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特表2023-526328ｓｉＲＮＡを使用してＰＲＤＭ２／ＲＩＺタンパク質の発現を調節するがん治療
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-21
(54)【発明の名称】ｓｉＲＮＡを使用してＰＲＤＭ２／ＲＩＺタンパク質の発現を調節するがん治療
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20230614BHJP
A61K 31/713 20060101ALI20230614BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230614BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230614BHJP
A61K 45/06 20060101ALI20230614BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20230614BHJP
A61K 47/69 20170101ALI20230614BHJP
A61K 9/51 20060101ALI20230614BHJP
A61K 9/14 20060101ALI20230614BHJP
C12N 15/113 20100101ALI20230614BHJP
C12N 15/115 20100101ALI20230614BHJP
A61K 31/513 20060101ALN20230614BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00
A61K31/713 ZNA
A61P43/00 111
A61P35/00
A61K45/06
A61K47/02
A61K47/69
A61K9/51
A61K9/14
C12N15/113 Z
C12N15/115 Z
A61K31/513
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022569509
(86)(22)【出願日】2021-05-13
(85)【翻訳文提出日】2023-01-12
(86)【国際出願番号】 US2021032311
(87)【国際公開番号】W WO2021231771
(87)【国際公開日】2021-11-18
(31)【優先権主張番号】63/024,624
(32)【優先日】2020-05-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522444151
【氏名又は名称】エイアールアイズィー・プリシジョン・メディスン・インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100135415
【弁理士】
【氏名又は名称】中濱 明子
(72)【発明者】
【氏名】ブックバインダー，ロニー・エル
(72)【発明者】
【氏名】ベイッシュ，ナレンドラ・ケイ
(72)【発明者】
【氏名】ナイルズ，ブラッド・ジェイ
(72)【発明者】
【氏名】フリン，ジョナサン
(72)【発明者】
【氏名】ヌニェス，ニコル
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA19
4C076AA31
4C076AA65
4C076AA95
4C076BB13
4C076CC27
4C076CC41
4C076DD27
4C076EE59
4C076FF01
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA17
4C084AA20
4C084MA41
4C084MA55
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZC412
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC43
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA66
4C086NA05
4C086NA13
4C086NA14
4C086ZB21
4C086ZB26
4C086ZC41
(57)【要約】
哺乳類ＲＩＺ２発現を特異的に阻害する阻害性ＲＮＡ分子であり、がんなどの細胞増殖性疾患における治療効果を有する。
【選択図】図３
【選択図】図３
【特許請求の範囲】
【請求項1】
細胞増殖を阻害する方法であって、細胞の集団を、網膜芽細胞腫タンパク質相互作用ジンクフィンガータンパク質２（ＲＩＺ２）阻害剤を含む組成物と接触させることを含む、方法。
【請求項2】
ＲＩＺ２阻害剤が、前記細胞におけるＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を減少させる、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
ＲＩＺ２阻害剤が、前記細胞においてＲＩＺ２タンパク質の発現を減少させる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記ＲＩＺ２ ｍＲＮＡは、前記細胞においてハウスキーピング遺伝子の発現と比較して少なくとも１０％減少する、請求項２に記載の方法。
【請求項5】
前記ＲＩＺ２ ｍＲＮＡは、対照細胞集団と比較して少なくとも１０％減少し、前記対照細胞集団は、前記ＲＩＺ２阻害剤を含む前記組成物と接触したことのない細胞集団である、請求項２または４に記載の方法。
【請求項6】
ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現は、前記対照細胞集団と比較して、少なくとも５０％減少する、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現は、前記対照細胞集団と比較して、少なくとも８０％減少する、請求項５に記載の方法。
【請求項8】
ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも１．１倍を超えるように変化させる、請求項１に記載の方法。
【請求項9】
ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも１．５倍を超えるように変化させる、請求項１に記載の方法。
【請求項10】
ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも２倍変化させる、請求項１に記載の方法。
【請求項11】
ＲＩＺ２阻害剤が、さらに、ＲＩＺ１の高メチル化を減少させる、請求項に記載の方法。
【請求項12】
前記細胞は、哺乳類細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項13】
前記細胞は、ヒト細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項14】
前記細胞は、がん細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項15】
ＲＩＺ２阻害剤を含む前記組成物は、送達システムに結合された一以上のポリヌクレオチドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項16】
前記ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号１の配列を有するセンス鎖および配列番号１０の配列を有するアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡ分子である、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号６の配列を有するセンス鎖および配列番号１１の配列を有するアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡ分子である、請求項１５に記載の方法。
【請求項18】
前記送達システムは、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、またはそれらの組み合わせのうちの一以上を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項19】
前記細胞は、乳房、結腸、子宮内膜、食道、胃、神経膠腫、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、骨髄腫、上咽頭、神経芽腫、卵巣、膵臓、副甲状腺、下垂体、前立腺、甲状腺、または子宮組織である組織に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項20】
対象において細胞増殖性の疾患または障害を治療する方法であって、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項21】
ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を投与する必要のある対象として患者を選択する方法であって、当該方法は、（ｉ）対照サンプルまたは対照値と比較して、前記対象の生体サンプルにおけるＲＩＺ１メチル化レベルの増加を検出すること、または
（ｉｉ）対照サンプルもしくは対照値と比較してＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの低下を検出することを含むものであり、
前記対照サンプルまたは前記対照値と比較して、前記対象の前記生体サンプル中のメチル化ＲＩＺ１の少なくとも１．１倍の増加またはＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの少なくとも２分の１の低下により、前記対象がＲＩＺ２阻害剤を含む前記組成物を投与する必要があるとして決定され、
前記対照サンプルは、臨床的に健康な個体からのサンプルであり、
対照値は、二以上の臨床的に健康な個体のサンプルからのＲＩＺ１メチル化レベルの平均値である、方法。
【請求項22】
前記細胞増殖性の疾患または障害は、がんである、請求項２０に記載の方法。
【請求項23】
前記組成物は、送達システムをさらに含む、請求項１、１９または２０に記載の方法。
【請求項24】
（ａ）ＲＩＺ２阻害剤、および（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項25】
前記ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号１の配列を有するセンス鎖および配列番号１０の配列を有するアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡ分子である、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項26】
前記ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号６の配列を有するセンス鎖および配列番号１１の配列を有するアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡ分子である、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項27】
前記ＲＩＺ２阻害剤は、（ｉ）ヒトＰＲＤＭ２／ＲＩＺ２遺伝子に対して相同性を有する１０～２１ヌクレオチドの二本鎖ＲＮＡを含むｓｉＲＮＡを含み、
（ｉｉ）ＰＥＧ分子に共有結合し、
（ｉｉｉ）細胞標的部分に結合されるものであり、
該細胞標的部分がアプタマーである、当該ｓｉＲＮＡを含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項28】
前記ＲＩＺ２阻害剤を組み込むカルシウムホスホシリケート（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｓｉｌｉｃａｔｅ）複合体を含むナノ粒子をさらに含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項29】
一以上の化学療法薬をさらに含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
相互参照
本願は、２０２０年５月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／０２４，６２４号の利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書で援用される。
本願は、２０２０年５月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／０２４，６２４号の利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書で援用される。
【0002】
がん疾患は、世界で二番目に主要な死因である、世界中の主要な健康上の懸念であり続けている。世界保健機関（ＷＨＯ）によると、新たな２２６万の症例の乳がん、次いで２２１万の症例の肺がんを含めて、２０２０年には世界中で１，０００万人近くががんで死亡すると推定されている。低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、いくつかの疾患で有望な結果を示してきた新規かつ新興の治療薬である。リンパ腫は、リンパ球から生じるがんである。Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）は、Ｔ細胞から生じるリンパ腫であり、これらは、米国におけるすべての非ホジキンリンパ腫の約７％を占める。ＴＣＬの一般的なサブタイプには、以下が含まれる。別段に特定されない末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬＮＯＳ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、および皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）。ＴＣＬの各タイプには、それぞれ独自の病状および症状がある。低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、いくつかの疾患で有望な結果を示してきた新規かつ新興の治療薬である。がんの複雑性および重症度を考慮して、改善され、正確に目標とする治療の開発に対して継続的な要望が存在する。
【発明の概要】
【0003】
本明細書においては、細胞増殖を阻害する方法であって、細胞の集団を、網膜芽細胞腫タンパク質相互作用ジンクフィンガータンパク質２（ＲＩＺ２）阻害剤を含む組成物と接触させることを含む当該方法を開示する。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤が、細胞においてＲＩＺ２の発現を減少させる。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤が、細胞においてＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を減少させる。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤が、細胞においてＲＩＺ２タンパク質の発現を減少させる。
【0004】
一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡは、細胞においてハウスキーピング遺伝子の発現と比較して少なくとも１０％減少する。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡは、対照細胞集団と比較して、少なくとも１０％減少する。一部の実施形態では、対照細胞集団は、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物と接触したことのない細胞集団である。
【0005】
一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現は、対照細胞集団と比較して、少なくとも５０％減少する。
【0006】
一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現は、対照細胞集団と比較して、少なくとも８０％減少する。
【0007】
一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤が、さらに、細胞集団においてＲＩＺ１の発現を増加させる。一部の実施形態では、当該組成物が、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡ発現レベルのＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を変化させる。一部の実施形態では、当該組成物が、ＲＩＺ１タンパク質発現レベルのＲＩＺ２タンパク質発現レベルに対する比を変化させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも１．１倍を超えるように変化させる。
【0008】
一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも１．５倍を超えるように変化させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも２倍変化させる。
【0009】
一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤が、さらに、ＲＩＺ１の高メチル化を減少させる。
【0010】
本明細書に記載される方法の一部の実施形態では、細胞は、哺乳類細胞である。一部の実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。一部の実施形態では、細胞は、がん細胞である。
【0011】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、細胞は、乳房、結腸、子宮内膜、食道、胃、神経膠腫、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、骨髄腫、上咽頭、神経芽腫、卵巣、膵臓、副甲状腺、下垂体、前立腺、甲状腺、または子宮組織である組織に由来する。一部の実施形態では、がん細胞は、血液がん由来である。
【0012】
一部の実施形態では、がん細胞は、固形腫瘍由来である。
【0013】
一部の実施形態では、接触させることは、細胞の集団を、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物と接触させることを含む。一部の実施形態では、接触させることにより、結果として、細胞の集団の細胞数が少なくとも１０％減少する。一部の実施形態では、接触させることにより、結果として、細胞の集団の細胞数が約９０％減少する。
【0014】
一部の実施形態では、細胞増殖を阻害することは、細胞量を少なくとも１０％減少させることを含む。一部の実施形態では、細胞増殖を阻害することは、細胞量を約５０％減少させることを含む。
【0015】
本明細書に開示される方法の一実施形態では、細胞を接触させることは、ＲＩＺ２阻害剤を細胞内に組み入れることをさらに含む。
【0016】
一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、非天然由来の化合物を含む。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、合成薬である。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、ペプチドを含む。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、複合体化したポリペプチドを含む。
【0017】
一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のポリヌクレオチドを含む。
【0018】
一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、合成ポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、一以上のポリヌクレオチドは、一以上の修飾ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物は、送達システムに結合された一以上のポリヌクレオチドを含む。
【0019】
一実施形態では、送達システムは、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）ポリマー、またはそれらの組み合わせのうちの一以上を含む。
【0020】
一部の実施形態では、送達システムは、脂質を含む。一部の実施形態では、送達システムは、ＰＥＧ化脂質を含む。一部の実施形態では、送達システムは、細胞標的部分を含む。一部の実施形態では、細胞標的部分は、細胞型特異的である。一部の実施形態では、細胞標的部分は、標的細胞上の受容体に選択的に結合するリガンドである。一部の実施形態では、細胞標的部分は、標的細胞上の細胞表面分子に結合する抗体である。一部の実施形態では、細胞標的部分は、単鎖抗体または抗体断片である。一部の実施形態では、細胞標的部分は、ペプチドである。一部の実施形態では、細胞標的部分は、細胞透過性ペプチドである。一部の実施形態では、細胞標的部分は、環状ペプチドである。一部の実施形態では、細胞標的部分は、アプタマーである。一部の実施形態では、送達システムは、リポソームを含む。一部の実施形態では、送達システムは、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、ＲＮＡ分子を含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、阻害性ＲＮＡ分子を含む。
【0021】
一実施形態では、本明細書で開示する阻害性ＲＮＡ分子は、ＰＲＤＭ２遺伝子またはＰＲＤＭ２遺伝子産物上の少なくとも１０個の隣接し合う核酸塩基に対してハイブリダイズする。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡは、約１０ヌクレオチド～約２１ヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、二本鎖である。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子は、一以上の修飾ヌクレオチドを含む。
【0022】
本明細書で開示する方法の一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号１の配列または配列番号１に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、阻害性二本鎖ＲＮＡを含む。本明細書で開示する方法の一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号１の配列および配列番号１０の配列を含む、阻害性二本鎖ＲＮＡを含む。
【0023】
本明細書で開示する方法の一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号６の配列または配列番号６に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、阻害性二本鎖ＲＮＡを含む。本明細書で開示する方法の一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号６の配列または配列番号１１の配列を含む、阻害性二本鎖ＲＮＡを含む。
【0024】
本明細書においては、対象において細胞増殖性の疾患または障害を治療する方法であって、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を対象に投与することを含む、当該方法を開示する。
【0025】
本明細書においては、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を投与する必要のある対象として患者を選択する方法であって、（ｉ）対照サンプルもしくは対照値と比較して、対象の生体サンプルにおいてＲＩＺ１メチル化レベルの増加を検出すること、または（ｉｉ）対照サンプルもしくは対照値と比較してＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの低下を検出することを含むものであり、対照サンプルまたは対照値と比較して、対象の生体サンプルにおいてメチル化したＲＩＺ１の少なくとも１．１倍の増加またはＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの少なくとも２分の１の低下により、当該対象がＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を投与する必要があるとして決定され、また対照サンプルは臨床的に健康な個体由来のサンプルであり、対照値は、二以上の臨床的に健康な個体のサンプルからのＲＩＺ１メチル化レベルの平均値である、当該方法を開示する。
【0026】
本明細書で開示する方法の一部の実施形態では、細胞増殖性の疾患または障害は、がんである。
【0027】
一部の実施形態では、がんは、乳房、結腸、子宮内膜、食道、胃、神経膠腫、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、骨髄腫、上咽頭、神経芽腫、卵巣、膵臓、副甲状腺、下垂体、前立腺、甲状腺、または子宮組織のがんである。
【0028】
一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、肺がんである。
【0029】
本明細書で開示する方法の一部の実施形態では、投与することは、有効量のＲＩＺ２阻害剤を投与することを含む。
【0030】
一部の実施形態では、有効量のＲＩＺ２阻害剤は、細胞増殖性障害に関連する少なくとも一以上の疾患のパラメータを減少させる量である。
【0031】
一部の実施形態では、細胞増殖性疾患は、がんであり、また有効量のＲＩＺ２が、がん細胞の数を減少させる。一部の実施形態では、細胞増殖性疾患は、固形腫瘍であり、また有効量のＲＩＺ２が、腫瘍量を減少させる。
【0032】
一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物は、送達システムに結合された一以上のポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、一以上のポリヌクレオチドは、阻害性ＲＮＡ分子を含む。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を含む二本鎖ＲＮＡ分子である。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を含む二本鎖ＲＮＡ分子である。
【0033】
一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、表２に列挙した配列のうちのいずれか一つに対して少なくとも９０％の配列同一性を含む二本鎖ＲＮＡ分子である。
【0034】
一部の実施形態では、組成物は、送達システムをさらに含む。一部の実施形態では、送達システムは、脂質および／または細胞標的部分を含む。一部の実施形態では、脂質は、ＰＥＧ化脂質である。一部の実施形態では、細胞標的部分は、細胞透過性ペプチド、環状ペプチド、抗体もしくはその断片、またはアプタマーである。
【0035】
さらに本明細書においては、（ａ）ＲＩＺ２阻害剤、および（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物が開示される。本明細書で開示する医薬組成物の一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のポリヌクレオチド分子および送達システムを含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、阻害性ＲＮＡ分子を含む。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子を、ＰＲＤＭ２遺伝子またはＰＲＤＭ２遺伝子産物上の少なくとも１０個の隣接し合う核酸塩基に対してハイブリダイズする。
【0036】
一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、約１０ヌクレオチド～約２１ヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、二本鎖である。一部の実施形態では、阻害性二本鎖ＲＮＡは、配列番号１の配列または配列番号１に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、阻害性二本鎖ＲＮＡは、配列番号１３の配列または配列番号１３に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、阻害性二本鎖ＲＮＡは、配列番号１３の配列または配列番号１４に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、送達システムは、細胞標的部分を含む。一部の実施形態では、細胞標的部分は、リガンド、および抗体または抗体断片、単鎖抗体、ペプチドまたはアプタマーである。一部の実施形態では、細胞透過性ペプチドである。
【0037】
一部の実施形態では、送達システムは、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、またはそれらの組み合わせのうちの一以上を含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、（ｉ）ヒトＰＲＤＭ２／ＲＩＺ２遺伝子に対して相同性を有する１０～２１ヌクレオチドの二本鎖ＲＮＡを含むｓｉＲＮＡを含み、（ｉｉ）ＰＥＧ分子に共有結合し、（ｉｉｉ）細胞標的部分に結合されるものであり、該細胞標的部分がアプタマーである、ｓｉＲＮＡを含む。一部の実施形態では、送達システムは、リポソームを含む。一部の実施形態では、送達システムは、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、およびそれらの組み合わせを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、カルシウムホスホシリケート（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｓｉｌｉｃａｔｅ）複合体を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＲＩＺ２阻害剤と結合したカルシウムホスホシリケート複合体をさらに含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、一以上の化学療法薬をさらに含む。
【0038】
前述の多機能性分子、核酸、ベクター、宿主細胞、または方法のいずれかのさらなる特徴は、以下の列挙された実施形態のうちの一以上を含む。
【0039】
当業者は、本明細書に記載する本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または通例の実験のみを使用して確認することができるだろう。こうした均等物は、以下の列挙された実施形態によって包含されることを意図する。
【0040】
前述の多機能性分子、核酸、ベクター、宿主細胞、または方法のいずれかのさらなる特徴は、以下の列挙された実施形態のうちの一以上を含む。
【図面の簡単な説明】
【0041】
【図1】[００４１]図１は、ＲＩＺ ｍＲＮＡに対する相補性を有するｓｉＲＮＡペイロードを含有する薬剤送達システムを含む、本発明の一実施形態による例を示す。この例では、薬剤送達システムはＰＥＧ化され、またペイロードをがん細胞またはがん幹細胞に特異的に向ける標的ペプチドを担持する。薬剤送達システムが一以上の追加のペイロードを含有し得ることを説明するために、ナノ粒子を、抗ＲＩＺ ｓｉＲＮＡに加えて、小分子または大分子の併用剤を含有するように示している。こうした追加のペイロードは、現在承認されている化学療法薬、リパーパス薬、またはがん細胞の死滅させる、もしくはがん細胞の増殖もしくは転移を制御するのを効果的に支援する、あらゆる薬剤であり得る。
【0042】
[００５１] 本明細書に番号付けされた添付図面は、例示のみで与えられるものであり、いかなる範囲への制限を意図していない。
【発明を実施するための形態】
【0043】
[００５２] 本開示は、哺乳類細胞におけるＲＩＺ１レベルおよびＲＩＺ２レベル間の均衡が、細胞の不安定でない正常なライフサイクルの決定因子であること、およびそれが不均衡であることが、細胞サイクルの変化を導き、これが例えば過形成またはがんなどの過剰増殖性障害につながることという重要な知見に基づく。本開示は、当該不均衡に対処し、それによってがんなどの過剰増殖性障害を防止または改善するために、ＲＩＺ２を特異的に標的化することができるというさらなる画期的な展開に基づく。
【0044】
[００５３] 現在の抗がん剤治療は有効性が限定的である。通常使用される抗がん剤は、腫瘍の一時的な緩解をもたらし、患者の延命に役立ち得るが、ほとんどの場合、がんを完全には除去しないことが多くその後腫瘍が再発する可能性があることを理由に治療に有効ではない。小分子化学療法は、現在、がんに対して最も広く使用されている治療であるが、その作用はほとんど非特異的である。
【0045】
[００５４] 化学療法薬は、非特異的な毒性作用が深刻であり、これは制御および破壊が意図されるがん性細胞のみならず、正常で健康な細胞および組織に対して、付随的に損傷を引き起こす。その結果、患者は毒性により激しい副作用に悩まされる。免疫療法は、毒性が低く且つ生存率を向上させると予想されたが、その見込みにもかかわらず、がん治療および良好な長期的な患者転帰の見通しは漸進的に向上するに過ぎなかった。標的療法および免疫療法は、従来の化学療法の補充または代替としてますます使用されるが、がんが一般的に適応し、急速に耐性を発現し、標的療法の効果を逃れるため、そのような療法は概して長期的な有効性を欠く。前述の理由から、化学療法、免疫療法、および標的療法が治癒に有効的であることはまれである。根本的原因に取り組むことで、例えば、そもそも細胞をがん化させてこの壊滅的な疾患を生じさせる根底にある遺伝的異常を克服することで、がんは治癒する可能性がある。このアプローチには、正常な細胞における腫瘍形成を抑制するが、異常発現した場合がん細胞形成の駆動因子となる、主要制御因子として作用するタンパク質の発現を調節することを伴い得る。
【0046】
[００５５] 特に興味深いのは、ＰＲＤＭクラスの腫瘍抑制遺伝子の発現を変動させることに焦点を当てたがん治療である。ＰＲＤＭは、細胞の成長、増殖、生存、および可動性を制御する遺伝子およびタンパク質のファミリーである。研究によると、ＰＲＤＭの発現および活性の変化が、がん細胞形成につながる正常細胞の最初の変化に通常含まれるということが示されている。ＰＲＤＭ遺伝子の異常発現は、多種多様ながん型に強く関与している。ＰＲＤＭは、例えば乳房、結腸、胃、肝臓、肺、黒色腫、前立腺、およびその他のがんなどの固形腫瘍、ならびに例えば白血病、リンパ腫、および骨髄腫などの血液がんにおける原因遺伝子および原因タンパク質として関連している。
【0047】
定義
[００５６] 別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解される意味を有する。以下の参考文献は、本発明で使用される多くの用語の全般的な定義を当業者に提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ ｅｄ．１９９４）、Ｔｈｅ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （Ｗａｌｋｅｒ ｅｄ．，１９８８）、Ｔｈｅ Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ （１９９１）、およびＨａｌｅ ＆ Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ Ｈａｒｐｅｒ Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、以下の用語は、以下に帰する意味を有する。本明細書で使用される用語は、単に特定の事例を記述する目的であり、限定することを意図するものではない。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が別途明示しない限り、複数形も含むことが意図される。さらに、用語「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「伴う（ｗｉｔｈ）」またはその変化形が、発明の詳細な説明および／または特許請求の範囲のいずれかで使用される限りにおいて、かかる用語は、用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同様に包括的であることが意図される。当然のことながら、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含まれる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの用語は、米国特許法においてそれに帰属する意味を有し得るものであり、例えばこれら用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」等を意味することが可能であり、また「本質的に～からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」および「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの用語は、米国特許法においてそれに帰する意味を有するものであり、例えば当該用語は、明示的に列挙されていない要素も許容するが、先行技術に見出される要素、または本発明の基本的もしくは新規の特徴に影響を及ぼす要素は除外する。本明細書のいかなる内容も、保証として意図されているものではない。
[００５６] 別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解される意味を有する。以下の参考文献は、本発明で使用される多くの用語の全般的な定義を当業者に提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ ｅｄ．１９９４）、Ｔｈｅ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （Ｗａｌｋｅｒ ｅｄ．，１９８８）、Ｔｈｅ Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ （１９９１）、およびＨａｌｅ ＆ Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ Ｈａｒｐｅｒ Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、以下の用語は、以下に帰する意味を有する。本明細書で使用される用語は、単に特定の事例を記述する目的であり、限定することを意図するものではない。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が別途明示しない限り、複数形も含むことが意図される。さらに、用語「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「伴う（ｗｉｔｈ）」またはその変化形が、発明の詳細な説明および／または特許請求の範囲のいずれかで使用される限りにおいて、かかる用語は、用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同様に包括的であることが意図される。当然のことながら、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含まれる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの用語は、米国特許法においてそれに帰属する意味を有し得るものであり、例えばこれら用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」等を意味することが可能であり、また「本質的に～からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」および「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの用語は、米国特許法においてそれに帰する意味を有するものであり、例えば当該用語は、明示的に列挙されていない要素も許容するが、先行技術に見出される要素、または本発明の基本的もしくは新規の特徴に影響を及ぼす要素は除外する。本明細書のいかなる内容も、保証として意図されているものではない。
【0048】
[００５７] 「薬剤」とは、あらゆる小分子の化合物、抗体、核酸分子、またはポリペプチド、またはその断片を意味する。
【0049】
[００５８] 用語「ポリヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書では区別なく使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含み、例えばｍＲＮＡである。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、および／もしくはその類似体、またはＤＮＡポリメラーゼもしくはＲＮＡポリメラーゼによってポリマーに組み込まれ得る任意の基質であり得る。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドおよび核酸は、インビトロで転写されるｍＲＮＡであり得る。一部の実施形態では、本発明の方法を使用して投与されるポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。
【0050】
[００５９] 二以上の核酸またはポリペプチドの文脈における「同一」または「一致」率という用語は、配列同一性の一部として何らかの保存的アミノ酸置換を考慮することなく最大限一致するように比較および整列（必要に応じてギャップを導入する）したときに、同じであるか、または同じであるヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を特定の割合を有する、二以上の配列または部分配列を指す。一致率は、配列比較ソフトウェアまたはアルゴリズムを使用して、または視覚的検査によって測定することができる。アミノ酸配列またはヌクレオチド配列のアラインメントを取得するために使用できる様々なアルゴリズムおよびソフトウェアは、当技術分野で周知である。これらには、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ、ＢｅｓｔＦｉｔ、ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ、およびそれらの変形が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、本明細書に記載する二つの核酸またはポリペプチドは、実質的に同一であるが、これは、配列比較アルゴリズムを使用してまたは視覚的検査によって測定しながら、最大限一致するように比較および整列された場合に少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、および一部の実施形態では少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のヌクレオチドまたはアミノ酸残基の同一性を有することを意味する。
【0051】
[００６０] 本明細書で使用される場合、細胞増殖性障害または過剰増殖性障害は、一以上の細胞周期関連遺伝子の機能停止に起因する、細胞増殖の増加、ほとんどの場合細胞増殖の制御不能に関連した疾患または障害である。例示的な過剰増殖性障害は、新形成、がんである。細胞周期は、細胞のライフサイクルにおける連続する二つのＧ０／Ｇ１期（または連続する二つのＧ１／Ｍ期）の間の周期的間隔であり、これは通常、最適な環境条件下では、細胞型で不変のままである。細胞周期異常は、概して細胞周期調節因子の破損によって引き起こされる場合がある、細胞のライフサイクルにおける連続する二つのＧ０／Ｇ１期（または連続する二つのＧ１／Ｍ期）間の正常な周期的間隔を破壊する障害であり得る。例えば、例示的な細胞周期調節因子は、サイクリンＤである。一部の実施形態では、ＲＩＺ１および／またはＲＩＺ２が、細胞周期の調節因子とみなされ得る。一部の実施形態では、ＲＩＺ１および／またはＲＩＺ２は、それらがライフサイクルを遍在的に制御するという点で、またはそれらが、細胞型、位置、もしくは環境条件に関係なく細胞のライフサイクルにおける節目を制御するという点で、細胞周期の主要調節因子とみなされ得る。
［００６１] 過形成は、例えば、例えばチェックポイント阻害剤である細胞周期調節因子の破損の結果として、急速な細胞増殖の状態として定義され得る。新形成は、細胞が腫瘍性転化、例えばがん性の悪性転換を経た状態である。
［００６１] 過形成は、例えば、例えばチェックポイント阻害剤である細胞周期調節因子の破損の結果として、急速な細胞増殖の状態として定義され得る。新形成は、細胞が腫瘍性転化、例えばがん性の悪性転換を経た状態である。
【0052】
[００６２] ＲＮＡ干渉およびｓｉＲＮＡ。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）とは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によって媒介される動物における配列特異的転写後遺伝子サイレンシングのプロセスを指す（Ｚａｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５－３３、Ｆｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ，３９１，８０６、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６，９５０－９５１、Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ，４０２，１２８－１２９、およびＳｔｒａｕｓｓ，１９９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６，８８６）。植物における対応するプロセス（Ｈｅｉｆｅｔｚら、国際ＰＣＴ出願公開公報、国際公開第９９／６１６３１号）は、通常、転写後遺伝子サイレンシングまたはＲＮＡサイレンシングと呼称され、また真菌においては膨化（ｑｕｅｌｌｉｎｇ）とも呼称される。細胞中に長鎖ｄｓＲＮＡが存在することが、ダイサーと呼ばれるリボヌクレアーゼＩＩＩ酵素の活性を刺激する（Ｂａｓｓ，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２３５、Ｚａｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５－３３、Ｈａｍｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎａｔｕｒｅ，４０４，２９３）。ダイサーは、ｄｓＲＮＡを、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）として知られる短い断片のｄｓＲＮＡへと処理する際に関与する（Ｚａｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５－３３、Ｂａｓｓ，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２３５、Ｂｅｒｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４０９，３６３）。ダイサーの活性に由来する低分子干渉ＲＮＡは、典型的には約２１～約２３ヌクレオチドの長さで、約１９塩基対の二本鎖体を含む（Ｚａｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５－３３、Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１５，１８８）。ダイサーはまた、翻訳制御に関与する保存された構造の前駆体ＲＮＡからの２１ヌクレオチドおよび２２ヌクレオチドである低分子一過性ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｔｅｍｐｏｒａｌ ＲＮＡ））の除去にも関与している（Ｈｕｔｖａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９３，８３４）。ＲＮＡｉ反応はまた、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と通常称されるエンドヌクレアーゼ複合体も特徴であり、これはｓｉＲＮＡ二本鎖体のうちのアンチセンス鎖に相補的な配列を有する一本鎖ＲＮＡの切断を媒介する。標的ＲＮＡの切断は、ｓｉＲＮＡ二本鎖体のうちのアンチセンス鎖に相補的な領域の真ん中で行われる（Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１５，１８８）。
【0053】
[００６３] 用語「阻害」はしばしば、「減少」または「発現レベルの減少」と区別なく使用されるが、これは阻害される特定の成分のレベルの減少を示し、当該減少は、部分的（例えば、２０％、５０％、７５％、８０％）であっても、または完全（約１００％）であってもよい。例えば、ＲＩＺ２阻害剤は、細胞内のＲＩＺ２タンパク質を約５０％、または約１００％阻害する。
【0054】
[００６４] 疾患、傷害、または障害の文脈で使用される場合、用語「治療」、「治療すること」、「緩和」などは、本明細書では、望ましい薬理学的および／または生理学的効果の獲得を概して意味するために使用され、また治療される状態の一以上の症状の重症度を改善、緩和、および／または低下させることを指すためにも使用され得る。当該効果は、疾患、状態、またはその症状の発症または再発を完全にまたは部分的に遅延させるという点で予防的であり得、ならびに／または疾患もしくは症状、および／もしくは当該疾患もしくは症状に起因する有害作用に対する部分的もしくは完全な治癒という点で治療的であり得る。本明細書で使用される場合、「治療」は、特にヒトである哺乳類の疾患または症状のあらゆる治療を包含し、以下を含む：（ａ）疾患または症状の素因があり得るが当該疾患または症状があるとまだ診断されていない対象において、当該疾患または症状が発症することを予防すること、（ｂ）当該疾患または症状を阻害すること（例えば、その発症を阻止すること）、または（ｃ）当該疾患または症状が緩和すること（例えば、当該疾患または症状の退縮を引き起こすこと、一以上の症状の改善をもたらすこと）。
【0055】
ＰＲＤＭ遺伝子および生態学
[００６５] 本開示は、例えばＰＲＤＭ２遺伝子である一以上のＰＲＤＭ遺伝子の発現および機能を調節する方法および組成物に関する。概して、ＰＲ／ＳＥＴ（ヒストンメチルトランスフェラーゼ（ＨＭＴ）の大きな群を画定する［Ｓｕ（ｖａｒ）３－９、Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ ＺｅｓｔｅおよびＴｒｉｔｈｏｒａｘ（トライソラクス）］）ドメイン２（ＰＲＤＭ２）は、ヒトでは現在１９種のメンバーを含む、ＰＲＤＭ（正の調節ドメイン（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｄｏｍａｉｎ））遺伝子ファミリー、Ｋｒｕｐｐｅｌ様ジンクフィンガー遺伝子産物のサブファミリーに属する。ＰＲドメインはタンパク質結合界面を有し、そしてそれらのいくつかは、普遍的なメチル供与体Ｓ－アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）を収容することができ、したがってリジンメチルトランスフェラーゼ（ＫＭＴ）としての機能を果たす。ＰＲＤＭ（ＰＲＤＩ－ＢＦ１およびＲＩＺ相同ドメイン含有）タンパク質ファミリーメンバーは、ヒストン／タンパク質メチルトランスフェラーゼ（ＰＲＤＭ）のスーパーファミリーに属するが、当該メンバーは、Ｃ末端にメチルトランスフェラーゼ活性およびジンクフィンガーアレイを伴って、保存されたＮ末端ＰＲドメインを特徴とする。このクラスのメンバーは、ＰＲドメインおよび異なる数のＺｎフィンガーが存在することを特徴とする。実験的証拠によると、ＰＲＤＭタンパク質は、遺伝子発現調節で重要な役割を果たし、直接的に、メチルトランスフェラーゼ活性を介して、またはクロマチンリモデリング複合体のリクルートを介して間接的に、クロマチン構造を変化させるということがわかっている。ＰＲＤＭタンパク質は転写因子として機能し、成長、分化、増殖、可動性、および生存を含む発生過程に関与する膨大な数の他の遺伝子の発現を支配する。したがって、ＰＲＤＭタンパク質は、発生シグナルに応答して細胞状態遷移を駆動および維持する主要転写調節因子である。一部のＰＲＤＭタンパク質は、通常、腫瘍抑制因子として機能するが、それらの発現が調節不全となった場合、または特定のアイソフォームが異常な割合で発現するようになると、これら変化が、がんの発症および進行の駆動因子となり得る。多くのがん型が、特定のＰＲＤＭタンパク質の機能障害と強く関連している。こうした腫瘍では、正常なＰＲＤＭタンパク質の発現が、異常に低いレベルである可能性がある。ＲＤＭタンパク質は、ステロイドホルモンのように異なる細胞シグナルによって誘導される効果を媒介すること、そして増殖因子の発現を制御すること、という二重の作用を有する。したがって、ＰＲＤＭタンパク質は、細胞の増殖および分化、その結果としての腫瘍性転化を制御するシグナルの伝達において中心的役割を果たす（Ｚａｚｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｂａｓｅｌ）．２０１３ Ｍａｒ；２（１）：１０７－１４１）。ＰＲドメインは、ヒストンメチルトランスフェラーゼの群を画定する触媒的なＳＥＴ（Ｓｕ（ｖａｒ）３－９（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｖａｒｉｅｇａｔｉｏｎ ３－９）、Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ ｚｅｓｔｅおよびＴｒｉｔｈｏｒａｘ（トライソラクス））ドメインと高い相同性を共有する（Ｘｉａｏ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２００３；１３：６９９－７０５）。ヒトゲノムでは、ＰＲ／ＳＥＴを有するタンパク質をコードする１７個の遺伝子があり、それらのうちＰＲＤＭ１１を除くすべてが、Ｚｎフィンガードメインを様々な数で有している（Ｆｕｍａｓｏｎｉ Ｉ．ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｅｖｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００７；７：１８７）。ＰＲＤＭタンパク質は、細胞の増殖および分化、その結果としての腫瘍性転化を制御するシグナルの伝達において中心的役割を果たす（Ｆｏｇ Ｃ．Ｋ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＥｓｓａｙｓ．２０１１；３４：５０－６０）。ＰＲＤＭファミリー遺伝子の共通の特徴は、選択的スプライシングによる、または異なるプロモーターの作用による、異なる分子形態の発現である。さらに、このファミリーの一部の遺伝子は、二つの選択的な形態として発現され、その一つはＰＲドメインを欠いている（ＰＲ－マイナス）が、もう一方であるＰＲ含有産物（ＰＲ－プラス）とその他の点では同一である（ＰＲＤＭ１、ＰＲＤＭ２、ＰＲＤＭ３、ＰＲＤＭ１６）［（Ｇｙｏｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３，１７０：３１２５－３１３３）、（Ｌｉｕ Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９７，２７２：２９８４－２９９１）］。他の遺伝子は、Ｚｎ－フィンガードメインが存在するかまたは存在しないかの点で異なるタンパク質をコードする（ＰＲＤＭ６、ＰＲＤＭ９）。
[００６５] 本開示は、例えばＰＲＤＭ２遺伝子である一以上のＰＲＤＭ遺伝子の発現および機能を調節する方法および組成物に関する。概して、ＰＲ／ＳＥＴ（ヒストンメチルトランスフェラーゼ（ＨＭＴ）の大きな群を画定する［Ｓｕ（ｖａｒ）３－９、Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ ＺｅｓｔｅおよびＴｒｉｔｈｏｒａｘ（トライソラクス）］）ドメイン２（ＰＲＤＭ２）は、ヒトでは現在１９種のメンバーを含む、ＰＲＤＭ（正の調節ドメイン（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｄｏｍａｉｎ））遺伝子ファミリー、Ｋｒｕｐｐｅｌ様ジンクフィンガー遺伝子産物のサブファミリーに属する。ＰＲドメインはタンパク質結合界面を有し、そしてそれらのいくつかは、普遍的なメチル供与体Ｓ－アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）を収容することができ、したがってリジンメチルトランスフェラーゼ（ＫＭＴ）としての機能を果たす。ＰＲＤＭ（ＰＲＤＩ－ＢＦ１およびＲＩＺ相同ドメイン含有）タンパク質ファミリーメンバーは、ヒストン／タンパク質メチルトランスフェラーゼ（ＰＲＤＭ）のスーパーファミリーに属するが、当該メンバーは、Ｃ末端にメチルトランスフェラーゼ活性およびジンクフィンガーアレイを伴って、保存されたＮ末端ＰＲドメインを特徴とする。このクラスのメンバーは、ＰＲドメインおよび異なる数のＺｎフィンガーが存在することを特徴とする。実験的証拠によると、ＰＲＤＭタンパク質は、遺伝子発現調節で重要な役割を果たし、直接的に、メチルトランスフェラーゼ活性を介して、またはクロマチンリモデリング複合体のリクルートを介して間接的に、クロマチン構造を変化させるということがわかっている。ＰＲＤＭタンパク質は転写因子として機能し、成長、分化、増殖、可動性、および生存を含む発生過程に関与する膨大な数の他の遺伝子の発現を支配する。したがって、ＰＲＤＭタンパク質は、発生シグナルに応答して細胞状態遷移を駆動および維持する主要転写調節因子である。一部のＰＲＤＭタンパク質は、通常、腫瘍抑制因子として機能するが、それらの発現が調節不全となった場合、または特定のアイソフォームが異常な割合で発現するようになると、これら変化が、がんの発症および進行の駆動因子となり得る。多くのがん型が、特定のＰＲＤＭタンパク質の機能障害と強く関連している。こうした腫瘍では、正常なＰＲＤＭタンパク質の発現が、異常に低いレベルである可能性がある。ＲＤＭタンパク質は、ステロイドホルモンのように異なる細胞シグナルによって誘導される効果を媒介すること、そして増殖因子の発現を制御すること、という二重の作用を有する。したがって、ＰＲＤＭタンパク質は、細胞の増殖および分化、その結果としての腫瘍性転化を制御するシグナルの伝達において中心的役割を果たす（Ｚａｚｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｂａｓｅｌ）．２０１３ Ｍａｒ；２（１）：１０７－１４１）。ＰＲドメインは、ヒストンメチルトランスフェラーゼの群を画定する触媒的なＳＥＴ（Ｓｕ（ｖａｒ）３－９（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｖａｒｉｅｇａｔｉｏｎ ３－９）、Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ ｚｅｓｔｅおよびＴｒｉｔｈｏｒａｘ（トライソラクス））ドメインと高い相同性を共有する（Ｘｉａｏ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２００３；１３：６９９－７０５）。ヒトゲノムでは、ＰＲ／ＳＥＴを有するタンパク質をコードする１７個の遺伝子があり、それらのうちＰＲＤＭ１１を除くすべてが、Ｚｎフィンガードメインを様々な数で有している（Ｆｕｍａｓｏｎｉ Ｉ．ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｅｖｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００７；７：１８７）。ＰＲＤＭタンパク質は、細胞の増殖および分化、その結果としての腫瘍性転化を制御するシグナルの伝達において中心的役割を果たす（Ｆｏｇ Ｃ．Ｋ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＥｓｓａｙｓ．２０１１；３４：５０－６０）。ＰＲＤＭファミリー遺伝子の共通の特徴は、選択的スプライシングによる、または異なるプロモーターの作用による、異なる分子形態の発現である。さらに、このファミリーの一部の遺伝子は、二つの選択的な形態として発現され、その一つはＰＲドメインを欠いている（ＰＲ－マイナス）が、もう一方であるＰＲ含有産物（ＰＲ－プラス）とその他の点では同一である（ＰＲＤＭ１、ＰＲＤＭ２、ＰＲＤＭ３、ＰＲＤＭ１６）［（Ｇｙｏｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３，１７０：３１２５－３１３３）、（Ｌｉｕ Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９７，２７２：２９８４－２９９１）］。他の遺伝子は、Ｚｎ－フィンガードメインが存在するかまたは存在しないかの点で異なるタンパク質をコードする（ＰＲＤＭ６、ＰＲＤＭ９）。
【0056】
[００６６] ＰＲＤＭ１およびＰＲＤＭ２は、それぞれＢｌｉｍｐ－１（Ｂ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ－１（Ｂリンパ球より誘導された成熟タンパク質－１））およびＲＩＺ（網膜芽細胞腫相互作用ジンクフィンガータンパク質）として最初に特定されたが、ＰＲ－プラスのアイソフォームおよびＰＲ－マイナスのアイソフォームをコードする二つのプロモーターを有する。ＰＲＤＭ１プロモーターは、それぞれエクソン１およびエクソン４の上流に位置決定されている。以下の二つのプロモーターにおけるこれら転写開始部位は以下をガイドする：ＰＲドメインが存在することのみが異なる、ＰＲＤＩ－ＢＦ１（正の調節ドメインＩ結合因子１）α（ＰＲ－プラス）ｅ ＰＲＤＩ－ＢＦ１β（ＰＲ－マイナス）。ＰＲＤＭ１と同様に、ＰＲＤＭ２は、二つのプロモーターによって開始される示差的転写によって、ＰＲＤＭ２ａ／ＲＩＺ１（ＰＲ－プラス）およびＰＲＤＭ２ｂ／ＲＩＺ２（ＰＲ－マイナス）である二つのタンパク質を発現する。ＰＲＤＭ２の一方のプロモーターは、エクソン１ａを含む領域内のオープンリーディングフレームの上流に位置し、また第二のプロモーターはイントロン５およびエクソン６の範囲内に位置している。ＰＲＤＭ２はまず、それぞれ独立の試験において、ヒトｃＤＮＡライブラリーの機能スクリーニングを通して、網膜芽細胞腫相互作用ジンクフィンガータンパク質（ＲＩＺ）として、およびＧＡＴＡ－３結合タンパク質として特定された（Ｓｏｒｒｅｎｔｉｎｏ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｖｏｌｕｍｅ １８６１，Ｉｓｓｕｅ ７，Ｐａｇｅｓ ６５７－６７１）。その後、ヒト単球性白血病細胞株のｃＤＮＡ発現ライブラリーから、ＰＲＤＭ２バリアントが単離され、これはＭＴＥ結合タンパク質ジンクフィンガー型（ＭＴＢ－ＺＦ）と名付けられた。
【0057】
【表1-1】
【0058】
【表1-2】
【0059】
[００６８] これまでのところ、酵素活性は、以下のいくつかのファミリーメンバーに関してのみ実験により実証されている。ＰＲＤＭ９（Ｈ３Ｋ４ｍｅ３、Ｈ３Ｋ９ｍｅ１／３、Ｈ３Ｋ１８ｍｅ１、Ｈ３Ｋ３６ｍｅ３およびＨ４Ｋ２０ｍｅ１／２に向けて）、ＰＲＤＭ２、ＰＲＤＭ３、およびＰＲＤＭ１６（Ｈ３Ｋ９ｍｅ１）、およびＰＲＤＭ８（Ｈ３Ｋ９ｍｅ３）（Ｘｉｅ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２：４２，２６３６－２６３６６）。さらに、ＰＲＤＭ６について、この活性の性質はさらなる解明を必要とするものの、その活性が報告されている。
【0060】
[００６９] ＰＲＤＭ２、すなわち網膜芽細胞腫結合タンパク質（ＲＩＺ）ＲＩＺは、Ｒｂ結合タンパク質およびＰＲＤＩ－ＢＦ１／ＢＬＩＭＰ１転写リプレッサーをコードし、これはＢリンパ球の成熟を促進する。ＲＩＺは、ＰＲＤＭ２ａ（ＲＩＺ１）およびＰＲＤＭ２ｂ（ＲＩＺ２）である二つのアイソフォームを有し得る。いずれのタンパク質も、哺乳類細胞で広く発現する。ＲＩＺ１は、ＲＩＺ２と同一であるが、アミノ末端に追加的な２０１残基を有する点が異なり、これはＲＩＺ１ではＰＲドメインを含む。ＲＩＺ１におけるこれら追加的な残基は、ＲＩＺ１タンパク質に特定の機能を付与することが知られている。内部プロモーターは、ＲＩＺ２を生成するが、これはＲＩＺ１ ＰＲドメインを欠いている。このＰＲドメインは、ＲＩＺ１アミノ末端領域内の主要な機能的モチーフを表す。ＰＲドメインは、ＳＥＴドメインの誘導体であり、またクロマチン介在性の遺伝子発現調節においてタンパク質結合インターフェースとして機能し得る。
【0061】
[００７０］ ＲＩＺ２では不在である、ＲＩＺ１内にＰＲドメインを含むＮ末端領域の配列の例を以下に示すが、推定のＰＲドメインを太字で示している：
【0062】
【表A】
【0063】
[００７２］ ＲＩＺ２は、ＲＩＺ１に存在する配列番号１９として示したセグメントが存在しないことを特徴とする。
【0064】
[００７３] 例示的なＲＩＺ２タンパク質配列を以下に提供する。
ＭＲＤＳＡＥＧＰＫＥＤＥＥＫＰＳＡＳＡＬＥＱＰＡＴＬＱＥＶＡＳＱＥＶＰＰＥＬＡＴＰＡＰＡＷＥＰＱ
ＰＥＰＤＥＲＬＥＡＡＡＣＥＶＮＤＬＧＥＥＥＥＥＥＥＥＥＤＥＥＥＥＥＤＤＤＤＤＥＬＥＤＥＧＥＥＥＡＳ
ＭＰＮＥＮＳＶＫＥＰＥＩＲＣＤＥＫＰＥＤＬＬＥＥＰＫＴＴＳＥＥＴＬＥＤＣＳＥＶＴＰＡＭＱＩＰＲＴＫＥ
ＥＡＮＧＤＶＦＥＴＦＭＦＰＣＱＨＣＥＲＫＦＴＴＫＱＧＬＥＲＨＭＨＩＨＩＳＴＶＮＨＡＦＫＣＫＹＣＧ
ＫＡＦＧＴＱＩＮＲＲＲＨＥＲＲＨＥＡＧＬＫＲＫＰＳＱＴＬＱＰＳＥＤＬＡＤＧＫＡＳＧＥＮＶＡＳＫＤ
ＤＳＳＰＰＳＬＧＰＤＣＬＩＭＮＳＥＫＡＳＱＤＴＩＮＳＳＶＶＥＥＮＧＥＶＫＥＬＨＰＣＫＹＣＫＫＶＦＧ
ＴＨＴＮＭＲＲＨＱＲＲＶＨＥＲＨＬＩＰＫＧＶＲＲＫＧＧＬＥＥＰＱＰＰＡＥＱＡＱＡＴＱＮＶＹＶＰ
ＳＴＥＰＥＥＥＧＥＡＤＤＶＹＩＭＤＩＳＳＮＩＳＥＮＬＮＹＹＩＤＧＫＩＱＴＮＮＮＴＳＮＣＤＶＩＥＭＥＳ
ＡＳＡＤＬＹＧＩＮＣＬＬＴＰＶＴＶＥＩＴＱＮＩＫＴＴＱＶＰＶＴＥＤＬＰＫＥＰＬＧＳＴＮＳＥＡＫＫＲＲ
ＴＡＳＰＰＡＬＰＫＩＫＡＥＴＤＳＤＰＭＶＰＳＣＳＬＳＬＰＬＳＩＳＴＴＥＡＶＳＦＨＫＥＫＳＶＹＬＳＳＫＬ
ＫＱＬＬＱＴＱＤＫＬＴＰＡＧＩＳＡＴＥＩＡＫＬＧＰＶＣＶＳＡＰＡＳＭＬＰＶＴＳＳＲＦＫＲＲＴＳＳＰＰ
ＳＳＰＱＨＳＰＡＬＲＤＦＧＫＰＳＤＧＫＡＡＷＴＤＡＧＬＴＳＫＫＳＫＬＥＳＨＳＤＳＰＡＷＳＬＳＧＲＤ
ＥＲＥＴＶＳＰＰＣＦＤＥＹＫＭＳＫＥＷＴＡＳＳＡＦＳＳＶＣＮＱＱＰＬＤＬＳＳＧＶＫＱＫＡＥＧＴＧＫ
ＴＰＶＱＷＥＳＶＬＤＬＳＶＨＫＫＨＣＳＤＳＥＧＫＥＦＫＥＳＨＳＶＱＰＴＣＳＡＶＫＫＲＫＰＴＴＣＭＬ
ＱＫＶＬＬＮＥＹＮＧＩＤＬＰＶＥＮＰＡＤＧＴＲＳＰＳＰＣＫＳＬＥＡＱＰＤＰＤＬＧＰＧＳＧＦＰＡＰＴＶ
ＥＳＴＰＤＶＣＰＳＳＰＡＬＱＴＰＳＬＳＳＧＱＬＰＰＬＬＩＰＴＤＰＳＳＰＰＰＣＰＰＶＬＴＶＡＴＰＰＰＰＬＬＰＴ
ＶＰＬＰＡＰＳＳＳＡＳＰＨＰＣＰＳＰＬＳＮＡＴＡＱＳＰＬＰＩＬＳＰＴＶＳＰＳＰＳＰＩＰＰＶＥＰＬＭＳＡＡＳＰ
ＧＰＰＴＬＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＦＳＳＳＳＳＳＳＳＰＳＰＰＰＬＳＡＩＳＳＶＶＳＳＧＤＮＬＥＡＳＬＰＭＩＳＦＫ
ＱＥＥＬＥＮＥＧＬＫＰＲＥＥＰＱＳＡＡＥＱＤＶＶＶＱＥＴＦＮＫＮＦＶＣＮＶＣＥＳＰＦＬＳＩＫＤＬＴＫ
ＨＬＳＩＨＡＥＥＷＰＦＫＣＥＦＣＶＱＬＦＫＤＫＴＤＬＳＥＨＲＦＬＬＨＧＶＧＮＩＦＶＣＳＶＣＫＫＥＦＡ
ＦＬＣＮＬＱＱＨＱＲＤＬＨＰＤＫＶＣＴＨＨＥＦＥＳＧＴＬＲＰＱＮＦＴＤＰＳＫＡＨＶＥＨＭＱＳＬＰＥ
ＤＰＬＥＴＳＫＥＥＥＥＬＮＤＳＳＥＥＬＹＴＴＩＫＩＭＡＳＧＩＫＴＫＤＰＤＶＲＬＧＬＮＱＨＹＰＳＦＫＰＰＰ
ＦＱＹＨＨＲＮＰＭＧＩＧＶＴＡＴＮＦＴＴＨＮＩＰＱＴＦＴＴＡＩＲＣＴＫＣＧＫＧＶＤＮＭＰＥＬＨＫＨＩ
ＬＡＣＡＳＡＳＤＫＫＲＹＴＰＫＫＮＰＶＰＬＫＱＴＶＱＰＫＮＧＶＶＶＬＤＮＳＧＫＮＡＦＲＲＭＧＱＰ
ＫＲＬＮＦＳＶＥＬＳＫＭＳＳＮＫＬＫＬＮＡＬＫＫＫＮＱＬＶＱＫＡＩＬＱＫＮＫＳＡＫＱＫＡＤＬＫＮ
ＡＣＥＳＳＳＨＩＣＰＹＣＮＲＥＦＴＹＩＧＳＬＮＫＨＡＡＦＳＣＰＫＫＰＬＳＰＰＫＫＫＶＳＨＳＳＫＫＧＧＨ
ＳＳＰＡＳＳＤＫＮＳＮＳＮＨＲＲＲＴＡＤＡＥＩＫＭＱＳＭＱＴＰＬＧＫＴＲＡＲＳＳＧＰＴＱＶＰＬＰＳＳＳ
ＦＲＳＫＱＮＶＫＦＡＡＳＶＫＳＫＫＰＳＳＳＳＬＲＮＳＳＰＩＲＭＡＫＩＴＨＶＥＧＫＫＰＫＡＶＡＫＮＨＳ
ＡＱＬＳＳＫＴＳＲＳＬＨＶＲＶＱＫＳＫＡＶＬＱＳＫＳＴＬＡＳＫＫＲＴＤＲＦＮＩＫＳＲＥＲＳＧＧＰＶＴ
ＲＳＬＱＬＡＡＡＡＤＬＳＥＮＫＲＥＤＧＳＡＫＱＥＬＫＤＦＲＮＦＬ（配列番号２０）。
ＭＲＤＳＡＥＧＰＫＥＤＥＥＫＰＳＡＳＡＬＥＱＰＡＴＬＱＥＶＡＳＱＥＶＰＰＥＬＡＴＰＡＰＡＷＥＰＱ
ＰＥＰＤＥＲＬＥＡＡＡＣＥＶＮＤＬＧＥＥＥＥＥＥＥＥＥＤＥＥＥＥＥＤＤＤＤＤＥＬＥＤＥＧＥＥＥＡＳ
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ＥＡＮＧＤＶＦＥＴＦＭＦＰＣＱＨＣＥＲＫＦＴＴＫＱＧＬＥＲＨＭＨＩＨＩＳＴＶＮＨＡＦＫＣＫＹＣＧ
ＫＡＦＧＴＱＩＮＲＲＲＨＥＲＲＨＥＡＧＬＫＲＫＰＳＱＴＬＱＰＳＥＤＬＡＤＧＫＡＳＧＥＮＶＡＳＫＤ
ＤＳＳＰＰＳＬＧＰＤＣＬＩＭＮＳＥＫＡＳＱＤＴＩＮＳＳＶＶＥＥＮＧＥＶＫＥＬＨＰＣＫＹＣＫＫＶＦＧ
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ＳＳＰＱＨＳＰＡＬＲＤＦＧＫＰＳＤＧＫＡＡＷＴＤＡＧＬＴＳＫＫＳＫＬＥＳＨＳＤＳＰＡＷＳＬＳＧＲＤ
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ＲＳＬＱＬＡＡＡＡＤＬＳＥＮＫＲＥＤＧＳＡＫＱＥＬＫＤＦＲＮＦＬ（配列番号２０）。
【0065】
[００７４] 配列番号２０の配列は、ＲＩＺ１のためのアミノ酸残基２０２から先において、ＲＩＺ１と完全に整列する。以下に示すように、問い合わせ配列はＲＩＺ１であり、またサブジェクト配列はＲＩＺ２である。例えば、ＰＲＤＭ２／ＲＩＺ１は、ＮＭ＿０１２２３１のものの配列である。例えば、ＰＲＤＭ２／ＲＩＺ２は、ＮＭ＿００１００７２５７のものの配列である。配列ＮＭ＿０１２２３１は、例示的なヒトＲＩＺ１配列である。配列ＮＭ＿００１００７２５７は、例示的なヒトＲＩＺ２配列である。
【0066】
【表B-1】
【0067】
【表B-2】
【0068】
[００７５] ＲＩＺ１およびＲＩＺ２のいずれも、ＧＣ含量が高いＳｐ－１様ＤＮＡエレメントに結合し、シミアンウイルス４０の早期プロモーターの転写を抑制するが、ＲＩＺ１はＲＩＺ２よりも強力な抑制因子であり、これはＲＩＺ１のＰＲドメインが転写を調節することを示唆する（Ｈｕａｎｇ，Ｓ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７３，Ｎｏ．２６，Ｉｓｓｕｅ ｏｆ Ｊｕｎｅ ２６，ｐｐ．１５９３３－１５９３９）。
【0069】
[００７６] ＲＩＺ１タンパク質は正常な組織中で発現するが、多くのヒト悪性組織およびがん細胞株においては、ＲＩＺ１発現レベルの低下もしくは不在、および／またはＲＩＺ２発現レベルの増加が検出されることがよくある。他のＰＲＤＭタンパク質について提案されてきたように、二つのタンパク質産物の量におけるこの「陰と陽」の不均衡が、腫瘍性転化に重要であり得る。さらに、ＲＩＺ２に対するＲＩＺ１の排他的な負の選択（特異的に遺伝子学的または後成的に媒介される発現低下）は、様々なヒトがんに共通する特徴であるようである。この知見は、ＲＩＺ１が腫瘍抑制活性を有し得ること、およびＲＩＺ２は、その細胞分裂活性を介して細胞増殖を促進することによる腫瘍形成に必要であることを示唆している。ＲＩＺ２の推定の内因性増殖促進発がん性は、ＲＩＺ１およびＲＩＺ２両者に存在するＺｎフィンガードメインの一番目のクラスター（残基３５９～５０７）に関連している。実際に、Ｚｎフィンガーのこのクラスターを発現する安定的にトランスフェクションされるＭＣＦ７細胞は、エストロゲンの欠乏状態またはエストロゲン刺激の両方において、対照細胞と比較して増殖速度の増加を示し、またより高い発現レベルのサイクリンＤ１およびＡと、抗エストロゲンの増殖阻害効果に対する応答性の低下とを示した。さらにプロテオミクス質量分析に基づく方法を介して、ＭＣＦ－７細胞におけるＰＲＤＭ２遺伝子Ｚｎフィンガードメインの強制発現は、様々なタイプのがんに関連または細胞増殖および分化に関与するタンパク質の分化発現と相関しており、当該タンパク質は例えばケラチンＫ８、糖分解酵素α－エノラーゼ、酸性プロテアーゼカテプシンＤ、およびヌクレオシド二リン酸キナーゼＡ等である。これらタンパク質の発現の変化が、観察された高めの増殖速度に寄与している可能性がある。ＲＩＺ２の発がんの妥当性は、ＲＩＺ１タンパク質中のＰＲドメインの存在によって阻害される可能性が高い。ＲＩＺ１およびＲＩＺ２間でのクロマチン調節上の大幅な機能的差異は、ＲＩＺ１に特定の機能を付与しているＰＲドメインに起因するものであるが、腫瘍形成におけるそれらがもつ正反対の役割が背景となっている可能性がある。
【0070】
[００７７] ＲＩＺ１およびＲＩＺ２のそれぞれの量が不均衡であることは、ここでＰＲ陽性アイソフォームは通常喪失するかまたは下方制御され、またＰＲ陰性アイソフォームはがん細胞中により高いレベルで常に存在していることにより、悪性腫瘍の重要な原因となり得る。興味深いことに、ＲＩＺ１アイソフォームはまた、ホルモン受容体との相互作用より下流にあるエストラジオール作用の重要な標的を意味する。さらに、この二つの産物間での不均衡は、他のヒトの疾患の分子基盤ともなり得る。図１に示す本発明による一実施形態では、薬剤送達ビヒクルは、血流中での薬物寿命を延長し、免疫系による破壊から薬剤送達システムを遮蔽するために、保護層（例えば、リポソームのＰＥＧ化）を備える。一実施形態では、薬剤送達システムは、腫瘍細胞またはがん幹細胞の表面上の受容体または他の部分を標的とするリガンドを介して、がん細胞に対して特異的に向けられる。リガンドは、高い特異性および親和性を有する標的がん細胞に結合する能力を有するタンパク質、ペプチド、または他のクラスの分子であり得る。この標的薬剤送達システムは、健康な細胞への損傷を保護するのみならず、標的部位にペイロードを集中させる必要がある。同時にこれは、効能を高め（より少ない薬剤用量で）、また安全性を向上させ、その結果より高い治療指標をもたらす必要がある。
【0071】
[００７８] 他の実施形態では、薬剤送達ビヒクルは、
阻害性ｓｉＲＮＡに加えてペイロードを担持し、薬物製剤の抗がん有効性を増強することができる。こうした追加的なペイロードとしては、限定されるものではないが、大分子または小分子の化学療法薬が挙げられ得る。
阻害性ｓｉＲＮＡに加えてペイロードを担持し、薬物製剤の抗がん有効性を増強することができる。こうした追加的なペイロードとしては、限定されるものではないが、大分子または小分子の化学療法薬が挙げられ得る。
【0072】
ＰＲＤＭ２遺伝子発現の調節
[００７９] ＰＲＤＭ２／ＲＩＺ１は、メチル化を介して制御することができる。一態様では、ＲＩＺ２の高メチル化を、がん療法のための標的とすることができる。例えば、ある研究では、ＰＲＤＭ２／ＲＩＺ１のメチル化頻度は、腫瘍では約７３％であるのに対して、遠隔の肺組織では２０％であることが観察されている（Ｔａｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１８：１１，２９９１－３００２）。
[００７９] ＰＲＤＭ２／ＲＩＺ１は、メチル化を介して制御することができる。一態様では、ＲＩＺ２の高メチル化を、がん療法のための標的とすることができる。例えば、ある研究では、ＰＲＤＭ２／ＲＩＺ１のメチル化頻度は、腫瘍では約７３％であるのに対して、遠隔の肺組織では２０％であることが観察されている（Ｔａｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１８：１１，２９９１－３００２）。
【0073】
[００８０] 二つのＲＩＺアイソフォームは、「陰と陽」の様式で細胞機能を制御し（Ｄｉ Ｚａｚｚｏ，Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１６，５，５４；ｄｏｉ：１０．３３９０）、それによってこの二つの形態は、二重の優遇される逆の反応を生じる。具体的には、ＲＩＺ１タンパク質は、腫瘍抑制因子の役割を果たし、細胞周期のＧ２／Ｍ期においてがん細胞を阻害して、アポトーシスを促進する一方で、ＲＩＺ２タンパク質は、癌原遺伝子として作用し、細胞分裂を促進する。すなわち、ＲＩＺ１およびＲＩＺ２の量が不均衡であることは、がん進行の重要な原因であり得る。この見解は、ＲＩＺ１発現のサイレンシングまたは調節解除が、ＲＩＺ２発現の増加と関連して、例えば肝細胞腫、白血病、悪性リンパ腫、乳がん、結腸直腸がん、甲状腺がん、およびその他を含めた種々のヒトがんにおいて観察されたという研究所見で裏付けられる。
【0074】
[００８１] 一態様では、本開示は、ＰＲＤＭ２遺伝子発現を制御するための方法を提供する。一実施形態では、この方法は、ＲＩＺ２発現を制御することができる。一部の実施形態では、この方法は、ＲＩＺ２発現を減少させるために使用することができる。一実施形態では、ＲＩＺ２発現が、本明細書に記載する方法を使用して、細胞において減少する。一部の実施形態では、本明細書に記載する方法は、哺乳類の系内で細胞においてＲＩＺ２発現を減少させるために使用される。一部の実施形態では、哺乳類の系はヒト系である。
【0075】
[００８２] 一実施形態では、本明細書において、正常細胞と比較してＲＩＺ２の発現が異常に高い細胞においてＲＩＺ２のレベルを減少させる方法を提供するものであるが、当該方法において正常細胞は健康な細胞、または健康な個体から採取された細胞であり、健康な個体は、疾患または症状の臨床徴候がない個体であり得る。一部の実施形態では、ＲＩＺ２の発現が異常に高い細胞は、細胞周期調節障害がある細胞である。一部の実施形態では、ＲＩＺ２の異常な高い発現を示す細胞は、過形成を呈する細胞である。一部の実施形態では、ＲＩＺ２の発現が異常に高い細胞は、がん細胞である。
【0076】
[００８３] 一部の実施形態では、本明細書において、がん細胞、または過形成を呈する細胞において特異的にＲＩＺ２発現を減少させる方法を提供するものであり、当該細胞はＲＩＺ２の異常な高い発現を呈する。一部の実施形態では、ＲＩＺ２の発現が異常に高い細胞はまた、同時にＲＩＺ１の発現の減少を呈する。一部の実施形態では、本明細書で提供する方法は、ＲＩＺ２発現を減少させ、同時にＲＩＺ１発現を増加させることができる。一部の実施形態では、本明細書で提供する方法は、細胞においてＲＩＺ１－ＲＩＺ２の均衡を回復させる。一部の実施形態では、本明細書で提供する方法は、ＲＩＺ１の発現増加およびＲＩＺ２の発現低下を可能にする。一部の実施形態では、本明細書で提供する方法は、ＲＩＺ２の発現低下によりＲＩＺ１の発現増加を可能にする。一部の実施形態では、本明細書で提供する方法は、細胞をＲＩＺ２阻害剤と接触させることを含む。
【0077】
[００８４] 本明細書では、正常細胞よりも高いＲＩＺ２レベルを発現する細胞においてＲＩＺ２を発現低下して、同時にＲＩＺ１レベルを発現増加する方法であって、正常細胞よりも高いＲＩＺ２レベルを発現する細胞はまた、正常細胞よりも低いＲＩＺ１レベルも呈するものである、当該方法を提供するが、この方法は、当該細胞を本開示に記載するＲＩＺ２阻害剤と接触させることを含む。一部の実施形態では、正常細胞は、正常な細胞分裂周期を呈する細胞である。一部の実施形態では、本明細書においては、細胞においてＲＩＺ１－ＲＩＺ２の均衡を回復させる方法を提供する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．１倍を超えるように変化する。例えば、一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．２倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．３倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．４倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．５倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．６倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．７倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．８倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．９倍を超えるように変化する。一実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比は、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を少なくとも２倍変化させる。
【0078】
[００８５] 一部の実施形態では、本明細書で提供する方法は、細胞を、網膜芽細胞腫タンパク質相互作用ジンクフィンガータンパク質２（ＲＩＺ２）阻害剤を含む組成物と接触させることを含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、非天然の薬剤、例えば合成薬である。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、小分子である。一部の実施形態では、小分子は、ＲＩＺ２を阻害するために特異的であり、ＲＩＺ１を阻害しないように設計される。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、ペプチドを含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、細胞においてＲＩＺ２を特異的に阻害するペプチドであり、また少なくとも約４個のアミノ酸、少なくとも約４個のアミノ酸、少なくとも約４個のアミノ酸、少なくとも約５個のアミノ酸、少なくとも約６個のアミノ酸、少なくとも約７個のアミノ酸、少なくとも約８個のアミノ酸、少なくとも約９個のアミノ酸、少なくとも約１０個のアミノ酸、少なくとも約１１個のアミノ酸、少なくとも約１２個のアミノ酸、少なくとも約１３個のアミノ酸、少なくとも約１４個のアミノ酸、少なくとも約１５アミノ酸、少なくとも約１６個のアミノ酸、少なくとも約１７個のアミノ酸、少なくとも約１８個のアミノ酸、少なくとも約１９個のアミノ酸、または少なくとも約２０個のアミノ酸、または２０個を超えるアミノ酸、を含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、複合体化したポリペプチドを含む。一部の実施形態では、複合体化ポリペプチドは、ＲＩＺ２レベルを減少させることができる少なくとも一つの生理活性ポリペプチド（ＲＩＺ２阻害剤）と、インビボで適用された場合に、安定性を与えるか、もしくは細胞膜を通過する経路を与えるか、または生理活性ペプチドを特定の細胞、組織、もしくは器官に向かわせることを可能にする部分とを含む。一部の実施形態においては、ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、合成ポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、ｓｉＲＮＡなどである合成ポリヌクレオチドを含む。
【0079】
[００８６] 一部の実施形態では、この方法は、細胞をＲＩＺ２阻害剤と接触させることを含み、当該ＲＩＺ２阻害剤は、ＲＩＺ２およびＲＩＺ１のレベルが正常細胞に匹敵するように、またはＲＩＺ１のＲＩＺ２に対する比率が正常細胞、すなわち例えば正常細胞周期である正常な細胞増殖速度である細胞と同様のレベルに戻すように、細胞においてＲＩＺ２レベルを減少させて細胞においてＲＩＺ１レベルを増加させるのに十分な量で存在するものである。
【0080】
[００８７] 一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、細胞増殖を阻害する方法であって、細胞の集団をＲＩＺ２阻害剤を含む組成物と接触させることを含む。
【0081】
[００８８] 一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、細胞の集団に適用されるとき、当該細胞集団における細胞増殖速度を、過剰増殖状態から、正常な健康細胞と同様の増殖速度まで低下させる。
【0082】
[００８９] 一部の実施形態では、本明細書に記載する方法は、細胞の集団に適用されるとき、結果として細胞の集団の細胞数を少なくとも１０％減少させる。一部の実施形態では、細胞をＲＩＺ２阻害剤と接触させることにより、結果として細胞の集団の細胞数を少なくとも約１５％、または少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、減少させる。
【0083】
[００９０] 一部の実施形態では、細胞をＲＩＺ２阻害剤と接触させることにより、結果として、細胞の集団の細胞数が約９０％減少する。一部の実施形態では、細胞増殖を阻害することは、細胞量を少なくとも１０％減少させることを含む。一部の実施形態では、細胞をＲＩＺ２阻害剤と接触させることにより、結果として細胞の集団の細胞量を少なくとも約１５％、または少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、減少させる。％．一部の実施形態では、細胞をＲＩＺ２阻害剤と接触させることにより、結果として細胞の集団の細胞量を少なくとも約１５％、または少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、減少させる。
【0084】
[００９１] 一部の実施形態では、細胞増殖を阻害することは、細胞量を約５０％減少させることを含む。一部の実施形態では、細胞増殖を阻害することは、細胞量を約６０％減少させることを含む。一部の実施形態では、細胞増殖を阻害することは、細胞量を約６５％減少させることを含む。一部の実施形態では、細胞増殖を阻害することは、細胞量を約７０％減少させることを含む。一部の実施形態では、細胞増殖を阻害することは、細胞量を約７５％減少させることを含む。
【0085】
[００９２] 一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、対象、例えばヒト対象において、治療有効量のＲＩＺ２阻害剤を対象に投与することによって、過剰増殖障害を治療する方法を含むものであり、当該阻害剤がある用量および適切な時間間隔で投与された場合に、対象の過剰増殖障害が軽減または改善される。一部の実施形態では、過剰増殖障害はがんである。
【0086】
ＰＲＤＭ２ ｓｉＲＮＡの設計
[００９３] 本明細書において、ＲＩＺ２発現を阻害するのに適した阻害性ＲＮＡ分子を提供する。一部の実施形態では、特定のＲＮＡ分子が、治療用途に好適である。例えば、低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、およびＲＮＡ推論（ＲＮＡｉ）により細胞内の遺伝子発現を調節することができる低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子などの合成された小核酸分子である。本発明のｓｉＮＡ分子は、化学的に修飾され得る。化学的に修飾したｓｉＮＡを使用することで、インビボでのヌクレアーゼ分解に対する耐性の増加および／または細胞取込みの改善を経て、天然ｓｉＲＮＡ分子の様々な特性を向上させることができる。本発明の化学的に修飾したｓｉＮＡ分子により、様々な治療的、美容的、薬用化粧品的、予防的、診断的、農業的、標的検証的、ゲノム発見的、遺伝子工学、および薬理ゲノミクス的な用途のための有用な試薬および方法が提供される。
[００９３] 本明細書において、ＲＩＺ２発現を阻害するのに適した阻害性ＲＮＡ分子を提供する。一部の実施形態では、特定のＲＮＡ分子が、治療用途に好適である。例えば、低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、およびＲＮＡ推論（ＲＮＡｉ）により細胞内の遺伝子発現を調節することができる低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子などの合成された小核酸分子である。本発明のｓｉＮＡ分子は、化学的に修飾され得る。化学的に修飾したｓｉＮＡを使用することで、インビボでのヌクレアーゼ分解に対する耐性の増加および／または細胞取込みの改善を経て、天然ｓｉＲＮＡ分子の様々な特性を向上させることができる。本発明の化学的に修飾したｓｉＮＡ分子により、様々な治療的、美容的、薬用化粧品的、予防的、診断的、農業的、標的検証的、ゲノム発見的、遺伝子工学、および薬理ゲノミクス的な用途のための有用な試薬および方法が提供される。
【0087】
[００９４] 一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＰＲＤＭ２遺伝子の少なくとも５、６、７、８、９、１０個の連続するヌクレオチドに結合することができる少なくとも５、６、７、８、９、１０個の連続するヌクレオチドに結合する。
【0088】
[００９５] 一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ１遺伝子またはＲＩＺ２遺伝子の少なくとも５、６、７、８、９、１０個の連続するヌクレオチドに結合することができる少なくとも５、６、７、８、９、１０個の連続するヌクレオチドに結合する。
【0089】
[００９６] 一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２遺伝子の少なくとも５、６、７、８、９、１０個の連続するヌクレオチドに結合することができる少なくとも５、６、７、８、９、１０個の連続するヌクレオチドに結合する。
【0090】
[００９７] 一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ１遺伝子ではなくＲＩＺ２遺伝子の少なくとも５、６、７、８、９、１０個の連続するヌクレオチドに結合することができる少なくとも５、６、７、８、９、１０個の連続するヌクレオチドに結合する。
【0091】
[００９８] 一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２遺伝子の少なくとも５、６、７、８、９、１０の連続するヌクレオチドに特異的に結合して、ＲＩＺ１発現レベルに悪影響を与えることなく、主としてＲＩＺ２遺伝子発現に影響を与える。
【0092】
[００９９] 一態様では、本開示は、ＲＩＺ１遺伝子の発現に悪影響を与えることなく、特にＲＩＺ１遺伝子の発現を減少させることなく、ＲＩＺ２遺伝子の発現を減少させる（例えばサイレンシングする）ことができる一以上のｓｉＲＮＡ配列を提供する。より詳細には、本明細書において、ＲＩＺ２遺伝子の発現を減少または阻害し、ＲＩＺ１遺伝子の発現を誘導するｓｉＲＮＡ配列を提供する。一部の実施形態では、本明細書で提供するｓｉＲＮＡ配列は、ヒトＲＩＺ１発現を阻害することなく、ヒトＲＩＺ２発現を減少または阻害することができる。一実施形態では、本開示は、ＲＩＺ２およびＲＩＺ１遺伝子の共通の領域を標的とする一以上のｓｉＲＮＡが、該ｓｉＲＮＡは遺伝子／遺伝子産物の両方に対して相同性を共有しているにもかかわらず、主としてＲＩＺ２は阻害するがＲＩＺ１は残すという、驚くべき予想外の知見に基づいている。
【0093】
[０１００] 一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から１～５００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から１０～５００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から１００～５００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から２００～５００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から５００～１０００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から２００～２０００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から５００～２５００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から１０００～２５００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から１６００～２２００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から１８００～２２００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から１９００～１９５０ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から１９２０～１９４０ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から２０００～３５００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から１０００～５０００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から１５００～３０００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から２５００～３５００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から３５００～５０００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から４０００～５０００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から４２５０～４５００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から４３００～４４００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から４５００～５０００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から４５５０～４７００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から４５６０～４６００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から４５００～６０００ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から５０００～６１４０ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から６０５０～６１５５ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの５’末端から６０９０～６１２０ヌクレオチドの間の領域を標的とするよう設計される。
【0094】
[０１０１] 本明細書に開示する本発明の例示的試験で示されるｓｉＲＮＡのポジティブ鎖およびネガティブ鎖を含む配列の例示的な一覧が以下に提供される。
【0095】
【表2】
【0096】
[０１０３] 本明細書において、表２に提示したセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む複数の二本鎖ポリヌクレオチド組成物が提供されるものであり、表２において左欄は、二本鎖ポリヌクレオチド対のそれぞれのセンス鎖配列を含み、その行内の右欄にアンチセンス鎖配列が提示されている。一実施形態では、ｓｉＲＮＡの長さは２１ヌクレオチドである。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、５’末端または３’末端において、１、２、または３ヌクレオチドの単一のヌクレオチド突出部位を含む。
【0097】
[０１０４] したがって、一実施形態では、本明細書において、配列番号１のセンス鎖、および配列番号１０のアンチセンス鎖を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤が提供される。
【0098】
[０１０５] 一実施形態では、本明細書において、配列番号６のセンス鎖、および配列番号１１のアンチセンス鎖を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤が提供される。
【0099】
[０１０６] 一実施形態では、本明細書において、配列番号２のセンス鎖、および配列番号１２のアンチセンス鎖を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤が提供される。
【0100】
[０１０７] 一実施形態では、本明細書において、配列番号３のセンス鎖、および配列番号１３のアンチセンス鎖を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤が提供される。
【0101】
[０１０８] 一実施形態では、本明細書において、配列番号４のセンス鎖、および配列番号１４のアンチセンス鎖を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤が提供される。
【0102】
[０１０９] 一実施形態では、本明細書において、配列番号５のセンス鎖、および配列番号１５のアンチセンス鎖を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤が提供される。
【0103】
[０１１０] 一実施形態では、本明細書において、配列番号７のセンス鎖、および配列番号１６のアンチセンス鎖を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤が提供される。
【0104】
[０１１１] 一実施形態では、本明細書において、配列番号８のセンス鎖、および配列番号１７のアンチセンス鎖を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤が提供される。
【0105】
[０１１２] 一実施形態では、本明細書において、配列番号９のセンス鎖、および配列番号１８のアンチセンス鎖を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤が提供される。
【0106】
[０１１３] 一態様では、本発明は、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現を阻害するための二本鎖ポリヌクレオチド組成物を提供する。一実施形態では、二本鎖ポリヌクレオチドは、いかなる修飾も伴わずに生じ得る。一実施形態では、センス分子またはアンチセンス分子内の一以上のヌクレオチドが修飾される。例えば、ＡＲＩＺ－００４７のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、ＡＲＩＺ－００１１と同じヌクレオチド配列を有するが、修飾されたヌクレオチドを含み、例えばセンス鎖が、５’末端にジスルフィド修飾を含む。一実施形態では、当該オリゴマーは、例えば配列番号６の５’－末端から９番目のヌクレオチド残基である、一続きの非修飾ヌクレオチドを中断する例えば２’－メトキシウリジンである一つの修飾ヌクレオチドを含む。一実施形態では、センス鎖またはアンチセンス鎖が、複数の修飾を含んでもよく、例えばＡＲＩＺ－００４７のアンチセンス鎖（配列番号１１）は、二つの５’－Ｐ’－メトキシウリジン残基をタンデムで含み、また３’末端における末端の３’－ジヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を含む。
【0107】
[０１１４] 本明細書では、表１において本明細書で提示した二本鎖ポリヌクレオチド組成物のいずれか一つのセンス鎖またはアンチセンス鎖のいずれかに対する一つ以上の修飾が企図される。一部の実施形態では、当該鎖の一方または両方は、修飾を含むように設計される。一部の実施形態では、一方の鎖が、中断またはギャップのあるモチーフを含み得、またもう一方の鎖が、ギャップのあるモチーフ、ヘミマー（ｈｅｍｉｍｅｒ）モチーフ、ブロックマー（ｂｌｏｃｋｍｅｒ）モチーフ、完全修飾モチーフ、位置的修飾モチーフ、または交互のモチーフを含み得る。「中断のある」モチーフまたは「ギャップのある」モチーフは、一続きのヌクレオチドが２領域、または好ましくは３領域に、例えば二つの外側の領域が両側に隣接した内側領域として分割されるように、ヌクレオシドの連続配列を中断する修飾ヌクレオシドを含む。これら領域は、少なくとも、ヌクレオシドを含む（異なる）糖基が修飾されていることによって、互いに中断され分離される。一部の実施形態では、異なる糖基を有するヌクレオシドは、オリゴマー化合物ｐ－Ｄ－リボヌクレオシド、または２’修飾ヌクレオシド、または４’－チオ修飾ヌクレオシド、または４’－チオ－２’修飾ヌクレオシド、または二環式糖修飾ヌクレオシドを含む。
【0108】
[０１１５] 一部の実施形態では、内部領域またはギャップは概してｐ－Ｄ－リボヌクレオシドを含むが、糖修飾ヌクレオシドの配列であり得る。一部の実施形態では、ギャップのあるオリゴマー化合物のギャップに位置するヌクレオシドは、その両翼とは異なる糖基を有する。一部の実施形態では、ギャップのあるオリゴマー化合物は、「対称的」である。一部の実施形態では、ギャップのあるオリゴマー化合物は、「非対称的」である。各翼が同一の均一な糖修飾であるギャップマー（ｇａｐｍｅｒ）は、対称的なギャップのあるオリゴマー化合物であり得る。各翼に異なる均一な修飾を有するギャップマーは、ギャップのある非対称的なオリゴマー化合物と称される。一部の実施形態では、これらのようなギャップのあるオリゴマー化合物は、例えば４’－チオ修飾ヌクレオシドを含む両翼（対称ギャップマー）と、ｐ－Ｄ－リボヌクレオシド、または４’－チオ修飾ヌクレオシド以外の修飾ヌクレオシドを含むギャップとを有し得る。一部の実施形態では、ギャップのある非対称的なオリゴマー化合物は、２’－ＯＣＨ３修飾ヌクレオシドを含む一方の翼と、４’－チオ修飾ヌクレオシドを含むもう一方の翼とを、ｐ Ｄ－リボヌクレオシド、または４’－チオもしくは２’－ＯＣＨ３修飾ヌクレオシド以外の糖修飾ヌクレオシドを含む内部領域（ギャップ）を伴って備え得る。
【0109】
[０１１６] 一部の実施形態では、本発明の組成物の各鎖は、例えばｓｉＲＮＡ経路における特定の役割を果たすように修飾され得る。アンチセンス鎖は、５’末端で修飾されて、ＲＩＳＣのうちの一領域でその役割を増強され得、一方で、５の３’末端は、異なるように修飾されて、ＲＩＳＣのうちのある異なる領域でその役割を増強され得る。
【0110】
[０１１７] 一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、Ｔ突出部位を含む。一部の実施形態では、Ｔ突出部位は、単一のウリジン（本明細書において提示される配列において、チミジン（Ｔ）と区別なく示される）、またはタンデムで二つのウリジンヌクレオチド残基（例えば、ｄＴｄＴ）を含む。
【0111】
[０１１８] 一部の実施形態では、一以上の残基は、ホスホロチオエート結合で結合する。
【0112】
[０１１９] 一態様では、本明細書では、例えばがんである過剰増殖性障害の治療のための、本明細書に記載のＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡのいずれか一つの使用が提供される。一態様では、本明細書では、例えばがんである過剰増殖性障害の治療に好適な医薬を調製するための、本明細書に記載のＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡのいずれか一つの使用が提供される。
【0113】
[０１２０] ＡＲＩＺ ｓｉＲＮＡ－０１１～ＡＲＩＺ ｓｉＲＮＡ－０１４は、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡ転写物およびＲＩＺ２ ｍＲＮＡ転写物の両方で共通する配列に対して相補的である。ＡＲＩＺ－０１５は、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの３’末端の最後の１９塩基に対して相補的であり、またＲＩＺ２に固有の四つの末端アミノ酸に対応するＲＩＺ２ ｍＲＮＡに固有の１０個のヌクレオチド、ならびにＲＩＺ１ ｍＲＮＡおよびＲＩＺ２ ｍＲＮＡの両方に共通する９個のヌクレオチドを含有する。ＡＲＩＺ－０４７は、当該示した塩基修飾を除き、ＡＲＩＺ－０１１と同じ配列である。
【0114】
[０１２１] ＡＲＩＺ ｓｉＲＮＡ－０６２～ＡＲＩＺ ｓｉＲＮＡ－０６４は、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡに固有の配列に対して相補的である。
【0115】
[０１２２] 一実施形態では、本明細書において、ＲＩＺ２のみを標的とし、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡを残すｓｉＲＮＡを提供する。一実施形態では、本明細書において、ＲＩＺ１のみを標的とし、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡに影響を及ぼさないｓｉＲＮＡを提供する。一実施形態では、本明細書において、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡを標的とし且つＲＩＺ１ ｍＲＮＡを残し、そしてＲＩＺ２ ｍＲＮＡに阻害効果を及ぼすｓｉＲＮＡを提供する。本明細書においては、本明細書で開示するｓｉＲＮＡがＲＩＺ１ ｍＲＮＡまたはＲＩＺ２ ｍＲＮＡのいずれかを標的とすることができるという事実にもかかわらず、出願人の知見では、ｓｉＲＮＡがＲＩＺ２ ｍＲＮＡを特異的に阻害することを示すという、驚くべき結果を提供する。さらに驚くべきなのは、本明細書で提示するように、ｓｉＲＮＡが結果的にＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの増加をもたらすという知見であった。さらにまた驚くべきなのは、本明細書に初めて開示される知見であるが、これは本発明のｓｉＲＮＡが、がん細胞の細胞死を優先的に招き、また非がん細胞を残したままとすることができるということである。このことは、ｓｉＲＮＡがＲＩＺ２ ｍＲＮＡおよびＲＩＺ１ ｍＲＮＡの両方に共通する領域を標的にすることができ、したがって両ｍＲＮＡを阻害する可能性があるという状態においては非常に予想外である。
【0116】
[０１２３] 一実施形態では、本明細書で提供するｓｉＲＮＡは、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡを標的とするが、当該ＲＩＺ２ ｍＲＮＡは、例えばがん細胞である罹患細胞において生じる場合に同時の低濃度のＲＩＺ１ ｍＲＮＡと比較して、例えば罹患細胞、過剰増殖性障害を有する細胞である例えばがん細胞である細胞など、所与の細胞中でより高濃度で存在するとき、ｓｉＲＮＡによる操作を利用可能である。何らかの理論に拘束されることを意図するものではないが、本発明のｓｉＲＮＡが、疾患細胞中においてＲＩＺ１ ｍＲＮＡよりも高い濃度で存在している、より標的化されやすいＲＩＺ２ ｍＲＮＡを標的とすれば、ｓｉＲＮＡがＲＩＺ２発現を阻害し、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡの同時の増加を招く可能性があり得る。ＲＩＺ１ ｍＲＮＡの増加は、細胞周期の恒常性をリセットするのを助け得、そして細胞死が、異常な増殖性細胞、例えばがん細胞に対して達成され得る。
【0117】
[０１２４] 一部の実施形態では、表２のｓｉＲＮＡのいずれか一つを含むＲＩＺ２阻害剤が、未処理細胞と比較して、処理細胞においてＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも９％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも１０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも１１％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも１２％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも１３％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも１４％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも１５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも１６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも１７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも１８％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも１９％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも２０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも２１％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも２２％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも２３％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも２４％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも２５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも２６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも２７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも２８％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも２９％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも３０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも３１％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも３２％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも３３％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも３４％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも３５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも３６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも３７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも３８％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも３９％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも４０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも４１％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも４２％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも４３％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも４４％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも４５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも４６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも４７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも４８％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも４９％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５１％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５２％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５３％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５４％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５８％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも５９％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６１％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６２％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６３％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６４％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６８％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも６９％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７１％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７２％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７３％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７４％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７８％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも７９％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８１％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８２％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８３％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８４％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８８％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも８９％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を少なくとも９０％減少させる。
【0118】
[０１２５] 一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、細胞においてハウスキーピング遺伝子の発現と比較してＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を減少させる。例示的なハウスキーピング遺伝子は、ＧＡＰＤＨまたはベータアクチン遺伝子である。一部の実施形態では、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡが、対照細胞または対照細胞集団におけるＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現と比較して、ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を減少させる。例示的なハウスキーピング遺伝子は、ＧＡＰＤＨ、またはベータアクチン遺伝子である。
【0119】
[０１２６] 一部の実施形態では、本明細書においては、細胞においてＲＩＺ１－ＲＩＺ２の均衡を回復させる方法を提供する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．１倍を超えるように変化する。例えば、一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．２倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．３倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．４倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．５倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．６倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．７倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．８倍を超えるように変化する。一部の実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比が、少なくとも１．９倍を超えるように変化する。一実施形態では、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比は、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を少なくとも２倍変化させる。
【0120】
[０１２７] 一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、疾患細胞（例えば、がん細胞）の細胞増殖を少なくとも１０％減少させるｓｉＲＮＡである。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約１５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約２０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約２５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約３０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約３５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約４０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約４５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約５０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約５５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約６０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約６５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約７０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約７５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約８０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約８１％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約８２％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約８３％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約８４％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約８５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約８６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約８７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約８８％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約８９％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約９０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約９１％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約９２％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約９３％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約９４％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約９５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約９６％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約９７％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約９８％減少させる。
【0121】
[０１２８] 一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約３５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約４０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約４５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約５０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約５５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約６０％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞増殖を約６５％減少させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約７０％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約７５％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約８０％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約８１％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約８２％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約８３％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約８４％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約８５％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約８６％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約８７％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約８８％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約８９％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約９０％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約９１％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約９２％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約９３％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約９４％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約９５％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約９６％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約９７％死滅させる。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約９８％死滅させる。
【0122】
[０１２９] 一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、腫瘍細胞量を少なくとも約１０％減少させ得る。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、未処置細胞と比較して、または対照細胞集団と比較して、細胞量（例えば、腫瘍細胞量）を約５０％減少させ得る。一部の実施形態では、細胞量の減少は、５０％を超えるものであり得、例えば約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％の減少である。
【0123】
[０１３０] 一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡは、非がん細胞に有意な影響を与えない。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡが、がん細胞を約２倍、２．２倍、死滅させる。
【0124】
[０１３１] 一部の実施形態では、一以上のｓｉＲＮＡは、過剰増殖性障害または新形成、例えば乳がん、結腸がん、子宮内膜がん、食道がん、神経膠腫、腎がん、白血病、リンパ腫、肺がん、肝がん、副甲状腺がん、下垂体がん、髄膜腫、骨髄腫、神経芽腫、前立腺がん、または甲状腺がん、の治療に使用するための医薬組成物に製剤化される。
【0125】
ｓｉＲＮＡの送達
[０１３２] 一態様では、本発明のｓｉＲＮＡは、リポソームに封入される。
[０１３３] 別の態様では、本発明のｓｉＲＮＡは、封入されていない二本鎖の分子である。
[０１３２] 一態様では、本発明のｓｉＲＮＡは、リポソームに封入される。
[０１３３] 別の態様では、本発明のｓｉＲＮＡは、封入されていない二本鎖の分子である。
【0126】
[０１３４] 一実施形態では、本発明のｓｉＲＮＡは、細胞標的部分と複合体化する。一実施形態では、本発明のｓｉＲＮＡは、細胞標的部分に結合する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、細胞表面要素を標的化することができる細胞標的部分と結合する。例示的な実施形態では、細胞標的部分は、がん細胞、または過剰増殖性細胞を標的とする。
【0127】
[０１３５] 一実施形態では、細胞標的部分は、リガンド、および抗体または抗体断片、単鎖抗体、ペプチドまたはアプタマーである。一実施形態では、細胞標的部分は、細胞透過性ペプチドである。一部の実施形態では、送達システムは、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、またはそれらの組み合わせのうちの一以上を含む。
【0128】
[０１３６] 一部の実施形態では、送達システムはシクロデキストリンを含む。
【0129】
[０１３７] 一部の実施形態では、送達システムはキトサンを含む。
【0130】
[０１３８] 一部の実施形態では、送達システムは炭水化物ポリマーを含む。
【0131】
[０１３９] 一部の実施形態では、送達システムはエラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）を含む。一実施形態では、標的送達システムは、受動的標的ナノキャリアを含む。「受動的」標的ナノキャリアは、血管透過性・滞留性亢進（ＥＰＲ）効果を利用する。
【0132】
[０１４０] 一部の実施形態では、がん細胞表面上の特定の分子またはリガンドは、例えば、抗体またはその断片で標的化される。例えば、前立腺がん標的撮像および療法のための特定の「アドレスタグ」としての単鎖抗前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）抗体（ｓｃＡｂＰＳＣＡ）である（Ｌｉｎｇ Ｙ，Ｗｅｉ Ｋ，Ｌｕｏ Ｙ，Ｇａｏ Ｘ，Ｚｈｏｎｇ Ｓ．Ｄｕａｌ ｄｏｃｅｔａｘｅｌ／ｓｕｐｅｒｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ ｉｒｏｎ ｏｘｉｄｅ ｌｏａｄｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｂｏｔｈ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１１；３２：７１３９－５０）。例えば、Ｈａｄｊｉｐａｎａｙｉｓらは、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）欠失変異体抗体を用いて、神経膠芽腫の標的撮像および治療的処置のための酸化鉄ナノ粒子を作製した（Ｈａｄｊｉｐａｎａｙｉｓ ＣＧ，Ｍａｃｈａｉｄｚｅ Ｒ，Ｋａｌｕｚｏｖａ Ｍ，Ｗａｎｇ Ｌ，Ｓｃｈｕｅｔｔｅ ＡＪ，Ｃｈｅｎ Ｈ．ｅｔ ａｌ．ＥＧＦＲｖＩＩＩ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｉｒｏｎ ｏｘｉｄｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ－ｇｕｉｄｅｄ ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎ－ｅｎｈａｎｃｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１０；７０：６３０３－１２）。例えば、ＣｈｅｎおよびＳｈｕａｉらは、Ｔ細胞への遺伝子送達のためにＣＤ３単鎖抗体（ｓｃＡｂＣＤ３）官能化非ウイルス性高分子ベクターを使用した（Ｃｈｅｎ Ｇ，Ｃｈｅｎ Ｗ，Ｗｕ Ｚ，Ｙｕａｎ Ｒ，Ｌｉ Ｈ，Ｇａｏ Ｊ．ｅｔ ａｌ．ＭＲＩ－ｖｉｓｉｂｌｅ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｖｅｃｔｏｒ ｂｅａｒｉｎｇ ＣＤ３ ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２００９；３０：１９６２－７０）。これら技術のいずれも、本明細書で企図されるｓｉＲＮＡ送達機序に適合させることができる。
【0133】
[０１４１] 一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、一以上の脂質成分、例えば陽イオン性脂質と結合する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、一以上の脂質成分、例えば少なくとも陽イオン性脂質および陰イオン性脂質と結合する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子で修飾される。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、一以上の脂質およびＰＥＧを含む複合体において結合する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、一以上の脂質およびＰＥＧを含む複合体において結合するものであり、当該ＰＥＧは定められた長さである。一実施形態では、ＰＥＧは、約２０～約１２０個の炭素原子を有する鎖を含む。一実施形態では、ＰＥＧは、約４０～１２０個の炭素原子を有する鎖を含む。一実施形態では、ＰＥＧは、約６０～１２０個の炭素原子を有する鎖を含む。一実施形態では、ＰＥＧは、約８０～１２０個の炭素原子を有する鎖を含む。一実施形態では、ＰＥＧは、約１００～１２０個の炭素原子を有する鎖を含む。一実施形態では、ＰＥＧは、約２０～４０個の炭素原子を有する鎖を含む。一実施形態では、ＰＥＧは、約２０～６０個の炭素原子を有する鎖を含む。一実施形態では、ＰＥＧは、約２０～８０個の炭素原子を有する鎖を含む。一実施形態では、ＰＥＧは、約２０～１００個の炭素原子を有する鎖を含む。一部の実施形態では、ＰＥＧは約２０００ｋＤａである。
【0134】
[０１４２] 一実施形態では、本発明のｓｉＲＮＡは、ナノ粒子を介して送達され得る。一実施形態では、当該ナノ粒子は、脂質ナノ粒子であり得る。一実施形態では、ナノ粒子は、リン酸カルシウムナノ粒子を含み得る。一部の実施形態では、リン酸カルシウムナノ粒子は、複数のｓｉＲＮＡを含む。
【0135】
[０１４３] 一実施形態では、ナノ粒子は、非毒性で、安定に、および分解可能に、インビボでｓｉＲＮＡを放出する。一実施形態では、ナノ粒子は、カルシウムホスホシリケート複合体を含む。カルシウムホスホシリケート複合体は、安定であり、非毒性である。
【0136】
[０１４４] 一部の実施形態では、図１に例示されるように、ナノ粒子は、「ナノジャケット」と称する。
【0137】
[０１４５] 一実施形態では、ナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子、カルシウムホスホシリケートなど）は、直径８０～２５０ｎｍの粒子を含む。
【0138】
[０１４６] 一実施形態では、本発明のｓｉＲＮＡは、細胞標的部分に結合し得る。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、５’－または３’の突出領域が、標的部分に化学的に架橋され得るように設計され得る。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、リンカーを介して標的部分に結合される。一部の実施形態では、リンカーは、非反応性の短いリンカー、例えば短いペプチドリンカーである。一実施形態では、リンカーは、生体活性ペプチドリンカーであり得る。一部の実施形態では、リンカーは、短いＰＥＧ分子であり、鎖中に１０～１２個の炭素原子を含む。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、ｓｉＲＮＡの一本鎖の５’末端または３’末端に架橋される。一実施形態では、当該架橋剤は、マレイミド官能性バイコンジュゲンーショナル（ｂｉ－ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎａｌ）リンカーである。一実施形態では、架橋剤は、短いポリマーである。一実施形態では、当該ポリマーは、機能性ポリマー、複合体ポリマー、またはコポリマー、例えばＰＬＧＡ－ＰＥＧ、ＰＬＡ－ＰＥＧ、ＰＣＡ－ＰＥＧ、脂質ＰＥＧ、ポリリジンＰＥＧである。
【0139】
[０１４７] 一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡ送達システムは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）表面基を有する陽イオン性脂質または電荷変換脂質を利用する、ＳＮＡＬＰ（Ｓｏｌｉｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｌｉｐｉｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ）技術である。
【0140】
[０１４８] 一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡ送達システムは、シクロデキストリン系送達システムである。
【0141】
[０１４９] 一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、直接またはリンカーを介して、アプタマーと複合体化する。アプタマーは、診断目的および治療目的の両方のための合成上扱い易いリガンドであり、しばしば核酸リガンド「オリゴボディ（ｏｌｉｇｏｂｏｄｙ）」または「化学抗体」と呼称される。細胞表面受容体に結合するアプタマーは、容易に細胞内に取り込まれる。アプタマーは、複雑な三次構造に折り畳まれ、そしてそれらの標的に対して高い親和性（低いｎＭから高いｐＭである平衡解離定数）および特異性で結合する能力を特徴とする。関心の標的に特異的なアプタマーの単離は、ＳＥＬＥＸ（試験管内進化法（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ））と呼ばれるプロセスの複数回の反復を伴う（Ｔｕｅｒｋ ａｎｄ Ｇｏｌｄ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９，６９８８－６９９２）。ＳＥＬＥＸプロセスでは、アプタマーライブラリーをタンパク質標的とインキュベートする。次いで、タンパク質に結合したアプタマーを特異的に回収する。これら配列を、ＰＣＲまたはＲＴ－ＰＣＲで増幅させる。次いで、回収した配列を表す一本鎖ＲＮＡ配列またはＤＮＡ配列が、これらＰＣＲ産物から生成され、その後の選択ラウンドで使用される。当業者に公知の例示的なアプタマーとしては、がんのタイプ、標的などに応じて、テネイシン－Ｃアプタマー（ＴＴＡ１）、ＰＭＳＡアプタマー、ＣＴＬＡ－４アプタマー、ＨＩＶ－二価アプタマーなどが挙げられ得る（Ｔｈｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．２００９ Ｓｅｐ １；１９（３）：２０９－２２２）。
【0142】
医薬組成物
[０１５０] 本明細書においては、ＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物を提供する。これは薬学的に許容可能な成分も含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のポリヌクレオチド分子および送達システムを含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、例えば二本鎖ｓｉＲＮＡ分子などである阻害性ＲＮＡ分子を含む。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子を、ＰＲＤＭ２遺伝子またはＰＲＤＭ２遺伝子産物上の少なくとも１０個の隣接し合う核酸塩基に対してハイブリダイズする。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、約１０ヌクレオチド～約２１ヌクレオチドの長さである。一部の実施形態においては、ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のｓｉＲＮＡを含む。
[０１５０] 本明細書においては、ＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物を提供する。これは薬学的に許容可能な成分も含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のポリヌクレオチド分子および送達システムを含む。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、例えば二本鎖ｓｉＲＮＡ分子などである阻害性ＲＮＡ分子を含む。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子を、ＰＲＤＭ２遺伝子またはＰＲＤＭ２遺伝子産物上の少なくとも１０個の隣接し合う核酸塩基に対してハイブリダイズする。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、約１０ヌクレオチド～約２１ヌクレオチドの長さである。一部の実施形態においては、ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のｓｉＲＮＡを含む。
【0143】
[０１５１] 本明細書においては、皮下注射で投与するための医薬組成物で製剤化されたｓｉＲＮＡを提供する。
【0144】
[０１５２] 本明細書においては、静脈内注射で投与するための医薬組成物で製剤化されたｓｉＲＮＡを提供する。
【0145】
[０１５３] 本明細書においては、全身投与のための医薬組成物で製剤化されたｓｉＲＮＡを提供する。
【0146】
[０１５４] 本明細書においては、局所的に投与するための医薬組成物で製剤化されたｓｉＲＮＡを提供する。
【0147】
[０１５５] 一実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、病原体を含まない水であり得る。一実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、中性ｐＨの適切な緩衝剤、例えばリン酸緩衝生理食塩水であり得る。一部の実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、弱酸性の水溶液であり得る。一部の実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、グリコール、グリセリン、ＤＭＳＯ、可溶性成分、糖類、塩類等を含み得る。一部の実施形態では、製剤は、製剤に所望の一貫性を付与する、および／または製剤成分の安定性を付与する、例えばスクロース、トレハロース、マンニトール、グリシン、ラクトースおよび／またはラフィノースなどの充填剤を含む。一部の実施形態では、当業者に公知のように、局所投与に共通して使用される賦形剤を使用することができる。
【0148】
[０１５６] 本明細書においては、配列番号１の配列または配列番号１に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む阻害性二本鎖ＲＮＡを含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、本明細書においては、配列番号１０の配列または配列番号１０に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む阻害性二本鎖ＲＮＡを含む医薬組成物を提供する。本明細書においては、センス鎖としての配列番号１の配列とアンチセンス鎖としての配列番号１０の配列とを含む阻害性二本鎖ＲＮＡを含む医薬組成物を提供する。
【0149】
[０１５７] 本明細書においては、配列番号６の配列または配列番号６に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む阻害性二本鎖ＲＮＡを含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、本明細書においては、配列番号１１の配列または配列番号１１に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む阻害性二本鎖ＲＮＡを含む医薬組成物を提供する。本明細書においては、センス鎖としての配列番号６の配列とアンチセンス鎖としての配列番号１１の配列とを含む阻害性二本鎖ＲＮＡを含む医薬組成物を提供する。
【0150】
[０１５８] 本明細書においては、阻害性二本鎖ＲＮＡを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、配列番号２のセンス鎖または配列番号２に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、および配列番号１２のアンチセンス鎖または配列番号１２に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤を本明細書において提供する。
【0151】
[０１５９] 一実施形態では、本明細書においては、配列番号３のセンス鎖または配列番号３に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、および配列番号１３のアンチセンス鎖または配列番号１３に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物を提供する。
【0152】
[０１６０] 一実施形態では、本明細書においては、配列番号４のセンス鎖または配列番号４に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、および配列番号１４のアンチセンス鎖または配列番号１４に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物を提供する。
【0153】
[０１６１] 一実施形態では、本明細書においては、配列番号５のセンス鎖または配列番号５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、および配列番号１５のアンチセンス鎖または配列番号１５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物を提供する。
【0154】
[０１６２] 一実施形態では、本明細書においては、配列番号７のセンス鎖または配列番号７に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、および配列番号１６のアンチセンス鎖または配列番号１６に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物を提供する。
【0155】
[０１６３] 一実施形態では、本明細書においては、配列番号８のセンス鎖または配列番号８に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、および配列番号１７のアンチセンス鎖または配列番号１７に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物を提供する。
【0156】
[０１６４] 一実施形態では、本明細書においては、配列番号９のセンス鎖または配列番号９に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、および配列番号１８のアンチセンス鎖または配列番号１８に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む二本鎖ポリヌクレオチドを含むＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物を提供する。
【0157】
[０１６５] 一部の実施形態では、医薬組成物は、上述の一以上のｓｉＲＮＡ、および本明細書に開示する例えばリポソーム、ナノ粒子などのｓｉＲＮＡ送達系を含む。一部の実施形態では、送達システムを有する医薬組成物は、細胞標的部分を含むものであり、該細胞標的部分は、リガンド、および抗体または抗体断片、単鎖抗体、ペプチドまたはアプタマーである。一部の実施形態では、細胞標的部分は、細胞透過性ペプチドである。一部の実施形態では、送達システムは、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、またはそれらの組み合わせのうちの一以上を含む。
【0158】
[０１６６] 本明細書においては、（ｉ）ヒトＰＲＤＭ２／ＲＩＺ２遺伝子に対して相同性を有する１０～２１ヌクレオチドの二本鎖ＲＮＡを含むｓｉＲＮＡを含み、（ｉｉ）ＰＥＧ分子に共有結合し、（ｉｉｉ）細胞標的部分に結合されるものであり、該細胞標的部分がアプタマーである、ｓｉＲＮＡを含むＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物を提供する。
【0159】
[０１６７] 一実施形態では、医薬組成物は、一以上の化学療法薬を含む。例示的な化学療法薬としては、以下に限定されないが、オビヌツズマブ、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イブルチニブ、メトトレキサート、シタラビン、デキサメタゾン、シスプラチン、ボルテゾミブ、フルダラビン、イデラリシブ、アカラブルチニブ、レナリドミド、ベネトクラクス、シクロホスファミド、イホスファミド、エトポシド、ペントスタチン、メルファラン、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、パノビノスタット、ダラツムマブ、エロツズマブ、サリドマイド、レナリドマイド、またはポマリドミド、またはそれらの組み合わせが挙げられ得る。
【0160】
[０１６８] 一実施形態では、治療用組成物は、追加の薬剤、例えばチェックポイント阻害剤、例えばＰＤ１阻害剤、ＰＤＬ１阻害剤、またはＣＴＬＡ４阻害剤またはそれらの組み合わせを含み得る。
【0161】
治療および診断方法
[０１６９] ＲＩＺ２を標的とする一以上の阻害性ＲＮＡ分子を含む上述の治療組成物は、対象における細胞増殖性障害を治療するために使用され得る。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一実施形態では、細胞増殖性障害は、がんである。一実施形態では、細胞増殖性障害は、細胞周期の調節解除、細胞周期チェックポイント阻害の喪失、および／またはＲＩＺ１／ＲＩＺ２不均衡と関連しているか、またはそれらの結果である。ＲＩＺ１のヒストンＨ３Ｋ９メチルトランスフェラーゼ活性が細胞増殖の負の調節で重要な役割を果たすこと、および様々ながんでＲＩＺ１発現が減少することは周知である。ＲＩＺ２は、がん細胞において発現増加することはわかっていたが、その生物学的活性は明らかでなかった。それは主としてＲＩＺ１の非機能的な対応物であると考えられており、またＲＩＺ２は、ＲＩＺ１機能の負の調節因子として作用するものであるが、生存および分化遺伝子発現の調節を介してエストロゲンの増殖効果を媒介すると仮定されていた。Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２０１２ Ｍａｒ；２２７（３）：９６４－７５。さらに、ＲＩＺ２は、ＲＩＺ１と比較して短いＮ末端で切断された転写物であり、翻訳産物であり、前者はＲＩＺ１とは無関係で操作する機会が少なかった。
[０１６９] ＲＩＺ２を標的とする一以上の阻害性ＲＮＡ分子を含む上述の治療組成物は、対象における細胞増殖性障害を治療するために使用され得る。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一実施形態では、細胞増殖性障害は、がんである。一実施形態では、細胞増殖性障害は、細胞周期の調節解除、細胞周期チェックポイント阻害の喪失、および／またはＲＩＺ１／ＲＩＺ２不均衡と関連しているか、またはそれらの結果である。ＲＩＺ１のヒストンＨ３Ｋ９メチルトランスフェラーゼ活性が細胞増殖の負の調節で重要な役割を果たすこと、および様々ながんでＲＩＺ１発現が減少することは周知である。ＲＩＺ２は、がん細胞において発現増加することはわかっていたが、その生物学的活性は明らかでなかった。それは主としてＲＩＺ１の非機能的な対応物であると考えられており、またＲＩＺ２は、ＲＩＺ１機能の負の調節因子として作用するものであるが、生存および分化遺伝子発現の調節を介してエストロゲンの増殖効果を媒介すると仮定されていた。Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２０１２ Ｍａｒ；２２７（３）：９６４－７５。さらに、ＲＩＺ２は、ＲＩＺ１と比較して短いＮ末端で切断された転写物であり、翻訳産物であり、前者はＲＩＺ１とは無関係で操作する機会が少なかった。
【0162】
[０１７０] 本開示は、ＲＩＺ２を標的とする方法、およびＲＩＺ１とは無関係にＲＩＺ２を阻害する組成物を提供する。
【0163】
[０１７１] 本明細書においては、ＲＩＺ２を特異的に標的化および操作するための治療方法および組成物を提供する。一実施形態では、治療用組成物は、細胞増殖性障害の治療のための、ＲＩＺ２に特異的なｓｉＲＮＡを含む医薬組成物を含む。一実施形態では、細胞増殖性障害は、がんである。
【0164】
[０１７２] 本明細書においては、がんを治療する方法を提供するものであり、この方法は、それを必要とする対象に、上記セクションのいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む。本開示の研究の結果として、ＲＩＺ２は、非常に有望な治療標的を提供し、そしてＲＩＺ２はがん細胞において選択的に発現低下し得るだけでなく、ＲＩＺ２が阻害されることによってＲＩＺ１は発現増加し得るということが現在わかっている。また、ＲＩＺ／ＲＩＺ２の不均衡、例えばＲＩＺ１は発現低下してＲＩＺ２は発現増加することは、細胞周期の有意に上流の節目での制御であるが、これは多くのがんに共通しており、したがってこの療法は、幅広いがんに適用可能である。例えば、一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物は、固形がんに治療的に適用可能である。一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物は、液性がん（ｌｉｑｕｉｄ ｃａｎｃｅｒ）に治療的に適用可能である。一実施形態では、がんは、乳房、結腸、子宮内膜、食道、胃、神経膠腫、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、骨髄腫、上咽頭、神経芽腫、卵巣、膵臓、副甲状腺、下垂体、前立腺、甲状腺、または子宮組織のがんである。
【0165】
[０１７３] 一実施形態では、がんは、固形腫瘍である。一実施形態では、がんは、肺がんである。本明細書に記載の方法および組成物を使用して、任意のがんが治療され得ることが企図される。がんの例としては、がん、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。かかるがんのより具体的な例を以下に記載し、また以下を含む：扁平上皮がん（例えば上皮の扁平上皮がん）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がんおよび肺の扁平上皮がんをはじめとする肺がん、腹膜がん、肝細胞がん、胃腸がんを含む胃がんまたは胃部のがん、膵がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、肝腫、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がんまたは子宮がん、唾液腺がん、腎臓がんまたは腎がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝細胞がん、肛門がん、陰茎がん、および頭頸部がん。用語「がん」は、原発性悪性細胞または腫瘍（例えば、その細胞が、元の悪性腫瘍または腫瘍の部位以外の対象の体内の部位に転移していないもの）、および二次性悪性細胞または腫瘍（例えば、転移、悪性細胞または腫瘍細胞の元の腫瘍の部位とは異なる二次的な部位への遊走、から生じるもの）を含む。
【0166】
[０１７４] 他の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤が、上述および本明細書に記載されるように、過剰増殖性障害、例えば過形成、がん、または過剰増殖性結合組織障害（例えば、過剰増殖性線維症）を治療するために使用される。一実施形態では、過剰増殖性線維症は、多系統の、または器官特異性のものである。例示的な過剰増殖性線維症としては、多系統性（例えば、全身性硬化症、多病巣性線維性硬化症、骨髄移植レシピエントにおける強皮症性移植片対宿主病、腎性全身性線維症、強皮症）、および器官特異性障害（例えば、眼、肺、肝臓、心臓、腎臓、膵臓、皮膚および他の器官の線維症）が挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態では、当該障害は、肝硬変または結核から選択される。他の実施形態では、障害は、ハンセン病である。
【0167】
[０１７５] 一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、肺がんを標的とし、かつ治療するように特異的に設計される。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、肺へのエアロゾル送達用に製剤化される。一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤は、静脈内注射を介した全身送達用に製剤化される。
【0168】
[０１７６] 一実施形態では、ＡＲＩＺ－０４７ ｓｉＲＮＡを含むＲＩＺ２阻害剤は、肺がんを治療するために設計される。
【0169】
[０１７７] 一実施形態では、ＡＲＩＺ－０４７は、生細胞または実験動物に対して毒性効果を示さない。
【0170】
[０１７８] 一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤を含む治療組成物は、化学療法薬と同時投与され得る。化学療法薬は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、またはリツキシマブ、またはそれらの組み合わせであり得る。他の化学療法薬としては、オビヌツズマブ、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イブルチニブ、メトトレキサート、シタラビン、デキサメタゾン、シスプラチン、ボルテゾミブ、フルダラビン、イデラリシブ、アカラブルチニブ、レナリドミド、ベネトクラクス、シクロホスファミド、イホスファミド、エトポシド、ペントスタチン、メルファラン、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、パノビノスタット、ダラツムマブ、エロツズマブ、サリドマイド、レナリドマイド、またはポマリドミド、またはそれらの組み合わせが挙げられる。「同時投与」とは、治療過程中に二以上の治療薬または医薬組成物を投与することを指す。こうした同時投与は、同時の投与または連続的な投与とすることができる。後で投与される方の治療薬または医薬組成物の連続的な投与は、ＲＩＺ２阻害剤を使用した治療過程中の任意の時点で生じ得る。
【0171】
[０１７９] 一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤ｓｉＲＮＡは、シスプラチンと同時投与され得る。
【0172】
[０１８０] 一実施形態では、上述した薬剤と共に本明細書に記載のｓｉＲＮＡ（例えば、ＡＲＩＺ－０４７）を使用することで、治療効果を達成するためにより低い濃度または用量の薬剤で十分であり得、それによってがんに罹患した対象における薬剤関連の毒性効果を低減することができるという利点を提供し得る。
【0173】
[０１８１] 本明細書で企図される医薬組成物の投与は、限定されないが、注入、輸液、または非経口を含め、従来技術を使用して実施され得る。一部の実施形態では、非経口投与は、血管内、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、腫瘍内、皮内、腹腔内、経気管的、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、および胸骨内への注入または注射が挙げられる。
【0174】
[０１８２] 一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物は、１日に１回、２日に１回、または３日に１回、または４日に１回、または５日に１回、または６日に１回、または７日に１回、または８日に１回、または９日に１回、または１０日に１回、または１１日に１回、または１２日に１回、または１３日に１回、または１４日に１回、で投与され得る。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物は、１５日に１回投与され得る。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物は、２０日に１回投与され得る。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物は、１ヶ月に１回投与され得る。一実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤を含む医薬組成物は、２ヶ月に１回、または３ヶ月に１回、または４ヶ月に１回、または５ヶ月に１回、または６ヶ月に１回、投与され得る。
【0175】
[０１８３] 一態様では、本明細書においては、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を投与する必要のある対象として患者を選択するものである、患者を選択する方法であって、（ｉ）対照サンプルもしくは対照値と比較して、対象の生体サンプルにおけるＲＩＺ１メチル化レベルの増加を検出すること、または（ｉｉ）対照サンプルもしくは対照値と比較してＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの低下を検出することを含むものであり、対照サンプルまたは対照値と比較して、対象の生体サンプルにおいてメチル化したＲＩＺ１の少なくとも１．１倍の増加またはＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの少なくとも２分の１の低下により、当該対象がＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を投与する必要があるとして決定され、また対照サンプルは臨床的に健康な個体由来のサンプルであり、対照値は、二以上の臨床的に健康な個体のサンプルからのＲＩＺ１メチル化レベルの平均値である、当該方法を提供する。
【0176】
[０１８４] 一部の実施形態では、ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１遺伝子の高メチル化を減少させる。
【0177】
キット
[０１８５] 本発明は、ＲＩＺ２阻害剤を含むキットも提供する。本開示の一部の態様は、がんまたは過剰増殖性障害の治療のためのキットを提供する。一実施形態では、当該キットは、新形成の治療キットである。
[０１８５] 本発明は、ＲＩＺ２阻害剤を含むキットも提供する。本開示の一部の態様は、がんまたは過剰増殖性障害の治療のためのキットを提供する。一実施形態では、当該キットは、新形成の治療キットである。
【0178】
[０１８６] 一実施形態では、キットは、治療活性成分の安全性および有効性を保証する温度および環境条件に保存される、使用に関する濃度および指示が示される適切にラベルをつけたボトル内の本開示に記載されるＲＩＺ２阻害剤を含む治療組成物を含み得る。
【0179】
[０１８７] 一実施形態では、キットは、生体試料中のＲＩＺ１ ｍＲＮＡおよびＲＩＺ２ ｍＲＮＡを検出するための検出体のセットを含み得る。検出体のセットは、プライマーのセット、例えばＲＩＺ１レベルを検出するためのフォワードプライマーおよびリバースプライマーのセット、ならびにＲＩＺ２レベルを検出するためのフォワードプライマーおよびリバースプライマーのセットを含み得る。一部の実施形態では、ＲＩＺ１レベルは、痰のサンプルで測定されて、新形成のバイオマーカーとしての役割を果たす。一実施形態では、キットは、ヒトよりの生体サンプル中のＲＩＺ１レベルおよびＲＩＺ２レベル（例えば、ｍＲＮＡ、タンパク質など）を検出するための一以上の成分を含む。一部の実施形態では、キットは、ＲＩＺ１メチル化を検出するための診断ユニットを含み得る。一実施形態では、ＲＩＺ１メチル化は、メチル化ベースのシーケンシングを使用して検出することができる。一実施形態では、ＲＩＺ１メチル化は、一以上のメチル化ベースのプライマーを使用して検出され得る。キットは、プライマー、試薬、酵素、緩衝剤などを含む一以上のバイアルを含み得る。各バイアルは、成分、濃度がラベル付けされている。キットは、キットの使用に関する少なくとも一つの説明書を含む。
【0180】
[０１８８] 新形成の治療キットは、新形成の治療において修飾された免疫細胞を使用するための説明書を含む。
【0181】
[０１８９] 検出キットは、含まれる構成要素、安全パラメータ、および使用指示に関する説明書を含む。
【0182】
[０１９０] 一部の実施形態では、単一のキットが、治療キットおよび検出キットの構成要素を含んでもよい。
【0183】
[０１９１] 本発明の実施は、別段の示唆が無い限り、当業者の理解の範囲内に充分ある、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学についての従来技術を採用する。当該技術は、文献中で完全に説明されており、例えば、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ” （Ｇａｉｔ，１９８４）、“Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）、“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｗｅｉｒ，１９９６）、“Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ” （Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ，１９８７）、“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）、“ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）、“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）などにある。これら技術は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの産生に適用可能であり、そしてそれ自体として本発明を作製および実施する際に考慮され得る。特定の実施形態に関して特に有用な技術については、以下のセクションで説明することとする。
【0184】
[０１９２]実施形態
１．細胞増殖を阻害する方法であって、細胞の集団を、網膜芽細胞腫タンパク質相互作用ジンクフィンガータンパク質２（ＲＩＺ２）阻害剤を含む組成物と接触させることを含む、方法。
２．ＲＩＺ２阻害剤が、細胞においてＲＩＺ２の発現を減少させる、実施形態１に記載の方法。
３．ＲＩＺ２阻害剤が、細胞においてＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を減少させる、実施形態１または２に記載の方法。
４．ＲＩＺ２ ｍＲＮＡは、細胞においてハウスキーピング遺伝子の発現と比較して少なくとも１０％減少する、実施形態３に記載の方法。
５．ＲＩＺ２ ｍＲＮＡは、対照細胞集団と比較して、少なくとも１０％減少する、実施形態３または４に記載の方法。
６．対照細胞集団は、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物と接触したことのない細胞集団である、実施形態５に記載の方法。
７．ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現は、対照細胞集団と比較して、少なくとも５０％減少する、実施形態５に記載の方法。
８．ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現は、対照細胞集団と比較して、少なくとも８０％減少する、実施形態５に記載の方法。
９．ＲＩＺ２阻害剤が、さらに、細胞集団においてＲＩＺ１の発現を増加させる、実施形態１から８のいずれか一つに記載の方法。
１０．組成物が、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡ発現レベルのＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を変化させる、実施形態９に記載の方法。
１１．組成物が、ＲＩＺ１タンパク質発現レベルのＲＩＺ２タンパク質発現レベルに対する比を変化させる、実施形態９に記載の方法。
１２．ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも１．１倍を超えるように変化させる、実施形態９または１０に記載の方法。
１３．ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも１．５倍を超えるように変化させる、実施形態９または１０に記載の方法。
１４．ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも２倍変化させる、実施形態９または１０に記載の方法。
１５．ＲＩＺ２阻害剤が、さらに、ＲＩＺ１の高メチル化を減少させる、実施形態１から８のいずれか一つに記載の方法。
１６．細胞は、哺乳類細胞である、実施形態１に記載の方法。
１７．細胞は、ヒト細胞である、実施形態１に記載の方法。
１８．細胞は、がん細胞である、実施形態１に記載の方法。
１９．細胞は、乳房、結腸、子宮内膜、食道、胃、神経膠腫、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、骨髄腫、上咽頭、神経芽腫、卵巣、膵臓、副甲状腺、下垂体、前立腺、甲状腺、または子宮組織である組織に由来する、実施形態１に記載の方法。
２０．がん細胞は、血液がん由来である、実施形態１８に記載の方法。
２１．がん細胞は、固形腫瘍由来である、実施形態８に記載の方法。
２２．接触させることは、細胞の集団を、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物と接触させることを含む、実施形態１に記載の方法。
２３．接触させることにより、結果として、細胞の集団の細胞数が少なくとも１０％減少する、実施形態２２に記載の方法。
２４．接触させることにより、結果として、細胞の集団の細胞数が約９０％減少する、実施形態２２に記載の方法。
２５．細胞増殖を阻害することは、細胞量を少なくとも１０％減少させることを含む、実施形態１または２２に記載の方法。
２６．細胞増殖を阻害することは、細胞量を約５０％減少させることを含む、実施形態２５に記載の方法。
２７．細胞を接触させることは、ＲＩＺ２阻害剤を細胞内に組み入れることをさらに含む、実施形態１に記載の方法。
２８．ＲＩＺ２阻害剤は、非天然由来の化合物を含む、実施形態１に記載の方法。
２９．ＲＩＺ２阻害剤は、合成薬である、実施形態２８に記載の方法。
３０．ＲＩＺ２阻害剤は、ペプチドを含む、実施形態２９に記載の方法。
３１．ＲＩＺ２阻害剤は、複合体化したポリペプチドを含む、実施形態２９に記載の方法。
３２．ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のポリヌクレオチドを含む、実施形態２９に記載の方法。
３３．ＲＩＺ２阻害剤は、合成ポリヌクレオチドを含む、実施形態３２に記載の方法。
３４．一以上のポリヌクレオチドは、一以上の修飾ヌクレオチドを含む、実施形態３３に記載の方法。
３５．ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物は、送達システムに結合された一以上のポリヌクレオチドを含む、実施形態１に記載の方法。
３６．送達システムは、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、またはそれらの組み合わせのうちの一以上を含む、実施形態３５に記載の方法。
３７．送達システムは、脂質を含む、実施形態３５に記載の方法。
３８．送達システムは、ＰＥＧ化脂質を含む、実施形態３５に記載の方法。
３９．送達システムは、細胞標的部分を含む、実施形態３５に記載の方法。
４０．細胞標的部分は、細胞型特異的である、実施形態３９に記載の方法。
４１．細胞標的部分は、標的細胞上の受容体に選択的に結合するリガンドである、実施形態３９に記載の方法。
４２．細胞標的部分は、標的細胞上の細胞表面分子に結合する抗体である、実施形態３９に記載の方法。
４３．細胞標的部分は、単鎖抗体または抗体断片である、実施形態４２に記載の方法。
４４．細胞標的部分は、ペプチドである、実施形態３９に記載の方法。
４５．細胞標的部分は、細胞透過性ペプチドである、実施形態４４に記載の方法。
４６．細胞標的部分は、環状ペプチドである、実施形態４４または４５に記載の方法。
４７．細胞標的部分は、アプタマーである、実施形態３９に記載の方法。
４８．送達システムは、リポソームを含む、実施形態３５に記載の方法。
４９．送達システムは、ナノ粒子を含む、実施形態３５に記載の方法。
５０．ＲＩＺ２阻害剤は、ＲＮＡ分子を含む、実施形態１から４９のいずれか一つに記載の方法。
５１．ＲＩＺ２阻害剤は、阻害性ＲＮＡ分子を含む、実施形態５０に記載の方法。
５２．阻害性ＲＮＡ分子は、ＰＲＤＭ２遺伝子またはＰＲＤＭ２遺伝子産物上の少なくとも１０個の隣接し合う核酸塩基に対してハイブリダイズする、実施形態５１に記載の方法。
５３．阻害性ＲＮＡは、約１０ヌクレオチド～約２１ヌクレオチドの長さである、実施形態５０に記載の方法。
５４．阻害性ＲＮＡ分子は、二本鎖である、実施形態５０に記載の方法。
５５．ＲＮＡ分子は、一以上の修飾ヌクレオチドを含む、実施形態５０に記載の方法。
５６．ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号１の配列を有するセンス鎖および配列番号１０の配列を有するアンチセンス鎖を含む阻害性二本鎖ＲＮＡを含む、実施形態１から５５のいずれか一つに記載の方法。
５７．ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号６の配列を有するセンス鎖および配列番号１１の配列を有するアンチセンス鎖を含む阻害性二本鎖ＲＮＡを含む、実施形態１から５５のいずれか一つに記載の方法。
５８．ＲＩＺ２阻害剤は、表２から選択されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む阻害性二本鎖ＲＮＡ分子を含む、実施形態１から５５のいずれか一つに記載の方法。
５９．対象において細胞増殖性の疾患または障害を治療する方法であって、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を対象に投与することを含む、方法。
６０．ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を投与する必要のある対象として患者を選択する方法であって、当該方法は、
（ｉ）対照サンプルもしくは対照値と比較して、対象の生体サンプルにおけるＲＩＺ１メチル化レベルの増加を検出すること、または
（ｉｉ）対照サンプルもしくは対照値と比較してＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの低下を検出することを含むものであり、
対照サンプルまたは対照値と比較して、対象の生体サンプルにおいてメチル化したＲＩＺ１の少なくとも１．１倍の増加またはＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの少なくとも２分の１の低下により、当該対象がＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を投与する必要があるとして決定され、また
対照サンプルは、臨床的に健康な個体からのサンプルであり、
対照値は、二以上の臨床的に健康な個体のサンプルからのＲＩＺ１メチル化レベルの平均値である、方法。
６１．細胞増殖性の疾患または障害は、がんである、実施形態５９に記載の方法。
６２．がんは、乳房、結腸、子宮内膜、食道、胃、神経膠腫、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、骨髄腫、上咽頭、神経芽腫、卵巣、膵臓、副甲状腺、下垂体、前立腺、甲状腺、または子宮組織のがんである、実施形態６１に記載の方法。
６３．がんは、固形腫瘍である、実施形態６１に記載の方法。
６４．がんは、肺がんである、実施形態６２に記載の方法。
６５．投与することは、有効量のＲＩＺ２阻害剤を投与することを含む、実施形態５９に記載の方法。
６６．有効量のＲＩＺ２阻害剤は、細胞増殖性障害に関連する少なくとも一以上の疾患のパラメータを減少させる量である、実施形態６５に記載の方法。
６７．細胞増殖性疾患は、がんであり、また有効量のＲＩＺ２が、がん細胞の数を減少させる、実施形態６６に記載の方法。
６８．細胞増殖性疾患は、固形腫瘍であり、また有効量のＲＩＺ２が、腫瘍量を減少させる、実施形態６６に記載の方法。
６９．ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物は、送達システムに結合された一以上のポリヌクレオチドを含む、実施形態５９または６０に記載の方法。
７０．一以上のポリヌクレオチドは、阻害性ＲＮＡ分子を含む、実施形態６９に記載の方法。
７１．阻害性ＲＮＡ分子は、配列番号１の配列を有するセンス鎖および配列番号１０の配列を有するアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡである、実施形態７０に記載の方法。
７２．阻害性ＲＮＡ分子は、配列番号６の配列を有するセンス鎖および配列番号１１の配列を有するアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡである、実施形態７０に記載の方法。
７３．組成物は、送達システムをさらに含む、実施形態１に記載の方法。
７４．送達システムは、脂質および／または細胞標的部分を含む、実施形態７３のいずれか一つに記載の方法。
７５．脂質は、ＰＥＧ化脂質を含む、実施形態７４に記載の方法。
７６．細胞標的部分は、細胞透過性ペプチド、環状ペプチド、抗体もしくはその断片、またはアプタマーである、実施形態７４に記載の方法。
７７．（ａ）ＲＩＺ２阻害剤、および（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。
７８．ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のポリヌクレオチド分子および送達システムを含む、上記した実施形態に記載の医薬組成物。
７９．ＲＩＺ２阻害剤は、阻害性ＲＮＡ分子を含む、実施形態７８に記載の医薬組成物。
８０．阻害性ＲＮＡ分子は、ＰＲＤＭ２遺伝子またはＰＲＤＭ２遺伝子産物上の少なくとも１０個の隣接し合う核酸塩基に対してハイブリダイズする、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８１．阻害性ＲＮＡ分子は、約１０ヌクレオチド～約２１ヌクレオチドの長さである、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８２．阻害性ＲＮＡ分子は、二本鎖である、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８３．阻害性二本鎖ＲＮＡは、配列番号１の配列を有するセンス鎖および配列番号１０の配列を有するアンチセンス鎖を含む、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８４．阻害性二本鎖ＲＮＡは、表２から選択されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８５．阻害性二本鎖ＲＮＡは、配列番号６の配列を有するセンス鎖および配列番号１１の配列を有するアンチセンス鎖を含む、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８６．送達システムは、細胞標的部分を含む、実施形態７８に記載の医薬組成物。
８７．細胞標的部分は、リガンド、および抗体または抗体断片、単鎖抗体、ペプチドまたはアプタマーである、実施形態８６に記載の医薬組成物。
８８．細胞透過性ペプチドである、実施形態８６に記載の医薬組成物。
８９．送達システムは、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、またはそれらの組み合わせのうちの一以上を含む、実施形態８６に記載の医薬組成物。
９０．ＲＩＺ２阻害剤は、
（ｉ）ヒトＰＲＤＭ２／ＲＩＺ２遺伝子に対して相同性を有する１０～２１ヌクレオチドの二本鎖ＲＮＡを含むｓｉＲＮＡを含み、
（ｉｉ）ＰＥＧ分子に共有結合し、
（ｉｉｉ）細胞標的部分に結合されるものであり、
該細胞標的部分がアプタマーである、当該ｓｉＲＮＡを含む、実施形態７８に記載の医薬組成物。
９１．送達システムは、リポソームを含む、実施形態７８に記載の医薬組成物。
９２．送達システムは、ナノ粒子を含む、実施形態７８に記載の医薬組成物。
９３．ナノ粒子は、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、およびそれらの組み合わせを含む、実施形態９２に記載の医薬組成物。
９４．ナノ粒子は、カルシウムホスホシリケート（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｓｉｌｉｃａｔｅ）複合体を含む、実施形態９２に記載の医薬組成物。
９５．ＲＩＺ２阻害剤と結合したカルシウムホスホシリケート複合体をさらに含む、実施形態９０に記載の医薬組成物。
９６．一以上の化学療法薬をさらに含む、実施形態７７に記載の医薬組成物。
１．細胞増殖を阻害する方法であって、細胞の集団を、網膜芽細胞腫タンパク質相互作用ジンクフィンガータンパク質２（ＲＩＺ２）阻害剤を含む組成物と接触させることを含む、方法。
２．ＲＩＺ２阻害剤が、細胞においてＲＩＺ２の発現を減少させる、実施形態１に記載の方法。
３．ＲＩＺ２阻害剤が、細胞においてＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現を減少させる、実施形態１または２に記載の方法。
４．ＲＩＺ２ ｍＲＮＡは、細胞においてハウスキーピング遺伝子の発現と比較して少なくとも１０％減少する、実施形態３に記載の方法。
５．ＲＩＺ２ ｍＲＮＡは、対照細胞集団と比較して、少なくとも１０％減少する、実施形態３または４に記載の方法。
６．対照細胞集団は、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物と接触したことのない細胞集団である、実施形態５に記載の方法。
７．ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現は、対照細胞集団と比較して、少なくとも５０％減少する、実施形態５に記載の方法。
８．ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの発現は、対照細胞集団と比較して、少なくとも８０％減少する、実施形態５に記載の方法。
９．ＲＩＺ２阻害剤が、さらに、細胞集団においてＲＩＺ１の発現を増加させる、実施形態１から８のいずれか一つに記載の方法。
１０．組成物が、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡ発現レベルのＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を変化させる、実施形態９に記載の方法。
１１．組成物が、ＲＩＺ１タンパク質発現レベルのＲＩＺ２タンパク質発現レベルに対する比を変化させる、実施形態９に記載の方法。
１２．ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも１．１倍を超えるように変化させる、実施形態９または１０に記載の方法。
１３．ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも１．５倍を超えるように変化させる、実施形態９または１０に記載の方法。
１４．ＲＩＺ２阻害剤が、ＲＩＺ１のＲＩＺ２ ｍＲＮＡ発現レベルに対する比を、少なくとも２倍変化させる、実施形態９または１０に記載の方法。
１５．ＲＩＺ２阻害剤が、さらに、ＲＩＺ１の高メチル化を減少させる、実施形態１から８のいずれか一つに記載の方法。
１６．細胞は、哺乳類細胞である、実施形態１に記載の方法。
１７．細胞は、ヒト細胞である、実施形態１に記載の方法。
１８．細胞は、がん細胞である、実施形態１に記載の方法。
１９．細胞は、乳房、結腸、子宮内膜、食道、胃、神経膠腫、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、骨髄腫、上咽頭、神経芽腫、卵巣、膵臓、副甲状腺、下垂体、前立腺、甲状腺、または子宮組織である組織に由来する、実施形態１に記載の方法。
２０．がん細胞は、血液がん由来である、実施形態１８に記載の方法。
２１．がん細胞は、固形腫瘍由来である、実施形態８に記載の方法。
２２．接触させることは、細胞の集団を、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物と接触させることを含む、実施形態１に記載の方法。
２３．接触させることにより、結果として、細胞の集団の細胞数が少なくとも１０％減少する、実施形態２２に記載の方法。
２４．接触させることにより、結果として、細胞の集団の細胞数が約９０％減少する、実施形態２２に記載の方法。
２５．細胞増殖を阻害することは、細胞量を少なくとも１０％減少させることを含む、実施形態１または２２に記載の方法。
２６．細胞増殖を阻害することは、細胞量を約５０％減少させることを含む、実施形態２５に記載の方法。
２７．細胞を接触させることは、ＲＩＺ２阻害剤を細胞内に組み入れることをさらに含む、実施形態１に記載の方法。
２８．ＲＩＺ２阻害剤は、非天然由来の化合物を含む、実施形態１に記載の方法。
２９．ＲＩＺ２阻害剤は、合成薬である、実施形態２８に記載の方法。
３０．ＲＩＺ２阻害剤は、ペプチドを含む、実施形態２９に記載の方法。
３１．ＲＩＺ２阻害剤は、複合体化したポリペプチドを含む、実施形態２９に記載の方法。
３２．ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のポリヌクレオチドを含む、実施形態２９に記載の方法。
３３．ＲＩＺ２阻害剤は、合成ポリヌクレオチドを含む、実施形態３２に記載の方法。
３４．一以上のポリヌクレオチドは、一以上の修飾ヌクレオチドを含む、実施形態３３に記載の方法。
３５．ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物は、送達システムに結合された一以上のポリヌクレオチドを含む、実施形態１に記載の方法。
３６．送達システムは、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、またはそれらの組み合わせのうちの一以上を含む、実施形態３５に記載の方法。
３７．送達システムは、脂質を含む、実施形態３５に記載の方法。
３８．送達システムは、ＰＥＧ化脂質を含む、実施形態３５に記載の方法。
３９．送達システムは、細胞標的部分を含む、実施形態３５に記載の方法。
４０．細胞標的部分は、細胞型特異的である、実施形態３９に記載の方法。
４１．細胞標的部分は、標的細胞上の受容体に選択的に結合するリガンドである、実施形態３９に記載の方法。
４２．細胞標的部分は、標的細胞上の細胞表面分子に結合する抗体である、実施形態３９に記載の方法。
４３．細胞標的部分は、単鎖抗体または抗体断片である、実施形態４２に記載の方法。
４４．細胞標的部分は、ペプチドである、実施形態３９に記載の方法。
４５．細胞標的部分は、細胞透過性ペプチドである、実施形態４４に記載の方法。
４６．細胞標的部分は、環状ペプチドである、実施形態４４または４５に記載の方法。
４７．細胞標的部分は、アプタマーである、実施形態３９に記載の方法。
４８．送達システムは、リポソームを含む、実施形態３５に記載の方法。
４９．送達システムは、ナノ粒子を含む、実施形態３５に記載の方法。
５０．ＲＩＺ２阻害剤は、ＲＮＡ分子を含む、実施形態１から４９のいずれか一つに記載の方法。
５１．ＲＩＺ２阻害剤は、阻害性ＲＮＡ分子を含む、実施形態５０に記載の方法。
５２．阻害性ＲＮＡ分子は、ＰＲＤＭ２遺伝子またはＰＲＤＭ２遺伝子産物上の少なくとも１０個の隣接し合う核酸塩基に対してハイブリダイズする、実施形態５１に記載の方法。
５３．阻害性ＲＮＡは、約１０ヌクレオチド～約２１ヌクレオチドの長さである、実施形態５０に記載の方法。
５４．阻害性ＲＮＡ分子は、二本鎖である、実施形態５０に記載の方法。
５５．ＲＮＡ分子は、一以上の修飾ヌクレオチドを含む、実施形態５０に記載の方法。
５６．ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号１の配列を有するセンス鎖および配列番号１０の配列を有するアンチセンス鎖を含む阻害性二本鎖ＲＮＡを含む、実施形態１から５５のいずれか一つに記載の方法。
５７．ＲＩＺ２阻害剤は、配列番号６の配列を有するセンス鎖および配列番号１１の配列を有するアンチセンス鎖を含む阻害性二本鎖ＲＮＡを含む、実施形態１から５５のいずれか一つに記載の方法。
５８．ＲＩＺ２阻害剤は、表２から選択されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む阻害性二本鎖ＲＮＡ分子を含む、実施形態１から５５のいずれか一つに記載の方法。
５９．対象において細胞増殖性の疾患または障害を治療する方法であって、ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を対象に投与することを含む、方法。
６０．ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を投与する必要のある対象として患者を選択する方法であって、当該方法は、
（ｉ）対照サンプルもしくは対照値と比較して、対象の生体サンプルにおけるＲＩＺ１メチル化レベルの増加を検出すること、または
（ｉｉ）対照サンプルもしくは対照値と比較してＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの低下を検出することを含むものであり、
対照サンプルまたは対照値と比較して、対象の生体サンプルにおいてメチル化したＲＩＺ１の少なくとも１．１倍の増加またはＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルの少なくとも２分の１の低下により、当該対象がＲＩＺ２阻害剤を含む組成物を投与する必要があるとして決定され、また
対照サンプルは、臨床的に健康な個体からのサンプルであり、
対照値は、二以上の臨床的に健康な個体のサンプルからのＲＩＺ１メチル化レベルの平均値である、方法。
６１．細胞増殖性の疾患または障害は、がんである、実施形態５９に記載の方法。
６２．がんは、乳房、結腸、子宮内膜、食道、胃、神経膠腫、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、骨髄腫、上咽頭、神経芽腫、卵巣、膵臓、副甲状腺、下垂体、前立腺、甲状腺、または子宮組織のがんである、実施形態６１に記載の方法。
６３．がんは、固形腫瘍である、実施形態６１に記載の方法。
６４．がんは、肺がんである、実施形態６２に記載の方法。
６５．投与することは、有効量のＲＩＺ２阻害剤を投与することを含む、実施形態５９に記載の方法。
６６．有効量のＲＩＺ２阻害剤は、細胞増殖性障害に関連する少なくとも一以上の疾患のパラメータを減少させる量である、実施形態６５に記載の方法。
６７．細胞増殖性疾患は、がんであり、また有効量のＲＩＺ２が、がん細胞の数を減少させる、実施形態６６に記載の方法。
６８．細胞増殖性疾患は、固形腫瘍であり、また有効量のＲＩＺ２が、腫瘍量を減少させる、実施形態６６に記載の方法。
６９．ＲＩＺ２阻害剤を含む組成物は、送達システムに結合された一以上のポリヌクレオチドを含む、実施形態５９または６０に記載の方法。
７０．一以上のポリヌクレオチドは、阻害性ＲＮＡ分子を含む、実施形態６９に記載の方法。
７１．阻害性ＲＮＡ分子は、配列番号１の配列を有するセンス鎖および配列番号１０の配列を有するアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡである、実施形態７０に記載の方法。
７２．阻害性ＲＮＡ分子は、配列番号６の配列を有するセンス鎖および配列番号１１の配列を有するアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡである、実施形態７０に記載の方法。
７３．組成物は、送達システムをさらに含む、実施形態１に記載の方法。
７４．送達システムは、脂質および／または細胞標的部分を含む、実施形態７３のいずれか一つに記載の方法。
７５．脂質は、ＰＥＧ化脂質を含む、実施形態７４に記載の方法。
７６．細胞標的部分は、細胞透過性ペプチド、環状ペプチド、抗体もしくはその断片、またはアプタマーである、実施形態７４に記載の方法。
７７．（ａ）ＲＩＺ２阻害剤、および（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。
７８．ＲＩＺ２阻害剤は、一以上のポリヌクレオチド分子および送達システムを含む、上記した実施形態に記載の医薬組成物。
７９．ＲＩＺ２阻害剤は、阻害性ＲＮＡ分子を含む、実施形態７８に記載の医薬組成物。
８０．阻害性ＲＮＡ分子は、ＰＲＤＭ２遺伝子またはＰＲＤＭ２遺伝子産物上の少なくとも１０個の隣接し合う核酸塩基に対してハイブリダイズする、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８１．阻害性ＲＮＡ分子は、約１０ヌクレオチド～約２１ヌクレオチドの長さである、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８２．阻害性ＲＮＡ分子は、二本鎖である、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８３．阻害性二本鎖ＲＮＡは、配列番号１の配列を有するセンス鎖および配列番号１０の配列を有するアンチセンス鎖を含む、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８４．阻害性二本鎖ＲＮＡは、表２から選択されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８５．阻害性二本鎖ＲＮＡは、配列番号６の配列を有するセンス鎖および配列番号１１の配列を有するアンチセンス鎖を含む、実施形態７７に記載の医薬組成物。
８６．送達システムは、細胞標的部分を含む、実施形態７８に記載の医薬組成物。
８７．細胞標的部分は、リガンド、および抗体または抗体断片、単鎖抗体、ペプチドまたはアプタマーである、実施形態８６に記載の医薬組成物。
８８．細胞透過性ペプチドである、実施形態８６に記載の医薬組成物。
８９．送達システムは、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、またはそれらの組み合わせのうちの一以上を含む、実施形態８６に記載の医薬組成物。
９０．ＲＩＺ２阻害剤は、
（ｉ）ヒトＰＲＤＭ２／ＲＩＺ２遺伝子に対して相同性を有する１０～２１ヌクレオチドの二本鎖ＲＮＡを含むｓｉＲＮＡを含み、
（ｉｉ）ＰＥＧ分子に共有結合し、
（ｉｉｉ）細胞標的部分に結合されるものであり、
該細胞標的部分がアプタマーである、当該ｓｉＲＮＡを含む、実施形態７８に記載の医薬組成物。
９１．送達システムは、リポソームを含む、実施形態７８に記載の医薬組成物。
９２．送達システムは、ナノ粒子を含む、実施形態７８に記載の医薬組成物。
９３．ナノ粒子は、脂質、シクロデキストリン、キトサン、炭水化物ポリマー、エラスチン様ポリマー（ＥＬＰ）、リン酸カルシウムポリマー、およびそれらの組み合わせを含む、実施形態９２に記載の医薬組成物。
９４．ナノ粒子は、カルシウムホスホシリケート（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｓｉｌｉｃａｔｅ）複合体を含む、実施形態９２に記載の医薬組成物。
９５．ＲＩＺ２阻害剤と結合したカルシウムホスホシリケート複合体をさらに含む、実施形態９０に記載の医薬組成物。
９６．一以上の化学療法薬をさらに含む、実施形態７７に記載の医薬組成物。
【0185】
[０１９３]参照による援用
本明細書で言及するすべての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許が、参照により援用されることを具体的かつ個別に示したかのように、それらの全体が参照により本明細書に援用される。
本明細書で言及するすべての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許が、参照により援用されることを具体的かつ個別に示したかのように、それらの全体が参照により本明細書に援用される。
【実施例】
【0186】
実施例１：ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡの効果
[０１９４] 以下の実施例は、当業者に、本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療方法を作製および使用する方法の完全な開示および説明を提供するために提示されており、発明者が自身の発明とみなすものの範囲を限定することを意図するものではない。
[０１９４] 以下の実施例は、当業者に、本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療方法を作製および使用する方法の完全な開示および説明を提供するために提示されており、発明者が自身の発明とみなすものの範囲を限定することを意図するものではない。
【0187】
[０１９５] Ａ５４９細胞株を使用したヒト肺がん細胞に対する効果的な細胞傷害性に関する、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ設計の例示的な実証を以下に記載する。
【0188】
[０１９６] 方法：Ａ５４９細胞を９６ウェルプレート（１，０００細胞／ウェル）に播種し、２４時間後、製造業者の指示に従って、０．２μｌのＤｈａｒｍａＦＥＣＴ １（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ，Ｉｎｃ．社）を使用して、１００ｎＭのｓｉＲＮＡをトランスフェクションした。培地は、２日後に交換し、そして４日後に、ＭＴＳ細胞生存率アッセイを使用して、未処理細胞と比較して、百分率の細胞生存率を決定した。対照細胞およびｓｉＲＮＡトランスフェクション細胞において、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡレベルおよびＲＩＺ２ ｍＲＮＡレベルをｑＰＣＲを使用して決定した。トランスフェクションの４８時間後に細胞からＲＮＡを抽出して、ＰＲＤＭアイソフォームＡ特異的ＰＣＲプライマーおよびＰＲＤＭアイソフォームＣ特異的ＰＣＲプライマーを使用してｍＲＮＡ発現レベルを検出した。ＲＩＺ ｍＲＮＡ発現レベルを、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルと比較して決定した。スクランブルｓｉＲＮＡを陰性対照として使用して、またＴｏｘ（トランスフェクション対照ｓｉＲＮＡ（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｉＲＮＡ）、市販されている）を陽性対照として使用した。
【0189】
[０１９７] 結果と考察：図２に、上記の実施例１に記載の方法による、ＡＲＩＺ－０１１、ＡＲＩＺ－０１２、ＡＲＩＺ－０１３、ＡＲＩＺ－０１４およびＡＲＩＺ－０１５を含む様々なｓｉＲＮＡへの曝露後の、Ａ５４９肺がん細胞の細胞生存率の結果を示す。Ａ５４９肺がん細胞の生存率は、ＡＲＩＺ－０１１、ＡＲＩＺ－０１２、およびＡＲＩＺ－０１５の適用により低下した。しかしながら、ＡＲＩＺ－０１１は、非常に有望な結果を示した。
【0190】
[０１９８] ｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０１１での処理後のＡ５４９細胞におけるＲＩＺ１ ｍＲＮＡおよびＲＩＺ２ ｍＲＮＡの相対レベルを調べ、図３に示すように、ＡＲＩＺ－０１１はＲＩＺ２ ｍＲＮＡにおける７５％に近い低下だけでなく、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡの同時増加も見せた。このことは、がん細胞株におけるＲＩＺ２ ｍＲＮＡの低下だけでなくＲＩＺ１／ＲＩＺ２比の不均衡の回復に関連した驚くべき予想外の結果であった。
【0191】
[０１９９] 結果をまとめると、ＰＲＤＭ２ ｓｉＲＮＡがＡ５４９肺がん細胞を死滅させるのに有効であったことが実証された。ｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０１１は、調べたｓｉＲＮＡの中で最も有効であり、ｓｉＲＮＡへの単回曝露後に相対細胞生存率が３０％まで低下した。
【0192】
[０２００] ＲＩＺ２ ｍＲＮＡの３’末端に固有の１０個のヌクレオチドを包含する、ＲＩＺ２に特異的なｓｉＲＮＡであるｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０１５は、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡおよびＲＩＺ２ ｍＲＮＡの両方に相補的であるＡＲＩＺ－０１１（細胞生存率３０％）よりもＡ５４９細胞の死滅（細胞生存率７０％）の点で効果が弱かった。
【0193】
[０２０１] 図３に示すＲＩＺ ｍＲＮＡアッセイの結果は、ｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０１１による見かけ上のオンコプロテインＲＩＺ２のノックダウンが、腫瘍抑制タンパク質ＲＩＺ１の発現増加と同時に起こるという点が驚くべき予想外のものであった。
【0194】
実施例２：ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡと化学療法薬の同時投与の効果
[０２０２] これは、ＰＲＤＭ ｓｉＲＮＡと化学療法薬（５－フルオロウラシル）との同時投与が、健康な細胞への影響は最小限でありながらヒト結腸がん細胞の死滅を増強するという、例示的な実証である。
[０２０２] これは、ＰＲＤＭ ｓｉＲＮＡと化学療法薬（５－フルオロウラシル）との同時投与が、健康な細胞への影響は最小限でありながらヒト結腸がん細胞の死滅を増強するという、例示的な実証である。
【0195】
[０２０３] 方法：細胞（細胞株ＨＣＴ１１６）を９６ウェルプレート（１，０００細胞／ウェル）に播種して、２４時間後、製造業者の指示に従って、０．２μｌのＤｈａｒｍａＦＥＣＴ １（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ，Ｉｎｃ．社）を使用して、１００ｎＭでｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０１１をトランスフェクションした。該当する場合、５－フルオロウラシル（２５μＭ）を、トランスフェクションの１日後に添加した。培地（該当する場合、５－フルオロウラシルを含む）は、２日後に交換し、そして４日後に、未処理細胞と比較して、百分率の細胞生存率を決定した。
【0196】
[０２０４] 結果と考察：図４に図示するように、ＡＲＩＺ－０１１ ｓｉＲＮＡおよび５ＦＵの同時投与により、ＨＣＴ１１６結腸がん細胞の細胞生存率が９７％低下することにつながったが、これに対しｓｉＲＮＡまたは５ＦＵいずれかの単回投与に応じては約７２～７４％の低下であった。実施例１において報告した知見と同様に、ＨＣＴ１１６細胞において、ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡがＲＩＺ２の発現レベルを選択的に減少させたが、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡの同時増加が観察された（図５）。
【0197】
[０２０５] ＨＣＴ１１６結腸がん細胞を死滅させる点で単独のｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０１１が有効であったが（１００ｎＭ用量で７４％が死滅）、２５μＭ濃度での化学療法薬５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）と同程度であり（７２％）、これら結果により、ｓｉＲＮＡが化学療法薬の有効性をさらに高めることができたということが示された。ＲＩＺ２ ｓｉＲＮＡは、細胞周期停止に起因してがん細胞を死滅させることが知られている腫瘍抑制因子ＲＩＺ１のｍＲＮＡで増加をもたらす。
【0198】
[０２０６]実施例３：ｓｉＲＮＡ修飾
[０２０７] 設計されたｓｉＲＮＡ中の核酸塩基の例示的な修飾を、以下のように実証および試験する。ｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０１１の場合、修飾されたｓｉＲＮＡは、示されるようにＡＲＩＺ－０４７（表１）、配列６、として設計される。本質的には、５’－ジスルフィド部分が組み込まれており、ｓｉＲＮＡ骨格のセンス鎖において一つのウリジンが２’－メトキシウリジンで置換されている。非センス鎖の修飾もまた、配列６の右側欄に示している。
[０２０７] 設計されたｓｉＲＮＡ中の核酸塩基の例示的な修飾を、以下のように実証および試験する。ｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０１１の場合、修飾されたｓｉＲＮＡは、示されるようにＡＲＩＺ－０４７（表１）、配列６、として設計される。本質的には、５’－ジスルフィド部分が組み込まれており、ｓｉＲＮＡ骨格のセンス鎖において一つのウリジンが２’－メトキシウリジンで置換されている。非センス鎖の修飾もまた、配列６の右側欄に示している。
【0199】
[０２０８] 図６に示されるように、ｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０４７単独（シスプラチンなし）は、健康な細胞（正常な結腸線維芽細胞ＣＣＤ－１１２）への限定的な害を伴うのみで、Ａ５４９肺がん細胞を死滅する（細胞死滅９２％）点で非常に有効であった。これら結果は、修飾ｓｉＲＮＡ（ＡＲＩＺ－０４７）が、非修飾のＡＲＩＺ－０１１よりも少ない５分の１の用量である２０ｎＭ用量で、がん細胞死滅に非常に有効である一方で、正常細胞に対する影響は最小限であることを実証するということを示している。さらにＡＲＩＺ－０４７は、シスプラチンと併用で、ＡＲＩＺ－０４７単独よりも有意により有効（細胞死滅９８％）であったが、ＡＲＩＺ－０４７単独よりも実質的に大きい害を健康な細胞にもたらした（５０％死滅）。
【0200】
[０２０９] 肺がんおよび結腸がんに関する以前のデータと同様に、肺がん細胞に関する図７に示すＲＩＺ ｍＲＮＡアッセイの結果は、ＲＩＺ１ ｍＲＮＡの増加およびＲＩＺ２ ｍＲＮＡの減少を示す。ここでも、ＲＩＺ１レベルに対する効果を示すこれら結果は、ＲＩＺ２の発現増加がＲＩＺ１の発現を低下させることをさらに示唆している。
【0201】
[０２１０]実施例４：多発性骨髄腫細胞に対するｓｉＲＮＡの効果
[０２１１] この実施例では、ｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０１１の効果を、多発性骨髄腫細胞株ＫＭＳ－１１でさらに試験した。ＫＭＳ－１１細胞株は、市販の供給元から入手し、元々は四名の多発性骨髄腫患者からの細胞に由来していた。これら細胞は形質細胞の特徴を有する。前述のセクションに記載したものと同様のプロトコルを使用して、ＡＲＩＺ－０１１が、Ｔｏｘ陽性対照と匹敵して、培地中でのＫＭＳ－１１細胞死に重要な役割を果たしており、約８０％であったことが観察された（図８）。これら結果は、ＡＲＩＺ－０１１が、複数のがん細胞株にわたって有効であり、そして細胞周期の節目での調節異常および過剰増殖を標的とするがん治療薬の開発の手段となり得ることを示す。
[０２１１] この実施例では、ｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０１１の効果を、多発性骨髄腫細胞株ＫＭＳ－１１でさらに試験した。ＫＭＳ－１１細胞株は、市販の供給元から入手し、元々は四名の多発性骨髄腫患者からの細胞に由来していた。これら細胞は形質細胞の特徴を有する。前述のセクションに記載したものと同様のプロトコルを使用して、ＡＲＩＺ－０１１が、Ｔｏｘ陽性対照と匹敵して、培地中でのＫＭＳ－１１細胞死に重要な役割を果たしており、約８０％であったことが観察された（図８）。これら結果は、ＡＲＩＺ－０１１が、複数のがん細胞株にわたって有効であり、そして細胞周期の節目での調節異常および過剰増殖を標的とするがん治療薬の開発の手段となり得ることを示す。
【0202】
[０２１２]実施例５：標的薬剤送達設計
[０２１３] 本明細書で開示されるｓｉＲＮＡを用いたがん治療のための標的薬剤送達システムのための例示的な設計をここに示す。キャリアは、抗ＲＩＺ ｓｉＲＮＡと複合体化した８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸－β－マレイミドプロピオン酸と複合体化した環状ペプチド標的リガンドからなる、腫瘍を標的とする自己組織化ペプチドナノ粒子であり、動物モデルにおいて標的受容体を発現するがん細胞までｓｉＲＮＡペイロードを特異的に送達させることができる。
[０２１３] 本明細書で開示されるｓｉＲＮＡを用いたがん治療のための標的薬剤送達システムのための例示的な設計をここに示す。キャリアは、抗ＲＩＺ ｓｉＲＮＡと複合体化した８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸－β－マレイミドプロピオン酸と複合体化した環状ペプチド標的リガンドからなる、腫瘍を標的とする自己組織化ペプチドナノ粒子であり、動物モデルにおいて標的受容体を発現するがん細胞までｓｉＲＮＡペイロードを特異的に送達させることができる。
【0203】
[０２１４]
前述のｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０４７を、環状ペプチドＲＧＤｆｋと複合体化して、（ＲＧＤｆｋ）／ｓｉＲＮＡを形成する（図９）。このｓｉＲＮＡは、短いリンカーを介してＰＥＧ分子に結合し、他方の末端にＲＧＤｆｋを有する。
前述のｓｉＲＮＡ ＡＲＩＺ－０４７を、環状ペプチドＲＧＤｆｋと複合体化して、（ＲＧＤｆｋ）／ｓｉＲＮＡを形成する（図９）。このｓｉＲＮＡは、短いリンカーを介してＰＥＧ分子に結合し、他方の末端にＲＧＤｆｋを有する。
【0204】
[０２１５]実施例６．インビボでのｓｉＲＮＡ有効性の試験
[０２１６] 雌の胸腺欠損ヌードマウスを使用して、Ａ５４９細胞をもつ肺腺がん腫瘍モデルを調製した。Ａ５４９肺がん腫瘍異種移植片を有するマウスに１日１回、（ＲＧＤｆｋ）／ｓｉＲＮＡを静脈内注射した。マウスは、ｃ（ＲＧＤｆｋ）／ｓｉＲＮＡの効果に関して腫瘍サイズを監視する。１４日後、マウスを屠殺し、そして腫瘍を切除して評価した。ＲＩＺ１、ＲＩＺ２、および関心の他の遺伝子に関するｍＲＮＡレベルをＲＴＰＣＲで調べるために、血液および他の組織を採取した。
[０２１６] 雌の胸腺欠損ヌードマウスを使用して、Ａ５４９細胞をもつ肺腺がん腫瘍モデルを調製した。Ａ５４９肺がん腫瘍異種移植片を有するマウスに１日１回、（ＲＧＤｆｋ）／ｓｉＲＮＡを静脈内注射した。マウスは、ｃ（ＲＧＤｆｋ）／ｓｉＲＮＡの効果に関して腫瘍サイズを監視する。１４日後、マウスを屠殺し、そして腫瘍を切除して評価した。ＲＩＺ１、ＲＩＺ２、および関心の他の遺伝子に関するｍＲＮＡレベルをＲＴＰＣＲで調べるために、血液および他の組織を採取した。
【0205】
[０２１７] ここに示す標的薬剤、例えばＲＧＤｆｋで複合体化したｓｉＲＮＡ分子の使用により、リポソームによるまたは他のナノ粒子型の送達システムの必要性が排除される。このことで、それらが肝臓および他の器官に蓄積することで生じるリポソームによるまたは他のタイプのナノ粒子の送達システムの使用に関連する毒性が低減または回避されることとなる。
【0206】
[０２１８]実施例７：リポソームを使用したインビボでの送達
[０２１９] この例示的な研究では、標的リガンドを提示するリン酸カルシウムナノ粒子を含むがん治療のための標的薬剤送達システムを使用して、動物モデルにおいてがん細胞までＰＲＤＭ２ ｓｉＲＮＡペイロードが特異的に送達される。
[０２１９] この例示的な研究では、標的リガンドを提示するリン酸カルシウムナノ粒子を含むがん治療のための標的薬剤送達システムを使用して、動物モデルにおいてがん細胞までＰＲＤＭ２ ｓｉＲＮＡペイロードが特異的に送達される。
【0207】
[０２２０] ＡＲＩＺ－０４７を担持し且つヒトＡ５４９肺がん細胞を標的とする標的ペプチドｃ（ＲＧＤｆｋ）をさらに提示できるナノ粒子を、Ｐａｒｅｔｔｅら（米国特許第１０，２２６，４２４号）が記載の方法に従って、調製する。簡潔に述べると、２１塩基対または２５塩基対のｓｉＲＮＡを、最初にＰＥＧ部分と複合体化する。ホスホアミドの化学では、５’ＰＯ４末端基をもつｓｉＲＮＡをアミン末端メトキシＰＥＧ分子と複合体化することを伴い、一方でチオエーテルの化学では、５’－スルフヒドリル末端基をもつｓｉＲＮＡをマレイミド末端メトキシＰＥＧ分子と複合体化することを伴う。ホスホアミドによる複合体化を達成するために、０．１２ＭのＮ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩、４７．６ｕＭの一本鎖ｓｉＲＮＡ（５’ＰＯ４基を含有する不活性鎖）、および０．２３８Ｍのアミン－ＰＥＧを、ｐＨ６で０．１Ｍのイミダゾールに溶解し、５０℃で１８時間インキュベートする。この反応で典型的には、１５～３０％の複合体化が得られる。あるいは、０．１ＭのＭＥＳ緩衝液、ｐＨ４をホスホアミド反応混合物に添加すると、７５～９０％の複合体化効率が得られる。チオエーテルの化学では、２００ｕＭの一本鎖ｓｉＲＮＡ（５’ＰＯ４基を含有する不活性鎖）を、０．１ＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ緩衝液中の０．０２ＭのＤＴＴの存在下で０．４７６Ｍのアミン－ＰＥＧと組み合わせて、反応物を２５℃で１８時間インキュベートする。この反応では、約５０％の複合体化が得られる。これら反応は、２ｋＤａおよび５ｋＤａのＰＥＧ分子を使用して実施された。複合体化後、７０℃に加熱してその後ゆっくりと冷却することにより、不活性（センス）鎖を、反応混合物中の複合体化していない活性（アンチセンス）鎖ＲＮＡにアニーリングする。高度に効率的な（７５～９０％）ホスホアミド反応に関しては、活性（アンチセンス）鎖および不活性（センス）鎖の両方における５’ＰＯ４基、または活性（アンチセンス）鎖における一つの５’ＰＯ４基のいずれかを含有する複合体化していないアニールリングされたｓｉＲＮＡを、以下に記載されるように、反応混合物に添加して脱塩精製を促進する。不活性（センス）鎖に５’ＰＯ４基が存在することで、より負電荷の粒子が得られ、一方でこれら基が存在しないと粒子の電荷は中性に近づくように変化する。
【0208】
[０２２１] 粒子は、カルシウムおよびリン酸塩を含有する５％のブドウ糖を用いて遠心分離濾過により洗浄され、組み込まれていないｓｉＲＮＡおよびｓｉＲＮＡ－ＰＥＧ複合体が除去される。あるいは、組み込まれていないｓｉＲＮＡ、Ｃａ、Ｃｌ、Ｎａ、およびＰＯ４を、１３２，０００ｇでの超遠心分離によって懸濁液から取り出すことができるが、これによりサンプル体積の底部１０％の粒子収集をもたらす。当該粒子を含有するサンプル体積の底部１０％を分離することにより、組み込まれていない残留成分が最大９０％減少する。粒子範囲内におけるｓｉＲＮＡの捕捉は、配列依存的であり、合成で添加されるｓｉＲＮＡのうちの１０～２５％の範囲である。本明細書に記載の合成は、以下に示すように、１６０ｎｍ以下の単峰の粒子サイズ分布でｓｉＲＮＡを含有するリン酸カルシウムナノ粒子をもたらす。
【0209】
[０２２２] このナノ粒子調製物が、先の実施例にあるようなＡ５４９肺がん腫瘍異種移植片を有するマウスに静脈内投与される。マウスに、本セクションに記載のナノ粒子中に封入された１ｍｇ／ＫｇのＡＲＩＺ－０４７の用量でｓｉＲＮＡを投与した。一部の実施形態では、これらナノ粒子は、「ナノジャケット」と称する。その後、治療有効性を決定するために、腫瘍サイズおよび治療の任意の毒性効果について、マウスを観察する。最も驚くべきことに、ＡＲＩＺ－０４７では、観察された２５日間にわたって腫瘍増殖の有効な制御を示した（図１０）。腫瘍増殖は、非ｓｉＲＮＡの参照対照と比較して約５０％抑制された。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【配列表】
【国際調査報告】