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▶ オーセントラ セラピュティクス ピーティーワイ エルティーディーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-13
(54)【発明の名称】ＣＮＳの増殖性疾患の処置
(51)【国際特許分類】
A61K 31/506 20060101AFI20230606BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230606BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230606BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20230606BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230606BHJP
A61K 31/4188 20060101ALI20230606BHJP
A61K 31/5377 20060101ALI20230606BHJP
【ＦＩ】
A61K31/506
A61P35/00
A61P43/00 105
A61P43/00 111
A61P35/04
A61K45/00
A61K31/4188
A61K31/5377
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022567459
(86)(22)【出願日】2021-05-05
(85)【翻訳文提出日】2022-12-16
(86)【国際出願番号】 AU2021000036
(87)【国際公開番号】W WO2021222967
(87)【国際公開日】2021-11-11
(31)【優先権主張番号】2020901435
(32)【優先日】2020-05-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
２．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】519271986
【氏名又は名称】オーセントラ セラピュティクス ピーティーワイ エルティーディー
【氏名又は名称原語表記】ＡＵＣＥＮＴＲＡ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＰＴＹ ＬＴＤ
(74)【代理人】
【識別番号】100107984
【弁理士】
【氏名又は名称】廣田 雅紀
(74)【代理人】
【識別番号】100182305
【弁理士】
【氏名又は名称】廣田 鉄平
(74)【代理人】
【識別番号】100096482
【弁理士】
【氏名又は名称】東海 裕作
(74)【代理人】
【識別番号】100131093
【弁理士】
【氏名又は名称】堀内 真
(74)【代理人】
【識別番号】100150902
【弁理士】
【氏名又は名称】山内 正子
(74)【代理人】
【識別番号】100141391
【弁理士】
【氏名又は名称】園元 修一
(74)【代理人】
【識別番号】100221958
【弁理士】
【氏名又は名称】篠田 真希恵
(74)【代理人】
【識別番号】100192441
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 仁
(72)【発明者】
【氏名】ワン シュドン
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084MA52
4C084NA05
4C084ZB211
4C084ZB261
4C084ZC201
4C084ZC202
4C084ZC751
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC42
4C086BC73
4C086CB05
4C086GA07
4C086GA08
4C086GA10
4C086GA12
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA52
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB21
4C086ZB26
4C086ZC20
4C086ZC75
(57)【要約】
神経膠芽腫を含む、ＣＮＳにおける増殖性細胞疾患及び状態の処置において使用するためのチアゾール－ピリミジン化合物類が開示されている。化合物は、ＣＤＫ４及び／またはＣＤＫ６の活性を阻害することにより腫瘍細胞増殖を遮断することができ、かつ血液脳関門を通過することができると考えられる。化合物は、一般構造Ｉ：（Ｉ）を有する：
【化１】
【選択図】なし
【化１】
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象において中枢神経系（ＣＮＳ）の増殖性細胞疾患または状態を処置する方法であって、前記対象に、治療有効量の、下に示される式Ｉの化合物：【化1】
［式中：
Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、脂環式、複素環式、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ－アルキル、Ｏ－アリール、ＣＯＯＨ、ＣＯ－アルキル、ＣＯ－アリール、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ－アルキル、ＣＯＮＨ－アリール、及びＣＯＮＨ－脂環式から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ－アルキル、及びＮＨ２から選択され；
Ｒ３は、少なくとも１個のＮヘテロ原子を含む複素環式、ＮＨ－アルキル、ＮＨ－アリール、Ｎ－（アルキル）２、Ｎ－（アリール）２、及びＮ－（アルキル）（アリール）から選択され；かつ
ｎは、０～３の範囲から選択される整数であり；かつ
ここで、前記アルキル、前記アリール、前記アラルキル、前記脂環式及び前記複素環式基は、アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、Ｏ－メチル、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、Ｎ（アルキル）２、ＣＯＯＨ、ＣＯＨ、ＣＯ（アルキル）、ＣＯＮＨ２及びＣＦ３から選択される１個または複数の基で任意選択で置換されていてよい］
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを、
任意選択で、薬学的に許容される担体、希釈剤及び／または添加剤と組み合わせて投与することを含む前記方法。
【請求項2】
Ｒ１がＨ、アルキル（例えば、Ｃ１～６アルキル、例えば、Ｃ１～３アルキル、例えば、メチル、エチル及びＣ（ＣＨ３）２またはＣ３～６シクロアルキル、例えば、シクロペンチル）、または複素環式（例えば、１または２個のＮ、ＯまたはＳヘテロ原子を含む飽和または不飽和５または６員環式基）である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
Ｒ１が、Ｈ、メチル、エチル、シクロプロピルまたはシクロペンチルである、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
Ｒ２がＨ、アルキル（例えば、Ｃ１～６アルキルまたは、好ましくは、Ｃ１～３アルキル、例えば、メチルまたはエチル）、ＣＮまたはハロゲン（好ましくは、Ｆ）である、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
Ｒ２がＨ、メチル、エチル、ＣＮまたはＦである、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
Ｒ３が、アルキル（例えば、Ｃ１～６アルキルまたは、好ましくは、Ｃ１～３アルキル、例えば、メチル、エチル及びＣＨ（ＣＨ３）２）、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、例えば、ＮＨ－メチル及びＮＨ－エチル、Ｎ（アルキル）２、例えば、Ｎ（Ｃ１～３アルキル）２（例えば、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）及びＮ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３））、ＣＯＨ及びＣＯ（Ｃ１～３アルキル）（例えば、ＣＯＣＨ３）から選択される１個または複数の基で任意選択で置換されている複素環式基（好ましくは、１個、しかし、より好ましくは２個のＮヘテロ原子を含む飽和または不飽和５または６員環式基）である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項7】
Ｒ３が、以下：【化2】
から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
ｎが０、１または２である、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
前記化合物が：５－（２－（（５－（４－（ジメチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－４－メチル－５－（２－（（５－（ピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）チアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（４－エチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
２－（（５－（４－アセチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－４－（４－メチル－２－（メチルアミノ）チアゾール－５－イル）ピリミジン－５－カルボニトリル；
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチル－４－メチルチアゾール－２－アミン
Ｎ－シクロペンチル－５－（５－フルオロ－２－（（５－モルホリノピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン
５－（２－（（５－（４－（エチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－（エチル（メチル）アミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（５－フルオロ－２－（（５－（（４－メチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（５－フルオロ－２－（（５－（（４－イソプロピルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；または
５－（２－（（５－（４－（ジエチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン
である、請求項１に記載の方法。
【請求項10】
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグが静脈内及び／または経口投与用に製剤化されている、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを前記対象に、テモゾラミド（ＴＭＺ）または他のキナーゼ阻害薬と組み合わせて投与する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
前記他のキナーゼ阻害薬をＰＩ３Ｋ、ｍＴＯＲ及び／またはＭＥＫの阻害薬から選択する、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記増殖性細胞疾患または状態が神経膠芽腫（ＧＢＭ）、髄芽細胞腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、星状細胞腫、上衣腫、乏突起膠腫、または転移性脳腫瘍である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項14】
対象において中枢神経系（ＣＮＳ）の増殖性細胞疾患または状態を処置するための医薬の製造における、請求項１～９のいずれか１項において定義されたとおりの化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用。
【請求項15】
対象において中枢神経系（ＣＮＳ）の増殖性細胞疾患または状態を処置するための、請求項１～９のいずれか１項において定義されたとおりの化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、中枢神経系（ＣＮＳ）の増殖性細胞疾患または状態を処置する際のチアゾール－ピリミジン化合物類の方法及び使用に関する。
【0002】
優先権書類
本出願は、「ＣＮＳの増殖性疾患の処置」と標題された２０２０年５月６日出願のオーストラリア特許仮出願第２０２０９０１４３５号による優先権を主張し、その内容全体が参照により本明細書に援用される。
本出願は、「ＣＮＳの増殖性疾患の処置」と標題された２０２０年５月６日出願のオーストラリア特許仮出願第２０２０９０１４３５号による優先権を主張し、その内容全体が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【0003】
原発性脳腫瘍は新生物の多様な群からなり、様々な細胞系譜に由来する。世界保健機関（ＷＨＯ）の分類によると、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍は、星細胞系、乏突起膠細胞系、または混合型に分類される。これらの腫瘍はサブタイプによりさらに分類され、組織診に基づき、ＩからＩＶにグレード分類されるが、その際、グレードＩＶが最も攻撃的である。米国だけでも、ほぼ８０，０００の新たな症例の原発性脳腫瘍及び他のＣＮＳ腫瘍が毎年診断されると推定されている。不幸なことに、これらのがんは、予後不良及び低い生存率により特徴づけられ；多形性神経膠芽腫（ＧＢＭ）がＣＮＳの最も攻撃的な原発性腫瘍であり、悪性原発性ＣＮＳ腫瘍のうちの４５％を、かつすべての神経膠腫のうちの５４％を占める。近年では多くのがんの生存率が改善し続けているが、ＣＮＳのがんは、同じレベルの成功率をまだ経験していない。例えば、２００９年から２０１３年の間に脳癌と診断された患者が５年生存する可能性は、およそ２５％であった。これは、同じ期間で合わせたすべてのがんでの約６８％の生存率と著しく対照的である。ＧＢＭ患者では、生存中央値は１５～２３カ月に過ぎず、５年生存率は約４．６％であり、これは、すべての脳腫瘍型のうちで最も低い値である。
【0004】
無限の細胞周期リエントリ及び進行をもたらす異常な細胞周期制御が、ヒトがんのホールマークである。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）が、様々なサイクリンサブユニットと関連することが公知であり、細胞周期制御、アポトーシス、神経生理、分化及び転写を含む、細胞における様々な重要な調節経路の調節において中枢となる役割を果たす。今日までに、少なくとも２０種のＣＤＫ及び３０サイクリンが同定されている。それらは、機能を反映して２つの主要な群、すなわち、細胞周期調節因子ＣＤＫ及び転写調節因子ＣＤＫに分類され得る（Ｗａｎｇ Ｓ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ ２９（６）：３０２－３１３， ２００８）。細胞周期調節因子ＣＤＫ類には、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、及びＣＤＫ７が含まれ、これらは、それらのサイクリンパートナー（例えば、サイクリンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｅ、Ｆ）と共に機能して、細胞周期の促進を調節する。転写調節因子ＣＤＫ類には、ＣＤＫ７、ＣＤＫ８、ＣＤＫ９及びＣＤＫ１１が含まれ、これらは、サイクリンＣ、Ｈ、Ｋ、Ｌ１、Ｌ２、Ｔ１及びＴ２と一緒に作用して、転写調節において役割を果たす傾向がある。ＣＤＫクラスの機能を考慮すると、ＣＤＫが細胞増殖性疾患及び状態、特に、がんに関与していることは驚くべきことではない。細胞増殖は、細胞分裂サイクルの直接的または間接的調節解除の結果であり、ＣＤＫは、このサイクルの様々な相の調節において重要な役割を果たす。したがって、ＣＤＫ及びそれらの関連サイクリンの阻害薬は、がん治療のための有用な標的であると考えられる。
【0005】
ＣＤＫ４／６は、細胞周期を制御し、ＩＮＫ４ファミリーのタンパク質によりしっかりと調節される。多数の研究により、ＣＤＫ４／６経路が、ＣＮＳ腫瘍及び神経膠腫を含むがんのかなり大部分において超活性化していることが立証されている（Ｘｕ Ｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ １３６： ４４５－４５２， ２０１８；Ｐａｒｓｏｎｓ ＤＷ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２１：１８０７－１８１２， ２００８；Ｂａｘ Ｄ Ａ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １６：３３６８－３３７７， ２０１０；及びＣａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｎ． Ｎａｔｕｒｅ ４５５：１０６１－１０６８， ２００８）。小児及び成人における神経膠腫のゲノムスケールでのプロファイリングから、ＧＢＭの８０％超で、ＣＤＫ４／６－Ｒｂ軸が調節解除されており、これは、（ｉ）ｐ１６ＩＮＫ４ａ及びｐ１５ＩＮＫ４ｂをコードするＣＤＫＮ２Ａ／Ｂ遺伝子の欠失、（ｉｉ）ＣＤＫ４／６の増幅／過剰発現、ならびに（ｉｉｉ）Ｒｂの欠失／変異から生じる（Ｓｃｈｍｉｄｔ ＥＥ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５４：６３２１－６３２４， １９９４）。ＣＤＫ４、ｐ１６ＩＮＫ４ａ及びＲｂは、不十分な生存の独立した予測因子である（Ａｏｋｉ Ｋ ｅｔ ａｌ．、Ｎｅｕｒｏ Ｏｎｃｏｌ ２０：６６－７７、２０１８）。したがって、ＣＤＫ４／６の阻害は、がん、特に神経膠芽腫を処置するための有効なアプローチであり得る。３種のＣＤＫ４／６阻害薬、すなわち、パルボシクリブ、リボシクリブ及びアベマシクリブが米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により、乳癌の処置のために承認されており、ＧＢＭ患者において治験された。しかしながら、パルボシクリブでの転帰は残念なものであり、治験は中止された。有効性の欠如は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過して、脳において薬物曝露する能力が限定的であることにより得る（Ｋａｒｅｎ Ｅ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎ ２０１３ ＡＡＣＲ－ＮＣＩ－ＥＯＲＴＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｖｏｌ． １２（１１ Ｓｕｐｐｌ） ２０１３）。
【0006】
成長因子受容体及びプロテインキナーゼを介しての細胞シグナル伝達は、細胞成長及び増殖の別の重要な調節因子である。正常な細胞成長では、成長因子が、受容体活性化を介して（すなわち、ＰＤＧＦまたはＥＧＦなど）、ＭＡＰキナーゼ経路を活性化させる。正常及び無制御の細胞成長に関係する最も重要なＭＡＰキナーゼ経路の１つは、Ｒａｓ／Ｒａｆキナーゼ経路である。活性なＧＴＰ結合Ｒｅｓは、Ｒａｆキナーゼの活性化及び間接的なリン酸化をもたらす。次いで、Ｒａｆは、ＭＥＫ１及びＭＥＫ２をリン酸化する（Ａｈｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ３３２：４１７－４３１， ２００１）。次いで、活性化ＭＥＫは、ＥＲＫ１及びＥＲＫ２をリン酸化する。続いて、リン酸化ＥＲＫは二量体化して、次いで、核に移行し、そこで蓄積し（Ｋｈｏｋｈｌａｔｃｈｅｖ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ ９３：６０５－６１５， １９９８）、次いで、核輸送、シグナル伝達、ＤＮＡ修復、ヌクレオソーム構築及び転座、ならびにｍＲＮＡプロセシング及び翻訳を含むいくつかの重要な細胞機能に関係する（Ａｈｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ ６：１３４３－１３５４， ２０００）。総じて、成長因子での処置は、増殖及び治療に対する抵抗性をもたらすＥＲＫ１／２の活性化につながる。したがって、ＭＡＰキナーゼ経路の標的化は、幅広いがん型に治療機会を提供し、最近では、ＭＥＫ阻害薬、セルメチニブが、神経線維腫症１型（ＮＦ１）症候性及び／または進行性、手術不能の叢状神経線維腫、不治遺伝的状態を有する患者の処置について、ＵＳブレークスルーセラピー指定を認められている。ＮＦ１遺伝子変異は、ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫシグナル伝達の調節不全をもたらし得、これは、無制御に細胞を成長させ、分化させ、コピーさせ得て、したがって、腫瘍を増殖させる。セルメチニブは、腫瘍増殖の阻害につながるＭＥＫ酵素を阻害する。
【0007】
がん細胞において、破壊されたシグナル伝達経路の主な帰結は、細胞がアポトーシス、増殖、及び転移を回避することを可能にするタンパク質発現のアンバランスである。ＧＢＭサブタイプ腫瘍のおよそ４０％が、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路を介して下流細胞内シグナル伝達のカスケードを活性化させる機能不全ＥＧＦＲ、細胞表面受容体チロシンキナーゼにより特徴づけられる。変異を介してのその増幅及び過剰発現は、血管新生、遊走及び転移により補助される神経膠腫増殖及び生存を促進する。したがって、ＥＧＦＲは、魅力的な治療標的として提案されている。しかしながら、再発性ＧＢＭを有する患者におけるＥＧＦＲ阻害薬、エルロチニブの第ＩＩ相試験は、有意な利益を示さなかった。ＰＫＣ及びＰＩ３Ｋ／ＡＫＴを標的とする阻害薬であるエンザスタウリンなどの、臨床第ＩＩ～ＩＩＩ試験において試験された他のチロシンキナーゼ阻害薬は、単独で、または化学治療と組み合わせて使用された場合に、ＧＢＭ患者において効果を実証しなかった。これらのＥＧＦＲ阻害薬化合物の失敗は、不十分な薬物動態（ＰＫ）及びＢＢＢ透過性による可能性がある。
【0008】
ＣＮＳ薬物の承認率は典型的には、非ＣＮＳ薬物よりもかなり低く、腫瘍学ＣＮＳ薬物開発の流失率（ａｔｔｒｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ）は非常に高い。したがって、脳腫瘍を処置するための薬物の発見は、大きな障害及び歴史的失敗により特徴づけられる。処置の成功のためには、薬物は第一に、密着結合により密接に接合して傍細胞移動（ｐａｒａ－ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｏｖｅｍｅｎｔ）を防いでいる脳内の毛細血管に固有の、密接に接続した内皮細胞の層であるＢＢＢを通過し得なければならない。内皮細胞を通って脳に至る化合物の通過は、その頂端膜；すなわち、循環血液と接触する膜で発現されるＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポーターの作用により制限され得る。これらのうち、Ｐ－糖タンパク質（Ｐ－ｇｐ）及び乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）が、多数の化合物の脳透過を一緒に制限する２種の主要なトランスポーターである（Ｗａｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ６：３７１－３８１， ２０１１；Ａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ３３６：２２３－２３３， ２０１１）。実際に、多くの化学治療薬が、このバリアにより脳へのアクセスを妨げられている。
【0009】
ＧＢＭの位置及びその正常な周囲脳組織の広範な浸潤は、外科的切除により腫瘍を完全に除去することができないことを意味する。さらに、周囲の正常な脳を侵襲する腫瘍細胞は、ＢＢＢにより治療薬から防御される。残念なことに、テモゾロミド（ＴＭＺ、神経膠芽腫のための唯一の標準治療の化学治療）などの、それでもアクセスするものも、限定的な有効性を有し、良くても数か月ほど生存を改善するにすぎない。今のところ、ＧＢＭ治療のための治験の大部分が失敗している。前臨床データにより、ＣＤＫ４／６阻害薬（すなわち、パルボシクリブ及びアベマシクリブ）の浸透はＢＢＢでの活発な流出により制限されることが示された。アベマシクリブは、げっ歯類脳においてパルボシクリブよりも比較的高い曝露を示したが、しかしながら、その治療可能性は、露見しているままである。明らかに、ＣＤＫ４／６などの新たな標的を指向し、かつ脳腫瘍及びＣＮＳの他のがんを処置するために有効であるようにＢＢＢを十分に通過し得る薬物を同定することが必要とされている。
【0010】
本出願人は、神経膠芽腫を含むＣＮＳにおける増殖性細胞疾患及び状態の処置で使用するためのチアゾール－ピリミジン化合物類を同定した。理論に束縛されることは望まないが、これらの化合物は、ＣＤＫ４及び／またはＣＤＫ６の活性を阻害することにより腫瘍細胞増殖を遮断し、かつＢＢＢを通過することができると考えられる。
【発明の概要】
【0011】
第１の態様では、本開示は、対象において中枢神経系（ＣＮＳ）の増殖性細胞疾患または状態を処置する方法であって、対象に、治療有効量の、下に示される式Ｉの化合物：
［式中：
Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、脂環式、複素環式、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ－アルキル、Ｏ－アリール、ＣＯＯＨ、ＣＯ－アルキル、ＣＯ－アリール、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ－アルキル、ＣＯＮＨ－アリール、及びＣＯＮＨ－脂環式から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ－アルキル、及びＮＨ２から選択され；
Ｒ３は、少なくとも１個のＮヘテロ原子を含む複素環式、ＮＨ－アルキル、ＮＨ－アリール、Ｎ－（アルキル）２、Ｎ－（アリール）２、及びＮ－（アルキル）（アリール）から選択され；かつ
ｎは、０～３の範囲から選択される整数であり；かつ
ここで、前記アルキル、アリール、アラルキル、脂環式及び複素環式基は、アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、Ｏ－メチル、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、Ｎ（アルキル）２、ＣＯＯＨ、ＣＯＨ、ＣＯ（アルキル）、ＣＯＮＨ２及びＣＦ３から選択される１個または複数の基で任意選択で置換されていてよい］
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを、
任意選択で、薬学的に許容される担体、希釈剤及び／または添加剤と組み合わせて投与することを含む前記方法を提供する。
【化1】
［式中：
Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、脂環式、複素環式、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ－アルキル、Ｏ－アリール、ＣＯＯＨ、ＣＯ－アルキル、ＣＯ－アリール、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ－アルキル、ＣＯＮＨ－アリール、及びＣＯＮＨ－脂環式から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ－アルキル、及びＮＨ２から選択され；
Ｒ３は、少なくとも１個のＮヘテロ原子を含む複素環式、ＮＨ－アルキル、ＮＨ－アリール、Ｎ－（アルキル）２、Ｎ－（アリール）２、及びＮ－（アルキル）（アリール）から選択され；かつ
ｎは、０～３の範囲から選択される整数であり；かつ
ここで、前記アルキル、アリール、アラルキル、脂環式及び複素環式基は、アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、Ｏ－メチル、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、Ｎ（アルキル）２、ＣＯＯＨ、ＣＯＨ、ＣＯ（アルキル）、ＣＯＮＨ２及びＣＦ３から選択される１個または複数の基で任意選択で置換されていてよい］
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを、
任意選択で、薬学的に許容される担体、希釈剤及び／または添加剤と組み合わせて投与することを含む前記方法を提供する。
【0012】
式Ｉの化合物は、抗増殖性活性を有することが見い出されており（例えば、これらの化合物は、ＣＤＫ４及び／またはＣＤＫ６の活性を阻害することにより腫瘍細胞増殖を遮断すると考えられる）、さらに、ＢＢＢを通過することができる。
【0013】
第２の態様では、本開示は、対象において中枢神経系（ＣＮＳ）の増殖性細胞疾患または状態、例えば、神経膠芽腫を処置するための医薬を製造する際の、第１の態様において定義されたとおりの化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用を提供する。
【0014】
第３の態様では、本開示は、対象において中枢神経系（ＣＮＳ）の増殖性細胞疾患または状態、例えば、神経膠芽腫を処置するための、第１の態様において定義されたとおりの化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【図1】Ｔ９８Ｇ ＧＢＭ細胞系における、単一の作用物質としての、かつ（Ａ）ｍＴＯＲ（エベロリムス；図面では「Ｅｖｅ」として示される）、（Ｂ）ＰＩ３Ｋ（アルペリシブ；「Ａｌｐ」）または（Ｃ）ＭＥＫ（セルメチニブ；「Ｓｅｌ」）の阻害薬と組み合わせての化合物１（５－（２－（（５－（４－（ジメチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン）の抗増殖性活性を示している。
【図2】単独か、もしくはＴＭＺと組み合わせた５μＭパルボシクリブ（「Ｐａｌｂ」）または化合物１での処置から４８時間後のＧＢＭ Ｕ８７細胞のアネキシンＶ／ＰＩアッセイの結果を示している。
【図3】ＣＤＫ４／６－媒介Ｒｂリン酸化の標的化を介しての、化合物１によるＧＢＭ Ｕ８７細胞コロニー形成の阻害を示している。
【図4】Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおける、２ｍｇ／ｋｇの静脈内投与後（Ａ）、及び（Ｂ）１０ｍｇ／ｋｇ経口投与から２４時間後の化合物１及び化合物２（Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン）の脳取り込みを示すグラフ結果を示し；他方で（Ｃ）は、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおける２ｍｇ／ｋｇ静脈内投与後の化合物６（Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン）の脳取り込みを示す。
【図5】皮下ＧＢＭ Ｕ８７細胞異種移植片での化合物１及び化合物２のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を実証するグラフ結果を示す。
【図6】それぞれＧＢＭ Ｕ８７及びＧ４Ｔ ＧＢＭ患者由来モデルの同所異種移植片での化合物１及び化合物２のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を実証するグラフ結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0016】
第１の態様では、本開示は、対象において中枢神経系（ＣＮＳ）の増殖性細胞疾患または状態を処置する方法であって、対象に、治療有効量の、下に示される式Ｉの化合物：
［式中：
Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、脂環式、複素環式、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ－アルキル、Ｏ－アリール、ＣＯＯＨ、ＣＯ－アルキル、ＣＯ－アリール、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ－アルキル、ＣＯＮＨ－アリール、及びＣＯＮＨ－脂環式から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ－アルキル、及びＮＨ２から選択され；
Ｒ３は、少なくとも１個のＮヘテロ原子を含む複素環式、ＮＨ－アルキル、ＮＨ－アリール、Ｎ－（アルキル）２、Ｎ－（アリール）２、及びＮ－（アルキル）（アリール）から選択され；かつ
ｎは、０～３の範囲から選択される整数であり；かつ
ここで、前記アルキル、アリール、アラルキル、脂環式及び複素環式基は、アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、Ｏ－メチル、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、Ｎ（アルキル）２、ＣＯＯＨ、ＣＯＨ、ＣＯ（アルキル）、ＣＯＮＨ２及びＣＦ３から選択される１個または複数の基で任意選択で置換されていてよい］
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを、
任意選択で、薬学的に許容される担体、希釈剤及び／または添加剤と組み合わせて投与することを含む前記方法を提供する。
【化2】
［式中：
Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、脂環式、複素環式、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ－アルキル、Ｏ－アリール、ＣＯＯＨ、ＣＯ－アルキル、ＣＯ－アリール、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ－アルキル、ＣＯＮＨ－アリール、及びＣＯＮＨ－脂環式から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ－アルキル、及びＮＨ２から選択され；
Ｒ３は、少なくとも１個のＮヘテロ原子を含む複素環式、ＮＨ－アルキル、ＮＨ－アリール、Ｎ－（アルキル）２、Ｎ－（アリール）２、及びＮ－（アルキル）（アリール）から選択され；かつ
ｎは、０～３の範囲から選択される整数であり；かつ
ここで、前記アルキル、アリール、アラルキル、脂環式及び複素環式基は、アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、Ｏ－メチル、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、Ｎ（アルキル）２、ＣＯＯＨ、ＣＯＨ、ＣＯ（アルキル）、ＣＯＮＨ２及びＣＦ３から選択される１個または複数の基で任意選択で置換されていてよい］
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを、
任意選択で、薬学的に許容される担体、希釈剤及び／または添加剤と組み合わせて投与することを含む前記方法を提供する。
【0017】
式Ｉの化合物は、抗増殖性活性を有することが見い出されており（例えば、これらの化合物は、ＣＤＫ４及び／またはＣＤＫ６の活性を阻害することにより腫瘍細胞増殖を遮断すると考えられる）、さらに、ＢＢＢを通過することができる。したがって、式Ｉの化合物は、神経膠芽腫などのＣＮＳの増殖性細胞疾患及び状態ならびに無制御の細胞増殖と関連する（または、言い換えると、細胞周期の制御を必要とする）ＣＮＳの他の疾患及び状態の処置において有用であると考えられる。本明細書で使用される場合、本開示の範囲内の抗増殖作用は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ全細胞アッセイにおいて細胞増殖を阻害する能力により実証され得る。性能についての方法を含むそのようなアッセイの例（複数可）は、本明細書において後記で提供される実施例においてより詳細に記載される。
【0018】
好ましくは、式Ｉの化合物は、ＣＤＫ４及び／またはＣＤＫ６から選択される１種または複数のプロテインキナーゼの活性を調節する（例えば、阻害する）。上述のとおり、ＣＤＫ４及びＣＤＫ６は、細胞周期調節因子としてのそれらの役割を介して、がん細胞増殖を促進する。したがって、少なくともＣＤＫ４及び／またはＣＤＫ６を阻害する式Ｉの化合物、ならびにその薬学的に許容される塩、溶媒和物及びプロドラッグは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ用途の両方において（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞ベースアッセイ）、かつ対象においてがんまたは別の増殖性障害もしくは状態を処置する治療方法の基礎として有用性を有する。
【0019】
式Ｉの化合物は、細胞周期におけるステップまたは段階のいずれか、例えば、核膜の形成、細胞周期の静止期からの進出（Ｇ０）、Ｇ１進行、染色体脱凝集、核膜破壊、ＳＴＡＲＴ、ＤＮＡ複製の開始、ＤＮＡ複製の進行、ＤＮＡ複製の停止、中心体複製、Ｇ２進行、有糸分裂または減数分裂機能の活性化、染色体凝集、中心体分離、微小管核形成、紡錘体形成及び機能、微小管モータータンパク質との相互作用、染色分体分離及び隔離、有糸分裂機能の不活性化、収縮環の形成、ならびに細胞質分裂機能を阻害し得る。特に、式Ｉの化合物は、クロマチン結合、複製複合体の形成、複製ライセンシング、リン酸化または他の二次的改変活性、タンパク質分解による分解、微小管結合、アクチン結合、セプチン結合、微小管形成中心核形成活性及び細胞周期シグナル伝達経路の構成成分への結合など、ある特定の遺伝子機能に影響を及ぼし得る。
【0020】
第２の態様では、本開示は、対象において中枢神経系（ＣＮＳ）の増殖性細胞疾患または状態、例えば、神経膠芽腫を処置するための医薬を製造する際の、第１の態様において定義されたとおりの化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用を提供する。
【0021】
第３の態様では、本開示は、対象において中枢神経系（ＣＮＳ）の増殖性細胞疾患または状態、例えば、神経膠芽腫を処置するための、第１の態様において定義されたとおりの化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用を提供する。
【0022】
本明細書では、当業者に周知であるいくつかの用語を使用する。それでも明瞭さを目的として、いくつかのこれらの用語を本明細書において後記で定義する。
【0023】
本明細書で使用される場合、「処置すること」という用語には、疾患または状態の確立された症状の予防、さらには緩和が含まれる。したがって、疾患または状態を「処置すること」の行為には、（１）疾患または状態に罹患しているか、または罹患しやすい対象において、疾患または状態の発生の臨床症状の出現を予防すること、または遅延させること；（２）疾患もしくは状態またはその少なくとも１つの臨床的もしくは亜臨床症状を阻害すること（すなわち、疾患もしくは状態の発生またはその再発（維持処置の場合に）を停止させる、減少させる、または遅延させること）；及び（３）疾患または状態を軽減する、または減弱させること（すなわち、疾患もしくは状態またはその臨床もしくは亜臨床症状の少なくとも１つの退縮を惹起すること）が含まれる。
【0024】
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語には、１～８個の炭素原子を有する直鎖状アルキル基、分枝状アルキル基及び環式アルキル基（例えば、メチル、エチルプロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルなど）が含まれる。
【0025】
本明細書で使用される場合、「アリール」という用語は、置換（モノ－またはポリ－）または非置換モノ芳香族またはポリ芳香族基を指し、その際、前記ポリ芳香族基は、縮合していても、または縮合していなくてもよい。したがって、この用語には、６～１０個の炭素原子を有する基（例えば、フェニル、ナフチルなど）が含まれる。「アリール」という用語は、「芳香族」という用語と同意語であることも理解されるべきである。
【0026】
本明細書で使用される場合、「アラルキル」という用語は、上で定義したとおりのアルキル及びアリールという用語の連結として使用される。
【0027】
「脂肪族」という用語は、当技術分野におけるその通常の意味を有し、アルカン、アルケン及びアルキンならびにその置換誘導体などの非芳香族基が含まれる。
【0028】
本明細書で使用される場合、「脂環式」という用語は、環式脂肪族基を指す。
【0029】
「ハロゲン」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを指す。
【0030】
本明細書で使用される場合、「複素環式」という用語は、環中に１個または複数のヘテロ原子（例えば、Ｎ）を含む飽和または不飽和環式基を指す。
【0031】
「誘導体」という用語は、本明細書で使用される場合、実体の任意の化学的改変を含む。そのような化学的改変の例示は、ハロゲン基、アルキル基、アシル基またはアミノ基による水素の置き換えである。
【0032】
本明細書で使用される場合、「医薬の製造」という語句は、直接的に医薬として、または式Ｉの化合物の１つまたは複数を含む医薬の製造のいずれかの段階での式Ｉの化合物の１つまたは複数の使用を含む。
【0033】
式Ｉの化合物の一部は、単一の立体異性体、ラセミ体、及び／または鏡像異性体及び／またはジアステレオ異性体の混合物として存在し得る。すべてのそのような単一の立体異性体、ラセミ体及びその混合物が本開示の範囲内に包含される。ジアステレオ異性体、鏡像異性体、及び幾何異性体などの異性体型は、当業者に公知の物理的及び／または化学的方法により分離することができる。
【0034】
「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書で使用される場合、式Ｉの化合物の所望の生物学的活性を維持している塩を指し、薬学的に許容される酸付加塩及び塩基付加塩が含まれる。式Ｉの化合物の適切な薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸から、または有機酸から調製することができる。そのような無機酸の例は、塩酸、硫酸及びリン酸である。適切な有機酸は、有機酸の脂肪族、脂環族、芳香族、複素環式カルボン酸及びスルホン酸群から選択することができ、その例は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、アルキルスルホン酸及びアリールスルホン酸である。薬学的に許容される塩についての追加の情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ， Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ １９９５において見い出され得る。
【0035】
「溶媒和物」という用語は、適切な溶媒での溶媒和から生じる式Ｉの化合物のいずれかの形態を指す。そのような形態は、例えば、溶媒と溶解化合物との間で形成され得る結晶性溶媒和物または複合体であり得る。
【0036】
「プロドラッグ」という用語は、通常は代謝手段により（例えば、加水分解、還元または酸化により）、生体系内で式Ｉの化合物に変換される化合物を意味する。例えば、ヒドロキシル基を含有する式Ｉの化合物のエステルプロドラッグは、ｉｎ ｖｉｖｏでの加水分解により、式Ｉの化合物に変換され得る。ヒドロキシル基を含有する式Ｉの化合物の適切なエステルは、例えば、酢酸エステル、クエン酸エステル、乳酸エステル、酒石酸エステル、マロン酸エステル、シュウ酸エステル、サリチル酸エステル、プロピオン酸エステル、コハク酸エステル、フマル酸エステル、マレイン酸エステル、メチレン－ビス－Ｐ－ヒドロキシナフトエ酸エステル、ゲンチシン酸エステル、イセチオン酸ゲンチシン酸、ジ－ｐ－トルオイル酒石酸エステル、メタンスルホン酸エステル、エタンスルホン酸エステル、ベンゼンスルホン酸エステル、ｐ－トルエンスルホン酸エステル、シクロヘキシルスルファミン酸エステル及びキナ酸エステルであり得る。別の例として、カルボキシ基を含有する式Ｉの化合物のエステルプロドラッグは、ｉｎ ｖｉｖｏでの加水分解により、式Ｉの化合物に変換可能であり得る。エステルプロドラッグの例には、Ｌｅｉｎｗｅｂｅｒ ＦＪ， Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ Ｒｅｖ １８：３７９－４３９ （１９８７）により記載されたものが含まれる。同様に、アミノ基を含有する式Ｉの化合物のアシルプロドラッグは、ｉｎ ｖｉｖｏで加水分解により式Ｉの化合物に変換され得る。アミンを含む、これら及び他の官能基のためのプロドラッグの例は、Ｐｒｏｄｒｕｇｓ： ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ａｎｄ ｒｅｗａｒｄｓ， Ｖａｌｅｎｔｉｎｏ Ｊ Ｓｔｅｌｌａ （ｅｄ）， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ， ２００７において提供されている。
【0037】
固体である式Ｉの化合物の場合には、化合物（またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ）は種々の結晶性または多形形態で存在し得て、それらすべてが、本開示の範囲内に包含されることは、当業者により理解されるであろう。
【0038】
「治療有効量」または「有効量」という用語は、有利なまたは所望の臨床結果をもたらすために十分な量である。治療有効量を１回または複数の投与で投与することができる。典型的には、治療有効量は、疾患もしくは状態を処置するために、または別段に、例えば、がんまたは別の増殖性細胞疾患もしくは状態などの疾患または状態を緩和する、寛解する、安定化する、逆転させる、その進行を減速させる、または遅延させるために十分である。例に過ぎないが、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの治療有効量は、１日あたり約０．１から約２５０ｍｇ／体重ｋｇ、より好ましくは１日あたり約０．１から約１００ｍｇ／体重ｋｇ、さらにより好ましくは１日あたり約０．１及び約２５ｍｇ／体重ｋｇを含んでよい。しかしながら、前記にも関わらず、治療有効量が変動し得て、特定の化合物（またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ）の活性、特定の化合物（またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ）の作用の代謝安定性及び長さ、年齢、体重、性別、健康、投与経路及び時間、特定の化合物（またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ）の排泄速度、ならびに例えば、処置されているがんまたは他の増殖性細胞疾患もしくは状態の重症度を含む様々な因子に依存することは当業者に理解されるであろう。
【0039】
一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｈ、アルキル（例えば、Ｃ１～６アルキル、例えば、Ｃ１～３アルキル、例えば、メチル、エチル及びＣ（ＣＨ３）２またはＣ３～６シクロアルキル、例えば、シクロペンチル）、または複素環式（例えば、１または２個のＮ、ＯまたはＳヘテロ原子を含む飽和または不飽和５または６員環式基）である。最も好ましくは、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～３アルキル（例えば、メチル）またはＣ３～６シクロアルキル、例えば、シクロペンチルである。
【0040】
一部の実施形態では、Ｒ２は、Ｈ、アルキル（例えば、Ｃ１～６アルキルまたは、好ましくは、Ｃ１～３アルキル、例えば、メチルまたはエチル）、ＣＮまたはハロゲン（好ましくは、Ｆ）である。
【0041】
一部の実施形態では、Ｒ３は、アルキル（例えば、Ｃ１～６アルキルまたは、好ましくは、Ｃ１～３アルキル、例えば、メチル、エチル及びＣＨ（ＣＨ３）２）、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、例えば、ＮＨ－メチル及びＮＨ－エチル、Ｎ（アルキル）２、例えば、Ｎ（Ｃ１～３アルキル）２（例えば、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２及びＮ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３））、ＣＯＨ及びＣＯ（Ｃ１～３アルキル）（例えば、ＣＯＣＨ３）から選択される１個または複数の基で任意選択で置換されている複素環式基（好ましくは、１個、しかし、より好ましくは２個のＮヘテロ原子を含む飽和または不飽和５または６員環式基）である。
【0042】
一部の特定の実施形態では、Ｒ３は、下記：
から選択される。
【化3】
から選択される。
【0043】
一部の実施形態では、ｎは、０、１または２である。ｎが１または２である場合、それにより、前記化合物は、ピリジン環の４位に炭素原子へのアルキル橋（例えば、－ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２－橋）を備えている。
【0044】
特に好ましい一実施形態では、前記化合物は：
５－（２－（（５－（４－（ジメチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－４－メチル－５－（２－（（５－（ピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）チアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（４－エチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
２－（（５－（４－アセチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－４－（４－メチル－２－（メチルアミノ）チアゾール－５－イル）ピリミジン－５－カルボニトリル；
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチル－４－メチルチアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－５－（５－フルオロ－２－（（５－モルホリノピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－（エチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－（エチル（メチル）アミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（５－フルオロ－２－（（５－（（４－メチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（５－フルオロ－２－（（５－（（４－イソプロピルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；または
５－（２－（（５－（４－（ジエチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン
である。
５－（２－（（５－（４－（ジメチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－４－メチル－５－（２－（（５－（ピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）チアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（４－エチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
２－（（５－（４－アセチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－４－（４－メチル－２－（メチルアミノ）チアゾール－５－イル）ピリミジン－５－カルボニトリル；
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチル－４－メチルチアゾール－２－アミン；
Ｎ－シクロペンチル－５－（５－フルオロ－２－（（５－モルホリノピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－（エチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（２－（（５－（４－（エチル（メチル）アミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（５－フルオロ－２－（（５－（（４－メチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；
５－（５－フルオロ－２－（（５－（（４－イソプロピルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン；または
５－（２－（（５－（４－（ジエチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン
である。
【0045】
一部の好ましい実施形態では、式Ｉの化合物は、標準的な細胞傷害性アッセイにより測定されるとおり、ヒト細胞系において抗増殖活性を示す。好ましくは、前記化合物は、標準的な細胞生存アッセイにより測定されるとおり、５μＭ未満、なおより好ましくは、１μＭ未満のＩＣ５０値を示す。より好ましくはさらに、前記化合物は、０．５μＭ未満のＩＣ５０値を示す。
【0046】
一部の好ましい実施形態では、式Ｉの化合物は、当業者に周知の任意の標準アッセイにより測定されるとおり、１種または複数のプロテインキナーゼを阻害する。好ましくは、前記化合物は、本明細書において後記の実施例２に記載のキナーゼアッセイにより測定されるとおり、１μＭ未満または０．５μＭ未満、より好ましくはさらに、０．１μＭ未満のＩＣ５０値を示す。
【0047】
第１の態様の方法において使用するための式Ｉの化合物の特定の例を下の表１に示す。
【表1-1】
【表1-2】
【0048】
式Ｉの化合物（ならびにその薬学的に許容される塩、溶媒和物及びプロドラッグ）は、がんまたは別の増殖性疾患もしくは状態の処置のために、１種または複数の追加の作用物質（複数可）と組み合わせて投与することができる。例えば、１つよりも多いがんシグナル伝達経路を同時に阻害して、がん細胞を、抗がん治療（例えば、他の抗がん作用物質、化学治療、放射線治療またはその組合せでの処置）に対してより感受性にするために、前記化合物を他の抗がん作用物質と組み合わせて使用することができる。したがって、特に、そのような抗がん作用物質がＢＢＢを透過することができる場合には、式Ｉの化合物を、次のカテゴリーの抗がん作用物質のうちの１つまたは複数と組み合わせて使用することができる：
・ 臨床腫瘍学において使用されるような他の抗増殖／抗新生物薬及びその組合せ、例えば、アルキル化薬（例えば、カルムスチン、プロカルバジン、ロムスチン、ビンクリスチン、及びＴＭＺ）；代謝拮抗薬（例えば、ゲムシタビン及び抗葉酸薬、例えば、５－フルオロウラシル及びテガフールのようなフルオロピリミジン、ラルチトレキセド、メトトレキサート、シトシンアラビノシド、フルダラビン及びヒドロキシ尿素）；抗腫瘍抗生物質（例えば、アンスラサイクリン、例えば、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン－Ｃ、ダクチノマイシン及びミトラマイシン）；細胞分裂抑制薬（例えば、ビンカアルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン及びビノレルビンならびにタキソール及びタキソテールを含むタキソイドならびにポロキナーゼ阻害薬）；及びトポイソメラーゼ阻害薬（例えば、エピポドフィロトキシン、例えば、エトポシド及びテニポシド、アムサクリン、トポテカン及びカンプトテシン）；
・ 細胞増殖抑制作用物質、例えば、抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン及びヨードキシフェン）、抗アンドロゲン（例えば、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド及びシプロテロン酢酸塩）、ＬＨＲＨアンタゴニストまたはＬＨＲＨアゴニスト（例えば、ゴセレリン、ロイプロレリン及びブセレリン）、プロゲストゲン（例えば、メゲストロール酢酸塩）、アロマターゼ阻害薬（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、ボラゾール及びエキセメスタンとして）及び５α－レダクターゼの阻害薬、例えば、フィナステリド；
・ 抗侵襲作用物質（例えば、ｃ－Ｓｒｃキナーゼファミリー阻害薬、例えば、４－（６－クロロ－２，３－メチレンジオキシアニリノ）－７－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］－５－テトラヒドロピラン－４－イルオキシキナゾリン（ＡＺＤ０５３０；国際特許公開番号ＷＯ０１／９４３４１）、Ｎ－（２－クロロ－６－メチルフェニル）－２－｛６－［４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル］－２－メチルピリミジン－４－イルアミノ｝チアゾール－５－カルボキサミド（ダサチニブ）及びボスチニブ（ＳＫＩ－６０６））、及びマリマスタットを含むメタロプロテイナーゼ阻害薬、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体機能の阻害薬またはヘパラナーゼに対する抗体；
・ 成長因子機能の阻害薬（例えば、成長因子抗体及び成長因子受容体抗体、例えば、抗ｅｒｂＢ２抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））、抗ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ、抗ｅｒｂＢ１抗体セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ、Ｃ２２５）ならびにＳｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ． Ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ， ２００５， Ｖｏｌ． ５４， ｐｐ１１－２９により開示されている任意の成長因子または成長因子受容体抗体）。そのような阻害薬には、チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、上皮成長因子ファミリーの阻害薬（例えば、ＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害薬、例えば、Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－７－メトキシ－６－（３－モルホリノプロポキシ）キナゾリン－４－アミン（ゲフィチニブ、ＺＤ１８３９）、Ｎ－（３－エチニルフェニル）－６，７－ビス（２－メトキシエトキシ）キナゾリン－４－アミン（エルロチニブ、ＯＳＩ－７７４）及び６－アクリルアミド－Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－７－（３－モルホリノプロポキシ）－キナゾリン－４－アミン（ＣＩ １０３３）、ｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、ラパチニブ）；肝細胞成長因子ファミリーの阻害薬；インスリン成長因子ファミリーの阻害薬；血小板由来成長因子ファミリーの阻害薬、例えば、イマチニブ及び／またはニロチニブ（ＡＭＮ１０７）；セリン／トレオニンキナーゼの阻害薬（例えば、Ｒａｓ／Ｒａｆシグナル伝達阻害薬、例えば、ソラフェニブ（ＢＡＹ ４３－９００６）、チピファルニブ（Ｒ１１５７７７）及びロナファルニブ（ＳＣＨ６６３３６）を含むファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬）、ＭＥＫ及び／またはＡＫＴキナーゼを介した細胞シグナル伝達の阻害薬、ｃ－ｋｉｔ阻害薬、ａｂｌキナーゼ阻害薬、ＰＩ３キナーゼ阻害薬、Ｐｌｔ３キナーゼ阻害薬、ＣＳＦ－１Ｒキナーゼ阻害薬、ＩＧＦ受容体（インスリン様成長因子）キナーゼ阻害薬；オーロラキナーゼ阻害薬（例えば、ＡＺＤ１１５２、ＰＨ７３９３５８、ＶＸ－６８０、ＭＬＮ８０５４、Ｒ７６３、ＭＰ２３５、ＭＰ５２９、ＶＸ－５２８及びＡＸ３９４５９）ならびにサイクリン依存性キナーゼ阻害薬、例えば、ＣＤＫ４及び／またはＣＤＫ６阻害薬（例えば、パルボシクリブ、リボシクリブ及びアベマシクリブ）も含まれる；
・ 抗脈管形成作用物質、例えば、血管内皮成長因子の作用を阻害するもの（例えば、抗血管内皮細胞成長因子抗体ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））及びＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、バンデタニブ（ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、スニチニブ（ＳＵ１１２４８）、アキシチニブ（ＡＧ－０１３７３６）、パゾパニブ（ＧＷ７８６０３４）及び４－（４－フルオロ－２－メチルインドール－５－イルオキシ）－６－メトキシ－７－（３－ピロリジン－１－イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１；国際特許公開番号ＷＯ００／４７２１２内の実施例２４０）、国際特許公開番号ＷＯ９７／２２５９６、ＷＯ９７／３００３５、ＷＯ９７／３２８５６及びＷＯ９８／１３３５４に開示のものなどの化合物、ならびに他の機構により作用する化合物（例えば、リノミド、インテグリンαｖβ３機能及びアンジオスタチンの阻害薬）；
・ 血管損傷作用物質（ｖａｓｃｕｌａｒ ｄａｍａｇｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、例えば、コンブレスタチンＡ４ならびに国際特許公開番号ＷＯ９９／０２１６６、ＷＯ００／４０５２９、ＷＯ００／４１６６９、ＷＯ０１／９２２２４、ＷＯ０２／０４４３４及びＷＯ０２／０８２１３に開示の化合物；
・ エンドセリン受容体アンタゴニスト、例えば、ジボテンタン（ＺＤ４０５４）またはアトラセンタン；
・ アンチセンス治療、例えば、前記で列挙されている標的を対象とするもの、例えば、ＩＳＩＳ２５０３、抗ｒａｓアンチセンス；
・ 例えば、異常な遺伝子、例えば、異常なｐ５３または異常なＢＲＣＡ１もしくはＢＲＣＡ２を置き換えるアプローチ、ＧＤＥＰＴ（遺伝子指向酵素プロドラッグ治療）アプローチ、例えば、シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌ニトロレダクターゼ酵素を使用するもの、及び化学治療または放射線治療、例えば、多剤耐性遺伝子治療に対する患者忍容性を増大させるアプローチを含む遺伝子治療アプローチ；ならびに
・ 例えば、サイトカイン、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子を用いるトランスフェクションなどの患者腫瘍細胞の免疫原性を増大させるｅｘ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｖｏアプローチを含む免疫治療アプローチ、Ｔ細胞アネルギーを低下させるアプローチ、トランスフェクトされた免疫細胞、例えば、サイトカイン－トランスフェクトされた樹状細胞を使用するアプローチ、サイトカイン－トランスフェクトされた腫瘍細胞系を使用するアプローチ及び抗イディオタイプ抗体を用いるアプローチ。
・ 臨床腫瘍学において使用されるような他の抗増殖／抗新生物薬及びその組合せ、例えば、アルキル化薬（例えば、カルムスチン、プロカルバジン、ロムスチン、ビンクリスチン、及びＴＭＺ）；代謝拮抗薬（例えば、ゲムシタビン及び抗葉酸薬、例えば、５－フルオロウラシル及びテガフールのようなフルオロピリミジン、ラルチトレキセド、メトトレキサート、シトシンアラビノシド、フルダラビン及びヒドロキシ尿素）；抗腫瘍抗生物質（例えば、アンスラサイクリン、例えば、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン－Ｃ、ダクチノマイシン及びミトラマイシン）；細胞分裂抑制薬（例えば、ビンカアルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン及びビノレルビンならびにタキソール及びタキソテールを含むタキソイドならびにポロキナーゼ阻害薬）；及びトポイソメラーゼ阻害薬（例えば、エピポドフィロトキシン、例えば、エトポシド及びテニポシド、アムサクリン、トポテカン及びカンプトテシン）；
・ 細胞増殖抑制作用物質、例えば、抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン及びヨードキシフェン）、抗アンドロゲン（例えば、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド及びシプロテロン酢酸塩）、ＬＨＲＨアンタゴニストまたはＬＨＲＨアゴニスト（例えば、ゴセレリン、ロイプロレリン及びブセレリン）、プロゲストゲン（例えば、メゲストロール酢酸塩）、アロマターゼ阻害薬（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、ボラゾール及びエキセメスタンとして）及び５α－レダクターゼの阻害薬、例えば、フィナステリド；
・ 抗侵襲作用物質（例えば、ｃ－Ｓｒｃキナーゼファミリー阻害薬、例えば、４－（６－クロロ－２，３－メチレンジオキシアニリノ）－７－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］－５－テトラヒドロピラン－４－イルオキシキナゾリン（ＡＺＤ０５３０；国際特許公開番号ＷＯ０１／９４３４１）、Ｎ－（２－クロロ－６－メチルフェニル）－２－｛６－［４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル］－２－メチルピリミジン－４－イルアミノ｝チアゾール－５－カルボキサミド（ダサチニブ）及びボスチニブ（ＳＫＩ－６０６））、及びマリマスタットを含むメタロプロテイナーゼ阻害薬、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体機能の阻害薬またはヘパラナーゼに対する抗体；
・ 成長因子機能の阻害薬（例えば、成長因子抗体及び成長因子受容体抗体、例えば、抗ｅｒｂＢ２抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））、抗ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ、抗ｅｒｂＢ１抗体セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ、Ｃ２２５）ならびにＳｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ． Ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ， ２００５， Ｖｏｌ． ５４， ｐｐ１１－２９により開示されている任意の成長因子または成長因子受容体抗体）。そのような阻害薬には、チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、上皮成長因子ファミリーの阻害薬（例えば、ＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害薬、例えば、Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－７－メトキシ－６－（３－モルホリノプロポキシ）キナゾリン－４－アミン（ゲフィチニブ、ＺＤ１８３９）、Ｎ－（３－エチニルフェニル）－６，７－ビス（２－メトキシエトキシ）キナゾリン－４－アミン（エルロチニブ、ＯＳＩ－７７４）及び６－アクリルアミド－Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－７－（３－モルホリノプロポキシ）－キナゾリン－４－アミン（ＣＩ １０３３）、ｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、ラパチニブ）；肝細胞成長因子ファミリーの阻害薬；インスリン成長因子ファミリーの阻害薬；血小板由来成長因子ファミリーの阻害薬、例えば、イマチニブ及び／またはニロチニブ（ＡＭＮ１０７）；セリン／トレオニンキナーゼの阻害薬（例えば、Ｒａｓ／Ｒａｆシグナル伝達阻害薬、例えば、ソラフェニブ（ＢＡＹ ４３－９００６）、チピファルニブ（Ｒ１１５７７７）及びロナファルニブ（ＳＣＨ６６３３６）を含むファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬）、ＭＥＫ及び／またはＡＫＴキナーゼを介した細胞シグナル伝達の阻害薬、ｃ－ｋｉｔ阻害薬、ａｂｌキナーゼ阻害薬、ＰＩ３キナーゼ阻害薬、Ｐｌｔ３キナーゼ阻害薬、ＣＳＦ－１Ｒキナーゼ阻害薬、ＩＧＦ受容体（インスリン様成長因子）キナーゼ阻害薬；オーロラキナーゼ阻害薬（例えば、ＡＺＤ１１５２、ＰＨ７３９３５８、ＶＸ－６８０、ＭＬＮ８０５４、Ｒ７６３、ＭＰ２３５、ＭＰ５２９、ＶＸ－５２８及びＡＸ３９４５９）ならびにサイクリン依存性キナーゼ阻害薬、例えば、ＣＤＫ４及び／またはＣＤＫ６阻害薬（例えば、パルボシクリブ、リボシクリブ及びアベマシクリブ）も含まれる；
・ 抗脈管形成作用物質、例えば、血管内皮成長因子の作用を阻害するもの（例えば、抗血管内皮細胞成長因子抗体ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））及びＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、バンデタニブ（ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、スニチニブ（ＳＵ１１２４８）、アキシチニブ（ＡＧ－０１３７３６）、パゾパニブ（ＧＷ７８６０３４）及び４－（４－フルオロ－２－メチルインドール－５－イルオキシ）－６－メトキシ－７－（３－ピロリジン－１－イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１；国際特許公開番号ＷＯ００／４７２１２内の実施例２４０）、国際特許公開番号ＷＯ９７／２２５９６、ＷＯ９７／３００３５、ＷＯ９７／３２８５６及びＷＯ９８／１３３５４に開示のものなどの化合物、ならびに他の機構により作用する化合物（例えば、リノミド、インテグリンαｖβ３機能及びアンジオスタチンの阻害薬）；
・ 血管損傷作用物質（ｖａｓｃｕｌａｒ ｄａｍａｇｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、例えば、コンブレスタチンＡ４ならびに国際特許公開番号ＷＯ９９／０２１６６、ＷＯ００／４０５２９、ＷＯ００／４１６６９、ＷＯ０１／９２２２４、ＷＯ０２／０４４３４及びＷＯ０２／０８２１３に開示の化合物；
・ エンドセリン受容体アンタゴニスト、例えば、ジボテンタン（ＺＤ４０５４）またはアトラセンタン；
・ アンチセンス治療、例えば、前記で列挙されている標的を対象とするもの、例えば、ＩＳＩＳ２５０３、抗ｒａｓアンチセンス；
・ 例えば、異常な遺伝子、例えば、異常なｐ５３または異常なＢＲＣＡ１もしくはＢＲＣＡ２を置き換えるアプローチ、ＧＤＥＰＴ（遺伝子指向酵素プロドラッグ治療）アプローチ、例えば、シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌ニトロレダクターゼ酵素を使用するもの、及び化学治療または放射線治療、例えば、多剤耐性遺伝子治療に対する患者忍容性を増大させるアプローチを含む遺伝子治療アプローチ；ならびに
・ 例えば、サイトカイン、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子を用いるトランスフェクションなどの患者腫瘍細胞の免疫原性を増大させるｅｘ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｖｏアプローチを含む免疫治療アプローチ、Ｔ細胞アネルギーを低下させるアプローチ、トランスフェクトされた免疫細胞、例えば、サイトカイン－トランスフェクトされた樹状細胞を使用するアプローチ、サイトカイン－トランスフェクトされた腫瘍細胞系を使用するアプローチ及び抗イディオタイプ抗体を用いるアプローチ。
【0049】
一部の実施形態では、式Ｉの化合物（ならびにその薬学的に許容される塩、溶媒和物及びプロドラッグ）をＴＭＺと組み合わせて投与することができる（及び／または放射線と共に用いる）。神経膠芽腫異種移植片を使用して、アベマシクリブまたはパルボシクリブ（両方ともＣＤＫ４／６阻害薬）をＴＭＺまたは放射線と共に使用することにより、ＤＮＡ二本鎖切断修復が阻害され、かつアポトーシスが増大することが実証されている（Ｒａｕｂ ＴＪ ｅｔ ａｌ． Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓｐｏｓ ４３：１３６０－１３７１， ２０１５；及びＭｉｃｈａｕｄ Ｋ ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ８：７０， ２０１０）。パルボシクリブは、ｍＴＯＲ阻害薬、エベロリムスと組み合わせた場合に、神経膠芽腫異種移植片に対して相乗作用する（Ｏｌｍｅｚ Ｉ ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎｉｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ＤＯＩ： １０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１７－０８０３， ２０１８）。パルボシクリブは、腫瘍細胞抗原及び抗腫瘍Ｔ細胞応答を増大させることも示されており、このことは、ＣＤＫ４及び／またはＣＤＫ６阻害の免疫効果が存在することを示唆している（Ｄｅｎｇ Ｊ ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＤＯＩ： １０．１１５８／２１５９－８２９０．ＣＤ－１７－０９１５， ２０１８）。他の実施形態では、式Ｉの化合物（ならびにその薬学的に許容される塩、溶媒和物及びプロドラッグ）は、ＰＩ３Ｋ、ｍＴＯＲ及び／またはＭＥＫの阻害薬から選択されるキナーゼ阻害薬と組み合わせて投与することができる。
【0050】
他の抗がん作用物質と組み合わせて使用される場合、式Ｉの化合物及び他の抗がん作用物質を、同じ医薬組成物で、または別々の医薬組成物で投与することができる。別々の医薬組成物で投与される場合、前記化合物及び他の抗がん作用物質を同時に、または連続的に任意の順序で（例えば、数秒または数分またはさらに数時間（例えば、２～４８時間）以内に）投与することができる。
【0051】
式Ｉの化合物を典型的には、ヒト対象において、がんまたは別の増殖性細胞疾患もしくは状態の処置に適用する。しかしながら、対象は、例えば、家畜動物（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ及びヤギ）、コンパニオン動物（例えば、イヌ及びネコ）及びエキゾチック動物（例えば、非ヒト霊長類、トラ、ゾウなど）から選択してもよい。
【0052】
本開示に従って処置され得るＣＮＳのがんならびに他の増殖性細胞疾患及び状態には、神経膠芽腫（例えば、ＧＢＭ）、髄芽細胞腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫を含む脳及び脊髄がん、他の悪性ＣＮＳ腫瘍、例えば、星状細胞腫、上衣腫（ｅｐｅｎｄｙｍｏｎａｓ）、乏突起膠腫または転移性脳腫瘍）、ならびにＣＮＳの良性新生物、例えば、神経鞘腫、下垂体腺腫、髄膜腫及び頭蓋咽頭腫が含まれる。
【0053】
一部の好ましい実施形態では、式Ｉの化合物を、例えば、ＧＢＭを含むＣＤＫ４及び／またはサイクリンＤの過剰発現により特徴づけられるものから選択される、ＣＮＳのがんならびに他の増殖性細胞疾患及び状態を処置するために使用する。ＣＤＫ４及び／またはサイクリンＤ過剰発現は、例えば、当業者に周知の技術のいずれか（例えば、ｑＰＣＲなどの定量的増幅技術）を使用して、適切な試料において、ＣＤＫ４及び／またはサイクリンＤをコードするｍＲＮＡの量を評価することにより決定することができる。
【0054】
一部の好ましい実施形態では、式Ｉの化合物を、例えば、髄芽腫を含む、ＣＤＫ６及び／またはサイクリンＤの過剰発現により特徴づけられるものから選択されるＣＮＳのがんならびに他の増殖性細胞疾患及び状態（Ｔａｄｅｓｓｅ ｅｔ ａｌ．， Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＣＤＫ６ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ： Ｓｔａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａｒｔ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎ ｐｒｅｓｓに概説されている）を処置するために使用する。ＣＤＫ６及び／またはサイクリンＤ過剰発現は、例えば、当業者に周知の技術のいずれか（例えば、ｑＰＣＲなどの定量的増幅技術）を使用して、適切な試料において、ＣＤＫ６及び／またはサイクリンＤをコードするｍＲＮＡの量を評価することにより決定することができる。
【0055】
式Ｉの化合物は、薬学的に許容される担体、希釈剤及び／または添加剤を用いて医薬組成物に製剤化することができる。適切な担体及び希釈剤の例は、当業者に周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ １９９５に記載されている。本明細書に記載の医薬組成物の様々な異なる形態のために適切な添加剤の例は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ， ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， （１９９４）， Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ａ Ｗａｄｅ ａｎｄ ＰＪ Ｗｅｌｌｅｒに見い出すことができる。適切な担体の例には、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが含まれる。適切な希釈剤の例には、エタノール、グリセロール及び水が含まれる。意図されている投与経路及び標準的な薬務に関連して、担体、希釈剤及び／または添加剤を選択することができる。
【0056】
式Ｉの化合物を含む医薬組成物は、任意の適切な結合剤、滑沢剤、懸濁化剤、コーティング剤及び可溶化剤をさらに含んでよい。適切な結合剤の例には、デンプン、ゼラチン、天然糖、例えば、グルコース、無水ラクトース、流動性ラクトース、ベータ－ラクトース、トウモロコシ甘味剤、天然及び合成ゴム、例えば、アラビアゴム、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース及びポリエチレングリコールが含まれる。適切な滑沢剤の例には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。防腐剤、安定化剤、色素及び香味剤も医薬組成物に供給することができる。防腐剤の例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸及びｐ－ヒドロキシ安息香酸のエステルが含まれる。抗酸化剤及び懸濁化剤を使用することもできる。
【0057】
式Ｉの化合物を含む医薬組成物を経口、直腸、膣、非経口、筋肉内、腹腔内、動脈内、髄腔内、気管支内、皮下、皮内、静脈内、経鼻、頬側または舌下投与経路に適応させることができる。経口投与では、圧縮錠剤、丸剤、錠剤、ゲル剤（ｇｅｌｌｕｌｅ）、滴剤、及びカプセル剤を特に使用することができる。他の投与形態では、医薬組成物は、静脈内、動脈内、髄腔内、皮下、皮内、腹腔内または筋肉内注射することができ、かつ滅菌または滅菌可能な溶液から調製される液剤または乳剤を含んでよい。式Ｉの化合物を含む医薬組成物は、坐剤、膣坐剤、懸濁剤、乳剤、ローション剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、噴霧剤、液剤または散布剤の形態であってもよい。医薬組成物は、単位剤形で（すなわち、単位用量を、または複数もしくはその副単位の単位用量を含有する別個のポーションの形態で）製剤化することができる。
【0058】
式Ｉの化合物は、例えば、適切なその酸付加塩または塩基塩を含む薬学的に許容される塩として提供することができる。適切な薬学的塩の概説は、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ６６：１－１９ （１９７７）において見い出すことができる。塩は、例えば、強無機酸、例えば、鉱酸（例えば、硫酸、リン酸またはハロゲン化水素酸）と、強有機カルボン酸、例えば、非置換であるか、もしくは（例えば、ハロゲンにより）置換されている１～４個の炭素原子のアルカンカルボン酸、例えば、酢酸と、飽和もしくは不飽和ジカルボン酸（例えば、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸またはテトラフタル酸）と、ヒドロキシカルボン酸（例えば、アスコルビン酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸またはクエン酸）と、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）と、安息香酸と、または有機スルホン酸（例えば、非置換であるか、または例えば、ハロゲンにより置換されている（Ｃ１～Ｃ４）－アルキル－またはアリール－スルホン酸）、例えば、メタン－またはｐ－トルエンスルホン酸）と共に形成される。
【0059】
式Ｉの化合物は、それらの様々な結晶形、多形及び無水／含水形で供給することができる。これに関して、そのような化合物の合成調製において使用される溶媒からの精製及びまたは単離方法をやや変化させることにより、そのような形態のいずれかで、化学化合物を単離することができることは当業者に周知である。
【0060】
式Ｉの化合物を合成する方法は、既に記載されている（例えば、ＷＯ２０１７／０２００６５を参照されたい）。一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、次の一般合成スキーム：
を適合させることにより合成することができ、その際、一般反応条件は：（ａ）ＤＭＦ－ＤＭＡまたはＢｒｅｄｅｒｅｃｋ試薬、還流；（ｂ）Ｓｅｌｅｃｔ Ｆｌｕｏｒ、ＭｅＯＨ；（ｃ）Ｅｔ３Ｎ、ＨｇＣｌ２、ＤＣＭ；（ｄ）ＴＦＡ／ＤＣＭ（１：１）、還流；（ｅ）Ａ、Ｂ、ＮａＯＨ、２－メトキシエタノール、マイクロ波及び（ｆ）Ｐｄ２ｄｂａ３、キサントホス、ｔ－ＢｕＯＮａ、ジオキサン、マイクロ波である。
【化4】
を適合させることにより合成することができ、その際、一般反応条件は：（ａ）ＤＭＦ－ＤＭＡまたはＢｒｅｄｅｒｅｃｋ試薬、還流；（ｂ）Ｓｅｌｅｃｔ Ｆｌｕｏｒ、ＭｅＯＨ；（ｃ）Ｅｔ３Ｎ、ＨｇＣｌ２、ＤＣＭ；（ｄ）ＴＦＡ／ＤＣＭ（１：１）、還流；（ｅ）Ａ、Ｂ、ＮａＯＨ、２－メトキシエタノール、マイクロ波及び（ｆ）Ｐｄ２ｄｂａ３、キサントホス、ｔ－ＢｕＯＮａ、ジオキサン、マイクロ波である。
【0061】
上のスキーム１の合成方法の記載に関連して、溶媒の選択、反応雰囲気、反応温度、実験期間及び後処理手順を含む提示されている反応条件はすべて、容易に選択することができることは、当業者に理解されるであろう。さらに、分子の様々な部分に存在する官能基が、利用される試薬及び反応条件と適合性である必要があることは当業者に理解されるであろう。
【0062】
必要な出発物質は、有機化学の標準的な手順により得ることができる。そのような出発物質の調製は、次の代表的なプロセスバリアントと併せて、本明細書において後記の実施例内で記載する。別法では、必要な出発物質は、当業者の通常の技能の範囲内である例示の手順と類似の手順により得ることができる。さらに、化合物の合成中に、またはある特定の出発物質の合成中に、ある特定の置換基を保護して、それらの不所望の反応を防ぐことが望ましいことがあることは分かるであろう。当業者は、そのような保護が必要とされる場合、及びそのような保護基を導入し、後で除去し得る方法を容易に理解するであろう。保護基の例は、例えば、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｇｒｅｅｎ（出版社：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ）に記載されている。保護基は、該当する保護基の除去に適切であると当業者に周知の任意の簡便な方法により除去することができ、そのような方法は、分子内の他の箇所の基の最小の侵害で、保護基の除去を行うように選択する。したがって、反応物が、例えば、アミノ、カルボキシルまたはヒドロキシルなどの基を含むならば、本明細書において記述の反応のいくつかにおいて、基を保護することが望ましいことがある。
【0063】
加えて、当業者は、スキーム１に示されている式Ａまたは式Ｂの化合物のカップリング反応において使用するために適した反応条件を選択することができるであろう。しかしながら、典型的には、反応を無水条件下で、かつ不活性雰囲気、例えば、アルゴンまたは窒素の存在下で実施する。反応を高温、例えば、８０～１８０℃の範囲内で、例えば、２０分から４８時間の適切な時間にわたって実施することもできる。適切には、反応をマイクロ波加熱下、例えば、８０～１８０℃で、２０分から１．５時間にわたって実施する。
【0064】
当業者に周知の技術を使用して、生じた化合物を単離及び精製することができる。
【0065】
本開示の方法及び使用を、次の非限定的実施例及び添付の図面を参照して、本明細書においてさらに後記する。
【実施例】
【0066】
実施例１ 代表的な化合物の合成
一般
１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、３００Ｋで、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ５００分光計（５００ＭＨｚで１Ｈ）で記録した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、残留非重水素化溶媒（またはテトラメチルシラン）の１Ｈシグナルを基準とした。高分解能質量スペクトルはＡＢ ＳＣＩＥＸ ＴｒｉｐｌｅＴＯＦ（登録商標）５６００質量分析計で記録し、すべての試料のイオン化は、ＥＳＩを使用して実施した。化合物の純度を分析用ＨＰＬＣにより決定したところ、９５％超であった。ＣＢＭ－２０Ａコミュニケーションバスモジュール、ＤＧＵ－２０Ａ５Ｒ脱気ユニット、ＬＣ－２０ＡＤ液体クロマトグラフポンプ、ＳＩＬ－２０ＡＨＴオートサンプラー、ＳＰＤ－Ｍ２０Ａフォトダイオードアレイ検出器、ＣＴＯ－２０Ａカラムオーブン及びＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ ５ｕ Ｃ１８ １００Ａ ２５０ｍｍ×４．６０ｍｍカラムを備えたＳｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ＵＦＬＣ（ＵｌｔｒａＦａｓｔ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）システムで、方法Ａ（１ｍＬ／分の流速で、７分にわたってＦＡ０．１％を含有するＭｅＯＨ５％から９５％への勾配、続いて、１３分にわたってＦＡ０．１％を含有するＭｅＯＨ９５％）、方法Ｂ（１ｍＬ／分の流速で、７分にわたってＦＡ０．１％を含有するＭｅＣＮ５％から９５％への勾配、続いて、１３分にわたってＦＡ０．１％を含有するＭｅＣＮ９５％）を使用して、分析用ＨＰＬＣを実施した。
一般
１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、３００Ｋで、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ５００分光計（５００ＭＨｚで１Ｈ）で記録した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、残留非重水素化溶媒（またはテトラメチルシラン）の１Ｈシグナルを基準とした。高分解能質量スペクトルはＡＢ ＳＣＩＥＸ ＴｒｉｐｌｅＴＯＦ（登録商標）５６００質量分析計で記録し、すべての試料のイオン化は、ＥＳＩを使用して実施した。化合物の純度を分析用ＨＰＬＣにより決定したところ、９５％超であった。ＣＢＭ－２０Ａコミュニケーションバスモジュール、ＤＧＵ－２０Ａ５Ｒ脱気ユニット、ＬＣ－２０ＡＤ液体クロマトグラフポンプ、ＳＩＬ－２０ＡＨＴオートサンプラー、ＳＰＤ－Ｍ２０Ａフォトダイオードアレイ検出器、ＣＴＯ－２０Ａカラムオーブン及びＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ ５ｕ Ｃ１８ １００Ａ ２５０ｍｍ×４．６０ｍｍカラムを備えたＳｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ＵＦＬＣ（ＵｌｔｒａＦａｓｔ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）システムで、方法Ａ（１ｍＬ／分の流速で、７分にわたってＦＡ０．１％を含有するＭｅＯＨ５％から９５％への勾配、続いて、１３分にわたってＦＡ０．１％を含有するＭｅＯＨ９５％）、方法Ｂ（１ｍＬ／分の流速で、７分にわたってＦＡ０．１％を含有するＭｅＣＮ５％から９５％への勾配、続いて、１３分にわたってＦＡ０．１％を含有するＭｅＣＮ９５％）を使用して、分析用ＨＰＬＣを実施した。
【0067】
５－（２－（（５－（４－（ジメチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン（１）：
２－メトキシエタノール（３ｍＬ）中の粗製１－（５－（４－（ジメチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（５２４ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）の溶液に、（（Ｅ）－３－（ジメチルアミノ）－２－フルオロ－１－（４－メチル－２－（メチルアミノ）チアゾール－５－イル）プロパ－２－エン－１－オン（２４３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及びＮａＯＨ（８０．０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で１時間にわたってマイクロ波照射下で加熱し、室温に冷却し、次いで、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、３２％アンモニア０．５ｍｌを常に添加しながらＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９０：１０へ傾斜）により精製して、１を茶色の固体（７６ｍｇ、１７．２％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １．５０ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ １１．０）， １．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ １１．０）， ２．２１ （ｓ， ７Ｈ）， ２．４７ （ｓ， ３Ｈ， ｔｈｉａｚｏｌｅ－ＣＨ３）， ２．６４ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ １１．０）， ２．８６ （ｔ， ３Ｈ， Ｊ ３．５）， ３．６３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ １１．０）， ７．３９ （ａｐｐ ｄ， １Ｈ， Ｊ ７．０）， ７．９２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０）， ７．９８ （ｓ， １Ｈ）， ８．１０ （ １Ｈ， Ｊ ４．０）， ８．４１ （ｓ， １Ｈ）， ９．４３ （ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４４３．２１３６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
２－メトキシエタノール（３ｍＬ）中の粗製１－（５－（４－（ジメチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（５２４ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）の溶液に、（（Ｅ）－３－（ジメチルアミノ）－２－フルオロ－１－（４－メチル－２－（メチルアミノ）チアゾール－５－イル）プロパ－２－エン－１－オン（２４３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及びＮａＯＨ（８０．０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で１時間にわたってマイクロ波照射下で加熱し、室温に冷却し、次いで、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、３２％アンモニア０．５ｍｌを常に添加しながらＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９０：１０へ傾斜）により精製して、１を茶色の固体（７６ｍｇ、１７．２％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １．５０ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ １１．０）， １．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ １１．０）， ２．２１ （ｓ， ７Ｈ）， ２．４７ （ｓ， ３Ｈ， ｔｈｉａｚｏｌｅ－ＣＨ３）， ２．６４ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ １１．０）， ２．８６ （ｔ， ３Ｈ， Ｊ ３．５）， ３．６３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ １１．０）， ７．３９ （ａｐｐ ｄ， １Ｈ， Ｊ ７．０）， ７．９２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０）， ７．９８ （ｓ， １Ｈ）， ８．１０ （ １Ｈ， Ｊ ４．０）， ８．４１ （ｓ， １Ｈ）， ９．４３ （ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４４３．２１３６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0068】
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン（２）：
ジオキサン（３ｍＬ）中の５－（２－アミノ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチル－４－メチルチアゾール－２－アミン（２００ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、１－（（６－ブロモピリジン－３－イル）メチル）－４－エチルピペラジン（２３３．ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２ｄｂａ３（３１ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）、キサントホス（４１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及びｔ－ＢｕＯＮａ（９８ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を添加し、マイクロ波照射下で、１５０℃で１時間にわたって加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９３：７へ傾斜）により精製して、２をオレンジ色の固体（１００ｍｇ、２９％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ０．９９ （ｔ， ３Ｈ， Ｊ ７．０）， １．４９－１．５９ （ｍ， ４Ｈ）， １．６４ － １．７２ （ｍ， ２Ｈ）， １．９０ － １．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３８ （ｓ ｂｒ， １０Ｈ）， ２．４８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ２．５）， ３．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９５ － ３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ７．６４ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ８．５ ＆ ２．０）， ８．１０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ８．５）， ８．１６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ２．０）， ８．２７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ７．０）， ８．４６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．５）， ９．７７ （ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４９７．２６０１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ジオキサン（３ｍＬ）中の５－（２－アミノ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチル－４－メチルチアゾール－２－アミン（２００ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、１－（（６－ブロモピリジン－３－イル）メチル）－４－エチルピペラジン（２３３．ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２ｄｂａ３（３１ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）、キサントホス（４１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及びｔ－ＢｕＯＮａ（９８ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を添加し、マイクロ波照射下で、１５０℃で１時間にわたって加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９３：７へ傾斜）により精製して、２をオレンジ色の固体（１００ｍｇ、２９％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ０．９９ （ｔ， ３Ｈ， Ｊ ７．０）， １．４９－１．５９ （ｍ， ４Ｈ）， １．６４ － １．７２ （ｍ， ２Ｈ）， １．９０ － １．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３８ （ｓ ｂｒ， １０Ｈ）， ２．４８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ２．５）， ３．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９５ － ３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ７．６４ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ８．５ ＆ ２．０）， ８．１０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ８．５）， ８．１６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ２．０）， ８．２７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ７．０）， ８．４６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．５）， ９．７７ （ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４９７．２６０１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0069】
Ｎ－シクロペンチル－４－メチル－５－（２－（（５－（ピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）チアゾール－２－アミン（３）：
２－メトキシエタノール（３ｍＬ）中の粗製１－（５－（ピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（４４１ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）及び（Ｅ）－１－（２－（シクロペンチルアミノ）－４－メチルチアゾール－５－イル）－３－（ジメチルアミノ）プロパ－２－エン－１－オン（２７９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＯＨ（８０．０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で、マイクロ波照射下で１時間にわたって加熱し、室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９２：８へ傾斜）により精製して、ＤＣＭ及びＭｅＯＨで再結晶化させて、３を暗黄色の固体（７０．０ｍｇ、１６％）として得た。融点２１０～２１３℃。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） １．４９－１．６８ （ｍ， ７Ｈ）， １．８９－１．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．８５ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ４．５）， ３．０２ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ６．９０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）， ７．３６ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ３．０）， ７．９８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．０７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０）， ８．１８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ７．０）， ８．３３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）， ９．３３ （ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４３７．２２２２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
２－メトキシエタノール（３ｍＬ）中の粗製１－（５－（ピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（４４１ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）及び（Ｅ）－１－（２－（シクロペンチルアミノ）－４－メチルチアゾール－５－イル）－３－（ジメチルアミノ）プロパ－２－エン－１－オン（２７９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＯＨ（８０．０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で、マイクロ波照射下で１時間にわたって加熱し、室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９２：８へ傾斜）により精製して、ＤＣＭ及びＭｅＯＨで再結晶化させて、３を暗黄色の固体（７０．０ｍｇ、１６％）として得た。融点２１０～２１３℃。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） １．４９－１．６８ （ｍ， ７Ｈ）， １．８９－１．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．８５ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ４．５）， ３．０２ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ６．９０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）， ７．３６ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ３．０）， ７．９８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．０７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０）， ８．１８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ７．０）， ８．３３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）， ９．３３ （ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４３７．２２２２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0070】
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（４－エチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン（４）：
２－メトキシエタノール（３ｍＬ）中の粗製１－（５－（４－エチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（４９６ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）及び（Ｅ）－１－（２－（シクロペンチルアミノ）－４－メチルチアゾール－５－イル）－３－（ジメチルアミノ）プロパ－２－エン－１－オン（２７９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＯＨ（８０．０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で、マイクロ波照射下で１時間にわたって加熱し、室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９６：４に傾斜）により精製し、ＭｅＯＨから再結晶化させて、４を黄色の固体（１１７ｍｇ、２５％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ １．１４ （ｔ， ３Ｈ， Ｊ ７．０）， １．５６－１．７６ （ｍ， ６Ｈ）， ２．０６－２．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４９ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ７．５）， ２．５４ （ｓ， ３Ｈ）， ２．６４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１９ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ４．５）， ３．１４ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．８６ （ａｐｐ ｓ， １Ｈ）， ５．７７ （ｓ， １Ｈ）， ６．８４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．０）， ７．３４ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ３．０）， ７．９４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ７．９４ （ｓ， １Ｈ）， ８．０１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．２６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０）， ８．３３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４６５．２５４１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
２－メトキシエタノール（３ｍＬ）中の粗製１－（５－（４－エチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（４９６ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）及び（Ｅ）－１－（２－（シクロペンチルアミノ）－４－メチルチアゾール－５－イル）－３－（ジメチルアミノ）プロパ－２－エン－１－オン（２７９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＯＨ（８０．０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で、マイクロ波照射下で１時間にわたって加熱し、室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９６：４に傾斜）により精製し、ＭｅＯＨから再結晶化させて、４を黄色の固体（１１７ｍｇ、２５％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ １．１４ （ｔ， ３Ｈ， Ｊ ７．０）， １．５６－１．７６ （ｍ， ６Ｈ）， ２．０６－２．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４９ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ７．５）， ２．５４ （ｓ， ３Ｈ）， ２．６４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１９ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ４．５）， ３．１４ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．８６ （ａｐｐ ｓ， １Ｈ）， ５．７７ （ｓ， １Ｈ）， ６．８４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．０）， ７．３４ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ３．０）， ７．９４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ７．９４ （ｓ， １Ｈ）， ８．０１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．２６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０）， ８．３３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４６５．２５４１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0071】
２－（（５－（４－アセチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－４－（４－メチル－２－（メチルアミノ）チアゾール－５－イル）ピリミジン－５－カルボニトリル（５）：
２－メトキシエタノール（４ｍＬ）中の粗製１－（５－（４－アセチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（３１５ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－（５－（２－シアノ－３－（ジメチルアミノ）ａｃｒｙｌｏｙｌ）－４－メチルチアゾール－２－イル）（メチル）カルバメート（３５０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及びＮａＯＨ（８２．０ｍｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で９０分間にわたってマイクロ波照射下で加熱し、室温に冷却し、次いで、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、３２％水性アンモニアを３％まで連続添加しながら、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９０：１０へ傾斜）により精製した。固体をＤＣＭ及びＭｅＯＨで洗浄し、次いで、濾過して、５を淡黄色の固体（１５７ｍｇ、３５％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ２．０４ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４０ （ｓ， ３Ｈ）， ２．８７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１０ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．１６ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．５８ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ５．０）， ７．４６ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．５ ＆ ３．０）， ７．９０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０）， ８．０６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．２６ （ｑ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．７５ （ｓ， １Ｈ）， １０．３３ （ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４５０．１８４４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
２－メトキシエタノール（４ｍＬ）中の粗製１－（５－（４－アセチルピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（３１５ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－（５－（２－シアノ－３－（ジメチルアミノ）ａｃｒｙｌｏｙｌ）－４－メチルチアゾール－２－イル）（メチル）カルバメート（３５０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及びＮａＯＨ（８２．０ｍｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で９０分間にわたってマイクロ波照射下で加熱し、室温に冷却し、次いで、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、３２％水性アンモニアを３％まで連続添加しながら、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９０：１０へ傾斜）により精製した。固体をＤＣＭ及びＭｅＯＨで洗浄し、次いで、濾過して、５を淡黄色の固体（１５７ｍｇ、３５％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ２．０４ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４０ （ｓ， ３Ｈ）， ２．８７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１０ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．１６ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．５８ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ５．０）， ７．４６ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．５ ＆ ３．０）， ７．９０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０）， ８．０６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．２６ （ｑ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．７５ （ｓ， １Ｈ）， １０．３３ （ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４５０．１８４４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0072】
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン（６）：
ジオキサン（３ｍＬ）中の５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチル－４－メチルチアゾール－２－アミン（２７５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の溶液に、１－（（６－ブロモピリジン－３－イル）メチル）－４－エチルピペラジン（３４１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２ｄｂａ３（４５．８ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、キサントホス（５８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びｔ－ＢｕＯＮａ（１４４ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を添加し、マイクロ波照射下で、１５０℃で１時間にわたって加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ＝９：１：０．３へ傾斜）により精製し、ＤＣＭ及びＭｅＯＨで再結晶化させて、６を白色の固体（２００ｍｇ、４２％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ １．０９ （ｔ， ３Ｈ， Ｊ ７．０）， １．５８ － １．７６ （ｍ， ６Ｈ）， ２．０８ － ２．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４３ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ７．０， ＣＨ２ＣＨ３）， ２．５５ （ｓ ｂｒ， １１Ｈ）， ３．４８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８６ － ３．９２ （ｍ， １Ｈ）， ５．４２ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ７．０）， ６．９０（ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）， ７．６８ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ２．５）， ７．８９ （ｓ， １Ｈ）， ８．１９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ２．０）， ８．３５ － ８．３８ （ｍ， ２Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４７９．２７０３［Ｍ＋Ｈ］＋．
ジオキサン（３ｍＬ）中の５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチル－４－メチルチアゾール－２－アミン（２７５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の溶液に、１－（（６－ブロモピリジン－３－イル）メチル）－４－エチルピペラジン（３４１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２ｄｂａ３（４５．８ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、キサントホス（５８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びｔ－ＢｕＯＮａ（１４４ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を添加し、マイクロ波照射下で、１５０℃で１時間にわたって加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ＝９：１：０．３へ傾斜）により精製し、ＤＣＭ及びＭｅＯＨで再結晶化させて、６を白色の固体（２００ｍｇ、４２％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ １．０９ （ｔ， ３Ｈ， Ｊ ７．０）， １．５８ － １．７６ （ｍ， ６Ｈ）， ２．０８ － ２．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４３ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ７．０， ＣＨ２ＣＨ３）， ２．５５ （ｓ ｂｒ， １１Ｈ）， ３．４８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８６ － ３．９２ （ｍ， １Ｈ）， ５．４２ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ７．０）， ６．９０（ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）， ７．６８ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ２．５）， ７．８９ （ｓ， １Ｈ）， ８．１９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ２．０）， ８．３５ － ８．３８ （ｍ， ２Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４７９．２７０３［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0073】
５－（２－（（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン（７）：
１－（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（７０２ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）及び（４６９ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）及び（（Ｅ）－３－（ジメチルアミノ）－２－フルオロ－１－（４－メチル－２－（メチルアミノ）チアゾール－５－イル）プロパ－２－エン－１－オン（２４３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を反応させることにより、化合物７をオレンジ色の固体（４０．０ｍｇ、１０％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １．７５－１．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ２．０）， ２．６２ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ６．０）， ２．８５ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ５．５）， ３．４５ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．５３ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ６．０）， ７．１３ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ３．０）， ７．７８ （ｓ， １Ｈ）， ７．７９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ４．５）， ８．０８ （ｑ， １Ｈ， Ｊ ４．５）， ８．３７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．５）， ９．２１ （ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４１５．１８２１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
１－（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（７０２ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）及び（４６９ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）及び（（Ｅ）－３－（ジメチルアミノ）－２－フルオロ－１－（４－メチル－２－（メチルアミノ）チアゾール－５－イル）プロパ－２－エン－１－オン（２４３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を反応させることにより、化合物７をオレンジ色の固体（４０．０ｍｇ、１０％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １．７５－１．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ２．０）， ２．６２ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ６．０）， ２．８５ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ５．５）， ３．４５ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．５３ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ６．０）， ７．１３ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ３．０）， ７．７８ （ｓ， １Ｈ）， ７．７９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ４．５）， ８．０８ （ｑ， １Ｈ， Ｊ ４．５）， ８．３７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．５）， ９．２１ （ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４１５．１８２１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0074】
５－（２－（（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチル－４－メチルチアゾール－２－アミン（８）：
２－メトキシエタノール（５ｍＬ）中の１－（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（７０２ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）及び（Ｅ）－１－（２－（シクロペンチルアミノ）－４－メチルチアゾール－５－イル）－３－（ジメチルアミノ）プロパ－２－エン－１－オン（５５８ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＯＨ（１６０．０ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で、マイクロ波照射下で２時間にわたって加熱し、室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィーにより精製して、８を黄色の固体（９０ｍｇ、１０％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ １．５０－１．７７ （ｍ， １０Ｈ）， １．９５ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ １０．５）， ２．０７－２．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５４ （ｓ， ３Ｈ）， ２．７５－２．８５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５３ － ３．５６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８５ － ３．９１ （ｍ， １Ｈ）， ５．４３ （ｄ， Ｊ ５．０， １Ｈ）， ６．８４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）， ７．３４ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ３．０）， ７．７５ （ｓ， １Ｈ）， ８．００ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．２５ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０）， ８．３２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４５１．２４１５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
２－メトキシエタノール（５ｍＬ）中の１－（５－（４－アミノピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（７０２ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）及び（Ｅ）－１－（２－（シクロペンチルアミノ）－４－メチルチアゾール－５－イル）－３－（ジメチルアミノ）プロパ－２－エン－１－オン（５５８ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＯＨ（１６０．０ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で、マイクロ波照射下で２時間にわたって加熱し、室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィーにより精製して、８を黄色の固体（９０ｍｇ、１０％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ １．５０－１．７７ （ｍ， １０Ｈ）， １．９５ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ １０．５）， ２．０７－２．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５４ （ｓ， ３Ｈ）， ２．７５－２．８５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５３ － ３．５６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８５ － ３．９１ （ｍ， １Ｈ）， ５．４３ （ｄ， Ｊ ５．０， １Ｈ）， ６．８４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）， ７．３４ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ３．０）， ７．７５ （ｓ， １Ｈ）， ８．００ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．２５ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０）， ８．３２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ５．５）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４５１．２４１５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0075】
Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－モルホリノピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－（トリフルオロメチル）チアゾール－２－アミン（９）：
２－メトキシエタノール（３ｍＬ）中の１－（５－モルホリノピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（４４２ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）及び（Ｅ）－１－（２－（シクロペンチルアミノ）－４－メチルチアゾール－５－イル）－３－（ジメチルアミノ）－２－フルオロプロパ－２－エン－１－オン（２９７ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＯＨ（８０．０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で、マイクロ波照射下で、１時間にわたって加熱し、室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィーにより精製して、９を茶色の固体（１２０ｍｇ、２６％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １．５０－１．５７ （ｍ， ４Ｈ）， １．６６ － １．６９ （ｍ， ２Ｈ）， １．９０ － １．９５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ２．５）， ３．０９ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．７５ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．９６ （ｍ， １Ｈ）， ７．４２ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ３．０）， ７．９６ （ｄ， １Ｈ， ， Ｊ ９．０）， ７．９８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．２４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ７．０）， ８．４１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ７．０）， ９．５２（ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４５６．１９７６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
２－メトキシエタノール（３ｍＬ）中の１－（５－モルホリノピリジン－２－イル）グアニジントリフルオロアセテート（４４２ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）及び（Ｅ）－１－（２－（シクロペンチルアミノ）－４－メチルチアゾール－５－イル）－３－（ジメチルアミノ）－２－フルオロプロパ－２－エン－１－オン（２９７ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＯＨ（８０．０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で、マイクロ波照射下で、１時間にわたって加熱し、室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィーにより精製して、９を茶色の固体（１２０ｍｇ、２６％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １．５０－１．５７ （ｍ， ４Ｈ）， １．６６ － １．６９ （ｍ， ２Ｈ）， １．９０ － １．９５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ２．５）， ３．０９ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．７５ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ５．０）， ３．９６ （ｍ， １Ｈ）， ７．４２ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ９．０ ＆ ３．０）， ７．９６ （ｄ， １Ｈ， ， Ｊ ９．０）， ７．９８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ３．０）， ８．２４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ７．０）， ８．４１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ７．０）， ９．５２（ｓ， １Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ４５６．１９７６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0076】
実施例２ 生物学的活性
キナーゼアッセイ
Ｅｕｒｏｆｉｎｓ Ｐｈａｒｍａ ＤｉｓｃｏｖｅｒｙまたはＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｐｒｏｆｉｌｅｒサービスを使用して、放射測定アッセイ（ＲＩＡ）によりＣＤＫ及び他のキナーゼの阻害を測定した。ＣＤＫ４／サイクリンＤ１、ＣＤＫ６／サイクリンＤ３及びＣＤＫ９／Ｔ１の阻害を、ＡＤＰ Ｇｌｏ Ｋｉｎａｓｅアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ、米国）を使用して社内でも決定した。簡単に述べると、ＣＤＫ４／サイクリンＤ１及びＣＤＫ６／サイクリンＤ３のキナーゼ反応を、キナーゼ反応緩衝液（４０ｎＭ ＴｒｉｓベースｐＨ７．５、２０ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．４ｍＭ ＤＴＴ）、０．１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ及びＲＢ－ＣＴＦ基質（網膜芽細胞腫タンパク質１ Ｃ末端画分）を用いて行った。ＣＤＫ９／サイクリンＴ１では、キナーゼ反応を、標準的なアッセイ緩衝液及びＫｉｎａｓｅ Ｄｉｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ及びＲＢＥＲ－ＩＲＳｔｉｄｅ基質を用いて行った。試験化合物について、１０の濃度（１０μＭから０．５ｎＭまで）のために、１：３の系列希釈物を調製した。ＡＴＰを添加することによりキナーゼ反応を開始し、４０分間にわたって３７℃でインキュベートし、次いで、ＡＤＰ Ｇｌｏ試薬１０μＬを添加することにより停止した。室温（ＲＴ）、暗所で、４０分間にわたってインキュベートした後に、１ウェルあたりキナーゼ検出試薬２０μＬを添加し、４０分間にわたってインキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、英国）を使用して、ルミネセンスを測定した。それぞれ、ＣＤＫキナーゼの存在及び非存在下で陽性及び陰性対照を行った。４－パラメーターロジスティック非線形回帰モデルをＧｒａｐｈｐａｄプリズム（Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．０）で用いて、５０％阻害（ＩＣ５０）値を計算した。それぞれのキナーゼについてＫｍ（ＡＴＰ）及びＩＣ５０値から、見掛け阻害定数（Ｋｉ）値を計算した。代表的な化合物の結果を表２に示す。
キナーゼアッセイ
Ｅｕｒｏｆｉｎｓ Ｐｈａｒｍａ ＤｉｓｃｏｖｅｒｙまたはＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｐｒｏｆｉｌｅｒサービスを使用して、放射測定アッセイ（ＲＩＡ）によりＣＤＫ及び他のキナーゼの阻害を測定した。ＣＤＫ４／サイクリンＤ１、ＣＤＫ６／サイクリンＤ３及びＣＤＫ９／Ｔ１の阻害を、ＡＤＰ Ｇｌｏ Ｋｉｎａｓｅアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ、米国）を使用して社内でも決定した。簡単に述べると、ＣＤＫ４／サイクリンＤ１及びＣＤＫ６／サイクリンＤ３のキナーゼ反応を、キナーゼ反応緩衝液（４０ｎＭ ＴｒｉｓベースｐＨ７．５、２０ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．４ｍＭ ＤＴＴ）、０．１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ及びＲＢ－ＣＴＦ基質（網膜芽細胞腫タンパク質１ Ｃ末端画分）を用いて行った。ＣＤＫ９／サイクリンＴ１では、キナーゼ反応を、標準的なアッセイ緩衝液及びＫｉｎａｓｅ Ｄｉｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ及びＲＢＥＲ－ＩＲＳｔｉｄｅ基質を用いて行った。試験化合物について、１０の濃度（１０μＭから０．５ｎＭまで）のために、１：３の系列希釈物を調製した。ＡＴＰを添加することによりキナーゼ反応を開始し、４０分間にわたって３７℃でインキュベートし、次いで、ＡＤＰ Ｇｌｏ試薬１０μＬを添加することにより停止した。室温（ＲＴ）、暗所で、４０分間にわたってインキュベートした後に、１ウェルあたりキナーゼ検出試薬２０μＬを添加し、４０分間にわたってインキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、英国）を使用して、ルミネセンスを測定した。それぞれ、ＣＤＫキナーゼの存在及び非存在下で陽性及び陰性対照を行った。４－パラメーターロジスティック非線形回帰モデルをＧｒａｐｈｐａｄプリズム（Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．０）で用いて、５０％阻害（ＩＣ５０）値を計算した。それぞれのキナーゼについてＫｍ（ＡＴＰ）及びＩＣ５０値から、見掛け阻害定数（Ｋｉ）値を計算した。代表的な化合物の結果を表２に示す。
【表2】
【0077】
細胞培養
この実施例で使用される３種のＧＢＭ細胞系すべて、すなわち、Ｕ８７、Ｕ２５１及びＴ９８Ｇを、１０％ウシ胎児血清を含むイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中で、７５ｃｍ２フラスコ内、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。いずれの実験セットアップの前にも、すべての細胞系をマイコプラズマ非含有であることを確認した。
この実施例で使用される３種のＧＢＭ細胞系すべて、すなわち、Ｕ８７、Ｕ２５１及びＴ９８Ｇを、１０％ウシ胎児血清を含むイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中で、７５ｃｍ２フラスコ内、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。いずれの実験セットアップの前にも、すべての細胞系をマイコプラズマ非含有であることを確認した。
【0078】
ＭＴＴ増殖アッセイ及び組合せ研究
既に報告されているとおりに（Ｗａｎｇ Ｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４７：１６６２－１６７５， ２００４；及びＤｉａｂ Ｓ． ｅｔ ａｌ． ＣｈｅＭｅｄＣｈｅｍ ９：９６２－９７２， ２０１４）、実施例１からの代表的な化合物を、それぞれ固形腫瘍細胞系（ＧＢＭ細胞系を含む）及び白血病細胞系での標準的なＭＴＴ（３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド）及びレザズリンアッセイに掛けた。細胞増殖の５０％を阻害するために必要とされる化合物濃度（ＧＩ５０）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、米国）を使用して決定した。結果を表３に示す。
既に報告されているとおりに（Ｗａｎｇ Ｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４７：１６６２－１６７５， ２００４；及びＤｉａｂ Ｓ． ｅｔ ａｌ． ＣｈｅＭｅｄＣｈｅｍ ９：９６２－９７２， ２０１４）、実施例１からの代表的な化合物を、それぞれ固形腫瘍細胞系（ＧＢＭ細胞系を含む）及び白血病細胞系での標準的なＭＴＴ（３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド）及びレザズリンアッセイに掛けた。細胞増殖の５０％を阻害するために必要とされる化合物濃度（ＧＩ５０）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、米国）を使用して決定した。結果を表３に示す。
【表3】
【0079】
組合せ研究のために、細胞を、１０μＬのエベロリムス（ｍＴＯＲの阻害薬）、アルペリシブ（ＰＩ３Ｋの阻害薬）またはセルメチニブ（ＭＥＫの阻害薬）と、１０μＬの本開示のＣＤＫ４／６阻害薬の１種とで、様々な濃度で７２時間にわたって処理した。その間に、５０μＬのＭＴＴを各ウェルに添加し、３．５時間のインキュベーションの後に、吸光度を５５０ｎｍで、ＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）マルチラベルプレートリーダー（Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、英国）により測定した。Ｃｈｏｕ－Ｔａｌａｌａｙ法により、ＣｏｍｐｕＳｙｎ ｖ １．０（ＣｏｍｂｏＳｙｎ、ＮＪ、米国）を用いて、結果を決定した。１未満、１及び１超の併用指数（ＣＩ）の値を、それぞれ相乗性、相加性及び拮抗性薬物相互作用と判断した（Ｃｈｏｕ ＴＣ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ ４：４５０－４５４， １９８３）。結果は図１に示されている。組合せ処置は、増殖に対して、単一作用物質処置と比べて高いレベルの阻害活性をもたらした。１未満のＣＩにより示されるとおり、相乗レベルの阻害の証拠が存在した。
【0080】
アポトーシスアッセイ
製造者プロトコルに従ってアネキシンＶ－ＦＩＴＣアポトーシス検出キットＩ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｉｎｃ．；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、米国）を用いて、化合物１がＧＢＭ細胞においてアポトーシスを誘導する能力を調査した。細胞ペレットを冷ＰＢＳ１ｍＬで２回洗浄し、３００×ｇで５分間にわたって遠心した。上清を除去した後に、細胞ペレットを１×アネキシンＶ結合緩衝液１００μＬ、アネキシンＶ－ＦＩＴＣ３μＬ及びヨウ化プロピジウム染色液３μＬで染色し、かつ暗所、室温で１５分間にわたってインキュベートした。アポトーシス細胞のパーセンテージをＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターにより測定した。ＧＢＭ Ｕ８７細胞を５μＭパルボシクリブ（「Ｐａｌｂ」）または化合物１（５μＭテモゾロミド（ＴＭＺ）を伴う、及び伴わない）で処理し、その後、４８時間後に、細胞をアッセイした。図２の結果は、化合物１（ＴＭＺを伴う、及び伴わない）が、対照の抗がん作用物質、パルボシクリブ（ＴＭＺを伴う、及び伴わない）よりも高いレベルで、ＧＢＭ細胞においてアポトーシスを誘導し得ることを示した。
製造者プロトコルに従ってアネキシンＶ－ＦＩＴＣアポトーシス検出キットＩ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｉｎｃ．；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、米国）を用いて、化合物１がＧＢＭ細胞においてアポトーシスを誘導する能力を調査した。細胞ペレットを冷ＰＢＳ１ｍＬで２回洗浄し、３００×ｇで５分間にわたって遠心した。上清を除去した後に、細胞ペレットを１×アネキシンＶ結合緩衝液１００μＬ、アネキシンＶ－ＦＩＴＣ３μＬ及びヨウ化プロピジウム染色液３μＬで染色し、かつ暗所、室温で１５分間にわたってインキュベートした。アポトーシス細胞のパーセンテージをＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターにより測定した。ＧＢＭ Ｕ８７細胞を５μＭパルボシクリブ（「Ｐａｌｂ」）または化合物１（５μＭテモゾロミド（ＴＭＺ）を伴う、及び伴わない）で処理し、その後、４８時間後に、細胞をアッセイした。図２の結果は、化合物１（ＴＭＺを伴う、及び伴わない）が、対照の抗がん作用物質、パルボシクリブ（ＴＭＺを伴う、及び伴わない）よりも高いレベルで、ＧＢＭ細胞においてアポトーシスを誘導し得ることを示した。
【0081】
ウェスタンブロット分析
細胞を３×１０５の密度で、新鮮な培地１０ｍＬと共に滅菌培養皿に播種し、化合物処理の前に３７℃、５％ＣＯ２で、終夜インキュベートした。２４時間後に、細胞をＰＢＳで収集し、３００×ｇで５分間にわたって遠心し、溶解緩衝液１００μＬ（２５ｍＭ４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸、３００ｍＭ塩化ナトリウム、１．５ｍＭ塩化マグネシウム、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、２０ｍＭ β－グリセロリン酸、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５ｍＭジチオスレイトール、１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム及び２５×プロテアーゼ阻害薬カクテル）で溶解させた。タンパク質溶解産物を４℃での１０分間の最大速度遠心分離の後に収集した。製造者プロトコルに従ってＢｉｏ－Ｒａｄ ＤＣタンパク質アッセイキットＩＩ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｓｙｄｎｅｙ、ＮＳＷ、オーストラリア）を用いてＢＳＡ標準曲線を実行することにより、細胞溶解産物のタンパク質濃度を決定した。タンパク質３０μｇを測定し、３×ローディング緩衝液と混合し、かつ９５℃で５分間にわたって、Ｔ１００サーマルサイクラー（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を用いて変性させた。次いで、各試料の分子質量をゲル電気泳動により、４～２０％ポリアクリルアミドゲル上で、１２０Ｖで１時間にわたって分離した。溶解したタンパク質をニトロセルロース膜に移し、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水中５％脱脂乳及びＴｗｅｅｎ ２０（ＴＢＳＴ）で１時間にわたって室温でブロックした。抗体をＴＢＳＴ中５％脱脂乳中で希釈した。膜を一次抗体と共に－２０℃で終夜インキュベートし、ＴＢＳＴで４回洗浄し、二次抗体で１時間にわたって室温で処理し、再びＴＢＳＴで４回洗浄した。次いで、Ａｍｅｒｓｈａｍ ＥＣＬプライム／セレクトウエスタンブロッティング検出試薬（ｐｒｉｍｅ／ｓｅｌｅｃｔ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｓｙｄｎｅｙ、ＮＳＷ、オーストラリア）を使用して、膜での化学発光を現像した。ＣｈｅｍｉＤｏｃＴＭ多重化イメージングシステム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して、バンド強度を決定した。使用する抗体は、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ、米国）から得た：ｐ－Ｒｂ（Ｓ７８０）＃９３０７、ｐ－Ｒｂ（Ｓ７９５）＃９３０１、ｐ－Ｒｂ（Ｓ８０７／８１１）＃８５１６、Ｒｂ ＃９３０９、サイクリンＤ１ ＃２９７８、サイクリンＥ ＃４１３２、ＣＤＫ４ ＃１２７９０、ＣＤＫ６ ＃１３３３１、β－アクチン ＃４９７０、ＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧ ＃７０７６及びＨＲＰ結合抗ウサギＩｇＧ ＃７０７４。図３Ａは、化合物１（及びパルボシクリブ、陽性対照）がリン酸化Ｒｂタンパク質（ｐＲｂ Ｓｅｒ７８０、ｐＲｂＳｅｒ７９５、ｐＲｂ８０７／８１１）のレベルを低下させたことを示しており、その細胞ＣＤＫ４／６阻害が確認される。
細胞を３×１０５の密度で、新鮮な培地１０ｍＬと共に滅菌培養皿に播種し、化合物処理の前に３７℃、５％ＣＯ２で、終夜インキュベートした。２４時間後に、細胞をＰＢＳで収集し、３００×ｇで５分間にわたって遠心し、溶解緩衝液１００μＬ（２５ｍＭ４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸、３００ｍＭ塩化ナトリウム、１．５ｍＭ塩化マグネシウム、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、２０ｍＭ β－グリセロリン酸、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５ｍＭジチオスレイトール、１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム及び２５×プロテアーゼ阻害薬カクテル）で溶解させた。タンパク質溶解産物を４℃での１０分間の最大速度遠心分離の後に収集した。製造者プロトコルに従ってＢｉｏ－Ｒａｄ ＤＣタンパク質アッセイキットＩＩ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｓｙｄｎｅｙ、ＮＳＷ、オーストラリア）を用いてＢＳＡ標準曲線を実行することにより、細胞溶解産物のタンパク質濃度を決定した。タンパク質３０μｇを測定し、３×ローディング緩衝液と混合し、かつ９５℃で５分間にわたって、Ｔ１００サーマルサイクラー（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を用いて変性させた。次いで、各試料の分子質量をゲル電気泳動により、４～２０％ポリアクリルアミドゲル上で、１２０Ｖで１時間にわたって分離した。溶解したタンパク質をニトロセルロース膜に移し、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水中５％脱脂乳及びＴｗｅｅｎ ２０（ＴＢＳＴ）で１時間にわたって室温でブロックした。抗体をＴＢＳＴ中５％脱脂乳中で希釈した。膜を一次抗体と共に－２０℃で終夜インキュベートし、ＴＢＳＴで４回洗浄し、二次抗体で１時間にわたって室温で処理し、再びＴＢＳＴで４回洗浄した。次いで、Ａｍｅｒｓｈａｍ ＥＣＬプライム／セレクトウエスタンブロッティング検出試薬（ｐｒｉｍｅ／ｓｅｌｅｃｔ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｓｙｄｎｅｙ、ＮＳＷ、オーストラリア）を使用して、膜での化学発光を現像した。ＣｈｅｍｉＤｏｃＴＭ多重化イメージングシステム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して、バンド強度を決定した。使用する抗体は、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ、米国）から得た：ｐ－Ｒｂ（Ｓ７８０）＃９３０７、ｐ－Ｒｂ（Ｓ７９５）＃９３０１、ｐ－Ｒｂ（Ｓ８０７／８１１）＃８５１６、Ｒｂ ＃９３０９、サイクリンＤ１ ＃２９７８、サイクリンＥ ＃４１３２、ＣＤＫ４ ＃１２７９０、ＣＤＫ６ ＃１３３３１、β－アクチン ＃４９７０、ＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧ ＃７０７６及びＨＲＰ結合抗ウサギＩｇＧ ＃７０７４。図３Ａは、化合物１（及びパルボシクリブ、陽性対照）がリン酸化Ｒｂタンパク質（ｐＲｂ Ｓｅｒ７８０、ｐＲｂＳｅｒ７９５、ｐＲｂ８０７／８１１）のレベルを低下させたことを示しており、その細胞ＣＤＫ４／６阻害が確認される。
【0082】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ腫瘍原性アッセイ
２００～４００細胞／ウェルの密度を１２ウェルプレートに播種し、化合物処理の前に終夜インキュベートした。各ウェルを、化合物１（または陽性対照パルボシクリブ）を含有する新鮮な培地と２～３日ごとに交換した。１０日後に、細胞をＰＢＳで洗浄し、固定し、クリスタルバイオレット染色液（０．０５％クリスタルバイオレット、１％ホルムアルデヒド、１％ＰＢＳ、１％エタノール）で染色した；結果は図３Ｂに示されている。化合物１は、３種のＧＢＭ細胞系すべての成長及び増殖を阻害している。
２００～４００細胞／ウェルの密度を１２ウェルプレートに播種し、化合物処理の前に終夜インキュベートした。各ウェルを、化合物１（または陽性対照パルボシクリブ）を含有する新鮮な培地と２～３日ごとに交換した。１０日後に、細胞をＰＢＳで洗浄し、固定し、クリスタルバイオレット染色液（０．０５％クリスタルバイオレット、１％ホルムアルデヒド、１％ＰＢＳ、１％エタノール）で染色した；結果は図３Ｂに示されている。化合物１は、３種のＧＢＭ細胞系すべての成長及び増殖を阻害している。
【0083】
脳取り込みアッセイ
記載されたとおりの方法（Ｔ Ｊ Ｒａｕｂ ｅｔ ａｌ．、前出）を使用して、脳により取り込まれる実施例１からの化合物の性向（それにより、ＢＢＢを通過することができることが示される）を調査した。簡単に述べると、Ｂａｌｂ／Ｃマウスに、化合物１または化合物２を静脈内投与した。投与後５分及び１時間目に、心臓血液を収集し、大脳半球を切除した。経口投与実験では、マウスに薬物を与え、血液及び大脳半球を投与後０．５、１、２、４、６、及び２４時間目に収集した。ホモジナイズされた脳及び血漿中の薬物の濃度をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより測定した；脳ホモジネートにおける濃度を脳濃度に変換し（脳組織１ｇあたりで表される）、１６μＬ／脳組織ｇの平均測定血漿体積について補正した。Ｃｅｎｔｒｉｆｒｅｅ（登録商標）ＵｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎＤｅｖｉｃｅを用いて、血漿及び脳における非結合画分を決定した。各薬物でのＫｐ，ｕの値を、神経治療薬のためのセットガイドラインと比較した（Ｋｕｌｋａｒｎｉ ＡＤ ｅｔ ａｌ． Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ １３：８５－９２， ２０１６）。等用量のパルボシクリブ及び／またはアベマシクリブを用いて、対照実験を行った。図４に示されている結果は、Ｋｐ，ｕ：非結合薬物濃度の脳対血漿比として表されており、これは通常、次の帯域に分類される：Ｋｐ，ｕ０．１未満、ＢＢＢを通過し得ない；Ｋｐ，ｕ０．３～０．５、ＢＢＢに十分にアクセスする；Ｋｐ，ｕ１．０超、ＢＢＢを自由に通過する（Ｋｕｌｋａｒｎｉ ｅｔ ａｌ．、前出）。化合物１、２及び６は、対照抗がん作用物質よりも、ＢＢＢを通過する有意に高い性向を実証した。
記載されたとおりの方法（Ｔ Ｊ Ｒａｕｂ ｅｔ ａｌ．、前出）を使用して、脳により取り込まれる実施例１からの化合物の性向（それにより、ＢＢＢを通過することができることが示される）を調査した。簡単に述べると、Ｂａｌｂ／Ｃマウスに、化合物１または化合物２を静脈内投与した。投与後５分及び１時間目に、心臓血液を収集し、大脳半球を切除した。経口投与実験では、マウスに薬物を与え、血液及び大脳半球を投与後０．５、１、２、４、６、及び２４時間目に収集した。ホモジナイズされた脳及び血漿中の薬物の濃度をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより測定した；脳ホモジネートにおける濃度を脳濃度に変換し（脳組織１ｇあたりで表される）、１６μＬ／脳組織ｇの平均測定血漿体積について補正した。Ｃｅｎｔｒｉｆｒｅｅ（登録商標）ＵｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎＤｅｖｉｃｅを用いて、血漿及び脳における非結合画分を決定した。各薬物でのＫｐ，ｕの値を、神経治療薬のためのセットガイドラインと比較した（Ｋｕｌｋａｒｎｉ ＡＤ ｅｔ ａｌ． Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ １３：８５－９２， ２０１６）。等用量のパルボシクリブ及び／またはアベマシクリブを用いて、対照実験を行った。図４に示されている結果は、Ｋｐ，ｕ：非結合薬物濃度の脳対血漿比として表されており、これは通常、次の帯域に分類される：Ｋｐ，ｕ０．１未満、ＢＢＢを通過し得ない；Ｋｐ，ｕ０．３～０．５、ＢＢＢに十分にアクセスする；Ｋｐ，ｕ１．０超、ＢＢＢを自由に通過する（Ｋｕｌｋａｒｎｉ ｅｔ ａｌ．、前出）。化合物１、２及び６は、対照抗がん作用物質よりも、ＢＢＢを通過する有意に高い性向を実証した。
【0084】
ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性
化合物１及び化合物２を皮下異種移植片モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性についても調査した。簡単に述べると、Ｕ８７ ＧＢＭ細胞を収集し、血清非含有培地及びマトリゲルの１：１混合物に再懸濁し、５×１０６細胞を５～６週齢の雌のＣＤ１ ｎｕ／ｎｕマウスのひ腹に皮下注射した。平均腫瘍体積が１５０～２００ｍｍ３に達したら、動物を処置群に無作為化し（１群あたりｎ＝１０）、ビヒクル（水中０．５％カルボキシメチルセルロース）、化合物１または化合物２で毎日、２１日間にわたって、図５Ａ及び５Ｂに示されている用量で経口で処置した。マウスを毒性及び体重減少の徴候について毎日観察し、腫瘍体積を１日おきに測定した。ビヒクル処置と比較して、化合物は両方とも、いずれの明白な毒性も伴うことなく、腫瘍成長を著しく減少させた（化合物１及び化合物２のそれぞれで２１日目にＴ／Ｃ＝３１％及び６％；両側ｔ検定により決定した場合ｐ＜０．００１）。
化合物１及び化合物２を皮下異種移植片モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性についても調査した。簡単に述べると、Ｕ８７ ＧＢＭ細胞を収集し、血清非含有培地及びマトリゲルの１：１混合物に再懸濁し、５×１０６細胞を５～６週齢の雌のＣＤ１ ｎｕ／ｎｕマウスのひ腹に皮下注射した。平均腫瘍体積が１５０～２００ｍｍ３に達したら、動物を処置群に無作為化し（１群あたりｎ＝１０）、ビヒクル（水中０．５％カルボキシメチルセルロース）、化合物１または化合物２で毎日、２１日間にわたって、図５Ａ及び５Ｂに示されている用量で経口で処置した。マウスを毒性及び体重減少の徴候について毎日観察し、腫瘍体積を１日おきに測定した。ビヒクル処置と比較して、化合物は両方とも、いずれの明白な毒性も伴うことなく、腫瘍成長を著しく減少させた（化合物１及び化合物２のそれぞれで２１日目にＴ／Ｃ＝３１％及び６％；両側ｔ検定により決定した場合ｐ＜０．００１）。
【0085】
別の研究で、Ｕ８７異種移植マウス（１群あたりｎ＝８）をそれぞれ、（１）ビヒクル、（２）化合物２（２５ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、毎日）、（３及び４）ＴＭＺ（５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、５日／週）、（５）化合物２で事前処置（２５ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、毎日×１０）、続いて、ＴＭＺ（５ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、５日／週×２）、（６）ＴＭＺで事前処置（５ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、５日／週×２）、続いて、化合物２（２５ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、毎日×１０）、及び（７）化合物２及びＴＭＺで同時処置で処置した。すべての処置群を２１日目までに完了し、７日間の休薬日を続け、その後、第２のサイクルの処置を２９日目から開始した（図５Ｂ）。化合物２は、ビヒクル処置群と比較した場合、いずれの明白な毒性も伴うことなく、単一の作用物としても、ＴＭＺと組み合わせても有意な抗腫瘍有効性を実証した（ｐ＜０．００１）。
【0086】
化合物１及び化合物２のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を、ＧＢＭ同所マウス異種移植片モデルにおいても調査した。例えば、化合物２を、各処置コホートごとにＵ８７ ＧＢＭ細胞を同所移植されたＮＳＧマウス（ｎ＝８）（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂｅｎ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ、米国）に１日１回、２１日間にわたって経口投与した。ＴＭＺを１日１回５日間にわたって経口投与し、陽性対照として使用した。非侵襲性生物発光全身イメージング技術により、疾病負荷を測定した。化合物２での処置は、ビヒクル処置マウスと比較すると、２１日目に腫瘍成長（ＴＧＩ＝８１．４％、ｐ＜０．００１）において有意な阻害をもたらした。ビヒクル対照と比較した場合、化合物２処置されたマウスでは、１５４．８％の寿命比［ＩＬＳ＝（Ｔ日－Ｃ日）／Ｃ日、ここで、Ｃ日＝対照群の生存日数及びＴ日＝処置群の生存日数］の上昇が観察された（図６Ａ）。
【0087】
別の研究で、図６Ｂに示されているとおり、ＧＢＭ患者由来Ｇ４Ｔ細胞を同所移植されたＮＳＧマウス（ｎ＝８）に、それぞれビヒクル、化合物１、ＴＭＺ、ならびに化合物１及びＴＭＺの同時処置を投与した。処置群のそれぞれの疾患負荷を生物発光全身イメージングにより測定した。化合物１は、単一の作用物質としても、またはＴＭＺとの組み合わせのいずれでも、腫瘍成長の有意な阻害を実証した（ｐ＜０．００１、図６Ｂ）。
【0088】
結論
式Ｉの化合物は、ＣＤＫ４／６を阻害することが示されたことで、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ設定の両方においてＧＢＭ細胞系に対して抗増殖性活性を有する。さらに、代表的な化合物、すなわち、化合物１（５－（２－（（５－（４－（ジメチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン）、化合物２（Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン）及び化合物６（Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン）は、血液脳関門を通過し得て、ＧＢＭ腫瘍担持動物モデルにおいて高度に有効であることが見い出され、式Ｉの化合物が、ＧＢＭなどのＣＮＳの増殖性細胞疾患及び状態を処置するための有効な治療薬を提供する優れた将来性を有することを示している。
式Ｉの化合物は、ＣＤＫ４／６を阻害することが示されたことで、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ設定の両方においてＧＢＭ細胞系に対して抗増殖性活性を有する。さらに、代表的な化合物、すなわち、化合物１（５－（２－（（５－（４－（ジメチルアミノ）ピペリジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－Ｎ，４－ジメチルチアゾール－２－アミン）、化合物２（Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン）及び化合物６（Ｎ－シクロペンチル－５－（２－（（５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－４－メチルチアゾール－２－アミン）は、血液脳関門を通過し得て、ＧＢＭ腫瘍担持動物モデルにおいて高度に有効であることが見い出され、式Ｉの化合物が、ＧＢＭなどのＣＮＳの増殖性細胞疾患及び状態を処置するための有効な治療薬を提供する優れた将来性を有することを示している。
【0089】
本明細書及び後続の特許請求の範囲を通じて、文脈が別段に要求しない限り、単語「含む」及び「包含する」ならびに「含むこと」及び「包含すること」などのその変化形は、述べられている整数または整数の群を包含することを意味するが、いずれかの他の整数または整数の群を排除するものではないことは理解されるであろう。
【0090】
本明細書における任意の従来技術への参照は、そのような従来技術が共通の一般知識の一部を形成するという示唆の任意の形態の承認ではなく、かつそのように解釈されるべきでもない。
【0091】
本開示がその使用において、記載の特定の用途に限定されないことは当業者には分かるであろう。本開示は、本明細書に記載または図示された特定の要素及び／または特徴に関して、その好ましい実施形態に限定されることもない。本開示は、開示の１つまたは複数の実施形態に限定されないが、後続の特許請求の範囲により記載及び定義される本開示の範囲から逸脱することなく、多数の再配列、変更及び置換が可能であることも分かるであろう。
【0092】
次の特許請求の範囲は、暫定的な特許請求の範囲に過ぎず、可能な特許請求の範囲の例として提供されており、本出願に基づき、いずれか将来の特許出願において請求されるものの範囲を限定することを意図したものではないことに注意されたい。後日、本開示の様々な態様をさらに定義する、または再定義するために、整数が例示の請求項に付加される、または削除されることがあり得る。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【国際調査報告】