特表 2023-527555 視覚機能を増強するための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-06-29

(54)【発明の名称】視覚機能を増強するための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/54 20170101AFI20230622BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230622BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20230622BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230622BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20230622BHJP

   A61K 47/65 20170101ALI20230622BHJP

   A61K 47/40 20060101ALI20230622BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20230622BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20230622BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20230622BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230622BHJP

   A61K 31/655 20060101ALI20230622BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20230622BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230622BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230622BHJP

   C12N 15/115 20100101ALI20230622BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230622BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230622BHJP

   C12N 5/071 20100101ALI20230622BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20230622BHJP

【ＦＩ】

A61K47/54

A61P43/00 105

A61P43/00 121

A61P27/02 ZNA

A61K47/68

A61K47/64

A61K47/65

A61K47/40

A61K9/107

A61K9/127

A61K9/51

A61K39/395 L

A61K39/395 C

A61K31/655

A61K38/17

A61K48/00

A61K35/76

C12N15/115 Z

C07K19/00

C07K16/28

C12N5/071

C12N15/864 100Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022573584

(86)(22)【出願日】2021-05-27

(85)【翻訳文提出日】2023-01-13

(86)【国際出願番号】 US2021034625

(87)【国際公開番号】W WO2021243086

(87)【国際公開日】2021-12-02

(31)【優先権主張番号】63/032,241

(32)【優先日】2020-05-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＮＯＮＩＤＥＴ

３．ｉＰａｄ

４．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】506115514

【氏名又は名称】ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア

【氏名又は名称原語表記】Ｔｈｅ Ｒｅｇｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ

(71)【出願人】

【識別番号】508348956

【氏名又は名称】マックス－プランク－ゲゼルシャフト ツア フェルデルンク デア ヴィッセンシャフテン エー．ファウ．

(71)【出願人】

【識別番号】508057896

【氏名又は名称】コーネル・ユニバーシティー

【氏名又は名称原語表記】ＣＯＲＮＥＬＬ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100102118

【弁理士】

【氏名又は名称】春名 雅夫

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】イサコフ エフド ワイ．

(72)【発明者】

【氏名】ブロイヒハーゲン ヨハネス

(72)【発明者】

【氏名】レヴィッツ ジョシュア ティー．

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA17

4C076AA19

4C076AA65

4C076AA95

4C076BB11

4C076BB24

4C076CC10

4C076CC26

4C076CC41

4C076EE39

4C076EE39A

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF11

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA13

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA23

4C084BA41

4C084CA18

4C084DC50

4C084MA02

4C084MA05

4C084MA22

4C084MA24

4C084MA38

4C084MA58

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA13

4C084ZA331

4C084ZA332

4C084ZB211

4C084ZB212

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB44

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4C085EE05

4C085GG01

4C085GG10

4C086AA01

4C086AA02

4C086DA30

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA05

4C086MA22

4C086MA24

4C086MA38

4C086MA58

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA13

4C086ZA33

4C086ZB21

4C086ZC75

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087CA09

4C087CA12

4C087MA02

4C087MA22

4C087MA24

4C087MA38

4C087MA58

4C087MA66

4C087NA05

4C087NA13

4C087ZA33

4C087ZB21

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA75

4H045EA20

4H045FA33

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、親和性剤と、分岐鎖リンカーと、２つ以上の光異性化可能な調節因子とを含むコンジュゲートを提供する。本開示は、当該コンジュゲートを含む組成物、及び当該組成物を含むデバイスを提供する。本開示は、視覚機能を増強するための方法を提供し、この方法は、それを必要とする個体に当該コンジュゲートを投与することを含む。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

眼内投与のための組成物であって、前記組成物が、
Ａ）コンジュゲートであって、
ａ）親和性剤であって、
ｉ）標的リガンド結合ポリペプチド；または
ｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するポリペプチド
に特異的に結合する、前記親和性剤；
ｂ）分岐鎖リンカー；ならびに
ｃ）２つ以上の光異性化可能な調節因子であって、それぞれ独立して、
ｉ）光異性化可能な基；及び
ｉｉ）前記標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンド
を含む、前記調節因子
を含む、前記コンジュゲートと、
Ｂ）眼内投与に適した、薬学的に許容される賦形剤と
を含む、前記組成物。

【請求項2】

前記親和性剤がベンジルグアニンを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記親和性剤がクロロアルカンを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記親和性剤がベンジルシトシンを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記親和性剤が抗体を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

前記親和性剤がアプタマーを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

前記親和性剤が小分子またはペプチドを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

前記分岐鎖リンカーが、光異性化可能な調節因子をそれぞれ独立して含む２つ以上のアームを含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項9】

前記分岐鎖リンカーが２つのアームを含む、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

前記分岐鎖リンカーが４つのアームを含む、請求項８に記載の組成物。

【請求項11】

前記分岐鎖リンカーが、式（ＢＬ）：

（式中、ｎは１～１０の整数である）
である部分を含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項12】

ｎが１である、請求項１１に記載の組成物。

【請求項13】

ｎが３である、請求項１１に記載の組成物。

【請求項14】

前記光異性化可能な基が、アゾベンゼン、環状アゾベンゼン、アゾヘテロアレーン、フルギド、スピロピラン、トリフェニルメタン、チオインジゴ、ジアリールエテン、及び過密アルケンから選択される部分を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項15】

前記光異性化可能な基がアゾベンゼンを含む、請求項１４に記載の組成物。

【請求項16】

前記リガンドがアゴニスト、アンタゴニスト、アロステリックモジュレーター、またはブロッカーである、請求項１～１５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項17】

前記標的リガンド結合ポリペプチドが、転写調節因子、イオンチャネル、カチオンチャネル、リガンド依存性イオンチャネル、電位依存性イオンチャネル、クオラムセンサー、フェロモン受容体、神経伝達物質受容体、Ｇタンパク質共役受容体、及び酵素から選択される、請求項１～１６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項18】

前記カチオンチャネルがカリウムチャネル、ナトリウムチャネル、またはカルシウムチャネルである、請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

前記標的リガンド結合ポリペプチドが、グルタミン酸受容体、代謝型グルタミン酸受容体、イオンチャネル型グルタミン酸受容体、イオンチャネル型ニコチン性アセチルコリン受容体、イオンチャネル型ＧＡＢＡ－Ａ受容体、代謝型ＧＡＢＡ－Ｂ受容体、代謝型ドーパミン受容体、イオンチャネル型プリン作動性Ｐ２Ｘ受容体、代謝型プリン作動性Ｐ２Ｙ受容体、代謝型セロトニン受容体、イオンチャネル型セロトニン受容体、イオンチャネル型グリシン受容体、カチオンチャネル、カリウムチャネル、カルシウムチャネル、ナトリウムチャネル、プロトンチャネル、アニオンチャネル、またはクロライドチャネルである、請求項１～１６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項20】

前記光異性化可能な基が、可視光に応答して異性化するアゾベンゼンを含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項21】

前記リガンドがグルタメートである、請求項１～２０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項22】

前記抗体が単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）またはナノボディである、請求項５に記載の組成物。

【請求項23】

前記抗体が代謝型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）に特異的であり、任意選択で、前記ｍＧｌｕＲが、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ５、またはｍＧｌｕＲ６である、請求項２２に記載の組成物。

【請求項24】

滅菌されており、発熱物質を含まない、請求項１～２３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項25】

前記薬学的に許容される賦形剤がシクロデキストリンを含む、請求項１～２４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項26】

前記シクロデキストリンが、α－シクロデキストリン、β－シクロデキストリン、γ－シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、スルホブチルエーテル－β－シクロデキストリン、または誘導体化シクロデキストリンである、請求項２５に記載の組成物。

【請求項27】

前記コンジュゲートがナノ粒子内にカプセル化されている、請求項１～２６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項28】

前記ナノ粒子がナノミセル、リポソーム、ナノスフェア、またはナノカプセルである、請求項５４に記載の組成物。

【請求項29】

眼内投与のための組成物であって、前記組成物が、
Ａ）システムであって、
ａ）請求項１～２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート；
ｂ）融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記コンジュゲート中に存在する前記リガンドに対する結合部位を含む、標的リガンド結合ポリペプチド；及び
ｉｉ）前記親和性剤に結合する異種融合パートナー
を含む、前記融合ポリペプチド
を含む、前記システムと、
Ｂ）眼内投与に適した、薬学的に許容される賦形剤と
を含む、前記組成物。

【請求項30】

前記異種融合パートナーが、配列番号１または配列番号４で示されるＳＮＡＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の組成物。

【請求項31】

前記異種融合パートナーが、配列番号２で示されるＣＬＩＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の組成物。

【請求項32】

前記異種融合パートナーが、配列番号３で示されるＨＡＬＯポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の組成物。

【請求項33】

眼内投与のための組成物であって、前記組成物が、
Ａ）システムであって、
ａ）請求項１～２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート；
ｂ）融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、
ｉ）前記リガンドに対する結合部位を含む、標的リガンド結合ポリペプチド；及び
ｉｉ）前記親和性剤に結合する異種融合パートナー
を含む、前記核酸
を含む、前記システムと、
Ｂ）眼内投与に適した、薬学的に許容される賦形剤と
を含む、前記組成物。

【請求項34】

前記異種融合パートナーが、配列番号１または配列番号４で示されるＳＮＡＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の組成物。

【請求項35】

前記異種融合パートナーが、配列番号３で示されるＨＡＬＯポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の組成物。

【請求項36】

前記異種融合パートナーが、配列番号２で示されるＣＬＩＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の組成物。

【請求項37】

前記核酸が組換えアデノウイルス随伴ウイルス（ＡＡＶ）ビリオン中に存在する、請求項３３～３６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項38】

前記ＡＡＶビリオンが、対応する野生型カプシドポリペプチドを含むＡＡＶビリオンと比較して、前記ＡＡＶビリオンによる網膜細胞の感染性の増加を提供するバリアントカプシドポリペプチドを含む、請求項３２に記載の組成物。

【請求項39】

眼内投与のための組成物であって、前記組成物が、
Ａ）システムであって、
ａ）請求項１～２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート；
ｂ）第１の融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記リガンドに対する結合部位を含む、標的リガンド結合ポリペプチド；及び
ｉｉ）異種ポリペプチド
を含む、前記第１の融合ポリペプチド；ならびに
ｃ）第２の融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記異種ポリペプチドに結合する抗体；及び
ｉｉ）前記親和性剤に結合する異種融合パートナー
を含む、前記第２の融合ポリペプチド
を含む、前記システムと、
Ｂ）眼内投与に適した、薬学的に許容される賦形剤と
を含む、前記組成物。

【請求項40】

前記親和性剤に結合する前記異種融合パートナーが、配列番号１または配列番号４で示されるＳＮＡＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の組成物。

【請求項41】

前記親和性剤に結合する前記異種融合パートナーが、配列番号３で示されるＨＡＬＯポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の組成物。

【請求項42】

前記親和性剤に結合する前記異種融合パートナーが、配列番号２で示されるＣＬＩＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の組成物。

【請求項43】

前記抗体が単鎖Ｆｖまたはナノボディである、請求項３９～４２のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項44】

前記異種ポリペプチドがエピトープタグである、請求項３９～４３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項45】

眼内投与のための組成物であって、前記組成物が、
Ａ）システムであって、
ａ）請求項１～２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート；
ｂ）融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記標的リガンド結合ポリペプチドに特異的に結合する抗体；及び
ｉｉ）ＳＮＡＰポリペプチド、ＨＡＬＯポリペプチド、及びＣＬＩＰポリペプチドから選択される、前記親和性剤に結合するポリペプチド
を含む、前記融合ポリペプチド
を含む、前記システムと、
Ｂ）眼内投与に適した、薬学的に許容される賦形剤と
を含む、前記組成物。

【請求項46】

光に対する網膜細胞の感受性を増強する方法であって、
前記網膜細胞を光に曝露することを含み、
前記網膜細胞が請求項１～２３のいずれか１項に記載のコンジュゲートまたは請求項２９～４５のいずれか１項に記載のシステムを含み、
前記光が、前記光調節可能なポリペプチドへの前記リガンドの結合をもたらす波長のものであり、
前記光調節可能なポリペプチドへの前記リガンドの結合が、光に対する前記網膜細胞の感受性を増加させる、前記方法。

【請求項47】

網膜細胞に光応答性を付与する方法であって、請求項１～２３のいずれか１項に記載のコンジュゲートまたは請求項２９～４５のいずれか１項に記載のシステムを前記網膜細胞に導入することを含む、前記方法。

【請求項48】

光に対する応答性の低下を特徴とする眼障害を治療する方法であって、請求項１～２９のいずれか１項に記載の組成物または請求項２９～４５のいずれか１項に記載の組成物を、前記眼障害を有する個体の眼に投与することを含む、前記方法。

【請求項49】

前記眼障害が遺伝性網膜変性疾患である、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記疾患が網膜色素変性症または加齢黄斑変性症である、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

ａ）請求項１～２９のいずれか１項に記載の組成物または請求項２９～４５のいずれか１項に記載のシステムを含む組成物を含む、容器と；
ｂ）個体の眼に前記組成物を導入するための手段と
を含む、医療装置。

【請求項52】

個体の眼に前記組成物を導入するための前記手段が針を含む、請求項５１に記載の装置。

【請求項53】

前記容器が注射器を含む、請求項５１または請求項５２に記載の装置。

【請求項54】

滅菌されている、請求項５１～５３のいずれか１項に記載の装置。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本願は、２０２０年５月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／０３２，２４１号の権益を主張し、その出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

連邦政府による資金提供を受けた研究の記載
本発明は、米国立衛生研究所によって授与されたＥＹ０１８２４１の下で政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。

【0003】

導入
網膜色素変性症（ＲＰ）は、光受容体の変性による失明をもたらすが、他の網膜細胞は温存するため、生存細胞における光活性化シグナル伝達タンパク質の発現によって視力が回復する可能性がある。ほとんどの取り組みは光活性化イオンチャネルを採用しているが、光受容細胞のオプシンなどの光活性化Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）は、網膜にネイティブで高感度で機能し、増幅シグナルカスケードの下流のチャネルを活性化するためにおそらく低発現で機能する魅力的な代替手段を表している。実際、最近、ロドプシンまたはメラノプシンの異所性発現が薄暗い光の下で光応答を回復することが示された。しかしながら、光受容細胞の外では、ロドプシンは遅い光応答を生成し、メラノプシンはさらに遅い光応答を生成する。ロドプシンの場合、運動はすでに遅すぎて、不動の視覚刺激があっても、パターン化された視覚をサポートできない。

【0004】

視覚機能を増強するための組成物及び方法が当該技術分野で必要とされている。

【発明の概要】

【0005】

概要
本開示は、親和性剤と、分岐鎖リンカーと、２つ以上の光異性化可能な調節因子とを含むコンジュゲートを提供する。本開示は、コンジュゲートを含む組成物、及び組成物を含むデバイスを提供する。本開示は、視覚機能を増強するための方法を提供し、この方法は、それを必要とする個体にコンジュゲートを投与することを含む。

【図面の簡単な説明】

【0006】

【図1A】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1B-1】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1B-2】図１Ｂ－１の説明を参照。

【図1C】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1D-1】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1D-2】図１Ｄ－１の説明を参照。

【図1E-1】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1E-2】図１Ｅ－１の説明を参照。

【図1E-3】図１Ｅ－１の説明を参照。

【図1E-4】図１Ｅ－１の説明を参照。

【図1F】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1G】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1H】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1I-1】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1I-2】図１Ｉ－１の説明を参照。

【図1J-1】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1J-2】図１Ｊ－１の説明を参照。

【図1J-3】図１Ｊ－１の説明を参照。

【図1J-4】図１Ｊ－１の説明を参照。

【図1J-5】図１Ｊ－１の説明を参照。

【図1K-1】本開示のコンジュゲートの実施形態の合成スキームを示す。

【図1K-2】図１Ｋ－１の説明を参照。

【図2A】ｍＧｌｕＲ２の光活性化に対するＰＯＲＴＬの効果を示す。

【図2B】図２Ａの説明を参照。

【図2C】図２Ａの説明を参照。

【図2D】図２Ａの説明を参照。

【図2E】図２Ａの説明を参照。

【図2F】図２Ａの説明を参照。

【図2G】図２Ａの説明を参照。

【図2H】図２Ａの説明を参照。

【図2I】図２Ａの説明を参照。

【図2J】図２Ａの説明を参照。

【図3A】ラットＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２またはヒトＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ６を発現するＨＥＫ２９３細胞におけるＧＩＲＫ光電流に対する一価ＢＧＡＧ_{１２，４６０}の効果を示す。

【図3B】図３Ａの説明を参照。

【図3C】図３Ａの説明を参照。

【図4A】ＨＥＫ２９３細胞におけるＧＩＲＫチャネルのＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２活性化の効力及び感度に対する多分岐ＢＧＡＧ_{１２，４６０}の効果を示す。

【図4B】図４Ａの説明を参照。

【図4C】図４Ａの説明を参照。

【図4D】図４Ａの説明を参照。

【図5A】ＡＡＶ２ ４ＹＦ ｈＳｙｎ－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の硝子体内注射後のｒｄ１マウスのＲＧＣにおけるＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の発現を示す。

【図5B】図５Ａの説明を参照。

【図5C】図５Ａの説明を参照。

【図5D】図５Ａの説明を参照。

【図6A】ｒｄ１マウスの光回避行動に対する、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）またはＯＮ双極細胞（ＯＮ－ＢＣ）における^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の効果を示す。

【図6B】図６Ａの説明を参照。

【図6C】図６Ａの説明を参照。

【図6D】図６Ａの説明を参照。

【図6E】図６Ａの説明を参照。

【図6F】図６Ａの説明を参照。

【図7A】ｒｄ１マウスにおける学習した空間パターン認識誘導行動に対する、ＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣにおける^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の効果を示す。

【図7B】図７Ａの説明を参照。

【図7C】図７Ａの説明を参照。

【図8A】ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２ ｒｄ１マウスにおけるパターン認識の回復に対するβ－シクロデキストリン中の^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}の効果を示す。

【図8B】図８Ａの説明を参照。

【図8C】図８Ａの説明を参照。

【図9A】 ^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}の硝子体内注射後のｒｄ１マウスにおける高視力線パターン認識の回復を示す。

【図9B】図９Ａの説明を参照。

【図9C】図９Ａの説明を参照。

【図10】ＲＧＣにおけるＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２またはＲＧＣの中波錐体オプシン（ＭＷオプシン）のいずれかを有するｒｄ１網膜から単離されたＲＧＣの微小電極アレイ（ＭＥＡ）記録を示す。

【図11A】ＭＷオプシンと比較した、移動ディスプレイでの線パターン認識の回復に対する、ｒｄｌマウスのＲＧＣにおける^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の効果を示す。

【図11B】図１１Ａの説明を参照。

【図11C】図１１Ａの説明を参照。

【図12】新規オブジェクト認識に対するｒｄｌマウスのＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣにおける^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の効果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0007】

定義
別途示されない限り、以下の用語は、以下の意味を有する。いずれかの未定義の用語には、それらの技術分野に認識されている意味がある。

【0008】

「アルキル」という用語は、例えば、１～４０個の炭素原子、１～１０個の炭素原子、または１～６個の炭素原子を有するモノラジカルの分枝または非分枝の飽和炭化水素鎖を指す。この用語は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－デシル、テトラデシルなどの基によって例示される。

【0009】

「置換（された）アルキル」という用語は、アルキル鎖中の１個以上の炭素原子が、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）_ｎ－（式中、ｎは０～２である）、－ＮＲ－（式中、Ｒは水素またはアルキルである）などのヘテロ原子で任意選択で置き換えられており、かつアルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロサイクリック、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、－ＳＯ－アルキル、－ＳＯ－アリール、－ＳＯ－ヘテロアリール、－ＳＯ_２－アルキル、－ＳＯ_２－アリール、－ＳＯ_２－ヘテロアリール、及び－ＮＲ^ａＲｂ（式中、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、同じであっても異なっていてもよく、水素、任意選択で置換されたアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロサイクリックから選択される）からなる群から選択される１～５個の置換基を有する、上で定義されるアルキル基を指す。

【0010】

「アルキルアミノアルキル」、「アルキルアミノアルケニル」、及び「アルキルアミノアルキニル」という用語は、Ｒ^ａＮＨＲ^ｂ－基（式中、Ｒ^ａは、上で定義されるアルキル基であり、Ｒ^ｂは、上で定義されるアルキレン、アルケニレン、またはアルキニレン基である）を指す。

【0011】

「アルカリール」または「アラルキル」という用語は、－アルキレン－アリール基及び－置換アルキレン－アリール基を指し、アルキレン、置換アルキレン、及びアリールは本明細書中に定義されている。

【0012】

「アルコキシ」という用語はまた、アルキル－Ｏ－基、アルケニル－Ｏ－基、シクロアルキル－Ｏ－基、シクロアルケニル－Ｏ－基、及びアルキニル－Ｏ－基を指し、式中、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、及びアルキニルは、本明細書中に定義されるとおりである。

【0013】

「置換アルコキシ」という用語は、置換アルキル－Ｏ－基、置換アルケニル－Ｏ－基、置換シクロアルキル－Ｏ－基、置換シクロアルケニル－Ｏ－基、及び置換アルキニル－Ｏ－基を指し、置換アルキル、置換アルケニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、及び置換アルキニルは、本明細書中に定義されるとおりである。

【0014】

「ハロアルコキシ」という用語は、アルキル基上の１個以上の水素原子がハロ基で置換されたアルキル－Ｏ－基を指し、例として、トリフルオロメトキシなどの基などが挙げられる。

【0015】

「アルキルアルコキシ」という用語は、－アルキレン－Ｏ－アルキル基、アルキレン－Ｏ－置換アルキル基、置換アルキレン－Ｏ－アルキル基、及び置換アルキレン－Ｏ－置換アルキル基を指し、アルキル、置換アルキル、アルキレン、及び置換アルキレンは、本明細書中に定義されるとおりである。

【0016】

「アルキルチオアルコキシ」という用語は、－アルキレン－Ｓ－アルキル基、アルキレン－Ｓ－置換アルキル基、置換アルキレン－Ｓ－アルキル基、及び置換アルキレン－Ｓ－置換アルキル基を指し、アルキル、置換アルキル、アルキレン、及び置換アルキレンは、本明細書中に定義されるとおりである。

【0017】

「アルケニル」という用語は、２～４０個の炭素原子、２～１０個の炭素原子、または２～６個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１つのビニル不飽和の部位（例えば、１～６個の部位）を有する、分枝または非分枝の不飽和炭化水素基のモノラジカルを指す。

【0018】

「置換アルケニル」という用語は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロサイクリック、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、－ＳＯ－アルキル、－ＳＯ－置換アルキル、－ＳＯ－アリール、－ＳＯ－ヘテロアリール、－ＳＯ_２－アルキル、－ＳＯ_２－置換アルキル、－ＳＯ_２－アリール、及び－ＳＯ_２－ヘテロアリールから選択される、１～５個の置換、または１～３個の置換を有する、上で定義されるアルケニル基を指す。

【0019】

「アルキニル」という用語は、２～４０個の炭素原子、２～２０個の炭素原子、または２～６個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１つのアセチレン（三重結合）不飽和の部位（例えば、１～６個の部位）を有する、不飽和の炭化水素のモノラジカルを指す。

【0020】

「置換アルキニル」という用語は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロサイクリック、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、－ＳＯ－アルキル、－ＳＯ－置換アルキル、－ＳＯ－アリール、－ＳＯ－ヘテロアリール、－ＳＯ_２－アルキル、－ＳＯ_２－置換アルキル、－ＳＯ_２－アリール、及び－ＳＯ_２－ヘテロアリールから選択される、１～５個の置換、または１～３個の置換を有する、上で定義されるアルキニル基を指す。

【0021】

「アシル」という用語は、ＨＣ（Ｏ）－基、アルキル－Ｃ（Ｏ）－基、置換アルキル－Ｃ（Ｏ）－基、シクロアルキル－Ｃ（Ｏ）－基、置換シクロアルキル－Ｃ（Ｏ）－基、シクロアルケニル－Ｃ（Ｏ）－基、置換シクロアルケニル－Ｃ（Ｏ）－基、アリール－Ｃ（Ｏ）－基、ヘテロアリール－Ｃ（Ｏ）－基、及びヘテロサイクリック－Ｃ（Ｏ）－基（式中、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロサイクリックは、本明細書で定義されるとおりである）を指す。

【0022】

「アシルアミノ」または「アミノカルボニル」という用語は、－Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ基を指し、式中、それぞれのＲは、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリックであるか、または両方のＲ基が一緒に結合してヘテロサイクリック基（例えばモルホリノ）を形成し、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロサイクリックは、本明細書で定義されるとおりである。

【0023】

「アミノアシル」という用語は、－ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ基（式中、それぞれのＲは、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロサイクリックであり、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロサイクリックは、本明細書中に定義されるとおりである）を指す。

【0024】

「アミノアシルオキシ」または「アルコキシカルボニルアミノ」という用語は、－ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲ基（式中、それぞれのＲは、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロサイクリックであり、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロサイクリックは、本明細書中に定義されるとおりである）を指す。

【0025】

「アシルオキシ」という用語は、アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ－基、置換アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ－基、シクロアルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ－基、置換シクロアルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ－基、アリール－Ｃ（Ｏ）Ｏ－基、ヘテロアリール－Ｃ（Ｏ）Ｏ－基、及びヘテロサイクリック－Ｃ（Ｏ）Ｏ－基を指し、式中、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロサイクリックは、本明細書中に定義されるとおりである。

【0026】

「アリール」という用語は、単一の環（例えば、フェニル）または複数の縮合（縮合）環（例えば、ナフチルもしくはアントリル）を有する、６～２０個の炭素原子の不飽和芳香族炭素環式基を指す。例示的なアリールとしては、フェニル、ナフチルなどが挙げられる。アリール置換基についての定義によって別段の定義がない限り、そのようなアリール基を、任意選択で、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロサイクリック、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、－ＳＯ－アルキル、－ＳＯ－置換アルキル、－ＳＯ－アリール、－ＳＯ－ヘテロアリール、－ＳＯ_２－アルキル、－ＳＯ_２－置換アルキル、－ＳＯ_２－アリール、－ＳＯ_２－ヘテロアリール、及びトリハロメチルから選択される１～５個の置換基、または１～３個の置換基で置換することができる。

【0027】

「アリールオキシ」という用語は、アリール－Ｏ－基（式中、アリール基は、上記で定義されるとおりであり、同様に本明細書で定義されるとおりの任意選択で置換されたアリール基を含む）を指す。

【0028】

「アミノ」という用語は、－ＮＨ_２基を指す。

【0029】

「置換アミノ」という用語は、－ＮＲＲ基（式中、それぞれのＲは、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロサイクリックからなる群から選択されるが、ただし、両方のＲが水素ではないという条件である）を指す。

【0030】

「カルボキシアルキル」または「アルコキシカルボニル」という用語は、「－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル」基、「－Ｃ（Ｏ）Ｏ－置換アルキル」基、「－Ｃ（Ｏ）Ｏ－シクロアルキル」基、「－Ｃ（Ｏ）Ｏ－置換シクロアルキル」基、「－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルケニル」基、「－Ｃ（Ｏ）Ｏ－置換アルケニル」基、「－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキニル」基、及び「－Ｃ（Ｏ）Ｏ－置換アルキニル」基を指し、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、及び置換アルキニル、アルキルは、本明細書で定義されるとおりである。

【0031】

「シクロアルキル」という用語は、単一の環状環または複数の縮合環を有する、３～２０個の炭素原子の環状アルキル基を指す。そのようなシクロアルキル基としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどの単環構造、またはアダマンタニルなどの多環構造が挙げられる。

【0032】

「置換シクロアルキル」という用語は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロサイクリック、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、－ＳＯ－アルキル、－ＳＯ－置換アルキル、－ＳＯ－アリール、－ＳＯ－ヘテロアリール、－ＳＯ_２－アルキル、－ＳＯ_２－置換アルキル、－ＳＯ_２－アリール、及び－ＳＯ_２－ヘテロアリールから選択される、１～５個の置換、または１～３個の置換を有する、シクロアルキル基を指す。

【0033】

「シクロアルケニル」という用語は、単一の環状環及び少なくとも１点の内部不飽和を有する、４～２０個の炭素原子の環状アルケニル基を指す。適切なシクロアルケニル基の例としては、例えば、シクロブタ－２－エニル、シクロペンタ－３－エニル、シクロオクタ－３－エニルなどが挙げられる。

【0034】

「置換シクロアルケニル」という用語は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロサイクリック、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、－ＳＯ－アルキル、－ＳＯ－置換アルキル、－ＳＯ－アリール、－ＳＯ－ヘテロアリール、－ＳＯ_２－アルキル、－ＳＯ_２－置換アルキル、－ＳＯ_２－アリール、及び－ＳＯ_２－ヘテロアリールから選択される、１～５個の置換、または１～３個の置換を有する、シクロアルケニル基を指す。

【0035】

「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、及びヨードを指す。

【0036】

「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの環内（１つを超える環が存在する場合）に、１～１５個の炭素原子、ならびに酸素、窒素、及び硫黄から選択される１～４個のヘテロ原子を有する芳香族基を指す。ヘテロアリール置換基についての定義によって別段の制限を受けない限り、そのようなヘテロアリール基を、任意選択で、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロサイクリック、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、－ＳＯ－アルキル、－ＳＯ－置換アルキル、－ＳＯ－アリール、－ＳＯ－ヘテロアリール、－ＳＯ_２－アルキル、－ＳＯ_２－置換アルキル、－ＳＯ_２－アリール、及び－ＳＯ_２－ヘテロアリール、及びトリハロメチルから選択される１～５個の置換基、または１～３個の置換基で置換することができる。

【0037】

「ヘテロアラルキル」という用語は、－アルキレン－ヘテロアリール基を指し、アルキレン及びヘテロアリールは、本明細書で定義されるとおりである。そのようなヘテロアラルキル基は、ピリジルメチル、ピリジルエチル、インドリルメチルなどによって例示される。

【0038】

「ヘテロアリールオキシ」という用語は、ヘテロアリール－Ｏ－基を指す。

【0039】

「複素環」または「ヘテロサイクリック」という用語は、環内に、１～４０個の炭素原子、ならびに窒素、硫黄、リン、及び／または酸素から選択される１～１０個のヘテロ原子、例えば１～４個のヘテロ原子を有する、単環または複数の縮合環を有する、モノラジカルの飽和または不飽和の基を指す。ヘテロサイクリック置換基についての定義により別段の制限を受けない限り、そのようなヘテロサイクリック基は、任意選択で、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロサイクリック、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、－ＳＯ－アルキル、－ＳＯ－置換アルキル、－ＳＯ－アリール、－ＳＯ－ヘテロアリール、－ＳＯ_２－アルキル、－ＳＯ_２－置換アルキル、－ＳＯ_２－アリール、及び－ＳＯ_２－ヘテロアリールから選択される、１～５個の置換、または１～３個の置換で置換することができる。

【0040】

窒素ヘテロアリール及び複素環の例としては、ピロール、チオフェン、フラン、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、モルホリン、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェンなど、及びＮ－アルコキシ－窒素含有複素環が挙げられるが、これらに限定されない。

【0041】

「ヘテロシクロオキシ」という用語は、ヘテロサイクリック－Ｏ－基を指す。

【0042】

「ヘテロシクロチオ」という用語は、ヘテロサイクリック－Ｓ－基を指す。

【0043】

「ヘテロシクレン」という用語は、本明細書で定義される複素環から形成されるジラジカル基を指し、２，６－モルホリノ基、２，５－モルホリノ基などで例示される。

【0044】

「ヘテロアリールアミノ」という用語は、１つまたは２つの環原子がＮであり、残りの環原子がＣである５員の芳香族環を指す。ヘテロアリールアミノ環は、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール環に融合されていてよく、任意選択で、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、ハロ、シアノ、アシル、アミノ、置換アミノ、アシルアミノ、－ＯＲ（式中、Ｒは水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アシル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、もしくはヘテロアラルキル）、または－Ｓ（Ｏ）_ｎＲ（式中、ｎは０～２の整数であり、Ｒは水素（ただし、ｎは０であるという条件である）、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アミノ、ヘテロシクロ、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキルから選択される１つ以上の置換基、例えば、１つまたは２つの置換基で置換されていてもよい。

【0045】

「ヘテロシクロアミノ」という用語は、４～８個の環原子の飽和一価環状基を指し、ここで、少なくとも１個の環原子はＮであり、Ｎ、Ｏ、またはＳ（Ｏ）ｎ（式中、ｎは０～２の整数である）からなる群から選択される１つまたは２つの追加の環ヘテロ原子を任意選択で含み、残りの環原子はＣであり、ここで１つまたは２つのＣ原子は任意選択でカルボニル基で置き換えられていてもよい。ヘテロシクロアミノ環は、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール環に融合されていてよく、任意選択で、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、ハロ、シアノ、アシル、アミノ、置換アミノ、アシルアミノ、－ＯＲ（式中、Ｒは水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アシル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、もしくはヘテロアラルキル）、または－Ｓ（Ｏ）_ｎＲ（式中、ｎは０～２の整数であり、Ｒは水素（ただし、ｎは０であるという条件である）、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アミノ、ヘテロシクロ、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキル）から選択される１つ以上の置換基、例えば、１つまたは２つの置換基で置換されていてもよい。

【0046】

「オキシアシルアミノ」または「アミノカルボニルオキシ」という用語は、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲ基（式中、それぞれのＲは、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロサイクリックであり、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロサイクリックは、本明細書中に定義されるとおりである）を指す。

【0047】

「チオール」という用語は、－ＳＨ基を指す。

【0048】

「チオアルコキシ」または「アルキルチオ」という用語は、－Ｓ－アルキル基を指す。

【0049】

「置換チオアルコキシ」という用語とは、－Ｓ－置換アルキル基を指す。

【0050】

「チオアリールオキシ」という用語は、アリール－Ｓ－基（式中、アリール基は、上で定義されるとおりであり、同様に上で定義されるとおりの任意選択で置換されたアリール基を含む）を指す。

【0051】

「チオヘテロアリールオキシ」という用語は、ヘテロアリール－Ｓ－基（式中、ヘテロアリール基は、上で定義されるとおりであり、同様に上で定義されるとおりの任意選択で置換されたアリール基を含む）を指す。

【0052】

１つ以上の置換基を含む上記の基のいずれに関しても、当然ながら、そのような基は、立体的に実用的でない及び／または合成上非実現的な置換または置換パターンをいっさい含まないことが理解される。さらに、実施形態の化合物は、これらの化合物の置換から生じるすべての立体化学異性体を含む。

【0053】

「薬学的に許容される塩」という用語は、生物学的効果を保持し、生物学的またはその他の点で望ましくないものではない塩を指す。多くの場合、実施形態の化合物は、アミノ基及び／またはカルボキシル基またはそれに類似する基の存在により、酸及び／または塩基の塩を形成することができる。

【0054】

薬学上許容される塩基付加塩は、無機塩基及び有機塩基から調製可能である。無機塩基由来の塩としては、例示にすぎないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、及びマグネシウムの塩が挙げられる。有機塩基に由来する塩としては、アルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミン、ジ（置換アルケニル）アミン、トリ（置換アルケニル）アミン、シクロアルキルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換シクロアルキルアミン、二置換シクロアルキルアミン、三置換シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シクロアルケニル）アミン、置換シクロアルケニルアミン、二置換シクロアルケニルアミン、三置換シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリヘテロアリールアミン、ヘテロサイクリックアミン、ジヘテロサイクリックアミン、トリヘテロサイクリックアミン、ジアミンとトリアミンの混合物などの第一級、第二級、及び第三級アミンの塩が含まれるが、これらに限定されず、アミン上の置換基の少なくとも２つが異なり、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクリックなどからなる群から選択される。２つまたは３つの置換基がアミノ窒素と一緒になってヘテロサイクリック基またはヘテロアリール基を形成するアミンも挙げられる。適切なアミンの例としては、例示にすぎないが、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリ（イソ－プロピル）アミン、トリ（ｎ－プロピル）アミン、エタノールアミン、２－ジメチルアミノエタノール、トロメタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、Ｎ－アルキルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ－エチルピペリジンなどが挙げられる。

【0055】

薬学上許容される酸付加塩は、無機酸及び有機酸から調製可能である。無機酸由来の塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。有機酸由来の塩としては、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエン－スルホン酸、サリチル酸などが挙げられる。

【0056】

「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書では、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために交換可能に使用される。本用語は、修飾された（例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、リン酸化、または標識構成成分とのコンジュゲーション）アミノ酸ポリマーも包含する。

【0057】

ポリペプチドは、別のポリペプチドに対して特定のパーセントの「配列同一性」を有し、アラインメントしたときに、塩基またはアミノ酸のパーセンテージが、それら２つの配列を比較したときに同一であることを意味する。配列類似性をいくつかの異なる様式で決定することができる。配列類似性を決定するために、配列は、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／のワールドワイドウェブ上で利用可能なＢＬＡＳＴを含む方法及びコンピュータプログラムを用いてアラインメントすることができる。別のアラインメントアルゴリズムはＦＡＳＴＡであり、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．の完全所有子会社である、米国ウィスコンシン州マディソンのＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）パッケージで利用可能である。アラインメントの他の技術は、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ． ２６６： Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ（１９９６），ｅｄ． Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，ａ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｈａｒｃｏｕｒｔ Ｂｒａｃｅ ＆ Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡに記載されている。配列間のギャップを許容するアラインメントプログラムが特に興味深い。Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎは、配列アラインメントにおけるギャップを許容する一種のアルゴリズムである。Ｍｅｔｈ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．７０：１７３－１８７（１９９７）を参照されたい。また、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアラインメント方法を用いたＧＡＰプログラムを利用して、配列をアラインメントさせることができる。Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４３－４５３（１９７０）を参照されたい。

【0058】

配列同一性を決定するためのＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎのローカルホモロジーアルゴリズム（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２：４８２－４８９（１９８１））を用いたＢｅｓｔＦｉｔプログラムが興味深い。ギャップ生成ペナルティは一般に１～５、通常２～４の範囲であり、多くの実施形態では３である。ギャップ拡張ペナルティは一般に約０．０１～０．２０の範囲であり、多くの場合０．１０である。このプログラムは、比較するために入力された配列によって決定されるデフォルトパラメーターを有する。配列同一性は、このプログラムによって決定されるデフォルトパラメーターを用いて決定することができる。このプログラムは、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）パッケージ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ）からも入手可能である。

【0059】

興味深い別のプログラムは、ＦａｓｔＤＢアルゴリズムである。ＦａｓｔＤＢは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ． １２７－１４９，１９８８，Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．に記載される。配列同一性パーセントは、次のパラメーターに基づいてＦａｓｔＤＢによって計算される：
ミスマッチペナルティ：１．００、
ギャップペナルティ：１．００、
ギャップサイズペナルティ：０．３３、
結合ペナルティ（Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ）：３０．０。

【0060】

「リンカー」または「連結」という用語は、２つの基を接続し、１００原子以下の長さの骨格を有する連結部分を指す。リンカーまたは連結は、２つの基を接続する共有結合または１～１００原子の長さの鎖、例えば、１、２、３、４、５、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、またはそれ以上の長さの炭素原子の鎖であり得、リンカーは直鎖状、分枝鎖状、環状、または単一の原子であり得る。場合によっては、リンカーは、３つ以上の基を接続する連結部分を指す分枝鎖リンカーである。特定の場合において、リンカー骨格の１、２、３、４、または５、またはそれ以上の炭素原子は、硫黄、窒素、または酸素ヘテロ原子で任意選択で置換され得る。場合によっては、リンカー骨格は、エーテル、チオエーテル、アミノ、アミド、スルホンアミド、カルバメート、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、エステル、チオエステル、またはイミンなどの連結官能基を含む。骨格原子間の結合は、飽和または不飽和であってもよく、場合によっては、１つ、２つ、または３つ以下の不飽和結合がリンカー骨格に存在する。リンカーは、例えば、アルキル、アリール、またはアルケニル基を有する、１つ以上の置換基を含み得る。リンカーとしては、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル、第三級アミン、直鎖状または分枝鎖状であり得るアルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、１－メチルエチル（イソプロピル）、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルエチル（ｔ－ブチル）などが挙げられるが、これらに限定されない。リンカー骨格は、環状基、例えば、アリール、複素環またはシクロアルキル基を含み得、環状基の２個以上の原子、例えば、２、３または４個の原子が骨格に含まれる。リンカーは、切断可能または切断不可能であり得る。

【0061】

「ポリエチレンオキシド」、「ＰＥＯ」、「ポリエチレングリコール」、及び「ＰＥＧ」という用語は交換可能に使用され、式－－（ＣＨ_２－－ＣＨ_２－－Ｏ－－）_ｎ－によって表される鎖を含むポリマー基またはその誘導体を指す。いくつかの実施形態では、「ｎ」は、５０００以下、例えば、１０００以下、５００以下、２００以下、１００以下、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、例えば、３～１５、または１０～１５である。

【0062】

「網膜細胞」という用語は、本明細書において、網膜神経節細胞、アマクリン細胞、水平細胞、双極細胞、ならびに桿体及び錐体を含む光受容細胞などの網膜を含む細胞型のうちのいずれかを指し得る。

【0063】

「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語には、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びＦｄ断片、キメラ抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体（ｓｃＡｂ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、単一ドメイン重鎖抗体、単一ドメイン軽鎖抗体、ナノボディ、二重特異性抗体、多重特異性抗体、及び抗体の抗原結合（本明細書中では抗原結合とも呼ばれる）部分と非抗体タンパク質などを含む融合タンパク質を含むがこれらに限定されない、任意のアイソタイプの抗体または免疫グロブリン、抗原（例えば、標的リガンド結合ポリペプチド）への特異的結合を保持する抗体の断片が含まれる。この用語にはまた、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）_２、及び／または抗原への特異的結合を保持する他の抗体断片、及びモノクローナル抗体も包含される。

【0064】

本明細書で使用される場合、「ナノボディ」（Ｎｂ）という用語は、天然に存在する重鎖抗体に由来する最小の抗原結合断片または単一可変ドメイン（Ｖ_ＨＨ）を指し、当業者に知られている。それらは、ラクダ科動物に見られる重鎖のみの抗体に由来する。「ラクダ科」の科では、軽鎖ポリペプチドを欠く免疫グロブリンが見られる。「ラクダ科」には、旧世界のラクダ科（Ｃａｍｅｌｕｓ ｂａｃｔｒｉａｎｕｓ及びＣａｍｅｌｕｓ ｄｒｏｍｅｄａｒｉｕｓ）と、新世界のラクダ科（例えば、Ｌｌａｍａ ｐａｃｃｏｓ、Ｌｌａｍａ ｇｌａｍａ、Ｌｌａｍａ ｇｕａｎｉｃｏｅ、及びＬｌａｍａ ｖｉｃｕｇｎａ）が含まれる。単一可変ドメイン重鎖抗体は、本明細書ではナノボディまたはＶ_ＨＨ抗体と呼ばれる。

【0065】

軟骨魚類も重鎖抗体（ＩｇＮＡＲ；「免疫グロブリン新抗原受容体」）を有しており、そこからＶ_ＮＡＲ断片と呼ばれる単一ドメイン抗体を得ることができる。したがって、場合によっては、親和性剤はＩｇＮＡＲである。

【0066】

「抗体断片」には、無傷の抗体の一部分、例えば、無傷の抗体の抗原結合領域または可変領域が含まれる。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． ８（１０）：１０５７－１０６２）；ドメイン抗体（ｄＡｂ；Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２１：４８４）；単鎖抗体分子；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化により、それぞれが単一の抗原結合部位を有する、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映する名称である、残りの「Ｆｃ」断片とがもたらされる。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、かつ依然として抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）_２断片がもたらされる。抗体断片としては、例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’_２、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆｅｂ、及びＳＭＩＰが挙げられる。ｓｄＡｂの例としては、ラクダ科のＶＨＨ及び軟骨魚類のＶＮＡＲがある。

【0067】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この領域は、緊密な非共有結合した１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。それぞれの可変ドメインの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）がＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ二量体の表面上の抗原結合部位を画定するように相互作用するのは、この配置においてである。まとめると、６つのＣＤＲは、抗体に抗原結合特異性を与える。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、完全な結合部位よりも低い親和性においてであるが、抗原を認識して結合する能力を有する。

【0068】

「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。いくつかの実施形態では、Ｆｖポリペプチドは、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することが可能になる。ｓＦｖの総説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ． １１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ． ２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。

【0069】

「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、これらの断片は、同じポリペプチド鎖内の軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に接続した重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ）。同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと強制的に対形成させ、２つの抗原結合部位を生成することができる。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８により完全に記載される。

【0070】

本明細書で使用される場合、「治療」、「治療すること」などの用語は、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを指す。その効果は、疾患もしくはその病状を完全にもしくは部分的に予防することに関して予防的であり得、及び／または疾患及び／または疾患に起因する有害作用の部分的もしくは完全な治癒に関して治療的であり得る。本明細書で使用される場合、「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の治療を包含し、（ａ）その疾患にかかりやすいか、その疾患にかかる危険性を有し得るが、まだそれを有すると診断されていない対象における発症を予防すること、（ｂ）その疾患を阻害すること、すなわち、その発症を阻止すること、（ｃ）その疾患を軽減すること、すなわち、その疾患の退行を引き起こすこと、及び（ｄ）疾患によって失われた機能を補うこと、を含む。

【0071】

本明細書で交換可能に使用される「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」という用語は、マウス（ラット、マウス）、非ヒト霊長類、ヒト、イヌ、ネコ、有蹄動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ）、ウサギ類などを含むがこれらに限定されない哺乳動物を指す。場合によっては、個体はヒトである。場合によっては、個体は非ヒト霊長類である。場合によっては、個体はげっ歯類、例えばラットまたはマウスである。場合によっては、個体はウサギ類、例えばウサギである。

【0072】

「網膜細胞」という用語は、本明細書において、網膜神経節細胞、アマクリン細胞、水平細胞、双極細胞、ならびに桿体及び錐体を含む光受容細胞、ミュラーグリア細胞、星状細胞（例えば、網膜星状細胞）、及び網膜色素上皮などの網膜を含む細胞型のうちのいずれかを指し得る。

【0073】

「ＡＡＶ」は、アデノ随伴ウイルスの略語であり、ウイルス自体またはその誘導体を指すために使用することができる。本用語は、その他の点で要求される場合を除いて、すべてのサブタイプ、及び天然に存在する形態と組換え形態の両方を包含する。「ｒＡＡＶ」の略語は、組換えアデノ随伴ウイルスを指し、組換えＡＡＶベクター（または「ｒＡＡＶベクター」）とも呼ばれる。「ＡＡＶ」という用語には、ＡＡＶ１型（ＡＡＶ－１）、ＡＡＶ２型（ＡＡＶ－２）、ＡＡＶ３型（ＡＡＶ－３）、ＡＡＶ４型（ＡＡＶ－４）、ＡＡＶ５型（ＡＡＶ－５）、ＡＡＶ６型（ＡＡＶ－６）、ＡＡＶ７型（ＡＡＶ－７）、ＡＡＶ８型（ＡＡＶ－８）、ＡＡＶ９型（ＡＡＶ－９）、ＡＡＶ１０型（ＡＡＶ－１０）、ＡＡＶ１１型（ＡＡＶ－１１）、鳥類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、及びヒツジＡＡＶが含まれる。例えば、Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３０：３７５を参照されたい。「ＡＡＶ」という用語には、キメラＡＡＶも含まれる。「霊長類ＡＡＶ」は霊長類から単離されたＡＡＶを指し、「非霊長類ＡＡＶ」は非霊長類哺乳動物から単離されたＡＡＶを指し、「ウシＡＡＶ」はウシ哺乳動物（例えばウシ）から単離されたＡＡＶを指すなどである。

【0074】

本明細書で使用される場合、「ｒＡＡＶベクター」は、ＡＡＶ由来ではないポリヌクレオチド（すなわち、ＡＡＶと異種のポリヌクレオチド）を含むＡＡＶベクターを指し、例えば、異種のポリヌクレオチドが、細胞の遺伝子形質転換のための目的の遺伝子産物（例えば、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド）をコードするヌクレオチド配列を含む。概して、異種ポリヌクレオチドは、少なくとも１つ、一般的には２つのＡＡＶ末端逆位配列（ＩＴＲ）によって隣接される。ｒＡＡＶベクターという用語は、ｒＡＡＶベクター粒子とｒＡＡＶベクタープラスミドの両方を包含する。

【0075】

「ＡＡＶウイルス」または「ＡＡＶウイルス粒子」または「ｒＡＡＶベクター粒子」は、少なくとも１つのＡＡＶカプシドタンパク質（典型的には、野生型ＡＡＶのカプシドタンパク質のすべてによる）とカプシド形成されたポリヌクレオチドｒＡＡＶベクターとからなるウイルス粒子を指す。粒子が異種ポリヌクレオチド（すなわち、哺乳動物細胞に送達される導入遺伝子などの野生型ＡＡＶゲノム以外のポリヌクレオチド）を含む場合、これは、典型的には、「ｒＡＡＶベクター粒子」または単に「ｒＡＡＶベクター」と呼ばれる。したがって、ｒＡＡＶ粒子の生成は、ｒＡＡＶベクターの生成を必然的に含み、例えば、ベクターは、ｒＡＡＶ粒子内に含有される。

【0076】

本発明をさらに説明する前に、本発明は記載された特定の実施形態に限定されず、よって当然のことながら変化し得ることが理解されるべきである。本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用する用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであり、限定することを目的とするものではないことも理解されるべきである。

【0077】

一定の範囲の値が提供されるとき、文脈が他を明確に指示しない限り、その範囲の上限と下限との間、及び、その述べられた範囲内の任意の他の述べられた値または中間の値における、各々の中間の値は、その下限の単位の１０分の１まで本発明に包含されることが理解されるべきである。これらのより小さい範囲の上限及び下限は、述べられた範囲内の任意の具体的に除外された限定を有することを条件として、独立してより小さな範囲に含まれ得、本発明にも包含される。述べられる範囲が限界の一方または両方を含む場合、それらの含まれた限界のいずれかまたは両方を除外する範囲はまた、本発明に含まれる。

【0078】

別段定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明の所属する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書において記載されているものと類似または同等の任意の方法及び物質はまた、本発明の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法及び物質はここに記載される。本明細書において述べられたすべての刊行物は、ともに刊行物が引用されている方法及び／または物質を開示及び記載するための参照により本明細書に組み入れる。

【0079】

本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を含むことは注目されるべきである。したがって、例えば「コンジュゲート」に対する言及は、複数のそのようなコンジュゲートを含み、「光異性化可能な部分」に対する言及は、１つ以上のそのような光異性化可能な部分及び当業者に公知のそれらの均等物などへの言及を含む。特許請求の範囲は、任意選択の要素を除外するように起草され得ることにさらに留意されたい。そのようなとき、この記述は、特許請求の範囲における要素の列挙、または「否定的な」限定の使用に関連して「単独で」、「のみ」などのような排他的用語の使用の先行詞として役立つことを意図する。

【0080】

明確さのために別個の実施形態と関連して記載される本発明のある特定の特徴はまた、単一の実施形態において組み合わせて提供され得る。逆に、簡潔さのために単一の実施形態と関連して記載される本発明のさまざまな特徴はまた、別個に、または任意の好適な部分的な組み合わせとして提供され得る。本発明に関する実施形態のすべての組み合わせは、本発明に具体的に包含され、各々及びすべての組み合わせが個別にかつ明示的に開示されるかのように、本明細書において開示される。さらに、さまざまな実施形態のすべての部分的な組み合わせ及びそれらの要素もまた本発明に具体的に包含され、各々及びすべてのそのような部分的な組み合わせが個別にかつ明示的に本明細書に開示されるかのように、本明細書に開示される。

【0081】

本明細書において論じられている刊行物は、本出願の出願日より前のそれらの開示についてのみが提供されている。本明細書中のいかなるものも、先行発明のために、本発明がそのような刊行物に先行する権利がないということの承認として解釈されるべきではない。さらに、提示される公開日が、実際の公開日と異なることがあり得、それは、個別に確認する必要がある場合がある。

【0082】

詳細な説明
本開示は、ｉ）標的リガンド結合ポリペプチド、またはｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するポリペプチドと；ｂ）分岐鎖リンカーと；ｃ）２つ以上の光異性化可能な調節因子とを含み、２つ以上の光異性化可能な調節因子のそれぞれが独立して、ｉ）光異性化可能な基；及びｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンドを含む、コンジュゲートを提供する。本開示は、本開示のコンジュゲートを含むシステム及び組成物を提供する。本開示は、標的ポリペプチドの活性を調節するため、及び標的細胞または細胞集団の活性を調節するために、本開示のコンジュゲートを使用する方法を提供する。

【0083】

光スイッチコンジュゲート
本開示は、ａ）ｉ）標的リガンド結合ポリペプチド、またはｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するポリペプチドに特異的に結合する親和性剤と；ｂ）分岐鎖リンカーと；ｃ）２つ以上の光異性化可能な調節因子とを含み、２つ以上の光異性化可能な調節因子のそれぞれが独立して、ｉ）光異性化可能な基；及びｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンドを含む、コンジュゲートを提供する。本開示のコンジュゲートはまた、本明細書では「親和性タグ付き光スイッチ」とも呼ばれる。光異性化可能な調節因子はまた、本明細書では「光スイッチ」とも呼ばれる。

【0084】

本開示のコンジュゲートは、標的リガンド結合ポリペプチドの活性を調節する。コンジュゲート中の光異性化可能な調節因子のそれぞれは、標的リガンド結合ポリペプチドと独立して相互作用することができ、光異性化可能な調節因子のそれぞれに存在するリガンドは、光によって制御される様式で標的リガンド結合ポリペプチドのリガンド結合部位に結合することができる。リガンド、光異性化可能な調節因子の設計、及び光の波長などの因子に応じて、本開示のコンジュゲートは、標的リガンド結合ポリペプチドの活性を増加もしくは減少させることができ、他の刺激に対するその感受性を調節する（例えば、増加もしくは減少させる）ことができ、標的リガンド結合ポリペプチドを特定の立体配座に安定化させることができ、または標的リガンド結合ポリペプチドの立体配座の変化を誘導することができる。

【0085】

本開示のコンジュゲートに存在する親和性剤は、標的リガンド結合ポリペプチドに結合し、それによってコンジュゲートに存在するリガンドを標的リガンド結合ポリペプチドと近接させ、リガンドの１つが光依存的な様式で、標的リガンド結合ポリペプチドのリガンド結合部位に結合できるようにする。本開示のコンジュゲートが標的リガンド結合ポリペプチドに結合すると、標的リガンド結合ポリペプチドは光調節されたポリペプチドになる。

【0086】

光調節されたポリペプチドが曝露される光の波長の変化及び／または強度（Δλ）は、光調節されたポリペプチドのリガンド結合部位へのリガンド結合の変化をもたらす、例えば、光調節されたポリペプチドのリガンド結合部位への本開示のコンジュゲートのリガンド部分の１つの結合の変化をもたらす。「光調節されたポリペプチドが曝露される光の波長の変化」としては、１）λ_１からλ_２への変化；２）λ_２からλ_１への変化；３）λ_１から暗（光なし）への変化；及び４）暗からλ_１への変化が挙げられる。λ_１からλ_２へ、次いでλ_２からλ_１へ、そして戻る、例えば、第１の波長から第２の波長への切り替え、そして再び戻るという繰り返しの変化も企図される。また、明から暗、暗から明などの繰り返しの変化も企図される。

【0087】

上記のように、本開示のコンジュゲートは、ａ）親和性剤と；ｂ）分岐鎖リンカーと；ｃ）２つ以上の光異性化可能な調節因子と、を含む。本開示によるコンジュゲートでは、分枝鎖リンカーは、親和性剤を２つ以上の光異性化可能な調節因子に結合する。例えば、分岐鎖リンカーは、親和性剤と２つ以上の光異性化可能な調節因子との間のリンカーであり得、分岐鎖リンカーは、２つ以上のアーム、例えば、３つ以上のアーム、４つ以上のアーム、５つ以上のアーム、６つ以上のアーム、７つ以上のアーム、８つ以上のアーム、９つ以上のアーム、または１０個以上のアームを含む。分岐鎖リンカーのそれぞれのアームは、光異性化可能な調節因子に結合することができる。本開示のコンジュゲートの実施形態は、分岐鎖リンカーを介して親和性剤に接続された、２つ以上の光異性化可能な調節因子、例えば、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、または１０個以上の光異性化可能な調節因子を含むことができる。上記のように、コンジュゲート中の光異性化可能な調節因子のそれぞれは、標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンドを含む。対応して、本開示のコンジュゲートは、分岐鎖リンカーを介して親和性剤に接続された、２つ以上のリガンド、例えば、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、または１０個以上のリガンドを含むことができる。例えば、いくつかの実施形態では、分岐鎖リンカーは２つのアームを含むことができ、それぞれのアームは光異性化可能な調節因子に接続されている。これらの実施形態では、親和性剤は、分岐鎖リンカーの別々のアームを介して、２つの光異性化可能な調節因子のそれぞれに結合され、したがって２つのリガンドのそれぞれに結合される。他の実施形態では、分岐鎖リンカーは４つのアームを含むことができ、それぞれのアームは光異性化可能な調節因子に接続されている。これらの実施形態では、親和性剤は、分岐鎖リンカーの別々のアームを介して、４つの光異性化可能な調節因子のそれぞれに結合され、したがって４つのリガンドのそれぞれに結合される。

【0088】

場合によっては、波長の変化（λ_１からλ_２；明から暗へ；または暗から明へ）は、リガンドの１つのリガンド結合部位への結合に変化をもたらす。本明細書で使用される場合、「リガンド結合部位へのリガンドの結合の変化」または「リガンド結合部位へのリガンドの１つの結合の変化」は、増加した結合及び減少した結合を含む。本明細書で使用される場合、「増加した結合」には、コンジュゲート中の光異性化可能な調節因子中のリガンドの１つのリガンド結合部位への結合の増加した可能性；リガンド結合部位に対する１つ以上のリガンドの増加した結合親和性；リガンド結合部位でのリガンドの増加した局所濃度；リガンド結合部位におけるリガンドの１つの増加した占有率のうちの１つ以上が含まれる。本明細書で使用される場合、「減少した結合」には、コンジュゲート中の光異性化可能な調節因子中のリガンドの１つのリガンド結合部位への結合の減少した可能性；リガンド結合部位に対する１つ以上のリガンドの減少した結合親和性；リガンド結合部位でのリガンドの減少した局所濃度；リガンド結合部位におけるリガンドの１つの減少した占有率のうちの１つ以上が含まれる。本明細書で使用される場合、本開示の調節因子のコンジュゲートが曝露される、または受容体／合成光調節因子複合体が曝露される、「波長の変化」という用語は、λ_１からλ_２への波長の変化；明から暗への変化；または暗から明への変化を指す。結合の増加としては、結合における、約１０％から約２０％、約２０％から約５０％、約５０％から約２倍、約２倍から約５倍、約５倍から約１０倍、約１０倍から約５０倍、約５０倍から約１０^２倍、約１０^２倍から約１０^４倍、約１０^４倍から約１０^６倍、約１０^６倍から約１０^８倍、または１０^８倍を超える増加が挙げられる。結合の減少としては、結合における、約５％から約１０％、約２０％から約３０％、約３０％から約４０％、約４０％から約５０％、約５０％から約６０％、約６０％から約７０％、約７０％から約８０％、約８０％から約９０％、または約９０％から１００％の減少が挙げられる。

【0089】

例えば、場合によっては、コンジュゲートのリガンドは、第１の波長の光でリガンド結合部位に結合する第１の確率を有し、リガンドは、第２の波長の光でリガンド結合部位に結合する第２の確率を有し、第２の確率は第１の確率よりも低くなる。他の場合では、コンジュゲートのリガンドは、第１の波長の光でリガンド結合部位に結合する第１の確率を有し、リガンドは、第２の波長の光でリガンド結合部位に結合する第２の確率を有し、第２の確率は第１の確率よりも高くなる。他の場合では、コンジュゲートのリガンドは、光に曝露された場合にリガンド結合部位に結合する第１の確率を有し、リガンドは、光がない（例えば暗で）とリガンド結合部位に結合する第２の確率を有し、第２の確率は第１の確率よりも低くなる。他の場合では、コンジュゲートのリガンドは、光に曝露された場合にリガンド結合部位に結合する第１の確率を有し、リガンドは、光がないとリガンド結合部位に結合する第２の確率を有し、第２の確率は第１の確率よりも高くなる。

【0090】

いくつかの実施形態では、本開示のコンジュゲートは２つ以上の光異性化可能な調節因子を含み、したがって２つ以上のリガンドを含むため、リガンド部位に結合するリガンドの確率は、光異性化可能な調節因子を１つだけ有し、したがってリガンドを１つだけ有するコンジュゲートよりも高くなる。本開示のコンジュゲートは、２つ以上の光異性化可能な調節因子を含むため、リガンド結合部位に近接するリガンドの局所濃度は、光異性化可能な調節因子を１つだけ、したがってリガンドを１つだけ有するコンジュゲートよりも高くなり得る。リガンド結合部位近くの本開示のコンジュゲートのリガンドの増加した局所濃度は、上記の結合の増加をもたらし得る。

【0091】

光調節されたポリペプチドのリガンド結合部位における本開示のコンジュゲートのリガンドの局所濃度は高い。例えば、対象の光調節されたポリペプチド中のリガンド結合部位における本開示のコンジュゲートのリガンドの局所濃度は、約５００ｎＭ～約５０ｍＭ、例えば、約５００ｎＭ～約１０ｍＭ、約７５０ｎＭ～約１ｍＭ、約１μＭ～約７５０μＭ、約１０μＭ～約５００μＭ、約１０μＭ～約２５０μＭ、約５０μＭ～約２００μＭ、または約５０μＭ～約１５０μＭの範囲、例えば約１００μＭである。いくつかの実施形態では、対象の光調節されたポリペプチドのリガンド結合部位における本開示のコンジュゲートのリガンドの局所濃度は、約５００ｎＭ～約５０ｍＭ、例えば、約５００ｎＭ～約７５０ｎＭ、約７５０ｎＭ～約１ｍＭ、約１ｍＭ～約５ｍＭ、約５ｍＭ～約１０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約２０ｍＭ～約３０ｍＭ、または約３０ｍＭ～約５０ｍＭの範囲である。

【0092】

リガンド結合部位へのリガンドの結合、またはリガンド結合部位へのより高い親和性のリガンド結合をもたらす波長の変化
場合によっては、光調節されたポリペプチドが曝露される光の波長の変化は、光調節されたポリペプチドにおけるリガンド結合部位に対する本開示のコンジュゲートのリガンドの１つ以上の結合親和性の増加をもたらす。例えば、場合によっては、光調節されたポリペプチドが曝露される光の波長の変化は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２５０倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約１０^３倍、少なくとも約５×１０^３倍、少なくとも約１０^４倍、少なくとも約５×１０^４倍、またはそれ以上、結合親和性が増加する。

【0093】

リガンドがアゴニストである場合、波長の変化は、場合によっては、光調節されたポリペプチドの活性化をもたらす。リガンドがアゴニストである場合、波長の変化は、場合によっては、光調節されたポリペプチドの脱感作をもたらす。逆に、リガンドがアンタゴニストである場合、波長の変化は、場合によっては、光調節されたポリペプチドの活性化のブロック、例えば遊離アゴニストで光調節されたポリペプチドを活性化する能力のブロックをもたらす。リガンドがブロッカー（例えば、イオンチャネルの細孔ブロッカー、またはポリペプチドまたは核酸などの他の生体高分子に結合する相互作用ドメイン）である場合、波長の変化は、場合によってはポリペプチド活性のブロックをもたらす。

【0094】

別の言い方をすれば、リガンドがアゴニストであり、光調節ポリペプチドが曝露される光の波長の変化が、光調節されたポリペプチドのリガンド結合部位に対するコンジュゲートのリガンド部分の結合親和性がより高くなる場合、波長の変化により、不活性状態から活性状態、または脱感作状態への移行が起こる。リガンドがアンタゴニストである場合、波長の変化は応答状態から非応答状態への移行をもたらす。リガンドがブロッカーである場合、波長の変化により、活性状態から不活性状態への移行が起こる。

【0095】

リガンド結合部位からのリガンドの除去、または結合親和性の低下をもたらす波長の変化
場合によっては、光調節されたポリペプチドが曝露される光の波長の変化は、光調節されたポリペプチドのリガンド結合部位からの本開示のコンジュゲートのリガンドの除去をもたらし、例えば、リガンドはリガンド結合部位に結合していない。いくつかの場合において、光調節されたポリペプチドが曝露される光の波長の変化は、光調節されたポリペプチドのリガンド結合部位に対する本開示のコンジュゲートのリガンドの１つ以上の結合親和性の低下をもたらし、例えば、リガンドは、リガンド結合部位に対する結合親和性が低下している。例えば、場合によっては、光調節されたポリペプチドが曝露される光の波長が変化すると、結合親和性が少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、またはそれ以上低下する。

【0096】

リガンドがアゴニストである場合、波長の変化は、場合によっては、光調節されたポリペプチドの活性化をもたらす。リガンドがアゴニストである場合、波長の変化は、場合によっては、光調節されたポリペプチドの不活性化をもたらす。リガンドがアゴニストである場合、波長の変化は、場合によっては、光調節されたポリペプチドの脱感作からの回復をもたらす。逆に、リガンドがアンタゴニストである場合、波長の変化は、場合によっては、リガンド結合部位の占有及びポリペプチドのバックグラウンド活性の低下、または代替的に、生理学的刺激による活性化の喪失をもたらす。リガンドがアンタゴニストである場合、波長の変化により場合によってはアンタゴニストが除去され、生理学的刺激による活性化が可能になる。リガンドが負のアロステリックモジュレーターである場合、結合を引き起こす波長の変化は、別の刺激に対する感受性または有効性の増加をもたらし得る。リガンドが正のアロステリックモジュレーターである場合、結合を引き起こす波長の変化は、別の刺激に対する感受性または有効性の減少をもたらし得る。場合によっては、リガンド結合部位は、リガンドによる結合が別の刺激に対する感度または有効性を増加または減少させる調節部位となり、光スイッチ調節因子の結合を制御することによって光がこのプロセスを調節する。場合によっては、リガンドは、ポリペプチドの活性部位のブロッカー（例えば、イオンチャネルの細孔ブロッカー、またはポリペプチドもしくは核酸などの他の生体高分子に結合する相互作用ドメイン、または酵素活性部位のブロッカー）であり、波長の変化は、受容体が正常に機能するのを防止にするかまたは可能にするために、ポリペプチド活性のブロックまたはブロックの緩和をもたらす。

【0097】

別の言い方をすれば、リガンドがアゴニストであり、光調節されたポリペプチドが曝露される光の波長の変化が、光調節されたポリペプチドのリガンド結合部位からの本開示のコンジュゲートのリガンドの除去（または非結合）をもたらす場合、波長の変化により、より活性な状態からより活性の低い状態へ、または脱感作状態から応答状態への移行が生じる。リガンドが負のアロステリックモジュレーターである場合、非結合を引き起こす波長の変化は、別の刺激に対する感受性または有効性の増加をもたらす。リガンドが正のアロステリックモジュレーターである場合、非結合を引き起こす波長の変化は、別の刺激に対する感受性または有効性の減少をもたらす。リガンドがアンタゴニストである場合、非結合を引き起こす波長の変化は、非応答状態から応答状態へ、または不活性状態から何らかのバックグラウンド「基底」（非リガンド）活性を伴う状態への移行をもたらす。リガンドがブロッカーである場合、非結合を引き起こす波長の変化は、不活性状態から活性状態への移行をもたらす。

【0098】

親和性剤
本開示のコンジュゲートに存在する親和性剤は、標的リガンド結合ポリペプチドに直接結合することにより、または標的リガンド結合ポリペプチドに結合するポリペプチドに結合することにより、または標的リガンド結合ポリペプチドと融合して発現される融合パートナーに結合することにより、光異性化可能な調節因子を、標的リガンド結合ポリペプチドを標的とする。

【0099】

場合によっては、親和性剤は標的リガンド結合ポリペプチドに特異的に結合する。したがって、例えば、場合によっては、親和性剤は、少なくとも１０^－６Ｍ、少なくとも１０^－７Ｍ、少なくとも１０^－８Ｍ、少なくとも１０^－９Ｍ、または少なくとも１０^－１０Ｍの親和性で標的リガンド結合ポリペプチドに結合する。場合によっては、親和性剤は標的リガンド結合ポリペプチドに直接結合する。場合によっては、親和性剤は、標的リガンド結合ポリペプチドに結合するポリペプチドに結合する。

【0100】

適切な親和性剤としては、自己標識ポリペプチドに結合する剤；抗体；アプタマー；ペプチド；及び小分子が挙げられるが、これらに限定されない。

【0101】

自己標識ポリペプチドに結合する剤
適切な親和性剤としては、ヌクレオシド塩基誘導体が挙げられる。場合によっては、ヌクレオシド塩基誘導体のヌクレオシド塩基は、グアニン、シトシン、ウラシル、チミン、キサンチン、及びヒポキサンチンから選択される。例えば、ヌクレオシド塩基誘導体のヌクレオシド塩基は、グアニン、キサンチン、またはヒポキサンチンであり得る。場合によっては、ヌクレオシド塩基誘導体のヌクレオシド塩基はグアニンである。他の例では、ヌクレオシド塩基誘導体のヌクレオシド塩基は、シトシン、チミン、またはウラシルであり得る。場合によっては、ヌクレオシド塩基誘導体のヌクレオシド塩基はシトシンである。ヌクレオシド塩基を誘導体化して、本開示のコンジュゲートの親和性剤のヌクレオシド塩基誘導体を提供することができる。場合によっては、親和性剤のヌクレオシド塩基誘導体は、ベンジルグアニンまたはベンジルシトシンなどのベンジルヌクレオシド塩基である。場合によっては、親和性剤はベンジルグアニンである。親和性剤がベンジルグアニンである実施形態では、ベンジルグアニン親和性剤は、ＳＮＡＰタグへの共有結合を提供し得る。場合によっては、親和性剤はベンジルシトシンである。親和性剤がベンジルシトシンである実施形態では、ベンジルシトシン親和性剤は、ＣＬＩＰタグへの共有結合を提供し得る。場合によっては、親和性剤はクロロピリミジンである。クロロピリミジンはＳＮＡＰタグに結合できる。

【0102】

適切な親和性剤としてはまた、アルキルまたはアルキル誘導体中の１個以上の水素原子がハロゲン、例えばフルオロ、クロロ、またはブロモで置換されているハロアルキル誘導体などのアルキル誘導体が挙げられる。場合によっては、ハロアルキル誘導体はフルオロアルカンである。場合によっては、ハロアルキル誘導体はクロロアルカンである。場合によっては、ハロアルキル誘導体はブロモアルカンである。場合によっては、親和性剤は、Ｃｌ（ＣＨ_２）_６（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_２などのクロロアルカンである。親和性剤がクロロアルカンである実施形態では、クロロアルカン親和性剤は、ＨＡＬＯタグへの共有結合を提供し得る。

【0103】

抗体
場合によっては、本開示のコンジュゲートに存在する親和性剤は抗体である。場合によっては、本開示のコンジュゲートに含めるのに適した抗体は、標的リガンド結合ポリペプチドに結合する。標的リガンド結合ポリペプチドの例を以下に提供する。本開示のコンジュゲートに含めるのに適した抗体は、光異性化可能な調節因子に存在するリガンドの標的リガンド結合ポリペプチドへの結合を阻害しない。一般に、本開示のコンジュゲートに含めるのに適した抗体は、標的リガンド結合ポリペプチドの活性を実質的に変化させない。場合によっては、親和性剤は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。場合によっては、親和性剤はナノボディである。

【0104】

場合によっては、親和性剤は、標的リガンド結合ポリペプチドに特異的に結合する抗体であり、標的リガンド結合ポリペプチドは、転写調節因子、イオンチャネル、カチオンチャネル、リガンド依存性イオンチャネル、電位依存性イオンチャネル、クオラムセンサー、フェロモン受容体、神経伝達物質受容体、Ｇタンパク質共役受容体、及び酵素から選択される。

【0105】

場合によっては、親和性剤は、標的リガンド結合ポリペプチドに特異的に結合する抗体であり、標的リガンド結合ポリペプチドは、カリウムチャネル、ナトリウムチャネル、またはカルシウムチャネルから選択される。

【0106】

場合によっては、親和性剤は、標的リガンド結合ポリペプチドに特異的に結合する抗体であり、標的リガンド結合ポリペプチドは、グルタミン酸受容体、代謝型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）、イオンチャネル型グルタミン酸受容体（例えば、カイネート受容体；ＡＭＰＡ受容体；ＮＭＤＡ受容体）、イオンチャネル型ニコチン性アセチルコリン受容体、イオンチャネル型ＧＡＢＡ－Ａ受容体、代謝型ＧＡＢＡ－Ｂ受容体、代謝型ドーパミン受容体、イオンチャネル型プリン作動性Ｐ２Ｘ受容体、代謝型プリン作動性Ｐ２Ｙ受容体、代謝型セロトニン受容体、イオンチャネル型セロトニン受容体、イオンチャネル型グリシン受容体、カチオンチャネル、カリウムチャネル、カルシウムチャネル、ナトリウムチャネル、プロトンチャネル、アニオンチャネル、及びクロライドチャネルから選択される。場合によっては、親和性剤は、代謝型グルタミン酸受容体に特異的に結合する抗体であり、代謝型グルタミン酸受容体としては、例えば、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ５、ｍＧｌｕＲ６などが挙げられる。

【0107】

非限定的な一例として、親和性剤は、ｍＧｌｕＲ２に特異的に結合するｓｃＦｖである。別の非限定的な例として、親和性剤は、ｍＧｌｕＲ２に特異的に結合するナノボディである。別の非限定的な例として、親和性剤は、ｍＧｌｕＲ３に特異的に結合するｓｃＦｖである。別の非限定的な例として、親和性剤は、ｍＧｌｕＲ３に特異的に結合するナノボディである。別の非限定的な例として、親和性剤は、ｍＧｌｕＲ５に特異的に結合するｓｃＦｖである。別の非限定的な例として、親和性剤は、ｍＧｌｕＲ５に特異的に結合するナノボディである。別の非限定的な例として、親和性剤は、ｍＧｌｕＲ６に特異的に結合するｓｃＦｖである。別の非限定的な例として、親和性剤は、ｍＧｌｕＲ６に特異的に結合するナノボディである。

【0108】

小分子
本開示のコンジュゲートにおける親和性剤としての使用に適した小分子としては、２ｋＤａ未満、１ｋＤａ未満、５００ダルトン未満、２５０ダルトン未満、２００ダルトン未満、１００ダルトン未満、７５ダルトン未満、または５０ダルトン未満の分子量を有する小分子が挙げられる。例えば、本開示のコンジュゲートにおける親和性剤としての使用に適した小分子は、１０ダルトン～２ｋＤａ、例えば、１０ダルトン～２５ダルトン、２５ダルトン～５０ダルトン、５０ダルトン～１００ダルトン、１００ダルトン～１５０ダルトン、１５０ダルトン～２５０ダルトン、２５０ダルトン～５００ダルトン、５００ダルトン～１ｋＤａ、または１ｋＤａ～２ｋＤａの分子量を有することができる。

【0109】

本開示のコンジュゲートにおける親和性剤としての使用に適した小分子は、一般に、標的リガンド結合ポリペプチドのリガンドではない。本開示のコンジュゲートにおける親和性剤としての使用に適した小分子は、一般に、リガンドが結合する部位以外の部位で標的リガンド結合ポリペプチドに結合し、標的リガンド結合ポリペプチドへのリガンドの結合を実質的に阻害しない。

【0110】

アプタマー
親和性剤としての使用に適したアプタマーとしては、ＲＮＡアプタマー、ＤＮＡアプタマー、及びペプチドアプタマーが挙げられる。本開示のコンジュゲートに含めるのに適したアプタマーは、光異性化可能な調節因子に存在するリガンドの標的リガンド結合ポリペプチドへの結合を阻害しない。一般に、本開示のコンジュゲートに含めるのに適したアプタマーは、標的リガンド結合ポリペプチドの活性を実質的に変化させない。

【0111】

核酸アプタマーは、約１０ヌクレオチド～約２００ヌクレオチド、例えば、１０ヌクレオチド（ｎｔ）～１５ｎｔ、１０ｎｔ～１５ｎｔ、１５ｎｔ～２０ｎｔ、２０ｎｔ～２５ｎｔ、２５ｎｔ～５０ｎｔ、５０ｎｔ～７５ｎｔ、７５ｎｔ～１００ｎｔ、１００ｎｔ～１５０ｎｔ、または１５０ｎｔ～２００ｎｔの長さを有し得る。核酸アプタマーは、約１０ヌクレオチド～約５０ヌクレオチドの長さを有し得る。核酸アプタマーは、約１０ヌクレオチド～約２５ヌクレオチドの長さを有し得る。

【0112】

ＤＮＡアプタマーは、任意の公知の方法を用いて調製することができる。例えば、ＤＮＡ－ＳＥＬＥＸ法を用いることができる。ＳＥＬＥＸ法では、ラウンド数を増やしたり、または競合物質を用いたりして厳しい選択条件を設定することにより、標的ポリペプチドに対してより強い結合能を示すアプタマーが濃縮及び選択される。そこで、ＳＥＬＥＸのラウンド数を調整することにより、及び／または競合条件を変えることにより、結合力の異なるアプタマー、結合様式の異なるアプタマー、結合力または結合様式が同じでも塩基配列の異なるアプタマーを得ることができる。ＳＥＬＥＸ法は、ポリメラーゼ連鎖反応による増幅プロセス、プロセス中マンガンイオンなどを用いて変異を起こすことを含み、より多様性のあるＳＥＬＥＸを行うことが可能である。ポリペプチド（またはポリペプチドの一部）に特異的なアプタマーは、例えば、Ｏｇａｗａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ，Ｌｅｔｔ，１４：４００１－４００４，２００４；及びＪａｙａｓｅｎａ，Ｓ． Ｄ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４５：１６２８－１６５０，１９９９に記載されるものなどの標準的な技術を用いて製造することができる。

【0113】

核酸アプタマーは、天然に存在するヌクレオチドを含むことができ、天然に存在しないヌクレオチドも含むことができる。天然に存在するヌクレオチドのみを含むＤＮＡアプタマーとしては、アデニン、グアニン、シトシン、及びチミンのいずれかの天然塩基を有するデオキシリボヌクレオチドから構成されるＤＮＡアプタマーが挙げられる。天然に存在するヌクレオチドのみを含むＲＮＡアプタマーとしては、アデニン、グアニン、シトシン、及びウラシルのいずれかの天然塩基を有するリボヌクレオチドから構成されるＲＮＡから構成されるＲＮＡアプタマーが挙げられる。天然に存在しないヌクレオチドは、天然に存在しない塩基、リン酸基、及び糖を含む。天然に存在しない塩基（または「人工塩基」）とは、天然のヌクレオチドを構成する天然の塩基と同様の特性を有し、天然塩基のようにそのパートナーの塩基類似体（「相補的な人工塩基」と呼ばれる）と人工的な塩基対を形成できる人工的に構築された塩基類似体を指す。「人工塩基対形成」という用語は、一対の相補的な天然塩基アデニンとチミン、アデニンとウラシル、またはグアニンとシトシンのように、一対の相補的人工塩基間に形成される塩基対形成を指す。人工塩基対形成には、天然塩基間の塩基対形成に見られる水素結合による化学結合、人工塩基間の分子構造に基づく会合による物理的結合、疎水性相互作用によるスタッキング効果が含まれる。

【0114】

アプタマーは、２’－Ｏ－メチル部分、２’－ＮＨ_２部分などの１つ以上の部分を含むように改変できる。

【0115】

さまざまなポリペプチドに結合するアプタマーは、当該技術分野で知られている。例えば、アプタマーデータベースは、インターネットでｗｗｗ（ｄｏｔ）ａｐｔａｇｅｎ（ｄｏｔ）ｃｏｍ／ａｐｔａｍｅｒ－ｉｎｄｅｘ／ａｐｔａｍｅｒ－ｌｉｓｔで入手できる。さらに、上記のように、当業者は、目的の標的リガンド結合ポリペプチドに結合するアプタマーを容易に設計することができる。

【0116】

分岐鎖リンカー
上記のように、本開示のコンジュゲートは、ａ）親和性剤と；ｂ）分岐鎖リンカーと；ｃ）２つ以上の光異性化可能な調節因子と、を含む。分岐鎖リンカーは、コンジュゲートの２つ以上の光異性化可能な調節因子に親和性剤を結合するリンカーである。したがって、分枝鎖リンカーは、親和性剤に結合することができ、光異性化可能な調節因子をそれぞれ独立して含む２つ以上のアームを含むことができる。例えば、分枝鎖リンカーは、第１の末端で親和性剤に結合することができ、第２の末端に２つ以上のアームを含むことができ、２つ以上のアームのそれぞれは、光異性化可能な調節因子に独立して結合する。場合によっては、分岐鎖リンカーは、２つ以上のアーム、例えば、３つ以上のアーム、４つ以上のアーム、５つ以上のアーム、６つ以上のアーム、７つ以上のアーム、８つ以上のアーム、９つ以上のアーム、または１０個以上のアームを含み、アームのそれぞれが独立して光異性化可能な調節因子に接続されている。さらに、上記のように、本開示のコンジュゲートのそれぞれの光異性化可能な調節因子は、光異性化可能な基を含む。そのようなとき、分岐鎖リンカーは、２つ以上のアーム、例えば、３つ以上のアーム、４つ以上のアーム、５つ以上のアーム、６つ以上のアーム、７つ以上のアーム、８つ以上のアーム、９つ以上のアーム、または１０個以上のアームを含むことができ、アームのそれぞれが独立して光異性化可能な基に接続されている。さらに、上記のように、本開示のコンジュゲートのそれぞれの光異性化可能な調節因子は、標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンドを含む。そのようなとき、分岐鎖リンカーは、２つ以上のアーム、例えば、３つ以上のアーム、４つ以上のアーム、５つ以上のアーム、６つ以上のアーム、７つ以上のアーム、８つ以上のアーム、９つ以上のアーム、または１０個以上のアームを含むことができ、アームのそれぞれが独立してリガンドを含む。場合によっては、分岐鎖リンカーは２つのアームを含む。場合によっては、分岐鎖リンカーは４つのアームを含む。さらに、場合によっては、本開示のコンジュゲートの分岐鎖リンカーは、４～１０個のアーム、または４～９個のアーム、または４～８個のアーム、または４～７個のアーム、または４～６個のアーム、または４～５個のアーム、または５～１０個のアーム、または５～９個のアーム、または５～８個のアーム、または５～７個のアーム、または５～６個のアーム、または６～１０個のアーム、または６～９個のアーム、または６～８個のアーム、または６～７個のアームを含み、アームのそれぞれは独立してリガンドを含む。他のより具体的な実施形態では、本開示のコンジュゲートの分岐鎖リンカーは、４個のアームを含み、アームのそれぞれは、目的の標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンドを独立して含む。

【0117】

本開示のコンジュゲートの分岐鎖リンカーは、親和性剤を２つ以上の光異性化可能な調節因子に結合する任意の適切な分岐鎖リンカーであり得る。分岐鎖リンカーは、親和性剤及びそれぞれの光異性化可能な調節因子への好都合な結合化学を提供する適切な官能基を含み得る。例えば、アミド、エーテル、アミン、エステル官能基などであるがこれらに限定されない任意の種類の官能基を使用して、分岐鎖リンカーを親和性剤及び／または光異性化可能な調節因子に接続することができる。いくつかの実施形態では、アミド官能基は、分岐鎖リンカーと親和性剤及び／または光異性化可能な調節因子との間の便利な結合化学を提供する。

【0118】

場合によっては、分枝鎖リンカーは、式（ＢＬ）：

（式中、ｎは１～１０の整数である）
である部分を含む。

【0119】

場合によっては、親和性剤は、部分の左側で式（ＢＬ）の分岐鎖リンカーに結合する、すなわち、波線で示される位置で部分の左側のアミド基に結合する。上記のように、本開示の分岐鎖リンカーは、２つ以上のアームを含むことができ、それぞれのアームは別個の光異性化可能な調節因子に接続される。場合によっては、ｎが１で、分岐鎖リンカーが２つの光異性化可能な調節因子に結合する。場合によっては、ｎが２で、分岐鎖リンカーが３つの光異性化可能な調節因子に結合する。場合によっては、ｎが３で、分岐鎖リンカーが４つの光異性化可能な調節因子に結合する。場合によっては、ｎが４で、分岐鎖リンカーが５つの光異性化可能な調節因子に結合する。場合によっては、ｎが５で、分岐鎖リンカーが６つの光異性化可能な調節因子に結合する。場合によっては、ｎが６で、分岐鎖リンカーが７つの光異性化可能な調節因子に結合する。場合によっては、ｎが７で、分岐鎖リンカーが８つの光異性化可能な調節因子に結合する。場合によっては、ｎが８で、分岐鎖リンカーが９つの光異性化可能な調節因子に結合する。場合によっては、ｎが９で、分岐鎖リンカーが１０つの光異性化可能な調節因子に結合する。場合によっては、ｎが１０で、分岐鎖リンカーが１１つの光異性化可能な調節因子に結合する。

【0120】

例えば、ｎが１である式（ＢＬ）の部分において、この部分は、１つのグルタルアミド基、すなわち、式（ＢＬ）の括弧内に示される基を含む。この場合、ｎが１の場合、部分の右側に２つのアームが示され、それぞれのアームにはアミド官能基が含まれる。式（ＢＬ）の部分において、グルタルアミド基のアームのそれぞれは、部分の右側の波線によって示されるそれぞれの結合点で光異性化可能な調節因子に結合することができるアミド官能基を含む。そのようなとき、ｎが１の場合、それぞれのアームは光異性化可能な調節因子を含み、分岐鎖リンカーは２つの光異性化可能な調節因子に結合する。

【0121】

他の実施形態では、ｎは３であり得る。この場合、式（ＢＬ）の部分は、３つのグルタルアミド基を含み、第２のグルタルアミド基は、式（ＢＬ）の部分の第１のグルタルアミド基の右上のアミド官能基に波線で示される結合点で結合し、第３のグルタルアミド基は、式（ＢＬ）の部分の第１のグルタルアミド基の右下のアミド官能基に波線で示される結合点で結合する。さらに、第２のグルタルアミド基は２つのアームを含み、それぞれのアームはそれぞれの光異性化可能な調節因子に結合しており、第３のグルタルアミド基は２つのアームを含み、それぞれのアームはそれぞれの光異性化可能な調節因子に結合している。したがって、ｎが３である場合、式（ＢＬ）の分岐鎖リンカーは、分岐鎖リンカーが４つの光異性化可能な調節因子に結合するように、それぞれが光異性化可能な調節因子を含む４つのアームを含む。

【0122】

他の場合では、式（ＢＬ）の部分において、ｎは１～１０、または１～９、または１～８、または１～７、または１～６、または１～５、または１～４である。他の場合では、式（ＢＬ）の部分において、ｎは２～１０、または２～９、または２～８、または２～７、または２～６、または２～５、または２～４である。他の場合では、式（ＢＬ）の部分において、ｎは３～１０、または３～９、または３～８、または３～７、または３～６、または３～５、または３～４である。他の場合では、式（ＢＬ）の部分において、ｎは、４～１０、または４～９、または４～８、または４～７、または４～６、または４～５である。他の場合では、式（ＢＬ）の部分において、ｎは、５～１０、または５～９、または５～８、または５～７、または５～６である。他の場合では、式（ＢＬ）の部分において、ｎは、６～１０、または６～９、または６～８、または６～７である。

【0123】

光異性化可能な調節因子
上記のように、本開示のコンジュゲートに存在する光異性化可能な調節因子は、ｉ）光異性化可能な基と；ｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンドと、を含む。

【0124】

光異性化可能な基
上記のように、本開示のコンジュゲートに存在する光異性化可能な調節因子は、ｉ）光異性化可能な基と；ｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンドと、を含む。

【0125】

光異性化可能な基は当該技術分野で既知であり、任意の既知の光異性化可能な基を、本開示のコンジュゲートに存在する光異性化可能な調節因子に含めることができる。適切な光異性化可能な基としては、アゾベンゼン、環状アゾベンゼン及びアゾヘテロアレーンならびにそれらの誘導体；スピロピラン及びその誘導体；トリフェニルメタン及びその誘導体；４，５－エポキシ－２－シクロペンテン及びその誘導体；フルギド及びその誘導体；チオインジゴ及びその誘導体；ジアリールエテン及びその誘導体；ジアリルエテン及びその誘導体；過密アルケン及びその誘導体；及びアントラセン及びその誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、適切な光異性化可能な基は、本明細書の実施例に示されるような光異性化可能な基である。

【0126】

適切なスピロピラン誘導体としては、１，３，３－トリメチルインドリノベンゾピリロスピラン；１，３，３－トリメチルインドリノ－６’－ニトロベンゾピリロスピラン；１，３，３－トリメチルインドリノ－６’－ブロモベンゾピリロスピラン；１－ｎ－デシル－３，３－ジメチルインドリノ－６’－ニトロベンゾピリロスピラン；１－ｎ－オクタデシル－１－３，３－ジメチルインドリノ－６’－ニトロベンゾピリロスピラン；３’，３’－ジメチル－６－ニトロ－１’－［２－（フェニルカルバモイル）エチル］スピロ；［２Ｈ－１－ベンゾピラン－２，２’－インドリン］；１，３，３－トリメチルインドリノ－８’－メトキシベンゾピリロスピラン；及び１，３，３－トリメチルインドリノ－β－ナフトピリロスピランが挙げられるが、これらに限定されない。スピロピランまたはスピロピラン誘導体に対応するメロシアニン形態も使用に適している。

【0127】

適切なトリフェニルメタン誘導体としては、マラカイトグリーン誘導体、具体的には、例えば、ビス［ジメチルアミノ）フェニル］フェニルメタノール、ビス［４－（ジエチルアミノ）フェニル］フェニルメタノール、ビス［４－（ジブチルアミノ）フェニル］フェニルメタノール、及びビス［４－（ジエチルアミノ）フェニル］フェニルメタンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0128】

適切な４，５－エポキシ－２－シクロペンテン誘導体としては、例えば、２，３－ジフェニル－１－インデノンオキシド及び２’，３’－ジメチル－２，３－ジフェニル－１－インデノンオキシドが挙げられる。

【0129】

適切なアゾベンゼン化合物としては、例えば、側鎖に架橋したアゾベンゼン残基を有する化合物、例えば、４－カルボキシアゾベンゼンがポリビニルアルコールのヒドロキシル基に結合したエステルである化合物、または４－カルボキシアゾベンゼンがポリアリルアミンのアミノ基に結合したアミドである化合物が挙げられる。また、適切なものは主鎖にアゾベンゼン残基を有するアゾベンゼン化合物、例えば、ビス（４－ヒドロキシフェニル）ジメチルメタン（ビスフェノールＡとも呼ばれる）と４，４’－ジカルボキシアゾベンゼンとのエステル結合、またはエチレングリコールと４，４’－ジカルボキシアゾベンゼンとのエステル結合によって形成されるものである。

【0130】

本発明のコンジュゲート及び光異性化可能な調節因子での使用に適合させることができる適切な環状アゾベンゼン及びアゾヘテロアレーン化合物としては、１１，１２－ジヒドロジベンゾ［ｃ，ｇ］［１，２］ジアゾシン－５－オキシド、

、ヘテロジアゾシン、例えば、Ｈａｍｍｅｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．，２０１６，１３８（４０），ｐｐ １３１１１－１３１１４）に記載される光スイッチ、ならびにＣａｌｂｏ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．，２０１７，１３９（３），ｐｐ １２６１－１２７４に記載されるような、３－ピラゾール（３ｐｚＨまたは３ｐｚＭｅ）、５－ピラゾール（５ｐｚＨまたは５ｐｚＭｅ）、３－ピロール（３ｐｙＨまたは３ｐｙＭｅ）、トリアゾール及びテトラゾール（ｔｅｔまたは３ｔｒｉ）などのアゾヘテロアレーン光スイッチが挙げられるが、これらに限定されない。これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0131】

適切なフルギド誘導体としては、イソプロピリデンフルギド及びアダマンチリデンフルギドが挙げられるが、これらに限定されない。

【0132】

適切なジアリルエテン誘導体としては、例えば、１，２－ジシアノ－１，２－ビス（２，３，５－トリメチル－４－チエニル）エタン、２，３－ビス（２，３，５－トリメチル－４－チエチル）無水マレイン酸；１，２－ジシアノ－１，２－ビス（２，３，５－トリメチル－４－セレニル）エタン；２，３－ビス（２，３，５－トリメチル－４－セレニル）無水マレイン酸；及び１，２－ジシアノ－１，２－ビス（２－メチル－３－Ｎ－メチルインドール）エタンが挙げられる。

【0133】

適切なジアリールエテン誘導体としては、置換ペルフルオロシクロペンテン－ビス－３－チエニル及びビス－３－チエニルマレイミドが挙げられるが、これらに限定されない。

【0134】

適切な過密アルケンとしては、シス－２－ニトロ－７－（ジメチルアミノ）－９－（２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－ナフト［２，１－ｂ］チオピラン－１’－イリデン）－９Ｈ－チオキサンテン及びトランス－ジメチル－［１－（２－ニトロ－チオキサンテン－９－イリデン）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｆ］チオクロメン－８－イル］アミンが挙げられるが、これらに限定されない。過密アルケンは文献に記載されている。例えば、ｔｅｒＷｉｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｏｒｇ． Ｂｉｏｍｏｌ． Ｃｈｅｍ． ３：２８－３０；及びＧｅｅｒｔｓｅｍａ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ａｇｎｅｗ ＣＨｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ． ３８：２７３８を参照されたい。

【0135】

他の適切な光異性化可能な基としては、例えば、ジアゾケトン、アリールアジド、ジアゼレン、及びベンゾフェノンを含む、アフィニティー標識に一般的に使用される反応基が挙げられる。

【0136】

場合によっては、コンジュゲートの光異性化可能な基（例えば、本明細書で定義される）は、以下の式のアゾベンゼン（例えば、アゾベンゼン光スイッチ）：

（式中、
Ｒ^１及びＲ^６が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、－ＮＲ^１０Ｒ^１１、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）Ｒ^１３、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１３、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１２Ｒ^１３、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－２０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、ヘテロアリール、複素環、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクロチオ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアミノ、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、置換Ｃ_４－１０シクロアルケニル、シアノ、ハロ、－ＯＲ^１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０、－ＳＲ^１０、－Ｓ（Ｏ）Ｒ^１０、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^１０から選択される１つ以上の任意の置換基であり；
ｘが、１～５の整数であり；
ｙが、１～５の整数であり；
式中、Ｒ^１０～Ｒ^１３は以下に定義されるとおりである）
またはその薬学的に許容される塩である。

【0137】

場合によっては、本開示のコンジュゲートに存在する光異性化可能な基は、式１の化合物：

（式中、
Ｑ^１が、－ＣＨ_２－または－Ｃ（＝Ｏ）－であり；
Ｑ^２が、本開示に従って記載されるように、リガンド（または標識または反応基または第２の親和性剤）であり；
それぞれのＲ^１が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、－ＮＲ^１０Ｒ^１１、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）Ｒ^１３、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１３、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１２Ｒ^１３、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－２０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、ヘテロアリール、複素環、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクロチオ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアミノ、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、置換Ｃ_４－１０シクロアルケニル、シアノ、ハロ、－ＯＲ^１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０、－ＳＲ^１０、－Ｓ（Ｏ）Ｒ^１０、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^１０から独立して選択され；
ｗが、１～１０の整数であり；
ｘが、１～５の整数であり；
ｙが、１～４の整数であり；
Ｒ^２が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－２０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、及び置換Ｃ_４－１０シクロアルケニルから選択され；
それぞれのＲ^６が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、－ＮＲ^１０Ｒ^１１、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）Ｒ^１３、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－２０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、ヘテロアリール、複素環、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクロチオ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアミノ、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、置換Ｃ_４－１０シクロアルケニル、シアノ、ハロ、－ＯＲ^１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０、－ＳＲ^１０、－Ｓ（Ｏ）Ｒ^１０、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^１０から独立して選択され；
Ｒ^１０及びＲ^１１が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－２０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、及び置換Ｃ_４－１０シクロアルケニルからそれぞれ独立して選択され；
Ｒ^１２が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－２０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、及び置換Ｃ_４－１０シクロアルケニルから選択され；
Ｒ^１３が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、置換Ｃ_４－１０シクロアルケニル、－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_３ ^＋、及び－ＣＨ_２－ＳＯ_３ ^－から選択される）
またはその薬学的に許容される塩である。

【0138】

式１の特定の実施形態では、Ｑ^１は、－ＣＨ_２－である。式１の特定の実施形態では、Ｑ^１は、－Ｃ（＝Ｏ）－である。

【0139】

式１のいくつかの例では、Ｒ^１の１つは、リンカーを介して親和性剤に連結される（例えば、本明細書に記載されるように）。場合によっては、リンカーは分枝鎖リンカーを含む（例えば、本明細書に記載されるように）。

【0140】

場合によっては、本開示のコンジュゲートに存在する光異性化可能な基は、式２の化合物：

（式中、
Ｑ^２が、本開示に従って記載されるように、リガンド（または標識または反応基または第２の親和性剤）であり；
それぞれのＲ^１が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、－ＮＲ^１０Ｒ^１１、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）Ｒ^１３、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１３、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１２Ｒ^１３、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－２０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、ヘテロアリール、複素環、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクロチオ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアミノ、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、置換Ｃ_４－１０シクロアルケニル、シアノ、ハロ、－ＯＲ^１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０、－ＳＲ^１０、－Ｓ（Ｏ）Ｒ^１０、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ_１０から独立して選択され；
ｗが、１～１０の整数であり；
ｘが、１～５の整数であり；
ｙが、１～４の整数であり；
Ｒ^２が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－２０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、及び置換Ｃ_４－１０シクロアルケニルから選択され；
それぞれのＲ^６が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、－ＮＲ^１０Ｒ１１、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）Ｒ^１３、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－２０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、ヘテロアリール、複素環、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクロチオ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアミノ、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、置換Ｃ_４－１０シクロアルケニル、シアノ、ハロ、－ＯＲ^１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０、－ＳＲ^１０、－Ｓ（Ｏ）Ｒ^１０、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^１０から独立して選択され；
Ｒ^１０及びＲ^１１が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－２０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、及び置換Ｃ_４－１０シクロアルケニルからそれぞれ独立して選択され；
Ｒ^１２が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ６－２０アリール、置換Ｃ６－２０アリール、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、及び置換Ｃ_４－１０シクロアルケニルから選択され；
Ｒ^１３が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、置換Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、置換Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_２－１０アルキニル、置換Ｃ_２－１０アルキニル、Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、置換Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_４－１０シクロアルキル、置換Ｃ_４－１０シクロアルキル、Ｃ_４－１０シクロアルケニル、置換Ｃ_４－１０シクロアルケニル、－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_３）^３＋、及び－ＣＨ_２－ＳＯ_３ ^－から選択される）
またはその薬学的に許容される塩である。

【0141】

式２のいくつかの例では、Ｒ^１基の１つは、リンカーを介して親和性剤に連結される（例えば、本明細書に記載されるように）。場合によっては、リンカーは分枝鎖リンカーを含む（例えば、本明細書に記載されるように）。

【0142】

場合によっては、本開示のコンジュゲートに存在する光異性化可能な基は、式３の化合物：

（式中、
Ｑ^２が、本開示に従って記載されるように、リガンド（または標識または反応基または第２の親和性剤）であり；
ｗが、１～１０の整数であり；
Ｒ^１が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、－ＮＲ^１０Ｒ^１１、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）Ｒ^１３、－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１３、及び－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１２Ｒ^１３から選択され；
Ｒ^２が、水素またはＣ_１－１０アルキルであり；
Ｒ^１０及びＲ^１１が、水素及びＣ_１－１０アルキルから独立して選択され、
Ｒ^１２が、水素またはＣ_１－１０アルキルであり；
Ｒ^１３が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_１－８アルケニル、Ｃ_６－１０アリール、及び置換Ｃ_１－１０アルキルから選択される）
またはその薬学的に許容される塩である。

【0143】

式３の特定の実施形態では、Ｒ^１は、Ｃ_１－８アルキルなどのＣ_１－１０アルキル、例えば、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－５アルキル、またはＣ_１－４アルキルである。式３のいくつかの実施形態では、Ｒ^１はＣ_１－４アルキルである。

【0144】

式３の特定の実施形態では、Ｒ^１は－ＮＲ^１０Ｒ^１１である。

【0145】

式３の特定の実施形態では、Ｒ^１は－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）Ｒ^１３である。

【0146】

特定の実施形態では、Ｒ^２はＨである。

【0147】

式３のいくつかの例では、Ｒ^１基は、リンカーを介して親和性剤に連結される（例えば、本明細書に記載されるように）。場合によっては、リンカーは分枝鎖リンカーを含む（例えば、本明細書に記載されるように）。例えば、Ｒ^１が－ＮＲ^１０Ｒ^１１である実施形態では、Ｒ^１基は、リンカーを介して、Ｒ^１０基またはＲ^１１基のいずれかを介して親和性剤に結合することができる。Ｒ^１が－ＮＲ^１２Ｃ（Ｏ）Ｒ^１３である他の場合では、Ｒ^１基は、リンカーを介して、Ｒ^１３基を介して親和性剤に連結され得る。

【0148】

式１、２、または３のいくつかの例では、Ｑ^２は、本開示に従って記載されるようにリガンドである。

【0149】

式１、２、または３のいくつかの例では、Ｑ^２は、本開示に従って記載されるように標識である。例えば、標識は、本明細書に記載されるように、フルオロフォアなどの検出可能な標識であり得る。

【0150】

式１、２、または３のいくつかの例では、Ｑ^２は、本開示に従って記載されるように反応性基である。

【0151】

式１、２、または３のいくつかの例では、Ｑ^２は、本開示に従って記載されるように第２の親和性剤である。

【0152】

場合によっては、本開示のコンジュゲートに存在する光異性化可能な基は、以下に示すアゾベンゼン化合物である：

ここで、波線はコンジュゲートの残りの部分への結合点を示している。例えば、アゾベンゼンの左側の波線は、リンカー（例えば、本明細書に記載の分岐鎖リンカー）への結合点を示し得、アゾベンゼンの右側の波線は、本明細書に記載のリガンドへの結合点を示し得る。

【0153】

場合によっては、光異性化可能な基はアゾベンゼンであり、例えば、アゾベンゼンの光異性化可能な基はＷＯ２０１９／０６０７８５に見られ、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0154】

リガンド
上記のように、本開示のコンジュゲートに存在する光異性化可能な調節因子は、ｉ）光異性化可能な基と；ｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンドと、を含む。

【0155】

本明細書で使用される場合、「リガンド」という用語は、ポリペプチドに結合し、ポリペプチドの活性に変化をもたらし、及び／またはポリペプチドの立体構造に変化をもたらし、及び／またはポリペプチドへの別のポリペプチドの結合に影響を及ぼす、またはポリペプチドに対する別のリガンドの影響に影響を及ぼす分子（例えば、小分子、ペプチド、またはタンパク質）を指す。リガンドとしては、アゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニスト、アンタゴニスト、アロステリックモジュレーター、及びブロッカーが挙げられる。

【0156】

場合によっては、リガンドは天然に存在するリガンドである。他の場合では、リガンドは合成リガンドである。場合によっては、リガンドは内因性リガンドである。いくつかの場合、リガンドはアゴニストである。いくつかの場合、リガンドは逆アゴニストである。他の場合では、リガンドは部分アゴニストである。他の場合では、リガンドはアンタゴニストである。他の場合では、リガンドはアロステリックモジュレーターである。他の場合では、リガンドはブロッカーである。「アンタゴニスト」という用語は、一般に、リガンド結合ポリペプチドに結合し、リガンド結合ポリペプチドの結合を阻害する薬剤を指す。「アンタゴニスト」は、オルソステリック部位（アゴニストが結合するのと同じ部位）もしくはアロステリック部位、またはその近くに結合するが、リガンド結合ポリペプチドを活性化しない薬剤であり得る。代替的に、アンタゴニストは一般に、アゴニストによる結合を排除するか、またはアゴニストによる活性化を妨害し、したがって活性化を防止または妨害する。「アロステリックモジュレーター」は、オルソステリックリガンド結合部位から離れたアロステリック部位に結合する薬剤であり得、アロステリックリガンドの結合は、オルソステリックリガンドに対する感受性もしくは有効性を低下させる（負のアロステリックモジュレーター）か、またはオルソステリックリガンドに対する感受性もしくは有効性を増加させる（正のアロステリックモジュレーター）。「ブロッカー」という用語は、活性部位、細孔、またはアロステリック部位に直接作用する薬剤を指す。本明細書での使用に適したリガンドは、リガンド結合ポリペプチドのリガンド結合部位に可逆的に結合する。

【0157】

リガンドは、標的リガンド結合ポリペプチド、及び標的リガンド結合ポリペプチドに対する所望の効果に部分的に基づいて選択される。例えば、ホルモン結合転写因子のリガンドは、場合によっては、ホルモン、またはホルモンの合成類似体、またはホルモン結合もしくは作用を正もしくは負に妨害もしくは調節するリガンドである。テトラサイクリントランス活性化因子のリガンドは、場合によってはテトラサイクリンまたはその合成類似体である。酵素に対するリガンドは、場合によっては、酵素の合成アゴニストまたはアンタゴニストである。場合によっては、リガンドがリガンド結合部位をブロックする。酵素またはイオンチャネルのリガンドは、場合によっては、酵素活性部位またはイオンチャネル細孔のブロッカーである。リガンド依存性イオンチャネルまたはＧタンパク質共役受容体または他の膜関連受容体または可溶性受容体のリガンドは、場合によっては、天然に存在するリガンド、またはリガンドの合成バージョン、例えばリガンドの合成類似体、または、そのリガンドの結合もしくは作用を正もしくは負に妨害もしくは調節するリガンドである。

【0158】

場合によっては、リガンドは小分子リガンドである。小分子リガンドは、約５０ダルトン～約３０００ダルトン、例えば、約５０ダルトン～約７５ダルトン、約７５ダルトン～約１００ダルトン、約１００ダルトン～約２５０ダルトン、約２５０ダルトン～約５００ダルトン、約５００ダルトン～約７５０ダルトン、約７５０ダルトン～約１０００ダルトン、約１０００ダルトン～約１２５０ダルトン、約１２５０ダルトン～約１５００ダルトン、約１５００ダルトン～約２０００ダルトン、約２０００ダルトン～約２５００ダルトン、または約２５００ダルトン～約３０００ダルトンの範囲の分子量を有することができる。

【0159】

他の場合では、リガンドはペプチドリガンドである。ペプチドリガンドは、約１ｋＤａ～約２０ｋＤａ、例えば、約１ｋＤａ～約２ｋＤａ、約２ｋＤａ～約５ｋＤａ、約５ｋＤａ～約７ｋＤａ、約７ｋＤａ～約１０ｋＤａ、約１０ｋＤａ～約１２ｋＤａ、約１２ｋＤａ～約１５ｋＤａ、または約１５ｋＤａ～約２０ｋＤａの範囲の分子量を有することができる。ペプチドリガンドは、２アミノ酸～２０アミノ酸の長さを有することができる。例えば、ペプチドリガンドは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸の長さを有することができる。ペプチドリガンドは、２アミノ酸～５アミノ酸、５アミノ酸～１０アミノ酸、１０アミノ酸～１５アミノ酸、または１５アミノ酸～２０アミノ酸の長さを有することができる。ペプチドリガンドは、２０アミノ酸よりも長く、例えば２００アミノ酸までであり得る。

【0160】

適切なリガンドとしては、リガンド結合タンパク質の機能をブロックまたは活性化するリガンドが挙げられるが、これらに限定されず、リガンド結合タンパク質としては、イオン及び高分子透過チャネル；受容体（伝達物質に結合するイオンチャネル型受容体；ホルモンに結合するイオンチャネル型受容体；メタボトロピック受容体、及び他のＧタンパク質共役受容体（ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ５、及びｍＧｌｕＲ６などのｍＧｌｕＲ受容体が挙げられるがこれらに限定されない）が挙げられるがこれらに限定されない）；受容体チロシンキナーゼ；増殖因子受容体；及び可溶性または膜結合または細胞外の小分子またはタンパク質に結合することによってシグナル伝達する他の膜受容体）；トランスポーター（イオントランスポーター、有機分子トランスポーター、ペプチドトランスポーター、及びタンパク質トランスポーターが挙げられるがこれらに限定されない）；酵素（キナーゼ；ホスファターゼ；ユビキチンリガーゼ；アセチラーゼ；オキソ還元酵素；リパーゼ；脂質部分をタンパク質に付加または除去する酵素；プロテアーゼ；リガーゼ、ヘリカーゼ、トポイソメラーゼ、及びテロメラーゼが挙げられるがこれらに限定されない核酸を修飾する酵素が挙げられるがこれらに限定されない）；モータータンパク質（キネシン、ダイニン及びその他の微小管ベースのモーター、ミオシン及びその他のアクチンベースのモーター、ＤＮＡ及びＲＮＡポリメラーゼ、及びポリヌクレオチドに沿って移動するその他のモーターが挙げられる）；足場タンパク質；アダプタータンパク質；細胞骨格タンパク質；ならびに細胞内のタンパク質ドメイン及び上部構造を局在化または組織化する他のタンパク質が挙げられる。

【0161】

適切なリガンドとしては、全身麻酔薬として機能するリガンド；局所麻酔薬として機能するリガンド：鎮痛剤として機能するリガンド；合成及び半合成オピオイド鎮痛薬（例えば、フェナントレン、フェニルヘプチルアミン、フェニルピペリジン、モルフィナン、及びベンゾモルファン）、（例示的なオピオイド鎮痛薬としては、モルヒネ、オキシコドン、フェンタニル、ペンタゾシン、ヒドロモルフォン、メペリジン、メタドン、レボルファノール、オキシモルフォン、レバロルファン、コデイン、ジヒドロコデイン、ヒドロコドン、プロポキシフェン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、ナルブフィン、及びペンタゾシンが挙げられる）；イオンチャネル型グルタミン酸受容体アゴニスト及びアンタゴニスト、例えば、Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アゴニスト、アンタゴニスト、及びアロステリックモジュレーター、カイネート（ＫＡ）受容体アゴニスト及びアンタゴニスト、及びアロステリックモジュレーター、α－アミノ－３－ヒドロキシ－５－メチルイソオキサゾール－４－プロピオン酸（ＡＭＰＡ）受容体アゴニスト及びアンタゴニスト、及びアロステリックモジュレーター、ならびに代謝型グルタミン酸受容体アゴニスト及びアンタゴニスト、及びアロステリックモジュレーター；非オピオイド鎮痛薬、例えば、アセチルサリチル酸、トリサリチル酸コリンマグネシウム、アセトアミノフェン、イブプロフェン、フェノプロフェン、ジフルシナル、及びナプロキセン；ムスカリン受容体アゴニスト；ムスカリン受容体アンタゴニスト；アセチルコリン受容体アゴニスト；アセチルコリン受容体アンタゴニスト；セロトニン受容体アゴニスト；セロトニン受容体アンタゴニスト；酵素阻害剤；ベンゾジアゼピン、例えばクロルジアゼポキシド、クロラゼペート、ジアゼパム、フルラゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、テマゼパムまたはトリアゾラム；バルビツレート鎮静剤、例えば、アモバルビタール、アプロバルビタール、ブタバルビタール、ブタビタール、メフォバルビタール、メタバルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、セコバルビタール、タルブタール、テアミラール、またはチオペンタール；鎮静作用を有するＨ_１アンタゴニスト、例えば、ジフェンヒドラミン、ピリラミン、プロメタジン、クロルフェニラミン、またはクロルシクリジン；ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、例えばデキストロメトルファン（（＋）－３－ヒドロキシ－Ｎ－メチルモルフィナン）またはその代謝物であるデキストロルファン（（＋）－３－ヒドロキシ－Ｎ－メチルモルフィナン）、ケタミン、メマンチン、ピロロキノリンキニーネ、ｃｉｓ－４－（ホスホノメチル）－２－ピペリジンカルボン酸、ブジピン、トピラメート、ネラメキサン、またはペルジンフォテル；α－アドレナリン、例えば、ドキサゾシン、タムスロシン、クロニジン、グアンファシン、デクスメタトミジン、モダフィニル、フェントラミン、テラザシン、プラザシン、または４－アミノ－６，７－ジメトキシ－２－（５－メタン－スルホンアミド－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノール－２－イル）－５－（２－ピリジル）キナゾリン；三環系抗うつ薬、例えば、デシプラミン、イミプラミン、アミトリプチリン、またはノルトリプチリン；抗痙攣薬、例えば、カルバマゼピン、ラモトリジン、トピラトメート、またはバルプロエート；タキキニン（ＮＫ）アンタゴニスト、特にＮＫ－３、ＮＫ－２、またはＮＫ－１アンタゴニスト、例えば（α－Ｒ，９Ｒ）－７－［３，５－ｂｉｓ（トリフルオロメチル）ベンジル］－８，９，１０，１１－テトラヒドロ－９－メチル－５－（４－メチルフェニル）－７Ｈ－［１，４］ジアゾシノ［２，１－ｇ］［１，７］－ナフチリジン－６－１３－ジオン（ＴＡＫ－６３７）、５－［［（２Ｒ，３Ｓ）－２－［（１Ｒ）－１－［３，５－ｂｉｓ（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ－３－（４－フルオロフェニル）－４－モルホリニル］－メチル］－１，２－ジヒドロ－３Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－オン（ＭＫ－８６９）、アプレピタント、レーンピタント、ダピタント、または３－［［２－メトキシ－５－（トリフルオロメトキシ）フェニル］－メチルアミノ］－２－フェニルピペリジン（２Ｓ，３Ｓ）；ムスカリンアンタゴニスト、例えばオキシブチニン、トルテロジン、プロピベリン、塩化トロプシウム、ダリフェナシン、ソリフェナシン、テミベリン、またはイプラトロピウム；シクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ－２）選択的阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、パレコキシブ、バルデコキシブ、デラコキシブ、エトリコキシブ、またはルミラコキシブ；バニロイド受容体アゴニスト（例えばレジンフェラトキシン）またはアンタゴニスト（例えばカプサゼピン）；プロプラノロールなどのβ－アドレナリン；５－ＨＴ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、例えば５－ＨＴ_１Ｂ／_１Ｄアゴニスト、例えばエレトリプタン、スマトリプタン、ナラトリプタン、ゾルミトリプタン、またはリザトリプタン；５－ＨＴ_２Ａ受容体アンタゴニスト、例えばＲ（＋）－α－（２，３－ジメトキシ－フェニル）－１－［２－（４－フルオロフェニルエチル）］－４－ピペリジンメタノール（ＭＤＬ－１００９０７）；などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0162】

Ｎａ^＋チャネルに適したリガンドとしては、リドカイン、ノボカイン、キシロカイン、リグノカイン、ノボカイン、カルボカイン、エチドカイン、プロカイン、プロントカイン、プリロカイン、ブピバカイン、シンコカイン、メピバカイン、キニジン、フレカイニド、プロカイン、Ｎ－［［２’－（アミノスルホニル）ビフェニル－４－イル］メチル］－Ｎ’－（２，２’－ビチエン－５－イルメチル）スクシンイミド（ＢＰＢＴＳ）、ＱＸ－３１４、サキシトキシン、テトロドトキシン、及びＩＩＩ型コノトキシンが挙げられるが、これらに限定されない。Ｎａ^＋チャネルに適したリガンドとしては、テトロドトキシン、サキシトキシン、グアニジニウム、ポリアミン（例えば、スペルミン、カダベリン、プトレシン、μ－コノトキシン、及びδ－コノトキシンなど）も挙げられるが、これらに限定されない。

【0163】

Ｋ^＋チャネルに適したリガンドとしては、四級アンモニウム（例えば、テトラエチルアンモニウム、テトラブチルアンモニウム、テトラペンチルアンモニウム）、４－アミノピリジン、スルホニル尿素、グリベンクラミド；トルブタミド；フェントラミン、キウニン、キニジン、ペプチド毒素（例、カリブドトキシン、アギトキシン－２、アパミン、デンドロトキシン、ＶＳＴＸ１、ハナトキシン－１、ハナトキシン－２、チチュウ毒素Ｋ－αが挙げられるが、これらに限定されない。

【0164】

ＣＮＧチャネル及びＨＣＮチャネルに適したリガンドとしては、１－ｃｉｓジルチアゼム及びＺＤ７２８８が挙げられるが、これらに限定されない。グリシン受容体に適したリガンドとしては、ストリキニーネ及びピクロトキシンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0165】

ニコチン性アセチルコリン受容体に適したリガンドとしては、（＋）－ツボクラリン、メチルリカコニチン、ガラミン、ニコチン；アナトキシンＡ、エピバチジン、ＡＢＴ－９４、ロフォトキシン、シチシン、ヘキサメトニウム、メカミラミン、及びジヒドロ－β－エリスロイジンが挙げられるが、これらに限定されない。ムスカリン性アセチルコリン受容体に適したリガンドとしては、米国特許第７，４３９，２５５号に記載のムスカリン性アセチルコリン受容体アンタゴニスト；ＡＦ２６７Ｂ（例えば、米国特許第７，４３９，２５１号を参照されたい）；フェニルプロパルギルオキシ－１，２，５－チアジアゾール－キヌクリジン；カルバコール；ピレンザピン；マイグラスタチン；米国特許第７，２３２，８４１号に記載の化合物などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0166】

ＧＡＢＡ受容体に適したリガンドとしては、ムシモール、ＴＨＩＰ、プロカビド、ビククリン、ピクロトキシン、ガバジン、ガバペンチン、ジアゼパム、クロナゼパム、フルマゼニル、β－カルボリンカルボン酸エチルエステル、バクロフェン、ファクロフェン、及びバルビツレートが挙げられるが、これらに限定されない。

【0167】

場合によっては、例えば、標的リガンド結合ポリペプチドがｍＧｌｕＲである場合、リガンドはグルタメートである。場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドがｍＧｌｕＲ受容体である場合、リガンドは、ｍＧｌｕＲ受容体（ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ５、及びｍＧｌｕＲ６が挙げられるがこれらに限定されない）の天然に存在するリガンドまたは合成リガンドである。

【0168】

多くの適切なリガンドが当業者に知られている。リガンドの選択は、リガンドが結合する標的（例えば、受容体、イオンチャネル、酵素など）に部分的に依存する。

【0169】

フルオロフォア
場合によっては、本開示のコンジュゲートはフルオロフォアを含む。例えば、上記のように、Ｑ^２は、フルオロフォアなどの標識であり得る。フルオロフォアの例としては、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）色素（例えば、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４０５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５００、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５１４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５５５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６１０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６３５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６８０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７００、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７９０など）、ＡＴＴＯ色素（例えば、ＡＴＴＯ ３９０、ＡＴＴＯ ４２５、ＡＴＴＯ ４６５、ＡＴＴＯ ４８８、ＡＴＴＯ ４９５、ＡＴＴＯ ５１４、ＡＴＴＯ ５２０、ＡＴＴＯ ５３２、ＡＴＴＯ Ｒｈｏ６Ｇ、ＡＴＴＯ ５４２、ＡＴＴＯ ５５０、ＡＴＴＯ ５６５、ＡＴＴＯ Ｒｈｏ３Ｂ、ＡＴＴＯ Ｒｈｏ１１、ＡＴＴＯ Ｒｈｏ１２、ＡＴＴＯ Ｔｈｉｏ１２、ＡＴＴＯ Ｒｈｏ１０１、ＡＴＴＯ ５９０、ＡＴＴＯ ５９４、ＡＴＴＯ Ｒｈｏ１３、ＡＴＴＯ ６１０、ＡＴＴＯ ６２０、ＡＴＴＯ Ｒｈｏ１４、ＡＴＴＯ ６３３、ＡＴＴＯ ６４７、ＡＴＴＯ ６４７Ｎ、ＡＴＴＯ ６５５、ＡＴＴＯ Ｏｘａ１２、ＡＴＴＯ ６６５、ＡＴＴＯ ６８０、ＡＴＴＯ ７００、ＡＴＴＯ ７２５、ＡＴＴＯ ７４０）、ＤｙＬｉｇｈｔ色素、シアニン色素（例えば、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ３ｂ、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、Ｃｙ７．５）、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ色素、Ｓｕｌｆｏ Ｃｙ色素、Ｓｅｔａ色素、ＩＲＩＳ色素、ＳｅＴａｕ色素、ＳＲｆｌｕｏｒ色素、Ｓｑｕａｒｅ色素、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、テトラメチルローダミン（ＴＭＲ）、シリコンローダミン（ＳｉＲ）、テキサスレッド、オレゴングリーン、パシフィックブルー、パシフィックグリーン、及びパシフィックオレンジが挙げられるが、これらに限定されない。

【0170】

標的リガンド結合ポリペプチド
上記のように、本開示のコンジュゲートは、標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンドを含む。

【0171】

適切な標的リガンド結合タンパク質としては、イオン及び高分子透過チャネル；受容体（伝達物質に結合するイオンチャネル型受容体；ホルモンに結合するイオンチャネル型受容体；メタボトロピック受容体、及び他のＧタンパク質共役受容体；受容体チロシンキナーゼ；増殖因子受容体；及び可溶性または膜結合または細胞外の小分子またはタンパク質に結合することによってシグナル伝達する他の膜受容体が挙げられるがこれらに限定されない）；トランスポーター（イオントランスポーター、有機分子トランスポーター、ペプチドトランスポーター、及びタンパク質トランスポーターが挙げられるがこれらに限定されない）；酵素（キナーゼ；ホスファターゼ；ユビキチンリガーゼ；アセチラーゼ；オキソ還元酵素；リパーゼ；脂質部分をタンパク質に付加または除去する酵素；プロテアーゼ；リガーゼ、ヘリカーゼ、トポイソメラーゼ、及びテロメラーゼが挙げられるがこれらに限定されない核酸を修飾する酵素が挙げられるがこれらに限定されない）；モータータンパク質（キネシン、ダイニン及びその他の微小管ベースのモーター、ミオシン及びその他のアクチンベースのモーター、ＤＮＡ及びＲＮＡポリメラーゼ、及びポリヌクレオチドに沿って移動するその他のモーターが挙げられる）；足場タンパク質；アダプタータンパク質；細胞骨格タンパク質；ならびに細胞内のタンパク質ドメイン及び上部構造を局在化または組織化する他のタンパク質が挙げられる。

【0172】

場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドは、転写調節因子、イオンチャネル、カチオンチャネル、リガンド依存性イオンチャネル、電位依存性イオンチャネル、クオラムセンサー、フェロモン受容体、神経伝達物質受容体、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、または酵素である。場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドは、カチオンチャネル、例えば、カリウムチャネル、ナトリウムチャネル、またはカルシウムチャネルである。場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドは、グルタミン酸受容体、代謝型グルタミン酸受容体、イオンチャネル型グルタミン酸受容体、イオンチャネル型ニコチン性アセチルコリン受容体、イオンチャネル型ＧＡＢＡ－Ａ受容体、またはイオンチャネル型プリン作動性Ｐ２Ｘ受容体である。場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドは、グルタミン酸受容体、代謝型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）、イオンチャネル型グルタミン酸受容体（例えば、カイネート受容体；ＡＭＰＡ受容体；ＮＭＤＡ受容体）、イオンチャネル型ニコチン性アセチルコリン受容体、イオンチャネル型ＧＡＢＡ－Ａ受容体、代謝型ＧＡＢＡ－Ｂ受容体、代謝型ドーパミン受容体、イオンチャネル型プリン作動性Ｐ２Ｘ受容体、代謝型プリン作動性Ｐ２Ｙ受容体、代謝型セロトニン受容体、イオンチャネル型セロトニン受容体、イオンチャネル型グリシン受容体、カチオンチャネル、カリウムチャネル、カルシウムチャネル、ナトリウムチャネル、プロトンチャネル、アニオンチャネル、及びクロライドチャネルから選択される。

【0173】

場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドは、代謝型グルタミン酸受容体から選択され、代謝型グルタミン酸受容体としては、例えば、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ５、ｍＧｌｕＲ６などが挙げられる。

【0174】

標的リガンド結合ポリペプチドに結合するポリペプチド
上記のように、本開示のコンジュゲートは、ｉ）標的リガンド結合ポリペプチド、またはｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するポリペプチドに結合する親和性剤を含む。

【0175】

場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドに結合するポリペプチドは、ｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合する抗体と、ｉｉ）コンジュゲート中に存在する親和性剤に結合するポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドである。例えば、コンジュゲート中に存在する親和性剤に結合するポリペプチドは、ＳＮＡＰポリペプチド（ここで、親和性剤はベンジルグアニンである）、ＣＬＩＰポリペプチド（ここで、親和性剤はベンジルシトシンである）、またはＨＡＬＯポリペプチド（ここで、親和性剤はクロロアルカンである）であり得る。

【0176】

例示的なコンジュゲート
場合によっては、本開示のコンジュゲートは、式Ｉ：
（Ａ）－（Ｘ^１）_ｎ－（Ｂ）－［（Ｘ^２）_ｍ－（Ｃ）－（Ｘ^３）_ｐ－（Ｄ）］_ｑ （式Ｉ）
（式中、
Ａは親和性剤であり；
Ｘ^１は、存在する場合、第１のリンカーであり、ｎは０または１であり；
Ｂは分岐鎖リンカーであり；
Ｘ^２は、存在する場合、第２のリンカーであり、ｍは０または１であり；
Ｃは光異性化可能な基であり；
Ｘ^３は、存在する場合、第３のリンカーであり、ｐは０または１であり；
Ｄはリガンドであり；
ｑは、２～１０の整数である）を有する化合物である。

【0177】

適切な親和性剤は、本開示に記載されているものである。例えば、本開示に記載されるように、親和性剤は、ベンジルグアニン、ベンジルシトシン、クロロアルカン、抗体、アプタマー、小分子、またはペプチドなどであり得るが、これらに限定されない。場合によっては、親和性剤は、標的リガンド結合ポリペプチドに特異的な抗体である。適切な抗体の非限定的な例としては、例えば、標的リガンド結合ポリペプチドに特異的なナノボディ（例えば、ｍＧｌｕＲ２に特異的に結合するナノボディ）；及び標的リガンド結合ポリペプチドに特異的なｓｃＦｖ抗体（例えば、ｍＧｌｕＲ２に特異的に結合するｓｃＦｖ）が挙げられる。

【0178】

Ｘ^１は、存在する場合、第１のリンカーであり、ｎは０または１である。例えば、ｎが０である場合、Ｘ^１は存在せず、ＡはＢに直接的に接続する。他の例では、ｎが１であり、Ｘ^１が存在する。同様に、Ｘ^２は、存在する場合、第２のリンカーであり、ｍは０または１である。例えば、ｍが０である場合、Ｘ^２は存在せず、ＢはＣに直接的に接続する。他の例では、ｍが１であり、Ｘ^２が存在する。同様に、Ｘ^３は、存在する場合、第３のリンカーであり、ｐは０または１である。例えば、ｐが０である場合、Ｘ^３は存在せず、ＣはＤに直接的に接続する。他の例では、ｐが１であり、Ｘ^３が存在する。場合によっては、Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３の少なくとも１つが存在する。場合によっては、Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３のうちの１つのみが存在する。場合によっては、Ｘ^１とＸ^２が存在し、Ｘ^３が存在しない。場合によっては、Ｘ^１とＸ^３が存在し、Ｘ^２が存在しない。場合によっては、Ｘ^２とＸ^３が存在し、Ｘ^１が存在しない。場合によっては、Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３が存在する。

【0179】

Ｘ^１、Ｘ^２、及び／またはＸ^３に適したリンカーとしては、ポリカーボン鎖、ポリ（エチレングリコール）；ペプチドなどが挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、リンカーはＣ_１－Ｃ_２５アルキルである。場合によっては、リンカーは置換Ｃ_１－Ｃ_２５アルキルである。場合によっては、リンカーはポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）であり、ＰＥＧは２～５０個のエチレングリコールモノマーを含む。例えば、ＰＥＧは、２～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～３５、３５～４０、４０～４５、または４５～５０のエチレングリコール単位を含む。例えば、リンカーは、ＰＥＧが１２個のエチレングリコールモノマー（すなわち、ＰＥＧ１２）を含むＰＥＧであり得る。場合によっては、リンカーは２アミノ酸～５０アミノ酸、例えば、２アミノ酸～５アミノ酸、５アミノ酸～１０アミノ酸、１０アミノ酸～１５アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、または３０アミノ酸～５０アミノ酸のペプチドである。場合によっては、リンカーは、長さが２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸のペプチドである。

【0180】

適切な分岐鎖リンカーとしては、本開示に記載されているものが挙げられる。例えば、適切な分枝鎖リンカーとしては、本明細書に記載されるように、１つ以上（例えば、１～１０個）のグルタルアミド基を含む分枝鎖リンカーが挙げられる。他の適切な分岐鎖リンカーとしては、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）デンドリマーなどのデンドリマー構造が挙げられるが、これらに限定されない。

【0181】

適切な光異性化可能な基としては、アゾベンゼン、環状アゾベンゼン、アゾヘテロアレーン、フルギド、スピロピラン、トリフェニルメタン、チオインジゴ、ジアリールエテン、及び過密アルケンから選択される部分などの本開示に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、光異性化可能な基はアゾベンゼンである（例えば、本明細書に記載のように）。

【0182】

適切なリガンドとしては、本開示に記載されたものが挙げられる。場合によっては、リガンドは、アゴニスト、アンタゴニスト、アロステリックモジュレーター、またはブロッカーである（例えば、本明細書に記載のように）。

【0183】

式Ｉの他の実施形態では、Ｄは、本開示に記載の標識、反応性基、または第２の親和性剤である。

【0184】

場合によっては、コンジュゲートは式（Ａ）－（Ｘ^１）_ｎ－（Ｂ）－［（Ｘ^２）_ｍ－（Ｃ）－（Ｄ）］_ｑを有する。

【0185】

場合によっては、コンジュゲートは式（Ａ）－（Ｘ^１）_ｎ－（Ｂ）－［（Ｃ）－（Ｄ）］_ｑを有する。

【0186】

場合によっては、コンジュゲートは式（Ａ）－（Ｂ）－［（Ｘ^２）_ｍ－（Ｃ）－（Ｘ^３）_ｐ－（Ｄ）］_ｑを有する。

【0187】

場合によっては、コンジュゲートは式（Ａ）－（Ｂ）－［（Ｘ^２）_ｍ－（Ｃ）－（Ｄ）］_ｑを有する。

【0188】

場合によっては、コンジュゲートは式（Ａ）－（Ｘ^１）_ｎ－（Ｂ）－［（Ｘ^２）_ｍ－（Ｃ）－（Ｘ^３）_ｐ－（Ｄ）］_ｑを有する。

【0189】

第１のリンカー（Ｘ^１）、第２のリンカー（Ｘ^２）、または第３のリンカー（Ｘ^３）を含むかまたは含まない、適切なＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤ部分の任意の組み合わせが、本開示によるコンジュゲートにおいて使用され得る。コンジュゲートの例としては、コンジュゲートであって、
（ｉ）Ａがベンジルシトシンであり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼンであり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｉｉ）Ａがベンジルシトシンであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼンであり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｉｉｉ）Ａがベンジルシトシンであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン３８０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｉｖ）Ａがベンジルシトシンであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｖ）Ａがクロロアルカンであり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼンであり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｖｉ）Ａがクロロアルカンであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼンであり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｖｉｉ）Ａがクロロアルカンであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン３８０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｖｉｉｉ）Ａがクロロアルカンであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｉｘ）Ａがベンジルグアニンであり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼンであり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｘ）Ａがベンジルグアニンであり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｃがアゾベンゼンであり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｘｉ）Ａがベンジルグアニンであり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｃがアゾベンゼン３８０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｘｉｉ）Ａがベンジルグアニンであり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｘｉｉｉ）Ａがベンジルグアニンであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼンであり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｉｖ）Ａがベンジルグアニンであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｃがアゾベンゼンであり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｖ）Ａがベンジルグアニンであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｃがアゾベンゼン３８０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｖｉ）Ａがベンジルグアニンであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
などのコンジュゲートが挙げられるが、これらに限定されない。

【0190】

第１のリンカー（Ｘ^１）、第２のリンカー（Ｘ^２）、または第３のリンカー（Ｘ^３）を含むかまたは含まない、適切なＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤ部分の任意の組み合わせが、本開示によるコンジュゲートにおいて使用され得る。コンジュゲートの例としては、コンジュゲートであって、
（ｉ）Ａが標的リガンド結合ポリペプチドに特異的な抗体であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｉｉ）Ａが標的リガンド結合ポリペプチドに特異的な抗体であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｉｉｉ）Ａが標的リガンド結合ポリペプチドに特異的な抗体であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｉｖ）Ａが標的リガンド結合ポリペプチドに特異的な抗体であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｖ）Ａが代謝型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）に特異的な抗体であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｖｉ）ＡがｍＧｌｕＲ（例えば、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ５、またはｍＧｌｕＲ６）に特異的な抗体であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｖｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ（例えば、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ５、またはｍＧｌｕＲ６）に特異的な抗体であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｖｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ（例えば、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ５、またはｍＧｌｕＲ６）に特異的な抗体であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｖｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ２（例えば、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ５、またはｍＧｌｕＲ６）に特異的な抗体であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｉｘ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的な抗体であり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｘ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的な抗体であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｉ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的な抗体であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的なナノボディであり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｘｉｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的なナノボディであり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｘｉｖ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的なナノボディであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｖ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的なナノボディであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的なｓｃＦｖであり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｘｉｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的なｓｃＦｖであり、Ｂがグルタルアミドを含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが２である；
（ｘｉｖ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的なｓｃＦｖであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｖ）ＡがｍＧｌｕＲ２に特異的なｓｃＦｖであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｖｉ）ＡがｍＧｌｕＲ（例えば、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ５、またはｍＧｌｕＲ６）に特異的な抗体であり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｖｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ（例えば、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ５、またはｍＧｌｕＲ６）に特異的なｓｃＦｖであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｖｉｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ（例えば、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ５、またはｍＧｌｕＲ６）に特異的なナノボディであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｉｘ）ＡがｍＧｌｕＲ４に特異的なナノボディであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｘ）ＡがｍＧｌｕＲ４に特異的なナノボディであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｘｉ）ＡがｍＧｌｕ４に特異的なナノボディであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｘｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ５に特異的なナノボディであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｘｉｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ５に特異的なナノボディであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｘｉｖ）ＡがｍＧｌｕＲ５に特異的なナノボディであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｘｖ）ＡがｍＧｌｕＲ６に特異的なナノボディであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｘｖｉ）ＡがｍＧｌｕＲ６に特異的なナノボディであり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｘ^２がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
（ｘｘｖｉｉ）ＡがｍＧｌｕＲ６に特異的なナノボディであり、Ｘ^１がＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ１２またはＰＥＧ２８）であり、Ｂが３つのグルタルアミド部分を含む分岐鎖リンカーであり、Ｃがアゾベンゼン４６０であり、Ｄがグルタメートであり、ｑが４である；
などのコンジュゲートが挙げられるが、これらに限定されない。

【0191】

光スイッチコンジュゲート及び融合ポリペプチドを含む組成物及び組み合わせ
場合によっては、本開示は、ａ）本開示の光スイッチコンジュゲートと、ｂ）光スイッチコンジュゲート中に存在する親和性剤に結合するポリペプチドを含む融合ポリペプチド、または融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、組成物及び／または組み合わせを提供する。光スイッチコンジュゲート及び融合ポリペプチドまたは融合ポリヌクレオチドは、同じ組成物の一部であり、対象に一緒に投与することができる。代替的に、光スイッチコンジュゲート及び融合ポリペプチドまたは融合ポリヌクレオチドは、異なる時期に及び／またはさまざまな手段もしくは投与方法によって投与される薬剤の組み合わせを含む治療アプローチの一部であり得る。場合によっては、本開示の組成物は、ａ）本開示の光スイッチコンジュゲートと、ｂ）ｉ）リガンド（例えば、本開示の光スイッチに存在するリガンド）に対する受容体、及びｉｉ）融合パートナーを含む融合ポリペプチド（または融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）と、を含み、融合パートナーは光スイッチコンジュゲートに存在する親和性部分に結合するポリペプチドである。場合によっては、本開示の組成物は、ａ）本開示の光スイッチコンジュゲートと、ｂ）ｉ）リガンド（例えば、本開示の光スイッチコンジュゲートに存在するリガンド）に対する受容体、及びｉｉ）融合パートナーを含む第１の融合ポリペプチド（またはそれをコードするポリヌクレオチド）と、を含み、融合パートナーは第２の融合ポリペプチドに存在する抗体によって結合されるエピトープを示し、第２の融合ポリペプチドは、ｉ）第１の融合ポリペプチドの融合パートナーに存在するエピトープに結合する抗体、及びｉｉ）光スイッチコンジュゲートに存在する親和性部分に結合するポリペプチドを含む。

【0192】

光スイッチコンジュゲート及び単一の融合ポリペプチドを含む組成物
場合によっては、本開示の組成物または組み合わせは、ａ）本開示の光スイッチコンジュゲートと、ｂ）光スイッチコンジュゲートに存在する親和性剤に結合するポリペプチドを含む融合ポリペプチド（または、融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド）と、を含む。場合によっては、融合ポリペプチドは、ａ）リガンド（例えば、本開示の光スイッチコンジュゲートに存在するリガンド）に対する受容体と、ｂ）融合パートナーと、を含み、融合パートナーはＳＮＡＰポリペプチド、ＣＬＩＰポリペプチド、またはＨＡＬＯポリペプチドである。例えば、場合によっては、リガンドに対する受容体は、グルタミン酸受容体、代謝型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）、イオンチャネル型グルタミン酸受容体（例えば、カイネート受容体；ＡＭＰＡ受容体；ＮＭＤＡ受容体）、イオンチャネル型ニコチン性アセチルコリン受容体、イオンチャネル型ＧＡＢＡ－Ａ受容体、代謝型ＧＡＢＡ－Ｂ受容体、代謝型ドーパミン受容体、イオンチャネル型プリン作動性Ｐ２Ｘ受容体、代謝型プリン作動性Ｐ２Ｙ受容体、代謝型セロトニン受容体、イオンチャネル型セロトニン受容体、イオンチャネル型グリシン受容体、カチオンチャネル、カリウムチャネル、カルシウムチャネル、ナトリウムチャネル、プロトンチャネル、アニオンチャネル、及びクロライドチャネルである。

【0193】

場合によっては、本開示の組成物または組み合わせは、ａ）本開示のコンジュゲートと、ｂ）融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸と、を含む。核酸は発現ベクターであり得る。ヌクレオチド配列は、プロモーターに作動可能に連結することができる。発現ベクターは、例えば、組換えウイルス発現ベクターであり得る。非限定的な例として、発現ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであり得、組換えＡＡＶベクターは、融合ポリペプチドをコードする異種ヌクレオチド配列を含む。組換えＡＡＶベクターはまた、バリアントカプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことができ、バリアントカプシドタンパク質は網膜細胞の感染をもたらす。場合によっては、組換えＡＡＶベクターを眼に投与する。場合によっては、組換えＡＡＶベクターを硝子体内で眼に投与する。

【0194】

場合によっては、本開示の組成物または組み合わせは、ａ）本開示の光スイッチコンジュゲート（親和性剤は、上記のヌクレオシド塩基誘導体（例えば、ベンジルグアニン、ベンジルシトシン、クロロアルカン、クロロピリミジンなど）である）と、ｂ）ｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに特異的な抗体（例えば、ｓｃＦｖまたはナノボディ）；及びｉｉ）コンジュゲートに存在する親和性剤に結合するポリペプチド（例えば、ＳＮＡＰポリペプチド；ＣＬＩＰポリペプチド；ＨＡＬＯポリペプチドなど）を含む融合ポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の組成物または組み合わせは、ａ）本開示の光スイッチコンジュゲート（親和性剤は、上記のヌクレオシド塩基誘導体（例えば、ベンジルグアニン、ベンジルシトシン、クロロアルカン、クロロピリミジンなど）である）と、ｂ）ｉ）ｍＧｌｕＲに特異的なナノボディまたはｓｃＦｖ；及びｉｉ）コンジュゲートに存在する親和性剤に結合するポリペプチド（例えば、ＳＮＡＰポリペプチド；ＣＬＩＰポリペプチド；ＨＡＬＯポリペプチドなど）を含む融合ポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の組成物または組み合わせは、ａ）本開示の光スイッチコンジュゲート（親和性剤は、上記のヌクレオシド塩基誘導体（例えば、ベンジルグアニン、ベンジルシトシン、クロロアルカン、クロロピリミジンなど）である）と、ｂ）ｉ）ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ５、またはｍＧｌｕＲ５に特異的なナノボディまたはｓｃＦｖ；及びｉｉ）コンジュゲートに存在する親和性剤に結合するポリペプチド（例えば、ＳＮＡＰポリペプチド；ＣＬＩＰポリペプチド；ＨＡＬＯポリペプチドなど）を含む融合ポリペプチドと、を含む。

【0195】

光スイッチコンジュゲート及び２つの融合ポリペプチドを含む組成物
場合によっては、融合ポリペプチドは、ａ）リガンド（例えば、本開示の光スイッチコンジュゲートに存在するリガンド）に対する受容体と、ｂ）融合パートナーを含み、融合パートナーは、抗体によって特異的に結合される抗原である。場合によっては、抗体は融合ポリペプチドであり、ａ）抗体と、ｂ）融合パートナーとを含み、融合パートナーはＳＮＡＰポリペプチド、ＣＬＩＰポリペプチド、またはＨＡＬＯポリペプチドである。他の適切な融合パートナーとしては、例えば、エピトープタグ（例えば、ヘマグルチニンタグ、ＦＬＡＧタグ、ポリ（Ｈｉｓ）タグなど）が挙げられる。ハロベースのオリゴヌクレオチド結合剤（ＨＯＢ）ポリペプチドも使用に適している。例えば、Ｋｏｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ． １７：１１０２を参照されたい。ＨＯＢポリペプチドは、クロロヘキシル部分に結合する。トリメトプリム（ＴＭＰ）タグ、トリメトプリム誘導体との非共有高親和性複合体を形成するＥ． ｃｏｌｉジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）の操作された形態も使用に適している。例えば、Ｇａｌｌａｇｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９）ＡＣＳ Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． ４：５４７；及びＪｉｎｇ ａｎｄ Ｃｏｒｎｉｓｈ（２０１３）ＡＣＳ Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． ８：１７０４を参照されたい。

【0196】

ＳＮＡＰ
場合によっては、ＳＮＡＰポリペプチドは、次のアミノ酸配列：ＭＤＫＤＣＥＭＫＲＴＴＬＤＳＰＬＧＫＬＥＬＳＧＣＥＱＧＬＨＲＩＩＦＬＧＫＧＴＳＡＡＤＡＶＥＶＰＡＰＡＡＶＬＧＧＰＥＰＬＭＱＡＴＡＷＬＮＡＹＦＨＱＰＥＡＩＥＥＦＰＶＰＡＬＨＨＰＶＦＱＱＥＳＦＴＲＱＶＬＷＫＬＬＫＶＶＫＦＧＥＶＩＳＹＳＨＬＡＡＬＡＧＮＰＡＡＴＡＡＶＫＴＡＬＳＧＮＰＶＰＩＬＩＰＣＨＲＶＶＱＧＤＬＤＶＧＧＹＥＧＧＬＡＶＫＥＷＬＬＡＨＥＧＨＲＬＧＫＰＧＬＧ（配列番号１）に対して、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＳＮＡＰポリペプチドは、Ｏ^６－ベンジルグアニン（ＢＧ）に結合する。

【0197】

場合によっては、ＳＮＡＰポリペプチドは、次のアミノ酸配列：ＤＫＤＣＥＭＫＲＴＴＬＤＳＰＬＧＫＬＥＬＳＧＣＥＱＧＬＨＥＩＫＬＬＧＫＧＴＳＡＡＤＡＶＥＶＰＡＰＡＡＶＬＧＧＰＥＰＬＭＱＡＴＡＷＬＮＡＹＦＨＱＰＥＡＩＥＥＦＰＶＰＡＬＨＨＰＶＦＱＱＥＳＦＴＲＱＶＬＷＫＬＬＫＶＶＫＦＧＥＶＩＳＹＱＱＬＡＡＬＡＧＮＰＡＡＴＡＡＶＫＴＡＬＳＧＮＰＶＰＩＬＩＰＣＨＲＶＶＳＳＳＧＡＶＧＧＹＥＧＧＬＡＶＫＥＷＬＬＡＨＥＧＨＲＬＧＫＰＧＬＧ（配列番号４）に対して、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0198】

場合によっては、ＳＮＡＰポリペプチドまたはそのバリアントはベンジルグアニンに結合する。

【0199】

ＣＬＩＰ
ＣＬＩＰポリペプチドは、次のアミノ酸配列：ＭＤＫＤＣＥＭＫＲＴＴＬＤＳＰＬＧＫＬＥＬＳＧＣＥＱＧＬＨＲＩＩＦＬＧＫＧＴＳＡＡＤＡＶＥＶＰＡＰＡＡＶＬＧＧＰＥＰＬＩＱＡＴＡＷＬＮＡＹＦＨＱＰＥＡＩＥＥＦＰＶＰＡＬＨＨＰＶＦＱＱＥＳＦＴＲＱＶＬＷＫＬＬＫＶＶＫＦＧＥＶＩＳＥＳＨＬＡＡＬＶＧＮＰＡＡＴＡＡＶＮＴＡＬＤＧＮＰＶＰＩＬＩＰＣＨＲＶＶＱＧＤＳＤＶＧＰＹＬＧＧＬＡＶＫＥＷＬＬＡＨＥＧＨＲＬＧＫＰＧＬＧ（配列番号２）に対して、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＣＬＩＰポリペプチドは、Ｏ^２－ベンジルシトシン（ＢＣ）に結合することができる。

【0200】

ＨＡＬＯ
ＨＡＬＯポリペプチドは、次のアミノ酸配列：ＭＡＥＩＧＴＧＦＰＦＤＰＨＹＶＥＶＬＧＥＲＭＨＹＶＤＶＧＰＲＤＧＴＰＶＬＦＬＨＧＮＰＴＳＳＹＶＷＲＮＩＩＰＨＶＡＰＴＨＲＣＩＡＰＤＬＩＧＭＧＫＳＤＫＰＤＬＧＹＦＦＤＤＨＶＲＦＭＤＡＦＩＥＡＬＧＬＥＥＶＶＬＶＩＨＤＷＧＳＡＬＧＦＨＷＡＫＲＮＰＥＲＶＫＧＩＡＦＭＥＦＩＲＰＩＰＴＷＤＥＷＰＥＦＡＲＥＴＦＱＡＦＲＴＴＤＶＧＲＫＬＩＩＤＱＮＶＦＩＥＧＴＬＰＭＧＶＶＲＰＬＴＥＶＥＭＤＨＹＲＥＰＦＬＮＰＶＤＲＥＰＬＷＲＦＰＮＥＬＰＩＡＧＥＰＡＮＩＶＡＬＶＥＥＹＭＤＷＬＨＱＳＰＶＰＫＬＬＦＷＧＴＰＧＶＬＩＰＰＡＥＡＡＲＬＡＫＳＬＰＮＣＫＡＶＤＩＧＰＧＬＮＬＬＱＥＤＮＰＤＬＩＧＳＥＩＡＲＷＬＳＴＬＥＩＳＧ（配列番号３）に対して、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＨＡＬＯポリペプチドはクロロアルカンに結合する。

【0201】

ベクター
本開示はまた、本明細書に記載の組成物及び／または組み合わせを含む発現ベクター、送達ベクター、及び他のベクターを提供する。

【0202】

発現ベクターとしては、任意の手段による、本開示の細胞への本開示の組成物のインビトロまたはエクスビボ送達に適した任意のベクターが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、発現ベクターはプラスミドを含む。場合によっては、プラスミドを本開示の細胞にエレクトロポレーションする。本開示の発現ベクターはまた、インビトロまたはエクスビボで組成物を導入するために使用される場合、本開示の送達ベクターを含み得る。

【0203】

送達ベクターとしては、インビボまたはインサイチュで（無傷の眼の文脈で）、本開示の細胞への本開示の組成物のインビボ送達に適した任意のベクターが挙げられるが、これらに限定されない。本開示の送達ベクターとしては、ウイルスベクター及び非ウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なウイルスベクターとしては、任意の血清型のアデノ随伴ベクターが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な非ウイルスベクターとしては、脂質ベクター、ポリマーベクター、及び粒子ベクターが挙げられるが、これらに限定されない。脂質ベクターとしては、リポソーム、脂質ナノ粒子、ミセル、脂質ポリマーソーム、及びエキソソームが挙げられるが、これらに限定されない。ポリマーベクターとしては、ポリマーソーム、脂質ナノ粒子、及びナノ粒子が挙げられるが、これらに限定されない。粒子ベクターとしては、すべての形状及び組成のナノ粒子が挙げられるが、これらに限定されない。

【0204】

場合によっては、本開示の送達ベクターは、目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターをコードする配列を含む組成物を含む、本開示の組成物を含む。本開示の送達ベクターのいくつかの実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。場合によっては、ウイルスベクターはアデノ随伴ベクター（ＡＡＶ）である。場合によっては、ＡＡＶは組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）である。場合によっては、ｒＡＡＶは、第１の血清型のＡＡＶから単離されたかまたはそれに由来する配列と、第２の血清型のＡＡＶから単離されたかまたはそれに由来する配列と、を含む。場合によっては、ｒＡＡＶは、第１の血清型のＡＡＶから単離されたかまたはそれに由来するカプシド配列と、第２の血清型のＡＡＶから単離されたかまたはそれに由来するカプシド挿入配列と、を含む。例示的なＡＡＶ血清型としては、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、本開示のＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、及びＡＡＶ８のうちの１つ以上から単離されたかまたはそれに由来する配列を含む。場合によっては、本開示のＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ９のうちの１つ以上に由来する野生型配列を含む。場合によっては、本開示のＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ９のうちの１つ以上から単離されたかまたはそれに由来するカプシド配列を含む。場合によっては、本開示のＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２及びＡＡＶ４から単離されたかまたはそれに由来するカプシド配列を含む。場合によっては、本開示のＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２及びＡＡＶ５から単離されたかまたはそれに由来するカプシド配列を含む。場合によっては、本開示のＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２及びＡＡＶ８から単離されたかまたはそれに由来するカプシド配列を含む。場合によっては、本開示のＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ９から単離されたかまたはそれに由来する２つ以上の配列を含む組換えまたはキメラカプシド配列を含む。

【0205】

本開示のある特定の実施形態では、改変アデノ随伴ベクター（ＡＡＶ）が、ＷＯ２０１８／０２２９０５及び／または米国出願連続番号６３／０３２，２０６に記載されるように使用される。これらの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0206】

場合によっては、ＡＡＶベクターを含む送達ベクターは、網膜細胞型を標的とする。場合によっては、ＡＡＶベクターを含む送達ベクターは、網膜細胞型に対する指向性を有する。場合によっては、網膜細胞型はニューロンである。場合によっては、網膜細胞型は網膜神経節細胞である。場合によっては、網膜細胞型は水平細胞である。場合によっては、網膜細胞型は、アマクリン細胞である。場合によっては、網膜細胞型は双極細胞である。場合によっては、網膜細胞型は光受容細胞である。場合によっては、網膜細胞型は光受容細胞ではない。光受容細胞としては桿体細胞と錐体細胞が挙げられる。

【0207】

場合によっては、細胞は網膜ニューロンまたはその前駆細胞である。いくつかの実施形態では、前駆細胞は、神経褶細胞、初期網膜前駆細胞（ＲＰＣ）、後期ＲＰＣ、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、または網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞である。いくつかの実施形態では、本開示のＥＳＣは、ヒト胚またはヒト組織から単離されず、それらにも由来しない。

【0208】

場合によっては、本開示の組成物を分化細胞及び／または分化した細胞型になることができる前駆細胞に送達することができる。

【0209】

調節因子
場合によっては、本開示のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、１つ以上の転写調節因子に作動可能に連結される。例えば、場合によっては、目的の遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列は、構成的プロモーターなどのプロモーターに作動可能に連結されている。他の場合では、目的の遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列は、誘導性プロモーターに作動可能に連結されている。場合によっては、目的の遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列は、組織特異的な調節因子または細胞型特異的な調節因子に作動可能に連結されている。例えば、場合によっては、目的の遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列は、網膜細胞特異的プロモーターに作動可能に連結されている。例えば、場合によっては、目的の遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列は、光受容体特異的調節因子（例えば、光受容体特異的プロモーター）、例えば、光受容細胞における作動可能に連結された遺伝子の選択的発現をもたらす調節因子に作動可能に連結されている。好適な光受容体特異的調節因子としては、例えば、ロドプシンプロモーター、ロドプシンキナーゼプロモーター（Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ． ４４：４０７６）；βホスホジエステラーゼ遺伝子プロモーター（Ｎｉｃｏｕｄ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ． Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ． ９：１０１５）；網膜色素変性症遺伝子プロモーター（Ｎｉｃｏｕｄ ｅｔ ａｌ．（２００７）ｓｕｐｒａ）；光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）遺伝子エンハンサー（Ｎｉｃｏｕｄ ｅｔ ａｌ．（２００７）ｓｕｐｒａ）；ＩＲＢＰ遺伝子プロモーター（Ｙｏｋｏｙａｍａ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ． ５５：２２５）が挙げられる。

【0210】

適切なプロモーターとしては、ＣＡＧプロモーター（Ｍｉｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｇｅｎｅ ７９：２６９）；サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター；グルタミン酸代謝型受容体－６（ｇｒｍ６）プロモーター（Ｃｒｏｎｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）ＥＭＢＯ Ｍｏｌ． Ｍｅｄ． ６：１１７５）；Ｐｌｅｉａｄｅｓプロモーター（Ｐｏｒｔａｌｅｓ－Ｃａｓａｍａｒ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０７：１６５８９）；コリンアセチルトランスフェラーゼ（ＣｈＡＴ）プロモーター（Ｍｉｓａｗａ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６７：２０３９２）；小胞グルタミン酸トランスポーター（Ｖ－ｇｌｕｔ）プロモーター（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ． １３７７：１）；グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）プロモーター（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ． １１４４：１９；Ｒｉｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｊ． Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ． １８：２７）；コレシストキニン（ＣＣＫ）プロモーター（Ｒｉｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｊ． Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ． １８：２７）；パルブアルブミン（ＰＶ）プロモーター；ソマトスタチン（ＳＳＴ）プロモーター；ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）プロモーター；及び血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。適切なプロモーターとしては、赤錐体オプシンプロモーター、ロドプシンプロモーター、ロドプシンキナーゼプロモーター、及びＧｌｕＲプロモーター（例えば、ＧｌｕＲ６プロモーター；ｇｒｍ６とも呼ばれる）が挙げられるが、これらに限定されない。適切なプロモーターとしては、卵黄様黄斑ジストロフィー２（ＶＭＤ２）遺伝子プロモーター、及び光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）遺伝子プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。Ｌ７プロモーター（Ｏｂｅｒｄｉｃｋ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４８：２２３）、ｔｈｙ－１プロモーター、リカバリンプロモーター（Ｗｉｅｃｈｍａｎｎ ａｎｄ Ｈｏｗａｒｄ（２００３）Ｃｕｒｒ． Ｅｙｅ Ｒｅｓ． ２６：２５）；カルビンジンプロモーター；及びβアクチンプロモーターも使用に適している。適切なプロモーターとしては、合成（天然に存在しない）プロモーター／エンハンサーの組み合わせも挙げられる。

【0211】

本開示に従って有用な他の適切なプロモーターとしては、例えば、ガンマシヌクレイン（ＳＮＣＧ）プロモーター（例えば、Ｃｈａｆｆｉｏｌ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． ２５（１１）２５４６）、ＣＢｈプロモーター（例えば、Ｇｒｅｙ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ２２（９）：１１４３－５３）、ｍｉｎｉＣＡＧプロモーター（例えば、Ｇｒｅｙ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ２２（９）：１１４３－５３）、ニューロフィラメントヘビー（ＮＥＦＨ）プロモーター（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎ－Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｓｃｉ． Ｒｅｐ．１０：１６５１５）、Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ１（ＧＲＫ１）プロモーター（例えば、Ｋｈａｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｉｎｖｅｓｔ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ． ４８（９）：３９５４－６１）、レチンアルデヒド結合タンパク質１（ＲＬＢＰ１）プロモーター（例えば、Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｌｉｎ． Ｄｅｖ． ２：１５０２２；Ｖｏｇｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｉｎｖｅｓｔ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ． ４８，３８７２－３８７７）、卵黄様筋ジストロフィー－２（ＶＭＤ２）プロモーター（例えば、Ｃｏｎｌｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． Ｃｌｉｎ． Ｄｅｖ． ２４，２３－２８）、シナプシンＩ（Ｓｙｎ１）プロモーター（例えば、Ｋｕｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００３））、ｅｎｈＳｙｎ１プロモーター（例えば、Ｈｉｏｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１４（１１）：８７２－８２）、またはそれらの機能的断片もしくはバリアントが挙げられる。

【0212】

本開示のいくつかの実施形態では、組成物は、エンハンサーを含む配列、イントロンまたはその任意の部分を含む配列、エクソンまたはその任意の部分を含む配列、Ｋｏｚａｋ配列を含む配列、転写後応答エレメント（ＰＲＥ）を含む配列、末端逆位配列（ＩＴＲ）配列を含む配列、長い末端反復（ＬＴＲ）配列を含む配列、及びポリＡ配列のうちの１つ以上をさらに含む。

【0213】

本開示の組成物のいくつかの実施形態では、組成物は連結要素をさらに含む。本開示の連結要素は、プロモーターをコードする配列を、目的のポリペプチドをコードする配列に連結することができる。代替的に、または付加的に、本開示の連結要素は、組成物を、表面、タグ、標識（検出可能または配列バーコード）、リガンド、エピトープ、捕捉プローブ、選択可能マーカー、または本開示の送達ビヒクルのうちの１つ以上に可逆的にまたは非可逆的に連結することができる。

【0214】

組成物
実施形態は、本開示のコンジュゲートを含む組成物をさらに提供する。本開示のコンジュゲートを含む組成物は、塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ_２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ_４など；緩衝剤、例えばＴｒｉｓ緩衝液、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（２－エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－ｔｒｉｓ［ヒドロキシメチル］メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）など；可溶化剤；界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ－２０、Ｎｏｎｉｄｅｔ－Ｐ４０などの非イオン性界面活性剤；プロテアーゼ阻害剤；などのうちの１つ以上を含むことができる。

【0215】

医薬組成物
本開示は、本開示のコンジュゲートまたは本開示の組成物を含む医薬組成物を提供する。場合によっては、医薬組成物は、それを必要とする個体に投与するのに適切である。場合によっては、医薬組成物は、それを必要とする個体に投与するのに適切であり、個体はヒトである。

【0216】

本開示のコンジュゲートまたは組成物を含む医薬組成物は、患者に単独で、または他の補助活性剤と組み合わせて投与され得る。医薬組成物は、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、湿式粉砕、乳化、カプセル化、封入、及び凍結乾燥を非限定的に含む、さまざまなプロセスのいずれかを使用して製造することができる。医薬組成物は、無菌溶液、懸濁液、エマルション、凍結乾燥物、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル、粉末、シロップ、エリキシル、または投与に適した任意の他の剤形を含むがこれらに限定されないさまざまな形態のいずれかを取ることができる。

【0217】

本開示のコンジュゲートまたは組成物を含む医薬組成物は、活性成分の薬学的に許容される組成物への加工を促進する薬学的に許容される担体（複数可）を任意選択で含むことができる。本明細書で使用される場合、「薬理学的に許容される担体」という用語は、投与された場合に長期的または永続的な有害な影響を実質的に持たない任意の担体を指し、「薬理学的に許容されるビヒクル、安定剤、希釈剤、補助剤、または賦形剤」などの用語を包含する。そのような担体は、一般に、活性化合物と混合されるか、または活性化合物を希釈または封入することが可能であり、固体、半固体、または液体の薬剤であり得る。活性成分は、可溶性であってもよいし、所望の担体または希釈剤中の懸濁液として送達できることが理解される。例えば、蒸留、脱イオン水、生理食塩水などの水性媒体；溶剤；分散媒体；コーティング；抗菌剤及び抗真菌剤；等張及び吸収遅延剤；またはいずれか他の不活性成分を含むが、これらに限定されない種々の薬学的に許容される担体のいずれかを使用することができる。薬理学的に許容される担体の選択は、投与様式に依存し得る。いかなる薬学的に許容される担体も活性成分と不適合でない限り、薬学的に許容される組成物に使用することが企図される。そのような薬学的担体の特定の用途の非限定的な例は、“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ”（Ｈｏｗａｒｄ Ｃ． Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，７^ｔｈ ｅｄ． １９９９）；“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０^ｔｈ ２０００）；“Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ” Ｊｏｅｌ Ｇ． Ｈａｒｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ，１０．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄ． ２００１）；及び“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ”（Ｒａｙｍｏｎｄ Ｃ． Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，ＡＰｈＡ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，４^ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ ２００３）に見出すことができる。

【0218】

本発明の医薬組成物は、非限定的に、緩衝液、防腐剤、等張化剤、塩、抗酸化物質、生理学的物質、薬理学的物質、増量剤、乳化剤、湿潤剤、甘味、または香味剤などを含む、他の薬学的に許容される成分を非限定的に任意選択で含み得る。得られる調製物が薬学的に許容されるという条件で、ｐＨを調整するためのさまざまな緩衝液及び手段を使用して、本明細書に開示される医薬組成物を調製することができる。薬学的に許容される緩衝液の非限定的な例として、酢酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液、リン酸塩緩衝液、中性緩衝食塩水、リン酸塩緩衝食塩水、及びホウ酸塩緩衝液が挙げられる。酸または塩基を使用して、必要に応じて組成物のｐＨを調整できることが理解される。薬学的に許容される防腐剤としては、非限定的に、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチル化ヒドロキシアニソール、及びブチル化ヒドロキシトルエンが挙げられる。有益な防腐剤としては、非限定的に、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、及び安定化オキシクロロ組成物、例えば、ＰＵＲＩＴＥ（商標）が挙げられる。本発明の医薬組成物に含めるのに適した張度調整剤としては、非限定的に、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトールまたはグリセリンなどの塩、及び他の薬学的に許容される張度調整剤が挙げられる。薬理学の分野で知られているこれら及び他の物質が、本発明の医薬組成物に含まれ得ることが理解される。

【0219】

薬学的に許容される担体として機能し得る物質のいくつかの例としては、（１）ラクトース、グルコース、及びスクロース等の糖、（２）トウモロコシデンプン、及びジャガイモデンプンなどのデンプン、（３）セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロース、（４）粉末トラガカント、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）カカオバター及び坐剤用ワックス等の賦形剤、（９）落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及びダイズ油等の油、（１０）プロピレングリコール等のグリコール、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコール等のポリオール、（１２）オレイン酸エチル及びラウリン酸エチル等のエステル、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等の緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）発熱物質を含まない水、（１７）等張食塩水、（１８）リンガー液、（１９）エチルアルコール、（２０）ｐＨ緩衝溶液、（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、及び／またはポリ無水物、ならびに（２２）医薬製剤に使用されるその他の非毒性の適合物質が挙げられる。

【0220】

本開示のコンジュゲートまたは組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とともに製剤化することができる。多種多様の薬学的に許容される賦形剤が当該技術分野で既知であり、本明細書で詳細に説明される必要はない。例えば、Ａ． Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，” ２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ． Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，７^ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ． Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，３^ｒｄ ｅｄ． Ａｍｅｒ． Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃを含むさまざまな刊行物に、薬学的に許容される賦形剤が十分に記載されている。

【0221】

ビヒクル、アジュバント、担体または希釈剤などの薬学的に許容される賦形剤は、一般に容易に入手可能である。さらに、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤、安定化剤、湿潤剤などの薬学的に許容される補助物質は、一般に容易に入手可能である。

【0222】

本開示の方法（以下に記載）では、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、病状または症状の所望の軽減をもたらすことができる任意の便利な手段を使用して宿主に投与され得る。したがって、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、治療的投与のためにさまざまな製剤に組み込むことができる。より具体的には、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、適切な薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせることによって医薬組成物に製剤化することができ、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤、及びエアロゾルなどの固体、半固体、液体、または気体形態の製剤に製剤化することができる。

【0223】

本開示のコンジュゲートまたは組成物は、錠剤、粉末、顆粒、またはカプセルを製造するために、単独で、または適切な添加剤、例えばラクトース、マンニトール、コーンスターチまたはポテトスターチなどの従来の添加物とともに；結晶セルロース、セルロース誘導体、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチンのような結合剤とともに；コーンスターチ、ポテトスターチまたはカルボキシメチルセルロースナトリウムのような崩壊剤とともに；タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑剤とともに；及び必要に応じて、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、及び香味剤とともに組み合わせて使用することができる。このような製剤は、経口投与に使用することができる。

【0224】

本開示のコンジュゲートまたは組成物は、植物または他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールなどの水性または非水性溶媒に溶解、懸濁、または乳化することにより；及び、必要に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、及び防腐剤などの従来の添加剤とともに、注射用の製剤に製剤化することができる。注射に適した製剤は、硝子体内、眼内、筋肉内、皮下、舌下、または他の投与経路、例えば、歯肉組織または他の口腔組織への注射によって投与することができる。このような製剤は局所投与にも適している。

【0225】

場合によっては、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、硝子体内注射によって投与される。場合によっては、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、眼内投与によって投与される。場合によっては、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、網膜下注射によって投与される。

【0226】

本開示のコンジュゲートまたは組成物は、吸入によって投与されるエアロゾル製剤で利用することができる。本開示のコンジュゲートまたは組成物は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容される加圧噴射剤に製剤化することができる。

【0227】

さらに、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、乳化基剤または水溶性基剤などのさまざまな基剤と混合することによって坐剤にすることができる。本開示のコンジュゲートまたは組成物は、坐剤を介して直腸に投与することができる。坐剤は、体温で溶けるが、室温では凝固する、カカオバター、カーボワックス、ポリエチレングリコールなどのビヒクルを含むことができる。

【0228】

シロップ剤、エリキシル剤、及び懸濁剤などの経口投与または直腸投与のための単位剤形を提供してもよく、それぞれの剤形単位、例えば、小さじ１杯、大さじ１杯の、錠剤または坐剤は、１つ以上の阻害剤を含む所定量の組成物を含む。同様に、注射または静脈内投与のための単位剤形は、滅菌水、生理食塩水、または別の薬学的に許容される担体中の溶液として組成物中に本開示のコンジュゲートを含み得る。

【0229】

本明細書で使用される場合、「単位剤形」という用語は、ヒト及び動物の対象のための単位投与量として適切な物理的に分離した単位を指し、それぞれの単位は所定量の本開示のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される希釈剤、担体、またはビヒクルと組み合わせて所望の効果を生じるのに十分な量で計算される。本開示のコンジュゲートに関する仕様は、使用される特定の化合物、及び達成すべき効果、ならびに宿主におけるそれぞれの化合物に関連する薬力学に依存する。

【0230】

本開示のコンジュゲートまたは組成物は、注射可能なものとして投与することができる。注射可能な組成物は、液体の溶液または懸濁液としてとして調製される。注射前に液体ビヒクルに溶解または懸濁するのに適した固体形態も調製することができる。調製物はまた、乳化されるか、または活性成分がリポソームビヒクルにカプセル化され得る。

【0231】

本開示のコンジュゲートまたは組成物は、薬学的に許容される賦形剤と一緒に医薬組成物に製剤化することができる。場合によっては、本発明の医薬組成物は対象への投与に適しており、例えば無菌である。例えば、場合によっては、本発明の医薬組成物は、例えば、組成物が無菌であり、検出可能な発熱物質及び／またはその他の毒素を含まない場合、ヒト対象への投与に適している。

【0232】

本開示のコンジュゲートまたは組成物は、個体の眼への投与に適した医薬組成物に製剤化することができる。例えば、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、硝子体内投与に適した医薬組成物に製剤化することができる。

【0233】

本開示のコンジュゲートまたは組成物は、コンジュゲートのインビボ半減期を増加させる薬学的に許容される賦形剤と一緒に医薬組成物に製剤化することができる。例えば、場合によっては、本開示の組成物は、ｉ）本開示のコンジュゲートまたは組成物と、ｉｉ）シクロデキストリンと、を含む。

【0234】

適切なシクロデキストリンとしては、例えば、α－シクロデキストリン、β－シクロデキストリン、γ－シクロデキストリン、２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル－γ－シクロデキストリン、２，６－ジ－Ｏ－エチル－β－シクロデキストリン、スルホブチルエーテル－β－シクロデキストリン、メチル化シクロデキストリン（例えば、メチル化β－シクロデキストリン；例えば、ＤＩＭＥＢと呼ばれるＣ－２及びＣ－６位のすべてにメチル基を有するβ－シクロデキストリン）；ＣＲＹＳＭＥＢ；ＲＡＭＥＢ；など）、ヘプタキス－（２，３，６－トリ－Ｏ－メチル）－β－シクロデキストリン（ＴＲＩＭＥＢ）、マルトシル－β－シクロデキストリンなどが挙げられる。場合によっては、本開示の組成物は、ｉ）本開示のコンジュゲートまたは組成物と、ｉｉ）シクロデキストリンと、を含む。場合によっては、本開示の組成物は、ｉ）本開示のコンジュゲートまたは組成物と、ｉｉ）β－シクロデキストリンと、を含む。場合によっては、本開示は、薬剤をシクロデキストリンと組み合わせて製剤化することにより、薬剤を必要とする対象に薬剤を硝子体内投与する方法を提供する。本明細書に示されるように、優れたインビボ有効性及び／または治療効果の持続性は、シクロデキストリンとともに製剤化された本開示のコンジュゲートの硝子体内投与後に達成することができる。

【0235】

場合によっては、本開示の組成物は、ｉ）本開示のコンジュゲートまたは組成物と、ｉｉ）アルキルグリコシドと、を含む。場合によっては、アルキルグリコシドは、ウンデシルマルトシド、ドデシルマルトシド、トリデシルマルトシド、テトラデシルマルトシド、スクロースモノドデカノエート、スクロースモノトリデカノエート、及びスクロースモノテトラデカノエートからなる群から選択される。

【0236】

場合によっては、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、連続送達システムによって送達される。「連続送達システム」という用語は、本明細書では「制御送達システム」と交換可能に使用され、その多種多様なものが当該技術分野で知られている、カテーテル、注射装置などと組み合わせた連続（例えば、制御）送達装置（例えば、ポンプ）を包含する。

【0237】

場合によっては、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、ミセル（例えば、ナノミセル）、ナノ粒子、またはリポソーム中に存在する（例えば、その中にカプセル化されている）。例えば、場合によっては、本開示のコンジュゲートは、ポリヒドロキシエチルアスパルタミド（ＰＨＥＡ）とペグ化ＰＨＥＡとのコポリマーを含むナノミセル中に存在する（例えば、その中にカプセル化されている）。別の例として、場合によっては、本開示のコンジュゲートは、ポリ（エチレンオキシド）－ポリ（プロピレンオキシド）－ポリ（エチレンオキシド）コポリマーを含むナノミセル中に存在する（例えば、その中にカプセル化されている）。別の例として、場合によっては、本開示のコンジュゲートは、アルブミン、アルギン酸ナトリウム、キトサン、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、及びポリカプロラクトンのうちの１つ以上を含むナノ粒子中に存在する（例えば、その中にカプセル化されている）。別の例として、場合によっては、本開示のコンジュゲートは、臭化ジドデシルジメチルアンモニウム、ステアリルアミン、またはＮ－［１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－塩化トリメチルアンモニウムを含むリポソーム中に存在する（例えば、その中にカプセル化されている）。

【0238】

方法
本開示のコンジュゲートは、標的リガンド結合ポリペプチドの活性を調節するのに使用される。本開示のコンジュゲートは、本開示のコンジュゲートを含む細胞の活性を調節するのに使用され、細胞は標的リガンド結合ポリペプチドを含む。したがって、本開示は、標的リガンド結合ポリペプチドの活性を調節する方法、及び本開示のコンジュゲートを含む細胞の活性を調節する方法であって、細胞が標的リガンド結合ポリペプチドを含む方法を提供する。場合によっては、本開示の方法は、リガンドが標的リガンド結合ポリペプチドのリガンド結合部位に結合するように、コンジュゲート（またはコンジュゲートを含む細胞または組織）を適切な光条件に曝露することを含む。場合によっては、本開示の方法は、リガンドが標的リガンド結合ポリペプチドのリガンド結合部位に結合しないように、コンジュゲート（またはコンジュゲートを含む細胞または組織）を適切な光条件に曝露することを含む。

【0239】

本開示は、標的リガンド結合ポリペプチドの活性を調節する方法であって、方法が、ａ）標的リガンド結合ポリペプチドを、本開示のコンジュゲートと接触させて、光調節可能なポリペプチドを生成することと、ｂ）光調節可能なポリペプチドへのリガンドの結合をもたらす波長の光に光調節可能なポリペプチドを曝露することであって、光調節可能なポリペプチドへのリガンドの結合が光調節可能なポリペプチドの活性を調節する曝露することと、を含む方法を提供する。本開示は、標的リガンド結合ポリペプチドの活性を調節する方法であって、方法が、ａ）標的リガンド結合ポリペプチドを、本開示のコンジュゲートと接触させて、光調節可能なポリペプチドを生成することと、ｂ）光調節可能なポリペプチドのリガンド結合部位からのリガンドの放出をもたらす波長の光に光調節可能なポリペプチドを曝露することであって、光調節可能なポリペプチドのリガンド結合部位からのリガンドの放出が光調節可能なポリペプチドの活性を調節する曝露することと、を含む方法を提供する。

【0240】

標的リガンド結合ポリペプチド（または光調節可能なポリペプチド）の「活性を調節すること」には、ポリペプチドの活性を増加すること；ポリペプチドの活性を阻害すること；ポリペプチドを別の（例えば、非光）刺激に対して感作すること；別の刺激に対するポリペプチドの感受性を低下させること；別の刺激がポリペプチドを活性化する効力を増大させること；及び別の刺激がポリペプチドを活性化する効力を減少させることが含まれる。活性は、調節されるポリペプチドに依存する。例えば、場合によっては、リガンドはアゴニストであり、標的リガンド結合ポリペプチド（または光調節可能なポリペプチド）へのリガンドの結合は、標的リガンド結合ポリペプチド（または光調節可能なポリペプチド）の活性化をもたらす。他の例では、リガンドはアンタゴニストであり、標的リガンド結合ポリペプチド（または光調節可能なポリペプチド）へのリガンドの結合は、標的リガンド結合ポリペプチド（または光調節可能なポリペプチド）の阻害、脱感作、または非活性化をもたらす。

【0241】

標的リガンド結合ポリペプチドとしては、転写調節因子、イオンチャネル、カチオンチャネル、リガンド依存性イオンチャネル、電位依存性イオンチャネル、クオラムセンサー、フェロモン受容体、神経伝達物質受容体、酵素、酵素、モータータンパク質、トランスポーター、膜輸送タンパク質、Ｇタンパク質共役受容体、Ｇタンパク質、受容体チロシンキナーゼ、足場タンパク質、アダプタータンパク質、細胞骨格タンパク質、接着タンパク質、膜標的タンパク質、分泌を指示するタンパク質、及びタンパク質の局在化ドメインまたはタンパク質相互作用ドメインが挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドはカチオンチャネルである。場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドはアニオンチャネルである。場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドはカリウムチャネルである。場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドはナトリウムチャネルである。場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドはカルシウムチャネルである。

【0242】

場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドは無細胞組成物である。すなわち、標的リガンド結合ポリペプチドは細胞内に存在しない。

【0243】

場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドはインビトロで細胞に存在する。場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドはインビボで細胞内に存在する。

【0244】

標的リガンド結合ポリペプチドが細胞内に存在する場合、細胞は任意の型の細胞であり得る。例えば、細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞、非ヒト霊長類細胞、げっ歯類細胞などであり得る。細胞は、網膜細胞、筋細胞、神経細胞、血球（例えば、有核血球）、上皮細胞、内皮細胞、皮膚細胞、肺細胞などであり得る。

【0245】

場合によっては、標的リガンド結合ポリペプチドは細胞内に存在する。場合によっては、細胞は網膜細胞である。場合によっては、細胞はアマクリン細胞である。場合によっては、細胞は神経節細胞（例えば、網膜神経節細胞（ＲＧＣ））である。場合によっては、細胞は双極細胞である。場合によっては、細胞はミューラー細胞である。場合によっては、細胞はＯＮ双極細胞（ＯＮ－ＢＣ）である。場合によっては、細胞はＯＦＦ双極細胞である。

【0246】

本開示は、標的細胞の活性を調節する方法であって、この方法が、標的細胞を光に曝露することを含み、標的細胞が、本開示のコンジュゲート及び標的リガンド結合ポリペプチドを含み、光は、標的リガンド結合ポリペプチドへのリガンドの結合をもたらす波長のものであり、標的リガンド結合ポリペプチドへのリガンドの結合は標的細胞の活性を調節する、方法を提供する。本開示は、標的細胞の活性を調節する方法であって、この方法が、標的細胞を光に曝露することを含み、標的細胞が、本開示のコンジュゲート及び標的リガンド結合ポリペプチドを含み、光は、標的リガンド結合ポリペプチドからのリガンドの放出をもたらす波長のものであり、標的リガンド結合ポリペプチドからのリガンドの結合の放出は標的細胞の活性を調節する、方法を提供する。場合によっては、細胞は標的細胞集団である。場合によっては、標的細胞または細胞集団は組織に存在する。

【0247】

本開示は、通常は光に直接応答しない網膜細胞に光に対する感受性を導入するか、またはすでに光感受性の網膜細胞の光応答を増強する方法であって、方法は、網膜細胞を光に曝露することを含み、網膜細胞が本開示のコンジュゲート及び標的リガンド結合ポリペプチドを含み、光が標的リガンド結合ポリペプチドへのリガンドの結合をもたらす波長のものであり、標的リガンド結合ポリペプチドへのリガンドの結合が、光に反応した網膜細胞の活性を調節する、方法を提供する。例えば、網膜細胞中の標的ポリペプチドは、アマクリン細胞中のｍＧｌｕＲ２もしくはｍＧｌｕＲ８または双極細胞中のｍＧｌｕＲ６もしくはｍＧｌｕＲ７または神経節細胞中のｍＧｌｕＲ４などの代謝型グルタミン酸受容体であり得る。これらの場合、適切な光異性化部分－リガンドの組み合わせは、Ｄ立体異性体結合を持つアゾベンゼン－グルタミン酸であり得る。例えば、Ｂｒｏｉｃｈｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＡＣＳ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ １，３８３－３９３；及びＬｅｖｉｔｚ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １１４，Ｅ３５４６－Ｅ３５５４を参照されたい。他の例として、標的ポリペプチドは、双極細胞、アマクリン細胞、または神経節細胞におけるＧｌｕＫ２、ＧｌｕＫ５、ＧｌｕＮ２Ａ、またはＧｌｕＮ２Ｂなどのイオンチャネル型グルタミン酸受容体であり得る。これらの場合、適切な光異性化部分－リガンドの組み合わせは、Ｌ立体異性体結合を有するアゾベンゼン－グルタメート（例えば、Ｖｏｌｇｒａｆ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏ． ２：４７；Ｖｏｌｇｒａｆ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １２９：２６０；及びＢｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｅｌｉｆｅ ５：ｅ１２０４０を参照されたい），または ＡＴＧ（例えば、Ｌａｐｒｅｌｌ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎａｔ． Ｃｏｍｍｕｎ． ６：８０７６を参照されたい）であり得る。別の例として、標的ポリペプチドは、ＧｌｕＲＡ１などのイオンチャネル型グルタミン酸受容体であってもよい。この場合、適切な光異性化部分－リガンドの組み合わせは、ＳｈｕＢＱＸ－３であり得る（例えば、Ｂａｒｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｃｈｅｍ． Ｓｃｉ． ８：６１１を参照されたい）。別の例として、標的ポリペプチドは、アマクリン細胞または神経節細胞におけるイオンチャネル型ニコチン性アセチルコリン受容体であり得、リガンドは、ＡＣ－５、ＭＡＡＣｈ、ＨｏＣｈＰＥ、ＭＧ－６２４、またはＭＡＨｏＣｈであり得る（例えば、Ｔｏｃｈｉｔｓｋｙ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ． Ｃｈｅｍ． ４：１０５を参照されたい）。別の例として、標的ポリペプチドは、アマクリン細胞または神経節細胞におけるイオンチャネル型ＧＡＢＡ－Ａ受容体であり得、リガンドは、ＰＡＧ－２Ａ、ＰＡＧ－２Ｂ、またはＰＡＧ－３Ｃであり得る。別の例として、標的ポリペプチドは神経節細胞におけるイオンチャネル型Ｐ２Ｘ受容体であり得、リガンドはＭＥＡ－ＴＭＡであり得る（例えば、Ｌｅｍｏｉｎｅ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １１０：２０８１３を参照されたい）。

【0248】

本開示は、光に対する低下した応答性を特徴とする眼障害を治療する方法であって、方法が、本開示のコンジュゲート、または本開示のコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）を、眼障害を有する個体の眼に投与することを含む、方法を提供する。場合によっては、コンジュゲート、またはコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）は、硝子体内注射を介して個体に投与される。場合によっては、コンジュゲート、またはコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）は、眼内投与を介して個体に投与される。場合によっては、コンジュゲート、またはコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）は、網膜下注射を介して個体に投与される。

【0249】

光に対する応答性の低下を特徴とする眼障害としては、網膜色素変性症及び加齢性黄斑変性症などの遺伝性網膜変性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。本開示の方法による治療に適した眼障害としては、網膜色素変性症、黄斑変性症、網膜分離症、レーバー先天性黒内障、及び糖尿病性網膜症が挙げられるが、これらに限定されない。

【0250】

視覚機能を増強する方法
本開示は、個体の眼の視覚機能を増強または回復する方法を提供する。この方法は、有効量の本開示のコンジュゲートまたは組成物を個体の眼に投与することを含む。

【0251】

個体の眼への本開示のコンジュゲートまたは組成物の投与は、個体によるパターン化された視覚及び画像認識を提供することができる。画像認識は静止画像及び／または動く映像のものであり得る。

【0252】

場合によっては、有効量の本開示のコンジュゲートまたは組成物を個体の眼に投与することは、約１０^－５Ｗ／ｃｍ^２～約１０Ｗ／ｃｍ^２の光強度での画像認識を提供する。場合によっては、有効量の本開示のコンジュゲートまたは組成物を個体の眼に投与することは、５Ｗ／ｃｍ^２未満、例えば、３Ｗ／ｃｍ^２未満、２Ｗ／ｃｍ^２未満、または１Ｗ／ｃｍ^２未満の光強度での画像認識を提供する。例えば、有効量の本開示のコンジュゲートまたは組成物を個体の眼に投与することは、約１０^－５Ｗ／ｃｍ^２～約１０^－１Ｗ／ｃｍ^２、約１０^－４Ｗ／ｃｍ^２～約１０^－２Ｗ／ｃｍ^２、約１０^－４Ｗ／ｃｍ^２～約１Ｗ／ｃｍ^２、約１０^－４Ｗ／ｃｍ^２～約１０^－１Ｗ／ｃｍ^２、または約１０^－４Ｗ／ｃｍ^２～約５×１０^－１Ｗ／ｃｍ^２の光強度での画像認識を提供する。場合によっては、有効量の本開示のコンジュゲートまたは組成物を個体の眼に投与することは、約１０^－５Ｗ／ｃｍ^２～約１０^－４Ｗ／ｃｍ^２、約１０^－４Ｗ／ｃｍ^２～約１０^－３Ｗ／ｃｍ^２、約１０^－３Ｗ／ｃｍ^２～約１０^－２Ｗ／ｃｍ^２、約１０^－２Ｗ／ｃｍ^２～約１０^－１Ｗ／ｃｍ^２、または約１０^－１Ｗ／ｃｍ^２～約１Ｗ／ｃｍ^２の光強度での画像認識を提供する。

【0253】

場合によっては、本開示のコンジュゲートは、上記の「４６０アゾベンゼン」を含む。場合によっては、「４６０アゾベンゼン」を含む本開示のコンジュゲートは、「アゾベンゼン３８０」を含むコンジュゲートによって網膜細胞にもたらされる「オフ」キネティクスよりも、少なくとも１０倍、少なくとも２５倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、少なくとも１，０００倍、少なくとも２，０００倍、少なくとも３，０００倍、少なくとも４，０００倍、少なくとも５，０００倍、少なくとも７，５００倍、少なくとも１０，０００倍、または１０，０００倍を超えて速い「オフ」キネティクスを提供する。「オフ」キネティクスとは、光を取り除くとき（暗闇で）、光応答がオフになるキネティクスを指す。例えば、場合によっては、「４６０アゾベンゼン」を含む本開示のコンジュゲートは、１０秒未満、５秒未満、１秒未満、９００ミリ秒（ｍｓ）未満、８００ｍｓ未満、７００ｍｓ未満、６００ｍｓ未満、５００ｍｓ未満、または４００ｍｓ未満の「オフ」キネティクスをもたらす。場合によっては、「４６０アゾベンゼン」を含む本開示のコンジュゲートは、約１００ｍｓ～約２００ｍｓ、約２００ｍｓ～約３００ｍｓ、約３００ｍｓ～約４００ｍｓ、約４００ｍｓ～約５００ｍｓ、約５００ｍｓ～約６００ｍｓ、約６００ｍｓ～約７００ｍｓ、約７００ｍｓ～約８００ｍｓ、約８００ｍｓ～約９００ｍｓ、約９００ｍｓ～約１秒、約１秒～約５秒、または約５秒～約１０秒の「オフ」キネティクスをもたらす。

【0254】

場合によっては、本開示のコンジュゲートは、上記の「４６０アゾベンゼン」を含む。「４６０アゾベンゼン」を含む本開示のコンジュゲートは、可視光（例えば、青色光）による励起をもたらす。したがって、「４６０アゾベンゼン」を含む本開示のコンジュゲートの眼への投与は、可視光に対する眼の応答性をもたらす。

【0255】

本開示のコンジュゲートまたは組成物は、有効量で投与されて、個体の視覚機能を、コンジュゲートの投与前の視覚機能と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または１０倍を超えて増加する。視覚機能の試験は当該技術分野で知られており、視覚機能を評価するために任意の既知の試験を適用することができる。

【0256】

場合によっては、本開示のコンジュゲートは、画像が約４センチメートル／秒（ｃｍ／ｓ）を超える、約５ｃｍ／ｓを超える、約６ｃｍ／ｓを超える、約７ｃｍ／ｓを超える、または約８ｃｍ／ｓを超える速度で移動している場合に、動く映像の視覚的検出をもたらす。場合によっては、本開示のコンジュゲートは、画像が８ｃｍ／ｓを超える、例えば８ｃｍ／ｓ～約９ｃｍ／ｓ、９ｃｍ／ｓ～１０ｃｍ／ｓ、１０ｃｍ／ｓ～１２ｃｍ／ｓ、１２ｃｍ／ｓ～１４ｃｍ／ｓ、または１４ｃｍ／ｓ～約１６ｃｍ／ｓの速度で移動している場合に、動く映像の視覚的検出を提供する。

【0257】

場合によっては、本開示のコンジュゲートは、実施例において^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}として言及される（及び図１Ｊ及び図４Ａに示される）コンジュゲートである。^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}コンジュゲートは、増強された視覚機能をもたらし得る。^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}コンジュゲートは、パターン化された視覚と画像認識をもたらし得る。画像認識は静止画像及び／または動く映像のものであり得る。場合によっては、^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}コンジュゲートは、画像が約４センチメートル／秒（ｃｍ／ｓ）を超える、約５ｃｍ／ｓを超える、約６ｃｍ／ｓを超える、約７ｃｍ／ｓを超える、または約８ｃｍ／ｓを超える速度で移動している場合に、動く映像の視覚的検出をもたらす。場合によっては、^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}コンジュゲートは、画像が８ｃｍ／ｓを超える、例えば８ｃｍ／ｓ～約９ｃｍ／ｓ、９ｃｍ／ｓ～１０ｃｍ／ｓ、１０ｃｍ／ｓ～１２ｃｍ／ｓ、１２ｃｍ／ｓ～１４ｃｍ／ｓ、または１４ｃｍ／ｓ～約１６ｃｍ／ｓの速度で移動している場合に、動く映像の視覚的検出を提供する。場合によっては、^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}コンジュゲートは、一価のＢＧＡＧ_{１２，４６０}よりも１００倍～２５０倍高い光感度をもたらす。

【0258】

場合によっては、本開示のコンジュゲート、またはコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）は、硝子体内注射を介して個体に投与される。場合によっては、コンジュゲート、またはコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）は、眼内投与を介して個体に投与される。場合によっては、コンジュゲート、またはコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）は、網膜下注射を介して個体に投与される。

【0259】

場合によっては、本開示のコンジュゲートまたは組成物の複数回用量が個体に投与される。投与の頻度は、さまざまな因子のいずれか、例えば症状の重症度などに応じて変動し得る。例えば、場合によっては、本開示のコンジュゲートまたは組成物は、６週間に１回、５週間に１回、１か月に１回、４週間に１回、１か月に２回、１か月に３回、隔週（ｑｏｗ）、１週間に１回（ｑｗ）、１週間に２回（ｂｉｗ）、１週間に３回（ｔｉｗ）、１週間に４回、１週間に５回、１週間に６回、２日に１回（ｑｏｄ）、１日に１回（ｑｄ）、１日に２回（ｑｉｄ）、または１日に３回（ｔｉｄ）投与される。

【0260】

本開示のコンジュゲートまたは組成物は、約１日から約１年または１年を超える期間にわたって個体に投与することができる。例えば、本開示のコンジュゲートは、１週間～２週間、２週間～１か月、１か月～４か月、４か月～６か月、６か月～１年間、または１年を超える期間にわたって個体に投与することができる。

【0261】

本開示の方法による治療に適した個体としては、桿体及び錐体の光受容体の喪失により視覚機能が低下した個体が挙げられる。場合によっては、個体は、網膜色素変性症、網膜分離症、またはレーバー先天性黒内障などの遺伝性の網膜変性疾患を有する。場合によっては、個体は、網膜色素変性症、黄斑変性症、加齢性黄斑変性症、網膜分離症、及びレーバー先天性黒内障、及び糖尿病性網膜症から選択される眼疾患（例えば、遺伝性眼疾患）を有する。本開示の方法による治療に適した個体としては、天然の光感受性が失われ、したがって視力が損なわれる網膜変性状態を有するが、網膜回路の後半のニューロン（例えば、双極細胞または脳に出力されるアマクリン介在ニューロンまたは神経節細胞）は免れ、錐体オプシン（複数可）の導入によって光に直接感応することができる個体が挙げられる。

【0262】

本開示の方法による治療に適した個体としては、遺伝的または遺伝された根拠のない、外傷性または急性の網膜損傷を有する個体が挙げられる。例えば、場合によっては、個体は、爆傷などの鈍的外傷（例えば、軍事戦闘における）に起因するか、または例えば自動車事故または頭部への衝撃をもたらすその他の事故の過程での頭部への衝撃に起因する網膜剥離を経験している。いくつかの例では、下にあるＲＰＥからの網膜の外傷性剥離により光受容体が失われるが、内部網膜ニューロンは無傷である。本開示の方法による治療に適した個体としては、急性光損傷、レーザー曝露、または化学毒性による光受容体喪失を有する個体が挙げられる。

【0263】

装置
本開示は、本開示のコンジュゲートまたは組成物を含む装置を提供する。

【0264】

本開示の装置は、ａ）本開示の組成物（本開示のコンジュゲートを含む組成物）を含む容器と、ｂ）個体の眼に組成物を導入するための手段と、を含み得る。場合によっては、個体の眼に組成物を導入するための手段は針を含む。場合によっては、容器は注射器を含む。場合によっては、装置は滅菌される。場合によっては、装置は埋め込み可能である。

【0265】

本開示の非限定的態様の例
態様セットＡ
上記の本発明の主題の実施形態を含む態様は、単独でも、１つ以上の他の態様または実施形態と組み合わせても有益であり得る。上記の記載を限定することなく、本開示の特定の非限定的態様が以下に提示される。本開示を読むと当業者には明らかであるように、個々の番号が付された態様のそれぞれは、先行または後続の個々の番号が付された態様のうちのいずれかとともに使用され得るか、または組み合わされ得る。これは、態様のすべてのそのような組み合わせのサポートを提供することを意図し、以下に明示的に記載されている態様の組み合わせに限定することを意図しない。

【0266】

態様１．コンジュゲートであって、前記コンジュゲートが、
ａ）親和性剤であって、
ｉ）標的リガンド結合ポリペプチド；または
ｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するポリペプチド
に特異的に結合する、前記親和性剤と；
ｂ）分岐鎖リンカーと；
ｃ）それぞれ独立して、
ｉ）光異性化可能な基；及び
ｉｉ）前記標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンド
を含む、２つ以上の光異性化可能な調節因子と
を含む、前記コンジュゲート。

【0267】

態様２．前記親和性剤がベンジルグアニンを含む、態様１に記載のコンジュゲート。

【0268】

態様３．前記親和性剤がクロロアルカンを含む、態様１に記載のコンジュゲート。

【0269】

態様４．前記親和性剤がベンジルシトシンを含む、態様１に記載のコンジュゲート。

【0270】

態様５．前記親和性剤が抗体を含む、態様１に記載のコンジュゲート。

【0271】

態様６．前記親和性剤がアプタマーを含む、態様１に記載のコンジュゲート。

【0272】

態様７．前記親和性剤が小分子またはペプチドを含む、態様１に記載のコンジュゲート。

【0273】

態様８．前記分岐鎖リンカーが、光異性化可能な調節因子をそれぞれ独立して含む２つ以上のアームを含む、態様１～７のいずれか１つに記載のコンジュゲート。

【0274】

態様９．前記分岐鎖リンカーが２つのアームを含む、態様８に記載のコンジュゲート。

【0275】

態様１０．前記分岐鎖リンカーが４つのアームを含む、態様８に記載のコンジュゲート。

【0276】

態様１１．前記分岐鎖リンカーが、式（ＢＬ）：

（式中、ｎは１～１０の整数である）
である部分を含む、態様１～１０のいずれか１つに記載のコンジュゲート。

【0277】

態様１２．ｎが１である、態様１１に記載のコンジュゲート。

【0278】

態様１３．ｎが３である、態様１１に記載のコンジュゲート。

【0279】

態様１４．前記光異性化可能な基が、アゾベンゼン、環状アゾベンゼン、アゾヘテロアレーン、フルギド、スピロピラン、トリフェニルメタン、チオインジゴ、ジアリールエテン、及び過密アルケンから選択される部分を含む、態様１～１３のいずれか１つに記載のコンジュゲート。

【0280】

態様１５．前記光異性化可能な基がアゾベンゼンを含む、態様１４に記載のコンジュゲート。

【0281】

態様１６．前記リガンドがアゴニスト、アンタゴニスト、アロステリックモジュレーター、またはブロッカーである、態様１～１５のいずれか１つに記載のコンジュゲート。

【0282】

態様１７．前記標的リガンド結合ポリペプチドが、転写調節因子、イオンチャネル、カチオンチャネル、リガンド依存性イオンチャネル、電位依存性イオンチャネル、クオラムセンサー、フェロモン受容体、神経伝達物質受容体、Ｇタンパク質共役受容体、及び酵素から選択される、態様１～１６のいずれか１つに記載のコンジュゲート。

【0283】

態様１８．前記カチオンチャネルがカリウムチャネル、ナトリウムチャネル、またはカルシウムチャネルである、態様１７に記載のコンジュゲート。

【0284】

態様１９．前記標的リガンド結合ポリペプチドが、グルタミン酸受容体、代謝型グルタミン酸受容体、イオンチャネル型グルタミン酸受容体、イオンチャネル型ニコチン性アセチルコリン受容体、イオンチャネル型ＧＡＢＡ－Ａ受容体、代謝型ＧＡＢＡ－Ｂ受容体、代謝型ドーパミン受容体、イオンチャネル型プリン作動性Ｐ２Ｘ受容体、代謝型プリン作動性Ｐ２Ｙ受容体、代謝型セロトニン受容体、イオンチャネル型セロトニン受容体、イオンチャネル型グリシン受容体、カチオンチャネル、カリウムチャネル、カルシウムチャネル、ナトリウムチャネル、プロトンチャネル、アニオンチャネル、またはクロライドチャネルである、態様１～１６のいずれか１つに記載のコンジュゲート。

【0285】

態様２０．システムであって、前記システムが、
ａ）態様１～１９のいずれか１つに記載のコンジュゲートと；
ｂ）融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記コンジュゲート中に存在するリガンドに対する結合部位を含む、標的リガンド結合ポリペプチド；及び
ｉｉ）前記親和性剤に結合する異種融合パートナー
を含む、前記融合ポリペプチドと
を含む、前記システム。

【0286】

態様２１．前記異種融合パートナーが、配列番号１で示されるＳＮＡＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様２０に記載のシステム。

【0287】

態様２２．前記異種融合パートナーが、配列番号２で示されるＣＬＩＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様２０に記載のシステム。

【0288】

態様２３．前記異種融合パートナーが、配列番号３で示されるＨＡＬＯポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様２０に記載のシステム。

【0289】

態様２４．システムであって、前記システムが、
ａ）態様１～１９のいずれか１つに記載のコンジュゲートと；
ｂ）融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、
ｉ）リガンドに対する結合部位を含む、標的リガンド結合ポリペプチド；及び
ｉｉ）前記親和性剤に結合する異種融合パートナー
を含む、前記核酸と
を含む、前記システム。

【0290】

態様２５．前記異種融合パートナーが、配列番号１で示されるＳＮＡＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様２４に記載のシステム。

【0291】

態様２６．前記異種融合パートナーが、配列番号３で示されるＨＡＬＯポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様２４に記載のシステム。

【0292】

態様２７．前記異種融合パートナーが、配列番号２で示されるＣＬＩＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様２４に記載のシステム。

【0293】

態様２８．前記核酸が組換えアデノウイルス随伴ウイルス（ＡＡＶ）ビリオン中に存在する、態様２４～２７のいずれか１つに記載のシステム。

【0294】

態様２９．前記ＡＡＶビリオンが、対応する野生型カプシドポリペプチドを含むＡＡＶビリオンと比較して、ＡＡＶビリオンによる網膜細胞の感染性の増加を提供するバリアントカプシドポリペプチドを含む、態様２８に記載のシステム。

【0295】

態様３０．システムであって、前記システムが、
ａ）態様１～１９のいずれか１つに記載のコンジュゲートと；
ｂ）第１の融合ポリペプチドであって、
ｉ）リガンドに対する結合部位を含む、標的リガンド結合ポリペプチド；及び
ｉｉ）異種ポリペプチド
を含む、前記第１の融合ポリペプチドと；
ｃ）第２の融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記異種ポリペプチドに結合する抗体；及び
ｉｉ）前記親和性剤に結合する異種融合パートナー
を含む、前記第２の融合ポリペプチドと
を含む、前記システム。

【0296】

態様３１．前記親和性剤に結合する前記異種融合パートナーが、配列番号１で示されるＳＮＡＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様３０に記載のシステム。

【0297】

態様３２．前記親和性剤に結合する前記異種融合パートナーが、配列番号３で示されるＨＡＬＯポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様３０に記載のシステム。

【0298】

態様３３．前記親和性剤に結合する前記異種融合パートナーが、配列番号２で示されるＣＬＩＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様３０に記載のシステム。

【0299】

態様３４．前記抗体が単鎖Ｆｖまたはナノボディである、態様３０～３３のいずれか１つに記載のシステム。

【0300】

態様３５．前記異種ポリペプチドがエピトープタグである、態様３０～３４のいずれか１つに記載のシステム。

【0301】

態様３６．システムであって、前記システムが、
ａ）態様１～１９のいずれか１つに記載のコンジュゲートと；
ｂ）融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記標的リガンド結合ポリペプチドに特異的に結合する抗体；及び
ｉｉ）ＳＮＡＰポリペプチド、ＨＡＬＯポリペプチド、及びＣＬＩＰポリペプチドから選択される、前記親和性剤に結合するポリペプチド
を含む、前記融合ポリペプチドと
を含む、前記システム。

【0302】

態様３７．標的ポリペプチドの活性を調節する方法であって、前記方法が、
ａ）前記標的ポリペプチドを態様１～１９のいずれか１つに記載のコンジュゲートと接触させて、光調節可能なポリペプチドを生成することと；
ｂ）前記光調節可能なポリペプチドへの前記リガンドの結合をもたらす波長の光に前記光調節可能なポリペプチドを曝露することであって、前記光調節可能なポリペプチドへの前記リガンドの結合が、前記光調節可能なポリペプチドの活性を調節する、曝露することと
を含む、前記方法。

【0303】

態様３８．前記リガンドがアゴニストであり、前記光調節可能なポリペプチドへの前記リガンドの結合が前記光調節可能なポリペプチドの活性化をもたらす、態様３７に記載の方法。

【0304】

態様３９．前記リガンドがアンタゴニストであり、前記光調節可能なポリペプチドへの前記リガンドの結合が前記光調節可能なポリペプチドの、阻害、脱感作、または不活性化をもたらす、態様３７に記載の方法。

【0305】

態様４０．前記標的ポリペプチドが、転写調節因子、イオンチャネル、カチオンチャネル、リガンド依存性イオンチャネル、電位依存性イオンチャネル、クオラムセンサー、フェロモン受容体、神経伝達物質受容体、酵素、酵素、モータータンパク質、トランスポーター、膜輸送タンパク質、Ｇタンパク質共役受容体、Ｇタンパク質、受容体チロシンキナーゼ、足場タンパク質、アダプタータンパク質、細胞骨格タンパク質、接着タンパク質、膜標的タンパク質、分泌を指示するタンパク質、及びタンパク質の局在化ドメインまたはタンパク質相互作用ドメインから選択される、態様３７～３９のいずれか１つに記載の方法。

【0306】

態様４１．前記カチオンチャネルがカリウムチャネル、ナトリウムチャネル、またはカルシウムチャネルである、態様４０に記載の方法。

【0307】

態様４２．前記標的ポリペプチドが細胞内にある、態様３７～４１のいずれか１つに記載の方法。

【0308】

態様４３．前記細胞がインビボである、態様４２に記載の方法。

【0309】

態様４４．前記細胞が網膜細胞である、態様４３に記載の方法。

【0310】

態様４５．光に対する網膜細胞の感受性を増強する方法であって、
前記網膜細胞を光に曝露することを含み、前記網膜細胞が、態様１～１９のいずれか１つに記載のコンジュゲートまたは態様２０～３６のいずれか１つに記載のシステムを含み、前記光が、前記光調節可能なポリペプチドへの前記リガンドの結合をもたらす波長のものであり、前記光調節可能なポリペプチドへの前記リガンドの結合が、光に対する前記網膜細胞の感受性を増加させる、前記方法。

【0311】

態様４６．網膜細胞に光応答性を付与する方法であって、態様１～１９のいずれか１つに記載のコンジュゲートまたは態様２０～３６のいずれか１つに記載のシステムを前記網膜細胞に導入することを含む、前記方法。

【0312】

態様４７．光に対する応答性の低下を特徴とする眼障害を治療する方法であって、態様１～１９のいずれか１つに記載のコンジュゲートまたは態様２０～３６のいずれか１つに記載のシステムを、前記眼障害を有する個体の眼に投与することを含む、前記方法。

【0313】

態様４８．前記眼障害が遺伝性網膜変性疾患である、態様４７に記載の方法。

【0314】

態様４９．前記疾患が網膜色素変性症または加齢黄斑変性症である、態様４８に記載の方法。

【0315】

態様５０．
ａ）態様１～１９のいずれか１つに記載のコンジュゲートと；
ｂ）薬学的に許容される賦形剤と
を含む、組成物。

【0316】

態様５１．滅菌されており、発熱物質を含まない、態様５０に記載の組成物。

【0317】

態様５２．前記薬学的に許容される賦形剤がシクロデキストリンを含む、態様５０または態様５１に記載の組成物。

【0318】

態様５３．前記シクロデキストリンが、α－シクロデキストリン、β－シクロデキストリン、γ－シクロデキストリン、または誘導体化シクロデキストリンである、態様５２に記載の組成物。

【0319】

態様５４．前記コンジュゲートがナノ粒子内にカプセル化されている、態様５０～５３のいずれか１つに記載の組成物。

【0320】

態様５５．前記ナノ粒子がナノミセル、リポソーム、ナノスフェア、またはナノカプセルである、態様５４に記載の組成物。

【0321】

態様５６．
ａ）態様５０～５５のいずれか１つに記載の組成物を含む容器と；
ｂ）個体の眼に組成物を導入するための手段と
を含む、医療装置。

【0322】

態様５７．個体の眼に組成物を導入するための手段が針を含む、態様５６に記載の装置。

【0323】

態様５８．前記容器が注射器を含む、態様５６または態様５７に記載の装置。

【0324】

態様５９．滅菌されている、態様５６～５８のいずれか１つに記載の装置。

【0325】

態様６０．
ａ）親和性剤と；
ｂ）分岐鎖リンカーと；
ｃ）それぞれ独立して、
ｉ）光異性化可能な基；及び
ｉｉ）標識、反応基、または第２の親和性剤
を含む、２つ以上の光異性化可能な調節因子と
を含む、コンジュゲート。

【0326】

態様セットＢ
上記の本発明の主題の実施形態を含む態様は、単独でも、１つ以上の他の態様または実施形態と組み合わせても有益であり得る。上記の記載を限定することなく、本開示の特定の非限定的態様が以下に提示される。本開示を読むと当業者には明らかであるように、個々の番号が付された態様のそれぞれは、先行または後続の個々の番号が付された態様のうちのいずれかとともに使用され得るか、または組み合わされ得る。これは、態様のすべてのそのような組み合わせのサポートを提供することを意図し、以下に明示的に記載されている態様の組み合わせに限定しない。

【0327】

態様１．眼内投与のための組成物であって、前記組成物が、
Ａ）コンジュゲートであって、
ａ）親和性剤であって、
ｉ）標的リガンド結合ポリペプチド；または
ｉｉ）標的リガンド結合ポリペプチドに結合するポリペプチド
に特異的に結合する、親和性剤；
ｂ）分岐鎖リンカー；
ｃ）それぞれ独立して、
ｉ）光異性化可能な基；及び
ｉｉ）前記標的リガンド結合ポリペプチドに結合するリガンド
を含む、２つ以上の光異性化可能な調節因子
を含む、前記コンジュゲートと、
Ｂ）眼内投与に適した、薬学的に許容される賦形剤と
を含む、前記組成物。

【0328】

態様２．前記親和性剤がベンジルグアニンを含む、態様１に記載の組成物。

【0329】

態様３．前記親和性剤がクロロアルカンを含む、態様１に記載の組成物。

【0330】

態様４．前記親和性剤がベンジルシトシンを含む、態様１に記載の組成物。

【0331】

態様５．前記親和性剤が抗体を含む、態様１に記載の組成物。

【0332】

態様６．前記親和性剤がアプタマーを含む、態様１に記載の組成物。

【0333】

態様７．前記親和性剤が小分子またはペプチドを含む、態様１に記載の組成物。

【0334】

態様８．前記分岐鎖リンカーが、光異性化可能な調節因子をそれぞれ独立して含む２つ以上のアームを含む、態様１～７のいずれか１つに記載の組成物。

【0335】

態様９．前記分岐鎖リンカーが２つのアームを含む、態様８に記載の組成物。

【0336】

態様１０．前記分岐鎖リンカーが４つのアームを含む、態様８に記載の組成物。

【0337】

態様１１．前記分岐鎖リンカーが、式（ＢＬ）：

（式中、ｎは１～１０の整数である）
である部分を含む、態様１～１０のいずれか１つに記載の組成物。

【0338】

態様１２．ｎが１である、態様１１に記載の組成物。

【0339】

態様１３．ｎが３である、態様１１に記載の組成物。

【0340】

態様１４．前記光異性化可能な基が、アゾベンゼン、環状アゾベンゼン、アゾヘテロアレーン、フルギド、スピロピラン、トリフェニルメタン、チオインジゴ、ジアリールエテン、及び過密アルケンから選択される部分を含む、態様１～１３のいずれか１つに記載の組成物。

【0341】

態様１５．前記光異性化可能な基がアゾベンゼンを含む、態様１４に記載の組成物。

【0342】

態様１６．前記リガンドがアゴニスト、アンタゴニスト、アロステリックモジュレーター、またはブロッカーである、態様１～１５のいずれか１つに記載の組成物。

【0343】

態様１７．前記標的リガンド結合ポリペプチドが、転写調節因子、イオンチャネル、カチオンチャネル、リガンド依存性イオンチャネル、電位依存性イオンチャネル、クオラムセンサー、フェロモン受容体、神経伝達物質受容体、Ｇタンパク質共役受容体、及び酵素から選択される、態様１～１６のいずれか１つに記載の組成物。

【0344】

態様１８．前記カチオンチャネルがカリウムチャネル、ナトリウムチャネル、またはカルシウムチャネルである、態様１７に記載の組成物。

【0345】

態様１９．前記標的リガンド結合ポリペプチドが、グルタミン酸受容体、代謝型グルタミン酸受容体、イオンチャネル型グルタミン酸受容体、イオンチャネル型ニコチン性アセチルコリン受容体、イオンチャネル型ＧＡＢＡ－Ａ受容体、代謝型ＧＡＢＡ－Ｂ受容体、代謝型ドーパミン受容体、イオンチャネル型プリン作動性Ｐ２Ｘ受容体、代謝型プリン作動性Ｐ２Ｙ受容体、代謝型セロトニン受容体、イオンチャネル型セロトニン受容体、イオンチャネル型グリシン受容体、カチオンチャネル、カリウムチャネル、カルシウムチャネル、ナトリウムチャネル、プロトンチャネル、アニオンチャネル、またはクロライドチャネルである、態様１～１６のいずれか１つに記載の組成物。

【0346】

態様２０．前記光異性化可能な基が、可視光に応答して異性化するアゾベンゼンを含む、態様１～１９のいずれか１つに記載の組成物。

【0347】

態様２１．前記リガンドがグルタメートである、態様１～２０のいずれか１つに記載の組成物。

【0348】

態様２２．前記抗体が単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）またはナノボディである、態様５に記載の組成物。

【0349】

態様２３．前記抗体が代謝型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）に特異的であり、任意選択で、前記ｍＧｌｕＲが、ｍＧｌｕＲ２、ｍＧｌｕＲ３、ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ５、またはｍＧｌｕＲ６である、態様２２に記載の組成物。

【0350】

態様２４．滅菌されており、発熱物質を含まない、態様１～２３のいずれか１つに記載の組成物。

【0351】

態様２５．前記薬学的に許容される賦形剤がシクロデキストリンを含む、態様１～２４のいずれか１つに記載の組成物。

【0352】

態様２６．前記シクロデキストリンが、α－シクロデキストリン、β－シクロデキストリン、γ－シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、スルホブチルエーテル－β－シクロデキストリン、または誘導体化シクロデキストリンである、態様２５に記載の組成物。

【0353】

態様２７．前記コンジュゲートがナノ粒子内にカプセル化されている、態様１～２６のいずれか１つに記載の組成物。

【0354】

態様２８．前記ナノ粒子がナノミセル、リポソーム、ナノスフェア、またはナノカプセルである、態様５４に記載の組成物。

【0355】

態様２９．眼内投与のための組成物であって、前記組成物が、
Ａ）システムであって、
ａ）態様１～２３のいずれか１つに記載のコンジュゲート；
ｂ）融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記コンジュゲート中に存在する前記リガンドに対する結合部位を含む、標的リガンド結合ポリペプチド；及び
ｉｉ）前記親和性剤に結合する異種融合パートナー
を含む、前記融合ポリペプチド
を含む、前記システムと、
Ｂ）眼内投与に適した、薬学的に許容される賦形剤と
を含む、前記組成物。

【0356】

態様３０．前記異種融合パートナーが、配列番号１または配列番号４で示されるＳＮＡＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様２９に記載の組成物。

【0357】

態様３１．前記異種融合パートナーが、配列番号２で示されるＣＬＩＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の組成物。

【0358】

態様３２．前記異種融合パートナーが、配列番号３で示されるＨＡＬＯポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の組成物。

【0359】

態様３３．眼内投与のための組成物であって、前記組成物が、
Ａ）システムであって、
ａ）請求項１～２３のいずれか１つに記載のコンジュゲート；
ｂ）融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、
ｉ）前記リガンドに対する結合部位を含む、標的リガンド結合ポリペプチド；及び
ｉｉ）前記親和性剤に結合する異種融合パートナー
を含む、前記核酸
を含む、前記システムと、
Ｂ）眼内投与に適した、薬学的に許容される賦形剤と
を含む、前記組成物。

【0360】

態様３４．前記異種融合パートナーが、配列番号１または配列番号４で示されるＳＮＡＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の組成物。

【0361】

態様３５．前記異種融合パートナーが、配列番号３で示されるＨＡＬＯポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の組成物。

【0362】

態様３６．前記異種融合パートナーが、配列番号２で示されるＣＬＩＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の組成物。

【0363】

態様３７．前記核酸が組換えアデノウイルス随伴ウイルス（ＡＡＶ）ビリオン中に存在する、請求項３３～３６のいずれか１つに記載の組成物。

【0364】

態様３８．前記ＡＡＶビリオンが、対応する野生型カプシドポリペプチドを含むＡＡＶビリオンと比較して、前記ＡＡＶビリオンによる網膜細胞の感染性の増加を提供するバリアントカプシドポリペプチドを含む、請求項３２に記載の組成物。

【0365】

態様３９．眼内投与のための組成物であって、前記組成物が、
Ａ）システムであって、
ａ）態様１～２３のいずれか１つに記載のコンジュゲート；
ｂ）第１の融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記リガンドに対する結合部位を含む、標的リガンド結合ポリペプチド；及び
ｉｉ）異種ポリペプチド
を含む、前記第１の融合ポリペプチド；
ｃ）第２の融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記異種ポリペプチドに結合する抗体；及び
ｉｉ）前記親和性剤に結合する異種融合パートナー
を含む、前記第２の融合ポリペプチド
を含む、前記システムと、
Ｂ）眼内投与に適した、薬学的に許容される賦形剤と
を含む、前記組成物。

【0366】

態様４０．前記親和性剤に結合する前記異種融合パートナーが、配列番号１または配列番号４で示されるＳＮＡＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様３９に記載の組成物。

【0367】

態様４１．前記親和性剤に結合する前記異種融合パートナーが、配列番号３で示されるＨＡＬＯポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様３９に記載の組成物。

【0368】

態様４２．前記親和性剤に結合する前記異種融合パートナーが、配列番号２で示されるＣＬＩＰポリペプチドアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様３９に記載の組成物。

【0369】

態様４３．前記抗体が単鎖Ｆｖまたはナノボディである、態様３９～４２のいずれか１つに記載の組成物。

【0370】

態様４４．前記異種ポリペプチドがエピトープタグである、態様３９～４３のいずれか１つに記載の組成物。

【0371】

態様４５．眼内投与のための組成物であって、前記組成物が、
Ａ）システムであって、
ａ）態様１～２３のいずれか１つに記載のコンジュゲート；
ｂ）融合ポリペプチドであって、
ｉ）前記標的リガンド結合ポリペプチドに特異的に結合する抗体；及び
ｉｉ）ＳＮＡＰポリペプチド、ＨＡＬＯポリペプチド、及びＣＬＩＰポリペプチドから選択される、親和性剤に結合するポリペプチド
を含む、前記融合ポリペプチド
を含む、前記システムと、
Ｂ）眼内投与に適した、薬学的に許容される賦形剤と
を含む、前記組成物。

【0372】

態様４６．光に対する網膜細胞の感受性を増強する方法であって、
前記網膜細胞を光に曝露することを含み、前記網膜細胞が、態様１～２３のいずれか１つに記載のコンジュゲートまたは態様２９～４５のいずれか１つに記載のシステムを含み、前記光が、前記光調節可能なポリペプチドへの前記リガンドの結合をもたらす波長のものであり、前記光調節可能なポリペプチドへの前記リガンドの結合が、光に対する前記網膜細胞の感受性を増加させる、前記方法。

【0373】

態様４７．網膜細胞に光応答性を付与する方法であって、態様１～２３のいずれか１つに記載のコンジュゲートまたは態様２９～４５のいずれか１つに記載のシステムを前記網膜細胞に導入することを含む、前記方法。

【0374】

態様４８．光に対する応答性の低下を特徴とする眼障害を治療する方法であって、態様１～２９のいずれか１つに記載の組成物または態様２９～４５のいずれか１つに記載の組成物を、前記眼障害を有する個体の眼に投与することを含む、前記方法。

【0375】

態様４９．前記眼障害が遺伝性網膜変性疾患である、態様４８に記載の方法。

【0376】

態様５０．前記疾患が網膜色素変性症または加齢黄斑変性症である、態様４９に記載の方法。

【0377】

態様５１．
ａ）態様１～２９のいずれか１つに記載の組成物または態様２９～４５のいずれか１つに記載の組成物を含む、容器と；
ｂ）個体の眼に組成物を導入するための手段と
を含む、医療装置。

【0378】

態様５２．個体の眼に組成物を導入するための手段が針を含む、態様５１に記載の装置。

【0379】

態様５３．前記容器が注射器を含む、態様５１または態様５２に記載の装置。

【0380】

態様５４．滅菌されている、態様５１～５３のいずれか１つに記載の装置。

【実施例】

【0381】

以下の実施例は、当業者に本発明をいかに作製及び使用するかの完全な開示及び説明を提供するために進められ、本願発明者が彼らの発明とみなすものの範囲を限定することを意図するものではなく、また以下の実験が実施された全部または唯一の実験であることを表すことを意図するものでもない。使用される数値（例えば、量、温度等）に関して正確さを確実にするための努力がなされてきたが、いくつかの実験誤差及び偏差が考慮されるべきである。別途示されない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、そして圧力は大気圧または大気圧付近である。例えば、ｂｐ、塩基対（複数可）；ｋｂ、キロベース（複数可）；ｐｌ、ピコリットル（複数可）；ｓまたはｓｅｃ、秒（複数可）；ｍｉｎ、分（複数可）；ｈまたはｈｒ、時間（複数可）；ａａ、アミノ酸（複数可）；ｋｂ、キロベース（複数可）；ｂｐ、塩基対（複数可）；ｎｔ、ヌクレオチド（複数可）；ｉ．ｍ．、筋肉内（筋肉内に）；ｉ．ｐ．、腹腔内（腹腔内に）；ｓ．ｃ．、皮下（皮下に）；などの標準的な略語が使用され得る。

【0382】

実施例１：２×ＢＧＡＧと４×ＢＧＡＧの調製
材料及び方法
一般的な化学的方法
すべての反応は、図１Ａ～１ＫのスキームＳ１～Ｓ１１に概説されている。

【0383】

クロマトグラフィー及び反応用の溶媒は、モレキュラーシーブ上で乾燥状態でまたはＨＰＬＣグレードで購入した。別段の記載がない限り、市販の他の試薬はすべて、さらなる精製を行わずに使用した。ＬＣ－ＭＳは、Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８（１．７μｍ、５０×２．１ｍｍ）を備えたＮｅｘｅｒａ ＵＨＰＬＣ システムに接続されたＳｈｉｍａｄｚｕ ＭＳ２０２０で実行された。緩衝液Ａ：Ｈ_２Ｏ中の０．１％のＦＡ、緩衝液Ｂ：アセトニトリル。典型的な勾配は、０．５分間１０％Ｂ→４．５分間にわたって９０％Ｂへの勾配→０．５分間９０％Ｂ→０．５分間にわたって９９％Ｂへの勾配で、１ｍＬ／分の流速であった。

【0384】

高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａシステムで結合されたＢｒｕｋｅｒ ｍａＸｉｓ ＩＩ ＥＴＤを使用して実行された。機器は、Ｂｒｕｋｅｒｓ ｏｔｏｆＣｏｎｔｒｏｌ ４．１及びＨｙｓｔａｒ ４．１ ＳＲ２（４．１．３１．１）ソフトウェアを介して制御された。取得レートは３Ｈｚに設定し、次のソースパラメーターをポジティブモードエレクトロスプレーイオン化に使用した：エンドプレートオフセット＝５００Ｖ；キャピラリー電圧＝３８００Ｖ；ネブライザーのガス圧＝４５ｐｓｉ；ドライガスフロー＝１０Ｌ／分；乾燥温度＝２５０℃。トランスファー、四重極、コリジョンセルの設定は質量範囲に依存し、それぞれの分析対象物の分子量を考慮して微調整された。内部キャリブレーションには、ナトリウム形式のクラスターを使用した。サンプルは、高速液体クロマトグラフィーによって脱塩された。Ｓｕｐｅｌｃｏ Ｔｉｔａｎ（商標）Ｃ１８ ＵＨＰＬＣ カラム、１．９μｍ、ポアサイズ８０Å、２０×２．１ｍｍ、１０から９８％の０．１％ＦＡを含む水性ＭｅＣＮの２分間の勾配（Ｈ_２Ｏ：Ｃａｒｌ Ｒｏｔｈ ＧｍｂＨ ＋ Ｃｏ． ＫＧ ＲＯＴＩＳＯＬＶ（登録商標）Ｕｌｔｒａ ＬＣ－ＭＳ；ＭｅＣＮ：Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ ＬｉＣｈｒｏｓｏｌｖ（登録商標）Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ｈｙｐｅｒｇｒａｄｅ ｆｏｒ ＬＣ－ＭＳ；ＬＣ－ＭＳのためのＦＡ－Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ ＬｉＣｈｒｏｐｕｒ（登録商標）ギ酸９８％～１００％）を分離に使用した。１０％水性ＡＣＮ（ハイパーグレード）でのサンプル希釈と注入量は、分析対象物のイオン化効率に応じて選択された。したがって、オンカラムローディングは０．２５～５．０ｎｇであった。Ｂｒｕｋｅｒ’ｓ ＤａｔａＡｎａｌｙｓｉｓ ４．４ ＳＲ１ソフトウェアによって、記録されたスペクトルの自動内部再キャリブレーションとデータ分析を実行した。

【0385】

分取ＲＰ－ＨＰＬＣは、Ｓｕｐｅｌｃｏ Ａｓｃｅｎｔｉｓ（登録商標）Ｃ１８ ＨＰＬＣカラム（５μｍ、２５０×２１．２ｍｍ）での生成物収集（２２０、２８０、３６０、または４６０ｎｍにおいて）のための２９９８ＰＤＡ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ ｅ２６９５システムで実行された。緩衝液Ａ：Ｈ_２Ｏ中の０．１％のＴＦＡ、緩衝液Ｂ：アセトニトリル。典型的な勾配は、５分間１０％Ｂ→４５分間にわたって９０％Ｂへの勾配→５分間９０％Ｂ→５分間にわたって９９％Ｂへの勾配で、８ｍＬ／分の流速であった。化合物１、２、２５、及びＢＧ－ＣＯＯＨ、ＢＣ－ＤＢＣＯは以前に記載されていた（Ｂｒｏｉｃｈｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｌｅｖｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。

【0386】

略語：ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン；ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン；ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ＦＡ：ギ酸；Ｓｕ：スクシンイミジル；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＴＳＴＵ：Ｏ－（Ｎ－スクシンイミジル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート。

【0387】

注意事項と観察事項：ＮＨＳエステルの安定性：ＴＳＴＵはＢＧＡＧの合成に使用される最適なカップリング試薬であり、通常数分以内に酸をその対応するＮＨＳ－エステルに変換する。ほとんどのＮＨＳエステルは精製せずにインサイチュで使用されたが、ＲＰ－ＨＰＬＣ（化合物４を参照されたい）及び即時の凍結乾燥によって単離することができる。分解をもたらす凍結融解のサイクルを繰り返さないように、分注して－２０℃で保存することが推奨される。Ｆｍｏｃ脱保護：Ｆｍｏｃは、固相ペプチド合成で広く使用されている標準的なアミン保護基であり、アミドカップリング（ＤＭＦ中の活性化剤を使用）とその後の脱保護（ＤＭＦ中のピペリジンを使用）が高収率で反復的に実行される。これに着想を得て、労力と精製ステップを削減する目的で、ＴＳＴＵを活性化剤としてＤＭＦ中でペプチドカップリングを行い、アミドカップリングが完了した後、５ｖｏｌ％のピペリジンを反応混合物に直接加えた。これは、構造１に基づくすべての青方偏移アゾベンゼン化合物で確実に機能することが我々の手で証明されたが、構造２に基づく赤方偏移アゾベンゼン化合物でこの方法を使用すると、複雑な反応混合物が生じる。ＲＰ－ＨＰＬＣによる精製されるＦｍｏｃ含有化合物を使用して、ＴＳＴＵからＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、及び尿素副生成物を除去し、脱保護試薬としてＭｅＣＮ中のＤＢＵを使用した。実際、これは赤方偏移化合物によって非常によく許容され、以下の手順で使用される場合に注目される。酸に対するＢＧ、ＢＣ、及びＨａｌｏ同類物の安定性：ＢＧＡＧは遊離アミンへのＮＨＢｏｃ基の最終的な脱保護を必要とし、ＴＦＡが最適な脱保護剤であるが、Ｏ－ベンジル化グアニン及びシトシン塩基は強酸に対して不安定であることが示された。ＴＦＡは、予冷したＴＦＡを氷上に置いておけばＢＧ含有化合物とともに使用でき、その除去はロータリーエバポレーターではなく、換気の良い化学フードで穏やかな窒素の流れを適用することによって行われることが判明した。ＢＣ含有化合物は無傷でこの処理を耐えることができず、これが、ＮＨＢｏｃ基が事前に脱保護され、歪み促進アルキンアジドクリック反応が別の直交する方法で実行される理由である。しかしながら、Ｈａｌｏ基は、室温でニートＴＦＡに対して不活性である。

【0388】

ＮＨＳエステルを生成するための一般的なプロトコールＡ：１ｍＬのバイアルに１．０当量のＤＭＦに溶解した酸（１ｍＬ／１０ｍｇ）及び４．０当量のＤＩＰＥＡを入れ、その後１．１当量のＴＳＴＵを一度に加えた（１ｍｇ未満の量のＴＳＴＵの場合、ＴＳＴＵを過剰に加えないことが重要であるため、原液を調製した）。活性ＮＨＳエステルを１５分間形成させ、さらに精製することなく使用した。

【0389】

ペプチドカップリング及びインサイチュＦｍｏｃ脱保護の一般手順Ｂ：１ｍＬのバイアルに１．０当量のＤＭＦに溶解したアミン（１ｍＬ／１０ｍｇ）及び４．０当量のＤＩＰＥＡを入れた。予め形成されたＮＨＳエステル（セクション１．３）を１滴ずつ加え、反応混合物を室温で攪拌した。ＬＣＭＳに従って完全な変換が見られる（通常、３０分未満）と、５ｖｏｌ％のピペリジンを反応混合物に加え、反応物をさらに１０分間攪拌した後、５ｖｏｌ％のＨＯＡｃ及び１０ｖｏｌ％の水を添加してクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。

【0390】

分岐のためのペプチドカップリングの一般手順Ｃ：１ｍＬのバイアルに３．０当量のＤＭＦに溶解したアミン（１ｍＬ／１０ｍｇ）及び８．０当量のＤＩＰＥＡを入れた。ビスＮＨＳエステル４（１．０当量）を同量のＤＭＦに溶解し、激しく攪拌しながらゆっくりと滴加した。添加の順序と速度は、副生成物（すなわち、コハク酸のイミド、モノアミド）を最小限に抑えるために重要である。ＬＣＭＳに従って完全な変換が見られると、反応物を直接脱保護またはクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた（下記を参照されたい）。

【0391】

Ｂｏｃ脱保護の一般手順Ｄ：１５ｍＬファルコンチューブにＢｏｃ保護化合物を入れ、氷浴に入れた。予冷した（４℃）ＴＦＡをニートで加えた。反応混合物をボルテックスして均一性を確保し、１５分間氷上に戻し、穏やかな窒素流下ですべての揮発性物質を除去した。残留物はＤＭＦ／水（９／１）で溶解してＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。注：アゾベンゼンを含む反応混合物は、ＴＦＡを添加すると濃い赤色になった。

【0392】

合成
５－（（２－（２－（（６－クロロヘキシル）オキシ）エトキシ）エチル）アミノ）－５－オキソペンタン酸（ハロ－ＣＯＯＨ）
４ｍＬのドラムバイアルに１００ｍｇ（３１０μｍｏｌ、１．０当量）のＨａｌｏＮＨＢｏｃを入れ、１ｍＬのニートＴＦＡを加えた。溶液を室温で５分間静置した後、穏やかな窒素流下ですべての揮発性物質を除去した。１ｍＬのＤＭＦと１６０μＬのＤＩＰＥＡを加えた後、３５．３ｍｇ（３１０μｍｏｌ、１．０当量）の無水グルタル酸を一度に加えた。反応混合物を一晩インキュベートした後、１６０μＬのＨＯＡｃでクエンチし、水で希釈し、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけ、凍結乾燥後に９２ｍｇ（２７４μｍｏｌ）の所望の生成物を透明な油状物として８８％の収率で得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１５Ｈ_２９ＣｌＮＯ_５ ［Ｍ＋Ｈ］^＋の理論値：３３８．１７２９、実測値：３３８．１７２８。

【0393】

ビス（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）－Ｄ－グルタミン酸（４）
４ｍＬのドラムバイアルに、３ｍＬのＤＭＳＯに溶解した３００ｍｇ（８１２μｍｏｌ、１．０当量）の（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル－Ｄ－グルタミン酸（３）と８５０μＬのＤＩＰＥＡを入れ、その後９７８ｍｇ（３．２５ｍｍｏｌ、４．０当量）のＴＳＴＵを一度に添加した。反応混合物を１時間激しく攪拌した後、８５０μＬのＨＯＡｃと２００μＬの水を加えてクエンチし、分取ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。所望の生成物は、凍結乾燥後に白色の粉末として３５％の収率（１６１ｍｇ、２８６μｍｏｌ）で得られた。注：加水分解を抑制するために、ＨＰＬＣシステムからの溶出後の即時凍結乾燥を強く推奨する。ＮＨＳエステルも加水分解する複数回の凍結融解サイクルを避けるために、生成物を分注した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２８Ｈ_２６Ｎ_３Ｏ_１０［Ｍ＋Ｈ］^＋の理論値：５６４．１６１３、実測値：５６４．１６１４。

【0394】

（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（２，２’－（（（Ｒ）－２－アミノペンタンジイオル）ビス（アザンジイル））ビス（アセチル））ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））ビス（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸）（５）

【0395】

５を一般手順Ｃに従って調製し、反応混合物に５ｖｏｌ％のピペリジンを添加することによりインサイチュで脱保護した。反応物をさらに１０分間攪拌した後、５ｖｏｌ％のＨＯＡｃ及び１０ｖｏｌ％の水を添加してクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_６１Ｈ_７９Ｎ_１３Ｏ_１８［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の理論値：６４０．７８２８、実測値：６４０．７８３５。

【0396】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（（Ｒ）－１－アミノ－４１－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバモイル）－３９，４４－ジオキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサ－４０，４５－ジアザヘプタテトラコンタン－４７－アミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）－４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸（６）

【0397】

６は、一般手順Ｂに従って調製されたが、第１のステップは５０℃で実施された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_８８Ｈ_１３２Ｎ_１４Ｏ_３１［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の理論値：９４０．４５８６、実測値：９４０．４５８２。

【0398】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（（Ｒ）－１－（４－（（（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）メチル）フェニル）－４９－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバモイル）－３，７，４７，５２－テトラオキソ－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４－ドデカオキサ－２，８，４８，５３－テトラアザペンタペンタコンタン－５５－アミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）－４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸（７）

【0399】

７は、ピペリジンを添加せずに、一般手順Ａに従って調製されたＢＧ－ＣＯＯＳｕを用いて、一般手順Ｂに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１０６Ｈ_１５０Ｎ_２０Ｏ_３４［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の理論値：１１２４．０３２１、実測値：１１２４．０３２７。

【0400】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－アミノ－４－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（（Ｒ）－４９－（３－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－アミノ－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－３－オキソプロピル）－１－（４－（（（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）メチル）フェニル）－３，７，４７，５０－テトラオキソ－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４－ドデカオキサ－２，８，４８，５１－テトラアザトリペンタコンタン－５３－アミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）ペンタン二酸（^２ｘＢＧＡＧ_１２）

【0401】

^２ｘＢＧＡＧ_１２は、一般手順Ｄに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_９６Ｈ_１３４Ｎ_２０Ｏ_３０［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の理論値：１０３２．９７９７、実測値：１０３２．９７８７。

【0402】

（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（２，２’－（（（Ｒ）－２－（５－（（４－（（（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）メチル）ベンジル）アミノ）－５－オキソペンタンアミド）ペンタンジオイル）ビス（アザンジイル））ビス（アセチル））ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））ビス（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸）（８）

【0403】

８は、ピペリジンを添加せずに、第１のステップを５０℃で実行して一般手順Ａに従って調製されたＢＧ－ＣＯＯＳｕを用いて、一般手順Ｂに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_７９Ｈ_９５Ｎ_１９Ｏ_２１［Ｍ－２Ｈ］^２－の理論値：８２１．８４０２、実測値：８２１．８４１３。

【0404】

（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（２，２’－（（（Ｒ）－２－（５－（（４－（（（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）メチル）ベンジル）アミノ）－５－オキソペンタンアミド）ペンタンジオイル）ビス（アザンジイル））ビス（アセチル））ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））ビス（２－アミノペンタン二酸）（^２ｘＢＧＡＧ_０）

【0405】

^２ｘＢＧＡＧ_０は、一般手順Ｄに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_６９Ｈ_７９Ｎ_１９Ｏ_１７［Ｍ－２Ｈ］^２－の理論値：７２１．７８７８、実測値：７２１．７８７０。

【0406】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（１－アミノ－３９－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサ－４０－アザドテトラコンタン－４２－アミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）－４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸（９）

【0407】

９は、一般手順Ｂに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_５５Ｈ_９０Ｎ_７Ｏ_２１［Ｍ＋Ｈ］^＋の理論値：１１８４．６１８４、実測値：１１８４．６１７６。

【0408】

（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（（Ｒ）－４５－アミノ－４，４４，４８，８８－テトラオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５－テトラコサオキサ－３，４３，４９，８９－テトラアザヘノナコンタンジオイル）ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））ビス（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸）（１０）

【0409】

１０を一般手順Ｃに従って調製し、反応混合物に５ｖｏｌ％のピペリジンを添加することによりインサイチュで脱保護した。反応物をさらに１０分間攪拌した後、５ｖｏｌ％のＨＯＡｃ及び１０ｖｏｌ％の水を添加してクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１１５Ｈ_１８６Ｎ_１５Ｏ_４４［Ｍ＋３Ｈ］^３＋の理論値：８２７．４２６４、実測値：８２４．４２６１。

【0410】

（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（（Ｒ）－４５－（５－（（４－（（（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）メチル）ベンジル）アミノ）－５－オキソペンタンアミド）－４，４４，４８，８８－テトラオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５－テトラコサオキサ－３，４３，４９，８９－テトラアザヘノナコンタンジオイル）ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））ビス（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸）（１１）

【0411】

１１は、ピペリジンを添加せずに、第１のステップを５０℃で実行して一般手順Ａに従って調製されたＢＧ－ＣＯＯＳｕを用いて、一般手順Ｂに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１３３Ｈ_２０４Ｎ_２１Ｏ_４７［Ｍ＋３Ｈ］^３＋の理論値：９４９．４７４４、実測値：９４９．４７４７。

【0412】

（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（（Ｒ）－４５－（５－（（４－（（（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）メチル）ベンジル）アミノ）－５－オキソペンタンアミド）－４，４４，４８，８８－テトラオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５－テトラコサオキサ－３，４３，４９，８９－テトラアザヘノナコンタンジオイル）ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））ビス（２－アミノペンタン二酸）（^２ｘＢＧＡＧ_{１２，ｖ２}）

【0413】

^２ｘＢＧＡＧ_{１２，ｖ２}は、一般手順Ｄに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１２３Ｈ_１８８Ｎ_２１Ｏ_４３［Ｍ＋３Ｈ］^３＋の理論値：８８２．７７２８、実測値：８８２．７７２３。

【0414】

（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（（Ｒ）－４５－アミノ－４，４４，４８，８８－テトラオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５－テトラコサオキサ－３，４３，４９，８９－テトラアザヘノナコンタンジオイル））ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））ビス（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸）（１２）

【0415】

１２を一般手順Ｃに従って調製し、反応混合物に５ｖｏｌ％のピペリジンを添加することによりインサイチュで脱保護した。反応物をさらに１０分間攪拌した後、５ｖｏｌ％のＨＯＡｃ及び１０ｖｏｌ％の水を添加してクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１１５Ｈ_１８６Ｎ_１５Ｏ_４４［Ｍ＋３Ｈ］^３＋の理論値：８２７．４２６４、実測値：８２７．４２５５。

【0416】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－［３－（｛４－［（１Ｅ）－２－［４－（２－｛１－［（４Ｒ）－４－［（２Ｒ）－２－アミノ－４－｛［（１Ｒ）－１，３－ビス［（３８－｛［（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）メチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］プロピル］カルバモイル｝ブタンアミド］－４－［（３８－｛［（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）メチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］ブタンアミド］－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－アミド｝アセトアミド）フェニル］ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）プロピル］－４－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝ペンタン二酸（１３）

【0417】

１３は、一般手順Ｂに従って調製されたが、第１のステップは５０℃で実施された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２３５Ｈ_３７５Ｎ_３１Ｏ_９０［Ｍ＋４Ｈ］^４＋の理論値：１２８６．３９４０、実測値：１２８６．３９２５。

【0418】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－［３－（｛４－［（１Ｅ）－２－［４－（２－｛１－［（４Ｒ）－４－［（２Ｒ）－２－（４－｛［（４－｛［（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ］メチル｝フェニル）メチル］カルバモイル｝ブタンアミド）－４－｛［（１Ｒ）－１，３－ビス［（３８－｛［（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）メチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］プロピル］カルバモイル｝ブタンアミド］－４－［（３８－｛［（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）メチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］ブタンアミド］－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－アミド｝アセトアミド）フェニル］ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）プロピル］－４－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝ペンタン二酸（１４）

【0419】

１４は、ピペリジンを添加せずに、一般手順Ａに従って調製されたＢＧ－ＣＯＯＳｕを用いて、一般手順Ｂに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２５３Ｈ_１３８５Ｎ_３７Ｏ_９３［Ｍ＋４Ｈ］^４＋の理論値：１３６０．１８０７、実測値：１３６０．１８０４。

【0420】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－アミノ－４－［３－（｛４－［（１Ｅ）－２－［４－（２－｛１－［（４Ｒ）－４－［（３８－｛［（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－アミノ－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）メチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］－４－［（２Ｒ）－２－（４－｛［（４－｛［（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ］メチル｝フェニル）メチル］カルバモイル｝ブタンアミド）－４－｛［（１Ｒ）－１，３－ビス［（３８－｛［（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－アミノ－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）メチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］プロピル］カルバモイル｝ブタンアミド］ブタンアミド］－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－アミド｝アセトアミド）フェニル］ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）プロピル］ペンタン二酸（^４ｘＢＧＡＧ_１２）

【0421】

^４ｘＢＧＡＧ_１２は、一般手順Ｄに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２３３Ｈ_３６３Ｎ_３７Ｏ_８５［Ｍ＋６Ｈ］^６＋の理論値：８４０．２５４１、実測値：８４０．２５３３。

【0422】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（（Ｒ）－１－アジド－４１－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバモイル）－３９，４４－ジオキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサ－４０，４５－ジアザヘプタテトラコンタン－４７－アミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）－４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸（１５）

【0423】

１５は、脱保護のためにピペリジンを添加することなく、一般手順Ｂに従って調製された。粗製物をＲＰ－ＨＰＬＣにかけ、アゾベンゼン含有画分を収集し、乾燥させ、さらなる特性評価を行わずに次のステップに供した。

【0424】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－アミノ－４－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（（Ｒ）－４１－（３－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－アミノ－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－３－オキソプロピル）－１－アジド－３９，４２－ジオキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサ－４０，４３－ジアザペンタテトラコンタン－４５－アミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）ペンタン二酸（１６）

【0425】

１６は、一般手順Ｄに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_７８Ｈ_１１５Ｎ_１６Ｏ_２７［Ｍ＋３Ｈ］^３＋の理論値：５６９．２７００、実測値：５６９．２７０５。

【0426】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－アミノ－４－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（（Ｒ）－４１－（３－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－アミノ－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－３－オキソプロピル）－１－（８－（４－（（４－（（（４－アミノピリミジン－２－イル）オキシ）メチル）ベンジル）アミノ）－４－オキソブタノイル）－８，９－ジヒドロ－３Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｄ］アゾシン－３－イル）－３９，４２－ジオキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサ－４０，４３－ジアザペンタテトラコンタン－４５－アミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）ペンタン二酸（^２ｘＢＣＡＧ_１２）

【0427】

４ｍＬのドラムバイアルに、ＭｅＯＨに溶解した１６を入れた。ＢＣ－ＤＢＣＯを一度に添加し、反応混合物を一晩インキュベートした後、穏やかな窒素流下ですべての揮発性物質を除去した。粗製物をＤＭＦ及び水（９／１）に溶解し、ＲＰ－ＨＰＬＣ精製にかけて、凍結乾燥後に^２ｘＢＣＡＧ_１２を黄色の粉末として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１０９Ｈ_１４２Ｎ_２１Ｏ_３０［Ｍ＋３Ｈ］^３＋の理論値：７４２．００８２、実測値：７４２．００８０。

【0428】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（６１－クロロ－４，４４，４８－トリオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，５２，５５－テトラデカオキサ－３，４３，４９－トリアザヘンヘキサコンタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）ペンタン二酸（１７）

【0429】

１７は、ピペリジンを添加せずに、一般手順Ａに従って調製されたＨａｌｏ－ＣＯＯＳｕを用いて、一般手順Ｂに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_７０Ｈ_１１７ＣｌＮ_８Ｏ_２５［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の理論値：７５３．３９１３、実測値：７５３．３９１７。

【0430】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－アミノ－４－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（６１－クロロ－４，４４，４８－トリオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，５２，５５－テトラデカオキサ－３，４３，４９－トリアザヘンヘキサコンタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）ペンタン二酸（ＣｌＡＧ_１２）

【0431】

ＣｌＡＧ_１２は、一般手順Ｄに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_６５Ｈ_１０９ＣｌＮ_８Ｏ_２３［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の理論値：７０２．３６４２、実測値：７０２．３６４２。

【0432】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（（Ｒ）－５－（３－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－３－オキソプロピル）－６４－クロロ－４，７，４７，５１－テトラオキソ－１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，５５，５８－テトラデカオキサ－３，６，４６，５２－テトラアザテトラヘキサコンタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）ペンタン二酸（１８）

【0433】

１８は、ピペリジンを添加せずに、一般手順Ａに従って調製されたＨａｌｏ－ＣＯＯＳｕを用いて、一般手順Ｂに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１０３Ｈ_１５８ＣｌＮ_１５Ｏ_３５［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の理論値：１１００．５３７７、実測値：１１００．５３７０。

【0434】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－アミノ－４－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（（Ｒ）－５－（３－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－アミノ－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－３－オキソプロピル）－６４－クロロ－４，７，４７，５１－テトラオキソ－１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，５５，５８－テトラデカオキサ－３，６，４６，５２－テトラアザテトラヘキサコンタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）ペンタン二酸（^２ｘＣｌＡＧ_１２）

【0435】

^２ｘＣｌＡＧ_１２は、一般手順Ｄに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_９３Ｈ_１４２ＣｌＮ_１５Ｏ_３１［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の理論値：１０００．４８５２、実測値：１０００．４８５３。

【0436】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（（１－アミノ－３９－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサ－４０－アザドテトラコンタン－４２－イル）アミノ）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）－４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸（１９）

【0437】

１９は、ピペリジンを添加せずに一般手順Ｂに従って調製された。代わりに、ＲＰ－ＨＰＬＣ精製後にＦｍｏｃ保護化合物が得られ、乾燥させ、５％のＤＢＵを添加してＭｅＣＮ中に再溶解した。反応混合物を１時間インキュベートした後、ＨＯＡｃ及び水の添加によりクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_５５Ｈ_９３Ｎ_７Ｏ_２０［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の理論値：５８５．８２３２、実測値：５８５．８２３２。

【0438】

（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（（Ｒ）－４５－アミノ－４，４４，４８，８８－テトラオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５－テトラコサオキサ－３，４３，４９，８９－テトラアザヘノナコンタン－１，９１－ジイル）ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））ビス（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸）（２０）

【0439】

２０は、ピペリジンを添加せずに一般手順Ｂに従って調製された。代わりに、ＲＰ－ＨＰＬＣ精製後にＦｍｏｃ保護化合物が得られ、乾燥させ、５％のＤＢＵを添加してＭｅＣＮ中に再溶解した。反応混合物を１時間インキュベートした後、ＨＯＡｃ及び水の添加によりクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１１５Ｈ_１９０Ｎ_１５Ｏ_４２［Ｍ＋３Ｈ］^３＋の理論値：８１８．１０６９、実測値：８１８．１０７５。

【0440】

（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（（Ｒ）－４５－（５－（（４－（（（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）メチル）ベンジル）アミノ）－５－オキソペンタンアミド）－４，４４，４８，８８－テトラオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５－テトラコサオキサ－３，４３，４９，８９－テトラアザヘノナコンタン－１，９１－ジイル）ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））ビス（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン二酸）（２１）

【0441】

２１は、ピペリジンを添加せずに、第１のステップを５０℃で実行して一般手順Ａに従って調製されたＢＧ－ＣＯＯＳｕを用いて、一般手順Ｂに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１３３Ｈ_２０８Ｎ_２１Ｏ_４５［Ｍ＋３Ｈ］^３＋の理論値：９４０．１５４９、実測値：９４０．１５４６。

【0442】

（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（（Ｒ）－４５－（５－（（４－（（（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）メチル）ベンジル）アミノ）－５－オキソペンタンアミド）－４，４４，４８，８８－テトラオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５－テトラコサオキサ－３，４３，４９，８９－テトラアザヘノナコンタン－１，９１－ジイル）ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））ビス（２－アミノペンタン二酸）（^２ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}）

【0443】

^２ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、一般手順Ｄに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１２３Ｈ_１９３Ｎ_２１Ｏ_４１［Ｍ＋４Ｈ］^４＋の理論値：６５５．３４１８、実測値：６５５．３４１６。

【0444】

ジメチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（４－（（４－（（Ｅ）－（４－（（１－アミノ－３９－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサ－４０－アザドテトラコンタン－４２－イル）アミノ）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－４－オキソブチル）－４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタンジオエート（２３）

【0445】

２３は、ピペリジンを添加せずに一般手順Ｂに従って調製された。代わりに、ＲＰ－ＨＰＬＣ精製後にＦｍｏｃ保護化合物が得られ、乾燥させ、５％のＤＢＵを添加してＭｅＣＮ中に再溶解した。反応混合物を１時間インキュベートした後、ＨＯＡｃ及び水の添加によりクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_５７Ｈ_９７Ｎ_７Ｏ_２０［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の理論値：５９９．８３８９、実測値：５９９．８３８７。

【0446】

テトラメチル４，４’－（（（（（１Ｅ，１’Ｅ）－（（（（Ｒ）－４５－アミノ－４，４４，４８，８８－テトラオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５－テトラコサオキサ－３，４３，４９，８９－テトラアザヘノナコンタン－１，９１－ジイル）ビス（アザンジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（ジアゼン－２，１－ジイル））ビス（４，１－フェニレン））ビス（アザンジイル））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル））（２Ｓ，２’Ｓ，４Ｓ，４’Ｓ）－ビス（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタンジオエート）（２４）

【0447】

２４は、ピペリジンを添加せずに一般手順Ｂに従って調製された。代わりに、ＲＰ－ＨＰＬＣ精製後にＦｍｏｃ保護化合物が得られ、乾燥させ、５％のＤＢＵを添加してＭｅＣＮ中に再溶解した。反応混合物を１時間インキュベートした後、ＨＯＡｃ及び水の添加によりクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１１９Ｈ_１９８Ｎ_１５Ｏ_４２［Ｍ＋３Ｈ］^３＋の理論値：８３６．７９４５、実測値：８３６．７９４０。

【0448】

１，５－ジメチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－［３－（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（２－｛１－［（４Ｒ）－４－［（２Ｒ）－２－アミノ－４－｛［（１Ｒ）－１，３－ビス［（３８－｛［２－（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝－８－メトキシ－５－（メトキシカルボニル）－８－オキソオクタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝アミノ）エチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］プロピル］カルバモイル｝ブタンアミド］－４－［（３８－｛［２－（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝－８－メトキシ－５－（メトキシカルボニル）－８－オキソオクタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝アミノ）エチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］ブタンアミド］－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－アミド｝エチル）アミノ］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）プロピル］－４－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝ペンタンジオエート（２５）

【0449】

２５は、ピペリジンを添加せずに一般手順Ｂに従って調製された。代わりに、ＲＰ－ＨＰＬＣ精製後にＦｍｏｃ保護化合物が得られ、乾燥させ、５％のＤＢＵを添加してＭｅＣＮ中に再溶解した。反応混合物を１時間インキュベートした後、ＨＯＡｃ及び水の添加によりクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２４３Ｈ_３９９Ｎ_３１Ｏ_８６［Ｍ＋４Ｈ］^４＋の理論値：１２８２．４４６０、実測値：１２８２．４４４７。

【0450】

１，５－ジメチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－［３－（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（２－｛１－［（４Ｒ）－４－［（２Ｒ）－２－（４－｛［（４－｛［（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ］メチル｝フェニル）メチル］カルバモイル｝ブタンアミド）－４－｛［（１Ｒ）－１，３－ビス［（３８－｛［２－（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝－８－メトキシ－５－（メトキシカルボニル）－８－オキソオクタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝アミノ）エチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］プロピル］カルバモイル｝ブタンアミド］－４－［（３８－｛［２－（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝－８－メトキシ－５－（メトキシカルボニル）－８－オキソオクタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝アミノ）エチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］ブタンアミド］－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－アミド｝エチル）アミノ］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）プロピル］－４－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝ペンタンジオエート（２６）

【0451】

４ｍＬのドラムバイアルに２５（１．０当量）、ＢＧ－ＣＯＯＨ（１．１当量）を入れ、ＤＩＰＥＡ（４．０当量）及びＤＭＦに溶解した後、ＨＢＴＵ（１．２当量）を一度に加えた。混合物を２時間インキュベートした後、５ｖｏｌ％のＨＯＡｃを加えてクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２６１Ｈ_４１７Ｎ_３７Ｏ_８９［Ｍ＋４Ｈ］^４＋の理論値：１３７４．２３２８、実測値：１３７４．２３０５。

【0452】

（２Ｓ，４Ｓ）－２－アミノ－４－［３－（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（２－｛１－［（４Ｒ）－４－［（３８－｛［２－（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－アミノ－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝アミノ）エチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］－４－［（２Ｒ）－２－（４－｛［（４－｛［（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ］メチル｝フェニル）メチル］カルバモイル｝ブタンアミド）－４－｛［（１Ｒ）－１，３－ビス［（３８－｛［２－（｛４－［（１Ｅ）－２－｛４－［（５Ｓ，７Ｓ）－７－アミノ－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝アミノ）エチル］カルバモイル｝－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサオクタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］プロピル］カルバモイル｝ブタンアミド］ブタンアミド］－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－アミド｝エチル）アミノ］フェニル｝ジアゼン－１－イル］フェニル｝カルバモイル）プロピル］ペンタン二酸（^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}）

【0453】

１５ｍＬのファルコンチューブに２６を入れ、ＭｅＯＨ／１ＭのＬｉＯＨ（１／１）に溶解した。室温で１時間放置し、５ｖｏｌ％のＨＯＡｃを加えてクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけた。アゾベンゼン含有画分（２７）をプールして凍結乾燥し、手順１．６に従って０℃でニートＴＦＡ中で最終脱保護を行った。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２３３Ｈ_３７２Ｎ_３７Ｏ_８１［Ｍ＋７Ｈ］^７＋の理論値：７１２．３７３６、実測値：７１２．３７３３。

【0454】

１－（６－（（（Ｓ）－５－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－カルボキシペンチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（３０）

【0455】

丸底フラスコに３５．０ｍｇ（７２．４μｍｏｌ、１．０当量）の１－（５－カルボキシペンチル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（２９）（Ｕｅｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０１１）を入れ、１．５ｍＬのＤＭＳＯ及び５０μＬのＤＩＰＥＡに溶解した。ＴＳＴＵ（２１．８ｍｇ、７２．４μｍｏｌ、１．０当量）を一度に加え、混合物を３０分間インキュベートした後、３２．０ｍｇ（８６．８μｍｏｌ、１．２当量）のＦｍｏｃ－Ｌｙｓ－ＯＨ（２８）を一度に加えた。反応混合物をさらに１時間インキュベートした後、５０μＬのＨＯＡｃを加えてクエンチし、ＲＰ－ＨＰＬＣにかけ、凍結乾燥後に２６ｍｇ（３２．２μｍｏｌ）の所望の生成物を青色の粉末として４５％の収率で得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_５３Ｈ_６１Ｎ_４Ｏ_５［Ｍ］^＋の理論値：８３３．４６３６、実測値：８３３．４６３９。

【0456】

１－（６－（（（Ｓ）－５－アミノ－６－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ））－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（３１）

【0457】

３１は、一般手順Ｂに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_６６Ｈ_８５Ｎ_１０Ｏ_１０［Ｍ］^＋の理論値：１１７７．６４４５、実測値：１１７７．６４５２。

【0458】

１－（（Ｓ）－１－アミノ－４１－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバモイル）－３９，４７－ジオキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサ－４０，４６－ジアザドペンタコンタン－５２－イル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（３２）

【0459】

３２は、一般手順Ｂに従って調製され、第１のステップは５０℃で実施された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_９３Ｈ_１３９Ｎ_１１Ｏ_２３［Ｍ＋Ｈ］^２＋の理論値：８８９．５０３３、実測値：８８９．５０３７。

【0460】

１－（（Ｓ）－１－（４－（（（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）メチル）フェニル）－４９－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバモイル）－３，７，４７，５５－テトラオキソ－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４－ドデカオキサ－２，８，４８，５４－テトラアザヘキサコンタン－６０－イル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（３３）

【0461】

３３は、ピペリジンを添加せずに、一般手順Ａに従って調製されたＢＧ－ＣＯＯＳｕを用いて、一般手順Ｂに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１１１Ｈ_１５８Ｎ_１７Ｏ_２４［Ｍ＋２Ｈ］^３＋の理論値：７１５．３８５９、実測値：７１５．３８５９。

【0462】

１－（（Ｓ）－４９－（（２－（（４－（（Ｅ）－（４－（（５Ｓ，７Ｓ）－７－アミノ－５，７－ジカルボキシヘプタンアミド）フェニル）ジアゼニル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバモイル）－１－（４－（（（２－アミノ－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）メチル）フェニル）－３，７，４７，５５－テトラオキソ－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４－ドデカオキサ－２，８，４８，５４－テトラアザヘキサコンタン－６０－イル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（ＢＧＡＧ_１２－Ｃｙ５）

【0463】

ＢＧＡＧ_１２－Ｃｙ５は、一般手順Ｄに従って調製された。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１０６Ｈ_１５０Ｎ_１７Ｏ_２４［Ｍ＋２Ｈ］^３＋の理論値：６８２．０３５１、実測値：６８２．０３５４。

【0464】

略語：ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン；ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン；ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ＦＡ：ギ酸；Ｓｕ：スクシンイミジル；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＴＳＴＵ：Ｏ－（Ｎ－スクシンイミジル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート。

【0465】

ＨＥＫ細胞と培養されたニューロンの電気生理学
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞からの全細胞パッチクランプ記録は、以前に記載されたように（Ｆａｒｒａｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，２０１８）、トランスフェクションの２４～４８時間後に実施された。簡潔に述べると、－６０ｍＶでの電圧クランプ記録を高カリウム（１２０ｍＭ）溶液中で行い、受容体活性化時に大きな内向き電流を可能にした。

【0466】

培養された皮質ニューロンの全細胞パッチクランプ記録は、トランスフェクションの４～６日後（１１～１５ＤＩＶ）に、１３８ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのＫＣｌ、１．２ｍＭのＭｇＣｌ_２、２．５ｍＭのＣａＣｌ_２、１０ｍＭのグルコース、及び５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４を含む細胞外溶液中（ｍＭ）で実施した。含まれる細胞内溶液（ｍＭ）：１４０ｍＭのグルコン酸カリウム、１０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＥＧＴＡ、２ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのＣａＣｌ_２、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、２ｍＭのＭｇＡＴＰ、及び０．３ｍＭのＮａ_２ＧＴＰ、ｐＨ７．２。過分極測定のために、細胞は、光スイッチングの前に電流注入で－６０ｍＶに調整された。静止電位が－４０ｍＶ以下の細胞のみを分析した。

【0467】

別段の記載がない限り、適切な細胞外記録溶液中で、細胞を１～１０μＭのＰＯＲＴＬとともに３７℃で４５～６０分間インキュベートした。標識効率は、以前に記載されているように決定された（Ｌｅｖｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。ＣｏｏｌＬＥＤ ｐＥ－４０００を使用して、４０倍の対物レンズを介して視野全体に照明を適用した。サンプル面の光強度は１～２ｍＷ／ｍｍ^２であった。ｐＣｌａｍｐソフトウェアは、データ取得と照明の制御の両方に使用された。すべての薬物はＴｏｃｒｉｓから購入し、重力駆動の灌流システムを使用して適用した。

【0468】

結果
光切り替え可能な、直交する、離れて連結されたリガンド（「ＰＯＲＴＬ」）が設計された。具体的には、ＳＮＡＰ、ＣＬＩＰ、Ｈａｌｏ、及びナノボディベースの標識戦略のために、分岐したＰＯＲＴＬが設計及び特性評価された。

【0469】

ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２にコンジュゲートされた、ベンジルグアニン－アゾベンゼン－グルタメート（「ＢＧＡＧ_ｎ」、ここでｎはＢＧ（ベンジルグアニン）とアゾベンゼン（Ａ）の間で繰り返されるポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）の数である）のプロトタイプシステムの分析が実施された。

【0470】

ＰＯＲＴＬシステムの主な利点は、化学部分の柔軟なミックスアンドマッチングによってＰＯＲＴＬを設計及び合成できる能力である（図２Ａ）。ＣＬＩＰでタグ付けされたｍＧｌｕＲ２の高効率の光学的制御を可能にするために、直交標識を有するＳＮＡＰのバリアント（Ｇａｕｔｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８）、「二重ＢＣＡＧ_１２」（^２ｘＢＣＡＧ_１２）を合成した（スキームＳ６（図１Ｆ））。^２ｘＢＧＡＧ_１２と同様に、^２ｘＢＣＡＧ_１２は、ＣＬＩＰ－ｍＧｌｕＲ２のほぼ完全な光学的制御を可能にした（図２Ｂ～２Ｄ）。分岐は、ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現する細胞に適用した場合、光電流を示さなかった^２ｘＢＣＡＧ_１２の特異性を変更しなかった（１ｍＭグルタミン酸に対して２．８±０．３％、ｎ＝３細胞）。

【0471】

ＰＯＲＴＬのレパートリーを第３の自己標識である直交自殺酵素にさらに拡大することを目標に、塩化アルキルと特異的に反応するＨａｌｏタグ（Ｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，２００８）を使用した。ＣｌＡＧ_１２（スキームＳ１、Ｓ７（図１Ａ及び図１Ｇ））を合成した。正常なグルタミン酸感受性を示すＮ末端Ｈａｌｏタグ付きｍＧｌｕＲ２構築物をクローニングした。Ｈａｌｏ標的化ＰＯＲＴＬの分岐が光スイッチングを増強するという仮説に基づいて、「ｄｏｕｂｌｅＣｌＡＧ_１２」（^２ｘＣｌＡＧ_１２）（スキームＳ８（図１Ｈ）；図２Ｅ）を合成した。両方のＰＯＲＴＬは、ＢＧＡＧと同一のスペクトル特性を有するｍＧｌｕＲ２の光活性化を示したが（図２Ｆ）、Ｈａｌｏ－ｍＧｌｕＲ２の光活性化の効率は分岐によって増強された（図２Ｆ、２Ｇ）。^２ｘＣｌＡＧ_１２の標識効率が特徴付けられた。ＳＮＡＰタグのＢＧＡＧ標識と同様の濃度依存性が見られ、飽和には１μＭの標識で十分である。この結果は、Ｈａｌｏタグを分岐ＰＯＲＴＬアプローチに導入し、ツールキットを３つの異なる直交タンパク質タグに拡張する。

【0472】

アゾベンゼンベースの光スイッチの主な利点は、化合物の光化学特性を調整できる能力のことである。以前に報告された赤方偏移ＢＧＡＧ_{１２，４６０}により、ｍＧｌｕＲ２の可視光に誘導される高速緩和光活性化が可能になり、視力回復用途を含むいくつかの状況で有利になる（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎ． ８：１８６２）。しかしながら、ＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、おそらく光定常状態でのｃｉｓの集団が減少しているため、ＢＧＡＧ_１２よりもＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の活性化が弱いことを示している（Ｈｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。「ＤｏｕｂｌｅＢＧＡＧ_{１２，４６０}」を合成した（スキームＳ９（図１Ｉ））。ｄｏｕｂｌｅＢＧＡＧ_{１２，４６０}によるＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の可視光光活性化の増強が観察された。第２の分岐を追加することによるわずかな改善を考慮して、４つのアゾベンゼン－グルタメートを含む^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}を設計及び合成した。ｍＧｌｕＲ２のほぼ完全な光活性化をもたらすさらなる増強が観察された（スキームＳ１０（図１Ｊ）；図３Ｈ～Ｊ）。ＢＧＡＧ_１２の双安定アゾベンゼンとは対照的に、ＢＧＡＧ_{１２，４６０}ベースのＰＯＲＴＬは暗所で高速緩和を示し、光活性化の振幅を強度依存にすることができる。ｃｉｓ－アゾベンゼンの重要な集団を生成する能力の増強と一致して、分岐はＢＧＡＧ_{１２，４６０}の光感受性を増加させた。

【0473】

最後に、テザー光薬理学の長期的な目標は、そのような化合物によって提供される光学的制御を、抗体を介したタンパク質の標的化に組み込むことである。ＰＯＲＴＬで標識されたＳＮＡＰタグ付きナノボディからなる「ナノボディ－光スイッチコンジュゲート」（ＮＰＣ）が報告されている。抗ＧＦＰナノボディを含むＮＰＣは、ＧＦＰタグ付きｍＧｌｕＲ２を光活性化できるが、効率は限られている（Ｆａｒｒａｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。試験した他のシステムと同様に、^２ｘＢＧＡＧ_１２は、ｍＧｌｕＲ２のＮＰＣを介した光スイッチングの光スイッチ効率を２倍にした。この結果は、分岐したＰＯＲＴＬが光スイッチの効率を改善するための効果的な一般的な戦略であることをさらに裏付けている。

【0474】

図１Ａ～１Ｊ（Ａ）ＳＮＡＰ、ＣＬＩＰ、及び、Ｈａｌｏタグ付き受容体のＰＯＲＴＬをミックスアンドマッチ設計するための化学部分のツールセット。（Ｂ～Ｄ）^２ｘＢＣＡＧ_１２（Ｂ）は、ＢＣＡＧ_１２と比較してＣＬＩＰ－ｍＧｌｕＲ２光活性化の効率を高める。^＊は統計的有意性を示す（独立ｔ検定、ｐ＝０．００００８）。（Ｅ～Ｇ）^２ｘＣｌＡＧ_１２（Ｅ）は、ＣｌＡＧ_１２（Ｆ、Ｇ）と比較して、Ｈａｌｏ－ｍＧｌｕＲ２の効率を高める。^＊は統計的有意性を示す（独立ｔ検定、ｐ＝０．００６）。（Ｈ～Ｊ）分岐は、ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の可視光媒介（青色のバー＝４６０ｎｍ）の光活性化の効率を高める。^＊は統計的有意性を示す（独立ｔ検定；ＢＧＡＧ_{１２，４６０}と^２ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の間でｐ＝０．０２、^２ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}と^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の間でｐ＝０．００９）。試験された細胞の数は括弧内に示されている。エラーバーはｓ．ｅ．ｍ．を示す。

【0475】

実施例２：４ｘＢＧＡＧによる視力回復
屋内強度で視力回復を提供するために感度を増強するために、それぞれが光活性化グルタミン酸を有する４つの分岐を含むＢＧＡＧ_{１２，４６０}のバージョン（^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}）が使用された。培養細胞において、^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}で効果が約２倍と感度が約５倍増加した。ＡＡＶの硝子体内注射を使用して、盲目のｒｄ１マウスのＲＧＣまたはＯＮ双極細胞（ＯＮ－ＢＣ）にＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を導入した。これらの細胞タイプのそれぞれにおいて、^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２は、自然な光嫌悪行動が回復し、動物は、異なる距離に配置された平行線からなる２つの視覚的手がかりを区別できるようになった。回復した視覚誘導行動の光に対する感度は、１ｘＢＧＡＧの１００倍から約２５０倍に増加した。これは、細胞培養測定から予想されるよりもはるかに高い値である。この増加により、動物は部屋の光の強さでｉＰａｄディスプレイを使用して視覚タスクを実行できるようになった。これは、視覚回復への２コンポーネントアプローチの最初のものである。^４ｘＢＧＡＧは、野生型の視力限界に近づく線パターン認識をサポートすることが判明した。さらに、^４ｘＢＧＡＧは、視覚ディスプレイが８ｃｍ／秒で移動するときに、線パターン認識と野生型視覚をサポートすることが判明した。

【0476】

β－シクロデキストリンに^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}を製剤化すると、１回の注射で少なくとも５週間は光の知覚が回復した。ヒトｍＧｌｕＲ６（ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ６）に基づくバリアントバージョンは、ＨＥＫ２９３細胞のＢＧＡＧ_{１２，４６０}によって光スイッチされることもでき、ｍＧｌｕＲ６の特殊なシグナル伝達カスケードとエフェクターチャネルが含まれている光受容細胞によって放出されるグルタミン酸の主要な受容体であるＯＮ－ＢＣでさらに効果的であり得ることを示唆している。

【0477】

^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲシステムは、ＧＰＣＲオプシンの高感度とＢＧＡＧ－ｍＧｌｕＲの６つの主要な利点：ｉ）堅牢な光応答、ｉｉ）光退色の欠如、ｉｉｉ）速い動力学、ｉｖ）野生型（視力のある）マウスでは機能しない、光受容体入力を失ったＲＧＣに対する選択性を示唆する（すなわち、入力を保持するＲＧＣとの干渉の欠如）、及びｖ）有害作用が生じた場合に中止する能力を組み合わせている。

【0478】

材料及び方法
動物、ＡＡＶ、及び光スイッチ
マウス実験は、カリフォルニア大学動物管理使用委員会の明示的な承認の下で実施された。ｗｔマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）及びｒｄ１マウス（Ｃ３Ｈ）はＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入し、１２時間光／暗サイクルで、食物と水を自由に与えて飼育した。ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２をコードするｃＤＮＡは、ＲＧＣでの発現用のヒトシナプシンプロモーター（ｈｓｙｎ－１）またはＯＮ－ＢＣでの発現用のマウスｇｒｍ６最小プロモーターの４コピーコンカテマー（４×ｇｒｍ６）のいずれかの制御下で確立されたウイルスカセットに挿入され、ＡＡＶ ２／２－４ＹＦカプシドにパッケージ化された。１０^１０～１０^１２個のウイルスゲノムを含むベクターは、マイクロインジェクションによってｒｄ１マウスの眼の硝子体に２μｌの量で送達された。ｒＡＡＶ注射はｐ３０～ｐ６０で、インビボ及びインビトロ実験ではｐ９０～ｐ１６０であった。ＡＡＶは、前述のように作成された。

【0479】

光スイッチの調製
光スイッチ化合物は、Ｂｒｏｉｃｈｈａｇｅｎ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＡＣＳ Ｃｅｎｔ Ｓｃｉ １，３８３－３９３に記載されたプロトコールを使用して合成された。１％ＤＭＳＯ中１ｍＭの最終的な使用液のために、１００％医薬品グレードのＤＭＳＯ（Ｃｒｙｏｓｅｒｖ；Ｂｉｏｎｉｃｈｅ Ｐｈａｒｍａ）中２００ｍＭのＢＧＡＧ_{１２，４６０}（Ｌ－ジアステレオマー）の原液を、滅菌ＰＢＳで１：１００に希釈した。使用液は、投与前に調製するか、冷凍庫に保存して必要に応じて使用するために調製するか、記録浴から回収して再利用のために保存（ＲＴまたは冷凍庫）した。網膜外植片へのＢＧＡＧ_{１２，４６０}またはＢＧＡＧ_１２の適用は、５０μＭ～５０ｎＭのＢＧＡＧ_{１２，４６０}（１％を超えるＤＭＳＯを含むＰＢＳ中）の濃度で２００μＬの容量で実施された。インビボ行動実験では、１ｍＭのＢＧＡＧ_{１２，４６０}溶液（１％ＤＭＳＯを含むＰＢＳ中）の２μＬ量または３．５μＬ量（１μＬの最終硝子体濃度）を、６週間より前にＡＡＶで治療した眼に注射した。インビボ濃度依存実験では、マウスの眼には５．３μＬの容量が含まれていると仮定され、３．５μＭ、１．８２５μＭ、及び０．１８２５μＭのＢＧＡＧ_{１２，４６０}溶液（１％ＤＭＳＯを含むＰＢＳ中）の２μＬの量を眼に注射して、１μＭ、５００ｎＭ、及び５０ｎＭの最終濃度を得た^６２。水和徐放用のＰＢＳ中５％の医薬品グレードのβシクロデキストリン（シクロデックス）をＢＧＡＧ_{１２，４６０}と混合して最終濃度３μＭとし、２μＬをマウスの眼に両側注射した。ＭＡＧ０_４６０を合成し、１００μＭの濃度で２μＬで投与した。

【0480】

組織の調製と免疫組織化学
ＡＡＶ２／２－ｈｓｙｎ－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２処置後４週間を超えるマウスは、硝子体内に１０ｕＭのＢＧコンジュゲートＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ－６４７染料の１ｕＬを注射された。２５時間後、マウスを屠殺し、眼を４％パラホルムアルデヒド（Ｔｅｄ Ｐｅｌｌａ）で固定し（３０分）、網膜を取り出し、組織をブロッキング緩衝液［ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の１０％正常ヤギ血清、１％ＢＳＡ、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００］で室温２時間インキュベートした。ＰＢＳを使用して網膜を完全に洗浄し、ＤＡＰＩ（細胞核染色－青）を含浸させたＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）媒体を使用してスライド上にフラットにマウントした。Ｇａｕｂ．，ｅｔ ａｌ． （２０１４）^１２に以前に記載されるように、さらにＡＡＶ２／２－ｈｓｙｎ－ＬｉＧｌｕＲと共注入された網膜は、ＧｌｕＫ２／Ｋ３に対するモノクローナル抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）にさらされ（ブロッキング緩衝液で１：５００希釈、４℃で一晩）、続いて二次抗ウサギＡｌｅｘａ ４８８抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を適用した（１：１，０００希釈、室温で２時間）。ＢＧコンジュゲートＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ－６４７によるＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２のインビトロ連続標識とＬｉＧｌｕＲで認識されるＧｌｕＫ２サブユニットの抗体染色も、最小限の固定（１０分）を使用して成功裏に達成された。網膜切片の場合、マウント全体をアガロース（Ｓｉｇｍａ）に埋め込み、ビブラトーム（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して中速、最大振動、厚さ２００μｍで横方向に薄切した。網膜凍結切片またはホールマウントでの免疫組織化学に使用される網膜組織を処理し、共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ ＴＣＳ ＳＰ５；Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）で検査した。細胞計数のために、網膜を凍結切片にし、ＤＡＰＩで染色した。１μｍ^３のＺスタック画像（２４切片）は、２０倍の対物レンズを備えたＺｅｉｓｓ ＬＳＭ－８８０ ＮＬＯ Ａｉｒｙｓｃａｎ顕微鏡を使用して得られた。バックグラウンドを最小限に抑え、個別の細胞を区別するためにオフセットを増やして使用し、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアを使用して３Ｄ画像内の個々の細胞を計数して分析を行った。

【0481】

行動分析
２チャンバーの明暗パッシブ回避試験が実行された。約１００μＷｃｍ^－２での白色光（波長範囲）、または０．５～２５μＷｃｍ^－２での青色光（４６０／４５ｎｍ）もしくは緑色光（５３５／５０ｎｍ）を均一に分散した光でチャンバーの上に取り付けた。動物の動きは、シャトルボックス上のＩＲセンサーを使用して追跡された。明るいチャンバーと暗いチャンバーで費やされた時間は、Ｇｒａｐｈｉｃ Ｓｔａｔｅ及びＧｒａｐｈｉｃ Ｓｔａｔｅ ＲＴ（Ｃｏｕｌｂｏｕｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して測定及び分析された。

【0482】

恐怖条件付け実験は、チャンバーの天井に取り付けられた視覚的な合図を提示するＬＥＤスクリーンを備えたＣｏｕｌｂｏｕｒｎシングルショックチャンバーを使用して実行された。動物は、１５分間にわたる０．７ｍＡでの３回のショック試験からなる対または非対の光の合図による恐怖条件付けを受けた。ショックを見越した凍結動作は、ＣｏｕｌｂｏｕｒｎのＦｒｅｅｚｅＦｒａｍｅソフトウェアによって記録され、刺激前に収集された動き動作に正規化された。恐怖応答が刺激遷移に条件付けられているかどうかを判断するために、対のコホートと非対のコホートの間でパフォーマンスを比較した。

【0483】

Ｃｏｕｌｂｏｕｒｎシャトルボックス（Ｈ１０－１１Ｍ－ＳＣ）を使用して、前述の^１９のように変更された能動的回避を分析したが、今度はｉＰａｄタブレット画面がシャトルケージの壁に取り付けられ、それぞれが２本の線の間での方向または距離が異なる２つの画像のいずれかを表示するが、その他の点では形状、サイズ、光強度は同じであった。嫌悪イメージ側は、０．７ｍＡのフットショックと組み合わせた。リコール時に、位置の偏りを避けるために光のパターンを逆にし、それぞれの側で費やした時間を記録した。順応性は、ディスプレイをさまざまな強度に暗くしたり明るくしたりして試験された。

【0484】

結果
非分岐一価ＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、ＳＮＡＰタグ付きヒトｍＧｌｕＲ６で機能する
ｍＧｌｕＲ６受容体はＯＮ－ＢＣで発現し、網膜の他の細胞型では発現しない（Ｄｈｉｎｇｒａ ａｎｄ Ｖａｒｄｉ ２０１２）Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐ． Ｒｅｖ． Ｍｅｍｂｒ． Ｔｒａｎｓｐ． Ｓｉｇｎａｌ １：６４１）。これは、光受容細胞によって放出されるグルタミン酸に対するＯＮ－ＢＣの主要な受容体として機能し、この細胞型ではエフェクターシグナル伝達系に対する特殊なＧタンパク質シグナル伝達を持っている（Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ３１：１１５２１）。ＯＮ－ＢＣ用のｍＧｌｕＲ６のＢＧＡＧ光活性化バージョンの作成は、このネイティブのシグナル伝達カスケードを利用して、光に対する応答を強化できると考えられていた。ラットｍＧｌｕＲ６のＮ末端ＳＮＡＰタグ付きバージョン（ＳＮＡＰ－ｒｍＧｌｕＲ６）は、ＧＩＲＫチャネルとともに、ＨＥＫ２９３細胞で発現した。細胞をＢＧＡＧ_{１２，４６０}で標識し、青色（４６０ｎｍ）光の閃光に対する応答を調べた。これらの細胞では光電流は観察されなかった（図３Ｃ）。ヒトｍＧｌｕＲ６（ＳＮＡＰ－ｈｍＧｌｕＲ６）をＨＥＫ２９３細胞で発現させ、細胞をＢＧＡＧ_{１２，４６０}で標識した。今回は、ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２と同じくらい大きいＧＩＲＫ光電流が観察された（図３Ｃ）。ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２とＳＮＡＰｈｍＧｌｕＲ６のＢＧＡＧ_{１２，４６０}光活性化の同様の効力は、ｍＧｌｕＲ６がそのネイティブのシグナル伝達カスケードとエフェクターチャネルとの特権的なカップリングを持っている場合、後者がＯＮ－ＢＣでより効果的である可能性があることを示唆している。

【0485】

図３Ａ～３Ｃ。一価ＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、ＨＥＫ２９３細胞でラットＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２及びヒトＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ６ ＧＩＲＫ光電流を誘発する。図３Ａ。グループＩＩ及びＩＩＩのｍＧｌｕＲは、それぞれｍＧｌｕＲ２及び６のように、ニューロンのＧＩＲＫチャネルにカップリングし、このシステムは非神経細胞株で再構成されるため、ＢＧＡＧ光スイッチにカップリングしたＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２または６は光によって活性化され、ＧＩＲＫ電流の過分極を誘発する。図３Ｂ。青色（４６０ｎｍ）光は、ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を光活性化し、－６０ｍＶに電圧クランプされたＨＥＫ２９３細胞において共発現したＧＩＲＫチャネルから、［Ｋ＋］_ｉｎ＝［Ｋ＋］_ｏｕｔ＝１５０ｍＭで内向きＫ＋電流を引き起こす。図３Ｃ。白色光は、ＳＮＡＰタグ付きラットｍＧｌｕＲ２（ＳＮＡＰ－ｒｍＧｌｕＲ２）を発現するＢＧＡＧ_{１２，４６０}ＨＥＫ２９３細胞でＧＩＲＫを活性化し、白色光はラットＳＮＡＰ－ｒｍＧｌｕＲ６を活性化しないが、ヒトバリアントＳＮＡＰ－ｈｍＧｌｕＲ６を活性化する。

【0486】

分岐した多価ＢＧＡＧは、ＨＥＫ２９３細胞におけるＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２活性化の有効性と感度を高める
受容体付着部位（ＢＧ）ごとに１つの光活性化グルタミン酸（ＡＧ）を持つ（すなわち、それぞれのｍＧｌｕＲサブユニットに１つのリガンドを配置する）、単一の枝を照らすためのＢＧＡＧ_{１２，４６０}の感度を高めるために、それぞれが光活性化グルタミン酸を持つ複数の枝に置き換えられた（それにより、サブユニットごとに過剰なリガンドが生成される）（図４Ａ）（Ａｃｏｓｔａ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。ＨＥＫ２９３細胞では、リガンド数を２（^２ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}）及び４（^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}）に増やすと、光による受容体の結合と活性化が徐々に増加する。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、ＢＧＡＧ_{１２，４６０}の有効性を約２倍にし、飽和グルタミン酸で達成される最大活性化近くに達する（図４Ｂ～４Ｃ）。重要なことに、^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、ＨＥＫ２９３細胞において、約５倍感度を増加させる（強度応答曲線の中間点をシフトする）（図４Ｄ）。

【0487】

図４Ａ～４Ｄ。多分岐ＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、ＨＥＫ２９３細胞のＧＩＲＫチャネルのＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２活性化の効力と感度を高める。図４Ａ。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、ｍＧｌｕＲのそれぞれのサブユニット上のＳＮＡＰへの１：１結合のための単一のＢＧ末端と、１２－ＰＥＧリンカーの４つの分岐とからなり、それぞれの分岐は光切り替え可能なアゾベンゼン－グルタミン酸（ＡＧ）を有する。図４Ｂ。ＳＮＡ－ｍＧｌｕＲ２にコンジュゲートした^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の代表的な例は、共発現したＧＩＲＫチャネルを光活性化して、飽和（１ｍＭ）グルタミン酸で得られる最大レベルに近づける。図４Ｃ。ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の光活性化効率の依存性。単一、２分岐、及び４分岐のＢＧＡＧ_{１２，４６０}を使用によるＧＩＲＫ電流として読み取られる。図４Ｄ。強度応答曲線は、^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}で左にシフトする（感度が高くなる）。

【0488】

４分岐ＢＧＡＧが高感度光嫌悪を回復
インビトロで培養細胞に見られる感度のこの増加がインビボで網膜に変換されるかどうかを調べるために、ＡＡＶを使用して、ヒトシナプシンプロモーター（ｈＳｙｎ）の下でＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２をコードする遺伝子（ＡＡＶ２ ４ＹＦ：ｈＳｙｎ－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２）を、盲目のｒｄ１マウスの網膜神経節細胞（ＲＧＣ）に導入した（図５Ａ）。数週間後、ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の発現とそのＢＧ標識の特異性を評価するために、マウスの光受容細胞が変性した時点で（図５Ｃ）、マウスの硝子体にＢＧ染料（図５Ｂ）を注入した。網膜の横断切片では、主にＲＧＣの樹状突起層に色素が観察された（図５Ｄ）。

【0489】

図５Ａ～５Ｄ。ＡＡＶ２ ４ＹＦ ｈＳｙｎ－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の硝子体内注射は、ｒｄ１マウスのＲＧＣで発現を促進する。図５Ａ。ＡＡＶ２ ４ＹＦ ｈＳｙｎ－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２ウイルス送達構築物。図５Ｂ。ｍＧｌｕＲ２のＳＮＡＰタグは、蛍光ＢＧ色素で標識できる。図５Ｃ。遺伝性網膜変性による光受容細胞層の喪失を伴う網膜の模式図。図５Ｄ。６週間前にＡＡＶ２ ４ＹＦ ｈＳｙｎ－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２に感染し、ＢＧ色素で標識されたｒｄ１マウスから単離した網膜の横断切片は、ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の発現がＲＧＣ樹状突起に限定されていることを示している。

【0490】

ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２が、視覚を回復できるかどうかを判断するために、ＡＡＶ２ ４ＹＦ：ｈＳｙｎ－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の硝子体内注射を受けたｒｄ１マウスの別のコホートが、６週間を超えて後に^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の２回目の硝子体内注射を受けた。次の３～６日間、視覚を２つのパラダイムで試験した。１つ目は、動物が明暗を区別できるかどうかを評価し、そうであれば、検出できる光の強度を決定し、２つ目はその２つの異なる空間線パターンを区別する能力を試験する。

【0491】

自然光嫌悪行動が試験された。２チャンバーのシャトルボックスには、それぞれのチャンバーにｉＰａｄ－ｍｉｎｉが装備されており、そのうちの１つは完全に照明された白いスクリーン（８８ｕＷ／ｃｍ^２）とし、もう一方を黒にする（図６Ｃ）。視力のあるマウスは光恐怖症であり、明るいチャンバーで過ごす時間が短いのに対し、盲目のｒｄ１マウスは２つのチャンバーで同じ時間を過ごす。ＲＧＣでＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現するＲｄ１マウスに、ＰＢＳ中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}を硝子体内注射した。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}注射後の最初の１週間で、これらのマウスは、２つのチャンバーで同じ時間を過ごした対照のｒｄ１同腹仔（ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現せず、^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}を注射されてもいない）（図６Ｄ、紫色の破線）と対照的に、照らされたチャンバーよりも暗いチャンバーで多くの時間を過ごした（図６Ｄ、緑色の記号）。

【0492】

^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}注射の３週間後、ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２発現ｒｄ１マウスの暗色選好は消失し（図６Ｄ、緑色の記号）、一価のＢＧＡＧ_{１２，４６０}で以前に見られた低下と一致した（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１７）前出）。おそらく、眼からＢＧＡＧ_{１２，４６０}が除去されたためである。β－シクロデキストリンに^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}を製剤化すると、眼における持続性が延長されることにより、光知覚の回復期間が延長されるかどうかが試験された。β－シクロデキストリン中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}が実際に４週間、これまでで最も長い観察期間で光知覚を回復したことが観察された（図６Ｄ、赤色の記号）。この最初の分析に続いて、より長い研究が行われた。β－シクロデキストリン中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、硝子体内注射後６週間で光嫌悪を回復し、７週で約半分に、８週でバックグラウンドに低下したことが判明した（図６Ｅ）。

【0493】

これらの結果は、ＲＧＣでの^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２は、以前は盲目だったマウスが薄暗い部屋の光を検出できるようになることを示す。これは、はるかに高い強度の光（５ｍＷ／ｃｍ^２）が必要であり、明るいＬＥＤ光源を必要とする一価ＢＧＡＧ_{１２，４６０}で以前に観察されたものと比較して、ほぼ１００倍の感度の顕著な向上を表している（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１７）前出）。

【0494】

^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２がまた、ＯＮ－ＢＣで光の知覚を回復するかどうか試験された。これを試験するために、ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２をコードする遺伝子を、同じＡＡＶ ４ＹＦベクターを使用してＯＮ－ＢＣに導入したが、ｈＳｙｎプロモーターを排他的にＯＮ－ＢＣで発現するｍＧｌｕＲ６遺伝子のＯＮ－ＢＣ選択的プロモーターに置き換えた。最小ｇｒｍ６プロモーターの４つのコピーのコンカテマー（４ｘｇｒｍ６）を使用した。ｒｄ１マウスにおけるＡＡＶ２ ４ＹＦ：４ｘｇｒｍ６－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の硝子体内注射から約６週間後、ＰＢＳ中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}を硝子体内注射し、明／暗光嫌悪アッセイを使用して試験した。注射後の最初の週に、これらの処置されたｒｄ１マウスは暗室でより多くの時間を過ごしたが、この暗色選好は、ＰＢＳ中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の注射後３週目までに消失した（図６Ｄ、灰色の記号）。しかしながら、上記のＲＧＣで見られるように、β－シクロデキストリン中の製剤は、暗所回避の回復を４週間まで延長した（図６Ｄ、青色の記号）。

【0495】

したがって、多価の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、ＲＧＣとＯＮ－ＢＣの両方でＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を十分に強力に活性化し、部屋の明かりのレベルで薄暗い光の検出をサポートし、ステロイドの眼への送達に使用される賦形剤中の製剤は、１回の注射後の作用を数週間延長する。

【0496】

光に対する感度を定量化するために、２チャンバー明／暗システムでの自然光嫌悪の回復は、照明付きチャンバーのさまざまなレベルの照明で比較された。最大の光嫌悪行動は２５μＷ／ｃｍ^２で観察され、最大応答の半分が５～２５μＷ／ｃｍ^２であり（図６Ｆ）、以前に非分岐ＢＧＡＧで観察されたものと比較して約２５０倍の感度の増加があった。

【0497】

図６Ａ～６Ｆ。ＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣでの^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２。ＲＧＣはｒｄ１マウスの光回避行動を回復する。図６Ａ及び６Ｂ。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の模式図（Ａ）とβ－シクロデキストリンの分子図（Ｂ）。図６Ｃ。２つのｉＰａｄ ｍｉｎｉディスプレイを備えた明／暗２チャンバーシャトルボックスは、１つが照明された白色（８８μＷ／ｃｍ^２）であり、もう１つがオフにされる。図６Ｄ。未処理のｒｄ１マウスは、９００秒の観察期間の半分を暗室で、残りの半分を明室で過ごす（紫色の点線）。ＲＧＣでの発現用にｈＳｙｎ－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２をコードするＡＡＶ（緑色と赤色）、またはＯＮ－ＢＣでの発現用に４ｘｇｒｍ６－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ（灰色と青色）をコードするＡＡＶを硝子体内に注射したｒｄ１マウスは、ＰＢＳ（緑色と灰色）またはβ－シクロデキストリン（赤色と青色）で製剤化された^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}を注射してから１週間後、暗チャンバーでより多くの時間を過ごす。しかしながら、ＰＢＳで製剤化された^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}では、３週間で効果が弱まるが、β－シクロデキストリンで製剤化された場合は４週間持続する。図６Ｅ。未処置のｒｄ１マウスは、９００秒の観察期間の半分を暗室で過ごし、残りの半分を明室で過ごす（下の赤色の破線）。ＲＧＣでの発現用のｈＳｙｎ－ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２をコードするＡＡＶを硝子体内注射したｒｄ１マウスは、β－シクロデキストリンで製剤化された^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の注射後１週間から始まり、暗室（上部の赤色の破線）でより多くの時間を過ごし、６週目まで続く。効果は８週目までに低下し、未処置のｒｄ１マウスと同等の成績を示した。図６Ｆ。光の強度が異なる２チャンバー明／暗ボックスにおける光嫌悪分析は、強度応答関係をもたらす。ＲＧＣでの^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２は、２５μＷ／ｃｍ^２で最大の光嫌悪反応をサポートし、５～２５μＷ／ｃｍ^２で最大応答の半分であり、たまに０．２μＷ／ｃｍ^２で稼働する。

【0498】

４分岐ＢＧＡＧが高感度線パターン認識を回復する
上記のとおり、ＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣのいずれかで、^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２が高感度の光知覚を付与する。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２がパターン化されたビジョンをサポートするかどうかを調べた。処置及び未処置のｒｄ１マウスが学習した負の関連タスクで２つの異なる線パターンを識別する能力を試験した。タスクは、それぞれのチャンバーの床が導電性であり、独立した嫌悪的な軽度のフットショックを加えることができる２チャンバーアリーナで実行される。それぞれのチャンバーの遠端にはｉＰａｄ ｍｉｎｉがあり、２つの間隔（１ｃｍ対６ｃｍ）の１つで平行な垂直線からなる独特の線パターンを示した（図７Ｂ）。マウスは２日間訓練され、その間、チャンバーの１つで軽度のフットショックが与えられた。フットショックに関連する線のパターンは、最初はランダムに割り当てられたが、その後２日間のトレーニングを通じてその動物に対して一貫性が保たれた。３日目はフットショックを与えず、ディスプレイのみを表示した。チャンバーは、嗅覚の手がかりを取り除くために、それぞれのトレーニングまたは試験セッションの前後に完全に洗浄された。部屋の参照視覚的な合図を避けるために、部屋は暗く保たれた。そして、場所の偏りを避けるために、トレーニングの２日目の終わりと試験日の間で嫌悪と非嫌悪の合図を切り替えた。２つの線のパターンを区別するのに十分な視力がある場合、晴眼動物は以前にフットショックに関連付けられていた線のパターンのある側を避けるが、未処置の盲目ｒｄ１は、トレーニング中に嫌悪していた側での時間を短縮する位置バイアスを示し、試験日には非嫌悪の視覚的合図を示した（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１７）前出；及びＢｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎ． １０：１２２１）。

【0499】

ＲＧＣでＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現するＲｄ１マウスは、ＰＢＳ中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の硝子体内注射後１週間以内に訓練及び試験され、非嫌悪視覚表示の側でより多くの時間を費やした（図７Ｃ）。この行動は、未処置のｒｄ１マウスの行動とはまったく対照的であり、その位置バイアスにより、トレーニング期間中は嫌悪の合図を示したが、試験期間中は非嫌悪の合図を示したチャンバーを好むようになった（図７Ｃ）。ＯＮ－ＢＣでＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現するＲｄ１マウスは、ＰＢＳ中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の硝子体内注射後１週間以内に訓練及び試験され、同様に非嫌悪視覚表示の側でより多くの時間を費やした（図７Ｃ）。非嫌悪関連の視覚的合図を持つチャンバーの強い選好性は、ＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣのいずれかでの^４×ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２が、空間パターン認識を回復し、１ｃｍ対６ｃｍ離れた平行線のペアを区別するのに十分な視力が提供されることを示す。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}をβ－シクロデキストリンで製剤化した場合、硝子体内注射後５週間、これら２つの線パターンを区別する能力の回復が持続した（図８Ａ～８Ｃ）。

【0500】

β－シクロデキストリン中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の製剤は、光知覚の回復を数週間延長したので（図６Ｄ及び６Ｅ）、β－シクロデキストリンが線パターン認識の回復期間も延長するかどうかを調べた。β－シクロデキストリン中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}により、ＯＮ－ＢＣまたはＲＧＣのいずれかでＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を含むｒｄ１マウスの能力が回復し、硝子体内注射後５週間、１ｃｍと６ｃｍ離れた線のペアを示すｉＰａｄディスプレイを区別できることがわかった（図８Ａ～８Ｃ）。５週間の効果は、ＯＮ－ＢＣにＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を注射してから２週間後の効果と比較して変化がなかったが、ＲＧＣにＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を持つ動物の約半分に減少した。

【0501】

回復された線パターン認識をさらに評価するために、線を細くし、線間の分離を減らした。０．２５ｃｍまたは０．５ｃｍのいずれかで離れた０．５ｃｍ幅の線のディスプレイが比較された。２チャンバーシステムでは、決定点からｉＰａｄまでの距離が１８ｃｍであるため、太さ０．５ｃｍの線が０．５ｃｍ離れたディスプレイは、１度あたり０．２サイクルの視運動ドラムの空間周波数に匹敵し、野生型マウスの視力限界に近い（Ｋｒｅｔｓｃｈｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。マウスは、ＰＢＳ中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の硝子体内注射後に、ＲＧＣにおける未処置のｒｄ１マウス及びＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現するｒｄ１マウスでのフットショックで０．２５ｃｍまたは０．５ｃｍ離れた線ペアのいずれかをペアリングすることによって訓練された。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}により、ｒｄ１マウスがタスクを実行し、野生型マウスと同様に実行できるようになった（図９）。

【0502】

図７Ａ～７Ｃ。ＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣにおける^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２は、ｒｄ１マウスで学習した空間パターン認識誘導行動を回復する。図７Ａ。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の模式図。図７Ｂ。ｉＰａｄ ｍｉｎｉディスプレイを使用して嫌悪関連条件付け用に構成された２チャンバーシャトルボックスは、一方のチャンバーで１ｃｍ、もう一方のチャンバーで６ｃｍ離れた白い背景に２つの平行な黒い垂直バーを備えている。図７Ｃ。未処置のｒｄ１マウスは、９００秒の観察時間の半分未満を嫌悪側に費やす。これは、トレーニング期間中に嫌悪した反対側に対する位置バイアスのためである。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}注射の１週間以内に、ＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣでＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現するｒｄ１マウスは、どちらも非嫌悪線パターンディスプレイの選好性を示す。４×ＢＧＡＧは、ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２がＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣのいずれかで発現している場合に、近接線識別視力タスクをサポートする。

【0503】

図８Ａ－８Ｃ。図８Ａ。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}及びβ－シクロデキストリン。図８Ｂ。それぞれのチャンバーのｉＰａｄに表示される視覚的合図を示す、関連する嫌悪条件付け用に構成された２チャンバーシャトルボックス：１ｃｍまたは６ｃｍ離れた白い背景に幅１ｃｍの黒色のバー。図８Ｃ。β－シクロデキストリン中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、未処置のｒｄ１対照と比較して、ＯＮ－ＢＣまたはＲＧＣのいずれかでＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現するｒｄ１マウスに硝子体内注射後２週間及び５週間、線パターン認識を回復させる（非嫌悪関連ディスプレイを備えたチャンバーを選好）。

【0504】

図９。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、ｒｄ１マウスのＲＧＣにおける高視力の線パターン認識を回復する。ＲＧＣでＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現するｒｄ１マウスに硝子体内注射した後のＰＢＳ中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}は、Ｃ５７野生型動物の正常な視力と同様に、線パターンの認識を回復する。ディスプレイは、０．２５ｃｍまたは０．５ｃｍのいずれかで離れた０．５ｃｍ幅のバーを使用し、空間周波数は通常のマウスの視覚の解像度限界に近づいた。

【0505】

分岐ＢＧＡＧは、移動するディスプレイでの線パターン認識を回復する。
回復した光応答の開始、減衰、及び回復の動力学は、視覚パターンを認識する能力に影響を及ぼすと予想される。ＲＧＣの中波錐体オプシンが静止及び移動の視覚ディスプレイの両方で線パターン認識をサポートし、一方でより遅いロドプシンがディスプレイは静止していてもサポートしない理由を説明するために、照明の終了時にベースラインに戻るのが速く、後続の光パルスへの応答性が回復するのが速いことが提案されている（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１９）前出）。ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２によるシグナル伝達及び回復が、中波錐体オプシンよりも、光に対する応答の遅延が短く、照明終了後のベースラインへの復帰が速いので（図１０Ａ～１０Ｃ）（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１７）前出；（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１９）前出）、課題は、ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２がまた、より高速な移動速度での線パターン認識もサポートするかどうかを調べることであった。これは、ここでは線が動いている点を除いて上記のように（図８Ａ～８Ｃ）、一方のディスプレイでは６ｃｍ、他方のディスプレイでは１ｃｍ離れた線で、線パターン識別タスクで試験された。ＲＧＣにおいて^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を有するｒｄ１動物は、線表示が４ｃｍ／秒または８ｃｍ／秒のいずれかで移動した場合、野生型動物と同様に機能したことが判明した（図１１）。対照的に、ディスプレイが１ｃｍ／秒で動くときにうまく機能することが示された（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１９）前出）ＲＧＣで中波錐体オプシンを発現するｒｄ１動物は、ディスプレイが４ｃｍ／秒で移動したときに未処置のｒｄ１動物のレベルで機能した（図１１）。したがって、ＲＧＣにおける^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の速度制限は８ｃｍ／秒を超え、一方、ＲＧＣにおける中波錐体オプシンのそれは４ｃｍ／秒未満である。

【0506】

図１０Ａ～１０Ｃ。ＲＧＣにおける、ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２または中波錐体オプシンを有する、単離されたｒｄ１網膜からのＲＧＣのＭＥＡ記録。Ａ）ＢＧＡＧ_{１２，４６０}の硝子体内注射後の、野生型マウス（Ｗｔ；赤色）、ＲＧＣにおける中波（ＭＷ）錐体オプシンを発現するｒｄ１マウス（黒色）、及びＲＧＣにおけるＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現するｒｄ１マウス（青色）から単離された３つの代表的な網膜の数十のＲＧＣにおける１秒の光フラッシュに対する平均応答の重ね合わせ。ＭＷ－オプシンの遅延応答と比較した、Ｗｔ及びＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２における光の開始に対する短い潜伏応答に注目されたい。Ｂ）ＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２の青色光活性化は、照明中に持続的な振幅を伴う即時の抑制を引き起こし、続いて照明の終了後に一時的な興奮性リバウンドを引き起こす。光パルスが短くなる（光子の数が減少する）と、抑制とリバウンド励起の振幅が減少するが、反応速度は変化せず、短い遅延と高速な活性化と非活性化が維持される（（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１７）前出より）。Ｃ）中波錐体オプシンの緑色光活性化は、遅延後に一時的な励起を引き起こす。光パルスが短くなるにつれて、ピーク応答までの遅延が増加し、非活性化が遅くなる（（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１９）前出より）。

【0507】

図１１。ｒｄ１マウスのＲＧＣにおける^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２は、移動ディスプレイでの線パターンの認識が回復する。嫌悪関連条件付け用に構成された２チャンバーシャトルボックスは、それぞれのチャンバーのｉＰａｄに表示される視覚的合図を示す：４ｃｍ／秒または８ｃｍ／秒で左から右に移動する１ｃｍまたは６ｃｍ離れた白い背景に幅１ｃｍの黒色のバー。

【0508】

^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２は、新しいオブジェクトの探査を回復する
上記の実験では、^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２が、コンピュータディスプレイを使用したパターン認識を可能にすることを示した。^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２が、周囲の入射光が３次元オブジェクトを照らす自然環境で動作するかどうかを調べた。これに対処するために、新規オブジェクトの認識と探索行動を試験するのに一般的に使用されるオープンフィールドアリーナが採用された。マウスは自然にオープンスペースを避け、周囲の壁に近づく。これらの安全な場所からの探索的な遠出は、新しい刺激によって動機付けられ得る。マウスは探索中に複数の感覚モダリティを使用するが、視覚は空間ナビゲーションにとって重要であることが示されている。アリーナは、２つの異なる新しいオブジェクトを含む立方体で構成されていた。マウスは、動物が壁に沿って歩いたり、他のオブジェクトを探索したりしても、偶発的な遭遇の可能性が低くなるように、オブジェクト自体から十分に離れたアリーナの壁に置かれた。未処置のｒｄ１マウス、及びＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣのいずれかで^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現するｒｄ１マウスが撮影された。彼らの動きは、最初にアリーナに配置されたときから１０分間追跡された。遠方の視覚に依存する可能性が最も高い探索行動の側面、すなわち、新規オブジェクトの探索までの待ち時間が評価された。未処置のｒｄ１マウスは、最初のオブジェクトに長い待ち時間があり、向きを変えるときに偶然オブジェクトに遭遇することがよくあった。データを図１２に示す。ＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣのいずれかにＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を含むＲｄ１マウスは、β－シクロデキストリン中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の硝子体内注射から５週間後の潜伏期間が短かった。これらの結果は、ＯＮ－ＢＣまたはＲＧＣのいずれかにおける^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２が、以前は盲目だった動物に、周囲光の下でオブジェクトの自然な視覚を提供することを示唆している。

【0509】

図１２。ｒｄ１マウスのＲＧＣまたはＯＮ－ＢＣにおける、^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}：ＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２は、新規オブジェクト認識をサポートする。オープンフィールド行動アリーナには、２つの新規オブジェクトが含まれていた。マウスを追跡して、移動速度とオブジェクトの探索までの待ち時間を測定した。β－シクロデキストリン中の^４ｘＢＧＡＧ_{１２，４６０}の硝子体内注射の５週間後の、未処置のｒｄ１マウス及びＯＮ－ＢＣまたはＲＧＣのいずれかにおいてＳＮＡＰ－ｍＧｌｕＲ２を発現するｒｄ１マウスにおける最初のオブジェクトの探索までの待ち時間。

【0510】

本発明をその具体的な実施態様を参照して説明したが、本発明の真の精神と範囲を逸脱することなくさまざまな変更がなされたり、均等物と置き換えたりすることができることは当業者によって理解されるべきである。さらに、特定の状況、物質、物質の組成、プロセス、プロセスステップ、またはステップを本発明の目的、趣旨及び範囲に適合させるために多くの改変がなされ得る。すべてのそのような改変は、本明細書に添付の特許請求の範囲の範囲内に入ることが意図される。

【図1A】

【図1B-1】

【図1B-2】

【図1C】

【図1D-1】

【図1D-2】

【図1E-1】

【図1E-2】

【図1E-3】

【図1E-4】

【図1F】

【図1G】

【図1H】

【図1I-1】

【図1I-2】

【図1J-1】

【図1J-2】

【図1J-3】

【図1J-4】

【図1J-5】

【図1K-1】

【図1K-2】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図2G】

【図2H】

【図2I】

【図2J】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図6F】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12】

【図13】

【配列表】

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【国際調査報告】