特表 2023-522921 肺組織に対する急性損傷のための新規治療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-06-01

(54)【発明の名称】肺組織に対する急性損傷のための新規治療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20230525BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20230525BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20230525BHJP

   A61K 9/72 20060101ALI20230525BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20230525BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20230525BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20230525BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230525BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230525BHJP

   A61P 7/02 20060101ALI20230525BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20230525BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20230525BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20230525BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P11/00

A61K9/12

A61K9/72

A61K9/14

A61K9/08

A61P31/12

A61P29/00

A61P43/00 107

A61P7/02

A61P11/02

A61K9/19

A61P31/14

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022563428

(86)(22)【出願日】2021-04-21

(85)【翻訳文提出日】2022-12-16

(86)【国際出願番号】 IL2021050455

(87)【国際公開番号】W WO2021214767

(87)【国際公開日】2021-10-28

(31)【優先権主張番号】63/012,927

(32)【優先日】2020-04-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/061,210

(32)【優先日】2020-08-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522408119

【氏名又は名称】リモデレス シーヴイ リミテッド

(71)【出願人】

【識別番号】522408120

【氏名又は名称】トラスティーズ オブ ボストン ユニバーシィティ

(74)【代理人】

【識別番号】100205659

【弁理士】

【氏名又は名称】齋藤 拓也

(74)【代理人】

【識別番号】100185269

【弁理士】

【氏名又は名称】小菅 一弘

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】シュナイダーマン、ジェイコブ

(72)【発明者】

【氏名】ドゥ―アム、フロリアン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

【Ｆターム（参考）】

4C076AA11

4C076AA24

4C076AA30

4C076AA93

4C076BB27

4C076CC05

4C076CC10

4C076CC14

4C076CC15

4C076CC26

4C076CC35

4C076FF68

4C084AA17

4C084MA13

4C084MA17

4C084MA43

4C084MA44

4C084NA10

4C084NA14

4C084ZA34

4C084ZA54

4C084ZA59

4C084ZB11

4C084ZB22

4C084ZB33

(57)【要約】

本開示の様々な実施形態により、損傷した肺組織、例えば、ウイルス感染（例えば、コロナウイルス）および／または細菌感染および／または寄生虫病原体を有する患者、あるいは化学物質への曝露によって肺組織が損傷した患者、ならびに急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を有する患者の肺を処置するための方法が提供される。肺におけるサイトカイン合成を阻止することによって、脳を神経侵害から保護し、肺から離れた器官に対する炎症性損傷を防止するための方法もまた提供される。処置は、レプチンアンタゴニスト（ＬｅｐＡ）を患者の上気道および／または肺に局所的に投与することを含む。典型的には、ＬｅｐＡは吸入可能組成物（例えば、エアロゾルなど）で投与される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

患者の損傷した肺組織を処置するための方法であって、レプチンアンタゴニスト（ＬｅｐＡ）を前記患者の肺に局所的に投与することを含む方法。

【請求項2】

前記ＬｅｐＡを、吸入可能組成物でエアロゾルを介して投与することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

エアロゾルを介してＬｅｐＡを投与することが、ネブライザー、吸入器または換気補助器を使用することを含む、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

約１０μｇ～１００μｇの範囲内にある効果的な送達ＬｅｐＡ用量を前記患者に投与することを含む、請求項２に記載の方法。

【請求項5】

前記吸入可能組成物が空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）を１．５μｍ～４．５μｍの範囲内に有する、請求項２に記載の方法。

【請求項6】

前記吸入可能組成物が、前記粒子の５０％超が１．５μｍ未満であるＦＰＦ（微細粒子画分）を有する、請求項２に記載の方法。

【請求項7】

前記吸入可能組成物が乾燥粉末を含む、請求項２に記載の方法。

【請求項8】

前記吸入可能組成物が生理学的生理食塩水溶液を溶質として含む、請求項２に記載の方法。

【請求項9】

前記損傷した肺組織が、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、ウイルス、細菌または寄生虫病原体による感染、および化学物質への曝露のうちの少なくとも１つを患っている患者の組織である、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記損傷した肺組織が、コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に感染した患者の組織である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

コロナウイルス感染患者を処置するための方法であって、レプチンアンタゴニスト（ＬｅｐＡ）を前記患者の気道に局所的に投与することを含む方法。

【請求項12】

約１０μｇ～１００μｇの範囲内にある効果的な送達ＬｅｐＡ用量を前記患者に投与することを含む、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記ＬｅｐＡを、吸入可能組成物でエアロゾルを介して投与することを含む、請求項１１に記載の方法。

【請求項14】

前記吸入可能組成物が、乾燥粉末、または生理学的生理食塩水溶液に溶解したＬｅｐＡを含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記患者の肺におけるウイルス量を減少させること、前記患者の肺における炎症を軽減させること、前記患者の肺の遠位の気管支上皮細胞および肺胞上皮細胞の完全性および生存能を保つこと、損傷した肺細胞におけるサイトカイン合成を阻止すること、サイトカインレベルの全身的増大を防止し、それにより、前記患者の肺から離れた器官に影響を及ぼすことが知られているサイトカインストームを防止すること、前記患者の脳におけるウイルス量を減少させ、前記患者の鼻の細胞ならびに嗅上皮細胞および嗅神経細胞を介したコロナウイルスの神経侵害を軽減させること、ならびに静脈および／または動脈の血栓症を促進させることが知られている血液凝固性亢進を低下させることのうちの１つまたは複数について有用である、請求項１１に記載の方法。

【請求項16】

上気道および肺組織に局所的に適用するための、エアロゾル形態での吸入可能組成物であって、レプチンアンタゴニスト（ＬｅｐＡ）を含む組成物。

【請求項17】

肺胞細胞に対して、また鼻の細胞ならびに嗅上皮細胞および嗅神経細胞に対して送達されることになる１０μｇ～１００μｇの範囲での効果的なＬｅｐＡ用量を含む、請求項１６に記載の組成物。

【請求項18】

生理学的生理食塩水溶液に溶解した前記ＬｅｐＡを含む、請求項１６に記載の組成物。

【請求項19】

前記ＬｅｐＡを乾燥した凍結乾燥粉末として含む、請求項１６に記載の組成物。

【請求項20】

空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）が１．５μｍ～４．５μｍの範囲内にあるエアロゾル液滴を有する、請求項１６に記載の組成物。

【請求項21】

前記エアロゾル粒子の５０％超が１．５μｍ未満であるＦＰＦを有する、請求項１６に記載の組成物。

【請求項22】

前記ＬｅｐＡが、レプチンもしくはレプチン受容体に結合すること、および／またはレプチンもしくはレプチン受容体を分解することが可能である作用物質、ならびにレプチンもしくはレプチン受容体の発現をＤＮＡレベルまたはＲＮＡレベルでダウンレギュレーションすることが可能である作用物質のうちの少なくとも１つを含む、請求項１６に記載の組成物。

【請求項23】

前記ＬｅｐＡがＳＨＬＡ（超活性なヒトレプチンアンタゴニスト）を含む、請求項２２に記載の組成物。

【請求項24】

患者の肺におけるウイルス量を減少させること、患者の肺における炎症を軽減させること、患者の肺の遠位の気管支上皮細胞および肺胞上皮細胞の完全性および生存能を保つこと、損傷した肺細胞におけるサイトカイン合成を阻止すること、サイトカインレベルの全身的増大を防止し、それにより、患者の肺から離れた器官に影響を及ぼすことが知られているサイトカインストームを防止すること、患者の脳におけるウイルス量を減少させ、患者の鼻の細胞ならびに嗅上皮細胞および嗅神経細胞を介したコロナウイルスの神経侵害を軽減させること、ならびに静脈および／または動脈の血栓症を促進させることが知られている血液凝固性亢進を低下させることのうちの１つまたは複数について有用である、請求項１６に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、レプチンアンタゴニストを肺に局所的に適用することに基づく肺組織損傷のための治療法に関する。

【背景技術】

【0002】

ＣＯＶＩＤ１９は主に、肺胞上皮細胞表面のＡＣＥ２受容体にウイルスのスパイク（Ｓタンパク質）を介して結合する新規なコロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされる呼吸器疾患である。その結果として生じる肺病理は、肺組織における進行性の有害な再構築、サイトカインレベルの局所的および全身的な上昇、急性の肺炎症、全身的な血管炎および凝固障害によって特徴づけられる。ＣＯＶＩＤ１９疾患の急性期には、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が鼻の鼻甲介上皮および嗅神経を経由して脳ニューロンを侵害することに関連づけられる神経学的症状が伴い得る。さらに、約１／３のコロナウイルス感染患者が疾患後の後期神経学的症状を示している。

【0003】

高血圧および肥満が、これらはともに炎症に関連する一方で、ＣＯＶＩＤ１９疾患の重症度と相関することが示されている。特筆すべきことに、上昇した循環レプチンレベルが肥満の顕著な特徴である。レプチンおよびレプチン受容体が、ＨＩＶなどのウイルス感染では過剰発現していることが示され、また、レプチンが、サイトカイン調節不全を伴った重症の２００９年新型インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）感染の病理発生のメディエーターであることが見出された。そのうえ、レプチンは、ＣＯＶＩＤ１９患者において高頻度で発生する静脈および動脈の血栓症を促進させている。

【0004】

有害な組織再構築が、コロナウイルス感染に対する応答の一部として肺胞の壁で起きている。このプロセスは、炎症性の単球およびマクロファージの局所的な広範囲に及ぶ浸潤、局所的なＲＯＳ合成、サイトカイン蓄積、ならびに好中球活性化によって特徴づけられる。また、レプチンホルモンおよびレプチン受容体が傷害部位において局所的に合成される。

【0005】

局所的に利用可能なレプチン受容体に結合するレプチンアンタゴニストにより、不活性な複合体が生じる。したがって、様々なレプチンアンタゴニストが、大動脈瘤につながる中膜変性を起こしやすい大動脈壁に局所的に投与されたときには細胞および組織の完全性を保護することにおいて効果的であることが示されている。

【0006】

しかしながら、コロナウイルスに感染した肺組織に対するレプチンアンタゴニストの効果、ならびにその後の肺組織損傷および関連した合併症（例えば、直接的な神経侵害、および原発性肺事象によって誘発されるような遠隔性の炎症応答を介する合併症など）を処置することにおけるレプチンアンタゴニストの効力は、依然として不可解である。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

本開示の様々な実施形態により、損傷した肺組織を、レプチンアンタゴニスト（ＬｅｐＡ）を上気道および／または肺に局所的に投与することによって処置するための方法が提供される。典型的には、ＬｅｐＡは、吸入可能組成物で、すなわち、湿ったエアロゾル（例えば、溶質としての生理学的生理食塩水溶液（例えば、０．９％生理食塩水）に溶解したＬｅｐＡ）である場合があるエアロゾル、または乾燥した吸入可能組成物（粉末）で投与される。

【0008】

いくつかの実施形態において、ＬｅｐＡは、自発的用手呼吸（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｍａｎｕａｌ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）のためのネブライザーを使用することによって、あるいは重度呼吸不全または意識不明の患者の場合には換気補助により、例えば、機械的呼吸器を使用することによりエアロゾルを導入することによってエアロゾルを介して投与される。

【0009】

本開示の様々な実施形態により、所与の患者、例えば、ウイルス感染（例えば、コロナウイルス）および／または細菌感染および／または寄生虫病原体を有する患者、あるいは化学物質への曝露によって肺組織が損傷した患者、ならびに急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を有する患者の急性損傷肺のための処置が提供される。

【0010】

いくつかの実施形態において、本開示は、コロナウイルス感染患者を、レプチンアンタゴニスト（ＬｅｐＡ）を患者の上気道および肺に局所的に投与することによって処置するための方法を提供する。

【0011】

ＬｅｐＡは、患者に毎日、例えば、１日に１回または２回、投与される場合がある。いくつかの実施形態において、約１０μｇ～１００μｇのＬｅｐＡの（肺に投与される）効果的な１日送達用量が、吸入可能組成物で（例えば、０．９％生理食塩水溶液に溶解した、または乾燥粉末として）肺に適用される。

【0012】

処置は、本開示の様々な実施形態によれば、とりわけ、肺におけるウイルス量を減少させるために、肺における炎症を軽減させるために、肺の肺胞細胞の完全性および生存能を保つために、肺から離れた器官をサイトカインストームから保護するために、ならびに離れた器官（例えば、脳など）におけるウイルス量を減少させるために有用である場合がある。

【0013】

本開示の様々な実施形態により、肺組織に局所的に適用するための、ＬｅｐＡを含む吸入可能組成物が提供される。組成物はＬｅｐＡを生理食塩水溶液において、または乾燥粉末として含む場合がある。組成物は、ヒト対象のためは、肺に送達される約１０μｇ～１００μｇのＬｅｐＡの効果的な送達用量を含む場合がある。１つの実施形態において、組成物は、肺胞細胞に対して、また鼻の細胞ならびに嗅上皮細胞および嗅神経細胞に対して送達されることになる１０μｇ～１００μｇの範囲での効果的なＬｅｐＡ用量を含む。

【0014】

用語「レプチンアンタゴニスト」には、組織におけるレプチン活性を典型的には当該組織への局所的投与によりダウンレギュレーションすることが可能である作用物質が含まれる。例えば、レプチンアンタゴニストには、レプチンもしくはレプチン受容体に結合すること、および／またはレプチンもしくはレプチン受容体を分解することが可能である下記作用物質の少なくとも１つ；あるいはレプチンおよび／またはレプチン受容体の発現をＤＮＡレベルまたはＲＮＡレベルでダウンレギュレーションすることが可能である作用物質が含まれる場合がある。いくつかの実施形態において、レプチンアンタゴニストは、選択的に投与されるための局所的適用のために設計されている、したがって、関与組織のみに影響を及ぼし、周囲組織または離れた組織にはどのような影響であれ追跡可能または機能的な影響がない１６ＫＤの組換えタンパク質（天然に合成されたレプチンホルモンの変異体）である。

【0015】

次に、本開示が、より完全に理解され得るように、以下の例示的な図を参照してある特定の例および実施形態に関連して説明される。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】例１において、ＬｅｐＡ処置により組織完全性および細胞生存能が保たれたことを明らかにする経時的分析を示す。

【0017】

【図2】例２において、ＬｅｐＡまたは生理食塩水溶液により処置されるＳＡＲＳ ＣＯＶ－２接種（１０^∧６ＰＦＵ）後４日目でのＫ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスの肺組織のＨ＆Ｅを示す。

【0018】

【図3A】例２において、生理食塩水またはＬｅｐＡにより処置されるＫ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスの肺組織におけるウイルス量をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２接種（１０^∧６ＰＦＵ）後４日目において示す（ただし、ＬｅｐＡ処置が接種後２４時間で開始された）。

【0019】

【図3B】例２において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２接種後４日目でのＫ１８－ｈＡＣＥ２マウスの生理食塩水処置肺組織対ＬｅｐＡ処置肺組織におけるＴＮＦαおよびＩＬ６のｍＲＮＡの発現をまとめたものである（ただし、ＬｅｐＡ処置が接種後２４時間で開始された）。

【0020】

【図4】例２において、生理食塩水またはＬｅｐＡにより処置されるＫ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスの肺組織および脳組織におけるウイルス量をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２接種（１０^∧６ＰＦＵ）後４日目および７日目において示す（ただし、ＬｅｐＡ処置が接種後１２時間で開始された）。

【0021】

【図5】例２において、ＬｅｐＡ処置が接種後１２時間で開始されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２接種（１０^∧６ＰＦＵ）後４日目でのマウスからの肺組織のＩＨＣ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクおよびＨ＆Ｅを示す。

【0022】

【図6】例２において、ＬｅｐＡ処置が接種後１２時間で開始されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２接種（１０^∧６ＰＦＵ）後７日目でのＫ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスの肺組織のＩＨＣ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクおよびＨ＆Ｅを示す。

【0023】

【図7】ＬｅｐＡ処置が接種後１２時間で開始されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２接種（１０^∧６ＰＦＵ）後４日目でのＫ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスの脳組織のＩＨＣ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクおよびＨ＆Ｅを示す。

【0024】

【図8】例２において、ＬｅｐＡ処置が接種後１２時間で開始されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２接種（１０^∧６ＰＦＵ）後７日目でのＫ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスの脳組織のＩＨＣ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクおよびＨ＆Ｅを示す。

【発明を実施するための形態】

【0025】

本開示の様々な実施形態により、肺および／または脳の組織に対する損傷の防止および改善（これらはまとめて、「処置」として示される場合がある）が可能となる。

【0026】

ウイルス感染（および他の感染性因子）、無菌性の化学的損傷、およびＡＲＤＳ他などの状態は、生体組織細胞を損傷するＲＯＳ（活性酸素種）の生成を誘発する侵害性ストレスを引き起こす場合がある。ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路が、レプチン／レプチン受容体複合体の局所的活性化によって駆動されるので、これらの状況のもとで細胞に影響を及ぼし、これにより、局所的炎症および細胞アポトーシスを促進させる重要な経路である。局所的ＬｅｐＡ療法により、侵害性ストレスによって損傷している生体細胞の完全性および生存能が保護され、かつ保たれる。

【0027】

本開示の１つの実施形態により、組織再構築に起因する組織に対する損傷、例えば、肺組織への感染（例えば、コロナウイルス感染など）の後での組織再構築に起因する組織損傷を処置することが可能となる。

【0028】

１つの実施形態において、コロナウイルス感染患者を処置するための方法が提供される。この方法は、レプチンアンタゴニストを患者の気道（例えば、上気道および肺）に局所的に投与することを含む。

【0029】

本開示の１つの実施形態により、損傷した組織に局所的に適用するための、レプチンアンタゴニスト（ＬｅｐＡ）を含有する組成物が提供される。１つの実施形態において、組成物は０．９％生理食塩水溶液に溶解したＬｅｐＡを含む。別の実施形態において、組成物はＬｅｐＡの乾燥した微視的粉末を含む。典型的には、組成物は、エアロゾル形態で投与されるように設計される。

【0030】

コロナウイルス感染患者を処置するための方法、および上記で記載される組成物はまた、患者の肺におけるウイルス量を減少させること、患者の肺における炎症を軽減させること、患者の肺の遠位の気管支上皮細胞および肺胞上皮細胞の完全性および生存能を保つこと、損傷した肺細胞におけるサイトカイン合成を阻止すること、サイトカインレベルの全身的増大を防止し、それにより、患者の肺から離れた器官に影響を及ぼすことが知られているサイトカインストームを防止すること、患者の脳におけるウイルス量を減少させ、患者の鼻の細胞ならびに嗅上皮細胞および嗅神経細胞を介したコロナウイルスの神経侵害を軽減させること、ならびに静脈および／または動脈の血栓症を促進させることが知られている血液凝固性亢進を低下させることの１つまたは複数について有用である場合がある。

【0031】

レプチンアンタゴニストは、組織におけるレプチン活性を典型的には当該組織への局所的投与によりダウンレギュレーションすることが可能である作用物質を示す。そのような作用物質には、レプチンもしくはレプチン受容体に局所的に結合すること、および／またはレプチンもしくはレプチン受容体を局所的に分解することが可能である分子、化合物または成分、同様にまた、レプチンおよび／またはレプチン受容体の発現をＤＮＡレベルまたはＲＮＡレベルで局所的にダウンレギュレーションすることが可能である分子、化合物または成分（すなわち、転写または翻訳を局所的に阻止することが可能である作用物質）が含まれる場合がある。本明細書中に例示される実施形態において、ＬｅｐＡには、天然の哺乳動物レプチンのムテイン（変異体）、例えば、組換えによる１６ＫＤタンパク質、すなわち、生来的な内因性レプチンと比較してレプチン受容体に対する６０倍高い親和性を示すＳＭＬＡ（超活性なマウスレプチンアンタゴニスト）およびＳＨＬＡ（超活性なヒトレプチンアンタゴニスト）のような類似した親和性またはより高い親和性によりレプチン受容体に結合することができ、しかし、形成された複合体がレプチン受容体活性化効力を欠いている、天然に合成されたレプチンホルモンの変異体が含まれる。したがって、この変異体は内因性レプチンの活性を阻止し、または弱める。１つの実施形態において、ヒトレプチンホルモンの変異体が使用され、例えば、超活性なヒトレプチンアンタゴニストＳＨＬＡ（ＰＬＲ Ｌｄｔによって頒布される；例えば、カタログ番号ＳＬＡＮ－２ ＧＥＮＥ ＩＤ ３９５２、またはカタログ番号番号ＳＬＡＮ－１ ＧＥＮＥ ＩＤ １６８４６）などが使用される。

【0032】

組成物におけるＬｅｐＡの治療効果的な量（効果的な送達量）は、器官に依存して、具体的には治療予定の組織のサイズに依存して変動する場合がある。標的組織に対するＬｅｐＡの局所的な直接的適用では、単離された器官における明確にされた損傷組織に対処するための動脈内への選択的なＬｅｐＡ投与と比較して、より少ない用量が要求される。本開示の実施形態において、ＬｅｐＡ療法は局所的適用のみのために（例えば、エアロゾルを介して）使用され、全身的散布によって使用されない。１つの実施形態において、例えば、コロナウイルス（例えば、ＣＯＶＩＤ１９）に感染した患者の処置のために使用されるときには、ＬｅｐＡの効果的な送達用量（１０μｇ～１００μｇ）が、直接吸入により、（場合によっては毎日の処置あたり）肺に送達される。

【0033】

１つの実施形態において、組成物はＳＨＬＡ（超活性なヒトレプチンアンタゴニスト）を含む。

【0034】

本明細書中で使用される場合、用語「投与」は、例えば、エアロゾルデバイス、吸入器デバイス、人工呼吸器、または有効成分（例えば、ＬｅｐＡおよび場合によっては他の治療剤）を患者の上気道および肺に送達することが可能である別のデバイスを介して、処方量のＬｅｐＡを患者の肺に導入することを意味する。

【0035】

本開示の実施形態による様々な組成物が、肺を標的とするために特に設計される場合がある。例えば、組成物はエアロゾル形態である場合がある。吸入されたエアロゾルの使用により、肺の選択的処置が、高い薬物濃度が下気道において達成されることによって直接的に可能となる。

【0036】

空気動力学的中央粒子径（ｍａｓｓ ｍｅｄｉａｎ ａｅｒｏｄｙｎａｍｉｃ ｄｉａｍｅｔｅｒ；ＭＭＡＤ）が４．５μｍ未満であるエアロゾルが、小さい気管支および細気管支の効果的な標的化のために使用される。より小さいサイズのＭＭＡＤを有するエアロゾルが、微小液滴を肺胞において遠位に沈着させるために好都合であるに違いない。本開示の１つの実施形態によれば、上気道および肺組織への効果的な局所的適用のための吸入可能組成物はレプチンアンタゴニストを含み、ＭＭＡＤが１．５μｍであるエアロゾル液滴を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、ＭＭＡＤが１．５μｍ～４．５μｍの範囲にあるエアロゾル液滴を有する。

【0037】

いくつかの実施形態において、非キャリア型の乾燥粉末組成物が使用される場合がある。この組成物は、乾燥粉末としての凍結乾燥されたＬｅｐＡを含む場合があり、コロナウイルスに感染した患者を処置するための方法、または損傷した（例えば、どのような理由からであれ損傷した）肺を処置するための方法は、組成物を患者の肺組織に送達するための乾燥粉末吸入器の使用を含む。いくつかの実施形態において、乾燥粉末吸入器による投与のためのＬｅｐＡのキャリア型組成物が提供される。

【0038】

いくつかの実施形態において、乾燥粉末吸入器による投与のための、ＬｅｐＡおよび効力制御剤（ｆｏｒｃｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｇｅｎｔ）を含有するキャリア型組成物が提供される。いくつかの実施形態において、乾燥粉末吸入器による投与のためのＬｅｐＡのキャリア型組成物であって、微細粒子画分（ＦＰＦ）が１．５μｍ未満であり、いくつかの実施形態では０．５μｍ未満であるキャリア型組成物が提供される。

【0039】

いくつかの実施形態において、吸入可能組成物は、粒子の５０％超が１．５μｍ未満であるＦＰＦを有する。

【0040】

本開示の実施形態による様々な組成物が、患者に投与するための様々な好適な容器に詰められる場合がある。例えば、組成物は、投与のための総用量を含有するカプセルに充填される場合がある。カプセルは、乾燥粉末吸入器デバイスまたは他の好適な肺投与デバイスを使用することによる患者による肺投与のために設計される場合がある。

【0041】

いくつかの実施形態において、加圧定量吸入器、ソフトミスト吸入器、およびスマートミスト吸入器が、ＬｅｐＡの投与のために使用される場合がある。ミスト吸入器のために、水性溶液が使用される場合がある。１つの実施形態において、０．９％生理食塩水溶液に溶解したＬｅｐＡが、例えば、ネブライザー、吸入器または換気補助器を介して、患者に投与される。ネブライザーが自発的用手呼吸のために使用される場合があり、一方、換気補助器、例えば、機械的呼吸器が、重度呼吸不全の患者または意識不明の患者において使用される場合がある。

【0042】

本開示の発明者らは、レプチンアンタゴニスト（ＬｅｐＡ）をコロナウイルス感染マウスにおいて肺に、エアロゾルを介して局所的に投与することは、ウイルス量を減少させ、ウイルス排除を促進させ、かつ、肺における炎症促進性サイトカインの発現を低下させたことを示している。患部肺細胞によるサイトカイン合成の阻害は、全身的なサイトカインレベルをコロナウイルスに感染した対象において低下させ、したがって、このことにより、全身的なサイトカインストーム、血管炎、全身的な凝固障害、および離れた器官（例えば、心臓、腎臓、脳および筋肉など）における損傷を防止することが予想される。

【0043】

エアロゾルを介したＬｅｐＡ処置は、ウイルス感染、重度の炎症、および細胞の損傷軽減から脳を保護することにおいて効果的であることが見出された。このことが、嗅球を経由したＣＮＳ内へのウイルスの直接的な侵入を防止することによって特に達成された。ＬｅｐＡ処置はまた、患者の脳におけるウイルス量を減少させること、そして患者の鼻の細胞ならびに嗅上皮細胞および嗅神経細胞を介したコロナウイルスの神経侵害を軽減させることにおいて効果的であることが見出された。

【0044】

下記に記載される例において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染時の損傷した肺組織および／または脳組織を保護すること、または処置することにおけるＬｅｐＡの有益な効果が、ヒトＡＣＥ２のトランスジェニックマウスモデルを使用して示された。

【0045】

本明細書中に記載される実験で使用されるＬｅｐＡには、ＳＭＬＡ、すなわち、ヒト型であるＳＨＬＡと構造的および機能的に類似するマウス型が含まれる。

【0046】

レプチンアンタゴニストであるＳＨＬＡおよびＳＭＬＡは、レプチン受容体に対する親和性が、内因性レプチンと比較して６０倍大きい。ＳＭＬＡを使用する以前の実験では、毒性の徴候が何ら認められず、末梢循環への全身的な漏出の証拠が何ら認められず、また、全身的なホルモン乱れも認められなかった。

【0047】

以下の例では、損傷した組織を処置すること、組織を感染（例えば、肺のウイルス感染および／または細菌感染）から保護すること、感染組織におけるウイルス感染の効果的な排除を促進することにおけるＬｅｐＡの好都合な特性、同様にまた、本開示が実際にどのように実施され得るかの様々な局面が例示される。これらの例は、本開示の範囲を限定するためには意図されない。

【0048】

例１
例１は、肺に適用されるようなＬｅｐＡエアロゾル療法の安全性を、７日間にわたって適用後モニターされたマウスにおいて明らかにする。

【0049】

材料および方法：

【0050】

野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスをこの実験では使用した。マウスを、（マウス／肺あたりおよそ１μｇのＬｅｐＡを送達する）エアロゾルを介して肺に投与されるＬｅｐＡにさらした。１ｍｇのＬｅｐＡを０．９％生理食塩水溶液に溶解し、臨床的にハイグレードのｅＦｌｏｗ迅速ネブライザーシステム（ＰＡＲＩ）に導入した。処置後、マウスを追跡調査し、選択されたマウスを治療後１日目、３日目および７日目に屠殺して、肺の組織学を評価した。

【0051】

結果：

【0052】

図１に示される組織学的結果は、保たれた組織完全性および細胞生存能を明らかにする経時的分析を示す。損なわれた肺機能を示唆する徴候もまた何ら認められなかった。すべてのマウスが、正常な行動をＬｅｐＡエアロゾル療法の後で示した。

【0053】

例２
例２は、高用量のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス（１０^∧６ ＰＦＵ）（ＷＡ１／２０２０株）が接種された後のヒトＡＣＥ２トランスジェニックマウスの肺に施されるＬｅｐＡエアロゾル療法の結果を明らかにする。ＬｅｐＡを、連続する７日間にわたって１日１回、エアロゾルを介して投与した（１日あたり１匹のマウスにつき肺に送達される推定用量が１μｇであった）。結果から、肺における減少したウイルス量、低下した炎症変化、および阻害されたサイトカイン（ＴＮＦαおよびＩＬ－６）合成の証拠が得られる。例２における実験の結果からはまた、ＬｅｐＡエアロゾル処置が脳におけるウイルス量を減少させ、かつ、ウイルスのＣＮＳ（中枢神経系）内への直接的な神経侵害を防止することが示された。このことが、最も恐らくは、上気道を介した吸入ＬｅｐＡの影響（これにより、鼻甲介の上皮細胞裏層が保護される）、および直接的には嗅神経を介した吸入ＬｅｐＡの影響によってもまた達成されている。

【0054】

材料および方法：

【0055】

様々な研究により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ヒトアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）に結合することによってヒト細胞に進入することが示されている。トランスジェニックｈＡＣＥ２マウスが、ヒトサイトケラチン１８（Ｋ１８）プロモーターの制御下にあるヒトＡＣＥ２コード配列を野生型マウスに導入して、ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウス株を作製することによって作り出されている。ＡＣＥ２発現が、感染した気道上皮細胞で認められた。Ｋ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスへのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の鼻腔内接種が神経侵害を促進させることが、本開示の発明者らおよび他者によって示されている。このモデルにおける感染時の死亡原因は不明であり、肺に誘発された病理または肺炎によって至らされる可能性は低い。しかしながら、このモデルでは、肺および脳がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に重症感染している。感染は気道上皮で始まり、下部呼吸器に広がり、その後、脳に広がる。感染は、肺におけるマクロファージおよびリンパ球の浸潤、ならびに肺および脳における炎症促進性サイトカインおよびケモカインのアップレギュレーションを引き起こしている。感染後、Ｋ１８－ｈＡＣＥ２マウスは、体重が急速に減少し、嗜眠状態および呼吸困難になることが示された。

【0056】

ＣＯＶＩＤ１９において肺に施されるＬｅｐＡ処置の効力を詳しく調べるために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のマウスモデル（Ｋ１８－ｈＡＣＥ２）を使用した。ＡＣＥ２ ＴＧマウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。２０匹のマウスにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス（１０^∧６ ＰＦＵ）を鼻腔内接種した。

【0057】

第Ｉ相：

【0058】

超活性なマウスレプチンアンタゴニスト（ＳＭＬＡ）－ＬｅｐＡ（ｎ＝１０）、または生理食塩水（ｎ＝１０）を、連続する３日間にわたってエアロゾルを介して投与した。

【0059】

ＬｅｐＡ療法をウイルスの鼻腔内接種の２４時間後に開始した。

【0060】

それぞれの群からの５匹のマウスを接種後（ＤＰＩ）４日目に屠殺し、生存動物をＤＰＩ－１１において安楽死させた。

【0061】

第ＩＩ相：

【0062】

ＬｅｐＡ療法を、（第Ｉ相で使用される２４時間間隔の代わりに）ウイルスを接種した１２時間後に施した。同様に、ＬｅｐＡ療法の継続期間を３日間から７日間に延ばした。

【0063】

第Ｉ相の結果：

【0064】

肺組織および脳組織の免疫組織化学（ＩＨＣ）、ならびにヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を使用する組織化学を含めた組織学的検査を、ＤＰＩ－４およびＤＰＩ－１１のマウスに対して行った。

【0065】

図２はＬｅｐＡ処置肺組織ＤＰＩ－４（上段左側）対生理食塩水対照肺組織ＤＰＩ－４（下段）対正常肺組織（上段右側）のＨ＆Ｅを示し、これらから、ＬｅｐＡ処置の組織は非損傷（正常肺組織と同じ）であるように見え、それに対して、生理食塩水処置の組織は損傷していることが明らかにされる。

【0066】

ウイルス量、ＩＬ－６およびＴＮＦαのｍＲＮＡレベルをＤＰＩ－４のマウスにおいて評価した。

【0067】

図３Ａは、ＬｅｐＡにより処置される組織に対して、生理食塩水により処置される肺組織おけるウイルス量を示す。ＬｅｐＡ処置マウスにおいて肺組織は、ｍｇ組織あたり１０^７未満のウイルスＲＮＡコピー数に低下したウイルス量を示し、これに対して、生理食塩水処置の肺組織ははるかに高いウイルス量を示すことが明らかにされた。ｍｇ組織あたり１０^７未満のウイルスＲＮＡコピー数のウイルス量を有する組織は、（組織学によって明らかにされるように）生産的に感染しておらず、したがって、ＬｅｐＡ処置の肺は、生理食塩水処置の対照と比較して、より低いウイルス量および活性ウイルス複製の非存在を示したと結論づけられている。

【0068】

図３Ｂは、生理食塩水処置肺組織対ＬｅｐＡ処置肺組織におけるＴＮＦαおよびＩＬ６のｍＲＮＡ発現をＤＰＩ－４のマウスにおいてまとめたものである。ＴＮＦαおよびＩＬ６の両方の発現が、生理食塩水処置マウスに対して、ＬｅｐＡ処置マウスからの肺では低くなっており、このことから、ウイルス量とＴＮＦα／ＩＬ６発現との間における相関が示された。これらの結果から、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染マウスのＬｅｐＡ処置の明らかな効果が示され、ＬｅｐＡ処置が肺組織を過剰な炎症から保護することが示唆される。

【0069】

第ＩＩ相の結果：

【0070】

図４は、生理食塩水またはＬｅｐＡにより処置されるＫ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスの肺組織および脳組織におけるウイルス量をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２接種（１０^∧６ＰＦＵ）後４日目および７日目において示す。ＬｅｐＡ処置を接種後１２時間で開始した。図３Ａおよび図４に示される結果は、ＬｅｐＡ処置が肺および脳のウイルス量を減少させることを明らかにする。

【0071】

図５は、ＬｅｐＡ処置マウスに対する生理食塩水処置（対照）マウスからの肺組織のＩＨＣ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（下段）およびＨ＆Ｅ（上段）をＤＰＩ－４において示す。

【0072】

図６は、ＬｅｐＡ処置マウスからの肺組織のＩＨＣ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（下段）およびＨ＆Ｅ（上段）をＤＰＩ－７において示す。

【0073】

図７は、ＬｅｐＡ処置マウスに対する生理食塩水処置マウスからの脳組織のＩＨＣ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（下段）およびＨ＆Ｅ（上段）をＤＰＩ－４において示す。

【0074】

図８は、ＬｅｐＡ処置マウスからの脳（上段）組織のＩＨＣ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（下段）およびＨ＆ＥをＤＰＩ－７において示す。

【0075】

ＬｅｐＡ処置マウスはウイルススパイク抗原をＤＰＩ－４およびＤＰＩ－７で脳において全く明らかにせず、これに対して、生理食塩水処置マウスはコロナウイルススパイク抗原をＤＰＩ４で示し（図７において矢印によって示される）、ＤＰＩ－７でははるかに高い密度で示した（図８において矢印によって示される）。

【0076】

嗅球の分析により、ＬｅｐＡ処置マウスは、ウイルススパイク抗原の存在をＤＰＩ－４で示すことは稀であり、その非存在をＤＰＩ－７で示し、一方、生理食塩水処置マウスは、嗅球におけるウイルス抗原が多量であることを両方の時点でもたらしたことが明らかになった。

【0077】

これらの結果は、ＬｅｐＡが肺からのウイルス排除を促進し、脳を神経侵害から保護することを示す。

【0078】

体重減少または生存における差がＬｅｐＡ処置マウスと対照マウスとの間で何ら明らかにされなかった。特筆すべきことに、いくつかの証拠により、ＡＣＥ２ ＴＧマウスは最も恐らくは、肺機能不全または神経学的損傷とは別の原因で死亡することが示唆されるので、死亡率はこの試験における終了点ではなかった。

【0079】

本明細書中に記載される例は、コロナウイルス感染動物のＬｅｐＡ処置が重度の肺炎症からの保護をもたらし、ウイルス量を減少させ、かつウイルス排除を促進させ、そして肺組織におけるＩＬ－６およびＴＮＦαのｍＲＮＡアップレギュレーションを防止することを明らかにする。

【0080】

上記結果に基づいて、エアロゾル吸入を介した選択的な局所的ＬｅｐＡ療法は高度な保護的利益をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染時において、また、恐らくはではあるが、同様に、他のウイルスおよび病原体による様々な肺感染においてももたらすと推定することができる。また、この治療法は、どのような原因によってであれ化学的肺損傷およびＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）の場合において、細胞の完全性、生存能および機能を保護する有益な効果をもたらすに違いない。

【0081】

ＬｅｐＡエアロゾル療法は、本開示の様々な実施形態によって提供される場合、短時間作用性であり、かつ、損傷した肺組織を、全身的なＬｅｐＡ散布を伴うことなく救済するために患部組織に局所的に適用される。局所的に適用され、損傷した肺組織における有害な再構築および局所的炎症を阻止するにもかかわらず、本処置は結果的には全身的なサイトカインストームを減弱させ、これにより、血管炎、全身的な凝固障害、ならびに離れた器官に対する損傷を防止する。したがって、本開示の様々な実施形態は、損傷した肺組織および／または脳組織に対する効果的かつ安全な治療法を提供しており、コロナウイルス感染患者を効果的かつ安全に処置するために使用される場合がある。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【国際調査報告】