▶ キンドレッド バイオサイエンシズ インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-13
(54)【発明の名称】獣医学的使用のための長時間作用性抗ＩＬ３１抗体
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230606BHJP
C07K 16/24 20060101ALI20230606BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20230606BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20230606BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20230606BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230606BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230606BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230606BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230606BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20230606BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230606BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20230606BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20230606BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20230606BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20230606BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20230606BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20230606BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20230606BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20230606BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20230606BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/24 ZNA
C07K16/28
C07K19/00
C12N15/62 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61K39/395 U
A61P37/08
A61P17/04
A61P17/00
A61P11/06
A61K9/08
A61K47/18
A61K47/02
A61K47/26
G01N33/53 P
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022563136
(86)(22)【出願日】2021-04-22
(85)【翻訳文提出日】2022-12-16
(86)【国際出願番号】 US2021028548
(87)【国際公開番号】W WO2021216810
(87)【国際公開日】2021-10-28
(31)【優先権主張番号】63/014,033
(32)【優先日】2020-04-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/014,549
(32)【優先日】2020-04-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】517299032
【氏名又は名称】キンドレッド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】リー， シー ジアン
(72)【発明者】
【氏名】グェン， ラム
(72)【発明者】
【氏名】チュー， チンイー
(72)【発明者】
【氏名】チン， リチャード
(72)【発明者】
【氏名】チャン， ハンチュン
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C076
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA02
4B064CA05
4B064CA06
4B064CA08
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B064DA13
4B065AA01X
4B065AA01Y
4B065AA57X
4B065AA57Y
4B065AA72X
4B065AA72Y
4B065AA83X
4B065AA83Y
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA44
4C076AA12
4C076BB11
4C076BB12
4C076BB14
4C076BB15
4C076BB16
4C076CC07
4C076CC15
4C076CC18
4C076DD23
4C076DD37R
4C076DD38A
4C076DD60
4C076DD67A
4C076EE23
4C085AA14
4C085BB17
4C085GG01
4C085GG03
4C085GG04
4C085GG10
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA09
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
イヌＩＬ３１および／またはネコＩＬ３１に結合する長時間作用性抗ＩＬ３１抗体に関する様々な実施形態が提供される。そのような抗体は、イヌ、ネコおよびウマなどのコンパニオンアニマルにおけるＩＬ３１誘導状態を治療するための方法において使用することができる。
【選択図】図２２
【選択図】図２２
【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号２３のアミノ酸配列を含むエピトープに結合し、低ｐＨなどで、野生型Ｆｃポリペプチドと比較して増加した親和性で新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合することができるコンパニオンアニマル種由来のバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む、イヌＩＬ３１に結合する単離抗体。
【請求項2】
ＰＳＤＸ１Ｘ２ＫＩのアミノ酸配列（配列番号４５）を含むエピトープに結合し、ここで、Ｘは任意のアミノ酸残基である、イヌＩＬ３１に結合する単離抗体。
【請求項3】
Ｘ１が疎水性アミノ酸であるか、またはＸ１がＡ、Ｖ、ＩおよびＬから選択されるか、またはＸ１がＶおよびＩから選択される；ならびに、Ｘ２が親水性アミノ酸であるか、またはＸ２がＡ、Ｒ、Ｋ、ＱおよびＮから選択されるか、またはＸ２がＲおよびＱから選択される、請求項２に記載の単離抗体。
【請求項4】
Ｘ１がＶであり、Ｘ２がＲであるか、またはＸ１がＩであり、Ｘ２がＱである、請求項２または請求項３に記載の単離抗体。
【請求項5】
配列番号８８のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項２～４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項6】
バイオレイヤー干渉法によって測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、または１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）で、イヌＩＬ３１に結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項7】
ＳＴＡＴ－３リン酸化の低減によって測定して、コンパニオンアニマル種におけるＩＬ３１シグナル伝達機能を低減する、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項8】
コンパニオンアニマル種が、イヌ、ネコまたはウマである、請求項７に記載の抗体。
【請求項9】
イムノブロット解析および／またはバイオレイヤー干渉法によって決定して、ネコＩＬ３１またはウマＩＬ３１に結合する、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項10】
イヌＩＬ３１への結合においてモノクローナルＭ１４抗体と競合する、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項11】
ネコＩＬ３１への結合においてモノクローナルＭ１４抗体と競合する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項12】
イムノブロット解析および／またはバイオレイヤー干渉法によって決定して、ヒトＩＬ３１に結合しない、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項13】
モノクローナル抗体である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項14】
イヌ化抗体、ネコ化抗体、ウマ化抗体またはキメラ抗体である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項15】
マウス可変重鎖フレームワーク領域またはマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項16】
重鎖および軽鎖を含み、ａ）重鎖が、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ１配列；配列番号２、６２、８９または８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ２配列；および、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、
ｂ）軽鎖が、配列番号８または配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ１配列；配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ２配列；および、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項17】
ａ）（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号２または配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；および（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖、またはｂ）（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号６２または配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；および（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖
を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項18】
ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖、またはｂ）（ｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖
を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項19】
（ａ）配列番号４、７０または７９の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ－ＦＲ１）配列、（ｂ）配列番号５、７１または８０のＨＣ－ＦＲ２配列、（ｃ）配列番号６、７２、７３または８１のＨＣ－ＦＲ３配列、（ｄ）配列番号７、７４、１２４または８２のＨＣ－ＦＲ４配列、（ｅ）配列番号１１、７５または８３の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ－ＦＲ１）配列、（ｆ）配列番号１２、７６または８４のＬＣ－ＦＲ２配列、（ｇ）配列番号１３、７７または８５のＬＣ－ＦＲ３配列、または（ｈ）配列番号１４、７８または８６のＬＣ－ＦＲ４配列のうちの１つ以上をさらに含む、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項20】
ａ）（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；またはｂ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号１５または配列番号１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｃ）（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列
を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項21】
配列番号２４、配列番号１６または配列番号３２の可変軽鎖配列を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項22】
配列番号２５、配列番号１５、配列番号１２３または配列番号３３の可変重鎖配列を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項23】
配列番号２４の可変軽鎖配列および配列番号２５の可変重鎖配列；配列番号１６の可変軽鎖配列および配列番号１５または配列番号１２３の可変重鎖配列；または配列番号３２の可変軽鎖配列および配列番号３３の可変重鎖配列を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項24】
コンパニオンアニマルに由来する定常重鎖領域または定常軽鎖領域を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項25】
バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、約５．０～約６．５の範囲のｐＨ、例えば約５．０のｐＨ、約５．２のｐＨ、約５．５のｐＨ、約６．０のｐＨ、約６．２のｐＨ、または約６．５のｐＨで、バイオレイヤー干渉法、表面プラズモン共鳴法、または任意のタンパク質－タンパク質相互作用ツールによって測定して、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドよりも高い親和性でＦｃＲｎに結合する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項26】
バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、約５．０～約６．５の範囲のｐＨ、例えば約５．０のｐＨ、約５．５のｐＨ、約６．０のｐＨ、または約６．５のｐＨで、バイオレイヤー干渉法、表面プラズモン共鳴法、または任意のタンパク質－タンパク質相互作用ツールによって測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０１１Ｍ未満、１×１０１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満または１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でＦｃＲｎに結合する、請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項27】
バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型Ｆｃポリペプチドと比較して増加した親和性でＦｃＲｎに結合し、抗体タンパク質が、野生型Ｆｃポリペプチドを含む抗体と比較して増加した血清半減期を有する、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項28】
バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６または配列番号１０７のアミノ酸配列を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項29】
バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、ａ）配列番号９０の２３位に対応する位置にチロシンまたはフェニルアラニン、
ｂ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシン、
ｃ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にヒスチジン、
ｄ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にチロシン、
ｅ）配列番号９０の２０７位に対応する位置にチロシン、
ｆ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にヒスチジン、
ｇ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にチロシン、または
ｈ）配列番号９０の２０７位に対応する位置にチロシン
を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項30】
バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、ａ）配列番号９０の２３位にチロシンまたはフェニルアラニン、
ｂ）配列番号９０の８２位にチロシン、
ｃ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にヒスチジン、
ｄ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にチロシン、
ｅ）配列番号９０の２０７位にチロシン、
ｆ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にヒスチジン、
ｇ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にチロシン；または
ｈ）配列番号９０の２０７位にチロシン
を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項31】
ａ）配列番号１０８、配列番号１０９または配列番号１１０の重鎖アミノ酸配列、ｂ）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列、
ｃ）配列番号１１４、配列番号１１５または配列番号１１６の重鎖アミノ酸配列、
ｄ）配列番号１１７、配列番号１１８または配列番号１１９の重鎖アミノ酸配列、または
ｅ）配列番号１２０、配列番号１２１または配列番号１２２の重鎖アミノ酸配列
を含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項32】
ａ）（ｉ）配列番号２６の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１０８、配列番号１０９または配列番号１１０の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；またはｂ）（ｉ）配列番号２１の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；
ｃ）（ｉ）配列番号３７の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１１４、配列番号１１５または配列番号１１６の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；
ｄ）（ｉ）配列番号３８の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；または
ｅ）（ｉ）配列番号３９の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１２０、配列番号１２１または配列番号１２２の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列
を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項33】
配列番号２１の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項34】
配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項35】
Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦａｂ’－ＳＨから選択される抗体断片である、請求項１～３４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項36】
二重特異性であり、ＩＬ３１ならびにＩＬ４Ｒ、ＩＬ１７、ＴＮＦα、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２５、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＩＬ２３、ＩｇＥ、ＣＤ１１α、ＩＬ６Ｒ、α４－インテグリン、ＩＬ１２、ＩＬ１β、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ３３、ＩＬ３３Ｒ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲまたはＢｌｙＳから選択される１つ以上の抗原に結合する、請求項１～３５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項37】
請求項１～３６のいずれか一項に記載の抗体をコードする単離核酸。
【請求項38】
請求項３７に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項39】
請求項３８に記載の宿主細胞を培養することと、抗体を単離することとを含む、抗体を産生する方法。
【請求項40】
請求項１～３６のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物。
【請求項41】
請求項１～３６のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体が、Ｌ－ヒスチジン、塩化ナトリウムおよびポリソルベート８０を含み、薬学的組成物が、５．０～６．２のｐＨを有する、薬学的組成物。
【請求項42】
５．０～６．０、または５．３～５．７、または５．５のｐＨを有する、請求項４１に記載の薬学的組成物。
【請求項43】
５ｍＭ～１００ｍＭ、１０ｍＭ～５０ｍＭ、２０ｍＭ～３０ｍＭ、１０～３０ｍＭ、または２０ｍＭのＬ－ヒスチジン濃度を有する、請求項４０または請求項４１に記載の薬学的組成物。
【請求項44】
８０～２００ｍＭ、１００～１７５ｍＭ、１２０～１５０ｍＭ、または１４０ｍＭの塩化ナトリウム濃度を有する、請求項４１～４３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項45】
０．００５ｍｇ／ｍＬ～０．５ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～０．１ｍｇ／ｍＬ、または０．０５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０濃度を有する、請求項４１～４４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項46】
薬学的に許容される担体が少なくとも一種類の糖を含む、請求項４１～４５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項47】
０．５％～２０％、１％～１０％、１％～５％または１％～３％の糖濃度を有する、請求項４６に記載の薬学的組成物。
【請求項48】
薬学的に許容される担体が、スクロース、トレハロース、Ｄ－マンニトール、マルトースおよび／またはソルビトールを含む、請求項４１～４７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項49】
抗菌剤を含む、請求項４１～４８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項50】
ｍ－クレゾールまたはメチルパラベンを含む、請求項４１～４９のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項51】
０．２％のｍ－クレゾールおよび／または０．９％のメチルパラベンを含む、請求項４１～５０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項52】
ＩＬ３１誘導状態を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法であって、コンパニオンアニマル種に、治療的有効量の請求項１～３６のいずれか一項に記載の抗体または請求項４０～５１のいずれか一項に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
【請求項53】
ＩＬ－３１誘導状態を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法であって、コンパニオンアニマル種に、治療的有効量の抗ＩＬ３１抗体を、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、９週間ごと、１０週間ごと、１２週間ごと、１４週間ごと、１６週間ごと、１８週間ごと、２０週間ごと、２２週間ごと、または２４週間ごとに投与することを含む、方法。
【請求項54】
抗ＩＬ３１抗体が、請求項１～３６のいずれか一項に記載の抗体または請求項４０～５１のいずれか一項に記載の薬学的組成物を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項55】
コンパニオンアニマル種が、イヌ、ネコまたはウマである、請求項５２～５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項56】
ＩＬ３１誘導状態が掻痒またはアレルギー状態である、請求項５２～５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項57】
ＩＬ３１誘導状態が、アトピー性皮膚炎、掻痒症、喘息、乾癬、強皮症および湿疹から選択される、請求項５２～５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項58】
抗体または薬学的組成物が非経口投与される、請求項５２～５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項59】
抗体または薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路または吸入経路によって投与される、請求項５２～５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項60】
抗体が一投与あたり０．０１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与される、請求項５２～５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項61】
抗体または薬学的組成物と組み合わせて、Ｊａｋ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤またはＭＡＰＫ阻害剤を投与することを含む、請求項５２～６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項62】
抗体または薬学的組成物と組み合わせて、抗ＩＬ４Ｒ抗体、抗ＩＬ１７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＩＬ４抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＩＬ２３抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＣＤ１１α抗体、抗ＩＬ６Ｒ抗体、抗α４－インテグリン抗体、抗ＩＬ１２抗体、抗ＩＬ１β抗体、抗ＩＬ５抗体、抗ＩＬ５Ｒ抗体、抗ＩＬ２２抗体、抗ＩＬ２２Ｒ抗体、抗ＩＬ３３抗体、抗ＩＬ３３Ｒ抗体、抗ＴＳＬＰ抗体、抗ＴＳＬＰＲ抗体および抗ＢｌｙＳ抗体から選択される１つ以上の抗体を投与することを含む、請求項５２～６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項63】
細胞におけるＩＬ３１シグナル伝達機能を低減する方法であって、請求項１～３６のいずれか一項に記載の抗体または請求項４０～５１のいずれか一項に記載の薬学的組成物を、抗体の細胞外ＩＬ３１への結合を許容する条件下で細胞に曝露し、それにより、ＩＬ３１受容体への結合を低減すること、および／または細胞によるＩＬ３１シグナル伝達機能を低減することを含む、方法。
【請求項64】
細胞が、エクスビボで抗体または薬学的組成物に曝露される、請求項６３に記載の方法。
【請求項65】
細胞が、ｉｎ ｖｉｖｏで抗体または薬学的組成物に曝露される、請求項６３に記載の方法。
【請求項66】
細胞が、イヌ細胞、ネコ細胞またはウマ細胞である、請求項６１～６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項67】
コンパニオンアニマル種由来の試料中のＩＬ３１を検出する方法であって、試料を請求項１～３６のいずれか一項に記載の抗体または請求項４０～５１のいずれか一項に記載の薬学的組成物と、抗体のＩＬ３１への結合を許容する条件下で接触させることと、試料中の抗体とＩＬ３１との間に複合体が形成されているかどうかを検出することとを含む、方法。
【請求項68】
試料が、イヌ、ネコまたはウマから得られた生物学的試料である、請求項６７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年４月２２日に出願された米国仮出願第６３／０１４，０３３号、および２０２０年４月２３日に出願された米国仮出願第６３／０１４，５４９号の利益を主張し、これらの各々は、任意の目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年４月２２日に出願された米国仮出願第６３／０１４，０３３号、および２０２０年４月２３日に出願された米国仮出願第６３／０１４，５４９号の利益を主張し、これらの各々は、任意の目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表
本出願は、電子形式の配列表と共に出願されている。配列表は、２０２１年４月２１日に作成された２０２１－０４－２１＿０１１５７－００３４－００ＰＣＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという表題のファイルとして提供されており、このファイルのサイズは２２５Ｋｂである。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、電子形式の配列表と共に出願されている。配列表は、２０２１年４月２１日に作成された２０２１－０４－２１＿０１１５７－００３４－００ＰＣＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという表題のファイルとして提供されており、このファイルのサイズは２２５Ｋｂである。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0003】
本発明は、単離された長時間作用性抗ＩＬ３１抗体、例えば、イヌＩＬ３１および／またはネコＩＬ３１に結合する抗体、ならびに、それを使用する方法、例えば、ＩＬ３１誘導状態を治療する方法、または、例えば、イヌ、ネコおよびウマなどのコンパニオンアニマルの細胞におけるＩＬ３１シグナル伝達機能を低減する方法に関する。
【背景技術】
【0004】
インターロイキン３１（ＩＬ３１）は、主にＴｈ２細胞によって産生されるサイトカインであり、掻痒性および他の形態のアレルギー疾患（例えば、アトピー性皮膚炎）などの皮膚疾患の促進に関与すると理解されている。ＩＬ３１は、その受容体に結合し、ＪＡＫ１の活性化などの下流活性を活性化することによって機能し、皮膚炎および他の障害に関連する臨床的問題の多くを引き起こすと考えられている。
【0005】
ネコ、イヌおよびウマなどのコンパニオンアニマルは、アトピー性皮膚炎を含むヒト皮膚疾患に類似する多くの皮膚疾患に罹患している。しかしながら、ＩＬ３１配列は、ヒト、ネコ、イヌおよびウマの間で異なる。したがって、ＩＬ３１シグナル伝達を低減するため、およびＩＬ３１誘導状態を治療するためにコンパニオンアニマルＩＬ３１に特異的に結合するように使用することができ、かつ、より長い投与間隔および／または投与用量の低減を可能にし得る、血清半減期が増加した方法および化合物が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【0006】
いくつかの実施形態では、イヌＩＬ３１に結合する長時間作用性の単離抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は増加した血清半減期を有する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体はバリアントＦｃポリペプチドを含み、この場合、抗ＩＬ３１抗体は野生型Ｆｃポリペプチドを含む抗体と比較して増加した血清半減期を有する。
【0007】
いくつかの実施形態では、イヌＩＬ３１に結合し、野生型Ｆｃポリペプチドと比較して増加した親和性で新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合することができるコンパニオンアニマル種由来のバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む、単離抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２２のアミノ酸３４～５０を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＳＤＸ１Ｘ２ＫＩのアミノ酸配列（配列番号４５）を含むエピトープに結合し、ここで、Ｘは任意のアミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、疎水性アミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、Ａ、Ｖ、ＩおよびＬから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、ＶおよびＩから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、親水性アミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ２はＡ、Ｒ、Ｋ、ＱおよびＮから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２はＲおよびＱから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ１はＶであり、Ｘ２はＲである。いくつかの実施形態では、Ｘ１はＩであり、Ｘ２はＱである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８８のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する。
【0008】
いくつかの実施形態では、抗体は、バイオレイヤー干渉法によって測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、または１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）で、イヌＩＬ３１に結合する。
【0009】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＳＴＡＴ－３リン酸化の低減によって測定して、コンパニオンアニマル種におけるＩＬ３１シグナル伝達機能を低減する。いくつかの実施形態では、コンパニオンアニマル種は、イヌ、ネコまたはウマである。
【0010】
いくつかの実施形態では、抗体は、イムノブロット解析および／またはバイオレイヤー干渉法によって決定して、ネコＩＬ３１またはウマＩＬ３１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、イヌＩＬ３１への結合においてモノクローナルＭ１４抗体と競合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ネコＩＬ３１への結合においてモノクローナルＭ１４抗体と競合する。いくつかの実施形態では、抗体は、イムノブロット解析および／またはバイオレイヤー干渉法によって決定して、ヒトＩＬ３１に結合しない。
【0011】
いくつかの実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、イヌ化抗体、ネコ化抗体、ウマ化抗体またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、マウス可変重鎖フレームワーク領域またはマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である。
【0012】
いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖および軽鎖を含み、
ａ．重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ１配列；配列番号２、６２、８９または８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ２配列；および、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、
ｂ．軽鎖は、配列番号８または配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ１配列；配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ２配列；および、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
ａ．重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ１配列；配列番号２、６２、８９または８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ２配列；および、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、
ｂ．軽鎖は、配列番号８または配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ１配列；配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ２配列；および、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
【0013】
いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２または８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖を含む。
【0014】
いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６２または８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖を含む。
【0015】
いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖を含む。
【0016】
いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖を含む。
【0017】
いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号４、７０または７９の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ－ＦＲ１）配列、（ｂ）配列番号５、７１または８０のＨＣ－ＦＲ２配列、（ｃ）配列番号６、７２、７３または８１のＨＣ－ＦＲ３配列、（ｄ）配列番号７、７４、１２４または８２のＨＣ－ＦＲ４配列、（ｅ）配列番号１１、７５または８３の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ－ＦＲ１）配列、（ｆ）配列番号１２、７６または８４のＬＣ－ＦＲ２配列、（ｇ）配列番号１３、７７または８５のＬＣ－ＦＲ３配列、または（ｈ）配列番号１４、７８または８６のＬＣ－ＦＲ４配列のうちの１つ以上を含む。
【0018】
いくつかの実施形態では、抗体は、
ａ．（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｂ．（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号１５または配列番号１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｃ．（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列
を含む。
ａ．（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｂ．（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号１５または配列番号１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｃ．（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列
を含む。
【0019】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２４、配列番号１６または配列番号３２の可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２５、配列番号１５、配列番号１２３または配列番号３３の可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２４の可変軽鎖配列および配列番号２５の可変重鎖配列；配列番号１６の可変軽鎖配列および配列番号１５または配列番号１２３の可変重鎖配列；または配列番号３２の可変軽鎖配列および配列番号３３の可変重鎖配列を含む。
【0020】
いくつかの実施形態では、抗体は、コンパニオンアニマルに由来する定常重鎖領域または定常軽鎖領域を含むキメラ抗体である。
【0021】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、約５．０～約６．５の範囲のｐＨ、例えば約５．０のｐＨ、約５．２のｐＨ、約５．５のｐＨ、約６．０のｐＨ、約６．２のｐＨ、または約６．５のｐＨで、バイオレイヤー干渉法、表面プラズモン共鳴法、または任意のタンパク質－タンパク質相互作用ツールによって測定して、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドよりも高い親和性でＦｃＲｎに結合する。
【0022】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、約５．０～約６．５の範囲のｐＨ、例えば約５．０のｐＨ、約５．５のｐＨ、約６．０のｐＨ、または約６．５のｐＨで、バイオレイヤー干渉法、表面プラズモン共鳴法、または任意のタンパク質－タンパク質相互作用ツールによって測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０１１Ｍ未満、１×１０１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、または１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でＦｃＲｎに結合する。
【0023】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、例えば低ｐＨで、野生型Ｆｃポリペプチドと比較して増加した親和性でＦｃＲｎに結合し、抗体は、野生型Ｆｃポリペプチドを含む抗体と比較して増加した血清半減期を有する。
【0024】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６または配列番号１０７のアミノ酸配列を含む。
【0025】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、
ａ）配列番号９０の２３位に対応する位置にチロシンまたはフェニルアラニン、
ｂ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシン、
ｃ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にヒスチジン、
ｄ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にチロシン、
ｅ）配列番号９０の２０７位に対応する位置にチロシン、
ｆ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にヒスチジン、
ｇ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にチロシン、または
ｈ）配列番号９０の２０７位に対応する位置にチロシン
を含む。
ａ）配列番号９０の２３位に対応する位置にチロシンまたはフェニルアラニン、
ｂ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシン、
ｃ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にヒスチジン、
ｄ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にチロシン、
ｅ）配列番号９０の２０７位に対応する位置にチロシン、
ｆ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にヒスチジン、
ｇ）配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にチロシン、または
ｈ）配列番号９０の２０７位に対応する位置にチロシン
を含む。
【0026】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、
ａ）配列番号９０の２３位にチロシンまたはフェニルアラニン、
ｂ）配列番号９０の８２位にチロシン、
ｃ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にヒスチジン、
ｄ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にチロシン、
ｅ）配列番号９０の２０７位にチロシン、
ｆ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にヒスチジン、
ｇ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にチロシン；または
ｈ）配列番号９０の２０７位にチロシン
を含む。
ａ）配列番号９０の２３位にチロシンまたはフェニルアラニン、
ｂ）配列番号９０の８２位にチロシン、
ｃ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にヒスチジン、
ｄ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にチロシン、
ｅ）配列番号９０の２０７位にチロシン、
ｆ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にヒスチジン、
ｇ）配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にチロシン；または
ｈ）配列番号９０の２０７位にチロシン
を含む。
【0027】
いくつかの実施形態では、抗体は、
ａ）配列番号１０８、配列番号１０９または配列番号１１０の重鎖アミノ酸配列、
ｂ）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列、
ｃ）配列番号１１４、配列番号１１５または配列番号１１６の重鎖アミノ酸配列、
ｄ）配列番号１１７、配列番号１１８または配列番号１１９の重鎖アミノ酸配列、または
ｅ）配列番号１２０、配列番号１２１または配列番号１２２の重鎖アミノ酸配列
を含む。
ａ）配列番号１０８、配列番号１０９または配列番号１１０の重鎖アミノ酸配列、
ｂ）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列、
ｃ）配列番号１１４、配列番号１１５または配列番号１１６の重鎖アミノ酸配列、
ｄ）配列番号１１７、配列番号１１８または配列番号１１９の重鎖アミノ酸配列、または
ｅ）配列番号１２０、配列番号１２１または配列番号１２２の重鎖アミノ酸配列
を含む。
【0028】
いくつかの実施形態では、抗体は、
ａ．（ｉ）配列番号２６の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１０８、配列番号１０９または配列番号１１０の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；
ｂ．（ｉ）配列番号２１の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；
ｃ．（ｉ）配列番号３７の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１１４、配列番号１１５または配列番号１１６の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；
ｄ．（ｉ）配列番号３８の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；または
ｅ．（ｉ）配列番号３９の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１２０、配列番号１２１または配列番号１２２の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列
を含む。
ａ．（ｉ）配列番号２６の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１０８、配列番号１０９または配列番号１１０の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；
ｂ．（ｉ）配列番号２１の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；
ｃ．（ｉ）配列番号３７の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１１４、配列番号１１５または配列番号１１６の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；
ｄ．（ｉ）配列番号３８の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列；または
ｅ．（ｉ）配列番号３９の軽鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１２０、配列番号１２１または配列番号１２２の重鎖アミノ酸配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列
を含む。
【0029】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２１の軽鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列を含む。
【0030】
いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦａｂ’－ＳＨから選択される抗体断片である。
【0031】
いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性であり、ＩＬ３１ならびにＩＬ４Ｒ、ＩＬ１７、ＴＮＦα、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２５、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＩＬ２３、ＩｇＥ、ＣＤ１１α、ＩＬ６Ｒ、α４－インテグリン、ＩＬ１２、ＩＬ１β、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ３３、ＩＬ３３Ｒ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲまたはＢｌｙＳから選択される１つ以上の抗原に結合する。
【0032】
いくつかの実施形態では、上記の抗ＩＬ３１抗体をコードする単離核酸が提供される。いくつかの実施形態では、上記の抗ＩＬ３１抗体をコードする核酸を含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態では、上記の抗ＩＬ３１抗体をコードする核酸を含むそのような宿主細胞を培養することと、抗体を単離することとを含む、抗ＩＬ３１抗体を産生する方法が提供される。
【0033】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＩＬ３１抗体および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＩＬ３１抗体および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体が、Ｌ－ヒスチジン、塩化ナトリウムおよびポリソルベート８０を含む、薬学的組成物が提供される。
【0034】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、５．０～６．２のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、５．０～６．０、または５．３～５．７、または５．５のｐＨを有する。
【0035】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、５ｍＭ～１００ｍＭ、１０ｍＭ～５０ｍＭ、２０ｍＭ～３０ｍＭ、１０～３０ｍＭ、または２０ｍＭのＬ－ヒスチジン濃度を有する。
【0036】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、８０～２００ｍＭ、１００～１７５ｍＭ、１２０～１５０ｍＭ、または１４０ｍＭの塩化ナトリウム濃度を有する。
【0037】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、０．００５ｍｇ／ｍＬ～０．５ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～０．１ｍｇ／ｍＬ、または０．０５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０濃度を有する。
【0038】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、少なくとも一種類の糖を含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、０．５％～２０％、１％～１０％、１％～５％、または１％～３％の少なくとも一種類の糖の濃度を有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、スクロース、トレハロース、Ｄ－マンニトール、マルトースおよび／またはソルビトールを含む。
【0039】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、抗菌剤を含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、ｍ－クレゾールまたはメチルパラベンを含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、０．２％のｍ－クレゾールおよび／または０．９％のメチルパラベンを含む。
【0040】
抗体および薬学的組成物の使用
いくつかの実施形態では、ＩＬ３１誘導状態を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法であって、コンパニオンアニマル種に、治療的有効量の本明細書に記載の抗ＩＬ３１抗体または本明細書に記載の抗体を含む薬学的組成物を投与することを含む方法が提供される。
いくつかの実施形態では、ＩＬ３１誘導状態を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法であって、コンパニオンアニマル種に、治療的有効量の本明細書に記載の抗ＩＬ３１抗体または本明細書に記載の抗体を含む薬学的組成物を投与することを含む方法が提供される。
【0041】
いくつかの実施形態では、コンパニオンアニマル種に長時間作用性抗ＩＬ３１抗体を投与することを含む、ＩＬ３１誘導状態を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、治療的有効量の抗ＩＬ３１抗体を、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、９週間ごと、１０週間ごと、１２週間ごと、１４週間ごと、１６週間ごと、１８週間ごと、２０週間ごと、２２週間ごと、または２４週間ごとにコンパニオンアニマル種に投与する。
【0042】
いくつかの実施形態では、コンパニオンアニマル種は、イヌ、ネコまたはウマである。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１誘導状態は掻痒またはアレルギー状態である。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１誘導状態は、アトピー性皮膚炎、掻痒症、喘息、乾癬、強皮症および湿疹から選択される。
【0043】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体または薬学的組成物は、非経口投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体または薬学的組成物は、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路または吸入経路によって投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体または薬学的組成物は、一投与あたり０．０１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与される。
【0044】
いくつかの実施形態では、方法は、抗ＩＬ３１抗体または薬学的組成物と組み合わせて、Ｊａｋ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤またはＭＡＰＫ阻害剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、抗ＩＬ３１抗体または薬学的組成物と組み合わせて、抗ＩＬ４Ｒ抗体、抗ＩＬ１７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＩＬ４抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＩＬ２３抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＣＤ１１α抗体、抗ＩＬ６Ｒ抗体、抗α４－インテグリン抗体、抗ＩＬ１２抗体、抗ＩＬ１β抗体、抗ＩＬ５抗体、抗ＩＬ５Ｒ抗体、抗ＩＬ２２抗体、抗ＩＬ２２Ｒ抗体、抗ＩＬ３３抗体、抗ＩＬ３３Ｒ抗体、抗ＴＳＬＰ抗体、抗ＴＳＬＰＲ抗体および抗ＢｌｙＳ抗体から選択される１つ以上の抗体を投与することを含む。
【0045】
いくつかの実施形態では、細胞内のＩＬ３１シグナル伝達機能を低減する方法であって、抗ＩＬ３１抗体、本明細書に記載の薬学的組成物を、抗体の細胞外ＩＬ３１への結合を許容する条件下で細胞に曝露し、それによりＩＬ３１受容体への結合を低減すること、および／または細胞によるＩＬ３１シグナル伝達機能を低減することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、エクスビボで抗体または薬学的組成物に曝露される。いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏで抗体または薬学的組成物に曝露される。いくつかの実施形態では、細胞は、イヌ細胞、ネコ細胞またはウマ細胞である。
【0046】
いくつかの実施形態では、コンパニオンアニマル種由来の試料中のＩＬ３１を検出する方法であって、試料を抗ＩＬ３１抗体または本明細書に記載の薬学的組成物と、抗体のＩＬ３１への結合を許容する条件下で接触させることと、試料中の抗体とＩＬ３１との間に複合体が形成されているかどうかを検出することとを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、試料は、イヌ、ネコまたはウマから得られた生物学的試料である。
【図面の簡単な説明】
【0047】
【図2A】様々な濃度のキメラＭ１４抗体を用いたイヌＩＬ３１結合分析のグラフである。
【図2B】様々な濃度のキメラＭ１４抗体を用いたイヌＩＬ３１結合分析の別のグラフである。
【図3A】様々な濃度のイヌ化Ｍ１４抗体を用いたイヌＩＬ３１結合分析のグラフである。
【図3B】様々な濃度のイヌ化Ｍ１４抗体を用いたイヌＩＬ３１結合分析の別のグラフである。
【図4】様々な濃度のイヌ化Ｍ１４抗体でのイヌＩＬ３１シグナル伝達の阻害を示すイムノブロットである。
【図5A】Ｍ１４抗体でプローブしたＧＳＴ－イヌ－ＩＬ３１欠失のイムノブロットである。
【図5B】抗ＧＳＴ抗体でプローブしたＧＳＴ－イヌ－ＩＬ３１欠失のイムノブロットである。
【図6A】Ｍ１４抗体でプローブしたＧＳＴ－イヌ－ＩＬ３１欠失のイムノブロットである。
【図6B】抗ＧＳＴ抗体でプローブしたＧＳＴ－イヌ－ＩＬ３１欠失のイムノブロットである。
【図7A】Ｍ１４抗体でプローブしたヒトＦｃに融合したネコおよびウマＩＬ３１タンパク質のイムノブロットである。
【図7B】抗ＦＣ抗体でプローブしたヒトＦｃに融合したネコおよびウマＩＬ３１タンパク質のイムノブロットである。
【図8】抗イヌＩＬ３１抗体（上のパネル）および抗ＧＳＴ抗体（下のパネル）を使用した成熟イヌＩＬ３１エピトープの精密エピトープマッピングおよびアラニンスキャニングのイムノブロット解析を示す。
【図9】抗イヌＩＬ３１抗体（上のパネル）および抗ＧＳＴ抗体（下のパネル）を使用した成熟イヌＩＬ３１エピトープの精密エピトープマッピングおよびアラニンスキャニングのイムノブロット解析を示す。
【図10】抗イヌＩＬ３１抗体（上のパネル）および抗ＧＳＴ抗体（下のパネル）を使用した成熟イヌＩＬ３１エピトープの精密エピトープマッピングおよびアラニンスキャニングのイムノブロット解析を示す。
【図11】抗イヌＩＬ３１抗体（上のパネル）および抗ＧＳＴ抗体（下のパネル）を使用した成熟イヌＩＬ３１エピトープの精密エピトープマッピングおよびアラニンスキャニングのイムノブロット解析を示す。
【図12】抗イヌＩＬ３１抗体（上のパネル）および抗ＧＳＴ抗体（下のパネル）を使用した成熟イヌＩＬ３１エピトープの精密エピトープマッピングおよびアラニンスキャニングのイムノブロット解析を示す。
【図13】抗イヌＩＬ３１抗体Ｍ１４のセイウチＩＬ３１に対するイムノブロット交差反応性である。
【図14】野生型イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドに結合する様々な濃度のイヌＦｃＲｎ（１２．５、２５、５０、１００および２００ｎＭ）のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図15】バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＬ（２３）Ｙに結合する様々な濃度のイヌＦｃＲｎ（１２．５、２５、５０、１００および２００ｎＭ）のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図16】バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＬ（２３）Ｆに結合する様々な濃度のイヌＦｃＲｎ（１２．５、２５、５０、１００および２００ｎＭ）のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図17】バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＬ（２３）Ｍに結合する様々な濃度のイヌＦｃＲｎ（１２．５、２５、５０、１００および２００ｎＭ）のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図18】バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＹＴＥに結合する様々な濃度のイヌＦｃＲｎ（１２．５、２５、５０、１００および２００ｎＭ）のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図19】イヌＦｃＲｎに結合するキメラバリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ Ｆ００抗体（Ａ）およびＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ Ｆ００抗体（Ｂ）のＯｃｔｅｔＲｅｄセンサーグラムを、Ｐｈｅ変異を有しないキメラバリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ（Ｃ）およびＰｈｅ変異を有しないＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ（Ｄ）のセンサーグラムと比較した図である。
【図20】２ｍｇ／ｋｇでのラットへの皮下投与後のキメラバリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆ００抗体（「ＩｇＧ－Ａ Ｆ００」；ｎ＝２）およびＰｈｅ変異を有しないキメラバリアントイヌＩｇＧ－Ａ（「ＩｇＧ－Ａ」；ｎ＝２）の血清薬物動態プロファイルを示す。
【図21】イヌＦｃＲｎに結合するバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ（０Ｙ０、０ＹＨ、０ＹＹまたは００Ｙ）を有するキメラ抗体のＯｃｔｅｔＲｅｄセンサーグラムを、野生型イヌＩｇＧ－Ｂを有するキメラ抗体のセンサーグラムと比較した図である。
【図22】実施例１８に記載のイヌにおけるｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態研究から得られた経時的に正規化された抗体のパーセントを示すチャートである。
【発明を実施するための形態】
【0048】
特定の配列の説明
【0049】
特定の実施形態の説明
イヌＩＬ３１および／またはネコＩＬ３１に結合する抗体、例えば、長時間作用性抗ＩＬ３１抗体が提供される。ＩＬ３１に結合する抗体を形成することができる抗体の重鎖および軽鎖も提供される。さらに、１つ以上の特定の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体、重鎖および軽鎖が提供される。イヌＩＬ３１に対する抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。イヌＩＬ３１に対する抗体を産生または精製する方法も提供される。イヌＩＬ３１に対する抗体を使用する治療方法が提供される。そのような方法としては、限定されないが、コンパニオンアニマル種におけるＩＬ３１誘導状態を治療する方法が挙げられる。コンパニオンアニマル種からの試料中のＩＬ３１を検出する方法が提供される。
イヌＩＬ３１および／またはネコＩＬ３１に結合する抗体、例えば、長時間作用性抗ＩＬ３１抗体が提供される。ＩＬ３１に結合する抗体を形成することができる抗体の重鎖および軽鎖も提供される。さらに、１つ以上の特定の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体、重鎖および軽鎖が提供される。イヌＩＬ３１に対する抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。イヌＩＬ３１に対する抗体を産生または精製する方法も提供される。イヌＩＬ３１に対する抗体を使用する治療方法が提供される。そのような方法としては、限定されないが、コンパニオンアニマル種におけるＩＬ３１誘導状態を治療する方法が挙げられる。コンパニオンアニマル種からの試料中のＩＬ３１を検出する方法が提供される。
【0050】
本明細書で提供されるＩＬ３１抗体に関連して使用され得る、プロテインＡへの結合の増加、Ｃ１ｑへの結合の減少、ＣＤ１６への結合の減少、ＦｃＲｎへの結合の増加を有するコンパニオンアニマルからのバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドも提供される。
【0051】
読者の便宜のために、本明細書で使用される用語の以下の定義が提供される。
【0052】
本明細書で使用される場合、Ｋｄなどの数値用語は、科学的測定に基づいて計算され、したがって適切な測定誤差の影響を受ける。場合によっては、数値用語は、最も近い有効数字に丸められた数値を含み得る。
【0053】
本明細書で使用される場合、「ａ」または「ａｎ」は、特に明記しない限り、「少なくとも１つ」または「１つ以上」を意味する。本明細書で使用される場合、「または」という用語は、特に明記しない限り、「および／または」を意味する。複数従属請求項の文脈では、他の請求項を参照するときの「または」の使用は、代替の請求項のみを指す。
【0054】
抗ＩＬ３１抗体
ＩＬ３１に対する新規抗体、例えば、イヌＩＬ３１、ネコＩＬ３１および／またはウマＩＬ３１に結合する抗体が提供される。本明細書で提供される抗ＩＬ３１抗体としては、限定されないが、モノクローナル抗体、マウス抗体、キメラ抗体、イヌ化抗体、ネコ化抗体およびウマ化抗体が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、Ｍ１４、Ｍ１８、Ｍ１９およびＭ８７などの単離マウスモノクローナル抗体である。
ＩＬ３１に対する新規抗体、例えば、イヌＩＬ３１、ネコＩＬ３１および／またはウマＩＬ３１に結合する抗体が提供される。本明細書で提供される抗ＩＬ３１抗体としては、限定されないが、モノクローナル抗体、マウス抗体、キメラ抗体、イヌ化抗体、ネコ化抗体およびウマ化抗体が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、Ｍ１４、Ｍ１８、Ｍ１９およびＭ８７などの単離マウスモノクローナル抗体である。
【0055】
モノクローナル抗体Ｍ１４、Ｍ１８、Ｍ１９およびＭ８７は、以下のように単離した。簡潔には、マウスをイヌＩＬ３１で免疫化し、標準的なハイブリドーマ技術によってマウスモノクローナル抗体クローンを得た。酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、ＩＬ３１結合抗体を産生するハイブリドーマクローンについてスクリーニングした。結合親和性および本明細書に記載の細胞ベースの機能アッセイに基づいて、モノクローナル抗体Ｍ１４、Ｍ１８、Ｍ１９およびＭ８７を産生するハイブリドーマクローンをさらなる調査のために選択した。４つのクローンの各々の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）を配列決定し、配列アラインメントによって分析した（図１）。
【0056】
モノクローナル抗体Ｍ１４のアミノ酸配列も本明細書で提供される。例えば、モノクローナル抗体Ｍ１４の可変重鎖ＣＤＲ（配列番号１～３；配列番号８９は、ＣＤＲ－Ｈ２の代替定義である）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号８～１０）、可変領域重鎖フレームワーク配列（配列番号４～７）、および可変領域軽鎖フレームワーク配列（配列番号１１～１４）が提供される。モノクローナル抗体Ｍ１４の可変軽鎖、軽鎖、可変重鎖、ならびに可変およびヒンジ重鎖のアミノ酸配列が提供される（それぞれ、配列番号２４、３６、２５および４０）。
【0057】
さらに、モノクローナル抗体Ｍ１８、Ｍ１９およびＭ８７のＣＤＲ、フレームワーク配列、可変軽鎖、可変重鎖のアミノ酸配列が提供される（例えば、図１を参照されたい）。モノクローナル抗体Ｍ１９の可変重鎖ＣＤＲ（配列番号１～３；配列番号８９は、ＣＤＲ－Ｈ２の代替定義である）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号８～１０）、可変軽鎖（配列番号６５）、軽鎖（配列番号３８）、可変およびヒンジ重鎖（配列番号４２）、ならびに可変重鎖（配列番号６８）が提供される。モノクローナル抗体Ｍ１８の可変重鎖ＣＤＲ（配列番号１、６２および３；配列番号８７は、ＣＤＲ－Ｈ２の代替定義である）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号６３、９および１０）、可変軽鎖（配列番号６４）、軽鎖（配列番号３７）、可変およびヒンジ重鎖（配列番号４１）、ならびに可変重鎖（配列番号６７）が提供される。モノクローナル抗体Ｍ８７の可変軽鎖（配列番号６６）、軽鎖（配列番号３９）、可変およびヒンジ重鎖（配列番号４３）、ならびに可変重鎖（配列番号６９）が提供される。
【0058】
モノクローナル抗体Ｍ１４、Ｍ１８、Ｍ１９およびＭ８７に由来するキメラ抗体、イヌ化抗体、ネコ化抗体およびウマ化抗体も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、イヌ化モノクローナル抗体Ｍ１４のアミノ酸配列、例えば配列番号１５～２１、７０～７８および１２３～１２４が提供される。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体Ｍ１４に由来するネコ化抗体のアミノ酸配列、例えば配列番号３２～３５および７９～８６が提供される。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体Ｍ１４に由来するキメラ抗体のアミノ酸配列、例えば、配列番号２６、２７、３０および３１が提供される。
【0059】
本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーなど）および三重特異性抗体）、および抗体断片（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ＳｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディなど）を含むがこれらに限定されない様々な抗体構造を包含する。イヌ、ネコ、およびウマ種は、多くの哺乳動物に共通する異なる種類（クラス）の抗体を有する。
【0060】
抗体という用語には、限定されないが、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ジｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ（単一ドメイン抗体）および（Ｆａｂ’）２（化学的に結合したＦ（ａｂ’）２を含む）などの抗原に結合することができる断片が含まれる。抗体のパパイン消化は、各々が単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、その名称が容易に結晶化するその能力を反映する残留「Ｆｃ」断片とを産生する。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）２断片が得られる。抗体という用語には、限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびマウス、ヒト、カニクイザル、イヌ、ネコ、ウマなどの様々な種の抗体も含まれる。さらに、本明細書で提供されるすべての抗体コンストラクトについて、他の生物体由来の配列を有するバリアントも企図される。したがって、抗体のマウスバージョンが開示される場合、当業者は、マウス配列ベースの抗体をネコ、イヌ、ウマなどの配列に変換する方法を理解するであろう。抗体断片には、単鎖ｓｃＦｖ、タンデムジｓｃＦｖ、ダイアボディ、タンデムトリｓｄｃＦｖ、ミニボディなどのいずれかの配向も含まれる。抗体断片には、ナノボディ（ｓｄＡｂ、軽鎖を含まない、重鎖の一対の可変ドメインなどの単一のモノマードメインを有する抗体）も含まれる。抗体断片は、いくつかの実施形態では特定の種であるものとして（例えば、マウスｓｃＦｖまたはイヌｓｃＦｖ）と呼ばれ得る。これは、コンストラクトの供給源ではなく、非ＣＤＲ領域の少なくとも一部の配列を示す。いくつかの実施形態では、抗体は、標識を含むか、または第２の部分にコンジュゲートされる。
【0061】
「標識」および「検出可能な標識」という用語は、特異的結合対のメンバー間の反応（例えば、結合）を検出可能にするために抗体またはその被分析物に結合した部分を意味する。特異的結合対の標識されたメンバーは、「検出可能に標識された」と称される。したがって、「標識結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質の同定を提供する標識が組み込まれたタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、標識は、視覚的または機器的手段、例えば放射性標識アミノ酸の組み込みまたは標識アビジン（例えば、蛍光マーカーまたは光学的方法もしくは比色法によって検出することができる酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することができるビオチニル部分のポリペプチドへの結合によって検出可能なシグナルを生成することができる検出可能なマーカーである。ポリペプチドの標識の例としては、限定されないが、以下が挙げられる：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、または１５３Ｓｍ）；色素原、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；２次レポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、２次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）によって認識される所定のポリペプチドエピトープ；および磁性剤、例えばガドリニウムキレート。イムノアッセイに一般的に使用される標識の代表的な例としては、光を生成する部分、例えばアクリジニウム化合物、および蛍光を生成する部分、例えばフルオレセインが挙げられる。これに関して、部分自体は検出可能に標識されていなくてもよいが、さらに別の部分と反応すると検出可能になり得る。
【0062】
「モノクローナル抗体」という用語は、抗体の実質的に均一な集団の抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得る可能性のある天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。さらに、典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対するものである。したがって、モノクローナル抗体の試料は、抗原上の同じエピトープに結合することができる。修飾語「モノクローナル」とは、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に最初に記載されているハイブリドーマ法によって作製され得るか、または米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているような組換えＤＮＡ法によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４に記載されている技術を使用して作製されたファージライブラリから単離され得る。
【0063】
いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、クローンＭ１４、Ｍ１８、Ｍ１９およびＭ８７から選択される単離マウス抗体である。
【0064】
「アミノ酸配列」とは、ペプチドまたはタンパク質中のアミノ酸残基の配列を意味する。「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換的に使用され、最小長さに限定されない。このようなアミノ酸残基のポリマーは、天然または非天然アミノ酸残基を含有することができ、限定されないが、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、ダイマー、トリマーおよびマルチマーが挙げられる。完全長タンパク質およびその断片の両方が定義に包含される。この用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化などを含む。さらに、本開示の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する欠失、付加、および置換（一般に本質的に保存的）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発などの意図的なものであってもよく、またはタンパク質を産生する宿主の突然変異またはＰＣＲ増幅によるエラーなどの偶発的なものであってもよい。
【0065】
本明細書で使用される「ＩＬ３１」とは、細胞におけるＩＬ３１の発現およびプロセシングから生じる任意の天然ＩＬ３１を指す。この用語は、別途指示がない限り、霊長類（例えば、ヒトおよびカニクイザル）およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物、およびコンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコおよびウマ）を含む任意の脊椎動物起源からのＩＬ３１を含む。この用語はまた、ＩＬ３１の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも含む。
【0066】
いくつかの実施形態では、イヌＩＬ３１は、配列番号２２または配列番号４４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ネコＩＬ３１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ウマＩＬ３１は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ３１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、セイウチＩＬ３１は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、マウスＩＬ３１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、ＩＬ３１は、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、または配列番号６０のアミノ酸配列を含む。
【0067】
抗体の「ＩＬ３１結合ドメイン」という用語は、ＩＬ３１に結合する抗ＩＬ３１抗体の軽鎖および重鎖によって形成される結合ドメインを意味する。
【0068】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３１結合ドメインは、ヒトＩＬ３１に結合するよりも大きい親和性でイヌＩＬ３１に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１結合ドメインは、ネコＩＬ３１またはウマＩＬ３１などの他のコンパニオンアニマルのＩＬ３１に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１結合ドメインはヒトＩＬ３１に結合しない。
【0069】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗原結合分子（例えば、抗体、抗体断片、または抗体結合領域を含む足場タンパク質）が結合する標的分子（例えば、タンパク質、核酸、炭水化物または脂質などの抗原）上の部位を指す。エピトープは、多くの場合、アミノ酸、ポリペプチドまたは糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基を含み、特定の３次元構造特徴ならびに特定の荷電特徴を有する。エピトープは、標的分子の近接残基または並置された非近接残基（例えば、アミノ酸、ヌクレオチド、糖類、脂質部分）の両方から形成され得る。近接残基（例えば、アミノ酸、ヌクレオチド、糖類、脂質部分）から形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒への曝露時に保持されるが、３次折り畳みによって形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒での処理時に失われる。エピトープは、限定されないが、少なくとも３、少なくとも５または８～１０個の残基（例えば、アミノ酸またはヌクレオチド）を含み得る。いくつかの例では、エピトープは、２０残基未満（例えば、アミノ酸またはヌクレオチド）、１５残基未満または１２残基未満の長さである。２つの抗体は、抗原に対する競合的結合を示す場合、抗原内の同じエピトープに結合し得る。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗原結合分子上のＣＤＲ残基までの一定の最小距離によって同定することができる。いくつかの実施形態では、エピトープは上記の距離によって同定することができ、抗体残基と抗原残基との間の結合（例えば、水素結合）に関与する残基にさらに限定することができる。エピトープは、様々なスキャンによっても同定することができ、例えば、アラニンまたはアルギニンスキャンは、抗原結合分子が相互作用することができる１つ以上の残基を示すことができる。明示的に示されない限り、エピトープとしての残基のセットは、他の残基が特定の抗体のエピトープの一部であることを排除しない。むしろ、そのようなセットの存在は、エピトープの最小系列（または種のセット）を示す。したがって、いくつかの実施形態では、エピトープとして同定された残基のセットは、抗原上のエピトープに対する残基の排他的なリストではなく、抗原に関連する最小のエピトープを示す。
【0070】
いくつかの実施形態では、エピトープは、アミノ酸配列ＰＳＤＸ１Ｘ２ＫＩ（配列番号４５）を含み、ここで、Ｘは任意のアミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、疎水性アミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、Ａ、Ｖ、ＩおよびＬから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、ＶおよびＩから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、親水性アミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ２はＡ、Ｒ、Ｋ、ＱおよびＮから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２はＲおよびＱから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ１はＶであり、Ｘ２はＲである。いくつかの実施形態では、Ｘ１はＩであり、Ｘ２はＱである。いくつかの実施形態では、エピトープは配列番号８８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号２２のアミノ酸３４～５０内にある。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号２２のアミノ酸３４～５０を含む。
【0071】
「ＣＤＲ」という用語は、当業者に対する少なくとも１つの同定様式によって定義される相補性決定領域を意味する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、カバット番号付けスキーム、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの組み合わせ、ＡｂＭ定義、接触定義、またはＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭもしくは接触定義の組み合わせのいずれかに従って定義することができる。抗体内の様々なＣＤＲは、限定されないが、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３を含むそれらの適切な数および鎖型によって示すことができる。「ＣＤＲ」という用語は、本明細書では、超可変ループを含む「超可変領域」またはＨＶＲも包含するように使用される。
【0072】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２、配列番号６２、配列番号８９または配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、または（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号８または配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、または（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖を含む。
【0073】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２または８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖と、（ａ）配列番号８または６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖とを含む。
【0074】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６２または８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖と、（ａ）配列番号８または６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖とを含む。
【0075】
本明細書で使用される「可変領域」という用語は、少なくとも３つのＣＤＲを含む領域を指す。いくつかの実施形態では、可変領域は、３つのＣＤＲおよび少なくとも１つのフレームワーク領域（「ＦＲ」）を含む。「重鎖可変領域」または「可変重鎖」という用語は、少なくとも３つの重鎖ＣＤＲを含む領域を指すために互換的に使用される。「軽鎖可変領域」または「可変軽鎖」という用語は、少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲを含む領域を指すために互換的に使用される。いくつかの実施形態では、可変重鎖または可変軽鎖は、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＨＣ－ＦＲ１、ＨＣ－ＦＲ２、ＨＣ－ＦＲ３およびＨＣ－ＦＲ４から選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＬＣ－ＦＲ１、ＬＣ－ＦＲ２、ＬＣ－ＦＲ３およびＬＣ－ＦＲ４から選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域を含む。フレームワーク領域は、軽鎖ＣＤＲ間または重鎖ＣＤＲ間に並置され得る。例えば、抗体は、以下の構造を有する可変重鎖を含み得る：（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＣＤＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＣＤＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＣＤＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）。抗体は、以下の構造を有する可変重鎖を含み得る：（ＣＤＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＣＤＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＣＤＲ－Ｈ３）。抗体はまた、以下の構造を有する可変軽鎖を含み得る：（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＣＤＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＣＤＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＣＤＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）。抗体はまた、以下の構造を有する可変軽鎖を含み得る：（ＣＤＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＣＤＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＣＤＲ－Ｌ３）。
【0076】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号４の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ－ＦＲ１）配列、（ｂ）配列番号５のＨＣ－ＦＲ２配列、（ｃ）配列番号６のＨＣ－ＦＲ３配列、（ｄ）配列番号７のＨＣ－ＦＲ４配列、（ｅ）配列番号１１の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ－ＦＲ１）配列、（ｆ）配列番号１２のＬＣ－ＦＲ２配列、（ｇ）配列番号１３のＬＣ－ＦＲ３配列、または（ｈ）配列番号１４のＬＣ－ＦＲ４配列のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号１６、（ｂ）配列番号２４、または（ｃ）配列番号３２の可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号１５または配列番号１２３、（ｂ）配列番号２５、または（ｃ）配列番号３３の可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号１６の可変軽鎖配列および配列番号１５または配列番号１２３の可変重鎖配列、（ｂ）配列番号２４の可変軽鎖配列および配列番号２５の可変重鎖配列、または（ｃ）配列番号３２の可変軽鎖配列および配列番号３３の可変重鎖配列を含む。
【0077】
本明細書で使用される「定常領域」という用語は、少なくとも３つの定常ドメインを含む領域を指す。「重鎖定常領域」または「定常重鎖」という用語は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む領域を指すために互換的に使用される。非限定的な例示的重鎖定常領域としては、γ、δ、α、εおよびμが挙げられる。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体であり、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体である。特定のアイソタイプは、サブクラスにさらに細分することができる。例えば、ＩｇＧ抗体としては、限定されないが、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）およびＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体が挙げられ、ＩｇＡ抗体としては、限定されないが、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）およびＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体が挙げられ、およびＩｇＭ抗体としては、限定されないが、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２が挙げられる。「軽鎖定常領域」または「定常軽鎖」という用語は、軽鎖定常ドメインＣＬを含む領域を指すために互換的に使用される。非限定的な例示的軽鎖定常領域としては、λおよびκが挙げられる。ドメイン内の機能を変化させない欠失および変化は、特に指定されない限り、「定常領域」という用語の範囲内に包含される。イヌ、ネコおよびウマは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭなどの抗体クラスを有する。イヌＩｇＧ抗体クラス内には、ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣおよびＩｇＧ－Ｄがある。ネコＩｇＧ抗体クラス内には、ＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂおよびＩｇＧ２がある。ウマＩｇＧ抗体クラス内には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６およびＩｇＧ７がある。
【0078】
「キメラ抗体」または「キメラ」という用語は、重鎖または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来し、重鎖または軽鎖の残りの少なくとも一部が異なる供給源または種に由来する抗体を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、第１の種からの少なくとも１つの可変領域（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）および第２の種からの少なくとも１つの定常領域（例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウマなど）を含む抗体を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域および少なくとも１つのイヌ定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域および少なくとも１つのネコ定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体のすべての可変領域は、第１の種に由来し、キメラ抗体のすべての定常領域は、第２の種に由来する。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、コンパニオンアニマル由来の定常重鎖領域または定常軽鎖領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、マウス可変重鎖および軽鎖ならびにコンパニオンアニマル定常重鎖および軽鎖を含む。例えば、キメラ抗体は、マウス可変重鎖および軽鎖ならびにイヌ定常重鎖および軽鎖を含み得る；キメラ抗体は、マウス可変重鎖および軽鎖ならびにネコ定常重鎖および軽鎖を含み得る；または、キメラ抗体は、マウス可変重鎖および軽鎖ならびにウマ定常重鎖および軽鎖を含み得る。
【0079】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、
ａ．（ｉ）配列番号２６の軽鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号２７の重鎖アミノ酸配列、または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖配列、または
ｂ。（ｉ）配列番号３０の軽鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号３１の重鎖アミノ酸配列、または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖配列
を含むキメラ抗体を含む。
ａ．（ｉ）配列番号２６の軽鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号２７の重鎖アミノ酸配列、または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖配列、または
ｂ。（ｉ）配列番号３０の軽鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号３１の重鎖アミノ酸配列、または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖配列
を含むキメラ抗体を含む。
【0080】
「イヌキメラ」または「イヌキメラ抗体」とは、イヌに由来する重鎖の少なくとも一部または軽鎖の少なくとも一部を有するキメラ抗体を指す。「ネコキメラ」または「ネコキメラ抗体」とは、ネコに由来する重鎖の少なくとも一部または軽鎖の少なくとも一部を有するキメラ抗体を指す。「ウマキメラ」または「ウマキメラ抗体」とは、ウマに由来する重鎖の少なくとも一部または軽鎖の少なくとも一部を有するキメラ抗体を指す。いくつかの実施形態では、イヌキメラ抗体は、マウス可変重鎖および軽鎖ならびにイヌ定常重鎖および軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ネコキメラ抗体は、マウス可変重鎖および軽鎖ならびにネコ定常重鎖および軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ウマキメラ抗体は、マウス可変重鎖および軽鎖ならびにウマ定常重鎖および軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、マウス可変重鎖フレームワーク領域またはマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である。
【0081】
本明細書で使用される「イヌ抗体」は、イヌにおいて産生される抗体；イヌ免疫グロブリン遺伝子を含むかまたはイヌ免疫グロブリンペプチドを含む非イヌ動物において産生される抗体；またはファージディスプレイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を使用して選択される抗体であって、抗体レパートリーがイヌ免疫グロブリン配列に基づく抗体を包含する。「イヌ抗体」という用語は、イヌ配列である配列の属を示す。したがって、この用語は、抗体が作成されたプロセスを示すものではなく、関連する配列の属を示すものである。
【0082】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣおよびＩｇＧ－Ｄ定常領域から選択されるイヌ重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体はイヌＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣまたはＩｇＧ－Ｄ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号１７の重鎖アミノ酸配列、（ｂ）配列番号１８の重鎖アミノ酸配列、（ｃ）配列番号１９の重鎖アミノ酸配列、または（ｄ）配列番号２０の重鎖アミノ酸配列を含む。
【0083】
本明細書で使用される「ネコ抗体」は、ネコにおいて産生される抗体；ネコ免疫グロブリン遺伝子を含むかまたはネコ免疫グロブリンペプチドを含む非ネコ動物において産生される抗体；またはファージディスプレイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を使用して選択される抗体であって、抗体レパートリーがネコ免疫グロブリン配列に基づく抗体を包含する。「ネコ抗体」という用語は、ネコ配列である配列の属を示す。したがって、この用語は、抗体が作成されたプロセスを示すものではなく、関連する配列の属を示すものである。
【0084】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ定常領域から選択されるネコ重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、ネコＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ抗体である。
【0085】
本明細書で使用される「ウマ抗体」は、ウマにおいて産生される抗体；ウマ免疫グロブリン遺伝子を含むかまたはウマ免疫グロブリンペプチドを含む非ウマ動物において産生される抗体；またはファージディスプレイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を使用して選択される抗体であって、抗体レパートリーがウマ免疫グロブリン配列に基づく抗体を包含する。「ウマ抗体」という用語は、ウマ配列である配列の属を示す。したがって、この用語は、抗体が作成されたプロセスを示すものではなく、関連する配列の属を示すものである。
【0086】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６およびＩｇＧ７定常領域から選択されるウマ重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、ウマＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６およびＩｇＧ７抗体である。
【0087】
「イヌ化抗体」とは、非イヌ可変領域の一部の少なくとも１つのアミノ酸が、イヌ可変領域からの対応するアミノ酸で置換されている抗体を意味する。いくつかの実施形態では、イヌ化抗体は、少なくとも１つのイヌ定常領域（例えば、γ定数領域、α定数領域、δ定数領域、ε定数領域、μ定数領域など）またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、イヌ化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などの抗体断片である。「イヌ化」という用語はまた、非イヌ免疫グロブリンの最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合配列）である非イヌ（例えば、マウス）抗体の形態を示す。イヌ化抗体には、レシピエントのＣＤＲからの残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非イヌ種のＣＤＲからの残基（ドナー抗体）で置換されたイヌ免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれ得る。いくつかの例では、イヌ免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非イヌ残基によって置換される。さらに、イヌ化抗体は、レシピエント抗体にもインポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られないが、抗体性能をさらに改良および最適化するために含められる残基を含むことができる。
【0088】
いくつかの実施形態では、マウス可変重鎖またはマウス可変軽鎖の一部の少なくとも１つのアミノ酸残基が、イヌ可変領域からの対応するアミノ酸で置換されている。いくつかの実施形態では、修飾された鎖は、イヌ定常重鎖またはイヌ定常軽鎖に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号１５または配列番号１２３の重鎖配列、（ｂ）配列番号１７の重鎖配列、（ｃ）配列番号１８の重鎖配列、（ｄ）配列番号１９の重鎖配列、（ｅ）配列番号２０の重鎖配列、（ｆ）配列番号１６の軽鎖配列、または（ｇ）配列番号２１の軽鎖配列を含むイヌ化抗体である。
【0089】
「ネコ化抗体」とは、非ネコ可変領域の一部の少なくとも１つのアミノ酸が、ネコ可変領域からの対応するアミノ酸で置換されている抗体を意味する。いくつかの実施形態では、ネコ化抗体は、少なくとも１つのネコ定常領域（例えば、γ定数領域、α定数領域、δ定数領域、ε定数領域、μ定数領域など）またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ネコ化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などの抗体断片である。「ネコ化」という用語はまた、非ネコ免疫グロブリンの最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合配列）である非ネコ（例えば、マウス）抗体の形態を示す。ネコ化抗体には、レシピエントのＣＤＲからの残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ネコ種のＣＤＲからの残基（ドナー抗体）で置換されたネコ免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれ得る。いくつかの例では、ネコ免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ネコ残基によって置換される。さらに、ネコ化抗体は、レシピエント抗体にもインポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られないが、抗体性能をさらに改良および最適化するために含められる残基を含むことができる。
【0090】
いくつかの実施形態では、マウス可変重鎖またはマウス可変軽鎖の一部の少なくとも１つのアミノ酸残基が、ネコ可変領域からの対応するアミノ酸で置換されている。いくつかの実施形態では、修飾された鎖は、ネコ定常重鎖またはイヌ定常軽鎖に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号３２の軽鎖配列、（ｂ）配列番号３４の軽鎖配列、（ｃ）配列番号３３の重鎖配列、または（ｄ）配列番号３５の重鎖配列を含むネコ化抗体である。
【0091】
「ウマ化抗体」とは、非ウマ可変領域の一部の少なくとも１つのアミノ酸が、ウマ可変領域からの対応するアミノ酸で置換されている抗体を意味する。いくつかの実施形態では、ウマ化抗体は、少なくとも１つのウマ定常領域（例えば、γ定数領域、α定数領域、δ定数領域、ε定数領域、μ定数領域など）またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ウマ化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などの抗体断片である。「ウマ化」という用語はまた、非ウマ免疫グロブリンの最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合配列）である非ウマ（例えば、マウス）抗体の形態を示す。ウマ化抗体には、レシピエントのＣＤＲからの残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ウマ種のＣＤＲからの残基（ドナー抗体）で置換されたウマ免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれ得る。いくつかの例では、ウマ免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ウマ残基によって置換される。さらに、ウマ化抗体は、レシピエント抗体にもインポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られないが、抗体性能をさらに改良および最適化するために含められる残基を含むことができる。
【0092】
いくつかの実施形態では、マウス可変重鎖またはマウス可変軽鎖の一部の少なくとも１つのアミノ酸残基が、ウマ可変領域からの対応するアミノ酸で置換されている。いくつかの実施形態では、修飾された鎖は、ウマ定常重鎖またはイヌ定常軽鎖に融合される。
【0093】
「断片結晶化可能ポリペプチド」または「Ｆｃポリペプチド」とは、エフェクター分子および細胞と相互作用する抗体分子の部分である。これは、免疫グロブリン重鎖のＣ末端部分を含む。本明細書で使用される場合、Ｆｃポリペプチドは、全Ｆｃポリペプチドの１つ以上の生物活性を有するＦｃドメインの断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドの生物活性は、ＦｃＲｎに結合する能力である。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドの生物活性は、Ｃ１ｑに結合する能力である。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドの生物活性は、ＣＤ１６に結合する能力である。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドの生物活性は、プロテインＡに結合する能力である。Ｆｃポリペプチドの「エフェクター機能」は、刺激に応答して任意の抗体によって全体的または部分的に行われる作用または活性であり、補体固定および／またはＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害性）誘導を含み得る。
【0094】
「ＩｇＸ Ｆｃ」という用語は、Ｆｃ領域が特定の抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭなど）に由来することを意味し、「Ｘ」は抗体アイソタイプを示す。したがって、例えば、「ＩｇＧ Ｆｃ」はγ鎖のＦｃ領域を示し、「ＩｇＡ Ｆｃ」はα鎖のＦｃ領域を示し、「ＩｇＤ Ｆｃ」はδ鎖のＦｃ領域を示し、「ＩｇＥ Ｆｃ」はε鎖のＦｃ領域を示し、「ＩｇＭ Ｆｃ」はμ鎖のＦｃ領域を示す。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃ領域はＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＬ１を含む。「ＩｇＧ－Ｎ－Ｆｃ」は、Ｆｃ領域が抗体アイソタイプの特定のサブクラス（例えばイヌＩｇＧサブクラスＡ、Ｂ、ＣまたはＤ；ネコＩｇＧサブクラス１、２ａまたは２ｂなど）に由来することを示し、「Ｎ」はサブクラスを示す。いくつかの実施形態では、ＩｇＸ ＦｃまたはＩｇＸ－Ｎ－Ｆｃ領域は、イヌ、ネコまたはウマなどのコンパニオンアニマルに由来する。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣまたはＩｇＧ－Ｄなどのイヌγ重鎖から単離される。いくつかの例では、ＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂなどのネコγ重鎖から単離される。ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣまたはＩｇＧ－ＤのＦｃ領域を含む抗体は、組換え産生系においてより高い発現レベルを提供し得る。
【0095】
「ＩｇＸ Ｆｃ」および「ＩｇＸ Ｆｃポリペプチド」という用語は、特に指示されない限り、野生型ＩｇＸ ＦｃポリペプチドおよびバリアントＩｇＸ Ｆｃポリペプチドを含む。
【0096】
「野生型」とは、天然に存在するポリペプチドまたはその断片の非変異バージョンを指す。野生型ポリペプチドを組換え的に産生してもよい。
【0097】
いくつかの実施形態では、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０または配列番号９１のアミノ酸配列を含む。
【0098】
「バリアント」とは、単一または複数の非天然アミノ酸の置換、欠失および／または付加によって参照ポリペプチドとは異なるポリペプチドである。いくつかの実施形態では、バリアントは、参照ポリペプチド（例えば、野生型ポリペプチド）の少なくとも１つの生物活性を保持する。
【0099】
本明細書で使用される「バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド」とは、単一または複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加によって参照ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドとは異なり、参照ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドの少なくとも１つの生物活性を実質的に保持するＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである。
【0100】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、コンパニオンアニマル種のバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、バリアントイヌＩｇＧ ＦｃポリペプチドまたはネコＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド（例えば、バリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃポリペプチド、バリアントイヌＩｇＧ－Ｃ Ｆｃポリペプチド、またはバリアントイヌＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチド、バリアントネコＩｇＧ１ａ Ｆｃポリペプチド、バリアントネコＩｇＧ１ｂ Ｆｃポリペプチド、またはバリアントネコＩｇＧ２ Ｆｃポリペプチド）は、参照（例えば、野生型）ポリペプチドが実質的に欠く活性を有する。例えば、いくつかの実施形態では、バリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃポリペプチド、バリアントイヌＩｇＧ－Ｃ ＦｃポリペプチドまたはバリアントイヌＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチドは、プロテインＡに結合する。
【0101】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、修飾されたプロテインＡ結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、プロテインＡに対する結合親和性が増加している。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して精製され得る。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、修飾されたＣＤ１６結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、ＣＤ１６に対する結合親和性が減少している。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、ＡＤＣＣ免疫応答が低減し得る。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、修飾されたＣ１ｑ結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、Ｃ１ｑに対する結合親和性が低減する。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、補体結合が低減し得る。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、補体媒介性免疫応答が低減し得る。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、修飾されたＦｃＲｎ結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、ＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している。
【0102】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、修飾された新生児受容体（ＦｃＲｎ）結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、例えば低ｐＨで、ＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している。
【0103】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、約５．０～約６．５の範囲のｐＨ、例えば約５．０のｐＨ、約５．２のｐＨ、約５．５のｐＨ、約６．０のｐＨ、約６．２のｐＨ、または約６．５のｐＨで、バイオレイヤー干渉法、表面プラズモン共鳴法、または任意のタンパク質－タンパク質相互作用ツールによって測定して、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドよりも高い親和性でＦｃＲｎに結合する。
【0104】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、約５．０～約６．５の範囲のｐＨ、例えば約５．０のｐＨ、約５．５のｐＨ、約６．０のｐＨ、または約６．５のｐＨで、バイオレイヤー干渉法、表面プラズモン共鳴法、または任意のタンパク質－タンパク質相互作用ツールによって測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、または１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でＦｃＲｎに結合する。
【0105】
いくつかの実施形態では、イヌＩＬ３１に結合する長時間作用性の単離抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は増加した血清半減期を有する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体はバリアントＦｃポリペプチドを含み、この場合、抗ＩＬ３１抗体は野生型Ｆｃポリペプチドを含む抗体と比較して増加した血清半減期を有する。
【0106】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、野生型Ｆｃポリペプチドと比較して増加した親和性でＦｃＲｎに結合することができるバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含み、抗体は、野生型Ｆｃポリペプチドを含む抗ＩＬ３１抗体と比較して増加した血清半減期を有する。
【0107】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の２３位に対応する位置にチロシンまたはフェニルアラニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にチロシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の２０７位に対応する位置にチロシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８２位に対応する位置にチロシンおよび２０７位に対応する位置にチロシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の２０７位に対応する位置にチロシンを含む。
【0108】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の２３位にチロシンまたはフェニルアラニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８２位にチロシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にチロシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の２０７位にチロシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８２位にチロシンおよび２０７位にチロシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の２０７位にチロシンを含む。
【0109】
いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む。
【0110】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、本明細書に記載のバリアントイヌＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣまたはＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ａ）配列番号９６または配列番号９７のアミノ酸配列を含むバリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃポリペプチド；配列番号９４、配列番号９５、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６または配列番号１０７のアミノ酸配列を含むバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド；または（ｃ）配列番号９８または配列番号９９のアミノ酸配列を含むバリアントイヌＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドを含む。
【0111】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、配列番号１０８、配列番号１０９または配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、配列番号１１４、配列番号１１５または配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、配列番号１１７、配列番号１１８または配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、配列番号１２０、配列番号１２１または配列番号１２２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【0112】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、ａ）配列番号１０８、配列番号１０９または配列番号１１０の重鎖アミノ酸配列、ｂ）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列、ｃ）配列番号１１４、配列番号１１５または配列番号１１６の重鎖アミノ酸配列、ｄ）配列番号１１７、配列番号１１８または配列番号１１９の重鎖アミノ酸配列、またはｅ）配列番号１２０、配列番号１２１または配列番号１２２の重鎖アミノ酸配列を含む。
【0113】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ｉ）配列番号２６の軽鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号１０８、配列番号１０９または配列番号１１０の重鎖アミノ酸配列、または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列を含む。
【0114】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ｉ）配列番号２１の軽鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１２５、配列番号１２６または配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列、または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列を含む。
【0115】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ｉ）配列番号３７の軽鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号１１４、配列番号１１５または配列番号１１６の重鎖アミノ酸配列、または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列を含む。
【0116】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ｉ）配列番号３８の軽鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９の重鎖アミノ酸配列、または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列を含む。
【0117】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、（ｉ）配列番号３９の軽鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号１２０、配列番号１２１または配列番号１２２の重鎖アミノ酸配列、または（ｉｉｉ）（ｉ）のような軽鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）のような重鎖アミノ酸配列を含む。
【0118】
「親和性」という用語は、分子の単一の結合部位（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強さを意味する。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、当該技術分野で公知の一般的な方法、例えば、イムノブロット、ＥＬＩＳＡ ＫＤ、ＫｉｎＥｘ Ａ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）または表面プラズモン共鳴法デバイスなどによって測定することができる。
【0119】
「ＫＤ」、「Ｋｄ」、「Ｋｄ」または「Ｋｄ値」という用語は、抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すために互換的に使用される。いくつかの実施形態では、抗体のＫｄは、供給業者の指示書に従って、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＬＬＣ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）などのバイオセンサーを使用するバイオレイヤー干渉法アッセイを使用して測定される。簡潔には、ビオチン化抗原をセンサー先端に結合させ、抗体の会合を９０秒間監視し、解離を６００秒間監視する。希釈および結合工程のためのバッファーは、２０ｍＭホスフェート、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．２である。任意のドリフトを補正するために、バッファーのみのブランク曲線が差し引かれる。データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ分析ソフトウェアを使用して２：１結合モデルに当てはめて、会合速度定数（ｋｏｎ）、解離速度定数（ｋｏｆｆ）およびＫｄを決定する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算される。「ｋｏｎ」という用語は、抗体と抗原との会合の速度定数を指し、「ｋｏｆｆ」という用語は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離の速度定数を指す。
【0120】
抗原またはエピトープに「結合する」という用語は、当該技術分野でよく理解されている用語であり、そのような結合を決定する方法も当該技術分野でよく知られている。分子は、特定の細胞または物質と反応するか、それと会合するか、またはそれに対する親和性を有し、反応、会合または親和性が、当該技術分野で公知の１つ以上の方法、例えば、イムノブロット、ＥＬＩＳＡ ＫＤ、ＫｉｎＥｘ Ａ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、表面プラズモン共鳴法デバイスなどによって検出可能である場合、「結合」を示すと言われる。
【0121】
「表面プラズモン共鳴法」とは、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、Ｕｐｐｓａｌａ，ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによってリアルタイムの生物特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を示す。さらなる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９－２６を参照されたい。
【0122】
「バイオレイヤー干渉法」とは、バイオセンサー先端および内部参照層上の固定化タンパク質の層から反射された光の干渉パターンを分析する光学分析技術を指す。バイオセンサー先端に結合する分子の数の変化は、リアルタイムで測定することができる干渉パターンのシフトを引き起こす。バイオレイヤー干渉法のための非限定的な例示的デバイスは、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）システム（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＬＬＣ）である。例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３７７：２０９－２７７を参照されたい。
【0123】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、バイオレイヤー干渉法によって測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、または１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）で、イヌＩＬ３１、ネコＩＬ３１またはウマＩＬ３１に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、バイオレイヤー干渉法によって測定して、５ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－６Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－７Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－７Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－８Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－８Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－９Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－９Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－１０Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－１０Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－１１Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－１１Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－７Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－７Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－８Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－８Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－９Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－９Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－１０Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－１０Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、１ｘ１０－６Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－７Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～５ｘ１０－８Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－８Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～５ｘ１０－９Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－９Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～５ｘ１０－１０Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－１０Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～５ｘ１０－１１Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－１１Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、１ｘ１０－７Ｍ～５ｘ１０－８Ｍ、１ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－８Ｍ、１ｘ１０－７Ｍ～５ｘ１０－９Ｍ、１ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－９Ｍ、１ｘ１０－７Ｍ～５ｘ１０－１０Ｍ、１ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－１０Ｍ、１ｘ１０－７Ｍ～５ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－７Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、１ｘ１０－７Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－８Ｍ～１ｘ１０－８Ｍ、５ｘ１０－８Ｍ～５ｘ１０－９Ｍ、５ｘ１０－８Ｍ～１ｘ１０－９Ｍ、５ｘ１０－８Ｍ～５ｘ１０－１０Ｍ、５ｘ１０－８Ｍ～１ｘ１０－１０Ｍ、５ｘ１０－８Ｍ～５ｘ１０－１１Ｍ、５ｘ１０－８Ｍ～１ｘ１０－１１Ｍ、５ｘ１０－８Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－８Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、１ｘ１０－８Ｍ～５ｘ１０－９Ｍ、１ｘ１０－８Ｍ～１ｘ１０－９Ｍ、１ｘ１０－８Ｍ～５ｘ１０－１０Ｍ、１ｘ１０－８Ｍ～１ｘ１０－１０Ｍ、１ｘ１０－８Ｍ～５ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－８Ｍ～１ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－８Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、１ｘ１０－８Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－９Ｍ～１ｘ１０－９Ｍ、５ｘ１０－９Ｍ～５ｘ１０－１０Ｍ、５ｘ１０－９Ｍ～１ｘ１０－１０Ｍ、５ｘ１０－９Ｍ～５ｘ１０－１１Ｍ、５ｘ１０－９Ｍ～１ｘ１０－１１Ｍ、５ｘ１０－９Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－９Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、１ｘ１０－９Ｍ～５ｘ１０－１０Ｍ、１ｘ１０－９Ｍ～１ｘ１０－１０Ｍ、１ｘ１０－９Ｍ～５ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－９Ｍ～１ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－９Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、１ｘ１０－９Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－１０Ｍ～１ｘ１０－１０Ｍ、５ｘ１０－１０Ｍ～５ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－１０Ｍ～５ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－１０Ｍ～１ｘ１０－１１Ｍ、１ｘ１０－１０Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、１ｘ１０－１０Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－１１Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－１１Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、５ｘ１０－１１Ｍ～１ｘ１０－１２Ｍ、１ｘ１０－１１Ｍ～５ｘ１０－１２Ｍ、または１ｘ１０－１１Ｍ～１ｘ１０－１２ＭのＫｄでイヌＩＬ３１、ネコＩＬ３１またはウマＩＬ３１に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、イムノブロット解析によって決定して、イヌＩＬ３１、ネコＩＬ３１またはウマＩＬ３１に結合する。
【0124】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、イムノブロット解析および／またはバイオレイヤー干渉法によって決定して、ヒトＩＬ３１に結合しない。
【0125】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３１への結合について本明細書に記載の抗ＩＬ３１抗体（例えば、Ｍ１４、Ｍ１８、Ｍ１９またはＭ８７）と競合する抗ＩＬ３１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体のいずれかとの結合と競合する抗体を作製または使用することができる。いくつかの実施形態では、イヌＩＬ３１またはネコＩＬ３１への結合においてモノクローナルＭ１４抗体と競合する抗ＩＬ３１抗体が提供される。
【0126】
「増加した」または「より大きい」とは、参照に対する増加を意味する。いくつかの実施形態では、「増加した」または「より大きい」とは、参照値に対して約５％以上、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約１００％以上、約１２５％以上、約１５０％以上、約２００％以上、または約３００％以上の全体的な増加を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施形態では、「増加する」または「より大きい」とは、参照値に対して約５％～約５０％、約１０％～約２０％、約５０％～約１００％、約２５％～約７０％の全体的な増加を引き起こす能力を意味する。
【0127】
いくつかの実施形態では、バリアントＦｃポリペプチド、例えばバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、参照Ｆｃポリペプチドに対して約５％以上、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約１００％以上、約１２５％以上、約１５０％以上、約２００％以上の増加した親和性で、ＦｃＲｎまたはＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍに結合することができる。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃポリペプチドは、参照Ｆｃポリペプチドに対して約５％～約５０％、約１０％～約２０％、約５０％～約１００％、約２５％～約７０％の増加した親和性で、ＦｃＲｎまたはＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍに結合することができる。いくつかの実施形態では、参照Ｆｃポリペプチドは野生型Ｆｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、異なるバリアントＦｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、親和性は、約５．０～約６．５の範囲のｐＨでバイオレイヤー干渉法によって測定される。
【0128】
いくつかの実施形態では、薬物動態分析が、半減期、Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘおよび曲線下面積（ＡＵＣ）を含む、任意の数の薬物動態パラメーターを決定するために行われる。例えば、動物に、本明細書に記載の抗ＩＬ３１抗体および異なる時間間隔（例えば、注射前および／または投与後０．５、１、６、２４、４８、７２、１６８、２１６および／または３３６時間）で採取される血清試料を投与することができる。血清試料中の抗体濃度は、例えばＥＬＩＳＡによって決定することができる。
【0129】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、参照抗ＩＬ３１抗体に対して約５％以上、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約１００％以上、約１２５％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、または約３００％以上の血清半減期を有する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、参照抗ＩＬ３１抗体に対して約５％～約５０％、約１０％～約２０％、約５０％～約１００％、約２５％～約７０％の血清半減期を有する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、参照抗ＩＬ３１抗体に対して約１．５倍以上、約２倍以上、約３倍以上の血清半減期を有する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、参照抗ＩＬ３１抗体に対して約５％～約５０％、約１０％～約２０％、約５０％～約１００％、約２５％～約７０％、約２００％～約３００％長い血清半減期を有する。いくつかの実施形態では、参照抗ＩＬ３１抗体は、野生型Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、異なるバリアントＦｃポリペプチドである。
【0130】
「バリアント」とは、最大パーセント配列同一性を達成するために、必要に応じて、配列をアラインメントし、ギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、天然配列ポリペプチドと少なくとも約５０％のアミノ酸配列同一性を有する生物学的に活性なポリペプチドを意味する。そのようなバリアントとしては、例えば、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に１つ以上のアミノ酸残基が付加、欠失されているポリペプチドが挙げられる。
【0131】
いくつかの実施形態では、バリアントは、天然配列ポリペプチドと少なくとも約５０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約６０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約６５％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約７０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約７５％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を有する。
【0132】
本明細書で使用される場合、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」および「相同性」は、最大パーセント配列同一性を達成するために、必要に応じて、配列をアラインメントし、ギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、特定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＮＥ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当該技術分野の技術の範囲内にある様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の完全長にわたって最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。
【0133】
アミノ酸置換は、ポリペプチド中の１つのアミノ酸を別のアミノ酸で置換することを含み得るが、これに限定されない。例示的な置換を表２に示す。アミノ酸置換を目的の抗体に導入し、その生成物を所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングすることができる。
【0134】
【0135】
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って分類され得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
【0136】
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
【0137】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、重鎖および軽鎖を含み、
ａ．重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ１配列；配列番号２、配列番号６２、配列番号８９または配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ２配列；および、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、
ｂ．軽鎖は、配列番号８または配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ１配列；配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ２配列；および、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
ａ．重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ１配列；配列番号２、配列番号６２、配列番号８９または配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ２配列；および、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、
ｂ．軽鎖は、配列番号８または配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ１配列；配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ２配列；および、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性または少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
【0138】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、重鎖および軽鎖を含み、
ａ．（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｂ．（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号１５または配列番号１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｃ．（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｄ．（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｅ．（ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｆ．（ｉ）配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列。
ａ．（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｂ．（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号１５または配列番号１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｃ．（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｄ．（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｅ．（ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列；または
ｆ．（ｉ）配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；（ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有する可変重鎖配列；または（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変軽鎖配列および（ｉｉ）のような可変重鎖配列。
【0139】
「ベクター」という用語は、クローニングされたポリヌクレオチドまたは宿主細胞内で増殖させることができるポリヌクレオチドを含有するように操作することができるポリヌクレオチドを表すために使用される。ベクターは、以下の要素：複製開始点、目的のポリペプチドの発現を調節する１つ以上の調節配列（例えば、プロモーターまたはエンハンサーなど）、または１つ以上の選択マーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子および比色アッセイにおいて使用することができる遺伝子、例えば、β－ガラクトシダーゼなど）のうちの１つ以上を含み得る。「発現ベクター」という用語は、宿主細胞において目的のポリペプチドを発現させるために使用されるベクターを指す。
【0140】
「宿主細胞」とは、ベクターまたは単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであり得るかまたはレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞または真核細胞であり得る。例示的な真核細胞としては、哺乳動物細胞、例えば霊長類または非霊長類動物細胞；真菌細胞、例えば酵母；植物細胞；および昆虫細胞が挙げられる。非限定的な例示的哺乳動物細胞としては、限定されないが、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、２９３細胞、およびＣＨＯ細胞、ならびに２９３－６Ｅ、ＤＧ４４、ＣＨＯ－ＳおよびＣＨＯ－Ｋ細胞などのそれらの誘導体が挙げられる。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、天然、偶発的または意図的な突然変異のために、（形態またはゲノムＤＮＡ補体において）元の親細胞と必ずしも完全に同一ではない場合がある。宿主細胞は、本明細書で提供されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドでｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞を含む。
【0141】
本明細書で使用される「単離された」という用語は、通常天然に見出されるかまたは産生される成分の少なくともいくつかから分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離される場合、「単離された」と呼ばれる。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、ポリペプチドを含有する上清を、それを産生した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離する」ことと考えられる。同様に、ポリヌクレオチドは、それが典型的に天然に見出されるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡなど）の一部ではない場合、または例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合に、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」と呼ばれる。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、「単離された」と呼ばれることがある。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、クロマトグラフィー、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、プロテインＡカラムクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーおよびＣＨＴクロマトグラフィーなどを使用して精製される。
【0142】
「コンパニオンアニマル種」という用語は、ヒトのコンパニオンとなるのに適した動物を指す。いくつかの実施形態では、コンパニオンアニマル種は、イヌ、ネコ、ドッグ、キャット、ホース、ウサギ、フェレット、モルモット、げっ歯類などの小型哺乳動物である。いくつかの実施形態では、コンパニオンアニマル種は、ウマ、ウシ、ブタなどの家畜である。
【0143】
「ＩＬ３１シグナル伝達機能」という用語は、ＩＬ３１がその受容体または受容体複合体に結合するときに起こる下流活性のいずれか１つまたは組み合わせを指す。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１シグナル伝達機能は、ヤヌスキナーゼ（Ｊａｋ）１またはＪａｋ ２シグナル伝達分子の活性化を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１シグナル伝達機能は、ＳＴＡＴ－３またはＳＴＡＴ－５タンパク質のリン酸化を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１シグナル伝達機能は、ＥＲＫ１／２ ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を活性化することを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１シグナル伝達機能は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴシグナル伝達経路を活性化することを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１シグナル伝達機能は、Ｊａｋ１／２シグナル伝達経路を活性化することを含む。
【0144】
「ＳＴＡＴリン酸化」とは、リン酸化によるＳＴＡＴタンパク質の発現後修飾を意味する。例えば、「ＳＴＡＴ－３リン酸化」は、ＳＴＡＴ－３のリン酸化を指し、「ＳＴＡＴ－５リン酸化」はＳＴＡＴ－５のリン酸化を指す。いくつかの実施形態では、ＳＴＡＴ－３のリン酸化がイムノブロット解析によって測定される。例えば、細胞（例えば、イヌ単球ＤＨ８２細胞）を、本明細書に記載の抗ＩＬ３１抗体の存在下、３７℃で２４時間、１５％熱不活性化ウシ胎児血清、２ｍｍｏｌ／Ｌ ＧｌｕｔａＭａｘ、１ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸ナトリウムおよび１０ｎｍ／ｍＬイヌインターフェロン－ｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を含有する増殖培地（例えば、ＭＥＭ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標））において１ウェルあたり１×１０５細胞の密度で９６ウェル細胞培養プレートに置床する。抗ホスホＳＴＡＴ－３抗体および抗ＳＴＡＴ－３抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用した細胞溶解物のイムノブロット解析を使用して、リン酸化ＳＴＡＴ－３および非リン酸化ＳＴＡＴ－３の濃度を互いに対して検出し、β－アクチン対照と比較した。イムノブロットによってタンパク質の濃度を定性的または定量的に決定するための方法は、当業者に理解されている。いくつかの実施形態では、相対濃度は、イムノブロットの目視検査によって定性的に決定される。いくつかの実施形態では、リン酸化ＳＴＡＴ－３および非リン酸化ＳＴＡＴ－３の濃度は、イムノブロットをデジタル画像化し、バンドの強度を決定し、既知濃度のＳＴＡＴ－３タンパク質の線形標準曲線を使用して試料中のリン酸化ＳＴＡＴ－３または非リン酸化ＳＴＡＴ－３の濃度を逆算することによって定量的に決定される。
【0145】
「低減する」または「阻害する」とは、参照と比較して、活性、機能、または量を減少、低減、または停止させることを意味する。いくつかの実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、２０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、５０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、７５％、８５％、９０％、９５％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施形態では、上記の量は、同じ期間にわたる対照用量（プラセボなど）と比較して、一定期間にわたって阻害または減少される。本明細書で使用される「参照」とは、比較目的で使用される任意の試料、標準、またはレベルを指す。参照は、健康または非疾患性試料から得ることができる。いくつかの例では、参照は、コンパニオンアニマルの非疾患性または非治療試料から得られる。いくつかの例では、参照は、試験または治療されている動物ではない特定の種の１つ以上の健康な動物から得られる。
【0146】
本明細書で使用される「実質的に低減した」という用語は、当業者が２つの値の間の差を該値によって測定された生物学的特性の文脈内で統計的に有意であると見なすような、数値と参照数値との間の十分に高い程度の低減を示す。いくつかの実施形態では、実質的に低減した数値は、参照値と比較して、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％のいずれか１つよりも大きく低減する。
【0147】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３１抗体は、コンパニオンアニマル種におけるＩＬ３１シグナル伝達機能を、ＳＴＡＴ－３リン酸化における低減によって測定して、抗体の非存在下におけるＩＬ３１シグナル伝達機能と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％低減することができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１シグナル伝達機能の低減またはＳＴＡＴ－３リン酸化の低減は、１０％～１５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１０％～３０％、１０％～３５％、１０％～４０％、１０％～４５％、１０％～５０％、１０％～６０％、１０％～７０％、１０％～８０％、１０％～９０％、１０％～１００％、１５％～２０％、１５％～２５％、１５％～３０％、１５％～３５％、１５％～４０％、１５％～４５％、１５％～５０％、１５％～６０％、１５％～７０％、１５％～８０％、１５％～９０％、１５％～１００％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２０％～４０％、２０％～４５％、２０％～５０％、２０％～６０％、２０％～７０％、２０％～８０％、２０％～９０％、２０％～１００％、２５％～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、２５％～４５％、２５％～５０％、２５％～６０％、２５％～７０％、２５％～８０％、２５％～９０％、２５％～１００％、３０％～３５％、３０％～４０％、３０％～４５％、３０％～５０％、３０％～６０％、３０％～７０％、３０％～８０％、３０％～９０％、３０％～１００％、３５％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、３５％～６０％、３５％～７０％、３５％～８０％、３５％～９０％、３５％～１００％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～６０％、４０％～７０％、４０％～８０％、４０％～９０％、４０％～１００％、４５％～５０％、４５％～６０％、４５％～７０％、４５％～８０％、４５％～９０％、４５％～１００％、５０％～６０％、５０％～７０％、５０％～８０％、５０％～９０％、５０％～１００％、６０％～７０％、６０％～８０％、６０％～９０％、６０％～１００％、７０％～８０％、７０％～９０％、７０％～１００％、８０％～９０％、８０％～１００％、または９０％～１００％である。
【0148】
薬学的組成物
「薬学的製剤」および「薬学的組成物」という用語は、有効成分の生物活性が有効であることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象に対して許容できないほど毒性である追加の成分を含まない調製物を指す。
「薬学的製剤」および「薬学的組成物」という用語は、有効成分の生物活性が有効であることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象に対して許容できないほど毒性である追加の成分を含まない調製物を指す。
【0149】
「薬学的に許容される担体」とは、対象への投与のための「薬学的組成物」を一緒に含む治療剤と共に使用するための当該技術分野で慣用的な非毒性の固体、半固体、または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、処方助剤、または担体を指す。薬学的に許容される担体は、使用される投与量および濃度でレシピエントに非毒性であり、製剤の他の成分と適合性である。薬学的に許容される担体は、使用される製剤に適している。薬学的に許容される担体の例としては、アルミナ；ステアリン酸アルミニウム；レシチン；血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、イヌまたは他の動物アルブミン；バッファー、例えばホスフェート、シトレート、トロメタミンまたはＨＥＰＥＳバッファー；グリシン；ソルビン酸；ソルビン酸カリウム；飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物；水；塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、または三ケイ酸マグネシウム；ポリビニルピロリドン、セルロース系物質；ポリエチレングリコール；スクロース；マンニトール；または限定されないが、アルギニンを含むアミノ酸が挙げられる。
【0150】
薬学的組成物は、凍結乾燥形態で保存することができる。したがって、いくつかの実施形態では、調製プロセスは凍結乾燥工程を含む。次いで、凍結乾燥組成物は、典型的には、イヌ、ネコまたはウマへの投与前に、非経口投与に適した水性組成物として再製剤化され得る。他の実施形態では、特に抗体が熱変性および酸化変性に対して非常に安定である場合、薬学的組成物は、液体として、すなわち水性組成物として保存することができ、これをイヌ、ネコまたはウマに直接または適切な希釈で投与することができる。凍結乾燥組成物は、滅菌注射用水（ＷＦＩ）で再構成することができる。抗菌剤（例えば、静菌試薬、例えばベンジルアルコール）が含まれ得る。したがって、本発明は、固体または液体形態の薬学的組成物を提供する。
【0151】
薬学的組成物のｐＨは、投与される場合、約ｐＨ５～約ｐＨ８の範囲であり得る。本発明の組成物は、治療目的で使用される場合、無菌である。無菌状態は、滅菌濾過膜（例えば、０．２ミクロン膜）による濾過を含む、当該技術分野で公知のいくつかの手段のいずれかによって達成することができる。無菌状態は、抗菌剤の有無にかかわらず維持され得る。
【0152】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、５．０～６．２、５．０～６．０または５．３～５．７のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１または６．２のｐＨを有する。
【0153】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、Ｌ－ヒスチジン、塩化ナトリウムおよびポリソルベート８０を含む。
【0154】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、８０ｎＭ～２００ｎＭ、１００ｎＭ～１８０ｎＭ、１００ｎＭ～１７５ｎＭ、１１０ｎＭ～１７０ｎＭ、１２０ｎＭ～１６０ｎＭ、１２０ｎＭ～１５０ｎＭ、１３０ｎＭ～１５０ｎＭ、１３０ｎＭ～１６０ｎＭ、１００ｎＭ、８０ｎＭ、１１０ｎＭ、１２０ｎＭ、１３０ｎＭ、１４０ｎＭ、１５０ｎＭ、１６０ｎＭ、１７０ｎＭ、１８０ｎＭまたは２００ｎＭの濃度で塩化ナトリウムを含む。
【0155】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、０．００５ｍｇ／ｍＬ～０．５ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～０．１ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ～０．５ｍｇ／ｍＬ、０．００５ｍｇ／ｍＬ～０．０１ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、０．０７ｍｇ／ｍＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０９ｍｇ／ｍＬまたは０．１ｍｇ／ｍＬの濃度のポリソルベート８０を含む。
【0156】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、５ｍＭ～１００ｍＭ、１０ｍＭ～５０ｍＭ、２０ｍＭ～３０ｍＭ、１０ｍＭ～３０ｍＭ、２０ｍＭ～８０ｍＭ、３０ｍＭ～７０ｍＭ、４０ｍＭ～６０ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭまたは５０ｍＭの濃度でＬ－ヒスチジンを含む。
【0157】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、ｍ－クレゾールまたはベンジルアルコールを含む。いくつかの実施形態では、ｍ－クレゾールの濃度は、約０．２％、約０．１％～約０．３％、約０．０８％～約０．２５％、または約０．０５％～約０．２５％である。いくつかの実施形態では、ベンジルアルコールの濃度は、約１％、約０．５％～約２％、約０．２％～約２．５％、約１％～約５％、約０．５％～約５％、または約１％～約３％である。
【0158】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は糖を含む。いくつかの実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、Ｄ－マンニトール、マルトース、および／またはソルビトールである。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、０．５％～２０％、１％～１０％、１％～５％、１％～３％、０．５％、１％、２％、３％、４％、５％または１０％の濃度で糖を含む。
【0159】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、抗菌剤を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、ｍ－クレゾールまたはメチルパラベンを含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、０．２％のｍ－クレゾールを含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体または薬学的組成物は、０．９％のメチルパラベンを含む。
【0160】
抗体および薬学的組成物の使用
本発明の抗体を含む抗体または薬学的組成物は、ＩＬ－３１誘導状態を治療するために有用であり得る。本明細書で使用される場合、「ＩＬ３１誘導状態」とは、ＩＬ３１濃度の上昇したレベルまたは変化した勾配に関連する、それによって引き起こされる、またはそれによって特徴付けられる疾患を意味する。そのようなＩＬ３１誘導状態には、限定されないが、掻痒性疾患またはアレルギー疾患が含まれる。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１誘導状態は、アトピー性皮膚炎、掻痒症、喘息、乾癬、強皮症または湿疹である。ＩＬ３１誘導状態は、イヌ、ネコまたはウマを含むがこれらに限定されないコンパニオンアニマルにおいて示され得る。
本発明の抗体を含む抗体または薬学的組成物は、ＩＬ－３１誘導状態を治療するために有用であり得る。本明細書で使用される場合、「ＩＬ３１誘導状態」とは、ＩＬ３１濃度の上昇したレベルまたは変化した勾配に関連する、それによって引き起こされる、またはそれによって特徴付けられる疾患を意味する。そのようなＩＬ３１誘導状態には、限定されないが、掻痒性疾患またはアレルギー疾患が含まれる。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１誘導状態は、アトピー性皮膚炎、掻痒症、喘息、乾癬、強皮症または湿疹である。ＩＬ３１誘導状態は、イヌ、ネコまたはウマを含むがこれらに限定されないコンパニオンアニマルにおいて示され得る。
【0161】
本明細書で使用される場合、「治療」とは、有益なまたは所望の臨床結果を得るための手法である。本明細書で使用される「治療」とは、コンパニオンアニマルを含む哺乳動物における疾患の治療剤の任意の投与または適用を包含する。本開示の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、限定されないが、１つ以上の症候の緩和、疾患の程度の減弱、疾患の拡大の予防または遅延、疾患の再発の予防または遅延、疾患進行の遅延または減速、病状の改善、疾患または疾患の進行の阻害、疾患またはその進行の阻害または減速、その発症の停止、および寛解（部分的であるか全体的であるかにかかわらず）のいずれか１つ以上が含まれる。増殖性疾患の病理学的結果の低減も「治療」に包含される。本明細書で提供される方法は、治療のこれらの態様のいずれか１つ以上を企図する。上記と一致して、治療という用語は、障害のすべての態様の１００％の除去を必要としない。
【0162】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体またはそれを含む薬学的組成物を、ＩＬ３１誘導状態を治療するために本明細書の方法に従って利用することができる。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体または薬学的組成物を、ＩＬ３１誘導状態を治療するために、イヌ、ネコまたはウマなどのコンパニオンアニマルに投与する。
【0163】
物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストの「治療的有効量」は、治療される疾患の種類、病状、疾患の重症度および経過、治療目的の種類、任意の以前の治療、病歴、以前の治療に対する応答、担当獣医の裁量、動物の年齢、性別および体重、ならびに動物において所望の応答を誘発する物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストの能力などの要因に従って変動し得る。治療的有効量はまた、物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストの任意の毒性または有害効果を、治療上有益な効果が上回る量である。治療的有効量は、１回以上の投与で送達され得る。治療的有効量とは、所望の治療的または予防的結果を達成するために、必要な投与量および期間で有効な量を指す。
【0164】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体または抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物は、非経口投与、皮下投与、静脈内注入または筋肉内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体または抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物は、ボーラス注射として、または一定期間にわたる連続的注入によって投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体または抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物は、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路または吸入経路によって投与される。
【0165】
本明細書に記載される抗ＩＬ３１抗体は、一投与あたり０．０１ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、一投与あたり０．５ｍｇ／ｋｇ体重～５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、一投与あたり０．１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、一投与あたり０．１ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、一投与あたり１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、０．５ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、１ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、５ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、１０ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、２０ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、５０ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、５ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、０．５ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重～０．５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重～０．１ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、または５ｍｇ／ｋｇ体重～５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。
【0166】
抗ＩＬ３１抗体または抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物は、コンパニオンアニマルに単回、または一連の治療にわたって投与することができる。例えば、抗ＩＬ３１抗体または抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物は、少なくとも１回、２回以上、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、または少なくとも５回投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体または抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物は、コンパニオンアニマルに、１ヶ月に１回、例えば６ヶ月まで１ヶ月に１回投与することができる。いくつかの実施形態では、長時間作用性抗ＩＬ３１抗体または長時間作用性抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物は、コンパニオンアニマルに、必要に応じて、２ヶ月ごと、３ヶ月ごと、４ヶ月ごと、５ヶ月ごと、または６ヶ月ごとに投与することができる。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体または抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物は、コンパニオンアニマルに、５週間ごとに、例えば６ヶ月まで投与することができる。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体または抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物は、コンパニオンアニマルに、６週間ごとに、例えば６ヶ月まで投与することができる。いくつかの実施形態では、長時間作用性抗ＩＬ３１抗体または長時間作用性抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物は、コンパニオンアニマルに、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、９週間ごと、１０週間ごと、１１週間ごと、１２週間ごと、１３週間ごと、１４週間ごと、１５週間ごと、１６週間ごと、１８週間ごと、２０週間ごと、２２週間ごと、または２４週間ごとに投与することができる。
【0167】
いくつかの実施形態では、用量は、少なくとも２週間または３週間連続して週に１回投与され、いくつかの実施形態では、この治療サイクルは２回以上繰り返され、任意選択で１週間以上の治療なしで散在する。他の実施形態では、治療的有効用量は、２～５日間連続して１日１回投与され、いくつかの実施形態では、この治療サイクルは２回以上繰り返され、任意選択で１日以上または１週間以上の治療なしで散在する。
【0168】
いくつかの実施形態では、長時間作用性抗ＩＬ３１抗体は、参照抗ＩＬ３１抗体と比較して、低減した用量および／または増加した投与間隔で投与される。
【0169】
１つ以上のさらなる治療剤と「組み合わせて」投与することは、任意の順序での同時（コンカレント）および連続または逐次投与を含む。「同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）」という用語は、本明細書では、投与の少なくとも一部が時間的に重複するか、または１つの治療剤の投与が他の治療剤の投与と比較して短期間内である２つ以上の治療剤の投与を指すために使用される。例えば、２つ以上の治療剤は、およその指定された数分以下の時間間隔で投与される。「遂次的に（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ）」という用語は、本明細書では、１つ以上の他の薬剤の投与を中断した後に１つ以上の薬剤の投与が続く、または１つ以上の他の薬剤の投与前に１つ以上の薬剤の投与が始まる、２つ以上の治療剤の投与を指すために使用される。例えば、２つ以上の治療剤の投与は、およその指定された分数を超える時間間隔で投与される。本明細書で使用される場合、「と併せて」とは、別の治療様式に加えて１つの治療様式を投与することを指す。したがって、「と併せて」は、動物への他の治療様式の投与前、投与中または投与後の１つの治療様式の投与を指す。
【0170】
いくつかの実施形態では、方法は、抗ＩＬ３１抗体または抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物と組み合わせて、Ｊａｋ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤またはＭＡＰＫ阻害剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、抗ＩＬ３１抗体、または、抗ＩＬ３１抗体、抗ＩＬ４Ｒ抗体、抗ＩＬ１７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＩＬ４抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＩＬ２３抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＣＤ１１α抗体、抗ＩＬ６Ｒ抗体、抗α４－インテグリン抗体、抗ＩＬ１２抗体、抗ＩＬ１β抗体、抗ＩＬ５抗体、抗ＩＬ５Ｒ抗体、抗ＩＬ２２抗体、抗ＩＬ２２Ｒ抗体、抗ＩＬ３３抗体、抗ＩＬ３３Ｒ抗体、抗ＴＳＬＰ抗体、抗ＴＳＬＰＲ抗体もしくは抗ＢｌｙＳ抗体を含む薬学的組成物と組み合わせて投与することを含む。
【0171】
抗ＩＬ３１抗体または抗ＩＬ３１抗体を含む薬学的組成物を、ＩＬ３１への抗体の結合を許容する条件下で、細胞に曝露する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、エクスビボで抗体または薬学的組成物に曝露される。いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏで抗体または薬学的組成物に曝露される。いくつかの実施形態では、細胞は、細胞内ＩＬ３１への抗体の結合を許容する条件下で、抗ＩＬ３１抗体または薬学的組成物に曝露される。いくつかの実施形態では、細胞は、細胞外ＩＬ３１への抗体の結合を許容する条件下で、抗ＩＬ３１抗体または薬学的組成物に曝露される。いくつかの実施形態では、細胞は、限定されないが、対象への腹腔内注射、筋肉内注射、静脈内注射を含む、本明細書に記載の投与方法のいずれか１つ以上によって、抗ＩＬ３１抗体または薬学的組成物にｉｎ ｖｉｖｏで曝露され得る。いくつかの実施形態では、細胞は、抗体または薬学的組成物を含む培地に細胞を曝露することによって、抗ＩＬ３１抗体または薬学的組成物にエクスビボで曝露され得る。いくつかの実施形態では、細胞膜の透過性は、抗体または薬学的組成物を含む培地に細胞を曝露する前に、当業者によって理解されているいくつもの方法（細胞を電気穿孔すること、または塩化カルシウムを含む溶液に細胞を曝露することなど）の使用によって影響され得る。
【0172】
いくつかの実施形態では、結合は、細胞によるＩＬ３１シグナル伝達機能の低減をもたらす。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１抗体は、細胞におけるＩＬ３１シグナル伝達機能を、ＳＴＡＴ－３リン酸化における低減によって測定して、抗体の非存在下におけるＩＬ３１シグナル伝達機能と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％低減することができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ３１シグナル伝達機能の低減またはＳＴＡＴ－３リン酸化の低減は、１０％～１５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１０％～３０％、１０％～３５％、１０％～４０％、１０％～４５％、１０％～５０％、１０％～６０％、１０％～７０％、１０％～８０％、１０％～９０％、１０％～１００％、１５％～２０％、１５％～２５％、１５％～３０％、１５％～３５％、１５％～４０％、１５％～４５％、１５％～５０％、１５％～６０％、１５％～７０％、１５％～８０％、１５％～９０％、１５％～１００％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２０％～４０％、２０％～４５％、２０％～５０％、２０％～６０％、２０％～７０％、２０％～８０％、２０％～９０％、２０％～１００％、２５％～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、２５％～４５％、２５％～５０％、２５％～６０％、２５％～７０％、２５％～８０％、２５％～９０％、２５％～１００％、３０％～３５％、３０％～４０％、３０％～４５％、３０％～５０％、３０％～６０％、３０％～７０％、３０％～８０％、３０％～９０％、３０％～１００％、３５％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、３５％～６０％、３５％～７０％、３５％～８０％、３５％～９０％、３５％～１００％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～６０％、４０％～７０％、４０％～８０％、４０％～９０％、４０％～１００％、４５％～５０％、４５％～６０％、４５％～７０％、４５％～８０％、４５％～９０％、４５％～１００％、５０％～６０％、５０％～７０％、５０％～８０％、５０％～９０％、５０％～１００％、６０％～７０％、６０％～８０％、６０％～９０％、６０％～１００％、７０％～８０％、７０％～９０％、７０％～１００％、８０％～９０％、８０％～１００％、または９０％～１００％である。
【0173】
ＩＬ３１誘導状態の検出、診断および監視のために抗ＩＬ３１抗体、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを使用する方法が本明細書で提供される。コンパニオンアニマルが抗ＩＬ３１抗体療法に応答するかどうかを決定する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、方法は、動物がＩＬ３１を発現する細胞を有するかどうかを、抗ＩＬ３１抗体を使用して検出することを含む。いくつかの実施形態では、検出方法は、試料を抗体、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドと接触させることと、結合のレベルが参照試料または比較試料（例えば、対照）のレベルと異なるかどうかを決定することとを含む。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の抗体またはポリペプチドが対象動物のための適切な治療であるかどうかを決定するために有用であり得る。
【0174】
いくつかの実施形態では、試料は生物学的試料である。「生物学的試料」という用語は、生きているものまたは以前に生きていたものからの物質の量を意味する。いくつかの実施形態では、生物学的試料は細胞または細胞／組織溶解物である。いくつかの実施形態では、生物学的試料としては、限定されないが、血液、（例えば、全血）、血漿、血清、尿、滑液および上皮細胞が挙げられる。
【0175】
いくつかの実施形態では、細胞または細胞／組織溶解物を抗ＩＬ３１抗体と接触させ、抗体と細胞との間の結合を決定する。試験細胞が、同じ組織型の参照細胞と比較して結合活性を示す場合、それは、対象が抗ＩＬ３１抗体による治療から利益を得るであろうことを示し得る。いくつかの実施形態では、試験細胞は、コンパニオンアニマルの組織に由来する。
【0176】
特異的抗体－抗原結合を検出するための当該技術分野で公知の様々な方法を使用することができる。実施され得る例示的なイムノアッセイとしては、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、比濁阻害イムノアッセイ（ＮＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）が挙げられる。指標部分または標識基は、対象抗体に結合することができ、アッセイ装置および適合性イムノアッセイ手順の利用可能性によってしばしば決定される方法の様々な使用の必要性を満たすように選択される。適切な標識としては、限定されないが、放射性核種（例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、または３２Ｐ）、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼもしくはｐ－ガラクトシダーゼ）、蛍光部分もしくはタンパク質（例えば、フルオレセイン、ローダミン、フィコエリトリン、ＧＦＰもしくはＢＦＰ）、または発光部分（例えば、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｄｏｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）によって供給されるＱｄｏｔ（商標）ナノ粒子）が挙げられる。上記の様々なイムノアッセイを実施する際に使用される一般的な技術は、当業者に公知である。
【0177】
診断の目的のために、抗体を含むポリペプチドは、限定されないが、放射性同位体、蛍光標識、および当該技術分野で公知の様々な酵素－基質標識を含む検出可能な部分で標識することができる。標識を抗体にコンジュゲートする方法は、当該技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は標識される必要はなく、その存在は、第１の抗ＩＬ３１抗体に結合する第２の標識化抗体を使用して検出することができる。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３１抗体は、競合的結合アッセイ、直接および間接サンドイッチアッセイ、ならびに免疫沈降アッセイなどの任意の公知のアッセイ方法で使用することができる。Ｚｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｐｐ．１４７－１５８（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９８７）。抗ＩＬ３１抗体およびポリペプチドは、ｉｎ ｖｉｖｏ画像化などのｉｎ ｖｉｖｏ診断アッセイにも使用することができる。一般に、抗体またはポリペプチドは、免疫シンチグラフィーを使用して目的の細胞または組織を局在化させることができるように、放射性核種（例えば、１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ、１４Ｃ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、３Ｈ、または本明細書に概説されるものを含む任意の他の放射性核種標識）で標識される。抗体はまた、当該技術分野で公知の技術を使用して病理学における染色試薬として使用され得る。
【0178】
いくつかの実施形態では、第１の抗体が診断に使用され、第２の抗体が治療剤として使用される。いくつかの実施形態では、第１および第２の抗体は異なる。いくつかの実施形態では、第１および第２の抗体は両方とも、別々のエピトープに結合することによって、同時に抗原に結合することができる。
【0179】
以下の実施例は、本開示の特定の態様を例示するものであり、本開示を限定することを決して意図するものではない。
【実施例】
【0180】
実施例１
イヌＩＬ３１に結合するマウスモノクローナル抗体の同定
ＩＬ３１タンパク質（配列番号２２）をコードするイヌＩＬ３１遺伝子を、Ｃ末端にポリ－Ｈｉｓタグを有するように合成し、哺乳動物発現ベクターにクローニングした。イヌＩＬ３１遺伝子を保有するプラスミドを２９３細胞にトランスフェクトした。
イヌＩＬ３１に結合するマウスモノクローナル抗体の同定
ＩＬ３１タンパク質（配列番号２２）をコードするイヌＩＬ３１遺伝子を、Ｃ末端にポリ－Ｈｉｓタグを有するように合成し、哺乳動物発現ベクターにクローニングした。イヌＩＬ３１遺伝子を保有するプラスミドを２９３細胞にトランスフェクトした。
【0181】
イヌＩＬ３１タンパク質を含有する上清を回収し、濾過した。イヌＩＬ３１を、Ｎｉ－ＮＴＡカラム（ＣａｐｔｉｖＡ（登録商標）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｓｉｎ，Ｒｅｐｌｉｇｅｎ）を使用して親和性精製した。
【0182】
マウスモノクローナル抗体を、２９３細胞によって産生されるイヌＩＬ３１を免疫原として使用する標準的な免疫化を使用して同定した。２つの異なるアジュバントを免疫化中に使用し（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）、モノクローナル抗体を標準的なハイブリドーマ技術によって得た。酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を開発して、ＩＬ３１結合抗体を産生するクローンをスクリーニングした。第１のイヌＩＬ３１をビオチン化し、次いでストレプトアビジン被覆ウェルに導入した。次いで、免疫化血清をウェルに加えた後、洗浄し、ＨＲＰコンジュゲート抗マウス抗体で検出した。イヌＩＬ３１結合抗体の存在により、陽性シグナルが発現した。ＥＬＩＳＡによって試験した数千のクローンのうち、シグナル強度に基づいて最も高い結合親和性を有する１７０のクローンを、バイオセンサーアッセイ（Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ Ｏｃｔｅｔ）によるさらなる試験のために選択した。ビオチン化イヌＩＬ３１をセンサー先端に結合させ、抗イヌＩＬ３１抗体を含有するハイブリドーマクローン上清を遅いオフレート（抗体とリガンドとの間の解離速度）に基づいて選択した。上位１９の候補の結合親和性を単一濃度で測定し、抗体濃度をＢｉｏｓｅｎｓｏｒ Ｏｃｔｅｔを使用したプロテインＡ力価アッセイによって測定した後、平衡解離定数（Ｋｄ）として報告した。上位１９の候補のＫｄはそれぞれ１０ｎＭ未満であった。
【0183】
さらに、ＥＬＩＳＡに基づく高い結合活性を有する１７０個のクローンの各々を中和活性について試験した。以下の実施例４に記載の細胞ベースの機能アッセイを実施して、イヌＤＨ８２細胞を使用したイヌＩＬ３１媒介ｐＳＴＡＴシグナル伝達の低減における上位候補の活性を評価した。４つの上位クローン（Ｍ１４、Ｍ１８、Ｍ１９およびＭ８７）をさらなる調査のために選択した。注目すべきことに、ＥＬＩＳＡによって同定された高親和性結合剤の大部分は機能的ではなかった。
【0184】
実施例２
モノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡ配列の同定
Ｍ１４、Ｍ１８、Ｍ１９およびＭ８７を産生するハイブリドーマ細胞をペレット化した。ＲＮＡを抽出し、マウス免疫グロブリン（Ｉｇ）可変ドメインを増幅するためのオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、標準的な技術を用いてｃＤＮＡを得た。４つのクローンの各々の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）を配列決定し、配列アラインメントによって分析した（図１、配列番号３６～４３）。注目すべきことに、Ｍ１８のＣＤＲ－Ｌ１が１４位にイソロイシンを有し（配列番号６３）、Ｍ１４およびＭ１９が１４位にメチオニンを有し（配列番号８）、Ｍ１８のＣＤＲ－Ｈ２が９位にチロシンを有し（配列番号６２および配列番号８７）、Ｍ１４およびＭ１９が１４位にアスパラギン酸を有する（配列番号２および配列番号８９）ことを除いて、４つの活性抗体のうちの３つ（Ｍ１４、Ｍ１８およびＭ１９）は同じ６つのＣＤＲ配列を共有する。ＣＤＲ配列の類似性は、Ｍ１４、Ｍ１８およびＭ１９が共通のエピトープを共有することを示唆している。
モノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡ配列の同定
Ｍ１４、Ｍ１８、Ｍ１９およびＭ８７を産生するハイブリドーマ細胞をペレット化した。ＲＮＡを抽出し、マウス免疫グロブリン（Ｉｇ）可変ドメインを増幅するためのオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、標準的な技術を用いてｃＤＮＡを得た。４つのクローンの各々の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）を配列決定し、配列アラインメントによって分析した（図１、配列番号３６～４３）。注目すべきことに、Ｍ１８のＣＤＲ－Ｌ１が１４位にイソロイシンを有し（配列番号６３）、Ｍ１４およびＭ１９が１４位にメチオニンを有し（配列番号８）、Ｍ１８のＣＤＲ－Ｈ２が９位にチロシンを有し（配列番号６２および配列番号８７）、Ｍ１４およびＭ１９が１４位にアスパラギン酸を有する（配列番号２および配列番号８９）ことを除いて、４つの活性抗体のうちの３つ（Ｍ１４、Ｍ１８およびＭ１９）は同じ６つのＣＤＲ配列を共有する。ＣＤＲ配列の類似性は、Ｍ１４、Ｍ１８およびＭ１９が共通のエピトープを共有することを示唆している。
【0185】
実施例３
ＣＨＯ細胞からのマウス－イヌキメラおよびイヌ化ＩＬ３１－ｍＡｂ Ｍ１４の発現および精製
マウスＭ１４ ＶＨ（配列番号２５）およびマウスＶＬ（配列番号２４）をイヌ定常重鎖およびイヌ定常軽鎖に融合するために、キメラ抗体をコードするＤＮＡ配列を設計した。ヌクレオチド配列を化学的に合成し、ＣＨＯ宿主細胞へのトランスフェクションに適した発現ベクターに挿入した。ＣＨＯ細胞へのトランスフェクション後、軽鎖もしくは重鎖タンパク質またはその両方が細胞から分泌された。例えば、イヌＩｇＧ－Ｂを使用するキメラＭ１４を、一段階プロテインＡカラムクロマトグラフィーによって精製した。
ＣＨＯ細胞からのマウス－イヌキメラおよびイヌ化ＩＬ３１－ｍＡｂ Ｍ１４の発現および精製
マウスＭ１４ ＶＨ（配列番号２５）およびマウスＶＬ（配列番号２４）をイヌ定常重鎖およびイヌ定常軽鎖に融合するために、キメラ抗体をコードするＤＮＡ配列を設計した。ヌクレオチド配列を化学的に合成し、ＣＨＯ宿主細胞へのトランスフェクションに適した発現ベクターに挿入した。ＣＨＯ細胞へのトランスフェクション後、軽鎖もしくは重鎖タンパク質またはその両方が細胞から分泌された。例えば、イヌＩｇＧ－Ｂを使用するキメラＭ１４を、一段階プロテインＡカラムクロマトグラフィーによって精製した。
【0186】
マウスＭ１４ ＶＨおよびＶＬを、ＣＤＲ移植のための鋳型として適切なイヌ生殖系列抗体配列を検索および選択し、続いてタンパク質モデル化を行うことによってイヌ化した。イヌ化Ｍ１４ ＩｇＧ－Ｂ（配列番号１８および配列番号２１）は、プロテインＡカラムまたは他のクロマトグラフィー法、例えばイオン交換カラムクロマトグラフィー、疎水性相互作用カラムクロマトグラフィー、混合モードカラムクロマトグラフィー、例えばＣＨＴ、またはマルチモーダルモードカラムクロマトグラフィー、例えばＣａｐｔｏＭＭＣを用いて一段階で容易に発現および精製された。低ｐＨまたは他のウイルス不活性化およびウイルス除去工程を適用することができる。精製されたタンパク質を賦形剤と混合し、濾過によって滅菌して、本発明の薬学的組成物を調製する。薬学的組成物は、ＩＬ３１を阻害するために結合するのに十分な量でアトピー性皮膚炎を有するイヌに投与する。
【0187】
次いで、ベクターを使用して、ＦｒｅｅｓｔｙｌｅＭａｘ（商標）トランスフェクション試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＣＨＯ－Ｓ細胞でパイロットスケールのトランスフェクションを行った。上清を、馴化培地を清澄化することによって回収した。タンパク質をシングルパスプロテインＡクロマトグラフィー工程で精製し、さらなる調査に使用した。
【0188】
実施例４
ＩＬ３１結合活性の実証
この実施例は、キメラＭ１４（配列番号２６および配列番号２７）およびイヌ化Ｍ１４（配列番号１８および配列番号２１）を用いて例示される本発明の抗体が、治療活性のために必要な動態でイヌＩＬ３１に結合することを実証する。
ＩＬ３１結合活性の実証
この実施例は、キメラＭ１４（配列番号２６および配列番号２７）およびイヌ化Ｍ１４（配列番号１８および配列番号２１）を用いて例示される本発明の抗体が、治療活性のために必要な動態でイヌＩＬ３１に結合することを実証する。
【0189】
結合分析は、バイオセンサーＯｃｔｅｔを使用して以下のように行った。簡潔には、イヌＩＬ３１を、製造者の指示書に従って、ＥＺ－Ｌｉｎｋ（商標）ＮＨＳ－ＬＣ－Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ番号２１３３６）を使用して第一級アミン基で、またはＥＺ－Ｌｉｎｋ（商標）Ｂｉｏｔｉｎ－ＬＣ－Ｈｙｄｒａｚｉｄｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ番号２１３４０）を使用してグリカン基でビオチン化した。遊離の未反応ビオチンを、広範な透析によってビオチン化ＩＬ３１から除去した。ビオチン化イヌＩＬ３１をストレプトアビジンセンサー先端に捕捉した。４つの異なる濃度（４００、２００、６６．６、および３３ｎＭ）のキメラおよびイヌ化Ｍ１４抗体とヒトおよびイヌＩＬ３１（アミンコンジュゲートビオチン）との会合、ならびに１００ｎＭのイヌ化Ｍ１４抗体とイヌＩＬ３１（グリカンコンジュゲートビオチン）との会合を９０秒間監視した。解離を６００秒間監視した。任意のドリフトを補正するために、バッファーのみのブランク曲線を差し引いた。ＦｏｒｔｅＢｉｏ（商標）データ分析ソフトウェアを使用して、データを２：１結合モデルに当てはめて、ｋｏｎ、ｋｏｆｆおよびＫｄを決定した。希釈およびすべての結合工程のためのバッファーは、２０ｍＭホスフェート、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．２であった。
【0190】
ＣＨＯ－Ｓ細胞から、Ｃ末端ポリＨｉｓタグを有するイヌＩＬ３１を発現させ、精製した。ヒトＩＬ３１をＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄから入手し、ＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎバイオセンサーをＦｏｒｔｅＢｉｏ（カタログ番号１８－５０９）から入手した。結合動態は以下の通りであった。リガンドイヌＩＬ３１（アミンコンジュゲートビオチン）の場合、キメラＭ１４のＫｄ（Ｍ）は、イヌ化Ｍ１４について＜１．０×１０－１１（図２）および＜１．０×１０－１１（図３）であった。リガンドイヌＩＬ３１（グリカンコンジュゲートビオチン）の場合、イヌ化Ｍ１４のＫｄ（Ｍ）は＜１．０×１０－１２であり、ｋｏｆｆ（１／ｓ）は＜１．０×１０－７であった。
【0191】
キメラＭ１４およびイヌ化Ｍ１４は、ヒトＩＬ３１との明らかな結合シグナルを有していなかった。そのため、Ｋｄを測定することができなかった。
【0192】
実施例５
Ｍ１４がイヌＩＬ３１シグナル伝達を阻害することの実証
そのＩＬ３１受容体に結合した後、ＩＬ－３１はヤヌスキナーゼ（Ｊａｋ）１およびＪａｋ２シグナル伝達分子を活性化する。次に、活性化Ｊａｋは、下流シグナル伝達ＳＴＡＴ－３およびＳＴＡＴ－５のリン酸化を刺激する。抗ホスホ－Ｓｔａｔ３イムノブロット解析を使用して、無細胞培地のプロテインＡ精製画分から抗ＩＬ３１活性を検出した（Ｇｏｎｚａｌｅｓ ｅｔ．ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２０１３；２４：４８－ｅ１２）。簡潔には、イヌ単球ＤＨ８２細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を、３７℃で２４時間、１５％熱不活性化ウシ胎児血清、２ｍＭｏｌ／Ｌ ＧｌｕｔａＭａｘ、１ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸ナトリウムおよび１０ｎｇ／ｍＬイヌインターフェロン－ｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を含有するＭＥＭ増殖培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）において、１ウェルあたり１×１０５細胞の密度で、９６ウェル平底細胞培養プレートに置床した。この実験では、イヌＩＬ３１－Ｆｃの濃度は５ｎｇ／ｍＬ（８ｎＭ）であった。抗ホスホＳＴＡＴ－３および抗ＳＴＡＴ－３抗体は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。抗ベータアクチン抗体は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製であった。図４に示すように、イヌＩＬ３１シグナル伝達は、（ＳＴＡＴ－３リン酸化の低減によって証明されるように）細胞に曝露されたイヌ化Ｍ１４の濃度が増加するにつれて減少した（レーン１：抗ＩＬ３１抗体なし、レーン２：３．３ｎＭ、レーン３：６．６ｎＭ、レーン４：９．９ｎＭ、レーン５：１３．２ｎＭ）。
Ｍ１４がイヌＩＬ３１シグナル伝達を阻害することの実証
そのＩＬ３１受容体に結合した後、ＩＬ－３１はヤヌスキナーゼ（Ｊａｋ）１およびＪａｋ２シグナル伝達分子を活性化する。次に、活性化Ｊａｋは、下流シグナル伝達ＳＴＡＴ－３およびＳＴＡＴ－５のリン酸化を刺激する。抗ホスホ－Ｓｔａｔ３イムノブロット解析を使用して、無細胞培地のプロテインＡ精製画分から抗ＩＬ３１活性を検出した（Ｇｏｎｚａｌｅｓ ｅｔ．ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２０１３；２４：４８－ｅ１２）。簡潔には、イヌ単球ＤＨ８２細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を、３７℃で２４時間、１５％熱不活性化ウシ胎児血清、２ｍＭｏｌ／Ｌ ＧｌｕｔａＭａｘ、１ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸ナトリウムおよび１０ｎｇ／ｍＬイヌインターフェロン－ｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を含有するＭＥＭ増殖培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）において、１ウェルあたり１×１０５細胞の密度で、９６ウェル平底細胞培養プレートに置床した。この実験では、イヌＩＬ３１－Ｆｃの濃度は５ｎｇ／ｍＬ（８ｎＭ）であった。抗ホスホＳＴＡＴ－３および抗ＳＴＡＴ－３抗体は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。抗ベータアクチン抗体は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製であった。図４に示すように、イヌＩＬ３１シグナル伝達は、（ＳＴＡＴ－３リン酸化の低減によって証明されるように）細胞に曝露されたイヌ化Ｍ１４の濃度が増加するにつれて減少した（レーン１：抗ＩＬ３１抗体なし、レーン２：３．３ｎＭ、レーン３：６．６ｎＭ、レーン４：９．９ｎＭ、レーン５：１３．２ｎＭ）。
【0193】
実施例６
Ｍ１４イヌＩＬ３１結合エピトープの同定
Ｍ１４によって認識されるイヌＩＬ３１エピトープを同定するために、複数のＧＳＴイヌＩＬ３１断片融合分子を作製し、タンパク質を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において細胞内発現させた。ＧＳＴ融合タンパク質を膜に転写した後、キメラＭ１４を使用して膜をプローブした。ＩＬ３１断片がエピトープを含む場合、陽性シグナルが得られた。
Ｍ１４イヌＩＬ３１結合エピトープの同定
Ｍ１４によって認識されるイヌＩＬ３１エピトープを同定するために、複数のＧＳＴイヌＩＬ３１断片融合分子を作製し、タンパク質を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において細胞内発現させた。ＧＳＴ融合タンパク質を膜に転写した後、キメラＭ１４を使用して膜をプローブした。ＩＬ３１断片がエピトープを含む場合、陽性シグナルが得られた。
【0194】
【0195】
実施例７
Ｍ１４がネコＩＬ３１に交差反応することの実証
Ｍ１４抗体がネコＩＬ３１（配列番号２８）またはウマＩＬ３１（配列番号２９）を認識するかどうかを調べるために、各タンパク質をヒトＦｃに融合し、哺乳動物２９３細胞において発現させた。部分的に精製したタンパク質を膜にブロットし、Ｍ１４抗体でプローブした。図１のイムノブロットは、Ｍ１４がネコＩＬ３１に結合することを実証している。イムノブロットアッセイは、Ｍ１４とウマＩＬ３１との間の結合を検出しなかった。しかし、バイオレイヤー干渉法分析により、Ｍ１４抗体はウマＩＬ３１に結合するが、より低い親和性で結合することが明らかになった。センサーに固定化されているビオチン化ウマＩＬ３１を使用した予備的Ｋｄ測定により、親和性（Ｋｄ）が約１０～５０ｎＭであることが明らかになった。
Ｍ１４がネコＩＬ３１に交差反応することの実証
Ｍ１４抗体がネコＩＬ３１（配列番号２８）またはウマＩＬ３１（配列番号２９）を認識するかどうかを調べるために、各タンパク質をヒトＦｃに融合し、哺乳動物２９３細胞において発現させた。部分的に精製したタンパク質を膜にブロットし、Ｍ１４抗体でプローブした。図１のイムノブロットは、Ｍ１４がネコＩＬ３１に結合することを実証している。イムノブロットアッセイは、Ｍ１４とウマＩＬ３１との間の結合を検出しなかった。しかし、バイオレイヤー干渉法分析により、Ｍ１４抗体はウマＩＬ３１に結合するが、より低い親和性で結合することが明らかになった。センサーに固定化されているビオチン化ウマＩＬ３１を使用した予備的Ｋｄ測定により、親和性（Ｋｄ）が約１０～５０ｎＭであることが明らかになった。
【0196】
実施例８
ネコ化Ｍ１４
Ｍ１４可変軽鎖を（配列番号３２）としてネコ化し、Ｍ１４可変重鎖を（配列番号３３）としてネコ化した。最初に、マウス重鎖可変配列および軽鎖可変配列を使用して、ネコＶＨおよびＶＬの適切なバリアントを検索した。ＣＤＲを移植するために適切なネコのフレームを選択した。これらは、構造モデル化を使用してさらに最適化される。ネコＩｇＧ重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）およびネコ軽鎖定常ドメイン（ＣＬ１）に、ネコ化ＶＨおよびＶＬを融合した。
ネコ化Ｍ１４
Ｍ１４可変軽鎖を（配列番号３２）としてネコ化し、Ｍ１４可変重鎖を（配列番号３３）としてネコ化した。最初に、マウス重鎖可変配列および軽鎖可変配列を使用して、ネコＶＨおよびＶＬの適切なバリアントを検索した。ＣＤＲを移植するために適切なネコのフレームを選択した。これらは、構造モデル化を使用してさらに最適化される。ネコＩｇＧ重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）およびネコ軽鎖定常ドメイン（ＣＬ１）に、ネコ化ＶＨおよびＶＬを融合した。
【0197】
ネコＭ１４キメラ抗体（配列番号３０および配列番号３１）またはネコ化Ｍ１４抗体（配列番号３４および配列番号３５）は、ＩＬ３１誘導状態の治療のためにネコに投与されるものであり得る。
【0198】
実施例９
Ｍ１４イヌＩＬ３１結合エピトープの同定
Ｍ１４によって認識されるイヌＩＬ３１エピトープのアミノ酸残基をさらに同定するために、アラニン変異を保有する複数のＧＳＴイヌＩＬ３１エピトープ断片融合分子を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させた。図８～図１２は、抗イヌＩＬ３１－ｍＡｂ（Ｍ１４）またはイヌ化Ｍ１４（上のパネル）および抗ＧＳＴ抗体対照（下のパネル）でプローブしたイヌＩＬ３１－ＧＳＴ融合タンパク質の精密エピトープマッピングのイムノブロットを示す。各レーンにおける試験したエピトープ断片をイムノブロットの下に列挙する。断片名は、試験した成熟イヌＩＬ３１（配列番号４４）のアミノ酸の範囲およびアラニン変異が含まれる場合はその位置を示す。ＩＬ３１断片が野生型エピトープを含む場合、陽性シグナルが得られ、ＩＬ３１断片が抗体－リガンド相互作用に重要な残基にアラニン置換を含む場合、陰性シグナルが得られた。
Ｍ１４イヌＩＬ３１結合エピトープの同定
Ｍ１４によって認識されるイヌＩＬ３１エピトープのアミノ酸残基をさらに同定するために、アラニン変異を保有する複数のＧＳＴイヌＩＬ３１エピトープ断片融合分子を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させた。図８～図１２は、抗イヌＩＬ３１－ｍＡｂ（Ｍ１４）またはイヌ化Ｍ１４（上のパネル）および抗ＧＳＴ抗体対照（下のパネル）でプローブしたイヌＩＬ３１－ＧＳＴ融合タンパク質の精密エピトープマッピングのイムノブロットを示す。各レーンにおける試験したエピトープ断片をイムノブロットの下に列挙する。断片名は、試験した成熟イヌＩＬ３１（配列番号４４）のアミノ酸の範囲およびアラニン変異が含まれる場合はその位置を示す。ＩＬ３１断片が野生型エピトープを含む場合、陽性シグナルが得られ、ＩＬ３１断片が抗体－リガンド相互作用に重要な残基にアラニン置換を含む場合、陰性シグナルが得られた。
【0199】
エピトープマッピング研究の結果を以下の表３に要約する。結果は、成熟イヌＩＬ３１（配列番号４４）のＰ１２、Ｓ１３、Ｄ１４およびＫ１７が抗体Ｍ１４の結合に関与し、Ｒ１６およびＩ１８が部分的にＭ１４認識に関与することを示唆している。要するに、この研究の結果は、抗体Ｍ１４のＣＤＲに結合するＩＬ３１ポリペプチドのモチーフがＰＳＤＸ１Ｘ２ＫＩであり、ここで、Ｘ１およびＸ２は可変である（配列番号４５）ことを示唆している。
【0200】
【0201】
実施例１０
Ｍ１４は、ＰＳＤＸ１Ｘ２ＫＩエピトープモチーフを有する他の種のＩＬ３１に特異的に結合する
Ｍ１４によって認識されるＩＬ３１エピトープモチーフ（ＰＳＤＸ１Ｘ２ＫＩ；配列番号４５）は、ヒト（配列番号４６）またはマウス（配列番号６１）のＩＬ３１アミノ酸配列には存在しない。しかし、このモチーフは、ネコを含むいくつかの他の種で同定されている：
Ｆｅｌｉｓ ｃａｔｕｓ（ＸＰ＿０１１２８６１４０．１；配列番号２８）
Ｏｄｏｂｅｎｕｓ ｒｏｓｍａｒｕｓ ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ（ＸＰ＿００４３９５９９８．１；配列番号４７）
Ｐａｐｉｏ Ａｎｕｂｉｓ（ＸＰ＿００３９０７３５８．１；配列番号４９）
Ｕｒｓｕｓ ｍａｒｉｔｉｍｕｓ（ＸＰ＿００８６８７１６６．１；配列番号５１）
Ｌｅｐｔｏｎｙｃｈｏｔｅｓ ｗｅｄｄｅｌｌｉｉ（ＸＰ＿００６７４６５９５．１；配列番号５２）
Ｐａｎｔｈｅｒａ ｔｉｇｒｉｓ ａｌｔａｉｃａ（ＸＰ＿００７０７９６３６．１；配列番号５３）
Ａｃｉｎｏｎｙｘ ｊｕｂａｔｕｓ（ＸＰ＿０１４９１９２７５．１；配列番号５４）
Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（ＥＨＨ６６８０５．１；配列番号５５）
Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ（ＥＨＨ２１２７９．１号；配列番号５６）
Ｍａｎｄｒｉｌｌｕｓ ｌｅｕｃｏｐｈａｅｕｓ（ＸＰ＿０１１８１９８８２．１；配列番号５７）
Ｃｈｌｏｒｏｃｅｂｕｓ ｓａｂａｅｕｓ（ＸＰ＿００８００３２１１．１；配列番号５８）
Ｃｅｒｃｏｃｅｂｕｓ ａｔｙｓ（ＸＰ＿０１１９２６６２５．１；配列番号５９）
Ｒｈｉｎｏｐｉｔｈｅｃｕｓ ｒｏｘｅｌｌａｎａ（ＸＰ＿０１０３６６６４７．１；配列番号６０）
Ｍ１４は、ＰＳＤＸ１Ｘ２ＫＩエピトープモチーフを有する他の種のＩＬ３１に特異的に結合する
Ｍ１４によって認識されるＩＬ３１エピトープモチーフ（ＰＳＤＸ１Ｘ２ＫＩ；配列番号４５）は、ヒト（配列番号４６）またはマウス（配列番号６１）のＩＬ３１アミノ酸配列には存在しない。しかし、このモチーフは、ネコを含むいくつかの他の種で同定されている：
Ｆｅｌｉｓ ｃａｔｕｓ（ＸＰ＿０１１２８６１４０．１；配列番号２８）
Ｏｄｏｂｅｎｕｓ ｒｏｓｍａｒｕｓ ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ（ＸＰ＿００４３９５９９８．１；配列番号４７）
Ｐａｐｉｏ Ａｎｕｂｉｓ（ＸＰ＿００３９０７３５８．１；配列番号４９）
Ｕｒｓｕｓ ｍａｒｉｔｉｍｕｓ（ＸＰ＿００８６８７１６６．１；配列番号５１）
Ｌｅｐｔｏｎｙｃｈｏｔｅｓ ｗｅｄｄｅｌｌｉｉ（ＸＰ＿００６７４６５９５．１；配列番号５２）
Ｐａｎｔｈｅｒａ ｔｉｇｒｉｓ ａｌｔａｉｃａ（ＸＰ＿００７０７９６３６．１；配列番号５３）
Ａｃｉｎｏｎｙｘ ｊｕｂａｔｕｓ（ＸＰ＿０１４９１９２７５．１；配列番号５４）
Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（ＥＨＨ６６８０５．１；配列番号５５）
Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ（ＥＨＨ２１２７９．１号；配列番号５６）
Ｍａｎｄｒｉｌｌｕｓ ｌｅｕｃｏｐｈａｅｕｓ（ＸＰ＿０１１８１９８８２．１；配列番号５７）
Ｃｈｌｏｒｏｃｅｂｕｓ ｓａｂａｅｕｓ（ＸＰ＿００８００３２１１．１；配列番号５８）
Ｃｅｒｃｏｃｅｂｕｓ ａｔｙｓ（ＸＰ＿０１１９２６６２５．１；配列番号５９）
Ｒｈｉｎｏｐｉｔｈｅｃｕｓ ｒｏｘｅｌｌａｎａ（ＸＰ＿０１０３６６６４７．１；配列番号６０）
【0202】
セイウチＩＬ３１（配列番号４７）およびオリーブヒヒＩＬ３１（配列番号４９）は、抗体Ｍ１４によって認識され得るＰＳＤＸ１Ｘ２ＫＩエピトープ（配列番号４５）を有する。タンパク質精製を容易にするために、Ｃ末端ＨｉｓタグをセイウチＩＬ３１（配列番号４８）およびオリーブヒヒＩＬ３１（配列番号５０）に付加した。ウェスタンブロット分析により、Ｍ１４がセイウチＩＬ３１に結合することが確認された（図１３）。Ｍ１４抗体またはその誘導体は、上記の種のいずれかにおけるＩＬ３１誘導性疾患の治療剤および診断剤に使用することができる。
【0203】
実施例１１
イヌ化Ｍ１４抗体の熱安定性
イヌ化Ｍ１４抗体の熱安定性を、ＺｏｅｔｉｓのＣＹＴＯＰＯＩＮＴ（商標）、市販の抗ＩＬ３１抗体と広範囲のｐＨにわたって比較し、示差走査蛍光（ＤＳＦ）を使用して分析した。異なるｐＨでの各抗体の融解温度（Ｔｍ）を以下の表４に列挙する。ＣＹＴＯＰＯＩＮＴ（商標）およびイヌ化Ｍ１４抗体の両方を、ＰＤ Ｍｉｎｉｔｒａｐ（商標）Ｇ－２５カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、表４に列挙したアッセイバッファーにバッファー交換した。各抗体のＴｍを、同じバッファーおよびタンパク質濃度を使用して評価した。イヌ化Ｍ１４抗体は、広いｐＨ範囲にわたって、ＣＹＴＯＰＯＩＮＴ（商標）と比較して改善された熱安定性を示した。さらに、０．２２ｍｇ／ｍｌ抗体、ＣＹＴＯＰＯＩＮＴ（商標）では、５５℃で２日間のストレス条件下で沈殿したが、イヌ化Ｍ１４抗体では沈殿物は観察されなかった。
イヌ化Ｍ１４抗体の熱安定性
イヌ化Ｍ１４抗体の熱安定性を、ＺｏｅｔｉｓのＣＹＴＯＰＯＩＮＴ（商標）、市販の抗ＩＬ３１抗体と広範囲のｐＨにわたって比較し、示差走査蛍光（ＤＳＦ）を使用して分析した。異なるｐＨでの各抗体の融解温度（Ｔｍ）を以下の表４に列挙する。ＣＹＴＯＰＯＩＮＴ（商標）およびイヌ化Ｍ１４抗体の両方を、ＰＤ Ｍｉｎｉｔｒａｐ（商標）Ｇ－２５カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、表４に列挙したアッセイバッファーにバッファー交換した。各抗体のＴｍを、同じバッファーおよびタンパク質濃度を使用して評価した。イヌ化Ｍ１４抗体は、広いｐＨ範囲にわたって、ＣＹＴＯＰＯＩＮＴ（商標）と比較して改善された熱安定性を示した。さらに、０．２２ｍｇ／ｍｌ抗体、ＣＹＴＯＰＯＩＮＴ（商標）では、５５℃で２日間のストレス条件下で沈殿したが、イヌ化Ｍ１４抗体では沈殿物は観察されなかった。
【0204】
【0205】
実施例１２
イヌ化Ｍ１４抗体バッファー製剤
様々なバッファー製剤中のイヌ化Ｍ１４抗体の熱安定性を分析した。リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムまたはＬ－ヒスチジンを含有するバッファーを検討した。他の製剤変数としては、異なるｐＨ（ｐＨ５．２、５．５、６．０、６．５および７．０）、異なる濃度の塩化ナトリウム（５０ｍＭおよび１４０ｍＭ）、異なるポリソルベート（ポリソルベート２０およびポリソルベート８０）、ならびに異なる抗菌剤（ｍ－クレゾールおよびメチルパラベン）が挙げられた。各バッファー中のイヌ化Ｍ１４抗体の融解温度（Ｔｍ）を、示差走査蛍光（ＤＳＦ）技術によって２０℃～９５℃で測定した。表５は、試験した様々なバッファー中のイヌ化Ｍ１４抗体のＴｍ値を列挙している。
イヌ化Ｍ１４抗体バッファー製剤
様々なバッファー製剤中のイヌ化Ｍ１４抗体の熱安定性を分析した。リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムまたはＬ－ヒスチジンを含有するバッファーを検討した。他の製剤変数としては、異なるｐＨ（ｐＨ５．２、５．５、６．０、６．５および７．０）、異なる濃度の塩化ナトリウム（５０ｍＭおよび１４０ｍＭ）、異なるポリソルベート（ポリソルベート２０およびポリソルベート８０）、ならびに異なる抗菌剤（ｍ－クレゾールおよびメチルパラベン）が挙げられた。各バッファー中のイヌ化Ｍ１４抗体の融解温度（Ｔｍ）を、示差走査蛍光（ＤＳＦ）技術によって２０℃～９５℃で測定した。表５は、試験した様々なバッファー中のイヌ化Ｍ１４抗体のＴｍ値を列挙している。
【0206】
表５
＊ピークなしは、明確な融点が観察されなかったことを示す。
【0207】
以下の糖類（１％）：スクロース、トレハロース、Ｄ－マンニトール、マルトースおよびソルビトールの各々の１つの存在下での製剤Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ５およびＤ６のＴｍを、ＤＳＦを使用してさらに試験した。
【0208】
糖類を含むおよび含まない製剤も、４０℃で１日間、続いて４５℃で１日間、続いて５５℃で４日間のストレス条件下で試験した。サイズ排除ＨＰＬＣ分析を使用して、ストレス条件に供した後の様々な製剤中の抗体のモノマー形態および凝集形態を検出および定量した。試料をＳＨＯＤＥＸ（商標）ＫＷ８０３カラム（８ｍｍ×３００ｍｍ）にロードし、ＫＷ－Ｇガードカラムに取り付けた。Ａｇｉｌｅｎｔ １１００クロマトグラフィーシステムを、０．５ｍＬ／分の一定流速で、ランニングバッファーとして２×ＰＢＳ（２７０ｍＭ ＮａＣｌ、５．４ｍＭ ＫＣｌ、８．６ｍＭ Ｎａ２ＰＯ４）、ｐＨ７．２を用いて使用した。カラムは、サイログロブリン、ウシγ－グロブリン、ニワトリ卵白アルブミン、ウマミオグロビンおよびビタミンＢ１２（分子量１，３５０～６７０，０００）で構成されるＢＩＯＲＡＤゲル濾過標準（カタログ番号１５１－１９０１）で較正した。溶液中に残存するモノマー抗体の量は、２１４ｎｍまたは２８０ｎｍでＵＶ吸光度を測定し、曲線下のピーク面積を計算することによって決定した。
【0209】
ＤＳＦおよびＨＰＬＣ分析に基づいて、Ｌ－ヒスチジン、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０を含有し、５．０～６．２のｐＨを有する製剤、例えば製剤Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ６、Ｄ７、Ｄ１０およびＤ１２がより望ましいと考えられた。例えば、単回投与に望ましい製剤は以下の通りである。２０ｍＭ Ｌ－ヒスチジン；１４０ｍＭ塩化ナトリウム；ポリソルベート８０（０．０５ｍｇ／ｍＬ）；ｐＨ５．５。（防腐剤の存在下での）複数回投与に望ましい製剤は以下の通りである。
１．２０ｍＭ Ｌ－ヒスチジン；１４０ｍＭ塩化ナトリウム；ポリソルベート８０（０．０５ｍｇ／ｍＬ）；スクロース（１～３％）；ｍ－クレゾール（０．２％）；ｐＨ５．５；および
２．２０ｍＭ Ｌ－ヒスチジン；１４０ｍＭ塩化ナトリウム；ポリソルベート８０（０．０５ｍｇ／ｍＬ）；トレハロース（１～３％）；メチルパラベン（０．９％）；ｐＨ５．５。
１．２０ｍＭ Ｌ－ヒスチジン；１４０ｍＭ塩化ナトリウム；ポリソルベート８０（０．０５ｍｇ／ｍＬ）；スクロース（１～３％）；ｍ－クレゾール（０．２％）；ｐＨ５．５；および
２．２０ｍＭ Ｌ－ヒスチジン；１４０ｍＭ塩化ナトリウム；ポリソルベート８０（０．０５ｍｇ／ｍＬ）；トレハロース（１～３％）；メチルパラベン（０．９％）；ｐＨ５．５。
【0210】
実施例１３
イヌＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍ結合が増強されたバリアントイヌＩｇＧ－Ｂポリペプチドのスクリーニング
ポリ－Ｈｉｓタグを有するイヌＦｃＲｎ（配列番号９２）およびイヌＢ２Ｍ（配列番号９３）ヘテロダイマー複合体をＨＥＫ細胞において一過性に発現させ、Ｎｉ－ＮＴＡクロマトグラフィーを使用して精製した。
イヌＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍ結合が増強されたバリアントイヌＩｇＧ－Ｂポリペプチドのスクリーニング
ポリ－Ｈｉｓタグを有するイヌＦｃＲｎ（配列番号９２）およびイヌＢ２Ｍ（配列番号９３）ヘテロダイマー複合体をＨＥＫ細胞において一過性に発現させ、Ｎｉ－ＮＴＡクロマトグラフィーを使用して精製した。
【0211】
イヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃファージライブラリのＦａｓｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｆｏｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ Ａｆｆｉｎｉｔｙ（ＦＡＳＥＢＡ）を行った。簡潔には、イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドの読み枠をプラスミドｐＦＡＳＥＢＡにサブクローニングした。イヌＩｇＧ－Ｂ／イヌＦｃＲｎ／イヌＢ２Ｍ複合体の３次元タンパク質モデル化に基づいて、イヌＩｇＧ－Ｂの１２アミノ酸位置が、ＩｇＧ－ＢとＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍとの結合に潜在的に関与していると同定された。同定されたイヌＩｇＧ－Ｂの１２位置は、配列番号９０のＴｈｒ（２１）、Ｌｅｕ（２２）、Ｌｅｕ（２３）、Ｉｌｅ（２４）、Ａｌａ（２５）、Ｔｈｒ（２７）、Ｇｌｙ（８０）、Ｈｉｓ（８１）、Ｇｌｎ（８２）、Ｌｅｕ（８５）、Ｍｅｔ（２０１）およびＡｓｎ（２０７）であった。
【0212】
イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃの１２個の単一部位ＮＮＫ変異ライブラリを、２０個の可能なアミノ酸の各々が１２個の部位の各々で置換されたバリアントＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドを各ライブラリが含むように調製した。各ファージライブラリをｐＨ６．０でイヌＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍ複合体に対してパニングした。３回のパニングの後、ＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍ結合が増強されている可能性があるものとして合計５３個のＦｃファージクローンを同定し、配列決定によって変異を同定した。
【0213】
ＳＡＳＡタグを有する５３個のバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドの各々を発現する単一大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）コロニーを培養し、Ｆｃポリペプチドを発現するように誘導した。バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドを含有する細胞培地を、プレートまたはＢｉａｃｏｒｅチップ上で固定化ＢＳＡに曝露した。バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドを結合したプレートまたはチップを可溶型イヌＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍ複合体に曝露して、ｐＨ６での遅いオフレート（ｋｏｆｆ）についてスクリーニングした。野生型ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドと比較してイヌＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍ複合体とのより遅いｋｏｆｆを示す各バリアントＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドを同定した。４つのリードバリアントイヌＩｇＧ－Ｂポリペプチドを同定した：Ｌ（２３）Ｙ（配列番号９５；「Ｙ００」）；Ｌ（２３）Ｆ（配列番号９４；「Ｆ００」）；Ｌ（２３）Ｍ；およびＬ（２３）Ｓ。
【0214】
リードバリアントイヌＩｇＧ－Ｂポリペプチドの各々のｋｏｆｆをさらに調べた。ビオチン化イヌＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍ複合体をＢｉａｃｏｒｅチップに固定化し、ｐＨ６．０でＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用して、被分析物としての各バリアントイヌＩｇＧ－Ｂポリペプチドに曝露した。野生型イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドのｋｏｆｆ（１／ｓ）は１．２２×１０－１；バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＬ（２３）Ｙ（「Ｙ００」）のｋｏｆｆ（１／ｓ）は１．３８×１０－２；バリアントＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＬ（２３）Ｆ（「Ｆ００」）のｋｏｆｆ（１／ｓ）は６．３１×１０－２および８．４７×１０－２；バリアントイヌＩｇＧ－ＢポリペプチドＬ（２３）Ｍのｋｏｆｆ（１／ｓ）は１．２６×１０－１；および、バリアントイヌＩｇＧ－ＢポリペプチドＬ（２３）Ｓのｋｏｆｆ（１／ｓ）は２．４１×１０－１であった。
【0215】
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用して結合分析を行った。簡潔には、ＳＡＳＡタグを有するリードバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドを、それぞれＳｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＣＭ５に固定化した。各バリアントＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドと様々な濃度のイヌＦｃＲｎ／Ｂ２Ｍ複合体（１２．５、２５、５０、１００および２００ｎＭ）との会合を、定常状態に達するまで２５℃で監視した。１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５００ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０のランニングバッファーを使用した。バッファーのみのブランク曲線を対照として使用した。結果を図１０～図１４に示す。野生型イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドの定常状態Ｋｄは１．２５×１０－６（図１４）；バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＬ（２３）Ｙ（「Ｙ００」）の定常状態Ｋｄは１．１３×１０－７（図１５）；バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＬ（２３）Ｆ（「Ｆ００」）の定常状態Ｋｄは３．６７×１０－７（図１６）；バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＬ（２３）Ｍの定常状態Ｋｄは４．０６×１０－７（図１７）；および、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＹＴＥの定常状態Ｋｄは８．６２×１０－８（図１８）であった。
【0216】
実施例１４
イヌＩｇＧにおけるＰｈｅ変異がイヌＦｃＲｎ相互作用を増強する
ＦｃＲｎに対するバリアントイヌＦｃポリペプチドの親和性を、キメラ抗体との関連で評価した。イヌカッパ軽鎖に融合した抗体可変軽鎖、ならびに配列番号９６（Ｆ００；プロテインＡ＋；Ｃ１ｑ－；ＣＤ１６－）または配列番号９７（プロテインＡ＋；Ｃ１ｑ＋；ＣＤ１６＋）を含むバリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃポリペプチドおよび配列番号９８（Ｆ００；プロテインＡ＋；Ｃ１ｑ－；ＣＤ１６－）または配列番号９９（プロテインＡ＋；Ｃ１ｑ＋；ＣＤ１６＋）を含むバリアントイヌＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチドに融合した可変重鎖を発現させた。
イヌＩｇＧにおけるＰｈｅ変異がイヌＦｃＲｎ相互作用を増強する
ＦｃＲｎに対するバリアントイヌＦｃポリペプチドの親和性を、キメラ抗体との関連で評価した。イヌカッパ軽鎖に融合した抗体可変軽鎖、ならびに配列番号９６（Ｆ００；プロテインＡ＋；Ｃ１ｑ－；ＣＤ１６－）または配列番号９７（プロテインＡ＋；Ｃ１ｑ＋；ＣＤ１６＋）を含むバリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃポリペプチドおよび配列番号９８（Ｆ００；プロテインＡ＋；Ｃ１ｑ－；ＣＤ１６－）または配列番号９９（プロテインＡ＋；Ｃ１ｑ＋；ＣＤ１６＋）を含むバリアントイヌＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチドに融合した可変重鎖を発現させた。
【0217】
結合分析は、バイオセンサーＯｃｔｅｔＲｅｄを使用して以下のように行った。簡潔には、ビオチン化ＴＮＦαをストレプトアビジンセンサー先端に捕捉した。２０μｇ／ｍＬの抗体の会合体をＴＮＦαに結合させた。次いで、複合体を使用して、ｐＨ６．０でイヌＦｃＲｎ（５０μｇ／ｍＬ）に結合させた。解離をｐＨ７．２で行った。
【0218】
キメラバリアントイヌＩｇＧ－Ａ「Ｆ００」抗体（図１９、Ａ）およびＩｇＧ－Ｄ「Ｆ００」抗体（図１９、Ｂ）の結合プロファイルによって示されるように、Ｐｈｅ変異は、Ｐｈｅ変異を有しないキメラバリアントイヌＩｇＧ－Ａ（図１９、Ｃ）およびＰｈｅ変異を有しないＩｇＧ－Ｄ（図１９、Ｄ）と比較して、低ｐＨ（ｐＨ６．０、２０ｍＭクエン酸Ｎａ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ）でのイヌＦｃＲｎ結合を増強した。Ｐｈｅ変異を有するキメラバリアントイヌＩｇＧ－ＡおよびＩｇＧ－Ｄ抗体（図１９、ＡおよびＢ）は、低ｐＨ（ｐＨ６．０）でのイヌＦｃＲｎとの会合の増強および中性ｐＨ（ＰＢＳ ｐＨ７．２）での迅速な解離を示した。キメラバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ「Ｆ００」抗体でも同様の結合プロファイルの増強が観察された。
【0219】
実施例１５
イヌＩｇＧにおけるＰｈｅ変異の薬物動態
薬物動態分析を、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを使用して行った。ラットに、２ｍｇ／ｋｇのキメラバリアントイヌＩｇＧ－Ａ「Ｆ００」抗体およびＰｈｅ変異を有しないキメラバリアントイヌＩｇＧ－Ａを皮下投与した（１群あたり２匹のラット）。血清試料を注射前ならびに注射後０．５、１、６、２４、４８、７２、１６８、２１６および３３６時間にラットから採取した。血清試料中のイヌキメラ抗体濃度を以下のようにＥＬＩＳＡによって決定した。
イヌＩｇＧにおけるＰｈｅ変異の薬物動態
薬物動態分析を、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを使用して行った。ラットに、２ｍｇ／ｋｇのキメラバリアントイヌＩｇＧ－Ａ「Ｆ００」抗体およびＰｈｅ変異を有しないキメラバリアントイヌＩｇＧ－Ａを皮下投与した（１群あたり２匹のラット）。血清試料を注射前ならびに注射後０．５、１、６、２４、４８、７２、１６８、２１６および３３６時間にラットから採取した。血清試料中のイヌキメラ抗体濃度を以下のようにＥＬＩＳＡによって決定した。
【0220】
捕捉抗体（ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬ）を各ウェル中１００μｌで９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｐプレート上にコーティングした。プレートを４℃で一晩インキュベートし、ＰＢＳＴ（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含有するＰＢＳ）で５回洗浄した。各ウェルをＰＢＳＴ中５％ ＢＳＡ ２００μｌでブロックし、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで５回洗浄した。対照抗体の希釈液（１，０００ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬ）をプレートに二連で添加し、対照抗体を含まないブランクウェルと共に使用して標準曲線を作成した。血清試料を、５％ ＢＳＡ－ＰＢＳＴにおける１０倍、２０倍および４０倍希釈によって調製し、プレートに添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴで５回洗浄した。１００μｌのＨＲＰコンジュゲート抗体（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、カタログ番号ＨＣＡ２０４Ｐ）を５％ ＢＳＡ－ＰＢＳＴ中０．２５μｇ／ｍＬで各ウェルに添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴで５回洗浄した。１００μｌのＱｕａｎｔａＢｌｕ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５１６９）を各ウェルに添加した。蛍光を、１０～１５分間のインキュベーション後に３２５ｎｍ／４２０ｎｍで測定した（発光／励起）。血清試料中の抗ＴＮＦαの力価を標準曲線に対して計算した。
【0221】
ＩｇＧ－ＡのＡＵＣ０～３３６ｈは１５０９７０であったが、ＩｇＧ－Ａ「Ｆ００」は８４８９２４ｎｇ／ｍＬ＊ｈｒであった（図２０）。最終半減期は、それぞれ３３時間および１５２時間と推定された。したがって、単一のＰｈｅ変異は、ラットにおける抗体の薬物動態プロファイルを有意に改善した。
【0222】
実施例１６
イヌ、ネコおよびウマＩｇＧ ＦｃにおけるＰｈｅ変異
イヌＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣおよびＩｇＧ－Ｄ ＦｃにおけるＰｈｅ変異と、ＦｃＲｎとの相互作用を、３次元タンパク質構造分析を使用してモデル化した。Ｐｈｅの芳香族側鎖は、「ＷＰＥ」モチーフのＰｒｏ疎水性環（π－ＣＨ）においてイヌＦｃＲｎと疎水性相互作用を有するようである。さらに、Ｐｈｅ疎水性側鎖は、同じ「ＷＰＥ」モチーフのＰｒｏの隣のＧｌｕ側鎖と直接接触していてもよい。この相互作用は、中性ｐＨなどでＧｌｕ側鎖が脱プロトン化されて負電荷になる場合、エネルギーペナルティを有する可能性がある。したがって、芳香族からＧｌｕ－Ｈへの相互作用を最小限に抑えるために、Ｇｌｕ残基のある程度のプロトン化が必要とされ得る。これは、Ｐｈｅ変異を有するバリアントＩｇＧとＦｃＲｎとの間の相互作用が中性ｐＨで低減する理由を説明し得る。タンパク質構造分析に基づいて、相互作用はイヌＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣおよびＩｇＧ－Ｄ Ｆｃの間で保存されているようである。
イヌ、ネコおよびウマＩｇＧ ＦｃにおけるＰｈｅ変異
イヌＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣおよびＩｇＧ－Ｄ ＦｃにおけるＰｈｅ変異と、ＦｃＲｎとの相互作用を、３次元タンパク質構造分析を使用してモデル化した。Ｐｈｅの芳香族側鎖は、「ＷＰＥ」モチーフのＰｒｏ疎水性環（π－ＣＨ）においてイヌＦｃＲｎと疎水性相互作用を有するようである。さらに、Ｐｈｅ疎水性側鎖は、同じ「ＷＰＥ」モチーフのＰｒｏの隣のＧｌｕ側鎖と直接接触していてもよい。この相互作用は、中性ｐＨなどでＧｌｕ側鎖が脱プロトン化されて負電荷になる場合、エネルギーペナルティを有する可能性がある。したがって、芳香族からＧｌｕ－Ｈへの相互作用を最小限に抑えるために、Ｇｌｕ残基のある程度のプロトン化が必要とされ得る。これは、Ｐｈｅ変異を有するバリアントＩｇＧとＦｃＲｎとの間の相互作用が中性ｐＨで低減する理由を説明し得る。タンパク質構造分析に基づいて、相互作用はイヌＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣおよびＩｇＧ－Ｄ Ｆｃの間で保存されているようである。
【0223】
さらに、ネコＩｇＧ１ａおよびＩｇＧ２ ＦｃにおけるＰｈｅ変異間の相互作用を、ネコＦｃＲｎと複合体化した場合にモデル化した。イヌＩｇＧ Ｆｃで観察されたものと同じ相互作用が、ネコＩｇＧ Ｆｃで保存されているようであった。
【0224】
ウマＦｃＲｎとの複合体におけるウマＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６およびＩｇＧ７ ＦｃにおけるＰｈｅ変異間の相互作用もモデル化した。同じ相互作用がウマＩｇＧ Ｆｃで維持されているようであった。
【0225】
実施例１７
他の例示的バリアントイヌＩｇＧ ＦｃがイヌＦｃＲｎ相互作用を増強する
ＦｃＲｎに対するさらなるバリアントイヌＦｃポリペプチドの親和性を、キメラ抗体との関連で評価した。イヌカッパ軽鎖に融合した抗体可変軽鎖、ならびに野生型ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド（配列番号９０を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド０Ｙ０（配列番号１００を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド０ＹＨ（配列番号１０１を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド０ＹＹ（配列番号１０２を含む）およびバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド００Ｙ（配列番号１０３を含む）に融合した可変重鎖配列を発現させた。
他の例示的バリアントイヌＩｇＧ ＦｃがイヌＦｃＲｎ相互作用を増強する
ＦｃＲｎに対するさらなるバリアントイヌＦｃポリペプチドの親和性を、キメラ抗体との関連で評価した。イヌカッパ軽鎖に融合した抗体可変軽鎖、ならびに野生型ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド（配列番号９０を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド０Ｙ０（配列番号１００を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド０ＹＨ（配列番号１０１を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド０ＹＹ（配列番号１０２を含む）およびバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド００Ｙ（配列番号１０３を含む）に融合した可変重鎖配列を発現させた。
【0226】
結合分析は、バイオセンサーＯｃｔｅｔＲｅｄを使用して以下のように行った。簡潔には、ビオチン化標的をストレプトアビジンセンサー先端に捕捉した。２０μｇ／ｍＬの抗体の会合体をビオチン化標的に結合させた。次いで、複合体を使用して、ｐＨ６．０でイヌＦｃＲｎ（５０μｇ／ｍＬ）に結合させた。解離をｐＨ７．２で行った。
【0227】
キメラバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ抗体の各々は、キメラ野生型イヌＩｇＧ－Ｂ抗体と比較して、ｐＨ６．０でイヌＦｃＲｎに対する増強された結合を示し、各々が中性ｐＨでかなりの解離速度を有していた（図２１）。
【0228】
実施例１８
バリアントイヌＩｇＧ Ｆｃがイヌにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの抗体の半減期を延長する
ＦｃＲｎに対するバリアントイヌＦｃポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ半減期を、キメラ抗体との関連で評価した。イヌカッパ軽鎖に融合した抗体可変軽鎖、ならびに野生型ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド（配列番号９０を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＹＴＥ（配列番号１０４を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド０Ｙ０（配列番号１００を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＦ００（配列番号９４を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド０ＹＨ（配列番号１０１を含む）およびバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＹ００（配列番号９５を含む）に融合した可変重鎖を発現させ、ＰＢＳ、ｐＨ７．２中４０ｍｇ／ｍＬに精製した。
バリアントイヌＩｇＧ Ｆｃがイヌにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの抗体の半減期を延長する
ＦｃＲｎに対するバリアントイヌＦｃポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ半減期を、キメラ抗体との関連で評価した。イヌカッパ軽鎖に融合した抗体可変軽鎖、ならびに野生型ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド（配列番号９０を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＹＴＥ（配列番号１０４を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド０Ｙ０（配列番号１００を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＦ００（配列番号９４を含む）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド０ＹＨ（配列番号１０１を含む）およびバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ ＦｃポリペプチドＹ００（配列番号９５を含む）に融合した可変重鎖を発現させ、ＰＢＳ、ｐＨ７．２中４０ｍｇ／ｍＬに精製した。
【0229】
イヌ薬物動態は、Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＬＬＣで行った。雄ビーグル（約８～１４ｋｇ）をＭａｒｓｈａｌｌ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｎｏｒｔｈ Ｒｏｓｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋから入手した。１群あたりｎ＝２匹のイヌを用いて、合計１２匹のイヌを研究に使用した。６つの抗体を４ｍｇ／Ｋｇでイヌに皮下投与した。血清試料を注射前ならびに注射後６、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８、２１６、２６４、３３６、５０４および６７２時間に採取した。イヌキメラ抗体濃度を記載のようにＥＬＩＳＡによって決定した。１４４時間と３３６時間との間のＣｐをＬｎ［Ｃｐ］に変換し、次いで、Ｌｎ［Ｃｐ］ｔ＝－ｋ＊ｔ＋Ｌｎ［Ｃｐ］１４４ｈの形式の線形方程式に当てはめた。次いで、以下の表６に列挙されるように、勾配ｋから最終半減期を計算した。イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃにおける０Ｙ０、Ｆ００、０ＹＨおよびＹ００変異は、イヌにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの抗体の半減期を大幅に改善した。研究から得られた経時的に正規化された抗体パーセントを図２２に示す。
【0230】
表６：イヌにおける抗体半減期に対するバリアントイヌＩｇＧ Ｆｃの効果
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【配列表】
【国際調査報告】