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特表2023-524560内在性カンナビノイドシステムを調節することによる炎症性疾患または腸機能疾患の処置に使用するためのチモールを含む組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-12
(54)【発明の名称】内在性カンナビノイドシステムを調節することによる炎症性疾患または腸機能疾患の処置に使用するためのチモールを含む組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/05 20060101AFI20230605BHJP
A61K 36/9066 20060101ALI20230605BHJP
A61K 35/747 20150101ALI20230605BHJP
A61K 35/745 20150101ALI20230605BHJP
A61K 35/744 20150101ALI20230605BHJP
A61K 36/06 20060101ALI20230605BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20230605BHJP
A61P 1/12 20060101ALI20230605BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20230605BHJP
A23K 10/30 20160101ALN20230605BHJP
A23K 50/30 20160101ALN20230605BHJP
【ＦＩ】
A61K31/05
A61K36/9066
A61K35/747
A61K35/745
A61K35/744
A61K36/06
A61P1/04
A61P1/12
A61P29/00
A23K10/30
A23K50/30
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022567501
(86)(22)【出願日】2021-05-05
(85)【翻訳文提出日】2022-12-27
(86)【国際出願番号】 IB2021053803
(87)【国際公開番号】W WO2021224825
(87)【国際公開日】2021-11-11
(31)【優先権主張番号】102020000009922
(32)【優先日】2020-05-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522431966
【氏名又は名称】ヴェタグロ・インターナショナル・ソチエタ・ア・レスポンサビリタ・リミタータ
【氏名又は名称原語表記】ＶＥＴＡＧＲＯ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ Ｓ．Ｒ．Ｌ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100150500
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 靖
(74)【代理人】
【識別番号】100176474
【弁理士】
【氏名又は名称】秋山 信彦
(72)【発明者】
【氏名】ピーヴァ，アンドレア
(72)【発明者】
【氏名】グリッリ，エステル
【テーマコード（参考）】
2B005
2B150
4C087
4C088
4C206
【Ｆターム（参考）】
2B005EA01
2B150AA03
2B150AA05
2B150AA08
2B150AB10
2B150AB11
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2B150CJ08
2B150DD57
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4C206ZC61
4C206ZC75
(57)【要約】
本発明は、内在性カンナビノイドシステムの受容体および／または酵素を調節することにより、ヒト対象、単胃動物、家禽または魚における腸管の炎症性疾患または機能性疾患および関連症状の予防および／または治療的処置に用いるためのチモールを含む組成物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒト、単胃動物、鳥類または魚類において、エンドカンナビノイド系の受容体および／または酵素を調節することにより、炎症性および／または機能性腸疾患、または関連症状の予防および／または治療的処置のための方法における使用のための組成物であって、前記組成物は、以下：－チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍ；ならびに、所望により
－少なくとも１つの許容される医薬グレードまたは食品グレードの添加剤および／または賦形剤を含んでおり、
前記組成物は、チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍを埋め込むか、または組み込む徐放性脂質マトリックスをさらに含んでおり、前記徐放性脂質マトリックスは、少なくとも１つのＣ１０－Ｃ３０の範囲に含まれる炭素原子数を有する飽和または不飽和の遊離またはエステル化脂肪酸、および／または少なくとも１つのＣ６－Ｃ３０の範囲に含まれる炭素原子数を有する飽和または不飽和脂肪酸鎖を有するトリグリセリド、および／または少なくとも１つのＣ１６－Ｃ３６の範囲に含まれる炭素原子数を有するワックスを含むか、またはから成り、前記脂質マトリックスにより、胃保護および／または混合物Ｍの徐放性腸内放出、好ましくは混合物中に含まれるチモールの徐放性腸内放出が可能となる、
組成物。
【請求項2】
前記組成物が、豚のような単胃哺乳類；好ましくは、離乳期の豚のような単胃動物または単胃哺乳類に使用するためのものである、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項3】
前記疾患または症状が、慢性過敏性腸疾患(ＩＢＤ)、クローン症候群またはクローン病、潰瘍性大腸炎、分類不能大腸炎、顕微鏡的大腸炎、膠原線維性大腸炎、リンパ球浸潤性大腸炎、虚血性大腸炎、便流変更性大腸炎、回腸嚢炎、過敏性腸症候群(ＩＢＳ)、下痢型ＩＢＳ、便秘型ＩＢＳ、混合型ＩＢＳ、分類不能型ＩＢＳ、ディスペプシア、悪心、嘔吐、便秘、下痢、腹部膨満、鼓腸および肉体疲労から選択される、請求項１～２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項4】
前記徐放性放出脂質マトリックスは、Ｃ１４－Ｃ２４の範囲に含まれる炭素原子数を有する植物由来の少なくとも１つの水素化脂肪酸および／またはＣ１４－Ｃ２４の範囲に含まれる炭素原子数を有する植物由来の少なくとも１つの水素化トリグリセリドおよび／またはＣ２４－Ｃ３６の範囲に含まれる炭素原子数を有する動物由来の少なくとも１つのワックスを含むか、またはそれらから成り；好ましくは、前記脂肪酸、トリグリセリドまたはワックスが、パーム油、ヒマワリ油、コーン油、菜種油、ピーナッツ油、大豆油、オリーブ油、蜜蝋およびそれらの混合物から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項5】
前記混合物Ｍは、カルバクロール、オイゲノール、カプサイシン、ウコン、バニリン、シンナムアルデヒド、ジアリルジスルフィド、樟脳、リモネン、ロスマリン酸、ｐ-シメン、γ-テルピネン、α-ピネン、α-ツジョン、１,８－シネオール、ベルバスコシド、タンニン、メンソール、リナロール(リナロールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号７８－７０－６)、テルピネオール(テルピネオールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号９８－５５－５))、アントシアニン類(アントシアニン)、カテキン、α-ジンギベレン(Ｃ１５Ｈ２４ ＣＡＳ番号４９５－６０－３)およびそれらの混合物を含むか、またはそれらから成るグループ(Ｉ)から選択される、少なくとも１つの第１活性成分、好ましくは植物性の化合物(植物性成分)から得られる第１活性成分をさらに含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項6】
前記組成物が、チモールおよびカルバクロール、またはチモールおよびバニリン、またはチモールおよびメントール、またはチモールおよびリナロール(リナロールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号７８－７０－６)、またはチモールおよびテルピネオール(テルピネオールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号９８－５５－５))、またはチモールおよびアントシアニン類(アントシアニン)、またはチモールおよびカテキン類、またはチモールおよびα－ジンギベレン(Ｃ１５Ｈ２４ ＣＡＳ番号４９５－６０－３)ならびにそれらの混合物；あるいは、チモール、カルバクロールおよびカプサイシン、またはチモール、カルバクロールおよびシンナムアルデヒド、またはチモール、オイゲノールおよびベルバスコシドを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項7】
チモールと、所望によりグループ(Ｉ)から選択される別の前記第１活性成分(植物性成分)に加えて、前記組成物に含まれる混合物Ｍは、有機酸またはアルカリもしくはアルカリ土類金属カチオンとのその塩を含んでおり、前記有機酸は、乳酸、リンゴ酸、安息香酸、フマル酸、ソルビン酸、クエン酸、オクタン酸、ヘプタン酸、酪酸、ドデカン酸およびそれらの混合物を含むか、またはから成るグループ(ＩＩ)から選択され：好ましくは、混合物Ｍは、チモールおよびソルビン酸、またはチモール、ソルビン酸およびクエン酸、またはチモールおよび安息香酸、またはチモール、ソルビン酸、クエン酸および安息香酸、またはチモール、カルバクロールおよびソルビン酸、またはチモール、カルバクロール、ソルビン酸およびクエン酸、またはチモール、カルバクロール、シンナムアルデヒドおよびソルビン酸、またはチモール、カルバクロール、シンナムアルデヒド、ソルビン酸およびクエン酸、またはチモールおよび酪酸、またはチモール、クエン酸およびドデカン酸を含んでもよい、請求項１～６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項8】
前記混合物Ｍが、以下：－ラクトバチルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)属、ビフィドバクテリウム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)属、ストレプトコッカス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)属、ロイコノストック(Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ)属、ペディオコッカス(Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ)属、エンテロコッカス(Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ)属、サッカロミセス(Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ)属に属する細菌株またはプロバイオティック細菌株；および／または
－プレバイオティクス、例えばイヌリン、ラクチュロース、ラクチトール、マンノオリゴ糖、フラクトオリゴ糖およびガラクトオリゴ糖、トリブチリン、モノブチリン(モノブチリン Ｃ７Ｈ１４Ｏ４ ＣＡＳ番号５５７－２５－５)、モノラウリン(モノラウリン Ｃ１５Ｈ３０Ｏ４ ＣＡＳ番号２７２１５－３８－９)およびそれらの混合物；および／または
－金属塩、例えば、亜鉛および銅；ならびにその混合物、
からなるグループ(ＩＩＩ)から選択される少なくとも１つの別の第２活性成分をさらに含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項9】
前記組成物が、単胃動物および／または離乳期もしくは初期成長期の単胃動物用の飼料または飼料添加剤；好ましくは単胃哺乳類用、より好ましくは豚用の飼料または飼料添加剤である、請求項１～８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物の製造方法であって、前記方法は、水中油型エマルションあるいは油中水型エマルションを製造する工程を提供し、前記エマルションは、固体形態の組成物を得るために混合物を構成するグループ(Ｉ)および／またはグループ(ＩＩ)および／またはグループ(ＩＩＩ)の成分を含有する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、内在性カンナビノイドシステムの受容体および／または酵素を調節することにより、ヒト対象、または単胃動物あるいは家禽もしくは魚における腸管の炎症性疾患または機能性疾患および関連症状の予防および／または治療的処置に用いるためのチモールを含む組成物に関する。
【0002】
腸管の炎症性または機能性の疾患もしくは症状は、ヒトおよび単胃動物共に広範囲に共通しており、それらの発達段階、特に成長段階にあるヒトまたは動物対象のクオリティ・オブ・ライフに悪影響を与え、免疫系の弱体化によりさらなる疾患を発症するリスクにさらされる。
【0003】
これらの中で特に重要なものは、慢性炎症性腸疾患(ＩＢＤ)であり、ＩＢＤは、感染が病因ではなく(すなわち、細菌、ウイルス、真菌によって引き起こされない)、慢性的な発赤(phlogosis)の存在を特徴とする一群の病態学的疾患である。この一群の内の２つの重要な疾患はクローン病および潰瘍性大腸炎であって、ＩＢＤは、多因子性疾患であり、腸内細菌叢レベルでの過剰な免疫反応により、上皮のバリア機能に異常が生じることが一因である。特に、腸管上皮の完全性が喪失することは、ＩＢＤにおける重大な病原的役割に関与している。ＩＢＤに罹患した殆どの動物は、再発性または慢性の嘔吐または下痢の病歴を有する。ＩＢＤに罹患した動物では、しばしば体重の著しい減少が見られ、それに伴うあらゆる影響が生じる。
【0004】
ヒトおよび単胃動物に共通して多く見られる別の消化器系疾患には、過敏性腸症候群(略して、ＩＢＳ)がある。過敏性腸症候群は、機能性消化管障害(ＦＧＩＤ)の一群に属し、症状の出現のみに基づいて規定され得る診断カテゴリーであり、明らかな病原体の生息環境が無い(すなわち、細菌、ウイルスまたは真菌が存在しない)ことを特徴とし、腹部不快感または疼痛が腸内細菌叢の変化と相関している。糞便の特徴により、４つのグループに疾患が分けられる：便秘型ＩＢＳ(便秘型の腸)、下痢型ＩＢＳ(下痢型の腸)、便秘および下痢が交互に起こる混合型ＩＢＳおよび分類不能型ＩＢＳである。
【0005】
ヒトまたは単胃動物における腸管の炎症性または機能性疾患または症状を治療するために、現在までに利用出来る薬剤または化合物の殆どは、その疾患および症状を、完全におよび／または持続的に解消することはできていない。さらに、市販されている薬剤および治療方法は、望ましくない副作用が完全に無い訳ではなく、その使用を制限される場合もある。
【0006】
従って、公知の治療方法において依然として存在する制限および欠点を克服することを可能とする治療、ならびにヒト、動物、鳥、ニワトリおよび魚の腸管の炎症性疾患および症状または機能性疾患および症状に対して迅速、有効かつ持続的な反応を提供できる治療を行うことができる方法に対する当業者側の関心は、依然として高いものである。本発明が取り組み、かつ解決する技術的課題は、主に、ヒト対象、単胃動物、好ましくは単胃哺乳類(例えば、豚または家畜、家禽、好ましくは鳥およびニワトリおよび魚)における細菌、ウイルスまたは真菌が病因ではない炎症性および機能性両方の腸管障害(疾患または症状)を治療するための組成物および有効な治療方法を提供することにあり、特に腸の健康状態の維持および良好な状態および／または離乳期(または初期の成長期)の維持に関することにある。出願人は、精力的な研究開発活動の後に、特許請求の範囲に規定されるような特性を有する新規混合物および組成物(要するに、本発明の混合物および組成物)ならびに治療方法を提供することにより、前記技術的課題に取り組んで解決する。
【0007】
本発明は、また以下の図により十分に開示されるが、これは単に例示として提供されるものであるため、その保護範囲を限定するものではない。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【発明の概要】
【0009】
(発明の詳細な説明)
本発明の目的を形成するのは、ヒト、単胃動物、鳥、ニワトリまたは魚における内在性カンナビノイドシステムならびに腸管ケモセンシングシステム(gut chemosensing system)の受容体および／または酵素の調節(または、遺伝子発現の調節もしくは増強)により炎症性および機能性腸疾患または関連症状を予防および／または治療する方法に使用するための組成物(要するに、本発明の組成物)であって、前記組成物は、チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍ(要するに、本発明の混合物Ｍ)を含んでおり、所望により、前記組成物はさらに少なくとも１つの許容可能な医薬または食品グレードの添加剤および／または賦形剤を含むことを特徴とする。
本発明の目的を形成するのは、ヒト、単胃動物、鳥、ニワトリまたは魚における内在性カンナビノイドシステムならびに腸管ケモセンシングシステム(gut chemosensing system)の受容体および／または酵素の調節(または、遺伝子発現の調節もしくは増強)により炎症性および機能性腸疾患または関連症状を予防および／または治療する方法に使用するための組成物(要するに、本発明の組成物)であって、前記組成物は、チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍ(要するに、本発明の混合物Ｍ)を含んでおり、所望により、前記組成物はさらに少なくとも１つの許容可能な医薬または食品グレードの添加剤および／または賦形剤を含むことを特徴とする。
【0010】
炎症性および/または機能性腸疾患あるいは関連症状は、主に、微生物病原体(細菌、ウイルスまたは真菌)を有さない腸の疾患から選択される。有利には、本発明の組成物は、前記疾患の治療において効果的に使用される。
【0011】
有利には、本発明の組成物は、チモールが、内在性カンナビノイドシステム(ＥＣＳ)、例えばカンナビノイド－１(ＣＢ１)およびカンナビノイド－２(ＣＢ２)の受容体の腸内遺伝子発現を調節する能力ならびに／または内在性カンナビノイド分子のアナンダミド(ＡＥＡ)の分解に関与する内在性カンナビノイドシステム(ＥＣＳ)の酵素、例えば脂肪酸アミドヒドロラーゼ(ＦＡＡＨ)の腸内遺伝子発現を調節する能力に加えて、腸管ケモセンシングシステムの１以上のマーカー、例えば一過性受容体電位バニロイド－１(ＴＲＰＶ１)および／または嗅覚受容体１Ｇ１(ＯＲ１Ｇ１)の腸内遺伝子発現を調節する能力により、腸管の炎症性または機能性疾患の予防および／または治療のための興味深い治療特性を示す。
【0012】
有利なことには、本出願人により開発された組成物は、治療種のある機能として、腸内への段階的かつ標的化された放出が可能となるように処方および製造され得る。
【0013】
本発明の目的を構成するのは、チモールの他に、チモールと本発明の組成物中に存在する別の潜在的活性成分を埋め込む徐放性脂質マトリックスを含む組成物である。前記徐放性脂質マトリックスは、胃保護(胃の酸性ｐＨからの保護)を提供し、チモールおよび本発明の組成物中に存在し得る別の活性成分の腸内の徐放性放出、好ましくは２時間～２４時間、好ましくは４時間～８時間を含む時間の放出を可能にする。
【0014】
内在性カンナビノイドシステム(ＥＣＳ)(リガンドの生合成および分解に関与する受容体、シグナル伝達分子および酵素)の活性化は、炎症および胃腸系機能に関する制御および調節における有効なアプローチであると考えられている。
【0015】
ＣＢ１およびＣＢ２を代表とするカンナビノイド受容体は、腸および消化器系の細胞も含めて、生体の大部分に存在している。そのため、ＥＣＳは、免疫反応、代謝、消化活動および食欲などの重要な生理学的プロセスを制御し、生体の繊細な内部バランスであるホメオスタシスの維持に寄与していることが示唆された。それ故、内在性カンナビノイドシステムの機能異常、特に受容体(ＣＢ１、ＣＢ２)および酵素の遺伝子発現の変化は、炎症性腸疾患や機能性腸疾患において重大な影響を及ぼす。
【0016】
さらに、例えばＴＲＰＶ１(一過性受容体電位バニロイド－１：transient receptor potential vanilloid 1)およびＯＲ１Ｇ１(嗅覚受容体：olfactory receptor 1G1)のような様々な受容体が腸内に存在することから、「腸管ケモセンシングシステム」は、腸の炎症性または機能性疾患の治療に応用できる可能性が示唆されている。
【0017】
本発明の組成物または混合物は、重篤な副作用を示さずに、成人のヒト対象および動物の両方に、生育段階のヒト対象および動物の両方にならびに妊娠中の動物(雌)に投与することができる。
【0018】
つまり本発明の組成物または混合物は、製造が容易であって、また費用対効果に優れている。
本発明の組成物が添加剤および／または賦形剤を含まない場合、本発明の組成物は、本発明の混合物Ｍと同一である。
本発明の組成物が添加剤および／または賦形剤を含まない場合、本発明の組成物は、本発明の混合物Ｍと同一である。
【0019】
本発明が提供する前記治療方法は、治療上有効な量の本発明の組成物または混合物Ｍを、ヒト対象、単胃動物、家禽または魚に投与する方法である。
【0020】
本発明の文脈では、「単胃動物」という表現は、哺乳類および非哺乳類の単胃動物の両方を含むことが意図される。
【0021】
さらに、チモールを含む本発明の組成物または混合物Ｍは、腸の健康を維持するために、および/または前記ヒト対象または単胃動物、好ましくは単胃哺乳類の離乳期(または初期の成長段階)におけるサポートのために使用するためのものである。
【0022】
好ましくは、前記単胃動物は、単胃哺乳動物、特に離乳期の単胃動物または単胃哺乳動物である。さらに、本発明の文脈では、例えば、鳥類およびニワトリなどの家禽類ならびに魚類も含まれる。
【0023】
本発明の組成物または混合物Ｍによって治療することができる成体または離乳期の前記単胃哺乳動物は、以下から選択することができる：犬、猫、猿、豚、馬およびロバなどの馬類、離乳期前のウサギ、ハムスター、モルモット、マウス、スナネズミ、チンチラ、デグー、リス、モルモットおよびラットなどの齧歯類；イタチ、フェレットおよびオコジョ。
【0024】
本発明の組成物または混合物Ｍを用いて治療することができる成体または初期の成長段階にある前記哺乳類以外の単胃動物は、以下から選択することができる：家禽種(鳥類、好ましくはキジ目)の動物またはその他の家禽類、例えば、七面鳥、モルモット、キジ、孔雀、ウズラ、ハト、キジバト、ガチョウ、マガモおよびノバリケン、あるいは魚および甲殻類などの水生種に属する動物。
【0025】
記載された実施形態のいずれか１つの実施形態に従って、本発明の組成物または混合物Ｍを使用して予防的および／または治療的処置を行うことができる疾患または症状は、以下から選択されるものが有利である：慢性過敏性腸疾患(ＩＢＤ)、クローン症候群またはクローン病、潰瘍性大腸炎、分類不能大腸炎、顕微鏡的大腸炎、膠原線維性大腸炎、リンパ球浸潤性大腸炎、虚血性大腸炎、便流変更性大腸炎、回腸嚢炎、過敏性腸症候群(ＩＢＳ)、下痢型ＩＢＳ、便秘型ＩＢＳ、混合型ＩＢＳ、分類不能型ＩＢＳ、ディスペプシア、悪心、嘔吐、便秘、下痢、腹部膨満、鼓および肉体疲労などが挙げられる。
【0026】
記載された実施形態のいずれかによる本発明の組成物または混合物Ｍは、本発明で示される疾患の治療におけるさらなる治療アプローチ(例えば、薬剤)のアジュバントとして使用してもよい。
【0027】
チモールに加えて、本発明の組成物に含まれる混合物Ｍは、例えば、植物性の化合物(植物性成分：botanicals)から得られる別の第１活性成分をさらに含んでもよく、第１活性成分は、グループ(Ｉ)：カルバクロール、オイゲノール、カプサイシン、ウコン、バニリン、シンナムアルデヒド、ジアリルジスルフィド、樟脳、リモネン、ロスマリン酸、ｐ－シメン、γ-テルピネン、α-ピネン、α-ツジョン、１,８－シネオール、ベルバスコシド、タンニン、メンソール、リナロール(リナロールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号７８－７０－６)、テルピネオール(テルピネオールＣ１０Ｈ１８Ｏ（ＣＡＳ番号９８－５５－５))、アントシアニン類(アントシアニン)、カテキン、α-ジンギベレン(Ｃ１５Ｈ２４ ＣＡＳ番号４９５－６０－３)およびこれらの混合物から選択されるか、またはグループ(Ｉ)から構成される。
【0028】
実施形態において、本発明の組成物は、チモールおよびカルバクロール、またはチモールおよびバニリン、またはチモールおよびメントール、またはチモールおよびリナロール(リナロールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号７８－７０－６)またはチモールおよびテルピネオール(テルピネオールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号９８－５５－５)、またはチモールおよびアントシアニン類(アントシアニン)、またはチモールおよびカテキン、またはチモールおよびα－ジンギベレン(Ｃ１５Ｈ２４ ＣＡＳ番号４９５－６０－３)およびそれらの混合物；あるいは、チモール、カルバクロールおよびカプサイシン、またはチモール、カルバクロールおよびシンナムアルデヒド、またはチモール、オイゲノールおよびベルバスコシドを含んでいてよい。
【0029】
チモールと、所望によりグループ(Ｉ)から選択される別の前記第１活性成分(植物性の化合物)に加えて、本発明の組成物に含まれている混合物Ｍは、有機酸またはアルカリもしくはアルカリ土類金属カチオンとのその塩をさらに含んでいてもよく、前記有機酸は、乳酸、リンゴ酸、安息香酸、フマル酸、ソルビン酸、クエン酸、オクタン酸、ヘプタン酸、酪酸、ドデカン酸およびそれらの混合物；好ましくは、酪酸、安息香酸、ドデカン酸およびそれらの混合物を含むか、あるいは、前記から構成されるグループ(ＩＩ)から選択される。例えば、本発明の組成物は、チモールおよびソルビン酸；チモール、ソルビン酸およびクエン酸；チモールおよび安息香酸；チモール、ソルビン酸、クエン酸および安息香酸；チモール、カルバクロールおよびソルビン酸；チモール、カルバクロール、ソルビン酸およびクエン酸；チモール、カルバクロール、シンナムアルデヒドおよびソルビン酸；チモール、カルバクロール、シンナムアルデヒド、ソルビン酸およびクエン酸；チモールおよび酪酸；またはチモール、クエン酸およびドデカン酸；好ましくは、チモールおよび酪酸、チモールおよび安息香酸またはチモールおよびドデカン酸である。本発明の文脈において、チモールおよびグループ(Ｉ)から選択される別の前記第１活性成分(植物性の化合物)の両方は、精油、オレオレジンまたは植物抽出物の形態であってもよく、重要な態様は、前記精油またはオレオレジンまたは植物抽出物には、上述の分子(チモールおよびグループ(Ｉ)の植物性の化合物)が含まれるという点である。
【0030】
本発明の組成物に含まれている混合物Ｍにおいて、そのＡとＢとのモル比(ここで、Ａは、チモールと、所望によりグループ(Ｉ)から選択される少なくとも１つ以上の前記の別の第１活性成分(植物性の化合物)であり、Ｂは、グループ(ＩＩ)から選択される少なくとも１つ以上の有機酸またはその塩である)は、１：５００～５００：１、好ましくは１：３００～３００：１、より好ましくは１：１００～１００：１または１：５０～５０：１または１：１０～１０：１の範囲に含まれる。
【0031】
チモールと、所望により、グループ(Ｉ)から選択される別の前記第１活性成分および／またはグループ(ＩＩ)から選択される前記有機酸またはその塩に加えて、記載した実施形態のいずれかに依って、本発明の組成物に含まれる混合物Ｍは、以下：
－ラクトバチルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)属、ストレプトコッカス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)属、ロイコノストック(Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ)属、ビフィドバクテリウム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)属、ペディオコッカス(Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ)属、エンテロコッカス(Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ)属、サッカロミセス(Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ)属に属する細菌株またはプロバイオティクス細菌株；
－プレバイオティクス、例えばイヌリン、ラクチュロース、ラクチトール、マンノオリゴ糖、フラクトオリゴ糖およびガラクトオリゴ糖、トリブチリン、モノブチリン(モノブチリンＣ７Ｈ１４Ｏ４ ＣＡＳ番号５５７－２５－５)、モノラウリン(モノラウリンＣ１５Ｈ３０Ｏ４ ＣＡＳ番号２７２１５－３８－９)およびこれらの混合物など；
－金属塩、例えば、亜鉛および銅；ならびにその混合物、
からなるグループ(ＩＩＩ)から選択される少なくとも１つの別の第２活性成分をさらに含んでもよい。
－ラクトバチルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)属、ストレプトコッカス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)属、ロイコノストック(Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ)属、ビフィドバクテリウム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)属、ペディオコッカス(Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ)属、エンテロコッカス(Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ)属、サッカロミセス(Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ)属に属する細菌株またはプロバイオティクス細菌株；
－プレバイオティクス、例えばイヌリン、ラクチュロース、ラクチトール、マンノオリゴ糖、フラクトオリゴ糖およびガラクトオリゴ糖、トリブチリン、モノブチリン(モノブチリンＣ７Ｈ１４Ｏ４ ＣＡＳ番号５５７－２５－５)、モノラウリン(モノラウリンＣ１５Ｈ３０Ｏ４ ＣＡＳ番号２７２１５－３８－９)およびこれらの混合物など；
－金属塩、例えば、亜鉛および銅；ならびにその混合物、
からなるグループ(ＩＩＩ)から選択される少なくとも１つの別の第２活性成分をさらに含んでもよい。
【0032】
さらに、本発明の組成物は、記載された実施形態のいずれか１つに従って、チモールと、所望によりグループ(Ｉ)および／または(ＩＩ)および／または(ＩＩＩ)から選択される別の成分を含む前記混合物Ｍを埋め込むか、または導入される徐放性脂質マトリックスを含んでよい。前記徐放性脂質マトリックスは、Ｃ１０－Ｃ３０、好ましくはＣ１４－Ｃ２４またはＣ１６－Ｃ２２の範囲に含まれる炭素原子数を有する少なくとも１つの飽和または不飽和の遊離またはエステル化脂肪酸ならびに／またはＣ６－Ｃ３０、好ましくはＣ１４－Ｃ２４またはＣ１７－Ｃ２１の範囲に含まれる炭素原子数を有する少なくとも１つの飽和または不飽和脂肪酸鎖を有するトリグリセリド、ならびに／またはＣ１６－Ｃ３６、好ましくはＣ２４－Ｃ３６またはＣ２６－Ｃ３２の範囲に含まれる炭素原子数を有する少なくとも１つのワックスを含むか、あるいはそれらから成る；前記脂質マトリックスは、胃の酸性ｐＨから胃壁を保護することが可能であり、治療種および使用される脂質マトリックスタイプの機能として、チモールおよび混合物Ｍの中に存在し得る別の成分の腸内徐放性の放出を可能にする。徐放性放出は、２時間～２４時間、好ましくは４時間～８時間の範囲に含まれる時間にわたり起こり得る。
【0033】
マトリックスＭおよびそれを含む組成物は、当業者に公知の技術および装置を用いて製造される。特に、マトリックスＭを製造する工程は、ミキサーまたは撹拌手段もしくは混合手段および加熱手段を備えた容器中で、チモールと、所望により記載された実施形態のいずれかに関するグループ(Ｉ)および／または(ＩＩ)および／または(ＩＩＩ)から選択される１つまたは複数の別の成分を、全ての化合物と成分が全体としてマトリックスの中に一緒に埋め込まれるように、脂質マトリックスと一緒に混合する工程を提供する。
【0034】
「トリグリセリド」(または、トリアシルグリセロール)は、ヒドロキシル基の水素原子の代わりに３つの長鎖脂肪酸の鎖が存在するグリセロールの中性エステルである。一般的なトリグリセリド構造における脂肪酸の鎖長は、炭素原子数５～２８であるが、１７～１９がより一般的である。
【0035】
用語「脂肪酸」(略称としてＦＡ)という用語は、主に、偶数の炭素原子を有しており、分岐がなく、非環状(すなわち、環状の閉環を有しない分子で構成する)の長鎖脂肪族モノカルボン酸(構成炭素原子数は、Ｃ１０～Ｃ３０の範囲に含まれる)を示すために用いられるが、それだけに限定されるものではない。脂肪酸は、飽和(分子が、単結合のＣ－Ｃ結合のみを持つ場合)または不飽和(分子が二重結合のＣ＝Ｃ結合を持つ場合)であることが可能である。
【0036】
「ワックス」という用語は、高分子量の一価アルコールとの長鎖脂肪酸エステルを示すために使用される。ワックスには、植物由来と動物由来のもの(蜜蝋)とがある。蜜蝋は、炭化水素１４％、モノエステル３５％、ジエステル１４％、トリエステル３％、ヒドロキシモノエステル４％、ヒドロキシポリエステル８％、酸性エステル１％、酸性ポリエステル２％、遊離酸１２％、遊離アルコール１％、不特定物質６％などの様々な化合物で構成されている。蜜蝋の主成分は、長鎖(炭素数３０～３２)脂肪族アルコールにより形成されるパルミテート、パルミチン酸、ヒドロキシパルミテートおよびオレイン酸エステルであり、２つの主成分であるパルミチン酸トリアコンタニル(パルミチン酸ミリシル)ＣＨ３(ＣＨ２)２９Ｏ－ＣＯ－(ＣＨ２)１４ＣＨ３およびセロチン酸ＣＨ３(ＣＨ２)２４ＣＯＯＨは、６：１である。蜜蝋は、６２℃～６４℃の間の融点を示す。１５℃での密度は、０.９５８ｇ／ｃｍ３～０.９７０ｇ／ｃｍ３の範囲である。蜜蝋は大きく２種類に分類され得る。ヨーロッパ型と東洋型に分けられる。鹸化度は、ヨーロッパ型が３～５、東洋型が８～９である。
【0037】
前記徐放性脂質マトリックスに含まれるトリグリセリドは、植物または動物由来の水素化または非水素化トリグリセリドであってもよく、好ましくは植物および／または動物由来の水素化トリグリセリド、より好ましくは植物由来の水素化トリグリセリドである。
前記徐放性脂質マトリックス中に含まれる前記脂肪酸は、植物および／または動物由来の水素化もしくは非水素化脂肪酸、またはそのエステルであってもよく、好ましくは植物および／または動物由来の水素化脂肪酸、より好ましくは植物由来の水素化脂肪酸である。
前記徐放性脂質マトリックス中に含まれる前記ワックスは、植物および／または動物由来であってもよく、好ましくは蜜蝋である。
前記徐放性脂質マトリックス中に含まれる前記脂肪酸は、植物および／または動物由来の水素化もしくは非水素化脂肪酸、またはそのエステルであってもよく、好ましくは植物および／または動物由来の水素化脂肪酸、より好ましくは植物由来の水素化脂肪酸である。
前記徐放性脂質マトリックス中に含まれる前記ワックスは、植物および／または動物由来であってもよく、好ましくは蜜蝋である。
【0038】
植物起源の前記脂肪酸、トリグリセリドまたはワックスの例としては、水素化形態であっても、パーム油、ひまわり油、コーン油、菜種油、ピーナッツ油、大豆油、オリーブ油、蜜蝋およびそれらの混合物などである。また動物起源のトリグリセリドの例としては、水素化形態であっても、ニワトリの脂肪、水素化されたニワトリの脂肪、牛脂および豚ラードからも選択される。
【0039】
本発明の組成物は、１％～８０％、好ましくは１０％～５０％、より好ましくは１５％～４５％の範囲に含まれる重量％で、チモールと、所望により記載された実施形態のいずれか１つによるグループ(Ｉ)、(ＩＩ)および／または(ＩＩＩ)から選択される少なくとも１つの別の成分を含む混合物Ｍ；ならびに１０～８０％の範囲に含まれる重量％、好ましくは４０％～６０％、より好ましくは４５％～５５％で本発明の実施形態のいずれか１つの前記徐放性マトリックスを含んでよく、前記％は、組成物の総重量に対するものである。
記載されたいずれかの実施形態に係る本発明の組成物は、飼料または飼料添加物であってもよい。
記載されたいずれかの実施形態に係る本発明の組成物は、飼料または飼料添加物であってもよい。
【0040】
あるいは、記載された実施形態のいずれか１つによる、本発明の前記組成物は、ヒト対象および動物(動物用製品)の両方のための、医薬組成物、医療機器組成物、栄養補助食品、食品(または、新規食品または特定の医薬用途としての食品)、栄養補助食品用組成物であってもよい。
【0041】
有利には、記載された実施形態のいずれかによる本発明の混合物または組成物は、経口使用のために製剤化される。
【0042】
本発明の組成物は、固体形態、例えば、顆粒、フレーク状物、粉末、可溶性粉末、顆粒、錠剤またはカプセル；または液体形態、例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、スプレー形態で分配され得る液体またはシロップから選択される液体形態；または、半液体形態、例えば、ソフトゲルまたはゲルから選択される半液体形態において、経口使用のために製剤されてもよい。
【0043】
好ましくは、本発明の組成物は、固体形態、例えば、顆粒、粉末またはフレーク状物において経口使用するためのものである。
【0044】
有利には、本発明に記載の治療方法において有効であるためには、本発明の組成物は、５ｍｇ／ｋｇ～５０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ～２０００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１５ｍｇ／ｋｇ～１０００ｍｇ／ｋｇの範囲に含まれる量(供給飼料１ｋｇあたりのｍｇ：ｍｇ／ｋｇ)でチモールを含む１日用量にて必要とする動物に投与される。
【0045】
前記１日の投与量は、必要とする対象に単回投与(１回投与)してもよいし、反復投与(例えば、１日２回、３回または４回)してもよい。
【0046】
最後に、本発明の目的を形成するものとしては、単胃動物；好ましくは単胃哺乳動物、より好ましくは豚の離乳期または初期成長期をサポートするための、記載された実施形態の１つによる本発明の組成物もしくは混合物Ｍを含む前記飼料または飼料添加物の使用がある。
【0047】
本発明の目的を達成するために、本発明の混合物Ｍの成分(または、活性成分)、例えばチモール、グループ(Ｉ)、(ＩＩ)および／または(ＩＩＩ)の成分を、必要とする動物に、別々に、連続的に、また任意の順序で；例えば、時間間隔が近接した順序で(約０分から３０分)または時間的に近接していない順序で(１時間～約４、６、８または１２時間)投与してもよく、また同時または異なる頻度で投与してもよい。本発明の混合物Ｍの前記活性成分が単一の組成物で投与される場合、単一の組成物とは、本発明の組成物に相当する。
【0048】
別段規定されない限り、「ｘからｙの範囲に含まれる」量の成分を含む組成物または混合物またはその他のものという表現は、規定されていなくても、含まれる範囲の極値である前記範囲に存在する全ての量で前記成分が組成物その他中に存在し得ることを示すために使用される。
【0049】
別段規定されない限り、組成物が１つ以上の成分または物質を「含む」という表現は、具体的に示された１つまたは複数の成分または物質以外に、別の成分または物質が存在し得ることを意味する。
【0050】
本発明の文脈では、「治療方法」という表現は、疾病または疾患およびその症状または障害を除去、低下／減少または予防する目的で、細菌株または本発明の組成物を投与することを特徴とする、必要とする対象への介入を示すために使用される。
【0051】
「治療上有効な量」という用語は、個人、研究者、獣医師、医師または別の臨床医もしくは医療従事者により必要かつ規定される組織、体系、哺乳動物またはヒトにおいて生物学的または薬学的応答を誘起する活性化合物および／または細菌株の量を指す。
【0052】
本発明の文脈において、用語「医療機器」とは、１９９７年２月２４日付の政令番号４６に則った意味において使用されるか、または新規医療機器規則(ＥＵ)２０１７／７４５(ＭＤＲ)に則って使用される。
【0053】
本発明の文脈において、用語「新規食品」とは、１９９７年付けの規則ＥＣ ２５８に則った意味で使用される。
【0054】
本発明の目的を形成するものは、上記の組成物、好ましくはＦＲ１～ＦＲ１０およびＥ１～Ｅ１０の組成物の製造方法であって、水中油型エマルジョンおよび別に油中水型エマルジョンを製造する工程を提供し、前記エマルジョンは、固体形態の組成物を得るために混合物を構成するグループ(Ｉ)および／またはグループ(ＩＩ)および／またはグループ(ＩＩＩ)の成分を含有するものである。
【0055】
本発明の実施形態ＦＲｎを、以下に記載する。
【0056】
ＦＲ１．ヒト、単胃動物、鳥類または魚類において、エンドカナビノイド系の受容体および／または酵素を調節することにより、炎症性および／または機能性腸疾患、または関連症状の予防および／または治療的処置のための方法に使用するための組成物であって、
前記組成物は、以下：
－チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍ；および、所望により
－少なくとも１つの許容される医薬グレードまたは食品グレードの添加剤および／または賦形剤、を含む。
前記組成物は、以下：
－チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍ；および、所望により
－少なくとも１つの許容される医薬グレードまたは食品グレードの添加剤および／または賦形剤、を含む。
【0057】
ＦＲ２．前記組成物が、豚のような単胃哺乳類；好ましくは、離乳期の豚のような単胃動物または単胃哺乳類に使用するためのものである、ＦＲ１の使用のための組成物。
【0058】
ＦＲ３．前記疾患または症状が、慢性過敏性腸疾患(ＩＢＤ)、クローン症候群またはクローン病、潰瘍性大腸炎、分類不能大腸炎、顕微鏡的大腸炎、膠原病性大腸炎、リンパ球浸潤性大腸炎、虚血性大腸炎、便流変更性大腸炎、回腸嚢炎、過敏性腸症候群(ＩＢＳ)、下痢型ＩＢＳ、便秘型ＩＢＳ、混合型ＩＢＳ、分類不能型ＩＢＳ、ディスペプシア、悪心、嘔吐、便秘、下痢、腹部膨満、鼓腸および肉体疲労から選択される、ＦＲ１～２のいずれか１つの使用するための組成物。
【0059】
ＦＲ４．前記組成物が、チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍを埋め込むか、または組み込む徐放性脂質マトリックスをさらに含んでおり、前記徐放性脂質マトリックスは、少なくとも１つのＣ１０－Ｃ３０の範囲に含まれる炭素原子数を有する飽和または不飽和の遊離またはエステル化脂肪酸、および／または少なくとも１つのＣ６－Ｃ３０の範囲に含まれる炭素原子数を有する飽和または不飽和脂肪酸鎖を有するトリグリセリド、および／または少なくとも１つのＣ１６－Ｃ３６の範囲に含まれる炭素原子数を有するワックスを含むか、またはそれらから成り、前記脂質マトリックスにより、胃保護および／または混合物Ｍの徐放性腸内放出、好ましくは混合物中に含まれるチモールの徐放性腸内放出が可能となる、ＦＲ１～３のいずれか１つの使用のための組成物。
【0060】
ＦＲ５．前記徐放性放出脂質マトリックスは、Ｃ１４－Ｃ２４の範囲に含まれる炭素原子数を有する植物由来の少なくとも１つの水素化脂肪酸および／またはＣ１４－Ｃ２４の範囲に含まれる炭素原子数を有する植物由来の少なくとも１つの水素化トリグリセリドおよび／またはＣ２４－Ｃ３６の範囲に含まれる炭素原子数を有する動物由来の少なくとも１つのワックスを含むか、またはそれらから成り；好ましくは、前記脂肪酸、トリグリセリドまたはワックスが、パーム油、ヒマワリ油、コーン油、菜種油、ピーナッツ油、大豆油、オリーブ油、蜜蝋およびそれらの混合物から選択される、ＦＲ１～４のいずれか１つの使用のための組成物。
【0061】
ＦＲ６．前記混合物Ｍは、カルバクロール、オイゲノール、カプサイシン、ウコン、バニリン、シンナムアルデヒド、ジアリルジスルフィド、樟脳、リモネン、ロスマリン酸、ｐ－シメン、γ－テルピネン、α－ピネン、α－ツジョン、１,８－シネオール、ベルバスコシド、タンニンおよびそれらの混合物を含むか、またはそれらから成るグループ(Ｉ)から選択される、少なくとも１つの第１活性成分、好ましくは植物性の化合物(植物性成分)から得られる第１活性成分をさらに含む、ＦＲ１～５のいずれか１つの使用のための組成物。
【0062】
ＦＲ７．前記組成物が、チモールおよびカルバクロール、またはチモールおよびバニリン、またはチモール、カルバクロールおよびカプサイシン、またはチモール、カルバクロールおよびシンナムアルデヒド、またはチモール、オイゲノールおよびベルバスコシドを含む、ＦＲ１～６のいずれか１つの使用のための組成物。
【0063】
ＦＲ８．前記組成物に含まれる混合物Ｍは、チモールに加えて、所望によりグループ(Ｉ)から選択される前記別の第１活性成分(植物性成分)、有機酸またはアルカリもしくはアルカリ土類金属カチオンとのその塩を含んでおり、前記有機酸は、乳酸、リンゴ酸、安息香酸、フマル酸、ソルビン酸、クエン酸、オクタン酸、ヘプタン酸、酪酸、ドデカン酸およびそれらの混合物を含むか、またはそれらから成るグループ(ＩＩ)から選択され：好ましくは、チモールおよびソルビン酸、またはチモール、ソルビン酸およびクエン酸、またはチモールおよび安息香酸、またはチモール、ソルビン酸、クエン酸および安息香酸、またはチモール、カルバクロールおよびソルビン酸、またはチモール、カルバクロール、ソルビン酸およびクエン酸、またはチモール、カルバクロール、シンナムアルデヒドおよびソルビン酸、またはチモール、カルバクロール、シンナムアルデヒド、ソルビン酸およびクエン酸、またはチモールおよび酪酸、またはチモール、クエン酸およびドデカン酸を含んでもよい、ＦＲ１～７のいずれか１つの使用のための組成物。
【0064】
ＦＲ９．前記混合物Ｍが、以下：
－ラクトバチルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)属、ビフィドバクテリウム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)属、ストレプトコッカス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)属、ロイコノストック(Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ)属、ペディオコッカス(Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ)属、エンテロコッカス(Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ)属、サッカロミセス(Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ)属に属する細菌株またはプロバイオティックス細菌株；および／または
－プレバイオティクス、例えばイヌリン、ラクチュロース、ラクチトール、マンノオリゴ糖、フラクトオリゴ糖およびガラクトオリゴ糖、トリブチリンなど；および／または
－金属塩、例えば、亜鉛および銅；ならびにその混合物、
からなるグループ(ＩＩＩ)から選択される少なくとも１つの別の第２活性成分をさらに含む、ＦＲ１～８のいずれか１つの使用のための組成物。
－ラクトバチルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)属、ビフィドバクテリウム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)属、ストレプトコッカス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)属、ロイコノストック(Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ)属、ペディオコッカス(Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ)属、エンテロコッカス(Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ)属、サッカロミセス(Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ)属に属する細菌株またはプロバイオティックス細菌株；および／または
－プレバイオティクス、例えばイヌリン、ラクチュロース、ラクチトール、マンノオリゴ糖、フラクトオリゴ糖およびガラクトオリゴ糖、トリブチリンなど；および／または
－金属塩、例えば、亜鉛および銅；ならびにその混合物、
からなるグループ(ＩＩＩ)から選択される少なくとも１つの別の第２活性成分をさらに含む、ＦＲ１～８のいずれか１つの使用のための組成物。
【0065】
ＦＲ１０．前記組成物が、単胃動物および／または離乳期もしくは初期成長期の単胃動物用の飼料または飼料添加剤；好ましくは単胃哺乳類用、より好ましくは豚用の飼料または飼料添加剤である、ＦＲ１～９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【0066】
Ｅ１．ヒト、単胃動物、鳥類または魚類において、エンドカンナビノイド系の受容体および／または酵素を調節することにより、炎症性および／または機能性腸疾患、または関連症状の予防および／または治療的処置ための方法における使用のための組成物であって、前記組成物は、以下：
－チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍ；ならびに、所望により
－少なくとも１つの許容される医薬グレードまたは食品グレードの添加剤および／または賦形剤を含んでおり、
前記組成物は、チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍを埋め込むか、または組み込む徐放性脂質マトリックスをさらに含んでおり、前記徐放性脂質マトリックスは、少なくとも１つのＣ１０－Ｃ３０の範囲に含まれる炭素原子数を有する飽和または不飽和の遊離またはエステル化脂肪酸、および／または少なくとも１つのＣ６－Ｃ３０の範囲に含まれる炭素原子数を有する飽和または不飽和脂肪酸鎖を有するトリグリセリド、および／または少なくとも１つのＣ１６－Ｃ３６の範囲に含まれる炭素原子数を有するワックスを含むか、またはから成り、前記脂質マトリックスにより、胃保護および／または混合物Ｍの徐放性腸内放出、好ましくは混合物中に含まれるチモールの徐放性腸内放出が可能となる、組成物。
－チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍ；ならびに、所望により
－少なくとも１つの許容される医薬グレードまたは食品グレードの添加剤および／または賦形剤を含んでおり、
前記組成物は、チモールを含む混合物Ｍまたはチモールから成る混合物Ｍを埋め込むか、または組み込む徐放性脂質マトリックスをさらに含んでおり、前記徐放性脂質マトリックスは、少なくとも１つのＣ１０－Ｃ３０の範囲に含まれる炭素原子数を有する飽和または不飽和の遊離またはエステル化脂肪酸、および／または少なくとも１つのＣ６－Ｃ３０の範囲に含まれる炭素原子数を有する飽和または不飽和脂肪酸鎖を有するトリグリセリド、および／または少なくとも１つのＣ１６－Ｃ３６の範囲に含まれる炭素原子数を有するワックスを含むか、またはから成り、前記脂質マトリックスにより、胃保護および／または混合物Ｍの徐放性腸内放出、好ましくは混合物中に含まれるチモールの徐放性腸内放出が可能となる、組成物。
【0067】
Ｅ２．前記組成物が、豚のような単胃哺乳類；好ましくは、離乳期の豚のような単胃動物または単胃哺乳類に使用するためのものである、Ｅ１の使用のための組成物。
【0068】
Ｅ３．前記疾患または症状が、慢性過敏性腸疾患(ＩＢＤ)、クローン症候群またはクローン病、潰瘍性大腸炎、分類不能大腸炎、顕微鏡的大腸炎、膠原線維性大腸炎、リンパ球浸潤性大腸炎、虚血性大腸炎、便流変更性大腸炎、回腸嚢炎、過敏性腸症候群(ＩＢＳ)、下痢型ＩＢＳ、便秘型ＩＢＳ、混合型ＩＢＳ、分類不能型ＩＢＳ、ディスペプシア、悪心、嘔吐、便秘、下痢、腹部膨満、鼓腸および肉体疲労から選択される、Ｅ１または２のいずれか１つの使用のための組成物。
【0069】
Ｅ４．前記徐放性放出脂質マトリックスは、Ｃ１４－Ｃ２４の範囲に含まれる炭素原子数を有する植物由来の少なくとも１つの水素化脂肪酸および／またはＣ１４－Ｃ２４の範囲に含まれる炭素原子数を有する植物由来の少なくとも１つの水素化トリグリセリドおよび／またはＣ２４－Ｃ３６の範囲に含まれる炭素原子数を有する動物由来の少なくとも１つのワックスを含むか、またはそれらから成り；好ましくは、前記脂肪酸、トリグリセリドまたはワックスが、パーム油、ヒマワリ油、コーン油、菜種油、ピーナッツ油、大豆油、オリーブ油、蜜蝋およびそれらの混合物から選択される、Ｅ１～３のいずれか１つの使用のための組成物。
【0070】
Ｅ５．前記混合物Ｍは、カルバクロール、オイゲノール、カプサイシン、ウコン、バニリン、シンナムアルデヒド、ジアリルジスルフィド、樟脳、リモネン、ロスマリン酸、ｐ-シメン、γ-テルピネン、α-ピネン、α-ツジョン、１,８－シネオール、ベルバスコシド、タンニン、メンソール、リナロール(リナロールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号７８－７０－６)、テルピネオール(テルピネオールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号９８－５５－５))、アントシアニン類(アントシアニン)、カテキン、α-ジンギベレン(Ｃ１５Ｈ２４ ＣＡＳ番号４９５－６０－３)およびこれらの混合物を含むか、またはから成るグループ(Ｉ)から選択される、少なくとも１つの第１活性成分、好ましくは植物性の化合物(植物性成分)から得られる第１活性成分をさらに含むか、Ｅ１～４のいずれか１つの使用のための組成物。
【0071】
Ｅ６．前記組成物が、チモールおよびカルバクロール、またはチモールおよびバニリン、またはチモールおよびメントール、またはチモールおよびリナロール(リナロールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号７８－７０－６)、またはチモールおよびテルピネオール(テルピネオールＣ１０Ｈ１８Ｏ(ＣＡＳ番号９８－５５－５))、またはチモールおよびアントシアニン類(アントシアニン)、またはチモールおよびカテキン類、またはチモールおよびα-ジンギベレン(Ｃ１５Ｈ２４ ＣＡＳ番号４９５－６０－３)ならびにそれらの混合物；あるいは、チモール、カルバクロールおよびカプサイシン、またはチモール、カルバクロールおよびシンナムアルデヒド、またはチモール、オイゲノールおよびベルバスコシドを含む、Ｅ１～５のいずれか１つの使用のための組成物。
【0072】
Ｅ７．前記組成物に含まれる混合物Ｍは、チモールに加えて、所望によりグループ(Ｉ)から選択される別の前記第１活性成分(植物性成分)、有機酸またはアルカリもしくはアルカリ土類金属カチオンとのその塩を含んでおり、前記有機酸は、乳酸、リンゴ酸、安息香酸、フマル酸、ソルビン酸、クエン酸、オクタン酸、ヘプタン酸、酪酸、ドデカン酸およびそれらの混合物を含むか、またはそれらから成るグループ(ＩＩ)から選択され：好ましくは、チモールおよびソルビン酸、またはチモール、ソルビン酸およびクエン酸、またはチモールおよび安息香酸、またはチモール、ソルビン酸、クエン酸および安息香酸、またはチモール、カルバクロールおよびソルビン酸、またはチモール、カルバクロール、ソルビン酸およびクエン酸、またはチモール、カルバクロール、シンナムアルデヒドおよびソルビン酸、またはチモール、カルバクロール、シンナムアルデヒド、ソルビン酸およびクエン酸、またはチモールおよび酪酸、またはチモール、クエン酸およびドデカン酸を含んでもよい、Ｅ１～６のいずれか１つの使用のための組成物。
【0073】
Ｅ８．前記混合物Ｍが、以下：
－ラクトバチルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)属、ビフィドバクテリウム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)属、ストレプトコッカス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)属、ロイコノストック(Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ)属、ペディオコッカス(Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ)属、エンテロコッカス(Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ)属、サッカロミセス(Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ)属に属する細菌株またはプロバイオティック細菌株；および／または
－プレバイオティクス、例えばイヌリン、ラクチュロース、ラクチトール、マンノオリゴ糖、フラクトオリゴ糖およびガラクトオリゴ糖、トリブチリン、モノブチリン(モノブチリン Ｃ７Ｈ１４Ｏ４ ＣＡＳ番号５５７－２５－５)、モノラウリン(モノラウリン Ｃ１５Ｈ３０Ｏ４ ＣＡＳ番号２７２１５－３８－９)およびそれらの混合物；および／または
－金属塩、例えば、亜鉛および銅；ならびにその混合物、
からなるグループ(ＩＩＩ)から選択される少なくとも１つの別の第２活性成分をさらに含む、Ｅ１～７のいずれか１つの使用のための組成物。
－ラクトバチルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)属、ビフィドバクテリウム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)属、ストレプトコッカス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)属、ロイコノストック(Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ)属、ペディオコッカス(Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ)属、エンテロコッカス(Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ)属、サッカロミセス(Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ)属に属する細菌株またはプロバイオティック細菌株；および／または
－プレバイオティクス、例えばイヌリン、ラクチュロース、ラクチトール、マンノオリゴ糖、フラクトオリゴ糖およびガラクトオリゴ糖、トリブチリン、モノブチリン(モノブチリン Ｃ７Ｈ１４Ｏ４ ＣＡＳ番号５５７－２５－５)、モノラウリン(モノラウリン Ｃ１５Ｈ３０Ｏ４ ＣＡＳ番号２７２１５－３８－９)およびそれらの混合物；および／または
－金属塩、例えば、亜鉛および銅；ならびにその混合物、
からなるグループ(ＩＩＩ)から選択される少なくとも１つの別の第２活性成分をさらに含む、Ｅ１～７のいずれか１つの使用のための組成物。
【0074】
Ｅ９．前記組成物が、単胃動物および／または離乳期もしくは初期成長期の単胃動物用の飼料または飼料添加剤；好ましくは単胃哺乳類用、より好ましくは豚用の飼料または飼料添加剤である、Ｅ１～８のいずれか１つの使用のための組成物。
【0075】
Ｅ１０．Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つに記載の組成物の製造方法であって、前記方法は、水中油型エマルジョンあるいは油中水型エマルジョンを製造する工程を提供し、前記エマルジョンは、固体形態の組成物を得るために混合物を構成するグループ(Ｉ)および／またはグループ(ＩＩ)および／またはグループ(ＩＩＩ)の成分を含有する、方法。
【0076】
実験部
本試験の目的は、内在性カンナビノイドシステムおよび豚の腸管ケモセンシングシステムのマーカーの存在を試験することであり、第二に、チモールがこれらのマーカーをどのように調節するかを実証することである。
本試験の目的は、内在性カンナビノイドシステムおよび豚の腸管ケモセンシングシステムのマーカーの存在を試験することであり、第二に、チモールがこれらのマーカーをどのように調節するかを実証することである。
【0077】
方法
倫理に関する記述
本試験は、優良試験所規範の認証を受け、動物の保護および福祉の手引き(規制番号８６／６０９／ＥＥＣ)に従って運営されている動物生産・環境研究センター(ＣＥＲ－Ｏ)の施設において実施した。本試験で使用した動物は、欧州連合規制２０１０／６３／ＥＵに従って飼育および処理されたものである。本試験は、実験およびその他の科学的目的のために使用される動物の生育および飼育を扱う法律であるイタリア立法令第３１号およびイタリア委員会推奨２００７/５２６/ＥＣに従ってイタリア厚生省の認可を受けている。動物は、イタリアのベルガモにあるカシーナ・マンデリーナの飼育農場から入手した。
倫理に関する記述
本試験は、優良試験所規範の認証を受け、動物の保護および福祉の手引き(規制番号８６／６０９／ＥＥＣ)に従って運営されている動物生産・環境研究センター(ＣＥＲ－Ｏ)の施設において実施した。本試験で使用した動物は、欧州連合規制２０１０／６３／ＥＵに従って飼育および処理されたものである。本試験は、実験およびその他の科学的目的のために使用される動物の生育および飼育を扱う法律であるイタリア立法令第３１号およびイタリア委員会推奨２００７/５２６/ＥＣに従ってイタリア厚生省の認可を受けている。動物は、イタリアのベルガモにあるカシーナ・マンデリーナの飼育農場から入手した。
【0078】
動物および飼料
２８日齢で離乳させ、体重(ＢＷ)が７.７１±１.００ｋｇの子豚(Duroc-Large White)１５０頭を、４０の飼育小屋に分けて(飼育小屋あたり子豚４頭、去勢した雄と雌を、別々の飼育小屋に入れる)、以下の実験グループ(ｎ＝３２)のいずれかにランダムに割り付けた：基本飼料を与えるコントロール群(Ｔ１)、１ｋｇ飼料当たりに２５.５ｍｇのチモールを添加した基本飼料を与えた群(Ｔ２)、１ｋｇ飼料当たりに５１ｍｇのチモールを添加した基本飼料を与えた群(Ｔ３)、１ｋｇ飼料当たりに１５３ｍｇのチモールを添加した基本飼料を与えた群(Ｔ４)および１ｋｇ飼料当たりに５１０ｍｇのチモールを添加した基本飼料を与えた群(Ｔ５)。チモールは、脂質マトリックス(VetagroSpA, ReggioEmilia, Italy)に埋め込まれた形態で(マイクロカプセル化された形態で)提供された。チモールの濃度は、欧州医薬品庁が定めた食品および飼料への含有上限を満たすか、または上限を超えるように選択された。基本飼料は、国の評議会に従い、豚の栄養所要量を満たすか、または上限を超えるように配合し、飼料および水を自由摂取させた(基本飼料の組成は、表１に示す)。試験中、動物の健康状態をモニタリングした。子豚の体重は、試験の開始時(０日目)と終了時(１４日目)に各々測定した。実験１４日目(ｄ１４)に、各飼育小屋に収容された動物のＦＩ、ＡＤＦＩ、ＡＤＧおよびＦ：Ｇ(ＦＩ－飼料摂取量；ＡＤＦＩ－１日平均飼料摂取量；ＡＤＧ－１日平均増加量；Ｆ：Ｇ－飼料／増加比)などの生育パラメータを測定した。
２８日齢で離乳させ、体重(ＢＷ)が７.７１±１.００ｋｇの子豚(Duroc-Large White)１５０頭を、４０の飼育小屋に分けて(飼育小屋あたり子豚４頭、去勢した雄と雌を、別々の飼育小屋に入れる)、以下の実験グループ(ｎ＝３２)のいずれかにランダムに割り付けた：基本飼料を与えるコントロール群(Ｔ１)、１ｋｇ飼料当たりに２５.５ｍｇのチモールを添加した基本飼料を与えた群(Ｔ２)、１ｋｇ飼料当たりに５１ｍｇのチモールを添加した基本飼料を与えた群(Ｔ３)、１ｋｇ飼料当たりに１５３ｍｇのチモールを添加した基本飼料を与えた群(Ｔ４)および１ｋｇ飼料当たりに５１０ｍｇのチモールを添加した基本飼料を与えた群(Ｔ５)。チモールは、脂質マトリックス(VetagroSpA, ReggioEmilia, Italy)に埋め込まれた形態で(マイクロカプセル化された形態で)提供された。チモールの濃度は、欧州医薬品庁が定めた食品および飼料への含有上限を満たすか、または上限を超えるように選択された。基本飼料は、国の評議会に従い、豚の栄養所要量を満たすか、または上限を超えるように配合し、飼料および水を自由摂取させた(基本飼料の組成は、表１に示す)。試験中、動物の健康状態をモニタリングした。子豚の体重は、試験の開始時(０日目)と終了時(１４日目)に各々測定した。実験１４日目(ｄ１４)に、各飼育小屋に収容された動物のＦＩ、ＡＤＦＩ、ＡＤＧおよびＦ：Ｇ(ＦＩ－飼料摂取量；ＡＤＦＩ－１日平均飼料摂取量；ＡＤＧ－１日平均増加量；Ｆ：Ｇ－飼料／増加比)などの生育パラメータを測定した。
【表1】
【0079】
試験終了時、各投与群から８匹を屠殺し、試料を採取し、分析した。十二指腸および回腸の粘膜を、かき取り、採取した。十二指腸および回腸を、縦に切断して粘膜を露出させ、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄して粘液および消化物を除去した後、優しく掻き取り、袋に封入後、直ちに液体窒素で凍結し、遺伝子およびタンパク質発現の分析まで－８０℃で保存した。
【0080】
遺伝子発現解析
遺伝子発現は、Ｈｅｒｆｅｌらにより報告された方法[The Journal of Nutrition. 2011; 141:2139-45]を用いて分析した。試験の１４日目に採取した十二指腸および回腸を掻取った試料を、液体窒素中で乳鉢と乳棒を用いて粉砕して、Tissue Lyser(Qiagen, Hilden, Germany)を用いてホモジナイズした。全ＲＮＡ量は、Nucleo Spin(登録商標)RNA Kit(Macherey-Nagel, Dueren, Germany)を用いて、製造元の説明書に従って単離された。ゲノムＤＮＡの混入は、抽出キットに付属のデオキシリボヌクレアーゼ(rDNase, RNase-free；Macherey-Nagel)でサンプルを処理することにより除去した。ＲＮＡの収量および品質は、２６０ｎｍおよび２８０ｎｍの吸光度を測定することにより分光光度法で決定した(Microvolume Mode with SmartPathR Technology, Denovix)。１μｇのＲＮＡを、iScript cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, USA)を用いて、製造者の指示に従って逆転写した。リアルタイムＰＣＲは、iCycler Thermal Cycler system and SybrGreen Supermix (Bio-Rad Laboratories Inc.)を用いて実施した。サーモサイクルプロトコルは、９５℃で１分３０秒の初期変性ステップ、その後９５℃で１５秒の変性および６０℃で３０秒のアニーリングおよび伸長を４０サイクル行った。増幅後、溶融曲線分析を全てのサンプルについて行い、５５℃～９５℃まで０.５０℃／秒の速度でゆっくりと加熱し、非特異的産物が存在しないことを確認した。遺伝子発現は、豚のリボソームサブユニット６０Ｓの一部、特にリボソームタンパク質Ｌ３５(ＲＰＬ３５)をコードするハウスキーピング遺伝子(ＨＫ)に対して正規化された。平均閾値サイクル(ＣＴ)を、各目的遺伝子について決定し、幾何平均を、ＣＴが固定した任意の閾値に達するのに必要なサイクル数であるという仮定によりＨＫについて算出した。デルタＣＴを算出した後、２－ΔΔＣＴ方法[Livak KJ, et al., Methods 2001; 25:402-8]を改変して、相対発現量を解析し、コントロール群に対する相対発現量(倍率変化：fold changes)を算出した。配列、ＥＭＢＬデータベース／ＧｅｎＢａｎｋにおけるアクセション番号、予想される産物の長さ、および豚プライマーの参照配列を、表２に示す。ＣＢ１、ＤＧＬ－βおよびＯＲ１Ｇ１についてのプライマーオリゴヌクレオチドは、Ｐｒｉｍｅｒ－ＢＬＡＳＴツール(NCBI National Center for Biotechnology Information, www.ncbi.nlm.nih.gov)を用いて設計した。プライマーは、Life Technologies (Life Technologies Italia)から入手した。
遺伝子発現は、Ｈｅｒｆｅｌらにより報告された方法[The Journal of Nutrition. 2011; 141:2139-45]を用いて分析した。試験の１４日目に採取した十二指腸および回腸を掻取った試料を、液体窒素中で乳鉢と乳棒を用いて粉砕して、Tissue Lyser(Qiagen, Hilden, Germany)を用いてホモジナイズした。全ＲＮＡ量は、Nucleo Spin(登録商標)RNA Kit(Macherey-Nagel, Dueren, Germany)を用いて、製造元の説明書に従って単離された。ゲノムＤＮＡの混入は、抽出キットに付属のデオキシリボヌクレアーゼ(rDNase, RNase-free；Macherey-Nagel)でサンプルを処理することにより除去した。ＲＮＡの収量および品質は、２６０ｎｍおよび２８０ｎｍの吸光度を測定することにより分光光度法で決定した(Microvolume Mode with SmartPathR Technology, Denovix)。１μｇのＲＮＡを、iScript cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, USA)を用いて、製造者の指示に従って逆転写した。リアルタイムＰＣＲは、iCycler Thermal Cycler system and SybrGreen Supermix (Bio-Rad Laboratories Inc.)を用いて実施した。サーモサイクルプロトコルは、９５℃で１分３０秒の初期変性ステップ、その後９５℃で１５秒の変性および６０℃で３０秒のアニーリングおよび伸長を４０サイクル行った。増幅後、溶融曲線分析を全てのサンプルについて行い、５５℃～９５℃まで０.５０℃／秒の速度でゆっくりと加熱し、非特異的産物が存在しないことを確認した。遺伝子発現は、豚のリボソームサブユニット６０Ｓの一部、特にリボソームタンパク質Ｌ３５(ＲＰＬ３５)をコードするハウスキーピング遺伝子(ＨＫ)に対して正規化された。平均閾値サイクル(ＣＴ)を、各目的遺伝子について決定し、幾何平均を、ＣＴが固定した任意の閾値に達するのに必要なサイクル数であるという仮定によりＨＫについて算出した。デルタＣＴを算出した後、２－ΔΔＣＴ方法[Livak KJ, et al., Methods 2001; 25:402-8]を改変して、相対発現量を解析し、コントロール群に対する相対発現量(倍率変化：fold changes)を算出した。配列、ＥＭＢＬデータベース／ＧｅｎＢａｎｋにおけるアクセション番号、予想される産物の長さ、および豚プライマーの参照配列を、表２に示す。ＣＢ１、ＤＧＬ－βおよびＯＲ１Ｇ１についてのプライマーオリゴヌクレオチドは、Ｐｒｉｍｅｒ－ＢＬＡＳＴツール(NCBI National Center for Biotechnology Information, www.ncbi.nlm.nih.gov)を用いて設計した。プライマーは、Life Technologies (Life Technologies Italia)から入手した。
【0081】
表２．ｂｐ：産物の長さ；Ｆ：フォワード；Ｒ：リバース
【表2】
【0082】
統計解析
動物を完全無作為化により群分けを行い、データはGraphPad PrismR software (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA)を用いて分析した。データは、一元配置分散分析(one-way ANOVA)およびTukey事後検定を用いて分析し、処理群間の差異を検出した。飼育小屋は、成長パフォーマンスに対する実験単位であり、一方で、豚は、遺伝子発現の実験単位である。差はＰ＜０.０５で有意とみなし、傾向は０.０５＜Ｐ＜０.１と定義した。
動物を完全無作為化により群分けを行い、データはGraphPad PrismR software (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA)を用いて分析した。データは、一元配置分散分析(one-way ANOVA)およびTukey事後検定を用いて分析し、処理群間の差異を検出した。飼育小屋は、成長パフォーマンスに対する実験単位であり、一方で、豚は、遺伝子発現の実験単位である。差はＰ＜０.０５で有意とみなし、傾向は０.０５＜Ｐ＜０.１と定義した。
【0083】
結果
成長パフォーマンス
実験期間中、子豚は、良好な健康状態を維持しており、死亡は記録されなかった。実験期間中に、体重(ＢＷ)、飼料摂取量(ＦＩ)、１日平均飼料摂取量(ＡＤＦＩ)、１日平均体重増加量(ＡＤＧ)、飼料：体重増加比(Ｆ：Ｇ)についての処理群間の差異は認められなかった(データ示さず)。
成長パフォーマンス
実験期間中、子豚は、良好な健康状態を維持しており、死亡は記録されなかった。実験期間中に、体重(ＢＷ)、飼料摂取量(ＦＩ)、１日平均飼料摂取量(ＡＤＦＩ)、１日平均体重増加量(ＡＤＧ)、飼料：体重増加比(Ｆ：Ｇ)についての処理群間の差異は認められなかった(データ示さず)。
【0084】
内在性カンナビノイドシステム(ＥＣＳ)
図１は、１４日目(ｄ１４)の十二指腸粘膜および回腸粘膜におけるカンナビノイド受容体の遺伝子発現データをまとめたものである。カンナビノイド受容体１および２のｍＲＮＡは、十二指腸粘膜および回腸粘膜の両方で検出された。ＣＢ１ ｍＲＮＡのレベルは、コントロール群と比較して、Ｔ５群の十二指腸(Ｐ＝０.０２０９)、Ｔ４群およびＴ５群の回腸(Ｐ＝０.００５４)で有意に増加した。ＣＢ２ ｍＲＮＡのレベルは、コントロール群と比較して、Ｔ４群およびＴ５群の十二指腸および回腸の両方で有意に増加した(各々Ｐ＝０.００４およびＰ＝０.０１６２)。ＥＣＳ酵素の遺伝子発現に関するデータを、図２に示す。試験した全ての酵素のｍＲＮＡの存在が確認された。ＦＡＡＨ ｍＲＮＡレベルの差は、十二指腸では観察されなかったが、Ｔ４群の回腸ではコントロール群と比較して、ＦＡＡＨ ｍＲＮＡレベルが有意に増加した(Ｐ＝０.００２８)。
図１は、１４日目(ｄ１４)の十二指腸粘膜および回腸粘膜におけるカンナビノイド受容体の遺伝子発現データをまとめたものである。カンナビノイド受容体１および２のｍＲＮＡは、十二指腸粘膜および回腸粘膜の両方で検出された。ＣＢ１ ｍＲＮＡのレベルは、コントロール群と比較して、Ｔ５群の十二指腸(Ｐ＝０.０２０９)、Ｔ４群およびＴ５群の回腸(Ｐ＝０.００５４)で有意に増加した。ＣＢ２ ｍＲＮＡのレベルは、コントロール群と比較して、Ｔ４群およびＴ５群の十二指腸および回腸の両方で有意に増加した(各々Ｐ＝０.００４およびＰ＝０.０１６２)。ＥＣＳ酵素の遺伝子発現に関するデータを、図２に示す。試験した全ての酵素のｍＲＮＡの存在が確認された。ＦＡＡＨ ｍＲＮＡレベルの差は、十二指腸では観察されなかったが、Ｔ４群の回腸ではコントロール群と比較して、ＦＡＡＨ ｍＲＮＡレベルが有意に増加した(Ｐ＝０.００２８)。
【0085】
腸管ケモセンシングシステム
腸管ケモセンシングに関する結果を、図３に示す。腸管ケモセンシングマーカーに関しては、十二指腸および回腸粘膜でＴＲＰＶ１およびＯＲ１Ｇ１(Olfactory receptor 1G1)の両方のｍＲＮＡが検出された。さらに、１ｋｇ飼料当たりに５１０ｍｇチモールの投与終了時に、十二指腸のＴＲＰＶ１ ｍＲＮＡレベルが増加し(Ｐ＝０.０３８２)、Ｔ４群およびＴ５群の回腸では、コントロール群と比較してＴＲＰＶ１ ｍＲＮＡレベルの増加が認められた(Ｐ＝０.０１８３)。ＯＲ１Ｇ１ ｍＲＮＡは、コントロール群と比較して、１ｋｇ飼料当たりに５１０ｍｇ チモールを添加した飼料を与えた動物(Ｔ５)の十二指腸(Ｐ＝０.０２１０)および１ｋｇ飼料当たりに１５３ｍｇ チモールを与えた動物(Ｔ４)の回腸(Ｐ＝０.０２３５)において高いレベルで発現していた。
腸管ケモセンシングに関する結果を、図３に示す。腸管ケモセンシングマーカーに関しては、十二指腸および回腸粘膜でＴＲＰＶ１およびＯＲ１Ｇ１(Olfactory receptor 1G1)の両方のｍＲＮＡが検出された。さらに、１ｋｇ飼料当たりに５１０ｍｇチモールの投与終了時に、十二指腸のＴＲＰＶ１ ｍＲＮＡレベルが増加し(Ｐ＝０.０３８２)、Ｔ４群およびＴ５群の回腸では、コントロール群と比較してＴＲＰＶ１ ｍＲＮＡレベルの増加が認められた(Ｐ＝０.０１８３)。ＯＲ１Ｇ１ ｍＲＮＡは、コントロール群と比較して、１ｋｇ飼料当たりに５１０ｍｇ チモールを添加した飼料を与えた動物(Ｔ５)の十二指腸(Ｐ＝０.０２１０)および１ｋｇ飼料当たりに１５３ｍｇ チモールを与えた動物(Ｔ４)の回腸(Ｐ＝０.０２３５)において高いレベルで発現していた。
【0086】
結論
結論として、本試験のデータは、子豚の十二指腸および回腸粘膜に内在性カンナビノイドシステム(ＥＣＳ)および腸管ケモセンシングマーカーが存在することを確認するだけでなく、チモールがこれらのマーカーの遺伝子発現を調節することを実証するものであった。チモールは、十二指腸および回腸の両方で、ＣＢ１およびＣＢ２受容体をコードするｍＲＮＡの発現を増加させた。チモールはまた、内在性カンナビノイド分子の生合成および分解に関与する酵素(例えば、ＦＡＡＨ)のｍＲＮＡレベルを調節する。さらに、チモールが腸内で行うＯＲ１Ｇ１およびＴＲＰＶ１(化学感覚受容体)のアップレギュレーションは、特に、離乳期および成長期の動物の腸の健康を増進するための飼料添加剤としてのチモールの役割に関する可能性を示している。
結論として、本試験のデータは、子豚の十二指腸および回腸粘膜に内在性カンナビノイドシステム(ＥＣＳ)および腸管ケモセンシングマーカーが存在することを確認するだけでなく、チモールがこれらのマーカーの遺伝子発現を調節することを実証するものであった。チモールは、十二指腸および回腸の両方で、ＣＢ１およびＣＢ２受容体をコードするｍＲＮＡの発現を増加させた。チモールはまた、内在性カンナビノイド分子の生合成および分解に関与する酵素(例えば、ＦＡＡＨ)のｍＲＮＡレベルを調節する。さらに、チモールが腸内で行うＯＲ１Ｇ１およびＴＲＰＶ１(化学感覚受容体)のアップレギュレーションは、特に、離乳期および成長期の動物の腸の健康を増進するための飼料添加剤としてのチモールの役割に関する可能性を示している。
【図1】
【図2】
【図3】
【配列表】
【国際調査報告】