特表 2023-524819 てんかんを治療するための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-06-13

(54)【発明の名称】てんかんを治療するための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20230606BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 51/10 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 49/00 20060101ALI20230606BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 45/06 20060101ALI20230606BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P25/08

A61K39/395 D

A61K31/7088

A61K48/00

A61K51/10 200

A61K49/00

A61P43/00 121

A61K45/06

A61K39/395 N

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022567591

(86)(22)【出願日】2021-05-05

(85)【翻訳文提出日】2022-11-16

(86)【国際出願番号】 US2021030930

(87)【国際公開番号】W WO2021242493

(87)【国際公開日】2021-12-02

(31)【優先権主張番号】63/020,245

(32)【優先日】2020-05-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】516203081

【氏名又は名称】ザ ジェイ． デヴィッド グラッドストーン インスティテューツ， ア テスタメンタリー トラスト エスタブリッシュド アンダー ザ ウィル オブ ジェイ． デヴィッド グラッドストーン

(71)【出願人】

【識別番号】516008350

【氏名又は名称】アネクソン，インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】パズ，ジャンヌ ティー．

(72)【発明者】

【氏名】サンカラナラヤナン，セテュ

(72)【発明者】

【氏名】イェドノック，テッド

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA13

4C084AA17

4C084AA19

4C084AA20

4C084NA14

4C084ZA06

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB11

4C085EE01

4C085EE03

4C085HH03

4C085HH11

4C085KA03

4C085KA04

4C085KA05

4C085KB57

4C085LL13

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA06

4C086ZC75

(57)【要約】

本開示は、一般に、てんかんを予防するか、その発症リスクを低下させるか、またはそれを治療する方法であって、古典的補体経路の阻害剤を対象に投与することを含む、方法に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

てんかんを予防するか、その発症リスクを低下させるか、またはそれを治療する方法であって、古典的補体経路の阻害剤を対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項2】

前記てんかんは、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかんである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記症候性部分てんかんは、側頭葉てんかんである、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記阻害剤は、発作の間または発作後の最初の４週間以内に投与される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

前記阻害剤は、発作の間または発作後の最初の１週間以内に投与される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記阻害剤は、発作の間または発作後２４時間以内に投与される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記阻害剤は、発作の間または発作後１、２、３、４、５、もしくは６時間以内に投与される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記阻害剤は、前記発作によって誘発されるシナプス損失を阻害する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記阻害剤は、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、脳卒中、または遺伝的症候群に罹患している患者に投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記脳感染症は、脳炎、髄膜炎、内側側頭葉硬化、または脳腫瘍である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記てんかんは、前記外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、脳卒中、または遺伝的症候群によって誘発される、請求項９に記載の方法。

【請求項12】

前記てんかんは、ＴＢＩ誘発てんかんである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記阻害剤は、前記外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、脳卒中、または遺伝的症候群によって誘発されるシナプス損失を阻害する、請求項９～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記阻害剤は、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、または脳卒中の間またはその後の最初の４週間以内に投与される、請求項９～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記阻害剤は、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、または脳卒中の間またはその後の最初の１週間以内に投与される、請求項９～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項16】

前記阻害剤は、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、または脳卒中の間またはその後２４時間以内に投与される、請求項９～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記阻害剤は、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、または脳卒中の間またはその後１、２、３、４、５、もしくは６時間以内に投与される、請求項９～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記古典的補体経路の前記阻害剤は、Ｃ１ｑ阻害剤である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記Ｃ１ｑ阻害剤は、抗体、アプタマー、アンチセンス核酸または遺伝子編集剤である、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記阻害剤は、抗Ｃ１ｑ抗体である、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑと自己抗体との間またはＣ１ｑとＣ１ｒとの間、またはＣ１ｑとＣ１ｓとの間の相互作用を阻害する、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記抗Ｃ１ｑ抗体は、循環または組織からのＣ１ｑのクリアランスを促進する、請求項２０に記載の方法。

【請求項23】

前記抗体は、１００ｎＭ～０．００５ｎＭまたは０．００５ｎＭ未満の範囲の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する抗Ｃ１ｑ抗体である、請求項２０～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記抗体は、２０：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｑに結合する抗Ｃ１ｑ抗体である、請求項２０～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

前記抗体は、６：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｑに結合する抗Ｃ１ｑ抗体である、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記抗体は、２．５：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｑに結合する抗Ｃ１ｑ抗体である、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記抗体は、Ｃ１ｑに特異的に結合し、かつその生物学的活性を中和する、請求項２０～２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記生物学的活性は、（１）自己抗体に対するＣ１ｑ結合、（２）Ｃ１ｒに対するＣ１ｑ結合、（３）Ｃ１ｓに対するＣ１ｑ結合、（４）ＩｇＭに対するＣ１ｑ結合、（５）ＩｇＧに対するＣ１ｑ結合、（６）ホスファチジルセリンに対するＣ１ｑ結合、（７）ペントラキシン－３に対するＣ１ｑ結合、（８）Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）に対するＣ１ｑ結合、（９）球状Ｃ１ｑ受容体（ｇＣ１ｑＲ）に対するＣ１ｑ結合、（１０）補体受容体１（ＣＲ１）に対するＣ１ｑ結合、（１１）ベータ－アミロイドに対するＣ１ｑ結合、（１２）カルレチキュリンに対するＣ１ｑ結合、（１３）アポトーシス細胞に対するＣ１ｑ結合、または（１４）Ｂ細胞に対するＣ１ｑ結合である、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記生物学的活性が、（１）古典的補体活性化経路の活性化、（２）抗体及び補体依存性細胞傷害の活性化、（３）ＣＨ５０溶血、（４）シナプス損失、（５）Ｂ細胞抗体産生、（６）樹状細胞成熟、（７）Ｔ細胞増殖、（８）サイトカイン産生、（９）ミクログリア活性化、（１０）免疫複合体形成、（１１）シナプスもしくは神経終末の食作用、（１２）補体受容体３（ＣＲ３／Ｃ３）発現細胞の活性化、または（１３）神経炎症である、請求項２７または２８に記載の方法。

【請求項30】

前記ＣＨ５０溶血は、ヒト、マウス、ラット、イヌ、アカゲザル、及び／またはカニクイザルＣＨ５０溶血を含む、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記抗体は、ＣＨ５０溶血の少なくとも約５０％～少なくとも約９０％を中和することが可能である、請求項２９または３０に記載の方法。

【請求項32】

前記抗体は、１５０ｎｇ／ｍｌ未満、１００ｎｇ／ｍｌ未満、５０ｎｇ／ｍｌ未満、または２０ｎｇ／ｍｌ未満の用量でＣＨ５０溶血の少なくとも５０％を中和することが可能である、請求項２９～３１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項33】

前記抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、抗体断片、またはその抗体誘導体である、請求項２０～３２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項34】

前記抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子である、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記抗体は、標識基に連結される、請求項２０～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記標識基が、光学標識、放射性同位体、放射性核種、酵素基、ビオチニル基、核酸、オリゴヌクレオチド、酵素、または蛍光標識である、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号７のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項２０～３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項２０～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

前記抗体は、配列番号４及び３５～３８から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、前記軽鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号７のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項２０～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

前記軽鎖可変ドメインは、配列番号４及び３５～３８から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記抗体は、配列番号８及び３１～３４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、前記重鎖可変ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ３を含む、請求項２０～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記重鎖可変ドメインは、配列番号８及び３１～３４から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記抗体断片は、配列番号３９の重鎖Ｆａｂ断片及び配列番号４０の軽鎖Ｆａｂ断片を含む、請求項３３～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記古典的補体経路の前記阻害剤は、Ｃ１ｒ阻害剤である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

前記Ｃ１ｒ阻害剤は、抗体、アプタマー、アンチセンス核酸または遺伝子編集剤である、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記阻害剤は、抗Ｃ１ｒ抗体である、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記抗Ｃ１ｒ抗体は、Ｃ１ｒとＣ１ｑとの間もしくはＣ１ｒとＣ１ｓとの間の相互作用を阻害するか、または前記抗Ｃ１ｒ抗体は、Ｃ１ｒの触媒活性を阻害するか、もしくはｐｒｏ－Ｃ１ｒの活性プロテアーゼへの処理を阻害する、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記抗体は、１００ｎＭ～０．００５ｎＭまたは０．００５ｎＭ未満の範囲の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する抗Ｃ１ｒ抗体である、請求項４６または４７に記載の方法。

【請求項49】

前記抗体は、２０：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｒに結合する抗Ｃ１ｒ抗体である、請求項４６～４８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記抗体は、６：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｒに結合する抗Ｃ１ｒ抗体である、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記抗体は、２．５：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｒに結合する抗Ｃ１ｒ抗体である、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記抗Ｃ１ｒ抗体は、循環または組織からのＣ１ｒのクリアランスを促進する、請求項４６～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

前記古典的補体経路の前記阻害剤は、Ｃ１ｓ阻害剤である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

前記Ｃ１ｓ阻害剤は、抗体、アプタマー、アンチセンス核酸または遺伝子編集剤である、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記抗体は、抗Ｃ１ｓ抗体である、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

前記抗Ｃ１ｓ抗体は、Ｃ１ｓとＣ１ｑとの間またはＣ１ｓとＣ１ｒとの間またはＣ１ｓとＣ２もしくはＣ４との間の相互作用を阻害するか、あるいは前記抗Ｃ１ｓ抗体は、Ｃ１ｓの触媒活性を阻害するか、またはｐｒｏ－Ｃ１ｓの活性プロテアーゼへの処理を阻害するか、またはＣ１ｓの活性化形態に結合する、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

前記抗体は、１００ｎＭ～０．００５ｎＭまたは０．００５ｎＭ未満の範囲の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する抗Ｃ１ｓ抗体である、請求項５５または５６に記載の方法。

【請求項58】

前記抗体は、２０：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｓに結合する抗Ｃ１ｓ抗体である、請求項５５～５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

前記抗体は、６：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｓに結合する抗Ｃ１ｓ抗体である、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記抗体は、２．５：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｓに結合する抗Ｃ１ｓ抗体である、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記抗Ｃ１ｓ抗体は、循環または組織からのＣ１ｓのクリアランスを促進する、請求項５５～６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記古典的補体経路の前記阻害剤は、抗Ｃ１複合体抗体であり、任意選択的に、前記抗Ｃ１複合体抗体は、Ｃ１ｒもしくはＣ１ｓ活性化を阻害するか、またはＣ２もしくはＣ４に作用するそれらの能力を妨げる、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記抗Ｃ１複合体抗体は、前記Ｃ１複合体内の組み合わせエピトープに結合し、前記組み合わせエピトープは、Ｃ１ｑ及びＣ１ｓの両方、Ｃ１ｑ及びＣ１ｒの両方、Ｃ１ｒ及びＣ１ｓの両方、またはＣ１ｑ、Ｃ１ｒ及びＣ１ｓのそれぞれのアミノ酸を含む、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記抗体は、モノクローナル抗体である、請求項１９～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記抗体は、Ｃ４の切断を阻害し、かつＣ２の切断を阻害しない、請求項１９～６４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記抗体は、Ｃ２の切断を阻害し、かつＣ４の切断を阻害しない、請求項１９～６４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記抗体は、哺乳動物Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓに結合する、請求項１９～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

前記抗体は、ヒトＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓに結合する、請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

前記抗体は、哺乳動物Ｃ１複合体に結合する、請求項１９～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項70】

前記抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項１９～６９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項71】

前記抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びＦ（ａｂ’）_２断片から選択される抗体断片である、請求項１９～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項72】

前記抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である、請求項１９～７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

前記第１の抗原は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、及びＣ１ｓから選択され、前記第２の抗原は、血液脳関門を横断する輸送を容易にする抗原である、請求項７２に記載の方法。

【請求項74】

前記第２の抗原は、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプチド、またはＡＮＧ１００５である、請求項７２または７３に記載の方法。

【請求項75】

前記抗体は、少なくとも３０％～少なくとも９９．９％の範囲の量で、前記古典的補体活性化経路を阻害する、請求項１９～７４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項76】

前記抗体は、Ｃ１ｑ結合によって開始される代替補体活性化経路を阻害する、請求項１９～７４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項77】

前記抗体は、少なくとも３０％～少なくとも９９．９％の範囲の量で、前記代替補体活性化経路を阻害する、請求項１９～７４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項78】

前記抗体は、補体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＣＤＣＣ）を阻害する、請求項１９～７７に記載の方法。

【請求項79】

前記抗体は、少なくとも３０％～少なくとも９９．９％の範囲の量で、補体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＣＤＣＣ）活性化経路を阻害する、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

前記抗体は、自己抗体及び補体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＣＤＣＣ）を阻害する、請求項７８または７９に記載の方法。

【請求項81】

抗Ｃ１ｑ抗体、抗Ｃ１ｒ抗体、及び抗Ｃ１ｓ抗体から選択される第２の抗体を投与することを更に含む、請求項２０～８０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項82】

前記対象に、治療的有効量の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の阻害剤を投与することを更に含む、請求項１～８１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項83】

前記対象に、治療的有効量の前記古典的補体活性化経路の阻害剤を投与することを更に含む、請求項１～８２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項84】

前記対象に、治療的有効量の前記代替補体活性化経路の阻害剤を投与することを更に含む、請求項１～８３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項85】

前記対象に、治療的有効量の前記自己抗体とその対応する自己抗原との間の相互作用の阻害剤を投与することを更に含む、請求項１～８４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項86】

外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、脳卒中、または遺伝的症候群による対象のてんかん発症リスクを決定する方法であって、
（ａ）抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓ抗体を前記対象に投与することであって、前記抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓ抗体は、検出可能な標識に連結される、前記投与することと、
（ｂ）前記検出可能な標識を検出して、前記対象におけるＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓの量または位置を測定することと、
（ｃ）前記Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓのうちの１つ以上の量または位置を参照と比較することであって、前記てんかん発症リスクは、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓのうちの１つ以上の量または位置を前記参照と比較することに基づいて特徴付けられる、前記比較することと、を含む、前記方法。

【請求項87】

前記脳感染症は、脳炎、髄膜炎、内側側頭葉硬化、または脳腫瘍である、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

前記検出可能な標識は、核酸、オリゴヌクレオチド、酵素、放射性同位体、ビオチン、または蛍光標識を含む、請求項８６に記載の方法。

【請求項89】

前記抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びＦ（ａｂ’）_２断片から選択される抗体断片である、請求項８６に記載の方法。

【請求項90】

前記抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号７のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項８６～８９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項91】

前記抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項８６～９０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項92】

前記抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号４及び３５～３８から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、前記軽鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号７のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項８６～９１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項93】

前記軽鎖可変ドメインは、配列番号４及び３５～３８から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項９２に記載の方法。

【請求項94】

前記抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号８及び３１～３４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、前記重鎖可変ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ３を含む、請求項８６～９３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項95】

前記重鎖可変ドメインは、配列番号８及び３１～３４から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

前記てんかんは、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかんである、請求項８６～９５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項97】

前記症候性部分てんかんは、側頭葉てんかんである、請求項９６に記載の方法。

【請求項98】

前記症候性全般てんかんまたは前記症候性部分てんかんは、外傷性脳損傷によって誘発される、請求項９６に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
本発明は、ＡＲＭＹ／ＭＲＭＣによって授与されたＷ８１ＸＷＨ－１６－１－０５７６の下で政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。

【0002】

関連出願
この特許出願は、２０２０年５月５日に出願された米国仮特許出願番号６３／０２０，２４５の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

シーケンスリスト
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、かつその全体が参照により本明細書に組み込まれるシーケンスリストを含む。当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年５月３日に作成され、ＡＮＨ－０１０２５＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、４１，７７０バイトのサイズである。

【背景技術】

【0004】

てんかんは、一般的な神経学的障害であり、神経細胞の損傷または喪失を伴う最も一般的な神経学的障害のうちの１つとして同定されている。世界保健機関の推計によると、世界中で約５，０００万人がてんかんに罹患しており、罹患者の８０％近くが途上国に居住している。１０人に１人が正常寿命中に少なくとも１回てんかん発作を起こし、そのうちの３分の１はてんかんを発症する。全ての年齢層がてんかん発作を起こす可能性があるが、この障害は若年者及び高齢者の間で最も一般的である。てんかんは、米国で最も一般的な重篤な神経障害のうちの１つであり、しばしば長期的な管理が必要である。米国では毎年１５万人がてんかんを有すると新たに診断されている。

【0005】

最近の抗てんかん薬（エゾガビン、プレガバリン、レベチラセタム、ラモトリギン、トピラメート、バルプロ酸塩、ルフィナミド、ガバペンチン、カルバマゼピン、クロナゼパム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、及びフェニトイン）が入手可能であるにもかかわらず、利用可能な治療オプションは、疾患を予防または治療するのに十分な有効性がなく、発作は完全に根絶することが困難であり、約３分の１の患者は依然として制御されていない発作を有し、更に高い割合が少なくとも１つの抗けいれん関連の副作用（例えば、気分の変化、眠気、または歩行の不安定性）に罹患している。更に、発作はてんかんの最も劇的な特徴であるが、多くのてんかん患者は神経または精神疾患（記憶または認知障害、うつ病等）を発症する。例えば、内側側頭葉てんかんは、通常、おそらく海馬系の損傷及び／または脳の炎症に起因する記憶欠損を伴う。

【0006】

てんかんの治療は過去１０年間で進化してきたが、利用可能な治療オプションは、発作が進行したときのそれらの予防に焦点を当てており、現在の薬は、疾患の経過を治すことも改善することさえできない場合がある。現在市販されている抗てんかん薬は、抗てんかん原性薬ではないようである。これは、現在の薬剤が、疾患の進行を防止するために機械的に不適切な方法で作用するという事実に起因する可能性がある。よって、てんかんを予防及び治療するための新たな療法が当技術分野において必要とされている。

【発明の概要】

【0007】

本開示は、一般に、補体の活性化を阻害することによって、例えば、古典的補体経路を阻害することによって、てんかんを予防するか、その発症リスクを低下させるか、またはそれを治療する方法を対象とする。

【0008】

本開示は、一般に、古典的補体活性化を阻害することによって、例えば、補体因子Ｃｌｑ、Ｃｌｒ、もしくはＣｌｓを阻害することによって、例えば、これらの補体因子のうちの１つ以上に結合するモノクローナル抗体、キメラ、ヒト化抗体、抗体断片、抗体誘導体等の抗体を投与することを通じて、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、もしくは症候性部分てんかん等のてんかんを予防するか、そのリスクを低下させるか、またはそれを治療する方法を対象とする。

【0009】

いくつかの実施形態では、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ等の補体因子の活性は、古典的補体経路の活性化を阻止し、かつ特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、もしくは症候性部分てんかん等のてんかんを遅らせるか、または予防するように阻害される。古典的補体経路の阻害は、レクチン補体経路及び代替補体経路をインタクトなままとして、それらの正常な免疫機能を発揮する。特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんにおいてＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ等の補体因子を中和することに関連する方法が、本明細書に開示される。

【0010】

一態様では、本開示は、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん（例えば、側頭葉てんかん）等のてんかんを予防するか、その発症リスクを低下させるか、またはそれを治療する方法であって、古典的補体経路の阻害剤を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0011】

本明細書に記載の本発明の任意の態様に適用され得る多数の実施形態が更に提供される。例えば、いくつかの実施形態では、阻害剤は、発作の間もしくは発作後の最初の４週間以内、発作の間もしくは発作後の最初の１週間以内、発作の間もしくは発作後２４時間以内、または発作の間もしくは発作後１、２、３、４、５、もしくは６時間以内に投与される。いくつかの実施形態では、阻害剤は、発作によって誘発されるシナプス損失を阻害する。いくつかの実施形態では、阻害剤は、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、脳卒中、または遺伝的症候群に罹患している患者に投与される。脳感染症は、脳炎、髄膜炎、内側側頭葉硬化、または脳腫瘍であり得る。てんかんは、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、脳卒中、または遺伝的症候群によって誘発され得る。てんかんは、ＴＢＩ誘発てんかんであり得る。いくつかの実施形態では、阻害剤は、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、脳卒中、または遺伝的症候群によって誘発されるシナプス損失を阻害する。いくつかの実施形態では、阻害剤は、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、もしくは脳卒中の間またはその後の最初の４週間以内、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、もしくは脳卒中の間またはその後の最初の１週間以内、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、もしくは脳卒中の間またはその後２４時間以内、あるいは外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳損傷、脳感染症、もしくは脳卒中の間またはその後１、２、３、４、５、もしくは６時間以内に投与される。

【0012】

いくつかの実施形態では、古典的補体経路の阻害剤は、Ｃ１ｑ阻害剤である。例えば、Ｃ１ｑ阻害剤は、抗体、アプタマー、アンチセンス核酸または遺伝子編集剤であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、抗Ｃ１ｑ抗体である。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑと自己抗体との間、またはＣ１ｑとＣ１ｒとの間、またはＣ１ｑとＣ１ｓとの間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、循環または組織からのＣ１ｑのクリアランスを促進する。いくつかの実施形態では、抗体は、１００ｎＭ～０．００５ｎＭまたは０．００５ｎＭ未満の範囲の解離定数（ＫＤ）を有する抗Ｃ１ｑ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、２０：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｑに結合するか、６：１～１．０：１もしくは１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｑに結合するか、または２．５：１～１．０：１もしくは１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｑに結合する抗Ｃ１ｑ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｃ１ｑに特異的に結合し、かつその生物学的活性を中和し、生物学的活性は、（１）自己抗体に対するＣ１ｑ結合、（２）Ｃ１ｒに対するＣ１ｑ結合、（３）Ｃ１ｓに対するＣ１ｑ結合、（４）ＩｇＭに対するＣ１ｑ結合、（５）ＩｇＧに対するＣ１ｑ結合、（６）ホスファチジルセリンに対するＣ１ｑ結合、（７）ペントラキシン－３に対するＣ１ｑ結合、（８）Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）に対するＣ１ｑ結合、（９）球状Ｃ１ｑ受容体（ｇＣ１ｑＲ）に対するＣ１ｑ結合、（１０）補体受容体１（ＣＲ１）に対するＣ１ｑ結合、（１１）ベータ－アミロイドに対するＣ１ｑ結合、（１２）カルレチキュリンに対するＣ１ｑ結合、（１３）アポトーシス細胞に対するＣ１ｑ結合、または（１４）Ｂ細胞に対するＣ１ｑ結合等である。生物学的活性の別の例は、（１）古典的補体活性化経路の活性化、（２）抗体及び補体依存性細胞傷害の活性化、（３）ＣＨ５０溶血、（４）シナプス損失、（５）Ｂ細胞抗体産生、（６）樹状細胞成熟、（７）Ｔ細胞増殖、（８）サイトカイン産生、（９）ミクログリア活性化、（１０）免疫複合体形成、（１１）シナプスもしくは神経終末の食作用、（１２）補体受容体３（ＣＲ３／Ｃ３）発現細胞の活性化、または（１３）神経炎症である。いくつかの実施形態では、ＣＨ５０溶血は、ヒト、マウス、ラット、イヌ、アカゲザル、及び／またはカニクイザルＣＨ５０溶血を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、１５０ｎｇ／ｍｌ未満、１００ｎｇ／ｍｌ未満、５０ｎｇ／ｍｌ未満、もしくは２０ｎｇ／ｍｌ未満の用量でＣＨ５０溶血の少なくとも約５０％～少なくとも約９０％を中和するか、またはＣＨ５０溶血の少なくとも５０％を中和することが可能である。

【0013】

本抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、抗体断片、またはその抗体誘導体、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子であり得る。抗体は、光学標識、放射性同位体、放射性核種、酵素基、ビオチニル基、核酸、オリゴヌクレオチド、酵素、または蛍光標識等の標識基に連結され得る。

【0014】

ある特定の好ましい実施形態では、抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号７のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。同様に、ある特定の好ましい実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４及び３５～３８から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号７のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号４及び３５～３８から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８及び３１～３４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号８及び３１～３４から選択されるアミノ酸配列を含む。他の好ましい実施形態では、抗体断片は、配列番号３９の重鎖Ｆａｂ断片及び配列番号４０の軽鎖Ｆａｂ断片を含む。

【0015】

他の実施形態では、古典的補体経路の阻害剤は、Ｃ１ｒ阻害剤である。いくつかの実施形態では、Ｃ１ｒ阻害剤は、抗体、アプタマー、アンチセンス核酸または遺伝子編集剤である。いくつかの実施形態では、抗体は、抗Ｃ１ｒ抗体である。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｒ抗体は、Ｃ１ｒとＣ１ｑとの間もしくはＣ１ｒとＣ１ｓとの間の相互作用を阻害するか、または抗Ｃ１ｒ抗体は、Ｃ１ｒの触媒活性を阻害するか、もしくはｐｒｏ－Ｃ１ｒの活性プロテアーゼへの処理を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、１００ｎＭ～０．００５ｎＭまたは０．００５ｎＭ未満の範囲の解離定数（ＫＤ）を有する抗Ｃ１ｒ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、２０：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲、６：１～１．０：１もしくは１．０：１未満の範囲、または２．５：１～１．０：１もしくは１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｒに結合する抗Ｃ１ｒ抗体である。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｒ抗体は、循環または組織からのＣ１ｒのクリアランスを促進する。

【0016】

他の実施形態では、古典的補体経路の阻害剤は、Ｃ１ｓ阻害剤である。Ｃ１ｓ阻害剤は、抗体、アプタマー、アンチセンス核酸または遺伝子編集剤であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、抗Ｃ１ｓ抗体である。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、Ｃ１ｓとＣ１ｑとの間またはＣ１ｓとＣ１ｒとの間またはＣ１ｓとＣ２もしくはＣ４との間の相互作用を阻害するか、あるいは抗Ｃ１ｓ抗体は、Ｃ１ｓの触媒活性を阻害するか、またはｐｒｏ－Ｃ１ｓの活性プロテアーゼへの処理を阻害するか、またはＣ１ｓの活性化形態に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、１００ｎＭ～０．００５ｎＭまたは０．００５ｎＭ未満の範囲の解離定数（ＫＤ）を有する抗Ｃ１ｓ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、２０：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲、６：１～１．０：１もしくは１．０：１未満の範囲、または２．５：１～１．０：１もしくは１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｓに結合する抗Ｃ１ｓ抗体である。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、循環または組織からのＣ１ｓのクリアランスを促進する。

【0017】

他の実施形態では、古典的補体経路の阻害剤は、抗Ｃ１複合体抗体であり、任意選択的に、抗Ｃ１複合体抗体は、Ｃ１ｒもしくはＣ１ｓ活性化を阻害するか、またはＣ２もしくはＣ４に作用するそれらの能力を妨げ、例えば、抗Ｃ１複合体抗体は、Ｃ１複合体内の組み合わせエピトープに結合し、当該組み合わせエピトープは、Ｃ１ｑ及びＣ１ｓの両方、Ｃ１ｑ及びＣ１ｒの両方、Ｃ１ｒ及びＣ１ｓの両方、またはＣ１ｑ、Ｃ１ｒ及びＣ１ｓのそれぞれのアミノ酸を含む。抗体は、モノクローナル抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｃ４の切断を阻害し、かつＣ２の切断を阻害しないか、またはＣ２の切断を阻害し、かつＣ４の切断を阻害しない。

【0018】

いくつかの実施形態では、抗体は、哺乳動物Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓに結合するか、またはヒトＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、哺乳動物Ｃ１複合体に結合する。

【0019】

いくつかの実施形態では、抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びＦ（ａｂ’）２断片から選択される抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。例えば、第１の抗原は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、及びＣ１ｓから選択され得、第２の抗原は、血液脳関門を横断する輸送を容易にする抗原であり得る。第２の抗原は、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプチド、またはＡＮＧ１００５であり得る。

【0020】

いくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも３０％～少なくとも９９．９％の範囲の量で、古典的補体活性化経路阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｃ１ｑ結合によって開始される代替補体活性化経路を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも３０％～少なくとも９９．９％の範囲の量で、代替補体活性化経路阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、補体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＣＤＣＣ）を阻害し、例えば、抗体は、少なくとも３０％～少なくとも９９．９％の範囲の量で、補体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＣＤＣＣ）活性化経路を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、自己抗体及び補体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＣＤＣＣ）を阻害する。

【0021】

いくつかの実施形態では、方法は、抗Ｃ１ｑ抗体、抗Ｃ１ｒ抗体、及び抗Ｃ１ｓ抗体から選択される第２の抗体を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象に、治療的有効量の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の阻害剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象に、治療的有効量の古典的補体活性化経路の阻害剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象に、治療的有効量の代替補体活性化経路の阻害剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象に、治療的有効量の自己抗体とその対応する自己抗原との間の相互作用の阻害剤を投与することを更に含む。

【0022】

別の態様では、外傷性脳損傷、低酸素脳損傷、脳感染症、脳卒中、または遺伝的症候群による対象のてんかん発症リスクを決定する方法であって、（ａ）抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓ抗体を対象に投与することであって、抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓ抗体は、検出可能な標識に連結される、投与することと、（ｂ）検出可能な標識を検出して、対象におけるＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓの量または位置を測定することと、（ｃ）Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓのうちの１つ以上の量または位置を参照と比較することであって、てんかん発症リスクは、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓのうちの１つ以上の量または位置を参照と比較することに基づいて特徴付けられる、比較することと、を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、脳感染症は、脳炎、髄膜炎、内側側頭葉硬化、または脳腫瘍である。検出可能な標識は、核酸、オリゴヌクレオチド、酵素、放射性同位体、ビオチンまたは蛍光標識を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びＦ（ａｂ’）２断片から選択される抗体断片である。

【0023】

ある特定の好ましい実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号７のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号４及び３５～３８から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号７のアミノ酸を有するＨＶＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号４及び３５～３８から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号８及び３１～３４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＶＲ－Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号８及び３１～３４から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0024】

いくつかの実施形態では、てんかんは、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん（例えば、側頭葉てんかん）である。いくつかの実施形態では、症候性全般てんかんまたは症候性部分てんかんは、外傷性脳損傷によって誘発される。

【図面の簡単な説明】

【0025】

【図1A】ｍＴＢＩの３週間後に、損傷した皮質及び機能的に接続された視床が慢性炎症及びニューロン損失を示すことを示す。図１Ａ～１Ｂは、制御された皮質衝撃の部位及び深さ（図１Ａ）、ならびにＳ１皮質及びｎＲＴ及びＶＢ視床領域の位置（図１Ｂ）を示すマウス冠状脳切片の概略図を示す。インパクターの直径は３ｍｍであり、インパクトは０．８ｍｍの深さで右体性感覚皮質に送達された。図１Ｃは、Ｃ１ｑについて染色されたｍＴＢＩマウスからの代表的な冠状脳切片を示す。海馬における両側Ｃ１ｑ発現は、生理学的状態に特有であり、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスの両方に存在する。図１Ｄは、Ｃ１ｑ、神経細胞マーカーＮｅｕＮ、アストロサイトマーカーＧＦＡＰ、及びミクログリア／マクロファージマーカーＩＢＡ１について染色されたＳ１（上）、ＶＢ及びｎＲＴ（中）のクローズアップ画像、ならびにｎＲＴ（下）の共焦点画像を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。ｎＲＴにおける矢印は、共焦点画像の位置を示す。３００μｍ（上／中）及び２０μｍ（下）のスケールバー。図１Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域との蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり５～７匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図1B】ｍＴＢＩの３週間後に、損傷した皮質及び機能的に接続された視床が慢性炎症及びニューロン損失を示すことを示す。図１Ａ～１Ｂは、制御された皮質衝撃の部位及び深さ（図１Ａ）、ならびにＳ１皮質及びｎＲＴ及びＶＢ視床領域の位置（図１Ｂ）を示すマウス冠状脳切片の概略図を示す。インパクターの直径は３ｍｍであり、インパクトは０．８ｍｍの深さで右体性感覚皮質に送達された。図１Ｃは、Ｃ１ｑについて染色されたｍＴＢＩマウスからの代表的な冠状脳切片を示す。海馬における両側Ｃ１ｑ発現は、生理学的状態に特有であり、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスの両方に存在する。図１Ｄは、Ｃ１ｑ、神経細胞マーカーＮｅｕＮ、アストロサイトマーカーＧＦＡＰ、及びミクログリア／マクロファージマーカーＩＢＡ１について染色されたＳ１（上）、ＶＢ及びｎＲＴ（中）のクローズアップ画像、ならびにｎＲＴ（下）の共焦点画像を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。ｎＲＴにおける矢印は、共焦点画像の位置を示す。３００μｍ（上／中）及び２０μｍ（下）のスケールバー。図１Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域との蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり５～７匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図1C】ｍＴＢＩの３週間後に、損傷した皮質及び機能的に接続された視床が慢性炎症及びニューロン損失を示すことを示す。図１Ａ～１Ｂは、制御された皮質衝撃の部位及び深さ（図１Ａ）、ならびにＳ１皮質及びｎＲＴ及びＶＢ視床領域の位置（図１Ｂ）を示すマウス冠状脳切片の概略図を示す。インパクターの直径は３ｍｍであり、インパクトは０．８ｍｍの深さで右体性感覚皮質に送達された。図１Ｃは、Ｃ１ｑについて染色されたｍＴＢＩマウスからの代表的な冠状脳切片を示す。海馬における両側Ｃ１ｑ発現は、生理学的状態に特有であり、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスの両方に存在する。図１Ｄは、Ｃ１ｑ、神経細胞マーカーＮｅｕＮ、アストロサイトマーカーＧＦＡＰ、及びミクログリア／マクロファージマーカーＩＢＡ１について染色されたＳ１（上）、ＶＢ及びｎＲＴ（中）のクローズアップ画像、ならびにｎＲＴ（下）の共焦点画像を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。ｎＲＴにおける矢印は、共焦点画像の位置を示す。３００μｍ（上／中）及び２０μｍ（下）のスケールバー。図１Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域との蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり５～７匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図1D】ｍＴＢＩの３週間後に、損傷した皮質及び機能的に接続された視床が慢性炎症及びニューロン損失を示すことを示す。図１Ａ～１Ｂは、制御された皮質衝撃の部位及び深さ（図１Ａ）、ならびにＳ１皮質及びｎＲＴ及びＶＢ視床領域の位置（図１Ｂ）を示すマウス冠状脳切片の概略図を示す。インパクターの直径は３ｍｍであり、インパクトは０．８ｍｍの深さで右体性感覚皮質に送達された。図１Ｃは、Ｃ１ｑについて染色されたｍＴＢＩマウスからの代表的な冠状脳切片を示す。海馬における両側Ｃ１ｑ発現は、生理学的状態に特有であり、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスの両方に存在する。図１Ｄは、Ｃ１ｑ、神経細胞マーカーＮｅｕＮ、アストロサイトマーカーＧＦＡＰ、及びミクログリア／マクロファージマーカーＩＢＡ１について染色されたＳ１（上）、ＶＢ及びｎＲＴ（中）のクローズアップ画像、ならびにｎＲＴ（下）の共焦点画像を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。ｎＲＴにおける矢印は、共焦点画像の位置を示す。３００μｍ（上／中）及び２０μｍ（下）のスケールバー。図１Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域との蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり５～７匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図1E】ｍＴＢＩの３週間後に、損傷した皮質及び機能的に接続された視床が慢性炎症及びニューロン損失を示すことを示す。図１Ａ～１Ｂは、制御された皮質衝撃の部位及び深さ（図１Ａ）、ならびにＳ１皮質及びｎＲＴ及びＶＢ視床領域の位置（図１Ｂ）を示すマウス冠状脳切片の概略図を示す。インパクターの直径は３ｍｍであり、インパクトは０．８ｍｍの深さで右体性感覚皮質に送達された。図１Ｃは、Ｃ１ｑについて染色されたｍＴＢＩマウスからの代表的な冠状脳切片を示す。海馬における両側Ｃ１ｑ発現は、生理学的状態に特有であり、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスの両方に存在する。図１Ｄは、Ｃ１ｑ、神経細胞マーカーＮｅｕＮ、アストロサイトマーカーＧＦＡＰ、及びミクログリア／マクロファージマーカーＩＢＡ１について染色されたＳ１（上）、ＶＢ及びｎＲＴ（中）のクローズアップ画像、ならびにｎＲＴ（下）の共焦点画像を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。ｎＲＴにおける矢印は、共焦点画像の位置を示す。３００μｍ（上／中）及び２０μｍ（下）のスケールバー。図１Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域との蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり５～７匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図2A】傷害皮質と同側のｎＲＴが、ｍＴＢＩの３週間後にニューロン損失ならびにＩＰＳＣ及びＥＰＳＣ特性の変化を示すことを示す。図２Ａ～２Ｃは、「頭部」、「胴体（ｂｏｄｙ）」、及び「尾部」（図２Ａ）への分割の高倍率冠状画像、ならびに同側ｎＲＴ全体にわたるニューロン数（図２Ｂ）またはシャム群からの中央値に対して正規化された１区分当たりのニューロン数（図２Ｃ）の定量を示す。ニューロン数データは、マン－ホイットニー検定による、平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、平均）。図２Ｄ～２Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的なＩＰＳＣ記録（図２Ｄ）、ならびに４匹のシャムマウスからの１３個の後部ｎＲＴニューロン及び６匹のｍＴＢＩマウスからの２２個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｅ）を示す。ＩＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｆ～２Ｇは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的ＥＰＳＣ記録（図２Ｆ）、ならびに６匹のシャムマウスからの１１個の後部ｎＲＴニューロン及び７匹のｍＴＢＩマウスからの９個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｇ）を示す。挿入図は、同じスケールでプロットされた、シャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来の単一ｎＲＴニューロンからの平均ＥＰＳＣトレースを示す。ＥＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｈは、シャム手術（左）及びｍＴＢＩ（右）（アスタリスクでマークされた損傷部位）を有するＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆマウスからの冠状脳切片の代表的な画像を示す。下のパネルは、皮質からＶＢ及びｎＲＴへの投影末端を示す。１ｍｍ（上）と５００μｍ（下）のスケールバー。Ｎ＝６ｍＴＢＩマウスにおいて、皮質からＶＢ及びｎＲＴ（矢印でマーク）への投影末端の減少が観察された。図２Ｉは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域とのＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図2B】傷害皮質と同側のｎＲＴが、ｍＴＢＩの３週間後にニューロン損失ならびにＩＰＳＣ及びＥＰＳＣ特性の変化を示すことを示す。図２Ａ～２Ｃは、「頭部」、「胴体（ｂｏｄｙ）」、及び「尾部」（図２Ａ）への分割の高倍率冠状画像、ならびに同側ｎＲＴ全体にわたるニューロン数（図２Ｂ）またはシャム群からの中央値に対して正規化された１区分当たりのニューロン数（図２Ｃ）の定量を示す。ニューロン数データは、マン－ホイットニー検定による、平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、平均）。図２Ｄ～２Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的なＩＰＳＣ記録（図２Ｄ）、ならびに４匹のシャムマウスからの１３個の後部ｎＲＴニューロン及び６匹のｍＴＢＩマウスからの２２個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｅ）を示す。ＩＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｆ～２Ｇは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的ＥＰＳＣ記録（図２Ｆ）、ならびに６匹のシャムマウスからの１１個の後部ｎＲＴニューロン及び７匹のｍＴＢＩマウスからの９個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｇ）を示す。挿入図は、同じスケールでプロットされた、シャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来の単一ｎＲＴニューロンからの平均ＥＰＳＣトレースを示す。ＥＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｈは、シャム手術（左）及びｍＴＢＩ（右）（アスタリスクでマークされた損傷部位）を有するＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆマウスからの冠状脳切片の代表的な画像を示す。下のパネルは、皮質からＶＢ及びｎＲＴへの投影末端を示す。１ｍｍ（上）と５００μｍ（下）のスケールバー。Ｎ＝６ｍＴＢＩマウスにおいて、皮質からＶＢ及びｎＲＴ（矢印でマーク）への投影末端の減少が観察された。図２Ｉは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域とのＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図2C】傷害皮質と同側のｎＲＴが、ｍＴＢＩの３週間後にニューロン損失ならびにＩＰＳＣ及びＥＰＳＣ特性の変化を示すことを示す。図２Ａ～２Ｃは、「頭部」、「胴体（ｂｏｄｙ）」、及び「尾部」（図２Ａ）への分割の高倍率冠状画像、ならびに同側ｎＲＴ全体にわたるニューロン数（図２Ｂ）またはシャム群からの中央値に対して正規化された１区分当たりのニューロン数（図２Ｃ）の定量を示す。ニューロン数データは、マン－ホイットニー検定による、平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、平均）。図２Ｄ～２Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的なＩＰＳＣ記録（図２Ｄ）、ならびに４匹のシャムマウスからの１３個の後部ｎＲＴニューロン及び６匹のｍＴＢＩマウスからの２２個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｅ）を示す。ＩＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｆ～２Ｇは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的ＥＰＳＣ記録（図２Ｆ）、ならびに６匹のシャムマウスからの１１個の後部ｎＲＴニューロン及び７匹のｍＴＢＩマウスからの９個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｇ）を示す。挿入図は、同じスケールでプロットされた、シャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来の単一ｎＲＴニューロンからの平均ＥＰＳＣトレースを示す。ＥＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｈは、シャム手術（左）及びｍＴＢＩ（右）（アスタリスクでマークされた損傷部位）を有するＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆマウスからの冠状脳切片の代表的な画像を示す。下のパネルは、皮質からＶＢ及びｎＲＴへの投影末端を示す。１ｍｍ（上）と５００μｍ（下）のスケールバー。Ｎ＝６ｍＴＢＩマウスにおいて、皮質からＶＢ及びｎＲＴ（矢印でマーク）への投影末端の減少が観察された。図２Ｉは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域とのＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図2D】傷害皮質と同側のｎＲＴが、ｍＴＢＩの３週間後にニューロン損失ならびにＩＰＳＣ及びＥＰＳＣ特性の変化を示すことを示す。図２Ａ～２Ｃは、「頭部」、「胴体（ｂｏｄｙ）」、及び「尾部」（図２Ａ）への分割の高倍率冠状画像、ならびに同側ｎＲＴ全体にわたるニューロン数（図２Ｂ）またはシャム群からの中央値に対して正規化された１区分当たりのニューロン数（図２Ｃ）の定量を示す。ニューロン数データは、マン－ホイットニー検定による、平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、平均）。図２Ｄ～２Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的なＩＰＳＣ記録（図２Ｄ）、ならびに４匹のシャムマウスからの１３個の後部ｎＲＴニューロン及び６匹のｍＴＢＩマウスからの２２個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｅ）を示す。ＩＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｆ～２Ｇは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的ＥＰＳＣ記録（図２Ｆ）、ならびに６匹のシャムマウスからの１１個の後部ｎＲＴニューロン及び７匹のｍＴＢＩマウスからの９個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｇ）を示す。挿入図は、同じスケールでプロットされた、シャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来の単一ｎＲＴニューロンからの平均ＥＰＳＣトレースを示す。ＥＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｈは、シャム手術（左）及びｍＴＢＩ（右）（アスタリスクでマークされた損傷部位）を有するＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆマウスからの冠状脳切片の代表的な画像を示す。下のパネルは、皮質からＶＢ及びｎＲＴへの投影末端を示す。１ｍｍ（上）と５００μｍ（下）のスケールバー。Ｎ＝６ｍＴＢＩマウスにおいて、皮質からＶＢ及びｎＲＴ（矢印でマーク）への投影末端の減少が観察された。図２Ｉは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域とのＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図2E】傷害皮質と同側のｎＲＴが、ｍＴＢＩの３週間後にニューロン損失ならびにＩＰＳＣ及びＥＰＳＣ特性の変化を示すことを示す。図２Ａ～２Ｃは、「頭部」、「胴体（ｂｏｄｙ）」、及び「尾部」（図２Ａ）への分割の高倍率冠状画像、ならびに同側ｎＲＴ全体にわたるニューロン数（図２Ｂ）またはシャム群からの中央値に対して正規化された１区分当たりのニューロン数（図２Ｃ）の定量を示す。ニューロン数データは、マン－ホイットニー検定による、平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、平均）。図２Ｄ～２Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的なＩＰＳＣ記録（図２Ｄ）、ならびに４匹のシャムマウスからの１３個の後部ｎＲＴニューロン及び６匹のｍＴＢＩマウスからの２２個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｅ）を示す。ＩＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｆ～２Ｇは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的ＥＰＳＣ記録（図２Ｆ）、ならびに６匹のシャムマウスからの１１個の後部ｎＲＴニューロン及び７匹のｍＴＢＩマウスからの９個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｇ）を示す。挿入図は、同じスケールでプロットされた、シャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来の単一ｎＲＴニューロンからの平均ＥＰＳＣトレースを示す。ＥＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｈは、シャム手術（左）及びｍＴＢＩ（右）（アスタリスクでマークされた損傷部位）を有するＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆマウスからの冠状脳切片の代表的な画像を示す。下のパネルは、皮質からＶＢ及びｎＲＴへの投影末端を示す。１ｍｍ（上）と５００μｍ（下）のスケールバー。Ｎ＝６ｍＴＢＩマウスにおいて、皮質からＶＢ及びｎＲＴ（矢印でマーク）への投影末端の減少が観察された。図２Ｉは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域とのＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図2F】傷害皮質と同側のｎＲＴが、ｍＴＢＩの３週間後にニューロン損失ならびにＩＰＳＣ及びＥＰＳＣ特性の変化を示すことを示す。図２Ａ～２Ｃは、「頭部」、「胴体（ｂｏｄｙ）」、及び「尾部」（図２Ａ）への分割の高倍率冠状画像、ならびに同側ｎＲＴ全体にわたるニューロン数（図２Ｂ）またはシャム群からの中央値に対して正規化された１区分当たりのニューロン数（図２Ｃ）の定量を示す。ニューロン数データは、マン－ホイットニー検定による、平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、平均）。図２Ｄ～２Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的なＩＰＳＣ記録（図２Ｄ）、ならびに４匹のシャムマウスからの１３個の後部ｎＲＴニューロン及び６匹のｍＴＢＩマウスからの２２個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｅ）を示す。ＩＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｆ～２Ｇは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的ＥＰＳＣ記録（図２Ｆ）、ならびに６匹のシャムマウスからの１１個の後部ｎＲＴニューロン及び７匹のｍＴＢＩマウスからの９個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｇ）を示す。挿入図は、同じスケールでプロットされた、シャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来の単一ｎＲＴニューロンからの平均ＥＰＳＣトレースを示す。ＥＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｈは、シャム手術（左）及びｍＴＢＩ（右）（アスタリスクでマークされた損傷部位）を有するＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆマウスからの冠状脳切片の代表的な画像を示す。下のパネルは、皮質からＶＢ及びｎＲＴへの投影末端を示す。１ｍｍ（上）と５００μｍ（下）のスケールバー。Ｎ＝６ｍＴＢＩマウスにおいて、皮質からＶＢ及びｎＲＴ（矢印でマーク）への投影末端の減少が観察された。図２Ｉは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域とのＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図2G】傷害皮質と同側のｎＲＴが、ｍＴＢＩの３週間後にニューロン損失ならびにＩＰＳＣ及びＥＰＳＣ特性の変化を示すことを示す。図２Ａ～２Ｃは、「頭部」、「胴体（ｂｏｄｙ）」、及び「尾部」（図２Ａ）への分割の高倍率冠状画像、ならびに同側ｎＲＴ全体にわたるニューロン数（図２Ｂ）またはシャム群からの中央値に対して正規化された１区分当たりのニューロン数（図２Ｃ）の定量を示す。ニューロン数データは、マン－ホイットニー検定による、平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、平均）。図２Ｄ～２Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的なＩＰＳＣ記録（図２Ｄ）、ならびに４匹のシャムマウスからの１３個の後部ｎＲＴニューロン及び６匹のｍＴＢＩマウスからの２２個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｅ）を示す。ＩＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｆ～２Ｇは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的ＥＰＳＣ記録（図２Ｆ）、ならびに６匹のシャムマウスからの１１個の後部ｎＲＴニューロン及び７匹のｍＴＢＩマウスからの９個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｇ）を示す。挿入図は、同じスケールでプロットされた、シャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来の単一ｎＲＴニューロンからの平均ＥＰＳＣトレースを示す。ＥＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｈは、シャム手術（左）及びｍＴＢＩ（右）（アスタリスクでマークされた損傷部位）を有するＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆマウスからの冠状脳切片の代表的な画像を示す。下のパネルは、皮質からＶＢ及びｎＲＴへの投影末端を示す。１ｍｍ（上）と５００μｍ（下）のスケールバー。Ｎ＝６ｍＴＢＩマウスにおいて、皮質からＶＢ及びｎＲＴ（矢印でマーク）への投影末端の減少が観察された。図２Ｉは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域とのＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図2H】傷害皮質と同側のｎＲＴが、ｍＴＢＩの３週間後にニューロン損失ならびにＩＰＳＣ及びＥＰＳＣ特性の変化を示すことを示す。図２Ａ～２Ｃは、「頭部」、「胴体（ｂｏｄｙ）」、及び「尾部」（図２Ａ）への分割の高倍率冠状画像、ならびに同側ｎＲＴ全体にわたるニューロン数（図２Ｂ）またはシャム群からの中央値に対して正規化された１区分当たりのニューロン数（図２Ｃ）の定量を示す。ニューロン数データは、マン－ホイットニー検定による、平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、平均）。図２Ｄ～２Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的なＩＰＳＣ記録（図２Ｄ）、ならびに４匹のシャムマウスからの１３個の後部ｎＲＴニューロン及び６匹のｍＴＢＩマウスからの２２個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｅ）を示す。ＩＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｆ～２Ｇは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的ＥＰＳＣ記録（図２Ｆ）、ならびに６匹のシャムマウスからの１１個の後部ｎＲＴニューロン及び７匹のｍＴＢＩマウスからの９個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｇ）を示す。挿入図は、同じスケールでプロットされた、シャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来の単一ｎＲＴニューロンからの平均ＥＰＳＣトレースを示す。ＥＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｈは、シャム手術（左）及びｍＴＢＩ（右）（アスタリスクでマークされた損傷部位）を有するＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆマウスからの冠状脳切片の代表的な画像を示す。下のパネルは、皮質からＶＢ及びｎＲＴへの投影末端を示す。１ｍｍ（上）と５００μｍ（下）のスケールバー。Ｎ＝６ｍＴＢＩマウスにおいて、皮質からＶＢ及びｎＲＴ（矢印でマーク）への投影末端の減少が観察された。図２Ｉは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域とのＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図2I】傷害皮質と同側のｎＲＴが、ｍＴＢＩの３週間後にニューロン損失ならびにＩＰＳＣ及びＥＰＳＣ特性の変化を示すことを示す。図２Ａ～２Ｃは、「頭部」、「胴体（ｂｏｄｙ）」、及び「尾部」（図２Ａ）への分割の高倍率冠状画像、ならびに同側ｎＲＴ全体にわたるニューロン数（図２Ｂ）またはシャム群からの中央値に対して正規化された１区分当たりのニューロン数（図２Ｃ）の定量を示す。ニューロン数データは、マン－ホイットニー検定による、平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、平均）。図２Ｄ～２Ｅは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的なＩＰＳＣ記録（図２Ｄ）、ならびに４匹のシャムマウスからの１３個の後部ｎＲＴニューロン及び６匹のｍＴＢＩマウスからの２２個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｅ）を示す。ＩＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｆ～２Ｇは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける代表的なｎＲＴニューロンからの自発的ＥＰＳＣ記録（図２Ｆ）、ならびに６匹のシャムマウスからの１１個の後部ｎＲＴニューロン及び７匹のｍＴＢＩマウスからの９個の後部ｎＲＴニューロンにおける周波数及び振幅分布（図２Ｇ）を示す。挿入図は、同じスケールでプロットされた、シャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来の単一ｎＲＴニューロンからの平均ＥＰＳＣトレースを示す。ＥＰＳＣデータは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５）である。図２Ｈは、シャム手術（左）及びｍＴＢＩ（右）（アスタリスクでマークされた損傷部位）を有するＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆマウスからの冠状脳切片の代表的な画像を示す。下のパネルは、皮質からＶＢ及びｎＲＴへの投影末端を示す。１ｍｍ（上）と５００μｍ（下）のスケールバー。Ｎ＝６ｍＴＢＩマウスにおいて、皮質からＶＢ及びｎＲＴ（矢印でマーク）への投影末端の減少が観察された。図２Ｉは、シャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域とのＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図3A】ミクログリアが、ｍＴＢＩの３週間後の視床におけるＣ１ｑの供給源であることを示す、単一核ＲＮＡ配列決定を示す。図３Ａは、視床組織切除の位置を示す冠状脳切片の概略図を示す。図３Ｂ、３Ｃ、及び３Ｅは、細胞型系統（図３Ｂ）、核Ｃ１ｑａ発現（図３Ｃ）、またはＣ４ｂ発現（図３Ｅ）によって着色された単一核（データクリーニング後、ｎ＝４，９０８個の偽細胞、ｎ＝４，３３８個のｍＴＢＩ細胞）の均一なマニホールド近似及び投影（ＵＭＡＰ）投影を示す。図８Ａに記載されている系統マーカー。着色は、補間を使用してレンダリングされる。上に示される正規化された発現スケールは、各パネルの最大値とともに０－ｍａｘである。図３Ｄ及び３Ｆは、ウイルコクソンの順位和検定（ｎ．ｓ．＝有意ではない）で分析したシャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来のクラスター３（オリゴ３、図９Ｅ）からの、ミクログリア核にけるＣ１ｑａ発現（図３Ｄ）ならびにオリゴデンドロサイト核におけるＣ４ｂ発現（図３Ｆ）のバイオリンプロットを示す。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製物を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図３Ｇ及び３Ｈは、バルク細胞質ＲＮＡ中のＣ１ｑａ（図３Ｅ）及びＣ４ｂ（図３Ｈ）転写産物のＲＴ－ｑＰＣＲ定量を示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。

【図3B】ミクログリアが、ｍＴＢＩの３週間後の視床におけるＣ１ｑの供給源であることを示す、単一核ＲＮＡ配列決定を示す。図３Ａは、視床組織切除の位置を示す冠状脳切片の概略図を示す。図３Ｂ、３Ｃ、及び３Ｅは、細胞型系統（図３Ｂ）、核Ｃ１ｑａ発現（図３Ｃ）、またはＣ４ｂ発現（図３Ｅ）によって着色された単一核（データクリーニング後、ｎ＝４，９０８個の偽細胞、ｎ＝４，３３８個のｍＴＢＩ細胞）の均一なマニホールド近似及び投影（ＵＭＡＰ）投影を示す。図８Ａに記載されている系統マーカー。着色は、補間を使用してレンダリングされる。上に示される正規化された発現スケールは、各パネルの最大値とともに０－ｍａｘである。図３Ｄ及び３Ｆは、ウイルコクソンの順位和検定（ｎ．ｓ．＝有意ではない）で分析したシャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来のクラスター３（オリゴ３、図９Ｅ）からの、ミクログリア核にけるＣ１ｑａ発現（図３Ｄ）ならびにオリゴデンドロサイト核におけるＣ４ｂ発現（図３Ｆ）のバイオリンプロットを示す。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製物を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図３Ｇ及び３Ｈは、バルク細胞質ＲＮＡ中のＣ１ｑａ（図３Ｅ）及びＣ４ｂ（図３Ｈ）転写産物のＲＴ－ｑＰＣＲ定量を示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。

【図3C】ミクログリアが、ｍＴＢＩの３週間後の視床におけるＣ１ｑの供給源であることを示す、単一核ＲＮＡ配列決定を示す。図３Ａは、視床組織切除の位置を示す冠状脳切片の概略図を示す。図３Ｂ、３Ｃ、及び３Ｅは、細胞型系統（図３Ｂ）、核Ｃ１ｑａ発現（図３Ｃ）、またはＣ４ｂ発現（図３Ｅ）によって着色された単一核（データクリーニング後、ｎ＝４，９０８個の偽細胞、ｎ＝４，３３８個のｍＴＢＩ細胞）の均一なマニホールド近似及び投影（ＵＭＡＰ）投影を示す。図８Ａに記載されている系統マーカー。着色は、補間を使用してレンダリングされる。上に示される正規化された発現スケールは、各パネルの最大値とともに０－ｍａｘである。図３Ｄ及び３Ｆは、ウイルコクソンの順位和検定（ｎ．ｓ．＝有意ではない）で分析したシャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来のクラスター３（オリゴ３、図９Ｅ）からの、ミクログリア核にけるＣ１ｑａ発現（図３Ｄ）ならびにオリゴデンドロサイト核におけるＣ４ｂ発現（図３Ｆ）のバイオリンプロットを示す。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製物を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図３Ｇ及び３Ｈは、バルク細胞質ＲＮＡ中のＣ１ｑａ（図３Ｅ）及びＣ４ｂ（図３Ｈ）転写産物のＲＴ－ｑＰＣＲ定量を示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。

【図3D】ミクログリアが、ｍＴＢＩの３週間後の視床におけるＣ１ｑの供給源であることを示す、単一核ＲＮＡ配列決定を示す。図３Ａは、視床組織切除の位置を示す冠状脳切片の概略図を示す。図３Ｂ、３Ｃ、及び３Ｅは、細胞型系統（図３Ｂ）、核Ｃ１ｑａ発現（図３Ｃ）、またはＣ４ｂ発現（図３Ｅ）によって着色された単一核（データクリーニング後、ｎ＝４，９０８個の偽細胞、ｎ＝４，３３８個のｍＴＢＩ細胞）の均一なマニホールド近似及び投影（ＵＭＡＰ）投影を示す。図８Ａに記載されている系統マーカー。着色は、補間を使用してレンダリングされる。上に示される正規化された発現スケールは、各パネルの最大値とともに０－ｍａｘである。図３Ｄ及び３Ｆは、ウイルコクソンの順位和検定（ｎ．ｓ．＝有意ではない）で分析したシャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来のクラスター３（オリゴ３、図９Ｅ）からの、ミクログリア核にけるＣ１ｑａ発現（図３Ｄ）ならびにオリゴデンドロサイト核におけるＣ４ｂ発現（図３Ｆ）のバイオリンプロットを示す。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製物を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図３Ｇ及び３Ｈは、バルク細胞質ＲＮＡ中のＣ１ｑａ（図３Ｅ）及びＣ４ｂ（図３Ｈ）転写産物のＲＴ－ｑＰＣＲ定量を示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。

【図3E】ミクログリアが、ｍＴＢＩの３週間後の視床におけるＣ１ｑの供給源であることを示す、単一核ＲＮＡ配列決定を示す。図３Ａは、視床組織切除の位置を示す冠状脳切片の概略図を示す。図３Ｂ、３Ｃ、及び３Ｅは、細胞型系統（図３Ｂ）、核Ｃ１ｑａ発現（図３Ｃ）、またはＣ４ｂ発現（図３Ｅ）によって着色された単一核（データクリーニング後、ｎ＝４，９０８個の偽細胞、ｎ＝４，３３８個のｍＴＢＩ細胞）の均一なマニホールド近似及び投影（ＵＭＡＰ）投影を示す。図８Ａに記載されている系統マーカー。着色は、補間を使用してレンダリングされる。上に示される正規化された発現スケールは、各パネルの最大値とともに０－ｍａｘである。図３Ｄ及び３Ｆは、ウイルコクソンの順位和検定（ｎ．ｓ．＝有意ではない）で分析したシャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来のクラスター３（オリゴ３、図９Ｅ）からの、ミクログリア核にけるＣ１ｑａ発現（図３Ｄ）ならびにオリゴデンドロサイト核におけるＣ４ｂ発現（図３Ｆ）のバイオリンプロットを示す。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製物を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図３Ｇ及び３Ｈは、バルク細胞質ＲＮＡ中のＣ１ｑａ（図３Ｅ）及びＣ４ｂ（図３Ｈ）転写産物のＲＴ－ｑＰＣＲ定量を示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。

【図3F】ミクログリアが、ｍＴＢＩの３週間後の視床におけるＣ１ｑの供給源であることを示す、単一核ＲＮＡ配列決定を示す。図３Ａは、視床組織切除の位置を示す冠状脳切片の概略図を示す。図３Ｂ、３Ｃ、及び３Ｅは、細胞型系統（図３Ｂ）、核Ｃ１ｑａ発現（図３Ｃ）、またはＣ４ｂ発現（図３Ｅ）によって着色された単一核（データクリーニング後、ｎ＝４，９０８個の偽細胞、ｎ＝４，３３８個のｍＴＢＩ細胞）の均一なマニホールド近似及び投影（ＵＭＡＰ）投影を示す。図８Ａに記載されている系統マーカー。着色は、補間を使用してレンダリングされる。上に示される正規化された発現スケールは、各パネルの最大値とともに０－ｍａｘである。図３Ｄ及び３Ｆは、ウイルコクソンの順位和検定（ｎ．ｓ．＝有意ではない）で分析したシャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来のクラスター３（オリゴ３、図９Ｅ）からの、ミクログリア核にけるＣ１ｑａ発現（図３Ｄ）ならびにオリゴデンドロサイト核におけるＣ４ｂ発現（図３Ｆ）のバイオリンプロットを示す。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製物を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図３Ｇ及び３Ｈは、バルク細胞質ＲＮＡ中のＣ１ｑａ（図３Ｅ）及びＣ４ｂ（図３Ｈ）転写産物のＲＴ－ｑＰＣＲ定量を示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。

【図3G】ミクログリアが、ｍＴＢＩの３週間後の視床におけるＣ１ｑの供給源であることを示す、単一核ＲＮＡ配列決定を示す。図３Ａは、視床組織切除の位置を示す冠状脳切片の概略図を示す。図３Ｂ、３Ｃ、及び３Ｅは、細胞型系統（図３Ｂ）、核Ｃ１ｑａ発現（図３Ｃ）、またはＣ４ｂ発現（図３Ｅ）によって着色された単一核（データクリーニング後、ｎ＝４，９０８個の偽細胞、ｎ＝４，３３８個のｍＴＢＩ細胞）の均一なマニホールド近似及び投影（ＵＭＡＰ）投影を示す。図８Ａに記載されている系統マーカー。着色は、補間を使用してレンダリングされる。上に示される正規化された発現スケールは、各パネルの最大値とともに０－ｍａｘである。図３Ｄ及び３Ｆは、ウイルコクソンの順位和検定（ｎ．ｓ．＝有意ではない）で分析したシャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来のクラスター３（オリゴ３、図９Ｅ）からの、ミクログリア核にけるＣ１ｑａ発現（図３Ｄ）ならびにオリゴデンドロサイト核におけるＣ４ｂ発現（図３Ｆ）のバイオリンプロットを示す。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製物を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図３Ｇ及び３Ｈは、バルク細胞質ＲＮＡ中のＣ１ｑａ（図３Ｅ）及びＣ４ｂ（図３Ｈ）転写産物のＲＴ－ｑＰＣＲ定量を示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。

【図3H】ミクログリアが、ｍＴＢＩの３週間後の視床におけるＣ１ｑの供給源であることを示す、単一核ＲＮＡ配列決定を示す。図３Ａは、視床組織切除の位置を示す冠状脳切片の概略図を示す。図３Ｂ、３Ｃ、及び３Ｅは、細胞型系統（図３Ｂ）、核Ｃ１ｑａ発現（図３Ｃ）、またはＣ４ｂ発現（図３Ｅ）によって着色された単一核（データクリーニング後、ｎ＝４，９０８個の偽細胞、ｎ＝４，３３８個のｍＴＢＩ細胞）の均一なマニホールド近似及び投影（ＵＭＡＰ）投影を示す。図８Ａに記載されている系統マーカー。着色は、補間を使用してレンダリングされる。上に示される正規化された発現スケールは、各パネルの最大値とともに０－ｍａｘである。図３Ｄ及び３Ｆは、ウイルコクソンの順位和検定（ｎ．ｓ．＝有意ではない）で分析したシャムマウス及びｍＴＢＩマウス由来のクラスター３（オリゴ３、図９Ｅ）からの、ミクログリア核にけるＣ１ｑａ発現（図３Ｄ）ならびにオリゴデンドロサイト核におけるＣ４ｂ発現（図３Ｆ）のバイオリンプロットを示す。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製物を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図３Ｇ及び３Ｈは、バルク細胞質ＲＮＡ中のＣ１ｑａ（図３Ｅ）及びＣ４ｂ（図３Ｈ）転写産物のＲＴ－ｑＰＣＲ定量を示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。

【図4A】抗Ｃ１ｑ抗体がｍＴＢＩの３週間後に慢性炎症及びニューロン損失を低減することを示す。図４Ａ及び４Ｂは、抗Ｃ１ｑ抗体で処置し、Ｃ１ｑ、ＮｅｕＮ、ＧＦＡＰ、及びＩＢＡ１について染色されたｍＴＢＩマウス由来のＳ１（上）、ＶＢ、及びｎＲＴ（下）の代表的な冠状脳切片（図４Ａ）及びクローズアップ（図４Ｂ）を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。１ｍｍ（Ａ）、５００μｍ（Ｂ）のスケールバー。図４Ｃは、対照ならびに抗体処置されたシャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域との間のｎＲＴニューロン数及び蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析は、１群当たり６～８匹のマウスを含む（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図4B】抗Ｃ１ｑ抗体がｍＴＢＩの３週間後に慢性炎症及びニューロン損失を低減することを示す。図４Ａ及び４Ｂは、抗Ｃ１ｑ抗体で処置し、Ｃ１ｑ、ＮｅｕＮ、ＧＦＡＰ、及びＩＢＡ１について染色されたｍＴＢＩマウス由来のＳ１（上）、ＶＢ、及びｎＲＴ（下）の代表的な冠状脳切片（図４Ａ）及びクローズアップ（図４Ｂ）を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。１ｍｍ（Ａ）、５００μｍ（Ｂ）のスケールバー。図４Ｃは、対照ならびに抗体処置されたシャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域との間のｎＲＴニューロン数及び蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析は、１群当たり６～８匹のマウスを含む（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図4C】抗Ｃ１ｑ抗体がｍＴＢＩの３週間後に慢性炎症及びニューロン損失を低減することを示す。図４Ａ及び４Ｂは、抗Ｃ１ｑ抗体で処置し、Ｃ１ｑ、ＮｅｕＮ、ＧＦＡＰ、及びＩＢＡ１について染色されたｍＴＢＩマウス由来のＳ１（上）、ＶＢ、及びｎＲＴ（下）の代表的な冠状脳切片（図４Ａ）及びクローズアップ（図４Ｂ）を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。１ｍｍ（Ａ）、５００μｍ（Ｂ）のスケールバー。図４Ｃは、対照ならびに抗体処置されたシャムマウス及びｍＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域との間のｎＲＴニューロン数及び蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析は、１群当たり６～８匹のマウスを含む（ｎ＝マウス１匹当たり３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図5A】慢性的に記録されたｍＴＢＩマウスが、異なるＥＣｏＧ周波数帯域にわたって力が変化したことを示すことを示す。図５Ａは、ｍＴＢＩの最初の２４時間以内の同じ時点で撮影された、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な１０分間のスペクトログラムを示し、同側Ｓ１からのＥＣｏＧトレースが重ねられている。ｍＴＢＩスペクトログラムは脳波上の発作（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｅｉｚｕｒｅ）を示し、シャムスペクトログラムは正常なＥＣｏＧ活性を示す。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｂは、ｍＴＢＩの２～３週間後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な７日間のスペクトログラムを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｃ、５Ｅ、及び５Ｇは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｃ）、最初の３（図５Ｅ）、及び最初の１１（図５Ｇ）週間にわたって平均化された、シャムコホート及びｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を示す。Ｃにおける挿入図は、代表的なシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。詳細については、方法を参照のこと。図５Ｄ、５Ｆ、及び５Ｈは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｄ）、最初の３（図５Ｆ）、及び最初の１１（図５Ｈ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、たとえマウスが死亡するか、または実験的エンドポイントの前に電池が切れたとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）全てのマウスを表す。ｎ＝７匹のシャムマウス、１１匹のｍＴＢＩマウス。１匹のマウスは、ｍＴＢＩ後２日以内に死亡した。残りのマウスを、ｍＴＢＩ後の最初の１週間について記録し、次いで、ｍＴＢＩ後の１１週間まで交互に記録した。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図5B】慢性的に記録されたｍＴＢＩマウスが、異なるＥＣｏＧ周波数帯域にわたって力が変化したことを示すことを示す。図５Ａは、ｍＴＢＩの最初の２４時間以内の同じ時点で撮影された、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な１０分間のスペクトログラムを示し、同側Ｓ１からのＥＣｏＧトレースが重ねられている。ｍＴＢＩスペクトログラムは脳波上の発作（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｅｉｚｕｒｅ）を示し、シャムスペクトログラムは正常なＥＣｏＧ活性を示す。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｂは、ｍＴＢＩの２～３週間後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な７日間のスペクトログラムを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｃ、５Ｅ、及び５Ｇは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｃ）、最初の３（図５Ｅ）、及び最初の１１（図５Ｇ）週間にわたって平均化された、シャムコホート及びｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を示す。Ｃにおける挿入図は、代表的なシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。詳細については、方法を参照のこと。図５Ｄ、５Ｆ、及び５Ｈは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｄ）、最初の３（図５Ｆ）、及び最初の１１（図５Ｈ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、たとえマウスが死亡するか、または実験的エンドポイントの前に電池が切れたとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）全てのマウスを表す。ｎ＝７匹のシャムマウス、１１匹のｍＴＢＩマウス。１匹のマウスは、ｍＴＢＩ後２日以内に死亡した。残りのマウスを、ｍＴＢＩ後の最初の１週間について記録し、次いで、ｍＴＢＩ後の１１週間まで交互に記録した。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図5C】慢性的に記録されたｍＴＢＩマウスが、異なるＥＣｏＧ周波数帯域にわたって力が変化したことを示すことを示す。図５Ａは、ｍＴＢＩの最初の２４時間以内の同じ時点で撮影された、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な１０分間のスペクトログラムを示し、同側Ｓ１からのＥＣｏＧトレースが重ねられている。ｍＴＢＩスペクトログラムは脳波上の発作（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｅｉｚｕｒｅ）を示し、シャムスペクトログラムは正常なＥＣｏＧ活性を示す。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｂは、ｍＴＢＩの２～３週間後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な７日間のスペクトログラムを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｃ、５Ｅ、及び５Ｇは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｃ）、最初の３（図５Ｅ）、及び最初の１１（図５Ｇ）週間にわたって平均化された、シャムコホート及びｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を示す。Ｃにおける挿入図は、代表的なシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。詳細については、方法を参照のこと。図５Ｄ、５Ｆ、及び５Ｈは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｄ）、最初の３（図５Ｆ）、及び最初の１１（図５Ｈ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、たとえマウスが死亡するか、または実験的エンドポイントの前に電池が切れたとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）全てのマウスを表す。ｎ＝７匹のシャムマウス、１１匹のｍＴＢＩマウス。１匹のマウスは、ｍＴＢＩ後２日以内に死亡した。残りのマウスを、ｍＴＢＩ後の最初の１週間について記録し、次いで、ｍＴＢＩ後の１１週間まで交互に記録した。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図5D】慢性的に記録されたｍＴＢＩマウスが、異なるＥＣｏＧ周波数帯域にわたって力が変化したことを示すことを示す。図５Ａは、ｍＴＢＩの最初の２４時間以内の同じ時点で撮影された、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な１０分間のスペクトログラムを示し、同側Ｓ１からのＥＣｏＧトレースが重ねられている。ｍＴＢＩスペクトログラムは脳波上の発作（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｅｉｚｕｒｅ）を示し、シャムスペクトログラムは正常なＥＣｏＧ活性を示す。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｂは、ｍＴＢＩの２～３週間後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な７日間のスペクトログラムを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｃ、５Ｅ、及び５Ｇは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｃ）、最初の３（図５Ｅ）、及び最初の１１（図５Ｇ）週間にわたって平均化された、シャムコホート及びｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を示す。Ｃにおける挿入図は、代表的なシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。詳細については、方法を参照のこと。図５Ｄ、５Ｆ、及び５Ｈは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｄ）、最初の３（図５Ｆ）、及び最初の１１（図５Ｈ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、たとえマウスが死亡するか、または実験的エンドポイントの前に電池が切れたとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）全てのマウスを表す。ｎ＝７匹のシャムマウス、１１匹のｍＴＢＩマウス。１匹のマウスは、ｍＴＢＩ後２日以内に死亡した。残りのマウスを、ｍＴＢＩ後の最初の１週間について記録し、次いで、ｍＴＢＩ後の１１週間まで交互に記録した。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図5E】慢性的に記録されたｍＴＢＩマウスが、異なるＥＣｏＧ周波数帯域にわたって力が変化したことを示すことを示す。図５Ａは、ｍＴＢＩの最初の２４時間以内の同じ時点で撮影された、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な１０分間のスペクトログラムを示し、同側Ｓ１からのＥＣｏＧトレースが重ねられている。ｍＴＢＩスペクトログラムは脳波上の発作（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｅｉｚｕｒｅ）を示し、シャムスペクトログラムは正常なＥＣｏＧ活性を示す。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｂは、ｍＴＢＩの２～３週間後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な７日間のスペクトログラムを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｃ、５Ｅ、及び５Ｇは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｃ）、最初の３（図５Ｅ）、及び最初の１１（図５Ｇ）週間にわたって平均化された、シャムコホート及びｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を示す。Ｃにおける挿入図は、代表的なシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。詳細については、方法を参照のこと。図５Ｄ、５Ｆ、及び５Ｈは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｄ）、最初の３（図５Ｆ）、及び最初の１１（図５Ｈ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、たとえマウスが死亡するか、または実験的エンドポイントの前に電池が切れたとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）全てのマウスを表す。ｎ＝７匹のシャムマウス、１１匹のｍＴＢＩマウス。１匹のマウスは、ｍＴＢＩ後２日以内に死亡した。残りのマウスを、ｍＴＢＩ後の最初の１週間について記録し、次いで、ｍＴＢＩ後の１１週間まで交互に記録した。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図5F】慢性的に記録されたｍＴＢＩマウスが、異なるＥＣｏＧ周波数帯域にわたって力が変化したことを示すことを示す。図５Ａは、ｍＴＢＩの最初の２４時間以内の同じ時点で撮影された、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な１０分間のスペクトログラムを示し、同側Ｓ１からのＥＣｏＧトレースが重ねられている。ｍＴＢＩスペクトログラムは脳波上の発作（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｅｉｚｕｒｅ）を示し、シャムスペクトログラムは正常なＥＣｏＧ活性を示す。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｂは、ｍＴＢＩの２～３週間後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な７日間のスペクトログラムを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｃ、５Ｅ、及び５Ｇは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｃ）、最初の３（図５Ｅ）、及び最初の１１（図５Ｇ）週間にわたって平均化された、シャムコホート及びｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を示す。Ｃにおける挿入図は、代表的なシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。詳細については、方法を参照のこと。図５Ｄ、５Ｆ、及び５Ｈは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｄ）、最初の３（図５Ｆ）、及び最初の１１（図５Ｈ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、たとえマウスが死亡するか、または実験的エンドポイントの前に電池が切れたとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）全てのマウスを表す。ｎ＝７匹のシャムマウス、１１匹のｍＴＢＩマウス。１匹のマウスは、ｍＴＢＩ後２日以内に死亡した。残りのマウスを、ｍＴＢＩ後の最初の１週間について記録し、次いで、ｍＴＢＩ後の１１週間まで交互に記録した。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図5G】慢性的に記録されたｍＴＢＩマウスが、異なるＥＣｏＧ周波数帯域にわたって力が変化したことを示すことを示す。図５Ａは、ｍＴＢＩの最初の２４時間以内の同じ時点で撮影された、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な１０分間のスペクトログラムを示し、同側Ｓ１からのＥＣｏＧトレースが重ねられている。ｍＴＢＩスペクトログラムは脳波上の発作（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｅｉｚｕｒｅ）を示し、シャムスペクトログラムは正常なＥＣｏＧ活性を示す。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｂは、ｍＴＢＩの２～３週間後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な７日間のスペクトログラムを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｃ、５Ｅ、及び５Ｇは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｃ）、最初の３（図５Ｅ）、及び最初の１１（図５Ｇ）週間にわたって平均化された、シャムコホート及びｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を示す。Ｃにおける挿入図は、代表的なシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。詳細については、方法を参照のこと。図５Ｄ、５Ｆ、及び５Ｈは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｄ）、最初の３（図５Ｆ）、及び最初の１１（図５Ｈ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、たとえマウスが死亡するか、または実験的エンドポイントの前に電池が切れたとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）全てのマウスを表す。ｎ＝７匹のシャムマウス、１１匹のｍＴＢＩマウス。１匹のマウスは、ｍＴＢＩ後２日以内に死亡した。残りのマウスを、ｍＴＢＩ後の最初の１週間について記録し、次いで、ｍＴＢＩ後の１１週間まで交互に記録した。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図5H】慢性的に記録されたｍＴＢＩマウスが、異なるＥＣｏＧ周波数帯域にわたって力が変化したことを示すことを示す。図５Ａは、ｍＴＢＩの最初の２４時間以内の同じ時点で撮影された、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な１０分間のスペクトログラムを示し、同側Ｓ１からのＥＣｏＧトレースが重ねられている。ｍＴＢＩスペクトログラムは脳波上の発作（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｅｉｚｕｒｅ）を示し、シャムスペクトログラムは正常なＥＣｏＧ活性を示す。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｂは、ｍＴＢＩの２～３週間後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す、シャムマウス（左）及びｍＴＢＩマウス（右）からの代表的な７日間のスペクトログラムを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図５Ｃ、５Ｅ、及び５Ｇは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｃ）、最初の３（図５Ｅ）、及び最初の１１（図５Ｇ）週間にわたって平均化された、シャムコホート及びｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を示す。Ｃにおける挿入図は、代表的なシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。詳細については、方法を参照のこと。図５Ｄ、５Ｆ、及び５Ｈは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図５Ｄ）、最初の３（図５Ｆ）、及び最初の１１（図５Ｈ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、たとえマウスが死亡するか、または実験的エンドポイントの前に電池が切れたとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）全てのマウスを表す。ｎ＝７匹のシャムマウス、１１匹のｍＴＢＩマウス。１匹のマウスは、ｍＴＢＩ後２日以内に死亡した。残りのマウスを、ｍＴＢＩ後の最初の１週間について記録し、次いで、ｍＴＢＩ後の１１週間まで交互に記録した。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図6A】抗Ｃ１ｑ抗体が、ｍＴＢＩを有するマウスのＥＣｏＧスペクトル特徴に対して適度な効果を有することを示す。図６Ａは、対照処置マウス（左）及び抗体処置マウス（右）からの例示的なスペクトログラム（上）及びヒストグラム（下）を示し、ｍＴＢＩの１ヶ月後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図６Ｂ及び６Ｄは、対照処置ｍＴＢＩコホート及び抗体処置ｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を、ｍＴＢＩ後の最初の１（図６Ｂ）または最初の３（図６Ｄ）週間にわたって平均化したものを示す。挿入図は、代表的な対照処置ｍＴＢＩマウス及び抗体処置ｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。図６Ｃ及び６Ｅは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図６Ｃ）及び最初の３（図６Ｅ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、処置が終了する前に死亡したとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した全てのマウスを表す。ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図6B】抗Ｃ１ｑ抗体が、ｍＴＢＩを有するマウスのＥＣｏＧスペクトル特徴に対して適度な効果を有することを示す。図６Ａは、対照処置マウス（左）及び抗体処置マウス（右）からの例示的なスペクトログラム（上）及びヒストグラム（下）を示し、ｍＴＢＩの１ヶ月後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図６Ｂ及び６Ｄは、対照処置ｍＴＢＩコホート及び抗体処置ｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を、ｍＴＢＩ後の最初の１（図６Ｂ）または最初の３（図６Ｄ）週間にわたって平均化したものを示す。挿入図は、代表的な対照処置ｍＴＢＩマウス及び抗体処置ｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。図６Ｃ及び６Ｅは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図６Ｃ）及び最初の３（図６Ｅ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、処置が終了する前に死亡したとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した全てのマウスを表す。ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図6C】抗Ｃ１ｑ抗体が、ｍＴＢＩを有するマウスのＥＣｏＧスペクトル特徴に対して適度な効果を有することを示す。図６Ａは、対照処置マウス（左）及び抗体処置マウス（右）からの例示的なスペクトログラム（上）及びヒストグラム（下）を示し、ｍＴＢＩの１ヶ月後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図６Ｂ及び６Ｄは、対照処置ｍＴＢＩコホート及び抗体処置ｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を、ｍＴＢＩ後の最初の１（図６Ｂ）または最初の３（図６Ｄ）週間にわたって平均化したものを示す。挿入図は、代表的な対照処置ｍＴＢＩマウス及び抗体処置ｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。図６Ｃ及び６Ｅは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図６Ｃ）及び最初の３（図６Ｅ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、処置が終了する前に死亡したとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した全てのマウスを表す。ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図6D】抗Ｃ１ｑ抗体が、ｍＴＢＩを有するマウスのＥＣｏＧスペクトル特徴に対して適度な効果を有することを示す。図６Ａは、対照処置マウス（左）及び抗体処置マウス（右）からの例示的なスペクトログラム（上）及びヒストグラム（下）を示し、ｍＴＢＩの１ヶ月後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図６Ｂ及び６Ｄは、対照処置ｍＴＢＩコホート及び抗体処置ｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を、ｍＴＢＩ後の最初の１（図６Ｂ）または最初の３（図６Ｄ）週間にわたって平均化したものを示す。挿入図は、代表的な対照処置ｍＴＢＩマウス及び抗体処置ｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。図６Ｃ及び６Ｅは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図６Ｃ）及び最初の３（図６Ｅ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、処置が終了する前に死亡したとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した全てのマウスを表す。ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図6E】抗Ｃ１ｑ抗体が、ｍＴＢＩを有するマウスのＥＣｏＧスペクトル特徴に対して適度な効果を有することを示す。図６Ａは、対照処置マウス（左）及び抗体処置マウス（右）からの例示的なスペクトログラム（上）及びヒストグラム（下）を示し、ｍＴＢＩの１ヶ月後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。カラーバーは、パワー（ｍＶ２／Ｈｚ）を表す。図６Ｂ及び６Ｄは、対照処置ｍＴＢＩコホート及び抗体処置ｍＴＢＩコホートからのＥＣｏＧ活性のパワースペクトル密度を、ｍＴＢＩ後の最初の１（図６Ｂ）または最初の３（図６Ｄ）週間にわたって平均化したものを示す。挿入図は、代表的な対照処置ｍＴＢＩマウス及び抗体処置ｍＴＢＩマウスからのパワースペクトル密度プロットの例を示す。図６Ｃ及び６Ｅは、ｍＴＢＩ後の最初の１（図６Ｃ）及び最初の３（図６Ｅ）週間の周波数帯域にわたる平均パワーの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を示す。各ドットは、１つのマウスのパワーを表す。データは、処置が終了する前に死亡したとしても、記録され、二元配置分散分析で分析した全てのマウスを表す。ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚである。

【図7A】ＴＢＩを有する患者からの死後脳組織を示し、ＴＢＩの８日後に慢性炎症を示す。図７Ａは、ミクログリア及びマクロファージにおいて発現されるＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体のマーカーであるＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人の対照患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７８歳男性。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｂは、ＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人のＴＢＩ患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７９歳男性；転倒事故、傷害重症度（ＧＣＳ）：中等度、ＣＴ：脳浮腫；てんかんなし（ＴＢＩ後：８日）；前回の臨床評価に基づき、神経疾患の既往なし、認知機能低下の徴候なし；原発性神経変性病理の徴候なし、外傷性（ｔｒａｕｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ）びまん性軸索損傷の徴候なし。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｃは、（図７Ａ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｄは、（図７Ｂ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｅは、（図７Ａ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｆ～７Ｉは、（図７Ｂ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ（図７Ｆ～７Ｇ）及び４０μｍ（図７Ｈ～７Ｉ）。

【図7B】ＴＢＩを有する患者からの死後脳組織を示し、ＴＢＩの８日後に慢性炎症を示す。図７Ａは、ミクログリア及びマクロファージにおいて発現されるＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体のマーカーであるＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人の対照患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７８歳男性。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｂは、ＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人のＴＢＩ患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７９歳男性；転倒事故、傷害重症度（ＧＣＳ）：中等度、ＣＴ：脳浮腫；てんかんなし（ＴＢＩ後：８日）；前回の臨床評価に基づき、神経疾患の既往なし、認知機能低下の徴候なし；原発性神経変性病理の徴候なし、外傷性（ｔｒａｕｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ）びまん性軸索損傷の徴候なし。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｃは、（図７Ａ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｄは、（図７Ｂ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｅは、（図７Ａ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｆ～７Ｉは、（図７Ｂ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ（図７Ｆ～７Ｇ）及び４０μｍ（図７Ｈ～７Ｉ）。

【図7C】ＴＢＩを有する患者からの死後脳組織を示し、ＴＢＩの８日後に慢性炎症を示す。図７Ａは、ミクログリア及びマクロファージにおいて発現されるＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体のマーカーであるＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人の対照患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７８歳男性。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｂは、ＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人のＴＢＩ患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７９歳男性；転倒事故、傷害重症度（ＧＣＳ）：中等度、ＣＴ：脳浮腫；てんかんなし（ＴＢＩ後：８日）；前回の臨床評価に基づき、神経疾患の既往なし、認知機能低下の徴候なし；原発性神経変性病理の徴候なし、外傷性（ｔｒａｕｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ）びまん性軸索損傷の徴候なし。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｃは、（図７Ａ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｄは、（図７Ｂ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｅは、（図７Ａ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｆ～７Ｉは、（図７Ｂ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ（図７Ｆ～７Ｇ）及び４０μｍ（図７Ｈ～７Ｉ）。

【図7D】ＴＢＩを有する患者からの死後脳組織を示し、ＴＢＩの８日後に慢性炎症を示す。図７Ａは、ミクログリア及びマクロファージにおいて発現されるＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体のマーカーであるＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人の対照患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７８歳男性。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｂは、ＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人のＴＢＩ患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７９歳男性；転倒事故、傷害重症度（ＧＣＳ）：中等度、ＣＴ：脳浮腫；てんかんなし（ＴＢＩ後：８日）；前回の臨床評価に基づき、神経疾患の既往なし、認知機能低下の徴候なし；原発性神経変性病理の徴候なし、外傷性（ｔｒａｕｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ）びまん性軸索損傷の徴候なし。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｃは、（図７Ａ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｄは、（図７Ｂ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｅは、（図７Ａ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｆ～７Ｉは、（図７Ｂ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ（図７Ｆ～７Ｇ）及び４０μｍ（図７Ｈ～７Ｉ）。

【図7E】ＴＢＩを有する患者からの死後脳組織を示し、ＴＢＩの８日後に慢性炎症を示す。図７Ａは、ミクログリア及びマクロファージにおいて発現されるＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体のマーカーであるＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人の対照患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７８歳男性。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｂは、ＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人のＴＢＩ患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７９歳男性；転倒事故、傷害重症度（ＧＣＳ）：中等度、ＣＴ：脳浮腫；てんかんなし（ＴＢＩ後：８日）；前回の臨床評価に基づき、神経疾患の既往なし、認知機能低下の徴候なし；原発性神経変性病理の徴候なし、外傷性（ｔｒａｕｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ）びまん性軸索損傷の徴候なし。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｃは、（図７Ａ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｄは、（図７Ｂ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｅは、（図７Ａ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｆ～７Ｉは、（図７Ｂ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ（図７Ｆ～７Ｇ）及び４０μｍ（図７Ｈ～７Ｉ）。

【図7F】ＴＢＩを有する患者からの死後脳組織を示し、ＴＢＩの８日後に慢性炎症を示す。図７Ａは、ミクログリア及びマクロファージにおいて発現されるＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体のマーカーであるＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人の対照患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７８歳男性。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｂは、ＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人のＴＢＩ患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７９歳男性；転倒事故、傷害重症度（ＧＣＳ）：中等度、ＣＴ：脳浮腫；てんかんなし（ＴＢＩ後：８日）；前回の臨床評価に基づき、神経疾患の既往なし、認知機能低下の徴候なし；原発性神経変性病理の徴候なし、外傷性（ｔｒａｕｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ）びまん性軸索損傷の徴候なし。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｃは、（図７Ａ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｄは、（図７Ｂ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｅは、（図７Ａ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｆ～７Ｉは、（図７Ｂ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ（図７Ｆ～７Ｇ）及び４０μｍ（図７Ｈ～７Ｉ）。

【図7G】ＴＢＩを有する患者からの死後脳組織を示し、ＴＢＩの８日後に慢性炎症を示す。図７Ａは、ミクログリア及びマクロファージにおいて発現されるＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体のマーカーであるＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人の対照患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７８歳男性。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｂは、ＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人のＴＢＩ患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７９歳男性；転倒事故、傷害重症度（ＧＣＳ）：中等度、ＣＴ：脳浮腫；てんかんなし（ＴＢＩ後：８日）；前回の臨床評価に基づき、神経疾患の既往なし、認知機能低下の徴候なし；原発性神経変性病理の徴候なし、外傷性（ｔｒａｕｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ）びまん性軸索損傷の徴候なし。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｃは、（図７Ａ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｄは、（図７Ｂ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｅは、（図７Ａ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｆ～７Ｉは、（図７Ｂ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ（図７Ｆ～７Ｇ）及び４０μｍ（図７Ｈ～７Ｉ）。

【図7H】ＴＢＩを有する患者からの死後脳組織を示し、ＴＢＩの８日後に慢性炎症を示す。図７Ａは、ミクログリア及びマクロファージにおいて発現されるＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体のマーカーであるＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人の対照患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７８歳男性。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｂは、ＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人のＴＢＩ患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７９歳男性；転倒事故、傷害重症度（ＧＣＳ）：中等度、ＣＴ：脳浮腫；てんかんなし（ＴＢＩ後：８日）；前回の臨床評価に基づき、神経疾患の既往なし、認知機能低下の徴候なし；原発性神経変性病理の徴候なし、外傷性（ｔｒａｕｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ）びまん性軸索損傷の徴候なし。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｃは、（図７Ａ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｄは、（図７Ｂ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｅは、（図７Ａ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｆ～７Ｉは、（図７Ｂ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ（図７Ｆ～７Ｇ）及び４０μｍ（図７Ｈ～７Ｉ）。

【図7I】ＴＢＩを有する患者からの死後脳組織を示し、ＴＢＩの８日後に慢性炎症を示す。図７Ａは、ミクログリア及びマクロファージにおいて発現されるＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体のマーカーであるＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人の対照患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７８歳男性。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｂは、ＨＬＡ－ＤＲについて染色された１人のＴＢＩ患者からの死後脳組織を示す。症例情報：７９歳男性；転倒事故、傷害重症度（ＧＣＳ）：中等度、ＣＴ：脳浮腫；てんかんなし（ＴＢＩ後：８日）；前回の臨床評価に基づき、神経疾患の既往なし、認知機能低下の徴候なし；原発性神経変性病理の徴候なし、外傷性（ｔｒａｕｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄ）びまん性軸索損傷の徴候なし。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｃは、（図７Ａ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｄは、（図７Ｂ）と同じであるが、ＧＦＡＰについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｅは、（図７Ａ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ。図７Ｆ～７Ｉは、（図７Ｂ）と同じであるが、Ｃ１ｑについて染色されたものを示す。スケールバー、１ｃｍ（図７Ｆ～７Ｇ）及び４０μｍ（図７Ｈ～７Ｉ）。

【図8A】単一核ＲＮＡ配列決定が、ｍＴＢＩの３週間後のシャム視床組織とｍＴＢＩ視床組織との発現に大きな差異を示さないことを示す。図８Ａは、図３Ｂにおける各クラスターを定義するために使用される主要な系統遺伝子のバイオリンプロットを示す。図８Ｂは、複製物によって着色されたシャム及びｍＴＢＩ核のＵＭＡＰプロットを示す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図８Ｃは、Ａにおいて定義される系統の各々における、シャム（ｎ＝４，９０８）及びｍＴＢＩ（ｎ＝４，３３８）視床組織について収集された核のパーセントを示す。各系統の回収は、複製物間で類似している。各ドットは、生物学的複製物を表す。

【図8B】単一核ＲＮＡ配列決定が、ｍＴＢＩの３週間後のシャム視床組織とｍＴＢＩ視床組織との発現に大きな差異を示さないことを示す。図８Ａは、図３Ｂにおける各クラスターを定義するために使用される主要な系統遺伝子のバイオリンプロットを示す。図８Ｂは、複製物によって着色されたシャム及びｍＴＢＩ核のＵＭＡＰプロットを示す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図８Ｃは、Ａにおいて定義される系統の各々における、シャム（ｎ＝４，９０８）及びｍＴＢＩ（ｎ＝４，３３８）視床組織について収集された核のパーセントを示す。各系統の回収は、複製物間で類似している。各ドットは、生物学的複製物を表す。

【図8C】単一核ＲＮＡ配列決定が、ｍＴＢＩの３週間後のシャム視床組織とｍＴＢＩ視床組織との発現に大きな差異を示さないことを示す。図８Ａは、図３Ｂにおける各クラスターを定義するために使用される主要な系統遺伝子のバイオリンプロットを示す。図８Ｂは、複製物によって着色されたシャム及びｍＴＢＩ核のＵＭＡＰプロットを示す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図８Ｃは、Ａにおいて定義される系統の各々における、シャム（ｎ＝４，９０８）及びｍＴＢＩ（ｎ＝４，３３８）視床組織について収集された核のパーセントを示す。各系統の回収は、複製物間で類似している。各ドットは、生物学的複製物を表す。

【図9A】Ｃ１ｑａ及びＣ４ｂが、ｍＴＢＩの３週間後に視床組織において見出される主要な補体マーカーであることを示す。図９Ａは、ウイルコクソンの順位和検定（各バイオリンプロットの上に示される調整されたｐ値）で分析したシャム及びｍＴＢＩにおける、ミクログリアにおけるＡｐｏｅ及びＣｓｔ３の発現レベル、ならびにアストロサイトにおけるＡｐｏｅ及びＣｌｕの発現レベルを示す。図９Ｂは、シャム及びｍＴＢＩ視床組織からプロファイリングされた細胞の主要系統における補体系成分のバイオリンプロットを示す。図９Ｃは、オリゴデンドロサイト系統のサブクラスター化を示す。図９Ｄは、補完によってレンダリングされた、Ｃ４ｂの発現によって着色されたと同じ（図９Ｃ）ＵＭＡＰを示す。図９Ｅは、ウイルコクソンの順位和検定で分析した、シャム及びｍＴＢＩオリゴデンドロサイトサブクラスターにおけるＣ４ｂ発現のバイオリンプロットを示す。Ｃ４ｂは、オリゴデンドロサイトクラスター３（オリゴ３）において差次的に発現する。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図９Ｆは、成熟したオリゴデンドロサイトに関連するＫｉｒｒｅｌ３及びＯｐａｌｉｎ、分化するオリゴデンドロサイトに関連するＥｎｐｐ６、及びオリゴデンドロサイト成熟に関連するアラルミンであるＩｌ３３の発現によって着色された、（図９Ｃ）におけるものと同じＵＭＡＰを示す。図９Ｇは、バルク細胞質ＲＮＡから抽出したＲＮＡからのＣ２発現のＲＴ－ｑＰＣＲを示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。図９Ｈは、核ＲＮＡ配列データ及び細胞質ＲＮＡ ｑＰＣＲからの全ての補体タンパク質の発現をまとめた表を示す。

【図9B】Ｃ１ｑａ及びＣ４ｂが、ｍＴＢＩの３週間後に視床組織において見出される主要な補体マーカーであることを示す。図９Ａは、ウイルコクソンの順位和検定（各バイオリンプロットの上に示される調整されたｐ値）で分析したシャム及びｍＴＢＩにおける、ミクログリアにおけるＡｐｏｅ及びＣｓｔ３の発現レベル、ならびにアストロサイトにおけるＡｐｏｅ及びＣｌｕの発現レベルを示す。図９Ｂは、シャム及びｍＴＢＩ視床組織からプロファイリングされた細胞の主要系統における補体系成分のバイオリンプロットを示す。図９Ｃは、オリゴデンドロサイト系統のサブクラスター化を示す。図９Ｄは、補完によってレンダリングされた、Ｃ４ｂの発現によって着色されたと同じ（図９Ｃ）ＵＭＡＰを示す。図９Ｅは、ウイルコクソンの順位和検定で分析した、シャム及びｍＴＢＩオリゴデンドロサイトサブクラスターにおけるＣ４ｂ発現のバイオリンプロットを示す。Ｃ４ｂは、オリゴデンドロサイトクラスター３（オリゴ３）において差次的に発現する。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図９Ｆは、成熟したオリゴデンドロサイトに関連するＫｉｒｒｅｌ３及びＯｐａｌｉｎ、分化するオリゴデンドロサイトに関連するＥｎｐｐ６、及びオリゴデンドロサイト成熟に関連するアラルミンであるＩｌ３３の発現によって着色された、（図９Ｃ）におけるものと同じＵＭＡＰを示す。図９Ｇは、バルク細胞質ＲＮＡから抽出したＲＮＡからのＣ２発現のＲＴ－ｑＰＣＲを示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。図９Ｈは、核ＲＮＡ配列データ及び細胞質ＲＮＡ ｑＰＣＲからの全ての補体タンパク質の発現をまとめた表を示す。

【図9C】Ｃ１ｑａ及びＣ４ｂが、ｍＴＢＩの３週間後に視床組織において見出される主要な補体マーカーであることを示す。図９Ａは、ウイルコクソンの順位和検定（各バイオリンプロットの上に示される調整されたｐ値）で分析したシャム及びｍＴＢＩにおける、ミクログリアにおけるＡｐｏｅ及びＣｓｔ３の発現レベル、ならびにアストロサイトにおけるＡｐｏｅ及びＣｌｕの発現レベルを示す。図９Ｂは、シャム及びｍＴＢＩ視床組織からプロファイリングされた細胞の主要系統における補体系成分のバイオリンプロットを示す。図９Ｃは、オリゴデンドロサイト系統のサブクラスター化を示す。図９Ｄは、補完によってレンダリングされた、Ｃ４ｂの発現によって着色されたと同じ（図９Ｃ）ＵＭＡＰを示す。図９Ｅは、ウイルコクソンの順位和検定で分析した、シャム及びｍＴＢＩオリゴデンドロサイトサブクラスターにおけるＣ４ｂ発現のバイオリンプロットを示す。Ｃ４ｂは、オリゴデンドロサイトクラスター３（オリゴ３）において差次的に発現する。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図９Ｆは、成熟したオリゴデンドロサイトに関連するＫｉｒｒｅｌ３及びＯｐａｌｉｎ、分化するオリゴデンドロサイトに関連するＥｎｐｐ６、及びオリゴデンドロサイト成熟に関連するアラルミンであるＩｌ３３の発現によって着色された、（図９Ｃ）におけるものと同じＵＭＡＰを示す。図９Ｇは、バルク細胞質ＲＮＡから抽出したＲＮＡからのＣ２発現のＲＴ－ｑＰＣＲを示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。図９Ｈは、核ＲＮＡ配列データ及び細胞質ＲＮＡ ｑＰＣＲからの全ての補体タンパク質の発現をまとめた表を示す。

【図9D】Ｃ１ｑａ及びＣ４ｂが、ｍＴＢＩの３週間後に視床組織において見出される主要な補体マーカーであることを示す。図９Ａは、ウイルコクソンの順位和検定（各バイオリンプロットの上に示される調整されたｐ値）で分析したシャム及びｍＴＢＩにおける、ミクログリアにおけるＡｐｏｅ及びＣｓｔ３の発現レベル、ならびにアストロサイトにおけるＡｐｏｅ及びＣｌｕの発現レベルを示す。図９Ｂは、シャム及びｍＴＢＩ視床組織からプロファイリングされた細胞の主要系統における補体系成分のバイオリンプロットを示す。図９Ｃは、オリゴデンドロサイト系統のサブクラスター化を示す。図９Ｄは、補完によってレンダリングされた、Ｃ４ｂの発現によって着色されたと同じ（図９Ｃ）ＵＭＡＰを示す。図９Ｅは、ウイルコクソンの順位和検定で分析した、シャム及びｍＴＢＩオリゴデンドロサイトサブクラスターにおけるＣ４ｂ発現のバイオリンプロットを示す。Ｃ４ｂは、オリゴデンドロサイトクラスター３（オリゴ３）において差次的に発現する。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図９Ｆは、成熟したオリゴデンドロサイトに関連するＫｉｒｒｅｌ３及びＯｐａｌｉｎ、分化するオリゴデンドロサイトに関連するＥｎｐｐ６、及びオリゴデンドロサイト成熟に関連するアラルミンであるＩｌ３３の発現によって着色された、（図９Ｃ）におけるものと同じＵＭＡＰを示す。図９Ｇは、バルク細胞質ＲＮＡから抽出したＲＮＡからのＣ２発現のＲＴ－ｑＰＣＲを示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。図９Ｈは、核ＲＮＡ配列データ及び細胞質ＲＮＡ ｑＰＣＲからの全ての補体タンパク質の発現をまとめた表を示す。

【図9E】Ｃ１ｑａ及びＣ４ｂが、ｍＴＢＩの３週間後に視床組織において見出される主要な補体マーカーであることを示す。図９Ａは、ウイルコクソンの順位和検定（各バイオリンプロットの上に示される調整されたｐ値）で分析したシャム及びｍＴＢＩにおける、ミクログリアにおけるＡｐｏｅ及びＣｓｔ３の発現レベル、ならびにアストロサイトにおけるＡｐｏｅ及びＣｌｕの発現レベルを示す。図９Ｂは、シャム及びｍＴＢＩ視床組織からプロファイリングされた細胞の主要系統における補体系成分のバイオリンプロットを示す。図９Ｃは、オリゴデンドロサイト系統のサブクラスター化を示す。図９Ｄは、補完によってレンダリングされた、Ｃ４ｂの発現によって着色されたと同じ（図９Ｃ）ＵＭＡＰを示す。図９Ｅは、ウイルコクソンの順位和検定で分析した、シャム及びｍＴＢＩオリゴデンドロサイトサブクラスターにおけるＣ４ｂ発現のバイオリンプロットを示す。Ｃ４ｂは、オリゴデンドロサイトクラスター３（オリゴ３）において差次的に発現する。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図９Ｆは、成熟したオリゴデンドロサイトに関連するＫｉｒｒｅｌ３及びＯｐａｌｉｎ、分化するオリゴデンドロサイトに関連するＥｎｐｐ６、及びオリゴデンドロサイト成熟に関連するアラルミンであるＩｌ３３の発現によって着色された、（図９Ｃ）におけるものと同じＵＭＡＰを示す。図９Ｇは、バルク細胞質ＲＮＡから抽出したＲＮＡからのＣ２発現のＲＴ－ｑＰＣＲを示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。図９Ｈは、核ＲＮＡ配列データ及び細胞質ＲＮＡ ｑＰＣＲからの全ての補体タンパク質の発現をまとめた表を示す。

【図9F】Ｃ１ｑａ及びＣ４ｂが、ｍＴＢＩの３週間後に視床組織において見出される主要な補体マーカーであることを示す。図９Ａは、ウイルコクソンの順位和検定（各バイオリンプロットの上に示される調整されたｐ値）で分析したシャム及びｍＴＢＩにおける、ミクログリアにおけるＡｐｏｅ及びＣｓｔ３の発現レベル、ならびにアストロサイトにおけるＡｐｏｅ及びＣｌｕの発現レベルを示す。図９Ｂは、シャム及びｍＴＢＩ視床組織からプロファイリングされた細胞の主要系統における補体系成分のバイオリンプロットを示す。図９Ｃは、オリゴデンドロサイト系統のサブクラスター化を示す。図９Ｄは、補完によってレンダリングされた、Ｃ４ｂの発現によって着色されたと同じ（図９Ｃ）ＵＭＡＰを示す。図９Ｅは、ウイルコクソンの順位和検定で分析した、シャム及びｍＴＢＩオリゴデンドロサイトサブクラスターにおけるＣ４ｂ発現のバイオリンプロットを示す。Ｃ４ｂは、オリゴデンドロサイトクラスター３（オリゴ３）において差次的に発現する。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図９Ｆは、成熟したオリゴデンドロサイトに関連するＫｉｒｒｅｌ３及びＯｐａｌｉｎ、分化するオリゴデンドロサイトに関連するＥｎｐｐ６、及びオリゴデンドロサイト成熟に関連するアラルミンであるＩｌ３３の発現によって着色された、（図９Ｃ）におけるものと同じＵＭＡＰを示す。図９Ｇは、バルク細胞質ＲＮＡから抽出したＲＮＡからのＣ２発現のＲＴ－ｑＰＣＲを示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。図９Ｈは、核ＲＮＡ配列データ及び細胞質ＲＮＡ ｑＰＣＲからの全ての補体タンパク質の発現をまとめた表を示す。

【図9G】Ｃ１ｑａ及びＣ４ｂが、ｍＴＢＩの３週間後に視床組織において見出される主要な補体マーカーであることを示す。図９Ａは、ウイルコクソンの順位和検定（各バイオリンプロットの上に示される調整されたｐ値）で分析したシャム及びｍＴＢＩにおける、ミクログリアにおけるＡｐｏｅ及びＣｓｔ３の発現レベル、ならびにアストロサイトにおけるＡｐｏｅ及びＣｌｕの発現レベルを示す。図９Ｂは、シャム及びｍＴＢＩ視床組織からプロファイリングされた細胞の主要系統における補体系成分のバイオリンプロットを示す。図９Ｃは、オリゴデンドロサイト系統のサブクラスター化を示す。図９Ｄは、補完によってレンダリングされた、Ｃ４ｂの発現によって着色されたと同じ（図９Ｃ）ＵＭＡＰを示す。図９Ｅは、ウイルコクソンの順位和検定で分析した、シャム及びｍＴＢＩオリゴデンドロサイトサブクラスターにおけるＣ４ｂ発現のバイオリンプロットを示す。Ｃ４ｂは、オリゴデンドロサイトクラスター３（オリゴ３）において差次的に発現する。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図９Ｆは、成熟したオリゴデンドロサイトに関連するＫｉｒｒｅｌ３及びＯｐａｌｉｎ、分化するオリゴデンドロサイトに関連するＥｎｐｐ６、及びオリゴデンドロサイト成熟に関連するアラルミンであるＩｌ３３の発現によって着色された、（図９Ｃ）におけるものと同じＵＭＡＰを示す。図９Ｇは、バルク細胞質ＲＮＡから抽出したＲＮＡからのＣ２発現のＲＴ－ｑＰＣＲを示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。図９Ｈは、核ＲＮＡ配列データ及び細胞質ＲＮＡ ｑＰＣＲからの全ての補体タンパク質の発現をまとめた表を示す。

【図9H】Ｃ１ｑａ及びＣ４ｂが、ｍＴＢＩの３週間後に視床組織において見出される主要な補体マーカーであることを示す。図９Ａは、ウイルコクソンの順位和検定（各バイオリンプロットの上に示される調整されたｐ値）で分析したシャム及びｍＴＢＩにおける、ミクログリアにおけるＡｐｏｅ及びＣｓｔ３の発現レベル、ならびにアストロサイトにおけるＡｐｏｅ及びＣｌｕの発現レベルを示す。図９Ｂは、シャム及びｍＴＢＩ視床組織からプロファイリングされた細胞の主要系統における補体系成分のバイオリンプロットを示す。図９Ｃは、オリゴデンドロサイト系統のサブクラスター化を示す。図９Ｄは、補完によってレンダリングされた、Ｃ４ｂの発現によって着色されたと同じ（図９Ｃ）ＵＭＡＰを示す。図９Ｅは、ウイルコクソンの順位和検定で分析した、シャム及びｍＴＢＩオリゴデンドロサイトサブクラスターにおけるＣ４ｂ発現のバイオリンプロットを示す。Ｃ４ｂは、オリゴデンドロサイトクラスター３（オリゴ３）において差次的に発現する。分析は、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスをまとめて表す、両方の技術的複製を組み合わせる。各ドットは、単一核を表す。図９Ｆは、成熟したオリゴデンドロサイトに関連するＫｉｒｒｅｌ３及びＯｐａｌｉｎ、分化するオリゴデンドロサイトに関連するＥｎｐｐ６、及びオリゴデンドロサイト成熟に関連するアラルミンであるＩｌ３３の発現によって着色された、（図９Ｃ）におけるものと同じＵＭＡＰを示す。図９Ｇは、バルク細胞質ＲＮＡから抽出したＲＮＡからのＣ２発現のＲＴ－ｑＰＣＲを示す。各ドットは、１つの複製物から抽出されたバルクＲＮＡを表す（ｎ＝２つの生物学的プール、各点は、ｎ＝３つの技術的複製物を表す）。第１の複製物は、５匹のシャムマウス及び６匹のｍＴＢＩマウスを含み、第２の複製物は、４匹のシャムマウス及び４匹のｍＴＢＩマウスを含む。図９Ｈは、核ＲＮＡ配列データ及び細胞質ＲＮＡ ｑＰＣＲからの全ての補体タンパク質の発現をまとめた表を示す。

【図10A】単一核ＲＮＡ配列決定が視床ＧＡＢＡ作動性ニューロン内の発現勾配を示すが、シャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間には差異がほとんどないことを示す。図１０Ａは、補完によってレンダリングされた、Ｓｌｃ１７ａ６（左）及びＳｌｃ１７ａ７（右）の発現によって着色された、全てのプロファイルされた核（シャム及びｍＴＢＩ）のＵＭＡＰを示す。破線円内の核を、ＧＡＢＡ作動性ニューロンのサブクラスターに対して選択した。図１０Ｂは、新しいサブクラスターによって着色されたＡ）からのＧＡＢＡ作動性ニューロンのＵＭＡＰ投影を示す。図１０Ｃは、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロン核の総数における各サブクラスターのパーセンテージを示す。各点は、２つの生物学的複製物のうちの１つを表す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図１０Ｄは、（上）補完による、Ｅｃｅｌ１及びＳｐｐ１発現によって着色されたＵＭＡＰ投影を示す。「オーバーラップ」パネルは、２つのパネルを左側に組み合わせ、２つの遺伝子間に強いオーバーラップを有する核を含む。（下）上と同じ、Ｓｓｔ及びＰｖａｌｂを含む。灰色の円は、発現を有しない核を表す。図１０Ｅは、（図１０Ｂ）におけるサブクラスターからのＳｌｃ１７ａ７、Ｇａｄ２、Ｐｖａｌｂ及びＳｓｔのバイオリンプロットを示す。図１０Ｆは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンサブクラスターにおけるニューロン機能に関連するいくつかの遺伝子のヒートマップを示す。各遺伝子の大まかなカテゴリーが、右側に注釈されている。色は、全てのサブクラスターの平均に対して正規化されたスケーリングされた表現を表す。サブクラスターは、カドヘリンファミリー（Ｃｄｈ１２、Ｃｄｈ１３、Ｃｄｈ１８）及びプロトカドヘリンファミリーの遺伝子、セマフォリン遺伝子（Ｓｅｍａ５ｂ、Ｓｅｍａ３ｅ）、ならびに軸索誘導及び成長に関連するエフリン受容体ファミリー遺伝子（Ｅｐｈａ５、Ｅｐｈａ６）を含む、接着及び誘導分子の発現の点で異なる。サブクラスターはまた、グルタミン酸受容体（Ｇｒｉａ１、Ｇｒｉｎ２ａ、Ｇｒｉｋ４）、細胞外マトリックスタンパク質（Ｃｏｌ１２ａ１、Ｃｏｌ２５ａ１）、及びＰｖａｌｂ陽性ニューロンを調節すると考えられる上皮成長因子ファミリーメンバーであるＮｒｇ１等の細胞シグナル伝達分子の発現の点でも異なっていた。図１０Ｇは、全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンにわたってシャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間で差異的に発現される遺伝子の火山プロットを示す。灰色の線は、有意性カットオフ基準を示す。選択された数のミトコンドリア遺伝子が標識される。

【図10B】単一核ＲＮＡ配列決定が視床ＧＡＢＡ作動性ニューロン内の発現勾配を示すが、シャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間には差異がほとんどないことを示す。図１０Ａは、補完によってレンダリングされた、Ｓｌｃ１７ａ６（左）及びＳｌｃ１７ａ７（右）の発現によって着色された、全てのプロファイルされた核（シャム及びｍＴＢＩ）のＵＭＡＰを示す。破線円内の核を、ＧＡＢＡ作動性ニューロンのサブクラスターに対して選択した。図１０Ｂは、新しいサブクラスターによって着色されたＡ）からのＧＡＢＡ作動性ニューロンのＵＭＡＰ投影を示す。図１０Ｃは、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロン核の総数における各サブクラスターのパーセンテージを示す。各点は、２つの生物学的複製物のうちの１つを表す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図１０Ｄは、（上）補完による、Ｅｃｅｌ１及びＳｐｐ１発現によって着色されたＵＭＡＰ投影を示す。「オーバーラップ」パネルは、２つのパネルを左側に組み合わせ、２つの遺伝子間に強いオーバーラップを有する核を含む。（下）上と同じ、Ｓｓｔ及びＰｖａｌｂを含む。灰色の円は、発現を有しない核を表す。図１０Ｅは、（図１０Ｂ）におけるサブクラスターからのＳｌｃ１７ａ７、Ｇａｄ２、Ｐｖａｌｂ及びＳｓｔのバイオリンプロットを示す。図１０Ｆは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンサブクラスターにおけるニューロン機能に関連するいくつかの遺伝子のヒートマップを示す。各遺伝子の大まかなカテゴリーが、右側に注釈されている。色は、全てのサブクラスターの平均に対して正規化されたスケーリングされた表現を表す。サブクラスターは、カドヘリンファミリー（Ｃｄｈ１２、Ｃｄｈ１３、Ｃｄｈ１８）及びプロトカドヘリンファミリーの遺伝子、セマフォリン遺伝子（Ｓｅｍａ５ｂ、Ｓｅｍａ３ｅ）、ならびに軸索誘導及び成長に関連するエフリン受容体ファミリー遺伝子（Ｅｐｈａ５、Ｅｐｈａ６）を含む、接着及び誘導分子の発現の点で異なる。サブクラスターはまた、グルタミン酸受容体（Ｇｒｉａ１、Ｇｒｉｎ２ａ、Ｇｒｉｋ４）、細胞外マトリックスタンパク質（Ｃｏｌ１２ａ１、Ｃｏｌ２５ａ１）、及びＰｖａｌｂ陽性ニューロンを調節すると考えられる上皮成長因子ファミリーメンバーであるＮｒｇ１等の細胞シグナル伝達分子の発現の点でも異なっていた。図１０Ｇは、全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンにわたってシャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間で差異的に発現される遺伝子の火山プロットを示す。灰色の線は、有意性カットオフ基準を示す。選択された数のミトコンドリア遺伝子が標識される。

【図10C】単一核ＲＮＡ配列決定が視床ＧＡＢＡ作動性ニューロン内の発現勾配を示すが、シャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間には差異がほとんどないことを示す。図１０Ａは、補完によってレンダリングされた、Ｓｌｃ１７ａ６（左）及びＳｌｃ１７ａ７（右）の発現によって着色された、全てのプロファイルされた核（シャム及びｍＴＢＩ）のＵＭＡＰを示す。破線円内の核を、ＧＡＢＡ作動性ニューロンのサブクラスターに対して選択した。図１０Ｂは、新しいサブクラスターによって着色されたＡ）からのＧＡＢＡ作動性ニューロンのＵＭＡＰ投影を示す。図１０Ｃは、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロン核の総数における各サブクラスターのパーセンテージを示す。各点は、２つの生物学的複製物のうちの１つを表す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図１０Ｄは、（上）補完による、Ｅｃｅｌ１及びＳｐｐ１発現によって着色されたＵＭＡＰ投影を示す。「オーバーラップ」パネルは、２つのパネルを左側に組み合わせ、２つの遺伝子間に強いオーバーラップを有する核を含む。（下）上と同じ、Ｓｓｔ及びＰｖａｌｂを含む。灰色の円は、発現を有しない核を表す。図１０Ｅは、（図１０Ｂ）におけるサブクラスターからのＳｌｃ１７ａ７、Ｇａｄ２、Ｐｖａｌｂ及びＳｓｔのバイオリンプロットを示す。図１０Ｆは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンサブクラスターにおけるニューロン機能に関連するいくつかの遺伝子のヒートマップを示す。各遺伝子の大まかなカテゴリーが、右側に注釈されている。色は、全てのサブクラスターの平均に対して正規化されたスケーリングされた表現を表す。サブクラスターは、カドヘリンファミリー（Ｃｄｈ１２、Ｃｄｈ１３、Ｃｄｈ１８）及びプロトカドヘリンファミリーの遺伝子、セマフォリン遺伝子（Ｓｅｍａ５ｂ、Ｓｅｍａ３ｅ）、ならびに軸索誘導及び成長に関連するエフリン受容体ファミリー遺伝子（Ｅｐｈａ５、Ｅｐｈａ６）を含む、接着及び誘導分子の発現の点で異なる。サブクラスターはまた、グルタミン酸受容体（Ｇｒｉａ１、Ｇｒｉｎ２ａ、Ｇｒｉｋ４）、細胞外マトリックスタンパク質（Ｃｏｌ１２ａ１、Ｃｏｌ２５ａ１）、及びＰｖａｌｂ陽性ニューロンを調節すると考えられる上皮成長因子ファミリーメンバーであるＮｒｇ１等の細胞シグナル伝達分子の発現の点でも異なっていた。図１０Ｇは、全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンにわたってシャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間で差異的に発現される遺伝子の火山プロットを示す。灰色の線は、有意性カットオフ基準を示す。選択された数のミトコンドリア遺伝子が標識される。

【図10D-1】単一核ＲＮＡ配列決定が視床ＧＡＢＡ作動性ニューロン内の発現勾配を示すが、シャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間には差異がほとんどないことを示す。図１０Ａは、補完によってレンダリングされた、Ｓｌｃ１７ａ６（左）及びＳｌｃ１７ａ７（右）の発現によって着色された、全てのプロファイルされた核（シャム及びｍＴＢＩ）のＵＭＡＰを示す。破線円内の核を、ＧＡＢＡ作動性ニューロンのサブクラスターに対して選択した。図１０Ｂは、新しいサブクラスターによって着色されたＡ）からのＧＡＢＡ作動性ニューロンのＵＭＡＰ投影を示す。図１０Ｃは、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロン核の総数における各サブクラスターのパーセンテージを示す。各点は、２つの生物学的複製物のうちの１つを表す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図１０Ｄは、（上）補完による、Ｅｃｅｌ１及びＳｐｐ１発現によって着色されたＵＭＡＰ投影を示す。「オーバーラップ」パネルは、２つのパネルを左側に組み合わせ、２つの遺伝子間に強いオーバーラップを有する核を含む。（下）上と同じ、Ｓｓｔ及びＰｖａｌｂを含む。灰色の円は、発現を有しない核を表す。図１０Ｅは、（図１０Ｂ）におけるサブクラスターからのＳｌｃ１７ａ７、Ｇａｄ２、Ｐｖａｌｂ及びＳｓｔのバイオリンプロットを示す。図１０Ｆは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンサブクラスターにおけるニューロン機能に関連するいくつかの遺伝子のヒートマップを示す。各遺伝子の大まかなカテゴリーが、右側に注釈されている。色は、全てのサブクラスターの平均に対して正規化されたスケーリングされた表現を表す。サブクラスターは、カドヘリンファミリー（Ｃｄｈ１２、Ｃｄｈ１３、Ｃｄｈ１８）及びプロトカドヘリンファミリーの遺伝子、セマフォリン遺伝子（Ｓｅｍａ５ｂ、Ｓｅｍａ３ｅ）、ならびに軸索誘導及び成長に関連するエフリン受容体ファミリー遺伝子（Ｅｐｈａ５、Ｅｐｈａ６）を含む、接着及び誘導分子の発現の点で異なる。サブクラスターはまた、グルタミン酸受容体（Ｇｒｉａ１、Ｇｒｉｎ２ａ、Ｇｒｉｋ４）、細胞外マトリックスタンパク質（Ｃｏｌ１２ａ１、Ｃｏｌ２５ａ１）、及びＰｖａｌｂ陽性ニューロンを調節すると考えられる上皮成長因子ファミリーメンバーであるＮｒｇ１等の細胞シグナル伝達分子の発現の点でも異なっていた。図１０Ｇは、全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンにわたってシャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間で差異的に発現される遺伝子の火山プロットを示す。灰色の線は、有意性カットオフ基準を示す。選択された数のミトコンドリア遺伝子が標識される。

【図10D-2】単一核ＲＮＡ配列決定が視床ＧＡＢＡ作動性ニューロン内の発現勾配を示すが、シャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間には差異がほとんどないことを示す。図１０Ａは、補完によってレンダリングされた、Ｓｌｃ１７ａ６（左）及びＳｌｃ１７ａ７（右）の発現によって着色された、全てのプロファイルされた核（シャム及びｍＴＢＩ）のＵＭＡＰを示す。破線円内の核を、ＧＡＢＡ作動性ニューロンのサブクラスターに対して選択した。図１０Ｂは、新しいサブクラスターによって着色されたＡ）からのＧＡＢＡ作動性ニューロンのＵＭＡＰ投影を示す。図１０Ｃは、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロン核の総数における各サブクラスターのパーセンテージを示す。各点は、２つの生物学的複製物のうちの１つを表す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図１０Ｄは、（上）補完による、Ｅｃｅｌ１及びＳｐｐ１発現によって着色されたＵＭＡＰ投影を示す。「オーバーラップ」パネルは、２つのパネルを左側に組み合わせ、２つの遺伝子間に強いオーバーラップを有する核を含む。（下）上と同じ、Ｓｓｔ及びＰｖａｌｂを含む。灰色の円は、発現を有しない核を表す。図１０Ｅは、（図１０Ｂ）におけるサブクラスターからのＳｌｃ１７ａ７、Ｇａｄ２、Ｐｖａｌｂ及びＳｓｔのバイオリンプロットを示す。図１０Ｆは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンサブクラスターにおけるニューロン機能に関連するいくつかの遺伝子のヒートマップを示す。各遺伝子の大まかなカテゴリーが、右側に注釈されている。色は、全てのサブクラスターの平均に対して正規化されたスケーリングされた表現を表す。サブクラスターは、カドヘリンファミリー（Ｃｄｈ１２、Ｃｄｈ１３、Ｃｄｈ１８）及びプロトカドヘリンファミリーの遺伝子、セマフォリン遺伝子（Ｓｅｍａ５ｂ、Ｓｅｍａ３ｅ）、ならびに軸索誘導及び成長に関連するエフリン受容体ファミリー遺伝子（Ｅｐｈａ５、Ｅｐｈａ６）を含む、接着及び誘導分子の発現の点で異なる。サブクラスターはまた、グルタミン酸受容体（Ｇｒｉａ１、Ｇｒｉｎ２ａ、Ｇｒｉｋ４）、細胞外マトリックスタンパク質（Ｃｏｌ１２ａ１、Ｃｏｌ２５ａ１）、及びＰｖａｌｂ陽性ニューロンを調節すると考えられる上皮成長因子ファミリーメンバーであるＮｒｇ１等の細胞シグナル伝達分子の発現の点でも異なっていた。図１０Ｇは、全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンにわたってシャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間で差異的に発現される遺伝子の火山プロットを示す。灰色の線は、有意性カットオフ基準を示す。選択された数のミトコンドリア遺伝子が標識される。

【図10D-3】単一核ＲＮＡ配列決定が視床ＧＡＢＡ作動性ニューロン内の発現勾配を示すが、シャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間には差異がほとんどないことを示す。図１０Ａは、補完によってレンダリングされた、Ｓｌｃ１７ａ６（左）及びＳｌｃ１７ａ７（右）の発現によって着色された、全てのプロファイルされた核（シャム及びｍＴＢＩ）のＵＭＡＰを示す。破線円内の核を、ＧＡＢＡ作動性ニューロンのサブクラスターに対して選択した。図１０Ｂは、新しいサブクラスターによって着色されたＡ）からのＧＡＢＡ作動性ニューロンのＵＭＡＰ投影を示す。図１０Ｃは、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロン核の総数における各サブクラスターのパーセンテージを示す。各点は、２つの生物学的複製物のうちの１つを表す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図１０Ｄは、（上）補完による、Ｅｃｅｌ１及びＳｐｐ１発現によって着色されたＵＭＡＰ投影を示す。「オーバーラップ」パネルは、２つのパネルを左側に組み合わせ、２つの遺伝子間に強いオーバーラップを有する核を含む。（下）上と同じ、Ｓｓｔ及びＰｖａｌｂを含む。灰色の円は、発現を有しない核を表す。図１０Ｅは、（図１０Ｂ）におけるサブクラスターからのＳｌｃ１７ａ７、Ｇａｄ２、Ｐｖａｌｂ及びＳｓｔのバイオリンプロットを示す。図１０Ｆは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンサブクラスターにおけるニューロン機能に関連するいくつかの遺伝子のヒートマップを示す。各遺伝子の大まかなカテゴリーが、右側に注釈されている。色は、全てのサブクラスターの平均に対して正規化されたスケーリングされた表現を表す。サブクラスターは、カドヘリンファミリー（Ｃｄｈ１２、Ｃｄｈ１３、Ｃｄｈ１８）及びプロトカドヘリンファミリーの遺伝子、セマフォリン遺伝子（Ｓｅｍａ５ｂ、Ｓｅｍａ３ｅ）、ならびに軸索誘導及び成長に関連するエフリン受容体ファミリー遺伝子（Ｅｐｈａ５、Ｅｐｈａ６）を含む、接着及び誘導分子の発現の点で異なる。サブクラスターはまた、グルタミン酸受容体（Ｇｒｉａ１、Ｇｒｉｎ２ａ、Ｇｒｉｋ４）、細胞外マトリックスタンパク質（Ｃｏｌ１２ａ１、Ｃｏｌ２５ａ１）、及びＰｖａｌｂ陽性ニューロンを調節すると考えられる上皮成長因子ファミリーメンバーであるＮｒｇ１等の細胞シグナル伝達分子の発現の点でも異なっていた。図１０Ｇは、全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンにわたってシャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間で差異的に発現される遺伝子の火山プロットを示す。灰色の線は、有意性カットオフ基準を示す。選択された数のミトコンドリア遺伝子が標識される。

【図10E】単一核ＲＮＡ配列決定が視床ＧＡＢＡ作動性ニューロン内の発現勾配を示すが、シャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間には差異がほとんどないことを示す。図１０Ａは、補完によってレンダリングされた、Ｓｌｃ１７ａ６（左）及びＳｌｃ１７ａ７（右）の発現によって着色された、全てのプロファイルされた核（シャム及びｍＴＢＩ）のＵＭＡＰを示す。破線円内の核を、ＧＡＢＡ作動性ニューロンのサブクラスターに対して選択した。図１０Ｂは、新しいサブクラスターによって着色されたＡ）からのＧＡＢＡ作動性ニューロンのＵＭＡＰ投影を示す。図１０Ｃは、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロン核の総数における各サブクラスターのパーセンテージを示す。各点は、２つの生物学的複製物のうちの１つを表す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図１０Ｄは、（上）補完による、Ｅｃｅｌ１及びＳｐｐ１発現によって着色されたＵＭＡＰ投影を示す。「オーバーラップ」パネルは、２つのパネルを左側に組み合わせ、２つの遺伝子間に強いオーバーラップを有する核を含む。（下）上と同じ、Ｓｓｔ及びＰｖａｌｂを含む。灰色の円は、発現を有しない核を表す。図１０Ｅは、（図１０Ｂ）におけるサブクラスターからのＳｌｃ１７ａ７、Ｇａｄ２、Ｐｖａｌｂ及びＳｓｔのバイオリンプロットを示す。図１０Ｆは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンサブクラスターにおけるニューロン機能に関連するいくつかの遺伝子のヒートマップを示す。各遺伝子の大まかなカテゴリーが、右側に注釈されている。色は、全てのサブクラスターの平均に対して正規化されたスケーリングされた表現を表す。サブクラスターは、カドヘリンファミリー（Ｃｄｈ１２、Ｃｄｈ１３、Ｃｄｈ１８）及びプロトカドヘリンファミリーの遺伝子、セマフォリン遺伝子（Ｓｅｍａ５ｂ、Ｓｅｍａ３ｅ）、ならびに軸索誘導及び成長に関連するエフリン受容体ファミリー遺伝子（Ｅｐｈａ５、Ｅｐｈａ６）を含む、接着及び誘導分子の発現の点で異なる。サブクラスターはまた、グルタミン酸受容体（Ｇｒｉａ１、Ｇｒｉｎ２ａ、Ｇｒｉｋ４）、細胞外マトリックスタンパク質（Ｃｏｌ１２ａ１、Ｃｏｌ２５ａ１）、及びＰｖａｌｂ陽性ニューロンを調節すると考えられる上皮成長因子ファミリーメンバーであるＮｒｇ１等の細胞シグナル伝達分子の発現の点でも異なっていた。図１０Ｇは、全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンにわたってシャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間で差異的に発現される遺伝子の火山プロットを示す。灰色の線は、有意性カットオフ基準を示す。選択された数のミトコンドリア遺伝子が標識される。

【図10F】単一核ＲＮＡ配列決定が視床ＧＡＢＡ作動性ニューロン内の発現勾配を示すが、シャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間には差異がほとんどないことを示す。図１０Ａは、補完によってレンダリングされた、Ｓｌｃ１７ａ６（左）及びＳｌｃ１７ａ７（右）の発現によって着色された、全てのプロファイルされた核（シャム及びｍＴＢＩ）のＵＭＡＰを示す。破線円内の核を、ＧＡＢＡ作動性ニューロンのサブクラスターに対して選択した。図１０Ｂは、新しいサブクラスターによって着色されたＡ）からのＧＡＢＡ作動性ニューロンのＵＭＡＰ投影を示す。図１０Ｃは、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロン核の総数における各サブクラスターのパーセンテージを示す。各点は、２つの生物学的複製物のうちの１つを表す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図１０Ｄは、（上）補完による、Ｅｃｅｌ１及びＳｐｐ１発現によって着色されたＵＭＡＰ投影を示す。「オーバーラップ」パネルは、２つのパネルを左側に組み合わせ、２つの遺伝子間に強いオーバーラップを有する核を含む。（下）上と同じ、Ｓｓｔ及びＰｖａｌｂを含む。灰色の円は、発現を有しない核を表す。図１０Ｅは、（図１０Ｂ）におけるサブクラスターからのＳｌｃ１７ａ７、Ｇａｄ２、Ｐｖａｌｂ及びＳｓｔのバイオリンプロットを示す。図１０Ｆは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンサブクラスターにおけるニューロン機能に関連するいくつかの遺伝子のヒートマップを示す。各遺伝子の大まかなカテゴリーが、右側に注釈されている。色は、全てのサブクラスターの平均に対して正規化されたスケーリングされた表現を表す。サブクラスターは、カドヘリンファミリー（Ｃｄｈ１２、Ｃｄｈ１３、Ｃｄｈ１８）及びプロトカドヘリンファミリーの遺伝子、セマフォリン遺伝子（Ｓｅｍａ５ｂ、Ｓｅｍａ３ｅ）、ならびに軸索誘導及び成長に関連するエフリン受容体ファミリー遺伝子（Ｅｐｈａ５、Ｅｐｈａ６）を含む、接着及び誘導分子の発現の点で異なる。サブクラスターはまた、グルタミン酸受容体（Ｇｒｉａ１、Ｇｒｉｎ２ａ、Ｇｒｉｋ４）、細胞外マトリックスタンパク質（Ｃｏｌ１２ａ１、Ｃｏｌ２５ａ１）、及びＰｖａｌｂ陽性ニューロンを調節すると考えられる上皮成長因子ファミリーメンバーであるＮｒｇ１等の細胞シグナル伝達分子の発現の点でも異なっていた。図１０Ｇは、全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンにわたってシャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間で差異的に発現される遺伝子の火山プロットを示す。灰色の線は、有意性カットオフ基準を示す。選択された数のミトコンドリア遺伝子が標識される。

【図10G】単一核ＲＮＡ配列決定が視床ＧＡＢＡ作動性ニューロン内の発現勾配を示すが、シャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間には差異がほとんどないことを示す。図１０Ａは、補完によってレンダリングされた、Ｓｌｃ１７ａ６（左）及びＳｌｃ１７ａ７（右）の発現によって着色された、全てのプロファイルされた核（シャム及びｍＴＢＩ）のＵＭＡＰを示す。破線円内の核を、ＧＡＢＡ作動性ニューロンのサブクラスターに対して選択した。図１０Ｂは、新しいサブクラスターによって着色されたＡ）からのＧＡＢＡ作動性ニューロンのＵＭＡＰ投影を示す。図１０Ｃは、９匹のシャムマウス及び１０匹のｍＴＢＩマウスにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロン核の総数における各サブクラスターのパーセンテージを示す。各点は、２つの生物学的複製物のうちの１つを表す（ｒｅｐ１：ｎ＝５匹のシャムマウス、ｎ＝６匹のｍＴＢＩマウス、ｒｅｐ２：ｎ＝４匹のシャムマウス、ｎ＝４匹のｍＴＢＩマウス）。図１０Ｄは、（上）補完による、Ｅｃｅｌ１及びＳｐｐ１発現によって着色されたＵＭＡＰ投影を示す。「オーバーラップ」パネルは、２つのパネルを左側に組み合わせ、２つの遺伝子間に強いオーバーラップを有する核を含む。（下）上と同じ、Ｓｓｔ及びＰｖａｌｂを含む。灰色の円は、発現を有しない核を表す。図１０Ｅは、（図１０Ｂ）におけるサブクラスターからのＳｌｃ１７ａ７、Ｇａｄ２、Ｐｖａｌｂ及びＳｓｔのバイオリンプロットを示す。図１０Ｆは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンサブクラスターにおけるニューロン機能に関連するいくつかの遺伝子のヒートマップを示す。各遺伝子の大まかなカテゴリーが、右側に注釈されている。色は、全てのサブクラスターの平均に対して正規化されたスケーリングされた表現を表す。サブクラスターは、カドヘリンファミリー（Ｃｄｈ１２、Ｃｄｈ１３、Ｃｄｈ１８）及びプロトカドヘリンファミリーの遺伝子、セマフォリン遺伝子（Ｓｅｍａ５ｂ、Ｓｅｍａ３ｅ）、ならびに軸索誘導及び成長に関連するエフリン受容体ファミリー遺伝子（Ｅｐｈａ５、Ｅｐｈａ６）を含む、接着及び誘導分子の発現の点で異なる。サブクラスターはまた、グルタミン酸受容体（Ｇｒｉａ１、Ｇｒｉｎ２ａ、Ｇｒｉｋ４）、細胞外マトリックスタンパク質（Ｃｏｌ１２ａ１、Ｃｏｌ２５ａ１）、及びＰｖａｌｂ陽性ニューロンを調節すると考えられる上皮成長因子ファミリーメンバーであるＮｒｇ１等の細胞シグナル伝達分子の発現の点でも異なっていた。図１０Ｇは、全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンにわたってシャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間で差異的に発現される遺伝子の火山プロットを示す。灰色の線は、有意性カットオフ基準を示す。選択された数のミトコンドリア遺伝子が標識される。

【図11A】ｍＴＢＩの４週間後に、損傷した皮質及び機能的に接続された視床が慢性炎症及びニューロン損失を示すことを示す。図１１Ａは、Ｃ１ｑ、ＮｅｕＮ、ＧＦＡＰ、及びＩＢＡ１について染色された、Ｓ１（上）、ＶＢ、及びｎＲＴ（中）のクローズアップ画像、ならびにｎＲＴ（下）の共焦点画像を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。ｎＲＴにおける矢印は、共焦点画像の位置を示す。３００μｍ（上／中）及び２０μｍ（下）のスケールバー。図１１Ｂは、シャムマウス及びＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域との蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり４～６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり１～３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図11B】ｍＴＢＩの４週間後に、損傷した皮質及び機能的に接続された視床が慢性炎症及びニューロン損失を示すことを示す。図１１Ａは、Ｃ１ｑ、ＮｅｕＮ、ＧＦＡＰ、及びＩＢＡ１について染色された、Ｓ１（上）、ＶＢ、及びｎＲＴ（中）のクローズアップ画像、ならびにｎＲＴ（下）の共焦点画像を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。ｎＲＴにおける矢印は、共焦点画像の位置を示す。３００μｍ（上／中）及び２０μｍ（下）のスケールバー。図１１Ｂは、シャムマウス及びＴＢＩマウスにおける同側領域と対側領域との蛍光比の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり４～６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり１～３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図12A】Ｃ１ｑ－／－マウスがｍＴＢＩの３週間後に炎症及びニューロン損失の減少を示すことを示す。図１２Ａは、ＧＦＡＰ、ＩＢＡ１、及びＮｅｕＮについて染色されたＴＢＩ Ｃ１ｑ－／－マウスからの代表的な冠状脳切片を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。１ｍｍのスケールバー。図１２Ｂは、ＧＦＡＰ、ＩＢＡ１、及びＮｅｕＮについて染色されたＳ１（上）、ＶＢ、及びｎＲＴ（下）のクローズアップ画像を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。５００μｍのスケールバー。図１２Ｃは、シャムマウス及びＴＢＩ Ｃ１ｑ－／－マウスにおける、同側領域と対側領域との蛍光比及びｎＲＴニューロン数の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり４～６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり１～３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図12B】Ｃ１ｑ－／－マウスがｍＴＢＩの３週間後に炎症及びニューロン損失の減少を示すことを示す。図１２Ａは、ＧＦＡＰ、ＩＢＡ１、及びＮｅｕＮについて染色されたＴＢＩ Ｃ１ｑ－／－マウスからの代表的な冠状脳切片を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。１ｍｍのスケールバー。図１２Ｂは、ＧＦＡＰ、ＩＢＡ１、及びＮｅｕＮについて染色されたＳ１（上）、ＶＢ、及びｎＲＴ（下）のクローズアップ画像を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。５００μｍのスケールバー。図１２Ｃは、シャムマウス及びＴＢＩ Ｃ１ｑ－／－マウスにおける、同側領域と対側領域との蛍光比及びｎＲＴニューロン数の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり４～６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり１～３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図12C】Ｃ１ｑ－／－マウスがｍＴＢＩの３週間後に炎症及びニューロン損失の減少を示すことを示す。図１２Ａは、ＧＦＡＰ、ＩＢＡ１、及びＮｅｕＮについて染色されたＴＢＩ Ｃ１ｑ－／－マウスからの代表的な冠状脳切片を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。１ｍｍのスケールバー。図１２Ｂは、ＧＦＡＰ、ＩＢＡ１、及びＮｅｕＮについて染色されたＳ１（上）、ＶＢ、及びｎＲＴ（下）のクローズアップ画像を示す。右Ｓ１皮質の損傷部位は、アスタリスクでマークされている。５００μｍのスケールバー。図１２Ｃは、シャムマウス及びＴＢＩ Ｃ１ｑ－／－マウスにおける、同側領域と対側領域との蛍光比及びｎＲＴニューロン数の定量を示す。データは、マン－ホイットニー検定による、最小値から最大値までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、１群当たり４～６匹のマウスが含まれる（ｎ＝マウス１匹当たり１～３つの切片、１領域当たり１枚の画像）。

【図13A】血漿及び脳ＰＫ／ＰＤが、抗Ｃ１ｑ薬物処置されたシャムマウス及びＴＢＩマウスにおいて、遊離薬物及び還元されたＣ１ｑの存在を示すことを示す。図１３Ａは、ＴＢＩ及びシャムマウスを１００ｍｇ／ｋｇの抗Ｃ１ｑまたはアイソタイプ対照抗体の２回用量で処置した後、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して遊離薬物（ｆｒｅｅ ｄｒｕｇ）、Ｃ１ｑフリー（Ｃ１ｑ－ｆｒｅｅ）及び総Ｃ１ｑ（Ｃ１ｑ－ｔｏｔａｌ）の血漿レベルを測定したことを示す。点線は、定量の下限を示す。図１３Ｂ～１３Ｄは、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、同側（上）及び対側（下）の脳溶解物中の、遊離薬物（図１３Ｂ）、Ｃ１ｑフリー（図１３Ｃ）及び総Ｃ１ｑ（図１３Ｄ）のレベルを測定した。ナイーブマウスは、陰性対照であった。点線は、定量の下限を示す。データは、ＴＢＩ対照とＴＢＩ抗Ｃ１ｑとの間の、マン－ホイットニー検定による、最小から最大までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊ｐ＜０．０００１）である。分析には、１群当たり３～１５匹のマウスが含まれる。

【図13B】血漿及び脳ＰＫ／ＰＤが、抗Ｃ１ｑ薬物処置されたシャムマウス及びＴＢＩマウスにおいて、遊離薬物及び還元されたＣ１ｑの存在を示すことを示す。図１３Ａは、ＴＢＩ及びシャムマウスを１００ｍｇ／ｋｇの抗Ｃ１ｑまたはアイソタイプ対照抗体の２回用量で処置した後、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して遊離薬物（ｆｒｅｅ ｄｒｕｇ）、Ｃ１ｑフリー（Ｃ１ｑ－ｆｒｅｅ）及び総Ｃ１ｑ（Ｃ１ｑ－ｔｏｔａｌ）の血漿レベルを測定したことを示す。点線は、定量の下限を示す。図１３Ｂ～１３Ｄは、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、同側（上）及び対側（下）の脳溶解物中の、遊離薬物（図１３Ｂ）、Ｃ１ｑフリー（図１３Ｃ）及び総Ｃ１ｑ（図１３Ｄ）のレベルを測定した。ナイーブマウスは、陰性対照であった。点線は、定量の下限を示す。データは、ＴＢＩ対照とＴＢＩ抗Ｃ１ｑとの間の、マン－ホイットニー検定による、最小から最大までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊ｐ＜０．０００１）である。分析には、１群当たり３～１５匹のマウスが含まれる。

【図13C】血漿及び脳ＰＫ／ＰＤが、抗Ｃ１ｑ薬物処置されたシャムマウス及びＴＢＩマウスにおいて、遊離薬物及び還元されたＣ１ｑの存在を示すことを示す。図１３Ａは、ＴＢＩ及びシャムマウスを１００ｍｇ／ｋｇの抗Ｃ１ｑまたはアイソタイプ対照抗体の２回用量で処置した後、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して遊離薬物（ｆｒｅｅ ｄｒｕｇ）、Ｃ１ｑフリー（Ｃ１ｑ－ｆｒｅｅ）及び総Ｃ１ｑ（Ｃ１ｑ－ｔｏｔａｌ）の血漿レベルを測定したことを示す。点線は、定量の下限を示す。図１３Ｂ～１３Ｄは、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、同側（上）及び対側（下）の脳溶解物中の、遊離薬物（図１３Ｂ）、Ｃ１ｑフリー（図１３Ｃ）及び総Ｃ１ｑ（図１３Ｄ）のレベルを測定した。ナイーブマウスは、陰性対照であった。点線は、定量の下限を示す。データは、ＴＢＩ対照とＴＢＩ抗Ｃ１ｑとの間の、マン－ホイットニー検定による、最小から最大までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊ｐ＜０．０００１）である。分析には、１群当たり３～１５匹のマウスが含まれる。

【図13D】血漿及び脳ＰＫ／ＰＤが、抗Ｃ１ｑ薬物処置されたシャムマウス及びＴＢＩマウスにおいて、遊離薬物及び還元されたＣ１ｑの存在を示すことを示す。図１３Ａは、ＴＢＩ及びシャムマウスを１００ｍｇ／ｋｇの抗Ｃ１ｑまたはアイソタイプ対照抗体の２回用量で処置した後、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して遊離薬物（ｆｒｅｅ ｄｒｕｇ）、Ｃ１ｑフリー（Ｃ１ｑ－ｆｒｅｅ）及び総Ｃ１ｑ（Ｃ１ｑ－ｔｏｔａｌ）の血漿レベルを測定したことを示す。点線は、定量の下限を示す。図１３Ｂ～１３Ｄは、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、同側（上）及び対側（下）の脳溶解物中の、遊離薬物（図１３Ｂ）、Ｃ１ｑフリー（図１３Ｃ）及び総Ｃ１ｑ（図１３Ｄ）のレベルを測定した。ナイーブマウスは、陰性対照であった。点線は、定量の下限を示す。データは、ＴＢＩ対照とＴＢＩ抗Ｃ１ｑとの間の、マン－ホイットニー検定による、最小から最大までの全ての点を表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊ｐ＜０．０００１）である。分析には、１群当たり３～１５匹のマウスが含まれる。

【図14A】ｍＴＢＩを有するマウスが、θ～α周波数範囲において、ｍＴＢＩの４週間後に視床破裂を伴うタイムロックされた自発性発作様イベントを有することを示す。図１４Ａは、インビボ実験のための記録位置の図を示す。左：ＥＣｏＧ記録部位及びｍＴＢＩ位置をマウス頭蓋上で示す。右：ｎＲＴに一方的に埋め込まれたタングステン深度電極の近似位置。図１４Ｂは、皮質記録部位からの代表的なＥＣｏＧトレース、及び自発性発作様イベントを示すｎＲＴからのマルチユニットトレースを示す。図１４Ｃは、シャムマウス及びＴＢＩマウスにおける、同側Ｓ１皮質からのベースラインＥＣｏＧ信号の最初の１５分間における、異なる周波数帯域にわたる平均パワーを示すパワースペクトル分析を示す。図１４Ｄは、代表的なシャムマウス及びＴＢＩマウスにおける、同側Ｓ１皮質からのベースラインＥＣｏＧ信号の最初の１５分から得られた周波数にわたるパワーを示すペリオドグラムを示す。データは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析は、１群当たり１２～１４匹のマウスを含む。

【図14B】ｍＴＢＩを有するマウスが、θ～α周波数範囲において、ｍＴＢＩの４週間後に視床破裂を伴うタイムロックされた自発性発作様イベントを有することを示す。図１４Ａは、インビボ実験のための記録位置の図を示す。左：ＥＣｏＧ記録部位及びｍＴＢＩ位置をマウス頭蓋上で示す。右：ｎＲＴに一方的に埋め込まれたタングステン深度電極の近似位置。図１４Ｂは、皮質記録部位からの代表的なＥＣｏＧトレース、及び自発性発作様イベントを示すｎＲＴからのマルチユニットトレースを示す。図１４Ｃは、シャムマウス及びＴＢＩマウスにおける、同側Ｓ１皮質からのベースラインＥＣｏＧ信号の最初の１５分間における、異なる周波数帯域にわたる平均パワーを示すパワースペクトル分析を示す。図１４Ｄは、代表的なシャムマウス及びＴＢＩマウスにおける、同側Ｓ１皮質からのベースラインＥＣｏＧ信号の最初の１５分から得られた周波数にわたるパワーを示すペリオドグラムを示す。データは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析は、１群当たり１２～１４匹のマウスを含む。

【図14C】ｍＴＢＩを有するマウスが、θ～α周波数範囲において、ｍＴＢＩの４週間後に視床破裂を伴うタイムロックされた自発性発作様イベントを有することを示す。図１４Ａは、インビボ実験のための記録位置の図を示す。左：ＥＣｏＧ記録部位及びｍＴＢＩ位置をマウス頭蓋上で示す。右：ｎＲＴに一方的に埋め込まれたタングステン深度電極の近似位置。図１４Ｂは、皮質記録部位からの代表的なＥＣｏＧトレース、及び自発性発作様イベントを示すｎＲＴからのマルチユニットトレースを示す。図１４Ｃは、シャムマウス及びＴＢＩマウスにおける、同側Ｓ１皮質からのベースラインＥＣｏＧ信号の最初の１５分間における、異なる周波数帯域にわたる平均パワーを示すパワースペクトル分析を示す。図１４Ｄは、代表的なシャムマウス及びＴＢＩマウスにおける、同側Ｓ１皮質からのベースラインＥＣｏＧ信号の最初の１５分から得られた周波数にわたるパワーを示すペリオドグラムを示す。データは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析は、１群当たり１２～１４匹のマウスを含む。

【図14D】ｍＴＢＩを有するマウスが、θ～α周波数範囲において、ｍＴＢＩの４週間後に視床破裂を伴うタイムロックされた自発性発作様イベントを有することを示す。図１４Ａは、インビボ実験のための記録位置の図を示す。左：ＥＣｏＧ記録部位及びｍＴＢＩ位置をマウス頭蓋上で示す。右：ｎＲＴに一方的に埋め込まれたタングステン深度電極の近似位置。図１４Ｂは、皮質記録部位からの代表的なＥＣｏＧトレース、及び自発性発作様イベントを示すｎＲＴからのマルチユニットトレースを示す。図１４Ｃは、シャムマウス及びＴＢＩマウスにおける、同側Ｓ１皮質からのベースラインＥＣｏＧ信号の最初の１５分間における、異なる周波数帯域にわたる平均パワーを示すパワースペクトル分析を示す。図１４Ｄは、代表的なシャムマウス及びＴＢＩマウスにおける、同側Ｓ１皮質からのベースラインＥＣｏＧ信号の最初の１５分から得られた周波数にわたるパワーを示すペリオドグラムを示す。データは、マン－ホイットニー検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析は、１群当たり１２～１４匹のマウスを含む。

【図15A】抗Ｃ１ｑ抗体が、ｍＴＢＩを有するマウスのＥＣｏＧ力に対する慢性疾患修飾効果を有することを示す。図１５Ａは、対照処置マウス（左）及び抗体処置マウス（右）からの例示的なスペクトログラム（上）及びヒストグラム（下）を示し、処置終了後４週間であったＴＢＩの２．５ヶ月後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。図１５Ｂは、ＴＢＩ後の最初の日における異なる周波数帯域にわたってサンプリングされた対照処置コホート及び抗体処置コホートの累積分布関数を示す。各記録の開始から２４時間以内に４８ポイントをサンプリングした。図１５Ｃは、Ｂと同じであるが、ＴＢＩ後３週間であることを示す。各記録開始から１５．２５～２０．１日の間に２３２点をサンプリングした。図１５Ｄは、Ｂと同じであるが、ＴＢＩ後９～１５週間であることを示す。各記録開始から１０４．６日から１１０日の間に２９６ポイントをサンプリングした。データは、処置が終了する前に死亡したとしても、記録された全てのマウスを表す。対照処置マウス１匹及び抗体処置マウス１匹は、ＴＢＩ後３週間以内に死亡し、対照処置マウス２匹は、ＴＢＩ後６週間以内に死亡し、残りのマウスは、ＴＢＩ後少なくとも９週間記録した。２４時間で、ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。３週間で、ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。９～１５週で、ｎ＝６匹の対照処置マウス、４匹の抗体処置マウス。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚ。ｎｓ＝ｐ＞０．０５。

【図15B】抗Ｃ１ｑ抗体が、ｍＴＢＩを有するマウスのＥＣｏＧ力に対する慢性疾患修飾効果を有することを示す。図１５Ａは、対照処置マウス（左）及び抗体処置マウス（右）からの例示的なスペクトログラム（上）及びヒストグラム（下）を示し、処置終了後４週間であったＴＢＩの２．５ヶ月後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。図１５Ｂは、ＴＢＩ後の最初の日における異なる周波数帯域にわたってサンプリングされた対照処置コホート及び抗体処置コホートの累積分布関数を示す。各記録の開始から２４時間以内に４８ポイントをサンプリングした。図１５Ｃは、Ｂと同じであるが、ＴＢＩ後３週間であることを示す。各記録開始から１５．２５～２０．１日の間に２３２点をサンプリングした。図１５Ｄは、Ｂと同じであるが、ＴＢＩ後９～１５週間であることを示す。各記録開始から１０４．６日から１１０日の間に２９６ポイントをサンプリングした。データは、処置が終了する前に死亡したとしても、記録された全てのマウスを表す。対照処置マウス１匹及び抗体処置マウス１匹は、ＴＢＩ後３週間以内に死亡し、対照処置マウス２匹は、ＴＢＩ後６週間以内に死亡し、残りのマウスは、ＴＢＩ後少なくとも９週間記録した。２４時間で、ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。３週間で、ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。９～１５週で、ｎ＝６匹の対照処置マウス、４匹の抗体処置マウス。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚ。ｎｓ＝ｐ＞０．０５。

【図15C】抗Ｃ１ｑ抗体が、ｍＴＢＩを有するマウスのＥＣｏＧ力に対する慢性疾患修飾効果を有することを示す。図１５Ａは、対照処置マウス（左）及び抗体処置マウス（右）からの例示的なスペクトログラム（上）及びヒストグラム（下）を示し、処置終了後４週間であったＴＢＩの２．５ヶ月後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。図１５Ｂは、ＴＢＩ後の最初の日における異なる周波数帯域にわたってサンプリングされた対照処置コホート及び抗体処置コホートの累積分布関数を示す。各記録の開始から２４時間以内に４８ポイントをサンプリングした。図１５Ｃは、Ｂと同じであるが、ＴＢＩ後３週間であることを示す。各記録開始から１５．２５～２０．１日の間に２３２点をサンプリングした。図１５Ｄは、Ｂと同じであるが、ＴＢＩ後９～１５週間であることを示す。各記録開始から１０４．６日から１１０日の間に２９６ポイントをサンプリングした。データは、処置が終了する前に死亡したとしても、記録された全てのマウスを表す。対照処置マウス１匹及び抗体処置マウス１匹は、ＴＢＩ後３週間以内に死亡し、対照処置マウス２匹は、ＴＢＩ後６週間以内に死亡し、残りのマウスは、ＴＢＩ後少なくとも９週間記録した。２４時間で、ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。３週間で、ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。９～１５週で、ｎ＝６匹の対照処置マウス、４匹の抗体処置マウス。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚ。ｎｓ＝ｐ＞０．０５。

【図15D】抗Ｃ１ｑ抗体が、ｍＴＢＩを有するマウスのＥＣｏＧ力に対する慢性疾患修飾効果を有することを示す。図１５Ａは、対照処置マウス（左）及び抗体処置マウス（右）からの例示的なスペクトログラム（上）及びヒストグラム（下）を示し、処置終了後４週間であったＴＢＩの２．５ヶ月後の異なる周波数帯域にわたるパワーを示す。パワーバンドは、３０分毎にサンプリングされる。図１５Ｂは、ＴＢＩ後の最初の日における異なる周波数帯域にわたってサンプリングされた対照処置コホート及び抗体処置コホートの累積分布関数を示す。各記録の開始から２４時間以内に４８ポイントをサンプリングした。図１５Ｃは、Ｂと同じであるが、ＴＢＩ後３週間であることを示す。各記録開始から１５．２５～２０．１日の間に２３２点をサンプリングした。図１５Ｄは、Ｂと同じであるが、ＴＢＩ後９～１５週間であることを示す。各記録開始から１０４．６日から１１０日の間に２９６ポイントをサンプリングした。データは、処置が終了する前に死亡したとしても、記録された全てのマウスを表す。対照処置マウス１匹及び抗体処置マウス１匹は、ＴＢＩ後３週間以内に死亡し、対照処置マウス２匹は、ＴＢＩ後６週間以内に死亡し、残りのマウスは、ＴＢＩ後少なくとも９週間記録した。２４時間で、ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。３週間で、ｎ＝７匹の対照処置マウス、７匹の抗体処置マウス。９～１５週で、ｎ＝６匹の対照処置マウス、４匹の抗体処置マウス。Δ＝１～４Ｈｚ、θ＝５～８Ｈｚ、α＝９～１２Ｈｚ、σ＝１３～１５Ｈｚ、β＝１６～３０Ｈｚ、γ＝３１～５０Ｈｚ。ｎｓ＝ｐ＞０．０５。

【図16A】ｍＴＢＩの３週間後に、抗Ｃ１ｑ抗体が睡眠紡錘波の減少を回復することを示す。図１６Ａは、ｍＴＢＩの３週間後のシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからの代表的なＥＣｏＧ記録を示す。トレースは、バンドパス（ＢＰ）フィルタリングされたＥＣｏＧを表す。水平線：検出された紡錘波を示す。矢印はてんかんのスパイクを示す。図１６Ｂは、アイソタイプ対照または抗Ｃ１ｑ抗体で処置したｍＴＢＩマウスからの図１６Ａと同じものを示す。図１６Ｃは、１２時間のウィンドウ内に検出された、同側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波と対側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波との比を示す。データは、マン－ホイットニー順位和検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、ｎ＝６匹のシャムマウス、ｎ＝９匹のｍＴＢＩマウス（左）、ｎ＝７匹の対照処置ｍＴＢＩマウス、ｎ＝７匹の抗体処置ｍＴＢＩマウス（右）が含まれる。図１６Ｄは、（図１６Ｃ）におけるマウスからの対側及び同側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波の頻度、正規化された振幅及び持続時間を示す。データは、クラスカル・ウォリスの順位に基づく一元配置分散分析検定（Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ Ｏｎｅ Ｗａｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｎ Ｒａｎｋｓ）、全てのペアワイズ多重比較手順（ホルム－シダック（Ｈｏｌｍ－Ｓｉｄａｋ）法）で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。灰色の線は、各マウスの対側及び同側のデータを表す。

【図16B】ｍＴＢＩの３週間後に、抗Ｃ１ｑ抗体が睡眠紡錘波の減少を回復することを示す。図１６Ａは、ｍＴＢＩの３週間後のシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからの代表的なＥＣｏＧ記録を示す。トレースは、バンドパス（ＢＰ）フィルタリングされたＥＣｏＧを表す。水平線：検出された紡錘波を示す。矢印はてんかんのスパイクを示す。図１６Ｂは、アイソタイプ対照または抗Ｃ１ｑ抗体で処置したｍＴＢＩマウスからの図１６Ａと同じものを示す。図１６Ｃは、１２時間のウィンドウ内に検出された、同側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波と対側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波との比を示す。データは、マン－ホイットニー順位和検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、ｎ＝６匹のシャムマウス、ｎ＝９匹のｍＴＢＩマウス（左）、ｎ＝７匹の対照処置ｍＴＢＩマウス、ｎ＝７匹の抗体処置ｍＴＢＩマウス（右）が含まれる。図１６Ｄは、（図１６Ｃ）におけるマウスからの対側及び同側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波の頻度、正規化された振幅及び持続時間を示す。データは、クラスカル・ウォリスの順位に基づく一元配置分散分析検定（Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ Ｏｎｅ Ｗａｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｎ Ｒａｎｋｓ）、全てのペアワイズ多重比較手順（ホルム－シダック（Ｈｏｌｍ－Ｓｉｄａｋ）法）で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。灰色の線は、各マウスの対側及び同側のデータを表す。

【図16C】ｍＴＢＩの３週間後に、抗Ｃ１ｑ抗体が睡眠紡錘波の減少を回復することを示す。図１６Ａは、ｍＴＢＩの３週間後のシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからの代表的なＥＣｏＧ記録を示す。トレースは、バンドパス（ＢＰ）フィルタリングされたＥＣｏＧを表す。水平線：検出された紡錘波を示す。矢印はてんかんのスパイクを示す。図１６Ｂは、アイソタイプ対照または抗Ｃ１ｑ抗体で処置したｍＴＢＩマウスからの図１６Ａと同じものを示す。図１６Ｃは、１２時間のウィンドウ内に検出された、同側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波と対側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波との比を示す。データは、マン－ホイットニー順位和検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、ｎ＝６匹のシャムマウス、ｎ＝９匹のｍＴＢＩマウス（左）、ｎ＝７匹の対照処置ｍＴＢＩマウス、ｎ＝７匹の抗体処置ｍＴＢＩマウス（右）が含まれる。図１６Ｄは、（図１６Ｃ）におけるマウスからの対側及び同側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波の頻度、正規化された振幅及び持続時間を示す。データは、クラスカル・ウォリスの順位に基づく一元配置分散分析検定（Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ Ｏｎｅ Ｗａｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｎ Ｒａｎｋｓ）、全てのペアワイズ多重比較手順（ホルム－シダック（Ｈｏｌｍ－Ｓｉｄａｋ）法）で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。灰色の線は、各マウスの対側及び同側のデータを表す。

【図16D】ｍＴＢＩの３週間後に、抗Ｃ１ｑ抗体が睡眠紡錘波の減少を回復することを示す。図１６Ａは、ｍＴＢＩの３週間後のシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからの代表的なＥＣｏＧ記録を示す。トレースは、バンドパス（ＢＰ）フィルタリングされたＥＣｏＧを表す。水平線：検出された紡錘波を示す。矢印はてんかんのスパイクを示す。図１６Ｂは、アイソタイプ対照または抗Ｃ１ｑ抗体で処置したｍＴＢＩマウスからの図１６Ａと同じものを示す。図１６Ｃは、１２時間のウィンドウ内に検出された、同側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波と対側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波との比を示す。データは、マン－ホイットニー順位和検定で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。分析には、ｎ＝６匹のシャムマウス、ｎ＝９匹のｍＴＢＩマウス（左）、ｎ＝７匹の対照処置ｍＴＢＩマウス、ｎ＝７匹の抗体処置ｍＴＢＩマウス（右）が含まれる。図１６Ｄは、（図１６Ｃ）におけるマウスからの対側及び同側ＥＣｏＧにおける睡眠紡錘波の頻度、正規化された振幅及び持続時間を示す。データは、クラスカル・ウォリスの順位に基づく一元配置分散分析検定（Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ Ｏｎｅ Ｗａｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｎ Ｒａｎｋｓ）、全てのペアワイズ多重比較手順（ホルム－シダック（Ｈｏｌｍ－Ｓｉｄａｋ）法）で分析した平均±ＳＥＭを表し、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）である。灰色の線は、各マウスの対側及び同側のデータを表す。

【図17A】ｍＴＢＩの３週間後に発症する焦点てんかんスパイクを減少させる抗Ｃ１ｑ抗体を示す。図１７Ａは、ｍＴＢＩの３週間後のシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからの代表的なＥＣｏＧ記録を示す。水平の破線は、スパイク検出閾値を表す。垂直の赤い線は、検出されたスパイクを示す。図１７ＢＡは、アイソタイプ対照または抗Ｃ１ｑ抗体で処置したｍＴＢＩマウスの図１７Ａと同じものを示す。Ａ－Ｂのトレースは、ＮＲＥＭ睡眠のエピソードから得られている。図１７Ｃは、１２時間のウィンドウ内で検出されたてんかんスパイクの数を示す。データは、マン－ホイットニー順位和検定（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）で分析した平均±ＳＥＭを表す。挿入図：（Ｂ）に示されるｍＴＢＩマウスからの平均てんかんスパイク（ｎ＝５９２個のスパイク；平均（黒）±ＳＤ（灰色）。分析には、ｎ＝６匹のシャムマウス、ｎ＝９匹のｍＴＢＩマウス（左）、ｎ＝７匹の対照処置ｍＴＢＩマウス、ｎ＝６匹の抗体処置ｍＴＢＩマウスが含まれる。図１７Ｄ～１７Ｅは、図１７Ｃにおけるマウスからの睡眠紡錘波の比に対するてんかんスパイクの数を示す。個々の点は、各マウスを表し、エラーバーは、両方の軸にわたる平均±ＳＥＭを表す。

【図17B】ｍＴＢＩの３週間後に発症する焦点てんかんスパイクを減少させる抗Ｃ１ｑ抗体を示す。図１７Ａは、ｍＴＢＩの３週間後のシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからの代表的なＥＣｏＧ記録を示す。水平の破線は、スパイク検出閾値を表す。垂直の赤い線は、検出されたスパイクを示す。図１７ＢＡは、アイソタイプ対照または抗Ｃ１ｑ抗体で処置したｍＴＢＩマウスの図１７Ａと同じものを示す。Ａ－Ｂのトレースは、ＮＲＥＭ睡眠のエピソードから得られている。図１７Ｃは、１２時間のウィンドウ内で検出されたてんかんスパイクの数を示す。データは、マン－ホイットニー順位和検定（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）で分析した平均±ＳＥＭを表す。挿入図：（Ｂ）に示されるｍＴＢＩマウスからの平均てんかんスパイク（ｎ＝５９２個のスパイク；平均（黒）±ＳＤ（灰色）。分析には、ｎ＝６匹のシャムマウス、ｎ＝９匹のｍＴＢＩマウス（左）、ｎ＝７匹の対照処置ｍＴＢＩマウス、ｎ＝６匹の抗体処置ｍＴＢＩマウスが含まれる。図１７Ｄ～１７Ｅは、図１７Ｃにおけるマウスからの睡眠紡錘波の比に対するてんかんスパイクの数を示す。個々の点は、各マウスを表し、エラーバーは、両方の軸にわたる平均±ＳＥＭを表す。

【図17C】ｍＴＢＩの３週間後に発症する焦点てんかんスパイクを減少させる抗Ｃ１ｑ抗体を示す。図１７Ａは、ｍＴＢＩの３週間後のシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからの代表的なＥＣｏＧ記録を示す。水平の破線は、スパイク検出閾値を表す。垂直の赤い線は、検出されたスパイクを示す。図１７ＢＡは、アイソタイプ対照または抗Ｃ１ｑ抗体で処置したｍＴＢＩマウスの図１７Ａと同じものを示す。Ａ－Ｂのトレースは、ＮＲＥＭ睡眠のエピソードから得られている。図１７Ｃは、１２時間のウィンドウ内で検出されたてんかんスパイクの数を示す。データは、マン－ホイットニー順位和検定（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）で分析した平均±ＳＥＭを表す。挿入図：（Ｂ）に示されるｍＴＢＩマウスからの平均てんかんスパイク（ｎ＝５９２個のスパイク；平均（黒）±ＳＤ（灰色）。分析には、ｎ＝６匹のシャムマウス、ｎ＝９匹のｍＴＢＩマウス（左）、ｎ＝７匹の対照処置ｍＴＢＩマウス、ｎ＝６匹の抗体処置ｍＴＢＩマウスが含まれる。図１７Ｄ～１７Ｅは、図１７Ｃにおけるマウスからの睡眠紡錘波の比に対するてんかんスパイクの数を示す。個々の点は、各マウスを表し、エラーバーは、両方の軸にわたる平均±ＳＥＭを表す。

【図17D】ｍＴＢＩの３週間後に発症する焦点てんかんスパイクを減少させる抗Ｃ１ｑ抗体を示す。図１７Ａは、ｍＴＢＩの３週間後のシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからの代表的なＥＣｏＧ記録を示す。水平の破線は、スパイク検出閾値を表す。垂直の赤い線は、検出されたスパイクを示す。図１７ＢＡは、アイソタイプ対照または抗Ｃ１ｑ抗体で処置したｍＴＢＩマウスの図１７Ａと同じものを示す。Ａ－Ｂのトレースは、ＮＲＥＭ睡眠のエピソードから得られている。図１７Ｃは、１２時間のウィンドウ内で検出されたてんかんスパイクの数を示す。データは、マン－ホイットニー順位和検定（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）で分析した平均±ＳＥＭを表す。挿入図：（Ｂ）に示されるｍＴＢＩマウスからの平均てんかんスパイク（ｎ＝５９２個のスパイク；平均（黒）±ＳＤ（灰色）。分析には、ｎ＝６匹のシャムマウス、ｎ＝９匹のｍＴＢＩマウス（左）、ｎ＝７匹の対照処置ｍＴＢＩマウス、ｎ＝６匹の抗体処置ｍＴＢＩマウスが含まれる。図１７Ｄ～１７Ｅは、図１７Ｃにおけるマウスからの睡眠紡錘波の比に対するてんかんスパイクの数を示す。個々の点は、各マウスを表し、エラーバーは、両方の軸にわたる平均±ＳＥＭを表す。

【図17E】ｍＴＢＩの３週間後に発症する焦点てんかんスパイクを減少させる抗Ｃ１ｑ抗体を示す。図１７Ａは、ｍＴＢＩの３週間後のシャムマウス及びｍＴＢＩマウスからの代表的なＥＣｏＧ記録を示す。水平の破線は、スパイク検出閾値を表す。垂直の赤い線は、検出されたスパイクを示す。図１７ＢＡは、アイソタイプ対照または抗Ｃ１ｑ抗体で処置したｍＴＢＩマウスの図１７Ａと同じものを示す。Ａ－Ｂのトレースは、ＮＲＥＭ睡眠のエピソードから得られている。図１７Ｃは、１２時間のウィンドウ内で検出されたてんかんスパイクの数を示す。データは、マン－ホイットニー順位和検定（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）で分析した平均±ＳＥＭを表す。挿入図：（Ｂ）に示されるｍＴＢＩマウスからの平均てんかんスパイク（ｎ＝５９２個のスパイク；平均（黒）±ＳＤ（灰色）。分析には、ｎ＝６匹のシャムマウス、ｎ＝９匹のｍＴＢＩマウス（左）、ｎ＝７匹の対照処置ｍＴＢＩマウス、ｎ＝６匹の抗体処置ｍＴＢＩマウスが含まれる。図１７Ｄ～１７Ｅは、図１７Ｃにおけるマウスからの睡眠紡錘波の比に対するてんかんスパイクの数を示す。個々の点は、各マウスを表し、エラーバーは、両方の軸にわたる平均±ＳＥＭを表す。

【図18】睡眠紡錘波の検出を示す。同時に、ｍＴＢＩ周辺皮質及び対側皮質からのＥＣｏＧ信号（黒色）を８～１５Ｈｚでバンドパスフィルタリングし（灰色のトレース）、睡眠紡錘波検出閾値（Ｔｈｒ．）を適用した。描写される記録は、ｍＴＢＩの３週間後の抗Ｃ１ｑ処置ｍＴＢＩマウス（図１７Ｂと同じマウス）からのものである。

【発明を実施するための形態】

【0026】

本説明は、限定的な意味で理解されるべきではなく、単に本発明の一般的な原理を例示する目的で作成される。本発明の詳細な説明のセクションタイトル及び全体的な構成は、便宜上の目的のみであり、本発明を限定することを意図するものではない。

【0027】

生涯８０年間にてんかんを有する確率は約３％と推定されている。症例の約３０％において、てんかん（症候性てんかん）の発症を引き起こした脳への識別可能な損傷が存在する。更に３０％の患者は、原因が特定されていない症候性てんかんであると推定されている。外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脳卒中、てんかん発作重積状態及び感染症／炎症等の脳損傷は、通常、潜伏期間の後に生じ、しばしば進行性である後天性てんかんの原因のうちのいくつかである（すなわち、発作は、経時的により頻繁かつ重篤になる）。てんかん発作は、脳の手術の結果として回復中の患者でも生じ得る。加えて、集団の約１％について、てんかん発作は、明らかな理由またはその他の神経学的異常を伴うことなく、自発的である。このような自然発症てんかんは特発性てんかんと名付けられ、遺伝子由来であるとされる。

【0028】

てんかんは、特定の疾患、または単一の症候群でさえなく、むしろ、様々な病理学的プロセスに対して二次的であり得る任意の数の無秩序な脳機能から生じる広範なカテゴリーの症状群である。けいれん性障害、発作性障害、及び脳発作という用語は、いずれも、行動のステレオタイプな変化によって現れる脳機能障害の再発発作性エピソードを指すため、てんかんと同義で使用される。てんかん発作は、皮質に影響を及ぼすニューロンネットワークの電気的な過同期の結果である行動の突然の変化として知られている。てんかん発作は、機能の一過性障害に対する正常な脳の自然な応答でもあり得、したがって、てんかん障害の適応とは限らない。このような発作は、しばしば、誘発性、急性症候性、または反応性と称される。

【0029】

電圧ゲート及びリガンドゲートイオンチャネルのタンパク質サブユニットをコードする一部の遺伝子は、異なる形態のてんかん及び乳児発作症候群に関連している。制御されていない発作を有する患者は、有意な罹患率及び死亡率を経験する。

【0030】

てんかんでは、脳は病態生理学的または構造的に永続的に変化し、異常な過同期ニューロン発火を引き起こしている。発作を繰り返した結果、進行性の脳損傷が生じることがある。例えば、発作回数の関数としての、時間の経過に伴う海馬体積の漸進的な減少が報告されている。いくつかの臨床及び実験データは、慢性または急性発作を引き起こす際の血液脳関門（ＢＢＢ）機能の不全を示唆している。

【0031】

４０種類を超えるてんかん発作が特徴付けられており、これらは全般性（脳の両半球における発作発症）と部分性（焦点性；脳の一部における発作発症）に分けられる。全般発作は、欠神発作、ミオクローヌス発作、無緊張発作、及び強直性発作に更に分類され、部分発作は、単純発作及び複雑発作に細分化される。部分発作は全成人症例の約６０％を占め、側頭葉てんかん（ＴＬＥ）は部分発作の最も一般的な形態である。ＴＬＥ患者は、熱性発作、てんかん発作重積状態、及び感染症等の初期のリスク要因の病歴を有することが多い。無発作期間は、制御されていない部分発作が始まる前に存在し得る。発作頻度の増加及び認知機能の低下等の進行性の特徴がある。

【0032】

てんかんの病因は謎のままである。しかしながら、免疫経路の活性化がヒトてんかんにおいて役割を果たし、この炎症応答が発作の発生及び再発、ならびに発作関連ニューロン損傷の両方に寄与することを示唆する証拠がある。アストロサイトは、広範囲の免疫学的に関連する分子を産生することによって、ＣＮＳの炎症性環境に寄与することが知られている。これらは、クラスＩＩ主要組織適合性複合体抗原を発現し、多様なケモカイン及びサイトカインを産生することができる。そのような免疫因子はまた、ミクログリアを活性化し得る。

【0033】

例えば、側頭葉てんかん（ＴＬＥ）患者では、海馬内でのミクログリア活性化の徴候があり、これが活性化された免疫応答の証拠となる。核因子カッパＢ過剰発現は、ヒト海馬硬化症検体において、反応性アストロサイト及び生存ニューロンにおいて示されている。加えて、活性化されたグリア細胞と神経細胞の両方を含むＩＬ－１Ｂ系の顕著かつ持続的な活性化が存在する。対照的に、ヒト中間型ＴＬＥ検体では、適応免疫の細胞（ＣＤ３／ＣＤ８陽性Ｔリンパ球）はわずかしか検出されていない。更に、ヒトＴＬＥにおける炎症経路の活性化は、遺伝子発現プロファイル分析によっても支持される。最近の研究では、薬剤耐性中間型ＴＬＥを有する患者における主要な炎症性因子発現と発作頻度との相関が示されている。Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４－ＴＬＥ動物モデルにおけるいくつかのサイトカインの転写を誘発することが以前に示された炎症の主要なトリガー）遺伝子発現は直接相関するが、転写因子３（ＴＬＲ４の負の調節因子）の活性化及びＩＬ－８発現は発作頻度と逆相関する。

【0034】

調節不全の持続性炎症、血液脳関門損傷、及び制御されていない発作の間の相互作用は、ＴＬＥを含む様々なてんかん障害の進行を引き起こす制御されていない炎症を引き起こす自己永続的なサイクルを作出することができる。例えば、１つの重要な炎症媒介物質は、補体系である。補体系は、約３０の流体相及び細胞膜関連タンパク質からなる免疫応答に関与するタンパク質カスケードである。カスケードの活性化産物は、他の炎症媒介物質の産生に寄与し、したがって、炎症部位における組織の損傷を促進することができる。補体系成分の合成は主に肝臓で行われるが、グリア及びニューロンの両方が、病理学的条件においてこれらの炎症媒介物質を発現することができる。Ｃ３ａ及びＣ５ａは、補体活性化に応答して産生される最も強力な炎症促進分子である。古典的補体カスケードの開始分子であるＣ１ｑは、ストレス下でのニューロンのシナプスを認識する。Ｃ１ｑの活性化は、シナプス表面上の下流補体成分Ｃ４ｂ及びＣ３ｂの沈着をもたらし、免疫細胞による認識及びシナプスの物理的除去をもたらす。補体系の活性化はまた、リン脂質二重層内に孔を形成することによって標的細胞を損傷または溶解する膜攻撃複合体の形成をもたらす。ニューロンは、特に補体媒介性損傷を受けやすい。加えて、補体因子は、漏出したＢＢＢを介して脳に侵入する可能性があるが、発現の増加の一部は、活性化されたグリア細胞に由来する可能性が高い。興味深いことに、膜攻撃経路の個々のタンパク質（Ｃ５ｂ６、Ｃ７、Ｃ８、及びＣ９）を、覚醒し、自由に動くラットの海馬へ連続的に注入すると、行動性及び脳波上の発作ならびに細胞傷害の両方が誘発され、これはてんかん発生における補体系の役割を示唆する。

【0035】

加えて、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）は、世界で毎年約６，９００万人に影響を及ぼし、認知機能障害、感覚処理の困難、睡眠障害、及び前述のようにてんかんの発症につながる可能性がある。これらの有害な健康転帰のほとんどは、ＴＢＩの数ヶ月後または数年後に発生し、最初の影響の長期的な結果をもたらす間接的な二次損傷によって引き起こされる。

【0036】

ＴＢＩは皮質を急性に破壊するが、ほとんどのＴＢＩ関連障害は、経時的に発生する二次損傷を反映する。視床は、皮質と相互に接続しているため、二次損傷の可能性が高い部位である。直接皮質下構造（ｍＴＢＩ）を損傷しない軽度の皮質損傷のマウスモデルを使用して、我々は、皮質視床回路において特異的にＣ１ｑ発現の慢性的な増加を見出した。Ｃ１ｑ発現の増加は、ニューロン損失及び慢性炎症と共局在し、睡眠紡錘波の破壊及びてんかん活性の出現と相関した。Ｃ１ｑを遮断することは、これらの結果の大部分に対抗し、Ｃ１ｑがｍＴＢＩにおける疾患修飾因子であることを示した。単一核ＲＮＡ配列決定は、ミクログリアが視床Ｃ１ｑの供給源であることを示し、視床Ｃ１ｑは、オリゴデンドロサイト及びアストロサイトのサブセットに作用する可能性が高い。皮質は、頭蓋骨の真下に位置し、皮質－視床－皮質ループを含む多くのより大きな回路の一体的な部分であるため、しばしば主要な損傷の部位である。この回路は、感覚処理、注意、認知、及び睡眠に重要であり、これらは全てＴＢＩによって障害される可能性がある。視床自体は、ＴＢＩでは急性に損傷していないが、おそらく大脳皮質との長距離相互接続のために、二次損傷を経験する。視床の構造変化は、疲労及び認知機能障害を含むいくつかの長期的なＴＢＩ関連の健康転帰に関与しており、ＴＢＩを有する患者は、視床核に二次的及び慢性的な神経変性及び炎症を示す。

【0037】

慢性神経炎症は、二次創傷部位の一般的な特徴である。しかしながら、広範な抗炎症剤を用いたＴＢＩ後認知転帰を改善しようとするほとんどの試みは、おそらく異なる時点で保護的及び病原性の両方の役割を果たす多くの炎症経路があるため、失敗している。ＴＢＩ後の炎症及び損傷の潜在的な媒介物質は、ヒト及びげっ歯類の両方における脳病変の損傷周辺領域で活性化される補体経路である。補体活性化は、中枢神経系損傷における炎症及び神経毒性に寄与し、損傷、てんかん、及びアルツハイマー病に罹患しているヒト脳において増加する。古典的補体カスケードの開始分子であるＣ１ｑの異常な活性化は、機能的シナプスの除去を引き起こし、神経変性疾患の進行に寄与し得る。一方、Ｃ１ｑは、発達中の正常なシナプス刈り込み（ｓｙｎａｐｓｅ ｐｒｕｎｉｎｇ）に関与し、補体系は、細胞破片を除去し、感染症から中枢神経系を保護することによって、脳の恒常性において重要な役割を果たす。

【0038】

軽度の皮質損傷の機械的に牽引可能で高度に再現性のあるマウスモデルにおける、皮質視床回路に対するＴＢＩ後の二次損傷におけるＣ１ｑ経路の役割の発見が本明細書に提供される。このモデルは、治療窓、炎症性表現型、及び二次損傷の程度等の因子を同定し、これらは、ＴＢＩ後転帰の治療における標的化アプローチを支持する。

【0039】

ＴＢＩ後の体性感覚皮質視床回路全体を研究するために使用する１つの強力なツールは、慢性ＥＣｏＧ記録であり、ＴＢＩ後４ヶ月までの外傷後てんかん発症の進行及び皮質リズムの変化を研究するために特に使用される。細胞及び回路レベルでのこのような電気生理学的アプローチを使用して、ＴＢＩが、視床網核（ｎＲＴ）ニューロンのシナプス特性を変化させ、ブロードバンド活性の増加を含む、皮質視床回路における病理学的状態を媒介する可能性のある増加したＣ１ｑ蓄積と関連することを示す。

【0040】

ＴＢＩ後の長期の二次障害の遺伝子座としてのｎＲＴ
重度の頭部損傷の以前の観察では、ヒトｎＲＴにおける神経変性が見られる（４２）。我々の研究では、軽度の皮質損傷であっても、損傷から３週間後のｎＲＴでのニューロン損失につながる可能性があることが示されている。この神経変性の原因は、ｎＲＴにおける興奮毒性を引き起こす皮質入力の損失であり得、これは、皮質からの軸索求心性神経の高密度に起因する脆弱な脳領域であり得る（４２）。また、我々のＲＮＡ配列決定結果により、全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンサブクラスターにわたるｍＴＢＩ視床組織におけるミトコンドリア機能に関連する遺伝子の発現の増加が同定される。この観察は、ＴＢＩ後の神経変性の別の潜在的なメカニズムとして、ミトコンドリア媒介性細胞死を指摘する。

【0041】

ｎＲＴにおけるニューロンの損失は、この領域におけるシナプス変化のうちの一部を説明することができる。特に、ＴＢＩの３週間後には、ｎＲＴニューロンにおいてＩＰＳＣの頻度が減少した。多くのマイクロ回路において、ＧＡＢＡ作動性ニューロンに対する阻害の減少は、阻害の正味の増加をもたらす。対照的に、ｎＲＴにおけるＧＡＢＡ作動性阻害の喪失は、皮質視床回路過剰興奮性をもたらし、てんかん様活性を誘発する可能性さえある。実際、ｎＲＴ内ＧＡＢＡ作動性接続は、興奮性視床核への阻害性出力を調整し、振動性視床活動を制御するために重要であり、それらの喪失は皮質視床回路に対して有害である。ｎＲＴにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロンの死は、ｎＲＴ内阻害の減少に寄与し得る。この低下した阻害は、発作の感受性の増加に寄与し得、外傷後てんかん活性を発症する可能性の増加に寄与し得る、フィードフォワードＧＡＢＡ作動性阻害の喪失を引き起こし得る。

【0042】

ｎＲＴ ＥＰＳＣにおいても、特により低い頻度及び振幅ならびにより遅い動態において、欠損が観察された。これらの変化は、皮質ｎＲＴグルタミン酸作動性シナプスでＧｌｕＡ４ ＡＭＰＡ受容体を欠くてんかんのマウスモデルからの所見と類似する。この欠陥は、視床におけるフィードフォワード阻害の喪失、及びてんかん活性をもたらす。したがって、ｎＲＴ ＥＰＳＣの変化は、皮質視床回路の過同期及び発作に寄与するように見えるが、ＴＢＩ後のｎＲＴへの皮質グルタミン酸作動性入力の喪失に起因する可能性が高い。

【0043】

皮質視床回路、特にｎＲＴに見られる変化がてんかん活性及び認知機能低下に関与していることを考えると、これらの結果は、長期的なＴＢＩ転帰を治療するための新たな潜在的な標的としてこの回路をピンポイントで指摘している。特に興味深いことに、睡眠紡錘波が認知機能に大きな役割を果たしている。我々の所見は、睡眠紡錘波を治療し、ｍＴＢＩ後のてんかんスパイクを予防するための標的としてＣ１ｑをピンポイントで指摘している。

【0044】

ｎＲＴニューロンとは異なり、層－５錐体ニューロン及びＧＡＢＡ作動性の高速スパイク介在ニューロン等の皮質ニューロンは、慢性時点では、軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）によって変化しなかった。これらの観察は、皮質におけるＴＢＩ後の慢性的な過剰興奮性を回復または減少させる恒常性メカニズムの存在を示唆している。また、ＴＢＩの少なくとも特定の長期的転帰は、単に皮質の損傷からではなく、ｎＲＴ機能障害から生じるはずであることも確認されている。この点で、皮質ニューロンが慢性期には正常な興奮性及びシナプス機能を有するように見える一方で、ＥＣｏＧは睡眠紡錘波及びてんかんスパイクにおいて「局所的」な欠損を示すことが興味深い。この観察は、軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）を有するヒトにおける以前の電磁式脳造影研究、重度ＴＢＩを有するヒトにおけるＥＥＧ研究、及び重度ＴＢＩを有するラットからのＥＥＧ研究と一致し、ＴＢＩ後の早期の時点でデルタ活動の増加が観察された。正常な状態では、デルタ活動は、徐波睡眠、静かな覚醒（ｑｕｉｅｔ ｗａｋｅｆｕｌｎｅｓｓ）、及びより高い認知機能と関連している。損傷の場合、デルタ波は白質病変と関連付けられる。したがって、軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）の主な長期的影響は、皮質－視床－皮質ループの視床端にある。ｎＲＴが感覚皮質に局所的な睡眠紡錘波を生成する新たな役割を果たすことを考えると、ｎＲＴに対する二次損傷は、少なくとも部分的には、皮質における睡眠紡錘波の「局所的な」喪失の原因となり得る。

【0045】

疾患修飾因子としての慢性Ｃ１ｑ
Ｃ１ｑは、発達中のシナプス刈り込み等の正常な脳機能、ならびに重度ＴＢＩを含むいくつかの神経学的疾患への関与において十分に記録された役割を有する。加えて、Ｃ１ｑの発現は、ＴＢＩ後４ヶ月までの間、皮質視床回路で高度に増加した。本明細書に開示される研究は、皮質視床回路に焦点を当てており、電気生理学的記録を使用してｍＴＢＩ後の皮質視床回路を初めて機能的に特徴付け、かつ、ｍＴＢＩ後の睡眠紡錘波の喪失及びてんかんスパイクの発生にＣ１ｑ経路が関与することを初めて実証する。

【0046】

軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）マウスは、遮断Ｃ１ｑが抗発作効果を有するかどうかを判定するための慢性ＧＴＣＳを発現しなかったが、抗Ｃ１ｑ抗体の他の多くの保護効果が観察され、炎症及び神経変性の低下、ならびにＴＢＩ後の変化した皮質状態の回復、例えば、睡眠紡錘波の破壊及びてんかんスパイクに対する保護等が挙げられる。これらの観察及び保護的な炎症性細胞型と有害な炎症性細胞型との差異を暗示する以前の文献に基づいて、Ｃ１ｑは、異なる役割を果たすが、病理学の異なる段階では異なる役割を果たす。損傷の時点で、Ｃ１ｑは、皮質の主要部位内の損傷のサイズを制限するグリア瘢痕の形成を補助する。しかしながら、慢性期では、Ｃ１ｑ増加は、ｎＲＴにおける慢性炎症及び二次的な神経変性を促進する。

【0047】

皮質はまた、Ｃ１ｑの増加を呈するが、この部位でまたはこの時点では損傷的な役割を有さないように見えるか、または視床とは異なり、神経生理学は、慢性的な時点でシャムマウス及びＴＢＩマウスの皮質において類似しているため、対抗的な初期保護的役割を果たす可能性がある。これらの所見は、抗Ｃ１ｑ治療が、皮質での恒常的な回復を損なうことなく視床への二次損傷を防止することができる時間窓の存在を示唆する。

【0048】

我々のＲＮＡ配列決定結果は、ミクログリアがＣ１ｑの主な供給源であり、Ｃ４ｂのアストロサイト及びオリゴデンドロサイトであることを示唆し、その所見は、Ｃ１ｑ分子自体の上流（ミクログリア）及び下流（アストロサイト及びオリゴデンドロサイト）の両方の更なる細胞特異的治療標的を示し得る。Ｃ４はまた、Ｃ４－／－マウスの運動障害の減少によって示されるように、重度ＴＢＩ後の損傷を媒介するように見える。我々の配列決定データにおけるＨｃ発現の欠如は、ｎＲＴニューロン死のメカニズムが膜攻撃複合体媒介性溶解ではないことを示唆しているが、このメカニズムは配列決定アプローチだけでは決定できない。

【0049】

本明細書に開示される研究は、特定の時間窓内でＴＢＩの破壊的転帰を治療するためにＣ１ｑを標的とすることができる疾患修飾因子として特定している（この研究では、損傷の２４時間後に治療を開始する）。視床Ｃ１ｑはまた、長期にわたる二次損傷を発症する可能性のある個体を同定するのに役立つバイオマーカーとしても役立つ可能性がある。この研究は、ｍＴＢＩ後の慢性的な時点で皮質と視床の両方で電気生理学的記録を実行し、皮質損傷の慢性的な転帰として、ｎＲＴにおけるニューロン死及びＩＰＳＣ低下を同定する最初の研究である。加えて、ｎＲＴにおけるｍＴＢＩの慢性的な生理学的転帰を示すことにより、ｎＲＴを、感覚処理の変化、睡眠障害、及びてんかん等のＴＢＩ後転帰の治療のための新規の標的として同定する。

【0050】

異なる免疫経路、ＴＬＥ、及びＴＢＩ後の二次傷害（例えば、ＴＢＩ誘発てんかん等）の役割に関するこれらの研究にもかかわらず、てんかん及びその関連する進行を予防及び治療するための新たな組成物及び方法が当該技術分野において必要とされている。したがって、初期補体活性化経路の阻害は、例えば、補体活性化経路を含む、補体活性化の初期段階を阻害する抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、及び抗Ｃ１ｓ抗体を使用した、てんかんの有望な治療戦略であり得る。抗体には、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体断片、及び／またはその抗体誘導体が含まれる。

【0051】

Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ等の補体因子の活性を中和することは、古典的補体活性を阻害し、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんを遅くするか、または予防する。特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんにおいてＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ等の補体因子を中和することに関連する方法が、本明細書に開示される。

【0052】

本開示で挙げられる全ての配列は、米国特許第１０，３１６，０８１号、米国特許第１４／８９０，８１１号、米国特許第８，８７７，１９７号、米国特許第９，７０８，３９４号、米国特許出願第１５／３６０，５４９号、米国特許第９，５６２，１０６号、米国特許第１０，４５０，３８２号、米国特許第１０，４５７，７４５号、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２２４６２号（これらの各々は、それが開示する抗体及び関連する組成物について参照により本明細書に組み込まれる）から参照により組み込まれる。

【0053】

ある特定の態様では、本明細書に開示されているのは、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんを予防するか、その発症リスクを低下させるか、またはそれを治療する方法であって、補体経路の阻害剤を対象に投与することを含む、方法である。

【0054】

本明細書に開示されているのは、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんを阻害する方法であって、抗Ｃｌｑ抗体、抗Ｃｌｒ抗体、または抗Ｃｌｓ抗体等の抗体を患者に投与することを含む、方法である。ある特定の好ましい実施形態では、抗体は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓに結合し、補体活性化を阻害する。抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、その抗体断片、及び／またはその抗体誘導体であり得る。

【0055】

全長抗体は、組換えＤＮＡ操作技術の使用によって調製され得る。そのような操作バージョンには、例えば、天然抗体のアミノ酸配列内にまたはアミノ酸配列への挿入、欠失または変化によって天然抗体可変領域から作製されるものが含まれる。このタイプの特定の例には、１つ目の抗体からの少なくとも１つのＣＤＲ及び任意に１つ以上のフレームワークアミノ酸及び２つ目の抗体からの可変領域ドメインの残りを含有するそれらの操作された可変領域ドメインが含まれる。抗体をコードするＤＮＡは、全長抗体をコードするＤＮＡの所望の部分以外の全てを欠失させることによって調製され得る。キメラ化抗体をコードするＤＮＡは、ヒト定常領域を実質的にまたは独占的にコードするＤＮＡ、及びヒト以外の哺乳動物の可変領域の配列に実質的にまたは独占的に由来する可変領域をコードするＤＮＡを組換えることによって調製され得る。ヒト化抗体をコードするＤＮＡは、対応するヒト抗体領域に実質的にまたは独占的に由来する定常領域及び相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変領域をコードするＤＮＡ、及びヒト以外の哺乳動物に実質的にまたは独占的に由来するＣＤＲをコードするＤＮＡを組換えることによって調製され得る。

【0056】

抗体をコードするＤＮＡ分子の好適な供給源には、全長抗体を発現するハイブリドーマ等の細胞が含まれる。例えば、抗体は、抗体の重鎖及び／または軽鎖をコードする発現ベクターを発現する宿主細胞から単離され得る。

【0057】

抗体断片及び／または抗体誘導体はまた、抗体可変及び定常領域をコードするＤＮＡの操作及び再発現を含む組換えＤＮＡ操作技術の使用によって調製され得る。標準的な分子生物技術は、所望により、更なるアミノ酸またはドメインを改変、付加または欠失させるために使用され得る。可変または定常領域に対する任意の変化は、依然として、本明細書で使用される用語「可変」及び「定常」領域に包含される。いくつかの例では、Ｃ_Ｈ１ドメインの翻訳が鎖間システインで停止するように、Ｃ_Ｈ１の鎖間システインをコードするコドンの直後に終止コドンを導入することによって抗体断片を生成するためにＰＣＲが使用される。好適なＰＣＲプライマーを設計するための方法は当該技術分野でよく知られており、抗体Ｃ_Ｈ１ドメインの配列は容易に利用可能である。いくつかの実施形態では、終止コドンは、部位特異的変異誘発技術を使用して導入され得る。

【0058】

本開示の抗体は、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥならびにそのサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む）を含む任意の抗体アイソタイプ（「クラス」）に由来し得る。ある特定の好ましい実施形態では、抗体の重鎖及び軽鎖は、ＩｇＧに由来する。抗体の重鎖及び／または軽鎖は、マウスＩｇＧまたはヒトＩｇＧに由来し得る。ある特定の他の好ましい実施形態では、抗体の重鎖及び／または軽鎖は、ヒトＩｇＧ１に由来する。更に他の好ましい実施形態では、抗体の重鎖及び／または軽鎖は、ヒトＩｇＧ４に由来する。

【0059】

いくつかの実施形態では、阻害剤は、抗Ｃｌｑ抗体、抗Ｃｌｒ抗体、または抗Ｃｌｓ抗体等の抗体である。抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑと自己抗体との間、またはＣ１ｑとＣ１ｒとの間、またはＣ１ｑとＣ１ｓとの間の相互作用を阻害し得る。抗Ｃ１ｒ抗体は、Ｃ１ｒとＣ１ｑとの間、またはＣ１ｒとＣ１ｓとの間の相互作用を阻害し得る。抗Ｃ１ｒ抗体は、Ｃ１ｒの触媒活性を阻害し得、または抗Ｃ１ｒ抗体は、ｐｒｏ－Ｃ１ｒの活性プロテアーゼへの処理を阻害し得る。抗Ｃ１ｓ抗体は、Ｃ１ｓとＣ１ｑとの間、またはＣ１ｓとＣ１ｒとの間、またはＣ１ｓとＣ２もしくはＣ４との間の相互作用を阻害し得、または抗Ｃ１ｓ抗体は、Ｃ１ｓの触媒活性を阻害し得、またはそれは、ｐｒｏ－Ｃ１ｓの活性プロテアーゼへの処理を阻害し得る。いくつかの例では、抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓ抗体は、循環または組織からのＣ１ｑ、Ｃ１ｒまたはＣ１ｓのクリアランスを引き起こす。

【0060】

本明細書で開示される抗体は、例えば、哺乳動物Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ、好ましくはヒトＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓに結合する、モノクローナル抗体であり得る。抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、抗体断片、またはその抗体誘導体であり得る。本明細書に開示される抗体はまた、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過し得る。抗体は、ＢＢＢ受容体媒介性輸送系、例えば、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、レプチン受容体、ＬＤＬ受容体、またはＩＧＦ受容体を利用する系を活性化し得る。抗体は、ヒトへの投与に好適な十分なヒト配列を有するキメラ抗体であり得る。抗体は、グリコシル化または非グリコシル化であり得；いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、ＣＨＯ細胞における翻訳後修飾によって生成されるグリコシル化パターンで、グリコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｅ．ｃｏｌｉで産生される。

【0061】

抗体は、第１及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体であり得、例えば、第１の抗原は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、及びＣ１ｓから選択され、及び／または第２の抗原は、抗体が、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンギオペプチド、またはＡＮＧ１００５から選択される抗原等の、血液脳関門を通過することを可能にする抗原である。

【0062】

本開示の抗体は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、またはＣ１に結合し、その生物学的活性を阻害し得る。例えば、（１）自己抗体に対するＣ１ｑ結合、（２）Ｃ１ｒに対するＣ１ｑ結合、（３）Ｃ１ｓに対するＣ１ｑ結合、（４）ホスファチジルセリンに対するＣ１ｑ結合、（５）ペントラキシン－３に対するＣ１ｑ結合、（６）Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）に対するＣ１ｑ結合、（７）球状Ｃ１ｑ受容体（ｇＣ１ｑＲ）に対するＣ１ｑ結合、（８）補体受容体１（ＣＲ１）に対するＣ１ｑ結合、（９）Ｂアミロイドに対するＣ１ｑ結合、または（１０）カルレチキュリンに対するＣ１ｑ結合。他の実施形態では、Ｃ１ｑの生物学的活性は、（１）古典的補体活性化経路の活性化、（２）抗体及び補体依存性細胞傷害の活性化、（３）ＣＨ５０溶血、（４）シナプス損失、（５）Ｂ細胞抗体産生、（６）樹状細胞成熟、（７）Ｔ細胞増殖、（８）サイトカイン産生、（９）ミクログリア活性化、（１０）アルツス反応、（１１）シナプスもしくは神経終末の食作用、（１２）補体受容体３（ＣＲ３／Ｃ３）発現細胞の活性化である。

【0063】

いくつかの実施形態では、ＣＨ５０溶血は、ヒト、マウス、及び／またはラットＣＨ５０溶血を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＨ５０溶血の少なくとも約５０％～少なくとも約９５％を中和することが可能である。抗体はまた、１５０ｎｇ／ｍｌ未満、１００ｎｇ／ｍｌ未満、５０ｎｇ／ｍｌ未満、または２０ｎｇ／ｍｌ未満の用量でＣＨ５０溶血の少なくとも５０％を中和することが可能であり得る。

【0064】

補体活性を測定するための他のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイには、補体活性化中に形成する補体成分または複合体の分割生成物の測定のためのＥＬＩＳＡアッセイが含まれる。古典的経路を介する補体活性化は、血清中のＣ４ｄ及びＣ４のレベルを追跡することによって測定され得る。代替経路の活性化は、循環におけるＢｂまたはＣ３ｂＢｂＰ複合体のレベルを評価することによってＥＬＩＳＡで測定され得る。ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗体媒介性補体活性化アッセイもまた、Ｃ３ａ生成の阻害を評価するために使用され得る。

【0065】

本開示の抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、その抗体断片、またはその誘導体であり得る。

【0066】

本開示の抗体はまた、抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子であり得る。

【0067】

本明細書に開示されるのは、第２の薬剤、例えば、第２の阻害剤を対象に投与する方法である。いくつかの実施形態では、第２の阻害剤は、抗体（例えば、抗Ｃｌｑ抗体、抗Ｃｌｒ抗体、または抗Ｃｌｓ抗体）である。他の実施形態では、第２の阻害剤は、抗体依存性細胞傷害、代替補体活性化経路の阻害剤、及び／または自己抗体と自己抗原との間の相互作用の阻害剤であり得る。

【0068】

いくつかの実施形態では、対象のてんかん（特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等）発症リスクを決定する方法であって、（ａ）抗体（すなわち、抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓ抗体）を対象に投与することであって、抗体は、検出可能な標識に連結される、投与することと、（ｂ）検出可能な標識を検出して、対象におけるＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓの量または位置を測定することと、（ｃ）Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓのうちの１つ以上の量または位置を参照と比較することであって、てんかん（特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等）発症リスクは、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓのうちの１つ以上の量または位置を参照と比較することに基づいて特徴付けられる、比較することと、を含む、方法が提供される。検出可能な標識は、核酸、オリゴヌクレオチド、酵素、放射性同位体、ビオチンまたは蛍光標識を含み得る。いくつかの例では、抗体は、ビオチン化のプロセスを使用してビオチン等の補酵素で標識され得る。ビオチンが標識として使用される場合、抗体の検出は、アビジンまたはその細菌性対応物であるストレプトアビジン等のタンパク質の添加によって達成される（そのいずれかが、検出可能なマーカー、例えば、前述した色素、蛍光マーカー、例えば、フルオレセイン、放射性同位体または酵素、例えば、ペルオキシダーゼに結合され得る）。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ’）_２断片）である。

【0069】

本明細書に開示される抗体はまた、標識基、例えば、放射性同位体、放射性核種、酵素基、ビオチニル基、核酸、オリゴヌクレオチド、酵素、または蛍光標識に連結され得る。標識基は、潜在的立体障害を減少させるために任意の好適な長さのスペーサー腕部を介して抗体に連結され得る。タンパク質を標識するための様々な方法が当該技術分野で知られており、そのような標識抗体を調製するために使用され得る。

【0070】

様々な投与経路が企図される。そのような投与方法には、局所、非経口、皮下、腹腔内、肺内、髄腔内、鼻腔内、及び病巣内投与が含まれるがこれらに限定されない。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。中枢神経系の状態の治療のために、抗体は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、または更には経口投与等の非侵襲的末梢経路に続く血液脳関門を通過するように適合され得る。

【0071】

好適な抗体には、補体成分Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓに結合する抗体が含まれる。そのような抗体には、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体断片、及び／またはその抗体誘導体が含まれる。

【0072】

好ましい抗体は、齧歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター及びモルモット）を（１）ヒト血漿または血清からの精製された補体成分の酵素消化に由来する天然補体成分（例えば、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ）、または（２）真核生物系または原核生物系のいずれかによって発現した組換え補体成分、またはその誘導断片で免疫することによって樹立され得るモノクローナル抗体である。他の動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒト免疫グロブリンを発現するトランスジェニックマウス、及びヒトＢリンパ球が移植された重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスが免疫のために使用され得る。

【0073】

ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体は、病原体に対する免疫系の反応において免疫グロブリン（Ｉｇ）分子として天然に生成される。ヒト血清において８ｍｇ／ｍｌの濃度を有する優勢的な形式である約１５０ｋＤａのＩｇＧ１分子は、２つの同一の約５０ｋＤａの重鎖及び２つの同一の約２５ｋＤａの軽鎖から構成される。

【0074】

ハイブリドーマは、免疫された動物からのＢリンパ球をミエローマ細胞と融合させることによって従来の手順によって生成され得る。加えて、抗Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ抗体は、ファージディスプレイシステムにおいてヒトＢリンパ球からの組換え一本鎖ＦｖまたはＦａｂライブラリをスクリーニングすることによって生成され得る。ヒトＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓに対するＭＡｂの特異性は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンイムノブロッティング、または他の免疫化学的技術によって試験され得る。

【0075】

スクリーニングプロセスにおいて同定された抗体の補体活性化に対する阻害活性は、代替補体経路の場合は未感作ウサギまたはモルモットＲＢＣ、または古典的補体経路の場合は感作ニワトリまたはヒツジＲＢＣを使用して溶血アッセイによって評価され得る。古典的補体経路に特異的な阻害活性を示すそれらのハイブリドーマは、限界希釈によってクローニングされる。抗体は、上述したアッセイによってヒトＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓに対する特異性についての特性化のために精製される。

【0076】

抗Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ抗体の可変領域の分子構造に基づいて、分子モデリング及び合理的分子設計が使用されて、抗体の結合領域の分子構造を模倣し、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓの活性を阻害する小分子が生成され、スクリーニングされ得る。これらの小分子は、ペプチド、ペプチド模倣物、オリゴヌクレオチド、または有機化合物であり得る。模倣分子は、炎症症状及び自己免疫疾患において補体活性化の阻害剤として使用され得る。代替的には、コンビナトリアル化合物のライブラリから好適な小分子を単離するためにその分野で一般的に使用される大規模スクリーニング手順が使用され得る。

【0077】

本明細書に開示される抗体の好適な投薬量は、１０～５００μｇ／ｍＬの血清であり得る。実際の投薬量は、最適な投薬量を決定するための従来の方法論に従った臨床試験、すなわち、様々な投薬量を投与し、どの用量が望ましくない副作用を伴わずに好適な有効性を提供するかを決定するための臨床試験において決定され得る。

【0078】

組換えＤＮＡ技術の出現の前は、抗体分子の構造を切断し、分子のどの部分がその様々な機能を担っているのかを決定するために、ポリペプチド配列を切断するタンパク質分解酵素（プロテアーゼ）が使用されていた。プロテアーゼパパインでの限定消化は、抗体分子を３つの断片に切断する。Ｆａｂ断片として知られている２つの断片は同一であり、抗原結合活性を含有する。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２つの同一の腕部に対応し、その各々は、重鎖のＶ_Ｈ及びＣ_Ｈ１ドメインと対合した完全軽鎖からなる。他の断片は、抗原結合活性を含まないが、容易に結晶化することが当初観察され、この理由からＦｃ断片（結晶化可能断片）と名付けられた。

【0079】

Ｆａｂ分子は、定常ドメインＣ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３を欠く重鎖を有するＩｇ分子の人工の約５０ｋＤａの断片である。２つの異好性（Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ及びＣ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１）ドメイン相互作用は、Ｆａｂ分子の２つの鎖の構造の基礎にあり、これはＣ_ＬとＣ_Ｈ１との間のジスルフィド架橋によって更に安定化される。Ｆａｂ及びＩｇＧは、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（３つはそれぞれＶ_Ｌ及びＶ_Ｈに由来する（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３及びＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３））によって形成される同一の抗原結合部位を有する。ＣＤＲは、抗体の超可変抗原結合部位を画定する。最も高い配列バリエーションは、ＬＣＤＲ３及びＨＣＤＲ３に見られ、これは天然免疫系では、それぞれＶ_Ｌ及びＪ_Ｌ遺伝子またはＶ_Ｈ、Ｄ_Ｈ及びＪ_Ｈ遺伝子の再編成によって生成される。ＬＣＤＲ３及びＨＣＤＲ３は典型的には、抗原結合部位のコアを形成する。６つのＣＤＲを接続し、提示する保存領域は、フレームワーク領域と称される。可変ドメインの三次元構造において、フレームワーク領域は、外側では超可変ＣＤＲループによって及び内側では保存ジスルフィド架橋によって連結された２つの対向する逆平行β－シートのサンドイッチを形成する。

【0080】

定義
本明細書で使用される場合、「ａ」または「ａｎ」は、１つ以上を意味し得る。本明細書において請求項（複数可）で使用される場合、用語「含む」と併せて使用される場合、用語「ａ」または「ａｎ」は、１つまたは複数を意味し得る。例えば、「抗体」に対する言及は、１つから多くの抗体の言及である。本明細書で使用される場合、「別の」は、少なくとも第２のまたはそれ以上を意味し得る。

【0081】

本明細書で使用される場合、別の化合物または組成物と「併せた」投与は、同時投与及び／または異なる時点での投与を含む。併せた投与はまた、異なる投薬頻度または間隔、及び同じ投与経路または異なる投与経路を使用することを含む、共製剤としての投与または別々の組成物としての投与を包含する。

【0082】

用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書で「抗体」と互換的に使用される。本明細書における用語「抗体」は、最も広義に使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、所望の生物学的活性を示す場合に限り抗体断片、及び抗体誘導体を具体的に包含する。

【0083】

基本的な４鎖抗体単位は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌが一緒に対合すると、単一の抗原結合部位が形成される。異なるクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ ７１ ａｎｄ Ｃｈａｐｔｅｒ ６を参照されたい。

【0084】

任意の脊椎動物種に由来するＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプのうちの１つに割り当てられ得る。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てられ得る。５つのクラスの免疫グロブリンが存在する：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ（アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）及びミュー（「μ」）と標記される重鎖をそれぞれ有する）。γ及びαクラスは、ＣＨ配列及び機能の比較的小さな相違に基づいてサブクラス（アイソタイプ）に更に分類され、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構成はよく知られており、一般に、例えば、Ａｂｂａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４^ｔｈ ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，２０００）に記載されている。

【0085】

用語「薬剤」は、本明細書で使用される場合、特に補体経路を介してシナプス損失を調節する能力を有する任意の分子、例えば、タンパク質または医薬品を記載する。候補薬剤には、遺伝子要素、例えば、Ｃ１ｑ発現を阻害するアンチセンス分子及びＲＮＡｉ分子、ならびに補体阻害剤、例えばＣＤ５９等をコードする構築物も含まれる。候補薬剤は、典型的には有機分子であるが、多数の化学クラスを包含し、例えば、分子量が５０超及び約２，５００ダルトン未満である小さな有機化合物である。候補薬剤は、タンパク質、特に水素結合との構造的相互作用に必要な官能基を含み、典型的には、少なくともアミン、カルボニル、ヒドロキシル、またはカルボキシル基、好ましくは官能性化学基のうちの少なくとも２つを含む。候補薬剤は、多くの場合、上記官能基のうちの１つ以上で置換された環状炭素もしくは複素環式構造及び／または芳香族もしくは多芳香族構造を含む。候補薬剤はまた、ペプチド、糖類、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジン、誘導体、構造的類似体、またはそれらの組み合わせを含む生体分子の中に見出される。通常、複数のアッセイの混合は、様々な濃度に対する異なった反応を得るために異なる薬剤濃度で並行して実行される。典型的には、これらの濃度のうちの１つは、陰性対照として、すなわち、ゼロ濃度または検出レベル未満で機能する。

【0086】

「全長抗体」は通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖を含む約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結されている一方で、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖及び軽鎖は、規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）と、それに続くいくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を有し、その他端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。

【0087】

「単離された」分子または細胞は、それが生成された環境において通常関連する少なくとも１つの混入分子または細胞から同定及び分離された分子または細胞である。好ましくは、単離された分子または細胞は、生成環境に関連する全ての成分と会合しない。単離された分子または細胞は、天然に見られる形態または状況以外の形態である。そのため、単離された分子は、細胞に天然に存在する分子とは区別され；単離された細胞は、組織、器官、または個体に天然に存在する細胞とは区別される。いくつかの実施形態では、単離された分子は、本開示の抗Ｃ１ｓ、抗Ｃ１ｑ、または抗Ｃ１ｒ抗体である。他の実施形態では、単離された細胞は、本開示の抗Ｃ１ｓ、抗Ｃ１ｑ、または抗Ｃ１ｒ抗体を生成する宿主細胞またはハイブリドーマ細胞である。

【0088】

「単離された」抗体は、その生成環境（例えば、天然または組換え）の成分から同定、分離、及び／または回収されたものである。好ましくは、単離されたポリペプチドは、その生成環境からの全ての他の混入成分と会合しない。組換えトランスフェクション細胞に起因するもの等のその生成環境からの混入成分は、抗体の研究、診断的または治療的使用を典型的に妨げるであろう物質であり、これには酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質が含まれ得る。ある特定の好ましい実施形態では、ポリペプチドは、（１）例えば、ローリー法によって決定される、抗体の９５重量％超、いくつかの実施形態では、９９重量％超になるまで、（２）スピニングカップシークエネーターを使用して、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシーブルー、または好ましくはシルバー染色を使用して、非還元または還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均質性が得られるまで、精製されるであろう。単離された抗体には、抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換えＴ細胞内でｉｎ ｓｉｔｕの抗体が含まれる。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製工程を含むプロセスによって調製される。

【0089】

抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「Ｖ_Ｈ」及び「Ｖ_Ｌ」と称され得る。これらのドメインは通常、抗体の最も可変性の高い部分であり（同じクラスの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含有する。

【0090】

用語「可変」は、可変ドメインのある特定のセグメントが、抗体によって配列が大幅に異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体の、その特定の抗原に対する特異性を定義する。しかしながら、可変性は、可変ドメイン全体に均等に分布しているわけではない。むしろ、それは、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメインの両方において、超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、ベータ－シート構造を接続し、いくつかの場合では、ベータ－シート構造の一部を形成するループを形成する３つのＨＶＲによって接続されたベータ－シート立体配置を大いに採用する４つのＦＲ領域を含む。各鎖内のＨＶＲは、ＦＲ領域によって近接して互いに結び付いており、他方の鎖のＨＶＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗原に対する抗体の結合に直接的に関与しないが、様々なエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞毒性における抗体の関与を示す。

【0091】

本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」は、重鎖及び軽鎖の両方のポリペプチドの可変領域内に見られる非連続的抗原結合部位を意味することが意図されている。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９９１）（本明細書ではＫａｂａｔ １９９１とも称される）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）（本明細書ではＣｈｏｔｈｉａ １９８７とも称される）；及びＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）（定義には、互いに対して比較した場合にアミノ酸残基の重複またはサブセットが含まれる）に記載されている。それにもかかわらず、抗体もしくはグラフト抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指すためのいずれの定義の適用も、本明細書で定義及び使用される用語の範囲内であることが意図されている。

【0092】

本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ－Ｌ１」、「ＣＤＲ－Ｌ２」、及び「ＣＤＲ－Ｌ３」は、それぞれ、軽鎖可変領域における第１、第２、及び第３ＣＤＲを指す。本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ－Ｈ１」、「ＣＤＲ－Ｈ２」、及び「ＣＤＲ－Ｈ３」は、それぞれ、重鎖可変領域における第１、第２、及び第３ＣＤＲを指す。本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ－１」、「ＣＤＲ－２」、及び「ＣＤＲ－３」は、それぞれ、いずれかの鎖の可変領域の第１、第２及び第３ＣＤＲを指す。

【0093】

用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指す、すなわち、その集団の個々の抗体は、微量で存在し得る天然に存在する変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性体化、アミド化）を除き、同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して仕向けられている。異なる決定基（エピトープ）に対して仕向けられた異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して仕向けられている。それらの特異性に加え、モノクローナル抗体は、典型的にはハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロブリンが混入されていないので有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団として得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５－９７（１９７５）；Ｈｏｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３－２６０（１９９５），Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３－６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－４７２（２００４）；及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４））、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座もしくはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部もしくは全てを有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３；ＷＯ１９９６／３４０９６；ＷＯ１９９６／３３７３５；ＷＯ１９９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．ＵＳＡ ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；第５，５４５，８０６号；第５，５６９，８２５号；第５，６２５，１２６号；第５，６３３，４２５号；及び第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２－８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５－８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３（１９９５）を参照のこと）を含む、様々な技術によって作製される。

【0094】

用語「全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「完全抗体」は、抗体断片または抗体誘導体とは対照的に、実質的にインタクトな形態の抗体を指すために互換的に使用される。具体的には、完全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。いくつかの場合では、インタクトな抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。

【0095】

抗体の「抗体断片」または「機能的断片」は、インタクトな抗体の一部、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合及び／または可変領域または改変されたＦｃＲ結合能力を保持するまたは有する抗体のＦ領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２及びＦｖ断片；ダイアボディ；及び線状抗体が含まれる（米国特許５，６４１，８７０、実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）参照）。抗体断片の追加の例には、抗体誘導体、例えば、抗体断片から形成される一本鎖抗体分子、一価抗体及び多重特異性抗体が含まれる。

【0096】

「抗体誘導体」は、抗体の抗原結合領域を含む任意の構築物である。抗体誘導体の例には、抗体断片から形成される一本鎖抗体分子、一価抗体及び多重特異性抗体が含まれる。

【0097】

抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映して表記される１つの残留「Ｆｃ」断片とが生成される。Ｆａｂフラグメントは、Ｌ鎖全体に加えて、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ）、ならびに１つの重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）からなる。各Ｆａｂフラグメントは、抗原結合に関しては一価である、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大型Ｆ（ａｂ’）_２断片をもたらし、これは、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合したＦａｂ断片にほぼ対応し、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、Ｃ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む、いくつかの更なる残基を有することにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、元来、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生成された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも既知である。

【0098】

Ｆｃフラグメントは、ジスルフィドによって一緒に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列によって決定され、この領域はまた、ある特定の細胞型に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される。

【0099】

本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用され、天然配列のＦｃ領域及びバリアントＦｃ領域が含まれる。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムによると残基４４７）は、例えば、抗体の生成もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって、除去されてもよい。したがって、インタクトな抗体の組成物は、全Ｋ４４７残基が除去された抗体母集団、除去されたＫ４４７残基がない抗体母集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有しない抗体との混合物を有する抗体母集団を含んでもよい。本開示の抗体における使用に好適な天然配列のＦｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が含まれる。

【0100】

「天然配列Ｆｃ領域」は、天然で見られるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然に存在するバリアントが含まれる。

【0101】

「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸改変、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）によって天然配列Ｆｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域中または親ポリペプチドのＦｃ領域中に約１～約１０個のアミノ酸置換、及び好ましくは約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、ならびに最も好ましくは、それらと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらと少なくとも約９５％の相同性を保有する。

【0102】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。更に、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子バリアント及び選択的スプライシング形態を含むものであり、ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは主にその細胞質性ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（「ＩＴＩＭ」）をその細胞質性ドメインに含有する。（例えば、Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）を参照のこと）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４（１９９４）；及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．ＣＬＩＮ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）において検討されている。将来特定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。ＦｃＲは、抗体の血清半減期を増加させ得る。

【0103】

ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのインビボでのＦｃＲｎへの結合及び血清中半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスもしくはトランスフェクトヒト細胞株において、またはバリアントＦｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類においてアッセイすることができる。ＷＯ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合が改善また低減された抗体バリアントについて記載している。また、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照のこと。

【0104】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位及び抗原結合部位を含有する最小の抗体フラグメントである。このフラグメントは、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインが、非共有結合で緊密に結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗原結合特異性を抗体に与える、６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、全結合部位よりも低い親和性であるが、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まないＦｖの半分）でさえも、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。

【0105】

「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも短縮される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に結合されるＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含んでおり、ｓＦｖが抗原結合に所望される構造を形成することを可能にする。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照のこと。

【0106】

「ダイアボディ」という用語は、鎖内ではなく鎖間のＶドメイン対合を達成し、それによって二価フラグメント、すなわち、２つの抗原結合部位を有するフラグメントが得られるように、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間に短いリンカー（約５～１０個の残基）を用いてｓＦｖフラグメント（前の段落を参照されたい）を構築することによって調製された小さな抗体フラグメントを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインが異なるポリペプチド鎖に存在している、２つの「交差」ｓＦｖフラグメントのヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、ＥＰ ４０４，０９７；ＷＯ １９９３／０１１１６１；ＷＯ／２００９／１２１９４８；ＷＯ／２０１４／１９１４９３；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－４８（１９９３）においてより詳細に記載されている。

【0107】

本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である抗体（免疫グロブリン）、ならびにそのような抗体の断片を指し、これは、それらが所望される生物学的活性を呈する限りにおいてである（米国特許番号４，８１６，５６７；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－５５（１９８４））。本明細書における対象となるキメラ抗体には、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が含まれ、ここで、この抗体の抗原結合領域は、例えば、マカクザルに目的の抗原で免疫付与を行うことによって生成される抗体に由来する。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットである。

【0108】

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲからの残基が、所望される特異性、親和性、及び／または能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲからの残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含み得る。これらの改変は、結合親和性等の抗体の性能を更に改良するために行われ得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものであるが、ＦＲ領域には、結合親和性、異性体化、免疫原性等の抗体の性能を向上させる１つ以上の個々のＦＲ残基置換が含まれてもよい。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は典型的には、Ｈ鎖では６以下、及びＬ鎖では３以下である。ヒト化抗体はまた、任意に、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含む。更なる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照のこと。また、例えば、Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ， Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５－１１５ （１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３：１０３５－１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８－４３３（１９９４）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号及び第７，０８７，４０９号を参照のこと。

【0109】

「ヒト抗体」は、ヒトによって生成された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体、及び／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製する技術のうちの任意のものを用いて作製されたものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含む当該技術分野で既知の種々の技術を使用して生成され得る。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５（１９９１）に記載の方法も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。また、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）を参照のこと。ヒト抗体は、抗原攻撃に応答してそのような抗体を生成するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、免疫化異種マウス（ｘｅｎｏｍｉｃｅ）に抗原を投与することにより調製され得る（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関しては、米国特許第６，０７５，１８１及び６，１５０，５８４を参照のこと）。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体についても、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）を参照されたい。

【0110】

本明細書で使用される場合、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、配列が超可変性であり、及び／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。概して、抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。天然抗体において、Ｈ３及びＬ３は、これらの６つのＨＶＲのうちで最も高い多様性を呈し、特にＨ３が、抗体に優れた特異性を与える上で特有の役割を果たすと考えられている。例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：３７－４５（２０００）；Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｗｕ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１－２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３））を参照されたい。実際には、重鎖のみからなる天然に存在するラクダ科抗体は、軽鎖の不在下で機能的であり、安定している。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）及びＳｈｅｒｉｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３－７３６（１９９６）を参照のこと。

【0111】

いくつかのＨＶＲ描写が本明細書で使用され、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．）。Ｃｈｏｔｈｉａは、そうではなく、構造的ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。ＡｂＭ ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の妥協案を示し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づく。これらのＨＶＲの各々由来の残基が以下に記載される。

【表1】

【0112】

ＨＶＲは、以下のように「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬにおける２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、ならびにＶＨにおける２６～３５（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）、及び９３～１０２、９４～１０２、または９５～１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの伸長ＨＶＲの定義の各々について上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従って番号付けされる。

【0113】

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0114】

「Ｋａｂａｔにあるような可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにあるようなアミノ酸位置番号付け」という語句、及びそれらの変形は、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．における抗体の編集物の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用して、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲの短縮、またはそれへの挿入に対応するより少ないアミノ酸または追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔに従って残基５２ａ）を、また重鎖ＦＲ残基８２後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔに従って残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃ等）を含んでもよい。残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体に対して、抗体の配列と「標準の」Ｋａｂａｔによって番号付けされた配列との相同領域での整合によって決定され得る。

【0115】

Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、一般に、可変ドメイン内の残基（大体、軽鎖の１～１０７残基及び重鎖の１～１１３残基）に言及する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。（１９９１））。「ＥＵ番号付けシステム」または「ＥＵ指標」は、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する際に使用される（例えば、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．で報告されているＥＵ指標）。「ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指標」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。本明細書に別途述べられない限り、抗体の可変ドメインにおける残基番号への言及は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。本明細書で別途述べられない限り、抗体の定常ドメインにおける残基番号への言及は、ＥＵ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する（例えば、米国特許公開番号２０１０－２８０２２７参照）。

【0116】

「アクセプターヒトフレームワーク」は、本明細書で使用される場合、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク由来のＶＬフレームワークまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、それと同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれは既存のアミノ酸配列変化を含有してもよい。いくつかの実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨに存在する場合、好ましいそれらの変化が位置７１Ｈ、７３Ｈ、及び７８Ｈのうちの３つ、２つ、または１つにのみ存在し、例えば、それらの位置のアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、及び／または７８Ａであり得る。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。

【0117】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表する、フレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループから行われる。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）にあるようなサブグループである。例には、ＶＬに関するものが含まれ、サブグループは、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるようなサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、またはカッパＩＶであり得る。更に、ＶＨについては、サブグループは、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるようなサブグループＩ、サブグループＩＩ、またはサブグループＩＩＩであり得る。

【0118】

指定された位置における「アミノ酸改変」は、指定された残基の置換もしくは欠失、または指定された残基に隣接する少なくとも１個のアミノ酸残基の挿入を指す。指定された残基に「隣接する」挿入は、その１～２個の残基内への挿入を意味する。挿入は、指定された残基のＮ末端側またはＣ末端側であり得る。本明細書における好ましいアミノ酸改変は、置換である。

【0119】

「親和性成熟」抗体は、その１つ以上のＨＶＲに１つ以上の変化を有し、これらの変化が、それらの変化（複数可）を有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の向上をもたらすものである。いくつかの実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対するナノモルまたは更にはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当該技術分野で公知の手順によって生成される。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）は、ＶＨ及びＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟について記載している。ＨＶＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、例えば、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９－３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７－１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４－２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０－９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－８９６（１９９２）に記載されている。

【0120】

本明細書で使用される場合、用語「特異的に認識する」または「特異的に結合する」は、生物学的分子を含む分子の異種集団の存在下で標的の存在を決定する、標的と抗体との間の引力または結合等の測定可能な及び再生可能な相互作用を指す。例えば、標的またはエピトープに特異的または優先的に結合する抗体は、他の標的または標的の他のエピトープに結合する場合よりも高い親和性、アビディティで、より容易に、及び／またはより長い持続時間でこの標的またはエピトープに結合する抗体である。例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部位）は、第２の標的に特異的または優先的に結合する場合があり、または結合しない場合があることも理解される。このように、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的な結合を（含み得るが）必ずしも必要とするわけではない。標的に特異的に結合する抗体は、少なくとも約１０^３Ｍ^－１または１０^４Ｍ^－１、時に約１０^５Ｍ^－１または１０^６Ｍ^－１、他の例では約１０^６Ｍ^－１または１０^７Ｍ^－１、約１０^８Ｍ^－１～１０^９Ｍ^－１、または約１０^１０Ｍ^－１～１０^１１Ｍ^－１またはそれ以上の結合定数を有し得る。特定のタンパク質と特異的免疫反応性の抗体を選択するために多様なイムノアッセイ形式が使用され得る。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質と特異的免疫反応性のモノクローナル抗体を選択するために日常的に使用される。特異的免疫反応性を決定するために使用され得るイムノアッセイ形式及び条件の説明については、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。

【0121】

「同一性」は、本明細書で使用される場合、アライメントされた配列における任意の特定の位置でアミノ酸残基が配列間で同一であることを示す。「類似性」は、本明細書で使用される場合、アライメントされた配列における任意の特定の位置でアミノ酸残基が配列間で類似するタイプのものであることを示す。例えば、ロイシンは、イソロイシンまたはバリンの代わりに用いられ得る。しばしば互いに置換され得る他のアミノ酸には、以下が含まれるがこれらに限定されない：
－フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン（芳香族側鎖を有するアミノ酸）；
－リジン、アルギニン及びヒスチジン（塩基性側鎖を有するアミノ酸）；
－アスパルテート及びグルタメート（酸性側鎖を有するアミノ酸）；
－アスパラギン及びグルタミン（アミド側鎖を有するアミノ酸）；及び
－システイン及びメチオニン（硫黄含有側鎖を有するアミノ酸）

【0122】

同一性及び類似性の度合いは、容易に計算できる。（例えば、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７；及びＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１を参照のこと）。

【0123】

本明細書で使用される場合、補体タンパク質と第２のタンパク質との間の「相互作用」は、限定されないが、タンパク質－タンパク質相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合、及びイオン結合を包含する。本明細書で使用される場合、抗体が２つのタンパク質間の相互作用を破壊し、減少させ、または完全に排除する場合、抗体は、２つのタンパク質間の「相互作用を阻害する」。抗体またはその断片が２つのタンパク質のうちの１つに結合する場合、本開示の抗体、またはその断片は、２つのタンパク質間の「相互作用を阻害する」。

【0124】

「遮断」抗体、「アンタゴニスト」抗体、「阻害」抗体、または「中和」抗体は、それが結合する抗原の１つ以上の生物学的活性、例えば、１つ以上のタンパク質との相互作用を阻害または減少させる抗体である。いくつかの実施形態では、遮断抗体、アンタゴニスト抗体、阻害抗体、または「中和」抗体は、抗原の１つ以上の生物学的活性または相互作用を実質的にまたは完全に阻害する。

【0125】

用語「阻害剤」は、標的生体分子の活性または発現を減少させることによるものかどうかにかかわらず、標的生体分子、例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質の生物学的機能を阻害する能力を有する化合物を指す。阻害剤は、抗体、小分子、または核酸分子であり得る。用語「アンタゴニスト」は、受容体に結合し、受容体の生物学的反応を阻止または減衰させる化合物を指す。用語「阻害剤」はまた、「アンタゴニスト」を指し得る。

【0126】

抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因するそれらの生物学的活性を指し、抗体アイソタイプによって異なる。

【0127】

本明細書で使用される場合、用語「親和性」は、２つの物質（例えば、抗体及び抗原）の可逆的結合についての平衡定数を指し、解離定数（ＫＤ）として表される。親和性は、非関連アミノ酸配列に対する抗体の親和性よりも少なくとも１倍高く、少なくとも２倍高く、少なくとも３倍高く、少なくとも４倍高く、少なくとも５倍高く、少なくとも６倍高く、少なくとも７倍高く、少なくとも８倍高く、少なくとも９倍高く、少なくとも１０倍高く、少なくとも２０倍高く、少なくとも３０倍高く、少なくとも４０倍高く、少なくとも５０倍高く、少なくとも６０倍高く、少なくとも７０倍高く、少なくとも８０倍高く、少なくとも９０倍高く、少なくとも１００倍高く、または少なくとも１，０００倍高く、またはそれ以上であり得る。標的タンパク質に対する抗体の親和性は、例えば、約１００ナノモル濃度（ｎＭ）～約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ～約１ピコモル濃度（ｐＭ）、または約１００ｎＭ～約１フェムトモル濃度（ｆＭ）またはそれ以上であり得る。本明細書で使用される場合、用語「アビディティ」は、２つ以上の物質の複合体が希釈後に解離することに対する抵抗性を指す。用語「免疫反応性」及び「優先的に結合する」は、抗体及び／または抗原結合断片に関して本明細書で互換的に使用される。

【0128】

用語「結合」は、例えば、塩架橋及び水架橋等の相互作用を含む、共有結合性、静電気性、疎水性、及びイオン性及び／または水素結合相互作用による、２つの分子間の直接的会合を指す。例えば、対象抗Ｃ１ｓ抗体は、補体Ｃ１ｓタンパク質内のエピトープに特異的に結合する。「特異的結合」は、少なくとも約１０^－７Ｍ以上、例えば、５×１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、５×１０^－８Ｍ、及びそれ以上の親和性での結合を指す。「非特異的結合」は、約１０^－７Ｍ未満の親和性、例えば、１０^－６Ｍ、１０^－５Ｍ、１０^－４Ｍ等の親和性での結合を指す。

【0129】

用語「ｋ_ｏｎ」は、本明細書で使用される場合、抗原に対する抗体の会合についての速度定数を指すことが意図されている。

【0130】

用語「ｋ_ｏｆｆ」は、本明細書で使用される場合、抗体／抗原複合体からの抗体の解離についての速度定数を指すことが意図されている。

【0131】

用語「Ｋ_Ｄ」は、本明細書で使用される場合、抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すことが意図されている。

【0132】

本明細書で使用される場合、ペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に関して、「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、配列同一性最大パーセントを達成するために、配列を整合させ、必要に応じてギャップを導入した後の、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮しない、特定のペプチドもしくはポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合を指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、例えば、公共に利用可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して、当該技術分野における技術内の様々な方法で達成され得る。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するのに必要な当該技術分野で知られている任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定し得る。

【0133】

「生物学的サンプル」は、個体から得られる多様なサンプルタイプを包含し、診断またはモニタリングアッセイにおいて使用され得る。その定義は、血液及び生物学的起源の他の液体サンプル、固体組織サンプル、例えば、生検試料または組織培養物またはそれに由来する細胞及びその子孫を包含する。その定義にはまた、それらの調達後に任意の方法で、例えば、ポリヌクレオチド等のある特定の成分について試薬での処置、可溶化、または濃縮によって操作されたサンプルが含まれる。用語「生物学的サンプル」は、臨床サンプルを包含し、培養細胞、細胞上清、細胞ライセート、血清、血漿、生体液、及び組織サンプルも含む。用語「生物学的サンプル」には、尿、唾液、脳脊髄液、間質液、眼液、滑液、血液分画、例えば、血漿及び血清等が含まれる。用語「生物学的サンプル」にはまた、固体組織サンプル、組織培養サンプル、及び細胞サンプルが含まれる。

【0134】

「単離された」核酸分子は、それが生成された環境において通常関連する少なくとも１つの混入核酸分子から同定及び分離された核酸分子である。好ましくは、単離された核酸は、生成環境に関連する全ての成分と会合しない。本明細書におけるポリペプチド及び抗体をコードする単離された核酸分子は、天然に見られる形態または状況以外の形態である。そのため、単離された核酸分子は、細胞において天然に存在する本明細書における任意のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。

【0135】

用語「ベクター」は、本明細書で使用される場合は、それが連結された別の核酸を輸送することが可能な核酸分子を指すことが意図されている。ベクターの１つのタイプは、「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡを指す。ベクターの別のタイプは、ファージベクターである。ベクターの別のタイプは、ウイルスベクターであり、この場合、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノム内にライゲーションされ得る。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞において自己複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入すると宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それにより宿主ゲノムとともに複製される。更に、ある特定のベクターは、それらが機能可能に連結された遺伝子の発現を指示することが可能である。そのようなベクターは、本明細書で「組換え発現ベクター」、または単純に「発現ベクター」と称される。通常、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターはしばしば、プラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に使用される形態のベクターであるため互換的に使用され得る。

【0136】

本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」、または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変ヌクレオチドまたは塩基、及び／またはそれらのアナログ、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによってまたは合成反応によってポリマーに組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、改変ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチド及びそれらのアナログを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する改変は、ポリマーのアセンブリの前または後に付与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって隔てられていてもよい。ポリヌクレオチドは、合成後に生成される改変（複数可）、例えば、標識へのコンジュゲーションを含み得る。他のタイプの改変には、例えば、天然に存在するヌクレオチドのうちの１つ以上をアナログと置換する「キャップ」、ヌクレオチド間改変、例えば、非電荷性結合（例えば、メチルホスホン酸塩、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメート等）によるもの、及び電荷性結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート等）によるもの、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ－Ｌ－リジン等）等の懸垂部位を含むもの、挿入剤（例えば、アクリジン、ソラーレン等）によるもの、キレート剤（例えば、金属、放射活性金属、ホウ素、酸化金属等）を含むもの、アルキル化剤を含むもの、改変結合（例えば、アルファアノマー核酸等）によるもの、ならびにポリヌクレオチド（複数可）の未改変形態が含まれる。更に、糖内に通常存在するヒドロキシル基のうちのいずれかは、例えば、ホスホン酸基、リン酸基により置き換えられるか、標準的な保護基により保護されるか、もしくは活性化されて追加のヌクレオチドへの追加の結合を生成してもよく、または固体もしくは半固体支持体にコンジュゲーションされてもよい。５’及び３’末端ＯＨは、リン酸化され、またはアミンもしくは１～２０個の炭素原子の有機キャッピング基部位と置換され得る。他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化され得る。ポリヌクレオチドは、例えば、２’－Ｏ－メチル－、２’－Ｏ－アリル、２’－フルオロ－または２’－アジド－リボース、炭素環糖アナログ、α－アノマー糖、エピマー糖、例えば、アラビノース、キシロースまたはリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、アクリル酸アナログ、及び塩基性ヌクレオシドアナログ、例えば、メチルリボシドを含む、当該技術分野において一般的に知られているリボースまたはデオキシリボース糖のアナログ形態を含み得る。１つ以上のホスホジエステル結合は、代替連結基によって置き換えられ得る。これらの代替連結基には、ホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ_２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ、またはＣＨ_２（「ホルムアセタール」）（式中、各ＲまたはＲ’は、独立して、Ｈ、またはエーテル（－Ｏ－）結合を任意に含有する置換もしくは非置換アルキル（１～２０Ｃ）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたはアラルキルである）によって置き換えられた実施形態が含まれるがこれらに限定されない。ポリヌクレオチドにおける全ての結合が同一である必要はない。先述の記載は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書で言及される全てのポリヌクレオチドに適用される。

【0137】

「遺伝子編集剤」は、本明細書で使用される場合、その代表例として、Ｃａｓ９及びＣｐｆｌ ｇＲＮＡ等のＣＲＩＳＰＲ関連ヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼのＡｒｇｏｎａｕｔｅファミリー、クラスター化された規則的に間隔が空いた短い回文反復（ＣＲＩＳＰＲ）ヌクレアーゼ、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ、他のエンドヌクレアーゼ及び／またはエキソヌクレアーゼが挙げられる、遺伝子編集剤として定義される。Ｓｃｈｉｆｆｅｒ，２０１２，Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８８（１７）：８９２０－８９３６（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。

【0138】

「ＲＮＡ干渉剤」は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）による標的バイオマーカー遺伝子の発現を妨げるかまたは阻害する任意の薬剤として定義される。そのようなＲＮＡ干渉剤には、本発明の標的バイオマーカー遺伝子に相同なＲＮＡ分子またはその断片、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、及びＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）による標的バイオマーカー核酸の発現を妨げるかまたは阻害する小分子を含む核酸分子が含まれるが、これらに限定されない。

【0139】

「ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）」は、標的バイオマーカー核酸と同一もしくは非常に類似の配列のＲＮＡの発現または導入が、その標的遺伝子から転写されたメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の配列特異的分解または特異的転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）（Ｃｏｂｕｒｎ，Ｇ．ａｎｄ Ｃｕｌｌｅｎ，Ｂ．（２００２）Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７６（１８）：９２２５を参照のこと）をもたらし、それによって標的バイオマーカー核酸の発現を阻害する、進化的に保存されたプロセスである。一実施形態では、ＲＮＡは、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。このプロセスは、植物、無脊椎動物、及び哺乳動物細胞に記載されている。自然界では、ＲＮＡｉは、ｄｓＲＮＡ特異的エンドヌクレアーゼＤｉｃｅｒによって開始され、これは、ｓｉＲＮＡと呼ばれる二本鎖断片への長いｄｓＲＮＡのプロセッシブな切断を促進する。ｓｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡを認識し、切断するタンパク質複合体に組み込まれる。ＲＮＡｉはまた、標的バイオマーカー核酸の発現を阻害するかまたはサイレンシングするために、核酸分子、例えば、合成ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、または他のＲＮＡ干渉剤を導入することによって開始され得る。本明細書で使用される場合、「標的バイオマーカー核酸発現の阻害」または「マーカー遺伝子発現の阻害」は、標的バイオマーカー核酸によってコードされる標的バイオマーカー核酸もしくはタンパク質の発現またはタンパク質活性またはレベルのいずれかの減少を含む。減少は、標的バイオマーカー核酸の発現、またはＲＮＡ干渉剤によって標的化されていない標的バイオマーカー核酸によってコードされるタンパク質の活性もしくはレベルと比較して、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上であってよい。

【0140】

ＲＮＡｉに加えて、ゲノム編集は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、及び／またはＣ１ｓ等の補体経路成分等の、対象となるバイオマーカーの構成的または誘発されるノックアウトまたは変異等の、対象となるバイオマーカーのコピー数または遺伝子配列を調節するために使用され得る。例えば、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系は、ゲノム核酸の正確な編集のために（例えば、非機能的またはヌル変異を作製するために）使用され得る。そのような実施形態では、ＣＲＩＳＰＲガイドＲＮＡ及び／またはＣａｓ酵素が、発現されてもよい。例えば、ガイドＲＮＡのみを含有するベクターは、Ｃａｓ９酵素トランスジェニック動物または細胞に投与することができる。同様の戦略が使用され得る（例えば、デザイナー亜鉛フィンガー、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）またはホーミングメガヌクレアーゼ）。そのようなシステムは、当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第８，６９７，３５９号、Ｓａｎｄｅｒ ａｎｄ Ｊｏｕｎｇ （２０１４）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．３２：３４７－３５５；Ｈａｌｅ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ １３９：９４５－９５６；Ｋａｒｇｉｎｏｖ ａｎｄ Ｈａｎｎｏｎ （２０１０）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ３７：７；米国特許公開第２０１４／００８７４２６号及び第２０１２／０１７８１６９号；Ｂｏｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１３５－１３６；Ｂｏｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６：１５０９－１５１２；Ｍｏｓｃｏｕ ａｎｄ Ｂｏｇｄａｎｏｖｅ （２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６：１５０１；Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６：ｅ１９７２２；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３９：６３１５－６３２５；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４９－１５３；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３－１４８；Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４２：ｅ４７を参照のこと）。そのような遺伝子戦略は、当該技術分野でよく知られている方法に従って、構成的発現系または誘発性発現系を使用することができる。

【0141】

「Ｐｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）」は、非コードＲＮＡ小分子の最大のクラスである。ｐｉＲＮＡは、ｐｉｗｉタンパク質との相互作用を通じてＲＮＡ－タンパク質複合体を形成する。これらのｐｉＲＮＡ複合体は、生殖系細胞、特に精子形成における生殖系細胞におけるレトロトランスポゾン及び他の遺伝子要素のエピジェネティック遺伝子サイレンシング及び転写後遺伝子サイレンシングの両方に関連している。これらは、サイズ（２１～２４ｎｔではなく２６～３１ｎｔ）、配列保存性が欠如している、及び複雑性が増加している点でマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）とは異なる。しかしながら、他の小分子ＲＮＡと同様に、ｐｉＲＮＡは、遺伝子サイレンシング、具体的にはトランスポゾンのサイレンシングに関与していると考えられている。ｐｉＲＮＡの大部分は、トランスポゾン配列に対してアンチセンスであり、これは、トランスポゾンがｐｉＲＮＡ標的であることを示唆している。哺乳動物では、トランスポゾンサイレンシングにおけるｐｉＲＮＡの活性は、胚の発達の間に最も重要であるようであり、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ及びヒトの両方において、ｐｉＲＮＡは、精子形成に必要である。ｐｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）の形成を介したＲＮＡサイレンシングにおける役割を有する。

【0142】

「アプタマー」は、特定の標的分子に結合するオリゴヌクレオチドまたはペプチド分子である。「核酸アプタマー」は、インビトロ選択の反復ラウンドを通じて、または等価的に、ＳＥＬＥＸ（指数関数的濃縮によるリガンドの系統的進化）を通じて操作されて、小分子、タンパク質、核酸、更には細胞、組織及び生物等の様々な分子標的に結合する核酸種である。「ペプチドアプタマー」は、特定の標的分子に結合するように選択または操作される人工タンパク質である。これらのタンパク質は、タンパク質骨格によって示される可変配列の１つ以上のペプチドループからなる。これらは、典型的には、組み合わせライブラリから単離され、多くの場合、その後、定向変異または可変領域変異誘発及び選択のラウンドによって改善される。ペプチドアプタマーの進化である「アフィマータンパク質」は、特定の標的タンパク質に対して高親和性結合面を提供するペプチドループを示すように操作された、高度に安定した小タンパク質である。シスタチンのシステインプロテアーゼ阻害剤ファミリーに由来する、低分子量１２～１４ｋＤａのタンパク質である。アプタマーは、バイオテクノロジー及び治療用途に有用であり、一般的に使用される生体分子である抗体に匹敵する分子認識特性を提供する。それらの識別認識に加え、アプタマーは、試験管内で完全に操作することができ、化学合成によって容易に生成され、所望の貯蔵特性を有し、治療用途において免疫原性がほとんどまたはまったく誘発されないので、抗体よりも利点がある。

【0143】

本明細書でも「小分子干渉ＲＮＡ」と称される「小分子干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）は、例えばＲＮＡｉによる標的バイオマーカー核酸の発現を阻害するように機能する薬剤として定義される。ｓｉＲＮＡは、化学的に合成されてもよく、インビトロ転写によって産生されてもよいし、宿主細胞内で産生されてもよい。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、約１５～約４０ヌクレオチド長、好ましくは約１５～約２８ヌクレオチド長、より好ましくは約１９～約２５ヌクレオチド長、及びより好ましくは約１９、２０、２１、または２２ヌクレオチド長の二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子であり、約０、１、２、３、４、または５ヌクレオチドの長さを有する各鎖上に３’及び／または５’オーバーハングを含有してもよい。オーバーハングの長さは、２本の鎖間で独立しており、すなわち、１つの鎖上のオーバーハングの長さは、第２の鎖上のオーバーハングの長さに依存しない。好ましくは、ｓｉＲＮＡは、標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の分解または特異的転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）を通じて、ＲＮＡ干渉を促進することが可能である。

【0144】

別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、小分子ヘアピン（ステムループとも呼ばれる）ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である。一実施形態では、これらのｓｈＲＮＡは、短い（例えば、１９～２５ヌクレオチド）アンチセンス鎖、続いて５～９ヌクレオチドループ、及び類似のセンス鎖から構成される。あるいは、センス鎖は、ヌクレオチドループ構造の前であってもよく、アンチセンス鎖は後であってもよい。これらのｓｈＲＮＡは、プラスミド、レトロウイルス、及びレンチウイルスに含有され得、例えば、ｐｏｌ ＩＩＩ Ｕ６プロモーターまたは別のプロモーターから発現され得る（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ，ｅｔ ａｌ．（２００３）ＲＮＡ Ａｐｒ；９（４）：４９３－５０１（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。

【0145】

「宿主細胞」には、ポリヌクレオチド挿入物の組み込みのためのベクター（複数可）のためのレシピエントであり得、レシピエントとなっている個々の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は、天然、突然、または意図的変異のため、必ずしも元の親細胞と（形態においてまたはゲノムＤＮＡ相補体において）完全に同一である必要はない場合がある。宿主細胞には、本開示のポリヌクレオチド（複数可）でインビボでトランスフェクションされた細胞が含まれる。

【0146】

本明細書で使用される「担体」は、用いられる投薬量及び濃度でそれに曝露されている細胞または哺乳動物に対して非毒性の薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または安定化剤が含まれる。しばしば、生理的に許容可能な担体は、水性ｐＨ緩衝液である。生理的に許容可能な担体の例には、緩衝液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジン；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）が含まれる。

【0147】

「予防すること」という用語は、当該技術分野で認識されており、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかん等の状態に関連して使用される場合、当該技術分野で十分に理解されており、組成物を投与されない対象と比較して、対象における医学的状態の１つ以上の症状の頻度もしくは重症度を低下させるか、またはその発症を遅らせる組成物の投与を含む。同様に、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんの予防は、療法を受けていない患者と比較して、療法を受けている患者が、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、もしくは症候性部分てんかん等のてんかん、または関連する症状を発症する可能性を低減することを含む。

【0148】

用語「対象」は、本明細書で使用される場合、生存している哺乳動物を指し、用語「患者」と互換的に使用され得る。哺乳動物の例には、哺乳動物クラスの任意のメンバー：ヒト、非ヒト霊長類、例えば、チンパンジー、及び他の類人猿及びサル種；牧場動物、例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ；家庭動物、例えば、ウサギ、イヌ、及びネコ；齧歯類、例えば、ラット、マウス及びモルモットを含む実験動物等が含まれるがこれらに限定されない。その用語は、特定の年齢または性別を示さない。

【0149】

本明細書で使用される場合、用語「処置すること」または「処置」は、病態の症状、臨床的兆候、または根底にある病理を減少、停止、または逆行させて、対象の病態を安定化または改善することまたは対象の病態が対象が処置を受けなかった場合と同じ程度悪化する可能性を低下させることを含む。

【0150】

対象の処置方法に関して化合物の「治療的有効量」という用語は、（哺乳動物、好ましくはヒトに対する）所望の投薬レジメンの一部として投与される場合、例えば、任意の医学的処置に適用可能な妥当な利益／リスク比で、疾患または病態が処置されるために、または化粧品目的のために臨床的に許容可能な標準に従う、症状を軽減する、病態を改善する、または疾患病態の発症を遅らせる調製物における化合物（複数可）の量を指す。本明細書における治療的有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において所望の反応を引き起こすための抗体の能力等の要因に応じて変わり得る。

【0151】

本明細書で使用される場合、特定の疾患、障害、または病態を発症する「リスクのある」個体は、検出可能な疾患または疾患の症状を示してもいなくてもよく、また、本明細書に記載の処置方法の前に検出可能な疾患または疾患の症状を示してもいなくてもよい。「リスクのある」は、個体が、当該技術分野で知られているように、特定の疾患、障害、または病態の発症と相関する測定可能なパラメータである、１つ以上のリスク要因を有することを意味する。これらのリスク要因のうちの１つ以上を有する個体は、これらのリスク要因のうちの１つ以上を有さない個体よりも特定の疾患、障害、または病態を発症する可能性が高い。

【0152】

「慢性」投与は、初期の治療効果（活性）を長期間維持するように、急性様式とは対照的に連続した医薬品（複数可）の投与を指す。「間欠的」投与は、中断することなく連続的に投与されるのではなく、事実上周期的／定期的である処置を指す。

【0153】

本明細書で使用される場合、別の化合物または組成物と「併せた」投与は、同時投与及び／または異なる時点での投与を含む。併せた投与はまた、異なる投薬頻度または間隔、及び同じ投与経路または異なる投与経路を使用することを含む、共製剤としての投与または別々の組成物としての投与を包含する。

【0154】

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者が一般に理解する意味と同一の意味を有する。本明細書に記載のもの類似または同等の任意の方法及び物質も本発明の実践または試験において使用され得るが、好ましい方法及び物質をこれより説明する。本明細書に言及される全ての刊行物は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３））；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ ｅｄｓ．（１９９５）），Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８７））；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ），ｅｄ．，１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）；及びＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）に記載される広く利用されている方法論等、これらの刊行物が引用されるものに関連して、方法及び／または材料を開示及び説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。

【0155】

抗補体Ｃ１ｑ抗体
本明細書で開示される抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑの強力な阻害剤であり、任意の期間にわたって抹消及びＣＮＳの両方における継続的阻害のために投薬され、次いでその活性がＣＮＳの修復にとって重要であり得る時点で正常なＣ１ｑ機能の回復を可能にするために任意に停止され得る。動物研究において本明細書に開示される抗Ｃ１ｑ抗体で得られた結果は、同じ抗体のヒト化バージョン（本明細書に開示される抗体はマウス及びヒトＣ１ｑと交差反応する）、ならびにその断片及び／または誘導体を用いて臨床に容易に進展させることができる。

【0156】

Ｃ１ｑは、１８個のポリペプチド鎖（６個のＣ１ｑのＡ鎖、６個のＣ１ｑのＢ鎖、及び６個のＣ１ｑのＣ鎖）からなる４６０ｋＤａの大型多量体タンパク質である。Ｃ１ｒ及びＣ１ｓ補体タンパク質は、Ｃ１ｑ尾部領域に結合してＣ１複合体（Ｃ１ｑｒ_２ｓ_２）を形成する。

【0157】

好適な阻害剤としては、古典的補体活性化経路のＣ１複合体における補体因子Ｃ１ｑ及び／またはＣ１ｑに結合する抗体が挙げられる。結合した補体因子は、限定されないが、任意の哺乳動物生物、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ラクダ、ヒツジ、ヤギ、またはブタを含む補体系を有する任意の生物に由来し得る。

【0158】

本明細書で使用される場合、「Ｃ１複合体」は、限定されないが、１つのＣ１ｑタンパク質、２つのＣ１ｒタンパク質、及び２つのＣ１ｓタンパク質を含み得るタンパク質複合体（例えば、Ｃ１ｑｒ^２ｓ^２）を指す。

【0159】

本明細書で使用される場合、「補体因子Ｃ１ｑ」は、野生型配列及び天然に存在するバリアント配列の両方を指す。

【0160】

本開示の抗体によって認識される補体因子Ｃ１ｑの非限定的な例は、３つのポリペプチド鎖Ａ、Ｂ、及びＣを含むヒトＣ１ｑである：
Ｃ１ｑ，鎖Ａ（ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ），アクセッション番号 タンパク質
データベース：ＮＰ＿０５７０７５．１；ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ．：ＮＭ＿０１５９９１：
＞ｇｉ｜７７０５７５３｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０５７０７５．１｜補体Ｃ１ｑ
サブコンポーネントサブユニットＡ前駆体［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］
（配列番号１）
ＭＥＧＰＲＧＷＬＶＬＣＶＬＡＩＳＬＡＳＭＶＴＥＤＬＣＲＡＰＤＧＫＫＧＥＡＧＲＰＧＲＲＧＲＰＧＬＫＧＥＱＧＥＰＧＡＰＧＩＲＴＧＩＱＧＬＫＧＤＱＧＥＰＧＰＳＧＮＰＧＫＶＧＹＰＧＰＳＧＰＬＧＡＲＧＩＰＧＩＫＧＴＫＧＳＰＧＮＩＫＤＱＰＲＰＡＦＳＡＩＲＲＮＰＰＭＧＧＮＶＶＩＦＤＴＶＩＴＮＱＥＥＰＹＱＮＨＳＧＲＦＶＣＴＶＰＧＹＹＹＦＴＦＱＶＬＳＱＷＥＩＣＬＳＩＶＳＳＳＲＧＱＶＲＲＳＬＧＦＣＤＴＴＮＫＧＬＦＱＶＶＳＧＧＭＶＬＱＬＱＱＧＤＱＶＷＶＥＫＤＰＫＫＧＨＩＹＱＧＳＥＡＤＳＶＦＳＧＦＬＩＦＰＳＡ。
Ｃ１ｑ，鎖Ｂ（ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ），アクセッション番号 タンパク質
データベース：ＮＰ＿０００４８２．３；ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ．：ＮＭ＿０００４９１．３：
＞ｇｉ｜８７２９８８２８｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０００４８２．３｜補体Ｃｌｑ
サブコンポーネントサブユニットＢ前駆体［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］
（配列番号２）
ＭＭＭＫＩＰＷＧＳＩＰＶＬＭＬＬＬＬＬＧＬＩＤＩＳＱＡＱＬＳＣＴＧＰＰＡＩＰＧＩＰＧＩＰＧＴＰＧＰＤＧＱＰＧＴＰＧＩＫＧＥＫＧＬＰＧＬＡＧＤＨＧＥＦＧＥＫＧＤＰＧＩＰＧＮＰＧＫＶＧＰＫＧＰＭＧＰＫＧＧＰＧＡＰＧＡＰＧＰＫＧＥＳＧＤＹＫＡＴＱＫＩＡＦＳＡＴＲＴＩＮＶＰＬＲＲＤＱＴＩＲＦＤＨＶＩＴＮＭＮＮＮＹＥＰＲＳＧＫＦＴＣＫＶＰＧＬＹＹＦＴＹＨＡＳＳＲＧＮＬＣＶＮＬＭＲＧＲＥＲＡＱＫＶＶＴＦＣＤＹＡＹＮＴＦＱＶＴＴＧＧＭＶＬＫＬＥＱＧＥＮＶＦＬＱＡＴＤＫＮＳＬＬＧＭＥＧＡＮＳＩＦＳＧＦＬＬＦＰＤＭＥＡ。
Ｃ１ｑ，鎖Ｃ（ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ），アクセッション番号 タンパク質
データベース： ＮＰ＿００１１０７５７３．１；ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ．：
ＮＭ＿００１１１４１０１．１：
＞ｇｉ｜１６６２３５９０３｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１１０７５７３．１｜補体Ｃ１ｑ
サブコンポーネントサブユニットＣ前駆体［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］
（配列番号３）
ＭＤＶＧＰＳＳＬＰＨＬＧＬＫＬＬＬＬＬＬＬＬＰＬＲＧＱＡＮＴＧＣＹＧＩＰＧＭＰＧＬＰＧＡＰＧＫＤＧＹＤＧＬＰＧＰＫＧＥＰＧＩＰＡＩＰＧＩＲＧＰＫＧＱＫＧＥＰＧＬＰＧＨＰＧＫＮＧＰＭＧＰＰＧＭＰＧＶＰＧＰＭＧＩＰＧＥＰＧＥＥＧＲＹＫＱＫＦＱＳＶＦＴＶＴＲＱＴＨＱＰＰＡＰＮＳＬＩＲＦＮＡＶＬＴＮＰＱＧＤＹＤＴＳＴＧＫＦＴＣＫＶＰＧＬＹＹＦＶＹＨＡＳＨＴＡＮＬＣＶＬＬＹＲＳＧＶＫＶＶＴＦＣＧＨＴＳＫＴＮＱＶＮＳＧＧＶＬＬＲＬＱＶＧＥＥＶＷＬＡＶＮＤＹＹＤＭＶＧＩＱＧＳＤＳＶＦＳＧＦＬＬＦＰＤ。

【0161】

したがって、本開示の抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑタンパク質のポリペプチド鎖Ａ、ポリペプチド鎖Ｂ、及び／またはポリペプチド鎖Ｃに結合し得る。いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｃ１ｑ抗体は、ヒトＣ１ｑまたはそのホモログ、例えば、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ラクダ、ヒツジ、ヤギ、またはブタＣ１ｑのポリペプチド鎖Ａ、ポリペプチド鎖Ｂ、及び／またはポリペプチド鎖Ｃに結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。

【0162】

好適な抗体としては、補体Ｃ１ｑタンパク質に結合する抗体（すなわち、本明細書で抗Ｃ１ｑ抗体及びＣ１ｑ抗体とも称される抗補体Ｃ１ｑ抗体）及び特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんを予防するか、その発症リスクを低下させるか、またはそれを治療する方法のためのそのような抗体をコードする核酸分子が含まれる。

【0163】

Ｃ１ｑタンパク質に結合するのに好適な他の抗Ｃ１ｑ抗体は、当該技術分野でよく知られており、それには、例えば、抗体カタログ番号：ＡＦ２３７９、ＡＦ１６９６、ＭＡＢ１６９６、及びＭＡＢ２３７９１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）、ＮＢＰ１－８７４９２、ＮＢ１００－６４４２０、Ｈ０００００７１２－Ｂ０１Ｐ、Ｈ０００００７１２－Ｄ０１Ｐ、及びＨ０００００７１２－Ｄ０１（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、ＭＡ１－８３９６３、ＭＡ１－４０３１１、ＰＡ５－１４２０８、ＰＡ５－２９５８６、及びＰＡ１－３６１７７（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ａｂ７１９４０、ａｂ１１８６１、ａｂ４２２３、ａｂ７２３５５、ａｂ１８２４５１、ａｂ４６１９１、ａｂ２２７０７２、ａｂ１８２９４０、ａｂ２１６９７９、及びａｂ２３５４５４（ａｂｃａｍ）等が含まれる。更に、Ｃ１ｑ発現を低減するための複数のｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ構築物は、ＳｉＲＮＡ製品番号ｓｃ－４３６５１、ｓｃ－４４９６２、ｓｃ－１０５１５３、ｓｃ－１４１８４２、ＳｈＲＮＡ製品番号ｓｃ－４３６５１－ＳＨ、ｓｃ－４３６５１－Ｖ、ｓｃ－４４９６２－ＳＨ、ｓｃ－４４９６２－Ｖ、ｓｃ－１０５１５３－ＳＨ、ｓｃ－１０５１５３－Ｖ、ｓｃ－１４１８４２－ＳＨ、ｓｃ－１４１８４２－Ｖ、ＣＲＩＳＰＲ製品番号ｓｃ－４１９３８５、ｓｃ－４１９３８５－ＨＤＲ、ｓｃ－４１９３８５－ＮＩＣ、ｓｃ－４１９３８５－ＮＩＣ－２、ｓｃ－４０２１５６、ｓｃ－４０２１５６－ＫＯ－２、ｓｃ－４０４３０９、ｓｃ－４０４３０９－ＨＤＲ、ｓｃ－４０４３０９－ＮＩＣ、ｓｃ－４０４３０９－ＮＩＣ－２、ｓｃ－４１９３８６、ｓｃ－４１９３８６－ＨＤＲ、ｓｃ－４１９３８６－ＮＩＣ、ｓｃ－４１９３８６－ＮＩＣ－２（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ等）等の上記会社の商業製品リストに見出すことができる。

【0164】

以下の２０段落で挙げられる全ての配列は、米国特許番号９，７０８，３９４（それが開示する抗体及び関連する組成物について参照により本明細書に組み込まれる）から参照により組み込まれる。

【0165】

抗体Ｍ１の軽鎖及び重鎖可変ドメイン配列
標準的な技術を使用して、抗体Ｍ１の軽鎖可変及び重鎖可変ドメインをコードする核酸及びアミノ酸配列を決定した。抗体Ｍ１の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、

【0166】

【0167】

軽鎖可変ドメインの超可変領域（ＨＶＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。いくつかの実施形態では、Ｍ１軽鎖可変ドメインのＨＶＲ－Ｌ１は配列ＲＡＳＫＳＩＮＫＹＬＡ（配列番号５）を有し、Ｍ１軽鎖可変ドメインのＨＶＲ－Ｌ２は配列ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号６）を有し、Ｍ１軽鎖可変ドメインのＨＶＲ－Ｌ３は配列ＱＱＨＮＥＹＰＬＴ（配列番号７）を有する。

【0168】

抗体Ｍ１の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、

【0169】

【0170】

重鎖可変ドメインの超可変領域（ＨＶＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。いくつかの実施形態では、Ｍ１重鎖可変ドメインのＨＶＲ－Ｈ１は配列ＧＹＨＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号９）を有し、Ｍ１重鎖可変ドメインのＨＶＲ－Ｈ２は配列ＶＩＨＰＮＳＧＳＩＮＹＮＥＫＦＥＳ（配列番号１０）を有し、Ｍ１重鎖可変ドメインのＨＶＲ－Ｈ３は配列ＥＲＤＳＴＥＶＬＰＭＤＹ（配列番号１１）を有する。

【0171】

軽鎖可変ドメインをコードする核酸配列は、
ＧＡＴＧＴＣＣＡＧＡＴＡＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＴＡＴＣＴＴＧＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＡＡＣＣＡＴＴＡＣＴＡＴＴＡＡＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＴＡＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＡＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＡＡＣＴＡＡＴＡＡＧＣＴＴＣＴＴＡＴＣＴＡＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＡＣＴＴＴＧＣＡＡＴＣＴＧＧＡＡＴＴＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＣＡＴＡＡＴＧＡＡＴＡＣＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ（配列番号１２）。

【0172】

重鎖可変ドメインをコードする核酸配列は、
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＡＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＴＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＣＡＴＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＴＧＡＴＴＣＡＴＣＣＴＡＡＴＡＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＡＡＣＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＡＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＧＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＴＴＣＴＡＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＣＣＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１３）。

【0173】

物質の寄託
以下の物質は、ブダペスト条約に従ってＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ，１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．２０１１０－２２０９，ＵＳＡ（ＡＴＣＣ）に寄託された：

【表2】

【0174】

培養物の入手が特許出願の係属中及び３０年間、または最新の請求から５年後、または特許の有効期間のうち長い方まで利用可能となることを保証する条件下でＭ１抗体を生成するハイブリドーマ細胞株（マウスハイブリドーマＣ１ｑＭ１ ７７８８－１（Ｍ）０５１６１３）がＡＴＣＣに寄託された。寄託物は、その期間中に生存できなくなった場合に置き換えられる。寄託物は、本出願の対応出願、またはその子孫が出願された国における外国特許法によって要求されるように利用可能である。しかしながら、寄託物の利用可能性は、政府の措置によって付与された特許権を逸脱して本発明を実施するためのライセンスを構成するものではないことが理解されるべきである。

【0175】

本明細書では、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含む抗Ｃ１ｑ抗体を投与する方法が開示される。抗体は、少なくともヒトＣ１ｑ、マウスＣ１ｑ、またはラットＣ１ｑに結合し得る。抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体であり得る。抗体は、モノクローナル抗体、その抗体断片、及び／またはその抗体誘導体であり得る。軽鎖可変ドメインは、アクセッション番号ＰＴＡ－１２０３９９で寄託されたハイブリドーマ細胞株によって生成されるモノクローナル抗体Ｍ１のＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む。重鎖可変ドメインは、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２０３９９で寄託されたハイブリドーマ細胞株によって生成されるモノクローナル抗体Ｍ１のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む。

【0176】

いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＨＶＲ－Ｌ１の配列番号５、ＨＶＲ－Ｌ２の配列番号６、ＨＶＲ－Ｌ３の配列番号７、ＨＶＲ－Ｈ１の配列番号９、ＨＶＲ－Ｈ２の配列番号１０、及びＨＶＲ－Ｈ３の配列番号１１のうちの１つ以上を含む。

【0177】

抗体は、好ましくはＨＶＲ－Ｌ１ ＲＡＳＫＳＩＮＫＹＬＡ（配列番号５）、ＨＶＲ－Ｌ２ ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号６）、及びＨＶＲ－Ｌ３ ＱＱＨＮＥＹＰＬＴ（配列番号７）を保持しつつ、配列番号４と少なくとも８５％、９０％、または９５％同一の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み得る。抗体は、好ましくはＨＶＲ－Ｈ１ ＧＹＨＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号９）、ＨＶＲ－Ｈ２ ＶＩＨＰＮＳＧＳＩＮＹＮＥＫＦＥＳ（配列番号１０）、及びＨＶＲ－Ｈ３ ＥＲＤＳＴＥＶＬＰＭＤＹ（配列番号１１）を保持しつつ、配列番号８と少なくとも８５％、９０％、または９５％同一の重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み得る。

【0178】

本明細書では、Ｃ１ｑと自己抗体との間の相互作用を阻害する抗Ｃ１ｑ抗体を投与する方法が開示される。好ましい実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、循環または組織からのＣ１ｑのクリアランスを引き起こす。

【0179】

抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑタンパク質に結合してもよく、（ａ）配列番号１のアミノ酸残基１９６～２２６（配列番号１６）、または配列番号１のアミノ酸残基１９６～２２６（ＧＬＦＱＶＶＳＧＧＭＶＬＱＬＱＱＧＤＱＶＷＶＥＫＤＰＫＫＧＨＩ）（配列番号１６）に対応するＣ１ｑタンパク質鎖Ａ（Ｃ１ｑＡ）のアミノ酸残基、（ｂ）配列番号１のアミノ酸残基１９６～２２１（配列番号１７）、または配列番号１のアミノ酸残基１９６～２２１（ＧＬＦＱＶＶＳＧＧＭＶＬＱＬＱＱＧＤＱＶＷＶＥＫＤＰ）（配列番号１７）に対応するＣ１ｑＡのアミノ酸残基；（ｃ）配列番号１のアミノ酸残基２０２～２２１（配列番号１８）、または配列番号１のアミノ酸残基２０２～２２１（ＳＧＧＭＶＬＱＬＱＱＧＤＱＶＷＶＥＫＤＰ）（配列番号１８）に対応するＣ１ｑＡのアミノ酸残基；（ｄ）配列番号１のアミノ酸残基２０２～２１９（配列番号１９）、または配列番号１のアミノ酸残基２０２～２１９（ＳＧＧＭＶＬＱＬＱＱＧＤＱＶＷＶＥＫ）（配列番号１９）に対応するＣ１ｑＡのアミノ酸残基；及び（ｅ）配列番号１のアミノ酸残基Ｌｙｓ２１９及び／またはＳｅｒ２０２、または配列番号１のＬｙｓ２１９及び／またはＳｅｒ２０２に対応するＣ１ｑＡのアミノ酸残基から選択されるアミノ酸残基内のＣ１ｑタンパク質の１つ以上のアミノ酸に結合してもよい。

【0180】

いくつかの実施形態では、抗体は、更に、（ａ）配列番号３のアミノ酸残基２１８～２４０（配列番号２０）、または配列番号３のアミノ酸残基２１８～２４０（ＷＬＡＶＮＤＹＹＤＭＶＧＩ ＱＧＳＤＳＶＦＳＧＦ）（配列番号２０）に対応するＣ１ｑタンパク質鎖Ｃ（Ｃ１ｑＣ）のアミノ酸残基；（ｂ）配列番号３のアミノ酸残基２２５～２４０（配列番号２１）、または配列番号３のアミノ酸残基２２５～２４０（ＹＤＭＶＧＩ ＱＧＳＤＳＶＦＳＧＦ）（配列番号２１）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｃ）配列番号３のアミノ酸残基２２５～２３２（配列番号２２）、または配列番号３のアミノ酸残基２２５～２３２（ＹＤＭＶＧＩＱＧ）（配列番号２２）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｄ）配列番号３のアミノ酸残基Ｔｙｒ２２５、または配列番号３のアミノ酸残基Ｔｙｒ２２５に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｅ）配列番号３のアミノ酸残基１７４～１９６（配列番号２３）、または配列番号３のアミノ酸残基１７４～１９６（ＨＴＡＮＬＣＶＬＬＹＲＳＧＶＫＶＶＴＦＣＧＨＴ）（配列番号２３）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｆ）配列番号３のアミノ酸残基１８４～１９２（配列番号２４）、または配列番号３のアミノ酸残基１８４～１９２（ＲＳＧＶＫＶＶＴＦ）（配列番号２４）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｇ）配列番号３のアミノ酸残基１８５～１８７、または配列番号３のアミノ酸残基１８５～１８７（ＳＧＶ）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｈ）配列番号３のアミノ酸残基Ｓｅｒ１８５、または配列番号３のアミノ酸残基Ｓｅｒ１８５に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基から選択されるアミノ酸残基内のＣ１ｑタンパク質の１つ以上のアミノ酸に結合する。

【0181】

ある特定の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号１に示されるヒトＣ１ｑＡのアミノ酸残基Ｌｙｓ２１９及びＳｅｒ２０２、または配列番号１に示されるＬｙｓ２１９及びＳｅｒ２０２に対応するヒトＣ１ｑＡのアミノ酸、及び配列番号３に示されるヒトＣ１ｑＣのアミノ酸残基Ｔｙｒ２２５、または配列番号３に示されるＴｙｒ２２５に対応するヒトＣ１ｑＣのアミノ酸残基に結合する。ある特定の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号１に示されるヒトＣ１ｑＡのアミノ酸残基Ｌｙｓ２１９、または配列番号１に示されるＬｙｓ２１９に対応するヒトＣ１ｑＡのアミノ酸残基、及び配列番号３に示されるヒトＣ１ｑＣのアミノ酸残基Ｓｅｒ１８５、または配列番号３に示されるＳｅｒ１８５に対応するヒトＣ１ｑＣのアミノ酸残基に結合する。

【0182】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑタンパク質に結合し、（ａ）配列番号３のアミノ酸残基２１８～２４０（配列番号２０）、または配列番号３のアミノ酸残基２１８～２４０（ＷＬＡＶＮＤＹＹＤＭＶＧＩ ＱＧＳＤＳＶＦＳＧＦ）（配列番号２０）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｂ）配列番号３のアミノ酸残基２２５～２４０（配列番号２１）、または配列番号３のアミノ酸残基２２５～２４０（ＹＤＭＶＧＩ ＱＧＳＤＳＶＦＳＧＦ）（配列番号２１）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｃ）配列番号３のアミノ酸残基２２５～２３２（配列番号２２）、または配列番号３のアミノ酸残基２２５～２３２（ＹＤＭＶＧＩＱＧ）（配列番号２２）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｄ）配列番号３のアミノ酸残基Ｔｙｒ２２５、または配列番号３のアミノ酸残基Ｔｙｒ２２５に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｅ）配列番号３のアミノ酸残基１７４～１９６（配列番号２３）、または配列番号３のアミノ酸残基１７４～１９６（ＨＴＡＮＬＣＶＬＬＹＲＳＧＶＫＶＶＴＦＣＧＨＴ）（配列番号２３）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｆ）配列番号３のアミノ酸残基１８４～１９２（配列番号２４）、または配列番号３のアミノ酸残基１８４～１９２（ＲＳＧＶＫＶＶＴＦ）（配列番号２４）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｇ）配列番号３のアミノ酸残基１８５～１８７、または配列番号３のアミノ酸残基１８５～１８７（ＳＧＶ）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｈ）配列番号３のアミノ酸残基Ｓｅｒ１８５、または配列番号３のアミノ酸残基Ｓｅｒ１８５に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基から選択されるアミノ酸残基内のＣ１ｑタンパク質の１つ以上のアミノ酸に結合する。

【0183】

いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑとＣ１ｓとの間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑとＣ１ｒとの間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑとＣ１ｓとの間及びＣ１ｑとＣ１ｒとの間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑと別の抗体、例えば、自己抗体との間の相互作用を阻害する。好ましい実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、循環または組織からのＣ１ｑのクリアランスを引き起こす。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、２．５：１；２．０：１；１．５：１；または１．０：１未満の化学量論でそれぞれの相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、Ｃ１ｑ抗体は、およそ等モルの濃度のＣ１ｑ及び抗Ｃ１ｑ抗体で、Ｃ１ｑ－Ｃ１ｓ相互作用等の相互作用を阻害する。他の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、２０：１未満；１９．５：１未満；１９：１未満；１８．５：１未満；１８：１未満；１７．５：１未満；１７：１未満；１６．５：１未満；１６：１未満；１５．５：１未満；１５：１未満；１４．５：１未満；１４：１未満；１３．５：１未満；１３：１未満；１２．５：１未満；１２：１未満；１１．５：１未満；１１：１未満；１０．５：１未満；１０：１未満；９．５：１未満；９：１未満；８．５：１未満；８：１未満；７．５：１未満；７：１未満；６．５：１未満；６：１未満；５．５：１未満；５：１未満；４．５：１未満；４：１未満；３．５：１未満；３：１未満；２．５：１未満；２．０：１未満；１．５：１未満；または１．０：１未満の化学量論でＣ１ｑに結合する。ある特定の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、２０：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｑに結合する。ある特定の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、６：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｑに結合する。ある特定の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、２．５：１～１．０：１または１．０：１未満の範囲の結合化学量論でＣ１ｑに結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑとＣ１ｒとの間、またはＣ１ｑとＣ１ｓとの間、またはＣ１ｑとＣ１ｒ及びＣ１ｓの両方との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑとＣ１ｒとの間、Ｃ１ｑとＣ１ｓとの間、及び／またはＣ１ｑとＣ１ｒ及びＣ１ｓの両方との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑのＡ鎖に結合する。他の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑのＢ鎖に結合する。他の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑのＣ鎖に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑのＡ鎖、Ｃ１ｑのＢ鎖及び／またはＣ１ｑのＣ鎖に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑのＡ鎖、Ｂ鎖、及び／またはＣ鎖の球状ドメインに結合する。他の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑのＡ鎖、Ｃ１ｑのＢ鎖、及び／またはＣ１ｑのＣ鎖のコラーゲン様ドメインに結合する。

【0184】

本開示の抗体が２つ以上の補体因子間の相互作用、例えば、Ｃ１ｑ及びＣ１ｓの相互作用、またはＣ１ｑとＣ１ｒとの間の相互作用を阻害する場合、抗体の存在下で生じる相互作用は、本開示の抗体が非存在の対照と比べて少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％減少し得る。ある特定の実施形態では、抗体の存在下で生じる相互作用は、本開示の抗体が非存在の対照と比べて少なくとも３０％～少なくとも９９％の範囲の量だけ減少する。

【0185】

いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、本開示の抗体が非存在の対照と比べて、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、または少なくとも３０％～少なくとも９９％の範囲の量だけ、Ｃ２またはＣ４切断を阻害する。Ｃ２またはＣ４切断を測定するための方法は、当該技術分野でよく知られている。Ｃ２またはＣ４切断に関して本開示の抗体のＥＣ_５０値は、３μｇ／ｍｌ；２．５μｇ／ｍｌ；２．０μｇ／ｍｌ；１．５μｇ／ｍｌ；１．０μｇ／ｍｌ；０．５μｇ／ｍｌ；０．２５μｇ／ｍｌ；０．１μｇ／ｍｌ；０．０５μｇ／ｍｌ未満であり得る。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、およそ等モル濃度のＣ１ｑ及びそれぞれの抗Ｃ１ｑ抗体でＣ２またはＣ４切断を阻害する。

【0186】

いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、本開示の抗体が非存在の対照と比べて、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、または少なくとも３０％～少なくとも９９％の範囲の量だけ、自己抗体依存性及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を阻害する。自己抗体依存性及び補体依存性細胞傷害の阻害に関して本開示の抗体のＥＣ_５０値は、３μｇ／ｍｌ；２．５μｇ／ｍｌ；２．０μｇ／ｍｌ；１．５μｇ／ｍｌ；１．０μｇ／ｍｌ；０．５μｇ／ｍｌ；０．２５μｇ／ｍｌ；０．１μｇ／ｍｌ；０．０５μｇ／ｍｌ未満であり得る。

【0187】

いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、本開示の抗体が非存在の対照と比べて、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、または少なくとも３０％～少なくとも９９％の範囲の量だけ、補体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＣＤＣＣ）を阻害する。ＣＤＣＣを測定するための方法は、当該技術分野でよく知られている。ＣＤＣＣ阻害に関して本開示の抗体のＥＣ_５０値は、３μｇ／ｍｌ；２．５μｇ／ｍｌ；２．０μｇ／ｍｌ；１．５μｇ／ｍｌ；１．０μｇ／ｍｌ；０．５μｇ／ｍｌ；０．２５μｇ／ｍｌ；０．１μｇ／ｍｌ；０．０５μｇ／ｍｌ未満であり得る。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＣＤＣＣを阻害するが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を阻害しない。

【0188】

ヒト化抗補体Ｃ１ｑ抗体
本開示のヒト化抗体は、古典的補体経路のＣ１複合体における補体因子Ｃ１ｑ及び／またはＣ１ｑタンパク質に特異的に結合する。ヒト化抗Ｃ１ｑ抗体は、ヒトＣ１ｑ、ヒト及びマウスＣ１ｑ、ラットＣ１ｑ、またはヒトＣ１ｑ、マウスＣ１ｑ、及びラットＣ１ｑに特異的に結合し得る。

【0189】

以下の１６段落で挙げられる全ての配列は、米国特許第１０，３１６，０８１号（それが開示する抗体及び関連する組成物について参照により本明細書に組み込まれる）から参照により組み込まれる。

【0190】

いくつかの実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、配列番号４７のアミノ酸配列、または配列番号４７と少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４重鎖定常領域である。ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って１つ以上の改変及び／またはアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含み得る。そのような場合では、Ｆｃ領域は、位置２４８におけるロイシンからグルタメートへのアミノ酸置換を含み、そのような置換は、Ｆｃ領域がＦｃ受容体と相互作用することを阻害する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、位置２４１におけるセリンからプロリンへのアミノ酸置換を含み、そのような置換は、抗体におけるアームスイッチを防止する。

【0191】

ヒトＩｇＧ４（Ｓ２４１Ｐ Ｌ２４８Ｅ）重鎖定常ドメインのアミノ酸配列は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４７）

【0192】

抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み得、重鎖可変ドメインは、配列番号３１～３４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号３１～３４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定のそのような実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号３５～３８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号３５～３８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。

【0193】

重鎖可変ドメインバリアント１（ＶＨ１）のアミノ酸配列は、

【0194】

ＶＨ１の超可変領域（ＨＶＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。

【0195】

重鎖可変ドメインバリアント２（ＶＨ２）のアミノ酸配列は、

【0196】

ＶＨ２の超可変領域（ＨＶＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。

【0197】

重鎖可変ドメインバリアント３（ＶＨ３）のアミノ酸配列は、

【0198】

ＶＨ３の超可変領域（ＨＶＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。

【0199】

重鎖可変ドメインバリアント４（ＶＨ４）のアミノ酸配列は、

【0200】

ＶＨ４の超可変領域（ＨＶＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。

【0201】

カッパ軽鎖可変ドメインバリアント１（Ｖκ１）のアミノ酸配列は、

【0202】

Ｖκ１の超可変領域（ＨＶＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。

【0203】

カッパ軽鎖可変ドメインバリアント２（Ｖκ２）のアミノ酸配列は、

【0204】

Ｖκ２の超可変領域（ＨＶＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。

【0205】

カッパ軽鎖可変ドメインバリアント３（Ｖκ３）のアミノ酸配列は、

【0206】

Ｖκ３の超可変領域（ＨＶＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。

【0207】

カッパ軽鎖可変ドメインバリアント４（Ｖκ４）のアミノ酸配列は、

【0208】

Ｖκ４の超可変領域（ＨＶＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。

【0209】

抗体は、ＨＶＲ－Ｌ１ ＲＡＳＫＳＩＮＫＹＬＡ（配列番号５）、ＨＶＲ－Ｌ２ ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号６）、及びＨＶＲ－Ｌ３ ＱＱＨＮＥＹＰＬＴ（配列番号７）を保持しつつ、配列番号３５～３８と少なくとも８５％、９０％、または９５％同一の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み得る。抗体は、好ましくはＨＶＲ－Ｈ１ ＧＹＨＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号９）、ＨＶＲ－Ｈ２ ＶＩＨＰＮＳＧＳＩＮＹＮＥＫＦＥＳ（配列番号１０）、及びＨＶＲ－Ｈ３ ＥＲＤＳＴＥＶＬＰＭＤＹ（配列番号１１）を保持しつつ、配列番号３１～３４と少なくとも８５％、９０％、または９５％同一の重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み得る。

【0210】

いくつかの実施形態では、本開示のヒト化抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｆａｂ領域を含有する重鎖可変領域及びＦｃ領域を含有する重鎖定常領域を含み、Ｆａｂ領域は本開示のＣ１ｑタンパク質に特異的に結合するが、Ｆｃ領域はＣ１ｑタンパク質に結合することが不可能である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプに由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、補体活性を誘導することが不可能であり、及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することが不可能である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、限定されないが、アミノ酸置換を含む、１つ以上の改変を含む。ある特定の実施形態では、本開示のヒト化抗Ｃ１ｑ抗体のＦｃ領域は、Ｋａｂａｔ番号付け慣例に従う位置２４８またはＫａｂａｔ番号付け慣例に従う位置２４８に対応する位置で、及び／またはＫａｂａｔ番号付け慣例に従う位置２４１またはＫａｂａｔ番号付け慣例に従う位置２４１に対応する位置でアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置２４８または位置２４８に対応する位置でのアミノ酸置換は、Ｆｃ領域がＦｃ受容体と相互作用することを阻害する。いくつかの実施形態では、位置２４８または位置２４８に対応する位置でのアミノ酸置換は、ロイシンからグルタメートへのアミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、位置２４１または位置２４１に対応する位置でのアミノ酸置換は、抗体におけるアームスイッチを防止する。いくつかの実施形態では、位置２４１または位置２４１に対応する位置でのアミノ酸置換は、セリンからプロリンへのアミノ酸置換である。ある特定の実施形態では、本開示のヒト化抗Ｃ１ｑ抗体のＦｃ領域は、配列番号４７のアミノ酸配列、または配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。

【0211】

いくつかの実施形態では、本開示のヒト化抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑタンパク質に結合してもよく、（ａ）配列番号１のアミノ酸残基１９６～２２６（配列番号１６）、または配列番号１のアミノ酸残基１９６～２２６（ＧＬＦＱＶＶＳＧＧＭＶＬＱＬＱＱＧＤＱＶＷＶＥＫＤＰＫＫＧＨＩ）（配列番号１６）に対応するＣ１ｑタンパク質鎖Ａ（Ｃ１ｑＡ）のアミノ酸残基、（ｂ）配列番号１のアミノ酸残基１９６～２２１（配列番号１７）、または配列番号１のアミノ酸残基１９６～２２１（ＧＬＦＱＶＶＳＧＧＭＶＬＱＬＱＱＧＤＱＶＷＶＥＫＤＰ）（配列番号１７）に対応するＣ１ｑＡのアミノ酸残基；（ｃ）配列番号１のアミノ酸残基２０２～２２１（配列番号１８）、または配列番号１のアミノ酸残基２０２～２２１（ＳＧＧＭＶＬＱＬＱＱＧＤＱＶＷＶＥＫＤＰ）（配列番号１８）に対応するＣ１ｑＡのアミノ酸残基；（ｄ）配列番号１のアミノ酸残基２０２～２１９（配列番号１９）、または配列番号１のアミノ酸残基２０２～２１９（ＳＧＧＭＶＬＱＬＱＱＧＤＱＶＷＶＥＫ）（配列番号１９）に対応するＣ１ｑＡのアミノ酸残基；及び（ｅ）配列番号１のアミノ酸残基Ｌｙｓ２１９及び／またはＳｅｒ２０２、または配列番号１のＬｙｓ２１９及び／またはＳｅｒ２０２に対応するＣ１ｑＡのアミノ酸残基から選択されるアミノ酸残基内のＣ１ｑタンパク質の１つ以上のアミノ酸に結合してもよい。

【0212】

いくつかの実施形態では、ヒト化抗Ｃ１ｑ抗体は、更に、（ａ）配列番号３のアミノ酸残基２１８～２４０（配列番号２０）、または配列番号３のアミノ酸残基２１８～２４０（ＷＬＡＶＮＤＹＹＤＭＶＧＩ ＱＧＳＤＳＶＦＳＧＦ）（配列番号２０）に対応するＣ１ｑタンパク質鎖Ｃ（Ｃ１ｑＣ）のアミノ酸残基；（ｂ）配列番号３のアミノ酸残基２２５～２４０（配列番号２１）、または配列番号３のアミノ酸残基２２５～２４０（ＹＤＭＶＧＩ ＱＧＳＤＳＶＦＳＧＦ）（配列番号２１）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｃ）配列番号３のアミノ酸残基２２５～２３２（配列番号２２）、または配列番号３のアミノ酸残基２２５～２３２（ＹＤＭＶＧＩＱＧ）（配列番号２２）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｄ）配列番号３のアミノ酸残基Ｔｙｒ２２５、または配列番号３のアミノ酸残基Ｔｙｒ２２５に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｅ）配列番号３のアミノ酸残基１７４～１９６（配列番号２３）、または配列番号３のアミノ酸残基１７４～１９６（ＨＴＡＮＬＣＶＬＬＹＲＳＧＶＫＶＶＴＦＣＧＨＴ）（配列番号２３）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｆ）配列番号３のアミノ酸残基１８４～１９２（配列番号２４）、または配列番号３のアミノ酸残基１８４～１９２（ＲＳＧＶＫＶＶＴＦ）（配列番号２４）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｇ）配列番号３のアミノ酸残基１８５～１８７、または配列番号３のアミノ酸残基１８５～１８７（ＳＧＶ）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｈ）配列番号３のアミノ酸残基Ｓｅｒ１８５、または配列番号３のアミノ酸残基Ｓｅｒ１８５に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基から選択されるアミノ酸残基内のＣ１ｑタンパク質の１つ以上のアミノ酸に結合してもよい。

【0213】

ある特定の実施形態では、本開示のヒト化抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号１に示されるヒトＣ１ｑＡのアミノ酸残基Ｌｙｓ２１９及びＳｅｒ２０２、または配列番号１に示されるＬｙｓ２１９及びＳｅｒ２０２に対応するヒトＣ１ｑＡのアミノ酸、及び配列番号３に示されるヒトＣ１ｑＣのアミノ酸残基Ｔｙｒ２２５、または配列番号３に示されるＴｙｒ２２５に対応するヒトＣ１ｑＣのアミノ酸残基に結合してもよい。ある特定の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体は、配列番号１に示されるヒトＣ１ｑＡのアミノ酸残基Ｌｙｓ２１９、または配列番号１に示されるＬｙｓ２１９に対応するヒトＣ１ｑＡのアミノ酸残基、及び配列番号３に示されるヒトＣ１ｑＣのアミノ酸残基Ｓｅｒ１８５、または配列番号３に示されるＳｅｒ１８５に対応するヒトＣ１ｑＣのアミノ酸残基に結合する。

【0214】

いくつかの実施形態では、本開示のヒト化抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｃ１ｑタンパク質に結合してもよく、（ａ）配列番号３のアミノ酸残基２１８～２４０（配列番号２０）、または配列番号３のアミノ酸残基２１８～２４０（ＷＬＡＶＮＤＹＹＤＭＶＧＩ ＱＧＳＤＳＶＦＳＧＦ）（配列番号２０）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｂ）配列番号３のアミノ酸残基２２５～２４０（配列番号２１）、または配列番号３のアミノ酸残基２２５～２４０（ＹＤＭＶＧＩ ＱＧＳＤＳＶＦＳＧＦ）（配列番号２１）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｃ）配列番号３のアミノ酸残基２２５～２３２（配列番号２２）、または配列番号３のアミノ酸残基２２５～２３２（ＹＤＭＶＧＩＱＧ）（配列番号２２）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｄ）配列番号３のアミノ酸残基Ｔｙｒ２２５、または配列番号３のアミノ酸残基Ｔｙｒ２２５に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｅ）配列番号３のアミノ酸残基１７４～１９６（配列番号２３）、または配列番号３のアミノ酸残基１７４～１９６（ＨＴＡＮＬＣＶＬＬＹＲＳＧＶＫＶＶＴＦＣＧＨＴ）（配列番号２３）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｆ）配列番号３のアミノ酸残基１８４～１９２（配列番号２４）、または配列番号３のアミノ酸残基１８４～１９２（ＲＳＧＶＫＶＶＴＦ）（配列番号２４）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｇ）配列番号３のアミノ酸残基１８５～１８７、または配列番号３のアミノ酸残基１８５～１８７（ＳＧＶ）に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基；（ｈ）配列番号３のアミノ酸残基Ｓｅｒ１８５、または配列番号３のアミノ酸残基Ｓｅｒ１８５に対応するＣ１ｑＣのアミノ酸残基から選択されるアミノ酸残基内のＣ１ｑタンパク質の１つ以上のアミノ酸に結合する。

【0215】

抗Ｃ１ｑ Ｆａｂ断片
組換えＤＮＡ技術の出現の前は、抗体分子の構造を切断し、分子のどの部分がその様々な機能を担っているのかを決定するために、ポリペプチド配列を切断するタンパク質分解酵素（プロテアーゼ）が使用されていた。プロテアーゼパパインでの限定消化は、抗体分子を３つの断片に切断する。Ｆａｂ断片として知られている２つの断片は同一であり、抗原結合活性を含有する。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２つの同一の腕部に対応し、その各々は、重鎖のＶ_Ｈ及びＣ_Ｈ１ドメインと対合した完全軽鎖からなる。他の断片は、抗原結合活性を含まないが、容易に結晶化することが当初観察され、この理由からＦｃ断片（結晶化可能断片）と名付けられた。Ｆａｂ分子をＩｇＧ分子と比較した場合、Ｆａｂは、それらのより高い移動性及び組織浸透能力、それらの減少した循環半減期、抗体エフェクター機能を媒介することなく一価で抗原に結合するそれらの能力、ならびにそれらのより低い免疫原性のため、ある特定のインビボ用途についてＩｇＧよりも優れていることが見出された。

【0216】

Ｆａｂ分子は、定常ドメインＣ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３によって短縮された重鎖を有するＩｇ分子の人工の約５０ｋＤａの断片である。２つの異好性（Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ及びＣ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１）ドメイン相互作用は、Ｆａｂ分子の２つの鎖の構造の基礎にあり、これはＣ_ＬとＣ_Ｈ１との間のジスルフィド架橋によって更に安定化される。Ｆａｂ及びＩｇＧは、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（３つはそれぞれＶ_Ｌ及びＶ_Ｈに由来する（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３及びＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３））によって形成される同一の抗原結合部位を有する。ＣＤＲは、抗体の超可変抗原結合部位を画定する。最も高い配列バリエーションは、ＬＣＤＲ３及びＨＣＤＲ３に見られ、これは天然免疫系では、それぞれＶ_Ｌ及びＪ_Ｌ遺伝子またはＶ_Ｈ、Ｄ_Ｈ及びＪ_Ｈ遺伝子の再編成によって生成される。ＬＣＤＲ３及びＨＣＤＲ３は典型的には、抗原結合部位のコアを形成する。６つのＣＤＲを接続し、提示する保存領域は、フレームワーク領域と称される。可変ドメインの三次元構造において、フレームワーク領域は、外側では超可変ＣＤＲループによって及び内側では保存ジスルフィド架橋によって連結された２つの対向する逆平行β－シートのサンドイッチを形成する。Ｆａｂ及びＩｇＧの抗原結合部位の安定性及び汎用性のこの独自の組み合わせは、疾患の診断、モニタリング、予防、及び処置のための臨床業務においてその成功を強調する。

【0217】

全ての抗Ｃ１ｑ抗体Ｆａｂ断片配列は、米国特許出願第１５／３６０，５４９号（それが開示する抗体及び関連する組成物について参照により本明細書に組み込まれる）から参照により組み込まれる。

【0218】

ある特定の実施形態では、本開示は、重鎖（Ｖ_Ｈ／Ｃ_Ｈ１）及び軽鎖（Ｖ_Ｌ／Ｃ_Ｌ）を含むＣ１ｑタンパク質に結合する抗Ｃ１ｑ抗体Ｆａｂ断片であって、抗Ｃ１ｑ抗体Ｆａｂ断片は、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（３つはそれぞれＶ_Ｌ及びＶ_Ｈに由来する）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を有する、抗Ｃ１ｑ抗体Ｆａｂ断片を提供する。抗体Ｆａｂ断片の重鎖は、ＩｇＧ１の第１の重鎖ドメインの後で切断され（配列番号３９）、以下のアミノ酸配列を含む：

【0219】

【0220】

配列番号１の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。

【0221】

抗体Ｆａｂ断片の軽鎖ドメインは、以下のアミノ酸配列（配列番号４０）を含む：

【0222】

【0223】

配列番号２の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、太字かつ下線の文字で示されている。

【0224】

抗補体Ｃ１ｓ抗体
好適な阻害剤には、補体Ｃ１ｓタンパク質に結合する抗体（すなわち、本明細書で抗Ｃ１ｓ抗体及びＣ１ｓ抗体とも称される抗補体Ｃ１ｓ抗体）及びそのような抗体をコードする核酸分子が含まれる。補体Ｃ１ｓは、補体カスケードにおいて上流にあり、狭い範囲の基質特異性を有するので魅力的な標的である。更に、活性化形態のＣ１ｓに特異的に結合する抗体（例えば、限定されないが、モノクローナル抗体）を得ることが可能である。

【0225】

以下の２段落で挙げられる全ての配列は、米国特許出願第１４／８９０，８１１号（それが開示する抗体及び関連する組成物について参照により本明細書に組み込まれる）から参照により組み込まれる。

【0226】

ある特定の態様では、本明細書では、抗Ｃ１ｓ抗体を投与する方法が開示される。抗体は、マウス抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であり得る。いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインは、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含み、重鎖は、５／１５／２０１３にＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２０３５１）によって生成されるマウス抗ヒトＣ１ｓモノクローナル抗体５Ａ１のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む。他の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、５／１５／２０１３にＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２０３５２）によって生成されるマウス抗ヒトＣ１ｓモノクローナル抗体５Ｃ１２のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む。

【0227】

いくつかの実施形態では、抗体は、Ｃ１ｓまたはＣ１ｓプロ酵素に特異的に結合し、その生物学的活性、例えば、Ｃ１ｑに対するＣ１ｓ結合、Ｃ１ｒに対するＣ１ｓ結合、またはＣ２もしくはＣ４に対するＣ１ｓ結合を阻害する。生物学的活性は、Ｃ１ｓのタンパク質分解酵素活性、Ｃ１ｓプロ酵素の活性プロテアーゼへの変換、またはＣ２もしくはＣ４のタンパク質分解切断であり得る。ある特定の実施形態では、生物学的活性は、古典的補体活性化経路の活性化、抗体及び補体依存性細胞傷害の活性化、またはＣ１Ｆ溶血である。

【0228】

以下の６２段落における全ての配列は、Ｖａｎ Ｖｌａｓｓｅｌａｅｒ、米国特許番号８，８７７，１９７（それが開示する抗体及び関連する組成物について参照により本明細書に組み込まれる）から参照により組み込まれる。

【0229】

本明細書では、補体成分Ｃ１ｓのドメインＩＶ及びＶを包含する領域内のエピトープに特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体を投与する方法が開示される。いくつかの場合では、抗体は、補体成分４（Ｃ４）に対するＣ１ｓの結合を阻害し、及び／またはＣ１ｓのプロテアーゼ活性を阻害しない。いくつかの実施形態では、方法は、高いアビディティでＣ１複合体における補体成分Ｃ１ｓに結合するヒト化モノクローナル抗体を投与することを含む。

【0230】

本明細書では、アミノ酸配列配列番号５７を含む抗体軽鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）の１つ以上及び／またはアミノ酸配列配列番号５８を含む抗体重鎖可変領域のＣＤＲの１つ以上を有する抗Ｃ１ｓ抗体を投与する方法が開示される。抗Ｃ１ｓ抗体は、ヒトまたはラット補体Ｃ１ｓタンパク質に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、補体Ｃ１ｓタンパク質によって切断される少なくとも１つの基質の切断を阻害する。

【0231】

ある特定の実施形態では、抗体は、ａ）配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、及び配列番号５６から選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）；及び／またはｂ）配列番号６２、配列番号６３、配列番号５３、配列番号６４、配列番号６５：及び配列番号６６から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。

【0232】

抗体は、アミノ酸配列配列番号５１を有するＣＤＲ－Ｌ１、アミノ酸配列配列番号５２を有するＣＤＲ－Ｌ２、アミノ酸配列配列番号５３を有するＣＤＲ－Ｌ３、アミノ酸配列配列番号５４を有するＣＤＲ－Ｈ１、アミノ酸配列配列番号５５を有するＣＤＲ－Ｈ２、及びアミノ酸配列配列番号５６を有するＣＤＲ－Ｈ３を含み得る。

【0233】

他の実施形態では、抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列を有する可変領域の軽鎖ＣＤＲ、及び／または配列番号６８のアミノ酸配列を有する可変領域の重鎖ＣＤＲを含み得る。

【0234】

抗体は、補体成分Ｃ１ｓに特異的に結合するヒト化抗体であって、その抗体は、エピトープとの結合についてアミノ酸配列配列番号５７または配列番号６７を含む抗体軽鎖可変領域のＣＤＲの１つ以上、及び／またはアミノ酸配列配列番号５８または配列番号６８を含む抗体重鎖可変領域のＣＤＲの１つ以上を含む抗体と競合する、ヒト化抗体であり得る。

【0235】

他の例では、抗体は、補体Ｃ１ｓに特異的に結合するヒト化抗体であり得、その抗体は、ａ）補体Ｃ１ｓタンパク質内のエピトープに特異的に結合するヒト化抗体であって、抗体が、エピトープとの結合について配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、及び配列番号５６から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む抗体と競合する、ヒト化抗体；及びｂ）補体Ｃ１ｓタンパク質内のエピトープに特異的に結合するヒト化抗体であって、抗体が、エピトープとの結合について配列番号６２、配列番号６３、配列番号５３、配列番号６４、配列番号６５、及び配列番号６６から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む抗体と競合する、ヒト化抗体から選択される。いくつかの場合では、抗体は、エピトープとの結合についてａ）配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号６９、配列番号５５、及び配列番号５６；またはｂ）配列番号６２、配列番号６３、配列番号５３、配列番号６４、配列番号６５、及び配列番号６６を含む重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む抗体と競合する。

【0236】

抗体は、別々のポリペプチドに存在する軽鎖領域及び重鎖領域を含み得る。抗体は、Ｆｃ領域を含み得る。

【0237】

本明細書では、アミノ酸配列配列番号５７と９０％同一のアミノ酸配列の軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号５８と９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗Ｃ１ｓ抗体が開示される。

【0238】

抗Ｃ１ｓ抗体は、抗原結合断片、Ｉｇモノマー、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、ｓｃＦｖ、ｓｃＡｂ、ｄＡｂ、Ｆｖ、シングルドメイン重鎖抗体、シングルドメイン軽鎖抗体、単一特異性抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体から選択され得る。

【0239】

本明細書では、抗体ＩＰＮ００３（本明細書で「ＩＰＮ－Ｍ３４」または「Ｍ３４」または「ＴＮＴ００３」とも称される）が結合するエピトープへの結合について競合する抗体、例えば、抗体ＩＰＮ００３等の抗体ＩＰＮ００３の可変ドメインを含む抗体を投与する方法が開示される。

【0240】

いくつかの実施形態では、方法は、補体Ｃ１ｓタンパク質内のエピトープに特異的に結合する抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、単離された抗Ｃ１ｓ抗体は、活性化したＣ１ｓタンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、単離された抗Ｃ１ｓ抗体は、不活性形態のＣ１ｓに結合する。他の例では、単離された抗Ｃ１ｓ抗体は、活性化したＣ１ｓタンパク質及び不活性形態のＣ１ｓの両方に結合する。

【0241】

いくつかの実施形態では、方法は、Ｃ４の切断を阻害するモノクローナル抗体を投与することを含み、単離されたモノクローナル抗体は、Ｃ２の切断を阻害しない。いくつかの実施形態では、方法は、Ｃ２の切断を阻害するモノクローナル抗体を投与することを含み、単離されたモノクローナル抗体は、Ｃ４の切断を阻害しない。いくつかの場合では、単離されたモノクローナル抗体は、ヒト化されている。いくつかの場合では、抗体は、古典的補体経路の成分を阻害する。いくつかの場合では、抗体によって阻害される古典的補体経路の成分はＣ１ｓである。本開示はまた、Ｃ４の切断を阻害する単離されたモノクローナル抗体、または単離されたモノクローナル抗体を含む薬学的組成物をそれを必要とする個体に投与することによって、補体媒介性疾患または障害を処置する方法であって、単離されたモノクローナル抗体は、Ｃ２の切断を阻害しない、方法を提供する。

【0242】

いくつかの実施形態では、方法は、Ｃ１ｓによるＣ２またはＣ４の切断を阻害する、すなわち、Ｃ２またはＣ４のＣ１ｓ媒介性タンパク質分解切断を阻害するモノクローナル抗体を投与することを含む。いくつかの場合では、モノクローナル抗体は、ヒト化されている。いくつかの場合では、抗体は、Ｃ１ｓに対するＣ２またはＣ４の結合を阻害することによってＣ１ｓによるＣ２またはＣ４の切断を阻害する；例えば、いくつかの場合では、抗体は、Ｃ１ｓのＣ２またはＣ４結合部位に対するＣ２またはＣ４の結合を阻害することによってＣ２またはＣ４のＣ１ｓ媒介性切断を阻害する。よって、いくつかの場合では、抗体は、競合阻害剤として機能する。本開示はまた、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんの治療を必要とする個体に、Ｃ１ｓによるＣ２またはＣ４の切断、すなわち、Ｃ２またはＣ４のＣ１ｓ媒介性タンパク質分解切断を阻害する単離されたモノクローナル抗体を投与することによって、それを行う方法を提供する。

【0243】

いくつかの実施形態では、方法は、Ｃ１ｓによるＣ４の切断を阻害するモノクローナル抗体を投与することを含み、抗体は、Ｃ１ｓによる補体成分Ｃ２の切断を阻害せず；すなわち、抗体は、Ｃ４のＣ１ｓ媒介性切断を阻害するが、Ｃ２のＣ１ｓ媒介性切断を阻害しない。いくつかの場合では、モノクローナル抗体は、ヒト化されている。いくつかの場合では、モノクローナル抗体は、Ｃ１ｓに対するＣ４の結合を阻害するが、Ｃ１ｓに対するＣ２の結合を阻害しない。いくつかの実施形態では、方法は、Ｃ１ｓによるＣ４の切断を阻害する単離されたモノクローナル抗体をそれを必要とする個体に投与することによって、補体媒介性疾患または障害を処置することを含み、抗体は、Ｃ１ｓによる補体成分Ｃ２の切断を阻害せず；すなわち、抗体は、Ｃ４のＣ１ｓ媒介性切断を阻害するが、Ｃ２のＣ１ｓ媒介性切断を阻害しない。方法のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化されている。

【0244】

いくつかの実施形態では、方法は、Ｃ１ｓのドメインＩＶ及びＶを包含する領域内のエピトープに特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体を投与することを含む。例えば、ヒト化モノクローナル抗体は、図１に図示され、配列番号７０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸２７２～４２２内のエピトープに特異的に結合する。いくつかの場合では、ヒト化モノクローナル抗体は、図１に図示され、配列番号７０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸２７２～４２２内のエピトープに特異的に結合し、Ｃ１ｓに対するＣ４の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、方法は、図１に図示され、配列番号７０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸２７２～４２２内のエピトープに特異的に結合し、Ｃ１ｓに対するＣ４の結合を阻害するヒト化モノクローナル抗体をそれを必要とする個体に投与することによって、補体媒介性疾患または障害を処置することを含む。

【0245】

いくつかの実施形態では、方法は、Ｃ１ｓのドメインＩＶ及びＶを包含する領域内のコンフォメーションエピトープに特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体を投与することを含む。例えば、図１に図示され、配列番号７０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸２７２～４２２内のコンフォメーションエピトープに特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体。いくつかの場合では、ヒト化モノクローナル抗体は、図１に図示され、配列番号７０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸２７２～４２２内のコンフォメーションエピトープに特異的に結合し、Ｃ１ｓに対するＣ４の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、方法は、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんを含み、図１に図示され、配列番号７０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸２７２～４２２内のコンフォメーションエピトープに特異的に結合し、Ｃ１ｓに対するＣ４の結合を阻害するヒト化モノクローナル抗体を、それを必要とする個体に投与することを含む。

【0246】

いくつかの実施形態では、方法は、Ｃ１複合体における補体成分Ｃ１ｓに結合するモノクローナル抗体を投与すること含む。Ｃ１複合体は、６分子のＣ１ｑ、２分子のＣ１ｒ、及び２分子のＣ１ｓから構成される。いくつかの場合では、モノクローナル抗体は、ヒト化されている。よって、いくつかの場合では、Ｃ１複合体における補体成分Ｃ１ｓに結合するヒト化モノクローナル抗体。いくつかの場合では、抗体は、高いアビディティでＣ１複合体に存在するＣ１ｓに結合する。

【0247】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体（例えば、補体Ｃ１ｓタンパク質におけるエピトープに特異的に結合する対象抗体）は、ａ）ＩＰＮ００３抗体の１、２、または３つのＶＬ ＣＤＲを含む軽鎖領域；及びｂ）ＩＰＮ００３抗体の１、２、または３つのＶＨ ＣＤＲを含む重鎖領域を含み、ＶＨ及びＶＬ ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ（例えば、表１及びＫａｂａｔ １９９１を参照のこと）によって定義されるとおりである。

【0248】

他の実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体（例えば、補体Ｃ１ｓタンパク質におけるエピトープに特異的に結合する対象抗体）は、ａ）ＩＰＮ００３抗体の１、２、または３つのＶＬ ＣＤＲを含む軽鎖領域；及びｂ）ＩＰＮ００３抗体の１、２、または３つのＶＨ ＣＤＲを含む重鎖領域を含み、ＶＨ及びＶＬ ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ（例えば、表１及びＣｈｏｔｈｉａ １９８７を参照のこと）によって定義されるとおりである。

【0249】

ＩＰＮ００３抗体のＣＤＲアミノ酸配列、ならびにＶＬ及びＶＨアミノ酸配列を表２に示す。表２は、アミノ酸配列のそれぞれに割り当てられた配列番号も示す。

【0250】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体（例えば、補体Ｃ１ｓタンパク質におけるエピトープに特異的に結合する対象抗体）は、ａ）配列番号５１、配列番号５２、及び配列番号５３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む軽鎖領域；及びｂ）配列番号５４、配列番号５５、及び配列番号５６から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む重鎖領域を含む。これらの実施形態の一部において、抗Ｃ１ｓ抗体は、ヒト化ＶＨ及び／またはＶＬフレームワーク領域を含む。
配列番号５１：ＳＳＶＳＳＳＹＬＨＷＹＱ；
配列番号５２：ＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰ；
配列番号５３：ＨＱＹＹＲＬＰＰＩＴ；
配列番号５４：ＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶ；
配列番号５５：ＩＳＳＧＧＳＨＴＹＹ；
配列番号５６：ＡＲＬＦＴＧＹＡＭＤＹ。

【0251】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、及び配列番号５６から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。

【0252】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号５１、配列番号５２、及び配列番号５３を含む軽鎖可変領域を含む。

【0253】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号５４、配列番号５５、及び配列番号５６を含む重鎖可変領域を含む。

【0254】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号５１を有するＣＤＲ－Ｌ１、アミノ酸配列配列番号５２を有するＣＤＲ－Ｌ２、アミノ酸配列配列番号５３を有するＣＤＲ－Ｌ３、アミノ酸配列配列番号５４を有するＣＤＲ－Ｈ１、アミノ酸配列配列番号５５を有するＣＤＲ－Ｈ２、及びアミノ酸配列配列番号５６を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0255】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号５７に示されるアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
配列番号５７：
ＤＩＶＭＴＱＴＴＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＦＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＤＡＴＹＹＣＨＱＹＹＲＬＰＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。

【0256】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号５８に示されるアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
配列番号５８：
ＱＶＫＬＥＥＳＧＧＡＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＩＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＳＧＧＳＨＴＹＹＬＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＤＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＬＦＴＧＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴ。

【0257】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号５７と９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0258】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号５８と９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0259】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号５７を含む軽鎖可変領域を含む。

【0260】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号５８を含む重鎖可変領域を含む。

【0261】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号５７と９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及びアミノ酸配列配列番号５８と９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0262】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号５７を含む軽鎖可変領域及びアミノ酸配列配列番号５８を含む重鎖可変領域を含む。

【0263】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、補体Ｃ１ｓタンパク質内のエピトープに特異的に結合し、抗体は、エピトープとの結合についてアミノ酸配列配列番号５７を含む抗体軽鎖可変領域の軽鎖ＣＤＲ及びアミノ酸配列配列番号５８を含む抗体重鎖可変領域の重鎖ＣＤＲを含む抗体と競合する。

【0264】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号５７を含む抗体軽鎖可変領域の軽鎖ＣＤＲ及びアミノ酸配列配列番号５８を含む抗体重鎖可変領域の重鎖ＣＤＲを含む。

【0265】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体（例えば、補体Ｃ１ｓタンパク質におけるエピトープに特異的に結合する対象抗体）は、ａ）配列番号６２、配列番号６３、及び配列番号５３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む軽鎖領域；及びｂ）配列番号６４、配列番号６５、及び配列番号６６から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む重鎖領域を含む。
配列番号６２：ＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨ；
配列番号６３：ＳＴＳＮＬＡＳ；
配列番号５３：ＨＱＹＹＲＬＰＰＩＴ；
配列番号６４：ＮＹＡＭＳ；
配列番号６５：ＴＩＳＳＧＧＳＨＴＹＹＬＤＳＶＫＧ；
配列番号６６：ＬＦＴＧＹＡＭＤＹ

【0266】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号６２、配列番号６３、配列番号５３、配列番号６４、配列番号６５、及び配列番号６６から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。

【0267】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６２、配列番号６３、及び配列番号５３を含む軽鎖可変領域を含む。

【0268】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６４、配列番号６５、及び配列番号６６を含む重鎖可変領域を含む。

【0269】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６２を有するＣＤＲ－Ｌ１、アミノ酸配列配列番号６３を有するＣＤＲ－Ｌ２、アミノ酸配列配列番号５３を有するＣＤＲ－Ｌ３、アミノ酸配列配列番号６４を有するＣＤＲ－Ｈ１、アミノ酸配列配列番号６５を有するＣＤＲ－Ｈ２、及びアミノ酸配列配列番号６６を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0270】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号６７に示されるアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
配列番号６７：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＦＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＤＡＴＹＹＣＨＱＹＹＲＬＰＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。

【0271】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号６８に示されるアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
配列番号６８：
ＥＶＭＬＶＥＳＧＧＡＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＩＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＳＧＧＳＨＴＹＹＬＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＤＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＬＦＴＧＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。

【0272】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６７と９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0273】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６８と９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0274】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６７を含む軽鎖可変領域を含む。

【0275】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６８を含む重鎖可変領域を含む。

【0276】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６７と９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及びアミノ酸配列配列番号６８と９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0277】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６７と９５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及びアミノ酸配列配列番号６８と９５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0278】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６７を含む軽鎖可変領域及びアミノ酸配列配列番号６８を含む重鎖可変領域を含む。

【0279】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、補体Ｃ１ｓタンパク質内のエピトープに特異的に結合し、抗体は、エピトープとの結合についてアミノ酸配列配列番号６７を含む抗体軽鎖可変領域の軽鎖ＣＤＲ及びアミノ酸配列配列番号６８を含む抗体重鎖可変領域の重鎖ＣＤＲを含む抗体と競合する。

【0280】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、アミノ酸配列配列番号６７を含む抗体軽鎖可変領域の軽鎖ＣＤＲ及びアミノ酸配列配列番号６８を含む抗体重鎖可変領域の重鎖ＣＤＲを含む。

【0281】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号６７に示されるアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0282】

いくつかの実施形態では、抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号６８に示されるアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0283】

抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号７９に示され、図２に図示されるアミノ酸配列（ＶＨバリアント１）と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み得る。

【0284】

抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号８０に示され、図３に図示されるアミノ酸配列（ＶＨバリアント２）と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み得る。

【0285】

抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号８１に示され、図４に図示されるアミノ酸配列（ＶＨバリアント３）と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み得る。

【0286】

抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号８２に示され、図５に図示されるアミノ酸配列（ＶＨバリアント４）と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み得る。

【0287】

抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号８３に示され、図６に図示されるアミノ酸配列（ＶＫバリアント１）と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。

【0288】

抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号８４に示され、図７に図示されるアミノ酸配列（ＶＫバリアント２）と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。

【0289】

抗Ｃ１ｓ抗体は、配列番号８５に示され、図８に図示されるアミノ酸配列（ＶＫバリアント３）と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。

【0290】

抗Ｃ１ｓ抗体は、表３（図９）に示される、ＩＰＮ００３親抗体ＦＲアミノ酸配列に対して、フレームワーク（ＦＲ）アミノ酸置換のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個を含む重鎖可変領域を含み得る。

【0291】

補体の阻害
補体の活性を阻害するいくつかの分子が知られている。既知の化合物に加えて、好適な阻害剤は、本明細書に記載の方法によってスクリーニングすることができる。上述のように、正常細胞は、補体活性を阻止するタンパク質、例えば、ＣＤ５９、Ｃ１阻害剤等を産生することができる。本開示のいくつかの実施形態では、補体は、そのようなポリペプチドをコードする遺伝子の発現を上方制御することによって阻害される。

【0292】

補体活性化を阻止する分子の修飾も当該技術分野で知られている。例えば、そのような分子には、可溶性ＣＲ１等の修飾された補体受容体が含まれるが、これらに限定されない。ＣＲ１の最も一般的なアロタイプの成熟タンパク質は、１９９８個のアミノ酸残基：１９３０個の残基の細胞外ドメイン、２５個の残基の膜貫通領域、及び４３個の残基の細胞質ドメインを含有する。細胞外ドメイン全体は、短いコンセンサス反復（ＳＣＲ）または補体制御タンパク質反復（ＣＣＰＲ）と称される３０個の反復単位から構成され、それぞれが６０～７０個のアミノ酸残基からなる。最近のデータは、Ｃ１ｑがヒトＣＲ１に特異的に結合することを示す。したがって、ＣＲ１は、３つ全ての補体オプソニン、すなわちＣ３ｂ、Ｃ４ｂ、及びＣ１ｑを認識する。膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを欠く組換えヒトＣＲ１（ｓＣＲ１）の可溶性バージョンが産生され、天然ＣＲ１の全ての既知の機能を保持することが示されている。虚血／再灌流損傷の動物モデルにおけるｓＣＲ１の心臓保護の役割が確認されている。いくつかのタイプのヒトＣ１ｑ受容体（Ｃ１ｑＲ）が記載されている。これらには、Ｃ１ｑのコラーゲン様ドメインに結合するため、ｃＣ１ｑＲと称される、遍在的に分布する６０～６７ｋＤａ受容体が含まれる。このＣ１ｑＲバリアントは、単球貧食作用を調節する１２６ｋＤａ受容体であることが示された。ｇＣ１ｑＲは、膜結合分子ではなく、Ｃ１ｑの球状領域に対する親和性を有する分泌型可溶性タンパク質であり、補体活性化の流体相調整因子として機能し得る。

【0293】

崩壊促進因子（ＤＡＦ）（ＣＤ５５）は、４つのＳＣＲ、及び広範囲のＯ－結合型グリコシル化が可能なセリン／トレオニン濃縮ドメインから構成される。ＤＡＦは、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーによって細胞膜に結合され、Ｃ４ｂ及びＣ３ｂに結合するその能力を通じて、Ｃ３及びＣ５変換酵素を解離することによって作用する。可溶性バージョンのＤＡＦ（ｓＤＡＦ）は、補体活性化を阻害することが示されている。

【0294】

セリンプロテアーゼ阻害剤の「セルピン」ファミリーのメンバーであるＣ１阻害剤は、流体相Ｃ１活性化を防止する重グリコシル化血漿タンパク質である。Ｃ１阻害剤は、Ｃ１ｒ及びＣ１ｓの活性部位を遮断し、それらをＣ１ｑから解離することによって、補体活性化の古典的経路を調節する。

【0295】

補体活性化のペプチド阻害剤としては、Ｃ５ａが挙げられ、他の阻害分子としては、フカンが挙げられる。

【0296】

核酸、ベクター及び宿主細胞
本開示の方法において使用するのに好適な抗体は、例えば、米国特許番号４，８１６，５６７に記載されているように、組換え方法及び組成物を使用して生成され得る。いくつかの実施形態では、本開示の抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒまたは抗Ｃ１ｓ抗体のＶ_Ｌ／Ｃ_Ｌを含有するアミノ酸配列及び／またはＶ_Ｈ／Ｃ_Ｈ１を含有するアミノ酸配列をコードし得る。いくつかの実施形態では、そのような核酸を含有する１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。そのような核酸を含有する宿主細胞も提供され得る。宿主細胞は、（１）抗体のＶ_Ｌ／Ｃ_Ｌを含有するアミノ酸配列及び抗体のＶ_Ｈ／Ｃ_Ｈ１を含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有するベクター、または（２）抗体のＶ_Ｌ／Ｃ_Ｌを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第１のベクター及び抗体のＶ_Ｈ／Ｃ_Ｈ１を含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第２のベクターを含有し得る（例えば、形質導入されている）。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ等の細菌である。

【0297】

抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒまたは抗Ｃ１ｓ抗体を作製する方法が本明細書に開示される。方法は、抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒまたは抗Ｃ１ｓ抗体をコードする核酸を含有する本開示の宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む。いくつかの実施形態では、抗体はその後、宿主細胞（または宿主細胞培地）から回収される。

【0298】

本開示のヒト化抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒまたは抗Ｃ１ｓ抗体の組換え生成のため、抗体をコードする核酸は単離され、宿主細胞において更なるクローニング及び／または発現のための１つ以上のベクターに挿入される。そのような核酸は、慣用の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、シーケンシングされ得る。

【0299】

本開示の抗体、または本明細書に記載のその断片ポリペプチド（抗体を含む）のいずれかをコードする核酸配列を含有する好適なベクターには、限定されないが、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。好適なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築され得、または当該技術分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択され得る。選択されるクローニングベクターは、使用されることが意図された宿主細胞に応じて変わり得る一方で、有用なクローニングベクターは通常、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼのための単一の標的を保有し得、及び／またはベクターを含有するクローンを選択する際に使用され得るマーカーのための遺伝子を有し得る。好適な例には、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、及びシャトルベクター、例えば、ｐＳＡ３及びｐＡＴ２８が含まれる。これらの及び多くの他のクローニングベクターがＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ等の商業的ベンダーから利用可能である。

【0300】

対象となる核酸を含有するベクターは、エレクトロポレーション、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ－デキストラン、または他の物質を用いるトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；及び感染（例えば、ベクターはワクシニアウイルス等の感染性物質である）を含む、多数の適切な手段のいずれかによって宿主細胞に導入され得る。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択はしばしば、宿主細胞の特徴に依存する。いくつかの実施形態では、ベクターは、本開示の抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒまたは抗Ｃ１ｓ抗体をコードする１つ以上のアミノ酸配列を含有する核酸を含有する。

【0301】

抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、原核生物または真核細胞が含まれる。例えば、本開示の抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒまたは抗Ｃ１ｓ抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合、細菌において生成され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現について、（例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、第５，７８９，１９９号、及び第５，８４０，５２３号；ならびにＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４は、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について記載している）。他の実施形態では、本開示の抗体は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）において産生され得る（例えば、米国特許出願第１４／２６９，９５０号、米国特許第８，９８１，０７１号、Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９１ Ｊａｎ １；１９５（１）：２３５－４２）。発現後、抗体は、可溶性画分における細菌細胞ペーストから単離され得、更に精製され得る。

【0302】

対象となる病態
てんかんは、脳内の神経細胞の活動が妨害され、発作、または異常な行動の期間、感覚、及び時には意識の喪失を引き起こす一群の神経学的障害である。てんかん発作は、短時間でほとんど検出されないものから、長時間の激しい振せんまで様々なエピソードである。てんかんでは、発作は再発する傾向があり、直接の根本的な原因はない。ほとんどのてんかんの原因は不明であるが、脳損傷（例えば、ＴＢＩ）、脳卒中、脳腫瘍、及び物質使用障害の結果としててんかんを発症する人もいる。遺伝子変異が関連している疾患の割合は、わずかである。てんかん発作は、脳における過剰かつ異常な皮質神経細胞活性の結果である。診断には、典型的は、失神等の同様の症状を引き起こす可能性のある他の状態を除外することを含む。加えて、診断を下すことは、アルコール離脱または電解質の問題等の任意の他の発作の原因が存在するかどうかを決定することを含む。これは、脳を画像化し、血液検査を実行することによって行われ得る。てんかんはしばしば脳波検査（ＥＥＧ）で確認できるが、正常な検査ではその状態は除外されない。他の脳イメージング技術はまた、ある形態のてんかんを検出し得、機能的磁気共鳴画像法（ｆＭＲＩ）、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、及び単光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）等である。

【0303】

てんかんは、腫瘍、脳卒中、頭部外傷、中枢神経系の以前の感染症、遺伝子異常、及び出生時前後の脳損傷を含む多数の他の状態の結果として生じ得る。てんかんにはいくつかのタイプがあり、それぞれ原因、症状、及び治療が異なる。てんかんの大きく分けた２つのタイプは、特発性（遺伝的原因）、症候性または潜因性（推定症候性、原因不明）である。特発性全般てんかんでは、多くの場合、必ずしもそうではないが、てんかんの家族歴がある。特発性全般てんかんは、小児期または青年期に現れる傾向があるが、成人期まで診断されない場合がある。このタイプのてんかんでは、発作以外の神経系（脳または脊髄）の異常は、ＥＥＧまたは画像研究（ＭＲＩ）のいずれにおいても同定できない。脳は、脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャンでは構造的に正常であるが、特別な研究では、出生時から存在していた可能性のある脳の瘢痕または微妙な変化を示す可能性がある。特発性全般てんかんを有する人々は知能が正常であり、神経学的検査及びＭＲＩの結果は通常正常である。脳波検査（ＥＥＧ－脳内の電気インパルスを測定する検査）の結果は、脳内の単一の領域または複数の領域に影響を及ぼすてんかん性放電（いわゆる全般放電）を示す可能性がある。特発性全般てんかん患者に影響を及ぼす発作のタイプとしては、ミオクローヌス発作（四肢の突然で非常に短い期間のけいれん）、欠神発作（凝視発作）、及び／または全身性強直性間代性発作（けいれん大発作）が挙げられる。特発性全般てんかんは、通常、薬物療法で治療される。小児期の欠神てんかん及び多数の若年性ミオクローヌスてんかん患者の場合と同様、この状態を超えて発作を起こさなくなる人々もいる。

【0304】

特発性部分てんかんは、小児期（５歳～８歳）に始まり、家族歴の一部である可能性がある。小児期の良性焦点てんかん（ＢＦＥＣ）としても知られており、これは最も軽度のタイプのてんかんのうちの１つと考えられている。ほとんどの場合、思春期までになくなり、成人で診断されることはない。発作は睡眠中に生じる傾向があり、ほとんどの場合、顔面及び二次性全般（大発作）発作を含む単純な部分運動発作である。このタイプのてんかんは、通常、ＥＥＧで診断される。

【0305】

症候性全般てんかんは、広範囲にわたる脳損傷によって引き起こされる。症候性全般てんかんの最も一般的な原因は、出生時の損傷である。発作に加えて、これらの患者は多くの場合、精神遅滞または脳性麻痺等の他の神経学的問題を有する。副腎白質ジストロフィー（ＡＤＬ）または脳感染症（髄膜炎及び脳炎等）等の特定の遺伝性脳疾患は、症候性全般てんかんを引き起こす可能性もある。症候性全般てんかんの原因が特定できない場合、この障害は、潜因性てんかんと称され得る。これらのてんかんには様々なサブタイプが含まれる。最も一般的に知られているタイプは、レノックス・ガストー症候群である。これらの患者では、複数のタイプの発作（全身性強直性間代性発作、強直性発作、ミオクローヌス発作、強直性発作、脱力発作、及び欠神発作）が一般的であり、制御が困難である可能性がある。

【0306】

症候性部分（または焦点）てんかんは、成人期に始まる最も一般的なタイプのてんかんであるが、小児でも頻繁に発生する。このタイプのてんかんは、外傷性脳損傷、脳卒中、腫瘍、外傷、先天性（出生時に存在する）脳異常、脳組織の瘢痕化もしくは「硬化」、嚢胞、または感染症に起因する可能性がある、脳の局所的な異常によって引き起こされる。ＭＲＩスキャンではこれらの脳の異常が見られることがあるが、顕微鏡的であるため、何度も試みたにもかかわらず同定できないことがしばしばある。

【0307】

症候性部分（または焦点）てんかんの１つの例は、側頭葉てんかん（ＴＬＥ）であり、これは、主に神経細胞の過剰興奮性によって引き起こされる扁桃体－海馬の機能の異常調節を伴う一群の障害である。特に内側ＴＬＥ（ＭＴＬＥ）は、おそらく全てのてんかんの中で最も特徴的な電気臨床症候群であり、成人における焦点てんかんの最も頻繁な形態である。ＭＴＬＥを呈する患者の少なくとも７０％は、現在利用可能な薬剤に耐性を有する。側頭葉が焦点発作に陥りやすい固有の可能性は、扁桃体－海馬複合体及び内髄皮質を含む独特の解剖学的機能ネットワークに基づく。難治性ＴＬＥを有するほとんどの患者は、ＣＡ１及びＣＡ４サブフィールドにおける分節性ニューロン細胞消失、アストログリオーシス、顆粒細胞分散及び軸索再編成によって特性化される重度の片側性海馬萎縮、いわゆる海馬硬化症（ＨＳ）を呈する。ほとんどの場合、ＴＬＥの病因は不明（特発性）であるが、この障害は、熱性発作、外傷、脳卒中、脳感染症またはてんかん発作重積状態（ＳＥ）を含む初期の誘発（ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｎｇ）損傷にしばしば関連する。このような損傷は、てんかん発症プロセスを引き起こす脳内での病理学的変化を引き起こし、数ヶ月～数年の潜伏期間の後にてんかんを引き起こす可能性があるという一般的な合意がある。発作以外に、薬剤耐性ＴＬＥは、認知機能の低下、特に記憶機能への関与、及び精神医学的併存疾患によって特性化される。ＴＬＥの行動欠陥は、疾患の負荷に大きな影響を与え、多くの場合、発作自体よりもはるかに患者の生活の質に対する悪影響の原因となる。

【0308】

薬学的組成物及び投与
本開示の補体阻害剤（例えば、抗体）は、薬学的組成物の形態で投与され得る。

【0309】

本開示の阻害剤（例えば、抗体）の治療製剤は、所望の純度を有する阻害剤を任意の薬学的に許容可能な担体、賦形剤または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．［１９８０］）と混合することによって保存のために凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製され得る。許容可能な担体、賦形剤、または安定化剤は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、これには緩衝液、例えば、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、プロリン及び／またはリジン；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。

【0310】

リポフェクションまたはリポソームもまた、抗体または抗体断片を細胞に送達するために使用され得、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合するエピトープまたは最小断片が好ましい。

【0311】

阻害剤はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル内に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロ乳濁液、ナノ粒子、及びナノカプセル）中、またはマクロ乳濁液中に取り込まれ得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。

【0312】

投与のために使用される製剤は無菌であり得る。これは、滅菌濾過膜を介する濾過によって容易に達成される。

【0313】

持続放出調製物が調製され得る。持続放出調製物の好適な例には、阻害剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９）、Ｌ－グルタミン酸とγエチル－Ｌ－グルタミン酸エステルのコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドから構成される注射用ミクロスフェア）、及びポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン－酢酸ビニル及び乳酸－グリコール酸等のポリマーが１００日間にわたる分子の放出を可能にする一方で、ある特定のヒドロゲルは、より短い期間にわたってタンパク質を放出する。

【0314】

本開示の抗体及び組成物は典型的には、局所、非経口、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、及び病巣内投与を含むがこれらに限定されない様々な経路によって投与される。非経口投与経路には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、硝子体内、髄腔内、または皮下投与が含まれる。

【0315】

薬学的組成物はまた、所望の製剤に応じて、動物またはヒト投与のための薬学的組成物を製剤化するために一般的に使用されるビヒクルとして定義される、希釈剤の薬学的に許容可能な非毒性担体を含み得る。希釈剤は、組み合わせの生物学的活性に影響を及ぼさないように選択される。そのような希釈剤の例は、蒸留水、緩衝水、生理的生理食塩水、ＰＢＳ、リンゲル液、デキストロース溶液、及びハンクス溶液である。加えて、薬学的組成物または製剤は、他の担体、アジュバント、または非毒性、非治療性、非免疫原性安定化剤、賦形剤等を含み得る。組成物はまた、おおよその生理的条件のための追加の物質、例えば、ｐＨ調整及び緩衝剤、毒性調整剤、湿潤剤及び洗浄剤を含み得る。

【0316】

組成物はまた、例えば、抗酸化剤等の多様な安定化剤のいずれかを含み得る。薬学的組成物がポリペプチドを含む場合、ポリペプチドは、ポリペプチドのインビボ安定性を向上させるか、またはそうでなければその薬理学的特性を向上させる（例えば、ポリペプチドの半減期を増加させる、その毒性を低下させる、他の薬物動態及び／または薬力学的特性を向上させる、または溶解性もしくは取り込みを向上させる）様々なよく知られている化合物と複合体化され得る。そのような改変または錯化剤の例には、スルフェート、グルコネート、シトレート及びホスフェートが含まれる。組成物のポリペプチドはまた、それらのインビボ属性を向上させる分子と複合体化され得る。そのような分子には、例えば、炭水化物、ポリアミン、アミノ酸、他のペプチド、イオン（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、マンガン）、及び脂質が含まれる。様々なタイプの投与に好適な製剤に関する更なる指針は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，１７ｔｈ ｅｄ．（１９８５）で見ることができる。薬物送達のための方法の簡潔なレビューについては、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３（１９９０）を参照されたい。

【0317】

活性成分の毒性及び治療的有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定することを含む、細胞培養及び／または実験動物における標準的な薬学的手順に従って決定され得る。毒性と治療効果との間の用量比は治療指数であり、それは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。高い治療指数を示す化合物が好ましい。

【0318】

細胞培養及び／または動物研究から得られたデータは、ヒトのための投薬量の範囲を策定する際に使用され得る。活性成分の投薬量は典型的には、低い毒性でＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内に収まる。投薬量は、用いられる投薬形態及び利用される投与経路に応じてこの範囲内で変わり得る。

【0319】

本明細書に記載の薬学的組成物は、多様な異なる方法で投与され得る。例には、経口、鼻腔内、直腸、硝子体内、局所、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、真皮下、経皮、髄腔内、及び頭蓋内方法を介して薬学的に許容可能な担体を含有する組成物を投与することが含まれる。

【0320】

経口投与のために、活性成分は、カプセル、錠剤、及び粉末等の固体剤形で、またはエリキシル剤、シロップ剤、及び懸濁液等の液体剤形で投与され得る。活性成分（複数可）は、グルコース、ラクトース、スクロース、マンニトール、デンプン、セルロースまたはセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、サッカリンナトリウム、滑石、炭酸マグネシウム等の不活性成分及び粉末担体とともにゼラチンカプセルに封入され得る。望ましい色、味、安定性、緩衝能、分散、または他の既知の望ましい特徴を提供するために添加され得る追加の不活性成分の例は、赤色酸化鉄、シリカゲル、ラウリル硫酸ナトリウム、二酸化チタン、及び食用白インクである。同様の希釈剤は、圧縮錠剤を作製するために使用され得る。錠剤及びカプセルの両方は、数時間にわたる薬剤の連続的な放出を提供するために、持続放出製品として製造され得る。圧縮錠剤は、任意の不快な味を覆い隠し、雰囲気から錠剤を保護するために糖コーティングまたはフィルムコーティングされてもよいし、消化管内での選択的崩壊のために腸溶性コーティングされてもよい。経口投与のための液体剤形は、患者の受容性を増加させるための着色剤（ｃｏｌｏｒｉｎｇ）及び香料（ｆｌａｖｏｒｉｎｇ）を含有し得る。

【0321】

非経口投与に好適な製剤には、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、及び製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る水性及び非水性の等張性滅菌注射溶液、ならびに懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、及び防腐剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。

【0322】

薬学的組成物を製剤化するために使用される成分は、好ましくは、高純度のものであり、潜在的に有害な混入物質を実質的に含まない（例えば、少なくとも国の食品（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｏｄ）グレード、通常は少なくとも分析グレード、より典型的には少なくとも薬学的グレード）。更に、非経口的使用のために意図される組成物は通常、無菌である。所与の化合物が使用前に合成されなければならない限り、得られる生成物は、合成または精製プロセスの間に存在し得る任意の潜在的に毒性の物質、特に任意のエンドトキシンは典型的には実質的に含まれない。非経口投与のための組成物もまた、典型的には実質的に等張性であり、ＧＭＰ条件下で生成される。

【0323】

本開示の組成物は、任意の医学的に適切な手順、例えば、血管内（静脈内、動脈内、毛細血管内）投与、脳脊髄液への注射、硝子体内、局所、空洞内、または脳内への直接注射を使用して投与され得る。髄腔内投与は、既知の技術に従って、オマヤレザバーの使用を通じて実施され得る。（Ｆ．Ｂａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１１，７４，７６（１９８９））。

【0324】

治療剤が脳内に局所的に投与される場合、本開示の治療組成物の投与のための１つの方法は、任意の好適な技術、例えば、直接注射（必要に応じて、注射シリンジの定位位置決めによって補助される）によって、または投与のためにオマヤレザバーの先端を空洞もしくは嚢胞内に配置することによって、部位内またはその近くに沈着させることである。あるいは、対流強化送達カテーテルは、部位内に、自然もしくは外科的に作成された嚢胞内に、または正常な脳塊内に直接埋め込まれ得る。そのような対流強化薬学的組成物送達デバイスは、脳塊全体にわたる組成物の拡散を大幅に改善する。これらの送達デバイスの埋め込まれたカテーテルは、拡散性の流れではなく、（約０．５～１５．０μｌ／分の範囲の流量での）高流量のマイクロ注入を利用して、治療組成物を脳塊及び／または腫瘍塊に送達する。そのようなデバイスは、米国特許第５，７２０，７２０号（参照により本明細書に完全に組み込まれる）に記載されている。

【0325】

特定の患者に与えられる治療組成物の有効量は、多様な要素に依存し得、そのいくつかは患者毎に異なり得る。適任の臨床医は、患者に投与するための治療剤の有効量を決定することができる。薬剤の投薬量は、治療、投与経路、治療剤の特質、患者の治療剤に対する感受性等に依存する。ＬＤ５０動物データ及び他の情報を利用して、臨床医は、投与経路に応じて、個体のための最大安全用量を決定し得る。通常の技術を利用して、適任の臨床医は、日常的な臨床試験の過程で特定の治療組成物の投薬量を最適化することができる。組成物は、一連の複数回の投与で対象に投与され得る。治療組成物に関して、定期的な周期的投与が時に必要とされる場合があり、または望ましい場合がある。治療レジメンは薬剤に応じて変わる；例えば、いくつかの薬剤は、１日１回または１日２回のベースで長期間摂取され得る一方で、より選択的な薬剤は、例えば、１、２、３日またはそれ以上、１週以上、１ヶ月以上等のより規定された期間で１日１回、１日２回、週２回、週１回等で摂取されるように投与され得る。

【0326】

製剤は、脳内での保持及び安定化のために最適化され得る。薬剤が頭蓋区画内に投与される場合、薬剤は、区画内で保持され、拡散しないことまたはそうでなければ血液脳関門を通過しないことが望ましい。安定化技術には、分子量の増加を達成するために、架橋、多量体化、またはポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、中性タンパク質担体等の基への連結が含まれる。

【0327】

保持を増加させるための他のストラテジーには、生分解性または生体内分解性埋込物における薬剤の取り込みが含まれる。治療的活性剤の放出の速度は、ポリマーマトリックスを介する輸送速度、及び埋込物の生分解によって制御される。ポリマー障壁を介する薬物の輸送はまた、化合物溶解性、ポリマー親水性、ポリマー架橋の程度、ポリマー障壁が薬物に対してより透過性となるような水吸収時のポリマーの膨張、埋込物の形状等によって影響を受ける。埋込物は、埋込の部位として選択された領域のサイズ及び形状にふさわしい寸法のものである。埋込物は、粒子、シート、パッチ、プラーク、繊維、マイクロカプセル等であり得、選択された挿入部位と適合する任意のサイズまたは形状のものであり得る。

【0328】

埋込物は、モノリシック（すなわち、ポリマーマトリックスを介して均一に分布した活性剤を有する）であり、または封入され得る（活性剤のリザーバがポリマーマトリックスによって封入される）。用いられるポリマー組成物の選択は、投与の部位、所望の処置期間、患者忍容性、処置される疾患の特質等に応じて異なる。ポリマーの特性には、埋込の部位での生分解性、対象となる薬剤との相溶性、封入の容易性、生理的環境における半減期が含まれる。

【0329】

用いられ得る生分解性ポリマー組成物は、分解された場合にモノマーを含む生理的に許容可能な分解生成物をもたらす有機エステルまたはエーテルであり得る。無水物、アミド、オルトエステル等が、それ自体でまたは他のモノマーと組み合わせて利用され得る。ポリマーは、縮合ポリマーであり得る。ポリマーは、架橋されていても架橋されていなくてもよい。特に興味深いものは、ヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー（ホモポリマーまたはコポリマーのいずれか）、及び多糖類である。対象となるポリエステルには、Ｄ－乳酸、Ｌ－乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸のポリマー、ポリカプロラクトン、及びそれらの組み合わせが含まれる。Ｌ－乳酸またはＤ－乳酸を用いることにより、徐々に生分解するポリマーが達成される一方で、分解はラセミ体で実質的に促進される。グリコール酸及び乳酸のコポリマーが特に興味深く、その場合、生分解の速度が乳酸に対するグリコール酸の比によって制御される。最も急速に分解するコポリマーは、おおよそ等量のグリコール酸及び乳酸を有し、いずれのホモポリマーも分解に対してより抵抗性である。乳酸に対するグリコール酸の比はまた、埋込物の脆さに影響を与え、より柔軟性のある埋込物がより大きな形状にとって望ましい。対象となる多糖類には、アルギン酸カルシウム、及び官能化セルロース、特に水不溶性であり、分子量が約５ｋＤ～５００ｋＤであることによって特性化されるカルボキシメチルセルロースエステル等がある。生分解性ヒドロゲルも、本開示の埋込物に使用され得る。ヒドロゲルは典型的には、液体を吸収する能力によって特性化されるコポリマー物質である。用いられ得る例示的な生分解性ヒドロゲルは、Ｈｅｌｌｅｒ ｉｎ：Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎ．Ａ．Ｐｅｐｐｅｓ ｅｄ．，Ｖｏｌ．ＩＩＩ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９８７，ｐｐ１３７－１４９に記載されている。

【0330】

処置方法
本発明の方法は、補体の阻害剤である薬剤を投与することを通じて、てんかんに対する免疫応答を調節するためのものである。てんかんは、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、低酸素脳損傷、脳感染症、脳卒中、または遺伝的症候群によって誘発され得る。好ましい実施形態では、てんかんは、ＴＢＩ誘発てんかんである。理論に拘束されることなく、未熟アストロサイトは、発達中にニューロン内のＣ１ｑタンパク質の発現を誘発する。ＴＬＥ患者では、海馬内でミクログリア活性化の徴候があり、これは、免疫応答の活性化を示唆している。補体因子等の炎症媒介物質は、通常、健康な脳組織において非常に低いレベルで発現されるが、感染症、虚血、損傷、及び発作等の脳に対する多様な傷害によって急速に誘発され得る。Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、及びＣ１ｓの活性化は、発作及び発作関連ニューロン損傷の発生及び再発とともに、シナプス損失につながる炎症応答に寄与する。調節不全の持続性炎症、血液脳関門損傷、及び制御されていない発作は、ＴＬＥの進行を引き起こす。ＴＬＥの発症プロセス中、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、及びＣ１ｓの過剰発現は、補体活性化のためのシグナル、例えば、β－アミロイド、ＡＰＰ、ＩＦＮγ、ＴＮＦα等のサイトカインと連結され得、また炎症をもたらす。

【0331】

補体活性化を阻害する薬剤を投与することによって、そうでなければ失われるであろうシナプスを維持することができる。そのような薬剤には、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、及びＣ１ｓ阻害剤、天然補体阻害剤の発現を上方制御する薬剤、ニューロンにおけるＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ合成を下方制御する薬剤、補体活性化を阻止する薬剤、補体活性化のためのシグナルを阻止する薬剤等が含まれる。

【0332】

補体活性化を阻害する薬剤を投与することによって、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんを媒介する抗原特異的抗体の産生を低減することができる。そのような薬剤には、抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓ抗体阻害剤が含まれる。他の薬剤には、天然補体の発現を上方制御する阻害剤、または細胞におけるＣ１ｑ、Ｃ１ｒまたはＣ１ｓ合成を下方制御する薬剤、補体活性化を阻止する薬剤、補体活性化のためのシグナルを阻止する薬剤等が含まれ得る。

【0333】

方法は、シナプス損失に関連する状態においてニューロン機能の改善された維持を促進する。神経接続の維持は、未処置の患者に対する神経変性疾患における機能的改善を提供する。シナプス損失の防止は、１、２、３、４、５、６日間または少なくとも１週間の期間にわたってそのような処置を欠く対照に対する少なくとも測定可能な改善、例えば、シナプス数の少なくとも１０％の改善、少なくとも２０％の改善、少なくとも５０％の改善、またはそれ以上を含み得る。

【0334】

好ましくは、本発明の薬剤は、任意の副作用を最小限に抑えながらシナプス損失を減少させる投薬量で投与される。組成物は、インビボ使用のために医師の指導の下で得られ、使用されるであろうことが企図される。治療製剤の投薬量は、疾患の特質、投与の頻度、投与の様式、宿主からの薬剤のクリアランス等に応じて広く変わるであろう。

【0335】

特定の患者に与えられる治療組成物の有効量は、多様な要素に依存し、そのいくつかは患者毎に異なるであろう。通常の技術を利用して、適任の臨床医は、日常的な臨床試験の過程で特定の治療用または画像化組成物の投薬量を調整することができる。

【0336】

治療剤、例えば、補体の阻害剤、遺伝子発現の活性化剤等は、適切な薬学的に許容可能な担体または希釈剤との組み合わせによって治療投与のための多様な製剤に組み込まれ得、固体、半固体、液体または気体形態の調製物、例えば、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、座剤、注射剤、吸入剤、ゲル、マイクロスフィア、及びエアロゾルに製剤化され得る。したがって、化合物の投与は、経口、口腔内、直腸、非経口、腹腔内、皮内、経皮、髄腔内、鼻、気管内等の投与を含む様々な方法で達成され得る。活性剤は、投与後に全身的になり得、または局所的投与、壁内投与の使用、または埋込部位で活性用量を保持するように作用する埋込物の使用によって局在化され得る。

【0337】

血液脳関門（ＢＢＢ）を通じた薬物送達のための１つの戦略は、マンニトールまたはロイコトリエン等の浸透手段による、またはブラジキニン等の血管活性物質の使用による生化学的な、ＢＢＢの破壊を伴う。特定の薬剤を標的とするためにＢＢＢ開口を使用する可能性もある。ＢＢＢ破壊剤は、組成物が血管内注射によって投与される場合、本発明の治療組成物と同時に投与され得る。ＢＢＢを通過するための他の戦略は、グルコース及びアミノ酸担体等の担体媒介性トランスポーター、インスリンまたはトランスフェリンのための受容体媒介性トランスサイトーシス、ならびにｐ糖タンパク質等の活性流出トランスポーターを含む内因性輸送系の使用を伴い得る。活性輸送部位はまた、本発明で使用するための治療化合物または画像化化合物にコンジュゲートされてもよく、血管の上皮壁を通過する輸送を容易にする。あるいは、ＢＢＢの背後にある薬物送達は、オマヤレザバーを通じてのように、治療剤または画像化剤を頭蓋骨に直接くも膜下腔内送達することによって行われる。

【0338】

方法は、補体の生物学的活性を中和する。影響を受ける補体の生物学的活性は、（１）自己抗体に対するＣ１ｑ結合、（２）Ｃ１ｒに対するＣ１ｑ結合、（３）Ｃ１ｓに対するＣ１ｑ結合、（４）ＩｇＭに対するＣ１ｑ結合、（５）ＩｇＧに対するＣ１ｑ結合、（６）ホスファチジルセリンに対するＣ１ｑ結合、（７）ペントラキシン－３に対するＣ１ｑ結合、（８）Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）に対するＣ１ｑ結合、（９）球状Ｃ１ｑ受容体（ｇＣ１ｑＲ）に対するＣ１ｑ結合、（１０）補体受容体１（ＣＲ１）に対するＣ１ｑ結合、（１１）ベータ－アミロイドに対するＣ１ｑ結合、（１２）カルレチキュリンに対するＣ１ｑ結合、（１３）アポトーシス細胞に対するＣ１ｑ結合、または（１４）Ｂ細胞に対するＣ１ｑ結合であり得る。影響を受ける補体生物学的活性は、（１）古典的補体活性化経路の活性化、（２）抗体及び補体依存性細胞傷害の活性化、（３）ＣＨ５０溶血、（４）シナプス損失、（５）Ｂ細胞抗体産生、（６）樹状細胞成熟、（７）Ｔ細胞増殖、（８）サイトカイン産生、（９）ミクログリア活性化、（１０）アーサス反応、（１１）シナプスまたは神経終末の食作用、または（１２）補体受容体３（ＣＲ３／Ｃ３）発現細胞の活性化であり得る。

【0339】

組成物は、インビボ使用のために医師の指導の下で得られ、使用され得ることが企図される。治療製剤の投薬量は、疾患の特質、投与の頻度、投与の様式、宿主からの薬剤のクリアランス等に応じて広く変わり得る。

【0340】

特定の患者に与えられる治療組成物の有効量は、多様な要素に依存し得、そのいくつかは患者毎に異なり得る。通常の技術を利用して、適任の臨床医は、日常的な臨床試験の過程で特定の治療用または画像化組成物の投薬量を調整することができる。

【0341】

治療剤、例えば、補体の阻害剤、遺伝子発現の活性化剤等は、適切な薬学的に許容可能な担体または希釈剤との組み合わせによって治療投与のための多様な製剤に組み込まれ得、固体、半固体、液体または気体形態の調製物、例えば、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、座剤、注射剤、吸入剤、ゲル、マイクロスフィア、及びエアロゾルに製剤化され得る。したがって、化合物の投与は、経口、口腔内、直腸、非経口、腹腔内、皮内、経皮、髄腔内、鼻、気管内等の投与を含む様々な方法で達成され得る。活性剤は、投与後に全身的になり得、または局所的投与、壁内投与の使用、または埋込部位で活性用量を保持するように作用する埋込物の使用によって局在化され得る。

【0342】

化合物のスクリーニング
本発明の一態様において、阻害剤として使用される候補薬剤は、シナプス損失を調節する能力についてスクリーニングされる。そのような化合物のスクリーニングは、ｉｎ ｖｉｔｒｏモデル、遺伝子変化した細胞もしくは動物、または精製タンパク質を使用して実施され得る。多様なアッセイがこの目的のために使用され得る。一実施形態では、特定の補体タンパク質（例えばＣ１ｑ）及び補体活性化シグナル（例えばβ－アミロイド、ＡＰＰ等）を含む補体のアンタゴニストまたはアゴニストであることが予測される化合物は、以下に記載されるようにｉｎ ｖｉｔｒｏ培養システムで試験される。

【0343】

例えば、候補薬剤は、既知の薬理学によって、構造分析によって、コンピュータベースのモデリングを使用した合理的な薬物設計によって、結合アッセイによって等で同定され得る。化合物が結合するかどうか、またはそうでなければ補体活性に影響を及ぼすかどうかを決定するために様々なｉｎ ｖｉｔｒｏモデルが使用され得る。そのような候補化合物は、シナプス損失を許容する環境下でニューロンに接触するために使用される。そのような化合物は、シナプス損失に対する効果について、ｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて更に試験され得る。

【0344】

スクリーニングはまた、ニューロンにおけるＣ１ｑ発現を誘発するアストロサイト、例えば、未熟アストロサイトによって産生される分子についても実行され得る。そのようなアッセイでは、ニューロンとアストロサイトの共培養は、Ｃ１ｑ発現を誘発する分子の産生または発現について評価される。例えば、遮断抗体を培養物に添加して、ニューロンにおけるＣ１ｑ発現の誘発に対する効果を決定してもよい。

【0345】

シナプス損失は、培養物中のニューロンに候補薬剤を投与し、薬剤の不在または存在下でシナプスの存在を決定することによって定量される。本発明の一実施形態において、ニューロンは、例えば、ＲＧＣの一次培養物である。ＲＧＣの精製集団は、連続免疫パニング等の従来の方法によって得られる。細胞は、通常、適切な成長因子（例えば、ＣＮＴＦ、ＢＤＮＦ等）を含むであろう好適な培地で培養される。神経細胞（例えば、ＲＣＧ）を、堅牢なプロセスの成長（ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ）を可能にするのに十分な期間培養し、次いで候補薬剤で約１日～１週間の期間培養する。多くの実施形態では、ニューロンは、シナプス損失のためのシグナル伝達を誘発するために、生きたアストロサイト細胞フィーダー上で培養される。アストロサイトフィーダー層を培養する方法は、当該技術分野で知られている。例えば、皮質グリアは、非接着性細胞を除去して、ニューロンが生存できない培地中に配置することができる。

【0346】

シナプス定量のために、当該技術分野で知られているように、培養物を固定し、遮断し、洗浄し、次いで、抗体特異的シナプスタンパク質（例えば、シナプトタグミン等）で染色し、適切な試薬で可視化する。染色の分析は、顕微鏡的に実行され得る。一実施形態では、蛍光発光のデジタル画像は、ピクセル値範囲の未使用部分を除去するように調整されたカメラ及び画像キャプチャソフトウェアを備え、使用されたピクセル値は、ピクセル値範囲全体を利用するように調整される。対応するチャネル画像は、個々のカラーチャネルとして２つのシングルチャネル画像を含むカラー（ＲＧＢ）画像を作成するためにマージしてもよい。共局在化点は、ローリングボールバックグラウンド減算アルゴリズムを使用して、各画像チャネルから低周波バックグラウンドを除去することで識別することができる。画像内の全てのシナプトタグミン、ＰＳＤ－９５、及び共局在化点の数、平均面積、平均最小及び最大ピクセル強度、ならびに平均ピクセル強度が記録され、分析のためにディスクに保存される。

【0347】

候補薬剤は、合成または天然化合物のライブラリを含む多様な供給源から得られる。例えば、無作為化オリゴヌクレオチド及びオリゴペプチドの発現を含む、多種多様な有機化合物及び生体分子の無作為かつ指向性合成のための多数の手段が利用可能である。あるいは、細菌、真菌、植物及び動物抽出物の形態の天然化合物のライブラリが入手可能であるか、または容易に生成される。加えて、天然または合成で作製されたライブラリ及び化合物は、従来の化学的、物理的及び生化学的手段を通じて容易に改変され、組み合わせライブラリを生成するために使用され得る。既知の薬理学的薬剤は、アシル化、アルキル化、エステル化、アミド化等の直接的またはランダムな化学的改変を受けて、構造的類似体を生成し得る。試験剤は、例えば、天然物ライブラリまたは組み合わせライブラリ等のライブラリから得ることができる。

【0348】

候補化合物のライブラリはまた、合理的な設計によって調製できる。（一般に、Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐａｃ．Ｓｙｍｐ．Ｂｉｏｃｏｍｐａｔ．３０５－１６，１９９８；Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｉｄｅｄ Ｍｏｌ．Ｄｅｓ．１２：５９７－６０４，１９９８を参照のこと。それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例えば、ホスファターゼ阻害剤のライブラリは、組み合わせ化学ライブラリの合成によって調製することができる（一般に、ＤｅＷｉｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６９０９－１３，１９９３；国際特許公開第ＷＯ９４／０８０５１号；Ｂａｕｍ，Ｃｈｅｍ．＆Ｅｎｇ．Ｎｅｗｓ，７２：２０－２５，１９９４；Ｂｕｒｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：６０２７－３１，１９９５；Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：５５８８－８９，１９９５；Ｎｅｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５９：４７２３－２４，１９９４；Ｂｏｒｅｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６：３７３－７４，１９９４；Ｏｈｌｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１０９２２－２６を参照のこと。これらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。）

【0349】

任意のスクリーニング方法によって最初に特定される化合物は、見かけの活性を検証するために更に試験できる。このような方法の基本的な形式は、初期スクリーニング中に特定されたリード化合物を、ヒトのモデルとなる動物に投与し、次いで、シナプス損失に対する効果を決定することを含む。検証研究で利用されている動物モデルは、一般に哺乳動物である。好適な動物の具体例には、霊長類、マウス、及びラットが含まれるが、これらに限定されない。

【0350】

組み合わせ処置
本開示の補体阻害剤は、限定されないが、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんの任意の追加の処置と併せて使用され得る。

【0351】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示される抗体、抗体断片及び／または抗体誘導体は、第２の阻害性抗補体因子抗体、例えば、抗Ｃ１ｑまたは抗Ｃ１ｒ抗体、または抗Ｃ１ｓ抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗体は、抗Ｃ１ｓ抗体、抗Ｃ１ｑ抗体、及び／または抗Ｃ１ｒ抗体等の第２及び第３の阻害性抗補体因子抗体とともに投与される。

【0352】

いくつかの実施形態では、本開示の阻害剤は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の阻害剤と組み合わせて投与される。ＡＤＣＣ阻害剤には、限定されないが、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、またはＨＬＡ－Ｃを認識するキラー細胞Ｉｇ様受容体（ＫＩＲ）及びＨＬＡ－Ｅを認識するＣ型レクチンＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａヘテロ二量体等の可溶性ＮＫ細胞阻害受容体（例えば、Ｌｏｐｅｚ－Ｂｏｔｅｔ Ｍ．，Ｔ．Ｂｅｌｌｏｎ，Ｍ．Ｌｌａｎｏ，Ｆ．Ｎａｖａｒｒｏ，Ｐ．Ｇａｒｃｉａ＆Ｍ．ｄｅ Ｍｉｇｕｅｌ．（２０００），Ｐａｉｒｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｎｄ ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ＮＫ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ ＨＬＡ ｃｌａｓｓ Ｉ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６１：７－１７；Ｌａｎｉｅｒ Ｌ．Ｌ．（１９９８）Ｆｏｌｌｏｗ ｔｈｅ ｌｅａｄｅｒ：ＮＫ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ａｎｄ ｎｏｎｃｌａｓｓｉｃａｌ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ．Ｃｅｌｌ ９２：７０５－７０７）、及びカドミウム（例えば、Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １９９０；Ｖｏｌｕｍｅ２０，Ｐａｇｅｓ７３－８を参照のこと）が含まれ得る。

【0353】

いくつかの実施形態では、本開示の抗体、抗体断片及び／または抗体誘導体は、補体活性化の代替経路の阻害剤と組み合わせて投与される。そのような阻害剤には、限定されないが、Ｂ因子阻害抗体、Ｄ因子遮断抗体、可溶性、膜結合型、タグ付きもしくは融合タンパク質形態のＣＤ５９、ＤＡＦ、ＣＲ１、ＣＲ２、ＣｒｒｙまたはＣ３の切断を阻止するコムスタチン（Ｃｏｍｓｔａｔｉｎ）様ペプチド、非ペプチドＣ３ａＲアンタゴニスト、例えば、ＳＢ２９０１５７、コブラ毒因子または非特異的補体阻害剤、例えば、ナファモスタットメシル酸塩（ＦＵＴＨＡＮ；ＦＵＴ－１７５）、アプロチニン、Ｋ－７６モノカルボン酸（ＭＸ－１）及びヘパリン（例えば、Ｔ．Ｅ．Ｍｏｌｌｎｅｓ＆Ｍ．Ｋｉｒｓｃｈｆｉｎｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４３（２００６）１０７－１２１を参照のこと）が含まれ得る。

【0354】

いくつかの実施形態では、本開示の抗体、抗体断片及び／または抗体誘導体は、自己抗体とその自己抗原との間の相互作用の阻害剤と組み合わせて投与される。そのような阻害剤には、精製された可溶形態の自己抗原、または抗原模倣物、例えば、ペプチドまたはＲＮＡ由来ミモトープ（ＡＱＰ４抗原のミモトープを含む）が含まれ得る。代替的には、そのような阻害剤には、古典的補体経路を引き起こさずに、自己抗原を認識し、自己抗体の結合を防止する遮断薬が含まれ得る。そのような遮断薬には、例えば、自己抗原結合ＲＮＡアプタマーまたはＦｃドメインにおいてＣ１ｑ結合部位を欠く抗体（例えば、Ｃ１ｑに結合しないように操作されたＦａｂ断片または抗体）が含まれ得る。

【0355】

キット
本発明はまた、本開示の抗体、抗体断片、及び／または抗体誘導体を含むキットを提供する。本発明のキットは、本開示の精製された抗Ｃ１ｓ、抗Ｃ１ｑまたは抗Ｃ１ｒ抗体を含む１つ以上の容器及び当該技術分野で知られている方法に従って使用するための指示書を含む。通常、これらの指示書は、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等のてんかんを処置または診断するための阻害剤の投与の説明を含む。キットは、個体が疾患を有するかどうか及び疾患の病期を特定することに基づいて、処置に適した個体を選択する説明を更に含み得る。

【0356】

指示書は通常、意図された処置のための投薬量、投薬スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）または副次単位用量であり得る。本発明のキットにおいて供給される指示書は典型的には、ラベルまたはパッケージ挿入物（例えば、キットに含まれる紙シート）上の書面による指示書であるが、機械が読み取り可能な指示書（例えば、磁気または光学的保存ディスク上に保持される指示書）も許容可能である。

【0357】

ラベルまたはパッケージ挿入物は、組成物がＴＢＩ誘発てんかんの治療のために使用されることを示し得る。ＴＢＩ誘発てんかんのための指示書は、本明細書に記載の方法のいずれかを実施するために提供され得る。

【0358】

ラベルまたはパッケージ挿入物は、組成物がＴＬＥを治療するために使用されることを示し得る。ＴＬＥ指示書は、本明細書に記載の方法のいずれかを実施するために提供され得る。

【0359】

本発明のキットは、好適な包装内に配置される。好適な包装には、バイアル、ボトル、瓶、フレキシブル包装（例えば、密閉マイラーまたはプラスチックバッグ）等が含まれるがこれらに限定されない。特定のデバイス、例えば、吸入具、鼻投与デバイス（例えば、噴霧器）、または注入デバイス、例えば、ミニポンプと組み合わせて使用するためのパッケージも企図される。キットは、滅菌アクセスポート（例えば、容器は、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈用溶液袋またはバイアルであり得る）を有し得る。容器はまた、滅菌アクセスポート（例えば、容器は、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈用溶液袋またはバイアルであり得る）を有し得る。組成物における少なくとも１つの活性剤は、古典的補体経路の阻害剤である。容器は、第２の薬学的活性剤を更に含み得る。

【0360】

キットは、追加の成分、例えば、緩衝液及び説明情報を任意に提供し得る。通常、キットは、容器及び容器上のまたは容器に関連するラベルまたはパッケージ挿入物（複数可）を含む。

【0361】

診断の用途
てんかん発作を有する人の中には、異常なＥＥＧを有する人もいるが、有しない人も多い。発作のタイプとその影響を特定するのに役立ついくつかの更なる試験がある。これらには、てんかん及び関連する状態のための完全な神経学的相談、日常的なＥＥＧ及び外来患者及び入院患者のビデオＥＥＧモニタリングを含む神経生理学的検査、頭皮または頭蓋内電極を用いた長期の入院患者のビデオＥＥＧモニタリング、神経画像診断（例えば、ＭＲＩ、ＭＲＳ、ＰＥＴ、ｆＭＲＩ）、神経心理学、ならびに音声及び聴覚処理評価が含まれる。

【0362】

例えば、側頭葉てんかんは、部分的または局在関連てんかんの最も一般的な形態である。一般的に、側頭葉てんかんには２つのタイプがある。１つは側頭葉の内側または内部構造を伴い、２つ目は新皮質側頭葉てんかんと呼ばれ、側頭葉の外側部分を伴う。対象の側頭葉てんかん（ＴＬＥ）発症リスクを決定するのに有用ないくつかの特徴を理解することが重要である。ＴＬＥの１つの特徴は、意識の喪失（アウラの有無にかかわらず）または焦点認知障害発作（意識の喪失を伴う）を伴わない単純な焦点発作である。意識の喪失は、発作が両側葉を含むように広がるときに、焦点認知障害発作の間に生じる。疫学の用語では、焦点てんかんは側頭葉由来であることが多いが、ＴＬＥの真の有病率は分かっていない。提示に関しては、アウラは側頭葉発作の大部分で生じる。アウラ及び自動運動の大部分は、数秒または１～２分という非常に短い期間持続する。アウラは、感覚症状、自律神経症状、または精神的症状を引き起こす可能性がある。体性感覚及び特別な感覚現象には、幻覚とともに、嗅覚、聴覚及び味覚の錯覚が含まれる。患者は、物体の形状、サイズ、及び距離の歪みを報告することがある。このような視覚錯覚は、形成された視覚像が存在しない点で、後頭葉発作に関連する視覚幻覚とは異なる。例えば、物体は、通常よりも小さく、または大きく見えることがある。加えて、後上側頭回に発作を伴ってめまいが生じることがある。超心理現象には、既視感（既知）または未視感（未知）の感覚、離人感（例えば、自分から離れる感覚）または現実感喪失（周辺が非現実的に見える）、恐怖または不安が含まれ、患者は外から自分の身体を見ていると説明することがある。自律神経現象には、心拍数の変化及び発汗等がある。患者は、上腹部満腹感または吐き気を感じることがある。

【0363】

アウラに続いて、側頭葉焦点認知障害発作は、広目で動かない視線、拡張した瞳孔、及び行動の停止から始まる。舌鼓（ｌｉｐ－ｓｍａｃｋｉｎｇ）、咀嚼、及び嚥下が指摘されることがある。手の自動運動または四肢の片側ジストニア姿勢も生じることがある。焦点認知障害発作は、全身性強直性間代性（ＧＴＣ）発作に進化することがある。患者は通常、発作後の混乱期を経験する。発作後期は、数分間続くことがある。両側半球の関与のため、焦点認知障害発作の間に記憶喪失が生じる。

【0364】

ＴＬＥの根本的な原因には、過去の感染症（例えば、ヘルペス脳炎または細菌性髄膜炎）、外傷性脳損傷、脳悪性腫瘍または皮質瘢痕をもたらす頭部損傷もしくは出血、低酸素脳損傷、脳感染症、脳卒中、過誤腫、神経膠腫、遺伝的症候群、血管奇形（例えば、動静脈奇形、海綿状血管腫）、潜因性（原因は推定されるが、特定されていない）、または特発性が含まれる。ＴＬＥの他の根本的な原因には、小児期後半に始まり、軽快するが、青年期または成人期初期に難治性の形態で再発する、内側側頭葉てんかんから生じる海馬硬化症が含まれる。加えて、複雑な熱性けいれんを持つ小児の中には、晩年にＴＬＥを発症するリスクがあるようなので、熱性発作はＴＬＥにつながる可能性がある。

【0365】

鑑別診断は、ＴＬＥのリスクがある人の診断及び評価に使用されることがある。ＴＬＥ診断で使用される鑑別診断のいくつかの特徴には、過度の昼間の眠気（例えば、睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに起因する）、周期的四肢運動障害、遅発性ジスキネジア及び後頭葉てんかんが含まれ、これらは側頭葉に広がり、側頭葉発作と臨床的に区別できないことがある。心因発作（心因発作を有する患者もてんかん発作を有し得る）も、鑑別診断において使用される。ＴＬＥの鑑別診断では、欠神発作、認知障害発作、及び前頭葉焦点認知障害発作も使用される。欠神発作は、アウラを伴わない突然の発症によって特性化され、通常３０秒未満持続し、発作後の混乱はなく、複雑な自動運動とは関連しない。焦点認知障害発作は、通常、明確なアウラの前に起こり、１分を超えて持続し、発作後の混乱の期間がある。前頭葉焦点認知障害発作は、突然発症して終了する短時間の発作のクラスターに現れる。最小限の発作後状態があり、発声ならびに複雑な運動及び性的な自動運動を伴う行動の変化を引き起こすことがある。ＴＬＥとの鑑別には、脳波計（ＥＥＧ）の位置確認（ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）が必要な場合がある。

【0366】

更に、対象の側頭葉てんかん発症リスクを決定するための診断及び従来の方法に関して、ＭＲＩは、一般に、選択される神経画像診断である。特定のラベルを使用した脳の常套的なＭＲＩは、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）によって検出されない病変（例えば、小さな腫瘍、血管奇形、及び皮質異形成）を検出する。例えば、１つの検出可能な標識は、６０～９０％の感度を有する間欠的な［^１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース－陽電子放出断層撮影（^１８ＦＤＧ－ＰＥＴ）である。別の検出可能な標識は、動脈スピン標識（ＡＳＬ）であり、これは、磁気標識された動脈血の標的領域への流入を測定することによって、局所的な脳血流を定量することが可能である。

【0367】

薬剤耐性てんかんの評価のために実施されるＭＲＩには、専門的なプロトコルが必要である。例えば、海馬硬化症は、ニューロン損失及び神経膠症によって特性化される。ＨＳは、外科的に処置された成人のてんかんの最も一般的な病理学的基質であり、６７％の患者に見られる。新たにてんかんと診断された患者において、ＨＳは、成人の１．５～３％で報告されている。内側側頭構造（海馬、扁桃体、内髄皮質、及び海馬傍回）を評価する場合、ＭＲＩは、サイズ、シグナル、形状、及び二重病理（ＳＳＳＤ）を評価するために使用される。ＨＳの典型的なＭＲＩ所見は、Ｔ１加重ＳＰＧＲ上の海馬の萎縮（典型的には９０～９５％の症例で見られる）を含む。萎縮は、海馬体で最も顕著である。

【0368】

水抑制反転回復（ＦＬＡＩＲ）撮影を使用して、シグナルの増加が海馬で観察される。神経膠症の変化は、Ｔ２加重ＭＲＩで増加したシグナルとして現れる水分含有量を増加させるため、ＦＬＡＩＲは、海馬におけるシグナル変化を検出するのに理想的である。ＦＬＡＩＲシーケンスは、従来の薄いスライスＴ２加重スピンエコー画像上で、側脳室の側頭角における脳脊髄液（ＣＳＦ）のシグナル強度の増加と、海馬におけるシグナルの増加を小さくすることができる脈絡膜裂を無効にする。ＦＬＡＩＲ ＭＲＩ上の海馬のベースラインシグナルは、皮質のシグナルよりも大きい。小児では、新たに診断されたＴＬＥ患者の２１％にＨＳが認められ、難治性ＴＬＥ患者の最大５７％にＨＳが認められる。難治性ＴＬＥを有する小児におけるより一般的な所見としては、ＭＣＤ及び発達性腫瘍が挙げられる。

【0369】

ＣＴスキャンは、発作の緊急評価、またはＭＲＩが禁忌である場合（例えば、患者がペースメーカーまたは金属埋込物を使用している場合）に役割を果たす。造影剤を使用しないＣＴスキャンでは、いくつかの血管病変及び腫瘍を特定できない。ＣＴは、難治性てんかんの評価において限定的な役割しか果たさない。心拍の障害がてんかんを模擬する可能性がある場合、意識の変化を有する全ての患者、特に高齢者層の評価においても心電図検査（ＥＣＧ）を実施してもよい。２４時間の外来ＥＣＧ及び他の心血管検査（埋込式ループデバイスを含む）も役立つ可能性がある。放射性同位体フルオロデオキシグルコース（１８^Ｆ）（ＦＤＧ－ＰＥＴ）を検出可能な標識として使用した陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）は、ＭＲＩの結果が正常である場合に有用である。ＴＬＥ患者の３分の１が両側性の独立した側頭間葉型てんかん異常を有するため、発作間ＥＥＧは頭皮電極からの記録を得るためにも使用される。加えて、単光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）は、外科的介入の候補に有用であり、ビデオ－ＥＥＧテレメトリーは、術前評価の一部として使用される。ＴＬＥの診断がまだ確定していない場合にも使用される。

【0370】

本発明は、対象のてんかん（特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等）発症リスクを部分的に決定する方法であって、抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓ抗体を対象に投与することであって、抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓは、検出可能なラベルに連結されている、投与することと、検出可能なラベルを検出して、対象におけるＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓの量または位置を測定することと、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓのうちの１つ以上の量または位置を参照と比較することであって、てんかん（特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、または症候性部分てんかん等）発症リスクは、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓのうちの１つ以上の量または位置を参照と比較することに基づいて特徴付けられる、比較することと、を含む、方法を提供する。

【0371】

Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓのレベルを検出するための例示的な方法であって、したがって、試料が、特発性全般てんかん、特発性部分てんかん、症候性全般てんかん、もしくは症候性部分てんかん、またはその臨床サブタイプ等のてんかんに関連しているかどうかを分類するために有用である、方法は、対象から生体試料を取得することと、生体試料を、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓを検出することができる抗体と接触させることを含み、その結果、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓのレベルが生体試料中で検出される。特定の例では、統計的アルゴリズムは、単一の学習統計分類システムである。例えば、単一の学習統計分類システムを使用して、予測値または確率値、ならびにＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓの存在またはレベルに基づいて、試料をＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ試料として分類することができる。単一の学習統計分類システムの使用は、典型的には、感度、特異性、陽性予測値、陰性予測値、及び／または少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の全体的な精度を有するＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、またはＣ１ｓ試料として試料を分類する。

【0372】

他の適切な統計的アルゴリズムは、当業者によく知られている。例えば、学習統計分類システムは、複雑なデータセット（例えば、対象となるマーカーのパネル）に適合し、そのようなデータセットに基づいて決定を行うことができる機械学習アルゴリズム技術を含む。いくつかの実施形態では、分類ツリー（例えば、ランダムフォレスト）等の単一の学習統計分類システムが使用される。他の実施形態では、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、またはそれ以上の学習統計分類システムの組み合わせが、好ましくは、連動して使用される。学習統計分類システムの例には、帰納的学習（例えば、ランダムフォレスト、分類及び回帰ツリー（Ｃ＆ＲＴ）、ブーストツリー等の決定／分類ツリー）を使用するものが含まれるが、これらに限定されない。確率的で近似的に正しい（ＰＡＣ）学習、コネクショニスト学習（例えば、ニューラルネットワーク（ＮＮ）、人工ニューラルネットワーク（ＡＮＮ）、ニューロファジーネットワーク（ＮＦＮ）、ネットワーク構造、多層パーセプトロン等のパーセプトロン、多層フィードフォワードネットワーク、ニューラルネットワークの応用、信念ネットワークにおけるベイズ学習等）、強化学習（例えば、ナイーブ学習、適応動的学習、及び時間差学習等の既知の環境における受動学習、未知の環境における受動学習、未知の環境における能動学習、学習行動値関数、強化学習の応用等）、ならびに遺伝的アルゴリズム及び進化的プログラミングが含まれるが、これらに限定されない。他の学習統計分類システムは、サポートベクターマシン（例えば、カーネル法）、多変量適応回帰スプライン（ＭＡＲＳ）、リーベンバーグ－マルカートアルゴリズム、ガウス－ニュートンアルゴリズム、混合ガウス分布（ｍｉｘｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｇａｕｓｓｉａｎｓ）、勾配降下アルゴリズム、及び学習ベクトル量子化（ＬＶＱ）を含む。

【0373】

一実施形態では、本方法は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓによって媒介される状態または障害を有しない対象からの対照生体試料（例えば、生体試料）、寛解中またはＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓによって媒介される状態または障害を発症する前の対象からの生体試料、またはＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓによって媒介される状態もしくは障害の発症の治療中の対象からの生体試料を得ることを更に含む。

【0374】

Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、もしくはＣ１ｓの存在または非存在を検出するための例示的な方法は、対象に対する抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓ抗体であり、抗Ｃ１ｑ、抗Ｃ１ｒ、または抗Ｃ１ｓ抗体は、検出可能な標識に連結される。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、核酸、オリゴヌクレオチド、酵素、放射性同位体、ビオチン、または蛍光標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、ｘ線、ＣＴ、ＭＲＩ、超音波、ＰＥＴ及びＳＰＥＣＴのための造影剤を使用して検出され得る。いくつかの実施形態では、蛍光標識は、フルオレセイン、ローダミン、シアニン色素またはＢＯＤＩＰＹから選択される。

【0375】

本明細書に記載の様々な実施形態の特性のうちの１つ、いくつかまたは全ては、本明細書で提供される組成物及び方法の他の実施形態を形成するために組み合わされ得ることが理解されるべきである。本発明に関連する実施形態の全ての組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、ありとあらゆる組み合わせが個別にかつ明確に開示されたかのように本明細書に開示される。加えて、様々な実施形態及びそれらの要素の全ての副次的組み合わせも本発明によって具体的に包含され、ありとあらゆるそのような副次的組み合わせが個別にかつ明確に本明細書に開示されたかのように本明細書に開示される。本明細書で提供される組成物及び方法のこれらの及び他の態様は、当業者に明らかになる。

【実施例】

【0376】

実施例１：材料及び方法
動物
ほとんどの実験に成体（Ｐ３０－Ｐ１８０）雄のＣＤ１マウスを使用した。成体雄のＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆマウス（Ｔｇ（Ｔｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆ）ＧＰ５．１７Ｄｋｉｍ ＩＳＭＲ＿ＪＡＸ：０２５３９３；Ｃ５７ＢＬ／６コンジェニック）、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＩＳＭＲ＿ＪＡＸ：０００６６４）、及びＣ１ｑヌルマウス（Ｃ１ｑａｔｍ１Ｍｊｗ、ＩＳＭＲ＿ＡＰＢ：１４９４；Ｃ５７ＢＬ／６コンジェニック）を特定の実験に使用した。

【0377】

制御式皮質衝撃（ＣＣＩ）
２～５％のイソフルランでマウスを麻酔し、定位フレームに配置した。ブレグマから－１ｍｍ後方、正中線から＋３ｍｍ外側を中心とした右体性感覚皮質（Ｓ１）に対して３ｍｍの頭蓋切開を実行した。以下のパラメータを使用して、金属ピストンを装備したＣＣＩデバイス（Ｉｍｐａｃｔ Ｏｎｅ Ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ Ｉｍｐａｃｔｏｒ ｆｏｒ ＣＣＩ、Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＴＢＩを実行した。先端直径３ｍｍ、角度１５°、硬膜からの深さ０．８ｍｍ、速度３ｍ／ｓ、滞留時間１００ミリ秒。シャム動物は同一の麻酔及び頭蓋切開を受けたが、損傷は伝達されなかった。

【0378】

免疫染色及び顕微鏡検査
致死量のＦａｔａｌ－Ｐｌｕｓ（ｄｒｕｇｓ．ｃｏｍ／ｖｅｔ／ｆａｔａｌ－ｐｌｕｓ－ｓｏｌｕｔｉｏｎ．ｈｔｍｌのワールド・ワイド・ウェブ（Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂ）を参照）でマウスを麻酔し、１ＸＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒドで灌流した。連続した冠状切片（厚さ３０μｍ）を、Ｌｅｉｃａ ＳＭ２０００Ｒスライディングミクロトーム上で切断した。切片を、Ｃ１ｑ（１：７００、ウサギ、Ａｂｃａｍ、ａｂ１８２４５１、６４０ ＡＢ＿２７３２８４９）、ＧＦＡＰ（１：１０００、ニワトリ、Ａｂｃａｍ、ａｂ４６７４、ＡＢ＿３０４５５８）、ＧＦＰ（１：５００、ニワトリ、Ａｖｅｓ Ｌａｂｓ、ＡＢ＿１００００２４０）、Ｉｂａ１（１：５００、ウサギ、Ｗａｋｏ、０１９－１９７４１、ＡＢ＿８３９５０４）、及びＮｅｕＮ（１：５００、マウス、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭＡＢ ３７７、ＡＢ＿２２９８７７２）を対象とした抗体とともに、４℃で一晩インキュベーションした。洗浄後、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒコンジュゲーション二次抗体（１：３００、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａ－１１０２９）で切片を室温で２時間インキュベーションした。切片を褪色防止培地（ａｎｔｉｆａｄｅ ｍｅｄｉｕｍ）（Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ）に取り付け、Ｂｉｏｒｅｖｏ ＢＺ－９０００ Ｋｅｙｅｎｃｅ顕微鏡を使用して１０～２０倍で撮像した。Ｐｌａｎ Ａｐｏｃｈｒｏｍａｔ １０×／０．４５ ＮＡ空気対物レンズまたは６３×／１．４ ＮＡ油浸対物レンズを装備した共焦点レーザー走査顕微鏡（ＬＳＭ ８８０、ＺＥＩＳＳ）を使用して共焦点撮像を行った。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ４８８の４８８ｎｍ励起には多重線アルゴンレーザーを使用し、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ５９４の５６１ｎｍ励起にはＨｅＮｅレーザーを使用した。

【0379】

ヒト組織の免疫染色
ホルマリン固定パラフィン包埋組織を６μｍで切片化し、オルガノシランコーティングスライド（ＳＩＧＭＡ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）上に取り付けた。検体の代表的な切片を、ヘマトキシリン／エオシン及び免疫細胞化学のために処理した。Ｃ１ｑ（１：２００、ウサギポリクローナル；ＤＡＫＯ，デンマーク）の免疫細胞化学を、前述のようにパラフィン包埋組織上で実施した。切片を室温で１時間インキュベーションした後、一次抗体で４℃で一晩インキュベーションした。Ｐｏｗｅｒｖｉｓｉｏｎ法及び３，３－ジアミノベンジジンを色素原として用いて、単一標識免疫細胞化学を実行した。切片をヘマトキシリンで対比染色した。ｐＴａｕ（ＡＴ８）、β－アミロイド、ｐＴＤＰ－４３及びα－シヌクレイン等のマーカーを含む、広範囲な神経病理プロトコルを使用した（Ｂｒａｉｎ－Ｎｅｔ Ｅｕｒｏｐｅ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ；Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ １１５（５）：４９７－５０７・２００８の推奨に基づく）。

【0380】

電気生理学のためのスライス調製
マウスを、４％のイソフルランで安楽死させ、２３４ｍＭのスクロース、１１ｍＭのグルコース、１０ｍＭのＭｇＳＯ４、２．５ｍＭのＫＣｌ、１．２５ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、０．５ｍＭのＣａＣｌ２、及び２６ｍＭのＮａＨＣＯ３を含有する氷冷スクロース切断溶液で灌流し、９５％のＯ２及び５％のＣＯ２（ｐＨ７．４）で平衡化し、首を切断した。視床記録のための２５０μｍ厚の水平スライス、及びＬｅｉｃａ ＶＴ１２００ミクロトーム（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた新皮質記録のための冠状スライスを調製した。スライスを、１２６ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのグルコース、２．５ｍＭのＫＣｌ、２ｍＭのＣａＣｌ２、１．２５ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、１ｍＭのＭｇＳＯ４、及び２６ｍＭのＮａＨＣＯ３を含有する人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）中で３２℃で１時間、次いで２４～２６℃でインキュベーションし、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２（ｐＨ７．４）で平衡化した。視床スライス調製は、記載の通りに実行した。

【0381】

パッチクランプ電気生理学
前述のように記録を行った。Ｏｌｙｍｐｕｓ顕微鏡及び赤外線ビデオカメラを備えた差動コントラスト光学によって、Ｓ１、ｎＲＴ、及びＶＢニューロンを視覚的に識別した。ホウケイ酸ガラス製の記録電極は、細胞内溶液で充填した場合、２．５～４ＭΩの抵抗を有した。全ての記録でアクセス抵抗を監視し、アクセス抵抗が＜２５ＭΩの場合にのみ、分析のためにセルを含めた。固有の破裂特性及び自発的興奮性シナプス後電流（ＥＰＳＣ）を、ピクロトキシン（５０μＭ、Ｓｉｇｍａ）の存在下で記録し、内部溶液は、１２０ｍＭのグルコン酸カリウム、１１ｍＭのＥＧＴＡ、１１ｍＭのＫＣｌ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのＣａＣｌ２、及び１ｍＭのＭｇＣｌ２を含有し、ＫＯＨ（２９０ｍＯｓｍ）でｐＨを７．４に調整した。－１５ｍＶの液間電位について電位を補正した。

【0382】

自発的抑制性シナプス後電流（ＩＰＳＣ）をキヌレニン酸（２ｍＭ、Ｓｉｇｍａ）の存在下で記録し、内部溶液は、１３５ｍＭのＣｓＣｌ、１０ｍＭのＥＧＴＡ、１０ｍＭの６８５ＨＥＰＥＳ、５ｍＭのＱｘ－３１４（リドカインＮ－エチルブロミド）、及び２ｍＭのＭｇＣｌ２を含有し、ＣｓＯＨでｐＨを７．３に調整した（２９０ｍＯｓｍ）。

【0383】

単一核ＲＮＡ配列
組織解離
４％のイソフルランでマウスを安楽死させ、氷冷１ＸＰＢＳで灌流し、首を切断した。Ｌｅｉｃａ ＶＴ１２００ミクロトーム（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて３００μｍ厚の冠状スライスを調製し、ｎＲＴ及び隣接するリレー視床核の視覚誘発顕微鏡切断のためのＺｅｉｓｓ ＳｔｅＲＥＯ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．Ｖ８立体顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ）の下に（図３Ａに示すように）配置した。

【0384】

この試験のために、２つのシャム及びｍＴＢＩ複製物群を収集した。複製物１は、ｎ＝５匹のシャムマウス及びｎ＝６匹のｍＴＢＩマウスからの組織を含有した。複製物２は、ｎ＝４匹のシャムマウス及びｎ＝４匹のｍＴＢＩマウスからの組織を含有した。

【0385】

単一核単離
前述のように、核をｎＲＴ／視床及び皮質から単離した（６２及びｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１７５０４／ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．ｉｏ．６ｔ８ｈｅｒｗ）。簡単に述べると、組織を、２００単位のＲＮａｓｉｎ Ｐｌｕｓリボヌクレアーゼ阻害剤（Ｐｒｏｍｅｇａ）を含む１ｍＬの均質化緩衝液を用いて、予め冷却されたＤｏｕｎｃｅ組織グラインダーに入れた。組織試料を、緩い「Ａ」ペストル１０ストローク及びタイトな「Ｂ」サイズのペストル１５ストロークで均質化した。溶解物を４０μｍのＦｌｏｗＭｉストレーナーに通し、核を５００ＲＣＦ、４℃で強打した（ｐｅｌｔｅｄ）。細胞質ＲＮＡを含有する得られた上清の一部を、下流分析のために凍結した。ペレット化された核を均質化緩衝液中に再懸濁し、ヨウジキサノール勾配を使用して精製し、すぐにｓｎＲＮＡ－ｓｅｑに使用した。過剰の核をＢａｍＢａｎｋｅｒ（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）で凍結保存した。

【0386】

単一核ＲＮＡライブラリ構築及び配列決定
ＳｎＲＮＡ－ｓｅｑライブラリは、メーカーの仕様に従って、Ｄｕａｌ Ｉｎｄｅｘｅｓ（１０ｘ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）を有するＣｈｒｏｍｉｕｍ Ｎｅｘｔ ＧＥＭ Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｅｌｌ ３’ｖ３ライブラリキットを使用して処置した。全ての試料について、核を核希釈緩衝液中で１，０００個の核／μｌに希釈し、９，９００個の核をクロム上に装填し、６，０００個の核の標的回収を行った。複製物１及び２の核を異なるクロムラン上で処理した。ライブラリをモル濃度に基づいてプールし、Ｓ１フローセル及びｖ１ ３００サイクル試薬キットを使用してＩｌｌｕｍｉｎａ ＮｏｖａＳｅｑ ６０００システム上で配列決定した。読み取り１については２８サイクル、読み取り２については９０サイクル、インデックスｉ７については１０サイクル、インデックスｉ５については１０サイクルであった。Ｃｅｌｌ Ｒａｎｇｅｒ（４．０．０）（１０Ｘ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）を使用して、試料の脱多重化、バーコード処理、及びシングルセル遺伝子ＵＭＩカウントを実行した。読み取りをｍｍ１０にマッピングした（ＧＥＮＣＯＤＥ ｖＭ２３／Ｅｎｓｅｍｂｌ ９８、１０×から）。複製物１から、１細胞当たりの平均リード数が９２，５３３であるシャムマウスから２，３３７個の核を、１細胞当たりの平均リード数が１６２，３６３であるｍＴＢＩマウスから６５０個の核を回収した。複製物２から、１細胞当たりの平均リード数が４７，５９２であるシャムマウスから３，８９１個の核を、１細胞当たりの平均リード数が平均値４１，６５８の２，２００個の遺伝子であるＴＢＩマウスから４，５７５個の核を回収した。生データは、ＧＥＯ上にアクセッション番号で保存される。

【0387】

核クラスターの解析
ＣｅｌｌＲａｎｇｅｒで処置した後、Ｓｅｕｒａｔを用いてデータマトリックスを分析した。分析の前に、デフォルトのパラメータを使用してＳｏｕｐＸを使用して周辺のＲＮＡを除去した。ＤｏｕｂｌｅｔＦｉｎｄｅｒを使用して、各ＧＥＭ反応物から潜在的なダブレットを除去した。複製物１では、９０個のダブレットをシャムから除去し、１４７個をＴＢＩから除去した。複製物２では、２８個のダブレットをシャムから、１８１個をＴＢＩから除去した。ＤｏｕｂｌｅｔＦｉｎｄｅｒによる核シングレットを下流解析に利用した。二重特異性を除去することに加えて、ミトコンドリアＲＮＡの発現が１％を超える核を除去した。発現を対数スケールで正規化し、上位２０００の特徴をＰＣＡ及び下流クラスター化及びＵＭＡＰに使用した。Ｈａｒｍｏｎｙを使用して、別々の複製物を組み合わせた。Ｈａｒｍｏｎｙ補正後、複製物間の差異は観察されなかった。クラスターはＦｉｎｄＣｌｕｓｔｅｒｓを使用して呼び出し、キー系統マーカーを使用して手動で注釈付けした。Ｓｌｃ１７ａ７／Ｓｌｃ１７ａ６陰性ニューロンを選択した後、ＧＡＢＡ作動性核を再びサブクラスター化した。ＦｉｎｄｅｒＭａｒｋｅｒｓ機能を使用して、クラスター間及びシャムとｍＴＢＩとの間の両方で、差次的に発現した遺伝子（ＤＥＧ）を分析した。Ｐ値は、ウイルコクソンの順位和検定を使用して計算した。ＵＭＡＰプロジェクトにおける発現の視覚化のために、ＲＮＡ発現値を、細胞のＭａｒｋｏｖ Ａｆｆｉｎｉｔｙ－ｂａｓｅｄ Ｇｒａｐｈ Ｉｍｐｕｔａｔｉｏｎ（ＭＡＧＩＣ）を使用して推定した。

【0388】

細胞質ＲＮＡの定量的リアルタイムＰＣＲ
前述のように、バルク細胞質ＲＮＡを各複製試料から抽出した（６２）。簡単に述べると、１５０μＬのホモジネートを１．５ｍＬのＴｒｉｚｍａ（Ｚｙｍｏ）と混合した。水層を保持し、エタノールと混合し、Ｚｙｍｏ ＧＣカラム（Ｚｙｍｏ Ｑｕｉｃｋ ＲＮＡミニキット）に充填し、Ｚｙｍｏについての製造業者の仕様に従った。分光光度計を使用してＲＮＡ濃度を定量した。２００ｎｇの各試料を、ランダムヘックスプライマーを用いたメーカーの仕様に従って、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用したｃＤＮＡ合成のための入力として使用した。具体的な標的ｃＤＮＡを、メーカーの仕様に従ってＳＳＯ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｓｙｂｒ Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）を用いて定量した。アクチンを内部参照として使用するデルタ－デルタＣＴ法を用いて相対発現を計算した。バックグラウンドを決定するために、逆転写酵素を用いずに処理した試料を使用した。Ｃ１ｑａ－Ｆ ５’－ＡＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＴＣＡＧＧＧＡＴＧ－３’（配列番号６９）、Ｃ１ｑａ－Ｒ ５’－ＡＴＡＣＣＡＧＴＣＣＧＧＡＴＧＣＣＡＧＣ－３’（配列番号７０）、アクチン－Ｆ：５’－ＡＴＡＣＣＡＧＴＣＣＧＧＡＴＧＣＣＡＧＣ－３’（配列番号７１）、アクチン－Ｒ：５’－ＴＣＡＣＣＣＡＣＡＣＴＧＴＧＣＣＣＡＴＣＴＡＣＧＡ－３’（配列番号７２）、Ｃ４ｂ－Ｆ：５’－ＧＡＣＡＡＧＧＣＡＣＣＴＴＣＡＧＡＡＣＣ－３’（配列番号７３）、Ｃ４ｂ－Ｒ：５’－ＣＡＧＣＡＧＣＴＴＡＧＴＣＡＧＧＧＴＴＡＣＡ－３’（配列番号７４）、Ｃ１ｒａ－Ｆ：５’－ＧＣＣＡＴＧＣＣＣＡＧＧＴＧＣＡＡＧＡＴＣＡＡ－３’（配列番号７５）、Ｃ１ｒａ－Ｒ：５’－ＴＧＧＣＴＧＧＣＴＧＣＣＣＴＣＴＧＡＴＧ－３’（配列番号７６）、Ｃ１ｓ１－Ｆ：５’－ＴＧＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＣＡＡＣＴＣＣＧＧＴ－３’（配列番号７７）、Ｃ１ｓ－Ｒ：５’－ＧＧＴＧＧＧＴＡＣＴＣＣＡＣＡＧＧＣＴＧＧＡＡ－３’（配列番号７８）、Ｃ２－Ｆ：５’－ＣＴＣＡＴＣＣＧＣＧＴＴＴＡＣＴＣＣＡＴ－３’（配列番号７９）、Ｃ２－Ｒ：５’－ＴＧＴＴＣＴＧＴＴＣＧＡＴＧＣＴＣＡＧＧ－３’（配列番号８０）、Ｃ３－Ｆ：５’－ＡＧＣＡＧＧＴＣＡＴＣＡＡＧＴＣＡＧＧＣ－３’（配列番号８１）、Ｃ３－Ｒ：５’－ＧＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＴＧＴＴＧＧＧＣＴ－３’（配列番号８２）Ｃ４－Ｆ：５’－ＡＣＣＣＣＣＴＡＡＡＴＡＡＣＣＴＧＧ－３’（配列番号８３）、Ｃ４－Ｒ：５’－ＣＣＴＣＡＴＧＴＡＴＣＣＴＴＴＴＴＧＧＡ－３’（配列番号８４）、Ｈｃ－Ｆ：５’－ＡＧＧＧＴＡＣＴＴＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡ－３（配列番号８５）、Ｈｃ－Ｒ：５’－ＴＧＴＧＡＡＧＧＴＧＣＴＣＴＴＧＧＡＴＧ－３’（配列番号８６）。

【0389】

ＥＣｏＧ（皮質脳波計測）及びＭＵＡ（マルチユニット活動）を同時に記録するための装置の外科的埋め込み
自由に行動するマウスにおける同時ＥＣｏＧ、ＭＵＡ記録、及び光学操作のためのデバイスは、全て、に記載されているように、Ｐａｚラボでカスタムメイドされたものであった。概して、記録は、体性感覚サブネットワーク（一次体性感覚皮質（Ｓ１）、体性感覚腹基底視床（ＶＢ）、及び体性感覚網状視床核（ｎＲＴ））の評価のために最適化された。皮質ネジを、Ｓ１上の両側に（損傷の対側：ブレグマから後方－０．５ｍｍ、側方－３．２５ｍｍ、同側：ブレグマから前方＋１．０～１．４ｍｍ、側方＋２．５～３．０ｍｍ）、ＰＦＣの中央に（ブレグマから前方＋０．５ｍｍ、側方０ｍｍ）、Ｖ１上の右半球に（ブレグマから後方－２．９ｍｍ、側方＋２．７ｍｍ）埋め込んだ。ＶＢにおけるＭＵＡ記録については、ブレグマから後方－１．６５ｍｍ、側方＋１．７５ｍｍに電極を埋め込み、光ファイバーの先端を３．０ｍｍに、皮質表面に対して腹側３．２５ｍｍ及び３．５ｍｍに２本の電極を埋め込んだ。ｎＲＴにおけるＭＵＡ記録については、ブレグマから後方－１．４ｍｍ、側方＋２．１ｍｍに電極を埋め込み、光ファイバーの先端を２．７ｍｍに、皮質表面に対してそれぞれ腹側２．９ｍｍ及び３．０ｍｍに２本の電極を埋め込んだ。

【0390】

インビボ電気生理学及び行動
自由に行動するマウスにおける非慢性ＭＵＡ電気生理学的記録は、カスタムメイドオプトロードデバイスを使用して記載されるように実行した。ＥＣｏＧ及び視床ＬＦＰ／ＭＵ（局所電場電位／マルチユニット）信号を、ＲＺ５（ＴＤＴ）を使用して記録し、１２２１Ｈｚでサンプリングし、２４ｋＨｚで視床ＭＵＡ信号をサンプリングした。信号取得に同期したビデオカメラを使用して、動物を継続的に監視した。各記録の開始時に２％のイソフルランで動物を短時間麻酔して、記録のために接続した。各記録トライアルは１５～６０分間続いた。概日リズムを制御するために、通常の明暗サイクルを使用して動物を収容し、午前９時から午後６時の間に記録を実行した。記録は全て目覚めている間に実行した。突然死を起こさず、脳を回復させ、処理することができたマウスにおいて、安楽死後の組織学的検査により、オプトロードの位置を検証した。

【0391】

慢性ＥＣｏＧ記録のためのデバイスの外科的埋め込み
慢性ＥＣｏＧ記録に使用した無線テレメトリーデバイスはＤａｔａ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（ＤＳＩ）から購入したものである。制御式皮質衝撃手術を実行した後、上述したようにＳ１上に両側性皮質スクリューを埋め込んだ。バッテリー／トランスミッタ装置を右肩の皮膚の下に配置した。マウスが手術から回復するとすぐに記録を始めた。マウスは、自宅のケージに単独で収容された。ケージは、信号を取得コンピュータに送信する受信機の上に配置された。Ｐｏｎｅｍａｈソフトウェア（ＤＳＩ）を使用して、最大８匹のマウスからＥＣｏＧ信号を同時に連続的に記録し、５００Ｈｚでサンプリングした。

【0392】

統計分析
全ての数値は平均値として与えられ、エラーバーは特に断りのない限り、平均（ＳＥＭ）の標準誤差である。パラメトリック試験とノンパラメトリック試験を適宜選択し、図の凡例で報告した。データ分析を、ＭＡＴＬＡＢ（登録商標）（ＳＣＲ＿００１６２２）、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７／８（ＳＣＲ＿００２７９８）、ＩｍａｇｅＪ（ＳＣＲ＿００３０７０）、Ｐｏｎｅｍａｈ／ＮｅｕｒｏＳｃｏｒｅ（ＳＣＲ＿０１７１０７）、ｐＣｌａｍｐ（ＳＣＲ＿０１１３２３）、及びＳｐｉｋｅ２（ＳＣＲ＿０００９０３）で実行した。

【0393】

画像解析及び細胞定量
ＩｍａｇｅＪ（ＳＣＲ＿００３０７０）で開いた１０×Ｋｅｙｅｎｃｅ顕微鏡画像からＳ１、ｎＲＴ、ＶＢの対象領域（ＲＯＩ）を選択した。各ＲＯＩが損傷部位の同側面及び対側面の同じ領域を確実に覆うように、最初のＲＯＩを複製し、反対側の半球上に配置し直した。次いで、画像を８ビットに変換した。上限閾値を２５５の最大値に調整し、下限閾値を０からピクセルの外観が元の画像からの蛍光染色と最も密接に一致するまで増加させた。粒子分析を、同じ染色を有する全ての切片について同じ閾値境界を使用して、ＲＯＩ上で実行した。同側積分画素密度を対側積分画素密度で割ることによって、各脳領域について積分密度比を計算した。動物当たり３つの切片からの積分密度比を平均化して、各動物の脳面積当たりの単一の平均比を得た。

【0394】

ＮｅｕＮで染色した切片でｎＲＴ細胞カウントを実行した。ｎＲＴは、ＩｍａｇｅＪ（ＳＣＲ＿００３０７０）に概説されており、マニュアルカウンタープラグインを使用して、神経細胞体のマニュアル細胞カウントを実行した。

【0395】

電気生理学的特性の分析
入力抵抗（Ｒｉｎ）及び膜時間定数（τｍ）を、低強度電流ステップ（－２０～－６０ｐＡ）に応答して膜過分極から測定した。報告されたレオベース平均及びＳＥＭは、記録毎の刺激中に最初に少なくとも１つの活動電位を引き起こした電流に基づいて計算された。ＧｒａｐｈＰａｄ ７５５ Ｐｒｉｓｍ ７（ＳＣＲ＿００２７９８）を使用して、α＝０．０５（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）のマン－ホイットニー検定を使用して、全てのデータを分析した。

【0396】

各細胞からの２００個のランダムに選択されたイベントを使用して、１１個のシャムｎＲＴニューロン及び９個のＴＢＩニューロンからの累積確率分布をＭＡＴＬＡＢ（登録商標）（ＳＣＲ＿００１６２２）中で生成した。

【0397】

ＥＣｏＧにおける紡錘波（ｓｐｉｎｄｌｅ）及びてんかんスパイクイベントの検出
８～１５Ｈｚの周波数範囲の主軸を検出するために、Ｍｏｒｌｅｔ Ｗａｖｅｌｅｔ関数を使用した。ＥＣｏＧパワーの［１．５×Ｓ．Ｄ．＋１×平均］の閾値を検出し、少なくとも０．５秒間持続したこの閾値を超える全てのイベントを検出した（図１６、図１８）。検出された全てのイベントは、群に対して盲検化された科学者によって視覚的に検証された。紡錘波イベントの開始及びオフセット時間は、閾値の前後の交差０で最も近いサイクルまで延長した。紡錘波の振幅は、オンセットからオフセット時間までの紡錘波の平均振幅（８～１５Ｈｚ）から計算し、ＥＣｏＧ信号のＲＭＳで割って、マウス毎に平均化した。紡錘波の頻度は、各紡錘波イベントのＦＦＴの大きさからピーク頻度を抽出し、続いてマウス１匹当たりの平均周波数を計算することによって決定した。てんかんスパイクを含む偽陽性イベント（７×ＳＤ＋１×ベースラインの平均値、図１６及び１７の閾値を超えるイベントとして定義される）は、群に対して盲検化された科学者の目視検査後に拒否された。

【0398】

睡眠スコアリング及びデータ分析は、Ｓｐｉｋｅ２（ｖｅｒｓｉｏｎ ７．２０，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）及びＰｙｔｈｏｎ ３．７（Ｐｙｔｈｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）を使用して実行した。５秒のエポックを自動的にスコアリングし（Ｓｐｉｋｅ ２）、覚醒、ＲＥＭ睡眠（ＲＥＭ）、及びＮＲＥＭ／徐波睡眠として割り当てた。自動スコアリングは、処置群に対して盲検化された経験豊富な科学者によって更に目視検査された。ＥＣｏＧの総パワーに対するデルタ（δ、１．５～４Ｈｚ）の比（１．５～８０Ｈｚ）が、ロコモティブ活動がない場合の閾値よりも高かった場合、エポックをＮＲＥＭ睡眠として割り当てた。睡眠紡錘波解析は、ｍＴＢＩ／シャム手術後２０日目または２１日目の１２時間（午前７時～午後７時）にＮＲＥＭ睡眠中に実行した。同時間枠中に、てんかんスパイクを分析した。運動中に記録は分析されなかった。これは、運動アーチファクトをてんかんスパイクから確実に区別することが困難であったためである（図１７）。

【0399】

抗補体Ｃ１ｑ抗体
本明細書に記載される抗Ｃ１ｑ抗体Ｍ１は、マウスＣ１ｑへの堅牢な結合を示し、様々な動物種由来の血清における機能的補体活性を阻害することができる（Ｌａｎｓｉｔａ ｅｔ ａｌ ２０１７を参照のこと）。以前の研究では、げっ歯類及びサルにおける毒性は報告されておらず（Ｌａｎｓｉｔａ ｅｔ ａｌ ２０１７を参照のこと）、いくつかのマウスモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏ阻害が実証されている（ＭｃＧｏｎｉｇａｌ ｅｔ ａｌ ２０１３、Ｖｕｋｏｊｉｃｉｃ ｅｔ ａｌ ２０１９を参照のこと）。マウスに、抗Ｃ１ｑ抗体Ｍ１またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を、ＴＢＩまたはシャム手術の２４時間後に静脈内注射し、３日毎（ＴＢＩの４日後、ＴＢＩの７日後等）、３週間にわたって処置を続けた。

【0400】

治療パラダイム及び組織溶解
ＰＫ研究のために、マウスは０日目にシャム手術またはＴＢＩ手術を受け、１日目及び４日目に１００ｍｇ／ｋｇの抗Ｃ１ｑ抗体（Ｍ１）またはアイソタイプ対照で腹腔内処置した。５日目に、マウスにＰＢＳを灌流した。血漿及び脳（同側及び対側）を採取し、フラッシュ凍結した。（嗅球及び小脳を含まない）脳を、１：１０ｗ／ｖのＢｕｐＨ（商標）トリス緩衝生理食塩水（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ２８３７９）＋プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａ３２９６３）中で、Ｑｉａｇｅｎ ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ中の７ｍｍのスチールビーズで２分間、３０Ｈｚで均質化することによって溶解した。次いで、溶解物を１７，０００×ｇで２０分間スパニングした。上清をＥＬＩＳＡアッセイに使用した。

【0401】

薬力学（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）ＥＬＩＳＡアッセイ
遊離抗Ｃ１ｑ薬物Ｍ１（ＰＫ）、Ｃ１ｑフリー（ｆｒｅｅ Ｃ１ｑ）、総Ｃ１ｑ（ｔｏｔａｌ Ｃ１ｑ）、Ｃ１ｓ及びアルブミンのレベルをサンドイッチＥＬＩＳＡを使用して測定した。黒色９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ ４３７１１１）を、７５μＬのそれぞれの捕捉タンパク質／抗体：ＰＫの場合にはヒトＣ１ｑタンパク質（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈ）、Ｃ１ｑフリーの場合にはマウスモノクローナル抗Ｃ１ｑ（Ａｂｃａｍ，ａｂ７１９４０）、ならびにＣ１ｓの場合にはウサギポリクローナル抗Ｃ１ｑ（Ｄａｋｏ，Ａ０１３６）及びウサギポリクローナル抗マウスＣ１ｓ（ＬＳＢｉｏ，Ｃ４８３８２９）で、重炭酸緩衝液（ｐＨ９．４）中で４℃で一晩コーティングした。翌日、プレートをｄＰＢＳ ｐＨ７．４（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）で洗浄し、３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するｄＰＢＳでブロッキングした。アッセイ緩衝液（０．３％ＢＳＡ及び０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含有するｄＰＢＳ）中の精製タンパク質で標準曲線を作成した。試料を、適切な希釈でアッセイ緩衝液中で調製した。ブロッキング緩衝液をタッピングによってプレートから除去した。標準及び試料を１ウェル当たり７５μＬで２回（ｉｎ ｄｕｐｌｉｃａｔｅｓ）添加し、ＰＫ測定のために３００ｒｐｍで室温で１時間振盪しながらインキュベーションした。補体アッセイのために、試料を４℃で一晩インキュベーションし、続いて３７℃で３０分間インキュベーションし、次いで室温で１時間インキュベーションした。次いで、プレートを０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含有するｄＰＢＳで３回洗浄し、７５μＬのアルカリホスファターゼがコンジュゲーションされた二次抗体（ＰＫの場合にはヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｃ１ｑフリーの場合にはＭ１、総Ｃ１ｑの場合にはウサギポリクローナル抗Ｃ１ｑ、Ｃ１ｓの場合にはウサギポリクローナル抗Ｃ１ｓ）を全てのウェルに添加した。プレートを振盪しながら室温で１時間インキュベートし、０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含有するｄＰＢＳで３回洗浄し、７５μＬのアルカリホスファターゼ基質（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｔ２２１４）を使用して展開した。室温で２０分後、プレートをルミノメーターを使用して読み取った。アルブミンアッセイは、Ａｂｃａｍ（ａｂ２１０８９０）からのマッチした抗体対を、続いて検出のためのＡｖｉｄｉｎ－ＡＰ二次抗体を使用して行った。標準を４ＰＬロジスティックフィットを使用してフィッティングし、未知の濃度を決定した。分析物レベルを希釈因子について補正した。

【0402】

実施例２：二次Ｃ１ｑ発現は、視床における慢性炎症、神経変性、及びシナプス機能障害と一致する。
ｍＴＢＩの二次的、長期的な影響を判定するために、成体マウスの右一次体性感覚皮質（Ｓ１）に軽度の皮質衝撃損傷を誘発し（図１Ａ）、３週間後に脳へのその影響を評価した。この期間は、脳が損傷後に適応的かつ不適応的な変化を受けているヒトでの潜伏期に相当する。我々は、ニューロン（ＮｅｕＮ）及びグリア炎症（Ｃ１ｑ、古典的補体経路；ＧＦＡＰ、アストロサイト；ＩＢＡ１、ミクログリア／マクロファージ）のマーカーを用いた冠状脳切片の免疫蛍光染色によって、皮質視床回路におけるニューロン数及びグリア炎症を決定した（図１Ｃ～１Ｅ）。術後３週間、ｍＴＢＩマウスは、ＴＢＩ周辺Ｓ１皮質及び機能的に接続された腹基底視床（ＶＢ）及び網膜視床核（ｎＲＴ）において、シャムマウスよりも有意に高いＧＦＡＰ、Ｃ１ｑ及びＩＢＡ１発現を有した（図１Ｂ～１Ｅ）。皮質の炎症は、負傷後２４時間以内に生じ、機能的に接続されたｎＲＴ及びＶＢは、５日後頃にのみグリア変化を示し、これは、視床炎症が皮質損傷の二次的な結果であることを示唆している。また、ヒトＴＢＩ患者からの視床組織における類似の炎症性マーカーの発現の増加を見出し、視床炎症がヒトにおいてもＴＢＩの結果であることを確認した（図７）。

【0403】

グリア炎症は、視床領域、特にｎＲＴ（図１Ｄ～１Ｅ、図２Ａ）において著しいニューロン損失と関連し、ｎＲＴは、そのグルタミン酸作動性入力の大部分を皮質から受け取る。ｍＴＢＩマウスのｎＲＴは、特に、その興奮性入力のほとんどを損傷した体感覚皮質から受ける「体」領域において、シャムマウスのｎＲＴよりも有意にニューロンが少なかった（図２Ｂ～２Ｃ）。この結果は、炎症が損傷した皮質から接続された視床までの長距離の皮質視床回路に従うことを示唆している。

【0404】

Ｃ１ｑがこの回路の機能的損傷をマークする可能性があるかどうかを試験するために、損傷から３～６週間後に得られた脳スライスの皮質及び視床で全細胞パッチクランプ記録を実行した。ＴＢＩ周辺Ｓ１皮質における層５の錐体ニューロン及び高速スパイクＧＡＢＡ作動性介在ニューロン、ＶＢにおけるグルタミン酸作動性ニューロン、及びｎＲＴにおけるＧＡＢＡ作動性ニューロンを記録した。ニューロンの固有膜電気的特性ならびに自発的興奮性及び抑制性シナプス後電流（ｓＥＰＳＣ及びｓＩＰＳＣ）特性は、ＴＢＩ周辺皮質及びＶＢ視床の両方において、シャムマウスとｍＴＢＩマウスとの間で類似していた（詳細は表４を参照）。しかしながら、ｎＲＴにおいて、ｍＴＢＩは、ｓＩＰＳＣの頻度の低下をもたらした（図２Ｄ～２Ｅ）。更に、ｎＲＴ ｓＥＰＳＣは、振幅が小さく、より低い頻度に傾向があった（図２Ｆ～２Ｇ）。皮質視床ニューロンにおける神経細胞カルシウムレベルのマーカーであるＴｈｙ１－ＧＣａＭＰ６ｆを発現するマウスにおけるＧＦＰの免疫蛍光染色は、ｍＴＢＩ後の視床における蛍光の減少を明らかにし（図２Ｈ～２Ｉ）、皮質視床回路が実際に障害されることを示唆した。

【0405】

皮質視床回路に対するｍＴＢＩの主な長期的影響は、ｎＲＴにおけるシナプス伝達の破壊を含み、これは、Ｃ１ｑ発現の増加、皮質入力の減少、及び局所的ニューロン損失と一致すると結論づけられる。対照的に、ＴＢＩ周辺皮質及びＶＢ内のニューロンは、ｍＴＢＩ後の慢性期において正常に見え（表４）、これらの領域における炎症（特に、Ｃ１ｑ発現の増加）は、神経細胞興奮性またはシナプス機能における長期的な機能障害とは関連していないことを示唆している。

【0406】

表４Ｓ１皮質、ＶＢ、及びｎＲＴから記録された固有の特性、ＥＰＳＣ、及びＩＰＳＣデータの要約マウスをＴＢＩ後３～６週間の間記録し、記録条件は本方法のパッチクランプ電気生理学セクションに記載する。統計解析のためにマン－ホイットニー検定を実行した。

【表3-1】

【表3-2】

【表4-1】

【表4-2】

【表5】

【0407】

実施例３：Ｃ１ｑの慢性的な増加は、視床のミクログリアによって媒介される
視床におけるＣ１ｑの細胞起源を決定するために、損傷の３週間後にｎＲＴ及びＶＢ組織を微細解剖し（図３Ａ）、シャムマウス由来の６，２２８個の核、及びｍＴＢＩマウス由来の５，２２０個の核に対して単一核ＲＮＡ配列決定（ｓｎＲＮＡ－ｓｅｑ）を実行し、単離アーチファクトを伴わずに、同じ調製物由来の神経細胞集団及びグリア集団を堅牢に捕捉することを可能にした。周辺のＲＮＡについて補正し、潜在的なダブレットを除去した後、クラスター分析は、隣接する視床皮質リレー核に由来するミクログリア（Ｃｘ３ｃｒ１、Ｐ２ｒｙ１２）、アストロサイト（Ｃｌｄｎ１０、Ｆｇｆｒ３）、オリゴデンドロサイト（Ｍｏｂｐ、Ｏｌｉｇ１）、オリゴデンドロサイト前駆体（Ｓｏｘ８、Ｐｄｇｆｒａ）、ＧＡＢＡ作動性ニューロン（Ｇａｄ１、Ｇａｄ２）、及びグルタミン酸作動性ニューロン（Ｓｌｃ１７ａ６、Ｓｌｃ１７ａ７）を含む予想される細胞型を特定した（図３Ｂ、図８Ａ）。細胞組成物は、シャム試料とｍＴＢＩ試料との間で類似していた（図８Ｂ～８Ｃ）。

【0408】

ミクログリアは、Ｃ１ｑの１８サブユニットを共にコードする３つの遺伝子であるＣ１ｑａ、Ｃ１ｑｂ、及びＣ１ｑｃの高レベルを発現した（図３Ｃ、図９Ｂ）。しかしながら、核ＲＮＡ内でのそれらの発現は、ｍＴＢＩと偽試料との間で有意差はなく（図３Ｄ、図Ｓ３Ｂ）、細胞質ＲＮＡにおけるミクログリア活性化のコードに関する以前の報告と一致した。古典的補体経路においてＣ１ｑの下流に作用するＣ４ｂを発現した、シャムマウス及びＴＢＩマウスの両方における成熟オリゴデンドロサイト及びアストロサイト（図３Ｅ）。核ＲＮＡにおけるＣ４ｂ発現は、ｍＴＢＩ後のオリゴデンドロサイトの１つのサブクラスターにおいて５．２倍増加したが（図３Ｆ、図９Ｃ～９Ｆ）、アストロサイトにおいて有意に増加しなかった。Ｃ２及びＨｃ等の補体経路の他の成分の転写産物は検出されなかった（図９Ｂ、９Ｈ）。

【0409】

これらの観察は、ミクログリアをＣ１ｑタンパク質の可能性のある供給源としたが、ｍＴＢＩ後の視床におけるＣ１ｑの急増についての説明にはならなかった。この不一致に対処するために、ｑＲＴ－ＰＣＲを使用して、我々の核調製物のバルク細胞質画分におけるＣ１ｑａ ｍＲＮＡを調べた。この分析は、視床及び皮質の両方において、ｍＴＢＩ後のＣ１ｑａ ｍＲＮＡ発現の有意な増加を示した（図３Ｇ）。同様に、これらの２つの領域におけるｍＴＢＩマウスにおいて、Ｃ４ｂ発現が上方制御されたが、Ｃ３またはＨｃ（Ｃ５）等の他の補体分子の発現は上方制御されなかった（図３Ｈ、図９Ｈ）。

【0410】

総じて、我々の結果は、ミクログリアがｍＴＢＩマウスにおける慢性Ｃ１ｑのレベルの増加の原因であり、Ｃ１ｑがＣ４ｂ発現オリゴデンドロサイト及びアストロサイトを活性化する可能性が高いことを示唆している。これらの観察と一致して、ＴＢＩ後のミクログリア（Ａｐｏｅ、Ｃｓｔ３）及びアストロサイト（Ａｐｏｅ、Ｃｌｕ）活性化の少数のマーカーのみを検出した（図９Ａ）。

【0411】

実施例４：ｍＴＢＩは、ｎＲＴにおけるミトコンドリア遺伝子発現の選択的変化をもたらす
ｍＴＢＩ後のｎＲＴでシナプス異常及びニューロン損失を検出していたことから、ｎＲＴ ＧＡＢＡ作動性ニューロンにおける遺伝子発現の潜在的変化も調査した。ＧＡＢＡ作動性ニューロン（Ｓｌｃ１７ａ７及びＳｌｃ１７ａ６陰性、Ｇａｄ２陽性、図１０Ａ）のクラスター化は、ｎＲＴにおいて以前に報告された遺伝子（Ｐｖａｌｂ、Ｓｐｐ１及びＥｃｅｌ１、Ｃａｃｎａ１ｈ及びＣａｃｎａ１ｅ）の発現によって特性化される９つのサブクラスター（図１０Ｂ）を明らかにした。また、Ｐｖａｌｂレポーターマウスを用いて細胞選択を行った以前の研究では見逃されていたであろう、Ｐｖａｌｂ陰性であった３つのクラスター（サブクラスター２、８及び９、図１０Ｄ～１０Ｆ）を観察した。特に、サブクラスターの相対サイズは、ｍＴＢＩとシャムマウスとの間で変化せず（図１０Ｃ）、ｎＲＴ内の選択的脆弱性の欠如を示唆した。

【0412】

補体経路の成分は、いずれのＧＡＢＡレギュラーサブクラスターにおいても、ｍＴＢＩとシャムとの間で差異的に発現されなかった。対照的に、Ｃｏｘ６ｃ及びＣｏｘ５ａを含む、ミトコンドリア機能及び酸化的リン酸化に関連するいくつかの遺伝子は、ｍＴＢＩ後の全てのＧＡＢＡ作動性ニューロンにおいて上方制御された（図１０Ｇ）。

【0413】

全体的に、これらのデータは、Ｐｖａｌｂ、Ｓｐｐ１、及びＥｃｅｌ１等の主要なマーカー遺伝子の発現において異なる、ｎＲＴ ＧＡＢＡ作動性ニューロンの複数のサブクラスターの存在を支持する。これらの観察により、ｍＴＢＩ後の視床Ｃ１ｑ源がニューロンではないことが確認される。また、これらは、ｍＴＢＩ後のＧＡＢＡ作動性ｎＲＴニューロンにおけるニューロン損失またはシナプス機能障害の潜在的な媒介物質としてのミトコンドリアを示唆している。

【0414】

実施例５：Ｃ１ｑ機能を遮断することで、慢性グリア炎症及びニューロン損失を減少させる
Ｃ１ｑ発現の増加は慢性的であり（図１１Ａ～１１Ｂ）、したがってｍＴＢＩの長期的な効果を説明し得た。この仮説を試験するために、Ｃ１ｑに特異的に結合し、その下流活性を阻止する抗体を使用した。ｍＴＢＩまたはシャム手術の２４時間後に、マウスにＣ１ｑ抗体またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照の静脈内注射を行い、続いて週２回、３週間にわたって処置を行った。

【0415】

抗Ｃ１ｑ抗体で処置したｍＴＢＩマウスは、免疫蛍光染色によって監視されるように、対照処置したｍＴＢＩマウスと比較して、炎症の大幅な減少及びニューロン損失の減少を示し（図４Ａ～Ｃ）、平均して、抗体で処置したシャムマウスと同じ数のｎＲＴニューロンを有した（図４Ｃ）。対照ＩｇＧで処置したｍＴＢＩマウスは、ｍＴＢＩの３週間後に依然として炎症及びニューロン損失を示した（図４）。抗体処置の代替的なアプローチとして、Ｃ１ｑ－／－マウスを用いて研究を繰り返し、ＴＢＩ後のｎＲＴにおいても、それらが慢性炎症の減少及びニューロン損失の減少を示したことを見出した（図１２）。

【0416】

抗Ｃ１ｑ抗体が末梢ではなく脳内でその効果を発揮したことを確認するために、その濃度ならびに脳及び血漿中のＣ１ｑの濃度を測定した（図１３）。遊離抗Ｃ１ｑ抗体は、抗体処置されたシャムマウス及びｍＴＢＩマウスの脳内で、同側（０．４～８．６ｕｇ／ｍｌ）の濃度が対側（０．０９～３．８ｕｇ／ｍｌ）よりも若干高いことが検出された。これは、抗Ｃ１ｑ抗体を受けていないシャムマウスまたはｍＴＢＩマウスよりも低いＣ１ｑの濃度を伴い、最も顕著なのは同側であった（図１３Ｃ～１３Ｄ）。これらの観察は、抗Ｃ１ｑ抗体が、ｍＴＢＩ後のＣ１ｑの蓄積を防止することを強く示唆している。抗体を受けたシャムマウス及びｍＴＢＩマウスの血漿は、遊離または抗体結合のいずれかで、検出可能な量のＣ１ｑタンパク質を有しておらず、Ｃ１ｑフリーが循環から完全に消失していることを示す。

【0417】

これらの転帰は、Ｃ１ｑがｍＴＢＩにおける炎症及びニューロン損失をもたらし得ること、ならびにＣ１ｑの脳内での蓄積を阻止することが、これらの有害な影響を低減することを示す。

【0418】

実施例６：ＴＢＩは、皮質状態の長期的な変化と、自由に行動するマウスの興奮性につながる
次に、脳リズムを皮質視床回路機能のインビボでの読み出しとして使用して、ｍＴＢＩの縦衝撃を調査した。このために、頭蓋切開／ｍＴＢＩ誘発手術中に慢性無線電気皮質（ＥＣｏＧ）デバイスをシャム及びｍＴＢＩマウスに埋め込み、慢性記録のためにマウスを自宅のケージに戻し、ｍＴＢＩの１、３及び１１週間後のＥＣｏＧパワーの変化を分析した（図５）。光エポック（図５Ｃ～５Ｈ）及び暗エポックの両方の間に、ｍＴＢＩにおけるブロードバンドパワーの慢性的な増加を観察した。

【0419】

経時的に重篤なＴＢＩがてんかんの発生につながることが示されており、ｍＴＢＩについても真実である可能性があるかどうかを調査した。以前に報告された分類を用いて、てんかん様スパイク、てんかん性放電、棘徐波放電、ならびにｍＴＢＩの２４時間後及び３週間後の自発性焦点発作または全般発作を含む様々なタイプのてんかん活性を定量した。最初の２４時間で、１６匹のｍＴＢＩマウスのうち３匹が、８匹のシャムマウスのいずれも、全身性強直性間代性発作を示さなかった（ＧＴＣＳ、表５）。いずれのマウスも、後の時点（最大３週間）でＧＴＣＳを示さなかった（表５）。しかしながら、ｍＴＢＩの３週間後に、我々は、ｍＴＢＩマウス（ｎ＝９）において、シャムマウス（ｎ＝５）よりも多くのてんかん様スパイクを見出し、これは興奮性の増加を示唆している（表５）。同様に、同時ＥＣｏＧ及びマルチユニット視床記録を使用した別の記録設定では、ｍＴＢＩマウスは、ｍＴＢＩの１週間後及び最大３週間後に早くも、同期視床破裂及び正規化θ力の増加を含む自発性てんかん様イベントを有した（図１４）。

【0420】

ｍＴＢＩは、慢性的な時点で早期発作の可能性とブロードバンドＥＣｏＧパワーを増加させることによって、皮質ＥＣｏＧ活性を変化させると結論づけられる。

【0421】

表５シャム、ＴＢＩ、対照処置ＴＢＩ、及び抗体処置ＴＢＩマウスにおけるてんかん様活性分析の要約マウスを、ＴＢＩの日からＴＢＩの数週間後まで連続的に記録した。外科的及び記録状態は、「慢性ＥＣｏＧ記録のためのデバイスの外科的埋め込み」というタイトルの方法セクションに記載されている。解析は、ＴＢＩ後の最初の２４時間、及びＴＢＩ後の３週間に、４８時間の窓にわたって実行した。統計解析のために、混合効果ＡＮＯＶＡの反復測定を行った。

【表6-1】

【表6-2】

【0422】

実施例７：抗Ｃ１ｑ抗体は、ＴＢＩを有するマウスにおける慢性皮質状態の変化を防ぐ
Ｃ１ｑを遮断することが皮質状態の変化を救済することができるかどうかを判定するために、ｍＴＢＩの２４時間後に開始して、抗Ｃ１ｑ抗体またはアイソタイプ対照で５週間マウスを処置し、一方でｍＴＢＩの９～１５週間後までＥＣｏＧ記録を維持した（図６Ａ、図１５）。ＥＣｏＧスペクトル特徴は、抗Ｃ１ｑ抗体または対照処置の最初の週内で同様であった（図６Ｂ～６Ｃ、図１５Ｂ）。３週間で、抗Ｃ１ｑ群は、ほとんどの周波数帯域にわたってパワーの減少に傾向した（図６Ｄ～６Ｅ、図１５Ｃ）が、その減少は統計的に有意ではなかった。

【0423】

特に、てんかん様活動は、抗Ｃ１ｑ抗体の影響を受けなかった（表５）。ｍＴＢＩの３週間後、対照処置ｍＴＢＩマウスと抗体処置ｍＴＢＩマウスとの間に、ＧＴＣＳは見られず、てんかんイベントの頻度に差は見られなかった（表５）。

【0424】

これらの結果をまとめると、ＴＢＩ損傷後にＣ１ｑを遮断することで、マウスにおける皮質状態の二次的変化から保護することが示唆される。

【0425】

実施例８：ｍＴＢＩは、抗Ｃ１ｑ処置によって防止される睡眠紡錘波の喪失及びてんかんスパイクの増加をもたらす
次に、脳リズムを皮質視床回路機能の読み出しとして使用して、インビボでのｍＴＢＩの影響を調査した。このために、頭蓋切開／ｍＴＢＩ誘発手術中に慢性無線電気皮質（ＥＣｏＧ）デバイスをシャム及びｍＴＢＩマウスに埋め込み、慢性記録のためにマウスを自宅のケージに戻し、術後３週間の１２時間以内にＥＣｏＧリズムの変化を分析した（図１６）。ｎＲＴは、マウスの非急速眼球運動睡眠（ＮＲＥＭＳ）中の感覚皮質特異的睡眠紡錘波の供給源であることを考慮して、睡眠紡錘波の分析に焦点を当てた。術後３週間、シャムマウスは左右の感覚皮質に類似した数の睡眠紡錘波を有したが、ｍＴＢＩマウスでは、損傷に対する同側皮質は、対側皮質よりも少ない睡眠紡錘波を示した（図１６Ａ～１６Ｄ）。ｍＴＢＩマウスはまた、損傷に対する同側焦点てんかんスパイクを有した（図１６Ａ～１６Ｄ）。次に、Ｃ１ｑを遮断することがこれらの変化を防止することができるかどうかを判定するために、ｍＴＢＩの２４時間後から開始する抗Ｃ１ｑ抗体またはアイソタイプ対照でマウスを処置し、ｍＴＢＩの３週間後にＥＣｏＧを分析した。抗Ｃ１ｑ抗体で処置したマウスは、アイソタイプ対照で処置したマウスよりも正常な数の睡眠紡錘波（図１６Ｂ、１６Ｄ、１６Ｅ）、及びより少ないてんかんスパイクを示した（図１７Ｂ～１７Ｆ）。これらの結果は、ｍＴＢＩがｍＴＢＩ周辺皮質における睡眠紡錘波の喪失をもたらし、てんかんのスパイクを引き起こすこと、及びｍＴＢＩ後のＣ１ｑ媒介経路を遮断することが、これらの転帰の両方を防止することを示している。

【0426】

参照による組み込み
本明細書で言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各々の個々の刊行物、特許、または特許出願が、参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されたかのように、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。矛盾する場合、本明細書の任意の定義を含む本出願が優先される。

【0427】

均等物
当業者らは、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または単なる通常の実験のみを使用して確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図2G】

【図2H】

【図2I】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図3G】

【図3H】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図5F】

【図5G】

【図5H】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図7G】

【図7H】

【図7I】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図9F】

【図9G】

【図9H】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D-1】

【図10D-2】

【図10D-3】

【図10E】

【図10F】

【図10G】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図13D】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図15D】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【図16D】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図17D】

【図17E】

【図18】

【配列表】

2023524819000001.app

【国際調査報告】