(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-01
(54)【発明の名称】ブチルフタリドおよびその誘導体の使用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/365 20060101AFI20230525BHJP
A61P 25/02 20060101ALI20230525BHJP
A61P 35/00 20060101ALN20230525BHJP
【ＦＩ】
A61K31/365
A61P25/02
A61P35/00
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022557132
(86)(22)【出願日】2021-03-19
(85)【翻訳文提出日】2022-11-17
(86)【国際出願番号】 CN2021081817
(87)【国際公開番号】W WO2021185356
(87)【国際公開日】2021-09-23
(31)【優先権主張番号】202010202588.4
(32)【優先日】2020-03-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202010790778.2
(32)【優先日】2020-08-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202011233563.7
(32)【優先日】2020-11-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522371721
【氏名又は名称】石▲薬▼集▲團▼恩必普▲薬▼▲業▼有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】▲劉▼ 喜宝
(72)【発明者】
【氏名】李 ▲艷▼玲
(72)【発明者】
【氏名】▲劉▼ ▲潔▼茹
(72)【発明者】
【氏名】スチュアート・シー・アプフェル
(72)【発明者】
【氏名】▲馬▼ 玉秀
(72)【発明者】
【氏名】▲呉▼ ▲曉▼娟
(72)【発明者】
【氏名】王 玉青
(72)【発明者】
【氏名】▲楊▼ ▲漢▼▲ユ▼
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086BA17
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA52
4C086MA66
4C086NA06
4C086NA14
4C086ZA20
4C086ZB26
4C086ZB27
(57)【要約】
本発明は、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の、末梢神経障害、特に化学療法誘発性末梢神経障害を予防、緩和または治療するための薬物の製造における使用、並びにブチルフタリドおよびその誘導体が末梢神経障害、特に化学療法誘発性末梢神経障害を予防または治療する方法を提供する。生体内外の研究により、本発明に係る薬物は化学療法薬の腫瘍抑制効果および薬物動態学特性に影響を与えることなく、化学療法薬に起因した末梢神経障害を有効に予防、緩和または治療することができることが示されている。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の、末梢神経障害を予防、緩和または治療するための薬物の製造における、使用。
【請求項2】
前記末梢神経障害は、好ましくは薬物誘発性末梢神経障害であり、より好ましくは化学療法薬誘発性末梢神経障害であることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項3】
前記末梢神経障害を予防、緩和または治療することは、痛み、熱に対する感覚異常、または運動協調能力障害などの化学療法薬誘発性感覚異常および運動障害を予防、緩和または治療することを含むがこれらに限定されないことを特徴とする、請求項１～２のいずれか1項に記載の使用。
【請求項4】
前記薬物が、治療有効量のブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を含むことを特徴とする、請求項１～３のいずれか1項に記載の使用。
【請求項5】
前記薬物は、経口製剤、注射製剤、局所投与製剤、または外用製剤などであり、好ましくは経口製剤および注射製剤である臨床的に許容される製剤に製造されることを特徴とする、請求項１～４のいずれか1項に記載の使用。
【請求項6】
前記薬物は単回投与剤形または分割投与剤形であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか1項に記載の使用。
【請求項7】
前記薬物は経口製剤であり、前記経口製剤は、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ～約５００ｍｇ、または約１ｍｇ～３００ｍｇ、または約１ｍｇ～２００ｍｇ、または約５ｍｇ～１８０ｍｇ、または約１０ｍｇ～１５０ｍｇ、または約３０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約５０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約８０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約９０ｍｇ～１１０ｍｇ、または約１００ｍｇ含むことを特徴とする、請求項１～６のいずれか1項に記載の使用。
【請求項8】
前記経口製剤の１日投与量は、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１，００００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ～約５，０００ｍｇ、または約２０ｍｇ～３，０００ｍｇ、または約３０ｍｇ～２，０００ｍｇ、または約５０ｍｇ～１５００ｍｇ、または約７０ｍｇ～１２００ｍｇ、または約１００ｍｇ～１，０００ｍｇ、または約２００ｍｇ～９００ｍｇ、または約３００ｍｇ～８００ｍｇ、または約４００ｍｇ～７００ｍｇ、または約５００ｍｇ～６００ｍｇ、または約６０ｍｇ～８００ｍｇ、または約６０ｍｇ～６００ｍｇ、または約１００ｍｇ～８００ｍｇ、または約１００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～８００ｍｇ、または約３００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～８００ｍｇであることを特徴とする、請求項７に記載の使用。
【請求項9】
前記経口製剤は、１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、約６０ｍｇ～８００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約６０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、または８００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、約３０ｍｇ～４００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約３０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、または４００ｍｇ投与し、あるいは1日３回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、約２０ｍｇ～３００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約２０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、または３００ｍｇ投与することを特徴とする、請求項８に記載の使用。
【請求項10】
前記薬物は注射製剤であり、前記注射製剤は、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を、ブチルフタリド基準で約０．００１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約０．００５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬ、または約０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬ、または約０．１２ｍｇ／ｍＬ～０．８０ｍｇ／ｍＬ、または約０．１５ｍｇ／ｍＬ～０．５０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは約０．２０ｍｇ／ｍＬ～０．４０ｍｇ／ｍＬ、または約０．２０ｍｇ／ｍＬ～０．３０ｍｇ／ｍＬ、または約０．２５ｍｇ／ｍＬ含むことを特徴とする、請求項１～６のいずれか1項に記載の使用。
【請求項11】
前記注射製剤の１日投与量は、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、好ましくは約５ｍｇ～約５００ｍｇ、または約１０ｍｇ～３００ｍｇ、または約１５ｍｇ～２００ｍｇ、または約２０ｍｇ～１５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～１２０ｍｇ、または約３０ｍｇ～１００ｍｇ、または約３５ｍｇ～９０ｍｇ、または約４０ｍｇ～８０ｍｇ、または約４５ｍｇ～７０ｍｇ、または約５０ｍｇ～６０ｍｇ、または約１ｍｇ～１００ｍｇ、または約２ｍｇ～８０ｍｇ、または約５ｍｇ～７５ｍｇ、または約１０ｍｇ～５０ｍｇ、または約１５ｍｇ～５０ｍｇ、または約２０ｍｇ～５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～７５ｍｇ、または約２５ｍｇ～５０ｍｇであることを特徴とする、請求項１０に記載の使用。
【請求項12】
前記注射製剤は、１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ投与することを特徴とする、請求項１１に記載の使用。
【請求項13】
前記化学療法薬は、（１）パクリタキセル、ドセタキセルなどであるタキサン系薬物、もしくはビンクリスチンまたはビンブラスチンなどであるビンカアルカロイド系薬物、またはイクサベピロンなどであるエポチロン系薬物、またはボルテゾミブなどであるプロテアーゼ阻害剤系薬物を含む微小管系に作用しまたは有糸分裂に抵抗する化学療法薬、あるいは
（２）シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンなどである白金系薬物を含むＤＮＡ合成を阻害する化学療法薬、あるいは
（３）サリドマイド、レナリドマイドなどである免疫調節剤系薬物
からなる群から選ばれる１種または２種以上の薬物を含むがこれらに限定されないことを特徴とする、請求項１～１２のいずれか1項に記載の使用。
【請求項14】
前記ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩は、前記薬物の製造において、他の末梢神経障害治療薬１種または２種以上と組み合わせて用いることができ、好ましくは、前記他の末梢神経障害治療薬は、デュロセチンまたはその塩、モノシアロテトラヘキソシルガングリオシドナトリウムであることを特徴とする、請求項１～１３のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（関連出願の相互参照）
本出願は、中国国家知識産権局に２０１１年３月２０日に出願された出願番号２０２０１０２０２５８８．４、発明名称「ブチルフタリドおよびその誘導体の使用」の先願、２０２０年８月７日に出願された出願番号２０２０１０７９０７７８．２、発明名称「ブチルフタリドおよびその誘導体の使用」の先願、及び２０２０年１１月６日に出願された出願番号２０２０１１２３３５６３．７、発明名称「ブチルフタリドおよびその誘導体の使用」の先願の３件の中国発明特許出願の優先権及び権益を主張し、これらの先行出願の全体が援用により本願に組み込まれる。
本出願は、中国国家知識産権局に２０１１年３月２０日に出願された出願番号２０２０１０２０２５８８．４、発明名称「ブチルフタリドおよびその誘導体の使用」の先願、２０２０年８月７日に出願された出願番号２０２０１０７９０７７８．２、発明名称「ブチルフタリドおよびその誘導体の使用」の先願、及び２０２０年１１月６日に出願された出願番号２０２０１１２３３５６３．７、発明名称「ブチルフタリドおよびその誘導体の使用」の先願の３件の中国発明特許出願の優先権及び権益を主張し、これらの先行出願の全体が援用により本願に組み込まれる。
【0002】
本発明は医薬分野に属し、具体的にはブチルフタリドおよびその誘導体の、末梢神経障害、特に化学療法誘発性末梢神経障害を予防、緩和または治療する薬物の製造における使用に関し、ならびにブチルフタリドおよびその誘導体が末梢神経障害、特に化学療法誘発性末梢神経障害を予防、緩和または治療する方法に関する。
【背景技術】
【0003】
末梢神経障害は、感覚喪失、筋力低下と萎縮、腱反射の減退および血管運動症状の単独または任意の組み合わせからなる症候群である。臨床では、代謝性神経障害（例えば、糖尿病性神経障害）、外傷性神経障害（例えば、手根管症候群）、免疫性神経障害など、多くの末梢神経障害がある。化学療法誘発性末梢神経障害（chemotherapy-induced peripheral neuropathy: CIPN）は腫瘍患者の化学療法中に出現したよく見られる薬物投与量制限的な副作用である。ＣＩＰＮは最もよく見られる毒性神経障害のタイプである可能性があり、神経毒性化学療法薬（化学療法剤）を受けている患者の５８％から７８％に影響を及ぼし（Seretny M、Currie GL、Sena ES、et al. (2014). Incidence、prevalence、and predictors of chemotherapy-induced peripheral neuropathy:a systemic review and meta-analysis. Pain 155:2461-2470）、かつ、深刻な臨床結果がある。多くの場合、投与量制限毒性は化学治療剤の悪性腫瘍治療における使用を制限している。毒性神経障害の存在は、通常投与量の減少を招き、時には潜在的な救命療法の中止を招く（Gadgil S，Ergun M，van den Heuval SA，et al. (2019) A systematic summary and comparison of animal models for chemotherapy induced peripheral neuropathy (CIPN). PLOS ONE https://doi.org/10.1371/journal.pone.0221787参照）。神経毒性を有する可能性のある化学治療剤を受けた患者のうち、治療を開始してから６ヶ月後までに、３０～７１％の患者がＣＩＰＮに関連する症状が続いていると推定される。
【0004】
ＣＩＰＮは主に白金系（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン）、パクリタキセル系（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンカアルカロイド系（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン）、プロテアーゼ阻害剤（例えば、ボルテゾミブ（bortezomib））、免疫調節剤（サリドマイド、レナリドマイド）、エポチロン系（例えば、イクサベピロン（Ixabepilone））などの化学療法薬によって誘導される。ＣＩＰＮに関連する最もよく見られる症状は、手足の感覚異常、例えば痛み（灼熱痛、急激な激しい痛み、感覚鈍麻、痛覚障害、アロディニア、痛覚過敏）、刺痛（感覚異常）、痺れ感である（Ewertz M、Qvortrup C、Eckhoff L.(2015)Chemotherapy-induced peripheral neuropathy in patients treated with taxanes and platinum derivatives. ActaOncologica 54:587-591）。その他のよく見られる臨床所見は深部腱反射の減弱または欠損、体温または振動感の喪失、起立性低血圧症と感覚運動失調症（特に白金系薬物）などがある。運動症状（例えば、遠位や近位のの筋力低下、筋肉の痙攣、歩行機能障害）、自律神経症状（例えば、便秘や下痢、異常発汗、眩暈、または体位変化に伴う眩暈など）の発生頻度が低い。
【0005】
ＣＩＰＮの臨床経過は個々の化学療法薬（化学療法剤）によって異なる。多くの化学療法薬では、累積閾値に達した後に神経障害の症状が現れ始め、追加投与量の使用に伴い進行を続けている。具体的な薬物の投与方案の調整、投与頻度ひいては輸液速度は、特定の対象で発生する神経障害の発生頻度に影響を与える可能性があるが、化学療法の中止以外の方案にいかなる調整でも、治療対象におけるＣＩＰＮを完全に予防することはできない。一部の化学療法薬に対して原因薬を停止しても、ＣＩＰＮ症状は一定の時間進行し続けている。そのような事象は「滑走現象」と呼ばれている。症状が相対的安定していても、この事象は数ヶ月か数年または無期限に続く可能性がある。
【0006】
タキサン化学ファミリーの２つのメンバーとするパクリタキセルおよびドセタキセル（すなわち、ドセタキセル）は、一般的に複数種類の癌の治療に用いられている。タキサンは有糸分裂活動に必要な微小管を分解することにより癌増殖を阻害し、同じ機序で微小管による軸索輸送を破壊し、感覚神経細胞の栄養支持を阻害する。タキサン系は、乳癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、胃癌、頭頸部癌および前立腺癌の治療に一般に使用されている。パクリタキセル累積投与量７１５～１５００ｍｇ／ｍ２またはドセタキセル累積投与量３７１～６００ｍｇ／ｍ２を受けた患者では、２０～３５％の患者に小径と大型繊維の感覚神経細胞の中等度または重度（２～４級）の感覚神経障害が発生した。感覚症状（痺れ、刺痛、および痛み）は、通常四肢遠位で始まり、最初に脚、その後手であり、軸索輸送に対する作用機序と一致している。これらの患者の４０％には、症状が３年以上続く可能性があるが（Park SB、Goldstein D、Krishnan AV、et al.(2013)Chemotherapy-induced peripheral neurotoxicity:A critical analysis. CA Cancer J Clin 63:419-437）、５０％の患者症状が９ヶ月以内に回復した。タキサン系誘発性神経障害患者では、感覚神経障害がもっと普遍的で深刻であるが、一部の患者では精巧な運動制御能力もある程度低下した。
【0007】
シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンは、精巣、卵巣、子宮頚、頭頚部、結腸、および直腸の癌の治療に用いられる白金系薬物である。それらの作用機序は、ＤＮＡを交差架橋して癌細胞がＤＮＡ合成に関与する能力を制限することである。累積投与量６００ｍｇ／ｍ２以上の場合、大径の自己受容性感覚神経細胞損傷後の深刻な感覚性運動失調を引き起こすことは多い。累積投与量１１７０ｍｇ／ｍ２を受けた患者の５０％には、感覚性後根神経節に関連する３級感覚神経障害を発症した。最も顕著な表現は、刺痛、痺れ、自己受容性感覚喪失と深部腱反射の減弱または欠失であり、これらのいずれも多くの場合感覚繊維の大量欠損を示し（Park SB、Goldstein D、Krishnan AV、et al.(2013)Chemotherapy-induced peripheral neurotoxicity:A critical analysis. CA Cancer J Clin 63:419-437）、感覚神経伝導速度と幅も低下した。このような慢性型の神経障害の他、オキサリプラチンは輸液直後に発生し四肢に加えて顔面にも影響を及ぼす急性型の神経障害と関連している。白金系薬物の「滑走現象」は普遍的に存在する。
【0008】
ビンクリスチンおよびビンブラスチンは、最も臨床的に重要なビンカアルカロイド系薬物ビンカアルカロイドであり、白血病、ホジキン病、悪性リンパ腫、神経芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、カポジ肉腫、悪性黒色腫、肺癌および子宮癌を治療するために使用されている。それらの作用機序は、微小管の集積を標的とし、細胞分裂能力を喪失させ、細胞死を引き起こすことである。ビンクリスチン治療を受けた患者の３５～４５％には、感覚障害に加えて、異常な微細運動機能および異常な歩行を出現した。患者の３０％には、化学療法を中止した後に「滑走現象」を出現した（Park SB、Goldstein D、Krishnan AV、et al.(2013)Chemotherapy-induced peripheral neurotoxicity:A critical analysis. CA Cancer J Clin 63:419-437.）。
【0009】
ボルテゾミブは、多発性骨髄腫および他のいくつかの血液系悪性腫瘍患者の治療に非常に有効である比較的新しい化学療法薬である。ボルテゾミブの投与によれば、患者の５０％には重度の疼痛性感覚神経障害をもたらし、また患者の約３０％には中等度から重度の神経毒性が示された。症状としては遠位肢体麻痺、特に下肢の麻痺（知覚異常）、激しい灼熱痛などがある。ボルテゾミブと関連したＣＩＰＮは主に小線維性感覚神経障害であるが、一部の患者では自律神経障害も生じ、起立性低血圧、心拍変動抑制、胃排出遅延を呈することがある。運動損傷はまれであるが、発生することもある。神経障害は１６～２６ｍｇ／ｍ２の累積投与量で発症し、投与量の増加に伴い発病率が増加し、投与量が４０～４５ｍｇ／ｍ２になるまでに発病率は穏やかになる。神経障害の回復は遅く、治療後２～３ヶ月後患者の６０～８５％には依然として臨床的意義のある神経障害が存在している。
【0010】
サリドマイドおよびレナリドマイドは、人工的に合成されたグルタミン酸の誘導体であり、再発した難治な多発性骨髄腫の治療に用いられている。ＣＩＰＮはこのタイプの薬物療法の主要な副作用であり、緩和が遅くてひいては不可逆的である。サリドマイド誘発性神経障害は主に感覚の変化であり、最初は足部に発生し、その後手に延び、常に靴下のように分布し、遠端は重く、膝、肘以上に延びない。感覚鈍麻（hypoesthesia）、感覚過敏（hyperesthesia）、筋肉痛および触痛、麻痺、針刺し感、灼熱、緊張、手足の冷え、蒼白、足の痒みおよび赤い掌などを含む（Bkl D、de Souza S M、Costa-Lima C、et al. Thalidomidefor the treatment of gastrointestinal bleeding due toangiodysplasia in a patient with Glanzmann'sthrombasthenia[J]. Hematol Rep、2017、9(2):6961）。サリチルアミンの累積計量がが２０ｇを超えると、神経障害の発生と重症度と累積計量との間に正の相関性があることが示されている文献がある（桂瑞ら、『医学総説』Vol 18 No 11、2012年6月、P1739-1742）。
【0011】
イクサベピロンは半合成のエポチロンラクタム類似体であり、世界初のエポチロン抗腫瘍薬である。パクリタキセル薬物に比べて、両者の構造は異なるが、作用機序は類似しており、癌細胞分裂に関与することで腫瘍細胞アポトーシスをを引き起こす。イクサベピロンは末梢神経障害を誘発し、感覚神経異常を引き起こすことができ、そのような副作用は一般的に薬物停止の１ヶ月～２ヶ月後に消失する。感覚神経障害の程度は投与量と投与速度と関連している（Burotto M、Edgerly M、Velarde M、et al. A phase IImulti-center study of bevacizumab in combination withixabepilone in subjects with advanced renal cellcarcinoma [J]. Oncologist、2017、22(8):888-e84.）。
【0012】
ＣＩＰＮは化学療法に関する最もよく見られる重篤な副作用であると考えられているが、米国臨床腫瘍学会臨床実践ガイドラインでは、現在ＣＩＰＮを予防または逆転させる有効な治療法がないと結論しており、デュロセチン１剤の薬物のみを推奨しており（表１（予防）および表２（治療）参照、Hershman DL、Lacchetti C、Dworkin RH、et a.(2014). Prevention and management of chemotherapy-induced peripheral neuropathy in survivors of adult cancers:American society of clinical oncology clinical practice guideline. J Clin Oncol 32:1941-67）、治療は神経障害性疼痛薬物治療、支持的看護及び化学療法用量の調整に限られている（kolb n、and burns t(2018)clinical research in chemotherapy-induced peripheral neuropathy. neurology 91:379-380）。従って、ＣＩＰＮを効果的に予防・治療することは緊急に解決すべき臨床的課題である。
【0013】
【表1】
【0014】
【表2】
【0015】
ブチルフタリド（３－ｎ－ｂｕｔｙｌｐｈａｔｈｌｉｄｅ：ＮＢＰ）、化学名：３－ｎ－ブチルフタリド、ブチルフタリドとも呼ばれ、商品名：恩必普、式（Ｉ）に示すような構造を有し、軽度～中等度の虚血性脳卒中の治療薬である。
【化1】
【0016】
現在、末梢神経障害、特に化学療法誘発性末梢神経障害の予防または治療におけるブチルフタリドの使用に関する報告はまだない。
【発明の概要】
【0017】
本発明の目的の1つとしては、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の、末梢神経障害を予防、緩和または治療する薬物の製造における使用を提供することにある。前記末梢神経障害は、好ましくは薬物誘発性末梢神経障害であり、より好ましくは化学療法薬誘発性末梢神経障害である。前記末梢神経障害を予防、緩和または治療することは、痛み、熱に対する感覚異常、運動協調能力障害などの化学療法薬誘発性感覚異常および運動障害を予防、緩和または治療することを含むが、これらに限定されない。
【0018】
いくつかの実施形態において、前記薬物は単回投与剤形または分割投与剤形である。
いくつかの実施形態において、前記薬物は、経口製剤、注射製剤、局所投与製剤、または外用製剤などであり、好ましくは経口製剤および注射製剤である臨床的に許容される製剤に製造される。
いくつかの実施形態において、前記薬物は経口製剤である。前記経口製剤は、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ～約５００ｍｇ、または約１ｍｇ～３００ｍｇ、または約１ｍｇ～２００ｍｇ、または約５ｍｇ～１８０ｍｇ、または約１０ｍｇ～１５０ｍｇ、または約３０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約５０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約８０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約９０ｍｇ～１１０ｍｇ、または約１００ｍｇ含む。
いくつかの実施形態において、前記薬物は、経口製剤、注射製剤、局所投与製剤、または外用製剤などであり、好ましくは経口製剤および注射製剤である臨床的に許容される製剤に製造される。
いくつかの実施形態において、前記薬物は経口製剤である。前記経口製剤は、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ～約５００ｍｇ、または約１ｍｇ～３００ｍｇ、または約１ｍｇ～２００ｍｇ、または約５ｍｇ～１８０ｍｇ、または約１０ｍｇ～１５０ｍｇ、または約３０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約５０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約８０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約９０ｍｇ～１１０ｍｇ、または約１００ｍｇ含む。
【0019】
いくつかの実施形態において、前記経口製剤の１日投与量は、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１０，０００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ～約５０００ｍｇ、または約２０ｍｇ～３０００ｍｇ、または約３０ｍｇ～２，０００ｍｇ、または約５０ｍｇ～１５００ｍｇ、または約７０ｍｇ～１２００ｍｇ、または約１００ｍｇ～１，０００ｍｇ、または約２００ｍｇ～９００ｍｇ、または約３００ｍｇ～８００ｍｇ、または約４００ｍｇ～７００ｍｇ、または約５００ｍｇ～６００ｍｇ、または約６０ｍｇ～８００ｍｇ、または約６０ｍｇ～６００ｍｇ、または約１００ｍｇ～８００ｍｇ、または約１００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～８００ｍｇ、または約３００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～８００ｍｇである。
【0020】
いくつかの実施形態において、前記経口製剤は、１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、ブチルフタリド基準で約６０ｍｇ～８００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約６０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、または８００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、ブチルフタリド基準で約３０ｍｇ～４００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約３０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、または４００ｍｇ投与し、あるいは1日３回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、ブチルフタリド基準で約２０ｍｇ～３００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約２０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇまたは３００ｍｇ投与する。
【0021】
いくつかの実施形態において、前記薬物は注射製剤である。前記注射製剤は、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を、ブチルフタリド基準で約０．００１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約０．００５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬ、または約０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬ、または約０．１２ｍｇ／ｍＬ～０．８０ｍｇ／ｍＬ、または約０．１５ｍｇ／ｍＬ～０．５０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは約０．２０ｍｇ／ｍＬ～０．４０ｍｇ／ｍＬ、または約０．２０ｍｇ／ｍＬ～０．３０ｍｇ／ｍＬ、または約０．２５ｍｇ／ｍＬ含む。
【0022】
いくつかの実施形態において、前記注射製剤の１日投与量は、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、好ましくは約５ｍｇ～約５００ｍｇ、または約１０ｍｇ～３００ｍｇ、または約１５ｍｇ～２００ｍｇ、または約２０ｍｇ～１５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～１２０ｍｇ、または約３０ｍｇ～１００ｍｇ、または約３５ｍｇ～９０ｍｇ、または約４０ｍｇ～８０ｍｇ、または約４５ｍｇ～７０ｍｇ、または約５０ｍｇ～６０ｍｇ、または約１ｍｇ～１００ｍｇ、または約２ｍｇ～８０ｍｇ、または約５ｍｇ～７５ｍｇ、または約１０ｍｇ～５０ｍｇ、または約１５ｍｇ～５０ｍｇ、または約２０ｍｇ～５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～７５ｍｇ、または約２５ｍｇ～５０ｍｇである。
【0023】
いくつかの実施形態において、前記注射製剤は、１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約５０ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ投与する。
【0024】
いくつかの実施形態において、前記化学療法薬は、
（１）例えば、パクリタキセル、ドセタキセルなどであるタキサン系薬物を含む微小管系に作用しまたは有糸分裂に抵抗する化学療法薬、またはビンクリスチンまたはビンブラスチンなどであるビンカアルカロイド（vinca alkaloid）系薬物、またはイクサベピロン（Ixabepilone）などであるエポチロン系薬物、またはボルテゾミブなどであるプロテアーゼ阻害剤系薬物、あるいは
（２）例えば、シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンなどである白金系薬物を含む、ＤＮＡ合成を阻害する化学療法薬、あるいは
（３）サリドマイド、レナリドマイド（lenalidomide）などの免疫調節剤系薬物
からなる群から選ばれる１種または２種以上の薬物の組み合せを含むが、これらに限定されない。
（１）例えば、パクリタキセル、ドセタキセルなどであるタキサン系薬物を含む微小管系に作用しまたは有糸分裂に抵抗する化学療法薬、またはビンクリスチンまたはビンブラスチンなどであるビンカアルカロイド（vinca alkaloid）系薬物、またはイクサベピロン（Ixabepilone）などであるエポチロン系薬物、またはボルテゾミブなどであるプロテアーゼ阻害剤系薬物、あるいは
（２）例えば、シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンなどである白金系薬物を含む、ＤＮＡ合成を阻害する化学療法薬、あるいは
（３）サリドマイド、レナリドマイド（lenalidomide）などの免疫調節剤系薬物
からなる群から選ばれる１種または２種以上の薬物の組み合せを含むが、これらに限定されない。
【0025】
いくつかの実施形態において、前記ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩は、その他の末梢神経障害治療薬物における１種以上と組み合せて前記薬物を製造するために使用することができ、前記その他の末梢神経障害治療薬物は、好ましくはデュロセチンまたはその塩、モノシアロテトラヘキソシルガングリオシドナトリウム（monosialotetrahexosyl ganglioside sodium）である。
【0026】
本発明に係る他の目的の1つは、末梢神経障害を予防、緩和または治療する方法を提供することをさらに含む。前記方法は、治療有効量のブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を、受験者または患者に投与することを含み、前記末梢神経障害は、好ましくは薬物誘発性末梢神経障害であり、より好ましくは化学療法薬誘発性末梢神経障害である。
いくつかの実施形態において、前記投与は、経口投与、注射投与、局所投与または体外投与であってもよく、好ましくは、経口投与または注射投与である。前記治療有効量では、前記受験者または患者の末梢神経障害を予防、治療または緩和することができる。
いくつかの実施形態において、前記投与は、経口投与、注射投与、局所投与または体外投与であってもよく、好ましくは、経口投与または注射投与である。前記治療有効量では、前記受験者または患者の末梢神経障害を予防、治療または緩和することができる。
【0027】
いくつかの実施形態において、前記投与は、経口投与であってもよい。前記治療有効量とは、１日投与量が、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１０，０００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ～約５，０００ｍｇ、または約２０ｍｇ～３，０００ｍｇ、または約３０ｍｇ～２，０００ｍｇ、または約５０ｍｇ～１５００ｍｇ、または約７０ｍｇ～１２００ｍｇ、または約１００ｍｇ～１，０００ｍｇ、または約２００ｍｇ～９００ｍｇ、または約３００ｍｇ～８００ｍｇ、または約４００ｍｇ～７００ｍｇ、または約５００ｍｇ～６００ｍｇ、または約６０ｍｇ～８００ｍｇ、または約６０ｍｇ～６００ｍｇ、または約１００ｍｇ～８００ｍｇ、または約１００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～８００ｍｇ、または約３００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～８００ｍｇであることを指す。
【0028】
いくつかの実施形態において、前記投与は、注射投与であってもよい。前記治療有効量とは、１日投与量が、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、好ましくは約５ｍｇ～約５００ｍｇ、または約１０ｍｇ～３００ｍｇ、または約１５ｍｇ～２００ｍｇ、または約２０ｍｇ～１５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～１２０ｍｇ、または約３０ｍｇ～１００ｍｇ、または約３５ｍｇ～９０ｍｇ、または約４０ｍｇ～８０ｍｇ、または約４５ｍｇ～７０ｍｇ、または約５０ｍｇ～６０ｍｇ、または約１ｍｇ～１００ｍｇ、または約２ｍｇ～８０ｍｇ、または約５ｍｇ～７５ｍｇ、または約１０ｍｇ～５０ｍｇ、または約１５ｍｇ～５０ｍｇ、または約２０ｍｇ～５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～７５ｍｇ、または約２５ｍｇ～５０ｍｇであることを指す。
【0029】
いくつかの実施形態において、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩は、単回投与量または分割投与量で投与されている。
【0030】
いくつかの実施形態において、前記予防、緩和または治療する方法は、１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、約６０ｍｇ～８００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約６０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、または８００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、約３０ｍｇ～４００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約３０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、または４００ｍｇ投与し、あるいは1日３回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物またはその塩の経口製剤を、約２０ｍｇ～３００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約２０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇまたは３００ｍｇ投与し、あるいは１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約５０ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ投与する。
【0031】
いくつかの実施形態において、前記化学療法薬は、
（１）例えば、パクリタキセル、ドセタキセルなどであるタキサン系薬物を含む微小管系に作用しまたは有糸分裂に抵抗する化学療法薬、またはビンクリスチンまたはビンブラスチンなどであるビンカアルカロイド系薬物、またはイクサベピロンなどであるエポチロン系薬物、またはボルテゾミブなどであるプロテアーゼ阻害剤系薬物、あるいは
（２）例えばシスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンなどである白金系薬物を含む、ＤＮＡ合成を阻害する化学療法薬、あるいは
（３）サリドマイド、レナリドマイドなどの免疫調節剤系薬物
からなる群から選ばれる１種または２種以上の薬物の組み合せを含むが、これらに限定されない。
（１）例えば、パクリタキセル、ドセタキセルなどであるタキサン系薬物を含む微小管系に作用しまたは有糸分裂に抵抗する化学療法薬、またはビンクリスチンまたはビンブラスチンなどであるビンカアルカロイド系薬物、またはイクサベピロンなどであるエポチロン系薬物、またはボルテゾミブなどであるプロテアーゼ阻害剤系薬物、あるいは
（２）例えばシスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンなどである白金系薬物を含む、ＤＮＡ合成を阻害する化学療法薬、あるいは
（３）サリドマイド、レナリドマイドなどの免疫調節剤系薬物
からなる群から選ばれる１種または２種以上の薬物の組み合せを含むが、これらに限定されない。
【0032】
いくつかの実施形態において、前記ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩は、その他の末梢神経障害治療薬物における１種以上と組み合わせて使用することができ、前記その他の末梢神経障害治療薬物は、好ましくはデュロセチンまたはその塩、モノシアロテトラヘキソシルガングリオシドナトリウム（monosialotetrahexosyl ganglioside sodium）である。
【0033】
本発明の他の目的の1つは、末梢神経障害を予防、緩和または治療するために使用する、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を提供することがさらに含む。前記末梢神経障害は、好ましくは薬物誘発性末梢神経障害であり、より好ましくは化学療法薬誘発性末梢神経障害である。
【0034】
いくつかの実施形態において、前記予防、緩和または治療は、受験者または患者に治療有効量のブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を投与することを含む。
いくつかの実施形態において、前記投与は、経口投与、注射投与、局所投与および体外投与からなる群から選ばれ、好ましくは経口投与または注射投与である。前記治療有効量は、前記受験者または患者の末梢神経障害を予防、緩和または治療することができる。
いくつかの実施形態において、前記投与は、経口投与、注射投与、局所投与および体外投与からなる群から選ばれ、好ましくは経口投与または注射投与である。前記治療有効量は、前記受験者または患者の末梢神経障害を予防、緩和または治療することができる。
【0035】
いくつかの実施形態において、前記投与は経口投与である。前記治療有効量とは、１日投与量が、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１０，０００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ～約５，０００ｍｇ、または約２０ｍｇ～３，０００ｍｇ、または約３０ｍｇ～２，０００ｍｇ、または約５０ｍｇ～１５００ｍｇ、または約７０ｍｇ～１２００ｍｇ、または約１００ｍｇ～１，０００ｍｇ、または約２００ｍｇ～９００ｍｇ、または約３００ｍｇ～８００ｍｇ、または約４００ｍｇ～７００ｍｇ、または約５００ｍｇ～６００ｍｇ、または約６０ｍｇ～８００ｍｇ、または約６０ｍｇ～６００ｍｇ、または約１００ｍｇ～８００ｍｇ、または約１００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～８００ｍｇ、または約３００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～８００ｍｇであることを指す。
【0036】
いくつかの実施形態において、前記投与は注射投与である。前記治療有効量とは、１日投与量が、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、好ましくは、ブチルフタリド基準で約５ｍｇ～約５００ｍｇ、または約１０ｍｇ～３００ｍｇ、または約１５ｍｇ～２００ｍｇ、または約２０ｍｇ～１５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～１２０ｍｇ、または約３０ｍｇ～１００ｍｇ、または約３５ｍｇ～９０ｍｇ、または約４０ｍｇ～８０ｍｇ、または約４５ｍｇ～７０ｍｇ、または約５０ｍｇ～６０ｍｇ、または約１ｍｇ～１００ｍｇ、または約２ｍｇ～８０ｍｇ、または約５ｍｇ～７５ｍｇ、または約１０ｍｇ～５０ｍｇ、または約１５ｍｇ～５０ｍｇ、または約２０ｍｇ～５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～７５ｍｇ、または約２５ｍｇ～５０ｍｇであることを指す。
いくつかの実施形態において、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩は、単回投与量または分割投与量で投与されている。
いくつかの実施形態において、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩は、単回投与量または分割投与量で投与されている。
【0037】
いくつかの実施形態において、前記予防、緩和または治療する方法は、１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、ブチルフタリド基準で約６０ｍｇ～８００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約６０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、または８００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、ブチルフタリド基準で約３０ｍｇ～４００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約３０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇ投与し、あるいは1日３回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、ブチルフタリド基準で約２０ｍｇ～３００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約２０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇまたは３００ｍｇ投与し、あるいは１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約５０ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ投与する。
【0038】
いくつかの実施形態において、前記化学療法薬は、
（１）例えば、パクリタキセル、ドセタキセルなどであるタキサン系薬物を含む微小管系に作用しまたは有糸分裂に抵抗する化学療法薬、またはビンクリスチンまたはビンブラスチンなどであるビンカアルカロイド系薬物、またはイクサベピロンなどであるエポチロン系薬物、またはボルテゾミブなどであるプロテアーゼ阻害剤系薬物、あるいは
（２）例えば、シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンなどである白金系薬物を含む、ＤＮＡ合成を阻害する化学療法薬、あるいは
（３）サリドマイド、レナリドマイドなどの免疫調節剤系薬物
からなる群から選ばれる１種または２種以上の薬物を含むが、これらに限定されない。
（１）例えば、パクリタキセル、ドセタキセルなどであるタキサン系薬物を含む微小管系に作用しまたは有糸分裂に抵抗する化学療法薬、またはビンクリスチンまたはビンブラスチンなどであるビンカアルカロイド系薬物、またはイクサベピロンなどであるエポチロン系薬物、またはボルテゾミブなどであるプロテアーゼ阻害剤系薬物、あるいは
（２）例えば、シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンなどである白金系薬物を含む、ＤＮＡ合成を阻害する化学療法薬、あるいは
（３）サリドマイド、レナリドマイドなどの免疫調節剤系薬物
からなる群から選ばれる１種または２種以上の薬物を含むが、これらに限定されない。
【0039】
いくつかの実施形態において、前記ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩は、その他の末梢神経障害治療薬物における１種以上と組み合せて使用することができ、前記その他の末梢神経障害治療薬物は、好ましくはデュロセチンまたはその塩、モノシアロテトラヘキソシルガングリオシドナトリウム（monosialotetrahexosyl ganglioside sodium）である。
【0040】
本発明に係る他の目的の1つは、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を含む医薬組成物を提供することをさらに含む。前記医薬組成物は、末梢神経障害を予防、緩和または治療するために使用する。前記末梢神経障害は、好ましくは薬物誘発性末梢神経障害であり、より好ましくは化学療法薬誘発性末梢神経障害である。
【0041】
いくつかの実施形態において、前記予防、緩和または治療は、受験者または患者に治療有効量のブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を投与することを含む。
【0042】
いくつかの実施形態において、前記投与は、経口投与、注射投与、局所投与および体外投与からなる群から選ばれ、好ましくは経口投与または注射投与である。前記治療有効量は、前記受験者または患者の末梢神経障害を予防、緩和または治療することができる。
【0043】
いくつかの実施形態において、前記投与は経口投与である。前記治療有効量とは、１日投与量が、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１０，０００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ～約５０００ｍｇ、または約２０ｍｇ～３，０００ｍｇ、または約３０ｍｇ～２，０００ｍｇ、または約５０ｍｇ～１５００ｍｇ、または約７０ｍｇ～１２００ｍｇ、または約１００ｍｇ～１，０００ｍｇ、または約２００ｍｇ～９００ｍｇ、または約３００ｍｇ～８００ｍｇ、または約４００ｍｇ～７００ｍｇ、または約５００ｍｇ～６００ｍｇ、または約６０ｍｇ～８００ｍｇ、または約６０ｍｇ～６００ｍｇ、または約１００ｍｇ～８００ｍｇ、または約１００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～８００ｍｇ、または約３００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～８００ｍｇであることを指す。
【0044】
いくつかの実施形態において、前記投与は注射投与である。前記治療有効量とは、１日投与量が、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、好ましくは約５ｍｇ～約５００ｍｇ、または約１０ｍｇ～３００ｍｇ、または約１５ｍｇ～２００ｍｇ、または約２０ｍｇ～１５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～１２０ｍｇ、または約３０ｍｇ～１００ｍｇ、または約３５ｍｇ～９０ｍｇ、または約４０ｍｇ～８０ｍｇ、または約４５ｍｇ～７０ｍｇ、または約５０ｍｇ～６０ｍｇ、または約１ｍｇ～１００ｍｇ、または約２ｍｇ～８０ｍｇ、または約５ｍｇ～７５ｍｇ、または約１０ｍｇ～５０ｍｇ、または約１５ｍｇ～５０ｍｇ、または約２０ｍｇ～５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～７５ｍｇ、または約２５ｍｇ～５０ｍｇであることを指す。
【0045】
いくつかの実施形態において、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩は、単回投与量または分割投与量で投与されている。
【0046】
いくつかの実施形態において、前記予防、緩和または治療する方法は、１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、ブチルフタリド基準で約６０ｍｇ～８００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約６０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、または８００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、約３０ｍｇ～４００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約３０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇ投与し、あるいは1日３回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、ブチルフタリド基準で約２０ｍｇ～３００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約２０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇまたは３００ｍｇ投与し、あるいは１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約５０ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ投与する。
【0047】
いくつかの実施形態において、前記化学療法薬は、
（１）例えば、パクリタキセル、ドセタキセルなどであるタキサン系薬物を含む微小管系に作用しまたは有糸分裂に抵抗する化学療法薬、またはビンクリスチンまたはビンブラスチンなどであるビンカアルカロイド系薬物、またはイクサベピロンなどであるエポチロン系薬物、またはボルテゾミブなどであるプロテアーゼ阻害剤系薬物、あるいは
（２）例えば、シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンなどである白金系薬物を含む、ＤＮＡ合成を阻害する化学療法薬、あるいは
（３）サリドマイド、レナリドマイドなどの免疫調節剤系薬物
からなる群から選ばれる１種または２種以上の薬物を含むが、これらに限定されない。
（１）例えば、パクリタキセル、ドセタキセルなどであるタキサン系薬物を含む微小管系に作用しまたは有糸分裂に抵抗する化学療法薬、またはビンクリスチンまたはビンブラスチンなどであるビンカアルカロイド系薬物、またはイクサベピロンなどであるエポチロン系薬物、またはボルテゾミブなどであるプロテアーゼ阻害剤系薬物、あるいは
（２）例えば、シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンなどである白金系薬物を含む、ＤＮＡ合成を阻害する化学療法薬、あるいは
（３）サリドマイド、レナリドマイドなどの免疫調節剤系薬物
からなる群から選ばれる１種または２種以上の薬物を含むが、これらに限定されない。
【0048】
いくつかの実施形態において、前記ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩は、その他の末梢神経障害治療薬物における１種以上と組み合せて使用することができ、前記その他の末梢神経障害治療薬物は、好ましくはデュロセチンまたはその塩、モノシアロテトラヘキソシルガングリオシドナトリウム（monosialotetrahexosyl ganglioside sodium）である。
【0049】
本発明に記載のブチルフタリドの光学異性体は、Ｌ－ブチルフタリド、Ｄ－ブチルフタリド、または両方の任意の割合の混合物である。
本発明に記載のブチルフタリドのプロドラッグとは、プロドラッグの原理に基づいて設計された化合物を指し、そのような化合物は体内でブチルフタリドに代謝され、ブチルフタリドと同一または類似の薬理作用を発揮する。
本発明に記載のブチルフタリドのプロドラッグとは、プロドラッグの原理に基づいて設計された化合物を指し、そのような化合物は体内でブチルフタリドに代謝され、ブチルフタリドと同一または類似の薬理作用を発揮する。
【0050】
本発明に記載のブチルフタリドの重水素化物とは、ブチルフタリド化合物の構造における１つまたはいくつかの水素原子をその同位体原子重水素で置換されているものを指し、そのような重水素化物は、ブチルフタリドと同一または類似の薬理作用を備える。例えば、ＷＯ２０１９２４２７６５Ａ１に記載のブチルフタリドおよびその誘導体の重水素化誘導体、特に次の構造を備えたブチルフタリド重水素化誘導体が挙げられる。
【化2】
【0051】
本発明に記載のブチルフタリドの代謝産物とは、ブチルフタリドの生体内代謝産物やその誘導体を指し、そのような代謝産物は、ブチルフタリドと同一または類似の薬理作用を発揮することができる。例えば、ＣＮ１６８９５６３Ａに記載のブチルフタリド代謝産物ＭＩおよびＭＩＩ、ならびにＣＮ１０２５０３９１９ＡまたはＣＮ１０１２８９４３８Ａに記載のＭＩのエステルまたは塩などが挙げられる。
【化3】
【0052】
本発明に記載のブチルフタリドの開環生成物もしくは開環生成物の塩とは、ブチルフタリド構造におけるラクトンを開環して得られる生成物またはその塩を指し、そのような開環生成物は、閉環によりブチルフタリドを生体内で合成することができ、ブチルフタリドと同一または類似の薬理作用を発揮する。例えば、ＣＮ１３８２６８２Ａ、ＣＮ１５２３００３ＡおよびＣＮ１０４９７４０５０Ａに記載の以下のブチルフタリド開環生成物もしくは開環生成物の塩：
［式中、Ｍは１価の金属イオンであるカリウムイオン、ナトリウムイオンもしくはリチウムイオンであり、または二価の金属イオンであるカルシウムイオン、マグネシウムイオンもしくは亜鉛イオンであって、ｎ＝１またはｎ＝２であり、Ｍは、好ましくはカリウムイオンである。］
およびその光学異性体、
ならびに、ＣＮ１０８０８４２３３Ａに記載のグリコシル変性ブチルフタリド開環誘導体、ＣＮ１０９５０３５４８Ａに記載のブチルフタリド開環誘導体、ＣＮ１０８７１５５７９Ａに記載の２－（αヒドロキシルペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体などが挙げられる。
【化4】
【化5】
ならびに、ＣＮ１０８０８４２３３Ａに記載のグリコシル変性ブチルフタリド開環誘導体、ＣＮ１０９５０３５４８Ａに記載のブチルフタリド開環誘導体、ＣＮ１０８７１５５７９Ａに記載の２－（αヒドロキシルペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体などが挙げられる。
【0053】
本発明に記載のブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の投与量は、いずれもブチルフタリド基準である。
【0054】
その他のブチルフタリド類似物またはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩、例えばＣＮ１０６２１４６７４Ａに記載の７－ヒドロキシルブチルフタリド、ＣＮ１０１０２９０３７Ａに記載のハロゲン化ブチルフタリド（特に、５－ブロモブチルフタリド）、ＣＮ１０１４０２５６５Ａに記載のハロ２－（αヒドロキシルペンチル）安息香酸塩、ＣＮ１０４０８６３９９Ａに記載の５－ブロモ－２－（αヒドロキシルペンチル）安息香酸ナトリウム塩などが、ブチルフタリドと類似の薬理作用を発揮可能であると、当業者であれば理解することができる。
【0055】
本発明の明細書において、数値前の「約」とは、当該数値の±１０％、好ましくは、±５％、例えば、当該数値の±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％または±１％を指す。
【0056】
〔技術的効果〕
１．本発明に係る代表的な薬物であるブチルフタリドは、パクリタキセルまたはボルテゾミブ誘発性末梢神経障害を有意に改善することができ、この２種類の化学療法薬に起因した熱痛閾値および機械的痛閾値異常の症状を有意に逆転させることができる。
２．本発明に係る代表的な薬物であるブチルフタリドは、ボルテゾミブ、パクリタキセルが生体外培養の腫瘍細胞増殖を抑制する活性を弱めることはなく、ボルテゾミブ、パクリタキセルの生体内腫瘍抑制作用および薬物動態学特性にも有意な影響を与えない。
３．生体内外試験によると、本発明に係る薬物は、化学療法薬の抗腫瘍治療効果および薬物動態学特性に影響を与えない上で、化学療法薬に起因した末梢神経障害を治療または緩和できることが示されている。
１．本発明に係る代表的な薬物であるブチルフタリドは、パクリタキセルまたはボルテゾミブ誘発性末梢神経障害を有意に改善することができ、この２種類の化学療法薬に起因した熱痛閾値および機械的痛閾値異常の症状を有意に逆転させることができる。
２．本発明に係る代表的な薬物であるブチルフタリドは、ボルテゾミブ、パクリタキセルが生体外培養の腫瘍細胞増殖を抑制する活性を弱めることはなく、ボルテゾミブ、パクリタキセルの生体内腫瘍抑制作用および薬物動態学特性にも有意な影響を与えない。
３．生体内外試験によると、本発明に係る薬物は、化学療法薬の抗腫瘍治療効果および薬物動態学特性に影響を与えない上で、化学療法薬に起因した末梢神経障害を治療または緩和できることが示されている。
【図面の簡単な説明】
【0057】
【図1】実施例１に係るモデル化方法モードを模式的に示す図である。
【図2】実施例１に係る０日目～１６日目（Ｄ０～１６）各群ラットの体重変化を示す図である。モデル群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である。
【図3】実施例１に係る０日目～１３日目（Ｄ０～１３）の各群ラットの熱痛閾値の変化を示す図である。モデル群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である。
【図4】実施例１に係る７日目／１０日目／１３日目（Ｄ７／Ｄ１０／Ｄ１３）の各群ラットの熱痛閾値の比較を示す図である。モデル群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である。
【図5】実施例２に係るモデル化および投与時間軸を示す図である。
【図6】実施例２に係るラットの体重変化値（平均値±ＳＤ、ｎ＝１２）を示すグラフである。モデル群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である。
【図7】実施例２に係るラットの－１日目／７日目／１４日目の熱痛閾値の変化状況（平均値±ＳＤ、ｎ＝１２）を示す図である。モデル群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である。
【図8】実施例２に係るラットの０日目／６日目／１３日目の機械的痛閾値変化状況（平均値±ＳＤ、ｎ＝１２）を示す図である。モデル群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である。
【図9】実施例３に係る各群ラットの体重変化状況を示す図である。溶媒群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１であり、ａｂ－ＰＴＸ群に比べて、＃＃Ｐ≦０．０１である。
【図10】実施例４に係る各群ラットの体重変化状況を示す図である。統計学的分析により、溶媒群に比べると＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である。
【図11】実施例６に係るモデル化および投与時間軸を示す図である。
【図12】実施例６に係るＤ０～２０の各群ラットの体重変化状況を示す図である。モデル群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である。
【図13】実施例６に係るラットの熱痛閾値変化状況を示す図である。モデル群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である。
【図14】実施例６に係るラットの機械的痛閾値変化状況を示す図である。モデル群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である。
【図15】実施例８における各群のマウスの体重変化値（平均値±ＳＤ、ｎ＝６）を示すグラフである。
【図16】実施例８における腫瘍担持ラットの移植腫瘍体積変化を示すグラフである（平均値±ＳＤ、ｎ＝６、溶媒群に比べて、＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１である）。 〔注〕図面におけるｍｐｋは、ｍｇ／ｋｇに相当している。
【発明を実施するための形態】
【0058】
以下に列挙する実施例は、本発明に係る内容をより良く説明するためのものであり、本発明に係る内容が列挙した実施例に限定されるものではない。当業者は、上述の発明の概要にしたがって、実施形態の非本質的な改良及び調整を行っても、本発明に係る保護範囲に属する。
【0059】
実施例１：パクリタキセル（アルブミン結合型）化学療法誘発性ラット末梢神経障害に対するブチルフタリド（腹腔注射投与）の生体内薬効研究
１．試験動物
ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラット、雄、１８０～２００ｇ、５９匹。
２．薬物
パクリタキセル（アルブミン結合型）（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ（Ａｌｂｕｍｉｎ Ｂｏｕｎｄ）、ａｂ－ＰＴＸ）凍結乾燥粉末、１００ｍｇ／瓶、石薬グループの欧意薬業有限公司製造、ロット番号：Ｂ０４１９０９１２１、使用直前に生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド（ＮＢＰ）注射液、２５ｍｇ／５ｍＬ、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造、ロット番号：Ｑ２７１９０４０１、使用直前に生理食塩水で目標濃度に希釈した。
１．試験動物
ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラット、雄、１８０～２００ｇ、５９匹。
２．薬物
パクリタキセル（アルブミン結合型）（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ（Ａｌｂｕｍｉｎ Ｂｏｕｎｄ）、ａｂ－ＰＴＸ）凍結乾燥粉末、１００ｍｇ／瓶、石薬グループの欧意薬業有限公司製造、ロット番号：Ｂ０４１９０９１２１、使用直前に生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド（ＮＢＰ）注射液、２５ｍｇ／５ｍＬ、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造、ロット番号：Ｑ２７１９０４０１、使用直前に生理食塩水で目標濃度に希釈した。
【0060】
３．試験方法
（１）モデル作成および投与方法
雄ＳＤラットを用い、ａｂ－ＰＴＸ ５ｍｇ／ｋｇで投与体積が５ｍＬ／ｋｇであり、０日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１１日目に、腹腔注射投与（ｉ．ｐ．）によりモデル化を行った。ＮＢＰは、３つの投与量（１．５、５および１５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）であり、ａｂ－ＰＴＸモデル化の１日前に投与開始し、ａｂ－ＰＴＸ投与のモデル化期間に、ＮＢＰの１回目の投与はａｂ－ＰＴＸ投与の１時間前に腹腔注射投与し、ＮＢＰの２回目の投与と１回目の投与との間隔は４ｈであり、投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、毎日に投与を行い、１７日間連続投与した。正常群（Ｎｏｒｍａｌ）には、同じ頻度で０．９％生理食塩水（０．９％ＩＮＪ ＮＳ）を投与した。モデル化方法を図１に示す。動物の群分け、投与方法および投与量の詳細を表３に示す。
（１）モデル作成および投与方法
雄ＳＤラットを用い、ａｂ－ＰＴＸ ５ｍｇ／ｋｇで投与体積が５ｍＬ／ｋｇであり、０日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１１日目に、腹腔注射投与（ｉ．ｐ．）によりモデル化を行った。ＮＢＰは、３つの投与量（１．５、５および１５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）であり、ａｂ－ＰＴＸモデル化の１日前に投与開始し、ａｂ－ＰＴＸ投与のモデル化期間に、ＮＢＰの１回目の投与はａｂ－ＰＴＸ投与の１時間前に腹腔注射投与し、ＮＢＰの２回目の投与と１回目の投与との間隔は４ｈであり、投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、毎日に投与を行い、１７日間連続投与した。正常群（Ｎｏｒｍａｌ）には、同じ頻度で０．９％生理食塩水（０．９％ＩＮＪ ＮＳ）を投与した。モデル化方法を図１に示す。動物の群分け、投与方法および投与量の詳細を表３に示す。
【0061】
【表3】
【0062】
（２）群分け
ラットの熱痛閾値ベースライン値と体重に基づいて、ベースライン値が３～６ｓ範囲内におけるラットを選び、上記表３に従って均等に群分けした。
（３）観測指標
（ｉ）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、投与開始後、毎日一定時間に秤量したが、－１日目、０日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１０日目、１２日目、１４日目、および１６日目の体重データのみを統計した。
（ｉｉ）熱痛閾値（ｔｈｅｒｍａｌ ｐａｉｎ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）：電子足底痛測定器（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏ ｍｅｔｅｒ）を用い、光源の強度に調整して熱痛閾値ベースライン約３～６ｓを得、この時に光照強度は５８％であり、カットオフ値は１０ｓとした。ラットをガラス板上のプラスティック個室に置き、光源を開けてラット足底中心部を照射した。ラットの反射的退縮時間、すなわち熱痛閾値を記録し、各ラットの左足と右足をそれぞれ１回測定し、１５ｍｉｎ以上の間隔で３回繰り返し測定し、各ラットの６回の熱痛閾値の平均値を計算した。
ラットの熱痛閾値ベースライン値と体重に基づいて、ベースライン値が３～６ｓ範囲内におけるラットを選び、上記表３に従って均等に群分けした。
（３）観測指標
（ｉ）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、投与開始後、毎日一定時間に秤量したが、－１日目、０日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１０日目、１２日目、１４日目、および１６日目の体重データのみを統計した。
（ｉｉ）熱痛閾値（ｔｈｅｒｍａｌ ｐａｉｎ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）：電子足底痛測定器（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏ ｍｅｔｅｒ）を用い、光源の強度に調整して熱痛閾値ベースライン約３～６ｓを得、この時に光照強度は５８％であり、カットオフ値は１０ｓとした。ラットをガラス板上のプラスティック個室に置き、光源を開けてラット足底中心部を照射した。ラットの反射的退縮時間、すなわち熱痛閾値を記録し、各ラットの左足と右足をそれぞれ１回測定し、１５ｍｉｎ以上の間隔で３回繰り返し測定し、各ラットの６回の熱痛閾値の平均値を計算した。
【0063】
４．実験結果
（１）体重
モデル化（モデリング）の４日目～１６日目（Ｄ４～１６）には、正常群に比べて、モデル群のラット体重が有意に低下し（Ｐ＜０．０１）、モデル群に比べて、ＮＢＰ（１．５、５および１５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）３つの投与量群のラット体重が有意に変化しなかった。その詳細を図２に示す。
（１）体重
モデル化（モデリング）の４日目～１６日目（Ｄ４～１６）には、正常群に比べて、モデル群のラット体重が有意に低下し（Ｐ＜０．０１）、モデル群に比べて、ＮＢＰ（１．５、５および１５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）３つの投与量群のラット体重が有意に変化しなかった。その詳細を図２に示す。
【0064】
（２）熱痛閾値
７日目、１０日目、１３日目、１７日目には、測定した。７日目～１３日目（Ｄ７～１３）には、正常群に比べて、モデル群の熱痛閾値が有意に上昇（Ｐ＜０．０１）したが、モデル群に比べて、ＮＢＰ（１．５、５および１０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）群のいずれもモデルラットの熱痛閾値の上昇を有意に低下することができる（Ｐ＜０．０５またはＰ＜０．０１）。その詳細を図３および図４に示す。
１７日目（Ｄ１７）には、正常群に比べて、モデル群ラット熱痛閾値には、統計学的な差異は見られなかった（Ｄ１７データは示さず）ため、ＮＢＰ投与の群熱痛閾値を検出せずに実験を停止させた。
７日目、１０日目、１３日目、１７日目には、測定した。７日目～１３日目（Ｄ７～１３）には、正常群に比べて、モデル群の熱痛閾値が有意に上昇（Ｐ＜０．０１）したが、モデル群に比べて、ＮＢＰ（１．５、５および１０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）群のいずれもモデルラットの熱痛閾値の上昇を有意に低下することができる（Ｐ＜０．０５またはＰ＜０．０１）。その詳細を図３および図４に示す。
１７日目（Ｄ１７）には、正常群に比べて、モデル群ラット熱痛閾値には、統計学的な差異は見られなかった（Ｄ１７データは示さず）ため、ＮＢＰ投与の群熱痛閾値を検出せずに実験を停止させた。
【0065】
５．結論
ブチルフタリドでは、パクリタキセル（アルブミン結合型）誘発性ラット末梢神経障害の熱痛異常症状を有効に緩和することができる。
ブチルフタリドでは、パクリタキセル（アルブミン結合型）誘発性ラット末梢神経障害の熱痛異常症状を有効に緩和することができる。
【0066】
実施例２：パクリタキセル（アルブミン結合型）化学療法誘発性ラット末梢神経障害に対するブチルフタリド（胃内投与）の生体内薬効研究
１．試験動物
ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラット、雄、１６０～１８０ｇ、７２匹。
２．薬物
パクリタキセル（アルブミン結合型、ａｂ－ＰＴＸ）凍結乾燥粉末、１００ｍｇ／瓶、ロット番号：Ｂ０４１９０９１２１、石薬グループの欧意薬業有限公司製造、使用直前に生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド、経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、ロット番号：５１８１８０８０３、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造、使用直前に植物油で目標濃度に希釈した。
塩酸デュロキセチン、ロット番号：ＱＲＱＹＤ－ＪＮ、梯希愛（上海）化成工業発展有限公司、使用直前に２％のＤＭＳＯ含有生理食塩水で製作した。
１．試験動物
ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラット、雄、１６０～１８０ｇ、７２匹。
２．薬物
パクリタキセル（アルブミン結合型、ａｂ－ＰＴＸ）凍結乾燥粉末、１００ｍｇ／瓶、ロット番号：Ｂ０４１９０９１２１、石薬グループの欧意薬業有限公司製造、使用直前に生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド、経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、ロット番号：５１８１８０８０３、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造、使用直前に植物油で目標濃度に希釈した。
塩酸デュロキセチン、ロット番号：ＱＲＱＹＤ－ＪＮ、梯希愛（上海）化成工業発展有限公司、使用直前に２％のＤＭＳＯ含有生理食塩水で製作した。
【0067】
３．試験方法
３．１ モデル作成および投与方法
本試験では、雄ＳＤラットを用い、ａｂ－ＰＴＸ ５ｍｇ／ｋｇ、投与体積５ｍＬ／ｋｇで、０日目、２日目、４日目、６日目、９日目、１３日目（ａｂ－ＰＴＸの１回目の投与は試験０日目である）に、腹腔注射投与（ｉ．ｐ．）によりモデル化を行った。
３．１ モデル作成および投与方法
本試験では、雄ＳＤラットを用い、ａｂ－ＰＴＸ ５ｍｇ／ｋｇ、投与体積５ｍＬ／ｋｇで、０日目、２日目、４日目、６日目、９日目、１３日目（ａｂ－ＰＴＸの１回目の投与は試験０日目である）に、腹腔注射投与（ｉ．ｐ．）によりモデル化を行った。
【0068】
ＮＢＰは３つの投与量（３、１０、３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）を用い、陽性対照薬の塩酸デュロキセチン１５ｍｇ／ｋｇ ｑｄであった。ＮＢＰおよび塩酸デュロキセチンのぞれぞれはａｂ－ＰＴＸモデル化前の１日に投与開始し、ａｂ－ＰＴＸ投与モデル化期間、ＮＢＰ（１回目の投与）および塩酸デュロキセチンのぞれぞれはａｂ－ＰＴＸ腹腔注射投与前の１時間に投与し、ＮＢＰの２回目の投与と１回目の投与との間隔は４ｈ以上であり、投与体積５ｍＬ／ｋｇで連続に１４日間胃内投与した。
【0069】
モデル群には、ＮＢＰと同じ頻度および投与方法で植物油を投与した。
正常群には、ａｂ－ＰＴＸと同じ頻度および投与方法で生理食塩水を投与し、ＮＢＰと同じ頻度および投与方法で植物油を投与した。
モデル化方法および投与時間を図５に示し、動物の群分け、投与方法および投与量の詳細を表４に示す。
正常群には、ａｂ－ＰＴＸと同じ頻度および投与方法で生理食塩水を投与し、ＮＢＰと同じ頻度および投与方法で植物油を投与した。
モデル化方法および投与時間を図５に示し、動物の群分け、投与方法および投与量の詳細を表４に示す。
【0070】
【表4】
【0071】
３．２ 群分け
ラットの熱痛閾値ベースライン値と体重に基づいて、ベースライン値が３～６ｓ範囲内におけるラットを選び、上記３．１項における表４に従って均等に群分けした。。
ラットの熱痛閾値ベースライン値と体重に基づいて、ベースライン値が３～６ｓ範囲内におけるラットを選び、上記３．１項における表４に従って均等に群分けした。。
【0072】
３．３ 観測指標
（１）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、投与開始後、毎日一定時間に秤量したが、－１日目、０日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１０日目、１２日目および１４日目の体重データのみを統計した。
（２）熱痛閾値：－１日目、７日目、１４日目に測定を行った。方法：電子足底痛測定器（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用い、光源の強度を調整して熱痛閾値ベースライン約３～６ｓを得、この時に光照強度は５８％であり、カットオフ値は１０ｓとした。ラットをガラス板上のプラスティック個室に置き、光源を開けてラット足底中心部を照射した。ラットの反射的退縮時間、すなわち熱痛閾値を記録し、各ラットの左足と右足をそれぞれ１回測定し、１５ｍｉｎ以上の間隔で３回繰り返し測定し、各ラットの６回の熱痛閾値の平均値を計算した。
（１）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、投与開始後、毎日一定時間に秤量したが、－１日目、０日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１０日目、１２日目および１４日目の体重データのみを統計した。
（２）熱痛閾値：－１日目、７日目、１４日目に測定を行った。方法：電子足底痛測定器（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用い、光源の強度を調整して熱痛閾値ベースライン約３～６ｓを得、この時に光照強度は５８％であり、カットオフ値は１０ｓとした。ラットをガラス板上のプラスティック個室に置き、光源を開けてラット足底中心部を照射した。ラットの反射的退縮時間、すなわち熱痛閾値を記録し、各ラットの左足と右足をそれぞれ１回測定し、１５ｍｉｎ以上の間隔で３回繰り返し測定し、各ラットの６回の熱痛閾値の平均値を計算した。
【0073】
（３）機械的刺激痛閾値：０日目、６日目、１３日目に測定を行った。方法：電子機械的刺激痛測定器（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用い、ラットを鉄線網上のプラスティック個室に置き、１５ｍｉｎ静置し、直径０．４ｍｍの刺激プローブを選び、ラット足底中心部の位置に合わせ、ラットが反射的退縮になったまで力を徐々に小から大まで加え、この時の機器が示した最大値を記録し、すなわち機械的痛閾値であり、毎回の試験に各ラットの左足と右足を、それぞれ５分間以上の間隔で３回繰り返し測定し、各ラットの６回の機械的痛閾値の平均値を計算した。
【0074】
４．結果
４．１ 体重に対する影響
試験の４日目～１４日目には、正常群に比べて、モデル群のラット体重が有意に低下した（Ｐ＜０．０５）。投与期間全体において、モデル群に比べて、ＮＢＰの３つの投与量群（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）のラットの体重は明らかな変化がなく、塩酸デュロキセチン陽性薬物群はモデル群よりラット体重を有意に増加させることができ（Ｐ＜０．０５）、その詳細を図６に示す。
４．１ 体重に対する影響
試験の４日目～１４日目には、正常群に比べて、モデル群のラット体重が有意に低下した（Ｐ＜０．０５）。投与期間全体において、モデル群に比べて、ＮＢＰの３つの投与量群（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）のラットの体重は明らかな変化がなく、塩酸デュロキセチン陽性薬物群はモデル群よりラット体重を有意に増加させることができ（Ｐ＜０．０５）、その詳細を図６に示す。
【0075】
４．２ 熱痛閾値に対する影響
試験の７日目には、正常群に比べて、モデル群のラット熱痛閾値が有意に上昇し（Ｐ＜０．０１）、モデル群に比べて、ＮＢＰ（３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）群のラット熱痛閾値が有意に低下した（Ｐ＜０．０５）。
試験の７日目には、正常群に比べて、モデル群のラット熱痛閾値が有意に上昇し（Ｐ＜０．０１）、モデル群に比べて、ＮＢＰ（３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）群のラット熱痛閾値が有意に低下した（Ｐ＜０．０５）。
【0076】
試験の１４日目には、正常群に比べて、モデル群のラット熱痛閾値が有意に上昇し（Ｐ＜０．００１）、モデル群に比べて、ＮＢＰの３つの投与量群（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）は、塩酸デュロキセチン（１５ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）陽性薬物群は、ラット熱痛閾値のいずれも有意に低下し（Ｐ＜０．０５）、その詳細を図７に示す。
【0077】
４．３ 機械的痛閾値に対する影響
試験の６日目には、正常群に比べて、モデル群のラット機械的痛閾値は有意に上昇し（Ｐ＜０．０５）、モデル群に比べて、ＮＢＰ（３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）群のラット機械的痛閾値は有意に低下した（Ｐ＜０．０５）。
試験の１３日目には、正常群に比べて、モデル群のラット機械的痛閾値は有意に上昇し Ｐ＜０．００１）、モデル群に比べて、ＮＢＰ（１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）投与量群は、塩酸デュロキセチン（１５ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）陽性薬物群のラット機械的痛閾値のいずれも有意に低下し（Ｐ＜０．０５）、ＮＢＰ（３ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）投与量群のラット機械的痛閾値は低下傾向を示したが、統計的な差異はなかった。その詳細を図８に示す。
試験の６日目には、正常群に比べて、モデル群のラット機械的痛閾値は有意に上昇し（Ｐ＜０．０５）、モデル群に比べて、ＮＢＰ（３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）群のラット機械的痛閾値は有意に低下した（Ｐ＜０．０５）。
試験の１３日目には、正常群に比べて、モデル群のラット機械的痛閾値は有意に上昇し Ｐ＜０．００１）、モデル群に比べて、ＮＢＰ（１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）投与量群は、塩酸デュロキセチン（１５ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）陽性薬物群のラット機械的痛閾値のいずれも有意に低下し（Ｐ＜０．０５）、ＮＢＰ（３ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）投与量群のラット機械的痛閾値は低下傾向を示したが、統計的な差異はなかった。その詳細を図８に示す。
【0078】
６．結論
このような試験条件下で、ＮＢＰはａｂ－ＰＴＸ誘発性ラットのＰＩＰＮ（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ、ＰＩＰＮ）モデルの末梢神経障害の症状を用量依存的に緩和することができる。
このような試験条件下で、ＮＢＰはａｂ－ＰＴＸ誘発性ラットのＰＩＰＮ（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ、ＰＩＰＮ）モデルの末梢神経障害の症状を用量依存的に緩和することができる。
【0079】
実施例３：ａｂ－ＰＴＸの抗Ｂ１６／Ｆ１０移植腫瘍の抗腫瘍効果およびＰＫに及ぼすＮＢＰの影響
１．試験システム
１．１ 試験動物
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス、雌、１５～１７ｇ、４０匹。
１．２ 細胞株
Ｂ１６／Ｆ１０細胞（マウス悪性黒色腫細胞）：上海吉凱遺伝子化学技術有限公司から購入した。
１．試験システム
１．１ 試験動物
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス、雌、１５～１７ｇ、４０匹。
１．２ 細胞株
Ｂ１６／Ｆ１０細胞（マウス悪性黒色腫細胞）：上海吉凱遺伝子化学技術有限公司から購入した。
【0080】
２．薬物
パクリタキセル（アルブミン結合型）凍結乾燥粉末、１００ｍｇ／本、ロット番号：Ｂ０４１９０９１２１、石薬グループの欧意薬業有限公司製造、使用直前に生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド、２５ｍｇ／５ｍＬ／瓶、ロット番号：Ｑ２７１９０４０１、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造、使用直前に生理食塩水で目標濃度に希釈した。
パクリタキセル（アルブミン結合型）凍結乾燥粉末、１００ｍｇ／本、ロット番号：Ｂ０４１９０９１２１、石薬グループの欧意薬業有限公司製造、使用直前に生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド、２５ｍｇ／５ｍＬ／瓶、ロット番号：Ｑ２７１９０４０１、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造、使用直前に生理食塩水で目標濃度に希釈した。
【0081】
３．試験方法
３．１ モデル作成
生体外でＢ１６／Ｆ１０細胞を蘇生させて十分な量まで継代した後、顕微鏡で計数し、その後無血清培地で細胞を希釈し、細胞数を約１×１０７個／ｍＬに調整し、細胞懸濁液を氷水浴に置いた。
無菌注射器でＢ１６／Ｆ１０細胞懸濁液を抽出し、Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス前肢腋窩部皮下組織に接種し、接種体積は０．１ｍＬ／匹、腫瘍細胞を約１．０×１０６個含み、Ｃ５７ＢＬ／６ＮマウスＢ１６／Ｆ１０移植腫瘍モデルを作製した。
３．１ モデル作成
生体外でＢ１６／Ｆ１０細胞を蘇生させて十分な量まで継代した後、顕微鏡で計数し、その後無血清培地で細胞を希釈し、細胞数を約１×１０７個／ｍＬに調整し、細胞懸濁液を氷水浴に置いた。
無菌注射器でＢ１６／Ｆ１０細胞懸濁液を抽出し、Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス前肢腋窩部皮下組織に接種し、接種体積は０．１ｍＬ／匹、腫瘍細胞を約１．０×１０６個含み、Ｃ５７ＢＬ／６ＮマウスＢ１６／Ｆ１０移植腫瘍モデルを作製した。
【0082】
３．２ 投与方法
投与群：
ａｂ－ＰＴＸ単独投与群：ａｂ－ＰＴＸ（２５ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｗ）を、投与体積１０ｍＬ／ｋｇで週２回（１日目、４日目、８日目、１１日目、１５日目、1日１回）腹腔注射投与を行った。
ＮＢＰ／ａｂ－ＰＴＸ群：ａｂ－ＰＴＸ（２５ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｗ）を、週２回（１日目、４日目、８日目、１１日目、１５日目、1日１回）腹腔注射投与を行った。ＮＢＰ（３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）を、（０日目に投与開始し）１日２回腹腔注射投与を行った。ａｂ－ＰＴＸモデル化期間に、ＮＢＰの１回目の投与は、ａｂ－ＰＴＸ投与の１ｈ前に腹腔注射投与を行い、２回目の投与と１回目の投与との間隔は４ｈより大きく、１５日間連続投与した。投与体積はいずれも１０ｍＬ／ｋｇであった。
投与群：
ａｂ－ＰＴＸ単独投与群：ａｂ－ＰＴＸ（２５ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｗ）を、投与体積１０ｍＬ／ｋｇで週２回（１日目、４日目、８日目、１１日目、１５日目、1日１回）腹腔注射投与を行った。
ＮＢＰ／ａｂ－ＰＴＸ群：ａｂ－ＰＴＸ（２５ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｗ）を、週２回（１日目、４日目、８日目、１１日目、１５日目、1日１回）腹腔注射投与を行った。ＮＢＰ（３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）を、（０日目に投与開始し）１日２回腹腔注射投与を行った。ａｂ－ＰＴＸモデル化期間に、ＮＢＰの１回目の投与は、ａｂ－ＰＴＸ投与の１ｈ前に腹腔注射投与を行い、２回目の投与と１回目の投与との間隔は４ｈより大きく、１５日間連続投与した。投与体積はいずれも１０ｍＬ／ｋｇであった。
【0083】
溶媒群：ａｂ－ＰＴＸおよびＮＢＰと同じ頻度および投与体積で溶媒（生理食塩水）を腹腔注射投与した。
〔注〕ＮＢＰの３つの投与量は、それぞれ６０ｍｇ／ｄ、２００ｍｇ／ｄ、６００ｍｇ／ｄの成人１日投与量（６０ｋｇで、経口投与）に換算した。
〔注〕ＮＢＰの３つの投与量は、それぞれ６０ｍｇ／ｄ、２００ｍｇ／ｄ、６００ｍｇ／ｄの成人１日投与量（６０ｋｇで、経口投与）に換算した。
【0084】
３．３ 観測指標と評価指数
３．３．１ 一般観測指標
（１）一般状態観測：試験期間に全ての動物を1日1回観測し、体の各部位の異常と行動変化状況を記録した。
（２）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、適切な体重の動物を選択して試験に使用した。投与開始後１日１回一定時間に動物の体重を測定した。
（３）死亡および瀕死：死亡動物の死亡時間を記録し、瀕死動物の死亡時間を決定するために観測頻度を増加させるように注意した。
３．３．１ 一般観測指標
（１）一般状態観測：試験期間に全ての動物を1日1回観測し、体の各部位の異常と行動変化状況を記録した。
（２）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、適切な体重の動物を選択して試験に使用した。投与開始後１日１回一定時間に動物の体重を測定した。
（３）死亡および瀕死：死亡動物の死亡時間を記録し、瀕死動物の死亡時間を決定するために観測頻度を増加させるように注意した。
【0085】
３．３．２ 腫瘍重量
試験終了時、動物をＣＯ２で窒息安楽死させた後、腫瘍を剥ぎ取って秤量した。
腫瘍重量抑制率％＝（１－投与群の腫瘍重量／溶媒群の腫瘍重量）×１００％
３．３．３ ＰＫ採血と検出
ａｂ－ＰＴＸの最終回の投与前（０ｈ）、投与後５ｍｉｎ、０．５ｈ、１ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、２４ｈに採血し（詳細を表５に示す）、ヘパリンで抗凝固し、血漿を遠心分離し、－８０℃で保存して用意し、蛋白質沈殿－ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血漿中のパクリタキセル全量を測定した。
試験終了時、動物をＣＯ２で窒息安楽死させた後、腫瘍を剥ぎ取って秤量した。
腫瘍重量抑制率％＝（１－投与群の腫瘍重量／溶媒群の腫瘍重量）×１００％
３．３．３ ＰＫ採血と検出
ａｂ－ＰＴＸの最終回の投与前（０ｈ）、投与後５ｍｉｎ、０．５ｈ、１ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、２４ｈに採血し（詳細を表５に示す）、ヘパリンで抗凝固し、血漿を遠心分離し、－８０℃で保存して用意し、蛋白質沈殿－ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血漿中のパクリタキセル全量を測定した。
【0086】
【表5】
【0087】
４．結果
４．１ 体重に対する影響
溶媒群に比べて、各投与群のマウス体重の増加率は、いずれも有意に低下した（Ｐ＜０．０１）。ａｂ－ＰＴＸ群に比べて、ＮＢＰ／ａｂ－ＰＴＸの１０／２５ｍｇ／ｋｇ投与量群は、体重増加率が有意に低下した（Ｐ＜０．０１）。腫瘍重量データの分析から、各投与群の体重増加率の低下が腫瘍重量に対する薬物阻害による結果であると考えられる。その詳細を図９に示す。
４．１ 体重に対する影響
溶媒群に比べて、各投与群のマウス体重の増加率は、いずれも有意に低下した（Ｐ＜０．０１）。ａｂ－ＰＴＸ群に比べて、ＮＢＰ／ａｂ－ＰＴＸの１０／２５ｍｇ／ｋｇ投与量群は、体重増加率が有意に低下した（Ｐ＜０．０１）。腫瘍重量データの分析から、各投与群の体重増加率の低下が腫瘍重量に対する薬物阻害による結果であると考えられる。その詳細を図９に示す。
【0088】
４．２ 腫瘍重量に対する影響
溶媒群に比べて、各投与群は、腫瘍増殖を有意に抑制することができた（Ｐ＜０．００１）。ａｂ－ＰＴＸ群に比べて、異なる投与量のＮＢＰとａｂ－ＰＴＸとの併用投与による腫瘍抑制には有意差が認められなかった（Ｐ＞０．０５）。各群の腫瘍重量詳細を表６に示す。
溶媒群に比べて、各投与群は、腫瘍増殖を有意に抑制することができた（Ｐ＜０．００１）。ａｂ－ＰＴＸ群に比べて、異なる投与量のＮＢＰとａｂ－ＰＴＸとの併用投与による腫瘍抑制には有意差が認められなかった（Ｐ＞０．０５）。各群の腫瘍重量詳細を表６に示す。
【0089】
【表6】
【0090】
４．３ ＰＫに対する影響
蛋白質沈殿－ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血漿中のパクリタキセル全量を測定した。その結果、各投与群でＣｍａｘ、ＡＵＣ０～ｔなどの指標に有意差はなく、ＮＢＰがａｂ－ＰＴＸのマウス体内のＰＫ挙動に影響を与えなかった。詳細を表７に示す。
蛋白質沈殿－ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血漿中のパクリタキセル全量を測定した。その結果、各投与群でＣｍａｘ、ＡＵＣ０～ｔなどの指標に有意差はなく、ＮＢＰがａｂ－ＰＴＸのマウス体内のＰＫ挙動に影響を与えなかった。詳細を表７に示す。
【0091】
【表7】
【0092】
５．結論
本試験において、ＮＢＰは、ａｂ－ＰＴＸの抗腫瘍効果およびａｂ－ＰＴＸのＰＫ挙動に有意な影響を与えなかった。
本試験において、ＮＢＰは、ａｂ－ＰＴＸの抗腫瘍効果およびａｂ－ＰＴＸのＰＫ挙動に有意な影響を与えなかった。
【0093】
実施例４：ａｂ－ＰＴＸの抗ＪＩＭＴ－１移植腫瘍の抗腫瘍瘍効果およびＰＫに及ぼすＮＢＰの影響
１．試験システム
１．１ 試験動物
Ｎｕ／Ｎｕマウス、雌、１５～１７ｇ、４８匹。
１．２ 細胞株
ＪＩＭＴ－１細胞（ヒト乳癌細胞）：南京科佰生物科学技術有限公司から購入した。
１．試験システム
１．１ 試験動物
Ｎｕ／Ｎｕマウス、雌、１５～１７ｇ、４８匹。
１．２ 細胞株
ＪＩＭＴ－１細胞（ヒト乳癌細胞）：南京科佰生物科学技術有限公司から購入した。
【0094】
２．試験目的
本試験においてＮｕ／ＮｕマウスＪＩＭＴ－１細胞移植腫瘍モデルを用い、ＮＢＰのａｂ－ＰＴＸの抗腫瘍効果およびそのＰＫ挙動に対する影響を検証した。
本試験においてＮｕ／ＮｕマウスＪＩＭＴ－１細胞移植腫瘍モデルを用い、ＮＢＰのａｂ－ＰＴＸの抗腫瘍効果およびそのＰＫ挙動に対する影響を検証した。
【0095】
３．薬物
パクリタキセル（アルブミン結合型）凍結乾燥粉末、１００ｍｇ／本、ロット番号：Ｂ０４２００７４１０、石薬グループの欧意薬業有限公司製造、使用直前に生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド、経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、ロット番号：５１８１８０８０３、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造、使用直前に植物油で目標濃度に希釈した。
パクリタキセル（アルブミン結合型）凍結乾燥粉末、１００ｍｇ／本、ロット番号：Ｂ０４２００７４１０、石薬グループの欧意薬業有限公司製造、使用直前に生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド、経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、ロット番号：５１８１８０８０３、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造、使用直前に植物油で目標濃度に希釈した。
【0096】
４．試験方法
４．１ モデル作成
生体外でＪＩＭＴ－１細胞を蘇生させて十分な量まで継代した後、顕微鏡で計数し、その後無血清培地で細胞を希釈し、細胞数を約１×１０８個／ｍＬに調整し、細胞懸濁液を氷水浴に置いた。
無菌注射器でＪＩＭＴ－１細胞懸濁液を抽出し、Ｎｕ／Ｎｕマウス前肢腋窩部皮下組織に接種し、接種体積は０．１ｍＬ／匹、腫瘍細胞を約１．０×１０７個含み、Ｎｕ／ＮｕマウスＪＩＭＴ－１移植腫瘍モデルを作製した。
４．１ モデル作成
生体外でＪＩＭＴ－１細胞を蘇生させて十分な量まで継代した後、顕微鏡で計数し、その後無血清培地で細胞を希釈し、細胞数を約１×１０８個／ｍＬに調整し、細胞懸濁液を氷水浴に置いた。
無菌注射器でＪＩＭＴ－１細胞懸濁液を抽出し、Ｎｕ／Ｎｕマウス前肢腋窩部皮下組織に接種し、接種体積は０．１ｍＬ／匹、腫瘍細胞を約１．０×１０７個含み、Ｎｕ／ＮｕマウスＪＩＭＴ－１移植腫瘍モデルを作製した。
【0097】
４．２ 投与方法
各投与群：
ａｂ－ＰＴＸ単独投与群：ａｂ－ＰＴＸ（１５ｍｇ／ｋｇ、ｑｗ）を、週１回（０日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目）静脈注射投与を行った。投与期間：２８日間。投与体積：１０ｍＬ／ｋｇ。
ＮＢＰの単独投与群：ＮＢＰ（６０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）を、（０日目に投与開始し）１日２回経口胃内投与を行い、投与間隔は、４ｈより大きい必要があり、投与期間：２８日間。投与体積：いずれも１０ｍＬ／ｋｇ。
ＮＢＰ／ａｂ－ＰＴＸ群：ａｂ－ＰＴＸ（１５ｍｇ／ｋｇ、ｑｗ）を、週１回（０日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目）静脈注射投与を行った。ＮＢＰ（６ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）を、（０日目に投与開始し）１日２回経口胃内投与を行い、投与間隔は４ｈより大きい必要があり、ＮＢＰの１回目の投与はａｂ－ＰＴＸ投与の１ｈ前に行った。投与期間：２８日間。投与体積：いずれも１０ｍＬ／ｋｇ。
各投与群：
ａｂ－ＰＴＸ単独投与群：ａｂ－ＰＴＸ（１５ｍｇ／ｋｇ、ｑｗ）を、週１回（０日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目）静脈注射投与を行った。投与期間：２８日間。投与体積：１０ｍＬ／ｋｇ。
ＮＢＰの単独投与群：ＮＢＰ（６０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）を、（０日目に投与開始し）１日２回経口胃内投与を行い、投与間隔は、４ｈより大きい必要があり、投与期間：２８日間。投与体積：いずれも１０ｍＬ／ｋｇ。
ＮＢＰ／ａｂ－ＰＴＸ群：ａｂ－ＰＴＸ（１５ｍｇ／ｋｇ、ｑｗ）を、週１回（０日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目）静脈注射投与を行った。ＮＢＰ（６ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）を、（０日目に投与開始し）１日２回経口胃内投与を行い、投与間隔は４ｈより大きい必要があり、ＮＢＰの１回目の投与はａｂ－ＰＴＸ投与の１ｈ前に行った。投与期間：２８日間。投与体積：いずれも１０ｍＬ／ｋｇ。
【0098】
溶媒群：ａｂ－ＰＴＸと同じ頻度および方法で生理食塩水を投与し、ＮＢＰと同じ頻度および方法で植物油を投与した。
〔注〕ＮＢＰ投与量は、６０ｍｇ／ｄ、２００ｍｇ／ｄ、６００ｍｇ／ｄの成人１日投与量（６０ｋｇで、経口投与）に換算した。
〔注〕ＮＢＰ投与量は、６０ｍｇ／ｄ、２００ｍｇ／ｄ、６００ｍｇ／ｄの成人１日投与量（６０ｋｇで、経口投与）に換算した。
【0099】
４．３ 観測指標と評価指数
４．３．１ 一般観測指標
（１）一般状態観測：試験期間に全ての動物を1日1回観測し、体の各部位の異常と行動変化状況を記録した。
（２）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、適切な体重の動物を選択して試験に使用した。投与開始後１日１回一定時間に動物の体重を測定した。
（３）死亡および瀕死：死亡動物の死亡時間を記録し、瀕死動物の死亡時間を決定するために観測頻度を増加させるように注意した。
４．３．１ 一般観測指標
（１）一般状態観測：試験期間に全ての動物を1日1回観測し、体の各部位の異常と行動変化状況を記録した。
（２）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、適切な体重の動物を選択して試験に使用した。投与開始後１日１回一定時間に動物の体重を測定した。
（３）死亡および瀕死：死亡動物の死亡時間を記録し、瀕死動物の死亡時間を決定するために観測頻度を増加させるように注意した。
【0100】
４．３．２ 腫瘍重量
試験終了時、動物をＣＯ２で窒息安楽死させた後、腫瘍を剥ぎ取って秤量した。
腫瘍重量抑制率％＝（１－投与群の腫瘍重量／溶媒群の腫瘍重量）×１００％ 。
４．３．３ ＰＫ採血と検出
ａｂ－ＰＴＸの最終回の投与前（０ｈ）、投与後５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、０．５ｈ、１ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈに採血し（詳細を表８に示す）、ヘパリンで抗凝固し、血漿を遠心分離し、－８０℃で保存して用意し、蛋白質沈殿－ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血漿中のパクリタキセル全量を測定した。
試験終了時、動物をＣＯ２で窒息安楽死させた後、腫瘍を剥ぎ取って秤量した。
腫瘍重量抑制率％＝（１－投与群の腫瘍重量／溶媒群の腫瘍重量）×１００％ 。
４．３．３ ＰＫ採血と検出
ａｂ－ＰＴＸの最終回の投与前（０ｈ）、投与後５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、０．５ｈ、１ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈに採血し（詳細を表８に示す）、ヘパリンで抗凝固し、血漿を遠心分離し、－８０℃で保存して用意し、蛋白質沈殿－ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血漿中のパクリタキセル全量を測定した。
【0101】
【表8】
【0102】
【0103】
５．２ 腫瘍重量に対する影響
腫瘍重量の結果、溶媒群に比べて、ａｂ－ＰＴＸ投与群は腫瘍増殖を有意に抑制することができ（Ｐ＜０．００１）、ＮＢＰ（６０ｍｇ／ｋｇ）投与量群はマウスの腫瘍増殖には明らかな影響を与えなかったことが示され、ａｂ－ＰＴＸ（１５ｍｇ／ｋｇ）群に比べて、は異なる投与量のＮＢＰとａｂ－ＰＴＸとの併用投与では腫瘍抑制作用に有意差が認められなかった（Ｐ＞０．０５）ことが示され、その詳細を表９に示す。
腫瘍重量の結果、溶媒群に比べて、ａｂ－ＰＴＸ投与群は腫瘍増殖を有意に抑制することができ（Ｐ＜０．００１）、ＮＢＰ（６０ｍｇ／ｋｇ）投与量群はマウスの腫瘍増殖には明らかな影響を与えなかったことが示され、ａｂ－ＰＴＸ（１５ｍｇ／ｋｇ）群に比べて、は異なる投与量のＮＢＰとａｂ－ＰＴＸとの併用投与では腫瘍抑制作用に有意差が認められなかった（Ｐ＞０．０５）ことが示され、その詳細を表９に示す。
【0104】
【表9】
【0105】
５．４ ＰＫに対する影響
その結果、ａｂ－ＰＴＸ単独投与群、およびＮＢＰとａｂ－ＰＴＸとの併用投与群の血漿中のパクリタキセルの主な薬物動態パラメータに有意差がなくほぼ一致し、ブチルフタリドとａｂ－ＰＴＸとの併用投与後血漿中のパクリタキセルの薬物動態挙動に影響しないことが示され、その詳細を表１０に示す。
その結果、ａｂ－ＰＴＸ単独投与群、およびＮＢＰとａｂ－ＰＴＸとの併用投与群の血漿中のパクリタキセルの主な薬物動態パラメータに有意差がなくほぼ一致し、ブチルフタリドとａｂ－ＰＴＸとの併用投与後血漿中のパクリタキセルの薬物動態挙動に影響しないことが示され、その詳細を表１０に示す。
【0106】
【表10】
【0107】
６．結論
本試験において、ＮＢＰはａｂ－ＰＴＸの抗腫瘍効果およびａｂ－ＰＴＸのＰＫ挙動に有意な影響を与えなかった。
本試験において、ＮＢＰはａｂ－ＰＴＸの抗腫瘍効果およびａｂ－ＰＴＸのＰＫ挙動に有意な影響を与えなかった。
【0108】
実施例５：Ａｂ－ＰＴＸのインビトロ薬効に対するＮＢＰの影響
１．細胞および培養環境
１．細胞および培養環境
【0109】
【表11】
【0110】
２．試験目的
ＮＢＰが生体外でａｂ－ＰＴＸの腫瘍細胞増殖に対する阻害作用に影響するか否かを検討する。
３．薬物
パクリタキセル（アルブミン結合型）凍結乾燥粉末、１００ｍｇ／本、ロット番号：Ｂ０４１９０９１２１、石薬グループの欧意薬業有限公司製造。
ＮＢＰが生体外でａｂ－ＰＴＸの腫瘍細胞増殖に対する阻害作用に影響するか否かを検討する。
３．薬物
パクリタキセル（アルブミン結合型）凍結乾燥粉末、１００ｍｇ／本、ロット番号：Ｂ０４１９０９１２１、石薬グループの欧意薬業有限公司製造。
【0111】
ブチルフタリド、経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、ロット番号：５１８１８０８０３、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造。
【0112】
４．試験設計
本試験には、ａｂ－ＰＴＸ単独投与群、併用投与群（ａｂ－ＰＴＸ／ＮＢＰ）、ＮＢＰ群を分けた。各群には異なる薬物濃度勾配を設けた。
ａｂ－ＰＴＸ単独投与群：（１）ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＪＩＭＴ－１、ＳＫ－ＯＶ－３、Ａ５４９細胞株：ａｂ－ＰＴＸは初期濃度２００ｎＭとして３×連続希釈されてそれぞれ２００、６６．６７、２２．２２、７．４１、２．４７、０．８２、０．２７、０．０９ｎＭ合計で８つの濃度値とし、（２）Ａ３７５、ＨＴ２９細胞株：初回試験においてａｂ－ＰＴＸは初期濃度１００ｎＭとして３×連続希釈されてそれぞれ１００、３３．３３、１１．１１、３．７０、１．２４、０．４１、０．１４、０．０５ｎＭ合計で８つの濃度値とし、重複試験においてａｂ－ＰＴＸは初期濃度１００ｎＭとして２×連続希釈されてそれぞれ１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、１．５６、０．７８ｎＭ合計で８つの濃度値とした。
本試験には、ａｂ－ＰＴＸ単独投与群、併用投与群（ａｂ－ＰＴＸ／ＮＢＰ）、ＮＢＰ群を分けた。各群には異なる薬物濃度勾配を設けた。
ａｂ－ＰＴＸ単独投与群：（１）ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＪＩＭＴ－１、ＳＫ－ＯＶ－３、Ａ５４９細胞株：ａｂ－ＰＴＸは初期濃度２００ｎＭとして３×連続希釈されてそれぞれ２００、６６．６７、２２．２２、７．４１、２．４７、０．８２、０．２７、０．０９ｎＭ合計で８つの濃度値とし、（２）Ａ３７５、ＨＴ２９細胞株：初回試験においてａｂ－ＰＴＸは初期濃度１００ｎＭとして３×連続希釈されてそれぞれ１００、３３．３３、１１．１１、３．７０、１．２４、０．４１、０．１４、０．０５ｎＭ合計で８つの濃度値とし、重複試験においてａｂ－ＰＴＸは初期濃度１００ｎＭとして２×連続希釈されてそれぞれ１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、１．５６、０．７８ｎＭ合計で８つの濃度値とした。
【0113】
ａｂ－ＰＴＸ／ＮＢＰ群：ＮＢＰの最終濃度は３０μＭで、ａｂ－ＰＴＸの濃度勾配は単独投与群と同様であった。
ＮＢＰの単独投与群：ＮＢＰは初期濃度４８０μＭとして２×連続希釈されてそれぞれ４８０、２４０、１２０、６０、３０、１５、７．５、３．７５μＭ合計で８つの濃度値とした。
薬物作用時間はいずれも７２ｈである。
ＮＢＰの単独投与群：ＮＢＰは初期濃度４８０μＭとして２×連続希釈されてそれぞれ４８０、２４０、１２０、６０、３０、１５、７．５、３．７５μＭ合計で８つの濃度値とした。
薬物作用時間はいずれも７２ｈである。
【0114】
５．試験方法
通常培養中の対数増殖期にある細胞を一定数で９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルで接種した。２４時間付着した後、ａｂ－ＰＴＸ単独投与群に、異なる濃度勾配のａｂ－ＰＴＸ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加えた。ａｂ－ＰＴＸ／ＮＢＰ併用投与群に、異なる濃度勾配のａｂ－ＰＴＸと３０μＭのＮＢＰ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加えた。ＮＢＰの単独投与群に、異なる濃度勾配のＮＢＰ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加えた。各薬物の各濃度のいずれも３つの重複ウェルを設け、相応するブランクウェル（培地のみ）および正常ウェル（薬物濃度：０）を設けた。薬物作用７２時間後、２０μＬ／ウェルでＭＴＴ作動液（５ｍｇ／ｍＬ）を加えた。３７℃で４時間作用した後に、上清液を除去し、ＤＭＳＯ（分析純）１５０μＬを加えた。マイクロプレート発振器で十分に混合し、プレートをきれいに拭き取り、マイクロプレートリーダーにより５５０ｎｍにおける光学濃度（ＯＤ）を検出した。
通常培養中の対数増殖期にある細胞を一定数で９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルで接種した。２４時間付着した後、ａｂ－ＰＴＸ単独投与群に、異なる濃度勾配のａｂ－ＰＴＸ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加えた。ａｂ－ＰＴＸ／ＮＢＰ併用投与群に、異なる濃度勾配のａｂ－ＰＴＸと３０μＭのＮＢＰ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加えた。ＮＢＰの単独投与群に、異なる濃度勾配のＮＢＰ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加えた。各薬物の各濃度のいずれも３つの重複ウェルを設け、相応するブランクウェル（培地のみ）および正常ウェル（薬物濃度：０）を設けた。薬物作用７２時間後、２０μＬ／ウェルでＭＴＴ作動液（５ｍｇ／ｍＬ）を加えた。３７℃で４時間作用した後に、上清液を除去し、ＤＭＳＯ（分析純）１５０μＬを加えた。マイクロプレート発振器で十分に混合し、プレートをきれいに拭き取り、マイクロプレートリーダーにより５５０ｎｍにおける光学濃度（ＯＤ）を検出した。
【0115】
以下の式で細胞増殖の抑制率を計算した。
抑制率（％）＝（ＯＤ値正常ウェル－ＯＤ値投与ウェル）／（ＯＤ値正常ウェル－ＯＤ値ブランクウェル）×１００％
各濃度の抑制率に基づき、薬物の半抑制濃度ＩＣ５０をＳＰＳＳ１９．０で計算した。
試験を３回繰り返し、３回試験結果の平均値±ＳＤ（標準偏差）でＩＣ５０値を表した。
抑制率（％）＝（ＯＤ値正常ウェル－ＯＤ値投与ウェル）／（ＯＤ値正常ウェル－ＯＤ値ブランクウェル）×１００％
各濃度の抑制率に基づき、薬物の半抑制濃度ＩＣ５０をＳＰＳＳ１９．０で計算した。
試験を３回繰り返し、３回試験結果の平均値±ＳＤ（標準偏差）でＩＣ５０値を表した。
【0116】
６．結果
６．１ ａｂ－ＰＴＸのＩＣ５０値に対するＮＢＰの影響
ａｂ－ＰＴＸ単独投与群の結果、ａｂ－ＰＴＸがヒト乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＪＩＭＴ－１）、ヒト卵巣癌細胞（ＳＫ－ＯＶ－３）、ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒト悪性黒色腫（Ａ３７５）のインビトロ増殖のいずれもに対して明らかな抑制作用を有し、そのＩＣ５０平均値が５～５０ｎＭの範囲にあることが示された。特定濃度（３０μＭ）のＮＢＰを加えた併用投与では、ａｂ－ＰＴＸ単独投与に比べて、併用投与群の各細胞ａｂ－ＰＴＸのＩＣ５０平均値が５～５０ｎＭの範囲に維持して明らかな変化が認められなかった。当該結果、ＮＢＰがａｂ－ＰＴＸの腫瘍細胞増殖へのインビトロ阻害作用を有意に影響しなかったことが示された。
ａｂ－ＰＴＸ単独投与およびａｂ－ＰＴＸとＮＢＰとの併用投与が６株の腫瘍細胞のインビトロ増殖に対する抑制のＩＣ５０値を表１２に示す。
６．１ ａｂ－ＰＴＸのＩＣ５０値に対するＮＢＰの影響
ａｂ－ＰＴＸ単独投与群の結果、ａｂ－ＰＴＸがヒト乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＪＩＭＴ－１）、ヒト卵巣癌細胞（ＳＫ－ＯＶ－３）、ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒト悪性黒色腫（Ａ３７５）のインビトロ増殖のいずれもに対して明らかな抑制作用を有し、そのＩＣ５０平均値が５～５０ｎＭの範囲にあることが示された。特定濃度（３０μＭ）のＮＢＰを加えた併用投与では、ａｂ－ＰＴＸ単独投与に比べて、併用投与群の各細胞ａｂ－ＰＴＸのＩＣ５０平均値が５～５０ｎＭの範囲に維持して明らかな変化が認められなかった。当該結果、ＮＢＰがａｂ－ＰＴＸの腫瘍細胞増殖へのインビトロ阻害作用を有意に影響しなかったことが示された。
ａｂ－ＰＴＸ単独投与およびａｂ－ＰＴＸとＮＢＰとの併用投与が６株の腫瘍細胞のインビトロ増殖に対する抑制のＩＣ５０値を表１２に示す。
【0117】
【表12】
【0118】
６．２ 腫瘍細胞のインビトロ増殖に対するＮＢＰの影響
ＮＢＰ単独投与では、ヒト乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＪＩＭＴ－１）、ヒト卵巣癌細胞（ＳＫ－ＯＶ－３）、ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒト悪性黒色腫（Ａ３７５）のインビトロ増殖に対する明らかな抑制作用が認められなかった。なかでも６株の細胞増殖に対する３０μＭのＮＢＰの抑制率を表１３に示す。
ＮＢＰ単独投与では、ヒト乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＪＩＭＴ－１）、ヒト卵巣癌細胞（ＳＫ－ＯＶ－３）、ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒト悪性黒色腫（Ａ３７５）のインビトロ増殖に対する明らかな抑制作用が認められなかった。なかでも６株の細胞増殖に対する３０μＭのＮＢＰの抑制率を表１３に示す。
【0119】
【表13】
【0120】
７．結論
ＮＢＰは、ａｂ－ＰＴＸがヒト乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＪＩＭＴ－１）、ヒト卵巣癌細胞（ＳＫ－ＯＶ－３）、ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒト悪性黒色腫細胞（Ａ３７５）のインビトロ増殖に対する抑制作用に影響しなかった。かつ、ＮＢＰ単独投与では、ヒト乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＪＩＭＴ－１）、ヒト卵巣癌細胞（ＳＫ－ＯＶ－３）、ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒト悪性黒色腫（Ａ３７５）のインビトロ増殖に対する明らかな抑制作用が認められなかった。
ＮＢＰは、ａｂ－ＰＴＸがヒト乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＪＩＭＴ－１）、ヒト卵巣癌細胞（ＳＫ－ＯＶ－３）、ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒト悪性黒色腫細胞（Ａ３７５）のインビトロ増殖に対する抑制作用に影響しなかった。かつ、ＮＢＰ単独投与では、ヒト乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＪＩＭＴ－１）、ヒト卵巣癌細胞（ＳＫ－ＯＶ－３）、ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒト悪性黒色腫（Ａ３７５）のインビトロ増殖に対する明らかな抑制作用が認められなかった。
【0121】
実施例６：ボルテゾミブ（Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）化学療法誘発性末梢神経障害に対するブチルフタリドの生体内薬効研究
【0122】
１．試験動物
ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラット、雄、１８０～２００ｇ、７２匹。
ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラット、雄、１８０～２００ｇ、７２匹。
【0123】
２．薬物
ボルテゾミブ（Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）：ロット番号：２０１９１１０２、石薬グループの中奇製薬技術（石家荘）有限公司、使用直前に２％のＤＭＳＯを含む生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド：経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、ロット番号：５１８１８０８０３、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造。使用直前に植物油で目標濃度に希釈した。
塩酸デュロキセチン、ロット番号：ＱＲＱＹＤ－ＪＮ、梯希愛（上海）化成工業発展有限公司、使用直前に２％のＤＭＳＯ含有生理食塩水で調製した。
ボルテゾミブ（Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）：ロット番号：２０１９１１０２、石薬グループの中奇製薬技術（石家荘）有限公司、使用直前に２％のＤＭＳＯを含む生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド：経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、ロット番号：５１８１８０８０３、石薬グループの恩必普薬業有限公司製造。使用直前に植物油で目標濃度に希釈した。
塩酸デュロキセチン、ロット番号：ＱＲＱＹＤ－ＪＮ、梯希愛（上海）化成工業発展有限公司、使用直前に２％のＤＭＳＯ含有生理食塩水で調製した。
【0124】
３．試験方法
３．１ モデル作成および投与方法
本試験では、雄ＳＤラットを用い、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ投与量０．３ｍｇ／ｋｇ、投与体積５ｍＬ／ｋｇとし、０日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１０日目、１３日目に腹腔注射投与してモデル化を行った。
ＮＢＰは、３つの投与量（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）を用い、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂモデル化の１日前にＮＢＰの初回経口胃内投与を開始し、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ投与モデル化期間に、ＮＢＰの毎日の１回目の投与はＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ投与の１ｈ前に投与し、ＮＢＰの２回目の投与と１回目の投与との間隔：４ｈ以上、投与体積：１０ｍＬ／ｋｇ、連続投与期間：２１日間とした。
３．１ モデル作成および投与方法
本試験では、雄ＳＤラットを用い、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ投与量０．３ｍｇ／ｋｇ、投与体積５ｍＬ／ｋｇとし、０日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１０日目、１３日目に腹腔注射投与してモデル化を行った。
ＮＢＰは、３つの投与量（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）を用い、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂモデル化の１日前にＮＢＰの初回経口胃内投与を開始し、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ投与モデル化期間に、ＮＢＰの毎日の１回目の投与はＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ投与の１ｈ前に投与し、ＮＢＰの２回目の投与と１回目の投与との間隔：４ｈ以上、投与体積：１０ｍＬ／ｋｇ、連続投与期間：２１日間とした。
【0125】
正常対照群（Ｎｏｒｍａｌ）には、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂと同じ頻度および投与方法で２％のＤＭＳＯ含有生理食塩水を投与し、ＮＢＰと同じ頻度および投与方法で植物油を投与した。（モデル化および投与時間は図１１を参照し、動物の群分け、投与方法および投与量の詳細は表１４に示す）。
【0126】
【表14】
【0127】
３．２ 群分け
ラットの熱痛閾値ベースライン値と体重に基づき、ベースライン値が３～６ｓ範囲内におけるラットを選び、３．１項における表１４に従って均等に群分けした。
３．３ 観測指標
（１）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、投与開始後、毎日一定時間に秤量した。
（２）熱痛閾値：０日目、７日目、１４日目、２１日目に測定した。方法：電子足底痛測定器（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏ ｍｅｔｅｒ）を用い、光源の強度を調整して熱痛閾値ベースライン約３～６ｓを得、この時に光照強度は５８％であり、カットオフ値は１０ｓとした。ラットをガラス板上のプラスティック個室に置き、光源を開けてラット足底中心部を照射した。ラットの反射的退縮時間、すなわち熱痛閾値を記録し、各ラットの左足と右足をそれぞれ１回測定し、１５ｍｉｎ以上の間隔で３回繰り返し測定し、各ラットの６回の熱痛閾値の平均値を計算した。
ラットの熱痛閾値ベースライン値と体重に基づき、ベースライン値が３～６ｓ範囲内におけるラットを選び、３．１項における表１４に従って均等に群分けした。
３．３ 観測指標
（１）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、投与開始後、毎日一定時間に秤量した。
（２）熱痛閾値：０日目、７日目、１４日目、２１日目に測定した。方法：電子足底痛測定器（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏ ｍｅｔｅｒ）を用い、光源の強度を調整して熱痛閾値ベースライン約３～６ｓを得、この時に光照強度は５８％であり、カットオフ値は１０ｓとした。ラットをガラス板上のプラスティック個室に置き、光源を開けてラット足底中心部を照射した。ラットの反射的退縮時間、すなわち熱痛閾値を記録し、各ラットの左足と右足をそれぞれ１回測定し、１５ｍｉｎ以上の間隔で３回繰り返し測定し、各ラットの６回の熱痛閾値の平均値を計算した。
【0128】
（３）機械的刺激痛閾値：－１日目、６日目、１３日目、２０日目に測定した。方法：電子機械的刺激痛測定器（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用い、ラットを鉄線網上のプラスティック個室に置き、１５ｍｉｎ静置し、直径０．４ｍｍの刺激プローブを選び、ラット足底中心部の位置に合わせ、ラットが反射的退縮になったまで力を徐々に小から大まで加え、この時の機器が示した最大値を記録し、すなわち機械的痛閾値であり、毎回の試験には各ラットの左足と右足をそれぞれ５ｍｉｎ以上の間隔で３回繰り返し測定し、各ラットの６回の機械的痛閾値の平均値を計算した。
【0129】
４．結果
４．１ 体重に対する影響
試験の２１日目には、正常対照群に比べて、モデル群のラット体重が有意に低下し（Ｐ＜０．０５）、モデル群に比べて、ＮＢＰの３つの投与量群（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）はラット体重が明らかに変化しなく、その詳細を図１２に示す。
４．１ 体重に対する影響
試験の２１日目には、正常対照群に比べて、モデル群のラット体重が有意に低下し（Ｐ＜０．０５）、モデル群に比べて、ＮＢＰの３つの投与量群（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）はラット体重が明らかに変化しなく、その詳細を図１２に示す。
【0130】
４．２ 熱痛閾値に対する影響
試験の２１日目には、正常対照群に比べて、モデル群の熱痛閾値が有意に低下し、モデル群に比べて、ＮＢＰ（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）群のいずれもモデルラットの熱痛閾値の低下を有意に逆転させた。その詳細を図１３に示す。
４．３ 機械的刺激痛閾値に対する影響
試験の２０日目には、正常対照群に比べて、モデル群の機械的刺激痛閾値が有意に低下し、モデル群に比べて、ＮＢＰ（１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）群はいずれもモデルラットの機械的刺激痛閾値の低下を有意に逆転させ、その詳細を図１４に示す。
試験の２１日目には、正常対照群に比べて、モデル群の熱痛閾値が有意に低下し、モデル群に比べて、ＮＢＰ（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）群のいずれもモデルラットの熱痛閾値の低下を有意に逆転させた。その詳細を図１３に示す。
４．３ 機械的刺激痛閾値に対する影響
試験の２０日目には、正常対照群に比べて、モデル群の機械的刺激痛閾値が有意に低下し、モデル群に比べて、ＮＢＰ（１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）群はいずれもモデルラットの機械的刺激痛閾値の低下を有意に逆転させ、その詳細を図１４に示す。
【0131】
５．結論
このような試験条件下で、ＮＢＰはＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ誘発性ラットのＣＩＰＮモデルの末梢神経障害の症状を用量依存的に効果的に緩和することができた。
このような試験条件下で、ＮＢＰはＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ誘発性ラットのＣＩＰＮモデルの末梢神経障害の症状を用量依存的に効果的に緩和することができた。
【0132】
実施例７：生体外でＮＢＰのＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ抗腫瘍活性に対する影響試験
１．細胞および培養環境
１．細胞および培養環境
【0133】
【表15】
【0134】
２．試験目的
ＮＢＰがＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂの生体外で腫瘍細胞増殖の抑制作用に影響するか否かを考察する。
３．薬物
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ原料薬、製造元：石薬グループの中奇製薬技術（石家荘）有限公司、ロット番号：２０１９０８０２。
ブチルフタリド、経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、製造元：石薬グループの恩必普薬業有限公司、ロット番号：５１８１８０８０３。
ＮＢＰがＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂの生体外で腫瘍細胞増殖の抑制作用に影響するか否かを考察する。
３．薬物
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ原料薬、製造元：石薬グループの中奇製薬技術（石家荘）有限公司、ロット番号：２０１９０８０２。
ブチルフタリド、経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、製造元：石薬グループの恩必普薬業有限公司、ロット番号：５１８１８０８０３。
【0135】
４．試験設計
本試験には、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群、併用投与群（Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＮＢＰ）、ＮＢＰ単独投与群に分けた。薬物濃度勾配は群ごとに異なっていた。
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群：
（１）ＭＭ．１Ｓ、Ｊｅｋｏ－１、ＨＴ２９細胞：Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂは２０ｎＭを初期濃度とし、１．５×連続希釈されてそれぞれ２０、１３．３３、８．８９、５．９３、３．９５、２．６３、１．７６、１．１７ｎＭまで合計で８つの濃度値とした。
（２）Ａ５４９細胞：Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂは２００ｎＭを初期濃度とし、２×連続希釈されてそれぞれ２００、１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、１．５６ｎＭまで合計で８つの濃度値とした。
（３）ＤＵ１４５細胞：Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂは１００ｎＭを初期濃度とし、２×連続希釈されてそれぞれ１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、１．５６、０．７８ｎＭまで合計で８つの濃度値とした。
本試験には、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群、併用投与群（Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＮＢＰ）、ＮＢＰ単独投与群に分けた。薬物濃度勾配は群ごとに異なっていた。
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群：
（１）ＭＭ．１Ｓ、Ｊｅｋｏ－１、ＨＴ２９細胞：Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂは２０ｎＭを初期濃度とし、１．５×連続希釈されてそれぞれ２０、１３．３３、８．８９、５．９３、３．９５、２．６３、１．７６、１．１７ｎＭまで合計で８つの濃度値とした。
（２）Ａ５４９細胞：Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂは２００ｎＭを初期濃度とし、２×連続希釈されてそれぞれ２００、１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、１．５６ｎＭまで合計で８つの濃度値とした。
（３）ＤＵ１４５細胞：Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂは１００ｎＭを初期濃度とし、２×連続希釈されてそれぞれ１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、１．５６、０．７８ｎＭまで合計で８つの濃度値とした。
【0136】
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＮＢＰ群：
ＮＢＰ最終濃度は３０μＭであり、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂの濃度勾配はＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群の濃度と同様である。
ＮＢＰの単独投与群：
ＮＢＰは４８０μＭを初期濃度とし、２×連続希釈されてそれぞれ４８０、２４０、１２０、６０、３０、１５、７．５、３．７５μＭまで合計で８つの濃度値とした。
薬物の作用時間は、いずれも７２ｈであった。
ＮＢＰ最終濃度は３０μＭであり、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂの濃度勾配はＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群の濃度と同様である。
ＮＢＰの単独投与群：
ＮＢＰは４８０μＭを初期濃度とし、２×連続希釈されてそれぞれ４８０、２４０、１２０、６０、３０、１５、７．５、３．７５μＭまで合計で８つの濃度値とした。
薬物の作用時間は、いずれも７２ｈであった。
【0137】
５．試験方法
通常培養中の対数増殖期にある細胞を一定数で９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルで接種した。懸濁細胞ＭＭ．１ＳおよびＪｅｋｏ－１については、接種当日のＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ群に、異なる濃度勾配のＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加え、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＮＢＰ併用投与群に異なる濃度勾配のＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂと３０μＭのＮＢＰ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加え、ＮＢＰの単独投与群に異なる濃度勾配のＮＢＰ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加えた。付着細胞ＨＴ２９、Ａ５４９およびＤＵ１４５については、２４時間付着した後上記薬物を加えた。各薬物の各濃度にそれぞれ３つの重複ウェルを設定し、相応するブランクウェル（腫瘍細胞を接種せずに培地のみを有する）および正常ウェル（腫瘍細胞を接種した培地、薬物濃度は０である）を設定した。薬物作用７２時間後、ＭＴＴ作動液（５ｍｇ／ｍＬ）を２０μＬ／ウェルで加え、３７℃で４時間作用した後、上清液を除去し、ＤＭＳＯ（分析純）１５０μＬを加え、マイクロプレート発振器で十分に混合し、プレートをきれいに拭き取り、マイクロプレートリーダーにより５５０ｎｍにおける光学濃度（ＯＤ）を検出した。
通常培養中の対数増殖期にある細胞を一定数で９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルで接種した。懸濁細胞ＭＭ．１ＳおよびＪｅｋｏ－１については、接種当日のＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ群に、異なる濃度勾配のＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加え、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＮＢＰ併用投与群に異なる濃度勾配のＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂと３０μＭのＮＢＰ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加え、ＮＢＰの単独投与群に異なる濃度勾配のＮＢＰ含有培養液を１００μＬ／ウェルで加えた。付着細胞ＨＴ２９、Ａ５４９およびＤＵ１４５については、２４時間付着した後上記薬物を加えた。各薬物の各濃度にそれぞれ３つの重複ウェルを設定し、相応するブランクウェル（腫瘍細胞を接種せずに培地のみを有する）および正常ウェル（腫瘍細胞を接種した培地、薬物濃度は０である）を設定した。薬物作用７２時間後、ＭＴＴ作動液（５ｍｇ／ｍＬ）を２０μＬ／ウェルで加え、３７℃で４時間作用した後、上清液を除去し、ＤＭＳＯ（分析純）１５０μＬを加え、マイクロプレート発振器で十分に混合し、プレートをきれいに拭き取り、マイクロプレートリーダーにより５５０ｎｍにおける光学濃度（ＯＤ）を検出した。
【0138】
以下の式で細胞増殖の抑制率を計算した。
抑制率（％）＝（ＯＤ値正常ウェル－ＯＤ値投与ウェル）／（ＯＤ値正常ウェル－ＯＤ値ブランクウェル）×１００％
各濃度の抑制率に基づき、薬物の半抑制濃度ＩＣ５０をＳＰＳＳ１９．０で計算した。
試験を３回繰り返し、３回試験結果の平均値±ＳＤ（標準偏差）でＩＣ５０値を表した。
抑制率（％）＝（ＯＤ値正常ウェル－ＯＤ値投与ウェル）／（ＯＤ値正常ウェル－ＯＤ値ブランクウェル）×１００％
各濃度の抑制率に基づき、薬物の半抑制濃度ＩＣ５０をＳＰＳＳ１９．０で計算した。
試験を３回繰り返し、３回試験結果の平均値±ＳＤ（標準偏差）でＩＣ５０値を表した。
【0139】
６．結果
その結果、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群およびＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＮＢＰ併用投与群のいずれもＭＭ．１Ｓ、Ｊｅｋｏ－１、ＨＴ２９、Ａ５４９、ＤＵ１４５のインビトロ増殖に対して有意な抑制作用があり、そのＩＣ５０平均値は、いずれも１～２０ｎＭの範囲にあり、ＮＢＰがＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂの生体外で腫瘍細胞増殖の抑制作用に影響しないことが示された。その詳細を表１６に示す。
その結果、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群およびＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＮＢＰ併用投与群のいずれもＭＭ．１Ｓ、Ｊｅｋｏ－１、ＨＴ２９、Ａ５４９、ＤＵ１４５のインビトロ増殖に対して有意な抑制作用があり、そのＩＣ５０平均値は、いずれも１～２０ｎＭの範囲にあり、ＮＢＰがＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂの生体外で腫瘍細胞増殖の抑制作用に影響しないことが示された。その詳細を表１６に示す。
【0140】
【表16】
【0141】
ＮＢＰ単独投与では、ヒト多発性骨髄腫細胞（ＭＭ．１Ｓ）、ヒトマントル細胞リンパ腫細胞（Ｊｅｋｏ－１）、ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒト前立腺癌細胞（ＤＵ１４５）のインビトロ増殖に有意な抑制作用がなかった。なかでも、３０μＭ ＮＢＰ単独投与の５株細胞増殖に対する抑制率の詳細を表１７に示す。
【0142】
【表17】
【0143】
結論：ＮＢＰは、ヒト多発性骨髄腫細胞（ＭＭ．１Ｓ）、ヒトマントル細胞リンパ腫細胞（Ｊｅｋｏ－１）、ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒト前立腺癌細胞（ＤＵ１４５）のインビトロ増殖に対するＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂの抑制作用に影響しない。
【0144】
実施例８：Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂのインビトロ抗腫瘍効果に対するＮＢＰの影響の試験
１．試験システム
１．１ 試験動物
ＮＵ／ＮＵマウス、雌、１８～２０ｇ、４２匹。
１．２ 細胞株
ＭＭ．１Ｓ細胞（ヒト多発性骨髄腫細胞）：南京科佰生物科学技術有限公司から購入した。
２．試験目的
本試験は、ＮＵ／ＮＵマウスＭＭ．１Ｓ細胞移植腫瘍モデルを採用し、ＮＢＰがＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂの抗腫瘍効果およびそのＰＫ挙動に対する影響を検証した。
１．試験システム
１．１ 試験動物
ＮＵ／ＮＵマウス、雌、１８～２０ｇ、４２匹。
１．２ 細胞株
ＭＭ．１Ｓ細胞（ヒト多発性骨髄腫細胞）：南京科佰生物科学技術有限公司から購入した。
２．試験目的
本試験は、ＮＵ／ＮＵマウスＭＭ．１Ｓ細胞移植腫瘍モデルを採用し、ＮＢＰがＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂの抗腫瘍効果およびそのＰＫ挙動に対する影響を検証した。
【0145】
３．薬物
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ原料薬、製造元：石薬グループの中奇製薬技術（石家荘）有限公司、ロット番号：２０１９１１０２、使用直前に２％のＤＭＳＯを含む生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド、経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、製造元：石薬グループの恩必普薬業有限公司、ロット番号：５１８１８０８０３、使用直前に植物油で目標濃度に希釈した。
Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ原料薬、製造元：上海方楠生物科技有限公司、ロット番号：ＡＬ－０１２７－ＡＰＩ－１８１１００１、使用直前にプロピレングリコールおよび２０％ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン溶液を按５：９５の割合で混合して目標濃度溶液を調製した。
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ原料薬、製造元：石薬グループの中奇製薬技術（石家荘）有限公司、ロット番号：２０１９１１０２、使用直前に２％のＤＭＳＯを含む生理食塩水で溶解した。
ブチルフタリド、経口投与級（１０ｋｇ／瓶）、製造元：石薬グループの恩必普薬業有限公司、ロット番号：５１８１８０８０３、使用直前に植物油で目標濃度に希釈した。
Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ原料薬、製造元：上海方楠生物科技有限公司、ロット番号：ＡＬ－０１２７－ＡＰＩ－１８１１００１、使用直前にプロピレングリコールおよび２０％ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン溶液を按５：９５の割合で混合して目標濃度溶液を調製した。
【0146】
４．試験方法
４．１ モデル作成
生体外でＭＭ．１Ｓ細胞を蘇生させて十分な量まで継代した後、顕微鏡で計数し、その後無血清培地で細胞を希釈し、細胞数を約１×１０８個／ｍＬに調整し、細胞懸濁液を氷水浴に置いた。
無菌注射器でＭＭ．１Ｓ細胞懸濁液を抽出し、ＮＵ／ＮＵマウス前肢腋窩部皮下組織に接種し、接種体積は０．１ｍＬ／匹、腫瘍細胞を約１．０×１０７個含み、ＮＵ／ＮＵマウスＭＭ．１Ｓ移植腫瘍モデルを作製した。
４．１ モデル作成
生体外でＭＭ．１Ｓ細胞を蘇生させて十分な量まで継代した後、顕微鏡で計数し、その後無血清培地で細胞を希釈し、細胞数を約１×１０８個／ｍＬに調整し、細胞懸濁液を氷水浴に置いた。
無菌注射器でＭＭ．１Ｓ細胞懸濁液を抽出し、ＮＵ／ＮＵマウス前肢腋窩部皮下組織に接種し、接種体積は０．１ｍＬ／匹、腫瘍細胞を約１．０×１０７個含み、ＮＵ／ＮＵマウスＭＭ．１Ｓ移植腫瘍モデルを作製した。
【0147】
４．２ 投与方法
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群：週２回腹腔注射投与（０日目、３日目、７日目、１０日目、１５日目、1日１回）、０．５ｍｇ／ｋｇであった。
ＮＢＰの単独投与群：１日２回経口胃内投与（０日目に投与開始し）、６０ｍｇ／ｋｇ、ＮＢＰの２回目の投与と１回目の投与との間隔は４ｈ以上であった。
Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ単独投与群：1日１回胃内投与（０日目に投与開始し）、７０ｍｇ／ｋｇであった。
ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ併用投与群：投与頻度および投与量は、ＮＢＰおよびＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群のそれぞれの頻度と投与量と同様であった。
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群：週２回腹腔注射投与（０日目、３日目、７日目、１０日目、１５日目、1日１回）、０．５ｍｇ／ｋｇであった。
ＮＢＰの単独投与群：１日２回経口胃内投与（０日目に投与開始し）、６０ｍｇ／ｋｇ、ＮＢＰの２回目の投与と１回目の投与との間隔は４ｈ以上であった。
Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ単独投与群：1日１回胃内投与（０日目に投与開始し）、７０ｍｇ／ｋｇであった。
ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ併用投与群：投与頻度および投与量は、ＮＢＰおよびＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群のそれぞれの頻度と投与量と同様であった。
【0148】
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与群：投与頻度および投与量は、ＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂおよびＰａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ単独投与群のそれぞれの頻度と投与量と同様であった。
ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与群：投与頻度および投与量同ＮＢＰ、ＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂおよびＰａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ単独投与群のそれぞれの頻度と投与量と同様であった。
ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与群：投与頻度および投与量同ＮＢＰ、ＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂおよびＰａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ単独投与群のそれぞれの頻度と投与量と同様であった。
【0149】
溶媒群：ＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂおよびＮＢＰと同じ頻度および投与方法で溶媒を投与した。
投与期間：１６日間、投与体積：いずれも１０ｍＬ／ｋｇであった。
投与期間：１６日間、投与体積：いずれも１０ｍＬ／ｋｇであった。
【0150】
４．３ 観測指標と評価指数
４．３．１ 観測指標
（１）一般状態観測：試験期間に全ての動物を1日1回観測し、体の各部位の異常と行動変化状況を記録した。
（２）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、適切な体重の動物を選択して試験に使用した。投与開始後１日１回一定時間に動物の体重を測定した。
（３）死亡と瀕死：死亡動物の死亡時間を記録し、瀕死動物の死亡時間を決定するために観測頻度を増加させるように注意した。
４．３．１ 観測指標
（１）一般状態観測：試験期間に全ての動物を1日1回観測し、体の各部位の異常と行動変化状況を記録した。
（２）体重：試験前に全ての動物を１回秤量し、適切な体重の動物を選択して試験に使用した。投与開始後１日１回一定時間に動物の体重を測定した。
（３）死亡と瀕死：死亡動物の死亡時間を記録し、瀕死動物の死亡時間を決定するために観測頻度を増加させるように注意した。
【0151】
４．３．２ 腫瘍体積評価
動物を群分けした後、腫瘍の長径と短径を週２回測定した。
（１）腫瘍体積：
Ｖ＝１／２×Ａ×Ｂ２
（２）相対腫瘍体積：
（３）相対腫瘍体積増殖率：
（４）腫瘍増殖抑制率：
〔注〕Ｖ：腫瘍体積、Ａ：腫瘍の長さ、Ｂ：腫瘍の幅、ＲＴＶ：相対腫瘍体積、ＴＶｎｄ：ｎ日目の腫瘍体積、ＴＶ０ｄ：０日目の腫瘍体積、ＲＴＶｘｎｄ：ｎ日目の平均相対腫瘍体積、ＴＶＸｎ：投与群ｎ日目の平均腫瘍体積、ＴＶＸ０：投与群０日目の平均腫瘍体積、ＴＶＭｎ：溶媒群ｎ日目の平均腫瘍体積、ＴＶＭ０：溶媒群０日目の平均腫瘍体積。
動物を群分けした後、腫瘍の長径と短径を週２回測定した。
（１）腫瘍体積：
Ｖ＝１／２×Ａ×Ｂ２
（２）相対腫瘍体積：
【数1】
【数2】
【数3】
【0152】
４．３．３ 腫瘍重量
試験終了時、動物をＣＯ２で窒息安楽死させた後、腫瘍を剥ぎ取って秤量した。
腫瘍重量抑制率％＝（１－投与群の腫瘍重量／溶媒群の腫瘍重量）×１００％
４．３．４ ＰＫ採血と検出
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂの最終回の投与前（０ｈ）、投与後５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈ後に採血し（詳細を表１８に示す）、溶媒群のマウスには、０ｈのみに採血し、ヘパリンで抗凝固し、血漿を遠心分離し、－８０℃で保存して用意し、蛋白質沈殿－ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血漿中のＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂおよびブチルフタリドを測定した。
試験終了時、動物をＣＯ２で窒息安楽死させた後、腫瘍を剥ぎ取って秤量した。
腫瘍重量抑制率％＝（１－投与群の腫瘍重量／溶媒群の腫瘍重量）×１００％
４．３．４ ＰＫ採血と検出
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂの最終回の投与前（０ｈ）、投与後５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈ後に採血し（詳細を表１８に示す）、溶媒群のマウスには、０ｈのみに採血し、ヘパリンで抗凝固し、血漿を遠心分離し、－８０℃で保存して用意し、蛋白質沈殿－ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血漿中のＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂおよびブチルフタリドを測定した。
【0153】
【表18】
【0154】
試験結果
５．１ 体重に対する影響
体重データから見ると、各群でマウスの体重に有意差はなく（Ｐ＞０．０５）、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ、ＰａｌｂｏｃｉｃｌｉｂおよびＮＢＰのいずれもマウスの体重に影響を与えなかった。その詳細について、表１５を示す。
５．１ 体重に対する影響
体重データから見ると、各群でマウスの体重に有意差はなく（Ｐ＞０．０５）、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ、ＰａｌｂｏｃｉｃｌｉｂおよびＮＢＰのいずれもマウスの体重に影響を与えなかった。その詳細について、表１５を示す。
【0155】
５．２ 腫瘍体積に対する影響
試験終了時、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群に比べて、ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ併用投与において、ＮＢＰはＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂの腫瘍抑制効果に有意な負の影響を与えなかった。また、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与群に比べて、ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与群において、ＮＢＰはＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与の抗腫瘍効果にも有意な負の影響を与えなかった。各群の腫瘍体積の詳細について図１６に示し、試験終了時（１４日目）の体重、ＴＶ、ＲＴＶ、ＴＧＩ％、Ｔ／Ｃ％、腫瘍重量などの詳細について、表１９を示す。
試験終了時、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群に比べて、ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ併用投与において、ＮＢＰはＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂの腫瘍抑制効果に有意な負の影響を与えなかった。また、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与群に比べて、ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与群において、ＮＢＰはＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与の抗腫瘍効果にも有意な負の影響を与えなかった。各群の腫瘍体積の詳細について図１６に示し、試験終了時（１４日目）の体重、ＴＶ、ＲＴＶ、ＴＧＩ％、Ｔ／Ｃ％、腫瘍重量などの詳細について、表１９を示す。
【0156】
【表19】
【0157】
結論：本試験において、ＮＢＰはＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂおよびＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与の抗腫瘍効果に有意な影響を与えなかった。
【0158】
５．３ ＰＫに対する影響
結果は、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ群、ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ群、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ群およびＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ群のマウス体内におけるＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ曝露量はほぼ一致しており、ＮＢＰはＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与とＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与との体内薬物動態学的挙動にいずれも明らかな影響を与えていないことが示された。主薬動力学パラメータの詳細については、表２０、表２１および表２２を参照する。
結果は、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ群、ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ群、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ群およびＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ群のマウス体内におけるＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ曝露量はほぼ一致しており、ＮＢＰはＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与とＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与との体内薬物動態学的挙動にいずれも明らかな影響を与えていないことが示された。主薬動力学パラメータの詳細については、表２０、表２１および表２２を参照する。
【0159】
【表20】
【0160】
【表21】
【0161】
【表22】
【0162】
ＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂのＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ併用投与群およびＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ群におけるＣｍａｘ、ＡＵＣ０～ｔと、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群との間の比値は、それぞれ１．０１～１．１３および０．８１～１．１１である。Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０～ｔの対数変換された後、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＰａｌｂｏｃｉｃｌｉｂおよびＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ併用投与群とＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ単独投与群との間の比値は、それぞれ１．００～１．０５（ＬＮＣｍａｘ）および０．９６～１．０２（ＬＮＡＵＣ０～ｔ）であるため、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂの単独投与群と併用投与群との体内曝露はほぼ一致した。
【0163】
ＮＢＰがＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＰａｌｂｏｃｉｃｌｉｂおよびＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ併用投与群におけるＣｍａｘおよびＡＵＣ０～ｔと、ＮＢＰの単独投与群との比値は、それぞれ１．０８～１．２４および１．０３～１．８３である。Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０～ｔの対数変換された後、ＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＰａｌｂｏｃｉｃｌｉｂおよびＮＢＰ／Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ併用投与群と、ＮＢＰの単独投与群との比値は、それぞれ１．０２～１．０５（ＬＮＣｍａｘ）および１．００～１．１１（ＬＮＡＵＣ０～ｔ）である。したがって、ＮＢＰの胃内投与後、マウスの体内で明らかな個体差があり、各試験群におけるマウス例数が比較的少なく、対数変換後併用投与群と単独投与群との曝露レベルの比値によれば、ＮＢＰの単独投与群と併用投与群との体内曝露の間に有意差がなかったことが示された。
【0164】
結論：本試験において、ＮＢＰおよびＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂは、互いに相手のマウス体内の薬物動態学的挙動にほとんど影響しなかった。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【手続補正書】
【提出日】2022-11-22
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
末梢神経障害を予防、緩和または治療するために使用される、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を含む医薬組成物。
【請求項2】
前記末梢神経障害は薬物誘発性末梢神経障害であり、好ましくは化学療法薬誘発性末梢神経障害であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記末梢神経障害を予防、緩和または治療することは、痛み、熱に対する感覚異常、または運動協調能力障害などの化学療法薬誘発性感覚異常または運動障害を予防、緩和または治療することを含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記医薬組成物が、治療有効量のブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記医薬組成物は、経口製剤、注射製剤、局所投与製剤、または外用製剤などであり、好ましくは経口製剤および注射製剤である臨床的に許容される製剤に製造されることを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項6】
前記医薬組成物は単回投与剤形または分割投与剤形であることを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項7】
前記医薬組成物は経口製剤であり、前記経口製剤は、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１,０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ～約５００ｍｇ、または約１ｍｇ～３００ｍｇ、または約１ｍｇ～２００ｍｇ、または約５ｍｇ～１８０ｍｇ、または約１０ｍｇ～１５０ｍｇ、または約３０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約５０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約８０ｍｇ～１２０ｍｇ、または約９０ｍｇ～１１０ｍｇ、または約１００ｍｇ含むことを特徴とする、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記経口製剤の１日投与量は、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１,００００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ～約５,０００ｍｇ、または約２０ｍｇ～３,０００ｍｇ、または約３０ｍｇ～２,０００ｍｇ、または約５０ｍｇ～１５００ｍｇ、または約７０ｍｇ～１２００ｍｇ、または約１００ｍｇ～１,０００ｍｇ、または約２００ｍｇ～９００ｍｇ、または約３００ｍｇ～８００ｍｇ、または約４００ｍｇ～７００ｍｇ、または約５００ｍｇ～６００ｍｇ、または約６０ｍｇ～８００ｍｇ、または約６０ｍｇ～６００ｍｇ、または約１００ｍｇ～８００ｍｇ、または約１００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～６００ｍｇ、または約２００ｍｇ～８００ｍｇ、または約３００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～６００ｍｇ、または約４００ｍｇ～８００ｍｇであることを特徴とする、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項9】
前記経口製剤は、１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、約６０ｍｇ～８００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約６０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、または８００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、約３０ｍｇ～４００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約３０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、または４００ｍｇ投与し、あるいは1日３回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の経口製剤を、約２０ｍｇ～３００ｍｇ投与し、例えば毎回に経口製剤をブチルフタリド基準で約２０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、または３００ｍｇ投与することを特徴とする、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項10】
前記医薬組成物は注射製剤であり、前記注射製剤は、ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩を、ブチルフタリド基準で約０．００１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約０．００５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬ、または約０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬ、または約０．１２ｍｇ／ｍＬ～０．８０ｍｇ／ｍＬ、または約０．１５ｍｇ／ｍＬ～０．５０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは約０．２０ｍｇ／ｍＬ～０．４０ｍｇ／ｍＬ、または約０．２０ｍｇ／ｍＬ～０．３０ｍｇ／ｍＬ、または約０．２５ｍｇ／ｍＬ含むことを特徴とする、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記注射製剤の１日投与量は、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１,０００ｍｇ、好ましくは約５ｍｇ～約５００ｍｇ、または約１０ｍｇ～３００ｍｇ、または約１５ｍｇ～２００ｍｇ、または約２０ｍｇ～１５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～１２０ｍｇ、または約３０ｍｇ～１００ｍｇ、または約３５ｍｇ～９０ｍｇ、または約４０ｍｇ～８０ｍｇ、または約４５ｍｇ～７０ｍｇ、または約５０ｍｇ～６０ｍｇ、または約１ｍｇ～１００ｍｇ、または約２ｍｇ～８０ｍｇ、または約５ｍｇ～７５ｍｇ、または約１０ｍｇ～５０ｍｇ、または約１５ｍｇ～５０ｍｇ、または約２０ｍｇ～５０ｍｇ、または約２５ｍｇ～７５ｍｇ、または約２５ｍｇ～５０ｍｇであることを特徴とする、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記注射製剤は、１日１回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、ブチルフタリド基準で約１ｍｇ～約１００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ投与し、あるいは1日２回投与し、毎回にブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩の注射製剤を、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ投与することを特徴とする、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項13】
前記化学療法薬は、（１）パクリタキセル、ドセタキセルなどであるタキサン系薬物、もしくはビンクリスチンまたはビンブラスチンなどであるビンカアルカロイド系薬物、またはイクサベピロンなどであるエポチロン系薬物、またはボルテゾミブなどであるプロテアーゼ阻害剤系薬物を含む微小管系に作用しまたは有糸分裂に抵抗する化学療法薬、あるいは
（２）シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンなどである白金系薬物を含むＤＮＡ合成を阻害する化学療法薬、あるいは
（３）サリドマイド、レナリドマイドなどである免疫調節剤系薬物
からなる群から選ばれる１種または２種以上の薬物を含むことを特徴とする、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項14】
前記ブチルフタリドまたはその光学異性体、プロドラッグ、重水素化物、代謝産物、開環生成物もしくは開環生成物の塩と、他の末梢神経障害治療薬１種または２種以上と含み、好ましくは、前記他の末梢神経障害治療薬は、デュロセチンまたはその塩、モノシアロテトラヘキソシルガングリオシドナトリウムであることを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬組成物。【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0013】
【表1】
【手続補正3】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0014】
【表2】
【国際調査報告】