特表 2023-527083 アレナウイルスベクターを使用するがんの治療方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-06-26

(54)【発明の名称】アレナウイルスベクターを使用するがんの治療方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/76 20150101AFI20230619BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230619BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230619BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230619BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230619BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20230619BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230619BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20230619BHJP

   C12N 15/37 20060101ALI20230619BHJP

   C12N 15/40 20060101ALI20230619BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230619BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230619BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230619BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230619BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20230619BHJP

【ＦＩ】

A61K35/76

A61P35/00

A61K45/00

A61P43/00 121

A61K39/395 T

A61K38/02

A61K48/00

C12N15/62 Z ZNA

C12N15/37

C12N15/40

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N7/01

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022573287

(86)(22)【出願日】2021-05-12

(85)【翻訳文提出日】2023-01-23

(86)【国際出願番号】 EP2021062728

(87)【国際公開番号】W WO2021239471

(87)【国際公開日】2021-12-02

(31)【優先権主張番号】63/032,362

(32)【優先日】2020-05-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/173,155

(32)【優先日】2021-04-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/175,842

(32)【優先日】2021-04-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518408774

【氏名又は名称】ホオキパ バイオテック ジーエムビーエイチ

(74)【代理人】

【識別番号】100097456

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 徹

(72)【発明者】

【氏名】イゴール マトゥシャンスキー

(72)【発明者】

【氏名】アンディー ウォン

(72)【発明者】

【氏名】キアヌーシュ カッチャー

(72)【発明者】

【氏名】ドナ エドワーズ

(72)【発明者】

【氏名】ヘニング ローターバッハ

(72)【発明者】

【氏名】マイケル シュウェンディンガー

(72)【発明者】

【氏名】クロース オルリンガー

(72)【発明者】

【氏名】サラ シュミット

(72)【発明者】

【氏名】ウルスラ ベルカ

(72)【発明者】

【氏名】コリーヌ イアコブッチ

(72)【発明者】

【氏名】カティア シュリエンガー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AA95X

4B065AA95Y

4B065AB01

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4C087ZC75

(57)【要約】

本出願は概して、アレナウイルス粒子を使用するがん治療方法に関する。本明細書に記載する治療方法は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原をコードする３セグメントアレナウイルス粒子を用いて、頭頸扁平上皮細胞癌を含むがんを治療するためのものである。本明細書に記載する治療方法は、免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含むことができる。
【選択図】図２Ｂ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記患者に、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、前記有効量が約５×１０^５複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記方法。

【請求項2】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記患者に、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、前記有効量が約５×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記方法。

【請求項3】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記患者に、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、前記有効量が約５×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記方法。

【請求項4】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記患者に、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、前記有効量が約５×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記方法。

【請求項5】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記患者に、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、前記有効量が約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記方法。

【請求項6】

前記がんがＨＰＶ１６^＋である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記ＨＰＶ１６^＋癌が頭頸扁平上皮細胞癌である、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記ＨＰＶ１６^＋癌が肛門癌、子宮頸癌、外陰、または膣癌である、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

前記患者が、前記方法の前の少なくとも１つの標準的なケア治療法の際に、腫瘍の進行または再発を有している、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記少なくとも１つの標準的なケア治療法が、ペムブロリズマブ単剤療法を含む、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記患者が、リンパ節内に標的病変を有するのみである、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の前記投与が、静脈内注射を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記静脈内注射が、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、または８週間毎の頻度で投与される、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記静脈内注射が現行のものであるか、限定されたサイクル数で投与される、請求項１２または１３に記載の方法。

【請求項15】

前記限定されたサイクル数が、２、３、４、５、または６回である、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の前記有効量が、前記現行の静脈内注射で用いられる有効量よりも１ｌｏｇオーダー大きい、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記静脈内注射が現行のものであり、まず高頻度で、続いて低頻度で投与される、請求項１４に記載の方法。

【請求項18】

前記静脈内注射が現行のものであり、まず３週間毎の頻度で、続いて６週間毎の頻度で投与される、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記静脈内注射が現行のものであり、まず、４サイクルは３週間毎の頻度で、続いて、その後のサイクルは６週間毎の頻度で投与される、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記静脈内注射が現行のものであり、まず４週間毎の頻度で、続いて８週間毎の頻度で投与される、請求項１７に記載の方法。

【請求項21】

前記静脈内注射が現行のものであり、まず、４サイクルは４週間毎の頻度で、続いて、その後のサイクルは８週間毎の頻度で投与される、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記方法が、静脈内注射の前に腫瘍内注射をさらに含む、請求項１２～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の前記投与が、腫瘍内注射を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記方法が、有効量の免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）チェックポイント阻害剤を含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤が抗体である、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記抗体がニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、またはセミプリマブである、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）に由来する、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記ＬＣＭＶが、ＭＰ株；ＷＥ株；アームストロング株；アームストロングクローン１３株；または、内因性ＬＣＭＶクローン１３糖タンパク質の代わりに、ＬＣＭＶ株ＷＥの糖タンパク質を発現するＬＣＭＶクローン１３株である、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子がコンストラクト１を含む、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

コンストラクト１の前記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、コンストラクト１が、３週間毎の頻度で投与される、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子が、ピチンデウイルス（ＰＩＣＶ）に由来する、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項33】

前記ＰＩＣＶが、株Ｍｕｎｃｈｉｑｕｅ ＣｏＡｎ４７６３単離物Ｐ１８、またはＰ２株である、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子がコンストラクト２を含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記方法が、前記患者の治療前レベルと比較して、前記患者の血清内での、サイトカインまたはケモカインのレベルの変化をもたらす、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記サイトカイン及びケモカインが、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、及びＴＮＦαを含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記方法が、前記患者の治療前のレベルと比較して、前記患者の血清内での、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の増加をもたらす、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞が、ＣＤ８、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及び／またはＣＤ１０７ａに対して陽性である、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記Ｔ細胞が、予めインビトロ刺激及び／または増殖を行うことなく検出される、請求項３７または３８に記載の方法。

【請求項40】

前記方法が、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、腫瘍組織内への、Ｔ細胞のより多くの浸潤をもたらす、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記方法が、前記プラセーボを受ける患者（複数可）の前記治療前レベルと比較して、充実性腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）、及び／または、充実性腫瘍における免疫応答評価基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）を用いる、１つ以上の有効性エンドポイントの改善をもたらす、請求項１～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記１つ以上の有効性エンドポイントの改善が、より高い割合の客観的な奏効率、より高い割合の疾患制御率、より高い割合の部分奏功、より長い無増悪生存期間、及び／または、より長い全体の生残を含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

１つ以上のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、第１のアレナウイルス種に由来するヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、前記有効量が約５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、または１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記患者に、前記セッションの約半分の時点で、第２のアレナウイルス種に由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、前記有効量が約５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含む、前記方法。

【請求項44】

（ｉ）における前記第１のアレナウイルス種がリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）であり、（ｉｉ）における前記第２のアレナウイルス種がピチンデウイルス（ＰＩＣＶ）である、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

（ｉ）における前記第１のアレナウイルス種がＰＩＣＶであり、（ｉｉ）における前記第２のアレナウイルス種がＬＣＭＶである、請求項４３に記載の方法。

【請求項46】

前記ＬＣＭＶが、ＭＰ株；ＷＥ株；アームストロング株；アームストロングクローン１３株；または、内因性ＬＣＭＶクローン１３糖タンパク質の代わりに、ＬＣＭＶ株ＷＥの糖タンパク質を発現するＬＣＭＶクローン１３株である、請求項４４または４５に記載の方法。

【請求項47】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子がコンストラクト１を含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記ＰＩＣＶが、株Ｍｕｎｃｈｉｑｕｅ ＣｏＡｎ４７６３単離物Ｐ１８、またはＰ２株である、請求項４４または４５に記載の方法。

【請求項49】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子がコンストラクト２を含む、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

（ｉ）における前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子がコンストラクト２であり、（ｉｉ）における前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子がコンストラクト１である、請求項４５に記載の方法。

【請求項51】

１つ以上のセッションを含み、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、前記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、前記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含む、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

コンストラクト２の前記有効量が約１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、コンストラクト１の前記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、コンストラクト２及びコンストラクト１が静脈内投与され、各セッションが６週間続く、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記がんがＨＰＶ１６^＋である、請求項４３～５２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

前記ＨＰＶ１６^＋癌が頭頸扁平上皮細胞癌である、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記ＨＰＶ１６^＋癌が肛門癌、子宮頸癌、外陰、または膣癌である、請求項５３に記載の方法。

【請求項56】

前記患者が、前記方法の前の少なくとも１つの標準的なケア治療法の際に、腫瘍の進行または再発を有している、請求項４３～５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

前記少なくとも１つの標準的なケア治療法が、ペムブロリズマブ単剤療法を含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

前記患者が、リンパ節内に標的病変を有するのみである、請求項４３～５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

（ｉ）及び（ｉｉ）における前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を前記投与することが、静脈内注射を含む、請求項４３～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

各セッションが、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、または１６週間続く、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記セッションが現行のものであるか、限定されたセッション数で繰り返される、請求項５９または６０に記載の方法。

【請求項62】

前記限定されたセッション数が２、３、４、５、または６回である、請求項６１に記載の方法。

【請求項63】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の前記有効量が、前記現行のセッションで用いられる有効量よりも、１ｌｏｇオーダー大きい、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記静脈内注射が現行のものであり、まず短いセッションで、続いて長いセッションで投与される、請求項６１に記載の方法。

【請求項65】

前記静脈内注射が現行のものであり、まず、それぞれが６週間続くセッションで、続いて、それぞれが１２週間続くセッションで投与される、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

前記静脈内注射が現行のものであり、まず、それぞれが６週間続く２セッションで、続いて、それぞれが１２週間続くセッションで投与される、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

前記静脈内注射が現行のものであり、まず、それぞれが８週間続くセッションで、続いて、それぞれが１６週間続くセッションで投与される、請求項６４に記載の方法。

【請求項68】

前記静脈内注射が現行のものであり、まず、それぞれが８週間続く２セッションで、続いて、それぞれが１６週間続くセッションで投与される、請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

前記方法が、前記静脈内注射の前に腫瘍内注射をさらに含む、請求項５９～６８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項70】

前記腫瘍内注射が、前記静脈内注射の３週間前に投与される、請求項６９に記載の方法。

【請求項71】

前記腫瘍内注射がコンストラクト１と共に投与される、請求項６９または７０に記載の方法。

【請求項72】

前記組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の前記投与が、腫瘍内注射を含む、請求項４３～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

前記方法が、有効量の免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、請求項４３～７２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）チェックポイント阻害剤を含む、請求項７３に記載の方法。

【請求項75】

前記抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤が抗体である、請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

前記抗体がニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、またはセミプリマブである、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

前記方法が、前記患者の治療前レベルと比較して、前記患者の血清内での、サイトカインまたはケモカインのレベルの変化をもたらす、請求項４３～７６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項78】

前記サイトカイン及びケモカインが、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、及びＴＮＦαを含む、請求項７７に記載の方法。

【請求項79】

前記方法が、前記患者の治療前のレベルと比較して、前記患者の血清内での、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の増加をもたらす、請求項４３～７８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項80】

前記ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞が、ＣＤ８、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及び／またはＣＤ１０７ａに対して陽性である、請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

前記Ｔ細胞が、予めインビトロ刺激及び／または増殖を行うことなく検出される、請求項７９または８０に記載の方法。

【請求項82】

前記方法が、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、腫瘍組織内への、Ｔ細胞のより多くの浸潤をもたらす、請求項４３～８１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項83】

前記方法が、充実性腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）、及び／または、充実性腫瘍における免疫応答評価基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）を用いる、１つ以上の有効性エンドポイントの改善をもたらす、請求項４３～８２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項84】

前記１つ以上の有効性エンドポイントの改善が、より高い割合の客観的な奏効率、より高い割合の疾患制御率、より高い割合の部分奏功、より長い無増悪生存期間、より長い全体の生残を含む、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することを含み、前記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）であり、コンストラクト１が、４サイクルは３週間毎の頻度で、続いて、６週間毎の頻度の現行サイクルで静脈内投与される、前記方法。

【請求項86】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（ｉ）前記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、前記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）であり、前記コンストラクト１が、４サイクルは３週間毎の頻度で、続いて、６週間毎の頻度の現行サイクルで静脈内投与される、前記投与することと、
（ｉｉ）前記患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、前記方法。

【請求項87】

複数のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項88】

複数のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項89】

複数のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項90】

複数のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項91】

複数のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項92】

複数のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項93】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記セッションと、
（２）前記患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、前記方法。

【請求項94】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記セッションと、
（２）前記患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、前記方法。

【請求項95】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記セッションと、
（２）前記患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、前記方法。

【請求項96】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記セッションと、
（２）前記患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、前記方法。

【請求項97】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記セッションと、
（２）前記患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、前記方法。

【請求項98】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記セッションと、
（２）前記患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、前記方法。

【請求項99】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）前記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の前記有効量が約５×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
（２）３週間後に、前記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が約１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項100】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）前記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の前記有効量が約５×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
（２）３週間後に、前記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が約１×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項101】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）前記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の前記有効量が約５×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
（２）３週間後に、前記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が約１×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項102】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）前記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の前記有効量が約５×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
（２）３週間後に、前記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項103】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）前記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の前記有効量が約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
（２）３週間後に、前記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項104】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記方法が、
（１）前記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の前記有効量が約５×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
（２）３週間後に、前記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
前記最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、前記方法。

【請求項105】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、前記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、前記有効量が、約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）であり、コンストラクト１が、３サイクルは３週間毎の頻度で静脈内投与され、前記方法が３サイクル後に終了する、前記投与することを含む、前記方法。

【請求項106】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
各セッションが６週間続き、前記方法が３セッション後に終了する、前記方法。

【請求項107】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
各セッションが６週間続き、前記方法が３セッション後に終了する、前記方法。

【請求項108】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
各セッションが６週間続き、前記方法が３セッション後に終了する、前記方法。

【請求項109】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
各セッションが６週間続き、前記方法が３セッション後に終了する、前記方法。

【請求項110】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
各セッションが６週間続き、前記方法が３セッション後に終了する、前記方法。

【請求項111】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、
ｉ．前記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、前記有効量が、約１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、前記投与することと、
ｉｉ．前記セッションの約半分の時点において、前記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、前記有効量が、約５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、前記投与することと、を含み、
各セッションが６週間続き、前記方法が３セッション後に終了する、前記方法。

【請求項112】

配列番号１または２のヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列。

【請求項113】

配列番号３、４、５、６、７、または８のヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列。

【請求項114】

前記ヌクレオチド配列がＲＮＡである、請求項１１２または１１３に記載のヌクレオチド配列。

【請求項115】

請求項１１２～１１４のいずれか１項に記載のヌクレオチド配列を含む宿主細胞。

【請求項116】

配列番号３、４、及び５のヌクレオチド配列を含む、３セグメントＬＣＭＶ粒子。

【請求項117】

配列番号６、７、及び８のヌクレオチド配列を含む、３セグメントＰＩＣＶ粒子。

【請求項118】

請求項１１６または１１７に記載の３セグメントウイルス粒子と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物。

【請求項119】

前記ジヌクレオチド最適化ＨＰＶ１６ Ｅ７Ｅ６ヌクレオチド配列が、
ｉ．少なくとも４、５、６、７、８，９、または１０世代を継代した後、ＨＰＶの抗原の安定した発現を有することができ、
ｉｉ．前記コードされたＨＰＶ融合タンパク質を一貫して発現することができ、または
ｉｉｉ．前記コードされたＨＰＶ融合タンパク質に対して強力な免疫応答を誘発することができる、請求項１１６または１１７に記載の３セグメントアレナウイルス粒子。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２０年５月２９日に出願された米国シリアル番号第６３／０３２，３６２号、２０２１年４月９日に出願された同第６３／１７３，１５５号、及び、２０２１年４月１６日に出願された同第６３／１７５，８４２号に対する優先権を主張し、これらそれぞれの全体が、本明細書に参照により組み込まれている。

【0002】

本出願は概して、アレナウイルス粒子を使用するがんの治療方法に関し、より具体的には、ＨＰＶ抗原をコードする、３セグメントアレナウイルス粒子、及び、いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害剤の投与を使用する、頭頸扁平上皮細胞癌を含むがんを治療するための、具体的な治療方法に関する。

【背景技術】

【0003】

ヒトパピローマウイルス１６（ＨＰＶ１６）感染症は、子宮頸癌、頭頸癌、膣癌、及び肛門癌などの、世界的ながんの、実質的な割合、及び割合の増加と関連している（ｄｅ Ｍａｒｔｅｌ Ｃ， ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．２０１７；１４１：６６４－６７０を参照されたい）。ＨＰＶ１６^＋再発または転移癌を有する患者に対しては、治療オプションが限られており、長期生存の可能性が低い。ＨＰＶ１６^＋悪性状態の生成及び持続には、ＨＰＶ１６特異的Ｅ７及びＥ６がん遺伝子の安定した発現が必要であり、これは、細胞の、がん細胞への形質転換を駆動することが示されている（Ｓｃｈｍｉｄｔ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０２０；９（１）：１８０９９６０；Ｄｏｎｇ Ｚ，ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０２１；１１：５８６７９６を参照されたい）。したがって、ＨＰＶ１６特異的Ｅ７及びＥ６は、免疫原性の腫瘍関連抗原としての役割を果たす可能性がある。本明細書に記載の方法はＨＰＶ１６感染症の治療のニーズを満たし、関連する利点をもたらす。

【発明の概要】

【0004】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法を本明細書で提供する。このような方法は、患者に、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする、重複（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含む。アレナウイルス粒子の有効量は、約５×１０^５、約５×１０^６、約５×１０^７、約１×１０^８、または、約５×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）であることができる。

【0005】

いくつかの実施形態では、がんを治療するための、本明細書で提供する方法は、由来に関係なく、ＨＰＶ１６^＋癌を治療することを含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、頭頸扁平上皮細胞癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、肛門癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、子宮頸癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、膣癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、外陰癌と診断されている。

【0006】

いくつかの実施形態では、患者は、方法の前の少なくとも１つの標準的なケア治療法の際に、腫瘍の進行または再発を有した。いくつかの特定の実施形態では、少なくとも１つの標準的なケア治療法は、ペムブロリズマブ単剤療法を含む。他の実施形態では、患者は、リンパ節内に標的病変を有するのみである。

【0007】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は静脈内注射、腫瘍内注射、またはこれらの組み合わせを使用する、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の投与を含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載する、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の投与は、静脈内注射を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の投与は、腫瘍内注射を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の投与は、腫瘍内注射、続いて静脈内注射を含む。

【0008】

いくつかの実施形態では、静脈内注射は、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、または８週間毎の頻度で投与される。

【0009】

いくつかの実施形態では、静脈内注射は現行のものであるか、限定されたサイクル数で投与される。特定の実施形態では、限定されたサイクル数は、２、３、４、５、または６回である。他の特定の実施形態では、限定されたサイクル数で投与される、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の有効量は、現行の静脈内注射で用いられる有効量よりも、１ｌｏｇオーダー大きい。他の実施形態では、静脈内注射は現行のものであり、まず高頻度で、続いて低頻度で投与される。特定の実施形態では、静脈内注射は現行のものであり、まず３週間毎の頻度で、続いて６週間毎の頻度で投与される。一実施形態では、静脈内注射は現行のものであり、まず、４サイクルは３週間毎の頻度で、続いて、その後のサイクルは６週間毎の頻度で投与される。他の特定の実施形態では、静脈内注射は現行のものであり、まず４週間毎の頻度で、続いて８週間毎の頻度で投与される。一実施形態では、静脈内注射は現行のものであり、まず、４サイクルは４週間毎の頻度で、続いて、その後のサイクルは８週間毎の頻度で投与される。さらなる実施形態では、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の投与は、腫瘍内注射を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、有効量の免疫チェックポイント阻害剤を投与することもまた含むことができる。本明細書に記載の方法で使用するのに特に有用な、例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、抗ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）チェックポイント阻害剤が挙げられる。このような抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、またはセミプリマブなどの抗体であることができる。

【0011】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、本明細書に記載するコンストラクト１を含む、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を使用する。いくつかの実施形態では、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、ＭＰ株；ＷＥ株；アームストロング株；アームストロングクローン１３株；または、内因性ＬＣＭＶクローン１３糖タンパク質の代わりに、ＬＣＭＶ株ＷＥの糖タンパク質を発現するＬＣＭＶクローン１３株を含むＬＣＭＶに由来する。一実施形態では、有効量のコンストラクト１は、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、コンストラクト１は、３週間毎の頻度で投与される。

【0012】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、本明細書に記載するコンストラクト２を含む、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を使用する。いくつかの実施形態では、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、株Ｍｕｎｃｈｉｑｕｅ ＣｏＡｎ４７６３単離物Ｐ１８、Ｐ２株、または、Ｔｒａｐｉｄｏ及び同僚により説明されている（Ｔｒａｐｉｄｏ ｅｔ ａｌ，１９７１，Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ，２０：６３１－６４１）いくつかの単離物のうちのいずれかを含む、ピチンデウイルス（ＰＩＣＶ）に由来する。

【0013】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者の治療前レベルと比較して、患者の血清内での、サイトカインまたはケモカインレベルの変化をもたらす。いくつかの特定の実施形態ではサイトカイン及びケモカインは、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、及びＴＮＦαを含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者の治療前のレベルと比較して、患者の血清内での、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の増加をもたらす。いくつかの特定の実施形態ではＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞は、ＣＤ８、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及び／またはＣＤ１０７ａに対して陽性である。他の実施形態では、上述したＴ細胞は、予めインビトロ刺激及び／または増殖を行うことなく、検出される。さらに他の実施形態では、方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、腫瘍組織内への、Ｔ細胞のより多くの浸潤をもたらす。

【0015】

いくつかの実施形態では、方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、充実性腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）、及び／または、充実性腫瘍における免疫応答評価基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）を用いる、１つ以上の有効性エンドポイントの改善をもたらす。いくつかの特定の実施形態では、１つ以上の有効性エンドポイントの改善は、より高い割合の客観的な奏効率、より高い割合の疾患制御率、より高い割合の部分奏功、より長い無増悪生存期間、及び／または、より長い全体の生残を含む。

【0016】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（ｉ）上記患者に、第１のアレナウイルス種に由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、その有効量が約５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記患者に、第２のアレナウイルス種に由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、その有効量が約５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記方法もまた、本明細書において提供する。

【0017】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、（ｉ）及び／または（ｉｉ）を反復することをさらに含む。いくつかの実施形態では、（ｉ）におけるアレナウイルス種はＬＣＭＶであり、（ｉｉ）におけるアレナウイルス種はＰＩＣＶである。他の実施形態では、（ｉ）におけるアレナウイルス種はＰＩＣＶであり、（ｉｉ）におけるアレナウイルス種はＬＣＭＶである。

【0018】

１つ以上のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、（ｉ）上記患者に、第１のアレナウイルス種に由来するヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、その有効量が約５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、または１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（ｉｉ）上記患者に、セッションの約半分の時点で、第２のアレナウイルス種に由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、その有効量が約５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記方法を本明細書において提供する。いくつかの実施形態では、（ｉ）における第１のアレナウイルス種はリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）であり、（ｉｉ）における第２のアレナウイルス種はピチンデウイルス（ＰＩＣＶ）である。他の実施形態では、（ｉ）における第１のアレナウイルス種はＰＩＣＶであり、（ｉｉ）における第２のアレナウイルス種はＬＣＭＶである。

【0019】

いくつかの実施形態では、１回以上のセッションを含む方法であって、各セッションが、（ｉ）．患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、（ｉ）及び（ｉｉ）における組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することは、静脈内注射を含む。いくつかの特定の実施形態では、各セッションは、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、または１６週間続く。

【0020】

いくつかの実施形態では、がんを治療するための、本明細書で提供する方法は、由来に関係なく、ＨＰＶ１６^＋癌を治療することを含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、頭頸扁平上皮細胞癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、肛門癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、子宮頸癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、膣癌と診断されている。

【0021】

いくつかの実施形態では、患者は、方法の前の少なくとも１つの標準的なケア治療法の際に、腫瘍の進行または再発を有した。いくつかの特定の実施形態では、少なくとも１つの標準的なケア治療法は、ペムブロリズマブ単剤療法を含む。他の実施形態では、患者は、リンパ節内に標的病変を有するのみである。

【0022】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は静脈内注射、腫瘍内注射、またはこれらの組み合わせを使用する、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の投与を含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載する、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の投与は、静脈内注射を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の投与は、腫瘍内注射を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の投与は、腫瘍内注射、続いて静脈内注射を含む。

【0023】

いくつかの実施形態では、セッションは現行のものであるか、限定されたセッション数で繰り返される。いくつかの特定の実施形態では、限定されたセッション数は２、３、４、５、または６回である。いくつかの特定の実施形態では、限定されたセッション数で投与される、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の有効量は、現行のセッションで用いられる有効量よりも、１ｌｏｇオーダー大きい。いくつかの特定の実施形態では、静脈内注射は現行のものであり、まず短いセッションで、続いて長いセッションで投与される。いくつかの特定の実施形態では、静脈内注射は現行のものであり、まず、それぞれが６週間続くセッションで、続いて、それぞれが１２週間続くセッションで投与される。一実施形態では、静脈内注射は現行のものであり、まず、それぞれが６週間続く２セッションで、続いて、それぞれが１２週間続くセッションで投与される。いくつかの特定の実施形態では、静脈内注射は現行のものであり、まず、それぞれが８週間続くセッションで、続いて、それぞれが１６週間続くセッションで投与される。一実施形態では、静脈内注射は現行のものであり、まず、それぞれが８週間続く２セッションで、続いて、それぞれが１６週間続くセッションで投与される。

【0024】

いくつかの実施形態では、方法は、静脈内注射の前に腫瘍内注射をさらに含む。特定の実施形態では、腫瘍内注射は、静脈内注射の３週間前に投与される。さらに特定の実施形態では、腫瘍内注射はコンストラクト１と共に投与される。

【0025】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、有効量の免疫チェックポイント阻害剤を投与することもまた含むことができる。本明細書に記載の方法で使用するのに特に有用な、例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、抗ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）チェックポイント阻害剤が挙げられる。このような抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、またはセミプリマブなどの抗体であることができる。

【0026】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、本明細書に記載するコンストラクト１を含む、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を使用する。いくつかの実施形態では、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、ＭＰ株；ＷＥ株；アームストロング株；アームストロングクローン１３株；または、内因性ＬＣＭＶクローン１３糖タンパク質の代わりに、ＬＣＭＶ株ＷＥの糖タンパク質を発現するＬＣＭＶクローン１３株を含むＬＣＭＶに由来する。

【0027】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、本明細書に記載するコンストラクト２を含む、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を使用する。いくつかの実施形態では、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、株Ｍｕｎｃｈｉｑｕｅ ＣｏＡｎ４７６３単離物Ｐ１８、Ｐ２株、または、Ｔｒａｐｉｄｏ及び同僚により説明されている（Ｔｒａｐｉｄｏ ｅｔ ａｌ，１９７１，Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ，２０：６３１－６４１）いくつかの単離物のうちのいずれかを含むＰＩＣＶに由来する。

【0028】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者の治療前レベルと比較して、患者の血清内での、サイトカインのレベルまたはケモカインレベルの変化をもたらす。いくつかの特定の実施形態ではサイトカイン及びケモカインは、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、及びＴＮＦαを含む。

【0029】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者の治療前のレベルと比較して、患者の血清内での、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の増加をもたらす。いくつかの特定の実施形態ではＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞は、ＣＤ８、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及び／またはＣＤ１０７ａに対して陽性である。他の実施形態では、上述したＴ細胞は、予めインビトロ刺激及び／または増殖を行うことなく、検出される。さらに他の実施形態では、方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、腫瘍組織内への、Ｔ細胞のより多くの浸潤をもたらす。

【0030】

いくつかの実施形態では、方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、充実性腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）、及び／または、充実性腫瘍における免疫応答評価基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）を用いる、１つ以上の有効性エンドポイントの改善をもたらす。いくつかの特定の実施形態では、１つ以上の有効性エンドポイントの改善は、より高い割合の客観的な奏効率、より高い割合の疾患制御率、より高い割合の部分奏功、より長い無増悪生存期間、及び／または、より長い全体の生残を含む。

【0031】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）であり、上記コンストラクト１が、４サイクルは３週間毎の頻度で、続いて、６週間毎の頻度の現行サイクルで静脈内投与される、上記投与することと、患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0032】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0033】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0034】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0035】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0036】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0037】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0038】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0039】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0040】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0041】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0042】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0043】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0044】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約５×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0045】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約５×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0046】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約５×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0047】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約５×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0048】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0049】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約５×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0050】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）であり、コンストラクト１が、３サイクルは３週間毎の頻度で静脈内投与され、方法が３サイクル後に終了する、上記投与することを含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0051】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0052】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0053】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0054】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0055】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0056】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0057】

配列番号１または２のヌクレオチド配列を含む核酸を、本明細書において提供する。

【0058】

配列番号３、４、５、６、７、または８のヌクレオチド配列を含む核酸もまた、本明細書において提供する。

【0059】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸はＲＮＡである。

【0060】

配列番号１、２、３、４、５、６、７、または８のヌクレオチド配列を含む宿主細胞を、本明細書において提供する。

【0061】

配列番号３、４、及び５のヌクレオチド配列を含む３セグメントＬＣＭＶ粒子を、本明細書において提供する。

【0062】

配列番号６、７、及び８のヌクレオチド配列を含む３セグメントピチンデウイルス粒子もまた、本明細書において提供する。

【0063】

配列番号３、４、及び５のヌクレオチド配列を含む、３セグメントＬＣＭＶ粒子、または、配列番号６、７、及び８のヌクレオチド配列を含む３セグメントピチンデウイルス粒子、ならびに、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を、本明細書において提供する。

【0064】

いくつかの実施形態では、ジヌクレオチド最適化ＨＰＶ１６ Ｅ７Ｅ６ヌクレオチド配列を含む３セグメントアレナウイルス粒子は、少なくとも４、５、６、７、８，９、または１０世代を継代した後、ＨＰＶ抗原の安定した発現を有することができ、コードされたＨＰＶ融合タンパク質の一貫した発現を有することができる、または、コードされたＨＰＶ融合タンパク質に対して強力な免疫応答を誘発することができる。

【図面の簡単な説明】

【0065】

【図1】ＨＰＶ癌の負荷、及び、ＨＰＶと関連するがんを示す。

【0066】

【図2A】野生型アレナウイルス（例えば、ＬＣＭＶまたはＰＩＣＶ）、ＨＰＶ１６^＋ Ｅ７／Ｅ６の非発がん性融合タンパク質をコードする、アレナウイルスＬＣＭＶまたはＰＩＣＶに由来する、複製可能３セグメントアレナウイルス粒子、及び、３セグメントアレナウイルス粒子の複製減衰モードの概略図を示す。アレナウイルス（ＬＣＭＶ及びＰＩＣＶ）野生型粒子（左）、ならびにそのゲノム（右）を示す。アンチセンスＲＮＡゲノムは４種類のウイルス性タンパク質：ＧＰ（糖タンパク質）、ＮＰ（核タンパク質）、Ｌ（ＲＮＡ指向ＲＮＡポリメラーゼ）、及びＺ（ＲＩＮＧフィンガータンパク質Ｚ）をコードする。

【図2B】野生型アレナウイルス（例えば、ＬＣＭＶまたはＰＩＣＶ）、ＨＰＶ１６^＋ Ｅ７／Ｅ６の非発がん性融合タンパク質をコードする、アレナウイルスＬＣＭＶまたはＰＩＣＶに由来する、複製可能３セグメントアレナウイルス粒子、及び、３セグメントアレナウイルス粒子の複製減衰モードの概略図を示す。アスタリスク（＊）、及びＧＰまたはＮＰのいずれか、加えて、Ｌセグメントにより示される、５つのアミノ酸変異を有するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードして、Ｅ７及びＥ６の発がん能を妨げる、人工的に複製されたＳセグメントを含有する、組み換えられた３セグメントアレナウイルス粒子（コンストラクト１；ＬＣＭＶベースベクター、コンストラクト２：ＰＩＣＶベースベクター）を示す。

【図2C】野生型アレナウイルス（例えば、ＬＣＭＶまたはＰＩＣＶ）、ＨＰＶ１６^＋ Ｅ７／Ｅ６の非発がん性融合タンパク質をコードする、アレナウイルスＬＣＭＶまたはＰＩＣＶに由来する、複製可能３セグメントアレナウイルス粒子、及び、３セグメントアレナウイルス粒子の複製減衰モードの概略図を示す。それぞれ、野生型ＬＣＭＶ及びＰＩＣＶと比較して、３つのゲノムセグメントの不十分なパッケージングが、コンストラクト１及びコンストラクト２の減衰をもたらすことを示す。

【0067】

【図3A】マウスにおける、図２Ｂの、組み換えられたＬＣＭＶベースの３セグメントアレナウイルス粒子の、前臨床研究の結果を示す。このような粒子は、抗原特異的な様式で免疫系を刺激するために、樹状細胞、及び他の抗原提示細胞を標的化する。組み換えられたＬＣＭＶベースの３セグメントアレナウイルス粒子は、ＨＰＶ１６^＋腫瘍細胞に対して特異的に向けられた強力なＴ細胞応答を誘発する。静脈内（ＩＶ）投与により、粒子の用量を増加させて免疫化した、健常なマウスにおける血液ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＣＤ８（ＣＤ８^＋Ｂ２２０^－）Ｔ細胞の割合により図示される、組み換えられたＬＣＭＶベースの３セグメントアレナウイルス粒子（コンストラクト１）の免疫原性を示す。

【図3B】マウスにおける、図２Ｂの、組み換えられたＬＣＭＶベースの３セグメントアレナウイルス粒子の、前臨床研究の結果を示す。このような粒子は、抗原特異的な様式で免疫系を刺激するために、樹状細胞、及び他の抗原提示細胞を標的化する。組み換えられたＬＣＭＶベースの３セグメントアレナウイルス粒子は、ＨＰＶ１６^＋腫瘍細胞に対して特異的に向けられた強力なＴ細胞応答を誘発する。ＩＶ投与の後、用量を増加させた、組み換えられたＬＣＭＶベースの３セグメントアレナウイルス粒子で処理した、ＨＰＶ１６^＋ ＴＣ腫瘍を有するマウスにおける、腫瘍増殖の動態を示す。

【図3C】マウスにおける、図２Ｂの、組み換えられたＬＣＭＶベースの３セグメントアレナウイルス粒子の、前臨床研究の結果を示す。このような粒子は、抗原特異的な様式で免疫系を刺激するために、樹状細胞、及び他の抗原提示細胞を標的化する。組み換えられたＬＣＭＶベースの３セグメントアレナウイルス粒子は、ＨＰＶ１６^＋腫瘍細胞に対して特異的に向けられた強力なＴ細胞応答を誘発する。腫瘍内（ＩＴ）またはＩＶ投与後に、組み換えられたＬＣＭＶベースの３セグメントアレナウイルス粒子（コンストラクト１）で処理した、ＨＰＶ１６^＋ ＲＣ－１腫瘍を有するマウスの生残曲線を示す。

【0068】

【図4】用量漸増と、用量拡大戦略の両方を含む、治療研究設計を示す。コンストラクト１＝図２Ｂの、組み換えられたＬＣＭＶベースの３セグメントアレナウイルス粒子；ＲＰ２Ｄ＝推奨される第ＩＩ相用量；ＨＮＳＣＣ＝頭頸扁平上皮細胞癌；ＨＰＶ１６＝ヒトパピローマウイルス１６；ＩＶ＝静脈内；ＩＴ＝腫瘍内；ＲＣＶ ＦＦＵ＝複製可能ウイルスフォーカス形成単位；抗ＰＤ－１＝ＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤；

【0069】

【図5】フェーズ１の用量漸増研究のための治療設計を示す。

【0070】

【図6A】コンストラクト１での処理後の、異なる血清サイトカインまたはケモカインシグネチャーの結果を示す。８回の時点にわたる、１２名の患者に対する３０プレックスのサイトカイン及びケモカイン分析の結果を示す。４日目のデータは、１２名のうち１０名の患者から得られた。分析物（ｐｇ／ｍＬ）をｚスコアに変換した。階層クラスター化は訪問日に、各分析物レベルで実施した。

【図6B】コンストラクト１での処理後の、異なる血清サイトカインまたはケモカインシグネチャーの結果を示す。処理の４日後の、選択されたキーサイトカインの発現における、コンストラクト１での処理の効果を示す。１２名のうち９名の患者が、ベースライン、及び４日目の試料の両方を有した。

【0071】

【図7A】コンストラクト１またはコンストラクト２の単回投与後の、循環ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７特異的多機能性Ｔ細胞の結果を示す。単回ＩＶ用量のコンストラクト１またはコンストラクト２の投与後に、ベースラインから１５日目までの、スポット形成単位の変化における、直接的なＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ分析を示す。

【図7B】コンストラクト１またはコンストラクト２の単回投与後の、循環ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７特異的多機能性Ｔ細胞の結果を示す。単回ＩＶ用量のコンストラクト１またはコンストラクト２で処理した患者における、Ｅ６／Ｅ７特異的Ｔ細胞の増加を示す。

【図7C】コンストラクト１またはコンストラクト２の単回投与後の、循環ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７特異的多機能性Ｔ細胞の結果を示す。単回用量のコンストラクト１を受けた１名の患者のＣＤ８^＋ Ｔ細胞上でゲーティングされた後の、全末梢Ｔ細胞集団間におけるＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋の頻度、ならびに、ＩＦＮ－γ^＋、ＴＮＦ－α^＋、及びＣＤ１０７ａ^＋の頻度を示す。

【図7D】コンストラクト１またはコンストラクト２の単回投与後の、循環ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７特異的多機能性Ｔ細胞の結果を示す。単回用量のコンストラクト１を受けた別の１名の患者のＣＤ８^＋ Ｔ細胞上でゲーティングされた後の、全末梢Ｔ細胞集団間におけるＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋の頻度、ならびに、ＩＦＮ－γ^＋、ＴＮＦ－α^＋、及びＣＤ１０７ａ^＋の頻度を示す。

【図7E】コンストラクト１またはコンストラクト２の単回投与後の、循環ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７特異的多機能性Ｔ細胞の結果を示す。単回用量のコンストラクト２を受けた１名の患者のＣＤ８^＋ Ｔ細胞上でゲーティングされた後の、全末梢Ｔ細胞集団間におけるＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋の頻度、ならびに、ＩＦＮ－γ^＋、ＴＮＦ－α^＋、及びＣＤ１０７ａ^＋の頻度を示す。

【図7F】コンストラクト１またはコンストラクト２の単回投与後の、循環ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７特異的多機能性Ｔ細胞の結果を示す。３名の患者それぞれの円グラフを示し、コンストラクト１またはコンストラクト２の単回投与後の、３つの機能的応答マーカー（即ち、ＣＤ１０７ａ、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α）の組み合わせにおける、ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の相対頻度を表す。

【0072】

【図8】図２Ｂに従った、コンストラクト１のＥ７Ｅ６－ＮＰ－Ｓセグメント１（２６４８ｂｐ）を示す。以下の要素は、開示された配列の５’から３’に向けて示されている。ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）（１～７８ｂｐ）はハイライトなしで示される；ヒトパピローマウイルス１６型（ＨＰＶ１６）タンパク質Ｅ６及びＥ７で構成される合成融合タンパク質（７９～８４６ｂｐ）は緑で示される；ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）（８４７～９１０ｂｐ）は青で示される；ＬＣＭＶ ｃｌ１３に基づく核タンパク質（ＮＰ）（９１１～２５８７ｂｐ）は灰色で示される；ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）（２５８８～２６４８ｂｐ）はハイライトなしで示される。

【0073】

【図9】図２Ｂに従った、コンストラクト１のＥ７Ｅ６－ＧＰ－Ｓセグメント２（２６４８ｂｐ）を示す。以下の要素は、開示された配列の５’から３’に向けて示されている。ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）（１～７８ｂｐ）はハイライトなしで示される；ヒトパピローマウイルス１６型（ＨＰＶ１６）タンパク質Ｅ６及びＥ７で構成される合成融合タンパク質（７９～８４６ｂｐ）は緑で示される；ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）（８４７～９１０ｂｐ）は青で示される；ＬＣＭＶ ＷＥに基づく糖タンパク質（ＧＰ）（９１１～２４０７ｂｐ）は黄色で示される；ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）（２４０８～２４６８ｂｐ）はハイライトなしで示される。

【0074】

【図10】図２Ｂに従った、コンストラクト１のＬセグメント（７２２９ｂｐ）を示す。以下の要素は、開示された配列の５’から３’に向けて示されている。ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｌセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）（１～８９ｂｐ）はハイライトなしで示される；ＬＣＭＶ ｃｌ１３に基づくマトリックスタンパク質（Ｚ）（９０～３６２ｂｐ）は緑で示される；ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｌセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）（３６３～５６４ｂｐ）は青で示される；ＬＣＭＶ ｃｌ１３に基づくリボ核酸依存性リボ核酸ポリメラーゼタンパク質（Ｌ）（５６５～７１９７ｂｐ）は灰色で示される；ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｌセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）（７１９８～７２２９ｂｐ）はハイライトなしで示される；

【0075】

【図11】図２Ｂに従った、コンストラクト２のＥ７Ｅ６－ＮＰ－Ｓセグメント１（２６６３ｂｐ）を示す。以下の要素は、開示された配列の５’から３’に向けて示されている。ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）（１～５２ｐ）はハイライトなしで示される；ヒトパピローマウイルス１６型（ＨＰＶ１６）タンパク質Ｅ６及びＥ７で構成される合成融合タンパク質（５３～８２０ｂｐ）は緑で示される；ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）（８２１～８９４ｂｐ）は青で示される；ＰＩＣＶ ｐ１８に基づく核タンパク質（ＮＰ）（８９５～２５８０ｂｐ）は灰色で示される；ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）（２５８１～２６６３ｂｐ）はハイライトなしで示される。

【0076】

【図12】図２Ｂに従った、コンストラクト２のＥ７Ｅ６－ＧＰ－Ｓセグメント２（２５０４ｂｐ）を示す。以下の要素は、開示された配列の５’から３’に向けて示されている。ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）（１～５２ｐ）はハイライトなしで示される；ヒトパピローマウイルス１６型（ＨＰＶ１６）タンパク質Ｅ６及びＥ７で構成される合成融合タンパク質（５３～８２０ｂｐ）は緑で示される；ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）（８２１～８９４ｂｐ）は青で示される；ＰＩＣＶ ｐ１８に基づく糖タンパク質（ＧＰ）（８９５～２４２１ｂｐ）は黄色で示す；ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）（２４２２～２５０４ｂｐ）はハイライトなしで示される。

【0077】

【図13】図２Ｂに従った、コンストラクト２のＬセグメント（７０５８ｂｐ）を示す。以下の要素は、開示された配列の５’から３’に向けて示されている。ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｌセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）（１～８５ｂｐ）はハイライトなしで示す；ＰＩＣＶ ｐ１８に基づくマトリックスタンパク質（Ｚ）（８６～３７３ｂｐ）は赤で示す；ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｌセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）（３７４～４４３ｂｐ）は青で示す；ＰＩＣＶ ｐ１８に基づくリボ核酸依存性リボ核酸ポリメラーゼタンパク質（Ｌ）（４４４～７０２８ｂｐ）は灰色で示される；ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｌセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）（７０２９～７０５８ｂｐ）はハイライトなしで示す。

【0078】

【図14A】ＨＰＶ１６^＋腫瘍を有するマウスモデルにおける、コンストラクト１及び／またはコンストラクト２の有効性を示す。コンストラクト１の用量と、ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＣＤ８^＋Ｂ２２０^－Ｔ細胞の割合との相関を示す。ＣＤ８＝分化８のクラスター、Ｅ７＝ヒトパピローマウイルス１６由来の抗原性Ｅ７融合タンパク質。

【図14B】ＨＰＶ１６^＋腫瘍を有するマウスモデルにおける、コンストラクト１及び／またはコンストラクト２の有効性を示す。異なる用量のコンストラクト１による処理に対応する、経時的な腫瘍体積の変化を示す。ＦＦＵ＝フォーカス形成単位、ＨＰＶ＝ヒトパピローマウイルス、ＲＣＶ＝複製可能ウイルス。

【図14C】ＨＰＶ１６^＋腫瘍を有するマウスモデルにおける、コンストラクト１及び／またはコンストラクト２の有効性を示す。緩衝液のみで処理した対照動物と比較しての、コンストラクト１による処理、または、異なる投与経路（ｉ．ｖ．＝静脈内；ｉ．ｔ．腫瘍内）を経由する、無関係な対照抗原ＧＦＰを発現するアレナウイルスベクターによる処理に対応する、経時的な腫瘍体積の変化を示す。Ｅ７Ｅ６＝ヒトパピローマウイルス１６に由来する抗原性Ｅ７及びＥ６融合タンパク質、Ｇ＝群、ＧＦＰ＝緑色蛍光タンパク質、ｉ．ｔ．（ＩＴ）＝腫瘍内、ｉ．ｖ．（ＩＶ）＝静脈内、ｎ＝各実験群におけるマウスの数。

【図14D】ＨＰＶ１６^＋腫瘍を有するマウスモデルにおける、コンストラクト１及び／またはコンストラクト２の有効性を示す。２１日間隔で、１０^５ＲＣＶ ＦＦＵの各ベクターをｉ．ｖ．投与した後の、コンストラクト１及びコンストラクト２の示された投与レジメンに対応する、経時的な、マウスでのＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＣＤ８^＋Ｂ２２０^－Ｔ細胞の割合の変化を示す。ＣＤ＝分化のクラスター、Ｅ７Ｅ６＝ヒトパピローマウイルス１６に由来する抗原性Ｅ７及びＥ６融合タンパク質、Ｇ＝群、破線は、ベクター投与の配列を示す（プライム／１回目の用量、ブースト／２回目の用量）。

【図14E】ＨＰＶ１６^＋腫瘍を有するマウスモデルにおける、コンストラクト１及び／またはコンストラクト２の有効性を示す。４、７、または１０日間隔で、１０^５ＲＣＶ ＦＦＵの各ベクターをｉ．ｖ．投与した後の、コンストラクト１及びコンストラクト２の示された投与レジメンに対応する、経時的な腫瘍体積の変化を示す。Ｇ＝群、ｄ＝プライム投与とブースト投与の間の日数、破線は、ベクター投与の配列を示す（プライム／１回目の用量、ブースト／２回目の用量）。

【0079】

【図15】第Ｉ相の用量漸増及び第ＩＩ相の用量拡大を含む、実施例ＩＩＩの実験設計を示す。Ａｌｔ．＝交代、Ａｐｐｒｏｘ＝およそ、ＨＮＳＣＣ＝頭頸扁平上皮細胞癌、ＨＰＶ＝ヒトパピローマウイルス、ＩＴ＝腫瘍内、ＩＶ＝静脈内、ｎ＝患者の数、ＲＰ２Ｄ＝推奨される第ＩＩ相用量。

【0080】

【図16】実施例ＩＩＩにおけるバックフィルコホート用の実験設計を示す。

【0081】

【図17A】コンストラクト１の単剤療法と、コンストラクト２／コンストラクト１の交代２ベクター治療法の、有効性データを示す。個別の患者における治療期間を示す。治療時間＝最後の治療／死亡時－最初の投与日＋１；研究員により、ペムブロリズマブを、３名の患者におけるアレナウイルスベクター治療法に加えた。データ移動日時点で、ＴＬＦへのデータ入力が行われていない／正しくないために、数名の患者に対してはＥＤＣデータを使用した。ＤＬ、用量レベル；ＥＤＣ、電子データキャプチャ；ＨＮＳＣＣ、頭頸扁平上皮細胞癌；ＩＴ、腫瘍内；ＩＶ、静脈内；ＰＲ、部分奏功；Ｑ２Ｗ、２週間毎；Ｑ３Ｗ、３週間毎。

【図17B】コンストラクト１の単剤療法と、コンストラクト２／コンストラクト１の交代２ベクター治療法の、有効性データを示す。各個別の患者の、ベースラインからの、標的病変（ＴＬ）の直径合計（ＳＯＤ）の変化を示す。縞状の領域は、ペムブロリズマブを治療法に加えた後、標的病変変化の減少を示す。評価不可能な走査による進行割合、人工的に２％が割り当てられる。非中咽頭患者：Ａ、肛門；Ｃ、子宮頸；ＮＰ、鼻咽頭；Ｖ、膣。ＩＴ、腫瘍内、ＩＶ、静脈内；ＳＯＤ、直径合計；ＴＬ、標的病変。Ｑ２Ｗ＝２週間毎；Ｑ３Ｗ＝３週間毎；ＤＬ＝用量レベル。

【図17C】コンストラクト１の単剤療法と、コンストラクト２／コンストラクト１の交代２ベクター治療法の、有効性データを示す。投与スケジュール／経路による、ベースラインからの、最良の標的病変（ＴＬ）の直径合計（ＳＯＤ）を示す。Ｑ２Ｗ＝２週間毎；Ｑ３Ｗ＝３週間毎；ＤＬ＝用量レベル；ＩＶ＝静脈内；ＩＴ＝腫瘍内。

【図17D】コンストラクト１の単剤療法と、コンストラクト２／コンストラクト１の交代２ベクター治療法の、有効性データを示す。スパイダープロットにおける、各個別の患者の、ベースラインからの、標的病変（ＴＬ）の直径合計（ＳＯＤ）の変化を示す。白色の正方形は、ペムブロリズマブを加えた後に行われる走査を表す。評価不可能な有効性走査を有する１名の患者は、スパイダープロットには示さない。６０％の減少を有する標的病変は、＜１０ｍｍを測定したリンパ節であり、それ故に、完全奏功は確認されなかった。データ移動日時点で、ＴＬＦへのデータ入力が行われていない／正しくないために、数名の患者に対してはＥＤＣデータを使用した。ＥＤＣ、電子データキャプチャ；ＨＮＳＣＣ、頭頸扁平上皮細胞癌；ＳＯＤ、直径合計；ＴＬ、標的病変、ｕＣＲ、未確認の完全奏功。

【図17E】コンストラクト１の単剤療法と、コンストラクト２／コンストラクト１の交代２ベクター治療法の、有効性データを示す。治療した患者における無増悪生存期間（ＰＦＳ）を示す。ペムブロリズマブを受けた患者に対しては、ＰＦＳは、ＲＥＣＩＳＴ進行前にペムブロリズマブが加えられた後の時間も含む。

【図17F】コンストラクト１の単剤療法と、コンストラクト２／コンストラクト１の交代２ベクター治療法の、有効性データを示す。標的病変は、リンパ節病変のみを有する患者、加えて、非リンパ節病変のみを有する、または、リンパ節病変と非リンパ節病変の両方を有する患者における、ベースラインからの変化を示す。

【図17G】コンストラクト１の単剤療法と、コンストラクト２／コンストラクト１の交代２ベクター治療法の、有効性データを示す。３週間毎にコンストラクト１用量レベル２のＩＶ投与、及び、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法のＩＶ投与を受ける患者における、ＲＥＣＩＳＴが評価可能な病変に対する直径変化の合計を示す。

【図17H】コンストラクト１の単剤療法と、コンストラクト２／コンストラクト１の交代２ベクター治療法の、有効性データを示す。直径変化の最良の合計と、治療時間との相関を示す。

【図17I】コンストラクト１の単剤療法と、コンストラクト２／コンストラクト１の交代２ベクター治療法の、有効性データを示す。治療中の、ベースライン、及び後の時点における有効性走査を示す。

【0082】

【図18A】９回の時点にわたる、コンストラクト１での治療後の、３０プレックスのサイトカイン及びケモカイン分析の結果を示す。４日目のデータは、１２名のうち１０名の患者から得られた。分析物（ｐｇ／ｍＬ）をｚスコアに変換した。階層クラスター化は訪問日に、各分析物レベルで実施した。

【図18B】治療の４日後での選択されたキーサイトカインの発現における、コンストラクト１の単剤療法（ＤＬ１（５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ）もしくはＤＬ２（５×１０^６ＲＣＶ））、または、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法（コンストラクト２：１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、コンストラクト１：５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）による治療の効果を示す。

【0083】

【図19A】コンストラクト１の単剤療法、及び、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法により誘発される、強力な免疫原性を示す。３週間毎のＤＬ２（５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）における、コンストラクト１をＩＶで受けた６名の患者のＥＬＩＳｐｏｔの結果を示す。患者全員に由来する解凍した末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を、直接エキソビボＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ測定のために、重なり合うＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ペプチドで２４時間（±２時間）で刺激した。スポット形成単位の数／１×１０^６ ＰＢＭＣを示す。

【図19B】コンストラクト１の単剤療法、及び、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法により誘発される、強力な免疫原性を示す。３週間毎のＤＬ２（５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）における、コンストラクト１をＩＶで受けた６名の患者のＩＣＳの結果を示す。ＰＢＭＣを、重なり合うＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ペプチドで６時間刺激し、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、及びＣＤ１０７ａに対するその後の免疫染色のために洗浄して、多染性フローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ８ Ｔ細胞間でのＩＦＮ－γ^＋細胞の割合を示す。

【図19C】コンストラクト１の単剤療法、及び、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法により誘発される、強力な免疫原性を示す。３週間毎に、ＤＬ１（１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）でコンストラクト２を、及び、ＤＬ２（５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）でコンストラクト１をＩＶで受けた３名の患者の、ＥＬＩＳｐｏｔ結果を示す。患者全員に由来する解凍した末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を、直接エキソビボＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ測定のために、重なり合うＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ペプチドで２４時間（±２時間）で刺激した。スポット形成単位の数／１×１０^６ ＰＢＭＣを示す。定量上限（ＵＬＯＱ）は、水平の点線で表される。

【図19D】コンストラクト１の単剤療法、及び、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法により誘発される、強力な免疫原性を示す。３週間毎に、ＤＬ１（１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）でコンストラクト２を、及び、ＤＬ２（５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）でコンストラクト１をＩＶで受けた３名の患者の、ＩＣＳ結果を示す。ＰＢＭＣを、重なり合うＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ペプチドで６時間刺激し、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、及びＣＤ１０７ａに対するその後の免疫染色のために洗浄して、多染性フローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ８^＋ Ｔ細胞間でのＩＦＮ－γ^＋細胞の割合を示す。

【図19E】コンストラクト１の単剤療法、及び、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法により誘発される、強力な免疫原性を示す。コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を受ける１名の患者における、経時的なＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋ Ｔ細胞のフローサイトメトリー結果を示す。ＰＢＭＣを、Ｅ６／Ｅ７ペプチドで６時間刺激し、その後の免疫染色のために洗浄して、多染性フローサイトメトリーにより分析した。細胞をＣＤ３＋細胞上でゲーティングし、ＣＤ８ゲートを上回る数は、ＣＤ３＋Ｔ細胞内でのＣＤ８＋細胞の割合を示す。

【図19F】コンストラクト１の単剤療法、及び、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法により誘発される、強力な免疫原性を示す。コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を受ける１名の患者における、経時的な、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、またはＣＤ１０７ａを発現するＴ細胞のフローサイトメトリー結果を示す。ＰＢＭＣを、重なり合うＥ６／Ｅ７ペプチドプールで６時間刺激し、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、及びＣＤ１０７ａに対するその後の免疫染色のために洗浄して、多染性フローサイトメトリーにより分析した。細胞をＣＤ３＋ ＣＤ８＋ Ｔ細胞上でゲーティングした。

【図19G】個別の患者に対する、ベースラインから最大奏功（Ｍａｘ）までの、ＰＢＭＣの変化を示す。Ｍａｘとは、各個別の患者に対する、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔにより測定された最大のＥ６／Ｅ７特異的Ｔ細胞応答を意味する。３回以上のアレナウイルスベクター投与後の、ＷＢＣ １０^３／μＬ血液としての、ベースラインからＭａｘへの、白血球（ＷＢＣ）数の変化を示す（左パネル）。右パネルは、血液試料の、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、ＣＤ３、ＣＤ８、及びＣＤ４染色後での、フローサイトメトリー分析から計算した、ベースラインからＭａｘまでの、ＣＤ８／ＣＤ４比率の変化を示す。

【図19H】個別の患者に対する、ベースラインから最大奏功（Ｍａｘ）までの、ＰＢＭＣの変化を示す。Ｍａｘとは、各個別の患者に対する、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔにより測定された最大のＥ６／Ｅ７特異的Ｔ細胞応答を意味する。スポット形成単位／１０^６ ＰＢＭＣとしての、ベースライン及びＭａｘに対するＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ結果を示す。

【図19I】個別の患者に対する、ベースラインから最大奏功（Ｍａｘ）までの、ＰＢＭＣの変化を示す。Ｍａｘとは、各個別の患者に対する、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔにより測定された最大のＥ６／Ｅ７特異的Ｔ細胞応答を意味する。細胞内サイトカイン染色後のＰＢＭＣ試料からの、例示的な疑似カラープロットである。左のプロットはベースラインのものであり、右のプロットはＭａｘのものである。上列は、コンストラクト１ ＤＬ２（５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）ＩＶ－ＩＶで治療した患者由来のものであり、下列は、コンストラクト２ ＤＬ１（１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）及びコンストラクト１ ＤＬ２（５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）交代２ベクター治療法で治療した患者由来のものである。

【発明を実施するための形態】

【0084】

本明細書で使用する場合、用語「サイクル」とは、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の１つの種でがんを治療する方法で使用する場合には、投与日、及び、次の投与の前の日を意味することが意図される。

【0085】

本明細書で使用する場合、用語「セッション」とは、交代２ベクター治療アプローチにおいて、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の２つの種でがんを治療する方法で使用する場合に、第１の種の投与日、第２の種の投与の前の日、第２の種の投与、及び、第１の種の別の投与の前の日を意味することが意図される。

【0086】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法を本明細書で提供する。このような方法は、患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含む。粒子の有効量は、約５×１０^５、約５×１０^６、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵ、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ、または、約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであることができる。したがって、いくつかの実施形態では、がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、上記患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、上記有効量は約５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵである、上記方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、上記患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、上記有効量は約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵである、上記方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、上記患者に、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、上記有効量は約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、上記方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、上記患者に、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、上記有効量は約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、上記患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、上記有効量は約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記方法を本明細書で提供する。

【0087】

本明細書に記載の方法で使用するための組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の生成方法は、当該技術分野において周知である。例示的な方法は、２０１７年１１月９日に公開された米国特許出願公報第ＵＳ－２０１７－０３１９６７３－Ａ１号、２０１９年５月９日に公開された同第ＵＳ－２０１９－０１３５８７５－Ａ１号、及び、２０１８年６月２８日に公開された同第ＵＳ－２０１８－０１７９２５７－Ａ１号に見出すことができ、これらはそれぞれが、参照により本明細書に組み込まれている。これらの公報の観点から、本明細書に記載する、複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、そのような組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、複製可能３セグメントアレナウイルス粒子であって、ＮＰタンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が一方のＳセグメントに存在し、ＧＰタンパク質をコードするＯＲＦが他方のＳセグメントに存在する、上記複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を含むことを、当業者は理解するであろう。これらの公報では、本明細書に記載の方法で使用可能な組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を有する医薬組成物の説明もまた提供される。

【0088】

いくつかの実施形態では、がんを治療するための、本明細書で提供する方法は、由来に関係なく、あらゆるＨＰＶ１６^＋癌を治療することを含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、頭頸扁平上皮細胞癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、肛門癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、子宮頸癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、膣癌と診断されている。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌は、外陰癌と診断されている。したがって、いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌（例えば、頭頸扁平上皮細胞癌、子宮頸癌、肛門癌、外陰、または膣癌）の治療を必要とする患者において、上記患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することによる、上記ＨＰＶ１６^＋癌の治療方法であって、上記有効量が約５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵ、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ、または約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記方法を、本明細書で提供する。

【0089】

ＨＰＶ^＋癌を有する患者は、２つ以上の全身治療法を受けた患者も含んで、通常、標準的なケア治療法における、腫瘍の進行または再発（例えば、放射線、白金ベースの治療法、及び／または、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１治療法の失敗）に直面する。一方で、患者の中には、標準的なケア治療法で禁忌を示す人もいる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、方法の前の少なくとも１つの標準的なケア治療法の際に、腫瘍の進行または再発を有する患者を治療することを含む。いくつかの特定の実施形態では、本明細書で提供する方法を使用して、放射線が失敗した患者を治療する。いくつかの特定の実施形態では、本明細書で提供する方法を使用して、白金ベース治療に失敗した患者を治療する。いくつかの特定の実施形態では、本明細書で提供する方法を使用して、抗ＰＤ－１治療法が失敗した患者を治療する。いくつかの特定の実施形態では、本明細書で提供する方法を使用して、抗ＰＤ－Ｌ１治療法が失敗した患者を治療する。特定の一実施形態では、本明細書で提供する方法を使用して、ペムブロリズマブ単剤療法に失敗した患者を治療する。特定の一実施形態では、本明細書で提供する方法を使用して、ニボルマブ単剤療法に失敗した患者を治療する。特定の一実施形態では、本明細書で提供する方法を使用して、ピディリズマブ単剤療法に失敗した患者を治療する。特定の一実施形態では、本明細書で提供する方法を使用して、セミプリマブ単剤療法に失敗した患者を治療する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法を使用して、上述した治療法の２つ以上の組み合わせに失敗した患者を治療する。

【0090】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、病変がリンパ節に関与する、またはしない患者を治療することを含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、リンパ節内の標的病変のみを有する患者を治療することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、非リンパ節内の標的病変のみを有する患者を治療することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、リンパ節及び非リンパ節内の両方における標的病変を有する患者を治療することを含む。

【0091】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は静脈内注射、腫瘍内注射、またはこれらの組み合わせを使用する、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の投与を含む。したがって、いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌（例えば、頭頸扁平上皮細胞癌、子宮頸癌、肛門癌、外陰、または膣癌）の治療を必要とする患者において、上記患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を静脈内注射することによる、上記ＨＰＶ１６^＋癌の治療方法であって、上記有効量が約５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^７、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ、または約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記方法を、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌（例えば、頭頸扁平上皮細胞癌、子宮頸癌、肛門癌、外陰、または膣癌）の治療を必要とする患者において、上記患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を腫瘍内注射することによる、上記ＨＰＶ１６^＋癌の治療方法であって、上記有効量が約５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^７、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記方法を、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌（例えば、頭頸扁平上皮細胞癌、子宮頸癌、肛門癌、外陰、または膣癌）の治療を必要とする患者において、上記患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を腫瘍内注射し、続いて、上記患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を静脈内注射することによる、上記ＨＰＶ１６^＋癌の治療方法であって、上記腫瘍内注射の有効量が約５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^７、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ、または約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、上記静脈内注射の有効量が約５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^７、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ、または約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記方法を、本明細書で提供する。

【0092】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、一定の頻度（例えば、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、または８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、または１３週間毎、１４週間毎など）で、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子（例えば、コンストラクト１）を静脈内注射で投与することを含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を２週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を３週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を４週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を５週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を６週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を７週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を８週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を９週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を１０週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を１１週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を１２週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、１３週間毎、１４週間毎、１５週間毎、１６週間毎、１７週間毎、１８週間毎、１９週間毎、２０週間毎、２１週間毎、２２週間毎、２３週間毎、２４週間毎、２５週間毎、または２６週間毎の頻度で、有効量のコンストラクト１を静脈内注射で投与することを含む。好ましい実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト１を３週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。

【0093】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、一定の頻度（例えば、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、または８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、または１３週間毎、１４週間毎など）で、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子（例えば、コンストラクト２）を静脈内注射で投与することを含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を２週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を３週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を４週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を５週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を６週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を７週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を８週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を９週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を１０週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を１１週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を１２週間毎の頻度で、静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、１３週間毎、１４週間毎、１５週間毎、１６週間毎、１７週間毎、１８週間毎、１９週間毎、２０週間毎、２１週間毎、２２週間毎、２３週間毎、２４週間毎、２５週間毎、または２６週間毎の頻度で、有効量のコンストラクト２を静脈内注射で投与することを含む。

【0094】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行の治療を含む。他の実施形態では、本明細書で提供する方法は、限られた回数投与される治療を含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、一定の頻度で、かつ現行のものであり、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子（例えば、コンストラクト１またはコンストラクト２）を静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、限られた回数の間に一定の頻度で、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子（例えば、コンストラクト１またはコンストラクト２）を静脈内注射で投与することを含む。

【0095】

具体的には、限られたサイクル数投与されるのみの方法に対しては、適切なサイクル数、適切な用量、及び投与頻度などのいくつかの因子を最適化させて、現行のがんで投与される方法と同程度の治療効果を実現させる必要がある。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、２サイクルのみを２週間毎、２サイクルのみを３週間毎、２サイクルのみを４週間毎、２サイクルのみを５週間毎、２サイクルのみを６週間毎、２サイクルのみを７週間毎、２サイクルのみを８週間毎、２サイクルのみを９週間毎、２サイクルのみを１０週間毎、２サイクルのみを１１週間毎、２サイクルのみを１２週間毎で、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子（例えば、コンストラクト１またはコンストラクト２）を静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、３サイクルのみを２週間毎、３サイクルのみを３週間毎、３サイクルのみを４週間毎、３サイクルのみを５週間毎、３サイクルのみを６週間毎、３サイクルのみを７週間毎、３サイクルのみを８週間毎、３サイクルのみを９週間毎、３サイクルのみを１０週間毎、３サイクルのみを１１週間毎、３サイクルのみを１２週間毎で、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子（例えば、コンストラクト１またはコンストラクト２）を静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、４サイクルのみを２週間毎、４サイクルのみを３週間毎、４サイクルのみを４週間毎、４サイクルのみを５週間毎、４サイクルのみを６週間毎、４サイクルのみを７週間毎、４サイクルのみを８週間毎、４サイクルのみを９週間毎、４サイクルのみを１０週間毎、４サイクルのみを１１週間毎、４サイクルのみを１２週間毎で、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子（例えば、コンストラクト１またはコンストラクト２）を静脈内注射で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、５サイクルのみを２週間毎、５サイクルのみを３週間毎、５サイクルのみを４週間毎、５サイクルのみを５週間毎、５サイクルのみを６週間毎、５サイクルのみを７週間毎、５サイクルのみを８週間毎、５サイクルのみを９週間毎、５サイクルのみを１０週間毎、５サイクルのみを１１週間毎、５サイクルのみを１２週間毎で、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子（例えば、コンストラクト１またはコンストラクト２）を静脈内注射で投与することを含む。さらに、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内注射で限られたサイクル数投与することを含み、上記有効量は、５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵであることができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト１を静脈内注射で、同じパラグラフで上述したように、限られたサイクル数投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト１を静脈内注射で、同じパラグラフで上述したように、限られたサイクル数投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト１を静脈内注射で、同じパラグラフで上述したように、限られたサイクル数投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト１を静脈内注射で、同じパラグラフで上述したように、限られたサイクル数投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト１を静脈内注射で、同じパラグラフで上述したように、限られたサイクル数投与することを含む。さらに、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内注射で限られたサイクル数投与することを含み、上記有効量は、１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、または１×１０^１０ＲＣＶ ＦＦＵであることができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、１×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト２を静脈内注射で、同じパラグラフで上述したように、限られたサイクル数投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト２を静脈内注射で、同じパラグラフで上述したように、限られたサイクル数投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト２を静脈内注射で、同じパラグラフで上述したように、限られたサイクル数投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、１×１０^１０ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト２を静脈内注射で、同じパラグラフで上述したように、限られたサイクル数投与することを含む。

【0096】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、有効量の免疫チェックポイント阻害剤を投与することもまた含むことができる。本明細書に記載の方法で使用するのに特に有用な、例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、抗ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）チェックポイント阻害剤が挙げられる。このような抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、またはセミプリマブなどの抗体であることができる。したがって、いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６^＋癌（例えば、頭頸扁平上皮細胞癌、子宮頸癌、肛門癌、外陰、または膣癌）の治療を必要とする患者において、上記患者に、有効量の免疫チェックポイント阻害剤、及び、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することによる、上記ＨＰＶ１６^＋癌の治療方法であって、上記粒子の上記有効量が約５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵ、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ、または約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、上記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤（例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、またはセミプリマブ）である、上記方法を、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤はニボルマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤はペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤はピディリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤はセミプリマブである。

【0097】

具体的には、現行のがんで投与される方法に関しては、高頻度で開始し、その後頻度が下がる、適切な投与頻度、及び、最初に頻度が高い、適切なサイクル数（各投与は「サイクル」と定義される）などのいくつかの因子が、最適化される必要がある。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを有する、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子（例えば、コンストラクト１またはコンストラクト２）を静脈内注射で、高頻度、その後低頻度で投与することを含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１（例えば、５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２サイクルは２週間毎の頻度で、続いて、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、または１２週間毎の頻度で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１（例えば、５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２サイクルは３週間毎の頻度で、続いて、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、または１３週間毎の頻度で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１（例えば、５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２サイクルは４週間毎の頻度で、続いて、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、１３週間毎、または１４週間毎の頻度で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１（例えば、５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２サイクルは５週間毎の頻度で、続いて、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、１３週間毎、１４週間毎、または１５週間毎の頻度で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１（例えば、５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２サイクルは６週間毎の頻度で、続いて、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、１３週間毎、１４週間毎、１５週間毎、または１６週間毎の頻度で投与することを含む。いくつかの好ましい実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１（例えば、５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、４サイクルは３週間毎の頻度で、続いて、６週間毎の頻度で投与することを含む。他の好ましい実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト１（例えば、５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、４サイクルは４週間毎の頻度で、続いて、８週間毎の頻度で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２（例えば、１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２サイクルは２週間毎の頻度で、続いて、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、または１２週間毎の頻度で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２（例えば、１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２サイクルは３週間毎の頻度で、続いて、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、または１３週間毎の頻度で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２（例えば、１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２サイクルは４週間毎の頻度で、続いて、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、１３週間毎、または１４週間毎の頻度で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２（例えば、１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２サイクルは５週間毎の頻度で、続いて、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、１３週間毎、１４週間毎、または１５週間毎の頻度で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者に、有効量のコンストラクト２（例えば、１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵ）を静脈内注射で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２サイクルは６週間毎の頻度で、続いて、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、１３週間毎、１４週間毎、１５週間毎、または１６週間毎の頻度で投与することを含む。

【0098】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、本明細書（図２Ｂ、ならびに実施例Ｉ及びＩＩ）に記載するコンストラクト１（ＬＣＭＶベース）のアレナウイルス粒子を含む。さらに、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来する。具体的なＬＣＭＶの株としては、ＭＰ株；ＷＥ株；アームストロング株；アームストロングクローン１３株；または、内因性ＬＣＭＶクローン１３糖タンパク質の代わりに、ＬＣＭＶ株ＷＥの糖タンパク質を発現するＬＣＭＶクローン１３株が挙げられる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶ ＭＰ株に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶ ＷＥ株に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶアームストロング株に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶアームストロングクローン１３株に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、内因性ＬＣＭＶクローン１３糖タンパク質の代わりに、ＬＣＭＶ株ＷＥの糖タンパク質を発現するＬＣＭＶクローン１３株に由来する。

【0099】

他の実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、本明細書（図２Ｂ及び実施例ＩＩ）に記載するコンストラクト２（ＰＩＣＶベース）に由来する。具体的なＰＩＣＶの株としては、株Ｍｕｎｃｈｉｑｕｅ ＣｏＡｎ４７６３単離物Ｐ１８、Ｐ２株、または、Ｔｒａｐｉｄｏ及び同僚により説明されている（Ｔｒａｐｉｄｏ ｅｔ ａｌ，１９７１，Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ，２０：６３１－６４１）いくつかの単離物のうちのいずれかが挙げられる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、株Ｍｕｎｃｈｉｑｕｅ ＣｏＡｎ４７６３単離物Ｐ１８に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、Ｐ２株に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子は、Ｔｒａｐｉｄｏ及び同僚により説明されている（Ｔｒａｐｉｄｏ ｅｔ ａｌ，１９７１，Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ，２０：６３１－６４１）いくつかの単離物のうちのいずれかに由来する。

【0100】

特定のサイトカイン及びケモカインは、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与した後で測定される。測定可能なサイトカイン及びケモカインとしては、プロ炎症性及び抗炎症性サイトカイン及びケモカインが挙げられる。

【0101】

したがって、がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、上記患者に、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、上記有効量が約５×１０^５、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵ、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ、または約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、上記有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することが、上記患者における治療前レベルと比較して、上記患者の血清中でのサイトカインまたはケモカインのレベルの変化（即ち、増加または減少）をもたらす、上記方法をさらに本明細書で提供する。

【0102】

いくつかの特定の実施形態では、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインの変化（即ち、サイトカイン及びケモカインの増加または減少）としては、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２２、ＩＬ－３７、ＩＬ－３８、ＴＧＦ－β、ＩＦＮ－α、ＩＮＦ－β、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）－１α、ＭＩＰ－１β、単球化学遊走因子タンパク質（ＭＣＰ）－１、ＭＣＰ－４、エオタキシン、エオタキシン－３、胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ）、マクロファージ由来のケモカイン（ＭＤＣ）、及び、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0103】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインは、プロ炎症活性、及び／または抗炎症活性を有する。いくつかの実施形態では、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することは、患者の治療前レベルと比較して、患者の血清中での、サイトカインまたはケモカイン（例えば、プロ炎症活性、及び／または抗炎症活性を有する）のレベルの、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、２０倍、２１倍、２２倍、２３倍、２４倍、２５倍、２６倍、２７倍、２８倍、２９倍、または３０倍の変化（例えば、増加または減少）をもたらす。他の実施形態では、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することは、患者の治療前レベルと比較して、患者の血清中での、サイトカインまたはケモカイン（例えば、プロ炎症活性、及び／または抗炎症活性を有する）のレベルの、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、１８０倍、１９０倍、２００倍の変化（例えば、増加または減少）をもたらす。他の実施形態では、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することは、患者の治療前レベルと比較して、患者の血清中での、サイトカインまたはケモカイン（例えば、プロ炎症活性、及び／または抗炎症活性を有する）のレベルの、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍の変化（例えば、増加または減少）をもたらす。

【0104】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインは、患者集団を選択するためのバイオマーカーとしての役割を果たす。したがって、いくつかの実施形態では、治療前に、患者にて一定の閾値を上回る、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインのうちの１つ以上が測定されることは、その患者が本明細書で提供する方法に対して好適であることを示す。いくつかの実施形態では、治療前に、患者にて一定の閾値を下回る、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインのうちの１つ以上が測定されることは、その患者が本明細書で提供する方法に対して好適であることを示す。特定の実施形態では、治療前に、患者にて一定の閾値を下回る、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、ＴＮＦα、またはこれらの組み合わせが測定されることは、その患者が本明細書で提供する方法に対して好適であることを示す。

【0105】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインは、治療中に用量及び／またはレジメンを再調整するためのバイオマーカーとしての役割を果たす。したがって、いくつかの実施形態では、一定期間患者を治療した後に、一定の閾値を上回る、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインのうちの１つ以上が測定されることは、用量及び／または投与頻度の増加を示す。いくつかの実施形態では、一定期間患者を治療した後に、一定の閾値を上回る、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインのうちの１つ以上が測定されることは、同じ用量、及び／または投与頻度の維持を示す。いくつかの実施形態では、一定期間患者を治療した後に、一定の閾値を上回る、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインのうちの１つ以上が測定されることは、用量及び／または投与頻度の低下を示す。いくつかの実施形態では、一定期間患者を治療した後に、一定の閾値を下回る、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインのうちの１つ以上が測定されることは、用量及び／または投与頻度の増加を示す。いくつかの実施形態では、一定期間患者を治療した後に、一定の閾値を下回る、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインのうちの１つ以上が測定されることは、同じ用量、及び／または投与頻度の維持を示す。いくつかの実施形態では、一定期間患者を治療した後に、一定の閾値を下回る、本明細書に記載するサイトカイン及びケモカインのうちの１つ以上が測定されることは、用量及び／または投与頻度の低下を示す。いくつかの特定の実施形態では、一定期間患者を治療した後に、一定の閾値を下回る、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、ＴＮＦα、またはこれらの組み合わせが測定されることは、用量及び／または投与頻度の増加を示す。いくつかの特定の実施形態では、一定期間患者を治療した後に、一定の閾値を上回る、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、ＴＮＦα、またはこれらの組み合わせが測定されることは、同じ用量及び／または投与頻度の維持を示す。

【0106】

サイトカイン及びケモカインのレベルは、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする、重複（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与する前、及び投与した後の異なる時点において測定することができる。いくつかの実施形態では、サイトカイン及びケモカインのレベルは、アレナウイルス粒子の投与前に測定される。いくつかの実施形態では、サイトカイン及びケモカインのレベルは、アレナウイルス粒子の投与から１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間後に測定される。いくつかの実施形態では、サイトカイン及びケモカインのレベルは、アレナウイルス粒子の投与から２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、３０日、３５日、４０日、４５日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１５０日、３００日、４５０日後に測定される。

【0107】

サイトカイン及びケモカインのレベルは、バイオアッセイ（例えば、走化性活性、増殖、または細胞毒性の試験）、免疫学的検定（例えば、ＥＬＩＳＡ及び特に、多重ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ならびに、アプタマーベースの検出法、ならびに、放射能標識サイトカイン及びケモカインによる分子イメージングなどの様々なアッセイにより測定することができる。したがって、いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６をコードするアレナウイルス粒子を投与した後で、バイオアッセイ（例えば、走化性活性、増殖、または細胞毒性の試験）により、サイトカイン及びケモカインを測定する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６をコードするアレナウイルス粒子を投与した後で、免疫学的検定によりサイトカイン及びケモカインを測定する。特定の実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６をコードするアレナウイルス粒子を投与した後で、ＥＬＩＳＡによりサイトカイン及びケモカインを測定する。いくつかの好ましい実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６をコードするアレナウイルス粒子を投与した後で、多重ＥＬＩＳＡによりサイトカイン及びケモカインを測定する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６をコードするアレナウイルス粒子を投与した後で、フローサイトメトリーによりサイトカイン及びケモカインを測定する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６をコードするアレナウイルス粒子を投与した後で、アプタマーベースの検出法によりサイトカイン及びケモカインを測定する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６をコードするアレナウイルス粒子を投与した後で、放射能標識サイトカイン及びケモカインを用いる分子イメージングにより、サイトカイン及びケモカインを測定する。

【0108】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、上記患者に、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することを含み、上記有効量が約５×１０^５、約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵ、約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵ、または約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、上記有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することが、上記患者の治療前レベルと比較して、上記患者の血清内での、サイトカインまたはケモカインレベルの変化をもたらし、上記有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することが、患者の治療前のレベルと比較して、患者の血清内での、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の増加をもたらす、上記方法をさらに、本明細書で提供する。

【0109】

増加した、本明細書に記載するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞は、単独での、または組み合わせでの、異なる細胞マーカー（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、ＣＤ１０７ａ）に対して陽性であることができ、Ｔ細胞の異なる機能性を示す。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者の治療前のレベルと比較して、患者の血清内での、ＣＤ４に対して陽性であるＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者の治療前のレベルと比較して、患者の血清内での、ＣＤ８に対して陽性であるＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者の治療前のレベルと比較して、患者の血清内での、ＩＦＮ－γに対して陽性であるＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者の治療前のレベルと比較して、患者の血清内での、ＴＮＦαに対して陽性であるＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、患者の治療前のレベルと比較して、患者の血清内での、ＣＤ１０７ａに対して陽性であるＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の増加をもたらす。

【0110】

ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞は、ＥＬＩＳｐｏｔ及び細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）、続いてフローサイトメトリーなどの、様々なアッセイにより検出して定量することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、ＥＬＩＳｐｏｔにより、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞を検出して定量することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、ＩＣＳ、続いてフローサイトメトリーにより、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞を検出して定量することをさらに含む。

【0111】

具体的には、当該技術分野において周知の任意のアッセイを使用して、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的Ｔ細胞の応答を試験することができる。例えば、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用することができる（例えば、Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ Ｃ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８３；６５：１０９－１２１；及びＨｕｔｃｈｉｎｇｓ Ｐ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８９；１２０：１－８を参照されたい）。限定されるものではないが、ＩＦＮ－γなどのサイトカインは、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより測定することができる。簡潔に述べるとアッセイは以下のステップを含む：ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔプレートを抗サイトカイン抗体でコーティングする。細胞を、ＨＰＶ Ｅ７／Ｅ６に由来するペプチドにより、ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔプレート内でインキュベートする。ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６特異的細胞はサイトカインを分泌し、これはコーティングされた抗体に結合する。次に、細胞を洗い流し、第２のビオチン化抗サイトカイン抗体をプレートに添加し、アビジン－ＨＲＰ系、または他の適切な方法で可視化する。

【0112】

同様に、当該技術分野において周知の任意のアッセイを使用して、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６に対して特異的なＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋ Ｔ細胞の機能性を試験することができる。例えば、フローサイトメトリーと組み合わせたＩＣＳを使用することができる（例えば、Ｓｕｎｉ Ｍ．Ａ． ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ． １９９８；２１２：８９－９８；Ｎｏｍｕｒａ Ｌ．Ｅ． ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ． ２０００；４０：６０－６８；及びＧｈａｎｅｋａｒ Ｓ．Ａ． ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００１；８：６２８－６３を参照されたい）。簡潔に述べると、アッセイは、以下のステップを含む：ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６による細胞の活性化の際に、タンパク質輸送の阻害（例えば、ブレフェルジンＡ）を添加し、細胞内でサイトカインを保持する。規定のインキュベーション期間、通常は５時間後、洗浄工程が続き、他の細胞マーカーに対する抗体を細胞に添加することができる。次に、細胞を固定して易透化した。蛍光色素コンジュゲート化抗サイトカイン抗体を添加し、細胞をフローサイトメトリーにより分析することができる。

【0113】

がん免疫治療法により患者で誘発される標的特異的Ｔ細胞の頻度は通常、あまりに低く、その前のインビトロ増殖なしでこれらの応答を直接測定することはできないことが、当該技術分野において周知である。したがって、検出前に、インビトロＴ細胞刺激及び／または増殖を行うことは、当該技術分野において一般的に行われていることである（例えば、Ｔｒｉｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００３ Ａｐｒ １；２７５（１－２）：２５１－５．を参照されたい）。直接的な対比において、前述の段落で記載したＴ細胞の検出に関しては、本明細書に記載するＴ細胞頻度の増加は、予めインビトロ刺激及び／または増殖を行うことなく検出される。具体的には、治療された患者からの、新しい、または冷凍保存されていたが解凍された末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を、先にインビトロ増殖行うことなく、検出のために直接使用した（例えば、実施例ＩＩ及び実施例Ｖを参照されたい）。

【0114】

前述の段落で記載した、誘発されたＴ細胞の数及び機能性の検出とは別に、Ｔ細胞が移動して、腫瘍組織に浸潤することも、本明細書で提供する方法の有効性を読み取るのに重要なことである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、腫瘍組織に浸潤した、より多くのＴ細胞をもたらす。いくつかの特定の実施形態では、本明細書で提供する方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の、治療前レベルと比較して、ＨＰＶ１６^＋腫瘍組織に浸潤した、より多くのＣＤ８^＋ Ｔ細胞をもたらす（実施例ＩＩＩのセクション１１を参照されたい）。

【0115】

さらに、ワクチン接種の際の体液性免疫応答を測定するための他のアッセイは、抗原特異的血清ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）により行うことができる。簡潔に述べると、プレートを抗原（例えば、組み換えタンパク質）でコーティングし、ブロックして抗体の非特異的結合を避け、血清の連続希釈によりインキュベートする。インキュベーション後、例えば、酵素結合抗種（例えば、マウス、モルモット）特異的抗体（全てのＩｇＧまたはＩｇＧサブクラスを検出する）、及び、その後の呈色反応を使用して、結合した血清抗体を検出することができる。抗体力価を、例えば、終点幾何平均力価として測定することができる。

【0116】

さらに、血清中で中和抗体を測定するといった、他のアッセイを、ＧＦＰタグウイルス、または、ＨＰＶ Ｅ７／Ｅ６を発現する細胞株を用いる、以下の細胞アッセイにより行うことができる。加えて、外因性補体の源として、追加のモルモット血清を使用する。中和のために用いる１または２日前に、３８４ウェルプレートに６．５×１０^３細胞／ウェル（５０μＬ／ウェル）で播種することで、アッセイを開始する。１時間、３７℃で、細胞を用いることなく、９６ウェル滅菌組織培養皿にて中和を行う。中和インキュベーションステップの後、混合物を細胞に添加し、プレートリーダーによるＧＦＰ検出のために、さらに４日間インキュベートする。陽性の中和ヒト血清をアッセイの陽性対照として、各プレートで使用し、全結果の信頼性を確認する。力価（ＥＣ５０）を、４パラメーターロジスティック曲線適合を用いて測定する。追加の試験として、蛍光顕微鏡でウェルを確認する。同様に、誘発された抗体の中和活性を、臨床設定において測定することができる。

【0117】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、充実性腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）、及び／または、充実性腫瘍における免疫応答評価基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）を用いる、１つ以上の有効性エンドポイント（例えば、客観的な奏効率の割合、疾患制御率の割合、部分奏功の割合、無増悪生存期間、及び／または、全体的な生残）の改善をもたらす。したがって、いくつかの特定の実施形態では、本明細書で提供する方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、より高い割合の客観的な奏効率をもたらす。いくつかの特定の実施形態では本明細書で提供する方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、より高い割合の疾患制御率をもたらす。いくつかの特定の実施形態では本明細書で提供する方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、より高い割合の部分奏功をもたらす。いくつかの特定の実施形態では本明細書で提供する方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、より長い無増悪生存期間をもたらす。いくつかの特定の実施形態では本明細書で提供する方法は、プラセーボを受ける患者（複数可）の治療前レベルと比較して、より長い全体的な生残をもたらす。

【0118】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（ｉ）患者に、ＬＣＭＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）患者に、ＰＩＣＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記方法をさらに、本明細書で提供する。がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（ｉ）患者に、ＰＩＣＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）患者に、ＬＣＭＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記方法もまた、本明細書で提供する。

【0119】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（ｉ）患者に、ＬＣＭＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）患者に、ＰＩＣＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉ）と（ｉｉ）を、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回繰り返すことと、を含む、上記方法をさらに、本明細書で提供する。がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（ｉ）患者に、ＰＩＣＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）患者に、ＬＣＭＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉ）と（ｉｉ）を、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回繰り返すことと、を含む、上記方法もまた、本明細書で提供する。

【0120】

いくつかの実施形態では、前述の段落での、（ｉ）と（ｉｉ）の間隔は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、または１２週間である。他の実施形態では、前述の段落での、（ｉ）と（ｉｉ）の間隔は、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２３週間、または２４週間である。他の実施形態では、前述の段落での、（ｉ）と（ｉｉ）の間隔は、２５週間、２６週間、２７週間、２８週間、２９週間、３０週間、３１週間、３２週間、３３週間、３４週間、３５週間、または３６週間である。さらに、（ｉ）と（ｉｉ）の繰り返しの間に、間隔は、（ｉ）と（ｉｉ）の元のサイクルと同じであることができ、または、（ｉ）と（ｉｉ）の元のサイクルと異なっていることができる。したがって、繰り返しにおける（ｉ）と（ｉｉ）の間隔は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間であることができる。

【0121】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（ｉ）患者に、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、ＬＣＭＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記アレナウイルス粒子の上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）患者に、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、ＰＩＣＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、（ｉ）と（ｉｉ）は繰り返されることがないか、または、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、もしくは１０回繰り返される、上記方法を、さらに本明細書で提供する。がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（ｉ）患者に、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、ＰＩＣＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）患者に、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、ＬＣＭＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする複製（即ち、２つの）Ｓセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、（ｉ）と（ｉｉ）は繰り返されることがないか、または、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、もしくは１０回繰り返される、上記方法もまた、本明細書で提供する。

【0122】

１つ以上のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、（ｉ）上記患者に、ＬＣＭＶに由来するヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、その有効量が約５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、または１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（ｉｉ）上記患者に、セッションの約半分の時点で、ＰＩＣＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、その有効量が約５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記方法をさらに、本明細書において提供する。１つ以上のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、（ｉ）上記患者に、ＰＩＣＶに由来するヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、その有効量が約５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、または１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（ｉｉ）上記患者に、セッションの約半分の時点で、ＬＣＭＶに由来するＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする２つのＳセグメントを含む、有効量の組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与することであって、その有効量が約５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記方法もまた、本明細書において提供する。

【0123】

いくつかの特定の実施形態では、本明細書で提供する方法は、１つ以上のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記セッションを含む。特定の一実施形態では、本明細書で提供する方法は、１つ以上のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト２を静脈内投与することと、（ｉｉ）患者に、５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト１を静脈内投与することと、を含み、各セッションが６週間続く、上記セッションを含む。他の特定の実施形態では、本明細書で提供する方法は、１つ以上のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が、約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記セッションを含む。

【0124】

セッションの期間は、前述の段落での、（ｉ）の２連続した用量の投与の間隔を決める。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは４週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは６週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは８週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは１０週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは１２週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは１４週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは１６週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは１８週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは２０週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは２２週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは２４週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは２６週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは２８週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは３０週間続く。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する各セッションは、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２週間続く。

【0125】

いくつかの実施形態では、前述の段落での、（ｉ）及び（ｉｉ）の投与は、静脈内注射、腫瘍内注射、または、静脈内注射と腫瘍内注射の組み合わせを含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、１つ以上のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内、腫瘍内、または、静脈内注射と腫瘍内注射の組み合わせで投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内、腫瘍内、または、静脈内注射と腫瘍内注射の組み合わせで投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、１つ以上のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内、腫瘍内、または、静脈内注射と腫瘍内注射の組み合わせで投与することであって、上記有効量が約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内、腫瘍内、または、静脈内注射と腫瘍内注射の組み合わせで投与することであって、上記有効量が、約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記セッションを含む。

【0126】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行の治療を含む。他の実施形態では、本明細書で提供する方法は、限られた回数投与される治療を含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッション、または、限られた回数のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッション、または、限られた回数のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が、約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記セッションを含む。

【0127】

具体的には、限られた回数投与されるのみの方法に対しては、適切なセッション数（例えば、２、３、４、または５セッション）、適切な用量、及び、適切なセッション期間などの、いくつかの因子を最適化させて、現行のがんで投与される方法と同程度の治療効果を実現させる必要がある。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、２回のみのセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、または１×１０^１０ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、各セッションが、４、６、８、１０、または１２週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、３回のみのセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、または１×１０^１０ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、各セッションが、４、６、８、１０、または１２週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、４回のみのセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、または１×１０^１０ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、各セッションが、４、６、８、１０、または１２週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、５回のみのセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、または１×１０^１０ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、各セッションが、４、６、８、１０、または１２週間続く、上記セッションを含む。他の実施形態では、本明細書で提供する方法は、２回のみのセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、または１×１０^１０ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、各セッションが、４、６、８、１０、または１２週間続く、上記セッションを含む。他の実施形態では、本明細書で提供する方法は、３回のみのセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、または１×１０^１０ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、各セッションが、４、６、８、１０、または１２週間続く、上記セッションを含む。他の実施形態では、本明細書で提供する方法は、４回のみのセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、または１×１０^１０ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、各セッションが、４、６、８、１０、または１２週間続く、上記セッションを含む。他の実施形態では、本明細書で提供する方法は、５回のみのセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、または１×１０^１０ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、各セッションが、４、６、８、１０、または１２週間続く、上記セッションを含む。

【0128】

具体的には、現行のがんで投与される方法に関しては、適切な、相対的に短いセッションで開始し、適切な、相対的に長いセッション、及び、適切な量の、相対的に短いセッションが続くレジメンなどのいくつかの因子が、最適化される必要がある。

【0129】

したがって、適切な、相対的に短いセッションで開始し、適切な、相対的に長いセッションが続くレジメンを最適化した後に、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の２セッションはそれぞれ４週間続き、第３のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、６、８、１０、１２、１４、１６週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の２セッションはそれぞれ６週間続き、第３のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、または２４週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の２セッションはそれぞれ８週間続き、第３のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４，２６、２８、３０、または３２週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の２セッションはそれぞれ１０週間続き、第３のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４，２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、または４０週間続く、上記セッションを含む。同様に、同じことが、（ｉ）でコンストラクト１を投与し、（ｉｉ）でコンストラクト２を投与することを含む方法にも適用される。

【0130】

回数が変更された、相対的に短いセッションを含む方法をさらに、本明細書で提供する。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の３セッションはそれぞれ４週間続き、第４のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、６、８、１０、１２、１４、１６週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の３セッションはそれぞれ６週間続き、第４のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、または２４週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の３セッションはそれぞれ８週間続き、第４のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４，２６、２８、３０、または３２週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の３セッションはそれぞれ１０週間続き、第４のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、または４０週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の４セッションはそれぞれ４週間続き、第５のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、６、８、１０、１２、１４、１６週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の４セッションはそれぞれ６週間続き、第５のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、または２４週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の４セッションはそれぞれ８週間続き、第５のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４，２６、２８、３０、または３２週間続く、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含み、最初の４セッションはそれぞれ１０週間続き、第５のセッション、及びその後のセッションはそれぞれ、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４，２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、または４０週間続く、上記セッションを含む。同様に、同じことが、（ｉ）でコンストラクト１を投与し、（ｉｉ）でコンストラクト２を投与することを含む方法にも適用される。

【0131】

静脈内注射前に腫瘍内注射を行うことが、特別な効能をもたらし得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、コンストラクト１の腫瘍内注射に続く、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、コンストラクト２の腫瘍内注射に続く、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、コンストラクト１の腫瘍内注射に続く、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記セッションを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法は、コンストラクト２の腫瘍内注射に続く、現行のセッションであって、各セッションが、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、（ｉｉ）上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、または１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、を含む、上記セッションを含む。

【0132】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）であり、上記コンストラクト１が、４サイクルは３週間毎の頻度で、続いて、６週間毎の頻度の現行サイクルで静脈内投与される、上記投与することを含む、上記方法をさらに、本明細書において提供する。

【0133】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（ｉ）患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^５、５×１０^６、５×１０^７、１×１０^８、または５×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）であり、上記コンストラクト１が、４サイクルは３週間毎の頻度で、続いて、６週間毎の頻度の現行サイクルで静脈内投与される、上記投与することと、患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0134】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0135】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0136】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0137】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0138】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0139】

複数回のセッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0140】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0141】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0142】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0143】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0144】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0145】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）コンストラクト２及びコンストラクト１を投与する複数回のセッションであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記セッションと、（２）患者に、２００ｍｇのペムブロリズマブを、３週間毎の頻度で静脈内投与する、または、４００ｍｇのペムブロリズマブを、６週間毎の頻度で静脈内投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0146】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約５×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0147】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約５×１０^６複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0148】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約５×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0149】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約５×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。

【0150】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0151】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、（１）上記患者に、有効量のコンストラクト１を腫瘍内投与することであって、コンストラクト１の上記有効量が約５×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、（２）３週間後に、上記患者に複数回のセッションを投与することであって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵである、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、最初の２セッションがそれぞれ６週間続き、以降の現行のセッションがそれぞれ１２週間続く、上記投与することと、を含む、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0152】

がんの治療を必要とする患者における、がんの治療方法であって、上記患者に、有効量のコンストラクト１を投与することであって、上記有効量が、約５×１０^６、５×１０^７、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）であり、コンストラクト１が、３サイクルは３週間毎の頻度で静脈内投与され、方法が３サイクル後に終了する、上記投与することを含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0153】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^７複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0154】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0155】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^８複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0156】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^８ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0157】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約１×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0158】

３セッションを含む、がんの治療を必要とする患者におけるがんの治療方法であって、各セッションが、ｉ．上記患者に、有効量のコンストラクト２を静脈内投与することであって、上記有効量が、約１×１０^９複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）である、上記投与することと、ｉｉ．上記セッションの約半分の時点において、上記患者に、有効量のコンストラクト１を静脈内投与することであって、上記有効量が約５×１０^９ＲＣＶ ＦＦＵであり、各セッションが６週間続き、方法が３セッション後に終了する、上記投与することと、を含む、上記方法を、本明細書においてさらに提供する。

【0159】

単一のアレナウイルス種に由来する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を投与するための、本明細書に記載する実施形態は、異なるアレナウイルス種に由来する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子の反復投与に適用可能であると理解されている。

【0160】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載する組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物を本明細書で提供する。

【0161】

がんの治療方法で使用するための、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７／Ｅ６のジヌクレオチド最適化融合タンパク質をコードする核酸
ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）のＥ７／Ｅ６融合タンパク質をコードする最適化ヌクレオチド配列を、本明細書で提供する。これらの最適化オープンリーディングフレームは、配列番号１及び２として提供される。配列は、以下の「配列表」に示す。

【0162】

特定の実施形態では、これらの最適化オープンリーディングフレームは、アレナウイルスゲノムセグメントに含まれる。配列番号３は、ＬＣＭＶに由来する第１のＳセグメントを説明し、Ｅ７／Ｅ６融合タンパク質用の最適化オープンリーディングフレームは、５’ＵＴＲの制御下にあり、ＮＰタンパク質用のオープンリーディングフレームは、３’ＵＴＲの制御下にある。配列番号４は、ＬＣＭＶに由来する第２のＳセグメントを説明し、Ｅ７／Ｅ６融合タンパク質用の最適化オープンリーディングフレームは、５’ＵＴＲの制御下にあり、ＧＰタンパク質用のオープンリーディングフレームは、３’ＵＴＲの制御下にある。配列番号６は、ＰＩＣＶに由来する第１のＳセグメントを説明し、Ｅ７／Ｅ６融合タンパク質用の最適化オープンリーディングフレームは、５’ＵＴＲの制御下にあり、ＮＰタンパク質用のオープンリーディングフレームは、３’ＵＴＲの制御下にある。配列番号７は、ＰＩＣＶに由来する第２のＳセグメントを説明し、Ｅ７／Ｅ６融合タンパク質用の最適化オープンリーディングフレームは、５’ＵＴＲの制御下にあり、ＧＰタンパク質用のオープンリーディングフレームは、３’ＵＴＲの制御下にある。これらのゲノムセグメント（例えば、配列番号３、４、及び５；または、配列番号６、７、及び８）を、Ｌセグメント（それぞれ、配列番号５及び８）と共に、Ｓセグメント１及び２（それぞれ、配列番号３、４、６、７）などのウイルス粒子に組み込むことで、Ｅ７／Ｅ６融合タンパク質をコードする複製３セグメントウイルス粒子を作製することができる。

【0163】

配列番号１～８として示したヌクレオチド配列は、ＲＮＡまたはＤＮＡ配列であることができる。ウイルス粒子中に存在するようになると、これらのヌクレオチド配列は、ＲＮＡとして存在することができる。配列番号１～８として示されるＤＮＡ配列は、「Ｔ」（チミジン）を「Ｕ」（ウリジン）で置き換えることにより、ＲＮＡ配列に変換することができる。

【0164】

配列番号１～８として提供されるヌクレオチド配列は、本明細書で開示する治療方法で使用することができる。いくつかの実施形態では、配列番号３～５を使用して、３セグメント複製可能ウイルス粒子をコンストラクト１として生成することができる。いくつかの実施形態では、配列番号６～８を使用して、３セグメント複製可能ウイルス粒子をコンストラクト２として生成することができる。

【0165】

それぞれ、配列番号３～５、及び配列番号６～８を含む、組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子を含む医薬組成物を、本明細書で提供する。これらの医薬組成物は、本明細書で開示する任意の方法で使用することができる。

【0166】

配列番号１、２、３、４、５、６、７、または８のヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、本明細書で提供する。そのような発現ベクターを含む宿主細胞もまた、本明細書で提供する。当業者に既知の任意の方法を使用して、配列番号３～５のゲノムセグメントを含む、複製可能な３セグメントウイルス粒子を生成することができる。当業者に既知の任意の方法を使用して、配列番号６～８のゲノムセグメントを含む、複製可能な３セグメントウイルス粒子を生成することができる。配列番号３～８のゲノムセグメントのいずれか１つから転写可能な発現ベクターもまた、本明細書で提供する。
配列表

【表1】

【0167】

配列番号１及び２のヌクレオチド配列は、ＨＰＶ１６ Ｅ７Ｅ６融合タンパク質をコードする。配列番号１及び２のＨＰＶ１６ Ｅ７Ｅ６融合タンパク質のヌクレオチド配列を修飾して、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを減少させる（ジヌクレオチド最適化させる）。配列番号１または２を含むアレナウイルス粒子は、本明細書で提供する方法において、改善された遺伝安定性、改善された発現、及び、改善された免疫原性を示すことができる。これらの性質を実証するためのアッセイを以下に記載する。弱毒化した、複製可能なウイルスベクターを、ジヌクレオチド最適化Ｅ７Ｅ６ヌクレオチド配列、加えて、それぞれ、アレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）またはアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）に対する遺伝子を含む、２つの短い（Ｓ）ゲノムセグメント、ならびに、ＲＩＮＧフィンガータンパク質Ｚ、及びＲＮＡ指向ＲＮＡポリメラーゼＬに対する遺伝子を含む、長い（Ｌ）ゲノムセグメントをコードするプラスミドを含む、ｃＤＮＡレスキュー系を使用して新しく生成することができる。

【0168】

ジヌクレオチド最適化配列の臨床効果を実証するためのアッセイ
以下のアッセイを使用して、配列番号１または２のジヌクレオチド最適化配列の改善を実証することができる。

【0169】

遺伝的安定性
ジヌクレオチド最適化ＨＰＶ１６ Ｅ７Ｅ６ヌクレオチド配列をコードする３セグメントアレナウイルス粒子は、複数の世代を継代した後に、コードされたＨＰＶ抗原を安定して発現することができ、これは、より大規模なスケールでの商業生産に必要である。いくつかの実施形態では、３セグメントアレナウイルス粒子は、少なくとも４、５、６、７、８、９、または１０世代を継代した後に、ＨＰＶ抗原を安定して発現することができる。

【0170】

伝播細胞株における、ベクター候補の連続継代。小規模のＨＥＫ２９３細胞培養液に、ＭＯＩ ０．００１（ＲＣＶ ＦＦＵ／ｍＬ力価）にて、複製可能なベクターを感染させることができる。感染の４日後に、遠心分離により、上清を細胞及びデブリから取り除いてよい。そのようにして測定したＲＣＶ ＦＦＵ力価を使用して、上述のとおりの新しい細胞を感染させることにより、次の継代を生成することができる。ベクター原液材料は、９つの連続継代（最大、継代ｐ１０）にわたり継代させることができる。

【0171】

継代したベクター材料の分析。新しく生成した（Ｐ１）、加えて、その連続継代に由来するベクター材料の感染力をその後、ＦＦＵ及びＲＣＶ ＦＦＵアッセイにより分析することができる。異なる継代レベルの上清を含有するウイルスに由来するゲノムｖＲＮＡを単離し、転写させてｃＤＮＡにし、その後、対応する導入遺伝子及びＳセグメントに対して特異的な導入遺伝子フランキングプライマーを用いるＰＣＲによる増幅により、ベクターの導入遺伝子安定性を分析することができる。ベクター原液の導入遺伝子発現は、導入遺伝子特異的抗体を用いる、異なる継代レベルでの細胞溶解物のウエスタンブロット分析により確認することができる。

【0172】

抗原の発現
ジヌクレオチド最適化ＨＰＶ１６ Ｅ７Ｅ６ヌクレオチド配列をコードする３セグメントアレナウイルス粒子は、コードされたＨＰＶ融合タンパク質を一貫して発現することができる。

【0173】

コードされたＥ７Ｅ６抗原の発現レベルの分析。ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降、免疫細胞化学、または、ＦＡＣＳと組み合わせた免疫細胞化学を使用して、アレナウイルスのＳセグメント、または、３セグメントアレナウイルス粒子の遺伝子産物を定量化することができる。

【0174】

ウェスタンブロット。組織培養フラスコ、または懸濁液で増殖した、感染細胞を、ＲＩＰＡ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、感染後の所定の時点に溶解することができる、または、細胞溶解を行わずに直接用いることができる。試料は、還元剤、及び、ＮｕＰＡＧＥ ＬＤＳ試料緩衝液（ＮＯＶＥＸ）を用いて、９９℃まで１０分間加熱して、室温まで冷却することができ、その後、電気泳動のために、ＮｕＰＡＧＥ ４～１２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ ＳＤＳゲルにロードすることができる。タンパク質を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ｉＢｌｏｔ Ｇｅｌ移動デバイスを使用して、膜上にブロットすることができる。最後に、膜を、対象となるタンパク質に対して向けられる一次抗体、及び、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート化二次抗体でプローブし、続いて、Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ Ｗｅｓｔｅｒｎ化学発光ＨＲＰ基質（Ｍｅｒｃｋ／Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で染色することができる。

【0175】

ジヌクレオチド最適化ＨＰＶ１６ Ｅ７Ｅ６ヌクレオチド配列をコードする３セグメントアレナウイルス粒子は、コードされたＨＰＶ融合タンパク質に対して強力な免疫応答を誘発することができる。

【0176】

抗原特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞を検出するための、ＭＨＣペプチド多量体染色アッセイ。当該技術分野において周知の任意のアッセイを使用して、抗原特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞応答を測定することができる。例えば、ＭＨＣペプチド四量体染色アッセイを使用することができる（例えば、Ａｌｔｍａｎ Ｊ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９６；２７４：９４－９６；及びＭｕｒａｌｉ－Ｋｒｉｓｈｎａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１９９８；８：１７７－１８７）。簡潔に述べると、アッセイは、抗原特異的Ｔ細胞の存在を検出するために使用する四量体アッセイを含むことができる。抗原特異的Ｔ細胞を検出するためには、定義された抗原特異性、及び、Ｔ細胞のＭＨＣハプロタイプ（通常は蛍光標識されている）に対してオーダーメイドされた、ＭＨＣ分子のペプチド及び四量体の両方に結合しなければならない。四量体を認識し、故に、抗原に対して特異的であるＴ細胞は次に、蛍光標識により、フローサイトメトリーを用いて検出することができる。

【0177】

抗原特異的Ｔ細胞を検出するためのＥＬＩＳＰＯＴアッセイ。当該技術分野において周知の任意のアッセイを使用して、抗原特異的Ｔ細胞応答を試験することができる。例えば、表１「中央実験分析に対する試料収集の要約」に例示されている、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用することができ（例えば、Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ Ｃ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８３；６５：１０９－１２１；及びＨｕｔｃｈｉｎｇｓ Ｐ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８９；１２０：１－８を参照されたい）、限定されるものではないが、ＩＦＮ－γなどのサイトカインは、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより測定することができる。簡潔に述べるとアッセイは以下のステップを含む：ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔプレートを抗サイトカイン抗体でコーティングする。次に、細胞を、対象となる抗原に由来するペプチドにより、ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔプレート内でインキュベートする。抗原特異的細胞はサイトカインを分泌し、これは、コーティングされた抗体に結合する。次に、細胞を洗い流し、第２のビオチン化抗サイトカイン抗体をプレートに添加し、アビジン－ＨＲＰ系、または他の適切な方法で可視化する。

【0178】

【表2】

【0179】

ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋ Ｔ細胞の機能性を検出するための細胞内サイトカインアッセイ。当該技術分野において周知の任意のアッセイを使用して、ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋ Ｔ細胞応答の機能性を試験することができる。例えば、フローサイトメトリーと組み合わせた細胞内サイトカインアッセイを、限定されるものではないが、表１「中央実験分析に対する試料収集」に例示されているものとして使用することができる（例えば、Ｓｕｎｉ Ｍ．Ａ． ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ． １９９８；２１２：８９－９８；Ｎｏｍｕｒａ Ｌ．Ｅ． ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ． ２０００；４０：６０－６８；及びＧｈａｎｅｋａｒ Ｓ．Ａ． ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００１；８：６２８－６３を参照されたい）。簡潔に述べると、アッセイは、以下のステップを含む：特異的ペプチドまたはタンパク質による細胞の活性化の際に、タンパク質輸送の阻害（例えば、ブレフェルジンＡ）を添加し、細胞内でサイトカインを保持する。規定のインキュベーション期間、通常は５時間後、洗浄工程が続き、他の細胞マーカーに対する抗体を細胞に添加することができる。次に、細胞を固定して易透化した。蛍光色素コンジュゲート化抗サイトカイン抗体を添加し、細胞をフローサイトメトリーにより分析することができる。

【0180】

血清ＥＬＩＳＡ。動物（例えば、マウス、モルモット）のワクチン接種の際の、体液性免疫応答の測定は、抗原特異的血清ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）により行うことができる。簡潔に述べると、プレートを抗原（例えば、組み換えタンパク質）でコーティングし、ブロックして抗体の非特異的結合を避け、血清の連続希釈によりインキュベートすることができる。インキュベーション後、例えば、酵素結合抗種（例えば、マウス、モルモット）特異的抗体（全てのＩｇＧまたはＩｇＧサブクラスを検出する）、及び、その後の呈色反応を使用して、結合した血清抗体を検出することができる。抗体力価を、例えば、終点幾何平均力価として測定することができる。

【0181】

本開示の様々な実施形態の活性に実質的に影響を及ぼさない変更もまた、本明細書で提供する本開示の定義の中に含まれると理解されている。したがって、以下の実施例は、例示目的のためのものであり、本開示を限定するものではない。

【0182】

実施例Ｉ
ＨＰＶ１６^＋癌を有する患者における、単独での、または、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた、アレナウイルスベースのがん免疫療法
本実施例は、単独での、または、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた、アレナウイルスベース粒子を用いる免疫療法治療方法について記載する。

【0183】

本治療方法で使用可能なアレナウイルス粒子は、図２Ｂに記載されているＨＰＶ抗原コンストラクトである、コンストラクト１及びコンストラクト２を含む。さらに、本明細書に記載する治療方法で使用可能なＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６抗原用の抗原コンストラクトは、参照により本明細書に組み込まれている、２０１８年６月２８日に公開された米国特許出願公報第ＵＳ－２０１８－０１７９２５７－Ａ１号に記載されている抗原を含む。具体的には、特定の実施形態では、記載される治療方法で使用されるアレナウイルス粒子によりコードされるＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６抗原は、米国特許出願公報第ＵＳ－２０１８－０１７９２５７－Ａ１号の、配列番号１０のアミノ酸配列（コンストラクト１及びコンストラクト２）を含む。

【0184】

本治療方法で使用される免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤を含む。抗ＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤を含む、本明細書に記載する治療方法で使用可能な免疫チェックポイント阻害剤としては、参照により本明細書に組み込まれている、２０１８年１２月６日に公開された、米国特許出願公開第ＵＳ－２０１８－０３４４８３０－Ａ１号に記載されているものが挙げられる。

【0185】

本治療方法で使用されるアレナウイルス粒子の腫瘍内投与としては、参照により本明細書に組み込まれている、２０２０年４月１６日に公開された、米国特許出願公報ＵＳ－２０２０－０１１３９９５－Ａ１号に記載されている方法が挙げられる。

【0186】

コンストラクト１は、非発がん性Ｅ７及びＥ６融合タンパク質をコードするアレナウイルスＬＣＭＶに基づく、複製可能な、生弱毒化ベクターである。前臨床モデルにおいて、静脈内（ＩＶ）投与された、及び腫瘍内（ＩＴ）投与されたコンストラクト１は共に、ＨＰＶ１６特異的細胞傷害性Ｔ細胞及び関連する効能の誘発による、強力な免疫原性を示す（図３Ａ～３Ｃ）。

【0187】

ＨＰＶ１６^＋癌を有する患者における、単独での、または、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた、アレナウイルスベースのがん免疫療法を使用するための治療方法を、図４に記載する。本治療方法は、まずは、ＨＰＶ１６^＋と確認された再発／転移性がんにおける、コンストラクト１単剤療法、または、ＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤（抗ＰＤ－１）と組み合わせた、ヒトにおける第Ｉ／ＩＩ相研究である。第Ｉ相試験は、２つの治療群で構成され、それぞれ、３^＋３の用量漸増設計で実施される。群１には、コンストラクト１をＩＶのみで受ける、ＨＰＶ１６^＋頭頸扁平上皮細胞癌を有する患者が含まれる。群２には、最初の投与ではコンストラクト１をＩＴで、続いて、その後の投与でコンストラクト１をＩＶで受ける（ＩＴ－ＩＶ）、安全に接近できる腫瘍部位を有するＨＰＶ１６^＋癌患者が含まれる。コンストラクト１は、２１日毎に投与されることができる。第ＩＩ相試験の構成要素は、第Ｉ相で画定された、推奨される第ＩＩ相試験用量（ＲＰ２Ｄ）を用いて実施することができ、３つの群：群Ａ（コンストラクト１ ＩＶのみ）、群Ｂ（コンストラクト１ ＩＶ＋抗ＰＤ－１）、及び群Ｃ（コンストラクト１ ＩＴ－ＩＶ）で構成されることができる。

【0188】

治療方法に関する、鍵となる包含及び除外基準としては、以下が挙げられる：
－全ての患者－
－年齢≧１８歳
－０～１のＥＣＯＧ性能ステータス
－腫瘍応答に対して評価される、ＲＥＣＩＳＴ１．１基準に従った、少なくとも１つの測定可能な病変
－標準的なケア治療法（少なくとも１つの全身治療法を含む）、または、標準的なケアの禁忌の基準における、腫瘍進行または再発
－治療し、少なくとも４週間安定しない限り、未治療の、及び／または、症候性の転移性中枢神経系疾患は存在しない

【0189】

ＩＶ投与による、アレナウイルスベースの粒子のみ－
－組織学的に確認されたＨＰＶ１６^＋（遺伝子型）頭頸扁平上皮細胞癌
－別の方法で同意されない限り、最後の治療の進行後に収集された腫瘍組織

【0190】

ＩＴまたはＩＶ投与による、アレナウイルスベースの粒子－
－組織学的に確認された、任意の由来のＨＰＶ１６^＋（遺伝子型）癌
－別の方法で同意されない限り、生検及びＩＴ投与に受け入れられる、安全かつ接近可能な腫瘍部位
－生検及びＩＴ投与に受けいれられる腫瘍部位とは別に、ＲＥＣＩＳＴ１．１基準に従った、少なくとも１つのさらなる、測定可能な病変

【0191】

上述した治療方法を用いることで、以下の研究目的及びエンドポイントを評価することができる：
－一次
－第Ｉ相試験のみ：各群の、推奨される第ＩＩ相試験の用量
－第ＩＩ相のみ：全ての群の、予備的な抗腫瘍活性（ＯＲＲ）
－二次
－全ての群の安全性及び忍容性
－全ての群の、予備的な抗腫瘍活性（ＰＦＳ、ＯＳ、奏効期間、疾患制御率）
－探索
－予備的な免疫原性（Ｅ７及びＥ６抗原特異的アッセイ、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋ Ｔ細胞測定）
－血液、組織、血清、及び血漿での、免疫及び／または抗腫瘍応答と相関するバイオマーカー

【0192】

実施可能な統計分析は、用量レベル当たり、少なくとも３名の、ＤＬＴ評価可能な患者を含む、従来の３^＋３設計に続く、第Ｉ相試験用量漸増部の各群を含む。このウイルスベースの治療法に関して、最大用量は必ずしも、最も有効なものでなくてよい。それ故、コホートのバックフィルを使用して、複数の用量にまたがる、安全性及び潜在的な効能を、よりよく評価することができる。

【0193】

安全性分析に関しては、治療応急有害事象（ＴＥＡＥ）の数、及び発生率は、ＣＴＣＡＥグレードにより表にすることができる。処置応急異常実験室、生命徴候、及びＥＣＧ値の発生もまた、記述統計を用いてまとめることができる。

【0194】

効能分析に関しては、全ての有効性エンドポイントを、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１及びｉＲＥＣＩＳＴに従って測定することができる。第Ｉ相試験に関しては、有効性エンドポイントを提示することができ、形式的な統計試験は実施する必要がない。第ＩＩ相試験に関しては、ＯＲＲ及び疾患制御率を、Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ法に従い、正確な両側９５％ＣＩを使用してまとめることができる。奏効期間、ＰＦＳ、及びＯＳは、カプランマイヤー曲線を使用して実施することができる。

【0195】

実施例ＩＩ
進行性ＨＰＶ１６^＋癌を有する患者における、アレナウイルスベースのがん免疫療法の免疫原性
本実施例は、進行性ＨＰＶ１６＋癌を有する患者における、サイトカイン及びケモカインの変化、ならびに、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の誘発をもたらす、アレナウイルスベースの粒子を用いる免疫療法の免疫原性について記載する。

【0196】

非発がん性ＨＰＶ１６特異的Ｅ７及びＥ６融合タンパク質を有する、弱毒化した複製アレナウイルスベクターは、ＬＣＭＶまたはＰＩＣＶ（即ち、それぞれ、コンストラクト１及びコンストラクト２；図２Ｂを参照されたい）のゲノムバックグラウンドで発現した。

【0197】

以前の前臨床研究において、ＬＣＭＶベースのアレナウイルスのみの両方の投与、及び、ＰＩＣＶベースのアレナウイルス、続いて、ＬＣＭＶベースのアレナウイルスの連続投与（即ち、交代２ベクター療法）は、安全であり有効であることが示された。交代２ベクター療法は、Ｅ７及びＥ６特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞応答を誘発し、これは、循環Ｔ細胞の最大５０％を占めた（Ｓｃｈｍｉｄｔ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０２０；９（１）：１８０９９６０；Ｂｏｎｉｌｌａ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ Ｍｅｄ．２０２１；２（３）：１－１７を参照されたい）。

【0198】

現在の実施例では、ＨＰＶ１６^＋癌に対して、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１、及び／または、白金ベースの化学療法が以前に失敗した、以前に激しく治療した患者における、オープンラベルのｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ第１／２相臨床治験の、第１相部分から、免疫原性結果を入手した。コンストラクト１は、ＬＣＭＶ株ＷＥ由来のウイルス表面糖タンパク質を有する、ＬＣＭＶ株クローン１３に基づく、それぞれ、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする、２つのＳセグメントを含む、遺伝子組み換え複製可能３セグメントアレナウイルス粒子である。コンストラクト２は、ＰＩＣＶの毒性株継代１８に基づく、それぞれ、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６の融合タンパク質をコードする、２つのＳセグメントを含む、遺伝子組み換え複製可能３セグメントＰＩＣＶ粒子である。コンストラクト１のみ、または、コンストラクト１の代わりにコンストラクト２を単剤療法注射する、異なる用量レベル及びスケジュールを分析した（図５、Ｂｏｎｉｌｌａ Ｗ，ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ Ｍｅｄ．２０２１；２（３）：１－１７を参照されたい）。

【0199】

患者は、第１／２相研究に登録された。登録されたコホート用量、及び患者の数は、以下のとおりである。コンストラクト１単剤療法のコホート１に関しては、用量は５×１０^５複製可能ウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ；ｎ＝１３）であった；コンストラクト１単剤療法のコホート２に関しては、用量は５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであった（ｎ＝１３）。コンストラクト１とコンストラクト２の交代単剤療法のコホート１に関しては、コンストラクト１の用量は５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、コンストラクト２の用量は１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであった（ｎ＝５）；コンストラクト１とコンストラクト２の交代単剤療法のコホート２に関しては、コンストラクト１の用量は５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであり、コンストラクト２の用量は１×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであった（ｎ＝１）。登録された患者の７８．２％は頭頸扁平上皮細胞癌を有し、７５％は男性であった。年齢の中央痴は６２歳であった（年齢の範囲は、３０～８６歳であった）。登録された患者の５９．４％は、米国東海岸癌臨床試験群（ＥＣＯＧ）の性能ステータスが１であり、一連の治療法の前の中央痴は３であった（範囲は、１～８であった）。最初のラウンドの治療後の、免疫原性の測定及び分析を、以下に示す（即ち、実施例ＩＩ）。具体的には、コンストラクト１単剤療法で治療した患者は、５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト１を受けた。コンストラクト２単剤療法で治療されたが、データ収集の時間までにはコンストラクト１で治療されなかった患者は、１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト２を受けた。

【0200】

６６個の試料（最大１３回の時点での、１２名の患者）からの、血清サイトカイン及びケモカインパターンを、３０プレックスメソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）パネルにより評価した。治療後の、血清中のＩＦＮ－γシグネチャーは、免疫活性化の初期の兆候である。コンストラクト１の単回投与後に、患者の９０％においてＩＦＮ－γレベルが増加したことを、血清の３０プレックス分析の階層クラスター化は示した（図６Ａを参照されたい）。コンストラクト１の単回投与による治療の４日後に、本分析の９名の患者ほぼ全員において、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、及びＴＮＦαのレベルが増加した（図６Ｂ）。

【0201】

免疫刺激性サイトカイン及びケモカインレベルの、上記変化は、ナチュラルキラー（ＮＫ）及びＴ細胞の活性化の初期の兆候である。さらに、全身でのサイトカインレベルの、バランスが取られた生理学的増加もまた、ウイルス誘発性の免疫活性化を示す。同時に、サイトカインレベルの変化は一般に、有害事象と関連していなかった。

【0202】

ベースライン、及び、それぞれ、コンストラクト１またはコンストラクト２の単回投与の１５日後の試料を用いて、５名の患者において、直接ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ分析を実施した。具体的には、７名の患者からの、凍結保存して解凍した末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を、直接エキソビボＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ測定のために、重なり合うＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ペプチドで２４時間（±２時間）刺激した。７名のうち５名の患者から、データカットオフの時点で、ＥＬＩＳｐｏｔにより評価することができる十分な細胞が得られた。コンストラクト１及びコンストラクト２で処理した患者における、循環機能的Ｅ６／Ｅ７特異的Ｔ細胞の数は、エキソビボ直接ＥＬＩＳｐｏｔにおいて、検出を可能にするレベルに（即ち、Ｔ細胞のインビトロ増殖を伴わずに）達した。

【0203】

図７Ａに示すように、患者は全員（ｎ＝５）、ベースラインから１５日目まで、ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７重複ペプチドに対する、抗原特異的Ｔ細胞応答の強力な誘発を有した。図７Ｂに示すように、コンストラクト１単剤療法の単回投与を全身（ＩＶ）で受けた４名の患者において、ベースラインから１５日目までに、最大２５０倍の、抗原特異的ＩＦＮ－γ分泌Ｔ細胞の増加が観察された。加えて、コンストラクト２の単剤療法を単回投与（ＩＶ）した後、１名の患者で１５０倍の増加が観察された。

【0204】

細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を３名の患者で実施した。具体的には、ＩＣＳにより、３名の患者からの試料を、ベースライン及び１５日目において評価した。３名の患者（２名の患者はコンストラクト１で治療し、１名の患者はコンストラクト２で治療した）に由来する、凍結保存したＰＢＭＣを、ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７重複ペプチドで６時間刺激し、その後の免疫染色のために洗浄した。ＩＦＮ－γ^＋、ＴＮＦ－α^＋、ＩＬ－２^＋、ＣＤ１０７ａ^＋、ＣＤ４^＋、及びＣＤ８^＋ Ｔ細胞の頻度を、ＩＣＳで測定し、その後、多色フローサイトメトリーで分析した。ＩＣＳにより評価した３名の患者は、細胞をＥＬＩＳｐｏｔで試験した７名の患者に含まれた。

【0205】

図７Ｃ～７Ｅは、３名の患者の、ベースライン、及び１５日目における、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋ Ｔ細胞の頻度、ならびに、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞にてゲーティングされたＩＦＮ－γ^＋、ＴＮＦ－α^＋、及びＣＤ１０７ａ^＋細胞の頻度の、例示的な疑似カラープロットを示す。２名の患者は、それぞれ、ベースラインと１５日目において、コンストラクト１（８．３％と３２．９％；図７Ｃを参照されたい）、及び、コンストラクト２（４８．２％と６９．３％；図７Ｅを参照されたい）の単回投与後の、全末梢Ｔ細胞集団内で、Ｔ細胞、主にＣＤ８^＋ Ｔ細胞において、増加を有した。ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の中でも、Ｅ６／Ｅ７特異的ＩＦＮ－γ^＋ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞は、コンストラクト１またはコンストラクト２の単回投与後に、実質的に増加した。例えば、抗原特異的ＩＦＮ－γ^＋ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞は、コンストラクト１の単回投与後、ベースラインの０％から、１５日目に２．８％に増加した（図７Ｃを参照されたい）。コンストラクト２の単回投与後に、抗原特異的ＩＦＮ－γ^＋ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞は、ベースラインの０％から、１５日目に８．１％に増加した（図７Ｅを参照されたい）。同様に、Ｅ６／Ｅ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞は、１５日目において、相対的に高いＣＤ１０７ａの発現を有した。他方、コンストラクト１で治療した１名の患者は、ＴＮＦ－α^＋及びＣＤ１０７ａ^＋のわずかな増加を有したが、ＩＦＮ－γ^＋またはＣＤ８^＋ Ｔ細胞の増加は有しなかった（図７Ｄを参照されたい）。

【0206】

さらに、循環ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の多機能性を調査するために、３名の患者において、脱顆粒マーカーＣＤ１０７ａ、及び／または、サイトカインＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの同時染色を実施し、相対的頻度を図７Ｆに示した。

【0207】

上で図示したとおり、アレナウイルスベクターによる、ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ治験からのデータは最初、単剤療法として、Ｅ７／Ｅ６を発現するコンストラクト１またはコンストラクト２を全身注射した、ＨＰＶ１６^＋癌を有する患者は、鍵となる全身サイトカイン及びケモカインレベルが増加したことを示し、このことは、ウイルス誘発性の免疫活性化を示している。さらに、患者は、最初の投与後に、最大８％の、循環ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７特異的多機能性ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の、強力な誘発を示した。

【0208】

まとめると、本実施例は、Ｅ７／Ｅ６を発現するアレナウイルスベクターは、免疫療法、及び／または、化学療法不応性ＨＰＶ１６^＋癌を有する患者に対する、新規の潜在的な治療法を構成することを示す。

【0209】

実施例ＩＩＩ
ＨＰＶ１６^＋癌を有する患者における、アレナウイルスベースのがん免疫療法の用量漸増、及び用量拡大
本実施例は、ＨＰＶ１６^＋が確認される癌を有する患者における、コンストラクト１単剤療法、及び、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の、ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ第Ｉ／ＩＩ相多国籍マルチセンターオープンラベル研究について記載する。実施例は、２つのパート：第Ｉ相用量漸増、及び、第ＩＩ相用量拡大を含む。ＨＰＶ１６^＋頭頸扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）、及び、他の、ＨＰＶ１６^＋が確認された癌を有する患者における、ペムブロリズマブを用いる、または用いない、コンストラクト１単剤療法、及び／または、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を、用量拡大中に探索した。

【0210】

１．使用した試薬、及び、以前のインビボ実験
コンストラクト１は、ＬＣＭＶ株ＷＥに由来する、ウイルス表面糖タンパク質を有するＬＣＭＶ株クローン１３に基づく、遺伝子組み換えされたＴｈｅｒａＴ（登録商標）ベクターである（Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．２０１７；８：１５３２７）。コンストラクト１ベクターは、３セグメント複製可能弱毒化アレナウイルスベクター内の、ＨＰＶ１６ Ｅ７及びＥ６タンパク質（即ち、Ｅ７Ｅ６融合タンパク質）に基づき、非発がん性合成融合タンパク質を送達する。この合成Ｅ７Ｅ６融合タンパク質は、５つのピボット位置において、特に変異して（Ｃａｓｓｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ，２００４，Ｖａｃｃｉｎｅ．２００４；２２（３－４）：５２０－２７）、その網膜芽細胞腫タンパク質、及び、腫瘍タンパク質ｐ５３結合能がなくなっており、これによって、完全な抗原性を依然として維持しながら、親のＥ７及びＥ６タンパク質の発がん性がなくなっている。

【0211】

コンストラクト１は、免疫応答に寄与するベクター粒子のいくつかの画分を含有する。コンストラクト１を設計するために、１つの小セグメント（Ｓセグメント）が、ＬＣＭＶ株ＷＥ由来のＬＣＭＶウイルス表面糖タンパク質、加えて、変異Ｅ７Ｅ６融合タンパク質を有し、第２のＳセグメントが、ＬＣＭＶウイルス表面核タンパク質、加えて、第２の、変異Ｅ７Ｅ６融合タンパク質の同一のコピーを有するように、ＴｈｅｒａＴ（登録商標）ベクターを設計して、Ｅ７Ｅ６の変異版をコードした。加えて、コンストラクト１は、ＬＣＭＶクローン１３の大セグメント（Ｌセグメント）を含有する。したがって、コンストラクト１は、３つのゲノムセグメント（即ち、ｒ３ＬＣＭＶ）、２つのＳセグメント、及び１つのＬセグメントを含有する。３つのゲノムセグメントの非効率なパッケージングには、野生型ＬＣＭＶと比較してのコンストラクト１の弱毒化が根底にある。

【0212】

非臨床的研究は、マウスＴＣ－１モデルにおける、触知可能なＨＰＶ１６^＋腫瘍の腫瘍制御での、コンストラクト１の有効性を示した。図１４Ａに示すように、コンストラクト１の用量は、免疫原性と強力に相関し、図１４Ｂに示すように、多量のコンストラクト１もまた、マウスＴＣ－１腫瘍モデルにおける腫瘍増殖制御の改善をもたらした。具体的には、わずか１００ＲＣＶ ＦＦＵを含有するコンストラクト１の用量は、腫瘍増殖を有意に抑制した。用量当たり１０，０００～１，０００，０００ＲＣＶ ＦＦＵの範囲の、コンストラクト１の最大の３つの用量を用いる投与は、ほぼ完全な腫瘍増殖の抑制、ならびに、生残時間及び全体生残（ＯＳ）に関して著しい効果をもたらした。最大の有効用量は、これら３つのうち最低用量（１０，０００ＲＣＶ ＦＦＵ）において到達したことを、これらのデータは示唆する。全てのコンストラクト１の用量は、本モデルにおいて十分認容された。さらなる非臨床研究においては、腫瘍がおよそ１００ｍｍ^３となったときに、コンストラクト１を、ＩＶまたはＩＴのいずれかで動物に投与した。両方の場合において、図１４Ｃに示すように、単回用量のコンストラクト１は、治療したマウス全てにおいて、腫瘍増殖の有意な抑制をもたらし、ＩＴ投与は、およそ４０％の長期生残をもたらした。この非臨床データは、コンストラクト１は、ＨＰＶ１６^＋腫瘍の局所治療として投与（ＴＣ－１腫瘍のＩＴ投与）されたときに非常に効果的であり、このことは、全体の臨床開発プログラムの一部としての直接ＩＴ投与により、コンストラクト１の投与を支持することを示す。さらに、６ヶ月後に、これらの長期生残動物に同じ腫瘍を再投与したときには、新しい腫瘍増殖は検出されなかった。この保護は、コンストラクト１を単回投与のみで受けて、原発性腫瘍を治療したマウスにおいて明らかであった。これらの結果は、原発性腫瘍、転移性腫瘍、及び再発性腫瘍を治療するための、ヒトにおけるコンストラクト１のさらなる調査の可能性を示唆する。

【0213】

コンストラクト２は、ＰＩＣＶのＰ１８バリアントに基づく、遺伝子組み換えされた、弱毒化複製可能３セグメントＰＩＣＶベクターである。コンストラクト２はコンストラクト１におけるものと同じ、非発がん性ＨＰＶ１６ Ｅ７Ｅ６抗原を送達する。

【0214】

コンストラクト２は、不可欠なＰＩＣＶウイルス表面糖タンパク質及び核タンパク質を、１つのゲノムセグメントから２つの人工的に複製したゲノムＳセグメントに分離することにより、コンストラクト１ベクターにおけるものと同じ３セグメント原理を用いて設計された。結果的に、コンストラクト２ベクターは、ＰＩＣＶウイルス表面糖タンパク質、加えて、変異Ｅ７Ｅ６融合タンパク質を有する１つのＳセグメント；ＰＩＣＶウイルス表面核タンパク質、加えて、第２の、変異Ｅ７Ｅ６融合タンパク質の同一のコピーを有する、第２のＳセグメント；及び、ＰＩＣＶのＰ１８バリアントのＬセグメントを含む、３つのゲノムセグメント（即ち、ｒ３ＰＩＣＶ）を含有する。コンストラクト１と同様に、コンストラクト２におけるこれらのＳセグメントの遺伝子設計は、セグメント間での組み換え、及び、ＰＩＣＶ糖タンパク質と核タンパク質の両方をコードする、機能的野生型様単一Ｓセグメントへの復帰突然変異を絶対的に防止する。

【0215】

現在の実施例では、コンストラクト２は、連続交代ＩＶ投与方法に従い、コンストラクト１とともに投与され、ここでは、コンストラクト２は初回用量としてＩＶ投与され、次の用量はコンストラクト１のＩＶ投与されブースター用量であり、その後の投与は、コンストラクト２とコンストラクト１を継続して交代させる。本治療計画は、「コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法」として示される。コンストラクト２／コンストラクト１の交代治療レジメンは、腫瘍増殖の抑制をもたらし、全体の生残（ＯＳ）を延ばしたことを、ＴＣ１モデルにおける、触知可能なＨＰＶ１６^＋腫瘍を用いる非臨床研究は示しており、これは、ベクターのみ（相同のコンストラクト１＆コンストラクト１及びコンストラクト２＆コンストラクト２）、または、コンストラクト１で開始し、次いでコンストラクト２投与をブーストするいずれかに対して優れている。加えて、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法は、試験したありとあらゆる組み合わせレジメンにおいて、最も強力なＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答（免疫原性）を誘発した。図１４Ｄに示すように、コンストラクト１及びコンストラクト２の、合理的に設計した全ての投与レジメンの中で、コンストラクト２、続いてコンストラクト１の、連続ＩＶ投与（１０^５ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト２で開始し、１０^５ＲＣＶ ＦＦＵのコンストラクト１でブーストする、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター投与と呼ばれるレジメン）が、最も免疫原性のレジメンであることが証明され、これは、他の組み合わせ配列、または単一ベクターレジメンにより誘発されたものより実質的に高い、ＨＰＶ１６、Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を引き起こした。具体的には、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクターレジメン（Ｇ４）を受ける群において、コンストラクト１をブースト投与した５日後に、ＨＰＶ Ｅ７特異的細胞の頻度は、全ＣＤ８ Ｔ細胞の約４３％に達した。さらに、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の優れた免疫学的効果は、観察期間にわたり維持された（図１４Ｄを参照されたい）。図１４Ｅに示すように、ＨＰＶ１６^＋ ＴＣ１腫瘍モデルを用いるさらなる効能研究において、１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ（Ｇ４）の用量において、各ベクターを共にＩＶ投与する、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法もまた、コンストラクト１またはコンストラクト２のみ（Ｇ１及びＧ２）のいずれかを用いる相同プライムブーストレジメンと比較して、優れた腫瘍抑制能力を付与した。これらを合わせると、これらの知見は、ＨＰＶ１６^＋癌患者における、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法のさらなる臨床試験を是認する。

【0216】

加えて、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））を、本実施例で使用する。ペムブロリズマブは、単剤療法（腫瘍ＰＤ－Ｌ１が陽性［ＣＰＳ≧１］の患者に対する）、または、化学療法との組み合わせにおける、転移性もしくは切除不能な再発性ＨＮＳＣＣを有する患者の、第一線の治療に対して、ＦＤＡ及び欧州委員会により、最近認可された。

【0217】

２．実験設計
ＨＰＶ１６^＋ＨＮＳＣＣの患者は、ＩＶ治療群に登録する。ＨＰＶ１６^＋ＨＮＳＣＣ、及び、他のＨＰＶ１６^＋が確認された癌を有する患者は、ＩＴ ＩＶ治療群に含める。研究設計の概略は、図１５を参照されたい。

【0218】

第Ｉ相の用量漸増は、２つの治療レジメン：コンストラクト１単剤療法及びコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を有する。コンストラクト１単剤療法は、３つの異なる群（１、２、及び５、下表２を参照されたい）に与える。群１、２、及び５を研究し、静脈内（ＩＶ）及び腫瘍内（ＩＴ）治療のための、コンストラクト１の、安全な推奨される第ＩＩ相用量（ＲＰ２Ｄ）を決定した。群５は、３回用量で与えられるＩＶ投与として、コンストラクト１を調査する。コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法は、３つの異なる群（３、４、及び６）に与えられる。群３、４、及び６を研究史、ＩＶ投与のための、コンストラクト２の安全なＲＰ２Ｄを決定した。群６では、患者がまず、投与されるコンストラクト２を、続いてコンストラクト１を、各患者が、３用量のコンストラクト２、及びコンストラクト１をそれぞれ受ける（合計で６用量）まで交互に受けるとなるように、３用量のコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の投与を調査する。

【0219】

第ＩＩ相用量拡大は、下表２に示すように、最大で６つの治療群を有する。用量漸増結果からの、安全性、有効性、及び／またはバイオマーカーデータに基づき、特定の用量拡大治療群を適宜開放した。第ＩＩ相用量拡大群Ａ及びＢは、第Ｉ相用量漸増群１の完了時に開始する。第ＩＩ相用量拡大群Ｄ及びＥは、第Ｉ相用量漸増群３の完了時に開始する。第ＩＩ相用量拡大群Ｃは、第Ｉ相用量漸増群２の完了時に開始する。第ＩＩ相用量拡大群Ｆは、第Ｉ相用量漸増群４の完了時に開始する。

【0220】

第Ｉ相用量漸増に関して、群１、２、３、及び４の、およそ２０名の患者を各群に登録する；群５及び６は、それぞれおよそ３～６名の患者を登録する。各群に登録された患者の実際の数は、ＲＰ２Ｄが到達したときに応じて変化する。用量レベルが安全であることが測定された後に、各群にさらに患者を加えて、十分なバイオマーカーデータが確実に得られるようにしてよい。第ＩＩ相用量拡大に関して、群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及びＦでは、およそ２０名の患者が各群に登録された。全体で、およそ２００名の患者が本研究で登録され、そのうち、およそ１００名が第Ｉ相で、およそ６０～１００名が第ＩＩ相であった。

【表3】

【0221】

群２、４、Ｃ、及びＦに関して、最初の用量が、コンストラクト１のＩＴ投与である場合、ＩＴ投与を行ってはならないのであれば、最初の用量は、所与の用量レベルでＩＶとして与えられなければならない。この場合、所与の用量レベルに対するこの群は、ＨＰＶ１６^＋ 非ＨＮＳＣＣ癌に限られる。

【0222】

２．１ 第Ｉ相用量漸増
第Ｉ相用量漸増は、安全性及び忍容性段階であり、主要な有効性エンドポイントは存在しない。用量限定毒性（ＤＬＴ）観察期間の間に投与された最初の研究薬剤からのＤＬＴの発生を監視する。安全性パラメーター（例えば、ＡＥ及びＳＡＥの種類、頻度、及び重症度）を記録する。忍容性パラメーター（例えば、用量の中断、減少及び用量強度、ならびに、実験室での値の評価）もまた、記録する。第Ｉ相における、二次有効性エンドポイントは、客観的な奏効率（ＯＲＲ）及び疾患制御率（ＤＣＲ）、充実性腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）、及び、充実性腫瘍における免疫応答評価基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）である。ＯＲＲ及びＤＣＲを示す。事象である有効性エンドポイントまでの時間（奏効期間、無進行生存［ＰＦＳ］、及び、全体の生残［ＯＳ］）を列挙する。調査の読み取りとして、Ｅ７及びＥ６抗原特異的Ｔ細胞応答、ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞測定値、ベースライン及び治療後におけるＣＤ８トレーサーＰＥＴ走査での、ＳＵＶベースの定量的測定値の変化、ならびに、腫瘍被検査物、血液、及び血清／血漿内のバイオマーカーを試験する。６つの群の患者を割り当て、以下のとおりに治療する。

【0223】

群１（コンストラクト１ ＩＶのみ）：ＨＰＶ１６^＋ ＨＮＳＣＣを有する患者における、現行のＩＶ投与としてのコンストラクト１。

【0224】

群２（コンストラクト１ ＩＴ－ＩＶ）：ＩＴ投与の影響を受けやすい、安全で接近可能な腫瘍部位を有するＨＰＶ１６^＋癌の患者における、最初の用量はＩＴ投与としてのコンストラクト１、続いて、その後の用量はＩＶ投与としての、現行のコンストラクト１。

【0225】

群３（コンストラクト２ ＩＶ、及びコンストラクト１ ＩＶ）：ＨＰＶ１６^＋ ＨＮＳＣＣを有する患者における、ＩＶ投与（最初）としてのコンストラクト２、続いて、現行ベースでの、コンストラクト１ ＩＶの交代治療。

【0226】

群４（コンストラクト１ ＩＴ、続いて、コンストラクト２ ＩＶ及びコンストラクト１ ＩＶ）：最初の用量はＩＴ投与としてのコンストラクト１。治療は、コンストラクト２ ＩＶが続き、その後、ＩＴ投与の影響を受けやすい、安全で接近可能な腫瘍部位を有するＨＰＶ１６^＋癌の患者における、現行ベースでの、コンストラクト１ ＩＶの交代治療が続く。ＩＴ投与には、１つの腫瘍部位のみが必要である。

【0227】

群５（３用量のコンストラクト１ ＩＶ）：評価した最大用量での３回の投与が、連続投与よりも、Ｅ７／Ｅ６に対する同様の免疫原性を誘発するか否かを評価する。患者は、放射線治療を進めた場合に、別の３回用量のコンストラクト１ ＩＶを受ける選択肢を有する。

【0228】

群６（それぞれ、３回用量のコンストラクト２ ＩＶ、及びコンストラクト１ ＩＶ）：コンストラクト１及び２の治療用ワクチンの投与回数が限定されると、疾患の制御と適合性がある、一定レベルの循環Ｔ細胞に到達し、最後の注射の後に持続させることが可能か否かを試験するために、合計で６回の投与に対して、それぞれコンストラクト１及びコンストラクト２の３回投与を評価する。

【0229】

群１、３、５、及び６の患者は、１回以上の全身治療を含む、標準的なケア治療法において、腫瘍の進行または再発を伴う、ＨＰＶ１６^＋ ＨＮＳＣＣを有する患者である。群２及び４の患者は、ＩＴ投与の影響を受けやすい、安全で接近可能な腫瘍部位を有する、ＨＰＶ１６^＋癌を有する患者であり、この人達は、１回以上の全身治療を含む、標準的なケア治療法において、腫瘍の進行または再発を有した。

【0230】

第Ｉ相用量漸増の間に、バックフィルコホートを調査し、安全性及び潜在的な効能をよりよく評価するのが安全であると宣言されている、コンストラクト１単剤療法及び／またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の用量レベル（複数可）で評価される、さらなる患者を登録する。

【0231】

選択されたバックフィルコホートは、分子シグナル伝達及び腫瘍細胞応答における、コンストラクト１及び／または２の治療の効果を調査するための、「新しい一対の生検」を必要とし、効能及び応答を予測可能なバイオマーカーを識別する。さらに、腫瘍材料使用して、免疫組織化学染色により、腫瘍浸潤リンパ球のレベルを定量化する。分析により、腫瘍内の免疫細胞、及び特に、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の腫瘍浸潤の評価がもたらされる。

【0232】

バックフィルコホートの概略図を図１６に示す。バックフィルコホートは、コンストラクト１単剤療法用量コホート数と同じ数をキープし、各バックフィルコホートに小文字の文字を加えることで、さらに識別する。一例として、用量レベル１でコンストラクト１を調査する、コンストラクト１単剤療法用量コホート１が安全であると宣言された後、バックフィルコホートを、コホート１ａ、１ｂ、１ｃ、１ｄ、及び１ｅと名付けた。
バックフィルコホートはコンストラクト１及び／またはコンストラクト２治療を調査することができる：
・異なる投与スケジュールにおいて、
・ペムブロリズマブの、コンストラクト１及び／またはコンストラクト２治療の組み合わせを調査し、
・ＨＰＶ１６＋肛門癌患者を登録し、コンストラクト１及び／またはコンストラクト２をＩＶのみとして投与する、及び／または
ウイルスの排出、リンパ球サブセット（ＴｒｕＣｏｕｎｔ）、血清バイオマーカー、及び免疫原性の中枢分析のために、さらなる時点において生体試料を収集する。

【0233】

２．１．１ さらなるバイオマーカー分析
バックフィルコホート－ｋに関して、ウイルス排出、リンパ球サブセット（ＴｒｕＣｏｕｎｔ）、血清バイオマーカー、及び免疫原性を収集するさらなる時点を加えて、ｑ３ｗ、ｑ６ｗ用量スケジュールにおける、コンストラクト１単剤療法、またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法に対する、さらなる翻訳及びバイオマーカーデータを提供する。

【0234】

２．１．２ コンストラクト１及び／または２の研究治療に対する、交代投与スケジュールの調査
以前に推奨された安全な用量を用いる投与頻度は増加する。例えば、バックフィルコホート－ｂ及び－ｄは、２週間毎の用量（ｑ２ｗ）の投与スケジュールにおいて、コンストラクト１単剤療法を調査する。バックフィルコホート－ｃ及び－ｅは、サイクル１～４の４週間毎、及び、サイクル５から開始する８週間毎の投与スケジュールにおいて、コンストラクト１単剤療法及び／またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を調査する。このスケジュールは「ｑ４ｗ、ｑ８ｗ」として知られている。バックフィルコホートにおける「ｑ２ｗ」または「ｑ４ｗ、ｑ８ｗ」投与スケジュールがオープンになると、ＤＬＴは、用量漸増コホートと同じプロセスを用いて評価される。コンストラクト１及び／または２の研究治療における、安全性、忍容性、抗腫瘍活性、及び免疫原性の特性決定を、調査した交代投与スケジュールにおいて評価する。

【0235】

２．１．３ コンストラクト１及び／または２の研究治療が進行の際に加えられた、ペムブロリズマブによる治療を受ける患者
研究の第Ｉ相部分において、選択されたバックフィルコホートは、疾患が進行しており、ペムブロリズマブ治療が継続し、コンストラクト１単剤療法、またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法のいずれかを加えた、ペムブロリズマブ単剤療法による治療を受ける患者を登録する。疾患が進行し、コンストラクト１及び／または２治療を加えた後で、患者にペムブロリズマブ単剤療法を続けさせる理論的根拠は、患者がペムブロリズマブで進行するようになると、耐性を有する、または不応性の患者は、ペムブロリズマブが別の治療と組み合わされて投与される場合に、再び応答を始め得るという仮説を調査するためである。

【0236】

バックフィルコホート－ｆ及び－ｈは、疾患が進行しているペムブロリズマブ治療患者に、そのペムブロリズマブを継続させ、かつ「ｑ３ｗ、ｑ６ｗ」スケジュールに従い、コンストラクト１単剤療法、またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を加えさせる。同様に、バックフィルコホート－ｇ及び－ｉは、疾患が進行しているペムブロリズマブ治療患者に、そのペムブロリズマブを継続させ、かつ「ｑ４ｗ、ｑ８ｗ」に従い、コンストラクト１単剤療法、またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を加えさせる。

【0237】

ペムブロリズマブ単剤療法中の、患者の疾患の進行は適宜、不応性疾患を有するものとして、または、ペムブロリズマブへの耐性として特徴付けられなければならない。不応性及び耐性疾患の定義とは、以下のとおりである：不応性疾患（一次耐性）を有する患者は、充実性腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）バージョン１．１（ｖ１．１）により、ペムブロリズマブ単剤療法の最初の投与から６ヶ月以内に進行を有するものとして定義される。安定した疾患（ＳＤ）を有し、その後、ペムブロリズマブの最初の投与から６ヶ月以内に疾患進行の基準を満たす患者は、不応性疾患を有するものとみなされなければならない。ペムブロリズマブへの耐性（二次耐性）を有する患者は、ペムブロリズマブ単剤療法の最初の投与後、６ヶ月以降に、進行しているものと定義される。例外：ＡＥが原因の中止後にも疾患進行を有し、少なくとも６ヶ月ペムブロリズマブを受けず、初期臨床効果の証拠を有しない患者は、一次耐性を有するものとして最も良く分類される。

【0238】

２．１．４ ＩＶ投与のみを受けるＨＰＶ１６^＋肛門癌患者
バックフィルコホート－ｊは、ＩＶ投与を受ける５名のＨＰＶ１６^＋肛門癌患者を登録し、ｑ３ｗ、ｑ６ｗ投与スケジュールにおける、コンストラクト１単剤療法、またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法のいずれかの効能のみを評価する。このバックフィルコホート（複数可）に関与する資格を有するためには、患者は、必要とされる対象基準及び除外基準を満たさなければならない。

【0239】

２．２ 第ＩＩ相用量拡大
第ＩＩ相用量拡大は、第Ｉ相用量漸増で定義されている、ＲＰ２Ｄにおけるコンストラクト１単剤療法、及び／またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を評価する。

【0240】

群Ａ、Ｂ、Ｄ、及びＥに登録されている患者は、１回以上の全身治療を含む、標準的なケア治療法において、腫瘍の進行または再発を伴う、ＨＰＶ１６^＋ ＨＮＳＣＣを有する患者である。群Ｃ及びＦに登録されている患者は、ＩＴ投与の影響を受けやすい、安全で接近可能な腫瘍部位を有する、ＨＰＶ１６^＋癌を有する患者であり、この人達は、１回以上の全身治療を含む、標準的なケア治療法において、腫瘍の進行または再発を有した。

【0241】

第ＩＩ相用量拡大群における、一次有効性エンドポイントは、ＲＥＣＩＳＴ及びｉＲＥＣＩＳＴに基づく、ＯＲＲ及び疾患制御率である。ＲＥＣＩＳＴによるＯＲＲは、Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ法に従い、正確な両側９５％ＣＩを組み合わせたポイント推定を用いてまとめられる。第ＩＩ相試験に対する二次有効性エンドポイントは、奏効期間、ＰＦＳ、及びＯＳである。安全性パラメーター（例えば、ＡＥ及びＳＡＥの種類、頻度、及び重症度）を記録する。忍容性パラメーター（例えば、用量の中断、減少及び用量強度、ならびに、実験室での値の評価）もまた、記録する。ベースラインからの、標的病変腫瘍サイズの変化割合は、記述統計を用いてまとめられ、各時点で提示される。腫瘍サイズの最も高い変化割合もまた、まとめられている。腫瘍サイズもまた、ウォーターフォールプロットを用いてグラフにて示される。客観的な応答を有する治療群内の２名の患者を、さらなる開発の支えとして観察する。調査の読み出しとして、Ｅ７及びＥ６抗原特異的Ｔ細胞応答、ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞測定値、ならびに、腫瘍被検査物、血液、及び血清／血漿内のバイオマーカーを試験する。

【0242】

３．患者集団
本実施例は、あらゆる起源の、ＨＰＶ１６＋ ＨＮＳＣＣ及びＨＰＶ１６＋癌（例えば、頸、肛門、膣、外陰、または陰茎癌）を有する成人患者で実施される。対象基準を全て満たし、除外基準をいずれも満たさない患者のみが、本研究に登録することができる。以下の基準を、第Ｉ相用量漸増、及び第ＩＩ相用量拡大の両方に適用する。

【0243】

３．１ 対象基準
以下の基準を全て満たす場合にのみ、患者は本研究に含まれる資格がある：
１．インフォームドコンセントの同意書（ＩＣＦ）への署名時に１８歳以上である、男性または女性の患者。
２．患者は、コンピュータトモグラフィー（ＣＴ）、及び／または、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）により測定可能な、１個以上の病変を有しなければならず、これは、研究の実施中に、ＲＥＣＩＳＴ及びｉＲＥＣＩＳＴに従い、腫瘍応答に関して評価される。
３．０～１の、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）性能ステータス。
４．以前の治癒放射線療法が、研究治療投与の４週間以上前に完了していなければならない。以前の焦点姑息放射線療法が、研究治療投与の２週間以上前に完了していなければならない。
５．スクリーニング実験室値が以下の基準を満たさなければならず、研究治療投与前の２８日以内に入手されなければならない：
・絶対好中球数≧１，５００／ｍｍ^３（１．５×１０^９Ｌ）
・血小板≧１００×１０^３／ｍｍ^３（１００×１０^９／Ｌ）。
・ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ。
・血清クレアチニン≦２．０×通常の上限値（ＵＬＮ）またはクレアチニンクリアランス＞３０ｍＬ／分（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ式を用いる）。
・アスパルテートアミノトランスフェラーゼ及びアラニンアミノトランスフェラーゼ≦２．５×ＵＬＮ、または、肝臓転移を有する対象に対しては、≦５×ＵＬＮ。
・全ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ。直接ビリルビン≦ＵＬＮ、全ビリルビンレベルを有する対象に対しては、＞１．５×ＵＬＮ。
・国際標準比率（ＩＮＲ）またはプロトロンビン時間（ＰＴ）≦１．５×ＵＬＮ、ただし、ＰＴまたは部分的トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）が、抗凝血物質の使用目的の治療範囲内にある限りにおいて、対象が抗凝血物質治療法を受けない限り。
・活性化部分的トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）、または、部分的トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）≦１．５×ＵＬＮ、ただし、ＰＴまたはＰＴＴが、抗凝血物質の使用目的の治療範囲内にある限りにおいて、対象が抗凝血物質治療法を受けない限り。
６．研究員の考えにおいて、研究手順、制限、及び必要条件を理解することができ、遵守する意思がある。
７．研究において、参加の意思があり、参加のためのインフォームドコンセントを自発的に提供することができる。

【0244】

治療群１、群３、群５、群６、群Ａ、または群Ｄに登録された患者に関して
８．患者は、遺伝子型試験により、確認されたＨＰＶ１６^＋ ＨＮＳＣＣの文書を提出しなければならない。
９．患者は、１回以上の全身治療を含む、標準的なケア治療法において、腫瘍進行または再発（例えば、白金ベース療法、及び／または、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１療法の失敗）を有しなければならないか、または、標準的な治療法に禁忌を示す患者でなければならない。
１０．スポンサーと研究員との別段の同意がない限り、腫瘍組織（アーカイブ［２年以内］、または、スクリーニング中に新しい生検材料を提供することができる）が、最後の治療以降の患者の進行に従って収集される。

【0245】

第Ｉ相治療群１、２、３、または４において、現行のペムブロリズマブ療法（バックフィルコホート－ｆ、－ｇ、－ｈ、及び－ｉに適用可能である）に、コンストラクト１及び／または２治療を加えたバックフィルコホートに登録された患者に関して
１１．患者は、遺伝子型試験により、確認されたＨＰＶ１６^＋ ＨＮＳＣＣの文書を提出しなければならない。
１２．患者は、１回以上の全身治療を含む、標準的なケア治療法において、腫瘍進行または再発（例えば、白金ベース療法、及び／または、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１療法の失敗）を有しなければならないか、または、標準的な治療法に禁忌を示す患者でなければならない。
１３．スポンサーと研究員との別段の同意がない限り、腫瘍組織（アーカイブ［２年以内］、または、スクリーニング中に新しい生検材料を提供することができる）が、最後の治療以降の患者の進行に従って収集される。
１４．患者は、登録前にペムブロリズマブ単剤療法で現行の治療を受け、初期応答後に進行の証拠を示さなければならない。
以下の基準が全て満たされなければならない。
患者は、以下でなければならない：
・ｑ３ｗスケジュールで、少なくとも２サイクルのペムブロリズマブ単剤療法、または、より長いスケジュールで等価なもの（例えば、ｑ６ｗスケジュールの場合１サイクル）を受けている
・腫瘍応答（完全奏功［ＣＲ］もしくは部分奏功（ＰＲ］）、または、ペムブロリズマブ単剤療法の間に、ＲＥＣＩＳＴｖ１．１により、６ヶ月間以上続く延長ＳＤのいずれかの、最良の応答を示す
・その後、ｉＲＥＣＩＳＴにより、ペムブロリズマブ単剤療法において進行する（進行は、臨床的に許容されるのであれば、最初のＲＥＣＩＳＴｖ１．１進行の少なくとも４週間後に、第２の走査により確認される）。
注：患者は、本研究の開始前に、ペムブロリズマブ単剤療法を中断してはならない。

【0246】

第Ｉ相バックフィルコホート－ｊに登録された患者（ＨＰＶ１６^＋肛門癌）に関して
患者は、以下を有しなければならない：
１５．組織学的、または細胞学的に確認された、肛門管の局所進行した、または転移性の扁平上皮細胞癌。
注：後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）基準を満たさない、ＨＩＶ陽性患者は資格がある。注：登録の９０日より前にＨＰＶ予防ワクチンを受けている可能性がある患者は資格がある。
１６．免疫組織化学により文書化された、ＨＰＶ１６^＋腫瘍。ＨＰＶ１６^＋試験用試料は、遺伝子型試験のための、登録前に提出されなければならない。
１７．白金ベースの化学療法などの、１回以上の全身治療法を含む、標準的なケア治療での、腫瘍進行もしくは再発、または、標準的なケア治療法の資格がない。
１８．スポンサーと研究員との別段の同意がない限り、生検に受け入れられる、安全かつ接近可能な腫瘍部位：
注：腫瘍組織は、機関そのもののガイドライン、及び、そのような手順の必要条件に従い、介入放射線医学などの、画像ガイド生検により入手することができる。
１９．生検に受け入れられる腫瘍部位（複数可）とは関係なく、研究の実施中に、ＲＥＣＩＳＴ及びｉＲＥＣＩＳＴに従い、腫瘍応答に関して評価される、１個以上の測定可能な病変。

【0247】

治療群２、群４、群Ｃ、または群Ｆに登録される患者に関して（最初の投与は、腫瘍内投与として与えられるコンストラクト１である）
２０．遺伝子型試験による、確認された（任意の由来の）ＨＰＶ１６^＋癌の文書化。
２１．１回以上の全身治療を含む、標準的なケア治療法における、腫瘍進行または再発を有する患者、または、標準的なケア治療法に禁忌を示す患者に関して。
２２．患者は、スポンサーと研究員との別段の同意がない限り、生検及びＩＴ投与に受け入れられる、安全かつ接近可能な腫瘍部位を有しなければならない：
・腫瘍組織は、機関そのもののガイドライン、及び、そのような手順の必要条件に従い、介入放射線医学などの、画像ガイド生検により入手することができる。
・次に、ＩＴコンストラクト１を腫瘍部位に投与する。
２３．生検及びＩＴ投与に受け入れられる腫瘍部位（複数可）とは関係なく、患者は、研究実施の間に、ＲＥＣＩＳＴ及びｉＲＥＣＩＳＴに従い、腫瘍応答に関して評価される、１個以上の測定可能な病変を有しなければならない。

【0248】

治療群２、群４、群Ｃ、または群Ｆに登録される患者に関して（腫瘍内投与が、代わりにＩＶ投与として与えられる場合）
２４．遺伝子型試験による、確認されたＨＰＶ１６^＋非ＨＮＳＣＣ癌の文書化。
２５．１回以上の全身治療を含む、標準的なケア治療法における、腫瘍進行または再発を有する患者、または、標準的なケア治療法に禁忌を示す患者に関して。
２６．スポンサーと研究員との別段の同意がない限り、腫瘍組織（アーカイブ［２年以内］、または、スクリーニング中に新しい生検材料を提供することができる）が、最後の治療以降の患者の進行に従って収集される。

【0249】

第ＩＩ相治療群Ｂ、または群Ｅに登録される患者に関して
２７．遺伝子型試験による、確認されたＨＰＶ１６^＋ＨＮＳＣＣの文書化。
２８．患者は、添付文書、または生成物特性の一覧（ＳｍＰＣ）に従って、ペムブロリズマブを受ける資格がなければならない（即ち、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１治療法にナイーブであり、白金ベースの治療法が進行している）。
２９．スポンサーと研究員との別段の同意がない限り、腫瘍組織（アーカイブ［２年以内］、または、スクリーニング中に新しい生検材料を提供することができる）が、最後の治療以降の患者の進行に従って収集される。

【0250】

３．２ 除外基準
患者が、以下の基準のいずれかを満たす、または有する場合には、患者は研究から除外される：

【0251】

全ての患者
１．未治療の、及び／または、症候性の転移性中枢神経系（ＣＮＳ）疾患、及び／または、がん種性髄膜炎を有する患者。
例外：以下の場合、脳／ＣＮＳ転移を有する患者は資格を有する：
・彼らは、手術または放射線療法を受けており、疾患は安定しており（各評価に関して、ＭＲＩまたはＣＴスキャンのいずれかの、同一の撮像手法を用いるイメージングによる進行の証拠はない）、あらゆる神経系症状がベースラインに戻っており、及び
・新しい、または、拡大する脳腫瘍の証拠はなく、及び
・研究治療の最初の投与の資格を有する４週間以上前から、安定した用量のコルチコステロイド（≦１０ｍｇのプレドニゾンまたは等価物）を受けている。
注：この例外には、臨床安定性に関係なく除外された、がん腫性髄膜炎は含まれない。
２．研究参加、または研究治療投与と関連するリスクを増加させ得、患者が研究治療を受ける能力を損なわせ得、または、研究結果の解釈と干渉し得る、任意の深刻な、または制御されていない医学的疾患。これには、登録前の６ヶ月未満の、大脳血管の偶発症状／脳卒中、及び心筋梗塞を含む、臨床的に有意な（即ち、活性な）心臓血管疾患、不安定狭心症、うっ血性心不全（ニューヨーク心臓協会分類クラスＩＩ）、または、深刻な未制御心不整脈が含まれる。
３．スポンサーと研究員との別段の同意がない限り、臨床的に有意な、または、スクリーニング時に活性な介在を必要とする、同時発生の悪性新生物（十分に治療された、基底または扁平上皮細胞癌、非黒色腫皮膚癌を覗く）。
４．免疫抑制療法を必要とする、活性の、既知の、または疑いのある、自己免疫または炎症性疾患（低用量プレドニゾン（≦１０ｍｇまたは等価物）を除く）。以下は、本基準の例外である：
・白斑または脱毛症を有する患者。
・ホルモン交換時に安定した甲状腺機能低下症（例えば、橋本症候群後の）を有する患者。
・全身治療を必要としない、任意の慢性皮膚状態。
５．研究治療の最初の投与前に、グレード１またはベースラインまで回復していない脱毛症及び疲労以外の、放射線及び手術を含む、抗がん治療法前に全身に帰する毒性。回復が予想されず、白金ベースの治療法後に、ニューロパシーまたは中毒性難聴などの長期的な続発症をもたらす、抗癌治療法の前に全身に帰する毒性を有する患者は、登録が可能である。
６．別の方法において、抗がん治療法の半減期に基づく、症例毎において、スポンサーと研究員との同意がない限り、研究治療の最初の投与から２８日以内に、がんに対する任意の化学療法、生物学的、または治験中の治療法による治療。
例外：対象が、ペムブロリズマブを継続するバックフィルコホートに登録され、コンストラクト１単剤療法、または、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法のいずれかを加える場合、ペムブロリズマブによる現行の治療が許可される。
７．免疫抑制または交換投薬による治療：
・研究治療の最初の投与の１４日以内に、ステロイド、または吸収された局所ステロイド（用量は、＞１０ｍｇ／日のプレドニゾンまたは等価物）などの、免疫抑制レベルの全身投薬。
注：＞１０ｍｇ／日のプレドニゾンと等しい用量での、吸引、局所ステロイド及び副腎交換は、活性自己免疫疾患の不存在下で許容される。
・研究治療の最初の投与前から６ヶ月以内の、任意の慢性免疫抑制投薬（別の方法において、症例毎にスポンサーと研究員との同意がない限り）。
・過去２年以内に全身治療を必要とした（即ち、疾患改変剤、コルチコステロイド、または免疫抑制剤を使用する）活性自己免疫疾患。代償補充療法（例えば、副腎または下垂体不全に対する、チロキシン、インスリン、または、生理的コルチコステロイド代償補充療法など）は、全身治療の形態とはみなされない。
８．ヒト免疫グロブリンまたは抗体製剤投与に対する、以前のアナフィラキシーまたは他の深刻な反応。
９．スポンサーと研究員との別段の同意がない限り、研究治療の最初の投与前２８日以内に受けた生ワクチン。
１０．スポンサーと研究員との別段の同意がない限り、研究治療の最初の投与前２８日以内に免疫刺激性を有するか、または、主要な器官の機能に潜在的に干渉することが知られている、ハーブ療法。
１１．妊娠している、母乳栄養を行っている、または、研究中に妊娠予定の女性患者。
１２．別の方法において、症例毎にスポンサーと研究員との同意がない限り、全身療法を必要とする活性な感染症。
１３．活性または慢性の感染症を示す、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）またはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗体に対する陽性試験。ＨＣＶ抗体には陽性であるが、ＨＣＶリボ核酸（ＲＮＡ）には陰性であると試験される患者は、登録が可能である。
１４．ＡＩＤＳの既知の病歴。ＨＩＶの試験は必須ではない。
注：ＡＩＤＳを有しない、ＣＤ４ Ｔ細胞が＞２００／ｍｍ^３の、患者ＨＩＶ陽性患者は資格がある。
１５．本研究において、研究員の判断で、参加が禁忌である、他の同時発生の深刻な、及び／または、制御されていない医学的状態（例えば、膵炎；活性肝炎；安静時呼吸困難または間質性肺疾患を含む、慢性の閉塞性または拘束性肺疾患；副腎不全 副腎機能障害；制御されていない高血圧）。
１６．研究プロトコルに関する医学的フォローアップ及び準拠を認めない心理学的、家族性、社会学的、または地理的条件。

【0252】

研究でペムブロリズマブを受ける患者（群１、群２、群３、または群４における、第Ｉ相バックフィルコホート－ｆ、－ｇ、－ｈ、及び－ｉ；第ＩＩ相群Ｂまたは群Ｅにおける全ての患者）
１７．ペムブロリズマブに対する深刻な過敏性反応の病歴。
１８．添付文書またはＳｍＰＣに従いペムブロリズマブを受けることに対する、任意の禁忌
１９．同種異系組織／固形臓器移植
２０．ステロイドを必要とする（非感染性）肺炎、または現行の肺炎の病歴。

【0253】

４．治療レジメン
４．１ 第Ｉ相レジメン
群１（コンストラクト１の静脈内投与）：サイクル１～４に対しては、コンストラクト１を３週間毎に投与する。サイクル５で開始し、それ以降には、コンストラクト１を６週間毎に投与する。このスケジュールは「ｑ３ｗ、ｑ６ｗ」と呼ばれる。サイクル１～４に対しては、治療サイクルは２１日の期間と定義される。コンストラクト１の用量は、各サイクルの１日目（±３日）にＩＶ投与される。サイクル５及びその後のサイクルに対しては、治療サイクルは４２日の期間と定義される。コンストラクト１の用量は、各サイクルの１日目（±７日）にＩＶ投与される。

【0254】

群２（コンストラクト１の単回腫瘍内投与、続いて、コンストラクト１の静脈内投与）：サイクル１～４に対しては、コンストラクト１を３週間毎に投与する。サイクル５で開始し、それ以降には、コンストラクト１を６週間毎に投与する。このスケジュールは「ｑ３ｗ、ｑ６ｗ」と呼ばれる。サイクル１～４に対しては、治療サイクルは２１日の期間と定義される。治療は、サイクル１の１日目に、コンストラクト１を単回でＩＴ投与することで始まる。その後のコンストラクト１の用量は、サイクル２の１日目（±３日）、及びそこから後に、ＩＶ投与される。サイクル５及びその後のサイクルに対しては、治療サイクルは４２日の期間と定義される。コンストラクト１の用量は、各サイクルの１日目（±７日）にＩＶ投与される。

【0255】

ＩＴ投与は、介入放射線医学などの画像ガイド手順により実施することができる。ＩＴ投与の方法論は、機関の規格に従う。直接ＩＴ投与による全体積の送達が技術的に実現可能でない場合、残りのコンストラクト１の体積は、腫瘍周辺に、及び／または、局所投与で送達されなければならない（セクション５）。

【0256】

患者は、生検、及びコンストラクト１のＩＴ投与のために選択される、１つの病変を有する。選択された病変は、ＲＥＣＩＳＴ及びｉＲＥＣＩＳＴに従い、腫瘍応答の評価はされない（例えば、病変は、直径の変化に個別に従う可能性があるが、ＲＥＣＩＳＴ評価のために、直径の全体の合計には含めてはならない）。

【0257】

群３（コンストラクト１及びコンストラクト２の静脈内投与）： サイクル１及び２に対しては、治療サイクルは４２日の期間と定義される。患者には、３週間（２１日）毎に、まずコンストラクト２、続いてコンストラクト１、交代治療が投与され、以下のとおり、±３日のウィンドウを有する： コンストラクト２は、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。サイクル３及びその後のサイクルに対しては、治療サイクルは８４日の期間と定義される。サイクル３の１日目は、サイクル２の４２日目の完了後に開始する。コンストラクト２及びコンストラクト１の用量は、以下のとおり、±７日のウィンドウで、連続して６週間（４２日）毎に交代で投与される：コンストラクト２は、サイクル３、及びその後のサイクルの１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル３、及びその後のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。このスケジュールは「ｑ３ｗ、ｑ６ｗ」と呼ばれる。

【0258】

群４（コンストラクト１の単回ＩＴ投与、続いて、コンストラクト２とコンストラクト１の交代静脈内投与）：治療は、サイクル０の１日目に、コンストラクト１の最初にＩＴ投与することで始まる。２１日（３週間）後に、治療は、サイクル１の１日目にコンストラクト２をＩＶ投与し、２２日目にコンストラクト１をＩＶ投与することで継続する。サイクル１及び２に対しては、治療サイクルは４２日の期間と定義される。コンストラクト２及びコンストラクト１の用量は、以下のとおり、±３日のウィンドウで、連続して３週間（２１日）毎に交代で投与される： コンストラクト２は、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。サイクル３及びその後のサイクルに対しては、治療サイクルは８４日の期間と定義される。サイクル３の１日目は、サイクル２の４２日目の完了後に開始する。コンストラクト２及びコンストラクト１の用量は、以下のとおり、±７日のウィンドウで、連続して６週間（４２日）毎に交代で投与される：コンストラクト２は、サイクル３、及びその後のサイクルの１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル３、及びその後のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。このスケジュールは「ｑ３ｗ、ｑ６ｗ」と呼ばれる。ＩＴ投与は、上記群２に記載するものと同様である。

【0259】

群５（３回用量の、コンストラクト１の静脈内投与）：治療群５は、３回用量のコンストラクト１単剤療法の投与について調査する。患者は、３週間毎にコンストラクト１のＩＶ投与を受け、３回目の投与を受けた後に停止する。この治療計画は、「３用量コンストラクト１」と呼ばれる。治療サイクルは、２１日（３週間）の期間として定義される。３回用量のコンストラクト１は、サイクル１、２、及び３の１日目（±３日）から３週間空けて与えられる。効能評価のための腫瘍走査は、投与されたコンストラクト１の最初の投与から始まり、４２日（６週間）毎に実施される。腫瘍応答は、疾患が進行するまで、ＲＥＣＩＳＴを用いて測定する。ＲＥＣＩＳＴに従った疾患進行の際には、ｉＲＥＣＩＳＴを使用して腫瘍応答を評価する。

【0260】

ＲＥＣＩＳＴまたはｉＲＥＣＩＳＴにより定義される放射線進行の際、及び、患者が完全な３用量レジメンを受けた後、患者は、３週間空けて投与される、さらに３用量のコンストラクト１を受けることができる。３回レジメンの間に疾患が進行する患者は、さらに３回の投与を受ける資格がない。効能評価は、ＲＥＣＩＳＴに対して再度ベースライン化される。腫瘍走査（複数可）は、４２日（６週間）毎に継続する。ＲＥＣＩＳＴに従った疾患進行の際には、ｉＲＥＣＩＳＴを使用して腫瘍応答を評価する。ｉＲＥＣＩＳＴに従った疾患進行の後、患者は、ＥＯＴ訪問の研究に進み、必要とされる評価を完了する。

【0261】

群６（３回用量の、コンストラクト２及びコンストラクト１の静脈内投与）：治療群６では、３回用量のコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の投与を調査する。患者はそれぞれ、３回用量のコンストラクト２及びコンストラクト１を受け、合計で６回の投与を受ける。治療サイクルは、４２日間の期間として定義される。各サイクルにおいて、コンストラクト２がまず、続いてコンストラクト１が、交互に投与される。各投与は３週間空けて、以下のとおり、±３日のウィンドウで与えられる： コンストラクト２は、サイクル１、２、及び３の１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル１、２、及び３の２２日目にＩＶ投与される。この治療計画は、「３用量コンストラクト１及びコンストラクト２」と呼ばれる。

【0262】

効能評価のための腫瘍走査は、最初の用量のコンストラクト２が投与されてから開始し、４２日毎に行われる。腫瘍応答は、疾患が進行するまで、ＲＥＣＩＳＴを用いて測定する。ＲＥＣＩＳＴまたはｉＲＥＣＩＳＴにより定義される放射線進行の際、及び、患者が完全な３用量レジメンを受けた後、さらなる「３用量コンストラクト２及びコンストラクト１」治療を与えることができる。「３用量コンストラクト２及びコンストラクト１」レジメンの間に疾患が進行する患者は、さらなる３用量を受ける資格がない。効能評価は、ＲＥＣＩＳＴに対して再度ベースライン化される。腫瘍走査（複数可）は、４２日（６週間）毎に継続する。ＲＥＣＩＳＴに従った疾患進行の際には、ｉＲＥＣＩＳＴを使用して腫瘍応答を評価する。ｉＲＥＣＩＳＴに従った疾患進行の後、患者は、ＥＯＴ訪問の研究に進み、必要とされる評価を完了する。

【0263】

４．２ 第ＩＩ相用量拡大研究治療スケジュール
第ＩＩ相用量拡大の投与スケジュールは、用量漸増治療群の安全性、有効性、及び／またはバイオマーカー結果から入手可能なデータの確認に基づき同様に選択される。用量拡大のための研究治療投与スケジュールは、以下のうちの１つであることができる：
・「ｑ３ｗ、ｑ６ｗ」スケジュールに従い投与される、コンストラクト１及び／または２の研究治療。
・２週間毎に投与される、コンストラクト１及び／または２の研究治療。このスケジュールは「ｑ２ｗ」と呼ばれる。
・サイクル１～４では４週間毎に、及び、サイクル５から開始するその後は８週間毎に投与される、コンストラクト１及び／または２の研究治療。このスケジュールは「ｑ４ｗ、ｑ８ｗ」と呼ばれる。
・各投与が３週間空けて与えられる、コンストラクト１及び／または２治療の、３用量レジメン。この治療計画は、「３用量コンストラクト１及び／または２治療」と呼ばれる。

【0264】

群Ａ（コンストラクト１の静脈内投与）：コンストラクト１単剤療法の第ＩＩ相用量拡大群Ａは、第Ｉ相用量漸増群１の完了の際に（ＩＶ投与された際の、コンストラクト１のＲＰ２Ｄの測定と共に）始まることができる。サイクル１～４に対しては、治療サイクルは２１日の期間と定義される：コンストラクト１の用量は、各サイクルの１日目（±３日）に投与される。サイクル５及びその後のサイクルに対しては、治療サイクルは４２日の期間と定義される：コンストラクト１の用量は、各サイクルの１日目（±７日）に投与される。

【0265】

群Ｂ（コンストラクト１及びペムブロリズマブの静脈内投与）：コンストラクト１単剤療法及びペムブロリズマブの第ＩＩ相用量拡大群Ｂは、第Ｉ相用量漸増群１の完了の際に（ＩＶ投与された際の、コンストラクト１のＲＰ２Ｄの測定と共に）始まることができる。患者は、コンストラクト１単剤療法及びペムブロリズマブを受けている。サイクル１～４に対しては、治療サイクルは２１日の期間と定義される。コンストラクト１の用量は、各サイクルの１日目（±３日）のみに投与される。サイクル５及びその後のサイクルに対しては、治療サイクルは４２日の期間と定義される。コンストラクト１は、各サイクルの１日目（±７日）に投与される。ペムブロリズマブは、ｑ３ｗまたはｑ６ｗスケジュールで投与され、本研究訪問と重なり合う。

【0266】

群Ｃ（コンストラクト１の単回ＩＴ投与、続いて、コンストラクト１の静脈内投与）：コンストラクト１単剤療法の第ＩＩ相用量拡大群Ｃは、第Ｉ相用量漸増群２の完了の際に（コンストラクト１ ＩＶ及びＩＴのＲＰ２Ｄの測定と共に）始まることができる。サイクル１～４に対しては、治療サイクルは２１日の期間と定義される。治療は、サイクル１の１日目に、コンストラクト１を単回でＩＴ投与することで始まる。その後のコンストラクト１の用量は、各サイクルの１日目（±３日）に投与される。サイクル５及びその後のサイクルに対しては、治療サイクルは４２日の期間と定義される。コンストラクト１の用量は、各サイクルの１日目（±７日）に投与される。

【0267】

ＩＴ投与は、介入放射線医学などの画像ガイド手順により実施することができる。ＩＴ投与の方法論は、機関の規格に従う。理想的には、体積は全て、直接ＩＴ投与により送達されるべきである。直接ＩＴ投与による全体積の送達が技術的に実現可能でない場合、残りのコンストラクト１の体積は、腫瘍周辺に、及び／または、局所投与で送達されなければならない（セクション５を参照されたい）。

【0268】

患者は、生検、及びコンストラクト１のＩＴ投与のために選択される、１つの病変を有する。選択された病変は、ＲＥＣＩＳＴ及びｉＲＥＣＩＳＴに従い、腫瘍応答の評価はされない（例えば、病変は、直径の変化に個別に従う可能性があるが、ＲＥＣＩＳＴ評価のために、直径の全体の合計には含めてはならない）。他の病変は全て、コンストラクト１を受けないか、または生検されない。

【0269】

群Ｄ（コンストラクト２及びコンストラクト１の、連続交代静脈内投与）：コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の第ＩＩ用量拡大群Ｄは、第Ｉ相用量漸増群３の完了の際に（連続交代スケジュールで、コンストラクト１がＩＶ投与された際に、コンストラクト２のＲＰ２Ｄの測定と共に）始まることができる。サイクル１及び２に対しては、治療サイクルは４２日の期間と定義される。治療は、サイクル１の１日目にコンストラクト２をＩＶ投与することで開始し、以下に明記するように、３週間（２１日）毎に交代で、コンストラクト１が続く。コンストラクト２及びコンストラクト１の用量投与は、±３日のウィンドウを有する。コンストラクト２は、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。サイクル３及びその後のサイクルに対しては、治療サイクルは８４日の期間と定義される。サイクル３の１日目は、サイクル２の４２日目の完了後に開始する。サイクル３及びその後のサイクルにおける、コンストラクト２及びコンストラクト１の用量投与は、±７日のウィンドウを有する。コンストラクト２及びコンストラクト１の用量は、以下のとおりに、６週間（４２日）毎に交代する。コンストラクト２は、サイクル３、及びその後のサイクルの１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル３、及びその後のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。

【0270】

群Ｅ（コンストラクト２及びコンストラクト１の連続交代静脈内投与、ならびにペムブロリズマブ）：コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法、及びペムブロリズマブの第ＩＩ用量拡大群Ｅは、第Ｉ相用量漸増群３の完了の際に（連続交代スケジュールで、コンストラクト１がＩＶ投与された際に、コンストラクト２のＲＰ２Ｄの測定と共に）始まることができる。サイクル１～２に対しては、治療サイクルは４２日の期間と定義される。治療は、サイクル１の１日目に、コンストラクト２をＩＶ投与することで始まる。サイクル１及び２における、コンストラクト２及びコンストラクト１の用量投与は、±３日のウィンドウを有する。患者には、最初の２用量のコンストラクト２及びコンストラクト１交代が、以下のとおり３週間（２１日）毎に投与される： コンストラクト２は、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。サイクル３及びその後のサイクルに対しては、治療サイクルは８４日の期間と定義される。サイクル３の１日目は、サイクル２の４２日目の完了後に開始する。サイクル３及びその後のサイクルにおける、コンストラクト２及びコンストラクト１の用量投与は、±７日のウィンドウを有する。コンストラクト２及びコンストラクト１の用量は、以下のとおりに、６週間（４２日）毎に交代する。コンストラクト２は、サイクル３、及びその後のサイクルの１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル３、及びその後のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。ペムブロリズマブは、ｑ３ｗまたはｑ６ｗスケジュールで投与され、本研究訪問と重なり合う。

【0271】

群Ｆ（コンストラクト１の腫瘍内投与、続いて、コンストラクト２とコンストラクト１の連続交代静脈内投与）：

【0272】

第ＩＩ相用量拡大群Ｆは、第Ｉ相用量漸増群４の完了時に（ＩＴ投与された際のコンストラクト１のＲＰ２Ｄの測定と共に、及び続いて、ＩＶ投与された際のコンストラクト２及びコンストラクト１のＲＰ２Ｄの連続交代スケジュールにより）始まることができる。

【0273】

治療は、サイクル０の１日目に、コンストラクト１の最初にＩＴ投与することで始まる。ＩＴ投与は、介入放射線医学など画像ガイド手順によりガイドされることができる。２１日後、治療は、サイクル１の１日目にコンストラクト２をＩＶ投与し、２２日目にコンストラクト１をＩＶ投与することで継続する。理想的には、体積は全て、直接ＩＴ投与により送達されるべきである。直接ＩＴ投与による全体積の送達が技術的に実現可能でない場合、残りのコンストラクト１の体積は、腫瘍周辺に、及び／または、局所投与で送達されなければならない（セクション５を参照されたい）。

【0274】

サイクル１及び２に対しては、治療サイクルは４２日の期間と定義される。サイクル２における、コンストラクト２及びコンストラクト１の用量投与は、±３日のウィンドウを有する。患者には、コンストラクト２及びコンストラクト１交代が、以下のとおり３週間（２１日）毎に投与される： コンストラクト２は、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。サイクル３及びその後のサイクルに対しては、治療サイクルは８４日の期間と定義される。サイクル３の１日目は、サイクル２の４２日目の完了後に開始する。サイクル３及びその後のサイクルにおける、コンストラクト２及びコンストラクト１の用量投与は、±７日のウィンドウを有する。コンストラクト２及びコンストラクト１の用量は、以下のとおりに、６週間（４２日）毎に交代する。コンストラクト２は、サイクル３、及びその後のサイクルの１日目にＩＶ投与される。コンストラクト１は、サイクル３、及びその後のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。ＩＴ投与は、上記群Ｃにおけるものと同様である。

【0275】

４．３ 疾患進行の際のペムブロリズマブの追加
治療群１、２、３、または４のみに登録され、ｉＲＥＣＩＳＴにより定義されるように、その後放射線医学が進行した患者に対しては、ペムブロリズマブをコンストラクト１及び／または２治療に追加することができる。ペムブロリズマブを受ける資格があるかどうかは、ペムブロリズマブコホートに関係する対象及び除外基準を使用して評価しなければならない（セクション３を参照されたい）。ペムブロリズマブの投与は、研究と重ならなければならず、コンストラクト１単剤療法、または、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法が割り当てられた治療スケジュールに応じて、ｑ３ｗまたはｑ６ｗスケジュールに従わなければならない。

【0276】

ペムブロリズマブがコンストラクト１単剤療法、または、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法に加えられる場合、ＲＥＣＩＳＴｖ１．１を使用して、効能評価を再度ベースライン化される。ＲＥＣＩＳＴに従った疾患進行の際には、ｉＲＥＣＩＳＴを使用して腫瘍応答を評価する。

【0277】

５．治療投与
ＩＴ投与のためのコンストラクト１の全体積は、処方される条件付きコンストラクト１によって変化する（表３を参照されたい）。疾患の一病変及び／または部位を、コンストラクト１のＩＴ投与のために選択する。これは、生検のコンストラクト１ ＩＴ投与の前及び後で選択されたものと同じ、疾患の病変／部位でなければならない。理想的には、体積は全て、直接ＩＴ投与により送達されるべきである。直接ＩＴ投与による全体積の送達が技術的に実現可能でない場合、残りのコンストラクト１の体積は、主に、疾患の一特異的な病変または部位を治療するために、腫瘍周辺に、及び／または、局所投与で送達されなければならない。処方されるコンストラクト１の用量の全体積が確実に投与されるようにするため、以下の投与の種類を許可する：
・直接ＩＴ投与（腫瘍の漏出が起きた場合、これは許容される）；
・腫瘍周囲投与（直接ＩＴ注射が技術的に難しい場合）。
・腫瘍付近での局所投与（ＩＴ及び腫瘍周囲注射が技術的に難しい場合）。

【0278】

全ＩＴ体積の送達は、１回の注射、もしくは２回以上の注射により、または、１回の注射で、針を引き抜くこと無く複数回、再び位置決めをすることにより、あるいは、これらの組み合わせにより、生じることができる。

【0279】

ペムブロリズマブは、適切なＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）ＳｍＰＣまたは添付文書などの、機関のガイドライン、または標準的なケアに従って投与されなければならない。

【0280】

６．投薬
６．１ コンストラクト１に対して調査される用量レベル
下表３は、コンストラクト１の開始用量、及び、第Ｉ相用量漸増中に評価可能な用量レベルについて記載する（群１及び２）。第Ｉ相用量漸増群１（コンストラクト１ ＩＶのみ）に関しては、コンストラクト１の開始用量は、５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵで開始する。コンストラクト１のその後の用量は、表３に記載するように、次の連続用量レベルまで増加する。第Ｉ相用量漸増群２（コンストラクト１ ＩＴ－ＩＶ）に関しては、ＩＴ投与のためのコンストラクト１の開始用量は、５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵで開始する。ＩＴ投与のための開始用量もまた、５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵで開始する。ＩＴ及びＩＶ投与のための、コンストラクト１のその後の用量は同じであり、表３に列挙するように、次の連続用量まで共に増加する。

【0281】

第Ｉ相用量漸増群５（３用量コンストラクト１レジメン）に関しては、用量は、群１で安全と宣言された最大用量レベルから、１ｌｏｇオーダー大きく開始することができる。一例として、群５が患者を登録し、群１において安全と宣言された最大のコンストラクト１の用量が５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであるとき、調査可能なコンストラクト１の用量レベル群５は５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵである。コンストラクト１のその後の用量レベルは、表３に記載するように、次の連続用量レベルまで増加する。

【表4】

【0282】

６．２ コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法に対して調査される、条件付き用量レベル
提案された、コンストラクト２のヒト開始用量は、１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ。提案された、コンストラクト１のヒト開始用量は、群１または群２で安全と宣言された、最大の用量レベルである。ＲＰ２Ｄが、単剤療法のコンストラクト１に対して宣言される場合、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法におけるコンストラクト１の用量レベルはＲＰ２Ｄにて維持される一方で、コンストラクト２の条件付きレベルが調査される。表４は、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の開始用量、及び、第Ｉ相用量漸増（群３及び４）中に評価可能な用量レベルについて記載する。

【0283】

第Ｉ相用量漸増群６（３用量コンストラクト２及びコンストラクト１ ＩＶ）に関して、コンストラクト２及びコンストラクト１の用量は、群３で安全と宣言された最大用量レベルから、１ｌｏｇオーダー大きく開始することができる。一例として、群６が６名の患者を登録し、群３で安全と宣言された最大のコンストラクト２及びコンストラクト１の交代２ベクター治療用量が、コンストラクト１に対しては５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、及び、コンストラクト２に対しては１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵであるとき、群６への用量は、コンストラクト１に対しては５×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵ、及び、コンストラクト２に対しては１×１０^７ＲＣＶ ＦＦＵであることができる。コンストラクト２及びコンストラクト１の、その後の用量レベルは、表４に列挙する次の連続用量レベルまで増加する。

【表5】

６．３ ペムブロリズマブの投与
ペムブロリズマブは、第ＩＩ相の群Ｂ及びＥに対して、３週間毎に２００ｍｇ、または、６週間毎に４００ｍｇのスケジュールで投与される。

【0284】

７．効能評価
効能は、胸／腹／骨盤のＣＴまたはＭＲＩスキャン、及び、疾患が関連することが疑われる解剖学領域を全て利用して評価し、これを実施して、腫瘍応答を評価する。胸部スキャンに関して、ＣＴモダリティは必須である。超音波を使用して疾患部位を測定してはならない。ＣＴ／ＭＲＩスキャンが、研究治療投与と同じ日に予定されている場合、ＣＴ／ＭＲＩは、投与前に行わなければならない。

【0285】

その後、ｉＲＥＣＩＳＴにより定義されるように、放射線医学を進めた患者、及び、コンストラクト１単剤療法、またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を続けながらペムブロリズマブが導入された患者（セクション５．３．５）に対しては、効能評価をＲＥＣＩＳＴに対して再度ベースライン化する。ＲＥＣＩＳＴに従った疾患進行の際には、ｉＲＥＣＩＳＴを使用して腫瘍応答を評価する。

【0286】

任意の完全奏功（ＣＲ）または部分奏功（ＰＲ）は、好ましくは予定される間隔で、しかし、ＣＲまたはＰＲの初期文書化後、早くても４週間で確認されなければならない。ＣＲまたはＰＲの確認は、ＣＲまたはＰＲの初期の文章か後、次の評価可能な腫瘍評価にて確認することができる。

【表6】

【0287】

８．安全性評価
身体検査、生命徴候、身長、体重、心電図、及び、臨床実験室パラメーターなどの、当該技術分野において周知の特定の安全性測定を実施する。

【0288】

加えて、唾液、排泄物（例えば、糞便スワブ）、血液、及び尿由来の試料を、ウイルス排出分析のために収集する。ウイルスの排出は、定量的逆転写ＰＣＲにより、核タンパク質ＲＮＡのコピーを定量化することで分析され、感染力アッセイとつなぎ合わせて、排出材料を特性決定し、感染性ウイルスが存在しないことを確認することができる。ウイルス遮蔽収集に関して、収集した試料は、生存しているがん細胞を含有する可能性がある領域からのものであってはならない。

【0289】

９．バイオマーカー
９．１．血液でのバイオマーカー評価
可能性のあるコンストラクト１、コンストラクト２、及びペムブロリズマブＰＤマーカーを識別する調査目的に取り組むために、いくつかの調査候補バイオマーカーを評価する（表６を参照されたい）。

【0290】

研究中、血液試料（血清及び血漿を含む）を、フェノタイプ、ゲノム、プロテオーム、及び転写分析のために収集する。リンパ球サブセットのフェノタイプ特性決定のために、血液試料を収集する。血液中でメッセンジャーＲＮＡ発現プロファイリングを行い、臨床応答及び／または耐性と関連する遺伝子シグネチャーを評価する。環状腫瘍ＤＮＡ評価のために血漿を収集する。研究治療に対する中和及び結合抗体（特に、Ｅ７Ｅ６融合タンパク質）、ならびに、ＩＬ１、ＩＬ１２、及びＩＬ－１８、ＴＮＦ、及びＩＦＮ－γなどの、プロ炎症性Ｔｈ１／Ｔｈ２サイトカインを、血清中で評価する。

【表7】

【0291】

９．２ 腫瘍組織でのバイオマーカー評価
腫瘍組織試料を、分子シグナル伝達及び腫瘍細胞応答での、コンストラクト１単剤療法、及び、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の効果を調査するために収集し、効能及び応答を予測し得るバイオマーカーを同定する。

【0292】

腫瘍組織は、介入放射線医学などの、画像ガイド生検により入手する。患者は全員、核または切除生検のいずれか（微細針の吸引物は認められない）から組織を、バイオマーカー評価のために中央実験室に提出する。

【0293】

次世代配列決定などの新しい技術の適用により、腫瘍内で、遺伝レベルでの評価を行う機会を提供する。ＲＮＡ配列決定による遺伝子発現プロファイル、マイクロサテライトの不安定性、腫瘍変異負荷、及び、ヘテロ接合性のヒト白血球抗原の喪失などの、次世代バイオマーカーを、患者から入手した腫瘍組織で調査し、臨床応答及び／または耐性の潜在的なバイオマーカーを理解する。

【0294】

さらに、腫瘍材料使用して、免疫組織化学染色により、腫瘍浸潤リンパ球のレベルを定量化する。分析により、腫瘍内の免疫細胞、及び特に、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の腫瘍浸潤の評価がもたらされる。

【0295】

９．２．１ 腫瘍組織試料収集
腫瘍試料を、スクリーニング時、または、最初の研究薬物投与日及び投与後に収集する。接近可能であれば、新しい腫瘍生検を提供しなければならない。腫瘍生検及びＣＴ／ＭＲＩスキャンを同じ訪問時に実施するのであれば、ＣＴ／ＭＲＩスキャンを最初に行い、続いて腫瘍生検を行わなければならない。

【0296】

最初の投与としてコンストラクト１ ＩＴを受ける患者に対して（サイクル１の１日目、コンストラクト１単剤療法の投与前、または、サイクル０の１日目、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の投与前）：
・コンストラクト１ ＩＴ投与の前に、１つの病変を生検のために選択する。
・スポンサーと研究員との別段の同意がない限り、同じ病変にもまた、コンストラクト１をＩＴ投与する。

【0297】

図１６に明記するように、動員されてバックフィルコホートに登録される患者に対しては、最初の研究薬物投与の前、及び、バックフィルコホートでの参加のための、最初の効能評価ＣＴ／ＭＲＩスキャンの前の投与後に、対形成した、新しい腫瘍生検が必要である。

【0298】

組織試料は、バイオマーカー評価のために、コアまたは切除生検のいずれか（微細針の吸引物は認められない）から新しく入手されなければならない。最大の腫瘍病巣（最低でも２つのコア）、または最大の細胞充実性を有する腫瘍ブロックの提出が必要である。切除／除去被検査物の腫瘍ブロックが、スライドよりも好ましい。

【0299】

９．３ 他の調査バイオマーカー評価
セクション９．１及び９．２で明記したバイオマーカーに加えて、調査バイオマーカー研究は、実施例の間に収集した、任意の腫瘍組織、血清／血漿、及び末梢性単核球（ＰＢＭＣ）試料で実施してよい。これらのさらなる調査は、調査を、コンストラクト１及び／またはコンストラクト２の効果、及び／または安全性に対する、他の潜在的な関連のあるバイオマーカーまで拡大することができる。さらなる調査バイオマーカーとしては、四量体によりソートされた抗原特異的Ｔ細胞のプロファイリング、Ｔ細胞受容体配列決定、及び、抗原特異的Ｔ細胞上でのクロマチン変化が挙げられる。

【0300】

１０．免疫原性
免疫原性試験を全患者で行い、細胞内染色によりＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＣＤ１０７ａを測定することにより、患者のＣＤ８^＋ Ｔ細胞機能性及び抗原認識を、ならびに、ペムブロリズマブと共に、及びこれなしで、コンストラクト１、及び／またはコンストラクト２に対する抗原特異的免疫応答として、末梢血単核球細胞中での分泌ＩＦＮ－γ特異的細胞監視する（表７を参照されたい）。

【表8】

【0301】

１１．調査イメージングサブ研究
この調査免疫イメージング目的の目的は、コンストラクト１単剤療法、またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法による治療の際の、ＣＤ８＋細胞の、腫瘍組織への分布及び流入を捕捉することである。具体的には、ＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒを用いる全体ＰＥＴ／ＣＴ画像を評価することにより、ＣＤ８＋細胞の分布を測定しコンストラクト１単剤療法、またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法での治療の前及び後での変化を評価する。臨床的アウトカムは、ＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒシグナルを定量化することで相関される。さらに、治療の前及び後での、ＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒシグナルの変化の評価を使用して治療の有効性を予測し、コンストラクト１単剤療法、及び、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の初期段階の間での、真の放射線医学進行、及び擬似進行もまた区別する。

【0302】

実施例の第Ｉ相用量漸増部分の間に、サブ研究を実施して、ポジトロン放出型断層撮影法（ＰＥＴ）／ＣＴスキャンによる調査免疫イメージングを含めて、コンストラクト１単剤療法、またはコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を受ける、ＨＮＳＣＣを有する患者における、^８９Ｚｒ－Ｄｆ－ＩＡＢ２２Ｍ２Ｃ（デフェロキサミン（Ｄｆ）とコンジュゲート化し、ジルコニウム－８９で放射線標識された、ＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒ、抗ＣＤ８ミニボディ（ＩＡＢ２２Ｍ２Ｃ）（^８９Ｚｒ－Ｄｆ－ＩＡＢ２２Ｍ２Ｃ））を評価する。１．０（±２０％）ｍＣｉの用量のＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒ（１．５ｍｇ）のＡＰＩを、５～１０分にわたりＩＶ投与する。腫瘍内でのＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒの取り込みを、標準化取り込み値（ＳＵＶ）ベースの定量的測定（ＳＵＶｍａｘ、ＳＵＶｐｅａｋ、ＳＵＶｍｅａｎ、ＣＤ８腫瘍体積）により測定する。ＳＵＶ＞２０％ ＳＵＶｍａｘでＣＤ８の取り込みが増加した腫瘍組織の体積を定量化する。

【0303】

それぞれ、第Ｉ相用量漸増治療群１及び群３（実施例ＩＩＩのセクション２．１を参照されたい）に対する、ＨＰＶ１６^＋が確認されたがん患者の２つのバックフィルコホートを、ＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒイメージング研究に登録する。群１の患者は、コンストラクト１ ＩＶ投与を最初に投与する前の２週間（１４日）以内（ベースラインイメージング）、及び、コンストラクト１投与を２回目に投与した８～１２日後（治療後イメージング）に、ＩＶ注入としてのＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒを受ける。ＰＥＴ／ＣＴスキャン（ＰＥＴベースライン及びＰＥＴ治療後）は、ＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒをそれぞれ注入してから２４±３時間後に入手される。群２の患者は、コンストラクト２ ＩＶ投与を最初に投与する前の２週間（１４日）以内（ベースラインイメージング）、及び、コンストラクト１投与を最初に投与した８～１２日後（治療後イメージング）に、ＩＶ注入としてのＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒを受ける。ＰＥＴ／ＣＴスキャン（ＰＥＴベースライン及びＰＥＴ治療後）は、ＣＤ８ ＰＥＴ Ｔｒａｃｅｒをそれぞれ注入してから２４±３時間後に入手される。

【0304】

実施例ＩＶ
ＨＰＶ１６^＋癌を有する患者における、効果的なアレナウイルスベースのがん免疫療法
本実施例は、実施例ＩＩＩの用量漸増部分に関する予備データについて示す。

【0305】

合計で３８名の患者が登録され、そのうち３２名の患者はＨＮＳＣＣと診断され、６名の患者は、非ＨＮＳＣＣ ＨＰＶ１６^＋癌と診断された（表８を参照されたい）。

【表9】

【0306】

あらゆるコホートで、用量限定毒性は評価されず、用量レベル及びレジメンにまたがって、有意な変化は見られなかった。関連する深刻な、または関連するグレード≧３の事象は報告されず、用量減少、投与中断、中止、または死亡は発生しなかった。

【0307】

治療された患者の間で、疾患制御及び生残の延長が観察された。図１７に示すように、かなりの部分の患者が、安定した疾患または腫瘍縮小を経験した。図１７Ａにおけるスイマープロットは、個別の患者におけるアレナウイルスベクター治療法に対する治療期間及び応答を示し、治療時間は、最後の治療、または、［死亡－最初の投与日＋１］として計算される。図１７Ｂのウォーターフォールプロットは、アレナウイルスベクター治療法を受ける患者における、ベースラインからの標的病変変化を示す。大部分の患者は、安定した疾患を経験した。アレナウイルスベクター治療法の抗腫瘍活性は、部分奏功及び腫瘍減少を有する数名の患者で観察された。疾患制御率は、全体で６２％であった。患者の約３４％が、腫瘍退縮を経験した。異なる投与方法の差を評価するために、スケジュール及び用量レベル、ベースラインからの平均の最大標的病変変化（ＳＯＤ）を、２名以上の患者のコホートで分析した。図１７Ｃのそれぞれの結果は、腫瘍内（ＩＴ）投与に対する、静脈内（ＩＶ）の優秀性を示している。さらに、ベクター投与の間隔を３週間とすることが、２週間毎に投与されるベクターよりも優れているようであった。データは、同じ用量で、コンストラクト１の単回ベクター治療を受ける患者と比較して、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法で処理した患者における、優れた抗腫瘍効果をさらに示唆する。図１７Ｄ及び表９に示すように、患者のかなりのサブセットが、アレナウイルスベクター治療法後に安定した疾患を示した。アレナウイルスベクター治療法を受ける患者の、奏効率、疾患制御率、及び無増悪生存期間といった、いくつかのエンドポイントを、下表９にまとめる。概して、客観的な奏効率は６．９％であり、２名の患者が部分奏功を達成し、１６名の患者が安定した疾患を経験した。安定した疾患を有する患者の中で、４名は、少なくとも１６週間にわたり、この奏功を維持した。１１名の患者は進行性の疾患を有し、疾患制御は１８名の患者で見られた。患者全員に対する、無増悪生存期間の中央値は、２．２７ヶ月であった。しかし、コンストラクト１で治療され、用量レベル１または２で、３週間毎に静脈内投与される、頭頸扁平上皮細胞癌患者は、１８．２％の客観的な奏効率を有し、２名の患者が部分奏功を達成し、６名の患者（５４．５％）が安定した疾患を経験した。ＰＦＳの中央値は３．４５ヶ月であった。ＤＬ１はコンストラクト２を、ＤＬ２はコンストラクト１を３週間毎にＩＶ投与されて、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法を受ける患者では、４名の患者のうち４名が安定した疾患を経験し、無増悪生存期間の中央値は３．５８ヶ月であった。図１７Ｅは、全ＨＮＳＣＣ患者に対する無増悪生存期間を示す。

【表10】

【0308】

興味深いことに、リンパ節病変を、唯一の標的病変として有する患者は、標的病変として非リンパ節器官を有する患者よりも、アレナウイルスベクター治療法に対して良好に応答した（図１７Ｆを参照されたい）。同様に興味深いことに、コンストラクト１ ＤＬ２のＩＶ投与を３週間毎に受け（Ｇ１ＤＬ２Ｑ３Ｗ）、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法のＩＶ投与を３週間毎に受け（Ｇ３ ＤＬ１及びＤＬ２ Ｑ３Ｗ）る患者は、標的病変にて最良の応答を示した（図１７Ｇを参照されたい）。標的病変直径の変化の最良の合計と治療時間とを比較する際、治療期間が長い患者の大部分は、安定した疾患または腫瘍減少を経験した。直径変化の最良の合計と治療時間との相関を、図１７Ｈに示す。ケーススタディーとして、転移性頭頸扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）、及び中咽頭の原発性損傷部位を有する、１名の特定の患者において、３週間毎の、コンストラクト１ ＤＬ２単剤療法による静脈内治療の後に、急速な疾患の安定化、続いて部分奏功が観察された。それぞれの患者は、コンストラクト１で治療される前に、以下の事前治療を受けた：（１）シスプラチン＋肛門癌ＸＲＴ；（２）カルボプラチン／パクリタキセル／セツキシマブ；及び（３）ペムブロリズマブ。図１７Ｇに示すＣＴスキャンは、３９及び８０日目に腫瘍減少を示す（図１７Ｆを参照されたい）。患者は、疾患進行が確認されてから１２７日間、コンストラクト１のアレナウイルスベクター治療法を受け続けた。

【0309】

まとめると、アレナウイルスベースの治療用ワクチンの安全性プロファイルが、特に許容された。コンストラクト１単剤療法、及びコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の両方は概して、ＨＰＶ１６^＋腫瘍を有する進行患者において、十分に認容された。あらゆる組み合わせを用いない単剤として、治療法は、ＨＰＶ１６＋ ＨＮＳＣＣを有する、著しく事前に治療を受けた患者における、予備的な抗腫瘍活性を示した（下表１０を参照されたい）。

【表11】

【0310】

実施例Ｖ
ＨＰＶ１６^＋癌を有する患者における、アレナウイルスベースのがん免疫療法により誘発された免疫原性
本実施例は、コンストラクト１のみ、加えて、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法により誘発される、強力な免疫原性について示す。

【0311】

図６Ａがアップデートされた図１８Ａは、コンストラクト１を投与した後の、固有の血清サイトカインまたはケモカインシグネチャーを示す。ＩＦＮ－γレベルの増加は、分析した患者の９０％において、最初の治療の４日後に既に観察されている。ＩＦＮ－γの他に、他の免疫刺激性サイトカイン及びケモカインもまた、治療された患者では上方制御され、このことは、ＮＫ及びＴ細胞の活性化の初期の兆候を示す。例えば、コンストラクト１を単回投与することで、治療の４日後において、患者では、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、インターロイキン（ＩＬ）－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、及び腫瘍壊死因子腫瘍壊死因子のレベルが増加した。図６Ｂがアップデートされた図１８Ｂは、コンストラクト１単剤療法によりＤＬ１（５×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ）もしくはＤＬ２（５×１０^６ＲＣＶ）で、または、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法（コンストラクト２：１×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ、コンストラクト１：５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）で治療した４日後における、患者での、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＦＮ誘発性タンパク質（ＩＰ）－１０、及びＴＮＦαのレベルの増加を示す。

【0312】

【0313】

加えて、抗原特異的Ｔ細胞応答の誘発を、ＥＬＩＳｐｏｔ及び細胞内サイトカイン染色で測定した。当分野では、４～１４日のインビトロ刺激（ＩＶＳ）後にのみ、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔによりがん治療薬が、Ｔ細胞を増殖させて、抗原特異的Ｔ細胞の検出可能性を高める免疫原性を測定することが一般的であるものの、アレナウイルスベクター治療法の後の、抗原特異的Ｔ細胞応答の誘発は、事前のインビトロ増殖なしに直接測定した。具体的には、入手可能な試料を有する患者由来のＰＢＭＣを、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ及び細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によるＴ細胞分析のために選択した。

【0314】

図１９Ａ及び図１９Ｂに示すように、最大、３．５％のＩＦＮ－γ^＋ Ｅ６／Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を、用量レベル２（即ち、５×１０^６ＲＣＶ ＦＦＵ）のコンストラクト１の最初の投与後に検出した。

【0315】

驚くべきことに、静脈内コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の後に、１名の患者（患者１０６－０００５）において、前例のないＥ６／Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞レベルが観察された。図１９Ｃ及び図１９Ｄに示すように、コンストラクト２の単回投与後に、約１０％の抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞が観察され、２サイクルのコンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法の後に、最大約４０％の、ＩＦＮ－γ＋Ｅ６／Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出することができる。選択された患者（患者１０６－０００５）に対して、複数サイクルの、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法による治療の異なる時点において、多色フローサイトメトリーを実施した。図１９Ｅは、循環全ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の増加を示す。図１９Ｆは、同じ患者でＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、またはＣＤ１０７ａを発現した、機能的及び細胞毒性Ｅ６／Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の増加を示す。誘発されたＥ６／Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が多機能であり、枯渇していないことは、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、またはＣＤ１０７ａの産生を示す。

【0316】

コンストラクト１のみ、または、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法のいずれかでの治療により、患者において実質的な抗原特異的Ｔ細胞応答が誘発され、循環ＣＤ８＋ Ｔ細胞の最大４０％がＥ６／Ｅ７特異的であることを、図１９Ｇ～図１９Ｉはさらに示す。ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの産生は、対応するＴ細胞が枯渇していないことを示す。さらに、患者におけるＥ６／Ｅ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖は、マウスモデルで観察された結果を反映している。

【0317】

まとめると、コンストラクト１及びコンストラクト２は、血清中で、１型サイトカインの分泌を誘発した。事前のインビトロ増殖なしに実施した直接ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ及びＩＣＳは、大規模なＴ細胞応答を捕捉した。コンストラクト１及びコンストラクト２を単回投与することで、それぞれ、強力なＥ６／Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の駆動が可能となり、最大９．９％がＩＦＮ－γ^＋ ＣＤ８ Ｔ細胞であった。例えば、コンストラクト１の単回投与後に、３名の患者が、３％を超える抗原特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞を産生した。コンストラクト２の単回投与後に、１名の患者は、約１０％の抗原特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞に応答した。コンストラクト１のみ、または、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法のいずれかを受ける、ＩＶ投与された患者の８３％が、ＥＬＩＳｐｏｔ及び／またはＩＣＳにより測定される、ＨＰＶ１６ Ｅ７／Ｅ６に対する腫瘍抗原特異的Ｔ細胞応答の誘発、加えて、ＩＦＮ－γシグネチャーへのシフトを示した。ＨＰＶ１６^＋ ＨＮＳＣＣ患者に対して観察される、予備的な効能測定の観点から、３週間毎に投与されるコンストラクト１の単一ベクターは、１８％の全体の奏効率（ＯＲＲ）（１件は部分奏功（ＰＲ）、１件は未確認の完全奏功（ｕＣＲ））、及び、７３％の疾患制御率（ＤＣＲ）をもたらし、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法は、１００％のＤＣＲをもたらした。

【0318】

重要なことに、コンストラクト２／コンストラクト１交代２ベクター治療法は、前例のない、４０％の、Ｅ６／Ｅ７特異的ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８ Ｔ細胞を実現し、これは、広範なマージンによるがんワクチンなどの、インビボ治療法に対してこれまで報告されている中で、最も高い応答である。

【0319】

本願を通じて、様々な刊行物が参照されている。本開示が関連する分野の現状をさらに充分に説明する目的で、これらの刊行物の開示内容は、本願での参照により、その全体が、本明細書に援用される。上に示した実施例を参照して、本開示について説明してきたが、本開示の趣旨から逸脱しなければ、様々な修正を行えることを理解されたい。

【0320】

本明細書は、ＡＳＣＩＩテキストフォーマットで、コンピューターで読み取り可能な形態（ＣＲＦ）の、配列表の写しと共に出願されている。２０２１年５月４日に作成され、３５，７２５バイトのサイズの、１３１９４－０７１－２２８＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名称の配列表のＣＲＦの写しは、その全体が本明細書に参照により組み込まれている。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図7C-1】

【図7C-2】

【図7D-1】

【図7D-2】

【図7E-1】

【図7E-2】

【図7F】

【図8】

【図9】

【図10-1】

【図10-2】

【図10-3】

【図11】

【図12】

【図13-1】

【図13-2】

【図13-3】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図14E】

【図15-1】

【図15-2】

【図16-1】

【図16-2】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図17D】

【図17E】

【図17F】

【図17G】

【図17H】

【図17I】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図19C】

【図19D】

【図19E】

【図19F-1】

【図19F-2】

【図19G】

【図19H】

【図19I】

【手続補正書】

【提出日】2023-04-06

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2023527083000001.app

【国際調査報告】