▶ ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-06
(54)【発明の名称】抗ＣＤ１９抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230530BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20230530BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230530BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230530BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230530BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230530BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230530BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230530BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230530BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230530BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20230530BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/28 ZNA
C12N15/63 Z
C12N5/10
C12N1/21
C12N1/19
C12N1/15
A61P35/00
A61P35/02
A61K39/395 N
C12P21/08
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022564659
(86)(22)【出願日】2021-04-23
(85)【翻訳文提出日】2022-10-24
(86)【国際出願番号】 US2021028880
(87)【国際公開番号】W WO2021217024
(87)【国際公開日】2021-10-28
(31)【優先権主張番号】63/015,385
(32)【優先日】2020-04-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】500287639
【氏名又は名称】ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＭＩＬＬＥＮＮＩＵＭ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100136629
【弁理士】
【氏名又は名称】鎌田 光宜
(74)【代理人】
【識別番号】100080791
【弁理士】
【氏名又は名称】高島 一
(74)【代理人】
【識別番号】100125070
【弁理士】
【氏名又は名称】土井 京子
(74)【代理人】
【識別番号】100121212
【弁理士】
【氏名又は名称】田村 弥栄子
(74)【代理人】
【識別番号】100174296
【弁理士】
【氏名又は名称】當麻 博文
(74)【代理人】
【識別番号】100137729
【弁理士】
【氏名又は名称】赤井 厚子
(74)【代理人】
【識別番号】100151301
【弁理士】
【氏名又は名称】戸崎 富哉
(74)【代理人】
【識別番号】100152308
【弁理士】
【氏名又は名称】中 正道
(74)【代理人】
【識別番号】100201558
【弁理士】
【氏名又は名称】亀井 恵二郎
(72)【発明者】
【氏名】タヴァレス、ダニエル
(72)【発明者】
【氏名】プリンツ、ビアンカ
(72)【発明者】
【氏名】ゲーガン、ジェイムズ
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B065AA90X
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C085AA14
4C085BB33
4C085BB35
4C085BB36
4C085BB37
4C085BB41
4C085BB43
4C085BB44
4C085CC23
4C085EE01
4C085GG02
4C085GG03
4C085GG04
4C085GG05
4C085GG06
4H045AA11
4H045BA09
4H045DA76
4H045EA20
(57)【要約】
ＣＤ１９に特異的に結合する抗体、その断片、及び融合タンパク質、ならびにそのような抗体を作製及び使用する方法が記載されている。そのような抗体、融合タンパク質、及びその断片は、Ｂ細胞悪性腫瘍及び自己免疫疾患を含むさまざまなＢ細胞障害の治療及び診断に有用である。
【選択図】図３
【選択図】図３
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片であって、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む、前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項2】
ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＡＶＰＩＴ（配列番号１２）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項3】
ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＶＤＳＬＨＰＦＴ（配列番号１３）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項4】
ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＬＴ（配列番号１４）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項5】
ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＦＤＳＰＹＴ（配列番号１５）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項6】
ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＰＰＬＴ（配列番号１６）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項7】
ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＦＴ（配列番号１７）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項8】
ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＮＲＡＴ（配列番号１０）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＦＰＦＴ（配列番号１８）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項9】
ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＲＲＡＴ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＩＰＰＹＴ（配列番号１９）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項10】
配列番号２０に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）領域と、配列番号５に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）領域と、を含む、請求項１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項11】
ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号２０～２７に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）領域と、
配列番号５に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）領域と、を含む、前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項12】
前記ＶＬ領域が、配列番号２０～２７と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項13】
前記ＶＬ領域が、配列番号２０～２７と同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項14】
前記ＶＨ領域が、配列番号５と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項15】
前記ＶＨ領域が、配列番号５と同一であるアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項16】
前記ＶＬ領域が、配列番号２０～２７と同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号５と同一である、先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項17】
前記ＣＤ１９抗体またはその断片が、ＩｇＡ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＭ抗体、二重特異性抗体または多重特異性抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、単離されたＣＤＲまたはそれらのセット；単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ポリペプチド－Ｆｃ融合、単一ドメイン抗体、ラクダ科動物抗体、マスク抗体、小モジュラー免疫薬（「ＳＭＩＰｓ（商標）」）、単鎖、タンデムダイアボディ、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ、ナノボディ、ミニボディ、ＢｉＴＥ、アンキリンリピートタンパク質、ＤＡＲＰＩＮ、Ａｖｉｍｅｒ、ＤＡＲＴ、ＴＣＲ様抗体、アドネクチン、アフィリン、トランスボディ、アフィボディ、ＴｒｉｍｅｒＸ、ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ、及びＫＡＬＢＩＴＯＲからなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項18】
前記ＣＤ１９抗体またはその断片が、モノクローナル抗体または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項19】
前記ＣＤ１９抗体またはその断片が、ＩｇＧ定常領域を含む抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項20】
前記ＣＤ１９抗体またはその断片が、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項21】
前記ＣＤ１９ ｓｃＦｖが配列番号３６～３９を含むリンカー配列を含む、請求項２０に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項22】
前記ＣＤ１９ ｓｃＦｖが配列番号４０または４１から選択されるシグナルペプチドを含む、請求項２０または２１に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項23】
前記抗体またはその断片が、約８ナノモル（ｎＭ）～約２４２ｎＭのＫＤでＣＤ１９に結合する、先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項24】
前記抗体またはその断片が、約０．１ｎＭ～約２．７ｎＭのＥＣ５０で標的細胞上のＣＤ１９に結合する、先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片。
【請求項25】
がんを治療する方法であって、治療を必要とする対象に先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、前記方法。
【請求項26】
前記がんが、白血病、リンパ腫、または骨髄腫から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物であって、前記ＣＤ１９抗体またはその断片が：ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する重鎖可変領域を含む、前記医薬組成物。
【請求項28】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が：ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＡＶＰＩＴ（配列番号１２）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項29】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＶＤＳＬＨＰＦＴ（配列番号１３）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項30】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＬＴ（配列番号１４）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項31】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＦＤＳＰＹＴ（配列番号１５）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項32】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＰＰＬＴ（配列番号１６）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項33】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＦＴ（配列番号１７）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項34】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＮＲＡＴ（配列番号１０）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＦＰＦＴ（配列番号１８）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項35】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＲＲＡＴ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＩＰＰＹＴ（配列番号１９）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項36】
がんを治療する方法であって、ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片を治療を必要とする対象に投与することを含み、前記ＣＤ１９抗体またはその断片が：ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する重鎖可変領域を含む、前記方法。
【請求項37】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＡＶＰＩＴ（配列番号１２）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項38】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＶＤＳＬＨＰＦＴ（配列番号１３）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項39】
前記ＣＤ１９抗体またはその断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＬＴ（配列番号１４）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項40】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＦＤＳＰＹＴ（配列番号１５）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項41】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＰＰＬＴ（配列番号１６）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項42】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＦＴ（配列番号１７）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項43】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＮＲＡＴ（配列番号１０）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＦＰＦＴ（配列番号１８）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項44】
前記ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＲＲＡＴ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＩＰＰＹＴ（配列番号１９）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項45】
配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸。
【請求項46】
配列番号２０～２７のうちのいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸。
【請求項47】
請求項４５または４６のいずれかに記載の単離された核酸配列を含むベクター。
【請求項48】
請求項４７に記載のベクターを含む単離された細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本願は、２０２０年４月２４日に出願された米国特許仮出願第６０／０１５，３８５号に基づく優先権を主張するものであり、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
本願は、２０２０年４月２４日に出願された米国特許仮出願第６０／０１５，３８５号に基づく優先権を主張するものであり、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２１年３月３０日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＭＩＬ－００４ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、３８，７６５バイトのサイズである。
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２１年３月３０日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＭＩＬ－００４ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、３８，７６５バイトのサイズである。
【背景技術】
【0003】
ＣＤ１９抗原は、Ｂ細胞に見られる細胞表面タンパク質である。ＣＤ１９は、正常なＢ細胞と悪性Ｂ細胞の両方に発現しており、その異常増殖はＢ細胞リンパ腫をもたらし得る。例えば、ＣＤ１９は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、及び急性リンパ性白血病を含むがこれらに限定されないＢ細胞系統の悪性腫瘍で発現する。当該技術分野では、抗ＣＤ１９抗体を開発する必要がある。
【発明の概要】
【0004】
Ｂ細胞障害及びそれらの治療に関連する多くの問題に対処するために、本発明は、Ｂ細胞リンパ腫及び白血病ならびに自己免疫障害の治療のためのヒト抗ＣＤ１９抗体及びその断片を提供する。本発明の抗体及びその断片は、単独で、融合タンパク質中で、または少なくとも１つの診断薬及び／もしくは治療薬にコンジュゲートして、または他の治療法と組み合わせて使用することができる。本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体またはその断片とのヒトＣＤ１９の結合は、ＡＤＣＣ活性、アポトーシスの誘導、及びＢ細胞増殖の阻害を示し得る。
【0005】
一態様では、本発明は、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体またはその断片を提供する。一態様では、本発明は、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含むＣＤ１９抗体またはその断片を提供する。
【0006】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＡＶＰＩＴ（配列番号１２）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0007】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＶＤＳＬＨＰＦＴ（配列番号１３）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0008】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＬＴ（配列番号１４）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0009】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＦＤＳＰＹＴ（配列番号１５）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0010】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＰＰＬＴ（配列番号１６）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0011】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＦＴ（配列番号１７）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0012】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＮＲＡＴ（配列番号１０）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＦＰＦＴ（配列番号１８）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0013】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＲＲＡＴ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＩＰＰＹＴ（配列番号１９）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0014】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、配列番号２０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）領域と、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）領域と、を含む。
【0015】
一態様では、本発明は、配列番号２０～２７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）領域と、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）領域と、を含むＣＤ１９抗体またはその断片を提供する。
【0016】
いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号２０～２７と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0017】
いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号２０～２７と同一であるアミノ酸配列を含む。
【0018】
いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号５と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0019】
いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号５と同一であるアミノ酸配列を含む。
【0020】
いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号２０～２７と同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＨ領域は配列番号５と同一である。
【0021】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＩｇＡ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＭ抗体、二重特異性抗体または多重特異性抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、単離されたＣＤＲまたはそれらのセット；単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ポリペプチド－Ｆｃ融合、単一ドメイン抗体、ラクダ科動物抗体、マスク抗体、小モジュラー免疫薬（「ＳＭＩＰｓ（商標）」）、単鎖、タンデムダイアボディ、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ、ナノボディ、ミニボディ、ＢｉＴＥ、アンキリンリピートタンパク質、ＤＡＲＰＩＮ、Ａｖｉｍｅｒ、ＤＡＲＴ、ＴＣＲ様抗体、アドネクチン、アフィリン、トランスボディ、アフィボディ、ＴｒｉｍｅｒＸ、ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ、及びＫＡＬＢＩＴＯＲからなる群から選択される。
【0022】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、モノクローナル抗体または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。
【0023】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＩｇＧ定常領域を含む抗体である。
【0024】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。
【0025】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号３６～３９を含むリンカー配列を含む。
【0026】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号４０～４２から選択されるシグナルペプチドを含む。
【0027】
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、約８ナノモル（ｎＭ）～約２４２ｎＭのＫＤでＣＤ１９に結合する。
【0028】
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、標的細胞上のＣＤ１９に約０．１ｎＭ～約２．７ｎＭのＥＣ５０で結合する。
【0029】
一態様では、本発明は、がんを治療する方法であって、治療を必要とする対象に先行請求項のいずれか一項に記載のＣＤ１９抗体またはその断片を投与することを含む、方法を提供する。
【0030】
いくつかの実施形態では、がんは、白血病、リンパ腫、または骨髄腫から選択される。
【0031】
一態様では、本発明は、ＣＤ１９抗体またはその断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物であって、ＣＤ１９抗体またはその断片がＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する重鎖可変領域を含む、医薬組成物を提供する。
【0032】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＡＶＰＩＴ（配列番号１２）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0033】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＶＤＳＬＨＰＦＴ（配列番号１３）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0034】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＬＴ（配列番号１４）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0035】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＦＤＳＰＹＴ（配列番号１５）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0036】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＰＰＬＴ（配列番号１６）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0037】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＦＴ（配列番号１７）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0038】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＮＲＡＴ（配列番号１０）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＦＰＦＴ（配列番号１８）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0039】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＲＲＡＴ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＩＰＰＹＴ（配列番号１９）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む。
【0040】
一態様では、本発明は、がんを治療する方法であって、ＣＤ１９抗体またはその断片を治療を必要とする対象に投与することを含み、ＣＤ１９抗体またはその断片がＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する重鎖可変領域を含む、方法を提供する。
【0041】
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＡＶＰＩＴ（配列番号１２）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含むＣＤ１９抗体またはその断片を投与することを含む。
【0042】
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＶＤＳＬＨＰＦＴ（配列番号１３）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含むＣＤ１９抗体またはその断片を投与することを含む。
【0043】
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＬＴ（配列番号１４）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含むＣＤ１９抗体またはその断片を投与することを含む。
【0044】
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＦＤＳＰＹＴ（配列番号１５）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含むＣＤ１９抗体またはその断片を投与することを含む。
【0045】
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＰＰＬＴ（配列番号１６）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含むＣＤ１９抗体またはその断片を投与することを含む。
【0046】
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＦＴ（配列番号１７）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含むＣＤ１９抗体またはその断片を投与することを含む。
【0047】
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＮＲＡＴ（配列番号１０）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＦＰＦＴ（配列番号１８）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含むＣＤ１９抗体またはその断片を投与することを含む。
【0048】
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＲＲＡＴ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＩＰＰＹＴ（配列番号１９）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域をさらに含むＣＤ１９抗体またはその断片を投与することを含む。
【0049】
一態様では、本発明は、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸を提供する。
【0050】
一態様では、本発明は、配列番号２０～２７のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸を提供する。
【0051】
一態様では、本発明は、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列、及び／または配列番号２０～２７のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むベクターを提供する。
【0052】
一態様では、本発明は、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列、及び／または配列番号２０～２７のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むベクターを含む単離された細胞を提供する。
【0053】
定義
ＡまたはＡｎ：冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書において、冠詞の文法的な対象の、１または１を超えるもの（すなわち、少なくとも１）を指すために本明細書において使用される。例として、「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１個の要素または２個を超える要素を意味する。
ＡまたはＡｎ：冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書において、冠詞の文法的な対象の、１または１を超えるもの（すなわち、少なくとも１）を指すために本明細書において使用される。例として、「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１個の要素または２個を超える要素を意味する。
【0054】
親和性：本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、結合部分（例えば、抗原結合部分（例えば、本明細書に記載の可変ドメイン）及び／またはＦｃ受容体結合部分（例えば、本明細書に記載のＦｃＲｎ結合部分））と標的（例えば、抗原（例えば、ＣＤ１９）及び／またはＦｃＲ（例えば、ＦｃＲｎ））との間の結合相互作用の特徴を指し、それは結合相互作用の強さを示す。いくつかの実施形態では、親和性の尺度は、解離定数（ＫＤ）として表される。いくつかの実施形態では、結合部分は、標的に対して高い親和性を有する（例えば、約１０－７Ｍ未満、約１０－８Ｍ未満、または約１０－９Ｍ未満のＫＤ）。いくつかの実施形態では、結合部分は、標的に対して低い親和性を有する（例えば、約１０－７Ｍよりも高い、約１０－６Ｍよりも高い、約１０－５Ｍより高い、または約１０－４Ｍより高いＫＤ）。いくつかの実施形態では、結合部分は、第１のｐＨで標的に対して高い親和性を有し、第２のｐＨで標的に対して低い親和性を有し、第１のｐＨと第２のｐＨとの間のｐＨレベルで標的に対して中間の親和性を有する。
【0055】
およそまたは約：本明細書で使用される場合、１つ以上の目的の値に適用されるとき、「およそ」または「約」という用語は、言及された参照値に類似する値を指す。特定の実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、特に明記されていない限り、または文脈から明らかでない限り（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除いて）、言及された参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ以下のいずれかの方向（よりより大きいまたはより小さい）の範囲内の値の範囲を指す。
【0056】
抗体：本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域、例えば、免疫グロブリン可変ドメインまたは免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供するアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）及び軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）を含み得る。別の例では、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域及び２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。「抗体」という用語は、抗体の抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、及びｄＡｂ断片）、ならびに完全な抗体、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭのタイプ（及びそのサブタイプ）の無傷の免疫グロブリンを包含する。免疫グロブリンの軽鎖は、カッパまたはラムダのタイプであってもよい。
【0057】
結合部分：本明細書で使用される場合、「結合部分」は、標的、例えば目的の標的（例えば、抗原（例えば、ＣＤ１９）及び／またはＦｃＲ（例えば、ＦｃＲｎ））に特異的に結合することができる任意の分子または分子の一部である。結合部分としては、例えば、抗体、その抗原結合断片、Ｆｃ領域またはそのＦｃ断片、抗体模倣体、ペプチド、及びアプタマーが挙げられる。
【0058】
抗原結合断片またはその抗原断片とは、無傷の抗体の一部を指す。抗原結合断片またはその抗体断片とは、抗原（例えば、ＣＤ１９）に結合する無傷の抗体の一部を指す。抗原結合断片は、無傷の抗体の抗原決定可変領域を含み得る。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、線状抗体、抗体模倣物、ｓｃＦｖ、ならびに単鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【0059】
相補性決定領域（ＣＤＲ）：可変ドメインの「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの両方の蓄積、すなわちＡｂＭ、接触及び／または立体配座の定義、または当該技術分野で周知のＣＤＲ決定の任意の方法に従って同定される可変領域内のアミノ酸残基である。抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔらによって最初に定義された超可変領域として識別される場合がある。例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃを参照されたい。ＣＤＲの位置は、元はＣｈｏｔｈｉａ及び他によって説明される構造的ループ構造として識別される場合もある。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３，１９８９を参照されたい。ＣＤＲ同定のための他のアプローチとしては、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの間の妥協案であり、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（現在のＡｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用して導出される「ＡｂＭ定義」、またはＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５，１９９６に記載される、観察された抗原接触に基づくＣＤＲの「接触定義」が挙げられる。本明細書でＣＤＲの「立体配座定義」と呼ばれる別のアプローチでは、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピーの寄与をする残基として同定することができる。例えば、Ｍａｋａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８３：１ １５６－１１６６，２００８を参照されたい。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記のアプローチの１つに厳密に従わない場合があるが、特定の残基もしくは残基の群またはＣＤＲ全体でさえ、抗原結合に大きな影響を与えないという予測または実験的発見に照らして短縮または延長される可能性があるが、それでもＫａｂａｔのＣＤＲの少なくとも一部と重複する。本明細書で使用される場合、ＣＤＲは、アプローチの組み合わせを含む、当該技術分野で知られている任意のアプローチによって定義されるＣＤＲを指し得る。本明細書で使用される方法は、これらのアプローチのいずれかに従って定義されたＣＤＲを利用することができる。１つを超えるＣＤＲを含む任意の所与の実施形態について、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、拡張、ＡｂＭ、接触、及び／または立体配座の定義に従って定義され得る。
【0060】
定常領域：本明細書で使用される場合、「定常領域」という用語は、抗体の１つ以上の定常領域免疫グロブリンドメインに対応する、またはそれに由来するポリペプチドを指す。定常領域は、以下の免疫グロブリンドメインのうちのいずれかまたはすべてを含むことができる：ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＭに由来する）、及びＣＨ４ドメイン（ＩｇＥまたはＩｇＭに由来する）。
【0061】
エピトープ：本明細書で使用される場合、「エピトープ」は当該技術分野の用語であり、抗体が特異的に結合できる抗原の局在領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続アミノ酸（線状もしくは連続のエピトープ）であり得、またはエピトープは、例えば、ポリペプチドまたはポリペプチドの２つ以上の非連続領域から一緒になり得る（立体配座、非線状、不連続、もしくは不連続のエピトープ）。特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴペプチドスキャンアッセイ、及び／または変異導入マッピング（例えば、部位特異的変異導入マッピング）によって決定され得る。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は、当該技術分野で知られている方法のいずれかを使用して達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ，（１９９４） Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４） ：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０） Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７） Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５ ：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１ ：６３００－６３０３）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究することができ、例えばＲｅｆｍａｃ及びＰｈｅｎｉｘなどの当該技術分野で周知のコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができる。変異導入マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して達成することができる。例えば、アラニンスキャニング変異導入技術を含む変異導入技術の説明について、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ，（１９９５） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－ １３９４ ａｎｄ Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ ＆ Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照されたい。
【0062】
Ｆｃ領域：本明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域」という用語は、２つの「Ｆｃポリペプチド」の二量体を指し、それぞれの「Ｆｃポリペプチド」は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を含む。いくつかの実施形態では、「Ｆｃ領域」は、１つ以上のジスルフィド結合、化学リンカー、またはペプチドリンカーによって連結された２つのＦｃポリペプチドを含む。「Ｆｃポリペプチド」は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインを指し、これらのドメインに対してＮ末端のフレキシブルなヒンジの一部またはすべてを含み得る。ＩｇＧの場合、「Ｆｃポリペプチド」は、免疫グロブリンドメインＣガンマ２（Ｃγ２）及びＣガンマ３（Ｃγ３）、ならびにＣガンマ１（Ｃγ１）とＣγ２との間のヒンジの下部を含む。Ｆｃポリペプチドの境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃポリペプチドは、通常、Ｔ２２３またはＣ２２６またはＰ２３０からそのカルボキシル末端までの残基を含むと定義され、ナンバリングは、Ｋａｂａｔら（１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ）のＥＵインデックスに従う。ＩｇＡの場合、Ｆｃポリペプチドは、免疫グロブリンドメインＣアルファ２（Ｃα２）及びＣアルファ３（Ｃα３）、ならびにＣアルファ１（Ｃα１）とＣα２との間のヒンジの下部を含む。Ｆｃ領域は、合成、組換え、またはＩＶＩＧなどの天然源から生成されたものであり得る。
【0063】
Ｋａ：本明細書で使用される場合、「Ｋａ」は、結合部分／標的複合体を形成するための特定の結合部分と標的の会合速度を指す。
【0064】
Ｋｄ：本明細書で使用される場合、「Ｋｄ」は、特定の結合部分／標的複合体の解離速度を指す。
【0065】
ＫＤ：本明細書で使用される場合、「ＫＤ」は解離定数を指し、これはＫｄのＫａに対する比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られる、モル濃度（Ｍ）として表される。ＫＤ値は、当該技術分野で十分に確立された方法を使用して、例えば、表面プラズモン共鳴を使用するか、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用して決定することができる。
【0066】
参照：「参照」の実体、システム、量、条件のセットなどは、それらに対して、本明細書に記載されているように、試験実体、システム、量、条件のセットなどを比較するものである。例えば、いくつかの実施形態では、「参照」抗体は、本明細書に記載のように操作されていない対照抗体である。
【0067】
選択的結合：本明細書で使用される場合、「選択的結合」、「選択的に結合する」、「特異的結合」、または「特異的に結合する」とは、結合部分及び標的に関して、結合部分の標的への優先的会合であって、標的ではない実体への会合ではないことを指す。結合部分と非標的との間で、ある程度の非特異的結合が生じ得る。いくつかの実施形態では、結合部分と標的との間の結合が、結合部分と非標的との結合と比較して、２倍を超える、５倍を超える、１０倍を超える、または１００倍を超える場合、結合部分が標的に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、結合親和性が約１０－５Ｍ未満、約１０－６Ｍ未満、約１０－７Ｍ未満、約１０－８Ｍ未満、または約１０－９Ｍ未満である場合、結合部分は標的に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、例えばイムノアッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＫｉｎＥｘＡ ３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）、または当該技術分野で知られている他のアッセイによって決定されるとき、一般的により低い親和性で、他のペプチドまたはポリペプチドに結合し得る。
【0068】
単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）：本明細書で使用される場合、「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を形成するために共有結合された、免疫グロブリン（例えば、マウスまたはヒト）の重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質を指す。重鎖（ＶＨ）と軽鎖（ＶＬ）は、直接結合されるか、またはＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端に、もしくはＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端に、接続する、ペプチドコードリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５個のアミノ酸）によって結合される。リンカーは通常、柔軟性のためにグリシンが豊富で、溶解性のためにセリンまたはトレオニンが豊富である。リンカーは、細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域と軽鎖可変領域を連結することができる。リンカーの非限定的な例は、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ． ８０（６）：１９１０－１９１７（２００８）及びＷＯ２０１４／０８７０１０に開示され、それらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0069】
対象：本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、診断、予後、または治療が望まれる任意の対象を意味する。例えば、対象は哺乳動物、例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類（類人猿、サル、オランウータン、またはチンパンジーなど）、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、またはウシであり得る。
【0070】
標的：本明細書で使用される場合、「標的」は、抗体の結合部分またはその抗原結合断片によって特異的に結合される任意の分子である。いくつかの実施形態では、標的は、本明細書に記載の抗原（例えば、ＣＤ１９）である。いくつかの実施形態では、標的はＦｃＲ（例えば、ＦｃＲｎ）である。「第１の標的」及び「第２の標的」という用語は、本明細書では、同じ分子種の２つの分子ではなく、２つの異なる分子種の分子を指すために使用される。例えば、いくつかの実施形態では、第１の標的は血清タンパク質であり、第２の標的はＦｃＲｎである。
【0071】
治療有効量：本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、任意の医学的処置に適用可能な妥当な利益／リスク比で、処置される対象に治療効果を与える治療用分子（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）の量を指す。治療効果は、客観的（すなわち、いくつかの試験またはマーカーによって測定可能である）または主観的（すなわち、対象が効果の徴候を示すか、または効果を感じる）であり得る。特に、「治療有効量」は、特定の疾患または状態を処置、改善、または予防するのに有効な、あるいは例えば、疾患に関連する症状を改善すること、疾患の発症を予防もしくは遅延させること、及び／または疾患の症状の重症度もしくは頻度をも軽減することによって検出可能な治療効果または予防効果を示すのに有効な、治療用分子または組成物の量を指す。治療有効量は、複数の単位用量から構成され得る投与レジメンで投与され得る。任意の特定の治療用分子について、治療有効量（及び／または有効な投与レジメン内での適切な単位用量）は、例えば、投与経路、他の医薬品との組み合わせに応じて変動し得る。また、任意の特定の対象に対する具体的な治療有効量（及び／または単位用量）は、処置されている障害及び障害の重症度；使用される特定の医薬品の活性；使用される特定の組成物；対象の年齢、体重、全体的な健康状態、性別、及び食事；使用される特定の治療用分子の投与時間、投与経路、及び／または排出もしくは代謝の速度；処置期間；ならびに医学分野において周知の類似の因子を含む種々の因子に依存し得る。
【0072】
処置：本明細書で使用される場合、用語「処置」（同様に「処置する」または「処置すること」）は、特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、及び／または特徴を、部分的または完全に、軽減し、改善し、緩和し、阻害し、それらの発症を遅延させ、それらの重症度を低減し、及び／またはそれらの発生率を低減する治療用分子（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）の任意の投与を指す。そのような処置は、関連する疾患、障害、及び／もしくは状態の徴候を示さない対象のもの、ならびに／または疾患、障害、及び／もしくは状態の初期徴候のみを示す対象のものであり得る。代替的にまたは追加的に、そのような処置は、関連する疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の確立された徴候を示す対象のものであり得る。
【0073】
図面は説明のみを目的としており、限定を目的としていない。
【図面の簡単な説明】
【0074】
【図1】野生型及びＣＤ１９ノックアウトの、ＣＤ１９を発現するＲａｊｉ及びＮＡＬＭ－６細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体のフローサイトメトリークロマトグラムの例を示す。
【図2】Ａ～Ｃは、ＮＡＬＭ－６細胞上のＣＤ１９に結合する抗ＣＤ１９抗体の例示的な結合曲線を示す。
【図3】エピトープビニングによって抗ＣＤ１９抗体及びその抗原結合断片を特徴付けるために使用される競合アッセイの例示的な結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0075】
本開示は、部分的に、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）への結合を示す操作された抗体及びその抗原結合断片の発見に基づく。ＣＤ１９（表面抗原分類１９、Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｂ４、ＣＶＩＤ３、または分化抗原ＣＤ１９としても知られる）は、単一の膜貫通ドメイン、細胞質Ｃ末端、及び細胞外Ｎ末端を有するタンパク質である。ＣＤ１９は、正常及び腫瘍性のＢ細胞、濾胞性樹状細胞で特異的に発現する。ＣＤ１９の表面密度は、Ｂ細胞の発生と成熟を通じて、形質細胞の最終分化中に発現が失われるまで、高度に制御されている。さらに、ＣＤ１９はＢリンパ球の表面バイオマーカーであるため、このタイプのＢ細胞から生じるがん細胞（例えば、Ｂ細胞リンパ腫）を認識するための有用な抗原であり得る。
【0076】
抗体
本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に特異的に結合するように設計されている。特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９抗体及びその断片は、ヒトＣＤ１９に結合する。特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１１７１５６９．１（配列番号４）を有するアミノ酸配列またはその断片を含むか、またはそれからなる。
本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に特異的に結合するように設計されている。特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９抗体及びその断片は、ヒトＣＤ１９に結合する。特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１１７１５６９．１（配列番号４）を有するアミノ酸配列またはその断片を含むか、またはそれからなる。
【0077】
配列番号４は以下に提供される：
【0078】
ＭＰＰＰＲＬＬＦＦＬ ＬＦＬＴＰＭＥＶＲＰ ＥＥＰＬＶＶＫＶＥＥ ＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫ ＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬ ＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰ ＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧ ＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩ ＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱ ＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧ ＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧ ＷＴＶＮＶＥＧＳＧＥ ＬＦＲＷＮＶＳＤＬＧ ＧＬＧＣＧＬＫＮＲＳ ＳＥＧＰＳＳＰＳＧＫ ＬＭＳＰＫＬＹＶＷＡ ＫＤＲＰＥＩＷＥＧＥ ＰＰＣＬＰＰＲＤＳＬ ＮＱＳＬＳＱＤＬＴＭ ＡＰＧＳＴＬＷＬＳＣ ＧＶＰＰＤＳＶＳＲＧ ＰＬＳＷＴＨＶＨＰＫ ＧＰＫＳＬＬＳＬＥＬ ＫＤＤＲＰＡＲＤＭＷ ＶＭＥＴＧＬＬＬＰＲ ＡＴＡＱＤＡＧＫＹＹ ＣＨＲＧＮＬＴＭＳＦ ＨＬＥＩＴＡＲＰＶＬ ＷＨＷＬＬＲＴＧＧＷ ＫＶＳＡＶＴＬＡＹＬ ＩＦＣＬＣＳＬＶＧＩ ＬＨＬＱＲＡＬＶＬＲ ＲＫＲＫＲＭＴＤＰＴ ＲＲＦＦＫＶＴＰＰＰ ＧＳＧＰＱＮＱＹＧＮ ＶＬＳＬＰＴＰＴＳＧ ＬＧＲＡＱＲＷＡＡＧ ＬＧＧＴＡＰＳＹＧＮ ＰＳＳＤＶＱＡＤＧＡ ＬＧＳＲＳＰＰＧＶＧ ＰＥＥＥＥＧＥＧＹＥ ＥＰＤＳＥＥＤＳＥＦ ＹＥＮＤＳＮＬＧＱＤ ＱＬＳＱＤＧＳＧＹＥ ＮＰＥＤＥＰＬＧＰＥ ＤＥＤＳＦＳＮＡＥＳ ＹＥＮＥＤＥＥＬＴＱ ＰＶＡＲＴＭＤＦＬＳ ＰＨＧＳＡＷＤＰＳＲ ＥＡＴＳＬＡＧＳＱＳ ＹＥＤＭＲＧＩＬＹＡ ＡＰＱＬＲＳＩＲＧＱ ＰＧＰＮＨＥＥＤＡＤ ＳＹＥＮＭＤＮＰＤＧ ＰＤＰＡＷＧＧＧＧＲ ＭＧＴＷＳＴＲ ［配列番号４］
【0079】
特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９は、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１７６１．３（配列番号４５）を有するアミノ酸配列またはその断片を含むか、またはそれからなる。
【0080】
配列番号４５は以下に提供される：
ＭＰＰＰＲＬＬＦＦＬ ＬＦＬＴＰＭＥＶＲＰ ＥＥＰＬＶＶＫＶＥＥ ＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫ ＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬ ＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰ ＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧ ＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩ ＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱ ＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧ ＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧ ＷＴＶＮＶＥＧＳＧＥ ＬＦＲＷＮＶＳＤＬＧ ＧＬＧＣＧＬＫＮＲＳ ＳＥＧＰＳＳＰＳＧＫ ＬＭＳＰＫＬＹＶＷＡ ＫＤＲＰＥＩＷＥＧＥ ＰＰＣＬＰＰＲＤＳＬ ＮＱＳＬＳＱＤＬＴＭ ＡＰＧＳＴＬＷＬＳＣ ＧＶＰＰＤＳＶＳＲＧ ＰＬＳＷＴＨＶＨＰＫ ＧＰＫＳＬＬＳＬＥＬ ＫＤＤＲＰＡＲＤＭＷ ＶＭＥＴＧＬＬＬＰＲ ＡＴＡＱＤＡＧＫＹＹ ＣＨＲＧＮＬＴＭＳＦ ＨＬＥＩＴＡＲＰＶＬ ＷＨＷＬＬＲＴＧＧＷ ＫＶＳＡＶＴＬＡＹＬ ＩＦＣＬＣＳＬＶＧＩ ＬＨＬＱＲＡＬＶＬＲ ＲＫＲＫＲＭＴＤＰＴ ＲＲＦＦＫＶＴＰＰＰ ＧＳＧＰＱＮＱＹＧＮ ＶＬＳＬＰＴＰＴＳＧ ＬＧＲＡＱＲＷＡＡＧ ＬＧＧＴＡＰＳＹＧＮ ＰＳＳＤＶＱＡＤＧＡ ＬＧＳＲＳＰＰＧＶＧ ＰＥＥＥＥＧＥＧＹＥ ＥＰＤＳＥＥＤＳＥＦ ＹＥＮＤＳＮＬＧＱＤ ＱＬＳＱＤＧＳＧＹＥ ＮＰＥＤＥＰＬＧＰＥ ＤＥＤＳＦＳＮＡＥＳ ＹＥＮＥＤＥＥＬＴＱ ＰＶＡＲＴＭＤＦＬＳ ＰＨＧＳＡＷＤＰＳＲ ＥＡＴＳＬＧＳＱＳＹ ＥＤＭＲＧＩＬＹＡＡ ＰＱＬＲＳＩＲＧＱＰ ＧＰＮＨＥＥＤＡＤＳ ＹＥＮＭＤＮＰＤＧＰ ＤＰＡＷＧＧＧＧＲＭ ＧＴＷＳＴＲ ［配列番号 ４５］
ＭＰＰＰＲＬＬＦＦＬ ＬＦＬＴＰＭＥＶＲＰ ＥＥＰＬＶＶＫＶＥＥ ＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫ ＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬ ＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰ ＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧ ＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩ ＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱ ＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧ ＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧ ＷＴＶＮＶＥＧＳＧＥ ＬＦＲＷＮＶＳＤＬＧ ＧＬＧＣＧＬＫＮＲＳ ＳＥＧＰＳＳＰＳＧＫ ＬＭＳＰＫＬＹＶＷＡ ＫＤＲＰＥＩＷＥＧＥ ＰＰＣＬＰＰＲＤＳＬ ＮＱＳＬＳＱＤＬＴＭ ＡＰＧＳＴＬＷＬＳＣ ＧＶＰＰＤＳＶＳＲＧ ＰＬＳＷＴＨＶＨＰＫ ＧＰＫＳＬＬＳＬＥＬ ＫＤＤＲＰＡＲＤＭＷ ＶＭＥＴＧＬＬＬＰＲ ＡＴＡＱＤＡＧＫＹＹ ＣＨＲＧＮＬＴＭＳＦ ＨＬＥＩＴＡＲＰＶＬ ＷＨＷＬＬＲＴＧＧＷ ＫＶＳＡＶＴＬＡＹＬ ＩＦＣＬＣＳＬＶＧＩ ＬＨＬＱＲＡＬＶＬＲ ＲＫＲＫＲＭＴＤＰＴ ＲＲＦＦＫＶＴＰＰＰ ＧＳＧＰＱＮＱＹＧＮ ＶＬＳＬＰＴＰＴＳＧ ＬＧＲＡＱＲＷＡＡＧ ＬＧＧＴＡＰＳＹＧＮ ＰＳＳＤＶＱＡＤＧＡ ＬＧＳＲＳＰＰＧＶＧ ＰＥＥＥＥＧＥＧＹＥ ＥＰＤＳＥＥＤＳＥＦ ＹＥＮＤＳＮＬＧＱＤ ＱＬＳＱＤＧＳＧＹＥ ＮＰＥＤＥＰＬＧＰＥ ＤＥＤＳＦＳＮＡＥＳ ＹＥＮＥＤＥＥＬＴＱ ＰＶＡＲＴＭＤＦＬＳ ＰＨＧＳＡＷＤＰＳＲ ＥＡＴＳＬＧＳＱＳＹ ＥＤＭＲＧＩＬＹＡＡ ＰＱＬＲＳＩＲＧＱＰ ＧＰＮＨＥＥＤＡＤＳ ＹＥＮＭＤＮＰＤＧＰ ＤＰＡＷＧＧＧＧＲＭ ＧＴＷＳＴＲ ［配列番号 ４５］
【0081】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体及びその抗原結合断片は、ＣＤ１９の細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体及びその抗原結合断片は、ヒトＣＤ１９の細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９の細胞外ドメインは、配列番号４のアミノ酸２０～２９１を含むか、またはそれらからなる。特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９の細胞外ドメインは、配列番号４５のアミノ酸２０～２９１を含むか、またはそれらからなる。
【0082】
特定の実施形態では、ＣＤ１９は、配列番号４に記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列またはそれらの断片を含むかまたはそれからなる。
【0083】
特定の実施形態では、ＣＤ１９は、配列番号４５に記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列またはそれらの断片を含むかまたはそれからなる。
【0084】
本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、免疫グロブリン、重鎖抗体、軽鎖抗体、ＬＲＲベースの抗体、または抗体様特性を有する他のタンパク質足場、ならびに例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’２、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆｅｂ、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、マキシボディ、タンダブ、ＤＶＤ、ＢｉＴｅ、ＴａｎｄＡｂなどを含む当該技術分野で公知のその他の免疫学的結合部分、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。抗体の異なるクラスのサブユニット構造及び三次元構成は、当該技術分野で知られている。
【0085】
抗体は、４つのポリペプチド鎖、例えば、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖の免疫グロブリン分子であり得る。重鎖は、重鎖可変ドメイン及び重鎖定常ドメインを含むことができる。重鎖定常ドメインは、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及び場合によってはＣＨ４領域を含むことができる。適切な重鎖定常領域は、任意の免疫グロブリン（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、またはＩｇＥ）に由来し得る。いくつかの実施形態では、適切な重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４に由来し得る。特定の実施形態では、適切な重鎖定常領域はＩｇＧ１に由来する。軽鎖は、軽鎖可変ドメイン及び軽鎖定常ドメインを含むことができる。軽鎖定常ドメインは、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖のいずれかを含むことができる。重鎖の重鎖可変ドメイン及び軽鎖の軽鎖可変ドメインは、典型的には、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる可変性の領域にさらに分割され得る。そのような重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで以下の順序で配置された、３つのＣＤＲと４つのフレームワーク領域を含むことができる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。これらのうちの１つ以上は、本明細書に記載されているように操作することができる。それぞれのドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７ ａｎｄ １９９１））、またはＣｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７８－８８３（１９８９）．定義に従う。本明細書で使用される場合、ＣＤＲは、重鎖（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及び軽鎖（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）のそれぞれについて言及される。
【0086】
本発明の実施形態は、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、及びＣｌｏｔｈｉａナンバリングシステムなどの従来のナンバリングシステムを使用して識別される、本明細書に記載のｖＨ及びｖＬドメインに見出されるＣＤＲを含む抗体を含む。そのようなナンバリングシステムは、当該技術分野において周知である。
【0087】
重鎖可変領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、共通の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、以下の重鎖可変領域（ｖＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む：
ｖＨ ＣＤＲ１：ＳＹＧＭＨ（配列番号１）
ｖＨ ＣＤＲ２：ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）
ｖＨ ＣＤＲ３：ＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、共通の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、以下の重鎖可変領域（ｖＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む：
ｖＨ ＣＤＲ１：ＳＹＧＭＨ（配列番号１）
ｖＨ ＣＤＲ２：ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）
ｖＨ ＣＤＲ３：ＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）
【0088】
特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って識別される。
【0089】
いくつかの実施形態では、可変重鎖は、ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含む。
【0090】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、配列番号５に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する重鎖アミノ酸配列を含む。
【0091】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、配列番号５に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、一方で本明細書に記載のｖＨ ＣＤＲ１、ｖＨ ＣＤＲ２、及び／またはｖＨ ＣＤＲ３の配列のうちの１つ以上をさらに含む重鎖アミノ酸配列を含む。
【0092】
いくつかの実施形態では、操作された抗体は、配列番号５と同一の重鎖アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＨは、配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、配列番号５と比べて、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個以下のアミノ酸置換を含む。
【0093】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９可変重鎖は、以下の核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【0094】
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＧＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＣＴＧＡＴＡＴＧＧＴＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＧＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＴＡＴＴＡＡＧＡＧＧＡＴＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＴＡＣＡＴＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号６）
【0095】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、配列番号６に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有する重鎖核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、操作された抗体は、配列番号６と同一の重鎖核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、配列番号５と比べて３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個以下のアミノ酸置換を含む抗体をコードする核酸配列を含む。
【0096】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、配列番号６に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、一方で本明細書に記載のｖＨ ＣＤＲ１、ｖＨ ＣＤＲ２、及び／またはｖＨ ＣＤＲ３の配列のうちの１つ以上をさらに含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【0097】
当業者によって理解されるように、任意のそのような重鎖ＣＤＲ配列は、例えば分子生物学の技術によって、本明細書で開示されるかそうでなければ当該技術分野で既知の任意の形式の抗体またはその抗原結合断片に存在し得るような、本明細書で開示されるかそうでなければ当該技術分野で既知の任意のフレームワーク領域、ＣＤＲ、もしくは定常ドメイン、またはその一部を含む、本明細書に提供されるかそうでなければ当該技術分野で既知の任意の他の抗体配列またはドメインと容易に組み合わせることができる。
【0098】
本明細書に記載されるさまざまな操作された抗体において、重鎖定常ドメインは、任意のクラス（またはサブクラス）であり得る。本明細書に記載のさまざまな操作された抗体において、重鎖定常ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２などのサブクラスを含む、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥのうちの１つ以上のいずれかのアミノ酸配列を含み得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の操作された抗体の定常ドメインは、免疫グロブリン重鎖定常ドメインの２つ以上のクラス（またはサブクラス）の混合物を含み得る。例えば、抗ＣＤ１９抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥクラスの定常ドメインから選択される免疫グロブリン定常ドメインの配列を有する定常ドメインの第１の部分と、第１のものとは異なる、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥクラスの定常ドメインから選択される免疫グロブリン定常ドメインの配列を有する定常ドメインの第２の部分とを含むことができる。場合によっては、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の定常ドメインは、定常ドメインの特定のクラスの２つ以上のサブクラスの混合物、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラス定常ドメインから選択される免疫グロブリン定常ドメインの配列を有する定常ドメインの第１の部分と、第１とは異なる、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラス定常ドメインから選択される免疫グロブリン定常ドメインの配列を有する定常ドメインの第２部分とを含むことができる。いくつかの特定の実施形態では、定常ドメインは、ＩｇＧ２定常ドメインの全部または一部と、ＩｇＧ４定常ドメインの全部または一部と、を含む。
【0099】
場合によっては、抗ＣＤ１９抗体は、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、ＦｃγＲＩＶ、またはＦｃＲｎ受容体）に対する（参照定常領域と比べて）改変された結合を示す抗体定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片は、参照の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片と比べて、標的（例えば、ＦｃＲｎ受容体）に変化した様式で（例えば、ｐＨ感受性様式で（例えば、より多いもしくはより少ないｐＨ感受性様式で）及び／または減少もしくは増加した結合で、結合するように操作される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、１つ以上のＦｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、またはＦｃγＲＩＶ）に対する（参照定常領域と比べて）減少した結合を示す抗体定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、血清ｐＨで、及び／または細胞内ｐＨで（参照定常領域と比較して）ＦｃＲｎ受容体への増加した結合を示す抗体定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。
【0100】
例えば、抗ＣＤ１９抗体は、アミノ酸残基２５１～２５６、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９、及び４２８～４３６（Ｋａｂａｔナンバリング（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ））のうちの１つ以上の、アミノ酸付加、欠失、または置換を含むように操作されたＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含み得る。理論に拘束されることは望まないが、これらの定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片アミノ酸のうちの１つ以上が、Ｆｃ受容体、例えばＦｃＲｎとの相互作用を媒介すると考えられている。いくつかの実施形態では、これらの開示されたアミノ酸の１つ以上が、ヒスチジン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、またはグルタミンで置換されている。いくつかの実施形態では、非ヒスチジン残基がヒスチジン残基で置換されている。いくつかの実施形態では、ヒスチジン残基が非ヒスチジン残基で置換されている。
【0101】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、３０８位、３０９位、３１１位、３１２位、及び３１４位のうちの１つ以上にアミノ酸改変を有する、より具体的には、３０８位、３０９位、３１１位、３１２位、及び３１４位のうちの１つ以上の、それぞれトレオニン、プロリン、セリン、アスパラギン酸、及びロイシンへの置換を有する、ＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、３０８位、３０９位、及び３１１位のうちの１つ以上の残基が、それぞれイソロイシン、プロリン、及びグルタミン酸で置換されている。さらに他の実施形態では、３０８位、３０９位、３１１位、３１２位、及び３１４位のうちの１つ以上の残基が、それぞれトレオニン、プロリン、セリン、アスパラギン酸、及びロイシンで置換されている。
【0102】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、位置２５１、２５２、２５４、２５５、及び２５６のうちの１つ以上にアミノ酸改変を有する、より具体的には、これらの位置のうちの１つ以上に置換を有する、ＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、残基２５１はロイシンもしくはアルギニンで置換され、残基２５２はロイシン、チロシン、フェニルアラニン、セリン、トリプトファン、もしくはトレオニンで置換され、残基２５４はトレオニンもしくはセリンで置換され、残基２５５はロイシン、グリシン、イソロイシン、もしくはアルギニンで置換され、及び／または残基２５６は、セリン、フェニルアラニン、アルギニン、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、アスパラギン、もしくはトレオニンで置換されている。いくつかの実施形態では、残基２５１はロイシンで置換され、残基２５２はチロシンもしくはロイシンで置換され、残基２５４はトレオニンもしくはセリンで置換され、及び／または残基２５５はアルギニンで置換されている。さらに他の実施形態では、残基２５２はフェニルアラニンで置換され、及び／または残基２５６はアスパラギン酸で置換されている。いくつかの実施形態では、残基２５１はロイシンで置換され、残基２５２はチロシンで置換され、残基２５４はトレオニンもしくはセリンで置換され、及び／または残基２５５はアルギニンで置換されている。
【0103】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、位置４２８、４３３、４３４、４３５、及び４３６のうちの１つ以上にアミノ酸改変を有する、より具体的には、これらの位置のうちの１つ以上に置換を有する、ＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、残基４２８は、メチオニン、トレオニン、ロイシン、フェニルアラニン、もしくはセリンで置換され、残基４３３は、リジン、アルギニン、セリン、イソロイシン、プロリン、グルタミン、もしくはヒスチジンで置換され、残基４３４は、フェニルアラニン、チロシン、もしくはヒスチジンで置換され、残基４３５はチロシンで置換され、及び／または残基４３６は、ヒスチジン、アスパラギン、アルギニン、トレオニン、リジン、メチオニン、もしくはトレオニンで置換されている。いくつかの実施形態では、４３３位、４３４位、４３５位、及び４３６位のうちの１つ以上の残基は、それぞれリジン、フェニルアラニン、チロシン、及びヒスチジンで置換されている。いくつかの実施形態では、残基４２８はメチオニンで置換され、及び／または残基４３４はチロシンで置換されている。
【0104】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、３８５位、３８６位、３８７位、及び３８９位のうちの１つ以上にアミノ酸改変を有する、より具体的には、これらの位置のうちの１つ以上に置換を有する、ＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、残基３８５は、アルギニン、アスパラギン酸、セリン、トレオニン、ヒスチジン、リジン、もしくはアラニンで置換され、残基３８６は、トレオニン、プロリン、アスパラギン酸、セリン、リジン、アルギニン、イソロイシン、もしくはメチオニンで置換され、残基３８７は、アルギニン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、アラニン、もしくはプロリンで置換され、及び／または残基３８９はプロリンもしくはセリンで置換されている。いくつかの実施形態では、３８５位、３８６位、３８７位、及び３８９位のうちの１つ以上の残基は、アルギニン、トレオニン、アルギニン、及びプロリンでそれぞれ置換されている。いくつかの実施形態では、３８５位、３８６位、及び３８９位のうちの１つ以上の残基は、それぞれアスパラギン酸、プロリン、及びセリンで置換されている。
【0105】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、以下の置換のうちの１つ以上を有するＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む：残基２５１でのロイシン、残基２５２でのチロシンもしくはロイシン、残基２５４でのトレオニンもしくはセリン、残基２５５でのアルギニン、残基３０８でのトレオニン、残基３０９でのプロリン、残基３１１でのセリン、残基３１２でのアスパラギン酸、残基３１４でのロイシン、残基３８５でのアルギニン、残基３８６でのトレオニン、残基３８７でのアルギニン、残基３８９でのプロリン、残基４２８でのメチオニン、残基４３３でのリジン、残基４３４でのフェニルアラニンもしくはチロシン、位置４３５でのチロシン、及び／または４３６位でのチロシン。定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片に含めることができる追加のアミノ酸置換としては、例えば、米国特許第６，２７７，３７５号；同第８，０１２，４７６号；及び同第８，１６３，８８１号に記載されるものが挙げられる。
【0106】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／２８０２７及びＷＯ９８／４７５３１；ならびにＸｕ ｅｔ ａｌ．（２０００） Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００：１６－２６に記載されたＡｌａ－Ａｌａ変異を含む重鎖定常ドメインを含む。したがって、いくつかの実施形態では、Ａｌａ－Ａｌａ変異を含む重鎖定常領域内に１つ以上の変異を有する抗ＣＤ１９抗体は、エフェクター機能が低下しているか、またはエフェクター機能を有していない。これらの実施形態によれば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の定常領域は、２３４位でアラニンへの置換、及び／または２３５位（ＥＵナンバリング）でのアラニンへの変異を含み得る。
【0107】
当業者によって理解されるように、任意のそのような重鎖定常ドメイン配列は、例えば分子生物学の技術によって、本明細書で開示されるかそうでなければ当該技術分野で既知の任意の形式の抗体またはその抗原結合断片に存在し得るような、本明細書で開示されるかそうでなければ当該技術分野で既知の任意のフレームワーク領域、ＣＤＲ、もしくは定常ドメイン、またはその一部を含む、本明細書に提供されるかそうでなければ当該技術分野で既知の任意の他の抗体配列またはドメインと容易に組み合わせることができる。
【0108】
軽鎖可変領域
本発明はさらに、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１～３を含む、１つ以上の軽鎖可変領域にさまざまな特定の配列を含むＣＤ１９抗体またはその断片を提供する。さまざまな実施形態では、指定された軽鎖可変領域を有する分子は、上で議論されたように重鎖配列と共に提供される。特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って識別される。
本発明はさらに、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１～３を含む、１つ以上の軽鎖可変領域にさまざまな特定の配列を含むＣＤ１９抗体またはその断片を提供する。さまざまな実施形態では、指定された軽鎖可変領域を有する分子は、上で議論されたように重鎖配列と共に提供される。特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って識別される。
【0109】
したがって、一態様では、本発明は、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＡＶＰＩＴ（配列番号１２）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含むＣＤ１９抗体またはその断片を提供する。
【0110】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＶＤＳＬＨＰＦＴ（配列番号１３）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。
【0111】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＬＴ（配列番号１４）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。
【0112】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＦＤＳＰＹＴ（配列番号１５）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。
【0113】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡ（配列番号８）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＰＰＬＴ（配列番号１６）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。
【0114】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＧＶＰＰＦＴ（配列番号１７）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。
【0115】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＮＲＡＴ（配列番号１０）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＶＦＰＦＴ（配列番号１８）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。
【0116】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７）（ＬＣＤＲ１）、ＧＡＳＲＲＡＴ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＡＧＩＰＰＹＴ（配列番号１９）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。
【0117】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗体またはその断片は、配列番号２０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）領域と、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）領域と、を含む。
【0118】
一態様では、本発明は、配列番号２０～２７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）領域と、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）領域と、を含むＣＤ１９抗体またはその断片を提供する。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号２０～２７と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0119】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、ＳＹＧＭＨ（配列番号１）（ＨＣＤＲ１）、ＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）（ＨＣＤＲ２）、及びＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹ（配列番号３）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含み、及び／または表１に示される軽鎖可変領域（ｖＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、表１に示される軽鎖可変領域（ｖＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む。
【0120】
【表1】
【0121】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、表２に示されるアミノ酸配列を有するか、または表２に示される核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域（ｖＬ）を含む。
【0122】
【表2-1】
【0123】
【表2-2】
【0124】
【表2-3】
【0125】
【表2-4】
【0126】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２０～２７に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。
【0127】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２０～２７に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含み、一方で、本明細書に記載のｖＬ ＣＤＲ１、ｖＬ ＣＤＲ２、及び／またはｖＬ ＣＤＲ３配列のうちの１つ以上をも含む。
【0128】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、配列番号２０～２７と同一の軽鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２０～２７とくらべて、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個以下のアミノ酸置換を含む。
【0129】
いくつかの実施形態では、本発明の核酸配列は、配列番号２０～２７に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含み、一方で、本明細書に記載のｖＬ ＣＤＲ１、ｖＬ ＣＤＲ２、及び／またはｖＬ ＣＤＲ３配列のうちの１つ以上をも含む抗ＣＤ１９抗体をコードする。
【0130】
当業者によって理解されるように、任意のそのような軽鎖ＣＤＲ配列は、例えば、分子生物学の技術によって、本明細書で開示されるか、そうでなければ当該技術分野で知られる任意の形式の抗体またはその抗原結合断片に存在し得るような、本明細書で開示されるか、そうでなければ当該技術分野で既知の任意のフレームワーク領域、ＣＤＲ、もしくは定常ドメイン、またはその一部を含む、本明細書に提供されるか、そうでなければ当該技術分野で既知の任意の他の抗体配列またはドメインと容易に組み合わせることができる。
【0131】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、任意の軽鎖定常ドメイン配列、例えば当業者に知られている軽鎖の定常配列を含む軽鎖を含む。当業者が認識するように、軽鎖定常ドメインは、カッパ軽鎖定常ドメインまたはラムダ軽鎖定常ドメインであり得る。特定の実施形態では、本明細書に開示される軽鎖の定常ドメインは、カッパ軽鎖定常ドメインである。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、軽鎖定常ドメインを含む。
【0132】
例示的な抗体
操作された抗体は、本明細書に記載のさまざまな重鎖及び軽鎖を含むことができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、２つの重鎖及び軽鎖を含み得る。さまざまな実施形態では、本開示は、少なくとも１つの本明細書に開示される重鎖及び／もしくは軽鎖、少なくとも１つの本明細書に開示される重鎖フレームワークドメイン及び／もしくは軽鎖フレームワークドメイン、少なくとも１つの本明細書に開示される重鎖ＣＤＲドメイン及び／もしくは軽鎖ＣＤＲドメイン、ならびに／または本明細書に開示される任意の重鎖定常ドメイン及び／もしくは軽鎖定常ドメインを含む抗体を包含する。
操作された抗体は、本明細書に記載のさまざまな重鎖及び軽鎖を含むことができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、２つの重鎖及び軽鎖を含み得る。さまざまな実施形態では、本開示は、少なくとも１つの本明細書に開示される重鎖及び／もしくは軽鎖、少なくとも１つの本明細書に開示される重鎖フレームワークドメイン及び／もしくは軽鎖フレームワークドメイン、少なくとも１つの本明細書に開示される重鎖ＣＤＲドメイン及び／もしくは軽鎖ＣＤＲドメイン、ならびに／または本明細書に開示される任意の重鎖定常ドメイン及び／もしくは軽鎖定常ドメインを含む抗体を包含する。
【0133】
さまざまな実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗体は、ホモ二量体モノクローナル抗体である。さまざまな実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗体は、ヘテロ二量体モノクローナル抗体である。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、例えば、典型的な抗体、またはダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、マキシボディ、タンダブ、ＤＶＤ、ＢｉＴｅ、ｓｃＦｖ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、Ｆ（ａｂ’）２など、またはそれらの任意の組み合わせである。
【0134】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインまたは操作された抗体、またはその一部と、１つ以上の追加のポリペプチドと、を含む融合タンパク質を提供する。
【0135】
例示的な単鎖可変断片
いくつかの実施形態では、本開示は、単鎖可変断片を提供する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖはヒトｓｃＦｖである。「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を形成するために共有結合された、免疫グロブリン（例えば、マウスまたはヒト）の重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質を指す。重鎖（ＶＨ）と軽鎖（ＶＬ）は、直接結合されるか、またはＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端に、もしくはＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端に、接続する、ペプチドコードリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５個のアミノ酸）によって結合される。リンカーは通常、柔軟性のためにグリシンが豊富で、溶解性のためにセリンまたはトレオニンが豊富である。リンカーは、細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域と軽鎖可変領域を連結することができる。リンカーの非限定的な例は、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ． ８０（６）：１９１０－１９１７（２００８）及びＷＯ２０１４／０８７０１０に開示され、それらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、リンカーはＧ４Ｓリンカー（配列番号４６）である。
いくつかの実施形態では、本開示は、単鎖可変断片を提供する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖはヒトｓｃＦｖである。「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を形成するために共有結合された、免疫グロブリン（例えば、マウスまたはヒト）の重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質を指す。重鎖（ＶＨ）と軽鎖（ＶＬ）は、直接結合されるか、またはＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端に、もしくはＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端に、接続する、ペプチドコードリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５個のアミノ酸）によって結合される。リンカーは通常、柔軟性のためにグリシンが豊富で、溶解性のためにセリンまたはトレオニンが豊富である。リンカーは、細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域と軽鎖可変領域を連結することができる。リンカーの非限定的な例は、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ． ８０（６）：１９１０－１９１７（２００８）及びＷＯ２０１４／０８７０１０に開示され、それらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、リンカーはＧ４Ｓリンカー（配列番号４６）である。
【0136】
代替的に、または追加的に、ｓｃＦｖは、（例えば、Ｆａｂライブラリーから得られた抗体からではなく）Ｆａｂに由来してもよい。特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片はＦａｂである。特定の実施形態では、Ｆａｂは架橋されている。特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片はＦ（ａｂ）２である。前述の分子のいずれも、異種配列との融合タンパク質に含まれて、抗ＣＤ１９抗原抗体またはその抗原結合断片を形成することができる。
【0137】
特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、少なくとも約１×１０－６Ｍ、少なくとも約１×１０－７Ｍ、少なくとも約１×１０－８Ｍ、少なくとも約１×１０－９Ｍ、または少なくとも約１×１０－１０Ｍの解離定数（Ｋｄ）でＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合する。特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、少なくとも約２×１０－８Ｍの解離定数（Ｋｄ）でＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合する。特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、少なくとも約２×１０－８Ｍ～約８×１０－９Ｍの解離定数（Ｋｄ）でＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合する。
【0138】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、約１ｎＭ～５０ｎＭ、約５ｎＭ～３０ｎＭ、約５ｎＭ～２５ｎＭ、または約８ｎＭ～２０ｎＭの解離定数（Ｋｄ）でＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、少なくとも約５０ｎＭ、少なくとも約４０ｎＭ、少なくとも約３５ｎＭ、少なくとも約３０ｎＭ、少なくとも約２５ｎＭ、少なくとも約２０ｎＭ、少なくとも約１９ｎＭ、少なくとも約１８ｎＭ、少なくとも約１７ｎＭ、少なくとも約１６ｎＭ、少なくとも約１５ｎＭ、少なくとも約１４ｎＭ、少なくとも約１３ｎＭ、少なくとも約１２ｎＭ、少なくとも約１１ｎＭ、少なくとも約１０ｎＭ、少なくとも約９ｎＭ、少なくとも約８ｎＭ、少なくとも約７ｎＭ、少なくとも約６ｎＭ、少なくとも約５ｎＭの解離定数（Ｋｄ）でＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合する。
【0139】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号１～４を含む可変重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、表１に提供される１つ以上のＣＤＲ配列を含む可変軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、表２に提供される１つ以上の軽鎖配列を含む可変軽鎖を含む．
【0140】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、以下に提供される配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるリンカーを含む：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ［配列番号３６］
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ［配列番号３６］
【0141】
いくつかの実施形態では、リンカーは、以下に提供される配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号３７］。
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号３７］。
【0142】
いくつかの実施形態では、リンカーは、以下に提供される配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号３８］。
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号３８］。
【0143】
いくつかの実施形態では、リンカーは、以下に提供される配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号３９］。
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号３９］。
【0144】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体またはその断片は、保存的配列改変を含む（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体またはその断片）。いくつかの実施形態では、保存的配列改変は、アミノ酸配列を含む本開示の抗ＣＤ１９抗体またはその断片（例えば、抗体またはその断片）の結合特性に有意な影響を及ぼさないか、またはそれらの結合特性を変更しないアミノ酸改変である。保存的改変としては、アミノ酸の置換、付加、及び欠失が含まれ得る。改変は、部位特異的変異導入及びＰＣＲ媒介変異導入などの当該技術分野で知られている標準的な技術によって、抗ＣＤ１９抗体またはその断片に導入することができる。アミノ酸は、それらの電荷や極性などの物理化学的性質に応じてグループに分類できる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同じグループ内のアミノ酸で置き換えられているものである。例えば、アミノ酸は電荷によって分類できる：正電荷のアミノ酸にはリジン、アルギニン、ヒスチジンが含まれ、負電荷のアミノ酸にはアスパラギン酸、グルタミン酸が含まれ、中電荷のアミノ酸にはアラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンが含まれる。さらに、アミノ酸は極性によって分類できる：極性アミノ酸には、アルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リジン（塩基性極性）セリン、トレオニン、及びチロシンが含まれ；非極性アミノ酸には、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、及びバリンが含まれる。したがって、ＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基を同じグループからの他のアミノ酸残基で置換することができ、改変された抗体を保持された機能について試験することができる。特定の実施形態では、特定の配列またはＣＤＲ領域内の１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下の残基が改変される。
【0145】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖの軽鎖及び／または重鎖はシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、アミノ酸配列ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＤＴＲＣ（配列番号４０）、またはＭＥＦＧＬＳＷＶＦＬＶＡＬＬＲＧＶＱＣ（配列番号４１）に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の相同性または同一性を有するアミノ酸配列の配列を含む。
【0146】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含む。ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＡＧＡＶＰＩＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ ［配列番号４２］
【0147】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号４２に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の相同性または同一性を有するアミノ酸配列の配列を含む。
【0148】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含む。
【0149】
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＲＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＬＦＤＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ ［配列番号 ４３］
【0150】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号４３に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の相同性または同一性を有するアミノ酸配列の配列を含む。
【0151】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含む。
【0152】
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＰＶＥＧＬＬＲＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＲＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＡＧＩＰＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ ［配列番号 ４４］
【0153】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号４４に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の相同性または同一性を有するアミノ酸配列の配列を含む。
【0154】
ヌクレオチド配列
本開示は、１つ以上の重鎖、重鎖可変ドメイン、重鎖フレームワーク領域、重鎖ＣＤＲ、重鎖定常ドメイン、軽鎖、軽鎖可変ドメイン、軽鎖フレームワーク領域、軽鎖ＣＤＲ、軽鎖定常ドメイン、もしくは他の免疫グロブリン様配列、または本明細書に開示される抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。さまざまな実施形態では、そのようなヌクレオチド配列はベクター内に存在し得る。さまざまな実施形態では、そのようなヌクレオチドは、細胞、例えば、治療を必要とする対象の細胞、または抗体産生のための細胞、例えば、抗体産生のための哺乳動物細胞のゲノムに存在し得る。
本開示は、１つ以上の重鎖、重鎖可変ドメイン、重鎖フレームワーク領域、重鎖ＣＤＲ、重鎖定常ドメイン、軽鎖、軽鎖可変ドメイン、軽鎖フレームワーク領域、軽鎖ＣＤＲ、軽鎖定常ドメイン、もしくは他の免疫グロブリン様配列、または本明細書に開示される抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。さまざまな実施形態では、そのようなヌクレオチド配列はベクター内に存在し得る。さまざまな実施形態では、そのようなヌクレオチドは、細胞、例えば、治療を必要とする対象の細胞、または抗体産生のための細胞、例えば、抗体産生のための哺乳動物細胞のゲノムに存在し得る。
【0155】
操作された抗体と融合タンパク質
いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）本明細書に記載の１つ以上の抗原結合領域（例えば、免疫グロブリンの抗原結合領域、重鎖抗体、軽鎖抗体、ＬＲＲベースの抗体、または抗体様特性を有する他のタンパク質足場、ならびに例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’２、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆｅｂ、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、マキシボディ、タンダブ、ＤＶＤ、ＢｉＴｅ、ＴａｎｄＡｂなどを含む当該技術分野で既知のその他の抗原結合部分）、例えば、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメイン、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）と、（ｉｉ）１つ以上の追加のポリペプチドと、を含む、融合タンパク質を提供する。例えば、アルブミンは豊富な血清タンパク質であり、ＦｃＲｎとの相互作用によって媒介されるｐＨ依存性のリサイクルによって分解から保護されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインまたは操作された抗体、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）は、アルブミン、その一部（ＦｃＲｎに結合するアルブミンの一部など）、及び／または改善された親和性でＦｃＲｎに結合するアルブミンの操作されたバリアントに融合されている。他の例では、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインまたは操作された抗体、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）は、アルブミンに結合して融合タンパク質－アルブミン複合体を形成するポリペプチドに融合され、結果としてＦｃＲｎに結合することができる。いくつかの実施形態では、アルブミンに結合するポリペプチドは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。アルブミンまたはその一部は、ＦｃＲｎへの結合を改変できる１つ以上のアミノ酸の変異を含むことができる。そのような変異は当該技術分野で知られている（例えば、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ３：６１０ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｏｃｍｍｓ１６０７（２０１２）を参照されたい）。他の例では、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインまたは操作された抗体、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）がトランスフェリンに融合されている。トランスフェリンは、トランスフェリン受容体に結合することによってリサイクルされる（例えば、Ｗｉｄｅｒａ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ． Ｒｅｖ． ５５：１４３９－６６（２００３）を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）本明細書に記載の１つ以上の抗原結合領域（例えば、免疫グロブリンの抗原結合領域、重鎖抗体、軽鎖抗体、ＬＲＲベースの抗体、または抗体様特性を有する他のタンパク質足場、ならびに例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’２、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆｅｂ、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、マキシボディ、タンダブ、ＤＶＤ、ＢｉＴｅ、ＴａｎｄＡｂなどを含む当該技術分野で既知のその他の抗原結合部分）、例えば、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメイン、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）と、（ｉｉ）１つ以上の追加のポリペプチドと、を含む、融合タンパク質を提供する。例えば、アルブミンは豊富な血清タンパク質であり、ＦｃＲｎとの相互作用によって媒介されるｐＨ依存性のリサイクルによって分解から保護されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインまたは操作された抗体、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）は、アルブミン、その一部（ＦｃＲｎに結合するアルブミンの一部など）、及び／または改善された親和性でＦｃＲｎに結合するアルブミンの操作されたバリアントに融合されている。他の例では、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインまたは操作された抗体、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）は、アルブミンに結合して融合タンパク質－アルブミン複合体を形成するポリペプチドに融合され、結果としてＦｃＲｎに結合することができる。いくつかの実施形態では、アルブミンに結合するポリペプチドは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。アルブミンまたはその一部は、ＦｃＲｎへの結合を改変できる１つ以上のアミノ酸の変異を含むことができる。そのような変異は当該技術分野で知られている（例えば、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ３：６１０ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｏｃｍｍｓ１６０７（２０１２）を参照されたい）。他の例では、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインまたは操作された抗体、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）がトランスフェリンに融合されている。トランスフェリンは、トランスフェリン受容体に結合することによってリサイクルされる（例えば、Ｗｉｄｅｒａ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ． Ｒｅｖ． ５５：１４３９－６６（２００３）を参照されたい）。
【0156】
抗ＣＤ１９抗体とＣＤ１９のｐＨ依存性結合及び／またはＦｃ受容体
本明細書に記載の操作された抗体は、ＣＤ１９に対する親和性においてｐＨ依存性または増強されたｐＨ依存性（例えば、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインによって媒介される）、及び／またはＦｃＲｎに対する改変された親和性（例えば、増加、例えば、ｐＨ依存性）（例えば、本明細書に記載の１つ以上の定常ドメインによって媒介される）を示すように操作することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に結合することができる抗体、またはＣＤ１９に結合することができる可変ドメインは、区画（例えば、エンドソーム）ｐＨ（例えば、酸性ｐＨまたはｐＨ６．０以下のｐＨ）においてよりも、血清ｐＨ（例えば、中性ｐＨまたは７．４より高いｐＨ）において、より高い親和性でＣＤ１９に結合する。ＣＤ１９がｐＨ依存性ＣＤ１９結合を有する抗体によって結合されるさまざまな実施形態では、血清ｐＨから区画ｐＨへの（例えば、血清からエンドソームへの）ｐＨの遷移は、コンパートメントｐＨでの、及び／または特定のコンパートメント、例えばエンドソーム内でのＣＤ１９と抗体との分離（すなわち、「解離」）を容易にする。さまざまな実施形態では、そのようなｐＨ依存性結合は、抗体のリサイクル及び／またはＣＤ１９分解を媒介することができる。特定の例において、血清ｐＨから区画ｐＨ（例えば、血清からエンドソーム）への遷移は、区画ｐＨでの、及び／または特定の区画、例えばエンドソーム内でのＣＤ１９と抗体との分離（すなわち、「解離」）を促進し、抗体がＦｃＲｎによってリサイクルされ、抗原がリソソーム内で分解されるようにする。そのようないくつかの例では、ＣＤ１９結合のｐＨ依存性は、少なくともリサイクル時に抗体が血清に戻り、標的循環ＣＤ１９に自由に結合するという点で、抗体の「処理能力」を改善する。場合によっては、ｐＨ依存性ＣＤ１９結合を示す抗体のリサイクルは、抗体が最終的に分解するか分解されるまで続くことができ、その時までに、単一の抗体分子が、１つだけでなく、複数のＣＤ１９分子に結合し、その不活化を媒介することができる。
本明細書に記載の操作された抗体は、ＣＤ１９に対する親和性においてｐＨ依存性または増強されたｐＨ依存性（例えば、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインによって媒介される）、及び／またはＦｃＲｎに対する改変された親和性（例えば、増加、例えば、ｐＨ依存性）（例えば、本明細書に記載の１つ以上の定常ドメインによって媒介される）を示すように操作することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に結合することができる抗体、またはＣＤ１９に結合することができる可変ドメインは、区画（例えば、エンドソーム）ｐＨ（例えば、酸性ｐＨまたはｐＨ６．０以下のｐＨ）においてよりも、血清ｐＨ（例えば、中性ｐＨまたは７．４より高いｐＨ）において、より高い親和性でＣＤ１９に結合する。ＣＤ１９がｐＨ依存性ＣＤ１９結合を有する抗体によって結合されるさまざまな実施形態では、血清ｐＨから区画ｐＨへの（例えば、血清からエンドソームへの）ｐＨの遷移は、コンパートメントｐＨでの、及び／または特定のコンパートメント、例えばエンドソーム内でのＣＤ１９と抗体との分離（すなわち、「解離」）を容易にする。さまざまな実施形態では、そのようなｐＨ依存性結合は、抗体のリサイクル及び／またはＣＤ１９分解を媒介することができる。特定の例において、血清ｐＨから区画ｐＨ（例えば、血清からエンドソーム）への遷移は、区画ｐＨでの、及び／または特定の区画、例えばエンドソーム内でのＣＤ１９と抗体との分離（すなわち、「解離」）を促進し、抗体がＦｃＲｎによってリサイクルされ、抗原がリソソーム内で分解されるようにする。そのようないくつかの例では、ＣＤ１９結合のｐＨ依存性は、少なくともリサイクル時に抗体が血清に戻り、標的循環ＣＤ１９に自由に結合するという点で、抗体の「処理能力」を改善する。場合によっては、ｐＨ依存性ＣＤ１９結合を示す抗体のリサイクルは、抗体が最終的に分解するか分解されるまで続くことができ、その時までに、単一の抗体分子が、１つだけでなく、複数のＣＤ１９分子に結合し、その不活化を媒介することができる。
【0157】
特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗体は、ＦｃＲｎなどのＦｃ受容体に対する対照と比べて増加した親和性を示す定常ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、そのような対照と比べて増加した親和性は、血清のｐＨ値（例えば、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、またはそれ以上を超えるｐＨ）においてである。いくつかの実施形態では、そのような対照と比べて増加した親和性は、区画ｐＨ（例えば、７．２、７．１、７．０、６．９、６．８、６．７、６．６、６．５、６．４、６．３、６．２、６．１、６．０、５．９、５．８、５．７、５．６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５．０、またはそれ以下未満のｐＨ）においてである。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗体は、ＦｃＲｎなどのＦｃ受容体に対する親和性において対照と比べてｐＨ依存性（または増強されたｐＨ依存性）を示す定常ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）を含む。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）はＭＨＣクラスＩ様分子であり、異化作用からＩｇＧ及びアルブミンを保護するように機能し、上皮細胞を横切るＩｇＧの輸送を媒介し、プロフェッショナルな抗原提示細胞による抗原提示に関与する。ＩｇＧ抗体サブタイプは、主に細胞からＩｇＧをリサイクルするＦｃＲｎによるエンドソームからの抗体のスカベンジングにより、長い血清半減期を示す。
【0158】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体の血清半減期が増加する。例えば、抗ＣＤ１９抗体のＦｃＲｎへの結合は、抗体の血清半減期を約４日～約４５日まで、例えば、約５日～約３０日まで、約１０日～約３０日まで、または約２０日～約３０日まで増加させる。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、約５日、約１０日、約１５日、約２０日、約２５日、約３０日、約３５日、約４０日、約４５日、約５０日、またはそれ以上の血清半減期を有する。
【0159】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に対する親和性のｐＨ依存性変化を示す。親和性は、抗体と抗原のＫＤ（平衡解離定数）として測定でき、ＫＤと親和性は反比例の関係にある。さまざまな実施形態では、血清ｐＨ（例えば、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、もしくはそれ以上より大きいｐＨ）または血清条件下での、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体のＣＤ１９に対するＫＤは、約１０－４、１０－５、１０－６、１０－７、１０－８、１０－９、１０－１０、１０－１１、１０－１２、１０－１３、１０－１４、または１０－１５Ｍ未満である。特定の例において、血清ｐＨでの、本明細書に記載の抗体のＣＤ１９に対するＫＤは、０．００１～１ｎＭ、例えば、０．００１ｎＭ、０．００５ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、または１ｎＭである。いくつかの実施形態では、区画ｐＨ（例えば、７．２、７．１、７．０、６．９、６．８、６．７、６．６、６．５、６．４、６．３、６．２、６．１、６．０、５．９、５．８、５．７、５．６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５．０、もしくはそれ以下未満のｐＨ）または区画条件下での、ＣＤ１９に対するＫＤは、血清ｐＨまたは血清条件下でのＣＤ１９に対する同じ抗体のＫＤよりも、例えば少なくとも２倍、例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍、２，０００倍、３，０００倍、４，０００倍、５，０００倍、６，０００倍、７，０００倍、８，０００倍、９，０００倍、１０，０００倍、またはそれ以上高い（及び／あるいは区画ｐＨまたは区画条件下での、ＣＤ１９に対する抗体の親和性は、血清ｐＨまたは血清条件下での親和性と比べて減少し得る）。いくつかの実施形態では、区画ｐＨ（例えば、７．２、７．１、７．０、６．９、６．８、６．７、６．６、６．５、６．４、６．３、６．２、６．１、６．０、５．９、５．８、５．７、５．６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５．０、もしくはそれ以下未満のｐＨ）または区画条件下でのＣＤ１９に対するＫＤは、例えば、１０－１５、１０－１４、１０－１３、１０－１２、１０－１１、１０－１０、１０－９、１０－８、１０－７、１０－６、１０－５、１０－４、または１０－３Ｍより大きくあり得る。特定の例において、区画ｐＨまたは区画条件下での本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体のＣＤ１９に対するＫＤは、例えば１ｎＭ以上、例えば、１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、３００ｎＭ、４００ｎＭ、５００ｎＭ、６００ｎＭ、７００ｎＭ、８００ｎＭ、９００ｎＭ、１ｍＭ、またはそれ以上であり得る。
【0160】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、対象に、例えば対象の血清中に投与された場合、参照抗体（例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体）よりも長い半減期を示す。さまざまな実施形態では、血清中の参照抗体（例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体）の半減期は、例えば、２５０～３００時間であり得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の血清中半減期は、例えば、少なくとも２５０時間、例えば、少なくとも２６０、２７０、２８０、２９０、または３００時間であり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の血清中半減期は、少なくとも３００時間、例えば、少なくとも３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、または１，０００時間であり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の血清中半減期は、少なくとも１，０００時間、例えば、少なくとも１，５００、２，０００、２，５００、３，０００、３，５００、４，０００、４，５００、５，０００、６，０００、７，０００、８，０００、９，０００、１０，０００、１１，０００、１２，０００、１３，０００、１４，０００、または１５，０００時間、またはそれ以上であり得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の血清中半減期は、少なくとも１２日、１５日、２０日、２５日、３０日、３５日、４０日、４５日、５０日、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、またはそれ以上であり得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の血清中半減期は、参照抗体（例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体）と比較して、少なくとも、例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、１００倍、またはそれ以上増加し得る。
【0161】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、血漿中の半減期の増加、血漿中の平均保持時間の増加、及び／またはＣＤ１９クリアランスのレベルの上昇を示す（例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体）。これらのパラメーターは、当業者に知られている方法によって決定することができる（例えば、Ｎｅｓｔｏｒｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ４８：４０６－４１７（２００８）；Ｌｅｖｅｑｕｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２５：２３２７－２３４４（２００５）；Ｉｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ８：ｅ６３２３６． ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００６３２３６（２０１３）に記載されるように）。例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体（例えば、そのような抗ＣＤ１９抗体の単回用量）は、参照抗体と比べて、血漿中のＣＤ１９のレベルを少なくとも１０倍、５０倍、１００倍、２５０倍、５００、７５０倍、１０００倍、１５００倍、またはそれ以上低下させる。
【0162】
操作された抗体及びその断片
本開示によるＣＤ１９抗体及びその断片は、ｐＨ依存的に１つ以上の目的の標的に特異的に結合する１つ以上の結合部分を含むように操作される。ＣＤ１９抗体及びその断片は、核酸（例えば、ＲＮＡ及びＤＮＡ）、タンパク質（例えば、抗体）、及びそれらの組み合わせを包含する。ｐＨ依存性結合部分は、例えば、核酸（例えば、ＲＮＡ及びＤＮＡ）、ならびにアプタマー、ポリペプチド（例えば、抗体またはその断片、アルブミン、受容体、リガンド、シグナルペプチド、アビジン、及びプロテインＡ）、多糖類、ビオチン、疎水基、親水基、薬物、及び受容体に結合するあらゆる有機分子であり得るか、またはそれらを含み得る。
本開示によるＣＤ１９抗体及びその断片は、ｐＨ依存的に１つ以上の目的の標的に特異的に結合する１つ以上の結合部分を含むように操作される。ＣＤ１９抗体及びその断片は、核酸（例えば、ＲＮＡ及びＤＮＡ）、タンパク質（例えば、抗体）、及びそれらの組み合わせを包含する。ｐＨ依存性結合部分は、例えば、核酸（例えば、ＲＮＡ及びＤＮＡ）、ならびにアプタマー、ポリペプチド（例えば、抗体またはその断片、アルブミン、受容体、リガンド、シグナルペプチド、アビジン、及びプロテインＡ）、多糖類、ビオチン、疎水基、親水基、薬物、及び受容体に結合するあらゆる有機分子であり得るか、またはそれらを含み得る。
【0163】
結合部分としての抗体またはその断片
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９抗体である。場合によっては、本明細書に記載の１つ以上の結合部分は、抗体、その抗原結合断片、及び／またはそのＦｃ領域（またはＦｃ断片）であるか、またはそれらを含む。ＩｇＧ抗体の基本構造は、ジスルフィド結合によって一緒に連結された、２つの同一の軽ポリペプチド鎖と２つの同一の重ポリペプチド鎖とからなる。それぞれの鎖のアミノ末端に位置する最初のドメインは、アミノ酸配列が可変であり、個別の抗体に見られる抗体結合特異性を提供する。これらは、可変重（ＶＨ）領域及び可変軽（ＶＬ）領域として知られている。それぞれの鎖の他のドメインは、アミノ酸配列が比較的不変であり、定常重（ＣＨ）領域及び定常軽（ＣＬ）領域として知られている。ＩｇＧ抗体の場合、軽鎖には１つの可変領域（ＶＬ）と１つの定常領域（ＣＬ）が含まれる。ＩｇＧ重鎖は、可変領域（ＶＨ）、第１の定常領域（ＣＨ１）、ヒンジ領域、第２の定常領域（ＣＨ２）、及び第３の定常領域（ＣＨ３）を含む。ＩｇＥ及びＩｇＭ抗体では、重鎖に追加の定常領域（ＣＨ４）が含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９抗体である。場合によっては、本明細書に記載の１つ以上の結合部分は、抗体、その抗原結合断片、及び／またはそのＦｃ領域（またはＦｃ断片）であるか、またはそれらを含む。ＩｇＧ抗体の基本構造は、ジスルフィド結合によって一緒に連結された、２つの同一の軽ポリペプチド鎖と２つの同一の重ポリペプチド鎖とからなる。それぞれの鎖のアミノ末端に位置する最初のドメインは、アミノ酸配列が可変であり、個別の抗体に見られる抗体結合特異性を提供する。これらは、可変重（ＶＨ）領域及び可変軽（ＶＬ）領域として知られている。それぞれの鎖の他のドメインは、アミノ酸配列が比較的不変であり、定常重（ＣＨ）領域及び定常軽（ＣＬ）領域として知られている。ＩｇＧ抗体の場合、軽鎖には１つの可変領域（ＶＬ）と１つの定常領域（ＣＬ）が含まれる。ＩｇＧ重鎖は、可変領域（ＶＨ）、第１の定常領域（ＣＨ１）、ヒンジ領域、第２の定常領域（ＣＨ２）、及び第３の定常領域（ＣＨ３）を含む。ＩｇＥ及びＩｇＭ抗体では、重鎖に追加の定常領域（ＣＨ４）が含まれる。
【0164】
抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、組換え産生抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、操作された抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖及び２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖対、細胞内抗体、抗体融合体（本明細書では「抗体コンジュゲート」と呼ばれることもある）、ヘテロコンジュゲート抗体、抗体－薬物コンジュゲート、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（「抗体模倣体」と呼ばれることもある）、及び上記のいずれかの抗原結合断片が挙げられ得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。
【0165】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ断片」という用語は、Ｆｃ機能及び／またはＦｃ受容体への結合など、本明細書に記載の活性を保持するＦｃ領域の１つ以上の断片を指す。本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合部分」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の「抗原結合断片」という用語内に包含される結合断片の例としては、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）、及び単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技術を使用して得ることができ、断片は、無傷の抗体と同一の方法で有用性についてスクリーニングできる。
【0166】
いくつかの態様において、本発明は、ヒト重鎖及び／または軽定常領域を含み、ヒト重定常領域が、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、またはヒトＩｇＧ４のＦｃ領域を含むアイソタイプバリアントを含む、ヒトＣＤ１９に結合する抗体またはその断片を提供する。
【0167】
さらなる態様において、本発明は、ヒトＣＤ１９に結合するヒト化抗体またはその断片を提供し、抗体は、親抗体のアミノ酸３２４位のセリンをアスパラギンで置換するアミノ酸置換Ｓ３２４Ｎを含むバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含み、一方、バリアントヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む抗体は、親抗体と比較して改善された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示す。
【0168】
抗体または断片は、抗体を合成するための当該技術分野で公知の任意の方法によって生成することができる（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ． １９８８）；Ｂｒｉｎｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；ＷＯ９２／２２３２４；ＷＯ９８／４６６４５を参照されたい）。キメラ抗体は、例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２に記載されている方法を使用して産生することができ、ヒト化抗体は、例えば、米国特許第６，１８０，３７０号に記載される方法による。
【0169】
本明細書に記載のさらなる組成物及び方法は、二重特異性抗体及び多価抗体であり、例えば、Ｓｅｇａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８：１－６（２００１）；及びＴｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７：６０（１９９１）に記載される。
【0170】
操作された抗原結合領域
いくつかの実施形態では、結合部分は、抗体（例えば、ＩｇＧ抗体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ３抗体）、または抗原結合断片であるか、またはそれを含み、参照抗体または抗原結合断片と比べて改変された方法で（例えば、ｐＨ感受性様式で、例えば、より多いもしくはより少ないｐＨ感受性様式で）標的（すなわち抗原）に結合するように操作される。例えば、抗体は、１つ以上の抗体ＣＤＲ内及び／または抗体のＣＤＲ構造に関与する位置のアミノ酸を改変することによって（例えば、付加、削除、または置換することによって）操作することができる。改変され得る抗体の例示的な非限定的部位としては、以下が挙げられる（アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔナンバリング（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ）に基づいて示される）。
いくつかの実施形態では、結合部分は、抗体（例えば、ＩｇＧ抗体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ３抗体）、または抗原結合断片であるか、またはそれを含み、参照抗体または抗原結合断片と比べて改変された方法で（例えば、ｐＨ感受性様式で、例えば、より多いもしくはより少ないｐＨ感受性様式で）標的（すなわち抗原）に結合するように操作される。例えば、抗体は、１つ以上の抗体ＣＤＲ内及び／または抗体のＣＤＲ構造に関与する位置のアミノ酸を改変することによって（例えば、付加、削除、または置換することによって）操作することができる。改変され得る抗体の例示的な非限定的部位としては、以下が挙げられる（アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔナンバリング（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ）に基づいて示される）。
【0171】
重鎖：Ｈ２７、Ｈ３１、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５８、Ｈ５９、Ｈ６１、Ｈ６２、Ｈ６３、Ｈ６４、Ｈ６５、Ｈ９９、Ｈ１００ｂ、及びＨ１０２
【0172】
軽鎖：Ｌ２４、Ｌ２７、Ｌ２８、Ｌ３２、Ｌ５３、Ｌ５４、Ｌ５６、Ｌ９０、Ｌ９２、及びＬ９４。
【0173】
いくつかの実施形態では、これらの開示されたアミノ酸の１つ以上が、ヒスチジン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、またはグルタミンで置換され得る。理論に縛られることは望まないが、これらの位置の１つ以上のアミノ酸をヒスチジンで置換すると、ｐＨ依存性抗原結合特性を有する抗体が得られると考えられる。いくつかの実施形態では、非ヒスチジン残基がヒスチジン残基で置換されている。いくつかの実施形態では、ヒスチジン残基が非ヒスチジン残基で置換されている。追加の操作された抗原結合領域としては、例えば、米国特許出願公開第２０１１０２２９４８９号に記載されるものが挙げられる。
【0174】
操作された定常領域
場合によっては、結合部分は、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、ＦｃγＲＩＶ、またはＦｃＲｎ受容体）に結合する抗体定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片であるか、またはそれらを含む。いくつかの実施形態では、定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片は、参照の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片と比べて、標的（例えば、Ｆｃ受容体）に変化した様式で（例えば、ｐＨ感受性様式で（例えば、より多いもしくはより少ないｐＨ感受性様式で）、結合するように操作される。
場合によっては、結合部分は、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、ＦｃγＲＩＶ、またはＦｃＲｎ受容体）に結合する抗体定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片であるか、またはそれらを含む。いくつかの実施形態では、定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片は、参照の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片と比べて、標的（例えば、Ｆｃ受容体）に変化した様式で（例えば、ｐＨ感受性様式で（例えば、より多いもしくはより少ないｐＨ感受性様式で）、結合するように操作される。
【0175】
いくつかの例では、結合部分は、本明細書に記載のアミノ酸残基（例えば、２５１～２５６、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９、及び４２８～４３６（Ｋａｂａｔナンバリング（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ）））のうちの１つ以上の、アミノ酸付加、欠失、または置換を含むように操作されたＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片であり得るか、またはそれらを含む。
【0176】
ＣＤ１９抗体及びその断片の産生
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、既知の技術を使用した変異導入によって、１つ以上の標的へのｐＨ感受性結合を示す１つ以上の結合部分を含むように操作される。例えば、参照ポリペプチド（例えば、治療用抗体または治療用融合タンパク質）の配列を得ることができ、１つ以上のアミノ酸残基を付加、欠失、または置換することができる。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基のうちの１つ以上が、ヒスチジン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、またはグルタミンで置換されている。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸がヒスチジンで置換されている。理論に束縛されることは望まないが、アミノ酸残基をヒスチジンで置換するとプロトン化部位が挿入され、結合部分のｐＨ感受性を増加させることができると考えられている。ポリペプチドは、標準的な方法を使用して生成し、本明細書に記載の目的の標的への結合についてアッセイすることができる。結合部分のｐＨ感受性を増加させる追加の方法は、例えば、Ｓａｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：９０８－９１３（２００２）；Ｍｕｒｔａｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０：１６１９－１６３１（２０１１）；及び米国特許出願公開第２０１１０２２９４８９号に記載される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、既知の技術を使用した変異導入によって、１つ以上の標的へのｐＨ感受性結合を示す１つ以上の結合部分を含むように操作される。例えば、参照ポリペプチド（例えば、治療用抗体または治療用融合タンパク質）の配列を得ることができ、１つ以上のアミノ酸残基を付加、欠失、または置換することができる。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基のうちの１つ以上が、ヒスチジン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、またはグルタミンで置換されている。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸がヒスチジンで置換されている。理論に束縛されることは望まないが、アミノ酸残基をヒスチジンで置換するとプロトン化部位が挿入され、結合部分のｐＨ感受性を増加させることができると考えられている。ポリペプチドは、標準的な方法を使用して生成し、本明細書に記載の目的の標的への結合についてアッセイすることができる。結合部分のｐＨ感受性を増加させる追加の方法は、例えば、Ｓａｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：９０８－９１３（２００２）；Ｍｕｒｔａｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０：１６１９－１６３１（２０１１）；及び米国特許出願公開第２０１１０２２９４８９号に記載される。
【0177】
いくつかの実施形態では、目的の第１の標的が選択され、標的に選択的に結合する抗体が提供され、取得され、及び／または（例えば、本明細書に記載の既知の方法を使用して）生成される。抗原結合領域及び／またはＦｃ領域のうちの１つ以上のアミノ酸が置換され（例えば、ヒスチジン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、またはグルタミンで）、標的への（及び、追加的にまたは代替的に、ＦｃＲｎへの）結合のｐＨ感受性が、決定される。
【0178】
いくつかの実施形態では、目的の標的に自然に結合するポリペプチドが提供され、取得され、及び／または生成される。ポリペプチドは、既知の方法を使用して、本明細書に記載のＦｃ領域またはＦｃ断片（例えば、所望の結合親和性でＦｃＲｎに結合する）にコンジュゲートされる。例えば、ポリペプチドとＦｃ領域またはＦｃ断片とは、化学的手段によって、または融合タンパク質としての組換え発現によってコンジュゲートすることができる。追加的にまたは代替的に、ポリペプチドの１つ以上のアミノ酸を（例えば、ヒスチジン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、またはグルタミンで）置換することができ、ポリペプチドの結合のｐＨ感受性及び標的が決定される。
【0179】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、同定され、及び／またはスクリーニングで選択された、１つ以上の結合部分を含むように操作される。例えば、ｐＨ感受性様式で抗原に結合する抗原結合部分は、抗原結合部分を発現するライブラリー、例えばファージライブラリーを使用して同定することができる。そのようなライブラリーは、第１のｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）で抗原に対する第１の親和性を有し、第２のｐＨ（例えば、ｐＨ５．５）で抗原に対する第２の親和性を有する抗原結合部分についてスクリーニングすることができる。本明細書に記載の抗体またはその断片は、そのような同定されたｐＨ感受性抗原結合部分を含むように操作することができる。追加的に、及び／または代替的に、ライブラリーを使用して、ＦｃＲｎにｐＨ感受性様式で結合するＦｃＲｎ結合部分を同定することができる。組換え抗体ライブラリーをスクリーニングする方法は既知である（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２３：１１０５－１１１６（２００５）；米国特許第５，８３７，５００号；米国特許第５，５７１，６９８号；ＷＯ２０１２／０４４８３１を参照されたい）。
【0180】
ＰＥＧ化
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、モノまたはポリ（例えば、２～４の）ＰＥＧ部分を含むようにＰＥＧ化することができる。そのようなＰＥＧ化抗体は、非ＰＥＧ化参照抗体、例えば、同じアミノ酸配列を有するが異なる、異なる量のＰＥＧ化を有する、またはＰＥＧ化を有さない抗体と比較して増加した半減期を示し得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、モノまたはポリ（例えば、２～４の）ＰＥＧ部分を含むようにＰＥＧ化することができる。そのようなＰＥＧ化抗体は、非ＰＥＧ化参照抗体、例えば、同じアミノ酸配列を有するが異なる、異なる量のＰＥＧ化を有する、またはＰＥＧ化を有さない抗体と比較して増加した半減期を示し得る。
【0181】
ＰＥＧ化は、当該技術分野で知られている任意の適切な反応によって実施することができる。ＰＥＧ化タンパク質を調製するための方法は、一般に、（ａ）ポリペプチドをポリエチレングリコール（ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体など）と、それによってポリペプチドが１つ以上のＰＥＧ基に結合するようになる条件下で反応させることと；（ｂ）反応生成物（複数可）を得ることと、を含むことができる。一般に、反応の条件は、既知のパラメーター及び所望の結果に基づいてケースバイケースで決定することができる。
【0182】
当業者が利用できる多数のＰＥＧ結合方法がある。例えば、本明細書に記載の抗体またはその断片をＰＥＧ化するステップは、反応性ポリエチレングリコール分子とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して実施することができる。
【0183】
結合部分と標的の相互作用の測定
本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）の標的（例えば、ＣＤ１９及び／またはＦｃＲｎ）への結合特性は、当該技術分野で公知の方法、例えば、以下の方法のうちの１つによって測定することができる：ＢＩＡＣＯＲＥ分析、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｘ線結晶学、配列分析及びスキャニング変異導入。抗体とＣＤ１９及び／またはＦｃＲｎとの結合相互作用は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して分析できる。ＳＰＲまたは生体分子相互作用分析（ＢＩＡ）は、相互作用物質のいずれをも標識することなく、生体特異的な相互作用をリアルタイムで検出する。ＢＩＡチップの結合表面における質量の変化（結合事象を示す）は、表面近くの光の屈折率の変化をもたらす。屈折率の変化は検出可能なシグナルを生成し、生体分子間のリアルタイム反応の指標として測定される。ＳＰＲを使用するための方法は、例えば、米国特許第５，６４１，６４０号；Ｒａｅｔｈｅｒ（１９８８） Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎｓ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ；Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ ａｎｄ Ｕｒｂａｎｉｃｚｋｙ（１９９１） Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ． ６３：２３３８－２３４５；Ｓｚａｂｏ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ５：６９９－７０５、及びＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）によって提供されるオンライン資料に記載されている。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄ．）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（結合平衡除外法）アッセイも使用できる。
本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）の標的（例えば、ＣＤ１９及び／またはＦｃＲｎ）への結合特性は、当該技術分野で公知の方法、例えば、以下の方法のうちの１つによって測定することができる：ＢＩＡＣＯＲＥ分析、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｘ線結晶学、配列分析及びスキャニング変異導入。抗体とＣＤ１９及び／またはＦｃＲｎとの結合相互作用は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して分析できる。ＳＰＲまたは生体分子相互作用分析（ＢＩＡ）は、相互作用物質のいずれをも標識することなく、生体特異的な相互作用をリアルタイムで検出する。ＢＩＡチップの結合表面における質量の変化（結合事象を示す）は、表面近くの光の屈折率の変化をもたらす。屈折率の変化は検出可能なシグナルを生成し、生体分子間のリアルタイム反応の指標として測定される。ＳＰＲを使用するための方法は、例えば、米国特許第５，６４１，６４０号；Ｒａｅｔｈｅｒ（１９８８） Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎｓ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ；Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ ａｎｄ Ｕｒｂａｎｉｃｚｋｙ（１９９１） Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ． ６３：２３３８－２３４５；Ｓｚａｂｏ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ５：６９９－７０５、及びＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）によって提供されるオンライン資料に記載されている。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄ．）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（結合平衡除外法）アッセイも使用できる。
【0184】
ＳＰＲからの情報は、標的に対する結合部分（例えば、ＣＤ１９及び／またはＦｃＲｎに対する抗ＣＤ１９抗体）の結合について、平衡解離定数（ＫＤ）、ならびにＫｏｎとＫｏｆｆを含む動力学パラメーターの正確かつ定量的な測定を提供するために使用できる。このようなデータは、異なる分子を比較するために使用できる。ＳＰＲからの情報は、構造活性相関（ＳＡＲ）の開発にも使用できる。例えば、さまざまなｐＨレベルでの標的への特定の結合部分の動力学的及び平衡結合パラメーターを評価することができる。特定のｐＨレベルで、特定の結合パラメーター、例えば、高親和性、低親和性、及び遅いＫｏｆｆと相関する所与の位置のバリアントアミノ酸を同定することができる。
【0185】
処置方法
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、１つ以上のＣＤ１９関連状態を治療する方法で使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、医薬として使用するためのものである。ＣＤ１９関連状態は、非限定的に、ＣＤ１９発現によって引き起こされる状態、全体的にもしくは部分的にＣＤ１９発現に起因する症状に関与する状態、またはＣＤ１９発現に関連して起こることが知られている状態を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、１つ以上のＣＤ１９関連状態を治療する方法で使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、医薬として使用するためのものである。ＣＤ１９関連状態は、非限定的に、ＣＤ１９発現によって引き起こされる状態、全体的にもしくは部分的にＣＤ１９発現に起因する症状に関与する状態、またはＣＤ１９発現に関連して起こることが知られている状態を含み得る。
【0186】
いくつかの態様において、本発明は、ＣＤ１９に特異的に結合する薬剤（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体またはその断片）を投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。がんは、体内の異常な細胞の制御不能の増殖を特徴とするさまざまな疾患の広いグループである。制御不能の細胞分裂と増殖により、悪性腫瘍が形成され、隣接する組織に侵入し、リンパ系や血流を介して体の離れた部分に転移し得る。いくつかの実施形態では、「がん」または「がん組織」は固形腫瘍を含む。本発明の方法によって治療できるがんの例としては、リンパ腫、白血病、骨髄腫、及び他の白血球悪性腫瘍を含む免疫系のがんが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、がんはＢ細胞リンパ腫である。
【0187】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞リンパ腫は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、古典的ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生する大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、結節性リンパ球優勢ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞リンパ腫は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、及び非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞リンパ腫は非ホジキンリンパ腫である。
【0188】
さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体またはその断片）の投与は、有病率、頻度、レベル、及び／または本明細書に記載の、または当該技術分野で知られているＣＤ１９関連状態の１つ以上の症状またはバイオマーカーの量の減少、例えば、対象における以前の測定値または参照値と比較した、１つ以上の症状またはバイオマーカーの少なくとも３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％の減少をもたらす。
【0189】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）をがんを有する対象に投与すると、がんの１つ以上の症状またはバイオマーカーが、参照抗体、例えば、同等の条件下でのＣＤ１９結合を交差競合する抗体がするよりも大幅に減少または改善される。
【0190】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、参照タンパク質（例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体）と比較して有効用量の減少を示す。例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の有効用量は、例えば、１，０００ｍｇ／用量未満、例えば、９００ｍｇ／用量、８００ｍｇ／用量、７００ｍｇ／用量、６００ｍｇ／用量、５００ｍｇ／用量、５５０ｍｇ／用量、４００ｍｇ／用量、３５０ｍｇ／用量、３００ｍｇ／用量、２００ｍｇ／用量、１００ｍｇ／用量、５０ｍｇ／用量、２５ｍｇ／用量、またはそれ以下であり得る。特定の例において、本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗体の有効用量は、参照抗体の有効または推奨または承認された投与量よりも低く、参照抗体の投与量は、例えば、９００ｍｇ／投与、または６００ｍｇ／投与であり得る。代替的に、または本明細書に開示される投与量と組み合わせて、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、週に１回未満、例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、３か月間、４か月間、５か月間、６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、または１年間に１回未満である頻度で、有効にまたは有用に投与することができる。特定の例において、本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗体の有効または有用な投与頻度は、参照抗体の有効または推奨または承認された投与頻度よりも低く、参照抗体の投与頻度は毎週（例えば、対象の体重に応じて３００～６００ｍｇの投与量で）、または２週間ごとに（例えば、対象の体重に応じて３００～１２００ｍｇの投与量で）、投与することができる。
【0191】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、抗ＣＤ１９抗体が参照（例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体）と同一、同等、または実質的に同等の製剤で、及び／または参照と同一、同等、または実質的に同等の投与経路によって投与される場合、参照タンパク質、例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体と比較して少ない用量で投与して、同等、同等に有効、同等に有効、または実質的に有効な転帰を達成することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、抗ＣＤ１９抗体が参照と同一、同等、または実質的に同等の製剤で、及び／または参照と同一、同等、または実質的に同等の投与経路によって投与される場合、参照抗体（例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体）と比較して広げられた間隔で投与して、同等、同等に有効、同等に有効、または実質的に有効な転帰を達成することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、抗ＣＤ１９抗体が参照（例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体）と同一、同等、または実質的に同等の製剤で、及び／または参照と同一、同等、または実質的に同等の投与経路によって投与される場合、参照抗体と比較して、減少した単位用量の数で、及び／または短縮された治療期間で投与して、同等、同等に有効、同等に有効、または実質的に有効な転帰を達成することができる。
【0192】
いくつかのそのような実施形態によれば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の投与用量は、参照抗体、例えば、例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体の有効用量よりも、対象に投与されたときに有害反応、例えば、有害免疫反応を誘発する可能性が低い可能性がある。したがって、さまざまな実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗体は、投与される活性単位あたりで、参照抗体よりも有害反応または副作用を誘発する可能性が低くあり得る。さまざまな実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗体は、投与される活性単位あたりで、参照抗体よりも、特定の重症度を有する有害反応または副作用を誘発する可能性が低くあり得る。さまざまな実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗体は、投与される活性単位当たり、参照抗体よりも低い程度で、またはより少ない患者において、１つ以上の有害反応または副作用を誘発する可能性がある。ＣＤ１９に結合できる抗体の投与に関連する可能性のある有害反応または副作用の例としては、頭痛、鼻咽頭炎、背中の痛み、悪心、下痢、高血圧、上気道感染症、腹痛、嘔吐、貧血、咳、末梢浮腫、及び／または尿路感染が挙げられ得る。
【0193】
いくつかの実施形態では、対象への投与時に（例えば、単回用量で）、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、投与後の定義された時間（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日、またはそれ以上）に、同じ定義された時間での対照（例えばＣＤ１９結合に対して交差競合する抗体）のレベルと比べて血漿中の増加したレベルで測定される。例えば、単回用量の投与後の所定の時点で、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体のレベルは、参照抗体の対応するレベルよりも、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、または５００％高い。
【0194】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、（例えば単回用量の）投与後の定義された時間（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日、またはそれ以上）に、同じ定義された時間での対照のレベルと比べて血漿中の増加したレベルで測定される。例えば、投与後の所定の時点で、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体のレベルは、参照抗体の対応するレベルよりも、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、または５００％高い。
【0195】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、（例えば、対照、例えば、参照抗体、例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体と比べて）増加した半減期を有し、したがって、抗ＣＤ１９抗体は、投与間隔を広げて対象に投与することができる。例えば、抗ＣＤ１９抗体は、毎週１回、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、６週間ごと、８週間ごと、またはそれ以上の期間で投与することができる。
【0196】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）の治療有効量は、参照治療用タンパク質、例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する抗体の有効量の約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、または５％である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の単回用量は、参照抗体の２回以上の用量と同等の治療効果を達成する。
【0197】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、対象における標的抗原（例えば、ＣＤ１９）の濃度の約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、また５％である用量で投与される。
【0198】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、当業者に知られているさまざまな方法及び送達システムのいずれかを使用して、対象に物理的に導入することができる。本明細書に開示される製剤の例示的な投与経路としては、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄または他の非経口投与経路、例えば注射または注入によるものが挙げられる。本明細書で使用される場合、「非経口投与」という語句は、経腸投与及び局所投与以外の、通常は注射による投与方法を意味し、非限定的に、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び注入、並びにインビボのエレクトロポレーションが含まれる。いくつかの実施形態では、製剤は、局所、表皮または粘膜の投与経路のような非経口経路によって、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸内、舌下、または局所で投与される。また、投与は、例えば１回、複数回、及び／または１つ以上の長い期間にわたって行うことができる。
【0199】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）は、多くの診断及び治療用途に使用することができる。例えば、本明細書に記載の操作された抗体の検出可能に標識されたバージョンをアッセイで使用して、試料（例えば、生体試料）中のＣＤ１９の存在または量を検出することができる。本明細書に記載の操作された抗体は、ＣＤ１９への結合を研究するためのインビトロアッセイで使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、そうでなければＣＤ１９関連障害を治療するのに有用である追加の新規化合物を同定するために設計されたアッセイにおける陽性対照として使用することができる。例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に結合する追加の化合物（例えば、小分子、アプタマー、または抗体）を同定するためのアッセイにおいて陽性対照として使用することができる。
【0200】
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、対象、例えば、１つ以上のＣＤ１９関連状態を有する、有する疑いがある、発症するリスクがある、または治療中である、対象をモニタリングするのに使用することができる。モニタリングは、対象、例えば、対象の血清中のＣＤ１９の量または活性を決定することを含み得る。いくつかの実施形態では、評価は、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の投与後、少なくとも１時間、例えば、少なくとも２、４、６、８、１２、２４、もしくは４８時間、または少なくとも１日間、２日間、４日間、１０日間、１３日間、２０日間、もしくはそれ以上、または少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間、もしくはそれ以上行われる。対象は、以下の期間の１つ以上で評価することができる：治療の開始前；治療中；または治療の１つ以上の要素が投与された後。評価は、さらなる治療の必要性を評価すること、例えば、投与量、投与頻度、または治療期間を変更すべきかどうかを評価することを含むことができる。また、選択された治療法を追加または削除する必要性を評価すること、例えば、本明細書に記載のＣＤ１９関連障害の任意の治療を追加または削除することも含み得る。
【0201】
製剤化及び投与
さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）を医薬組成物に組み込むことができる。そのような医薬組成物は、例えば、疾患、例えばＣＤ１９関連障害の予防及び／または治療のために有用であり得る。医薬組成物は、当業者に知られている方法によって製剤化することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ． Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８５）に記載されているような）。
さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）を医薬組成物に組み込むことができる。そのような医薬組成物は、例えば、疾患、例えばＣＤ１９関連障害の予防及び／または治療のために有用であり得る。医薬組成物は、当業者に知られている方法によって製剤化することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ． Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８５）に記載されているような）。
【0202】
投与の適切な手段は、対象の年齢及び状態に基づいて選択することができる。本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体）を含む医薬組成物の単回用量は、体重１ｋｇあたり０．００１～１０００ｍｇの範囲から選択することができる。一方、用量は体重あたり０．００１～１０００００ｍｇの範囲で選択できるが、本開示はそのような範囲に限定されない。用量及び投与方法は、患者の体重、年齢、状態などに応じて変動し、当業者であれば必要に応じて適宜選択することができる。
【0203】
さまざまな実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤を含むように製剤化することができる。薬学的に許容される担体の例としては、非限定的に、生理学的に適合性のある任意の及びすべての溶媒、分散媒、被覆、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。本発明の組成物は、薬学的に許容される塩、例えば酸付加塩または塩基付加塩を含むことができる。
【0204】
さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗体を含む組成物、例えば注射用無菌製剤は、ビヒクルとして注射用蒸留水を使用して、従来の薬務に従って製剤化することができる。例えば、生理食塩水またはブドウ糖と、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウムなどの他の補充成分を含む等張液を、任意選択で適切な可溶化剤、例えば、エタノール、及びプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどの多価アルコールなどのアルコール、ポリソルベート８０（商標）、ＨＣＯ－５０などの非イオン性界面活性剤などと組み合わせて、注射用水溶液として使用することができる。
【0205】
本明細書に開示される場合、医薬組成物は当該技術分野で知られている任意の形態であってよい。そのような形態としては、例えば、液体、半固体、及び固体の剤形、例えば、液体の液剤（例えば、注射剤及び点滴剤）、分散剤または懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム、及び坐剤が挙げられる。
【0206】
任意の特定の形態の選択または使用は、部分的には、意図する投与様式及び治療への適用に依存し得る。例えば、全身または局所送達を目的とする組成物を含む組成物は、注射剤または点滴剤の形態であり得る。例えば、組成物は非経口様式（例えば静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内注射）による投与用に製剤化され得る。本明細書中で使用される場合、非経口投与は、通常は注射による、経腸投与及び局所投与以外の投与様式を指し、非限定的に、静脈内、鼻腔内、眼内、肺内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内及び胸骨内の注射及び注入が含まれる。
【0207】
投与経路は、非経口、例えば、注射による投与、経鼻投与、経肺投与、または経皮投与であり得る。投与は、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射による全身または局所であり得る。
【0208】
さまざまな実施形態では、本発明の医薬組成物は、液剤、マイクロエマルション、分散剤、リポソーム、または高い濃度での安定した保存に適した他の規則構造として製剤化することができる。滅菌注射剤は、必要量の本明細書に記載の組成物を上に挙げた成分の１つまたは組み合わせと共に適正な溶媒に組み込み、必要により、続いて濾過滅菌を行うことによって調製することができる。一般的に、分散剤は、本明細書に記載の組成物を、基礎的な分散媒及び上に列挙されるものからの必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルへと混合することによって調製される。滅菌注射剤を調製するための滅菌粉末の場合、調製方法は、事前に滅菌濾過された本明細書に記載の組成物と任意の所望の追加成分（下記参照）との溶液から、本明細書に記載の組成物と任意の所望の追加成分との粉末を生じる、真空乾燥及び凍結乾燥を含む。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散剤の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる試薬、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物中に含めることによってもたらすことができる。
【0209】
医薬組成物は、水または別の薬学的に許容される液体中の滅菌の溶液または懸濁液を含む注射可能な製剤の形態で非経口的に投与することができる。例えば、医薬組成物は、治療用分子を、薬学的に許容されるビヒクルまたは媒体、例えば、滅菌水及び生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味賦形剤、希釈剤、ビヒクル、防腐剤、結合剤と好適に組み合わせ、続いて、一般的に受け入れられている薬務に必要な単位用量形態で混合することによって製剤化することができる。医薬製剤に含まれる活性成分の量は、指定された範囲内の適切な用量が提供されるような量である。油性液体の非限定的な例としては、ゴマ油及び大豆油が挙げられ、可溶化剤として安息香酸ベンジルまたはベンジルアルコールと組み合わせることができる。含まれ得る他の品目は、リン酸緩衝液または酢酸ナトリウム緩衝液などの緩衝剤、塩酸プロカインなどの無痛化剤、ベンジルアルコールまたはフェノールなどの安定剤、及び抗酸化剤である。処方された注射剤は、適切なアンプルに包装することができる。
【0210】
いくつかの実施形態では、組成物は、０℃未満の温度（例えば、－２０℃または－８０℃）で保存するために製剤化することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、最大２年間（例えば、１か月間、２か月間、３か月間、４か月間、５か月間、６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１年間、１１／２年間、または２年間）、２～８℃（例えば４℃）での保存のために製剤化することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、２～８℃（例えば、４℃）で少なくとも１年間保存安定である。
【0211】
特定の例では、医薬組成物は、溶液として製剤化することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、例えば、適切な濃度で、２～８℃（例えば、４℃）での保存に適した緩衝された溶液として製剤化することができる。
【0212】
本明細書に記載の１つ以上の操作された抗体を含む組成物は、イムノリポソーム組成物に製剤化することができる。そのような製剤は、当該技術分野で知られている方法によって調製することができる。循環時間が強化されたリポソームは、例えば、米国特許第５，０１３，５５６号に開示される。
【0213】
特定の実施形態では、組成物は、インプラント及びマイクロカプセル化の送達系を含む制御放出製剤など、化合物を急速な放出から保護する担体とともに製剤化することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用できる。そのような製剤の調製のための多くの方法は、当該技術分野で知られている。例えば、Ｊ． Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（１９７８） ”Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，” Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。
【0214】
いくつかの実施形態では、組成物は、ヒトなどの哺乳動物への肺内投与（例えば、吸入器またはネブライザーによる投与）に適した組成物に製剤化することができる。そのような組成物を製剤化する方法は、当該技術分野で周知である。乾燥粉末吸入製剤及び製剤の投与に適したシステムも当該技術分野で知られている。経肺投与は経口及び／または鼻投与であってよい。肺送達用の薬学的デバイスの例としては、定量吸入器、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、及びネブライザーが挙げられる。例えば、本明細書に記載の組成物は、乾燥粉末吸入器によって対象の肺に投与することができる。これらの吸入器は、分散性で安定した乾燥粉末製剤を肺に送達する噴射剤を使用しないデバイスである。乾燥粉末吸入器は医学の技術分野でよく知られており、非限定的に、ＴＵＲＢＯＨＡＬＥＲ（登録商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）、ＡＩＲ（登録商標）吸入器（ＡＬＫＥＲＭＥＳ（登録商標）；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）；ＲＯＴＡＨＡＬＥＲ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）；及びＥＣＬＩＰＳＥ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）が含まれる。例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０４／０２６３８０、ＷＯ０４／０２４１５６、及びＷＯ０１／７８６９３も参照されたい。ＤＰＩデバイスは、インスリン及び成長ホルモンなどのポリペプチドの肺投与に使用されてきた。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、定量吸入器によって肺内投与することができる。これらの吸入器は、噴射剤に依存して、個別の用量の化合物を肺に送達する。追加のデバイス及び肺内投与方法は、例えば、米国特許出願公開第２００５０２７１６６０号及び同第２００９０１１０６７９号に記載されており、これらのそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0215】
いくつかの実施形態では、組成物は、例えば、薬学的に許容される溶液、懸濁液、または軟膏の形態で、眼への送達のために製剤化することができる。眼の治療に使用する製剤は、例えば、防腐剤、緩衝剤、等張化剤、抗酸化剤及び安定剤、非イオン性湿潤剤または清澄化剤、ならびに増粘剤などであるがこれらに限定されない追加の成分を含む、滅菌水性溶液の形態であり得る。本明細書に記載の製剤は、治療を必要とする対象（例えば、ＡＭＤに罹患している対象）の眼に、従来の方法、例えば点滴薬の形態で、または眼を１つ以上の組成物を含む治療溶液に浸すことによって、局所的に投与することができる。
【0216】
特定の実施形態では、眼の硝子体腔に薬物を導入するためのさまざまなデバイスが、本明細書に記載の組成物の投与に適切であり得る。例えば、米国特許出願公開第２００２／００２６１７６号は、硝子体腔内に突出して医薬品を硝子体腔内に送達するように、強膜を通して挿入することができる薬剤含有プラグを記載している。別の例では、米国特許第５，４４３，５０５号は、眼の内部への薬物の徐放のために、脈絡膜上腔または無血管領域への導入のための移植可能なデバイスを記載している。米国特許第５，７７３，０１９号及び同第６，００１，３８６号はそれぞれ、眼の強膜表面に取り付け可能な移植可能な薬物送達デバイスを開示している。治療薬を眼に送達するための追加の方法及びデバイス（例えば、経強膜パッチ及びコンタクトレンズを介した送達）は、例えば、Ａｍｂａｔｉ ａｎｄ Ａｄａｍｉｓ（２００２） Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ ２１（２）：１４５－１５１；Ｒａｎｔａ ａｎｄ Ｕｒｔｔｉ（２００６） Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ ５８（１１）：１１６４－１１８１；Ｂａｒｏｃａｓ ａｎｄ Ｂａｌａｃｈａｎｄｒａｎ（２００８） Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ５（１）：１－１０（１０）；Ｇｕｌｓｅｎ ａｎｄ Ｃｈａｕｈａｎ（２００４） Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ４５：２３４２－２３４７；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（２００７） Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｒｅｓ ３９：２４４－２５４；及びＰＣＴ公開番号ＷＯ０４／０７３５５１に記載され、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0217】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体の投与は、抗体をコードする核酸を対象に投与することによって達成される。本明細書に記載の治療用抗体をコードする核酸は、細胞内で抗体を発現及び産生するために使用できる核酸を送達するための遺伝子治療プロトコールの一部として使用される遺伝子構築物に組み込むことができる。そのような成分の発現構築物は、治療上有効な担体、例えば、成分遺伝子をインビボで細胞に効果的に送達できる任意の製剤または組成物中で投与することができる。アプローチとしては、組換えのレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、及び単純ヘルペスウイルス－１（ＨＳＶ－１）を含むウイルスベクター、または組換え細菌もしくは真核生物のプラスミドへの対象遺伝子の挿入が挙げられる。ウイルスベクターは細胞に直接トランスフェクトできる。プラスミドＤＮＡは、例えば、カチオン性リポソーム（リポフェクチン）または誘導体化されたポリリジンコンジュゲート、グラミシジンＳ、人工ウイルスエンベロープ、または他のそのような細胞内担体の助けを借りて送達することができ、さらに遺伝子構築物の直接注入またはＣａＰＯ４沈殿によって送達することができる（例えば、ＷＯ０４／０６０４０７を参照されたい）。適切なレトロウイルスの例としては、当業者に知られているｐＬＪ、ｐＺＩＰ、ｐＷＥ、及びｐＥＭが挙げられる（例えば、Ｅｇｌｉｔｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１３９５－１３９８；Ｄａｎｏｓ ａｎｄ Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９８８） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８５：６４６０－６４６４；Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８５：３０１４－３０１８；Ａｒｍｅｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９０） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８７：６１４１－６１４５；Ｈｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：８０３９－８０４３；Ｆｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：８３７７－８３８１；Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１８０２－１８０５；ｖａｎ Ｂｅｕｓｅｃｈｅｍ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：７６４０－７６４４；Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：６４１－６４７；Ｄａｉ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：１０８９２－１０８９５；Ｈｗｕ ｅｔ ａｌ．（１９９３） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５０：４１０４－４１１５；米国特許第４，８６８，１１６号、及び同第４，９８０，２８６号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／０７１３６、ＷＯ８９／０２４６８、ＷＯ８９／０５３４５、及びＷＯ９２／０７５７３を参照されたい）。別のウイルス遺伝子送達システムは、アデノウイルス由来のベクターを利用する（例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８８） ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６１６；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１－４３４；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｃｅｌｌ ６８：１４３－１５５を参照されたい）。アデノウイルス株Ａｄ５型ｄｌ３２４またはアデノウイルスの他の株（例えば、Ａｄ２、Ａｄ３、Ａｄ７など）に由来する適切なアデノウイルスベクターは、当業者に知られている。対象遺伝子の送達に有用なさらに別のウイルスベクター系は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。例えば、Ｆｌｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ７：３４９－３５６；Ｓａｍｕｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９８９） Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６３：３８２２－３８２８；及びＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９） Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６２：１９６３－１９７３を参照されたい。
【0218】
さまざまな実施形態では、皮下投与は、注射器、充填済み注射器、自動注射器（例えば、使い捨てまたは再使用可能）、ペン型注射器、パッチ注射器、ウェアラブル注射器、皮下注入セットを備えた携帯用注射器注入ポンプ、または皮下注射用の抗体薬と組み合わせるための他のデバイスなどのデバイスによって達成され得る。
【0219】
本開示の注射システムは、米国特許第５，３０８，３４１号に記載されているように送達ペンを使用することができる。糖尿病患者へのインスリンの自己送達に最も一般的に使用されるペンデバイスは、当該技術分野で周知である。このようなデバイスは、少なくとも１本の注射針（例えば、長さ約５～８ｍｍの３１ゲージの針）を含むことができ、通常、１回または複数回の治療単位用量の治療溶液が事前に充填されており、可能な限り痛みが少なく、対象への溶液の迅速な送達に有用である。１つの薬物送達ペンは、治療薬または他の薬物のバイアルを受け取ることができるバイアルホルダーを含む。ペンは完全に機械的なデバイスである場合もあれば、電子回路と組み合わせてユーザーに注射される医薬の投与量を正確に設定及び／または示す場合もある。例えば、米国特許第６，１９２，８９１号を参照されたい。いくつかの実施形態では、ペンデバイスの針は使い捨てであり、キットは、１つ以上の使い捨て交換針を含む。現在特徴付けられている組成物のいずれか１つの送達に適したペンデバイスはまた、例えば、米国特許第６，２７７，０９９号；同第６，２００，２９６号；及び同第６，１４６，３６１号に記載されている。これらのそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。マイクロニードルベースのペンデバイスは、例えば、米国特許第７，５５６，６１５号に記載されている。この開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｌｔｄ．製のＰｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｐｅｎ Ｉｎｊｅｃｔｏｒ（ＰＰＩ）デバイス、ＭＯＬＬＹ（商標）も参照されたい。
【0220】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、局所投与によって対象に治療的に送達することができる。本明細書で使用される場合、「局所投与」または「局所送達」は、組成物または薬剤の、血管系を介したその意図する標的組織または部位への輸送に依存しない送達を指すことができる。例えば、組成物は、組成物もしくは薬剤の注射もしくは移植によって、または組成物もしくは薬剤を含有する装置の注射もしくは移植によって送達され得る。特定の実施形態では、標的組織または部位の近くで局所投与した後、組成物もしくは薬剤、またはそれらの１つ以上の成分は、投与部位ではない意図された標的組織または部位に拡散し得る。
【0221】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、自己投与に適し得る単位剤形で存在し得る。このような単位剤形は、典型的には例えばバイアル、カートリッジ、充填済みシリンジ、または使い捨てペンなどの容器内で提供され得る。米国特許第６，３０２，８５５号に記載された投与装置のような投与装置も、例えば、本明細書に記載の注射システムと共に使用することができる。
【0222】
対象の障害を治療または予防することができる本明細書に記載の組成物の適切な用量は、例えば、治療対象の年齢、性別、及び体重、ならびに使用される特定の阻害剤化合物を含む、さまざまな因子に依存し得る。例えば、本明細書に記載の抗体を含むある組成物の異なる用量は、その抗体の異なる製剤の用量と比較して、ＣＤ１９関連障害を有する対象を治療するために必要とされ得る。対象に投与される用量に影響を及ぼす他の因子としては、例えば、障害の種類または重症度が挙げられる。例えば、あるＣＤ１９関連障害を有する対象は、別のＣＤ１９関連障害を有する対象とは異なる投与量の投与を必要とし得る。他の因子としては、例えば、同時にまたは以前に対象に影響を及ぼした他の医学的障害、対象の全体的な健康状態、対象の遺伝的素因、食事、投与期間、排泄速度、薬物の組み合わせ、及び対象に投与される任意の他の追加の治療法が挙げられ得る。任意の特定の対象に対する具体的な投与量及び治療レジメンもまた、治療する医師の判断に基づいて調整され得ることも理解されるべきである。
【0223】
本明細書に記載の組成物は、固定用量として、またはキログラムあたりのミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）の用量で投与することができる。いくつかの実施形態では、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の１つ以上に対する抗体の生成または他の宿主免疫応答を低減または回避するように用量を選択することもできる。決して限定することを意図するものではないが、本明細書に記載の組成物などの抗体の例示的な投与量としては、例えば、１～１０００ｍｇ／ｋｇ、１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～５０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～２５ｍｇ／ｋｇ、１～２０ｍｇ／ｋｇ、及び１～１０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。本明細書に記載の組成物の例示的な投与量としては、非限定的に、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。
【0224】
医薬溶液は、治療有効量の本明細書で記載の組成物を含むことができる。このような有効量は、当業者であれば、投与された組成物の効果、または複数の薬剤が使用される場合には組成物と１つ以上の追加の活性剤との組合せ効果に部分的に基づいて容易に決定することができる。本明細書に記載の組成物の治療有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに、組成物（及び１つ以上の追加の活性剤）が個体における所望の応答、例えば、少なくとも１つの状態パラメーターの改善、例えば、少なくとも１つのＣＤ１９関連障害の症状の改善を誘発する能力などの因子によってもまた変動し得る。例えば、本明細書に記載の組成物の治療有効量は、特定の障害、及び／または当該技術分野で知られている、もしくは本明細書に記載されている特定の障害の症状のうちのいずれか１つを阻害する（重症度を軽減する、もしくは発生を排除する）、及び／または予防することができる。治療有効量はまた、組成物の任意の毒作用または有害作用よりも治療的に有益な効果が上回る量である。
【0225】
本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの適切なヒト用量は、例えば第Ｉ相用量漸増試験でさらに評価することができる。例えば、ｖａｎ Ｇｕｒｐ ｅｔ ａｌ．（２００８） Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ８（８）：１７１１－１７１８；Ｈａｎｏｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．（２００７） Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １３（２，ｐａｒｔ １）：５２３－５３１；及びＨｅｔｈｅｒｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００６） Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ５０（１０）：３４９９－３５００を参照されたい。
【0226】
組成物の毒性及び治療効果は、細胞培養または実験動物（例えば、ＣＤ１９関連障害のいずれかの動物モデル）における既知の薬学的手順によって決定することができる。これらの手順は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対する致死量）及びＥＤ５０（集団の５０％における治療有効用量）を決定するために使用することができる。毒性と治療効果と間の用量比は、治療指数であり、それはＬＤ５０／ＥＤ５０の比率として表すことができる。高い治療指数を示す本明細書に記載の組成物が好ましい。有毒な副作用を示す組成物が使用される場合があるが、そのような化合物を影響を受ける組織の部位に標的化する送達システムを設計し、正常細胞への潜在的な損傷を最小限に抑え、それによって副作用を軽減するように注意する必要がある。
【0227】
当業者は、細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータを、ヒトで使用するための投与量範囲を製剤化する際に使用できることを理解するであろう。本明細書に記載の組成物の適切な投与量は、一般に、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ５０を含む組成物の循環濃度の範囲内にある。投与量は、採用された剤形及び／または使用される投与経路に依存して、この範囲内で変動する可能性がある。本明細書に記載の組成物に関して、治療有効量は、最初に細胞培養分析から推定することができる。用量は、細胞培養で決定されるＩ０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する抗体の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて製剤化することができる。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用できる。血漿中のレベルは、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。いくつかの実施形態では、例えば、局所投与（例えば、眼または関節への）が望まれる場合、細胞培養または動物モデルを使用して、局所部位内で治療有効濃度を達成するのに必要な用量を決定することができる。
【0228】
併用療法
さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、対象への少なくとも１つの追加の薬剤の投与をさらに含む一連の治療に含まれ得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体と組み合わせて投与される追加の薬剤は、薬剤化学療法剤であり得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗体と組み合わせて投与される追加の薬剤は、炎症を阻害する薬剤であり得る。
さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体は、対象への少なくとも１つの追加の薬剤の投与をさらに含む一連の治療に含まれ得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体と組み合わせて投与される追加の薬剤は、薬剤化学療法剤であり得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗体と組み合わせて投与される追加の薬剤は、炎症を阻害する薬剤であり得る。
【0229】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９に対する特異性を有する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、がん細胞に結合し、がん細胞に治療剤を送達し、ヒトＣＤ１９を発現するがん細胞を殺傷するために、治療剤（例えば、化学療法剤及び放射性原子）にコンジュゲート（例えば、連結）することができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は治療剤に連結される。いくつかの実施形態では、治療剤は、化学療法剤、サイトカイン、放射性原子、ｓｉＲＮＡ、または毒素である。いくつかの実施形態では、治療薬は化学療法薬である。いくつかの実施形態では、薬剤は放射性原子である。
【0230】
いくつかの実施形態では、方法は、ＣＤ１９関連障害の他の治療法と併せて実施することができる。例えば、組成物は、化学療法と同時に、その前に、またはその後に対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、養子療法の方法と同時に、その前に、またはその後に対象に投与することができる。
【0231】
さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体と組み合わせて投与される追加の薬剤は、抗ＣＤ１９抗体と同時に、抗ＣＤ１９抗体と同じ日に、または抗ＣＤ１９抗体と同じ週に投与され得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体と組み合わせて投与される追加の薬剤は、抗ＣＤ１９抗体と共に単一製剤で投与され得る。特定の実施形態では、追加の薬剤は、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の投与から時間的に離れた様式で、例えば、抗ＣＤ１９抗体の投与の１時間以上前もしくは後に、１日以上前もしくは後に、１週間以上前もしくは後に、または１か月以上前もしくは後に投与される。さまざまな実施形態では、１つ以上の追加の薬剤の投与頻度は、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の投与頻度と同じ、同様、または異なり得る。
【0232】
併用療法に包含されるのは、本明細書に記載の２つの異なる抗体の投与を含む治療レジメン、ならびに／または複数の製剤及び／もしくは投与経路による本明細書に記載の抗体の投与を含む治療レジメンである。
【0233】
いくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の追加の治療薬、例えば、対象におけるＣＤ１９関連障害（例えば、がんまたは自己免疫障害）を治療または予防するための追加の治療とともに製剤化することができる。対象におけるＣＤ１９関連障害を治療するための追加の薬剤は、治療される特定の障害に応じて変化するが、非限定的に、リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、オスファミド、カルボプラチン、エトポシド、デキサメタゾン、シタラビン、シスプラチン、シクロホスファミド、またはフルダラビンを含むことができる。
【0234】
本明細書に記載の組成物は、以前に、または現在投与されている治療を置き換えるかまたは増強することができる。例えば、本明細書に記載の組成物で治療すると、１つ以上の追加の活性剤の投与は、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体の投与に続いて、停止または減少することができ、例えば、より低いレベルで、例えば、ＣＤ１９結合について交差競合する参照抗体のより低いレベルで投与される。いくつかの実施形態では、以前の治療の投与を維持することができる。いくつかの実施形態では、組成物のレベルが治療効果を提供するのに十分なレベルに達するまで、以前の治療が維持される。２つの治療法は組み合わせて投与することができる。
【0235】
組換え遺伝子技術
本開示に従って、当業者の範囲内の従来の分子生物学、微生物学、及び組換えＤＮＡ技術を使用することができる。そのような技術は文献（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ＆ Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ（Ｄ． Ｎ． Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ． １９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ． Ｊ． Ｇａｉｔ ｅｄ． １９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ． Ｄ． Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ． Ｊ． Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．（１９８５））；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ． Ｄ． Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ． Ｊ． Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４））；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ． Ｉ． Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８６））；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６））；Ｂ． Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ． Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４）を参照されたい）に記載されている。
本開示に従って、当業者の範囲内の従来の分子生物学、微生物学、及び組換えＤＮＡ技術を使用することができる。そのような技術は文献（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ＆ Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ（Ｄ． Ｎ． Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ． １９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ． Ｊ． Ｇａｉｔ ｅｄ． １９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ． Ｄ． Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ． Ｊ． Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．（１９８５））；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ． Ｄ． Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ． Ｊ． Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４））；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ． Ｉ． Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８６））；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６））；Ｂ． Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ． Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４）を参照されたい）に記載されている。
【0236】
本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体などのポリペプチドをコードする核酸などの遺伝子の組換え発現は、ポリペプチドをコードする核酸を含む発現ベクターの構築を含み得る。ポリヌクレオチドが得られると、ポリペプチドの産生のためのベクターは、当該技術分野で知られている技術を使用する組換えＤＮＡ技術によって産生することができる。既知の方法を使用して、ポリペプチドコード配列と適切な転写及び翻訳制御シグナルとを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボ遺伝子組換えが挙げられる。
【0237】
発現ベクターを従来の技術によって宿主細胞に導入してもよく、次いでトランスフェクトした細胞を従来の技術によって培養して、ポリペプチドを産生してもよい。
【0238】
本明細書において言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。さらに、物質、方法、及び例は、例示にすぎず、限定を意図しない。別途定義されない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、本発明の所属する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書において記載されているものと類似または同等の方法及び物質を本発明の実施または試験において使用することができるが、適切な方法及び物質を本明細書に記載する。
【実施例】
【0239】
以下の実施例は、本発明を作成及び実施する好ましい様式のいくつかを説明するものである。しかしながら、これらの実施例は単に例示を目的としており、本発明の範囲を限定することを意図していないことを理解すべきである。
【0240】
実施例１ 抗ＣＤ１９抗体の同定と特性評価
本実施例は、抗ＣＤ１９抗体の特性評価を示す。ヒト抗ＣＤ１９抗体は、Ａｄｉｍａｂ酵母に由来し、産生された。抗原は、ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１４２５）を使用してビオチン化された。抗原は約１ｍｇ／ｍＬに濃縮され、１：７．５モル比のビオチン化試薬を添加する前に緩衝液をＰＢＳに交換された。溶液中の遊離ビオチンを除去するための別の緩衝液交換の前に、混合物を４℃で一晩保持した。ビオチン化は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ上の標識タンパク質のストレプトアビジンセンサー結合によって確認された。
本実施例は、抗ＣＤ１９抗体の特性評価を示す。ヒト抗ＣＤ１９抗体は、Ａｄｉｍａｂ酵母に由来し、産生された。抗原は、ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１４２５）を使用してビオチン化された。抗原は約１ｍｇ／ｍＬに濃縮され、１：７．５モル比のビオチン化試薬を添加する前に緩衝液をＰＢＳに交換された。溶液中の遊離ビオチンを除去するための別の緩衝液交換の前に、混合物を４℃で一晩保持した。ビオチン化は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ上の標識タンパク質のストレプトアビジンセンサー結合によって確認された。
【0241】
８つのナイーブなヒト合成酵母ライブラリーのそれぞれの約１０９の多様性は、以前に記載されたように増殖された（例えば、Ｙ．Ｘｕ ｅｔ ａｌ，ＰＥＤＳ ２６（１０），６６３－７０（２０１３）；ＷＯ２００９０３６３７９；ＷＯ２０１０１０５２５６；及びＷＯ２０１２００９５６８を参照されたい。）
【0242】
選択の最初の２ラウンドでは、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳシステムを利用した磁気ビーズ選別技術を、以前に記載されたように行った（例えば、Ｓｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８６（１－２），１４１－１５３（２００４）を参照されたい）。簡潔に述べると、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリー）は、洗浄緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中、３０℃で３０分間、ビオチン化抗原とインキュベートした。４０ｍＬの氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを２０ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、ストレプトアビジンＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（５００μＬ）を酵母に添加し、４℃で１５分間インキュベートした。次いで、酵母をペレット化し、５ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムにロードした。５ｍＬをロードした後、カラムを３ｍＬの洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、カラムを磁場から取り出し、酵母を５ｍＬの増殖培地で溶出し、一晩増殖させた。
【0243】
選択の第３ラウンドは、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）を使用して実行された。約２×１０７個の酵母をペレット化し、洗浄緩衝液で３回洗浄し、平衡条件下で１００～２００ｎＭのビオチン化抗原とともに３０℃でインキュベートした。ラウンド３のＦＡＣＳから選択された酵母産出物と共に、ビオチン化されたＮＡＬＭ－６及びＲａｊｉの細胞をインキュベートすることによって、選択の第４及び第５ラウンドを行った。インキュベーション後、前洗浄したＭ－２８０ ストレパビジンＤｙｎａｂｅａｄｓ（カタログ番号６０２１０）を、酵母／哺乳動物細胞複合体に添加し、インキュベートした。次に、ＤｙｎａＭａｇ－２磁石を使用して複合体を分離し、結合していない上清を除去した。ビーズ／細胞複合体を、１ｍＬの選択緩衝液で３回洗浄した。次いで、捕捉された複合体を、増殖用の酵母増殖培地を含むフラスコに移した。選択の第６ラウンドでは、増殖した酵母を、ＮＡＬＭ－６／Ｒａｊｉ細胞選択、１００ｎＭの組み換えＣＤ１９抗原による選択、または非特異的抗体を除去するための多特異性試薬（ＰＳＲ）によるネガティブ選択のいずれかの追加のラウンドにかけた。
【0244】
ＰＳＲの枯渇のために、以前に記載されたように、ライブラリーをビオチン化ＰＳＲ試薬の１：１０希釈でインキュベートした（例えば、Ｙ．Ｘｕ ｅｔ ａｌ，ＰＥＤＳ ２６（１０），６６３－７０（２０１３）を参照されたい）。次いで、酵母を洗浄緩衝液で２回洗浄し、１：１００希釈したヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトカッパ－ＦＩＴＣ（ＬＣ－ＦＩＴＣ）（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０６２－０２）及び１：５００希釈したストレプトアビジン－ＡＦ６３３（ＳＡ－６３３）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｓ２１３７５）または１：５０希釈したＥｘｔｒａｖｉｄｉｎ－ｐｈｙｃｏｅｒｔｈｙｒｉｎ（ＥＡ－ＰＥ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｅ４０１１）の二次試薬のいずれかで４℃で１５分間染色した。氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．３ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、ストレーナーでキャップした選別チューブに移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して選別を行い、所望の特性を持つ抗体を選択するためにソートゲートを決定した。所望の特性をすべて備えた母集団が得られるまで、選択のラウンドを繰り返した。選別の最終ラウンドの後、酵母を播種し、特性評価のために個々のコロニーをつつきとった。
【0245】
軽鎖の多様化
ナイーブ産出物からの重鎖を使用して、追加の選択ラウンドに使用される軽鎖多様化ライブラリーを調製した。重鎖プラスミドを酵母から抽出し、Ｅ．ｃｏｌｉで増殖させた後、Ｅ．ｃｏｌｉから精製し、５×１０６の多様性を有する軽鎖ライブラリーに形質転換した。上記のようにこれらのライブラリーに対して選択を行った。すなわち、ＭＡＣＳを１ラウンド、ＲａｊｉまたはＮＡＬＭ－６の細胞による２ラウンドの細胞選択をし、続いて組換えＣＤ１９抗原を使用して第４ラウンドのＦＡＣＳ選択をした。軽鎖の多様化に特異的に、Ｒａｊｉ及びＮＡＬＭ－６の細胞選択には、ＣＤ１９遺伝子の標的化遺伝子ノックアウトを受けた操作されたＲａｊｉ及びＮＡＬＭ－６の細胞による最初のネガティブ選択が組み込まれた。ＣＤ１９ノックアウト細胞による枯渇に続いて、内因性ＣＤ１９と過剰発現の両方を発現する操作されたＲａｊｉ及びＮＡＬＭ－６の細胞を使用して、ポジティブ選択を実行した。異なるＦＡＣＳ選択ラウンドで、ライブラリーを（多特異性試薬）ＰＳＲ結合、種交差反応性、及び抗原滴定による親和性圧力について評価した。所望の特徴を有する集団を得るために、選別が行われた。上記のそれぞれのＦＡＣＳ選択ラウンドからのそれぞれのコロニーを、配列決定及び特性評価のためにつつきとった。
ナイーブ産出物からの重鎖を使用して、追加の選択ラウンドに使用される軽鎖多様化ライブラリーを調製した。重鎖プラスミドを酵母から抽出し、Ｅ．ｃｏｌｉで増殖させた後、Ｅ．ｃｏｌｉから精製し、５×１０６の多様性を有する軽鎖ライブラリーに形質転換した。上記のようにこれらのライブラリーに対して選択を行った。すなわち、ＭＡＣＳを１ラウンド、ＲａｊｉまたはＮＡＬＭ－６の細胞による２ラウンドの細胞選択をし、続いて組換えＣＤ１９抗原を使用して第４ラウンドのＦＡＣＳ選択をした。軽鎖の多様化に特異的に、Ｒａｊｉ及びＮＡＬＭ－６の細胞選択には、ＣＤ１９遺伝子の標的化遺伝子ノックアウトを受けた操作されたＲａｊｉ及びＮＡＬＭ－６の細胞による最初のネガティブ選択が組み込まれた。ＣＤ１９ノックアウト細胞による枯渇に続いて、内因性ＣＤ１９と過剰発現の両方を発現する操作されたＲａｊｉ及びＮＡＬＭ－６の細胞を使用して、ポジティブ選択を実行した。異なるＦＡＣＳ選択ラウンドで、ライブラリーを（多特異性試薬）ＰＳＲ結合、種交差反応性、及び抗原滴定による親和性圧力について評価した。所望の特徴を有する集団を得るために、選別が行われた。上記のそれぞれのＦＡＣＳ選択ラウンドからのそれぞれのコロニーを、配列決定及び特性評価のためにつつきとった。
【0246】
抗体産生及び精製
酵母クローンは飽和状態まで増殖し、その後、振とうしながら３０℃で４８時間誘導された。誘導後、酵母細胞をペレット化し、上清を精製のために回収した。プロテインＡカラムを使用してＩｇＧを精製し、ｐＨ２．０の酢酸で溶出した。
酵母クローンは飽和状態まで増殖し、その後、振とうしながら３０℃で４８時間誘導された。誘導後、酵母細胞をペレット化し、上清を精製のために回収した。プロテインＡカラムを使用してＩｇＧを精製し、ｐＨ２．０の酢酸で溶出した。
【0247】
ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＫＤ測定
これらの抗ＣＤ１９抗体は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔシステム（Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４、概して以前に記載されたように（例えば、Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ，Ｍａｂｓ ５（２），２７０－２７８（２０１３）を参照されたい）において可溶性ＣＤ１９に対するそれらの結合親和性について試験された。簡潔に述べると、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、ＡＨＣセンサーにＩｇＧをオンラインでロードすることにより実行された。抗体を抗ヒトＩｇＧピンに固定し、可溶性ＣＤ１９－ＨＳＡ融合タンパク質（ヒト血清アルブミンに融合したＣＤ１９細胞外ドメイン）に結合させた。センサーは、アッセイ緩衝液で３０分間オフラインで平衡化され、次いでベースラインの確立のために６０秒間オンラインでモニターされた。ＩｇＧをロードしたセンサーを１００ｎＭの可溶性ＣＤ１９－ＨＳＡ融合タンパク質抗原に３分間曝露し、その後、オフレート測定のためにアッセイ緩衝液に３分間移した。すべての動力学は、１：１結合モデルを使用して分析した。結合動態の概要を表３に示す。例示的な抗体の親和性は、８ｎＭ～２０ｎＭの範囲であった。表３に示されるすべての抗ＣＤ１９抗体のｖＨは、配列番号５のｖＨ配列を含む。
これらの抗ＣＤ１９抗体は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔシステム（Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４、概して以前に記載されたように（例えば、Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ，Ｍａｂｓ ５（２），２７０－２７８（２０１３）を参照されたい）において可溶性ＣＤ１９に対するそれらの結合親和性について試験された。簡潔に述べると、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、ＡＨＣセンサーにＩｇＧをオンラインでロードすることにより実行された。抗体を抗ヒトＩｇＧピンに固定し、可溶性ＣＤ１９－ＨＳＡ融合タンパク質（ヒト血清アルブミンに融合したＣＤ１９細胞外ドメイン）に結合させた。センサーは、アッセイ緩衝液で３０分間オフラインで平衡化され、次いでベースラインの確立のために６０秒間オンラインでモニターされた。ＩｇＧをロードしたセンサーを１００ｎＭの可溶性ＣＤ１９－ＨＳＡ融合タンパク質抗原に３分間曝露し、その後、オフレート測定のためにアッセイ緩衝液に３分間移した。すべての動力学は、１：１結合モデルを使用して分析した。結合動態の概要を表３に示す。例示的な抗体の親和性は、８ｎＭ～２０ｎＭの範囲であった。表３に示されるすべての抗ＣＤ１９抗体のｖＨは、配列番号５のｖＨ配列を含む。
【0248】
【表3】
【0249】
実施例２． 抗ＣＤ１９抗体の細胞上結合
抗ＣＤ１９抗体の細胞上結合は、内因性ＣＤ１９を発現するＲａｊｉ及びＮＡＬＭ－６の細胞株に対するフローサイトメトリーによって評価された。それぞれの抗体は、ＣＤ１９陽性の親系統と対応するＣＤ１９ノックアウトの両方の、Ｒａｊｉ及びＮＡＬＭ－６の系統で試験され、細胞上の標的特異的結合を確認した。図１に示すフローサイトメトリークロマトグラムは、対応するノックアウト細胞株のバックグラウンド結合よりもＣＤ１９陽性株で１～２ｌｏｇシフトしていることを示している。
抗ＣＤ１９抗体の細胞上結合は、内因性ＣＤ１９を発現するＲａｊｉ及びＮＡＬＭ－６の細胞株に対するフローサイトメトリーによって評価された。それぞれの抗体は、ＣＤ１９陽性の親系統と対応するＣＤ１９ノックアウトの両方の、Ｒａｊｉ及びＮＡＬＭ－６の系統で試験され、細胞上の標的特異的結合を確認した。図１に示すフローサイトメトリークロマトグラムは、対応するノックアウト細胞株のバックグラウンド結合よりもＣＤ１９陽性株で１～２ｌｏｇシフトしていることを示している。
【0250】
図２Ａ～２Ｃに示す段階希釈フローサイトメトリーの結果は、ＮＡＬＭ－６細胞に対する飽和結合を示している。曲線から計算されたＥＣ５０値を表４に示す。例示的な抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも０．２ｎＭの高親和性でＣＤ１９陽性ＮＡＬＭ－６細胞に結合する。可溶性タンパク質に対してＣＤ１９陽性細胞で観察されたより高い親和性は、これらの抗体が、ＣＤ１９－ＨＳＡ融合タンパク質よりも細胞上により自然に提示される可能性があるエピトープに結合することを示唆している。
【0251】
【表4】
【0252】
実施例３． 交差競合によるエピトープビニング
交差競合エピトープビニングアッセイを実施して、抗ＣＤ１９抗体のいずれかが、参照抗ＣＤ１９抗体であるデニンツズマブからの固有の非競合エピトープに結合したかどうかを決定した。エピトープビニング／リガンドブロッキングは、サンドイッチ形式のクロスブロッキングアッセイを使用して実行された。対照の抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサーにロードし、センサー上の占有されていないＦｃ結合部位を無関係なヒトＩｇＧ１抗体でブロッキングした。次いで、センサーを１００ｎＭの標的抗原に曝露した後、二次抗標的抗体またはリガンドに曝露した。抗原結合後の二次抗体またはリガンドによるさらなる結合は、占有されていないエピトープ（非競合）を示し、結合がないことはエピトープブロッキング（競合またはリガンドブロッキング）を示す。
交差競合エピトープビニングアッセイを実施して、抗ＣＤ１９抗体のいずれかが、参照抗ＣＤ１９抗体であるデニンツズマブからの固有の非競合エピトープに結合したかどうかを決定した。エピトープビニング／リガンドブロッキングは、サンドイッチ形式のクロスブロッキングアッセイを使用して実行された。対照の抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサーにロードし、センサー上の占有されていないＦｃ結合部位を無関係なヒトＩｇＧ１抗体でブロッキングした。次いで、センサーを１００ｎＭの標的抗原に曝露した後、二次抗標的抗体またはリガンドに曝露した。抗原結合後の二次抗体またはリガンドによるさらなる結合は、占有されていないエピトープ（非競合）を示し、結合がないことはエピトープブロッキング（競合またはリガンドブロッキング）を示す。
【0253】
抗ＣＤ１９参照対照のデニンツズマブを抗ヒトＩｇＧピンで捕捉し、液相で可溶性ＣＤ１９をロードした。解離ステップを実行する代わりに、それぞれの試験抗体で２回目のローディングを実行した。デニンツズマブからの競合しないエピトープに結合する抗体は、トレース上の新しい結合イベントを反映するが、同じエピトープを有する抗体は、平坦なトレースによって反映されるデニンツズマブによってブロックされる。図３に示す結果は、それぞれの抗体がデニンツズマブと競合するエピトープに結合することを示している。これらの結果は、抗体が参照抗ＣＤ１９抗体デニンツズマブと競合するＣＤ１９上の同様のエピトープに結合することを示唆している。
【0254】
実施例４． 抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖのＣＤ１９結合の特性評価
共通のエピトープに対する相対的な競合は、Ｂｉａｃｏｒｅ ＳＰＲアッセイで評価された。このアッセイでは、抗ＣＤ１９抗体２（配列番号４２）のｖＨ及びｖＬを含むｓｃＦｖを、ＣＤ１９－Ｔ２バインダー、ＳＪ２５ｃ１、及びＦＭＣ６３（Ｋｙｍｒｉａｈの「チサゲンレクルユーセル」及びＹｅｓｃａｒｔａ の「アキシカブタゲン シロルユーセル」）に対する相対的な競合について評価された。抗体２ ｓｃＦｖをＢｉａｃｏｒｅ ＣＭ５チップに固定し、次いで、１００ｎＭのＣＤ１９－ＨＳＡ－ｈｉｓとそれぞれの競合ｓｃＦｖの滴定（０、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、及び８００ｎＭ）の混合物を結合させた。３分間の競合結合ステップの後、緩衝液ＨＢＳ－ＥＰ（３００ｍＭのＮａＣｌ）で５分間の解離を行った。
共通のエピトープに対する相対的な競合は、Ｂｉａｃｏｒｅ ＳＰＲアッセイで評価された。このアッセイでは、抗ＣＤ１９抗体２（配列番号４２）のｖＨ及びｖＬを含むｓｃＦｖを、ＣＤ１９－Ｔ２バインダー、ＳＪ２５ｃ１、及びＦＭＣ６３（Ｋｙｍｒｉａｈの「チサゲンレクルユーセル」及びＹｅｓｃａｒｔａ の「アキシカブタゲン シロルユーセル」）に対する相対的な競合について評価された。抗体２ ｓｃＦｖをＢｉａｃｏｒｅ ＣＭ５チップに固定し、次いで、１００ｎＭのＣＤ１９－ＨＳＡ－ｈｉｓとそれぞれの競合ｓｃＦｖの滴定（０、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、及び８００ｎＭ）の混合物を結合させた。３分間の競合結合ステップの後、緩衝液ＨＢＳ－ＥＰ（３００ｍＭのＮａＣｌ）で５分間の解離を行った。
【0255】
ＣＤ１９抗体１ ｓｃＦｖは、このアッセイで参照抗体のすべてと競合する（データは示さず）。ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖは、最低濃度（５０ｎＭ）でもＣＤ１９結合について完全に競合した。アッセイは、ＣＤ１９への少量の結合が保存された２５ｎＭを含むように繰り返され、これらの抗体が、ＳＪ２５Ｃ１ ｓｃＦｖと類似しているがわずかにそれよりも高い親和性でＣＤ１９に結合することを示唆している。これらのデータは、試験したバインダーのすべてが、ＣＤ１９上の重複するエピトープへの結合について競合することを示唆している。
【0256】
抗ＣＤ１９抗体が非特異的膜タンパク質に結合する可能性をさらに評価するために、本明細書に記載のＣＤ１９抗体由来のｓｃＦｖを表面膜タンパク質（ＳＭＰ）アッセイで評価した。ＳＭＰアッセイは、プレート上にコーティングされたヒトＨＥＫ－２９３または昆虫ＳＦ９細胞膜を用いたＥＬＩＳＡベースのアッセイで、試験抗体によるこれらの膜への非特異的結合を試験する。ＳＰＲアッセイと同様に、内部対照の高非特異結合抗体及び低非特異結合抗体（高非特異結合対照、ｓｃ２０９及び低非特異結合対照、５ｆ９）が含まれた。得られた結果は、ＨＥＫ－２９３膜またはＳＦ９膜のいずれかでのＣＤ１９抗体に対する結合活性が低く、上記のＳＰＲアッセイと一致していた。
【0257】
他の実施形態
本発明の多くの実施形態が本明細書に記載されているが、本開示及び実施例は、本発明の他の方法及び組成物を提供するために変更され得る。したがって、本発明の範囲が、一例として提示されている特定の実施形態に加えて、添付の特許請求の範囲によって定義されるべきであることが理解されるであろう。本明細書に引用されるすべての参照は、その全体が参照により組み込まれている。
本発明の多くの実施形態が本明細書に記載されているが、本開示及び実施例は、本発明の他の方法及び組成物を提供するために変更され得る。したがって、本発明の範囲が、一例として提示されている特定の実施形態に加えて、添付の特許請求の範囲によって定義されるべきであることが理解されるであろう。本明細書に引用されるすべての参照は、その全体が参照により組み込まれている。
【図1-1】
【図1-2】
【図2】
【図3】
【配列表】
【国際調査報告】