特表2023-525595パラ－アミノ－ベンジルリンカー、それを調製するための方法及びコンジュゲートにおけるその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-16
(54)【発明の名称】パラ－アミノ－ベンジルリンカー、それを調製するための方法及びコンジュゲートにおけるその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 5/083 20060101AFI20230609BHJP
C07K 16/00 20060101ALI20230609BHJP
A61K 47/65 20170101ALI20230609BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20230609BHJP
【ＦＩ】
C07K5/083
C07K16/00
A61K47/65
A61K47/68
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022570285
(86)(22)【出願日】2021-05-18
(85)【翻訳文提出日】2023-01-12
(86)【国際出願番号】 EP2021063195
(87)【国際公開番号】W WO2021233944
(87)【国際公開日】2021-11-25
(31)【優先権主張番号】20315247.5
(32)【優先日】2020-05-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】20209379.5
(32)【優先日】2020-11-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】500287019
【氏名又は名称】レ ラボラトワール セルヴィエ
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】弁理士法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】デソ，パトリス
(72)【発明者】
【氏名】フランゼッティ，ジョルジュ－アラン
(72)【発明者】
【氏名】スタルク，ジェローム－ブノワ
(72)【発明者】
【氏名】コストワ，ヴェセラ
【テーマコード（参考）】
4C076
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076CC41
4C076EE59
4C076FF70
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA12
4H045BA50
4H045CA40
4H045DA75
4H045EA20
4H045FA10
(57)【要約】
本発明は、薬物部分を抗体に連結するのに有用なパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物、前記パラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物が薬物部分に共有結合しているリンカー－薬物化合物及び前記パラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物が薬物部分に共有結合している抗体－薬物コンジュゲートであって、前記抗体により標的とされる特定の細胞又は組織タイプにおいて、前記薬物がコンジュゲートから酵素的に開裂される、抗体－薬物コンジュゲートに関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）：【化76】
［式中、
・Ｒ１は、ヒドロキシ基又はハロゲン原子を表わし、
・Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わし、
・Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、
・Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基、下記：
【化77】
の基、下記：
【化78】
の基又は下記：
【化79】
の基
を表わし、
・Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わし、
・Ｘは、水素原子、ヒドロキシ基又は保護基を表わし、
・Ｍ＋は、薬学的に許容され得る一価のカチオンを表わす］
で示されるパラアミノ－ベンジルリンカー化合物。
【請求項2】
Ｒ１が、ヒドロキシ基、臭素原子、塩素原子又はヨウ素原子を表わす、請求項１記載のパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物。
【請求項3】
Ｒ２が、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わす、請求項１記載のパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物。
【請求項4】
Ａ１が、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基又はメチル基を表わす）を表わす、請求項１記載のパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物。
【請求項5】
Ａ２が、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基（式中、Ｒ４は、イソプロピル基を表わす）、下記：【化80】
の基、下記：
【化81】
の基又は下記：
【化82】
の基
を表わす、請求項１記載のパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物。
【請求項6】
Ａ１が、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、Ａ２が、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基を表わす（式中、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わす）、請求項１記載のパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物。
【請求項7】
以下のもの：－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］メタンスルホナート、
－ ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸、
－ ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヨードメチル）ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（２－スルホナトエチル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド、
－ Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（３－スルホプロピル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド
である、請求項１記載のパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物。
【請求項8】
抗体－薬物コンジュゲートの調製に使用するための、請求項１～７のいずれか一項記載の式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物。
【請求項9】
式（ＩＩ）：【化83】
［式中、
・Ｄは、薬物部分を表わし、
・Ｔは、結合、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（Ｏ）－＊、－Ｏ－＊、－ＮＲ５－＊、－ＮＲ５－Ｃ（Ｏ）－＊又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＊（＊は、Ｄへの結合点を示す）であり、
・Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わし、
・Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、
・Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基、下記：
【化84】
の基、下記：
【化85】
の基又は下記：
【化86】
の基
を表わし、
・Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わし、
・Ｒ５は、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表わし、
・Ｚ’は、スペーサユニット前駆体を表わし、
・Ｍ＋は、薬学的に許容され得る一価のカチオンを表わす］
で示されるリンカー－薬物化合物。
【請求項10】
Ｒ２が、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わす、請求項９記載のリンカー－薬物化合物。
【請求項11】
Ａ１が、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基又はメチル基を表わす）を表わす、請求項９記載のリンカー－薬物化合物。
【請求項12】
Ａ２が、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基（式中、Ｒ４は、イソプロピル基を表わす）、下記：【化87】
の基、下記：
【化88】
の基又は下記：
【化89】
の基
を表わす、請求項９記載のリンカー－薬物化合物。
【請求項13】
Ｔが、結合又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＊を表わす（＊は、Ｄへの結合点を示す）、請求項９記載のリンカー－薬物化合物。
【請求項14】
Ｚ’が、下記のもの：【化90】
［式中、波線は、Ａ２基のＮ末端又はカルボニル基への共有結合部位を示す］
から選択される基を表わす、請求項９記載のリンカー－薬物化合物。
【請求項15】
下記のもの：【化91】
［式中、Ｒ２及びＤは、請求項９で定義されたとおりである］
である、請求項９記載のリンカー－薬物化合物。
【請求項16】
以下のもの：－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［［２－［２－［２－（２アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［１－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボニル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［３－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］オキセタン－３－カルボニル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、
－ ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］メタンスルホン酸、
－ ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；２，２，２－トリフルオロアセタート、
－ Ｎ－（｛［４－（｛Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニル｝アミノ）－２－スルホフェニル］メトキシ｝カルボニル）－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ，２Ｒ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド、
－ Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－（４－｛［（｛［（４Ｓ）－４，１１－ジエチル－９－ヒドロキシ－３，１４－ジオキソ－３，４，１２，１４－テトラヒドロ－１Ｈ－ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－４－イル］オキシ｝カルボニル）オキシ］メチル｝－３－スルホフェニル）－Ｌ－オルニチンアミド、
－ （１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－１，２，３，４，６，１１－ヘキサヒドロテトラセン－１－イル ２，３，６－トリデオキシ－３－［（｛［４－（｛Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチル｝アミノ）－２－スルホフェニル］メトキシ｝カルボニル）アミノ］－α－Ｌ－リキソ－ヘキソピラノシド、
－ Ｎ－｛３－［２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－｛４－［（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）－１１－［（２Ｓ）－ブタン－２－イル］－１２－（２－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ，２Ｒ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－２－オキソエチル）－４，１０－ジメチル－３，６，９－トリオキソ－５，８－ジ（プロパン－２－イル）－２，１３－ジオキサ－４，７，１０－トリアザテトラデカン－１－イル］－３－（２－スルホエチル）フェニル｝－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（３，４－ジブロモ－２，５－ジオキソ－ピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸
である、請求項９記載のリンカー－薬物化合物。
【請求項17】
式（ＩＩＩ）：【化92】
［式中、
・Ａｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントを表わし、
・Ｄは、薬物部分であり、
・Ｔは、結合、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（Ｏ）－＊、－Ｏ－＊、－ＮＲ５－＊、－ＮＲ５－Ｃ（Ｏ）－＊又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＊（＊は、Ｄへの結合点を示す）であり、
・Ｚは、スペーサユニットを表わし、
・Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、
・Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基、下記：
【化93】
の基、下記：
【化94】
の基又は下記：
【化95】
の基
を表わし、
・Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わし、
・Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わし、
・Ｒ５は、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表わし、
・Ｍ＋は、薬学的に許容され得る一価のカチオンを表わし、
・ｐは、１～８の整数である］
で示される抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項18】
・Ｔが、結合又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＊である（＊は、Ｄへの結合点を示す）、請求項１７記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項19】
Ｒ２が、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わす、請求項１７記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項20】
Ａ１が、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わす（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基又はメチル基を表わす）、請求項１７記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項21】
Ａ２が、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基（式中、Ｒ４は、イソプロピル基を表わす）、下記：【化96】
の基、下記：
【化97】
の基又は下記：
【化98】
の基
を表わす、請求項１７記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項22】
前記抗体－薬物コンジュゲートが、以下のもの：【化99】
［式中、Ｒ２及びＤは、請求項１７で定義されたとおりである］
から選択される、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物から形成される、
請求項１７記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項23】
前記抗体－薬物コンジュゲートが、以下のもの：【化100】
［式中、波線は、抗体又はその抗原結合フラグメントへの共有結合部位を示し、Ｄ及びＲ２は、請求項１７で定義されたとおりである］
から選択される式を含む、請求項１７記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項24】
請求項１７～２３のいずれか一項記載の抗体－薬物コンジュゲートと、医薬担体とを含む、医薬組成物。
【請求項25】
処置を必要とするほ乳類の処置に使用するための、請求項１７～２３のいずれか一項記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、薬物部分を抗体に連結するのに有用なパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物、前記パラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物が薬物部分に共有結合しているリンカー－薬物化合物及び薬物に共有結合している前記パラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、前記抗体により標的とされる特定の細胞又は組織タイプにおいて、前記薬物がコンジュゲートから酵素的に開裂される、抗体－薬物コンジュゲートに関する。
【0002】
発明の背景
標的治療薬は、非特異的毒性を低減し、従来の治療に対して有効性を向上させるように設計される。このアプローチは、非常に強力なコンジュゲート化小分子治療薬を抗原陽性細胞に特異的に送達する、モノクローナル抗体又は抗原結合フラグメントの強力な標的化能力により具体化される。毒性の問題に対処するために、化学療法作用薬（薬）を、腫瘍細胞に高度な特異性で結合する標的化分子、例えば抗体又はタンパク質レセプターリガンドに結合させて、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）又は免疫コンジュゲートと呼ばれる化合物が形成されてきた（Chau et al. Lancet 2019, 394, 793-804）。ＡＤＣ又は免疫コンジュゲートは、理論的には、より毒性が低いはずである。これはそれらが、細胞傷害性薬物を、特定の細胞表面抗原又はレセプターを正常細胞と比較して過剰に発現する疾患細胞に向かわせるためである。ＡＤＣ又は免疫コンジュゲートについての有望な進歩により、腫瘍部位又は腫瘍細胞内で開裂されるリンカーを介して抗体に結合された細胞傷害性剤が生じてきた。そのような進歩を、標的化送達を必要とする任意の疾患に適用することができる（Tumey, Innovations for Next-Generation Antibody-Drug Conjugates. Humana Press 2018, 187-214）。近年の例から、免疫媒介炎症性疾患（Wang et al. J Am Chem Soc. 2015, 137, 3229-32）、筋肉関連疾患（Sugo et al. J. Control. Release 2016, 237, 1-13）及び細菌感染により引き起こされる疾患（Mariathasan et al. Trends Mol. Med. 2017, 23, 135-149）にも関心が持たれていることが示されている。さらに、ＡＤＣは、細胞傷害性薬物に限定されず、撮像剤（Dammes et al. Theranostics 2020, 10, 938-955）又はオリゴヌクレオチド（Dovgan et al. Bioconjug. Chem. 2019, 30, 2483-2501）を抗原陽性細胞に特異的に送達するのに使用することができる。
標的治療薬は、非特異的毒性を低減し、従来の治療に対して有効性を向上させるように設計される。このアプローチは、非常に強力なコンジュゲート化小分子治療薬を抗原陽性細胞に特異的に送達する、モノクローナル抗体又は抗原結合フラグメントの強力な標的化能力により具体化される。毒性の問題に対処するために、化学療法作用薬（薬）を、腫瘍細胞に高度な特異性で結合する標的化分子、例えば抗体又はタンパク質レセプターリガンドに結合させて、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）又は免疫コンジュゲートと呼ばれる化合物が形成されてきた（Chau et al. Lancet 2019, 394, 793-804）。ＡＤＣ又は免疫コンジュゲートは、理論的には、より毒性が低いはずである。これはそれらが、細胞傷害性薬物を、特定の細胞表面抗原又はレセプターを正常細胞と比較して過剰に発現する疾患細胞に向かわせるためである。ＡＤＣ又は免疫コンジュゲートについての有望な進歩により、腫瘍部位又は腫瘍細胞内で開裂されるリンカーを介して抗体に結合された細胞傷害性剤が生じてきた。そのような進歩を、標的化送達を必要とする任意の疾患に適用することができる（Tumey, Innovations for Next-Generation Antibody-Drug Conjugates. Humana Press 2018, 187-214）。近年の例から、免疫媒介炎症性疾患（Wang et al. J Am Chem Soc. 2015, 137, 3229-32）、筋肉関連疾患（Sugo et al. J. Control. Release 2016, 237, 1-13）及び細菌感染により引き起こされる疾患（Mariathasan et al. Trends Mol. Med. 2017, 23, 135-149）にも関心が持たれていることが示されている。さらに、ＡＤＣは、細胞傷害性薬物に限定されず、撮像剤（Dammes et al. Theranostics 2020, 10, 938-955）又はオリゴヌクレオチド（Dovgan et al. Bioconjug. Chem. 2019, 30, 2483-2501）を抗原陽性細胞に特異的に送達するのに使用することができる。
【0003】
リンカーは、ＡＤＣの物理化学的特性に影響を及ぼす場合がある。多くの細胞傷害性薬物は、本質的に疎水性であるため、追加の疎水性部分を有する抗体にそれらを結合させると、凝集をもたらすおそれがある。ＡＤＣ凝集体は不溶性であり、達成可能な抗体への薬物負荷をしばしば制限し、ＡＤＣの効力に悪影響を及ぼすおそれがある。生物製剤のタンパク質凝集体は、一般的には、免疫原性の増加にも関連している。
【0004】
細胞特異的リガンドにコンジュゲートされた薬物、例えば細胞傷害性薬物又は細胞増殖抑制性薬物の標的化送達に対する化学的解決策は、コンジュゲート中のリガンドに薬物部分を結合させる「自壊牲リンカー」のＰＡＢＣ又はＰＡＢ（パラ－アミノベンジルオキシカルボニル又はパラアミノベンジル）である（Alouane et al. Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 7492-7509；Bargh et al. Chem. Soc. Rev. 2019, 48, 4361-4374）。ＰＡＢリンカー単位は、電子カスケードスペーサとも呼ばれる。ペプチド単位のカルボキシ末端とＰＡＢＣ又はＰＡＢのパラ－アミノベンジルとを結合させるアミド結合は、基質でありえ、特定のプロテアーゼにより開裂可能である。芳香族アミンは電子供与性になって、脱離基の放出をもたらす電子カスケードを開始し、これは二酸化炭素の脱離後に遊離薬物を放出する（de Groot et al. J. Org. Chem. 2001, 66, 8815-8830）。ＰＡＢＣ又はＰＡＢに隣接するペプチド結合が開裂されると（すなわち、細胞内酵素により）、薬物がリガンドから放出され、その結果、リンカーの残りの部分は結合していない（de Groot et al. Molecular Cancer Therapeutics 2002, 1, 901-911；de Groot et al. J. Med. Chem. 1999, 42, 5277-5283）。
【0005】
ペプチド単位とコンジュゲーションされたパラ－アミノベンジル又はパラ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ又はＰＡＢＣ）単位を含有するリンカーは、標的化リガンド、例えば抗体から薬物部分を放出するように、酵素的、加水分解的又は他の代謝的条件下での１，６－脱離及びフラグメント化の「自壊牲（ｓｅｌｆ－ｉｍｍｏｌａｔｉｎｇ）」又は「自壊牲（ｓｅｌｆ－ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）」機構を使用して開発されてきた（ＥＰ第１７１８６６７号；ＷＯ第２０１６／０４０６８４号）。プロドラッグ及びコンジュゲートにおけるＰＡＢ単位の使用については、Alouane et al. Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 7492-7509；Bargh et al. Chem. Soc. Rev. 2019, 48, 4361-4374；Dal Corso et al. Chem. Eur. J. 2019, 25,14740-14757も参照のこと。
【0006】
ＰＡＢタイプの自壊牲リンカーの欠点は、コンジュゲートの乏しい溶解性及び凝集をもたらす傾向である。例えば、ＷＯ第２０１７／２１４２８２号には、幾つかの親水性基（例えば、グルクロニド（glucoronides）、ポリヒドロキシル化側鎖．．．）を含有するＰＡＢタイプの自壊牲リンカーは、コンジュゲートの高度の凝集（１５％超）をもたらす。加えて、一部のＰＡＢ含有コンジュゲートは、特定の開裂酵素に適した基質ではない場合があるか、又は有効性を達成するには開裂が遅すぎる。結果として、薬理学的活性及び安定性を維持しながら、凝集を低減するために、自壊牲リンカーの構造を最適化することにより、抗体－薬物コンジュゲートの特性を改善することが望ましいであろう。予想外に、本明細書に開示されたパラ－アミノ－ベンジル単位及びペプチド単位を含む、これらの新規なパラ－アミノ－ベンジルリンカーは、上記言及された欠点に対処し、それらの使用により、下記実施例において実証されているように、低い凝集レベル、良好な安定性、望ましいレベルの薬物負荷及び予想される薬理学的活性を有するＡＤＣがもたらされる。
【図面の簡単な説明】
【0007】
【0008】
定義
「抗体」又は「Ａｂ」という用語は、最も広い意味で使用され、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、標的、例えばタンパク質、ポリペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質又は前述のものの組み合わせを認識し、それに特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、ポリクローナルもしくはモノクローナル、多鎖もしくは一本鎖又はインタクトな免疫グロブリンであってよく、天然起源又は組み換え起源に由来するものでありうる。「インタクトな」抗体は、典型的には、ジスルフィド結合により相互に結合した、少なくとも２つの重鎖（Ｈ）及び２つの軽鎖（Ｌ）を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においては、ＶＨと略す）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においては、ＶＬと略す）及び軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬから構成される。ＶＨ及びＶＬ領域を、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在している）にさらに細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシル末端に、下記順序で配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、ホストの組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体又はキメラ抗体でありうる。抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスのものでありうる。抗体は、インタクトな抗体又はその抗原結合フラグメントでありうる。
「抗体」又は「Ａｂ」という用語は、最も広い意味で使用され、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、標的、例えばタンパク質、ポリペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質又は前述のものの組み合わせを認識し、それに特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、ポリクローナルもしくはモノクローナル、多鎖もしくは一本鎖又はインタクトな免疫グロブリンであってよく、天然起源又は組み換え起源に由来するものでありうる。「インタクトな」抗体は、典型的には、ジスルフィド結合により相互に結合した、少なくとも２つの重鎖（Ｈ）及び２つの軽鎖（Ｌ）を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においては、ＶＨと略す）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においては、ＶＬと略す）及び軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬから構成される。ＶＨ及びＶＬ領域を、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在している）にさらに細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシル末端に、下記順序で配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、ホストの組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体又はキメラ抗体でありうる。抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスのものでありうる。抗体は、インタクトな抗体又はその抗原結合フラグメントでありうる。
【0009】
本明細書で使用する場合、「抗体フラグメント」又は「抗原結合フラグメント」又は「フラグメント」という用語は、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布により）能力を保持する抗体の少なくとも１つの部分を指す。また、抗原結合フラグメントは、抗原発現細胞に内部移行する能力を保持することもある。一部の実施態様では、抗原結合フラグメントは、免疫エフェクター活性も保持する。抗体、抗体フラグメント、抗原結合フラグメント等の用語は、より大きな高分子、例えばＡＤＣの文脈における、抗体由来の結合ドメインの使用を包含することが意図される。全長抗体のフラグメントは、全長抗体の抗原結合機能を果たすことができることが示されている。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、線状抗体、一本鎖ドメイン抗体、例えばｓｄＡｂ（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科ＶＨＨドメイン、抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体（例えば、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント）並びに抗体の単離されたＣＤＲ又は他のエピトープ結合フラグメントを含むが、これらに限定されない。また、抗原結合フラグメントを、一本鎖ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ディアボディ、トリアボディ、テトラボディ、二重特異性又は多重特異性抗体構築物、ＡＤＣ、ｖ－ＮＡＲ及びビス－ｓｃＦｖに組み込むこともできる（例えば、Holliger and Hudson Nat. Biotechnol. 2005, 23, 1126-1136を参照のこと）。また、抗原結合フラグメントを、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）等のポリペプチドに基づく足場にグラフト化することもできる（ＵＳ第６，７０３，１９９号を参照のこと。同文献には、フィブロネクチンポリペプチドミニボディが記載されている）。
【0010】
「ｓｃＦｖ」という用語は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗原結合フラグメントと、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗原結合フラグメントとを含む融合タンパク質を指し、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、連続的に連結されていて（例えば合成リンカー（例えば、短い柔軟なポリペプチドリンカー）を介して）、一本鎖ポリペプチドとして発現可能であり、ｓｃＦｖは、それが由来するインタクトな抗体の特異性を保持する。特に断りない限り、ｓｃＦｖは、例えば、ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端に関して、ＶＬ可変領域及びＶＨ可変領域をいずれの順序でも有することができ、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含むことができ、又はＶＨ－リンカー－ＶＬを含むことができる。抗原結合フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を使用して得られ、結合フラグメントは、インタクトな抗体と同じ様式で、有用性（例えば、結合親和性、内部移行）についてスクリーニングされる。抗原結合フラグメントを、例えばインタクトなタンパク質の開裂、例えば、プロテアーゼ又は化学的開裂により調製することができる。
【0011】
本明細書で使用する場合、「薬物」又は「作用薬」又は「治療薬（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｄｒｕｇ）」又は「治療作用薬（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔ）」という用語は、生物学的プロセスを調節可能であり、かつ／又は生物活性を有する、化合物、化合物の混合物、生体高分子、生体材料から作製された抽出物又はそれらの２つ以上の組み合わせを指す。特に、「薬物」という用語は、「化学療法作用薬」又は「抗ガン薬」を表わしうる。
【0012】
「化学療法作用薬」又は「抗ガン薬」という用語は、本明細書において、（作用機序にかかわらず）ガンの処置に有効な全ての作用薬を指すのに使用される。転移又は血管新生の阻害は、化学療法作用薬の特性であることが多い。化学療法作用薬は、抗体、生体分子及び小分子を含む。化学療法作用薬は、細胞傷害性作用薬又は細胞増殖抑制作用薬でありうる。化学療法作用薬の例は、モノメチルアウリスタチンＥ、アウリスタチンＥ、ＳＮ－３８、ドキソルビシン等を含むが、これらに限定されない。
【0013】
「細胞増殖抑制作用薬」という用語は、細胞増殖（ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ）及び／又は細胞の増加（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ）を阻害し又は抑制する作用薬を指す。
【0014】
「細胞傷害性作用薬」という用語は、主に、細胞の発現活性及び／又は機能を妨害することにより、細胞死を引き起こす物質を指す。
【0015】
本明細書で使用する場合、「ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル」という用語は、１つ以上のハロゲン原子、例えば、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素により置換されている（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を意味し、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２－フルオロエチル、２，２－ジフルオロエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、２，２，２－トリフルオロ－１，１－ジメチルエチル、２，２，２－トリクロロエチル、３－フルオロプロピル、４－フルオロブチル、クロロメチル、トリクロロメチル、ヨードメチル及びブロモメチルを含むが、これらに限定されない。
【0016】
「保護基」という用語は、特定の官能基を、化合物上の他の官能基を反応させる間封鎖（block）又は保護するのに一般的に利用される置換基を指す。例えば、「アミノ保護基」は、化合物中のアミノ官能基を封鎖又は保護する、アミノ基に結合した置換基である。適切なアミノ保護基は、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）及び９－フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を含む。同様に、「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ官能基を封鎖又は保護する、ヒドロキシ基の置換基を指す。適切なヒドロキシ保護基は、アセチル、ベンジル、ベンゾイル、テトラヒドロピラニル及びトリアルキルシリルを含む。また、「カルボニル保護基」は、カルボニル官能基を封鎖又は保護する、カルボニル基の置換基を指す。適切なカルボニル保護基は、アセタール、アシラール及びジチアンを含む。同様に、「カルボキシル保護基」は、カルボキシル官能基を封鎖又は保護する、カルボキシル基の置換基を指す。適切なカルボキシル保護基は、メチルエステル、ベンジルエステル、tert－ブチルエステル、シリルエステル及びオルトエステルを含む。保護基及びその使用の一般的な説明については、T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991を参照のこと。
【0017】
本明細書で使用する場合、「部分」という用語は、分子又は化合物の特定のセグメント、フラグメント又は官能基を意味する。化学部分は、分子、化合物又は化学式に埋め込まれるか又は付加される化学的実体（chemical entities）（すなわち、置換基又は可変基）として示される場合がある。
【0018】
本明細書で使用する場合、「架橋スペーサ」という用語は、共有結合して一緒になり、二価のペプチドＡ１－Ａ２を反応性基に連結する二価の部分を形成する、１つ以上のリンカー成分を指す。特定の実施態様では、「架橋スペーサ」は、Ａ２基のＮ末端にアミド結合を介して結合したカルボニル基を含む。特定の実施態様では、「架橋スペーサ」は、Ａ２基のカルボニル基にアミド結合を介して結合したアミノ基を含む。一部の実施態様では、架橋スペーサは、ポリオキシエチレン（ＰＥＧ）基を含む。他の実施態様では、架橋スペーサは、ブタノイル、ペンタノイル、ヘキサノイル、ヘプタノイル又はオクタノイル基を含む。一部の実施態様では、架橋スペーサは、ヘキサノイル基（すなわち、－ＣＯ－（ＣＨ２）５－基）を含む。好ましい実施態様では、架橋スペーサは、－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＰＥＧ１－、－ＣＯ－ＣＨ２－ＰＥＧ３－又は－ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＰＥＧ１－を含んでいてよい。
【0019】
本明細書で使用する場合、「ポリオキシエチレン」、「ポリエチレングリコール」又は「ＰＥＧ」という用語は、（ＯＣＨ２ＣＨ２）基から構成される直鎖、分枝鎖又は星形の構造（configuration）を指す。特定の実施態様では、ポリオキシエチレン又はＰＥＧ基は、＊－（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔ－＊＊（式中、ｔは、１～２０であり、「＊」は、Ａ２－Ａ１基に向かう末端を示し、「＊＊」は、反応性基への結合点を示す）である。一部の実施態様では、架橋スペーサは、＊－（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔ－＊＊（式中、ｔは、１～２０であり、「＊」は－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）－基（式中、カルボニル基はＡ２基のＮ末端に結合しており、ｎは、１～５である）への結合点を示し、「＊＊」は、反応性基への結合点を示す）であるＰＥＧ基を含む。一部の実施態様では、架橋スペーサは、＊－（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔ－＊＊（式中、ｔは、１～２０であり、「＊」は、－（ＣＨ２）ｎ－ＮＨ基（式中、アミノ基はＡ２基のカルボニル基に結合しており、ｎは、１～５である）への結合点を示し、「＊＊」は、反応性基への結合点を示す）であるＰＥＧ基を含む。例えば、本明細書で使用する場合、「ＰＥＧ３」という用語は、ｔが３であることを意味する。
【0020】
本明細書で使用する場合、「反応性基」という用語は、抗体又は抗体フラグメントの官能基と共有結合を形成可能な官能基である。一部の実施態様では、反応性基は、チオール、マレイミド、ジブロモマレイミド、ハロアセトアミド、アジド、アルキン、シクロオクテン、トリアリールホスフィン、オキサノボルナジエン（ｏｘａｎｏｂｏｒｎａｄｉｅｎｅ）、シクロオクチン、ジアリールテトラジン、モノアリールテトラジン、ノルボルネン、アルデヒド、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ＮＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、ケトン、ビニルスルホン、アジリジン、アミノ、アミノ酸残基…から選択されるが、これらに限定されない。好ましい実施態様では、反応基性は、マレイミド基、ジブロモマレイミド基、チオール基、シクロオクチン基又はアジド基、より好ましくは、マレイミド基、ジブロモマレイミド基又はアジド基から選択される。例えば、マレイミド又はジブロモマレイミド基はそれぞれ、下記：
の構造を有していてもよい。
【化1】
の構造を有していてもよい。
【0021】
例えば、アジド基は、構造：－Ｎ＝Ｎ＋＝Ｎ－を有していてもよい。
【0022】
本明細書で使用する場合、「結合基」という用語は、架橋スペーサを抗体又はそのフラグメントに連結する、二価又は三価の部分を指す。結合基は、反応性基と、抗体又はそのフラグメント上の官能基との間の反応により形成される、二価又は三価の部分である。一部の実施態様では、結合基の形成のための反応性基は、チオール、マレイミド、ジブロモマレイミド、ハロアセトアミド、アジド、アルキン、シクロオクテン、トリアリールホスフィン、オキサノボルナジエン、シクロオクチン、ジアリールテトラジン、モノアリールテトラジン、ノルボルネン、アルデヒド、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ＮＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、ケトン、ビニルスルホン、アジリジン、アミノ、アミノ酸残基…から選択されるが、これらに限定されない。好ましい実施態様では、結合基の形成のための反応基は、マレイミド基、ジブロモマレイミド基、チオール基、シクロオクチン基又はアジド基、より好ましくは、マレイミド基、ジブロモマレイミド基又はアジド基から選択される。
【0023】
本明細書で使用する場合、「スペーサユニット前駆体」又は「スペーサユニット前駆体Ｚ’」又は「Ｚ’」という用語は、架橋スペーサ及び反応性基を含む成分を指す。
【0024】
本明細書で使用する場合、「スペーサユニット」又は「スペーサユニットＺ」又は「Ｚ」という用語は、架橋スペーサ及び結合基を含む成分を指す。
【0025】
本明細書で使用する場合、「コンジュゲート」又は「抗体－薬物コンジュゲート」又は「ＡＤＣ」又は「免疫コンジュゲート」という用語は、式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカーを介して、薬物部分に共有結合している抗体を指す。一実施態様では、スペーサユニットＺがアミド基を介して抗体Ａｂに結合している、式（ＩＩＩ）で示される抗体－薬物コンジュゲートを、抗体Ａｂ上の遊離アミン官能基を、活性エステルを含有するスペーサユニットＺの前駆体と反応させることにより調製することができる。例えば、スペーサユニット前駆体Ｚ’上のカルボキシル基を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドと反応させることにより活性化し、次いでＡｂ－ＮＨ２と反応させて、Ａｂ及びＺがアミド基を介して結合しているコンジュゲートを形成してもよい。天然又は化学的操作のいずれかにより抗体上にある、スペーサユニットＺに連結させるための有用な官能基は、スルフヒドリル（－ＳＨ）、アミノ、ヒドロキシル、炭水化物のアノマーヒドロキシル基及びカルボキシルを含むが、これらに限定されない。一実施態様では、抗体上の反応性官能基は、スルフヒドリル及びアミノである。スルフヒドリル基は、抗体の分子内システインジスルフィド結合の還元により生じさせることができる。代替的には、２－イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）又は別のスルフヒドリル生成試薬を使用する、抗体のリシン部分のアミノ基の反応により、スルフヒドリル基を生じさせることができる。別の実施態様では、スペーサユニットＺは、抗体の硫黄原子と、スペーサユニットＺの硫黄原子との間のジスルフィド結合を介して、抗体Ａｂに連結される。さらに別の実施態様では、スペーサユニットＺの反応性基は、抗体の第一級又は第二級アミノ基との結合を形成することができる反応性部位を含有する。これらの反応性部位の例は、活性化されたエステル、例えば、スクシンイミドエステル、４－ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸クロリド、塩化スルホニル、イソシアナート及びイソチオシアナートを含むが、これらに限定されない。さらに別の実施態様では、スペーサユニットＺの反応性基は、グリコシル化抗体の糖（炭水化物）上のアルデヒド、アセタール又はケタール基と反応する。例えば、炭水化物を、過ヨウ素酸ナトリウム等の試薬を使用して穏やかに酸化させ、酸化された炭水化物の得られた（－ＣＨＯ）単位を、ヒドラジド、オキシム、第一級又は第二級アミン、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシラート及びアリールヒドラジド（例えば、Kaneko et al. Bioconjugate Chem. 1991, 2, 133-141に記載されたもの）等の官能基を含有するスペーサユニットと縮合させることができる。
【0026】
ＡＤＣの生成は、当業者に公知の技術により達成することができる。例示的な実施態様では、本発明は、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物を、反応性のスルフヒドリル、アミノ又はカルボキシル部分を有する抗体（又はそのフラグメント）と、適切な条件下で接触させて、反応性部分と、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物のスペーサユニット前駆体Ｚ’部分との縮合を起こさせる（Ｚ’は、前記接触により生じるＺに変換される）ことにより調製される、式（ＩＩＩ）で示されるＡＤＣを提供する。
【0027】
一部の実施態様では、式（ＩＩＩ）で示されるＡＤＣは、Ａ２－Ａ１基のＮ末端を抗体に結合させる二価の部分であるスペーサユニットＺを包含する。一部の実施態様では、式（ＩＩＩ）で示されるＡＤＣは、Ａ２－Ａ１基のカルボニル基を抗体に結合させる二価の部分であるスペーサユニットＺを包含する。
【0028】
スペーサユニットＺは、抗体についている（pending from）官能基、例えば、アミン（例えば、Ｌｙｓ残基からの－ＮＨ２）、カルボキシル（Ａｓｐ又はＧｌｕ残基からの－ＣＯＯＨ）又はスルフヒドリル（例えば、Ｃｙｓ残基からの－ＳＨ）に共有結合している。これらは、アミド又はチオエーテル又はジスルフィド基を形成する。スペーサユニット前駆体Ｚ’が抗体のスルフヒドリル官能基（例えば、Ｃｙｓ含有ペプチド又は還元抗体）と反応してチオエーテル結合を形成している、本発明の抗体－薬物コンジュゲートは、下記式：
［式中、Ａｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである］
で表わされるものを含む。他の実施態様では、スペーサユニット前駆体Ｚ’が抗体の２つのスルフヒドリル官能基と反応して２つのチオエーテル結合を形成している、本発明の抗体－薬物コンジュゲートは、下記式：
［式中、Ａｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである］
で表わされるものを含む。
【化2】
［式中、Ａｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである］
で表わされるものを含む。他の実施態様では、スペーサユニット前駆体Ｚ’が抗体の２つのスルフヒドリル官能基と反応して２つのチオエーテル結合を形成している、本発明の抗体－薬物コンジュゲートは、下記式：
【化3】
［式中、Ａｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである］
で表わされるものを含む。
【0029】
一部の実施態様では、抗体又は抗原結合フラグメントは、リンカー－薬物中間体と反応性である官能基を調製するように官能化される。一部の実施態様では、抗体又は抗原結合フラグメントは、細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）を使用して調製され、アミン含有シクロオクチンであるＢＣＮ（Ｎ－［（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチルオキシカルボニル］－１，８－ジアミノ－３，６－ジオキサオクタン）部分で特異的に官能化された反応性グルタミンである。一部の実施態様では、スペーサユニット前駆体Ｚ’が抗体のグルタミン官能基と反応してアミド結合を形成している、本発明のＡＤＣは、下記式：
［式中、Ａｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである］
で表わされるものを含む。
【化4】
［式中、Ａｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである］
で表わされるものを含む。
【0030】
「薬物負荷」という用語は、ｐで表わされ、本明細書においては、薬物対抗体比（ＤＡＲ又は薬物：抗体比）とも呼ばれる。薬物負荷は、抗体又は抗原結合フラグメント当たり、薬物部分１～８個の範囲でありうる。一部の実施態様では、より高い薬物負荷（例えば、ｐ＞８）では、特定の抗体－薬物コンジュゲートの凝集、不溶性、毒性又は細胞透過性の喪失を引き起こすおそれがある。また、より高い薬物負荷は、特定のＡＤＣの薬物動態（例えば、クリアランス）に悪影響を及ぼすおそれがある。一部の実施態様では、より低い薬物負荷（例えば、ｐ＜２）では、標的発現細胞に対する特定のＡＤＣの効力を低下させるおそれがある。一部の実施態様では、ｐは、２～８の整数である。一部の実施態様では、ｐは、２であるか又はｐは、４であるか又はｐは、８である。
【0031】
ＡＤＣの薬物負荷は、種々の方法で、例えば、抗体に対する薬物－リンカー中間体又はリンカー試薬のモル過剰を制限することにより、又はコンジュゲーション反応の時間もしくは温度を制限することにより制御することができるが、これらに限定されない。
【0032】
一部の実施態様では、コンジュゲーション反応により生じるＡＤＣの混合物中の薬物負荷は、抗体又は抗原結合フラグメント当たり、結合した薬物部分１～８個の範囲である。抗体又は抗原結合フラグメント当たりの薬物部分の平均数（すなわち、平均薬物負荷又は平均ｐ）を、当技術分野において公知の任意の従来の方法により、例えば、質量分光法（例えば、液体クロマトグラフィー－質量分光法（ＬＣ－ＭＳ））及び／又は高速液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＩＣ－ＨＰＬＣ）により計算することができる。一部の実施態様では、抗体又は抗原結合フラグメント当たりの薬物部分の平均数は、約１．５～約２．５、又は約７．０～約８である。一部の実施態様では、抗体又は抗原結合フラグメント当たりの薬物部分の平均数は、約２である。一部の実施態様では、抗体又は抗原結合フラグメント当たりの薬物部分の平均数は、２である。一部の実施態様では、抗体又は抗原結合フラグメント当たりの薬物部分の平均数は、約４である。一部の実施態様では、抗体又は抗原結合フラグメント当たりの薬物部分の平均数は、４である。一部の実施態様では、抗体又は抗原結合フラグメント当たりの薬物部分の平均数は、約８である。一部の実施態様では、抗体又は抗原結合フラグメント当たりの薬物部分の平均数は、８である。
【0033】
発明の詳細な説明
本発明の第１の態様によれば、式（Ｉ）：
［式中、
・Ｒ１は、ヒドロキシ基又はハロゲン原子を表わし、
・Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わし、
・Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、
・Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基、下記：
の基、下記：
の基又は下記：
の基
を表わし、
・Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わし、
・Ｘは、水素原子、ヒドロキシ基又は保護基を表わし、
・Ｍ＋は、薬学的に許容され得る一価のカチオンを表わす］
で示されるパラアミノ－ベンジルリンカー化合物が提供される。
本発明の第１の態様によれば、式（Ｉ）：
【化5】
［式中、
・Ｒ１は、ヒドロキシ基又はハロゲン原子を表わし、
・Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わし、
・Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、
・Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基、下記：
【化6】
の基、下記：
【化7】
の基又は下記：
【化8】
の基
を表わし、
・Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わし、
・Ｘは、水素原子、ヒドロキシ基又は保護基を表わし、
・Ｍ＋は、薬学的に許容され得る一価のカチオンを表わす］
で示されるパラアミノ－ベンジルリンカー化合物が提供される。
【0034】
好ましい実施態様では、Ｒ１は、ヒドロキシ基、臭素原子、塩素原子又はヨウ素原子を表わす。より好ましくは、Ｒ１は、ヒドロキシ基、塩素原子又はヨウ素原子を表わす。さらにより好ましくは、Ｒ１は、ヒドロキシ基を表わす。
【0035】
好ましくは、Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わす。Ｍ＋の例は、Ｌｉ＋、Ｎａ＋又はＫ＋を含む。好ましい実施態様では、Ｍ＋は、Ｎａ＋を表わす。
【0036】
特定の実施態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基（式中、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わす）を表わす。側鎖を有する炭素は、Ｄ又はＬ（Ｒ又はＳ）配置のいずれであってもよい。好ましくは、側鎖を有する炭素は、Ｌ配置である。特定の実施態様では、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、メチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、フェニル、ベンジル、ｐ－ヒドロキシベンジル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＳＨ、－ＣＨ２ＳｅＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨ２ＳＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、－ＣＨ２ＣＯＮＨ２、－ＣＨ２ＣＯＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）３ＮＨ２、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ３、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、－（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）４ＮＨ２、－（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ－（３－メチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピロール－２－イル）、－（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ－（３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピロール－２－イル）、－（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、－（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、－（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、４－イミダゾリルメチル、３－インドリルメチル・・・を表わすが、これらに限定されない。
【0037】
好ましい実施態様では、Ａ１－Ａ２基は、２個のアミノ酸単位を含有するジペプチドを形成し、前記アミノ酸単位は、天然及び非天然アミノ酸、好ましくは、天然アミノ酸から選択される。前記アミノ酸単位は、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、リシン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、セレノシステイン（Ｓｅｃ）、ピロリシン（Ｐｙｌ）、ホモセリン、ホモシステイン及びデスメチルピロリシンであることができる。
【0038】
一実施態様では、Ａ１がプロリン（Ｐｒｏ）アミノ酸単位を表わす場合、Ａ１は、下記式：
［式中、カルボニル基は、パラ－アミノ－ベンジル部分のアミノ基に結合しており、波線は、Ａ２基のカルボニル基への共有結合部位を示す］
により定義される。
【化9】
［式中、カルボニル基は、パラ－アミノ－ベンジル部分のアミノ基に結合しており、波線は、Ａ２基のカルボニル基への共有結合部位を示す］
により定義される。
【0039】
一実施態様では、Ａ２がプロリン（Ｐｒｏ）アミノ酸単位を表わす場合、Ａ２は、下記式：
［式中、カルボニル基は、Ａ１基のアミノ基に結合しており、波線は、本発明で定義されたＸ基、Ｚ’基又はＺ基への共有結合部位を示す］
により定義される。
【化10】
［式中、カルボニル基は、Ａ１基のアミノ基に結合しており、波線は、本発明で定義されたＸ基、Ｚ’基又はＺ基への共有結合部位を示す］
により定義される。
【0040】
特定の実施態様では、Ａ１－Ａ２基は、Ｖａｌ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｖａｌ；Ａｌａ－Ａｌａ；Ａｌａ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｌａ；Ａｓｎ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｓｎ；Ｃｉｔ－Ｃｉｔ；Ｖａｌ－Ｇｌｕ；Ｇｌｕ－Ｖａｌ；Ｓｅｒ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｓｅｒ；Ｌｙｓ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｌｙｓ；Ａｓｐ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｓｐ；Ａｌａ－Ｖａｌ；Ｖａｌ－Ａｌａ；Ｐｈｅ－Ａｌａ；Ａｌａ－Ｐｈｅ；Ｐｈｅ－Ｌｙｓ；Ｌｙｓ－Ｐｈｅ；Ｖａｌ－Ｌｙｓ；Ｌｙｓ－Ｖａｌ；Ａｌａ－Ｌｙｓ；Ｌｙｓ－Ａｌａ；Ｐｈｅ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｐｈｅ；Ｌｅｕ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｌｅｕ；Ｉｌｅ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｉｌｅ；Ｐｈｅ－Ａｒｇ；Ａｒｇ－Ｐｈｅ；Ｃｉｔ－Ｔｒｐ；Ｔｒｐ－Ｃｉｔを表わすことができる。好ましい実施態様では、Ａ１－Ａ２基は、Ｃｉｔ－Ｖａｌ又はＡｌａ－Ｖａｌを表わす。
【0041】
好ましくは、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基又はメチル基を表わす）を表わす。
【0042】
有利には、Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基（式中、Ｒ４は、イソプロピル基を表わす）、下記：
の基、下記：
の基又は下記：
の基
を表わす。
【化11】
の基、下記：
【化12】
の基又は下記：
【化13】
の基
を表わす。
【0043】
好ましい実施態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基又はメチル基を表わす）を表わし、Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基（式中、Ｒ４は、イソプロピル基を表わす）を表わす。
【0044】
別の好ましい実施態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基を表わす）を表わし、Ａ２は、下記：
の基又は下記：
の基
を表わす。
【化14】
の基又は下記：
【化15】
の基
を表わす。
【0045】
一実施態様では、Ｘは、水素原子又は保護基を表わす。好ましくは、Ｘは、水素原子、又はアミノ官能基、カルボニル官能基もしくはカルボキシル官能基の保護基を表わす。より好ましくは、Ｘは、水素原子又はＦｍｏｃ、ＢｏｃもしくはＣＢｚから選択される保護基を表わす。さらにより好ましくは、Ｘは、Ｆｍｏｃ保護基を表わす。
【0046】
式（Ｉ）で示される好ましいパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物は、以下のもの：
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］メタンスルホナート、
－ ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸、
－ ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヨードメチル）ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（２－スルホナトエチル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド、
－ Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（３－スルホプロピル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド
である
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］メタンスルホナート、
－ ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸、
－ ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヨードメチル）ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（２－スルホナトエチル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド、
－ Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（３－スルホプロピル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド
である
【0047】
また、本発明は、式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物の調製方法に関する。この方法は、出発物質として、式（ＩＶ）：
［式中、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）について定義されたとおりである］
で示される化合物を使用し、
これを還元反応に供して、式（Ｖ）：
［式中、Ｒ１及びＲ２は、本明細書において先で定義されたとおりである］
で示される化合物を生成し、
式（Ｖ）で示される化合物を式（ＶＩ）：
ＨＯ－Ａ１－Ｐ （ＶＩ）
［式中、Ｐは、アミノ保護基であり、Ａ１は、式（Ｉ）において定義されたとおりである］
で示される化合物とのカップリングにさらに供して、式（ＶＩＩ）
［式中、Ａ１、Ｐ、Ｒ１及びＲ２は、本明細書において先で定義されたとおりである］
で示される化合物を生成し、
式（ＶＩＩ）で示される化合物を式（ＶＩＩＩ）：
ＨＯ－Ａ２－Ｘ （ＶＩＩＩ）
［式中、Ｘ及びＡ２は、式（Ｉ）において定義されたとおりである］
で示される化合物とのカップリングにさらに供して、式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物を生成することを特徴とする。
【化16】
［式中、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）について定義されたとおりである］
で示される化合物を使用し、
これを還元反応に供して、式（Ｖ）：
【化17】
［式中、Ｒ１及びＲ２は、本明細書において先で定義されたとおりである］
で示される化合物を生成し、
式（Ｖ）で示される化合物を式（ＶＩ）：
ＨＯ－Ａ１－Ｐ （ＶＩ）
［式中、Ｐは、アミノ保護基であり、Ａ１は、式（Ｉ）において定義されたとおりである］
で示される化合物とのカップリングにさらに供して、式（ＶＩＩ）
【化18】
［式中、Ａ１、Ｐ、Ｒ１及びＲ２は、本明細書において先で定義されたとおりである］
で示される化合物を生成し、
式（ＶＩＩ）で示される化合物を式（ＶＩＩＩ）：
ＨＯ－Ａ２－Ｘ （ＶＩＩＩ）
［式中、Ｘ及びＡ２は、式（Ｉ）において定義されたとおりである］
で示される化合物とのカップリングにさらに供して、式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物を生成することを特徴とする。
【0048】
式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物を調製するための別の方法は、出発物質として、式（ＩＶ）で示される化合物から得られる式（Ｖ）で示される化合物を使用し、これを式（ＩＸ）：
ＨＯ－Ａ１－Ａ２－Ｘ （ＩＸ）
［式中、Ａ１、Ａ２及びＸは、式（Ｉ）において定義されたとおりである］
で示される化合物とのカップリングに供して、式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物を生成することを特徴とする。
ＨＯ－Ａ１－Ａ２－Ｘ （ＩＸ）
［式中、Ａ１、Ａ２及びＸは、式（Ｉ）において定義されたとおりである］
で示される化合物とのカップリングに供して、式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物を生成することを特徴とする。
【0049】
一実施態様では、上記言及された方法の最後で得られる、式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物を、従来の分離技術に従ってさらに精製することができる。この化合物は、必要に応じて、薬学的に許容され得る酸又は塩基とのそれらの付加塩に変換され、従来の分離技術に従ってそれらの異性体に分離することができ、上記された方法の過程の間の適切と考えられる任意の時点で、出発試薬又は合成中間体の何らかの基（ヒドロキシ、アミノ．．．）を、合成で必要とされるように、保護し、次いで脱保護し、官能化することができると理解される。式（ＩＶ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩＩ）及び（ＩＸ）で示される化合物は、市販されているか、又は文献に記載されている従来の化学反応を使用して当業者により得ることができるかのいずれかである。
【0050】
また、本発明は、抗体－薬物コンジュゲートの調製における、式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物の使用に関する。とりわけ、本発明は、抗体－薬物コンジュゲートの調製における、以下のもの：
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］メタンスルホナート、
－ ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸又は
－ ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヨードメチル）ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（２－スルホナトエチル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド、又は
－ Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（３－スルホプロピル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド
から選択される、式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物の使用に関する。
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］メタンスルホナート、
－ ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸又は
－ ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヨードメチル）ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（２－スルホナトエチル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド、又は
－ Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（３－スルホプロピル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド
から選択される、式（Ｉ）で示されるパラ－アミノ－ベンジルリンカー化合物の使用に関する。
【0051】
第２の態様では、本発明は、式（ＩＩ）：
［式中、
・Ｄは、薬物部分を表わし、
・Ｔは、結合、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（Ｏ）－＊、－Ｏ－＊、－ＮＲ５－＊、－ＮＲ５－Ｃ（Ｏ）－＊又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＊（＊は、Ｄへの結合点を示す）であり、
・Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わし、
・Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、
・Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基、下記：
の基、下記：
の基又は下記：
の基
を表わし、
・Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わし、
・Ｒ５は、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表わし、
・Ｚ’は、スペーサユニット前駆体を表わし、
・Ｍ＋は、薬学的に許容され得る一価のカチオンを表わす］
で示されるリンカー－薬物化合物を提供する。
【化19】
［式中、
・Ｄは、薬物部分を表わし、
・Ｔは、結合、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（Ｏ）－＊、－Ｏ－＊、－ＮＲ５－＊、－ＮＲ５－Ｃ（Ｏ）－＊又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＊（＊は、Ｄへの結合点を示す）であり、
・Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わし、
・Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、
・Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基、下記：
【化20】
の基、下記：
【化21】
の基又は下記：
【化22】
の基
を表わし、
・Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わし、
・Ｒ５は、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表わし、
・Ｚ’は、スペーサユニット前駆体を表わし、
・Ｍ＋は、薬学的に許容され得る一価のカチオンを表わす］
で示されるリンカー－薬物化合物を提供する。
【0052】
本発明の第２の態様における一実施態様では、Ｄは、窒素原子又は酸素原子を含む薬物部分であり、Ｄは、薬物部分の前記窒素原子又は酸素原子を介して、Ｔに直接結合している。一部の実施態様では、Ｄは、第四級化された第三級アミン含有薬物部分である。特定の実施態様では、Ｄは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＩＵＰＡＣ名：（Ｓ）－Ｎ－（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－（（Ｓ）－２－（（１Ｒ，２Ｒ）－３－（（（１Ｓ，２Ｒ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル）アミノ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル）ピロリジン－１－イル）－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル）－Ｎ，３－ジメチル－２－（（Ｓ）－３－メチル－２－（メチルアミノ）ブタンアミド）ブタンアミド又はＭＭＡＥ）、アウリスタチンＥ（ＩＵＰＡＣ名：（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（ジメチルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－Ｎ，３－ジメチル－ブタンアミド）、ＳＮ－３８（ＩＵＰＡＣ名：（４Ｓ）－４，１１－ジエチル－４，９－ジヒドロキシ－１Ｈ－ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）－ジオン）又はドキソルビシン（ＩＵＰＡＣ名：（１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－１，２，３，４，６，１１－ヘキサヒドロテトラセン－１－イル ３－アミノ－２，３，６－トリデオキシ－α－Ｌ－リキソ－ヘキソピラノシド）である。
【0053】
好ましくは、Ｔは、結合又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＊（＊は、Ｄへの結合点を示す）である。一部の実施態様では、Ｔが、結合である場合、Ｄは、第四級化された第三級アミン含有薬物部分である。
【0054】
好ましくは、本発明の第２の態様では、Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わす。本発明の第２の態様の好ましい実施態様では、Ｍ＋は、Ｎａ＋を表わす。
【0055】
有利には、本発明の第２の態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基又はメチル基を表わす）を表わす。
【0056】
本発明の第２の態様の好ましい実施態様では、Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基（式中、Ｒ４は、イソプロピル基を表わす）、下記：
の基、下記：
の基又は下記：
の基
を表わす。
【化23】
の基、下記：
【化24】
の基又は下記：
【化25】
の基
を表わす。
【0057】
本発明の第２の態様の別の好ましい実施態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基を表わす）を表わし、Ａ２は、下記：
の基又は下記：
の基
を表わす。
【化26】
の基又は下記：
【化27】
の基
を表わす。
【0058】
本発明の第２の態様の別の好ましい実施態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基を表わす（式中、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わす）。特に、Ｒ３及びＲ４が、アミノ酸の側鎖を表わす場合、側鎖を有する炭素は、Ｌ配置である。好ましい実施態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基又はメチル基を表わす）を表わし、Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ基（式中、Ｒ４は、イソプロピル基を表わす）を表わす。好ましくは、本発明の第２の態様では、Ａ１－Ａ２基は、Ｃｉｔ－Ｖａｌ又はＡｌａ－Ｖａｌを表わす。
【0059】
好ましくは、スペーサユニット前駆体Ｚ’は、下記のもの：
［式中、波線は、Ａ２基のＮ末端又はカルボニル基への共有結合部位を示す］
から選択される。
【化28】
［式中、波線は、Ａ２基のＮ末端又はカルボニル基への共有結合部位を示す］
から選択される。
【0060】
式（ＩＩ）で示される好ましいリンカー－薬物化合物は、下記のもの：
［式中、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される。
【化29】
［式中、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される。
【0061】
式（ＩＩ）で示されるより好ましいリンカー－薬物化合物は、下記のもの：
［式中、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される。
【化30】
［式中、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される。
【0062】
好ましい実施態様では、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物は、下記のもの：
［式中、Ｄは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される。
【化31】
［式中、Ｄは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される。
【0063】
特定の実施態様では、式（ＩＩ）で示される好ましいリンカー－薬物化合物は、以下のもの：
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［［２－［２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［１－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボニル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［３－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］オキセタン－３－カルボニル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、
－ ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］メタンスルホン酸、
－ ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；２，２，２－トリフルオロアセタート、
－ Ｎ－（｛［４－（｛Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニル｝アミノ）－２－スルホフェニル］メトキシ｝カルボニル）－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ，２Ｒ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド、
－ Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－（４－｛［（｛［（４Ｓ）－４，１１－ジエチル－９－ヒドロキシ－３，１４－ジオキソ－３，４，１２，１４－テトラヒドロ－１Ｈ－ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－４－イル］オキシ｝カルボニル）オキシ］メチル｝－３－スルホフェニル）－Ｌ－オルニチンアミド、
－ （１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－１，２，３，４，６，１１－ヘキサヒドロテトラセン－１－イル ２，３，６－トリデオキシ－３－［（｛［４－（｛Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチル｝アミノ）－２－スルホフェニル］メトキシ｝カルボニル）アミノ］－α－Ｌ－リキソ－ヘキソピラノシド、
－ Ｎ－｛３－［２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－｛４－［（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）－１１－［（２Ｓ）－ブタン－２－イル］－１２－（２－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ，２Ｒ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－２－オキソエチル）－４，１０－ジメチル－３，６，９－トリオキソ－５，８－ジ（プロパン－２－イル）－２，１３－ジオキサ－４，７，１０－トリアザテトラデカン－１－イル］－３－（２－スルホエチル）フェニル｝－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（３，４－ジブロモ－２，５－ジオキソ－ピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸
である。
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［［２－［２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［１－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボニル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、
－ ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［３－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］オキセタン－３－カルボニル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、
－ ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］メタンスルホン酸、
－ ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；２，２，２－トリフルオロアセタート、
－ Ｎ－（｛［４－（｛Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニル｝アミノ）－２－スルホフェニル］メトキシ｝カルボニル）－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ，２Ｒ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド、
－ Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－（４－｛［（｛［（４Ｓ）－４，１１－ジエチル－９－ヒドロキシ－３，１４－ジオキソ－３，４，１２，１４－テトラヒドロ－１Ｈ－ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－４－イル］オキシ｝カルボニル）オキシ］メチル｝－３－スルホフェニル）－Ｌ－オルニチンアミド、
－ （１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－１，２，３，４，６，１１－ヘキサヒドロテトラセン－１－イル ２，３，６－トリデオキシ－３－［（｛［４－（｛Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチル｝アミノ）－２－スルホフェニル］メトキシ｝カルボニル）アミノ］－α－Ｌ－リキソ－ヘキソピラノシド、
－ Ｎ－｛３－［２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－｛４－［（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）－１１－［（２Ｓ）－ブタン－２－イル］－１２－（２－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ，２Ｒ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－２－オキソエチル）－４，１０－ジメチル－３，６，９－トリオキソ－５，８－ジ（プロパン－２－イル）－２，１３－ジオキサ－４，７，１０－トリアザテトラデカン－１－イル］－３－（２－スルホエチル）フェニル｝－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド、
－ ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（３，４－ジブロモ－２，５－ジオキソ－ピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸
である。
【0064】
また、本発明は、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物を調製するための方法に関する。この方法は、出発物質として、式（Ｉ）：
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ａ１、Ａ２及びＸは、本明細書において先で定義されたとおりである］
で示される化合物を使用し、
ついで、これを修飾して、式（Ｘ）：
［式中、Ａ１、Ａ２、Ｄ、Ｒ２、Ｔ及びＸは、式（ＩＩ）において定義されたとおりである］
で示される化合物を生成し、
式（Ｘ）で示される化合物を、保護基Ｘを除去した後、式（ＸＩ）：
ＨＯ－Ｚ’ （ＸＩ）
［式中、Ｚ’は、式（ＩＩ）において定義されたとおりである］
で示される化合物とのカップリングにさらに供して、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物を生成することを特徴とする。
【化32】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ａ１、Ａ２及びＸは、本明細書において先で定義されたとおりである］
で示される化合物を使用し、
ついで、これを修飾して、式（Ｘ）：
【化33】
［式中、Ａ１、Ａ２、Ｄ、Ｒ２、Ｔ及びＸは、式（ＩＩ）において定義されたとおりである］
で示される化合物を生成し、
式（Ｘ）で示される化合物を、保護基Ｘを除去した後、式（ＸＩ）：
ＨＯ－Ｚ’ （ＸＩ）
［式中、Ｚ’は、式（ＩＩ）において定義されたとおりである］
で示される化合物とのカップリングにさらに供して、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物を生成することを特徴とする。
【0065】
式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物を調製するための別の方法は、出発物質として、式（ＩＶ）で示される化合物から２工程で得られる式（ＶＩＩ）で示される化合物を使用し、これを基Ｄ－Ｔとのカップリングに供して、式（ＸＩＩ）：
［式中、Ａ１、Ｄ、Ｐ、Ｒ２及びＴは、本明細書において先で定義されたとおりである］
で示される化合物を生成し、
式（ＸＩＩ）で示される化合物を、式（ＸＩＩＩ）：
ＨＯ－Ａ２－Ｚ’ （ＸＩＩＩ）
［式中、Ｚ及びＡ２は、式（Ｉ）において定義されたとおりである］
で示される化合物とのカップリングにさらに供して、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物を生成することを特徴とする。
【化34】
［式中、Ａ１、Ｄ、Ｐ、Ｒ２及びＴは、本明細書において先で定義されたとおりである］
で示される化合物を生成し、
式（ＸＩＩ）で示される化合物を、式（ＸＩＩＩ）：
ＨＯ－Ａ２－Ｚ’ （ＸＩＩＩ）
［式中、Ｚ及びＡ２は、式（Ｉ）において定義されたとおりである］
で示される化合物とのカップリングにさらに供して、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物を生成することを特徴とする。
【0066】
一実施態様では、上記言及された方法の最後で得られる、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物を、従来の分離技術に従ってさらに精製することができる。この化合物は、必要に応じて、薬学的に許容され得る酸又は塩基とのそれらの付加塩に変換され、従来の分離技術に従ってそれらの異性体に分離することができ、上記された方法の過程の間の適切と考えられる任意の時点で、出発試薬又は合成中間体の何らかの基（ヒドロキシ、アミノ．．．）を、合成で必要とされるように、保護し、次いで脱保護し、官能化することができると理解される。式（ＩＶ）、（ＸＩ）及び（ＸＩＩＩ）で示される化合物は、市販されているか、又は文献に記載されている従来の化学反応を使用して当業者により得ることができるかのいずれかである。
【0067】
また、本発明は、抗体－薬物コンジュゲートの調製における、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物の使用に関する。
【0068】
本発明の第３の態様では、式（ＩＩＩ）：
［式中、
・Ａｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントを表わし、
・Ｄは、薬物部分であり、
・Ｔは、結合、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（Ｏ）－＊、－Ｏ－＊、－ＮＲ５－＊、－ＮＲ５－Ｃ（Ｏ）－＊又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＊（＊は、Ｄへの結合点を示す）であり、
・Ｚは、スペーサユニットを表わし、
・Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、
・Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基、下記：
の基、下記：
の基又は下記：
の基
を表わし、
・Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わし、
・Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わし、
・Ｒ５は、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表わし、
・Ｍ＋は、薬学的に許容され得る一価のカチオンを表わし、
・ｐは、１～８の整数である］
で示される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が提供される。
【化35】
［式中、
・Ａｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントを表わし、
・Ｄは、薬物部分であり、
・Ｔは、結合、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（Ｏ）－＊、－Ｏ－＊、－ＮＲ５－＊、－ＮＲ５－Ｃ（Ｏ）－＊又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＊（＊は、Ｄへの結合点を示す）であり、
・Ｚは、スペーサユニットを表わし、
・Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、
・Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基、下記：
【化36】
の基、下記：
【化37】
の基又は下記：
【化38】
の基
を表わし、
・Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、直鎖もしくは分岐鎖－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は直鎖もしくは分岐鎖－ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わし、
・Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わし、
・Ｒ５は、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表わし、
・Ｍ＋は、薬学的に許容され得る一価のカチオンを表わし、
・ｐは、１～８の整数である］
で示される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が提供される。
【0069】
本発明の第３の態様における一実施態様では、Ｄは、窒素原子又は酸素原子を含む薬物部分であり、Ｄは、薬物部分の前記窒素原子又は酸素原子を介して、Ｔに直接結合している。本発明の第３の態様における一部の実施態様では、Ｄは、第四級化された第三級アミン含有薬物部分である。本発明の第３の態様における特定の実施態様では、Ｄは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＩＵＰＡＣ名：（Ｓ）－Ｎ－（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－（（Ｓ）－２－（（１Ｒ，２Ｒ）－３－（（（１Ｓ，２Ｒ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル）アミノ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル）ピロリジン－１－イル）－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル）－Ｎ，３－ジメチル－２－（（Ｓ）－３－メチル－２－（メチルアミノ）ブタンアミド）ブタンアミド又はＭＭＡＥ）、アウリスタチンＥ（ＩＵＰＡＣ名：（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（ジメチルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－Ｎ，３－ジメチル－ブタンアミド）、ＳＮ－３８（ＩＵＰＡＣ名：（４Ｓ）－４，１１－ジエチル－４，９－ジヒドロキシ－１Ｈ－ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）－ジオン）又はドキソルビシン（ＩＵＰＡＣ名：（１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－１，２，３，４，６，１１－ヘキサヒドロテトラセン－１－イル ３－アミノ－２，３，６－トリデオキシ－α－Ｌ－リキソ－ヘキソピラノシド）である。
【0070】
好ましくは、本発明の第３の態様では、Ｔは、結合又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＊（＊は、Ｄへの結合点を示す）である。本発明の第３の態様における一部の実施態様では、Ｔが、結合である場合、Ｄは、第四級化された第三級アミン含有薬物部分である。
【0071】
好ましくは、本発明の第３の態様では、Ｒ２は、－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（ＯＨ）基又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２（Ｏ－Ｍ＋）基を表わす。本発明の第３の態様の好ましい実施態様では、Ｍ＋は、Ｎａ＋を表わす。
【0072】
有利には、本発明の第３の態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基又はメチル基を表わす）を表わす。
【0073】
本発明の第３の態様の好ましい実施態様では、Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基（式中、Ｒ４は、イソプロピル基を表わす）、下記：
の基、下記：
の基又は下記：
の基
を表わす。
【化39】
の基、下記：
【化40】
の基又は下記：
【化41】
の基
を表わす。
【0074】
本発明の第３の態様の別の好ましい実施態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基を表わす）を表わし、Ａ２は、下記：
の基又は下記：
の基
を表わす。
【化42】
の基又は下記：
【化43】
の基
を表わす。
【0075】
本発明の第３の態様の別の好ましい実施態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ－基を表わし、Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ－基を表わす（式中、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、アミノ酸の側鎖を表わす）。特に、Ｒ３及びＲ４が、アミノ酸の側鎖を表わす場合、側鎖を有する炭素は、Ｌ配置である。好ましい実施態様では、Ａ１は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ３）－ＮＨ基（式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ２基又はメチル基を表わす）を表わし、Ａ２は、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ４）－ＮＨ基（式中、Ｒ４は、イソプロピル基を表わす）を表わす。好ましくは、本発明の第３の態様では、Ａ１－Ａ２基は、Ｃｉｔ－Ｖａｌ又はＡｌａ－Ｖａｌを表わす。
【0076】
好ましい実施態様では、式（ＩＩＩ）で示されるＡＤＣは、以下のもの：
［式中、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物から形成される。
【化44】
［式中、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物から形成される。
【0077】
より好ましくは、式（ＩＩＩ）で示されるＡＤＣは、以下のもの：
［式中、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物から形成される。
【化45】
［式中、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物から形成される。
【0078】
好ましい実施態様では、式（ＩＩＩ）で示されるＡＤＣは、以下のもの：
［式中、Ｄは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物から形成される。
【化46】
［式中、Ｄは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される、式（ＩＩ）で示されるリンカー－薬物化合物から形成される。
【0079】
特定の実施態様では、本発明は、式（ＩＩＩ）で示される抗体－薬物コンジュゲートであって、下記式：
の部分が、以下のもの：
［式中、波線は、抗体への共有結合部位を示し、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される式を含む、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。
【化47】
の部分が、以下のもの：
【化48】
［式中、波線は、抗体への共有結合部位を示し、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される式を含む、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。
【0080】
好ましい実施態様では、本発明は、式（ＩＩＩ）で示される抗体－薬物コンジュゲートであって、下記式：
の部分が、以下のもの：
［式中、波線は、抗体への共有結合部位を示し、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される式を含む、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。
【化49】
の部分が、以下のもの：
【化50】
［式中、波線は、抗体への共有結合部位を示し、Ｒ２及びＤは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される式を含む、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。
【0081】
好ましい実施態様では、本発明は、式（ＩＩＩ）で示される抗体－薬物コンジュゲートであって、下記式：
の部分が、以下のもの：
［式中、波線は、抗体への共有結合部位を示し、Ｄは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される式を含む、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。
【化51】
の部分が、以下のもの：
【化52】
［式中、波線は、抗体への共有結合部位を示し、Ｄは、本明細書において先で定義されたとおりである］
から選択される式を含む、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。
【0082】
本発明のＡＤＣは、処置を必要とするほ乳類、例えば、患者における疾患を処置するのに有用である。したがって、ＡＤＣの抗体が結合する抗原の発現に関連する障害、例えば、ガンの処置のための各種の状況において、ＡＤＣを使用することができる。ＡＤＣを、標的とする細胞に薬物を送達するのに使用することができる。理論に拘束されるものではないが、一実施態様では、ＡＤＣの抗体が、細胞表面抗原又はレセプターに結合し又はこれらと会合し、結合すると、抗原又はレセプターが媒介するエンドサイトーシス、又は他の内部移行機構を介して、ＡＤＣを前記細胞内に取り込ませる（内部移行させる）ことができる。抗原は、前記細胞に結合することができるか、又は前記細胞と会合した細胞外マトリックスタンパク質でありうる。一旦細胞内に入ると、リンカー系の成分に応じて、酵素的又は非酵素的に開裂可能な機構を介して、薬物が細胞内に放出される。別の実施態様では、薬物は前記細胞の近傍でＡＤＣから開裂され、その後、薬物は細胞に浸透する。
【0083】
本発明は、本明細書に記載されたＡＤＣ組成物と、薬学的に許容され得る担体とを含む、医薬組成物を提供する。医薬組成物は、ＡＤＣの抗体が結合する抗原の発現に関連する障害の処置のために、ＡＤＣを患者に投与することを可能にする任意の形態でありうる。特に、本発明は、少なくとも１種の式（ＩＩＩ）で示される抗体－薬物コンジュゲートを、１種以上の薬学的に許容され得る賦形剤との組み合わせで含む、医薬組成物に関する。例えば、医薬組成物は、液体又は凍結乾燥固体の形態でありうる。本発明の医薬組成物の中でも、とりわけ、経口、非経口、経鼻、経皮又は経皮（per- or trans-cutaneous）、直腸、経舌、眼又は呼吸投与に適したものに言及することができる。好ましい投与経路は、非経口である。非経口投与は、皮下注射、静脈内、筋肉内及び胸骨内注射又は注入技術を含む。好ましい実施態様では、ＡＤＣを含む医薬組成物は、液体溶液の形態で、静脈内投与される。液体は、注射による送達に有用でありうる。注射による投与のための組成物に、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、緩衝化剤、安定剤、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、吸収剤及び等張剤のうちの１種以上を含ませることもできる。
【0084】
別の態様では、本発明は、処置を必要とするほ乳類の処置のための医薬調製物の製造のための、上記定義されたいずれかの抗体－薬物コンジュゲートの使用に関する。別の態様では、本発明は、処置を必要とするほ乳類の処置に使用するための、上記定義されたいずれかの抗体－薬物コンジュゲートに関する。また、本発明は、処置を必要とするほ乳類を処置する方法であって、治療上有効な用量で、ほ乳類に医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。
【0085】
本発明は、下記実施例によりさらに例示される。これらの実施例は、例示を目的とするものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【0086】
略語
ＡＣＮ アセトニトリル（又はＣＨ３ＣＮ）
ＢＢＳ ホウ酸緩衝生理食塩水
ＤＢＣＯ ジベンゾシクロオクチン
ＤＥＡ Ｎ，Ｎ－ジエチルアミン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ ジメチルアセトアミド
ＤＭＡＰ ４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド（又はＮ，Ｎ－ジメチルホルムアジド）
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ Ｎ－エチル－Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノ－プロピルカルボジイミド
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
ＥＥＤＱ Ｎ－エトキシカルボニル－２－エトキシ－１，２－ジヒドロキノリン
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＦＡ ギ酸
ＨＡＴＵ １－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム ３－オキシド ヘキサフルオロホスファート
ＨＢＴＵ ［ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ（ジメチルアミノ）メチレン］－ジメチルアンモニウム；ヘキサフルオロホスファート
ＨＯＡｔ １－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ １－ヒドロキシ－ベンゾトリアゾール
ＭｅＯＨ メタノール
ＭＭＡＥ （２Ｓ）－Ｎ－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－３－メチル－２－（メチルアミノ）ブタンアミド
ＮＭＰ Ｎ－メチル－２－ピロリドン
ＰＢＳ リン酸緩衝生食水
Ｐｄ－Ｃ 炭素担持パラジウム
ｒｍｐ プロテインAの多点結合
ｒ．ｔ． 室温
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＳＴＵ ［ジメチルアミノ－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ－メチレン］－ジメチルアンモニウム；テトラフルオロボラート
ＡＣＮ アセトニトリル（又はＣＨ３ＣＮ）
ＢＢＳ ホウ酸緩衝生理食塩水
ＤＢＣＯ ジベンゾシクロオクチン
ＤＥＡ Ｎ，Ｎ－ジエチルアミン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ ジメチルアセトアミド
ＤＭＡＰ ４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド（又はＮ，Ｎ－ジメチルホルムアジド）
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ Ｎ－エチル－Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノ－プロピルカルボジイミド
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
ＥＥＤＱ Ｎ－エトキシカルボニル－２－エトキシ－１，２－ジヒドロキノリン
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＦＡ ギ酸
ＨＡＴＵ １－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム ３－オキシド ヘキサフルオロホスファート
ＨＢＴＵ ［ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ（ジメチルアミノ）メチレン］－ジメチルアンモニウム；ヘキサフルオロホスファート
ＨＯＡｔ １－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ １－ヒドロキシ－ベンゾトリアゾール
ＭｅＯＨ メタノール
ＭＭＡＥ （２Ｓ）－Ｎ－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－３－メチル－２－（メチルアミノ）ブタンアミド
ＮＭＰ Ｎ－メチル－２－ピロリドン
ＰＢＳ リン酸緩衝生食水
Ｐｄ－Ｃ 炭素担持パラジウム
ｒｍｐ プロテインAの多点結合
ｒ．ｔ． 室温
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＳＴＵ ［ジメチルアミノ－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ－メチレン］－ジメチルアンモニウム；テトラフルオロボラート
【0087】
材料及び方法／一般手法
商業的な供給元から得られた全ての試薬をさらに精製することなく使用した。無水溶媒を商業的な供給元から取得し、さらに乾燥させることなく使用した。フラッシュクロマトグラフィーを、プレパックシリカゲルカートリッジ（Macherey-Nagel Chromabond Flash）を用いて、CombiFlash（登録商標）Rf（Teledyne ISCO）で行った。薄層クロマトグラフィーを、Merck Type 60 F254シリカゲルで被覆された５×１０cmプレートで行った。マイクロ波加熱をCEM Discover（登録商標）装置で行った。
商業的な供給元から得られた全ての試薬をさらに精製することなく使用した。無水溶媒を商業的な供給元から取得し、さらに乾燥させることなく使用した。フラッシュクロマトグラフィーを、プレパックシリカゲルカートリッジ（Macherey-Nagel Chromabond Flash）を用いて、CombiFlash（登録商標）Rf（Teledyne ISCO）で行った。薄層クロマトグラフィーを、Merck Type 60 F254シリカゲルで被覆された５×１０cmプレートで行った。マイクロ波加熱をCEM Discover（登録商標）装置で行った。
【0088】
１Ｈ－ＮＭＲ測定を、溶媒としてＤＭＳＯ－ｄ６（ｄｍｓｏ－ｄ６又はＤＭＳＯとも記載される）又はＣＤＣｌ３を使用して、４００MHzのBruker Avance又は５００MHzのAvance Neo分光計で行った。１Ｈ ＮＭＲデータは、内部標準として溶媒の残留ピーク（ＤＭＳＯ－ｄ６について２．５０ppm及びＣＤＣｌ３について７．２６ppm）を使用して、百万分率（ppm）で与えられるデルタ値の形式である。分割パターンは、ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）、ｔ（トリプレット）、ｑ（カルテット）、ｍ（マルチプレット）、ｂｒｓ（ブロードシングレット）、ｄｄ（ダブレットのダブレット）、ｂｒｍ（ブロードマルチプレット）、ｔｄ（ダブレットのトリプレット）、ｄｔ（トリプレットのダブレット）、ｂｒ ｄｄ（ブロードなダブレットのダブレット）として指定される。
【0089】
ＩＲ測定を、ATR Golden Gate装置（SPECAC）を備えたBruker Tensor 27で行った。ＨＲＭＳ測定を、LTQ OrbiTrapVelos Pro質量分光計（ThermoFisher Scientific）で行った。試料をＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（２／１：ｖ／ｖ）中におおよそ０．０１～０．０５mg/mLの濃度範囲で溶解させ、０．１mL/分の流量で、２μLの注入によりソースに導入した。
【0090】
ＥＳＩイオン化パラメータは、下記のとおりとした：３．５kV及び３５０℃の移動イオンキャピラリー。全てのスペクトルを、ｌｏｃｋ ｍａｓｓを使用して、分解能３００００又は６００００の陽イオンモードで取得した。
【0091】
ＵＰＬＣ－ＭＳ
ダイオードアレイＵＶ検出器「PDA」及び「ZQ detector 2」質量装置並びにMassLinksソフトウェアを備えたWaters Aquity A-class。
ZQ detector 2：０．１５～６分及び１００～２３７２DaのＭＳスキャン
PDA検出器：１９０～４００nm
カラム：Acquity UPLC（登録商標）BEHカラムＣ１８、１．７μm、１３０Å、２．１×５０mm
カラムを４０℃、流量０．６mL/分で使用
溶媒Ａ：水＋０．０２％ ＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリル＋０．０２％ ＴＦＡ
２％ Ｂから１００％ Ｂへの５分間での勾配、ついで、１００％ Ｂで０．３分間の洗浄及び次の注入のために、２％ Ｂで０．５分間の平衡化（合計６分間の勾配）
ダイオードアレイＵＶ検出器「PDA」及び「ZQ detector 2」質量装置並びにMassLinksソフトウェアを備えたWaters Aquity A-class。
ZQ detector 2：０．１５～６分及び１００～２３７２DaのＭＳスキャン
PDA検出器：１９０～４００nm
カラム：Acquity UPLC（登録商標）BEHカラムＣ１８、１．７μm、１３０Å、２．１×５０mm
カラムを４０℃、流量０．６mL/分で使用
溶媒Ａ：水＋０．０２％ ＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリル＋０．０２％ ＴＦＡ
２％ Ｂから１００％ Ｂへの５分間での勾配、ついで、１００％ Ｂで０．３分間の洗浄及び次の注入のために、２％ Ｂで０．５分間の平衡化（合計６分間の勾配）
【0092】
分取ＨＰＬＣ
最大１００bar、最大流量２５０mL/分のInterchim Puriflash 4100（登録商標）又は最大２５０bar、最大流量２５０mL/分のInterchim Puriflash 4250（登録商標）
４つの溶媒を同時に勾配で使用することが可能な四元溶媒ポンプ
ＵＶ：収集のための、２００～４００nmの２波長
収集：８mL又は３２mLのチューブ
カラム Waters Xbridge（登録商標） １０μm
３つの分取ＨＰＬＣ法を使用した。
１）ＴＦＡ法：溶媒：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ、Ｂ＝アセトニトリル＋０．０５％ ＴＦＡ、１５～３０ＣＶ（カラム体積）で、５％から１００％へのＢの勾配
２）ＮＨ４ＨＣＯ３法：溶媒：Ａ＝水＋０．０２M ＮＨ４ＨＣＯ３、Ｂ＝アセトニトリル／水 ８０／２０＋０．０２M ＮＨ４ＨＣＯ３、１５～３０ＣＶで、５％から１００％へのＢの勾配
３）中性法：溶媒：Ａ＝水、Ｂ＝アセトニトリル、１５～３０ＣＶで、５％から１００％へのＢの勾配
最大１００bar、最大流量２５０mL/分のInterchim Puriflash 4100（登録商標）又は最大２５０bar、最大流量２５０mL/分のInterchim Puriflash 4250（登録商標）
４つの溶媒を同時に勾配で使用することが可能な四元溶媒ポンプ
ＵＶ：収集のための、２００～４００nmの２波長
収集：８mL又は３２mLのチューブ
カラム Waters Xbridge（登録商標） １０μm
３つの分取ＨＰＬＣ法を使用した。
１）ＴＦＡ法：溶媒：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ、Ｂ＝アセトニトリル＋０．０５％ ＴＦＡ、１５～３０ＣＶ（カラム体積）で、５％から１００％へのＢの勾配
２）ＮＨ４ＨＣＯ３法：溶媒：Ａ＝水＋０．０２M ＮＨ４ＨＣＯ３、Ｂ＝アセトニトリル／水 ８０／２０＋０．０２M ＮＨ４ＨＣＯ３、１５～３０ＣＶで、５％から１００％へのＢの勾配
３）中性法：溶媒：Ａ＝水、Ｂ＝アセトニトリル、１５～３０ＣＶで、５％から１００％へのＢの勾配
【0093】
純粋な化合物を含有する全ての画分を合わせ、直接凍結乾燥させて、化合物を非晶質粉末として与えた。
【0094】
分取ＳＦＣ精製
分取キラルＳＦＣをPIC solution Prep200システムで行った。試料を１５０mg/mLの濃度でエタノールに溶解させた。移動相を４０％ エタノール／ＣＯ２の均一濃度で保持した。装置には、Chiralpak IAカラム及び３mLのループを取り付けた。ＡＢＰＲ（自動背圧レギュレーター）を１００barに設定した。
分取キラルＳＦＣをPIC solution Prep200システムで行った。試料を１５０mg/mLの濃度でエタノールに溶解させた。移動相を４０％ エタノール／ＣＯ２の均一濃度で保持した。装置には、Chiralpak IAカラム及び３mLのループを取り付けた。ＡＢＰＲ（自動背圧レギュレーター）を１００barに設定した。
【0095】
ＩＵＰＡＣ化学名を、Biovia Draw Version 18.1. NETソフトウェアを使用して又はACD/Name 2018.2.2（File Version N50E41, Build 103230, 21 July 2018）ソフトウェアを使用して生成した。
【0096】
調製例１： （２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）１－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボキシラート
工程１： tert－ブチル １－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボキシラート
１－tert－ブトキシカルボニルシクロブタンカルボン酸（５８．６mg；０．２９３mmol）のＤＣＭ（５．８５mL）溶液に、１－［２－（２－アミノエトキシ）エチル］ピロール－２，５－ジオン（５３．９mg；０．２９３mmol）、ＥＤＣ（８４．２mg；０．４３９mmol）、ＨＯＢｔ（５９．３mg；０．４３９mmol）及びＤＩＰＥＡ（２０４μL；１．１７mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次に濃縮乾固し、ＤＭＦ（１mL）に可溶化した。ＤＭＦ（１mL）に残留物を可溶化した後、反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入(direct deposit)による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、標記化合物を与えた（５７．３mg；０．１５６mmol）。IR (cm-1): 3390, 1697/1666. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.5 (t, 1H), 7.02 (s, 2H), 3.55/3.5 (2t, 4H), 3.38 (t, 2H), 3.17 (q, 2H), 2.33 (m, 4H), 1.77 (m, 2H), 1.38 (s, 9H). UPLC-MS: MS (ESI): m/z [M+Na]+ = 389.26, [M+H-tBu]+ = 311.22
【化53】
工程１： tert－ブチル １－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボキシラート
１－tert－ブトキシカルボニルシクロブタンカルボン酸（５８．６mg；０．２９３mmol）のＤＣＭ（５．８５mL）溶液に、１－［２－（２－アミノエトキシ）エチル］ピロール－２，５－ジオン（５３．９mg；０．２９３mmol）、ＥＤＣ（８４．２mg；０．４３９mmol）、ＨＯＢｔ（５９．３mg；０．４３９mmol）及びＤＩＰＥＡ（２０４μL；１．１７mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次に濃縮乾固し、ＤＭＦ（１mL）に可溶化した。ＤＭＦ（１mL）に残留物を可溶化した後、反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入(direct deposit)による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、標記化合物を与えた（５７．３mg；０．１５６mmol）。IR (cm-1): 3390, 1697/1666. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.5 (t, 1H), 7.02 (s, 2H), 3.55/3.5 (2t, 4H), 3.38 (t, 2H), 3.17 (q, 2H), 2.33 (m, 4H), 1.77 (m, 2H), 1.38 (s, 9H). UPLC-MS: MS (ESI): m/z [M+Na]+ = 389.26, [M+H-tBu]+ = 311.22
【0097】
工程２： １－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボン酸
tert－ブチル １－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボキシラート（７mg；０．０１９１mmol）のＤＣＭ（０．１７５mL）溶液に、ＴＦＡ（５１．２μL；０．６６８mmol）を加えた。反応混合物を室温で３．５時間撹拌し、次に濃縮乾固し、標記化合物（５．８mg；０．０１８７mmol）を無色の油状物として得た。粗生成物を次の工程で用いた。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 311.35, [M+Na]+ = 333.37
tert－ブチル １－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボキシラート（７mg；０．０１９１mmol）のＤＣＭ（０．１７５mL）溶液に、ＴＦＡ（５１．２μL；０．６６８mmol）を加えた。反応混合物を室温で３．５時間撹拌し、次に濃縮乾固し、標記化合物（５．８mg；０．０１８７mmol）を無色の油状物として得た。粗生成物を次の工程で用いた。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 311.35, [M+Na]+ = 333.37
【0098】
工程３： 調製例１
１－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボン酸（８．４７mg；０．０２７３mmol）のＤＭＦ（０．５６０mL）溶液に、ＴＳＴＵ（９．０４mg；０．０３０mmol）及びＤＩＰＥＡ（９．５μL；０．０５４０mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌して、調製例１のＤＭＦ溶液を与えた。粗生成物を次の工程にそのまま用いる。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 408.43, [M+Na]+ = 430.38
１－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボン酸（８．４７mg；０．０２７３mmol）のＤＭＦ（０．５６０mL）溶液に、ＴＳＴＵ（９．０４mg；０．０３０mmol）及びＤＩＰＥＡ（９．５μL；０．０５４０mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌して、調製例１のＤＭＦ溶液を与えた。粗生成物を次の工程にそのまま用いる。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 408.43, [M+Na]+ = 430.38
【0099】
調製例２： （２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）３－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］オキセタン－３－カルボキシラート
工程１ ３－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］オキセタン－３－カルボン酸の合成
３－アミノオキセタン－３－カルボン酸（１１５mg；０．９８２mmol）のＤＭＦ（３．４５mL）溶液に、（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノアート（２７４．３mg；０．８８３mmol）及びＤＩＰＥＡ（８５５μL；４．９１mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次に濃縮乾固し、ＤＭＦ（１mL）に可溶化した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物の溶液を精製して、標記化合物を与えた（１６mg；０．０５１２mmol）。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 313.09, [M+Na]+ = 335.06. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 8.92 (s, 1H), 7.02 (s, 2H), 4.8/4.45 (2d, 4H), 3.57/3.48 (2m, 6H), 2.32 (t, 2H). IR (cm-1): 3700-2300, 1769/1740/1697, 692
【化54】
工程１ ３－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］オキセタン－３－カルボン酸の合成
３－アミノオキセタン－３－カルボン酸（１１５mg；０．９８２mmol）のＤＭＦ（３．４５mL）溶液に、（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノアート（２７４．３mg；０．８８３mmol）及びＤＩＰＥＡ（８５５μL；４．９１mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次に濃縮乾固し、ＤＭＦ（１mL）に可溶化した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物の溶液を精製して、標記化合物を与えた（１６mg；０．０５１２mmol）。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 313.09, [M+Na]+ = 335.06. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 8.92 (s, 1H), 7.02 (s, 2H), 4.8/4.45 (2d, 4H), 3.57/3.48 (2m, 6H), 2.32 (t, 2H). IR (cm-1): 3700-2300, 1769/1740/1697, 692
【0100】
工程２： 調製例２
３－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］オキセタン－３－カルボン酸（５．８mg；０．０１８７mmol）のＤＭＦ（０．３８０mL）溶液に、ＴＳＴＵ（６．３２mg；０．０２１０mmol）及びＤＩＰＥＡ（６．７μL；０．０３８２mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌して、調製例２のＤＭＦ溶液を与えた。粗生成物を次の工程にそのまま用いる。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 310.29, [M+Na]+ = 332.27
３－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］オキセタン－３－カルボン酸（５．８mg；０．０１８７mmol）のＤＭＦ（０．３８０mL）溶液に、ＴＳＴＵ（６．３２mg；０．０２１０mmol）及びＤＩＰＥＡ（６．７μL；０．０３８２mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌して、調製例２のＤＭＦ溶液を与えた。粗生成物を次の工程にそのまま用いる。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 310.29, [M+Na]+ = 332.27
【0101】
実施例１： ナトリウム５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート
工程１： ナトリウム ２－（ヒドロキシメチル）－５－ニトロ－ベンゼンスルホナート
ナトリウム ５－ニトロ－２－［（Ｅ）－２－（４－ニトロ－２－スルホ－フェニル）ビニル］ベンゼンスルホナート（２５．０ｇ；５２．７mmol；１当量）の水（３３６mL）溶液に、１．５時間オゾン流を導入した。反応の完了後、過剰なオゾンを除去するために混合物をアルゴンで３０分間パージした。次に、炭酸ナトリウム（３９．１ｇ；３６８mmol）及び水素化ホウ素ナトリウム（３．９９ｇ；１０５mmol）を加え、橙色の溶液を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固し、標記化合物（３９．９ｇ；１５６mmol）を褐色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 4.99 (d, 2H, J = 3.6 Hz), 5.36 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.83 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.21 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.45 (s, 1H).
【化55】
工程１： ナトリウム ２－（ヒドロキシメチル）－５－ニトロ－ベンゼンスルホナート
ナトリウム ５－ニトロ－２－［（Ｅ）－２－（４－ニトロ－２－スルホ－フェニル）ビニル］ベンゼンスルホナート（２５．０ｇ；５２．７mmol；１当量）の水（３３６mL）溶液に、１．５時間オゾン流を導入した。反応の完了後、過剰なオゾンを除去するために混合物をアルゴンで３０分間パージした。次に、炭酸ナトリウム（３９．１ｇ；３６８mmol）及び水素化ホウ素ナトリウム（３．９９ｇ；１０５mmol）を加え、橙色の溶液を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固し、標記化合物（３９．９ｇ；１５６mmol）を褐色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 4.99 (d, 2H, J = 3.6 Hz), 5.36 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.83 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.21 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.45 (s, 1H).
【0102】
工程２： ナトリウム ５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート
ナトリウム ２－（ヒドロキシメチル）－５－ニトロ－ベンゼンスルホナート（２６．９ｇ；１０５mmol）を、水（４０３mL）に可溶化した。次に、反応混合物をアルゴンでフラッシュした。Ｐｄ／Ｃ １０％（２．６５ｇ）を加え、次に黒色の懸濁液をアルゴンでフラッシュし、次に水素でフラッシュした。反応混合物を水素雰囲気下、室温で３．５日間撹拌した。Celite（登録商標）で濾過し、水及びメタノールで洗浄した後、濾液を濃縮乾固し、残った微量の水を除去するためにトルエンと３回共蒸発させた。溶離剤として酢酸エチル／メタノール（９０／１０～７０／３０）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによる精製が、標記化合物（１４．２９ｇ；６３．４６mmol）を微黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 4.52 (d, 2H, J = 5.2 Hz), 4.95 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 5.04 (s, 2H), 6.42 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 6.93 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.03 (s, 1H).
ナトリウム ２－（ヒドロキシメチル）－５－ニトロ－ベンゼンスルホナート（２６．９ｇ；１０５mmol）を、水（４０３mL）に可溶化した。次に、反応混合物をアルゴンでフラッシュした。Ｐｄ／Ｃ １０％（２．６５ｇ）を加え、次に黒色の懸濁液をアルゴンでフラッシュし、次に水素でフラッシュした。反応混合物を水素雰囲気下、室温で３．５日間撹拌した。Celite（登録商標）で濾過し、水及びメタノールで洗浄した後、濾液を濃縮乾固し、残った微量の水を除去するためにトルエンと３回共蒸発させた。溶離剤として酢酸エチル／メタノール（９０／１０～７０／３０）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによる精製が、標記化合物（１４．２９ｇ；６３．４６mmol）を微黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 4.52 (d, 2H, J = 5.2 Hz), 4.95 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 5.04 (s, 2H), 6.42 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 6.93 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.03 (s, 1H).
【0103】
工程３： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート
Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｃｉｔ－ＯＨ（CAS No. 133174-15-9；８８２mg；２．２２mmol）のＤＭＦ（３２．５mL）溶液に、ナトリウム ５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（５００mg；２．２２mmol）、ＨＢＴＵ（１．０１ｇ；２．６６mmol）及びＤＩＰＥＡ（９１７mL；５．５５mmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に濃縮乾固し、そして水（２×１００mL）と共蒸発させた。粗生成物を、中性法を用いるＣ１８のカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（１．０ｇ；１．４０mmol）を微赤色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ 4.30-4.12 (m, 4H), 4.74 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 5.05 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 5.37 (s, 2H), 5.97 (t, 1H, J = 4.8 Hz), 7.34-7.42 (m, 4H), 7.62-7.90 (m, 7H), 8.15 (s, 1H), 10.05 (s, 1H).
Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｃｉｔ－ＯＨ（CAS No. 133174-15-9；８８２mg；２．２２mmol）のＤＭＦ（３２．５mL）溶液に、ナトリウム ５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（５００mg；２．２２mmol）、ＨＢＴＵ（１．０１ｇ；２．６６mmol）及びＤＩＰＥＡ（９１７mL；５．５５mmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に濃縮乾固し、そして水（２×１００mL）と共蒸発させた。粗生成物を、中性法を用いるＣ１８のカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（１．０ｇ；１．４０mmol）を微赤色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ 4.30-4.12 (m, 4H), 4.74 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 5.05 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 5.37 (s, 2H), 5.97 (t, 1H, J = 4.8 Hz), 7.34-7.42 (m, 4H), 7.62-7.90 (m, 7H), 8.15 (s, 1H), 10.05 (s, 1H).
【0104】
工程４： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－アミノ－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（１１．２ｇ；１５．７３mmol）のＤＭＦ（２２４mL）溶液に、ピペリジン（３．１mL；３１．４７mmol）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次に水（４００mL）を加えた。水層を酢酸エチル（２×３００mL）、及びＤＣＭ（３００mL）で抽出した。炭酸ナトリウム（５．０１ｇ；４７．１mmol；３当量）を水層に加え、混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を凍結乾燥して、標記化合物（６．０１ｇ；１５．７３mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 1.55-1.64 (m, 4H), 2.99-3.01 (m, 2H), 3.58 (m, 1H), 4.75 (s, 2H), 5.06 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.98 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.38 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.72 (dd, 1H, J = 8.4 及び 2.4 Hz), 7.86 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 10.17 (s, 1H).
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（１１．２ｇ；１５．７３mmol）のＤＭＦ（２２４mL）溶液に、ピペリジン（３．１mL；３１．４７mmol）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次に水（４００mL）を加えた。水層を酢酸エチル（２×３００mL）、及びＤＣＭ（３００mL）で抽出した。炭酸ナトリウム（５．０１ｇ；４７．１mmol；３当量）を水層に加え、混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を凍結乾燥して、標記化合物（６．０１ｇ；１５．７３mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 1.55-1.64 (m, 4H), 2.99-3.01 (m, 2H), 3.58 (m, 1H), 4.75 (s, 2H), 5.06 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.98 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.38 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.72 (dd, 1H, J = 8.4 及び 2.4 Hz), 7.86 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 10.17 (s, 1H).
【0105】
工程５： 実施例１
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－アミノ－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（６．０１ｇ；１５．７３mmol）のＤＭＦ（１５０mL）溶液に、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＳｕ（CAS No. 130878-68-1；６．８５ｇ；１５．６９mmol）を加えた。ベージュ色の溶液を室温で３時間撹拌し、次に反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム(sodium hydrogenocarbonate)（１００mL）及び水（１００mL）で希釈し、そして濃縮乾固した。残留物を、溶離剤として酢酸エチル／メタノール ９０／１０～５０／５０を用いるシリカゲルで精製して、標記化合物（４．４４ｇ；６．３１mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): 0.85-0.90 (m, 6H), 1.31-1.76 (m, 4H), 1.95-2.06 (m, 1H), 2.91-3.05 (m, 2H), 3.95 (t, 1H, J = 8.4 Hz), 4.24-4.35 (m, 3H), 4.37-4.45 (m, 1H), 4.76 (d, 2H, J = 6 Hz), 5.07 (t, 1H, J = 6.4 Hz,), 5.40 (s, 2H), 6.03 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.32-7.46 (m, 6H), 7.67 (d, 1H, J = 8 Hz), 7.76 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.88-7.91 (m, 3H), 8.12 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 10.08 (s, 1H). 13C NMR (DMSO): 18.25, 19.24, 26.70, 29.56, 30.45, 39.50, 46.67, 53.17, 60.01, 60.96, 65.66, 117.85, 119.15, 120.05, 125.36, 127.06, 127.62, 128.09, 134.39, 136.79, 140.67, 143.89, 145.34, 156.08, 158.82, 170.37, 171.16. LCMS (2-100 アセトニトリル/H2O + 0.1%ギ酸): 93.85％ 保持時間 = 8.4分。陽モード: 682.15 検出 (MH+)。陰モード: 680.17 検出 (MH-)
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－アミノ－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（６．０１ｇ；１５．７３mmol）のＤＭＦ（１５０mL）溶液に、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＳｕ（CAS No. 130878-68-1；６．８５ｇ；１５．６９mmol）を加えた。ベージュ色の溶液を室温で３時間撹拌し、次に反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム(sodium hydrogenocarbonate)（１００mL）及び水（１００mL）で希釈し、そして濃縮乾固した。残留物を、溶離剤として酢酸エチル／メタノール ９０／１０～５０／５０を用いるシリカゲルで精製して、標記化合物（４．４４ｇ；６．３１mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): 0.85-0.90 (m, 6H), 1.31-1.76 (m, 4H), 1.95-2.06 (m, 1H), 2.91-3.05 (m, 2H), 3.95 (t, 1H, J = 8.4 Hz), 4.24-4.35 (m, 3H), 4.37-4.45 (m, 1H), 4.76 (d, 2H, J = 6 Hz), 5.07 (t, 1H, J = 6.4 Hz,), 5.40 (s, 2H), 6.03 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.32-7.46 (m, 6H), 7.67 (d, 1H, J = 8 Hz), 7.76 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.88-7.91 (m, 3H), 8.12 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 10.08 (s, 1H). 13C NMR (DMSO): 18.25, 19.24, 26.70, 29.56, 30.45, 39.50, 46.67, 53.17, 60.01, 60.96, 65.66, 117.85, 119.15, 120.05, 125.36, 127.06, 127.62, 128.09, 134.39, 136.79, 140.67, 143.89, 145.34, 156.08, 158.82, 170.37, 171.16. LCMS (2-100 アセトニトリル/H2O + 0.1%ギ酸): 93.85％ 保持時間 = 8.4分。陽モード: 682.15 検出 (MH+)。陰モード: 680.17 検出 (MH-)
【0106】
実施例２： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸
工程１： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（tert－ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート
Ｂｏｃ－Ｌ－Ａｌａ－ＯＨ（CAS No. 15761-38-3；５８８mg；３．１１mmol）のＤＭＦ（３８．６mL）溶液に、ＨＡＴＵ（１．７７ｇ；４．６７mmol）、ナトリウム ５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（７７１mg；３．４２mmol）及びＤＩＰＥＡ（１．２９mL；７．７８mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に濃縮乾固し、そして水と共蒸発させて、粗反応混合物を与えた。得られた残留物を、溶離剤として酢酸エチル／メタノール ９５：５～８０：２０を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（１．１７ｇ；２．９５mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 1.24 (s, 9H), 1.38 (m, 3H), 4.05-1.44 (m, 1H), 4.73 (d, 2H, J = 4.8 Hz), 5.04 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 6.97-7.02 (m, 1H), 7.33 (d, 1H, J = 8 Hz), 7.65-7.70 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 9.91 (s, 1H).
【化56】
工程１： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（tert－ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート
Ｂｏｃ－Ｌ－Ａｌａ－ＯＨ（CAS No. 15761-38-3；５８８mg；３．１１mmol）のＤＭＦ（３８．６mL）溶液に、ＨＡＴＵ（１．７７ｇ；４．６７mmol）、ナトリウム ５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（７７１mg；３．４２mmol）及びＤＩＰＥＡ（１．２９mL；７．７８mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に濃縮乾固し、そして水と共蒸発させて、粗反応混合物を与えた。得られた残留物を、溶離剤として酢酸エチル／メタノール ９５：５～８０：２０を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（１．１７ｇ；２．９５mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 1.24 (s, 9H), 1.38 (m, 3H), 4.05-1.44 (m, 1H), 4.73 (d, 2H, J = 4.8 Hz), 5.04 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 6.97-7.02 (m, 1H), 7.33 (d, 1H, J = 8 Hz), 7.65-7.70 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 9.91 (s, 1H).
【0107】
工程２： ５－［［（２Ｓ）－２－アミノプロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸、塩酸塩
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（tert－ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（１．１７ｇ；２．９５mmol；１当量）を、ＨＣｌの４N ジオキサン溶液（１０mL）に懸濁した。混合物を室温で２時間撹拌し、次に濃縮乾固して、粗混合物（９８２mg；２．９５mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 1.45 (d, 3H, J = 5.6 Hz), 3.91-4.0 (m, 1H), 4.76 (s, 2H), 7.41 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.66 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.85 (s, 1H), 8.17 (s, 2H), 10.44 (s, 1H)
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（tert－ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（１．１７ｇ；２．９５mmol；１当量）を、ＨＣｌの４N ジオキサン溶液（１０mL）に懸濁した。混合物を室温で２時間撹拌し、次に濃縮乾固して、粗混合物（９８２mg；２．９５mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 1.45 (d, 3H, J = 5.6 Hz), 3.91-4.0 (m, 1H), 4.76 (s, 2H), 7.41 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.66 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.85 (s, 1H), 8.17 (s, 2H), 10.44 (s, 1H)
【0108】
工程３： 実施例２
５－［［（２Ｓ）－２－アミノプロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸、塩酸塩（９８１mg；２．９５mmol）のＤＭＦ（３４．５mL）溶液に、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＳｕ（CAS No. 130878-68-1；１．２９ｇ；２．９５mmol；１当量）及びＤＩＰＥＡ（９７５μL；５．９mmol）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、次に濃縮乾固し、水と共蒸発させて、粗混合物を与えた。得られた残留物を、溶離剤として酢酸エチル／メタノール ９５：５～８０：２０を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、実施例２（１．２８ｇ；２．０７２mmol）を無色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.80-0.92 (m, 6H), 1.30 (d, 3H, J = 6.4 Hz), 2.02-2.10 (m, 1H), 4.17-4.31 (m, 3H), 4.37-4.44 (m, 1H), 4.73 (d, 2H, J = 5.6 Hz), 5.04 (t, 1H, J = 6.4 Hz), 7.28-7.36 (m, 3H), 7.37-7.47 (m, 3H), 7.66 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.71-7.77 (m, 2H), 7.83-7.85 (m, 1H), 7.88 (d, 2H, J = 7.6 Hz), 8.14 (d, 1H, J = 6.4 Hz), 9.99 (s, 1H).
５－［［（２Ｓ）－２－アミノプロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸、塩酸塩（９８１mg；２．９５mmol）のＤＭＦ（３４．５mL）溶液に、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＳｕ（CAS No. 130878-68-1；１．２９ｇ；２．９５mmol；１当量）及びＤＩＰＥＡ（９７５μL；５．９mmol）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、次に濃縮乾固し、水と共蒸発させて、粗混合物を与えた。得られた残留物を、溶離剤として酢酸エチル／メタノール ９５：５～８０：２０を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、実施例２（１．２８ｇ；２．０７２mmol）を無色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.80-0.92 (m, 6H), 1.30 (d, 3H, J = 6.4 Hz), 2.02-2.10 (m, 1H), 4.17-4.31 (m, 3H), 4.37-4.44 (m, 1H), 4.73 (d, 2H, J = 5.6 Hz), 5.04 (t, 1H, J = 6.4 Hz), 7.28-7.36 (m, 3H), 7.37-7.47 (m, 3H), 7.66 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.71-7.77 (m, 2H), 7.83-7.85 (m, 1H), 7.88 (d, 2H, J = 7.6 Hz), 8.14 (d, 1H, J = 6.4 Hz), 9.99 (s, 1H).
【0109】
実施例３： ナトリウム ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］メタンスルホナート
工程１： （２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタン酸
Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＳｕ（CAS No. 130878-68-1；１．５９ｇ；３．６４mmol；１．０当量）を、Ｌ（＋）－シトルリン（０．６７ｇ；３．８２mmol；１．０５当量）及び重炭酸ナトリウム（０．３２ｇ；３．８２mmol；１．０５当量）の、１，２－ジメトキシエタン（９．５mL）、水（９．５mL）及びＴＨＦ（４．７mL）の混合物溶液に室温で加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に溶媒を真空下で除去し、そしてｐＨ１になるまで１N 塩酸溶液で残留物を酸性化した。白色の懸濁液を濾過し、水（３×４０mL）、ジエチルエーテル（３×４０mL）で洗浄し、そしてアセトニトリル（２×１５０mL）と共蒸発させた。得られた白色の固体を、溶離剤として（ＤＣＭ／酢酸（９９／１））／メタノール（１０／０～７／３）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、次にジエチルエーテル（２×３０mL）でトリチュレートした。得られた固体を、メタノール（５０mL）と水（５０mL）との混合物に溶解し、濃縮乾固し、アセトニトリル（１００mL）と共蒸発させ、乾燥して、標記化合物（０．７５ｇ；１．５mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.84-0.88 (m, 6H), 1.34-1.41 (m, 2H), 1.51-1.73 (m, 2H), 1.95-2.04 (m, 1H), 2.91-2.96 (m, 2H), 3.88-3.92 (m, 1H), 4.06-4.11 (m, 1H), 4.19-4.31 (m, 3H), 5.36 (s, 2H), 5.91-5.94 (m, 1H), 7.30-7.34 (m, 2H), 7.39-7.45 (m, 3H), 7.75 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.4 Hz), 8.02 (brs, 1H), 12.56 (brs, 1H)
【化57】
工程１： （２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタン酸
Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＳｕ（CAS No. 130878-68-1；１．５９ｇ；３．６４mmol；１．０当量）を、Ｌ（＋）－シトルリン（０．６７ｇ；３．８２mmol；１．０５当量）及び重炭酸ナトリウム（０．３２ｇ；３．８２mmol；１．０５当量）の、１，２－ジメトキシエタン（９．５mL）、水（９．５mL）及びＴＨＦ（４．７mL）の混合物溶液に室温で加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に溶媒を真空下で除去し、そしてｐＨ１になるまで１N 塩酸溶液で残留物を酸性化した。白色の懸濁液を濾過し、水（３×４０mL）、ジエチルエーテル（３×４０mL）で洗浄し、そしてアセトニトリル（２×１５０mL）と共蒸発させた。得られた白色の固体を、溶離剤として（ＤＣＭ／酢酸（９９／１））／メタノール（１０／０～７／３）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、次にジエチルエーテル（２×３０mL）でトリチュレートした。得られた固体を、メタノール（５０mL）と水（５０mL）との混合物に溶解し、濃縮乾固し、アセトニトリル（１００mL）と共蒸発させ、乾燥して、標記化合物（０．７５ｇ；１．５mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.84-0.88 (m, 6H), 1.34-1.41 (m, 2H), 1.51-1.73 (m, 2H), 1.95-2.04 (m, 1H), 2.91-2.96 (m, 2H), 3.88-3.92 (m, 1H), 4.06-4.11 (m, 1H), 4.19-4.31 (m, 3H), 5.36 (s, 2H), 5.91-5.94 (m, 1H), 7.30-7.34 (m, 2H), 7.39-7.45 (m, 3H), 7.75 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.4 Hz), 8.02 (brs, 1H), 12.56 (brs, 1H)
【0110】
工程２： ナトリウム（２－メトキシカルボニル－５－ニトロ－フェニル）メタンスルホナート
亜硫酸ナトリウム（１４．３９ｇ；１１４．１７mmol）の水（２２８mL）溶液に、メチル ２－（ブロモメチル）－４－ニトロベンゾアート（１０．４３ｇ；３８．０６mmol）のメタノール（３７mL）懸濁液を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、次に濃縮乾固した。得られた粗生成物を、溶離剤として酢酸エチル／メタノール（１０／０～６／４）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（１３．９ｇ；３１．０７mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 3.82 (s, 3H), 4.29 (s, 2H), 7.87 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 8.16 (dd, 1H, J = 2.5 及び 8.6 Hz), 8.25 (d, 1H, J = 2.5 Hz)
亜硫酸ナトリウム（１４．３９ｇ；１１４．１７mmol）の水（２２８mL）溶液に、メチル ２－（ブロモメチル）－４－ニトロベンゾアート（１０．４３ｇ；３８．０６mmol）のメタノール（３７mL）懸濁液を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、次に濃縮乾固した。得られた粗生成物を、溶離剤として酢酸エチル／メタノール（１０／０～６／４）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（１３．９ｇ；３１．０７mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 3.82 (s, 3H), 4.29 (s, 2H), 7.87 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 8.16 (dd, 1H, J = 2.5 及び 8.6 Hz), 8.25 (d, 1H, J = 2.5 Hz)
【0111】
工程３： ナトリウム ［２－（ヒドロキシメチル）－５－ニトロ－フェニル］メタンスルホナート
ナトリウム （２－メトキシカルボニル－５－ニトロ－フェニル）メタンスルホナート（１０．１ｇ；２２．０９mmol）のＴＨＦ（３６８mL）懸濁液に、水素化ホウ素リチウム（０．５９ｇ；２４．３mmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に水素化ホウ素リチウム（０．２７ｇ；１１．０４mmol）を再び加え、そして反応混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をメタノール（５０mL）で希釈し、濃縮乾固した。粗生成物を、溶離剤として酢酸エチル／メタノール（１０／０～５／５）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（５．０９ｇ；６．５２mmol）を黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 3.90 (s, 2H), 4.76 (d, 2H, J = 5.7 Hz), 5.38 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.66 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.07-8.09 (m, 2H)
ナトリウム （２－メトキシカルボニル－５－ニトロ－フェニル）メタンスルホナート（１０．１ｇ；２２．０９mmol）のＴＨＦ（３６８mL）懸濁液に、水素化ホウ素リチウム（０．５９ｇ；２４．３mmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に水素化ホウ素リチウム（０．２７ｇ；１１．０４mmol）を再び加え、そして反応混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をメタノール（５０mL）で希釈し、濃縮乾固した。粗生成物を、溶離剤として酢酸エチル／メタノール（１０／０～５／５）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（５．０９ｇ；６．５２mmol）を黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 3.90 (s, 2H), 4.76 (d, 2H, J = 5.7 Hz), 5.38 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.66 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.07-8.09 (m, 2H)
【0112】
工程４： ナトリウム ［５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］メタンスルホナート
ナトリウム ［２－（ヒドロキシメチル）－５－ニトロ－フェニル］メタンスルホナート（２ｇ；３．５７mmol）のメタノール（１０２mL）溶液に、Ｐｄ／Ｃ １０％（０．５６ｇ；０．５３mmol）をアルゴン下で加えた。反応混合物を水素でパージし、水素大気圧下、室温で２時間撹拌した。次に、反応混合物をCelite（登録商標）で濾過し、メタノール（３×５０mL）で洗浄し、そして濃縮乾固した。得られた粗生成物を、アセトニトリル／水（２／９８～５０／５０）を用いるＣ１８のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（１．９８ｇ；３．４６mmol）を灰色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 3.72 (s, 2H), 4.3 (d, 2H, J = 5.9 Hz), 4.89 (s, 2H), 4.96 (t, 1H, J = 5.9 Hz), 6.38 (dd, 1H, J = 2.4 及び 8.1 Hz), 6.49 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.9 (d, 1H, J = 8.1 Hz)
ナトリウム ［２－（ヒドロキシメチル）－５－ニトロ－フェニル］メタンスルホナート（２ｇ；３．５７mmol）のメタノール（１０２mL）溶液に、Ｐｄ／Ｃ １０％（０．５６ｇ；０．５３mmol）をアルゴン下で加えた。反応混合物を水素でパージし、水素大気圧下、室温で２時間撹拌した。次に、反応混合物をCelite（登録商標）で濾過し、メタノール（３×５０mL）で洗浄し、そして濃縮乾固した。得られた粗生成物を、アセトニトリル／水（２／９８～５０／５０）を用いるＣ１８のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（１．９８ｇ；３．４６mmol）を灰色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 3.72 (s, 2H), 4.3 (d, 2H, J = 5.9 Hz), 4.89 (s, 2H), 4.96 (t, 1H, J = 5.9 Hz), 6.38 (dd, 1H, J = 2.4 及び 8.1 Hz), 6.49 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.9 (d, 1H, J = 8.1 Hz)
【0113】
工程５： 実施例３
（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタン酸（５４３mg；１．０９mmol）の乾燥ＤＭＦ（６mL）溶液に、ＨＡＴＵ（６００mg；１．５８mmol）、炭酸水素ナトリウム（１０２mg；１．２２mmol）及びナトリウム ［５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］メタンスルホナート（６５０mg；１．４１mmol）の乾燥ＤＭＦ（１４mL）懸濁液を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次にジオキサン（２００mL）と共蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＤＣＭ／メタノール（１０／０～５／５）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー、続いて溶離剤としてアセトニトリル／水＋０．１％ギ酸（２／９８～５０／５０）を用いるＣ１８のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、凍結乾燥後に実施例３（２３３mg；０．３２mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.84-0.89 (m, 6H), 1.32-1.49 (m, 2H), 1.54-1.73 (m, 2H), 1.94-2.04 (m, 1H), 2.89-3.09 (m, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.91-3.95 (m, 1H), 4.20-4.33 (m, 3H), 4.41-4.46 (m, 1H), 4.47 (s, 2H), 5.07 (brs, 1H), 5.40 (brs, 2H), 5.98 (t, 1H, J = 5.7 Hz), 7.21 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 7.31-7.36 (m, 3H), 7.39-7.45 (m, 3H), 7.63 (dd, 1H, J = 2.2 及び 8.3Hz), 7.75 (t, 2H, J = 7.5Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.4 Hz), 8.08 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 10.01-10.8 (m, 1H). LCMS (2-100 ACN/H2O + 0.1% TFA): 93.75％ 保持時間 = 8.1分 陰モード 694.14 検出 (M-H)
（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタン酸（５４３mg；１．０９mmol）の乾燥ＤＭＦ（６mL）溶液に、ＨＡＴＵ（６００mg；１．５８mmol）、炭酸水素ナトリウム（１０２mg；１．２２mmol）及びナトリウム ［５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］メタンスルホナート（６５０mg；１．４１mmol）の乾燥ＤＭＦ（１４mL）懸濁液を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次にジオキサン（２００mL）と共蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＤＣＭ／メタノール（１０／０～５／５）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー、続いて溶離剤としてアセトニトリル／水＋０．１％ギ酸（２／９８～５０／５０）を用いるＣ１８のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、凍結乾燥後に実施例３（２３３mg；０．３２mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.84-0.89 (m, 6H), 1.32-1.49 (m, 2H), 1.54-1.73 (m, 2H), 1.94-2.04 (m, 1H), 2.89-3.09 (m, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.91-3.95 (m, 1H), 4.20-4.33 (m, 3H), 4.41-4.46 (m, 1H), 4.47 (s, 2H), 5.07 (brs, 1H), 5.40 (brs, 2H), 5.98 (t, 1H, J = 5.7 Hz), 7.21 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 7.31-7.36 (m, 3H), 7.39-7.45 (m, 3H), 7.63 (dd, 1H, J = 2.2 及び 8.3Hz), 7.75 (t, 2H, J = 7.5Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.4 Hz), 8.08 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 10.01-10.8 (m, 1H). LCMS (2-100 ACN/H2O + 0.1% TFA): 93.75％ 保持時間 = 8.1分 陰モード 694.14 検出 (M-H)
【0114】
実施例４： ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸（実施例１の遊離酸；３００mg、０．４２６３mmol）を、無水ＮＭＰ（６mL）に室温で溶解した。並行して、ＳＯＣｌ２（２０６μL）のＮＭＰ（６mL）溶液を調製した。反応物に、前記ＳＯＣｌ２溶液（９００μL）を７５分間かけて６回加えた。最後の添加後、反応混合物を室温で１５分間撹拌した。反応混合物のOasisカラムへの直接導入により、ＴＦＡ法を用いて粗生成物を精製して、標記化合物（１３８mg；０．１９７１mmol）を白色の粉末として与えた。1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.15+8.1+7.42+6.0 (s+2d+m, 4H), 7.9 (m, 3H), 7.75 (m, 3H), 7.42+7.31 (2m, 5H), 5.23 (s, 2H), 4.4 (m, 1H), 4.3-4.2 (m, 3H), 3.95 (dd, 1H), 3.0 (m, 2H), 2.0 (m, 1H), 1.7 + 1.6 (2m, 2H), 1.48 + 1.37 (2m, 2H), 0.88 (2d, 6H). HR-ESI+: m/z[M+H]+ = 700.2199/700.2202 [測定値/理論値]
【化58】
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸（実施例１の遊離酸；３００mg、０．４２６３mmol）を、無水ＮＭＰ（６mL）に室温で溶解した。並行して、ＳＯＣｌ２（２０６μL）のＮＭＰ（６mL）溶液を調製した。反応物に、前記ＳＯＣｌ２溶液（９００μL）を７５分間かけて６回加えた。最後の添加後、反応混合物を室温で１５分間撹拌した。反応混合物のOasisカラムへの直接導入により、ＴＦＡ法を用いて粗生成物を精製して、標記化合物（１３８mg；０．１９７１mmol）を白色の粉末として与えた。1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.15+8.1+7.42+6.0 (s+2d+m, 4H), 7.9 (m, 3H), 7.75 (m, 3H), 7.42+7.31 (2m, 5H), 5.23 (s, 2H), 4.4 (m, 1H), 4.3-4.2 (m, 3H), 3.95 (dd, 1H), 3.0 (m, 2H), 2.0 (m, 1H), 1.7 + 1.6 (2m, 2H), 1.48 + 1.37 (2m, 2H), 0.88 (2d, 6H). HR-ESI+: m/z[M+H]+ = 700.2199/700.2202 [測定値/理論値]
【0115】
実施例５： ２－（クロロメチル）－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（実施例２から得たスルホナート；５０４．１mg、０．８１６mmol）のＮＭＰ（５mL）溶液に、ＳＯＣｌ２（６０μL ０．８１６mmol）のＮＭＰ（５００μL）溶液を７５分間かけて６回加えた。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。反応混合物のOasisカラムへの直接導入により、ＴＦＡ法を用いて粗生成物を精製して、白色の粉末として与えた（３３７mg）。IR波長 (cm-1): 3600～2400, 1688+1648, 1599, 1518, 1022. UPLC-MS: MS(ESI) m/z [M+H]+ = 614.17+616.18 (Cl)
【化59】
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（実施例２から得たスルホナート；５０４．１mg、０．８１６mmol）のＮＭＰ（５mL）溶液に、ＳＯＣｌ２（６０μL ０．８１６mmol）のＮＭＰ（５００μL）溶液を７５分間かけて６回加えた。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。反応混合物のOasisカラムへの直接導入により、ＴＦＡ法を用いて粗生成物を精製して、白色の粉末として与えた（３３７mg）。IR波長 (cm-1): 3600～2400, 1688+1648, 1599, 1518, 1022. UPLC-MS: MS(ESI) m/z [M+H]+ = 614.17+616.18 (Cl)
【0116】
実施例６： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート
工程１： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホナート
実施例１（４５０mg；０．６４mmol）のＤＭＦ（６mL）溶液に、ＤＩＥＡ（１．３４mL；７．６７mmol）及びビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（７７８mg；２．５６mmol）を加えた。溶液を室温で２時間撹拌し、ビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（３９０mg；１．２８mmol）を加えた。１時間後、溶液を減圧下で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のメタノール及び酢酸の勾配）により精製して、標記化合物を与えた（５２３mg；０．４５mmol）。1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.2/8.1/5.95 (m, 3H), 8.3 (d, 2H), 7.95 (s, 1H), 7.9 (d, 2H), 7.75 (dd, 1H), 7.75 (m, 2H), 7.65 (d, 2H), 7.4 (d, 4H), 7.35 (d, 1H), 5.7 (s, 2H), 5.35 (brs, 2H), 4.4 (m, 1H), 4.3 (t, 1H), 4.2 (d, 2H), 3.95 (m, 1H), 3 (m, 2H), 2 (m, 1H), 1.8-1.3 (m, 4H), 0.85 (2d, 6H)
【化60】
工程１： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホナート
実施例１（４５０mg；０．６４mmol）のＤＭＦ（６mL）溶液に、ＤＩＥＡ（１．３４mL；７．６７mmol）及びビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（７７８mg；２．５６mmol）を加えた。溶液を室温で２時間撹拌し、ビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（３９０mg；１．２８mmol）を加えた。１時間後、溶液を減圧下で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のメタノール及び酢酸の勾配）により精製して、標記化合物を与えた（５２３mg；０．４５mmol）。1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.2/8.1/5.95 (m, 3H), 8.3 (d, 2H), 7.95 (s, 1H), 7.9 (d, 2H), 7.75 (dd, 1H), 7.75 (m, 2H), 7.65 (d, 2H), 7.4 (d, 4H), 7.35 (d, 1H), 5.7 (s, 2H), 5.35 (brs, 2H), 4.4 (m, 1H), 4.3 (t, 1H), 4.2 (d, 2H), 3.95 (m, 1H), 3 (m, 2H), 2 (m, 1H), 1.8-1.3 (m, 4H), 0.85 (2d, 6H)
【0117】
工程２： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、トリフルオロ酢酸塩
ＭＭＡＥ（２００mg；０．２８mmol）のＤＭＦ（５．６mL）溶液に、ＤＩＥＡ（０．１９mL；１．３９mmol）を加え、続いてナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホナート（４７２mg；０．５５mmol）及びＨＯＢｔ（７５mg；０．５６mmol）を加えた。溶液を室温で３．５時間撹拌し、次にＤＥＡ（０．１９mL；１．３９mmol）を加えた。２時間後、溶液を減圧下で濃縮し、残留物を、ＴＦＡ法によるXbridge（登録商標）のＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、標記化合物を与えた（９９mg；０．０８mmol）。1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δppm 10.2/10 (2s, 1H), 8.56/8.35 (2m, 1H), 8.1 (d, 1H), 7.9 (brs, 1H), 7.88/7.6 (2d, 1H), 7.68 (brs, 1H), 7.35-7.13 (m, 5H), 7.3 (brs, 1H), 6/5.96 (2t, 1H), 5.5 (m, 2H), 5.4 (brs, 2H), 4.8-4.15 (m, 5H), 4.05-3.85 (m, 2H), 3.8-3.6 (5s, 9H), 3.62-3.5 (m, 2H), 3.1-2.8 (m, 5H), 3 (brs, 3H), 2.4/2.3 (d+dd, 2H), 2.2-1.9 (m, 3H), 1.9-1.75 (m, 11H), 1.05/1 (2d, 9H), 1-0.75 (m, 21H)
ＭＭＡＥ（２００mg；０．２８mmol）のＤＭＦ（５．６mL）溶液に、ＤＩＥＡ（０．１９mL；１．３９mmol）を加え、続いてナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホナート（４７２mg；０．５５mmol）及びＨＯＢｔ（７５mg；０．５６mmol）を加えた。溶液を室温で３．５時間撹拌し、次にＤＥＡ（０．１９mL；１．３９mmol）を加えた。２時間後、溶液を減圧下で濃縮し、残留物を、ＴＦＡ法によるXbridge（登録商標）のＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、標記化合物を与えた（９９mg；０．０８mmol）。1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δppm 10.2/10 (2s, 1H), 8.56/8.35 (2m, 1H), 8.1 (d, 1H), 7.9 (brs, 1H), 7.88/7.6 (2d, 1H), 7.68 (brs, 1H), 7.35-7.13 (m, 5H), 7.3 (brs, 1H), 6/5.96 (2t, 1H), 5.5 (m, 2H), 5.4 (brs, 2H), 4.8-4.15 (m, 5H), 4.05-3.85 (m, 2H), 3.8-3.6 (5s, 9H), 3.62-3.5 (m, 2H), 3.1-2.8 (m, 5H), 3 (brs, 3H), 2.4/2.3 (d+dd, 2H), 2.2-1.9 (m, 3H), 1.9-1.75 (m, 11H), 1.05/1 (2d, 9H), 1-0.75 (m, 21H)
【0118】
工程３： 実施例６
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（２２mg；０．０１８mmol）のＤＭＦ（０．１８mL）溶液に、ＤＩＥＡ（６．３μL mL；３６μmmol）及び１－［２－［３－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）－３－オキソ－プロポキシ］エチル］ピロール－２，５－ジオン（６．２mg；２０μmol）を加えた。溶液を室温で４．５時間撹拌した。反応物を、ＮＨ４ＨＣＯ３法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例６を与えた（９．６mg；６．８μmol）。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1420.7041 (δ = -0.3 ppm)
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（２２mg；０．０１８mmol）のＤＭＦ（０．１８mL）溶液に、ＤＩＥＡ（６．３μL mL；３６μmmol）及び１－［２－［３－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）－３－オキソ－プロポキシ］エチル］ピロール－２，５－ジオン（６．２mg；２０μmol）を加えた。溶液を室温で４．５時間撹拌した。反応物を、ＮＨ４ＨＣＯ３法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例６を与えた（９．６mg；６．８μmol）。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1420.7041 (δ = -0.3 ppm)
【0119】
実施例７： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（実施例６の工程２から得た；３０mg；０．０２５mmol）のＤＭＦ（０．２５mL）溶液に、ＤＩＥＡ（８．７μL mL；３６μmmol）及び（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノアート（８．４６mg；０．０２７mmol）を加えた。溶液を室温で３．５時間撹拌した。反応物を、ＮＨ４ＨＣＯ３法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例７を与えた（２０mg；１４．０９μmol）。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1418.7253 (δ = 0.1 ppm)
【化61】
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（実施例６の工程２から得た；３０mg；０．０２５mmol）のＤＭＦ（０．２５mL）溶液に、ＤＩＥＡ（８．７μL mL；３６μmmol）及び（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノアート（８．４６mg；０．０２７mmol）を加えた。溶液を室温で３．５時間撹拌した。反応物を、ＮＨ４ＨＣＯ３法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例７を与えた（２０mg；１４．０９μmol）。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1418.7253 (δ = 0.1 ppm)
【0120】
実施例８： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［［２－［２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート
２－［２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ］酢酸（６．４mg；０．０２７mmol）のＤＭＦ（１２５μL）溶液に、ＤＩＥＡ（２１．７μL；１２４μmmol）及びＴＳＴＵ（７．８８mg；０．０２６mmol）を加えた。活性化の完了後、５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（３０mg；０．０２５mmol）のＤＭＦ（０．１５mL）溶液を加えた。溶液を室温で２時間撹拌した。反応物を、ＮＨ４ＨＣＯ３法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例８を与えた（１６mg；１１．１０μmol）。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1440.7382 (δ = -2.6 ppm)
【化62】
２－［２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ］酢酸（６．４mg；０．０２７mmol）のＤＭＦ（１２５μL）溶液に、ＤＩＥＡ（２１．７μL；１２４μmmol）及びＴＳＴＵ（７．８８mg；０．０２６mmol）を加えた。活性化の完了後、５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（３０mg；０．０２５mmol）のＤＭＦ（０．１５mL）溶液を加えた。溶液を室温で２時間撹拌した。反応物を、ＮＨ４ＨＣＯ３法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例８を与えた（１６mg；１１．１０μmol）。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1440.7382 (δ = -2.6 ppm)
【0121】
実施例９： ５－［［（２Ｓ）－２－［［１－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］シクロブタンカルボニル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸
工程１： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホナート
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（２６１mg；０．４４８mmol）のＤＭＦ（５．７５mL）溶液に、ビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（１．０９ｇ；３．５８mmol）及びＤＩＰＥＡ（１．８７mL；１０．７５mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に濃縮乾固して、粗混合物を与えた。粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中２％ ＡｃＯＨを含有するメタノールの勾配）により精製して、標記化合物（１３７mg；０．１８３mmol）を白色の固体として与えた。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 748.48
【化63】
工程１： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホナート
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホナート（２６１mg；０．４４８mmol）のＤＭＦ（５．７５mL）溶液に、ビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（１．０９ｇ；３．５８mmol）及びＤＩＰＥＡ（１．８７mL；１０．７５mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に濃縮乾固して、粗混合物を与えた。粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中２％ ＡｃＯＨを含有するメタノールの勾配）により精製して、標記化合物（１３７mg；０．１８３mmol）を白色の固体として与えた。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 748.48
【0122】
工程２： ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸（６４．５mg；０．０８６３mmol）のＤＭＦ（１．４２mL）溶液に、ＭＭＡＥ（６１．９mg；０．０８６３mmol）、ＤＩＰＥＡ（７５．１μL；０．４３１mmol）及びＨＯＢｔ（２３．３mg；０．１７３mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、標記化合物を与えた（３３．５mg；０．０２５３mmol）。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 1326.88, [M+Na]+ = 1348.09
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸（６４．５mg；０．０８６３mmol）のＤＭＦ（１．４２mL）溶液に、ＭＭＡＥ（６１．９mg；０．０８６３mmol）、ＤＩＰＥＡ（７５．１μL；０．４３１mmol）及びＨＯＢｔ（２３．３mg；０．１７３mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、標記化合物を与えた（３３．５mg；０．０２５３mmol）。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 1326.88, [M+Na]+ = 1348.09
【0123】
工程３： ５－［［（２Ｓ）－２－アミノ－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート（３６．８mg；０．０２９２mmol）のＤＭＦ（７５０μL）溶液に、ピペリジン（２３．１μL；０．２３４mmol）を加えた。反応混合物を室温で１７時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物の溶液を精製して、標記化合物を与えた（１７mg；０．０１３９mmol）。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 1038.10, [M+Na]+ = 1059.85
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホナート（３６．８mg；０．０２９２mmol）のＤＭＦ（７５０μL）溶液に、ピペリジン（２３．１μL；０．２３４mmol）を加えた。反応混合物を室温で１７時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物の溶液を精製して、標記化合物を与えた（１７mg；０．０１３９mmol）。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 1038.10, [M+Na]+ = 1059.85
【0124】
工程４： 実施例９
５－［［（２Ｓ）－２－アミノ－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（２４．５mg；０．０２１５mmol）のＤＭＦ（７３５μL）溶液に、調製例１（１０．５mg；０．０２５８mmol）及びＤＩＰＥＡ（１９μL；０．１０８mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物の溶液を精製して、実施例９（１９．３mg；０．０１４７mmol）を白色の粉末として与えた。HR-ESI+: m/z [M+H]+ = 1396.7040/1396.7074 [測定値/理論値]
５－［［（２Ｓ）－２－アミノ－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（２４．５mg；０．０２１５mmol）のＤＭＦ（７３５μL）溶液に、調製例１（１０．５mg；０．０２５８mmol）及びＤＩＰＥＡ（１９μL；０．１０８mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物の溶液を精製して、実施例９（１９．３mg；０．０１４７mmol）を白色の粉末として与えた。HR-ESI+: m/z [M+H]+ = 1396.7040/1396.7074 [測定値/理論値]
【0125】
実施例１０： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸
工程１： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸
実施例２（１．２８ｇ；２．０７mmol）のＴＨＦ（６５mL）懸濁液に、ピリジン（８７５μL；１０．８mmol）を加え、続いて４－ニトロクロロギ酸フェニル（１．０９ｇ；５．４１mmol）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。次に、さらなる４－ニトロクロロギ酸フェニル（１．０９ｇ；５．４１mmol；２．５当量）を加えた。室温で５時間撹拌した後、混合物を濃縮乾固し、次に溶離剤として水／アセトニトリル ９０／１０～０／１００（３０分）を用いるＣ１８カラムクロマトグラフィーにより精製した。合わせた管(the combined tubes)のアセトニトリルを除去し、残りを凍結乾燥して、標記化合物（６５０mg；０．８３mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.88 (m, 6H), 1.31 (d, 3H, J = 4.8 Hz), 1.97-2.03 (m, 1H), 3.92 (t, 1H, J = 6.8 Hz), 4.23 (s, 2H), 4.24-4.34 (m, 1H), 4.42 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 5.69 (s, 2H), 7.30-7.48 (m, 6H), 7.62 (d, 2H, J = 8 Hz), 7.72-7.76 (m, 3H), 7.89 (d, 2H, J = 6.4 Hz), 7.94 (s, 1H), 8.18 (d, 1H, J = 5.6 Hz), 8.33 (d, 2H, J = 7.6 Hz), 10.11 (s, 1H). 13C NMR (DMSO): δ 18.01, 18.26, 19.21, 30.4, 46.66, 49.05, 59.91, 65.67, 67.82, 117.7, 119.1, 120.06, 122.66, 125.37, 126.33, 127.05, 127.62, 128.0, 138.06, 140.67, 143.77, 143.86, 145.1, 146.23, 151.96, 155.47, 156.12, 171.0, 171.15. LCMS (2-100 ACN/H2O+0.05% TFA): 90.41% 保持時間＝12.7分 陽モード578.41 検出. 陰モード 759.17 検出
【化64】
工程１： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸
実施例２（１．２８ｇ；２．０７mmol）のＴＨＦ（６５mL）懸濁液に、ピリジン（８７５μL；１０．８mmol）を加え、続いて４－ニトロクロロギ酸フェニル（１．０９ｇ；５．４１mmol）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。次に、さらなる４－ニトロクロロギ酸フェニル（１．０９ｇ；５．４１mmol；２．５当量）を加えた。室温で５時間撹拌した後、混合物を濃縮乾固し、次に溶離剤として水／アセトニトリル ９０／１０～０／１００（３０分）を用いるＣ１８カラムクロマトグラフィーにより精製した。合わせた管(the combined tubes)のアセトニトリルを除去し、残りを凍結乾燥して、標記化合物（６５０mg；０．８３mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.88 (m, 6H), 1.31 (d, 3H, J = 4.8 Hz), 1.97-2.03 (m, 1H), 3.92 (t, 1H, J = 6.8 Hz), 4.23 (s, 2H), 4.24-4.34 (m, 1H), 4.42 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 5.69 (s, 2H), 7.30-7.48 (m, 6H), 7.62 (d, 2H, J = 8 Hz), 7.72-7.76 (m, 3H), 7.89 (d, 2H, J = 6.4 Hz), 7.94 (s, 1H), 8.18 (d, 1H, J = 5.6 Hz), 8.33 (d, 2H, J = 7.6 Hz), 10.11 (s, 1H). 13C NMR (DMSO): δ 18.01, 18.26, 19.21, 30.4, 46.66, 49.05, 59.91, 65.67, 67.82, 117.7, 119.1, 120.06, 122.66, 125.37, 126.33, 127.05, 127.62, 128.0, 138.06, 140.67, 143.77, 143.86, 145.1, 146.23, 151.96, 155.47, 156.12, 171.0, 171.15. LCMS (2-100 ACN/H2O+0.05% TFA): 90.41% 保持時間＝12.7分 陽モード578.41 検出. 陰モード 759.17 検出
【0126】
工程２： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸（２９．３mg；０．０３７４mmol）のＤＭＦ（１．２０mL）溶液に、ＭＭＡＥ（２６．９mg；０．０３７４mmol）、ＤＩＰＥＡ（３２．６μL；０．１８７mmol）及びＨＯＢｔ（１０．１mg；０．０７５mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、標記化合物を与えた（３５．４mg；０．０２６４mmol）。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 1340.9
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸（２９．３mg；０．０３７４mmol）のＤＭＦ（１．２０mL）溶液に、ＭＭＡＥ（２６．９mg；０．０３７４mmol）、ＤＩＰＥＡ（３２．６μL；０．１８７mmol）及びＨＯＢｔ（１０．１mg；０．０７５mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、標記化合物を与えた（３５．４mg；０．０２６４mmol）。UPLC-MS: MS(ESI): m/z [M+H]+ = 1340.9
【0127】
工程３： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸（５０．１mg；０．０３７４mmol）のＤＭＦ（１．５mL）溶液に、ピペリジン（２９．６μL；０．２９９mmol）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物の溶液を精製して、標記化合物（２３mg；０．０１８７mmol）を白色の粉末として与えた。HR-ESI+: m/z [M+H]+ = 1117.6235/1117.6218, [M+2H]/2+ = 559.3146/559.3148 [測定値/理論値]
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸（５０．１mg；０．０３７４mmol）のＤＭＦ（１．５mL）溶液に、ピペリジン（２９．６μL；０．２９９mmol）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物の溶液を精製して、標記化合物（２３mg；０．０１８７mmol）を白色の粉末として与えた。HR-ESI+: m/z [M+H]+ = 1117.6235/1117.6218, [M+2H]/2+ = 559.3146/559.3148 [測定値/理論値]
【0128】
工程４： 実施例１０
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（１０．４mg；０．００８４５mmol）のＤＭＦ（０．３４mL）溶液に、（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノアート（２．９mg；０．００９２９mmol）及びＤＩＰＥＡ（７．３６μL；０．０４２２mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、及びＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、実施例１０（７．７mg；０．００５９mmol）を白色の粉末として与えた。HR-ESI+: m/z [M+H]+ = 1312.6701/1312.6750, [測定値/理論値]
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（１０．４mg；０．００８４５mmol）のＤＭＦ（０．３４mL）溶液に、（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノアート（２．９mg；０．００９２９mmol）及びＤＩＰＥＡ（７．３６μL；０．０４２２mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、及びＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、実施例１０（７．７mg；０．００５９mmol）を白色の粉末として与えた。HR-ESI+: m/z [M+H]+ = 1312.6701/1312.6750, [測定値/理論値]
【0129】
実施例１１： ５－［［（２Ｓ）－２－［［３－［２－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］エチルカルバモイル］オキセタン－３－カルボニル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸
５－［［（２Ｓ）－２－アミノ－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸；２，２，２－トリフルオロ酢酸（１６mg；０．０１３１mmol）のＤＭＦ（４８０μL）溶液に、調製例２（１０．２４mg；０．０２５０mmol）及びＤＩＰＥＡ（１１．４μL；０．０６５７mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物の溶液を精製して、実施例１１（４．４mg；０．００３１mmol）を白色の粉末として与えた。HR-ESI+: m/z [M+2H]2+ = 699.8477/699.8472 [測定値/理論値]
【化65】
５－［［（２Ｓ）－２－アミノ－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸；２，２，２－トリフルオロ酢酸（１６mg；０．０１３１mmol）のＤＭＦ（４８０μL）溶液に、調製例２（１０．２４mg；０．０２５０mmol）及びＤＩＰＥＡ（１１．４μL；０．０６５７mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物の溶液を精製して、実施例１１（４．４mg；０．００３１mmol）を白色の粉末として与えた。HR-ESI+: m/z [M+2H]2+ = 699.8477/699.8472 [測定値/理論値]
【0130】
実施例１２： ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］メタンスルホン酸
工程１： ナトリウム ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］フェニル］メタンスルホナート
実施例３（３０mg；０．０４１８mmol）のＤＭＦ（０．４mL）溶液に、ＤＩＥＡ（８７μL；７０．５０１mmol）及びビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（５１mg；０．１６７mmol）を加えた。溶液を室温で２時間撹拌し、ビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（２５mg；０．０８mmol）を再び加えた。室温で１時間後に、溶液を減圧下で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のメタノールの勾配）により精製して、標記化合物を与えた（２５mg；０．０３０mmol）。
【化66】
工程１： ナトリウム ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］フェニル］メタンスルホナート
実施例３（３０mg；０．０４１８mmol）のＤＭＦ（０．４mL）溶液に、ＤＩＥＡ（８７μL；７０．５０１mmol）及びビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（５１mg；０．１６７mmol）を加えた。溶液を室温で２時間撹拌し、ビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（２５mg；０．０８mmol）を再び加えた。室温で１時間後に、溶液を減圧下で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のメタノールの勾配）により精製して、標記化合物を与えた（２５mg；０．０３０mmol）。
【0131】
工程２： ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］メタンスルホン酸
ＭＭＡＥ（１０mg；０．０１３９mmol）のＤＭＦ（０．６mL）溶液に、ＤＩＥＡ（１２μL；０．０６９６mmol）を加え、続いてナトリウム ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］フェニル］メタンスルホナート（２４mg；０．０２８mmol）及びＨＯＢｔ（３．７７mg；０．０２７９mmol）を加えた。溶液を室温で３．５時間撹拌し、溶液を、ＴＦＡ法によるXbridge（登録商標）のＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより直接精製して、標記化合物を与えた（５．４mg；０．００３mmol）。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1439.7558 (δ = 1.9 ppm)
ＭＭＡＥ（１０mg；０．０１３９mmol）のＤＭＦ（０．６mL）溶液に、ＤＩＥＡ（１２μL；０．０６９６mmol）を加え、続いてナトリウム ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］フェニル］メタンスルホナート（２４mg；０．０２８mmol）及びＨＯＢｔ（３．７７mg；０．０２７９mmol）を加えた。溶液を室温で３．５時間撹拌し、溶液を、ＴＦＡ法によるXbridge（登録商標）のＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより直接精製して、標記化合物を与えた（５．４mg；０．００３mmol）。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1439.7558 (δ = 1.9 ppm)
【0132】
工程３： ［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］メタンスルホン酸、ＴＦＡ塩
［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］メタンスルホン酸（５mg；３．４μmol）を、ＤＭＦ（０．２mL）に溶解し、次にＤＥＡ（０．７μL；６．８mmol）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌し、溶液をＴＦＡ法によるXbridge（登録商標）のＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、標記化合物を与えた（３．５mg；２．６μmol）。
［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］メタンスルホン酸（５mg；３．４μmol）を、ＤＭＦ（０．２mL）に溶解し、次にＤＥＡ（０．７μL；６．８mmol）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌し、溶液をＴＦＡ法によるXbridge（登録商標）のＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、標記化合物を与えた（３．５mg；２．６μmol）。
【0133】
工程４： 実施例１２
［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］メタンスルホン酸、ＴＦＡ塩（３．５mg；２．６μmol）のＤＭＦ（１５μL）溶液に、ＤＩＥＡ（２．３μL；１３μmmol）及び１－［２－［３－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）－３－オキソ－プロポキシ］エチル］ピロール－２，５－ジオン（０．９mg；２．９μmol）を加えた。溶液を室温で２．５時間撹拌した。反応物を、ＮＨ４ＨＣＯ３法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１２を与えた（２．８mg；１．８μmol）。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1412.7397 (δ = 1.1 ppm)
［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］メタンスルホン酸、ＴＦＡ塩（３．５mg；２．６μmol）のＤＭＦ（１５μL）溶液に、ＤＩＥＡ（２．３μL；１３μmmol）及び１－［２－［３－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）－３－オキソ－プロポキシ］エチル］ピロール－２，５－ジオン（０．９mg；２．９μmol）を加えた。溶液を室温で２．５時間撹拌した。反応物を、ＮＨ４ＨＣＯ３法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１２を与えた（２．８mg；１．８μmol）。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1412.7397 (δ = 1.1 ppm)
【0134】
実施例１３： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヨードメチル）ベンゼンスルホン酸
実施例４（１００mg；１２３μmol）のアセトン（６mL）溶液に、ヨウ化ナトリウム（５１mg；３４０μmol）を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、化合物をさらに後処理することなく次の工程で用いた。UPLC-MS: [M+H]+ 792.65; [M+Na]+ 814.49
【化67】
実施例４（１００mg；１２３μmol）のアセトン（６mL）溶液に、ヨウ化ナトリウム（５１mg；３４０μmol）を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、化合物をさらに後処理することなく次の工程で用いた。UPLC-MS: [M+H]+ 792.65; [M+Na]+ 814.49
【0135】
実施例１４： ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；２，２，２－トリフルオロアセタート
工程１： ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；ヨージド
（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（ジメチルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－Ｎ，３－ジメチル－ブタンアミド（アウリスタチンＥ）（４２．１mg；５７．５μmol）のＤＭＦ（１０mL）溶液に、実施例１３（１５２mg；９５．８μmol）及びＤＩＰＥＡ（８３．４μL；３６５μmol）を連続して加えた。反応物を室温で１７時間撹拌した。所望の生成物をＵＰＬＣ－ＭＳにより観察し、溶液を次の工程で後処理することなく用いた。UPLC-MS: [M+H]+ 1396.31; [M+Na]+ 1418.37
【化68】
工程１： ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；ヨージド
（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（ジメチルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－Ｎ，３－ジメチル－ブタンアミド（アウリスタチンＥ）（４２．１mg；５７．５μmol）のＤＭＦ（１０mL）溶液に、実施例１３（１５２mg；９５．８μmol）及びＤＩＰＥＡ（８３．４μL；３６５μmol）を連続して加えた。反応物を室温で１７時間撹拌した。所望の生成物をＵＰＬＣ－ＭＳにより観察し、溶液を次の工程で後処理することなく用いた。UPLC-MS: [M+H]+ 1396.31; [M+Na]+ 1418.37
【0136】
工程２： ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；２，２，２－トリフルオロアセタート；２，２，２－トリフルオロ酢酸
［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；ヨージドのＤＭＦ溶液に、ピペリジン（４５．４μL；４６０μmol）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、所望の生成物（１５mg；１０．７μmol）を白色の固体として与えた。UPLC-MS: [M+H]+ 1174.51; [M+Na]+ 1197.03
［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；ヨージドのＤＭＦ溶液に、ピペリジン（４５．４μL；４６０μmol）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、所望の生成物（１５mg；１０．７μmol）を白色の固体として与えた。UPLC-MS: [M+H]+ 1174.51; [M+Na]+ 1197.03
【0137】
工程３： 実施例１４
［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；ヨージド（１５mg；１０．７μmol）のＤＭＦ（４５０μL）溶液に、（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）－３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノアート（３．７mg；１１．８μmol）及びＤＩＰＥＡ（９．３μL；５３．５μmol）を連続して加えた。溶液を室温で１時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、実施例１４（１５．７mg；１２．１μmol）を白色の固体として与えた。HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 1368.7460 (δ =-1.7 ppm)
［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－スルホ－フェニル］メチル－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－ジメチル－アンモニウム；ヨージド（１５mg；１０．７μmol）のＤＭＦ（４５０μL）溶液に、（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）－３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノアート（３．７mg；１１．８μmol）及びＤＩＰＥＡ（９．３μL；５３．５μmol）を連続して加えた。溶液を室温で１時間撹拌した。反応混合物のXbridge（登録商標）カラムへの直接導入による、ＴＦＡ法を用いるＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより、粗生成物を精製して、実施例１４（１５．７mg；１２．１μmol）を白色の固体として与えた。HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 1368.7460 (δ =-1.7 ppm)
【0138】
実施例２３： Ｎ－（｛［４－（｛Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニル｝アミノ）－２－スルホフェニル］メトキシ｝カルボニル）－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ，２Ｒ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（１２．７mg；０．０１０３mmol；実施例１０の工程３から得た）のＤＭＦ（０．４mL）溶液に、ＤＩＥＡ（９μL；５１μmol）及び（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノアート（３．５mg；１１．３μmol）を加えた。溶液を室温で６時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２３を与えた。IR (cm-1): 3278, 1768/1703, 1631, 1159, 829/696. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.96 (s, 1H), 8.1 (s, 1H), 7.87 (m, 2H), 7.68 (m, 1H), 7.6 (d, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.26 (m, 3H), 7.17 (m, 1H), 6.99 (s, 2H), 5.48 (m, 2H), 4.74 (m, 1H), 4.49 (m, 1H), 4.46 (m, 1H), 4.41 (m, 1H), 4.38 (m, 1H), 4.33 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.77 (m, 1H), 3.6 (m, 2H), 3.56 (m, 1H), 3.46 (m, 1H), 3.36 (m, 2H), 3.32 (m, 1H), 3.26 (m, 2H), 3.24 (m, 3H), 3.23 (m, 2H), 3.19 (m, 3H), 3.13 (m, 2H), 3.04 (m, 1H), 2.98 (m, 3H), 2.94 (m, 1H), 2.9 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.37 (br dd, 2H), 2.12 (m, 2H), 2.12 (m, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.97 (m, 2H), 1.49 (m, 9H), 1.29 (d, 3H), 0.89 (m, 27H). HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1310.6893 (δ = -4.5 ppm)
【化69】
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］プロパノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸、ＴＦＡ塩（１２．７mg；０．０１０３mmol；実施例１０の工程３から得た）のＤＭＦ（０．４mL）溶液に、ＤＩＥＡ（９μL；５１μmol）及び（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノアート（３．５mg；１１．３μmol）を加えた。溶液を室温で６時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２３を与えた。IR (cm-1): 3278, 1768/1703, 1631, 1159, 829/696. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.96 (s, 1H), 8.1 (s, 1H), 7.87 (m, 2H), 7.68 (m, 1H), 7.6 (d, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.26 (m, 3H), 7.17 (m, 1H), 6.99 (s, 2H), 5.48 (m, 2H), 4.74 (m, 1H), 4.49 (m, 1H), 4.46 (m, 1H), 4.41 (m, 1H), 4.38 (m, 1H), 4.33 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.77 (m, 1H), 3.6 (m, 2H), 3.56 (m, 1H), 3.46 (m, 1H), 3.36 (m, 2H), 3.32 (m, 1H), 3.26 (m, 2H), 3.24 (m, 3H), 3.23 (m, 2H), 3.19 (m, 3H), 3.13 (m, 2H), 3.04 (m, 1H), 2.98 (m, 3H), 2.94 (m, 1H), 2.9 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.37 (br dd, 2H), 2.12 (m, 2H), 2.12 (m, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.97 (m, 2H), 1.49 (m, 9H), 1.29 (d, 3H), 0.89 (m, 27H). HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1310.6893 (δ = -4.5 ppm)
【0139】
実施例２４： Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－（４－｛［（｛［（４Ｓ）－４，１１－ジエチル－９－ヒドロキシ－３，１４－ジオキソ－３，４，１２，１４－テトラヒドロ－１Ｈ－ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－４－イル］オキシ｝カルボニル）オキシ］メチル｝－３－スルホフェニル）－Ｌ－オルニチンアミド
工程１： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸
実施例１（２００mg；０．２８４mmol）のＤＭＦ（８mL）溶液に、ＤＥＡ（２１２μL；２．０５３mmol）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。過剰のＤＥＡを真空下で蒸発させ、粗予定化合物（expected compound）のＤＭＦ溶液を、次の工程でそのまま用いた。
【化70】
工程１： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸
実施例１（２００mg；０．２８４mmol）のＤＭＦ（８mL）溶液に、ＤＥＡ（２１２μL；２．０５３mmol）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。過剰のＤＥＡを真空下で蒸発させ、粗予定化合物（expected compound）のＤＭＦ溶液を、次の工程でそのまま用いた。
【0140】
工程２： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸
前工程からの化合物の溶液（８mL）に、ＤＩＥＡ（１０２μL；０．５８６６mmol）及び（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノアート（９９．４mg；０．３２２６mmol）を加えた。反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に予定の化合物を与えた。IR (cm-1): 3674 と 2999の間, 1768 (weak) + 1699 + 1641, 1238/1141, 825 及び 694. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.97 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.65 (dd, 1H), 7.32 (d, 1H), 6.99 (s, 2H), 6.02 (m, 1H), 5.18 (m, 1H), 4.72 (s, 2H), 4.36 (m, 1H), 4.21 (dd, 1H), 3.37 (t, 2H), 2.98 (m, 2H), 2.16 (m, 2H), 1.97 (m, 1H), 1.65 (m, 2H), 1.39 (m, 8H), 0.83 (dd, 6H). HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 653.2572 (δ = -4.2 ppm)
前工程からの化合物の溶液（８mL）に、ＤＩＥＡ（１０２μL；０．５８６６mmol）及び（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノアート（９９．４mg；０．３２２６mmol）を加えた。反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に予定の化合物を与えた。IR (cm-1): 3674 と 2999の間, 1768 (weak) + 1699 + 1641, 1238/1141, 825 及び 694. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.97 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.65 (dd, 1H), 7.32 (d, 1H), 6.99 (s, 2H), 6.02 (m, 1H), 5.18 (m, 1H), 4.72 (s, 2H), 4.36 (m, 1H), 4.21 (dd, 1H), 3.37 (t, 2H), 2.98 (m, 2H), 2.16 (m, 2H), 1.97 (m, 1H), 1.65 (m, 2H), 1.39 (m, 8H), 0.83 (dd, 6H). HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 653.2572 (δ = -4.2 ppm)
【0141】
工程３： tert－ブチル ［（１９Ｓ）－１０，１９－ジエチル－１９－ヒドロキシ－１４，１８－ジオキソ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－７－イル］カルボナート
（１９Ｓ）－１０，１９－ジエチル－７，１９－ジヒドロキシ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－１４，１８－ジオン（２２０mg；０．５６０７mmol）のＤＣＭ（２２mL）懸濁液に、粉末のtert－ブトキシカルボニル tert－ブチルカルボナート（１２８．５mg；０．５８８７mmol）及びピリジン（９１μL；１．１２１mmol）を加えた。黄色の懸濁液を室温で１８時間撹拌した。溶媒及び過剰のピリジンを真空下で蒸発させて取り除き、粗生成物をシリカのクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）により精製して、予定の化合物を黄色の粉末として与えた。IR (cm-1): 3700-3000, 1753, 1659, 1254/1142. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.21 (d, 1H), 8.09 (d, 1H), 7.74 (dd, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.5 (s, 1H), 5.38 (2s, 4H), 3.2 (q, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.54 (s, 9H), 1.3 (t, 3H), 0.88 (t, 3H)
（１９Ｓ）－１０，１９－ジエチル－７，１９－ジヒドロキシ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－１４，１８－ジオン（２２０mg；０．５６０７mmol）のＤＣＭ（２２mL）懸濁液に、粉末のtert－ブトキシカルボニル tert－ブチルカルボナート（１２８．５mg；０．５８８７mmol）及びピリジン（９１μL；１．１２１mmol）を加えた。黄色の懸濁液を室温で１８時間撹拌した。溶媒及び過剰のピリジンを真空下で蒸発させて取り除き、粗生成物をシリカのクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）により精製して、予定の化合物を黄色の粉末として与えた。IR (cm-1): 3700-3000, 1753, 1659, 1254/1142. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.21 (d, 1H), 8.09 (d, 1H), 7.74 (dd, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.5 (s, 1H), 5.38 (2s, 4H), 3.2 (q, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.54 (s, 9H), 1.3 (t, 3H), 0.88 (t, 3H)
【0142】
工程４： tert－ブチル ［（１９Ｓ）－１９－クロロカルボニルオキシ－１０，１９－ジエチル－１４，１８－ジオキソ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－７－イル］カルボナート
tert－ブチル ［（１９Ｓ）－１０，１９－ジエチル－１９－ヒドロキシ－１４，１８－ジオキソ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－７－イル］カルボナート（３０mg；０．０６０９mmol）のＤＣＭ（２mL）溶液に、ＤＭＡＰ（２２．３mg；０．１８２７mmol）を加え、続いてトリホスゲン（７．２mg；０．０２４４mmol）を加えた。反応物を室温で３０分間撹拌し、この溶液を次の工程でそのまま（as such）用いた。
tert－ブチル ［（１９Ｓ）－１０，１９－ジエチル－１９－ヒドロキシ－１４，１８－ジオキソ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－７－イル］カルボナート（３０mg；０．０６０９mmol）のＤＣＭ（２mL）溶液に、ＤＭＡＰ（２２．３mg；０．１８２７mmol）を加え、続いてトリホスゲン（７．２mg；０．０２４４mmol）を加えた。反応物を室温で３０分間撹拌し、この溶液を次の工程でそのまま（as such）用いた。
【0143】
工程５： ２－［［（１９Ｓ）－７－tert－ブトキシカルボニルオキシ－１０，１９－ジエチル－１４，１８－ジオキソ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－１９－イル］オキシカルボニルオキシメチル］－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸
tert－ブチル ［（１９Ｓ）－１９－クロロカルボニルオキシ－１０，１９－ジエチル－１４，１８－ジオキソ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－７－イル］カルボナートのＤＣＭ（２mL）溶液に、ＤＭＡＰ（２２．３mg；０．１８２７mmol）を加え、続いて５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸（３１．８０mg；０．０４８７３mmol；上記工程２に従って得た）を加えた。反応物を室温で１４時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるＣＳＨ（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に予定の化合物を与えた。
tert－ブチル ［（１９Ｓ）－１９－クロロカルボニルオキシ－１０，１９－ジエチル－１４，１８－ジオキソ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－７－イル］カルボナートのＤＣＭ（２mL）溶液に、ＤＭＡＰ（２２．３mg；０．１８２７mmol）を加え、続いて５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホン酸（３１．８０mg；０．０４８７３mmol；上記工程２に従って得た）を加えた。反応物を室温で１４時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるＣＳＨ（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に予定の化合物を与えた。
【0144】
工程６： 実施例２４
２－［［（１９Ｓ）－７－tert－ブトキシカルボニルオキシ－１０，１９－ジエチル－１４，１８－ジオキソ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－１９－イル］オキシカルボニルオキシメチル］－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸（１２．５mg；１．６６μmol）のＤＣＭ（２．５mL）溶液に、ＴＦＡ（０．３mL）を加え、溶液を室温で１．５時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるＣＳＨ（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に実施例２４を与えた。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1071.3768 (δ = 0.4 ppm)
２－［［（１９Ｓ）－７－tert－ブトキシカルボニルオキシ－１０，１９－ジエチル－１４，１８－ジオキソ－１７－オキサ－３，１３－ジアザペンタシクロ［１１．８．０．０２，１１．０４，９．０１５，２０］ヘンイコサ－１（２１），２，４（９），５，７，１０，１５（２０）－ヘプタエン－１９－イル］オキシカルボニルオキシメチル］－５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］ベンゼンスルホン酸（１２．５mg；１．６６μmol）のＤＣＭ（２．５mL）溶液に、ＴＦＡ（０．３mL）を加え、溶液を室温で１．５時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるＣＳＨ（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に実施例２４を与えた。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1071.3768 (δ = 0.4 ppm)
【0145】
実施例２５： （１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－１，２，３，４，６，１１－ヘキサヒドロテトラセン－１－イル ２，３，６－トリデオキシ－３－［（｛［４－（｛Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチル｝アミノ）－２－スルホフェニル］メトキシ｝カルボニル）アミノ］－α－Ｌ－ｌｙｘｏ－ヘキソピラノシド
工程１： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｒ）－３－ヒドロキシ－２－メチル－６－［［（１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（２－ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－２，４－ジヒドロ－１Ｈ－テトラセン－１－イル］オキシ］テトラヒドロピラン－４－イル］カルバモイルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホナート（１５７mg；０．１８５４mmol；実施例６の工程１から得た）のＤＭＦ（１１mL）溶液に、（７Ｓ，９Ｓ）－７－［（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－４－アミノ－５－ヒドロキシ－６－メチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシ－６，９，１１－トリヒドロキシ－９－（２－ヒドロキシアセチル）－４－メトキシ－８，１０－ジヒドロ－７Ｈ－テトラセン－５，１２－ジオン（１０７．５mg；０．１８５３mmol）を加え、続いてＤＩＥＡ（３２３μL；１．８５４mmol）を加えた。赤色の混合物は暗紫色に変化し、そして２時間の変換の後、完了した。この溶液を次の工程でそのまま用いた。
【化71】
工程１： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｒ）－３－ヒドロキシ－２－メチル－６－［［（１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（２－ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－２，４－ジヒドロ－１Ｈ－テトラセン－１－イル］オキシ］テトラヒドロピラン－４－イル］カルバモイルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸
ナトリウム ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］ベンゼンスルホナート（１５７mg；０．１８５４mmol；実施例６の工程１から得た）のＤＭＦ（１１mL）溶液に、（７Ｓ，９Ｓ）－７－［（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－４－アミノ－５－ヒドロキシ－６－メチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシ－６，９，１１－トリヒドロキシ－９－（２－ヒドロキシアセチル）－４－メトキシ－８，１０－ジヒドロ－７Ｈ－テトラセン－５，１２－ジオン（１０７．５mg；０．１８５３mmol）を加え、続いてＤＩＥＡ（３２３μL；１．８５４mmol）を加えた。赤色の混合物は暗紫色に変化し、そして２時間の変換の後、完了した。この溶液を次の工程でそのまま用いた。
【0146】
工程２： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｒ）－３－ヒドロキシ－２－メチル－６－［［（１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（２－ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－２，４－ジヒドロ－１Ｈ－テトラセン－１－イル］オキシ］テトラヒドロピラン－４－イル］カルバモイルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸
前工程で調製した、５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｒ）－３－ヒドロキシ－２－メチル－６－［［（１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（２－ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－２，４－ジヒドロ－１Ｈ－テトラセン－１－イル］オキシ］テトラヒドロピラン－４－イル］カルバモイルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸の溶液に、ＤＥＡ（９６μL；０．９２６８mmol）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。溶媒を部分的に蒸発させて取り除き、粗生成物を、ＴＦＡ法を用いるX-Bridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に予定の化合物を与えた。IR (cm-1): 3357, 2661, 1666/1608, 1585/1531, 1201, 1082, 1020, 763/709. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 14.06 (s, 1H), 13.29 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 8.04 (m, 3H), 7.93 (d, 1H), 7.93 (t, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.66 (dd, 1H), 7.61 (dd, 1H), 7.26 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 5.99 (t, 1H), 5.49 (brs, 1H), 5.37 (m, 2H), 5.25 (brs, 1H), 4.97 (t, 1H), 4.79 (brm, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.46 (q, 1H), 4.18 (q, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.75 (m, 1H), 3.63 (m, 1H), 3.51 (brs, 1H), 2.99 (m, 2H), 2.99 (m, 2H), 2.16 (m, 2H), 2.07 (m, 1H), 1.87 (td, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.61 (m, 1H), 1.5 (dt, 1H), 1.45 (m, 1H), 1.37 (m, 1H), 1.14 (d, 3H), 0.93 (2d, 6H)
前工程で調製した、５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｒ）－３－ヒドロキシ－２－メチル－６－［［（１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（２－ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－２，４－ジヒドロ－１Ｈ－テトラセン－１－イル］オキシ］テトラヒドロピラン－４－イル］カルバモイルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸の溶液に、ＤＥＡ（９６μL；０．９２６８mmol）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。溶媒を部分的に蒸発させて取り除き、粗生成物を、ＴＦＡ法を用いるX-Bridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に予定の化合物を与えた。IR (cm-1): 3357, 2661, 1666/1608, 1585/1531, 1201, 1082, 1020, 763/709. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 14.06 (s, 1H), 13.29 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 8.04 (m, 3H), 7.93 (d, 1H), 7.93 (t, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.66 (dd, 1H), 7.61 (dd, 1H), 7.26 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 5.99 (t, 1H), 5.49 (brs, 1H), 5.37 (m, 2H), 5.25 (brs, 1H), 4.97 (t, 1H), 4.79 (brm, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.46 (q, 1H), 4.18 (q, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.75 (m, 1H), 3.63 (m, 1H), 3.51 (brs, 1H), 2.99 (m, 2H), 2.99 (m, 2H), 2.16 (m, 2H), 2.07 (m, 1H), 1.87 (td, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.61 (m, 1H), 1.5 (dt, 1H), 1.45 (m, 1H), 1.37 (m, 1H), 1.14 (d, 3H), 0.93 (2d, 6H)
【0147】
工程３： 実施例２５
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｒ）－３－ヒドロキシ－２－メチル－６－［［（１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（２－ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－２，４－ジヒドロ－１Ｈ－テトラセン－１－イル］オキシ］テトラヒドロピラン－４－イル］カルバモイルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸（５mg；４．７μmol）のＤＭＦ（１mL）溶液に、ＤＩＥＡ（１．６μL；５．２μmmol）及び（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノアート（１．６mg；５．２μmol）を加えた。溶液を室温で１２時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２５を与えた。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1222.4153 (δ = 1.7 ppm)
５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｒ）－３－ヒドロキシ－２－メチル－６－［［（１Ｓ，３Ｓ）－３，５，１２－トリヒドロキシ－３－（２－ヒドロキシアセチル）－１０－メトキシ－６，１１－ジオキソ－２，４－ジヒドロ－１Ｈ－テトラセン－１－イル］オキシ］テトラヒドロピラン－４－イル］カルバモイルオキシメチル］ベンゼンスルホン酸（５mg；４．７μmol）のＤＭＦ（１mL）溶液に、ＤＩＥＡ（１．６μL；５．２μmmol）及び（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノアート（１．６mg；５．２μmol）を加えた。溶液を室温で１２時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるXbridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２５を与えた。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1222.4153 (δ = 1.7 ppm)
【0148】
実施例２６： ナトリウム Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（２－スルホナトエチル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド
工程１： （２－アリル－４－ニトロ－フェニル）メトキシ－tert－ブチル－ジメチル－シラン
tert－ブチル－［（２－ヨード－４－ニトロ－フェニル）メトキシ］－ジメチル－シラン（６．５６ｇ；１６．６８mmol）及びアリルトリブチルスズ（７．７６mL；２５．０２mmol）の１，４－ジオキサン（１６５mL）溶液を、アルゴン（３回）でパージした。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．９３ｇ；１．６７mmol）を加え、混合物をアルゴン（３回）で再びパージし、そして１００℃で１８時間撹拌した。反応混合物をCelite（登録商標）で濾過し、濃縮乾固した。残留物をＤＣＭ（１５０mL）に溶解し、１M 水酸化ナトリウム(sodium hydroxyde)水溶液で洗浄した。水層をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。得られた粗生成物を、溶離剤としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１０／０～９５／５）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物（４．９１ｇ；１５．９７mmol）を橙色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.11 (s, 6H), 0.92 (s, 9H), 3.49 (d, 2H, J = 6.5 Hz), 4.84 (s, 2H), 5.04-5.15 (m, 2H), 5.92-6.02 (m, 1H), 7.69 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 8.02 (d, 1H, J = 2.5 Hz), 8.13 (dd, 1H, J = 2.5 及び 8.5 Hz)
【化72】
工程１： （２－アリル－４－ニトロ－フェニル）メトキシ－tert－ブチル－ジメチル－シラン
tert－ブチル－［（２－ヨード－４－ニトロ－フェニル）メトキシ］－ジメチル－シラン（６．５６ｇ；１６．６８mmol）及びアリルトリブチルスズ（７．７６mL；２５．０２mmol）の１，４－ジオキサン（１６５mL）溶液を、アルゴン（３回）でパージした。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．９３ｇ；１．６７mmol）を加え、混合物をアルゴン（３回）で再びパージし、そして１００℃で１８時間撹拌した。反応混合物をCelite（登録商標）で濾過し、濃縮乾固した。残留物をＤＣＭ（１５０mL）に溶解し、１M 水酸化ナトリウム(sodium hydroxyde)水溶液で洗浄した。水層をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。得られた粗生成物を、溶離剤としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１０／０～９５／５）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物（４．９１ｇ；１５．９７mmol）を橙色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.11 (s, 6H), 0.92 (s, 9H), 3.49 (d, 2H, J = 6.5 Hz), 4.84 (s, 2H), 5.04-5.15 (m, 2H), 5.92-6.02 (m, 1H), 7.69 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 8.02 (d, 1H, J = 2.5 Hz), 8.13 (dd, 1H, J = 2.5 及び 8.5 Hz)
【0149】
工程２： ３－［２－［［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－５－ニトロ－フェニル］プロパン－１，２－ジオール
（２－アリル－４－ニトロ－フェニル）メトキシ－tert－ブチル－ジメチル－シラン（４．９１ｇ；１５．９７mmol）の、アセトン（１４７mL）と水（２０mL）の混合物溶液に、４－メチルモルホリン Ｎ－オキシド（３．７４ｇ；３１．９４mmol）及びオスミウム酸（VI）カリウム二水和物（０．２９ｇ；０．８mmol）を加え、混合物を室温で２０時間撹拌した。反応混合物を飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（４０mL）及び水（４０mL）でクエンチし、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。得られた粗生成物を、溶離剤としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１０／０～５／５）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物（４．６５ｇ；１３．６２mmol）を黄色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ0.11 (s, 6H), 0.93 (s, 9H), 2.58 (dd, 1H, J = 8.8 及び 14.2 Hz), 2.9 (dd, 1H, J = 3.5 及び 14.2 Hz), 3.26-3.30 (m, 1H), 3.36-3.41 (m, 1H), 3.61-3.68 (m, 1H), 4.7 (t, 1H, J = 5.7 Hz), 4.75 (d, 1H, J = 5.4 Hz), 4.84-4.93 (m, 2H), 7.65-7.67 (m, 1H), 8.08-8.11 (m, 2H)
（２－アリル－４－ニトロ－フェニル）メトキシ－tert－ブチル－ジメチル－シラン（４．９１ｇ；１５．９７mmol）の、アセトン（１４７mL）と水（２０mL）の混合物溶液に、４－メチルモルホリン Ｎ－オキシド（３．７４ｇ；３１．９４mmol）及びオスミウム酸（VI）カリウム二水和物（０．２９ｇ；０．８mmol）を加え、混合物を室温で２０時間撹拌した。反応混合物を飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（４０mL）及び水（４０mL）でクエンチし、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。得られた粗生成物を、溶離剤としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１０／０～５／５）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物（４．６５ｇ；１３．６２mmol）を黄色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ0.11 (s, 6H), 0.93 (s, 9H), 2.58 (dd, 1H, J = 8.8 及び 14.2 Hz), 2.9 (dd, 1H, J = 3.5 及び 14.2 Hz), 3.26-3.30 (m, 1H), 3.36-3.41 (m, 1H), 3.61-3.68 (m, 1H), 4.7 (t, 1H, J = 5.7 Hz), 4.75 (d, 1H, J = 5.4 Hz), 4.84-4.93 (m, 2H), 7.65-7.67 (m, 1H), 8.08-8.11 (m, 2H)
【0150】
工程３： ２－［２－［［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－５－ニトロ－フェニル］アセトアルデヒド
３－［２－［［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－５－ニトロ－フェニル］プロパン－１，２－ジオール（３．０５ｇ；８．２２mmol）の、水（１８mL）とＴＨＦ（５１mL）の混合物溶液に、０℃で、過ヨウ素酸ナトリウム（５．２７ｇ；２４．６５mmol）を少量ずつ加えた。反応混合物を０℃～１０℃で２時間撹拌し、次に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（５０mL）及び水（５０mL）でクエンチした。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、３０℃で濃縮乾固して、予定の化合物（２．６１ｇ；８．２２mmol）を黄色の油状物として与え、次の工程にそのまま用いた。1H NMR (DMSO): δ0.08 (s, 6H), 0.90 (s, 9H), 4.04 (s, 2H), 4.72 (s, 2H), 7.7 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.13 (d, 1H, J = 2.5 Hz), 8.18 (dd, 1H, J = 2.4 及び 8.5 Hz), 9.69 (s, 1H)
３－［２－［［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－５－ニトロ－フェニル］プロパン－１，２－ジオール（３．０５ｇ；８．２２mmol）の、水（１８mL）とＴＨＦ（５１mL）の混合物溶液に、０℃で、過ヨウ素酸ナトリウム（５．２７ｇ；２４．６５mmol）を少量ずつ加えた。反応混合物を０℃～１０℃で２時間撹拌し、次に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（５０mL）及び水（５０mL）でクエンチした。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、３０℃で濃縮乾固して、予定の化合物（２．６１ｇ；８．２２mmol）を黄色の油状物として与え、次の工程にそのまま用いた。1H NMR (DMSO): δ0.08 (s, 6H), 0.90 (s, 9H), 4.04 (s, 2H), 4.72 (s, 2H), 7.7 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.13 (d, 1H, J = 2.5 Hz), 8.18 (dd, 1H, J = 2.4 及び 8.5 Hz), 9.69 (s, 1H)
【0151】
工程４： ２－［２－［［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－５－ニトロ－フェニル］エタノール
２－［２－［［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－５－ニトロ－フェニル］アセトアルデヒド（２．６１ｇ；）のＭｅＯＨ（４０mL）溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（０．４７ｇ；１２．３３mmol）を０℃で加えた。反応混合物を室温に温め、１時間撹拌し、次にブライン（２５mL）及び水（２５mL）の添加によりクエンチした。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、次に合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。得られた粗生成物を、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１０／０～６／４）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物（１．３６ｇ；４．３６mmol）を黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ0.11 (s, 6H), 0.92 (s, 9H), 2.82 (t, 2H, J = 6.4 Hz), 3.67 (q, 2H, J = 5.9 Hz), 4.74 (t, 1H, J = 5.1 Hz), 4.87 (d, 2H), 7.66 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 8.08-8.11 (m, 2H)
２－［２－［［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－５－ニトロ－フェニル］アセトアルデヒド（２．６１ｇ；）のＭｅＯＨ（４０mL）溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（０．４７ｇ；１２．３３mmol）を０℃で加えた。反応混合物を室温に温め、１時間撹拌し、次にブライン（２５mL）及び水（２５mL）の添加によりクエンチした。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、次に合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。得られた粗生成物を、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１０／０～６／４）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物（１．３６ｇ；４．３６mmol）を黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ0.11 (s, 6H), 0.92 (s, 9H), 2.82 (t, 2H, J = 6.4 Hz), 3.67 (q, 2H, J = 5.9 Hz), 4.74 (t, 1H, J = 5.1 Hz), 4.87 (d, 2H), 7.66 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 8.08-8.11 (m, 2H)
【0152】
工程５： ［２－（２－ブロモエチル）－４－ニトロ－フェニル］メトキシ－tert－ブチル－ジメチル－シラン
２－［２－［［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－５－ニトロ－フェニル］エタノール（１．２６ｇ；４．０５mmol）のＴＨＦ（２５mL）溶液に、０℃で、ＴＥＡ（１．１２mL；８．０９mmol）及び塩化メシル（０．４７mL；６．０７mmol）を加えた。反応混合物を室温までゆっくりと放温し、５時間撹拌し、次に濾過し、そしてＴＨＦですすいだ。臭化リチウム（１．７６ｇ；２０．２３mmol）のＴＨＦ（２５mL）溶液に、濾液を０℃で加えた。反応混合物を室温までゆっくりと放温し、４日間撹拌し、次に飽和塩化アンモニウム水溶液（５０mL）でクエンチした。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、予定の化合物（１．３８ｇ；４．０３mmol）を黄色の油状物として与え、次の工程にそのまま用いた。1H NMR (DMSO): δ 0.12 (s, 6H), 0.92 (s, 9H), 3.27 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.81 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 4.87 (s, 2H), 7.68 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.13-8.16 (m, 1H), 8.18-8.19 (m, 1H)
２－［２－［［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－５－ニトロ－フェニル］エタノール（１．２６ｇ；４．０５mmol）のＴＨＦ（２５mL）溶液に、０℃で、ＴＥＡ（１．１２mL；８．０９mmol）及び塩化メシル（０．４７mL；６．０７mmol）を加えた。反応混合物を室温までゆっくりと放温し、５時間撹拌し、次に濾過し、そしてＴＨＦですすいだ。臭化リチウム（１．７６ｇ；２０．２３mmol）のＴＨＦ（２５mL）溶液に、濾液を０℃で加えた。反応混合物を室温までゆっくりと放温し、４日間撹拌し、次に飽和塩化アンモニウム水溶液（５０mL）でクエンチした。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、予定の化合物（１．３８ｇ；４．０３mmol）を黄色の油状物として与え、次の工程にそのまま用いた。1H NMR (DMSO): δ 0.12 (s, 6H), 0.92 (s, 9H), 3.27 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.81 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 4.87 (s, 2H), 7.68 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.13-8.16 (m, 1H), 8.18-8.19 (m, 1H)
【0153】
工程６： ［２－（２－ブロモエチル）－４－ニトロ－フェニル］メタノール
［２－（２－ブロモエチル）－４－ニトロ－フェニル］メトキシ－tert－ブチル－ジメチル－シラン（１．３８ｇ）の、ＴＨＦ（２８mL）及び水（１４mL）の溶液に、０℃で酢酸（４２mL；７３７．２８mmol）を加えた。反応混合物を室温までゆっくりと放温し、４日間撹拌し、次に水（１００mL）で希釈した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。得られた粗生成物を、溶離剤としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１０／０～６／４）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物（０．７３ｇ；２．８１mmol）をベージュ色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 3.27 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.8 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 4.67 (s, 2H), 5.51 (brs, 1H), 7.7 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.11-8.14 (m, 1H), 8.15-8.16 (m, 1H)
［２－（２－ブロモエチル）－４－ニトロ－フェニル］メトキシ－tert－ブチル－ジメチル－シラン（１．３８ｇ）の、ＴＨＦ（２８mL）及び水（１４mL）の溶液に、０℃で酢酸（４２mL；７３７．２８mmol）を加えた。反応混合物を室温までゆっくりと放温し、４日間撹拌し、次に水（１００mL）で希釈した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。得られた粗生成物を、溶離剤としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１０／０～６／４）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物（０．７３ｇ；２．８１mmol）をベージュ色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 3.27 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.8 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 4.67 (s, 2H), 5.51 (brs, 1H), 7.7 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.11-8.14 (m, 1H), 8.15-8.16 (m, 1H)
【0154】
工程７： ２－［２－（ヒドロキシメチル）－５－ニトロ－フェニル］エチルスルホニルオキシナトリウム(ethylsulfonyloxysodium)
［２－（２－ブロモエチル）－４－ニトロ－フェニル］メタノール（１８８mg；０．７２mmol）のＥｔＯＨ（７５０μL）溶液に、亜硫酸ナトリウム（２７３mg；２．１７mmol）の水（１．１mL）溶液及びヨウ化テトラブチルアンモニウム（１３mg；０．０３６mmol）を連続して加えた。反応混合物をマイクロ波照射下、７０℃で３５分間加熱した。反応混合物を水（２０mL）で希釈し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。水層を濃縮乾固し、得られた粗生成物を、溶離剤としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／０～６／４）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー、次に溶離剤としてＡＣＮ／水（２／９８～３４／６６）を用いるＣ１８でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物（８０mg；０．２８mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 2.66-2.70 (m, 2H), 2.94-2.98 (m, 2H), 4.64 (d, 2H, J = 5.3 Hz), 5.47 (t, 1H, J = 5.3 Hz), 7.68 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 7.99 (d, 1H, J = 2.3 Hz), 8.06 (dd, 1H, J = 2.4 及び 8.4 Hz)
［２－（２－ブロモエチル）－４－ニトロ－フェニル］メタノール（１８８mg；０．７２mmol）のＥｔＯＨ（７５０μL）溶液に、亜硫酸ナトリウム（２７３mg；２．１７mmol）の水（１．１mL）溶液及びヨウ化テトラブチルアンモニウム（１３mg；０．０３６mmol）を連続して加えた。反応混合物をマイクロ波照射下、７０℃で３５分間加熱した。反応混合物を水（２０mL）で希釈し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。水層を濃縮乾固し、得られた粗生成物を、溶離剤としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／０～６／４）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー、次に溶離剤としてＡＣＮ／水（２／９８～３４／６６）を用いるＣ１８でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物（８０mg；０．２８mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 2.66-2.70 (m, 2H), 2.94-2.98 (m, 2H), 4.64 (d, 2H, J = 5.3 Hz), 5.47 (t, 1H, J = 5.3 Hz), 7.68 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 7.99 (d, 1H, J = 2.3 Hz), 8.06 (dd, 1H, J = 2.4 及び 8.4 Hz)
【0155】
工程８： ２－［５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］エチルスルホニルオキシナトリウム
［２－（２－ブロモエチル）－４－ニトロ－フェニル］メタノール（２９３mg；１．０３mmol）の、ＭｅＯＨ（１１mL）及び水（２mL）の溶液に、アルゴン下でＰｄ／Ｃ １０％（５５mg；０．０５２mmol）を加えた。反応混合物を水素でパージし、水素大気圧下、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を４０μmのＰＴＦＥフィルターで濾過し、ＭｅＯＨ／水（１／１）の混合物ですすぎ、濃縮乾固して、予定の化合物（２７４mg；１．０３mmol）を黄色の固体として与え、次の工程にそのまま用いた。1H NMR (DMSO): δ 2.55-2.59 (m, 2H), 2.75-2.79 (m, 2H), 4.32 (d, 2H, J = 5.3 Hz), 5.66 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 4.86 (brs, 2H), 6.33-6.35 (m, 2H), 6.93 (d, 1H, J = 7.8 Hz)
［２－（２－ブロモエチル）－４－ニトロ－フェニル］メタノール（２９３mg；１．０３mmol）の、ＭｅＯＨ（１１mL）及び水（２mL）の溶液に、アルゴン下でＰｄ／Ｃ １０％（５５mg；０．０５２mmol）を加えた。反応混合物を水素でパージし、水素大気圧下、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を４０μmのＰＴＦＥフィルターで濾過し、ＭｅＯＨ／水（１／１）の混合物ですすぎ、濃縮乾固して、予定の化合物（２７４mg；１．０３mmol）を黄色の固体として与え、次の工程にそのまま用いた。1H NMR (DMSO): δ 2.55-2.59 (m, 2H), 2.75-2.79 (m, 2H), 4.32 (d, 2H, J = 5.3 Hz), 5.66 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 4.86 (brs, 2H), 6.33-6.35 (m, 2H), 6.93 (d, 1H, J = 7.8 Hz)
【0156】
工程９： 実施例２６
２－［５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］エチルスルホニルオキシナトリウム（３０４mg；１．１５mmol）のＤＭＦ（６mL）溶液に、（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタン酸（４７４mg；０．９６mmol）、ＨＡＴＵ（４７２mg；１．２４mmol）及び炭酸水素ナトリウム（１６０mg；１．９１mmol）を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、水（５０mL）で希釈し、そしてＥｔＯＡｃで洗浄した。水層を濃縮乾固し、溶離剤としてＡＣＮ／水＋ＴＦＡ（０．１％）（２／９８～５０／５０）を用いるＣ１８でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、凍結乾燥の後に、実施例２６（８３mg；０．１１mmol）を微黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.84-0.88 (m, 6H), 1.32-1.49 (m, 2H), 1.54-1.74 (m, 2H), 1.94-2.04 (m, 1H), 2.58-2.62 (m, 2H), 2.83-2.87 (m, 2H), 2.90-3.05 (m, 2H), 3.93 (t, 1H, J = 8 Hz), 4.23-4.34 (m, 3H), 4.37-4.43 (m, 1H), 4.45 (s, 2H), 5.34 (brs, 2H), 5.98 (brs, 1H), 7.25 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 7.30-7.34 (m, 2H), 7.39-7.44 (m, 4H), 7.74 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.5 Hz), 8.08 (d, 1H, J = 7.5 Hz), 9.90 (s, 1H). LCMS (2-100 ACN/H2O + 0.1% TFA): 76.60% 保持時間＝8.1分 陰モード 708.45 検出 (M-H)
２－［５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）フェニル］エチルスルホニルオキシナトリウム（３０４mg；１．１５mmol）のＤＭＦ（６mL）溶液に、（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタン酸（４７４mg；０．９６mmol）、ＨＡＴＵ（４７２mg；１．２４mmol）及び炭酸水素ナトリウム（１６０mg；１．９１mmol）を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、水（５０mL）で希釈し、そしてＥｔＯＡｃで洗浄した。水層を濃縮乾固し、溶離剤としてＡＣＮ／水＋ＴＦＡ（０．１％）（２／９８～５０／５０）を用いるＣ１８でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、凍結乾燥の後に、実施例２６（８３mg；０．１１mmol）を微黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.84-0.88 (m, 6H), 1.32-1.49 (m, 2H), 1.54-1.74 (m, 2H), 1.94-2.04 (m, 1H), 2.58-2.62 (m, 2H), 2.83-2.87 (m, 2H), 2.90-3.05 (m, 2H), 3.93 (t, 1H, J = 8 Hz), 4.23-4.34 (m, 3H), 4.37-4.43 (m, 1H), 4.45 (s, 2H), 5.34 (brs, 2H), 5.98 (brs, 1H), 7.25 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 7.30-7.34 (m, 2H), 7.39-7.44 (m, 4H), 7.74 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.5 Hz), 8.08 (d, 1H, J = 7.5 Hz), 9.90 (s, 1H). LCMS (2-100 ACN/H2O + 0.1% TFA): 76.60% 保持時間＝8.1分 陰モード 708.45 検出 (M-H)
【0157】
実施例２７： Ｎ－｛３－［２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エトキシ］プロパノイル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－｛４－［（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）－１１－［（２Ｓ）－ブタン－２－イル］－１２－（２－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ，２Ｒ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－２－オキソエチル）－４，１０－ジメチル－３，６，９－トリオキソ－５，８－ジ（プロパン－２－イル）－２，１３－ジオキサ－４，７，１０－トリアザテトラデカン－１－イル］－３－（２－スルホエチル）フェニル｝－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド
工程１： ２－［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］フェニル］エタンスルホン酸
実施例２６（３２mg、０．０４３６mmol）のＤＭＦ（０．５mL）溶液に、ビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（５３．１mg；０．１７４７mmol）及びＤＩＥＡ（９１μL；０．５２４０mmol）を加えた。溶液を室温で４時間撹拌した。真空下で蒸発乾固した後、粗生成物をシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物をもたらした。
【化73】
工程１： ２－［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］フェニル］エタンスルホン酸
実施例２６（３２mg、０．０４３６mmol）のＤＭＦ（０．５mL）溶液に、ビス（４－ニトロフェニル）カルボナート（５３．１mg；０．１７４７mmol）及びＤＩＥＡ（９１μL；０．５２４０mmol）を加えた。溶液を室温で４時間撹拌した。真空下で蒸発乾固した後、粗生成物をシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、予定の化合物をもたらした。
【0158】
工程２： ２－［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］エタンスルホン酸
ＭＭＡＥ（１７mg、０．０２３６８mmol）のＤＭＦ（６mL）溶液に、２－［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］フェニル］エタンスルホン酸（４１．４mg；０．０４７３mmol）、ＤＩＥＡ（２０μL；０．１１８４mmol）及びＨＯＢｔ（６．４mg；０．０４７mmol）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌し、この溶液を次の工程にそのまま取り込ませた(engaged)。
ＭＭＡＥ（１７mg、０．０２３６８mmol）のＤＭＦ（６mL）溶液に、２－［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］フェニル］エタンスルホン酸（４１．４mg；０．０４７３mmol）、ＤＩＥＡ（２０μL；０．１１８４mmol）及びＨＯＢｔ（６．４mg；０．０４７mmol）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌し、この溶液を次の工程にそのまま取り込ませた(engaged)。
【0159】
工程３： ２－［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］エタンスルホン酸、ＴＦＡ
２－［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］エタンスルホン酸の溶液に、ＤＥＡ（２４μL；０．２３３８mmol）を加え、溶液を室温で１．５時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるＣＳＨ（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に予定の化合物を与えた。
２－［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］エタンスルホン酸の溶液に、ＤＥＡ（２４μL；０．２３３８mmol）を加え、溶液を室温で１．５時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるＣＳＨ（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に予定の化合物を与えた。
【0160】
工程４： 実施例２７
２－［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］エタンスルホン酸、ＴＦＡ（９．５mg；７．１mmol）のＤＭＦ（０．２mL）溶液に、ＤＩＥＡ（２．５μL；０．０１４mmol）を加え、続いて（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノアート（２．４mg；７．８μmol）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるＣＳＨ（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に実施例２７を与えた。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1426.7443 (δ = -6.7 ppm)
２－［５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］フェニル］エタンスルホン酸、ＴＦＡ（９．５mg；７．１mmol）のＤＭＦ（０．２mL）溶液に、ＤＩＥＡ（２．５μL；０．０１４mmol）を加え、続いて（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）３－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エトキシ］プロパノアート（２．４mg；７．８μmol）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるＣＳＨ（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に実施例２７を与えた。HRMS (ESI) [M+H]+ 実測値 = 1426.7443 (δ = -6.7 ppm)
【0161】
実施例２８： ５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－［６－（３，４－ジブロモ－２，５－ジオキソ－ピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸
６－（３，４－ジブロモ－２，５－ジオキソ－ピロール－１－イル）ヘキサン酸のＤＭＦ（０．２mL）溶液に、粉末のＨＡＴＵ（１１．３mg；２９．８μmol）を加えた。反応物を室温で１０分間撹拌し、ルチジン（６．３μL；５４．２mmol）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌した。次に、５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸（１０mg；８．３μmol；実施例６の工程２から得た）を加え、反応物を室温で１５時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるX-Bridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に予定の化合物を与えた。HRMS (ESI) [M+H]+実測値 = 1552.5595 (δ = -2.5 ppm)
【化74】
６－（３，４－ジブロモ－２，５－ジオキソ－ピロール－１－イル）ヘキサン酸のＤＭＦ（０．２mL）溶液に、粉末のＨＡＴＵ（１１．３mg；２９．８μmol）を加えた。反応物を室温で１０分間撹拌し、ルチジン（６．３μL；５４．２mmol）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌した。次に、５－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノイル］アミノ］－５－ウレイド－ペンタノイル］アミノ］－２－［［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニル－エチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－プロピル］ピロリジン－１－イル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソ－ブチル］－メチル－カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］－メチル－カルバモイル］オキシメチル］ベンゼンスルホン酸（１０mg；８．３μmol；実施例６の工程２から得た）を加え、反応物を室温で１５時間撹拌した。反応物を、ＴＦＡ法を用いるX-Bridge（登録商標）カラムのＣ１８逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥後に予定の化合物を与えた。HRMS (ESI) [M+H]+実測値 = 1552.5595 (δ = -2.5 ppm)
【0162】
実施例３４： Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（３－スルホプロピル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド
工程１： ２－ヨード－４－ニトロ安息香酸
２－アミノ－４－ニトロ安息香酸（１０．０ｇ；５４．９mmol）のＡＣＮ（２８０mL）溶液に、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（３２．０ｇ；１６８mmol）を加えた。混合物を室温で１５分間撹拌し、次に亜硝酸ナトリウム（８．００ｇ；１１５．９mmol）及びヨウ化カリウム（２４．０ｇ；１４４．６mmol）の水（１４０mL）溶液を、１５分で滴下した。反応混合物を１９時間撹拌した。反応の完了後、混合物をチオ硫酸ナトリウム（１３．０２ｇ；８２．３６mmol）でクエンチし、そして３N 塩化水素水溶液（２５mL）で酸性化した。水層をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層を１N 塩化水素水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、標記化合物（１５．０ｇ；５１．２mmol）を橙色の粉末として与えた。1H NMR (DMSO): 7.86 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.27 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.64 (s, 1H), 13.8 (brs, 1H)
【化75】
工程１： ２－ヨード－４－ニトロ安息香酸
２－アミノ－４－ニトロ安息香酸（１０．０ｇ；５４．９mmol）のＡＣＮ（２８０mL）溶液に、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（３２．０ｇ；１６８mmol）を加えた。混合物を室温で１５分間撹拌し、次に亜硝酸ナトリウム（８．００ｇ；１１５．９mmol）及びヨウ化カリウム（２４．０ｇ；１４４．６mmol）の水（１４０mL）溶液を、１５分で滴下した。反応混合物を１９時間撹拌した。反応の完了後、混合物をチオ硫酸ナトリウム（１３．０２ｇ；８２．３６mmol）でクエンチし、そして３N 塩化水素水溶液（２５mL）で酸性化した。水層をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層を１N 塩化水素水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、標記化合物（１５．０ｇ；５１．２mmol）を橙色の粉末として与えた。1H NMR (DMSO): 7.86 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.27 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.64 (s, 1H), 13.8 (brs, 1H)
【0163】
工程２： （２－ヨード－４－ニトロフェニル）メタノール
２－ヨード－４－ニトロ安息香酸（５．００ｇ；１７．１mmol）のＴＨＦ（７０mL）溶液に、ボランの１N ＴＨＦ溶液（８５mL；８５．０mmol）を加えた。反応混合物を６５℃で４時間撹拌した。反応の完了後、反応混合物を室温に冷やし、ＭｅＯＨ（２００mL）でクエンチした。混合物を室温で３０分間撹拌し、次に濃縮乾固した。得られた残留物を、溶離剤としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（８０／２０～５０／５０）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（３．３８ｇ；１２．１mmol）を黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ4.47 (d, 2H, J = 5.2 Hz), 5.82 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 7.70 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.29 (dd, 1H, J = 8.8 及び2.0 Hz), 8.54 (d, 1H, J = 2.0 Hz)
２－ヨード－４－ニトロ安息香酸（５．００ｇ；１７．１mmol）のＴＨＦ（７０mL）溶液に、ボランの１N ＴＨＦ溶液（８５mL；８５．０mmol）を加えた。反応混合物を６５℃で４時間撹拌した。反応の完了後、反応混合物を室温に冷やし、ＭｅＯＨ（２００mL）でクエンチした。混合物を室温で３０分間撹拌し、次に濃縮乾固した。得られた残留物を、溶離剤としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（８０／２０～５０／５０）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（３．３８ｇ；１２．１mmol）を黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ4.47 (d, 2H, J = 5.2 Hz), 5.82 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 7.70 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.29 (dd, 1H, J = 8.8 及び2.0 Hz), 8.54 (d, 1H, J = 2.0 Hz)
【0164】
工程３： （４－アミノ－２－ヨードフェニル）メタノール
（２－ヨード－４－ニトロフェニル）メタノール（３．７０ｇ；１３．３mmol）の、ＥｔＯＨ（１００mL）及び水（２５mL）の溶液に、鉄（３．７０ｇ；６６．３mmol）及び塩化アンモニウム（８００mg；１５．０mmol）を連続して加えた。反応混合物を８０℃で３時間撹拌した。反応の完了後、反応混合物をCelite（登録商標）で濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、そして濃縮乾固した。得られた残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、標記化合物（２．４８ｇ；９．９５mmol）を黄色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ 4.28 (d, 2H, J = 5.2 Hz), 4.97 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 5.16 (s, 2H), 6.57 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.02-7.10 (m, 2H)
（２－ヨード－４－ニトロフェニル）メタノール（３．７０ｇ；１３．３mmol）の、ＥｔＯＨ（１００mL）及び水（２５mL）の溶液に、鉄（３．７０ｇ；６６．３mmol）及び塩化アンモニウム（８００mg；１５．０mmol）を連続して加えた。反応混合物を８０℃で３時間撹拌した。反応の完了後、反応混合物をCelite（登録商標）で濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、そして濃縮乾固した。得られた残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、標記化合物（２．４８ｇ；９．９５mmol）を黄色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ 4.28 (d, 2H, J = 5.2 Hz), 4.97 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 5.16 (s, 2H), 6.57 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.02-7.10 (m, 2H)
【0165】
工程４： ４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードアニリン
（４－アミノ－２－ヨードフェニル）メタノール（３．５１ｇ；１３．４mmol）のＤＣＭ（１５０mL）溶液に、イミダゾール（０．９５ｇ；１４．０mmol）を加えた。混合物を０℃に冷却し、次にtert－ブチルクロロジメチルシラン（２．４０mL；１３．８５mmol）のＤＣＭ（１５０mL）溶液を、１５分間かけて滴下した。氷浴を取り外し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応の完了後、反応混合物をＭｅＯＨ（２０mL）でクエンチし、そして濃縮乾固した。得られた残留物を、溶離剤としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１００／０～９０／１０）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（３．６４ｇ；１０．０mmol）を黄色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.06 (s, 6H), 0.88 (s, 9H), 4.46 (s, 2H), 5.24 (s, 2H), 6.55 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.03 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.05 (s, 1H)
（４－アミノ－２－ヨードフェニル）メタノール（３．５１ｇ；１３．４mmol）のＤＣＭ（１５０mL）溶液に、イミダゾール（０．９５ｇ；１４．０mmol）を加えた。混合物を０℃に冷却し、次にtert－ブチルクロロジメチルシラン（２．４０mL；１３．８５mmol）のＤＣＭ（１５０mL）溶液を、１５分間かけて滴下した。氷浴を取り外し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応の完了後、反応混合物をＭｅＯＨ（２０mL）でクエンチし、そして濃縮乾固した。得られた残留物を、溶離剤としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１００／０～９０／１０）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（３．６４ｇ；１０．０mmol）を黄色の油状物として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.06 (s, 6H), 0.88 (s, 9H), 4.46 (s, 2H), 5.24 (s, 2H), 6.55 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.03 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.05 (s, 1H)
【0166】
工程５： Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードフェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ２－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－オルニチンアミド
４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードアニリン（１０．０ｇ；２７．５mmol）の、ＭｅＯＨ（７０mL）及びＤＣＭ（１４０mL）の溶液に、Ｆｍｏｃ－Ｃｉｔ－ＯＨ（１２．０ｇ；３０．２８mmol）及びＥＥＤＱ（８．１７ｇ；３３．０mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１４時間撹拌した。反応の完了後、得られた残留物を、溶離剤としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００／０～８８／１２）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（１７．０９ｇ；２２．０mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.09 (s, 6H), 0.91 (s, 9H), 1.38-1.48 (m, 2H), 1.59-1.68 (m, 2H), 2.93-3.05 (m, 2H), 4.06-4.15 (m, 1H), 4.20-4.29 (m, 3H), 4.56 (s, 2H), 5.41 (s, 2H), 5.98 (t, 1H, J = 5.5 Hz), 7.30-7.43 (m, 5H), 7.55 (dd, 1H, J = 8.8 及び2.1 Hz), 7.69 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.74 (dd, 2H, J = 7.2 及び 3.4 Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.5 Hz), 8.25 (d, 1H, J = 1.5 Hz), 10.12 (s, 1H)
４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードアニリン（１０．０ｇ；２７．５mmol）の、ＭｅＯＨ（７０mL）及びＤＣＭ（１４０mL）の溶液に、Ｆｍｏｃ－Ｃｉｔ－ＯＨ（１２．０ｇ；３０．２８mmol）及びＥＥＤＱ（８．１７ｇ；３３．０mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１４時間撹拌した。反応の完了後、得られた残留物を、溶離剤としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００／０～８８／１２）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（１７．０９ｇ；２２．０mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.09 (s, 6H), 0.91 (s, 9H), 1.38-1.48 (m, 2H), 1.59-1.68 (m, 2H), 2.93-3.05 (m, 2H), 4.06-4.15 (m, 1H), 4.20-4.29 (m, 3H), 4.56 (s, 2H), 5.41 (s, 2H), 5.98 (t, 1H, J = 5.5 Hz), 7.30-7.43 (m, 5H), 7.55 (dd, 1H, J = 8.8 及び2.1 Hz), 7.69 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.74 (dd, 2H, J = 7.2 及び 3.4 Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.5 Hz), 8.25 (d, 1H, J = 1.5 Hz), 10.12 (s, 1H)
【0167】
工程６： Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードフェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド
Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードフェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ２－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－オルニチンアミド（１７．１ｇ；２３．０mmol）のＴＨＦ（１２０mL）溶液に、ジメチルアミンの２M ＴＨＦ溶液（４４．５mL；８９．０mmol）を加えた。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。濃縮乾固した後、得られた残留物を、溶離剤として水／ＡＣＮ（９８／０２～０／１００）を用いるＣ１８のカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（５．４７ｇ；１０．５mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.0 (s, 6H), 0.81 (s, 9H), 1.27-1.38 (m, 3H), 1.47-1.53 (m, 1H), 2.83-2.89 (m, 2H), 3.16-3.19 (m, 1H), 4.46 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 5.82 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.24 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 7.50 (dd, 1H, J = 8.3 及び 2.0 Hz), 8.17 (d, 1H, J = 2.0 Hz)
Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードフェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ２－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－オルニチンアミド（１７．１ｇ；２３．０mmol）のＴＨＦ（１２０mL）溶液に、ジメチルアミンの２M ＴＨＦ溶液（４４．５mL；８９．０mmol）を加えた。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。濃縮乾固した後、得られた残留物を、溶離剤として水／ＡＣＮ（９８／０２～０／１００）を用いるＣ１８のカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物（５．４７ｇ；１０．５mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.0 (s, 6H), 0.81 (s, 9H), 1.27-1.38 (m, 3H), 1.47-1.53 (m, 1H), 2.83-2.89 (m, 2H), 3.16-3.19 (m, 1H), 4.46 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 5.82 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.24 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 7.50 (dd, 1H, J = 8.3 及び 2.0 Hz), 8.17 (d, 1H, J = 2.0 Hz)
【0168】
工程７： Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードフェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド
Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードフェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド（３．００ｇ；５．７６mmol）の２－メチルテトラヒドロフラン（２４０mL）溶液に、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＳｕ（８．６５ｇ；８．６５mmol）及びＤＩＰＥＡ（１．９０mL；１１．５mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。反応混合物を焼結漏斗で濾過し、回収した固体を２－メチルテトラヒドロフランで洗浄し、次に高真空下で乾燥して、標記化合物（３．５７ｇ；４．２４mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.10 (s, 6H), 0.83-0.95 (m, 15H), 1.27-1.52 (m, 2H), 1.52-1.75 (m, 2H), 1.93-2.07 (m, 1H), 2.88-3.09 (m, 2H), 3.93 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 4.17-4.49 (m, 4H), 4.56 (s, 2H), 5.40 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.27-7.37 (m, 3H), 7.37-7.48 (m, 3H), 7.54 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 7.74 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.88 (d, 2H, J = 7.6 Hz), 8.13 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 8.22 (s, 1H), 10.11 (s, 1H)
Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードフェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド（３．００ｇ；５．７６mmol）の２－メチルテトラヒドロフラン（２４０mL）溶液に、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＳｕ（８．６５ｇ；８．６５mmol）及びＤＩＰＥＡ（１．９０mL；１１．５mmol）を連続して加えた。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。反応混合物を焼結漏斗で濾過し、回収した固体を２－メチルテトラヒドロフランで洗浄し、次に高真空下で乾燥して、標記化合物（３．５７ｇ；４．２４mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO): δ 0.10 (s, 6H), 0.83-0.95 (m, 15H), 1.27-1.52 (m, 2H), 1.52-1.75 (m, 2H), 1.93-2.07 (m, 1H), 2.88-3.09 (m, 2H), 3.93 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 4.17-4.49 (m, 4H), 4.56 (s, 2H), 5.40 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.27-7.37 (m, 3H), 7.37-7.48 (m, 3H), 7.54 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 7.74 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.88 (d, 2H, J = 7.6 Hz), 8.13 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 8.22 (s, 1H), 10.11 (s, 1H)
【0169】
工程８： Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－（３－ヒドロキシプロパ－１－イン－１－イル）フェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド
Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードフェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド（４．０ｇ；４．５５mmol）及び２－プロピン－１－オール（０．５４mL；９．１０mmol）の乾燥ＤＭＦ（３６mL）溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．２６mL；１３．６６mmol；３．０当量）を加えた。反応混合物をアルゴンでパージし、次にビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）ジクロリド（０．６４ｇ；０．９１mmol）及びヨウ化銅（Ｉ）（０．１７ｇ；０．９１mmol）を加えた。反応混合物をアルゴンで再びパージし、室温で１６時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム溶液（８０mL）を加え、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。粗生成物を、溶離剤としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／０～８５／１５）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記生成物（２．７ｇ；３．５２mmol）を褐色の固体として与えた。1H NMR (DMSO-d6): 0.08 (s, 6H), 0.85-0.89 (m, 6H), 0.90 (s, 9H), 1.32-1.48 (m, 2H), 1.54-1.74 (m, 2H), 1.94-2.03 (m, 1H), 2.89-3.06 (m, 2H), 3.93 (dd, 1H, J = 7.0 及び 9.1 Hz), 4.22-4.33 (m, 5H), 4.36-4.41 (m, 1H), 4.74 (s, 2H), 5.35 (t, 1H, J = 5.9 Hz), 5.40 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 7.32 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 7.36-7.43 (m, 4H), 7.48 (dd, 1H, J = 2.3 及び 8.8 Hz), 7.74 (t, 2H, J = 7.7 Hz), 7.78 (s, 1H), 7.89 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 8.14 (d, 1H, J = 7.1 Hz), 10.09 (s, 1H)
Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－ヨードフェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド（４．０ｇ；４．５５mmol）及び２－プロピン－１－オール（０．５４mL；９．１０mmol）の乾燥ＤＭＦ（３６mL）溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．２６mL；１３．６６mmol；３．０当量）を加えた。反応混合物をアルゴンでパージし、次にビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）ジクロリド（０．６４ｇ；０．９１mmol）及びヨウ化銅（Ｉ）（０．１７ｇ；０．９１mmol）を加えた。反応混合物をアルゴンで再びパージし、室温で１６時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム溶液（８０mL）を加え、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。粗生成物を、溶離剤としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／０～８５／１５）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記生成物（２．７ｇ；３．５２mmol）を褐色の固体として与えた。1H NMR (DMSO-d6): 0.08 (s, 6H), 0.85-0.89 (m, 6H), 0.90 (s, 9H), 1.32-1.48 (m, 2H), 1.54-1.74 (m, 2H), 1.94-2.03 (m, 1H), 2.89-3.06 (m, 2H), 3.93 (dd, 1H, J = 7.0 及び 9.1 Hz), 4.22-4.33 (m, 5H), 4.36-4.41 (m, 1H), 4.74 (s, 2H), 5.35 (t, 1H, J = 5.9 Hz), 5.40 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 7.32 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 7.36-7.43 (m, 4H), 7.48 (dd, 1H, J = 2.3 及び 8.8 Hz), 7.74 (t, 2H, J = 7.7 Hz), 7.78 (s, 1H), 7.89 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 8.14 (d, 1H, J = 7.1 Hz), 10.09 (s, 1H)
【0170】
工程９： Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－｛３－［（メタンスルホニル）オキシ］プロパ－１－イン－１－イル｝フェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド
Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－（３－ヒドロキシプロパ－１－イン－１－イル）フェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド（１．０ｇ；１．３mmol）の乾燥ＤＭＦ（９mL）溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．６４mL；３．９mmol）及びメタンスルホニルクロリド（０．１５mL；１．９５mmol）を連続して０℃で加えた。反応混合物を室温までゆっくりと放温し、１時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム溶液（２５mL）を加え、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、標記生成物（１．１ｇ；１．３mmol）を橙色のガム状物として与え、次の工程にそのまま使用した。1H NMR (DMSO-d6): 0.08 (s, 6H), 0.84-0.89 (m, 6H), 0.90 (s, 9H), 1.32-1.49 (m, 2H), 1.54-1.74 (m, 2H), 1.94-2.03 (m, 1H), 2.91-3.05 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.93 (dd, 1H, J = 7.1 及び 9.0 Hz), 4.20-4.33 (m, 3H), 4.37-4.42 (m, 1H), 4.75 (s, 2H), 5.23 (s, 2H), 5.4 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 5.8 Hz), 7.32 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.39-7.43 (m, 4H), 7.56 (dd, 1H, J = 2.3 及び 8.8 Hz), 7.74 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 7.83 (d, 1H, J = 2.3 Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.3 Hz), 8.14 (d, 1H, J = 7.3 Hz), 10.15 (s, 1H)
Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－（３－ヒドロキシプロパ－１－イン－１－イル）フェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド（１．０ｇ；１．３mmol）の乾燥ＤＭＦ（９mL）溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．６４mL；３．９mmol）及びメタンスルホニルクロリド（０．１５mL；１．９５mmol）を連続して０℃で加えた。反応混合物を室温までゆっくりと放温し、１時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム溶液（２５mL）を加え、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、標記生成物（１．１ｇ；１．３mmol）を橙色のガム状物として与え、次の工程にそのまま使用した。1H NMR (DMSO-d6): 0.08 (s, 6H), 0.84-0.89 (m, 6H), 0.90 (s, 9H), 1.32-1.49 (m, 2H), 1.54-1.74 (m, 2H), 1.94-2.03 (m, 1H), 2.91-3.05 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.93 (dd, 1H, J = 7.1 及び 9.0 Hz), 4.20-4.33 (m, 3H), 4.37-4.42 (m, 1H), 4.75 (s, 2H), 5.23 (s, 2H), 5.4 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 5.8 Hz), 7.32 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.39-7.43 (m, 4H), 7.56 (dd, 1H, J = 2.3 及び 8.8 Hz), 7.74 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 7.83 (d, 1H, J = 2.3 Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.3 Hz), 8.14 (d, 1H, J = 7.3 Hz), 10.15 (s, 1H)
【0171】
工程１０： Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－｛３－［３－（アセチルスルファニル）プロパ－１－イン－１－イル］－４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）フェニル｝－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド
Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－｛３－［（メタンスルホニル）オキシ］プロパ－１－イン－１－イル｝フェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド（１．１ｇ；１．３mmol）の乾燥ＤＭＦ（１０mL）溶液に、チオ酢酸カリウム（０．３ｇ；２．６mmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム溶液（３５mL）を加え、そして水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。粗生成物を、溶離剤としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／０～９／１）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記生成物（０．５２ｇ；０．６２mmol）を帯黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO-d6): 0.08 (s, 6H), 0.84-0.89 (m, 6H), 0.90 (s, 9H), 1.31-1.49 (m, 2H), 1.54-1.73 (m, 2H), 1.95-2.02 (m, 1H), 2.4 (s, 3H), 2.89-3.06 (m, 2H), 3.93 (dd, 1H, J = 6.9 及び 9.1 Hz), 3.97 (s, 2H), 4.20-4.33 (m, 3H), 4.36-4.41 (m, 1H), 4.69 (s, 2H), 5.39 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 5.8 Hz), 7.32 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.35-7.43 (m, 4H), 7.49 (dd, 1H, J = 2.2 及び8.5 Hz), 7.72-7.76 (m, 3H), 7.89 (d, 2H, J = 7.5 Hz), 8.12 (d, 1H, J = 7.4 Hz), 10.08 (s, 1H)
Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－［４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）－３－｛３－［（メタンスルホニル）オキシ］プロパ－１－イン－１－イル｝フェニル］－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド（１．１ｇ；１．３mmol）の乾燥ＤＭＦ（１０mL）溶液に、チオ酢酸カリウム（０．３ｇ；２．６mmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム溶液（３５mL）を加え、そして水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮乾固した。粗生成物を、溶離剤としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／０～９／１）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記生成物（０．５２ｇ；０．６２mmol）を帯黄色の固体として与えた。1H NMR (DMSO-d6): 0.08 (s, 6H), 0.84-0.89 (m, 6H), 0.90 (s, 9H), 1.31-1.49 (m, 2H), 1.54-1.73 (m, 2H), 1.95-2.02 (m, 1H), 2.4 (s, 3H), 2.89-3.06 (m, 2H), 3.93 (dd, 1H, J = 6.9 及び 9.1 Hz), 3.97 (s, 2H), 4.20-4.33 (m, 3H), 4.36-4.41 (m, 1H), 4.69 (s, 2H), 5.39 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 5.8 Hz), 7.32 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.35-7.43 (m, 4H), 7.49 (dd, 1H, J = 2.2 及び8.5 Hz), 7.72-7.76 (m, 3H), 7.89 (d, 2H, J = 7.5 Hz), 8.12 (d, 1H, J = 7.4 Hz), 10.08 (s, 1H)
【0172】
工程１１： Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（３－スルホプロパ－１－イン－１－イル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド
３５％ 過酸化水素溶液（１．０８mL；１２．５７mmol）に、ギ酸（９．６８mL；２５６．５mmol）を０℃で加えた。この溶液を１時間撹拌し、次にＮ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－｛３－［３－（アセチルスルファニル）プロパ－１－イン－１－イル］－４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）フェニル｝－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド（３６７mg；０．４４mmol）に室温で加えた。反応混合物を２時間撹拌し、水（２０mL）で希釈し、３５℃で濃縮乾固した。残留物を１N 塩酸（２５mL）に懸濁し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（７／３）で洗浄した。水層を３５℃で濃縮乾固した。粗生成物を、溶離剤としてＡＣＮ／水＋ＴＦＡ（０．１％）（２／９８～５０／５０）を用いるＣ１８でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、凍結乾燥の後に、標記の生成物（１１７mg；０．１３mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO-d6): δ 0.84-0.88 (m, 6H), 1.33-1.50 (m, 2H), 1.55-1.75 (m, 2H), 1.95-2.02 (m, 1H), 2.89-3.05 (m, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.91-3.95 (m, 1H), 4.20-4.33 (m, 3H), 4.37-4.42 (m, 1H), 4.55 (s, 2H), 5.22 (brs, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.32 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.36-7.43 (m, 4H), 7.48 (dd, 1H, J = 2.4 及び 9.2 Hz), 7.65 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.74 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.4 Hz), 8.12 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 10.03 (s, 1H). LCMS (2-100 ACN/H2O + 0.05% TFA): 77.27%, 保持時間＝8.3分 陽モード 720.26 検出 (M+H+)
３５％ 過酸化水素溶液（１．０８mL；１２．５７mmol）に、ギ酸（９．６８mL；２５６．５mmol）を０℃で加えた。この溶液を１時間撹拌し、次にＮ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－｛３－［３－（アセチルスルファニル）プロパ－１－イン－１－イル］－４－（｛［tert－ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）フェニル｝－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド（３６７mg；０．４４mmol）に室温で加えた。反応混合物を２時間撹拌し、水（２０mL）で希釈し、３５℃で濃縮乾固した。残留物を１N 塩酸（２５mL）に懸濁し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（７／３）で洗浄した。水層を３５℃で濃縮乾固した。粗生成物を、溶離剤としてＡＣＮ／水＋ＴＦＡ（０．１％）（２／９８～５０／５０）を用いるＣ１８でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、凍結乾燥の後に、標記の生成物（１１７mg；０．１３mmol）を白色の固体として与えた。1H NMR (DMSO-d6): δ 0.84-0.88 (m, 6H), 1.33-1.50 (m, 2H), 1.55-1.75 (m, 2H), 1.95-2.02 (m, 1H), 2.89-3.05 (m, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.91-3.95 (m, 1H), 4.20-4.33 (m, 3H), 4.37-4.42 (m, 1H), 4.55 (s, 2H), 5.22 (brs, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.32 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.36-7.43 (m, 4H), 7.48 (dd, 1H, J = 2.4 及び 9.2 Hz), 7.65 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.74 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 7.89 (d, 2H, J = 7.4 Hz), 8.12 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 10.03 (s, 1H). LCMS (2-100 ACN/H2O + 0.05% TFA): 77.27%, 保持時間＝8.3分 陽モード 720.26 検出 (M+H+)
【0173】
工程１２： 実施例３４
Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（３－スルホプロパ－１－イン－１－イル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド（１０mg；０．０１４mmol）の、ＴＨＦ（６００μL）及び酢酸（６０μL）懸濁液に、アルゴン下、５％ 乾燥Ｐｔ／Ｃ（７mg；０．００１８mmol）を加えた。反応混合物を水素で３回パージし、次に室温で６４時間撹拌した。反応混合物を４５μmのＰＴＦＥフィルターで濾過し、ＭｅＯＨ及びＭｅＯＨ／水（１／１）で洗浄し、次に濃縮乾固して、実施例３４（７mg）を橙色の油状物として与えた。LCMS (2-100 ACN/H2O + 0.05% FA): 6.93%, 保持時間＝8.8分 陰モード 722.19 検出 (M-H)
Ｎ－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル｝－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｎ－［４－（ヒドロキシメチル）－３－（３－スルホプロパ－１－イン－１－イル）フェニル］－Ｌ－オルニチンアミド（１０mg；０．０１４mmol）の、ＴＨＦ（６００μL）及び酢酸（６０μL）懸濁液に、アルゴン下、５％ 乾燥Ｐｔ／Ｃ（７mg；０．００１８mmol）を加えた。反応混合物を水素で３回パージし、次に室温で６４時間撹拌した。反応混合物を４５μmのＰＴＦＥフィルターで濾過し、ＭｅＯＨ及びＭｅＯＨ／水（１／１）で洗浄し、次に濃縮乾固して、実施例３４（７mg）を橙色の油状物として与えた。LCMS (2-100 ACN/H2O + 0.05% FA): 6.93%, 保持時間＝8.8分 陰モード 722.19 検出 (M-H)
【0174】
実施例６～１２、実施例１４～２５、実施例２７又は実施例２８に対して実施したように、実施例３４（式（Ｉ）のパラ－アミノ－ベンジル リンカー化合物）は、本発明による、式（ＩＩ）のリンカー－薬物化合物の調製及び式（ＩＩＩ）の抗体－薬物コンジュゲートの調製に使用することができる。
【0175】
実施例Ａ：ＡＤＣのコンジュゲーション及び分析的特徴決定
本出願全体を通して使用されるように、「標的抗原／抗体－リンカー－薬物」という一般形式の命名規則を使用して、抗体－薬物コンジュゲートを特定することができる。単なる例であるが、抗体－薬物コンジュゲートが「標的Ｘ－実施例Ｙ」と呼ばれる場合、このようなコンジュゲートは、標的Ｘに結合する抗体と、実施例Ｙに例示されたリンカー－薬物を含むであろう。
本出願全体を通して使用されるように、「標的抗原／抗体－リンカー－薬物」という一般形式の命名規則を使用して、抗体－薬物コンジュゲートを特定することができる。単なる例であるが、抗体－薬物コンジュゲートが「標的Ｘ－実施例Ｙ」と呼ばれる場合、このようなコンジュゲートは、標的Ｘに結合する抗体と、実施例Ｙに例示されたリンカー－薬物を含むであろう。
【0176】
１．コンジュゲーション
例示的なＡＤＣを、以下に記載される方法のうちの１つを使用して合成した。例示的なＡＤＣ合成に使用された抗体を、略語Ａｂ Ｔ ＴＧ及びＡｂ Ｔにより定義した（表１）。
例示的なＡＤＣを、以下に記載される方法のうちの１つを使用して合成した。例示的なＡＤＣ合成に使用された抗体を、略語Ａｂ Ｔ ＴＧ及びＡｂ Ｔにより定義した（表１）。
【0177】
【表1】
【0178】
抗体Ｔ ＴＧは、細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）反応性グルタミン（アミン含有シクロオクチンであるＢＣＮ（又はＮ－［（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチルオキシカルボニル］－１，８－ジアミノ－３，６－ジオキサオクタン）で特異的に官能化されている）を有していた。細菌トランスグルタミナーゼを使用した、ＢＣＮ部分への抗体の部位特異的なコンジュゲーションを、Innate Pharma 2013（presentation at ADC Summit, San Francisco, California, Oct. 15, 2013）、ＷＯ第２０１７／０５９１６０号及び同第２０１６／１４４６０８号に記載されているように行った。これらの修飾により、以下の方法Ａを使用して、記載されたアジド含有前駆体をコンジュゲーションすることが可能となった（図１）。https://patents.google.com/patent/WO2017059160A1/enhttps://patents.google.com/patent/WO2016144608A1/en
【0179】
Ａｂ Ｔのコンジュゲートを、４つの鎖間ジスルフィド結合を完全に還元し、続けて、過剰量の薬物とコンジュゲーションすることにより得た（図２）。本発明の目的で、水溶性第三級ホスフィン、例えば、トリス－（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を還元剤として使用した。完全な還元及びコンジュゲーションにより、主として、１抗体当たり８つの薬物を有する完全に負荷された種、及び最終的には、少量の割合の、６つの薬物が負荷されたｍＡｂが生成し、これから、７．１及び７．７との平均ＤＡＲ値が説明される（表２）。
【0180】
Ａｂ Ｔのコンジュゲートのいくつかを、以下の方法Ｄに記載される再架橋技術により生成した。Ａｂ Ｔの４つの鎖間ジスルフィド結合をＴＣＥＰで完全に還元し、ジブロモマレイミド官能化リンカー－ペイロードを使用して再形成した（図３）。抗体の各重鎖上の鎖間ジスルフィド架橋に関与するシステインの近接性に起因して、コンジュゲーションにより２つのコンホメーションがもたらされる。
【0181】
方法Ａ（ＤＡＲ２）
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、６１９μl、カップリング容量の２０％）をＡｂ溶液（１．８mg/mL；２．５mL、４．５mg）に加えた。この混合物をボルテックスで３０秒間撹拌し、続けて、４倍モル過剰のリンカー－ペイロード（warhead payload）（２０mM、ＤＭＳＯ中６μL）を加えた。この反応物を室温において、６４rpmで一晩撹拌した。非コンジュゲートリンカーペイロードを除去するために、１０倍モル過剰のＤＢＣＯ含有Tentagel樹脂（０．１～０．２mmol/g, Iris Biotech, CS-0477.0500）を加え、この混合物を室温で６時間撹拌した。Vivaspin 20, 50KD, PES（Sartorius Stedim, VS2031）を使用した３回のろ過サイクルにより、バッファーをＰＢＳ １Ｘ（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）に交換し、ついで、０．２μmの滅菌ＰＥＳフィルター、２５mm（Whatmann, G896-2502）を通して滅菌ろ過し、４℃で保存した。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、６１９μl、カップリング容量の２０％）をＡｂ溶液（１．８mg/mL；２．５mL、４．５mg）に加えた。この混合物をボルテックスで３０秒間撹拌し、続けて、４倍モル過剰のリンカー－ペイロード（warhead payload）（２０mM、ＤＭＳＯ中６μL）を加えた。この反応物を室温において、６４rpmで一晩撹拌した。非コンジュゲートリンカーペイロードを除去するために、１０倍モル過剰のＤＢＣＯ含有Tentagel樹脂（０．１～０．２mmol/g, Iris Biotech, CS-0477.0500）を加え、この混合物を室温で６時間撹拌した。Vivaspin 20, 50KD, PES（Sartorius Stedim, VS2031）を使用した３回のろ過サイクルにより、バッファーをＰＢＳ １Ｘ（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）に交換し、ついで、０．２μmの滅菌ＰＥＳフィルター、２５mm（Whatmann, G896-2502）を通して滅菌ろ過し、４℃で保存した。
【0182】
方法Ｂ（ＤＡＲ８）
Ａｂ溶液（１０．３mg/mL；０．５mL）を、ＥＤＴＡ含有ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４（１０mM；０．５mL）中で希釈して、カップリング反応物における最終ＥＤＴＡ濃度５mMを固定した。ついで、ＴＣＥＰ（ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４中１mM、８４９μL）を抗体に加え、続けて、３７℃で２時間インキュベーションした。還元後、抗体溶液を２～８℃に冷却し、２０倍モル過剰量のリンカー－ペイロード（５mM、ＤＭＳＯ中、１４１μl）を加えた。この反応物を４℃で１．５時間インキュベーションした。この溶液を２０分間遠心分離し（４℃で１４０００Ｇ）、HiLoad 26/600 Superdex 200pg（GE Healthcare, 28989336）ＳＥＣクロマトグラフィーカラムにロードした。ＡＤＣを、ＰＢＳ（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）中２０％ ＤＭＡで溶出し、続けて、ＰＢＳ １Ｘ ｐＨ７．４（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）中で２サイクル透析（１６時間及び４時間）を行った。コンジュゲートを、Vivaspin 20, 50KD, PES（Sartorius Stedim, VS2031）を使用して濃縮し、０．２μmの滅菌ＰＥＳフィルター、２５mm（Whatmann, G896-2502）を通して滅菌ろ過し、４℃で保存した。
Ａｂ溶液（１０．３mg/mL；０．５mL）を、ＥＤＴＡ含有ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４（１０mM；０．５mL）中で希釈して、カップリング反応物における最終ＥＤＴＡ濃度５mMを固定した。ついで、ＴＣＥＰ（ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４中１mM、８４９μL）を抗体に加え、続けて、３７℃で２時間インキュベーションした。還元後、抗体溶液を２～８℃に冷却し、２０倍モル過剰量のリンカー－ペイロード（５mM、ＤＭＳＯ中、１４１μl）を加えた。この反応物を４℃で１．５時間インキュベーションした。この溶液を２０分間遠心分離し（４℃で１４０００Ｇ）、HiLoad 26/600 Superdex 200pg（GE Healthcare, 28989336）ＳＥＣクロマトグラフィーカラムにロードした。ＡＤＣを、ＰＢＳ（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）中２０％ ＤＭＡで溶出し、続けて、ＰＢＳ １Ｘ ｐＨ７．４（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）中で２サイクル透析（１６時間及び４時間）を行った。コンジュゲートを、Vivaspin 20, 50KD, PES（Sartorius Stedim, VS2031）を使用して濃縮し、０．２μmの滅菌ＰＥＳフィルター、２５mm（Whatmann, G896-2502）を通して滅菌ろ過し、４℃で保存した。
【0183】
方法Ｃ（ＤＡＲ８）
Ａｂ溶液（１０．３mg/mL；０．５mL）を、ＥＤＴＡ含有ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４（１０mM；０．５mL）中で希釈して、カップリング反応物における最終ＥＤＴＡ濃度５mMを固定した。ついで、ＴＣＥＰ（ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４中１mM、８４９μL）を抗体に加え、続けて、３７℃で２時間インキュベーションした。還元後、抗体溶液を２～８℃に冷却し、２０倍モル過剰量のリンカー－ペイロード（５mM、ＤＭＳＯ中、１４１μL）を加えた。この反応物を４℃で１．５時間インキュベーションした。ついで、コンジュゲートをrmp protein A樹脂（GE Healthcare, 17-5138-01）で精製し、続けて、ＰＢＳ １× ｐＨ７．４（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）中で２サイクル透析（１６時間及び４時間）を行った。ＡＤＣを、Vivaspin 20, 50KD, PES（Sartorius Stedim, VS2031）を使用して濃縮し、０．２μmの滅菌ＰＥＳフィルター、２５mm（Whatmann, G896-2502）を通して滅菌ろ過し、４℃で保存した。
Ａｂ溶液（１０．３mg/mL；０．５mL）を、ＥＤＴＡ含有ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４（１０mM；０．５mL）中で希釈して、カップリング反応物における最終ＥＤＴＡ濃度５mMを固定した。ついで、ＴＣＥＰ（ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４中１mM、８４９μL）を抗体に加え、続けて、３７℃で２時間インキュベーションした。還元後、抗体溶液を２～８℃に冷却し、２０倍モル過剰量のリンカー－ペイロード（５mM、ＤＭＳＯ中、１４１μL）を加えた。この反応物を４℃で１．５時間インキュベーションした。ついで、コンジュゲートをrmp protein A樹脂（GE Healthcare, 17-5138-01）で精製し、続けて、ＰＢＳ １× ｐＨ７．４（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）中で２サイクル透析（１６時間及び４時間）を行った。ＡＤＣを、Vivaspin 20, 50KD, PES（Sartorius Stedim, VS2031）を使用して濃縮し、０．２μmの滅菌ＰＥＳフィルター、２５mm（Whatmann, G896-2502）を通して滅菌ろ過し、４℃で保存した。
【0184】
方法Ｄ（ＤＡＲ４）
ＡｂのＢＢＳバッファー ｐＨ８（以下に記載するように調製）溶液（５mg/mL、０．５ml）に、８倍モル過剰のＴＣＥＰ（ＢＢＳ ｐＨ８中１mM、１３７μl）を加えた。この反応物を３７℃で２時間インキュベーションした。ついで、７．５倍モル過剰のリンカー－ペイロード（１mM、ＤＭＦ中１２９μl）を加え、得られた溶液を室温において、６００rpmで混合した。得られたＡＤＣをＰＢＳ １Ｘ ｐＨ７．４（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）中において、４℃で１６時間透析した。ついで、コンジュゲートをrmp protein A樹脂（GE Healthcare, 17-5138-01）で精製し、続けて、ＰＢＳ １Ｘ ｐＨ７．４（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）中において、室温で２時間透析した。ＡＤＣを、Vivaspin 20, 50KD, PES（Sartorius Stedim, VS2031）を使用して濃縮し、０．２μmの滅菌ＰＥＳフィルター、２５mm（Whatmann, G896-2502）を通して滅菌ろ過し、４℃で保存した。
ＡｂのＢＢＳバッファー ｐＨ８（以下に記載するように調製）溶液（５mg/mL、０．５ml）に、８倍モル過剰のＴＣＥＰ（ＢＢＳ ｐＨ８中１mM、１３７μl）を加えた。この反応物を３７℃で２時間インキュベーションした。ついで、７．５倍モル過剰のリンカー－ペイロード（１mM、ＤＭＦ中１２９μl）を加え、得られた溶液を室温において、６００rpmで混合した。得られたＡＤＣをＰＢＳ １Ｘ ｐＨ７．４（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）中において、４℃で１６時間透析した。ついで、コンジュゲートをrmp protein A樹脂（GE Healthcare, 17-5138-01）で精製し、続けて、ＰＢＳ １Ｘ ｐＨ７．４（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）中において、室温で２時間透析した。ＡＤＣを、Vivaspin 20, 50KD, PES（Sartorius Stedim, VS2031）を使用して濃縮し、０．２μmの滅菌ＰＥＳフィルター、２５mm（Whatmann, G896-2502）を通して滅菌ろ過し、４℃で保存した。
【0185】
ＢＢＳバッファー ｐＨ８の調製：Ｎａ２Ｂ４Ｏ７・１０Ｈ２Ｏ（５２８mg）を脱イオン水（２７．７mL）に溶解させた。塩化ナトリウム（６３mg、２５mM）及びＥＤＴＡ（１６mg、１mM）を０．１M 塩酸 ２２．３mLに可溶化させた。ついで、２つの溶液同士を混合し、得られた溶液をそのままコンジュゲーション工程に使用した。
【0186】
２．ＬＣ－ＭＳの一般的な方法
例示的なＡＤＣの薬物対抗体比（ＤＡＲ）を、下記方法ＬＣ－Ｉ又はＬＣ－ＩＩを使用した、液体クロマトグラフィー－質量分光法（ＬＣ－ＭＳ）により決定した。ＬＣ－Ｉ法では、移動相ＡをＭＳグレードの水（Biosolve, Dieuze, France, 00232141B1BS）により精製し、移動相ＢをＭＳグレードのアセトニトリル（Biosolve, Dieuze, France, 0001204101BS）により精製し、移動相Ｄを、１％ ギ酸（ＦＡ）（Honeywell/Fluka, Bucharest, Romania, 56302）を添加したＭＳグレードの水により精製した。移動相Ｄを１０％に固定して、０．１％ ＦＡという移動相組成を維持し、カラム温度を８０℃に設定した。一般的なＭＳ法を合成された全てのＡＤＣについて最適化した（表２）。ＬＣ－ＩＩ法では、移動相ＡをＭＳグレードの水（Biosolve, Dieuze, France, 00232141B1BS）により精製し、移動相ＢをＭＳグレードのアセトニトリル（Biosolve, Dieuze, France, 0001204101BS）により精製した。両方とも、０．１％ ギ酸（ＦＡ）（Honeywell/Fluka, Bucharest, Romania, 56302）を含有する。カラム温度を８０℃に設定した。一般的なＭＳ法を合成された全てのＡＤＣについて最適化した（表２）。
例示的なＡＤＣの薬物対抗体比（ＤＡＲ）を、下記方法ＬＣ－Ｉ又はＬＣ－ＩＩを使用した、液体クロマトグラフィー－質量分光法（ＬＣ－ＭＳ）により決定した。ＬＣ－Ｉ法では、移動相ＡをＭＳグレードの水（Biosolve, Dieuze, France, 00232141B1BS）により精製し、移動相ＢをＭＳグレードのアセトニトリル（Biosolve, Dieuze, France, 0001204101BS）により精製し、移動相Ｄを、１％ ギ酸（ＦＡ）（Honeywell/Fluka, Bucharest, Romania, 56302）を添加したＭＳグレードの水により精製した。移動相Ｄを１０％に固定して、０．１％ ＦＡという移動相組成を維持し、カラム温度を８０℃に設定した。一般的なＭＳ法を合成された全てのＡＤＣについて最適化した（表２）。ＬＣ－ＩＩ法では、移動相ＡをＭＳグレードの水（Biosolve, Dieuze, France, 00232141B1BS）により精製し、移動相ＢをＭＳグレードのアセトニトリル（Biosolve, Dieuze, France, 0001204101BS）により精製した。両方とも、０．１％ ギ酸（ＦＡ）（Honeywell/Fluka, Bucharest, Romania, 56302）を含有する。カラム温度を８０℃に設定した。一般的なＭＳ法を合成された全てのＡＤＣについて最適化した（表２）。
【0187】
方法ＬＣ－Ｉ：ＡＤＣをBioresolve RP mAb Polyphenyl、４５０Ａ、２．７μm、２．１×１５０mm（Waters, Saint-Quentin-en-Yvelines, France, 186008946）にロードした。インタクトな条件及び還元条件の両方における分析について、流量を０．６mL/分として、２０％ Ｂで脱塩工程を１．５分間行った。流量を０．３mL/分として、２０％ Ｂで１．５分から、７０％ Ｂで１６．５分の勾配で、溶出工程を行った。洗浄工程を、流量０．６mL/分で、９０％ Ｂで１６．８分から１８．８分に設定した。最後に、流量を０．６mL/分として、２０％ Ｂで１９．１分から１．９分間、コンディショニング工程を使用した（総実行時間＝２１分）。
【0188】
方法ＬＣ－ＩＩ：ＡＤＣをBioresolve RP mAb Polyphenyl、４５０Ａ、２．７μm、２．１×１５０mm（Waters, Saint-Quentin-en-Yvelines, France, 186008946）にロードした。インタクトな条件及び還元条件の両方における分析について、流量を０．６mL/分として、２０％ Ｂで脱塩工程を１．５分間行った。ついで、同じ流量で、２０％ Ｂで１．５分から、５０％ Ｂで１６．５分の勾配で、溶出工程を行った。次の洗浄工程を、流量０．６mL/分で、１００％ Ｂで１６．８分から１８．８分に設定した。最後に、上記言及された流量で、１００％から２０％ Ｂで１８．８分から１９．２分までコンディショニング工程を使用し、さらに、２０％ Ｂで１．９分間カラムを安定させた（総実行時間＝２１分）。
【0189】
ＬＣ－ＭＳ分析を、Waters UPLC H-Class Bioクロマトグラフィーシステム－Xevo G2 XS Q-TOF ESI質量分光計（Waters, Manchester, UK）を使用して行った。ＡＤＣをインタクトな条件（予備処理なし）で又は５mM（最終濃度） ジチオスレイトールＤＴＴ（Thermo Scientific, Rockford, IL, 20291）を使用した還元後のいずれかで分析した。続けて、処理されたＡＤＣを、前述のＬＣ－Ｉ及びＬＣ－ＩＩを使用して分析した（表２）。分析物のエレクトロスプレーイオン化飛行時間質量スペクトルを、MassLynx（商標）収集ソフトウェア（Waters, Manchester, UK）を使用して取得した。ついで、抽出された強度対ｍ／ｚスペクトルを、MassLynx（商標）ソフトウェアの最大エントロピー（ＭａｘＥｎｔ）法を使用してデコンボリューションし、使用された処理に応じて、各インタクトな抗体種、又は各還元抗体フラグメントの質量を決定した。最後に、デコンボリューションされたスペクトル又はＵＶクロマトグラムから、コンジュゲーションされていない、及びコンジュゲーションされた、所定の種（ｍＡｂ又は関連フラグメント）の積分ＭＳ（総イオン電流）又はＵＶ（２８０nm）ピーク面積を合計することにより、ＤＡＲを決定した。ＵＶクロマトグラムによるＤＡＲ決定では、全ての種の％ 相対面積に、結合させた薬物の数を掛けた。全ての種の、合計され、重み付けされた面積を、％ 総相対面積の合計で割った結果、完全なＡＤＣの最終平均ＤＡＲ値の推定値が得られた。デコンボリューションされたスペクトルによるＤＡＲ決定のために、特定された全ての種の割合を、デコンボリューションされたスペクトルからの強度ピーク値により計算した。得られた割合に、結合させた薬物の数を掛けた。合計された結果から、完全なＡＤＣについての最終平均ＤＡＲ値の推定値が得られた。
【0190】
３．サイズ排除クロマトグラフィー
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を、ＡＤＣの品質である、精製後のその凝集割合を決定するために行った。この分析を、分析カラムSuperdex 200 Increase 5/150 GL（GE Healthcare, 28990945）で、１００％ ＰＢＳ ｐＨ７．４（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）のアイソクラティック条件下、流量０．４５mL／分において１２分間行った。コンジュゲート試料中の凝集画分の割合を、２８０nmにおける吸光度のピーク面積に基づいて定量した。その計算は、２８０nmでの高分子量溶出物を、高分子量溶出物とモノマー溶出物の、同じ波長における吸光度のピーク面積の合計で割って、１００を掛けた比に基づいている。
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を、ＡＤＣの品質である、精製後のその凝集割合を決定するために行った。この分析を、分析カラムSuperdex 200 Increase 5/150 GL（GE Healthcare, 28990945）で、１００％ ＰＢＳ ｐＨ７．４（Sigma Life Science, P3813, 10PAK）のアイソクラティック条件下、流量０．４５mL／分において１２分間行った。コンジュゲート試料中の凝集画分の割合を、２８０nmにおける吸光度のピーク面積に基づいて定量した。その計算は、２８０nmでの高分子量溶出物を、高分子量溶出物とモノマー溶出物の、同じ波長における吸光度のピーク面積の合計で割って、１００を掛けた比に基づいている。
【0191】
４．疎水性相互作用クロマトグラフィー
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を、リンカー－ペイロード及びバイオコンジュゲーション技術の、抗体に対する疎水性の影響を決定するために行った。この分析を、TSKgel Butyl-NPRカラム（Tosoh Bioscience, 0014947）を使用し、移動相Ａ（１．５M 硫酸アンモニウム（ＮＨ４）２ＳＯ４、２５mM 二塩基性リン酸カリウム（Ｋ２ＨＰＯ４）、ｐＨ７に調整）及びＢ（２５mM 二塩基性リン酸カリウム（Ｋ２ＨＰＯ４）、２０％ イソプロパノール、ｐＨ７に調整）で行った。５％ Ｂで、０．６mL/分の流量にて溶出を開始した。勾配を１７分間で５％から１００％のＢに上昇させ、続けて、洗浄工程を１００％のＢで５分間行った。最後に、コンディショニング工程を、２分間で１００％から５％のＢ、続けて、５％のＢで２分間行った。
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を、リンカー－ペイロード及びバイオコンジュゲーション技術の、抗体に対する疎水性の影響を決定するために行った。この分析を、TSKgel Butyl-NPRカラム（Tosoh Bioscience, 0014947）を使用し、移動相Ａ（１．５M 硫酸アンモニウム（ＮＨ４）２ＳＯ４、２５mM 二塩基性リン酸カリウム（Ｋ２ＨＰＯ４）、ｐＨ７に調整）及びＢ（２５mM 二塩基性リン酸カリウム（Ｋ２ＨＰＯ４）、２０％ イソプロパノール、ｐＨ７に調整）で行った。５％ Ｂで、０．６mL/分の流量にて溶出を開始した。勾配を１７分間で５％から１００％のＢに上昇させ、続けて、洗浄工程を１００％のＢで５分間行った。最後に、コンディショニング工程を、２分間で１００％から５％のＢ、続けて、５％のＢで２分間行った。
【0192】
本発明の目的で、各ＡＤＣの相対保持時間（ＲＲＴ）を、ＡＤＣ保持時間（ＲＴ）を抗体ＲＴで割ったものを使用して計算した（表３）。
【0193】
５．結果
例示的なＡＤＣの特徴決定を表２にまとめた（実施例１５～２２及び実施例２９～３３と命名；カップリング及びＬＣ－ＭＳ法、凝集状態及びＤＡＲ）。平均ＤＡＲ値を、上記ＬＣ－ＭＳ法ＬＣ－Ｉ又はＬＣ－ＩＩ（ポイント２）を使用して決定し、％ 凝集体を、上記されたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定した（ポイント３）。
例示的なＡＤＣの特徴決定を表２にまとめた（実施例１５～２２及び実施例２９～３３と命名；カップリング及びＬＣ－ＭＳ法、凝集状態及びＤＡＲ）。平均ＤＡＲ値を、上記ＬＣ－ＭＳ法ＬＣ－Ｉ又はＬＣ－ＩＩ（ポイント２）を使用して決定し、％ 凝集体を、上記されたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定した（ポイント３）。
【0194】
【表2】
【0195】
例示されたＡＤＣの疎水性を、上記されたＨＩＣクロマトグラフィーを使用した相対保持時間の計算により比較した（ポイント４）。表３に、コンジュゲートのＲＲＴ値をまとめた。
【0196】
【表3】
【0197】
安定性試験を、全ての例示されたＡＤＣについて行った。ここでは、コンジュゲートを、ＰＢＳバッファー中、＋３７℃で１週間にわたって加速分解の条件下でインキュベーションした。ＳＥＣクロマトグラフィーを、コンジュゲートの凝集状態を測定するのに利用した。得られた結果を表４に示す。
【0198】
【表4】
【0199】
実施例Ｂ：ＣＴＧアッセイを使用した細胞生存率に対する例示されたＡＤＣの効果
ＨＣＣ１９５４（ＨＥＲ＋）及びＭＯＬＴ４（ＨＥＲ－）細胞株を、１０％ 熱不活化ウシ胎児血清、ペニシリン（１００IU/mL）、ストレプトマイシン（１００μg/ml）及びＬ－グルタミン（２mM）を補充したＲＰＭＩ中で培養した。細胞株を、５％ ＣＯ２を含有する加湿雰囲気下、３７℃で培養した。細胞を９６マイクロウェルプレートに播種し、ＡＤＣに１２０時間曝露した（５倍連続希釈；各９濃度、３回）。３７℃／５％ ＣＯ２で５日間インキュベーションした後、CellTiterGloをウェル当たり試薬 ７５μLで使用して細胞ＡＴＰレベルを定量することにより、細胞生存率に対するＡＤＣの効果を評価した。全ての条件を３回試験した。発光を多目的プレートリーダーで定量した。ＩＣ５０を、標準的な４パラメトリックカーブフィッティングを使用して計算した。ＩＣ５０は、ＣＴＧシグナルが、対照について測定されたそれの５０％に低下する化合物濃度と定義される。各実験を少なくとも２回行い、結果には再現性があった。
ＨＣＣ１９５４（ＨＥＲ＋）及びＭＯＬＴ４（ＨＥＲ－）細胞株を、１０％ 熱不活化ウシ胎児血清、ペニシリン（１００IU/mL）、ストレプトマイシン（１００μg/ml）及びＬ－グルタミン（２mM）を補充したＲＰＭＩ中で培養した。細胞株を、５％ ＣＯ２を含有する加湿雰囲気下、３７℃で培養した。細胞を９６マイクロウェルプレートに播種し、ＡＤＣに１２０時間曝露した（５倍連続希釈；各９濃度、３回）。３７℃／５％ ＣＯ２で５日間インキュベーションした後、CellTiterGloをウェル当たり試薬 ７５μLで使用して細胞ＡＴＰレベルを定量することにより、細胞生存率に対するＡＤＣの効果を評価した。全ての条件を３回試験した。発光を多目的プレートリーダーで定量した。ＩＣ５０を、標準的な４パラメトリックカーブフィッティングを使用して計算した。ＩＣ５０は、ＣＴＧシグナルが、対照について測定されたそれの５０％に低下する化合物濃度と定義される。各実験を少なくとも２回行い、結果には再現性があった。
【0200】
表５に示されるように、例示されたＡＤＣは全て、ＣＴＧアッセイにおいて抗原陽性細胞で活性である。
【0201】
【表5】
【図1】
【図2】
【図3】
【国際調査報告】