特表 2023-524047 細胞の培養方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-06-08

(54)【発明の名称】細胞の培養方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/0783 20100101AFI20230601BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230601BHJP

   C12N 5/0735 20100101ALI20230601BHJP

   C12N 5/0789 20100101ALI20230601BHJP

   A61K 35/15 20150101ALI20230601BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20230601BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230601BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230601BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230601BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20230601BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20230601BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20230601BHJP

   C12N 15/867 20060101ALN20230601BHJP

   C12N 15/864 20060101ALN20230601BHJP

   C12N 15/861 20060101ALN20230601BHJP

   C12N 15/866 20060101ALN20230601BHJP

【ＦＩ】

C12N5/0783

C12N5/10

C12N5/0735

C12N5/0789

A61K35/15

A61K35/12

A61K35/76

A61P35/00

A61P35/02

C12N15/13

C12N15/12

C12N15/62 Z

C12N15/867 Z

C12N15/864 100Z

C12N15/861 Z

C12N15/866 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022566107

(86)(22)【出願日】2021-04-28

(85)【翻訳文提出日】2022-12-23

(86)【国際出願番号】 US2021029762

(87)【国際公開番号】W WO2021222479

(87)【国際公開日】2021-11-04

(31)【優先権主張番号】63/016,907

(32)【優先日】2020-04-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522421853

【氏名又は名称】ライエル・イミュノファーマ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＬＹＥＬＬ ＩＭＭＵＮＯＰＨＡＲＭＡ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100138911

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻井 陽子

(72)【発明者】

【氏名】ボドナラ，スマン クマール

(72)【発明者】

【氏名】アイル，ロバート ラングランド

(72)【発明者】

【氏名】レスティフォ，ニコラス ピー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA93X

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065BB02

4B065BB03

4B065BB15

4B065BB19

4B065BB34

4B065BB40

4B065CA24

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB64

4C087BC83

4C087CA12

4C087NA05

4C087ZB26

4C087ZB27

(57)【要約】

本開示は、細胞、例えば、万能性細胞、多能性細胞、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を、少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含む培地中で培養する方法を提供し、培地は高張ではない。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法は、細胞集団中において低分化細胞の数を増加させる。いくつかの態様では、培養細胞は、例えば、キメラ抗原受容体または操作Ｔ細胞受容体を含むように操作される。いくつかの態様では、細胞は、それを必要とする対象に投与される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

エクスビボまたはインビトロ培養中のヒト免疫細胞及び／またはヒト幹細胞の収量を、前記ヒト免疫細胞及び／または前記ヒト幹細胞の幹細胞性を高めながら増加させる方法であって、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞及び／またはヒト幹細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度が１１０ｍＭ～１４０ｍＭである、前記方法。

【請求項2】

免疫療法のためのヒト免疫細胞及び／またはヒト幹細胞の集団の調製方法であって、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞及び／またはヒト幹細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度が１１０ｍＭ～１４０ｍＭである、前記方法。

【請求項3】

免疫療法を目的とした、エクスビボまたはインビトロ培養中におけるヒト免疫細胞の幹細胞性の増加方法であって、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度が１１０ｍＭ～１４０ｍＭである、前記方法。

【請求項4】

前記カリウムイオン及び前記ＮａＣｌの総濃度が、１２０ｍＭ～１４０ｍＭである、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

前記カリウムイオンの濃度が、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、及び約８０ｍＭからなる群から選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記カリウムイオンの濃度が５０ｍＭ～６０ｍＭである、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記カリウムイオンの濃度が約５０ｍＭである、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記カリウムイオンの濃度が約５０ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が９０ｍＭ未満である、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記カリウムイオンの濃度が約５５ｍＭである、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記カリウムイオンの濃度が約５５ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が８５ｍＭ未満である、請求項１～６及び９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記カリウムイオンの濃度が約６０ｍＭである、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記カリウムイオンの濃度が約６０ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が８０ｍＭ未満である、請求項１～６及び１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記カリウムイオンの濃度が、６０ｍＭ～７０ｍＭである、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記カリウムイオンの濃度が約６５ｍＭである、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記カリウムイオンの濃度が約６５ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が７５ｍＭ未満である、請求項１３または１４に記載の方法。

【請求項16】

前記カリウムイオンの濃度が約７０ｍＭである、請求項１３に記載の方法。

【請求項17】

前記カリウムイオンの濃度が約７０ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が７０ｍＭ未満である、請求項１３または１６に記載の方法。

【請求項18】

前記カリウムイオンの濃度が約７５ｍＭである、請求項１３に記載の方法。

【請求項19】

前記カリウムイオンの濃度が約７５ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が６５ｍＭ未満である、請求項１３または１８に記載の方法。

【請求項20】

前記培地が１つ以上のサイトカインをさらに含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記１つ以上のサイトカインが、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５を含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項23】

前記細胞がヒト免疫細胞を含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記ヒト免疫細胞が、Ｔ細胞、ＴＩＬ、ＮＫ細胞、ＴＩＬ、Ｔｒｅｇ、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記細胞がヒト幹細胞を含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記細胞が、操作Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記培地が、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組合せをさらに含む、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記培地が細胞増殖剤をさらに含む、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

前記細胞増殖剤が、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤、ＡＣＬＹ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、ＣＡＬ１０１、ＩＣ８７１１４、及びそれらの任意の組合せから選択される、請求項２７に記載の方法。

【請求項32】

前記ＡＫＴ阻害剤が、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、ＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ、及びそれらの任意の組合せから選択される、請求項３０に記載の方法。

【請求項33】

前記培地が、出発細胞集団と比較した場合に最終細胞産物において、
ａ．低分化及び／または未分化細胞の数及び／またはパーセンテージを増加できる、
ｂ．形質導入効率を増加できる、
ｃ．幹様免疫細胞を増加できる、
ｄ．インビボ生存能を増加できる、
ｅ．分化能を増加できる、
ｆ．細胞疲弊を回避できる、あるいは
ｇ．それらの任意の組合せ
である、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項34】

前記培地がグルコースをさらに含む、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記グルコースの濃度が約１０ｍＭ超である、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記グルコースの濃度が、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである、請求項３４または３５に記載の方法。

【請求項37】

前記グルコースの濃度が、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記グルコースの濃度が、約１５．４ｍＭ、約１５．９ｍＭ、約１６．３ｍＭ、約１６．８ｍＭ、約１７．２ｍＭ、または約１７．７ｍＭである、請求項３４～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

前記培地がカルシウムイオンをさらに含む、請求項１～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

前記カルシウムイオンの濃度が約０．４ｍＭ超である、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記カルシウムイオンの濃度が、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである、請求項３９または４０に記載の方法。

【請求項42】

前記カルシウムイオンの濃度が、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである、請求項３９～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記培地が、約５０ｍＭのカリウムイオン及び
（ｉ）約８０．５ｍＭのＮａＣｌ、
（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース、
（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオン、または
（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せ
を含む、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記培地が、約５５ｍＭのカリウムイオン及び
（ｉ）約７６ｍＭのＮａＣｌ、
（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース、
（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオン、または
（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せ
を含む、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

前記培地が、約６０ｍＭのカリウムイオン及び
（ｉ）約７２．２ｍＭのＮａＣｌ、
（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース、
（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオン、または
（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せ
を含む、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

前記培地が、約６５ｍＭのカリウムイオン及び
（ｉ）約６７．６ｍＭのＮａＣｌ、
（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース、
（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオン、または
（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せ
を含む、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

前記培地が、約７０ｍＭのカリウムイオン及び
（ｉ）約６３．９ｍＭのＮａＣｌ、
（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース、
（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオン、または
（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せ
を含む、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

前記培地が、約７５ｍＭのカリウムイオン及び
（ｉ）約５９．３ｍＭのＮａＣｌ、
（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース、
（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオン、または
（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せ
を含む、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記培地が、約８０ｍＭのカリウムイオン及び
（ｉ）約５５．６ｍＭのＮａＣｌ、
（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース、
（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオン、または
（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せ
を含む、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記免疫細胞が、培養後にＣＤ３＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、もしくはＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組合せである、請求項１～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記培地が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－２を含む、請求項１～５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記ＩＬ－２の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記ＩＬ－２の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、請求項５１または５２に記載の方法。

【請求項54】

前記ＩＬ－２の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、請求項５１または５２に記載の方法。

【請求項55】

前記培地が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－２１を含む、請求項１～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項56】

前記ＩＬ－２１の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

前記ＩＬ－２１の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、請求項５５または５６に記載の方法。

【請求項58】

前記ＩＬ－２１の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、請求項５５または５６に記載の方法。

【請求項59】

前記培地が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－７を含む、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

前記ＩＬ－７の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、請求項５６に記載の方法。

【請求項61】

前記ＩＬ－７の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、請求項５９または６０に記載の方法。

【請求項62】

前記ＩＬ－７の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、請求項５９または６０に記載の方法。

【請求項63】

前記培地が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－１５を含む、請求項１～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

前記ＩＬ－１５の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、請求項６３に記載の方法。

【請求項65】

前記ＩＬ－１５の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、請求項６３または６４に記載の方法。

【請求項66】

前記ＩＬ－１５の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、請求項６３または６４に記載の方法。

【請求項67】

前記免疫細胞及び／または前記幹細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作Ｔ細胞受容体、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項１～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

前記免疫細胞及び／または前記幹細胞が、培養後にヒト対象に投与される、請求項１～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項69】

前記細胞が、さらにベクターで形質導入される、請求項１～６８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項70】

前記ベクターが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴＣＲ模倣物をコードする導入遺伝子を含む、請求項６９に記載の方法。

【請求項71】

前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組合せを標的とする、請求項２６及び６７～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項72】

前記ＴＣＲが、ＡＦＰ、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組合せを標的とする、請求項２７及び６７～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

前記ベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、ＡＡＶハイブリッドウイルス、バキュロウイルス、またはそれらの任意の組合せである、請求項６９～７２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

前記カリウムイオンが塩化カリウムを含む、請求項１～７３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項75】

請求項１～７４のいずれか１項に記載の方法によって調製される、細胞の集団。

【請求項76】

細胞の集団であって、ＣＤ３＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、及びＴＣＦ７＋である前記細胞を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％含み、前記細胞が、請求項１～７４のいずれか１項に記載の方法に従って培養される、前記細胞の集団。

【請求項77】

請求項１～７４のいずれか１項に記載の方法に有用な、細胞培養培地。

【請求項78】

（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）１００ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む、細胞培養培地。

【請求項79】

前記カリウムイオンの濃度が、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、または約１００ｍＭである、請求項７８に記載の培養培地。

【請求項80】

ａ．約４５ｍＭのカリウムイオン及び９５ｍＭ未満のＮａＣｌ、
ｂ．約５０ｍＭのカリウムイオン及び９０ｍＭ未満のＮａＣｌ、
ｃ．約５５ｍＭのカリウムイオン及び８５ｍＭ未満のＮａＣｌ、
ｄ．約６０ｍＭのカリウムイオン及び８０ｍＭ未満のＮａＣｌ、
ｅ．約６５ｍＭのカリウムイオン及び７５ｍＭ未満のＮａＣｌ、
ｆ．約７０ｍＭのカリウムイオン及び７０ｍＭ未満のＮａＣｌ、
ｇ．約７５ｍＭのカリウムイオン及び６５ｍＭ未満のＮａＣｌ、
ｈ．約８０ｍＭのカリウムイオン及び６０ｍＭ未満のＮａＣｌ、
ｉ．約８５ｍＭのカリウムイオン及び５５ｍＭ未満のＮａＣｌ、または
ｊ．約９０ｍＭのカリウムイオン及び５０ｍＭ未満のＮａＣｌ
を含む、請求項７８または７９に記載の培養培地。

【請求項81】

１つ以上のサイトカインをさらに含む、請求項７８～９０のいずれか１項に記載の培養培地。

【請求項82】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項９１に記載の培養培地。

【請求項83】

前記カリウムイオンが塩化カリウムを含む、請求項７８～８２のいずれか１項に記載の培養培地。

【請求項84】

疾患または状態の処置を必要とする対象の疾患または状態の処置方法であって、請求項７５または７６に記載の細胞の集団を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項85】

前記疾患または前記状態が、乳癌、頭頸部癌、子宮癌、脳癌、皮膚癌、腎癌、肺癌、結腸直腸癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、食道癌、眼癌、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））癌、胃腸癌、卵巣癌、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、またはそれらの組合せを含むがんに由来する腫瘍を含む、請求項８４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年４月２８日出願の米国仮特許出願第６３／０１６，９０７号の優先権及び利益を主張し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法に関する。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法は、培養下で低分化細胞及び／または未分化細胞の濃縮を促進する。本明細書に開示される方法を使用して培養される細胞は、新生抗原特異的Ｔ細胞療法を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法及びＴＣＲ Ｔ細胞療法を含むが、これらに限定されない様々な細胞療法に使用され得る。

【背景技術】

【0003】

がん免疫療法は、Ｔ細胞（感染細胞及び疾患細胞の免疫系の主な殺傷細胞）を利用して、腫瘍細胞を攻撃及び死滅させることに依拠する。しかしながら、免疫療法には重大な障害があり、これはＴ細胞の殺傷能力が低下し得ることであり、この現象は、多くの場合にＴ細胞の疲弊または最終分化と称される。免疫チェックポイント遮断、エクスビボ増殖腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）療法、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法、及びＴ細胞受容体操作（ＴＣＲ）Ｔ細胞療法は、患者から単離した機能的に活性なＴ細胞を活用し、効果を発揮するためには、高度に機能的なＴ細胞を必要とする処置である。これらのＴ細胞は、標的がん細胞上の抗原を認識するようにエクスビボで操作及び増殖される。Ｔ細胞療法は固形がんの治癒に一貫して効果的であるというわけではなく、その理由の１つは、Ｔ細胞が経時的に増殖または殺傷能力を失うためである。

【0004】

Ｔ細胞疲弊を克服する１つの手段は、低分化状態を有するＴ細胞を選択的に投与することである。例えば、Ｔメモリー幹細胞（Ｔ_ＳＣＭ）は、より分化したＴセントラルメモリー（Ｔ_ＣＭ）細胞またはＴエフェクターメモリー（Ｔ_ＥＭ）細胞よりも、投与後の患者においてより長い期間持続し、Ｔ_ＳＣＭは、より分化した細胞よりも、腫瘍サイズに対してより顕著で長期的な効果を発揮する。しかしながら、当該技術分野では、単離したＴ細胞の混合集団から低分化及び／またはナイーブＴ細胞を効率的に濃縮する方法が依然として必要である。

【発明の概要】

【0005】

本開示のある特定の態様は、免疫細胞及び／または幹細胞をエクスビボまたはインビトロで培養する方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中に免疫細胞及び／または幹細胞を置くことを含み、培地は高張ではない。本開示のある特定の態様は、免疫細胞及び／または幹細胞の集団を調製する方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中に免疫細胞及び／または幹細胞を置くことを含み、培地は高張ではない。

【0006】

いくつかの態様では、培地は、１つ以上のサイトカインをさらに含む。いくつかの態様では、１つ以上のサイトカインは、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0007】

本開示のある特定の態様は、未分化または低分化細胞の数またはパーセンテージをエクスビボまたはインビトロで増加させる方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中で免疫細胞及び／または幹細胞を培養することを含み、培地はＩＬ－２を含むが、ＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、培養後の免疫細胞及び／または幹細胞は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５を含む培地中で培養される免疫細胞及び／または幹細胞と比較して、より大きい数及び／またはより高いパーセンテージの未分化または低分化免疫細胞及び／または幹細胞を含む。

【0008】

本開示のある特定の態様は、未分化または低分化免疫細胞及び／または幹細胞の数及び／またはパーセンテージをエクスビボまたはインビトロで増加させる方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中に免疫細胞及び／または幹細胞を置くことを含み、培地はＩＬ－７及びＩＬ－２１を含むか、または培地はＩＬ－２、ＩＬ－７及びＩＬ－１５を含む。

【0009】

本開示のある特定の態様は、未分化または低分化免疫細胞及び／または幹細胞の数またはパーセンテージをエクスビボまたはインビトロで増加させる方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中に免疫細胞及び／または幹細胞を置くことを含み、培地はＩＬ－１５及びＩＬ－２１を含む。

【0010】

いくつかの態様では、細胞は免疫細胞を含む。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＴＩＬ、ＮＫ細胞、ＴＩＬ、Ｔｒｅｇ、及びそれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様では、細胞は幹細胞を含む。いくつかの態様では、細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する。いくつかの態様では、細胞はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、これは操作ＴＣＲであってよい。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、ナトリウムイオン、例えば、ＮａＣｌ、カルシウムイオン、グルコース、及び／またはそれらの任意の組合せをさらに含む。

【0011】

いくつかの態様では、培地は、細胞増殖剤をさらに含む。いくつかの態様では、細胞増殖剤は、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤、ＡＣＬＹ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、ＣＡＬ１０１、ＩＣ８７１１４、及びそれらの任意の組合せから選択される。いくつかの態様では、ＡＫＴ阻害剤は、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、ＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ、及びそれらの任意の組合せから選択される。いくつかの態様では、培地は、例えば、出発細胞集団と比較した場合に最終細胞産物において、低分化及び／または未分化細胞の数及び／またはパーセンテージを増加できる、形質導入効率を増加できる、幹様免疫細胞を増加できる、インビボ生存能を増加できる、分化能を増加できる、細胞疲弊を回避できる、あるいはそれらの任意の組合せである。

【0012】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、または約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約４５ｍＭ～約１００ｍＭ、約４５ｍＭ～約９０ｍＭ、約４５ｍＭ～約８０ｍＭ、約４５ｍＭ～約７０ｍＭ、約４５ｍＭ～約６０ｍＭ、約４５ｍＭ～約５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１００ｍＭ、約６０ｍＭ～約９０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約７０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７０ｍＭ～約９０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１００ｍＭ、約８０ｍＭ～約９０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１００ｍＭ、または約１００ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約８０ｍＭである。

【0013】

いくつかの態様では、培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する。

【0014】

いくつかの態様では、培地は、約２５０の浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５５の浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６０の浸透圧を有する。

【0015】

いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～３２０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約３１５ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する。

【0016】

いくつかの態様では、培地は、ナトリウムイオンをさらに含む。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約３０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約６５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約７５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、または約８０ｍＭである。

【0017】

いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約８０～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約８０～約９０ｍＭである。

【0018】

いくつかの態様では、培地は、グルコースをさらに含む。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ超である。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１５．４ｍＭ、約１５．９ｍＭ、約１６．３ｍＭ、約１６．８ｍＭ、約１７．２ｍＭ、または約１７．７ｍＭである。

【0019】

いくつかの態様では、培地は、カルシウムイオンをさらに含む。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ超である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである。

【0020】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約８０．５ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0021】

いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0022】

いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７２．２ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0023】

いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６７．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0024】

いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６３．９ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0025】

いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５９．３ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0026】

いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５５．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0027】

いくつかの態様では、免疫細胞は、培養後にＣＤ３＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、もしくはＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組合せである。

【0028】

いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬである。

【0029】

いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は、約１．０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬである。

【0030】

いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は、約１．０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬである。

【0031】

いくつかの態様では、ＩＬ－７の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－７の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－７の濃度は、約１．０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－７の濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬである。

【0032】

いくつかの態様では、ＩＬ－１５の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－１５の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－１５の濃度は、約１．０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－１５の濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬである。

【0033】

いくつかの態様では、免疫細胞及び／または幹細胞は、キメラ抗原受容体、操作Ｔ細胞受容体、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0034】

いくつかの態様では、免疫細胞及び／または幹細胞は、培養後にヒト対象に投与される。

【0035】

いくつかの態様では、細胞は、さらにベクターで形質導入される。いくつかの態様では、ベクターは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴＣＲ模倣物をコードする導入遺伝子を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組合せを標的とする。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＡＦＰ、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組合せを標的とする。いくつかの態様では、ベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、ＡＡＶハイブリッドウイルス、バキュロウイルス、またはそれらの任意の組合せである。本開示のある特定の態様は、本明細書に開示される方法によって調製される細胞の集団を対象とする。本開示のある特定の態様は、ＣＤ３＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、及びＴＣＦ７＋である細胞を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％含む細胞の集団を対象とし、細胞は、本明細書に開示される方法に従って培養される。本開示のある特定の態様は、本明細書に開示される方法に有用な細胞培養培地を対象とする。本開示のある特定の態様は、（ｉ）本明細書に開示されるような免疫細胞または幹細胞及び（ｉｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオンを含む細胞培養培地を対象とし、培養培地は高張ではない。

【0036】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、または約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、または約８０ｍＭである。いくつかの態様では、培養培地は、１つ以上のサイトカインをさらに含む。いくつかの態様では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの任意の組合せである。本開示のある特定の態様は、疾患または状態の処置を必要とする対象の疾患または状態を処置する方法に関し、本方法は、本明細書に開示される細胞の集団を対象に投与することを含む。いくつかの態様では、疾患または状態は、乳癌、頭頸部癌、子宮癌、脳癌、皮膚癌、腎癌、肺癌、結腸直腸癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、食道癌、眼癌、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））癌、胃腸癌、卵巣癌、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、またはそれらの組合せを含むがんに由来する腫瘍を含む。

【0037】

態様
態様１．免疫細胞及び／または幹細胞のエクスビボまたはインビトロでの培養方法であって、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中に免疫細胞及び／または幹細胞を置くことを含み、前記培地が高張ではない、前記方法。

【0038】

態様２．免疫細胞及び／または幹細胞の集団の調製方法であって、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中に免疫細胞及び／または幹細胞を置くことを含み、前記培地が高張ではない、前記方法。

【0039】

態様３．前記培地が、１つ以上のサイトカインをさらに含む、態様１または２に記載の方法。

【0040】

態様４．前記１つ以上のサイトカインが、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－７、インターロイキン２１、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、またはそれらの任意の組合せを含む、態様３に記載の方法。

【0041】

態様５．未分化または低分化細胞の数またはパーセンテージのエクスビボまたはインビトロでの増加方法であって、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中で免疫細胞及び／または幹細胞を培養することを含み、前記培地がＩＬ－２を含むが、ＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない、前記方法。

【0042】

態様６．前記培養後の前記免疫細胞及び／または前記幹細胞が、ＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５を含む培地中で培養される免疫細胞及び／または幹細胞と比較して、より大きい数及び／またはより高いパーセンテージの未分化または低分化免疫細胞及び／または幹細胞を含む、態様５に記載の方法。

【0043】

態様７．未分化または低分化免疫細胞及び／または幹細胞の数及び／またはパーセンテージのエクスビボまたはインビトロでの増加方法であって、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中に免疫細胞及び／または幹細胞を置くことを含み、前記培地がＩＬ－７及びＩＬ－２１を含む、前記方法。

【0044】

態様８．未分化または低分化免疫細胞及び／または幹細胞の数またはパーセンテージのエクスビボまたはインビトロでの増加方法であって、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中に前記免疫細胞及び／または前記幹細胞を置くことを含み、前記培地がＩＬ－１５及びＩＬ－２１を含む、前記方法。

【0045】

態様９．前記細胞が免疫細胞を含む、態様１～８のいずれか１つに記載の方法。

【0046】

態様１０．前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ＴＩＬ、ＮＫ細胞、ＴＩＬ、Ｔｒｅｇ、及びそれらの任意の組合せを含む、態様８に記載の方法。

【0047】

態様１１．前記細胞が幹細胞を含む、態様１～８のいずれか１つに記載の方法。

【0048】

態様１２．前記細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する、態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。

【0049】

態様１３．前記細胞が、操作Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する、態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。

【0050】

態様１４．前記培地が低張である、態様１～１３のいずれか１つに記載の方法。

【0051】

態様１５．前記培地が、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、グルコース、及び／またはそれらの任意の組合せをさらに含む、態様１～１４のいずれか１つに記載の方法。

【0052】

態様１６．前記培地が細胞増殖剤をさらに含む、態様１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0053】

態様１７．前記細胞増殖剤が、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤、ＡＣＬＹ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、またはそれらの任意の組合せを含む、態様１６に記載の方法。

【0054】

態様１８．前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、ＣＡＬ１０１、ＩＣ８７１１４、及びそれらの任意の組合せから選択される、態様１７に記載の方法。

【0055】

態様１９．前記ＡＫＴ阻害剤が、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、ＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ、及びそれらの任意の組合せから選択される、態様１７に記載の方法。

【0056】

態様２０．前記培地が、ａ．低分化及び／または未分化細胞の前記数及び／または前記パーセンテージを増加できる、ｂ．形質導入効率を増加できる、ｃ．幹様免疫細胞を増加できる、ｄ．インビボ生存能を増加できる、ｅ．分化能を増加できる、ｆ．細胞疲弊を回避できる、あるいはｇ．それらの任意の組合せである、態様１～１９のいずれか１つに記載の方法。

【0057】

態様２１．前記カリウムイオンの濃度が、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、または約１００ｍＭである、態様１～２０のいずれか１つに記載の方法。

【0058】

態様２２．前記カリウムイオンの濃度が、約４５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約４５ｍＭ～約１００ｍＭ、約４５ｍＭ～約９０ｍＭ、約４５ｍＭ～約８０ｍＭ、約４５ｍＭ～約７０ｍＭ、約４５ｍＭ～約６０ｍＭ、約４５ｍＭ～約５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１００ｍＭ、約６０ｍＭ～約９０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約７０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７０ｍＭ～約９０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１００ｍＭ、約８０ｍＭ～約９０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１００ｍＭ、または約１００ｍＭ～約１１０ｍＭである、態様１～２１のいずれか１つに記載の方法。

【0059】

態様２３．前記カリウムイオンの濃度が、約５０ｍＭ～約９０ｍＭである、態様１～２２のいずれか１つに記載の方法。

【0060】

態様２４．前記カリウムイオンの濃度が、約５０ｍＭ～約８０ｍＭである、態様１～２３のいずれか１つに記載の方法。

【0061】

態様２５．前記培地が、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の浸透圧を有する、態様１～２４のいずれか１つに記載の方法。

【0062】

態様２６．前記培地が、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する、態様１～２５のいずれか１つに記載の方法。

【0063】

態様２７．前記培地が、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する、態様１～２６のいずれか１つに記載の方法。

【0064】

態様２８．前記培地が、約２５０の浸透圧を有する、態様１～２７のいずれか１つに記載の方法。

【0065】

態様２９．前記培地が、約２５５の浸透圧を有する、態様１～２８のいずれか１つに記載の方法。

【0066】

態様３０．前記培地が、約２６０の浸透圧を有する、態様１～２９のいずれか１つに記載の方法。

【0067】

態様３１．前記培地が等張である、態様１～２４のいずれか１つに記載の方法。

【0068】

態様３２．前記培地が、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～３２０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の浸透圧を有する、態様３１に記載の方法。

【0069】

態様３３．前記培地が、約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約３１５ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する、態様３１または３２に記載の方法。

【0070】

態様３４．前記培地がナトリウムイオンをさらに含む、態様１～３３のいずれか１つに記載の方法。

【0071】

態様３５．前記ナトリウムイオンの濃度が、約２５ｍＭ～約１００ｍＭである、態様３４に記載の方法。

【0072】

態様３６．前記ナトリウムイオンの前記濃度が、約３０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約６５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約７５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである、態様３４または３５に記載の方法。

【0073】

態様３７．前記ナトリウムイオンの前記濃度が、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、または約８０ｍＭである、態様３４～３６のいずれか１つに記載の方法。

【0074】

態様３８．前記ナトリウムイオンの前記濃度が約５５ｍＭである、態様３４～３７のいずれか１つに記載の方法。

【0075】

態様３９．前記ナトリウムイオンの前記濃度が約６０ｍＭである、態様３４～３８のいずれか１つに記載の方法。

【0076】

態様４０．前記ナトリウムイオンの前記濃度が約６５ｍＭである、態様３４～３９のいずれか１つに記載の方法。

【0077】

態様４１．前記培地がグルコースをさらに含む、態様１～４０のいずれか１つに記載の方法。

【0078】

態様４２．前記グルコースの濃度が、約１０ｍＭ超である、態様４１に記載の方法。

【0079】

態様４３．前記グルコースの濃度が、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである、態様４１または４２に記載の方法。

【0080】

態様４４．前記グルコースの濃度が、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである、態様４１～４３のいずれか１つに記載の方法。

【0081】

態様４５．前記グルコースの濃度が、約１５．４ｍＭ、約１５．９ｍＭ、約１６．３ｍＭ、約１６．８ｍＭ、約１７．２ｍＭ、または約１７．７ｍＭである、態様４１～４４のいずれか１つに記載の方法。

【0082】

態様４６．前記培地がカルシウムイオンをさらに含む、態様１～４５のいずれか１つに記載の方法。

【0083】

態様４７．前記カルシウムイオンの濃度が、約０．４ｍＭ超である、態様４６に記載の方法。

【0084】

態様４８．前記カルシウムイオンの濃度が、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである、態様４６または４７に記載の方法。

【0085】

態様４９．前記カルシウムイオンの濃度が、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである、態様４６～４８のいずれか１つに記載の方法。

【0086】

態様５０．前記培地が、約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約８０．５ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む、態様１～４９のいずれか１つに記載の方法。

【0087】

態様５１．前記培地が、約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する、態様５０に記載の方法。

【0088】

態様５２．前記培地が、約５５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む、態様１～４９のいずれか１つに記載の方法。

【0089】

態様５３．前記培地が、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する、態様５２に記載の方法。

【0090】

態様５４．前記培地が、約６０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７２．２ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む、態様１～４９のいずれか１つに記載の方法。

【0091】

態様５５．前記培地が、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する、態様５４に記載の方法。

【0092】

態様５６．前記培地が、約６５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６７．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む、態様１～４９のいずれか１つに記載の方法。

【0093】

態様５７．前記培地が、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する、態様５６に記載の方法。

【0094】

態様５８．前記培地が、約７０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６３．９ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む、態様１～４９のいずれか１つに記載の方法。

【0095】

態様５９．前記培地が、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する、態様５８に記載の方法。

【0096】

態様６０．前記培地が、約７５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５９．３ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む、態様１～４９のいずれか１つに記載の方法。

【0097】

態様６１．前記培地が、約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する、態様６０に記載の方法。

【0098】

態様６２．前記培地が、約８０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５５．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む、態様１～４９のいずれか１つに記載の方法。

【0099】

態様６３．前記培地が、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する、態様６２に記載の方法。

【0100】

態様６４．前記免疫細胞が、培養後にＣＤ３＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、もしくはＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組合せである、態様９～５５のいずれか１つに記載の方法。

【0101】

態様６５．前記ＩＬ－２の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬである、態様４～６及び９～６４のいずれか１つに記載の方法。

【0102】

態様６６．前記ＩＬ－２の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、態様６５に記載の方法。

【0103】

態様６７．前記ＩＬ－２の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、態様６５または６６に記載の方法。

【0104】

態様６８．前記ＩＬ－２の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、態様６５または６６に記載の方法。

【0105】

態様６９．前記ＩＬ－２１の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬである、態様４、７、及び８～６８のいずれか１つに記載の方法。

【0106】

態様７０．前記ＩＬ－２１の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、態様６９に記載の方法。

【0107】

態様７１．前記ＩＬ－２１の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、態様６９または７０に記載の方法。

【0108】

態様７２．前記ＩＬ－２１の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、態様６９または７０に記載の方法。

【0109】

態様７３．前記ＩＬ－７の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬである、態様５～７及び９～７２のいずれか１つに記載の方法。

【0110】

態様７４．前記ＩＬ－７の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、態様７３に記載の方法。

【0111】

態様７５．前記ＩＬ－７の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、態様７３または７４に記載の方法。

【0112】

態様７６．前記ＩＬ－７の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、態様７３または７４に記載の方法。

【0113】

態様７７．前記ＩＬ－１５の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬである、態様４～６及び８～７６のいずれか１つに記載の方法。

【0114】

態様７８．前記ＩＬ－１５の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、態様７７に記載の方法。

【0115】

態様７９．前記ＩＬ－１５の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、態様７７または７８に記載の方法。

【0116】

態様８０．前記ＩＬ－１５の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、態様７７または７８に記載の方法。

【0117】

態様８１．前記免疫細胞及び／または前記幹細胞が、キメラ抗原受容体、操作Ｔ細胞受容体、またはそれらの任意の組合せを含む、態様１～８０のいずれか１つに記載の方法。

【0118】

態様８２．前記免疫細胞及び／または前記幹細胞が、培養後にヒト対象に投与される、態様１～８１のいずれか１つに記載の方法。

【0119】

態様８３．前記細胞が、さらにベクターで形質導入される、態様１～８２のいずれか１つに記載の方法。

【0120】

態様８４．前記ベクターが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴＣＲ模倣物をコードする導入遺伝子を含む、態様８３に記載の方法。

【0121】

態様８５．前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組合せを標的とする、態様８４に記載の方法。

【0122】

態様８６．前記ＴＣＲが、ＡＦＰ、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組合せを標的とする、態様８４に記載の方法。

【0123】

態様８７．前記ベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、ＡＡＶハイブリッドウイルス、バキュロウイルス、またはそれらの任意の組合せである、態様８４に記載の方法。

【0124】

態様８８．態様１～８７のいずれか１つに記載の方法によって調製される、細胞の集団。

【0125】

態様８９．細胞の集団であって、ＣＤ３＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、及びＴＣＦ７＋である前記細胞を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％含み、前記細胞が、態様１～８７のいずれか１つに記載の方法に従って培養される、前記細胞の集団。

【0126】

態様９０．態様１～８７のいずれか１つに記載の方法に有用な、細胞培養培地。

【0127】

態様９１．細胞培養培地であって、（ｉ）態様１～８７に記載されるような免疫細胞または幹細胞及び（ｉｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオンを含み、前記培養培地が高張ではない、前記細胞培養培地。

【0128】

態様９２．前記カリウムイオンの前記濃度が、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、または約１００ｍＭである、態様９１に記載の培養培地。

【0129】

態様９３．前記カリウムイオンの前記濃度が、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、または約８０ｍＭである、態様９１または９２に記載の培養培地。

【0130】

態様９４．１つ以上のサイトカインをさらに含む、態様９１～９３のいずれか１つに記載の培養培地。

【0131】

態様９５．前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの任意の組合せから選択される、態様９４に記載の培養培地。

【0132】

態様９６．疾患または状態の処置を必要とする対象の疾患または状態の処置方法であって、態様８８または８９に記載の細胞の集団を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【0133】

態様９７．前記疾患または前記状態が、乳癌、頭頸部癌、子宮癌、脳癌、皮膚癌、腎癌、肺癌、結腸直腸癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、食道癌、眼癌、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））癌、胃腸癌、卵巣癌、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、またはそれらの組合せを含むがんに由来する腫瘍を含む、態様９６に記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【0134】

【図1A】「幹細胞様」細胞、例えば、Ｔ細胞を正確に定義する、ＦＡＣＳ分析のための厳密な細胞表面マーカー及び転写因子を示す。

【図1B】様々な表現型の特徴及びバイオマーカー発現プロファイルで注釈を付けた、例示的な細胞、例えば、Ｔ細胞の進行性分化の図である。

【図2】Ａは、様々なカリウム濃度での相対的な細胞の幹様集団を示す散布図であり、培地は２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。Ｂは、様々なカリウム濃度での相対的な細胞の幹様集団を示す散布図であり、培地は２８０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。Ｃは、様々なカリウム濃度での相対的な細胞の幹様集団を示す散布図であり、培地は３２０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。Ｄは、様々なカリウム濃度での相対的な収量を示す散布図であり、培地は２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。Ｅは、様々なカリウム濃度での相対的な収量を示す散布図であり、培地は２８０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。Ｆは、様々なカリウム濃度での相対的な収量を示す散布図であり、培地は３２０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する（円形：５０ｍＭのカリウムイオン、四角形：６０ｍＭのカリウムイオン、三角形：７０ｍＭのカリウムイオン、逆三角形：８０ｍＭのカリウムイオン、菱形：９０ｍＭのカリウムイオン、白丸：対照）。Ｇは、対照培地または２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する低張培地中での培養後の相対的な幹様集団を示す折れ線グラフである。培地の張度を、表２に示したようなカリウム及びＮａＣｌの濃度に基づいて算出した。

【図3A】低張培養条件において高カリウム中でＴ細胞を培養する効果を示す。本明細書に開示されるいくつかの態様と一致するＴ細胞培養スキームを示す。

【図3B】低張培養条件において高カリウム中でＴ細胞を培養する効果を示す。様々な培養条件下でのＣＤ４５ＲＡ ＣＣＲ７の発現のＦＡＣＳ分析を示す。

【図3C】低張培養条件において高カリウム中でＴ細胞を培養する効果を示す。様々な培養条件下でのＣＤ４５ＲＡ及びＣＤ６２Ｌの発現のＦＡＣＳ分析を示す。

【図3D】低張培養条件において高カリウム中でＴ細胞を培養する効果を示す。様々な培養条件下でのＴ細胞持続性関連マーカーＣＤ２７及びＣＣＲ７^＋の発現のＦＡＣＳ分析を示す。

【図3E】低張培養条件において高カリウム中でＴ細胞を培養する効果を示す。様々な培養条件下でのＴＣＦ７及びＣＤ３９の発現のＦＡＣＳ分析を示す。

【図3F】低張培養条件において高カリウム中でＴ細胞を培養する効果を示す。ＴＣＦ７発現及びＣＤ３のＦＡＣｓ分析を示す。

【図3G】低張培養条件において高カリウム中でＴ細胞を培養する効果を示す。対照培地及び高カリウム培養条件を用いた低張改変培地からのＴＣＦ７^＋細胞のパーセンテージを示す。

【図4A】インビトロ増殖中のＴ細胞の収量及び生存率を示す。対照培地及び改変（低張）培地、すなわち、カリウムイオン及びＮａＣｌの組合せが１４０ｍＭ未満となるように高カリウム及びＮａＣｌを含有する培地中で培養したＴ細胞の増殖倍率（１０^６）を示す。

【図4B】インビトロ増殖中のＴ細胞の収量及び生存率を示す。対照培地及び改変（低張）培地、すなわち、カリウムイオン及びＮａＣｌの組合せが１４０ｍＭ未満となるように高カリウム及びＮａＣｌを含有する培地中で培養したＴ細胞の生存率を示す。

【図5A】低張コンディショニング培地で濃縮した「幹細胞様」Ｔ細胞を示す。対照培地中で培養したＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞からの「幹細胞様」マーカーのＦＡＣＳ分析を示す。

【図5B】低張コンディショニング培地で濃縮した「幹細胞様」Ｔ細胞を示す。改変（低張）培地、すなわち、カリウムイオン及びＮａＣｌの組合せが１４０ｍＭ未満となるように高カリウム及びＮａＣｌを含有する培地中で培養したＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞からの「幹細胞様」マーカーのＦＡＣＳ分析を示す。

【図6】形質導入効率に対する改変培地の効果を示す。改変（低張）培地は、カリウムイオン及びＮａＣｌの組合せが１４０ｍＭ未満となるように高カリウム及びＮａＣｌを有する。

【図7】Ｔ_ＳＣＭ集団に対する改変培地中の高カリウムの効果を示す。

【図8A】Ｔ_ＳＣＭ集団のエフェクター機能の運命に対する高カリウムの効果を示す。ＣＣＲ７＋細胞におけるＩＬ－２発現の濃縮及びＣＤ１９－ＣＡＲ操作ＣＤ４Ｔ細胞におけるＩＦＮ－γの減少を示すＦＡＣＳプロットを示す。

【図8B】Ｔ_ＳＣＭ集団のエフェクター機能の運命に対する高カリウムの効果を示す。ＣＣＲ７＋細胞におけるＩＬ－２発現の濃縮及びＣＤ１９－ＣＡＲ操作ＣＤ８Ｔ細胞におけるＩＦＮ－γの減少を示すＦＡＣＳプロットを示す。

【図8C】Ｔ_ＳＣＭ集団のエフェクター機能の運命に対する高カリウムの効果を示す。対照条件及び低張培養条件における高カリウム中でのＩＬ－２及びＩＦＮ－γ発現の定量化を示す。

【図9A】対照培地（左パネル）または高カリウム及び低張培養条件を用いた改変（低張）培地（右パネル）中におけるＴ_ＳＣＭ集団に対するサイトカインの効果を示す。ＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５の組合せの効果を示す。

【図9B】対照培地（左パネル）または高カリウム及び低張培養条件を用いた改変（低張）培地（右パネル）中におけるＴ_ＳＣＭ集団に対するサイトカインの効果を示す。ＩＬ－７及びＩＬ－２１の組合せの効果を示す。

【図10A】サイトカインの組合せと共に、対照培地中で、及び高カリウムを含む改変（低張）培地中の低張培養条件における高カリウム中で培養したＣＡＲ操作産物中のＴ_ＳＣＭ細胞の数を示す。ドナー１からのＣＡＲ操作産物中のＴ_ＳＣＭ細胞の数を示す。左から右へ、細胞を、ＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５、ＩＬ－２（１０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ－２及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ－７及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍＬ）、カリウムならびにＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５、カリウム及びＩＬ－２（１０ｎｇ／ｍＬ）、カリウムならびにＩＬ－２及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍＬ）、カリウムならびにＩＬ－７及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍＬ）、カリウムならびにＩＬ－１５及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍＬ）と共に培養した。

【図10B】サイトカインの組合せと共に、対照培地中で、及び高カリウムを含む改変（低張）培地中の低張培養条件における高カリウム中で培養したＣＡＲ操作産物中のＴ_ＳＣＭ細胞の数を示す。ドナー１からのＣＡＲ操作産物中のＴ_ＳＣＭ細胞の数を示す。左から右へ、細胞を、ＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５、ＩＬ－２（１０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ－２及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ－７及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍＬ）、カリウムならびにＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５、カリウム及びＩＬ－２（１０ｎｇ／ｍＬ）、カリウムならびにＩＬ－２及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍＬ）、カリウムならびにＩＬ－７及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍＬ）、カリウムならびにＩＬ－１５及びＩＬ－２１（１ｎｇ／ｍＬ）と共に培養した。

【図11】示されるように、ＩＬ－２及び／またはＩＦＮγを発現する細胞のパーセントの棒グラフであり、これは対照培地または低張培地（すなわち、カリウムイオン及びＮａＣｌの組合せが１４０ｍＭ未満となるように高カリウム及びＮａＣｌを含有する改変培地）中で培養したＲＯＲ１キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の分化状態を示している。

【図12】対照培地（「ＲＯＲ１ ＣＡＲ」）またはカリウムイオン及びＮａＣｌの組合せが１４０ｍＭ未満となるように高カリウム及びＮａＣｌを含有する改変低張培地中で共培養したＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の経時的死滅データのグラフ表示である。

【図13A】対照培地またはカリウムイオン及びＮａＣｌの組合せが１４０ｍＭ未満となるように高カリウム及びＮａＣｌを含有する培地中でＨ１９７５細胞と共培養したＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＬ－２分泌を示す棒グラフである。

【図13B】対照培地またはカリウムイオン及びＮａＣｌの組合せが１４０ｍＭ未満となるように高カリウム及びＮａＣｌを含有する培地中でＨ１９７５細胞と共培養したＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮγ分泌を示す棒グラフである。

【図14】対照培地（「ＲＯＲ１ ＣＡＲ」）ならびにカリウムイオン及びＮａＣｌの組合せが１４０ｍＭ未満となるように高カリウム及びＮａＣｌを含有する培地中でのＨ１９７５標的細胞との共培養におけるＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞増殖を示す折れ線グラフである。

【発明を実施するための形態】

【0135】

本開示は、細胞を培養する方法、本方法によって調製される細胞、及び／または細胞培養方法のための組成物もしくはキットを対象とする。本開示の細胞培養方法は、培養細胞の多能性及び／または万能性を増加できるか、あるいは細胞がベクターで形質導入されている場合の形質導入効率を増加できる。いくつかの態様では、培養方法は、細胞が培養される場合、及び／または細胞がインビボでの療法に使用される場合に細胞疲弊を減少及び／または回避できる。いくつかの態様では、培養方法はまた、インビボ生存能、インビボ持続性、インビボエフェクター機能、またはそれらの任意の組合せを増加できる。いくつかの態様では、本開示は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞を培養する方法を対象とし、本方法は、少なくとも約５ｍＭ（例えば、５ｍＭよりも高い）濃度でカリウムを含む培地中に細胞を置くことを含み、培地は高張ではなく、例えば、低張または等張である。本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞を培養する方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭよりも高い濃度、例えば、約５０ｍＭ～８０ｍＭのカリウムを含む培地中に細胞を置くことを含む。いくつかの態様では、細胞は免疫細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、制御性Ｔ（Ｔ_ｒｅｇ）細胞、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様では、細胞は多能性細胞である。いくつかの態様では、細胞は万能性細胞である。いくつかの態様では、万能性細胞は、人工万能性幹細胞または胚性幹細胞である。いくつかの態様では、細胞は造血幹細胞である。

【0136】

本開示のいくつかの態様は、エクスビボまたはインビトロ培養中のヒト免疫細胞及び／または幹細胞の収量を、ヒト免疫細胞及び／または幹細胞の幹細胞性を高めながら増加させる方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞及び／または幹細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。本開示のいくつかの態様は、免疫療法のためのヒト免疫細胞及び／または幹細胞の集団を調製する方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞及び／または幹細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。本開示のいくつかの態様は、免疫療法のために、エクスビボまたはインビトロ培養中のヒト免疫細胞の幹細胞性を高める方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ヒト免疫細胞はＴ細胞である。

【0137】

いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。ある特定の態様では、培地は、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはそれらの任意の組合せをさらに含む。いくつかの態様では、培地は、ＩＬ－２、ＩＬ－７及びＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、ＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組合せをさらに含む。

【0138】

本開示がより詳細に記載される前に、本開示は、記載される特定の組成物またはプロセスステップに限定されず、したがって、当然のことながら変更され得ると理解されるべきである。本開示を読むことで当業者には明らかであるように、本明細書に記載及び図示される個々の態様の各々は、本開示の範囲または趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの態様のいずれかから容易に分離され得るか、またはそれらの特徴と組み合わされ得る別個の構成要素及び特徴を有する。列挙されるいずれの方法も、列挙される事象の順序で、または論理的に可能な任意の他の順序で実施され得る。

【0139】

本明細書に提供される見出しは、本開示の様々な態様を限定するものではなく、これは本明細書全体を参照することによって定義され得る。本明細書に使用される専門用語は、特定の態様を記載することのみを目的とし、限定することを意図するものではないこともまた理解されるべきである。

【0140】

Ｉ．用語
本開示がより容易に理解され得るように、ある特定の用語が最初に定義される。本出願で使用される場合、本明細書に明示的な別段の定めがない限り、以下の用語の各々は、以下に記載される意味を有することとする。追加の定義が、本出願全体を通して記載される。

【0141】

本開示全体を通して、用語「ａ」または「ａｎ」要素は、その要素のうち１つ以上を指し、例えば、「キメラポリペプチド（ａ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」は、１つ以上のキメラポリペプチドを表すと理解される。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書では交換可能に使用され得る。加えて、「または」は、リスト内の構成要素のオープンリストを意味するために使用される。例えば、「ＸはＡまたはＢを含む」は、ＸがＡを含む、ＸがＢを含む、ＸがＡ及びＢを含む、またはＸがＡもしくはＢ及び任意の他の構成要素を含むことを意味する。

【0142】

さらに、「及び／または」は、本明細書で使用される場合、２つの指定された特徴または構成要素の各々の、他方を伴うか、または伴わない特定の開示とみなされるべきである。したがって、「及び／または」という用語は、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される場合、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、ならびに「Ｂ」（単独）を含むことを意図する。同様に、「及び／または」という用語は、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される場合、以下の態様の各々を包含することを意図する：Ａ、Ｂ、及びＣ、Ａ、Ｂ、またはＣ、ＡまたはＣ、ＡまたはＢ、ＢまたはＣ、Ａ及びＣ、Ａ及びＢ、Ｂ及びＣ、Ａ（単独）、Ｂ（単独）、ならびにＣ（単独）。

【0143】

本明細書において「含む」という言葉で態様が記載される場合は必ず、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及び／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で記載される別の類似の態様も提供されると理解される。

【0144】

別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての専門用語及び科学用語は、本開示が関連する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くに関する一般的な辞書を当業者に提供する。

【0145】

単位、接頭辞、及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）で承認された形式で示される。数値範囲は、範囲を定義する数を含む。

【0146】

本明細書で使用される略語は、本開示全体を通して定義される。本開示の様々な態様が、以下の小節においてさらに詳しく記載される。

【0147】

「約」または「本質的に含む」という用語は、当業者によって決定されるような特定の値または組成物の許容誤差範囲内にある値または組成物を指し、これは値または組成物が測定または決定される方法、すなわち、測定システムの限界に部分的に依存することになる。例えば、「約」または「本質的に含む」は、当該技術分野における慣習に従って、１または１を超える標準偏差内を意味し得る。あるいは、「約」または「本質的に含む」は、最大１０％の範囲を意味し得る。さらに、特に生物系またはプロセスに関して、本用語は、最大１桁または最大５倍の値を意味し得る。特定の値または組成物が本出願及び特許請求の範囲で提供される場合、別段の記載がない限り、「約」または「本質的に含む」の意味は、その特定の値または組成物の許容誤差範囲内にあると想定されるべきである。

【0148】

本明細書で使用される場合、「およそ」という用語は、目的の１つ以上の値に適用される場合、規定の参照値と類似している値を指す。ある特定の態様では、「およそ」という用語は、別段の記載がない限り、または別の方法が文脈から明らかでない限り（そのような数が可能な値の１００％を超えることになる場合を除く）、規定の参照値から１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満の値内にいずれの方向にも（上回るか、または下回る）含まれる値の範囲を指す。

【0149】

本明細書に記載される通り、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲または整数範囲は、別段の指示がない限り、列挙される範囲内の任意の整数の値を含み、適切な場合、その分数（整数の１０分の１及び１００分の１など）を含むと理解されるべきである。

【0150】

本明細書で使用される場合、「万能性細胞」という用語は、例えば、人体において任意の細胞型に分化できる自己複製細胞を指す。

【0151】

本明細書で使用される場合、「多能性細胞」は自己複製細胞を指し、これは２つ以上の分化した子孫細胞に分化できる。

【0152】

本明細書で使用される場合、「免疫細胞」という用語は、免疫系の細胞を指す。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔリンパ球（「Ｔ細胞」）、Ｂリンパ球（「Ｂ細胞」）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞または好中球から選択される。本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」という用語は交換可能であり、胸腺によって産生または処理されるあらゆるリンパ球を指す。Ｔ細胞の非限定的なクラスとしては、エフェクターＴ細胞及びＴｈ細胞（ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋Ｔ細胞など）が挙げられる。いくつかの態様では、免疫細胞はＴｈ１細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞はＴｈ２細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞はＴｃ１７細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞はＴｈ１７細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、腫瘍浸潤細胞（ＴＩＬ）である。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ_ｒｅｇ細胞である。

【0153】

本明細書で使用される場合、「メモリー」Ｔ細胞という用語は、これまでにそれらの同種抗原に遭遇し、応答した（例えば、インビボ、インビトロ、もしくはエクスビボで）Ｔ細胞または例えば、抗ＣＤ３抗体で刺激した（例えば、インビトロもしくはエクスビボで）Ｔ細胞を指す。免疫細胞は、二次曝露時に「メモリー様」表現型を有し、そのようなメモリーＴ細胞は、一次曝露中よりも迅速かつ強力な免疫応答を開始するために複製し得る。いくつかの態様では、メモリーＴ細胞は、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＣＭ細胞）、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔ_ＥＭ細胞）、組織常在性メモリーＴ細胞（Ｔ_ＲＭ細胞）、幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔ_ＳＣＭ細胞）、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0154】

本明細書で使用される場合、「幹細胞様メモリーＴ細胞」、「Ｔメモリー幹細胞」、または「Ｔ_ＳＣＭ細胞」という用語は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するメモリーＴ細胞を指し、自己複製する幹細胞様能力ならびにメモリー及びエフェクターＴ細胞サブセットの範囲全体を再構成する多能性を付与されている。

【0155】

本明細書で使用される場合、「セントラルメモリーＴ細胞」または「Ｔ_ＣＭ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するメモリーＴ細胞を指す。セントラルメモリーＴ細胞は、一般にリンパ節内及び末梢循環で見られる。

【0156】

本明細書で使用される場合、「エフェクターメモリーＴ細胞」または「Ｔ_ＥＭ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＯを発現するが、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌの発現を欠いているメモリーＴ細胞を指す。エフェクターメモリーＴ細胞は、リンパ節ホーミング受容体（例えば、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌ）を欠いているため、これらの細胞は通常、末梢循環及び非リンパ組織で見られる。

【0157】

本明細書で使用される場合、「組織常在性メモリーＴ細胞」または「Ｔ_ＲＭ細胞」という用語は、循環せず、皮膚、肺、及び胃腸管などの末梢組織に常在しているメモリーＴ細胞を指す。ある特定の態様では、組織常在性メモリーＴ細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞でもある。

【0158】

本明細書で使用される場合、「ナイーブＴ細胞」または「Ｔ_Ｎ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するが、ＣＤ９５は発現しないＴ細胞を指す。Ｔ_Ｎ細胞は、Ｔ細胞系統の中で最も未分化な細胞である。Ｔ_Ｎ細胞と抗原提示細胞（ＡＰＣ）との間の相互作用によって、活性化Ｔ_ＥＦＦ細胞へのＴ_Ｎ細胞の分化及び免疫応答が誘導される。

【0159】

「培養」という用語は、本明細書で使用される場合、エクスビボ及び／またはインビトロでの制御されている細胞の成長を指す。本明細書で使用される場合、「培養」は、細胞増殖中、または細胞操作（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、もしくはＴＣＲｍを発現するための構築物による形質導入）中の細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の成長を含む。いくつかの態様では、培養細胞は、対象、例えば、ヒト対象から得られる。いくつかの態様では、培養細胞は、ヒト対象から得られるＴ細胞またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、培養前に精製される。いくつかの態様では、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、腫瘍浸潤Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞である。いくつかの態様では、細胞培養は、例えば、細胞の増殖を増加させるために、培養細胞の数を増大させることを意図する。

【0160】

本明細書で使用される場合、「細胞操作」は、細胞、例えば、本明細書に開示される万能性細胞、多能性細胞、または免疫細胞の標的改変を指す。いくつかの態様では、細胞操作は、ウイルス遺伝子操作、非ウイルス遺伝子操作、腫瘍特異的標的化を可能にする受容体（例えば、ＴＣＲ、ＴＣＲｍ、及び／またはＣＡＲ）の導入、Ｔ細胞機能を改善する１つ以上の内因性遺伝子の導入、Ｔ細胞機能を改善する１つ以上の合成遺伝子の導入、あるいはそれらの任意の組合せを含む。

【0161】

本明細書で使用される場合、「幹細胞性」、「幹細胞様」、「幹様」、または「低分化」という用語は、よりナイーブな表現型と一致するマーカーを発現する細胞、例えば、万能性細胞、多能性細胞、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＴＩＬ）を指す。例えば、低分化Ｔ細胞は、Ｔ_Ｎ細胞またはＴ_ＳＣＭ細胞に特徴的な１つ以上のマーカーを発現し得る。いくつかの態様では、「低分化」または「幹様」Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現し、ＣＤ４５ＲＯは発現しない。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法は、低分化の表現型を有する細胞、例えば、万能性細胞、多能性細胞、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＴＩＬ）を促進する。いかなる特定の機構にも束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示される方法は、低分化細胞、例えば、万能性細胞、多能性細胞、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＴＩＬ）の分化を遮断、阻害、または制限し、培養下において幹様細胞の数の増加をもたらす。例えば、腫瘍を効果的に制御するには、幹細胞様メモリーまたはセントラルメモリー表現型を有する低分化免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの養子移入が好ましいと一般的に考えられている。Ｌｙｎｎ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５７６（７７８６）：２９３－３００（２０１９）、及びＧａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－１２９７（２０１１）を参照のこと。

【0162】

幹細胞性は、自己複製能力、多能性、及び増殖能の持続性を特徴とする。いくつかの態様では、幹細胞性は、特定の遺伝子シグネチャー、例えば、多数の遺伝子にわたる発現の組合せパターンを特徴とする。いくつかの態様では、遺伝子シグネチャーは、ＡＣＴＮ１、ＤＳＣ１、ＴＳＨＺ２、ＭＹＢ、ＬＥＦ１、ＴＩＭＤ４、ＭＡＬ、ＫＲＴ７３、ＳＥＳＮ３、ＣＤＣＡ７Ｌ、ＬＯＣ２８３１７４、ＴＣＦ７、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＬＡＳＳ６、ＵＢＥ２Ｅ２、ＩＬ７Ｒ、ＧＣＮＴ４、ＴＡＦ４Ｂ、ＳＵＬＴ１Ｂ１、ＳＥＬＰ、ＫＲＴ７２、ＳＴＸＢＰ１、ＴＣＥＡ３、ＦＣＧＢＰ、ＣＸＣＲ５、ＧＰＡ３３、ＮＥＬＬ２、ＡＰＢＡ２、ＳＥＬＬ、ＶＩＰＲ１、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＰＰＦＩＢＰ２、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＧＪＢ６、ＯＣＭ２、ＧＣＥＴ２、ＬＲＲＮ１、ＩＬ６ＳＴ、ＬＲＲＣ１６Ａ、ＩＧＳＦ９Ｂ、ＥＦＨＡ２、ＬＯＣ１２９２９３、ＡＰＰ、ＰＫＩＡ、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＣＨＭＰ７、ＫＩＡＡ０７４８、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＦＬＪ１３１９７、ＮＲＣＡＭ、Ｃ５ｏｒｆ１３、ＧＩＰＣ３、ＷＮＴ７Ａ、ＦＡＭ１１７Ｂ、ＢＥＮＤ５、ＬＧＭＮ、ＦＡＭ６３Ａ、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＡＲＨＧＥＦ１１、ＲＢＭ１１、ＲＩＣ３、ＬＤＬＲＡＰ１、ＰＥＬＩ１、ＰＴＫ２、ＫＣＴＤ１２、ＬＭＯ７、ＣＥＰ６８、ＳＤＫ２、ＭＣＯＬＮ３、ＺＮＦ２３８、ＥＤＡＲ、ＦＡＭ１５３Ｃ、ＦＡＡＨ２、ＢＣＬ９、Ｃ１７ｏｒｆ４８、ＭＡＰ１Ｄ、ＺＳＷＩＭ１、ＳＯＲＢＳ３、ＩＬ４Ｒ、ＳＥＲＰＩＮＦ１、Ｃ１６ｏｒｆ４５、ＳＰＴＢＮ１、ＫＣＮＱ１、ＬＤＨＢ、ＢＺＷ２、ＮＢＥＡ、ＧＡＬ３ＳＴ４、ＣＲＴＣ３、ＭＡＰ３Ｋ１、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＲＡＢ４３、ＳＧＴＢ、ＣＮＮ３、ＣＷＨ４３、ＫＬＨＬ３、ＰＩＭ２、ＲＧＭＢ、Ｃ１６ｏｒｆ７４、ＡＥＢＰ１、ＳＮＯＲＤ１１５－１１、ＳＮＯＲＤ１１５－１１、ＧＲＡＰ、及びそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の遺伝子を含む（例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ（２０１１）を参照のこと）。いくつかの態様では、遺伝子シグネチャーは、ＮＯＧ、ＴＩＭＤ４、ＭＹＢ、ＵＢＥ２Ｅ２、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＨＡＶＣＲ１、ＦＣＧＢＰ、ＰＰＦＩＢＰ２、ＴＰＳＴ１、ＡＣＴＮ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＫＲＴ７２、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＧＪＢ６、ＬＲＲＮ１、ＰＲＡＧＭＩＮ、ＧＩＰＣ３、ＦＬＮＢ、ＡＲＲＢ１、ＳＬＣ７Ａ８、ＮＵＣＢ２、ＬＲＲＣ７、ＭＹＯ１５Ｂ、ＭＡＬ、ＡＥＢＰ１、ＳＤＫ２、ＢＺＷ２、ＧＡＬ３ＳＴ４、ＰＩＴＰＮＭ２、ＺＮＦ４９６、ＦＡＭ１１７Ｂ、Ｃ１６ｏｒｆ７４、ＴＤＲＤ６、ＴＳＰＡＮ３２、Ｃ１８ｏｒｆ２２、Ｃ３ｏｒｆ４４、ＬＯＣ１２９２９３、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＭＬＸＩＰ、Ｃ７ｏｒｆ１０、ＳＴＸＢＰ１、ＫＣＮＱ１、ＦＬＪ１３１９７、ＬＤＬＲＡＰ１、ＲＡＢ４３、ＲＩＮ３、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＡＧＢＬ３、ＴＣＥＡ３、ＮＣＲＮＡ００１８５、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＦＡＭ１５３Ｃ、ＶＩＰＲ１、ＭＭＰ１９、ＨＢＳ１Ｌ、ＥＥＦ２Ｋ、ＳＮＯＲＡ５Ｃ、ＵＢＡＳＨ３Ａ、ＦＬＪ４３３９０、ＲＰ６－２１３Ｈ１９．１、ＩＮＰＰ５Ａ、ＰＩＭ２、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＳＮＲＫ、ＬＯＣ１００１２８２８８、ＰＩＧＶ、ＬＯＣ１００１２９８５８、ＳＰＴＢＮ１、ＰＲＯＳ１、ＭＭＰ２８、ＨＥＳ１、ＣＡＣＨＤ１、ＮＳＵＮ５Ｃ、ＬＥＦ１、ＴＴＴＹ１４、ＳＮＯＲＡ５４、ＨＳＦ２、Ｃ１６ｏｒｆ６７、ＮＳＵＮ５Ｂ、ＫＩＡＡ１２５７、ＮＲＧ２、ＣＡＤ、ＴＡＲＢＰ１、ＳＴＲＡＤＢ、ＭＴ１Ｆ、ＴＭＥＭ４１Ｂ、ＰＤＨＸ、ＫＤＭ６Ｂ、ＬＯＣ１００２８８３２２、ＵＸＳ１、ＬＧＭＮ、ＮＡＮＯＳ２、ＰＹＧＢ、ＲＡＳＧＲＰ２、Ｃ１４ｏｒｆ８０、ＸＰＯ６、ＳＬＣ２４Ａ６、ＦＡＭ１１３Ａ、ＭＲＭ１、ＦＢＸＷ８、ＮＤＵＦＳ２、ＫＣＴＤ１２、及びそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の遺伝子を含む（例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－１２９７（２０１１）を参照のこと）。

【0163】

多くのがんなどにおける長期的な抗原曝露の存在下で、より分化した免疫細胞、例えば、エフェクター及びエフェクターメモリーＴ細胞は、多くの場合に疲弊し、それらの抗腫瘍機能を失う。バイオマーカー、例えば、Ｔ細胞マーカーは、任意の方法を使用して測定され得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、抗体染色に続いてゲーティングしたフローサイトメトリーを使用して同定される。

【0164】

本明細書で使用される場合、「張度」という用語は、細胞膜に対する有効浸透圧勾配の尺度を指す。張度は、溶液、例えば、培地の浸透圧によって表され得る。本明細書で使用される場合、溶液、例えば、培地は、培地中の溶質の濃度が細胞内部の溶質の濃度と等しい場合に「等張」とみなされる。本明細書で使用される場合、等張培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する。本明細書で使用される場合、溶液、例えば、培地は、溶液中の溶質の濃度が細胞中の溶質の濃度よりも低い場合に「低張」とみなされる。本明細書で使用される場合、低張液は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、低張培地は、少なくとも約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、低張培地は、少なくとも約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、低張培地は、少なくとも約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載される低張培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。本明細書で使用される場合、溶液、例えば、培地は、溶液中の溶質の濃度が細胞中の溶質の濃度よりも高い場合に「高張」とみなされる。本明細書で使用される場合、高張液は、３００ｍＯｓｍ／Ｌ超の浸透圧を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載される高張培地は、約３２０ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する。ある特定の態様では、溶液、例えば、培地の張度は、カリウムイオン、ナトリウムイオン、グルコース、及びそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の溶質の濃度を増加または減少させることによって調整される。いくつかの態様では、溶液、例えば、培地の張度は、カリウムイオン及びＮａＣｌの濃度を増加または減少させることによって調整される。いくつかの態様では、培地の張度は、ある溶質の増加を第２の溶質の減少で相殺することによって維持され得る。例えば、ナトリウムイオンの濃度を変えることなく培地中のカリウムイオンの濃度を増加させると、培地の張度が増加し得る。しかしながら、カリウムイオンの濃度が増加し、ナトリウムイオンの濃度が減少する場合、元の培地の張度は維持され得る。本明細書で使用される場合、培地の張度は、カリウム濃度及びＮａＣｌ濃度の合計に２を乗じたものによって定義される。表２を参照のこと。

【0165】

本明細書で使用される場合、「カリウム」、「カリウムイオン」、「カリウムカチオン」、及び「Ｋ＋」という用語は交換可能に使用され、元素カリウムを指す。元素カリウムは溶液中に陽イオンとして存在する。しかしながら、カリウムイオンを含む溶液を調製する標準的な手段は、カリウム含有塩（例えば、ＫＣｌ）を溶液中に希釈することを含むことが、当業者には容易に明らかとなる。したがって、あるモル（Ｍ）濃度のカリウムイオンを含む溶液、例えば、培地は、等モル（Ｍ）濃度のカリウムを含む塩を含むと記載され得る。

【0166】

本明細書で使用される場合、「基本」培地という用語は、本明細書に開示される追加の要素、例えば、カリウム、ナトリウム、カルシウム、グルコース、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの任意の組合せのうち１つ以上を補充した任意の開始培地を指す。基本培地は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞を培養するための任意の培地であり得る。いくつかの態様では、基本培地は、平衡塩類溶液（例えば、ＰＢＳ、ＤＰＢＳ、ＨＢＳＳ、ＥＢＳＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、基本培地イーグル（ＢＭＥ）、Ｆ－１０、Ｆ－１２、ＲＰＭＩ１６４０、グラスゴー最小必須培地（ＧＭＥＭ）、アルファ最小必須培地（アルファＭＥＭ）、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｍ１９９、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＡＩＭ Ｖ、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地、及びそれらの任意の組合せから選択される。いくつかの態様では、基本培地は、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ Ｔ細胞ＣＤＭを含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）Ｐｒｏを含む。いくつかの態様では、基本培地は、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５（ＬＯＮＺＡ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、クリック培地を含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ＴＩＬ増殖培地を含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＴＩＬ急速増殖培地を含む。いくつかの態様では、基本培地は無血清である。いくつかの態様では、基本培地は、免疫細胞血清置換（ＩＣＳＲ）をさらに含む。例えば、いくつかの態様では、基本培地は、ＩＣＳＲを補充したＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＣＳＲを補充したＡＩＭ Ｖ、ＩＣＳＲを補充したＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＩＣＳＲを補充したＲＰＭＩ、ＩＣＳＲを補充したＴＥＸＭＡＣＳ（商標）、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様では、好適な基本培地としては、クリック培地、ＯｐＴｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＣＴＳ（登録商標））培地、Ｓｔｅｍｌｉｎｅ（登録商標）Ｔ細胞増殖培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＡＩＭ Ｖ（登録商標）培地（ＣＴＳ（登録商標））、ＴｅｘＭＡＣＳ（登録商標）培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（登録商標）培地（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ細胞増殖ＸＳＦＭ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、イスコフ培地、及び／またはＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。いくつかの態様では、基本培地は、ＮａＣｌ不含ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｉｍｉｚｅｒ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、張度を制御するために添加されるＮａＣｌ、例えば、カリウムイオンと組み合わせて添加されるＮａＣｌに加えて１つ以上のナトリウム塩を含む。

【0167】

本明細書で使用される場合、「サイトカイン」という用語は、細胞間の相互作用及び伝達に対して特定の効果を有する、細胞によって放出される小さな分泌タンパク質を指す。サイトカインの非限定的な例としては、インターロイキン（例えば、インターロイキン（ＩＬ）－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－１４、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１及びＩＬ－２３）、インターフェロン（ＩＦＮ、例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、及びＩＦＮ－γ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーメンバー、ならびにトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）ファミリーメンバーが挙げられる。本開示のある特定の態様は、サイトカインを含む培地中において細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、サイトカインはインターロイキンである。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１及びそれらの任意の組合せから選択される。ＩＬ－２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ６０５６８）は、抗原刺激または分裂促進刺激に応答してＴ細胞によって産生される。ＩＬ－２は、Ｔ細胞増殖及び免疫応答の制御に重要な他の活性を刺激することが知られている。ＩＬ－７（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１３２３２）は、リンパ球前駆細胞の増殖を刺激できる造血成長因子である。ＩＬ－７は、Ｂ細胞成熟のある特定の段階中に増殖において役割を果たすと考えられている。ＩＬ－１５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ４０９３３）は、ＩＬ－２と同様に、Ｔリンパ球の増殖を刺激するサイトカインである。ＩＬ－２１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＨＢＥ４）は、免疫調節活性を有するサイトカインである。ＩＬ－２１は、自然免疫と適応免疫との間の移行を促進し、Ｂ細胞中でＩｇＧ１及びＩｇＧ３の産生を誘導すると考えられている。ＩＬ－２１はまた、ＩＬ－１５との相乗作用でナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖及び成熟において役割を果たす場合があり、ＩＬ－２１は、活性化刺激に応答して成熟Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖を制御する場合がある。ＩＬ－１５及びＩＬ－１８との相乗作用により、ＩＬ－１５は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞中においてインターフェロンガンマ産生も刺激し、ＩＬ－２１は、Ｔ細胞媒介性免疫応答中に樹状細胞の活性化及び成熟を阻害する場合もある。

【0168】

本明細書で使用される場合、「よりも高い」という用語は、それを超えるが、等しくはないことを意味する。例えば、「４ｍＭよりも高い」は、４ｍＭを超えるが、４ｍＭを含まない任意の量を意味する。

【0169】

本明細書で使用される場合、「投与すること」は、様々な方法及び送達システムのいずれかを使用して、治療剤または治療剤を含む組成物を対象に物理的に導入することを指す。本明細書に記載される治療剤（例えば、本明細書に記載されるように培養したＴ細胞またはＮＫ細胞）のための異なる投与経路としては、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄または他の非経口投与経路、例えば、注射もしくは注入によるものが挙げられる。

【0170】

「非経口投与」という語句は、本明細書で使用される場合、経腸及び局所投与以外の、通常は注射による投与方法を意味し、これとしては、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、気管内、経肺、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、心室内、硝子体内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入に加えて、インビボエレクトロポレーションが挙げられるが、これらに限定されない。

【0171】

あるいは、本明細書に記載される治療剤（例えば、本明細書に記載されるように培養したＴ細胞またはＮＫ細胞）は、非経口経路、例えば、局所、表皮、または粘膜投与経路などによって、例えば、鼻腔内、経口、経膣、経直腸、舌下、または局所投与され得る。投与することはまた、例えば、１回、複数の回数、及び／または１以上の長期間にわたって実施され得る。

【0172】

本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、タンパク質、ペプチド、またはハプテンなどの任意の天然または合成免疫原性物質を指す。本明細書で使用される場合、「同種抗原」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）が認識することによって免疫細胞の活性化を誘導する（例えば、サイトカイン産生などのエフェクター機能を誘導する、及び／または細胞増殖のために細胞内シグナルを誘導する）抗原を指す。

【0173】

「がん」は、体内における異常細胞の制御不能な成長を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。無秩序な細胞の分裂及び成長は悪性腫瘍の形成をもたらし、これは隣接組織に浸潤し、リンパ系または血流を通って身体の遠位部に転移もし得る。「がん」は、本明細書で使用される場合、原発性がん、転移がん及び再発がんを指す。

【0174】

「血液悪性腫瘍」または「血液癌」という用語は、造血及びリンパ組織の哺乳動物のがん及び腫瘍を指す。血液悪性腫瘍の非限定的な例としては、血液、骨髄、リンパ節、及びリンパ系の組織に影響を及ぼすようなものが挙げられ、これらとしては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＩＶＩＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫が挙げられる。血液悪性腫瘍はまた、「液性腫瘍」とも称される。液性腫瘍癌としては、白血病、骨髄腫、及びリンパ腫に加えて、他の血液悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。

【0175】

「固形腫瘍」は、本明細書で使用される場合、組織の異常な腫瘤を指す。固形腫瘍は、良性または悪性の場合がある。固形腫瘍の非限定的な例としては、肉腫、癌腫、及びリンパ腫、例えば、肺、乳房、前立腺、結腸、直腸、及び膀胱のがんなどが挙げられる。固形腫瘍の組織構造は、実質（がん細胞）及びがん細胞が分散し、関連する微小環境を提供する場合がある関連する間質細胞を含む相互依存性組織区画を含む。

【0176】

いくつかの態様では、がんは、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭及び下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部組織の肉腫、基底細胞及び扁平上皮細胞皮膚癌、黒色腫、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍ならびにがん処置によって引き起こされる二次癌から選択される。いくつかの態様では、がんは、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アバーネシー肉腫、脂肪肉腫（ａｄｉｐｏｓｅ ｓａｒｃｏｍａ）、脂肪肉腫（ｌｉｐｏｓａｒｃｏｍａ）、胞巣状軟部肉腫、エナメル芽細胞肉腫、ブドウ状肉腫、緑色腫肉腫（ｃｈｌｏｒｏｍａ ｓａｒｃｏｍａ）、絨毛癌、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｓａｒｃｏｍａ）、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉腫肉腫、傍骨性肉腫、網状赤血球肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫、または毛細血管拡張性肉腫から選択される。いくつかの態様では、がんは、末端黒子型黒色腫、無色素性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング・パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、転移性黒色腫、結節性黒色腫、爪下黒色腫、または表在拡大型黒色腫から選択される。いくつかの態様では、がんは、腺房癌（ａｃｉｎａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、小葉癌（ａｃｉｎｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺嚢胞癌、腺様嚢胞癌、腺癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｄｅｎｏｍａｔｏｓｕｍ）、副腎皮質癌、肺胞癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌（ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、類基底癌、基底扁平上皮癌、気管支肺胞癌、細気管支癌、気管支原性肺癌、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛癌、膠様癌（ｃｏｌｌｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、面皰癌、子宮体部癌、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円柱上皮癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、円柱細胞癌、管癌、硬性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｄｕｒｕｍ）、胎児性癌、脳様癌（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、類表皮癌腫、腺上皮癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｅ ａｄｅｎｏｉｄｅｓ）、外方発育癌（ｅｘｏｐｈｙｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、潰瘍癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｅｘ ｕｌｃｅｒｅ）、線維癌、膠様癌（ｇｅｌａｔｉｎｉｆｏｒｍ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、膠様癌（ｇｅｌａｔｉｎｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｇｉａｎｔ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｇｉｇａｎｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母組織癌、血様癌、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌（Ｈｕｒｔｈｌｅ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、硝子状癌（ｈｙａｌｉｎｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、副腎様癌（ｈｙｐｅｍｅｐｈｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、乳児性胎児性癌、上皮内癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ）、表皮内癌、上皮内癌（ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クロムペッヘル癌（Ｋｒｏｍｐｅｃｈｅｒ’ｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クルチツキー細胞癌（Ｋｕｌｃｈｉｔｚｋｙ－ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、大細胞癌、レンズ状癌（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、レンズ状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪腫様癌、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄様癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌、軟性癌、粘液性癌（ｍｕｃｉｎｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液分泌癌、粘液細胞癌、粘表皮癌、粘液癌、粘液性癌（ｍｕｃｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液腫様癌、上咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭癌、門脈周囲癌、前浸潤癌、有棘細胞癌、軟性癌（ｐｕｌｔａｃｅｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫様癌、シュナイダー癌、硬癌（ｓｃｉｒｒｈｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、バレイショ状癌（ｓｏｌａｎｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、球状細胞癌（ｓｐｈｅｒｏｉｄａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、紡錘細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌、紐様癌（ｓｔｒｉｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、毛細血管拡張癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｔｉｃｕｍ）、毛細血管拡張癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔｏｄｅｓ）、移行上皮癌、結節癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節癌（ｔｕｂｅｒｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣状癌、または絨毛癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｖｉｆｌｏｓｕｍ）から選択される。いくつかの態様では、がんは、白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺腫瘍、原発性脳腫瘍、胃癌、結腸癌、悪性膵インスリノーマ（ｉｎｓｕｌａｎｏｍａ）、悪性カルチノイド、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、神経芽細胞腫、神経内分泌癌、食道癌、尿生殖路癌、悪性高カルシウム血症、子宮頸癌、子宮内膜癌、副腎皮質癌、前立腺癌、ミュラー管癌、卵巣癌、腹膜癌、卵管癌、または子宮体部漿液性腺癌から選択される。

【0177】

本明細書で使用される場合、「免疫応答」という用語は、外来作用物質に対する脊椎動物内の生物学的応答を指し、この応答は、これらの作用物質及びそれらに起因する疾患から生物を保護する。免疫応答は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞または好中球）ならびにこれらの細胞のいずれかまたは肝臓で産生される可溶性高分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）の作用によって媒介され、この応答は、侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性細胞もしくは他の異常細胞、または自己免疫もしくは病的炎症の場合には、正常なヒトの細胞もしくは組織の選択的標的化、結合、損傷、破壊、及び／または脊椎動物の身体からの排除をもたらすものである。免疫反応としては、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞もしくはＴｈ細胞、例えば、ＣＤ４^＋もしくはＣＤ８^＋Ｔ細胞などの活性化もしくは阻害、またはＴｒｅｇ細胞の阻害が挙げられる。本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」という用語は交換可能であり、胸腺によって産生または処理されるあらゆるリンパ球を指す。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＮＫＴ細胞である。

【0178】

本明細書で使用される場合、「抗腫瘍免疫応答」という用語は、腫瘍抗原に対する免疫応答を指す。

【0179】

「対象」は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語としては、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ならびにマウス、ラット及びモルモットなどのげっ歯類などの脊椎動物が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、対象はヒトである。「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」という語句は、例えば、腫瘍成長を制御するための、本明細書に記載されるように培養したＴ細胞の投与から恩恵を受けることになる、哺乳動物対象などの対象を含む。

【0180】

「治療有効量」または「治療上有効な投与量」という用語は、所望の生物学的結果、治療結果、及び／または予防結果をもたらす作用物質（例えば、本明細書に記載されるように培養したＴ細胞またはＮＫ細胞）の量を指す。その結果は、疾患の徴候、症状、または原因のうち１つ以上の減少、改善、緩和、軽減（ｌｅｓｓｅｎｉｎｇ）、遅延、及び／または軽減（ａｌｌｅｖｉａｔｉｏｎ）、あるいは生物系の任意の他の所望の変化であり得る。固形腫瘍に関して、有効量は、腫瘍を縮小させる、及び／または腫瘍の成長速度を減少させる（腫瘍成長を抑制するなど）、あるいは他の望ましくない細胞増殖を防止または遅延させるのに十分な量を含む。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍発達を遅延させるのに十分な量である。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍再発を防止または遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。

【0181】

有効量の組成物（例えば、本明細書に記載されるように培養した細胞）は、例えば、（ｉ）がん細胞の数を減少させ得る、（ｉｉ）腫瘍サイズを縮小し得る、（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞の浸潤を阻害し、遅延させ、ある程度まで遅らせてそれを停止し得る、（ｉｖ）阻害し得る（すなわち、腫瘍転移をある程度まで遅らせてそれを停止し得る）、（ｖ）腫瘍成長を阻害し得る、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／または再発を防止もしくは遅延させ得る、及び／または（ｖｉｉ）がんと関連する症状のうち１つ以上をある程度まで軽減し得る。

【0182】

いくつかの態様では、「治療有効量」は、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に記載されるように培養したＴ細胞）の量であり、これは進行性固形腫瘍などのがんの著しい減少またはがんの進行の緩徐化（退縮）をもたらすことが臨床的に証明されている。疾患退縮を促進する本開示の治療剤（例えば、本明細書に記載されるように培養したＴ細胞）の能力は、当業者に既知の様々な方法を使用して、例えば、臨床試験中のヒト対象で、ヒトでの効力を予測する動物モデル系で、またはインビトロアッセイで薬剤の活性をアッセイすることなどによって評価され得る。

【0183】

処置に関する「有効」及び「有効性」という用語は、薬理学的有効性及び生理学的安全性の両方を含む。薬理学的有効性は、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に記載されるように培養した細胞）が患者のがん退縮を促進する能力を指す。生理学的安全性は、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に記載されるように培養した細胞）の投与に起因する毒性、あるいは細胞、器官、及び／または生物レベルでの他の有害生理作用（有害作用）のレベルを指す。

【0184】

「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原と細胞外ドメインとの結合時に特殊な機能を細胞に実施させる、細胞内ドメインに結合した抗原特異的細胞外ドメインを有する組換え融合タンパク質を指す。いくつかの態様では、本明細書に開示されるキメラ抗原受容体は、本開示のキメラポリペプチドを含む。

【0185】

「人工Ｔ細胞受容体」、「キメラＴ細胞受容体」、及び「キメラ免疫受容体」という用語は各々、本明細書では「キメラ抗原受容体」という用語と交換可能に使用され得る。キメラ抗原受容体は、ＭＨＣ非依存性抗原と結合し、その細胞内ドメインを介して活性化シグナルを伝達するその両方の能力によって他の抗原結合剤とは区別される。

【0186】

キメラ抗原受容体の抗原特異的細胞外ドメインは、抗原、典型的には悪性腫瘍の表面発現抗原を認識し、それと特異的に結合する。抗原特異的細胞外ドメインが抗原と特異的に結合するのは、例えば、そのドメインが、約０．１ｐＭ～約１０μＭ、例えば、約０．１ｐＭ～約１μＭまたは約０．１ｐＭ～約１００ｎＭの親和性定数または相互作用の親和性（Ｋ_Ｄ）で抗原と結合する場合である。相互作用の親和性を決定する方法は、当該技術分野において既知である。本開示のＣＡＲでの使用に適した抗原特異的細胞外ドメインは、任意の抗原結合ポリペプチドであり得、多種多様のポリペプチドが当該技術分野において既知である。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。他の抗体ベースの認識ドメイン、例えば、ｃＡｂ ＶＨＨ（ラクダ科抗体可変ドメイン）及びそのヒト化型、ＩｇＮＡＲ ＶＨ（サメ抗体可変ドメイン）及びそのヒト化型、ｓｄＡｂ ＶＨ（単一ドメイン抗体可変ドメイン）、ならびに「ラクダ化」抗体可変ドメインなども、本開示のＣＡＲでの使用に適している。いくつかの態様では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ベースの認識ドメイン、例えば、一本鎖ＴＣＲ（ｓｃＴｖ、すなわち、Ｖアルファ、Ｖベータを含有する一本鎖２ドメインＴＣＲ）なども、本開示のＴＣＲでの使用に適している。

【0187】

本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」という用語は、α鎖及びβ鎖の２本の異なる膜貫通ポリペプチド鎖で構成されるヘテロ二量体を指し、鎖の各々が、鎖をＴ細胞表面膜内に固定する定常領域、及びＭＨＣによって提示される抗原を認識し、それに結合する可変領域からなる。ＴＣＲ複合体は、２つのヘテロ二量体のＣＤ３γε及びＣＤ３δε、ならびに１つのホモ二量体のＣＤ３ζを形成する６つのポリペプチドと会合し、これらが共にＣＤ３複合体を形成する。Ｔ細胞受容体操作Ｔ細胞療法は、これらの複合体を保持するＴ細胞の改変を利用して、特定の腫瘍細胞によって発現される抗原を特異的に標的とする。本明細書で使用される場合、「ＴＣＲ」という用語は、天然に存在するＴＣＲ及び操作されたＴＣＲを含む。

【0188】

本明細書で使用される場合、「操作ＴＣＲ」または「操作Ｔ細胞受容体」は、選択され、クローニングして、及び／またはその後に免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの集団に導入される、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）／ペプチド標的抗原に所望の親和性で特異的に結合するように操作されているＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を指す。

【0189】

「ＴＣＲ模倣物」または「ＴＣＲｍ」は、ペプチド及びＭＨＣ－Ｉ分子の両方を含むエピトープを認識する抗体の型を指し、Ｔ細胞上のＴＣＲによるそのような複合体の認識と同様である。

【0190】

本明細書で使用される場合、「ｕｇ」及び「ｕＭ」という用語は、それぞれ「μｇ」及び「μΜ」と交換可能に使用される。

【0191】

本明細書に記載される様々な態様は、以下の小節においてさらに詳しく記載される。

【0192】

ＩＩ．本開示の方法
本開示は、エクスビボまたはインビトロで細胞を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、本開示の方法は、細胞、例えば、万能性細胞、多能性細胞、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＴＩＬ）を培養条件で培養すること、または培養条件中に置くことを含み、培養（例えば、培地の張度、サイトカイン、及び／またはそれらの任意の組合せ）は、細胞の分化を制限または防止し、それによって細胞療法におけるそれらの使用に影響を及ぼすか、またはそれを改善できる。

【0193】

細胞培養培地は、様々な疾病の処置を目的として、細胞を増殖及び活性化するために使用される細胞産物のインビトロ増殖に有用である。最も緊急性の高い満たされていないニーズの１つは、療法に使用され得る細胞、例えば、がん細胞を破壊し得る細胞の増殖である。転移性固形腫瘍は、米国だけで５００，０００人を超える死者数の原因である。Ｔリンパ球は、他の利用可能な処置が無効な状況において腫瘍を死滅させることができると知られている。例えば、外科手術、化学療法、放射線療法及び「標的」または小分子療法は、多くの一般的な種類の転移がん、例えば、結腸、乳房、肺、膵臓、前立腺、胆管及び他の組織型のがんなどには効果的ではない。細胞ベースのがん免疫療法は、これらの組織型における根治療法を表し得る。

【0194】

細胞免疫療法の有効性は、インビボでの持続性、多能性、及び非対称細胞分裂（Ｔ細胞幹細胞性の表現型の特徴）に依存する。治療用細胞の培養及び／または操作に用いられる培地は、細胞の代謝、エピジェネティック、及び表現型の特質に大きな影響を与え得る。現在使用されている培地の配合は、およそ４０年間大きく変化していない（Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ １９９（８）：５１９－２４（１９６７）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。しかしながら、本明細書に開示される信頼性の高い前臨床データは、イオン、特にカリウム（Ｋ＋）、栄養素、及び／またはサイトカインの濃度が、エクスビボ操作中にＴ細胞の多能性に著しく影響を及ぼし得ることを実証している。この効果は多因子的であり、治療用細胞の標的、腫瘍微小環境内の細胞機能、及び移入前の治療用細胞の品質に依存する。本明細書に開示されるのは、例えば、養子移入前に抗腫瘍細胞の幹細胞性を促進するための戦略である。

【0195】

本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を、従来の免疫細胞培養培地と比較して、漸増濃度のカリウムイオン（例えば、約４０ｍＭ超、約４５ｍＭ超、約５０ｍＭ超、約５５ｍＭ超、約６０ｍＭ超、約６５ｍＭ超、または約７０ｍＭ超）を含む培地中で培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、高カリウムを含む培地は、低張または等張である。

【0196】

本開示のいくつかの態様は、エクスビボまたはインビトロ培養中のヒト免疫細胞及び／または幹細胞の収量を、ヒト免疫細胞及び／または幹細胞の幹細胞性を高めながら増加させる方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞及び／または幹細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。本開示のいくつかの態様は、免疫療法のためのヒト免疫細胞及び／または幹細胞の集団を調製する方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞及び／または幹細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。本開示のいくつかの態様は、免疫療法のために、エクスビボまたはインビトロ培養中のヒト免疫細胞の幹細胞性を高める方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。

【0197】

いくつかの態様では、本開示の方法は、細胞、例えば、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを、少なくとも約５ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む培地中に置くこと、培地中で成長、または培養することを含み、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約５０ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の方法は、細胞、例えば、Ｔ細胞を、約４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中に置くこと、培地中で成長、または培養することを含み、培地は低張または等張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約５０ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の方法は、細胞、例えば、Ｔ細胞を、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む培地中に置くこと、培地中で成長、または培養することを含み、培地は低張または等張である。本開示のいくつかの態様は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴＣＲ発現免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの集団を調製する方法を対象とし、本方法は、少なくとも約５ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含み、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約５０ｍＭである。本開示のいくつかの態様は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴＣＲ発現免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの集団を調製する方法を対象とし、本方法は、少なくとも約５ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含み、培地は高張ではない、例えば、培地は低張または等張である。本開示のいくつかの態様は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴＣＲ発現免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの集団を調製する方法を対象とし、本方法は、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含む。いくつかの態様では、培地は低張または等張である。培地は、十分な量のカリウム塩を添加することによって調製され得る。培地の張度は、カリウムイオンの濃度に対して培地中のＮａＣｌの濃度を制御することによって変更され得る。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0198】

いくつかの態様では、本開示はまた、高濃度のカリウムイオン（例えば、約５ｍＭよりも高い、例えば、４０ｍＭよりも高い、例えば、５５ｍＭ～７０ｍＭ）を有するが、等張または低張である培地中で成長させた細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）が、高張である培地中で成長させた細胞よりも分化が最小限の、より幹様な表現型を保持できることも提供する。したがって、いくつかの態様では、カリウム塩を添加した後、培地は高張ではない。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。ある特定の態様では、培地は、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはそれらの任意の組合せをさらに含む。いくつかの態様では、培地は、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組合せをさらに含む。

【0199】

ある特定の態様では、本明細書に開示される方法を使用して培養した細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）の集団は、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地中において、または高張条件下で従来の方法を使用して培養した細胞の集団と比較して幹様細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）は、出発細胞集団と比較して幹様細胞に特徴的なマーカーの発現増加を呈する。いくつかの態様では、出発細胞集団は、ヒト対象から得られる細胞を含む。いくつかの態様では、出発細胞集団は、ヒト対象から得られるＴ細胞を含む。いくつかの態様では、出発Ｔ細胞集団は、Ｔ_Ｎ細胞、Ｔ_ＳＣＭ細胞、Ｔ_ＣＭ細胞、Ｔ_ＥＭ細胞、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0200】

細胞多能性の増加は、当該技術分野において既知の任意の方法を使用して測定され得る。ある特定の態様では、細胞の幹細胞性は、抗体染色に続いてゲーティングしたフローサイトメトリーによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は、オートファジーフラックスによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は、グルコース取込みによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は、脂肪酸取込みによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は、ミトコンドリア量によって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は、ＲＮＡ定量化／発現分析（例えば、マイクロアレイ、ｑＰＣＲ（ｔａｑｍａｎ）、ＲＮＡ－Ｓｅｑ．、単一細胞ＲＮＡ－Ｓｅｑ．、またはそれらの任意の組合せ）によって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は、代謝アッセイ（例えば、Ｓｅａｈｏｒｓｅ代謝アッセイ、細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）の分析、酸素消費速度（ＯＣＲ）の分析、予備呼吸能の分析、及び／またはミトコンドリア膜電位（ＴＭＲＭ）の分析）によって測定される。いくつかの態様では、幹細胞性は、１つ以上のインビボ機能アッセイ（例えば、細胞持続性、抗腫瘍能、抗腫瘍クリアランス、ウイルスクリアランス、多能性、及びそれらの任意の組合せをアッセイすること）を使用して測定される。

【0201】

いくつかの態様では、細胞、例えば、万能性細胞、多能性細胞、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）の分化状態は、低分化細胞に特有のマーカーを発現する細胞数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、幹様Ｔ細胞数の増加は、Ｔ_Ｎ及び／またはＴ_ＳＣＭ細胞に特有のマーカーを発現するＴ細胞数の増加を特徴とする。ある特定の態様では、幹様Ｔ細胞数の増加は、Ｔ_ＳＣＭ細胞に特有のマーカーを発現するＴ細胞数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＡを発現するＴ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＣＲ７を発現するＴ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ６２Ｌを発現するＴ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ２８を発現するＴ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ９５を発現するＴ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＯを発現しない。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、及びＣＤ６２Ｌ^＋であるＴ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＴＣＦ７を発現する細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋であるＴ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ３を発現する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ３^＋、ＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋であるＴ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ２７を発現する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ２７^＋、ＣＤ３^＋、ＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋であるＴ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、Ｔ_ＳＣＭ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、Ｔ_Ｎ細胞数の増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、Ｔ_ＳＣＭ及びＴ_Ｎ細胞数の増加を呈する。

【0202】

いくつかの態様では、培養物中の幹様細胞の数は、培養前の幹様細胞の数と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％増加する。いくつかの態様では、培養物中の幹様細胞の数は、培養前の幹様細胞の数と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、または少なくとも約２０倍増加する。

【0203】

いくつかの態様では、本明細書に開示される方法によるＴ細胞の培養後、幹様Ｔ細胞は、培養物中におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％を構成する。

【0204】

いくつかの態様では、本明細書に開示される方法によるＴ細胞の培養後、幹様Ｔは、培養物中におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％を構成する。

【0205】

いくつかの態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）は、形質導入効率の増加を呈する。いくつかの態様では、形質導入後、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞は、従来の方法を使用して同様に形質導入して培養した細胞と比較した場合に、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲｍをコードする標的導入遺伝子を発現する細胞のパーセンテージが高い。ある特定の態様では、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）は、ウイルスベクターを使用して形質導入される。いくつかの態様では、ウイルスベクターはＡＡＶを含む。いくつかの態様では、ウイルスベクターはレトロウイルスを含む。いくつかの態様では、ウイルスベクターはレンチウイルスを含む。ある特定の態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞は、細胞のレンチウイルス形質導入後、従来の方法を使用して同様に形質導入して培養した細胞と比較した場合に、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現するパーセンテージが高い。いくつかの態様では、形質導入効率は、従来の方法を使用して同様に形質導入して培養した細胞と比較して、少なくとも１．５倍増加する。いくつかの態様では、形質導入効率は、従来の方法を使用して同様に形質導入して培養した細胞と比較して、少なくとも２倍増加する。

【0206】

いくつかの態様では、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）は、本明細書に開示される方法に従って培養する前に形質導入される。いくつかの態様では、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）は、本明細書に開示される方法に従って培養した後に形質導入される。いくつかの態様では、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）は、本明細書に開示される方法に従って、例えば、形質導入前、形質導入中、及び形質導入後に、少なくとも５０ｍＭのカリウムイオンを含む低張または等張培地中で培養される。

【0207】

ある特定の態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの養子移入時に、移入細胞は、従来の培養条件を使用して培養した細胞と比較した場合、細胞疲弊の減少を呈する。ある特定の態様では、培養細胞の養子移入時に、移入細胞は、従来の培養条件を使用して培養した細胞と比較した場合、インビボでより長い期間持続する。いくつかの態様では、移入細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、従来の培養条件を使用して培養した細胞と比較した場合、より高いインビボ有効性、例えば、殺腫瘍活性を有する。いくつかの態様では、従来の培養条件を使用して培養した細胞と比較した場合、対象での応答、例えば、腫瘍体積の減少を誘発するために必要な、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞の用量が低い。

【0208】

本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を、少なくとも約５ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む培地中で培養する方法を対象とし、培地は低張である。本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中で培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む培地中で培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む培地中で培養する方法を対象とし、培地は低張または等張である。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、対象から単離されると直ちに、例えば、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む、本明細書に開示される培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、細胞の増殖中に、例えば、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む、本明細書に開示される培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、細胞の操作中に、例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲをコードする構築物による形質導入中に、例えば、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む、本明細書に開示される培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、細胞の操作後に、例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲをコードする構築物による形質導入後に、例えば、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む、本明細書に開示される培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、増殖及び操作全体にわたって、例えば、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む、本明細書に開示される培地中で培養される。ある特定の態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、ウイルス遺伝子操作全体にわたって、例えば、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む、本明細書に開示される培地中で培養される。ある特定の態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、非ウイルス遺伝子操作全体にわたって、例えば、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む、本明細書に開示される培地中で培養される。ある特定の態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、腫瘍特異的標的化を可能にするための受容体（例えば、ＴＣＲ、ＴＣＲｍ、及び／またはＣＡＲ）の導入中に、例えば、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む、本明細書に開示される培地中で培養される。ある特定の態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、Ｔ細胞機能を改善する１つ以上の内因性遺伝子の導入全体にわたって、例えば、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む、本明細書に開示される培地中で培養される。ある特定の態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、Ｔ細胞機能を改善する１つ以上の合成遺伝子の導入全体にわたって、例えば、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む、本明細書に開示される培地中で培養される。

【0209】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、または少なくとも約４５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、または約４５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭである。

【0210】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約８０ｍＭ、少なくとも約８５ｍＭ、少なくとも約９０ｍＭ、少なくとも約９５ｍＭ、少なくとも約１００ｍＭ、少なくとも約１０５ｍＭ、少なくとも約１１０ｍＭ、少なくとも約１１５ｍＭ、少なくとも約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭである。

【0211】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５ｍＭ～約１００ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５ｍＭ～約９０ｍＭ、約５ｍＭ～約８０ｍＭ、約５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５ｍＭ～約５０ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２５ｍＭ～約１００ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約２５ｍＭ～約９０ｍＭ、約２５ｍＭ～約８０ｍＭ、約２５ｍＭ～約７０ｍＭ、約２５ｍＭ～約６０ｍＭ、または約２５ｍＭ～約５０ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約１００ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８５ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７５ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６５ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５５ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ未満のＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0212】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約９５ｍＭ、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0213】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約５５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約５５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約５５ｍＭ～約１００ｍＭ、約５５ｍＭ～約９５ｍＭ、約５５ｍＭ～約９０ｍＭ、約５５ｍＭ～約８５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、または約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0214】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約６０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約６０ｍＭ～約１００ｍＭ、約６０ｍＭ～約９５ｍＭ、約６０ｍＭ～約９０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0215】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約６５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約６５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約６５ｍＭ～約１００ｍＭ、約６５ｍＭ～約９５ｍＭ、約６５ｍＭ～約９０ｍＭ、約６５ｍＭ～約８５ｍＭ、約６５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６５ｍＭ～約７５ｍＭ、または約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0216】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約７０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約７０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約７０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７０ｍＭ～約９５ｍＭ、約７０ｍＭ～約９０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0217】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約７５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約７５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約７５ｍＭ～約１００ｍＭ、約７５ｍＭ～約９５ｍＭ、約７５ｍＭ～約９０ｍＭ、約７５ｍＭ～約８５ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約６５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0218】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約８０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約８０ｍＭ～約１００ｍＭ、約８０ｍＭ～約９５ｍＭ、約８０ｍＭ～約９０ｍＭ、または約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0219】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約８５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約８５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約８５ｍＭ～約１００ｍＭ、約８５ｍＭ～約９５ｍＭ、または約８５ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約６５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0220】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約９０ｍＭ～約１００ｍＭ、または約９０ｍＭ～約９５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約５０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0221】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約９５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９５ｍＭ～約１０５ｍＭ、または約９５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約９５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約５５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0222】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭ～約１１５ｍＭ、約１００ｍＭ～約１１０ｍＭ、または約１００ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１００ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約５０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0223】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０５ｍＭ～約１１５ｍＭ、または約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１０５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約３５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0224】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１１０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約３０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0225】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約９０ｍＭである。

【0226】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約６０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0227】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約５５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０未満～約８５である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約６０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８５未満～約８０である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約６５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８０ｍＭ未満～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約７０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７５ｍＭ未満～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約７５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７０ｍＭ未満～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７５ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約６５未満～約６０である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約８５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約６０ｍＭ未満～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８５ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約５５ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭ～約９５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９０ｍＭ～約９５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約５０未満～約４５である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９５ｍＭ～約１００ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約４５ｍＭ未満～約４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１００ｍＭ～約１０５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約４０ｍＭ未満～約３５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約３５未満～約３０である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約３０ｍＭ未満～約２５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１５ｍＭ～約１２０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約２５ｍＭ未満～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0228】

ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張である。ある特定の態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張である。

【0229】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭよりも高く、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４１ｍＭよりも高く、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４１ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４２ｍＭよりも高く、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４２ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４３ｍＭよりも高く、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４３ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４４ｍＭよりも高く、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４４ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４５ｍＭよりも高く、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４５ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４６ｍＭよりも高く、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４６ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４７ｍＭよりも高く、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４７ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４８ｍＭよりも高く、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４８ｍＭであり、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４９ｍＭよりも高く、培地は低張である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４９ｍＭであり、培地は低張である。

【0230】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４１ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４２ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４３ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４４ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４５ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４６ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４７ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４８ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４９ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0231】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５１ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５２ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５３ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５４ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５６ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５７ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５８ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５９ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５９ｍＭである。ある特定の態様では、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は等張である。

【0232】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５１ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５２ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５３ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５４ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５６ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５７ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５８ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５９ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0233】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６１ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６２ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６３ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６４ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６６ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６７ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６８ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６９ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６９ｍＭである。ある特定の態様では、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は等張である。

【0234】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６１ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６２ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６３ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６４ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６６ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６７ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６８ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６９ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0235】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７１ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７２ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７３ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７４ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７６ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７７ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７８ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７９ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７９ｍＭである。ある特定の態様では、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は等張である。

【0236】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７１ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７２ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７３ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７４ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７５ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７６ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７７ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７８ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７９ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0237】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８１ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８２ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８３ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８４ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８６ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８７ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８８ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８９ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８９ｍＭである。ある特定の態様では、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は等張である。

【0238】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８１ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８２ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８３ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８４ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８５ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８６ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８７ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８８ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８９ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0239】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９１ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９２ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９３ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９４ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９６ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９７ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９８ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９９ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９９ｍＭである。ある特定の態様では、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は等張である。

【0240】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９０ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９１ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９２ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９３ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９４ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９５ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９６ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９７ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９８ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９９ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0241】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０１ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０２ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０３ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０４ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０５ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０６ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０７ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０８ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０９ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０９ｍＭである。ある特定の態様では、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は等張である。

【0242】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１００ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１００ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０１ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０２ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０３ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０４ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０６ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０７ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０８ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０９ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0243】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１０ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１１ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１２ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１３ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１４ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１５ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１６ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１７ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１８ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１９ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１９ｍＭである。ある特定の態様では、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は等張である。

【0244】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１１ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１２ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１３ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１４ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１５ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１６ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１７ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１８ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１９ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0245】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２０ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２１ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２２ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２３ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２４ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２５ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２６ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２７ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２８ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２９ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２９ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１３０ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１３０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は等張である。

【0246】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２０ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２１ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２２ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２３ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２４ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２５ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２６ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２７ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２８ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２９ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１３０ｍＭよりも高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１３０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0247】

いくつかの態様では、高濃度のカリウムイオンを含む培地は、培地中に十分な量のカリウム塩を添加することによって調製され得る。いくつかの態様では、カリウム塩の非限定的な例としては、アミントリクロロ白金酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ａｍｉｎｅｔｒｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎａｔｅ）、アクアペンタクロロルテニウム酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ａｑｕａｐｅｎｔａｃｈｌｏｒｏｒｕｔｈｅｎａｔｅ）、ビス（オキサラト）白金（ＩＩ）酸カリウム二水和物、硫酸水素カリウム、水素化ホウ素カリウム、臭化カリウム、炭酸カリウム、塩化カリウム、クロム酸カリウム、重クロム酸カリウム、ジシアノ銀酸カリウム、ジシアノ金酸カリウム、フッ化カリウム、フルオロ硫酸カリウム、ヘキサクロロイリジウム酸カリウム、ヘキサクロロオスミウム酸カリウム、ヘキサクロロパラジウム酸カリウム、ヘキサクロロ白金酸カリウム、ヘキサクロロレニウム酸カリウム、ヘキサシアノクロム酸カリウム、ヘキサシアノ鉄酸カリウム、ヘキサシアノルテニウム（ＩＩ）酸カリウム水和物、ヘキサフルオロアンチモン酸カリウム、ヘキサフルオロニッケル酸カリウム、ヘキサフルオロリン酸カリウム、ヘキサフルオロチタン酸カリウム、ヘキサフルオロジルコン酸カリウム、ヘキサヒドロキソアンチモン酸カリウム、ヘキサヨード白金酸カリウム、ヘキサヨードレニウム酸カリウム、水酸化カリウム、ヨウ素酸カリウム、ヨウ化カリウム、マンガン酸カリウム、メタバナジン酸カリウム、モリブデン酸カリウム、硝酸カリウム、ニトロソジスルホン酸カリウム、オスミウム（ＶＩ）酸カリウム二水和物、ペンタクロロニトロシルルテニウム酸カリウム、過塩素酸カリウム、過レニウム酸カリウム、過ルテニウム酸カリウム、過硫酸カリウム、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、ピロリン酸カリウム、セレノシアン酸カリウム、セレノシアン酸カリウム、スズ酸カリウム三水和物、硫酸カリウム、テルル酸カリウム水和物、亜テルル酸カリウム、四ホウ酸カリウム四水和物、テトラブロモ金酸カリウム、テトラブロモパラジウム酸カリウム、テトラクロロパラジウム酸カリウム、テトラクロロ白金酸カリウム、テトラシアノパラジウム酸カリウム、テトラシアノ白金酸カリウム、テトラフルオロホウ酸カリウム、テトラニトロ白金酸カリウム、テトラチオン酸カリウム、ｐ－トルエンチオスルホン酸カリウム、及びヒドロキシクエン酸カリウム三塩基性一水和物が挙げられる。ある特定の態様では、カリウム塩は、塩化カリウム（ＫＣｌ）を含む。ある特定の態様では、カリウム塩は、グルコン酸カリウムを含む。ある特定の態様では、カリウム塩は、クエン酸カリウムを含む。ある特定の態様では、カリウム塩は、ヒドロキシクエン酸カリウムを含む。

【0248】

いくつかの態様では、培地は、本明細書に開示される濃度でカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、本明細書に開示される濃度でカリウムイオンを含み、培地は、約２８０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0249】

いくつかの態様では、培地は約５０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約５０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約５０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５４ｍＯｓｍｏｌ～約２５６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約５０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0250】

いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭ、約５２ｍＭ、約５３ｍＭ、または約５４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭ、約５２ｍＭ、約５３ｍＭ、または約５４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭ、約５２ｍＭ、約５３ｍＭ、または約５４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５４ｍＯｓｍｏｌ～約２５６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭ、約５２ｍＭ、約５３ｍＭ、または約５４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭ、約５２ｍＭ、約５３ｍＭ、または約５４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0251】

いくつかの態様では、培地は約５５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約５５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約５５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５４ｍＯｓｍｏｌ～約２５６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約５５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0252】

いくつかの態様では、培地は、約５６ｍＭ、約５７ｍＭ、約５８ｍＭ、または約５９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約５６ｍＭ、約５７ｍＭ、約５８ｍＭ、または約５９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約５６ｍＭ、約５７ｍＭ、約５８ｍＭ、または約５９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２５８ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約６０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0253】

いくつかの態様では、培地は約６０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約６０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約６０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５６ｍＯｓｍｏｌ～約２５８ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約６０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0254】

いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭ、約６２ｍＭ、約６３ｍＭ、または約６４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭ、約６２ｍＭ、約６３ｍＭ、または約６４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭ、約６２ｍＭ、約６３ｍＭ、または約６４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５６ｍＯｓｍｏｌ～約２５８ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭ、約６２ｍＭ、約６３ｍＭ、または約６４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭ、約６２ｍＭ、約６３ｍＭ、または約６４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0255】

いくつかの態様では、培地は約６５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約６５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約６５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７ｍＯｓｍｏｌ～約２５８ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約６５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0256】

いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭ、約６７ｍＭ、約６８ｍＭ、または約６９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭ、約６７ｍＭ、約６８ｍＭ、または約６９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭ、約６７ｍＭ、約６８ｍＭ、または約６９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭ、約６７ｍＭ、約６８ｍＭ、または約６９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭ、約６７ｍＭ、約６８ｍＭ、または約６９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0257】

いくつかの態様では、培地は約７０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約７０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約７０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９ｍＯｓｍｏｌ～約２６１ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約７０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0258】

いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭ、約７２ｍＭ、約７３ｍＭ、または約７４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭ、約７２ｍＭ、約７３ｍＭ、または約７４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭ、約７２ｍＭ、約７３ｍＭ、または約７４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９ｍＯｓｍｏｌ～約２６１ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭ、約７２ｍＭ、約７３ｍＭ、または約７４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭ、約７２ｍＭ、約７３ｍＭ、または約７４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0259】

いくつかの態様では、培地は約７５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約７５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約７５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９ｍＯｓｍｏｌ～約２６１ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約７５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0260】

いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６１ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６３ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６１ｍＯｓｍｏｌ～約２６３ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0261】

いくつかの態様では、培地は約８０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約８０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約８０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６１ｍＯｓｍｏｌ～約２６３ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は約８０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0262】

いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６３ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６４ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌ～約２７０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６１ｍＯｓｍｏｌ～約２６３ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６３ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0263】

いくつかの態様では、培地は、細胞増殖剤をさらに含む。本明細書で使用される場合、「細胞増殖剤」は、培養細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）のインビトロ及び／またはエクスビボ成長及び増殖を促進する薬剤、例えば、小分子、ポリペプチド、またはそれらの任意の組合せを指す。いくつかの態様では、細胞増殖剤は、ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの態様では、培地は、ＡＫＴ阻害剤をさらに含む。いくつかの態様では、培地は、ＰＩ３Ｋ阻害剤及びＡＫＴ阻害剤をさらに含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＬＹ２９４００２を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＣ８７１１４を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、イデラリシブを含む（例えば、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖ．２（３）：２１０－２３（２０１８）を参照のこと）。いくつかの態様では、培地は、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤をさらに含む。いくつかの態様では、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤は、ＴＷＳ１１９を含む。いくつかの態様では、培地は、ＡＣＬＹ阻害剤をさらに含む。いくつかの態様では、ＡＣＬＹ阻害剤は、ヒドロキシクエン酸カリウム三塩基性一水和物を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、クエン酸ヒドロキシルを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ピクチリシブを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＣＡＬ－１０１を含む。いくつかの態様では、ＡＫＴ阻害剤は、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、またはＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ（ＣＡＳ ６１２８４７－０９－３）を含む。

【0264】

いくつかの態様では、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）は、エクスビボ培養の全体にわたって、例えば、Ｔ細胞が対象から単離された時から、成長、増殖、操作を経て投与まで本明細書に開示される培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）は、増殖期間中、本明細書に開示される培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）は、増殖期間中、本明細書に開示される培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）は、生細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）の総数が、少なくとも約１０^４、５×１０^４、１０^５、５×１０^５、１０^６、または５×１０^６個の総細胞数となるまで本明細書に開示される培地中で培養される。

【0265】

ＩＩ．Ａ．ナトリウム
本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）約１１５ｍＭ未満の濃度のナトリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含み、培地は低張または等張である。本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）約１１５ｍＭ未満の濃度のナトリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含む。本開示のある特定の態様は、Ｔ細胞を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）約１１５ｍＭ未満の濃度のナトリウムイオンを含む培地中にＴ細胞を置くことを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。

【0266】

いくつかの態様では、ナトリウムの目標濃度は、より高濃度のナトリウムイオンを含む基本培地から開始し、ナトリウムイオンの目標濃度に到達するように溶液を希釈することによって達成される。いくつかの態様では、ナトリウムの目標濃度は、１つ以上のナトリウム塩を添加することにより、ナトリウムイオンの濃度を上昇させることによって達成される。ナトリウム塩の非限定的な例としては、（メタ）過ヨウ素酸ナトリウム、酒石酸アルセニルナトリウム水和物（ｓｏｄｉｕｍ ａｒｓｅｎｙｌ ｔａｒｔｒａｔｅ ｈｙｄｒａｔｅ）、アジ化ナトリウム、ナトリウムベンジルオキシド、臭化ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クロム酸ナトリウム、シクロヘキサン酪酸ナトリウム、ナトリウムエタンチオラート、フッ化ナトリウム、フルオロリン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、ヘキサクロロイリジウム（ＩＩＩ）酸ナトリウム水和物、ヘキサクロロイリジウム（ＩＶ）酸ナトリウム六水和物、ヘキサクロロ白金（ＩＶ）酸ナトリウム六水和物、ヘキサクロロロジウム（ＩＩＩ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロアルミン酸ナトリウム、ヘキサフルオロアンチモン（Ｖ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロヒ（Ｖ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロ鉄（ＩＩＩ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロリン酸ナトリウム、ヘキサフルオロケイ酸ナトリウム、ヘキサヒドロキシ白金（ＩＶ）酸ナトリウム、ヘキサメタリン酸ナトリウム、二フッ化水素ナトリウム、硫酸水素ナトリウム、ナトリウム水素シアナミド、水酸化ナトリウム、ヨウ化ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム四水和物、メタケイ酸ナトリウム九水和物、メタバナジン酸ナトリウム、モリブデン酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、シュウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム一水和物、過炭酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、過ヨウ素酸ナトリウム、過マンガン酸ナトリウム、過レニウム酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ピロリン酸ナトリウム、セレン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、スズ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、亜テルル酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム、テトラクロロアルミン酸ナトリウム、テトラクロロ金（ＩＩＩ）酸ナトリウム、テトラクロロパラジウム（ＩＩ）酸ナトリウム、テトラクロロ白金（ＩＩ）酸ナトリウム、チオリン酸ナトリウム三塩基性（ｓｏｄｉｕｍ ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｔｒｉｂａｓｉｃ）、チオ硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム五水和物、オキシフッ化イットリウムナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｙｔｔｒｉｕｍ ｏｘｙｆｌｕｏｒｉｄｅ）、トリメタリン酸三ナトリウム、及びそれらの任意の組合せが挙げられる。ある特定の態様では、ナトリウム塩は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含む。ある特定の態様では、ナトリウム塩は、グルコン酸ナトリウムを含む。ある特定の態様では、ナトリウム塩は、重炭酸ナトリウムを含む。ある特定の態様では、ナトリウム塩は、ヒドロキシクエン酸ナトリウムを含む。ある特定の態様では、ナトリウム塩は、リン酸ナトリウムを含む。

【0267】

いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、基本培地の濃度よりも低い。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、カリウムイオンの濃度が増加するにつれて減少する。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約２５ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約６５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約７５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約８５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約３０ｍＭ～約３５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約３５ｍＭ～約４０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約４５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約４５ｍＭ～約５０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約９０ｍＭである。

【0268】

いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、または約９０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約４５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５５．６ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５９．３ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６３．９ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６７．６ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７２．２ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７６ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約８０．５ｍＭである。

【0269】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約６７ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約６８ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約６９ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７２ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７３ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７４ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオンを含む。

【0270】

いくつかの態様では、培地は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン及び約３０ｍＭ～約１０９ｍＭのＮａＣｌを含み、ＮａＣｌの濃度（ｍＭ）は、（１３５－カリウムイオン濃度）以下である。いくつかの態様では、培地は、約４０ｍＭのカリウムイオン及び約９５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約９５ｍＭ、約９４ｍＭ、約９３ｍＭ、約９２ｍＭ、約９１ｍＭ、約９０ｍＭ、約８５ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約４５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約９０ｍＭ、約８９ｍＭ、約８８ｍＭ、約８７ｍＭ、約８６ｍＭ、約８５ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約８５ｍＭ、約８４ｍＭ、約８３ｍＭ、約８２ｍＭ、約８１ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約８０ｍＭ、約７９ｍＭ、約７８ｍＭ、約７７ｍＭ、約７６ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約７５ｍＭ、約７４ｍＭ、約７３ｍＭ、約７２ｍＭ、約７１ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約７０ｍＭ、約６９ｍＭ、約６８ｍＭ、約６７ｍＭ、約６６ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約６５ｍＭ、約６４ｍＭ、約６３ｍＭ、約６２ｍＭ、約６１ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約６０ｍＭ、約５９ｍＭ、約５８ｍＭ、約５７ｍＭ、約５６ｍＭ、約５５ｍＭ、約５０ｍＭ、約４５ｍＭ、または約４０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約５５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約５５ｍＭ、約５４ｍＭ、約５３ｍＭ、約５２ｍＭ、約５１ｍＭ、約５０ｍＭ、約４５ｍＭ、約４０ｍＭ、または約３５ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約８５ｍＭのカリウムイオン及び約５０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約５０ｍＭ、約４９ｍＭ、約４８ｍＭ、約４７ｍＭ、約４６ｍＭ、約４５ｍＭ、約４０ｍＭ、約３５ｍＭ、または約３０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約９０ｍＭのカリウムイオン及び約４５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約４５ｍＭ、約４４ｍＭ、約４３ｍＭ、約４２ｍＭ、約４１ｍＭ、約４０ｍＭ、約３５ｍＭ、約３０ｍＭ、または約２５ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６１ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６２ｍＭのＮａＣｌを含む。

【0271】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約８０．５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約８０．５ｍＭのナトリウムイオンを含み、培地は、約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0272】

いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約７６ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約７６ｍＭのナトリウムイオンを含み、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0273】

いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約７２．２ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約７２．２ｍＭのナトリウムイオンを含み、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0274】

いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約６７．６ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約６７．６ｍＭのナトリウムイオンを含み、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0275】

いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６３．９ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６３．９ｍＭのナトリウムイオンを含み、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0276】

いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約５９．３ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約５９．３ｍＭのナトリウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0277】

いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約５５．６ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約５５．６ｍＭのナトリウムイオンを含み、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0278】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。

【0279】

本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）約１００ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む培地中に細胞を置くことを含む。本開示のある特定の態様は、Ｔ細胞を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）約９０ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む培地中にＴ細胞を置くことを含む。

【0280】

ＩＩ．Ｂ．糖類
本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）糖類を含む培地中に細胞を置くことを含み、培地は低張または等張である。本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）糖類を含む培地中に細胞を置くことを含む。本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）糖類を含む培地中に細胞を置くことを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）糖類を含む培地中に細胞を置くことを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0281】

いくつかの態様では、糖類の目標濃度は、より高濃度の糖類を含む基本培地から開始し、糖類の目標濃度に到達するように溶液を希釈することによって達成される。いくつかの態様では、糖類の目標濃度は、所望の濃度に到達するまで糖類を添加することにより、糖類の濃度を上昇させることによって達成される。

【0282】

いくつかの態様では、糖類は、単糖、二糖、または多糖である。いくつかの態様では、糖類は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、マルトース、スクロース、ラクトース、トレハロース、及びそれらの任意の組合せから選択される。ある特定の態様では、糖類はグルコースである。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）５０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約４０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0283】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約４．２９ｇ／Ｌ未満である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約２４ｍＭ未満である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ超である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４ｍＭ～約１４．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４．５ｍＭ～約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５ｍＭ～約１５．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．５ｍＭ～約１６ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６ｍＭ～約１６．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．５ｍＭ～約１７ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７ｍＭ～約１７．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．５ｍＭ～約１８ｍＭである。

【0284】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１０．５ｍＭ、約１１ｍＭ、約１１．５ｍＭ、約１２ｍＭ、約１２．５ｍＭ、約１３ｍＭ、約１３．５ｍＭ、約１４ｍＭ、約１４．５ｍＭ、約１５ｍＭ、約１５．５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１６．５ｍＭ、約１７ｍＭ、約１７．５ｍＭ、約１８ｍＭ、約１８．５ｍＭ、約１９ｍＭ、約１９．５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２０．５ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである。

【0285】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約６ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約７ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約８ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約９ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１１ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１１．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１２ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１２．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１３ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１３．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．４ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．９ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．３ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．８ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．２ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．７ｍＭである。

【0286】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約１７．７ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約１７．７ｍＭのグルコースを含み、培地は、約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0287】

いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約１７．２ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約１７．２ｍＭのグルコースを含み、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0288】

いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約１６．８ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約１６．８ｍＭのグルコースを含み、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0289】

いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約１６．３ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約１６．３ｍＭのグルコースを含み、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0290】

いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約１５．９ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約１５．９ｍＭのグルコースを含み、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0291】

いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約１５．４ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約１５．４ｍＭのグルコースを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0292】

いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約１５ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約１５ｍＭのグルコースを含み、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。

【0293】

ＩＩ．Ｃ．カルシウム
本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）ナトリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含み、培地は低張または等張である。本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）ナトリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含む。本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）ナトリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）少なくとも約４０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）ＮａＣｌを含む培地中に細胞を置くことを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）ＮａＣｌを含む培地中に細胞を置くことを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0294】

いくつかの態様では、カルシウムの目標濃度は、より高濃度のカルシウムイオンを含む基本培地から開始し、カルシウムイオンの目標濃度に到達するように溶液を希釈することによって達成される。いくつかの態様では、カルシウムの目標濃度は、１つ以上のカルシウム塩を添加することにより、カルシウムイオンの濃度を上昇させることによって達成される。カルシウム塩の非限定的な例としては、臭化カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、カルシウムシアナミド、フッ化カルシウム、水素化カルシウム、水酸化カルシウム、ヨウ素酸カルシウム、ヨウ化カルシウム、硝酸カルシウム、亜硝酸カルシウム、シュウ酸カルシウム、過塩素酸カルシウム四水和物、第一リン酸カルシウム、リン酸三カルシウム、硫酸カルシウム、チオシアン酸カルシウム四水和物、ヒドロキシアパタイト、及びそれらの任意の組合せが挙げられる。いくつかの態様では、カルシウム塩は、塩化カルシウム（ＣａＣｌ_２）を含む。いくつかの態様では、カルシウム塩は、グルコン酸カルシウムを含む。

【0295】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、基本培地の濃度よりも低い。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、基本培地の濃度よりも高い。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ超である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約２．８ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約２．５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約２．０ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．９ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．８ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．７ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．６ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．４ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．３ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ未満である。

【0296】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ～約２．８ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．７ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約０．８～約０．９ｍＭ、約０．８～約１．０ｍＭ、約０．８～約１．１ｍＭ、約０．８～約１．２ｍＭ、約０．８～約１．３ｍＭ、約０．８～約１．４ｍＭ、約０．８～約１．５ｍＭ、約０．８～約１．６ｍＭ、約０．８～約１．７ｍＭ、約０．８～約１．８ｍＭ、約０．９～約１．０ｍＭ、約０．９～約１．１ｍＭ、約０．９～約１．２ｍＭ、約０．９～約１．３ｍＭ、約０．９～約１．４ｍＭ、約０．９～約１．５ｍＭ、約０．９～約１．６ｍＭ、約０．９～約１．７ｍＭ、約０．９～約１．８ｍＭ、約１．０～約１．１ｍＭ、約１．０～約１．２ｍＭ、約１．０～約１．３ｍＭ、約１．０～約１．４ｍＭ、約１．０～約１．５ｍＭ、約１．０～約１．６ｍＭ、約１．０～約１．７ｍＭ、約１．０～約１．８ｍＭ、約１．１～約１．２ｍＭ、約１．１～約１．３ｍＭ、約１．１～約１．４ｍＭ、約１．１～約１．５ｍＭ、約１．１～約１．６ｍＭ、約１．１～約１．７ｍＭ、約１．１～約１．８ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである。

【0297】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．９ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭ～約０．９ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．９ｍＭ～約１．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ～約１．１ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭ～約１．２ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭ～約１．３ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．３ｍＭ～約１．４ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．４ｍＭ～約１．５ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．５ｍＭ～約１．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．７ｍＭ～約１．８ｍＭである。

【0298】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．７ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．９ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．３ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．４ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．５ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．７ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．８ｍＭである。

【0299】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約１．８ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約１．８ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン、約１．８ｍＭのカルシウムイオン、及びＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0300】

いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約１．７ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約１．７ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン、約１．７ｍＭのカルシウムイオン、及びＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0301】

いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約１．６ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約１．６ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン、約１．６ｍＭのカルシウムイオン、及びＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0302】

いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約１．５ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約１．５ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン、約１．５ｍＭのカルシウムイオン、及びＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0303】

いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約１．４ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約１．４ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン、約１．４ｍＭのカルシウムイオン、及びＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0304】

いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約１．３ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約１．３ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン、約１．３ｍＭのカルシウムイオン、及びＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0305】

いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約１．２ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約１．２ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン、約１．２ｍＭのカルシウムイオン、及びＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0306】

ＩＩ．Ｄ．張度
本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性細胞、多能性細胞、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＴＩＬ）を、従来の培地よりも高濃度のカリウムイオン（例えば、約５ｍＭ超のカリウムイオン）を含む培地中で培養する方法を対象とし、培地は高張ではない。驚くべきことに、高カリウムイオン濃度（例えば、５ｍＭ超のカリウムイオン）を有する非高張培地中で万能性／多能性／免疫細胞を培養すると、培養物中の幹様（例えば、低分化または未分化）細胞数の増加がもたらされることを見出した。この効果は、（ｉ）培地が高濃度のカリウム（例えば、５ｍＭ超、例えば、５０ｍＭ超）を有し、培地が低張または等張である場合に最も顕著である。したがって、培養培地中のカリウムイオンを増加させると、調整しなければ張度が上昇する可能性があるが、本明細書に開示されるデータは、カリウムイオンのみの増加は、低張または等張条件下でのカリウムイオンの増加と比べて、細胞集団における幹様特性の促進に効果的ではないことを示唆している。

【0307】

本開示のいくつかの態様では、培地の張度は調整される。いくつかの態様では、培地の張度は、基本培地の張度よりも低い。いくつかの態様では、培地の張度は、基本培地の張度よりも高い。いくつかの態様では、培地の張度は、基本培地の張度と同じである。

【0308】

本開示で使用される培地は、低張または等張であり得る。培地の張度は、培地中のカリウムイオンの濃度を含む、多数の要因によって影響を受け得る。いくつかの態様では、カリウムイオン濃度の増加は、１つ以上の他の要因の濃度の増加または減少と対になる。いくつかの態様では、この組合せは、培地の張度に影響を及ぼす。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加する一方で、ナトリウムイオン、例えば、ＮａＣｌの濃度が減少する。

【0309】

いくつかの態様では、本発明の培地に有用な培地は、カリウムイオンの機能及び張度に基づいて調製され得る。表２を参照のこと。例えば、いくつかの態様では、本開示に有用な培地が低張（例えば、２８０ｍＯｓｍ未満）であり、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンを含む場合、低張として培地を維持するのに十分なＮａＣｌの濃度は、次の式に基づいて決定され得る：ＮａＣｌ濃度＝（所望の張度（２８０）／２）－カリウムイオン濃度（すなわち、ＮａＣｌの濃度（ｍＭ）が（１４０－カリウムイオン濃度）以下である）。いくつかの態様では、本明細書に開示される低張培地は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭのカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度を含む。したがって、低張培地の場合、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度が１１０ｍＭ～１４０ｍＭである限り、カリウムイオンの濃度は、５０ｍＭ～９０ｍＭの濃度に設定され得、ナトリウムイオン濃度は、９０ｍＭ～５０ｍＭ、またはそれ未満であり得る。いくつかの態様では、本明細書に開示される低張培地は、１１５ｍＭ～１４０ｍＭのカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度を含む。いくつかの態様では、本明細書に開示される低張培地は、１２０ｍＭ～１４０ｍＭのカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度を含む。

【0310】

いくつかの態様では、培地は等張（２８０ｍＯｓｍ～３００ｍＯｓｍ）であり、約５０ｍＭ～７０ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む。対応するナトリウムイオンの濃度が、次の式に基づいて再度算出され得る：ＮａＣｌ濃度＝（所望の張度／２）－カリウムイオン濃度。例えば、カリウムイオンの濃度が５０ｍＭであり、所望の張度が３００ｍＯｓｍである場合、ナトリウム濃度は１００ｍＭであり得る。

【0311】

いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±１ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±４ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±８ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±９ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±１０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～３２０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約３１５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0312】

いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように（表２を参照のこと）、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２７５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、２７５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２７０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、２７０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２５５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、２５５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、張度は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌよりも高い。いくつかの態様では、培地は、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0313】

いくつかの態様では、培地は、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２１５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２０５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。

【0314】

いくつかの態様では、培地は、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２７０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２５４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５６ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５７ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５８ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５８ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５９ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６１ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６１ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６２ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６３ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６４ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるように、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0315】

いくつかの態様では、培地は、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、張度は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される。

【0316】

いくつかの態様では、培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５４．７の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、張度は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される。

【0317】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約８０．５ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約８０．５ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含み、培地は約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約８０．５ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約８０．５ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオンを含む。

【0318】

いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含み、培地は約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７６ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約７６ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオンを含む。

【0319】

いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７２．２ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７２．２ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含み、培地は約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７２．２ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約７２．２ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオンを含む。

【0320】

いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６７．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６７．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含み、培地は約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６７．６ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約６７．６ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオンを含む。

【0321】

いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６３．９ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６３．９ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含み、培地は約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６３．９ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約６３．９ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオンを含む。

【0322】

いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５９．３ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５９．３ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含み、培地は約２６０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５９．３ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約５９．３ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオンを含む。

【0323】

いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５５．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５５．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含み、培地は約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５５．６ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約５５．６ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオンを含む。

【0324】

培地の浸透圧は、任意の時点で、例えば、本明細書に開示される等張または低張状態に調整され得る。いくつかの態様では、培地の浸透圧は、細胞が培地に添加される前に、例えば、本明細書に開示される等張または低張状態に調整され得る。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作前、例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現する構築物による形質導入前に低張または等張培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作中、例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現する構築物による形質導入中に低張または等張培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作後、例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現する構築物による形質導入後に低張または等張培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞増殖全体を通して低張または等張培地中で培養される。

【0325】

ＩＩ．Ｅ．サイトカイン
本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）本明細書に開示されるように、少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン、及び（ｉｉ）サイトカインを含む培地中に細胞を置くことを含み、培地は低張または等張である。本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）本明細書に開示されるように、４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン、及び（ｉｉ）サイトカインを含む培地中に細胞を置くことを含む。本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、（ｉ）本明細書に開示されるように、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン、及び（ｉｉ）サイトカインを含む培地中に細胞を置くことを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。

【0326】

本開示のいくつかの態様は、多数の低分化免疫細胞、例えば、幹様Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬ、例えば、１つ以上のＴ_ＳＣＭ様表現型及び／または機能を有する細胞を、免疫細胞中においてエクスビボまたはインビトロで増加させる方法を対象とし、本方法は、（ｉ）本明細書に開示されるように、少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウム、及び（ｉｉ）サイトカインを含む培地中に細胞を置くことを含み、培地は低張または等張である。本開示のいくつかの態様は、多数の低分化免疫細胞、例えば、幹様Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬ、例えば、１つ以上のＴ_ＳＣＭ様表現型及び／または機能を有する細胞を、免疫細胞中においてエクスビボまたはインビトロで増加させる方法を対象とし、本方法は、（ｉ）本明細書に開示されるように、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウム、及び（ｉｉ）サイトカインを含む培地中に細胞を置くことを含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの任意の組合せから選択される。

【0327】

サイトカインは、任意の時点で培地に添加され得る。いくつかの態様では、サイトカインは、細胞が培地に添加される前に培地に添加される。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作前、例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現する構築物による形質導入前に、（ｉ）本明細書に開示される濃度のカリウム、及び（ｉｉ）サイトカインを含む培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作中、例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現する構築物による形質導入中に、（ｉ）本明細書に開示される濃度のカリウム、及び（ｉｉ）サイトカインを含む培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作後、例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現する構築物による形質導入後に、（ｉ）本明細書に開示される濃度のカリウム、及び（ｉｉ）サイトカインを含む培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞増殖全体を通して（ｉ）本明細書に開示される濃度のカリウム、及び（ｉｉ）サイトカインを含む培地中で培養される。

【0328】

いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭ超のカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭ超のカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭ超のカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭ超のカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、培地はＩＬ－７を含まない。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭ超のカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、培地はＩＬ－７を含まない。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、培地はＩＬ－７を含まない。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、培地はＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭ超のカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、培地はＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、培地はＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、培地はＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭ超のカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、培地はＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、培地はＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉｉ）ＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭ超のカリウムイオンならびに（ｉｉ）ＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉｉ）ＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉｉ）ＩＬ－７及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭ超のカリウムイオンならびに（ｉｉ）ＩＬ－７及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉｉ）ＩＬ－７及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉｉ）ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭ超のカリウムイオンならびに（ｉｉ）ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉｉ）ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地はＮａＣｌをさらに含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0329】

本開示のある特定の態様は、多数の低分化免疫細胞、例えば、幹様Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬ、例えば、Ｔ_ＳＣＭ様表現型を有する細胞を、免疫細胞中においてエクスビボまたはインビトロで増加させる方法を対象とし、本方法は、少なくとも約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む培地中で細胞を培養することを含み、培地はＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、ＩＬ－７及び／またはＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、培地中での培養後に低分化細胞、例えば、幹様Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬ、例えば、Ｔ_ＳＣＭ様表現型を有する細胞の数が、ＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５を含む培地中で培養した低分化細胞の数よりも高い。

【0330】

いくつかの態様では、培地は、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0331】

いくつかの態様では、培地は、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0332】

いくつかの態様では、培地は、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬを含む。いくつかの態様では、培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0333】

いくつかの態様では、培地は、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0334】

いくつかの態様では、培地は、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。

【0335】

いくつかの態様では、培地は、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。

【0336】

いくつかの態様では、培地は、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

【0337】

いくつかの態様では、培地は、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地はＮａＣｌをさらに含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0338】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、及び（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地は低張である。

【0339】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオンならびに約５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地は低張である。

【0340】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。

【0341】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び（ｖｉｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地は低張である。

【0342】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオンならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。

【0343】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。

【0344】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオンならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地は低張である。

【0345】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、及び（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0346】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。

【0347】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

【0348】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び（ｖｉｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

【0349】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0350】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0351】

ある特定の態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び（ｖｉ）約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0352】

いくつかの態様では、培地は、４０ｍＭ超のカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約１２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約１２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約１２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約１２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約１２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約１２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約１２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約１２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0353】

ＩＩ．Ｆ．基本培地
本開示のある特定の態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含み、培地は低張または等張である。本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含む。本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び１００ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む培地中に細胞を置くことを含む。本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含む。本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法を対象とし、本方法は、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び９０ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む培地中に細胞を置くことを含む。いくつかの態様では、培地は、基本培地にカリウムイオンを添加することによって調製される。細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養するために使用される、当該技術分野において既知の任意の基本培地が使用され得る。

【0354】

いくつかの態様では、基本培地は、１つ以上の必須アミノ酸をさらに含む。いくつかの態様では、基本培地は、Ｌ－アルギニン、Ｌ－シスチン、Ｌ－イソロイシン、Ｌ－ロイシン、Ｌ－リジン、Ｌ－メチオニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－チロシン、Ｌ－バリン、及びＬ－グルタミン、またはそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の必須アミノ酸を含む。いくつかの態様では、基本培地はＬ－グルタミンを含む。

【0355】

いくつかの態様では、基本培地は、少なくとも約０．０１ｍＭの１つ以上の必須アミノ酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭの１つ以上の必須アミノ酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約１ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約９ｍＭ、約１ｍＭ～約８ｍＭ、約１ｍＭ～約７ｍＭ、約１ｍＭ～約６ｍＭ、約１ｍＭ～約５ｍＭ、約１ｍＭ～約４ｍＭ、約１ｍＭ～約３ｍＭ、または約１ｍＭ～約２ｍＭの１つ以上の必須アミノ酸を含む。

【0356】

いくつかの態様では、基本培地は、少なくとも約０．０１ｍＭ、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．５ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約２ｍＭ、少なくとも約３ｍＭ、少なくとも約４ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１１ｍＭ、少なくとも約１２ｍＭ、少なくとも約１３ｍＭ、少なくとも約１４ｍＭ、もしくは少なくとも約１５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭの１つ以上の必須アミノ酸を含む。

【0357】

ある特定の態様では、基本培地は、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．２ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．４ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．６ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．８ｍＭ、約２．９ｍＭ、約３．０ｍＭ、約３．１ｍＭ、約３．２ｍＭ、約３．３ｍＭ、約３．４ｍＭ、約３．５ｍＭ、約３．６ｍＭ、約３．７ｍＭ、約３．８ｍＭ、約３．９ｍＭ、約４．０ｍＭ、約４．１ｍＭ、約４．２ｍＭ、約４．３ｍＭ、約４．４ｍＭ、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、約５．５ｍＭ、約５．６ｍＭ、約５．７ｍＭ、約５．８ｍＭ、約５．９ｍＭ、約６．０ｍＭ、約６．１ｍＭ、約６．２ｍＭ、約６．３ｍＭ、約６．４ｍＭ、約６．５ｍＭ、約６．６ｍＭ、約６．７ｍＭ、約６．８ｍＭ、約６．９ｍＭ、または約７．０ｍＭの１つ以上の必須アミノ酸を含む。

【0358】

いくつかの態様では、基本培地はＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、少なくとも約０．０１ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約１ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約９ｍＭ、約１ｍＭ～約８ｍＭ、約１ｍＭ～約７ｍＭ、約１ｍＭ～約６ｍＭ、約１ｍＭ～約５ｍＭ、約１ｍＭ～約４ｍＭ、約１ｍＭ～約３ｍＭ、または約１ｍＭ～約２ｍＭのＬ－グルタミンを含む。

【0359】

いくつかの態様では、基本培地は、少なくとも約０．０１ｍＭ、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．５ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約２ｍＭ、少なくとも約３ｍＭ、少なくとも約４ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１１ｍＭ、少なくとも約１２ｍＭ、少なくとも約１３ｍＭ、少なくとも約１４ｍＭ、もしくは少なくとも約１５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭのＬ－グルタミンを含む。

【0360】

ある特定の態様では、基本培地は、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．２ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．４ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．６ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．８ｍＭ、約２．９ｍＭ、約３．０ｍＭ、約３．１ｍＭ、約３．２ｍＭ、約３．３ｍＭ、約３．４ｍＭ、約３．５ｍＭ、約３．６ｍＭ、約３．７ｍＭ、約３．８ｍＭ、約３．９ｍＭ、約４．０ｍＭ、約４．１ｍＭ、約４．２ｍＭ、約４．３ｍＭ、約４．４ｍＭ、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、約５．５ｍＭ、約５．６ｍＭ、約５．７ｍＭ、約５．８ｍＭ、約５．９ｍＭ、約６．０ｍＭ、約６．１ｍＭ、約６．２ｍＭ、約６．３ｍＭ、約６．４ｍＭ、約６．５ｍＭ、約６．６ｍＭ、約６．７ｍＭ、約６．８ｍＭ、約６．９ｍＭ、または約７．０ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．７ｍＭのＬ－グルタミンを含む。ある特定の態様では、基本培地は、約１．６８ｍＭのＬ－グルタミンを含む。

【0361】

いくつかの態様では、基本培地は、約０．１４ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．１５ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．７６ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．８３ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．８４ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．９７ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約２．０５ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約２．１１ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約２．１８ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約５．４１ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約５．４７ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．１０ｍＭ未満のＬ－グルタミンを含む。

【0362】

いくつかの態様では、基本培地はＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、少なくとも約０．０１ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約１ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約９ｍＭ、約１ｍＭ～約８ｍＭ、約１ｍＭ～約７ｍＭ、約１ｍＭ～約６ｍＭ、約１ｍＭ～約５ｍＭ、約１ｍＭ～約４ｍＭ、約１ｍＭ～約３ｍＭ、または約１ｍＭ～約２ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。

【0363】

いくつかの態様では、基本培地は、少なくとも約０．０１ｍＭ、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．５ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約２ｍＭ、少なくとも約３ｍＭ、少なくとも約４ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１１ｍＭ、少なくとも約１２ｍＭ、少なくとも約１３ｍＭ、少なくとも約１４ｍＭ、もしくは少なくとも約１５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。

【0364】

ある特定の態様では、基本培地は、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．２ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．４ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．６ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．８ｍＭ、約２．９ｍＭ、約３．０ｍＭ、約３．１ｍＭ、約３．２ｍＭ、約３．３ｍＭ、約３．４ｍＭ、約３．５ｍＭ、約３．６ｍＭ、約３．７ｍＭ、約３．８ｍＭ、約３．９ｍＭ、約４．０ｍＭ、約４．１ｍＭ、約４．２ｍＭ、約４．３ｍＭ、約４．４ｍＭ、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、約５．５ｍＭ、約５．６ｍＭ、約５．７ｍＭ、約５．８ｍＭ、約５．９ｍＭ、約６．０ｍＭ、約６．１ｍＭ、約６．２ｍＭ、約６．３ｍＭ、約６．４ｍＭ、約６．５ｍＭ、約６．６ｍＭ、約６．７ｍＭ、約６．８ｍＭ、約６．９ｍＭ、または約７．０ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。

【0365】

いくつかの態様では、基本培地は、約０．１５ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．１７ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．１８ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．１９ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．８５ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．８６ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．９ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．９５ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．０６ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．０９ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．１０ｍＭ未満のＬ－グルタミン酸を含む。

【0366】

いくつかの態様では、基本培地はジペプチドを含む。いくつかの態様では、基本培地は、グルタミン－グルタミン（Ｇｌｎ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、アラニル－グルタミン（Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。

【0367】

いくつかの態様では、基本培地は、少なくとも約０．１ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．１ｍＭ～約５０ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．１ｍＭ～約４０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約２ｍＭ～約２０ｍＭ、約３ｍＭ～約２０ｍＭ、約４ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約６ｍＭ～約２０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約２０ｍＭ、約９ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約２ｍＭ～約１０ｍＭ、約３ｍＭ～約１０ｍＭ、約４ｍＭ～約１０ｍＭ、約５ｍＭ～約１０ｍＭ、約６ｍＭ～約１０ｍＭ、約７ｍＭ～約１０ｍＭ、約８ｍＭ～約１０ｍＭ、または約９ｍＭ～約１０ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。

【0368】

いくつかの態様では、基本培地は、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約２ｍＭ、少なくとも約３ｍＭ、少なくとも約４ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１１ｍＭ、少なくとも約１２ｍＭ、少なくとも約１３ｍＭ、少なくとも約１４ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約１６ｍＭ、少なくとも約１７ｍＭ、少なくとも約１８ｍＭ、少なくとも約１９ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、または少なくとも約５０ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。

【0369】

ある特定の態様では、基本培地は、約１ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．７ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。ある特定の態様では、基本培地は、約１．６８ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。

【0370】

ある特定の態様では、基本培地は、約６ｍＭ、約６．１ｍＭ、約６．２ｍＭ、約６．３ｍＭ、約６．４ｍＭ、約６．５ｍＭ、約６．６ｍＭ、約６．７ｍＭ、約６．８ｍＭ、約６．９ｍＭ、約７．０ｍＭ、約７．１ｍＭ、または約７．２ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約６．８ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約６．８１ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約６．９ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約６．９６ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。ある特定の態様では、基本培地は、約７．０ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。

【0371】

ある特定の態様では、基本培地は、約５ｍＭ未満のアンモニア（ＮＨ_３）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、約４ｍＭ未満、約３．５ｍＭ未満、約３ｍＭ未満、約２．５ｍＭ未満、約２ｍＭ未満、約１．５ｍＭ未満、約１ｍＭ未満、約０．５ｍＭ未満、約０．４ｍＭ未満、約０．３ｍＭ未満、約０．２ｍＭ未満、または約０．１ｍＭ未満のアンモニアを含む。ある特定の態様では、基本培地は、約０．０１ｍＭのアンモニア～約２ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．９ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．８ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．７ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．６ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．５ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．４ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．３ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．２ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．１ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．９ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．８ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．７ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．６ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．５ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．４ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．３ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．２ｍＭ未満のアンモニア、または約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．１ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．２ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．２５ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．２５９ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．２８ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１．３ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．３ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．３４ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．３５ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．３６ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．３７ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．３ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．２９ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．２８ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．２７８ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、基本培地はアンモニアを含まない。

【0372】

いくつかの態様では、基本培地は乳酸塩を含む。ある特定の態様では、基本培地は乳酸塩を含まない。

【0373】

いくつかの態様では、基本培地はカリウムを含み、例えば、基本培地は、本明細書に記載されるように、カリウムの添加前にカリウムを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約１０ｍＭ未満のカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．２ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．４ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．６ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．８ｍＭ、約２．９ｍＭ、約３．０ｍＭ、約３．１ｍＭ、約３．２ｍＭ、約３．３ｍＭ、約３．４ｍＭ、約３．５ｍＭ、約３．６ｍＭ、約３．７ｍＭ、約３．８ｍＭ、約３．９ｍＭ、約４．０ｍＭ、約４．１ｍＭ、約４．２ｍＭ、約４．３ｍＭ、約４．４ｍＭ、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、約５．５ｍＭ、約５．６ｍＭ、約５．７ｍＭ、約５．８ｍＭ、約５．９ｍＭ、または約６．０ｍＭのカリウムイオンを含む。ある特定の態様では、基本培地は、約４ｍＭのカリウムイオンを含む。

【0374】

いくつかの態様では、基本培地は、平衡塩類溶液（例えば、ＰＢＳ、ＤＰＢＳ、ＨＢＳＳ、ＥＢＳＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、基本培地イーグル（ＢＭＥ）、Ｆ－１０、Ｆ－１２、ＲＰＭＩ１６４０、グラスゴー最小必須培地（ＧＭＥＭ）、アルファ最小必須培地（アルファＭＥＭ）、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｍ１９９、ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＡＩＭ Ｖ、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地、及びそれらの任意の組合せから選択される。いくつかの態様では、基本培地は、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ Ｔ細胞ＣＤＭを含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）Ｐｒｏを含む。いくつかの態様では、基本培地は、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５（ＬＯＮＺＡ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地は無血清である。いくつかの態様では、基本培地は、免疫細胞血清置換（ＩＣＳＲ）をさらに含む。例えば、いくつかの態様では、基本培地は、ＩＣＳＲを補充したＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＣＳＲを補充したＡＩＭ Ｖ、ＩＣＳＲを補充したＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＩＣＳＲを補充したＲＰＭＩ、ＩＣＳＲを補充したＴＥＸＭＡＣＳ（商標）、またはそれらの任意の組合せを含む。特定の態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全を含む。

【0375】

ＩＩ．Ｇ．細胞
本開示のいくつかの態様は、細胞を培養する方法を対象とし、本方法は、本明細書に開示されるように、少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む低張または等張培地中に細胞を置くことを含む。本開示のある特定の態様は、細胞を培養する方法を対象とし、本方法は、本明細書に開示されるように、４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含む。本開示のある特定の態様は、細胞を培養する方法を対象とし、本方法は、本明細書に開示されるように、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む培地中に細胞を置くことを含む。

【0376】

本開示のいくつかの態様は、細胞（例えば、本明細書に開示されるヒト免疫細胞及び／または幹細胞）を培養する方法を対象とし、本方法は、本明細書に開示されるように、少なくとも約４０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び１００ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む培地中に細胞を置くことを含む。本開示のある特定の態様は、細胞（例えば、本明細書に開示されるヒト免疫細胞及び／または幹細胞）を培養する方法を対象とし、本方法は、本明細書に開示されるように、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び９０ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む培地中に細胞を置くことを含む。

【0377】

培地中に置かれる細胞は、療法を必要とする対象から収集及び／または単離されている細胞であり得る。いくつかの態様では、培地中に置かれる細胞は、培養前に操作されている。いくつかの態様では、培地中に置かれる細胞は、増殖している。培地中に置かれる細胞は、出発（初期、すなわち、患者試料、アフェレーシス試料、バフィーコート）細胞と称され得る。本明細書に開示される培地中でそれらを培養することから生じる細胞は、結果として得られる（培養した）細胞と称され得る。

【0378】

本明細書に開示される方法は、培養万能性細胞または多能性細胞の低分化表現型を促進する培養条件を提供する。したがって、本明細書に開示される方法及び培地は、多能性（例えば、万能性）細胞型の培養に有用である。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法を使用して培養可能な細胞は、多能性細胞である。いくつかの態様では、細胞は万能性細胞である。ある特定の態様では、万能性細胞は、胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む。ある特定の態様では、万能性細胞は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含む。いくつかの態様では、細胞は造血幹細胞である。

【0379】

ある特定の態様では、細胞は免疫細胞である。いくつかの態様では、出発免疫細胞は、ヒト対象から単離される。いくつかの態様では、出発免疫細胞は、同種細胞療法のためにヒト対象から単離される。いくつかの態様では、出発免疫細胞は、自己細胞療法のためにヒト対象から単離される。いくつかの態様では、細胞はＴ細胞である。いくつかの態様では、細胞はＮＫ細胞である。いくつかの態様では、細胞はＴＩＬである。いくつかの態様では、細胞はＴｒｅｇである。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、ヒト対象から単離される。いくつかの態様では、免疫細胞は、腫瘍浸潤Ｔ細胞または腫瘍浸潤ＮＫ細胞である。ある特定の態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは操作される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むように操作される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、操作Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むように操作される。

【0380】

いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、本明細書に開示される方法に従って培養前に操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、本明細書に開示される方法に従って培養後に操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、本明細書に開示される方法に従って、例えば、細胞操作前、細胞操作中、及び細胞操作後に、少なくとも５０ｍＭのカリウムイオンを含む低張または等張培地中で培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、操作Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように操作される。ある特定の態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを、本明細書に開示される条件下で、例えば、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンを含む低張または等張培地中で培養すると、より高い形質導入効率がもたらされる。いくつかの態様では、形質導入効率は、４ｍＭ以下のカリウムイオンを含む培地中で培養した細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬと比較した場合、本明細書に開示される方法に従って、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンを含む低張または等張培地中で培養した細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬでは少なくとも約２倍高い。いくつかの態様では、形質導入効率は、４ｍＭ以下のカリウムイオンを含む培地中で培養した細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬと比較した場合、本明細書に開示される方法に従って、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンを含む低張または等張培地中で培養した細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬでは少なくとも約２．５倍高い。

【0381】

いくつかの態様では、細胞は、抗原受容体及び／または別の追加のポリペプチドを発現する構築物を含む。いくつかの態様では、抗原受容体は、抗体、ｓｃＦｖなどの操作抗体、ＣＡＲ、操作ＴＣＲ、ＴＣＲ模倣物（例えば、抗体－Ｔ細胞受容体（ａｂＴＣＲ）もしくはキメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ））、またはキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）を含む。例として、ＴＣＲは、ＴＣＲ（例えば、アルファ／ベータＴＣＲまたはガンマ／デルタＴＣＲ）の抗原結合ドメインが、抗体（抗体の定常ドメインの有無にかかわらず）の抗原結合ドメインで置き換えられている操作ＴＣＲを含み得、次いで操作ＴＣＲは、ＴＣＲのシグナル伝達機能を保持しながら抗体の抗原に特異的となる。キメラシグナル伝達受容体は、（１）細胞外結合ドメイン（例えば、天然／改変受容体細胞外ドメイン、天然／改変リガンド細胞外ドメイン、ｓｃＦｖ、ナノボディ、Ｆａｂ、ＤＡＲＰｉｎ、及びａｆｆｉｂｏｄｙ）、（２）膜貫通ドメイン、ならびに（３）細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、転写因子を活性化するドメイン、あるいはＪＡＫ／ＳＴＡＴ、キナーゼ、ホスファターゼ、及びユビキチンを動員及び／または活性化するドメイン、ＳＨ３、ＳＨ２、及びＰＤＺ）を含み得る。例えば、ＥＰ３４０７９３Ｂ１、ＷＯ２０１７／０７０６０８、ＷＯ２０１８／２００５８２、ＷＯ２０１８／２００５８３、ＷＯ２０１８／２００５８５、及びＸｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１８）４：６２を参照のこと。

【0382】

いくつかの態様では、抗原受容体は、目的の抗原（例えば、腫瘍抗原または病原体の抗原）を標的とする。抗原としては、ＡＦＰ（アルファ－フェトプロテイン）、αｖβ６または別のインテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、Ｂｒａｆ、ＣＡ９（炭酸脱水酵素９）、ＣＣＬ－１（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド１）、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ３５２、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、クローディン１８．２、クローディン６、ｃ－ＭＥＴ、ＤＬＬ３（デルタ様タンパク質３）、ＤＬＬ４、ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３）、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＧ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＰＧ－４０、エフリンＢ２、ＥＰＨａ２（エフリン受容体Ａ２）、ＥＲＢＢ二量体、エストロゲン受容体、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体）、ＦＡＰ－α（線維芽細胞活性化タンパク質α）、胎児ＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＣＲＬ５、ＦＲ－α（葉酸受容体アルファ）、ＧＣＣ（グアニルシクラーゼＣ）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２（グリピカン－２）、ＧＰＣ３、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質ＮＭＢ）、ＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体５Ｄ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、Ｂ型肝炎表面抗原、ＨＬＡ－Ａ１（ヒト白血球抗原Ａ１）、ＨＬＡ－Ａ２（ヒト白血球抗原Ａ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ（ヒト高分子量黒色腫関連抗原）、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様成長因子１受容体）、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＩＬ－２２Ｒａ（ＩＬ－２２受容体アルファ）、ＩＬ－１３Ｒａ２（ＩＬ－１３受容体アルファ２）、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩ－ＣＡＭ）、Ｌｉｖ－１、ＬＲＲＣ８Ａ（８ファミリーメンバーＡを含有するロイシンリッチリピート）、ルイスＹ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１（メランＡ）、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）、ＭＣＳＰ（黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、メソテリン、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１６、ＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＡＦＰ、ＫＲＡＳ、ＮＹ－ＥＳＯ、ＭＡＧＥ－Ａ、及びＷＴ１に由来するペプチドと複合化したＨＬＡ－Ａ）、ＮＣＡＭ（神経細胞接着分子）、ネクチン－４、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラー群２メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＥＳＯ、腫瘍胎児抗原、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＲＡＭＥ（黒色腫優先発現抗原）、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質α）、ＳＬＩＴ、ＳＬＩＴＲＫ６（ＮＴＲＫ様タンパク質６）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原１）、サバイビン、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質）、Ｔｒｏｐ－２、ＶＥＧＦＲ１（血管内皮増殖因子受容体１）、ＶＥＧＦＲ２、ならびにＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、及び他の病原体に由来する抗原が挙げられ得るが、これらに限定されない。

【0383】

ある特定の態様では、抗原受容体は、ｈＴＥＲＴを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＫＲＡＳを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、Ｂｒａｆを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＴＧＦβＲＩＩを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＭＡＧＥ Ａ１０／Ａ４を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＡＦＰを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＰＲＡＭＥを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＭＡＧＥ Ａ１を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＷＴ－１を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＮＹ－ＥＳＯを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＰＲＡＭＥを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＮＹ－ＥＳＯを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１９を標的とする。

【0384】

いくつかの態様では、抗原受容体は、ＢＣＭＡを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１４７を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１９を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１９及びＣＤ２８を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ２０を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ２０及びＣＤ１９を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ２２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ３０を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＥＡを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＤＬＬ３を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＧＤ２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＨＥＲ２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＩＬ－１ＲＡＰを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、メソテリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、メソテリン（ｍｅｔｈｏｔｈｅｌｉｎ）を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＮＫＧ２Ｄを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＰＳＭＡを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＴｎＭＵＣ１を標的とする。

【0385】

ＩＩ．Ｇ．１．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、ＣＡＲを含む。いくつかの態様では、ＣＡＲを発現するように調製され得る細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）は、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞、例えば、モノＣＡＲ Ｔ細胞、ゲノム編集ＣＡＲ Ｔ細胞、二重ＣＡＲ Ｔ細胞、またはタンデムＣＡＲ Ｔ細胞である。そのようなＣＡＲ Ｔ細胞の例は、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４４１９５号で提供される。

【0386】

いくつかの態様では、ＣＡＲは、腫瘍細胞、例えば、悪性Ｂ細胞、悪性Ｔ細胞、または悪性形質細胞などで発現される１つ以上の抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。

【0387】

いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。

【0388】

いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１４７を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１９を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＲＯＲ１を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＧＰＣ３を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＧＰＣ２を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１９及びＣＤ２８を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ２０を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ２０及びＣＤ１９を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ２２を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ３０を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＥＡを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＤＬＬ３を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＧＤ２を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＨＥＲ２を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＩＬ－１ＲＡＰを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、メソテリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、メソテリン（ｍｅｔｈｏｔｈｅｌｉｎ）を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＮＫＧ２Ｄを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＰＳＭＡを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＴｎＭＵＣ１を標的とする。

【0389】

ある特定の態様では、ＣＡＲは、ＭＨＣと複合化した抗原と特異的に結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＴＣＲｍ、例えば、本明細書に開示される任意のＴＣＲｍに由来する抗原結合ドメインを含む。

【0390】

ＩＩ．Ｇ．２．Ｔ細胞受容体操作（ＴＣＲ）細胞
いくつかの態様では、本明細書に開示される免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴＩＬは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、操作ＴＣＲを含む。いくつかの態様では、ＴＣＲは、腫瘍抗原に特異的に結合する。本明細書で使用される場合、「操作ＴＣＲ」または「操作Ｔ細胞受容体」という用語は、選択され、クローニングして、及び／またはその後に免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの集団に導入される、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）／ペプチド標的抗原に所望の親和性で特異的に結合するように操作されているＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を指す。いくつかの態様では、ＴＣＲは、がん患者から同定される新生抗原と特異的に結合する。

【0391】

いくつかの態様では、ＴＣＲは、腫瘍細胞、例えば、悪性Ｂ細胞、悪性Ｔ細胞、または悪性形質細胞などで発現される１つ以上の抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。

【0392】

ある特定の態様では、本開示の操作細胞は、抗原を標的とするＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し得る。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、共通の腫瘍関連抗原（共通ＴＡＡ）及び特有の腫瘍関連抗原（特有ＴＡＡ）、または腫瘍特異的抗原という主な種類を標的とし得る。前者としては、がん精巣（ＣＴ）抗原、過剰発現抗原、及び分化抗原が挙げられ得るが、これらに限定されない一方で、後者としては、新生抗原及びオンコウイルス抗原が挙げられ得るが、これらに限定されない。ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６タンパク質及びＨＰＶ Ｅ７タンパク質は、オンコウイルス抗原の分類に属する。

【0393】

いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、ＣＴ抗原、例えば、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９．２３、ＭＡＧＥ－Ａ１０、及びＭＡＧＥ－Ａ１２を含むが、これらに限定されないＭＡＧＥを標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、黒色腫及び正常なメラノサイトで主に見られる、糖タンパク質（ｇｐ１００）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原（ＭＡＲＴ－１）、及び／またはチロシナーゼを標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ１）、すなわち、ほとんどの急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病、ほぼ全種類の固形腫瘍及びいくつかの決定組織、例えば、心臓組織などで高発現される過剰発現抗原の一種を標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、メソテリン、すなわち、中皮腫で高発現されるが、気管を含む、いくつかの組織の中皮細胞上にも存在する別の種類の過剰発現抗原を標的とし得る。

【0394】

いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、個々の腫瘍に特異的なランダムな体細胞変異によって形成され得る、任意の新生抗原を標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＡＦＰ、Ｂｒａｆ、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択されるがん抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。

【0395】

ある特定の態様では、ＴＣＲは、ｈＴＥＲＴと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＫＲＡＳと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、Ｂｒａｆと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＴＧＦβＲＩＩと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＭＡＧＥ Ａ１０／Ａ４と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＡＦＰと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＰＲＡＭＥと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＭＡＧＥ Ａ１と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＷＴ－１と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＮＹ－ＥＳＯと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＰＲＡＭＥと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＮＹ－ＥＳＯと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＣＤ１９と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。ある特定の態様では、ＴＣＲは、がん患者から同定される新生抗原と特異的に結合する。

【0396】

いくつかの態様では、ＴＣＲは、細胞内ガンマ／デルタドメインを含む。いくつかの態様では、ＴＣＲは、抗体－Ｔ細胞受容体（ＡｂＴＣＲ）である（例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ４：６２（２０１８）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0397】

ＩＩ．Ｇ．３．Ｔ細胞受容体模倣物（ＴＣＲｍ）
いくつかの態様では、本明細書に開示される免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、ＴＣＲ様抗体としても知られる、Ｔ細胞受容体模倣物（ＴＣＲｍ）を含む。ＴＣＲｍは、ペプチド及びＭＨＣ－Ｉ分子の両方を含むエピトープを認識する抗体の型であり、Ｔ細胞上のＴＣＲによるそのような複合体の認識と同様である（例えば、Ｔｒａｎｅｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８（１００１）：１－１２（２０１７）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、腫瘍抗原に特異的に結合する。ある特定の態様では、ＴＣＲｍは、がん患者から同定される新生抗原と特異的に結合する。

【0398】

いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、腫瘍細胞、例えば、悪性Ｂ細胞、悪性Ｔ細胞、または悪性形質細胞などで発現される１つ以上の抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、モノクローナル抗体である。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＷＴ１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＷＴ１の断片に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＥＳＫ１を含む（例えば、Ａｔａｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２８（１）：１９４－２０５（２０１６）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＭＡＧＥ－Ａ１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ｐ６８ ＲＮＡヘリカーゼ／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ｈＣＧ－ｂ／ＨＬＡＡ＊０２：０１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、Ｈｅｒ２－Ｅ７５／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１との関連でＰＲ－１に特異的に結合する（例えば、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（１）：ｅ１０４９８０３（Ｊｕｎｅ ２０１５）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＨＬＡ－Ａ＊２４上に提示される、サバイビン－２Ｂ由来の九量体ペプチドであるＡＹＡＣＮＴＳＴＬ（ＳＶ２Ｂ８０－８８）（ＳＶ２Ｂ８０－８８／ＨＬＡ－Ａ＊２４）に特異的に結合する（例えば、Ｋｕｒｏｓａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ９（９８２７）：１－１１（２０１９）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、１つ以上の腫瘍関連ＰＲＡＭＥペプチド／ＨＬＡ－Ｉ抗原と特異的に結合する（例えば、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１２７（７）：２７０５－１８（２０１７）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、チロシナーゼに特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、テロメラーゼ触媒サブユニットと特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、糖タンパク質１００（ｇｐ１００）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ムチン１（ＭＵＣ１）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＮＹＥＳＯ－１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＭＡＲＴ－１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＰＲＡＭＥに特異的に結合する。

【0399】

いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ウイルス抗原に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、Ｅｎｖ１８３／Ａ２（Ｈｅｐ Ｂ／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＫＰ１４／１及びＫＰ１５／１１（ＨＩＶエンベロープｇｐ１６０／ＨＬＡＡ＊０２：０１）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＲＬ３６Ａ（ウエストナイルウイルス／マウスＨ－２Ｄｂ）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＨＴＬＶに由来するウイルスエピトープに特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、インフルエンザに由来するウイルスエピトープに特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＣＭＶに由来するウイルスエピトープに特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＨＩＶに由来するウイルスエピトープに特異的に結合する。

【0400】

ＩＩＩ．本開示の組成物
ＩＩＩ．Ａ．細胞培養培地
本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示されるように、少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含む低張または等張細胞培養培地を対象とする。本開示のある特定の態様は、本明細書に開示されるように、４０ｍＭよりも高いカリウムイオンを含む細胞培養培地を対象とする。本開示のある特定の態様は、本明細書に開示されるように、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンを含む細胞培養培地を対象とする。いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は等張である。

【0401】

本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示されるように、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び９０ｍＭ未満のＮａＣｌを含む細胞培養培地を対象とする。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、少なくとも１１０ｍＭである。

【0402】

いくつかの態様では、培地は約４０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約４１ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約４２ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約４３ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約４４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約４５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約４６ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約４７ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約４８ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約４９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0403】

いくつかの態様では、培地は約５０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約５０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約５０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５４ｍＯｓｍｏｌ～約２５６ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約５０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0404】

いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭ、約５２ｍＭ、約５３ｍＭ、または約５４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭ、約５２ｍＭ、約５３ｍＭ、または約５４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭ、約５２ｍＭ、約５３ｍＭ、または約５４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５４ｍＯｓｍｏｌ～約２５６ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭ、約５２ｍＭ、約５３ｍＭ、または約５４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭ、約５２ｍＭ、約５３ｍＭ、または約５４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0405】

いくつかの態様では、培地は約５５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約５５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約５５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５４ｍＯｓｍｏｌ～約２５６ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約５５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0406】

いくつかの態様では、培地は、約５６ｍＭ、約５７ｍＭ、約５８ｍＭ、または約５９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５６ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約５６ｍＭ、約５７ｍＭ、約５８ｍＭ、または約５９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約５６ｍＭ、約５７ｍＭ、約５８ｍＭ、または約５９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２５８ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約６０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0407】

いくつかの態様では、培地は約６０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約６０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約６０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５６ｍＯｓｍｏｌ～約２５８ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約６０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0408】

いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭ、約６２ｍＭ、約６３ｍＭ、または約６４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭ、約６２ｍＭ、約６３ｍＭ、または約６４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭ、約６２ｍＭ、約６３ｍＭ、または約６４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５６ｍＯｓｍｏｌ～約２５８ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭ、約６２ｍＭ、約６３ｍＭ、または約６４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭ、約６２ｍＭ、約６３ｍＭ、または約６４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0409】

いくつかの態様では、培地は約６５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約６５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約６５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７ｍＯｓｍｏｌ～約２５８ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約６５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0410】

いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭ、約６７ｍＭ、約６８ｍＭ、または約６９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭ、約６７ｍＭ、約６８ｍＭ、または約６９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭ、約６７ｍＭ、約６８ｍＭ、または約６９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７ｍＯｓｍｏｌ～約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭ、約６７ｍＭ、約６８ｍＭ、または約６９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭ、約６７ｍＭ、約６８ｍＭ、または約６９ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0411】

いくつかの態様では、培地は約７０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５９ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約７０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約７０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９ｍＯｓｍｏｌ～約２６１ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約７０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0412】

いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭ、約７２ｍＭ、約７３ｍＭ、または約７４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭ、約７２ｍＭ、約７３ｍＭ、または約７４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭ、約７２ｍＭ、約７３ｍＭ、または約７４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９ｍＯｓｍｏｌ～約２６１ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭ、約７２ｍＭ、約７３ｍＭ、または約７４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭ、約７２ｍＭ、約７３ｍＭ、または約７４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0413】

いくつかの態様では、培地は約７５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約７５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約７５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５９ｍＯｓｍｏｌ～約２６１ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約７５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0414】

いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６１ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６３ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６１ｍＯｓｍｏｌ～約２６３ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、または約８４ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0415】

いくつかの態様では、培地は約８０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２６２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約８０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約８０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６１ｍＯｓｍｏｌ～約２６３ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は約８０ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0416】

いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６３ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６４ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２５５ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌ～約２７０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６１ｍＯｓｍｏｌ～約２６３ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭ、約８２ｍＭ、約８３ｍＭ、約８４ｍＭ、または約８５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、約２６３ｍＯｓｍｏｌ～約２６５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0417】

いくつかの態様では、培地はナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、基本培地の濃度よりも低い。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、カリウムイオンの濃度が増加するにつれて減少する。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約２５ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約６５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約７５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約８５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約３０ｍＭ～約３５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約３５ｍＭ～約４０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約４５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約４５ｍＭ～約５０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。

【0418】

いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、または約９０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５５．６ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５９．３ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６３．９ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６７．６ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７２．２ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約７６ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約８０．５ｍＭである。

【0419】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約８０．５ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約７６ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約７２．２ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約６７．６ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６３．９ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約５９．３ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約５５．６ｍＭのナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。

【0420】

いくつかの態様では、培地は、約４０ｍＭのカリウムイオン及び１００ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約４１ｍＭのカリウムイオン及び９９ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約４２ｍＭのカリウムイオン及び９８ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約４３ｍＭのカリウムイオン及び９７ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約４４ｍＭのカリウムイオン及び９６ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約４５ｍＭのカリウムイオン及び９５ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約４６ｍＭのカリウムイオン及び９４ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約４７ｍＭのカリウムイオン及び９３ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約４８ｍＭのカリウムイオン及び９２ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約４９ｍＭのカリウムイオン及び９１ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。

【0421】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び９０ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約５１ｍＭのカリウムイオン及び８９ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約５２ｍＭのカリウムイオン及び８８ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約５３ｍＭのカリウムイオン及び８７ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約５４ｍＭのカリウムイオン及び８６ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び８５ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約５６ｍＭのカリウムイオン及び８４ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約５７ｍＭのカリウムイオン及び８３ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約５８ｍＭのカリウムイオン及び８２ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約５９ｍＭのカリウムイオン及び８１ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。

【0422】

いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び８０ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約６１ｍＭのカリウムイオン及び７９ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約６２ｍＭのカリウムイオン及び７８ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約６３ｍＭのカリウムイオン及び７７ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約６４ｍＭのカリウムイオン及び７６ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び７５ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭのカリウムイオン及び７４ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約６７ｍＭのカリウムイオン及び７３ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約６８ｍＭのカリウムイオン及び７２ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約６９ｍＭのカリウムイオン及び７１ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。

【0423】

いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び７０ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭのカリウムイオン及び６９ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約７２ｍＭのカリウムイオン及び６８ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約７３ｍＭのカリウムイオン及び６７ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約７４ｍＭのカリウムイオン及び６６ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び６５ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約７６ｍＭのカリウムイオン及び６４ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約７７ｍＭのカリウムイオン及び６３ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約７８ｍＭのカリウムイオン及び６２ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約７９ｍＭのカリウムイオン及び６１ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。

【0424】

いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び６０ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約８１ｍＭのカリウムイオン及び５９ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約８２ｍＭのカリウムイオン及び５８ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約８３ｍＭのカリウムイオン及び５７ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約８４ｍＭのカリウムイオン及び５６ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約８５ｍＭのカリウムイオン及び５５ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約８６ｍＭのカリウムイオン及び５４ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約８７ｍＭのカリウムイオン及び５３ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約８８ｍＭのカリウムイオン及び５２ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約８９ｍＭのカリウムイオン及び５１ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。

【0425】

いくつかの態様では、培地は、約８９０ｍＭのカリウムイオン及び５０ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約９１ｍＭのカリウムイオン及び４９ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約９２ｍＭのカリウムイオン及び４８ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約９３ｍＭのカリウムイオン及び４７ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約９４ｍＭのカリウムイオン及び４６ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約９５ｍＭのカリウムイオン及び４５ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約９６ｍＭのカリウムイオン及び４４ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約９７ｍＭのカリウムイオン及び４３ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約９８ｍＭのカリウムイオン及び４２ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。いくつかの態様では、培地は、約９９ｍＭのカリウムイオン及び４１ｍＭのＮａＣｌ濃度を含む。

【0426】

いくつかの態様では、培地はＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、ＮａＣｌの濃度は、基本培地の濃度よりも低い。いくつかの態様では、ＮａＣｌの濃度は、カリウムイオンの濃度が増加するにつれて減少する。いくつかの態様では、ＮａＣｌの濃度は、約２５ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、ＮａＣｌの濃度は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約６５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約７５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約５０ｍＭ～約８５ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約５５ｍＭ～約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約３０ｍＭ～約３５ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約３５ｍＭ～約４０ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約４０ｍＭ～約４５ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約４５ｍＭ～約５０ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。ある特定の態様では、ＮａＣｌの濃度は、約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。

【0427】

いくつかの態様では、培地はカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ超である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約２．８ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約２．５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約２．０ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．９ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．８ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．７ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．６ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．４ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．３ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ未満である。

【0428】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ～約２．８ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．７ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約０．８～約０．９ｍＭ、約０．８～約１．０ｍＭ、約０．８～約１．１ｍＭ、約０．８～約１．２ｍＭ、約０．８～約１．３ｍＭ、約０．８～約１．４ｍＭ、約０．８～約１．５ｍＭ、約０．８～約１．６ｍＭ、約０．８～約１．７ｍＭ、約０．８～約１．８ｍＭ、約０．９～約１．０ｍＭ、約０．９～約１．１ｍＭ、約０．９～約１．２ｍＭ、約０．９～約１．３ｍＭ、約０．９～約１．４ｍＭ、約０．９～約１．５ｍＭ、約０．９～約１．６ｍＭ、約０．９～約１．７ｍＭ、約０．９～約１．８ｍＭ、約１．０～約１．１ｍＭ、約１．０～約１．２ｍＭ、約１．０～約１．３ｍＭ、約１．０～約１．４ｍＭ、約１．０～約１．５ｍＭ、約１．０～約１．６ｍＭ、約１．０～約１．７ｍＭ、約１．０～約１．８ｍＭ、約１．１～約１．２ｍＭ、約１．１～約１．３ｍＭ、約１．１～約１．４ｍＭ、約１．１～約１．５ｍＭ、約１．１～約１．６ｍＭ、約１．１～約１．７ｍＭ、約１．１～約１．８ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである。

【0429】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．９ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭ～約０．９ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．９ｍＭ～約１．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ～約１．１ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭ～約１．２ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭ～約１．３ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．３ｍＭ～約１．４ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．４ｍＭ～約１．５ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．５ｍＭ～約１．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．７ｍＭ～約１．８ｍＭである。

【0430】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．７ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．９ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．３ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．４ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．５ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．７ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．８ｍＭである。

【0431】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約１．８ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、９０ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0432】

いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約１．７ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、８５ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0433】

いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約１．６ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、培地は、８０ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0434】

いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約１．５ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、７５ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0435】

いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約１．４ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、７０ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0436】

いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約１．３ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、６５ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0437】

いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約１．２ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は、６０ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0438】

いくつかの態様では、培地は糖類を含む。いくつかの態様では、糖類は、単糖、二糖、または多糖である。いくつかの態様では、糖類は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、マルトース、スクロース、ラクトース、トレハロース、及びそれらの任意の組合せから選択される。ある特定の態様では、糖類はグルコースである。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、培地は、２つ以上の糖類を含む。いくつかの態様では、培地は、グルコース及びガラクトースを含む。いくつかの態様では、培地は、グルコース及びフルクトースを含む。いくつかの態様では、培地は、グルコース及びマンノースを含む。いくつかの態様では、培地は、グルコース及びマルトースを含む。いくつかの態様では、培地は、グルコース及びスクロースを含む。いくつかの態様では、培地は、グルコース及びラクトースを含む。いくつかの態様では、培地は、グルコース及びトレハロースを含む。

【0439】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約４．２９ｇ／Ｌ未満である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約２４ｍＭ未満である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ超である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ超である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４ｍＭ～約１４．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４．５ｍＭ～約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５ｍＭ～約１５．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．５ｍＭ～約１６ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６ｍＭ～約１６．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．５ｍＭ～約１７ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７ｍＭ～約１７．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．５ｍＭ～約１８ｍＭである。

【0440】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１０．５ｍＭ、約１１ｍＭ、約１１．５ｍＭ、約１２ｍＭ、約１２．５ｍＭ、約１３ｍＭ、約１３．５ｍＭ、約１４ｍＭ、約１４．５ｍＭ、約１５ｍＭ、約１５．５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１６．５ｍＭ、約１７ｍＭ、約１７．５ｍＭ、約１８ｍＭ、約１８．５ｍＭ、約１９ｍＭ、約１９．５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２０．５ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである。

【0441】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１３ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１３．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．４ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．９ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．３ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．８ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．２ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．７ｍＭである。

【0442】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約１７．７ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、９０ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0443】

いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約１７．２ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、８５ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0444】

いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約１６．８ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、８０ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0445】

いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約１６．３ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、７５ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0446】

いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約１５．９ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、７０ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0447】

いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約１５．４ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、６５ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0448】

いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約１５ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、６０ｍＭ未満のＮａＣｌをさらに含む。

【0449】

いくつかの態様では、培地は等張である。いくつかの態様では、培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±１ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±４ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±８ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±９ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±１０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～３２０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約３１５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、張度は、カリウムイオン及びＮａＣｌの濃度を加算し、２を乗じることによって測定される。

【0450】

いくつかの態様では、培地は低張である。いくつかの態様では、培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２７５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２７０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、２５５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２１５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２０５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、張度は、カリウムイオン及びＮａＣｌの濃度を加算し、２を乗じることによって測定される。

【0451】

いくつかの態様では、培地は、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２７０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２５４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５６ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５７ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５８ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５８ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５９ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６１ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６１ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６２ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６３ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６４ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、張度は、カリウムイオン及びＮａＣｌの濃度を加算し、２を乗じることによって測定される。

【0452】

いくつかの態様では、培地は、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、張度は、カリウムイオン及びＮａＣｌの濃度を加算し、２を乗じることによって測定される。

【0453】

いくつかの態様では、培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５４．７の張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、張度は、カリウムイオン及びＮａＣｌの濃度を加算し、２を乗じることによって測定される。

【0454】

いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約８０．５ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５４．７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約８０．５ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。

【0455】

いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約７６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２５５．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７６ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。

【0456】

いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７２．２ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約７２．２ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２５７．２ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約７２．２ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。

【0457】

いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６７．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約６７．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２５７．５ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６７．６ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。

【0458】

いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６３．９ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約６３．９ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２５９．７ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約６３．９ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。

【0459】

いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５９．３ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約５９．３ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２６０ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５９．３ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。

【0460】

いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５５．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様では、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオンならびに（ｉ）約５５．６ｍＭのナトリウムイオン、（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース、及び（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオンを含み、培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍｏｌの張度を有する。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉ）約５５．６ｍＭのＮａＣｌ、（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース、（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオン、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せを含む。

【0461】

ＩＩＩ．Ｂ．本方法に従って調製される細胞
本開示のある特定の態様は、本明細書に開示される方法に従って培養した１つ以上の万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を含む細胞組成物を対象とする。本開示のいくつかの態様は、エクスビボまたはインビトロ培養中のヒト免疫細胞及び／または幹細胞の収量を、ヒト免疫細胞及び／または幹細胞の幹細胞性を高めながら増加させる方法によって作製される細胞組成物を対象とし、本方法は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び１００ｍＭ～３０ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞及び／または幹細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。本開示のいくつかの態様は、免疫療法のためのヒト免疫細胞及び／または幹細胞の集団を調製する方法によって作製される細胞組成物を対象とし、本方法は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び１００ｍＭ～３０ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞及び／または幹細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。本開示のいくつかの態様は、免疫療法のために、エクスビボまたはインビトロ培養中のヒト免疫細胞の幹細胞性を高める方法によって作製される細胞組成物を対象とし、本方法は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び１００ｍＭ～３０ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中でヒト免疫細胞を培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。

【0462】

本方法に従って、及び／または本明細書に開示される培地中で培養した細胞は、従来の方法に従って培養した同等の細胞と比較した場合、低分化細胞数が増加している。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞は、幹様表現型に特有の１つ以上のマーカーの発現増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞は、形質導入効率の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞は、対象への移植時にインビボ生存能の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞は、分化能の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞は、細胞疲弊の減少を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞は、対象への移植時にインビボ持続性の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞は、対象への移植時にインビボ活性の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法に従って培養した細胞は、対象への移植時により持続的なインビボ応答を呈する。いくつかの態様では、対象はヒトである。

【0463】

いくつかの態様では、細胞組成物中における少なくとも約５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物中における少なくとも約１０％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物中における少なくとも約１５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物中における少なくとも約２０％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物中における少なくとも約２５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物中における少なくとも約３０％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物中における少なくとも約３５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物中における少なくとも約４０％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物中における少なくとも約４５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物中における少なくとも約５０％の細胞が、幹様表現型を有する。

【0464】

いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約１．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約２．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約２．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約３．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約３．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約４．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約４．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約５．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約５．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約６．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約６．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約７．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約７．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約８．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約９．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約１５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約２０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約３０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約４０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約５０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約７５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約１００倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約５００倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物中における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物中における細胞の数と比較した場合に少なくとも約１０００倍増加する。

【0465】

いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ９５を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ４５ＲＯを発現しない。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ４５ＲＡを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＣＲ７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ６２Ｌを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＴＣＦ７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ３を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ２７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ９５及びＣＤ４５ＲＡを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、及びＣＣＲ７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、及びＴＣＦ７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの割合増加を含み、これらの細胞はＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現し、ＣＤ４５ＲＯを発現しない。

【0466】

いくつかの態様では、細胞組成物は、１つ以上の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを含み、これらは遺伝子操作される。いくつかの態様では、細胞組成物は、１つ以上の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを含み、これらはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される。本明細書、例えば、上記節ＩＩ．Ｇ．１．に開示される任意のＣＡＲが、細胞組成物の細胞に使用され得る。

【0467】

いくつかの態様では、細胞組成物は、１つ以上の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを含み、これらはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、操作ＴＣＲを発現するように操作される。本明細書、例えば、上記節ＩＩ．Ｇ．２．に開示される任意のＴＣＲが、細胞組成物の細胞に使用され得る。

【0468】

いくつかの態様では、細胞組成物は、１つ以上の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを含み、これらはＴＣＲｍを発現するように操作される。本明細書、例えば、上記節ＩＩ．Ｇ．３．に開示される任意のＴＣＲｍが、細胞組成物の細胞に使用され得る。

【0469】

いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物（例えば、療法として使用するための最終細胞産物の収量）は、少なくとも約１×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^３、５×１０^３、１×１０^４、５×１０^４、１×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９個の幹様細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、６×１０^１０、７×１０^１０、８×１０^１０、９×１０^１０、１０×１０^１０、１１×１０^１０、１２×１０^１０、１３×１０^１０、１４×１０^１０、または１５×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^６個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^６個の幹様細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約２×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約３×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約４×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約５×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約６×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約７×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約８×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約９×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１０×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１１×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１２×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１３×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１４×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１５×１０^１０個の細胞を含む。いくつかの態様では、細胞収量は、ＣＤ３＋細胞の総数を表す。

【0470】

ＩＶ．細胞培養培地の調製方法
本開示のある特定の態様は、本明細書に開示される細胞培養培地を作製する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は、少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含む低張または等張細胞培養培地を作製する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンを含む細胞培養培地を作製する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び９０ｍＭ未満のＮａＣｌを含む細胞培養培地を作製する方法を対象とする。いくつかの態様では、培地は、市販の培地、例えば、本明細書に開示される基本培地を、少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオンならびにナトリウムイオン、カルシウムイオン、糖類（例えば、グルコース）、ならびにサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１）のうち１つ以上に変更することによって調製される。

【0471】

いくつかの態様では、基本培地は、本明細書に開示される任意の基本培地、例えば、上記節ＩＩ．Ｆ．に記載される基本培地である。いくつかの態様では、基本培地は、５ｍＭ未満の濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、５０ｍＭ未満の濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、基本培地は、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、糖類（例えば、グルコース）、ならびにサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１）のうち１つ以上を含む。

【0472】

いくつかの態様では、基本培地は、平衡塩類溶液（例えば、ＰＢＳ、ＤＰＢＳ、ＨＢＳＳ、ＥＢＳＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、基本培地イーグル（ＢＭＥ）、Ｆ－１０、Ｆ－１２、ＲＰＭＩ１６４０、グラスゴー最小必須培地（ＧＭＥＭ）、アルファ最小必須培地（アルファＭＥＭ）、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｍ１９９、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＡＩＭ Ｖ、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地、及びそれらの任意の組合せから選択される。いくつかの態様では、基本培地は、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ Ｔ細胞ＣＤＭを含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）Ｐｒｏを含む。いくつかの態様では、基本培地は、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５（ＬＯＮＺＡ）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地は無血清である。いくつかの態様では、基本培地は、免疫細胞血清置換（ＩＣＳＲ）をさらに含む。例えば、いくつかの態様では、基本培地は、ＩＣＳＲを補充したＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＣＳＲを補充したＡＩＭ Ｖ、ＩＣＳＲを補充したＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＩＣＳＲを補充したＲＰＭＩ、ＩＣＳＲを補充したＴＥＸＭＡＣＳ（商標）、またはそれらの任意の組合せを含む。特定の態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全を含む。

【0473】

いくつかの態様では、本明細書に記載される細胞培養培地を調製する方法は、カリウムイオンが所望の濃度に到達するまで基本培地にカリウムイオンを添加することを含む。いくつかの態様では、カリウムイオンは、培地中に十分な量のカリウム塩を添加することによって基本培地に添加される。いくつかの態様では、カリウム塩の非限定的な例としては、アミントリクロロ白金酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ａｍｉｎｅｔｒｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎａｔｅ）、アクアペンタクロロルテニウム酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ａｑｕａｐｅｎｔａｃｈｌｏｒｏｒｕｔｈｅｎａｔｅ）、ビス（オキサラト）白金（ＩＩ）酸カリウム二水和物、硫酸水素カリウム、水素化ホウ素カリウム、臭化カリウム、炭酸カリウム、塩化カリウム、クロム酸カリウム、重クロム酸カリウム、ジシアノ銀酸カリウム、ジシアノ金酸カリウム、フッ化カリウム、フルオロ硫酸カリウム、ヘキサクロロイリジウム酸カリウム、ヘキサクロロオスミウム酸カリウム、ヘキサクロロパラジウム酸カリウム、ヘキサクロロ白金酸カリウム、ヘキサクロロレニウム酸カリウム、ヘキサシアノクロム酸カリウム、ヘキサシアノ鉄酸カリウム、ヘキサシアノルテニウム（ＩＩ）酸カリウム水和物、ヘキサフルオロアンチモン酸カリウム、ヘキサフルオロニッケル酸カリウム、ヘキサフルオロリン酸カリウム、ヘキサフルオロチタン酸カリウム、ヘキサフルオロジルコン酸カリウム、ヘキサヒドロキソアンチモン酸カリウム、ヘキサヨード白金酸カリウム、ヘキサヨードレニウム酸カリウム、水酸化カリウム、ヨウ素酸カリウム、ヨウ化カリウム、マンガン酸カリウム、メタバナジン酸カリウム、モリブデン酸カリウム、硝酸カリウム、ニトロソジスルホン酸カリウム、オスミウム（ＶＩ）酸カリウム二水和物、ペンタクロロニトロシルルテニウム酸カリウム、過塩素酸カリウム、過レニウム酸カリウム、過ルテニウム酸カリウム、過硫酸カリウム、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、ピロリン酸カリウム、セレノシアン酸カリウム、セレノシアン酸カリウム、スズ酸カリウム三水和物、硫酸カリウム、テルル酸カリウム水和物、亜テルル酸カリウム、四ホウ酸カリウム四水和物、テトラブロモ金酸カリウム、テトラブロモパラジウム酸カリウム、テトラクロロパラジウム酸カリウム、テトラクロロ白金酸カリウム、テトラシアノパラジウム酸カリウム、テトラシアノ白金酸カリウム、テトラフルオロホウ酸カリウム、テトラニトロ白金酸カリウム、テトラチオン酸カリウム、ｐ－トルエンチオスルホン酸カリウム、及びヒドロキシクエン酸カリウム三塩基性一水和物が挙げられる。ある特定の態様では、カリウム塩は、塩化カリウム（ＫＣｌ）を含む。ある特定の態様では、カリウム塩は、クエン酸カリウムを含む。ある特定の態様では、カリウム塩は、ヒドロキシクエン酸カリウムを含む。

【0474】

本開示のいくつかの態様では、細胞培養培地は、少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及びナトリウムイオンを含み、培地は低張または等張である。本開示のいくつかの態様では、細胞培養培地は、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及びナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される細胞培養培地を調製する方法は、ナトリウムイオンが所望の濃度に到達するまで基本培地にナトリウムイオンを添加することを含む。いくつかの態様では、ナトリウムイオンは、１つ以上のナトリウム塩を添加する基本培地に添加される。ナトリウム塩の非限定的な例としては、（メタ）過ヨウ素酸ナトリウム、酒石酸アルセニルナトリウム水和物（ｓｏｄｉｕｍ ａｒｓｅｎｙｌ ｔａｒｔｒａｔｅ ｈｙｄｒａｔｅ）、アジ化ナトリウム、ナトリウムベンジルオキシド、臭化ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クロム酸ナトリウム、シクロヘキサン酪酸ナトリウム、ナトリウムエタンチオラート、フッ化ナトリウム、フルオロリン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、ヘキサクロロイリジウム（ＩＩＩ）酸ナトリウム水和物、ヘキサクロロイリジウム（ＩＶ）酸ナトリウム六水和物、ヘキサクロロ白金（ＩＶ）酸ナトリウム六水和物、ヘキサクロロロジウム（ＩＩＩ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロアルミン酸ナトリウム、ヘキサフルオロアンチモン（Ｖ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロヒ（Ｖ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロ鉄（ＩＩＩ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロリン酸ナトリウム、ヘキサフルオロケイ酸ナトリウム、ヘキサヒドロキシ白金（ＩＶ）酸ナトリウム、ヘキサメタリン酸ナトリウム、二フッ化水素ナトリウム、硫酸水素ナトリウム、ナトリウム水素シアナミド、水酸化ナトリウム、ヨウ化ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム四水和物、メタケイ酸ナトリウム九水和物、メタバナジン酸ナトリウム、モリブデン酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、シュウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム一水和物、過炭酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、過ヨウ素酸ナトリウム、過マンガン酸ナトリウム、過レニウム酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ピロリン酸ナトリウム、セレン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、スズ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、亜テルル酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム、テトラクロロアルミン酸ナトリウム、テトラクロロ金（ＩＩＩ）酸ナトリウム、テトラクロロパラジウム（ＩＩ）酸ナトリウム、テトラクロロ白金（ＩＩ）酸ナトリウム、チオリン酸ナトリウム三塩基性（ｓｏｄｉｕｍ ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｔｒｉｂａｓｉｃ）、チオ硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム五水和物、オキシフッ化イットリウムナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｙｔｔｒｉｕｍ ｏｘｙｆｌｕｏｒｉｄｅ）、トリメタリン酸三ナトリウム、及びそれらの任意の組合せが挙げられる。ある特定の態様では、ナトリウム塩は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含む。ある特定の態様では、ナトリウム塩は、重炭酸ナトリウムを含む。ある特定の態様では、ナトリウム塩は、ヒドロキシクエン酸ナトリウムを含む。ある特定の態様では、ナトリウム塩は、リン酸ナトリウムを含む。本開示のいくつかの態様では、細胞培養培地は、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び９０ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される細胞培養培地を調製する方法は、ナトリウムイオンが所望の濃度に到達するまで基本培地にＮａＣｌを添加することを含み、カリウム及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ超～１４０ｍＭ未満である。

【0475】

いくつかの態様では、ナトリウムイオンの所望の濃度は、基本培地の濃度よりも低い。したがって、いくつかの態様では、ナトリウムイオンの所望の濃度は、ナトリウムイオンを欠くか、またはより低濃度のナトリウムイオンを有する好適な溶液で基本培地を希釈することによって達成される。

【0476】

本開示のいくつかの態様では、細胞培養培地は、少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及びカルシウムイオンを含み、培地は低張または等張である。本開示のいくつかの態様では、細胞培養培地は、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及びカルシウムイオンを含む。本開示のいくつかの態様では、細胞培養培地は、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン、９０ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌ及びカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される細胞培養培地を調製する方法は、カルシウムイオンが所望の濃度に到達するまで基本培地にカルシウムイオンを添加することを含む。いくつかの態様では、カルシウムイオンは、１つ以上のカルシウム塩を添加する基本培地に添加される。カルシウム塩の非限定的な例としては、臭化カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、カルシウムシアナミド、フッ化カルシウム、水素化カルシウム、水酸化カルシウム、ヨウ素酸カルシウム、ヨウ化カルシウム、硝酸カルシウム、亜硝酸カルシウム、シュウ酸カルシウム、過塩素酸カルシウム四水和物、第一リン酸カルシウム、リン酸三カルシウム、硫酸カルシウム、チオシアン酸カルシウム四水和物、ヒドロキシアパタイト、及びそれらの任意の組合せが挙げられる。いくつかの態様では、カルシウム塩は、塩化カルシウム（ＣａＣｌ_２）を含む。

【0477】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの所望の濃度は、基本培地の濃度よりも低い。したがって、いくつかの態様では、カルシウムイオンの所望の濃度は、カルシウムイオンを欠くか、またはより低濃度のカルシウムイオンを有する好適な溶液で基本培地を希釈することによって達成される。

【0478】

本開示のいくつかの態様では、細胞培養培地は、少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び糖類、例えば、グルコースを含み、培地は低張または等張である。本開示のいくつかの態様では、細胞培養培地は、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び糖類、例えば、グルコースを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される細胞培養培地を調製する方法は、糖類、例えば、グルコースが所望の濃度に到達するまで基本培地に糖類、例えば、グルコースを添加することを含む。糖類の非限定的な例としては、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、マルトース、スクロース、ラクトース、トレハロース、及びそれらの任意の組合せが挙げられる。いくつかの態様では、糖類はグルコースを含む。

【0479】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの所望の濃度は、基本培地の濃度よりも低い。したがって、いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの所望の濃度は、糖類、例えば、グルコースを欠くか、またはより低濃度の糖類、例えば、グルコースを有する好適な溶液で基本培地を希釈することによって達成される。

【0480】

いくつかの態様では、培地の張度は、目標浸透圧に到達するように調整される。いくつかの態様では、培地の目標浸透圧は、基本培地の浸透圧よりも低い。いくつかの態様では、培地の目標浸透圧は、基本培地の浸透圧よりも高い。いくつかの態様では、培地の目標浸透圧は、基本培地の浸透圧と同じである。

【0481】

培地は、低張、等張、または高張であり得る。培地の張度は、培地中のカリウムイオンの濃度を含む、多数の要因によって影響を受け得る。いくつかの態様では、カリウムイオン濃度の増加は、１つ以上の他の要因の濃度の増加または減少と対になる。いくつかの態様では、この組合せは、培地の張度に影響を及ぼす。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加する一方で、ナトリウムイオンの濃度は減少する。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加する一方で、糖類、例えば、グルコースの濃度は減少する。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加する一方で、カルシウムイオンの濃度は減少する。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加する一方で、ナトリウムイオン及び糖類、例えば、グルコースの濃度は減少する。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加する一方で、ナトリウムイオン及びカルシウムイオンの濃度は減少する。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加する一方で、ナトリウムイオン、糖類（例えば、グルコース）、及びカルシウムイオンの濃度は減少する。いくつかの態様では、カリウムイオン、ナトリウムイオン、及び／または糖類（例えば、グルコース）の濃度は、目標張度を得るために調整される。

【0482】

ＩＶ．処置方法
本開示のある特定の態様は、本明細書に開示される方法のいずれかに従って培養した細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）の集団を対象とする。ある特定の態様では、細胞は免疫細胞である。いくつかの態様では、細胞はＴ細胞である。いくつかの態様では、細胞はＮＫ細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、ヒト対象から単離される。いくつかの態様では、免疫細胞は、腫瘍浸潤Ｔ細胞または腫瘍浸潤ＮＫ細胞である。ある特定の態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは操作される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むように操作される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、操作Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むように操作される。いくつかの態様では、ＴＣＲは、がん患者で同定される新生抗原を認識する。

【0483】

いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、ＣＡＲを含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７、またはＴｃ１７細胞である。いくつかの態様では、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞、例えば、モノＣＡＲ Ｔ細胞、ゲノム編集ＣＡＲ Ｔ細胞、二重ＣＡＲ Ｔ細胞、またはタンデムＣＡＲ Ｔ細胞である。そのようなＣＡＲ Ｔ細胞の例は、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４４１９５号で提供される。

【0484】

いくつかの態様では、細胞は、抗原受容体及び／または別の追加のポリペプチドを発現する構築物を含む。いくつかの態様では、抗原受容体は、抗体、ｓｃＦｖなどの操作抗体、ＣＡＲ、操作ＴＣＲ、ＴＣＲ模倣物（例えば、抗体－Ｔ細胞受容体（ａｂＴＣＲ）もしくはキメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ））、またはキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）を含む。例として、ＴＣＲは、ＴＣＲ（例えば、アルファ／ベータＴＣＲまたはガンマ／デルタＴＣＲ）の抗原結合ドメインが、抗体（抗体の定常ドメインの有無にかかわらず）の抗原結合ドメインで置き換えられている操作ＴＣＲを含んでよく、次いで操作ＴＣＲは、ＴＣＲのシグナル伝達機能を保持しながら抗体の抗原に特異的となる。キメラシグナル伝達受容体は、（１）細胞外結合ドメイン（例えば、天然／改変受容体細胞外ドメイン、天然／改変リガンド細胞外ドメイン、ｓｃＦｖ、ナノボディ、Ｆａｂ、ＤＡＲＰｉｎ、及びａｆｆｉｂｏｄｙ）、（２）膜貫通ドメイン、ならびに（３）細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、転写因子を活性化するドメイン、あるいはＪＡＫ／ＳＴＡＴ、キナーゼ、ホスファターゼ、及びユビキチンを動員及び／または活性化するドメイン、ＳＨ３、ＳＨ２、及びＰＤＺ）を含んでよい。例えば、ＥＰ３４０７９３Ｂ１、ＷＯ２０１７／０７０６０８、ＷＯ２０１８／２００５８２、ＷＯ２０１８／２００５８３、ＷＯ２０１８／２００５８５、及びＸｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１８）４：６２を参照のこと。

【0485】

いくつかの態様では、抗原受容体は、目的の抗原（例えば、腫瘍抗原または病原体の抗原）を標的とする。抗原としては、ＡＦＰ（アルファ－フェトプロテイン）、αｖβ６または別のインテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂｒａｆ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＣＡ９（炭酸脱水酵素９）、ＣＣＬ－１（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド１）、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ３５２、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、クローディン１８．２、クローディン６、ｃ－ＭＥＴ、ＤＬＬ３（デルタ様タンパク質３）、ＤＬＬ４、ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３）、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＧ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＰＧ－４０、エフリンＢ２、ＥＰＨａ２（エフリン受容体Ａ２）、ＥＲＢＢ二量体、エストロゲン受容体、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体）、ＦＡＰ－α（線維芽細胞活性化タンパク質α）、胎児ＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＣＲＬ５、ＦＲ－α（葉酸受容体アルファ）、ＧＣＣ（グアニルシクラーゼＣ）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２（グリピカン－２）、ＧＰＣ３、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質ＮＭＢ）、ＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体５Ｄ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、Ｂ型肝炎表面抗原、ＨＬＡ－Ａ１（ヒト白血球抗原Ａ１）、ＨＬＡ－Ａ２（ヒト白血球抗原Ａ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ（ヒト高分子量黒色腫関連抗原）、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様成長因子１受容体）、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＩＬ－２２Ｒａ（ＩＬ－２２受容体アルファ）、ＩＬ－１３Ｒａ２（ＩＬ－１３受容体アルファ２）、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩ－ＣＡＭ）、Ｌｉｖ－１、ＬＲＲＣ８Ａ（８ファミリーメンバーＡを含有するロイシンリッチリピート）、ルイスＹ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１（メランＡ）、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）、ＭＣＳＰ（黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、メソテリン、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１６、ＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＡＦＰ、ＫＲＡＳ、ＮＹ－ＥＳＯ、ＭＡＧＥ－Ａ、及びＷＴ１に由来するペプチドと複合化したＨＬＡ－Ａ）、ＮＣＡＭ（神経細胞接着分子）、ネクチン－４、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラー群２メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＥＳＯ、腫瘍胎児抗原、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＲＡＭＥ（黒色腫優先発現抗原）、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質α）、ＳＬＩＴ、ＳＬＩＴＲＫ６（ＮＴＲＫ様タンパク質６）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原１）、サバイビン、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質）、Ｔｒｏｐ－２、ＶＥＧＦＲ１（血管内皮増殖因子受容体１）、ＶＥＧＦＲ２、ならびにＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、及び他の病原体に由来する抗原が挙げられてよいが、これらに限定されない。

【0486】

ある特定の態様では、抗原受容体は、ｈＴＥＲＴを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＫＲＡＳを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、Ｂｒａｆを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＴＧＦβＲＩＩを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＭＡＧＥ Ａ１０／Ａ４を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＡＦＰを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＰＲＡＭＥを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＭＡＧＥ Ａ１を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＷＴ－１を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＮＹ－ＥＳＯを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＰＲＡＭＥを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＮＹ－ＥＳＯを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１９を標的とする。

【0487】

いくつかの態様では、抗原受容体は、ＢＣＭＡを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１４７を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１９を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１９及びＣＤ２８を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ２０を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ２０及びＣＤ１９を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ２２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ３０を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＥＡを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＤＬＬ３を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＧＤ２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＨＥＲ２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＩＬ－１ＲＡＰを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、メソテリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、メソテリン（ｍｅｔｈｏｔｈｅｌｉｎ）を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＮＫＧ２Ｄを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＰＳＭＡを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＴｎＭＵＣ１を標的とする。

【0488】

いくつかの態様では、ＣＡＲは、腫瘍細胞、例えば、悪性Ｂ細胞、悪性Ｔ細胞、または悪性形質細胞などで発現される１つ以上の抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。

【0489】

いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１４７を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１９を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ１９及びＣＤ２８を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ２０を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ２０及びＣＤ１９を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ２２を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＤ３０を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＥＡを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＤＬＬ３を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＧＤ２を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＨＥＲ２を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＩＬ－１ＲＡＰを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、メソテリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、メソテリン（ｍｅｔｈｏｔｈｅｌｉｎ）を標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＮＫＧ２Ｄを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＰＳＭＡを標的とする。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＴｎＭＵＣ１を標的とする。

【0490】

いくつかの態様では、本明細書に開示される免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、操作ＴＣＲを含む。いくつかの態様では、操作ＴＣＲは、腫瘍抗原に特異的に結合する。本明細書で使用される場合、「操作ＴＣＲ」または「操作Ｔ細胞受容体」という用語は、選択され、クローニングして、及び／またはその後にＴ細胞の集団に導入される、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）／ペプチド標的抗原に所望の親和性で特異的に結合するように操作されているＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を指す。

【0491】

いくつかの態様では、ＴＣＲは、腫瘍細胞、例えば、悪性Ｂ細胞、悪性Ｔ細胞、または悪性形質細胞などで発現される１つ以上の抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。

【0492】

ある特定の態様では、本開示の操作細胞は、抗原を標的とするＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、共通の腫瘍関連抗原（共通ＴＡＡ）を標的とする。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、特有の腫瘍関連抗原（特有ＴＡＡ）を標的とする。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、腫瘍特異的抗原を標的とする。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、ＣＴ抗原、例えば、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９．２３、ＭＡＧＥ－Ａ１０、及びＭＡＧＥ－Ａ１２を含むが、これらに限定されないＭＡＧＥを標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、黒色腫及び正常なメラノサイトで主に見られる、糖タンパク質（ｇｐ１００）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原（ＭＡＲＴ－１）、及び／またはチロシナーゼを標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ１）、すなわち、ほとんどの急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病、ほぼ全種類の固形腫瘍及びいくつかの決定組織、例えば、心臓組織などで高発現される過剰発現抗原の一種を標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、メソテリン、すなわち、中皮腫で高発現されるが、気管を含む、いくつかの組織の中皮細胞上にも存在する別の種類の過剰発現抗原を標的とし得る。

【0493】

いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、個々の腫瘍に特異的なランダムな体細胞変異によって形成され得る、任意の新生抗原を標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＡＦＰ、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択されるがん抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。

【0494】

ある特定の態様では、ＴＣＲは、ｈＴＥＲＴと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＫＲＡＳと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、Ｂｒａｆと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＴＧＦβＲＩＩと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＭＡＧＥ Ａ１０／Ａ４と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＡＦＰと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＰＲＡＭＥと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＭＡＧＥ Ａ１と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＷＴ－１と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＮＹ－ＥＳＯと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＰＲＡＭＥと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＮＹ－ＥＳＯと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＣＤ１９と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは、がん患者で同定される新生抗原と特異的に結合する。

【0495】

いくつかの態様では、細胞、例えば、万能性細胞、多能性細胞、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＴＩＬ）は、それを必要とする対象に投与される。いくつかの態様では、本明細書に開示される方法を使用して調製される細胞、例えば、万能性細胞、多能性細胞、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＴＩＬ）は、がん、例えば、腫瘍を処置するために対象に投与される。いくつかの態様では、処置方法は、有効量の本開示の細胞組成物、例えば、本明細書に開示される方法に従って調製される細胞、例えば、本明細書に開示されるキメラポリペプチドまたはＴＣＲを発現するＴ細胞を対象に投与することを含む。

【0496】

本開示はまた、対象の標的細胞集団または組織に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激する方法も提供し、本方法は、有効量の本開示の細胞組成物、例えば、本明細書に開示される方法に従って調製される細胞、例えば、本明細書に開示されるキメラポリペプチドまたはＴＣＲを発現するＴ細胞を投与することを含む。

【0497】

本開示はまた、抗腫瘍免疫を必要とする対象に抗腫瘍免疫を提供する方法も提供し、本方法は、本開示の細胞組成物、例えば、本明細書に開示される方法に従って調製される細胞、例えば、本明細書に開示されるキメラポリペプチドまたはＴＣＲを発現するＴ細胞を対象に投与することを含む。

【0498】

いくつかの態様では、本開示の細胞組成物で投与される細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの態様では、細胞は自己Ｔ細胞である。

【0499】

いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）を投与することは、参照腫瘍体積と比較して対象の腫瘍体積を減少させる。いくつかの態様では、参照腫瘍体積は、操作細胞の投与前における対象の腫瘍体積である。さらなる態様では、参照腫瘍体積は、投与を受けなかった対応する対象の腫瘍体積である。いくつかの態様では、対象の腫瘍体積は、参照腫瘍体積と比較して、投与後に少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少する。

【0500】

いくつかの態様では、腫瘍を処置することは、対象の腫瘍重量を減少させることを含む。ある特定の態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）を投与することは、対象に投与される場合に対象の腫瘍重量を減少させ得る。いくつかの態様では、腫瘍重量は、参照腫瘍重量と比較して、投与後に少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少する。いくつかの態様では、参照腫瘍重量は、本開示の細胞組成物の投与前における対象の腫瘍重量である。さらなる態様では、参照腫瘍重量は、投与を受けなかった対応する対象の腫瘍重量である。

【0501】

いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）を、例えば、腫瘍に罹患している対象に投与することは、対象の腫瘍及び／または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）内におけるＴＩＬ（例えば、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋）の数及び／またはパーセンテージを増加し得る。ある特定の態様では、腫瘍及び／またはＴＭＥ内におけるＴＩＬの数及び／またはパーセンテージは、参照値（例えば、本開示の細胞組成物を受けなかった対象または本開示の細胞組成物の投与前における同じ対象の対応する値）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１２０％、少なくとも約１３０％、少なくとも約１４０％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１６０％、少なくとも約１７０％、少なくとも約１８０％、少なくとも約１９０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２１０％、少なくとも２２０％、少なくとも約２３０％、少なくとも約２４０％、少なくとも約２５０％、少なくとも約２６０％、少なくとも約２７０％、少なくとも約２８０％、少なくとも約２９０％、もしくは少なくとも約３００％またはそれを超えて増加する。

【0502】

いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）を、例えば、腫瘍に罹患している対象に投与することは、従来の方法に従って調製される細胞、例えば、少なくとも５０ｍＭのカリウムイオン濃度を含まない培地中で培養した細胞を含む同様の細胞療法を投与した対象における免疫応答の持続時間と比較して、対象の免疫応答の持続時間を増加させ得る。ある特定の態様では、免疫応答の持続時間は、参照値（例えば、従来の方法に従って調製される細胞、例えば、少なくとも５０ｍＭのカリウムイオン濃度を含まない培地中で培養した細胞を含む同様の細胞療法を投与した対象）と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、もしくは少なくとも約１０００％またはそれを超えて増加する。ある特定の態様では、免疫応答の持続時間は、参照値（例えば、従来の方法に従って調製される細胞、例えば、少なくとも５０ｍＭのカリウムイオン濃度を含まない培地中で培養した細胞を含む同様の細胞療法を投与した対象）と比較して、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、もしくは少なくとも約１０倍またはそれを超えて増加する。

【0503】

上記に加えて、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）を投与することは、腫瘍の処置に寄与する他の効果を有し得る。

【0504】

本明細書に記載されるように、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、様々ながん型、例えば、乳癌、頭頸部癌、子宮癌、脳癌、皮膚癌、腎癌、肺癌、結腸直腸癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、食道癌、眼癌、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））癌、胃腸癌、卵巣癌、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、またはそれらの組合せを含むがんに由来する腫瘍を処置するために使用され得る。

【0505】

いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、他の治療剤（例えば、抗がん剤及び／または免疫調節剤）と組み合わせて使用され得る。したがって、ある特定の態様では、本明細書に開示される腫瘍を処置する方法は、本開示の細胞組成物を１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて投与することを含む。

【0506】

いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、免疫経路の複数の要素が標的とされ得るように、１つ以上の抗がん剤と組み合わせて使用され得る。いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント阻害剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介するシグナル伝達を遮断する）。

【0507】

本発明の方法に使用され得る免疫チェックポイント阻害剤の非限定的な例は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＰＤ－１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＴＩＭ－３アンタゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）、またはそれらの組合せを含む。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１アンタゴニストである。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体である。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。併用療法の包括的かつ非限定的な一覧は、本出願の他の箇所で詳細に開示される。

【0508】

いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、追加の治療剤の投与前または投与後に対象に投与される。他の態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、追加の治療剤と同時に対象に投与される。ある特定の態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）及び追加の治療剤は、薬学的に許容される担体内の単一の組成物として同時に投与され得る。他の態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）及び追加の治療剤は、別個の組成物として同時に投与される。

【0509】

いくつかの態様では、対象は、ラットまたはマウスなどの非ヒト動物である。いくつかの態様では、対象はヒトである。

【0510】

いくつかの態様では、本明細書に開示される細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、他の治療剤（例えば、抗がん剤及び／または免疫調節剤）と組み合わせて使用され得る。したがって、ある特定の態様では、本明細書に開示される腫瘍を処置する方法は、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）を１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて対象に投与することを含む。そのような薬剤としては、例えば、化学療法薬、標的抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞傷害剤、免疫ベースの療法、サイトカイン、外科的処置、放射線治療、共刺激分子の活性剤、免疫チェックポイント阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはそれらの任意の組合せを挙げられ得る。

【0511】

いくつかの態様では、本明細書に開示される細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、標準治療（例えば、外科手術、放射線、及び化学療法）と組み合わせて使用され得る。本明細書に記載される方法は、維持療法、例えば、腫瘍の発生または再発を防止することを目的とした療法としても使用され得る。

【0512】

いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、免疫経路の複数の要素が標的とされ得るように、１つ以上の抗がん剤と組み合わせて使用され得る。そのような組合せの非限定的なものとしては、腫瘍抗原提示を増強する療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）、例えば、ＣＴＬＡ－４及び／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２経路の阻害、及び／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞（例えば、骨髄系由来サプレッサー細胞）の枯渇もしくは遮断によって、負の免疫制御を阻害する療法、例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０、及び／またはＣＤ４０もしくはＧＩＴＲ経路を刺激する、及び／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストを用いた、正の免疫制御を刺激する療法、抗腫瘍Ｔ細胞の発生頻度を全身で増加させる療法、例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）を使用して、またはエクスビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって腫瘍中のＴｒｅｇなどのＴｒｅｇを枯渇させる、または阻害する療法、腫瘍中のサプレッサー骨髄細胞の機能に影響を与える療法、腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えば、アントラサイクリン）、遺伝子操作細胞、例えば、キメラ抗原受容体を発現するように操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ療法）を含む養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移入、代謝酵素、例えば、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素合成酵素などを阻害する療法、Ｔ細胞アネルギーまたは疲弊を逆転させる／防止する療法、腫瘍部位の自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する療法、免疫刺激性サイトカインの投与、免疫抑制サイトカインの遮断、あるいはそれらの任意の組合せが挙げられる。

【0513】

いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント阻害剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介するシグナル伝達を遮断する）。本発明の方法に使用され得る免疫チェックポイント阻害剤の非限定的な例は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＰＤ－１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＴＩＭ－３アンタゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）、またはそれらの組合せを含む。そのような免疫チェックポイント阻害剤の非限定的な例としては、以下のものが挙げられる：抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、ＭＫ－３４７５）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＰＤＲ００１、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＴＳＲ－０４２、ＲＥＧＮ２８１０、ＪＳ００１、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ－２６６１３８０）、ＰＦ－０６８０１５９１、ＢＧＢ－Ａ３１７、ＢＩ７５４０９１、ＳＨＲ－１２１０、及びそれらの組合せ）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）、ＲＧ７４４６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＯ５５４１２６７）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標））、ＢＭＳ－９３６５５９、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標））、ＬＹ３３０００５４、ＣＸ－０７２（Ｐｒｏｃｌａｉｍ－ＣＸ－０７２）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、ＭＤＸ－１１０５、及びそれらの組合せ）、ならびに抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、トレメリムマブ（チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６）、ＡＧＥＮ－１８８４、ＡＴＯＲ－１０１５、及びそれらの組合せ）。

【0514】

いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント活性剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介するシグナル伝達を促進する）。ある特定の態様では、免疫チェックポイント活性剤は、ＯＸ４０アゴニスト（例えば、抗ＯＸ４０抗体）、ＬＡＧ－３アゴニスト（例えば抗ＬＡＧ－３抗体）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト（例えば、抗ＣＤ１３７抗体）、ＧＩＴＲアゴニスト（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）、ＴＩＭ３アゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、またはそれらの組合せを含む。

【0515】

いくつかの態様では、本明細書に開示される細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、追加の治療剤の投与前または投与後に対象に投与される。他の態様では、本明細書に開示される細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、追加の治療剤と同時に対象に投与される。ある特定の態様では、本明細書に開示される細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）及び追加の治療剤は、薬学的に許容される担体内の単一の組成物として同時に投与され得る。他の態様では、本明細書に開示される細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）及び追加の治療剤は、別個の組成物として同時に投与される。いくつかの態様では、追加の治療剤及び本明細書に開示される細胞組成物（例えば、本明細書に開示される方法に従って調製されるＣＡＲまたはＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）は、順次投与される。

【0516】

本開示のある特定の態様は、自己免疫疾患を処置する方法を対象とし、本方法は、本明細書に開示される方法のいずれかに従って培養した細胞、例えば、Ｔｒｅｇ細胞を投与することを含む。本開示の他の態様は、炎症病態を処置する方法を対象とし、本方法は、本明細書に開示される方法のいずれかに従って培養した細胞、例えば、Ｔｒｅｇ細胞を投与することを含む。いくつかの態様では、炎症病態は、サイトカイン放出症候群を含む。いくつかの態様では、炎症病態は敗血症を含む。いくつかの態様では、炎症病態は、移植片対宿主病を含む。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔｒｅｇ細胞は操作される。

【実施例】

【0517】

実施例１．方法
培地調製：Ｔ細胞馴化培地（ＴＣＭ）に、ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（Ｇｉｂｃｏ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、ＩＬ－２（２００ＩＵ／ｍＬ）、ＩＬ－７（１２０ＩＵ／ｍｌ）、ＩＬ－１５（２０ＩＵ／ｍｌ）を補充した。

【0518】

低張コンディショニング培地の場合、様々な濃度のナトリウム、カリウム、グルコース及びカルシウムを含むＴＣＭ培地を、ＮａＣｌ、グルコース、及びカルシウム不含ＲＰＭＩを添加することによって調整した。規定のＮａＣｌ不含ＲＰＭＩをＴＣＭに添加した後、最終濃度を、ＮａＣｌ（４０～８０ｍＭ）、ＫＣｌ（４０～８０ｍＭ）、カルシウム（０．５～２．８ｍＭ）、グルコース（１０～２４ｍＭ）及び浸透圧（約２５０～２６０ｍＯｓｍｏｌ）の範囲内とした。表１を参照のこと。

【表1】

【0519】

また、本発明者らは、様々なカリウム濃度で一定の張度条件（２５０ｍＯｓｍｏｌ－低張、２８０ｍＯｓｍｏｌ－等張、３２０ｍＯｓｍｏｌ－高張）を維持することによってＴ細胞に対する張度の効果を試験した。低張条件での最終濃度、ＮａＣｌ（３５～７５ｍＭ）、ＫＣｌ（５０～９０ｍＭ）、等張条件での最終濃度、ＮａＣｌ（５０～９０ｍＭ）、ＫＣｌ（５０～９０ｍＭ）、高張条件での最終濃度、ＮａＣｌ（７０～１１０ｍＭ）、ＫＣｌ（５０～９０ｍＭ）。表２を参照のこと。

【表2】

【0520】

細胞培養及び形質導入：健康なドナーの凍結保存されたヒトＣＤ４及びＣＤ８細胞を、Ｔ細胞馴化培地－ＴＣＭ、基本培地、または低張コンディショニング培地中でＴｒａｎｓＡｃｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて活性化した。ＴＣＭまたは低張コンディショニング培地中における２４時間の活性化後、Ｔ細胞をレンチウイルス粒子で形質導入し、Ｇｒｅｘプレート（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ）内にキメラ抗原受容体（抗ＣＤ１９ ＣＡＲ）を導入した。形質導入の翌日、Ｔ細胞に新鮮な培地を補充し、ＴｒａｎｓＡｃｔを希釈してＴ細胞活性化を終了させた。細胞の成長及び密度に応じて、Ｇｒｅｘプレート中の培地の半分を吸引することによって、Ｔ細胞に温かい２倍サイトカイン培地を与えた。７日目に、細胞を回収して計数し、フローサイトメトリーによって幹細胞性マーカーの発現を分析した。

【0521】

細胞内サイトカインアッセイ：７日目に、Ｔ細胞を洗浄して対照培地内に置き、ブレフェルジンＡの存在下においてホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）及びイオノマイシンを用いた５時間の再刺激に供し、細胞内サイトカインのＩＬ－２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦαを測定した。Ｔ細胞を、固定可能な生／死溶液（ｆｉｘａｂｌｅ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を含有するＦＡＣＳ緩衝液中において表面抗体染色で染色した。固定及び透過処理後、細胞を細胞内サイトカインに対する各々の抗体で染色した。細胞内サイトカイン発現の定量化を、フローサイトメトリーを使用して評価した。

【0522】

フローサイトメトリーによる幹細胞性表現型ＣＡＲ発現測定：７日目に、各々の処理からの生Ｔ細胞をフローサイトメトリーによって評価した。細胞を最初に細胞染色緩衝液で洗浄し、抗ＣＣＲ７を用いて３７℃で１５分間染色した。その後、いくつかの他の抗原に対する抗体（以下に詳述）の２倍マスターミックスを細胞に添加し、４℃で２０分間インキュベートした。細胞を細胞染色緩衝液で洗浄し、製造業者のプロトコールに従ってｆｏｘｐ３染色キット（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で透過処理した。固定後、細胞をＴＣＦ７について４℃で２０分間染色し、その後、ａｕｒｏｒａ（ｃｙｔｅｋ）上でのフローサイトメトリーによって細胞を分析した。以下は、幹細胞性マーカーの評価に使用した抗体の一覧である：ＣＤ８（ＢＤ－＃５６３７９５）、ＣＤ４（ＢＤ－＃６１２９３６）、ＣＤ２７（ＢＤ－＃６１２８２９）、ＣＤ３（Ｔｈｅｒｍｏ－＃６１２８９３）、ＣＤ２８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ－＃３０２９３６）、ＣＤ６２Ｌ、ＣＡＲ－ＥＧＦＲ（Ｔｈｅｒｍｏ－＃３５２９１１）、ＣＤ４５ＲＯ（ＢＤ＃５６４２９０）、ＣＤ３９（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ－＃３２８２３６）、ＴＣＦ７（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ－＃１４４５６）、ＣＣＲ７（ＢＤ－＃５６２３８１）、ＣＤ１２７（Ｂｉｏ ｌｅｇｅｎｄ－＃３５１３２４）、ＣＤ４５ＲＡ（ＢＤ－＃５６０６７３）。

【0523】

実施例２．結果
培地成分の操作に関する複数の手段は、生成したＴ細胞産物に重大な変化をもたらし得る。要するに、本発明者らは、次の項目：張度、無機塩、栄養素（グルコース）、及び／またはサイトカイン含有量のうち１つ以上を順次及び並行の両方で操作した。本発明者らは、希釈張度の操作から開始し、複数の表面マーカーによって評価したように、最終的なＴ細胞の幹細胞性に影響を及ぼすその役割を評価した。最終的なＴ細胞集団の幹細胞性をまとめるために、本発明者らは、フローサイトメトリーゲーティングスキーマを示して、最高量の相対的な幹細胞性を有するＴ細胞の所望の亜集団の相対的な集団を定量化した（図１Ａ）。示したフローサイトメトリースキーマは、得られたＴ細胞の予想した幹細胞性、代謝機能、及びインビボ挙動についての一般に認められている代用物である（図１Ｂ）。

【0524】

本発明者らは、細胞計数及び多色フローサイトメトリーによって評価したように、ＣＤ３^＋、ＣＤ４５ＲＯ^－、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ２７^＋、ＣＤ２８^＋、及びＴＣＦ７^＋であったＴ細胞の相対数によってこれらの介入の効果を定量化した（図２Ａ～２Ｆ）。張度と並行して、本発明者らは、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、及びＣａ^２＋を同時に変更したが、その理由は、これらが全て、Ｔ細胞の運命及び機能を制御する役割が報告されているからである（Ｔｒｅｂａｋ＆Ｋｉｎｅｔ，Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ（２０１９），Ｖｅｒｋｈｒａｔｓｋｙ ｅｔ ａｌ，Ｅｘｐ．Ｐｈｙｓｉｏ（２０１９））。塩化物を、記載した陽イオンへの変更に合わせてさらに変更した。本発明者らは、高濃度のカリウム、より低濃度のＮａ、及び低濃度のＣａを含む相対的「低張」液が、最大数の幹様細胞をもたらしたことを見出した（図２Ａ～２Ｆ）。特に、５０ｍＭ、５５ｍＭ、または６０ｍＭのカリウムを有する低張培地（２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満）中でのＴ細胞の培養によって、対照培地中で培養したＴ細胞と比較した場合、幹様細胞の相対数が少なくとも１倍増加し、最大２．５倍増加した（典型的には範囲の上限に近い）。さらに、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、または９０ｍＭのカリウムを有する低張培地中でのＴ細胞の培養によって、対照培地中で培養したＴ細胞と比較した場合、幹様細胞の相対数が少なくとも２．５倍増加し、最大１５倍増加した（典型的には少なくとも４～５倍の増加）。同様に、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、または７０ｍＭのカリウムを有する等張培地（約２７０～３００ｍＯｓｍ／Ｌ）中で培養したＴ細胞は、対照培地中で培養したＴ細胞と比較した場合、幹様細胞の相対数が少なくとも１倍増加し、最大２．５倍増加した（典型的には範囲の上限に近い）。

【0525】

カリウムレベルの増加は一般に、許容される、またはさらに改善された細胞収量とある程度相関した。特に、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、または７５ｍＭのカリウムを有する低張培地または等張培地中で培養したＴ細胞は、対照培地中で培養したＴ細胞と比較した場合、治療上許容される細胞収量を有した。逆に、７０～７５ｍＭを超えるＫ＋濃度の増加は、複数のドナーにわたって細胞収量に対して再現性よく有害であった（図２Ｄ～２Ｆ）。

【0526】

グルコース濃度を、これらの滴定に対してさらに操作した。栄養制限はＴ細胞の幹細胞性及び寿命を促進すると報告されていて、解糖の阻害は幹細胞性を促進する。逆に、グルコース濃度が高くなると、エフェクター機能が促進され、同時に幹細胞性が消失する。このことと一致して、最も望ましいＴ細胞プロファイルを実証した培地配合は、より低いグルコース濃度を有していた。したがって、本発明者らは、最高数の幹様Ｔ細胞からなる、最も望ましい細胞産物を含む再配合培地は、対照培地条件と比較して、低張、中程度の高カリウム、低ナトリウム、低カルシウム、及び低血糖であると結論づける。

【0527】

低張培養条件におけるイオン塩の滴定（図３Ａ）にわたって、本発明者らは、リンパ節ホーミング分子ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴ細胞持続性関連マーカーＣＤ２７と共にＣＤ４５ＲＡ^＋の発現増加を見出した（図３Ｂ～３Ｄ）。表１は、カリウム（５０～９０ｍＭ）、塩化ナトリウム（５０～９０ｍＭ）、グルコース（１５～２０ｍＭ）、カルシウム（１．２～２．０ｍＭ）、浸透圧、及び張度を含む各培地を示している。表１はまた、対照培地、すなわち、約１０３ｍＭのＮａＣｌを含有する、ＲＰＭＩ基本培地中に高カリウム（５５．３ｍＭ）を含む高張培地も含む（この実験のデータは示さず）。対照条件と比較して、高カリウムを含む低張培地は、約３０～５０％のＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋発現の増加、約３０～５０％のＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋発現の増加、及び約１０～２０％のＣＣＲ７^＋ＣＤ２７^＋細胞の増加をもたらした（図３Ｂ～３Ｄ）。ＣＤ３９は、活性化Ｔ細胞上で発現されるエクトＡＴＰ／ＡＤＰアーゼであり、Ｔ細胞エフェクターの分化、疲弊及びアポトーシスに関与する。ＣＤ３９の発現増加は、促進老化及び幹細胞様表現型の同時消失の尺度である。対照条件と比較して、低張馴化培地は、約２０～３０％のＣＤ３９^＋発現の減少をもたらした（図３Ｅ）。これらの結果は、高カリウムが、Ｔ細胞の疲弊を防ぎながら低分化細胞を濃縮することを示している。結果はまた、低張コンディショニングが、ＣＡＲ^＋Ｔ細胞においてＴＣＦ７を増加させ、ＣＤ３９発現を減少させたことを示している（図３Ｅ）。転写因子ＴＣＦ７は、Ｔ幹細胞様表現型の維持、ならびに自己複製能力及びより多くのエフェクターＴ細胞を産生する能力において主要な役割を果たす。対照条件と比較して、６０ｍＭ～８０ｍＭの範囲の高カリウムを含む培地は、約２０～４０％のＴＣＦ７^＋発現の増加をもたらした（図３Ｆ～３Ｇ）。これらの結果は、ＣＡＲ－ＴまたはＴ細胞産物に対する低張コンディショニングが、養子移入後の生存及び持続能力と関連していることを示している。

【0528】

低張コンディショニングでの培養は、インビトロ増殖中のＴ細胞の収量または生存率に影響を及ぼさなかった（図４Ａ～４Ｂ）。Ｔ細胞の収量及び生存率は、複数のドナー間で一貫しており、これは低張培地を効果的に使用し、臨床グレード試薬を使用して低分化細胞を含有する細胞産物を産生し得ることを実証した。

【0529】

高カリウムコンディショニングによって低分化細胞が濃縮されたため、本発明者らは、次に「幹様」Ｔ細胞を正確に定義する厳密な表面マーカー及び転写因子（図１Ａ）を使用してＴ_ＳＣＭ集団を確認しようと努めた（例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１１を参照のこと）。本発明者らの結果は、低張コンディショニングによって、ＣＤ４及びＣＤ８ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞の両方でＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋が濃縮されたことを示した（図５Ａ～５Ｂ）。対照条件と比較して、低張馴化培地は、形質導入効率を約２～３倍増加させた（図６）。これらのストリンジェントな基準を使用して、本発明者らは、対照条件と比較して高カリウムによって、幹様集団が３～８倍増加することを見出した（図７）。

【0530】

これまでの報告では、インビトロで完全なエフェクター機能を獲得すると、養子移入したＴ細胞の有効性が損なわれ、細胞あたりのＩＦＮγの産生が、このエフェクター機能獲得の信頼できる代用となることが示されている（Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ ｅｔ ａｌ，ＪＣＩ ２００５）。逆に、ＩＬ－２産生能を保持しているそれらのＴ細胞は、幹細胞能を保持している集団を表す（Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，ＪＣＩ（２００５）、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＳＴＭ（２０１２））。したがって、本発明者らは、低張馴化培地を使用して生成したＴ細胞集団のエフェクター機能の運命を評価した。対照条件と比較して、低張馴化培地はリンパ球ホーミング受容体を保持し、ＩＬ－２発現を３倍増強し、ＩＧＮγ発現を３分の１に減少させた（図８Ａ～８Ｃ）。ＩＧＮγ及びＩＬ－２の相反する効果は、Ｔ細胞のインビトロ増殖中に低分化状態を維持するために重要である。この現象は、ＣＣＲ７発現を消失させることなく、ＣＤ４及びＣＤ８サブセットの両方で観察されている（図８Ａ～８Ｂ）。

【0531】

これまでの報告では、ＩＬ－２が多数の活性化Ｔ細胞の産生に非常に有用な一方で、Ｔ細胞のＩＬ－２分化及び増殖へのインビトロでの曝露後に、急速分化が同時に起こり、同時に幹細胞性が消失することも観察されることを示している（Ｗａｌｄｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００６）。逆に、以前の報告（Ｈｉｎｒｉｃｈｓ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００８）では、代替の一般的なガンマ鎖サイトカインを利用すると、Ｔ細胞の幹細胞性が比較的保持された状態で同様の細胞収量が得られ得ることが示されている。この目的のために、本発明者らは、これらのサイトカインの異なる組合せの滴定量が、Ｔ細胞の幹細胞性及び総細胞収量に関して、本発明者らが別の方法で再配合した培地に追加の利点を提供し得るかどうかを試験した。本発明者らの結果は、ＩＬ－７及びＩＬ－２１の組合せが、低分化産物を濃縮するのに十分であったことを示した（図９Ａ～９Ｂ）。これらのサイトカインの組合せは、標準的な培養条件と比較して、ナイーブ様細胞の濃縮に対する効果が非常にわずかであった。しかしながら、ＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋を含む厳密なマーカーを使用すると、本発明者らの結果は、標準的な培養条件と比較して、高カリウム及び低張培養条件と組み合わせたＩＬ－７、ＩＬ－２１が、ＣＡＲ操作産物中において比較的高い数（約２０倍超）の幹様細胞をもたらしたことを示している（図１０Ａ～１０Ｂ）。

【0532】

高カリウムを含む低張培地でＣＡＲ操作Ｔ細胞を培養する効果は、組換えＴＣＲ改変免疫細胞でも観察した。上に記載した通り、Ｔ細胞をＮＹ－ＥＳＯ－１ ＴＣＲでトランスフェクトし、高カリウムを含む低張培地中で培養した。高カリウムを含む低張培地中におけるそのようなＴＣＲ改変免疫細胞の培養は、高カリウムを含む同様の低張条件下で培養したＣＡＲ－Ｔ細胞と同様の細胞収量（約１５０００万細胞）、生存率（９０％以上）、ならびに幹様表現型（約５０％のＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡを発現したＣＤ３^＋細胞）をもたらした（データは示さず）。

【0533】

実施例３．低張培地中で培養したＣＡＲ Ｔ細胞の特徴付け
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋ドナー適合Ｔ細胞を、対照培地または上に記載したように高カリウムを含む低張培地中で培養し、その両方に２００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２、１２００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－７、及び２００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－１５（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を補充し、Ｔｒａｎｓａｃｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して活性化した。活性化から２４または４８時間後、細胞を、ＲＯＲ１キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするレンチウイルスで形質導入した。Ｔ細胞を２．５ｅ６生Ｔ細胞／ｍｌで対照培地または高カリウムを含む低張培地中のいずれかに再懸濁させ、２００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２、１２００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－７、及び２００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－１５を補充した。一晩インキュベートした後、細胞をＧ－ＲＥＸ（登録商標）プレート（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ）に移し、活性化後に７日間増殖させてから、以下に記載したアッセイに後で使用するために凍結保存した。

【0534】

高カリウムを含む低張培地中での培養は、産生中の低分化Ｔ細胞の定着を大幅に改善する。そのような幹様Ｔ細胞はまた、標的刺激時の増殖能及び腫瘍細胞殺傷能が高い（データは示さず）。

【0535】

増殖後７日目に、群あたり１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞を、ＰＭＡ及びイオノマイシンカクテルで刺激し、続いてゴルジ阻害剤（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、製造業者の指示に従って）で刺激した。サイトカイン産生を、細胞内染色及びフローサイトメトリーを介して生／ＣＤ３＋／ＣＡＲ＋によって測定し、次いでＩＬ－２＋、ＩＦＮγ＋、ＩＬ－２＋／ＩＦＮγのダブルポジティブ、及びダブルネガティブサブセットを比較して評価した。

【0536】

高カリウムを含む低張培地中で増殖させたＣＡＲ Ｔ細胞は、対照培地中で増殖させたＣＡＲ Ｔ細胞と比較して、ＩＬ－２＋及びＩＬ－２＋／ＩＦＮγ＋ダブルポジティブＴ細胞の濃縮を示す（図１１、３人の個別ドナーの平均）。このサイトカインプロファイルは表面マーカー分析と一致し、その場合に高カリウムを含む低張培地中で細胞を培養すると、低分化で幹様のＴ細胞が多いＣＡＲ Ｔ細胞集団が産生される。Ｔ細胞中におけるＩＬ－２産生は、ＩＦＮγの産生のみ、またはサイトカインを産生しない場合と比較して低分化Ｔ細胞を示している。さらに、ＩＬ－２産生の増加はＣＡＲ Ｔ細胞の持続性を支持し、それゆえ、より良好な治療薬となる。

【0537】

Ｔ細胞傷害性を評価するために、上に記載したように生成したＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞を、Ｎｕｃｌｉｇｈｔ Ｒｅｄ標識（ＮＬＲ）Ｈ１９７５－ＲＯＲ１＋標的腫瘍細胞と共に１：５（Ｅ：Ｔ）の比で、ＣＡＲ Ｔ条件ごとに３つの技術的複製物を含んで２４ウェルプレート中に播種した。腫瘍細胞の死滅を、腫瘍細胞単独の場合と比較して平均ＮＬＲ強度の経時的なＩｎｃｕｃｙｔｅ蛍光測定によって決定した。３日間の培養後、Ｔ細胞の３分の１を標的細胞ウェルから取り出し、新鮮な標的細胞上に播種してＩｎｃｕｃｙｔｅ内で置き換えた。これを３日または４日のいずれかの間隔で、さらに最大で３～４回繰り返した。

【0538】

高カリウムを含む低張培地中で培養したＣＡＲ Ｔ細胞は、対照培地中で培養したＣＡＲ Ｔ細胞と比較した場合に細胞傷害性の増強を示した（図１２、ｙ軸は標的細胞密度を表す）。対照培地中で培養したＣＡＲ Ｔ細胞は、経時的に標的腫瘍細胞の成長を制御する能力を失う。この細胞傷害性の増加は、高カリウムを含む低張培地中で培養したＣＡＲ Ｔ細胞が、より大きく、かつより持続的な抗腫瘍効果を有することを示している。

【0539】

上記の経時的死滅アッセイからのＣＡＲ Ｔ細胞のサイトカイン分泌を評価した。簡潔に述べると、各刺激後（例えば、３日目、７日目、及び１０日目）、標的腫瘍細胞との共培養の２４時間後に培地上清を収集した。サイトカイン分泌を、Ｖ－ＰＬＥＸ Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ １ Ｈｕｍａｎ Ｋｉｔ（ＭＳＤ）を使用して測定した。

【0540】

高カリウムを含む低張培地中で培養したＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞は、対照培地中で培養したＣＡＲ Ｔ細胞と比較した場合、Ｈ１９７５標的腫瘍細胞との共培養において有意に多くのＩＬ－２（図１３Ａ）及びＩＦＮγ（図１３Ｂ）を産生した。図１１に示したＰＭＡ／イオノマイシンで刺激したＴ細胞で得られたデータと同様に、高カリウムを含む低張培地中で培養したＣＡＲ Ｔ細胞は、ＥＬＩＳＡによって評価したように、標的腫瘍細胞と共培養した場合、ＩＬ－２分泌の増加（約４倍）及びＩＦＮγ分泌の増加（約４倍）を示す。刺激を繰り返すと、全ての試料でＩＬ－２分泌が消失するが、高カリウムを含む低張培地中で培養したＣＡＲ Ｔ細胞は、３回の標的細胞刺激全体を通して著しく高いＩＦＮγを示した。高カリウムを含む低張培地中で培養したＣＡＲ Ｔ細胞によるサイトカイン分泌の規模及び持続時間の増加は、ＣＡＲ Ｔ細胞の最終分化の遅延によるより強力な抗腫瘍応答を示している。

【0541】

高カリウムを含む低張培地中で培養したＣＡＲ Ｔ細胞はまた、経時的死滅アッセイにおいてＨ１９７５標的腫瘍細胞との共培養で増殖の増強を示す（図２６）。増殖の増大は、高カリウムを含む低張培地が、高い増殖能を伴うより幹様な細胞を産生したことを示している。増殖の増加はまた、高カリウムを含む低張培地中で培養することによって産生したＣＡＲ Ｔ細胞が、優れた抗腫瘍応答を有することも裏付けている。

【0542】

実施例４．培地の調製方法及びＴＩＬの培養方法
市販のＴ細胞培地（例えば、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｉｍｉｚｅｒ（商標）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）またはＴＥＸＭＡＣＳ（商標））を調製した。高カリウムを含む低張コンディショニング培地も調製した：Ｔ細胞培地の無機塩イオン濃度を、ＮａＣｌ不含Ｔ細胞培地を使用して調整した。低張コンディショニング培地の最終濃度は、以下の通りであった：ＮａＣｌ（４０～８０ｍＭ）、ＫＣｌ（４０～９０ｍＭ）、カルシウム（０．５～２．８ｍＭ）、及びグルコース（１０～２４ｍＭ）。

【0543】

ＴＩＬを、対照培地、または２．５％血清サプリメント（ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭのＬ－ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（Ｇｉｂｃｏ）、Ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ）、２０μｇ／ｍｌのＦＵＮＧＩＮ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、及び１ｍＭのＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩（Ｓｉｇｍａ）を補充した、高カリウムを含む低張コンディショニング培地中のいずれかで培養した。

【0544】

ＴＩＬを、様々な腫瘍型（結腸、肺、肝細胞癌、腎臓、膵臓、乳房、黒色腫、及び前立腺）から外科的に切除した複数の腫瘍から単離し、対照培地または高カリウムを含む低張培地中のいずれかに播種して培養した。次いで、最終増殖のためにＴＩＬを新鮮な対照培地に移した。

【0545】

高カリウムを含む低張培地中で培養したＴＩＬは、低分化で幹様表現型を有するＴＩＬを示す（データは示さず）。

【0546】

発明を実施するための形態節は、特許請求の範囲を解釈するために使用されることを意図し、発明の概要及び要約節はそれを意図しないと理解されるべきである。発明の概要及び要約節は、本発明者ら（複数可）によって企図されるような本開示の、全てではないが１つ以上の例示的な実施形態を記載する場合があり、したがって、本開示及び添付の特許請求の範囲を決して限定することを意図するものではない。

【0547】

本開示は、特定の機能及びそれらの関係性の実施を示す機能的構成要素を使用して上に記載されている。これらの機能的構成要素の境界は、記載の便宜上、本明細書では任意に定義されている。特定の機能及びそれらの関係性が適切に実施されている限り、別の境界が定義され得る。

【0548】

特定の実施形態の前述した記載は、本開示の一般的性質を完全に明らかにすることになるため、他者が、当業者の技能範囲内の知識を適用することによって、本開示の一般概念から逸脱することなく、そのような特定の実施形態を様々な用途に合わせて過度な実験を行うことなく、容易に修正及び／または適合させ得る。したがって、そのような適合及び修正は、本明細書に提示される教示及び指針に基づいて、開示される実施形態と同等の意味及び範囲内にあることを意図する。本明細書の表現または用語は、制限ではなく説明を目的としており、そのため本明細書の用語または表現は、当業者によって教示及び指針に照らして解釈されると理解されるべきである。

【0549】

本開示の幅広さ及び範囲は、上記の例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきではなく、以下の特許請求の範囲及びその等価物に従ってのみ定義されるべきである。

【0550】

本出願全体を通して引用される全ての引用文献（文献参照、米国または外国特許または特許出願、及びウェブサイトを含む）の内容は、その全体があらゆる目的のために本明細書に記載されているかのように参照によって本明細書に明示的に組み込まれ、本明細書で引用される参考文献も同様である。何らかの矛盾が生じる場合、本明細書に文章で開示される内容が優先される。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図3G】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図11】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図14】

【国際調査報告】