特表 2023-524639 患者特異的免疫療法用細胞の製造調整システム及び調整方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-06-13

(54)【発明の名称】患者特異的免疫療法用細胞の製造調整システム及び調整方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/0783 20100101AFI20230606BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 35/13 20150101ALI20230606BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20230606BHJP

   C07K 14/55 20060101ALN20230606BHJP

   C07K 16/10 20060101ALN20230606BHJP

【ＦＩ】

C12N5/0783 ZNA

C12Q1/02

A61K35/13

A61K35/17

C07K14/55

C07K16/10

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022562933

(86)(22)【出願日】2021-04-22

(85)【翻訳文提出日】2022-12-14

(86)【国際出願番号】 US2021028709

(87)【国際公開番号】W WO2021216920

(87)【国際公開日】2021-10-28

(31)【優先権主張番号】63/155,711

(32)【優先日】2021-03-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/013,942

(32)【優先日】2020-04-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/159,806

(32)【優先日】2021-03-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＱＲコード

(71)【出願人】

【識別番号】519006377

【氏名又は名称】アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100109346

【弁理士】

【氏名又は名称】大貫 敏史

(74)【代理人】

【識別番号】100117189

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 昭彦

(74)【代理人】

【識別番号】100134120

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 和彦

(72)【発明者】

【氏名】ブルックス，アン

(72)【発明者】

【氏名】マクリデス，スティーブ

(72)【発明者】

【氏名】ランツィ，クリスティン

【テーマコード（参考）】

4B063

4B065

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B063QA01

4B063QA20

4B063QQ02

4B063QQ05

4B063QQ08

4B063QR72

4B063QR74

4B063QR77

4B063QR90

4B063QS36

4B063QS40

4B063QX01

4B065AA94X

4B065AC20

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4B065CA44

4B065CA46

4C087AA01

4C087AA03

4C087BB37

4C087BB63

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZB26

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA04

4H045DA76

4H045EA20

(57)【要約】

患者向け増殖細胞療法製剤の製造の調整方法は、上記患者向けの上記細胞療法製剤を増殖させるための細胞注文を受信することと；上記細胞注文に関連する患者固有の識別子または細胞注文識別子を作成することと；上記患者から得られた固形腫瘍の少なくとも一部から上記細胞療法製剤を増殖させるためのプロセスを開始することとを含んでいてもよい。上記増殖プロセスにおける第１の時点の後の第２の時点において、上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが特定の受け入れ基準を満たさない場合には、上記第２の時点における受け入れパラメータに基いて、上記第１の時点から、細胞増殖技法を使用して上記細胞療法製剤の増殖を再実施するかどうかが判定される。上記増殖のかかる再実施が可能な場合には、上記増殖細胞療法製剤を使用した患者の治療イベントが計画変更される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

患者の腫瘍から得られた細胞集団を細胞療法製剤へと増殖させることによる前記細胞療法製剤の製造方法であって、
計算装置によって、前記患者向けに前記細胞集団を増殖させるための細胞注文を受信することと、
前記計算装置によって、前記細胞注文に関連する患者固有の識別子を含む細胞注文識別子を作成することと、
前記細胞療法製剤を製造するためのプロセスを開始することであり、前記プロセスが
製造施設において前記細胞集団を受け入れた後に、前記計算装置によって、その後に得られる増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータに応じて、患者の治療イベントを動的に計画立案することと、
前記得られた細胞集団の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して細胞療法製剤の増殖を開始すること、及び前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することと、
前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが特定の受け入れ基準を満たすかどうかを判定することと、
前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記受け入れ基準を満たすとの判定に呼応して、細胞療法の第１の増殖を完了することと、
前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、前記計算装置によって、臨床上決定された、前記患者における前記増殖細胞療法製剤の注入と、前記患者における前記増殖細胞療法製剤の注入の前または後の患者の治療イベントとの間の時間の間隔に基づいて、前記患者の治療イベントを計画変更すること、及び後続の細胞療法製剤の増殖を完了することと
を含む前記プロセスを開始することと
を含む前記方法。

【請求項2】

患者の腫瘍から得られた細胞集団を細胞療法製剤へと増殖させることによる前記細胞療法製剤の製造方法であって、
前記患者向けに前記細胞療法製剤を製造するための細胞注文に基づいて、製造施設において前記患者由来の細胞集団を受け入れることと、
計算装置によって、前記細胞注文に関連する患者固有の識別子を含む細胞注文識別子を作成することと、
前記細胞療法製剤を製造するためのプロセスを開始することであり、前記プロセスが、
前記製造施設において前記細胞集団を受け入れた後に、前記計算装置によって、患者の治療イベントをスケジュール化することと、
前記細胞集団の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して細胞療法製剤の増殖を開始すること、ならびに第１の時点及び前記第１の時点の後の第２の時点で前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することと、
前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが対応する時点に関連する受け入れ基準を満たすかどうかを判定することと、
前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、前記第１の時点における前記受け入れ基準を満たすとの判定に呼応して、得られた細胞療法製剤の少なくとも一部から、前記細胞増殖技法を使用して、前記細胞療法製剤の増殖を前記第２の時点まで継続することと、
前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、前記第２の時点における前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、
前記細胞療法製剤の増殖を、前記細胞増殖技法を使用して前記第１の時点から再実施することが、前記第２の時点における受け入れパラメータに基づいて実現可能であるかどうかを判定することと、
前記再実施が実現可能であるとの判定に呼応して、前記第２の時点で得られた細胞療法製剤の少なくとも一部から、前記細胞増殖技法を使用して前記細胞療法製剤の増殖を再実施して、前記細胞療法製剤を得ることと、
前記計算装置によって、前記第１の時点からの前記細胞療法製剤の増殖の再実施後の前記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることと、
前記計算装置によって、見積られた前記細胞療法製剤の増殖の完了時間及び前記患者における前記増殖細胞療法製剤の注入の前または後の患者の治療イベントのタイミングに基づいて、前記患者の治療イベントを計画変更すること、及び後続の、前記第１の時点からの前記細胞療法製剤の増殖を完了することと
を含む前記プロセスを開始することと
を含む前記方法。

【請求項3】

前記細胞療法製剤がＴ細胞を含む、請求項１～２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項4】

前記細胞療法製剤が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む、請求項１～２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

前記患者の治療イベントが、入院期間、切除日、リンパ球除去日、前記患者に前記細胞療法製剤を注入する注入日、及びＩＬ－２処置日のうちの１つ以上を含む、請求項１～２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記受け入れ基準を満たすかどうかを判定することが、前記第１及び第２の時点を含む、前記得られた細胞療法製剤の増殖の開始後の複数の時点における、前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することを含む、請求項１～２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記患者の治療イベントを計画変更することが、前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、前記複数の時点のいずれにおいても前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、前記患者の治療イベントを計画変更することを含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記患者の治療イベントを計画変更することが、前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、前記複数の時点のいずれにおいても前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、前記患者の治療イベントを打ち切ることを含む、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、前記複数の時点のいずれにおいても前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、前記細胞療法製剤の後続の増殖を打ち切る、請求項６に記載の方法。

【請求項10】

前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することが、生存率、無菌性、細胞数、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ数、ＣＤ３数、エンドトキシンアッセイの結果、及びグラム染色アッセイの結果のうちの１つ以上の測定を含む、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記細胞増殖技法が急速増殖ステップを含み、
前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、前記急速増殖ステップの前の受け入れ基準を満たすかどうかを判定することと、
前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記受け入れ基準を満たすとの判定に呼応して、前記増殖細胞療法製剤の製造の完了より前の日でリンパ球除去日を計画立案すること、前記増殖細胞療法製剤の製造の完了後の日に注入日を計画立案すること、及び前記注入日の後にＩＬ－２処置日を計画立案することと
をさらに含む、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記細胞増殖技法が単一の閉鎖型容器バイオリアクター中で前記細胞療法製剤を培養することを含む、請求項１～２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記第１の時点からの前記細胞療法製剤の増殖の再実施後の前記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることが、前記第２の時点での受け入れパラメータ、及び前記第１の時点から前記細胞療法製剤の増殖を再実施するために使用される細胞集団に関連する受け入れパラメータの一方または両方に基づいて、前記第１の時点から増殖プロセスを完了するのに必要な時間を決定することを含む、請求項２に記載の方法。

【請求項14】

請求項１～２のいずれか１項に記載の方法であって、
前記細胞療法製剤を増殖させるための前記細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
前記細胞注文を受信したところで、前記患者固有の識別子及び前記細胞注文識別子の一方または両方を含む、前記患者に関連する前記細胞注文を受信したことの確認を前記病院側インターフェースに送信することをさらに含む前記方法。

【請求項15】

前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記細胞療法製剤の増殖中の受け入れ基準を満たすかどうかを判定するための、前記第１及び第２の時点を含む複数の時点に対応する一連の日付を、前記細胞増殖技法及び前記細胞注文の受信時に応じて計画立案することをさらに含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記患者の治療イベントを計画変更したところで、前記患者固有の識別子に関連する前記患者の治療イベントの更新されたスケジュールを前記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項17】

前記完了時間に基づいて、前記患者固有の識別子に関連する集荷依頼をロジスティックスインターフェースに送信することと、
前記完了時間に基づいて、前記患者固有の識別子に関連する前記患者の治療イベントのスケジュールを病院側インターフェースに送信することと
をさらに含む、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記第１の時点からの前記細胞療法製剤の増殖の再実施が実現可能であるとの判定に呼応して、
前記計算装置によって、前記患者固有の識別子から前記細胞注文識別子を分離することと、
前記計算装置によって、前記細胞注文に関連する新たな細胞注文識別子を作成すること、及び前記新たな細胞注文識別子を前記患者固有の識別子と関連付けることと
をさらに含む、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

請求項１８に記載の方法であって、
前記細胞療法製剤を増殖させるための前記細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
前記新たな細胞注文識別子及び前記細胞療法製剤の増殖の見積もられた完了時間を含む前記患者固有の識別子を前記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、前記方法。

【請求項20】

前記計算装置によって、前記患者の治療イベントの前記計画変更に基づいて、前記患者の治療イベントに関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールを作成することと、
出荷及びロジスティックスイベントの計画変更に基づいて、前記新たな細胞注文識別子を含む前記患者固有の識別子に関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールをロジスティックスインターフェースに送信することと
をさらに含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項21】

受け入れパラメータが特定の受け入れ基準を満たすかどうかの判定が行われる各時点で、前記計算装置によって、それぞれ個々の時点に対応するフィールドを含む前記新たな細胞注文識別子及び前記判定の結果を、前記患者固有の識別子と関連付けることをさらに含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項22】

前記計画立案することが、前記計算装置によって、前記新たな細胞注文識別子を含む前記患者固有の識別子に基づいて前記患者の治療イベントを計画立案することを含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記再実施することが可能ではないとの判定に呼応して、前記計算装置によって、前記第２の時点の後に計画立案された前記患者の治療イベントを取り消すことをさらに含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項24】

前記患者の治療イベントの取り消しを病院側インターフェース及びロジスティックスインターフェースに送信することをさらに含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記再実施することが実現可能でないとの判定に呼応して、前記増殖細胞療法製剤を廃棄すること、及び前記患者固有の識別子を前記細胞注文識別子から分離することをさらに含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記計画変更された患者の治療イベントに従って、請求項１に記載の方法によって得られた増殖細胞療法製剤による前記患者の治療方法。

【請求項27】

ある患者向けの細胞療法製剤の製造方法であって、
計算装置において、前記患者向けの前記細胞療法製剤を製造するための細胞注文、複数の製造施設における前記細胞療法製剤を製造するための製造スロットであり、それぞれの製造施設向けの前記製造スロットが、前記それぞれの製造施設に関連する製造業者のコンピュータサブシステムから前記計算装置で受信される前記製造スロット、及び前記細胞療法製剤で前記患者を治療するための患者の治療イベントの仮スケジュールを受信することと、
前記計算装置によって、前記患者の治療イベントの前記仮スケジュールに基づいて、前記細胞療法製剤を製造するための複数の利用可能な製造スロットを決定すること、及びそれらを計画立案ユーザーインターフェースに表示することと、
前記利用可能な製造スロットの１つを選択した後に、医療施設において、前記患者の治療イベントの前記仮スケジュール及び前記利用可能な製造スロットに従って、前記患者から固形腫瘍を得るための処置を前記患者に実施することと、
得られた固形腫瘍を、前記利用可能な製造スロットに従って、前記利用可能な製造スロットに対応する製造施設に移送することと、
前記得られた固形腫瘍を前記製造施設において受け入れたところで、前記得られた固形腫瘍の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して前記細胞療法製剤の製造を開始することと、
前記細胞療法製剤の製造中に、第１の時点及び前記第１の時点の後の第２の時点において、製造された前記細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定し、且つ前記受け入れパラメータが対応する時点に関連する受け入れ基準であり、前記対応する時点に関連するアッセイの結果に基づいて決定される前記受け入れ基準を満たすかどうか判定することと、
前記計算装置によって、前記細胞療法製剤の製造のための製造スケジュール、前記製造施設に対応する製造スロット、及び前記患者の治療イベントの前記仮スケジュールを、前記第１及び第２の時点の一方または両方における前記受け入れ基準を満たすかどうかに基づいて修正することと、
前記第１及び第２の時点における前記受け入れ基準を満たす場合に、修正された製造スケジュールに従って、前記細胞療法製剤の製造を完了することと
を含む前記方法。

【請求項28】

前記製造された細胞療法製剤を前記医療施設に移送することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記細胞注文を受信したところで、前記計算装置によって、前記患者及び前記細胞注文に関連する患者固有の識別子を作成することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項30】

前記計算装置によって、前記患者固有の識別子、前記細胞注文、前記製造スロット、及び前記利用可能な製造スロットに対応する前記製造施設を含む、前記得られた固形腫瘍の容器用の出荷ラベルを自動的に作成することをさらに含む、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記計算装置によって、前記細胞療法製剤を製造するために使用される製造プロセスに対応する、前記製造ラベルが作成された時点、容器を識別するバーコード、前記患者固有の識別子、前記時点で完了した製造ステップ、前記完了したプロセスに関連する受け入れパラメータ、及び前記時点で実施されている製造プロセスを含む、前記得られた固形腫瘍の容器用の製造ラベルを自動的に作成することをさらに含む、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記細胞療法製剤がＴ細胞を含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項33】

前記細胞療法製剤が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項34】

前記患者の治療イベントが、入院期間、切除日、リンパ球除去日、前記患者に前記細胞療法製剤を注入する注入日、及びＩＬ－２処置日のうちの１つ以上を含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項35】

前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記受け入れ基準を満たすかどうかを判定することが、前記第１及び第２の時点を含む、受け入れられた細胞療法製剤の増殖の開始後の複数の時点における、前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することを含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項36】

前記計算装置によって、
前記患者の治療イベントを計画変更することと、
後続の細胞療法製剤の増殖を完了することと
をさらに含み、
前記患者の治療イベントを計画変更することが、前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが、前記複数の時点のいずれにおいても前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、前記患者の治療イベントを計画変更することを含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記患者の治療イベントを計画変更することが、前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、前記複数の時点のいずれにおいても前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、前記患者の治療イベントを打ち切ることを含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項38】

前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、前記複数の時点のいずれにおいても前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、前記細胞療法製剤の後続の増殖を打ち切る、請求項３５に記載の方法。

【請求項39】

前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することが、生存率、無菌性、細胞数、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ数、ＣＤ３数、エンドトキシンアッセイの結果、及びグラム染色アッセイの結果のうちの１つ以上の測定を含む、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記細胞増殖技法が急速増殖ステップを含み、
前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが、前記急速増殖ステップの前の受け入れ基準を満たすかどうかを判定することと、
前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記受け入れ基準を満たすとの判定に呼応して、前記細胞療法製剤の製造の完了より前の日でリンパ球除去日を計画立案すること、前記細胞療法製剤の製造の完了後の日に注入日を計画立案すること、及び前記注入日の後にＩＬ－２処置日を計画立案することと
をさらに含む、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記細胞増殖技法が単一の閉鎖型容器バイオリアクター中で前記細胞療法製剤を培養することを含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項42】

前記計算装置によって前記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることをさらに含み、前記第１の時点からの前記細胞療法製剤の増殖の再実施後の前記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることが、前記第２の時点での受け入れパラメータ、及び前記第１の時点から前記細胞療法製剤の増殖を再実施するために使用される細胞集団に関連する受け入れパラメータの一方または両方に基づいて、前記第１の時点から増殖プロセスを完了するのに必要な時間を決定することを含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項43】

請求項２７に記載の方法であって、
細胞療法製剤を増殖させるための細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
前記細胞注文を受信したところで、患者固有の識別子及び細胞注文識別子の一方または両方を含む、患者に関連する細胞注文を受信したことの確認を病院側インターフェースに送信することをさらに含む前記方法。

【請求項44】

前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記細胞療法製剤の増殖中の受け入れ基準を満たすかどうかを判定するための、前記第１及び第２の時点を含む複数の時点に対応する一連の日付を、前記細胞増殖技法及び前記細胞注文の受信時に応じて計画立案することをさらに含む、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記患者の治療イベントを計画変更したところで、前記患者固有の識別子に関連する前記患者の治療イベントの更新されたスケジュールを前記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

完了時間に基づいて、前記患者固有の識別子に関連する集荷依頼をロジスティックスインターフェースに送信することと、
完了時間に基づいて、前記患者固有の識別子に関連する前記患者の治療イベントのスケジュールを病院側インターフェースに送信することと
をさらに含む、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記第１の時点からの前記細胞療法製剤の増殖の再実施が実現可能であるとの判定に呼応して、
前記計算装置によって、前記患者固有の識別子から前記細胞注文識別子を分離することと、
前記計算装置によって、前記細胞注文に関連する新たな細胞注文識別子を作成すること、及び前記新たな細胞注文識別子を前記患者固有の識別子と関連付けることと
をさらに含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

請求項４７に記載の方法であって、
前記細胞療法製剤を増殖させるための前記細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
前記新たな細胞注文識別子及び前記細胞療法製剤の増殖の見積もられた完了時間を含む前記患者固有の識別子を前記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、前記方法。

【請求項49】

前記計算装置によって、前記患者の治療イベントの前記計画変更に基づいて、前記患者の治療イベントに関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールを作成することと、
出荷及びロジスティックスイベントの計画変更に基づいて、前記新たな細胞注文識別子を含む前記患者固有の識別子に関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールをロジスティックスインターフェースに送信することと
をさらに含む、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

受け入れパラメータが前記受け入れ基準を満たすかどうかの判定が行われる各時点で、前記計算装置によって、それぞれ個々の時点に対応するフィールドを含む前記新たな細胞注文識別子及び前記判定の結果を、前記患者固有の識別子と関連付けることをさらに含む、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記計画立案することが、前記計算装置によって、前記新たな細胞注文識別子を含む前記患者固有の識別子に基づいて前記患者の治療イベントを計画立案することを含む、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記再実施することが可能ではないとの判定に呼応して、前記計算装置によって、前記第２の時点の後に計画立案された前記患者の治療イベントを取り消すことをさらに含む、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記患者の治療イベントの取り消しを病院側インターフェース及びロジスティックスインターフェースに送信することをさらに含む、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記再実施することが実現可能でないとの判定に呼応して、前記増殖細胞療法製剤を廃棄すること、及び前記患者固有の識別子を前記細胞注文識別子から分離することをさらに含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記計画変更された患者の治療イベントに従って、請求項２７に記載の方法によって得られた前記製造された細胞療法製剤による前記患者の治療方法。

【請求項56】

細胞療法製剤の製造方法であって、
製造施設において、患者から得られた固形腫瘍を受け入れることと、
計算装置によって、前記得られた固形腫瘍の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して前記細胞療法製剤を製造するためのプロセスにおいて使用される製造容器用の、前記患者、前記製造プロセス、及び製造された前記細胞療法製剤の品質に関連する情報を含む製造ラベルを作成することと、
前記細胞療法製剤を製造するためのプロセスであり、
医療施設において、前記患者から固形腫瘍を得るために、前記患者に対して処置を実施することと、
得られた固形腫瘍を製造施設に移送することと、
前記製造施設において前記得られた固形腫瘍を受け入れた後に、計算装置によって、その後に得られる増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータに依存して、患者の治療イベントを動的に計画立案することと、
前記得られた固形腫瘍の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して前記細胞療法製剤の増殖を開始すること、及び複数の時点で前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することと
を含む前記プロセスを開始することと、
前記複数の時点において、前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定するための品質管理アッセイを実施することと、
前記計算装置において、前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータを受信することと、
前記計算装置によって、複数の時点のそれぞれに対応する更新された製造ラベルであり、前記更新された製造ラベルは前記製造された細胞療法製剤の品質に関連する更新された情報を含み、前記更新された情報は対応する時点における前記受け入れパラメータを含む、前記製造ラベルを作成することと、
前記計算装置によって、前記複数の時点のそれぞれにおいて前記更新された製造ラベルを読み取ることと、
前記複数の時点のそれぞれにおいて前記更新された製造ラベルから読み取られた情報に基づいて、前記細胞療法製剤の増殖を完了することと
を含む前記方法。

【請求項57】

後続の製造ステップ用の前記更新された製造ラベル上の前記患者に関する情報が、直前の製造ステップの製造ラベル上の前記患者に関する情報と一致しないか、または
前記製造プロセスにおける所与の時点の前記更新された製造ラベル上の受け入れパラメータが、前記製造プロセスの当該の時点の受け入れ基準を満たしていない、
但し、前記受け入れパラメータが、生存率、無菌性、細胞数、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ数、ＣＤ３数、エンドトキシンアッセイの結果、及びグラム染色アッセイの結果のうちの１つ以上を含む場合、
前記計算装置によって警告信号を発することをさらに含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

前記患者に関する情報が、患者固有の識別子及び前記患者向けの前記細胞療法製剤を製造するための細胞注文に関連する細胞注文識別子を含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項59】

前記細胞増殖技法が単一の閉鎖型容器バイオリアクター中で前記細胞療法製剤を培養することを含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項60】

前記製造ラベルが、前記患者、前記製造プロセス、及び前記製造された細胞療法製剤の品質に関連する情報をコード化したバーコードを含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項61】

前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記製造プロセス中の受け入れ基準を満たすかどうかを判定するための、第１の時点及び前記第１の時点の後の第２の時点を含む複数の時点に対応する一連の日付を、使用されている前記細胞増殖技法及び前記製造施設での細胞注文の受信時に応じて計画立案することをさらに含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項62】

配送業者計算サブシステムを介して、を含む配送状況の情報を受信すること、ならびに、前記配送状況の情報を受信することに呼応して、決定した製造のスケジュールに基いて前記製造された細胞療法製剤を出荷するための出荷スケジュールを決定すること、及び前記製造された細胞療法製剤が入った輸送容器用の出荷ラベルを作成することを、ロジスティックスインターフェースに取り込むことをさらに含む、請求項６１に記載の方法。

【請求項63】

前記決定された出荷スケジュールに基づいて、ロジスティックス施設に出荷要請を送信することをさらに含む、請求項に６１に記載の方法。

【請求項64】

最終的な品質管理アッセイを実施する前に、前記製造された細胞療法製剤が入った輸送容器用の出荷ラベルを作成することをさらに含み、但し、前記出荷ラベルは、最終的な品質管理アッセイが、対応する受け入れラメーターが対応する受け入れ基準を満たすことを示してない限り、前記製造された細胞療法製剤は出荷可能ではないことを示す、請求項に６１に記載の方法。

【請求項65】

前記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記受け入れ基準を満たすと判定したところで、前記細胞療法の製造の完了日を決定することと、
前記計算装置によって、前記完了日に基づいて、患者を治療するための前記細胞療法製剤の使用に対応する前記患者の治療イベントのスケジュールを作成することと、
ロジスティックスインターフェースに、前記完了日に基づいて集荷依頼を送信することと、
病院側インターフェースに、前記患者の治療イベントのスケジュールを送信することと
をさらに含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項66】

前記細胞療法製剤がＴ細胞を含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項67】

前記細胞療法製剤が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項68】

前記患者の治療イベントが、入院期間、切除日、リンパ球除去日、前記患者に前記細胞療法製剤を注入する注入日、及びＩＬ－２処置日のうちの１つ以上を含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項69】

前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記受け入れ基準を満たすかどうかを判定することが、前記第１及び第２の時点を含む、前記得られた細胞療法製剤の増殖の開始後の複数の時点における、前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することを含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項70】

前記計算装置によって、
前記患者の治療イベントを計画変更することと、
後続の細胞療法製剤の増殖を完了することと
をさらに含み、
前記患者の治療イベントを計画変更することが、前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、前記複数の時点のいずれにおいても前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、前記患者の治療イベントを計画変更することを含む、請求項６９に記載の方法。

【請求項71】

前記患者の治療イベントを計画変更することが、前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、前記複数の時点のいずれにおいても前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、前記患者の治療イベントを打ち切ることを含む、請求項６９に記載の方法。

【請求項72】

前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、前記複数の時点のいずれにおいても前記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、前記細胞療法製剤の後続の増殖を打ち切る、請求項６９に記載の方法。

【請求項73】

前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することが、生存率、無菌性、細胞数、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ数、ＣＤ３数、エンドトキシンアッセイの結果、及びグラム染色アッセイの結果のうちの１つ以上の測定を含む、請求項７２に記載の方法。

【請求項74】

前記細胞増殖技法が急速増殖ステップを含み、
前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、前記急速増殖ステップの前の受け入れ基準を満たすかどうかを判定することと、
前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記受け入れ基準を満たすとの判定に呼応して、前記細胞療法製剤の製造の完了より前の日でリンパ球除去日を計画立案すること、前記細胞療法製剤の製造の完了後の日に注入日を計画立案すること、及び前記注入日の後にＩＬ－２処置日を計画立案することと
をさらに含む、請求項７３に記載の方法。

【請求項75】

前記細胞増殖技法が単一の閉鎖型容器バイオリアクター中で前記細胞療法製剤を培養することを含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項76】

前記第１の時点からの前記細胞療法製剤の増殖の再実施後の前記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることが、前記第２の時点での受け入れパラメータ、及び前記第１の時点から前記細胞療法製剤の増殖を再実施するために使用される細胞集団に関連する受け入れパラメータの一方または両方に基づいて、前記第１の時点から増殖プロセスを完了するのに必要な時間を決定することを含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項77】

請求項５８に記載の方法であって、
前記細胞療法製剤を増殖させるための前記細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
前記細胞注文を受信したところで、前記患者固有の識別子及び前記細胞注文識別子の一方または両方を含む、前記患者に関連する前記細胞注文を受信したことの確認を前記病院側インターフェースに送信することをさらに含む前記方法。

【請求項78】

前記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが前記細胞療法製剤の増殖中の受け入れ基準を満たすかどうかを判定するための、前記第１及び第２の時点を含む複数の時点に対応する一連の日付を、前記細胞増殖技法及び前記細胞注文の受信時に応じて計画立案することをさらに含む、請求項７７に記載の方法。

【請求項79】

前記患者の治療イベントを計画変更したところで、前記患者固有の識別子に関連する前記患者の治療イベントの更新されたスケジュールを前記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

完了時間に基づいて、前記患者固有の識別子に関連する集荷依頼をロジスティックスインターフェースに送信することと、
完了時間に基づいて、前記患者固有の識別子に関連する前記患者の治療イベントのスケジュールを病院側インターフェースに送信することと
をさらに含む、請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

前記第１の時点からの前記細胞療法製剤の増殖の再実施が実現可能であるとの判定に呼応して、
前記計算装置によって、前記患者固有の識別子から前記細胞注文識別子を分離することと、
前記計算装置によって、前記細胞注文に関連する新たな細胞注文識別子を作成すること、及び前記新たな細胞注文識別子を前記患者固有の識別子と関連付けることと
をさらに含む、請求項８０に記載の方法。

【請求項82】

請求項８１に記載の方法であって、
前記細胞療法製剤を増殖させるための前記細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
前記新たな細胞注文識別子及び前記細胞療法製剤の増殖の見積もられた完了時間を含む前記患者固有の識別子を前記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、前記方法。

【請求項83】

前記計算装置によって、前記患者の治療イベントの前記計画変更に基づいて、前記患者の治療イベントに関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールを作成することと、
出荷及びロジスティックスイベントの計画変更に基づいて、前記新たな細胞注文識別子を含む前記患者固有の識別子に関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールをロジスティックスインターフェースに送信することと
をさらに含む、請求項８２に記載の方法。

【請求項84】

受け入れパラメータが特定の受け入れ基準を満たすかどうかの判定が行われる各時点で、前記計算装置によって、それぞれ個々の時点に対応するフィールドを含む前記新たな細胞注文識別子及び前記判定の結果を、前記患者固有の識別子と関連付けることをさらに含む、請求項８１に記載の方法。

【請求項85】

前記計画立案することが、前記計算装置によって、前記新たな細胞注文識別子を含む前記患者固有の識別子に基づいて前記患者の治療イベントを計画立案することを含む、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

前記再実施することが可能ではないとの判定に呼応して、前記計算装置によって、前記第２の時点の後に計画立案された前記患者の治療イベントを取り消すことをさらに含む、請求項８５に記載の方法。

【請求項87】

前記患者の治療イベントの取り消しを病院側インターフェース及びロジスティックスインターフェースに送信することをさらに含む、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

前記再実施することが実現可能でないとの判定に呼応して、前記増殖細胞療法製剤を廃棄すること、及び前記患者固有の識別子を前記細胞注文識別子から分離することをさらに含む、請求項８７に記載の方法。

【請求項89】

前記計画変更された患者の治療イベントに従い、請求項５６に記載の方法によって得られた前記増殖細胞療法製剤によって前記患者を治療する方法。

【発明の詳細な説明】

【関連出願の相互参照】

【0001】

本出願は、２０２０年４月２２日出願の米国仮出願第６３／０１３，９４２号、２０２１年３月２日出願の米国仮出願第６３／１５５，７１１号、及び２０２１年３月１１日出願の米国仮出願第６３／１５９，８０６号の優先権を主張し、上記出願のそれぞれは全ての目的に対してその全体が本明細書に援用される。

【背景技術】

【0002】

腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の養子移入を用いた大型の難治性癌の治療は、予後不良の患者に対する強力な治療手法を表す。Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００６， ６， ３８３－３９３。免疫療法の成功には多量のＴＩＬが必要であり、商業化に向けてロバストで信頼性のある方法が求められている。これは、細胞拡大培養に伴う技術上、物流上、及び規制上の問題に起因して、実現が課題となっている。ＩＬ－２ベースのＴＩＬ拡大培養と、それに続く「迅速拡大培養法」（ＲＥＰ：Ｒａｐｉｄ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ）が、その速さ及び効率から、ＴＩＬ拡大培養に好ましい方法となりつつある。Ｄｕｄｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００２， ２９８， ８５０－５４；Ｄｕｄｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． ２００５， ２３， ２３４６－５７；Ｄｕｄｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． ２００８， ２６， ５２３３－３９；Ｒｉｄｄｅｌｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２， ２５７， ２３８－４１；Ｄｕｄｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ． ２００３， ２６， ３３２－４２。ＲＥＰは１４日の期間でＴＩＬの１，０００倍の拡大をもたらすことができるが、それにはフィーダー細胞として、多くの場合に複数のドナーからの、大過剰の（例えば２００倍の）照射した同種異系末梢血単核球（ＰＢＭＣ、単核細胞（ＭＮＣ）としても知られている）、並びに抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）及び高用量のＩＬ－２が必要である。Ｄｕｄｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ． ２００３， ２６， ３３２－４２。ＲＥＰ処理に供されたＴＩＬにより、黒色腫の患者において宿主免疫抑制後に養子細胞療法が成功した。

【図面の簡単な説明】

【0003】

【図1】同種異系ＴＩＬを製造するためのさまざまなステップを含む、ＴＩＬを使用する養子細胞療法を使用する患者の治療におけるさまざまな段階の概略図である。

【図2A】ＴＩＬ製造のためのＧＥＮ３プロセスのタイムラインを示す図である。

【図2B】２ＡプロセスとＴＩＬ製造のためのＧＥＮ３プロセスの１つの実施形態との間の比較を示す図である。

【図2C】ＴＩＬ製造のためのＧＥＮ３の実施形態、ＧＥＮ３．１プロセスの実施形態、及びＧＥＮ３．１プロセスの上記に代わる実施形態の間の比較を示す図である。

【図3A】ある患者向けのＴＩＬの製造を調整するためのシステムのブロックダイアグラムである。

【図3B】いくつかの実施形態に係るこれらのプラットフォーム内のこれらの標準に加えて、市販のソフトウェアプラットフォーム上で適宜改変または構築されたシステム３００のコンポーネントの目的スキーマを示す図である。

【図3C】いくつかの実施形態に係る、製造施設における製造プロセスを通しての、生物学的材料の追跡の概略図である。

【図3D】（続き）いくつかの実施形態に係る、製造施設における製造プロセスを通しての、生物学的材料の追跡の概略図である。

【図3E】（続き）いくつかの実施形態に係る、製造施設における製造プロセスを通しての、生物学的材料の追跡の概略図である。

【図3F】製造プロセスのいくつかの実施形態（例えばＧＥＮ３プロセス）に係る、固形腫瘍を得ることから製造プロセスを経て患者への注入までの、細胞療法製剤の移動過程を通じて、ＣＯＣ及びＣＯＩを維持するためのプロセスの概略図である。

【図3G】いくつかの実施形態に係る、細胞療法製剤のラベルの代表的な画像である。

【図3H】いくつかの実施形態に係る、細胞療法製剤の製造プロセス中に作成されるさまざまな種類のラベルを示す表である。

【図3I】いくつかの実施形態に係る、完成品用のラベルの代表的な画像である。

【図3J】いくつかの実施形態に係る、完成品用のラベルの代表的な画像である。

【図3K】いくつかの実施形態に係る、腫瘍入手の書式の代表的なスクリーンショット画像である。

【図3L】いくつかの実施形態に係る、腫瘍入手の書式の代表的なスクリーンショット画像である。

【図3M】いくつかの実施形態に係る、腫瘍入手の書式の代表的なスクリーンショット画像である。

【図3N】いくつかの実施形態に係る、腫瘍入手の書式の代表的なスクリーンショット画像である。

【図3O】いくつかの実施形態に係る、腫瘍入手の書式の代表的なスクリーンショット画像である。

【図3P】いくつかの実施形態に係る、腫瘍入手の書式の代表的なスクリーンショット画像である。

【図4A】ＴＩＬ製造プロセスの成功に基づく、患者の治療イベントのスケジュールの決定のフローチャートである。

【図4B】ＴＩＬ製造プロセスの成功に基づく、患者の治療イベントのスケジュールの決定のフローチャートである。

【図4C】ＴＩＬ製造プロセスの成功に基づく、患者の治療イベントのスケジュールの決定の、上記に代わる実施形態のフローチャートである。

【図5】ＴＩＬ製造のための２２日間のプロセスであるプロセス２Ａの実施形態の図である。

【図6】ＴＩＬ製造のための１Ｃプロセスと２Ａプロセスの実施形態との間の比較を示す図である。

【図7】１Ｃプロセスのタイムラインを示す図である。

【図8】２Ａプロセスの実施形態の詳細な概略図である。

【図9】ステップＡ～Ｆの概要を提供する例示的なプロセス２Ａチャートを示す。

【図10】プロセス１Ｃ及びプロセス２Ａの例示的な実施形態からのステップＡ～Ｆの比較表である。

【図11】プロセス１Ｃの実施形態とプロセス２Ａの実施形態の詳細な比較の図である。

【0004】

配列表の簡単な説明
配列番号１はムロモナブの重鎖のアミノ酸配列である。

【0005】

配列番号２はムロモナブの軽鎖のアミノ酸配列である。

【0006】

配列番号３は組換えヒトＩＬ－２タンパク質のアミノ酸配列である。

【0007】

配列番号４はアルデスロイキンのアミノ酸配列である。

【0008】

配列番号５はＩＬ－２の一形態である。

【0009】

配列番号６はネムバロイキン・アルファ（ｎｅｍｖａｌｅｕｋｉｎ ａｌｆａ）のアミノ酸配列である。

【0010】

配列番号７はＩＬ－２の一形態である。

【0011】

配列番号８はムチンドメインポリペプチドである。

【0012】

配列番号９は組換えヒトＩＬ－４タンパク質のアミノ酸配列である。

【0013】

配列番号１０は組換えヒトＩＬ－７タンパク質のアミノ酸配列である。

【0014】

配列番号１１は組換えヒトＩＬ－１５タンパク質のアミノ酸配列である。

【0015】

配列番号１２は組換えヒトＩＬ－２１タンパク質のアミノ酸配列である。

【0016】

配列番号１３はＩＬ－２配列である。

【0017】

配列番号１４はＩＬ－２ムテイン配列である。

【0018】

配列番号１５はＩＬ－２ムテイン配列である。

【0019】

配列番号１６はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ１＿ＩＬ－２である。

【0020】

配列番号１７はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ２である。

【0021】

配列番号１８はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ３である。

【0022】

配列番号１９はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ１＿ＩＬ－２ Ｋａｂａｔである。

【0023】

配列番号２０はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ２ Ｋａｂａｔである。

【0024】

配列番号２１はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ３ Ｋａｂａｔである。

【0025】

配列番号２２はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ１＿ＩＬ－２ Ｃｌｏｔｈｉａである。

【0026】

配列番号２３はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ２ Ｃｌｏｔｈｉａである。

【0027】

配列番号２４はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ３ Ｃｌｏｔｈｉａである。

【0028】

配列番号２５はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ１＿ＩＬ－２ ＩＭＧＴである。

【0029】

配列番号２６はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ２ ＩＭＧＴである。

【0030】

配列番号２７はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ３ ＩＭＧＴである。

【0031】

配列番号２８はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＶ_Ｈ鎖である。

【0032】

配列番号２９はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１の重鎖である。

【0033】

配列番号３０はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ１ Ｋａｂａｔである。

【0034】

配列番号３１はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ２ Ｋａｂａｔである。

【0035】

配列番号３２はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ３ Ｋａｂａｔである。

【0036】

配列番号３３はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ１ Ｃｌｏｔｈｉａである。

【0037】

配列番号３４はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ２ Ｃｌｏｔｈｉａである。

【0038】

配列番号３５はＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ３ Ｃｌｏｔｈｉａである。

【0039】

配列番号３６はＶ_Ｌ鎖である。

【0040】

配列番号３７は軽鎖である。

【0041】

配列番号３８は軽鎖である。

【0042】

配列番号３９は軽鎖である。

【0043】

配列番号４０はヒト４－１ＢＢのアミノ酸配列である。

【0044】

配列番号４１はマウス４－１ＢＢのアミノ酸配列である。

【0045】

配列番号４２は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の重鎖である。

【0046】

配列番号４３は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の軽鎖である。

【0047】

配列番号４４は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0048】

配列番号４５は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0049】

配列番号４６は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の重鎖ＣＤＲ１である。

【0050】

配列番号４７は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の重鎖ＣＤＲ２である。

【0051】

配列番号４８は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の重鎖ＣＤＲ３である。

【0052】

配列番号４９は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の軽鎖ＣＤＲ１である。

【0053】

配列番号５０は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の軽鎖ＣＤＲ２である。

【0054】

配列番号５１は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の軽鎖ＣＤＲ３である。

【0055】

配列番号５２は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の重鎖である。

【0056】

配列番号５３は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の軽鎖である。

【0057】

配列番号５４は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0058】

配列番号５５は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0059】

配列番号５６は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の重鎖ＣＤＲ１である。

【0060】

配列番号５７は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の重鎖ＣＤＲ２である。

【0061】

配列番号５８は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の重鎖ＣＤＲ３である。

【0062】

配列番号５９は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の軽鎖ＣＤＲ１である。

【0063】

配列番号６０は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の軽鎖ＣＤＲ２である。

【0064】

配列番号６１は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の軽鎖ＣＤＲ３である。

【0065】

配列番号６２はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のＦｃドメインである。

【0066】

配列番号６３はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0067】

配列番号６４はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0068】

配列番号６５はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0069】

配列番号６６はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0070】

配列番号６７はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0071】

配列番号６８はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0072】

配列番号６９はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0073】

配列番号７０はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0074】

配列番号７１はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0075】

配列番号７２はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0076】

配列番号７３はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のＦｃドメインである。

【0077】

配列番号７４はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0078】

配列番号７５はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0079】

配列番号７６はＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。

【0080】

配列番号７７は４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）のアミノ酸配列である。

【0081】

配列番号７８は４－１ＢＢＬポリペプチドの可溶性部分である。

【0082】

配列番号７９は、４－１ＢＢアゴニスト抗体である４Ｂ４－１－１バージョン１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0083】

配列番号８０は、４－１ＢＢアゴニスト抗体である４Ｂ４－１－１バージョン１の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0084】

配列番号８１は、４－１ＢＢアゴニスト抗体である４Ｂ４－１－１バージョン２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0085】

配列番号８２は、４－１ＢＢアゴニスト抗体である４Ｂ４－１－１バージョン２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0086】

配列番号８３は、４－１ＢＢアゴニスト抗体であるＨ３９Ｅ３－２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0087】

配列番号８４は、４－１ＢＢアゴニスト抗体であるＨ３９Ｅ３－２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0088】

配列番号８５はヒトＯＸ４０のアミノ酸配列である。

【0089】

配列番号８６はマウスＯＸ４０のアミノ酸配列である。

【0090】

配列番号８７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるタボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の重鎖である。

【0091】

配列番号８８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるタボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の軽鎖である。

【0092】

配列番号８９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるタボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0093】

配列番号９０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるタボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0094】

配列番号９１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるタボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の重鎖ＣＤＲ１である。

【0095】

配列番号９２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるタボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の重鎖ＣＤＲ２である。

【0096】

配列番号９３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるタボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の重鎖ＣＤＲ３である。

【0097】

配列番号９４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるタボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の軽鎖ＣＤＲ１である。

【0098】

配列番号９５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるタボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の軽鎖ＣＤＲ２である。

【0099】

配列番号９６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるタボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の軽鎖ＣＤＲ３である。

【0100】

配列番号９７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１１Ｄ４の重鎖である。

【0101】

配列番号９８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１１Ｄ４の軽鎖である。

【0102】

配列番号９９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１１Ｄ４の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0103】

配列番号１００は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１１Ｄ４の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0104】

配列番号１０１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１１Ｄ４の重鎖ＣＤＲ１である。

【0105】

配列番号１０２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１１Ｄ４の重鎖ＣＤＲ２である。

【0106】

配列番号１０３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１１Ｄ４の重鎖ＣＤＲ３である。

【0107】

配列番号１０４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１１Ｄ４の軽鎖ＣＤＲ１である。

【0108】

配列番号１０５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１１Ｄ４の軽鎖ＣＤＲ２である。

【0109】

配列番号１０６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１１Ｄ４の軽鎖ＣＤＲ３である。

【0110】

配列番号１０７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１８Ｄ８の重鎖である。

【0111】

配列番号１０８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１８Ｄ８の軽鎖である。

【0112】

配列番号１０９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１８Ｄ８の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0113】

配列番号１１０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１８Ｄ８の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0114】

配列番号１１１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１８Ｄ８の重鎖ＣＤＲ１である。

【0115】

配列番号１１２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１８Ｄ８の重鎖ＣＤＲ２である。

【0116】

配列番号１１３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１８Ｄ８の重鎖ＣＤＲ３である。

【0117】

配列番号１１４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１８Ｄ８の軽鎖ＣＤＲ１である。

【0118】

配列番号１１５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１８Ｄ８の軽鎖ＣＤＲ２である。

【0119】

配列番号１１６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である１８Ｄ８の軽鎖ＣＤＲ３である。

【0120】

配列番号１１７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１１９－１２２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0121】

配列番号１１８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１１９－１２２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0122】

配列番号１１９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１１９－１２２の重鎖ＣＤＲ１である。

【0123】

配列番号１２０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１１９－１２２の重鎖ＣＤＲ２である。

【0124】

配列番号１２１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１１９－１２２の重鎖ＣＤＲ３である。

【0125】

配列番号１２２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１１９－１２２の軽鎖ＣＤＲ１である。

【0126】

配列番号１２３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１１９－１２２の軽鎖ＣＤＲ２である。

【0127】

配列番号１２４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１１９－１２２の軽鎖ＣＤＲ３である。

【0128】

配列番号１２５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１０６－２２２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0129】

配列番号１２６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１０６－２２２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0130】

配列番号１２７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１０６－２２２の重鎖ＣＤＲ１である。

【0131】

配列番号１２８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１０６－２２２の重鎖ＣＤＲ２である。

【0132】

配列番号１２９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１０６－２２２の重鎖ＣＤＲ３である。

【0133】

配列番号１３０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１０６－２２２の軽鎖ＣＤＲ１である。

【0134】

配列番号１３１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１０６－２２２の軽鎖ＣＤＲ２である。

【0135】

配列番号１３２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体であるＨｕ１０６－２２２の軽鎖ＣＤＲ３である。

【0136】

配列番号１３３はＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）のアミノ酸配列である。

【0137】

配列番号１３４はＯＸ４０Ｌポリペプチドの可溶性部分である。

【0138】

配列番号１３５はＯＸ４０Ｌポリペプチドの別の可溶性部分である。

【0139】

配列番号１３６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である００８の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0140】

配列番号１３７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である００８の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0141】

配列番号１３８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である０１１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0142】

配列番号１３９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である０１１の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0143】

配列番号１４０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である０２１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0144】

配列番号１４１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である０２１の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0145】

配列番号１４２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である０２３の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0146】

配列番号１４３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体である０２３の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0147】

配列番号１４４はＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0148】

配列番号１４５はＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0149】

配列番号１４６はＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0150】

配列番号１４７はＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0151】

配列番号１４８はヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0152】

配列番号１４９はヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0153】

配列番号１５０はヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0154】

配列番号１５１はヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0155】

配列番号１５２はヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0156】

配列番号１５３はヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0157】

配列番号１５４はヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0158】

配列番号１５５はヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0159】

配列番号１５６はＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

【0160】

配列番号１５７はＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

【0161】

配列番号１５８は、ＰＤ－１阻害剤であるニボルマブの重鎖のアミノ酸配列である。

【0162】

配列番号１５９は、ＰＤ－１阻害剤であるニボルマブの軽鎖のアミノ酸配列である。

【0163】

配列番号１６０は、ＰＤ－１阻害剤であるニボルマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列である。

【0164】

配列番号１６１は、ＰＤ－１阻害剤であるニボルマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列である。

【0165】

配列番号１６２は、ＰＤ－１阻害剤であるニボルマブの重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0166】

配列番号１６３は、ＰＤ－１阻害剤であるニボルマブの重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0167】

配列番号１６４は、ＰＤ－１阻害剤であるニボルマブの重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0168】

配列番号１６５は、ＰＤ－１阻害剤であるニボルマブの軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0169】

配列番号１６６は、ＰＤ－１阻害剤であるニボルマブの軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0170】

配列番号１６７は、ＰＤ－１阻害剤であるニボルマブの軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0171】

配列番号１６８は、ＰＤ－１阻害剤であるペムブロリズマブの重鎖のアミノ酸配列である。

【0172】

配列番号１６９は、ＰＤ－１阻害剤であるペムブロリズマブの軽鎖のアミノ酸配列である。

【0173】

配列番号１７０は、ＰＤ－１阻害剤であるペムブロリズマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列である。

【0174】

配列番号１７１は、ＰＤ－１阻害剤であるペムブロリズマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列である。

【0175】

配列番号１７２は、ＰＤ－１阻害剤であるペムブロリズマブの重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0176】

配列番号１７３は、ＰＤ－１阻害剤であるペムブロリズマブの重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0177】

配列番号１７４は、ＰＤ－１阻害剤であるペムブロリズマブの重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0178】

配列番号１７５は、ＰＤ－１阻害剤であるペムブロリズマブの軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0179】

配列番号１７６は、ＰＤ－１阻害剤であるペムブロリズマブの軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0180】

配列番号１７７は、ＰＤ－１阻害剤であるペムブロリズマブの軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0181】

配列番号１７８は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるデュルバルマブの重鎖のアミノ酸配列である。

【0182】

配列番号１７９は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるデュルバルマブの軽鎖のアミノ酸配列である。

【0183】

配列番号１８０は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるデュルバルマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列である。

【0184】

配列番号１８１は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるデュルバルマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列である。

【0185】

配列番号１８２は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるデュルバルマブの重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0186】

配列番号１８３は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるデュルバルマブの重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0187】

配列番号１８４は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるデュルバルマブの重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0188】

配列番号１８５は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるデュルバルマブの軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0189】

配列番号１８６は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるデュルバルマブの軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0190】

配列番号１８７は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるデュルバルマブの軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0191】

配列番号１８８は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアベルマブの重鎖のアミノ酸配列である。

【0192】

配列番号１８９は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアベルマブの軽鎖のアミノ酸配列である。

【0193】

配列番号１９０は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアベルマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列である。

【0194】

配列番号１９１は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアベルマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列である。

【0195】

配列番号１９２は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアベルマブの重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0196】

配列番号１９３は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアベルマブの重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0197】

配列番号１９４は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアベルマブの重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0198】

配列番号１９５は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアベルマブの軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0199】

配列番号１９６は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアベルマブの軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0200】

配列番号１９７は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアベルマブの軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0201】

配列番号１９８は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブの重鎖のアミノ酸配列である。

【0202】

配列番号１９９は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブの軽鎖のアミノ酸配列である。

【0203】

配列番号２００は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列である。

【0204】

配列番号２０１は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列である。

【0205】

配列番号２０２は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブの重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0206】

配列番号２０３は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブの重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0207】

配列番号２０４は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブの重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0208】

配列番号２０５は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブの軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0209】

配列番号２０６は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブの軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0210】

配列番号２０７は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブの軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0211】

配列番号２０８は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるイピリムマブの重鎖のアミノ酸配列である。

【0212】

配列番号２０９は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるイピリムマブの軽鎖のアミノ酸配列である。

【0213】

配列番号２１０は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるイピリムマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列である。

【0214】

配列番号２１１は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるイピリムマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列である。

【0215】

配列番号２１２は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるイピリムマブの重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0216】

配列番号２１３は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるイピリムマブの重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0217】

配列番号２１４は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるイピリムマブの重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0218】

配列番号２１５は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるイピリムマブの軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0219】

配列番号２１６は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるイピリムマブの軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0220】

配列番号２１７は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるイピリムマブの軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0221】

配列番号２１８は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるトレメリムマブの重鎖のアミノ酸配列である。

【0222】

配列番号２１９は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるトレメリムマブの軽鎖のアミノ酸配列である。

【0223】

配列番号２２０は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるトレメリムマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列である。

【0224】

配列番号２２１は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるトレメリムマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列である。

【0225】

配列番号２２２は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるトレメリムマブの重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0226】

配列番号２２３は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるトレメリムマブの重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0227】

配列番号２２４は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるトレメリムマブの重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0228】

配列番号２２５は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるトレメリムマブの軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0229】

配列番号２２６は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるトレメリムマブの軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0230】

配列番号２２７は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるトレメリムマブの軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0231】

配列番号２２８は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるザリフレリマブの重鎖のアミノ酸配列である。

【0232】

配列番号２２９は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるザリフレリマブの軽鎖のアミノ酸配列である。

【0233】

配列番号２３０は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるザリフレリマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列である。

【0234】

配列番号２３１は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるザリフレリマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列である。

【0235】

配列番号２３２は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるザリフレリマブの重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0236】

配列番号２３３は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるザリフレリマブの重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0237】

配列番号２３４は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるザリフレリマブの重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【0238】

配列番号２３５は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるザリフレリマブの軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

【0239】

配列番号２３６は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるザリフレリマブの軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

【0240】

配列番号２３７は、ＣＴＬＡ－４阻害剤であるザリフレリマブの軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

【発明を実施するための形態】

【0241】

Ｉ．はじめに
急速増殖プロトコル（ＲＥＰ）によってエクスビボで培養されたＴＩＬを利用することにより、黒色腫の患者における宿主免疫抑制後の養子細胞療法が成功した。例えば、場合により、腫瘍特異的Ｔリンパ球の養子移入の前のリンパ球除去が、制御性Ｔ細胞及び免疫系の競合要素（「サイトカインシンク」）の除去による治効の向上において重要な役割を果たすことが判明している。場合によって、ＡＣＴを受ける患者を、ＴＩＬの注入前に、例えばＴＩＬ注入の２８～２５日前に、非骨髄破壊的化学療法によって前処置することにより、ＡＣＴの有効性が向上する場合がある。ＴＩＬ注入後のＩＬ－２治療レジメンが、治療の成功の可能性を向上させる可能性があることも判明している。これらの注入前の処置及び注入後の処置のタイミング及び継続時間は、治療レジメン全体の最終的な有効性を決定する。

【0242】

したがって、さまざまな治療レジメンの計画立案は、それ自体が最終製品の受け入れパラメータに依存するＴＩＬ製造プロセスのタイミング及び期間に依存する。現在の輸液の受け入れパラメータは、増殖ＴＩＬ製剤（本明細書ではＲＥＰ製剤とも呼ばれる）の、ＴＩＬの組成（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ８、またはＣＤ４陽性）の読み取り値ならびに増殖倍率及び生存率に依拠する。上記ＲＥＰ製剤の増殖倍率及び生存率は、今度は、増殖プロセス中に測定されるさまざまなパラメータに依存する。注入のための許容可能なＲＥＰ製剤の出力及びタイミングのかかる変動によって、製造施設への腫瘍の輸送のロジスティックス、ＲＥＰ製剤の移送、及びＴＩＬ製造プロセスの間のさまざまな患者の治療イベントの計画立案に問題が生じる。

【0243】

さらに、ＴＩＬ製造プロセスの種々の段階中での細胞生存率及び細胞数などのさまざまなパラメータによって、ＴＩＬ製造プロセスの最終段階で許容可能な生存率、数値上の倍率、及び最終的な細胞数が得られるように、その後の段階の継続期間が決定される。

【0244】

加えて、製造の遅延、材料の誤表示、及び患者の誤認を回避し、それによって患者の安全性を向上させるために、当該の生物学的材料を、ＴＩＬ製造プロセス全体を含めて、該物質が当該の患者から取り出される時点から該物質が上記患者に注入される時点まで追跡することが重要である。

【0245】

本開示は、製造プロセスの種々の段階中で測定されたさまざまなパラメータに基づいて、さまざまな患者の治療イベントを動的に計画立案することによって、患者のための増殖した細胞療法製剤の製造プロセスとさまざまな患者の治療イベントとを調整するためのフレームワークを提供する。

【0246】

例えば、一実施形態において、ある患者向けの増殖Ｔ細胞の製造の調整方法は、コンピュータ処理によって、上記患者向けのＴ細胞を増殖させるための細胞注文を受信することと、計算装置によって、上記細胞注文に関連する患者固有の識別子または細胞注文識別子を作成することと、Ｔ細胞を増殖させるためのプロセスを開始することとを含んでいてもよい。上記Ｔ細胞を増殖させるためのプロセスは、臨床施設において、上記患者からＴ細胞を得るための処置を上記患者に対して実施することと、得られたＴ細胞を上記製造施設に移送することとを含んでいてもよい。上記製造施設において得られたＴ細胞を受け入れた後に、計算装置によって患者の治療イベントが動的に計画立案される。動的な計画立案は、その後に得られる増殖Ｔ細胞における受け入れパラメータに依存する。上記得られたＴ細胞の少なくとも一部からの、細胞増殖技法を使用したＴ細胞の増殖が開始され、上記増殖Ｔ細胞における受け入れパラメータが測定される。

【0247】

別の実施形態において、ある患者向けの増殖細胞療法製剤の製造の調整方法は、計算装置によって、上記患者のための上記細胞療法製剤を増殖させるための細胞注文を受信することと、上記計算装置によって、細胞注文に関連する細胞注文識別子を含む患者固有の識別子を作成することと、上記細胞療法製剤を増殖させるためのプロセスを開始することとを含んでいてもよい。上記細胞療法製剤を増殖させるためのプロセスは、臨床施設において、上記患者から固形腫瘍を得るための処置を上記患者に対して実施することと、得られた固形腫瘍を製造施設に移送することとを含んでいてもよい。上記製造施設において上記固形腫瘍を受け入れた後に、上記計算装置によって上記患者の治療イベントが動的に計画立案される。動的計画立案は、その後に得られる増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータに依存する。上記得られた固形腫瘍の少なくとも一部からの、細胞増殖技法を使用した上記細胞療法製剤の増殖が開始され、上記細胞療法製剤の受け入れパラメータが、第１の時点及び上記第１の時点の後の第２の時点において測定される。上記第１の時点及び第２の時点において、上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが特定の受け入れ基準を満たすかどうかが判定される。上記第１の時点において受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たす場合、上記細胞療法製剤の増殖は上記第２の時点まで継続される。上記第２の時点において上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たさない場合、上記細胞増殖技法を使用した上記細胞療法製剤の増殖を上記第１の時点から再実施することができるかどうかが、上記第２の時点における受け入れパラメータに基づいて判定される。上記増殖の再実施が可能であると判定される場合には、上記第２の時点において得られた細胞療法製剤の少なくとも一部からの、上記細胞増殖技法を使用した上記細胞療法製剤の増殖が、上記第１の時点から再実施される。上記第１の時点からの上記細胞療法製剤の増殖の再実施後の、上記細胞療法製剤の増殖の完了時間が見積もられる。上記患者の治療イベントは、上記細胞療法製剤の増殖の見積もられた完了時間、及び上記患者への上記増殖細胞療法製剤の注入の前または後の患者の治療イベントのタイミングに基づいて計画変更される。上記細胞療法製剤の上記その後の増殖は、上記第１の時点から完了される。

【0248】

本開示はさらに、当該生物学的材料が当該患者から取り出される時間から上記患者に注入により戻される時間までの、上記生物学的材料の正確な追跡方法及び追跡システムも提供する。特に、本明細書で開示される方法及びシステムによって、上記生物学的材料の一連のアイデンティティー及び一連の管理の維持が容易になる。

【0249】

例えば、一実施形態において、患者の生物学的材料の追跡方法は、上記患者向けの生物学的材料を製造するための細胞注文を受信することを含んでいてもよい。上記細胞注文を受信したところで、計算装置が上記細胞注文に関連する患者固有の識別子を作成する。上記患者固有の識別子は、患者識別子、細胞注文識別子、注文コード、及び細胞注文ロット番号のうちの１つ以上を含んでいてもよい。次いで、上記患者の生物学的材料は、該生物学的材料が上記患者から取り出される臨床施設から製造施設への上記生物学的材料の輸送中、製造施設での製造プロセス中、及び製造された生物学的材料の、上記製造施設から、上記製造された生物学的材料が戻り、該材料が上記患者固有の識別子を使用して患者に注入される臨床施設への輸送中に追跡を受ける。上記追跡は、計算装置により、出荷及び製造プロセスからの各ステップにおける追跡イベントを記録することを含んでいてもよい。上記追跡イベントの記録は、上記患者の生物学的材料の一連の管理を含む。

【0250】

他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する当該技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で言及された全ての特許及び刊行物は、全体として参照により本明細書において援用される。

【0251】

用語「インビボ」とは、対象の体内で起こる事象を指す。

【0252】

用語「インビトロ」は、対象の体外で起こる事象を指す。インビトロアッセイは、生細胞又は死細胞を利用した細胞ベースのアッセイを包含し、また、インタクトな細胞を利用しない無細胞アッセイも包含し得る。

【0253】

用語「エキソビボ」は、対象の体から摘出された細胞、組織及び／又は臓器の処置又は処置の実施を含む事象を指す。適切には、細胞、組織、及び／又は臓器は、手術又は処置の方法で対象の体に戻される。

【0254】

用語「迅速拡大培養」は、１週間の期間で少なくとも約３倍（又は４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、又は９倍）、より好ましくは１週間の期間で少なくとも約１０倍（又は２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、又は９０倍）、又は最も好ましくは１週間の期間で少なくとも約１００倍の抗原特異的ＴＩＬ数の増加を意味する。複数の迅速拡大培養プロトコルが以下に記載される。

【0255】

本明細書において「腫瘍浸潤リンパ球」又は「ＴＩＬ」とは、対象の血流を離れて腫瘍中に遊走した、当初白血球細胞として得られた細胞の集団を意味する。ＴＩＬとしては、限定はされないが、ＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞（リンパ球）、Ｔｈ１及びＴｈ１７ ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞及びＭ１マクロファージが挙げられる。ＴＩＬには、初代ＴＩＬ及び二次ＴＩＬの両方が含まれる。「初代ＴＩＬ」は、本明細書に概説されるとおり患者組織試料から得られるものであり（「新鮮に得られた」または「新鮮に単離された」と称されることもある）、及び「二次ＴＩＬ」は、限定はされないが、バルクＴＩＬ、拡大培養ＴＩＬ（「ＲＥＰ ＴＩＬ」又は「ポストＲＥＰ ＴＩＬ」）を含め、本明細書で考察するとおり拡大培養された又は増殖した任意のＴＩＬ細胞集団である。ＴＩＬ細胞集団は、遺伝子修飾ＴＩＬを含み得る。

【0256】

本明細書において「細胞集団」（ＴＩＬを含む）は、共通の形質を共有する多数の細胞を意味する。一般に、集団は、概して数が１×１０^６～１×１０^１０個の範囲であり、異なるＴＩＬ集団は異なる数を含む。例えば、ＩＬ－２の存在下での初代ＴＩＬの初期成長は、およそ１×１０^８個の細胞のバルクＴＩＬ集団をもたらす。ＲＥＰ拡大培養は、概して１．５×１０^９～１．５×１０^１０個の注入用の細胞集団が提供されるように行われる。いくつかの実施形態において、ＲＥＰ増殖は、２．３×１０^１０～１３．７×１０^１０個の細胞集団が生じるように行われる。

【0257】

本明細書において「凍結保存ＴＩＬ」とは、初代、バルク、または増殖（ＲＥＰ ＴＩＬ）のいずれかのＴＩＬが約－１５０℃～－６０℃の範囲で処理及び保存されることを意味する。一般的な凍結保存方法はまた、実施例を含む本明細書の他の部分にも記載される。明確にするために言えば、「凍結保存ＴＩＬ」は、初代ＴＩＬの供給源として用いられ得る凍結組織試料と区別可能なものである。

【0258】

本明細書において「解凍された凍結保存ＴＩＬ」とは、それまで凍結保存されており、次いで室温、または細胞培養温度もしくはＴＩＬを患者に投与することができる温度を含む、但しこれらに限定されない温度に戻すように処理されたＴＩＬ集団を意味する。

【0259】

ＴＩＬは、概して、細胞表面マーカーを使用して生化学的に、または腫瘍に浸潤して治療を達成するその能力によって機能的に定義することもできる。ＴＩＬは、一般に、以下のバイオマーカー、すなわち、ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲα／β、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５６、ＣＣＲ７、ＣＤ４５Ｒａ、ＣＤ９５、ＰＤ－１、及びＣＤ２５のうちの１種以上を発現することによって分類することができる。加えて及びあるいは、ＴＩＬは、患者への再導入時に固形腫瘍に浸潤するその能力によって機能的に定義することができる。

【0260】

用語「凍結保存培地（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ）」または「凍結保存培地（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ）」は、細胞の凍結保存に使用することができる任意の培地を指す。かかる培地としては、７％～１０％のＤＭＳＯを含む培地を挙げることができる。例示的な培地としては、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０、Ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍａｓｏｌ、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。用語「ＣＳ１０」とは、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓまたはＢｉｏｌｉｆｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓから入手される凍結保存培地を指す。ＣＳ１０倍地は、商品名「ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０」と呼ばれる場合がある。ＣＳ１０培地は、ＤＭＳＯを含む無血清、無動物成分培地である。

【0261】

用語「セントラルメモリーＴ細胞」とは、ヒトにおいてはＣＤ４５Ｒ０＋であり、且つＣＣＲ７（ＣＣＲ７^ｈｉ）及びＣＤ６２Ｌ（ＣＤ６２^ｈｉ）を構成的に発現するＴ細胞のサブセットを指す。セントラルメモリーＴ細胞の表面表現型として、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤ１２７（ＩＬ－７Ｒ）、及びＩＬ－１５Ｒも挙げられる。セントラルメモリーＴ細胞の転写因子としては、ＢＣＬ－６、ＢＣＬ－６Ｂ、ＭＢＤ２、及びＢＭＩ１が挙げられる。セントラルメモリーＴ細胞はＴＣＲ惹起後にエフェクター分子としてＩＬ－２及びＣＤ４０Ｌを主に分泌する。セントラルメモリーＴ細胞は血中のＣＤ４コンパートメントにおいて優勢であり、ヒトにおいてはリンパ節及び扁桃腺で比例的に高濃度化する。

【0262】

用語「エフェクターメモリーＴ細胞」は、セントラルメモリーＴ細胞と同様にＣＤ４５Ｒ０＋であるが、ＣＣＲ７の構成的発現が欠損しており（ＣＣＲ７^ｌｏ）、且つＣＤ６２Ｌ発現が不均一であるかまたは低い（ＣＤ６２Ｌ^ｌｏ）、ヒトまたは哺乳動物Ｔ細胞のサブセットを指す。セントラルメモリーＴ細胞の表面表現型として、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤ１２７（ＩＬ－７Ｒ）、及びＩＬ－１５Ｒも挙げられる。セントラルメモリーＴ細胞の転写因子としては、ＢＬＩＭＰ１が挙げられる。エフェクターメモリーＴ細胞は抗原刺激後に、インターフェロン－γ、ＩＬ－４、及びＩＬ－５を含む、高レベルの炎症性サイトカインを急速に分泌する。エフェクターメモリーＴ細胞は血中のＣＤ８コンパートメントにおいて優勢であり、ヒトにおいては、肺、肝臓、及び腸で比例的に高濃度化する。ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞は多量のパーフォリンを有する。

【0263】

用語「閉鎖型システム」とは、外部環境に対して閉鎖されているシステムを指す。本発明の方法では、細胞培養方法に適切な任意の閉鎖型システムを用いることができる。閉鎖型システムとしては、例えば閉鎖型Ｇコンテナが挙げられるが、これに限定はされない。閉鎖型システムに腫瘍セグメントが添加された後は、ＴＩＬの患者への投与の直前までこのシステムは外部環境に対して開放されない。

【0264】

腫瘍の分断プロセスを記述するために本明細書で使用される、用語「断片化する」、「断片」、及び「断片化された」は、腫瘍組織を破壊する、薄片に切る、分割する、及び細切するなどの、機械的断片化方法、ならびに腫瘍組織の物理的構造を破壊する任意の他の方法を含む。

【0265】

用語「細針吸引」またはＦＮＡとは、試料を採取するが腫瘍を除去または切除しない、腫瘍の試料採取を含む、試料採取または診断処置に使用することができる形式の生検処置を指す。細針吸引では、中空針、例えば２５～１８ゲージ、を腫瘍または腫瘍を含む領域中に挿入し、液体及び細胞（組織を含む）を得て、さらなる分析または本明細書に記載の増殖に供する。ＦＮＡでは、細胞は、組織細胞の組織学的構造を維持することなく取り出される。ＦＮＡはＴＩＬを含む場合がある。場合によっては、超音波ガイド下細針吸引生検用の針を使用して細針吸引生検が実施される。ＦＮＡ針は、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｃｏｖｉｄｉｅｎなどから市販されている。

【0266】

用語「コア生検」または「コア針生検」とは、試料を採取するが腫瘍を除去または切除しない、腫瘍の試料採取を含む、試料採取または診断処置に使用することができる形式の生検処置を指す。コア生検では、中空針、例えば１６～１１ゲージ、を腫瘍または腫瘍を含む領域中に挿入し、液体及び細胞（組織を含む）を得て、さらなる分析または本明細書に記載の増殖に供する。コア生検では、ＦＮＡと比較して針のサイズが大きいことを考慮すると、細胞を、組織細胞の組織学的構造をある程度維持した状態で取り出すことができる。コア生検用の針は一般に、腫瘍の組織学的構造の少なくとも一部を維持することができるゲージサイズの針である。コア生検はＴＩＬを含む場合がある。場合によっては、コア針生検は、Ｂａｒｄ Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎなどから市販されている、生検装置、真空支援コア針生検装置、ステレオガイド下コア針生検装置、超音波ガイド下コア針生検装置、ＭＲＩガイド下コア針生検装置を使用して実施される。

【0267】

用語「末梢血単核球」及び「ＰＢＭＣ」は、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）及び単球を含めた、円形の核を有する末梢血細胞を指す。抗原提示細胞（ＰＢＭＣは抗原提示細胞の一種である）として使用される場合、末梢血単核球は、放射線照射された同種異系末梢血単核球である。

【0268】

用語「末梢血リンパ球」及び「ＰＢＬ」とは、末梢血から増殖させたＴ細胞を指す。いくつかの実施形態において、ＰＢＬは、ドナー由来の全血またはアフェレシス製剤から分離される。いくつかの実施形態において、ＰＢＬは、ＣＤ３＋ ＣＤ４５＋のＴ細胞表現型などのＴ細胞表現型の正の選択または負の選択によって、ドナー由来の全血またはアフェレシス製剤から分離される。

【0269】

用語「抗ＣＤ３抗体」は、抗体又はその変異体、例えばモノクローナル抗体であって、成熟Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体におけるＣＤ３受容体に対するヒト、ヒト化、キメラ又はマウス抗体を含むものを指す。抗ＣＤ３抗体には、ムロモナブとしても知られるＯＫＴ－３が含まれる。抗ＣＤ３抗体には、Ｔ３及びＣＤ３εとしても知られるＵＨＣＴ１クローンも含まれる。他の抗ＣＤ３抗体には、例えば、オテリキシズマブ、テプリズマブ、及びビジリズマブが含まれる。

【0270】

用語「ＯＫＴ－３」（本明細書では「ＯＫＴ３」とも称される）は、成熟Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体におけるＣＤ３受容体に対する、ヒト、ヒト化、キメラ、若しくはマウス抗体を含めたモノクローナル抗体又はそのバイオシミラー若しくは変異体を指し、ＯＫＴ－３（３０ｎｇ／ｍＬ、ＭＡＣＳ ＧＭＰ ＣＤ３ ｐｕｒｅ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ， ＵＳＡ）及びムロモナブ又はその変異体、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、若しくはバイオシミラーなど、市販されている形態を含む。ムロモナブの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を表１に提供する（配列番号１及び配列番号２）。ＯＫＴ－３の産生能を有するハイブリドーマが米国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）に寄託されており、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ ８００１が付与されている。ＯＫＴ－３の産生能を有するハイブリドーマはまた、欧州認証細胞培養株保存機関（ＥＣＡＣＣ：Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｅｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）にも寄託されており、カタログ番号８６０２２７０６が付与されている。

【表1】

【0271】

用語「ＩＬ－２」（本明細書では「ＩＬ２」とも呼ばれる）は、インターロイキン－２として知られるＴ細胞増殖因子を指し、そのヒト及び哺乳動物の形態、保存的アミノ酸置換体、グリコフォーム、バイオシミラー、及び変異体を含む、ＩＬ－２の全ての形態を含む。ＩＬ－２については、例えば、Ｎｅｌｓｏｎ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００４， １７２， ３９８３－８８及びＭａｌｅｋ， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００８， ２６， ４５３－７９に報告されており、これらの文献の開示は本明細書に援用される。本発明における使用に好適な組換えヒトＩＬ－２のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号３）。例えば、用語ＩＬ－２には、ヒトの組換え形態のＩＬ－２、例えばアルデスロイキン（ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ、１つの使い捨てバイアル当たり２２００万ＩＵで複数の供給業者から市販されている）、ならびにＣｅｌｌＧｅｎｉｘ， Ｉｎｃ．、Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈ， ＮＨ， ＵＳＡ（ＣＥＬＬＧＲＯ ＧＭＰ）またはＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．、Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ， ＮＪ， ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－２０９－ｂ）によって工業的に供給されている組換えＩＬ－２の形態及び他の販売業者からの他の市販の均等物が包含される。アルデスロイキン（ｄｅｓ－アラニル－１、セリン－１２５ヒトＩＬ－２）は、分子量が約１５ｋＤａの非グリコシル化ヒト組換え形態のＩＬ－２である。本発明における使用に好適なアルデスロイキンのアミノ酸配列を表２に示す（配列番号４）。用語ＩＬ－２は、Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ， ＣＡ， ＵＳＡから入手可能な、または国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／１３２４９６Ａ１号の実施例１９に記載の方法、もしくは米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０２７５１３３Ａ１号に記載の方法（上記特許文献の開示は本明細書に援用される）などの、当技術分野で公知の方法によって調製することができる、ペグ化ＩＬ２プロドラッグであるベムペガルデスロイキン（ＮＫＴＲ－２１４、配列番号４に示され、平均で６個のリシン残基が［（２，７－ビス｛［メチルポリ（オキシエチレン）］カルバモイル｝－９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニルでＮ^６置換されているペグ化ヒト組換えＩＬ－２）を含む、本明細書に記載されるペグ化形態のＩＬ－２も包含する。本発明における使用に好適なベムペガルデスロイキン（ＮＫＴＲ－２１４）及び他のペグ化ＩＬ－２が、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０３２８７９１Ａ１号及び国際公開第ＷＯ２０１２／０６５０８６Ａ１号に記載されている（これらの開示は本明細書に援用される）。本発明における使用に好適な上記に代わる形態の複合化ＩＬ－２は、米国特許第４，７６６，１０６号、第５，２０６，３４４号、第５，０８９，２６１号、及び第４，９０２，５０２号に記載されており、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。本発明における使用に好適なＩＬ－２の製剤は米国特許第６，７０６，２８９号に記載されており、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。

【0272】

いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、Ｓｙｎｔｈｏｒｘ， Ｉｎｃから入手可能なＴＨＯＲ－７０７である。ＴＨＯＲ－７０７の調製及び特性及び本発明における使用に好適な上記に代わるさらなる形態ＩＬ－２の形態は、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０１８１２２０Ａ１号及び第ＵＳ２０２０／０３３０６０１Ａ１号に記載されており、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチド、及び、上記単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドに、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されるアミノ酸の位置（但し、上記アミノ酸残基の番号付けは配列番号５に対応している）で結合する複合化部分を含む、インターロイキン２（ＩＬ－２）複合体である。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸位置は、Ｒ３８及びＫ６４から選択される。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸の位置は、Ｅ６１、Ｅ６２、及びＥ６８から選択される。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸の位置はＥ６２である。いくつかの実施形態において、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される上記アミノ酸残基は、リシン、システイン、またはヒスチジンにさらに変異される。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸残基はシステインに変異される。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸残基はリシンに変異される。いくつかの実施形態において、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される上記アミノ酸残基は、非天然アミノ酸にさらに変異される。いくつかの実施形態において、上記非天然アミノ酸は、Ｎ^６－アジドエトキシ－Ｌ－リシン（ＡｚＫ）、Ｎ^６－プロパルギルエトキシ－Ｌ－リシン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ－Ｌ－リシン、ノルボルネンリシン、ＴＣＯ－リシン、メチルテトラジンリシン、アリルオキシカルボニルリシン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、２－アミノ－８－オキソオクタン酸、ｐ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ－ヨード－Ｌ－フェニルアラニン、ｍ－アセチルフェニルアラニン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、ｐ－プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ－プロパルギル－フェニルアラニン、３－メチル－フェニルアラニン、Ｌ－ドパ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジド－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アシル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ベンゾイル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ブロモフェニルアラニン、ｐ－アミノ－Ｌ－フェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、Ｏ－アリルチロシン、Ｏ－メチル－Ｌ－チロシン、Ｏ－４－アリル－Ｌ－チロシン、４－プロピル－Ｌ－チロシン、ホスホノチロシン、トリ－Ｏ－アセチル－ＧｌｃＮＡｃｐ－セリン、Ｌ－ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ－３－（２－ナフチル）アラニン、２－アミノ－３－（（２－（（３－（ベンジルオキシ）－３－オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２－アミノ－３－（フェニルセラニル）プロパン酸、またはセレノシステインを含む。いくつかの実施形態において、上記ＩＬ－２複合体は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２受容体α（ＩＬ－２Ｒα）サブユニットに対する親和性が低下する。いくつかの実施形態において、上記親和性の低下は、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性で、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または９９％を超える低下である。いくつかの実施形態において、上記低下した親和性は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、約１／１、１／２、１／３、１／４、１／５、１／６、１／７、１／８、１／９、１／１０、１／３０、１／５０、１／１００、１／２００、１／３００、１／５００、１／１０００、またはそれよりも低い。いくつかの実施形態において、上記複合化部分は、ＩＬ－２のＩＬ－２Ｒαとの結合を損なわせるかまたは遮断する。いくつかの実施形態において、上記複合化部分は水溶性ポリマーを含む。いくつかの実施形態において、さらなる複合化部分は水溶性ポリマーを含む。いくつかの実施形態において、上記水溶性ポリマーのそれぞれは独立に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィン性アルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（メタクリル酸ヒドロキシアルキル）、多糖、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、上記水溶性ポリマーのそれぞれは独立に、ＰＥＧを含む。いくつかの実施形態において、上記ＰＥＧは直鎖状ＰＥＧまたは分岐鎖状ＰＥＧである。いくつかの実施形態において、上記水溶性ポリマーのそれぞれは独立に、多糖を含む。いくつかの実施形態において、上記多糖は、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、またはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。いくつかの実施形態において、上記水溶性ポリマーのそれぞれは独立に、グリカンを含む。いくつかの実施形態において、上記水溶性ポリマーのそれぞれは独立に、ポリアミンを含む。いくつかの実施形態において、上記複合化部分はタンパク質を含む。いくつかの実施形態において、上記さらなる複合化部分はタンパク質を含む。いくつかの実施形態において、上記タンパク質のそれぞれは独立に、アルブミン、トランスフェリン、またはトランスサイレチンを含む。いくつかの実施形態において、上記タンパク質のそれぞれは独立にＦｃ部分を含む。いくつかの実施形態において、上記タンパク質のそれぞれは独立にＩｇＧのＦｃ部分を含む。いくつかの実施形態において、上記複合化部分はポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、上記さらなる複合化部分はポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、上記ポリペプチドのそれぞれは独立に、ＸＴＥＮペプチド、高グリシンホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、またはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。いくつかの実施形態において、上記単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドはグルタミル化によって修飾される。いくつかの実施形態において、上記複合化部分は上記単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドに直接結合する。いくつかの実施形態において、上記複合化部分は、リンカーを介して上記単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドに間接的に結合する。いくつかの実施形態において、上記リンカーはホモ二官能性リンカーを含む。いくつかの実施形態において、上記ホモ二官能性リンカーは、Ｌｏｍａｎｔ試薬であるジチオビス（プロピオン酸スクシンイミジル）（ＤＳＰ）、３’３’－ジチオビス（プロピオン酸スルホスクシンイミジル）（ＤＴＳＳＰ）、スベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）、スベリン酸ビス（スルホスクシンイミジル）（ＢＳ）、酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）、酒石酸ジスルホスクシンイミジル（スルホＤＳＴ）、エチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシナート）（ＥＧＳ）、グルタル酸ジスクシンイミジル（ＤＳＧ）、Ｎ，Ｎ’－ジスクシンイミジルカーボネート（ＤＳＣ）、アジピミデートジメチル（ＤＭＡ）、ピメリミデートジメチル（ＤＭＰ）、スベリミデートジメチル（ＤＭＳ）、ジメチル－３、３’－ジチオビスプロピオンイミダート（ＤＴＢＰ）、１，４－ジ－（３’－（２’－ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン（ＤＦＤＮＢ）もしくは１，３－ジフルオロ－４，６－ジニトロベンゼンなどのハロゲン化アリール含有化合物、４，４’－ジフルオロ－３，３’－ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス－［β－（４－アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ－トルイジン、３，３’－ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’－ｐ－ジアミノジフェニル、ジヨード－ｐ－キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ’－エチレンビス（ヨードアセトアミド）、またはＮ，Ｎ’－ヘキサメチレン－ビス（ヨードアセトアミド）を含む。いくつかの実施形態において、上記リンカーはヘテロ二官能性リンカーを含む。いくつかの実施形態において、上記ヘテロ二官能性リンカーは、３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸Ｎ－スクシンイミジル（ｓＰＤＰ）、３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸長鎖Ｎ－スクシンイミジル（ＬＣ－ｓＰＤＰ）、３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸水溶性長鎖Ｎ－スクシンイミジル（スルホ－ＬＣ－ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、６－［α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサン酸スルホスクシンイミジル（スルホ－ＬＣ－ｓＭＰＴ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸スクシンイミジル（ｓＭＣＣ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸スルホスクシンイミジル（スルホ－ｓＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢｓ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＭＢｓ）、（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸Ｎ－スクシンイミジル（ｓＩＡＢ）、（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸スルホスクシンイミジル（スルホ－ｓＩＡＢ）、４－（ｐ－マレイミドフェニル）酪酸スクシンイミジル（ｓＭＰＢ）、４－（ｐ－マレイミドフェニル）酪酸スルホスクシンイミジル（スルホ－ｓＭＰＢ）、Ｎ－（γ－マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢｓ）、Ｎ－（γ－マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢｓ）、６－（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサン酸スクシンイミジル（ｓＩＡＸ）、６［６－（（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサン酸スクシンイミジル（ｓｌＡＸＸ）、４－（（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸スクシンイミジル（ｓＩＡＣ）、６－（（（（（４－ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボニル）アミノ）ヘキサン酸スクシンイミジル（ｓＩＡＣＸ）、ヨード酢酸ｐ－ニトロフェニル（ＮＰＩＡ）、４－（４Ｎマレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）などのカルボニル反応性且つスルフヒドリル反応性の架橋剤、４－（Ｎ－


マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシル－ヒドラジド－８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３－（２－ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル－４－アジドサリチル酸（ＮＨｓ－ＡｓＡ）、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル－４－アジドサリチル酸（スルホ－ＮＨｓ－ＡｓＡ）、（４－アジドサリチルアミド）ヘキサン酸スルホスクシンイミジル（スルホ－ＮＨｓ－ＬＣ－ＡｓＡ）、２－（ｐ－アジドサリチルアミド）エチル－１，３’－ジチオプロピオン酸スルホスクシンイミジル（ｓＡｓＤ）、４－アジド安息香酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル（ＨｓＡＢ）、４－アジド安息香酸Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル（スルホ－ＨｓＡＢ）、６－（４’－アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸Ｎ－スクシンイミジル（ｓＡＮＰＡＨ）、６－（４’－アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸スルホスクシンイミジル（スルホ－ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ－５－アジド－２－ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ－ＮＯｓ）、２－（ｍ－アジド－ｏ－ニトロベンザミド）－エチル－１，３’－ジチオプロピオン酸スルホスクシンイミジル（ｓＡＮＤ）、４－アジドフェニル－１，３’－ジチオプロピオン酸Ｎ－スクシンイミジル（ｓＡＤＰ）、４－アジドフェニル－１，３’－ジチオプロピオン酸Ｎ－スルホスクシンイミジル（スルホ－ｓＡＤＰ）、４－（ｐ－アジドフェニル）酪酸スルホスクシンイミジル（スルホ－ｓＡＰＢ）、２－（７－アジド－４－メチルクマリン－３－アセトアミド）エチル－１，３’－ジチオプロピオン酸スルホスクシンイミジル（ｓＡＥＤ）、７－アジド－４－メチルクマリン－３－酢酸スルホスクシンイミジル（スルホ－ｓＡＭＣＡ）、ジアゾピルビン酸ｐ－ニトロフェニル（ｐＮＰＤＰ）、２－ジアゾ－３，３，３－トリフルオロプロピオン酸ｐ－ニトロフェニル（ＰＮＰ－ＤＴＰ）、ｌ－（ｐ－アジドサリチルアミド）－４－（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ－［４－（ｐ－アジドサリチルアミド）ブチル］－３’－（２’－ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン－４－ヨードアセトアミド、ｐ－アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、４－（ｐ－アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、またはｐ－アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）を含む。いくつかの実施形態において、上記リンカーは、任意選択でジペプチドリンカーを含む、切断可能なリンカーを含む。いくつかの実施形態において、上記ジペプチドリンカーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ａｌａ、またはＶａｌ－Ｌｙｓを含む。いくつかの実施形態において、上記リンカーは切断不能のリンカーを含む。いくつかの実施形態において、上記リンカーは、任意選択でマレイミドカプロイル（ｍｃ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸スクシンイミジル（ｓＭＣＣ）、または４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸スルホスクシンイミジル（スルホ－ｓＭＣＣ）を含むマレイミド基を含む。いくつかの実施形態において、上記リンカーはスペーサーをさらに含む。いくつかの実施形態において、上記スペーサーは、ｐ－アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、それらの誘導体、または類似体を含む。いくつかの実施形態において、上記複合化部分は、ＩＬ－２複合体の血清半減期を延長することが可能である。いくつかの実施形態において、上記さらなる複合化部分は、ＩＬ－２複合体の血清半減期を延長することが可能である。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、本明細書に記載のＩＬ－２の形態のいずれかのフラグメントである。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０１８１２２０Ａ１号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０３３０６０１Ａｌ号に開示されるようにペグ化されている。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む複合化部分に共有結合したＮ^６－アジドエトキシ－Ｌ－リシン（ＡｚＫ）を含むＩＬ－２ポリペプチドを含むＩＬ－２複合体であって、上記ＩＬ－２ポリペプチドが、配列番号５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ配列番号５内のアミノ酸の位置に関して、Ｋ３５位、Ｆ４２位、Ｆ４４位、Ｋ４３位、Ｅ６２位、Ｐ６５位、Ｒ３８位、Ｔ４１位、Ｅ６８位、Ｙ４５位、Ｖ６９位、またはＬ７２位のアミノ酸が上記ＡｚＫによって置換されている上記ＩＬ－２複合体である。いくつかの実施形態において、上記ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号５に対して１残基のＮ末端での欠失を含む。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適な上記ＩＬ－２の形態は、ＩＬ－２Ｒのアルファ鎖結合性は失われているが、中程度の親和性のＩＬ－２Ｒベータ－ガンマシグナル伝達複合体への正常な結合は保持している。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適な上記ＩＬ－２の形態は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む複合化部分に共有結合したＮ^６－アジドエトキシ－Ｌ－リシン（ＡｚＫ）を含むＩＬ－２ポリペプチドを含むＩＬ－２複合体であって、上記ＩＬ－２ポリペプチドが、配列番号５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ配列番号５内のアミノ酸の位置に関して、Ｋ３５位、Ｆ４２位、Ｆ４４位、Ｋ４３位、Ｅ６２位、Ｐ６５位、Ｒ３８位、Ｔ４１位、Ｅ６８位、Ｙ４５位、Ｖ６９位、またはＬ７２位のアミノ酸が上記ＡｚＫによって置換されている上記ＩＬ－２複合体である。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適な上記ＩＬ－２の形態は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む複合化部分に共有結合したＮ^６－アジドエトキシ－Ｌ－リシン（ＡｚＫ）を含むＩＬ－２ポリペプチドを含むＩＬ－２複合体であって、上記ＩＬ－２ポリペプチドが、配列番号５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ配列番号５内のアミノ酸の位置に関して、Ｋ３５位、Ｆ４２位、Ｆ４４位、Ｋ４３位、Ｅ６２位、Ｐ６５位、Ｒ３８位、Ｔ４１位、Ｅ６８位、Ｙ４５位、Ｖ６９位、またはＬ７２位のアミノ酸が上記ＡｚＫによって置換されている上記ＩＬ－２複合体である。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適な上記ＩＬ－２の形態は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む複合化部分に共有結合したＮ^６－アジドエトキシ－Ｌ－リシン（ＡｚＫ）を含むＩＬ－２ポリペプチドを含むＩＬ－２複合体であって、上記ＩＬ－２ポリペプチドが、配列番号５に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ配列番号５内のアミノ酸の位置に関して、Ｋ３５位、Ｆ４２位、Ｆ４４位、Ｋ４３位、Ｅ６２位、Ｐ６５位、Ｒ３８位、Ｔ４１位、Ｅ６８位、Ｙ４５位、Ｖ６９位、またはＬ７２位のアミノ酸が上記ＡｚＫによって置換されている上記ＩＬ－２複合体である。

【0273】

いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ， Ｉｎｃ．から入手可能な、ＡＬＫＳ－４２３０（配列番号６）としても知られるネムバロイキン・アルファである。ネムバロイキン・アルファは、ヒトインターロイキン２フラグメント（１～５９）、変異体（Ｃｙｓ^１２５＞Ｓｅｒ^５１）、ペプチジルリンカー（^６０ＧＧ^６１）を介してヒトインターロイキン２フラグメント（６２～１３２）に融合、ペプチジルリンカー（^１３３ＧＳＧＧＧＳ^１３８）を介してヒトインターロイキン２受容体α鎖フラグメント（１３９－３０３）に融合、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中で産生、グリコシル化；ヒトインターロイキン２（ＩＬ－２）（７５～１３３）－ペプチド［Ｃｙｓ^１２５（５１）＞Ｓｅｒ］－変異体（１～５９）、Ｇ_２ペプチドリンカー（６０～６１）を介してヒトインターロイキン２（ＩＬ－２）（４～７４）－ペプチド（６２～１３２）に及びＧＳＧ_３Ｓペプチドリンカー（１３３～１３８）を介してヒトインターロイキン２受容体α鎖（ＩＬ２Ｒサブユニットアルファ、ＩＬ２Ｒα、ＩＬ２ＲＡ）（ｌ～１６５）－ペプチド（１３９～３０３）に融合、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中で産生、糖型アルファとしても知られている。ネムバロイキン・アルファのアミノ酸配列を配列番号６に示す。いくつかの実施形態において、ネムバロイキン・アルファは、以下の翻訳後修飾、すなわち、３１～１１６位、１４１～２８５位、１８４～２４２位、２６９～３０１位、１６６～１９７位または１６６～１９９位、１６８～１９９位または１６８～１９７位（配列番号６における番号付けを使用）のジスルフィド架橋、及び配列番号６における番号付けを使用したＮ１８７位、Ｎ２０６位、Ｔ２１２位のグリコシル化部位を示す。ネムバロイキン・アルファの調製及び特性、ならびに本発明における使用に好適な上記に代わるさらなるＩＬ－２の形態は、米国特許出願公開第ＵＳ２０２１／００３８６８４Ａ１号及び米国特許第１０，１８３，９７９号に記載され、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、配列番号６に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９０％の配列同一性を有するタンパク質である。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、配列番号６に示すアミノ酸配列またはその保存的アミノ酸置換体を有する。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、配列番号７のアミノ酸２４～４５２、またはその変異体、フラグメント、もしくは誘導体を含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、配列番号７のアミノ酸２４～４５２、またはそのバリアント、フラグメント、もしくは誘導体に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む融合タンパク質である。本発明における使用に好適な他のＩＬ－２の形態は、米国特許第１０，１８３，９７９号に記載されており、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。任意選択で、いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、ムチンドメインポリペプチドリンカーによって第２の融合パートナーに連結された第１の融合パートナーを含む融合タンパク質であって、上記第１の融合パートナーが、ＩＬ－１ＲαまたはＩＬ－１Ｒαに対して少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性を有し、ＩＬ－１Ｒαの受容体アンタゴニスト活性を有するタンパク質であり、上記第２の融合パートナーが、Ｆｃ領域を含む免疫グロブリンの全てまたは一部を含み、上記ムチンドメインポリペプチドリンカーが、配列番号８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記融合タンパク質の半減期が、上記ムチンドメインポリペプチドリンカーの非存在下での上記第２の融合タンパク質に対する上記第１の融合タンパク質の融合と比較して向上している上記融合タンパク質である。

【表2】

【0274】

いくつかの実施形態において、本発明における使用に好適なＩＬ－２の形態は、相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）、及び上記Ｖ_ＨもしくはＶ_ＬのＣＤＲ中に合体したＩＬ－２分子またはそのフラグメントを含む抗体サイトカイン合体タンパク質であって、制御性Ｔ細胞よりもＴエフェクター細胞を優先的に増殖させる上記抗体サイトカイン合体タンパク質を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）、及び上記Ｖ_ＨもしくはＶ_ＬのＣＤＲ中に合体したＩＬ－２分子またはそのフラグメントを含み、但し、上記ＩＬ－２分子はムテインであり、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、制御性Ｔ細胞よりもＴエフェクター細胞を優先的に増殖させる。一実施形態において、上記ＩＬ－２レジメンは、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０２７０３３４Ａ１号に記載されている抗体の投与を含み、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）；ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）；及び上記Ｖ_ＨもしくはＶ_ＬのＣＤＲ中に合体したＩＬ－２分子またはそのフラグメントを含み、但し、上記ＩＬ－２分子はムテインであり、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、制御性Ｔ細胞よりもＴエフェクター細胞を優先的に増殖させ、上記抗体は、配列番号３９を含むＩｇＧクラス軽鎖及び配列番号３８を含むＩｇＧクラス重鎖；配列番号３７を含むＩｇＧクラス軽鎖及び配列番号２９を含むＩｇＧクラス重鎖；配列番号３９を含むＩｇＧクラス軽鎖及び配列番号２９を含むＩｇＧクラス重鎖；ならびに配列番号３７を含むＩｇＧクラス軽鎖及び配列番号３８を含むＩｇＧクラス重鎖からなる群より選択される、ＩｇＧクラス重鎖及びＩｇＧクラス軽鎖をさらに含む。

【0275】

一実施形態において、ＩＬ－２分子またはそのフラグメントは上記Ｖ_ＨのＨＣＤＲ１中に合体され、上記ＩＬ－２分子はムテインである。一実施形態において、ＩＬ－２分子またはそのフラグメントは、上記Ｖ_ＨのＨＣＤＲ２中に合体され、上記ＩＬ－２分子はムテインである。一実施形態において、ＩＬ－２分子またはそのフラグメントは、上記Ｖ_ＨのＨＣＤＲ３に合体され、上記ＩＬ－２分子はムテインである。一実施形態において、ＩＬ－２分子またはそのフラグメントは、上記Ｖ_ＬのＬＣＤＲ１に合体され、上記ＩＬ－２分子はムテインである。一実施形態において、ＩＬ－２分子またはそのフラグメントは、上記Ｖ_ＬのＬＣＤＲ２に合体され、上記ＩＬ－２分子はムテインである。一実施形態において、ＩＬ－２分子またはそのフラグメントは、上記Ｖ_ＬのＬＣＤＲ３に合体され、上記ＩＬ－２分子はムテインである。

【0276】

上記ＩＬ－２分子の挿入は、上記ＣＤＲのＮ末端領域もしくはその近傍、上記ＣＤＲの中間領域、または上記ＣＤＲのＣ末端領域もしくはその近傍であってよい。いくつかの実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、ＣＤＲ中に組み込まれたＩＬ－２分子を含み、上記ＩＬ２の配列は上記ＣＤＲの配列をフレームシフトしない。いくつかの実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、ＣＤＲ中に組み込まれたＩＬ－２分子を含み、上記ＩＬ－２の配列はＣＤＲ配列の全部または一部を置換する。上記ＩＬ－２分子による置換は、上記ＣＤＲのＮ末端領域、上記ＣＤＲの中間領域、または上記ＣＤＲのＣ末端領域もしくはその近傍であってよい。上記ＩＬ－２分子による置換は、ＣＤＲ配列のわずか１つもしくは２つのアミノ酸、またはＣＤＲ配列全体であってよい。

【0277】

いくつかの実施形態において、ＩＬ－２分子は、ペプチドリンカーなしで、ＣＤＲ配列とＩＬ－２配列の間に、追加のアミノ酸なしでＣＤＲ中に直接合体される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２分子は、ＣＤＲ配列とＩＬ－２配列の間に、１つ以上の追加のアミノ酸を有するペプチドリンカーを用いてＣＤＲ中に間接的に合体される。

【0278】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＩＬ－２分子はＩＬ－２ムテインである。場合により、上記ＩＬ－２ムテインはＲ６７Ａ置換を含む。いくつかの実施形態において、上記ＩＬ－２ムテインは、アミノ酸配列配列番号１４または配列番号１５を含む。いくつかの実施形態において、上記ＩＬ－２ムテインは、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０２７０３３４Ａ１号の表１のアミノ酸配列を含み、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。

【0279】

一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２、及び配列番号２５からなる群より選択されるＨＣＤＲ１を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、及び配列番号１６からなる群より選択されるＨＣＤＲ１を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、及び配列番号２６からなる群より選択されるＨＣＤＲ２からなる群より選択されるＨＣＤＲ１を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４、及び配列番号２７からなる群より選択されるＨＣＤＲ３を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ領域を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ領域及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、米国特許出願公開第２０２０／０２７０３３４Ａ１号のＩｇＧ．ＩＬ２Ｆ７１Ａ．Ｈ１またはＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１、あるいはその変異体、誘導体、もしくはフラグメント、またはその保存的アミノ酸置換体、またはそれに対する少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するタンパク質を含む。一実施形態において、本明細書に記載の抗体サイトカイン合体タンパク質の抗体成分は、免疫グロブリン配列、フレームワーク配列、またはパリビズマブのＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体サイトカイン合体タンパク質の血清半減期は、アルデスロイキンまたは同等の分子などの、但しこれらに限定されない野生型ＩＬ－２分子よりも長い。一実施形態において、本明細書に記載の抗体サイトカイン合体タンパク質は、表３に示す配列を有する。

【表3-1】

【表3-2】

【0280】

用語「ＩＬ－４」（本明細書では「ＩＬ４」とも称される）は、インターロイキン４として知られるサイトカインを指し、これはＴｈ２ Ｔ細胞によって産生され、並びに好酸球、好塩基球、及びマスト細胞によって産生される。ＩＬ－４は、ナイーブヘルパーＴ細胞（Ｔｈ０細胞）のＴｈ２ Ｔ細胞への分化を調節する。Ｓｔｅｉｎｋｅ ａｎｄ Ｂｏｒｉｓｈ， Ｒｅｓｐｉｒ． Ｒｅｓ． ２００１， ２， ６６－７０。ＩＬ－４によって活性化されると、続いてＴｈ２ Ｔ細胞はポジティブフィードバックループで更なるＩＬ－４を産生する。ＩＬ－４はまた、Ｂ細胞増殖及びクラスＩＩ ＭＨＣ発現も刺激し、Ｂ細胞からのＩｇＥ及びＩｇＧ_１発現へのクラススイッチも誘導する。本発明における使用に好適な組換えヒトＩＬ－４は、ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．、Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ， ＮＪ， ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－２１１）及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．， Ｗａｌｔｈａｍ， ＭＡ， ＵＳＡ（ヒトＩＬ－１５組換えタンパク質、カタログ番号Ｇｉｂｃｏ ＣＴＰ００４３）を含む複数の供給業者から市販されている。本発明における使用に好適な組換えヒトＩＬ－４のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号９）。

【0281】

用語「ＩＬ－４」（本明細書では「ＩＬ４」とも呼ばれる）とは、インターロイキン４として知られるサイトカインを指し、これはＴｈ２ Ｔ細胞、ならびに好酸球、好塩基球、及びマスト細胞によって産生される。ＩＬ－４は、ナイーブヘルパーＴ細胞（Ｔｈ０細胞）のＴｈ２ Ｔ細胞への分化を調節する。Ｓｔｅｉｎｋｅ ａｎｄ Ｂｏｒｉｓｈ， Ｒｅｓｐｉｒ． Ｒｅｓ． ２００１， ２， ６６－７０。Ｔｈ２ Ｔ細胞は、ＩＬ－４によって活性化されると、続いてポジティブフィードバックループで更なるＩＬ－４を産生する。ＩＬ－４はまた、Ｂ細胞の増殖及びクラスＩＩ ＭＨＣ発現も刺激し、Ｂ細胞からのＩｇＥ及びＩｇＧ_１発現へのクラススイッチも誘導する。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－４は、ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．、Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ， ＮＪ， ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－２１１）及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ， ＭＡ， ＵＳＡ（ヒトＩＬ－１５組換えタンパク質、カタログ番号Ｇｉｂｃｏ ＣＴＰ００４３）を含め、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－４のアミノ酸配列を表２に提供する（配列番号５）。

【0282】

用語「ＩＬ－７」（本明細書では「ＩＬ７」とも称される）は、インターロイキン７として知られるグリコシル化組織由来サイトカインを指し、これは間質及び上皮細胞、並びに樹状細胞から入手し得る。Ｆｒｙ ａｎｄ Ｍａｃｋａｌｌ， Ｂｌｏｏｄ ２００２， ９９， ３８９２－９０４。ＩＬ－７はＴ細胞の発達を刺激することができる。ＩＬ－７は、ＩＬ－７受容体αと共通γ鎖受容体とからなるヘテロ二量体のＩＬ－７受容体に結合し、それが胸腺内でのＴ細胞発達及び末梢内での生存にとって重要な一連のシグナルとなる。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－７は、ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．、Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ， ＮＪ， ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－２５４）及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ， ＭＡ， ＵＳＡ（ヒトＩＬ－１５組換えタンパク質、カタログ番号Ｇｉｂｃｏ ＰＨＣ００７１）を含め、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－７のアミノ酸配列を表２に提供する（配列番号６）。

【0283】

用語「ＩＬ－１５」（本明細書では「ＩＬ１５」とも称される）は、インターロイキン－１５として知られるＴ細胞成長因子を指し、そのヒト及び哺乳類形態、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、バイオシミラー、及び変異体を含め、あらゆる形態のＩＬ－２が含まれる。ＩＬ－１５については、例えば、Ｆｅｈｎｉｇｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ， Ｂｌｏｏｄ ２００１， ９７， １４－３２（この開示は参照により本明細書に援用される）に記載されている。ＩＬ－１５はβ及びγシグナル伝達受容体サブユニットをＩＬ－２と共有している。組換えヒトＩＬ－１５は、分子質量が１２．８ｋＤａの、１１４アミノ酸（及びＮ末端メチオニン）を含む単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖である。組換えヒトＩＬ－１５は、ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．、Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ， ＮＪ， ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－２３０－ｂ）及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ， ＭＡ， ＵＳＡ（ヒトＩＬ－１５組換えタンパク質、カタログ番号３４－８１５９－８２）を含め、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－１５のアミノ酸配列を表２に提供する（配列番号７）。

【0284】

用語「ＩＬ－２１」（本明細書では「ＩＬ２１」とも称される）は、インターロイキン－２１として知られるプレイオトロピックサイトカインタンパク質を指し、そのヒト及び哺乳類形態、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、バイオシミラー、及び変異体を含め、あらゆる形態のＩＬ－２１が含まれる。ＩＬ－２１については、例えば、Ｓｐｏｌｓｋｉ ａｎｄ Ｌｅｏｎａｒｄ， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｄｒｕｇ． Ｄｉｓｃ． ２０１４， １３， ３７９－９５（この開示は参照により本明細書に援用される）に記載されている。ＩＬ－２１は、主としてナチュラルキラーＴ細胞及び活性化ヒトＣＤ４^＋ Ｔ細胞によって産生される。組換えヒトＩＬ－２１は、分子質量が１５．４ｋＤａの、１３２アミノ酸を含む単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖である。組換えヒトＩＬ－２１は、ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．、Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ， ＮＪ， ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－４０８－ｂ）及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ， ＭＡ， ＵＳＡ（ヒトＩＬ－２１組換えタンパク質、カタログ番号１４－８２１９－８０）を含め、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－２１のアミノ酸配列を表２に提供する（配列番号８）。

【0285】

「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」、又は「治療量」が指示されるとき、本発明の組成物の正確な投与量は、医師が、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度、及び患者（対象）の状態の個体差を考慮して決定することができる。概して、本明細書に記載される腫瘍浸潤リンパ球（例えば、二次ＴＩＬ又は遺伝子修飾された細胞傷害性リンパ球）を含む医薬組成物は１０^４～１０^１１細胞／ｋｇ体重（例えば、１０^５～１０^６、１０^５～１０^１０、１０^５～１０^１１、１０^６～１０^１０、１０^６～１０^１１、１０^７～１０^１１、１０^７～１０^１０、１０^８～１０^１１、１０^８～１０^１０、１０^９～１０^１１、又は１０^９～１０^１０細胞／ｋｇ体重）（これらの範囲内にある全ての整数値を含む）の投薬量で投与されてもよいと言うことができる。腫瘍浸潤リンパ球（場合によっては遺伝子修飾された細胞傷害性リンパ球を含む）組成物はまた、これらの投薬量で複数回投与されてもよい。腫瘍浸潤リンパ球（ある場合には、遺伝子的なものを含む）は、免疫療法で一般に公知の注入技法を用いることにより投与し得る（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇ． Ｊ． ｏｆ Ｍｅｄ． ３１９： １６７６， １９８８を参照のこと）。特定の患者に最適な投薬量及び処置レジームは、医学分野の当業者が疾患の徴候に関して患者をモニタし及びそれに応じて処置を調整することにより、容易に決定することができる。

【0286】

用語「血液学的悪性腫瘍」、「血液学的悪性腫瘍」、または関連する意味の用語は、限定はされないが、血液、骨髄、リンパ節、及びリンパ系の組織を含め、哺乳類における造血及びリンパ系組織の癌及び腫瘍を指す。血液学的悪性腫瘍は「液性腫瘍」とも称される。血液学的悪性腫瘍としては、限定はされないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫が挙げられる。用語「Ｂ細胞血液学的悪性腫瘍」は、Ｂ細胞を冒す血液学的悪性腫瘍を指す。

【0287】

用語「固形腫瘍」は、通常嚢胞又は液体範囲を含まない異常な組織塊を指す。固形腫瘍は良性又は悪性であり得る。用語「固形腫瘍癌」は、悪性、新生物性、又は癌性の固形腫瘍を指す。固形腫瘍癌としては、限定はされないが、肺癌、乳癌、前立腺癌、結腸癌、直腸癌、及び膀胱癌など、肉腫、癌腫、及びリンパ腫が挙げられる。固形腫瘍の組織構造は、実質（癌細胞）と、癌細胞が分散するところであって支持微小環境をもたらし得る支持間質細胞とを含む相互依存的組織コンパートメントを含む。

【0288】

用語「液性腫瘍」は、事実上流体である異常な細胞塊を指す。液性腫瘍癌としては、限定はされないが、白血病、骨髄腫、及びリンパ腫、並びに他の血液学的悪性腫瘍が挙げられる。液性腫瘍から入手されるＴＩＬはまた、本明細書において骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）とも称され得る。末梢血中を循環する液性腫瘍を含む液性腫瘍から得られるＴＩＬは、本明細書においてＰＢＬと呼ばれる場合もある。用語ＭＩＬ、ＴＩＬ、及びＰＢＬは本明細書において同義で使用され、当該の細胞が由来する組織の種類に基づいてのみ異なる。

【0289】

用語「微小環境」は、本明細書で使用されるとき、固形腫瘍又は血液学的腫瘍の微小環境全体又は微小環境内の個々の細胞サブセットを指し得る。腫瘍微小環境は、本明細書で使用されるとき、Ｓｗａｒｔｚ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ２０１２， ７２， ２４７３に記載されるとおり、「新生物形質転換を促進し、腫瘍成長及び浸潤を支援し、腫瘍を宿主免疫から保護し、治療抵抗性を助長し、及び顕性転移が発育するためのニッチを提供する細胞、可溶性因子、シグナル伝達分子、細胞外マトリックス、及び機械的キュー」の複合混合物を指す。腫瘍は、Ｔ細胞によって認識されるはずの抗原を発現するが、微小環境による免疫抑制のため、免疫系による腫瘍クリアランスはまれである。

【0290】

本明細書では、用語「動的に計画立案すること」または「動的計画立案」とは、１つ以上のその後のイベントの成果（ｏｕｔｃｏｍｅ）または結果（ｒｅｓｕｌｔ）に基づいて、行われるイベントの柔軟なスケジュールを作成することを指す場合がある。したがって、患者の治療イベントなどのイベントの予定日は、該予定日の計画を立案した後、但し該イベントの前に実施される１つ以上の製造ステップの成果または結果に基づいて、動的に変更される場合がある。

【0291】

ある実施形態において、本発明は、ＴＩＬ集団で癌を治療する方法を含み、ここで患者は本発明に係るＴＩＬの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前処置される。一部の実施形態において、ＴＩＬ集団が提供されてもよく、ここで患者は、本発明に係るＴＩＬの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前処置される。ある実施形態において、骨髄非破壊的化学療法は、２日間（ＴＩＬ注入前２７日目及び２６日目）のシクロホスファミド６０ｍｇ／ｋｇ／日及び５日間（ＴＩＬ注入前２７～２３日目）のフルダラビン２５ｍｇ／ｍ^２／日である。ある実施形態において、骨髄非破壊的化学療法及び本発明に係るＴＩＬ注入（０日目）の後、患者は生理学的忍容量まで８時間毎に静脈内に７２０，０００ＩＵ／ｋｇのＩＬ－２の静脈内注入を受ける。

【0292】

実験的知見から、腫瘍特異的Ｔリンパ球の養子移入前のリンパ球枯渇が、調節性Ｔ細胞及び免疫系の競合エレメント（「サイトカインシンク」）の除去により、治療有効性の増強において重要な役割を果たすことが指摘される。従って、本発明の一部の実施形態は、本発明のｒＴＩＬを導入する前に患者に対してリンパ球枯渇ステップ（「免疫抑制コンディショニング」とも称される）を利用する。

【0293】

用語「共投与」、「共投与する」、「～と併用して投与される」、「～と併用して投与する」、「同時の」、及び「並行した」は、本明細書で使用されるとき、両方の医薬品有効成分及び／又はその代謝産物が対象に同じ時点で存在するような対象への２つ以上の医薬品有効成分（本発明の好ましい実施形態において、例えば、複数のＴＩＬとの併用での少なくとも１つのカリウムチャネル作動薬）の投与を包含する。共投与には、別個の組成物での同時投与、別個の組成物での異なる時点における投与、又は２つ以上の医薬品有効成分が存在する組成物での投与が含まれる。別個の組成物での同時投与及び両方の薬剤が存在する組成物での投与が好ましい。

【0294】

用語「有効量」又は「治療有効量」は、限定はされないが疾患治療を含めた、意図した適用を達成するのに十分な本明細書に記載されるとおりの化合物又は化合物の組み合わせの量を指す。治療有効量は、意図した適用（インビトロ又はインビボ）、又は治療下の対象及び疾患病態（例えば、対象の体重、年齢及び性別）、疾患病態の重症度、又は投与方法に応じて異なり得る。この用語はまた、標的細胞において特定の応答（例えば、血小板粘着及び／又は細胞遊走の低減）を生じさせるであろう用量にも適用される。具体的な用量は、選択した詳細な化合物、従うべき投与レジメン、化合物が他の化合物と併用して投与されるかどうか、投与タイミング、その投与先の組織、及び化合物を運ぶ物理的デリバリーシステムに応じて異なることになる。

【0295】

用語「治療」、「治療している」、「治療する」などは、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を達成することを指す。効果は、疾患又はその症状を完全に又は部分的に防ぐという意味で予防的であってもよく、及び／又は疾患及び／又は疾患に起因する有害作用を部分的に又は完全に治癒するという意味で治療的であってもよい。「治療」は、本明細書で使用されるとき、哺乳類、特にヒトにおける疾患の任意の治療を包含し、（ａ）疾患の素因があり得るが、まだそれを有するとは診断されてない対象において疾患の発生を防ぐこと；（ｂ）疾患を阻害すること、即ちその発症又は進行を止めること；及び（ｃ）疾患を軽減すること、即ち疾患の退縮を生じさせること及び／又は１つ以上の疾患症状を軽減することが含まれる。「治療」はまた、疾患又は病態がない場合であっても、薬理学的効果を提供するための薬剤の送達を包含することも意図される。例えば、「治療」は、例えばワクチンの場合に、疾患状態がない中で免疫応答を誘発し又は免疫を付与することのできる組成物の送達を包含する。

【0296】

用語「異種」は、核酸又はタンパク質の一部分に関連して使用されるとき、その核酸又はタンパク質が、自然中では互いに同じ関係で見出されない２つ以上の部分配列を含むことを示す。例えば、核酸は、典型的には組換え産生されて、新規の機能性核酸を作り出すように編成された無関係の遺伝子からの２つ以上の配列、例えば、ある供給源からのプロモーターと別の供給源からのコード領域、又は異なる供給源からのコード領域を有する。同様に、異種タンパク質とは、タンパク質が、自然中では互いに同じ関係で見出されない２つ以上の部分配列（例えば、融合タンパク質）を含むことを示す。

【0297】

２つ以上の核酸又はポリペプチドの文脈で用語「配列同一性」、「パーセント同一性」、及び「配列パーセント同一性」（又はこれらの同義語、例えば「９９％同一」）は、いかなる保存的アミノ酸置換も配列同一性の一部として考慮せず、対応が最大となるように比較及びアラインメント（必要に応じてギャップを導入する）したときに同じである、又は同じであるヌクレオチド若しくはアミノ酸残基を特定の割合だけ有する２つ以上の配列又は部分配列を指す。パーセント同一性は、配列比較ソフトウェア又はアルゴリズムを用いるか、又は目視検査によって測定することができる。アミノ酸又はヌクレオチド配列のアラインメントを達成するために使用し得る様々なアルゴリズム及びソフトウェアが当該技術分野において公知である。パーセント配列同一性の決定に好適なプログラムとしては、例えば、米国政府の国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）ＢＬＡＳＴウェブサイトから利用可能なＢＬＡＳＴプログラムスイートが挙げられる。２つの配列間の比較は、ＢＬＡＳＴＮ又はＢＬＡＳＴＰのいずれかのアルゴリズムを使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴＮは核酸配列の比較に使用され、一方、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列の比較に使用される。ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ， Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）又はＤＮＡＳＴＡＲから利用可能なＭｅｇＡｌｉｇｎが、配列のアラインメントに使用し得る更なる公的に利用可能なソフトウェアプログラムである。当業者は、特定のアラインメントソフトウェアによるアラインメントを最大化するための適切なパラメータを決定することができる。特定の実施形態では、アラインメントソフトウェアのデフォルトパラメータが使用される。

【0298】

本明細書で使用されるとき、用語「変異体」は、限定はされないが、参照タンパク質、参照抗体、または参照融合タンパク質のアミノ酸配列の範囲内の又はそれに隣接する特定の位置における１つ以上の置換、欠失及び／又は付加の点で参照抗体、参照融合タンパク質、または参照融合タンパク質のアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を含む抗体又は融合タンパク質を包含する。変異体は、参照抗体のアミノ酸配列と比較して、そのアミノ酸配列に１つ以上の保存的置換を含み得る。保存的置換は、例えば、同様の荷電又は非荷電アミノ酸の置換を含み得る。変異体は、参照抗体、参照融合タンパク質、または参照融合タンパク質の抗原に特異的に結合する能力を保持している。変異体という用語はまた、ペグ化抗体又はタンパク質も含む。

【0299】

本明細書において「腫瘍浸潤リンパ球」又は「ＴＩＬ」とは、対象の血流を離れて腫瘍中に遊走した、当初白血球細胞として得られた細胞の集団を意味する。ＴＩＬとしては、限定はされないが、ＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞（リンパ球）、Ｔｈ１及びＴｈ１７ ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞及びＭ１マクロファージが挙げられる。ＴＩＬには、初代ＴＩＬ及び二次ＴＩＬの両方が含まれる。「初代ＴＩＬ」は、本明細書に概説されるとおり患者組織試料から得られるものであり（「新鮮に得られた」または「新鮮に単離された」と称されることもある）、及び「二次ＴＩＬ」は、限定はされないが、バルクＴＩＬ、拡大培養ＴＩＬ（「ＲＥＰ ＴＩＬ」）並びに本明細書で考察するとおりの「ｒｅＲＥＰ ＴＩＬ」を含め、本明細書で考察するとおり拡大培養された又は成長した任意のＴＩＬ細胞集団である。ｒｅＲＥＰ ＴＩＬは、例えば、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２追加拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含む、図２Ａ及び／または図９のステップＤに記載されたものなど）を含み得る。

【0300】

ＴＩＬは、概して、細胞表面マーカーを使用して生化学的に定義することも、又は腫瘍に浸潤して処置を達成するその能力によって機能的に定義することもできる。ＴＩＬは、一般に、以下のバイオマーカーのうちの１つ以上を発現することによって分類することができる：ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲαβ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５６、ＣＣＲ７、ＣＤ４５Ｒａ、ＣＤ９５、ＰＤ－１、及びＣＤ２５。加えて、及び或いは、ＴＩＬは、患者への再導入時に固形腫瘍に浸潤するその能力によって機能的に定義することができる。ＴＩＬは、更に効力によって特徴付けられてもよく－例えば、ＴＩＬは、例えばインターフェロン（ＩＦＮ）遊離が約５０ｐｇ／ｍＬより高い、約１００ｐｇ／ｍＬより高い、約１５０ｐｇ／ｍＬより高い、又は約２００ｐｇ／ｍＬより高い場合に効力があると見なすことができる。例えば、インターフェロン（ＩＦＮγ）遊離が約５０ｐｇ／ｍＬを超える、約１００ｐｇ／ｍＬを超える、約１５０ｐｇ／ｍＬを超える、約２００ｐｇ／ｍＬを超える、約３００ｐｇ／ｍＬを超える、約４００ｐｇ／ｍＬを超える、約５００ｐｇ／ｍＬを超える、約６００ｐｇ／ｍＬを超える、約７００ｐｇ／ｍＬを超える、約８００ｐｇ／ｍＬを超える、約９００ｐｇ／ｍＬを超える、約１０００ｐｇ／ｍＬを超える場合に、ＴＩＬＳは効力があると見なすことができる。

【0301】

用語「薬学的に許容される担体」又は「薬学的に許容される賦形剤」は、ありとあらゆる溶媒、分散剤、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、並びに不活性成分を含むものとする。活性医薬成分のためのかかる薬学的に許容される担体又は薬学的に許容される賦形剤の使用は当該技術分野において周知である。任意の従来の薬学的に許容される担体又は薬学的に許容される賦形剤が活性医薬成分と適合しない場合を除き、本発明の治療用組成物におけるその使用が企図される。他の薬物などの追加の活性医薬成分もまた、記載の組成物及び方法に援用され得る。

【0302】

用語「約」及び「およそ」は、統計的に意味のある値の範囲内を指す。かかる範囲は、所定の値又は範囲の一桁以内、好ましくは５０％以内、より好ましくは２０％以内、更により好ましくは１０％以内、更により好ましくは５％以内であり得る。用語「約」又は「およそ」に含まれる許容変動は、研究中の特定の系に依存し、当業者には容易に理解できる。更に、本明細書で使用される場合、用語「約」及び「およそ」は、寸法、サイズ、配合、パラメータ、形状、及びその他の量及び特性が正確ではないことを意味するが、近似及び／又はより大きい又はより小さい場合があり、必要に応じて、公差、変換係数、四捨五入、測定誤差など、及び当業者に公知の他の因子を反映する。一般に、寸法、サイズ、配合、パラメータ、形状、又は他の量若しくは特性は、明示的にそうであると明記されているか否かにかかわらず、「約」又は「およそ」である。大きく異なるサイズ、形状及び寸法の実施形態が、記載された用語を採用する場合があることに留意されたい。

【0303】

添付の特許請求の範囲で使用される場合、「を含む」、「から本質的になる」、及び「からなる」という移行用語は、記載されていない追加の請求要素又はステップがある場合、それらが特許請求の範囲から除外されることに関して、元の形式及び修正された形式で、特許請求（複数可）の範囲を定義する。用語「を含む」は、包括的又は無制限であることを意図しており、追加の、引用されていない要素、方法、ステップ、又は材料を除外するものではない。用語「からなる」は、特許請求の範囲で指定されたもの以外の要素、ステップ、又は材料を除外し、後者の場合、指定された材料（複数可）に関連する通常の不純物を除外する。用語「から本質的になる」は、特許請求の範囲を特定の要素、ステップ又は材料（複数可）、及び請求された発明の基本的及び新規の特性（複数可）に実質的に影響しないものに限定する。本発明を具体化する本明細書に記載の全ての組成物、方法及びキットは、代替実施形態において、「を含む」、「から本質的になる」、及び「からなる」という移行用語のいずれかによってより具体的に定義され得る。

【0304】

ＩＩ．ＴＩＬ製造プロセス（ＧＥＮ３プロセスの実施形態）
いかなる特定の理論にも制限されるものではないが、本発明の方法に記載の、Ｔ細胞の活性化のプライミングを行う、プライミングである第１の増殖のと、それに続くＴ細胞の活性化をブーストする急速な第２の増殖により、「より若い」表現型を保持した増殖Ｔ細胞の調製が可能になり、それによって、本発明の増殖Ｔ細胞は、他の方法によって増殖させたＴ細胞よりもがん細胞に対するより高い細胞傷害性を示すことが期待される。特に、本発明の方法によって教示される、抗ＣＤ３抗体（例えばＯＫＴ－３）、ＩＬ－２、及び任意選択で抗原提示細胞（ＡＰＣ）への曝露によってプライミングされ、次いで、さらに抗ＣＤ－３抗体（例えばＯＫＴ－３）、ＩＬ－２、及びＡＰＣへのその後の曝露によってブーストされるＴ細胞の活性化によって、培養中のＴ細胞の成熟が制限または回避され、成熟度の低い表現型を有するＴ細胞集団が得られ、培養中の増殖によるＴ細胞の消耗がより少なくなり、がん細胞に対してより高い細胞傷害性を示すと考えられる。いくつかの実施形態において、上記急速な第２の増殖のステップは、（ａ）第１の容器、例えばＧ－ＲＥＸ １００ＭＣＳ容器中で、約３～４日間、小規模の培養物中でＴ細胞を培養することによって上記急速な第２の増殖を実施し、次いで（ｂ）上記小規模培養物中の上記Ｔ細胞を、上記第１の容器よりも大きな第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ ５００ＭＣＳ容器に移し、上記第２の容器において、上記小規模培養物由来のＴ細胞をより大きな規模の培養物中で約４～７日間培養することによって、培養物のスケールアップを実現するための複数のステップに分割される。いくつかの実施形態において、上記急速増殖のステップは、（ａ）第１の容器、例えばＧ－ＲＥＸ １００ＭＣＳ容器中で、約３～４日間、小規模の培養物中でＴ細胞を培養することによって上記急速な第２の増殖を実施し、次いで（ｂ）上記小規模培養物から上記Ｔ細胞を、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の、上記第１の容器と同サイズの第２の容器に移し、且つ上記容器間で配分し、第２の容器のそれぞれにおいて、かかる第２の容器に移された第１の小規模培養物由来のＴ細胞の一部を、第２の小規模培養物中で約４～７日間培養することによって、培養物のスケールアウトを実現するための複数のステップに分割される。いくつかの実施形態において、上記急速増殖のステップは、（ａ）第１の容器、例えばＧ－ＲＥＸ １００ＭＣＳ容器中で、約３～４日間、小規模の培養物中でＴ細胞を培養することによって上記急速な第２の増殖を実施し、次いで（ｂ）上記小規模培養物から上記Ｔ細胞を、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の、上記第１の容器よりも大きな第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ ５００ＭＣＳ容器に移し、且つ上記容器間で配分し、第２の容器のそれぞれにおいて、かかる第２の容器に移された第１の小規模培養物由来のＴ細胞の一部を、より大きな規模の培養物中で約４～７日間培養することによって、培養物のスケールアウト及びスケールアップを実現するための複数のステップに分割される。いくつかの実施形態において、上記急速増殖のステップは、（ａ）第１の容器、例えばＧ－ＲＥＸ １００ＭＣＳ容器中で、約４日間、小規模の培養物中でＴ細胞を培養することによって上記急速な第２の増殖を実施し、次いで（ｂ）上記小規模培養物から上記Ｔ細胞を、２、３、または４個の、上記第１の容器よりも大きな第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ ５００ＭＣＳ容器に移し、且つ上記容器間で配分し、第２の容器のそれぞれにおいて、かかる第２の容器に移された小規模培養物由来のＴ細胞の一部を、より大きな規模の培養物中で約５日間培養することによって、培養物のスケールアウト及びスケールアップを実現するための複数のステップに分割される。

【0305】

これらの特徴のいくつかを含む、プロセス３として知られる（本明細書ではＧＥＮ３とも呼ばれる）、例としてのＴＩＬプロセスを図２Ａ及び２Ｃならびに／または図９に示し、プロセス２Ａに対する本発明のこの実施形態のいくつかの利点を図２Ｂに記載する。プロセス３の２つの実施形態を図２Ｃに示す。プロセス２ＡまたはＧｅｎ２は、米国特許公開第２０１８／０２８０４３６号にも記載されており、上記特許文献はその全体が本明細書に援用される。プロセス３すなわちＧｅｎ３は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０５９７１８号（その全体が本明細書に援用される）ならびに、本出願に示す図５、６、８、９、１０、及び１１にも記載されている。

【0306】

いくつかの実施形態において、上記急速な第２の増殖は、プライミングである第１の増殖によって生じたＴ細胞の活性化が、低下、減退、減衰、または鎮静し始めた後に実施される。

【0307】

いくつかの実施形態において、上記急速な第２の増殖は、プライミングである第１の増殖によって生じたＴ細胞の活性化が、（約）１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％低下した後に実施される。

【0308】

いくつかの実施形態において、上記急速な第２の増殖は、プライミングである第１の増殖によって生じたＴ細胞の活性化が、（約）１％～１００％の範囲の割合で低下した後に実施される。

【0309】

いくつかの実施形態において、上記急速な第２の増殖は、プライミングである第１の増殖によって生じたＴ細胞の活性化が、（約）１％～１０％、１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％の範囲の割合で低下した後に実施される。

【0310】

いくつかの実施形態において、上記急速な第２の増殖は、プライミングである第１の増殖によって生じたＴ細胞の活性化が、少なくとも（約）１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％低下した後に実施される。

【0311】

いくつかの実施形態において、上記急速な第２の増殖は、プライミングである第１の増殖によって生じたＴ細胞の活性化が、最大で、（約）１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％低下した後に実施される。

【0312】

いくつかの実施形態において、上記プライミングである第１の増殖によって生じたＴ細胞の活性化の低下は、抗原による刺激に応答してＴ細胞によって遊離するインターフェロンガンマの量の低下よって測定される。Ｔ細胞によって遊離するインターフェロンガンマの量が、インターフェロンガンマの初期レベルまたは対照レベルと比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、及び／または７５％低下すると、Ｔ細胞の活性化が低下していることを示す。Ｔ細胞によって遊離するインターフェロンガンマの量が、２００ｐｇ／ｍＬ未満、２５０ｐｇ／ｍＬ未満、３００ｐｇ／ｍＬ未満、３５０ｐｇ／ｍＬ未満、４００ｐｇ／ｍＬ未満、４５０ｐｇ／ｍＬ未満、５００ｐｇ／ｍＬ未満、５５０ｐｇ／ｍＬ未満、６００ｐｇ／ｍＬ未満、６５０ｐｇ／ｍＬ未満、７００ｐｇ／ｍＬ未満、７５０ｐｇ／ｍＬ未満、８００ｐｇ／ｍＬ未満、８５０ｐｇ／ｍＬ未満、９００ｐｇ／ｍＬ未満、９５０ｐｇ／ｍＬ未満、または１０００ｐｇ／ｍＬ未満に低下すると、Ｔ細胞の活性化が低下していることを示す。

【0313】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞のプライミングである第１の増殖は、最長で（約）７日または（約）８日間実施される。

【0314】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞のプライミングである第１の増殖は、最長で（約）１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、または８日間実施される。

【0315】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞のプライミングである第１の増殖は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、または８日間実施される。

【0316】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞の第２の急速増殖は、最長で（約）１１日間実施される。

【0317】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞の第２の急速増殖は、最長で（約）１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、または１１日間実施される。

【0318】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞の第２の急速増殖は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、または１１日間実施される。

【0319】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞のプライミングである第１の増殖は（約）１日～（約）７日間実施され、上記Ｔ細胞の第２の急速増殖は（約）１日～（約）１１日間実施される。

【0320】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞のプライミングである第１の増殖は、最長で（約）１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、または８日間実施され、上記Ｔ細胞の第２の急速増殖は、最長で（約）１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、または１１日間実施される。

【0321】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞のプライミングである第１の増殖は（約）１日～（約）８日間実施され、上記Ｔ細胞の第２の急速増殖は（約）１日～（約）９日間実施される。

【0322】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞のプライミングである第１の増殖は８日間実施され、上記Ｔ細胞の第２の急速増殖は９日間実施される。

【0323】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞のプライミングである第１の増殖は（約）１日～（約）７日間実施され、上記Ｔ細胞の第２の急速増殖は（約）１日～（約）９日間実施される。

【0324】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞のプライミングである第１の増殖は７日間実施され、上記Ｔ細胞の第２の急速増殖は９日間実施される。

【0325】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。

【0326】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞は骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）である。

【0327】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞は末梢血リンパ球（ＰＢＬ）である。

【0328】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞はがんに罹患しているドナーから得られる。

【0329】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞はがんに罹患している患者から切除された腫瘍から得られたＴＩＬである。

【0330】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞は血液悪性腫瘍に罹患している患者の骨髄から得られたＭＩＬである。

【0331】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞はドナー由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から得られたＰＢＬである。いくつかの実施形態において、上記ドナーはがんに罹患している。いくつかの実施形態において、上記がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって生じる癌、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽腫（ＧＢＭを含む）、消化器癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって生じる癌、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽腫（ＧＢＭを含む）、消化器癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記ドナーは腫瘍に罹患している。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は液性腫瘍である。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は固形腫瘍である。いくつかの実施形態において、上記ドナーは血液悪性腫瘍に罹患している。

【0332】

本開示の特定の態様において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ分離などの、任意且つ多数の当業者に公知の技法を使用して、対象から採取された単位血液から得ることができる。好ましい一態様において、一個体の循環血液由来の細胞はアフェレシスによって得られる。アフェレシス製剤は通常、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、その他の有核白血球を含むリンパ球；赤血球；及び血小板を含む。一態様において、アフェレシスによって収取された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、任意選択で、その後の処理ステップのために、上記細胞を適宜の緩衝液または培地中に入れておいてもよい。一実施形態において、上記細胞はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。上記に代わる実施形態において、洗浄液にはカルシウムが含まれず、マグネシウムが含まれない場合があり、全てではないにしても多くの二価陽イオンが含まれない場合がある。一態様において、Ｔ細胞は、末梢血リンパ球から、赤血球を溶解し、単球を、例えばＰＥＲＣＯＬＬ密度勾配による遠心分離または向流遠心水簸によって除去することによって単離される。

【0333】

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞は、全血から分離されたＰＢＬ、またはドナー由来のリンパ球が濃縮されたアフェレシス製剤である。いくつかの実施形態において、上記ドナーはがんに罹患している。いくつかの実施形態において、上記がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって生じる癌、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽腫（ＧＢＭを含む）、消化器癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって生じる癌、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽腫（ＧＢＭを含む）、消化器癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記ドナーは腫瘍に罹患している。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は液性腫瘍である。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は固形腫瘍である。いくつかの実施形態において、上記ドナーは血液悪性腫瘍に罹患している。いくつかの実施形態において、上記ＰＢＬは、全血またはリンパ球が濃縮されたアフェレシス製剤から、正の選択法または負の選択法を使用する、すなわち、Ｔ細胞表現型のマーカー（複数可）、例えば、ＣＤ３＋ ＣＤ４５＋を使用してＰＢＬを除去する、または非Ｔ細胞表現型細胞を除去し、ＰＢＬを残すことによって単離される。他の実施形態において、上記ＰＢＬは勾配遠心分離によって単離される。ドナーの組織由来のＰＢＬを単離したところで、適宜の数の単離ＰＢＬ（いくつかの実施形態において、おおよそ１×１０^７個のＰＢＬ）を、本明細書に記載のいずれかの方法のプライミングである第１の増殖に従って、プライミングである第１の増殖の培養物中に播種することによって、ＰＢＬのプライミングである第１の増殖を開始することができる。

【0334】

本明細書において論じ且つ概説するように、ＴＩＬは患者試料から採取され、患者に移植する前に、本明細書に記載のＴＩＬの増殖プロセスを使用して該ＴＩＬの数を拡大するように操作される。いくつかの実施形態において、上記ＴＩＬは、後述するように、任意選択で遺伝子操作されてもよい。いくつかの実施形態において、上記ＴＩＬは、増殖の前または後に凍結保存されてもよい。解凍したところで、患者に注入する前に再刺激して該ＴＩＬの代謝を高めてもよい。

【0335】

いくつかの実施形態において、この後ならびに実施例及び図において詳細に論じるように、上記プライミングである第１の増殖（本明細書において前急速増殖（前ＲＥＰ）と呼ばれるプロセス、ならびに図２ＡにステップＢとして示すプロセスを含む）は１～８日に短縮され、上記急速な第２の増殖（本明細書において急速増殖プロトコル（ＲＥＰ）と呼ばれるプロセス、ならびに図２ＡにステップＤとして示すプロセスを含む）は１～９日に短縮される。いくつかの実施形態において、この後ならびに実施例及び図において詳細に論じるように、プライミングである第１の増殖（本明細書において前急速増殖（前ＲＥＰ）と呼ばれるプロセス、ならびに図２ＡにステップＢとして示すプロセスを含む）は１～８日に短縮され、急速な第２の増殖（本明細書において急速増殖プロトコル（ＲＥＰ）と呼ばれるプロセス、ならびに図２ＡにステップＤとして示すプロセスを含む）は１～８日に短縮される。いくつかの実施形態において、この後ならびに実施例及び図において詳細に論じるように、プライミングである第１の増殖（本明細書において前急速増殖（前ＲＥＰ）と呼ばれるプロセス、ならびに図２ＡにステップＢとして示すプロセスを含む）は１～７日に短縮され、急速な第２の増殖（本明細書において急速増殖プロトコル（ＲＥＰ）と呼ばれるプロセス、ならびに図２ＡにステップＤとして示すプロセスを含む）は１～９日に短縮される。いくつかの実施形態において、この後ならびに実施例及び図において詳細に論じるように、プライミングである第１の増殖（本明細書において前急速増殖（前ＲＥＰ）と呼ばれるプロセス、ならびに図２ＡにステップＢとして示すプロセスを含む）は１～７日であり、急速な第２の増殖（本明細書において急速増殖プロトコル（ＲＥＰ）と呼ばれるプロセス、ならびに図２ＡにステップＤとして示すプロセスを含む）は１～１０日である。いくつかの実施形態において、プライミングである第１の増殖（例えば、図２ＡのステップＢとして記載される増殖）は８日に短縮され、急速な第２の増殖（例えば、図２ＡのステップＤとして記載される増殖）は７～９日である。いくつかの実施形態において、プライミングである第１の増殖（例えば、図２ＡのステップＢとして記載される増殖）は８日であり、急速な第２の増殖（例えば、図２ＡのステップＤとして記載される増殖）は８～９日である。いくつかの実施形態において、プライミングである第１の増殖（例えば、図２ＡのステップＢとして記載される増殖）は７日に短縮され、急速な第２の増殖（例えば、図２ＡのステップＤとして記載される増殖）は７～８日である。いくつかの実施形態において、プライミングである第１の増殖（例えば、図２ＡのステップＢとして記載される増殖）は８日に短縮され、急速な第２の増殖（例えば、図２ＡのステップＤとして記載される増殖）は８日である。いくつかの実施形態において、プライミングである第１の増殖（例えば、図２ＡのステップＢとして記載される増殖）は８日であり、急速な第２の増殖（例えば、図２ＡのステップＤとして記載される増殖）は９日である。いくつかの実施形態において、プライミングである第１の増殖（例えば、図２ＡのステップＢとして記載される増殖）は８日であり、急速な第２の増殖（例えば、図２ＡのステップＤとして記載される増殖）は１０日である。いくつかの実施形態において、プライミングである第１の増殖（例えば、図２ＡのステップＢとして記載される増殖）は７日間であり、急速な第２の増殖（例えば、図２ＡのステップＤとして記載される増殖）は７～１０日である。いくつかの実施形態において、プライミングである第１の増殖（例えば、図２ＡのステップＢとして記載される増殖）は７日であり、急速な第２の増殖（例えば、図２ＡのステップＤとして記載される増殖）は８～１０日である。いくつかの実施形態において、プライミングである第１の増殖（例えば、図２ＡのステップＢとして記載される増殖）は７日であり、急速な第２の増殖（例えば、図２ＡのステップＤとして記載される増殖）は９～１０日である。いくつかの実施形態において、プライミングである第１の増殖（例えば、図２ＡのステップＢとして記載される増殖）は７日に短縮され、急速な第２の増殖（例えば、図２ＡのステップＤとして記載される増殖）は７～９日である。いくつかの実施形態において、この後ならびに実施例及び図において詳細に論じるように、プライミングである第１の増殖と急速な第２の増殖との組み合わせ（例えば、図２ＡのステップＢ及びステップＤとして記載される増殖）は１４～１６日である。特に、本発明の特定の実施形態は、ＩＬ－２の存在下での抗ＣＤ３抗体、例えばＯＫＴ－３への曝露または少なくともＩＬ－２及び抗ＣＤ３抗体、例えばＯＫＴ－３の存在下での抗原への曝露によってＴＩＬが活性化される、第１の増殖ステップのプライミングを含むことが考えられる。特定の実施形態において、プライミングである第１の増殖ステップにおいて活性化されるＴＩＬは、ＴＩＬの最初の集団、すなわち初代細胞集団である。

【0336】

いくつかの実施形態において、上記ＴＩＬは、第１の増殖後且つ第２の増殖の前に保存されず、上記ＴＩＬは直接第２の増殖に移る（例えば、いくつかの実施形態において、図２Ａに示すように、ステップＢからステップＤへの移行の間に保存はされない）。いくつかの実施形態において、上記移行は、本明細書に記載されるように閉鎖型システムで行われる。いくつかの実施形態において、第１の増殖由来のＴＩＬである第２のＴＩＬ集団は、移行期間なしで第２の増殖に直接移る。

【0337】

いくつかの実施形態において、第１の増殖、例えば、図２Ａに係るステップＢは、閉鎖型システムバイオリアクター中で実施される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＴＩＬの増殖用の閉鎖型システムが使用される。いくつかの実施形態において、単一のバイオリアクターが使用される。いくつかの実施形態において、使用される上記単一のバイオリアクターは、例えばＧ－ＲＥＸ－１０またはＧ－ＲＥＸ－１００である。いくつかの実施形態において、上記閉鎖型システムバイオリアクターは単一のバイオリアクターである。

【0338】

本明細書において言及される、Ａ、Ｂ、Ｃなどの「ステップ」の呼称は、図２Ａにおける非限定的な例に関し、且つ本明細書に記載の特定の非限定的な実施形態に関する。この後及び図２Ａにおけるステップの順序は例示であり、ステップの任意の組み合わせもしくは順序、ならびに追加のステップ、ステップの繰り返し、及び／またはステップの省略は、本出願及び本明細書に開示の方法の企図するところである。

【0339】

Ａ．細胞生存率アッセイ
細胞生存率アッセイは、上記プライミングである第１の増殖（初期バルク増殖と称する場合もある）の後に、当技術分野で公知の標準的なアッセイを使用して実施することができる。したがって、特定の実施形態において、本方法は、プライミングである第１の増殖の後に細胞生存率アッセイを実施することを含む。いくつかの実施形態において、細胞生存率アッセイは、上記第２の増殖の後（例えばＲＥＰの後）、ならびに最終的な回収の後に行ってもよい。例えば、上記バルクＴＩＬの試料に対してトリパンブルー排除アッセイを行ってもよく、該アッセイでは、死細胞が選択的に標識され、生存率の評価が可能になる。生存率の試験に使用する他のアッセイとしては、Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅアッセイ及びＭＴＴアッセイを挙げることができるが、これらに限定はされない。

【0340】

１．細胞数、生存率、フローサイトメトリー
いくつかの実施形態において、細胞数及び／または生存率が測定される。ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ５６、ならびに本明細書に開示または記載のいずれかのその他のマーカーなどの、但しこれらに限定されないマーカーの発現は、例えば、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， ＳａｎＪｏｓｅ， ＣＡから市販されている抗体などの、但しこれらに限定されない抗体を用い、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定することができる。上記細胞の計数は、使い捨てのｃ－ｃｈｉｐ血球計算盤（ＶＷＲ， Ｂａｔａｖｉａ， ＩＬ）を使用し、手動で行うことができ、生存率は、トリパンブルー染色を含む、但しこれに限定されない、当技術分野で公知の任意の方法を使用して評価することができる。上記細胞生存率は、米国特許出願第１５／８６３，６３４号に基づいてアッセイすることもでき、上記特許文献はその全体が本明細書に援用される。細胞生存率は、米国特許公開第２０１８／０２８０４３６号または国際特許公開第ＷＯ／２０１８／０８１４７３号に基づいてアッセイすることもでき、これらの特許文献は共に、全ての目的に対してそれらの全体が本明細書に援用される。

【0341】

場合によっては、上記バルクＴＩＬ集団は、以下に論じるプロトコルを使用して直ちに凍結保存してもよい。あるいは、以下に論じるように、上記バルクＴＩＬ集団をＲＥＰに供し、次いで凍結保存してもよい。同様に、遺伝子組換えＴＩＬが治療に使用されることになる場合には、バルクまたはＲＥＰ ＴＩＬ集団は、適切な治療のための遺伝子組換えに供されてもよい。

【0342】

ＩＩＩ．ＴＩＬ製造プロセス（プロセス２Ａの実施形態）
これらの特徴のいくつかを含むプロセス２Ａとして知られる例示的なＴＩＬプロセスを図５に示し、プロセス１Ｃに対する本発明のこの実施形態の相違点及び利点のいくつかを図６ならびに図１１に記載する。プロセス１Ｃを、比較のために図６、７、及び１０に示す。プロセス２Ａの一実施形態を図６ならびに図５、９、１０、及び１１に示す。図１０及び１１には、例示的な２Ａプロセスを例示的な１Ｃプロセスと比較してさらに示す。

【0343】

本明細書において考察されるとおり、本発明は、患者への移植前に凍結保存ＴＩＬを再刺激することによりその代謝活性、ひいては相対的健康を増加させることに関するステップ、及び前記代謝的健康の試験方法を含み得る。概して本明細書に概説されるとおり、ＴＩＬは概して患者試料から採取し、操作することにより、患者への移植前にその数が拡大される。一部の実施形態において、ＴＩＬは任意選択で以下に考察するとおり遺伝的に操作されてもよい。

【0344】

一部の実施形態において、ＴＩＬは凍結保存され得る。解凍後、ＴＩＬは、患者への注入前に、その代謝を高めるために再刺激されてもよい。

【0345】

一部の実施形態において、以下並びに実施例及び図で詳細に考察するとおり、第１の拡大培養（プレＲＥＰと称されるプロセス及び図９にステップＡとして示されるプロセスを含む）は、３～１４日間に短縮され、第２の拡大培養（ＲＥＰと称されるプロセス及び図９にステップＢとして示されるプロセスを含む）は、７～１４日間に短縮される。一部の実施形態において、実施例で考察され、図５、６、８、９、１０、及び１１に示すとおり、第１の拡大培養（例えば、図９のステップＢとして記載される拡大培養）は１１日間に短縮され、第２の拡大培養（例えば、図９のステップＤに記載される拡大培養）は１１日間に短縮される。一部の実施形態において、以下並びに実施例及び図で詳細に考察するように、第１の拡大培養及び第２の拡大培養（例えば、図９のステップＢ及びステップＤとして記載される拡大培養）の組み合わせは２２日間に短縮される。

【0346】

以下の「ステップ」名Ａ、Ｂ、Ｃ等は、図９を参照し、且つ本明細書に記載の実施形態を参照する。以下及び図９におけるステップの順序は例示であり、ステップの任意の組み合わせ又は順序、並びに追加のステップ、ステップの繰り返し、及び／又はステップの省略が、本願及び本明細書に開示される方法によって企図される。

【0347】

Ａ．ステップＡ：患者腫瘍試料を入手する
一般に、ＴＩＬは初めは患者腫瘍試料から入手され、次に本明細書に記載されるとおりの更なる操作のためより大きい集団へと拡大培養され、任意選択で凍結保存され、本明細書に概説されるとおり再刺激され、及び任意選択でＴＩＬの健康の指標として表現型及び代謝パラメータが判定される。

【0348】

患者腫瘍試料は当該技術分野において公知の方法を用いて、概して、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、又はその他の、腫瘍とＴＩＬ細胞との混合物を含む試料を入手するための手段によって入手されてもよい。いくつかの実施形態において、複数の病巣からの試料採取（ｍｕｌｔｉｌｅｓｉｏｎａｌ ｓａｍｐｌｉｎｇ）が使用される。いくつかの実施形態において、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、またはその他の、腫瘍とＴＩＬ細胞との混合物を含む試料を得るための手段は、複数の病巣からの試料採取（すなわち、当該患者の、１つ以上の腫瘍部位及び／または位置ならびに同一の位置または極めて近接した位置の１つ以上の腫瘍から試料を得ること）を含む。一般に、腫瘍試料は、原発腫瘍、浸潤性腫瘍又は転移性腫瘍を含めた任意の固形腫瘍からであってもよい。腫瘍試料はまた、血液学的悪性腫瘍から入手された腫瘍など、液性腫瘍であってもよい。固形腫瘍は、肺組織の固形腫瘍であってもよい。いくつかの実施形態において、有用なＴＩＬは非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）から得られる。

【0349】

入手後、腫瘍試料は概して鋭的剥離を用いて１～約８ｍｍ^３の小片に断片化され、約２～３ｍｍ^３が特に有用である。いくつかの実施形態において、ＴＩＬは酵素的腫瘍消化物を使用してこれらの断片から培養される。かかる腫瘍消化物は、酵素培地（例えば、ロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ：Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）１６４０緩衝液、２ｍＭグルタミン酸塩、１０ｍｃｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０単位／ｍＬのＤＮアーゼ及び１．０ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ）中でのインキュベーションと、それに続く機械的解離（例えば、組織解離装置を用いる）によって作製されてもよい。腫瘍消化物は、腫瘍を酵素培地中に置き、腫瘍を約１分間機械的に解離した後、続いて５％ＣＯ_２下３７℃で３０分間インキュベートし、続いてごく小さい組織片しか存在しなくなるまで前述の条件下で機械的解離及びインキュベーションのサイクルを繰り返すことにより作製されてもよい。この処理の終了時、細胞懸濁液が多数の赤血球又は死細胞を含有する場合、ＦＩＣＯＬＬ分枝状親水性多糖を使用した密度勾配分離を実施して、それらの細胞を除去し得る。米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３ Ａ１号（この開示は参照により本明細書に援用される）に記載されるものなど、当該技術分野において公知の代替的な方法を用いてもよい。前述の方法のいずれも、ＴＩＬの拡大培養方法又は癌の治療方法に関して本明細書に記載される任意の実施形態において用いることができる。

【0350】

腫瘍解離酵素混合物は、コラゲナーゼ（コラゲナーゼの任意の配合物または種類を含む）、Ａｃｃｕｔａｓｅ（商標）、Ａｃｃｕｍａｘ（商標）、ヒアルロニダーゼ、中性プロテアーゼ（ディスパーゼ）、キモトリプシン、キモパパイン、トリプシン、カゼイナーゼ、エラスターゼ、パパイン、ＸＩＶ型プロテアーゼ（プロナーゼ）、デオキシリボヌクレアーゼＩ（ＤＮアーゼ）、トリプシン阻害剤、任意のその他の解離酵素またはタンパク質分解酵素、及びそれらの任意の組み合わせなどの、但しこれらに限定されない１種以上の解離（消化）酵素を含んでいてもよい。

【0351】

いくつかの実施形態において、上記解離酵素は凍結乾燥酵素から再構成される。いくつかの実施形態において、凍結乾燥酵素は、ある量のＨＢＳＳなどの無菌緩衝液中で再構成される。

【0352】

場合により、コラゲナーゼ（動物由来物を含まないコラゲナーゼ１型など）は１０ｍＬの無菌ＨＢＳＳまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥保存酵素は２８９２ＰＺ Ｕ／バイアルの濃度であってよい。いくつかの実施形態において、コラゲナーゼは、５ｍＬ～１５ｍＬの緩衝液中で再構成される。いくつかの実施形態において、再構成後に、上記コラゲナーゼの原液は、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、例えば、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約３５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約３００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２１０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２２０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２３０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２４０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２６０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２７０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２８０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２８９．２ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約３００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約３５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、または約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬの範囲である。

【0353】

いくつかの実施形態において、中性プロテアーゼは、１ｍＬの無菌ＨＢＳＳまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥保存酵素は１７５ＤＭＣ Ｕ／バイアルの濃度であってよい。いくつかの実施形態において、再構成後に、上記中性プロテアーゼの原液は、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約４００ＤＭＣ／ｍＬ、例えば、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約４００ＤＭＣ／ｍＬ、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約３５０ＤＭＣ／ｍＬ、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約３００ＤＭＣ／ｍＬ、約１５０ＤＭＣ／ｍＬ～約４００ＤＭＣ／ｍＬ、約１００ＤＭＣ／ｍＬ、約１１０ＤＭＣ／ｍＬ、約１２０ＤＭＣ／ｍＬ、約１３０ＤＭＣ／ｍＬ、約１４０ＤＭＣ／ｍＬ、約１５０ＤＭＣ／ｍＬ、約１６０ＤＭＣ／ｍＬ、約１７０ＤＭＣ／ｍＬ、約１７５ＤＭＣ／ｍＬ、約１８０ＤＭＣ／ｍＬ、約１９０ＤＭＣ／ｍＬ、約２００ＤＭＣ／ｍＬ、約２５０ＤＭＣ／ｍＬｍＬ、約３００ＤＭＣ／ｍＬ、約３５０ＤＭＣ／ｍＬ、または約４００ＤＭＣ／ｍＬの範囲である。

【0354】

いくつかの実施形態において、ＤＮアーゼＩは１ｍＬの無菌ＨＢＳＳまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥保存酵素は４ＫＵ／バイアルの濃度であった。いくつかの実施形態において、再構成後に、上記中性プロテアーゼの原液は、約１ＫＵ／ｍＬ～１０ＫＵ／ｍＬ、例えば、約１ＫＵ／ｍＬ、約２ＫＵ／ｍＬ、約３ＫＵ／ｍＬ、約４ＫＵ／ｍＬ、約５ＫＵ／ｍＬ、約６ＫＵ／ｍＬ、約７ＫＵ／ｍＬ、約８ＫＵ／ｍＬ、約９ＫＵ／ｍＬ、または約１０ＫＵ／ｍＬの範囲である。

【0355】

いくつかの実施形態において、上記酵素の原液は変動する可能性があり、濃度を測定する必要がある場合がある。いくつかの実施形態において、上記凍結乾燥保存酵素の濃度を検証してもよい。いくつかの実施形態において、消化用カクテルに添加される酵素の最終的な量は、上記測定した保存酵素の濃度に基づいて調整される。

【0356】

いくつかの実施形態において、上記酵素混合物は、約４．７ｍＬの滅菌ＨＢＳＳ中に約１０．２ｕｌの中性プロテアーゼ（０．３６ＤＭＣ Ｕ／ｍＬ）、２１．３μＬのコラゲナーゼ（１．２ＰＺ／ｍＬ）、及び２５０ｕｌのＤＮアーゼＩ（２００Ｕ／ｍＬ）を含む。

【0357】

上記に示したように、いくつかの実施形態において、上記ＴＩＬは固形腫瘍に由来する。いくつかの実施形態において、上記固形腫瘍は断片化されていない。いくつかの実施形態において、上記固形腫瘍は断片化されておらず、腫瘍全体として酵素消化に供される。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮアーゼ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で消化される。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮアーゼ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で１～２時間消化される。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮアーゼ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中、３７℃、５％ ＣＯ_２で１～２時間消化される。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮアーゼ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中、３７℃、５％ ＣＯ_２で、一定に回転させながら１～２時間消化される。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は一定に回転させながら終夜消化される。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は３７℃、５％ ＣＯ_２で、一定に回転させながら終夜消化される。いくつかの実施形態において、腫瘍全体を上記酵素と混合して、腫瘍消化反応混合物を形成する。

【0358】

いくつかの実施形態において、上記腫瘍は、無菌緩衝液中の上記凍結乾燥酵素で再構成される。いくつかの実施形態において、上記緩衝液は滅菌ＨＢＳＳである。

【0359】

いくつかの実施形態において、上記酵素混合物はコラゲナーゼを含む。いくつかの実施形態において、上記コラゲナーゼはコラゲナーゼＩＶである。いくつかの実施形態において、上記コラゲナーゼの作業用原液は、１００ｍｇ／ｍＬの１０×作業用原液である。

【0360】

いくつかの実施形態において、上記酵素混合物はＤＮアーゼを含む。いくつかの実施形態において、上記ＤＮアーゼの作業用原液は、１０，０００ＩＵ／ｍＬの１０×作業用原液である。

【0361】

いくつかの実施形態において、上記酵素混合物はヒアルロニダーゼを含む。いくつかの実施形態において、上記ヒアルロニダーゼの作業用原液は、１０ｍｇ／ｍＬの１０×作業用原液である。

【0362】

いくつかの実施形態において、上記酵素混合物は、１０ｍｇ／ｍＬ コラゲナーゼ、１０００ＩＵ／ｍＬ ＤＮアーゼ、及び１ｍｇ／ｍＬ ヒアルロニダーゼを含む。

【0363】

いくつかの実施形態において、上記酵素混合物は、１０ｍｇ／ｍＬ コラゲナーゼ、５００ＩＵ／ｍＬ ＤＮアーゼ、及び１ｍｇ／ｍＬ ヒアルロニダーゼを含む。

【0364】

一般に、採取された細胞懸濁液は「初代細胞集団」又は「新鮮に採取した」細胞集団と呼ばれる。

【0365】

一部の実施形態において、断片化は、例えば剥離並びに消化を含めた物理的断片化を含む。一部の実施形態において、断片化は物理的断片化である。一部の実施形態において、断片化は剥離である。一部の実施形態において、断片化は消化による。一部の実施形態において、ＴＩＬは初めに、患者から入手された酵素的腫瘍消化物及び腫瘍断片から培養することができる。一実施形態において、ＴＩＬは初めに、患者から入手された酵素的腫瘍消化物及び腫瘍断片から培養することができる。

【0366】

一部の実施形態において、腫瘍が固形腫瘍である場合、例えばステップＡ（図１に提供される）における腫瘍試料の入手後に、腫瘍は物理的断片化を受ける。一部の実施形態において、断片化は凍結保存前に行われる。一部の実施形態において、断片化は凍結保存後に行われる。一部の実施形態において、断片化は、腫瘍の入手後に、いかなる凍結保存もなしに行われる。一部の実施形態において、腫瘍は断片化され、第１の拡大培養用の各容器に１０、２０、３０、４０個又はそれを超える数の断片又は小片が置かれる。一部の実施形態において、腫瘍は断片化され、第１の拡大培養用の各容器に３０又は４０個の断片又は小片が置かれる。一部の実施形態において、腫瘍は断片化され、第１の拡大培養用の各容器に４０個の断片又は小片が置かれる。一部の実施形態において、複数の断片は、約４～約５０個の断片を含み、各断片は約２７ｍｍ^３の容積を有する。一部の実施形態において、複数の断片は、約１３００ｍｍ^３～約１５００ｍｍ^３の総容積を有する約３０～約６０個の断片を含む。一部の実施形態において、複数の断片は、約１３５０ｍｍ^３の総容積を有する約５０個の断片を含む。一部の実施形態において、複数の断片は、約１ｇ～約１．５ｇの総質量を有する約５０個の断片を含む。一部の実施形態において、複数の断片は、約４個の断片を含む。

【0367】

一部の実施形態において、ＴＩＬは腫瘍断片から入手される。一部の実施形態において、腫瘍断片は鋭的剥離で入手される。一部の実施形態において、腫瘍断片は約１ｍｍ^３～１０ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約１ｍｍ^３～８ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約１ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約２ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約３ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約４ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約５ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約６ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約７ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約８ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約９ｍｍ^３である。一部の実施形態において、腫瘍断片は約１０ｍｍ^３である。いくつかの実施形態において、上記腫瘍は、１～４ｍｍ×１～４ｍｍ×１～４ｍｍである。いくつかの実施形態において、腫瘍は１ｍｍ×１ｍｍ×１ｍｍである。いくつかの実施形態において、腫瘍は２ｍｍ×２ｍｍ×２ｍｍである。いくつかの実施形態において、腫瘍は３ｍｍ×３ｍｍ×３ｍｍである。いくつかの実施形態において、腫瘍は４ｍｍ×４ｍｍ×４ｍｍである。

【0368】

いくつかの実施形態において、上記腫瘍は、それぞれの小片上の出血性組織、壊死性組織、及び／または脂肪組織の量を最小限に抑えるために切除される。いくつかの実施形態において、腫瘍は、それぞれの小片上の出血性組織の量を最小限に抑えるために切除される。いくつかの実施形態において、腫瘍は、それぞれの小片上の壊死性組織の量を最小限に抑えるために切除される。いくつかの実施形態において、腫瘍は、それぞれの小片上の脂肪組織の量を最小限に抑えるために切除される。

【0369】

いくつかの実施形態において、上記腫瘍の断片化は、腫瘍の内部構造を維持するために実施される。いくつかの実施形態において、腫瘍の断片化は、外科用メスを用いた切断動作を行うことなく実施される。一部の実施形態において、ＴＩＬは腫瘍消化物から入手される。一部の実施形態では、腫瘍消化物は、酵素培地中、例えば限定はされないが、ＲＰＭＩ １６４０、２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ、１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０Ｕ／ｍＬ ＤＮアーゼ、及び１．０ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ中におけるインキュベーションと、それに続く機械的解離（ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ， ＣＡ）によって作成した。腫瘍を酵素培地に置いた後、腫瘍を約１分間機械的に解離し得る。次に溶液を５％ＣＯ_２下３７℃で３０分間インキュベートし、次にそれを再び約１分間機械的に破壊し得る。再び５％ＣＯ_２下３７℃で３０分間インキュベートした後、腫瘍を３度目に約１分間機械的に破壊し得る。一部の実施形態において、３度目の機械的破壊後に大型の組織片が存在した場合、５％ＣＯ_２下３７℃での更に３０分間のインキュベーションを伴う又は伴わない１回又は２回の更なる機械的解離を試料に適用した。一部の実施形態において、最終回のインキュベーションの終了時に細胞懸濁液が多数の赤血球又は死細胞を含有した場合、Ｆｉｃｏｌｌを使用した密度勾配分離を実施して、そうした細胞を除去し得る。

【0370】

一部の実施形態において、第１の拡大培養ステップ前の採取された細胞懸濁液は、「初代細胞集団」又は「新鮮に採取した」細胞集団と呼ばれる。

【0371】

一部の実施形態において、細胞は、以下に更に詳細に記載する、同様に図９に例示するステップＢに記載の拡大培養に進む前に、任意選択で試料採取後に凍結され、凍結貯蔵されてもよい。

【0372】

１．胸水中のＴ細胞とＴＩＬ
いくつかの実施形態において、上記試料は胸水試料である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のプロセスによる増殖のためのＴ細胞またはＴＩＬの供給源は胸水試料である。いくつかの実施形態において、上記試料は胸水由来の試料である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のプロセスによる増殖のためのＴ細胞またはＴＩＬの供給源は、胸水由来の試料である。例えば、米国特許公開第ＵＳ２０１４／０２９５４２６号に記載の方法を参照されたく、該特許文献は全ての目的に対してその全体が本明細書に援用される。

【0373】

いくつかの実施形態において、ＴＩＬを含むことが疑われる及び／もしくはＴＩＬを含む任意の胸水（ｐｌｅｕｒａｌ ｆｌｕｉｄ）または胸水（ｐｌｅｕｒａｌ ｅｆｆｕｓｉｏｎ）を使用することができる。かかる試料は、ＮＳＣＬＣもしくはＳＣＬＣなどの原発性または転移肺癌に由来する場合がある。いくつかの実施形態において、上記試料は、別の器官、例えば乳房、卵巣、結腸、または前立腺に由来する二次転移癌細胞である場合がある。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の増殖方法で使用するための試料は胸膜浸出液である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の増殖方法で使用するための試料は胸膜漏出液である。他の生物学的試料としては、例えば、腹部からの腹水または膵嚢胞液を含む、ＴＩＬを含有する他の漿液を挙げることができる。腹水と胸水は非常に類似した化学系を含んでおり、腹部及び肺が共に、悪性腫瘍の同一の問題により、胸膜腔及び腹腔内に中皮ライン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌ ｌｉｎｅｓ）及び流体形態（ｆｌｕｉｄ ｆｏｒｍｓ）を有し、かかる流体は、いくつかの実施形態においてＴＩＬを含む。その開示が胸水を例示するいくつかの実施形態において、ＴＩＬを含む腹水または他の嚢胞液を使用した同様の方法が実施され、類似の結果を得ることができる。

【0374】

いくつかの実施形態において、上記胸水は、患者から直接取り出されたままの未処理の形態である。いくつかの実施形態において、上記未処理の胸水を、接触ステップの前に、ＥＤＴＡ管またはヘパリン管などの標準的な採血管に入れる。いくつかの実施形態において、上未処理の胸水を、接触ステップの前に、標準的なＣｅｌｌＳａｖｅ（登録商標）管（Ｖｅｒｉｄｅｘ）に入れる。いくつかの実施形態において、上記試料を、生ＴＩＬの数の減少を回避するために、患者からの採取の直後にＣｅｌｌＳａｖｅ管に入れる。未処理の胸水中に放置した場合、生ＴＩＬの数は、４℃であっても２４時間以内にかなりの程度まで減少する可能性がある。いくつかの実施形態において、上記試料を、患者から取り出した後、１時間、５時間、１０時間、１５時間以内、または最長で２４時間以内に適宜の採血管に入れる。いくつかの実施形態において、上記試料を、患者から取り出した後、１時間、５時間、１０時間、１５時間、または最長で２４時間以内に４℃の適宜の採血管に入れる。

【0375】

いくつかの実施形態において、選択された対象由来の胸水試料を希釈してもよい。一実施形態において、希釈は胸水対希釈剤が１：１０である。別の実施形態において、希釈は胸水対希釈剤が１：９である。別の実施形態において、希釈は胸水対希釈剤が１：８である。別の実施形態において、希釈は胸水対希釈剤が１：５である。別の実施形態において、希釈は胸水対希釈剤が１：２である。別の実施形態において、希釈は胸水対希釈剤が１：１である。いくつかの実施形態において、希釈剤としては、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、別の緩衝液または生理学的に許容される希釈剤が挙げられる。いくつかの実施形態において、上記試料を、生ＴＩＬの減少を回避するために、患者からの採取及び希釈の直後にＣｅｌｌＳａｖｅ管に入れ、未処理の胸水中に放置した場合、上記生ＴＩＬの減少は、４℃であっても２４～４８時間以内にかなりの程度で起こる可能性がある。いくつかの実施形態において、上記胸水試料を、患者からの採取及び希釈の後、１時間、５時間、１０時間、１５時間、２４時間、３６時間以内、最長で４８時間以内に適宜の採血管に入れる。いくつかの実施形態において、胸水試料を、患者からの採取及び希釈の後、１時間、５時間、１０時間、１５時間、２４時間、３６時間以内、最長で４８時間以内に、４℃の適宜の採血管に入れる。

【0376】

さらに別の実施形態において、胸水試料は、さらなる処理ステップの前に、従来の手段によって濃縮される。いくつかの実施形態において、この胸水の前処理は、本方法を実施する実験室への輸送または後の分析のために（例えば、上記本方法の実施または分析が採取後２４～４８時間より後の場合）、当該胸水を凍結保存する必要がある状況において好ましい。いくつかの実施形態において、上記胸水試料は、対象から抜き出した後にこの胸水試料を遠心分離し、遠心分離物またはペレットを緩衝液に再懸濁することによって調製される。いくつかの実施形態において、上記胸水試料は、輸送または後の分析及び／または処理のために凍結保存される前に、複数回の遠心分離及び再懸濁に供される。

【0377】

いくつかの実施形態において、胸水試料は、さらなる処理ステップの前に、ろ過法を使用することによって濃縮される。いくつかの実施形態において、接触ステップで使用される胸水試料は、上記胸水が膜を通過することは可能であるが、腫瘍細胞は保持される、既知であり且つ本質的に均一な細孔径を含むフィルターを通して上記胸水をろ過することによって調製される。いくつかの実施形態において、上記膜中の細孔の径は少なくとも４μＭであってよい。別の実施形態において、細孔径は５μＭ以上であってよく、他の実施形態において、６、７、８、９、または１０μＭのいずれかであってよい。ろ過後に、上記膜によって保持されたＴＩＬを含む細胞は、膜から適宜の生理学的に許容される緩衝液中に洗い流されてもよい。次いで、このような方法で濃縮されたＴＩＬを含む細胞は、本方法の接触ステップに使用することができる。

【0378】

いくつかの実施形態において、胸水試料（例えば、上記未処理の胸水を含む）、希釈胸水、または再懸濁細胞ペレットを、上記試料中に存在する無核赤血球を差次的に溶解する溶解試薬と接触させる。いくつかの実施形態において、このステップは、上記胸水が実質的な数のＲＢＣを含む状況において、さらなる処理ステップの前に実施される。好適な溶解試薬としては、単一の溶解試薬、もしくは溶解試薬及びクエンチ試薬、または溶解試薬、クエンチ試薬、及び固定化試薬が挙げられる。好適な溶解システムは市販されており、該システムとしてはＢＤ Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ（商標）システム（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）が挙げられる。他の溶解システムとしては、Ｖｅｒｓａｌｙｓｅ（商標）システム、ＦＡＣＳｌｙｓｅ（商標）システム（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）、Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｐ（商標）システムもしくはＥｒｙｔｈｒｏｌｙｓｅ ＩＩシステム（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ， Ｉｎｃ．）、または塩化アンモニウムシステムが挙げられる。いくつかの実施形態において、上記溶解試薬は、胸水中の、赤血球の効率的な溶解、ならびにＴＩＬ及びＴＩＬの表現型特性の保存である主要な要件によって異なっていてもよい。溶解のために単一の試薬の使用に加えて、本明細書に記載の方法に有用な溶解システムは、第２の試薬、例えば、本方法の残りのステップ中に上記溶解試薬の効果をクエンチまたは遅延させる試薬、例えば、Ｓｔａｂｉｌｙｓｅ（商標）試薬（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ， Ｉｎｃ．）を含んでいてもよい。溶解試薬の選択または本方法の好ましい実施に応じて、従来の固定化試薬を使用してもよい。

【0379】

いくつかの実施形態において、本明細書で上記の、未処理の、希釈した、または複数回遠心分離したもしくは処理した胸水試料は、本明細書に提示するようにさらに処理される及び／または増殖される前に、約－１４０℃の温度で凍結保存される。

【0380】

Ｂ．ステップＢ：第１の拡大培養
１．幼若ＴＩＬ
一部の実施形態において、本方法は、対象／患者への投与時に複製サイクルを増加させることができる幼若ＴＩＬを得ることを提供し、したがって、成熟ＴＩＬ（即ち、被験者／患者への投与前に更に多くの回数の複製を受けたＴＩＬ）を超える追加の治療上の利点を提供し得る。幼若ＴＩＬの特徴が、文献に記載されている。例えば、Ｄｏｎｉａ， ａｔ ａｌ．， Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ７５：１５７－１６７ （２０１２）、Ｄｕｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， １６：６１２２－６１３１ （２０１０）、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ， ２８（３）：２５８－２６７ （２００５）、Ｂｅｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， １９（１７）：ＯＦ１－ＯＦ９ （２０１３）、Ｂｅｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ３２：４１５－４２３ （２００９）、Ｒｏｂｂｉｎｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００４；１７３：７１２５－７１３０、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ， ３０：１２３－１２９ （２００７）、Ｚｈｏｕ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ， ２８：５３－６２ （２００５）、及びＴｒａｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ， ３１：７４２－７５１ （２００８）であり、これらは全て、全体として参照により本明細書に援用される。

【0381】

Ｔ及びＢリンパ球の多様な抗原受容体は、限られているが多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメントＶ（可変）、Ｄ（多様性）、Ｊ（結合）、及びＣ（定数）は、免疫グロブリン及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合特異性及び下流側での適用を決定する。本発明は、Ｔ細胞レパートリーの多様性を示し、増加させるＴＩＬを生成する方法を提供する。一部の実施形態において、本方法により得られたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。一部の実施形態において、本方法によって得られたＴＩＬは、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。一部の実施形態において、図１０に例示されているように、本方法によって得られたＴＩＬは、新鮮に回収したＴＩＬ及び／又は、プロセス１Ｃと称される方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。一部の実施形態において、第１の拡大培養で得られたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。一部の実施形態において、多様性の増加は、免疫グロブリンの多様性及び／又はＴ細胞受容体の多様性の増加である。一部の実施形態において、免疫グロブリンの多様性は、免疫グロブリン重鎖にある。一部の実施形態において、免疫グロブリンの多様性は、免疫グロブリン軽鎖にある。一部の実施形態において、多様性はＴ細胞受容体にある。一部の実施形態において、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるＴ細胞受容体の１つにある。一部の実施形態において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ及び／又はベータの発現が増加する。一部の実施形態において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファの発現が増加する。一部の実施形態において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ベータの発現が増加する。一部の実施形態において、ＴＣＲａｂ（即ち、ＴＣＲα／β）の発現が増加する。

【0382】

腫瘍断片の剥離又は消化後、例えば、図９のステップＡに記載されたように、得られた細胞は、腫瘍及び他の細胞よりもＴＩＬの成長に有利な条件下で血清含有ＩＬ－２において培養される。一部の実施形態において、腫瘍消化物は、２ｍＬウェルにおいて、不活性化ヒトＡＢ血清を６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２と共に含む培地中でインキュベートされる。この初代細胞集団は、数日、概して３～１４日の期間にわたって培養され、それによりバルクＴＩＬ集団、概して約１×１０^８個のバルクＴＩＬ細胞が得られる。一部の実施形態において、この初代細胞集団は、７～１４日の期間にわたって培養され、それによりバルクＴＩＬ集団、概して約１×１０^８個のバルクＴＩＬ細胞が得られる。一部の実施形態において、この初代細胞集団は、１０～１４日の期間にわたって培養され、それによりバルクＴＩＬ集団、概して約１×１０^８個のバルクＴＩＬ細胞が得られる。一部の実施形態において、この初代細胞集団は、約１１日の期間にわたって培養され、それによりバルクＴＩＬ集団、概して約１×１０^８個のバルクＴＩＬ細胞が得られる。

【0383】

好ましい実施形態において、以下及び本明細書で説明するように、初期バルクＴＩＬ拡大培養ステップ（例えば、プレＲＥＰと称されるプロセスを含み得る図９のステップＢで説明したものなど）、その後の、以下ステップＤの下及び本明細書に記載されているように、第２の拡大培養（ステップＤ、高速拡大培養プロトコル（ＲＥＰ）ステップと称されるプロセスを含む）、その後の、任意選択の凍結保存、及びその後の第２のステップＤ（再刺激ＲＥＰステップと称されるプロセスを含む）を使用してＴＩＬの拡大培養を実施することができる。このプロセスによって得られたＴＩＬは、任意選択で、本明細書に記載されるとおり表現型特徴及び代謝パラメータが特徴付けられてもよい。

【0384】

実施形態において、ＴＩＬ培養が２４ウェルプレートで、例えばＣｏｓｔａｒ２４ウェル細胞培養クラスター、平底（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、Ｃｏｒｎｉｎｇ， ＮＹを使用して開始される場合、各ウェルには、ＩＬ－２（６０００ＩＵ／ｍＬ；Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ．、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ， ＣＡ）を含む２ｍＬの完全培地（ＣＭ）中、１×１０^６個の腫瘍消化物細胞又は１個の腫瘍断片を播種することができる。一部の実施形態において、腫瘍断片は約１ｍｍ^３～１０ｍｍ^３である。

【0385】

一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は、培養培地の略称である「ＣＭ」と称される。一部の実施形態において、ステップＢのＣＭは、１０％ヒトＡＢ血清、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、及び１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシンを添加したＧｌｕｔａＭＡＸ含有ＲＰＭＩ １６４０からなる。培養が、４０ｍＬ容量及び１０ｃｍ^２ガス透過性シリコン底のガス透過性フラスコ（例えば、Ｇ－Ｒｅｘ１０；Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ， Ｎｅｗ Ｂｒｉｇｈｔｏｎ， ＭＮ）内で開始される実施形態では（図１）、各フラスコに、１０～４０ｍＬのＩＬ－２含有ＣＭ中の１０～４０×１０^６個の腫瘍消化物生細胞又は５～３０個の腫瘍断片をロードした。Ｇ－Ｒｅｘ１０及び２４ウェルプレートのいずれも、加湿インキュベーターにおいて５％ＣＯ_２下３７℃でインキュベートし、培養開始から５日後に培地の半分を取り出して、新鮮なＣＭ及びＩＬ－２を補充し、５日目以降は２～３日毎に培地の半分を交換した。

【0386】

腫瘍断片の調製後、得られた細胞（即ち断片）は、腫瘍及び他の細胞よりもＴＩＬの成長に有利な条件下で血清含有ＩＬ－２において培養される。一部の実施形態において、腫瘍消化物は、２ｍＬウェルにおいて、不活性化ヒトＡＢ血清を６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２と共に含む培地中で（又は、ある場合には、本明細書に概説されるとおり、ａＡＰＣ細胞集団の存在下で）インキュベートされる。この初代細胞集団は、数日、概して１０～１４日の期間にわたって培養され、それによりバルクＴＩＬ集団、概して約１×１０^８個のバルクＴＩＬ細胞が得られる。一部の実施形態において、第１の拡大培養の間の成長培地はＩＬ－２又はその変異体を含む。一部の実施形態において、ＩＬは組換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）である。一部の実施形態においてＩＬ－２ストック溶液は、１ｍｇバイアルにつき２０～３０×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ－２ストック溶液は１ｍｇバイアルにつき２０×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態においてＩＬ－２ストック溶液は１ｍｇバイアルにつき２５×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態においてＩＬ－２ストック溶液は１ｍｇバイアルにつき３０×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ－２ストック溶液は４～８×１０^６ＩＵ／ｍｇのＩＬ－２の最終濃度を有する。一部の実施形態において、ＩＬ－２ストック溶液は５～７×１０^６ＩＵ／ｍｇのＩＬ－２の最終濃度を有する。一部の実施形態において、ＩＬ－２ストック溶液は６×１０^６ＩＵ／ｍｇのＩＬ－２の最終濃度を有する。一部の実施形態において、ＩＬ－２ストック溶液は実施例４に記載されるとおり調製される。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約１０，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約９，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約８，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約７，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２又は約５，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は、約９，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、乃至約５，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は、約８，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、乃至約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は、約７，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、乃至約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態において、細胞培養培地はＩＬ－２を更に含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態において、細胞培養培地はＩＬ－２を更に含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態において、細胞培養培地は、約１０００ＩＵ／ｍＬ、約１５００ＩＵ／ｍＬ、約２０００ＩＵ／ｍＬ、約２５００ＩＵ／ｍＬ、約３０００ＩＵ／ｍＬ、約３５００ＩＵ／ｍＬ、約４０００ＩＵ／ｍＬ、約４５００ＩＵ／ｍＬ、約５０００ＩＵ／ｍＬ、約５５００ＩＵ／ｍＬ、約６０００ＩＵ／ｍＬ、約６５００ＩＵ／ｍＬ、約７０００ＩＵ／ｍＬ、約７５００ＩＵ／ｍＬ、又は約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態において、細胞培養培地は、１０００～２０００ＩＵ／ｍＬ、２０００～３０００ＩＵ／ｍＬ、３０００～４０００ＩＵ／ｍＬ、４０００～５０００ＩＵ／ｍＬ、５０００～６０００ＩＵ／ｍＬ、６０００～７０００ＩＵ／ｍＬ、７０００～８０００ＩＵ／ｍＬの間、又は約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0387】

一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１４０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、又は約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。ある実施形態において、細胞培養培地はＩＬ－１５を更に含む。好ましい一実施形態において、細胞培養培地は約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

【0388】

一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約４ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約３ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、又は約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。ある実施形態において、細胞培養培地はＩＬ－２１を更に含む。好ましい一実施形態において、細胞培養培地は約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0389】

一実施形態において、上記細胞培養培地はＯＫＴ－３抗体を含む。いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。一実施形態において、細胞培養培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２．５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約７．５ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約２５ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約３５ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ、約５００ｎｇ／ｍＬ、及び約１μｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。一実施形態において、細胞培養培地は、０．１ｎｇ／ｍＬ～１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ～５ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ～１０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～２０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ～４０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。いくつかの実施形態において、細胞培養培地はＯＫＴ－３抗体を含まない。いくつかの実施形態において、上記ＯＫＴ－３抗体はムロモナブである。

【0390】

いくつかの実施形態において、上記細胞培養培地は細胞培養培地中に１種以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む。いくつかの実施形態において、上記ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、４－１ＢＢアゴニストを含む。いくつかの実施形態において、上記ＴＮＦＲＳＦアゴニストは４－１ＢＢアゴニストであり、上記４－１ＢＢアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、ＥＵ－１０１、融合タンパク質、ならびにそれらのフラグメント、誘導体、変異体、バイオシミラー、及び組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、０．１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬの細胞培養培地中の濃度を得るのに十分な濃度で添加される。いくつかの実施形態において、上記ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、２０μｇ／ｍＬ～４０μｇ／ｍＬの細胞培養培地中の濃度を得るのに十分な濃度で添加される。

【0391】

いくつかの実施形態において、上記細胞培養培地は、１種以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストに加えて、約３０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度のＩＬ－２及び約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度のＯＫＴ－３抗体をさらに含み、上記細胞培養培地は、１種以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストは４－１ＢＢアゴニストを含む。

【0392】

一部の実施形態において、第１の拡大培養培地は、培養培地（ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉａ）の略称である「ＣＭ」と称される。一部の実施形態において、これはＣＭ１（培養培地１）と称される。一部の実施形態において、ＣＭは、１０％ヒトＡＢ血清、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、及び１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシンを添加したＧｌｕｔａＭＡＸ含有ＲＰＭＩ １６４０からなる。培養が、４０ｍＬ容量及び１０ｃｍ^２ガス透過性シリコン底のガス透過性フラスコ（例えば、Ｇ－Ｒｅｘ１０；Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ、Ｎｅｗ Ｂｒｉｇｈｔｏｎ， ＭＮ）内で開始される実施形態では（図１）、各フラスコに、１０～４０ｍＬのＩＬ－２含有ＣＭ中の１０～４０×１０^６個の腫瘍消化物生細胞又は５～３０個の腫瘍断片をロードした。Ｇ－Ｒｅｘ１０及び２４ウェルプレートのいずれも、加湿インキュベーターにおいて５％ＣＯ_２下３７℃でインキュベートし、培養開始から５日後に培地の半分を取り出して、新鮮なＣＭ及びＩＬ－２を補充し、５日目以降は２～３日毎に培地の半分を交換した。一部の実施形態において、ＣＭは、実施例に記載されるＣＭ１であり、実施例５を参照のこと。一部の実施形態において、第１の拡大培養は初期細胞培養培地又は第１の細胞培養培地中で行われる。一部の実施形態において、初期細胞培養培地又は第１の細胞培養培地はＩＬ－２を含む。

【0393】

一部の実施形態において、実施例及び図で考察されているように、第１の拡大培養（例えば、プレＲＥＰと称されることもあるものを含み得る、図９のステップＢに記載されるプロセスなどを含む）プロセスは３～１４日間に短縮される。一部の実施形態において、実施例で考察し、図５、６、８、９、１０、及び１１並びに、例えば、図９のステップＢに記載されている拡大培養を含む、第１の拡大培養（例えば、プレＲＥＰと称されることもあるものを含み得る、図９のステップＢに記載されるプロセスなどを含む）は７～１４日間に短縮される。一部の実施形態において、実施例で考察し、図５、６、８、９、１０、及び１１に示すように、ステップＢの第１の拡大培養は１０～１４日間に短縮される。一部の実施形態において、実施例で考察し、図５、６、８、９、１０、及び１１、並びに、例えば、図９のステップＢに記載されている拡大培養を含む、第１の拡大培養は１１日間に短縮される。

【0394】

一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、又は１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は１日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は２日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は３日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は４日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は５日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は６日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は７日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は８日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は９日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は１０日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は１１日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は１２日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は１３日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は１日～１１日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は２日～１１日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は３日～１１日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は４日～１１日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は５日～１１日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は６日～１１日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は７日～１１日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は８日～１１日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は９日～１１日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は１０日～１１日間続行され得る。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は１１日間続行され得る。

【0395】

一部の実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／又はＩＬ－２１の組み合わせが、第１の拡大培養中の組み合わせとして用いられる。一部の実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／又はＩＬ－２１、並びにそれらの任意選択の組み合わせは、例えば、図９による、並びに本明細書に記載されているとおり、ステップＢプロセス中を含む、第１の拡大培養中に含められ得る。一部の実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の組み合わせが、第１の拡大培養中の組み合わせとして用いられる。一部の実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、並びにそれらの任意選択の組み合わせは、例えば、図９による、及び本明細書に記載されているとおりステップＢプロセス中に含められ得る。

【0396】

一部の実施形態において、図で考察されているように、第１の拡大培養（例えば、プレＲＥＰと称される、図９のステップＢに記載されるプロセスなどを含む）プロセスは３～１４日間に短縮される。一部の実施形態において、図５、６、８、９、１０、及び１１に示すように、ステップＢの第１の拡大培養は７～１４日間に短縮される。一部の実施形態において、図５、６、８、９、１０、及び１１に示すように、ステップＢの第１の拡大培養は１０～１４日間に短縮される。一部の実施形態において、図５、６、８、９、１０、及び１１に示すように、第１の拡大培養は１１日間に短縮される。

【0397】

一部の実施形態において、第１の拡大培養、例えば、図９によるステップＢは、閉鎖系バイオリアクターで実施される。一部の実施形態において、本明細書で記載されるとおり、ＴＩＬ拡大培養のために閉鎖系が用いられる。一部の実施形態において、単一のバイオリアクターが用いられる。一部の実施形態において、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１０又はＧ－ＲＥＸ－１００である。一部の実施形態において、閉鎖系バイオリアクターは単一のバイオリアクターである。

【0398】

１．サイトカイン及びその他の添加物
本明細書に記載の増殖方法は、一般に、当技術分野で公知のとおり、高用量のサイトカイン、特にＩＬ－２を含む培地を使用する。

【0399】

あるいは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１７／０１０７４９０Ａ１（該特許文献の開示は本明細書に援用される）に記載されるように、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の２種以上の組み合わせを用いたサイトカインの組み合わせを、ＴＩＬの急速増殖及び／または第２の増殖に使用することがさらに可能である。従って、例えば、可能性のある組み合わせとしては、ＩＬ－２とＩＬ－１５、ＩＬ－２とＩＬ－２１、ＩＬ－１５とＩＬ－２１とＩＬ－２、またはＩＬ－１５とＩＬ－２１が挙げられ、後者は多くの実施形態において特に使用される。サイトカインの組み合わせの使用は、上記特許文献に記載されるように、リンパ球、特にＴ細胞の生成に特に好都合である。

【0400】

一実施形態において、ステップＢはまた、本明細書の他所に記載されるように、培地にＯＫＴ－３抗体またはムロモナブを添加することを含んでいてもよい。一実施形態において、ステップＢはまた、本明細書の他所に記載されるように、培地に４－１ＢＢアゴニストを添加することを含んでいてもよい。一実施形態において、ステップＢはまた、本明細書の他所に記載されるように、培地にＯＸ－４０アゴニストを添加することを含んでいてもよい。他の実施形態において、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０３０７７９６Ａ１（該特許文献の開示は本明細書に援用される）に記載されるように、ステップＢ中に、チアゾリシンジオン化合物などの増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）－ガンマアゴニストを含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーターＩ－アルファアゴニストなどの添加剤を使用してもよい。

【0401】

Ｃ．ステップＣ：第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行
ある場合には、例えば、図９に示されるように、例えばステップＢから得られるＴＩＬ集団を含む、第１の拡大培養から得られるバルクＴＩＬ集団は、以下本明細書で考察されるプロトコルを使用して、直ちに凍結保存してもよい。或いは、第２のＴＩＬ集団と称される第１の拡大培養から得られたＴＩＬ集団は、第２の拡大培養（ＲＥＰと呼ばれることがある拡大培養を含み得る）に供し、その後、以下で考察するように凍結保存してもよい。同様に、遺伝子修飾ＴＩＬが治療に使用される場合、第１のＴＩＬ集団（バルクＴＩＬ集団と称されることもある）又は、第２のＴＩＬ集団（一部の実施形態において、ＲＥＰ ＴＩＬ集団と称される集団を含み得る）は、拡大培養の前又は、第１の拡大培養の後で第２の拡大培養の前に、適切な処置のために遺伝子修飾に供してもよい。

【0402】

一部の実施形態において、第１の拡大培養から（例えば、図９に示されるとおりのステップＢから）入手されたＴＩＬは、選択のためのフェノタイピングまで貯蔵される。一部の実施形態において、第１の拡大培養から（例えば、図９に示されるとおりのステップＢから）入手されたＴＩＬは、貯蔵されず第２の拡大培養に直接進む。一部の実施形態において、第１の拡大培養から入手されたＴＩＬは、第１の拡大培養後、第２の拡大培養前に凍結保存されない。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから約３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、又は１４日の時点で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから約３日～１４日の時点で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから約４日～１４日の時点で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから約４日～１０日の時点で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから約７日～１４日の時点で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから約１４日の時点で行われる。

【0403】

一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、又は１４日の時点で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから１日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１のＴＩＬ拡大培養は２日～１４日間続行され得る。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから３日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから４日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから５日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから６日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから７日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから８日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから９日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから１０日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから１１日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから１２日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから１３日～１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから１４日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから１日～１１日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから２日～１１日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから３日～１１日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから４日～１１日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから５日～１１日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから６日～１１日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから７日～１１日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから８日～１１日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから９日～１１日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから１０日～１１日で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、断片化が行われたときから１１日で行われる。

【0404】

一部の実施形態において、ＴＩＬは第１の拡大培養の後、第２の拡大培養の前に貯蔵されず、ＴＩＬは第２の拡大培養に直接進む（例えば、一部の実施形態において、図９に示すように、ステップＢからステップＤへの移行中に貯蔵は行われない）。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおり、移行は閉鎖系で行われる。一部の実施形態において、第１の拡大培養からのＴＩＬは、第２のＴＩＬ集団からのＴＩＬであり、移行期間を伴わず第２の拡大培養に直接進む。

【0405】

一部の実施形態において、第１の拡大培養から第２の拡大培養への移行は、例えば、図９によるステップＣは、閉鎖系バイオリアクターで実施される。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおり、ＴＩＬ拡大培養のために閉鎖系が用いられる。一部の実施形態において、単一のバイオリアクターが用いられる。一部の実施形態において、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１０又はＧ－ＲＥＸ－１００である。一部の実施形態において、閉鎖系バイオリアクターは単一のバイオリアクターである。

【0406】

Ｄ．ステップＤ： 第２の拡大培養
一部の実施形態において、ＴＩＬ細胞集団は、例えば、図９に記載のとおり、ステップＡ及びステップＢ、並びにステップＣと称される移行後、回収及び初期バルク処理の後、数が増加する）。この更なる増加は、本明細書では第２の拡大培養と称され、これは、当該技術分野で一般に迅速拡大培養プロセスと称される拡大培養プロセス（ＲＥＰ、並びに図９のステップＤに示されるプロセス）を含み得る。第２の拡大培養は、概して、フィーダー細胞、サイトカイン源、及び抗ＣＤ３抗体を含め、幾つもの成分を含むガス透過性容器内の培養培地を使用して達成することができる。

【0407】

一部の実施形態において、ＴＩＬの第２の拡大培養又は第２のＴＩＬ拡大培養（これはＲＥＰと称されることもある拡大培養；並びに図９のステップＤに示されるプロセスを含み得る）は、当業者に公知の任意のＴＩＬフラスコ又は容器を使用して実施することができる。一部の実施形態において、第２のＴＩＬ拡大培養は７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、又は１４日間続行し得る。一部の実施形態において、第２のＴＩＬ拡大培養は約７日～約１４日間続行し得る。一部の実施形態において、第２のＴＩＬ拡大培養は約８日～約１４日間続行し得る。一部の実施形態において、第２のＴＩＬ拡大培養は約９日～約１４日間続行し得る。一部の実施形態において、第２のＴＩＬ拡大培養は約１０日～約１４日間続行し得る。一部の実施形態において、第２のＴＩＬ拡大培養は約１１日～約１４日間続行し得る。一部の実施形態において、第２のＴＩＬ拡大培養は約１２日～約１４日間続行し得る。一部の実施形態において、第２のＴＩＬ拡大培養は約１３日～約１４日間続行し得る。一部の実施形態において、第２のＴＩＬ拡大培養は約１４日間続行し得る。

【0408】

ある実施形態において、第２の拡大培養は、本開示の方法（例えば、ＲＥＰと呼ばれる拡大培養、並びに図９のステップＤに示されるプロセスを含む）を使用して、ガス透過性容器内で実施することができる。例えば、ＴＩＬは、インターロイキン－２（ＩＬ－２）又はインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）の存在下で非特異的Ｔ細胞受容体刺激を用いて迅速に拡大培養することができる。非特異的Ｔ細胞受容体刺激としては、例えば、約３０ｎｇ／ｍｌのＯＫＴ３などの抗ＣＤ３抗体、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ， Ｒａｒｉｔａｎ， ＮＪ又はＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ， Ａｕｂｕｒｎ， ＣＡから市販されている）又は、ＵＨＣＴ－１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ， ＵＳＡから市販されている）を挙げることができる。ＴＩＬは、任意選択で３００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２又はＩＬ－１５など、Ｔ細胞成長因子の存在下で、ヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペプチド、例えば、０．３μΜ ＭＡＲＴ－１：２６－３５（２７Ｌ）又はｇｐｌ ００：２０９－２１７（２１０Ｍ）など、任意選択でベクターから発現させることのできる、１つ又は複数のエピトープなど、その抗原性部分を含めたがんの１つ以上の抗原を、第２の拡大培養の間に含めることにより、インビトロでのＴＩＬの更なる刺激を誘発するように拡大培養することができる。他の好適な抗原としては、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼ癌抗原、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＳＳＸ－２、及びＶＥＧＦＲ２、又はその抗原性部分を挙げることができる。ＴＩＬはまた、ＨＬＡ－Ａ２発現抗原提示細胞にパルスしたがんの同じ１つ又は複数の抗原による再刺激によっても迅速に拡大培養し得る。或いは、ＴＩＬは、例えば照射自己リンパ球によるか、又は照射ＨＬＡ－Ａ２＋同種異系リンパ球及びＩＬ－２によって更に再刺激することができる。一部の実施形態において、再刺激は、第２の拡大培養の一部として生じる。一部の実施形態において、放射線照射された自己リンパ球の存在下で、又は放射線照射されたＨＬＡ－Ａ２＋同種リンパ球及びＩＬ－２とともに第２の拡大培養が発生する。

【0409】

ある実施形態において、細胞培養培地はＩＬ－２を更に含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態において、細胞培養培地は、約１０００ＩＵ／ｍＬ、約１５００ＩＵ／ｍＬ、約２０００ＩＵ／ｍＬ、約２５００ＩＵ／ｍＬ、約３０００ＩＵ／ｍＬ、約３５００ＩＵ／ｍＬ、約４０００ＩＵ／ｍＬ、約４５００ＩＵ／ｍＬ、約５０００ＩＵ／ｍＬ、約５５００ＩＵ／ｍＬ、約６０００ＩＵ／ｍＬ、約６５００ＩＵ／ｍＬ、約７０００ＩＵ／ｍＬ、約７５００ＩＵ／ｍＬ、又は約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態において、細胞培養培地は、１０００～２０００ＩＵ／ｍＬ、２０００～３０００ＩＵ／ｍＬ、３０００～４０００ＩＵ／ｍＬ、４０００～５０００ＩＵ／ｍＬ、５０００～６０００ＩＵ／ｍＬ、６０００～７０００ＩＵ／ｍＬ、７０００～８０００ＩＵ／ｍＬ、又は８０００ＩＵ／ｍＬの間のＩＬ－２を含む。

【0410】

ある実施形態において、細胞培養培地はＯＫＴ３抗体を含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体を含む。ある実施形態において、細胞培養培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２．５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約７．５ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約２５ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約３５ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ、約５００ｎｇ／ｍＬ、及び約１μｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体を含む。ある実施形態において、細胞培養培地は、０．１ｎｇ／ｍＬ～１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ～５ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ～１０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～２０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ～４０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、及び５０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体を含む。

【0411】

一部の実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／又はＩＬ－２１の組み合わせが、第２の拡大培養中の組み合わせとして用いられる。一部の実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／又はＩＬ－２１、並びにそれらの任意選択の組み合わせは、例えば、図９による、並びに本明細書に記載されているとおり、ステップＤプロセス中を含む、第２の拡大培養中に含められ得る。一部の実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の組み合わせが、第２の拡大培養中の組み合わせとして用いられる。一部の実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、並びにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図９による、及び本明細書に記載されているとおり、ステップＤプロセス中に含められ得る。

【0412】

一部の実施形態において、第２の拡大培養は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示フィーダー細胞を含む添加細胞培養培地で実施されてもよい。一部の実施形態において、第２の拡大培養は添加細胞培養培地で行われる。一部の実施形態において、添加細胞培養培地は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示フィーダー細胞を含む。一部の実施形態において、第２の細胞培養培地は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ；抗原提示フィーダー細胞とも称される）を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示フィーダー細胞を含む細胞培養培地で生じる（即ち、抗原提示細胞）。

【0413】

一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１４０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、又は約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。ある実施形態において、細胞培養培地はＩＬ－１５を更に含む。好ましい一実施形態において、細胞培養培地は約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

【0414】

一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約４ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約３ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、又は約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、第２の拡大培養培地は約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。ある実施形態において、細胞培養培地はＩＬ－２１を更に含む。好ましい一実施形態において、細胞培養培地は約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0415】

一部の実施形態において、抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）はＰＢＭＣである。ある実施形態において、迅速拡大培養及び／又は第２の拡大培養におけるＴＩＬとＰＢＭＣ及び／又は抗原提示細胞との比は、約１対２５、約１対５０、約１対１００、約１対１２５、約１対１５０、約１対１７５、約１対２００、約１対２２５、約１対２５０、約１対２７５、約１対３００、約１対３２５、約１対３５０、約１対３７５、約１対４００、又は約１対５００である。ある実施形態において、迅速拡大培養及び／又は第２の拡大培養におけるＴＩＬとＰＢＭＣとの比は１対５０～１対３００である。ある実施形態において、迅速拡大培養及び／又は第２の拡大培養におけるＴＩＬとＰＢＭＣとの比は１対１００～１対２００である。

【0416】

一実施形態において、ＲＥＰ及び／又は第２の拡大培養は、バルクＴＩＬを１５０ｍｌ培地中の１００倍又は２００倍過剰の不活性化フィーダー細胞、３０ｍｇ／ｍＬ ＯＫＴ３抗ＣＤ３抗体及び３０００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２と混合してフラスコ内で実施される。細胞を別の成長チャンバに移すまで培地補充が行われる（概して新鮮培地による呼吸を介した３分の２の培地補充）。別の成長チャンバには、以下に更に十分に考察するとおりのＧ－ＲＥＸフラスコ及びガス透過性容器が含まれる。

【0417】

一部の実施形態において、第２の拡大培養（ＲＥＰプロセスと称されるプロセスを含み得る）は、実施例及び図で考察されるように、７～１４日間に短縮される。一部の実施形態において、第２の拡大培養は１１日間に短縮される。

【0418】

ある実施形態において、ＲＥＰ及び／又は第２の拡大培養は、前述のように（Ｔｒａｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００８， ３１， ７４２－５１；Ｄｕｄｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３， ２６， ３３２－４２）Ｔ－１７５フラスコ及びガス透過性バッグ又はガス透過性培養器具（Ｇ－Ｒｅｘフラスコ）を使用して実施してもよい。一部の実施形態において、第２の拡大培養（迅速拡大培養と称される拡大培養を含む）は、Ｔ－１７５フラスコで実施され、１５０ｍＬの培地に懸濁した約１×１０^６個のＴＩＬを各Ｔ－１７５フラスコに加えてもよい。ＴＩＬは、ＩＬ－２の３０００ＩＵ／ｍＬ及び抗ＣＤ３の３０ｎｇ／ｍＬを添加したＣＭ及びＡＩＭ－Ｖ培地の１対１の混合物で培養してもよい。Ｔ－１７５フラスコは５％ＣＯ_２下３７℃でインキュベートしてもよい。培地の半分は、５日目に、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む５０／５０培地を使用して交換されてもよい。一部の実施形態において、７日目に、２つのＴ－１７５フラスコからの細胞を３Ｌバッグに合わせることができ、その３００ｍＬのＴＩＬ懸濁液に、５％ヒトＡＢ血清及び３０００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２を含む３００ｍＬのＡＩＭ Ｖを加えた。毎日又は２日毎に各バッグの細胞数をカウントし、新鮮培地を加えて細胞数を０．５～２．０×１０^６細胞／ｍＬに保った。

【0419】

一実施形態において、第２の拡大培養（これはＲＥＰと称される拡大培養；並びに図９のステップＤに称されるものを含み得る）は、１００ｃｍガス透過性シリコン底の５００ｍＬ容量ガス透過性フラスコ（Ｇ－Ｒｅｘ １００、Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｎｅｗ Ｂｒｉｇｈｔｏｎ， ＭＮ， ＵＳＡから市販されている）において実施され得、５％ヒトＡＢ血清、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２及び３０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）を添加した４００ｍＬの５０／５０培地中で５×１０^６又は１０×１０^６個のＴＩＬをＰＢＭＣと培養し得る。Ｇ－Ｒｅｘ １００フラスコは５％ＣＯ_２下３７℃でインキュベートし得る。５日目、２５０ｍＬの上清を取り出して遠心ボトルに入れ、１５００ｒｐｍ（４９１×ｇ）で１０分間遠心し得る。５％ヒトＡＢ血清、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬの新鮮培地にＴＩＬペレットを再懸濁し、元のＧ－Ｒｅｘ １００フラスコに戻し加え得る。Ｇ－Ｒｅｘ １００フラスコ内でＴＩＬを連続的に拡大培養するときは、７日目に各Ｇ－Ｒｅｘ １００のＴＩＬを各フラスコ内に存在する３００ｍＬの培地に懸濁してもよく、及び細胞懸濁液を３つの１００ｍＬアリコートに分割してもよく、それらを３つのＧ－Ｒｅｘ １００フラスコの播種に使用し得る。次に、５％ヒトＡＢ血清及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ－Ｖを各フラスコに加え得る。Ｇ－Ｒｅｘ １００フラスコは５％ＣＯ_２下３７℃でインキュベートしてもよく、４日後、各Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコに３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ－Ｖを加え得る。細胞は培養１４日目に回収し得る。

【0420】

一実施形態において、第２の拡大培養（ＲＥＰと称される拡大培養を含む）は、バルクＴＩＬを１５０ｍｌ培地中の１００倍又は２００倍過剰の不活性化フィーダー細胞、３０ｍｇ／ｍＬ ＯＫＴ３抗ＣＤ３抗体及び３０００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２と混合してフラスコ内で実施される。一部の実施形態において、細胞が別の成長チャンバに移されるまで培地交換が行われる。一部の実施形態において、培地の２／３が新鮮培地による呼吸に置き換えられる。一部の実施形態において、別の成長チャンバには、以下に更に十分に考察するとおりのＧ－ＲＥＸフラスコ及びガス透過性容器が含まれる。

【0421】

一実施形態において、第２の拡大培養（ＲＥＰと称される拡大培養を含む）が実施され、これは優れた腫瘍応答性に関してＴＩＬを選択するステップを更に含む。当該技術分野において公知の任意の選択方法を用いることができる。例えば、米国特許出願公開第２０１６／００１００５８ Ａ１号（この開示は参照により本明細書に援用される）に記載される方法が、優れた腫瘍応答性に関するＴＩＬの選択に用いられてもよい。

【0422】

任意選択で、第２の拡大培養（ＲＥＰ拡大培養と称される拡大培養を含む）の後に、当該技術分野において公知の標準アッセイを用いて細胞生存率アッセイを実施することができる。例えば、バルクＴＩＬの試料に対してトリパンブルー色素排除アッセイを行うことができ、これは死細胞を選択的に標識して生存率の評価を可能にするものである。一部の実施形態では、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｋ２自動セルカウンター（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｌａｗｒｅｎｃｅ， ＭＡ）を使用してＴＩＬ試料をカウントし、生存率を決定することができる。一部の実施形態では、生存率は、例えば実施例１５に記載されるＣｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｋ２ Ｉｍａｇｅ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ自動セルカウンタープロトコルに従い決定される。

【0423】

一部の実施形態において、ＴＩＬの第２の拡大培養（ＲＥＰと称される拡大培養を含む）は、先述のとおりＴ－１７５フラスコ及びガス透過性バッグ（Ｔｒａｎ ＫＱ， Ｚｈｏｕ Ｊ， Ｄｕｒｆｌｉｎｇｅｒ ＫＨ， ｅｔ ａｌ．， ２００８， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．， ３１：７４２－７５１及びＤｕｄｌｅｙ ＭＥ， Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈ ＪＲ， Ｓｈｅｌｔｏｎ ＴＥ， ｅｔ ａｌ． ２００３， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．， ２６：３３２－３４２）又はガス透過性Ｇ－Ｒｅｘフラスコを使用して実施することができる。一部の実施形態において、第２の拡大培養はフラスコを使用して実施される。一部の実施形態において、第２の拡大培養はガス透過性Ｇ－Ｒｅｘフラスコを使用して実施される。一部の実施形態において、Ｔ－１７５フラスコで実施される第２の拡大培養、及び約１×１０^６個のＴＩＬを約１５０ｍＬの培地中に懸濁し、これを各Ｔ－１７５フラスコに加える。ＴＩＬは、「フィーダー」細胞としての照射（５０Ｇｙ）された同種異系ＰＢＭＣと１対１００の比で培養し、及び細胞は、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３を添加したＣＭとＡＩＭ－Ｖ培地との１対１混合物（５０／５０培地）で培養した。Ｔ－１７５フラスコは５％ＣＯ_２下３７℃でインキュベートする。一部の実施形態において、培地の半分は、５日目に３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む５０／５０培地を使用して交換される。一部の実施形態において、７日目、２つのＴ－１７５フラスコからの細胞を３Ｌバッグに合わせ、その３００ｍＬのＴＩＬ懸濁液に、５％ヒトＡＢ血清及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む３００ｍＬのＡＩＭ－Ｖを加える。毎日又は２日毎に各バッグの細胞数をカウントしてもよく、新鮮培地を加えて細胞数を約０．５～約２．０×１０^６細胞／ｍＬに保ち得る。

【0424】

一部の実施形態において、第２の拡大培養（ＲＥＰと称される拡大培養を含む）は、１００ｃｍ^２ガス透過性シリコン底の５００ｍＬ容量フラスコ（Ｇ－Ｒｅｘ １００， Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ）において実施され（図１）、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３を添加した４００ｍＬの５０／５０培地中で約５×１０^６又は１０×１０^６個のＴＩＬを照射同種異系ＰＢＭＣと１対１００の比で培養する。Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコは５％ＣＯ_２下３７℃でインキュベートされる。一部の実施形態において、５日目に、２５０ｍＬの上清を取り出して遠心ボトルに入れ、１５００ｒｐｍ（４９１ｇ）で１０分間遠心する。次に３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬの新鮮５０／５０培地にＴＩＬペレットを再懸濁し、元のＧ－Ｒｅｘ１００フラスコに加え戻し得る。ＴＩＬがＧ－Ｒｅｘ１００フラスコ内で連続的に拡大培養される実施形態では、７日目に各Ｇ－Ｒｅｘ１００内のＴＩＬを各フラスコ内に存在する３００ｍＬの培地に懸濁し、及び細胞懸濁液を３つの１００ｍＬアリコートに分割しており、それらを３つのＧ－Ｒｅｘ１００フラスコの播種に使用される。次に、５％ヒトＡＢ血清及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ－Ｖを各フラスコに加える。Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコは５％ＣＯ_２下３７℃でインキュベートされ、４日後、各Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコに３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ－Ｖを加える。細胞は培養１４日目に回収される。

【0425】

Ｔ及びＢリンパ球の多様な抗原受容体は、限られているが多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメントＶ（可変）、Ｄ（多様性）、Ｊ（結合）、及びＣ（定数）は、免疫グロブリン及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合特異性及び下流側での適用を決定する。本発明は、Ｔ細胞レパートリーの多様性を示し、増加させるＴＩＬを生成する方法を提供する。一部の実施形態において、本方法により得られたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。一部の実施形態において、第２の拡大培養で得られたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。一部の実施形態において、多様性の増加は、免疫グロブリンの多様性及び／又はＴ細胞受容体の多様性の増加である。一部の実施形態において、免疫グロブリンの多様性は、免疫グロブリン重鎖にある。一部の実施形態において、免疫グロブリンの多様性は、免疫グロブリン軽鎖にある。一部の実施形態において、多様性はＴ細胞受容体にある。一部の実施形態において、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるＴ細胞受容体の１つにある。一部の実施形態において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ及び／又はベータの発現が増加する。一部の実施形態において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファの発現が増加する。一部の実施形態において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ベータの発現が増加する。一部の実施形態において、ＴＣＲａｂ（即ち、ＴＣＲα／β）の発現が増加する。

【0426】

一部の実施形態において、第２の拡大培養培地（例えば、ＣＭ２又は第２の細胞培養培地と称されることもある）は、以下で更に詳細に考察するとおり、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、並びに抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）を含む。

【0427】

一部の実施形態において、第２の拡大培養、例えば、図９によるステップＤは、閉鎖系バイオリアクターで実施される。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおり、ＴＩＬ拡大培養のために閉鎖系が用いられる。一部の実施形態において、単一のバイオリアクターが用いられる。一部の実施形態において、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ －１０又はＧ－ＲＥＸ －１００である。一部の実施形態において、閉鎖系バイオリアクターは単一のバイオリアクターである。

【0428】

１．フィーダー細胞及び抗原提示細胞
一実施形態では、本明細書に記載の第２の拡大培養手順（例えば、図９のステップＤに記載された拡大培養、並びにＲＥＰと称される拡大培養を含む）は、ＲＥＰ ＴＩＬ拡大培養中及び／又は第２の拡大培養中に過剰量のフィーダー細胞が必要である。多くの実施形態において、フィーダー細胞は、健常供血者からの標準的な全血ユニットから入手される末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配分離などの標準方法を用いて入手される。

【0429】

一般に、同種異系ＰＢＭＣは、照射又は熱処理のいずれかにより不活性化され、実施例、特に放射線照射された同種異系ＰＢＭＣの複製不能性を評価するための例示的なプロトコルを提供する実施例１４に記載されるように、ＲＥＰ手順で使用される。

【0430】

一部の実施形態において、１４日目の生細胞の総数がＲＥＰの０日目及び／又は第２の拡大培養の０日目に培養（即ち、第２の拡大培養の開始日）に移行した初期の生細胞数より少ない場合、ＰＢＭＣは複製不能とみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡大培養手順での使用が認められる。例えば、実施例１４を参照のこと。

【0431】

一部の実施形態において、ＯＫＴ３及びＩＬ－２の存在下で培養された生細胞の総数が、７日目及び１４日目に、ＲＥＰの０日目及び／又は第２の拡大培養の０日目（即ち、第２の拡大培養の開始日）に培養に移行した初期の生細胞数から増加していない場合、ＰＢＭＣは複製不能とみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡大培養手順での使用が認められる。一部の実施形態において、ＰＢＭＣは、３０ｎｇ／ｍｌのＯＫＴ３抗体及び３０００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２の存在下で培養される。例えば、実施例１３を参照のこと。

【0432】

一部の実施形態において、ＯＫＴ３及びＩＬ－２の存在下で培養された生細胞の総数が、７日目及び１４日目に、ＲＥＰの０日目及び／又は第２の拡大培養の０日目（即ち、第２の拡大培養の開始日）に培養に移行した初期の生細胞数から増加していない場合、ＰＢＭＣは複製不能とみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡大培養手順での使用が認められる。一部の実施形態において、ＰＢＭＣは、５～６０ｎｇ／ｍｌのＯＫＴ３抗体及び１０００～６０００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２の存在下で培養される。一部の実施形態において、ＰＢＭＣは、１０～５０ｎｇ／ｍｌのＯＫＴ３抗体及び２０００～５０００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２の存在下で培養される。一部の実施形態において、ＰＢＭＣは、２０～４０ｎｇ／ｍｌのＯＫＴ３抗体及び２０００～４０００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２の存在下で培養される。一部の実施形態において、ＰＢＭＣは、２５～３５ｎｇ／ｍｌのＯＫＴ３抗体及び２５００～３５００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２の存在下で培養される。

【0433】

一部の実施形態において、抗原提示フィーダー細胞はＰＢＭＣである。一部の実施形態において、抗原提示フィーダー細胞は人工抗原提示フィーダー細胞である。ある実施形態において、第２の拡大培養におけるＴＩＬと抗原提示フィーダー細胞との比は、約１対２５、約１対５０、約１対１００、約１対１２５、約１対１５０、約１対１７５、約１対２００、約１対２２５、約１対２５０、約１対２７５、約１対３００、約１対３２５、約１対３５０、約１対３７５、約１対４００、又は約１対５００である。ある実施形態において、第２の拡大培養におけるＴＩＬと抗原提示フィーダー細胞との比は１対５０～１対３００である。ある実施形態において、第２の拡大培養におけるＴＩＬと抗原提示フィーダー細胞との比は１対１００～１対２００である。

【0434】

ある実施形態において、本明細書に記載の第２の拡大培養手順は、約２．５×１０^９個のフィーダー細胞と約１００×１０^６個のＴＩＬとの比を必要とする。別の実施形態において、本明細書に記載の第２の拡大培養手順は、約２．５×１０^９個のフィーダー細胞と約５０×１０^６個のＴＩＬとの比を必要とする。更に別の実施形態において、本明細書に記載の第２の拡大培養手順は、約２．５×１０^９個のフィーダー細胞と約２５×１０^６個のＴＩＬを必要とする。

【0435】

ある実施形態において、本明細書に記載の第２の拡大培養手順は、第２の拡大培養中に過剰量のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態において、フィーダー細胞は、健常供血者からの標準的な全血ユニットから入手される末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配分離などの標準方法を用いて入手される。ある実施形態では、ＰＢＭＣの代わりに人工抗原提示（ａＡＰＣ）細胞が使用される。

【0436】

一般に、同種異系ＰＢＭＣは、照射又は熱処理のいずれかによって不活性化され、図５、６、８、９、１０、及び１１に記載された例示的な手順を含む、本明細書に記載されたＴＩＬ拡大培養手順で使用される。

【0437】

ある実施形態において、人工抗原提示細胞は、ＰＢＭＣの代替として、又はそれと組み合わせて、第２の拡大培養で使用される。

【0438】

２．サイトカイン
本明細書に記載の拡大培養方法は、一般に、当該技術分野において公知のとおり、高用量のサイトカイン、特にＩＬ－２を含む培養培地を使用する。

【0439】

或いは、ＴＩＬの迅速拡大培養又は第２の拡大培養にサイトカインの組み合わせを使用することが更に可能であり、ＩＬ－２、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１のうちの２つ以上の組み合わせについては、概して国際公開第２０１５／１８９３５６号及び国際公開第２０１５／１８９３５７号（本明細書によって全体として参照により明示的に援用される）に概説されるとおりである。従って、可能な組み合わせとしては、ＩＬ－２とＩＬ－１５、ＩＬ－２とＩＬ－２１、ＩＬ－１５とＩＬ－２１とＩＬ－２、ＩＬ－１５とＩＬ－２１が挙げられ、後者には多くの実施形態において特定の使用が見出される。これらの明細書に記載されるとおり、サイトカインの組み合わせを使用することは、特にリンパ球、詳細にはＴ細胞の生成に有利である。

【0440】

３．抗ＣＤ３抗体
一部の実施形態において、本明細書に記載の拡大培養方法で使用される培養培地（ＲＥＰと称されるものを含み、例えば、図９を参照のこと）は、抗ＣＤ３抗体も含む。抗ＣＤ３抗体をＩＬ－２と併用すると、ＴＩＬ集団においてＴ細胞活性化及び細胞分裂が誘導される。この効果は完全長抗体並びにＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片で見ることができ、前者が概して好ましい；例えば、Ｔｓｏｕｋａｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８５， １３５， １７１９（本明細書によって全体として参照により援用される）を参照のこと。

【0441】

当業者は理解するであろうとおり、本発明において使用が見出される好適な抗ヒトＣＤ３抗体は、限定はされないが、ネズミ科動物、ヒト、霊長類、ラット、及びイヌ科動物抗体を含めた、様々な哺乳類からの抗ヒトＣＤ３ポリクローナル及びモノクローナル抗体を含め、幾つも存在する。詳細な実施形態では、ＯＫＴ３抗ＣＤ３抗体が使用される（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ， Ｒａｒｉｔａｎ， ＮＪ又はＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ， Ａｕｂｕｒｎ， ＣＡから市販されている）。

【0442】

Ｅ．ステップＥ：ＴＩＬを回収する
第２の拡大培養ステップの後、細胞は回収することができる。一部の実施形態において、ＴＩＬは、例えば、図９に提供されるとおり、１、２、３、４回又はそれ以上の拡大培養ステップの後に回収される。一部の実施形態において、ＴＩＬは、例えば、図９に提供されるとおり、２回の拡大培養ステップの後に回収される。

【0443】

ＴＩＬは、例えば遠心によることを含め、任意の適切な且つ無菌の方法で回収することができる。ＴＩＬ回収方法は当該技術分野において周知であり、本プロセスと共に任意のかかる公知の方法を用いることができる。一部の実施形態において、ＴＩＬは自動化系を使用して回収される。

【0444】

セルハーベスター及び／又は細胞処理系は、例えば、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ、Ｔｏｍｔｅｃ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、及びＩｎｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｉｎｃ．を含む様々な供給源から市販されている。任意の細胞ベースのハーベスターを本方法で使用することができる。一部の実施形態において、セルハーベスター及び／又は細胞処理系は、膜ベースの細胞ハーベスターである。一部の実施形態において、細胞回収は、ＬＯＶＯ系（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ製）などの細胞処理系を介して行われる。用語「ＬＯＶＯ細胞処理系」は、滅菌及び／又は閉鎖系環境で、回転膜又は回転フィルターなどの膜又はフィルターを通して細胞を含む溶液を送り出すことができ、ペレット化せず上清又は細胞培養液を除去する連続フロー及び細胞処理を可能にする、あらゆる販売業者によって製造された機器又は装置も指す。一部の実施形態において、セルハーベスター及び／又は細胞処理系は、閉鎖、無菌系で細胞分離、洗浄、流体交換、濃縮、及び／又は他の細胞処理ステップを実施することができる。

【0445】

一部の実施形態において、回収、例えば、図９によるステップＥは、閉鎖系バイオリアクターから実施される。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおり、ＴＩＬ拡大培養のために閉鎖系が用いられる。一部の実施形態において、単一のバイオリアクターが用いられる。一部の実施形態において、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１０又はＧ－ＲＥＸ－１００である。一部の実施形態において、閉鎖系バイオリアクターは単一のバイオリアクターである。

【0446】

Ｆ．ステップＦ：最終的な製剤化及び／又は輸注バッグに移す
図９に例示的順序で提供されるとおりの、且つ上記及び本明細書に詳細に概説されるとおりのステップＡ～Ｅが完了した後、細胞は患者への投与における使用のため容器に移される。一部の実施形態において、上記に記載される拡大培養方法を用いて治療上十分な数のＴＩＬが入手されると、ＴＩＬは患者への投与における使用のため容器に移される。

【0447】

ある実施形態において、本開示のＡＰＣを使用して拡大培養したＴＩＬは、医薬組成物として患者に投与される。ある実施形態において、医薬組成物は滅菌緩衝液中のＴＩＬの懸濁液である。本開示のＰＢＭＣを使用して拡大培養したＴＩＬは、当該技術分野において公知のとおりの任意の好適な経路によって投与されてよい。一部の実施形態において、Ｔ細胞は単回動脈内又は静脈内注入として投与され、これは好ましくは約３０～６０分間継続される。他の好適な投与経路としては、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内が挙げられる。

【0448】

１．医薬組成物、投薬量、及び投与レジメン
ある実施形態において、本開示の方法を使用して拡大培養したＴＩＬは、医薬組成物として患者に投与される。ある実施形態において、医薬組成物は滅菌緩衝液中のＴＩＬの懸濁液である。本開示のＰＢＭＣを使用して拡大培養したＴＩＬは、当該技術分野において公知のとおりの任意の好適な経路によって投与されてよい。一部の実施形態において、Ｔ細胞は単回動脈内又は静脈内注入として投与され、これは好ましくは約３０～６０分間継続される。他の好適な投与経路としては、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内投与が挙げられる。

【0449】

任意の好適な用量のＴＩＬを投与することができる。一部の実施形態において、約２．３×１０^１０～約１３．７×１０^１０個のＴＩＬが投与され、特にがんが黒色腫である場合、平均約７．８×１０^１０個のＴＩＬである。ある実施形態において、約１．２×１０^１０～約４．３×１０^１０個のＴＩＬが投与される。一部の実施形態において、約３×１０^１０～約１２×１０^１０個のＴＩＬが投与される。一部の実施形態において、約４×１０^１０～約１０×１０^１０個のＴＩＬが投与される。一部の実施形態において、約５×１０^１０～約８×１０^１０個のＴＩＬが投与される。一部の実施形態において、約６×１０^１０～約８×１０^１０個のＴＩＬが投与される。一部の実施形態において、約７×１０^１０～約８×１０^１０個のＴＩＬが投与される。一部の実施形態において、治療上有効な投薬量は約２．３×１０^１０～約１３．７×１０^１０個である。一部の実施形態において、治療上有効な投薬量は、特にがんが黒色腫である場合、約７．８×１０^１０個のＴＩＬである。一部の実施形態において、治療上有効な投薬量は約１．２×１０^１０～約４．３×１０^１０個のＴＩＬである。一部の実施形態において、治療上有効な投薬量は約３×１０^１０～約１２×１０^１０個のＴＩＬである。一部の実施形態において、治療上有効な投薬量は約４×１０^１０～約１０×１０^１０個のＴＩＬである。一部の実施形態において、治療上有効な投薬量は約５×１０^１０～約８×１０^１０個のＴＩＬである。一部の実施形態において、治療上有効な投薬量は約６×１０^１０～約８×１０^１０個のＴＩＬである。一部の実施形態において、治療上有効な投薬量は約７×１０^１０～約８×１０^１０個のＴＩＬである。

【0450】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの数は、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、１×１０^８、２×１０^８、３×１０^８、４×１０^８、５×１０^８、６×１０^８、７×１０^８、８×１０^８、９×１０^８、１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、６×１０^１０、７×１０^１０、８×１０^１０、９×１０^１０、１×１０^１１、２×１０^１１、３×１０^１１、４×１０^１１、５×１０^１１、６×１０^１１、７×１０^１１、８×１０^１１、９×１０^１１、１×１０^１２、２×１０^１２、３×１０^１２、４×１０^１２、５×１０^１２、６×１０^１２、７×１０^１２、８×１０^１２、９×１０^１２、１×１０^１３、２×１０^１３、３×１０^１３、４×１０^１３、５×１０^１３、６×１０^１３、７×１０^１３、８×１０^１３、及び９×１０^１３個である。ある実施形態において、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの数は、１×１０^６～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～５×１０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、５×１０^９～１×１０^１０、１×１０^１０～５×１０^１０、５×１０^１０～１×１０^１１、５×１０^１１～１×１０^１２、１×１０^１２～５×１０^１２、及び５×１０^１２～１×１０^１３個の範囲である。

【0451】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、例えば、医薬組成物の１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％又は０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖ未満である。

【0452】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、医薬組成物の９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９．７５％、１９．５０％、１９．２５％ １９％、１８．７５％、１８．５０％、１８．２５％ １８％、１７．７５％、１７．５０％、１７．２５％ １７％、１６．７５％、１６．５０％、１６．２５％ １６％、１５．７５％、１５．５０％、１５．２５％ １５％、１４．７５％、１４．５０％、１４．２５％ １４％、１３．７５％、１３．５０％、１３．２５％ １３％、１２．７５％、１２．５０％、１２．２５％ １２％、１１．７５％、１１．５０％、１１．２５％ １１％、１０．７５％、１０．５０％、１０．２５％ １０％、９．７５％、９．５０％、９．２５％ ９％、８．７５％、８．５０％、８．２５％ ８％、７．７５％、７．５０％、７．２５％ ７％、６．７５％、６．５０％、６．２５％ ６％、５．７５％、５．５０％、５．２５％ ５％、４．７５％、４．５０％、４．２５％、４％、３．７５％、３．５０％、３．２５％、３％、２．７５％、２．５０％、２．２５％、２％、１．７５％、１．５０％、１２５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％又は０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、又はｖ／ｖ超である。

【0453】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、医薬組成物の約０．０００１％～約５０％、約０．００１％～約４０％、約０．０１％～約３０％、約０．０２％～約２９％、約０．０３％～約２８％、約０．０４％～約２７％、約０．０５％～約２６％、約０．０６％～約２５％、約０．０７％～約２４％、約０．０８％～約２３％、約０．０９％～約２２％、約０．１％～約２１％、約０．２％～約２０％、約０．３％～約１９％、約０．４％～約１８％、約０．５％～約１７％、約０．６％～約１６％、約０．７％～約１５％、約０．８％～約１４％、約０．９％～約１２％又は約１％～約１０％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖの範囲である。

【0454】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、医薬組成物の約０．００１％～約１０％、約０．０１％～約５％、約０．０２％～約４．５％、約０．０３％～約４％、約０．０４％～約３．５％、約０．０５％～約３％、約０．０６％～約２．５％、約０．０７％～約２％、約０．０８％～約１．５％、約０．０９％～約１％、約０．１％～約０．９％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖの範囲である。

【0455】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの量は、１０ｇ、９．５ｇ、９．０ｇ、８．５ｇ、８．０ｇ、７．５ｇ、７．０ｇ、６．５ｇ、６．０ｇ、５．５ｇ、５．０ｇ、４．５ｇ、４．０ｇ、３．５ｇ、３．０ｇ、２．５ｇ、２．０ｇ、１．５ｇ、１．０ｇ、０．９５ｇ、０．９ｇ、０．８５ｇ、０．８ｇ、０．７５ｇ、０．７ｇ、０．６５ｇ、０．６ｇ、０．５５ｇ、０．５ｇ、０．４５ｇ、０．４ｇ、０．３５ｇ、０．３ｇ、０．２５ｇ、０．２ｇ、０．１５ｇ、０．１ｇ、０．０９ｇ、０．０８ｇ、０．０７ｇ、０．０６ｇ、０．０５ｇ、０．０４ｇ、０．０３ｇ、０．０２ｇ、０．０１ｇ、０．００９ｇ、０．００８ｇ、０．００７ｇ、０．００６ｇ、０．００５ｇ、０．００４ｇ、０．００３ｇ、０．００２ｇ、０．００１ｇ、０．０００９ｇ、０．０００８ｇ、０．０００７ｇ、０．０００６ｇ、０．０００５ｇ、０．０００４ｇ、０．０００３ｇ、０．０００２ｇ、又は０．０００１ｇ以下である。

【0456】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの量は、０．０００１ｇ、０．０００２ｇ、０．０００３ｇ、０．０００４ｇ、０．０００５ｇ、０．０００６ｇ、０．０００７ｇ、０．０００８ｇ、０．０００９ｇ、０．００１ｇ、０．００１５ｇ、０．００２ｇ、０．００２５ｇ、０．００３ｇ、０．００３５ｇ、０．００４ｇ、０．００４５ｇ、０．００５ｇ、０．００５５ｇ、０．００６ｇ、０．００６５ｇ、０．００７ｇ、０．００７５ｇ、０．００８ｇ、０．００８５ｇ、０．００９ｇ、０．００９５ｇ、０．０１ｇ、０．０１５ｇ、０．０２ｇ、０．０２５ｇ、０．０３ｇ、０．０３５ｇ、０．０４ｇ、０．０４５ｇ、０．０５ｇ、０．０５５ｇ、０．０６ｇ、０．０６５ｇ、０．０７ｇ、０．０７５ｇ、０．０８ｇ、０．０８５ｇ、０．０９ｇ、０．０９５ｇ、０．１ｇ、０．１５ｇ、０．２ｇ、０．２５ｇ、０．３ｇ、０．３５ｇ、０．４ｇ、０．４５ｇ、０．５ｇ、０．５５ｇ、０．６ｇ、０．６５ｇ、０．７ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、０．８５ｇ、０．９ｇ、０．９５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５、３ｇ、３．５、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ、又は１０ｇ超である。

【0457】

本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬは、広い投薬量範囲にわたって有効である。正確な投薬量は、投与経路、化合物の投与形態、治療対象の性別及び年齢、治療対象の体重、並びに主治医の優先的選択及び経験に依存することになる。臨床的に確立されたＴＩＬの投薬量もまた、適宜用いられ得る。ＴＩＬの投薬量など、本明細書の方法を用いて投与される医薬組成物の量は、治療下のヒト又は哺乳類、障害又は病態の重症度、投与速度、医薬品有効成分の性質及び処方医師の裁量に依存することになる。

【0458】

一部の実施形態において、ＴＩＬは単回用量で投与されてもよい。かかる投与は、注射、例えば静脈内注射によってもよい。一部の実施形態において、ＴＩＬは複数回用量で投与されてもよい。投与は、年１回、２回、３回、４回、５回、６回、又は６回超であってもよい。投与は、月１回、２週間に１回、週１回、又は隔日１回であってもよい。ＴＩＬの投与は必要な限り継続されてもよい。

【0459】

一部の実施形態において、ＴＩＬの有効投薬量は、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、１×１０^８、２×１０^８、３×１０^８、４×１０^８、５×１０^８、６×１０^８、７×１０^８、８×１０^８、９×１０^８、１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、６×１０^１０、７×１０^１０、８×１０^１０、９×１０^１０、１×１０^１１、２×１０^１１、３×１０^１１、４×１０^１１、５×１０^１１、６×１０^１１、７×１０^１１、８×１０^１１、９×１０^１１、１×１０^１２、２×１０^１２、３×１０^１２、４×１０^１２、５×１０^１２、６×１０^１２、７×１０^１２、８×１０^１２、９×１０^１２、１×１０^１３、２×１０^１３、３×１０^１３、４×１０^１３、５×１０^１３、６×１０^１３、７×１０^１３、８×１０^１３、及び９×１０^１３個である。一部の実施形態において、ＴＩＬの有効投薬量は、１×１０^６～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～５×１０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、５×１０^９～１×１０^１０、１×１０^１０～５×１０^１０、５×１０^１０～１×１０^１１、５×１０^１１～１×１０^１２、１×１０^１２～５×１０^１２、及び５×１０^１２～１×１０^１３個の範囲である。

【0460】

一部の実施形態において、ＴＩＬの有効投薬量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約４．３ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ～約３．６ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約３．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３５ｍｇ／ｋｇ～約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ～約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ～約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ～約１．７ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ～約１．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約１．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．５５ｍｇ／ｋｇ～約０．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．６５ｍｇ／ｋｇ～約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ～約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ～約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．８５ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１．８５ｍｇ／ｋｇ、約１．１５ｍｇ／ｋｇ～約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇｍｇ～約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．３５ｍｇ／ｋｇ～約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２．１５ｍｇ／ｋｇ～約３．６ｍｇ／ｋｇ、約２．３ｍｇ／ｋｇ～約３．４ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ～約３．３ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ～約３．１５ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ、又は約２．８５ｍｇ／ｋｇ～約２．９５ｍｇ／ｋｇの範囲である。

【0461】

一部の実施形態において、ＴＩＬの有効投薬量は、約１ｍｇ～約５００ｍｇ、約１０ｍｇ～約３００ｍｇ、約２０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約２５ｍｇ～約２００ｍｇ、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、約５ｍｇ～約４５ｍｇ、約１０ｍｇ～約４０ｍｇ、約１５ｍｇ～約３５ｍｇ、約２０ｍｇ～約３０ｍｇ、約２３ｍｇ～約２８ｍｇ、約５０ｍｇ～約１５０ｍｇ、約６０ｍｇ～約１４０ｍｇ、約７０ｍｇ～約１３０ｍｇ、約８０ｍｇ～約１２０ｍｇ、約９０ｍｇ～約１１０ｍｇ、又は約９５ｍｇ～約１０５ｍｇ、約９８ｍｇ～約１０２ｍｇ、約１５０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１６０ｍｇ～約２４０ｍｇ、約１７０ｍｇ～約２３０ｍｇ、約１８０ｍｇ～約２２０ｍｇ、約１９０ｍｇ～約２１０ｍｇ、約１９５ｍｇ～約２０５ｍｇ、又は約１９８～約２０７ｍｇの範囲である。

【0462】

有効量のＴＩＬは、鼻腔内及び経皮経路、動脈内注射によること、静脈内、腹腔内、非経口的、筋肉内、皮下、局所、移植によること、又は吸入によることを含め、同様の有用性を有する薬剤について一般に認められている任意の投与方式により、単回用量又は複数回用量のいずれで投与されてもよい。

【0463】

Ｇ．任意選択の細胞生存率分析
任意選択で、ステップＢの第１の拡大培養の後に、当該技術分野において公知の標準アッセイを用いて細胞生存率アッセイを実施することができる。例えば、バルクＴＩＬの試料に対してトリパンブルー色素排除アッセイを行うことができ、これは死細胞を選択的に標識して生存率の評価を可能にするものである。生存率の試験に用いられる他のアッセイとしては、限定はされないが、アラマーブルーアッセイ；及びＭＴＴアッセイを挙げることができる。

【0464】

１．細胞数、生存率、フローサイトメトリー
一部の実施形態において、細胞数及び／又は生存率が測定される。限定はされないが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ５６などのマーカー、並びに本明細書に開示又は記載される任意の他のものの発現を抗体によるフローサイトメトリー、例えば限定はされないが、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＢＤ Ｂｉｏ－ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ， ＣＡ）から市販されているものによって測定することができる。細胞は、ディスポーザブルｃ－ｃｈｉｐ血球計算盤（ＶＷＲ、Ｂａｔａｖｉａ， ＩＬ）を使用して手動でカウントすることができ、及び生存率は、限定はされないがトリパンブルー染色を含め、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて評価することができる。

【0465】

ある場合には、バルクＴＩＬ集団は、以下で考察するプロトコルを用いて直ちに凍結保存することができる。或いは、バルクＴＩＬ集団は、以下で考察するとおり、ＲＥＰに供し、次に凍結保存してもよい。同様に、療法において遺伝子修飾ＴＩＬが使用されることになる場合、バルク又はＲＥＰ ＴＩＬ集団を好適な治療のための遺伝子修飾に供してもよい。

【0466】

２．細胞培養
ある実施形態において、ＴＩＬの拡大培養方法は、約５，０００ｍＬ～約２５，０００ｍＬの細胞培地、約５，０００ｍＬ～約１０，０００ｍＬの細胞培地、又は約５，８００ｍＬ～約８，７００ｍＬの細胞培地を使用することを含み得る。ある実施形態において、ＴＩＬ数の拡大には１種類以下の細胞培養培地が使用される。任意の好適な細胞培養培地、例えば、ＡＩＭ－Ｖ細胞培地（Ｌ－グルタミン、５０μＭ硫酸ストレプトマイシン、及び１０μＭ硫酸ゲンタマイシン）細胞培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）を使用し得る。この点に関して、本発明の方法では有利には、ＴＩＬ数の拡大に必要な培地の量及び培地の種類の数が減少する。ある実施形態において、ＴＩＬ数の拡大は、３日又は４日おき以下の頻度で細胞に新鮮細胞培養培地を加える（細胞をフィードするとも称される）ことを含み得る。ガス透過性容器内で細胞の数を拡大すると、細胞の拡大培養に必要なフィーディング頻度が減少することにより細胞の数の拡大に必要な手順が簡便になる。

【0467】

ある実施形態において、第１及び／又は第２のガス透過性容器内の細胞培地はろ過されていない。ろ過されていない細胞培地を使用すると、細胞の数の拡大に必要な手順が簡便になり得る。ある実施形態において、第１及び／又は第２のガス透過性容器内の細胞培地はβ－メルカプトエタノール（ＢＭＥ）を含まない。

【0468】

ある実施形態において、哺乳類から腫瘍組織試料を入手すること；細胞培地が中に入った第１のガス透過性容器内で腫瘍組織試料を培養すること；腫瘍組織試料からＴＩＬを入手すること；ａＡＰＣを使用して細胞培地が中に入った第２のガス透過性容器内でＴＩＬ数を約１４～約４２日間、例えば約２８日間拡大することを含む本方法の所要期間。

【0469】

ある実施形態において、ＴＩＬはガス透過性容器内で拡大培養される。ガス透過性容器は、米国特許出願公開第２００５／０１０６７１７ Ａ１号（この開示は参照により本明細書に援用される）に記載されるものを含め、当該技術分野において公知の方法、組成物、及び装置を用いたＰＢＭＣを使用したＴＩＬの拡大培養に用いられている。ある実施形態において、ＴＩＬはガス透過性バッグ内で拡大培養される。ある実施形態において、ＴＩＬは、Ｘｕｒｉ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｗ２５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）など、ガス透過性バッグ内でＴＩＬを拡大培養する細胞拡大培養システムを使用して拡大培養される。ある実施形態において、ＴＩＬは、Ｘｕｒｉ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｗ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）としても知られるＷＡＶＥ Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ Ｓｙｓｔｅｍなど、ガス透過性バッグ内でＴＩＬを拡大培養する細胞拡大培養システムを使用して拡大培養される。ある実施形態において、細胞拡大培養システムは、約１００ｍＬ、約２００ｍＬ、約３００ｍＬ、約４００ｍＬ、約５００ｍＬ、約６００ｍＬ、約７００ｍＬ、約８００ｍＬ、約９００ｍＬ、約１Ｌ、約２Ｌ、約３Ｌ、約４Ｌ、約５Ｌ、約６Ｌ、約７Ｌ、約８Ｌ、約９Ｌ、及び約１０Ｌからなる群から選択される容積を有するガス透過性細胞バッグを含む。ある実施形態において、ＴＩＬはＧ－Ｒｅｘフラスコ（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇから市販されている）において拡大培養することができる。かかる実施形態は、細胞集団を約５×１０^５細胞／ｃｍ^２から１０×１０^６～３０×１０^６細胞／ｃｍ^２へと拡大培養することを可能にする。ある実施形態において、この拡大培養は、細胞に新鮮な細胞培養培地を加える（細胞をフィードするとも称される）ことなく行われる。ある実施形態において、これは、ＧＲｅｘフラスコ内に約１０ｃｍの高さの培地がある限りフィーディングなしである。ある実施形態において、これにフィーディングはないが、１つ以上のサイトカインが加えられる。ある実施形態において、サイトカインは、サイトカインを培地と混合する必要は一切なしにボーラスとして加えることができる。かかる容器、装置、及び方法は当該技術分野において公知で、ＴＩＬの拡大培養に用いられており、米国特許出願公開第２０１４／０３７７７３９Ａ１号、国際公開第２０１４／２１００３６ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０１１５６１７ Ａ１号、国際公開第２０１３／１８８４２７ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１１／０１３６２２８ Ａ１号、米国特許第８，８０９，０５０ Ｂ２号、国際公開第２０１１／０７２０８８ Ａ２号、米国特許出願公開第２０１６／０２０８２１６ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３ Ａ１号、国際公開第２０１２／１２９２０１ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０１０２０７５ Ａ１号、米国特許第８，９５６，８６０ Ｂ２号、国際公開第２０１３／１７３８３５ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１５／０１７５９６６ Ａ１号（これらの開示は参照により本明細書に援用される）に記載されるものが含まれる。かかるプロセスはまた、Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ， ２０１２， ３５：２８３－２９２にも記載されている。任意選択のＴＩＬ遺伝子改変

【0470】

一部の実施形態において、ＴＩＬは任意選択で、限定はされないが、高親和性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、ＭＡＧＥ－１、ＨＥＲ２、若しくはＮＹ－ＥＳＯ－１などの腫瘍関連抗原を標的とするＴＣＲ、又は腫瘍関連細胞表面分子（例えばメソテリン）若しくは系統限定的細胞表面分子（例えばＣＤ１９）に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含め、追加の機能性を含むように遺伝子改変される。

【0471】

Ｈ．任意選択のＴＩＬ凍結保存
上記で考察したとおり、且つ図９に提供したとおりステップＡ～Ｅにおいて例示したとおり、ＴＩＬ拡大培養プロセス全体を通じて数々の時点で凍結保存を行うことができる。一部の実施形態において、（例えば、図９のステップＤに係るとおり）第２の拡大培養後の拡大培養ＴＩＬ集団が凍結保存されてもよい。凍結保存は、概して、凍結溶液、例えば８５％補体不活性化ＡＢ血清及び１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中にＴＩＬ集団を置くことにより達成し得る。この溶液中の細胞を極低温バイアルに入れ、－８０℃で２４時間貯蔵し、任意選択で凍結保存のため気体窒素フリーザーに移す。Ｓａｄｅｇｈｉ， ｅｔ ａｌ．， Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａ ２０１３， ５２， ９７８－９８６を参照のこと。一部の実施形態において、ＴＩＬは５％ＤＭＳＯに凍結保存される。一部の実施形態において、ＴＩＬは細胞培養培地＋５％ＤＭＳＯに凍結保存される。一部の実施形態において、ＴＩＬは、実施例８及び９に提供される方法に従い凍結保存される。

【0472】

適切な場合、細胞をフリーザーから取り出し、３７℃の水浴中で溶液の約５分の４が解凍されるまで解凍する。細胞は概して完全培地中に再懸濁され、任意選択で１回以上洗浄される。一部の実施形態では、当該技術分野において公知のとおり解凍ＴＩＬをカウントし、生存率に関して評価することができる。

【0473】

Ｉ．拡大培養したＴＩＬの表現型特徴
一部の実施形態において、ＴＩＬは拡大培養後に、本明細書及び実施例に記載されるものを含め、多数の表現型マーカーの発現に関して分析される。ある実施形態では、１つ以上の表現型マーカーの発現が調べられる。一部の実施形態において、ＴＩＬの表現型特徴は、ステップＢの第１の拡大培養後に分析される。一部の実施形態において、ＴＩＬの表現型特徴は、ステップＣの移行中に分析される。一部の実施形態において、ＴＩＬの表現型特徴は、ステップＣに係る移行中且つ凍結保存後に分析される。一部の実施形態において、ＴＩＬの表現型特徴は、ステップＤに係る第２の拡大培養後に分析される。一部の実施形態において、ＴＩＬの表現型特徴は、ステップＤに係る２回以上の拡大培養後に分析される。一部の実施形態において、マーカーは、ＴＣＲａｂ（すなわち、ＴＣＲα／β）、ＣＤ５７、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ２７、ＣＤ５６、ＣＤ８ａ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ８ａ、ＣＣＲ７、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ３８、及びＨＬＡ－ＤＲからなる群から選択される。一部の実施形態において、マーカーは、ＴＣＲａｂ（すなわち、ＴＣＲα／β）、ＣＤ５７、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ２７、ＣＤ５６、及びＣＤ８ａからなる群から選択される。ある実施形態において、マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ８ａ、ＣＣＲ７、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ３８、及びＨＬＡ－ＤＲからなる群から選択される。一部の実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４個のマーカーの発現が調べられる。一部の実施形態では、各群から１つ以上のマーカーからの発現が調べられる。一部の実施形態では、解凍ＴＩＬと比較したとき新鮮ＴＩＬにおいてＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ３８、及びＣＤ６９発現のうちの１つ以上が維持される（即ち、統計的に有意な差を呈しない）。一部の実施形態では、解凍ＴＩＬにおいてＴＩＬの活性化状態が維持される。

【0474】

ある実施形態において、１つ以上の調節マーカーの発現が測定される。一部の実施形態において、調節マーカーは、ＣＤ１３７、ＣＤ８ａ、Ｌａｇ３、ＣＤ４、ＣＤ３、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＣＤ６９、ＣＤ８ａ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ４、ＣＤ３、ＫＬＲＧ１、及びＣＤ１５４からなる群から選択される。一部の実施形態において、調節マーカーは、ＣＤ１３７、ＣＤ８ａ、Ｌａｇ３、ＣＤ４、ＣＤ３、ＰＤ－１、及びＴＩＭ－３からなる群から選択される。一部の実施形態において、調節マーカーは、ＣＤ６９、ＣＤ８ａ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ４、ＣＤ３、ＫＬＲＧ１、及びＣＤ１５４からなる群から選択される。一部の実施形態において、調節分子発現は新鮮ＴＩＬと比較したとき解凍ＴＩＬにおいて低下する。一部の実施形態において、調節分子ＬＡＧ－３及びＴＩＭ－３の発現は新鮮ＴＩＬと比較したとき解凍ＴＩＬにおいて低下する。一部の実施形態において、ＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、ＴＣＲαβ発現に有意な差はない。一部の実施形態において、解凍ＴＩＬと比較したとき新鮮ＴＩＬにおいてＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、ＴＣＲαβ発現、及び／又はメモリーマーカーに有意な差はない。一部の実施形態において、例えば図９に例示されているように、本明細書で提供される方法によって作製されるＴＩＬ、及び／又は例えば、図９で具体化されているもの以外の方法を含む本明細書で提供する以外の他の方法を使用して調製されたＴＩＬ間のＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、ＴＣＲαβ発現には有意な差は無い。

【0475】

一部の実施形態において、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、第３のＴＩＬ集団、回収したＴＩＬ集団、及び／又はＣＤ４、ＣＤ８、及び／又はＮＫ、ＴＣＲαβ発現に基づく治療用ＴＩＬ集団の選択は、上記で考察した、又は図９の例を含むいずれのステップ中にも実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ４、ＣＤ８、及び／又はＮＫ、ＴＣＲαβに基づく第１のＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ４、ＣＤ８、及び／又はＮＫ、ＴＣＲαβ発現に基づく第２のＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ４、ＣＤ８、及び／又はＮＫ、ＴＣＲαβ発現に基づく第３のＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ４、ＣＤ８、及び／又はＮＫ、ＴＣＲαβ発現に基づく回収したＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ４、ＣＤ８、及び／又はＮＫ、ＴＣＲαβ発現に基づく治療用ＴＩＬ集団の選択は実施されない。

【0476】

ある実施形態において、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、第３のＴＩＬ集団、又はＣＤ４、ＣＤ８、及び／又はＮＫ、ＴＣＲαβ発現に基づく回収ＴＩＬの選択は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療用ＴＩＬ集団に拡大培養する方法のステップ（ａ）～（ｆ）のいずれの間も実施されず、このステップは
（ａ） 患者から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することにより、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること；
（ｂ） 腫瘍断片を閉鎖系に加えること；
（ｃ） ＩＬ－２を含む細胞培養培地で第１のＴＩＬ集団を培養し第２のＴＩＬ集団を生じさせることにより第１の拡大培養を実施することであって、第１の拡大培養は、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器内で実施され、第１の拡大培養は、第２のＴＩＬ集団を得るため約３～１４日間行われ、第２のＴＩＬ集団の数は、第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行は系を開放せずに発生すること；
（ｄ） 第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することにより第２の拡大培養を実施して第３のＴＩＬ集団を生じさせることであって、第３のＴＩＬ集団を入手するために第２の拡大培養が約７～１４日間実施され、第３のＴＩＬ集団は、第２のＴＩＬ集団と比べてエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞の増加サブ集団を含む治療用ＴＩＬ集団であり、第２の拡大培養は第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器で行われ、及びステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行は系を開放せずに発生すること；
（ｅ） ステップ（ｄ）から得られた治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行は、系を開放せずに発生すること；及び
（ｆ） ステップ（ｅ）で回収したＴＩＬ集団を輸注バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行は、系を開放せずに発生すること
を含む。

【0477】

ある実施形態において、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、第３のＴＩＬ集団、又はＣＤ４、ＣＤ８、及び／又はＮＫ、ＴＣＲαβ発現に基づく回収ＴＩＬの選択は、がんを有する対象の処置を行う方法のステップ（ａ）～（ｈ）のいずれの間も実施されず、この拡大培養した腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を投与することを含む方法は、
（ａ） 対象から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することにより、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること；
（ｂ） 腫瘍断片を閉鎖系に加えること；
（ｃ） ＩＬ－２を含む細胞培養培地で第１のＴＩＬ集団を培養し第２のＴＩＬ集団を生じさせることにより第１の拡大培養を実施することであって、第１の拡大培養は、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器内で実施され、第１の拡大培養は、第２のＴＩＬ集団を得るため約３～１４日間行われ、第２のＴＩＬ集団の数は、第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行は系を開放せずに発生すること；
（ｄ） 第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することにより第２の拡大培養を実施して第３のＴＩＬ集団を生じさせることであって、第３のＴＩＬ集団を入手するために第２の拡大培養が約７～１４日間実施され、第３のＴＩＬ集団は、第２のＴＩＬ集団と比べてエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞の増加サブ集団を含む治療用ＴＩＬ集団であり、第２の拡大培養は第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器で行われ、及びステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行は系を開放せずに発生すること；
（ｅ） ステップ（ｄ）から得られた治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行は、系を開放せずに発生すること；及び
（ｆ） ステップ（ｅ）で回収したＴＩＬ集団を輸注バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行は、系を開放せずに発生すること；
（ｇ） 凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）で回収したＴＩＬ集団を含む輸注バッグを任意選択で凍結保存すること；及び
（ｈ） ステップ（ｇ）における輸注バッグから治療上有効な投薬量の第３のＴＩＬ集団を患者に投与すること
を含む。

【0478】

一部の実施形態において、メモリーマーカーは、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌからなる群から選択される。

【0479】

一部の実施形態において、解凍ＴＩＬと比較したときの新鮮ＴＩＬの生存率は、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％である。一部の実施形態において、新鮮ＴＩＬ及び解凍ＴＩＬの両方の生存率が、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、又は９８％超である。一部の実施形態において、新鮮産物及び解凍産物の両方の生存率が、８０％超、８１％超、８２％超、８３％超、８４％超、８５％超、８６％超、８７％超、８８％超、８９％超、又は９０％超である。一部の実施形態において、新鮮産物及び解凍産物の両方の生存率が８６％超である。

【0480】

ある実施形態において、再刺激ＴＩＬはまた、サイトカイン遊離アッセイを用いてサイトカイン遊離に関しても判定することができる。一部の実施形態において、ＴＩＬは、ＯＫＴ３か又は自己腫瘍消化物との共培養かのいずれかによる刺激に応答したインターフェロン－７（ＩＦＮ－７）分泌に関して判定することができる。例えば、ＯＫＴ３刺激を用いる実施形態では、ＴＩＬを広範に洗浄し、リン酸緩衝生理食塩水で希釈した０．１又は１．０μｇ／ｍＬのＯＫＴ３をプレコートした９６ウェル平底プレートに０．２ｍＬ ＣＭ中１×１０^５細胞でデュプリケートウェルを調製する。一晩インキュベートした後、上清を回収し、上清中のＩＦＮ－７をＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ／Ｅｎｄｏｇｅｎ、Ｗｏｂｕｒｎ， ＭＡ）によって測定する。共培養アッセイについては、１×１０^５個のＴＩＬ細胞を９６ウェルプレートに自己腫瘍細胞と共に（１：１比）置く。２４時間のインキュベーション後、上清を回収し、ＩＦＮ－７遊離を例えばＥＬＩＳＡによって定量化することができる。

【0481】

細胞表面バイオマーカーのフローサイトメトリー分析：細胞表面マーカーのフローサイトメトリー分析のため、ＴＩＬ試料をアリコートに分けた。例えば実施例７、８、及び９を参照のこと。

【0482】

一部の実施形態において、ＴＩＬは様々な調節マーカーに関して判定されるものである。一部の実施形態において、調節マーカーは、ＴＣＲα／β、ＣＤ５６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、ＣＤ９５、ＩＬ－２Ｒ－、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＫＬＲＧ１、及びＣＤ１２２からなる群から選択される。一部の実施形態において、調節マーカーはＴＣＲα／βである。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ５６である。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ２７である。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ２８である。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ５７である。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ４５ＲＡである。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ４５ＲＯである。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ２５である。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ１２７である。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ９５である。一部の実施形態において、調節マーカーはＩＬ－２Ｒ－である。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＣＲ７である。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ６２Ｌである。一部の実施形態において、調節マーカーはＫＬＲＧ１である。一部の実施形態において、調節マーカーはＣＤ１２２である。

【0483】

一実施形態において、拡大培養されたＴＩＬは、本明細書及び実施例に記載されるものを含め、多数の表現型マーカーの発現に関して分析される。ある実施形態では、１つ以上の表現型マーカーの発現が調べられる。一部の実施形態において、マーカーは、ＴＣＲａｂ（即ち、ＴＣＲα／β）、ＣＤ５７、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ２７、ＣＤ５６、ＣＤ８ａ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ８ａ、ＣＣＲ７、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ３８、及びＨＬＡ－ＤＲからなる群から選択される。一部の実施形態において、マーカーは、ＴＣＲａｂ（即ち、ＴＣＲα／β）、ＣＤ５７、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ２７、ＣＤ５６、及びＣＤ８ａからなる群から選択される。ある実施形態において、マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ８ａ、ＣＣＲ７、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ３８、及びＨＬＡ－ＤＲからなる群から選択される。一部の実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４個のマーカーの発現が調べられる。一部の実施形態では、各群から１つ以上のマーカーからの発現が調べられる。一部の実施形態では、解凍ＴＩＬと比較したとき新鮮ＴＩＬにおいてＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ３８、及びＣＤ６９発現のうちの１つ以上が維持される（即ち、統計的に有意な差を呈しない）。一部の実施形態では、解凍ＴＩＬにおいてＴＩＬの活性化状態が維持される。

【0484】

ある実施形態において、１つ以上の調節マーカーの発現が測定される。一部の実施形態において、調節マーカーは、ＣＤ１３７、ＣＤ８ａ、Ｌａｇ３、ＣＤ４、ＣＤ３、ＰＤ１、ＴＩＭ－３、ＣＤ６９、ＣＤ８ａ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ４、ＣＤ３、ＫＬＲＧ１、及びＣＤ１５４からなる群から選択される。一部の実施形態において、調節マーカーは、ＣＤ１３７、ＣＤ８ａ、Ｌａｇ３、ＣＤ４、ＣＤ３、ＰＤ１、及びＴＩＭ－３からなる群から選択される。一部の実施形態において、調節マーカーは、ＣＤ６９、ＣＤ８ａ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ４、ＣＤ３、ＫＬＲＧ１、及びＣＤ１５４からなる群から選択される。一部の実施形態において、調節分子発現は新鮮ＴＩＬと比較したとき解凍ＴＩＬにおいて低下する。一部の実施形態において、調節分子ＬＡＧ－３及びＴＩＭ－３の発現は新鮮ＴＩＬと比較したとき解凍ＴＩＬにおいて低下する。一部の実施形態において、ＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、ＴＣＲαβ発現に有意な差はない。一部の実施形態において、解凍ＴＩＬと比較したとき新鮮ＴＩＬにおいてＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、ＴＣＲαβ発現、及び／又はメモリーマーカーに有意な差はない。

【0485】

一部の実施形態において、メモリーマーカーは、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌからなる群から選択される。

【0486】

一部の実施形態において、解凍ＴＩＬと比較したときの新鮮ＴＩＬの生存率は、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％である。一部の実施形態において、新鮮ＴＩＬ及び解凍ＴＩＬの両方の生存率が、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、又は９８％超である。一部の実施形態において、新鮮産物及び解凍産物の両方の生存率が、８０％超、８１％超、８２％超、８３％超、８４％超、８５％超、８６％超、８７％超、８８％超、８９％超、又は９０％超である。一部の実施形態において、新鮮産物及び解凍産物の両方の生存率が８６％超である。

【0487】

ある実施形態において、再刺激ＴＩＬはまた、サイトカイン遊離アッセイを用いてサイトカイン遊離に関しても判定することができる。一部の実施形態において、ＴＩＬは、ＯＫＴ３か又は自己腫瘍消化物との共培養かのいずれかによる刺激に応答したインターフェロン－７（ＩＦＮ－７）分泌に関して判定することができる。例えば、ＯＫＴ３刺激を用いる実施形態では、ＴＩＬを広範に洗浄し、リン酸緩衝生理食塩水で希釈した０．１又は１．０μｇ／ｍＬのＯＫＴ３をプレコートした９６ウェル平底プレートに０．２ｍＬ ＣＭ中１×１０^５細胞でデュプリケートウェルを調製する。一晩インキュベートした後、上清を回収し、上清中のＩＦＮ－７をＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ／Ｅｎｄｏｇｅｎ、Ｗｏｂｕｒｎ， ＭＡ）によって測定する。共培養アッセイについては、１×１０^５個のＴＩＬ細胞を９６ウェルプレートに自己腫瘍細胞と共に置く（１：１の比率）。２４時間のインキュベーション後、上清を回収し、ＩＦＮ－７遊離を例えばＥＬＩＳＡによって定量化することができる。

【0488】

いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬ超～３０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬ以上のグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、５０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、７０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、９０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１１０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１３０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１５０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１７０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１９０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、３０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、またはそれを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、５０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、７０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、９０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１１０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１３０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１５０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１７０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬある。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１９０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬ２６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬ超～３０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬ以上のグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、５０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、７０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、９０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１１０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１３０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１５０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１７０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１９０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、１８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、２８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、３０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超える、またはそれを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、５０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、７０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、９０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１１０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、


１３０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１５０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１７０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１９０００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２２００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２４００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２６００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２８００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３０００００ｐｇ／１０^６ＴＩＬを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。

【0489】

いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１０００ｐｇ／ｍｌ超～３０００００ｐｇ／ｍｌ以上のグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１０００ｐｇ／ｍｌを超える、２０００ｐｇ／ｍｌを超える、３０００ｐｇ／ｍｌを超える、４０００ｐｇ／ｍｌを超える、５０００ｐｇ／ｍｌを超える、６０００ｐｇ／ｍｌを超える、７０００ｐｇ／ｍｌを超える、８０００ｐｇ／ｍｌを超える、９０００ｐｇ／ｍｌを超える、１００００ｐｇ／ｍｌを超える、２００００ｐｇ／ｍｌを超える、３００００ｐｇ／ｍｌを超える、４００００ｐｇ／ｍｌを超える、５００００ｐｇ／ｍｌを超える、６００００ｐｇ／ｍｌを超える、７００００ｐｇ／ｍｌを超える、８００００ｐｇ／ｍｌを超える、９００００ｐｇ／ｍｌを超える、１０００００ｐｇ／ｍｌ超える、またはそれを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１０００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２０００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３０００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、４０００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢ示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、５０００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、６０００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、７０００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、８０００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、９０００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、４００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、５００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、６００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、７００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、８００００ｐｇ／ｍｌ超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、９００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１０００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１２００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１４００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢを示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１６００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、１８００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２０００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２２００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２４００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２６００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、２８００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、３０００００ｐｇ／ｍｌを超えるグランザイムＢの分泌を示すＴＩＬである。

【0490】

いくつかの実施形態において、本発明の増殖方法は、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９に示すＴＩＬを含む、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、インビトロでのグランザイムＢの分泌の増加を示す増殖ＴＩＬ集団を産生する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも１倍～５０倍以上増加する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍以上増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも１倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも２倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも３倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも４倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも５倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも６倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも７倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも８倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも９倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも１０倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも２０倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも３０倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも４０倍増加する。いくつかの実施形態において、本発明の増殖ＴＩＬ集団のグランザイムＢの分泌は、非増殖ＴＩＬ集団と比較して、少なくとも５０倍増加する。

【0491】

一部の実施形態において、表現型の特徴付けは、凍結保存後に調べられる。

【0492】

Ｊ．拡大培養したＴＩＬの代謝的健康
再刺激したＴＩＬは、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は解凍後のＴＩＬのいずれと比較したときも、基礎解糖の有意な亢進によって特徴付けられる。ある実施形態において、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、第３のＴＩＬ集団、回収ＴＩＬ集団、及び／又はＣＤ８発現に基づく治療用ＴＩＬ集団の選択は、上記で考察した、又は図９の例を含むいずれのステップ中にも実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ８発現に基づく第１のＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ８発現に基づく第２のＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ８発現に基づく第３のＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ８発現に基づく回収ＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ８発現に基づく治療用ＴＩＬ集団の選択は実施されない。

【0493】

ある実施形態において、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、第３のＴＩＬ集団、又はＣＤ８発現に基づく回収ＴＩＬの選択は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療用ＴＩＬ集団に拡大培養する方法のステップ（ａ）～（ｆ）のいずれの間も実施されず、このステップは、
（ａ） 患者から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することにより、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること；
（ｂ） 腫瘍断片を閉鎖系に加えること；
（ｃ） ＩＬ－２を含む細胞培養培地で第１のＴＩＬ集団を培養し第２のＴＩＬ集団を生じさせることにより第１の拡大培養を実施することであって、第１の拡大培養は、第１ガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器内で実施され、第１の拡大培養は、第２のＴＩＬ集団を得るため約３～１４日間行われ、第２のＴＩＬ集団の数は、第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行は系を開放せずに発生すること；
（ｄ） 第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することにより第２の拡大培養を実施して第３のＴＩＬ集団を生じさせることであって、第３のＴＩＬ集団を入手するために第２の拡大培養が約７～１４日間実施され、第３のＴＩＬ集団は、第２のＴＩＬ集団と比べてエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞の増加サブ集団を含む治療用ＴＩＬ集団であり、第２の拡大培養は第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器で行われ、及びステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行は系を開放せずに発生すること；
（ｅ） ステップ（ｄ）から得られた治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行は、系を開放せずに発生すること；及び
（ｆ） ステップ（ｅ）で回収したＴＩＬ集団を輸注バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行は、系を開放せずに発生すること
を含む。

【0494】

ある実施形態において、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、第３のＴＩＬ集団、又はＣＤ８発現に基づく回収ＴＩＬの選択は、がんを有する対象の処置を行う方法のステップ（ａ）～（ｈ）のいずれの間も実施されず、この拡大培養した腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を投与することを含む方法は、
（ａ） 対象から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することにより、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること；
（ｂ） 腫瘍断片を閉鎖系に加えること；
（ｃ） ＩＬ－２を含む細胞培養培地で第１のＴＩＬ集団を培養し第２のＴＩＬ集団を生じさせることにより第１の拡大培養を実施することであって、第１の拡大培養は、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器内で実施され、第１の拡大培養は、第２のＴＩＬ集団を得るため約３～１４日間行われ、第２のＴＩＬ集団の数は、第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行は系を開放せずに発生すること；
（ｄ） 第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することにより第２の拡大培養を実施して第３のＴＩＬ集団を生じさせることであって、第３のＴＩＬ集団を入手するために第２の拡大培養が約７～１４日間実施され、第３のＴＩＬ集団は、第２のＴＩＬ集団と比べてエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞の増加サブ集団を含むＴ細胞治療用ＴＩＬ集団であり、第２の拡大培養は第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器で行われ、及びステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行は系を開放せずに発生すること；
（ｅ） ステップ（ｄ）から得られた治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行は、系を開放せずに発生すること；及び
（ｆ） ステップ（ｅ）で回収したＴＩＬ集団を輸注バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行は、系を開放せずに発生すること；
（ｇ） 凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）で回収したＴＩＬ集団を含む輸注バッグを任意選択で凍結保存すること；及び
（ｈ） ステップ（ｇ）における輸注バッグから治療上有効な投薬量の第３のＴＩＬ集団を患者に投与すること
を含む。

【0495】

本明細書に記載された方法によって調製されたＴＩＬは、例えば、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は、例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、基礎解糖の有意な差に特徴付けられる。ある実施形態において、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、第３のＴＩＬ集団、回収ＴＩＬ集団、及び／又はＣＤ８発現に基づく治療用ＴＩＬ集団の選択は、上記で考察した、又は図９の例を含むいずれのステップ中にも実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ８発現に基づく第１のＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ８発現に基づく第２のＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ８発現に基づく第３のＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ８発現に基づく回収ＴＩＬ集団の選択は実施されない。一部の実施形態において、ＣＤ８発現に基づく治療用ＴＩＬ集団の選択は実施されない。ある実施形態において、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、第３のＴＩＬ集団、又はＣＤ８発現に基づく回収ＴＩＬの選択は、ステップ（ａ）～（ｈ）のいずれの間も実施されない。

【0496】

本開示の異なる方法で拡大培養したＴＩＬについて、予備呼吸容量（ＳＲＣ）及び解糖予備能を判定することができる。Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ細胞ミトストレステストは、ミトコンドリアにおける電子伝達鎖の成分を標的にする呼吸調節因子を用いて細胞の酸素消費速度（ＯＣＲ）を直接測定することによりミトコンドリア機能を測定する。試験化合物（オリゴマイシン、ＦＣＣＰ、及びロテノンとアンチマイシンＡとの混合物、以下に記載する）を連続的に注入して、それぞれ、ＡＴＰ産生、最大呼吸、及び非ミトコンドリア呼吸を測定する。次にこれらのパラメータ及び基礎呼吸を使用してプロトンリーク及び予備呼吸容量を計算する。各調節因子が電子伝達鎖の特異的成分を標的にする。オリゴマイシンはＡＴＰシンターゼ（複合体Ｖ）を阻害し、オリゴマイシン注射後のＯＣＲの低下は、細胞性ＡＴＰ産生に関連するミトコンドリア呼吸と相関する。カルボニルシアニド－４（トリフルオロメトキシ）フェニルヒドラゾン（ＦＣＣＰ）は、プロトン勾配を破綻させてミトコンドリア膜電位を破壊する脱共役剤である。結果として、電子伝達鎖を通じた電子流が抑制されず、複合体ＩＶによって酸素が最大限に消費される。ひいてはＦＣＣＰの刺激を受けたＯＣＲを使用して、最大呼吸と基礎呼吸との差として定義される予備呼吸容量を計算することができる。予備呼吸容量（ＳＲＣ）は、細胞がエネルギー要求の増加に応答する能力の尺度である。第３の注射は、複合体Ｉ阻害薬であるロテノンと、複合体ＩＩＩ阻害薬であるアンチマイシンＡとの混合物である。この組み合わせはミトコンドリア呼吸を遮断し、ミトコンドリア外部の過程によってドライブされる非ミトコンドリア呼吸の計算を可能にする。一部の実施形態において、比較は、例えば、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬに対するものである。

【0497】

一部の実施形態において、代謝アッセイは基礎呼吸である。一般に、第２の拡大培養ＴＩＬは、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の基礎呼吸速度を有する。一部の実施形態において、基礎呼吸速度は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度の約５０％～約９９％である。一部の実施形態において、基礎呼吸速度は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度の約６０％～約９９％である。一部の実施形態において、基礎呼吸速度は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度の約７０％～約９９％である。一部の実施形態において、基礎呼吸速度は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度の約８０％～約９９％である。一部の実施形態において、基礎呼吸速度は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度の約９０％～約９９％である。一部の実施形態において、基礎呼吸速度は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度の約９５％～約９９％である。一部の実施形態において、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度と統計的に有意な差のない基礎呼吸速度を有する。一部の実施形態において、比較は、例えば新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬに対するものである。

【0498】

一部の実施形態において、代謝アッセイは予備呼吸容量である。一般に、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬの基礎呼吸速度及び／又は、例えば、図９に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供するもの以外の他の方法を使用して調整したＴＩＬの少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の予備呼吸容量を有する。一部の実施形態において、予備呼吸容量は、新鮮に採取したＴＩＬの基礎呼吸速度の約５０％～約９９％である。一部の実施形態において、予備呼吸容量は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約５０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、予備呼吸容量は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約６０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、予備呼吸容量は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約７０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、予備呼吸容量は、新鮮に採取したＴＩＬの基礎呼吸速度の約８０％～約９９％である。一部の実施形態において、予備呼吸容量は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約９０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、予備呼吸容量は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約９５％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は、例えば、図９に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供するもの以外の他の方法を使用して調整したＴＩＬの基礎呼吸速度とは統計的に有意な差を呈しない予備呼吸容量を有する。

【0499】

一般に、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の予備呼吸容量を有する。一部の実施形態において、測定される代謝アッセイは解糖予備能である。一部の実施形態において、代謝アッセイは予備呼吸容量である。細胞（呼吸）代謝を測定するため、細胞をミトコンドリア呼吸及び解糖の阻害薬で処理して、以下の尺度からなるＴＩＬの代謝プロファイルを決定した：ベースライン酸化的リン酸化（ＯＣＲによる測定時）、予備呼吸容量、ベースライン解糖活性（ＥＣＡＲによる測定時）、及び解糖予備能。代謝プロファイルは、ミトコンドリアＡＴＰ産生の遮断時に細胞が解糖を遂行する能力を決定することが可能な、Ｓｅａｈｏｒｓｅコンビネーションミトコンドリア／解糖ストレステストアッセイ（Ａｇｉｌｅｎｔ（登録商標）から市販されているキットを含む）を用いて実施した。一部の実施形態において、細胞がグルコース飢餓状態にあり、次にグルコースを注入し、続いてストレス作用剤を注入する。一部の実施形態において、ストレス作用剤は、オリゴマイシン、ＦＣＣＰ、ロテノン、アンチマイシンＡ及び／又は２－デオキシグルコース（２－ＤＧ）、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される。一部の実施形態において、オリゴマイシンは１０ｍＭで加えられる。一部の実施形態において、ＦＣＣＰは１０ｍＭで加えられる。一部の実施形態において、ロテノンは２．５ｍＭで加えられる。一部の実施形態において、アンチマイシンＡは２．５ｍＭで加えられる。一部の実施形態において、２－デオキシグルコース（２－ＤＧ）は５００ｍＭで加えられる。一部の実施形態において、解糖能、解糖予備能、及び／又は非解糖酸性化が測定される。一般に、ＴＩＬは、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の解糖予備能を有する。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの基礎呼吸速度の約５０％～約９９％である。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約６０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約７０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約８０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約９０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約９５％～約９９％の基礎呼吸速度である。

【0500】

一部の実施形態において、代謝アッセイは基礎解糖である。一部の実施形態において、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬの基礎呼吸速度及び／又は、例えば、図９に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供するもの以外の他の方法を使用して調整したＴＩＬに比べて少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、又は少なくとも１０倍の基礎解糖の増加を有する。一部の実施形態において、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は、例えば、図９に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供するもの以外の他の方法を使用して調整したＴＩＬと比べて約２倍～約１０倍の基礎解糖の増加を有する。一部の実施形態において、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は、例えば、図９に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供するもの以外の他の方法を使用して調整したＴＩＬと比べて約２倍～約８倍の基礎解糖の増加を有する。一部の実施形態において、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は、例えば、図９に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供するもの以外の他の方法を使用して調整したＴＩＬと比べて約３倍～約７倍の基礎解糖の増加を有する。一部の実施形態において、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は、例えば、図９に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供するもの以外の他の方法を使用して調整したＴＩＬと比べて約２倍～約４倍の基礎解糖の増加を有する。一部の実施形態において、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は、例えば、図９に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供するもの以外の他の方法を使用して調整したＴＩＬと比べて約２倍～約３倍の基礎解糖の増加を有する。

【0501】

一般に、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は、新鮮に採取したＴＩＬの基礎呼吸速度及び／又は、例えば、図９に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供するもの以外の他の方法を使用して調整したＴＩＬの少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の解糖予備能を有する。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬの基礎呼吸速度の約５０％～約９９％である。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約６０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約７０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約８０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬの約９０％～約９９％の基礎呼吸速度である。一部の実施形態において、解糖予備能は、新鮮に採取したＴＩＬの基礎呼吸速度の約９５％～約９９％である。

【0502】

グランザイムＢ産生：グランザイムＢは、ＴＩＬが標的細胞を死滅させる能力の別の尺度である。ＣＤ３、ＣＤ２８、及びＣＤ１３７／４－１ＢＢに対する抗体を使用して上記に記載したとおり再刺激した培地上清について、そのグランザイムＢレベルもまた、Ｈｕｍａｎ Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ， ＭＮ）を製造者の指示に従い使用して評価した。一部の実施形態において、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）はグランザイムＢ産生が増加する。一部の実施形態において、第２の拡大培養ＴＩＬ又は第２の追加の拡大培養ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含め、図９のステップＤに記載されるものなど）は細胞傷害活性が増加する。

【0503】

一部の実施形態において、テロメア長は、細胞生存率及び／又は細胞機能の尺度として使用することができる。一部の実施形態において、テロメアは、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、驚くべきことに、本発明によって作製されたＴＩＬと同一の長さであった。テロメア長の測定：ゲノムＤＮＡ及び細胞学的調製物中のテロメア長を測定するために、様々な方法が使用されてきた。テロメア制限フラグメント（ＴＲＦ）分析は、テロメア長を測定するための究極の判断基準である（ｄｅ Ｌａｎｇｅ ｅｔ ａｌ．， １９９０）。ただし、ＴＲＦの主な制限は、大量のＤＮＡ（１．５＾ｇ）を必要とすることである。テロメア長の測定に広く使用されている２つの技術、即ち、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ）及び定量的ＰＣＲを本発明で用いてもよい。一部の実施形態において、ステップＡで初めに回収したＴＩＬと、例えば図９に提供されたステップＤから拡大培養したＴＩＬとの間でテロメア長に変化はない。

【0504】

いくつかの実施形態において、上記ＴＩＬは、グランザイムＢ、パーフォリン、及びグラニュライシンからなる群より選択される１種以上のマーカーを発現する。いくつかの実施形態において、ＴＩＬはグランザイムＢを発現する。いくつかの実施形態において、ＴＩＬはパーフォリンを発現する。いくつかの実施形態において、ＴＩＬはグラニュライシンを発現する。

【0505】

一実施形態において、サイトカイン遊離アッセイを使用して、再刺激ＴＩＬのサイトカイン遊離を評価することもできる。いくつかの実施形態において、ＴＩＬのインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）の分泌を評価することができる。いくつかの実施形態において、上記ＩＦＮ－γの分泌はＥＬＩＳＡアッセイによって測定される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γの分泌は、上記急速な第２の増殖ステップの後、例えば図２Ａ～２Ｃ（特に、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９）に示すステップＤの後に、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定される。いくつかの実施形態において、ＴＩＬの健康状態はＩＦＮ－ガンマ（ＩＦＮ－γ）の分泌によって測定される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γの分泌は活性なＴＩＬであることを示す。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γ産生の効力アッセイが使用される。ＩＦＮ－γ産生は細胞傷害能の別の尺度である。ＩＦＮ－γ産生は、ＣＤ３、ＣＤ２８、及びＣＤ１３７／４－１ＢＢに対する抗体で刺激されたＴＩＬの、培地中のサイトカインＩＦＮ－γのレベルを測定することによって測定することができる。これらの刺激されたＴＩＬ由来の培地中のＩＦＮ－γのレベルは、ＩＦＮ－γ遊離を測定することによって測定することができる。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ～２Ｃ（特に、例えば図２Ａ）に示す２Ａプロセス中のステップＤと比較した、例えば、図２Ａ～２Ｃ（特に、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９）に示すＧｅｎ３プロセス中のステップＤのＴＩＬにおけるＩＦＮ－γ産生の増加は、ステップＤのＴＩＬの細胞傷害能の増加を示している。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γの分泌は、１倍、２倍、３倍、４倍、または５倍以上増加する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γの分泌は１倍増加する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γの分泌は２倍増加する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γの分泌は３倍増加する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γの分泌は４倍増加する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γの分泌は５倍増加する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γは、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡキットを使用して測定される。いくつかの実施形態において、エクスビボのＴＩＬにおけるＩＦＮ－γが測定される。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ｂの方法を含む本発明の方法によって産生されたＴＩＬを含む、エクスビボのＴＩＬにおけるＩＦＮ－γが測定される。

【0506】

いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、または５倍以上のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１倍多いＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２倍多いＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも３倍多いＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも４倍多いＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも５倍多いＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、

【0507】

いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１００ｐｇ／ｍｌ～約１０００ｐｇ／ｍＬ以上のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２００ｐｇ／ｍｌ、少なくとも２５０ｐｇ／ｍｌ、少なくとも３００ｐｇ／ｍｌ、少なくとも３５０ｐｇ／ｍｌ、少なくとも４００ｐｇ／ｍｌ、少なくとも４５０ｐｇ／ｍｌ、少なくとも５００ｐｇ／ｍｌ、少なくとも５５０ｐｇ／ｍｌ、少なくとも６００ｐｇ／ｍｌ、少なくとも６５０ｐｇ／ｍｌ、少なくとも７００ｐｇ／ｍｌ、少なくとも７５０ｐｇ／ｍｌ、少なくとも８００ｐｇ／ｍｌ、少なくとも８５０ｐｇ／ｍｌ、少なくとも９００ｐｇ／ｍｌ、少なくとも９５０ｐｇ／ｍｌ、または少なくとも１０００ｐｇ／ｍＬ以上のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも３００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも４００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも５００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも６００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも７００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも８００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも９００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも３０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも４０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも５０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも６０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも７０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも８０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも９０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１０，０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１５，０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２０，０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２５，０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも３０，０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも３５，０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも４０，０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも４５，０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも５０，０００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。

【0508】

いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも２５０ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも３００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも３５０ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも４００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも４５０ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも５００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも５５０ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも６００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも６５０ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも７００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも７５０ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも８００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも８５０ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも９００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、少なくとも９５０ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞、または少なくとも１０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも３００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも４００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも５００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも６００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも７００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも８００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも９００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも３０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも４０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも５０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも６０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも７０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも８０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも９０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１５，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２５，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも３０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも３５，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも４０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも４５，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも５０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞のＩＦＮ－γの分泌が可能なＴＩＬである。

【0509】

いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、ＩＦＮ－γの分泌と比較して、高くとも１／１、１／２、１／３、１／４、または１／５以下の低さのＴＦＮ－α（すなわち、ＴＦＮ－アルファ）の分泌レベルが可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、ＩＦＮ－γの分泌と比較して、高くとも１／１以下の低さのＴＦＮ－αの分泌レベルが可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、ＩＦＮ－γの分泌と比較して、高くとも１／２以下の低さのＴＦＮ－αの分泌レベルが可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、ＩＦＮ－γの分泌と比較して、高くとも１／３以下の低さのＴＦＮ－αの分泌レベルが可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、ＩＮＦ－γの分泌と比較して、高くとも１／４以下の低さのＴＦＮ－αの分泌レベルが可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、ＩＦＮ－γの分泌と比較して、高くとも１／５以下の低さのＴＮＦ－αの分泌レベルが可能なＴＩＬである。

【0510】

いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも５００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも１０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも２０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも３０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも４０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも５０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも６０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも７０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも８０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。いくつかの実施形態において、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬは、少なくとも９０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ／５ｅ５細胞以上のＴＮＦ－α（すなわち、ＴＮＦ－アルファ）の分泌が可能なＴＩＬである。

【0511】

いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γ及びグランザイムＢのレベルを測定して、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬの表現型特性を判定する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αのレベルを測定して、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬの表現型特性を判定する。いくつかの実施形態において、グランザイムＢ及びＴＮＦ－αのレベルを測定して、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬの表現型特性を判定する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－γ、グランザイムＢ、及びＴＮＦ－αのレベルを測定して、例えば、図２Ａ及び／または図２Ｂ及び／または図２Ｃ及び／または図９の方法を含む、本発明の増殖方法によって産生されるＴＩＬの表現型特性を判定する。

【0512】

一部の実施形態において、標的細胞を溶解するＴＩＬの細胞傷害能は、高感度の用量依存的方法でＴＩＬの細胞傷害能を測定するＴＩＬアッセイのための生物発光リダイレクト溶解アッセイ（効力アッセイ）に従って、生物発光細胞株Ｐ８１５（クローンＧ６）とのＴＩＬの共培養アッセイを使用して評価された。

【0513】

一部の実施形態において、本方法は、上記に記載したとおりの方法を用いた、ＴＩＬ生存率を評価するためのアッセイを含む。一部の実施形態において、ＴＩＬは、例えば図９に提供されるとおりのものを含め、上記で考察したとおり拡大培養される。一部の実施形態において、ＴＩＬは、生存率の評価前に凍結保存される。一部の実施形態において、生存率評価は、第１の拡大培養、第２の拡大培養、及び追加の第２の拡大培養の実施前にＴＩＬを解凍することを含む。一部の実施形態において、本方法は、ＴＩＬ集団の細胞増殖、細胞毒性、細胞死、及び／又はその他の生存率に関連する事項を評価するためのアッセイを提供する。生存率は、上記に記載されるＴＩＬ代謝アッセイのいずれか並びに当該技術分野において公知の細胞生存率の評価について公知の任意の方法によって測定することができる。一部の実施形態において、本方法は、図９に例示されるものを含め、本明細書に記載される方法を用いて拡大培養されたＴＩＬの細胞増殖、細胞毒性、細胞死、及び／又はその他の生存率に関連する事項を評価するためのアッセイを提供する。

【0514】

本発明はまた、ＴＩＬ生存率を決定するためのアッセイ方法も提供する。一部の実施形態において、ＴＩＬは、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して同等の生存率を有する。一部の実施形態において、ＴＩＬは、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して生存率が増加した。本開示は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）をより大きいＴＩＬ集団に拡大培養することによりＴＩＬの生存率をアッセイする方法も提供し、この方法は、
（ｉ）予め拡大培養された第１のＴＩＬ集団を入手すること；
（ｉｉ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で前記第１のＴＩＬ集団を培養することにより第１の拡大培養を実施して第２のＴＩＬ集団を生じさせること；及び
（ｉｉｉ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することにより第２の拡大培養を実施して第３のＴＩＬ集団を生じさせることであって、第３のＴＩＬ集団が第２のＴＩＬ集団より少なくとも１００倍数が多く、及び第３のＴＩＬ集団を入手するために第２の拡大培養が少なくとも１４日間実施され、第３のＴＩＬ集団が第２のＴＩＬ集団と比べて増加したエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞サブ集団を含み、及び第３の集団が生存率に関して更にアッセイされること
を含む。

【0515】

一部の実施形態において、本方法は、
（ｉｖ）第３のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、追加のＯＫＴ－３、及び追加のＡＰＣを添加することにより追加の第２の拡大培養を実施することを更に含み、ここで追加の第２の拡大培養は、ステップ（ｉｉｉ）で入手されたよりも大きいＴＩＬ集団を入手するため少なくとも１４日間実施され、より大きいＴＩＬ集団は第３のＴＩＬ集団と比べて増加したエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞サブ集団を含み、及び第３の集団は生存率に関して更にアッセイされる。

【0516】

一部の実施形態において、ステップ（ｉ）の前に、細胞は凍結保存される。

【0517】

一部の実施形態において、細胞はステップ（ｉ）の実施前に解凍される。

【0518】

一部の実施形態において、分析に十分なＴＩＬを入手するため、ステップ（ｉｖ）が１～４回繰り返される。

【0519】

一部の実施形態において、ステップ（ｉ）～（ｉｉｉ）又は（ｉｖ）は約４０日～約５０日の期間内に実施される。

【0520】

一部の実施形態において、ステップ（ｉ）～（ｉｉｉ）又は（ｉｖ）は約４２日～約４８日の期間内に実施される。

【0521】

一部の実施形態において、ステップ（ｉ）～（ｉｉｉ）又は（ｉｖ）は約４２日～約４５日の期間内に実施される。

【0522】

一部の実施形態において、ステップ（ｉ）～（ｉｉｉ）又は（ｉｖ）は約４４日以内に実施される。

【0523】

一部の実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）又は（ｉｖ）からの細胞は、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＴＣＲαβを新鮮採取細胞と同程度に発現する。

【0524】

一部の実施形態において、抗原提示細胞は末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である。

【0525】

一部の実施形態において、ＰＢＭＣはステップ（ｉｉｉ）において９～１７日目のいずれかに細胞培養物に加えられる。

【0526】

一部の実施形態において、ステップ（ｉｖ）のより大きいＴＩＬ集団中のエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞は、第３の細胞集団中のエフェクターＴ細胞、及び／又はセントラルメモリーＴ細胞と比べて、ＣＤ２７の発現、ＣＤ２８の発現、より長いテロメア、ＣＤ５７発現の増加、及びＣＤ５６発現の減少からなる群から選択される１つ以上の特徴を呈する。

【0527】

一部の実施形態において、エフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞はＣＤ５７発現の増加及びＣＤ５６発現の減少を呈する。

【0528】

一部の実施形態において、ＡＰＣは人工ＡＰＣ（ａＡＰＣ）である。

【0529】

一部の実施形態において、本方法は、高親和性Ｔ細胞受容体をコードする核酸を含む発現ベクターで第１のＴＩＬ集団を形質導入するステップを更に含む。

【0530】

一部の実施形態において、形質導入ステップはステップ（ｉ）の前に行われる。

【0531】

一部の実施形態において、本方法は、Ｔ細胞シグナル伝達分子の少なくとも１つのエンドドメインに融合した単鎖可変断片抗体を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含む発現ベクターで第１のＴＩＬ集団を形質導入するステップを更に含む。

【0532】

一部の実施形態において、形質導入ステップはステップ（ｉ）の前に行われる。

【0533】

一部の実施形態において、ＴＩＬは生存率に関してアッセイされる。

【0534】

一部の実施形態において、ＴＩＬは凍結保存後に生存率に関してアッセイされる。

【0535】

一部の実施形態において、ＴＩＬは凍結保存後及びステップ（ｉｖ）の後に生存率に関してアッセイされる。

【0536】

Ｔ及びＢリンパ球の多様な抗原受容体は、限られているが多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメントＶ（可変）、Ｄ（多様性）、Ｊ（結合）、及びＣ（定数）は、免疫グロブリン及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合特異性及び下流側での適用を決定する。本発明は、Ｔ細胞レパートリーの多様性を示し、増加させるＴＩＬを生成する方法を提供する（ポリクローナル性と称されることがある）。一部の実施形態において、Ｔ細胞レパートリーの多様性の増加は、新鮮に採取したＴＩＬ及び／又は例えば、図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して生存率が増加した。一部の実施形態において、本方法により得られたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。一部の実施形態において、第１の拡大培養で得られたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。一部の実施形態において、多様性の増加は、免疫グロブリンの多様性及び／又はＴ細胞受容体の多様性の増加である。一部の実施形態において、免疫グロブリンの多様性は、免疫グロブリン重鎖にある。一部の実施形態において、免疫グロブリンの多様性は、免疫グロブリン軽鎖にある。一部の実施形態において、多様性はＴ細胞受容体にある。一部の実施形態において、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるＴ細胞受容体の１つにある。一部の実施形態において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ及び／又はベータの発現が増加する。一部の実施形態において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファの発現が増加する。一部の実施形態において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ベータの発現が増加する。一部の実施形態において、ＴＣＲａｂ（即ち、ＴＣＲα／β）の発現が増加する。

【0537】

本開示によれば、ＴＩＬの生存率をアッセイする方法及び／又は対象への投与における更なる使用。一部の実施形態において、腫瘍浸潤リンパ球（ｔｕｍｏｒ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｔｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）（ＴＩＬ）をアッセイする方法は、
（ｉ）第１のＴＩＬ集団を入手すること；
（ｉｉ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することにより第１の拡大培養を実施して第２のＴＩＬ集団を生じさせること；及び
（ｉｉｉ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することにより第２の拡大培養を実施して第３のＴＩＬ集団を生じさせることであって、第３のＴＩＬ集団の数が第２のＴＩＬ集団より少なくとも５０倍多いこと；
（ｉｖ）第３のＴＩＬ集団を回収し、洗浄し、及び凍結保存すること；
（ｖ）凍結保存ＴＩＬを極低温で貯蔵すること；
（ｖｉ）第３のＴＩＬ集団を解凍して解凍された第３のＴＩＬ集団を提供すること；及び
（ｖｉｉ）第３の集団の細胞培養培地にＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及びＡＰＣを添加することにより、解凍された第３のＴＩＬ集団の一部の追加の第２の拡大培養を少なくとも３日の追加の拡大培養期間（ｒｅＲＥＰ期間と称されることがある）にわたって実施することであって、この第３の拡大培養を実施して第４のＴＩＬ集団を入手し、第４のＴＩＬ集団中のＴＩＬ数を第３のＴＩＬ集団中のＴＩＬ数と比較して比を求めること；
（ｖｉｉｉ）ステップ（ｖｉｉ）の比に基づき、解凍されたＴＩＬ集団が患者への投与に好適かどうかを決定すること；
（ｉｘ）ステップ（ｖｉｉｉ）において第４のＴＩＬ集団中のＴＩＬ数と第３のＴＩＬ集団中のＴＩＬ数との比が５：１より大きいと決定されるとき、治療上有効な投薬量の解凍された第３のＴＩＬ集団を患者に投与すること
を含む。

【0538】

一部の実施形態において、追加の拡大培養期間（ｒｅＲＥＰ期間と称されることがある）は、第４のＴＩＬ集団中のＴＩＬ数と第３のＴＩＬ集団中のＴＩＬ数との比が５０：１より大きくなるまで実施される。

【0539】

一部の実施形態において、治療上有効な投薬量となるのに十分なＴＩＬの数は約２．３×１０^１０～約１３．７×１０^１０個である。

【0540】

一部の実施形態において、ステップ（ｉ）～（ｖｉｉ）は約４０日～約５０日の期間内に実施される。一部の実施形態において、ステップ（ｉ）～（ｖｉｉ）は約４２日～約４８日の期間内に実施される。一部の実施形態において、ステップ（ｉ）～（ｖｉｉ）は約４２日～約４５日の期間内に実施される。一部の実施形態において、ステップ（ｉ）～（ｖｉｉ）は約４４日以内に実施される。

【0541】

一部の実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）又は（ｖｉｉ）からの細胞は、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＴＣＲαβを新鮮採取細胞と同程度に発現する。一部の実施形態において細胞はＴＩＬである。

【0542】

一部の実施形態において、抗原提示細胞は末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である。一部の実施形態において、ＰＢＭＣはステップ（ｉｉｉ）において９～１７日目のいずれかに細胞培養物に加えられる。

【0543】

一部の実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）又は（ｖｉｉ）のより大きいＴＩＬ集団中のエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞は、第３の細胞集団中のエフェクターＴ細胞、及び／又はセントラルメモリーＴ細胞と比べて、ＣＤ２７の発現、ＣＤ２８の発現、より長いテロメア、ＣＤ５７発現の増加、及びＣＤ５６発現の減少からなる群から選択される１つ以上の特徴を呈する。

【0544】

一部の実施形態において、エフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞はＣＤ５７発現の増加及びＣＤ５６発現の減少を呈する。

【0545】

一部の実施形態において、ＡＰＣは人工ＡＰＣ（ａＡＰＣ）である。

【0546】

一部の実施形態において、高親和性Ｔ細胞受容体をコードする核酸を含む発現ベクターで第１のＴＩＬ集団を形質導入するステップ。

【0547】

一部の実施形態において、形質導入ステップはステップ（ｉ）の前に行われる。

【0548】

一部の実施形態において、Ｔ細胞シグナル伝達分子の少なくとも１つのエンドドメインに融合した単鎖可変断片抗体を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含む発現ベクターで第１のＴＩＬ集団を形質導入するステップ。

【0549】

一部の実施形態において、形質導入ステップはステップ（ｉ）の前に行われる。

【0550】

一部の実施形態において、ＴＩＬはステップ（ｖｉｉ）の後に生存率に関してアッセイされる。

【0551】

本開示はまた、更なるＴＩＬのアッセイ方法も提供する。一部の実施形態において、本開示は、ＴＩＬのアッセイ方法を提供し、この方法は、
（ｉ）第１の凍結保存ＴＩＬ集団の一部を入手すること；
（ｉｉ）第１の凍結保存ＴＩＬ集団の一部を解凍すること；
（ｉｉｉ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団の一部を少なくとも３日の追加の拡大培養期間（（ｒｅＲＥＰ期間と称されることがある）にわたって培養することにより第１の拡大培養を実施して第２のＴＩＬ集団を生じさせることであって、第１のＴＩＬ集団からの一部を第２のＴＩＬ集団と比較してＴＩＬ数の比を求め、第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬ数と第１のＴＩＬ集団の一部のＴＩＬ数との比が５：１より大きいこと；
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の比に基づき、第１のＴＩＬ集団が患者への治療的投与における使用に好適かどうかを決定すること；
（ｖ）ステップ（ｉｖ）において第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬ数と第１のＴＩＬ集団中のＴＩＬ数との比が５：１より大きいと決定されるとき、第１のＴＩＬ集団が治療的投与における使用に好適であると決定すること
を含む。

【0552】

一部の実施形態において、第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬ数と第１のＴＩＬ集団の一部のＴＩＬ数との比は５０：１より大きい。

【0553】

一部の実施形態において、本方法は、本明細書に提供される任意の実施形態に記載されるとおりの方法によりステップ（ｉ）からの第１の凍結保存ＴＩＬ集団全体の拡大培養を実施することを更に含む。

【0554】

一部の実施形態において、本方法は、ステップ（ｉ）からの第１の凍結保存ＴＩＬ集団全体を患者に投与することを更に含む。

【0555】

Ｋ．ＴＩＬ製造用閉鎖系
本発明は、ＴＩＬ培養プロセス中の閉鎖系の使用を提供する。かかる閉鎖系は、微生物汚染の防止及び／又は削減を可能にし、使用するフラスコの数が少なくなり、コスト削減が可能となる。一部の実施形態において、閉鎖系は２つの容器を使用する。

【0556】

かかる閉鎖系は、当該技術分野で公知であり、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｂｅｒ／ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．ｈｔｍ及びｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ＢｉｏｌｏｇｉｃｓＢｌｏｏｄＶａｃｃｉｎｅｓ／ＧｕｉｄａｎｃｅＣｏｍｐｌｉａｎｃｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／Ｇｕｉｄａｎｃｅｓ／Ｂｌｏｏｄ／ｕｃｍ０７６７７９．ｈｔｍ．に記載されている。

【0557】

ＦＤＡのウェブサイトで提供されているように、滅菌方法を備えた閉鎖系は公知であり、詳細に記載されている。ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ＢｉｏｌｏｇｉｃｓＢｌｏｏｄＶａｃｃｉｎｅｓ／ＧｕｉｄａｎｃｅＣｏｍｐｌｉａｎｃｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／Ｇｕｉｄａｎｃｅｓ／Ｂｌｏｏｄ／ｕｃｍ０７６７７９．ｈｔｍを参照のこと。上記で参照され、以下の関連箇所にて提供されている。

【0558】

序論
滅菌接続装置（ＳＴＣＤ：Ｓｔｅｒｉｌｅ Ｃｏｎｎｅｃｔｉｎｇ Ｄｅｖｉｃｅ）は、互換性のある２つの配管の間に滅菌溶接を産生する。この手順により、様々な直径の容器及びチューブを滅菌接続できる。このガイダンスでは、これらの装置の使用に関する推奨管理基準と手順について記載する。このガイダンスは、滅菌接続装置の製造業者がマーケティングの承認又は認可を得るためにＦＤＡに提出しなければならないデータ又は情報は取り扱っていない。また、表示方法において許可されていない目的で承認又は認可された滅菌接続装置を使用すると、米連邦食品医薬品化粧品法下で、装置が粗悪品及び不正表示品と見なされる可能性があることに注意することも重要である。

【0559】

１．ＦＤＡ推奨事項
ＦＤＡ認可のＳＴＣＤを日常的に使用することを提案する血液製剤の製造業者は、各血液製剤の標準操作手順（ＳＯＰ：Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）マニュアルに、かかる使用に関する情報を組み込む必要がある。これらの記載には、記録管理、製品追跡、チューブ溶接品質管理、ソフトウェア及び使い捨て用品のロット番号（追加する要素の販売業者を含む）が含まれていなければならない。品質管理手順には、各溶接の完全性試験を含めなくてはならない。

【0560】

２．ＳＴＣＤの適用
ユーザは、装置の使用により、安全性と有効性が実証されていない規制製品の新製品を作成したり、構成を大幅に変更したりする可能性があることに注意する必要がある。ライセンスの対象となる「新製品」については、ＳＯＰの提出に加え、申請書又は申請書の補足資料をＦＤＡに提出する必要がある。一般に、細胞組成を含むプーリング又は混合は、ライセンス適用又は適用の追加の提出及び承認を必要とする製品の変更を表す。かかる適用及び適用の追加には、「新製品」が提案された日付の期間全体にわたって意図された使用に対して安全且つ効果的であることを実証するデータ及び製造手順の説明を含める必要がある。

【0561】

以下の論評は、ＦＤＡが認可又は承認したＳＴＣＤのより一般的な使用に関するガイダンスとして提供されている。

【0562】

Ｌ．血液採血セットへの新しい針又は小さい針の追加
手順の開始前にＳＴＣＤを使用して針を追加すること（全血液採取、血小板フェレーシス、又は元血漿採取）は、機能的に閉鎖系を開放するものとは見なされない。手順中に針を追加する場合は、液体充填チューブの溶接が承認されているＳＴＣＤのみを使用する必要がある。溶接の完全性試験を満たす場合、ＳＴＣＤの使用は機能的に閉鎖系を開放するものとは見なされない。

【0563】

血小板、開放系で調製されたフェレーシスには２４時間の期限が表示され、機能的閉鎖系で調製された血小板、フェレーシス製品には５日間の期限が表示される必要がある（Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｆｏｒ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ， Ｐｈｅｒｅｓｉｓ， Ｏｃｔｏｂｅｒ ７， １９８８を参照のこと）。

【0564】

追加されたチューブと針の販売業者と仕様は、血液センターのＳＯＰと記録に記載する必要がある。針を追加するためのＳＴＣＤの使用は、認可された施設が事前承認を必要とする製造の大きな変化を表すものではない。

【0565】

Ｍ．成分の調製のためのＳＴＣＤの使用
ＳＴＣＤを使用して追加する成分調製バッグを取り付ける場合、移送パックの販売業者を特定し、血液ユニット番号とＡＢＯ／Ｒｈの適切な検証を識別する記録を適切に維持する必要がある。全ての血液及び血液成分に適切な表示をする必要がある（２１ ＣＦＲ ６０６．１２１）。
例：
・新鮮凍結血漿からクリオプレシピテート抗血友病因子を産生するため、４枚目のバッグを全血採取トリプルパックに追加する。
・赤血球ユニットへの添加剤溶液の接続。
・成分の製造での使用のためにＦＤＡで認可されたインラインフィルターの追加。
・血小板フェレーシスハーネスへの第３の保管容器の追加。
・上記の用途では、手順を作成して記録を保持する必要があるが、手順を決めるために使用権者がＦＤＡの承認を得る必要はない。

【0566】

１．血液製剤をプールするためのＳＴＣＤの使用
全血採取から調製された血小板をプールするためにＳＴＣＤを適切に使用することにより、一般的に使用されるスパイク及びポートの入り口からの潜在的な汚染を取り除くことができる。輸血の直前実施されるプーリングは、かかる適切な使用の例である。プールされた血小板は、プール後４時間以内に投与しなくてはならない（２１ ＣＦＲ ６０６．１２２（ｌ）（２）を参照）。

【0567】

ただし、プーリング及びその後の保管は、無作為のドナーユニットの管理と比較してリスクを高める可能性があり、ある汚染されたユニットが投与前に他のユニットと共にプールされ、貯蔵される場合、投与される総細菌接種量は、追加量における複製の結果として増加する可能性がある。したがって、血小板を４時間を超えるプール及び貯蔵するためのＳＴＣＤの推奨使用は、かかるプーリングがリスク増加と関連しているか否かを十分に解決するデータによって裏付けられるべきである。

【0568】

かかる血小板のプーリングは、新製品の製造を構成する。

【0569】

血小板を含むプーリング又は混合は、保管期間が４時間を超える場合、新製品の製造と見なされ、ライセンス申請又は申請補足資料の提出と承認が必要となる。

【0570】

２．小児用の使用及び分割ユニット用のアリコートを調製するためのＳＴＣＤの使用
ＳＴＣＤを使用して調製された全血、赤血球、新鮮凍結血漿の小児用ユニット及び分割ユニットは、以下の条件を満たす場合、生物製剤承認申請（ＢＬＡ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｌｉｃｅｎｓｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）の補足資料が必要な新製品とは見なさない。
製造業者は、使用する各抗凝固剤の承認を含む、元の（即ち、分割されていない）製品について、承認された生物製剤承認又は追加ライセンスを有している必要がある。
表示は、配布前に確認及び承認のために提出する必要がある。表記は、ＦＤＡ Ｆｏｒｍ ２５６７、Ｔｒａｎｓｍｉｔｔａｌ ｏｆ Ｌａｂｅｌｓ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｒｓの所見欄に基づいて行う必要がある。
準備中の成分の保管が承認された最終産物容器を使用する必要がある。

【0571】

認可を受けて製造された血小板には、少なくとも５．５×（１０）^１０個の血小板が含まれていなくてはならない（２１ ＣＦＲ ６４０．２４（ｃ））。免許で製造された血小板、フェレーシスには、少なくとも３．０×（１０）^１１の血小板が含まれていなくてはならない（Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ， Ｐｈｅｒｅｓｉｓ， Ｏｃｔｏｂｅｒ ７， １９８８を参照）。

【0572】

ＳＴＣＤを使用して全血採取及び自動化されたヘマフェレーシス手順によって調製された血漿及び血小板から分割された製品を調製する場合に従うべき手順には、以下の説明を含める必要がある。
・ＦＤＡが認可したＳＴＣＤでアフェレーシスハーネス又は収集容器を改良する方法。
・スプリット血漿又は全血製剤の最小量。
・スプリット血小板フェレーシス製剤の容積及び血小板濃度。
・製剤の保管時間。製剤は承認された容器に入れ、かかる容器の表示に記載されている保管時間に合わせる必要がある。
・血液センターの記録において分割された製品に表示を付けて追跡するために使用する方法。

【0573】

注記：アリコートの表示手順は、必要に応じて、全ての成分の追跡及び不良品回収を許可するのに十分な手順記帳に明確に記載する必要がある。

【0574】

３．自動化された血漿交換手順中追加の生理食塩水ライン又は抗凝固剤ラインの接続ためのＳＴＣＤの使用
手順を作成して機器製造業者の使用指示に従って記録を保持する必要があるが、手順を決めるために使用権者がＦＤＡの承認を得る必要はない。

【0575】

４．処理液の取り付けのためのＳＴＣＤの使用
ＳＴＣＤを使用して、洗浄液又は凍結赤血球製剤に処理液の入った容器を取り付ける場合、得られた産物の定められた期日期間は２４時間であるが、より長い期間をサポートするＣＢＥＲへの承認申請書又は申請補足資料の書式で提供される場合に限る（２１ ＣＦＲ ６１０．５３（ｃ））。免除又は変更は、ＣＢＥＲセンター長から書面で承認されなければならない（２１ ＣＦＲ ６１０．５３（ｄ））。

【0576】

５．ＦＤＡ認可済み白血球除去フィルターを追加するためのＳＴＣＤの使用
一部の白血球除去フィルターは、全血採取系に一体的に取り付けられていない。保管前ろ過にＳＴＣＤを使用する手順は、フィルター製造業者の使用指示に従わなくてはならない。

【0577】

交付前に白血球が減少した場合、製造上の重要な変化と見なされる。したがって、ＳＴＣＤを使用して調製された新しい白血球削減製品の場合、製造業者は生物製剤承認申請（２１ ＣＦＲ ６０１．２）又は事前承認申請補足資料をＦＤＡ（２１ ＣＦＲ ６０１．１２）に提出する必要がある。

【0578】

血液製剤容器から試験用試料を取り出すためのＳＴＣＤの使用（例えば、血小板又は血小板の容器から血小板の試料を取り出すためのＳＴＣＤの使用、交差適合用のフェレーシスなど）。

【0579】

試料回収後の産物の容積及び／又は細胞数が元の表示又は情報の回状に記載されているものと異なる場合、製剤の表示は新しい容積及び／又は細胞数を反映すべく修正しなくてはならない。例えば、血小板１単位中の血小板数を５．５×（１０）^１０未満に減少させる試料は取り出してはならない（２１ ＣＦＲ ６４０．２４ （ｃ））。

【0580】

６．ＦＤＡガイダンスからの追加情報
ＦＤＡガイダンスでは、一般的なガイダンスに加え、ＳＴＣＤ使用を申し入れるＦＤＡへの申請書及び申請補足資料の提出のための仕様に関する具体的な情報及び例を示す。ＳＴＣＤの適切な使用に関してさらなる疑問が生じた場合は、ＦＤＡ生物製剤評価センター血液研究・審査課まで質問すること。

【0581】

一部の実施形態において、閉鎖系は、腫瘍断片が得られた時点からＴＩＬが患者への投与又は凍結保存の準備が整うまで１つの容器を使用する。一部の実施形態において、２つの容器が使用される場合、第１の容器は閉鎖型Ｇコンテナであり、ＴＩＬ集団は遠心され、第１の閉鎖型Ｇコンテナを開かずに輸注バッグに移される。一部の実施形態において、２つの容器が使用される場合、輸注バッグは、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ含有輸注バッグである。閉鎖系又は閉鎖ＴＩＬ細胞培養系は、腫瘍試料及び／又は腫瘍断片が追加されると、系が外側からしっかりと密閉され、細菌、真菌、及び／又はその他の微生物汚染がない閉鎖環境を形成する。

【0582】

一部の実施形態において、微生物汚染の減少は約５％～約１００％である。一部の実施形態において、微生物汚染の減少は約５％～約９５％である。一部の実施形態において、微生物汚染の減少は約５％～約９０％である。一部の実施形態において、微生物汚染の減少は約１０％～約９０％である。一部の実施形態において、微生物汚染の減少は約１５％～約８５％である。一部の実施形態において、微生物汚染の減少は、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。

【0583】

閉鎖系は、微生物汚染の不在下及び／又は大幅に減少させＴＩＬを成長させる。

【0584】

更に、ＴＩＬ細胞培養環境のｐＨ、二酸化炭素分圧及び酸素分圧は、細胞が培養されるにつれてそれぞれ変化する。したがって、たとえ細胞培養に適した培地が流通していても、ＴＩＬ成長に最適な環境として閉鎖環境を常に維持する必要がある。このため、閉鎖環境の培養液内のｐＨ、二酸化炭素分圧及び酸素分圧の物理的要因は、センサーによって監視され、そのセンサーの信号は、培養環境の入口に設置されたガス交換器の制御に使用され、閉鎖環境のガス分圧は、細胞培養環境を最適化するため、培養液の変化に従ってリアルタイムで調整されることが望ましい。一部の実施形態において、本発明は、閉鎖環境への入口に、閉鎖環境のｐＨ、二酸化炭素分圧及び酸素分圧を測定し、監視装置からの信号に基づいてガス濃度を自動的に調整することにより、細胞培養環境を最適化する監視装置を備えたガス交換器を一体化した閉鎖細胞培養系を提供する。

【0585】

一部の実施形態において、閉鎖環境内の圧力は連続的又は断続的に制御される。つまり、閉鎖環境内の圧力は、例えば、圧力維持装置によって変化させることができ、即ち、空間が、陽圧状態のＴＩＬの成長に適していることを保証するか、又は陰圧状態の流体の滲出を促進し、ひいては、細胞成長を促進することを確実にする。更に、断続的に負圧を加えることにより、閉鎖環境の容積の一時的な収縮によって閉鎖環境内の循環液を均一且つ効率的に交換することが可能である。

【0586】

一部の実施形態において、ＴＩＬの成長に最適な培養成分を置換又は追加することができ、ＩＬ－２及び／又はＯＫＴ３などの要因、並びに組み合わせを追加してもよい。

【0587】

Ｎ．細胞培養
ある実施形態において、ＴＩＬの拡大培養方法は、上記で考察され図９で例示されているものを含み、約５，０００ｍＬ～約２５，０００ｍＬの細胞培地、約５，０００ｍＬ～約１０，０００ｍＬの細胞培地、又は約５，８００ｍＬ～約８，７００ｍＬの細胞培地を使用することを含み得る。一部の実施形態において、培地は、例えば、実施例２１に記載されるように、無血清培地である。一部の実施形態において、第１の拡大培養の培地は無血清である。一部の実施形態において、第２の拡大培養の培地は無血清である。一部の実施形態において、第１及び第２の拡大培養の培地は双方とも無血清である。ある実施形態において、ＴＩＬ数の拡大には１種類以下の細胞培養培地が使用される。任意の好適な細胞培養培地、例えば、ＡＩＭ－Ｖ細胞培地（Ｌ－グルタミン、５０μＭ硫酸ストレプトマイシン、及び１０μＭ硫酸ゲンタマイシン）細胞培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）を使用し得る。この点に関して、本発明の方法では有利には、ＴＩＬ数の拡大に必要な培地の量及び培地の種類の数が減少する。ある実施形態において、ＴＩＬ数の拡大は、３日又は４日に１回以下の頻度で細胞をフィードすることを含み得る。ガス透過性容器内で細胞の数を拡大すると、細胞の拡大培養に必要なフィーディング頻度が減少することにより細胞の数の拡大に必要な手順が簡便になる。

【0588】

ある実施形態において、第１及び／又は第２のガス透過性容器内の細胞培地はろ過されていない。ろ過されていない細胞培地を使用すると、細胞の数の拡大に必要な手順が簡便になり得る。ある実施形態において、第１及び／又は第２のガス透過性容器内の細胞培地はβ－メルカプトエタノール（ＢＭＥ）を含まない。

【0589】

ある実施形態において、哺乳類から腫瘍組織試料を入手すること；細胞培地が中に入った第１のガス透過性容器内で腫瘍組織試料を培養すること；腫瘍組織試料からＴＩＬを入手すること；細胞培地を含有する第２のガス透過性容器内でＴＩＬ数を約７～１４日間、例えば約１１日間拡大することを含む本方法の所要期間。一部の実施形態において、プレＲＥＰは約７～１４日間、例えば、約１１日間である。一部の実施形態において、ＲＥＰは約７～１４日間、例えば、約１１日間である。

【0590】

ある実施形態において、ＴＩＬはガス透過性容器内で拡大培養される。ガス透過性容器は、米国特許出願公開第２００５／０１０６７１７ Ａ１号（この開示は参照により本明細書に援用される）に記載されるものを含め、当該技術分野において公知の方法、組成物、及び装置を用いたＰＢＭＣを使用したＴＩＬの拡大培養に用いられている。ある実施形態において、ＴＩＬはガス透過性バッグ内で拡大培養される。ある実施形態において、ＴＩＬは、Ｘｕｒｉ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｗ２５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）など、ガス透過性バッグ内でＴＩＬを拡大培養する細胞拡大培養システムを使用して拡大培養される。ある実施形態において、ＴＩＬは、Ｘｕｒｉ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｗ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）としても知られるＷＡＶＥ Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ Ｓｙｓｔｅｍなど、ガス透過性バッグ内でＴＩＬを拡大培養する細胞拡大培養システムを使用して拡大培養される。ある実施形態において、細胞拡大培養システムは、約１００ｍＬ、約２００ｍＬ、約３００ｍＬ、約４００ｍＬ、約５００ｍＬ、約６００ｍＬ、約７００ｍＬ、約８００ｍＬ、約９００ｍＬ、約１Ｌ、約２Ｌ、約３Ｌ、約４Ｌ、約５Ｌ、約６Ｌ、約７Ｌ、約８Ｌ、約９Ｌ、及び約１０Ｌからなる群から選択される容積を有するガス透過性細胞バッグを含む。

【0591】

ある実施形態において、ＴＩＬはＧ－Ｒｅｘフラスコ（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇから市販されている）において拡大培養することができる。かかる実施形態は、細胞集団を約５×１０^５細胞／ｃｍ^２から１０×１０^６～３０×１０^６細胞／ｃｍ^２へと拡大培養することを可能にする。一実施形態では、これはフィーディングを伴わない。ある実施形態において、これは、Ｇ－Ｒｅｘフラスコ内に約１０ｃｍの高さの培地がある限りフィーディングなしである。ある実施形態において、これにフィーディングはないが、１つ以上のサイトカインが加えられる。ある実施形態において、サイトカインは、サイトカインを培地と混合する必要は一切なしにボーラスとして加えることができる。かかる容器、装置、及び方法は当該技術分野において公知で、ＴＩＬの拡大培養に用いられており、米国特許出願公開第２０１４／０３７７７３９Ａ１号、国際公開第２０１４／２１００３６ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０１１５６１７ Ａ１号、国際公開第２０１３／１８８４２７ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１１／０１３６２２８ Ａ１号、米国特許第８，８０９，０５０ Ｂ２号、国際公開第２０１１／０７２０８８ Ａ２号、米国特許出願公開第２０１６／０２０８２１６ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３ Ａ１号、国際公開第２０１２／１２９２０１ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０１０２０７５ Ａ１号、米国特許第８，９５６，８６０ Ｂ２号、国際公開第２０１３／１７３８３５ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１５／０１７５９６６ Ａ１号（これらの開示は参照により本明細書に援用される）に記載されるものが含まれる。かかるプロセスはまた、Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ， ２０１２， ３５：２８３－２９２にも記載されている。

【0592】

Ｏ．任意選択のＴＩＬ遺伝子改変
一部の実施形態において、ＴＩＬは任意選択で、限定はされないが、高親和性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、ＭＡＧＥ－１、ＨＥＲ２、若しくはＮＹ－ＥＳＯ－１などの腫瘍関連抗原を標的とするＴＣＲ、又は腫瘍関連細胞表面分子（例えばメソテリン）若しくは系統限定的細胞表面分子（例えばＣＤ１９）に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含め、追加の機能性を含むように遺伝子改変される。

【0593】

Ｐ．任意選択のＴＩＬ凍結保存
バルクＴＩＬ集団又はＴＩＬの拡大培養集団のいずれかを、必要に応じて凍結保存できる。一部の実施形態において、治療用ＴＩＬ集団で凍結保存が行われる。一部の実施形態において、凍結保存は、第２の拡大培養後に回収したＴＩＬで生じる。一部の実施形態において、図９の例示的ステップＦのＴＩＬで凍結保存が行われる。一部の実施形態において、ＴＩＬは輸注バッグ中に凍結保存される。一部の実施形態において、ＴＩＬは、輸注バッグでの置換前に凍結保存される。一部の実施形態において、ＴＩＬは、凍結保存されるが輸注バッグ中には置かれない。一部の実施形態において、凍結保存は凍結保存培地を使用して実施される。一部の実施形態において、凍結保存培地は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有する。これは、概して、凍結溶液、例えば８５％補体不活性化ＡＢ血清及び１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中にＴＩＬ集団を入れることにより達成される。この溶液中の細胞を極低温バイアルに入れ、－８０℃で２４時間貯蔵し、任意選択で凍結保存のため気体窒素フリーザーに移す。Ｓａｄｅｇｈｉ， ｅｔ ａｌ．， Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａ ２０１３， ５２， ９７８－９８６を参照のこと。

【0594】

適切な場合、細胞をフリーザーから取り出し、３７℃の水浴中で溶液の約５分の４が解凍されるまで解凍する。細胞は概して完全培地中に再懸濁され、任意選択で１回以上洗浄される。一部の実施形態では、当該技術分野において公知のとおり解凍ＴＩＬをカウントし、生存率に関して評価することができる。

【0595】

好ましい実施態様において、ＴＩＬの集団はＣＳ１０凍結保存培地（ＣｒｙｏＳｔｏｒ １０、ＢｉｏＬｉｆｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を用いて凍結保存される。好ましい実施態様において、ＴＩＬの集団は凍結保存培地（ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有する）を用いて凍結保存される。好ましい実施形態において、ＴＩＬの集団は、１：１（容積：容積）の比のＣＳ１０及び細胞培養培地を用いて凍結保存される。好ましい実施形態において、ＴＩＬの集団は、約１：１（容積：容積）の比のＣＳ１０及び細胞培養培地を使用し、更に追加のＩＬ－２を含んで凍結保存される。

【0596】

上記でステップＡ～Ｅにおいて考察したとおり、ＴＩＬ拡大培養プロセス全体を通じて数々の時点で凍結保存を行うことができる。一部の実施形態において、ステップＢに係る第１の拡大培養後のバルクＴＩＬ集団又はステップＤに係る１回以上の第２の拡大培養後の拡大培養ＴＩＬ集団が凍結保存されてもよい。凍結保存は、概して、凍結溶液、例えば８５％補体不活性化ＡＢ血清及び１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中にＴＩＬ集団を置くことにより達成し得る。この溶液中の細胞を極低温バイアルに入れ、－８０℃で２４時間貯蔵し、任意選択で凍結保存のため気体窒素フリーザーに移す。Ｓａｄｅｇｈｉ， ｅｔ ａｌ．， Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａ ２０１３， ５２， ９７８－９８６を参照のこと。

【0597】

適切な場合、細胞をフリーザーから取り出し、３７℃の水浴中で溶液の約５分の４が解凍されるまで解凍する。細胞は概して完全培地中に再懸濁され、任意選択で１回以上洗浄される。一部の実施形態では、当該技術分野において公知のとおり解凍ＴＩＬをカウントし、生存率に関して評価することができる。

【0598】

ある場合には、ステップＢのＴＩＬ集団は、以下で考察するプロトコルを用いて直ちに凍結保存することができる。或いは、バルクＴＩＬ集団にステップＣ及びステップＤを施し、ステップＤ後に凍結保存することができる。同様に、遺伝子修飾ＴＩＬを治療に使用する場合、ステップＢ又はステップＤのＴＩＬ集団は、適切な処置のため遺伝子修飾の対象となり得る。

【0599】

Ｑ．任意選択の細胞生存率分析
任意選択で、第１の拡大培養（初めのバルク拡大培養と称されることがある）の後に、当該技術分野において公知の標準アッセイを用いて細胞生存率アッセイを実施することができる。例えば、バルクＴＩＬの試料に対してトリパンブルー色素排除アッセイを行うことができ、これは死細胞を選択的に標識して生存率の評価を可能にするものである。生存率の試験に用いられる他のアッセイとしては、限定はされないが、アラマーブルーアッセイ；及びＭＴＴアッセイを挙げることができる。

【0600】

１．細胞数、生存率、フローサイトメトリー
一部の実施形態において、細胞数及び／又は生存率が測定される。限定はされないが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ５６などのマーカー、並びに本明細書に開示又は記載される任意の他のものの発現を抗体によるフローサイトメトリー、例えば限定はされないが、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＢＤ Ｂｉｏ－ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ， ＣＡ）から市販されているものによって測定することができる。細胞は、ディスポーザブルｃ－ｃｈｉｐ血球計算盤（ＶＷＲ、Ｂａｔａｖｉａ， ＩＬ）を使用して手動でカウントすることができ、及び生存率は、限定はされないがトリパンブルー染色を含め、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて評価することができる。

【0601】

ある場合には、バルクＴＩＬ集団は、以下で考察するプロトコルを用いて直ちに凍結保存することができる。或いは、バルクＴＩＬ集団は、以下で考察するとおり、ＲＥＰに供し、次に凍結保存してもよい。同様に、療法において遺伝子修飾ＴＩＬが使用されることになる場合、バルク又はＲＥＰ ＴＩＬ集団を好適な処置のための遺伝子修飾に供してもよい。

【0602】

２．細胞培養
ある実施形態において、ＴＩＬの拡大培養方法は、約５，０００ｍＬ～約２５，０００ｍＬの細胞培地、約５，０００ｍＬ～約１０，０００ｍＬの細胞培地、又は約５，８００ｍＬ～約８，７００ｍＬの細胞培地を使用することを含み得る。ある実施形態において、ＴＩＬ数の拡大には１種類以下の細胞培養培地が使用される。任意の好適な細胞培養培地、例えば、ＡＩＭ－Ｖ細胞培地（Ｌ－グルタミン、５０μＭ硫酸ストレプトマイシン、及び１０μＭ硫酸ゲンタマイシン）細胞培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）を使用し得る。この点に関して、本発明の方法では有利には、ＴＩＬ数の拡大に必要な培地の量及び培地の種類の数が減少する。ある実施形態において、ＴＩＬ数の拡大は、３日又は４日に１回以下の頻度で細胞をフィードすることを含み得る。ガス透過性容器内で細胞の数を拡大すると、細胞の拡大培養に必要なフィーディング頻度が減少することにより細胞の数の拡大に必要な手順が簡便になる。

【0603】

ある実施形態において、第１及び／又は第２のガス透過性容器内の細胞培地はろ過されていない。ろ過されていない細胞培地を使用すると、細胞の数の拡大に必要な手順が簡便になり得る。ある実施形態において、第１及び／又は第２のガス透過性容器内の細胞培地はβ－メルカプトエタノール（ＢＭＥ）を含まない。

【0604】

ある実施形態において、哺乳類から腫瘍組織試料を入手すること；細胞培地が中に入った第１のガス透過性容器内で腫瘍組織試料を培養すること；腫瘍組織試料からＴＩＬを入手すること；ａＡＰＣを使用して細胞培地が中に入った第２のガス透過性容器内でＴＩＬ数を約１４～約４２日間、例えば約２８日間拡大することを含む本方法の所要期間。

【0605】

ある実施形態において、ＴＩＬはガス透過性容器内で拡大培養される。ガス透過性容器は、米国特許出願公開第２００５／０１０６７１７ Ａ１号（この開示は参照により本明細書に援用される）に記載されるものを含め、当該技術分野において公知の方法、組成物、及び装置を用いたＰＢＭＣを使用したＴＩＬの拡大培養に用いられている。ある実施形態において、ＴＩＬはガス透過性バッグ内で拡大培養される。ある実施形態において、ＴＩＬは、Ｘｕｒｉ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｗ２５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）など、ガス透過性バッグ内でＴＩＬを拡大培養する細胞拡大培養システムを使用して拡大培養される。ある実施形態において、ＴＩＬは、Ｘｕｒｉ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｗ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）としても知られるＷＡＶＥ Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ Ｓｙｓｔｅｍなど、ガス透過性バッグ内でＴＩＬを拡大培養する細胞拡大培養システムを使用して拡大培養される。ある実施形態において、細胞拡大培養システムは、約１００ｍＬ、約２００ｍＬ、約３００ｍＬ、約４００ｍＬ、約５００ｍＬ、約６００ｍＬ、約７００ｍＬ、約８００ｍＬ、約９００ｍＬ、約１Ｌ、約２Ｌ、約３Ｌ、約４Ｌ、約５Ｌ、約６Ｌ、約７Ｌ、約８Ｌ、約９Ｌ、及び約１０Ｌからなる群から選択される容積を有するガス透過性細胞バッグを含む。

【0606】

ある実施形態において、ＴＩＬはＧ－Ｒｅｘフラスコ（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇから市販されている）において拡大培養することができる。かかる実施形態は、細胞集団を約５×１０^５細胞／ｃｍ^２から１０×１０^６～３０×１０^６細胞／ｃｍ^２へと拡大培養することを可能にする。一実施形態では、これはフィーディングを伴わない。ある実施形態において、これは、Ｇ－Ｒｅｘフラスコ内に約１０ｃｍの高さの培地がある限りフィーディングなしである。ある実施形態において、これにフィーディングはないが、１つ以上のサイトカインが加えられる。ある実施形態において、サイトカインは、サイトカインを培地と混合する必要は一切なしにボーラスとして加えることができる。かかる容器、装置、及び方法は当該技術分野において公知で、ＴＩＬの拡大培養に用いられており、米国特許出願公開第２０１４／０３７７７３９Ａ１号、国際公開第２０１４／２１００３６ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０１１５６１７ Ａ１号、国際公開第２０１３／１８８４２７ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１１／０１３６２２８ Ａ１号、米国特許第８，８０９，０５０ Ｂ２号、国際公開第２０１１／０７２０８８ Ａ２号、米国特許出願公開第２０１６／０２０８２１６ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３ Ａ１号、国際公開第２０１２／１２９２０１ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０１０２０７５ Ａ１号、米国特許第８，９５６，８６０ Ｂ２号、国際公開第２０１３／１７３８３５ Ａ１号、米国特許出願公開第２０１５／０１７５９６６ Ａ１号（これらの開示は参照により本明細書に援用される）に記載されるものが含まれる。かかるプロセスはまた、Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ， ２０１２， ３５：２８３－２９２にも記載されている。任意選択のＴＩＬ遺伝子改変

【0607】

一部の実施形態において、ＴＩＬは任意選択で、限定はされないが、高親和性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、ＭＡＧＥ－１、ＨＥＲ２、若しくはＮＹ－ＥＳＯ－１などの腫瘍関連抗原を標的とするＴＣＲ、又は腫瘍関連細胞表面分子（例えばメソテリン）若しくは系統限定的細胞表面分子（例えばＣＤ１９）に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含め、追加の機能性を含むように遺伝子改変される。

【0608】

ＩＶ．患者の処置方法
処置方法は、最初のＴＩＬ収集及びＴＩＬの培養から始まる。かかる方法については、両方ともに当該技術分野において、例えばＪｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ， ２０１２， ３５（３）：２８３－２９２（全体として参照により本明細書に援用される）により記載されている。処置方法の実施形態は、実施例を含む以下のセクション全体で説明される。

【0609】

本明細書に記載の方法、例えば上記のステップＡ～Ｆに記載の方法を含む、又は上記のステップＡ～Ｆに記載の方法（又、図２Ａ及び／または図９に示すものなど）に従って作製された拡大培養ＴＩＬは、がん患者の処置における特定の使用（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｏｆｆ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ２０１６， ３４（２０）：２３８９－２３９、並びに補足内容）が見出される。一部の実施形態では、ＴＩＬは、先述のとおり転移性黒色腫の寄託切除物から成長させた（Ｄｕｄｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．， ２００３， ２６：３３２－３４２を参照のこと；全体として参照により本明細書に援用される）。新鮮腫瘍は無菌条件下で剥離し得る。正式な病理解析のため、代表試料を収集し得る。２ｍｍ^３～３ｍｍ^３の単一の断片が使用され得る。一部の実施形態において、患者１人当たり５、１０、１５、２０、２５又は３０の試料を入手する。一部の実施形態において、患者１人当たり２０、２５、又は３０の試料を入手する。一部の実施形態において、患者１人当たり２０、２２、２４、２６、又は２８の試料を入手する。一部の実施形態において、患者１人当たり２４の試料を入手する。試料を２４ウェルプレートの個々のウェルに置き、高用量ＩＬ－２（６，０００ＩＵ／ｍＬ）を含む成長培地中に維持し、腫瘍の破壊及び／又はＴＩＬの増殖に関してモニタし得る。処理後に生細胞が残っている任意の腫瘍を酵素消化して単一細胞懸濁液にし、本明細書に記載されるとおり凍結保存し得る。

【0610】

一部の実施形態において、表現型分析（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ５６）のため拡大培養ＴＩＬをサンプリングし、利用可能な場合には自己腫瘍に対して試験し得る。ＴＩＬは、一晩の共培養によりインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）レベル＞２００ｐｇ／ｍＬ及びバックグラウンドの２倍となった場合に応答性であると見なすことができる。（Ｇｏｆｆ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．， ２０１０， ３３：８４０－８４７；全体として参照により本明細書に援用される）。一部の実施形態において、自己応答性又は十分な成長パターンのエビデンスを有する培養物が、迅速拡大培養（ＲＥＰ）と称されることもある第２の拡大培養を含め、第２の拡大培養（例えば、図２Ａ及び／または図９のステップＤにおいて提供されるとおりの第２の拡大培養）に選択され得る。一部の実施形態において、高い自己応答性（例えば、第２の拡大培養中の高い増殖）を有する拡大培養ＴＩＬが、追加の第２の拡大培養に選択される。一部の実施形態において、自己応答性（例えば、図２Ａ及び／または図９のステップＤに提供されるとおりの第２の拡大培養中の高い増殖）を有するＴＩＬが、図２Ａ及び／または図９のステップＤに係る追加の第２の拡大培養に選択される。

【0611】

一部の実施形態において、患者はＡＣＴ（養子細胞移入）に直接移されず、例えば、一部の実施形態において、腫瘍採取後及び／又は第１の拡大培養後、細胞はすぐには利用されない。一部の実施形態において、ＴＩＬは凍結保存し、患者への投与の２日前に解凍することができる。一部の実施形態において、ＴＩＬは凍結保存し、患者への投与の１日前に解凍することができる。一部の実施形態において、ＴＩＬは凍結保存し、患者への投与の直前に解凍することができる。

【0612】

輸注バッグＴＩＬの凍結保存試料の細胞表現型は、表面マーカーＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ７、及びＣＤ４５ＲＡ（ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）に関するフローサイトメトリー（例えば、ＦｌｏｗＪｏ）、並びに本明細書に記載される方法のいずれかによって分析することができる。血清サイトカインは標準的な酵素結合免疫吸着アッセイ法を用いることにより測定した。血清ＩＦＮ－ｇの上昇は、＞１００ｐｇ／ｍＬ、且つ血清ＩＦＮ－γのベースラインレベルよりも少なくとも４倍、または少なくとも３倍、または少なくとも２倍、または少なくとも１倍高いことと定義することができる。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞１０００ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞２００ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞２５０ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞３００ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞３５０ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞４００ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞４５０ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞５００ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞５５０ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞６００ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞６５０ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞７００ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞７５０ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞８００ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞８５０ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞９００ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞９５０ｐｇ／ｍＬと定義される。いくつかの実施形態において、血清ＩＦＮ－γの上昇とは＞１０００ｐｇ／ｍＬと定義される。

【0613】

一部の実施形態において、本明細書で提供される方法、例えば図２Ａ及び／または図９に例示される方法により作製されるＴＩＬは、ＴＩＬの臨床有効性の驚くべき改善を提供する。一部の実施形態において、本明細書で提供される方法、例えば図２Ａ及び／または図９に例示される方法により作製されるＴＩＬは、例えば図２Ａ及び／または図９に例示される方法以外の方法を含む、本明細書に記載されるもの以外の方法により作製されるＴＩＬに比べて臨床有効性が増加する。一部の実施形態において、本明細書に記載されているもの以外の方法は、プロセス１Ｃ及び／又はジェネレーション１（Ｇｅｎ１）と称される方法を含む。一部の実施形態において、有効性の増加は、ＤＣＲ、ＯＲＲ、及び／又は他の臨床応答によって測定される。一部の実施形態において、本明細書で提供される方法、例えば図２Ａ及び／または図９に例示される方法により作製されるＴＩＬは、例えば図２Ａ及び／または図９に例示される方法以外の、例えばＧｅｎ１プロセスを含む、本明細書に記載されるもの以外の方法により作製されるＴＩＬと同様の応答時間及び安全プロファイルを示す。

【0614】

一部の実施形態において、ＩＦＮ－ガンマ（ＩＦＮ－γ）は、処置有効性及び／又は臨床有効性の増加の指標である。一部の実施形態において、ＴＩＬで処置された被験者の血液中のＩＦＮ－γは、活性ＴＩＬの指標である。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γ産生の効力アッセイが用いられる。ＩＦＮ－γ産生は、細胞傷害能のもう１つの尺度である。ＩＦＮ－γ産生は、本発明の方法、例えば、図２Ａ及び／または図９に例示されるものを含む方法により調製されたＴＩＬで処置された対象の血液、血清、又はＴＩＬエキソビボ中のサイトカインＩＦＮ－γのレベルを決定することにより測定できる。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γの増加は、本発明の方法により作製されたＴＩＬで処置された患者における処置有効性の指標である。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γは、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して、１倍、２倍、３倍、４倍、又は５倍以上増加する。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γ分泌は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供される以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して、１倍増加する。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γ分泌は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して２倍増加する。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γ分泌は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して３倍増加する。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γ分泌は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して４倍増加する。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γ分泌は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して５倍増加する。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γはＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔを使用して測定される。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γは、例えば図２Ａ及び／または図９に記載されるものを含む、本発明の方法により調製されたＴＩＬで処置された対象のＴＩＬエキソビボで測定される。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γは、例えば図２Ａ及び／または図９に記載されるものを含む、本発明の方法により調製されたＴＩＬで処置された対象の血液で測定される。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γは、例えば図２Ａ及び／または図９に記載されるものを含む、本発明の方法により調製されたＴＩＬで処置された対象のＴＩＬ血清で測定される。

【0615】

一部の実施形態において、例えば図２Ａ及び／または図９に記載されるものを含む本発明の方法により調製されたＴＩＬは、例えば図２Ａ及び／または図９に例示されない、例えばプロセス１Ｃメソッドと称されるものを含む他の方法により作製されるＴＩＬと比較してポリクローナル性の増加を示す。一部の実施形態において、有意に改善されたポリクローナル性及び／又は増加したポリクローナル性は、処置有効性及び／又は臨床有効性の増加の指標である。一部の実施形態において、ポリクローナル性とは、Ｔ細胞レパートリーの多様性を指す。一部の実施形態において、ポリクローナル性の増加は、本発明の方法に作製されたＴＩＬを投与された患者に関する処置有効性の指標である。一部の実施形態において、ポリクローナル性は、例えば、図２Ａ及び／または図９に具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して１倍、２倍、１０倍、１００倍、５００倍、又は１０００倍増加する。一部の実施形態において、ポリクローナル性は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して、１倍増加する。一部の実施形態において、ポリクローナル性は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して、２倍増加する。一部の実施形態において、ポリクローナル性は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して、１０倍増加する。一部の実施形態において、ポリクローナル性は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して、１００倍増加する。一部の実施形態において、ポリクローナル性は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して、５００倍増加する。一部の実施形態において、ポリクローナル性は、未処置患者と比較して、及び／又は、例えば、図２Ａ及び／または図９で具体化された方法以外の方法を含む、本明細書で提供する以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで処置された患者と比較して、１０００倍増加する。

【0616】

有効性の尺度には、当該技術分野において公知であり、本明細書に記載されるように、疾患制御率（ＤＣＲ：Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒａｔｅ）並びに全奏効率（ＯＲＲ：Ｏｖｅｒａｌｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｒａｔｅ）が含まれ得る。

【0617】

Ａ．がんの処置方法
本明細書に記載の組成物及び方法は、疾患の処置方法で使用することができる。一実施形態において、それらは、成人の患者または小児の患者のがんなどの、過剰成長性障害の処置に使用するためのものである。それらはまた、本明細書及び以下の段落に記載されているとおりその他の障害の処置に使用されてもよい。

【0618】

一部の実施形態において、過剰成長性障害はがんである。一部の実施形態において、過剰成長性障害は固形腫瘍癌である。一部の実施形態において、固形腫瘍癌は、肛門癌、膀胱癌、乳癌（トリプルネガティブ乳癌を含む）、骨癌、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）によって生じる癌、中枢神経系関連癌（上衣腫、髄芽腫、神経芽細胞腫、松果体芽腫、及び原始神経外胚葉性腫瘍を含む）、子宮頸癌（扁平上皮子宮頸癌、腺扁平上皮子宮頸癌、及び子宮頸部腺癌を含む）、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、食道胃接合部癌、胃癌、消化器癌、消化管間質腫瘍、神経膠芽腫、神経膠腫、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、下咽頭癌、喉頭癌、鼻咽頭癌、中咽頭癌、及び咽頭癌を含む）、腎臓癌、肝臓癌、肺癌（非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び小細胞肺癌を含む）、黒色腫（ブドウ膜黒色腫、脈絡膜黒色腫、毛様体黒色腫、または虹彩黒色腫を含む）、中皮腫（悪性肋膜中皮腫を含む）、卵巣癌、膵臓癌（膵性管腺癌を含む）、陰茎癌、直腸癌、腎癌、腎細胞癌、肉腫（ユーイング肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、及びその他の骨及び軟部組織肉腫を含む）、甲状腺癌（退形成甲状腺癌を含む）、子宮癌、ならびに膣癌からなる群より選択される。

【0619】

いくつかの実施形態において、上記過剰増殖性障害は血液悪性腫瘍である。いくつかの実施形態において、上記血液悪性腫瘍は、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、ろ胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、及び多発性骨髄腫からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記がんが血液悪性腫瘍である上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、１種以上のＣＣＲを発現するように改変されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用するがん患者の治療方法であって、上記がんが血液悪性腫瘍である上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、１種以上のＣＣＲを発現するように改変されたＭＩＬまたはＰＢＬを使用するがん患者の治療方法であって、上記がんが血液悪性腫瘍である上記治療方法を含む。

【0620】

一実施形態において、上記がんは、再発した、または化学療法、放射線療法、もしくは免疫療法を含む少なくとも１種の以前の療法による治療に対して難治性である、固形腫瘍癌及び血液悪性腫瘍を含む前述のがんの１種である。一実施形態において、上記がんは、再発した、または化学療法、放射線療法、及び／または免疫療法を含む少なくとも２種の以前の療法による治療に対して難治性である前述のがんの１種である。一実施形態において、上記がんは、再発した、または化学療法、放射線療法、及び／または免疫療法を含む少なくとも３種の以前の療法による治療に対して難治性である前述のがんの１種である。

【0621】

いくつかの実施形態において、上記がんは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）癌またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）癌である。ＭＳＩ－Ｈ癌及びｄＭＭＲ癌ならびにそれらに対する検査は、Ｋａｗａｋａｍｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｔｒｅａｔ． Ｏｐｔｉｏｎｓ Ｏｎｃｏｌ． ２０１５， １６， ３０（上記文献の開示は本明細書に援用される）に報告されている。

【0622】

いくつかの実施形態において、本発明は、１種以上のＣＣＲを発現するように改変されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用するがん患者の治療方法であって、上記患者がヒトである上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、１種以上のＣＣＲを発現するように改変されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用するがん患者の治療方法であって、上記患者が非ヒトである上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、１種以上のＣＣＲを発現するように改変されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用するがん患者の治療方法であって、上記患者が伴侶動物である上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、１種以上のＣＣＲを発現するように改変されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用するがん患者の治療方法であって、上記患者が霊長類の、ウマ科の、イヌ科の、またはネコ科の動物である上記治療方法を含む。

【0623】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記がんがＢＲＡＦ阻害剤及び／またはＭＥＫ阻害剤による治療に対して難治性である上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記がんが、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、エンコラフェニブ、ソラフェニブ、及び薬学的に許容されるそれらの塩または溶媒和物からなる群より選択されるＢＲＡＦ阻害剤による治療に対して難治性である上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記がんが、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ピマセルチニブ、レファメチニブ、及び薬学的に許容されるその塩または溶媒和物からなる群より選択されるＭＥＫ阻害剤による治療に対して難治性である上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記がんが、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、エンコラフェニブ、ソラフェニブ、及び薬学的に許容されるそれらの塩または溶媒和物からなる群より選択されるＢＲＡＦ阻害剤、ならびにトラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ピマセルチニブ、レファメチニブ、及び薬学的に許容されるその塩または溶媒和物からなる群より選択されるＭＥＫ阻害剤による治療に対して難治性である上記治療方法を含む。

【0624】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記がんが小児癌である上記治療方法を含む。

【0625】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記がんがブドウ膜黒色腫である上記治療方法を含む。

【0626】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記ブドウ膜黒色腫が脈絡膜黒色腫、毛様体黒色腫、または虹彩黒色腫である上記治療方法を含む。

【0627】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記小児癌が神経芽細胞腫である上記治療方法を含む。

【0628】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記小児癌が肉腫である上記治療方法を含む。

【0629】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記肉腫が骨肉腫である上記治療方法を含む。

【0630】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記肉腫が軟部組織肉腫である上記治療方法を含む。

【0631】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記軟部組織肉腫が横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、または原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）である上記治療方法を含む。

【0632】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記小児癌が中枢神経系（ＣＮＳ）関連癌である上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、上記小児癌は化学療法による治療に対して難治性である。いくつかの実施形態において、上記小児癌は放射線療法による治療に対して難治性である。いくつかの実施形態において、上記小児癌はジヌツキシマブによる治療に対して難治性である。

【0633】

いくつかの実施形態において、本発明は、がん患者の治療方法であって、上記ＣＮＳ関連癌が髄芽腫、松果体芽腫、神経膠腫、上衣腫、または神経膠芽腫である上記治療方法を含む。

【0634】

本明細書に記載の組成物及び方法は、がんの治療方法であって、上記がんが、抗ＰＤ－１抗体もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体による以前の治療に対して難治性または抵抗性である上記治療方法に使用してもよい。いくつかの実施形態において、患者は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体による一次治療に対して難治性の患者である。いくつかの実施形態において、上記患者は、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体に対して以前の応答を示さない。いくつかの実施形態において、上記患者は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体に対する以前の応答を示し、その後、患者のがんが進行する。いくつかの実施形態において、上記がんは、少なくとも１種の化学療法剤との併用での抗ＣＴＬＡ－４抗体及び／または抗ＰＤ－１抗体もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体に対して難治性である。いくつかの実施形態において、以前の化学療法剤は、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、及び／またはシスプラチンである。いくつかの以前の実施形態において、上記化学療法剤（複数可）はプラチナダブレット化学療法剤である。いくつかの実施形態において、上記プラチナダブレット療法剤は、シスプラチン及びカルボプラチンからなる群より選択される第１の化学療法剤と、ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはナブパクリタキセルを含む）からなる群より選択される第２の化学療法剤とを含む。いくつかの実施形態において、上記プラチナダブレット療法剤はペメトレキセドとの併用である。

【0635】

いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは、ＰＤ－Ｌ１陰性である、及び／またはＰＤ－Ｌ１の発現が、本明細書の他の箇所に記載されるｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ （ＴＰＳ）で１％未満であるがんを有する患者に由来する。

【0636】

いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と、白金ダブレット療法剤とを含む併用療法であって、上記プラチナダブレット療法剤が、

【0637】

ｉ）シスプラチン及びカルボプラチンからなる群より選択される第１の化学療法剤と、

【0638】

ｉｉ）ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、もしくはナブパクリタキセルを含む）からなる群より選択される第２の化学療法剤と
を含む上記併用療法に対して難治性である。

【0639】

いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と、ペメトレキセドと、プラチナダブレット療法剤とを含む併用療法であって、上記プラチナダブレット療法剤が、

【0640】

ｉ）シスプラチン及びカルボプラチンからなる群より選択される第１の化学療法剤と、

【0641】

ｉｉ）ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、もしくはナブパクリタキセルを含む）からなる群より選択される第２の化学療法剤と
を含む上記併用療法に対して難治性である。

【0642】

いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは抗ＰＤ－１抗体による治療を受けている。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療を受けている。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣの患者は治療未経験である。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは抗ＰＤ－１抗体による治療を受けていない。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療を受けていない。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは以前化学療法剤による治療を受けていた。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは以前化学療法剤による治療を受けていたが、今は化学療法剤による治療を受けていない。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１治療未経験である。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣの患者はＰＤ－Ｌ１の発現が低い。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣの患者は、治療未経験のＮＳＣＬＣを有するか、または化学療法による治療後であるが抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１治療未経験である。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣの患者は、治療未経験であるか、または化学療法による治療後であるが抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１治療未経験であり、且つＰＤ－Ｌ１の発現が低い。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣの患者はベースラインにおいて巨大腫瘤病変を有する。いくつかの実施形態において、上記対象は、ベースラインにおいて巨大腫瘤病変を有し、且つＰＤ－Ｌ１の発現が低い。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣの患者は検出可能にＰＤ－Ｌ１を発現しない。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣの患者は、治療未経験であるか、または化学療法による治療後であるが抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１治療未経験であり、且つ検出可能にＰＤ－Ｌ１を発現しない。いくつかの実施形態において、上記患者は、ベースラインにおいて巨大腫瘤病変を有し、且つ検出可能にＰＤ－Ｌ１を発現しない。いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１の発現が低い及び／またはベースラインにおいて巨大腫瘤病変を有する上記ＮＳＣＬＣの患者は、治療未経験のＮＳＣＬＣを有するか、または化学療法後（例えば、化学療法剤後）であるが抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１治療未経験である。いくつかの実施形態において、横断面または前頭面のいずれかで測定した最大腫瘍径が７ｃｍを超える巨大腫瘤病変が適応である。いくつかの実施形態において、短軸径が２０ｍｍ以上である腫脹リンパ節がある場合の巨大腫瘤病変が適応である。いくつかの実施形態において、上記化学療法剤はＮＳＣＬＣに対する標準治療薬を含む。

【0643】

いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１の発現は、ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ （ＴＰＳ）によって測定される。いくつかの実施形態において、上記難治性ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象のｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ （ＴＰＳ）は１％未満である。いくつかの実施形態において、難治性ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象のＴＰＳは１％以上である。いくつかの実施形態において、難治性ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象は以前に抗ＰＤ－１抗体及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療を受けており、ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅは上記抗ＰＤ－１抗体及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療の前に測定された。いくつかの実施形態において、難治性ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象は以前に抗ＰＤ－１抗体及による治療を受けており、ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅは上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療の前に測定された。

【0644】

いくつかの実施形態において、本発明の方法によって調製されたＴＩＬ（例えば、図１に記載されたＴＩＬを含む）は、例えば、プロセス１Ｃの方法と呼ばれる方法などの、図１に例示されていない方法を含む他の方法によって産生されたＴＩＬと比較して、多クローン性の増加を示す。いくつかの実施形態において、有意に向上した多クローン性及び／または増加した多クローン性は、がん治療の治効及び／または臨床的有効性の増加の指標である。いくつかの実施形態において、多クローン性とはＴ細胞レパートリーの多様性を指す。いくつかの実施形態において、ポリクローナリティの増加は、本発明の方法によって産生されたＴＩＬの投与に関する治効の指標とすることができる。いくつかの実施形態において、例えば、図１で具体化される方法以外の方法を含む、本明細書において提供される方法以外の他の方法によって調製されたＴＩＬと比較して、ポリクローナリティが、１倍、２倍、１０倍、１００倍、５００倍、または１０００倍増加する。いくつかの実施形態において、未治療の患者と比較して及び／または、例えば、図１で具体化される方法以外の方法を含む、本明細書において提供される方法以外の他の方法によって調製されたＴＩＬによる治療を受けた患者と比較して、ポリクローナリティが１倍増加する。いくつかの実施形態において、未治療の患者と比較して及び／または、例えば、図１で具体化される方法以外の方法を含む、本明細書において提供される方法以外の他の方法によって調製されたＴＩＬによる治療を受けた患者と比較して、ポリクローナリティが２倍増加する。いくつかの実施形態において、未治療の患者と比較して及び／または、例えば、図１で具体化される方法以外の方法を含む、本明細書において提供される方法以外の他の方法によって調製されたＴＩＬによる治療を受けた患者と比較して、ポリクローナリティが１０倍増加する。いくつかの実施形態において、未治療の患者と比較して及び／または、例えば、図１で具体化される方法以外の方法を含む、本明細書において提供される方法以外の他の方法によって調製されたＴＩＬによる治療を受けた患者と比較して、ポリクローナリティが１００倍増加する。いくつかの実施形態において、未治療の患者と比較して及び／または、例えば、図１で具体化される方法以外の方法を含む、本明細書において提供される方法以外の他の方法によって調製されたＴＩＬによる治療を受けた患者と比較して、ポリクローナリティが５００倍増加する。いくつかの実施形態において、未治療の患者と比較して及び／または、例えば、図１で具体化される方法以外の方法を含む、本明細書において提供される方法以外の他の方法によって調製されたＴＩＬによる治療を受けた患者と比較して、ポリクローナリティが１０００倍増加する。

【0645】

いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１の発現は、本明細書に記載の１種以上の試験方法を使用したｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅによって測定される。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象または患者のｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ （ＴＰＳ）は１％未満である。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣ腫瘍のＴＰＳは１％以上である。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象または患者は以前に抗ＰＤ－１抗体及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療を受けており、ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅは上記抗ＰＤ－１抗体及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療の前に測定された。いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象または患者は以前に抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療を受けており、ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅは上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療の前に測定された。いくつかの実施形態において、上記難治性または抵抗性ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象または患者のｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ （ＴＰＳ）は１％未満である。いくつかの実施形態において、上記難治性または抵抗性ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象または患者のＴＰＳは１％以上である。いくつかの実施形態において、上記難治性または抵抗性ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象または患者は以前に抗ＰＤ－１抗体及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療を受けており、ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅは上記抗ＰＤ－１抗体及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療の前に測定された。いくつかの実施形態において、上記難治性または抵抗性ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患した対象または患者は抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療を受けており、ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅは上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療の前に測定された。

【0646】

いくつかの実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは、ＮＳＣＬＣが示すｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ （ＴＰＳ）、すなわち、抗ＰＤ－１療法もしくは抗ＰＤ－Ｌ１療法の前に採取された患者由来の生腫瘍細胞のうちの、任意の強度での部分的なまたは完全な、ＰＤ－Ｌ１タンパク質に対する膜染色を示す細胞のパーセンテージが１％未満である（ＴＰＳが１％未満の）ＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、０．１％未満、０．０９％未満、０．０８％未満、０．０７％未満、０．０６％未満、０．０５％未満、０．０４％未満、０．０３％未満、０．０２％未満、及び０．０１％未満からなる群より選択されるＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、約２％、約１％、約０．９％、約０．８％、約０．７％、約０．６％、約０．５％、約０．４％、約０．３％、約０．２％、約０．１％、約０．０９％、約０．０８％、約０．０７％、約０．０６％、約０．０５％、約０．０４％、約０．０３％、約０．０２％、約０．０１％からなる群より選択されるＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは０％～１％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは０％～０．９％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは０％～０．８％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは０％～０．７％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは０％～０．６％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは０％～０．５％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは０％～０．４％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは０％～０．３％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは０％～０．２％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。一実施形態において、上記ＮＳＣＬＣは０％～０．１％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ＴＰＳは、Ｈｉｒｓｃｈ， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｔｈｏｒａｃ． Ｏｎｃｏｌ． ２０１７， １２， ２０８－２２２に記載の方法、あるいはペムブロリズマブもしくはその他の抗ＰＤ－１療法剤または抗ＰＤ－Ｌ１療法剤による治療の前のＴＰＳの測定に使用される方法などの、当技術分野において公知の方法によって測定することができる。米国食品医薬品局によって承認されたＴＰＳの測定方法も使用することができる。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１はエキソソームＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１は循環腫瘍細胞上に存在する。

【0647】

いくつかの実施形態において、上記部分的な膜染色としては、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％以上の部分的な膜染色が挙げられる。いくつかの実施形態において、上記完全な膜染色としては、約１００％の膜染色が挙げられる。

【0648】

いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１に関する試験は、患者の血清中のＰＤ－Ｌ１レベルを測定することを含んでいてもよい。これらの実施形態において、患者の血清中のＰＤ－Ｌ１の測定により、腫瘍の不均一性の不確実性及び一連の生検に対する患者不快感が取り除かれる。

【0649】

いくつかの実施形態において、ベースラインまたは標準レベルと比較した可溶性ＰＤ－Ｌ１の上昇は、ＮＳＣＬＣにおける予後悪化と相関する。例えば、Ｏｋｕｍａ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ， ２０１８， １９， ４１０－４１７；Ｖｅｃｃｈｉａｒｅｌｌｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ， ２０１８， ９， １７５５４－１７５６３を参照されたい。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１はエキソソームＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１は循環腫瘍細胞上に存在する。

【0650】

一実施形態において、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法を必要とする対象または患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を投与することによる非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法であって、上記対象または患者が、

【0651】

所定のＰＤ－Ｌ１のｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ（ＴＰＳ）が１％未満であること、

【0652】

ＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコアが１％～４９％であること、または

【0653】

所定の、１種以上のドライバー変異が存在しないこと
の少なくとも１つを有し、

【0654】

但し、上記ドライバー変異は、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０変異、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／またはＭＥＴシグナル伝達の変化、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢＩ変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ａＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、ならびにＧＮＡ１１変異からなる群より選択され、

【0655】

（ａ）上記対象もしくは患者から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片へと処理することにより、上記対象または患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること及び／あるいは受け入れることと、

【0656】

（ｂ）上記第１のＴＩＬ集団を閉鎖型システム中に加えることと、

【0657】

（ｃ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で上記第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の増殖を実施して、第２のＴＩＬ集団を産生させることであって、上記第１の増殖が、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器中で実施され、上記第１の増殖が約３～１４日間実施されて上記第２のＴＩＬ集団を得て、上記第２のＴＩＬ集団の数が、上記第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記第１の増殖を実施して第２のＴＩＬ集団を産生させることと、

【0658】

（ｄ）上記第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することによって第２の増殖を実施して、第３のＴＩＬ集団を産生させることであって、上記第２の増殖が約７～１４日間実施されて上記第３のＴＩＬ集団を得て、上記第３のＴＩＬ集団が治療用ＴＩＬ集団であり、上記第２の増殖が第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器中で実施され、ステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記第２の増殖を実施して第３のＴＩＬ集団を産生させることと、

【0659】

（ｅ）ステップ（ｄ）から得られた上記治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記治療用ＴＩＬ集団を回収することと、

【0660】

（ｆ）ステップ（ｅ）から回収したＴＩＬ集団を輸注バッグに移送することであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移送が上記システムを開放することなく行われる、上記移送することと

【0661】

（ｇ）ステップ（ｆ）から回収したＴＩＬ集団が入った輸注バッグを、凍結保存プロセスを使用して凍結保存することと、

【0662】

（ｈ）ステップ（ｇ）における輸注バッグから治療有効用量の上記第３のＴＩＬ集団を上記患者に投与することと
を含む、上記治療方法を提供する。

【0663】

一実施形態において、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を投与することによる非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法であって、

【0664】

（ａ）上記患者の腫瘍のＰＤ－Ｌ１の発現及びＰＤ－Ｌ１のｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ （ＴＰＳ）を試験することと、

【0665】

（ｂ）上記患者に１種以上のドライバー変異が存在しないことを試験することであって、上記ドライバー変異が、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０変異、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／またはＭＥＴシグナル伝達の変化、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢＩ変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ａＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、ならびにＧＮＡ１１変異からなる群より選択される、上記試験することと、

【0666】

（ｃ）上記患者のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコアが約１％～約４９％であることを測定すること、及び上記患者にはドライバー変異も存在しないことを測定することと、

【0667】

（ｄ）上記対象から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片へと処理することにより、上記対象もしくは患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること及び／または受け入れることと、

【0668】

（ｅ）上記第１のＴＩＬ集団を閉鎖型システム中に加えることと、

【0669】

（ｆ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で上記第１のＴＩＬ集団を培養ことによって第１の増殖を実施して、第２のＴＩＬ集団を産生させることであって、上記第１の増殖が、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器中で実施され、上記第１の増殖が約３～１４日間実施されて上記第２のＴＩＬ集団を得て、上記第２のＴＩＬ集団の数が、上記第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも５０倍多く、ステップ（ｅ）からステップ（ｆ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記第１の増殖を実施して第２のＴＩＬ集団を産生させることと、

【0670】

（ｇ）上記第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することによって第２の増殖を実施して、第３のＴＩＬ集団を産生させることであって、上記第２の増殖が約７～１４日間実施されて上記第３のＴＩＬ集団を得て、上記第３のＴＩＬ集団が治療用ＴＩＬ集団であり、上記第２の増殖が第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器中で実施され、ステップ（ｆ）からステップ（ｇ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記第２の増殖を実施して第３のＴＩＬ集団を産生させることと、

【0671】

（ｈ）ステップ（ｄ）から得られた治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記治療用ＴＩＬ集団を回収することと、

【0672】

（ｉ）ステップ（ｅ）から回収したＴＩＬ集団を輸注バッグに移送することであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移送が上記システムを開放することなく行われる、上記移送することと

【0673】

（ｊ）ステップ（ｆ）から回収したＴＩＬ集団が入った輸注バッグを、凍結保存プロセスを使用して凍結保存することと、

【0674】

（ｋ）ステップ（ｇ）における輸注バッグから治療有効用量の上記第３のＴＩＬ集団を上記対象または患者に投与することと
を含む、上記治療方法を提供する。

【0675】

一実施形態において、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を投与することによる非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法であって、

【0676】

（ａ）上記患者の腫瘍のＰＤ－Ｌ１の発現及びＰＤ－Ｌ１のｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ （ＴＰＳ）を試験することと、

【0677】

（ｂ）上記患者に１種以上のドライバー変異が存在しないことを試験することであって、上記ドライバー変異が、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０変異、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／またはＭＥＴシグナル伝達の変化、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢＩ変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ａＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、ならびにＧＮＡ１１変異からなる群より選択される、上記試験することと、

【0678】

（ｃ）上記患者のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコアが約１％未満であることを測定すること、及び上記患者にはドライバー変異も存在しないことを測定することと、

【0679】

（ｄ）上記対象から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片へと処理することにより、上記対象もしくは患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること及び／または受け入れることと、

【0680】

（ｅ）上記第１のＴＩＬ集団を閉鎖型システム中に加えることと、

【0681】

（ｆ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で上記第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の増殖を実施して、第２のＴＩＬ集団を産生させることであって、上記第１の増殖が、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器中で実施され、上記第１の増殖が約３～１４日間実施されて上記第２のＴＩＬ集団を得て、上記第２のＴＩＬ集団の数が、上記第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも５０倍多く、ステップ（ｅ）からステップ（ｆ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記第１の増殖を実施して第２のＴＩＬ集団を産生させることと、

【0682】

（ｇ）上記第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することによって第２の増殖を実施して、第３のＴＩＬ集団を産生させることであって、上記第２の増殖が約７～１４日間実施されて上記第３のＴＩＬ集団を得て、上記第３のＴＩＬ集団が治療用ＴＩＬ集団であり、上記第２の増殖が第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器中で実施され、ステップ（ｆ）からステップ（ｇ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記第２の増殖を実施して第３のＴＩＬ集団を産生させることと、

【0683】

（ｈ）ステップ（ｄ）から得られた治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記治療用ＴＩＬ集団を回収することと、

【0684】

（ｉ）ステップ（ｅ）から回収したＴＩＬ集団を輸注バッグに移送することであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移送が上記システムを開放することなく行われる、上記移送することと

【0685】

（ｊ）ステップ（ｆ）から回収したＴＩＬ集団が入った輸注バッグを、凍結保存プロセスを使用して凍結保存することと、

【0686】

（ｋ）ステップ（ｇ）における輸注バッグから治療有効用量の上記第３のＴＩＬ集団を上記対象または患者に投与することと
を含む、上記治療方法を提供する。

【0687】

一実施形態において、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を投与することによる非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法であって、

【0688】

（ａ）上記患者の腫瘍のＰＤ－Ｌ１の発現及びＰＤ－Ｌ１のｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ （ＴＰＳ）を試験することと、

【0689】

（ｂ）上記患者に１種以上のドライバー変異が存在しないことを試験することであって、上記ドライバー変異が、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、またはＲＥＴ融合からなる群より選択される、上記試験することと、

【0690】

（ｃ）上記患者のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコアが約１％～約４９％であることを測定すること、及び上記患者にはドライバー変異も存在しないことを測定することと、

【0691】

（ｄ）上記対象から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片へと処理することにより、上記対象もしくは患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること及び／または受け入れることと、

【0692】

（ｅ）上記第１のＴＩＬ集団を閉鎖型システム中に加えることと、

【0693】

（ｆ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で上記第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の増殖を実施して、第２のＴＩＬ集団を産生させることであって、上記第１の増殖が、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器中で実施され、上記第１の増殖が約３～１４日間実施されて上記第２のＴＩＬ集団を得て、上記第２のＴＩＬ集団の数が、上記第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも５０倍多く、ステップ（ｅ）からステップ（ｆ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記第１の増殖を実施して第２のＴＩＬ集団を産生させることと、

【0694】

（ｇ）上記第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することによって第２の増殖を実施して、第３のＴＩＬ集団を産生させることであって、上記第２の増殖が約７～１４日間実施されて上記第３のＴＩＬ集団を得て、上記第３のＴＩＬ集団が治療用ＴＩＬ集団であり、上記第２の増殖が第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器中で実施され、ステップ（ｆ）からステップ（ｇ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記第２の増殖を実施して第３のＴＩＬ集団を産生させることと、

【0695】

（ｈ）ステップ（ｄ）から得られた治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記治療用ＴＩＬ集団を回収することと、

【0696】

（ｉ）ステップ（ｅ）から回収したＴＩＬ集団を輸注バッグに移送することであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移送が上記システムを開放することなく行われる、上記移送することと

【0697】

（ｊ）ステップ（ｆ）から回収したＴＩＬ集団が入った輸注バッグを、凍結保存プロセスを使用して凍結保存することと、

【0698】

（ｋ）ステップ（ｇ）における輸注バッグから治療有効用量の上記第３のＴＩＬ集団を上記対象または患者に投与することと
を含む、上記治療方法を提供する。

【0699】

一実施形態において、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を投与することによる非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法であって、

【0700】

（ａ）上記患者の腫瘍のＰＤ－Ｌ１の発現及びＰＤ－Ｌ１のｔｕｍｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ （ＴＰＳ）を試験することと、

【0701】

（ｂ）上記患者に１種以上のドライバー変異が存在しないことを試験することであって、上記ドライバー変異が、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、またはＲＥＴ融合からなる群より選択される、上記試験することと、

【0702】

（ｃ）上記患者のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコアが約１％未満であることを測定すること、及び上記患者にはドライバー変異も存在しないことを測定することと、

【0703】

（ｄ）上記対象から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片へと処理することにより、上記対象もしくは患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を得ること及び／または受け入れることと、

【0704】

（ｅ）上記第１のＴＩＬ集団を閉鎖型システム中に加えることと、

【0705】

（ｆ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で上記第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の増殖を実施して、第２のＴＩＬ集団を産生させることであって、上記第１の増殖が、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器中で実施され、上記第１の増殖が約３～１４日間実施されて上記第２のＴＩＬ集団を得て、上記第２のＴＩＬ集団の数が、上記第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも５０倍多く、ステップ（ｅ）からステップ（ｆ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記第１の増殖を実施して第２のＴＩＬ集団を産生させることと、

【0706】

（ｇ）上記第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加することによって第２の増殖を実施して、第３のＴＩＬ集団を産生させることであって、上記第２の増殖が約７～１４日間実施されて上記第３のＴＩＬ集団を得て、上記第３のＴＩＬ集団が治療用ＴＩＬ集団であり、上記第２の増殖が第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器中で実施され、ステップ（ｆ）からステップ（ｇ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記第２の増殖を実施して第３のＴＩＬ集団を産生させることと、

【0707】

（ｈ）ステップ（ｄ）から得られた治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が上記システムを開放することなく行われる、上記治療用ＴＩＬ集団を回収することと、

【0708】

（ｉ）ステップ（ｅ）から回収したＴＩＬ集団を輸注バッグに移送することであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移送が上記システムを開放することなく行われる、上記移送することと

【0709】

（ｊ）ステップ（ｆ）から回収したＴＩＬ集団が入った輸注バッグを、凍結保存プロセスを使用して凍結保存することと、

【0710】

（ｋ）ステップ（ｇ）における輸注バッグから治療有効用量の上記第３のＴＩＬ集団を上記対象または患者に投与することと
を含む、上記治療方法を提供する。

【0711】

別の実施形態において、本発明は、がんを有する対象の治療方法であって、上記対象に治療有効用量の本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団を投与することを含む上記治療方法を提供する。

【0712】

別の実施形態において、本発明は、がんを有する対象の治療方法であって、上記対象に治療有効用量の本明細書に記載のＴＩＬ組成物を投与することを含む上記治療方法を提供する。

【0713】

別の実施形態において、本発明は、治療有効用量の本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団及びＴＩＬ組成物をそれぞれ投与する前に、上記非骨髄破壊的リンパ球除去レジメンが施されるように改変された、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法を提供する。

【0714】

別の実施形態において、本発明は、上記非骨髄破壊的リンパ球除去レジメンが、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与するステップと、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与するステップとを含むように改変された、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法を提供する。

【0715】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記対象への上記ＴＩＬ細胞の投与の翌日に開始する高用量ＩＬ－２レジメンで上記対象を治療するステップをさらに含むように改変された上記治療方法を提供する。

【0716】

別の実施形態において、本発明は、上記高用量ＩＬ－２レジメンが、８時間毎に１５分間のボーラス静脈内注入としての６００，０００または７２０，０００ＩＵ／ｋｇの、許容量に達するまでの投与を含むように改変された、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法を提供する。

【0717】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんが固形腫瘍であるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0718】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんが、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって生じる癌、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽腫（ＧＢＭを含む）、消化器癌、腎癌、または腎細胞癌であるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0719】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんが、黒色腫、ＨＮＳＣＣ、子宮頸癌、ＮＳＣＬＣ、神経膠芽腫（ＧＢＭを含む）、及び消化器癌であるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0720】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんが黒色腫であるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0721】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんがＨＮＳＣＣであるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0722】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんが子宮頸癌であるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0723】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんがＮＳＣＬＣであるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0724】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんが神経膠芽腫（ＧＢＭを含む）であるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0725】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんが消化器癌であるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0726】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんが高頻度変異癌であるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0727】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のがんを有する対象の治療方法であって、上記がんが小児高頻度変異癌であるように改変された、上記治療方法を提供する。

【0728】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団であって、がんを有する対象に治療有効用量の上記治療用ＴＩＬ集団を投与することを含む上記対象の治療方法に使用するための、上記治療用ＴＩＬ集団を提供する。

【0729】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のＴＩＬ組成物であって、がんを有する対象に治療有効用量の上記ＴＩＬ組成物を投与することを含む上記対象の治療方法に使用するための、上記ＴＩＬ組成物を提供する。

【0730】

別の実施形態において、本発明は、上記対象に治療有効用量の本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団及び本明細書に記載のＴＩＬ組成物を投与する前に、上記対象に非骨髄破壊的リンパ球除去レジメンが施されるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団及び本明細書に記載のＴＩＬ組成物を提供する。

【0731】

別の実施形態において、本発明は、上記非骨髄破壊的リンパ球除去レジメンが、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与するステップと、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与するステップとを含むように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0732】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物であって、患者への上記ＴＩＬ細胞の投与の翌日に開始する高用量ＩＬ－２レジメンで上記患者を治療するステップをさらに含むように改変された上記治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0733】

別の実施形態において、本発明は、上記高用量ＩＬ－２レジメンが、８時間毎に１５分間のボーラス静脈内注入としての６００，０００もしくは７２０，０００ＩＵ／ｋｇの、許容量に達するまでの投与を含むように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0734】

別の実施形態において、本発明は、上記がんが固形腫瘍であるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0735】

別の実施形態において、本発明は、上記がんが、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって生じる癌、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽腫（ＧＢＭを含む）、消化器癌、腎癌、もしくは腎細胞癌であるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0736】

別の実施形態において、本発明は、上記がんが、黒色腫、ＨＮＳＣＣ、子宮頸癌、ＮＳＣＬＣ、神経膠芽腫（ＧＢＭを含む）、及び消化器癌であるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0737】

別の実施形態において、本発明は、上記がんが黒色腫であるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0738】

別の実施形態において、本発明は、上記がんがＨＮＳＣＣであるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0739】

別の実施形態において、本発明は、上記がんが子宮頸癌であるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0740】

別の実施形態において、本発明は、上記がんがＮＳＣＬＣであるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0741】

別の実施形態において、本発明は、上記がんが神経膠芽腫であるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0742】

別の実施形態において、本発明は、上記がんが消化器癌であるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0743】

別の実施形態において、本発明は、上記がんが高頻度変異癌であるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0744】

別の実施形態において、本発明は、上記がんが小児高頻度変異癌であるように改変された、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

【0745】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団の、対象に治療有効用量の上記治療用ＴＩＬ集団を投与することを含む上記対象のがんの治療方法への使用を提供する。

【0746】

別の実施形態において、本発明は、先行する段落のいずれかに記載のＴＩＬ組成物の、対象に治療有効用量の上記ＴＩＬ組成物を投与することを含む上記対象のがんの治療方法への使用を提供する。

【0747】

別の実施形態において、本発明は、患者に非骨髄破壊的リンパ球除去レジメンを施し、その後、対象に治療有効用量の先行する段落のいずれかに記載の治療用ＴＩＬ集団または治療有効用量の本明細書に記載のＴＩＬ組成物を投与することを含む、上記患者のがんの治療方法における、本明細書に記載の治療用ＴＩＬ集団または本明細書に記載のＴＩＬ組成物の使用を提供する。

【0748】

１．ドライバー変異に基づくがんの治療方法
本明細書では、語句「ドライバー変異」及び／または「治療につながる変異（ａｃｔｉｏｎａｂｌｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）」及び／または「発がん性ドライバー変異」とは、一般的に発がん性ドライバー（すなわち、がんドライバーまたはがん誘導因子）と考えられる変異を指す。１種以上のこれらの変異の存在は、従来、標的療法の標的として利用されてきた。多くの場合、ドライバー変異は、例えばチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を含む標的治療用部分による治療に向けて検査及び／または分析される。かかるドライバー変異は、いくつかの実施形態において、第一選択治療に対する応答に強い影響を与えるまたは影響を及ぼす可能性がある。本明細書に記載のＴＩＬによる治療方法及びＴＩＬ組成物は、かかるドライバー変異が患者または対象に存在するかどうかにかかわらず、治療に対して有効である。かかるドライバー変異は、全エキソーム配列決定または特定のドライバー変異の検出を狙った方法を含む、当技術分野で公知の任意の方法によって試験し、測定することができる。

【0749】

いくつかの実施形態において、上記がんは、１種以上のドライバー変異が存在するまたは存在しないがんである。いくつかの実施形態において、上記がんは、１種以上のドライバー変異が存在する。いくつかの実施形態において、上記がんは、１種以上のドライバー変異が存在しない。いくつかの実施形態において、上記がんは、１種以上のドライバー変異の有無について分析が行われている。いくつかの実施形態において、上記１種以上のドライバー変異は存在しない。いくつかの実施形態において、がん治療は、１種以上のドライバー変異の有無とは無関係である。いくつかの実施形態において、上記がんは、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｋ変異、ＢＲＡＦ Ｖ６００変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／またはＭＥＴシグナル伝達の変化、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、及びＧＮＡ１１変異からなる群より選択される１種以上のドライバー変異を示す。いくつかの実施形態において、上記がんが示すＰＤ－Ｌ１のＴＰＳは１％未満であり、且つ所定の、１種以上のドライバー変異が存在しない。

【0750】

いくつかの実施形態において、上記がんは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ｃ－Ｒｏｓ阻害剤、ＲＥＴ阻害剤、ＥＲＢＢ２阻害剤、ＢＲＣＡ阻害剤、ＭＡＰ２Ｋ１阻害剤、ＰＩＫ３ＣＡ阻害剤、ＣＤＫＮ２Ａ阻害剤、ＰＴＥＮ阻害剤、ＵＭＤ阻害剤、ＮＲＡＳ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＮＦ１阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＴＰ５３阻害剤、ＣＲＥＢＢＰ阻害剤、ＫＭＴ２Ｃ阻害剤、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢＩ阻害剤、ＡＴＭ阻害剤、ＳＥＴＤ２阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＴＰＮ１１阻害剤、ＦＧＦＲ１阻害剤、ＥＰ３００阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、ＦＢＸＷ７阻害剤、ＣＣＮＤ３阻害剤、及びＧＮＡ１１阻害剤による治療に対して適応ではないがんである。

【0751】

いくつかの実施形態において、上記がんが示すＰＤ－Ｌ１のＴＰＳは１％未満であり、且つ上記がんは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ｃ－Ｒｏｓ阻害剤、ＲＥＴ阻害剤、ＥＲＢＢ２阻害剤、ＢＲＣＡ阻害剤、ＭＡＰ２Ｋ１阻害剤、ＰＩＫ３ＣＡ阻害剤、ＣＤＫＮ２Ａ阻害剤、ＰＴＥＮ阻害剤、ＵＭＤ阻害剤、ＮＲＡＳ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＮＦ１阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＴＰ５３阻害剤、ＣＲＥＢＢＰ阻害剤、ＫＭＴ２Ｃ阻害剤、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢＩ阻害剤、ＡＴＭ阻害剤、ＳＥＴＤ２阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＴＰＮ１１阻害剤、ＦＧＦＲ１阻害剤、ＥＰ３００阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、ＦＢＸＷ７阻害剤、ＣＣＮＤ３阻害剤、及びＧＮＡ１１阻害剤による治療に対して適応ではないがんである。

【0752】

いくつかの実施形態において、上記がんはＮＳＣＬＣであり、ＥＧＦＲ変異によってＮＳＣＬＣから小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）へと腫瘍が転化する。

【0753】

いくつかの実施形態において、がん（またはその生検）は高腫瘍変異負荷（高ＴＭＢ；＞１０ｍｕｔ／ｋｂ）及び／または高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ高）を示す。いくつかの実施形態において、上記がん（またはその生検）は高腫瘍変異負荷（高ＴＭＢ；＞１０ｍｕｔ／ｋｂ）を示す。いくつかの実施形態において、がん（またはその生検）は高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ高）を示す。腫瘍変異負荷を評価するための方法及びシステムは当技術分野で公知である。かかる方法及びシステムの例示的な開示は、米国特許第９，７９２，４０３号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１８／０３６３０６６Ａ１号、国際特許出願公開第ＷＯ２０１３／０７０６３４Ａ１号及び第ＷＯ２０１８／１０６８８４Ａ１号、ならびにＭｅｔｚｋｅｒ， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｒｅｖ． ２０１０， １１， ３１－４６に記載され、上記文献のそれぞれは本明細書に援用される。

【0754】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ変異としては、例えば、Ｔ７９０Ｍ、Ｅｘ１９欠失、Ｌ８５８Ｒ、エクソン２０挿入、欠失Ｅ７０９－Ｔ７１０挿入Ｄ、Ｉ７４４＿Ｋ７４５挿入ＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５＿Ｅ７４６挿入ＴＰＶＡＩＫ、Ｅ７０９Ｘ、Ｅ７０９Ｋ、Ｅ７０９Ａ、エクソン１８欠失、Ｇ７１９Ｘ、Ｇ７１９Ａ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｓ７６８Ｉ、Ｌ７４７Ｐ、Ａ７６３＿７６４挿入ＦＱＥＡ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１挿入ＮＰＧ、Ａ７６３＿７６４挿入ＦＱＥＡ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３挿入ＤＮＰエクソン２０挿入、Ｈ７７３＿Ｖ７７４挿入ＮＰＨエクソン２０挿入、Ｓ７６８Ｉ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１挿入ＳＶＤ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０挿入ＡＳＶ、ｐ．Ｋ７４５＿Ｅ７４６挿入ＩＰＶＡＩＫ、ｐ．Ｋ７４５＿Ｅ７４６挿入ＴＰＶＡＩＫ、ｐ．Ｉ７４４＿Ｋ７４５挿入ＫＩＰＶＡＩ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１挿入ＮＰＧ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３挿入ＰＮＰ、Ａ７６３＿Ｙ７６４挿入ＦＱＥＡ、及び／またはＥＧＦＲキナーゼドメイン重複（ＥＧＦＲ－ＫＤＤ）が挙げられるが、これらに限定はされない。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ変異は、Ｔ７９０Ｍ、Ｅｘ１９欠失、Ｌ８５８Ｒ、エクソン２０挿入、欠失Ｅ７０９－Ｔ７１０挿入Ｄ、Ｉ７４４＿Ｋ７４５挿入ＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５＿Ｅ７４６挿入ＴＰＶＡＩＫ、Ｅ７０９Ｘ、Ｅ７０９Ｋ、Ｅ７０９Ａ、エクソン１８欠失、Ｇ７１９Ｘ、Ｇ７１９Ａ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｓ７６８Ｉ、Ｌ７４７Ｐ、Ａ７６３＿７６４挿入ＦＱＥＡ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１挿入ＮＰＧ、Ａ７６３＿７６４挿入ＦＱＥＡ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３挿入ＤＮＰエクソン２０挿入、Ｈ７７３＿Ｖ７７４挿入ＮＰＨエクソン２０挿入、Ｓ７６８Ｉ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１挿入ＳＶＤ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０挿入ＡＳＶ、ｐ．Ｋ７４５＿Ｅ７４６挿入ＩＰＶＡＩＫ、ｐ．Ｋ７４５＿Ｅ７４６挿入ＴＰＶＡＩＫ、ｐ．Ｉ７４４＿Ｋ７４５挿入ＫＩＰＶＡＩ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１挿入ＮＰＧ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３挿入ＰＮＰ、Ａ７６３＿Ｙ７６４挿入ＦＱＥＡ、及びＥＧＦＲキナーゼドメイン重複（ＥＧＦＲ－ＫＤＤ）からなる群より選択される。

【0755】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ変異は、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ、Ｅｘ１９欠失／Ｔ７９０Ｍ、Ｇ７１９Ｘ／Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｘ／Ｓ７６８Ｉ（もしくはＳ７６８Ｉ／Ｇ７１９Ｘ）、Ｓ７６８Ｉ／Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８５８Ｒ／Ｅ７０９Ａ、及び／またはＥ７４６＿Ｔ７５１欠失挿入Ａ＋Ｔ７９０Ｍを含む、但しこれらに限定されない二重変異である。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ変異は、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ、Ｅｘｌ９欠失／Ｔ７９０Ｍ、Ｇ７１９Ｘ／Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｘ／Ｓ７６８Ｉ（またはＳ７６８Ｉ／Ｇ７１９Ｘ）、Ｓ７６８Ｉ／Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８５８Ｒ／Ｅ７０９Ａ、及びＥ７４６＿Ｔ７５１欠失挿入Ａ＋Ｔ７９０Ｍからなる群より選択される二重変異である。ＥＧＦＲ変異に関するさらなる特性及び方法は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０２０６１８Ａ１号記載され、上記特許文献は本明細書に援用される。

【0756】

いくつかの実施形態において、上記ＡＬＫ変異体としては、ＥＭＬ４－ＡＬＫ変異体１（ＡＢ２７４７２２．１；ＢＡＦ７３６１１．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫ変異体２（ＡＢ２７５８８９．１；ＢＡＦ７３６１２．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫ変異体３ａ（ＡＢ３７４３６１．１；ＢＡＧ５５００３．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫ変異体３ｂ（ＡＢ３７４３６２．１；ＢＡＧ５５００４．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫ変異体４（ＡＢ３７４３６３．１；ＢＡＧ７５１４７．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫ変異体５ａ（ＡＢ３７４３６４．１；ＢＡＧ７５１４８．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫ変異体５ｂ（ＡＢ３７４３６５．１；ＢＡＧ７５１４９．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫ変異体６（ＡＢ４６２４１１．１；ＢＡＨ５７３３５．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫ変異体７（ＡＢ４６２４１２．１；ＢＡＨ５７３３６．１）、ＫＩＦ５Ｂ－ＡＬＫ（ＡＢ４６２４１３．１；ＢＡＨ５７３３７．１）、ＮＰＭ－ＡＬＫ、ＴＰＭ３－ＡＬＫ、ＴＦＧＸＬ－ＡＬＫ、ＴＥＧＬ－ＡＬＫ、ＴＦＧＳ－ＡＬＫ、Ａ１１Ｃ－ＡＬＫ、ＣＬＴＣ－ＡＬＫ、ＭＳＮ－ＡＬＫ、ＴＰＭ４－ＡＬＫ、ＭＹＨ９－ＡＬＫ、ＲＡＮＢＰ２－ＡＬＫ、ＡＬ０１７－ＡＬＫ、及びＣＡＲＳ－ＡＬＫが挙げられるが、これらに限定はされない（例えば、Ｐｕｌｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．， （２００４） Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． １９９：３３０－３５８を参照のこと）。さらに、当業者であれば、ＡＬＫキナーゼとその融合パートナーの間での特定の融合事象に応じて、ＡＬＫキナーゼ変異体が生じることを理解しよう（例えば、Ｈｏｒｎ ａｎｄ Ｐａｏ， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． ２００９， ２７， ４２４７－４２５３（上記文献の開示は本明細書に援用される）に報告されているように、ＥＭＬ４は、少なくとも２、６ａ、６ｂ、１３、１４、及び／または１５において融合する場合がある）。

【0757】

さらなるＡＬＫ変異の例は米国特許第９，０１８，２３０号及び第９，４５８，５０８号に開示され、上記特許文献は本明細書に援用される。

【0758】

いくつかの実施形態において、本発明のＲＯＳ１変異はＲＯＳ１融合であり、ＲＯＳ１融合においては、ＲＯＳ１タンパク質のキナーゼドメインを含むＲＯＳ１ポリペプチドの一部（またはそれをコードするポリヌクレオチド）が別のポリペプチド（またはそれをコードするポリヌクレオチド）の全てまたは一部に融合しており、その２番目のポリペプチドまたはポリヌクレオチドの名称が融合体の名称に付される。いくつかの実施形態において、上記ＲＯＳ１変異は、好ましくは、ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３２及び３４に融合したＳＬＣ３４Ａ２エクソン１３欠失２０４６及び４）、ＣＤ７４－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３２及び３４に融合したＣＤ７４エクソン６）、ＥＺＲ－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３４に融合したＥＺＲエクソン１０）、ＴＰＭ３－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３５に融合したＴＰＭ３エクソン８）、ＬＲＩＧ３－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３５に融合したＬＲＩＧ３エクソン１６）、ＳＤＣ４－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３２に融合したＳＤＣ４エクソン２及び４ならびにＲＯＳ１エクソン３４に融合したＳＤＣ４エクソン４）、ＦＩＧ－ＲＯＳ１としても知られるＧＯＰＣ－ＲＯＳ１、（ＲＯＳ１エクソン３５に融合したＧＯＰＣエクソン８及びＲＯＳ１エクソン３６に融合したＧＯＰＣエクソン４）、ならびにＲＯＳ１Ｇ２０３２Ｒとしても知られるＧ２０３２Ｒからなる群より選択されるＲＯＳ１融合タンパク質の指標である、ＲＯＳ１融合タンパク質（例えば、ＩＨＣによる）及び／またはＲＯＳ１融合遺伝子（例えば、ＦＩＳＨによる）、及び／またはＲＯＳ１ ｍＲＮＡ（例えば、ｑＲＴ－ＰＣＲによる）として測定される。

【0759】

ＲＯＳ１変異及びＲＯＳ融合のさらなる開示は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／０２２１７３７Ａ１号、第ＵＳ２０１５／００５６１９３Ａ１号、及び第ＵＳ２０１０／０１４３９１８Ａ１号、ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０９３９２８Ａ１号に記載され、上記特許文献のそれぞれは本明細書に援用される。いくつかの実施形態において、上記ＲＥＴ変異はＲＥＴ融合または点変異である。

【0760】

いくつかの実施形態において、ＲＥＴ点変異としては、Ｈ６６５０、Ｋ６６６Ｅ、Ｋ６６６Ｍ、Ｓ６８６Ｎ、Ｇ６９１Ｓ、Ｒ６９４Ｑ、Ｍ７００Ｌ、Ｖ７０６Ｍ、Ｖ７０６Ａ、Ｅ７１３Ｋ、Ｇ７３６Ｒ、Ｇ７４８Ｃ、Ａ７５０Ｐ、Ｓ７６５Ｐ、Ｐ７６６Ｓ、Ｅ７６８Ｑ、Ｅ７６８Ｄ、Ｌ７６９Ｌ、Ｒ７７０Ｑ、Ｄ７７１Ｎ、Ｎ７７７Ｓ、Ｖ７７８１、Ｑ７８１Ｒ、Ｌ７９０Ｆ、Ｙ７９１Ｆ、Ｙ７９１Ｎ、Ｖ８０４Ｌ、Ｖ８０４Ｍ、Ｖ８０４Ｅ、Ｅ８０５Ｋ、Ｅ８０６Ｃ、Ｙ８０６Ｅ、Ｙ８０６Ｆ、Ｙ８０６Ｓ、Ｙ８０６Ｇ、Ｙ８０６Ｃ、Ｅ８１８Ｋ、Ｓ８１９Ｉ、Ｇ８２３Ｅ、Ｙ８２６Ｍ、Ｒ８３３Ｃ、Ｐ８４１Ｌ、Ｐ８４１Ｐ、Ｅ８４３Ｄ、Ｒ８４４Ｗ、Ｒ８４４Ｑ、Ｒ８４４Ｌ、Ｍ８４８Ｔ、１８５２Ｍ、Ａ８６６Ｗ、Ｒ８７３Ｗ、Ａ８７６Ｖ、Ｌ８８１Ｖ、Ａ８８３Ｆ、Ａ８８３Ｓ、Ａ８８３Ｔ、Ｅ８８４Ｋ、Ｒ８８６Ｗ、Ｓ８９１Ａ、Ｒ８９７０、Ｄ８９８Ｖ、Ｅ９０１Ｋ、５９０４Ｆ、Ｓ９０４Ｃ２、Ｋ９０７Ｅ、Ｋ９０７Ｍ、Ｒ９０８Ｋ、Ｇ９１１Ｄ、Ｒ９１２Ｐ、Ｒ９１２ＱＭ９１８Ｔ、Ｍ９１８Ｖ、Ｍ９１８Ｌ６、Ａ９１９Ｖ、Ｅ９２１Ｋ、Ｓ９２２Ｐ、Ｓ９２２Ｙ、Ｔ９３０Ｍ、Ｆ９６１Ｌ、Ｒ９７２Ｇ、Ｒ９８２Ｃ、Ｍ１００９Ｖ、Ｄ１０１７Ｎ、Ｖ１０４１６、及びＭ１０６４Ｔが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0761】

いくつかの実施形態において、ＲＥＴ融合は、ＲＥＴと、ＢＣＲ、ＢＣＲ、ＣＬＩＰ１、ＫＩＦＳＢ、ＣＣＤＣ６、ＰＴＣｌｅｘ９、ＮＣＯＡ４、ＴＲＩＭ３３、ＥＲＣ１、ＦＧＦＲＩＯＰ、ＭＢＤ１、ＲＡＢ６１Ｐ２、ＰＲＫＡＲＩＡ、ＴＲＩＭ２４、ＫＴＮ１、ＧＯＬＧＡ５、ＨＯＯＫ３、ＫＩＡＡ１４６８、ＴＲＩＭ２７、ＡＫＡＰ１３、ＦＫＢＰ１５、ＳＰＥＣＣＩＬ、ＴＢＬ１ＸＲ１、ＣＥＰ５５、ＣＵＸ１、ＡＣＢＤ５、ＭＹＨ１３、ＰＩＢＦ１、ＫＩＡＡ１２１７、及びＭＰＲＩＰからなる群より選択される融合パートナーとの間の融合である。

【0762】

ＲＥＴ変異のさらなる開示は、米国特許第１００３５７８９号に記載され、上記特許文献は本記載をもってその全体が援用される。

【0763】

いくつかの実施形態において、ＢＲＡＦ変異はＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ／Ｋ変異である。他の実施形態において、上記ＢＲＡＦ変異は非Ｖ６００Ｅ／Ｋ変異である。

【0764】

いくつかの実施形態において、上記非Ｖ６００Ｅ／ＫＢＲＡＦ変異は、キナーゼ活性化変異、キナーゼ障害変異、またはキナーゼ未知変異、及びそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、キナーゼ活性化変異は、Ｒ４６２Ｉ、１４６３Ｓ、Ｇ４６４Ｅ、Ｇ４６４Ｒ、Ｇ４６４Ｖ、Ｇ４６６Ａ、Ｇ４６９Ａ、Ｎ５８ ｉｓ、Ｅ５８６Ｋ、Ｆ５９５Ｌ、Ｌ５９７Ｑ、Ｌ５９７Ｒ、Ｌ５９７５、Ｌ５９７Ｖ、Ａ５９８Ｖ、Ｔ５９９Ｅ、Ｖ６００Ｒ、Ｋ６０１Ｅ、５６０２Ｄ、Ａ７２８Ｖ、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、キナーゼ障害変異は、Ｇ４６６Ｅ、Ｇ４６６Ｒ、Ｇ４６６Ｖ、Ｙ４７２Ｃ、Ｋ４８３Ｍ、Ｄ５９４Ａ、Ｄ５９４Ｅ、Ｄ５９４Ｇ、Ｄ５９４Ｈ、Ｄ５９４Ｎ、Ｄ５９４Ｖ、Ｇ５９６Ｒ、Ｔ５９９Ａ、５６０２Ａ、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、キナーゼ未知変異は、Ｔ４４０１、５４６７Ｌ、Ｇ４６９Ｅ、Ｇ４６９Ｒ、Ｇ４６９５、Ｇ４６９Ｖ、Ｌ５８４Ｆ、Ｌ５８８Ｆ、Ｖ６００Ｋ６０１欠失挿入Ｅ、５６０５１、Ｑ６０９Ｌ、Ｅ６１１Ｑ、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記非Ｖ６００Ｅ／Ｋ ＢＲＡＦ変異は、Ｄ５９４、Ｇ４６９、Ｋ６０１Ｅ、Ｌ５９７、Ｔ５９９重複、Ｌ４８５Ｗ、Ｆ２４７Ｌ、Ｇ４６６Ｖ、ＢＲＡＦ融合、ＢＲＡＦ－ＡＧＡＰ３再構成、ＢＲＡＦエクソン１５スライス変異体、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される。

【0765】

いくつかの実施形態において、Ｍｅｔ変異としては、点変異、欠失変異、挿入変異、反転、異常なスプライシング、ミスセンス変異、またはｃ－Ｍｅｔタンパク質の少なくとも１つの生物活性の増加、チロシンキナーゼ活性、例えば、向上した受容体ホモログ二量化、形成のリガンド結合、ｂｏｄｙ及びヘテロ二量体の亢進などを生じさせる遺伝子増幅（ｇｅｎｅ ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｈａｔ ｃａｕｓｅｓ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃ－Ｍｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎ， ｔｈｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｓｕｃｈ ａｓ ｉｍｐｒｏｖｅｄ， ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｏｍｏｌｏｇ ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ Ｌｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ， ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｏｆ ｂｏｄｙ ａｎｄ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ ｅｔｃ．）が挙げられる。上記Ｍｅｔ変異の位置は、ｃ－Ｍｅｔ遺伝子の任意の部分であってよい。一実施形態において、上記変異は、ｃ－ＭＥＴ遺伝子によってコードされるｃ－Ｍｅｔタンパク質のキナーゼドメイン中にある。いくつかの実施形態において、上記ｃ－Ｍｅｔ変異は、Ｎ３７５、Ｖ１３、Ｖ９２３、Ｒ１７５、Ｖ１３６、Ｌ２２９、Ｓ３２３、Ｒ９８８、Ｓ１０５８／Ｔ１０１０、及びＥ１６８における点変異である。

【0766】

いくつかの実施形態において、ＥＲＢＢ２変異は、ＥＲＢＢ２のアミノ酸配列における点変異である。いくつかの実施形態において、上記ＥＲＢＢ２の点変異は、アミノ酸置換を生じる点変異、ｍＲＮＡスプライシングを生じる点変異、または上流領域における点変異である。ここで、上記変異は、Ｑ５６８Ｅ、Ｐ６０１Ｒ、Ｉ６２８Ｍ、Ｐ８８５Ｓ、Ｒ１４３Ｑ、Ｒ４３４Ｑ、及びＥ８７４Ｋからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を生じさせるヌクレオチド変異を含む。

【0767】

いくつかの実施形態において、ＥＲＢＢ２変異はＥＲＢＢ２の増幅である。いくつかの実施形態において、上記ＥＲＢＢ２増幅は、Ｖ６５９Ｅ、Ｇ３０９Ａ、Ｇ３０９Ｅ、Ｓ３１０Ｆ、Ｄ７６９Ｈ、Ｄ７６９Ｙ、Ｖ７７７Ｌ、Ｐ７８０挿入、Ｐ７８０－Ｙ７８１挿入ＧＳＰ、Ｖ８４２Ｉ、Ｒ８９６Ｃ、Ｋ７５３Ｅ、及びＬ７５５Ｓからなる群より選択される点変異を含み、これらは、ポリメラーゼ連鎖反応または他の配列決定技法、例えば、Ｂｏｓｅ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ． ２０１３， ３（２）， ２２４－２３７；及びＺｕｏ， ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１６， ２２（１９）， ４８５９－４８６９（上記文献の開示は本明細書に援用される）に報告されている技法によって検出することができる。

【0768】

いくつかの実施形態において、ＢＲＣＡ変異は、ＢＲＣＡ１及び／またはＢＲＣＡ２、好ましくはＢＲＣＡ１における、及び／または１種以上の他の遺伝子であって、該遺伝子のタンパク質産物がＤＮＡ損傷部位でＢＲＣＡ１及び／またはＢＲＣＡ２と会合する上記遺伝子（ＡＴＭ、ＡＴＲ、Ｃｈｋ２、Ｈ２ＡＸ、５３ＢＰ１、ＮＦＢＤ１、Ｍｒｅ１１、Ｒａｄ５０、Ｎｉｂｒｉｎ、ＢＲＣＡ１関連ＲＩＮＧドメイン（ＢＡＲＤ１）、Ａｂｒａｘａｓ、及びＭＳＨ２を含む）における変異である。これらの遺伝子の１つ以上の変異によって、ＢＲＣＡ１及び／またはＢＲＣＡ２の変異を模倣する遺伝子発現パターンが生じる可能性がある。

【0769】

特定の実施形態において、ＢＲＣＡ変異は非同義変異を含む。いくつかの実施形態において、ＢＲＣＡ変異はナンセンス変異を含む。いくつかの実施形態において、上記ＢＲＣＡ変異はフレームシフト変異を含む。いくつかの実施形態において、上記ＢＲＣＡ変異はスプライシング変異を含む。いくつかの実施形態において、ＢＲＣＡ変異は、変異ｍＲＮＡとして、最終的には変異タンパク質として発現される。いくつかの実施形態において、ＢＲＣＡ１／２タンパク質は機能性である。他の実施形態において、ＢＲＣＡ１／２タンパク質は活性が低下している。他の実施形態において、ＢＲＣＡ１／２タンパク質は非機能性である。

【0770】

本明細書で置換に関して使用される場合、変異に関する」記号「＝」は、一般に、同義置換、サイレントコドン、及び／またはサイレント置換を指す。特に、同義置換（サイレント置換またはサイレントコドンとも呼ばれる）は、タンパク質をコードする遺伝子のエクソンにおいて、１つのヌクレオチド塩基が別のヌクレオチド塩基に置換されることを指し、この場合、生成するアミノ酸配列は改変されない。これは、遺伝コードが「縮重」している、すなわち、いくつかのアミノ酸が複数の３塩基対コドンによってコードされているという事実に起因する。所与のアミノ酸に対するコドンの一部には、同一のアミノ酸をコードする他のコドンと１塩基対のみが異なるものがあるために、野生型塩基がそれに代わる塩基の１種に置換される点変異においても、遺伝子の翻訳中に伸長するポリペプチド鎖中に同一のアミノ酸が組み込まれることになる。いくつかの実施形態において、非コードＤＮＡに影響を及ぼす同義置換及び同義変異は多くの場合サイレント変異と見なされる。但し、上記変異がサイレントで影響を受けない場合は必ずしもこの限りではない。例えば、同義変異は、転写、スプライシング、ｍＲＮＡ輸送、及び翻訳に影響を与える可能性があり、それらのいずれかによって得られる表現型が変化し、上記同義変異が非サイレントになる可能性がある。稀なコドンに対するｔＲＮＡの基質特異性が、翻訳のタイミング、延いてはタンパク質の共翻訳フォールディングに影響を与える可能性がある。このことは、多くの種で観測されているコドン使用バイアスに現れている。非同義置換／非同義変異により、恣意的に、保存的（類似した物理化学的特性をもつアミノ酸への変化）、半保存的（例えば、負荷電のアミノ酸から正荷電のアミノ酸へ）、または急進的（ｒａｄｉｃａｌ）（大幅に異なるアミノ酸）として分類される場合があるアミノ酸の変化が生じる。いくつかの実施形態において、上記ＢＲＣＡ変異は、Ｐ８７１Ｌ、Ｋ１１８３Ｒ、Ｄ６９３Ｎ、Ｓ１６３４Ｇ、Ｅ１０３８Ｇ、Ｓ１０４０Ｎ、Ｓ６９４＝（＝：サイレンスコドン）、Ｍ１６７３Ｉ、Ｑ３５６Ｒ、Ｓ１４３６＝、Ｌ７７１＝、Ｋ６５４Ｓｆｓ＊４７、Ｓ１９８Ｎ、Ｒ４９６Ｈ、Ｒ８４１Ｗ、Ｒ１３４７Ｇ、Ｈ６１９Ｎ、Ｓ１５３３Ｉ、Ｌ３０＝、Ａ６２２Ｖ、Ｙ６５５Ｖｆｓ＊１８、Ｒ４９６Ｃ、Ｅ５９７Ｋ、Ｒ１４４３＊、Ｅ２３Ｖｆｓ＊１７、Ｌ３０Ｆ、Ｅｌｌ１Ｇｆｓ＊３、Ｋ３３９Ｒｆｓ＊２、Ｌ５１２Ｆ、Ｄ６９３Ｎ、Ｐ８７１Ｓ、Ｓ１１４０Ｇ、Ｑ１２４０＊、Ｐ１７７０Ｓ、Ｒ７＝、Ｌ５２Ｆ、Ｔ１７６Ｍ、Ａ２２４Ｓ、Ｌ３４７＝、Ｓ５６１Ｆ、Ｅ５９７＊、Ｋ８２０Ｅ、Ｋ８９３Ｒｆｓ＊１０７、Ｅ９６２Ｋ、Ｍ１０１４Ｉ、Ｒ１０２８Ｈ、Ｅ１２５８Ｄ、Ｅ１３４６Ｋ、Ｒ１３４７Ｔ、Ｌ１４３９Ｆ、Ｈ１４７２Ｒ、Ｑ１４８８＊、Ｓ１５７２Ｃ、Ｅ１６０２Ｋ、Ｒ１６１０Ｃ、Ｌ１６２１＝、Ｑ１６２５＊、Ｑ１６２５＝、Ｄ１７５４Ｎ、Ｒ１７７２Ｑ、Ｒ１８５６＊、及びそれらの任意の組み合わせを含む、但しこれらに限定されないＢＲＣＡ１変異である。

【0771】

いくつかの実施形態において、ＢＲＣＡ変異は、Ｖ２４６６Ａ、Ｎ２８９Ｈ、Ｎ９９１Ｄ、Ｓ４５５＝（＝：サイレンスコドン）、Ｎ３７２Ｈ、Ｈ７４３＝、Ｖ１２６９＝、Ｓ２４１４＝、Ｖ２１７１＝、Ｌ１５２１＝、Ｔ３０３３Ｎｆｓ＊ｌｌ、Ｋ１１３２＝、Ｔ３０３３Ｌｆｓ＊２９、Ｒ２８４２Ｃ、Ｎ１７８４Ｔｆｓ＊７、Ｋ３３２６＊、Ｋ３３２６＊、Ｄ１４２０Ｙ、Ｉ６０５Ｙｆｓ＊９、Ｉ３４１２Ｖ、Ａ２９５１Ｔ、Ｔ３０８５Ｎｆｓ＊２６、Ｒ２６４５Ｎｆｓ＊３、Ｓ１０１３＊、Ｔ１９１５Ｍ、Ｆ３０９０＝、Ｖ３２４４Ｉ、Ａ１３９３Ｖ、Ｒ２０３４Ｃ、Ｌ１３５６＝、Ｅ２９８１Ｒｆｓ＊３７、Ｎ１７８４Ｋｆｓ＊３、Ｋ３４１６Ｎｆｓ＊ｌｌ、Ｋ１６９１Ｎｆｓ＊１５、Ｓ１９８２Ｒｆｓ＊２２、及びそれらの任意の組み合わせを含む、但しこれらに限定されないＢＲＣＡ２変異である。

【0772】

いくつかの実施形態において、ＮＲＡＳ変異としては、Ｅ６３Ｋ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ａ、Ｑ６１Ｌ、Ｇ１３Ｖ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｃ、Ｑ６１Ｐ、Ｇ１３Ｓ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１８Ｔ、Ｑ６１Ｘ、Ｇ６０Ｅ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１＝（＝：サイレンスコドン）、Ｑ６１Ｅ、Ｑ６１Ｒ、Ａ１４６Ｔ、Ａ５９Ｔ、Ａ５９Ｄ、Ｑ６１＝、Ｒ６８Ｔ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｇ７５＝、Ａ９１Ｖ、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0773】

Ｅ１３２Ｋいくつかの実施形態において、ＰＩＫ３ＣＡ変異としては、置換変異、欠失変異、及び挿入変異が挙げられる。いくつかの実施形態において、変異は、ＰＩＫ３ＣＡのヘリカルドメインにおいて及びそのキナーゼにおいて、他の実施形態において、ＰＩＫ３ＣＡのＰ８５ＢＤドメインにおいて発生する。いくつかの実施形態において、上記ＰＩＫ３ＣＡ変異は、エクソン１、２、４、５、７、９、１３、１８、及び２０に存在する。いくつかの実施形態において、上記ＰＩＫ３ＣＡ変異はエクソン９及び２０に存在する。さらに他の実施形態において、上記ＰＩＫ３ＣＡ変異は上記に挙げた任意の変異の組み合わせである。これらのエクソンの任意の組み合わせを、任意選択で他のエクソンの試験と組み合わせて試験してもよい。変異の試験は、コード配列全体に沿って行うことも、または変異がクラスター化されていることが判明している領域に集中して行うこともできる。変異の特定のホットスポットが、ＰＩＫ３ＣＡコード配列のヌクレオチド位置１６２４、１６３３、１６３６、及び３１４０で発生する。

【0774】

いくつかの実施形態において、ＰＩＫ３ＣＡ変異のサイズは小さく、１～３ヌクレオチドの範囲である。いくつかの実施形態において、上記ＰＩＫ３ＣＡ変異としては、Ｇ１６２４Ａ、Ｇ１６３３Ａ、Ｃ１６３６Ａ、Ａ３１４０Ｇ、Ｇ１１３Ａ、Ｔ１２５８Ｃ、Ｇ３１２９Ｔ、Ｃ３１３９Ｔ、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ、Ｑ５４６Ｒ、Ｈ１０４７Ｌ、Ｈ１０４７Ｒ、及びＧ２７０２Ｔが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0775】

いくつかの実施形態において、ＭＡＰ２Ｋ１変異は体細胞ＭＡＰ２Ｋ１変異であり、任意選択で、ＭＥＫ１レベルを上方制御するＭＡＰ２Ｋ１変異である。いくつかの実施形態において、上記ＭＡＰ２Ｋ１変異は、ＨＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＡＲＡＦ、ＢＲＡＦ、ＲＡＦ１、ＭＡＰ２Ｋ２、ＭＡＰＫ１、ＭＡＰＫ３、ＭＡＰ３Ｋ３を含む、ＲＡＳ／ＭＡＰＫ経路に関連する１つ以上の遺伝子における変異である。特定の実施形態において、上記ＭＡＰ２Ｋ１変異は、ＲＡＳＡ、ＰＴＥＮ、ＥＮＧ、ＡＣＶＲＬ１、ＳＭＡＤ４、ＧＤＦ２、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上の遺伝子に存在する。

【0776】

いくつかの実施形態において、ＭＡＰ２Ｋ１変異としては、Ｐ１２４Ｓ、Ｑ５６Ｐ、Ｋ５７Ｎ、Ｅ２０３Ｋ、Ｇ２３７＊、Ｐ１２４Ｌ、Ｇ１２８Ｄ、Ｄ６７Ｎ、Ｋ５７Ｅ、Ｅ１０２＿Ｉ１０３欠失、Ｃ１２１Ｓ、Ｋ５７Ｔ、Ｋ５７Ｎ、Ｑ５６Ｐ、Ｐ１２４Ｌ、Ｋ５７Ｎ、Ｇ１２８Ｖ、Ｑ５８＿Ｅ６２欠失、Ｆ５３Ｌ、Ｉ１２６＝、Ｉ１０３＿Ｋ１０４欠失、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0777】

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳ変異は非同義変異を含む。いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳ変異はナンセンス変異を含む。いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳ変異はフレームシフト変異を含む。いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳ変異は、スプライシング変異を含む。いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳ変異は、変異体ｍＲＮＡとして、最終的には変異タンパク質として発現される。いくつかの実施形態において、変異ＫＲＡＳタンパク質は機能性である。他の実施形態において、変異ＫＲＡＳタンパク質は活性が低下している。他の実施形態において、変異ＫＲＡＳタンパク質は非機能性である。

【0778】

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳ変異としては、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｃ、Ｑ６１Ｈ、Ａ１４６Ｔ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｌ、Ｇ１３Ｓ、１４６Ｖ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１２Ｆ、Ｋ１１７Ｎ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｖ、Ａ５９Ｔ、Ｖ１４Ｉ、Ｋ１１７Ｎ、Ｑ２２Ｋ、Ｑ６１Ｐ、Ａ１４６Ｐ、Ｇ１３Ｄ、Ｌ１９Ｆ、Ｌ１９Ｆ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ６０＝、Ｇ１２＝、Ｇ１３＝、Ａ１８Ｄ、Ｔ５８Ｉ、Ｑ６１Ｅ、Ｅ６３Ｋ、Ｇ１２Ｌ、Ｇ１３Ｖ、Ａ５９Ｇ、Ｇ６０Ｄ、Ｇ１０Ｒ、Ｇ１０重複、Ｄ５７Ｎ、Ａ５９Ｅ、Ｖ１４Ｇ、Ｄ３３Ｅ、Ｇ１２Ｉ、Ｇ１３重複、及びそれらの任意の組み合わせ（但し、＝はサイレンスコード化を示す）が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0779】

いくつかの実施形態において、ＮＦ１変異変異としては、置換変異、欠失変異、ミスセンス変異、異常なスプライシング変異、及び挿入変異が挙げられる。いくつかの実施形態において、上記ＮＦ１変異は機能喪失（ＬＯＦ）変異である。いくつかの実施形態において、上記ＮＦ１変異は、Ｒ１９４７Ｘ（Ｃ５８３９Ｔ）、Ｒ３０４Ｘ、エクソン３７変異、エクソン４ｂ変異、エクソン７変異、エクソン１０ｂ変異、及びエクソン１０ｃ変異（例えば、１５７０Ｇ→Ｔ、Ｅ５２４Ｘ）からなる群より選択される。

【0780】

いくつかの実施形態において、ＣＤＫＮ２Ａ変異としては、Ｒ２４Ｐ、Ｄ１０８Ｇ、Ｄ１０８Ｎ、Ｄ１０８Ｙ、Ｇ１２５Ｒ、Ｐ１１４Ｌ、Ｒ８０＊、Ｒ５８＊、Ｈ８３Ｙ、Ｗ１１０＊、Ｐ１１４Ｌ、Ｅ８８＊、Ｗ１１０＊、Ｅ１２０＊、Ｄ１０８Ｙ、Ｄ８４Ｙ、Ｄ８４Ｎ、Ｅ６９＊、Ｐ８１Ｌ、Ｑ５０＊、Ｌ７８Ｈｆｓ＊４１、Ｄ１０８Ｎ、Ｓ１２＊、Ｐ４８Ｌ、Ｅ６１＊、Ｙ４４＊、Ｅ８８Ｋ、Ｒ８０＊、Ｄ８４Ｇ、Ｌ１６Ｐｆｓ＊９、Ｙ１２９＊、Ｄ１０８Ｈ、Ａ１４８Ｔ、Ａ３６Ｇ、Ａ１０２Ｖ、Ｗ１５＊、Ｈ８３Ｒ、Ａ５７Ｖ、Ｅ３３＊、Ｄ７４Ｙ、Ａ７６Ｖ、Ｅ１５３Ｋ、Ｄ７４Ｎ、Ｈ８３Ｄ、Ｖ８２Ｍ、Ｒ５８＊、Ｙ１２９＊、Ｅｌ１９＊、Ｙ４４＊、Ｄ７４Ａ、Ｔ１８＿Ａ１９重複、Ｙ４４Ｌｆｓ＊７６、Ｌ３２＿Ｌ３７欠失、Ｖ２８＿Ｅ３３欠失、Ｄ１４＿Ｌ１６欠失、Ａ６８Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0781】

いくつかの実施形態において、ＰＴＥＮ変異は非同義変異を含む。いくつかの実施形態において、上記ＰＴＥＮ変異はナンセンス変異を含む。いくつかの実施形態において、上記ＰＴＥＮ変異はフレームシフト変異を含む。いくつかの実施形態において、上記ＰＴＥＮ変異はスプライシング変異を含む。いくつかの実施形態において、変異ＰＴＥＮは、ｍＲＮＡとして、最終的にはタンパク質として発現される。いくつかの実施形態において、上記変異ＰＴＥＮタンパク質は機能性である。他の実施形態において、上記変異ＰＴＥＮタンパク質は活性が低下している。他の実施形態において、上記変異ＰＴＥＮタンパク質は非機能性である。いくつかの実施形態において、上記ＰＴＥＮ変異としては、Ｒ１３０Ｑ、Ｒ１３０Ｇ、Ｔ３１９＊、Ｒ２３３＊、Ｒ１３０＊、Ｋ２６７Ｒｆｓ＊９、Ｎ３２３Ｍｆｓ＊２１、Ｎ３２３Ｋｆｓ＊２、Ｒ１７３Ｃ、Ｒ１７３Ｈ、Ｒ３３５＊、Ｑ１７１＊、Ｑ２４５＊、Ｅ７＊、Ｄ２６８Ｇｆｓ＊３０、Ｒ１３０Ｑ、Ｑ２１４＊、Ｒ１３０Ｌ、Ｃ１３６Ｒ、Ｑ２９８＊、Ｑ１７＊、Ｈ９３Ｒ、Ｐ２４８Ｔｆｓ＊５、Ｉ３３欠失、Ｒ２３３＊、Ｅ２９９＊、Ｇ１３２Ｄ、Ｙ６８Ｈ、Ｔ３１９Ｋｆｓ＊２４、Ｎ３２９Ｋｆｓ＊１４、Ｖ１６６Ｓｆｓ＊１４、Ｖ２９０＊、Ｔ３１９Ｎｆｓ＊６、Ｒ１４２Ｗ、Ｐ３８Ｓ、Ａ１２６Ｔ、Ｈ６１Ｒ、Ｆ２７８Ｌ、Ｓ２２９＊、Ｒ１３０Ｐ、Ｇ１２９Ｒ、Ｒ１３０Ｑｆｓ＊４、Ｐ２４６Ｌ、Ｒ１３０＊、Ｇ１６５Ｒ、Ｃ１３６Ｙ、Ｒ１７３Ｃ、Ｉ１０１Ｔ、Ｙ１５５Ｃ、Ｄ９２Ｅ、Ｋ１６４Ｒｆｓ＊３、Ｎ１８４Ｅｆｓ＊６、Ｇ１２９Ｅ、Ｒ１３０Ｇ、Ｇ３６Ｒ、Ｆ３４１Ｖ、Ｈ１２３Ｙ、Ｃ１２４Ｓ、Ｍ３５ＶＧ１２７Ｅ、Ｇ１６５Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0782】

いくつかの実施形態において、ＴＰ５３変異としては、Ｒ１７５Ｈ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２４８Ｗ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２８２Ｗ、Ｃ１３５Ｙ、Ｃ１４１Ｙ、Ｐ１５１Ｓ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ１５８Ｌ、Ｙ１６３Ｃ、Ｖ１７３Ｌ、Ｖ１７３Ｍ、Ｃ１７６Ｆ、Ｈ１７９Ｒ、Ｈ１７９Ｙ、Ｈ１７９Ｑ、Ｙ２０５Ｃ、Ｙ２２０Ｃ、Ｙ２３４Ｃ、Ｍ２３７Ｉ、Ｃ２３８Ｙ、Ｓ２４１Ｆ、Ｇ２４５Ｄ、Ｇ２４５Ｃ、Ｒ２４８Ｌ、Ｒ２４９Ｍ、Ｖ２７２Ｍ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ２７８Ｌ、Ｒ２８０Ｔ、Ｅ２８５Ｋ、Ｅ２８６Ｋ、Ｒ１５８Ｈ、Ｃ１７６Ｙ、Ｉ１９５Ｔ、Ｇ２１４Ｒ、Ｇ２４５Ｖ、Ｇ２６６Ｒ、Ｇ２６６Ｅ、Ｐ２７８Ｓ、Ｒ２８０Ｋ、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。いくつかのさらなる実施形態において、上記ＴＰ５３変異は、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２７３Ｈ、Ｃ１４１Ｙ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ１５８Ｌ、Ｙ１６３Ｃ、Ｖ１７３Ｌ、Ｖ１７３Ｍ、Ｙ２０５Ｃ、Ｙ２２０Ｃ、Ｇ２４５Ｃ、Ｒ２４９Ｍ、Ｖ２７２Ｍ、Ｒ２７３Ｌ、及びＥ２８６Ｋからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記ＴＰ５３変異は上記の変異の１種以上を含む。

【0783】

いくつかの実施形態において、ＣＲＥＢＢＰ変異としては、Ｒ１４４６Ｃ、Ｒ１４４６Ｈ、Ｓ１６８０欠失、Ｉ１０８４Ｓｆｓ＊１５、Ｐ１９４８Ｌ、Ｉ１０８４Ｎｆｓ＊３、？Ｒ３８６＊、Ｓ８９３Ｌ、Ｒ１３４１＊、Ｐ１４２３Ｌｆｓ＊３６、Ｐ１４８８Ｌ、Ｙ１５０３Ｈ、Ｒ１６６４Ｃ、Ａ１８２４Ｔ、Ｒ１１７３＊、Ｒ１３６０＊、Ｙ１４５０Ｃ、Ｈ２２２８Ｄ、Ｓ７１Ｌ、Ｐ９２８＝、Ｄ１４３５Ｎ、Ｗ１５０２Ｃ、Ｙ１５０３Ｄ、Ｒ４８３＊、Ｒ６０１Ｑ、Ｓ９４５Ｌ、Ｒ１１０３＊、Ｒ１２８８Ｗ、Ｒ１３９２＊、Ｃ１４０８Ｙ、Ｄ１４３５Ｇ、Ｒ１４４６Ｌ、Ｈ１４８５Ｙ、Ｑ１４９１Ｋ、Ｑ９６＊、Ｌ３６１Ｍ、Ｌ５２４Ｗｆｓ＊６、Ｑ５４０＊、Ｑ１０７３＊、Ａ１１００Ｖ、Ｒ１１６９Ｃ、Ｃ１２３７Ｙ、Ｒ１３４７Ｗ、Ｇ１４１１Ｅ、Ｗ１４７２Ｃ、Ｉ１４８３Ｆ、Ｐ１４８８Ｔ、Ｒ１４９８＊、Ｙ１５０３Ｆ、Ｑ１８５６＊、Ｒ１９８５Ｃ、Ｒ２１０４Ｃ、Ｓ２３２８Ｌ、Ｖ２３４９＝、Ｓ２３７７Ｌ、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0784】

いくつかの実施形態において、ＫＭＴ２Ｃ変異としては、Ｄ３４８Ｎ、Ｐ３５０＝、Ｒ３８０Ｌ、Ｃ３９１＊、Ｐ３０９Ｓ、Ｃ９８８Ｆ、Ｙ９８７Ｈ、Ｓ９９０Ｇ、Ｋ２７９７Ｒｆｓ＊２６、Ｖ３４６＝、Ｒ８９４Ｑ、Ｒ２８４Ｑ、Ｓ８０６＝、Ｒ１６９０＝、Ｐ９８６＝、Ａ１６８５Ｓ、Ｇ３１５Ｓ、Ｑ７５５＊、Ｒ９０９Ｋ、Ｔ３１６Ｓ、Ｓ７７２Ｌ、Ｇ８３８Ｓ、Ｌ２９１Ｆ、Ｐ３３５＝，Ｃ９８８Ｆ，Ｑ２６８０＝，Ｅ７６５Ｇ，Ｋ３３９Ｎ，Ｙ８１６＊，Ｒ５２６Ｐ，Ｎ７２９Ｄ，Ｇ８４５Ｅ，Ｉ８１７Ｎｆｓ＊ｌｌ，Ｇ８９２Ｒ，Ｃｌ１０３＊，Ｓ３６６０Ｌ，Ｆ４４９６Ｌｆｓ＊２１，Ｇ３１５Ｃ，Ｒ８８６Ｃ，Ｄ３４８Ｎ，Ｓ７９３＝，Ｖ９１９Ｌ，Ｒ２４８１Ｓ、Ｒ２８８４＊、Ｒ４５４９Ｃ、Ｍ３０５Ｄｆｓ＊２８、Ｔ３１６Ｓ、Ｐ３７７＝、Ｉ４５５Ｍ、Ｔ８２０Ｉ、Ｓ９６５＝、Ｓ７３０Ｙ、Ｐ８６０Ｓ、Ｑ８７３Ｈｆｓ＊４０、Ｒ９０４＊、Ｒ２６１０Ｑ、Ｒ４４７８＊、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0785】

いくつかの実施形態において、ＫＭＴ２Ｄ変異としては、Ｌ１４１９Ｐ、Ｅ６４０Ｄ、Ｅ５４１Ｄ、Ｅ４５５Ｄ、Ｔ２１３１Ｐ、Ｋ１４２０Ｒ、Ｐ２３５４Ｌｆｓ＊３０、Ｇ２４９３＝、Ｑ３６１２＝、Ｉ９４２＝、Ｔ１１９５Ｈｆｓ＊１７、Ｐ４１７０＝、Ｐ１１９４Ｈ、Ｇ１２３５Ｖｆｓ＊９５、Ｐ４５６３＝、Ｐ６４７Ｈｆｓ＊２８３、Ｌ４４９＿Ｐ４５７欠失、Ｐ３５５７＝、Ｑ３６０３＝、Ｒ１７０２＊、Ｐ６４８Ｔｆｓ＊２、Ｒ５５０１＊、Ｒ４１９８＊、Ｒ４４８４＊、Ｒ８３Ｑ、Ｒ１９０３＊、Ｒ２６８５＊、Ｒ４２８２＊、Ｌ５３２６＝、Ｒ５４３２Ｗ、Ｒ２７３４＊、Ｑ２８００＊、Ｒ２８３０＊、Ｑ３７４５重複、Ｓ４０１０Ｐ、Ｒ４９０４＊、Ｇ５１８２Ａｆｓ＊６１、Ｒ５２１４Ｈ、Ｒ１６１５＊、Ｑ２３８０＊、Ｒ２６８７＊、Ｒ２７７１＊、Ｖ３０８９Ｗｆｓ＊３０、Ｑ３７９９Ｇｆｓ＊２１２、Ｒ４５３６＊、Ｒ５０３０Ｃ、Ｒ５０４８Ｃ、Ｒ５４３２Ｑ、Ａ２２１Ｌｆｓ＊４０、Ａ４７６Ｔ、Ａ２１１９Ｌｆｓ＊２５、Ｐ２５５７Ｌ、Ｒ２８０１＊、Ｑ３９１３＊、Ｒ４４２０Ｗ、Ｇ４６４１＝、Ｒ５０９７＊、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0786】

いくつかの実施形態において、ＡＲＩＤ１Ａ変異としては、Ｃ８８４＊（＊：ナンセンス変異）、Ｅ９６６Ｋ、Ｑ１４１１＊、Ｆ１７２０ｆｓ（ｆｓ：フレームシフト）、Ｇ１８４７ｆｓ、Ｃ１８７４ｆｓ、Ｄ１９５７Ｅ、Ｑ１４３０、Ｒ１７２１ｆｓ、Ｇ１２５５Ｅ、Ｇ２８４ｆｓ、Ｒ１７２２＊、Ｍ２７４ｆｓ、Ｇ１８４７ｆｓ、Ｐ５５９ｆｓ、Ｒ１２７６＊、Ｑ２１７６ｆｓ、Ｈ２０３ｆｓ、Ａ５９１ｆｓ、Ｑ１３２２＊、Ｓ２２６４＊、Ｑ５８６＊、Ｑ５４８Ｆｓ、及びＮ７５６ｆｓ挙げられるが、これらに限定はされない。

【0787】

いくつかの実施形態において、ＲＢＩ変異としては、Ｒ３２０Ｘ、Ｒ４６７Ｘ、Ｒ５７９Ｘ、Ｒ４５５Ｘ、Ｒ３５８Ｘ、Ｒ２５１Ｘ、Ｒ７８７Ｘ、Ｒ５５２Ｘ、Ｒ２５５Ｘ、Ｒ５５６Ｘ、Ｙ７９０Ｘ、Ｑ５７５Ｘ、Ｅ３２３Ｘ、Ｒ６６１Ｗ、Ｒ５７９＊、Ｒ４５５＊、Ｒ５５６＊．Ｒ７８７＊、Ｒ６６１Ｗ、Ｒ４４５＊、Ｒ４６７＊、Ｑ２１７＊、Ｑ４７１＊、Ｗ１９５＊、Ｑ３９５＊、Ｉ６８０Ｔ、Ｅ１３７＊、Ｒ２５５＊、Ｑ３４４＊、Ｑ６２＊、Ｅ４４０Ｋ、Ａ４８８Ｖ、Ｐ７７７Ｌｆｓ＊３３、Ｅ３２２Ｋ、Ｒ６５６Ｗ、Ｇ６１７Ｒｆｓ＊３６、Ｃ２２１＊、Ｅ４４０＊、Ｑ９３＊、Ｑ５０４＊、Ｅ１２５＊、Ｓ８３４＊、Ｅ３２３＊、Ｑ６８５＊、Ｓ８２９＊、Ｗ５１６＊、Ｇ４３５＊、Ｑ２５７＊、Ｅ７９＊、Ｓ５６７Ｌ、Ｖ６５４Ｍ、Ｖ６５４Ｓｆｓ＊１４、Ｇ１００Ｅｆｓ＊１１、Ｋ７１５＊、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0788】

いくつかの実施形態において、ＡＴＭ変異は、１０７４４Ａ＞Ｇ；１０７４４Ａ＞Ｇ；１１４８２Ｇ＞Ａ；ＩＶＳ３－５５８Ａ＞Ｔ；１４６Ｃ＞Ｇ；３８１欠失Ａ；ＩＶＳ８－３欠失ＧＴ；１０２８欠失ＡＡＡＡ；１１２０Ｃ＞Ｔ；１９３０挿入１６；ＩＶＳ１６＋２Ｔ＞Ｃ；２５７２Ｔ＞Ｃ；ＩＶＳ２１＋１Ｇ＞Ａ；３０８５欠失Ａ；３３８１欠失ＴＧＡＣ；３６０２欠失ＴＴ；４０５２欠失Ｔ；４３９６Ｃ＞Ｔ；５１８８Ｃ＞Ｔ；５２９０欠失Ｃ；５５４６欠失Ｔ；５７９１Ｇ＞ＣＣＴ；６０４７Ａ＞Ｇ；ＩＶＳ４４－１Ｇ＞Ｔ；６６７２欠失ＧＣ／６６７７欠失ＴＡＣＧ；６７３６欠失１１／６７４９欠失７；７１５９挿入ＡＧＣＣ；７６７１欠失ＧＴＴＴ；７７０５欠失ｌ４；７８６５Ｃ＞Ｔ；７９７９欠失ＴＧＴ；８１７７Ｃ＞Ｔ；８５４５Ｃ＞Ｔ；８５６５Ｔ＞Ａ；ＩＶＳ６４＋１Ｇ＞Ｔ；及び９０１０欠失２８を含む、但しこれらに限定されないＡＴＭ遺伝子配列における変異である。

【0789】

本発明のいくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２変異は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿０１４１５９のｍＲＮＡ配列の転写開始コドンの位置が１に設定される場合の、ＳＥＴＤ２タンパク質をコードする遺伝子配列の変化である。いくつかの実施形態において、７５５８番目のＧ（グアニン）がＴ（チミン）に置換され、４７７４番目のＣ（シトシン）がＴに置換され、１２１０番目のＡ（アデニン）がＴに置換され、４８８３番目のＴがＧに置換され、５２９０番目のＣがＴに置換され、７０７２番目のＣがＴに置換され、４１４４番目のＧがＴに置換され、１２９７のＣがＴに置換され、７５５番目のＴがＧに置換され、７２６１のＴがＧに置換され、６７００がＴに置換され、２５３６番目のＣがＴに置換され、７４３８番目のＣがＴ置換に置換され、または、３８６６位にＡの挿入があり、６７１２位にＴの挿入があり、７５７２位にＴの挿入があり、９１３番目のＡの欠失があり、５６１９番目のＣの欠失があり、塩基４６０３～４６０４の欠失があり、１番目の塩基の欠失があり、１９３６番目のＣの欠失があり、３０９４～３１１８塩基の欠失があり、５２８９位にＡの挿入があり、且つ６３２３～６３３３塩基の欠失がある。

【0790】

いくつかの実施形態において、ＦＬＴ３変異としては、（Ｑ５６９＿Ｅ６４８）挿入、Ｄ８３５Ｘ、（Ｑ５６９＿Ｅ６４８）欠失挿入、（Ｄ８３５＿Ｉ８３６）、Ｄ８３５Ｙ、Ｄ８３５Ｖ、Ｄ８３５Ｙ、Ｄ８３５Ｈ、Ｔ２２７Ｍ、Ｉ８３６欠失、Ｎ６７６Ｋ、Ｄ８３５Ｅ、Ｙ５９７＿Ｅ５９８挿入ＤＹＶＤＦＲＥＹ、Ｄ８３５Ｅ、Ｄ８３５欠失、Ｆ５９４＿Ｄ６００重複、Ａ６８０Ｖ、Ｄ８３９Ｇ、Ｄ９６＝、Ｄ８３５Ｈ、Ｖ４９１Ｌ、Ｄ８３５Ｅ、Ｑ９８９＊、Ｄ８３５Ｖ、Ｌ５６１＝、Ｉ８３６欠失、Ｐ９８６Ａｆｓ＊２７、Ｄ７Ｇ、Ｄ３２４Ｎ、Ｓ４５１Ｆ、Ｄ８３５Ｎ、Ｌ５７６Ｐ、Ｙ５９７＿Ｅ５９８挿入ＤＶＤＦＲＥＹ、Ｖ４９１Ｌ、Ｎ８４１Ｔ、Ｄ３２４Ｎ、Ｙ５７２Ｃ、Ｒ５９５＿Ｌ６０１重複、Ｋ６６３Ｒ、Ｎ６７６Ｋ、Ｆ６９１Ｌ、Ｄ８３５Ａ、Ｉ８３６Ｈ、Ｎ８４１Ｋ、Ｓ９９３Ｌ、Ｌ８３２Ｆ、Ｉ８３６Ｍ、Ａ６６Ｖ、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0791】

いくつかの実施形態において、ＰＴＰＮ１１変異としては、Ｅ７６Ｋ、Ａ７２Ｖ、Ａ７２Ｔ、Ｄ６１Ｙ、Ｄ６１Ｖ、Ｇ６０Ｖ、Ｅ６９Ｋ、Ｅ７６Ｇ、Ｇ５０７Ｖ、Ｓ５０６Ｌ、Ｇ５０７Ａ、Ｔ７３Ｉ、Ｅ７６Ａ、Ｅ７６Ｑ、Ｓ５０６Ｐ、Ｄ６１Ｎ、Ｆ７１Ｌ、Ｅ７６Ｖ、Ｆ７１Ｌ、Ａ７２Ｄ、Ｖ４３２Ｍ、Ｔ４７２Ｍ、Ｐ４９５Ｌ、Ｎ５８Ｙ、Ｆ２８５Ｓ、Ｓ５０６Ａ、Ｓ１８９Ａ、Ａ４６５Ｔ、Ｒ５０２Ｗ、Ｇ５０７Ｒ、Ｔ５１１Ｋ、Ｄ６１Ｈ、Ｄ６１Ｇ、Ｇ５０７Ｅ、Ｇ６０Ｒ、Ｇ６０Ａ、Ｑ５１４Ｌ、Ｅ１３９Ｄ、Ｙ１９７Ｄ＊、Ｎ３０８Ｄ、Ｑ５１４Ｈ、Ｑ５１４Ｈ、Ｎ５８Ｓ、Ｅ１２３Ｄ、Ｌ２０６＝、Ａ４６５Ｇ、Ｐ４９５Ｓ、Ｇ５０７Ｒ、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0792】

いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ１変異としては、Ｎ５７７Ｋ、Ｋ６８７Ｅ、Ｎ５７７Ｋ、Ｄ１６６欠失、Ｔ３７１Ｍ、Ｒ４７６Ｗ、Ｔ３５０＝、Ｅ４９８Ｋ、Ｎ５７７Ｄ、Ｄ６８３Ｇ、Ｒ８７Ｃ、Ａ１５４Ｄ、Ｎ３０３＝、Ａ３７４Ｖ、Ｄ５５０＝、Ｓ６３３＝、Ｖ６９５Ｌ、Ｇ７２８＝、Ｒ７６５Ｗ、Ｐ８０３Ｓ、Ｗ１９Ｃ、Ｐ５６＝、Ｒ１１３Ｃ、Ｖ１４９Ｉ、Ｓ１５８Ｌ、Ｄ１６６重複Ｒ２２０Ｃ、Ｎ２２４Ｋｆｓ＊８、Ｄ２４９Ｎ、Ｒ２８１Ｗ、Ｒ２８１Ｑ、Ａ２９９Ｓ、Ｓ４２４Ｌ、Ｓ４６１Ｆ、Ｓ４６７Ｆ、Ｒ５０６Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0793】

いくつかの実施形態において、ＥＰ３００変異としては、Ｄ１３９９Ｎ、Ｙ１４１４Ｃ、Ｍ１４７０Ｃｆｓ＊２６、Ｙ１１１１＊、Ｈ２３２４Ｐｆｓ＊５５、Ｒ１６２７Ｗ、Ｎ２２０９＿Ｑ２２１３欠失挿入Ｋ、Ｑ２２６８欠失、Ｌ４１５Ｐ、Ｍ１４７０Ｎｆｓ＊３、Ｅ１５１４Ｋ、Ｃ１２０１Ｙ、Ｐ１４５２Ｌ、Ｓ９５２＊、Ｃ１１６４Ｙ、Ｄ１３９９Ｙ、Ｓ５０７Ｇ、Ｑ８２４＊、Ｄ１５０７Ｎ、Ｈ２３２４Ｔｆｓ＊２９、Ｐ９２５Ｔ、Ｐ１４４０Ｌ、Ｗ１４６６Ｃ、Ｐ１５０２Ｌ、Ａ１６２９Ｖ、Ｒ１６４５＊、Ｎ１７００Ｔｆｓ＊９、Ｐ１８６９Ｌ、Ｑ６５＊、Ａ１７１Ｖ、Ｒ２０２＊、Ｒ５８０Ｑ、Ａ６２７Ｖ、Ｑ１０８２＊、Ｎ１２３６Ｋｆｓ＊２、Ｎ１２８６Ｓ、Ｒ１３１２＊、Ｒ１３５６＊、Ｃ１３８５Ｆ、Ｈ１４５１Ｌ、Ｒ１４６２＊、Ｙ１４６７Ｎ、Ｙ１４６７Ｈ、Ｒ１４７８Ｈ、Ｒ１６２７Ｑ、Ｒ８６＊、Ｒ３７０Ｈ、Ｒ３９７＊、Ｒ７５４Ｃ、Ｐ８４２Ｓ、Ｉ９９７Ｖ、Ｅ１０１４＊、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0794】

いくつかの実施形態において、ＭＹＣ変異変異としては、Ｅ６１Ｔ、Ｅ６８Ｉ、Ｒ７４Ｑ、Ｒ７５Ｎ、Ｗ１３５Ｅ、Ｗ１３６Ｅ、Ｖ３９４Ｄ、Ｌ４２０Ｐ、Ｗ９６Ｅ、Ｖ３２５Ｄ、Ｌ３５１Ｐ、Ｎ末端で４１アミノ酸が欠失したＭＹＣタンパク質（ｄＮ２ＭＹＣ）、Ｎ２６Ｓ、Ｓ１６１Ｌ、Ｐ７４Ｌ、Ｖ７Ｍ、Ｆ１５３Ｓ、Ｅ５４Ｄ、Ｐ２４６、Ｌ１６４Ｖ、Ｐ７４Ｓ、Ａ５９Ｖ、Ｔ７３Ｉ、Ｐ７２Ｔ、Ｔ７３Ａ、Ｈ３７４Ｒ、Ｐ１７Ｓ、Ｔ７３Ｎ、Ｓ２６４Ｎ、Ｐ７２Ｓ、Ｑ５２欠失、Ｓ２１Ｔ、Ｐ７４Ａ、Ｓ１０７Ｎ、Ｐ７５Ｓ、Ｓ７７Ｐ、Ｐ２６１Ｓ、Ｐ７４Ｑ、Ｓ１９０Ｒ、Ａ５９Ｔ、Ｆ１５３Ｃ、Ｐ７５Ｈ、Ｔ７３Ｉ、Ｓ７７Ｆ、Ｎ１１Ｓ、Ｓ２１Ｎ、Ｐ７８Ｌ、Ｐ７２Ｌ、Ｎ９Ｋ、Ｓ１９０Ｎ、Ｓ２６７Ｆ、Ｔ７３Ｐ、Ｐ７８Ｓ、Ｇ１０５Ｄ、Ｓ１８７Ｃ、Ｌ７１Ｍ、Ｑ１０Ｈ、Ｌ１９１ｘ、Ｑ５０ｘ、Ｌ１９１Ｆ、Ｒ２５Ｋ、Ｆ１３０Ｌ、Ｙ２７Ｓ、Ｄ１９５Ｎ、Ｄ２Ｇ、Ｖ２０Ａ、Ｖ６Ｇ、Ｖ２０Ｉ、Ｄ２Ｈ、Ｐ７５Ａ、Ｇ１５２Ｄ、Ｐ７４Ｔ、Ｃ４０Ｙ、Ｅ８Ｋ、Ｑ４８ｘ、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0795】

いくつかの実施形態において、ＥＺＨ２変異はヒストンのメチル化パターンの変化と関連している。いくつかの実施形態において、ＥＺＨ２変異の変異によって、アミノ酸Ｙ６４１（Ｙ６４６、触媒ドメインと同等）がＦ、Ｎ、Ｈ、ＳまたはＣのいずれかに変換され、それによりＨ３Ｋ２７が過剰にトリメチル化され、リンパ腫形が駆動される。いくつかの実施形態において、上記ＥＺＨ２変異は、ＥＺＨ２ ＳＥＴドメイン変異、ＥＺＨ２の過剰発現、他のＰＲＣ２サブユニットの過剰発現、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）の機能喪失変異、及びＭＬＬ２の機能喪失を含む。ＥＺＨ２ Ｙ６４６変異に対してヘテロ接合である細胞によって、ＥＺＨ２タンパク質に対してホモ接合性の野生型（ＷＴ）である細胞、またはＹ６４６変異に対してホモ接合性である細胞と比較して、Ｈ３Ｋ２７が過剰にトリメチル化される。

【0796】

いくつかの実施形態において、ＥＺＨ２変異としては、Ｙ６４６Ｆ、Ｙ６４６Ｎ、Ｄ１８５Ｈ、Ｙ６４６Ｆ、Ｙ６４６Ｓ、Ｙ６４６Ｈ、Ｒ６９０Ｈ、Ｙ６４６Ｘ、Ｅ７４５Ｋ、Ｙ６４６Ｃ、Ｖ６２６Ｍ、Ｖ６７９Ｍ、Ｒ６９０Ｈ、Ｒ６８４Ｈ、Ａ６８２Ｇ、Ｅ２４９Ｋ、Ｇ１５９Ｒ、Ｒ２８８Ｑ、Ｎ３２２Ｓ、Ａ６９２Ｖ、Ｒ６９０Ｃ、Ｄ７３０＊（挿入フレームシフト）、Ｓ６９５Ｌ、Ｒ６８４Ｃ、Ｍ６６７Ｔ、Ｒ２８８＊、Ｓ６４４＊、Ｄ１９２Ｎ、Ｋ５５０Ｔ、Ｑ６５３Ｅ、Ｄ６６４Ｇ、Ｒ３４７Ｑ、Ｙ６４６Ｃ、Ｇ６６０Ｒ、Ｒ２１３Ｃ、Ａ２５５Ｔ、Ｓ５３８Ｌ、Ｎ６９３Ｋ、Ｉ５５Ｍ、Ｒ５６１Ｈ、Ａ６９２Ｖ、Ｋ５１５Ｒ、Ｙ７３３＊、Ｒ６３＊、Ｑ５７０＊、Ｑ３２８＊、Ｒ２５Ｑ、Ｔ４６７Ｐ Ａ６５６Ｖ、Ｔ５７３Ｉ、Ｃ５７１Ｙ、Ｅ７２５Ｋ、Ｒ１６Ｗ、Ｐ５７７Ｌ、Ｆ１４５Ｓ、Ｖ６８０Ｍ、Ｇ６８６Ｄ、Ｇ１３５Ｒ、Ｋ６３４Ｅ、Ｓ６５２Ｆ、Ｒ２９８Ｃ、Ｇ６４８Ｅ、Ｒ５６６Ｈ、Ｌ１４９Ｒ、Ｒ５０２Ｑ、Ｙ７３１Ｄ、Ｒ３１３Ｗ、Ｎ６７５Ｋ、Ｓ６５２Ｃ、Ｔ３７４Ｈｆｓ＊３、Ｎ１５２Ｉｆｓ＊１５、Ｅ４０１Ｋｆｓ＊２２、Ｋ４０６Ｍｆｓ＊１７、Ｅ２４６＊、Ｓ６２４Ｃ、Ｉ１４６Ｔ、Ｖ６２６Ｍ、Ｌ６７４Ｓ、Ｈ６９４Ｒ、Ａ５８１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0797】

いくつかの実施形態において、ＪＡＫ２変異はＪＡＫ２遺伝子中の変異であり、Ｇ１９２０Ｔ変異、Ｇ１９２０Ｔ／Ｃ１９２２Ｔ変異、またはＧ１９２０Ａ変異との組み合わせでのＴ１９２３Ｃ変異が挙げられるが、これらに限定はされない。いくつかの実施形態において、ＪＡＫ２変異は、Ｖ６１７Ｆ、Ｖ６１７Ｉ、Ｒ６８３Ｇ、Ｎ５４２＿Ｅ５４３欠失、Ｅ５４３＿Ｄ５４４欠失、Ｒ６８３Ｓ、Ｒ６８３Ｘ、Ｆ５３７＿Ｋ５３９欠失挿入Ｌ（フレーム内欠失）、Ｋ５３９Ｌ、Ｎ１１０８Ｓ、Ｒ１１１３Ｈ、Ｒ１０６３Ｈ、Ｒ４８７Ｃ、Ｉ５４０Ｍｆｓ＊３（欠失－フレームシフト）、Ｒ８６７Ｑ、Ｋ５３９Ｌ、Ｇ５７１Ｓ、Ｒ１１１３Ｃ、Ｒ９３８Ｑ、Ｒ２２８Ｑ、Ｌ８３０＊、Ｅ１０８０＊、Ｋ５３９Ｌ、Ｃ６１８Ｒ、Ｒ５６４Ｑ、Ｄ１０３６Ｈ、Ｌ１０８８Ｓ、Ｈ５３８Ｎｆｓ＊４、Ｄ８７３Ｎ、Ｖ３９２Ｍ、Ｉ６８２Ｆ、Ｌ３９３Ｖ、Ｍ５３５Ｉ、Ｃ６１８Ｒ、Ｔ８７５Ｎ、Ｌ６１１Ｖ、Ｄ３１９Ｎ、Ｌ６１１Ｓ、Ｇ９２１Ｓ、Ｈ５３８Ｙ、Ｓ１０３５Ｌ、及びそれらの組み合わせを含む、但しこれらに限定されない、１つ以上の置換を含む変異ＪＡＫ２タンパク質である。

【0798】

いくつかの実施形態において、ＦＢＸＷ７変異は、Ｗ２４４＊（＊：停止コドン）、Ｒ２２２＊、Ｒ２７８＊、Ｅ１９２Ａ、Ｓ２８２＊、Ｅ１１３Ｄ、Ｒ４６５Ｈ／Ｃ、７２６＋１Ｇ＞Ａスプライス、Ｒ５０５Ｃ、Ｒ４７９Ｑ、Ｒ４６５Ｃ、Ｒ３６７＊、Ｒ４９９Ｖｆｓ＊２５（ｆｓ＊：フレームシフト）、Ｒ６５８＊、Ｄ６００Ｙ、Ｄ５２０Ｎ、Ｄ５２０Ｙ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される点変異である。さらなる実施形態において、上記ＦＢＸＷ７変異は、Ｒ４７９Ｑ及びＳ５８２Ｌ、Ｒ４６５Ｈ及びＳ５８２Ｌ、Ｄ５２０Ｎ、Ｄ５２０Ｙ及びＲ１４Ｑ、ならびにＲ３６７＊及びＳ５８２Ｌを含む、但しこれらに限定されない、二重または三重変異である。

【0799】

いくつかの実施形態において、ＣＣＮＤ３変異としては、Ｓ２５９Ａ、Ｒ２７１Ｐｆｓ＊５３（挿入によるフレームシフト）、Ｅ５１＊、Ｑ２６０＊、Ｐ１９９Ｓ、Ｔ２８３Ａ、Ｔ２８３Ｐ、Ｖ２８７Ｄ、Ｄ２８６＿Ｔ２８８欠失、Ｒ２７１Ｇｆｓ＊３３、Ｑ２７６＊、Ｒ２４１Ｑ、Ｄ２３８Ｇ、Ｒ３３Ｐ、Ｉ２９０Ｋ、Ｉ２９０Ｔ、Ｉ２９０Ｒ、Ｐ２６７ｆｓ、Ｐ２８４Ｓ、Ｐ２８４Ｌ、Ｐ１００Ｓ、Ｅ２５３Ｄ、Ｓ２６２Ｉ、Ｒ１４Ｗ、Ｒ１１４Ｌ、Ｄ２３８Ｎ、Ａ２６６Ｅ、Ｒ１６７Ｗ、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0800】

いくつかの実施形態において、ＧＮＡ１１変異としては、Ｑ２０９Ｌ、Ｒ１８３Ｃ、Ｔ２５７＝、Ｒ１８３Ｃ、Ｇ２０８Ａｆｓ＊１６、Ｑ２０９Ｈ、Ｒ１８３Ｃ、Ｑ２０９Ｐ、Ｑ２０９Ｒ、Ｑ２０９Ｈ、？Ｔ９６＝、Ｒ２１０Ｗ、Ｒ２５６Ｑ、Ｔ３３４＝、Ｇ４８Ｄ、Ｓ５３Ｇ、Ｑ２０９Ｐ、Ｒ２１３Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。いくつかの実施形態において、上記ＧＮＡ１１変異は、エクソン４に２つの変異、例えば、ＶＩ８２の変異及びＴ１７５の変異、またはエクソン５に１つ以上の変異を有する。

【0801】

２．ＰＤ－１阻害剤及びＰＤ－Ｌ１阻害剤との併用
いくつかの実施形態において、がん患者に提供されるＴＩＬ療法は、治療用ＴＩＬ集団単独による治療を含んでいてもよく、またはＴＩＬと１種以上のＰＤ－１阻害剤及び／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤とを含む併用治療を含んでいてもよい。

【0802】

プログラム死１（ＰＤ－１）は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、活性化単球、及び樹状細胞によって発現される２８８アミノ酸の膜貫通免疫チェックポイント受容体タンパク質である。ＣＤ２７９としても知られるＰＤ－１は、ＣＤ２８ファミリーに属し、ヒトにおいては第２染色体上のＰｄｃｄｌ遺伝子によってコードされる。ＰＤ－１は、１つの免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリードメイン、膜貫通領域、及び免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）及び免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含む細胞内ドメインから構成される。Ｋｅｉｒ， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００８， ２６， ６７７－７０４によって報告されているように、ＰＤ－１ならびにそのリガンド（ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２）は免疫寛容において重要な役割を果たす。ＰＤ－１はＴ細胞免疫応答を負に制御する抑制シグナルを与える。ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１またはＣＤ２７４としても知られる）及びＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣまたはＣＤ２７３としても知られる）は腫瘍細胞上及び間質細胞上で発現し、これらの細胞はＰＤ－１を発現する活性化Ｔ細胞に遭遇する可能性があり、これがＴ細胞の免疫抑制に繋がる。ＰＤ－Ｌ１は、ヒト９番染色体上のＣｄ２７４遺伝子によってコードされる２９０アミノ酸の膜貫通タンパク質である。Ｔｏｐａｌｉａｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｎ． Ｅｎｇ． Ｊ． Ｍｅｄ． ２０１２， ３６６， ２４４３－５４に報告されているような最近の臨床研究において実証されているように、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤の使用によってＰＤ－１とそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２との間の相互作用を遮断することにより、免疫耐性を克服することができる。ＰＤ－Ｌ１は多くの腫瘍細胞株上で発現する一方、ＰＤ－Ｌ２は主として樹状細胞及び少数の腫瘍細胞株上で発現する。ＰＤ－１は、Ｔ細胞（活性化後にＰＤ－１を誘導的に発現する）に加えて、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、活性化単球、及び樹状細胞上でも発現する。

【0803】

一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、当技術分野で公知の任意のＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－１遮断剤であってよい。特に、上記のＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－１遮断剤は、以下の段落でより詳細に説明するＰＤ－１阻害剤または遮断剤の１種である。用語「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」は、本明細書では、ＰＤ－１阻害剤に関して同義で使用される。疑義を避けるために申し述べるが、抗体であるＰＤ－１阻害剤に対する本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合フラグメント、変異体、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーを指す場合がある。疑義を避けるために申し述べるが、本明細書でのＰＤ－１阻害剤への言及は、小分子化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指す場合もある。

【0804】

好ましい実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、抗体（すなわち、抗ＰＤ－１抗体）、そのＦａｂフラグメント、または単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含むそのフラグメントである。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はポリクローナル抗体である。好ましい実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１との結合に関して競合する、及び／またはＰＤ－１上のエピトープに結合する。一実施形態において、上記抗体は、ＰＤ－１との結合につ関して競合する、及び／またはＰＤ－１上のエピトープに結合する。

【0805】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、約１００ｐＭ以下のＫＤ（結合解離定数）でヒトＰＤ－１に結合する、約９０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、約８０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、約７０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、約６０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、約５０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、約４０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、約３０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、約２０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、約１０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、または約１ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合するＰＤ－１阻害剤である。

【0806】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、約７．５×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃ（結合速度定数）でヒトＰＤ－１に結合する、約７．５×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約８×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約８．５×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約９×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約９．５×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、または約１×１０^６ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合するＰＤ－１阻害剤である。

【0807】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、約２×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃ（解離速度定数）でヒトＰＤ－１に結合する、約２．１×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約２．２×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約２．３×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約２．４×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約２．５×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約２．６×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約２．７×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約２．８×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、約２．９×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合する、または約３×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－１に結合するＰＤ－１阻害剤である。

【0808】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を約１０ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を約９ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を約８ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を約７ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を約６ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を約５ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を約４ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を約３ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を約２ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、あるいはヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を約１ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害するＰＤ－１阻害剤である。

【0809】

一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ．からＯＰＤＩＶＯとして市販されている）、またはそのバイオシミラー、抗原結合フラグメント、コンジュゲート、もしくは変異体である。ニボルマブはＰＤ－１受容体を遮断する完全ヒトＩｇＧ４抗体である。一実施形態において、上記抗ＰＤ－１抗体は免疫グロブリンＧ４κ抗（ヒトＣＤ２７４）抗体である。ニボルマブは、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）登録番号９４６４１４－９４－４が割り当てられており、５Ｃ４、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、及びＯＮＯ－４５３８としても知られている。ニボルマブの調製及び特性は、米国特許第８，００８，４４９号及び国際特許公開第ＷＯ２００６／１２１１６８号に記載されており、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。さまざまな形態のがんにおけるニボルマブの臨床上の安全性及び有効性は、Ｗａｎｇ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｓ． ２０１４， ２， ８４６－５６；Ｐａｇｅ， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｍｅｄ．， ２０１４， ６５， １８５－２０２；及びＷｅｂｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ２０１３， ３１， ４３１１－４３１８（上記文献の開示は本明細書に援用される）に報告されている。ニボルマブのアミノ酸配列を表１８に示す。ニボルマブは、２２－９６、１４０－１９６、２５４－３１４、３６０－４１８、２２’’－９６’’、１４０’’－１９６’’、２５４’’－３１４’’、及び３６０’’－４１８’’に重鎖内ジスルフィド結合；２３’－８８’、１３４’－１９４’、２３’’’－８８’’’、及び１３４’’’－１９４’’’に軽鎖内ジスルフィド結合；１２７－２１４’、１２７’’－２１４’’’に重鎖－軽鎖間ジスルフィド結合、２１９－２１９’’及び２２２－２２２’’に重鎖－重鎖間ジスルフィド結合；ならびに２９０、２９０’’にＮ－グリコシル化部位（Ｈ ＣＨ２ ８４．４）を含む。

【0810】

一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、配列番号１５８に示す重鎖及び配列番号１５９に示す軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１５８及び配列番号１５９に示す配列、またはそれらの抗原結合フラグメント、Ｆａｂフラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、変異体、もしくはコンジュゲートを有する重鎖及び軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１５８及び配列番号１５９に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１５８及び配列番号１５９に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１５８及び配列番号１５９に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１５８及び配列番号１５９に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号４６３及び配列番号１５９に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。

【0811】

一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号１６０に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含み、上記ＰＤ－１阻害剤の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１６１に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６０及び配列番号１６１に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６０及び配列番号１６１に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一であるＶＨ及びＶＬ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６０及び配列番号１６１に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６０及び配列番号１６１に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６０及び配列番号１６１に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＶＨ及びＶＬ領域を含む。

【0812】

一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６２、配列番号１６３、及び配列番号１６４に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに、それぞれ配列番号１６５、配列番号１６６、及び配列番号１６７に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。一実施形態において、上記抗体は、上述の抗体のいずれかとして、ＰＤ－１上の同一のエピトープへの結合に関して競合する及び／または上記エピトープに結合する。

【0813】

一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、医薬品規制当局によって承認された、ニボルマブに関する抗ＰＤ－１バイオシミラーモノクローナル抗体である。一実施形態において、上記バイオシミラーは、基準医薬品もしくは基準生物学的産物のアミノ酸配列に対して、少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、上記基準医薬品もしくは基準生物学的産物と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む抗ＰＤ－１抗体を含み、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はニボルマブである。いくつかの実施形態において、上記１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、承認されたまたは承認申請された抗ＰＤ－１抗体であり、上記抗ＰＤ－１抗体は、基準医薬品または基準生物学的産物の製剤とは異なる製剤で提供され、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はニボルマブである。上記抗ＰＤ－１抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの医薬品規制当局によって承認されていてもよい。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はニボルマブである。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はニボルマブである。

【表4】

【0814】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0815】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは約２００ｍｇ～約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約２００ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４８０ｍｇ、または約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0816】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎に投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0817】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除不能な黒色腫または転移黒色腫を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除不能な黒色腫または転移黒色腫を治療するために投与され、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除不能な黒色腫または転移黒色腫を治療するために投与され、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除不能な黒色腫または転移黒色腫を治療するために投与され、約１ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同日にイピリムマブ３ｍｇ／ｋｇが投与され、これが３週間毎に４回繰り返され、次いで２週間毎に２４０ｍｇまたは４週間毎に４８０ｍｇが投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0818】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは黒色腫のアジュバント治療のために投与される。いくつかの実施形態において、黒色腫のアジュバント治療のために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、黒色腫のアジュバント治療のために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0819】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは、転移非小細胞肺癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、転移非小細胞肺癌を治療するために、２週間毎に約３ｍｇ／ｋｇで、６週間毎に約１ｍｇ／ｋｇのイピリムマブと共に投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、転移非小細胞肺癌を治療するために、３週間毎に約３６０ｍｇで、６週間毎に１ｍｇ／ｋｇのイピリムマブ及び２サイクルのプラチナダブレット化学療法と共に投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、転移非小細胞肺癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇまたは４週間毎に４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0820】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは、小細胞肺癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、小細胞肺癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0821】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは、悪性胸膜中皮腫を治療するために、３週間毎に約３６０ｍｇで、６週間毎に１ｍｇ／ｋｇのイピリムマブと共に投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0822】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは進行腎細胞癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、進行腎細胞癌を治療するために２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、進行腎細胞癌を治療するために４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、進行腎細胞癌を治療するために約３ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同日にイピリムマブが１ｍｇ／ｋｇで投与され、これが３週間毎に４回繰り返され、次いで２週間毎に２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、進行腎細胞癌を治療するために約３ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同日にイピリムマブが１ｍｇ／ｋｇで投与され、これが３週間毎に４回繰り返され、次いで、２週間毎に２４０ｍｇまたは４週間毎に４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0823】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは古典的ホジキンリンパ腫を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、古典的ホジキンリンパ腫を治療するために２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、古典的ホジキンリンパ腫を治療するために４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0824】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは、頭頸部の再発または転移扁平上皮癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、頭頸部の再発または転移扁平上皮癌を治療するために２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、頭頸部の再発または転移扁平上皮癌を治療するために４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0825】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは、局所進行または転移尿路上皮癌を治療するために２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、局所進行または転移尿路上皮癌を治療するために４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブはまた、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0826】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移結腸直腸癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、成人患者及び小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移結腸直腸癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、４０ｋｇ以上の成人患者及び小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移結腸直腸癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、４０ｋｇ以上の成人患者及び小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移結腸直腸癌を治療するために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0827】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは、４０ｋｇ未満の小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移結腸直腸癌を治療するために、２週間毎に約３ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、４０ｋｇ以上の成人患者及び小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移結腸直腸癌を治療するために、約３ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同日にイピリムマブが１ｍｇ／ｋｇで投与され、これが３週間毎に４回繰り返され、次いで２週間毎に２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、４０ｋｇ以上の成人患者及び小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移結腸直腸癌を治療するために、約３ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同日にイピリムマブが１ｍｇ／ｋｇで投与され、これが３週間毎に４回繰り返され、次いで４週間毎に４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0828】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは、肝細胞癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、肝細胞癌を治療するために２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、肝細胞癌を治療するために４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、肝細胞癌を治療するために、約１ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同日にイピリムマブが３ｍｇ／ｋｇで投与され、これが３週間毎に４回繰り返され、次いで２週間毎に２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、肝細胞癌を治療するために、約１ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同日にイピリムマブが３ｍｇ／ｋｇで投与され、これが３週間毎に４回繰り返され、次いで４週間毎に４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0829】

いくつかの実施形態において、ニボルマブは食道扁平上皮癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、食道扁平上皮癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、食道扁平上皮癌を治療するために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ニボルマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ニボルマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ニボルマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0830】

別の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．， Ｉｎｃ．， Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ， ＮＪ， ＵＳＡからＫＥＹＴＲＵＤＡとして市販されている）、またはその抗原結合フラグメント、コンジュゲート、もしくは変異体を含む。ペムブロリズマブにはＣＡＳ登録番号１３７４８５３－９１－４が割り当てられており、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、及びＳＣＨ－９００４７５としても知られる。ペムブロリズマブは、免疫グロブリンＧ４、抗（ヒトタンパク質ＰＤＣＤ１（プログラム細胞死１））（ヒト－Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓモノクローナル重鎖）、ヒト－Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓモノクローナル軽鎖とのジスルフィド、二量体（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ４， ａｎｔｉ－（ｈｕｍａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ＰＤＣＤ１ （ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ １）） （ｈｕｍａｎ－Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ）， ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ－Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ， ｄｉｍｅｒ）構造を有する。ペムブロリズマブの上記構造は、免疫グロブリンＧ４、抗（ヒトプログラム細胞死１）；ヒト化マウスモノクローナル［２２８－Ｌ－プロリン（Ｈ１０－Ｓ＞Ｐ）］γ４重鎖（１３４－２１８’）－ヒト化マウスモノクローナルκ軽鎖とのジスルフィド二量体（２２６－２２６’’：２２９－２２９’’）－ビスジスルフィド（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ４， ａｎｔｉ－（ｈｕｍａｎ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ １）；ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｍｏｕｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ［２２８－Ｌ－ｐｒｏｌｉｎｅ（Ｈ１０－Ｓ＞Ｐ）］γ４ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ （１３４－２１８’）－ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｍｏｕｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ κ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｄｉｍｅｒ （２２６－２２６’’：２２９－２２９’’）－ｂｉｓｄｉｓｕｌｆｉｄｅ）として記述することもできる。ペムブロリズマブの特性、使用、及び調製は、国際特許公開第ＷＯ２００８／１５６７１２Ａ１号、米国特許第８，３５４，５０９号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／０２６６６１７Ａ１号、第ＵＳ２０１３／０１０８６５１Ａ１号、及び第ＵＳ２０１３／０１０９８４３Ａ２号に記載されており、これらの開示は本明細書に援用される。さまざまな形態のがんにおけるペムブロリズマブの臨床上の安全性及び有効性は、Ｆｕｅｒｓｔ， Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｔｉｍｅｓ， ２０１４， ３６， ３５－３６；Ｒｏｂｅｒｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ， ２０１４， ３８４， １１０９－１７；及びＴｈｏｍａｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐ． Ｏｐｉｎ． Ｂｉｏｌ． Ｔｈｅｒ．， ２０１４， １４， １０６１－１０６４に報告されている。ペンブロリズマブのアミノ酸配列を表１９に示す。ペンブロリズマブは、以下のジスルフィド架橋、すなわち、２２－９６、２２’’－９６’’、２３’－９２’、２３’’’－９２’’’、１３４－２１８’、１３４’’－２１８’’’、１３８’－１９８’、１３８’’’－１９８’’’、１４７－２０３、１４７’’－２０３’’、２２６－２２６’’、２２９－２２９’’、２６１－３２１、２６１’’－３２１’’、３６７－４２５、及び３６７’’－４２５’’、ならびに以下のグリコシル化部位（Ｎ）、すなわち、Ａｓｎ－２９７及びＡｓｎ－２９７’’を含む。ペムブロリズマブは、Ｆｃ領域中に安定化Ｓ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ４／κイソ型であり、この変異がＩｇＧ４ヒンジ領域に挿入されることによって、ＩｇＧ４抗体に関して一般的に観測される半分子の形成が防止される。ペムブロリズマブは、各重鎖のＦｃドメイン内のＡｓｎ２９７で不均一にグリコシル化されており、インタクトな抗体の分子量は約１４９ｋＤａである。ペムブロリズマブの主たる糖型はフコシル化アガラクト二分岐型グリカン（Ｇ０Ｆ）である。

【0831】

一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、配列番号１６８によって示す重鎖及び配列番号１６９によって示す軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６８及び配列番号１６９に示す配列、またはそれらの抗原結合フラグメント、Ｆａｂフラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、変異体、もしくはコンジュゲートを有する重鎖及び軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６８及び配列番号１６９に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６８及び配列番号１６９に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６８及び配列番号１６９に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６８及び配列番号１６９に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１６８及び配列番号１６９に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。

【0832】

一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号１７０に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含み、ＰＤ－１阻害剤の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１７１に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１７０及び配列番号１７１に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１７０及び配列番号１７１に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１７０及び配列番号１７１に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１７０及び配列番号１７１に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１７０及び配列番号１７１に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

【0833】

一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ配列番号１７２、配列番号１７３、及び配列番号１７４に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに、それぞれ配列番号１７５、配列番号１７６、及び配列番号１７７に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。一実施形態において、上記抗体は、上述の抗体のいずれかとして、ＰＤ－１上の同一のエピトープへの結合に関して競合する及び／または上記エピトープに結合する。

【0834】

一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、医薬品規制当局によって承認された、ペムブロリズマブに関する抗ＰＤ－１バイオシミラーモノクローナル抗体である。一実施形態において、上記バイオシミラーは、基準医薬品もしくは基準生物学的産物のアミノ酸配列に対して、少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、上記基準医薬品もしくは基準生物学的産物と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む抗ＰＤ－１抗体を含み、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はペムブロリズマブである。いくつかの実施形態において、上記１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、承認されたまたは承認申請された抗ＰＤ－１抗体であり、上記抗ＰＤ－１抗体は、基準医薬品または基準生物学的産物の製剤とは異なる製剤で提供され、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はペムブロリズマブである。上記抗ＰＤ－１抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの医薬品規制当局によって承認されていてもよい。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はペムブロリズマブである。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はペムブロリズマブである。

【表5】

【0835】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0836】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは約２００ｍｇ～約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは、約２００ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４８０ｍｇ、または約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0837】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤はペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎に投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0838】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは黒色腫を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは黒色腫を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは黒色腫を治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0839】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブはＮＳＣＬＣを治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブはＮＳＣＬＣを治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブはＮＳＣＬＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0840】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブはＳＣＬＣを治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態においＳＣＬＣて、ペムブロリズマブはＮＳＣＬＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0841】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブはＨＮＳＣＣを治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブはＨＮＳＣＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0842】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）または原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）または原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）を治療するために、成人に対して６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）または原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）を治療するために、小児に対して３週間毎に約２ｍｇ／ｋｇ（最大２００ｍｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブはま切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0843】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、尿路上皮癌を治療するために３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、尿路上皮癌を治療するために６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0844】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ＭＳＩ－ＨまたはｄＭＭＲ癌を治療するために、成人に対して６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ＭＳＩ－ＨまたはｄＭＭＲ癌を治療するために、小児に対して３週間毎に約２ｍｇ／ｋｇ（最大２００ｍｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与はＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0845】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）結腸直腸癌（ＣＲＣ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ＭＳＩ－ＨまたはｄＭＭＲ ＣＲＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0846】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、胃癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、胃癌を治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0847】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、食道癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、食道癌を治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0848】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、子宮頸癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、子宮頸癌を治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0849】

いくつかの実施形態において、ペンブロリズマブは、肝細胞癌（ＨＣＣ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ＨＣＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0850】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、メルケル細胞癌（ＭＣＣ）を治療するために、成人に対して３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ＭＣＣを治療するために、成人に対して６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ＭＣＣを治療するために、小児に対して、３週間毎に約２ｍｇ／ｋｇ（最大２００ｍｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0851】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、腎細胞癌（ＲＣＣ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ＲＣＣを治療するために、アキシチニブ５ｍｇが１日２回経口投与されると共に、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0852】

いくつかの実施形態において、ペンブロリズマブは、子宮内膜癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、子宮内膜癌を治療するために、ＭＳＩ－ＨまたはｄＭＭＲではない腫瘍に対して、レンバチニブ２０ｍｇが１日１回経口投与されると共に、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0853】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、腫瘍変異負荷高値（ＴＭＢ－Ｈ）癌を治療するために、成人に対して３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ＴＭＢ－Ｈ癌を治療するために、成人に対して６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ＴＭＢ－Ｈ癌を治療するために、小児に対して３週間毎に約２ｍｇ／ｋｇ（最大２００ｍｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0854】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、皮膚有棘細胞癌（ｃＳＣＣ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ｃＳＣＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0855】

いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、ＴＮＢＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0856】

一実施形態において、患者または対象が成人、すなわち、成人の適応症の治療である場合、６週間毎に４００ｍｇの追加の投薬レジメンを採用してもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、３、４、または５日後に開始される。いくつかの実施形態において、上記ペムブロリズマブの投与は、ＩＬ－２投与の１、２、または３日後に開始される。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブは、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に投与されてもよい。

【0857】

一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、抗ｍ－ＰＤ－１クローンＪ４３（カタログ番号ＢＥ００３３－２）及びＲＭＰ１－１４（カタログ番号ＢＥ０１４６）（Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ， Ｉｎｃ．， Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ， ＮＨ， ＵＳＡ）などの市販の抗ＰＤ－１モノクローナル抗体である。多くの市販の抗ＰＤ－１抗体が当業者に公知である。

【0858】

一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、米国特許第８，３５４，５０９号または米国特許出願公開第２０１０／０２６６６１７Ａ１号、第２０１３／０１０８６５１Ａ１号、第２０１３／０１０９８４３Ａ２号に開示される抗体であり、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、米国特許第８，２８７，８５６号、第８，５８０，２４７号、及び第８，１６８，７５７号、ならびに米国特許出願公開第２００９／００２８８５７Ａ１号、第２０１０／０２８５０１３Ａ１号、第２０１３／００２２６００Ａ１号、及び第２０１１／０００８３６９Ａ１号に記載の抗ＰＤ－１抗体であり、上記特許文献の教示は、本記述をもって援用される。別の実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、米国特許第８，７３５，５５３Ｂ１号に開示の抗ＰＤ－１抗体であり、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、ＣＴ－０１１としても知られるピジリズマブであり、これは米国特許第８，６８６，１１９号に記載され、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。

【0859】

一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、米国特許第８，９０７，０５３号、第９，０９６，６４２号、及び第９，０４４，４４２号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／００８７５８１号に記載されるものなどの、小分子またはペプチド、もしくはペプチド誘導体；米国特許出願公開第２０１５／００７３０２４号に記載のものなどの１，２，４－オキサジアゾール化合物及び誘導体；米国特許出願公開第２０１５／００７３０４２号に記載のものなどの環状ペプチド模倣化合物及び誘導体；米国特許出願公開第２０１５／０１２５４９１号に記載のものなどの環状化合物及び誘導体；国際特許出願公開第ＷＯ２０１５／０３３３０１号に記載のものなどの１，３，４－オキサジアゾール及び１，３，４－チアジアゾール化合物及び誘導体；国際特許出願公開第ＷＯ２０１５／０３６９２７号及び第ＷＯ２０１５／０４４９０号に記載のものなどのペプチド系化合物及び誘導体；あるいは米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０２９４８９８号に記載のものなどの大環状ペプチド系化合物及び誘導体であってよく、上記特許文献のそれぞれの開示は、本記述をもってそれらの全体が援用される。一実施形態において、上記ＰＤ－１阻害剤は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ， Ｉｎｃ．から市販されているセミプリマブである。

【0860】

一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、当技術分野で公知の任意のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤、アンタゴニスト、または遮断剤であってよい。特に、上記ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、以下の段落でより詳細に説明するＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤、アンタゴニスト、または遮断剤の１種である。本明細書では、用語「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」は、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２阻害剤に関して同義で使用される。疑義を避けるために申し述べるが、本明細書では、抗体であるＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤への言及は、化合物またはその抗原結合フラグメント、変異体、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーを指す場合がある。疑義を避けるために申し述べるが、本明細書では、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤への言及は、化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指す場合がある。

【0861】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物、プロセス、及び方法は、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤を含む。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は小分子である。好ましい実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、抗体（すなわち、抗ＰＤ－１抗体）、そのＦａｂフラグメント、または単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含むそのフラグメントである。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤はポリクローナル抗体である。好ましい実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２との結合に関して競合し、且つ／またはＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２上のエピトープに結合する。一実施形態において、上記抗体は、ＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２との結合に関して競合し、且つ／またはＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２上のエピトープに結合する。

【0862】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＰＤ－Ｌ１阻害剤は、当該化合物がＰＤ－Ｌ２受容体を含む他の受容体と結合もしくは相互作用する濃度よりも実質的に低い濃度で、該化合物がＰＤ－Ｌ１と結合または相互作用するという点で、ＰＤ－Ｌ１に対して選択的である。特定の実施形態において、上記化合物は、該化合物がＰＤ－Ｌ２受容体と結合する結合定数よりも少なくとも約２倍高い、約３倍高い、約５倍高い、約１０倍高い、約２０倍高い、約３０倍高い、約５０倍高い、約１００倍高い、約２００倍高い、約３００倍高い、または約５００倍高い結合定数でＰＤ－Ｌ１受容体と結合する。

【0863】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＰＤ－Ｌ２阻害剤は、当該化合物がＰＤ－Ｌ１受容体を含む他の受容体と結合もしくは相互作用する濃度よりも実質的に低い濃度で、該化合物がＰＤ－Ｌ２と結合または相互作用するという点で、ＰＤ－Ｌ２に対して選択的である。特定の実施形態において、上記化合物は、該化合物がＰＤ－Ｌ１受容体と結合する結合定数よりも少なくとも約２倍高い、約３倍高い、約５倍高い、約１０倍高い、約２０倍高い、約３０倍高い、約５０倍高い、約１００倍高い、約２００倍高い、約３００倍高い、または約５００倍高い結合定数でＰＤ－Ｌ２受容体と結合する。

【0864】

いかなる理論にも拘束されるものではないが、腫瘍細胞はＰＤ－Ｌ１を発現し、Ｔ細胞はＰＤ－１を発現すると考えられている。但し、腫瘍細胞によるＰＤ－Ｌ１の発現は、ＰＤ－１阻害剤もしくは遮断剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤もしくは遮断剤の有効性にとって必要あるものではない。一実施形態において、腫瘍細胞はＰＤ－Ｌ１を発現する。別の実施形態において、腫瘍細胞はＰＤ－Ｌ１を発現しない。いくつかの実施形態において、本方法は、本明細書に記載のものなどのＰＤ－１抗体とＰＤ－Ｌ１抗体との組み合わせを、ＴＩＬと組み合わせることを含んでいてもよい。ＰＤ－１抗体及びＰＤ－Ｌ１抗体とＴＩＬとの組み合わせの投与は、同時であっても逐次的であってもよい。

【0865】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、約１００ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約９０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約８０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約７０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約６０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約５０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約４０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、または約３０ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する上記阻害剤である。

【0866】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、約７．５×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約８×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約８．５×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約９×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約９．５×１０^５ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、または約１×１０^６ｌ／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する上記阻害剤である。

【0867】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、約２×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、約２．１×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１に結合する、約２．２×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１に結合する、約２．３×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１に結合する、約２．４×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１に結合する、約２．５×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１に結合する、約２．６×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１に結合する、約２．７×^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する、または約３×１０^－５ｌ／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃでヒトＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２に結合する上記阻害剤である。

【0868】

いくつかの実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を、約１０ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を、約９ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を、約８ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を、約７ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を、約６ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を、約５ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を、約４ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を、約３ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を、約２ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する、あるいはヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２のヒトＰＤ－１への結合を、約１ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断または阻害する上記阻害剤である。

【0869】

一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＭＥＤＩ４７３６としても知られるデュルバルマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ ｐｌｃ．の子会社であるＭｅｄｉｍｍｕｎｅ， ＬＬＣ， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ， Ｍａｒｙｌａｎｄから市販されている）、またはその抗原結合フラグメント、コンジュゲート、または変異体である。一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、米国特許第８，７７９，１０８号または米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号に開示の抗体であり、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。デュルバルマブの臨床上の効果は、Ｐａｇｅ， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｍｅｄ．， ２０１４， ６５， １８５－２０２；Ｂｒａｈｍｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． ２０１４， ３２， ５ｓ （ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ， ａｂｓｔｒａｃｔ ８０２１）；及びＭｃＤｅｒｍｏｔｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｖ．， ２０１４， ４０， １０５６－６４に報告されている。デュルバルマブの調製及び特性は米国特許第８，７７９，１０８号に記載されており、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。デュルバルマブのアミノ酸配列を表２０に示す。デュルバルマブモノクローナル抗体は、２２－９６、２２’’－９６’’、２３’－８９’、２３’’’－８９’’’、１３５’－１９５’、１３５’’’－１９５’’’、１４８－２０４、１４８’’－２０４’’、２１５’－２２４、２１５’’’－２２４’’、２３０－２３０’’、２３３－２３３’’、２６５－３２５、２６５’’－３２５’’、３７１－４２９、及び３７１’’－４２９’にジスルフィド結合、ならびにＡｓｎ－３０１及びＡｓｎ－３０１’’にＮ－グリコシル化部位を含む。

【0870】

一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１７８によって示す重鎖及び配列番号１７９によって示す軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１７８及び配列番号１７９に示す配列、またはそれらの抗原結合フラグメント、Ｆａｂフラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、変異体、もしくはコンジュゲートを有する重鎖及び軽鎖含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１７８及び配列番号１７９に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１７８及び配列番号１７９に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１７８及び配列番号１７９に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１７８及び配列番号１７９に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１７８及び配列番号１７９に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。

【0871】

一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、デュルバルマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号１８０に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含み、ＰＤ－Ｌ１阻害剤の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１８１に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８０及び配列番号１８１に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８０及び配列番号１８１に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８０及び配列番号１８１に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８０及び配列番号１８１に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８０及び配列番号１８１に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

【0872】

一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８２、配列番号１８３、及び配列番号１８４に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに、それぞれ配列番号１８５、配列番号１８６、及び配列番号１８７に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。一実施形態において、上記抗体は、上述の抗体のいずれかとして、ＰＤ－Ｌ１上の同一のエピトープへの結合に関して競合する及び／または上記エピトープに結合する。

【0873】

一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、医薬品規制当局によって承認された、デュルバルマブに関する抗ＰＤ－Ｌ１バイオシミラーモノクローナル抗体である。一実施形態において、上記バイオシミラーは、基準医薬品もしくは基準生物学的産物のアミノ酸配列に対して、少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、上記基準医薬品もしくは基準生物学的産物と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含み、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はデュルバルマブである。いくつかの実施形態において、上記１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、承認されたまたは承認申請された抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり、上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、基準医薬品または基準生物学的産物の製剤とは異なる製剤で提供され、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はデュルバルマブである。上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの医薬品規制当局によって承認されていてもよい。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はデュルバルマブである。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はデュルバルマブである。

【表6】

【0874】

一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ／ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏから市販されている）としても知られるアベルマブ、またはその抗原結合フラグメント、コンジュゲート、もしくは変異体である。アベルマブの調製及び特性は、米国特許出願公開第２０１４／０３４１９１７Ａ１号に記載され、その開示は具体的に本明細書に援用される。アベルマブのアミノ酸配列を表２１に示す。アベルマブは、２２－９６、１４７－２０３、２６４－３２４、３７０－４２８、２２’’－９６’’、１４７’’－２０３’’、２６４’’－３２４’’、及び３７０’’－４２８’’に重鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３～Ｃ１０４）；２２’－９０’、１３８’－１９７’、２２’’’－９０’’’、及び１３８’’’－１９７’’’に軽鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３－Ｃ１０４）；２２３－２１５’及び２２３’’－２１５’’’に重鎖－軽鎖内ジスルフィド結合（ｈ ５－ＣＬ １２６）；２２９－２２９’’及び２３２－２３２’’に重鎖－重鎖内ジスルフィド結合（ｈ １１、ｈ １４）；３００、３００’’にＮ－グリコシル化部位（Ｈ ＣＨ２ Ｎ８４．４）；フコシル化された複雑な二アンテナＣＨＯ型グリカン；ならびに４５０及び４５０’にＨ ＣＨＳ Ｋ２ Ｃ末端リシンクリッピングを有する。

【0875】

一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１８８によって示す重鎖及び配列番号１８９によって示す軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１８８及び配列番号１８９に示す配列、またはそれらの抗原結合フラグメント、Ｆａｂフラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、変異体、もしくはコンジュゲートを有する重鎖及び軽鎖含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８８及び配列番号１８９に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８８及び配列番号１８９に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８８及び配列番号１８９に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８８及び配列番号１８９に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１８８及び配列番号１８９に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。

【0876】

一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アベルマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号１９０に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含み、ＰＤ－Ｌ１阻害剤の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１９１に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９０及び配列番号１９１に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９０及び配列番号１９１に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９０及び配列番号１９１に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９０及び配列番号１９１に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９０及び配列番号１９１に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

【0877】

一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９２、配列番号１９３、及び配列番号１９４に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに、それぞれ配列番号１９５、配列番号１９６、及び配列番号１９７に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。一実施形態において、上記抗体は、上述の抗体のいずれかとして、ＰＤ－Ｌ１上の同一のエピトープへの結合に関して競合する及び／または上記エピトープに結合する。

【0878】

一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、医薬品規制当局によって承認された、アベルマブに関する抗ＰＤ－Ｌ１バイオシミラーモノクローナル抗体である。一実施形態において、上記バイオシミラーは、基準医薬品もしくは基準生物学的産物のアミノ酸配列に対して、少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、上記基準医薬品もしくは基準生物学的産物と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含み、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はアベルマブである。いくつかの実施形態において、上記１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、承認されたまたは承認申請された抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり、上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、基準医薬品または基準生物学的産物の製剤とは異なる製剤で提供され、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はアベルマブである。上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの医薬品規制当局によって承認されていてもよい。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はアベルマブである。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はアベルマブである。

【表7】

【0879】

一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＭＰＤＬ３２８０ＡまたはＲＧ７４４６としても知られるアテゾリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ， Ｉｎｃ．， Ｒｏｃｈｅ Ｈｏｌｄｉｎｇ ＡＧの子会社， Ｂａｓｅｌ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌｎｄ）からＴＥＣＥＮＴＲＩＱとして市販されている）、またはその抗原結合フラグメント、コンジュゲート、もしくはその変異体である。一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は米国特許第８，２１７，１４９号に開示の抗体であり、上記特許文献の開示は本明細書に具体的に援用される。一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０５６Ａ１号、第２０１３／００４５２００Ａ１号、第２０１３／００４５２０１Ａ１号、第２０１３／００４５２０２Ａ１号、または第２０１４／００６５１３５Ａ１号に開示された抗体であり、それらの開示は本明細書に具体的に援用される。アテゾリズマブの調製及び特性は米国特許第８，２１７，１４９号に記載されており、その開示は本明細書に援用される。アテゾリズマブのアミノ酸配列を表２２に示す。アテゾリズマブは、２２－９６、１４５－２０１、２６２－３２２、３６８－４２６、２２’’－９６’’、１４５’’－２０１’’、２６２’’－３２２’’、及び３６８’’－４２６’’に重鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３－Ｃ１０４）；２３’－８８’、１３４’－１９４’、２３’’’－８８’’’、及び１３４’’’－１９４’’’に軽鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３－Ｃ１０４）；２２１－２１４’及び２２１’’－２１４’’’に重鎖－軽鎖内ジスルフィド結合（ｈ５－ＣＬ １２６）；２２７－２２７’’及び２３０－２３０’’に重鎖－重鎖内ジスルフィド結合（ｈ １１、ｈ １４）；ならびに２９８及び２９８’にＮ－グリコシル化部位（Ｈ ＣＨ２ Ｎ８４．４＞Ａ）を有する。

【0880】

一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１９８によって示す重鎖及び配列番号１９９によって示す軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１９８及び配列番号１９９に示す配列、またはそれらの抗原結合フラグメント、Ｆａｂフラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、変異体、もしくはコンジュゲートを有する重鎖及び軽鎖含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９８及び配列番号１９９に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９８及び配列番号１９９に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９８及び配列番号１９９に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９８及び配列番号１９９に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号１９８及び配列番号１９９に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。

【0881】

一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号２００に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含み、ＰＤ－Ｌ１阻害剤の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２０１に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号２００及び配列番号２０１に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号２００及び配列番号２０１に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号２００及び配列番号２０１に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号２００及び配列番号２０１に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号２００及び配列番号２０１に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

【0882】

一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ配列番号２０２、配列番号２０３、及び配列番号２０４に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに、それぞれ配列番号２０５、配列番号２０６、及び配列番号２０７に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。一実施形態において、上記抗体は、上述の抗体のいずれかとして、ＰＤ－Ｌ１上の同一のエピトープへの結合に関して競合する及び／または上記エピトープに結合する。

【0883】

一実施形態において、上記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、医薬品規制当局によって承認された、アテゾリズマブに関する抗ＰＤ－Ｌ１バイオシミラーモノクローナル抗体である。一実施形態において、上記バイオシミラーは、基準医薬品もしくは基準生物学的産物のアミノ酸配列に対して、少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、上記基準医薬品もしくは基準生物学的産物と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含み、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はアテゾリズマブである。いくつかの実施形態において、上記１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、承認されたまたは承認申請された抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり、上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、基準医薬品または基準生物学的産物の製剤とは異なる製剤で提供され、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はアテゾリズマブである。上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの医薬品規制当局によって承認されていてもよい。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はアテゾリズマブである。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はアテゾリズマブである。

【表8】

【0884】

一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤としては、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０３４１９１７Ａ１号に記載の抗体が挙げられ、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。別の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１との結合に関してこれらの抗体のいずれかと競合する抗体も含まれる。一実施形態において、上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３５５５９としても知られるＭＤＸ－１１０５であり、これは米国特許第７，９４３，７４３号に開示され、その開示は本明細書に援用される。一実施形態において、上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号（本明細書に援用される）に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体から選択される。

【0885】

一実施形態において、上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＩＮＶＩＶＯＭＡＢ抗ｍ－ＰＤ－Ｌ１クローン１０Ｆ．９Ｇ２（カタログ番号ＢＥ０１０１， Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ， Ｉｎｃ．， Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ， ＮＨ， ＵＳＡ）などの市販のモノクローナル抗体である。一実施形態において、上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ ＥＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ（ＭＩＨ１）などの市販のモノクローナル抗体である。多くの市販の抗ＰＤ－Ｌ１抗体が当業者に公知である。

【0886】

一実施形態において、上記抗ＰＤ－Ｌ２抗体は、ＢＩＯＬＥＧＥＮＤ ２４Ｆ．１０Ｃ１２マウスＩｇＧ２ａ、κイソ型（カタログ番号３２９６０２ Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ， Ｉｎｃ．， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）、ＳＩＧＭＡ抗ＰＤ－Ｌ２抗体（カタログ番号ＳＡＢ３５００３９５， Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）、または当業者に公知の他の市販の抗ＰＤ－Ｌ２抗体などの、市販のモノクローナル抗体である。

【0887】

いくつかの実施形態において、本発明は、ＴＩＬレジメンを施すステップを含むがんの患者の治療方法であって、上記ＴＩＬレジメンが、ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物を含み、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを投与するステップをさらに含む、上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、及び（ｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含む組成物を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、及び（ｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含むキットを含む。

【0888】

３．ＣＴＬＡ－４阻害剤との併用
いくつかの実施形態において、がん患者に提供されるＴＩＬ療法は、治療用ＴＩＬ集団単独による治療を含んでいてもよく、またはＴＩＬと１種以上のＣＴＬＡ－４阻害剤とを含む併用治療を含んでいてもよい。

【0889】

細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）は、免疫グロブリンスーパーファミリーの構成因子であり、ヘルパーＴ細胞の表面上で発現する。ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ２８依存性Ｔ細胞活性化の負の制御因子であり、適応免疫応答のチェックポイントとして機能する。Ｔ細胞共刺激タンパク質ＣＤ２８と同様に、ＣＴＬＡ－４結合抗原は細胞上にＣＤ８０及びＣＤ８６を提示する。ＣＴＬＡ－４は抑制シグナルをＴ細胞に送達する一方、ＣＤ２８は刺激シグナルを送達する。ヒトＣＴＬＡ－４に対するヒト抗体は、ウイルス感染症及び細菌感染症の治療または予防、及びがんの治療などの、多くの疾患状態における免疫刺激モジュレーターとして記載されている（ＷＯ０１／１４４２４及びＷＯ００／３７５０４）。イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０）及びトレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６）を含む、但しこれらに限定されない多数の完全ヒト抗ヒトＣＴＬＡ－４モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が、種々の固形腫瘍の治療に関する治験において検討されている。

【0890】

いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、当技術分野で公知の任意のＣＴＬＡ－４阻害剤または遮断剤であってよい。特に、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、以下の段落でより詳細に説明するＣＴＬＡ－４阻害剤または遮断剤の１種である。本明細書では、用語「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」は、ＣＴＬＡ－４阻害剤に関して同義で使用される。疑義を避けるために申し述べるが、抗体であるＣＴＬＡ－４に対する本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合フラグメント、変異体、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーを指す場合がある。疑義を避けるために申し述べるが、本明細書でのＣＴＬＡ－４への言及は、小分子化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指す場合もある。

【0891】

本発明の方法における使用に好適なＣＴＬＡ－４阻害剤としては、抗ＣＴＬＡ－４抗体、ヒト抗ＣＴＬＡ－４抗体、マウス抗ＣＴＬＡ－４抗体、哺乳動物抗ＣＴＬＡ－４抗体、ヒト化抗ＣＴＬＡ－４抗体、モノクローナル抗ＣＴＬＡ－４抗体、ポリクローナル抗ＣＴＬＡ－４抗体、キメラ抗ＣＴＬＡ－４抗体、ＭＤＸ－０１０（イピリムマブ）、トレメリムマブ、抗ＣＤ２８抗体、抗－ＣＴＬＡ－４アドネクチン、抗ＣＴＬＡ－４ドメイン抗体、単鎖抗ＣＴＬＡ－４フラグメント、重鎖抗ＣＴＬＡ－４フラグメント、軽鎖抗ＣＴＬＡ－４フラグメント、共刺激経路を刺激するＣＴＬＡ－４の阻害剤、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００１／０１４４２４号に開示の抗体、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００４／０３５６０７号に開示の抗体、米国公開第２００５／０２０１９９４号に開示の抗体、登録欧州特許第ＥＰ１２１２４２２Ｂ１号に開示の抗体が挙げられるが、これらに限定はされない（上記特許文献のそれぞれの開示は本明細書に援用される）。さらなるＣＴＬＡ－４抗体は、第５，８１１，０９７号、第５，８５５，８８７号、第６，０５１，２２７号、及び第６，９８４，７２０号；ＰＣＴ公開第ＷＯ０１／１４４２４号及び第ＷＯ００／３７５０４号；ならびに米国公開第２００２／００３９５８１号及び第２００２／０８６０１４号に記載され、上記特許文献のそれぞれの開示は本明細書に援用される。本発明の方法で使用することができる他の抗ＣＴＬＡ－４抗体としては、例えば、ＷＯ９８／４２７５２；米国特許第６，６８２，７３６号及び第６，２０７，１５６号；Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９５（１７）：１００６７－１００７１ （１９９８）；Ｃａｍａｃｈｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ２２（１４５）： Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ． ２５０５ （２００４） （ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＰ－６７５２０６）；Ｍｏｋｙｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５８：５３０１－５３０４ （１９９８）、ならびに米国特許第５，９７７，３１８号、第６，６８２，７３６号、第７，１０９，００３号、及び第７，１３２，２８１号に開示の抗ＣＴＬＡ－４抗体が挙げられ、上記文献のそれぞれの開示は本明細書に援用される。

【0892】

さらなるＣＴＬＡ－４阻害剤としては、以下、すなわち、ＣＤ２８抗原のその同族リガンドに結合する能力を破壊すること、ＣＴＬＡ－４のその同族リガンドに結合する能力を阻害すること、共刺激経路を介してＴ細胞応答を増大させること、Ｂ７のＣＤ２８及び／またはＣＴＬＡ－４に結合する能力を妨害すること、Ｂ７の共刺激経路を活性化する能力を妨害すること、ＣＤ８０のＣＤ２８及び／またはＣＴＬＡ－４に結合する能力を妨害すること、ＣＤ８０の共刺激経路を活性化する能力を妨害すること、ＣＤ８６のＣＤ２８及び／またはＣＴＬＡ－４に結合する能力を妨害すること、ＣＤ８６の共刺激経路を活性化する能力を妨害すること、ならびに共刺激経路が全般的に活性化されることを妨害することができる任意の阻害剤が挙げられるが、これらに限定はされない。これには必然的に、他のＣＴＬＡ－４阻害剤がある中で、共刺激経路の他の構成因子がある中で、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４の小分子阻害剤；共刺激経路の他の構成因子がある中で、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４に対する抗体；共刺激経路の他の構成因子がある中で、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４に対するアンチセンス分子；；共刺激経路の他の構成因子がある中で、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４に対するアドネクチン；共刺激経路の他の構成因子がある中で、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４のＲＮＡｉ阻害剤（一本鎖及び二本鎖の両方）を含む。

【0893】

いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、約１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、１０^－８Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下、１０^－１０Ｍ以下未満、１０^－１１Ｍ以下、１０^－１２Ｍ以下、例えば、１０^－１３Ｍ～１０^－１６Ｍ、またはエンドポイントとして上述の値のいずれか２つを有する任意の範囲内のＫ_ｄでＣＴＬＡ－４に結合する。いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、同一のアッセイを使用して比較した場合に、イピリムマブのＫ_ｄの１０倍以下のＫ_ｄでＣＴＬＡ－４に結合する。いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、同一のアッセイを使用して比較した場合に、イピリムマブのＫ_ｄとほぼ同一かまたはそれよりも小さい（例えば、最小で１／１０の小ささ、または最小で１／１００の小ささ）のＫ_ｄでＣＴＬＡ－４に結合する。いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤による、ＣＴＬＡ－４のＣＤ８０またはＣＤ８６に対する結合の阻害のＩＣ５０値は、同一のアッセイを使用して比較した場合に、イピリムマブによって媒介されるＣＴＬＡ－４のそれぞれＣＤ８０またはＣＤ８６に対する結合の阻害のＩＣ５０値の１０倍以下である。いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤による、ＣＴＬＡ－４のＣＤ８０またはＣＤ８６に対する結合の阻害のＩＣ５０値は、同一のアッセイを使用して比較した場合に、イピリムマブによって媒介されるＣＴＬＡ－４のそれぞれＣＤ８０またはＣＤ８６に対する結合の阻害のＩＣ５０値とほぼ同一かまたはそれよりも小さい（例えば、最小で１／１０の小ささ、または最小で１／１００の小ささ）。

【0894】

いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、適宜の対照に対して、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、もしくは１００％、例えば、５０％～７５％、７５％～９０％、もしくは９０％～１００％、ＣＴＬＡ－４の発現を阻害する、及び／またはその生物学的活性を低下させるのに十分な量で使用される。いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ－４経路阻害剤は、適宜の対照に対して、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、もしくは１００％、例えば、適宜の対照に対して、５０％～７５％、７５％～９０％、もしくは９０％～１００％、ＣＴＬＡ－４のＣＤ８０もしくはＣＤ８６、または両方に対する結合を低減することによって、ＣＴＬＡ－４の生物学的活性を低下させるのに十分な量で使用される。対象となる薬剤の効果を評価または定量化する文脈における好適な対照は、一般的には、上記対象の薬剤、例えばＣＴＬＡ－４経路阻害剤に暴露されていない、もしくは該薬剤で処理されていない（またはごくわずかな量に曝露されたもしくはごくわずかな量で処理された）同等の生物学的系（例えば、細胞または対象）である。いくつかの実施形態において、生物学的系はそれ自体の対照の役割を果たしてもよい（例えば、当該の生物学的系を、当該薬剤への曝露または該薬剤による処理の前に評価し、曝露または処理を開始したまたは該処理が終了した後の状態と比較してもよい）。いくつかの実施形態において、バックグラウンドの（ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ）対照を使用してもよい。

【0895】

一実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ．からＹｅｒｖｏｙとして市販されている）、またはそのバイオシミラー、抗原結合フラグメント、コンジュゲート、もしくは変異体である。当技術分野で公知のように、イピリムマブとは、機能性のヒトレパートリーを生成するための重鎖及び軽鎖をコードするヒト遺伝子を有するトランスジェニックマウスに由来する完全ヒトＩｇＧ１κ抗体である抗ＣＴＬＡ－４抗体を指す。イピリムマブは、そのＣＡＳ登録番号４７７２０２－００－９及びＰＣＴ公開第ＷＯ０１／１４４２４号（その全体が全ての目的に対して本明細書に援用される）によって参照することもできる。イピリムマブは抗体１０Ｄ１として開示されている。詳細には、イピリムマブは、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含む（配列番号２１１を含む軽鎖可変領域及び配列番号２１０を含む重鎖可変領域を有する）。イピリムマブの医薬組成物としては、イピリムマブ及び１種以上の希釈剤、ビヒクル、または賦形剤を含む全ての薬学的に許容される組成物が挙げられる。イピリムマブを含む医薬組成物の例は、国際特許出願公開第ＷＯ２００７／６７９５９号に記載されている。イピリムマブは静脈内（ＩＶ）投与することができる。

【0896】

一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、配列番号２０８によって示す重鎖及び配列番号２０９によって示す軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２０８及び配列番号２０９に示す配列、またはそれらの抗原結合フラグメント、Ｆａｂフラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、変異体、もしくはコンジュゲートを有する重鎖及び軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２０８及び配列番号２０９に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２０８及び配列番号２０９に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２０８及び配列番号２０９に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２０８及び配列番号２０９に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２０８及び配列番号２０９に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。

【0897】

一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号２１０に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含み、ＣＴＬＡ－４阻害剤の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２１１に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１０及び配列番号２１１に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１０及び配列番号２１１に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１０及び配列番号２１１に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１０及び配列番号２１１に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１０及び配列番号２１１に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

【0898】

一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１２、配列番号２１３、及び配列番号２１４に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに、それぞれ配列番号２１５、配列番号２１６、及び配列番号２１７に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。一実施形態において、上記抗体は、上述の抗体のいずれかとして、ＣＴＬＡ－４上の同一のエピトープへの結合に関して競合する及び／または上記エピトープに結合する。

【0899】

一実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、医薬品規制当局によって承認された、イピリムマブに関する抗ＣＴＬＡ－４バイオシミラーモノクローナル抗体である。一実施形態において、上記バイオシミラーは、基準医薬品もしくは基準生物学的産物のアミノ酸配列に対して、少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、上記基準医薬品もしくは基準生物学的産物と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む抗ＣＴＬＡ－４抗体を含み、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はイピリムマブである。いくつかの実施形態において、上記１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。イピリムマブのアミノ酸配列を表２３に示す。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、承認されたまたは承認申請された抗ＣＴＬＡ－４抗体であり、上記抗ＣＴＬＡ－４抗体は、基準医薬品または基準生物学的産物の製剤とは異なる製剤で提供され、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はイピリムマブである。上記抗ＣＴＬＡ－４抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの医薬品規制当局によって承認されていてもよい。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はイピリムマブである。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はイピリムマブである。

【表9】

【0900】

いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤はイピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤はイピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記イピリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0901】

いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤はイピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは約２００ｍｇ～約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤はイピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、約２００ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４８０ｍｇ、または約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記イピリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0902】

いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤はイピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎に投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記イピリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0903】

いくつかの実施形態において、イピリムマブは、切除不能または転移黒色腫を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブは、切除不能または転移黒色腫を治療するために、３週間毎に約 ｍｇ／ｋｇで最大４回投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記イピリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0904】

いくつかの実施形態において、イピリムマブは黒色腫のアジュバント治療のために投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブは、黒色腫のアジュバント治療のために、３週間毎に約１０ｍｇ／ｋｇで４回投与され、その後、１２週間毎に１０ｍｇ／ｋｇで最大３年間投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記イピリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0905】

いくつかの実施形態において、イピリムマブは進行腎細胞癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブは、進行腎細胞癌を治療するために、ニボルマブ３ｍｇ／ｋｇが投与されるのと同日の直後に約１ｍｇ／ｋｇで投与され、これが３週間毎に４回繰り返される。いくつかの実施形態において、上記併用の４回の投与を完了した後に、ニボルマブは、進行腎細胞癌及び／または腎細胞癌用の標準的な投薬レジメンに従って、単剤として投与されてもよい。いくつかの実施形態において、イピリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記イピリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0906】

いくつかの実施形態において、イピリムマブは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移結腸直腸癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移結腸直腸癌を治療するために、ニボルマブ３ｍｇ／ｋｇが３０分間にわたって静脈内投与されるのと同日の直後に、約１ｍｇ／ｋｇで３０分間にわたって静脈内投与され、これが３週間毎に４回繰り返される。いくつかの実施形態において、上記併用の４回の投与を完了した後に、ニボルマブを、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移結腸直腸癌用の標準的な投薬レジメンに従って推奨されるように、単剤として投与する。いくつかの実施形態において、イピリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記イピリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0907】

いくつかの実施形態において、イピリムマブは、肝細胞癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブは、肝細胞癌を治療するために、ニボルマブ１ｍｇ／ｋｇが３０分間にわたって静脈内投与されるのと同日の直後に、約３ｍｇ／ｋｇで３０分間にわたって静脈内投与され、これが３週間毎に４回繰り返される。いくつかの実施形態において、上記併用の４回の投与を完了した後に、ニボルマブを、肝細胞癌用の標準的な投薬レジメンに従って単剤として投与する。いくつかの実施形態において、イピリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記イピリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0908】

いくつかの実施形態において、イピリムマブは、転移非小細胞肺癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブは、転移非小細胞肺癌を治療するために、２週間毎のニボルマブ３ｍｇ／ｋｇと共に、６週間毎に約１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブは、転移非小細胞肺癌を治療するために、３週間毎のニボルマブ３６０ｍｇ及び２サイクルのプラチナダブレット化学療法と共に、６週間毎に約１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記イピリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0909】

いくつかの実施形態において、イピリムマブは、悪性胸膜中皮腫を治療するために投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブは、悪性胸膜中皮腫を治療するために、３週間毎のニボルマブ３６０ｍｇと共に、６週間毎に約１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記イピリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0910】

トレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６としても知られる）は、完全ヒトＩｇＧ２モノクローナル抗体であり、ＣＡＳ番号７４５０１３－５９－６を有する。トレメリムマブは、米国特許第６，６８２，７３６号（本明細書に援用される）において抗体１１．２．１として開示される。トレメリムマブの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号２１８及び２１９に示す。トレメリムマブは、黒色腫及び乳がんを含む種々の腫瘍の治療に関する治験において検討されており、上記治験において、トレメリムマブは、４週間または１２週間毎に単回投与または複数回投与のいずれかとして、０．０１～１５ｍｇ／ｋｇの用量範囲で静脈内投与された。本発明によって提供されるレジメンでは、トレメリムマブは局所投与、特に皮内投与または皮下投与される。皮内投与または皮下投与されるトレメリムマブの有効量は、通常、一人当り５～２００ｍｇ／回の範囲である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブの有効量は、一人当り１０～１５０ｍｇ／回の範囲である。いくつかの特定の実施形態において、トレメリムマブの有効量は、一人当り約１０、２５、３７．５、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、または２００ｍｇ／回である。

【0911】

一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、配列番号２１８によって示す重鎖及び配列番号２１９によって示す軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１８及び配列番号２１９に示す配列、またはそれらの抗原結合フラグメント、Ｆａｂフラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、変異体、もしくはコンジュゲートを有する重鎖及び軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１８及び配列番号２１９に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１８及び配列番号２１９に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１８及び配列番号２１９に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１８及び配列番号２１９に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２１８及び配列番号２１９に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。

【0912】

一実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、トレメリムマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。一実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号２２０に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含み、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２２１に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２０及び配列番号２２１に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２０及び配列番号２２１に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２０及び配列番号２２１に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２０及び配列番号２２１に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２０及び配列番号２２１に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

【0913】

一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２２、配列番号２２３、及び配列番号２２４に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに、それぞれ配列番号２２５、配列番号２２６、及び配列番号２２７に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。一実施形態において、上記抗体は、上述の抗体のいずれかとして、ＣＴＬＡ－４上の同一のエピトープへの結合に関して競合する及び／または上記エピトープに結合する。

【0914】

一実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、医薬品規制当局によって承認された、トレメリムマブに関する抗ＣＴＬＡ－４バイオシミラーモノクローナル抗体である。一実施形態において、上記バイオシミラーは、基準医薬品もしくは基準生物学的産物のアミノ酸配列に対して、少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、上記基準医薬品もしくは基準生物学的産物と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む抗ＣＴＬＡ－４抗体を含み、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はトレメリムマブである。いくつかの実施形態において、上記１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。トレメリムマブのアミノ酸配列を表２４に示す。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、承認されたまたは承認申請された抗ＣＴＬＡ－４抗体であり、上記抗ＣＴＬＡ－４抗体は、基準医薬品または基準生物学的産物の製剤とは異なる製剤で提供され、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はトレメリムマブである。上記抗ＣＴＬＡ－４抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの医薬品規制当局によって承認されていてもよい。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はトレメリムマブである。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はトレメリムマブである。

【表10】

【0915】

いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤はトレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤はトレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、トレメリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記トレメリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0916】

いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤はトレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは約２００ｍｇ～約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤はトレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、約２００ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４８０ｍｇ、または約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、トレメリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記トレメリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0917】

いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤はトレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎に投与される。いくつかの実施形態において、トレメリムマブの投与は、切除の１、２、３、４、または５週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。いくつかの実施形態において、上記トレメリムマブの投与は、切除の１、２、または３週間前（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を得る前）に開始される。

【0918】

一実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、Ａｇｅｎｕｓ製ザリフレリマブ、またはそのバイオシミラー、抗原結合フラグメント、コンジュゲート、もしくは変異体である。ザリフレリマブは完全ヒトモノクローナル抗体である。ザリフレリマブには、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）登録番号２１４８３２１－６９－９が割り当てられており、ＡＧＥＮ１８８４としても知られている。ザリフレリマブの調製及び特性は、米国特許第１０，１４４，７７９号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／００２４３５０Ａ１号に記載され、上記特許文献の開示は本明細書に援用される。

【0919】

一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、配列番号２２８によって示す重鎖及び配列番号２２９によって示す軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２８及び配列番号２２９に示す配列、またはそれらの抗原結合フラグメント、Ｆａｂフラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、変異体、もしくはコンジュゲートを有する重鎖及び軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２８及び配列番号２２９に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２８及び配列番号２２９に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２８及び配列番号２２９に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２８及び配列番号２２９に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２２８及び配列番号２２９に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一である重鎖ならびに軽鎖を含む。

【0920】

一実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、ザリフレリマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。一実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号２３０に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含み、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２３１に示す配列、またはその保存的アミノ酸置換体を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２３０及び配列番号２３１に示す配列とそれぞれ少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２３０及び配列番号２３１に示す配列とそれぞれ少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２３０及び配列番号２３１に示す配列とそれぞれ少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２３０及び配列番号２３１に示す配列とそれぞれ少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２３０及び配列番号２３１に示す配列とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

【0921】

一実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ配列番号２３２、配列番号２３３、及び配列番号２３４に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに、それぞれ配列番号２３５、配列番号２３６、及び配列番号２３７に示す配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換体を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。一実施形態において、上記抗体は、上述の抗体のいずれかとして、ＣＴＬＡ－４上の同一のエピトープへの結合に関して競合する及び／または上記エピトープに結合する。

【0922】

一実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、医薬品規制当局によって承認された、ザリフレリマブに関するＣＴＬＡ－４バイオシミラーモノクローナル抗体である。一実施形態において、上記バイオシミラーは、基準医薬品もしくは基準生物学的産物のアミノ酸配列に対して、少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、上記基準医薬品もしくは基準生物学的産物と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む抗ＣＴＬＡ－４抗体を含み、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はザリフレリマブである。いくつかの実施形態において、上記１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。ザリフレリマブのアミノ酸配列を表２５に示す。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、承認されたまたは承認申請された抗ＣＴＬＡ－４抗体であり、上記抗ＣＴＬＡ－４抗体は、基準医薬品または基準生物学的産物の製剤とは異なる製剤で提供され、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はザリフレリマブである。上記抗ＣＴＬＡ－４抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの医薬品規制当局によって承認されていてもよい。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは、１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はザリフレリマブである。いくつかの実施形態において、上記バイオシミラーは１種以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、上記１種以上の賦形剤は、基準医薬品もしくは基準生物学的産物に含まれる賦形剤と同一であるかまたは異なり、但し、上記基準医薬品または基準生物学的産物はザリフレリマブである。

【表11】

【0923】

さらなる抗ＣＴＬＡ－４抗体の例としては、当業者に公知のＡＧＥＮ１１８１、ＢＭＳ－９８６２１８、ＢＣＤ－１４５、ＯＮＣ－３９２、ＣＳ１００２、ＲＥＧＮ４６５９、及びＡＤＧ１１６が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0924】

いくつかの実施形態において、上記抗ＣＴＬＡ－４抗体は、以下の特許公開公報、すなわち、ＵＳ２０１９／００４８０９６、ＵＳ２０２０／０２２３９０７、ＵＳ２０１９／０２０１３３４、ＵＳ２０１９／０２０１３３４、ＵＳ２００５／０２０１９９４、ＥＰ１２１２４２２Ｂｌ、ＷＯ２０１８／２０４７６０、ＷＯ２０１８／２０４７６０、ＷＯ２００１／０１４４２４、ＷＯ２００４／０３５６０７、ＷＯ２００３／０８６４５９、ＷＯ２０１２／１２０１２５、ＷＯ２０００／０３７５０４、ＷＯ２００９／１００１４０、ＷＯ２００６／０９６４９、ＷＯ２００５／０９２３８０、ＷＯ２００７／１２３７３７、ＷＯ２００６／０２９２１９、ＷＯ２０１０／０９７９５９７、ＷＯ２００６／１２１６８、及びＷＯ１９９７／０２０５７４（上記特許文献のそれぞれは本明細書に援用される）のいずれかに開示される抗ＣＴＬＡ－４抗体である。さらなるＣＴＬＡ－４抗体は、米国特許第５，８１１，０９７、第５，８５５，８８７号、第６，０５１，２２７号、及び第６，９８４，７２０号；ＰＣＴ公開第ＷＯ０１／１４４２４号及び第ＷＯ００／３７５０４号；米国公開第２００２／００３９５８１号及び第２００２／０８６０１４号、ならびに／または米国特許第５，９７７，３１８号、第６，６８２，７３６号、第７，１０９，００３号、及び第７，１３２，２８１号（上記特許文献のそれぞれは本明細書に援用される）に記載される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＴＬＡ－４抗体は、例えば、ＷＯ９８／４２７５２；米国特許第６，６８２，７３６号及び第６，２０７，１５６号；Ｈｕｒｗｉｔｚ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９９８， ９５， １００６７－１００７１ （１９９８）；Ｃａｍａｃｈｏ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．， ２００４， ２２， １４５ （Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ． ２５０５ （２００４） （ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＰ－６７５２０６）；またはＭｏｋｙｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， １９９８， ５８， ５３０１－５３０４ （１９９８）（これらの文献のそれぞれは本明細書に援用される）に開示される抗ＣＴＬＡ－４抗体である。

【0925】

いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、ＷＯ１９９６／０４０９１５（本明細書に援用される）に開示されるＣＴＬＡ－４リガンドである。

【0926】

いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、ＣＴＬＡ－４発現の核酸阻害剤である。例えば、抗ＣＴＬＡ－４ ＲＮＡｉ分子は、ＰＣＴ公開第ＷＯ１９９９／０３２６１９号及び第ＷＯ２００１／０２９０５８号；米国公開第２００３／００５１２６３号、第２００３／００５５０２０号、第２００３／００５６２３５号、第２００４／２６５８３９号、第２００５／０１００９１３号、第２００６／００２４７９８号、第２００８／００５０３４２号、第２００８／００８１３７３号、第２００８／０２４８５７６号、及び第２００８／０５５４４３号；ならびに／または米国特許第６，５０６，５５９号、第７，２８２，５６４号、第７，５３８，０９５号、及び第７，５６０，４３８号（本明細書に援用される）に記載の分子の形態をとる場合がある。場合によっては、上記抗ＣＴＬＡ－４ＲＮＡｉ分子は、欧州特許第ＥＰ１３０９７２６号（本明細書に援用される）に記載の二本鎖ＲＮＡｉ分子の形態をとる。場合によっては、上記抗ＣＴＬＡ－４ＲＮＡｉ分子は、米国特許第７，０５６，７０４号及び第７，０７８，１９６号（本明細書に援用される）に記載の二本鎖ＲＮＡｉ分子の形態をとる。いくつかの実施形態において、上記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、国際特許出願公開第ＷＯ２００４／０８１０２１号（本明細書に援用される）に記載のアプタマーである。

【0927】

他の実施形態において、本発明の抗ＣＴＬＡ－４ＲＮＡｉ分子は、米国特許第５，８９８，０３１号、第６，１０７，０９４号、第７，４３２，２４９号、及び第７，４３２，２５０号、ならびに欧州出願第ＥＰ０９２８２９０号（本明細書に援用される）に記載のＲＮＡ分子である。

【0928】

いくつかの実施形態において、本発明は、ＴＩＬレジメンを施すステップを含むがんの患者の治療方法であって、上記ＴＩＬレジメンが、ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物を含み、ＣＴＬＡ－４阻害剤を投与するステップをさらに含む、上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、及び（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤を含む組成物を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、及び（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤を含むキットを含む。

【0929】

いくつかの実施形態において、本発明は、ＴＩＬレジメンを施すステップを含むがんの患者の治療方法であって、上記ＴＩＬレジメンが、ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物を含み、ＣＴＬＡ－４阻害剤と、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを投与するステップをさらに含む、上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤、及び（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含む組成物を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤、及び（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含むキットを含む。

【0930】

４．患者のリンパ球除去プレコンディショニング
ある実施形態において、本発明は、ＴＩＬ集団でがんを処置する方法を含み、ここで患者は本開示に係るＴＩＬの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前処置される。ある実施形態において、本発明は、骨髄非破壊的化学療法で前処置された患者のがん処置に使用するためのＴＩＬの集団を含む。ある実施形態において、ＴＩＬの集団は注入による投与用である。ある実施形態において、骨髄非破壊的化学療法は、２日間（ＴＩＬ注入前２７日目及び２６日目）のシクロホスファミド６０ｍｇ／ｋｇ／日及び５日間（ＴＩＬ注入前２７～２３日目）のフルダラビン２５ｍｇ／ｍ^２／日である。ある実施形態において、骨髄非破壊的化学療法及び本開示に係るＴＩＬ注入（０日目）の後、患者は生理学的忍容量まで８時間毎に静脈内に７２０，０００ＩＵ／ｋｇのＩＬ－２（アルデスロイキン、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮとして市販）の静脈内注入を受ける。特定の実施形態では、ＴＩＬの集団は、ＩＬ－２と組み合わせてがんを処置するのに使用され、ＩＬ－２はＴＩＬの集団の後に投与される。

【0931】

実験的知見から、腫瘍特異的Ｔリンパ球の養子移入前のリンパ球枯渇が、調節性Ｔ細胞及び免疫系の競合エレメント（「サイトカインシンク」）の除去により、処置有効性の増強において重要な役割を果たすことが指摘される。従って、本発明の一部の実施形態は、本発明のＴＩＬを導入する前に患者に対してリンパ球枯渇ステップ（「免疫抑制コンディショニング」とも称される）を利用する。

【0932】

一般に、リンパ球枯渇はフルダラビン又はシクロホスファミド（その活性型はマホスファミドと称される）及びこれらの組み合わせの投与を使用して行われる。かかる方法については、Ｇａｓｓｎｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１１， ６０， ７５－８５， Ｍｕｒａｎｓｋｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．Ｏｎｃｏｌ．， ２００６， ３， ６６８－６８１， Ｄｕｄｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００８， ２６， ５２３３－５２３９、及びＤｕｄｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００５， ２３， ２３４６－２３５７（これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されている。

【0933】

一部の実施形態において、フルダラビンは０．５μｇ／ｍｌ～１０μｇ／ｍＬフルダラビンの濃度で投与される。一部の実施形態において、フルダラビンは１μｇ／ｍＬフルダラビンの濃度で投与される。一部の実施形態において、フルダラビン処置は１日、２日、３日、４日、５日、６日、又は７日間又はそれ以上にわたり投与される。一部の実施形態において、フルダラビンは、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日、２５ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日、３５ｍｇ／ｋｇ／日、４０ｍｇ／ｋｇ／日、又は４５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で投与される。一部の実施形態において、フルダラビン処置は３５ｍｇ／ｋｇ／日で２～７日間にわたり投与される。一部の実施形態において、フルダラビン処置は３５ｍｇ／ｋｇ／日で４～５日間にわたり投与される。一部の実施形態において、フルダラビン処置は２５ｍｇ／ｋｇ／日で４～５日間にわたり投与される。

【0934】

一部の実施形態において、活性型のシクロホスファミドであるマホスファミドは、シクロホスファミドの投与による０．５μｇ／ｍＬ～１０μｇ／ｍＬの濃度で得られる。一部の実施形態において、活性型のシクロホスファミドであるマホスファミドは、シクロホスファミドの投与による１μｇ／ｍＬの濃度で得られる。一部の実施形態において、シクロホスファミド処置は１日、２日、３日、４日、５日、６日、又は７日間又はそれ以上にわたり投与される。一部の実施形態において、シクロホスファミドは、１００ｍｇ／ｍ^２／日、１５０ｍｇ／ｍ^２／日、１７５ｍｇ／ｍ^２／日、２００ｍｇ／ｍ^２／日、２２５ｍｇ／ｍ^２／日、２５０ｍｇ／ｍ^２／日、２７５ｍｇ／ｍ^２／日、又は３００ｍｇ／ｍ^２／日の投薬量で投与される。一部の実施形態において、シクロホスファミドは静脈内に（即ち、ｉ．ｖ．）投与される。一部の実施形態において、シクロホスファミド処置は３５ｍｇ／ｋｇ／日で２～７日間にわたり投与される。一部の実施形態において、シクロホスファミド処置は２５０ｍｇ／ｍ^２／日、ｉ．ｖ．で４～５日間にわたり投与される。一部の実施形態において、シクロホスファミド処置は２５０ｍｇ／ｍ^２／日、ｉ．ｖ．で４日間にわたり投与される。

【0935】

一部の実施形態において、リンパ球枯渇は、フルダラビン及びシクロホスファミドの患者に併せて投与することで実施される。一部の実施形態において、４日間にわたってフルダラビンは２５ｍｇ／ｍ２／日、ｉ．ｖ．で投与され、シクロホスファミドは２５０ｍｇ／ｍ^２／日、ｉ．ｖ．で投与される。

【0936】

ある実施形態において、リンパ球枯渇は、６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間のシクロホスファミドの投与ステップと、それに続く２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間のフルダラビンの投与により実施される。

【0937】

一実施形態において、上記リンパ球除去は、６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間のシクロホスファミドの投与と、２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間のフルダラビンの投与とによって実施され、但し、最初の２日間はシクロホスファミドとフルダラビンの両方が投与され、リンパ球除去は全部で５日間で実施される。

【0938】

一実施形態において、上記リンパ球除去は、約５０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間のシクロホスファミドの投与と、約２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間のフルダラビンの投与とによって実施され、但し、最初の２日間はシクロホスファミドとフルダラビンの両方が投与され、リンパ球除去は全部で５日間で実施される。

【0939】

一実施形態において、上記リンパ球除去は、約５０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間のシクロホスファミドの投与と、約２０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間のフルダラビンの投与とによって実施され、但し、最初の２日間はシクロホスファミドとフルダラビンの両方が投与され、リンパ球除去は全部で５日間で実施される。

【0940】

一実施形態において、上記リンパ球除去は、約４０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間のシクロホスファミドの投与と、約２０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間のフルダラビンの投与とによって実施され、但し、最初の２日間はシクロホスファミドとフルダラビンの両方が投与され、リンパ球除去は全部で５日間で実施される。

【0941】

一実施形態において、上記リンパ球除去は、約４０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間のシクロホスファミドの投与と、約１５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間のフルダラビンの投与とによって実施され、但し、最初の２日間はシクロホスファミドとフルダラビンの両方が投与され、リンパ球除去は全部で５日間で実施される。

【0942】

一実施形態において、上記リンパ球除去は、６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量のシクロホスファミド及び２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量のフルダラビンの２日間の投与と、それに続く２５ｍｇ／ｍ２／日の用量のフルダラビンの３日間の投与とによって実施される。

【0943】

一実施形態において、シクロホスファミドはメスナと共に投与される。一実施形態において、メスナは１５ｍｇ／ｋｇで投与される。メスナが注入される実施形態において、且つ連続的に注入される場合、メスナは、シクロホスファミドの各用量と同時に開始され、シクロホスファミドと共に約２時間にわたって注入され（－５日目及び／または－４日目）、その後残りの２２時間は３ｍｇ／ｋｇ／時間の速度で、２４時間にわたって注入されてもよい。

【0944】

一実施形態において、上記リンパ球除去は、患者への第３のＴＩＬ集団の投与の翌日に開始される、ＩＬ－２レジメンを使用して患者を処置するステップを含む。

【0945】

一実施形態において、上記リンパ球除去は、患者への第３のＴＩＬ集団の投与と同日に開始される、ＩＬ－２レジメンを使用して患者を処置するステップを含む。

【0946】

いくつかの実施形態において、上記リンパ球除去は、５日のプレコンディショニング処置を含む。いくつかの実施形態において、上記の「日」は、－５日目～－１日、または０日目～４日目として示される。いくつかの実施形態において、上記レジメンは、－５日目及び－４日目（すなわち、０日目及び１日目）のシクロホスファミドを含む。いくつかの実施形態において、上記レジメンは、－５日目及び－４日目（すなわち、０日目及び１日目）の静脈内投与シクロホスファミドを含む。いくつかの実施形態において、上記レジメンは、－５日目及び－４日目（すなわち、０日目及び１日目）の６０ｍｇ／ｋｇでの静脈内投与シクロホスファミドを含む。いくつかの実施形態において、シクロホスファミドはメスナと共に投与される。いくつかの実施形態において、上記レジメンはフルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態において、上記レジメンは静脈内投与フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態において、上記レジメンは２５ｍｇ／ｍ^２の静脈内投与フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態において、上記レジメンは－５日目及び－１日目（すなわち、０日目～４日目）の２５ｍｇ／ｍ^２の静脈内投与フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態において、上記レジメンは－５日目及び－１日目（すなわち、０日目～４日目）の２５ｍｇ／ｍ^２の静脈内投与フルダラビンをさらに含む。

【0947】

いくつかの実施形態において、上記骨髄非破壊性リンパ球除去レジメンは、６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量のシクロホスファミド及び２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量のフルダラビンの２日間の投与、ならびにそれに続く２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量のフルダラビンの５日間の投与のステップを含む。

【0948】

いくつかの実施形態において、上記骨髄非破壊性リンパ球除去レジメンは、６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量のシクロホスファミド及び２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量のフルダラビンの２日間の投与、ならびにそれに続く２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量のフルダラビンの３日間の投与のステップを含む。

【0949】

いくつかの実施形態において、上記骨髄非破壊性リンパ球除去レジメンは表２６に従って施される。

【表12】

【0950】

いくつかの実施形態において、上記骨髄非破壊性リンパ球除去レジメンは表２７に従って施される。

【表13】

【0951】

いくつかの実施形態において、上記骨髄非破壊性リンパ球除去レジメンは表２８に従って施される。

【表14】

【0952】

いくつかの実施形態において、上記骨髄非破壊性リンパ球除去レジメンは表２９に従って施される。

【表15】

【0953】

いくつかの実施形態において、上記骨髄非破壊性リンパ球除去レジメンは表３０に従って施される。

【表16】

【0954】

いくつかの実施形態において、上記骨髄非破壊性リンパ球除去レジメンは表３１に従って施される。

【表17】

【0955】

いくつかの実施形態において、上記骨髄非破壊性リンパ球除去レジメンは表３２に従って施される。

【表18】

【0956】

いくつかの実施形態において、上記骨髄非破壊性リンパ球除去レジメンは表３３に従って施される。

【表19】

【0957】

いくつかの実施形態において、骨髄破壊的リンパ球除去レジメンの上述の実施形態と共に使用されるＴＩＬ注入液は、本明細書に記載の、ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物を含む、本明細書に記載の任意のＴＩＬ組成物であってよく、上記ＴＩＬ注入液に代えてのＭＩＬ及びＰＢＬの注入液、ならびに、本明細書に記載のＩＬ－２レジメンの追加及び併用療法剤（例えばＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１阻害剤など）の投与を含んでいてもよい。

【0958】

５．ＩＬ－２レジメン
ある実施形態において、ＩＬ－２レジメンは、高用量ＩＬ－２レジメンを含み、治療用ＴＩＬ集団の治療有効部分を投与した１日後から静脈内投与され始めた、高用量ＩＬ－２レジメンはアルデスロイキン又はそのバイオシミラー若しくはそれらの変異体を含み、アルデロイキン又はそのバイオシミラー若しくは変異体が忍容量まで８時間毎に１５分ボーラス静脈内注入を使用して、最大１４用量で、０．０３７ｍｇ／ｋｇ又は０．０４４ｍｇ／ｋｇ ＩＵ／ｋｇ（患者の体重）の用量で投与される。９日間の休息の後、このスケジュールを更に１４回、合計で最大２８回まで繰り返してもよい。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２は、１回、２回、３回、４回、５回、または６回投与される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２は、最大用量で最大６回投与される。

【0959】

ある実施形態において、ＩＬ－２レジメンは、漸減性ＩＬ－２レジメンを含む。漸減性ＩＬ－２レジメンは、Ｏ’Ｄａｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９９９， １７， ２７５２－６１及びＥｔｏｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ ２０００， ８８， １７０３－９に記載されており、これらの開示は参照により本明細書に援用される。ある実施形態において、漸減性ＩＬ－２レジメンは、１８×１０^６ ＩＵ／ｍ^２のアルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくは変異体の６時間にわたる静脈内投与、それに続く１８×１０６ ＩＵ／ｍ^２の１２時間にわたる静脈内投与、その後１８×１０^６ ＩＵ／ｍ^２の２４時間にわたる静脈内投与、その後４．５×１０^６ ＩＵ／ｍ２の７２時間にわたる静脈内投与を含む。この処置サイクルは、最大４サイクル、２８日毎に繰り返してもよい。ある実施形態において、漸減性ＩＬ－２レジメンは、１日目の１８，０００，０００ＩＵ／ｍ^２、２日目の９，０００，０００ＩＵ／ｍ^２、３日目及び４日目の４，５００，０００ＩＵ／ｍ^２を含む。

【0960】

一実施形態において、上記ＩＬ－２レジメンは低用量ＩＬ－２レジメンを含む。Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ－Ｖｉｌｌａｒ ａｎｄ Ｈａｆｌｅｒ， Ｎａｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０００， １９， ６６５－６７３；Ｈａｒｔｅｍａｎｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． ２０１３， １， ２９５－３０５；及びＲｏｓｅｎｚｗａｉｇ， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｒｈｅｕｍ． Ｄｉｓ． ２０１９， ７８， ２０９－２１７（それらの開示は本明細書に援用される）に報告される低用量ＩＬ－２レジメンを含む、本技術分野で公知の、任意の低用量ＩＬ－２レジメンを使用することができる。一実施形態において、低用量ＩＬ－２レジメンは、２４時間当たり１８×１０^６ ＩＵ／ｍ^２のアルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくは変異体を、５日間連続注入として投与し、続く２～６日間はＩＬ－２療法を実施せず、続いて任意選択で、２４時間当たり１８×１０^６ ＩＵ／ｍ^２の連続注入として、さらに５日間、アルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくは変異体を静脈内投与し、続く３週間は任意選択でＩＬ－２療法を実施せず、その後追加のサイクルを施してもよい。

【0961】

一実施形態において、上記ＩＬ－２レジメンは、０．１０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４、または２１日毎にペグ化ＩＬ－２を投与することを含む。一実施形態において、上記ＩＬ－２レジメンは、０．１０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４、または２１日毎に、ベンペガルデスロイキン、またはそのフラグメント、変異体、もしくはバイオシミラーを投与することを含む。

【0962】

一実施形態において、上記ＩＬ－２レジメンは、０．１０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４、または２１日毎に、ＴＨＯＲ－７０７、またはそのフラグメント、変異体、もしくはバイオシミラーを投与することを含む。

【0963】

一実施形態において、上記ＩＬ－２レジメンは、０．１０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４、または２１日毎に、ネムバロイキンアルファ、またはそのフラグメント、変異体、もしくはバイオシミラーを投与することを含む。

【0964】

一実施形態において、上記ＩＬ－２レジメンは、抗体骨格上に合体したＩＬ－２フラグメントの投与を含む。一実施形態において、上記ＩＬ－２レジメンは、ＩＬ－２低親和性受容体に結合した抗体－サイトカイン合体タンパク質の投与を含む。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）；ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）；及び上記Ｖ_ＨもしくはＶ_ＬのＣＤＲ中に合体したＩＬ－２分子またはそのフラグメントを含み、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、制御性Ｔ細胞に対してＴエフェクター細胞を優先的に増殖させる。一実施形態において、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）；ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）；及び上記Ｖ_ＨもしくはＶ_ＬのＣＤＲ中に合体したＩＬ－２分子またはそのフラグメントを含み、上記ＩＬ－２分子はムテインであり、上記抗体サイトカイン合体タンパク質は、制御性Ｔ細胞よりもＴエフェクター細胞を優先的に増殖する。一実施形態において、上記ＩＬ－２レジメンは、配列番号２９及び配列番号３８からなる群より選択される重鎖と、配列番号３７及び配列番号３９からなる群より選択される軽鎖とを含む抗体、またはそのフラグメント、変異体、もしくはバイオシミラーを、０．１０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４、または２１日毎に投与することを含む。

【0965】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体サイトカイン合体タンパク質は、アルデスロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））または同等の分子などの、但しこれに限定されない野生型ＩＬ－２分子よりも長い血清半減期を有する。

【0966】

いくつかの実施形態において、骨髄破壊的リンパ球除去レジメンの上述の実施形態と共に使用されるＴＩＬ注入液は、本明細書に記載の任意のＴＩＬ組成物であってよく、上記ＴＩＬ注入液に代えてのＭＩＬ及びＰＢＬの注入液、ならびに、本明細書に記載のＩＬ－２レジメンの追加及び併用療法剤（例えばＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１阻害剤など）の投与を含んでいてもよい。

【0967】

いくつかの実施形態において、本発明は、ＴＩＬレジメンを施すステップを含むがんの患者の治療方法であって、上記ＴＩＬレジメンが、ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物を含み、ＩＬ－２レジメンを施すステップをさらに含む、上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、及び（ｉｉ）ＩＬ－２レジメンを含む組成物を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、及び（ｉｉ）ＩＬ－２レジメンを含むキットを含む。

【0968】

いくつかの実施形態において、本発明は、ＴＩＬレジメンを施すステップを含むがんの患者の治療方法であって、上記ＴＩＬレジメンが、ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物を含み、ＩＬ－２レジメンを施す及びＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを投与するステップをさらに含む、上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、（ｉｉ）ＩＬ－２レジメン、及び（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含む組成物を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、（ｉｉ）ＩＬ－２レジメン、及び（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含むキットを含む。

【0969】

いくつかの実施形態において、本発明は、ＴＩＬレジメンを施すステップを含むがんの患者の治療方法であって、上記ＴＩＬレジメンが、ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物を含み、ＣＴＬＡ－４阻害剤を投与し、ＩＬ－２レジメンを施すステップをさらに含む、上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－２レジメンを含む組成物を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－２レジメンを含むキットを含む。

【0970】

いくつかの実施形態において、本発明は、ＴＩＬレジメンを施すステップを含むがんの患者の治療方法であって、上記ＴＩＬレジメンが、ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物を含み、ＩＬ－２レジメンを施し、ＣＴＬＡ－４阻害剤及びＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを投与するステップをさらに含む、上記治療方法を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、（ｉｉ）ＩＬ－２レジメン、（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれか、及び（ｉｖ）ＣＴＬＡ－４阻害剤を含む組成物を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子組換えされたＴＩＬ産物、（ｉｉ）ＩＬ－２レジメン、（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれか、及び（ｉｖ）ＣＴＬＡ－４阻害剤を含むキットを含む。

【0971】

Ｂ．養子細胞移入
養子細胞移入（ＡＣＴ）は有効な形態の免疫療法であり、抗腫瘍活性を有する免疫細胞をがん患者に移入することを含む。ＡＣＴは、抗腫瘍活性を有するリンパ球のインビトロ同定、それらの細胞の数を増やすインビトロ拡大培養、及びがん担持宿主へのその注入を伴う治療手法である。養子移入に使用されるリンパ球は、切除された腫瘍の間質に由来してもよい（腫瘍浸潤リンパ球又はＴＩＬ）。ＡＣＴ用のＴＩＬは、本明細書に記載されるとおり調製することができる。一部の実施形態において、ＴＩＬは、例えば図２Ａ及び／または図９に記載されるとおりの方法により調製される。ＴＩＬはまた、抗腫瘍Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されている場合には血液から誘導されてもよく、混合リンパ球腫瘍細胞培養物（ＭＬＴＣ）でエンリッチされてもよく、又は自己抗原提示細胞及び腫瘍由来ペプチドを使用してクローニングされてもよい。注入しようとするがん担持宿主にリンパ球が由来するＡＣＴは、自家ＡＣＴと称される。米国特許出願公開第２０１１／００５２５３０号は、主に転移性黒色腫に罹患している患者の治療に向けた、がん退縮を促進するため養子細胞療法を実施する方法に関する（これらの方法に関して全体として参照により援用される）。一部の実施形態において、ＴＩＬは、本明細書に記載されるとおり投与することができる。一部の実施形態において、ＴＩＬは単回用量で投与することができる。かかる投与は、注射、例えば静脈内注射によってもよい。一部の実施形態において、ＴＩＬ及び／又は細胞傷害性リンパ球は複数回用量で投与されてもよい。投与は、年１回、２回、３回、４回、５回、６回、又は６回超であってもよい。投与は、月１回、２週間に１回、週１回、又は隔日１回であってもよい。ＴＩＬ及び／又は細胞傷害性リンパ球の投与は必要な限り継続されてもよい。

【0972】

Ｖ．細胞増殖産物の製造と患者の治療イベントの調整
本明細書において論じるように、患者からの腫瘍切除からＴＩＬ製造の完了までのタイミングは、例えば、患者から入手可能な腫瘍のサイズ、製造の種々の段階の終点における細胞数、製造の種々の段階に要する日数等を含むいくつかの因子に応じて変化する。結果として、患者のさまざまな治療イベントのスケジュール化にはある程度の柔軟性が必要である。いくつかの実施形態において、患者の治療イベントにはリンパ球除去が含まれる。いくつかの実施形態において、患者の治療イベントにはＴＩＬ注入が含まれる。いくつかの実施形態において、患者の治療イベントには白血球除去処置が含まれる。いくつかの実施形態において、患者の治療イベントにはＩＬ－２レジメンの投与を含む。いくつかの実施形態において、患者の治療イベントには腫瘍切除が含まれる。いくつかの実施形態において、患者の治療イベントには術後の処置のための入院滞在が含まれる。

【0973】

本開示の一態様は、本明細書に開示の方法を実施するためのシステムを提供する。上記システムは、患者ポータル、製造ポータル、臨床医ポータル、及びロジスティックスポータルを含んでいてもよい。上記患者ポータルにより、患者または患者に関連する人（例えば、介護者、後見人、または法的に認められた代理人）（本明細書では便宜上「患者」と総称する）が、患者の治療イベントのスケジュールに関する情報にアクセスできるようになる。上記患者ポータルでは、患者がこの情報にアクセスするために認証情報を提供する必要がある場合がある。上記患者ポータルにより、患者は、例えば住所または他の個人情報などの、患者に関する情報を編集することも可能である。

【0974】

上記臨床医ポータル（病院側インターフェースとも呼ばれる）により、診療施設（すなわち、診療施設職員）が、患者、製造プロセス、製造施設、ロジスティクス提供者に関する情報、ならびに当該診療施設において行われた、もしくは行われる予定のさまざまな患者の治療イベントに関する情報にアクセスする及び／または上記情報を編集することが可能になる。

【0975】

上記製造ポータルは、病院側インターフェース及びロジスティクスポータル／ロジスティクスインターフェースと通信して、製造プロセス及び／または製造スロットの利用可能性に関する情報を決定及び伝達する。製造ポータルにより、本明細書に開示の種々の製造ステップにおいて更新された品質情報を含む製造ラベルの作成も可能になる。

【0976】

本明細書では、ロジスティクスインターフェースとも呼ばれるロジスティクスポータルは、製造ポータル及び病院側インターフェースと通信して、例えば、製造スケジュール、製造スロットの利用可能性、及び材料のタイムリーな出荷を容易にするための患者の治療イベントのスケジュールを含む、材料（すなわち、固形腫瘍、または製造された細胞療法製剤）の出荷スケジュールに関する情報を診療施設と製造施設の間で交換する。

【0977】

本明細書で開示のさまざまな方法を実施するためのシステムは、独自のコンピュータプログラムを実装するか、または例えばＶｉｎｅｔｉ、Ｓａｌｅｓｆｏｒｃｅ．ｃｏｍ、Ｓａｌｅｓｆｏｒｃｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｃｌｏｕｄ、ＩＱＶＩＡ、ＴｒａｃＳｅｌ、及びＳＡＰなどの市販のソフトウェアを適宜に修正することのいずれかにより、計算システムに実装することができる。

【0978】

上記システムを適切に実装し、本明細書に開示の１つ以上の方法を実行するように市販のソフトウェアプラットフォームを修正することにより、上記プラットフォームは、該プラットフォームの当初の設計の対象になっていなかったプロセスを実行することができる。換言すれば、いくつかの実施形態において、上記修正は、当該プラットフォームによって提供されるさまざまなツールの特殊な使い方に基づくことができる。いくつかの実施形態において、本明細書に開示のさまざまな方法を実行するためのシステムは、物流業務の自動化を可能にする企業資源計画（ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ ｒｅｓｏｕｒｃｅ ｐｌａｎｎｉｎｇ）（ＥＲＰ）システムと製造業務の自動化を可能にする製造実行システム（ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｅｘｅｃｕｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）（ＭＥＳ）とを統合するフレームワークプログラムなどのソフトウェアプラットフォームを含んでいてもよい。かかるフレームワークプログラムの例は米国特許第７，３４３，６０５号に記載されており、上記特許文献はその全体が本明細書に援用される。

【0979】

例えば、ＭＥＳアプリケーションと共に、企業コントロールレベル（ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｌｅｖｅｌ）（企業資源計画レベル（Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｐｌａｎｎｉｎｇ ｌｅｖｅｌ））及び自動化レベル（コントロールレベル）からのアプリケーションも、フレームワークプログラムを介して統合し、ワークステーションを介して監視または管理することができる（例えば、臨床施設、製造施設、または配送施設における）。したがって、フレームワークプログラムは、患者の登録、腫瘍の入手、製造施設への腫瘍の輸送、治療用または増殖細胞療法製剤の製造、治療用細胞療法製剤の臨床施設への輸送、患者への治療の実施、及びその後の患者の治療イベントを含む患者の治療プロセス全体のための統合プラットフォームを形成することができる。上記企業コントロールレベル、上記ＭＥＳレベル、及び上記自動化レベルとは異なるアプリケーションを、上記フレームワークプログラムによって、アダプター及び／またはラッパーを用いて簡単に且つ費用効果的に統合することができる。したがって、上記フレームワークプログラムを、ミドルウェアプラットフォーム及び製造アプリケーション統合ツールと見なす必要がある。エンドユーザー（例えば、ケースマネージャー）は、ワークステーションを介して監視対象のアプリケーションのそれぞれのステータスを確認する、及び上記アプリケーションのデータ及びメソッドにアクセスすることもできる。さらに、エンドユーザーは、このアクセスによってアプリケーションを相互に接続することができる。

【0980】

したがって、上記フレームワークプログラムによって、第１に、異なる企業レベル由来のアプリケーションの垂直統合を実現することが可能になり、第２に、上記フレームワークプログラムによって、ＭＥＳレベルでのアプリケーションの水平統合が可能になる。

【0981】

例えば、上記プラットフォーム中への情報の保存を可能にするソフトウェアベースのケースオブジェクトは、保存される情報のタイプの全体的なデフィニションである。例えば、既製のプラットフォーム中のソフトウェアベースのケースオブジェクトにより、顧客からの問い合わせに関する情報の保存が可能になる。かかるオブジェクトの場合、そのタイプのデータの特定のインスタンスに関する情報を格納する複数のレコードが存在する場合がある。したがって、個人のトレーニングについての問い合わせに関する情報を格納するケースレコードと、別の個人のコンフィギュレーションに関する情報を格納する別のケースレコードが出力される。これらのオブジェクトは、例えば、患者、当該の患者に関する患者の治療イベント、及び対応するスケジュールに関する情報を格納するようにカスタマイズすることができる。

【0982】

同様に、既製のプラットフォーム内で提供される、通知及びアラートなどの自動化されたアクション、及びビジネスロジックアクションなどのワークフロールールを修正して、スケジュール及びプロセスステップの変更、例えば、製造プロセスの変更、ならびにそれに伴う製造スケジュール、製造スロットの利用可能性、及びＱＡ試験の結果に基づく患者の治療イベントのスケジュールの変更などをトリガーすることができる。

【0983】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のシステムは、米国特許第１０，７４７，２０９号及び米国特許第７，７９９，２７３号（それらの全体が本明細書に援用される）に記載されるものなどの、製造プロセスの間に起こり得る障害発生時点を判定するための品質保証機能を提供する。

【0984】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のシステムは、その全体が本明細書に援用される米国特許第８，４９１，８３９号に記載されるものなどの、患者から得られた固形腫瘍（またはそのフラグメント）から最終的な細胞療法製剤を製造するプロセス中に作成された電子的バッチ記録の完全性を維持するように構成されたデータシステムを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示のシステムは、治療用Ｔ細胞集団などの増殖細胞療法製剤を産生する細胞製造プロセスにおける使用に適合したアプリケーションソフトウェアを備える。上記アプリケーションソフトウェアは、ガス透過性装置などのセル製造用の閉鎖型システムに含まれる複数の装置を制御するように構成される。

【0985】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のシステムは、本明細書に開示のアプリケーションソフトウェア及び細胞製造方法を統合して、複数のエンドユーザーによって使用される包括的な検証プロトコル及び品質保証プロトコルを提供し、それによってシステムからコンパイルされたデータが解析され且つ使用されて、品質保証プロトコル及び検証プロトコルが達成されているかどうかを判断する。

【0986】

いくつかの実施形態において、本システムは、上記アプリケーションソフトウェアを複数の製品ライン及び／または複数の細胞製造施設に適用し、それによって、複数の細胞製造ライン及び複数の製品ラインが同一システムを使用して監視及び制御される。

【0987】

いくつかの実施形態において、本システムが、本明細書に記載の方法を細胞製造プロセスの細胞培養システムのバッチ最適化に実行され、それにより、該細胞培養システムによってコンパイルされたデータが規定時間外に継続的に追跡され、上記データが当該細胞培養システムを解析するのに使用される。さらに、上記データは統合され、当該細胞製造プロセス全体の品質管理プロセスを解析するのに使用される。

【0988】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のシステムにより、最終的な細胞療法製剤を製造するプロセスのさまざまなステップを実行するためのワークステーションの設計が可能になる。上記ワークステーションは、前のステップに関連するデータの検証が可能になり、実行中のプロセスの完全性を保証し、可能な場合には是正措置を講じることができるように構成することができる。かかるワークステーション設計の例は米国特許第８，０４１，４４４号に記載され、上記特許文献はその全体が本明細書に援用される。

【0989】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のシステムは、病院施設と、該病院施設で得られた固形腫瘍から細胞療法製剤を製造することが可能なさまざまな製造業者との間の調整を、上記さまざまな製造業者における利用可能な製造スケジュールへのアクセスを提供することによって可能にする。かかる調整を可能にするシステムの例は、米国特許第８，０６９，０７１号に記載され、上記特許文献はその全体が本明細書に援用される。

【0990】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のシステムは、上記細胞療法製剤の製造に関連するさまざまなエンティティが、該細胞療法製剤の製造及び輸送に関する情報に対してリアルタイムでアクセスする（然るべき許可を得て）ことを可能にするクラウドベースのアーキテクチャに基づいている。かかるクラウドベースのアーキテクチャの例は、米国特許第９，９６５，５６２号に記載され、上記特許文献はその全体が本明細書に援用される。

【0991】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のシステムは、患者からの腫瘍の取得、得られた腫瘍からの細胞療法製剤の製造、ならびに上記腫瘍及び細胞療法製剤の輸送に関連する職員が、米国特許出願公開第２００４／０２４３２６０号（その全体が本明細書に援用される）に記載されるような、プロセス制御及び承認のための電子署名を使用して、自証する（ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅｍｓｅｌｖｅｓ）及び自証する（ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｅ ｔｈｅｍｓｅｌｖｅｓ）ことを可能にする。

【0992】

いくつかの実施形態において、本システムは、該システム中に顧客関係管理（ＣＲＭ）サブシステムをさらに含んでいてもまたは組み込んでいてもよい。上記ＣＲＭサブシステムは、例えば、医師、病院施設、看護師、請求者、取引先担当者などのさまざまな関係者に関する情報を保管してもよい。上記情報は上記ＣＲＭサブシステムによって維持され、１つの統合されたファンネル（ｆｕｎｎｅｌ）における関係者の単一の見解（ｖｉｅｗ）の維持が可能になり、これにより、システム内でプライバシーコンプライアンスに基づいた方法で、潜在顧客及び関係者のプラットフォームベースの単一ファンネルの見解（ｓｉｎｇｌｅ－ｆｕｎｎｅｌ ｖｉｅｗ）を共有することができる。当事者間の関係に関連する情報は、分散型マルチマスター、マルチスレーブ、もしくはピアツーピアのコンテキストで、個人を特定することができる情報を削除することによって部分的にまたは完全に匿名で、１つ以上の分散型スレーブあるいはピアＣＲＭシステムに分配することができる。かかるＣＲＭサブシステムの１例が、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０２４４３５１号、米国特許第ＵＳ８，４８９，４５１号、及び米国特許第ＵＳ９，３４２，２９２号に開示され、上記特許文献のそれぞれは、その全体が本明細書に援用される。

【0993】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のシステムは、リアルタイムの医療イベント及び／または製造イベントによってトリガーされるメッセージを受信、処理、及びルーティングするための中央イベント処理サブシステムを含むネットワークを提供するように動作可能であってよい。上記中央イベント処理システムは、例えば、医療イベントに関連する患者情報を識別し、当該患者情報を、健康計画、臨床現場の場所、ＴＩＬ製造施設、及び／またはロジスティクスプロバイダーのうちの１つ以上と照合してもよい。医療イベント及び／または製造イベントを利害関係者と照合すると、上記中央イベント処理サブシステムは、上記医療イベント及び／または製造イベントに関する情報の少なくとも一部を１人以上の利害関係者に、当該トリガーイベントの短期間のうちに（例えば、ほぼリアルタイムで）発信する。例えば、各関係者に関連する規則に基づいて、上記中央イベント処理サブシステムは情報を発信し、且つ／または関係者に警告もしくは通知を発真して、当該利害関係者に上記医療イベントを認識させてもよい。かかる中央イベント処理サブシステムの例は米国特許出願公開第２０１４／０３７２１４７号及び米国特許第１０，２４２，０６０号に記載されており、上記特許文献のそれぞれはその全体が本明細書に援用される。

【0994】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のシステムは、例えば、腫瘍の切除、リンパ球除去、白血球除去、ＴＩＬの注入、及び／もしくはＩＬ－２レジメン、または本明細書に開示のその他の患者の治療イベントなどの患者の治療イベントを含むがん治療レジメンのワークフローを選択するように動作可能である。上記ワークフローを選択すると、本システムは、患者に代わって細胞注入療法に対応する注文書を作成することができ、上記細胞注入療法に対応する注文書は、細胞注文及び上記がん治療に対応する特定の治療レジメンの依頼のうちの少なくとも１つを含む。かかるワークフロー選択サブシステムの例は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／００８８９８５号に開示されており、上記特許文献はその全体が本明細書に援用される。

【0995】

いくつかの実施形態において、本システムは、患者もしくは患者の代理人とのテキスト通信または音声通信の前に、リモートアクセスデバイスの認証を含むサービス依頼の認証を含んでいてもよい電話サブシステムを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、上記認証は、取外し型アクセスデバイスを自動的に認証することによって、または患者（もしくは代理人）に質問をすることによって実施されてもよい。かかる電話サブシステム及び認証方法の例は米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／００２６７４７号に開示されており、上記特許文献はその全体が本明細書に援用される。

【0996】

Ａ．細胞増殖産物の製造の調整システム
本開示の実施形態は、例えば、ある患者用のＴ細胞またはＴＩＬなどの細胞療法製剤の製造を調整し、且つ製造プロセスのさまざまな段階、ならびにさまざまな患者の治療イベントを、上記製造プロセスのさまざまな段階の進行及び成否に基づいて動的に計画立案するための方法ならびにシステムを含む。

【0997】

本明細書に記載の方法及びシステムは、免疫療法手順中に、患者固有の生物学的試料に対する連続的且つ自動的なｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙを提供する、既存のシステムを超える特定の技術的利点を提供し、利害関係者－患者、医師、製造者、及びその他の医療関係者など－が、上記免疫療法手順の現在の相及び該手順中の患者の生体試料の状況を迅速に理解し、追跡するために使用することができるコンピュータ化された情報ポータルを創出するように、さらに動作可能である。ｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙを維持する能力の欠如－生命を脅かす病気に対処している患者にとって計り知れないほど深刻な場合がある、製造プロセスにおける遅延につながる。

【0998】

本開示の実施形態により、製造プロセス（ＱＡ、製造、リリース試験、及び出荷の最終決定を含む）中の上記生物学的材料のｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙ及び最終製品の配送プロセス（出荷及び注入施設への配送を含む）中の上記生物学的材料のｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙの維持が可能になる。本開示の実施形態により、継続的に且つ絶え間なくｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙを特定の患者に連携させることがさらに可能になり、それによって、製造の全ての相において当該患者と当該生物学的材料との間の完全なｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙが保証される。

【0999】

上記ＣＯＣ及びＣＯＩの維持は、患者から、輸送、製造プロセス、輸送を経て患者に戻る、上記生物学的材料の全体の行程の間の各イベントを、細胞注文識別子及び患者固有の識別子（該識別子は当該患者に特有である）と関連付け、且つ上記行程全体の間の各イベントを追跡することによって実施される。

【1000】

さらに、本明細書に記載の方法及びシステムは、患者からの生体組織の取得を製造プロセスと統合し且つ同期させる、ならびに生体組織の取得から細胞療法製剤の投与及びその後の治療イベントまでの各ステップをＣＯＣ及びＣＯＩに関して監査する能力を提供するように動作可能である。

【1001】

本明細書に記載の方法及びシステムは、さらに、患者から生体組織を取得するためのロジスティックス、選択された製造施設への上記生体組織の配送、上記選択された製造施設における細胞療法製剤の製造、及び上記製造施設から患者の治療を行う診療施設への上記細胞療法製剤の配送を調整するように動作可能である。

【1002】

図３Ａは、本開示の実施形態に係る、ある患者向けの細胞療法製剤の製造を調整するためのシステムのブロックダイアグラムを示す。いくつかの実施形態において、図３Ａの構成要素によって実行される機能は、単一の構成要素に統合されてもよい。また、いくつかの実施形態において、図３Ａの１つ以上の構成要素によって実行される機能は、図３Ａの他の構成要素によって実行されてもよい。

【1003】

図３Ａを参照すると、システム３００は、病院側インターフェース１１０、イベントスケジューラ１２０、ロジスティックスインターフェース（本明細書では配送ポータルとも呼ばれる）１３０、及び／または製造ポータル１４０を含んでいてもよい。病院側インターフェース１１０、イベントスケジューラ１２０、ロジスティックスインターフェース１３０、及び製造ポータル１４０のそれぞれは、例えば、ＬＡＮ、ＷＡＮ（例えば、インターネット）、及び／または移動体通信ネットワークなどの通信ネットワークを使用して、上記他の３つと通信する。

【1004】

いくつかの実施形態において、病院側インターフェース１１０、イベントスケジューラ１２０、ロジスティックスインターフェース１３０、製造ポータル１４０、及び対応するモジュール（例えば、図３に示す）は、例えば、Ｖｉｎｅｔｉ、Ｓａｌｅｓｆｏｒｃｅ．ｃｏｍ、Ｓａｌｅｓｆｏｒｃｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｃｌｏｕｄ、ＩＱＶＩＡ、ＴｒａｃＳｅｌ、及びＳＡＰによって提供されるものなどの市販のソフトウェアプラットフォーム上で適宜に改変または構築される。

【1005】

病院側インターフェース１１０は、患者の治療の実施、例えば、本明細書に開示のがんの治療の提供に対して責任を負う病院または他の施設と関連していてもよく、または上記と情報交換してもよい。いくつかの実施形態において、病院側インターフェース１１０は、患者から固形腫瘍を取得し、上記固形腫瘍またはそのフラグメントから細胞療法製剤を得る手順を実施する臨床施設に関連付けられる。いくつかの実施形態において、上記臨床施設は、上記固形腫瘍を得ることのみの機能を果たし、上記固形腫瘍またはそのフラグメントから細胞療法製剤を得るプロセスは製造施設において実施されてもよい。

【1006】

いくつかの実施形態において、病院側インターフェース１１０は、製造施設から得られた増殖細胞療法製剤の注入を実施し、患者にその後の看護及び／または任意の事前もしくは後続の治療を提供する病院に関連付けられる。上記病院もしくは診療所の臨床医または従業員は、病院側インターフェース１１０を介してシステム３００と情報交換することができる。

【1007】

いくつかの実施形態において、病院側インターフェース１１０は、例えば、デスクトップコンピュータ、クラウドサーバ、ラップトップコンピュータ、モバイルデバイス、またはハードウェアモジュール及び、プロセッサ上で動作し且つメモリと情報交換するソフトウェアモジュールを備える任意の他の計算装置などの、１つ以上の計算装置を備える。病院側インターフェース１１０は、有線または無線接続を介して、病院もしくは臨床施設で操作される、または病院もしくは臨床施設に関連する計算装置に接続されていてもよい。

【1008】

いくつかの実施形態において、病院側インターフェース１１０は、患者からの摘出時から患者への注入時までの患者由来の生物学的材料（例えば、患者由来の腫瘍、患者から得られたＴ細胞、Ｔ細胞増殖プロセスのさまざまな段階の増殖Ｔ細胞）を追跡するように構成された追跡モジュール１１２を備えていてもよい。

【1009】

いくつかの実施形態において、患者がＴＩＬ注入治療に登録されると、該患者向けの増殖細胞療法製剤の製造のための細胞注文が起草され、上記細胞注文に関連する細胞注文識別子が作成される。いくつかの実施形態において、上記細胞注文に従って注文書が作成され、病院施設からシステムにアップロードされる。いくつかの実施形態において、本システムは、注文書を作成及び／またはアップロードするためのインターフェースを備えていてもよい。

【1010】

さらに、当該患者に特有である患者固有の識別子が作成され、上記細胞注文識別子に関連付けられる。いくつかの実施形態において、上記患者固有の識別子は、例えば、患者毎に順に追加される単一の文字（Ａ～Ｚ）である、連続する接尾辞を有する患者ＩＤ番号を含んでいてもよい。上記患者固有の識別子は、本システム中で一意的である。いくつかの実施形態において、上記患者固有の識別子は、特定のペルソナにのみ可視であってもよい（本明細書の他所で詳述）。いくつかの実施形態において、上記患者固有の識別子は、上記患者の生物学的材料ならびに上記製造された生物学的材料の行程を通じて、印刷される全てのラベルに印刷される。いくつかの実施形態において、上記患者固有の識別子は、全てのシステムユーザーに対して読取り専用である。換言すれば、上記患者固有の識別子は、いくつかの実施形態において、一度作成されたら編集することができない。

【1011】

いくつかの実施形態において、上記細胞注文識別子は、例えば、一意的な患者識別子、細胞注文識別子、注文コード、細胞注文ロット番号、さまざまな時点における１つ以上の受け入れパラメータの値、さまざまな時点における受け入れ基準が満たされているかどうかを示す１つ以上の指標、またはそれらの組み合わせなどの情報を含んでいてもよい。

【1012】

いくつかの実施形態において、上記細胞注文識別子及び上記患者固有の識別子は、当該患者に関連するいずれかの生物学的材料（例えば、当該患者から摘出された固形腫瘍、その断片、そこから抽出された細胞療法産物、もしくは上記細胞療法産物の増殖から得られる増殖細胞療法製剤）の管理が変わるまたは処理を受ける各点で読み取られる。読み取られたそれぞれは、当該患者からの摘出時から該患者への注入時までのプロセス全体で、追跡モジュール１１２によって記録され且つ検証されてもよい。プロセス全体の間の各ステップにおける患者固有の識別子の検証により、上記製剤のｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙ（ＣＯＩ）が保証される一方プロセス全体の間の各ステップにおける細胞注文識別子の検証により、上記製剤のｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙ（ＣＯＣ）が保証される。ＣＯＩ及びＣＯＣの維持に関する詳細は、本明細書の別の他所で説明される。

【1013】

いくつかの実施形態において、上記読み取られた情報は病院施設によって作成される注文書で検証される。例えば、出荷が製造施設で受け入れられると、出荷コンテナ上のラベルが読み取られてもよく、且つ該ラベル上の情報が注文書と照合されて正確性が保証されてもよい。いくつかの実施形態において、上記検証の結果が本システム内に記録される。

【1014】

追跡モジュール１１２が図３Ａに示され、且つ本明細書において、病院側インターフェース１１０の一部として説明されているが、該追跡モジュール１１２は、いくつかの実施形態において、プロセッサ及びメモリを有するスタンドアローンの計算装置として実装されていてもよい。同様に、上記追跡モジュール１１２は、いくつかの実施形態において、ソフトウェアモジュール（例えば、クラウドサーバ上に格納される）として実装されていてもよい。

【1015】

いくつかの実施形態において、上記病院側インターフェース１１０は、患者アクセスモジュール１１６を介して制限されたアクセスを患者に提供し、該患者が治療手順及び対応するスケジュールに関する情報を取得できるようにしてもよい。上記患者アクセスモジュール１１６はまた、上記患者が、例えば、個人識別情報、保険情報、及び臨床医のための自分の健康状態に関する情報など、自分自身に関する情報を提供できるようにすることもできる。

【1016】

上記病院側インターフェース１１０は、臨床施設の職員が所定のプロトコルに従って患者から固形腫瘍を得ること、及び上記患者から固形腫瘍を得る処置に関する情報を入力することができるように動作可能な入手モジュール１１４をさらに備えていてもよい。上記固形腫瘍を得る処置に関する情報は、いくつかの実施形態において、規制要件への準拠を保証するための事後監査を可能にするために保管されてもよい。

【1017】

いくつかの実施形態において、入手モジュール１１４は、臨床施設の職員が、固形腫瘍及び当該患者から固形腫瘍を得るために使用されるプロセスに関する情報を製造施設に提供することをさらに可能にしてもよい。臨床施設も固形腫瘍から細胞療法製剤を得ることが可能な実施形態において、入手モジュール１１４は、臨床施設の職員が、例えば、上記細胞療法製剤を得るために使用したプロセスまたは手順、及び得られた胞療法製剤に対して実施した品質管理アッセイの結果などの、得られた細胞療法製剤に関する情報を製造施設に提供することをさらに可能にしてもよい。

【1018】

いくつかの実施形態において、病院側インターフェース１１０は、製造調整モジュール１１８をさらに備えていてもよい。製造調整モジュール１１８は、臨床施設におけるユーザーが、例えば、１つ以上の製造施設のそれぞれにおける製造スロットの利用可能性及び利用可能な機能などの、１つ以上の製造施設に関する情報を得ることができるように動作可能である。製造調整モジュール１１８は、臨床施設におけるユーザーが、選択された製造施設での製造スロットの予約を調整し、且つロジスティックスインターフェース１３０を介してロジスティックスプロバイダと調整して、固形腫瘍、そのフラグメント、または患者から得た細胞療法製剤の輸送を手配することをさらに可能にする。製造調整モジュール１１８は、臨床施設におけるユーザーが、製造ポータル１４０を介して、製造プロセス及び／または製造プロセス中に実施される品質管理アッセイに関する情報を得ることをさらに可能にする。

【1019】

イベントスケジューラ１２０は、臨床施設及び製造施設で実施されるさまざまな活動を調整するように動作可能である。それに加えてまたまたはそれに代えて、イベントスケジューラ１２０は、臨床施設及び製造施設、細胞療法製剤を製造する施設、例えば、細胞療法製剤の増殖が行われる施設の間での細胞療法製剤の輸送を容易にするように、さまざまな活動の計画立案に関する情報をロジスティックスプロバイダに提供してもよい。以下でより詳細に説明するように、細胞療法製剤の製造の間に行われる種々のイベントに基づいて、上記イベントスケジューラは、他のイベント（複数可）を行う必要がある場合に、動的に計画立案するように構成されている。

【1020】

いくつかの実施形態において、イベントスケジューラ１２０は、例えば、デスクトップコンピュータ、サーバ、ラップトップコンピュータ、モバイルデバイス、またはハードウェアモジュール及び、プロセッサ上で動作し且つメモリと情報交換するソフトウェアモジュールを備える任意の他の計算装置などの計算装置１２２を備える。上記ハードウェアモジュール及び／またはソフトウェアモジュールは、受け入れ判定モジュール１２３及び計画立案モジュール１２５を備える。いくつかの実施形態において、計算装置１２２は、病院インターフェース１１０、製造ポータル１４０、及びロジスティックスインターフェース１３０を介してアクセス可能なクラウドサーバであってもよい。イベントスケジューラ１２０は、有線または無線接続を介して、製造施設及び／または病院施設において操作される、または製造施設及び／または病院施設に関連する計算装置に接続されていてもよい。

【1021】

図３Ａにおいて、受け入れ判定モジュール１２３はイベントスケジューラ１２０の一部として示されているが、受け入れ判定モジュール１２３は製造ポータル１４０の一部として実装されてもよいことを理解されたい。あるいは、モジュール１２３は、例えば、クラウドサーバ上でホストされるスタンドアローンのソフトウェアモジュールとして実装されてもよい。

【1022】

ロジスティックスインターフェースまたは配送ポータル１３０は、例えば、配送業務もしくは荷物処理業務などのロジスティックスプロバイダと関連付けられ得るか、またはそれらと情報交換してもよい。

【1023】

いくつかの実施形態において、ロジスティックスインターフェース１３０は、例えば、デスクトップコンピュータ、クラウドサーバ、ラップトップコンピュータ、モバイルデバイス、またはハードウェアモジュール及び、プロセッサ上で動作し且つメモリと情報交換するソフトウェアモジュールを備える任意の他の計算装置などの計算装置を備える。ロジスティックスインターフェース１３０は、インターネットなどのネットワークを介した有線または無線接続を介して、ロジスティックスプロバイダにおいて操作される、またはロジスティックスプロバイダに関連する計算装置に接続されていてもよい。

【1024】

製造ポータル１４０は、増殖細胞療法製剤を製造する製造施設に関連付けられていてもよい。製造ポータル１４０は、製造施設の職員が、例えば、ｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙを維持すること、製造中に実施される品質管理アッセイに関する情報を記録すること、さまざまなプロセス間の移行を記録すること、及び増殖プロセス中の細胞療法製剤の容器用のラベルを提供することを含む、増殖細胞製剤の製造中のさまざまなプロセスを制御するならびに記録することが可能になるように動作可能である。

【1025】

いくつかの実施形態において、製造ポータル１４０は、例えば、デスクトップコンピュータ、クラウドサーバ、ラップトップコンピュータ、モバイルデバイス、またはハードウェアモジュール及び、プロセッサ上で動作し且つメモリと情報交換するソフトウェアモジュールを備える任意の他の計算装置などの計算装置を備える。製造ポータル１４０は、有線または無線接続を介して、製造施設において操作される、または製造施設に関連する計算装置に接続されていてもよい。

【1026】

いくつかの実施形態において、製造ポータル１４０は、ラベル表示モジュール１４２及びＣＯＣ／ＣＯＩモジュール１４４を備える。ラベル表示モジュール１４２は、製造施設の職員が増殖細胞療法製剤を製造するプロセス（本明細書において増殖プロセスとも呼ばれる）中に細胞療法製剤を搬送する容器用のラベルを作成することができるように動作可能である。ラベルは、例えば、患者固有の識別子、上記容器を取り扱う、及び／または増殖プロセスの現在及び／もしくは以前のステップを実施する職員に関する識別子、以前のステップで実施された品質管理アッセイの結果、ラベルを作成する理由に関連する理由コード、患者固有の識別子によって細胞療法製剤を識別するバーコードまたは２Ｄコード（例えばＱＲコード）、ならびに他の適宜の情報などの情報を含んでいてもよい。

【1027】

ＣＯＣ／ＣＯＩモジュール１４４は、製造施設に関連するユーザーが、増殖プロセス中にｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙの監査を維持うることができるように動作可能である。ＣＯＣ／ＣＯＩモジュール１４４は、製造施設に関連するユーザーが、増殖しつつある細胞療法製剤に関連する患者のｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙの監査を維持できるように、さらに動作可能である。

【1028】

図３Ｂは、市販のソフトウェアプラットフォーム内の標準の構成要素に加えて、これらのプラットフォーム上で適宜に改変または構築されたシステム３００の構成要素の目的スキーマを示す。例えば、市販のソフトウェアプラットフォームは、患者アクセス（例えば、患者識別子、患者連絡先情報、患者認証情報などを含む）、治療計画（例えば、患者の治療イベント初期スケジュールを含む）、臨床医アクセス（例えば、臨床医識別子、及び臨床医認証情報）、ならびに製造アクセス（例えば、製造施設の連絡先情報）に対応する内蔵オブジェクトを有していてもよい。

【1029】

一方、当該患者から固形腫瘍を得るための処置に関連する腫瘍入手フォーム、増殖細胞療法製剤の製造に使用されるプロセスに関する情報及び得られた固形腫瘍の処理の方法に関する情報を含む製造注文、１つ以上の製造施設での製造スケジュール、プロセス全体の監査を可能にするためのラベル監査証跡などのオブジェクトは、システム３００に関連する特定の機能を提供するように、上記内蔵オブジェクトとインターフェースで接続するように特注されてもよい。

【1030】

上記特注オブジェクトと上記内蔵オブジェクトは、当該患者からの固形腫瘍の取得から該患者への増殖細胞療法製剤の注入までの全てのイベントを通じて、ＣＯＣ及びＣＯＩを維持し且つ監査することを可能にするように、システム３００中で互いに情報交換するように構成される。上記特注オブジェクトは上記内蔵オブジェクトと共同して、製造プロセスの進行状況に基づいて、患者の治療イベント及び関連するロジスティックスを同様に計画立案する。

【1031】

例えば、いくつかの実施形態において、ロットの記録及びラベル監査証跡などの特注オブジェクトをシステム３００中に提供してもよい。これらの特注オブジェクトは、特注のワークフロー自動化及び特注のユーザープロファイルに加えて、市販のソフトウェアプラットフォームに、例えば、市販のソフトウェアプラットフォーム内では当初想定されていなかった場合がある、ＣＯＣ／ＣＯＩの維持、監査機能、製造の実績に基づく患者の治療イベントの動的計画立案、製造の実績に基づくラベルの作成、及び／または製造の実績と入手との間の情報交換などの機能を付与する。腫瘍入手処置、ＣＯＣ及びＣＯＩの維持、ならびに製造プロセス中のラベルの作成に関する上記特注オブジェクトと上記内蔵オブジェクトとの間の情報交換のさらなる詳細は、本明細書の他所に記載される。

【1032】

Ｂ．ＣＯＣ及びＣＯＩの維持のための特注オブジェクトと内蔵オブジェクトとの間の情報交換
図３Ｃ～３Ｅは、本開示のいくつかの実施形態に係る、製造施設における製造プロセスを通しての生物学的材料の追跡の概略図である。いくつかの実施形態において、まず、臨床施設で患者から得られた腫瘍試料が製造施設に配送される際に、出荷ラベルが読み取られ、この読み取りから得られた腫瘍試料情報がシステム上の対応するコンピュータベースのオブジェクトに関連付けられる。上記情報としては、細胞注文識別子、患者固有の識別子、腫瘍切除の時期、腫瘍切除に使用されるプロセス、切除後の腫瘍の保存に使用されるプロセス、及び上記腫瘍由来の細胞療法製剤の増殖に使用されると予想されるプロセスを挙げることができるが、これらに限定はされない。上記読み取りから得られる患者関連情報が、製造施設で別個に受信された（例えば、製造ポータル１４０を介して）細胞注文により検証されると、上記腫瘍はシステム中に製造施設で受信されたものとして示され、ｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙは製造施設に渡される。製造プロセスを通じてｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙが如何にして維持されるかについての詳細は、本明細書の他所に記載される。

【1033】

次に、腫瘍を移動させて品質の確認が行われる。品質チェックの間に、上記読み取りから受け取られた腫瘍関連情報がさらに検証され、腫瘍試料が必要な品質基準を満たしていることを確認する。このプロセスで検証される情報としては、例えば、腫瘍切除に使用されるプロセスならびに切除後の腫瘍の保管及び出荷に使用されるプロセスに関する情報が挙げられる。腫瘍切除に使用されるプロセスに関連する上記情報としては、例えば、本明細書の他所でさらに詳細に説明する腫瘍入手形態から処理されるさまざまなフィールドを挙げることができる。上記腫瘍が品質基準を満たしていると見なされると、対応するラベルが読み取られ、対応するオブジェクトが更新される。オブジェクトに含まれる更新された情報は、例えば、病院施設ならびにロジスティックスプロバイダ（本明細書では配送業者施設とも呼ばれる）を含むシステム全体を通してアクセス可能である。いくつかの実施形態において、病院施設及び配送業者施設に関連するさまざまなプロセスが、上記更新されたオブジェクトに基づいて更新される。

【1034】

次いで上記腫瘍は製造に移される。次に、ゼロ日目のバッチ記録ラベルが読み取られ、適切な腫瘍試料が製造に移されており、且つ適切な製造プロセスによって処理されることとなることを検証する。次いで、腫瘍は適宜のフラスコ（当該患者向けの腫瘍を処理する増殖プロセス用の培地及び試薬を含む）に移され、フラスコのラベルが読み取られる。対応するオブジェクトが、上記読み取りから得られる情報を適宜のタイムスタンプと共に使用して更新される。

【1035】

次いで、０日目のフラスコをインキュベータ室に手動で移動させ、そこから製造室に移動させる。製造室では、フラスコのラベルが再度読み取られ、該ラベルに含まれる情報が記録される。上記フラスコのラベルからの情報も使用され、適切な製造プロセスが守られていることを保証する。

【1036】

最初の必要な時間（例えば、図３Ｃに示される１１日間）の後に、後に続く特定の製造プロセスに基づいて、フラスコに播種を行う。播種プロセス中に、フラスコを製造室から取り出す必要がある場合がある。かかる場合には、フラスコのラベルが読み取られ、フラスコが製造室を出る前後にバッチ記録が更新される。上記前後の読み取りからの情報は、さらなるプロセスが実施される前に照合される。

【1037】

上記播種プロセスに続いて、フラスコが製造室に再導入される。播種プロセスに続く製造室への再導入の前後にフラスコのラベルが読み取られ、バッチ記録が更新される。読み取り前後の情報を照合して、正しいフラスコが使用されていること、及び細胞療法製剤をさらに処理するために適切な後続プロセスが使用されていることを確認する。

【1038】

第２の必要な時間の後（例えば、図３Ｃに示す１６日目）に、細胞は、播種したフラスコから複数のバッグ（例えば、図３Ｃに示す５つのバッグ）に分割される。バッグのそれぞれのラベルが、製造室に再導入される前後に読み取られ、バッチ記録及び対応するオブジェクトが適宜に更新される。上記読み取り前後の情報を使用して、細胞注文に従って細胞がフラスコから分割されること、及びバッグが適宜の製造プロセスを使用してさらに処理されることを検証する。

【1039】

いくつかの実施形態において、上記第１及び第２の必要な時間に品質アッセイが実施され、製造プロセスが細胞注文に従って進行し、所定のスケジュールに従っていることを保証する。かかる実施形態において、上記品質管理アッセイの結果も上記読み取られる情報に含まれてもよい。対応する読み取りからかかる情報を得たところで、対応する時点で得られた細胞療法製剤の品質が特定の品質基準を満たさないと判断される場合には、バッチ記録及び対応するオブジェクトがそれに応じて更新される。必要に応じて、製造プロセスのスケジュールも更新される。いくつかの実施形態において、上記更新されたスケジュールが病院施設ならびに配送業者に伝達され、その結果、病院施設及び配送業者によって実施されることになっている、対応するプロセスのスケジュールが適宜に更新されてもよい。製造スケジュールがいつ、どのように更新されるかについての詳細は本明細書の他所に記載される。

【1040】

次いで、上記製造プロセスは、複数のバッグ中で所定の終点まで（スケジュールどおりに、または適宜に修正されたスケジュール及び／または中間ステップで）継続される。いくつかの実施形態において、上記複数のバッグのうちの１つの細胞を使用して、最終的な増殖細胞療法製剤に対する品質アッセイを実施する。次に、品質アッセイから選択されたバッグならびに最終製品として出荷されることになる細胞が入ったバッグにラベルが貼付され、バッチ記録及び対応するオブジェクトを更新するために上記ラベルが読み取られる。

【1041】

次いで、最終製品として出荷されることになるバッグは、カセットに入れられ、冷凍されて病院施設へ輸送される。カセットのラベルが読み取られ、バッチ記録が対応するオブジェクトと共に更新される。次に、品質管理アッセイを実施するために使用されことになるバッグのラベルが読み取られ、バッチ記録及び対応するオブジェクトが更新され、上記バッグが品質管理ステーションに移動される。品質管理アッセイの結果が得られたところで、その結果が読み取られ、バッチ記録及び対応するオブジェクトが更新される。

【1042】

いくつかの実施形態において、上記最終製品として出荷されることになるバッグは、当該バッグ中の製剤が、品質アッセイの結果がまだ入手できないために、治療での使用に関して未だ承認を受けていないとの警告を付して、配送業者に（及び最終的には病院施設に）出荷されてもよい。かかる実施形態において、品質アッセイの結果が得られると、対応するオブジェクトがリアルタイムで更新され、それにより最終的な細胞療法製剤を患者に送達するのに要する時間が短縮される。

【1043】

品質アッセイの結果が、最終的な細胞療法製剤が当該患者の治療上の使用に関して承認されたことを示したところで、カセットが読み取られ、バッチ記録及び対応するオブジェクトが更新される。次いで、カセットに輸送のための準備または処理が行われ、ロジスティックスプロバイダ（すなわち配送業者）に引き渡され、読み取りが行われ、ｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙが配送業者に渡されたことを示す。

【1044】

次に上記配送業者は、上記最終的な細胞療法製剤を病院施設に輸送し、そこでラベルが再度読み取られ、ｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙが病院施設に渡されたことを示す。製造施設及び配送業者が、上記最終的な細胞療法製剤が病院施設に送達されたことの通知を受けるように、バッチ記録及び対応するオブジェクトが更新される。

【1045】

Ｃ．製造プロセス中の細胞療法製剤のラベル表示、ならびにｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙの維持
図３Ｆは、本製造プロセスのいくつかの実施形態（例えば、ＧＥＮ ２プロセス、またはＧＥＮ ３プロセス）に係る、固形腫瘍を得ることから本製造プロセスを経て患者への注入までの、細胞療法製剤の行程を通じてのＣＯＣ及びＣＯＩの維持のためのプロセスの概略図である。いくつかの実施形態において、まず、病院側インターフェース１１０が、病院側インターフェース１１０に接続された病院の従業員（例えば登録看護師）から患者に関する情報を受信する。患者に関する情報としては、健康保険に関する情報、個人識別情報、健康関連情報、患者登録情報（例えば同意書）、または当該患者の識別及び看護に役立つ可能性のある患者に関するその他の任意の情報を挙げることができる。

【1046】

病院の従業員、例えば臨床医が患者を例えばＴＩＬ注入療法の候補者として決定した後に、上記患者は、病院側インターフェース１１０に接続されたコンピュータを介して、ＴＩＬ注入療法を進めることに対する同意を提示してもよい。

【1047】

次いで、上記病院の従業員は、イベントスケジューラ１２０を介して、上記患者向けのＴＩＬ注入療法剤を注文してもよい。次いで、上記病院の請求部門の従業員が、ロジスティックスインターフェース１３０を介して、上記患者向けのＴＩＬ注入療法剤の注文書を発行してもよい。上記ＴＩＬ注入療法剤の注文及び注文書は、病院側インターフェース１１０に送信されてもよい。病院側インターフェース１１０は、上記注文及び注文書の受信を確認するのみならず、イベントスケジューラ１２０に細胞注文を発行する前に、患者の登録及び同意が完了していることを確認してもよい。同様に、病院側インターフェースは、保険提供者と通信して、さまざまな患者の治療イベントが計画立案されていることを通知し、支払いを処理するために保険提供者に患者の治療イベントのスケジュールを提供してもよい。

【1048】

次に、患者固有の識別子が細胞注文に関連付けられ、且つ全ての処理ステップ及び／または出荷ステップにおいて患者に関連する生物学的材料に添付して、本明細書でさらに詳述される生物学的材料の中断のないｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙの追跡を可能にすることができる。患者固有の識別子はまた、治療レジメン全体を通して当該患者を追跡するために、患者のみならず、異なる患者治療プロセスを施すために使用される治療機器に関連付けられてもよい。

【1049】

患者固有の識別子はまた、さまざまな患者の治療イベントに伴う支払いの処理を可能にするように、病院側インターフェース１１０を介して保険提供者に伝達されてもよい。患者固有の識別子は、配送ポータル１３０を介して配送業者にさらに伝達され、配送業者が、輸送されている生物学的物質に関連する患者のアイデンティティを検証できるようにしてもよい。

【1050】

本明細書に開示のさまざまな実施形態において、計画立案モジュール１２５と病院側インターフェース１１０、製造ポータル１４０、またはロジスティックスインターフェース１３０との間の、製造イベント及び／または患者の治療イベントのスケジュールに関するいずれの通信（変更されたか否か）も、処理されている及び計画立案されている細胞注文に関連する患者固有の識別子を伴う。患者固有の識別子を含むかかる通信により、病院側インターフェース１１０、製造ポータル１４０、及びロジスティックスインターフェース１３０は、生物学的材料を正確に処理し、追跡し、且つ識別することが可能になり、それによって生物学的材料または患者の誤認が回避され、且つ患者の安全が向上する。

【1051】

さらに、本明細書で詳細に説明するように、患者固有の識別子は、増殖プロセスを通じてＣＯＣ／ＣＯＩの維持を可能にし、且つ規制上の要件の遵守のための事後監査を可能にするための、増殖プロセス中に使用される容器用のラベルを作成するために使用される。

【1052】

いくつかの実施形態において、患者固有の識別子は、ｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙ／ｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙを追跡するため、ならびにイベント履歴を追跡するためにも使用されるように構成された細胞注文識別子に含まれていてもよい。いくつかの実施形態において、細胞注文識別子は、患者固有の識別子に加えて、処理ステップを経てきた患者由来の生物学的材料にそれぞれ対応するいくつかの証印またはフィールドを含んでいてもよい。図３Ｇは、いくつかの実施形態に係る細胞療法製剤用のラベルの代表的な画像である。いくつかの実施形態において、上記ラベルは、細胞注文識別子３５０、２Ｄコード（例えば、ＱＲコード）３６２、理由フィールド３７０、及び製品フィールド３８０を含む。細胞注文識別子３５０は、例えば、患者氏名３５４、患者固有の識別子３５２、患者の生年月日（例えば、さらなる検証用）３５６、病院関連患者識別子３５８、及び製造ロット番号３６０を含んでいてもよい。

【1053】

したがって、上記ラベルによって、ＣＯＩ／ＣＯＣの維持が可能になり、また臨床治療センターでの腫瘍切除由来の材料の追跡、腫瘍材料の製造施設への出荷、全ての工程内試料及び最終製品試料の試験を含む製造、医薬品の臨床治療センターへの出荷、及び医薬品の注入の追跡も可能になる。

【1054】

いくつかの実施形態において、固形腫瘍を得ることから本製造プロセスを経て患者への注入までの、細胞療法製剤の行程中の異なる時点で、図３Ｈに示すものなどの異なるラベルが作成されてもよい。上記異なる時点で作成されたラベルは、図３Ｇに示すラベルに含まれる追加のまたは異なる情報を含んでいてもよい。例えば、いくつかの実施形態において、細胞増殖プロセス中に作成され、例えば、細胞増殖プロセス中に使用される容器に貼付されるラベルは、さまざまな時点に対応するフィールド、及びそれぞれの時点で行われる、増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが特定の受け入れ基準を満たすかどうかの判定の結果を含んでいてもよい。

【1055】

したがって、本プロセスの任意の段階で、上記ラベルは（患者固有の識別子を介して）患者に関する情報を提供し、それによりｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙの維持が可能になる。上記ラベルはまた、関連する生物学的材料が経てきたさまざまな処理ステップに関する情報を提供してもよく、これによりｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙの記録ならびにイベント履歴が、例えば、監査目的で提供される。

【1056】

したがって、システム３００は、細胞療法製剤の製造プロセス及びサプライチェーン全体にわたってＣＯＩ及びＣＯＣを維持するように構成されてもよい。さらに、システム３００は、２１ ＣＦＲ Ｐａｒｔ １１， ＨＩＰＡＡ （Ｈｅａｌｔｈ Ｉｎｓｕｒａｎｃｅ Ｐｏｒｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ａｃｃｏｕｎｔａｂｉｌｉｔｙ Ａｃｔ）、及びＧＤＰＲ （Ｇｅｎｅｒａｌ Ｄａｔａ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）の規制を満たし、且つデータが安全に保護されることを保証する保護手段を備えるように構成されていてもよい。

【1057】

機密データへのアクセスを限定及び制限するために、システム３００は、いくつかの実施形態において、ユーザーベースの役割によるアクセス制御を実装する。いくつかの実施形態において、上記ラベル上には該ラベルの作成時のタイムスタンプが含まれていてもよい。

【1058】

いくつかの実施形態において、追跡モジュールを介して追跡されている細胞注文識別子は、例えば、さまざまな出荷／輸送イベント、さまざまな製造プロセスイベント、及び／もしくは治療レジメンにおけるさまざまなステップに関連する証印またはフィールドをさらに含んでいてもよい。これらの証印またはフィールドは、ラベル上に印刷されていなくてもよいが、患者に関連する生物学的材料の追跡ならびに治療の進行の追跡のために、追跡モジュールによって作成または追加される。かかる実施形態において、所与のインデックスまたはフィールドが変更または更新される全てのステップにおいて、特定のステップの完了時間を示すタイムスタンプが、細胞注文識別子に関連付けられてもよくまたは付加されてもよい。かかる更新された細胞注文識別子中に含まれる情報は、本明細書の他所で詳細に論じるように、患者の治療イベントを動的に計画変更するために使用されてもよい。

【1059】

１．製造プロセス中の細胞療法製剤のラベル表示
再度図３Ｆを参照すると、いくつかの実施形態において、細胞注文識別子は、読取り可能なラベル上に印刷され、バーコードまたはＱＲコード（もしくは２Ｄコード）に関連付けられて、腫瘍切除から自家製剤の注入までの識別の適切な検証が可能になる。上記ラベルは、上記生物学的材料ならびに上記治療レジメンに関連する対象に貼付されてもよい。例えば、患者固有の識別子を含む上記ラベルは、切除された腫瘍を病院または臨床施設からＴＩＬ製造施設に搬送する容器、ＴＩＬ製造設備及び製造のさまざまなステップ中の容器、増殖ＴＩＬを病院または臨床施設に返送するための輸送容器、さまざまな治療イベントに関連する機器、またはそれらの任意の組み合わせに貼付されてもよい。

【1060】

例えば、いくつかの実装形態において、患者は、病院側インターフェース１１０の患者アクセスモジュール１１６を介して本システムに入ることができ、登録される。追跡可能な患者情報のシステム内における登録及び取得時に、患者固有の識別子（ＣＯＩ番号）が本システムによって患者に割り当てられてもよい。上記患者固有の識別子の割り当てにより、切除日及び製造スロットの計画立案が可能になる。

【1061】

本システム内での製造スロットの計画立案により、細胞注文書の作成及び製造施設におけるロット番号の割り当てがトリガーされる。

【1062】

腫瘍切除の前に、臨床施設は本システムにアクセスし、正しい患者識別を確認し、腫瘍ボトルラベル及び腫瘍荷主ラベルを作成してもよい。上記ラベルは、細胞注文識別子に加えて患者固有の識別子を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、患者固有の識別子は、細胞注文識別子内のフィールドであってもよい。

【1063】

追跡モジュール１１２において、腫瘍切除に続いてｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙが開始される。次いで、ラベル表示された腫瘍ボトルが出荷部門に預けられ、配送業者に引き渡されて製造施設に輸送される。システム３００に統合された配送業者のシステムにおいて、配送業者が荷主ラベル上の細胞注文番号が発送注文書の細胞注文番号と一致することを検証することから、ｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙが継続し、それによって、治療センターと製造施設との間の腫瘍のリアルタイムでの追跡が行われる。

【1064】

配送業者への腫瘍の送達時に、本システム内で送達の証明が行われてもよい。腫瘍を受け入れたところで、製造担当者は、製造モジュール１４０においてＣＯＣ／ＣＯＩモジュール１４４を介してシステムに製造ロット番号を入力する。患者記録（製造調整モジュール１１８を介して利用可能になっている）をプルアップし、腫瘍ボトルのラベルがシステム中に読み取られ、患者固有の識別子が製造ロット番号に関連付けられていることを検証する。検証されたところで、ＣＯＣは製造施設に引き渡される。

【1065】

製造施設の職員が本システムに入ってもよく、本システムでは、ラベル表示モジュール１４２によって、細胞注文を含む仕掛品（ＷＩＰ）ラベルの作成が可能になる。事後の記録の監査を容易にするために、上記ＷＩＰラベルは、バッチ記録に添付され、且つ細胞培養フラスコに貼付されてもよい。図３Ｇは一実施形態に係るＷＩＰラベルの代表的な画像である。図３Ｈは、一実施形態に係る異なるＷＩＰ型のラベル及びそれぞれの型のラベルに含まれる情報を示す。

【1066】

次に、製造担当者は、製造プロセス中の重要な移行ポイントでラベルを読み取って、細胞増殖フラスコ上の細胞注文識別子番号がバッチ記録と一致することを検証し、製造プロセス全体にわたってＣＯＩが維持されることを保証する。

【1067】

さらに、各品質管理（ＱＣ）試料は、得られた結果がその後対応するバッチ記録にリンクされることを保証するように、ＣＯＩ番号を含むそれ自体のラベルを有することになる。製造プロセスが完了したところで、ラベル表示モジュール１４２は完成した製品用のラベルを作成してもよい。図３Ｉ及び３Ｊは完成した製品用のラベルの例である。

【1068】

図３Ｉ及び３Ｊに示すように、これらの完成した製品用のラベルには、氏名３５４、生年月日（ＤＯＢ）３５６、及び患者固有の識別子３５２を含む独自の患者ＩＤが含まれる。完成した製品用のラベルは最終製品に貼付され、バッチ記録とラベルの両方が読み取られて、製造施設内のＣＯＩ及び完全なｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙを保証する。

【1069】

完成した製品は、一致する患者固有の識別子を含む同一の細胞注文識別子と共に出荷部門に預けられ、検証され、配送業者に移され、治療センターに送達されて、注入される。次いで配送業者は、輸送容器上の細胞注文識別子及び患者固有の識別子が、ロジスティックスインターフェース１３０を介して受信した配送業者のシステム中の細胞注文及び患者情報と一致することを検証し、それによって、製造施設と治療センター間のそれぞれの医薬製品ロットの略リアルタイムでの追跡を行ってもよい。この時点で、ＣＯＣは製造施設から配送業者に移転される。

【1070】

配送業者は完成した製品を治療センターに配送し、患者への注入が行われる。配送業者は、ロジスティックスインターフェース１３０を介して配達証明（ＰＯＤ）を開始してもよく、ＣＯＣが配送業者から治療センターに引き渡される。ＣＯＩは、治療センターにおける上記製品の患者への注入をもって終了する。

【1071】

本明細書で論じるように、各処理ステップの後に、病院側インターフェース１１０、イベントスケジューラ１２０、製造ポータル１４０、及びロジスティックスインターフェース１３０の間で患者固有の識別子を通信することにより、全ての関係者（例えば、臨床施設、製造施設、及びロジスティックスプロバイダ）は、当該生物学的材料のｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙならびにｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙの記録を受信し、且つ該生物学的材料が経てきたさまざまなプロセスステップの記録も受信する。

【1072】

したがって、ラベルを介して固形腫瘍に与えられる患者固有の識別子及び細胞注文により、患者の安全ならびに規制遵守（ＦＤＡ監査など）のために必要なｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙを維持するように、出荷の追跡が可能になる。

【1073】

２．製造プロセスが変更される場合のラベルの調整
固形腫瘍が製造施設で受け入れられたところで、細胞療法製剤の製造が細胞注文に従って開始される。例えば、固形腫瘍の少なくとも一部を、細胞増殖技法を使用して細胞療法製剤を製造するために使用することができる。

【1074】

いくつかの実施形態において、製造施設に関連するコンピュータサブシステム、例えばラベル表示モジュール１４２は、第２のラベルを、細胞増殖に使用される固形腫瘍の一部に関連付けるように印刷させてもよい。第２のラベルは、患者固有の識別子及び細胞注文識別子を含んでいてもよい。第２のラベルにより、ｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙを維持するための細胞療法製剤の追跡が更に可能になる。

【1075】

続いて、細胞療法製剤の製造中に、さまざまな時点で製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが測定される。次いで、上記受け入れパラメータが受け入れ判定モジュール１２３で比較されて、特定の時点で測定された上記受け入れパラメータが、対応する時点での受け入れ基準を満たすかどうかを判定する。上記受け入れパラメータは、本明細書に開示される任意且つ適宜の方法またはプロセスによって測定することができる。さらに、上記受け入れ基準は、本明細書に開示される任意の受け入れ基準であってよい。

【1076】

いくつかの実施形態において、上記受け入れパラメータの測定結果、及び該受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たすかどうかは、本明細書の他所で開示するように、細胞注文識別子に付加されてもよい。いくつかの実施形態において、上記受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たすか（または満たさないか）の判定結果に基づいて、第３のラベルがされてもよい。

【1077】

例えば、第２の時点での受け入れパラメータが第２の時点での受け入れ基準を満たさない場合には、第３のラベルは、製造プロセス中に使用される容器用に、第２時点での受け入れパラメータが第２の時点での受け入れ基準を満たさないとの情報、及び第２の時点での受け入れ基準が満たされない理由を伝達するための「理由コード」を含むように作成される。

【1078】

さらに、第２の時点で得られた細胞療法製剤を、第２の時点での受け入れ基準を満たす細胞療法製剤を適切に得るために、第２の時点よりも前の第１の時点から再処理してもよいと判定された場合、第３のラベルは、例えば、本明細書の他所で開示される新たなまたは更新された細胞注文識別子などの情報を含んでいてもよい。かかる場合には、第３のラベルは、第２の時点での受け入れ基準が満たされない理由、及び当該細胞療法製剤を第１の時点から再処理することが適切である理由に関する情報を伝達するための「理由コード」をさらに含んでいてもよい。

【1079】

次に、受け入れ判定モジュール１２３において判定される、１つ以上の時点での受け入れ基準が満たされるかどうかに基づき、細胞療法製剤の製造に関する製造スケジュールが適宜に修正されて、本明細書の他所において論じられる更新された製造スケジュールを作成する。さらに、当該製造施設における製造スロットの利用可能性も、細胞療法製剤の製造の現在のスケジュールの変更（変更がある場合）を反映するように、適宜に修正される。次いで、当該製造施設における製造スロットの利用可能性の変更または更新が、計算装置に通信されてもよい。さらに、患者の治療イベントの仮スケジュールも、更新された製造スケジュールに基づいて修正される場合があり、患者の治療イベントの更新されたスケジュールが計算装置に通信されてもよい。

【1080】

次いで、上記更新された製造スケジュールに従って、細胞療法製剤の製造が完了する。

【1081】

いくつかの実施形態において、受け入れパラメータが測定される複数の時点のそれぞれに対応する製造ラベルが作成される。それぞれの時点における製造ラベルは、製造された細胞療法製剤の品質に関連する更新された情報を含んでいてもよい。上記更新された情報は、対応する時点での受け入れパラメータ、及び／または上記受け入れパラメータがその時点における受け入れ基準を満たすかどうかを含んでいてもよい。

【1082】

さらに、いくつかの実施形態において、製造プロセスを制御するコントローラは、更新された製造ラベルを読取り、その後の処理ステップを決定するように構成されてもよい。例えば、第２の時点でのＱＡ試験後の更新された製造ラベルが、細胞療法製剤が特定の受け入れ基準を満たしていないことを示しているが、細胞療法製剤が第１の時点から再処理されてもよい場合に、上記コントローラは製造プロセスの適宜の変更を行ってもよい。さらに、更新されたラベルの情報に基づいて、製造スケジュール、製造スロットの利用可能性、及び患者の治療イベントのスケジュールに対する適宜の変更も行われる。当業者であれば、上記更新された製造ラベルは、製造された細胞療法製剤の品質に関する情報ならびにｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙを容易にするための理由コードに加えて、細胞注文識別子及び患者固有の識別子を含んでいてもよいことを理解しよう。

【1083】

当業者であれば、上記更新された製造ラベルを読取ることから得られる、製造スケジュール、製造スロットの利用可能性、及び患者の治療イベントのスケジュールの変更に関する情報が、病院側インターフェース及びロジスティックスインターフェースに通信されて、対応する計算装置が、それらのエンティティに関連するそれぞれのスケジュールに対応する変更を行うことを可能にする。

【1084】

Ｄ．細胞療法製剤の製造と患者の治療イベントとの調整
図４Ａ及び４Ｂは、本開示の実施形態に係る、ある患者向けのＴＩＬの製造の調整方法のフローチャートを示す。いくつかの実施形態において、図４Ａ及び４Ｂに示す方法は、全体として図３Ａに示すシステム上で実行されるが、いくつかの実施形態において、図４Ａ及び４Ｂに示す方法は、図３Ａに示すシステムの一部によって実行される。いくつかの実施形態において、イベントスケジューラ１２０は、例えば、Ｓ３０５で、病院側インターフェース１１０から、上記患者向けに細胞療法製剤、例えばＴ細胞を増殖させるための細胞注文、及び細胞注文に関連する患者固有の識別子を受信する。

【1085】

いくつかの実施形態において、患者固有の識別子またはそれに代えて細胞注文識別子は、追跡モジュール１１２ではなく、例えばＳ３１０において、イベントスケジューラ１２０によって作成される。

【1086】

細胞注文は、例えば、患者識別情報、さまざまな患者の治療イベントの目標日、及び／または最終的な増殖ＴＩＬ製造製品の目標パラメータなどの情報を含んでいてもよい。細胞注文が受信されたところで、イベントスケジューラ１２０は、患者固有の識別子に対応する細胞注文が受信されたことを示す確認を病院側インターフェース１１０に送信してもよい。患者固有の識別子がイベントスケジューラ１２０によって作成される実施形態において、イベントスケジューラ１２０は、上記患者向けの細胞注文が受信されたことを示す確認を送信し、患者固有の識別子または細胞注文識別子を病院側インターフェース１１０に提供してもよい。さらに、イベントスケジューラ１２０は、受信した細胞注文に基づく患者の治療イベントの目標スケジュールを送信してもよい。

【1087】

さらに、イベントスケジューラ１２０は、患者固有の識別子を含む開始依頼を、例えば、Ｓ３１５において、病院側インターフェース１１０に、例えば、臨床施設に送信して、患者に対する処置を実施して、該患者から固形腫瘍を得て、取得した固形腫瘍を製造施設に移送する配送業者の回収時間を計画立案する。本明細書で論じるように、上記処置としては、患者から腫瘍の一部を取り出すための腫瘍生検が挙げることができるが、これに限定はされない。いくつかの実施形態において、イベントスケジューラ１２０は、病院側インターフェース１１０を使用して従業員から処置日を受信してもよい。これに呼応して、イベントスケジューラ１２０は、必要に応じて、上記従業員に用品（例えば、腫瘍切除キット、需要輸送容器、または冷凍輸送容器）を注文し、且つ該用品を患者固有の識別子と関連付けするように促してもよい。

【1088】

固形腫瘍を得るための処置が実施され、例えばＳ３２０で上記固形腫瘍が出荷された後、且つ上記得られた固形腫瘍が製造施設で受け入れられたところで、計画立案モジュール１２５は、例えばＳ３２５で、さまざまな製造イベントならびにさまざまな患者の治療イベントを動的に計画立案し、且つ各イベントを患者固有の識別子と関連付ける。いくつかの実施形態において、計画立案モジュール１２５は、得られた固形腫瘍を受け取る前、例えば、病院側インターフェース１１０から、患者から固形腫瘍を得るための処置の計画立案に関する情報を受信したときなどに、製造イベント及び患者の治療イベントのスケジュールを決定し、且つ各イベントを患者固有の識別子と関連付ける。

【1089】

さまざまな製造イベントのスケジュールが患者固有の識別子に関連付けられ、且つ上記スケジュールは、対応する、さまざまな製造ステップ（例えば、図２Ａ、２Ｂ、もしくは２Ｃ及び／または図９に示すステップＡ～Ｆ）が実施される目標日、ならびに対応するＴＩＬ製造プロセス完了の目標日を含んでいてもよい。本明細書で論じるように、さまざまな製造ステップの目標日は、受け入れた腫瘍のサイズ、所与のステップを開始する前の細胞数、所与のステップの終了時の細胞数の倍率、所与のステップの間に特定の細胞数の倍率を達成するのに要する日数、及び／またはその他の因子などの因子に依存する場合がある。

【1090】

さまざまな患者の治療イベントのスケジュールは、患者固有の識別子に関連するさまざまな患者の治療イベントの目標日、例えば、ＴＩＬ注入の目標日、リンパ球除去日、入院期間、ＩＬ－２注入レジメンのスケジュール、及び／またはその他の類似の治療関連の日付などを含んでいてもよい。本明細書で論じるように、患者の治療イベントのスケジュールは、製造イベントのスケジュール、特にＴＩＬの製造完了日に依存する。いくつかの実施形態において、さまざまな患者の治療イベントのスケジュールが、患者固有の識別子と共に病院側インターフェース１１０に送信されてもよい。

【1091】

計画立案モジュール１２５は、種々の製造ステップの進行及び成否に基づいて製造イベントのスケジュールならびに患者の治療イベントのスケジュールを動的に変更するように構成される。例えば、種々のステップにおける増殖細胞療法製剤に関連する受け入れパラメータが特定の受け入れ基準を満たすかどうかに応じて、後続の製造ステップを開始する日を変更する必要があり、それによって今度は目標完了日が変更され、結果として、患者の治療イベントの日が、例えば、図４Ｂまたは４Ｃに示す方法を使用して変更する必要が生じる。

【1092】

受け入れ判定モジュール１２３は、増殖細胞療法製剤に関連する受け入れパラメータが特定の受け入れ基準を満たすかどうかを判定する。受け入れパラメータとしては、細胞数、細胞生存率、無菌性、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ数、ＣＤ３数、ＣＤ５数、インターフェロンγ（ＩＮＦ－γ）産生、エンドトキシンアッセイの結果、グラム染色アッセイの結果等が挙げられるが、これらに限定はされない。これらの受け入れパラメータの一部または全ては、当該受け入れパラメータが測定されるステップに応じて、受け入れ基準を満たす必要がある場合がある。例えば、プライミングである第１の増殖の終了時（本明細書では第１の時点とも呼ばれる）、例えば、増殖の開始から１１日目において、受け入れ基準は、細胞数が少なくとも５×１０^６生存細胞である必要があることである場合がある。種々のステップにおける受け入れ基準は、増殖を実施するために使用されるプロセス（例えば、Ｇｅｎ ２、Ｇｅｎ ３、Ｇｅｎ ３．１など）にも依存する。

【1093】

したがって、受け入れ判定モジュール１２３は、受け入れパラメータが、増殖を実施するために使用されるプロセスに応じて、増殖開始後の２つ以上の異なる時点で特定の受け入れ基準を満たすかどうかを判定してもよい。換言すれば、受け入れ判定モジュール１２３が、本明細書においてＱＡ試験とも呼ばれる品質試験を、異なる指定された時点のそれぞれで実施して次の活動指針を決定し、且つ計画立案モジュール１２５が、受け入れ判定モジュール１２３から得られたＱＡ試験の結果に基づいて、後続の製造ステップ及び患者の治療イベントを動的に計画立案する。

【1094】

Ｇｅｎ ２、Ｇｅｎ ２様、及びＧｅｎ ３プロセスの最終製品試験の受け入れパラメータ及び受け入れ基準の一例を表Ｂに示す。

【1095】

【表20】

【1096】

図４Ｂを参照すると、一実施形態において、細胞療法製剤の増殖の開始に続いて、受け入れ判定モジュール１２３は、例えばＳ４０２で、第１の時点の増殖細胞療法製剤が、第１の時点（例えば、図２Ａ及び／または図９に示すステップＢの後）に関連するＱＡ試験に合格するかどうかを判定する。例えばＳ４０４で、細胞がＱＡ試験に合格しないとの判定に際して、受け入れ判定モジュール１２３は、汚染に起因して細胞がＱＡ試験に合格しないかどうかを判定する。汚染に起因して細胞がＱＡ試験に合格しなかった場合、例えばＳ４２２で、当該ケースは中止の可能性について検討が行われる。

【1097】

一方、汚染以外の理由、例えば、細胞数が少ないまたは生存率が低いなどの理由で細胞がＱＡ試験に合格しなかった場合、計画立案モジュール１２５は、例えばＳ４０８で、進行中のステップを細胞がＱＡ試験に合格しなかった理由に応じた時間延長し、且つ最終的な回収の結果を検討してもよい。いくつかの実施形態において、進行中のステップをある時間延長した結果として、後続の全ての製造ステップ及び患者の治療イベントが計画変更されてもよい。

【1098】

あるいは、計画立案モジュール１２５は、製造プロセスの完了が可能性として遅延することを考慮して、または製造された細胞療法製剤を可能性として低温凍結することを考慮して、製造の完了から細胞療法製剤の注入までの間の遅れを許容するように、患者の治療イベントのみを計画変更してもよい。いくつかの実施形態において、細胞療法製剤は患者のＴ細胞を含むことが理解されよう。いくつかの実施形態において、細胞療法製剤は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む。したがって、本明細書における議論において、簡潔にすることを目的に、細胞療法製剤を同義でＴ細胞またはＴＩＬと呼ぶ場合がある。

【1099】

例えば、場合により、細胞療法製剤は、第１の時点でＱＡ試験に合格しなかったにもかかわらず、最終ＱＡ試験に合格する場合がある。かかる場合には、製造イベント及び患者の治療イベントの理想的なスケジュールから逸脱し、不必要な患者の治療を回避するように、最終的なＱＡ試験が実施されるまでリンパ除去を遅らせることが賢明な場合がある。したがって、細胞が第１の時点でＱＡ試験に合格しなかった理由に応じて、Ｓ４１８で、患者の治療イベントのスケジュールが患者の治療イベントの理想的なスケジュールから逸脱する必要があるかどうかが判定される。患者の治療イベントのスケジュールが理想的なスケジュールから逸脱する必要があるとの判定に際して、計画立案モジュール１２５は、例えばＳ４２０で、リンパ球除去ならびに後続の患者の治療イベントを計画変更しても（すなわち遅延させても）よく、さらに任意選択で、製造プロセスの完了に続いて低温凍結ステップを計画立案してもよい。

【1100】

再度Ｓ４０２を参照すると、細胞が第１の時点でＱＡ試験に合格する場合、製造プロセスまたは患者の治療イベントのスケジュールに対する変更は必要ない。次いで、受け入れ判定モジュール１２３は、例えばＳ４０６で、第２の時点における増殖Ｔ細胞が第２の時点（例えば、図２Ａ及び／もしくは図９に示すステップＣまたはステップＤの後）に関連するＱＡ試験に合格するかどうかを判定する。

【1101】

第２の時点で細胞がＱＡ試験に合格しない場合、受け入れ判定モジュール１２３は、例えばＳ４０４で、細胞が汚染に起因してＱＡ試験に合格しなかったかどうかを判定する。細胞が汚染に起因してＱＡ試験に合格しなかった場合には、例えばＳ４２２で、当該ケースは中止の可能性について検討が行われる。

【1102】

一方、汚染以外の理由、例えば、細胞数が少ないまたは生存率が低いなどの理由で細胞がＱＡ試験に合格しなかった場合、計画立案モジュール１２５は、例えばＳ４０８で、進行中のステップを細胞がＱＡ試験に合格しなかった理由に応じた時間延長し、且つ最終的な回収の結果を検討してもよい。いくつかの実施形態において、進行中のステップをある時間延長した結果として、後続の全ての製造ステップ及び患者の治療イベントが計画変更されてもよい。

【1103】

あるいは、計画立案モジュール１２５は、製造プロセスの完了が可能性として遅延することを考慮して、または製造されたＴＩＬを可能性として低温凍結することを考慮して、製造の完了からＴＩＬの注入までの間の遅れを許容するように、患者の治療イベントのみを計画変更する。

【1104】

例えば、場合により、細胞は、第２の時点でＱＡ試験に合格しなかったにもかかわらず、最終ＱＡ試験に合格する場合がある。かかる場合には、患者の治療イベントの理想的な事前に決定されたスケジュール（本明細書ではゴールデンパスの（ｏｆ ｔｈｅ ｇｏｌｄｅｎ ｐａｔｈ）とも呼ばれる）から逸脱し、不必要な患者の治療を回避するように、最終的なＱＡ試験が実施されるまでリンパ除去を遅らせることが賢明な場合がある。したがって、細胞が第２の時点でＱＡ試験に合格しなかった理由に応じて、計画立案モジュール１２５が、例えばＳ４２０で、リンパ球除去ならびに後続の患者の治療イベントを計画変更しても（すなわち遅延させても）よく、製造プロセスの完了に続いて低温凍結ステップをさらに計画立案してもよい。

【1105】

いくつかの実施形態において、細胞が第１または第２の時点でＱＡ試験に不合格になる場合には、患者固有の識別子は、細胞がそれぞれの時点でＱＡ試験に不合格になったことを識別するように更新されてもよく、病院側インターフェース１１０及びロジスティックインターフェース１３０に、当該患者に対する患者の治療イベント（患者固有の識別子に関連する）をキャンセルするまたは遅らせる必要がある可能性があることが通知される。患者の治療イベントのスケジュールが事前に決定されたスケジュール（例えば、ゴールデンパススケジュール）から逸脱しており、且つ患者の治療イベントが計画変更されている場合、病院側インターフェース１１０及びロジスティックスインターフェース１３０に、患者固有の識別子に対応するスケジュールが更新されたことことが通知され、且つ上記更新されたスケジュールが病院側インターフェース１１０及びロジスティックスインターフェース１３０に通信される。

【1106】

かかる通知により、臨床施設または病院は、患者の治療イベントのさまざまなスケジュールを適宜に調整し、ならびに適切な人員の利用可能性、及びそれぞれの患者の治療イベントに必要な施設と機器の利用可能性に関連する必要なロジスティックスの手配を行うことが可能になる。上記通知によって、病院または臨床施設が患者の治療イベントのスケジュールの変更を患者に知らせることがさらに容易になる場合がある。あるいは、イベントスケジューラ１２０及び／または病院側インターフェース１１０は、当該患者と直接通信して、患者の治療イベントのスケジュールの変更を患者に通知し、該患者が、変更されたスケジュールに従って患者の治療イベントを手配することに関して、病院または臨床施設と調製することを可能にしてもよい。

【1107】

いくつかの実施形態において、病院側インターフェース１１０は、支払いを処理するための適宜の措置が講じられるように、更新されたスケジュールを保険提供者にさらに通信してもよい。

【1108】

同様に、上記通知により、ロジスティックスプロバイダ（複数可）は、例えば、適宜の配送ボックスの手配、及び生物学的材料を取り扱うための適切な人員の利用可能性などの、生物学的材料の出荷の計画変更のための必要な手配を行ってもよい。

【1109】

再度Ｓ４０６を参照すると、細胞が第２の時点でのＱＡ試験に合格する場合、計画立案モジュール１２５は、患者の治療イベントのスケジュールを維持してもよい。例えば、いくつかの実施形態において、計画立案モジュール１２５は、例えばＳ４１０で、病院側インターフェース１１０に、事前に決定されたスケジュールに基づいて患者にリンパ球除去処置を施すことができるという通信を、製造プロセスがなおも遅れる場合、または目的の最終製品が得られない場合の、低いがゼロではない確率が存在するとの注意と共に行ってもよい。かかる通信は、図４Ｂでは「リスクを伴うリンパ球除去」と呼んでいる。かかる状況では、製造プロセスまたは患者の治療イベントのスケジュールに変更は行われない。

【1110】

次に、受け入れ判定モジュール１２３は、例えばＳ４１２で、第３の時点における増殖Ｔ細胞が第３の時点（例えば、図２Ａ及び／もしくは図９に示すステップＤまたはステップＥの後）に関連するＱＡ試験に合格するかどうかを判定する。

【1111】

細胞が第３の時点のＱＡ試験に合格する場合には、増殖細胞は、目標のＴＩＬ注入日に製品出荷の準備ができていると見なされる。かかる場合には、計画立案モジュール１２５は、例えばＳ４２４で、病院側インターフェース１１０に、患者の治療イベントが目標スケジュールで継続されることを通知する。換言すれば、スケジュールの変更はない。

【1112】

一方、細胞が第３の時点のＱＡ試験に合格しない場合には、例えばＳ４１４で、製品影響評価が（例えば、治療を施す医師または最高医療責任者によって）実施され、第３の時点のＱＡ試験に合格しなかった理由に応じて、当該増殖細胞を注入用に提供することができるか、または治療を中止するかを判定する。上記製品影響評価時に、例えばＳ４１６で、利用可能な製品による治療を継続することに関連する特定のリスクが存在する可能性があるとの注意を払って治療を進めることができると判断される場合には、例えばＳ４２４で、患者の治療イベントのスケジュールを何ら変更することなく、当該増殖細胞の出荷が承認される。

【1113】

図４Ｃを参照すると、一実施形態において、細胞療法製剤の増殖の開始に続いて、受け入れ判定モジュール１２３は、例えばＳ４０２で、増殖細胞療法製剤が第１の時点で、第１の時点（例えば、図２Ａ及び／または図９に示すステップＢの後）に関連するＱＡ試験に合格するかどうかを判定する。例えばＳ４０４での、細胞が第１の時点でＱＡ試験に合格しないとの判定に際し、受け入れ判定モジュール１２３は、細胞が汚染に起因してＱＡ試験に合格しなかったのかどうかを判定する。細胞が汚染に起因してＱＡ試験に合格しなかった場合には、例えばＳ４２２で、当該ケースは中止の可能性について検討が行われる。

【1114】

一方、汚染以外の理由、例えば、細胞数が少ないまたは生存率が低いなどの理由で細胞がＱＡ試験に合格しなかった場合、計画立案モジュール１２５は、例えばＳ４０８で、進行中のステップを細胞がＱＡ試験に合格しなかった理由に応じた時間延長し、且つ最終的な回収の結果を検討してもよい。いくつかの実施形態において、進行中のステップをある時間延長した結果として、後続の全ての製造ステップ及び患者の治療イベントが計画変更されてもよい。

【1115】

Ｓ４０２を再度参照すると、細胞が第１の時点でＱＡ試験に合格する場合、製造プロセスのスケジュールまたは患者の治療イベントの変更は行われない。次いで、受け入れ判定モジュール１２３は、例えば、Ｓ４０６で、第２の時点における増殖Ｔ細胞が、第２の時点（例えば、図２Ａ及び／もしくは図９に示すステップＣまたはステップＤの後）に関連するＱＡ試験に合格するかどうかを判定する。

【1116】

細胞が第２の時点でＱＡ試験に合格しない場合には、受け入れ判定モジュール１２３は、例えばＳ４０４’で、細胞が汚染に起因してＱＡ試験に合格しなかったのかどうかを判定する。細胞が汚染に起因してＱＡ試験に合格しなかった場合には、例えばＳ４２２で、当該ケースは中止の可能性について検討が行われる。

【1117】

一方、汚染以外の理由、例えば、細胞数が少ないまたは生存率が低いなどの理由で細胞がＱＡ試験に合格しなかった場合には、受け入れ判定モジュール１２３は、例えばＳ４５８で、第２の時点で得られた細胞療法製剤が、第１の時点から細胞製造プロセスを再実施して、第２の時点における受け入れ基準を満たす受け入れパラメータを有する第２の時点での細胞療法製剤を得ることが可能であるのに十分な品質の製剤であるかどうかを判定する。かかる判定は、第２の時点で得られた細胞療法製剤の受け入れパラメータに基づいて行うことができる。例として、第２の時点での受け入れパラメータが、第２の時点での総生細胞数を除く全ての受け入れ基準を満たす場合には、第１の時点と第２の時点の間の細胞製造プロセスを再実施して、必要な生細胞数を得ることが実行可能である可能性がある。

【1118】

第１の時点からのセル製造プロセスの再実施が実行可能でないと判断される場合には、例えばＳ４２２で、当該ケースは中止の可能性について検討が行われる。

【1119】

一方、第１の時点と第２の時点との間の細胞製造プロセスの再実施が実行可能であると判定される場合には、計画立案モジュール１２５が、例えばＳ４６０で、上記第１の時点と第２の時点との間のプロセスの再実施後の細胞製造プロセスの完了時間を推定する。第１の時点と第２の時点との間で細胞製造プロセスを再実施するのに必要な時間は、第２の時点で得られた細胞療法製剤の受け入れパラメータに基づいて推定することができることが理解されよう。したがって、第１の時点からのプロセスの再実施を含む、本細胞増殖プロセスを完了するのに必要な時間は、第２の時点で得られた細胞療法製剤の受け入れパラメータに依存する可能性がある。

【1120】

次いで、計画立案モジュール１２５は、第２の時点で得られた細胞療法製剤の受け入れパラメータに基づいて、第１の時点から細胞製造プロセスを再実施した結果として、後続の全ての製造ステップ及び患者の治療イベントを計画変更してもよい。例えば、計画立案モジュール１２５は、製造プロセスの完了が遅延することを考慮して、または製造されたＴＩＬを可能性として低温凍結することを考慮して、製造の完了からＴＩＬの注入までの間の遅れを許容するように、患者の治療イベントのみを計画変更してもよい。

【1121】

一方、第２の時点で得られた細胞療法製剤の受け入れパラメータが全ての受け入れ基準を満たす場合には、細胞製造プロセスは当初計画された通りに継続することができる。

【1122】

当業者であれば、かかる再実施が実行可能であるとの判定に際して、第１の時点から細胞製造プロセスを再実施した後も更に、繰り返された第２の時点（本明細書では新たな第２の時点とも呼ばれる）で得られる細胞療法製剤の受け入れパラメータが測定されることを理解しよう。次いで、第２の時点を過ぎて細胞製造プロセスを継続する前に、上記繰り返された第２の時点における受け入れパラメータ（本細胞製造プロセスにおける当初の第２の時点とは異なる可能性がある）が、第２の時点の受け入れ基準を満たすかどうかが再度判定される。

【1123】

次に、いくつかの実施形態において、継続されるプロセスは、図４Ｂに示されるものと同一の経路「Ｂ」をたどる。例えば、場合により、細胞は、第２の時点でＱＡ試験に合格しなかったにもかかわらず、最終ＱＡ試験に合格する場合がある。かかる場合には、患者の治療イベントの理想的な事前に決定されたスケジュール（本明細書ではゴールデンパスのとも呼ばれる）から逸脱し、不必要な患者の治療を回避するように、最終的なＱＡ試験が実施されるまでリンパ除去を遅らせることが賢明な場合がある。したがって、細胞が第２の時点でＱＡ試験に合格しなかった理由に応じて、計画立案モジュール１２５が、例えばＳ４２０で、リンパ球除去ならびに後続の患者の治療イベントを計画変更しても（すなわち遅延させても）よく、製造プロセスの完了に続いて低温凍結ステップをさらに計画立案してもよい。

【1124】

当業者であれば、細胞製造プロセスが受け入れパラメータを測定するためのいくつかの時点を有し、それらの受け入れパラメータがそれらの対応する時点における受け入れ基準を満たすかどうかを判定する場合、ステップを再実施することが実行可能である可能性があることを理解しよう。したがって、用語「第１の時点」及び「第２の時点」は、必ずしも受け入れパラメータが測定される数字上第１及び第２の時点を言い表すものではない。代わりに、上記「第１の時点」とは、細胞製造プロセス中の時点であって、その後の時点での受け入れパラメータが受け入れ基準を満たさない場合に、上記時点から細胞製造プロセスのステップを再実施することが実行可能である可能性がある上記時点を指す。例えば、１Ｃプロセス（図６を参照のこと）において、上記第１及び第２の時点は、それぞれ２７日目及び３０日目、それぞれ３０日目及び３６日目、またはそれぞれ３６日目及び４３日目であってよい。同様に、２Ａプロセス（図６を参照のこと）において、上記第１及び第２の時点は、それぞれ１１日目及び１６日目、またはそれぞれ１６日目及び２２日目であってよい。

【1125】

いくつかの実施形態において、細胞が第１または第２の時点でＱＡ試験に不合格になる場合には、患者固有の識別子は、細胞がそれぞれの時点でＱＡ試験に不合格になったことを識別するように更新されてもよく、病院側インターフェース１１０及びロジスティックインターフェース１３０に、当該患者に対する患者の治療イベント（患者固有の識別子に関連する）をキャンセルするまたは遅らせる必要がある可能性があることが通知される。

【1126】

第１の時点からの細胞製造プロセスの再実施が実行可能である場合、細胞療法製剤の製造スケジュールが理想的なスケジュールから逸脱する可能性があることから、患者の治療イベントのスケジュールも事前に決定されたスケジュール（例えば、ゴールデンパススケジュール）から逸脱する。したがって、計画立案モジュールは、患者の治療イベントを計画変更し、病院側インターフェース１１０及びロジスティックスインターフェース１３０に、患者固有の識別子に対応するスケジュールが更新されたことことが通知される。上記更新されたスケジュールは病院側インターフェース１１０及びロジスティックスインターフェース１３０に通信される。

【1127】

本明細書において論じるように、スケジュールの変更に関するかかる通知により、臨床施設または病院は、患者の治療イベントのさまざまなスケジュールを適宜に調整することが可能になる。さらに、適切な人員の利用可能性、及びそれぞれの患者の治療イベントに必要な施設と機器の利用可能性に関連する必要なロジスティックスの手配を行うことができる。上記通知によって、病院または臨床施設が患者の治療イベントのスケジュールの変更を患者に知らせることがさらに容易になる場合がある。あるいは、イベントスケジューラ１２０及び／または病院側インターフェース１１０は、当該患者と直接通信して、患者の治療イベントのスケジュールの変更を患者に通知し、該患者が、変更されたスケジュールに従って患者の治療イベントを手配することに関して、病院または臨床施設と調製することを可能にしてもよい。

【1128】

いくつかの実施形態において、病院側インターフェース１１０は、支払いを処理するための適宜の措置をとることができるように、更新されたスケジュールを保険提供者にさらに通信してもよい。

【1129】

同様に、上記通知により、ロジスティックスプロバイダ（複数可）は、例えば、適宜の配送ボックスの手配、及び生物学的材料を取り扱うための適切な人員の利用可能性などの、生物学的材料の出荷の計画変更のための必要な手配を行ってもよい。

【1130】

いくつかの実施形態において、治療が中止されない限り、計画立案モジュール１２５は、ロジスティックスインターフェース１３０と通信して、さまざまな時点でのＱＡ試験の結果に基づいて決定された完了日に基づいて集荷注文を提示する。次いでロジスティックスインターフェース１３０は、ロジスティックスプロバイダ（図示せず）と通信して、増殖ＴＩＬを適時に集荷して病院または臨床施設に出荷し、その後患者の治療（例えば注入）を行うために適宜の手配を行う。例えば、いくつかの実施形態において、ロジスティックスプロバイダは、計画立案された患者の治療イベントの一定の日数の前に、生物学的試料を取り扱うための専用容器を病院または臨床施設に出荷する必要がある場合がある。

【1131】

同様に、増殖細胞がＱＡ試験に合格すると判定される場合には、計画立案モジュール１２５は、計画立案された完了日及び患者の治療イベントのスケジュール（すなわち、更新されたスケジュール）を病院側インターフェース１１０に伝達する。一方、治療が中止されるべきであると判定される場合には、計画立案モジュール１２５は、治療が中止されるべきであることを病院側インターフェース１１０と通信する。

【1132】

いくつかの実施形態において、患者の治療イベントの計画変更に際して、患者の治療イベントの更新されたスケジュールが、関連する患者固有の識別子とともに病院側インターフェース１１０に送信される。

【1133】

いくつかの実施形態において、細胞製造プロセスのステップを第１の時点から再実施することが実行可能であると判定される場合には、細胞注文識別子と患者固有の識別子との間の関連付けが更新されてもよい。例えば、細胞療法製剤の増殖を第１の時点から再実施することが実行可能であるとの判定に際し、細胞注文識別子は患者固有の識別子から分離される。細胞注文に関連する新たな細胞注文識別子が作成されてもよく、且つ患者固有の識別子が該新たな細胞注文識別子に関連付けられる。上記新たな細胞注文識別子は、いくつかの実施形態において、第２の時点で測定された受け入れパラメータに基づいて作成することができる。上記細胞注文識別子は、いくつかの実施形態において、細胞療法製剤の受け入れパラメータが測定される各時点に対応するフィールドを含んでいてもよい。さらに、いくつかの実施形態において、上記細胞注文識別子は、例えば、どの受け入れパラメータが受け入れ基準を満たしているか、及び当該受け入れパラメータの値を含む、受け入れパラメータが受け入れ基準を満たしているかどうかの判定の結果も含んでいてよい。

【1134】

いくつかの実施形態において、患者固有の識別子、上記新たな細胞注文識別子、及び細胞療法製剤の増殖の推定完了時間が病院側インターフェースに送信され、病院側インターフェースが細胞療法製剤を追跡すること及び細胞療法製剤を患者に関連付けることが可能になる。

【1135】

細胞注文識別子に含まれるさまざまなフィールドが、計画立案モジュール１２５が、患者の治療イベントならびに、さまざまな時点で作成される更新されたまたは新たな細胞注文識別子に基づいて、患者の治療イベントに関連付けられる出荷イベント及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールを決定することを可能にしてもよい。次いで、上記新たなスケジュールが、関連する患者固有の識別子と共にロジスティックスインターフェースに送信される。患者固有の識別子及び更新されたまたは新たな細胞注文識別子はまた、いくつかの実施形態において、細胞療法製剤のｃｈａｉｎ ｏｆ ｃｕｓｔｏｄｙ及びｃｈａｉｎ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｔｙを維持するように、新たなスケジュールと共にロジスティックスインターフェースに送信されてもよい。

【1136】

いくつかの実施形態において、例えば、第２の時点での受け入れパラメータが受け入れ基準の特定の閾値を満たさないために、細胞製造プロセスのステップの再実施が実行可能でないと判定された場合には、第２の時点より後の患者の治療はキャンセルされてもよい。かかる実施形態において、上記患者の治療のキャンセルは、病院側インターフェース及びロジスティックスインターフェースに通信される。いくつかの実施形態において、増殖細胞療法製剤は、細胞製造プロセスのステップの再実施が実行可能でないと判定される際に処分されてもよい。例えば、生存可能な増殖細胞療法製剤の入手が可能ではない場合に、細胞製造プロセスのステップを再実施することができないと、細胞療法製剤の注入が不可能になる。したがって、第２の時点の後に患者の治療イベントを継続することは、（例えば、健康上の結果の観点から、または経済的結果の観点から、またはその両方の観点から）患者にとって有害である可能性がある。さらに、第２の時点で測定された受け入れパラメータに基づいて、第２の時点での増殖細胞療法製剤をさらに使用することができないと判定された場合（例えば、第２の時点での細胞療法製剤が汚染されているか、他の特定の受け入れ基準を満たさない場合）、細胞療法製剤は処分されてもよい。かかる場合には、細胞注文識別子は患者固有の識別子から分離される。

【1137】

Ｅ．製造施設間の製造スロットの調整
本開示のさらなる態様において、ある患者向けの細胞療法製剤の製造方法が開示される。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記患者向けの細胞療法製剤を製造するための細胞注文を受信することを含む。上記細胞注文は、臨床施設に関連する計算装置で受信されてもよい。上記細胞注文は、例えば病院側インターフェース１１０を介して受信されてもよい。いくつかの実施形態において、上記計算装置は、上記細胞注文を受信すると、患者固有の識別子及び細胞注文識別子を作成し、上記患者固有の識別子及び細胞注文識別子を上記細胞注文に関連付けてもよい。

【1138】

上記計算装置は、上記細胞注文に加えて、細胞療法製剤を製造するための複数の製造施設における製造スロットを受信してもよい。例えば、上記計算装置が、上記計算装置による問い合わせに応答した製造スロットに関する情報を受信することができるように、例えばインターネットを介して、複数の製造施設に関連するコンピュータサブシステムに通信可能に結合されていてもよい。それぞれの製造施設の製造スロットは、当該製造施設が細胞注文に従って細胞療法製剤を製造することが可能であるための、該製造施設における機器及び人員の利用可能性を示すことができる。

【1139】

上記計算装置は、細胞療法製剤によって当該の患者を治療するための、患者の治療イベントの仮スケジュールをさらに受信してもよい。上記仮スケジュールは、細胞療法製剤が、本明細書の他所で議論される製造プロセス中の各製造ステップにおけるＱＡ基準を満たすことを仮定した、細胞療法製剤を製造する理想的なスケジュールに基づいて決定されてもよい。

【1140】

細胞注文、製造スロット、及び患者の治療イベントの仮スケジュールを受信したところで、上記計算装置は、計画立案ユーザーインターフェースにおいて、患者の治療イベントの上記仮スケジュールに基づいて、細胞療法製剤を製造するための複数の利用可能な製造スロットを決定し、且つ表示してもよい。上記利用可能な製造スロットは、例えば、臨床施設の所在地、それぞれの製造施設の所在地、それぞれの製造施設と臨床施設との間で細胞療法製剤を輸送するためのロジスティックスプロバイダの利用可能性、患者の治療イベントに関連する必要な治療手順を実施するための、臨床施設における臨床職員の利用可能性、及びそれぞれの場所における細胞療法製剤の到着及び／または使用のタイミングに影響を与える可能性のあるいずれかの他の要因などの要因に基づいて決定される。

【1141】

次に、利用可能な製造スロットの１つが、計算装置を操作する者によって、または自動的に計算装置によって選択される。利用可能な製造スロットが選択されたところで、例えば医療施設において、適宜の処置を実施することにより、患者から固形腫瘍を得ることができる。上記処置は、仮スケジュールに従って、且つそれぞれの製造施設への固形腫瘍の出荷のタイミング及びロジスティックスプロバイダの利用可能性を考慮して、利用可能な製造スロットに基づいて実施することができる。いくつかの実施形態において、上記計算装置は、固形腫瘍に関連付けられる第１の荷主ラベル（例えば、図３Ｈの１行目を参照のこと）の印刷を開始してもよい。第１の荷主ラベルは、患者固有の識別子及び細胞注文識別子を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、第１のラベルは、臨床施設、選択された製造施設、及びロジスティックスプロバイダに関する情報をさらに含んでいてもよい。さらに、第１の製品ラベル（例えば、図３Ｈの２行目を参照のこと）が製品容器に関連付けられる。第１の製品ラベルの例を図３Ｇに示す。

【1142】

次いで、固形腫瘍は、当該製造スロットの利用可能性に従って、選択された製造施設に移送される。当業者であれば、固形腫瘍は生細胞を含むことから、選択された製造施設への固形腫瘍の到着のタイミングは、製造ステップを許容される時間枠で開始することができるように、当該製造スロットの利用可能性と慎重に調整される必要があることを理解しよう。したがって、臨床施設から選択された製造施設への固形腫瘍の移送は、ロジスティックプロバイダの利用可能性、ならびにかかる移送に影響を与える可能性のある他の要因に基づいて慎重に調整される必要がある。例えば、場合により、予期することが可能な天候に関係するまたは交通機関による遅延が生じる場合があり、したがって、それに応じて移送スケジュールが調整されてもよい。他の場合には、移送の遅延が予測できない場合もある。しかし、かかる場合であっても、臨床施設から選択された製造施設への固形腫瘍の移送は、他の適宜の方法で調整されてもよい。

【1143】

Ｆ．腫瘍入手プロトコル
再度図３Ａを参照すると、システム３００の病院側インターフェースは、臨床施設の職員が所定のプロトコルに従って患者から固形腫瘍を得て、患者から固形腫瘍を得るための手順に関する情報を入力することを可能にする腫瘍入手モジュール１１４を備える。

【1144】

いくつかの実施形態において、上記入手モジュール１１４は、患者から固形腫瘍（またはそのフラグメント）を得るプロセス、及び該固形腫瘍を製造施設へ輸送するために準備するプロセス中に適切な手順に従うことを保証するために、臨床施設の職員によって使用される腫瘍入手フォームを備える。図３Ｋ～３Ｐは、本開示のいくつかの実施形態に係る腫瘍入手フォームの代表的なスクリーンショットである。上記腫瘍入手フォームは、いくつかの実施形態において、患者から腫瘍を得る専門家が実施する手順に関する情報を入力することを求めてもよい。入力された情報は、必要に応じて事後監査のためのバッチ記録の更新に使用されてもよい。

【1145】

さらに、上記バッチ記録に含まれる情報は本システム全体でアクセス可能である（適切な許可を得て）ことから、腫瘍を得るために従うプロセスに関する情報は、製造施設の職員にも利用可能である。いくつかの実施形態において、製造施設の職員は、製造施設で受け入れた生物学的材料が、さらなる処理に適していることを保証するための品質管理手段として、腫瘍を得るためのプロセスに関連する情報にアクセスすることができる。

【1146】

いくつかの実施形態において、上記腫瘍入手フォームは、上記専門家がプロセスの次のステップに進むことができるようになる前に、特定の基準が満たされていることを求めるスマートフォーム機能を備える。例えば、上記専門家は、プロセス中に使用される細胞培養培地に関する、有効期限などの情報を入力することを求められてもよく、有効期限が現在の日付より前である場合には、腫瘍入手モジュール１１４が上記専門家に警告してもよい。さらに、腫瘍入手モジュール１１４は、上記専門家がプロセスに関するさらなる情報を入力することを許可しない場合があり、それにより上記専門家はプロセスを中止せざるを得なくなる。

【1147】

同様に、上記腫瘍入手フォームは、上記専門家が後続のステップまたは手順に関する情報を入力することを可能にする前に、特定のステップまたは手順を実施済みであることを求めてもよい。したがって、上記入手モジュール１１４は、上記専門家が特定のステップを抜かすまたはとばすことなく特定のプロトコルに従うことを求める。

【1148】

いくつかの実施形態において、上記入手モジュール１１４は、製造施設への輸送のために得られた腫瘍を配送業者に渡すことを可能にする前に、当該腫瘍入手フォームが検証されることを求めてもよい。この検証要件は、腫瘍を得る際に適切なプロトコル及び手順が確実に守られるようにするフェイルセーフとして機能する。いくつかの実施形態において、上記入手モジュール１１４は、腫瘍入手フォームを検証する人物が、腫瘍入手フォームに情報を入力する人物と同一でないことを求めてもよい。かかる検証要件により、適切な規制要件の遵守も保証される。

【1149】

Ｇ．患者支援サービス
本開示の実施形態は、移動、健康管理、健康保険、返済、及び他の治療関連サービスの支援において、患者または患者の代理人（本明細書では患者と総称する）とインターフェースで接続する患者支援サービスを可能にするように、さらに動作可能である。上記患者支援サービスは、いくつかの実施形態において、製造プロセス及びＣＯＣ／ＣＯＩプロセスにアクセス可能な（適切な許可を得て）電話インターフェース及びペルソナとインターフェース）とインターフェースで接続することができる。本明細書で使用される用語ペルソナとは、ユーザーの種類を指す。所与のペルソナには、本システム及び本システム内の情報への特定のレベルのアクセスが提供され、上記ペルソナは特定の機能にアクセスすることができる。本システム内のペルソナとしては、コミュニティペルソナ（Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ Ｐｅｒｓｏｎａ）、組織入手ペルソナ（Ｔｉｓｓｕｅ Ｐｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔ Ｐｅｒｓｏｎａ）、製造ペルソナ（Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒ Ｐｅｒｓｏｎａ）、患者支援ペルソナ（Ｐａｔｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｐｅｒｓｏｎａ）、患者ペルソナ（Ｐａｔｉｅｎｔ Ｐｅｒｓｏｎａ）、及び健康システムユーザーペルソナ（Ｈｅａｌｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ Ｕｓｅｒ ｐｅｒｓｏｎａ）が挙げられるが、これらに限定はされない。

【1150】

コミュニティペルソナは、患者に治療処置を提供するセンターの職員がアクセス可能なコミュニティユーザーに関連する。コミュニティペルソナのユーザーとしては、例えば、細胞療法コーディネータ、骨髄移植の看護師、病院の請求部門などが挙げられる。コミュニティペルソナのユーザーに関連する機能としては、新規患者の登録、患者の登録データの更新、患者向けのＴＩＬ注文依頼書の作成及び送信、切除日の計画立案または変更、ゴールデンパスの日付の表示、最終製品の配送日の表示、病院の注文書のアップロード、患者の同意書のアップロード、患者支援オプションへの患者の登録、介護者記録の表示及び更新、承認のための腫瘍入手フォームの記入及び提出、腫瘍入手フォームの承認、腫瘍入手フォームの印刷、腫瘍入手フォームのアップロード、ならびに培地ボトルラベル及び腫瘍荷主ラベルの印刷が挙げられるが、これらに限定はされない。

【1151】

製造ペルソナに関連するユーザーとしては、腫瘍受け入れ担当者、品質管理担当者、製造プロセス担当者、及び最終製品包装担当者が挙げられる。製造ペルソナに関連する機能としては、ロット番号の入力、利用可能な及び予約済みの製造スロットの表示、工程内ラベル、最終製品ラベル、及び出荷ラベルの印刷ならびに読み取りが挙げられるが、これらに限定はされない。

【1152】

腫瘍入手ペルソナに関連するユーザーとしては、例えば、外科医及び骨髄移植看護師が挙げられる。腫瘍入手ペルソナに関連する機能としては、腫瘍入手フォームの記入、承認のための腫瘍入手フォームの提出、腫瘍入手フォームの承認、腫瘍入手フォームの印刷、及び腫瘍入手フォームのアップロードを挙げることができるが、これらに限定はされない。

【1153】

患者支援ペルソナのユーザーとしては、患者支援担当者、患者カウンセラー、病院の請求部門管理者、病院の保険管理者などを挙げることができるが、これらに限定はされない。患者支援ペルソナに関連する機能としては、患者支援サービスのケースの表示、ケースへのファイルのアップロード、ケースへの注釈付け、ケースのケースマネージャーへの転送などを挙げることができるが、これらに限定はされない。

【1154】

本システムのいくつかの実施形態において、特定の種類の情報に特定のペルソナがアクセス可能である。いくつかの実施形態において、上記情報は、特定の種類の機能を実施する場合にのみ、特定のペルソナのユーザーがアクセス可能であり、他の種類の機能を実施する場合にはアクセス不可の場合がある。例えば、いくつかの実施形態において、ＣＯＣ／ＣＯＩ及び製造プロセスの情報は、患者支援ペルソナを介して病院の請求部門管理者及び／または病院の保険管理者がアクセス可能であってよいが、患者カウンセラーは閲覧不可である。いくつかの実施形態において、製造及びＣＯＣ／ＣＯＩの情報は、例えば、患者の治療イベントの計画立案、計画立案プロセスによる患者の支援、及び／または患者の治療イベントのための輸送での患者の支援の機能を実施する患者支援担当者が閲覧可能であってよいが、同担当者による編集は不可である。

【1155】

例えば、いくつかの実施形態において、患者の腫瘍から得られた細胞集団を細胞療法製剤へと増殖させることによる細胞療法製剤の製造方法は、
上記患者向けに上記細胞療法製剤を製造するための細胞注文に基づいて、製造施設において上記患者由来の細胞集団を受け入れることと、
計算装置によって、上記細胞注文に関連する細胞注文識別子を含む患者固有の識別子を作成することと、
上記細胞療法製剤を製造するためのプロセスであって、
上記製造施設において上記細胞集団を受け入れた後に、上記計算装置によって、患者の治療イベントを計画立案することと、
上記細胞集団の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して細胞療法製剤の増殖を開始すること、ならびに第１の時点及び上記第１の時点の後の第２の時点で上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することと、
上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが対応する時点に関連する受け入れ基準を満たすかどうかを判定することと、
上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、上記第１の時点における受け入れ基準を満たすとの判定に呼応して、得られた細胞療法製剤の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して、細胞療法製剤の増殖を上記第２の時点まで継続することと、
上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、上記第２の時点における受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、
上記細胞療法製剤の増殖を、上記細胞増殖技法を使用して上記第１の時点から再実施することが、上記第２の時点における受け入れパラメータに基づいて実現可能であるかどうかを判定することと、
上記再実施が実現可能であるとの判定に呼応して、上記第２の時点で得られた細胞療法製剤の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して細胞療法製剤の増殖を再実施して、細胞療法製剤を得ることと、
上記計算装置によって、上記第１の時点からの上記細胞療法製剤の増殖の再実施後の上記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることと、
上記計算装置によって、見積られた上記細胞療法製剤の増殖の完了時間及び上記患者における上記増殖細胞療法製剤の注入の前または後の患者の治療イベントのタイミングに基づいて、上記患者の治療イベントを計画変更すること、及び後続の、上記第１の時点からの細胞療法製剤の増殖を完了することと、
を含む上記プロセスを開始することと、
例えば、移動、健康管理、健康保険、返済、及び他の治療関連サービスの支援などの患者支援サービスを提供することと
を含む。

【1156】

ＶＩ．その他の考慮事項

【1157】

上記に示す例は、本発明の組成物、システム及び方法の実施形態をどのように作成及び使用すればよいかについて当業者に完全な開示及び説明を付与するために提供され、本発明者らがその発明と見なすものの範囲を限定することは意図されない。当業者には明らかな本発明を実施するための上述の態様の変形例は、以下の特許請求の範囲内にあることが意図される。本明細書において言及される全ての特許及び刊行物は、本発明が関係する技術分野の当業者の技能水準の指標である。

【1158】

全ての見出し及びセクション表示は、明確にするために、且つあくまでも参考として使用され、いかなる形であっても限定するものと考えられてはならない。例えば、当業者は、異なる見出し及びセクションからの様々な態様を本明細書に記載される本発明の趣旨及び範囲に従い適宜組み合わせることの有用性を理解するであろう。

【1159】

本明細書に引用する全ての参考文献は、各個別の刊行物または特許または特許出願があらゆる目的から全体として参照により援用されると具体的且つ個別的に指示されたものとみなすのと同程度に、本明細書によって全体として及びあらゆる目的から参照により本明細書に援用される。

【1160】

当業者には明らかであろうとおり、本願の多くの改良及び変形をその趣旨及び範囲から逸脱することなく行うことができる。本明細書に記載される具体的な実施形態及び例は単に例として提供され、本願は、特許請求の範囲に認められる均等物の全範囲と共に、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ限定されるべきである。

【1161】

本開示の態様のさまざまな例が、便宜上番号付きの条項（１、２、３など）として記載される。これらは例として提示しており、本主題の技術を限定するものではない。図及び参照番号の識別を、単に例として且つ例証を目的として以下にきさいしており、上記条項はそれらの識別によって限定されない。

【1162】

第１項 患者の腫瘍から得られた細胞集団を細胞療法製剤へと増殖させることによる上記細胞療法製剤の製造方法であって、
上記患者向けに上記細胞療法製剤を製造するための細胞注文に基づいて、製造施設において上記患者由来の細胞集団を受け入れることと、
計算装置によって、上記細胞注文に関連する細胞注文識別子を含む患者固有の識別子を作成することと、
上記細胞療法製剤を製造するためのプロセスを開始することであり、上記プロセスが、
上記製造施設において上記細胞集団を受け入れた後に、上記計算装置によって、患者の治療イベントを計画立案することと、
上記細胞集団の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して上記細胞療法製剤の増殖を開始すること、ならびに第１の時点及び上記第１の時点の後の第２の時点で上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することと、
上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが対応する時点に関連する受け入れ基準を満たすかどうかを判定することと、
上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、上記第１の時点における受け入れ基準を満たすとの判定に呼応して、得られた細胞療法製剤の少なくとも一部から、上記細胞増殖技法を使用して、上記細胞療法製剤の増殖を上記第２の時点まで継続することと、
上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、上記第２の時点における受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、
上記細胞療法製剤の増殖を、上記細胞増殖技法を使用して上記第１の時点から再実施することが、上記第２の時点における受け入れパラメータに基づいて実現可能であるかどうかを判定することと、
上記再実施が実現可能であるとの判定に呼応して、上記第２の時点で得られた細胞療法製剤の少なくとも一部から、上記細胞増殖技法を使用して上記細胞療法製剤の増殖を再実施して、上記細胞療法製剤を得ることと、
上記計算装置によって、上記第１の時点からの上記細胞療法製剤の増殖の再実施後の上記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることと、
上記計算装置によって、見積られた上記細胞療法製剤の増殖の完了時間及び上記患者における上記増殖細胞療法製剤の注入の前または後の上記患者の治療イベントのタイミングに基づいて、上記患者の治療イベントを計画変更すること、及び後続の、上記第１の時点からの細胞療法製剤の増殖を完了することと
を含む上記プロセスを開始することと
を含む上記方法。

【1163】

第２項 上記細胞療法製剤がＴ細胞を含む、第１項に記載の方法。

【1164】

第３項 上記細胞療法製剤が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む、第１項に記載の方法。

【1165】

第４項 上記患者の治療イベントが、入院期間、切除日、リンパ球除去日、上記患者に上記細胞療法製剤を注入する注入日、及びＩＬ－２処置日のうちの１つ以上を含む、第１項に記載の方法。

【1166】

第５項 上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たすかどうかを判定することが、上記第１及び第２の時点を含む、上記得られた細胞療法製剤の増殖の開始後の複数の時点における、上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することを含む、第１項に記載の方法。

【1167】

第６項 上記患者の治療イベントを計画変更することが、上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、上記複数の時点のいずれにおいても上記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、上記患者の治療イベントを計画変更することを含む、第５項に記載の方法。

【1168】

第７項 上記患者の治療イベントを計画変更することが、上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、上記複数の時点のいずれにおいても上記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、上記患者の治療イベントを打ち切ることを含む、第５項に記載の方法。

【1169】

第８項 上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、上記複数の時点のいずれにおいても上記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、上記細胞療法製剤の後続の増殖を打ち切る、第５項に記載の方法。

【1170】

第９項 上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することが、生存率、無菌性、細胞数、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ数、ＣＤ３数、エンドトキシンアッセイの結果、及びグラム染色アッセイの結果のうちの１つ以上の測定を含む、第８項に記載の方法。

【1171】

第１０項 上記細胞増殖技法が急速増殖ステップを含み、
上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、上記急速増殖ステップの前の受け入れ基準を満たすかどうかを判定することと、
上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たすとの判定に呼応して、上記増殖細胞療法製剤の製造の完了より前の日でリンパ球除去日を計画立案すること、上記増殖細胞療法製剤の製造の完了後の日に注入日を計画立案すること、及び上記注入日の後にＩＬ－２処置日を計画立案することと
をさらに含む、第９項に記載の方法。

【1172】

第１１項 上記細胞増殖技法が単一の閉鎖型容器バイオリアクター中で上記細胞療法製剤を培養することを含む、第１項に記載の方法。

【1173】

第１２項 上記第１の時点からの上記細胞療法製剤の増殖の再実施後の上記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることが、上記第２の時点での受け入れパラメータ、及び上記第１の時点から上記細胞療法製剤の増殖を再実施するために使用される細胞集団に関連する受け入れパラメータの一方または両方に基づいて、上記第１の時点から増殖プロセスを完了するのに必要な時間を決定することを含む、第１項に記載の方法。

【1174】

第１３項 第１項に記載の方法であって、
上記細胞療法製剤を増殖させるための細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
上記細胞注文を受信したところで、上記患者固有の識別子及び上記細胞注文識別子の一方または両方を含む、上記患者に関連する上記細胞注文を受信したことの確認を上記病院側インターフェースに送信することをさらに含む上記方法。

【1175】

第１４項 上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記細胞療法製剤の増殖中の受け入れ基準を満たすかどうかを判定するための、上記第１及び第２の時点を含む複数の時点に対応する一連の日付を、上記細胞増殖技法及び上記細胞注文の受信時に応じて計画立案することをさらに含む、第１３項に記載の方法。

【1176】

第１５項 上記患者の治療イベントを計画変更したところで、上記患者固有の識別子に関連する上記患者の治療イベントの更新されたスケジュールを上記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、第１３項に記載の方法。

【1177】

第１６項 上記完了時間に基づいて、上記患者固有の識別子に関連する集荷依頼をロジスティックスインターフェースに送信することと、
上記完了時間に基づいて、上記患者固有の識別子に関連する上記患者の治療イベントのスケジュールを病院側インターフェースに送信することと
をさらに含む、第１５項に記載の方法。

【1178】

第１７項 上記第１の時点からの上記細胞療法製剤の増殖の再実施が実現可能であるとの判定に呼応して、
上記計算装置によって、上記患者固有の識別子から上記細胞注文識別子を分離することと、
上記計算装置によって、上記細胞注文に関連する新たな細胞注文識別子を作成すること、及び上記新たな細胞注文識別子を上記患者固有の識別子と関連付けることと
をさらに含む、第１６項に記載の方法。

【1179】

第１８項 第１７項に記載の方法であって、
上記細胞療法製剤を増殖させるための上記細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
上記新たな細胞注文識別子及び上記細胞療法製剤の増殖の見積もられた完了時間を含む上記患者固有の識別子を上記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、上記方法。

【1180】

第１９項 上記計算装置によって、上記患者の治療イベントの上記計画変更に基づいて、上記患者の治療イベントに関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールを作成することと、
出荷及びロジスティックスイベントの計画変更に基づいて、上記新たな細胞注文識別子を含む上記患者固有の識別子に関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールをロジスティックスインターフェースに送信することと
をさらに含む、第１７項に記載の方法。

【1181】

第２０項 受け入れパラメータが特定の受け入れ基準を満たすかどうかの判定が行われる各時点で、上記計算装置によって、それぞれ個々の時点に対応するフィールドを含む上記新たな細胞注文識別子及び上記判定の結果を、上記患者固有の識別子と関連付けることをさらに含む、第１７項に記載の方法。

【1182】

第２１項 上記計画立案することが、上記計算装置によって、上記新たな細胞注文識別子を含む上記患者固有の識別子に基づいて上記患者の治療イベントを計画立案することを含む、第２０項に記載の方法。

【1183】

第２２項 上記再実施することが可能ではないとの判定に呼応して、上記計算装置によって、上記第２の時点の後に計画立案された上記患者の治療イベントを取り消すことをさらに含む、第２１項に記載の方法。

【1184】

第２３項 上記患者の治療イベントの取り消しを病院側インターフェース及びロジスティックスインターフェースに送信することをさらに含む、第２２項に記載の方法。

【1185】

第２４項 上記再実施することが実現可能でないとの判定に呼応して、上記増殖細胞療法製剤を廃棄すること、及び上記患者固有の識別子を上記細胞注文識別子から分離することをさらに含む、第２３項に記載の方法。

【1186】

第２５項 上記計画変更された患者の治療イベントに従って、第１項に記載の方法によって得られた増殖細胞療法製剤による上記患者の治療方法。

【1187】

第２６項 ある患者向けの細胞療法製剤の製造方法であって、
計算装置において、上記患者向けの上記細胞療法製剤を製造するための細胞注文、複数の製造施設における上記細胞療法製剤を製造するための製造スロットであり、それぞれの製造施設向けの製造スロットが、上記それぞれの製造施設に関連する製造業者のコンピュータサブシステムから上記計算装置で受信される上記製造スロット、及び上記細胞療法製剤で上記患者を治療するための患者の治療イベントの仮スケジュールを受信することと、
上記計算装置によって、上記患者の治療イベントの上記仮スケジュールに基づいて、上記細胞療法製剤を製造するための複数の利用可能な製造スロットを決定すること、及びそれらを計画立案ユーザーインターフェースに表示することと、
上記利用可能な製造スロットの１つを選択した後に、医療施設において、上記患者の治療イベントの仮スケジュール及び利用可能な製造スロットに従って、上記患者から固形腫瘍を得るための処置を上記患者に実施することと、
得られた固形腫瘍を、上記利用可能な製造スロットに従って、上記利用可能な製造スロットに対応する製造施設に移送することと、
上記得られた固形腫瘍を上記製造施設において受け入れたところで、上記得られた固形腫瘍の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して上記細胞療法製剤の製造を開始することと、
上記細胞療法製剤の製造中に、第１の時点及び上記第１の時点の後の第２の時点において、製造された上記細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定し、且つ上記受け入れパラメータが対応する時点に関連する受け入れ基準であり、上記対応する時点に関連するアッセイの結果に基づいて決定される上記受け入れ基準を満たすかどうか判定することと、
上記計算装置によって、上記細胞療法製剤の製造のための製造スケジュール、上記製造施設に対応する製造スロット、及び上記患者の治療イベントの上記仮スケジュールを、上記第１及び第２の時点の一方または両方における上記受け入れ基準を満たすかどうかに基づいて修正することと、
上記第１及び第２の時点における上記受け入れ基準を満たす場合に、修正された製造スケジュールに従って、上記細胞療法製剤の製造を完了することと
を含む上記方法。

【1188】

第２７項 上記製造された細胞療法製剤を上記医療施設に移送することをさらに含む、第２６項に記載の方法。

【1189】

第２８項 上記細胞注文を受信したところで、上記計算装置によって、上記患者及び上記細胞注文に関連する患者固有の識別子を作成することをさらに含む、第２６項に記載の方法。

【1190】

第２９項 上記計算装置によって、上記患者固有の識別子、上記細胞注文、上記製造スロット、及び上記利用可能な製造スロットに対応する上記製造施設を含む、上記得られた固形腫瘍の容器用の出荷ラベルを自動的に作成することをさらに含む、第２８項に記載の方法。

【1191】

第３０項 上記計算装置によって、上記細胞療法製剤を製造するために使用される製造プロセスに対応する、上記製造ラベルが作成された時点、容器を識別するバーコード、上記患者固有の識別子、上記時点で完了した製造ステップ、上記完了したプロセスに関連する受け入れパラメータ、及び上記時点で実施されている製造プロセスを含む、上記得られた固形腫瘍の容器用の製造ラベルを自動的に作成することをさらに含む、第２９項に記載の方法。

【1192】

第３１項 上記細胞療法製剤がＴ細胞を含む、第２６項に記載の方法。

【1193】

第３２項 上記細胞療法製剤が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む、第２６項に記載の方法。

【1194】

第３３項 上記患者の治療イベントが、入院期間、切除日、リンパ球除去日、上記患者に上記細胞療法製剤を注入する注入日、及びＩＬ－２処置日のうちの１つ以上を含む、第２６項に記載の方法。

【1195】

第３４項 上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たすかどうかを判定することが、上記第１及び第２の時点を含む、受け入れられた細胞療法製剤の増殖の開始後の複数の時点における、上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することを含む、第２６項に記載の方法。

【1196】

第３５項 上記計算装置によって、
上記患者の治療イベントを計画変更することと、
後続の細胞療法製剤の増殖を完了することと
をさらに含み、
上記患者の治療イベントを計画変更することが、上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが、上記複数の時点のいずれにおいても上記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、上記患者の治療イベントを計画変更することを含む、第３４項に記載の方法。

【1197】

第３６項 上記患者の治療イベントを計画変更することが、上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、上記複数の時点のいずれにおいても上記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、上記患者の治療イベントを打ち切ることを含む、第３４項に記載の方法。

【1198】

第３７項 上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、上記複数の時点のいずれにおいても上記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、上記細胞療法製剤の後続の増殖を打ち切る、第３４項に記載の方法。

【1199】

第３８項 上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することが、生存率、無菌性、細胞数、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ数、ＣＤ３数、エンドトキシンアッセイの結果、及びグラム染色アッセイの結果のうちの１つ以上の測定を含む、第３７項に記載の方法。

【1200】

第３９項 上記細胞増殖技法が急速増殖ステップを含み、
上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが、上記急速増殖ステップの前の受け入れ基準を満たすかどうかを判定することと、
上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たすとの判定に呼応して、上記細胞療法製剤の製造の完了より前の日でリンパ球除去日を計画立案すること、上記細胞療法製剤の製造の完了後の日に注入日を計画立案すること、及び上記注入日の後にＩＬ－２処置日を計画立案することと
をさらに含む、第３８項に記載の方法

【1201】

第４０項 上記細胞増殖技法が単一の閉鎖型容器バイオリアクター中で上記細胞療法製剤を培養することを含む、第２６項に記載の方法。

【1202】

第４１項 上記計算装置によって上記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることをさらに含み、上記第１の時点からの上記細胞療法製剤の増殖の再実施後の上記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることが、上記第２の時点での受け入れパラメータ、及び上記第１の時点から上記細胞療法製剤の増殖を再実施するために使用される細胞集団に関連する受け入れパラメータの一方または両方に基づいて、上記第１の時点から増殖プロセスを完了するのに必要な時間を決定することを含む、第２６項に記載の方法。

【1203】

第４２項 第２９項に記載の方法であって、
上記細胞療法製剤を増殖させるための上記細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
上記細胞注文を受信したところで、上記患者固有の識別子及び上記細胞注文識別子の一方または両方を含む、上記患者に関連する細胞注文を受信したことの確認を上記病院側インターフェースに送信することをさらに含む上記方法。

【1204】

第４３項 上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記細胞療法製剤の増殖中の受け入れ基準を満たすかどうかを判定するための、上記第１及び第２の時点を含む複数の時点に対応する一連の日付を、上記細胞増殖技法及び上記細胞注文の受信時に応じて計画立案することをさらに含む、第４２項に記載の方法。

【1205】

第４４項 上記患者の治療イベントを計画変更したところで、上記患者固有の識別子に関連する上記患者の治療イベントの更新されたスケジュールを上記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、第４３項に記載の方法。

【1206】

第４５項 完了時間に基づいて、上記患者固有の識別子に関連する集荷依頼をロジスティックスインターフェースに送信することと、
完了時間に基づいて、上記患者固有の識別子に関連する上記患者の治療イベントのスケジュールを病院側インターフェースに送信することと
をさらに含む、第４４項に記載の方法。

【1207】

第４６項 上記第１の時点からの上記細胞療法製剤の増殖の再実施が実現可能であるとの判定に呼応して、
上記計算装置によって、上記患者固有の識別子から上記細胞注文識別子を分離することと、
上記計算装置によって、上記細胞注文に関連する新たな細胞注文識別子を作成すること、及び上記新たな細胞注文識別子を上記患者固有の識別子と関連付けることと
をさらに含む、第４５項に記載の方法。

【1208】

第４７項 第４６項に記載の方法であって、
上記細胞療法製剤を増殖させるための上記細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
上記新たな細胞注文識別子及び上記細胞療法製剤の増殖の見積もられた完了時間を含む上記患者固有の識別子を上記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、上記方法。

【1209】

第４８項 以下をさらに含む、第４７項に記載の方法：

【1210】

上記計算装置によって、上記患者の治療イベントの上記計画変更に基づいて、上記患者の治療イベントに関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールを作成することと、
出荷及びロジスティックスイベントの計画変更に基づいて、上記新たな細胞注文識別子を含む上記患者固有の識別子に関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールをロジスティックスインターフェースに送信すること。

【1211】

第４９項 受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たすかどうかの判定が行われる各時点で、上記計算装置によって、それぞれ個々の時点に対応するフィールドを含む上記新たな細胞注文識別子及び上記判定の結果を、上記患者固有の識別子と関連付けることをさらに含む、第４８項に記載の方法。

【1212】

第５０項 上記計画立案することが、上記計算装置によって、上記新たな細胞注文識別子を含む上記患者固有の識別子に基づいて上記患者の治療イベントを計画立案することを含む、第４９項に記載の方法。

【1213】

第５１項 上記再実施することが可能ではないとの判定に呼応して、上記計算装置によって、上記第２の時点の後に計画立案された上記患者の治療イベントを取り消すことをさらに含む、第５０項に記載の方法。

【1214】

第５２項 上記患者の治療イベントの取り消しを病院側インターフェース及びロジスティックスインターフェースに送信することをさらに含む、第５１項に記載の方法。

【1215】

第５３項 上記再実施することが実現可能でないとの判定に呼応して、上記増殖細胞療法製剤を廃棄すること、及び上記患者固有の識別子を上記細胞注文識別子から分離することをさらに含む、第５２項に記載の方法。

【1216】

第５４項 上記計画変更された患者の治療イベントに従って、第２６項に記載の方法によって得られた上記製造された細胞療法製剤による上記患者の治療方法。

【1217】

第５５項
製造施設において、患者から得られた固形腫瘍を受け入れることと、
計算装置によって、上記得られた固形腫瘍の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して細胞療法製剤を製造するためのプロセスにおいて使用される製造容器用の、上記患者、上記製造プロセス、及び製造された上記細胞療法製剤の品質に関連する情報を含む製造ラベルを作成することと、
上記細胞療法製剤を製造するためのプロセスを開始することと、を含む細胞療法製剤の製造方法であって、
前記プロセスが、
医療施設において、上記患者から固形腫瘍を得るために、上記患者に対して処置を実施することと、
得られた固形腫瘍を製造施設に移送することと、
上記製造施設において上記得られた固形腫瘍を受け入れた後に、計算装置によって、その後に得られる増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータに依存して、患者の治療イベントを動的に計画立案することと、
上記得られた固形腫瘍の少なくとも一部から、細胞増殖技法を使用して上記細胞療法製剤の増殖を開始すること、及び複数の時点で上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することと
を含む上記プロセスを開始することと、
上記複数の時点において、上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定するための品質管理アッセイを実施することと、
上記計算装置において、上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータを受信することと、
上記計算装置によって、上記複数の時点のそれぞれに対応する更新された製造ラベルであり、上記更新された製造ラベルは上記製造された細胞療法製剤の品質に関連する更新された情報を含み、上記更新された情報は対応する時点における上記受け入れパラメータを含む、上記製造ラベルを作成することと、
上記計算装置によって、上記複数の時点のそれぞれにおいて上記更新された製造ラベルを読取ることと、
上記複数の時点のそれぞれにおいて上記更新された製造ラベルから読取られた情報に基づいて、上記細胞療法製剤の増殖を完了することと、を含む、前記方法。

【1218】

第５６項 後続の製造ステップ用の上記更新された製造ラベル上の上記患者に関する情報が、直前の製造ステップの製造ラベル上の上記患者に関する情報と一致しないか、または
上記製造プロセスにおける所与の時点の上記更新された製造ラベル上の受け入れパラメータが、上記製造プロセスの当該の時点の受け入れ基準を満たしていない、
但し、上記受け入れパラメータが、生存率、無菌性、細胞数、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ数、ＣＤ３数、エンドトキシンアッセイの結果、及びグラム染色アッセイの結果のうちの１つ以上を含む場合、
上記計算装置によって警告信号を発することをさらに含む、第５５項に記載の方法。

【1219】

第５７項 上記患者に関する情報が、患者固有の識別子及び上記患者向けの上記細胞療法製剤を製造するための細胞注文に関連する細胞注文識別子を含む、第５５項に記載の方法。

【1220】

第５８項 上記細胞増殖技法が単一の閉鎖型容器バイオリアクター中で上記細胞療法製剤を培養することを含む、第５５項に記載の方法。

【1221】

第５９項 上記製造ラベルが、上記患者、上記製造プロセス、及び上記製造された細胞療法製剤の品質に関連する情報をコード化したバーコードを含む、第５５項に記載の方法。

【1222】

第６０項 上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記製造プロセス中の受け入れ基準を満たすかどうかを判定するための、第１の時点及び上記第１の時点の後の第２の時点を含む複数の時点に対応する一連の日付を、使用されている細胞増殖技法及び製造施設での細胞注文の受信時に応じて計画立案することをさらに含む、第５６項に記載の方法。

【1223】

第６１項 配送業者計算サブシステムを介して、を含む配送状況の情報を受信すること、ならびに、上記配送状況の情報を受信することに呼応して、決定した製造のスケジュールに基いて上記製造された細胞療法製剤を出荷するための出荷スケジュールを決定すること、及び上記製造された細胞療法製剤が入った輸送容器用の出荷ラベルを作成することを、ロジスティックスインターフェースに取り込むことをさらに含む、第６０項に記載の方法。

【1224】

第６２項 上記決定された出荷スケジュールに基づいて、ロジスティックス施設に出荷要請を送信することをさらに含む、第６０項に記載の方法。

【1225】

第６３項 最終的な品質管理アッセイを実施する前に、上記製造された細胞療法製剤が入った輸送容器用の出荷ラベルを作成することをさらに含み、但し、上記出荷ラベルは、上記最終的な品質管理アッセイの結果が、対応する受け入れパラメータが対応する受け入れ基準を満たすことを示してない限り、上記製造された細胞療法製剤は出荷可能ではないことを示す、第６０項に記載の方法。

【1226】

第６４項 上記製造された細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たすと判定したところで、上記細胞療法の製造の完了日を決定することと、
上記計算装置によって、上記完了日に基づいて、患者を治療するための上記細胞療法製剤の使用に対応する上記患者の治療イベントのスケジュールを作成することと、
ロジスティックスインターフェースに、上記完了日に基づいて集荷依頼を送信することと、
病院側インターフェースに、上記患者の治療イベントのスケジュールを送信することと
をさらに含む、第５６項に記載の方法。

【1227】

第６５項 上記細胞療法製剤がＴ細胞を含む、第５５項に記載の方法。

【1228】

第６６項 上記細胞療法製剤が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む、第５５項に記載の方法。

【1229】

第６７項 上記患者の治療イベントが、入院期間、切除日、リンパ球除去日、上記患者に上記細胞療法製剤を注入する注入日、及びＩＬ－２処置日のうちの１つ以上を含む、第５５項に記載の方法。

【1230】

第６８項 上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たすかどうかを判定することが、上記第１及び第２の時点を含む、上記得られた細胞療法製剤の増殖の開始後の複数の時点における、上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することを含む、第５６項に記載の方法。

【1231】

第６９項 上記計算装置によって、
上記患者の治療イベントを計画変更することと、
後続の細胞療法製剤の増殖を完了することと
をさらに含み、
上記患者の治療イベントを計画変更することが、上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、上記複数の時点のいずれにおいても上記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、上記患者の治療イベントを計画変更することを含む、第６８項に記載の方法。

【1232】

第７０項 上記患者の治療イベントを計画変更することが、上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、上記複数の時点のいずれにおいても上記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、上記患者の治療イベントを打ち切ることを含む、第６８項に記載の方法。

【1233】

第７１項 上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、汚染に起因して、上記複数の時点のいずれにおいても上記受け入れ基準を満たさないとの判定に呼応して、上記細胞療法製剤の後続の増殖を打ち切る、第６８項に記載の方法。

【1234】

第７２項 上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータを測定することが、生存率、無菌性、細胞数、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ数、ＣＤ３数、エンドトキシンアッセイの結果、及びグラム染色アッセイの結果のうちの１つ以上の測定を含む、第７１項に記載の方法。

【1235】

第７３項 上記細胞増殖技法が急速増殖ステップを含み、
上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが、上記急速増殖ステップの前の受け入れ基準を満たすかどうかを判定することと、
上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記受け入れ基準を満たすとの判定に呼応して、上記細胞療法製剤の製造の完了より前の日でリンパ球除去日を計画立案すること、上記細胞療法製剤の製造の完了後の日に注入日を計画立案すること、及び上記注入日の後にＩＬ－２処置日を計画立案することと
をさらに含む、第７２項に記載の方法。

【1236】

第７４項 上記細胞増殖技法が単一の閉鎖型容器バイオリアクター中で上記細胞療法製剤を培養することを含む、第５５項に記載の方法。

【1237】

第７５項 上記第１の時点からの上記細胞療法製剤の増殖の再実施後の上記細胞療法製剤の増殖の完了時間を見積ることが、上記第２の時点での受け入れパラメータ、及び上記第１の時点から上記細胞療法製剤の増殖を再実施するために使用される細胞集団に関連する受け入れパラメータの一方または両方に基づいて、上記第１の時点から増殖プロセスを完了するのに必要な時間を決定することを含む、第５５項に記載の方法。

【1238】

第７６項 第５７項に記載の方法であって、
上記細胞療法製剤を増殖させるための細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
上記細胞注文を受信したところで、上記患者固有の識別子及び上記細胞注文識別子の一方または両方を含む、上記患者に関連する細胞注文を受信したことの確認を上記病院側インターフェースに送信することをさらに含む上記方法。

【1239】

第７７項 上記増殖細胞療法製剤の受け入れパラメータが上記細胞療法製剤の増殖中の受け入れ基準を満たすかどうかを判定するための、上記第１及び第２の時点を含む複数の時点に対応する一連の日付を、上記細胞増殖技法及び上記細胞注文の受信時に応じて計画立案することをさらに含む、第７６項に記載の方法。

【1240】

第７８項 上記患者の治療イベントを計画変更したところで、上記患者固有の識別子に関連する上記患者の治療イベントの更新されたスケジュールを上記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、第７６項に記載の方法。

【1241】

第７９項 完了時間に基づいて、上記患者固有の識別子に関連する集荷依頼をロジスティックスインターフェースに送信することと、
完了時間に基づいて、上記患者固有の識別子に関連する上記患者の治療イベントのスケジュールを病院側インターフェースに送信することと
をさらに含む、第７８項に記載の方法。

【1242】

第８０項 上記第１の時点からの上記細胞療法製剤の増殖の再実施が実現可能であるとの判定に呼応して、
上記計算装置によって、上記患者固有の識別子から上記細胞注文識別子を分離することと、
上記計算装置によって、上記細胞注文に関連する新たな細胞注文識別子を作成すること、及び上記新たな細胞注文識別子を上記患者固有の識別子と関連付けることと
をさらに含む、第７９項に記載の方法。

【1243】

第８１項 第８０項に記載の方法であって、
上記細胞療法製剤を増殖させるための上記細胞注文が病院側インターフェースから受信され、
上記新たな細胞注文識別子及び上記細胞療法製剤の増殖の見積もられた完了時間を含む上記患者固有の識別子を上記病院側インターフェースに送信することをさらに含む、上記方法。

【1244】

第８２項 上記計算装置によって、上記患者の治療イベントの上記計画変更に基づいて、上記患者の治療イベントに関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールを作成することと、
出荷及びロジスティックスイベントの計画変更に基づいて、上記新たな細胞注文識別子を含む上記患者固有の識別子に関連する出荷及びロジスティックスイベントの新たなスケジュールをロジスティックスインターフェースに送信することと
をさらに含む、第８０項に記載の方法。

【1245】

第８３項 受け入れパラメータが特定の受け入れ基準を満たすかどうかの判定が行われる各時点で、上記計算装置によって、それぞれ個々の時点に対応するフィールドを含む上記新たな細胞注文識別子及び上記判定の結果を、上記患者固有の識別子と関連付けることをさらに含む、第８０項に記載の方法。

【1246】

第８４項 上記計画立案することが、上記計算装置によって、上記新たな細胞注文識別子を含む上記患者固有の識別子に基づいて上記患者の治療イベントを計画立案することを含む、第８３項に記載の方法。

【1247】

第８５項 上記再実施することが可能ではないとの判定に呼応して、上記計算装置によって、上記第２の時点の後に計画立案された上記患者の治療イベントを取り消すことをさらに含む、第８４項に記載の方法。

【1248】

第８６項 上記患者の治療イベントの取り消しを病院側インターフェース及びロジスティックスインターフェースに送信することをさらに含む、第８５項に記載の方法。

【1249】

第８７項 上記再実施することが実現可能でないとの判定に呼応して、上記増殖細胞療法製剤を廃棄すること、及び上記患者固有の識別子を上記細胞注文識別子から分離することをさらに含む、第８６項に記載の方法。

【1250】

第８８項 上記計画変更された患者の治療イベントに従い、第５５項に記載の方法によって得られた上記増殖細胞療法製剤によって上記患者を治療する方法。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図3G】

【図3H】

【図3I】

【図3J】

【図3K】

【図3L】

【図3M】

【図3N】

【図3O】

【図3P】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【配列表】

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【国際調査報告】