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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-19
(54)【発明の名称】ＳＴ２抗原結合タンパク質
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230612BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20230612BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230612BHJP
C12N 15/86 20060101ALI20230612BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230612BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230612BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230612BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230612BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20230612BHJP
C07K 16/44 20060101ALI20230612BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230612BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20230612BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20230612BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20230612BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20230612BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20230612BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20230612BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20230612BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20230612BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20230612BHJP
A61P 19/00 20060101ALI20230612BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20230612BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20230612BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20230612BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20230612BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/28 ZNA
C12N15/63 Z
C12N15/86 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C07K19/00
C07K16/44
A61K39/395 N
A61P11/06
A61P11/02
A61P37/08
A61P29/00
A61P11/00
A61P1/04
A61P17/00
A61P17/06
A61P19/02
A61P29/00 101
A61P19/00
A61P1/16
A61P3/10
A61P9/00
A61P37/06
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022568971
(86)(22)【出願日】2021-05-11
(85)【翻訳文提出日】2023-01-06
(86)【国際出願番号】 CN2021093066
(87)【国際公開番号】W WO2021228091
(87)【国際公開日】2021-11-18
(31)【優先権主張番号】202010397572.3
(32)【優先日】2020-05-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】516089784
【氏名又は名称】チア タイ ティエンチン ファーマシューティカル グループ カンパニー リミテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｃｈｉａ Ｔａｉ Ｔｉａｎｑｉｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．３６９ Ｙｕｚｈｏｕ Ｓｏｕｔｈ Ｒｄ．，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２２２０６２ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】110001195
【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】張 正 平
(72)【発明者】
【氏名】應 樹 松
(72)【発明者】
【氏名】徐 宏 江
(72)【発明者】
【氏名】楊 玲
(72)【発明者】
【氏名】張 喜 全
(72)【発明者】
【氏名】郭 峻
(72)【発明者】
【氏名】施 偉
(72)【発明者】
【氏名】宋 偉
(72)【発明者】
【氏名】周 云 燕
【テーマコード（参考）】
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA83X
4B065AA86X
4B065AA87X
4B065AA87Y
4B065AA88X
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA25
4B065CA44
4B065CA46
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB41
4C085BB43
4C085CC23
4C085DD63
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA75
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
(57)【要約】
ＳＴ２抗原結合タンパク質、例えば、ＳＴ２に特異的結合するマウス、ヒト、キメラ又はヒト化の抗体又はその抗原結合断片を提供し、また、上記抗体及びその抗原結合断片をコードする核酸分子、並びに前記抗体又はその抗原結合断片を発現するための発現ベクター及び宿主細胞を提供する。さらに、前記の抗抗体及びその抗原結合断片の調製方法及び使用方法を提供し、前記使用方法にはＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症を治療及び予防することが含まれる。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
分離されたＳＴ２抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又はその抗原結合断片には、
（ｉ）下記の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３；
（１）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１５で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２０で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（２）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１６で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（３）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１２で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２２で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（４）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１３で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１８で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２３で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（５）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１９で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２２で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは
（６）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１８で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（ｉｉ）下記の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３；
（１）軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２５で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号２９で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３２で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（２）軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２６で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（３）軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは
（４）軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２８で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３３で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
又は、
（ｉｉｉ）（ｉ）で示される重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに（ｉｉ）で示される軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３が含まれる。ここで、配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｑ，Ｅ又はＫ、Ｘ３＝Ｋ又はＱである。
配列番号３０のアミノ酸配列は、ＱＸ４ＳＮＬＡＳであり、Ｘ４＝Ｍ又はＬである。
【請求項2】
配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、（ｉ）Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；
（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｅ、Ｘ３＝Ｋ又はＱであり；或いは
（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｋ又はＱである、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項3】
前記抗体又はその抗原結合断片には、下記の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、（１）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１５で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２０で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２５で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号２９で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３２で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（２）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１６で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２６で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（３）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１２で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２２で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（４）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１３で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１８で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２３で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（５）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１９で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２２で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは
（６）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１８で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２８で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３３で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
ただし、配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、
（ｉ）Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；
（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｅ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；或いは
（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｋ又はＱである。
そして、配列番号３０のアミノ酸配列は、ＱＸ４ＳＮＬＡＳであり、Ｘ４＝Ｍ又はＬである、請求項１又は２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項4】
前記抗体又はその抗原結合断片はキメラ又はヒト化されたものである、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項5】
分離されたＳＴ２抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又はその抗原結合断片には、
（ｉ）下記の重鎖可変領域；
前記重鎖可変領域には、配列番号３５、３７、３９、４１、４３、４５、７１又は７３で示される配列を含む、又は配列番号３５、３７、３９、４１、４３、４５、７１又は７３で示される配列と比較して、少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（ｉｉ）下記の軽鎖可変領域；
前記軽鎖可変領域には、配列番号３６、３８、４０、４２、４４、４６又は７９で示される配列を含む、又は配列番号３６、３８、４０、４２、４４、４６又は７９で示される配列と比較して、少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；又は
（ｉｉｉ）（ｉ）で示される重鎖可変領域および（ｉｉ）で示される軽鎖可変領域；
が含まれる。
【請求項6】
前記抗体又はその抗原結合断片には、下記の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が含まれる；ここで、（１）前記重鎖可変領域には、配列番号３５で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号３６で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（２）前記重鎖可変領域には、配列番号３７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号３８で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（３）前記重鎖可変領域には、配列番号３９で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号４０で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（４）前記重鎖可変領域には、配列番号４１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号４２で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（５）前記重鎖可変領域には、配列番号４３で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号４４で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（６）前記重鎖可変領域には、配列番号４５で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号４６で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（７）前記重鎖可変領域には、配列番号７１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号７９で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは
（８）前記重鎖可変領域には、配列番号７３で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号７９で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項7】
分離されたＳＴ２抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又はその抗原結合断片には、
（ｉ）下記の重鎖；
前記重鎖には、配列番号４７、５１、５５、５９、６３、６７、７５又は７７で示される配列を含むか、又は配列番号４７、５１、５５、５９、６３、６７、７５又は７７で示される配列と比較して、少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（ｉｉ）下記の軽鎖；
前記軽鎖には、配列番号４９、５３、５７、６１、６５、６９又は８１で示される配列を含むか、又は配列番号４９、５３、５７、６１、６５、６９又は８１で示される配列と比較して、少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは
（ｉｉｉ）（ｉ）で示される重鎖及び（ｉｉ）で示される軽鎖；
が含まれる。
【請求項8】
前記抗体又はその抗原結合断片は、下記の重鎖及び軽鎖が含まれる；ここで、（１）前記重鎖には、配列番号４７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号４９で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（２）前記重鎖には、配列番号５１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号５３で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（３）前記重鎖には、配列番号５５で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号５７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（４）前記重鎖には、配列番号５９で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号６１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（５）前記重鎖には、配列番号６３で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号６５で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（６）前記重鎖には、配列番号６７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号６９で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（７）前記重鎖には、配列番号７５で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号８１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは
（８）前記重鎖には、配列番号７７で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号８１で示される配列又はそれと少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項７に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項9】
前記抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ、分離されたＣＤＲ領域、単鎖Ｆｖ分子又はそれらの組み合わせから選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項10】
前記抗体又はその抗原結合断片は、ヒト又はサルのＳＴ２と特異的に結合し、ＩＬ３３／ＳＴ２の結合及びそのシグナル伝導を阻害する、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項11】
前記抗体又はその抗原結合断片は、実質的にＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ１Ｒ３、ＩＬ１Ｒ７、ＩＬ１Ｒ８及びＩＬ１Ｒ９と結合しない、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項12】
前記抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ４＋Ｔ細胞でのＩＬ３３／ＳＴ２によって誘導されるＩＬ５分泌を阻害する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項13】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする分離された核酸分子。
【請求項14】
請求項１３に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項15】
請求項１３に記載の核酸分子又は請求項１４に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項16】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片を含むポリペプチド融合体又は多重特異性分子。
【請求項17】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子又は請求項１３に記載の核酸分子を含むウイルスベクター。
【請求項18】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片、並びに１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又は担体を含む医薬組成物。
【請求項19】
被験者由来のサンプルにおけるＳＴ２発現量の検出方法であって、前記方法には、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片及びＳＴ２が複合体を形成する条件下で、前記抗体又はその抗原結合断片を前記サンプルに接触させる手順が含まれる、方法。
【請求項20】
必要のある被験者でＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症を治療又は寛解する方法であって、前記方法には、前記被験者に治療有効量の請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は請求項１３に記載の核酸分子を投与することが含まれる、方法。
【請求項21】
前記ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症には、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性細気管支炎、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、全身性エリテマトーデス、類天疱瘡、関節リウマチ、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、肺線維症、肝線維症、全身性硬化症、サルコイドーシス、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糖尿病性疾患、心血管疾患、又はそれらの組み合わせが含まれる、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連アプリケーションへの相互参照
本公開は、２０２０年５月１２日に中国に出願した特許出願２０２０１０３９７５７２．３号に基づき優先権を主張し、その全ての内容を全体として本公開に援用しており、あらゆる目的で使用する。
本公開は、２０２０年５月１２日に中国に出願した特許出願２０２０１０３９７５７２．３号に基づき優先権を主張し、その全ての内容を全体として本公開に援用しており、あらゆる目的で使用する。
【0002】
技術分野
本公開は、分離された抗体に関与する。具体的には、本公開は、ＳＴ２に特異的結合するマウス、キメラ及びヒト化モノクローナル抗体又はその抗原結合断片、並びに前記抗体又はその抗原結合断片を生産するための核酸、発現ベクター、宿主細胞を提供する。本公開は、さらに、前記抗体又はその抗原結合部分を含むポリペプチド融合体、多重特異性分子、ウイルスベクター及び医薬組成物、並びに前記抗体又はその抗原結合断片を用いた診断と治療方法を提供する。
本公開は、分離された抗体に関与する。具体的には、本公開は、ＳＴ２に特異的結合するマウス、キメラ及びヒト化モノクローナル抗体又はその抗原結合断片、並びに前記抗体又はその抗原結合断片を生産するための核酸、発現ベクター、宿主細胞を提供する。本公開は、さらに、前記抗体又はその抗原結合部分を含むポリペプチド融合体、多重特異性分子、ウイルスベクター及び医薬組成物、並びに前記抗体又はその抗原結合断片を用いた診断と治療方法を提供する。
【背景技術】
【0003】
背景技術
インターロイキン３３（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ３３、ＩＬ３３）は、ＩＬ－１サイトカインファミリーのメンバーであり、組織内皮細胞又は上皮細胞によって発現され、細胞がストレス、感染及び損傷などの刺激を受けると、ＩＬ３３が損傷した細胞で「ａｌａｒｍｉｎ」として発現され、外部の抗原刺激シグナルをＴｈ２経路に伝達する。ＩＬ３３の受容体は、ＩＬ－１受容体関連タンパク質（ＩＬ－１ＲＬ１、ＳＴ２）及びＩＬ－１受容体補助タンパク質（ＩＬ－１ＲＡＰ）の２種のタンパク質から構成されている。ＩＬ－１ＲＡＰの関与により、ＩＬ３３とＳＴ２の結合はシグナル伝達を誘導できるが、ＩＬ－１ＲＡＰはＩＬ３３又はＳＴ２と直接結合することができない（Ｃｈａｃｋｅｒｉａｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：２５５１－２５５５）。
インターロイキン３３（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ３３、ＩＬ３３）は、ＩＬ－１サイトカインファミリーのメンバーであり、組織内皮細胞又は上皮細胞によって発現され、細胞がストレス、感染及び損傷などの刺激を受けると、ＩＬ３３が損傷した細胞で「ａｌａｒｍｉｎ」として発現され、外部の抗原刺激シグナルをＴｈ２経路に伝達する。ＩＬ３３の受容体は、ＩＬ－１受容体関連タンパク質（ＩＬ－１ＲＬ１、ＳＴ２）及びＩＬ－１受容体補助タンパク質（ＩＬ－１ＲＡＰ）の２種のタンパク質から構成されている。ＩＬ－１ＲＡＰの関与により、ＩＬ３３とＳＴ２の結合はシグナル伝達を誘導できるが、ＩＬ－１ＲＡＰはＩＬ３３又はＳＴ２と直接結合することができない（Ｃｈａｃｋｅｒｉａｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：２５５１－２５５５）。
【0004】
ＳＴ２は、膜貫通ＳＴ２Ｌ、可溶性ｓＳＴ２及び変異型ＳＴ２Ｖの３つのサブタイプを備えるＴｏｌｌ／ＩＬ１受容体ファミリーに属している。ここで、ＳＴ２Ｌは、主にＩＬ３３の細胞内シグナル応答を媒介する。ＳＴ２Ｌは、主にＴｈ２型細胞、ＩＬＣ２細胞、肥満細胞、Ｔｒｅｇ細胞の表面で発現されており、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、好酸球及び好塩基球の表面でも発現されている。
【0005】
ＩＬ３３は、細胞表面のＳＴ２Ｌと結合し、ＩＬ－１ＲＡｃＰを動員することで、ＭｙＤ８８／ＮＦκＢ細胞経路を活性化し、肥満細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｒｅｇ細胞及ＩＬＣ２などの細胞にＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、ＴＮＦ、ＩＮＦ－γなどの炎症性因子、及びＣＣＬ１７、ＣＣＬ２２、ＣＸＣＬ８などのケモカインの分泌を誘導し、炎症反応を誘発する。ＩＬ－３３は、例えば、アレルギー性鼻炎（Ｋａｍｅｋｕｒａ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ．４２：２１８－２８）、関節リウマチ、強直性脊椎炎、アトピー性皮膚炎（Ｓａｖｉｎｋｏ Ｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３２：１３９２－１４００）、乾癬などの粘膜組織の炎症、関節炎症、及び慢性皮膚炎症の疾患における発現が異常に上昇し、且つＩＬ３３／ＳＴ２伝達経路の調節不全は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（Ｈａｃｋｅｒ，Ｌａｍｂｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ａｎａｌ．２３：３７２－９、気管支炎、炎症性腸疾患（Ｂｅｌｔｒａｎ ＣＪ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｉｎｆｌａｍｍ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ．１６：１０９７－１０７）、全身性エリテマトーデス、肝線維症、全身性硬化症などの免疫を介した疾患と密切的に関連している。遺伝子レベルの分析により、ＩＬ３３及びＳＴ２遺伝子には、好塩基球の数に関連し、アトピー性皮膚炎及び喘息類疾患の発生に密切的に関連しているいくつかの一塩基多型（ＳＮＰ）部位がある（Ｓｈｉｍｉｚｕ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ．１４：２９１９－２７；Ｇｕｄｂｊａｒｔｓｓｏｎ ＤＦ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．４１：３４２－７）。したがって、ＩＬ３３とＳＴ２との結合をブロックし、ＩＬ３３／ＳＴ２シグナル経路とその誘発性炎症反応を阻害することは、炎症性免疫関連疾患治療の重要な方向になる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
発明の概要
本公開は、ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患の治療に適した、高親和力、高特異的、高い生理活性を持つＳＴ２抗体を提供する。
本公開は、ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患の治療に適した、高親和力、高特異的、高い生理活性を持つＳＴ２抗体を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本公開は、分離された抗体、例えば、ＳＴ２と結合（例えば、ヒトＳＴ２及びサルＳＴ２）するマウス、ヒト、キメラ又はヒト化のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【0008】
本公開の抗体又はその抗原結合断片には、ＳＴ２タンパク質の検出、並びにＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症の治療及び予防など様々な用途がある。前記ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症には、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性細気管支炎、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、全身性エリテマトーデス、類天疱瘡、関節リウマチ、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、肺線維症、肝線維症、全身性硬化症、サルコイドーシス、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糖尿病性疾患、心血管疾患、又はそれらの組み合わせが含まれる。
【0009】
一側面では、本公開は、重鎖ＣＤＲが含まれる、分離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。前記重鎖ＣＤＲは、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３を含む。ここで、（１）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１５で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２０で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（２）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１６で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（３）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１２で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２２で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（４）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１３で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１８で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２３で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（５）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１９で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２２で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは（６）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１８で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0010】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。ここで、配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｑ，Ｅ又はＫ、Ｘ３＝Ｋ又はＱである。
【0011】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。ここで、配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｅ、Ｘ３＝Ｋ又はＱであり；或いはＸ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｋ又はＱである。
【0012】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。ここで、配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｅ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｅ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｋ又はＱであり；或いはＸ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｋ又はＱである。
【0013】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。ここで、配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝Ｋ；Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｅ、Ｘ３＝Ｑ；或いはＸ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｋである。
【0014】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。そして、それはモノクローナル抗体（例えば、マウス、キメラ又はヒト化抗体）である。
【0015】
いくつかの実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列には、配列番号３５、３７、３９、４１、４３、４５、７１又は７３で示される配列を含むか；或いは配列番号３５、３７、３９、４１、４３、４５、７１又は７３で示される配列と比較して、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0016】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。そして、それはモノクローナル抗体（例えば、マウス、キメラ又はヒト化抗体）である。
【0017】
いくつかの具体的な実施形態において、配列番号７１で示されるアミノ酸は、配列番号７２で示される核酸によってコードされてよく、配列番号７３で示されるアミノ酸は、配列番号７４で示される核酸によってコードされてよい。
【0018】
いくつかの実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は軽鎖ＣＤＲを含む。前記軽鎖ＣＤＲは、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。ここで、（１）軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２５で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号２９で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３２で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（２）軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２６で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（３）軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは（４）軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２８で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３３で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0019】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。ここで、配列番号３０のアミノ酸配列は、ＱＸ４ＳＮＬＡＳ、Ｘ４＝Ｍ又はＬである。
【0020】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。そして、それはモノクローナル抗体（例えば、マウス、キメラ又はヒト化抗体）である。
【0021】
いくつかの実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片には軽鎖可変領域を含む。前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列には、配列番号３６、３８、４０、４２、４４、４６又は７９で示される配列を含むか；或いは、配列番号３６、３８、４０、４２、４４、４６又は７９で示される配列と比較して、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0022】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。そして、それはモノクローナル抗体（例えば、マウス、キメラ又はヒト化抗体）である。
【0023】
いくつかの具体的な実施形態において、配列番号７９で示されるアミノ酸は、配列番号８０で示される核酸によってコードされてよい。
【0024】
いくつかの実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。ここで、（１）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１５で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２０で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２５で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号２９で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３２で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（２）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１６で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２６で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（３）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１２で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２２で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（４）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１３で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１８で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２３で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（５）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１９で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２２で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３０で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは（６）重鎖ＣＤＲ１には、配列番号１１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２には、配列番号１８で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３には、配列番号２４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１には、配列番号２８で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２には、配列番号３１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び軽鎖ＣＤＲ３には、配列番号３３で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0025】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。ここで、配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｑ，Ｅ又はＫ、Ｘ３＝Ｋ又はＱである。そして、配列番号３０のアミノ酸配列は、ＱＸ４ＳＮＬＡＳであり、Ｘ４＝Ｍ又はＬである。
【0026】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。ここで、配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｅ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ｎ又はＡ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｋ又はＱである。そして、配列番号３０のアミノ酸配列は、ＱＸ４ＳＮＬＡＳであり、Ｘ４＝Ｍ又はＬである。
【0027】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。ここで、配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｅ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｅ、Ｘ３＝Ｋ又はＱ；Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｋ又はＱであり；或いはＸ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｋ又はＱである。そして、配列番号３０のアミノ酸配列は、ＱＸ４ＳＮＬＡＳであり、Ｘ４＝Ｍ又はＬである。
【0028】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。ここで、配列番号１７のアミノ酸配列は、ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＸ１Ｘ２ＫＦＸ３Ｇであり、Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝Ｋ；Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｅ、Ｘ３＝Ｑ；或いはＸ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｋである；そして、配列番号３０のアミノ酸配列は、ＱＸ４ＳＮＬＡＳであり、Ｘ４＝Ｍ又はＬである。
【0029】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。そして、それはモノクローナル抗体（例えば、マウス、キメラ又はヒト化抗体）である。
【0030】
いくつかの実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片には、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が含まれる。ここで、（１）前記重鎖可変領域には、配列番号３５で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号３６で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（２）前記重鎖可変領域には、配列番号３７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号３８で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（３）前記重鎖可変領域には、配列番号３９で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号４０で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（４）前記重鎖可変領域には、配列番号４１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号４２で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（５）前記重鎖可変領域には、配列番号４３で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号４４で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（６）前記重鎖可変領域には、配列番号４５で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号４６で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（７）前記重鎖可変領域には、配列番号７１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号７９で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは（８）前記重鎖可変領域には、配列番号７３で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖可変領域には、配列番号７９で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0031】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。そして、それはモノクローナル抗体（例えば、マウス、キメラ又はヒト化抗体）である。
【0032】
いくつかの実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は重鎖を含む。前記重鎖のアミノ酸配列には、配列番号４７、５１、５５、５９、６３、６７、７５又は７７で示される配列を含むか；或いは配列番号４７、５１、５５、５９、６３、６７、７５又は７７で示される配列と比較して、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0033】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。そして、それはモノクローナル抗体（例えば、マウス、キメラ又はヒト化抗体）である。
【0034】
いくつかの具体的な実施形態において、前記配列番号４７、５１、５５、５９、６３、６７、７５及び７７で示されるアミノ酸は、それぞれ配列番号４８、５２、５６、６０、６４、６８、７６及び７８で示される核酸によってコードされてもよい。
【0035】
いくつかの実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は軽鎖を含む。前記軽鎖のアミノ酸配列には、配列番号４９、５３、５７、６１、６５、６９又は８１で示される配列を含むか；或いは、配列番号４９、５３、５７、６１、６５、６９又は８１で示される配列と比較して、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0036】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。そして、それはモノクローナル抗体（例えば、マウス、キメラ又はヒト化抗体）である。
【0037】
いくつかの具体的な実施形態において、前記配列番号４９、５３、５７、６１、６５、６９及び８１で示されるアミノ酸は、それぞれ配列番号５０、５４、５８、６２、６６、７０及び８２で示される核酸によってコードされてもよい。
【0038】
いくつかの実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、重鎖及び軽鎖を含む。ここで、（１）前記重鎖には、配列番号４７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号４９で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（２）前記重鎖には、配列番号５１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号５３で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（３）前記重鎖には、配列番号５５で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号５７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（４）前記重鎖には、配列番号５９で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号６１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（５）前記重鎖には、配列番号６３で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号６５で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（６）前記重鎖には、配列番号６７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号６９で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；（７）前記重鎖には、配列番号７５で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号８１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは（８）前記重鎖には、配列番号７７で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び前記軽鎖には、配列番号８１で示される配列又はそれと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0039】
いくつかの具体的な実施形態において、前記分離された抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。そして、それはモノクローナル抗体（例えば、マウス、キメラ又はヒト化抗体）である。
【0040】
いくつかの実施形態において、前記分離された抗体（例えば、マウス、キメラ又はヒト化抗体）又はその抗原結合断片は、重鎖及び軽鎖を含む。前記重鎖には、重鎖可変領域及び重鎖定常領域が含まれる。前記軽鎖には、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域が含まれる。ここで、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は上記アミノ酸配列を含む。重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４定常領域を有し、好ましくはヒトＩｇＧ２定常領域を有する。軽鎖定常領域は、ヒトκ定常領域又はλ定常領域を有する。ここで、この抗体又は抗原結合断片は、ＳＴ２と結合する。
【0041】
いくつかの実施形態において、本公開の抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む、又は２つの重鎖及び２つの軽鎖から構成される。重鎖及び軽鎖はジスルフィド結合によって連結されている。ここで、各々の重鎖は、上記重鎖定常領域、重鎖可変領域又はＣＤＲ配列を含み、各々の軽鎖は、上記軽鎖定常領域、軽鎖可変領域又はＣＤＲ配列を含む。ここで、重鎖可変領域のＣ－末端は、重鎖定常領域のＮ－末端に連結されており、軽鎖可変領域のＣ－末端は、軽鎖定常領域のＮ－末端に連結されている。本公開の抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプの全長抗体であってもよい。別の実施形態において、本公開の抗体は、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、又は、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ又は分離されたＣＤＲ領域などの抗体断片であってもよい。
【0042】
一側面では、本公開は、本公開の抗体又はその抗原結合断片、並びに他の機能的分子を含むポリペプチド融合体を提供する。前記他の機能的分子は、ペプチド又はタンパク質又は非タンパク質であってもよい。前記ポリペプチド融合体には、ＳＴ２と結合する機能、並びに１つ又は複数の他の機能がある。一側面では、本公開は、さらに本公開の抗体又はその抗原結合断片、並びに前記抗体又は抗原結合断片の特異性と異なると少なくとも１つ他の機能部分を含む多重特異性分子を提供する。前記他の機能部分は、別のペプチド又はタンパク質であってもよく、前記多重特異性分子は、ＳＴ２及び少なくとも１つの他の疾患関連タンパク質、例えば、ＩｇＥと結合することができる。一方、本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、ウイルスベクターによってコードされる又はウイルスベクターによって担持される。
【0043】
一側面では、本公開は、さらに本公開の抗体又はその抗原結合断片、本公開の多重特異性分子、ポリペプチド融合体、又はウイルスベクター、並びに薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又は担体を含む医薬組成物を提供する。
【0044】
一側面では、本公開は、さらに本公開の抗体又はその抗原結合断片をコードする分離された核酸分子、前記核酸分子を含む発現ベクター、並びに前記発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。
【0045】
一側面では、本公開は、さらにＳＴ２抗体又はその抗原結合断片を調製する方法を提供する。その方法には以下の手順が含まれる：（ｉ）宿主細胞に抗体又はその抗原結合断片を発現させること、及び（ｉｉ）宿主細胞又はその細胞培養物から抗体又はその抗原結合断片を分離すること。
【0046】
一方、本公開は、被験者由来のサンプルにおけるＳＴ２発現量を検出する方法を提供する。この方法には、本公開の抗体又はその抗原結合断片とＳＴ２との結合可能な条件下で（又はＳＴ２と複合体を形成する条件下で）、前記サンプルを抗体又はその抗原結合断片と接触する手順が含まれる。
【0047】
一方、本公開は、必要のある被験者でＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症を治療又は寛解する方法を提供する。前記ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症には、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性細気管支炎、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、全身性エリテマトーデス、類天疱瘡、関節リウマチ、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、肺線維症、肝線維症、全身性硬化症、サルコイドーシス、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糖尿病性疾患、心血管疾患、又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。その方法には、前記被験者に治療有効量の本公開の抗体又はその抗原結合断片、又はその医薬組成物を投与することが含まれる。いくつかの実施形態において、この方法には、前記被験者に治療有効量の本公開の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子を投与することが含まれる。いくつかの実施形態において、この方法には、前記被験者に治療有効量の本公開のポリペプチド融合体、多重特異性分子、ウイルスベクター、又はその医薬組成物を投与することが含まれる。いくつかの実施形態において、前記多重特異性分子は、ＳＴ２及び少なくとももう１つの疾患関連タンパク質、例えば、ＴＳＬＰ、ＩｇＥ、ＩＬ４、ＩＬ１３又はＩＬ－５と結合できる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの他の抗体は、本公開の抗体又はその抗原結合断片と一緒に使用される。例えば、ＴＳＬＰ抗体、ＴＳＬＰＲ抗体、ＩＬ４抗体、ＩＬ４Ｒ抗体、ＩｇＥ抗体である。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの別の医薬は、本公開の抗体又はその抗原結合断片と一緒に使用される。例えば、抗喘息薬、抗慢性閉塞性肺疾患薬、抗潰瘍性大腸炎薬、抗アブノマル皮膚炎薬、又は抗乾癬薬である。
【0048】
次の特定の説明と実施形態に基づいて、この開示の他の特性と利点はより明確になり、特定の説明と実施形態を制限的と解釈すべきではない。本公開に引用されているすべての文献、ＧｅｎＢａｎｋレコード、特許及びすでに公開された特許出願の内容は、参照を通じて本公開に明確に含まれている。
【図面の簡単な説明】
【0049】
【図1】図１：ＥＬＩＳＡ検出による一定の濃度範囲内におけるキメラ抗ＳＴ２抗体とｈＳＴ２との結合である。図１は、キメラ抗体ｘｉ１７Ｅ２、ｘｉ８Ｆ４、ｘｉ２６Ａ１、ｘｉ３１Ｃ８、ｘｉ３Ｃ６、ｘｉ７Ｄ１はｈＳＴ２との結合を示し、ＲＧ６１４９の結合をコントロールとして示している。
【図2】図２：ＥＬＩＳＡ検出による一定の濃度範囲内におけるキメラ抗ＳＴ２抗体とｃｙｎｏ－ＳＴ２との結合である。図２は、キメラ抗体ｘｉ１７Ｅ２、ｘｉ８Ｆ４、ｘｉ２６Ａ１、ｘｉ３１Ｃ８、ｘｉ３Ｃ６、ｘｉ７Ｄ１はｃｙｎｏ－ＳＴ２との結合を示し、ＲＧ６１４９の結合をコントロールとして示している。
【図3】図３：ＥＬＩＳＡ検出による一定の抗体濃度範囲内におけるキメラ抗ＳＴ２抗体のＩＬ３３／ＳＴ２結合に対する阻害作用。図３は、キメラ抗体ｘｉ２６Ａ１、ｘｉ７Ｄ１、ｘｉ１７Ｅ２、ｘｉ３１Ｃ８、ｘｉ３Ｃ６、ｘｉ８Ｆ４のＩＬ３３／ＳＴ２結合に対する阻害を示し、ＲＧ６１４９の阻害をコントロールとして示している。
【図4】図４：ＥＬＩＳＡ検出による一定の濃度範囲内におけるヒト化抗ＳＴ２抗体とｈＳＴ２との結合である。図４は、ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２はｈＳＴ２との結合を示し、キメラ抗体ｘｉ３１Ｃ８、ＲＧ６１４９及びＧＳＫ３７７２８４７の結合をコントロールとして示し、ＩｇＧ２の結合をネガティブコントロールとして示している。
【図5】図５：ＥＬＩＳＡ検出による一定の濃度範囲内におけるヒト化抗ＳＴ２抗体とｃｙｎｏ－ＳＴ２との結合である。図５は、ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２はｃｙｎｏ－ＳＴ２との結合を示し、キメラ抗体ｘｉ３１Ｃ８、ＲＧ６１４９及びＧＳＫ３７７２８４７の結合をコントロールとして示し、ＩｇＧ２の結合をネガティブコントロールとして示している。
【図6】図６：ＥＬＩＳＡ検出による一定の抗体濃度範囲内におけるヒト化抗ＳＴ２抗体のＩＬ３３／ＳＴ２結合に対する阻害作用。図６は、ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２のＩＬ３３／ＳＴ２結合に対する阻害を示し、キメラ抗体ｘｉ３１Ｃ８、ＲＧ６１４９及びＧＳＫ３７７２８４７の阻害をコントロールとして示している。
【図7】図７：ＦＡＣＳ検出による一定の抗体濃度範囲内におけるキメラ抗ＳＴ２抗体のｈＳＴ２過剰発現細胞に対する結合作用。図７は、キメラ抗体ｘｉ３１Ｃ８、ｘｉ２６Ａ１、ｘｉ７Ｄ１、ｘｉ３Ｃ６、ｘｉ８Ｆ４、ｘｉ１７Ｅ２がｈＳＴ２過剰発現ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ細胞との結合を示し、ＲＧ６１４９の結合をコントロールとして示し、ＩｇＧ４の結合をネガティブコントロールとして示している。
【図8】図８：ＦＡＣＳ検出による一定の抗体濃度範囲内におけるキメラ抗ＳＴ２抗体のｃｙｎｏ－ＳＴ２過剰発現細胞に対する結合作用。図８は、キメラ抗体ｘｉ３１Ｃ８、ｘｉ２６Ａ１、ｘｉ７Ｄ１、ｘｉ３Ｃ６、ｘｉ８Ｆ４、ｘｉ１７Ｅ２がｃｙｎｏ－ＳＴ２過剰発現ＨＥＫ２９３Ｔ－Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ細胞との結合を示し、ＲＧ６１４９の結合をコントロールとして示し、ＩｇＧ４の結合をネガティブコントロールとして示している。
【図9】図９：細胞活性検出による一定の抗体濃度範囲内におけるキメラ抗ＳＴ２抗体のＩＬ３３／ＳＴ２結合に対する阻害作用。図９は、キメラ抗体ｘｉ３１Ｃ８、ｘｉ２６Ａ１、ｘｉ７Ｄ１、ｘｉ３Ｃ６による、ＩＬ３３タンパク質とｈＳＴ２発現ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ細胞との相互作用の阻害を示し、ＲＧ６１４９の阻害をコントロールとして示している。
【図10】図１０：ＦＡＣＳ検出による一定の抗体濃度範囲内におけるヒト化抗ＳＴ２抗体のｈＳＴ２過剰発現細胞に対する結合作用。図１０は、ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２がｈＳＴ２過剰発現ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ細胞との結合を示し、キメラ抗体ｘｉ３１Ｃ８、ＲＧ６１４９及びＧＳＫ３７７２８４７の結合をコントロールとして示し、ＩｇＧ２の結合をネガティブコントロールとして示している。
【図11】図１１：細胞活性検出による一定の抗体濃度範囲内におけるヒト化抗ＳＴ２抗体のＩＬ３３／ＳＴ２結合に対する阻害作用。図１１は、ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２による、ＩＬ３３タンパク質とｈＳＴ２発現ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ細胞との相互作用の阻害を示し、キメラ抗体ｘｉ３１Ｃ８、ＲＧ６１４９及びＧＳＫ３７７２８４７の阻害をコントロールとして示し、ＩｇＧ２の阻害をネガティブコントロールとして示している。
【発明を実施するための形態】
【0050】
本公開で使用される用語は、制限を目的としたものではなく、特定の例を説明するためだけのものであることを理解すべきである。特に定義されていない限り、本公開に使用されているすべての技術的及び科学用語の意味は、当業者が通常理解しているものと同じである。
【0051】
「ＳＴ２」には、ＳＴ２改変体、相同体、ホモログ及びオーソログを含む。例えば、いくつかの実施形態において、ヒトＳＴ２タンパク質に特異的な抗体は、場合によっては別の生物種（例えば、サル）のＳＴ２タンパク質と交差反応することができる。いくつかの実施形態において、ヒトＳＴ２タンパク質に特異的な抗体は、他の生物種又はその他タイプのタンパク質と特異的に交差反応せず、ヒトＳＴ２タンパク質に特異的に交差反応することができ、或いは全ての他の生物種のＳＴ２タンパク質と交差反応せず、ある特定の生物種と交差反応できる。
【0052】
「ヒトＳＴ２」又は「ｈＳＴ２」という用語などは、本開示で交換可能であり、ヒトＳＴ２アミノ酸配列、例えば配列番号１で示されるヒトＳＴ２アミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。前記タンパク質は、いくつかのドメインで構成されている：アミノ酸１－１８番目は、リーダー配列に対応し、アミノ酸１９－３３１番目は、細胞外ドメインに対応し、アミノ酸３３２－３５０番目は、膜貫通ドメインに対応し、アミノ酸３５１－５５６番目は、細胞内ドメインに対応する。「サルＳＴ２」又は「ｃｙｎｏ－ＳＴ２」という用語などは、本開示で交換可能であり、サルＳＴ２アミノ酸配列、例えば配列番号１０で示されるサルＳＴ２アミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。
【0053】
本公開の「抗体」には、全長抗体及びその任意の抗原結合断片（即ち、「抗原結合部分」）又は単鎖を含む。全長抗体には、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質であり、重鎖及び軽鎖はジスルフィド結合によって連結されている。それぞれの重鎖は重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、即ち、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬから構成される。ＶＨ及びＶＬ区は、さらに超可変領域、即ち、相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び配列が相対保存的なフレームワーク領域（ＦＲ）に分けられる。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。アミノ基端からカルボキシル基端までは、それぞれＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の通りである。重鎖及び軽鎖の可変領域には、抗原と相互作用する結合ドメインが含まれる。抗体の定常領域は、免疫グロブリンと宿主組織又は因子との結合を媒介することができる。前記宿主組織又は因子には、免疫系の複数の細胞（例えば、効果細胞）及び古典的な補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が含まれる。
【0054】
抗体の「抗原結合断片」又は「抗体結合部分」は、抗体の１つ又は複数の断片を指し、抗原（例えば、ＳＴ２タンパク質）との特異的結合機能を保持する。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片を通して実施することがすでに確認されている。抗体の「抗原結合部分／断片」という用語に含まれる例示には、（ｉ）Ｆａｂ断片：ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインから構成される単価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片：ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋で連結された２つのＦａｂ断片が含まれる二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインから構成されるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の一方のアームにおけるＶＬ及びＶＨドメインから構成されるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインから構成されるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３４１：５４４－５４６（１９８９）を参照）；（ｖｉ）分離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；並びに（ｖｉｉ）ナノ抗体：単一の可変ドメイン及び２つの定常ドメインを含む重鎖可変領域；がある。また、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬ及びＶＨは異なる遺伝子によってコードされるが、組換えの方法を用いてリンカーを合成し、ＶＨ及びＶＬを単一のタンパク質鎖に連結できる。ここで、ＶＬ及びＶＨは、ペアリングして単価の分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と呼ばれる；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４２：４２３－４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９－５８８３（１９８８）を参照）を形成する。これらの単鎖抗体も、抗原結合部分／断片という用語に含まれている。これらの抗体断片は、当業者で既知の従来技術によって得られることができ、且つ断片は全長抗体と同じ方法で機能スクリーニングにより得られる。
【0055】
「分離された抗体」は、実質的に異なる抗原特異性を持つ他の抗体を含まない抗体を意味する（例えば、ＳＴ２タンパク質と特異的に結合する分離された抗体は実質的にＳＴ２以外の抗原に特異的結合するタンパク質を含まない抗体である）。しかし、ヒトＳＴ２タンパク質と特異的結合する、分離された抗体は、他の抗原（例えば、他の生物種由来するＳＴ２タンパク質）と交差結合性を持っている可能性がある。また、分離された抗体は、実質的に他の細胞成分及び／又は化学物質を含まないことである。
【0056】
「マウス抗体」又は「マウス由来抗体」は、可変領域でのフレームワーク領域及びＣＤＲ領域は全てマウス系免疫グロブリン配列から由来する抗体を意味する。また、抗体に定常領域が含まれば、定常領域もマウス系免疫グロブリン配列から由来する。本公開のマウス抗体には、マウス系免疫グロブリン配列によってコードされるアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダム又は点変異又はｉｎ ｖｉｖｏでの細胞変異を通じて導入された変異）が含まれてもよいが、「マウス抗体」には、マウスのフレームワーク配列に他の哺乳類からのＣＤＲ配列が挿入された抗体が含まない。
【0057】
「キメラ抗体」は、非ヒトからの遺伝的物質とヒトからの遺伝的物質を組み合わせて作られた抗体を意味する。或いは、より一般的に言えば、キメラ抗体は、ある種の生物種の遺伝的物質及びと別の生物種的遺伝的物質からの抗体である。本公開において、キメラ抗体も「Ｘｉ」と表される。
【0058】
「ヒト化抗体」は、非ヒト生物種からの抗体であるが、そのタンパク質配列が人間によって自然に生成される抗体の類似性を高めるために修正されている抗体を意味する。本公開において、ヒト化抗体も「ｈｚ」と表される。
【0059】
「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体カテゴリ（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ１）を意味する。
【0060】
「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」は、本公開において、「抗原と特異的結合した抗体」という用語と相互交換的に使える。
【0061】
「ヒトＳＴ２と特異的結合する」抗体は、ヒトＳＴ２タンパク質（さらに他の非ヒト生物種のＳＴ２タンパク質もあり得る）と結合するが、実質的に非ＳＴ２タンパク質と結合しない抗体を意味する。好ましくは、抗体は、「高親和力」でヒトＳＴ２と結合する。即ち、ＫＤが５．０×１０－８Ｍ以下であり、１．０×１０－８Ｍ以下であり、好ましくは５．０×１０－９Ｍ以下であり、１．０×１０－９Ｍ以下であり、より好ましくは５．０×１０－１０Ｍ以下であり、１．０×１０－１０Ｍ以下である。
【0062】
タンパク質又は細胞に「実質的に結合しない」という用語は、タンパク質又は細胞と結合しない、又は高親和力でそれと結合しない。即ち、タンパク質又は細胞と結合するＫＤが１．０×１０－６Ｍ以上であり、好ましくは１．０×１０－５Ｍ以上であり、１．０×１０－４Ｍ以上であり、より好ましくは１．０×１０－３Ｍ以上であり、１．０×１０－２Ｍ以上である。
【0063】
ＩｇＧの場合、「高親和力」という用語は、ＫＤが１．０×１０－６Ｍ以下であり、１．０×１０－７Ｍ以下であり、好ましくは１．０×１０－８Ｍ以下であり、５．０×１０－９Ｍ以下であり、より好ましくは１．０×１０－９Ｍ以下である。しかし、他の抗体アイソタイプの場合、「高親和力」で結合することが前記意味ではない。例えば、ＩｇＭアイソタイプの「高親和力」で結合するとは、ＫＤが１０－６Ｍ以下であり、好ましくは１０－７Ｍ以下であり、より好ましくは１０－８Ｍ以下である。
【0064】
「同一性」は、２つの核酸配列間又は２つのポリペプチド間の類似性を意味する。本公開の配列同一性は、少なくとも８０％、８５％、９０％又は９５％であり、好ましくは少なくとも９５％である。非制限性の例には、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％が含まれる。２つの配列間の配列対比及び同一性比率の測定は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅＷｅｂサイト上のＢＬＡＳＴＮ／ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルト設定によって実行できる。
【0065】
「ＥＣ５０値」という用語は、半分の有効濃度とも言われ、特定の暴露時間の後に、最大効果の５０％に達した抗体濃度を意味する。
【0066】
「ＩＣ５０値」という用語は、半分の抑制性濃度とも言われ、抗体のない場合と比較して、規定の生物学・生化学機能の５０％が阻害された抗体濃度を意味する。
【0067】
「抑制」又は「阻害」という用語は相互交換的に使え、且つ部分的及び完全に抑制／阻害が含まれる。いくつかの実施形態において、ＳＴ２抗体は、ＩＬ３３／ＳＴ２の結合を少なくとも約５０％抑制し、例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又は１００％抑制する。
【0068】
「被験者」という用語は、任意の人又は非ヒト動物が含まれる。「非ヒト動物」という用語は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物及非哺乳動物が含まれ、好ましくは哺乳動物であり、例えば、非ヒトの霊長類動物、ヒツジ、犬、ネコ、ウシ及びウマである。
【0069】
「治療有効量」という用語は、疾患又は病症の予防又は改善に十分な量、及び／又は疾患又は病症の厳重性を軽減する量を意味し、病気の重症度の低下、無症候性期間の頻度と持続時間の増加、病気によって引き起こされる損傷又は無能を予防できる量ことが好ましい。治療有効量は、治療された疾患に関連しており、当業者は実際の有効量を簡単に決定できる。
【0070】
特に説明しない限り、単一数の使用には複数形が含まれる。特に説明しない限り、それ以外の場合、「１つ」又は「１種類」という言葉は、「少なくとも１つ」又は「少なくとも１種類」を意味する。特に説明しない限り、「少なくとも１つ」は、「１つ又は複数の」の意味に相当し、「及び／又は」の使用は「及び」或いは「又は」を意味する。
【0071】
この開示の多くの側面については、より具体的に以下で説明する。
【0072】
抗ＳＴ２抗体がＳＴ２と特異的に結合してＩＬ３３／ＳＴ２の相互作用を阻害し、並びに、他の有益な機能特徴
本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、高親和力でヒトＳＴ２と特異的に結合する。本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２（例えば、ヒトＳＴ２及びサルＳＴ２）に特異的結合して、ＩＬ３３／ＳＴ２の結合及びそのシグナル伝導を阻害する。本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ４＋Ｔ細胞上でＩＬ３３／ＳＴ２によって誘導されたＩＬ５の分泌を阻害する。本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、実質的に他のＩＬ－１Ｒファミリー受容体、例えば、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ１Ｒ３、ＩＬ１Ｒ７、ＩＬ１Ｒ８及びＩＬ１Ｒ９と結合しない。本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、良好的な物理的安定性（例えば、熱安定性）を有する。本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、長い体内半減期を持っている。
本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、高親和力でヒトＳＴ２と特異的に結合する。本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、ＳＴ２（例えば、ヒトＳＴ２及びサルＳＴ２）に特異的結合して、ＩＬ３３／ＳＴ２の結合及びそのシグナル伝導を阻害する。本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ４＋Ｔ細胞上でＩＬ３３／ＳＴ２によって誘導されたＩＬ５の分泌を阻害する。本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、実質的に他のＩＬ－１Ｒファミリー受容体、例えば、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ１Ｒ３、ＩＬ１Ｒ７、ＩＬ１Ｒ８及びＩＬ１Ｒ９と結合しない。本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、良好的な物理的安定性（例えば、熱安定性）を有する。本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、長い体内半減期を持っている。
【0073】
好ましくは、本公開のＳＴ２抗体はモノクローナル抗体である。また、抗体は、例えば、マウス、キメラ又はヒト化モノクローナル抗体であってもよい。
【0074】
ＳＴ２モノクローナル抗体
好ましくは、本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、以下で説明する構造と化学的特性の抗体である。ＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、重鎖ＣＤＲ領域及び軽鎖ＣＤＲ領域が含まれる。ここで、表１及び表２に重鎖ＣＤＲ配列、並びに軽鎖ＣＤＲ配列を例示的に提供する。ＳＴ２抗体又はその抗原結合断片には、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が含まれる。ここで、表３に、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を例示的に提供する。一部の抗体には同じＣＤＲがあり、一部の抗体には同じＶＨ又はＶＬがある。抗体の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域であっても良く、抗体の軽鎖定常領域は、ヒトκ軽鎖定常領域であってもよい。これらの抗体は、さらにマウスＩｇＧ１又はＩｇＧ４重鎖定常領域及び／又はマウスκ軽鎖定常領域が含まれることができる。
好ましくは、本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、以下で説明する構造と化学的特性の抗体である。ＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は、重鎖ＣＤＲ領域及び軽鎖ＣＤＲ領域が含まれる。ここで、表１及び表２に重鎖ＣＤＲ配列、並びに軽鎖ＣＤＲ配列を例示的に提供する。ＳＴ２抗体又はその抗原結合断片には、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が含まれる。ここで、表３に、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を例示的に提供する。一部の抗体には同じＣＤＲがあり、一部の抗体には同じＶＨ又はＶＬがある。抗体の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域であっても良く、抗体の軽鎖定常領域は、ヒトκ軽鎖定常領域であってもよい。これらの抗体は、さらにマウスＩｇＧ１又はＩｇＧ４重鎖定常領域及び／又はマウスκ軽鎖定常領域が含まれることができる。
【0075】
表１における重鎖ＣＤＲ領域及び表２における軽鎖ＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔ番号システムで定義される。しかし、本分野で公知しているように、ＣＤＲ領域は、重／軽鎖可変領域配列に基づき、他の番号システム例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ又はＣｏｎｔａｃｔ番号システム／方法によって決定される。
【0076】
【表1】
【0077】
【表2】
【0078】
【表3-1】
【0079】
【表3-2】
【0080】
【表4-1】
【0081】
【表4-2】
【0082】
【表4-3】
【0083】
【表4-4】
【0084】
【表4-5】
【0085】
【表4-6】
【0086】
ヒトＳＴ２と結合する他の抗ＳＴ２抗体のＶＨ及び／又はＶＬ配列（又はＣＤＲ配列）は、本公開の抗体のＶＨ及び／又はＶＬ配列（又はＣＤＲ配列）と「組合せ、ペアリング」することができる。好ましくは、ＶＨ及びＶＬ鎖（又はそのＣＤＲ）を組合せ、ペアリングする場合には、特定のＶＨ／ＶＬペアにおけるＶＨ配列は、似ている構造を持つＶＨ配列に置き換えることができる。同様に、好ましくは特定のＶＨ／ＶＬペアにおけるＶＬ配列を似ている構造を持つＶＬ配列に置き換えることができる。
【0087】
したがって、一実施形態において、本公開の抗体又はその抗原結合断片には、
（ａ）表３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
（ｂ）表３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又はヒトＳＴ２と特異的に結合するもう１つのＳＴ２抗体のＶＬ；が含まれる。
（ａ）表３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
（ｂ）表３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又はヒトＳＴ２と特異的に結合するもう１つのＳＴ２抗体のＶＬ；が含まれる。
【0088】
別の実施形態において、本公開の抗体又はその抗原結合断片には、
（ａ）表１に示される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３；及び
（ｂ）表２に示される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はヒトＳＴ２と特異的に結合するもう１つのＳＴ２抗体のＣＤＲｓ；が含まれる。
（ａ）表１に示される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３；及び
（ｂ）表２に示される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はヒトＳＴ２と特異的に結合するもう１つのＳＴ２抗体のＣＤＲｓ；が含まれる。
【0089】
別の実施形態において、本公開の抗体又はその抗原結合断片には、本公開のＳＴ２抗体の重鎖ＣＤＲ２と、ヒトＳＴ２と結合する他の抗体のＣＤＲ、例えば他のＳＴ２抗体の重鎖ＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ３、及び／又は軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３とが含まれる。
【0090】
また、本分野で既知のように、ＣＤＲ３ドメインはＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２ドメインと無関係であり、同種抗原に対する抗体の結合特異性を独立して決定することができ、且つ該ＣＤＲ３配列に基づき同じ結合特異性を持つ複数の抗体を生成できると予測できる。例えば、Ｋｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ． ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ．８３（２）：２５２－２６０（２０００）；Ｂｅｉｂｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：８３３－８４９（２０００）；Ｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５：８９１０－８９１５（１９９８）；Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６：２１６１－２１６２（１９９４）；Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９２：２５２９－２５３３（１９９５）；Ｄｉｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：７３９－７４９（１９９６）；Ｂｅｒｅｚｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＢＩＡｊｏｕｒｎａｌ ８：Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｖｉｅｗ ８（２００１）；Ｉｇａｒａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｔｏｋｙｏ）．１１７：４５２－７（１９９５）；Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．７２：８０７－１０（１９９８）；Ｌｅｖｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：４３７４－８（１９９３）；Ｐｏｌｙｍｅｎｉｓ ａｎｄ Ｓｔｏｌｌｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５２１８－５３２９（１９９４）ａｎｄ Ｘｕ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１３：３７－４５（２０００）；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．６，９５１，６４６；６，９１４，１２８；６，０９０，３８２；６，８１８，２１６；６，１５６，３１３；６，８２７，９２５；５，８３３，９４３；５，７６２，９０５及び５，７６０，１８５を参照してください。これらの参考文献はすべて参照によりこの公開に引用される。
【0091】
別の実施形態において、本公開の抗体又はその抗原結合断片は、本公開のＳＴ２抗体の重鎖ＣＤＲ２、並びに少なくとも本公開のＳＴ２抗体の重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲ３、又はヒトＳＴ２と特異的に結合するもう１つのＳＴ２抗体の重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲ３を含む。好ましくは、これらの抗体と本公開のＳＴ２抗体とは（ａ）ＳＴ２と競合に結合する；（ｂ）機能特徴を維持する；（ｃ）同じ的エピトープと結合する；及び／又は（ｄ）本公開が有する同様な結合親和力を持っている。別の実施形態において、本公開の抗体又はその抗原結合断片には、さらに本公開のＳＴ２抗体の軽鎖ＣＤＲ２、又はヒトＳＴ２と特異的に結合するもう１つのＳＴ２抗体の軽鎖ＣＤＲ２を含む。本公開の抗体又はその抗原結合断片は、さらに本公開のＳＴ２抗体の重及び／又は軽鎖ＣＤＲ１、又はヒトＳＴ２と特異的に結合するもう１つのＳＴ２抗体の重及び／又は軽鎖ＣＤＲ１を含む。
【0092】
保存的修飾
別の実施形態において、本公開の抗体又はその抗原結合断片には、本公開のＳＴ２抗体に対して１つ又は複数の保存的修飾された重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む。本分野で理解されるべきものは、いくつかの保存的な配列の修正は、抗原結合を消滅させない。例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ ３２：１１８０－８（１９９３）；ｄｅ Ｗｉｌｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：８３５－４１（１９９７）；Ｋｏｍｉｓｓａｒｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２： ２６８６４－２６８７０（１９９７）；Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：１６０５－１２（１９９２）；Ｋｅｌｌｅｙ ａｎｄ Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：６８６２－３５（１９９３）；Ａｄｉｂ－Ｃｏｎｑｕｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：３４１－６（１９９８）；Ｂｅｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎ．Ｒｅｓ．６：２８３５－４３（２０００）を参照してください。
別の実施形態において、本公開の抗体又はその抗原結合断片には、本公開のＳＴ２抗体に対して１つ又は複数の保存的修飾された重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む。本分野で理解されるべきものは、いくつかの保存的な配列の修正は、抗原結合を消滅させない。例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ ３２：１１８０－８（１９９３）；ｄｅ Ｗｉｌｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：８３５－４１（１９９７）；Ｋｏｍｉｓｓａｒｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２： ２６８６４－２６８７０（１９９７）；Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：１６０５－１２（１９９２）；Ｋｅｌｌｅｙ ａｎｄ Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：６８６２－３５（１９９３）；Ａｄｉｂ－Ｃｏｎｑｕｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：３４１－６（１９９８）；Ｂｅｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎ．Ｒｅｓ．６：２８３５－４３（２０００）を参照してください。
【0093】
したがって、一実施形態において、抗体には、重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域が含まれる、前記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域には、それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３が含まれる。その中で、
（ａ）重鎖可変領域のＣＤＲ１配列には、表１に示される配列、及び／又はその保存的修飾が含まれる；及び／又は
（ｂ）重鎖可変領域のＣＤＲ２配列には、表１に示される配列、及び／又はその保存的修飾が含まれる；及び／又は
（ｃ）重鎖可変領域のＣＤＲ３配列には、表１に示される配列、及び／又は及びその保存的修飾が含まれる；及び／又は
（ｄ）軽鎖可変領域のＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列には、表２に示される配列；及び／又はその保存的修正が含まれる；且つ
（ｅ）抗体は、ヒトＳＴ２と特異的に結合する。
（ａ）重鎖可変領域のＣＤＲ１配列には、表１に示される配列、及び／又はその保存的修飾が含まれる；及び／又は
（ｂ）重鎖可変領域のＣＤＲ２配列には、表１に示される配列、及び／又はその保存的修飾が含まれる；及び／又は
（ｃ）重鎖可変領域のＣＤＲ３配列には、表１に示される配列、及び／又は及びその保存的修飾が含まれる；及び／又は
（ｄ）軽鎖可変領域のＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列には、表２に示される配列；及び／又はその保存的修正が含まれる；且つ
（ｅ）抗体は、ヒトＳＴ２と特異的に結合する。
【0094】
本公開の抗体には、例えば、ヒトＳＴ２に対する高親和力、並びにＩＬ３３／ＳＴ２の結合及びそのシグナル伝導の阻害など１つ又は複数の機能特性を持っている。
【0095】
複数の実施形態において、抗体は、マウス、キメラ又はヒト化抗体又はその抗原結合断片であってもよい。
【0096】
本公開で使用される「保存の配列修飾」という用語は、抗体結合特性に大きな影響を与えないアミノ酸修飾を意味する。このような保存的修飾には、アミノ酸置換、添加及び欠失が含まれる。本分野で已知している標準的な技術、例えば点変異及びＰＣＲを介した変異などによって、修飾は、本公開の抗体に導入される。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似した側鎖のアミノ酸残基に置換されることを指す。類似した側鎖のアミノ酸残基ファミリーは、本分野で知られている。これらのアミノ酸残基ファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、電極なし側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。したがって、本公開の抗体のＣＤＲ領域中の１つ又は複数のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーにおける他のアミノ酸残基に置換されることができ、また、得られた抗体は、本公開に記載の機能テストを使用して保留機能（即ち、上記的機能）を検出することができる。
【0097】
エンジニアリング及び修飾の抗体
本公開の抗体は、本公開のＳＴ２抗体の１つ又は複数のＶＨ／ＶＬ配列を有する抗体を出発材料として、エンジニアリングにより修飾された抗体を生成する。抗体は、１つ又は２つの可変領域（即ち、ＶＨ及び／又はＶＬ）内（例えば、１つ又は複数のＣＤＲ領域及び／又は１つ又は複数のフレームワーク領域）の１つ又は複数の残基に遺伝学的修飾を行うことができる。また、或いは、抗体では、定常領域における残基にエンジニアリング修飾、例えば、抗体のエフェクター機能の改変を行うことができる。
本公開の抗体は、本公開のＳＴ２抗体の１つ又は複数のＶＨ／ＶＬ配列を有する抗体を出発材料として、エンジニアリングにより修飾された抗体を生成する。抗体は、１つ又は２つの可変領域（即ち、ＶＨ及び／又はＶＬ）内（例えば、１つ又は複数のＣＤＲ領域及び／又は１つ又は複数のフレームワーク領域）の１つ又は複数の残基に遺伝学的修飾を行うことができる。また、或いは、抗体では、定常領域における残基にエンジニアリング修飾、例えば、抗体のエフェクター機能の改変を行うことができる。
【0098】
いくつかの実施形態において、ＣＤＲ移植は、抗体の可変領域に対する遺伝学的修飾に使用できる。抗体は、主に、６つの重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置するアミノ酸残基と標的抗原との相互作用によるものである。したがって、各抗体ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲ外の配列よりも多様である。ＣＤＲ配列は主な抗体－抗原相互作用を担当するためので、発現ベクターを構築することで、特定の天然抗体のＣＤＲ配列を異なる特性を持つ異なる抗体のスケルトンシーケンスに移植され、特定の天然抗体の特性を疑似した組換え抗体を発現させる（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ．３３２：３２３－３２７（１９９８）；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ．３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ；Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９－１００３３（１９８９）；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．５，２２５，５３９；５，５３０，１０１；５，５８５，０８９；５，６９３，７６２と６，１８０，３７０）。
【0099】
したがって、本公開の別の実施形態は、重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域が含まれる、分離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。重鎖可変領域には、本公開の上記配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域には、本公開の上記配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３が含まれる。これらの抗体には、本公開のモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬ的ＣＤＲ配列が含まれているが、それらが異なるスケルトンシーケンスを含むことができる。
【0100】
このようなスケルトンシーケンスは、生殖系抗体遺伝子配列を含むオープンＤＮＡデータベース又は公開参考文献から取得できる。例えば、ヒト重鎖可変領域及び軽鎖可変領域遺伝子に使用される生殖系ＤＮＡ配列は、Ｖｂａｓｅヒト系配列データベース（ｗｗｗ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅ）、並びにＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）（前記と同じ）から取得でき、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８（１９９２）；及びＣｏｘ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７－８３６（１９９４）から取得できる。別の実施形態において、ヒト重鎖可変領域及び軽鎖可変領域遺伝子に使用される生殖系ＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースから取得できる。
【0101】
当業者で知られているＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴの配列の類似性の検索方法の１つ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）、上記と同様である）を用いて、抗体タンパク質配列をタンパク質配列データベースと比較する。
【0102】
本公開の抗体のスケルトンシーケンスは、本公開の抗体で使用されるスケルトンシーケンスの構造に類似しているものが好ましい。ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を該スケルトンシーケンスが得られる系免疫グロブリン遺伝子と同じ配列を持つフレームワーク領域に移植する、或いはＣＤＲ配列を系配列と比較して１つ又は複数の変異を有するフレームワーク領域に移植することができる。例えば、場合によっては、フレームワーク領域中の残基を変異させるのが有益であり、抗体の抗原結合能を維持又は増強することができる（例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．５，５３０，１０１；５，５８５，０８９；５，６９３，７６２及び６，１８０，３７０を参照）。
【0103】
別のタイプの可変領域修飾は、ＶＨ及び／又はＶＬ的ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させて、目標抗体の１つ又は複数の特性（例えば、親和力、物理化学的性質）を改善することである。突然変異は、部位指向の突然変異誘発又はＰＣＲを介した突然変異誘発によって導入することができ、抗体結合又は他の機能的特性に対する変異の効果は、本分野で知られているｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏアッセイを通じて評価できる。好ましくは、本分野で知られている保存的な修飾が導入されている。アミノ酸の置換、追加又は欠失であり得、好ましくは置換である。また、通常、各ＣＤＲ内の１、２、３、４、又は５つ以下の残基が変更される。
【0104】
また、別の実施形態において、本公開は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が含まれる、分離されたＳＴ２モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。それは、以下のものを含む：（ａ）本公開の配列、又は１、２、３、４又は５つのアミノ酸置換、欠失又は添加を有するアミノ酸配列、を含むＶＨ ＣＤＲ１領域；（ｂ）本公開の配列、又は１、２、３、４又は５つのアミノ酸置換、欠失又は添加を有するアミノ酸配列、を含むＶＨ ＣＤＲ２領域；（ｃ）本公開の配列、又は１、２、３、４又は５つのアミノ酸置換、欠失又は添加を有するアミノ酸配列、を含むＶＨ ＣＤＲ３領域；（ｄ）本公開の配列、又は１、２、３、４又は５つのアミノ酸置換、欠失又は添加を有するアミノ酸配列、を含むＶＬ ＣＤＲ１領域；（ｅ）本公開の配列、又は１、２、３、４又は５つのアミノ酸置換、欠失又は添加を有するアミノ酸配列、を含むＶＬ ＣＤＲ２領域；（ｆ）本公開の配列、又は１、２、３、４又は５つのアミノ酸置換、欠失又は添加を有するアミノ酸配列、を含むＶＬ ＣＤＲ３領域。
【0105】
本公開の遺伝子組み換え抗体には、抗体の特性を改善するためにＶＨ及び／又はＶＬのフレームワーク領域が修飾された抗体が含まれている。一般に、このようなフレームワーク領域の修飾は、抗体の免疫原性を低下させる可能性がある。例えば、１つ以上のフレームワーク残基は、対応する生殖系列シーケンスへ「復帰変異」する。より具体的には、体細胞変異を受けている抗体には、得られた抗体生殖細胞配列とは異なるフレームワーク領域残基が含まれている場合がある。これらの残基は、抗体フレームワーク配列を得られた抗体の生殖線配列と比較することにより特定できる。
【0106】
別のタイプのフレームワークの修飾には、Ｔ細胞エピトープを除去するためにフレームワーク領域の１つ又は複数の残基を変異させることや１つ又は複数のＣＤＲを変異させることにより、抗体によるある免疫原性を減少させることが含まれる。この方法は「脱免疫」としても知られており、米国特許公開２００３０１５３０４３で詳細に説明されている。
【0107】
また、フレームワーク領域又はＣＤＲ領域の修飾のほか、別のタイプの修飾として、遺伝子工学に基づくここで開示された抗体のＦＣ領域の修飾は、一般的に抗体の１つ以上の機能的特性、例えば、血清半減期、補体固定、ＦＣ受容体結合、及び／又は抗原依存性細胞毒性などを変更するために使用される。また、本公開の抗体は、化学的に修飾される（例えば、１つ以上の化学官能基と結合する）やそのグリコシル化を変更するように修飾されるなど、抗体の１つ以上の機能的特性を変化させるために修飾することもできる。
【0108】
一実施形態において、例えば、ヒンジ領域のシステイン残基の数を増加又は減少させることにより、ＣＨ１ヒンジ領域が修飾される。この方法については、米国特許Ｎｏ．５，６７７，４２５で詳細に説明している。例えば、ＣＨ１ヒンジ領域のシステイン残基の数を変更すると、軽鎖と重鎖のアセンブリを促進したり、抗体の安定性を改善又は低下させたりする可能性がある。
【0109】
別の実施形態において、抗体のＦｃ－ヒンジ領域は変異して、抗体の生物学的半減期を増加又は減少させる。より具体的には、天然ＦＣヒンジドメインに対してブドウ球菌タンパク質Ａ（ＳｐＡ）との結合を減少させるように、ＦＣ－ヒンジ領域のＣＨ２－ＣＨ３領域に１つ以上のアミノ酸変異が導入される。この方法については、米国特許Ｎｏ．６，１６５，７４５で詳細に説明している。
【0110】
別の実施形態において、抗体のグリコシル化が修飾される。例えば、脱グリコシル化抗体（即ち、この抗体がグリコシル化を欠いている）を調製できる。このようなグリコシル化修飾は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を改変することによって達成することができる。例えば、１つ又は複数のアミノ酸置換を行うと、１つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位を排除するため、それらの部位でのグリコシル化を行うことができる。このような脱グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を高める可能性がある。例えば、米国特許Ｎｏ．５，７１４，３５０及び６，３５０，８６１を参照してください。
【0111】
また、フコース残基の減少を伴う低フコシル化抗体、又は二等分ＧｌｃＮａｃ構造の増加を伴う抗体など、グリコシル化の変化を伴う抗体を調製できる。グリコシル化の変化により、抗体のＡＤＣＣ活性が増加することが実証されている。このようなグリコシル化の修飾は、例えば、グリコシル化システムが変更されている宿主細胞で抗体を発現することにより達成できる。グリコシル化システムとは、周知であり、ここで本公開の組換え抗体を発現するための宿主細胞として使用して、グリコシル化の変化を伴う抗体を産生できる。例えば、細胞株ＭＳ７０４、ＭＳ７０５、及びＭＳ７０９がフコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦｕＴ８（α（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ）を欠いているため、ＭＳ７０４、ＭＳ７０５及びＭＳ７０９細胞株で発現する抗体はフコースを欠いている。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５及びＭｓ７０９ＦＵＴ８－／－細胞株は、２つの代替ベクターを使用してＣＨＯ／ＤＧ４４細胞のＦｕＴ８遺伝子の標的破壊によって調製された。（米国特許２００４０１１０７０４及びＯｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４－２２（２００４）を参照）。別の例として、ＥＰ１，１７６，１９５では、ＦＵＴ８遺伝子機能が破壊された細胞株を説明している。この遺伝子はフコシルトランスフェラーゼをコードし、そのような細胞株で発現した抗体は、α－１，６結合関連酵素を減少又は除去することにより低フコシル化を示しる。ＥＰ１，１７６，１９５では、抗体のＦｃ領域に結合したＮ－アセチルグルコサミンにフコースを添加するための酵素活性が低い又は存在しない細胞株、例えば、ラット骨髄腫細胞株Ｙｂ２／０を説明している（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６６２）。ＷＯ０３／０３５８３５は、ＣＨＯバリアント細胞株であるＬＥＣ１３細胞を説明している。これは、フコースをＡｓｎ（２９７）関連糖に追加する能力を低下させ、宿主細胞によって発現する抗体のフコシル化が低いことをもたらす。（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０（２００２）を参照）。ＷＯ０６／０８９２３１に記載されているように、グリコシル化特性の変化を伴う抗体も卵で調製できる。或いは、レムナなどの植物細胞では、グリコシル化特性が変化した抗体を調製できる。ＷＯ９９／５４３４２は、細胞株で発現した抗体がＧｌｃＮａｃ構造を増加させることでＡＤＣＣ活性を増強するように、糖タンパク質を修飾するグリコシルトランタンゼ（例えば、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼＩＩＩ（ＧＮＴＩＩＩ））を発現するように遺伝的に操作される細胞株を開示している。（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０（１９９９）を参照）。或いは、フコシダーゼは抗体のフコース残基を切断するために使用される。例えば、α－Ｌ－フコシダーゼは抗体からフコース残基を除去する。（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６－２３（１９７５））。
【0112】
本公開の抗体の別のタイプの修飾はＰＥＧ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）である。例えば、抗体のＰＥＧ化は、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させる可能性がある。ＰＥＧ化抗体を得るために、抗体又はその断片を、例えば、１つ以上のＰＥＧ基が抗体又は抗体フラグメントに付着するような条件下で、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えばＰＥＧの反応性エステル又はアルデヒド誘導体と反応させる。好ましくは、ＰＥＧ化は、活性ＰＥＧ分子（又は同様の反応性水溶性ポリマー）を使用したアシル化又はアルキル化によって実行される。本公開で使用される「ポリエチレングリコール」という用語には、モノ（Ｃ１－Ｃ１０）アルコキシ－又はアリロキシポリエチレングリコール又はポリエチレングリコールマレイミドなど、他のタンパク質誘導体を生成するためのあらゆる形態のＰＥＧが含まれている。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ化される抗体は脱グリコシル化抗体である。ＰＥＧ化の方法は周知であり、ここで開示された抗体に適用できる。例えば、ＥＰ０１５４３１６及びＥＰ０４０１３８４を参照してください。
【0113】
抗体の物理的性質
本公開の抗体は、それらの様々な物理的特性によって特徴付けられる可能性があるため、それらが属するカテゴリは決定及び／又は識別される。例えば、抗体は、軽鎖又は重鎖可変領域の１つ以上のグリコシル化部位を含むことができる。これらのグリコシル化部位は、抗体の免疫原性の増加、又は抗原結合の変化によって引き起こされる抗体のＰＫ値の変化をもたらす可能性がある（Ｍａｒｓｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ．４１：６７３－７０２（１９７２）；Ｇａｌａ＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：５４８９－９４（２００４）；Ｗａｌｌｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１６８：１０９９－１０９（１９８８）；Ｓｐｉｒｏ，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ．１２：４３Ｒ－５６Ｒ（２００２）；Ｐａｒｅｋｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１６：４５２－７（１９８５）；Ｍｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３７：６９７－７０６（２０００））。グリコシル化は、Ｎ－Ｘ－Ｓ／Ｔシーケンスを含むモチーフで発生することが知られている。特定のケースでは、ＳＴ２抗体が可変領域のグリコシル化を含まないことが好ましい。これは、可変領域にグリコシル化モチーフを含まない抗体を選択するか、グリコシル化領域内の残基を変異させることによって達成できる。
本公開の抗体は、それらの様々な物理的特性によって特徴付けられる可能性があるため、それらが属するカテゴリは決定及び／又は識別される。例えば、抗体は、軽鎖又は重鎖可変領域の１つ以上のグリコシル化部位を含むことができる。これらのグリコシル化部位は、抗体の免疫原性の増加、又は抗原結合の変化によって引き起こされる抗体のＰＫ値の変化をもたらす可能性がある（Ｍａｒｓｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ．４１：６７３－７０２（１９７２）；Ｇａｌａ＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：５４８９－９４（２００４）；Ｗａｌｌｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１６８：１０９９－１０９（１９８８）；Ｓｐｉｒｏ，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ．１２：４３Ｒ－５６Ｒ（２００２）；Ｐａｒｅｋｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１６：４５２－７（１９８５）；Ｍｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３７：６９７－７０６（２０００））。グリコシル化は、Ｎ－Ｘ－Ｓ／Ｔシーケンスを含むモチーフで発生することが知られている。特定のケースでは、ＳＴ２抗体が可変領域のグリコシル化を含まないことが好ましい。これは、可変領域にグリコシル化モチーフを含まない抗体を選択するか、グリコシル化領域内の残基を変異させることによって達成できる。
【0114】
１つの好適な実施形態において、抗体はアスパラギン異性化部位を含まないことである。アスパラギンの脱アミド化は、Ｎ－Ｇ又はＤ－Ｇシーケンスで発生し、イソアスパギン酸残基の産生をもたらし、安定性を低下させる可能性がある。
【0115】
各抗体には、通常は６～９．５のｐＨ範囲内で、ユニークな等電点（ｐＩ）がある。ＩｇＧ１抗体のｐＩは通常、７～９．５のｐＨ範囲内にあるが、ＩｇＧ４抗体のｐＩは通常６～８のｐＨ範囲内である。正常範囲外のｐＩ値を持つ抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏ条件下で展開し、不安定になる可能性があると推測されている。したがって、正常範囲内にｐＩ値を持つＳＴ２抗体が好ましい。これは、正常範囲内にｐＩ値を持つ抗体を選択するか、表面残基を変異させることによって達成できる。
【0116】
本公開抗体をコードする核酸分子
一方、本開示は、本公開抗体の重鎖及び／又は軽鎖可変領域又はＣＤＲをコードする核酸分子を提供する。核酸は、無傷の細胞、細胞溶解物、又は部分的に精製又は実質的に純粋な形に存在する場合がある。標準的な技術を使用して、他の細胞核酸又はタンパク質など、他の細胞成分又は他の汚染物質から精製すると、核酸は「分離」又は「実質的に純粋」である。本明細書に開示されている核酸は、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡである可能性があり、イントロンシーケンスを含む場合と含まない場合がある。１つの好適な実施形態において、核酸はｃＤＮＡ分子である。
一方、本開示は、本公開抗体の重鎖及び／又は軽鎖可変領域又はＣＤＲをコードする核酸分子を提供する。核酸は、無傷の細胞、細胞溶解物、又は部分的に精製又は実質的に純粋な形に存在する場合がある。標準的な技術を使用して、他の細胞核酸又はタンパク質など、他の細胞成分又は他の汚染物質から精製すると、核酸は「分離」又は「実質的に純粋」である。本明細書に開示されている核酸は、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡである可能性があり、イントロンシーケンスを含む場合と含まない場合がある。１つの好適な実施形態において、核酸はｃＤＮＡ分子である。
【0117】
本公開の核酸は、標準的な分子生物学技術を使用して得ることができる。ハイブリドーマ（例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウスから調製したハイブリドーマ）によって発現する抗体については、ハイブリドーマから調製された抗体をコードする軽鎖及び重鎖ｃＤＮＡは、標準のＰＣＲ増幅又はｃＤＮＡクローン化技術を使用して得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリーから得られた抗体（例えば、ファージディスプレイ技術の使用）の場合、そのような抗体をコードする核酸を遺伝子ライブラリーから回収できる。
【0118】
好ましくは、本公開の核酸分子には、ここで開示されているＳＴ２モノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬシーケンス又はＣＤＲをコードするものが含まれている。ＶＨ及びＶＬフラグメントをコードするＤＮＡフラグメントが取得されると、可変領域遺伝子を完全長抗体鎖遺伝子、ＦＡＢフラグメント遺伝子又はｓｃＦｖ遺伝子に変換するなどの操作は、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用してさらに実施できる。これらの操作では、ＶＬ又はＶＨをコードするＤＮＡフラグメントは、別のタンパク質、例えば、抗体定常領域又は柔軟なリンカーをコードする別のＤＮＡフラグメントに操作可能に連結している。本公開で使用される「操作可能に連結」という用語は、２つのＤＮＡフラグメントによってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように、２つのＤＮＡフラグメントが連結されることを意味する。
【0119】
ＶＨ領域をコードする分離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に操作可能に連結することにより、完全な長さの重鎖遺伝子に変換できる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は周知であり、ＤＮＡフラグメントは標準のＰＣＲ増幅を取得できる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、又はＩｇＤ定常領域である可能性があるが、ＩｇＧ２定常領域で最も好ましい。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子の場合、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に操作可能に連結できる。
【0120】
ＶＬ領域をコードする分離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域（ＣＬ）をコードする別のＤＮＡ分子に操作可能に連結することにより、完全な長さの軽鎖遺伝子（及びＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換できる。ヒトの軽鎖定常領域遺伝子の配列は周知であり、ＤＮＡフラグメントは標準のＰＣＲ増幅を取得できる。好適な実施形態において、軽鎖定常領域はκ又はλ軽鎖定常領域である可能性がある。
【0121】
ｓｃＦｖ遺伝子を調製するために、ＶＨ及びＶＬをコードしたＤＮＡフラグメントを、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）３などの柔軟なリンカーをコードする別の断片に操作可能に連結することにより、ＶＨ及びＶＬシーケンスを連続単一鎖タンパク質として発現できる。ここで、このＶＬ及びＶＨ領域は柔軟なリンカーを介して連結されている（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３（１９８８）；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４（１９９０）を参照）。
【0122】
本公開のモノクローナル抗体の調製
本公開のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎＮａｔｕｒｅ．２５６：４９５（１９７５）の自然の体細胞ハイブリダイゼーション（ハイブリドーマ）技術を使用して調製できる。モノクローナル抗体を調製するための他の実施形態には、Ｂリンパ球のウイルス形質転換及びファージ表示技術が含まれる。キメラ又はヒト化された抗体も本分野でよく知られている。例えば、米国特許４，８１６，５６７；５，２２５，５３９；５，５３０，１０１；５，５８５，０８９；５，６９３，７６２及び６，１８０，３７０を参照してください。
本公開のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎＮａｔｕｒｅ．２５６：４９５（１９７５）の自然の体細胞ハイブリダイゼーション（ハイブリドーマ）技術を使用して調製できる。モノクローナル抗体を調製するための他の実施形態には、Ｂリンパ球のウイルス形質転換及びファージ表示技術が含まれる。キメラ又はヒト化された抗体も本分野でよく知られている。例えば、米国特許４，８１６，５６７；５，２２５，５３９；５，５３０，１０１；５，５８５，０８９；５，６９３，７６２及び６，１８０，３７０を参照してください。
【0123】
モノクローナル抗体のトランスフェクトーマの調製
本公開の抗体は、例えば、組換えＤＮＡ技術と遺伝子トランスフェクション法の組み合わせを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマで産生することもできる（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２１９８５）。一実施形態において、標準的な分子生物学技術を使用して得られた部分又は全長の軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡが、転写及び翻訳の制御配列に操作可能に連結するように、１つ以上の発現ベクターに挿入される。この場合、「操作可能に連結」という用語は、ベクターの転写及び翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写と翻訳を調節する規定の機能を果たすように、抗体遺伝子をベクターに連結することを指す。
本公開の抗体は、例えば、組換えＤＮＡ技術と遺伝子トランスフェクション法の組み合わせを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマで産生することもできる（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２１９８５）。一実施形態において、標準的な分子生物学技術を使用して得られた部分又は全長の軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡが、転写及び翻訳の制御配列に操作可能に連結するように、１つ以上の発現ベクターに挿入される。この場合、「操作可能に連結」という用語は、ベクターの転写及び翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写と翻訳を調節する規定の機能を果たすように、抗体遺伝子をベクターに連結することを指す。
【0124】
「制御配列」という用語には、抗体遺伝子の転写又は翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー、及びその他の発現制御因子（例えば、ポリアデニル化シグナル）が含まれる。このような制御配列は、Ｇｏｅｄｄｅｌ（Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ（１９９０））で説明されている。好ましくは、哺乳類の宿主細胞での発現の制御配列には、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｓｉｍｉａｎウイルス４０（ＳＶ４０）、例えば、アデノウイルスメジャー後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ）などのアデノウイルス由来プロモーターやエンハンサーなど哺乳類細胞の高レベルのタンパク質発現を行うウイルス元素が含まれる。或いは、ユビキチンプロモーターやβ－グロビンプロモーターなどの非ウイルス制御配列が使用される。また、調節因子は、ＳＶ４０初期プロモーターからの配列とヒトＴ細胞白血病ウイルス １ 型の長い末端反復配列を含むシーケンスからなるＳＲαプロモーターシステムなど、異なる起源の配列で構成されている（Ｔａｋｅｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ（Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４６６－４７２（１９８８））。発現ベクター及び発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選択される。
【0125】
抗体軽鎖遺伝子と抗体重鎖遺伝子は、同じ発現ベクター又は異なる発現ベクターに挿入できる。好適な実施形態において、ＶＨをベクター内のＣＨに作動可能に連結され、ＶＬをベクター内のＣＬに作動可能に連結されているように、可変領域を、所望のアイソタイプの重鎖定常領域及び軽鎖定常領域をコードしている発現ベクターへ挿入することによって、完全長抗体遺伝子を作成できる。あるいは、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで連結されるように、抗体鎖遺伝子をベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（即ち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。
【0126】
抗体鎖遺伝子と制御配列に加えて、本公開の組換え発現ベクターは、宿主細胞のベクターの複製（複製開始点など）や選択可能なマーカー遺伝子を調節するシーケンスなど、他の配列を保有ことができる。選択可能なマーカー遺伝子を使用して、ベクトルが導入された宿主細胞を選択できる（例えば、米国特許４，３９９，２１６；４，６３４，６６５及び５，１７９，０１７を参照）。例えば、選択可能なマーカー遺伝子は通常、ベクターが導入された宿主細胞にＧ４１８、ヒグロマイシン、又はメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を与える。好ましい選択可能なマーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ｄｈｆｒ）遺伝子（ＤＨＦＲ宿主細胞のメトトレキサート選択／増幅用）及びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択用）が含まれる。
【0127】
軽鎖と重鎖を発現するために、宿主細胞には、標準的な技術を使用して、重鎖と軽鎖をコードする発現ベクトルをトランスフェクトする。「トランスフェクト」という用語には、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどの原核生物又は真核生物の宿主細胞に外因性ＤＮＡを導入するための様々な技術が含まれる。原核生物又は真核生物の宿主細胞でここで本公開の抗体を発現することは理論的に実現可能であるが、真核細胞で抗体を発現することが好ましく、哺乳類宿主細胞で抗体を発現することが最も好ましい。これは、真核細胞、特に哺乳類細胞が、原核細胞よりも適切に折り畳まれ、免疫学的に活性な抗体を組み立てて分泌する可能性が高いためである。
【0128】
ここで開示されている組換え抗体を発現するための好ましい哺乳類宿主細胞には、中国のハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）（ＤＨＦＲ選択可能なマーカーで投与されたｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含む。例えば、Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０（１９８０）で説明されている通りである。ＤＨＦＲは、それらのＤＨＦＲ選択マーカーは、例えば、ＲＪ Ｋａｕｆｍａｎ及びＰＡ Ｓｈａｒｐ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１－６２１（１９８２）で説明されている通りである）、ＮＳＯ骨髓瘤細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が含まれる。特にＮＳＯ骨髄腫細胞を使用する場合の別の適宜の発現システムは、ＷＯ８７／０４４６２、ＷＯ８９／０１０３６及びＥＰ３３８，８４１で開示されているＧＳ遺伝子発現システムである。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳類の宿主細胞に導入されると、抗体は、宿主細胞の抗体の発現を可能にするのに十分な期間宿主細胞を培養することにより、又は抗体の分泌を宿主細胞が成長させる培地に十分に許可することにより調製される。抗体は、タンパク質精製法を使用して培地から回収できる。
【0129】
ポリペプチド融合体
一方、本公開は、１つ又は複数の本公開の抗体又はその抗原結合断片を含むポリペプチド融合体を関与する。ここで、本公開の抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つ他の機能的分子に連結されている。前記他の機能的分子は、ペプチド又はタンパク質又は非タンパク質である可能性がある。一実施形態において、本公開のポリペプチド融合体には、免疫コンジュゲートが含まれる。前記免疫コンジュゲートには、１つ又は複数の本公開の抗体又はその抗原結合断片が含まれ、並びに少なくとも本公開の抗体又はその抗原結合断片に連結されたステロイドなどの治療剤が含まれる。一実施形態において、本公開のポリペプチド融合体には複機能分子が含まれる。前記複機能分子には、１つ又は複数の本公開の抗体又はその抗原結合断片、並びに少なくとも本公開の抗体又はその抗原結合断片に連結された免疫サイトカイン又は受容体配体が含まれる。前記免疫サイトカイン又は受容体リガンドは、ＩｇＥ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ－１７、ＩＬ－２３、ＩＬ－３３、ＯＸ４０配体（ＯＸ４０Ｌ）、ＧＭ－ＣＳＦ又はＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒに対するものであってもよい。一実施形態において、複機能分子は、ＦＣ受容体結合機能とＳＴ２結合機能に加えて第３の機能を持っている。前記第３の機能はＩｇＥ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ－１７、ＩＬ－２３、ＩＬ－３３、ＯＸ４０配体（ＯＸ４０Ｌ）、ＧＭ－ＣＳＦ又はＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒに対するものであってもよい。本明細書で使用されるように、「複機能分子」には、３つ以上の機能を持つ分子が含まれる。他の実施形態において、ここで明らかにされたポリペプチド融合には、他の形態も含まれている。これら及び他の形態のポリペプチド融合体は、遺伝子工学法、化学的方法などによって調製できる。
一方、本公開は、１つ又は複数の本公開の抗体又はその抗原結合断片を含むポリペプチド融合体を関与する。ここで、本公開の抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つ他の機能的分子に連結されている。前記他の機能的分子は、ペプチド又はタンパク質又は非タンパク質である可能性がある。一実施形態において、本公開のポリペプチド融合体には、免疫コンジュゲートが含まれる。前記免疫コンジュゲートには、１つ又は複数の本公開の抗体又はその抗原結合断片が含まれ、並びに少なくとも本公開の抗体又はその抗原結合断片に連結されたステロイドなどの治療剤が含まれる。一実施形態において、本公開のポリペプチド融合体には複機能分子が含まれる。前記複機能分子には、１つ又は複数の本公開の抗体又はその抗原結合断片、並びに少なくとも本公開の抗体又はその抗原結合断片に連結された免疫サイトカイン又は受容体配体が含まれる。前記免疫サイトカイン又は受容体リガンドは、ＩｇＥ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ－１７、ＩＬ－２３、ＩＬ－３３、ＯＸ４０配体（ＯＸ４０Ｌ）、ＧＭ－ＣＳＦ又はＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒに対するものであってもよい。一実施形態において、複機能分子は、ＦＣ受容体結合機能とＳＴ２結合機能に加えて第３の機能を持っている。前記第３の機能はＩｇＥ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ－１７、ＩＬ－２３、ＩＬ－３３、ＯＸ４０配体（ＯＸ４０Ｌ）、ＧＭ－ＣＳＦ又はＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒに対するものであってもよい。本明細書で使用されるように、「複機能分子」には、３つ以上の機能を持つ分子が含まれる。他の実施形態において、ここで明らかにされたポリペプチド融合には、他の形態も含まれている。これら及び他の形態のポリペプチド融合体は、遺伝子工学法、化学的方法などによって調製できる。
【0130】
多重特異性分子
一方、本公開は、１つ又は複数の本公開の抗体又はその抗原結合断片を含む多重特異性分子に関与する。ここで、本公開の抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に開示された抗体又は抗原結合フラグメントとは異なる特異性を持つ少なくとも１つの他の官能部分に連結されている。前記他の機能部分には、もう１つのペプチド又はタンパク質（例えば、もう１つの抗体又はその抗原結合断片）が含まれる。そうすると、少なくとも２つの異なる結合部位又は標的に結合する多重特異性分子を生成する。したがって、本公開で使用される「多重特異性分子」は、２種類の特異性（即ち、二重特異的分子）、３種類の特異性（即ち、三重特異的分子）、４種類の特異性（即ち、四重特異的分子）又はそれ以上の複数の特異的分子が含まれる。
一方、本公開は、１つ又は複数の本公開の抗体又はその抗原結合断片を含む多重特異性分子に関与する。ここで、本公開の抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に開示された抗体又は抗原結合フラグメントとは異なる特異性を持つ少なくとも１つの他の官能部分に連結されている。前記他の機能部分には、もう１つのペプチド又はタンパク質（例えば、もう１つの抗体又はその抗原結合断片）が含まれる。そうすると、少なくとも２つの異なる結合部位又は標的に結合する多重特異性分子を生成する。したがって、本公開で使用される「多重特異性分子」は、２種類の特異性（即ち、二重特異的分子）、３種類の特異性（即ち、三重特異的分子）、４種類の特異性（即ち、四重特異的分子）又はそれ以上の複数の特異的分子が含まれる。
【0131】
１つの特定の実施形態において、本公開の多重特異性分子では、抗ＦＣ結合特異性とＳＴ２結合特異性に加えて、１つ以上の他の特異性を持つ場合がある。例示的には、前記他の特異性は、ＩｇＥ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ９、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ１７、ＩＬ２３、ＩＬ３３又はＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒに対することであってもよい。
【0132】
１つの特定の実施形態において、多重特異性分子が様々な形とサイズで存在する場合がある。例示的には、サイズスペクトルの一端では、二重特異性分子は従来の抗体フォーマットを保持するが、違いなのは、２つの結合アームが同じ特異性ではなく、異なる特異性を持っていることでありい、もう一方の端には、ペプチド鎖によって結合された２つの単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ’ｓ）からなる二重特異性分子、いわゆるＢｓ（ｓｃＦｖ）２構築物である。中間サイズの二重特異性分子には、ペプチジル リンカーによって連結された２つの異なるＦ（ａｂ）フラグメントが含まれる。これら及び他のフォーマットの二重特異性分子は、遺伝子工学、体細胞ハイブリダイゼーション、又は化学的方法によって調製することができる。例えば、Ｋｕｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｃｉｔｅｄ ｓｕｐｒａ；Ｃａｏ ａｎｄ Ｓｕｒｅｓｈ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．９（６）．６３５－６４４（１９９８）；及びｖａｎ Ｓｐｒｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ．２１（８）：３９１－３９７（２０００）を参照してください。
【0133】
ウイルスベクター
一方、本公開の抗体又はその抗原結合断片は、ウイルスベクターによってコードされる；又はウイルスベクターによって担持される。また、本公開の抗体又はその抗原結合断片は、ウイルスベクターと共に使用できる；又は、抗体又はその抗原結合断片をコード又は担持しているウイルスベクターを人体に導入できる。
一方、本公開の抗体又はその抗原結合断片は、ウイルスベクターによってコードされる；又はウイルスベクターによって担持される。また、本公開の抗体又はその抗原結合断片は、ウイルスベクターと共に使用できる；又は、抗体又はその抗原結合断片をコード又は担持しているウイルスベクターを人体に導入できる。
【0134】
本公開は、さらに、本公開のポリペプチド融合体、多重特異性分子、ウイルスベクター、並びに薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又は担体を含む医薬組成物を提供する。
【0135】
医薬組成物
一方、本公開は、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合断片を、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と共に製剤化してなる医薬組成物を提供する。上記医薬組成物は、別の抗体や薬物、例えば、別のＳＴ２抗体、抗ＩｇＥ抗体、別の抗炎薬、抗喘息薬、抗慢性閉塞性肺疾患薬、抗潰瘍性大腸炎薬、抗アブノマル皮膚炎薬又は抗乾癬薬などの１つ又は複数の薬学的に有効な成分を含んでよい。
一方、本公開は、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合断片を、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と共に製剤化してなる医薬組成物を提供する。上記医薬組成物は、別の抗体や薬物、例えば、別のＳＴ２抗体、抗ＩｇＥ抗体、別の抗炎薬、抗喘息薬、抗慢性閉塞性肺疾患薬、抗潰瘍性大腸炎薬、抗アブノマル皮膚炎薬又は抗乾癬薬などの１つ又は複数の薬学的に有効な成分を含んでよい。
【0136】
好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄又は表皮投与（例えば、注射又は注入による）に適している。投与経路に応じて、有効成分を不活性化する可能性のある酸や他の自然条件の作用から保護するために、有効成分を材料で封入することができます。「非経口投与」という用語は、経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、通常は注射によるものであり、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、被膜内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内への注射及び注入が含まれるが、これらに限定されない。あるいは、本公開の医薬組成物は、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸内、舌下又は局所などの外用、表皮又は粘膜投与経路などの非経口経路を介して投与することができる。
【0137】
医薬組成物は、滅菌水溶液又は分散液の形態であることができる。それらはまた、マイクロエマルション、リポソーム、又は高薬物濃度に適した他の秩序構造に処方することもできる。
【0138】
投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラス用量を投与してもよいし、複数の分割用量を経時的に投与してもよく、又は治療状況の緊急性によって示されるように、用量を比例的に減少又は増加させることができる。投与を容易にし、投与量を均一にするために、投与単位形態で非経口投与される組成物を処方することが特に有利である。本明細書で使用される投与単位形態は、治療される対象に対する単位投与量として適切な物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な薬学的担体と関連して所望の治療効果を生み出すように計算された所定の量を含む。あるいは、抗体は持続放出製剤として投与されてもよく、この場合、必要な投与頻度は少なくなる。
【0139】
組成物を投与する場合、投与量は、宿主の体重１ｋｇ当たり約０．０００１～１００ｍｇ、より通常は０．０１～５ｍｇの範囲であり得る。例えば、投与量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、又は１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内であり得る。例示的な治療計画は、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヶ月に１回、３ヶ月に１回、又は３～６ヶ月に１回の投与が必要がある。
【0140】
薬学組成物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤であり得る。エチレンビニルアセテート、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。
【0141】
いくつかの実施形態において、本公開の抗体は、インビボでの適切な分布を確実にするように処方することができる。例えば、本公開の抗体が血液脳関門を通過することを確実にするために、それらをリポソームに製剤化することができ、特定の細胞又は臓器への選択的輸送を増強するためのターゲティング部分をさらに含むことができる。
【0142】
本公開の用途及び方法
本公開の抗体又はその抗原結合断片（コード化核酸分子、医薬組成物、ポリペプチド融合体、多分子分子、又はウイルスベクター）は、診断に関連する様々なｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの用途がある。ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病状の治療及び／又は予防に関与する。前記ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症には、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性細気管支炎、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、全身性エリテマトーデス、類天疱瘡、関節リウマチ、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、肺線維症、肝線維症、全身性硬化症、サルコイドーシス、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糖尿病性疾患、心血管疾患、又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。本公開の抗体又は抗原結合断片を被験者に適用して、前記疾患又は病症を軽減、緩和、又は治療することができる。診断中に、本公開の抗体及びＳＴ２が複合体を形成する条件下で、前記抗体又はその抗原結合断片を前記サンプルに接触させることで、被験者サンプルのＳＴ２タンパク質の量を検出できる。
本公開の抗体又はその抗原結合断片（コード化核酸分子、医薬組成物、ポリペプチド融合体、多分子分子、又はウイルスベクター）は、診断に関連する様々なｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの用途がある。ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病状の治療及び／又は予防に関与する。前記ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症には、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性細気管支炎、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、全身性エリテマトーデス、類天疱瘡、関節リウマチ、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、肺線維症、肝線維症、全身性硬化症、サルコイドーシス、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糖尿病性疾患、心血管疾患、又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。本公開の抗体又は抗原結合断片を被験者に適用して、前記疾患又は病症を軽減、緩和、又は治療することができる。診断中に、本公開の抗体及びＳＴ２が複合体を形成する条件下で、前記抗体又はその抗原結合断片を前記サンプルに接触させることで、被験者サンプルのＳＴ２タンパク質の量を検出できる。
【0143】
これら及びその他の方法の開示については、以下でさらに説明する。
【0144】
併用療法
本公開は、本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片（コード核酸分子、医薬組成物、ポリペプチド融合体、多重特異性分子又はウイルスベクター）を１つ又は多種類の他の抗体又は医薬と共同に投与することを提供し、それは、被験者のＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症を軽減、緩和、又は治療することができる。前記ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症には、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性細気管支炎、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、全身性エリテマトーデス、類天疱瘡、関節リウマチ、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、肺線維症、肝線維症、全身性硬化症、サルコイドーシス、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糖尿病性疾患、心血管疾患、又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、本公開は、被験者の喘息、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎を治療する方法を提供する。ここで、本公開は、ＳＴ２抗体又はその抗原結合断片、並びに１つ又は多種類の他の抗体一緒に使用される。例えば、ＴＳＬＰ抗体、ＴＳＬＰＲ抗体、ＩＬ４抗体、ＩＬ４Ｒ抗体、ＩＬ１３抗体、ＩＬ１３Ｒ抗体、ＩＬ５抗体、ＩＬ５Ｒ抗体及び／又はＩｇＥ抗体である。別の実施形態において、本公開は、被験者の喘息、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎を治療する方法を提供する。ここで、本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は少なくとも１つの別の医薬と一緒に使用される。例えば、抗喘息薬、抗慢性閉塞性肺疾患薬、抗アブノマル皮膚炎薬である。いくつかの実施形態において、被験者は人である。ここで開示されたＳＴ２抗体又はその抗原結合断片と組み合わせて使用できる他の治療法には、アレルゲン曝露の削減又は回避、ホルモン療法、手術なども含まれる。
本公開は、本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片（コード核酸分子、医薬組成物、ポリペプチド融合体、多重特異性分子又はウイルスベクター）を１つ又は多種類の他の抗体又は医薬と共同に投与することを提供し、それは、被験者のＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症を軽減、緩和、又は治療することができる。前記ＩＬ３３／ＳＴ２を介した関連疾患及び病症には、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性細気管支炎、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、全身性エリテマトーデス、類天疱瘡、関節リウマチ、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、肺線維症、肝線維症、全身性硬化症、サルコイドーシス、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糖尿病性疾患、心血管疾患、又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、本公開は、被験者の喘息、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎を治療する方法を提供する。ここで、本公開は、ＳＴ２抗体又はその抗原結合断片、並びに１つ又は多種類の他の抗体一緒に使用される。例えば、ＴＳＬＰ抗体、ＴＳＬＰＲ抗体、ＩＬ４抗体、ＩＬ４Ｒ抗体、ＩＬ１３抗体、ＩＬ１３Ｒ抗体、ＩＬ５抗体、ＩＬ５Ｒ抗体及び／又はＩｇＥ抗体である。別の実施形態において、本公開は、被験者の喘息、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎を治療する方法を提供する。ここで、本公開のＳＴ２抗体又はその抗原結合断片は少なくとも１つの別の医薬と一緒に使用される。例えば、抗喘息薬、抗慢性閉塞性肺疾患薬、抗アブノマル皮膚炎薬である。いくつかの実施形態において、被験者は人である。ここで開示されたＳＴ２抗体又はその抗原結合断片と組み合わせて使用できる他の治療法には、アレルゲン曝露の削減又は回避、ホルモン療法、手術なども含まれる。
【0145】
この公開で議論されている治療薬の組み合わせ（即ち、併用）は、薬学的に許容される担体の単一組成として同時に投与することができる。又は、各薬剤が医薬品に許容できる担体にある別々の組成として同時に投与することができる。別の実施形態において、治療薬の組み合わせを順番に適用できる。
【0146】
また、併用療法が複数回投与され、薬剤が順次に投与されると、各時点でのシーケンシャル投与の配列を逆転又は維持することができ、順次投与を同時投与又はその任意の組み合わせと組み合わせることができる。
【0147】
目的を明確に理解するためには、前記の発明は例と実施形態を通じて詳細に説明されているが、この公衆の教義によれば、この分野の普通の技術者は、精神的及び特許の範囲から逸脱することなく、この一般にいくつかの変更と修正を行うことができることが明らかである。本公開は、以下の例の説明によってさらに説明されているが、これは制限されることを意図していない。このアートに熟練したものは、実質的に類似した結果を生み出すために変更又は変更される可能性のある様々な非批判的なパラメーターを容易に識別する。
【0148】
特に示されない限り、現在の開示の操作は、本分野の範囲でタンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、及び薬理学における従来の方法を採用する。
【実施例】
【0149】
実施例１、ＳＴ２抗原及び検出用タンパク質の調製
ヒトＵｎｉＰｒｏｔ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｌｉｋｅ １（ＳＴ２）ｉｓｏｆｏｒｍ Ａ（配列番号１）の全長遺伝子（ｈＳＴ２）を本公開のＳＴ２のテンプレートとして使用して、本開示の抗原および検出用タンパク質をコードする遺伝子配列を取得した。マウスの免疫化または後のスクリーニングアッセイのために、マウス抗体重鎖Ｆｃフラグメント（マウスＩｇＧ２ａなど）と組換えてｈＳＴ２－ｍＦｃを形成できるか、またはヒト抗体重鎖Ｆｃと組換えてｈＳＴ２－ｈＦｃを形成するできる。マウス抗体重鎖Ｆｃタグを備えたｈＳＴ２細胞外ドメインを含む組換えタンパク質（ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃ、配列番号２）をコードしたｃＤＮＡと、ヒト抗体重鎖Ｆｃタグを含むｈＳＴ２細胞外ドメインを含む組換えタンパク質（ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｈＦｃ、配列番号４）をコードするｃＤＮＡ（それぞれ配列番号３及び５）は、遺伝子合成によって取得し、それぞれｐｃＤＮＡ３．１発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｖ－７９０）にサブクローニングした。Ｅｘｐｉ２９３細胞（Ｔｈｅｒｍｏ、Ａ１４５２７）に上記で構築したベクターをトランスフェクトして一過性発現させた。次いで、ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃおよびｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｈＦｃ組換えタンパク質をプロテインＡカラム（ＧＥヘルスケア）にて精製した。
ヒトＵｎｉＰｒｏｔ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｌｉｋｅ １（ＳＴ２）ｉｓｏｆｏｒｍ Ａ（配列番号１）の全長遺伝子（ｈＳＴ２）を本公開のＳＴ２のテンプレートとして使用して、本開示の抗原および検出用タンパク質をコードする遺伝子配列を取得した。マウスの免疫化または後のスクリーニングアッセイのために、マウス抗体重鎖Ｆｃフラグメント（マウスＩｇＧ２ａなど）と組換えてｈＳＴ２－ｍＦｃを形成できるか、またはヒト抗体重鎖Ｆｃと組換えてｈＳＴ２－ｈＦｃを形成するできる。マウス抗体重鎖Ｆｃタグを備えたｈＳＴ２細胞外ドメインを含む組換えタンパク質（ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃ、配列番号２）をコードしたｃＤＮＡと、ヒト抗体重鎖Ｆｃタグを含むｈＳＴ２細胞外ドメインを含む組換えタンパク質（ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｈＦｃ、配列番号４）をコードするｃＤＮＡ（それぞれ配列番号３及び５）は、遺伝子合成によって取得し、それぞれｐｃＤＮＡ３．１発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｖ－７９０）にサブクローニングした。Ｅｘｐｉ２９３細胞（Ｔｈｅｒｍｏ、Ａ１４５２７）に上記で構築したベクターをトランスフェクトして一過性発現させた。次いで、ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃおよびｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｈＦｃ組換えタンパク質をプロテインＡカラム（ＧＥヘルスケア）にて精製した。
【0150】
ａｖｉｔａｇを含むヒトＩＬ３３を含む組換えタンパク質をコードしたｃＤＮＡ（配列番号７）は、遺伝子合成によって取得し、ＧＳＴタグ付き発現ベクターにクローニングされた。上記で構築されたベクターは、誘導発現のためのＢＬ２１コンピテントセルに形質転換した。ＧＳＴ－ＩＬ３３ａｖｉｔａｇグタンパク質をＧＳＴ精製カラムで精製し、トロンビン酵素（シグマ社製、Ｔ４６４８－１ＫＵ）で消化し、ＧＳＴを除去してｈＩＬ３３ａｖｉｔａｇ（配列番号６）を得た。
【0151】
ヒトＩＬ３３組換えタンパク質（配列番号９）をコードしたｃＤＮＡは、遺伝子合成によって取得し、ＧＳＴタグ付き発現ベクターにクローン化された。上記で構築されたベクターは、誘導発現のためのＢＬ２１コンピテントセルに形質転換した。ＧＳＴ－ＩＬ３３グタンパク質をＧＳＴ精製カラムで精製し、トロンビン酵素（シグマ社製、Ｔ４６４８－１ＫＵ）で消化し、ＧＳＴを除去してｈＩＬ３３タンパク質（配列番号８）を得た。
【0152】
実施例中のＳＴ２抗体ＲＧ６１４９は、社内で調製されたＣＮ１０４３３４５８２中の抗体ＡＢ２を指し、その重鎖と軽鎖のアミノ酸配列は、本開示の配列番号８３及び配列番号８４に記載されている通りである。ＳＴ２抗体ＧＳＫ３７７２８４７は、社内で調製されたＣＮ１０４４１１３３３中の抗体ＳＴＬＭ２０８を指し、その重鎖と軽鎖のアミノ酸配列は、本開示の配列番号８５及び配列番号８６に記載されている通りである。
【0153】
実施例２、抗ＳＴ２ハイブリドーマモノクローナル抗体の調製
精製されたｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃ組換えタンパク質（１００μｇ／マウス）を同容積の完全なフロイントのアジュバント（Ｓｉｇｍａ，Ｆ５８８１－１０Ｘ１０ＭＬ）（初回免疫）又は不完全なフロイントのアジュバント（Ｓｉｇｍａ，Ｆ５５０６－１０Ｘ１０ＭＬ）（追加免疫）とよく混合して乳化させ、ＢＡＬＢ／Ｃマウスに対して２週間ごとに計８週間皮下免疫した。融合の３日前に、アジュバントフリーのｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃ抗原（５０μｇ／マウス）をブースター免疫として腹腔内注射した。免疫マウス由来の脾臓細胞（１×１０８）とＳＰ２／０骨髄腫細胞（２×１０７）とを、ＰＥＧ媒介融合ステップにて融合させて、ハイブリドーマ細胞を得た。融合後、細胞をＨＡＴ完全培地（Ｇｉｂｃｏ、２１０６００１７）に再懸濁し、０．１ｍＬ／ウェルで９６ウェルプレートに分注して、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで培養した。一般に、融合から約１０～１５日間後、細胞培養上清についてＥＬＩＳＡによりＳＴ２結合活性を測定し（実施例５を参照）、ポジティブホールの細胞培養上清を選択し、ＥＬＩＳＡ法により、ＩＬ３３／ＳＴ２結合に対するブロッキング活性を測定した（実施例６を参照）。
精製されたｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃ組換えタンパク質（１００μｇ／マウス）を同容積の完全なフロイントのアジュバント（Ｓｉｇｍａ，Ｆ５８８１－１０Ｘ１０ＭＬ）（初回免疫）又は不完全なフロイントのアジュバント（Ｓｉｇｍａ，Ｆ５５０６－１０Ｘ１０ＭＬ）（追加免疫）とよく混合して乳化させ、ＢＡＬＢ／Ｃマウスに対して２週間ごとに計８週間皮下免疫した。融合の３日前に、アジュバントフリーのｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃ抗原（５０μｇ／マウス）をブースター免疫として腹腔内注射した。免疫マウス由来の脾臓細胞（１×１０８）とＳＰ２／０骨髄腫細胞（２×１０７）とを、ＰＥＧ媒介融合ステップにて融合させて、ハイブリドーマ細胞を得た。融合後、細胞をＨＡＴ完全培地（Ｇｉｂｃｏ、２１０６００１７）に再懸濁し、０．１ｍＬ／ウェルで９６ウェルプレートに分注して、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで培養した。一般に、融合から約１０～１５日間後、細胞培養上清についてＥＬＩＳＡによりＳＴ２結合活性を測定し（実施例５を参照）、ポジティブホールの細胞培養上清を選択し、ＥＬＩＳＡ法により、ＩＬ３３／ＳＴ２結合に対するブロッキング活性を測定した（実施例６を参照）。
【0154】
ＳＴ２が特異的に結合され、ＩＬ３３／ＳＴ２結合にブロックできるウェルが選択され、細胞密度に応じて２４ウェルプレートに拡大された。２４ウェルプレートに転移された細胞株が再テストされた後、保存と最初のサブクローニングが行われた。最初のサブクローニング中、陽性と判定された細胞株を保存したうえで、第２のサブクローニングが実行された。第２のサブクローニング中、陽性と判定された細胞株を保存したうえで、タンパク質の発現に供した。
【0155】
実施例３、抗ＳＴ２抗体のｃＤＮＡ獲得とキメラ抗体構造の構築
全ＲＮＡ抽出キットを使用して、上記の結合及びブロッキング機能を備えているハイブリッド腫瘍細胞から全ＲＮＡを分離し、テンプレートとして使用して、指示書によると、第１鎖のｃＤＮＡがＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ逆転写酵素（Ｔｈｅｒｍｏ、１８０８００５１）によって合成された。次に、縮重マウスＩｇＧプライマーを使用して、ＰＣＲ反応を介して抗体の可変領域配列を増幅した。
全ＲＮＡ抽出キットを使用して、上記の結合及びブロッキング機能を備えているハイブリッド腫瘍細胞から全ＲＮＡを分離し、テンプレートとして使用して、指示書によると、第１鎖のｃＤＮＡがＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ逆転写酵素（Ｔｈｅｒｍｏ、１８０８００５１）によって合成された。次に、縮重マウスＩｇＧプライマーを使用して、ＰＣＲ反応を介して抗体の可変領域配列を増幅した。
【0156】
ＰＣＲ混合物は、０．５μｇ／ｍＬ臭化エチジウム含有の１％アガロース／トリスホウ酸ゲル中で電気泳動した。予想されるサイズのＤＮＡフラグメント（重鎖と軽鎖の場合は約５００ｂｐ）をゲルから切除し、精製した。精製されたＰＣＲ産物をｐＭＤ－１９Ｔベクター（Ｔａｋａｒａ、６０１３）にクローニングし、ＤＨ５αコンピテント大腸菌（Ｔａｋａｒａ、９０５７）に形質転換した。５つのコロニーがＬＢ培養プレートから選ばれ、ＤＮＡシーケンスに供した。抗体の重鎖可変領域配列、並びに軽鎖可変領域配列：７Ｄ１（配列番号３５、３６）、３Ｃ６（配列番号３７、３８）、３１Ｃ８（配列番号３９、４０）、２６Ａ１（配列番号４１、４２）、８Ｆ４（配列番号４３、４４）、１７Ｅ２（配列番号４５、４６）が得られた。
【0157】
キメラ抗体の構築と発現について、マウスＶＬ領域遺伝子合成フラグメントは、二重消化によりヒトκ鎖定常領域に連結され、キメラ軽鎖を構築した。マウスＶＨ領域遺伝子合成フラグメントは、二重消化によりヒトＩｇＧ２定常領域に連結され、キメラ重鎖を構築した。
【0158】
上記キメラ軽鎖を含むＤＮＡベクター及び上記キメラ重鎖を含むＤＮＡベクターは、Ｅｘｐｉ ＣＨＯ細胞（５０ｍＬ体系、６×１０６／ｍＬ細胞、１μｇ／ｍＬＤＮＡ）にコトランスフェクトし、一過性発現させ、７日間培養した。次に、細胞培養上清中のキメラ抗体を、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａカラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。
【0159】
実施例４、ｈＳＴ２抗原に対する抗ＳＴ２抗体の親和性の測定
抗マウスＩｇＧ抗体（ヒトＳＴ２抗原の捕獲用、Ｃｙｔｉｖａ、２９２１５２８１）又は抗ｈｉｓ抗体（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙ ＳＴ２抗原の捕獲用、Ｃｙｔｉｖａ、２９２３４６０２）を、製品の指示書に記載されている方法を使用してＣＭ５バイオチップ（Ｃｙｔｉｖａ、ＢＲ－１０００－１２）に結合し、一連の濃度（３２．８ｎＭ、１６．４ｎＭ、８．２ｎＭ、４．１ｎＭ、２．０５ｎＭ、１．０２５９ｎＭ、０．５１２９７ｎＭ）の抗ＳＴ２抗体をチップ表面上に流し、反応信号は、Ｂｉａｃｏｒｅ機器（Ｃｙｔｉｖａ、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００）を使用してリアルタイムで検出され、その後、結合－解離曲線が得られた。各サイクルで解離が完了した後、バイオチップは次のキャプチャのための再生ソリューションで再生された。この手順は、それぞれのＳＴ２抗体の親和性が決定されるまで繰り返された。得られたデータは、１：１（ｌａｎｇｍｕｉｒ）結合モデルを備えたＧＥ ＢＩＡｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して最終的に分析して、結合速度定数ｋａ（ｋｏｎ）及び解離速度定数ｋｄ（ｋｏｆｆ）を測定し、ＫＤ＝ｋｄ／ｋａによって解離定数ＫＤを計算した。抗ＳＴ２抗体のヒトＳＴ２抗原（ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃ）、Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙ ＳＴ２抗原（Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ｈｉｓ、Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａ１、９０９１５－Ｃ０８Ｈ）に対する親和性、及び抗ＳＴ２キメラ抗体のＳＴ２に対する親和性については、表５に示された。
抗マウスＩｇＧ抗体（ヒトＳＴ２抗原の捕獲用、Ｃｙｔｉｖａ、２９２１５２８１）又は抗ｈｉｓ抗体（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙ ＳＴ２抗原の捕獲用、Ｃｙｔｉｖａ、２９２３４６０２）を、製品の指示書に記載されている方法を使用してＣＭ５バイオチップ（Ｃｙｔｉｖａ、ＢＲ－１０００－１２）に結合し、一連の濃度（３２．８ｎＭ、１６．４ｎＭ、８．２ｎＭ、４．１ｎＭ、２．０５ｎＭ、１．０２５９ｎＭ、０．５１２９７ｎＭ）の抗ＳＴ２抗体をチップ表面上に流し、反応信号は、Ｂｉａｃｏｒｅ機器（Ｃｙｔｉｖａ、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００）を使用してリアルタイムで検出され、その後、結合－解離曲線が得られた。各サイクルで解離が完了した後、バイオチップは次のキャプチャのための再生ソリューションで再生された。この手順は、それぞれのＳＴ２抗体の親和性が決定されるまで繰り返された。得られたデータは、１：１（ｌａｎｇｍｕｉｒ）結合モデルを備えたＧＥ ＢＩＡｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して最終的に分析して、結合速度定数ｋａ（ｋｏｎ）及び解離速度定数ｋｄ（ｋｏｆｆ）を測定し、ＫＤ＝ｋｄ／ｋａによって解離定数ＫＤを計算した。抗ＳＴ２抗体のヒトＳＴ２抗原（ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃ）、Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙ ＳＴ２抗原（Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ｈｉｓ、Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａ１、９０９１５－Ｃ０８Ｈ）に対する親和性、及び抗ＳＴ２キメラ抗体のＳＴ２に対する親和性については、表５に示された。
【0160】
【表5】
【0161】
実施例５、ＥＬＩＳＡによる抗ＳＴ２抗体の結合分析
ＳＴ２結合スクリーニングおよび抗体の分析は、ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃ（キメラおよびヒト化抗体の測定用）、ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｈＦｃタンパク質（ハイブリドーマ抗体の測定用）、およびＣｙｎｏ－ＳＴ２－ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、９０９１５－Ｃ０８Ｈ）を抗原として用いてＥＬＩＳＡにより行った。２μｇ／ｍＬ ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃまたはＣｙｎｏ－ＳＴ２－ｈｉｓ抗原を１００μＬ／ウェルで高吸着９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、９０１８）にコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。吸着していない抗原をよく洗い流した後、非特異的結合部位をブロッキングバッファー（２％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ）でブロックした。プレートを洗浄バッファー（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄した後、抗ＳＴ２抗体（初期濃度１０ｎＭからの８つの濃度：３．３３３ｎＭ、１．１１１ｎＭ、０．３７０ｎＭ、０．１２３ｎＭ、０．０４１ｎＭ、０．０１４ｎＭ、０．００５ｎＭ、および０．００２ｎＭ）を１００μＬ／ウェルで添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合二次抗体を添加し、プレートをさらに６０分間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、基質ＴＭＢ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ、００－４２０１－５６）を１００μＬ／ウェルで加え、プレートを室温で２分間インキュベートした。停止液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を１００μＬ／ウェルで添加し、反応を終了させた。比色シグナルを生成し、マイクロプレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して４５０ｎｍで読み取りした。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５を使用して分析され、ＥＣ５０値が計算された。抗ＳＴ２キメラ抗体とｈＳＴ２及びＣｙｎｏ－ＳＴ２との結合のＥＣ５０値を表６及び図１－２に示す通りである。
ＳＴ２結合スクリーニングおよび抗体の分析は、ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃ（キメラおよびヒト化抗体の測定用）、ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｈＦｃタンパク質（ハイブリドーマ抗体の測定用）、およびＣｙｎｏ－ＳＴ２－ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、９０９１５－Ｃ０８Ｈ）を抗原として用いてＥＬＩＳＡにより行った。２μｇ／ｍＬ ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃまたはＣｙｎｏ－ＳＴ２－ｈｉｓ抗原を１００μＬ／ウェルで高吸着９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、９０１８）にコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。吸着していない抗原をよく洗い流した後、非特異的結合部位をブロッキングバッファー（２％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ）でブロックした。プレートを洗浄バッファー（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄した後、抗ＳＴ２抗体（初期濃度１０ｎＭからの８つの濃度：３．３３３ｎＭ、１．１１１ｎＭ、０．３７０ｎＭ、０．１２３ｎＭ、０．０４１ｎＭ、０．０１４ｎＭ、０．００５ｎＭ、および０．００２ｎＭ）を１００μＬ／ウェルで添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合二次抗体を添加し、プレートをさらに６０分間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、基質ＴＭＢ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ、００－４２０１－５６）を１００μＬ／ウェルで加え、プレートを室温で２分間インキュベートした。停止液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を１００μＬ／ウェルで添加し、反応を終了させた。比色シグナルを生成し、マイクロプレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して４５０ｎｍで読み取りした。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５を使用して分析され、ＥＣ５０値が計算された。抗ＳＴ２キメラ抗体とｈＳＴ２及びＣｙｎｏ－ＳＴ２との結合のＥＣ５０値を表６及び図１－２に示す通りである。
【0162】
【表6】
【0163】
実施例６、ＥＬＩＳＡによる抗ＳＴ２抗体のブロッキング分析
抗ＳＴ２抗体がｈＩＬ３３のｈＳＴ２への結合をブロックできるかどうかは、ＥＬＩＳＡに基づいて決定された。２ μｇ／ｍＬ ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｈＦｃを１００μＬ／ウェルで高吸着９６ウェルプレートにコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。吸着していない抗原をよく洗い流した後、非特異的結合部位をブロッキングバッファー（１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳＴ）でブロックした。プレートを洗浄バッファー（ＰＢＳＴ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄した後、抗ＳＴ２抗体（初期濃度６６．６７ｎＭから８つの濃度に２倍希釈）を１００μＬ／ウェルで添加して、３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで３回洗浄した後、各ウェルに１００μｌのビオチン標識ｈＩＬ３３ Ａｖｉｔａｇ（０．１μｇ／ｍＬの濃度）を加え、３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで３回洗浄した後、１：１０００希釈のアビジンＨＲＰ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、０１６－０３０－０８４）を１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、基質ＴＭＢ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ、００－４２０１－５６）を１００μＬ／ウェルで加え、プレートを室温で３分間インキュベートした。反応を終了するために、５０μＬの停止溶液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を加えた。比色シグナルを生成し、マイクロプレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して４５０ｎｍで読み取りした。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５を使用して分析され、ＩＣ５０値が計算された。抗ＳＴ２キメラ抗体のＩＬ３３／ＳＴ２結合をブロッキングするＩＣ５０値を表７及び図３に示す。
抗ＳＴ２抗体がｈＩＬ３３のｈＳＴ２への結合をブロックできるかどうかは、ＥＬＩＳＡに基づいて決定された。２ μｇ／ｍＬ ｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｈＦｃを１００μＬ／ウェルで高吸着９６ウェルプレートにコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。吸着していない抗原をよく洗い流した後、非特異的結合部位をブロッキングバッファー（１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳＴ）でブロックした。プレートを洗浄バッファー（ＰＢＳＴ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄した後、抗ＳＴ２抗体（初期濃度６６．６７ｎＭから８つの濃度に２倍希釈）を１００μＬ／ウェルで添加して、３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで３回洗浄した後、各ウェルに１００μｌのビオチン標識ｈＩＬ３３ Ａｖｉｔａｇ（０．１μｇ／ｍＬの濃度）を加え、３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで３回洗浄した後、１：１０００希釈のアビジンＨＲＰ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、０１６－０３０－０８４）を１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、基質ＴＭＢ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ、００－４２０１－５６）を１００μＬ／ウェルで加え、プレートを室温で３分間インキュベートした。反応を終了するために、５０μＬの停止溶液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を加えた。比色シグナルを生成し、マイクロプレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して４５０ｎｍで読み取りした。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５を使用して分析され、ＩＣ５０値が計算された。抗ＳＴ２キメラ抗体のＩＬ３３／ＳＴ２結合をブロッキングするＩＣ５０値を表７及び図３に示す。
【0164】
【表7】
【0165】
実施例７、抗ＳＴ２抗体の細胞ベースの結合分析
ＦＡＣＳ方法に基づいて、ｈＳＴ２（配列番号１）を過剰発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞株（ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）とカニクイザルＳＴ２（配列番号１０）を過剰発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞株（ＨＥＫ２９３Ｔ－Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）との結合アッセイで、抗ＳＴ２抗体とｈＳＴ２過剰発現細胞株、ｃｙｎｏ－ＳＴ２過剰発現細胞株との結合能を分析した。レンチウイルストランスフェクション系を使用して、ｐＬｅｎｔｉ６．３－ｈＳＴ２プラスミド及びｐＬｅｎｔｉ６．３－ＮＦκＢ－ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅプラスミドをＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトして、細胞株ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅを構築した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にｐＬｅｎｔｉ６．３－ｃｙｎｏＳＴ２及びｐＬｅｎｔｉ６．３－ＮＦκＢ－ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅプラスミドをトランスフェクトして、細胞株ＨＥＫ２９３Ｔ－Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅを構築した。
ＦＡＣＳ方法に基づいて、ｈＳＴ２（配列番号１）を過剰発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞株（ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）とカニクイザルＳＴ２（配列番号１０）を過剰発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞株（ＨＥＫ２９３Ｔ－Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）との結合アッセイで、抗ＳＴ２抗体とｈＳＴ２過剰発現細胞株、ｃｙｎｏ－ＳＴ２過剰発現細胞株との結合能を分析した。レンチウイルストランスフェクション系を使用して、ｐＬｅｎｔｉ６．３－ｈＳＴ２プラスミド及びｐＬｅｎｔｉ６．３－ＮＦκＢ－ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅプラスミドをＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトして、細胞株ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅを構築した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にｐＬｅｎｔｉ６．３－ｃｙｎｏＳＴ２及びｐＬｅｎｔｉ６．３－ＮＦκＢ－ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅプラスミドをトランスフェクトして、細胞株ＨＥＫ２９３Ｔ－Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅを構築した。
【0166】
３×１０５のＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ又はＨＥＫ２９３Ｔ－Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ細胞を９６ウェル培養プレートに加えた。段階希釈した抗ＳＴ２抗体（ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ細胞との結合試験において、抗ＳＴ２抗体の初期濃度が６６７ｎＭであり、４倍濃度勾配に従って８つの濃度を希釈した。ＨＥＫ２９３Ｔ－Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅとの結合実験において、抗ＳＴ２抗体の初期濃度が４００ｎＭであり、４倍濃度勾配に従って８つの濃度を希釈した）を細胞懸濁液に加えた。プレートを室温で６０分間インキュベートした後、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。１：２００希釈したＰＥ ｇｏａｔ－ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ－ＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、１０９－１１６－１７０）を１００μＬ／ウェルで添加し、プレートを室温で３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、１００ｕｌＬのＰＢＳに再懸濁し、その後、蛍光シグナルを分析し、フローサイトメーター（ＢＤ、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６）を使用して検出した。細胞株表面上のｈＳＴ２及びｃｙｎｏ－ＳＴ２に対する抗ＳＴ２抗体の結合能力は、染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）から測定された。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５にて分析され、ＥＣ５０値が計算された。細胞レベルでのｈＳＴ２及びｃｙｎｏ－ＳＴ２に対する抗ＳＴ２キメラ抗体の結合のＥＣ５０値を表８及び図７～８に示す。
【0167】
【表8】
【0168】
実施例８、ＩＬ３３タンパク質とｈＳＴ２過剰発現細胞株（ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）の間の相互作用をブロックする抗ＳＴ２抗体のアッセイ
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、自然にＩＬ１ＲＡｃＰタンパク質を高レベルで発現する。そして、レンチウイルストランスフェクションシステムを使用して、ｐＬｅｎｔｉ６．３－ｈＳＴ２プラスミド及びｐＬｅｎｔｉ６．３－ＮＦκＢ－ＬｕｃｉｆｅｒａｓａｅプラスミドをＨＥＫ２９３細胞に、トランスフェクトして、安定的なトランスフェクトされた細胞系ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅを構築した。ＩＬ３３はＳＴ２に結合すると、ＩＬ－１ＲＡｃＰを募集して、下流のＮＦκＢシグナル伝達経路を活性化できるため、ルシフェラーゼの発現が開始される。系に抗－ＳＴ２抗体がある場合、ＩＬ３３とＳＴ２の結合がブロックされ、そしてＬｕｃｉｆｅｒａｓｅの発現がブロックされることになる。抗ＳＴ２抗体のブロッキング活性は、反応基質の蛍光の強度の変化を検出することにより評価された。
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、自然にＩＬ１ＲＡｃＰタンパク質を高レベルで発現する。そして、レンチウイルストランスフェクションシステムを使用して、ｐＬｅｎｔｉ６．３－ｈＳＴ２プラスミド及びｐＬｅｎｔｉ６．３－ＮＦκＢ－ＬｕｃｉｆｅｒａｓａｅプラスミドをＨＥＫ２９３細胞に、トランスフェクトして、安定的なトランスフェクトされた細胞系ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅを構築した。ＩＬ３３はＳＴ２に結合すると、ＩＬ－１ＲＡｃＰを募集して、下流のＮＦκＢシグナル伝達経路を活性化できるため、ルシフェラーゼの発現が開始される。系に抗－ＳＴ２抗体がある場合、ＩＬ３３とＳＴ２の結合がブロックされ、そしてＬｕｃｉｆｅｒａｓｅの発現がブロックされることになる。抗ＳＴ２抗体のブロッキング活性は、反応基質の蛍光の強度の変化を検出することにより評価された。
【0169】
良好な状態の対数期のＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅ細胞を採取し、２．５×１０５細胞／ｍＬに希釈した。細胞希釈液を３８４ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、２６２３６０）に２０μＬ／ウェルで添加しました。次に、段階希釈した抗ＳＴ２抗体（初期濃度６６７ｎＭから４倍に段階希釈）を１５μＬ／ウェルで添加した。プレートを３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、１５μＬのｈＩＬ３３タンパク質を各ウェルに加えた（最終濃度５０ｐＭ）。混合物をよく混合し、３７℃で５時間インキュベートした。次に、５０μｌのＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標） Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ６１２０）を各ウェルに加え、混合物を２～５分間暗所で反応させた。化学発光信号は、マイクロプレートリーダー（ＰＥ，Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して読み取られた。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５にて分析され、ＩＣ５０値が計算された。細胞レベルでのＩＬ３３／ＳＴ２シグナル伝達の抗ＳＴ２キメラ抗体のブロッキングのＩＣ５０値を表９及び図９に示す。
【0170】
【表9】
【0171】
実施例９、ＩＬ ３３タンパク質とｈＳＴ２（（ＫＵ８１２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅ）を自然に発現する細胞間の相互作用をブロックする抗ＳＴ２抗体のアッセイ
ＫＵ８１２細胞は、ＳＴ２及びＩＬ１ＲＡｃＰタンパク質を自然に発現する。レンチウイルストランスフェクションシステムを使用して、ｐＬｅｎｔｉ６．３－ＮＦκＢ－ＬｕｃｉｆｅｒａｓａｅをＫｕ８１２細胞にトランスフェクトして、安定的なトランスフェクトされた細胞株ＫＵ８１２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅを構築した。実験原理は実施例８に参照してください。良好な状態の対数期のＫＵ８１２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅ細胞を採取し、２．５×１０５細胞／ｍＬに希釈した。細胞希釈液を３８４ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、２６２３６０）に２０μＬ／ウェルで添加しました。次に、段階希釈した抗ＳＴ２抗体（初期濃度６６７ｎＭから４倍に段階希釈）を１５μＬ／ウェルで添加した。プレートを３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、１５μＬのｈＩＬ３３タンパク質を各ウェルに加えた（最終濃度２００ ｐＭ）。混合物をよく混合し、３７℃で５時間インキュベートした。次に、５０μｌのＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標） Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ６１２０）を各ウェルに加え、混合物を２～５分間暗所で反応させた。化学発光信号は、マイクロプレートリーダー（ＰＥ，Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して読み取られた。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５にて分析され、ＩＣ５０値が計算された。
ＫＵ８１２細胞は、ＳＴ２及びＩＬ１ＲＡｃＰタンパク質を自然に発現する。レンチウイルストランスフェクションシステムを使用して、ｐＬｅｎｔｉ６．３－ＮＦκＢ－ＬｕｃｉｆｅｒａｓａｅをＫｕ８１２細胞にトランスフェクトして、安定的なトランスフェクトされた細胞株ＫＵ８１２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅを構築した。実験原理は実施例８に参照してください。良好な状態の対数期のＫＵ８１２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓａｅ細胞を採取し、２．５×１０５細胞／ｍＬに希釈した。細胞希釈液を３８４ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、２６２３６０）に２０μＬ／ウェルで添加しました。次に、段階希釈した抗ＳＴ２抗体（初期濃度６６７ｎＭから４倍に段階希釈）を１５μＬ／ウェルで添加した。プレートを３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、１５μＬのｈＩＬ３３タンパク質を各ウェルに加えた（最終濃度２００ ｐＭ）。混合物をよく混合し、３７℃で５時間インキュベートした。次に、５０μｌのＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標） Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ６１２０）を各ウェルに加え、混合物を２～５分間暗所で反応させた。化学発光信号は、マイクロプレートリーダー（ＰＥ，Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して読み取られた。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５にて分析され、ＩＣ５０値が計算された。
【0172】
実施例１０、ＩＬ３３とＩＬ２共刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞との相互作用をブロックする抗ＳＴ２抗体のアッセイ
ＩＬ３３及びＩＬ２による共刺激下では、ＩＬ３３はＣＤ４＋Ｔ細胞表面のＳＴ２に結合し、下流のシグナル伝達経路を活性化してサイトカインＩＬ５の分泌を誘導する。抗ＳＴ２抗体が系に存在する場合、ＩＬ３３のＣＤ４＋Ｔ細胞のＳＴ２への結合をブロックし、ＩＬ５分泌を阻害する。ＩＬ３３とＩＬ２共刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞間の相互作用をブロックする抗ＳＴ２抗体の能力を、ＩＬ５含有量を測定することにより分析した。
ＩＬ３３及びＩＬ２による共刺激下では、ＩＬ３３はＣＤ４＋Ｔ細胞表面のＳＴ２に結合し、下流のシグナル伝達経路を活性化してサイトカインＩＬ５の分泌を誘導する。抗ＳＴ２抗体が系に存在する場合、ＩＬ３３のＣＤ４＋Ｔ細胞のＳＴ２への結合をブロックし、ＩＬ５分泌を阻害する。ＩＬ３３とＩＬ２共刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞間の相互作用をブロックする抗ＳＴ２抗体の能力を、ＩＬ５含有量を測定することにより分析した。
【0173】
ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞選別キット（ｓｔｅｍｃｅｌｌ、１７９５２）を用い、ヒトＰＢＭＣからＣＤ４＋Ｔ細胞を選別し、２．５×１０５個細胞／ウェルで９６孔Ｕ底細胞培養プレートに播種し、６０μＬ／ウェルにした。次に、１５μＬ／ウェルで希釈した抗ＳＴ２抗体（５３ｎＭの初期濃度からの３倍希釈）を加えた。プレートを３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、１５μＬのｈＩＬ３３タンパク質（最終濃度４ｎｇ／ｍＬ）及び１５μＬのＩＬ２（最終濃度１０ｎｇ／ｍＬ）（ＰｒｉｍｅＧｅｎｅ、ＧＭＰ－１０１－０２）を各ウェルに加えた。よく混合し、３７℃で４８時間インキュベートした。インキュベーション後、上清を収集して、ＩＬ５アッセイキット（Ｒ＆Ｄ、ＤＹ２０５）の指示書に従い、上清のＩＬ５含有量を測定した。ＯＤ４５０値は、マイクロプレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して読み取られた。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５にて分析され、ＩＣ５０値が計算された。抗ＳＴ２キメラ抗体の、ＩＬ３３／ＳＴ２によるＣＤ４＋Ｔ細胞でのＩＬ５誘導分泌のブロッキングのＩＣ５０値の結果を表１０に示す。
【0174】
【表10】
【0175】
実施例１１、抗ヒトＳＴ２ハイブリドーマモノクローナル抗体のヒト化
３１Ｃ８（重鎖可変領域配列の配列番号３９；軽鎖可変領域配列の配列番号４０）が人化設計に選択された。確立されたＣＤＲ移植法が採用され、マウス抗体のヒト化に使用できるヒト抗体フレームワーク領域が選択された。マウス抗体可変領域のアミノ酸に対する最高の配列同一性（即ち、配列類似性）を備えたヒト生殖系抗体又はそのサブタイプが選択された。マウス抗体の重鎖可変領域ＣＤＲと軽鎖可変領域ＣＤＲを選択したフレームワーク領域に挿入し、フレームワーク領域の残基を変異させた。一部のＣＤＲは、物理化学的特性や制剤性など、抗体の特性を改善するためにさらに変異した。ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２が得られた。ここで、ｈｚ３１Ｃ８－１．１の重鎖可変領域と軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７１及び配列番号７９であった。ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１の重鎖可変領域と軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号７２及び配列番号８０であった。ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．２の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３及び配列番号７９であった。ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．２重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号７４及び配列番号８０であった。
３１Ｃ８（重鎖可変領域配列の配列番号３９；軽鎖可変領域配列の配列番号４０）が人化設計に選択された。確立されたＣＤＲ移植法が採用され、マウス抗体のヒト化に使用できるヒト抗体フレームワーク領域が選択された。マウス抗体可変領域のアミノ酸に対する最高の配列同一性（即ち、配列類似性）を備えたヒト生殖系抗体又はそのサブタイプが選択された。マウス抗体の重鎖可変領域ＣＤＲと軽鎖可変領域ＣＤＲを選択したフレームワーク領域に挿入し、フレームワーク領域の残基を変異させた。一部のＣＤＲは、物理化学的特性や制剤性など、抗体の特性を改善するためにさらに変異した。ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２が得られた。ここで、ｈｚ３１Ｃ８－１．１の重鎖可変領域と軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７１及び配列番号７９であった。ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１の重鎖可変領域と軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号７２及び配列番号８０であった。ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．２の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３及び配列番号７９であった。ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．２重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号７４及び配列番号８０であった。
【0176】
ヒト化されたＶＬ領域遺伝子合成フラグメントは、二重消化によりヒトκ鎖定常領域に連結され、ヒト化された軽鎖を構築し、ヒト領域の遺伝子合成断片を、二重消化によりヒトＩｇＧ２定常領域に連結され、ヒト化された重鎖を構築した。発現ベクターに、各抗体に対応するヒト化重鎖及び軽鎖ＤＮＡをトランスフェクトした。ＥｘｐｉＣＨＯ発現システムを使用して、タンパク質発現を実行した。次に、細胞培養上清中のヒト化された抗体をＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラムを介して精製した。
【0177】
実施例１２、ヒト化抗ＳＴ２抗体の生物学的機能アッセイ
実施例４、実施例５、実施例６、実施例７、実施例８、実施例９及び実施例１０の方法に従って、ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８１－１．１（重鎖配列配列番号７５、軽鎖配列配列番号８１）及びｈｚ３１Ｃ８－１．２（重鎖配列配列番号７７、軽鎖配列配列番号８１）に対して親和力、結合、阻害及細胞機能の分析を行った。本公開において、「ｈｚ」及び「ｘｉ」は、それぞれヒト化抗体及びキメラ抗体を示し、例えば、「ｈｚ３１Ｃ８１－１．１」及び「ｈｚ３１Ｃ８１－１．２」は、ヒト化の３１Ｃ８１－１．１及び３１Ｃ８１－１．２抗体を示し、「ｘｉ３１Ｃ８」はキメラの３１Ｃ８抗体を示す。
実施例４、実施例５、実施例６、実施例７、実施例８、実施例９及び実施例１０の方法に従って、ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８１－１．１（重鎖配列配列番号７５、軽鎖配列配列番号８１）及びｈｚ３１Ｃ８－１．２（重鎖配列配列番号７７、軽鎖配列配列番号８１）に対して親和力、結合、阻害及細胞機能の分析を行った。本公開において、「ｈｚ」及び「ｘｉ」は、それぞれヒト化抗体及びキメラ抗体を示し、例えば、「ｈｚ３１Ｃ８１－１．１」及び「ｈｚ３１Ｃ８１－１．２」は、ヒト化の３１Ｃ８１－１．１及び３１Ｃ８１－１．２抗体を示し、「ｘｉ３１Ｃ８」はキメラの３１Ｃ８抗体を示す。
【0178】
抗ＳＴ２ヒト化抗体とＳＴ２の親和力結果は表１１に示す。抗ＳＴ２ヒト化抗体がＥＬＩＳＡ実験におけるｈＳＴ２及びＣｙｎｏ－ＳＴ２と結合したＥＣ５０値を表１２及び図４－５に示す。抗ＳＴ２ヒト化抗体がＥＬＩＳＡにおけるＩＬ３３／ＳＴ２の結合を阻害したＩＣ５０値を表１３及び図６に示す。抗ＳＴ２ヒト化抗体が細胞レベルのｈＳＴ２と結合したＥＣ５０値を表１４及び図１０に示す。抗ＳＴ２ヒト化抗体が細胞レベルのＩＬ３３／ＳＴ２シグナル伝導作用を阻害するＩＣ５０値を表１５及び図１１－１２に示す。抗ＳＴ２ヒト化抗体がＣＤ４＋Ｔ細胞でＩＬ３３／ＳＴ２によって誘導されたＩＬ５分泌作用を阻害するＩＣ５０値を表１６及び図１３に示す。
【0179】
【表11】
【0180】
【表12】
【0181】
【表13】
【0182】
【表14】
【0183】
【表15】
【0184】
【表16】
【0185】
実施例１３、ヒト化抗ＳＴ２抗体の安定性アッセイ
それぞれの抗体の熱安定性は、ＤＳＣ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ、示差走査熱量測定）によって決定された。サンプルはＰＢＳバッファー（ｐＨ ７．４）に溶解し、ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して測定を実施した。表１７に示すように、本開示のヒト化抗ＳＴ２抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２はどちらも優れた熱安定性を示し、コントロールとしての抗ＳＴ２抗体ＲＧ６１４９及びＧＳＫ３７７２８４７よりも優れていた。
それぞれの抗体の熱安定性は、ＤＳＣ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ、示差走査熱量測定）によって決定された。サンプルはＰＢＳバッファー（ｐＨ ７．４）に溶解し、ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して測定を実施した。表１７に示すように、本開示のヒト化抗ＳＴ２抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２はどちらも優れた熱安定性を示し、コントロールとしての抗ＳＴ２抗体ＲＧ６１４９及びＧＳＫ３７７２８４７よりも優れていた。
【0186】
【表17】
【0187】
抗体について、特定の濃度条件でＳＥＣ－ＨＰＬＣ法にて周期的な安定性を測定した。例えば、抗体濃度が約１ｍｇ／ｍｌで制御され、ＰＢＳバッファー（ｐＨ ７．２）で４０℃で２週間保存したときの安定性を比較した。ＬＣ－２０ＡＤＸＲ／ＤＧＵ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）を使用して実行された。表１８に示すように、本開示のヒト化抗ＳＴ２抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．１はどちらも良好な安定性を示した。
【0188】
【表18】
【0189】
抗ＳＴ２抗体をＰＢＳ緩衝液で１．５ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈して、７２℃で５分間処理された後、ＥＬＩＳＡによって抗原との結合活性について測定した。ＥＬＩＳＡ手順は次の通りである。９６ウェルプレートは、２μｇ／ｍｌの抗原としてのｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃで１００μＬ／ウェルコーティングされ、４℃で一晩インキュベートされた。吸着されていない抗原が十分に洗い流された後、非特異的結合部位はブロッキングバッファー（１％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳＴ）でブロックされた。プレートを洗浄バッファー（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ、ＰＢＳＴ）で３回洗浄した後、抗ＳＴ２抗体（初期濃度から１．５μｇ／ｍｌから８つの濃度に３倍希釈した。）を１００μｌ／ｗｅｌｌで加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、抗ヒトＩｇＧＦｃγ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１０９－０３５－００８）を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、発色のために、基質ＴＭＢ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ、００－４２０１－５６）を１００μＬ／ウェルで添加した。プレートを室温で５分間インキュベートした後、反応を停止するために停止溶液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を加えた。プレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して、４５０ｎｍで信号を読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５でデータを分析し、ＥＣ５０値が計算されたところ、表１９に示すように、本開示のヒト化抗ＳＴ２抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．１はどちらも優れた熱安定性を示した。
【0190】
【表19】
【0191】
実施例１４、ＩＬ１Ｒファミリー受容体を使用したヒト化抗ＳＴ２抗体の交差反応性
ＳＴ２はＩＬ１Ｒ受容体ファミリーに属する。ＩＬ１Ｒファミリー受容体との抗ＳＴ２抗体の交差反応性は、ＥＬＩＳＡによって決定された。前記ＩＬ１Ｒファミリー受容体には、ｃＩＬ１Ｒ１／ＣＤ１２１ａ （Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，１０１２６－Ｈ０８Ｈ）、ＩＬ１Ｒ２／ＣＤ１２１ｂ（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１１１－Ｈ０８Ｈ）、ＩＬ１Ｒ３／ＩＬ１ＲＡＰ（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１２１－Ｈ０８Ｈ）、ＩＬ１Ｒ７／ＩＬ－１８ＲＡｃＰ（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１７６－Ｈ０８Ｈ）、ＩＬ１Ｒ８／ＩＬ１ＲＡＰＬ１ （Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１７７－Ｈ０８Ｈ）、ＩＬ１Ｒ９／ＩＬ１ＲＡＰＬ２（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１５６－Ｈ０８Ｈ）が含まれる。ＥＬＩＳＡアッセイは、上記のタンパク質を抗原（２μｇ／ｍｌ）として使用して実行した。具体的なＥＬＩＳＡ手順については、実施例１３を参照してください。非結合とは、最高濃度の抗体が抗原と結合しないままであることを意味する。弱い結合とは、最高濃度の抗体が、抗原に弱く結合し、低濃度の抗体が結合しないことを意味する。強い結合とは、非常に良好な結合曲線に適合する結合データであることを意味する。
ＳＴ２はＩＬ１Ｒ受容体ファミリーに属する。ＩＬ１Ｒファミリー受容体との抗ＳＴ２抗体の交差反応性は、ＥＬＩＳＡによって決定された。前記ＩＬ１Ｒファミリー受容体には、ｃＩＬ１Ｒ１／ＣＤ１２１ａ （Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，１０１２６－Ｈ０８Ｈ）、ＩＬ１Ｒ２／ＣＤ１２１ｂ（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１１１－Ｈ０８Ｈ）、ＩＬ１Ｒ３／ＩＬ１ＲＡＰ（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１２１－Ｈ０８Ｈ）、ＩＬ１Ｒ７／ＩＬ－１８ＲＡｃＰ（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１７６－Ｈ０８Ｈ）、ＩＬ１Ｒ８／ＩＬ１ＲＡＰＬ１ （Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１７７－Ｈ０８Ｈ）、ＩＬ１Ｒ９／ＩＬ１ＲＡＰＬ２（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１５６－Ｈ０８Ｈ）が含まれる。ＥＬＩＳＡアッセイは、上記のタンパク質を抗原（２μｇ／ｍｌ）として使用して実行した。具体的なＥＬＩＳＡ手順については、実施例１３を参照してください。非結合とは、最高濃度の抗体が抗原と結合しないままであることを意味する。弱い結合とは、最高濃度の抗体が、抗原に弱く結合し、低濃度の抗体が結合しないことを意味する。強い結合とは、非常に良好な結合曲線に適合する結合データであることを意味する。
【0192】
【表20】
【0193】
実施例１５、ヒト化抗ＳＴ２抗体の薬物動態評価
実験には、南京大学モデルの動物から購入した１８匹のＢａｌｂ／ｃマウスを使用して、各グループに６個とし、１２／１２時間の視野調整、自由に飲料水を食べさせる。実験日に、マウスにはそれぞれ、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により１ｍｇ／ｍｌのサンプルを投与した。眼窩血液は、投与前に（０分、又は投与前に１日以上）及び投与後３０分、８時間、２４時間、２ｄ（４８時間）、４ｄ（９６時間）、７日、及び１４日血清を採集され、ＥＬＩＳＡ法により抗体濃度を測定した。ＥＬＩＳＡの手順は次の通りである。９６ウェルプレートは、１００μＬ／ウェルの抗原として２μｇ／ｍＬのＳＴ２－Ｈｉｓ（シノビオロジー、１０１０５－Ｈ０８Ｈ）でコーティングされ、４℃で一晩インキュベートされた。吸着されていない抗原が十分に洗い流された後、非特異的結合部位はブロッキングバッファー（１％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳＴ）でブロックされた。プレートを洗浄バッファー（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ、ＰＢＳＴ）で３回洗浄した後、１００μｌの被検血清を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、抗マウスＩｇＧＦｃγ二次抗体を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、発色のために、基質ＴＭＢ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ、００－４２０１－５６）を１００μＬ／ウェルで添加した。プレートを室温で５分間インキュベートした後、反応を停止するために停止溶液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を加えた。プレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して、４５０ｎｍで信号を読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５でデータを分析した。表２１を参照すると、ＰＫ分析では、本開示のヒト化抗ＳＴ２抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．１の半減期が約９．７ｄと７．３３ｄであり、コントロールとしての抗ＳＴ２抗体ＲＧ６１４９よりも優れたことが示されている。
実験には、南京大学モデルの動物から購入した１８匹のＢａｌｂ／ｃマウスを使用して、各グループに６個とし、１２／１２時間の視野調整、自由に飲料水を食べさせる。実験日に、マウスにはそれぞれ、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により１ｍｇ／ｍｌのサンプルを投与した。眼窩血液は、投与前に（０分、又は投与前に１日以上）及び投与後３０分、８時間、２４時間、２ｄ（４８時間）、４ｄ（９６時間）、７日、及び１４日血清を採集され、ＥＬＩＳＡ法により抗体濃度を測定した。ＥＬＩＳＡの手順は次の通りである。９６ウェルプレートは、１００μＬ／ウェルの抗原として２μｇ／ｍＬのＳＴ２－Ｈｉｓ（シノビオロジー、１０１０５－Ｈ０８Ｈ）でコーティングされ、４℃で一晩インキュベートされた。吸着されていない抗原が十分に洗い流された後、非特異的結合部位はブロッキングバッファー（１％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳＴ）でブロックされた。プレートを洗浄バッファー（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ、ＰＢＳＴ）で３回洗浄した後、１００μｌの被検血清を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、抗マウスＩｇＧＦｃγ二次抗体を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、発色のために、基質ＴＭＢ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ、００－４２０１－５６）を１００μＬ／ウェルで添加した。プレートを室温で５分間インキュベートした後、反応を停止するために停止溶液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を加えた。プレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して、４５０ｎｍで信号を読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５でデータを分析した。表２１を参照すると、ＰＫ分析では、本開示のヒト化抗ＳＴ２抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．１の半減期が約９．７ｄと７．３３ｄであり、コントロールとしての抗ＳＴ２抗体ＲＧ６１４９よりも優れたことが示されている。
【0194】
【表21】
【0195】
本開示は、一般的な説明と特定の実施形態を通じて上記で詳細に説明されているが、本開示に基づいて修正又は改善を行うことができることが当業者に明らかになりる。したがって、本公開の精神から離れることなく行われたこのような修正と改善はすべて、本公開の保護範囲内にある。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-01-12
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0166】
３×１０５のＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ又はＨＥＫ２９３Ｔ－Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ細胞を９６ウェル培養プレートに加えた。段階希釈した抗ＳＴ２抗体（ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ細胞との結合試験において、抗ＳＴ２抗体の初期濃度が６６７ｎＭであり、４倍濃度勾配に従って８つの濃度を希釈した。ＨＥＫ２９３Ｔ－Ｃｙｎｏ－ＳＴ２－ＮＦκＢ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅとの結合実験において、抗ＳＴ２抗体の初期濃度が４００ｎＭであり、４倍濃度勾配に従って８つの濃度を希釈した）を細胞懸濁液に加えた。プレートを室温で６０分間インキュベートした後、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。１：２００希釈したＰＥ ｇｏａｔ－ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ－ＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、１０９－１１６－１７０）を１００μＬ／ウェルで添加し、プレートを室温で３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、１００μＬのＰＢＳに再懸濁し、その後、蛍光シグナルを分析し、フローサイトメーター（ＢＤ、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６）を使用して検出した。細胞株表面上のｈＳＴ２及びｃｙｎｏ－ＳＴ２に対する抗ＳＴ２抗体の結合能力は、染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）から測定された。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５にて分析され、ＥＣ５０値が計算された。細胞レベルでのｈＳＴ２及びｃｙｎｏ－ＳＴ２に対する抗ＳＴ２キメラ抗体の結合のＥＣ５０値を表８及び図７～８に示す。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0177】
実施例１２、ヒト化抗ＳＴ２抗体の生物学的機能アッセイ
実施例４、実施例５、実施例６、実施例７、実施例８、実施例９及び実施例１０の方法に従って、ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１（重鎖配列配列番号７５、軽鎖配列配列番号８１）及びｈｚ３１Ｃ８－１．２（重鎖配列配列番号７７、軽鎖配列配列番号８１）に対して親和力、結合、阻害及細胞機能の分析を行った。本公開において、「ｈｚ」及び「ｘｉ」は、それぞれヒト化抗体及びキメラ抗体を示し、例えば、「ｈｚ３１Ｃ８－１．１」及び「ｈｚ３１Ｃ８－１．２」は、ヒト化の３１Ｃ８－１．１及び３１Ｃ８－１．２抗体を示し、「ｘｉ３１Ｃ８」はキメラの３１Ｃ８抗体を示す。
実施例４、実施例５、実施例６、実施例７、実施例８、実施例９及び実施例１０の方法に従って、ヒト化抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１（重鎖配列配列番号７５、軽鎖配列配列番号８１）及びｈｚ３１Ｃ８－１．２（重鎖配列配列番号７７、軽鎖配列配列番号８１）に対して親和力、結合、阻害及細胞機能の分析を行った。本公開において、「ｈｚ」及び「ｘｉ」は、それぞれヒト化抗体及びキメラ抗体を示し、例えば、「ｈｚ３１Ｃ８－１．１」及び「ｈｚ３１Ｃ８－１．２」は、ヒト化の３１Ｃ８－１．１及び３１Ｃ８－１．２抗体を示し、「ｘｉ３１Ｃ８」はキメラの３１Ｃ８抗体を示す。
【手続補正3】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0187】
抗体について、特定の濃度条件でＳＥＣ－ＨＰＬＣ法にて周期的な安定性を測定した。例えば、抗体濃度が約１ｍｇ／ｍｌで制御され、ＰＢＳバッファー（ｐＨ ７．２）で４０℃で２週間保存したときの安定性を比較した。ＬＣ－２０ＡＤＸＲ／ＤＧＵ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）を使用して実行された。表１８に示すように、本開示のヒト化抗ＳＴ２抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２はどちらも良好な安定性を示した。
【手続補正4】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0189】
抗ＳＴ２抗体をＰＢＳ緩衝液で１．５ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈して、７２℃で５分間処理された後、ＥＬＩＳＡによって抗原との結合活性について測定した。ＥＬＩＳＡ手順は次の通りである。９６ウェルプレートは、２μｇ／ｍｌの抗原としてのｈＳＴ２－ＥＣＤ－ｍＦｃで１００μＬ／ウェルコーティングされ、４℃で一晩インキュベートされた。吸着されていない抗原が十分に洗い流された後、非特異的結合部位はブロッキングバッファー（１％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳＴ）でブロックされた。プレートを洗浄バッファー（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ、ＰＢＳＴ）で３回洗浄した後、抗ＳＴ２抗体（初期濃度から１．５μｇ／ｍｌから８つの濃度に３倍希釈した。）を１００μｌ／ｗｅｌｌで加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、抗ヒトＩｇＧＦｃγ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１０９－０３５－００８）を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、発色のために、基質ＴＭＢ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ、００－４２０１－５６）を１００μＬ／ウェルで添加した。プレートを室温で５分間インキュベートした後、反応を停止するために停止溶液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を加えた。プレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して、４５０ｎｍで信号を読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５でデータを分析し、ＥＣ５０値が計算されたところ、表１９に示すように、本開示のヒト化抗ＳＴ２抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２はどちらも優れた熱安定性を示した。
【手続補正5】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0193】
実施例１５、ヒト化抗ＳＴ２抗体の薬物動態評価
実験には、南京大学モデルの動物から購入した１８匹のＢａｌｂ／ｃマウスを使用して、各グループに６個とし、１２／１２時間の視野調整、自由に飲料水を食べさせる。実験日に、マウスにはそれぞれ、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により１ｍｇ／ｍｌのサンプルを投与した。眼窩血液は、投与前に（０分、又は投与前に１日以上）及び投与後３０分、８時間、２４時間、２ｄ（４８時間）、４ｄ（９６時間）、７日、及び１４日血清を採集され、ＥＬＩＳＡ法により抗体濃度を測定した。ＥＬＩＳＡの手順は次の通りである。９６ウェルプレートは、１００μＬ／ウェルの抗原として２μｇ／ｍＬのＳＴ２－Ｈｉｓ（シノビオロジー、１０１０５－Ｈ０８Ｈ）でコーティングされ、４℃で一晩インキュベートされた。吸着されていない抗原が十分に洗い流された後、非特異的結合部位はブロッキングバッファー（１％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳＴ）でブロックされた。プレートを洗浄バッファー（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ、ＰＢＳＴ）で３回洗浄した後、１００μｌの被検血清を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、抗マウスＩｇＧＦｃγ二次抗体を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、発色のために、基質ＴＭＢ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ、００－４２０１－５６）を１００μＬ／ウェルで添加した。プレートを室温で５分間インキュベートした後、反応を停止するために停止溶液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を加えた。プレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して、４５０ｎｍで信号を読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５でデータを分析した。表２１を参照すると、ＰＫ分析では、本開示のヒト化抗ＳＴ２抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２の半減期が約９．７ｄと７．３３ｄであり、コントロールとしての抗ＳＴ２抗体ＲＧ６１４９よりも優れたことが示されている。
実験には、南京大学モデルの動物から購入した１８匹のＢａｌｂ／ｃマウスを使用して、各グループに６個とし、１２／１２時間の視野調整、自由に飲料水を食べさせる。実験日に、マウスにはそれぞれ、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により１ｍｇ／ｍｌのサンプルを投与した。眼窩血液は、投与前に（０分、又は投与前に１日以上）及び投与後３０分、８時間、２４時間、２ｄ（４８時間）、４ｄ（９６時間）、７日、及び１４日血清を採集され、ＥＬＩＳＡ法により抗体濃度を測定した。ＥＬＩＳＡの手順は次の通りである。９６ウェルプレートは、１００μＬ／ウェルの抗原として２μｇ／ｍＬのＳＴ２－Ｈｉｓ（シノビオロジー、１０１０５－Ｈ０８Ｈ）でコーティングされ、４℃で一晩インキュベートされた。吸着されていない抗原が十分に洗い流された後、非特異的結合部位はブロッキングバッファー（１％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳＴ）でブロックされた。プレートを洗浄バッファー（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ、ＰＢＳＴ）で３回洗浄した後、１００μｌの被検血清を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、抗マウスＩｇＧＦｃγ二次抗体を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで洗浄した後、発色のために、基質ＴＭＢ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ、００－４２０１－５６）を１００μＬ／ウェルで添加した。プレートを室温で５分間インキュベートした後、反応を停止するために停止溶液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を加えた。プレートリーダー（ＰＥ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して、４５０ｎｍで信号を読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５でデータを分析した。表２１を参照すると、ＰＫ分析では、本開示のヒト化抗ＳＴ２抗体ｈｚ３１Ｃ８－１．１及びｈｚ３１Ｃ８－１．２の半減期が約９．７ｄと７．３３ｄであり、コントロールとしての抗ＳＴ２抗体ＲＧ６１４９よりも優れたことが示されている。
【手続補正6】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】