(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-01
(54)【発明の名称】トラベクテジンおよびアミノ酸を含む組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/4985 20060101AFI20230525BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230525BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20230525BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20230525BHJP
A61K 47/04 20060101ALI20230525BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20230525BHJP
A61K 47/14 20170101ALI20230525BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20230525BHJP
【ＦＩ】
A61K31/4985
A61P35/00
A61K47/18
A61K47/12
A61K47/04
A61K47/20
A61K47/14
A61K47/22
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022562956
(86)(22)【出願日】2021-04-15
(85)【翻訳文提出日】2022-11-24
(86)【国際出願番号】 EP2021059772
(87)【国際公開番号】W WO2021209545
(87)【国際公開日】2021-10-21
(31)【優先権主張番号】20169567.3
(32)【優先日】2020-04-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＰＬＵＲＯＮＩＣ
(71)【出願人】
【識別番号】522403561
【氏名又は名称】エバー バリンジェクト ゲーエムベーハー
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100163784
【弁理士】
【氏名又は名称】武田 健志
(72)【発明者】
【氏名】アハライトナー，マリア－レナ
(72)【発明者】
【氏名】ゲーヴォルフ，ニコラウス
(72)【発明者】
【氏名】シュナイト，ハインツ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076AA30
4C076CC27
4C076DD09
4C076DD22Z
4C076DD30Z
4C076DD41Z
4C076DD43Z
4C076DD49
4C076DD51
4C076DD51Q
4C076DD51Z
4C076DD55S
4C076DD59
4C076EE23
4C076FF63
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB31
4C086MA02
4C086MA05
4C086MA17
4C086MA44
4C086MA66
4C086NA03
4C086ZB26
(57)【要約】
本発明は、トラベクテジンを含む安定した医薬組成物に関する。本発明はまた、トラベクテジンおよびアミノ酸を含む、凍結乾燥した配合物および静脈内注射溶液を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
トラベクテジン及びアミノ酸を含む組成物であって、トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）が１：１０～１：２５０である、上記組成物。
【請求項2】
アミノ酸が、アルギニン、ヒスチジン、リジン、フェニルアラニン及びイソロイシン、メチオニン、アセチルシステイン、システイン、シトルリン、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
アミノ酸が、Ｌ－アルギニンである、請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）が１：５０～１：１００である、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項5】
トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）が約１：７０である、請求項４に記載の組成物。
【請求項6】
緩衝剤をさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項7】
緩衝剤が、クエン酸、リン酸、酢酸、塩基性アミノ酸及び水酸化ナトリウム、もしくはそれらの任意の混合物、又はクエン酸、リン酸、及び場合によって塩基性アミノ酸の混合物からなる群から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項8】
錯化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；抗酸化剤、例えば、モノチオグリセロール；界面活性剤、例えば、ポリソルベート；及びアスコルビン酸を含む群から選択されるさらなる物質を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項9】
トラベクテジン及びアミノ酸を含む凍結乾燥した配合物であって、トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）が１：１０～１：２５０である、上記配合物。
【請求項10】
アミノ酸が、アルギニン、ヒスチジン、リジン、フェニルアラニン及びイソロイシン、メチオニン、アセチルシステイン、システイン、シトルリン、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項９に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項11】
アミノ酸が、Ｌ－アルギニンである、請求項１０に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項12】
トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）が１：５０～１：１００である、請求項９～１１のいずれか１項に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項13】
トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）が約１：７０である、請求項１２に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項14】
前記組成物が、緩衝剤をさらに含む、請求項９～１３のいずれか１項に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項15】
緩衝剤が、クエン酸、リン酸、酢酸、塩基性アミノ酸及び水酸化ナトリウム、もしくはそれらの任意の混合物、又はクエン酸、リン酸、及び場合によって塩基性アミノ酸の混合物からなる群から選択される、請求項１４に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項16】
前記組成物が、錯化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；抗酸化剤、例えば、モノチオグリセロール；界面活性剤、例えば、ポリソルベート；及びアスコルビン酸を含む群から選択されるさらなる物質を含む、請求項９～１５のいずれか１項に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項17】
アミノ酸が、Ｌ－アルギニンであり、緩衝剤が、クエン酸もしくはリン酸、又はそれらの混合物である、請求項９及び１５に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項18】
バイアルの形態で提供される、請求項９～１７のいずれか１項に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項19】
バイアルが、トラベクテジン０．１～１ｍｇ、Ｌ－アルギニン１０～６０ｍｇ、クエン酸０．５～８ｍｇ、リン酸５～４０ｍｇを含有する、請求項１８に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項20】
バイアルが、トラベクテジン０．２５ｍｇ、Ｌ－アルギニン１７．４ｍｇ、クエン酸１．９ｍｇ、及びリン酸１０～１５ｍｇを含有する、請求項１９に記載の凍結乾燥した配合物。
【請求項21】
トラベクテジン、アミノ酸、緩衝剤及び注射用の水を含む点滴静注用の溶液であって、トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）が１：１０～１：２５０である、上記溶液。
【請求項22】
がんの治療における使用のための、請求項２１に記載の点滴静注溶液。前記がんが、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、卵巣がん、乳がん、黒色腫、結腸直腸がん、中皮腫、腎がん、子宮体がん及び肺がん、又はそれらの任意の組合せの群から選択される肉腫である、請求項２２に記載の使用のための点滴静注溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
説明
[0001]本発明は、トラベクテジンおよびアミノ酸を含む、組成物、凍結乾燥した配合物および静脈内注射に関する。
[0001]本発明は、トラベクテジンおよびアミノ酸を含む、組成物、凍結乾燥した配合物および静脈内注射に関する。
【背景技術】
【0002】
[0002]トラベクテジン（エクチナサイジンまたはＥＴ－７４３）は、海洋性の尾索類Ｅｃｔｅｉｎａｓｃｉｄｉａ ｔｕｒｂｉｎａｔａから最初に単離され、抗腫瘍活性を有する、テトラヒドロイソキノリンアルカロイドである。
【0003】
[0003]トラベクテジンは、制限された水溶解度および熱安定性を有しており、医療目的のための配合物の開発についての課題を示す。トラベクテジンは、肉腫および卵巣がんの治療において特に有効である。
【0004】
[0004]ＷＯ２００００６９４４１では、ヒトにおけるがんの治療のための医薬組成物の調製におけるトラベクテジンの使用が開示されている。医薬組成物は、増量剤としてのマンニトール、およびトラベクテジンを安定させるためにｐＨ４のリン酸緩衝液を含有する凍結乾燥した生成物として配合される。配合物は、点滴静注として投与される。
【0005】
[0005]ＷＯ２００６０４６０７９では、二糖類が、エクチナサイジン配合物を安定させることが開示されている。ＷＯ２００６０４６０７９では、エクチナサイジン、例えば、ＥＴ－７４３および二糖、例えば、スクロースを含む、組成物が記載されており、この組成物は、凍結乾燥され、再構成され、点滴静注を得る。
【0006】
[0006]トラベクテジンは、トラベクテジン０．２５ｍｇ、スクロース１００ｍｇおよびリン酸二水素カリウムの形態のカリウム２ｍｇ、ならびにｐＨ調整のための水酸化カリウムおよびリン酸を含有するバイアルの形態で提供される、無菌の凍結乾燥した生成物として現在配合される。
【0007】
[0007]ＷＯ２０１７１３３５４４Ａ１は、第１の賦形剤としてのグルコース、および第２の賦形剤としてのヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムもしくはヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンを含み得る、安定したトラベクテジン配合物に関する。
【0008】
[0008]ＩＮ２０１７４１０４１１７３では、トラベクテジンの安定した医薬組成物が開示されている。１：４００の比でトラベクテジンおよびＬ－アルギニンを含む配合物が例証される。そのような大量のアミノ酸によって、凍結乾燥についての高い溶液体積、および継続的により長い乾燥周期がもたらされる。さらに、大量の補助添加物は、患者に悪影響をもたらし得る。
【0009】
[0009]化学療法薬としてのトラベクテジンの重要性を考慮して、生体適合性であり、安定しており、医療目的のために適した、改善されたトラベクテジンの配合物への必要がさらにある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
[0010]本発明の目的は、安定しており、医療目的のために適した、トラベクテジンの配合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0011】
[0011]本目的は、特許請求した対象により解決され、本明細書中に開示した通りである。
[0012]本発明は、トラベクテジンおよび少なくとも１種のアミノ酸を含む組成物を提供し、トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）は、１：１０～１：２５０である。
[0012]本発明は、トラベクテジンおよび少なくとも１種のアミノ酸を含む組成物を提供し、トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）は、１：１０～１：２５０である。
【0012】
[0013]一実施形態によれば、アミノ酸は、アルギニン、ヒスチジン、リジン、フェニルアラニンおよびイソロイシン、メチオニン、アセチルシステイン、システイン、シトルリン、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【0013】
[0014]一実施形態では、アミノ酸は、Ｌ－アルギニンである。
[0015]一実施形態では、トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）は、１：１０～１：２５０、または１：５０～１：１００、または約１：７０である。
[0015]一実施形態では、トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）は、１：１０～１：２５０、または１：５０～１：１００、または約１：７０である。
【0014】
[0016]一態様では、本明細書中に記載される組成物は、緩衝剤を含む。緩衝剤は、クエン酸、リン酸、酢酸、塩基性アミノ酸および水酸化ナトリウム、もしくはそれらの任意の混合物、またはクエン酸、リン酸、場合によっては、塩基性アミノ酸の混合物からなる群から選択されてもよい。
【0015】
[0017]一態様では、本明細書中に記載される組成物は、錯化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；抗酸化剤、例えば、モノチオグリセロール；界面活性剤、例えば、ポリソルベート；マンニトール；およびアスコルビン酸を含む群から選択されるさらなる物質を含む。
【0016】
[0018]本発明による配合物において、ｐＨ制御の一次供給源は、緩衝剤である。通常、緩衝剤は、酸または塩基およびそれぞれ、その共役塩基または酸として存在する。一実施形態では、緩衝塩の範囲は、１～１００ｍＭ、好ましくは、５～５０ｍＭの間、最も優先的には、約１０ｍＭである（固体配合物中、緩衝液の量は、再構成／希釈後、この濃度を生成するために選択される）。緩衝液の濃度および溶液のｐＨは、溶解性および安定性の最適なバランスを得るために、有利には選ばれる。適当な緩衝液の例には、弱酸および弱酸の共役塩基のアルカリ金属塩（例えば、ナトリウム、カリウム）、例えば、クエン酸ナトリウムおよびリン酸水素二ナトリウムの混合物が含まれる。
【0017】
[0019]一実施形態では、組成物は、凍結乾燥した配合物の形態である。したがって、本発明はまた、トラベクテジン、少なくとも１種のアミノ酸を含む凍結乾燥した配合物を提供し、トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）は、１：１０～１：２５０である。さらなる態様では、アミノ酸は、アルギニン、ヒスチジン、リジン、フェニルアラニンおよびイソロイシン、メチオニン、アセチルシステイン、システイン、シトルリン、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される。特定の実施形態では、アミノ酸は、Ｌ－アルギニンである。さらなる実施形態によれば、凍結乾燥した配合物は、トラベクテジンを含み、アミノ酸は、重量比（ｗ／ｗ）１：５０～１：１００である。特定の実施形態では、トラベクテジン対アミノ酸の重量比（ｗ／ｗ）は、約１：７０である。
【0018】
[0020]さらなる実施形態では、凍結乾燥した配合物は、緩衝剤を含む。
[0021]一態様では、凍結乾燥した配合物中のアミノ酸は、Ｌ－アルギニンであり、緩衝剤は、クエン酸またはリン酸、もしくはそれらの混合物である。
[0021]一態様では、凍結乾燥した配合物中のアミノ酸は、Ｌ－アルギニンであり、緩衝剤は、クエン酸またはリン酸、もしくはそれらの混合物である。
【0019】
[0022]別の態様では、凍結乾燥した配合物は、バイアルの形態で提供される。模範的な実施形態では、バイアルは、トラベクテジン０．１～１ｍｇ、Ｌ－アルギニン１０～６０ｍｇ、クエン酸０．５～８ｍｇ、リン酸５～４０ｍｇを含有する。特定の実施形態では、バイアルは、トラベクテジン０．２５ｍｇ、Ｌ－アルギニン１７．４ｍｇ、クエン酸１．９ｍｇ、およびリン酸１０～１５ｍｇを含有する。
【0020】
[0023]凍結乾燥した配合物は、水性媒体中で再構成することにより、点滴静注溶液を調製するのに適している。したがって、本発明は、トラベクテジン、アミノ酸、緩衝剤および注射用の水を含む、点滴静注溶液をさらに提供する。
【0021】
[0024]一態様では、点滴静注溶液は、がんの治療において使用される。治療され得るがんは、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、卵巣がん、乳がん、黒色腫、結腸直腸がん、中皮腫、腎がん、子宮体がんおよび肺がん、またはそれらの任意の組合せの群から選択される肉腫であり得る。
【0022】
[0025]さらなる実施形態では、本明細書中に記載される点滴静注は、進行性軟部組織肉腫を伴う成人患者の治療のために使用される。
[0026］一実施形態では、点滴静注溶液は、再発した白金感受性卵巣がんを伴う患者の治療のために使用される。治療は、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＰＬＤ）と組み合わせてもよい。
[0026］一実施形態では、点滴静注溶液は、再発した白金感受性卵巣がんを伴う患者の治療のために使用される。治療は、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＰＬＤ）と組み合わせてもよい。
【図面の簡単な説明】
【0023】
【図1】[0027]２９ｈまで５℃（上図）および２２℃（下図）で保存した短期安定性サンプルの純度を示す図である。
【図2】[0028]２～８℃での凍結乾燥物の安定性：参照（０．２５ｍｇ／ｍＬ）のＲＰ－ＨＰＬＣによるトラベクテジン（Ａ２８５ｎｍ）の含有量（％）を示す図である。
【図3】[0029]２～８℃での凍結乾燥物の安定性：ＲＰ－ＨＰＬＣ分析（Ａ２８５ｎｍ）によるトラベクテジンピークの相対的ピーク領域としてのサンプルの純度を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0024】
[0030]本発明は、トラベクテジンおよび少なくとも１種のアミノ酸を含む組成物に関する。本配合物は、作用物質としてトラベクテジンを含み、凍結乾燥した配合物として配合することができ、これは、再構成して点滴静注を得ることができる。
【0025】
[0031]本発明の文脈において、トラベクテジンは、それらの起源の組合せを含めて、天然起源、半合成起源または合成起源のものであり得る。
[0032]トラベクテジンの公知の配合物は、糖類（例えば、ＷＯ２０１７１３３５４４Ａ１）を使用して、安定した配合物を得る。しかしながら、糖類は、医薬配合物において使用される場合、いくつかの好ましくない特性を示すことがある。第１に、グルコースおよびサッカロースは、追加の炭水化物摂取を考慮に入れずに、糖尿病患者に投与することができない。糖尿病患者は、いくつかの境界域内でそれらの血糖値を維持するために、グルコースを産生する炭水化物の摂取およびグルコース－低下薬物治療を制御することを要する。したがって、グルコースまたはサッカロースを含有する薬物配合物は、この特定の患者群に最適でない。
[0032]トラベクテジンの公知の配合物は、糖類（例えば、ＷＯ２０１７１３３５４４Ａ１）を使用して、安定した配合物を得る。しかしながら、糖類は、医薬配合物において使用される場合、いくつかの好ましくない特性を示すことがある。第１に、グルコースおよびサッカロースは、追加の炭水化物摂取を考慮に入れずに、糖尿病患者に投与することができない。糖尿病患者は、いくつかの境界域内でそれらの血糖値を維持するために、グルコースを産生する炭水化物の摂取およびグルコース－低下薬物治療を制御することを要する。したがって、グルコースまたはサッカロースを含有する薬物配合物は、この特定の患者群に最適でない。
【0026】
[0033]さらに、糖類は、形成されることになるトラベクテジンのある特定の分解生成物についての発生源でもある。溶液中のヘミアセタール構造（すなわち、すべての「還元」糖）を形成することができるすべての糖類は、ヒドロキシ基と反応して、安定したアセタールおよび水を形成することができる（Ｊｅｒｒｙ Ｍａｒｃｈ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３版、７８９～７９０頁；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ）。反応生成物、アセタールおよび水は、薬物化合物、例えば、トラベクテジンおよびそのヒドロキシ基と平衡にある。水の除去下で（例えば、フリーズドライした後）、その平衡は、アセタール側に大いに転じ、したがって、関連する含量でこの反応生成物を形成する。
【0027】
[0034]したがって、構造がそのようなヒドロキシ基を示すトラベクテジンは、フリーズドライ中、グルコースまたはラクトースのような還元糖とともにアセタールを形成する傾向がある。
【0028】
[0035]この特定の分解経路は、グルコースを含有するトラベクテジンのフリーズドライ配合物において観察されている。かかる配合物がフリーズドライされる場合、トラベクテジン－グルコースアセタールの形成を観察した。それにも関わらず、このアセタールが、凍結乾燥物の再構成において加水分解し、それは、再構成された溶液中で（例えば、６時間後、相対的レベル約０．５％で）何時間もやはり存在する。それは、ＨＰＬＣにより検出することができる。用いられたＨＰＬＣ法は、本明細書中配合物スクリーニングセクションにおいて記載されるものと同一である。分解は、最終的に、かなり低いが、検出可能なレベルのアセタール不純物と平衡になる。トラベクテジン投与量の一部が、アセタール中で失われ、療法に利用できないため、未知の毒性の分解生成物を含有する製剤を患者に適用することは、毒性の観点からだけでなく、投与量の精度の観点からも問題がある可能性もある。
【0029】
[0036]還元糖（例えば、グルコースまたはラクトース）を含有するトラベクテジン配合物のこの副作用は、注入が開始される前に、アセタールのほとんどが加水分解されるまで、輸液の調製後にただ待つことにより克服することができる。しかしながら、医療活動において、これは、時間がかかり、望ましくない、避けるべき手順である。したがって、この種の分解生成物を示さない配合物が有利である。
【0030】
[0037]やはり、ＩＮ２０１７４１０４１１７３に開示される配合物は、トラベクテジンの安定した医薬組成物の調製のために、糖アルコールと組み合わせた単糖類を主として使用する。あるいは、アミノ酸もやはり、賦形剤として使用され得る。１：４００の比でトラベクテジンおよびＬ－アルギニンを含む配合物が例証される。
【0031】
[0038]本発明者らは、さらに低量のアミノ酸が、トラベクテジン分解生成物を生成せずに、トラベクテジン組成物を安定させることを驚くべきことに見出した。本文脈中において、用語「安定性」は、製薬プロセス工学についての作業部会（Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）（ＡＰＶ）により開発された定義を意味することが理解され、それに従って、「安定性」は、製造業者により指定されたその期間の終わりまで、規定された治験薬の品質を意味する。薬物の品質は、作用物質の含有量および純度、感覚的に知覚できる、物理化学的および微生物学的特性により決定され、それによって、作用物質の含有量は、その期間の終わりまでに、公表された値の９０％未満に減少するべきでない。
【0032】
[0039]本発明に従って生成された配合物は、２～８℃の温度で少なくとも３カ月、好ましくは、少なくとも６カ月、より好ましくは、少なくとも１２カ月、さらに好ましくは、少なくとも２４カ月、最も好ましくは、少なくとも３６カ月の安定性（または換言すれば、有効期間または実働時間）を有し、それによって、その期間の終わりまでのトラベクテジン含有量は、本来使用されるトラベクテジンの９０％、好ましくは、９５％未満に減少しない。
【0033】
[0040]用語「アミノ酸」とは、タンパク質原性および非タンパク質原性アミノ酸を含めた、天然アミノ酸、合成アミノ酸、およびアミノ酸類似体、それらの構造が、かかる立体異性体形態が可能である場合、それらのＤおよびＬ立体異性体の形態のすべてを指す。アミノ酸には、非極性、極性、塩基性および酸性アミノ酸が含まれる。非極性タンパク質原性アミノ酸は、グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）およびメチオニン（Ｍｅｔ）である。極性タンパク質原性アミノ酸には、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、チロシン（Ｔｙｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）およびシステイン（Ｃｙｓ）が含まれる。塩基性タンパク質原性アミノ酸には、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）およびリジン（Ｌｙｓ）が含まれる。酸性タンパク質原性アミノ酸には、アスパラギン酸（Ａｓｐ）およびグルタミン酸（Ｇｌｕ）が含まれる。合成アミノ酸には、アセチルシステインが含まれる。非タンパク質原性アミノ酸には、シトルリンが含まれる。
【0034】
[0041]本発明と関連して、アミノ酸は、非極性、極性、塩基性もしくは酸性アミノ酸、またはそれらの任意の組合せであり得る。一実施形態によれば、アミノ酸は、非極性タンパク質原性アミノ酸、特に、Ｌ－フェニルアラニンまたはＬ－イソロイシン、またはそれらの任意の組合せの群から選択される。
【0035】
[0042]さらなる実施形態では、アミノ酸は、塩基性アミノ酸、例えば、Ｌ－アルギニン、Ｌ－リジンまたはＬ－ヒスチジンの群から選択される。詳細には、アミノ酸は、Ｌ－アルギニンである。一態様では、Ｌ－アルギニンは、１種または複数のさらなるアミノ酸、例えば、Ｌ－フェニルアラニンまたはＬ－イソロイシンなどと組み合わせてもよい。
【0036】
[0043]別の実施形態では、アミノ酸は、シトルリンである。さらなる別の実施形態では、アミノ酸は、アセチルシステインである。
[0044]本明細書中に記載される実施形態におけるトラベクテジン対アミノ酸の比は、アミノ酸の溶解性に従って、および配合物がフリーズドライされる場合、アミノ酸のフリーズドライ性（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙａｂｉｌｉｔｙ）にやはり従って、決定される。トラベクテジン対アミノ酸（ｗ／ｗ）の重量比（ｗ／ｗ）は、約１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０、１：９０、１：１００、１：１５０、１：２００、または１：２５０であり得る。いくつかの実施形態では、重量比は、１：１０～１：２５０の範囲内、または１：５０～１：１００の範囲内である。特定の実施形態では、重量比は、約１：７０である。
[0044]本明細書中に記載される実施形態におけるトラベクテジン対アミノ酸の比は、アミノ酸の溶解性に従って、および配合物がフリーズドライされる場合、アミノ酸のフリーズドライ性（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙａｂｉｌｉｔｙ）にやはり従って、決定される。トラベクテジン対アミノ酸（ｗ／ｗ）の重量比（ｗ／ｗ）は、約１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０、１：９０、１：１００、１：１５０、１：２００、または１：２５０であり得る。いくつかの実施形態では、重量比は、１：１０～１：２５０の範囲内、または１：５０～１：１００の範囲内である。特定の実施形態では、重量比は、約１：７０である。
【0037】
[0045]用語「約」とは、本発明で使用される場合、列挙した値の＋／－１０％の範囲内の値を指す。
[0046]特定の態様では、本明細書中に記載される組成物は、緩衝剤をさらに含む。緩衝剤は、トラベクテジンの安定性を支持する範囲内の系のｐＨを維持することを可能にする。通常、ｐＨは、ｐＨ２～ｐＨ５の範囲内であることになる。適した緩衝液は、例えば、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸／リン酸緩衝液、乳酸緩衝液、アスコルビン酸緩衝液、酒石酸／クエン酸緩衝液、炭酸水素／塩酸緩衝液、アセテートまたは酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、グリシン／塩酸緩衝液である。いくつかの実施形態では、アミノ酸に基づいた緩衝液は、例えば、組成物中に既に存在するアミノ酸に基づいた緩衝液を用いてもよい。前記緩衝剤の混合物をやはり使用してもよい。
[0046]特定の態様では、本明細書中に記載される組成物は、緩衝剤をさらに含む。緩衝剤は、トラベクテジンの安定性を支持する範囲内の系のｐＨを維持することを可能にする。通常、ｐＨは、ｐＨ２～ｐＨ５の範囲内であることになる。適した緩衝液は、例えば、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸／リン酸緩衝液、乳酸緩衝液、アスコルビン酸緩衝液、酒石酸／クエン酸緩衝液、炭酸水素／塩酸緩衝液、アセテートまたは酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、グリシン／塩酸緩衝液である。いくつかの実施形態では、アミノ酸に基づいた緩衝液は、例えば、組成物中に既に存在するアミノ酸に基づいた緩衝液を用いてもよい。前記緩衝剤の混合物をやはり使用してもよい。
【0038】
[0047]一実施形態によれば、緩衝剤は、クエン酸、リン酸、酢酸、塩基性アミノ酸および水酸化ナトリウム、もしくはそれらの任意の混合物からなる群から選択される。さらなる実施形態では、緩衝剤は、クエン酸およびリン酸（クエン酸／リン酸緩衝液）の混合物である。詳細には、クエン酸／リン酸緩衝液は、緩衝剤として、塩基性アミノ酸、例えば、Ｌ－アルギニンをさらに含有してもよい。さらに、水酸化ナトリウムは、ｐＨ調整のために使用され得る。
【0039】
[0048]他の成分は、組成物中で、例えば、錯化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；抗酸化剤、例えば、モノチオグリセロール；界面活性剤；マンニトール；およびアスコルビン酸が含まれ得る。界面活性剤についての例には、ポリソルベート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートまたはステアリン酸ポリオキシル、リン脂質、例えば、レシチン；ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマー、例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ界面活性剤；１２－ヒドロキシステアリン酸のポリオキシエチレンエステル、例えば、Ｓｏｌｕｔｏｌ界面活性剤；コレステロールのエトキシレート、例えば、ジアシルグリセロール、ジアルキルグリセロール；胆汁酸塩、例えば、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウムなど；モノラウリン酸スクロース、モノラウリン酸スクロースのような、スクロースエステル；ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）；またはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）が含まれる。
【0040】
[0049]本明細書中に記載される組成物は、凍結乾燥した配合物の形態であり得る。用語「凍結乾燥配合物」とは、本発明で使用される場合、薬学的に有効な量のトラベクテジンを含む混合物の凍結乾燥（フリーズドライ）により調製される配合物を指す。本発明者らは、凍結乾燥プロセスにおける増量剤としての１種または複数のアミノ酸の使用によって、保存条件を改善し、冷蔵条件および室温を含めて、広い温度範囲で、凍結乾燥した配合物の長期保存が可能になるということを驚くべきことに見出した。
【0041】
[0050]したがって、本発明は、トラベクテジン、少なくとも１種のアミノ酸、緩衝剤、場合によっては、増量剤、例えば、マンニトールを含む凍結乾燥した配合物を提供する。アミノ酸は、増量剤として作用し得る。
【0042】
[0051]用語「増量剤」とは、本発明で使用される場合、塊を凍結乾燥した（フリーズドライした）混合物に加え、凍結乾燥したケークの物理的構造に寄与する（例えば、通気孔構造を維持する本質的に均一な凍結乾燥したケークの生成を容易にする）化合物を指す。薬学的に洗練されたケークを提供することに加えて、増量剤は、崩壊温度を調整する、凍結融解保護を提供するおよび長期保存に対して安定性を高めることに関して、有用な品質をも与えることができる。模範的な増量剤には、マンニトール、グリシン、ラクトース、スクロース、デキストロースおよびヒドロキシエチルデンプンが含まれる。増量剤は、結晶性（例えば、グリシン、またはマンニトール）または非晶性（例えば、デキストラン、またはヒドロキシエチルデンプン）であり得る。
【0043】
[0052]特定の実施形態では、本明細書中に記載される凍結乾燥した配合物中のアミノ酸は、非極性、極性、塩基性もしくは酸性アミノ酸、またはそれらの任意の組合せである。アミノ酸は、非極性アミノ酸、例えば、Ｌ－フェニルアラニンもしくはＬ－イソロイシン、または塩基性アミノ酸、例えば、Ｌ－アルギニン、Ｌ－リジンもしくはＬ－ヒスチジン、またはそれらの任意の組合せであり得る。詳細には、アミノ酸は、Ｌ－アルギニンである。一態様では、Ｌ－アルギニンは、１種または複数のさらなるアミノ酸、例えば、Ｌ－フェニルアラニンまたはＬ－イソロイシンと組み合わせてもよい。別の実施形態では、アミノ酸は、シトルリンである。さらなる別の実施形態では、アミノ酸は、アセチルシステインである。
【0044】
[0053]一実施形態では、前記凍結乾燥配合物中のアミノ酸は、Ｌ－アルギニンであり、緩衝剤は、クエン酸およびリン酸（クエン酸／リン酸緩衝液）の混合物である。アミノ酸は、塩基と一緒になって、さらに、緩衝剤としても作用し得る。
【0045】
[0054]本発明による凍結乾燥した配合物は、凍結乾燥前溶液の形態で本明細書中に記載される組成物をフリーズドライすることにより調製することができる。本明細書中に記載されるのは、凍結乾燥前の形態の組成物をフリーズドライするステップを含む、凍結乾燥した配合物を調製する方法であり、凍結乾燥前溶液は、０．１～１ｍｇ／ｍＬの濃度のトラベクテジン、１０～３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＬ－アルギニン、０．５～４ｍｇ／ｍＬの濃度のクエン酸、および５～２０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸を含む。凍結乾燥前溶液のｐＨは、ｐＨ２～ｐＨ５の範囲内であり、詳細には、ｐＨ４～ｐＨ５の間の範囲であり、さらに詳細には、ｐＨは４．８である。凍結乾燥した配合物を調製する方法は、例えば、リン酸および／または水酸化ナトリウムを加えることにより、前記所望の値にｐＨを調整することをさらに含み得る。
【0046】
[0055]一態様では、凍結乾燥した配合物は、バイアルの形態で提供される。一実施形態によれば、バイアルは、成形ガラスバイアルまたは管ガラスバイアルである。しかしながら、本発明は、したがって、容器がその目的とした使用および標準について許容される限り、特定の容器の形態またはデザインにより限定されない。
【0047】
[0056]凍結乾燥した配合物は、トラベクテジンの指定された量を含有するバイアルにおいて、通常、示される。例えば、バイアル中のトラベクテジンの量は、０．２５ｍｇまたは１ｍｇである。凍結乾燥した配合物を含有するバイアルを提供するために、凍結乾燥前溶液を、バイアルに加え、フリーズドライする。バイアルに加えた凍結乾燥前の体積は、１ｍＬ～５ｍＬ、または１～４ｍＬの範囲内である。
【0048】
[0057]一実施形態では、バイアルは、トラベクテジン０．１～１ｍｇ、例えば、トラベクテジン０．２５ｍｇ、およびＬ－アルギニン１０～３０ｍｇ、例えば、Ｌ－アルギニン１７．４ｍｇ、およびクエン酸０．５～４ｍｇ、例えば、クエン酸１．９ｍｇ、およびリン酸５～２０ｍｇ、またはリン酸１０～１５ｍｇを含有する。
【0049】
[0058]バイアルの形態で凍結乾燥した配合物を提供することは、単純な輸送および取扱い、ならびにそれを必要とする患者に容易に投与することができる配合物への直接の再構成を可能にする。
【0050】
[0059]凍結乾燥した配合物を再構成し希釈し、静脈内注射に備える溶液の形態で組成物を得ることができる。
[0060]用語「再構成する」または「再構成」とは、本発明で使用される場合、凍結乾燥した配合物が、薬学的に許容される水性再構成溶液、例えば、注射用の水、塩化ナトリウム溶液またはグルコース溶液を加えることによっておよびそれらと混合することによって液体の形態に転換されるプロセスを指す。
[0060]用語「再構成する」または「再構成」とは、本発明で使用される場合、凍結乾燥した配合物が、薬学的に許容される水性再構成溶液、例えば、注射用の水、塩化ナトリウム溶液またはグルコース溶液を加えることによっておよびそれらと混合することによって液体の形態に転換されるプロセスを指す。
【0051】
[0061]本明細書中に記載される本発明は、トラベクテジン、アミノ酸、緩衝剤および注射用の水を含む点滴静注を提供する。本発明は、凍結乾燥した配合物を準備するステップと、水性系で前記凍結乾燥配合物を再構成するステップと、水性注入媒体を使用した点滴静注のために適した濃度に前記再構成された配合物を希釈するステップとを含む、点滴静注を調製する方法をさらに提供する。
【0052】
[0062]再構成溶液の実際の量は、本発明の実施形態の特徴を制限していない。制限するものではないが、例証として、本発明による凍結乾燥配合物の実施形態は、水の体積で再構成される。かかる体積のほとんどは、約２０ｍＬを超えず、好ましい体積は、約１ｍＬ～約１５ｍＬまでの範囲、または約１ｍＬ～約１０ｍＬの範囲、または約５ｍＬである。かかる実施形態における再構成される溶液は、トラベクテジンの濃度約０．０５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ、または約０．１５ｍｇ／ｍＬを含有する。
【0053】
[0063]再構成される溶液は、望まれる場合、さらに希釈されてもよい。このさらなる希釈は、水性注入媒体で行うことができ、これは、通常、０．９％塩化ナトリウムまたは５％グルコースである。再構成される溶液は、再構成される溶液中の濃度および希釈液中の所望の濃度に応じて、希釈されることになる。
【0054】
[0064]一態様では、点滴静注は、がんの治療において使用される。一態様では、がんは、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫；卵巣がん、乳がん、黒色腫、結腸直腸がん、中皮腫、腎がん、子宮体がんおよび肺がん、またはそれらの任意の組合せ、および複数のかかる形態のがんを有する状態の群から選択される、肉腫である。本文脈中で「治療」は、がんの状態（複数可）の寛解をもたらす行為を指すことが理解される。本発明による配合物の実施形態はまた、好都合には、他の治療に応答しない、治療抵抗性がんの状態の治療に使用することもできる。一実施形態では、点滴静注は、進行性軟部組織肉腫を伴う成人患者の治療のために使用される。
【0055】
[0065]トラベクテジンは、別の薬物と組み合わせて使用することができる。例えば、トラベクテジンは、別の抗腫瘍薬とともに投与することができる。かかる他の薬物の例には、ドキソルビシン、シスプラチン、パクリタキセル、カルボプラチン、ペグ化リポソームドキソルビシン、ドセタキセル、カペシタビン、およびゲムシタビンが含まれる。他の作用機序を有する薬物は、デキサメタゾンを含めて、使用することができる。他の薬物の投与は、トラベクテジンの投与前、投与中または投与後であり得る。
【0056】
[0066]別の実施形態では、本明細書中に記載される点滴静注は、再発した白金感受性卵巣がんを伴う患者の治療のために使用され、治療は、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＰＬＤ）と組み合わされる。
【0057】
[0067]詳細には、本明細書中に記載される点滴静注は、サイクルを基準にした、例えば、１～２０サイクル静脈内投与される。このサイクルは、トラベクテジン注入を注入する相、通常、トラベクテジンを注入しない相もやはり含まれる。通常、このサイクルは、週単位で取り組まれ、したがって、このサイクルは、普通は、１または数週間のトラベクテジン注入相、およびこのサイクルを完了するのに１または数週間を含む。３週間のサイクルが好ましいが、代わりに、これは、１～６週間でもよい。注入相は、それ自体、例えば、１～７２ｈ、さらに通常は、約１、３または２４ｈの各サイクルで単回投与；または１～５ｈ、特に、１もしくは３ｈのサイクルの注入相で、毎日注入；または１～３ｈ、特に、２もしくは３ｈのサイクルの注入相で週を基準にした注入であり得る。各サイクルの開始時の単回投与が好ましい。詳細には、注入時間は、約１、３または２４ｈである。
【0058】
[0068]静脈内トラベクテジン配合物の模範的な投薬プロトコールは、例えば、ＷＯ２００６０４６０７９に記載される。かかる投薬プロトコールには、次が含まれる。
ａ）体表面積約１．５ｍｇ／ｍ２、サイクル間で３週間間隔で２４ｈにわたって点滴静注として投与される；
ｂ）体表面積約１．３ｍｇ／ｍ２、サイクル間で３週間間隔で３ｈにわたって点滴静注として投与される；
ｃ）体表面積約０．５８０ｍｇ／ｍ２、３週間３ｈにわたって点滴静注として毎週投与し、１週間休養する。
ａ）体表面積約１．５ｍｇ／ｍ２、サイクル間で３週間間隔で２４ｈにわたって点滴静注として投与される；
ｂ）体表面積約１．３ｍｇ／ｍ２、サイクル間で３週間間隔で３ｈにわたって点滴静注として投与される；
ｃ）体表面積約０．５８０ｍｇ／ｍ２、３週間３ｈにわたって点滴静注として毎週投与し、１週間休養する。
【実施例】
【0059】
[0069]次に示される実施例は、本発明の理解を助けるために記載されるが、いかなる方法においても本発明の範囲を限定することを目的とせず、限定するものと解釈するべきではない。実施例は、従来の方法、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による定量化の詳細な説明を含まない。かかる方法は、当業者に周知である。
実施例１ － 配合物の変種
[0070]表１に示される通りトラベクテジンについての配合物の変種を示した。異なる増量剤を使用した。例えば、「０．１Ｍ Ａｒｇ」は、０．１ｍｏｌ／Ｌの濃度でのＬ－アルギニンを指す。
実施例１ － 配合物の変種
[0070]表１に示される通りトラベクテジンについての配合物の変種を示した。異なる増量剤を使用した。例えば、「０．１Ｍ Ａｒｇ」は、０．１ｍｏｌ／Ｌの濃度でのＬ－アルギニンを指す。
【0060】
【表1】
【0061】
実施例２ － 凍結乾燥前溶液の短期安定性
[0071]合計で、９種の凍結乾燥前溶液を調製した。配合物の変種を、５０ｍＬガラス容器中にトラベクテジンおよそ１０ｍｇを予め秤量し、トラベクテジンの標的濃度０．２５ｍｇ／ｍＬに達するよう溶媒の算出した量を加えることにより調合した。凍結乾燥前溶液を、室温（２２℃）でおよそ３０分間ローラーミキサーで混合した。溶液を、０．２μｍシリンジフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｆｌｕｏｒｏｄｙｎｅ（登録商標）ＩＩメンブレン）を使用してろ過し、清潔なおよびパイロジェンを除去した（ｄｅｐｙｒｏｇｅｎｉｚｅｄ）１０Ｒガラスバイアル中に（バイアル当たり１ｍＬ）充てんした。
[0071]合計で、９種の凍結乾燥前溶液を調製した。配合物の変種を、５０ｍＬガラス容器中にトラベクテジンおよそ１０ｍｇを予め秤量し、トラベクテジンの標的濃度０．２５ｍｇ／ｍＬに達するよう溶媒の算出した量を加えることにより調合した。凍結乾燥前溶液を、室温（２２℃）でおよそ３０分間ローラーミキサーで混合した。溶液を、０．２μｍシリンジフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｆｌｕｏｒｏｄｙｎｅ（登録商標）ＩＩメンブレン）を使用してろ過し、清潔なおよびパイロジェンを除去した（ｄｅｐｙｒｏｇｅｎｉｚｅｄ）１０Ｒガラスバイアル中に（バイアル当たり１ｍＬ）充てんした。
【0062】
[0072]トラベクテジン（０．２５ｍｇ／ｍＬ）の液体配合物の安定性を、２～８℃および２５℃で短期（０ｈおよび２４ｈ）安定性実験において試験した。トラベクテジン含有量におけるいくつかの分散を、異なる配合物の変種間のＲＰ－ＨＰＬＣ分析（パラメーターについて、表４を参照のこと）により観察したが、ストレスを与えた（２～８℃または２５℃で、２４ｈ）およびストレスを与えなかった（０ｈ）サンプル間の差はわずかだった（表２を参照のこと）。表２は、トラベクテジン安定性アッセイの結果を示す。ＲＰ－ＨＰＬＣ（２８５ｎｍで検出）により決定された通りトラベクテジンの含有量を、参照の％で示す。純度を、相対的ピーク領域として分析する。表２に示した不純物の量を決定した。量を、相対的ピーク領域（％）として決定した。ほとんどの不純物を、わずかな量（表２）でのみ検出した。トラベクテジン安定性の温度依存性を観察することができた。低ｐＨ変種は、それらの高ｐＨ相当物と比較して、大幅にさらに安定すると思われた。
【0063】
【表2】
【0064】
実施例３ － 凍結乾燥
[0073]充てんされたバイアルを、凍結乾燥位置に栓をし、ステンレス鋼製トレイに装てんし、ＬｙｏＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）バッグ（凍結乾燥機の汚染を防止するために、蒸気透過性ＰＴＦＥメンブレンを有するバッグ）に包んだ。２種のパイロット凍結乾燥機（Ｈｏｆ Ｓｏｎｄｅｒａｎｌａｇｅｎｂａｕ社、Ｌｏｈｒａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用した（ＧＴ２、棚面積０．３６ｍ２およびＧＦ３、棚面積０．２５ｍ２）。いくつかの異なる配合物の変種を、１回の凍結乾燥の実行でフリーズドライした際（実行１：配合物の変種１番～４番、実行２：配合物の変種８番～９番）、一般的な保存的凍結乾燥パラメーターを選択した（表３）。
[0073]充てんされたバイアルを、凍結乾燥位置に栓をし、ステンレス鋼製トレイに装てんし、ＬｙｏＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）バッグ（凍結乾燥機の汚染を防止するために、蒸気透過性ＰＴＦＥメンブレンを有するバッグ）に包んだ。２種のパイロット凍結乾燥機（Ｈｏｆ Ｓｏｎｄｅｒａｎｌａｇｅｎｂａｕ社、Ｌｏｈｒａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用した（ＧＴ２、棚面積０．３６ｍ２およびＧＦ３、棚面積０．２５ｍ２）。いくつかの異なる配合物の変種を、１回の凍結乾燥の実行でフリーズドライした際（実行１：配合物の変種１番～４番、実行２：配合物の変種８番～９番）、一般的な保存的凍結乾燥パラメーターを選択した（表３）。
【0065】
【表3】
【0066】
[0074]すべての配合物の変種は、凍結乾燥に適していた。ほとんどの変種は、凍結乾燥中の不純物（特に、ＲＲＴ１．３２（Ａ２８５ｎｍ）のいくらかの増加を示し、トラベクテジンの感受性を示した。
【0067】
[0075]さらに配合物の変種を区別するために、すべての配合物の変種１～４番および８～９番の凍結乾燥したサンプルの安定性を、加速安定性試験において評価した。
実施例４ － 凍結乾燥したサンプルの短期安定性試験
[0076]実行可能な凍結乾燥において得られたサンプルを、３通りの温度：２～８℃、２５℃および４０℃で安定性試験をした。サンプルを、外観、再構成速度、ＲＰ－ＨＰＬＣによる分解プロフィールおよび一般的なカール・フィッシャーオーブン法（Ｔ０のみ）を使用して残留する含水量に関して凍結乾燥直後（Ｔ０）、保存期間の１カ月後（Ｔ１）、２カ月後（Ｔ２）、３カ月後（Ｔ３）および６カ月後（Ｔ６）に分析した。
実施例４ － 凍結乾燥したサンプルの短期安定性試験
[0076]実行可能な凍結乾燥において得られたサンプルを、３通りの温度：２～８℃、２５℃および４０℃で安定性試験をした。サンプルを、外観、再構成速度、ＲＰ－ＨＰＬＣによる分解プロフィールおよび一般的なカール・フィッシャーオーブン法（Ｔ０のみ）を使用して残留する含水量に関して凍結乾燥直後（Ｔ０）、保存期間の１カ月後（Ｔ１）、２カ月後（Ｔ２）、３カ月後（Ｔ３）および６カ月後（Ｔ６）に分析した。
【0068】
[0077]各配合物の変種のサンプルを、保存し、分析した。すべての配合物の変種は、固体ケークを形成し、これは、試験期間中視覚的に安定したままであった。注射用の水１ｍＬ中の再構成は、すべての変種の場合、すべての時点で、高速であり、１０秒以内に自然に起きた。
凍結乾燥物の含有量および純度
[0078]再構成される凍結乾燥物を、ＲＰ－ＨＰＬＣ（パラメーターについて、表４を参照のこと）により分析して、トラベクテジン含有量および不純物プロフィールを決定した。２～８℃で保存の場合の結果を、図２および図３にまとめて示す。
凍結乾燥物の含有量および純度
[0078]再構成される凍結乾燥物を、ＲＰ－ＨＰＬＣ（パラメーターについて、表４を参照のこと）により分析して、トラベクテジン含有量および不純物プロフィールを決定した。２～８℃で保存の場合の結果を、図２および図３にまとめて示す。
【0069】
【表4】
【0070】
[0079]ｐＨ４．８へのｐＨ調整のためのＨ３ＰＯ４を含むクエン酸中のＬ－アルギニンを含む配合物（配合物４番、表１および表５を参照のこと）は、４０℃の保存温度でも、非常に良好な安定性結果を示す。
【0071】
【表5】
【0072】
実施例５ － ３カ月安定性試験
[0080]３種の異なる配合物の変種（アルギニンリン酸ｐＨ３．０、ｐＨ３．４、およびｐＨ３．８、表１および５を参照のこと）を調製し、凍結乾燥し、アッセイおよび不純物プロフィールに関して経時的に分析した。
実験の詳細
[0081]安定性試験の場合、トラベクテジン配合物の変種の凍結乾燥したサンプルを、２～８℃、２５℃および３０℃で保存した。トラベクテジンを含まないプラセボ溶液を、２５℃で保存し、ＨＰＬＣ分析用参照サンプルとして利用する。分析時点は、１カ月後、３カ月後である（表６および７を参照のこと）。
[0080]３種の異なる配合物の変種（アルギニンリン酸ｐＨ３．０、ｐＨ３．４、およびｐＨ３．８、表１および５を参照のこと）を調製し、凍結乾燥し、アッセイおよび不純物プロフィールに関して経時的に分析した。
実験の詳細
[0081]安定性試験の場合、トラベクテジン配合物の変種の凍結乾燥したサンプルを、２～８℃、２５℃および３０℃で保存した。トラベクテジンを含まないプラセボ溶液を、２５℃で保存し、ＨＰＬＣ分析用参照サンプルとして利用する。分析時点は、１カ月後、３カ月後である（表６および７を参照のこと）。
【0073】
【表6】
【0074】
【表7】
【0075】
実施例６ － ６カ月安定性試験
凍結乾燥溶液の調合
[0082]１２種の異なる配合物の変種（表８を参照のこと）を、調製し、凍結乾燥し、トラベクテジン含有量および純度プロフィールに関して経時的に分析した。各配合物は、凍結乾燥前にトラベクテジン０．２５ｍｇ／ｍＬを含有する。
凍結乾燥溶液の調合
[0082]１２種の異なる配合物の変種（表８を参照のこと）を、調製し、凍結乾燥し、トラベクテジン含有量および純度プロフィールに関して経時的に分析した。各配合物は、凍結乾燥前にトラベクテジン０．２５ｍｇ／ｍＬを含有する。
【0076】
【表8】
【0077】
[0083]選択された配合物の変種を、５０ｍＬガラスバイアル中にトラベクテジンおよそ１２．５ｍｇを予め秤量し、トラベクテジンの標的濃度０．２５ｍｇ／ｍＬに達するよう溶媒の算出した量を加えることにより調合した。
【0078】
[0084]１２種の配合物の変種（ＡＰＩ－なしの緩衝液）のそれぞれを、ビーカーに、対応する物質を個別に秤量し、指定された体積の９０％の精製水に溶解し、変種７番の場合、水酸化ナトリウム溶液（３０％）または塩酸溶液（２５％）、他の変種の場合、オルト－リン酸（８５％）でｐＨ調整し、その後、精製水を最終体積に加えることにより調製した。次いで、算出した量の溶媒（緩衝液）を、ガラスバイアル５０ｍＬ中の予め秤量したトラベクテジンに加えて、トラベクテジンの標的濃度０．２５ｍｇ／ｍＬにした。希釈用の緩衝液体積は、変種毎に０．２５ｍｇ／ｍＬについての質量で実際に秤量されたものに適合している。
溶液を、室温（２２℃）でおよそ３０分間マグネチックスターラーで完全に溶解するまで撹拌した。溶解溶液を、０．２μｍシリンジフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｆｌｕｏｒｏｄｙｎｅ（登録商標）ＩＩメンブレン）を使用してろ過し、清潔なおよびパイロジェンを除去した１０Ｒガラスバイアル中に（バイアル当たり１ｍＬ）充てんした。
凍結乾燥
[0085]充てんされたバイアルを、凍結乾燥位置に部分的に栓をし、ステンレス鋼製トレイ装てんし、ＬｙｏＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）バッグ（凍結乾燥機の汚染を防止するために、蒸気透過性ＰＴＦＥメンブレンを有するバッグ）に包み密封した。バイアルを、凍結乾燥機に装てんし、凍結乾燥した。
溶液を、室温（２２℃）でおよそ３０分間マグネチックスターラーで完全に溶解するまで撹拌した。溶解溶液を、０．２μｍシリンジフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｆｌｕｏｒｏｄｙｎｅ（登録商標）ＩＩメンブレン）を使用してろ過し、清潔なおよびパイロジェンを除去した１０Ｒガラスバイアル中に（バイアル当たり１ｍＬ）充てんした。
凍結乾燥
[0085]充てんされたバイアルを、凍結乾燥位置に部分的に栓をし、ステンレス鋼製トレイ装てんし、ＬｙｏＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）バッグ（凍結乾燥機の汚染を防止するために、蒸気透過性ＰＴＦＥメンブレンを有するバッグ）に包み密封した。バイアルを、凍結乾燥機に装てんし、凍結乾燥した。
【0079】
[0086]凍結乾燥後、バイアルを、窒素で７５０ｍｂａｒまでガス抜きし、バイアルを閉じた。取り外した後、バイアルをクリンプシールし、７０％イソプロパノール／水で除染した。
保存
[0087]凍結乾燥したサンプルを、６カ月まで２５℃で保存し、
・ 外観、
・ 再構成挙動；
・ 溶液の透明性（比濁分析の混濁度）；
・ 再構成後のｐＨ測定；
・ ＲＰ－ＨＰＬＣによる分解プロフィール；および
・ 一般的なカール・フィッシャーオーブン法を使用した残留する含水量（Ｔ０のみ）
に関して、凍結乾燥直後（Ｔ０）、保存期間の１カ月後（Ｔ１ｍ）、３カ月後（Ｔ３ｍ）および６カ月後（Ｔ６ｍ）に分析した。
再構成
[0088]共栓を、バイアルから取り除き、凍結乾燥物をピペットを使用して精製水５．０ｍＬで再構成し；再構成速度および挙動をモニターした。
一般的なカール・フィッシャーオーブン法による残留する含水量の分析
[0089]サンプルの残りの水分を、７７４ ｏｖｅｎ ｓａｍｐｌｅ ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（Ｍｅｔｒｏｈｍ社）を装備した７５６カール・フィッシャー電量計を使用した、カール・フィッシャー滴定によって決定した。
保存
[0087]凍結乾燥したサンプルを、６カ月まで２５℃で保存し、
・ 外観、
・ 再構成挙動；
・ 溶液の透明性（比濁分析の混濁度）；
・ 再構成後のｐＨ測定；
・ ＲＰ－ＨＰＬＣによる分解プロフィール；および
・ 一般的なカール・フィッシャーオーブン法を使用した残留する含水量（Ｔ０のみ）
に関して、凍結乾燥直後（Ｔ０）、保存期間の１カ月後（Ｔ１ｍ）、３カ月後（Ｔ３ｍ）および６カ月後（Ｔ６ｍ）に分析した。
再構成
[0088]共栓を、バイアルから取り除き、凍結乾燥物をピペットを使用して精製水５．０ｍＬで再構成し；再構成速度および挙動をモニターした。
一般的なカール・フィッシャーオーブン法による残留する含水量の分析
[0089]サンプルの残りの水分を、７７４ ｏｖｅｎ ｓａｍｐｌｅ ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（Ｍｅｔｒｏｈｍ社）を装備した７５６カール・フィッシャー電量計を使用した、カール・フィッシャー滴定によって決定した。
【0080】
[0090]各測定について、各サンプル（およそ２０～５０ｍｇ）のうちの１つの凍結乾燥物を、カール・フィッシャーバイアルに移動した。正確な重量を記録した。バイアルを、クリンプキャップで密閉し、１１０℃に加熱したカール・フィッシャー電量計のオーブンに移動した。クリンプキャップのセプタムを、注射針により貫通させ、生成された水蒸気を、乾燥窒素によって滴定チャンバーに直接移動した。空のガラスバイアルを、ブランク補正として使用した。サンプルを、２回分析した。
ｐＨ測定
[0091]サンプルのｐＨを、一般のｐＨメーターを使用して再構成後（精製水５ｍＬ）、バイアル中で直接測定した。
ｐＨメーター：微小電極を有するＳｅｖｅｎＭｕｌｔｉ、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ社。
ｐＨ測定
[0091]サンプルのｐＨを、一般のｐＨメーターを使用して再構成後（精製水５ｍＬ）、バイアル中で直接測定した。
ｐＨメーター：微小電極を有するＳｅｖｅｎＭｕｌｔｉ、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ社。
【0081】
ｐＨメーターを、使用前にｐＨ４．０、ｐＨ７．０およびｐＨ９．０で較正した。
ＲＰ－ＨＰＬＣによる含有量および純度
[0092]ＲＰ－ＨＰＬＣを、表４に従って行った。
ＲＰ－ＨＰＬＣによる含有量および純度
[0092]ＲＰ－ＨＰＬＣを、表４に従って行った。
【0082】
[0093]不純物の検出を、２種の異なる検出器の波長（２８５ｎｍおよび２５５ｎｍ）で行って、すべてのあり得る不純物を包含した。一部の不純物が、波長のうちの一方で他方よりも高い吸収を示したことが観察された。したがって、２つの異なる波長における評価アプローチは、すべての関連する不純物の完全な適用範囲を裏付けている。
サンプル調製：
[0094]ＲＰ－ＨＰＬＣ分析のために、凍結乾燥物を、精製水１ｍＬで再構成した。ＨＰＬＣ分析用のさらなるサンプル希釈を要さなかった。
凍結乾燥物の含有量および純度
[0095]再構成された凍結乾燥物を、ＲＰ－ＨＰＬＣにより分析して、トラベクテジン含有量および純度プロフィールを決定した。これらの結果を、図１３および図１４にまとめて示した。図１３は、参照のＲＰ－ＨＰＬＣ（％）により測定された、Ｔ０、Ｔ１ｍ、Ｔ３ｍおよびＴ６ｍにおける、トラベクテジンの含有量を示す。全サンプルは、その期間にわたって安定したトラベクテジン含有量を示す。図１４は、ＲＰ－ＨＰＣＬにより分析した、トラベクテジンの相対的ピーク領域としてのサンプルの純度を示す。全サンプルは、その期間にわたって高純度プロフィールを示す。
サンプルの不純物プロフィール
[0096]サンプルを、２５℃で保存し、１、３および６カ月後に試験した。２５℃は、加速試験条件を考慮し、それにより配合物の安定性の評価が可能になる。長期保存条件は、冷蔵庫での保存（２～８℃）の可能性が最も高いはずである。
サンプル調製：
[0094]ＲＰ－ＨＰＬＣ分析のために、凍結乾燥物を、精製水１ｍＬで再構成した。ＨＰＬＣ分析用のさらなるサンプル希釈を要さなかった。
凍結乾燥物の含有量および純度
[0095]再構成された凍結乾燥物を、ＲＰ－ＨＰＬＣにより分析して、トラベクテジン含有量および純度プロフィールを決定した。これらの結果を、図１３および図１４にまとめて示した。図１３は、参照のＲＰ－ＨＰＬＣ（％）により測定された、Ｔ０、Ｔ１ｍ、Ｔ３ｍおよびＴ６ｍにおける、トラベクテジンの含有量を示す。全サンプルは、その期間にわたって安定したトラベクテジン含有量を示す。図１４は、ＲＰ－ＨＰＣＬにより分析した、トラベクテジンの相対的ピーク領域としてのサンプルの純度を示す。全サンプルは、その期間にわたって高純度プロフィールを示す。
サンプルの不純物プロフィール
[0096]サンプルを、２５℃で保存し、１、３および６カ月後に試験した。２５℃は、加速試験条件を考慮し、それにより配合物の安定性の評価が可能になる。長期保存条件は、冷蔵庫での保存（２～８℃）の可能性が最も高いはずである。
【0083】
[0097]サンプルの不純物を分析し、結果を次の表に示す。
【0084】
【表9】
【0085】
【表10】
【0086】
【表11】
【0087】
【表12】
【0088】
【表13】
【0089】
【表14】
【0090】
【表15】
【0091】
【表16】
【0092】
【表17】
【0093】
【表18】
【0094】
【表19】
【0095】
【表20】
【図1】
【図2】
【図3】
【国際調査報告】