酸配列を含む抗体；
ｉ）Ｈ－ＣＤＲ１～３及びＬ－ＣＤＲ１～３が配列番号５～１０、１５～２０、２５～３０、３５～４０、４５～５０、５５～６０、又は６５～７０のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体；
ｊ）配列番号３及び４、１３及び１４、２３及び２４、３３及び３４、４３及び４４、５３及び５４、６３及び６４、又は７３及び７４のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ及びＶＬを含む抗体；
ｋ）配列番号３及び４、１３及び１４、２３及び２４、３３及び３４、４３及び４４、５３及び５４、６３及び６４、又は７３及び７４のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ及びＶＬを含む抗体；
ｌ）３及び７５、ならびに４及び７６；１３及び７５、ならびに１４及び７６；２３及び７５、ならびに２４及び７６；３３及び７５、ならびに３４及び７６；４３及び７５、ならびに４４及び７６；５３及び７５、ならびに５４及び７６；６３及び７５、ならびに６４及び７６；又は７３及び７５、ならびに７４及び７６のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む抗体。
【0096】
一部の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体組成物は、インビボで腫瘍成長を阻害しうる、及び／又は腫瘍成長退行を誘導しうる。一部の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体組成物は、がん患者における転移を遅くしうる又は逆転させうる。一部の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体組成物は、がん患者の生存を延長しうる。
【0097】
本開示はまた、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体組成物を産生するための方法を提供し、該方法は、第１の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分及び第２の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分を提供すること、ならびに２つの抗体又は部分を混合することを含む。
【0098】
二重特異性結合分子
本開示はまた、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体の結合特異性を有する（例、抗原結合部分、例えば６つのＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬなどを含む）二重特異性結合分子を提供する。一部の実施形態では、二重特異性結合分子は、加えて、別の、別個の抗ＦＬＴ３抗体（例、本明細書中に記載する別の抗ＦＬＴ３抗体）又は異なるタンパク質、例えばがん抗原もしくはその活性が疾患状態、例えばがんなどを媒介する別の細胞表面分子などを標的化する抗体の結合特異性を有する。そのような二重特異性結合分子は当技術分野において公知であり、異なる型の二重特異性結合分子の例を、本明細書中の他の場所に与える。
本開示はまた、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体の結合特異性を有する（例、抗原結合部分、例えば６つのＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬなどを含む）二重特異性結合分子を提供する。一部の実施形態では、二重特異性結合分子は、加えて、別の、別個の抗ＦＬＴ３抗体（例、本明細書中に記載する別の抗ＦＬＴ３抗体）又は異なるタンパク質、例えばがん抗原もしくはその活性が疾患状態、例えばがんなどを媒介する別の細胞表面分子などを標的化する抗体の結合特異性を有する。そのような二重特異性結合分子は当技術分野において公知であり、異なる型の二重特異性結合分子の例を、本明細書中の他の場所に与える。
【0099】
核酸分子及びベクター
本開示はまた、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子及び配列を提供する。一部の実施形態では、異なる核酸分子が、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列をコードする。他の実施形態では、同じ核酸分子が、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列をコードする。
本開示はまた、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子及び配列を提供する。一部の実施形態では、異なる核酸分子が、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列をコードする。他の実施形態では、同じ核酸分子が、抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列をコードする。
【0100】
ヌクレオチド配列への言及は、他に特定しない限り、その相補体を包含する。したがって、特別な配列を有する核酸への言及は、その相補配列を伴う、その相補鎖を包含すると理解すべきである。本明細書中で言及する用語「ポリヌクレオチド」は、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれか、又はヌクレオチドのいずれかの型の修飾形態の、長さが少なくとも１０塩基のヌクレオチドの高分子形態を意味する。この用語は、一本鎖及び二本鎖の形態を含む。
【0101】
一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体もしくはその抗原結合部分の、重鎖もしくはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、又は軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、又はその両方を含む核酸分子を提供する。
【0102】
本開示はまた、本明細書中に列挙する１つ以上のヌクレオチド配列と、例えば、配列番号１、２、１１、１２、２１、２２、３１、３２、４１、４２、５１、５２、６１、６２、７１、及び７２からなる群より選択されるヌクレオチド配列と、又は配列番号３、４、１３、１４、２３、２４、３３、３４、４３、４４、５３、５４、６３、６４、７３、及び７４からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と少なくとも７０%、７５%、８０%、８５%、９０%、９５%、９７%、９８%、又は９９%同一である（例えば、少なくとも９０%同一である）ヌクレオチド配列を提供する。核酸配列の文脈における用語「パーセント配列同一性」は、最大対応のために整列させた場合に同じである２つの配列中の残基に言及する。配列同一性比較の長さは、少なくとも約９ヌクレオチド、通常は少なくとも約１８ヌクレオチド、より通常は少なくとも約２４ヌクレオチド、典型的には少なくとも約２８ヌクレオチド、より典型的には少なくとも約３２ヌクレオチド、及び好ましくは少なくとも約３６、４８又はそれ以上のヌクレオチドの長さにわたりうる。ヌクレオチド配列同一性を測定するために使用できる、当技術分野において公知の多数の異なるアルゴリズムがある。例えば、ポリヌクレオチド配列は、Wisconsin Package Version 10.0、Genetics Computer Group（ＧＣＧ）（ウィスコンシン州マジソン）におけるプログラムであるＦＡＳＴＡ、Ｇａｐ、又はＢｅｓｔｆｉｔを使用して比較することができる。ＦＡＳＴＡは、例えば、プログラムＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３を含み、クエリ配列と検索配列との間の最良のオーバーラップの領域のアラインメント及びパーセント配列同一性を提供する（例、Pearson, Methods Enzymol. (1990) 183:63-98；Pearson, Methods Mol. Biol. (2000) 132:185-219;Pearson, Methods Enzymol. (1996) 266:227-58；及びPearson, J. Mol. Biol. (1998) 276:71-84；参照により本明細書中に組み込まれる）。他に特定しない限り、特定のプログラム又はアルゴリズム用のデフォルトパラメータが使用される。例えば、核酸配列間のパーセント配列同一性は、ＦＡＳＴＡをそのデフォルトパラメータ（ワードサイズ６及びスコアリングマトリックスについてのＮＯＰＡＭ係数）で使用して、又はＧａｐをそのデフォルトパラメータで使用して、ＧＣＧバージョン６．１で提供されるように決定することができる（参照により本明細書中に組み込まれる）。
【0103】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号１、２、１１、１２、２１、２２、３１、３２、４１、４２、５１、５２、６１、６２、７１、及び７２からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供する。特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号１及び２、１１及び１２、２１及び２２、３１及び３２、４１及び４２、５１及び５２、６１及び６２、又は７１及び７２のヌクレオチド配列を含む。
【0104】
上の実施形態のいずれにおいても、核酸分子は単離されうる。本明細書中で「単離された」又は「精製された」として言及する核酸分子は、（１）それらの供給源のゲノムＤＮＡもしくは細胞ＲＮＡの核酸から分離された、及び／又は（２）自然において生じない核酸である。
【0105】
さらなる実施形態では、本開示は、本明細書中に記載する抗体又はその抗原結合部分の鎖の一方又は両方を発現させるために適切なベクターを提供する。用語「ベクター」は、本明細書中で使用するように、それが連結された別の核酸を輸送することが可能な核酸分子を意味する。一部の実施形態では、ベクターはプラスミド、即ち、追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされうるＤＮＡの環状二本鎖片である。さらに、特定のベクターは、操作的に連結された遺伝子の発現を方向付けることが可能である。そのようなベクターは、本明細書中では「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）として言及する。
【0106】
本開示は、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又は重鎖及び軽鎖の両方をコードする核酸分子を含むベクターを提供する。特定の実施形態では、本開示のベクターは、本明細書中に記載する核酸分子を含む。本開示はさらに、融合タンパク質、改変抗体、抗体フラグメント、及びそれらのプローブをコードする核酸分子を含むベクターを提供する。ベクターは、発現制御配列をさらに含みうる。
【0107】
本明細書中で使用する用語「発現制御配列」は、それらがライゲーションされるコード配列の発現及びプロセシングをもたらすために必要であるポリヌクレオチド配列を意味する。発現制御配列は、適した転写開始配列、終結配列、プロモーター配列、及びエンハンサー配列；効率的なＲＮＡ処理シグナル、例えばスプライシングシグナル及びポリアデニル化シグナルなど；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を増強させる配列（即ち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を増強する配列；ならびに、所望の場合、タンパク質分泌を増強する配列を含む。そのような制御配列の性質は、宿主生物に応じて異なり；原核生物では、そのような制御配列は、一般的に、プロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含み；真核生物では、一般的に、そのような制御配列はプロモーター及び転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、最低限、その存在が発現及びプロセシングのために必須である全ての成分を含むことを意図しており、また、その存在が有利である追加の成分、例えばリーダー配列及び融合パートナー配列を含むことができる。
【0108】
一部の実施形態では、本明細書中に記載する核酸分子は、任意の供給源からの重鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列にインフレームで連結された、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分からのＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列を含む。同様に、本明細書中に記載する核酸分子は、任意の供給源からの軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列にインフレームで連結された、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分からのＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。
【0109】
本開示のさらなる実施形態では、ＶＨ及び／又はＶＬをコードする核酸分子は、全長抗体遺伝子に「変換」されうる。一部の実施形態では、ＶＨ又はＶＬドメインをコードする核酸分子は、それぞれ重鎖定常（ＣＨ）領域又は軽鎖定常（ＣＬ）領域を既にコードする発現ベクター中への挿入により、全長抗体遺伝子に変換されて、ＶＨセグメントが、ベクター内のＣＨセグメントに操作的に連結され、及び／又はＶＬセグメントが、ベクター内のＣＬセグメントに操作的に連結される。別の実施形態では、ＶＨ及び／又はＶＬドメインをコードする核酸分子は、ＶＨ及び／又はＶＬドメインをコードする核酸分子を、標準的な分子生物学的技術を使用して、ＣＨ及び／又はＣＬ領域をコードする核酸分子に連結、例えば、ライゲーションすることにより全長抗体遺伝子に変換される。全長重鎖及び／又は軽鎖をコードする核酸分子を次に、それらが導入された細胞から発現させ、抗ＦＬＴ３抗体を単離してもよい。
【0110】
一部の実施形態では、結果として得られるフレームワーク領域が、対応する生殖細胞系遺伝子のアミノ酸配列を有するように、フレームワーク領域は変異される。変異を、例えば、抗ＦＬＴ３抗体の半減期を増加させるために、フレームワーク領域又は定常領域において作成してもよい。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ００／０９５６０を参照のこと。フレームワーク領域又は定常領域中の変異はまた、抗体の免疫原性を改変するために、及び／又は別の分子への共有結合的又は非共有結合的な結合のための部位を提供するために作成してもよい。本開示によれば、抗体は、可変ドメインのＣＤＲ又はフレームワーク領域のいずれか１つ以上において、あるいは定常領域において変異を有しうる。
【0111】
宿主細胞ならびに抗体及び抗体組成物産生の方法
本開示はまた、本明細書中に記載する抗体組成物ならびに抗体及びそれらの抗原結合部分を産生するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分を産生するための方法に関し、該方法は、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分の重鎖又はその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、及び軽鎖又はその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む宿主細胞（例、組換え宿主細胞）を提供すること；抗体又は抗原結合部分の発現のために適切な条件下で前記宿主細胞を培養すること；ならびに、結果として得られた抗体又は抗原結合部分を単離することを含む。そのような組換え宿主細胞におけるそのような発現により産生される抗体又は抗原結合部分は、本明細書において「組換え」抗体又は抗原結合部分として言及する。本開示はまた、そのような宿主細胞の子孫細胞、及び同により産生される抗体又は抗原結合部分を提供する。
本開示はまた、本明細書中に記載する抗体組成物ならびに抗体及びそれらの抗原結合部分を産生するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分を産生するための方法に関し、該方法は、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分の重鎖又はその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、及び軽鎖又はその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む宿主細胞（例、組換え宿主細胞）を提供すること；抗体又は抗原結合部分の発現のために適切な条件下で前記宿主細胞を培養すること；ならびに、結果として得られた抗体又は抗原結合部分を単離することを含む。そのような組換え宿主細胞におけるそのような発現により産生される抗体又は抗原結合部分は、本明細書において「組換え」抗体又は抗原結合部分として言及する。本開示はまた、そのような宿主細胞の子孫細胞、及び同により産生される抗体又は抗原結合部分を提供する。
【0112】
用語「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）は、本明細書中で使用するように、組換え発現ベクターが導入された細胞を意味する。定義により、組換え宿主細胞は自然において生じない。本開示は、例えば、本明細書中に記載するベクターを含みうる宿主細胞を提供する。本開示はまた、例えば、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分の重鎖又はその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、軽鎖又はその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、あるいはその両方を含む宿主細胞を提供する。「組換え宿主細胞」及び「宿主細胞」は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も意味することを理解すべきである。特定の改変が、変異又は環境の影響のいずれかに起因して後続の世代において生じうるため、そのような子孫は、実際には親細胞と同一ではないことがあるが、しかし、依然として本明細書中で使用する用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。
【0113】
抗ＦＬＴ３抗体及びその抗原結合部分をコードする核酸分子、ならびにこれらの核酸分子を含むベクターは、適切な哺乳動物、植物、細菌又は酵母宿主細胞のトランスフェクションのために使用することができる。形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための任意の公知の方法によることができる。哺乳動物細胞中への異種ポリヌクレオチドの導入のための方法は、当技術分野において周知であり、デキストラン媒介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソーム中でのポリヌクレオチドのカプセル化、及び核中へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションを含む。また、核酸分子を、ウイルスベクターにより哺乳動物細胞中に導入してもよい。
【0114】
異なる細胞株により、又はトランスジェニック動物において発現される抗体は、互いに異なるグリコシル化パターンを有する可能性が高い。しかし、本明細書中で提供する核酸分子によりコードされる、又は本明細書中で提供するアミノ酸配列を含む全ての抗体が、抗体のグリコシル化状態に関係なく、より一般的には、翻訳後修飾の存在又は非存在に関係なく、本開示の一部である。
【0115】
医薬組成物
本開示の別の実施形態は、活性成分として（又は唯一の活性成分として）、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子を含む医薬組成物である。医薬組成物は、加えて、医薬的に許容可能な賦形剤を含んでもよい。一部の実施形態では、医薬組成物は、がん、例えば、本明細書中に記載するがんの寛解、予防、及び／又は処置について意図する。特定の実施形態では、がんは、組織、例えば皮膚、肺、腸、結腸、卵巣、脳、前立腺、腎臓、軟部組織、造血系、頭頸部、肝臓、骨、膀胱、乳房、胃、子宮、子宮頸部、及び膵臓などにある。
本開示の別の実施形態は、活性成分として（又は唯一の活性成分として）、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子を含む医薬組成物である。医薬組成物は、加えて、医薬的に許容可能な賦形剤を含んでもよい。一部の実施形態では、医薬組成物は、がん、例えば、本明細書中に記載するがんの寛解、予防、及び／又は処置について意図する。特定の実施形態では、がんは、組織、例えば皮膚、肺、腸、結腸、卵巣、脳、前立腺、腎臓、軟部組織、造血系、頭頸部、肝臓、骨、膀胱、乳房、胃、子宮、子宮頸部、及び膵臓などにある。
【0116】
本開示の医薬組成物は、本開示の１つ以上の抗ＦＬＴ３抗体、抗原結合部分、抗体組成物、又は二重特異性結合分子、例えば、１つ又は２つの抗ＦＬＴ３抗体、抗原結合部分、又は二重特異性結合分子を含みうる。一部の実施形態では、組成物は、本開示の単一の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を含む。別の実施形態では、組成物は、本開示の２つの別の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分を含む。
【0117】
一部の実施形態では、医薬組成物は、本開示の少なくとも１つの抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、例えば、１つの抗ＦＬＴ３抗体又は部分、及び１つ以上の関連する細胞表面受容体、例えば、１つ以上のがん関連受容体を標的化する１つ以上の追加の抗体を含みうる。
【0118】
一部の実施形態では、医薬組成物は、本開示の少なくとも１つの抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、例えば、１つの抗ＦＬＴ３抗体又は部分、ならびに、例えば、免疫刺激剤、ワクチン、化学療法剤、抗悪性腫瘍剤、抗血管新生剤、及びチロシンキナーゼ阻害剤より選択される１つ以上の追加の薬剤を含みうる。
【0119】
一般的に、本開示の抗体、抗原結合部分、及び二重特異性結合分子は、例えば、以下に記載するように、１つ以上の医薬的に許容可能な賦形剤との関連における製剤として投与するのに適切である。
【0120】
用語「賦形剤」は、本開示の化合物以外の任意の成分を記載するために本明細書中で使用される。賦形剤の選択は、要因、例えば特定の投与様式、溶解性及び安定性に対する賦形剤の効果、ならびに投与形態の性質などに大きく依存しうる。本明細書中で使用するように、「医薬的に許容可能な賦形剤」は、生理学的に適合する任意の及び全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。医薬的に許容可能な賦形剤の一部の例は、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、ならびにそれらの組み合わせである。多くの場合では、等張剤、例えば、糖類、多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトールなど、又は塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましいであろう。医薬的に許容可能な物質の追加の例は、湿潤剤あるいは少量の補助物質、例えば湿潤剤又は乳化剤、保存剤又は緩衝剤などであり、それらによって抗体の有効期間又は有効性が増強される。
【0121】
本開示の医薬組成物及びそれらの調製のための方法は、当業者には容易に明らかであろう。そのような組成物及びそれらの調製のための方法は、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 19th Edition（Mack Publishing Company, 1995）において見出されうる。医薬組成物は、好ましくは、ＧＭＰ（適正製造規範）条件下で製造される。
【0122】
本開示の医薬組成物は、単一の単位用量として、又は複数の単一の単位用量として、調製、包装、又は大量に販売されうる。本明細書中で使用するように、「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の別々の量である。活性成分の量は、一般的に、対象に投与されうる活性成分の投与量、又はそのような投与量の都合のよい割合、例えば、そのような投与量の半分又は３分の１に等しい。
【0123】
非経口投与のための適切な医薬組成物の製剤は、典型的には、医薬的に許容可能な担体、例えば滅菌水又は滅菌等張生理食塩水などと組み合わされた活性成分を含む。そのような製剤は、ボーラス投与のために又は連続投与のために適切な形態で調製、包装、又は販売されうる。注射用製剤は、単位投与形態において、例えば保存剤を含むアンプル中又は複数用量容器中などで調製、包装、又は販売されうる。非経口投与用の製剤は、懸濁液、溶液、油性又は水性ビヒクル中のエマルジョン、ペーストなどを含むが、これらに限定されない。そのような製剤は、１つ以上の追加の成分（懸濁剤、安定剤、又は分散剤を含むが、これらに限定されない）をさらに含みうる。非経口投与用の製剤の一部の実施形態では、活性成分は、再構成された組成物の非経口投与の前に、適切なビヒクル（例、無菌の発熱物質不含水）での再構成のための乾燥（即ち、粉末又は顆粒）形態で提供される。非経口製剤はまた、賦形剤、例えば塩、炭水化物、及び緩衝剤（好ましくは、ｐＨ３～９まで）などを含みうる水溶液を含むが、しかし、一部の適用については、それらは、無菌の非水溶液として、又は適切なビヒクル、例えば無菌の発熱物質不含水などとの併用において使用される乾燥形態としてより適切に製剤化されうる。例示的な非経口投与形態は、無菌水溶液、例えば、水性プロピレングリコール又はデキストロース溶液における溶液又は懸濁液を含む。そのような投与形態は、所望の場合、適切に緩衝化することができる。有用である他の非経口投与可能な製剤は、活性成分を微結晶形態で又はリポソーム製剤で含む製剤を含む。
【0124】
本開示の抗体及び組成物の治療的な使用
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体及びその抗原結合部分、抗ＦＬＴ３抗体組成物、及び二重特異性結合分子は、例えば、ＦＬＴ３活性を刺激することにより、それを必要とする患者（例、哺乳動物、例えばヒトなど）において免疫系を増強又は活性化するために使用される。特定の実施形態では、患者は免疫抑制されている。特定の実施形態では、医師は、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、組成物、又は二重特異性結合分子を投与することにより、患者自身の免疫系の抗がん活性を強化することができる。例えば、医師は、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分、抗体組成物、又は二重特異性結合分子を単独で、又は他の治療薬剤との組み合わせにおいて（連続的に又は同時に）投与することにより、患者において抗腫瘍活性を強化することができる。
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体及びその抗原結合部分、抗ＦＬＴ３抗体組成物、及び二重特異性結合分子は、例えば、ＦＬＴ３活性を刺激することにより、それを必要とする患者（例、哺乳動物、例えばヒトなど）において免疫系を増強又は活性化するために使用される。特定の実施形態では、患者は免疫抑制されている。特定の実施形態では、医師は、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、組成物、又は二重特異性結合分子を投与することにより、患者自身の免疫系の抗がん活性を強化することができる。例えば、医師は、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分、抗体組成物、又は二重特異性結合分子を単独で、又は他の治療薬剤との組み合わせにおいて（連続的に又は同時に）投与することにより、患者において抗腫瘍活性を強化することができる。
【0125】
特定の実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合部分、組成物、及び二重特異性結合分子は、がん、例えば、ＦＬＴ３陽性がんの処置における使用のためである。がんは、１つ以上の組織、例えば皮膚、肺、腸、結腸、卵巣、脳、前立腺、腎臓、軟部組織、造血系、頭頸部、肝臓、骨、膀胱、乳房、胃、子宮、子宮頸部、及び膵臓などにありうる。一部の実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合部分、組成物、又は二重特異性結合分子は、低い免疫細胞浸潤（例、樹状細胞浸潤）を伴う腫瘍を処置する際における使用のためである。
【0126】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体、抗原結合部分、組成物、及び二重特異性結合分子により処置されるがんは、例えば、黒色腫（例、皮膚、粘膜、又は眼の黒色腫；進行性又は転移性黒色腫）、皮膚基底細胞がん、神経膠芽腫、神経膠腫、神経膠肉腫、星細胞腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、副腎皮質がん、頭頸部扁平上皮がん、口腔がん、唾液腺がん、鼻咽頭がん、乳がん、肺がん（例、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺がん、及び扁平上皮肺がん）、食道がん、胃食道接合部がん、胃がん、胃腸がん、原発性腹膜がん、肝臓がん、肝細胞がん、胆道がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、卵巣がん、卵管がん、膀胱がん、上部尿路がん、尿路上皮がん、腎細胞がん、腎臓がん、泌尿生殖器がん、子宮頸がん、前立腺がん、線維肉腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、組織球腫、膵臓がん、子宮内膜がん、虫垂がん、進行メルケル細胞がん、多発性骨髄腫、肉腫、絨毛がん、赤白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、肥満細胞性白血病、小リンパ球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、単球性リンパ腫、ＨＴＬＶ関連Ｔ細胞性白血病／リンパ腫、中皮腫、及び固形腫瘍を含みうる。がんは、例えば、早期、中間、後期、局所進行、又は転移段階でありうるが、再発性であるか、又は他の治療薬（例、他の抗ＦＬＴ３治療薬又はチェックポイント阻害剤）に対して難治性でありうる、あるいは利用可能な標準治療がないことがある。
【0127】
一部の実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３抗体、抗原結合部分、組成物、及び二重特異性結合分子により処置される状態は、例えば、黒色腫（例、皮膚、粘膜、又は眼の黒色腫）、神経膠腫、多形性膠芽腫、頭頸部扁平上皮がん、乳がん、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、腎臓がん、リンパ腫（例、Ｂ細胞リンパ腫又は非ホジキンリンパ腫）、白血病（例、急性骨髄性白血病）、多発性骨髄腫、形質細胞腫瘍、ならびに骨髄異形成疾患及び／又は骨髄増殖性疾患を含みうる。
【0128】
一部の実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合部分、組成物、又は二重特異性結合分子は、免疫障害の処置における使用のためである。
【0129】
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子を使用して、免疫不全（例、化学療法又は放射線治療に起因する）である、又は免疫不全になるリスクがある患者を処置してもよい。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子を使用して、幹細胞移植後の患者において幹細胞を増殖させてもよい。
【0130】
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子は、ウイルス感染及び／又は寄生虫感染を処置する際、例えば、病原体が宿主免疫応答を阻害する場合での使用のためである。病原体は、例えば、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、Ｂ、又はＣ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、リンパ性脈絡膜髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、アデノウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、デングウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ジョン・カニンガム（ＪＣ）ウイルス、アルボウイルス脳炎ウイルス、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア、マラリア、リーシュマニア、黄色ブドウ球菌、結核菌、又は緑膿菌でありうる。
【0131】
「処置する」、「処置すること」、及び「処置」は、生物学的障害及び／又はその付随する症状の少なくとも１つを軽減又は抑止する方法を指す。本明細書中で使用するように、疾患、障害、又は状態を「軽減する」は、疾患、障害、又は状態の症状の重症度及び／又は発生頻度を低下させることを意味する。さらに、本明細書中での「処置」への言及は、治癒的、緩和的、及び予防的処置への言及を含む。
【0132】
「治療有効量」は、処置されている障害の症状の１つ以上をある程度軽減する、投与されている治療薬剤の量を指す。治療有効量の抗がん治療薬は、例えば、腫瘍成長の遅延、腫瘍の縮小、生存率の増加、がん細胞の排除、遅い又は減少した疾患進行、転移の逆転、又は医療従事者により望まれる他の臨床的エンドポイントをもたらしうる。
【0133】
本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子は、単独で、あるいは１つ以上の他の薬物又は抗体との組み合わせにおいて（又はそれらの任意の組み合わせとして）投与されうる。したがって、本明細書中に記載する医薬組成物、方法、及び使用は、以下に詳述するように、他の活性薬剤との組み合わせ（同時投与）の実施形態も包含する。
【0134】
本明細書中で使用するように、用語「同時投与」、「同時投与された」、及び「との組み合わせにおいて」は、１つ以上の他の治療薬を伴う、本開示の抗ＦＬＴ３抗体及びその抗原結合部分、抗体組成物、ならびに二重特異性結合分子を指し、以下を意味することを意図し、以下に言及し、以下を含む：
ａ）処置を必要とする患者への、本開示の抗体／抗原結合部分／抗体組成物／二重特異性結合分子及び治療薬のそのような組み合わせの同時投与であって、そのような成分が、実質的に同時に前記患者に前記成分を放出する単一投与形態中に一緒に製剤化される場合、
ｂ）処置を必要とする患者への、本開示の抗体／抗原結合部分／抗体組成物／二重特異性結合分子及び治療薬のそのような組み合わせの実質的に同時の投与であって、そのような成分が、前記患者により実質的に同時に摂取される別々の投与形態中に互いに別々に製剤化される場合、その際、前記成分が実質的に同時に前記患者に放出される、
ｃ）処置を必要とする患者への、本開示の抗体／抗原結合部分／抗体組成物／二重特異性結合分子及び治療薬のそのような組み合わせの連続投与であって、そのような成分が、各々の投与の間に有意な時間間隔を伴って前記患者により連続的な時間に摂取される別々の投与形態中に互いに別々に製剤化される場合、その際、前記成分は実質的に異なる時間に前記患者に放出される；及び
ｄ）処置を必要とする患者への、本開示の抗体／抗原結合部分／抗体組成物／二重特異性結合分子及び治療薬のそのような組み合わせの連続投与であって、そのような成分が、制御された様式で前記成分を放出する単一投与形態中に一緒に製剤化される場合、その際、それらは同時に、連続的に、及び／又は重複して、同じ及び／又は異なる時間に前記患者に放出され、各々の部分は同じ又は異なる経路のいずれかにより投与されうる。
ａ）処置を必要とする患者への、本開示の抗体／抗原結合部分／抗体組成物／二重特異性結合分子及び治療薬のそのような組み合わせの同時投与であって、そのような成分が、実質的に同時に前記患者に前記成分を放出する単一投与形態中に一緒に製剤化される場合、
ｂ）処置を必要とする患者への、本開示の抗体／抗原結合部分／抗体組成物／二重特異性結合分子及び治療薬のそのような組み合わせの実質的に同時の投与であって、そのような成分が、前記患者により実質的に同時に摂取される別々の投与形態中に互いに別々に製剤化される場合、その際、前記成分が実質的に同時に前記患者に放出される、
ｃ）処置を必要とする患者への、本開示の抗体／抗原結合部分／抗体組成物／二重特異性結合分子及び治療薬のそのような組み合わせの連続投与であって、そのような成分が、各々の投与の間に有意な時間間隔を伴って前記患者により連続的な時間に摂取される別々の投与形態中に互いに別々に製剤化される場合、その際、前記成分は実質的に異なる時間に前記患者に放出される；及び
ｄ）処置を必要とする患者への、本開示の抗体／抗原結合部分／抗体組成物／二重特異性結合分子及び治療薬のそのような組み合わせの連続投与であって、そのような成分が、制御された様式で前記成分を放出する単一投与形態中に一緒に製剤化される場合、その際、それらは同時に、連続的に、及び／又は重複して、同じ及び／又は異なる時間に前記患者に放出され、各々の部分は同じ又は異なる経路のいずれかにより投与されうる。
【0135】
本開示の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子は、追加の治療的処置を伴うことなく、即ち、独立治療（単剤療法）として投与してもよい。あるいは、本開示の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子での処置は、少なくとも１つの追加の治療的処置（併用治療）、例えば、別の免疫刺激薬剤、抗がん薬剤（例、化学療法剤、抗悪性腫瘍剤、抗血管新生剤、又はチロシンキナーゼ阻害剤）、又はワクチン（例、腫瘍ワクチン）を含みうる。
【0136】
一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子は、がんの処置のための別の医薬／薬物と同時投与又は製剤化されうる。追加の治療的処置は、例えば、免疫刺激剤、ワクチン、化学療法剤、抗悪性腫瘍剤、又は抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤、及び／又は放射線治療を含みうる。一部の実施形態では、追加の治療的処置は、異なる抗がん抗体を含みうる。
【0137】
本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子、及び少なくとも１つの他の薬剤（例、化学療法剤、抗悪性腫瘍剤、又は抗血管形成剤）を含む医薬的物品は、がん治療における同時の、別々の又は連続的な投与のための併用処置として使用されうる。他の薬剤は、問題の特定のがんの処置のために適切な任意の薬剤、例えば、アルキル化剤、例えば、白金誘導体、例えばシスプラチン、カルボプラチン、及び／又はオキサリプラチンなど；植物アルコイド、例えば、パクリタキセル、ドセタキセル及び／又はイリノテカン；抗腫瘍抗生物質、例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンミトキサントロン、ダクチノマイシン、ブレオマイシン、アクチノマイシン、ルテオマイシン、及び／又はマイトマイシン；トポイソメラーゼ阻害剤、例えばトポテカンなど；代謝拮抗物質、例えば、フルオロウラシル及び／又は他のフルオロピリミジン；ＦＯＬＦＯＸ；オシメルチニブ；シクロホスファミド；アントラサイクリン；ダカルバジン；ゲムシタビン；又はそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される薬剤でありうる。一部の実施形態では、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子によって、他の薬剤に対する応答性が再確立される。
【0138】
本開示の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子はまた、他の抗がん治療、例えばワクチン、サイトカイン、酵素阻害剤、免疫刺激化合物、及びＴ細胞治療などとの組み合わせにおいて使用してもよい。ワクチンの場合では、それは、例えば、処置されているがんについて関連する１つ以上の抗原を含むタンパク質、ペプチド、もしくはＤＮＡワクチン、又は抗原とともに樹状細胞を含むワクチンでありうる。適切なサイトカインは、例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮ－ガンマ、及びＧＭ－ＣＳＦを含む。抗がん活性を有する酵素阻害剤の型の例は、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、例えば、１－メチル－Ｄ－トリプトファン（１－Ｄ－ＭＴ）である。また、企図するのは、養子Ｔ細胞治療であって、それは、患者自身のＴ細胞を増殖又は操作して、彼らの腫瘍を認識及び攻撃することを含む、種々の免疫療法技術を指す。
【0139】
本開示の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子は、チロシンキナーゼ阻害剤との関連における補助治療において使用されうることも企図される。これらは合成の、主にキナゾリン由来の低分子量分子であって、受容体の細胞内チロシンキナーゼドメインと相互作用し、例えば、細胞内Ｍｇ－ＡＴＰ結合部位について競合することにより、リガンド誘導受容体リン酸化を阻害する。
【0140】
一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子は、免疫系の活性化を媒介する医薬／薬物（Ａ２ＡＲ、Ａ１ＡＲ、Ａ２ＢＲ、Ａ３ＡＲ、ＡＤＡ、ＡＬＰ、ＡＸＬ、ＢＴＬＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１１６、ＣＤ１２３、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＣＤ５５、ＣＤ７３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、ＣＴＬＡ－３、ＣＥＡＣＡＭ（例、ＣＥＡＣＡＭ－１及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５など）、ＥＧＦＲ、ＦＬＴ３、ＦＬＴ３Ｌ、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＬＡＧ－３、ＬＩＬＲＢ１、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＩＤＯ、ＩＬ２Ｒ、ＩＬ４Ｒ、ＫＩＲ、ＬＡＩＲ１、ＭＥＴ、ＮＫＧ２Ａ、ＰＡＰ、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２、ＯＸ４０、ＳＴＩＮＧ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、ＴＧＦＲ－ベータ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９及びＴＬＲ１０、ＴＮＦＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＩＳＴＡ、ＬＩＬＲＢ２、ＣＭＴＭ６及び／又は２Ｂ４の発現又は活性を調節する薬剤を含むが、これらに限定されない）との組み合わせにおいて使用されうる。一部の実施形態では、薬剤によって、樹状細胞の活性、分化、増殖、又は動員が増強される。特定の実施形態では、薬剤は小分子阻害剤である。特定の実施形態では、薬剤は、上の分子の１つに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントである。本開示の抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子をサイトカイン（例、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、又はＩＬ－２１）、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤などとの組み合わせにおいて使用してもよい。
【0141】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子をＦＬＴ３Ｌ、ＣＤ４０、ＡＸＬ、ＴＬＲ、又はＰＤ－１の発現又は活性を調節する薬剤との組み合わせにおいて使用してもよい。
【0142】
本開示はまた、ＣＡＲ－Ｔ技術における使用のためでありうる、キメラ抗原受容体の調製における、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又は抗原結合部分の配列（例、６つのＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬ配列）の使用を企図する。
【0143】
本開示の抗体及びその抗原結合部分、抗体組成物、ならびに二重特異性結合分子は、本明細書中に記載する処置の方法において使用してもよく、本明細書中に記載する処置における使用のためでありうる、及び／又は本明細書中に記載する処置のための医薬の製造における使用のためでありうる。
【0144】
用量及び投与経路
本開示の抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子は、問題の状態の処置のための有効量で、即ち、所望の結果を達成するために必要な投与量及び期間で投与されうる。治療有効量は、要因、例えば処置されている特定の状態、患者の年齢、性別、体重、及び抗体など、ならびに抗体が、単独処置として、あるいは１つ以上の追加の抗がん処置との組み合わせにおいて投与されているか否かに従って変動しうる。
本開示の抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子は、問題の状態の処置のための有効量で、即ち、所望の結果を達成するために必要な投与量及び期間で投与されうる。治療有効量は、要因、例えば処置されている特定の状態、患者の年齢、性別、体重、及び抗体など、ならびに抗体が、単独処置として、あるいは１つ以上の追加の抗がん処置との組み合わせにおいて投与されているか否かに従って変動しうる。
【0145】
投薬レジメンは、最適な所望の応答を提供するように調整されうる。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、又は用量を、治療状況の緊急性により示されるように、比例的に低下又は増加させてもよい。投与の容易さ及び投与量の均一性のために、非経口組成物を投与単位形態において製剤化することが特に有利である。投与単位形態は、本明細書中で使用するように、処置される患者／対象のための単位投与量として適した物理的に別々の単位を指す；各々の単位は、要求される医薬的担体との関連において所望の治療効果を産生するように算出された所定量の活性化合物を含む。本開示の投与単位形態についての仕様は、一般的に、（ａ）治療薬剤の特有の特徴及び達成されるべき特定の治療効果又は予防効果、ならびに（ｂ）個人における過敏症の処置のためにそのような活性化合物を調合する当技術分野において固有の限界により決定され、これらに直接的に依存する。
【0146】
このように、当業者は、本明細書中で提供される開示に基づいて、用量及び投与レジメンが治療技術分野において周知の方法に従って調整されることを理解するであろう。すなわち、最大耐用量を容易に確立することができ、検出可能な治療上の利益を患者に提供する有効量を、検出可能な治療上の利益を患者に提供するために各々の薬剤を投与するための時間的要件と同様に決定することができる。したがって、特定の用量及び投与レジメンを本明細書中に例示している一方で、これらの例によって、本開示の実行において患者に提供されうる用量及び投与レジメンは決して限定されない。
【0147】
投与量の値は、軽減される状態の種類及び重症度で変動しうるが、単回又は複数用量を含みうることに注意すべきである。任意の特定の対象について、特定の投与レジメンを、個人の必要性及び組成物を投与している又は投与を監督している者の専門的判断に従って、経時的に調整すべきであること、ならびに本明細書中に示す投与量の範囲は例示的なだけあり、具体化された組成物の範囲又は実行を限定することを意図しないことをさらに理解すべきである。さらに、本開示の組成物を用いた投与レジメンは、多様な要因（疾患の種類、患者の年齢、体重、性別、医学的状態、病状の重症度、投与の経路、及び用いられる特定の抗体を含む）に基づきうる。このように、投与レジメンは広く変動しうるが、しかし、標準的な方法を使用して日常的に決定されうる。例えば、用量は、薬物動態学的又は薬力学的パラメーターに基づいて調整することができ、それは、臨床効果、例えば毒性効果及び／又は臨床検査値などを含みうる。このように、本開示は、当業者により決定される患者内の用量漸増を包含する。適した投与量及びレジメンの決定は、関連技術において周知であり、一度、本明細書中に開示する教示が提供されると、当業者により包含されることが理解されるであろう。
【0148】
腫瘍治療のための有効量は、患者における疾患進行を安定化する及び／又は症状を寛解させる能力、ならびに、好ましくは、例えば、腫瘍サイズを低下させることにより疾患進行を逆転させるその能力により測定してもよい。がんを阻害する、本開示の抗体、抗原結合部分、抗体組成物、又は二重特異性結合分子の能力は、インビトロアッセイ（例、実施例において記載されるように）により、ならびにヒト腫瘍における有効性を予測する適切な動物モデルにおいて評価されうる。適切な投与レジメンが、各々の特定の状況において最適な治療応答を提供するために選択され、例えば、単回ボーラスとして又は連続注入として投与され、各々の症例の緊急事態により示される投与量の可能な調整を伴う。
【0149】
本開示の抗体又はその抗原結合部分、抗体組成物、あるいは二重特異性結合分子は、当技術分野において受け入れられているペプチド、タンパク質、又は抗体を投与するための任意の方法により投与してもよく、典型的には非経口投与のために適切である。本明細書中で使用するように、「非経口投与」は、対象の組織の物理的な破裂及び組織における破裂を通じた投与により特徴付けられる任意の投与経路を含み、このように、一般的に、血流中への、筋肉中への、又は内臓中への直接投与をもたらす。非経口投与は、このように、注射による、外科的切開を通じた適用による、組織貫通非外科的創傷を通じた適用などによる投与を含むが、これらに限定されない。特に、非経口投与は、皮下、腹腔内、筋肉内、胸骨内、大槽内、静脈内、動脈内、くも膜下腔内、尿道内、頭蓋内、腫瘍内、及び滑膜内注射又は注入を含むが、これらに限定されないことを企図する。特定の実施形態は、静脈内経路及び皮下経路を含む。
【0150】
診断的使用及び組成物
本開示の抗体及び抗原結合部分はまた、診断プロセス（例、インビトロ又はエクスビボ）においても有用である。例えば、抗体及び抗原結合部分を使用して、患者からのサンプル（例、組織サンプル、又は体液サンプル、例えば炎症性滲出液、血液、血清、腸液、唾液、又は尿など）中のＦＬＴ３のレベルを検出及び／又は測定することができる。適切な検出及び測定方法は、免疫学的方法、例えばフローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、化学発光アッセイ、ラジオイムノアッセイ、及び免疫組織学などを含む。本開示は、本明細書中に記載する抗体及び抗原結合部分を含むキット（例、診断キット）をさらに包含する。
本開示の抗体及び抗原結合部分はまた、診断プロセス（例、インビトロ又はエクスビボ）においても有用である。例えば、抗体及び抗原結合部分を使用して、患者からのサンプル（例、組織サンプル、又は体液サンプル、例えば炎症性滲出液、血液、血清、腸液、唾液、又は尿など）中のＦＬＴ３のレベルを検出及び／又は測定することができる。適切な検出及び測定方法は、免疫学的方法、例えばフローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、化学発光アッセイ、ラジオイムノアッセイ、及び免疫組織学などを含む。本開示は、本明細書中に記載する抗体及び抗原結合部分を含むキット（例、診断キット）をさらに包含する。
【0151】
製造品及びキット
本開示はまた、製造品、例えば、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子の医薬組成物、場合により追加の生物学的に活性な分子（例、別の治療薬剤）を含む１つ以上の容器（例、使い捨て容器又は複数回使用容器）、及び使用説明書を含むキットを提供する。抗体又は抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子、及び任意の追加の生物学的に活性な分子は、適切な包装、例えば非反応性ガラス又はプラスチックで作製されたバイアル又はアンプルなどの中に別々に包装することができる。特定の実施形態では、バイアル又はアンプルは、抗体又は抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子、及び場合により生物学的に活性な分子の濃縮ストック（例、２倍、５倍、１０倍又はそれ以上）を保持する。特定の実施形態では、製造品、例えばキットなどは、抗体又は抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子及び／又は生物学的に活性な分子を投与するための医療機器（例、注射器及び針）；及び／又は適した希釈剤（例、滅菌水及び生理食塩水）を含む。本開示はまた、前記物品を製造するための方法を含む。
本開示はまた、製造品、例えば、本明細書中に記載する抗ＦＬＴ３抗体又はその抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子の医薬組成物、場合により追加の生物学的に活性な分子（例、別の治療薬剤）を含む１つ以上の容器（例、使い捨て容器又は複数回使用容器）、及び使用説明書を含むキットを提供する。抗体又は抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子、及び任意の追加の生物学的に活性な分子は、適切な包装、例えば非反応性ガラス又はプラスチックで作製されたバイアル又はアンプルなどの中に別々に包装することができる。特定の実施形態では、バイアル又はアンプルは、抗体又は抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子、及び場合により生物学的に活性な分子の濃縮ストック（例、２倍、５倍、１０倍又はそれ以上）を保持する。特定の実施形態では、製造品、例えばキットなどは、抗体又は抗原結合部分、組成物、あるいは二重特異性結合分子及び／又は生物学的に活性な分子を投与するための医療機器（例、注射器及び針）；及び／又は適した希釈剤（例、滅菌水及び生理食塩水）を含む。本開示はまた、前記物品を製造するための方法を含む。
【0152】
本明細書中で他に定義しない限り、本開示との関連において使用される科学用語及び技術用語は、当業者により一般に理解される意味を有するものとする。例示的な方法及び材料を以下に記載するが、本明細書中に記載するものと類似又は等価の方法及び材料をまた、本開示の実行又はテストにおいて使用することができる。矛盾する場合では、本明細書が、定義を含め、優先される。
【0153】
一般的に、本明細書中に記載する細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、分析化学、合成有機化学、医薬品及び薬学化学、ならびにタンパク質及び核酸化学ならびにハイブリダイゼーションとの関連において使用される命名法、及びそれらの技術は、当技術分野において周知であり、一般に使用されているものである。酵素反応及び精製技術は、当技術分野において一般に達成されるように、又は本明細書中に記載するように、製造元の仕様書に従って実施される。
【0154】
さらに、文脈により他に要求されない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。本明細書及び実施形態を通じて、言葉「有する（ｈａｖｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、又は変形、例えば「有する（ｈａｓ）」、「有している（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、又は「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などは、記載される整数又は整数のグループの包含を意味するが、しかし、任意の他の整数又は整数のグループの除外を意味しないと理解される。
【0155】
本明細書中で言及する全ての刊行物及び他の参考文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。多数の文書を本明細書中で引用しているが、この引用は、これらの文書のいずれかが当技術分野における共通の一般知識の一部を形成するという承認を成さない。
【0156】
本開示をより良く理解するために、以下の実施例を記載する。これらの実施例は、例証だけの目的のためであり、本開示の範囲を任意の様式で限定するとして解釈すべきではない。
【0157】
実施例
【0158】
実施例１．ラットＢ細胞からの抗ＦＬＴ３抗体のクローニング
材料及び方法
ヒトＦＬＴ３に対する抗体を、OmniRat（登録商標）ラット（Osborn et al., J Immunol. 190(4):1481-90 (2013)）（完全にヒトのイディオタイプを伴う抗体を産生するLigand Pharmaceuticals Inc.からのトランスジェニックラット系統）から由来する抗体レパートリーから単離した。単一細胞選別抗体分泌Ｂ細胞（ＡＳＣ）からのラット由来抗体遺伝子のクローニングを、Symplex（商標）抗体発見技術（Meijer et al., J Mol Biol 358(3):764-72 (2006)）を用いて実施した。
材料及び方法
ヒトＦＬＴ３に対する抗体を、OmniRat（登録商標）ラット（Osborn et al., J Immunol. 190(4):1481-90 (2013)）（完全にヒトのイディオタイプを伴う抗体を産生するLigand Pharmaceuticals Inc.からのトランスジェニックラット系統）から由来する抗体レパートリーから単離した。単一細胞選別抗体分泌Ｂ細胞（ＡＳＣ）からのラット由来抗体遺伝子のクローニングを、Symplex（商標）抗体発見技術（Meijer et al., J Mol Biol 358(3):764-72 (2006)）を用いて実施した。
【0159】
ＩｇＧ１－ＬＡＬＡフォーマット（下記を参照のこと）中に完全ヒト免疫グロブリンをコードする抗体レパートリー構築物をＨＥＫ２９３細胞中にトランスフェクトした。細胞上清を、ハイスループットフォーマットにおいてフローサイトメトリーを使用して、ＣＨＯ細胞の表面上に発現されたＦＬＴ３への結合についてスクリーニングした。ＦＬＴ３反応性クローンをＤＮＡ配列決定により分析し、抗体をコードするＤＮＡ配列を抽出した。選択した抗体クローンを、以下に記載するように発現させ、機能的にテストした。
【0160】
抗体をコードするｃＤＮＡフラグメントのSymplex（商標）クローニングにおける縮重プライマーの使用により導入された重鎖及び軽鎖のアミノ末端におけるミスセンス変異を、生殖系列配列に戻して修正した。表１は、１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６７９、１７４９４、１７５４３、及び１７４９７と指定された生殖細胞系抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメインのヌクレオチド配列を示す。修正プロセスは、生殖細胞系へのアミノ末端配列の修正ならびにコドン使用の最適化を含む。ヒト生殖系列配列に一致するための標的を、重鎖及び軽鎖可変領域についてのブラスト相同性検索により同定された。表１はまた、生殖細胞系の修正を受けていないバージョンの抗体１７６６７（１７６６７．０）についての重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列を含む。
【0161】
抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、及び１７４９７の可変ドメイン、定常領域、及び相補性決定領域（ＣＤＲ）のタンパク質配列をそれぞれ表２、表３、及び表４中に示す。
【0162】
結果
表１は、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、及び１７４９７の可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を示す。
表１は、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、及び１７４９７の可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を示す。
【表1】
【0163】
表２は、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、及び１７４９７の推定アミノ酸配列を示す。ＣＤＲを太字／下線で示す。
【表2】
【0164】
表３は、重鎖及び軽鎖定常領域のアミノ酸配列（それぞれＣＨ及びＣＬ）を示す。「ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ」は、ＩｇＧ１抗体のＦｃ領域のエフェクター機能を低下させることが公知である重鎖（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩＭＧＴ（登録商標）ナンバリングスキームに従って番号付けされる）における「ＬＡＬＡ」変異の存在を指す（Hezareh et al., J Virol. (2001) 75(24):12161-8;Hessell et al., Nature (2007) 449(7158):101-4）。
【表3】
【0165】
表４は、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、及び１７４９７の重鎖及び軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を示し、ＣＤＲはＩＭＧＴ（登録商標）システムに従って定義される。
【表4】
【0166】
表５は、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７６６７－０、１７６７９、１７４９４、１７５４３、及び１７４９７８についての配列番号情報を示す。他に記載しない限り、配列はアミノ酸配列である。
【表5】
【0167】
実施例２．ＥＯＬ－１増殖アッセイにおける抗ＦＬＴ３抗体のインビトロ機能スクリーニング
この実施例は、アゴニスト活性を伴うリード候補を同定する目的で、抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のパネルのインビトロ機能評価を記載する。抗体を、ＦＬＴ３発現がん細胞株ＥＯＬ－１の増殖を刺激するそれらの能力について評価した。
この実施例は、アゴニスト活性を伴うリード候補を同定する目的で、抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のパネルのインビトロ機能評価を記載する。抗体を、ＦＬＴ３発現がん細胞株ＥＯＬ－１の増殖を刺激するそれらの能力について評価した。
【0168】
材料及び方法
抗ＦＬＴ３抗体のパネルを、ＦＬＴ３発現がん細胞株ＥＯＬ－１の増殖を誘導するそれらの能力についてインビトロで評価した。ＥＯＬ－１細胞を、０．５%ＦＢＳ及び１% Ｐ／Ｓを添加したRPMI 1640 Glutamax培地中に播種し、最終濃度２５μg/mLで、示された抗体を５日間にわたりインキュベートした。細胞増殖を、製造元の指示に従って、ＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Roche）を使用して定量化した。
結果
抗ＦＬＴ３抗体での処理後のＥＯＬ－１細胞の増殖を図１中に示す。ＥＯＬ－１細胞の増殖を誘導する能力は、テストした抗体間で大きく変動した。一部の抗体は、このアッセイにおいて効果を示さなかった一方で、他の抗体は、ＥＯＬ－１細胞の増殖を誘導するそれらの能力により示される刺激能力を有していた。
抗ＦＬＴ３抗体のパネルを、ＦＬＴ３発現がん細胞株ＥＯＬ－１の増殖を誘導するそれらの能力についてインビトロで評価した。ＥＯＬ－１細胞を、０．５%ＦＢＳ及び１% Ｐ／Ｓを添加したRPMI 1640 Glutamax培地中に播種し、最終濃度２５μg/mLで、示された抗体を５日間にわたりインキュベートした。細胞増殖を、製造元の指示に従って、ＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Roche）を使用して定量化した。
結果
抗ＦＬＴ３抗体での処理後のＥＯＬ－１細胞の増殖を図１中に示す。ＥＯＬ－１細胞の増殖を誘導する能力は、テストした抗体間で大きく変動した。一部の抗体は、このアッセイにおいて効果を示さなかった一方で、他の抗体は、ＥＯＬ－１細胞の増殖を誘導するそれらの能力により示される刺激能力を有していた。
【0169】
実施例３．抗ＦＬＴ３参照抗体類似体のクローニング
材料及び方法
表６中の抗体類似体の重鎖及び軽鎖可変ドメインをコードするアミノ酸配列を、列挙する特許出願から得た。タンパク質配列を、ヒトコドンの使用により、ＤＮＡ配列に逆翻訳した。対応するＤＮＡ配列を遺伝子合成し、ヒト重鎖又は軽鎖の定常領域を含む発現ベクター中にクローニングし、全長抗体鎖の発現をもたらした。発現用に選択されたヒト抗体アイソタイプを抗体フォーマット列中に列挙している。ＣＨＯ細胞に、標準的なタンパク質発現系を使用して、結果として得られた発現プラスミドをトランスフェクトした。対応する抗体上清を、標準的なプロテインＡ精製カラムクロマトグラフィーを使用して精製した。
材料及び方法
表６中の抗体類似体の重鎖及び軽鎖可変ドメインをコードするアミノ酸配列を、列挙する特許出願から得た。タンパク質配列を、ヒトコドンの使用により、ＤＮＡ配列に逆翻訳した。対応するＤＮＡ配列を遺伝子合成し、ヒト重鎖又は軽鎖の定常領域を含む発現ベクター中にクローニングし、全長抗体鎖の発現をもたらした。発現用に選択されたヒト抗体アイソタイプを抗体フォーマット列中に列挙している。ＣＨＯ細胞に、標準的なタンパク質発現系を使用して、結果として得られた発現プラスミドをトランスフェクトした。対応する抗体上清を、標準的なプロテインＡ精製カラムクロマトグラフィーを使用して精製した。
【表6】
【0170】
実施例４．ヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質をトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞への抗ＦＬＴ３抗体の直接結合
この実施例は、細胞上で一過性に発現されたヒト、マウス、及びカニクイザルＦＬＴ３タンパク質への抗ＦＬＴ３抗体の結合を実証する。
この実施例は、細胞上で一過性に発現されたヒト、マウス、及びカニクイザルＦＬＴ３タンパク質への抗ＦＬＴ３抗体の結合を実証する。
【0171】
材料及び方法
ＣＨＯ－Ｓ細胞上で発現されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質への７つの抗ＦＬＴ３抗体の結合を評価し、ＩＭＣ－ＥＢ１０類似体のものと比較した。
ＣＨＯ－Ｓ細胞上で発現されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質への７つの抗ＦＬＴ３抗体の結合を評価し、ＩＭＣ－ＥＢ１０類似体のものと比較した。
【0172】
抗ＦＬＴ３抗体を、ヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３を一過性に発現するハムスターＣＨＯ－Ｓ細胞株と４℃で３０分間にわたりインキュベートした。細胞を２回洗浄し、その後にＡＦ６４７コンジュゲート二次抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体と追加の２０分間にわたりインキュベートした。洗浄工程後、抗体結合を、ハイスループットフローサイトメーターiQue Screener PLUS（Sartorius）を使用して検出し、各々のウェル中のＡＦ６４７シグナルのＧｅｏＭｅａｎを測定した。すべての濃度を三回アッセイし、１２ポイントの滴定曲線を各々の抗体について作成した。
結果
細胞上に発現されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３への抗体の結合曲線を図２中に示す。アッセイされた抗体は、細胞に提示されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質に異なる効力及び有効性で結合する。
結果
細胞上に発現されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３への抗体の結合曲線を図２中に示す。アッセイされた抗体は、細胞に提示されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質に異なる効力及び有効性で結合する。
【0173】
実施例５．７つの抗ＦＬＴ３抗体によるヒトＦＬＴ３へのＦＬＴ３リガンド結合の遮断
材料及び方法
組換えヒトＦＬＴ３ ＥＣＤ ＨＩＳタグ付き融合受容体（Sino Biological）への抗ＦＬＴ３抗体の結合及びＦＬＴ３Ｌのそれらの遮断／非遮断を、OCTET ＱＫ３８４機器（ForteBio）でのバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により測定した。ＨＩＳタグ付きＦＬＴ３を、事前に平衡化したＡｎｔｉ－Ｐｅｎｔａ－ＨＩＳ（ＨＩＳ１Ｋ）Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ（ForteBio）上に６００秒間にわたり固定化し、５００nM 抗ＦＬＴ３抗体の６００秒間の会合、ならびに１００nM ＦＬＴ３Ｌ及び５００nM ＭＡＢの３００秒間の会合が続いた。固定化ＦＬＴ３への総ＦＬＴ３Ｌ結合応答を並行して測定した。データをForteBio Data Analysis（８．２）プログラムにおいて分析した。
材料及び方法
組換えヒトＦＬＴ３ ＥＣＤ ＨＩＳタグ付き融合受容体（Sino Biological）への抗ＦＬＴ３抗体の結合及びＦＬＴ３Ｌのそれらの遮断／非遮断を、OCTET ＱＫ３８４機器（ForteBio）でのバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により測定した。ＨＩＳタグ付きＦＬＴ３を、事前に平衡化したＡｎｔｉ－Ｐｅｎｔａ－ＨＩＳ（ＨＩＳ１Ｋ）Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ（ForteBio）上に６００秒間にわたり固定化し、５００nM 抗ＦＬＴ３抗体の６００秒間の会合、ならびに１００nM ＦＬＴ３Ｌ及び５００nM ＭＡＢの３００秒間の会合が続いた。固定化ＦＬＴ３への総ＦＬＴ３Ｌ結合応答を並行して測定した。データをForteBio Data Analysis（８．２）プログラムにおいて分析した。
【0174】
結果
抗体１７５４３、１７４９４、１７６７９、１７６６７、１７５２６、１７５６６、１７４９７、及びコントロールｍＡｂの遮断プロファイルを図３中に示す。抗ＦＬＴ３ｍＡｂのいずれも、ＦＬＴ３へのリガンドの結合を完全に遮断したＩＭＣ－ＥＢ１０類似体を除き、飽和条件でＦＬＴ３へのＦＬＴ３Ｌの結合を遮断しなかった。
抗体１７５４３、１７４９４、１７６７９、１７６６７、１７５２６、１７５６６、１７４９７、及びコントロールｍＡｂの遮断プロファイルを図３中に示す。抗ＦＬＴ３ｍＡｂのいずれも、ＦＬＴ３へのリガンドの結合を完全に遮断したＩＭＣ－ＥＢ１０類似体を除き、飽和条件でＦＬＴ３へのＦＬＴ３Ｌの結合を遮断しなかった。
【0175】
実施例６．７つの抗ＦＬＴ３抗体による、ヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質をトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞へのＦＬＴ３リガンドＦｃ結合の遮断
この実施例は、抗ＦＬＴ３抗体による、ＣＨＯ－Ｓ細胞上で発現されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質へのＦＬＴ３リガンドＦｃタンパク質結合の遮断を記載する。
この実施例は、抗ＦＬＴ３抗体による、ＣＨＯ－Ｓ細胞上で発現されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質へのＦＬＴ３リガンドＦｃタンパク質結合の遮断を記載する。
【0176】
材料及び方法
ＣＨＯ－Ｓ細胞上で発現されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質への７つの抗ＦＬＴ３抗体の結合を評価し、ＦＬＴ３リガンド－Ｆｃタンパク質の存在においてＩＭＣ－ＥＢ１０類似体のそれと比較した。
ＣＨＯ－Ｓ細胞上で発現されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質への７つの抗ＦＬＴ３抗体の結合を評価し、ＦＬＴ３リガンド－Ｆｃタンパク質の存在においてＩＭＣ－ＥＢ１０類似体のそれと比較した。
【0177】
抗ＦＬＴ３抗体を、ヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３を一過性に発現するハムスターＣＨＯ－Ｓ細胞株と４℃で３０分間にわたりインキュベートした。細胞を２回洗浄し、その後にＡＦ６４７コンジュゲートＦＬＴ３リガンドＦｃと追加の２０分間にわたりインキュベートした。洗浄工程後、ＡＦ６４７コンジュゲートＦＬＴ３リガンドＦｃタンパク質の残留結合を、ハイスループットフローサイトメーターiQue Screener PLUS（Sartorius）を使用して検出し、各々のウェル中のＡＦ６４７シグナルのＧｅｏＭｅａｎを測定した。すべての濃度を三回アッセイし、１２ポイントの滴定曲線を各々の抗体について作成した。
【0178】
結果
細胞上に発現されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３への抗体の遮断曲線を図４中に示す。アッセイされた抗体によって、細胞に提示されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質へのＡＦ６４７コンジュゲートＦＬＴ３Ｌ－Ｆｃタンパク質の結合は、テストしたいずれの濃度でも遮断されなかった。ＩＭＣ－ＥＢ１０類似体抗体によって、細胞に提示されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質へのＡＦ６４７コンジュゲートＦＬＴ３リガンドＦｃタンパク質の結合が部分的に遮断された。
細胞上に発現されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３への抗体の遮断曲線を図４中に示す。アッセイされた抗体によって、細胞に提示されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質へのＡＦ６４７コンジュゲートＦＬＴ３Ｌ－Ｆｃタンパク質の結合は、テストしたいずれの濃度でも遮断されなかった。ＩＭＣ－ＥＢ１０類似体抗体によって、細胞に提示されたヒト、カニクイザル、又はマウスＦＬＴ３タンパク質へのＡＦ６４７コンジュゲートＦＬＴ３リガンドＦｃタンパク質の結合が部分的に遮断された。
【0179】
実施例７．ＥＯＬ－１増殖アッセイにおける抗ＦＬＴ３抗体のインビトロ機能活性
この実施例では、用量依存的アゴニスト活性を実証する目的で、７つの抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のインビトロ機能評価を記載する。抗体を、ＦＬＴ３発現がん細胞株ＥＯＬ－１の増殖を刺激するそれらの能力について評価した。ＦＬＴ３リガンドを比較のために含めた。
この実施例では、用量依存的アゴニスト活性を実証する目的で、７つの抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のインビトロ機能評価を記載する。抗体を、ＦＬＴ３発現がん細胞株ＥＯＬ－１の増殖を刺激するそれらの能力について評価した。ＦＬＴ３リガンドを比較のために含めた。
【0180】
材料及び方法
７つの抗ＦＬＴ３抗体を、ＦＬＴ３発現がん細胞株ＥＯＬ－１の増殖を誘導するそれらの能力についてインビトロでさらに詳細に評価した。ＥＯＬ－１細胞を、０．５%ＦＢＳ及び１%Ｐ／Ｓを添加したRPMI 1640 Glutamax培地中に播種し、２５μg/mLから開始する、示した抗体の２倍滴定で５日間にわたりインキュベートした。１μg/mLから開始するＦＬＴ３リガンドの２倍滴定を比較のために含めた。細胞増殖を、製造元の指示に従ってＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Roche）を使用して定量化した。
７つの抗ＦＬＴ３抗体を、ＦＬＴ３発現がん細胞株ＥＯＬ－１の増殖を誘導するそれらの能力についてインビトロでさらに詳細に評価した。ＥＯＬ－１細胞を、０．５%ＦＢＳ及び１%Ｐ／Ｓを添加したRPMI 1640 Glutamax培地中に播種し、２５μg/mLから開始する、示した抗体の２倍滴定で５日間にわたりインキュベートした。１μg/mLから開始するＦＬＴ３リガンドの２倍滴定を比較のために含めた。細胞増殖を、製造元の指示に従ってＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Roche）を使用して定量化した。
【0181】
結果
抗ＦＬＴ３抗体での処理後のＥＯＬ－１細胞の増殖を図５に示す。テストした全ての７つの抗体が、ＥＯＬ－１細胞の増殖を誘導するそれらの能力により示されるように、用量依存的な刺激能力を実証した。
抗ＦＬＴ３抗体での処理後のＥＯＬ－１細胞の増殖を図５に示す。テストした全ての７つの抗体が、ＥＯＬ－１細胞の増殖を誘導するそれらの能力により示されるように、用量依存的な刺激能力を実証した。
【0182】
実施例８．細胞増殖アッセイにおける異なるＩｇＧフォーマットでの抗ＦＬＴ３抗体のインビトロ機能活性
この実施例は、用量依存的アゴニスト活性を実証する目的で、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットのいずれかの抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のインビトロ機能評価を実証する。抗体を、ＦＬＴ３発現がん細胞株ＥＯＬ－１及びＯＣＩ－ＡＭＬ５の増殖を刺激するそれらの能力について評価した。
この実施例は、用量依存的アゴニスト活性を実証する目的で、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットのいずれかの抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のインビトロ機能評価を実証する。抗体を、ＦＬＴ３発現がん細胞株ＥＯＬ－１及びＯＣＩ－ＡＭＬ５の増殖を刺激するそれらの能力について評価した。
【0183】
材料及び方法
ＥＯＬ－１及びＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞を、０．５% ＦＢＳ及び１% Ｐ／Ｓを添加したRPMI 1640 Glutamax培地中に播種し、２５μg/mLから開始する、示した抗体の２倍滴定で５日間にわたりインキュベートした。細胞増殖を、製造元の指示に従ってＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Roche）を使用して定量化した。
結果
抗ＦＬＴ３抗体での処理後のＥＯＬ－１細胞及びＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞の増殖をそれぞれ図６Ａ及び６Ｂ中に示す。選択した抗体のＩｇＧ１－ＬＡＬＡ及びＩｇＧ２アイソタイプの両方が、ＥＯＬ－１細胞株及びＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞株の両方の増殖を誘導するそれらの能力により示されるように、用量依存的な刺激能力を実証した。
ＥＯＬ－１及びＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞を、０．５% ＦＢＳ及び１% Ｐ／Ｓを添加したRPMI 1640 Glutamax培地中に播種し、２５μg/mLから開始する、示した抗体の２倍滴定で５日間にわたりインキュベートした。細胞増殖を、製造元の指示に従ってＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Roche）を使用して定量化した。
結果
抗ＦＬＴ３抗体での処理後のＥＯＬ－１細胞及びＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞の増殖をそれぞれ図６Ａ及び６Ｂ中に示す。選択した抗体のＩｇＧ１－ＬＡＬＡ及びＩｇＧ２アイソタイプの両方が、ＥＯＬ－１細胞株及びＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞株の両方の増殖を誘導するそれらの能力により示されるように、用量依存的な刺激能力を実証した。
【0184】
実施例９．初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖に対する抗ＦＬＴ３抗体の効果
この実施例では、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞におけるアゴニスト活性を検証する目的で、７つの抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体、ならびにＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットでの選択された抗体のインビトロ機能評価を記載する。抗体を、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を刺激するそれらの能力について評価した。ＦＬＴ３リガンドを比較のために含めた。
この実施例では、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞におけるアゴニスト活性を検証する目的で、７つの抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体、ならびにＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットでの選択された抗体のインビトロ機能評価を記載する。抗体を、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を刺激するそれらの能力について評価した。ＦＬＴ３リガンドを比較のために含めた。
【0185】
材料及び方法
初代ヒト骨髄由来ＣＤ３４＋幹細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得た。ＣＤ３４＋幹細胞を、５０ng/mLトロンボポエチン（ＴＰＯ）及び２５ng/mL ＩＬ－３を添加した造血前駆細胞（ＨＰＣ）増殖培地ＤＸＦ（PromoCell）中に播種し、示した抗体（２５μg/ mL）又はＦＬＴ３リガンド（２５０ng/mL）と７日間にわたりインキュベートした。細胞増殖を、製造元の指示に従ってＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Roche）を使用して定量化した。
初代ヒト骨髄由来ＣＤ３４＋幹細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得た。ＣＤ３４＋幹細胞を、５０ng/mLトロンボポエチン（ＴＰＯ）及び２５ng/mL ＩＬ－３を添加した造血前駆細胞（ＨＰＣ）増殖培地ＤＸＦ（PromoCell）中に播種し、示した抗体（２５μg/ mL）又はＦＬＴ３リガンド（２５０ng/mL）と７日間にわたりインキュベートした。細胞増殖を、製造元の指示に従ってＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Roche）を使用して定量化した。
【0186】
結果
抗ＦＬＴ３抗体での処理後の初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を図７中に示す。全てのテストした７つの抗ＦＬＴ３抗体が、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を誘導したことは明らかであり、それらの刺激能力が確認された（左パネル）。ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ及びＩｇＧ２フォーマットでの選択した抗体はまた、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を誘導した（右パネル）。ＦＬＴ３リガンドを陽性コントロールとして含めた。
抗ＦＬＴ３抗体での処理後の初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を図７中に示す。全てのテストした７つの抗ＦＬＴ３抗体が、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を誘導したことは明らかであり、それらの刺激能力が確認された（左パネル）。ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ及びＩｇＧ２フォーマットでの選択した抗体はまた、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の増殖を誘導した（右パネル）。ＦＬＴ３リガンドを陽性コントロールとして含めた。
【0187】
実施例１０．ヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞の分化に対する抗ＦＬＴ３抗体の効果
この実施例は、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞におけるアゴニスト活性を検証する目的で、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ及びＩｇＧ２フォーマットでの２つの抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のインビトロ機能評価を記載する。抗体を、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の分化を誘導するそれらの能力について評価した。ＦＬＴ３リガンドを比較のために含めた。
この実施例は、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞におけるアゴニスト活性を検証する目的で、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ及びＩｇＧ２フォーマットでの２つの抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のインビトロ機能評価を記載する。抗体を、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の分化を誘導するそれらの能力について評価した。ＦＬＴ３リガンドを比較のために含めた。
【0188】
材料及び方法
初代ヒト骨髄由来ＣＤ３４＋幹細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得た。ＣＤ３４＋幹細胞を、１０% ＦＢＳ、１% ＰｅｎＳｔｒｅｐ、１０mM ＨＥＰＥＳ、２０μM ２－メルカプトエタノール、２０ng/mL ＩＬ－３、２０ng/mL ＧＭ－ＣＳＦ、及び２０ng/mL ＩＬ－４を含むＩＭＤＭ培地中に播種した。その後、抗ＦＬＴ３抗体（２５μg/mL）又はＦＬＴ３リガンド（２５０ng/mL）を培養物に加えて、細胞を２週間にわたりインキュベートした。サプリメント及び抗ＦＬＴ３抗体又はＦＬＴ３リガンドを含む新鮮な培地を、２週間の培養の間に２回加えた。細胞を収集し、ＣＤ１４及びＣＤ１ｃの発現をフローサイトメトリーにより分析した。簡単には、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、Human BD Fc Block及びZombie Aqua FixableViability色素（死細胞マーカー）で、４℃で２０分間にわたり染色した。その後、細胞を洗浄し、細胞表面マーカーに対する抗体（抗ＣＤ１４－ＦＩＴＣ、抗ＣＤ１ｃ－ＰＥ－ＣＦ５９４、抗ＣＤ１１ｃ－ＢＶ４２１、抗ＣＤ１２３－ＰＥ、抗ＣＤ１４１－ＰｅｒＣＰＣｙ５．５）で、暗所において４℃で３０分間にわたり染色した。２回の最終洗浄後、細胞を、BD FACSCelestaフローサイトメーター及びFacsDivaソフトウェアを使用して分析した。データ分析を、GraphPad Prism 5.0を使用して実施した。
初代ヒト骨髄由来ＣＤ３４＋幹細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得た。ＣＤ３４＋幹細胞を、１０% ＦＢＳ、１% ＰｅｎＳｔｒｅｐ、１０mM ＨＥＰＥＳ、２０μM ２－メルカプトエタノール、２０ng/mL ＩＬ－３、２０ng/mL ＧＭ－ＣＳＦ、及び２０ng/mL ＩＬ－４を含むＩＭＤＭ培地中に播種した。その後、抗ＦＬＴ３抗体（２５μg/mL）又はＦＬＴ３リガンド（２５０ng/mL）を培養物に加えて、細胞を２週間にわたりインキュベートした。サプリメント及び抗ＦＬＴ３抗体又はＦＬＴ３リガンドを含む新鮮な培地を、２週間の培養の間に２回加えた。細胞を収集し、ＣＤ１４及びＣＤ１ｃの発現をフローサイトメトリーにより分析した。簡単には、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、Human BD Fc Block及びZombie Aqua FixableViability色素（死細胞マーカー）で、４℃で２０分間にわたり染色した。その後、細胞を洗浄し、細胞表面マーカーに対する抗体（抗ＣＤ１４－ＦＩＴＣ、抗ＣＤ１ｃ－ＰＥ－ＣＦ５９４、抗ＣＤ１１ｃ－ＢＶ４２１、抗ＣＤ１２３－ＰＥ、抗ＣＤ１４１－ＰｅｒＣＰＣｙ５．５）で、暗所において４℃で３０分間にわたり染色した。２回の最終洗浄後、細胞を、BD FACSCelestaフローサイトメーター及びFacsDivaソフトウェアを使用して分析した。データ分析を、GraphPad Prism 5.0を使用して実施した。
【0189】
結果
２つの抗ＦＬＴ３抗体のアゴニスト活性を、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の分化を誘導するそれらの能力を通じて評価した。テストした抗ＦＬＴ３抗体は両方が、未処理コントロールと比較して、ＣＤ１４＋（図８Ａ）及びＣＤ１ｃ＋（図８Ｂ）細胞、ならびに樹状細胞亜集団（ｐＤＣ、ｃＤＣ１、及びｃＤＣ２）（図８Ｃ）の頻度を増加させるそれらの能力により示されるように、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の分化を誘導することができた。ＦＬＴ３リガンドを陽性コントロールとして含めた。
２つの抗ＦＬＴ３抗体のアゴニスト活性を、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の分化を誘導するそれらの能力を通じて評価した。テストした抗ＦＬＴ３抗体は両方が、未処理コントロールと比較して、ＣＤ１４＋（図８Ａ）及びＣＤ１ｃ＋（図８Ｂ）細胞、ならびに樹状細胞亜集団（ｐＤＣ、ｃＤＣ１、及びｃＤＣ２）（図８Ｃ）の頻度を増加させるそれらの能力により示されるように、初代ヒトＣＤ３４＋幹細胞の分化を誘導することができた。ＦＬＴ３リガンドを陽性コントロールとして含めた。
【0190】
実施例１１．Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける抗ＦＬＴ３抗体のインビボ機能活性
この実施例は、免疫適格性マウスにおいて樹状細胞の増殖及び動員を誘導するその能力を検証する目的で、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットでの抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のインビボ機能評価を記載する。ＦＬＴ３リガンドを比較のために含めた。
この実施例は、免疫適格性マウスにおいて樹状細胞の増殖及び動員を誘導するその能力を検証する目的で、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットでの抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のインビボ機能評価を記載する。ＦＬＴ３リガンドを比較のために含めた。
【0191】
材料及び方法
４０匹の雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを、各々において５匹を伴う８つの処置群に分けた。処置は０日目に開始し、１３日目に終了した。マウスはビヒクル；０．１mg/kg、１mg/kg、又は１０mg/kgでの抗ＦＬＴ３抗体を週２回の腹腔内注射；又は週５回の１０μgのＦＬＴ３Ｌの腹腔内注射を受けた。終了時に、全てのマウスからの脾臓を採取し、フローサイトメトリーにより分析した。細胞を抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ抗体、抗ＣＤ３７０－ＰＥ抗体、抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５抗体、抗ＣＤ１１ｂ－ＰＥ－Ｃｙ７抗体、抗Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ－ＡＰＣ－Ｃｙ抗体、抗ＣＤ１１ｃ－ＢＶ４２１抗体、抗Ｌｙ６Ｃ－ＦＩＴＣ抗体、抗ＣＤ３－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５抗体、及び抗ＣＤ４５Ｒ－ＡＰＣ抗体で染色した。Zombie Aquaを生／死細胞の識別のために使用した。細胞を、BD FACSVerseフローサイトメーター及びFacsDivaソフトウェアを使用して分析した。データ分析を、GraphPad Prism 5.0を使用して実施した。
４０匹の雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを、各々において５匹を伴う８つの処置群に分けた。処置は０日目に開始し、１３日目に終了した。マウスはビヒクル；０．１mg/kg、１mg/kg、又は１０mg/kgでの抗ＦＬＴ３抗体を週２回の腹腔内注射；又は週５回の１０μgのＦＬＴ３Ｌの腹腔内注射を受けた。終了時に、全てのマウスからの脾臓を採取し、フローサイトメトリーにより分析した。細胞を抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ抗体、抗ＣＤ３７０－ＰＥ抗体、抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５抗体、抗ＣＤ１１ｂ－ＰＥ－Ｃｙ７抗体、抗Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ－ＡＰＣ－Ｃｙ抗体、抗ＣＤ１１ｃ－ＢＶ４２１抗体、抗Ｌｙ６Ｃ－ＦＩＴＣ抗体、抗ＣＤ３－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５抗体、及び抗ＣＤ４５Ｒ－ＡＰＣ抗体で染色した。Zombie Aquaを生／死細胞の識別のために使用した。細胞を、BD FACSVerseフローサイトメーター及びFacsDivaソフトウェアを使用して分析した。データ分析を、GraphPad Prism 5.0を使用して実施した。
【0192】
結果
ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットでの抗ＦＬＴ３抗体のインビボアゴニスト活性を、３つの異なる用量で免疫適格性マウスにおいて樹状細胞（ＤＣ）動員を誘導するその能力に関して評価した。亜集団の大半のＤＣ動員を誘導するためのＩｇＧ１－ＬＡＬＡ及びＩｇＧ２フォーマットでの抗ＦＬＴ３抗体の最も効率的な用量は、ビヒクルと比較した細胞数における増加倍数により実証されるように、１０mg/kgであった（図９Ａ及び９Ｂ）。ＦＬＴ３リガンドを陽性コントロールとして含めた。
ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットでの抗ＦＬＴ３抗体のインビボアゴニスト活性を、３つの異なる用量で免疫適格性マウスにおいて樹状細胞（ＤＣ）動員を誘導するその能力に関して評価した。亜集団の大半のＤＣ動員を誘導するためのＩｇＧ１－ＬＡＬＡ及びＩｇＧ２フォーマットでの抗ＦＬＴ３抗体の最も効率的な用量は、ビヒクルと比較した細胞数における増加倍数により実証されるように、１０mg/kgであった（図９Ａ及び９Ｂ）。ＦＬＴ３リガンドを陽性コントロールとして含めた。
【0193】
実施例１２．ＣＤ３４ヒト化マウスにおける抗ＦＬＴ３抗体のインビボ機能活性
この実施例は、ヒトＣＤ３４＋幹細胞で再構成された免疫不全マウス（「ＣＤ３４ヒト化マウス」）において樹状細胞動員を誘導するその能力を検証する目的での、抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のインビボ機能評価を記載する。ＦＬＴ３リガンドを比較のために含めた。
この実施例は、ヒトＣＤ３４＋幹細胞で再構成された免疫不全マウス（「ＣＤ３４ヒト化マウス」）において樹状細胞動員を誘導するその能力を検証する目的での、抗ＦＬＴ３モノクローナル抗体のインビボ機能評価を記載する。ＦＬＴ３リガンドを比較のために含めた。
【0194】
材料及び方法
３６匹の雌ＮＯＤ／Ｓｈｉ－ＳＣＩＤ／ＩＬ－２Ｒγヌル（ＮＣＧ）マウスを、ヒト臍帯血から単離した造血幹細胞（ＣＤ３４＋）を使用してヒト化した。２５%を上回るヒト化率（ｈＣＤ４５／総ＣＤ４５）を伴うマウスだけを試験のために使用した。マウスを、ヒト化率及びＣＤ３４ドナーに基づいて、各々の群中に６匹の動物を伴う６つの処置群に無作為化した。処置を０日目に開始し、１１日目に終了した。マウスは、週２回のビヒクル、１又は１０mg/kgの抗ＦＬＴ３抗体の腹腔内注射、あるいは週５回の１０μgのＦＬＴ３Ｌの腹腔内注射を受けた。終了時に、全てのマウスからの脾臓及び骨髄を採取し、フローサイトメトリーにより分析した。細胞を抗ＣＤ１ｃ－ＢＶ４２１抗体、抗ＣＤ１１ｃ－ＢＶ５１０抗体、抗ＣＤ１４－ＢＶ６５０抗体、抗ＣＤ１２３－ＦＩＴＣ抗体、抗ＣＤ３－ＰｅｒＣＰＶｉｏ７００抗体、抗ＣＤ２０－ＰｅｒＣＰＶｉｏ７００抗体、抗ＣＤ５６－ＰｅｒＣＰＶｉｏ７００抗体、抗ＣＤ３０１－ＰＥ抗体、抗ＣＤ１４１－ＰＥ－Ｖｉｏ６１５抗体、抗ｈＣＤ４５－ＰＥ－Ｖｉｏ７７０抗体、抗ＣＤ３７０－ＡＰＣ抗体、及び抗ＨＬＡ－ＤＲ－ＡＰＣ－Ｃｙ７抗体で染色した。Fixable Yellowを生／死細胞の識別のために使用した。細胞を、Attune NxTフローサイトメーター及びFacsDivaソフトウェアを使用して分析した。データ分析を、GraphPad Prism 5.0を使用して実施した。
３６匹の雌ＮＯＤ／Ｓｈｉ－ＳＣＩＤ／ＩＬ－２Ｒγヌル（ＮＣＧ）マウスを、ヒト臍帯血から単離した造血幹細胞（ＣＤ３４＋）を使用してヒト化した。２５%を上回るヒト化率（ｈＣＤ４５／総ＣＤ４５）を伴うマウスだけを試験のために使用した。マウスを、ヒト化率及びＣＤ３４ドナーに基づいて、各々の群中に６匹の動物を伴う６つの処置群に無作為化した。処置を０日目に開始し、１１日目に終了した。マウスは、週２回のビヒクル、１又は１０mg/kgの抗ＦＬＴ３抗体の腹腔内注射、あるいは週５回の１０μgのＦＬＴ３Ｌの腹腔内注射を受けた。終了時に、全てのマウスからの脾臓及び骨髄を採取し、フローサイトメトリーにより分析した。細胞を抗ＣＤ１ｃ－ＢＶ４２１抗体、抗ＣＤ１１ｃ－ＢＶ５１０抗体、抗ＣＤ１４－ＢＶ６５０抗体、抗ＣＤ１２３－ＦＩＴＣ抗体、抗ＣＤ３－ＰｅｒＣＰＶｉｏ７００抗体、抗ＣＤ２０－ＰｅｒＣＰＶｉｏ７００抗体、抗ＣＤ５６－ＰｅｒＣＰＶｉｏ７００抗体、抗ＣＤ３０１－ＰＥ抗体、抗ＣＤ１４１－ＰＥ－Ｖｉｏ６１５抗体、抗ｈＣＤ４５－ＰＥ－Ｖｉｏ７７０抗体、抗ＣＤ３７０－ＡＰＣ抗体、及び抗ＨＬＡ－ＤＲ－ＡＰＣ－Ｃｙ７抗体で染色した。Fixable Yellowを生／死細胞の識別のために使用した。細胞を、Attune NxTフローサイトメーター及びFacsDivaソフトウェアを使用して分析した。データ分析を、GraphPad Prism 5.0を使用して実施した。
【0195】
結果
ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットでの抗ＦＬＴ３抗体のインビボアゴニスト活性を、２つの異なる用量でＣＤ３４ヒト化マウスにおいてＤＣ動員を誘導するその能力に関して評価した。両方の用量での両方のフォーマットにおいて、抗体は、ビヒクルと比較した増加倍数で実証されるように、脾臓（図１０Ａ及び１０Ｂ）及び骨髄（図１０Ｃ及び１０Ｄ）におけるサブセットの大半のＤＣ動員を誘導することができた。ＦＬＴ３リガンドを陽性コントロールとして含めた。
ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ又はＩｇＧ２フォーマットでの抗ＦＬＴ３抗体のインビボアゴニスト活性を、２つの異なる用量でＣＤ３４ヒト化マウスにおいてＤＣ動員を誘導するその能力に関して評価した。両方の用量での両方のフォーマットにおいて、抗体は、ビヒクルと比較した増加倍数で実証されるように、脾臓（図１０Ａ及び１０Ｂ）及び骨髄（図１０Ｃ及び１０Ｄ）におけるサブセットの大半のＤＣ動員を誘導することができた。ＦＬＴ３リガンドを陽性コントロールとして含めた。
【0196】
実施例１３．ヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞における遺伝子発現に対する抗ＦＬＴ３抗体及びＦＬＴ３リガンドの効果
この実施例は、アゴニスト抗ＦＬＴ３抗体を用いたヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞のインビトロ刺激によって、ＦＬＴ３リガンドと類似の遺伝子発現における変化が誘導されることを実証し、類似の刺激経路のエビデンスを提供する。
この実施例は、アゴニスト抗ＦＬＴ３抗体を用いたヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞のインビトロ刺激によって、ＦＬＴ３リガンドと類似の遺伝子発現における変化が誘導されることを実証し、類似の刺激経路のエビデンスを提供する。
【0197】
材料及び方法
初代ヒト骨髄由来ＣＤ３４＋幹細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得た。ＣＤ３４＋幹細胞を、１０% ＦＢＳ、１% PenStrep、１０mM ＨＥＰＥＳ、２０μM ２－メルカプトエタノール、２０ng/ml ＩＬ－３、２０ng/ml ＧＭ－ＣＳＦ、及び２０ng/ml ＩＬ－４を含むＩＭＤＭ培地中に播種した。その後、抗ＦＬＴ３抗体（２５μg/mL）又はＦＬＴ３リガンド（２５０ng/ml）を培養物に加えて、細胞を２週間にわたりインキュベートした。サプリメント及び抗ＦＬＴ３抗体又はＦＬＴ３リガンドを含む新鮮な培地を、２週間の培養の間に２回加えた。細胞を収集し、ＲＮＡを、製造元の指示に従ってRNeasy Micro kit（Qiagen）を使用して抽出した。１００ngのＲＮＡを、nCounter SPRINT Profilerでの遺伝子発現分析用のインプットとして使用した。遺伝子発現を、nCounter Myeloid Innate Immunity Panel（ＸＴ＿ＰＧＸ＿ｈｕＶ２＿Ｍｙｅｌｏｉｄ、NanoString Technologies）を使用して分析し、nSolver Analysisソフトウェアをデータ品質管理、標準化、及び遺伝子発現差分析のために使用した。スピアマンの順位相関を使用し、試験した遺伝子間での関連性を分析した。
初代ヒト骨髄由来ＣＤ３４＋幹細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得た。ＣＤ３４＋幹細胞を、１０% ＦＢＳ、１% PenStrep、１０mM ＨＥＰＥＳ、２０μM ２－メルカプトエタノール、２０ng/ml ＩＬ－３、２０ng/ml ＧＭ－ＣＳＦ、及び２０ng/ml ＩＬ－４を含むＩＭＤＭ培地中に播種した。その後、抗ＦＬＴ３抗体（２５μg/mL）又はＦＬＴ３リガンド（２５０ng/ml）を培養物に加えて、細胞を２週間にわたりインキュベートした。サプリメント及び抗ＦＬＴ３抗体又はＦＬＴ３リガンドを含む新鮮な培地を、２週間の培養の間に２回加えた。細胞を収集し、ＲＮＡを、製造元の指示に従ってRNeasy Micro kit（Qiagen）を使用して抽出した。１００ngのＲＮＡを、nCounter SPRINT Profilerでの遺伝子発現分析用のインプットとして使用した。遺伝子発現を、nCounter Myeloid Innate Immunity Panel（ＸＴ＿ＰＧＸ＿ｈｕＶ２＿Ｍｙｅｌｏｉｄ、NanoString Technologies）を使用して分析し、nSolver Analysisソフトウェアをデータ品質管理、標準化、及び遺伝子発現差分析のために使用した。スピアマンの順位相関を使用し、試験した遺伝子間での関連性を分析した。
【0198】
結果
図１１中に示すように、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ（左パネル）及びＩｇＧ２（右パネル）フォーマットの両方でのテストした抗体によって、ＦＬＴ３リガンドと類似の遺伝子発現における変化が誘導された。アゴニスト抗ＦＬＴ３抗体及びＦＬＴ３リガンドにより誘導される遺伝子発現における観察された変化の間の強い相関は、それらが類似の方法でヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞を刺激することを示す。
図１１中に示すように、ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ（左パネル）及びＩｇＧ２（右パネル）フォーマットの両方でのテストした抗体によって、ＦＬＴ３リガンドと類似の遺伝子発現における変化が誘導された。アゴニスト抗ＦＬＴ３抗体及びＦＬＴ３リガンドにより誘導される遺伝子発現における観察された変化の間の強い相関は、それらが類似の方法でヒト初代ＣＤ３４＋幹細胞を刺激することを示す。
【0199】
実施例１４．ヒトＦＬＴ３への抗ＦＬＴ３ Ｆａｂフラグメントの結合動力学
この実施例は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定される、ヒトＦＬＴ３ドメイン１への抗ＦＬＴ３ Ｆａｂフラグメントの結合を評価する。
この実施例は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定される、ヒトＦＬＴ３ドメイン１への抗ＦＬＴ３ Ｆａｂフラグメントの結合を評価する。
【0200】
材料及び方法
ヒトＦＬＴ３ドメイン１をコードするｃＤＮＡ（ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ３６８８８）を合成し、ＣＭＶプロモーター及びヒトＩｇＦｃ配列（残基Ｐ１０１－Ｋ３３０）を含むベクター中にクローニングし、Ｃ末端に対するＩｇＦｃの融合をもたらし、ExpiCHO（商標）発現系において一過性に発現させた。収集後、上清を、Carterra LSAを使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により抗ＦＬＴ３ Ｆａｂへの結合についてテストした。HC200M（Carterra）チップを、アミンカップリングを使用してヤギ抗ヒトＩｇＦｃ（Southern Biotech）により機能化した。チップを、新たに調製した０．４M ＥＤＣ、０．１Mスルホ－ＮＨＳ、及び０．１M ＭＥＳ、ｐＨ５．５（１：１：１ ｖ／ｖ／ｖ）により５分間にわたり活性化し、１０mM酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５中で１０分間にわたり７５μg/mL抗ヒトＩｇＦｃと共役させ、過剰の反応性エステルを１Mエタノールアミン、ｐＨ８．５の注入により３分間にわたりクエンチした。機器を泳動緩衝液（ＰＢＳ ｐＨ７．４、０．０１% Ｔｗｅｅｎ－２０、０．５mg/ml ＢＳＡ）でプライミングした。プライミング及び洗浄後、培養上清中のＦＬＴ３融合タンパク質を、チップの個々のスポット上に１２分間にわたり複製として捕捉した。Ｆａｂ分析物を各々、泳動緩衝液中で調製した。動態分析を、増加濃度で単量体Ｆａｂの動態滴定シリーズを適用することにより実施した。Ｆａｂ会合を５分間にわたり実施し、抗原解離を５分間にわたり記録した。Ｆａｂ注入の各々のサイクル後、表面を０．４５% Ｈ３ＰＯ４、２×２０秒により再生し、泳動緩衝液中で５分間にわたり洗浄した。結合応答を、CarterraのKITソフトウェアツールを使用して、処理及び分析した。処理データを、オンレート（ｋｏｎ又はｋａ）、オフレート（ｋｏｆｆ又はｋｄ）、及び親和性（ＫＤ）定数の算出のために、単純なラングミュア１：１結合モデルに適合した。
ヒトＦＬＴ３ドメイン１をコードするｃＤＮＡ（ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ３６８８８）を合成し、ＣＭＶプロモーター及びヒトＩｇＦｃ配列（残基Ｐ１０１－Ｋ３３０）を含むベクター中にクローニングし、Ｃ末端に対するＩｇＦｃの融合をもたらし、ExpiCHO（商標）発現系において一過性に発現させた。収集後、上清を、Carterra LSAを使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により抗ＦＬＴ３ Ｆａｂへの結合についてテストした。HC200M（Carterra）チップを、アミンカップリングを使用してヤギ抗ヒトＩｇＦｃ（Southern Biotech）により機能化した。チップを、新たに調製した０．４M ＥＤＣ、０．１Mスルホ－ＮＨＳ、及び０．１M ＭＥＳ、ｐＨ５．５（１：１：１ ｖ／ｖ／ｖ）により５分間にわたり活性化し、１０mM酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５中で１０分間にわたり７５μg/mL抗ヒトＩｇＦｃと共役させ、過剰の反応性エステルを１Mエタノールアミン、ｐＨ８．５の注入により３分間にわたりクエンチした。機器を泳動緩衝液（ＰＢＳ ｐＨ７．４、０．０１% Ｔｗｅｅｎ－２０、０．５mg/ml ＢＳＡ）でプライミングした。プライミング及び洗浄後、培養上清中のＦＬＴ３融合タンパク質を、チップの個々のスポット上に１２分間にわたり複製として捕捉した。Ｆａｂ分析物を各々、泳動緩衝液中で調製した。動態分析を、増加濃度で単量体Ｆａｂの動態滴定シリーズを適用することにより実施した。Ｆａｂ会合を５分間にわたり実施し、抗原解離を５分間にわたり記録した。Ｆａｂ注入の各々のサイクル後、表面を０．４５% Ｈ３ＰＯ４、２×２０秒により再生し、泳動緩衝液中で５分間にわたり洗浄した。結合応答を、CarterraのKITソフトウェアツールを使用して、処理及び分析した。処理データを、オンレート（ｋｏｎ又はｋａ）、オフレート（ｋｏｆｆ又はｋｄ）、及び親和性（ＫＤ）定数の算出のために、単純なラングミュア１：１結合モデルに適合した。
【0201】
結果
ヒトＦＬＴ３ドメイン１への抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７５４３、及び１７４９７のＦａｂフラグメントの結合動態を以下の表７中に示す。データを平均値±ＳＥＭ、ｎ＝４として提示する。
ヒトＦＬＴ３ドメイン１への抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７５４３、及び１７４９７のＦａｂフラグメントの結合動態を以下の表７中に示す。データを平均値±ＳＥＭ、ｎ＝４として提示する。
【表7】
【0202】
実施例１５．抗ＦＬＴ３抗体のエピトープビニング
この実施例は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定された対の競合パターンに基づくエピトープビン中への抗ＦＬＴ３抗体のグループ化を記載する。異なるエピトープビンに属する抗体が、ＦＬＴ３ ＥＣＤ上の異なるエピトープを認識する。
この実施例は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定された対の競合パターンに基づくエピトープビン中への抗ＦＬＴ３抗体のグループ化を記載する。異なるエピトープビンに属する抗体が、ＦＬＴ３ ＥＣＤ上の異なるエピトープを認識する。
【0203】
材料及び方法
対の抗体競合の研究を、IBIS-MX96機器（IBIS、オランダ）を使用して、ＳＰＲにより実施した。抗ＦＬＴ３抗体をＰＢＳ中で３μg/mLに希釈し、Continuous Flow Microspotterを使用して１５分間にわたり捕捉することによりG-a-hu-IgG Fc SensEye（登録商標）上にスポットし、ハーセプチン（トラスツズマブ）による残留結合部位の遮断及びSensEye FixItキット（IBIS、オランダ）による架橋が続いた。センサー調製後、抗体競合分析を、古典的なサンドイッチアッセイを使用して実施した。組換えＦＬＴ３－ｈｉｓ ＥＣＤ抗原（Sino Biological Inc）をＰＢＳ、０．０５% Ｔｗｅｅｎ２０、２００nMハーセプチン泳動緩衝液中で希釈し、１００nM濃度で注入し、抗ＦＬＴ３抗体のコンジュゲートアレイにより捕捉した。次に、泳動緩衝液中で１００nMに希釈したＦＬＴ３抗体の各々の個別の注入を実施して、抗体競合パターンを確立した。組換えＦＬＴ３リガンド（１００nM）を、リガンド遮断抗体を特徴付けるための分析物として含めた。データをエピトープビニング２．０（Wasatch、米国）により分析した。
対の抗体競合の研究を、IBIS-MX96機器（IBIS、オランダ）を使用して、ＳＰＲにより実施した。抗ＦＬＴ３抗体をＰＢＳ中で３μg/mLに希釈し、Continuous Flow Microspotterを使用して１５分間にわたり捕捉することによりG-a-hu-IgG Fc SensEye（登録商標）上にスポットし、ハーセプチン（トラスツズマブ）による残留結合部位の遮断及びSensEye FixItキット（IBIS、オランダ）による架橋が続いた。センサー調製後、抗体競合分析を、古典的なサンドイッチアッセイを使用して実施した。組換えＦＬＴ３－ｈｉｓ ＥＣＤ抗原（Sino Biological Inc）をＰＢＳ、０．０５% Ｔｗｅｅｎ２０、２００nMハーセプチン泳動緩衝液中で希釈し、１００nM濃度で注入し、抗ＦＬＴ３抗体のコンジュゲートアレイにより捕捉した。次に、泳動緩衝液中で１００nMに希釈したＦＬＴ３抗体の各々の個別の注入を実施して、抗体競合パターンを確立した。組換えＦＬＴ３リガンド（１００nM）を、リガンド遮断抗体を特徴付けるための分析物として含めた。データをエピトープビニング２．０（Wasatch、米国）により分析した。
【0204】
結果
図１２は、抗ＦＬＴ３ｍＡｂ１７６６７、１７５６６、１７５２６、及び１７５４３、ＩＭＣ－ＥＢ１０類似体、ならびにエピトープビニング分析から由来するＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）のノードプロットを示す。抗ＦＬＴ３抗体は、３つの別々のグループ、又はビンに分配された。ビン１（薄灰色）は、抗体１７５２６、１７５４３、１７５６６、及び１７６６７を含み、それらは全て互いに交差遮断し、これらの抗体がＦＬＴ３細胞外ドメインの類似のエピトープに結合することを示す。ビン２（灰色）はＩＭＣ－ＥＢ１０類似体からなり、それは、公開データ（米国特許公開２０１１／００９１４７０）と一致してＦＬＴ３Ｌを遮断する。ビン３（白色）は、抗体１７４９７だけからなり、この抗体が分析において他の抗体とは異なるエピトープを認識することを示す。
図１２は、抗ＦＬＴ３ｍＡｂ１７６６７、１７５６６、１７５２６、及び１７５４３、ＩＭＣ－ＥＢ１０類似体、ならびにエピトープビニング分析から由来するＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）のノードプロットを示す。抗ＦＬＴ３抗体は、３つの別々のグループ、又はビンに分配された。ビン１（薄灰色）は、抗体１７５２６、１７５４３、１７５６６、及び１７６６７を含み、それらは全て互いに交差遮断し、これらの抗体がＦＬＴ３細胞外ドメインの類似のエピトープに結合することを示す。ビン２（灰色）はＩＭＣ－ＥＢ１０類似体からなり、それは、公開データ（米国特許公開２０１１／００９１４７０）と一致してＦＬＴ３Ｌを遮断する。ビン３（白色）は、抗体１７４９７だけからなり、この抗体が分析において他の抗体とは異なるエピトープを認識することを示す。
【0205】
結論として、ＩＭＣ－ＥＢ１０類似体を除き、テストした抗体のいずれもＦＬＴ３Ｌを遮断しなかった。抗体１７５２６、１７５４３、１７５６６、及び１７６６７は重複するエピトープに結合する一方で、１７４９７は別のエピトープに結合する。
【0206】
実施例１６．変異誘発及び表面プラズモン共鳴による抗ＦＬＴ３抗体のエピトープマッピング
この実施例は、モノクローナル抗ＦＬＴ３抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７５４３、及び１７４９７により認識されるエピトープが、ＦＬＴ３細胞外ドメイン（ＥＣＤ）上にどのように分布するかを例証する。線状及び立体構造エピトープを変異誘発アプローチ及び表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により特徴付けた。
この実施例は、モノクローナル抗ＦＬＴ３抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７５４３、及び１７４９７により認識されるエピトープが、ＦＬＴ３細胞外ドメイン（ＥＣＤ）上にどのように分布するかを例証する。線状及び立体構造エピトープを変異誘発アプローチ及び表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により特徴付けた。
【0207】
材料及び方法
ヒト及びラット（ドブネズミ）ＦＬＴ３のタンパク質配列をUniProtからダウンロードし（それぞれアクセッション番号Ｐ３６８８８及びＡ０Ａ０Ｇ２ＪＷ５９）、整列させた。線状エピトープをマッピングするために、ヒトＦＬＴ３ ＥＣＤのドメイン１のＦｃ融合タンパク質を生成し、５つのアミノ酸により重複するセグメント中に対応するラットＦＬＴ３配列により順次交換された１０アミノ酸を有する。立体構造エピトープをＦＬＴ３ドメイン１のアラニンスキャン変異誘発により特徴付けた。
ヒト及びラット（ドブネズミ）ＦＬＴ３のタンパク質配列をUniProtからダウンロードし（それぞれアクセッション番号Ｐ３６８８８及びＡ０Ａ０Ｇ２ＪＷ５９）、整列させた。線状エピトープをマッピングするために、ヒトＦＬＴ３ ＥＣＤのドメイン１のＦｃ融合タンパク質を生成し、５つのアミノ酸により重複するセグメント中に対応するラットＦＬＴ３配列により順次交換された１０アミノ酸を有する。立体構造エピトープをＦＬＴ３ドメイン１のアラニンスキャン変異誘発により特徴付けた。
【0208】
ヒトＦＬＴ３ドメイン１をコードするｃＤＮＡを合成し、ＣＭＶプロモーター及びヒトＩｇＦｃ配列（残基Ｐ１０１－Ｋ３３０）を含むベクター中にクローニングし、Ｃ末端に対するＩｇＦｃの融合をもたらした。野生型（ｗｔ）及び変異型ヒトＦＬＴ３ドメイン１Ｆｃ融合コンストラクトを、標準的な遺伝子合成技術により生成して、タンパク質をExpiCHO（商標）発現系において一過性に発現させた。収集後、上清を、Carterra LSAを使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により抗ＦＬＴ３ Ｆａｂへの結合についてテストした。HC200M（Carterra）チップを、アミンカップリングを使用してヤギ抗ヒトＩｇＦｃ（Southern Biotech）により機能化した。チップを、新たに調製した０．４M ＥＤＣ、０．１M スルホ－ＮＨＳ、及び０．１M ＭＥＳ、ｐＨ５．５（１：１：１ ｖ／ｖ／ｖ）により５分間にわたり活性化し、１０mM 酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５中で１０分間にわたり７５μg/mL抗ヒトＩｇＦｃと共役させ、過剰の反応性エステルを１Mエタノールアミン、ｐＨ８．５の注入により３分間にわたりクエンチした。機器を泳動緩衝液（ＰＢＳ ｐＨ７．４、０．０１% Ｔｗｅｅｎ－２０、０．５mg/ml ＢＳＡ）でプライミングした。プライミング及び洗浄後、培養上清中のＦＬＴ３融合タンパク質を、チップの個々のスポット上に１２分間にわたりデュプリケートとして捕捉した。Ｆａｂ分析物を各々、泳動緩衝液中で調製した。動態分析を、増加濃度で単量体Ｆａｂの動態滴定シリーズを適用することにより実施した。Ｆａｂ会合を５分間にわたり実施し、抗原解離を５分間にわたり記録した。Ｆａｂ注入の各々のサイクル後、表面を０．４５% Ｈ３ＰＯ４、２×２０秒により再生し、泳動緩衝液中で５分間にわたり洗浄した。結合応答を、CarterraのKITソフトウェアツールを使用して、処理及び分析した。処理データを、オンレート（ｋｏｎ又はｋａ）、オフレート（ｋｏｆｆ又はｋｄ）、及び親和性（ＫＤ）定数の算出のために、単純なラングミュア１：１結合モデルに適合した。全てのＦａｂフラグメントについて共通の不活性タンパク質を生成する変異を、選択解除した。結合の有意な喪失を起こすアミノ酸を同定するために、野生型ヒトＦＬＴ３と比較して結合親和性において少なくとも５倍減少した、及び／又は３を上回るｚスコアを有するとのカットオフを使用して、エピトープを定義した。
【0209】
結果
抗ＦＬＴ３抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７５４３、及び１７４９７の線状及び立体構造エピトープを表８中に示す。
抗ＦＬＴ３抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、１７５４３、及び１７４９７の線状及び立体構造エピトープを表８中に示す。
【表8】
【0210】
ＦＬＴ３の細胞外ドメインは、５つの免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン（Ｄ１～Ｄ５）から成る。この実施例における抗ＦＬＴ３抗体は全て、ＦＬＴ３ Ｄ１に結合した。表８中に示すように、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、及び１７５４３が類似のエピトープに結合した一方で、マウス交差反応性抗体１７４９７は、エピトープビニングにより予測される別のエピトープに結合した（実施例１５）。
【0211】
エピトープをＦＬＴ３リガンド受容体複合体上にマッピングした（ＰＤＢエントリー：３ＱＳ９、図１３）。結晶構造は、ＦＬＴ３ Ｄ３の先端に結合界面を伴うＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）に二価で結合する２つの受容体分子から成る。この複合体は、Ｎ末端Ｄ１が高度に柔軟で、Ｄ１とＤ２の間のリンカー領域周辺に少なくとも２つの異なる方向を有し、タンパク質複合体の残り部分と相互作用しない開環様構造を形成する（Verstrate et al., Blood (2011) 1:60-68）。
【0212】
１７５６６、１７５２６、１７６６７、及び１７５４３のエピトープにおける共通セクションが、Ｄ２の開始直前のＤ１のＣ末端に位置付けられた。この共有セクションはＤ１の内面に位置付けられた一方で、１７４９７のエピトープはＦＬＴ３Ｌに対してＤ１の外面に位置付けられた。リガンド受容体複合体中の各々のＤ１上のエピトープ間の距離は、エピトープの各々について約９０Åから１２０Åであったが（図１３）、これは２つのエピトープへのＩｇＧ分子結合の最適な距離内である（Zhang et al., Nature Communication (2020) 11:3114及びZhang et al., Scientific Reports (2015) 5:9803）。Ｄ１が高度に柔軟性であり、異なる方向に適応できる（Verstrate et al.、上記）ことを考慮すると、これらのエピトープに結合する抗体はＦＬＴ３を二量体化し、ＦＬＴ３リガンドとは無関係な受容体シグナル伝達を活性化することができる可能性が高い。
【0213】
結論として、エピトープマッピング分析によって、抗体１７５６６、１７５２６、１７６６７、及び１７５４３のエピトープがＦＬＴ３ Ｄ１の内面上の残基を共有する一方で、抗体１７４９７がＤ１の外面上の別のエピトープに結合することが示された。ＦＬＴ３ Ｄ１上に位置付けられるエピトープは、アゴニスト抗ＦＬＴ３抗体及び受容体活性化のために最適であるように思われる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図9A】
【図9B】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図10D】
【図11】
【図12】
【図13】
【配列表】
【国際調査報告】