特表 2023-527621 哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を含む標的化モジュール

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-06-30

(54)【発明の名称】哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を含む標的化モジュール

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230623BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20230623BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20230623BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230623BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20230623BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230623BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230623BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230623BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230623BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20230623BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230623BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230623BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230623BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230623BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20230623BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/62 Z

C12N15/85 Z

C07K16/28

C07K16/30

C07K19/00

C12N5/10

A61P37/04

A61P35/00

A61P31/00

A61P37/06

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K48/00

A61K35/76

C12P21/08

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022555742

(86)(22)【出願日】2021-03-16

(85)【翻訳文提出日】2022-11-07

(86)【国際出願番号】 EP2021056625

(87)【国際公開番号】W WO2021185807

(87)【国際公開日】2021-09-23

(31)【優先権主張番号】20163257.7

(32)【優先日】2020-03-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517071070

【氏名又は名称】アヴェンセル ユーロップ ゲー・エム・ベー・ハー

【氏名又は名称原語表記】ＡｖｅｎＣｅｌｌ Ｅｕｒｏｐｅ ＧｍｂＨ

【住所又は居所原語表記】Ｔａｔｚｂｅｒｇ４７，０１３０７ Ｄｒｅｓｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ

(74)【代理人】

【識別番号】100069556

【弁理士】

【氏名又は名称】江崎 光史

(74)【代理人】

【識別番号】100111486

【弁理士】

【氏名又は名称】鍛冶澤 實

(74)【代理人】

【識別番号】100139527

【弁理士】

【氏名又は名称】上西 克礼

(74)【代理人】

【識別番号】100164781

【弁理士】

【氏名又は名称】虎山 一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100221981

【弁理士】

【氏名又は名称】石田 大成

(72)【発明者】

【氏名】エーニンガー・アルミン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA13

4C084MA17

4C084MA22

4C084MA23

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB091

4C084ZB092

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB311

4C084ZB312

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085CC23

4C085EE01

4C085GG01

4C085GG02

4C087AA01

4C087AA02

4C087CA12

4C087MA17

4C087MA22

4C087MA23

4C087MA66

4C087NA14

4C087ZB08

4C087ZB09

4C087ZB26

4C087ZB31

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、少なくとも１つのＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ドメイン、ならびにタグ結合ドメインまたはタグを含む標的化モジュールに、標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、ベクター、または細胞に、標的化モジュールと、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞とを含む医薬組成物およびキットに関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、
ｉ）少なくとも１つのＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ドメイン、
ｉｉ）タグ結合ドメインまたはタグ、
を含む標的化モジュールであって、
前記標準化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞と組み合わせて投与され、
前記のスイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインを含み、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、および
－第３のドメインはシグナル変換ドメインであり、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、
前記の標的化モジュール。

【請求項2】

１価または２価である、請求項１に記載の標的化モジュール。

【請求項3】

ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ドメインが、ＢＭＳ－９３６５５９、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、３Ｆ２．１またはそれらのフラグメントである、請求項１または２に記載の標的化モジュール。

【請求項4】

タグがペプチドエピトープタグである、請求項１～３のいずれか一つに記載の標的化モジュール。

【請求項5】

ペプチドエピトープタグが、ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、酵母転写因子ＧＣＮ４由来の短い線状ペプチド配列、ロイシンジッパー配列、またはヒト核タンパク質由来の、好ましくはヒトＬａタンパク質由来の短い線状ペプチド配列である、請求項４に記載の標的化モジュール。

【請求項6】

エフェクター細胞結合ドメインをさらに含み、エフェクター細胞結合ドメインが、ヒトＣＤ３鎖、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）またはヒトＣＤ１６上のエピトープに特異的に結合する、請求項１～５のいずれか一つに記載の標的化モジュール。

【請求項7】

前記の少なくとも１つのＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ドメインおよび／または前記のエフェクター細胞結合ドメインの可変領域が、ヒト化アミノ酸配列を含む、請求項１～６のいずれか一つに記載の標的化モジュール。

【請求項8】

長さが２０～１６００個のアミノ酸の範囲内にある、請求項１～７のいずれか一つに記載の標的化モジュール。

【請求項9】

哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、請求項１～８のいずれか一つに記載の標的化モジュールであって、
前記標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールと組み合わせて投与され、
前記の少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、少なくとも１つの標的細胞結合ドメイン、およびタグ結合ドメインまたはタグを含み、
前記の少なくとも１つの標的細胞結合ドメインは、指定される抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンドの突然変異体およびアナログを含めた、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５２、ＣＤ９０、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１５０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８４、ＣＤ２２３、ＣＤ２２９、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ３１９、ＣＤ３６６およびＣＤ３７１、インターロイキン受容体、とりわけ好ましくはＩＬ－８Ｒα（ＣＸＣＲ１）、ＩＬ－８Ｒβ（ＣＸＣＲ２）、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１１Ｒβ、ＩＬ－１３Ｒα１および２、ＣＸＣＲ４、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバーおよびそれらの突然変異体、とりわけ好ましくはＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４またはそれらの突然変異体、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバー、エフリン、エフリン受容体、とりわけ好ましくはＥｐｈＡ１－１０、ＥｐｈＡ５またはＥｐｈＢ１－６、前立腺特異的抗原、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、胚抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）および胎児アセチルコリン（ａｃｅｔｈｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）受容体、血管内皮成長因子ファミリーのメンバー、上皮細胞接着分子ＥｐＣＡＭ、アルファフェトプロテインＡＦＰ、細胞間接着分子ファミリーのメンバー、ムチンタンパク質ファミリーのメンバー、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ヒト高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、葉酸結合タンパク質ＦＢＰ、葉酸受容体、ソマトスタチン受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド、サイトカイン受容体、上皮糖タンパク質ファミリーのメンバー、ジシアロガングリオシド（ｄｉａｓｉａｌｏｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）、グリピカン、Ｇタンパク質共役受容体、炭酸脱水酵素ファミリーのメンバー、糖鎖抗原ファミリーのメンバー、Ｎｏｔｃｈリガンド、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、糖タンパク質Ａ３３、グアニル酸シクラーゼ２Ｃ、および腫瘍特異的グリカンを含む群から選択される表面抗原に結合する抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンドであり、
請求項１～８のいずれか一つに記載の標的化モジュール、および前記の少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールが、異なる標的細胞結合ドメイン、および同一のタグ結合ドメインまたはタグを含む、
前記の標的化モジュール。

【請求項10】

哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、請求項１～９のいずれか一つに記載の標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸、ベクターまたは細胞であって、
前記の核酸、ベクターまたは細胞は、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞と組み合わせて投与され、
前記スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインを含み、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、および
－第３のドメインはシグナル変換ドメインであり、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、
前記の核酸、ベクターまたは細胞。

【請求項11】

誘導性発現系、好ましくはＴｅｔ－Ｏｎ、Ｔｅｔ－Ｏｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ、Ｔｅｔ－Ｏｎ ３Ｇ、Ｔ－ＲＥｘ、または活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）に応答性のプロモーターから選択される誘導性発現系をさらに含む、請求項１０に記載の核酸、ベクターまたは細胞。

【請求項12】

スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、
前記のスイッチ可能なキメラ抗原受容体が３つのドメインを含み、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、および
－第３のドメインはシグナル変換ドメインであり、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、
請求項１０または１１に記載の核酸、ベクターまたは細胞。

【請求項13】

－誘導性発現系、好ましくはＴｅｔ－Ｏｎ、Ｔｅｔ－Ｏｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ、Ｔｅｔ－Ｏｎ ３Ｇ、ＴＲＥｘ、またはＮＦＡＴに応答性のプロモーターから選択される誘導性発現系、ならびに
－スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列、ここで、前記のスイッチ可能なキメラ抗原受容体が３つのドメインを含み、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、および
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、ならびに
－請求項１～９のいずれか一つに記載の標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列、
を含む、核酸、ベクターまたは細胞であって、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、前記の核酸、ベクターまたは細胞。

【請求項14】

哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、請求項１～９のいずれか一つに記載の標的化モジュール、請求項１０～１３のいずれか一つに記載の核酸、ベクターまたは細胞を含む、医薬組成物であって、
前記医薬組成物は、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞と組み合わせて投与され、
前記のスイッチ可能なキメラ抗原受容体は３つのドメインを含み、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、および
－第３のドメインはシグナル変換ドメインであり、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、
前記の医薬組成物。

【請求項15】

ａ）請求項１～９のいずれか一つに記載の標的化モジュール、請求項１０～１３のいずれか一つに記載の核酸、ベクターまたは細胞、ならびに
ｂ）スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞、
を含むキットであって、
前記のスイッチ可能なキメラ抗原受容体は３つのドメインを含み、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、および
－第３のドメインはシグナル変換ドメインであり、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、
前記のキット。

【請求項16】

タグが、ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、酵母転写因子ＧＣＮ４由来の短い線状ペプチド配列、ロイシンジッパー配列、またはヒト核タンパク質由来の、好ましくはヒトＬａタンパク質由来の短い線状ペプチド配列である、請求項１５に記載のキット。

【請求項17】

タグ結合ドメインが、ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、酵母転写因子ＧＣＮ４由来の短い線状ペプチド配列、ロイシンジッパー配列、またはヒト核タンパク質由来の、好ましくはヒトＬａタンパク質由来の短い線状ペプチド配列に結合する抗体または抗体フラグメントである、請求項１５または１６に記載のキット。

【請求項18】

細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインが、ヒトＣＤ２８分子、ＣＤ８ａ鎖、ＮＫ細胞受容体、好ましくはナチュラルキラー群ＮＫＧ２Ｄ、のヒンジおよび膜貫通ドメイン；または抗体の定常領域の一部、ならびにそれらの組み合わせから選択される、請求項１５～１７のいずれか一つに記載のキット。

【請求項19】

シグナル変換ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０およびＣＤ２７、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）の細胞質領域、ＣＤ３鎖、ＤＡＰ１２、ＣＤ１２２（インターロイキン－２受容体β）、ＣＤ１３２（インターロイキン－２受容体γ）、ＣＤ１２７（インターロイキン－７受容体α）、ＣＤ３６０（インターロイキン－２１受容体）、活性化Ｆｃ受容体ならびにそれらの突然変異体の細胞質領域から選択される、請求項１５～１８のいずれか一つに記載のキット。

【請求項20】

標的化モジュール、および／またはスイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターもしくは細胞が、医薬組成物の形態にある、請求項１５～１９のいずれか一つに記載のキット。

【請求項21】

哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、好ましくは癌、感染性疾患または自己免疫疾患の治療における使用のための、請求項１５～２０のいずれか一つに記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、少なくとも１つのＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ドメイン、ならびにタグ結合ドメインまたはタグを含む標的化モジュールに、標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、ベクター、または細胞に、標的化モジュールと、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞とを含む医薬組成物およびキットに関する。

【背景技術】

【0002】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）とは、抗原特異性を提供する結合部分、および免疫受容体に由来する１種または数種のシグナル伝達鎖からなる人工受容体である（Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉら２０１０）（非特許文献１）。これらの２つの主なＣＡＲドメインは、ＣＡＲを細胞原形質膜に固定（ａｎｃｈｏｒ）する膜貫通ドメインを含む連結ペプチド鎖によって接続される。免疫細胞、特にＴおよびＮＫ細胞は、それらの原形質膜に挿入されたＣＡＲを発現するように遺伝子改変され得る。そのようなＣＡＲ改変免疫細胞が、ＣＡＲ結合部分の適当な標的を発現しているまたはそれで修飾されている他の細胞または組織構造に遭遇した場合、標的抗原にＣＡＲ結合部分が結合すると、ＣＡＲ改変免疫細胞は標的に架橋される。架橋は、ＣＡＲシグナル伝達鎖を介したシグナル経路の誘導につながり、ＣＡＲグラフト免疫細胞の生物学的特性を変化させる。例えば、エフェクターＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞におけるＣＡＲ誘発は、溶解性化合物およびサイトカインの分泌などの典型的なエフェクター機能を活性化すると考えられ、最終的にそれぞれの標的細胞の殺傷につながる。対照的に、遺伝子改変された制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）におけるＣＡＲ活性化は、インターロイキン（ＩＬ）－１０または腫瘍成長因子ベータ（ＴＧＦ－β）分泌などのＴｒｅｇ特異的な免疫調節性および抑制性メカニズムの活性化につながる。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を用いて操作された免疫細胞の養子移入は、現在、さもなければ治療不能の悪性、感染性、または自己免疫性の疾患の治療に対する非常に有望な治療選択肢と考えられている。今日まで、２種のＣＡＲ－Ｔ細胞治療法が、Ｂ細胞由来悪性腫瘍の治療に対して販売承認を得ており、この手法の臨床上の実行可能性を提供している。

【0003】

しかしながら、従来のＣＡＲ技術は、この治療様態が臨床治療に広く適用され得る前に解決される必要があるいくつかの重大な問題を伴っている。まず第一に、いくつかの安全性問題が取り組まれなければならない。これまでのところ、従来のＣＡＲを用いて操作されたＴ細胞の免疫応答は、患者への注入後に制御することが難しい。深刻な有害事象率は高い（Ｔｉｔｏｖら２０１８）（非特許文献２）。とりわけ、正常組織での予想外の標的遺伝子発現は、正常細胞に対する操作されたＴ細胞の急速でかつ厳しい免疫反応を惹起し得、それは重度の副作用を引き起こし得る（Ｌａｍｅｒｓら２００６（非特許文献３）、Ｍｏｒｇａｎら２０１０（非特許文献４））。さらに、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、新しいクラスの自己増幅細胞薬であることから、注入されたＴ細胞は、重い腫瘍負荷の存在下で活発な増大を受け得、腫瘍崩壊症候群、サイトカイン放出症候群、およびマクロファージ活性化症候群につながる（ＢｒｕｄｎｏおよびＫｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ２０１６（非特許文献５）、Ｍａｕｄｅら２０１４（非特許文献６））。従来のＣＡＲ技術の別の欠点は、単一抗原に、操作されたＴ細胞再標的化が制限されることである。そのような単一療法的手法は、治療中に標的抗原を失ってしまう腫瘍回避バリアントの発達のリスクを暗示している。数カ月後の、従来のＣＡＲ Ｔ細胞療法の下での腫瘍回避バリアントの出現は、臨床試験においてすでに観察された（Ｇｒｕｐｐら２０１３（非特許文献７）、Ｓｏｔｉｌｌｏら２０１５（非特許文献８））。まとめると、これらの障害は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の適用を非常にわずかな適応に制限する。実際、臨床上の有効性の例は、今まで、ＣＤ１９標的化およびＢＣＭＡ標的化ＣＡＲ－Ｔ細胞に制限されている。

【0004】

モジュール式「普遍的（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ）」ＣＡＲ－Ｔ（ＵｎｉＣＡＲ）手法は、ＣＡＲの抗原認識および活性化ドメインを２つの別個の作動単位に分離することによって、これらの限界を克服し得る。Ｔ細胞は、タグを認識する普遍的結合ドメインを有するＣＡＲを発現するように操作される（Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉら２０１６（非特許文献９））。抗原特異性は、普遍的ＣＡＲによって認識されるタグに融合した抗原結合ドメインからなる可溶性アダプタータンパク質によって提供される。Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉらは、インビトロおよびインビボにおけるＣＤ３３および／またはＣＤ１２３陽性の急性骨髄性白血病細胞の処理を記載する。

【0005】

国際公開第２０１２／０８２８４１号（特許文献１）は、普遍的抗タグキメラ抗原受容体発現Ｔ細胞、および細胞関連障害、例えば癌を治療する方法を開示する。加えて、国際公開第２０１３／０４４２２５号（特許文献２）は、多様でかつ複数の抗原を標的化するための、Ｔ細胞によって発現される普遍的免疫受容体を開示する。両方法は、普遍的抗タグ免疫受容体を発現する改変Ｔ細胞の使用を記載する。これらのＴ細胞は、これらの表面抗原に結合する可溶性モジュールを付加的に適用し、かつそれぞれのタグを担持することによって、疾患関連細胞表面抗原にリダイレクトし得る。国際公開第２０１６／０３０４１４号（特許文献３）は、核タンパク質に基づく内因性タグを使用して、安全でかつ効率的な様式で多様な障害に対してのリダイレクションを可能にする遺伝子改変された免疫細胞を提供する。

【0006】

国際公開第２０１８／２２４６６０号（特許文献４）は、ヒト表面タンパク質またはタンパク質複合体に特異的な化学合成されたペプチド結合単位を含む普遍的抗タグキメラ抗原受容体発現Ｔ細胞に対する標的モジュール、およびそれらの利点、特に迅速でかつ容易な調製、安定性の向上、および良好な薬学的特性を記載する。国際公開第２０１６／１６８７７３号（特許文献５）は、受容体結合パートナー、特にペプチド抗原、標的結合部分、特に可溶性Ｔ細胞受容体もしくはその一部、または抗体フラグメント；およびリンカーを含む、ＣＡＲ－Ｔ細胞に対するペプチド・ネオエピトープ（ＰＮＥ）に基づくスイッチを開示する。

【0007】

国際公開第２０１５／０５７８３４号（特許文献６）は、スイッチ可能なＣＡＲ－Ｔ細胞、および受容体結合パートナー、特にペプチド抗原を含む、ＣＡＲ－Ｔ細胞に対するスイッチを開示する。ペプチド抗原は、天然の、非天然の、または人工のペプチド、特に酵母転写因子ＧＣＮ４またはそのホモログであり得る。さらに、スイッチは、標的結合部分、特に、好ましくは抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＥＡ抗体、およびそのフラグメントから選択される抗体または抗体フラグメント、ならびにリンカーを含む。

【0008】

Ｙｕらは、いわゆるサイトカイン放出症候群を含めた毒性、およびオンターゲット・オフ腫瘍毒性を低下させるための、異なる世代のＣＡＲ－Ｔ細胞およびストラテジー（Ｙｕら２０１９（非特許文献１０））、特に自殺遺伝子、例えば単純ヘルペス・ウイルス・チミジン・キナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）もしくは誘導性カスパーゼ９（ｉＣａｓｐ９）による、またはＦＩＴＣ結合ＣＡＲ－Ｔ細胞およびＦＩＴＣを含む小分子および腫瘍標的に対する抗体、特にセツキシマブ、トラスツズマブ、もしくはリツキシマブを使用した普遍的ＣＡＲシステムによる、特にスイッチ可能なＣＡＲ－Ｔ細胞を記載する。

【0009】

さらに、Ｙｕらは、ＰＤ－１阻害ＣＡＲ－Ｔ細胞（ｉＣＡＲ）を開示し、ｉ－ＣＡＲ－Ｔ細胞の不利な点、特に、ｉＣＡＲ－Ｔ細胞は、腫瘍に不在でありまたは下方調節されており、オフターゲット組織によって発現される組織特異的抗原のみを認識すること、ならびにｉＣＡＲ－Ｔ細胞の時間的および空間的制御は不可能であることを指摘する。

【0010】

国際公開第２０１８／０７８０６６号（特許文献７）は、リンカー／標識エピトープ結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル変換ドメインを含む、抗リンカー／標識エピトープ（抗ＬＬＥ）細胞外ＣＡＲであって、細胞外リンカー／標識エピトープ結合ドメインは、抗原結合部分（ＡＢＭ）、天然に存在する標識エピトープ（ＬａＭ）、およびリンカー（ＬｉＭ）を含む標的細胞結合分子（ＴＣＢＭ）に結合し、ＡＢＭは、標的細胞上の抗原、好ましくは腫瘍抗原に特異的に結合し、リンカーは、ＡＢＭおよびＬａＭを接続し、リンカー／標識エピトープを形成し、細胞外ＬＬＥ結合ドメインは、天然に存在するＬａＭよりも高い選好性でＬＬＥに結合する、抗ＬＬＥ細胞外ＣＡＲを開示する。

【0011】

血液学的悪性腫瘍におけるキメラ抗原受容体改変Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）を使用して顕著に治療が成功しているにもかかわらず、腫瘍細胞によるＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２等の阻害性免疫チェックポイントの発現を含めた、それらの不均質性および免疫抑制環境を考慮すると、固形腫瘍を標的にすることは依然として困難なままである。前臨床モデルは、ＣＡＲ－Ｔ療法と、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１軸を標的にするチェックポイント阻害剤とを組み合わせることが、固形腫瘍においてＣＡＲ－Ｔの抗癌活性を増強するための有望なストラテジーであり得ることを実証し、進行中の第Ｉ相試験はこのストラテジーを臨床的に評価しているところである（Ｇｒｏｓｓｅｒら２０１９（非特許文献１１））。しかしながら、その幅広い適用性および効力を限定する、チェックポイント遮断に対する一次耐性および獲得耐性が高頻度に観察される（腫瘍回避バリアント）。加えて、特異性の欠如は、いくつかの臓器に影響を及ぼす免疫関連有害事象の高頻度の発生をもたらす。

【0012】

Ｒａｆｉｑらは、インビボで抗腫瘍効力を増強するための、ＣＡＲ－Ｔ細胞によるＰＤ－１遮断ｓｃＦｖの標的化送達のための方法を開示する（Ｒａｆｉｑら２０１８（非特許文献１２））。さらに、Ｒａｆｉｑらは、ＣＡＲ－Ｔ細胞および免疫チェックポイント遮断阻害剤、特にＰＤ－１遮断ｍＡｂを含む併用療法との比較；ならびにＣＡＲ－Ｔ細胞療法の効力の増加、特に、ＰＤ－１遮断ｍＡｂの可変重鎖および軽鎖から獲得されたｃ－ｍｙｃタグ付けされたｓｃＦｖを含む、ＣＤ１９またはＭＵＣ１６^ｅｃｔｏに対するＣＡＲ構築物を用いた処理によって、ＰＤ－Ｌ１腫瘍を持つマウスの生存を増加させることを記載する。

【0013】

さらに、Ｒａｆｉｑらは、ＣＡＲ－Ｔ細胞応答のＰＤ－１誘導性衰退を阻止するための代替法として、ＰＤ－１の細胞外ドメインが活性化シグナル伝達ドメインに連結されているキメラスイッチ受容体の共発現、またはドミナント・ネガティブＰＤ－１受容体を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の共改変、およびこれらの方法の不利な点、特に保護がＴ細胞自体に限定されることを開示する。ドミナント・ネガティブＰＤ－１受容体を発現させる後者の手法は、Ｃｈｅｒｋａｓｓｋｙら（Ｃｈｅｒｋａｓｓｋｙら２０１７（非特許文献１３）によっても開示される。

【0014】

Ｐｒｏｓｓｅｒらは、Ｔ細胞に対する抑制性腫瘍ＰＤ－Ｌ１効果を逆転させるための、ＣＤ２８の膜貫通および細胞質ドメインを使用した、共刺激受容体へのＰＤ－１の変換によって産生される、ＰＤ－１およびＣＤ２８キメラ受容体を発現し、一方でＰＤ－Ｌ１に結合する受容体の能力を保持する、改変された初代ヒトＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を記載する（Ｐｒｏｓｓｅｒら２０１２（非特許文献１４））。さらに、Ｐｒｏｓｓｅｒらは、ＰＤ－Ｌ１腫瘍による、改変Ｔ細胞の共刺激を開示する。不利なことには、キメラＰＤ－１：ＣＤ２８受容体を有する改変Ｔ細胞は、それらがＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２陽性細胞に曝露された場合、常に共刺激シグナルを受け取る。ＰＤ－Ｌ１は、腫瘍細胞によってだけでなく抗原提示細胞によっても発現されることから、この慢性刺激は、腫瘍回避バリアントの発達および非特異的効果（すなわち、自己免疫）のリスク、ならびに発癌性形質転換リスクを増加させる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0015】

【特許文献1】国際公開第２０１２／０８２８４１号

【特許文献2】国際公開第２０１３／０４４２２５号

【特許文献3】国際公開第２０１６／０３０４１４号

【特許文献4】国際公開第２０１８／２２４６６０号

【特許文献5】国際公開第２０１６／１６８７７３号

【特許文献6】国際公開第２０１５／０５７８３４号

【特許文献7】国際公開第２０１８／０７８０６６号

【非特許文献】

【0016】

【非特許文献1】Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉら２０１０

【非特許文献2】Ｔｉｔｏｖら２０１８

【非特許文献3】Ｌａｍｅｒｓら２００６

【非特許文献4】Ｍｏｒｇａｎら２０１０

【非特許文献5】ＢｒｕｄｎｏおよびＫｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ２０１６

【非特許文献6】Ｍａｕｄｅら２０１４

【非特許文献7】Ｇｒｕｐｐら２０１３

【非特許文献8】Ｓｏｔｉｌｌｏら２０１５

【非特許文献9】Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉら２０１６

【非特許文献10】Ｙｕら２０１９

【非特許文献11】Ｇｒｏｓｓｅｒら２０１９

【非特許文献12】Ｒａｆｉｑら２０１８

【非特許文献13】Ｃｈｅｒｋａｓｓｋｙら２０１７

【非特許文献14】Ｐｒｏｓｓｅｒら２０１２

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

本発明の目的は、最先端技術の不利な点を克服する手法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0018】

前記目的は、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、好ましくは癌、感染性疾患または自己免疫疾患の治療における使用のための、
ｉ）少なくとも１つのＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ドメイン、
ｉｉ）タグ結合ドメインまたはタグ
を含む標的化モジュールであって、
標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞と組み合わせて投与され、
前記のスイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含み、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、
前記標的化モジュールによって解決される。

【0019】

有利には、スイッチ可能なキメラ抗原受容体との組み合わせで使用される本発明に従った標的化モジュールは、腫瘍細胞によって発現されるＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を能動的に標的にし、著しい抗腫瘍応答を誘導し得、スイッチ可能なキメラ抗原受容体の抗腫瘍応答は、標的化モジュールの存在下においてのみ誘導される。効果は、標的化モジュールの投与を抑え、中断することによって直ちに中断され得る。さらに有利には、本発明に従った標的化モジュールの薬物動態学的および薬力学的半減期は短く、好ましくは１０分間～５時間の範囲内にあり、媒介性免疫応答の急速でかつ可逆的なスイッチオフメカニズムを提供する。有利には、本発明に従った標的化モジュールの毒性は低く、それは、インビトロ実験において、標的化モジュールが補充されない場合、ＰＤ－Ｌ１低発現細胞を取っておくことによって実証され得るように、急速なスイッチオフメカニズムの結果である。

【0020】

本明細書において使用するとき、「標的化モジュール」という用語は、少なくとも２つの異なるドメインを有する単離されたタンパク質であって、各ドメインは、それぞれ標的または標的の均一な群に特異的であり、少なくとも１つのドメイン、特にＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ドメインは、標的細胞に特異的であり；１つのドメイン、特にタグ結合ドメインまたはタグは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体に特異的である、前記の単離されたタンパク質を指す。

【0021】

本発明によれば、標的化モジュールは、少なくとも１つのＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、または少なくとも１つのＰＤ－Ｌ２結合ドメイン、または少なくとも１つのＰＤ－Ｌ１結合ドメインおよび少なくとも１つのＰＤ－Ｌ２結合ドメインを含む。

【0022】

本明細書において使用するとき、「ＰＤ－Ｌ１」（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ ｌｉｇａｎｄ １：プログラム死リガンド１）とは、ヒトにおいてＣＤ２７４またはＰＤＣＤ１ＬＧ１遺伝子によってコードされ、ＰＤ－１のリガンドである、配列番号１に従った膜貫通タンパク質を指す。本明細書において使用するとき、「ＰＤ－Ｌ２」（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ １ ｌｉｇａｎｄ ２：プログラム死１リガンド２）とは、ヒトにおいてＣＤ２７３またはＰＤＣＤ１ＬＧ２遺伝子によってコードされ、ＰＤ－１のリガンドである、配列番号２に従った膜貫通タンパク質を指す。

【0023】

本明細書において使用するとき、「ドメイン」という用語は、タンパク質の残部から独立して存在し得かつ機能し得る、タンパク質配列の一部を指す。

【0024】

本明細書において使用するとき、「特異的」という用語は、サンプルに存在する結合パートナー（例えば、腫瘍抗原）タンパク質を認識しかつ結合するが、サンプルにおける他の分子を実質的に認識せず結合もしない、抗体もしくは抗体フラグメント、またはタンパク質、ペプチド、または低分子量有機リガンドの能力を指す。

【0025】

本明細書において使用するとき、「結合する」または「結合」という用語は、非共有結合、特にイオン結合、水素結合、ファン・デル・ワールス力、および／または疎水性相互作用を指す。

【0026】

本明細書において使用するとき、「組み合わせて投与される」という用語は、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の投与の前、それと同時に、および／またはその後に、標的化モジュールが投与される処理を指す。

【0027】

一部の実施形態において、標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の投与の、好ましくは１時間～２日間前に、より好ましくは４～２４時間前に、それだけで投与される。有利には、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の投与の前の標的化モジュールの投与は、当該スイッチ可能なキメラ抗原受容体を刺激し、スイッチ可能なキメラ抗原受容体担持エフェクター細胞の増大および標的部位でのそれらの蓄積を増加させる。

【0028】

さらなる実施形態において、標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞と同時に投与される。

【0029】

さらなる実施形態において、標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の投与の後、好ましくは３日間～３０日間の範囲内で投与される。さらに、標的化モジュールの付加的なそのような投薬を休止期間の後に実施して、スイッチ可能なキメラ抗原受容体担持エフェクター細胞を再活性化し得る。

【0030】

本明細書において使用するとき、「スイッチ可能なキメラ抗原受容体」という用語は、人工キメラ融合タンパク質、特にタグ結合ドメインまたはタグ、細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメイン、ならびにシグナル変換ドメインを含む受容体を指す（図１）。ドメインは、異なる起源に由来し得、それゆえ受容体はキメラと呼ばれる。有利には、受容体は、タグ結合ドメインまたはタグを用いて、種々の標的化モジュールに結合し得る。

【0031】

有利には、スイッチ可能なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするヌクレオチド配列を含む細胞は、標的化モジュールのタグ結合ドメインまたはタグに対する結合特異性を有するスイッチ可能なＣＡＲを発現し、それはその結果、標的細胞上のＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２に結合する。

【0032】

「自己免疫障害」という用語は、体内に正常に存在する物質および組織に対する、身体の異常な免疫応答（自己免疫）を指す。

【0033】

一部の実施形態において、標的化モジュールは、単量体または二量体形態、好ましくは単量体形態にある。

【0034】

さらなる実施形態において、標的化モジュールは１価または２価である。

【0035】

一部の実施形態において、本発明に従った標的化モジュールは２価であり、１つのＰＤ－Ｌ１および１つのＰＤ－Ｌ２結合ドメインを含む。

【0036】

好ましくは、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは抗体または抗体フラグメントである。好ましくは、ＰＤ－Ｌ２結合ドメインは抗体または抗体フラグメントである。

【0037】

本明細書において使用するとき、「抗体」という用語は、Ｆａｂ’可変領域を介して抗原に結合するタンパク質を指す。フラグメント抗原結合（Ｆａｂ）フラグメントとは、抗原に結合する、抗体における領域である。それは、重鎖（Ｖ_Ｈ）および軽鎖（Ｖ_Ｌ）のそれぞれの１つの定常および１つの可変ドメインから構成される。本明細書において使用するとき、「抗体フラグメント」という用語は、抗体の軽鎖または重鎖の少なくとも可変ドメインを含むタンパク質を指す。一実施形態において、抗体フラグメントは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、およびＦａｂ発現ライブラリーによって産生されるフラグメント、または単一ドメイン抗体（ナノボディ）から選択される。

【0038】

本明細書において使用するとき、「単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）」という用語は、共有結合で連結された、抗体の軽鎖および重鎖の可変ドメインを含む人工抗体フラグメントを指す。一実施形態において、抗体の軽鎖（Ｖ_Ｌ）および重鎖（Ｖ_Ｈ）の可変ドメインは、１０～２５個のアミノ酸の短いペプチドによって共有結合で連結される。さらなる実施形態において、短いペプチドは、Ｖ_ＨのＮ末端とＶ_ＬのＣ末端とを連結する、または逆もまた同様。

【0039】

一部の実施形態において、抗体は、動物種から、好ましくは哺乳類、例えばヒト、サル、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、イヌ、またはネコから獲得される。好ましくは、抗体または抗体フラグメントは、ヒト、ヒト化、または脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）抗体である。ヒト化抗体は、様々な方式、例えばリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）およびＣＤＲグラフトによって調製され得る。リサーフェシングの場合、分子モデリング、統計解析、および突然変異導入の組み合わせを使用して、標的生物の抗体の表面に類似するように抗体の表面のすべての非ＣＤＲ領域を改変する。ＣＤＲグラフトでは、本発明に従ったＣＤＲ領域が、公知のヒトフレームワーク領域に導入され、それは元のものと配列が類似している。脱免疫化抗体は、インシリコのペプチド－ＭＨＣアフィニティー予測に基づいて予測される免疫原性ホットスポットを与える残基を特異的に突然変異させることによって獲得され得る。

【0040】

一部の実施形態において、抗体または抗体フラグメントは、インシリコ設計を含めた組み換えＤＮＡ技法によって、非ヒト抗体の抗原結合領域がヒト抗体のフレームワークに移入されている、ポリクローナル、モノクローナル、またはキメラ抗体である。

【0041】

一部の実施形態において、選択されたタグまたは抗原に対する抗体は、特定のタンパク質を発現する細胞、該タンパク質をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ、該タンパク質自体または任意の一部、該タンパク質の免疫原性特性を保持するフラグメントまたはオリゴペプチドを用いた注射による、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス、ヒトを含むがそれらに限定されない様々な宿主の免疫付与によって産生され得る。

【0042】

一部の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、ＰＤ－１、ＢＭＳ－９３６５５９、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、３Ｆ２．１、およびそれらのフラグメントから選択される。好ましくは、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、ＢＭＳ－９３６５５９、アテゾリズマブまたはデュルバルマブのｓｃＦｖフラグメントである。

【0043】

本明細書において使用するとき、「フラグメント」という用語は、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインのアミノ酸配列の少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％からなるタンパク質を指す。

【0044】

本明細書において使用するとき、「ＰＤ－１」（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｐｒｏｔｅｉｎ １：プログラム細胞死タンパク質１）という用語は、免疫系を下方調節し、かつＴ細胞炎症活性を抑制することにより自己寛容を促進することによって、ヒト身体の細胞に対する免疫系の応答を調節することにおいて役割を有する細胞の表面にあるタンパク質を指す。好ましくは、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号３またはそのフラグメントと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含み、当該少なくとも１種の配列は、抗原ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２に結合する。一部の実施形態において、配列番号３のフラグメントは、ＰＤ－１の細胞外ドメインを含む。

【0045】

本明細書において使用するとき、「ＢＭＳ－９３６５５９」という用語は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体を指す。好ましくは、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号４および配列番号５または配列番号６７および配列番号６８または配列番号６９および配列番号７０または配列番号７１および配列番号７２または配列番号７３および配列番号７４または配列番号７５および配列番号７６または配列番号７７および配列番号７８または配列番号７９および配列番号８０または配列番号８１および配列番号８２または配列番号８３および配列番号８４と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含み、当該少なくとも１種の配列は抗原ＰＤ－Ｌ１に結合する。

【0046】

より好ましくは、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号４および配列番号５または配列番号７７および配列番号７８と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含み、当該少なくとも１種の配列は抗原ＰＤ－Ｌ１に結合する。

【0047】

一部の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、および配列番号１０４を含む群の１種の配列と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含む。

【0048】

好ましくは、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号８６または配列番号９７と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含む。

【0049】

本明細書において使用するとき、「アテゾリズマブ」という用語は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体を指す。好ましくは、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号６および配列番号７と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含み、当該少なくとも１種の配列は抗原ＰＤ－Ｌ１に結合する。

【0050】

一部の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号５７または配列番号６５と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含む。

【0051】

本明細書において使用するとき、「デュルバルマブ」という用語は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体を指す。好ましくは、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号８および配列番号９と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含み、当該少なくとも１種の配列は抗原ＰＤ－Ｌ１に結合する。

【0052】

一部の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号５８または配列番号６６と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含む。

【0053】

本明細書において使用するとき、「アベルマブ」という用語は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体を指す。好ましくは、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号６１および配列番号６２または配列番号１０５および配列番号１０６と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含み、当該少なくとも１種の配列は抗原ＰＤ－Ｌ１に結合する。

【0054】

一部の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号１０７または配列番号１０８と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含む。

【0055】

本明細書において使用するとき、「３Ｆ２．１」という用語は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体を指す。好ましくは、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、それぞれが、配列番号６３および配列番号６４と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含み、当該少なくとも１種の配列は抗原ＰＤ－Ｌ１に結合する。

【0056】

本明細書において使用するとき、「タグ」という用語は、ペプチドまたはタンパク質に付着した、それらが特異的な原子、イオンまたは分子、特にタグ結合ドメインに結合するのを可能にするペプチド配列を指す。

【0057】

一部の実施形態において、ＰＤ－Ｌ２結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ２に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントから選択される。

【0058】

一部の実施形態において、タグはペプチドエピトープタグである。さらなる実施形態において、タグは１０～２０個のアミノ酸を含む。

【0059】

一部の実施形態において、ペプチドエピトープタグは、ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、好ましくは配列番号１０、配列番号１１に従った、酵母転写因子ＧＣＮ４由来の短い線状ペプチド配列またはその突然変異体；ロイシン・ジッパー配列、好ましくはＳＹＮＺＩＰ １～ＳＹＮＺＩＰ ４８、ＢＡＴＦ、ＦＯＳ、ＡＴＦ４、ＡＴＦ３、ＢＡＣＨ１、ＪＵＮＤ、ＮＦＥ２Ｌ３、ＨＥＰＴＡＤ（Ｒｅｉｎｋｅら２０１０）、配列番号１２もしくは配列番号１３に従った配列またはその突然変異体；あるいはヒト核タンパク質由来の、好ましくはヒトＬａタンパク質由来の短い線状ペプチド配列である。好ましくは、ヒトＬａタンパク質由来のペプチドエピトープタグは、配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９、または配列番号１５もしくは配列番号１６に従ったＥ７Ｂ６、最も好ましくは配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９または配列番号１６に従ったＥ７Ｂ６である。

【0060】

本明細書において使用するとき、「突然変異体」という用語は、指定されるペプチドまたはタンパク質と少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有するペプチドまたはタンパク質を指す。有利には、突然変異体は、指定されるペプチドまたはタンパク質の１種または複数の活性を有し得、特にペプチドエピトープタグと同一のタグ結合ドメインに結合する。

【0061】

一部の実施形態において、突然変異体は、ペプチドまたはタンパク質の短縮型バージョンである。本明細書において使用するとき、「短縮型バージョン（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ｖｅｒｓｉｏｎｓ）」という用語は、指定されるペプチドまたはタンパク質と少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８５％の鎖長および１００％の配列同一性を有し、最も好ましくは少なくとも９５％の鎖長および１００％の配列同一性を有する、短くされたペプチドまたはタンパク質を指す。有利には、短縮型バージョンは、指定されるペプチドまたはタンパク質の活性の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％を有する。

【0062】

本明細書において使用するとき、「核タンパク質」という用語は、細胞核に見い出されるタンパク質を指す。

【0063】

一部の実施形態において、Ｈｉｓタグは、好ましくは６～１４個のヒスチジン残基の範囲内の、ヒスチジン残基からなるアミノ酸配列である。

【0064】

有利には、核抗原由来のペプチド配列であるタグは、生理学的条件下での天然タンパク質の背景において、対応するタグ結合ドメインによってアクセスされ得ずかつ結合され得ない。さらに有利には、タグは免疫原性ではない。これは、サイトカインストームまたはサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）と様々に称される有毒なレベルのサイトカインの放出などの、ＣＡＲ発現免疫細胞による無制御のオンターゲット・オフサイト毒性のリスクの最小化につながる。

【0065】

好ましい実施形態において、ペプチドエピトープタグは、ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、好ましくは配列番号１０、配列番号１１に従った、酵母転写因子ＧＣＮ４由来の短い線状ペプチド配列；ロイシン・ジッパー配列、好ましくはＳＹＮＺＩＰ １～ＳＹＮＺＩＰ ４８、ＢＡＴＦ、ＦＯＳ、ＡＴＦ４、ＡＴＦ３、ＢＡＣＨ１、ＪＵＮＤ、ＮＦＥ２Ｌ３、ＨＥＰＴＡＤ（Ｒｅｉｎｋｅら２０１０）、配列番号１２もしくは配列番号１３に従った配列；または、ヒト核タンパク質由来の、好ましくはヒトＬａタンパク質由来の短い線状ペプチド配列である。好ましくは、ヒトＬａタンパク質由来のペプチドエピトープタグは、配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９、または配列番号１５もしくは配列番号１６に従ったＥ７Ｂ６、最も好ましくは配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９または配列番号１６に従ったＥ７Ｂ６である。

【0066】

さらなる実施形態において、タグ結合ドメインは抗体または抗体フラグメントである。

【0067】

一部の実施形態において、タグ結合ドメインは、ヒト核Ｌａタンパク質由来のタグに結合し、好ましくはタグ結合ドメインは抗体または抗原結合フラグメントであり、タグ結合ドメインは、抗ＬａエピトープｓｃＦｖ、より好ましくは、以下の配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＸ^１ＳＳＱＳＬＬＮＳＲＴＸ^２ＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＸ^３ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＸ^４ＴＦＧＧＧＴＫＶＥｌＫ（配列番号１７）
Ｘ^１～Ｘ^４は、好ましくはタンパク質を構成する（ｐｒｏｔｅｉｎｏｇｅｎｉｃ）アルファアミノ酸残基から選択される、可変アミノ酸残基である、配列；または、配列番号１９もしくは配列番号２１の配列の一方と少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、に従ったＶ_Ｌを含む抗ＬａエピトープｓｃＦｖを構成する。

【0068】

一部の実施形態において、可変アミノ酸残基Ｘ^１～Ｘ^４は、以下のように選択される：
Ｘ^１は、セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、およびアルギニン等の極性でかつ／または正に帯電した残基；好ましくはリジンまたはアルギニンから選択され；
Ｘ^２は、好ましくはリジンおよびプロリンから選択され；
Ｘ^３は、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、およびアルギニン等の極性でかつ帯電した残基、好ましくはグルタミン酸およびリジンから選択され；
Ｘ^４は、イソロイシン、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、およびトリプトファン等の疎水性残基；好ましくはロイシンまたはプロリンから選択される。

【0069】

さらなる実施形態において、タグ結合ドメインは抗体または抗原結合フラグメントであり、タグ結合ドメインは、配列番号１８または配列番号２０の配列の一方と少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む抗ＬａエピトープｓｃＦｖを構成する。

【0070】

好ましくは、タグ結合ドメインは、それぞれが、配列番号１８（Ｖ_Ｈ）および配列番号１９（Ｖ_Ｌ）に従った配列、または配列番号２０（Ｖ_Ｈ）および配列番号２１（Ｖ_Ｌ）に従った配列と、少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む抗ＬａエピトープｓｃＦｖを構成する。

【0071】

最も好ましくは、タグ結合ドメインは、配列番号１８（Ｖ_Ｈ）および配列番号１９（Ｖ_Ｌ）に従った抗Ｌａ ５Ｂ９ ｓｃＦｖ、または配列番号２０（Ｖ_Ｈ）および配列番号２１（Ｖ_Ｌ）に従った抗Ｌａ ７Ｂ６ ｓｃＦｖを構成する。

【0072】

さらなる実施形態において、本発明に従った標的化モジュールは、エフェクター細胞結合ドメインをさらに含み、エフェクター細胞結合ドメインは、ヒトＣＤ３鎖、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはヒトＣＤ１６上のエピトープに特異的に結合する。

【0073】

本明細書において使用するとき、「エフェクター細胞結合ドメイン」という用語は、エフェクター細胞上のタンパク質またはタンパク質複合体（抗原）に特異的に結合するペプチドまたはタンパク質を指す。本明細書において使用するとき、「タンパク質複合体」という用語は、２以上の会合したタンパク質鎖の群を指す。

【0074】

本明細書において使用するとき、「エフェクター細胞」という用語は、免疫反応を実行する免疫細胞、特に細胞溶解、食作用および／または免疫抑制活性を有する免疫細胞を指す。好ましくは、エフェクター細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはマクロファージである。

【0075】

有利には、標的化モジュールは、ドメインに結合し、そのような相互作用の要求される数に関するある特定の閾値を超えることによって、エフェクター細胞を活性化する。

【0076】

好ましくは、エフェクター細胞結合ドメインは抗体または抗体フラグメントである。

【0077】

一実施形態において、エフェクター細胞結合ドメインは、最高１０^－８Ｍの解離定数Ｋ_ｄで、ヒトＣＤ３上のエピトープに特異的に結合する。一般に、エフェクター細胞結合ドメインのアフィニティー、特に解離定数Ｋ_ｄは、表面プラズモン共鳴測定またはフローサイトメトリーに基づく細胞結合アッセイを用いて決定される。

【0078】

好ましくは、エフェクター細胞結合ドメインは、低いアフィニティーで、好ましくは１０^－４Ｍ～１０^－８Ｍの範囲内の解離定数Ｋ_ｄで、ヒトＣＤ３上のエピトープに特異的に結合する。

【0079】

一部の実施形態において、エフェクター細胞結合ドメインは、以下の配列：
ｉ）配列番号２２もしくは２４に従ったＶ_Ｌ、および／または
ｉｉ）配列番号２３もしくは２５に従ったＶ_Ｈ
の少なくとも一方を含む。

【0080】

一部の実施形態において、エフェクター細胞結合ドメインは、配列番号２２もしくは２４および／または配列番号２３もしくは２５と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含み、当該少なくとも１種の配列は抗原ＣＤ３に結合する。

【0081】

好ましくは、ヒト化抗ヒトＣＤ３エフェクター細胞結合ドメインは、例えばｓｃＦｖの形態で、配列番号２５に従った重鎖（Ｖ_Ｈ）の可変領域、および配列番号２４に従った軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域を含む。好ましくは、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、グリシンセリンリンカーを介して接続される。

【0082】

一部の実施形態において、エフェクター細胞結合ドメインはヒト化抗ＴＣＲドメインであり、好ましくは、以下の配列：
ｉ）配列番号２６に従ったＶ_Ｌ、および／または
ｉｉ）配列番号２７に従ったＶ_Ｈ
の少なくとも一方を含む。

【0083】

一部の実施形態において、エフェクター細胞結合ドメインは、配列番号２６または２７に従った配列と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含み、当該少なくとも１種の配列は抗原ＴＣＲに結合する。

【0084】

一部の実施形態において、エフェクター細胞結合ドメインはヒト化抗ＣＤ１６Ａドメインであり、好ましくは、以下の配列：
ｉ）配列番号２８に従ったＶ_Ｌ、および／または
ｉｉ）配列番号２９に従ったＶ_Ｈ
の少なくとも一方、好ましくは配列番号２８に従ったＶ_Ｌおよび配列番号２９に従ったＶ_Ｈを含む。

【0085】

一実施形態において、エフェクター細胞結合ドメインは、配列番号２８または２９に従った配列と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１種の配列を含み、少なくとも１種の配列は抗原ＣＤ１６Ａに結合する。

【0086】

一部の実施形態において、少なくとも１つのＰＤ－Ｌ１および／もしくはＰＤ－Ｌ２結合ドメイン、ならびに／またはエフェクター細胞結合ドメインの可変領域は、ヒト化アミノ酸配列を含む。

【0087】

一部の実施形態において、本発明に従った標的化モジュールの異なるドメインは、リンカーによって互いと連結される。リンカーは、好ましくは１０～２０個のアミノ酸残基の短い配列を含む。一部の実施形態において、標的化モジュールは、ドメインが、それらがエフェクター細胞および標的細胞結合に対する特異性を呈するのを可能にする３次元フォールディングを有するように選択される、柔軟性のあるペプチド配列を含む。好ましいリンカーは、１～１０、好ましくは１～５から選択されるｘおよびｙを有する構造（Ｇ_ｘＳ_ｙ）を有するグリシン－セリンリンカーである。配列Ｇ_４Ｓ_１の１～１０リピートが最も好ましい。さらに、抗体誘導体のプロテアーゼ耐性を増加させ得るペプチド配列から構成されるリンカーが好ましい。

【0088】

好ましくは、本発明に従った標的化モジュールは、融合タンパク質として発現される。

【0089】

一部の実施形態において、本発明に従った標的化モジュールは、共刺激リガンド、放射性核種、細胞死誘導化学的化合物、および半減期増加ドメイン、好ましくはＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、ＨＳＡ、またはそれらの突然変異体を含む群から選択されるさらなるドメインを含む。本明細書において使用するとき、「突然変異体」という用語は、半減期増加ドメインと少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有するタンパク質を指す。有利には、突然変異体は、指定されるペプチドまたはタンパク質の１種または複数の活性を有し得、特に突然変異体は、半減期増加ドメインのように半減期を増加させる。

【0090】

好ましい実施形態において、本発明に従った標的化モジュールは、共刺激リガンド、放射性核種、細胞死誘導化学的化合物、および半減期増加ドメイン、好ましくはＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＨＳＡを含む群から選択されるさらなるドメインを含む。

【0091】

一部の実施形態において、本発明に従った標的化モジュールの長さは、２０～１６００個のアミノ酸の範囲内にある。

【0092】

一部の実施形態において、本発明に従った標的化モジュールは、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法において使用され、標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールと組み合わせて投与され、少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、少なくとも１つの標的細胞結合ドメインおよびタグ結合ドメインもしくはタグを含み、少なくとも１つの標的細胞結合ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５２、ＣＤ９０、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１５０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８４、ＣＤ２２３、ＣＤ２２９、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ３１９、ＣＤ３６６、およびＣＤ３７１、インターロイキン受容体、とりわけ好ましくはＩＬ－８Ｒα（ＣＸＣＲ１）、ＩＬ－８Ｒβ（ＣＸＣＲ２）、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１１Ｒβ、ＩＬ－１３Ｒα１および２、ＣＸＣＲ４、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバーおよびそれらの突然変異体、とりわけ好ましくはＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、またはそれらの突然変異体、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバー、エフリン、エフリン受容体、とりわけ好ましくはＥｐｈＡ１－１０、ＥｐｈＡ５、またはＥｐｈＢ１－６、前立腺特異的抗原、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、胚抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、および胎児アセチルコリン（ａｃｅｔｈｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）受容体、血管内皮成長因子ファミリーのメンバー、上皮細胞接着分子ＥｐＣＡＭ、アルファフェトプロテインＡＦＰ、細胞間接着分子ファミリーのメンバー、ムチンタンパク質ファミリーのメンバー、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ヒト高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、葉酸結合タンパク質（ｆｏｌａｔｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）ＦＢＰ、葉酸（ｆｏｌａｔｅ）受容体、ソマトスタチン受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド、サイトカイン受容体、上皮糖タンパク質ファミリーのメンバー、ジシアロガングリオシド（ｄｉａｓｉａｌｏｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ）、グリピカン、Ｇタンパク質共役受容体、炭酸脱水酵素ファミリーのメンバー、糖鎖抗原（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ）ファミリーのメンバー、Ｎｏｔｃｈリガンド、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、糖タンパク質Ａ３３、グアニル酸シクラーゼ２Ｃ、ならびに腫瘍特異的グリカンを含む群から選択される表面抗原に結合する抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンド（指定した抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンドの突然変異体およびアナログを含む）であり、本発明に従った標的化モジュール、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、異なる標的細胞結合ドメイン、および同一のタグ結合ドメインまたはタグを含む。

【0093】

本明細書において使用するとき、「標的細胞結合ドメイン」という用語は、標的細胞、好ましくは癌細胞、Ｔ細胞、感染細胞、または病原体もしくは寄生生物の表面のタンパク質またはタンパク質複合体（抗原）に特異的に結合する、ペプチド、タンパク質または低分子量有機リガンドを指す。

【0094】

本明細書において使用するとき、「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は互換可能に使用され、ペプチド結合によって共有結合で連結されたアミノ酸残基から構成される化合物を指す。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質またはペプチドの配列を構成できるアミノ酸の最大数に限界は課されない。

【0095】

本明細書において使用するとき、「低分子量有機リガンド」という用語は、標的細胞、好ましくは癌細胞、Ｔ細胞、感染細胞または病原体もしくは寄生生物の表面のタンパク質またはタンパク質複合体（抗原）に特異的に結合する、最大１０キロダルトン、好ましくは最大３キロダルトンの分子量を有する有機分子を指す。

【0096】

「標的細胞結合ドメイン」という用語は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のアルファおよびベータまたはガンマおよびデルタ鎖から構成される可溶性Ｔ細胞受容体、それらのフラグメントまたは突然変異体も含む。そのようなＴＣＲ由来結合部分は、ヒト白血球抗原クラス（ＨＬＡ）ＩおよびＩＩタンパク質複合体によって提示されるペプチドを認識しかつ結合する。例は、ＥＧＦＲファミリー、サバイビン、ｓｒｙ様高移動度（ｍｏｔｉｌｉｔｙ）群ボックス（ＳＯＸ）タンパク質ファミリー、黒色腫関連抗原（例えば、自己免疫原性癌／精巣抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１、黒色腫抗原ファミリーＡのメンバーＭＡＧＥＡ、黒色腫において優先的に発現される抗原ＰＲＡＭＥ）、および白血病関連抗原（例えば、ウィルムス腫瘍遺伝子１ ＷＴ１）などのタンパク質に由来するペプチドに特異的なＴＣＲであるが、それらに限定されない。

【0097】

本明細書において使用するとき、「突然変異体」という用語は、指定される抗体、抗体フラグメント、タンパク質またはペプチドと少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有するペプチドまたはタンパク質を指す。有利には、突然変異体は、指定される抗体、抗体フラグメント、タンパク質またはペプチドと同一の抗原に結合する。

【0098】

本明細書において使用するとき、「アナログ」という用語は、指定される抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンドと高い程度の構造同一性を有し、好ましくは少なくとも１つの原子、原子の群、官能基または部分構造が、別の群の原子、例えばヒドロキシ基で置き換えられている分子を指す。一部の実施形態において、ソマトスタチン（ＳＲＩＦ１４）のアナログは、オクトレオチドまたはパシレオチドである。有利には、アナログは、指定される抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンドと同一の抗原に結合する。

【0099】

一部の実施形態において、指定される抗体、抗体フラグメント、タンパク質またはペプチドのアナログは、Ｄアミノ酸、擬ペプチド結合、アミノアルコール、タンパク質を構成しないアミノ酸、非天然アミノ酸、改変された側鎖を有するアミノ酸および／または環状タンパク質を含む群から選択される改変を含む。有利には、これらのアナログは、安定性の増加を示す。

【0100】

さらなる実施形態において、標的細胞結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のアルファおよびベータまたはガンマおよびデルタ鎖からなる可溶性Ｔ細胞受容体である。

【0101】

好ましい実施形態において、少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、少なくとも１つの標的細胞結合ドメインおよびタグ結合ドメインまたはタグを含み、少なくとも１つの標的細胞結合ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５２、ＣＤ９０、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１５０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８４、ＣＤ２２３、ＣＤ２２９、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ３１９、ＣＤ３６６、およびＣＤ３７１、インターロイキン受容体、とりわけ好ましくはＩＬ－８Ｒα（ＣＸＣＲ１）、ＩＬ－８Ｒβ（ＣＸＣＲ２）、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１１Ｒβ、ＩＬ－１３Ｒα１および２、ＣＸＣＲ４、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバー、とりわけ好ましくはＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、またはＥｒｂＢ４；腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバー、エフリン、エフリン受容体、とりわけ好ましくはＥｐｈＡ１－１０、ＥｐｈＡ５、またはＥｐｈＢ１－６、前立腺特異的抗原、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、胚抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、および胎児アセチルコリン受容体、血管内皮成長因子ファミリーのメンバー、上皮細胞接着分子ＥｐＣＡＭ、アルファフェトプロテインＡＦＰ、細胞間接着分子ファミリーのメンバー、ムチンタンパク質ファミリーのメンバー、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ヒト高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、葉酸結合タンパク質ＦＢＰ、葉酸受容体、ソマトスタチン受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド、サイトカイン受容体、上皮糖タンパク質ファミリーのメンバー、ジシアロガングリオシド、グリピカン、Ｇタンパク質共役受容体、炭酸脱水酵素ファミリーのメンバー、糖鎖抗原ファミリーのメンバー、Ｎｏｔｃｈリガンド、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、糖タンパク質Ａ３３、グアニル酸シクラーゼ２Ｃ、ならびに腫瘍特異的グリカンを含む群から選択される表面抗原に結合する抗体または抗体フラグメントであり、本発明に従った標的化モジュール、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、異なる標的細胞結合ドメインおよび同一のタグ結合ドメインまたはタグを含む。

【0102】

さらなる実施形態において、少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、ＰＳＣＡおよびＰＳＭＡ、ＣＤ１９およびＣＤ２０、ＣＤ１９およびＣＤ２２、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２、ＣＤ１９およびＣＤ１２３、ＣＤ３３およびＣＤ１２３、ＣＤ３３およびＣＤ９９、ＣＤ３３およびＣＤ３６６、ＣＤ１２３およびＣＤ３６６、ＣＤ１２３およびＣＤ３７１、ＣＤ３６６およびＣＤ３７１、ＥｒｂＢ－１およびＥｒｂＢ－２、ＰＳＣＡおよびＥｒｂＢ－２、ＰＳＭＡおよびＣＥＡ、ＩＬ－１３Ｒα２およびＥｒｂＢ－２、ＣＤ３８およびＣＤ２６９、メソテリンおよびムチン１６から選択される表面抗原に結合する２つの標的細胞結合ドメインを含む。

【0103】

好ましくは、本発明に従った標的化モジュールは、配列番号５７～５９に従った配列の１つを含み、より好ましくは本発明に従った標的化モジュールは、配列番号５７～５９に従った配列の１つからなる。

【0104】

好ましい実施形態において、本発明に従った標的化モジュールは、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法において使用され、標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールの投与の後、好ましくは３日間～３０日間の範囲内で投与される。有利には、さらに別の標的化モジュールと組み合わせ標的化モジュールを使用することによって（ここで、標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞、およびさらに別の標的化モジュールの投与の後に投与される）、ＰＤ－Ｌ１療法の有害な全身効果は低下する。さらに、標的化モジュールの付加的なそのような投薬を休止期間の後に実施して、スイッチ可能なキメラ抗原受容体担持エフェクター細胞を再活性化し得る。

【0105】

より好ましくは、本発明に従った標的化モジュールは、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法において使用され、少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の投与の前、好ましくは１時間～２日間前に、より好ましくは４～２４時間前に、それだけで投与され、本発明に従った標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の投与の後、好ましくは３日間～３０日間の範囲内で投与される。さらに、標的化モジュールの付加的なそのような投薬を休止期間の後に実施して、スイッチ可能なキメラ抗原受容体担持エフェクター細胞を再活性化し得る。

【0106】

本発明は、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、好ましくは癌、感染性疾患、または自己免疫疾患の治療における使用のための、本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、ベクター、または細胞であって；
核酸、ベクター、または細胞は、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞と組み合わせて投与され、スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含み、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、
本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、ベクター、または細胞をさらに含む。

【0107】

本発明によれば、核酸、ベクター、および／または細胞は単離される。本明細書において使用するとき、「単離された」という用語は、天然の状態から変更されたまたは取り出されたことを意味する。

【0108】

一部の実施形態において、核酸はｃＤＮＡである。本明細書において使用するとき、「ｃＤＮＡ」（相補的ＤＮＡ）という用語は、逆転写酵素という酵素によって触媒される反応において、一本鎖ＲＮＡ、例えばｍＲＮＡから合成される二本鎖ＤＮＡを指す。一部の実施形態において、ｃＤＮＡは合成起源のものである。さらなる実施形態において、ｃＤＮＡはｍＲＮＡに由来し、それゆえ、ゲノムＤＮＡとは対照的に、エクソンのみを含有し、イントロンを含有しない。

【0109】

ベクターは、好ましくはプラスミド、人工染色体、線状化ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ウイルス粒子、または宿主細胞もしくは宿主生物のゲノムに安定に組み入れられる発現カセットを含有する別のベクターである。

【0110】

一部の実施形態において、細胞は、免疫細胞、好ましくは細胞溶解、食作用または免疫抑制活性を有する免疫細胞、例えばＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびマクロファージから選択される。好ましい実施形態において、細胞は、アルファ／ベータおよびガンマ／デルタＴ細胞、または幹細胞メモリーＴ細胞もしくはセントラルメモリーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞などのＴ細胞の亜集団を含めたＴ細胞；あるいはＮＫ細胞から選択される。

【0111】

一部の実施形態において、核酸、ベクター、または細胞は、誘導性発現系をさらに含む。一部の実施形態において、誘導性発現系は、ｌａｃオペロン、トランスポゾンＴｎ１０、またはテトラサイクリンオペロンを含むがそれらに限定されない、原核生物オペロンをベースとする。他の実施形態において、誘導性発現系は、ステロイド受容体、エストロゲン受容体、プロゲステロン、またはメタロチオネインをベースとする発現システムを含むがそれらに限定されない、真核生物シグナル伝達経路の構成要素をベースとする。

【0112】

好ましい実施形態において、誘導性発現系は、Ｔｅｔ－Ｏｎ（登録商標）（また、ｒｔＴＡ；ＴＥＴ Ｓｙｓｔｅｍｓ、タカラバイオ）、Ｔｅｔ－Ｏｎ（登録商標）Ａｄｖａｎｃｅｄ（また、ｒｔＴＡ２^Ｓ－Ｍ２またはｒｔＴＡ２－ｓｙｎ１；ＴＥＴ Ｓｙｓｔｅｍｓ、タカラバイオ）、Ｔｅｔ－Ｏｎ（登録商標）３Ｇ（また、ｒｔＴＡ－Ｖ１６；ＴＥＴ Ｓｙｓｔｅｍｓ、タカラバイオ）、Ｔ－ＲＥｘ（登録商標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、または活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）に応答性のプロモーターから選択される。

【0113】

本明細書において使用するとき、「Ｔｅｔ－Ｏｎ」という用語は、少なくともテトラサイクリン応答エレメント（ＴＲＥ）およびリバース・テトラサイクリン・トランスアクチベーター（ｒｔＴＡ）タンパク質またはそれらのバリアントを含む、誘導性発現系を指す。本明細書において使用するとき、「リバース・テトラサイクリン・トランスアクチベーター（ｒｔＴＡ）タンパク質」という用語は、テトラサイクリンまたはテトラサイクリンの誘導体、例えばドキシサイクリンによって結合された場合、ＴＲＥ上のオペレーター（ｔｅｔＯ）に結合し得るタンパク質を指す。ゆえに、システムへのテトラサイクリンまたはテトラサイクリンの誘導体の導入は、遺伝子産物の転写を始動する。一部の実施形態において、誘導性発現系は、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列、および／または本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列の転写を誘導し、好ましくは誘導性発現系は、本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列の転写を誘導する。

【0114】

本明細書において使用するとき、「バリアント」という用語は、ヌクレオチドまたは指定されるアミノ酸配列の１種または複数の機能を果たし得る、ヌクレオチド配列、ペプチド、またはタンパク質を指す。

【0115】

本明細書において使用するとき、「誘導体」という用語は、少なくとも１つの原子、原子の群、官能基または部分構造が、別の原子、原子の群、官能基または部分構造、例えばヒドロキシ基で置き換えられている、分子と高い程度の構造同一性、好ましくは同じ骨格（ｓｃａｆｆｏｌｄ）を有する分子を指す。有利には、誘導体は、指定される分子の１種または複数の活性を有し得る。

【0116】

有利には、Ｔｅｔ－Ｏｎシステムは、テトラサイクリンまたはテトラサイクリンの誘導体による抑止よりもむしろ、そのより迅速な応答性およびその活性化で、Ｔｅｔ－Ｏｆｆよりも好ましい。

【0117】

一部の実施形態において、ｒｔＴＡタンパク質は、ｒＴｅｔＲ（リバース・テトラサイクリン・リプレッサー）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）由来のＴｅｔＲ（テトラサイクリン・リプレッサー）の突然変異バージョン、および単純ヘルペスウイルス由来のビリオンタンパク質１６（ＶＰ１６）活性化ドメインの融合タンパク質である。好ましい実施形態において、ｒｔＴＡは、配列番号３０、配列番号３１、または配列番号３２を含む。

【0118】

本明細書において使用するとき、「テトラサイクリン応答エレメント（ＴＲＥ）」という用語は、そのプロモーターの下流にある１つまたは複数の遺伝子の発現の増加によってｒｔＴＡタンパク質の結合に応答する、最小プロモーターを有する少なくとも１つのＴｅｔＯ配列を指す。

【0119】

一部の実施形態において、ＴＲＥは、好ましくはスペーサー配列によって、より好ましくは配列番号３４を含むスペーサー配列によって分離された、配列番号３３に従った１９ｂｐの細菌ＴｅｔＯ配列の２～９リピート、好ましくは７リピートからなる。

【0120】

好ましい実施形態において、ＴＲＥは配列番号３５である。

【0121】

本明細書において使用するとき、「Ｔｅｔ－Ｏｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ」という用語は、配列番号３１のｒｔＴＡに対応する、ヒトコドン最適化されかつ３つの最小転写活性化ドメインを含む、基底発現の低下およびドキシサイクリンに対する感度の増加を有するＴｅｔ－Ｏｎシステムを指す。

【0122】

本明細書において使用するとき、「Ｔｅｔ－Ｏｎ ３Ｇ」という用語は、配列番号３２のｒｔＴＡに対応する、ドキシサイクリンに対する感度のさらなる増加を有するＴｅｔ－Ｏｎシステムを指す。

【0123】

本明細書において使用するとき、「Ｔ－ＲＥｘ」という用語は、関心対象の遺伝子が、上流のＣＭＶプロモーターおよび２つのＴｅｔＯ２部位によって隣接されるシステムを指す。各ＴｅｔＯ２部位へのＴｅｔＲホモ二量体の結合は、テトラサイクリンまたはテトラサイクリンの誘導体の非存在下で遺伝子発現を抑止する。ＴｅｔＲホモ二量体に対するテトラサイクリンまたはテトラサイクリンの誘導体の存在下で、それらはＴｅｔＯ２から解離し、関心対象の遺伝子の発現をもたらす。

【0124】

本明細書において使用するとき、「活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）に応答性のプロモーター」という用語は、遺伝子産物の転写を始動する活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）によって結合される、ヒト細胞核に天然に存在するプロモーターを指す。本明細書において使用するとき、「活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）」という用語は、転写のための１つのＤＮＡ結合ドメイン、およびカルシニューリンによる活性化のための２つのカルシニューリン結合ドメインを有する転写因子を指す。カルシニューリンによる活性化は、カルシウムセンサータンパク質であるカルモジュリンによる、セリン／トレオニンホスファターゼであるカルシニューリンの活性化によって生じる。活性化されたカルシニューリンは、ＮＦＡＴタンパク質のアミノ末端におけるセリンに富む領域（ＳＲＲ）およびＳＰリピートを脱リン酸化し、核局在化シグナルを曝露する立体構造変化をもたらし、ＮＦＡＴ核輸送をもたらす。

【0125】

一部の実施形態において、ＮＦＡＴに応答性のプロモーターは、任意選択的にスペーサー配列によって分離され、その後に最小プロモーターが続く、配列番号３６に従った３０ｂｐのヒトＮＦＡＴ結合配列の２～１２リピート、好ましくは６リピートからなる。

【0126】

一部の実施形態において、最小プロモーターは、配列番号３７または配列番号３８に従ったインターロイキン－２（ＩＬ－２）プロモーターに由来する。

【0127】

一部の実施形態において、ＮＦＡＴに応答性のプロモーターは、配列番号３９または配列番号４０を有する。

【0128】

さらなる実施形態において、本発明に従った核酸、ベクター、または細胞は、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、
スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含み、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する。

【0129】

本発明の別の態様は、
－好ましくはＴｅｔ－Ｏｎ、Ｔｅｔ－Ｏｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ、Ｔｅｔ－Ｏｎ ３Ｇ、Ｔ－ＲＥｘ、またはＮＦＡＴに応答性のプロモーターから選択される誘導性発現系、ならびに
－スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列であって、
スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含む、ヌクレオチド配列、ならびに
－本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列であって、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、ヌクレオチド配列
を含む、核酸、ベクター、または細胞である。

【0130】

一部の実施形態において、誘導性発現系は、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列、および／または本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列の転写を誘導し、好ましくは誘導性発現系は、本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列の転写を誘導する。

【0131】

本発明は、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、好ましくは癌、感染性疾患、または自己免疫疾患の治療における使用のための、本発明に従った標的化モジュール、本発明に従った核酸、ベクター、または細胞を含む医薬組成物であって；
医薬組成物は、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞と組み合わせて投与され、スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含み、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、
医薬組成物をさらに含む。

【0132】

医薬組成物は、好ましくは非経口的に、特に好ましくは静脈内に投与される。一実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与に適切な形態で存在する。好ましくは、医薬組成物は、溶液、エマルションまたは懸濁液である。

【0133】

一部の実施形態において、医薬組成物は、１ｎｇ／ｍｌ～５００ｍｇ／ｍｌの範囲内の、好ましくは５μｇ／ｍｌ～５ｍｇ／ｍｌの範囲内の濃度の、本発明に従った標的化モジュール、核酸、ベクターおよび／または細胞を含む注射用緩衝溶液である。

【0134】

一部の実施形態において、医薬組成物は、薬学的に許容可能な希釈剤または担体をさらに含む。さらなる実施形態において、担体は、水、水性バッファー溶液、０．９％生理食塩溶液、５％グルコース、５％キシリトール、０．３％グリシン溶液、リンゲル溶液、アミノ酸溶液、および同様の溶媒から選択される。さらなる実施形態において、水性バッファー溶液は、ｐＨ５．０～ｐＨ７．０の範囲内のｐＨ値を有する水性ヒスチジン、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム緩衝溶液から選択される。一部の実施形態において、バッファー溶液は、１ｍｍｏｌ／ｌ（ｍＭ）～５００ｍＭの範囲内の、好ましくは５ｍＭ～２０ｍＭの範囲内の、とりわけ好ましくは５ｍＭ～１０ｍＭの範囲内のバッファー濃度を有する。さらなる実施形態において、担体は、好ましくは１ｍＭ～３００ｍＭの範囲内の、とりわけ好ましくは１５０ｍＭの濃度の、塩化ナトリウムを含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、好ましくは１ｍＭ～９００ｍＭの範囲内の、とりわけ好ましくは５０ｍＭおよび６００ｍＭの範囲内の濃度の、安定剤をさらに含む。一部の実施形態において、安定剤は、スクロース、トレハロース、またはＬ－メチオニンである。

【0135】

一部の実施形態において、医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む。「薬学的に許容可能な賦形剤」という用語は、およその生理学的条件を提供しかつ／または安定性を増加させる化合物、例えば、ｐＨ値を調整するための剤および緩衝化剤、毒性等を調整するための剤を指す。一部の実施形態において、薬学的に許容可能な賦形剤は、０．０００１％（ｗ／ｖ）～１％（ｗ／ｖ）の範囲内の、とりわけ好ましくは０．００１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）の範囲内の酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム、およびポリソルベート－８０、好ましくはポリソルベート－８０から選択される。

【0136】

好ましい実施形態において、医薬組成物は、２５μｇ／日～１００ｍｇ／日の範囲内の投薬分量で、好ましくは０．１ｍｇ／日～２０ｍｇ／日の範囲内の投薬分量で標的化モジュールを含む。

【0137】

さらなる実施形態において、医薬組成物は無菌である。医薬組成物は、滅菌濾過を含むがそれに限定されない、従来の周知の技法によって滅菌される。

【0138】

一部の実施形態において、医薬組成物は、対象への投与のために使用される。

【0139】

一部の実施形態において、医薬組成物は、保存の前に凍結乾燥されるか、または周囲温度で溶液として、もしくは冷凍保存を含むがそれに限定されない、周囲温度よりも下で保存される。

【0140】

一部の実施形態において、医薬組成物は、対象への投与の前に注入液および安定剤溶液中で再構成されかつ／または希釈される。再構成または注入／安定化に使用される溶液は、医薬組成物に対して言及される構成要素または同様の構成要素のいずれかを含有し得る。

【0141】

本発明の別の態様は、
ａ）本発明に従った標的化モジュール、本発明に従った核酸、ベクターまたは細胞、ならびに
ｂ）スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞であって、
スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含み、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞
を含むキットである。

【0142】

一部の実施形態において、タグはペプチドエピトープタグである。さらなる実施形態において、タグは１０～２０個のアミノ酸を含む。

【0143】

一部の実施形態において、ペプチドエピトープタグは、ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、好ましくは配列番号１０、配列番号１１に従った、酵母転写因子ＧＣＮ４由来の短い線状ペプチド配列またはそれらの突然変異体；ロイシン・ジッパー配列、好ましくはＳＹＮＺＩＰ １～ＳＹＮＺＩＰ ４８、ＢＡＴＦ、ＦＯＳ、ＡＴＦ４、ＡＴＦ３、ＢＡＣＨ１、ＪＵＮＤ、ＮＦＥ２Ｌ３、ＨＥＰＴＡＤ（Ｒｅｉｎｋｅら２０１０）、配列番号１２もしくは配列番号１３に従った配列またはそれらの突然変異体、あるいはヒト核タンパク質由来の、好ましくはヒトＬａタンパク質由来の短い線状ペプチド配列である。好ましくは、ヒトＬａタンパク質由来のペプチドエピトープタグは、配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９、または配列番号１５もしくは配列番号１６に従ったＥ７Ｂ６、最も好ましくは配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９または配列番号１６に従ったＥ７Ｂ６である。

【0144】

一部の実施形態において、Ｈｉｓタグは、好ましくは６～１４個のヒスチジン残基の範囲内の、ヒスチジン残基からなるアミノ酸配列である。

【0145】

好ましい実施形態において、ペプチドエピトープタグは、ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、好ましくは配列番号１０もしくは配列番号１１に従った、酵母転写因子ＧＣＮ４由来の短い線状ペプチド配列；ロイシン・ジッパー配列、好ましくはＳＹＮＺＩＰ １～ＳＹＮＺＩＰ ４８、ＢＡＴＦ、ＦＯＳ、ＡＴＦ４、ＡＴＦ３、ＢＡＣＨ１、ＪＵＮＤ、ＮＦＥ２Ｌ３、ＨＥＰＴＡＤ（Ｒｅｉｎｋｅら２０１０）、配列番号１２もしくは配列番号１３に従った配列；または、ヒト核タンパク質由来の、好ましくはヒトＬａタンパク質由来の短い線状ペプチド配列である。

【0146】

さらなる実施形態において、タグ結合ドメインは抗体または抗体フラグメントである。

【0147】

一部の実施形態において、タグ結合ドメインは、ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、酵母転写因子ＧＣＮ４由来の短い線状ペプチド配列、ロイシン・ジッパー配列、またはヒト核タンパク質由来の短い線状ペプチド配列に結合する抗体または抗体フラグメントである。

【0148】

一部の実施形態において、タグ結合ドメインは、ヒト核Ｌａタンパク質由来のタグに結合し、好ましくはタグ結合ドメインは抗体または抗原結合フラグメントであり、タグ結合ドメインは、抗ＬａエピトープｓｃＦｖ、より好ましくは、以下の配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＸ^１ＳＳＱＳＬＬＮＳＲＴＸ^２ＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＸ^３ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＸ^４ＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩｌＫ（配列番号１７）
ここでＸ^１～Ｘ^４は、好ましくはタンパク質を構成するアルファアミノ酸残基から選択される、可変アミノ酸残基である、配列；または、配列番号１９もしくは配列番号２１の配列の一方と少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、に従ったＶ_Ｌを含む抗ＬａエピトープｓｃＦｖを構成する。

【0149】

一部の実施形態において、可変アミノ酸残基Ｘ^１～Ｘ^４は、以下のように選択される：
Ｘ^１は、セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、およびアルギニン等の極性でかつ／または正に帯電した残基から選択され；好ましくはＸ^１は、リジンまたはアルギニンであり；
Ｘ^２は、好ましくはリジンおよびプロリンから選択され；
Ｘ^３は、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、およびアルギニン等の極性でかつ帯電した残基、好ましくはグルタミン酸およびリジンから選択され；
Ｘ^４は、イソロイシン、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、およびトリプトファン等の疎水性残基から選択され；好ましくはＺ^４は、ロイシンまたはプロリンから選択される。

【0150】

さらなる実施形態において、タグ結合ドメインは抗体または抗原結合フラグメントであり、タグ結合ドメインは、配列番号１８もしくは配列番号２０の配列の一方と少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む抗ＬａエピトープｓｃＦｖを構成する。

【0151】

好ましくは、タグ結合ドメインは、それぞれが、配列番号１８（Ｖ_Ｈ）および配列番号１９（Ｖ_Ｌ）に従った配列、または配列番号２０（Ｖ_Ｈ）および配列番号２１（Ｖ_Ｌ）に従った配列と、少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む抗ＬａエピトープｓｃＦｖを構成する。

【0152】

最も好ましくは、タグ結合ドメインは、配列番号１８（Ｖ_Ｈ）および配列番号１９（Ｖ_Ｌ）に従った抗Ｌａ ５Ｂ９ ｓｃＦｖ、または配列番号２０（Ｖ_Ｈ）および配列番号２１（Ｖ_Ｌ）に従った抗Ｌａ ７Ｂ６ ｓｃＦｖを構成する。

【0153】

本明細書において使用するとき、「細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメイン」という用語は、スイッチ可能なＣＡＲを細胞の細胞膜に固定し、その特定の標的化モジュールに最適に結合するために細胞の表面から突き出している、タグ結合ドメインまたはタグに接続された柔軟性のあるペプチド配列を指す。

【0154】

一部の実施形態において、細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ２８分子、ＣＤ８ａ鎖、ＮＫ細胞受容体、好ましくはナチュラルキラー群ＮＫＧ２Ｄ、のヒンジおよび膜貫通ドメイン；または抗体の定常領域の一部、ならびにそれらの組み合わせから選択される。本明細書において使用するとき、「それらの組み合わせ」という用語は、種々のヒンジおよび膜貫通ドメインの組み合わせを指す。

【0155】

Ｐｉｎｔｈｕｓら２００３、Ｐｉｎｔｈｕｓら２００４、およびＣａｒｔｅｌｌｉｅｒｉら２０１６は、ＣＡＲにおけるヒトＣＤ２８分子のヒンジおよび膜貫通ドメインの使用を記載する（Ｐｉｎｔｈｕｓら２００３、Ｐｉｎｔｈｕｓら２００４、Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉら２０１６）。

【0156】

Ｃａｒｐｅｎｔｉｎｏら、Ｍｉｌｏｎｅら、およびＺｈａｏらは、ＣＡＲにおけるヒトＣＤ８α分子のヒンジおよび膜貫通ドメインの使用を記載する（Ｃａｒｐｅｎｔｉｎｏら２００９、Ｍｉｌｏｎｅら２００９、Ｚｈａｏら２００９）。

【0157】

Ｚｈａｎｇら２００５およびＺｈａｎｇら２００６は、ＣＡＲにおけるＮＫＧ２Ｄのヒンジおよび膜貫通ドメインの使用を記載する（Ｚｈａｎｇら２００５、Ｚｈａｎｇら２００６）。

【0158】

Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｆｒｉｇａｕｌｔら、およびＷａｎｇらは、免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ）の定常領域の一部のヒンジおよび膜貫通ドメインの使用を記載する（Ｈｏｍｂａｃｈら２００７、Ｆｒｉｇａｕｌｔら２０１５、Ｗａｎｇら２００７）。Ｆｒｉｇａｕｌｔらは、ＩｇＧ４の定常領域のヒンジドメインの使用を記載する。

【0159】

細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインの組み合わせの例は、ＣＤ２８細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメイン、ＣＤ８アルファ細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメイン、ＣＤ２８またはＣＤ１３７膜貫通ドメインと組み合わせられたＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域であるが、それらに限定されない。

【0160】

本明細書において使用するとき、「シグナル変換ドメイン」という用語は、ヒト細胞表面タンパク質またはタンパク質複合体（標的細胞）への、スイッチ可能なＣＡＲを発現する細胞（エフェクター細胞）の架橋によって、細胞内にシグナルを送るペプチド配列を指す。エフェクターおよび標的細胞の間の架橋は、本発明に従った標的化モジュールによって媒介される。

【0161】

一部の実施形態において、シグナル変換ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０およびＣＤ２７、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ３鎖の細胞質領域、ＤＡＰ１２、ＣＤ１２２（インターロイキン－２受容体β）、ＣＤ１３２（インターロイキン－２受容体γ）、ＣＤ１２７（インターロイキン－７受容体α）、ＣＤ３６０（インターロイキン－２１受容体）、活性化Ｆｃ受容体、ならびにそれらの突然変異体、の細胞質領域から選択される。

【0162】

本明細書において使用するとき、「突然変異体」という用語は、シグナル変換ドメインと少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有するタンパク質を指す。有利には、突然変異体は、指定されるシグナル変換ドメインと同じ方式で、ヒト細胞表面タンパク質またはタンパク質複合体（標的細胞）への、スイッチ可能なＣＡＲを発現する細胞（エフェクター細胞）の架橋によって、細胞内にシグナルを送る。

【0163】

一部の実施形態において、突然変異体は、短縮型バージョンである。本明細書において使用するとき、「短縮型バージョン」という用語は、シグナル変換ドメインと少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８５％の鎖長および１００％の配列同一性を有し、最も好ましくは少なくとも９５％の鎖長および１００％の配列同一性を有する、短くされたタンパク質を指す。有利には、短縮型バージョンは、指定されるシグナル変換ドメインの少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の活性を有する。

【0164】

Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｍａｈｅｒら、およびＣａｒｔｅｌｌｉｅｒｉらは、ＣＡＲにおけるシグナル変換ドメインとしてのＣＤ２８の細胞質領域の使用を記載する（Ｈｏｍｂａｃｈら２００１、Ｍａｈｅｒら２００２、Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉら２０１６）。Ｇｕｅｄａｎらは、シグナル変換ドメインとしてのＣＤ２８の細胞質領域の突然変異体の使用を記載する（Ｇｕｅｄａｎら２０２０）。

【0165】

ＭｉｌｏｎｅらおよびＦｉｎｎｅｙらは、シグナル変換ドメインとしてのＣＤ１３７（４－１ＢＢ）の細胞質領域の使用を記載する（Ｆｉｎｎｅｙら２００４、Ｍｉｌｏｎｅら２００９）。

【0166】

Ｆｉｎｎｅｙら、ならびにＨｏｍｂａｃｈおよびＡｂｋｅｎは、ＣＡＲにおけるシグナル変換ドメインとしてのＣＤ１３４（ＯＸ４０）の細胞質領域の使用を記載する（Ｆｉｎｎｅｙら２００４、ＨｏｍｂａｃｈおよびＡｂｋｅｎ ２０１１、ＨｏｍｂａｃｈおよびＡｂｋｅｎ ２０１３）。

【0167】

Ｇｕｅｄａｎらは、シグナル変換ドメインとしてのＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）の細胞質領域の使用を記載する（Ｇｕｅｄａｎら２０１８）。

【0168】

Ｚｈａｎｇらは、シグナル変換ドメインとしてのＤＡＰ１０の使用を記載する（Ｚｈａｎｇら２００５）。

【0169】

Ｆｅｄｏｒｏｖらは、ＣＡＲにおけるシグナル変換ドメインとしてのプログラム細胞死１（ＰＤ－１）のおよび細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）の使用を記載する（Ｆｅｄｏｒｏｖら２０１３）。

【0170】

ＧｏｎｇらおよびＧａｄｅらは、ＣＡＲにおけるシグナル変換ドメインとしてのＣＤ３鎖、特にＣＤ３ζ鎖の細胞質領域の使用を記載する（Ｇｏｎｇら１９９９、Ｇａｄｅら２００５）。

【0171】

Ｔｏｐｆｅｒらは、ＣＡＲにおけるシグナル変換ドメインとしてのＤＡＰ１２の使用を記載する（Ｔｏｐｆｅｒら２０１５）。

【0172】

Ｋａｇｏｙａらは、ＣＡＲにおけるシグナル変換ドメインとしてのインターロイキン受容体に由来するシグナル伝達鎖またはモチーフの使用を記載する（Ｋａｇｏｙａら２０１８）。

【0173】

ＬａｍｅｒｓらおよびＫｅｒｓｈａｗらは、シグナル変換ドメインとしての活性化Ｆｃ受容体、特にＦｃイプシロン受容体γ鎖の使用を記載する（Ｌａｍｅｒｓら２００４、Ｋｅｒｓｈａｗら２００６）。

【0174】

好ましい実施形態において、シグナル変換ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０およびＣＤ２７、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ３鎖の細胞質領域、ＤＡＰ１２、ＣＤ１２２（インターロイキン－２受容体β）、ＣＤ１３２（インターロイキン－２受容体γ）、ＣＤ１２７（インターロイキン－７受容体α）、ならびにＣＤ３６０（インターロイキン－２１受容体）、活性化Ｆｃ受容体、の細胞質領域から選択される。

【0175】

一部の実施形態において、スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、とりわけ好ましくはＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０およびＣＤ２７、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）の細胞質領域、ＣＤ３鎖、ＤＡＰ１２、ＣＤ１２２（インターロイキン－２受容体β）、ＣＤ１３２（インターロイキン－２受容体γ）、ＣＤ１２７（インターロイキン－７受容体α）、ＣＤ３６０（インターロイキン－２１受容体）、活性化Ｆｃ受容体、ならびにそれらの突然変異体、の細胞質領域から選択される、少なくとも１つのシグナル変換ドメイン、好ましくは２、３、４つ、またはそれを超えるシグナル変換ドメインを含む。

【0176】

好ましい実施形態において、スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、とりわけ好ましくはＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０およびＣＤ２７、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ３鎖の細胞質領域、ＤＡＰ１２、ＣＤ１２２（インターロイキン－２受容体β）、ＣＤ１３２（インターロイキン－２受容体γ）、ＣＤ１２７（インターロイキン－７受容体α）、ならびにＣＤ３６０（インターロイキン－２１受容体）、活性化Ｆｃ受容体、の細胞質領域から選択される、少なくとも１つのシグナル変換ドメイン、好ましくは２、３、４つ、またはそれを超えるシグナル変換ドメインを含む。

【0177】

さらなる実施形態において、スイッチ可能なキメラ抗原受容体は第４のドメインを含み、第４のドメインは、細胞表面のキメラ抗原受容体を検出するまたはキメラ抗原受容体Ｔ細胞を刺激する働きをし得る、受容体の細胞外部分における短いペプチドリンカーである。

【0178】

さらなる実施形態において、第４のドメインは、第４のドメインに特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍａｂ）に対する線状エピトープを形成する。一部の実施形態において、第４のドメインは、少なくとも１つの線状エピトープ、好ましくは配列番号１５または配列番号１６に従ったＥ７Ｂ６を含む。

【0179】

一部の実施形態において、第４のドメインは、タグ結合ドメインまたはタグと、細胞外ヒンジドメインまたは細胞外ヒンジドメインの不可欠な部分との間に位置する。

【0180】

有利には、第４のドメインを有するスイッチ可能なＣＡＲグラフト細胞は特異的に刺激されて、インビトロでもインビボでも、非グラフト細胞と比較して優先的に増殖しかつより長く持続することができる。さらに有利には、第４のドメインは、混合された細胞集団からスイッチ可能なＣＡＲグラフト細胞を精製するために、またはスイッチ可能なＣＡＲグラフト細胞媒介性免疫応答を弱め、かつスイッチ可能なＣＡＲグラフト細胞をインビボで排除するためにも使用され得る。

【0181】

さらなる実施形態において、スイッチ可能なＣＡＲはシグナルペプチドを含む。有利には、シグナルペプチドは、エフェクター細胞の細胞表面での発現を可能にする。一実施形態において、シグナルペプチドは、タグ結合ドメインまたはタグの前のスイッチ可能なＣＡＲヌクレオチド配列のＮ末端にある。一部の実施形態において、シグナルペプチドは、共翻訳的にまたは翻訳後的にタンパク質を分泌経路に標的化し、免疫原性反応を逃れるために、ＣＤ２８、ＣＤ８アルファ、ＩＬ－２、またはヒト起源の抗体の重鎖もしくは軽鎖などのタンパク質由来のリーダーペプチドから選択される。

【0182】

さらなる実施形態において、核酸はｃＤＮＡである。

【0183】

一部の実施形態において、核酸は、配列番号４１～４８の配列のうちの１つに従ったスイッチ可能なＣＡＲをコードする。好ましくは、核酸は、配列番号４９～５６の配列のうちの１つである。

【0184】

一部の実施形態において、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含む細胞は、免疫細胞、好ましくは細胞溶解、食作用または免疫抑制活性を有する免疫細胞、例えばＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびマクロファージから選択される。好ましい実施形態において、細胞は、アルファ／ベータおよびガンマ／デルタＴ細胞、または幹細胞メモリーＴ細胞もしくはセントラルメモリーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞などのＴ細胞の亜集団を含めたＴ細胞；あるいはＮＫ細胞から選択される。

【0185】

一部の実施形態において、キットは、少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールをさらに含み、少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、少なくとも１つの標的細胞結合ドメイン、およびタグ結合ドメインまたはタグを含み、少なくとも１つの標的細胞結合ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５２、ＣＤ９０、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１５０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８４、ＣＤ２２３、ＣＤ２２９、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ３１９、ＣＤ３６６、およびＣＤ３７１、インターロイキン受容体、とりわけ好ましくはＩＬ－８Ｒα（ＣＸＣＲ１）、ＩＬ－８Ｒβ（ＣＸＣＲ２）、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１１Ｒβ、ＩＬ－１３Ｒα１および２、ＣＸＣＲ４、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバーおよびそれらの突然変異体、とりわけ好ましくはＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、またはそれらの突然変異体、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバー、エフリン、エフリン受容体、とりわけ好ましくはＥｐｈＡ１－１０、ＥｐｈＡ５、またはＥｐｈＢ１－６、前立腺特異的抗原、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、胚抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、および胎児アセチルコリン受容体、血管内皮成長因子ファミリーのメンバー、上皮細胞接着分子ＥｐＣＡＭ、アルファフェトプロテインＡＦＰ、細胞間接着分子ファミリーのメンバー、ムチンタンパク質ファミリーのメンバー、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ヒト高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、葉酸結合タンパク質ＦＢＰ、葉酸受容体、ソマトスタチン受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド、サイトカイン受容体、上皮糖タンパク質ファミリーのメンバー、ジシアロガングリオシド、グリピカン、Ｇタンパク質共役受容体、炭酸脱水酵素ファミリーのメンバー、糖鎖抗原ファミリーのメンバー、Ｎｏｔｃｈリガンド、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、糖タンパク質Ａ３３、グアニル酸シクラーゼ２Ｃ、ならびに腫瘍特異的グリカンを含む群から選択される表面抗原に結合する抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチド、または低分子量有機リガンド（指定した抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンドの突然変異体およびアナログを含む）であり、本発明に従った標的化モジュール、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、異なる標的細胞結合ドメイン、および同一のタグ結合ドメインまたはタグを含む。そのようなキットは、免疫系からの腫瘍回避を避けるのに適切である。

【0186】

「標的細胞結合ドメイン」という用語は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のアルファおよびベータまたはガンマおよびデルタ鎖から構成される可溶性Ｔ細胞受容体、それらのフラグメントまたは突然変異体も含む。

【0187】

好ましい実施形態において、キットは、少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールをさらに含み、少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、少なくとも１つの標的細胞結合ドメインおよびタグ結合ドメインまたはタグを含み、少なくとも１つの標的細胞結合ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５２、ＣＤ９０、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１５０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８４、ＣＤ２２３、ＣＤ２２９、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ３１９、ＣＤ３６６、およびＣＤ３７１、インターロイキン受容体、とりわけ好ましくはＩＬ－８Ｒα（ＣＸＣＲ１）、ＩＬ－８Ｒβ（ＣＸＣＲ２）、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１１Ｒβ、ＩＬ－１３Ｒα１および２、ＣＸＣＲ４、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバー、とりわけ好ましくはＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、またはＥｒｂＢ４；腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバー、エフリン、エフリン受容体、とりわけ好ましくはＥｐｈＡ１－１０、ＥｐｈＡ５、またはＥｐｈＢ１－６、前立腺特異的抗原、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、胚抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、および胎児アセチルコリン受容体、血管内皮成長因子ファミリーのメンバー、上皮細胞接着分子ＥｐＣＡＭ、アルファフェトプロテインＡＦＰ、細胞間接着分子ファミリーのメンバー、ムチンタンパク質ファミリーのメンバー、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ヒト高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、葉酸結合タンパク質ＦＢＰ、葉酸受容体、ソマトスタチン受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド、サイトカイン受容体、上皮糖タンパク質ファミリーのメンバー、ジシアロガングリオシド、グリピカン、Ｇタンパク質共役受容体、炭酸脱水酵素ファミリーのメンバー、糖鎖抗原ファミリーのメンバー、Ｎｏｔｃｈリガンド、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、糖タンパク質Ａ３３、グアニル酸シクラーゼ２Ｃ、ならびに腫瘍特異的グリカンを含む群から選択される表面抗原に結合する抗体または抗体フラグメントであり、本発明に従った標的化モジュール、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、異なる標的細胞結合ドメイン、および同一のタグ結合ドメインまたはタグを含む。

【0188】

一部の実施形態において、キットは、
・本発明に従った核酸、ベクターまたは細胞、ならびに
・スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞であって、
スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含む、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞
・少なくとも１つのさらに別の標的化モジュール
を含み、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合し、
本発明に従った標的化モジュール、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、異なる標的細胞結合ドメイン、および同一のタグ結合ドメインまたはタグを含む。

【0189】

一部の実施形態において、キットは、１～３つの標的化モジュール、好ましくは本発明に従った１つの標的化モジュール、および１つまたは２つのさらに別の標的化モジュールを含む。

【0190】

一部の実施形態において、タグ結合ドメインまたはタグは、スイッチ可能なＣＡＲを含むポリペプチドのアミノ末端に存在する。有利には、アミノ末端にタグ結合ドメインまたはタグを置くことは、タグ結合ドメインまたはタグが、標的細胞に結合している標的化モジュールに妨げるものなくアクセルすることを可能にする。

【0191】

一部の実施形態において、キットは、誘導物質、好ましくはテトラサイクリンまたはテトラサイクリンの誘導体、例えばドキシサイクリンをさらに含む。

【0192】

キットの一部の実施形態において、標的化モジュール、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターおよび／または細胞は、医薬組成物の形態にある。

【0193】

医薬組成物は、好ましくは非経口的に、特に好ましくは静脈内に投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与に適切な形態で存在する。好ましくは、医薬組成物は、溶液、エマルションまたは懸濁液である。

【0194】

一部の実施形態において、医薬組成物は、１μｇ／ｍｌ～５００ｍｇ／ｍｌの、好ましくは５０μｇ／ｍｌ～５０ｍｇ／ｍｌの、本発明に従った標的化モジュールおよび／または核酸および／またはベクターおよび／または細胞を含む注射用緩衝溶液である。

【0195】

一部の実施形態において、医薬組成物は、１，０００ｍｌ^－１～５・１０^８ｍｌ^－１、好ましくは１・１０^５ｍｌ^－１～２．５・１０^７ｍｌ^－１の、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含む細胞を含む注射用緩衝溶液である。

【0196】

一部の実施形態において、医薬組成物は、薬学的に許容可能な希釈剤または担体をさらに含む。さらなる実施形態において、担体は、水、水性バッファー溶液、０．９％生理食塩溶液、５％グルコース、５％キシリトール、０．３％グリシン溶液、リンゲル溶液、アミノ酸溶液、および同様の溶媒から選択される。さらなる実施形態において、水性バッファー溶液は、ｐＨ５．０～ｐＨ８．０の範囲内のｐＨ値を有する、好ましくはｐＨ６．０～ｐＨ７．０の範囲内のｐＨ値を有する水性ヒスチジン、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム緩衝溶液から選択される。一部の実施形態において、バッファー溶液は、１ｍｍｏｌ／ｌ（ｍＭ）～５００ｍＭの範囲内の、好ましくは５ｍＭ～２０ｍＭの範囲内の、とりわけ好ましくは５ｍＭ～１０ｍＭの範囲内のバッファー濃度を有する。さらなる実施形態において、担体は、好ましくは０ｍＭ～３００ｍＭの範囲内の、とりわけ好ましくは１５０ｍＭの濃度の、塩化ナトリウムを含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、好ましくは１ｍＭ～９００ｍＭの範囲内の、とりわけ好ましくは１０ｍＭおよび６００ｍＭの範囲内の濃度の、安定剤をさらに含む。一部の実施形態において、安定剤は、スクロース、トレハロース、またはＬ－メチオニンである。

【0197】

さらなる実施形態において、医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む。「薬学的に許容可能な賦形剤」という用語は、およその生理学的条件を提供しかつ／または安定性を増加させる化合物、例えば、ｐＨ値を調整するための剤および緩衝化剤、毒性等を調整するための剤、または医薬組成物の冷凍保存を可能にする剤を指す。一部の実施形態において、薬学的に許容可能な賦形剤は、０．０００１％（ｗ／ｖ）～１％（ｗ／ｖ）の範囲内の、とりわけ好ましくは０．００１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）の範囲内の酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム、およびポリソルベート－８０、好ましくはポリソルベート－８０から選択される。

【0198】

好ましい実施形態において、医薬組成物は、２５μｇ／日～１００ｍｇ／日の範囲内の投薬分量で、好ましくは０．１ｍｇ／日～１０ｍｇ／日の範囲内の投薬分量で標的化モジュールを含む。

【0199】

さらなる実施形態において、医薬組成物は無菌である。医薬組成物は、滅菌濾過を含むがそれに限定されない、従来の周知の技法によって滅菌される。

【0200】

一部の実施形態において、医薬組成物は、対象への投与のために使用される。

【0201】

一部の実施形態において、医薬組成物は、保存の前に凍結乾燥されるか、または周囲温度で溶液として、もしくは冷凍保存を含むがそれに限定されない、周囲温度よりも下で保存される。

【0202】

一部の実施形態において、医薬組成物は、対象への投与の前に注入液および安定剤溶液中で再構成されかつ／または希釈される。再構成または注入／安定化に使用される溶液は、医薬組成物に対して言及される構成要素または同様の構成要素のいずれかを含有し得る。

【0203】

好ましい実施形態において、医薬組成物は、投与あたり１・１０^７～１・１０^９個の範囲内の投薬分量で、好ましくは投与あたり１・１０^８～５・１０^８個の範囲内の投薬分量で、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含む細胞を含む。

【0204】

本発明の別の態様は、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、好ましくは癌、感染性疾患、または自己免疫疾患の治療における使用のための、本発明に従ったキットである。

【0205】

一部の実施形態において、本発明に従った標的化モジュール、本発明に従った核酸、ベクター、もしくは細胞、または本発明に従ったキットは、癌、感染症、または自己免疫疾患の症例における治療的および／または診断的使用のための医薬を製造するために使用される。

【0206】

本発明のさらなる態様は、本発明に従った標的化モジュール、細胞もしくはベクター、医薬組成物、またはキットの投与による、癌、感染性疾患、または自己免疫疾患を有する哺乳類、好ましくはヒトにおける、キメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法である。治療適用に関しては、本発明に従った標的化モジュール、およびスイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の薬理学的に有効な分量を含む、本発明に従った無菌の医薬組成物または本発明に従った無菌のキットを対象に投与して、前述の疾病を治療する。

【0207】

一部の実施形態において、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法；好ましくは癌、感染性疾患、または自己免疫疾患の治療のための方法は、誘導物質、好ましくはテトラサイクリンまたはテトラサイクリンの誘導体、例えばドキシサイクリンの投与をさらに含む。

【0208】

一部の実施形態において、誘導物質、好ましくはテトラサイクリンまたはテトラサイクリンの誘導体、例えばドキシサイクリンは、本発明に従った核酸、ベクター、または細胞の投与の後に、経口的にまたは静脈内に投与される。

【0209】

一部の実施形態において、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法、好ましくは癌、感染性疾患、または自己免疫疾患の治療のための方法は、以下のステップ：
ａ）本発明に従った標的化モジュールの有効量を哺乳類に投与するステップ、ならびに
ｂ）スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の有効量を哺乳類に投与するステップであって、
スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含み、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、ステップ
を含み、
標的化モジュールは、ベクターまたは細胞の投与の前、投与と同時に、または投与の後に哺乳類に投与される。

【0210】

さらなる実施形態において、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法、好ましくは癌、感染性疾患、または自己免疫疾患の治療のための方法は、以下のステップ：
ａ）少なくとも１つの標的細胞結合ドメイン、およびタグ結合ドメインまたはタグを含む標的化モジュールの有効量を哺乳類に投与するステップであって、
少なくとも１つの標的細胞結合ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５２、ＣＤ９０、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１５０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８４、ＣＤ２２３、ＣＤ２２９、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ３１９、ＣＤ３６６、およびＣＤ３７１、インターロイキン受容体、とりわけ好ましくはＩＬ－８Ｒα（ＣＸＣＲ１）、ＩＬ－８Ｒβ（ＣＸＣＲ２）、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１１Ｒβ、ＩＬ－１３Ｒα１および２、ＣＸＣＲ４、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバーおよびそれらの突然変異体、とりわけ好ましくはＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、またはそれらの突然変異体、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバー、エフリン、エフリン受容体、とりわけ好ましくはＥｐｈＡ１－１０、ＥｐｈＡ５、またはＥｐｈＢ１－６、前立腺特異的抗原、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、胚抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、および胎児アセチルコリン受容体、血管内皮成長因子ファミリーのメンバー、上皮細胞接着分子ＥｐＣＡＭ、アルファフェトプロテインＡＦＰ、細胞間接着分子ファミリーのメンバー、ムチンタンパク質ファミリーのメンバー、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ヒト高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、葉酸結合タンパク質ＦＢＰ、葉酸受容体、ソマトスタチン受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド、サイトカイン受容体、上皮糖タンパク質ファミリーのメンバー、ジシアロガングリオシド、グリピカン、Ｇタンパク質共役受容体、炭酸脱水酵素ファミリーのメンバー、糖鎖抗原ファミリーのメンバー、Ｎｏｔｃｈリガンド、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、糖タンパク質Ａ３３、グアニル酸シクラーゼ２Ｃ、ならびに腫瘍特異的グリカンを含む群から選択される表面抗原に結合する抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンド（指定した抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンドの突然変異体およびアナログを含む）である、ステップ、ならびに
ｂ）スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の有効量を哺乳類に投与するステップであって、
スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含み、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、ステップ、ならびに
ｃ）本発明に従った標的化モジュールの有効量を哺乳類に投与するステップ
を含み、
本発明に従った標的化モジュール、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、異なる標的細胞結合ドメイン、および同一のタグ結合ドメインまたはタグを含み、
方法は、ステップａ）、ｂ）、およびｃ）の順序で行われる。

【0211】

「標的細胞結合ドメイン」という用語は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のアルファおよびベータまたはガンマおよびデルタ鎖から構成される可溶性Ｔ細胞受容体、それらのフラグメントまたは突然変異体も含む。

【0212】

好ましい実施形態において、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法、好ましくは癌、感染性疾患、または自己免疫疾患の治療のための方法は、以下のステップ：
ａ）少なくとも１つの標的細胞結合ドメイン、およびタグ結合ドメインまたはタグを含む標的化モジュールの有効量を哺乳類に投与するステップであって、
少なくとも１つの標的細胞結合ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５２、ＣＤ９０、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１５０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８４、ＣＤ２２３、ＣＤ２２９、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ３１９、ＣＤ３６６、およびＣＤ３７１、インターロイキン受容体、とりわけ好ましくはＩＬ－８Ｒα（ＣＸＣＲ１）、ＩＬ－８Ｒβ（ＣＸＣＲ２）、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１１Ｒβ、ＩＬ－１３Ｒα１および２、ＣＸＣＲ４、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバー、とりわけ好ましくはＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、またはＥｒｂＢ４；腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバー、エフリン、エフリン受容体、とりわけ好ましくはＥｐｈＡ１－１０、ＥｐｈＡ５、またはＥｐｈＢ１－６、前立腺特異的抗原、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、胚抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、および胎児アセチルコリン受容体、血管内皮成長因子ファミリーのメンバー、上皮細胞接着分子ＥｐＣＡＭ、アルファフェトプロテインＡＦＰ、細胞間接着分子ファミリーのメンバー、ムチンタンパク質ファミリーのメンバー、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ヒト高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、葉酸結合タンパク質ＦＢＰ、葉酸受容体、ソマトスタチン受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド、サイトカイン受容体、上皮糖タンパク質ファミリーのメンバー、ジシアロガングリオシド、グリピカン、Ｇタンパク質共役受容体、炭酸脱水酵素ファミリーのメンバー、糖鎖抗原ファミリーのメンバー、Ｎｏｔｃｈリガンド、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、糖タンパク質Ａ３３、グアニル酸シクラーゼ２Ｃ、ならびに腫瘍特異的グリカンを含む群から選択される表面抗原に結合する抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンドである、ステップ、ならびに
ｂ）スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の有効量を哺乳類に投与するステップであって、
スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含み、
標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、ステップ、ならびに
ｃ）本発明に従った標的化モジュールの有効量を哺乳類に投与するステップ
を含み、
本発明に従った標的化モジュール、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、異なる標的細胞結合ドメイン、および同一のタグ結合ドメインまたはタグを含み、
方法は、ステップａ）、ｂ）、およびｃ）の順序で行われる。

【0213】

好ましい実施形態において、標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の投与の前、好ましくは１時間～２日間前に、より好ましくは４～２４時間前に、それだけで投与され、本発明に従った標的化モジュールは、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターまたは細胞の投与の後、好ましくは３日間～３０日間の範囲内で投与される。さらに、標的化モジュールの付加的なそのような投薬を休止期間の後に実施して、スイッチ可能なキメラ抗原受容体担持エフェクター細胞を再活性化し得る。

【0214】

さらなる実施形態において、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法、好ましくは癌、感染性疾患、または自己免疫疾患の治療のための方法は、以下のステップ：
ａ）好ましくはＴｅｔ－Ｏｎ、Ｔｅｔ－Ｏｎ Ａｄｖａｎｃｅｄトランスアクチベーター、Ｔｅｔ－Ｏｎ ３Ｇ、またはＮＦＡＴに応答性のプロモーターから選択される、誘導性発現系；ならびに、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列であって、スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含む、ヌクレオチド配列、ならびに
本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列であって、標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、ヌクレオチド配列
を含む、ベクターまたは細胞の有効量を哺乳類に投与するステップ、ならびに
ｂ）誘導物質、好ましくはテトラサイクリンまたはテトラサイクリンの誘導体、例えばドキシサイクリンの有効量を哺乳類に投与するステップ
を含む。

【0215】

一部の実施形態において、誘導性発現系は、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列、および／または本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列の転写を誘導し、好ましくは誘導性発現系は、本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列の転写を誘導する。

【0216】

好ましい実施形態において、哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法、好ましくは癌、感染性疾患、または自己免疫疾患の治療のための方法は、以下のステップ：
ａ）少なくとも１つの標的細胞結合ドメイン、およびタグ結合ドメインまたはタグを含む標的化モジュールの有効量を哺乳類に投与するステップであって、
少なくとも１つの標的細胞結合ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５２、ＣＤ９０、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１５０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８４、ＣＤ２２３、ＣＤ２２９、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ３１９、ＣＤ３６６、およびＣＤ３７１、インターロイキン受容体、とりわけ好ましくはＩＬ－８Ｒα（ＣＸＣＲ１）、ＩＬ－８Ｒβ（ＣＸＣＲ２）、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１１Ｒβ、ＩＬ－１３Ｒα１および２、ＣＸＣＲ４、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバー、とりわけ好ましくはＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、またはＥｒｂＢ４；腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバー、エフリン、エフリン受容体、とりわけ好ましくはＥｐｈＡ１－１０、ＥｐｈＡ５、またはＥｐｈＢ１－６、前立腺特異的抗原、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、胚抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、および胎児アセチルコリン受容体、血管内皮成長因子ファミリーのメンバー、上皮細胞接着分子ＥｐＣＡＭ、アルファフェトプロテインＡＦＰ、細胞間接着分子ファミリーのメンバー、ムチンタンパク質ファミリーのメンバー、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ヒト高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、葉酸結合タンパク質ＦＢＰ、葉酸受容体、ソマトスタチン受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド、サイトカイン受容体、上皮糖タンパク質ファミリーのメンバー、ジシアロガングリオシド、グリピカン、Ｇタンパク質共役受容体、炭酸脱水酵素ファミリーのメンバー、糖鎖抗原ファミリーのメンバー、Ｎｏｔｃｈリガンド、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、糖タンパク質Ａ３３、グアニル酸シクラーゼ２Ｃ、ならびに腫瘍特異的グリカンを含む群から選択される表面抗原に結合する抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチドまたは低分子量有機リガンドである、ステップ、ならびに
ｂ）好ましくはＴｅｔ－Ｏｎ、Ｔｅｔ－Ｏｎ Ａｄｖａｎｃｅｄトランスアクチベーター、Ｔｅｔ－Ｏｎ ３Ｇ、またはＮＦＡＴに応答性のプロモーターから選択される、誘導性発現系；ならびに、スイッチ可能なキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列であって、スイッチ可能なキメラ抗原受容体は、３つのドメインであって、
－第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり、
－第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、
－第３のドメインはシグナル変換ドメインである、
３つのドメインを含む、ヌクレオチド配列、ならびに
本発明に従った標的化モジュールをコードするヌクレオチド配列であって、標的化モジュールのタグ結合ドメインがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグに結合するか、または標的化モジュールのタグがスイッチ可能なキメラ抗原受容体のタグ結合ドメインに結合する、ヌクレオチド配列
を含む、ベクターまたは細胞の有効量を哺乳類に投与するステップ、ならびに
ｃ）誘導物質、好ましくはテトラサイクリンまたはテトラサイクリンの誘導体、例えばドキシサイクリンの有効量を哺乳類に投与するステップ
を含み、
本発明に従った標的化モジュール、および少なくとも１つのさらに別の標的化モジュールは、異なる標的細胞結合ドメイン、および同一のタグ結合ドメインまたはタグを含み、
方法は、好ましくはステップａ）、ｂ）、およびｃ）の順序で行われる。

【0217】

さらなる実施形態において、前述の実施形態は組み合わせられ得る。

【0218】

本発明は、ここで、以下の非限定的な図および例によってさらに説明される。

【図面の簡単な説明】

【0219】

【図1】図１は、第１のドメインはタグ結合ドメインまたはタグであり（ｓｃＦｖとして例示される）、第２のドメインは細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメインであり、第３のドメインはシグナル変換ドメインであり、任意選択的な第４のドメインは受容体の細胞外部分における短いペプチドリンカーである、３つのドメインを有するスイッチ可能なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の概要を示す。

【図2】図２は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞への、３つの異なるＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭについてのフローサイトメトリーに基づくインビトロ結合アッセイの結果を示す。データは、少なくとも４回の独立した実験についての平均±ＳＤとして提示されている。

【図3】図３は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞へ、３つの異なるＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭによってリダイレクトされたスイッチ可能なキメラ抗原受容体Ｔ細胞についてのフローサイトメトリーに基づくインビトロ殺傷アッセイの結果を示す。Ａ）２４時間およびＢ）４８時間のインキュベーション後に、標的細胞数を決定した。データは、個々のＴ細胞ドナーに関する４回の独立した実験についての平均±ＳＤとして提示されている。

【図4】図４は、インターフェロン－γ処理されたＰＣ３－ＰＳＣＡ細胞へ、２つの異なる抗ＰＤ－Ｌ１ ＴＭによってリダイレクトされた、スイッチ可能なキメラ抗原受容体Ｔ細胞についての生細胞顕微鏡法インビトロ殺傷アッセイの結果を示す。データは、個々のＴ細胞ドナーに関する４回の独立した実験についての平均±ＳＤとして提示されている。

【図5】図５は、ＰＣ３－ＰＳＣＡ腫瘍を皮下移植され、単独での、または抗ＰＳＣＡ ＴＭ、デュルバルマブに基づく抗ＰＤ－Ｌ１ ＴＭ、もしくはデュルバルマブとの種々の組み合わせでの、スイッチ可能なキメラ抗原受容体Ｔ細胞で処理された免疫不全マウスのインビボ処理の結果を示す。データは、群あたり１１匹のマウスについての平均±ＳＥＭとして提示されている。

【図6】図６は、組み合わせられたＵｎｉＣＡＲおよびＴｅｔＯｎ誘導性免疫チェックポイント特異的標的化モジュール発現カセットの概要を示す（ＴＲＥ－テトラサイクリン応答エレメント、ＥＦ１ａ－伸長因子１ａ、ｒｔＴＡ－リバース・テトラサイクリン・トランスアクチベーター、ｉＲＦＰ－赤外蛍光タンパク質、ｅＧＦＰ－増強緑色蛍光タンパク質）。

【図7】図７は、レンチウイルス遺伝子移入：ＵｎｉＣＡＲと組み合わせられたＴｅｔＯｎ－カセットの制御下におけるＰＤ－Ｌ１結合標的化モジュールのドキシサイクリン誘導性遺伝子発現によって獲得された遺伝子改変された初代ヒトＴ細胞の頻度を示す。示されたデータは、個々のヒトＴ細胞ドナーから獲得された少なくとも６つのバッチを表す。

【図8】図８は、Ａ）４８時間後およびＢ）１２０時間後の、ドキシサイクリン応答性ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下でＵｎｉＣＡＲならびにＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭを発現するように遺伝子操作されたヒトＴ細胞の標的化モジュール依存的細胞傷害性応答を示す。６人の独立したヒトドナーに関して獲得された結果の平均±ＳＤが示されている。

【図9】図９は、Ａ）４８時間後およびＢ）１２０時間後の、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭを分泌するように改変されたＵｎｉＣＡＲ－Ｔによって媒介されるＰＤ－Ｌ１陽性Ｎａｌｍ－６細胞の溶解を査定するためのフローサイトメトリーに基づく細胞傷害性アッセイを示す。データは、それぞれ、個々のＴ細胞ドナーに関する少なくとも４回の独立した実験についての平均±ＳＤとして提示されている。

【図10】図１０は、Ａ）４８時間後およびＢ）１２０時間後の、本質的にＰＤ－Ｌ１を上方調節するＰＣ３－ＰＳＣＡ細胞に対する、ドキシサイクリン応答性ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下でＵｎｉＣＡＲならびにＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭを発現するヒトＴ細胞についての細胞傷害性アッセイを示す。データは、それぞれ、個々のＴ細胞ドナーに関する３回の反復的な実験についての平均±ＳＤとして示されている。

【図11】図１１は、ドキシサイクリン誘導があると、遺伝子操作されたヒトＴ細胞によって分泌されるＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１の濃度の定量化を示す。データは、５人の個々のＴ細胞ドナーに関する５回の反復的な実験についての平均±ＳＤとして提示されている。

【図12】図１２は、ドキシサイクリン誘導性ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１分泌のオン／オフスイッチの反応速度論を示す。データは、４人の個々のＴ細胞ドナーおよび実験についての平均±ＳＤとして提示されている。

【図13】図１３は、ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１のドキシサイクリン誘導性発現による活性化に依存した、表面におけるＵｎｉＣＡＲ分子の定量化を示す。３人の個々のＴ細胞ドナーについての平均±ＳＤが示されており、統計的有意性を、対応のあるｔ検定によって算出した、＊＊ｐ＜０．０１。

【図14】図１４は、ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下におけるＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖの基底発現が、細胞傷害性誘導の閾値を下回ることを示す。スイッチ可能なキメラ抗原受容体を発現しかつドキシサイクリンに応答してＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖを分泌するように遺伝子改変されたヒトＴ細胞を、１，０００ｎｇ／ｍｌのドキシサイクリンの非存在下（ＳＮ ｗ／ｏ）または存在下（ＳＮ ＋）において標準的培養培地中で７２時間培養した。上清を収穫し、１：５希釈し、Ｎａｌｍ－６－ＰＤ－Ｌ１標的細胞、およびスイッチ可能なキメラ抗原受容体のみを発現するように遺伝子改変されたヒトＴ細胞に添加した。付加的な対照として、細胞ミックスを、１ｎＭの精製ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１（＋ＴＭ）または単純細胞培養培地（ｐｌａｉｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ）（ｗ／ｏ ＴＭ）とともにインキュベートした。２４時間のインキュベーション後に、標的細胞の溶解をフローサイトメトリーを使用して解析した。データは、４人の個々のＴ細胞ドナーについての平均±ＳＤとして提示されている。統計的有意性を、一元配置ＡＮＯＶＡによって算出した、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【図15】図１５は、フローサイトメトリーに基づく細胞傷害性アッセイが後に続く、３７℃で７２時間の培養培地中でのＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１の安定性を示す。

【図16】図１６は、前立腺癌（ＰＣａ）の異種移植モデルにおける、ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下でＵｎｉＣＡＲおよびＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖを発現するように遺伝子操作されたヒトＴ細胞のインビボ効力を示す。Ａ）実験セットアップの概略図。Ｂ）少なくとも９匹のマウスについての平均±ＳＥＭとして、時間の関数としてプロットされた測定された腫瘍容積。

【図17】図１７は、組み換えヒトＦｃタグ付けされたＰＤ－Ｌ１へのＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１の結合についての表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定を示す。

【図18】図１８は、組み換えヒトＦｃタグ付けされたＰＤ－Ｌ１へのＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ２の結合についての表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定を示す。

【図19】図１９は、ＵｎｉＣＡＲおよびＵｎｉＣＡＲ／ＰＤ－１スイッチ改変Ｔ細胞による、組み換えＰＤ－Ｌ１を発現する急性骨髄性白血病細胞株ＭＯＬＭ－１３のインビトロ排除を示す。Ａ）ＭＯＬＭ－１３細胞を、組み換えＰＤ－Ｌ１を発現するように操作し、ＰＤ－Ｌ１表面発現についてフローサイトメトリーにより解析した。Ｂ）ＵｎｉＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＤ１３７／ＣＤ３－ζ、ＵＣ０４）またはＵｎｉＣＡＲ－ＰＤ－１スイッチＴ細胞を、ＣＤ３３特異的標的化モジュール（ＴＭ ＣＤ３３）の非存在下または存在下において、２：１のエフェクター対標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比でＭＯＬＭ－１３－ＰＤ－Ｌ１とともに共培養した。ＭＯＬＭ－１３－ＰＤ－Ｌ１に対する細胞傷害反応性を、４８時間および１２０時間後にフローサイトメトリーにより査定した（平均±ＳＤ）。Ｃ）ＭＯＬＭ－１３－ＰＤ－Ｌ１との共培養の１２０時間後の、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ２５の表面染色によるＴ細胞活性化の解析（平均±ＳＤ）。ｎ＝３の独立したＴ細胞ドナーに対する統計的有意性を、ウィルコクソンの符号順位検定によって査定した（＊Ｐ＜０．０５、ｎｓ＝有意でない）。

【図20】図２０は、ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１バリアントの血漿濃度をＥＬＩＳＡによって決定することによる、ＮＳＧマウスにおけるＴＭ－ＰＤＬ１バリアントの薬物動態学的調査を示す：Ａ）ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ２、Ｂ）ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ３、およびＣ）ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ４を示す。データは、解析された時点あたり３～４匹のマウスに対して示されている。

【図21】図２１は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞株上のＰＤ－Ｌ１特異的ＴＭの標的媒介性内在化を示す：ＰＤ－Ｌ１特異的可溶性アダプターのＰＤ－Ｌ１媒介性薬力学的半減期を決定するために、ＰＤ－Ｌ１陽性標的細胞株（Ａ）ＤＵ－１４５および（Ｂ）Ｕ－２５１を、１０００ｎＭのＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ３（ＴＭＰＤ－Ｌ１_ｖ３）またはＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ５（ＴＭＰＤ－Ｌ１_ｖ５）で染色し、４℃または３７℃のいずれかで表示される時点の間インキュベートした。データは、測定された最も高いＭＦＩに対して、獲得されたＭＦＩを正規化することによる、最大についての結合％として示されている。付加的に、薬力学的半減期（ｔ_１／２）を、３７℃で各ＴＭに対して算出した。データは、技術的に三重で測定された１回の実験についての平均±ＳＤとして示されている。

【実施例】

【0220】

スイッチ可能なＣＡＲ細胞の産生
様々な方法によって、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２に向けられたスイッチ可能なＣＡＲおよび／または誘導性ＴＭを発現するように、免疫細胞を遺伝子操作し得る。スイッチ可能なＣＡＲ、および遺伝子操作された免疫細胞におけるその発現を確実にするためのすべての必要なエレメントをコードするポリヌクレオチドベクターを、免疫細胞に移入する。ベクターの移入は、核酸のエレクトロポレーションもしくはトランスフェクション、またはアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、フォーミーウイルスまたはレンチウイルスのウイルス遺伝子移入などのウイルスベクターシステムの支援によって実施され得る。

【0221】

選択されたスイッチ可能なＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターをまず構築することによって、レンチウイルス遺伝子移入を、免疫細胞におけるスイッチ可能なＣＡＲの安定な発現に適用する。レンチウイルスベクターは、ｐＬＶＸ－ＥＦ１ａｌｐｈａ ＵｎｉＣＡＲ ２８／ζ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、タカラバイオグループ）であり、ベクターのレンチウイルス部分はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に由来し、ＭＳＣ／ＩＲＥＳ／ＺｘＧｒｅｅｎＩ部を、スイッチ可能なＣＡＲ構築物によって置き換えた。

【0222】

レンチウイルス粒子は、スイッチ可能なＣＡＲをコードするレンチウイルスベクタープラスミドによるヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３Ｔ（ＡＣＣ ６３５）細胞の一過性のトランスフェクション、ならびに群特異的抗原（ｇｒｏｕｐ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ）（ｇａｇ）およびポリメラーゼ（ｐｏｌ）をコードするプラスミド（ｐｓＰＡＸ２）＋エンベロープをコードするプラスミド（ｐＭＤ２．Ｇ）による共トランスフェクションによって産生される。トランスフェクションの後、パッケージングプラスミドは、ＨＩＶ－１のＧａｇおよびＰｏｌタンパク質を発現する。プラスミドＭＤ２．Ｇは、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）をコードする。ＶＳＶ－Ｇは、広範な哺乳類細胞に形質導入するためのレンチウイルスベクターに使用される。種々のウイルス種由来の様々なエンベロープが、この目的のために利用され得る。レンチウイルスベクターは、両種指向性マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）のエンベロープ糖タンパク質（Ｅｎｖ）、または水疱性口内炎ウイルスのＧタンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）、プロトタイプフォーミーウイルス（ｐｒｏｔｏｔｙｐｉｃ ｆｏａｍｙ ｖｉｒｕｓ：ＰＦＶ）の改変エンベロープ、またはテナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）およびＭＬＶに由来するキメラエンベロープ糖タンパク質バリアントを用いて、偽型に成功し得る。

【0223】

トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞由来の上清を、トランスフェクションの２４時間～９６時間後に収穫し、ウイルス粒子を、超遠心分離または他の方法によって上清から濃縮する。免疫細胞のレンチウイルス形質導入に関しては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）または単離されたＴ細胞を、溶液で与えられたまたはプラスチック細胞培養ディッシュもしくは磁気ビーズもしくは生分解性ポリマーマトリックスにコートされた、ＣＤ３複合体に特異的なｍａｂ、例えばクローンＯＫＴ３またはＵＣＨＴ１で活性化する。ＰＢＭＣまたは単離されたＴ細胞の活性化を、単独でまたはプラスチック細胞培養ディッシュもしくは磁気ビーズもしくは生分解性ポリマーマトリックスにコートされて組み合わされた、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、またはＣＤ１３７に特異的なｍａｂまたはリガンドを用いて共刺激経路を刺激し、ならびにインターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、およびＩＬ－２１などの外因性組み換えサイトカインの供給によってさらに増強する。濃縮されたまたは濃縮されていないウイルス粒子を、活性化ＣＤ３特異的抗体、および／または共刺激受容体ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、もしくはＣＤ１３７に特異的な抗体、および／または組み換えサイトカインの初回投与の２４時間～９６時間後にＰＢＭＣまたはＴ細胞培養物に単回または複数回用量として添加する。Ｔ細胞エレクトロポレーション、形質導入、および増大（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）は、手動の取り扱いによる開かれた細胞培養システムにおいて、または閉じられた部分的にもしくは完全に自動化したシステムにおいて実施され得る。

【0224】

Ｔ細胞の安定な形質導入は、ウイルス上清の最終投与の後３日目以降、スイッチ可能なＣＡＲの表面発現に対するタグ含有分子またはスイッチ可能なＣＡＲの第４のドメインに向けられたｍａｂを用いて染色した後に、フローサイトメトリーによって判定され得る。スイッチ可能なＣＡＲを形質導入されたＴ細胞は、組み換えサイトカインおよび活性化抗ＣＤ３ ｍａｂの供給の下でそれらを培養することによって、インビトロで増殖し得る。

【0225】

スイッチ可能なＣＡＲが、ｍａｂに対する線状エピトープを形成するペプチド配列である任意選択の第４のドメインを持つ場合、スイッチ可能なＣＡＲを発現するように遺伝子改変された免疫細胞は、培養ディッシュの表面にまたは任意の種類のビーズもしくは生分解性ポリマーマトリックスに、第４のスイッチ可能なＣＡＲドメインに結合するｍａｂまたはその抗体フラグメントをコーティングすることによって、インビトロで特異的に増殖し得、それは既定の比で細胞培養物に添加される。スイッチ可能なＣＡＲペプチドドメインへの、表面にコーティングされたｍａｂの結合は、細胞表面に発現したスイッチ可能なＣＡＲの架橋および免疫シナプスの形成を誘導し、それは、スイッチ可能なＣＡＲのシグナルドメインによって特異的に誘発されるシグナル経路の活性化につながる。これは、誘導されたシグナル経路に応じて、スイッチ可能なＣＡＲ担持免疫細胞の増殖の増強および活性化誘導性細胞死に対する持続的耐性、それゆえ、混合集団におけるスイッチ可能なＣＡＲ遺伝子改変免疫細胞の富化につながり得る。

【0226】

ｍａｂに対する線状エピトープを形成するペプチド配列である任意選択の第４のドメインは、混合集団から、スイッチ可能なＣＡＲ発現免疫細胞を富化しかつ精製するためにさらに利用され得る。富化および精製は、細胞選別のためにスイッチ可能なＣＡＲ発現細胞を印付けする、または細胞単離に利用され得る小さな粒子にスイッチ可能なＣＡＲ発現免疫細胞を一過性に連結するための、第４のスイッチ可能なＣＡＲドメインに結合するｍａｂまたはその抗体フラグメントの支援で実施される。１つの態様において、スイッチ可能なＣＡＲグラフト免疫細胞を、第４のドメインを認識するｍａｂとともにインキュベートする。次に、任意選択の第４のドメインに結合するｍａｂの種特異的でかつアイソタイプ特異的な重鎖および軽鎖に向けられた抗体またはそのフラグメントとコンジュゲートされている磁気ビーズを添加する。ゆえに、スイッチ可能なＣＡＲ発現免疫細胞および磁気ビーズは連結され、捕捉され、磁場において他の免疫細胞から分離される。

【0227】

本発明に従った標的化モジュールの設計
１つの例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは、リンカーによって接続された配列番号６および７、ならびに配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む、配列番号５７に従ったアテゾリズマブのｓｃＦｖを含む（ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１）。

【0228】

代替的な例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは、リンカーによって接続された配列番号６および７、ならびに配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む、配列番号６５に従ったアテゾリズマブのｓｃＦｖを含む。

【0229】

さらなる例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは、リンカーによって接続された配列番号８および９、ならびに配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む、配列番号５８に従ったデュルバルマブのｓｃＦｖを含む（ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ２）。

【0230】

代替的な例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは、リンカーによって接続された配列番号８および９、ならびに配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む、配列番号６６に従ったデュルバルマブのｓｃＦｖを含む。

【0231】

さらなる例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは、リンカーによって接続された配列番号４および５、ならびに配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む、配列番号８６に従ったＢＭＳ－９３６５５９のｓｃＦｖを含む（ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ３）。

【0232】

代替的な例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは、リンカーによって接続された配列番号４および５、ならびに配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む、配列番号８５に従ったＢＭＳ－９３６５５９のｓｃＦｖを含む。

【0233】

さらなる例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは、リンカーによって接続された配列番号７７および７８、ならびに配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む、配列番号９７に従ったＢＭＳ－９３６５５９のｓｃＦｖを含む（ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ４）。

【0234】

代替的な例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは、リンカーによって接続された配列番号７７および７８、ならびに配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む、配列番号９８に従ったＢＭＳ－９３６５５９のｓｃＦｖを含む。

【0235】

さらなる例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは、リンカーによって接続された配列番号６７および６８、ならびに配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む、配列番号８７に従ったＢＭＳ－９３６５５９のｓｃＦｖを含む（ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ５）。

【0236】

代替的な例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは、リンカーによって接続された配列番号６７および６８、ならびに配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む、配列番号８８に従ったＢＭＳ－９３６５５９のｓｃＦｖを含む。

【0237】

さらなる例において、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭは２価であり、２つのＰＤ－１細胞外ドメインを含み、そのそれぞれは、配列番号３のフラグメントおよび配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９である（ＴＭ－ｔｄＰＤ１）。ＴＭ－ｔｄＰＤ－１は、配列番号５９によってコードされる。

【0238】

本発明に従った標的化モジュールの機能性の特徴付け
ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭの機能性は、表面プラズモン共鳴を使用したヒトおよびマウスＰＤ－Ｌ１への結合アッセイにおいて、ならびに細胞をベースとする細胞傷害性アッセイにおいて確認され得る。

【0239】

ＰＤ－Ｌ１を発現するように形質導入されたＮａｌｍ－６細胞への、３つの異なるＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭについてのフローサイトメトリーに基づくインビトロ結合アッセイの結果が図２に示されている。データは、少なくとも４回の独立した実験についての平均±ＳＤとして提示されている。

【0240】

ＰＤ－Ｌ１を発現するように形質導入されたＮａｌｍ－６細胞へ、３つの異なるＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合ＴＭによってリダイレクトされた、スイッチ可能なキメラ抗原受容体Ｔ細胞（配列番号６０）についてのフローサイトメトリーに基づくインビトロ殺傷アッセイの結果が図３に示されている。エフェクター対標的の比（Ｅ：Ｔ）は１：１であった。Ａ）２４時間およびＢ）４８時間のインキュベーション後に、標的細胞数を決定した。データは、個々のＴ細胞ドナーに関する４回の独立した実験についての平均±ＳＤとして提示されている。

【0241】

インターフェロン－γ処理されたＰＣ３－ＰＳＣＡ細胞へ、２つの異なる抗ＰＤ－Ｌ１ ＴＭによってリダイレクトされた、スイッチ可能なキメラ抗原受容体Ｔ細胞（配列番号６０）についての生細胞顕微鏡法に基づくインビトロ殺傷アッセイの結果が図４に示されている。エフェクター対標的の比（Ｅ：Ｔ）は１：１であった。９６時間のインキュベーション後に、標的細胞数を決定した。データは、個々のＴ細胞ドナーに関する４回の独立した実験についての平均±ＳＤとして提示されている。

【0242】

ＰＣ３－ＰＳＣＡ腫瘍を皮下移植され、単独での、または抗ＰＳＣＡ ＴＭ、デュルバルマブに基づく抗ＰＤ－Ｌ１ ＴＭ、もしくはデュルバルマブとの種々の組み合わせでの、スイッチ可能なキメラ抗原受容体Ｔ細胞（配列番号６０）で処理された免疫不全マウスのインビボ処理の結果が図５に示されている。スイッチ可能なキメラ抗原受容体Ｔ細胞を、表示される時点で静脈内に注射した。表示される処理期間（Ｔ）のそれぞれの間に、ＴＭを腹腔内に１日２回注射し、デュルバルマブを腹腔内に１回注射した。データは、群あたり１１匹のマウスについての平均±ＳＥＭとして提示されている。

【0243】

組み合わせられたスイッチ可能なＣＡＲおよび誘導性標的化モジュール発現カセットの設計（図６）
レンチウイルス遺伝子発現プラスミドは、ゾセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａ）ウイルス由来ペプチド切断部位（２ｐＡ）によって分離された、ｒｔＴＡおよびＵｎｉＣＡＲの連続的ポリシストロン性転写のためのＥＦ１ａプロモーターを含有する。加えて、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合標的化モジュール（ＴＭ）は、ＴＲＥ３Ｇプロモーターの制御下にあり、それは、ドキシサイクリンの存在下におけるｒｔＴＡの結合によってのみ活性化される。この編成は、ドキシサイクリン依存的な誘導性でかつ可逆的な遺伝子発現を可能にする。

【0244】

組み合わせられたスイッチ可能なＣＡＲおよび誘導性標的化モジュール発現カセットの機能性の特徴付け
レンチウイルス遺伝子移入によって獲得された遺伝子改変された初代ヒトＴ細胞の頻度が図７に示されている。志願した健常なヒトドナーから単離されたＴ細胞に、レンチウイルス上清を用いて形質導入し、ＵｎｉＣＡＲと組み合わせられたＴｅｔＯｎ－カセットの制御下における、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合標的化モジュール（ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ－１、ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ２、およびＴＭ－ｔｄＰＤ１）のドキシサイクリン誘導性遺伝子発現のための遺伝情報を移入した。形質導入後１４日目における形質導入効率を、ＵｎｉＣＡＲヒンジに組み込まれた細胞外Ｅ７Ｂ６タグに向けられた一次マウスａ７Ｂ６－ｍＡｂ（１０μｇ／ｍｌ）を使用した、表面に呈示されたＵｎｉＣＡＲの免疫蛍光染色により解析した。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７コンジュゲートヤギ－ａ－マウスＡｂを、二次Ａｂとして使用した。

【0245】

ドキシサイクリン応答性ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下でＵｎｉＣＡＲおよび本発明に従ったＴＭを発現するように遺伝子操作されたヒトＴ細胞のＴＭ依存的細胞傷害性応答が図８に示されている。志願した健常なヒトドナーから単離されたＴ細胞を、ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下でＵｎｉＣＡＲならびにＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２結合標的化モジュール、特にＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ２を発現するように遺伝子改変した。標的癌細胞に対するＴＭ依存的細胞傷害性応答を媒介するＵｎｉＣＡＲ改変細胞の能力を、フローサイトメトリーに基づく細胞傷害性アッセイにおいて評価した。ＥＰ２９９０４１６Ｂ１に従ったＰＳＣＡ結合ドメイン；および配列番号１４に従ったヒトＬａエピトープＥ５Ｂ９を含む増加する濃度のＰＳＣＡ結合ＴＭの存在下において、Ｎａｌｍ－６－ＰＳＣＡ細胞を、ヒトＵｎｉＣＡＲ発現Ｔ細胞とともに１：１の総Ｔ細胞対標的細胞の比で培養した。表示される時点で、生きた標的細胞の数を決定した。特異的溶解を、ＴＭの添加なしの対照と比べて算出した。

【0246】

ＰＤ－Ｌ１特異的ＴＭを分泌するように改変されたＵｎｉＣＡＲ－Ｔによって媒介されるＰＤ－Ｌ１陽性Ｎａｌｍ－６細胞の溶解を査定するための細胞傷害性アッセイの結果が図９に示されている。１，０００～１ｎｇ／ｍｌに及ぶ減少する濃度のドキシサイクリンの存在下において、Ｎａｌｍ－６－ＰＤ－Ｌ１標的細胞を、遺伝子改変されたヒトＴ細胞とともに１：１の総Ｔ細胞対標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比で培養した。Ｔ細胞を、ＵｎｉＣＡＲおよびドキシサイクリン応答性ＴｅｔＯｎ－カセットを発現するように操作して、ドキシサイクリンの存在下においてＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ－１、ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ２、またはＴＭ－ｔｄＰＤ１の発現および分泌を誘導した。標的細胞の特異的溶解を、インキュベーションのＡ）４８時間およびＢ）１２０時間後に解析し、ドキシサイクリンなしのバックグラウンド溶解に対して正規化した。

【0247】

図１０は、本質的にＰＤ－Ｌ１を上方調節するＰＣ３－ＰＳＣＡ細胞に対する、ドキシサイクリン応答性ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下でＵｎｉＣＡＲおよびＰＤ－Ｌ１特異的ＴＭを発現するヒトＴ細胞についての細胞傷害性アッセイの結果を示している。ＰＣ３－ＰＳＣＡ細胞を２５ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ－γで処理して、ＰＤ－Ｌ１上方調節を誘導した。その後、ＰＤ－Ｌ１提示ＰＣ３－ＰＳＣＡ細胞を、ＵｎｉＣＡＲおよびＰＤ－Ｌ１特異的ＴＭ、特にＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１を発現する遺伝子改変されたＴ細胞とともに、ドキシサイクリン誘導性ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下で、１：１の総Ｔ細胞対標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比でＡ）４８時間およびＢ）１２０時間インキュベートした。ドキシサイクリンを１０００～１ｎｇ／ｍｌの減少する濃度で添加し、特異的溶解を、ドキシサイクリンなしでの標的細胞の溶解と比べて算出した。

【0248】

ＰＤ－Ｌ１陽性標的細胞、および１：１の総Ｔ細胞対標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比でＵｎｉＣＡＲとドキシサイクリン誘導性ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１に対するＴｅｔＯｎ－カセットとを発現するように操作されたヒトＴ細胞を、減少する濃度のドキシサイクリンとともに１２０時間インキュベートすることによって、ドキシサイクリン誘導があると、遺伝子操作されたヒトＴ細胞によって分泌されるＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓＦｖ１の濃度の定量化（図１１）を行った。無細胞上清を収穫し、分泌されたＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１濃度をＥＬＩＳＡによって解析した。ドキシサイクリン濃度が、ｎｇ／ｍｌおよび結果として生じるモル濃度単位でのＴＭ濃度に対してそれぞれプロット（ｂｌｏｔ）されている。

【0249】

ドキシサイクリン誘導性ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１分泌のオン／オフスイッチの反応速度論が図１２に示されている。オン相の各表示される時点に関しては、ドキシサイクリン（ｄｏｘ）誘導性ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下でＵｎｉＣＡＲおよびＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１を発現するように遺伝子操作された１×１０^５個のヒトＴ細胞を、１０００ｎｇ／ｍｌのドキシサイクリンの存在下において５００μｌの培養培地中でインキュベートした。同じように、オフ相に関しては、操作されたＴ細胞のプールを、まず同量のドキシサイクリンとともに２４時間培養し、その後徹底的に洗浄し、ＯＮ相に関して記載されるように、しかしドキシサイクリンの添加なしで、付加的な４、６、８、１２、および２４時間培養した。解析される各時点に関して、無細胞上清を収穫し、ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１レベルをＥＬＩＳＡを使用して定量化した。

【0250】

ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１のドキシサイクリン誘導性発現による活性化に依存した、表面におけるＵｎｉＣＡＲ分子の定量化が図１３に示されている。操作されたＴ細胞上のＵｎｉＣＡＲ表面分子の数を、ＤＡＫＯ ＱＩＦＩＫＩＴ（登録商標）を用いて作成された検量線を使用して定量化した。遺伝子操作されたＴ細胞の免疫蛍光染色を、ＵｎｉＣＡＲ検出のための抗７Ｂ６－ｍＡｂを使用して実施し、二次ＡｂとしてのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７ヤギ－ａ－マウスＡｂを、事前に染色されたＴ細胞に、ただしキャリブレーションビーズにも適用した。ＵｎｉＣＡＲ、およびドキシサイクリン誘導性ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１に対するＴｅｔＯｎ－カセットを発現する遺伝子操作されたヒトＴ細胞を、１，０００ｎｇ／ｍｌのドキシサイクリンの非存在下または存在下で２４時間培養した。

【0251】

図１４は、ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下におけるＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖの基底発現が、細胞傷害性誘導の閾値を下回ることを示している。ＵｎｉＣＡＲを発現しかつドキシサイクリンに応答してＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖを分泌するように遺伝子改変されたヒトＴ細胞を、１，０００ｎｇ／ｍｌのドキシサイクリンの非存在下（ＳＮ ｗ／ｏ）または存在下（ＳＮ ＋）において標準的培養培地中で７２時間培養した。上清を収穫し、１：５希釈し、Ｎａｌｍ－６－ＰＤ－Ｌ１標的細胞、およびＵｎｉＣＡＲのみを発現するように遺伝子改変されたヒトＴ細胞に添加した。付加的な対照として、細胞ミックスを、１ｎＭの精製ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１（＋ＴＭ）またはその代わりに単純細胞培養培地（ｗ／ｏ ＴＭ）とともにインキュベートした。２４時間のインキュベーション後に、標的細胞の溶解をフローサイトメトリーを使用して解析した。

【0252】

３７℃でのＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ１の安定性を検証するために、精製されたＴＭを３７℃で７２時間培養培地中でインキュベートし、１：１の総Ｔ細胞対標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比で、ＵｎｉＣＡＲのみを発現するように遺伝子改変されたヒトＴ細胞およびＮａｌｍ－６－ＰＤ－Ｌ１標的細胞を２４時間使用して、標準的なフローサイトメトリーに基づく細胞傷害性アッセイにおいて効能を解析した（図１５）。

【0253】

前立腺癌（ＰＣａ）の異種移植モデルにおける、ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下でＵｎｉＣＡＲおよびＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖを発現するように遺伝子操作されたヒトＴ細胞のインビボ効力が図１６に示されている。マウスに、１×１０^６個の腫瘍細胞（ＰＣ３－ＰＳＣＡ）を皮下移植した（図１６Ａ）。２５日後、２００万個のＴ細胞（そのうちの２８．７％は、ＴｅｔＯｎ－カセットの制御下でＵｎｉＣＡＲおよびＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖを発現するように遺伝子操作された）を投与し、ドキシサイクリン付与を同日に開始した。ドキシサイクリンの付与を連続して２週間続け、その間の２日間では停止した。第２の処理サイクルを２週間後に開始し、同じ方式で実施した。腫瘍容積を１週間に１回デジタルキャリパーで測定し、少なくとも９匹のマウスについての平均±ＳＥＭとして時間の関数としてプロットした（図１６Ｂ）。

【0254】

ＣＤ３３に対して標的化モジュールを用いてリダイレクトされたスイッチ可能なＣＡＲと、ＰＤ－Ｌ１：ＣＤ２８スイッチ受容体との組み合わせ
ＵｎｉＣＡＲおよびＵｎｉＣＡＲ／ＰＤ－１スイッチ改変Ｔ細胞による、組み換えＰＤ－Ｌ１を発現する急性骨髄性白血病細胞株ＭＯＬＭ－１３のインビトロ排除を、組み換えＰＤ－Ｌ１を発現するように操作されたＭＯＬＭ－１３細胞によって調べ、ＰＤ－Ｌ１表面発現についてフローサイトメトリーにより解析した（図１９Ａを参照されたい）。

【0255】

ＵｎｉＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＤ１３７／ＣＤ３－ζ、ＵＣ０４）またはＵｎｉＣＡＲ－ＰＤ－１スイッチＴ細胞を、ＣＤ３３特異的標的化モジュール（ＴＭ ＣＤ３３）の非存在下または存在下において、２：１のエフェクター対標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比でＭＯＬＭ－１３－ＰＤ－Ｌ１とともに共培養した。ＭＯＬＭ－１３－ＰＤ－Ｌ１に対する細胞傷害反応性を、４８時間および１２０時間後にフローサイトメトリーにより査定した（図１９Ｂを参照されたい、平均±ＳＤ）。

【0256】

Ｔ細胞活性化を、ＭＯＬＭ－１３－ＰＤ－Ｌ１との共培養の１２０時間後に、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ２５の表面染色によって解析した（図１９Ｃを参照されたい、平均±ＳＤ）。ｎ＝３の独立したＴ細胞ドナーに対する統計的有意性を、ウィルコクソンの符号順位検定によって査定した（＊Ｐ＜０．０５、ｎｓ＝有意でない）。

【0257】

ＵｎｉＣＡＲとの組み合わせでのＰＤ－Ｌ１：ＣＤ２８スイッチ受容体（４－１ＢＢ－ＣＤ３ゼータ ＵｎｉＣＡＲ）は、ＭＯＬＭ－１３－ＰＤ－Ｌ１細胞の高い標的化モジュール非依存的溶解を呈し、そのような手法の限界を指摘する。

【0258】

ＴＭ－ＰＤＬ１バリアントの薬物動態学的調査
ＮＳＧマウスにおけるＴＭ－ＰＤＬ１バリアントの薬物動態学的調査に関しては、ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１を、ＮＳＧマウスの１μｇ／ｇ_ＢＷの静脈内尾静脈注射により投与した。表示される時点で、末梢血を眼窩後穿刺により採取した。ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１バリアントの血漿濃度を、ＰＤＬ１－Ｆｃキメラ捕捉タンパク質および抗５Ｈｉｓ ＨＲＰコンジュゲート検出抗体を利用したＥＬＩＳＡにより決定した（定量化の下限０．０３～０．２２ｎｇ／ｍｌのアッセイ濃度）。図２０のＡ）、Ｂ）、Ｃ）において、データは、解析された時点あたり３～４匹のマウスに対して示されている。表示される薬物動態学的パラメーターを、重み付き（１／Ｙ^２）２コンパートメント解析を適用したＰＫ ｓｏｌｖｅｒ ２．０（Ｚｈａｎｇら２０１０）を利用して規定した。終末相の傾きを、最後の３つまたは４つの時点から算出した（ｔ_１／２β）。図２０において、Ａ）ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ２、Ｂ）ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ３、およびＣ）ＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ４の濃度が示されており、表１は、算出された薬物動態学的（ＰＫ）パラメーターを示している。

【0259】

【表1】

【0260】

図２１において、ＰＤ－Ｌ１発現細胞株上のＰＤ－Ｌ１特異的ＴＭの標的媒介性内在化が示されている。ＰＤ－Ｌ１特異的可溶性アダプターのＰＤ－Ｌ１媒介性薬力学的半減期を決定するために、ＰＤ－Ｌ１陽性標的細胞株（Ａ）ＤＵ－１４５および（Ｂ）Ｕ－２５１を、１０００ｎＭのＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ３（ＴＭＰＤ－Ｌ１_ｖ３）またはＴＭ－ＰＤ－Ｌ１－ｓｃＦｖ５（ＴＭＰＤ－Ｌ１_ｖ５）で染色した。その後、染色された標的細胞を、４℃または３７℃のいずれかで表示される時点の間インキュベートした。ＰＤ－Ｌ１特異的ＴＭの結合を、ＰＥ標識α－Ｈｉｓ Ａｂを使用したフローサイトメトリーにより解析した。付加的に、薬力学的半減期（ｔ１／２）を、３７℃で各ＴＭに対して算出した。

【0261】

引用された非特許文献
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Ｇｒｕｐｐ ＳＡ， Ｌａｏｓ Ｍ， Ｂａｒｒｅｔｔ Ｄ， Ａｐｌｅｎｃ Ｒ， Ｐｏｒｔｅｒ ＤＬ， Ｒｈｅｉｎｇｏｌｄ ＳＲ， Ｔｅａｃｈｅｙ ＤＴ， Ｃｈｅｗ Ａ， Ｈａｕｃｋ Ｂ， Ｗｒｉｇｈｔ ＪＦ， Ｍｉｌｏｎｅ ＭＣ， Ｌｅｖｉｎｅ， ＢＬ， Ｊｕｎｅ ＣＨ （２０１３） Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ Ａｃｕｔｅ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ． Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３６８， １５０９－１５１８．
Ｇｕｅｄａｎ Ｓ， Ｐｏｓｅｙ ＡＤ， Ｓｈａｗ Ｃ， Ｗｉｎｇ Ａ， Ｄａ Ｔ， Ｐａｔｅｌ ＰＲ， ＭｃＧｅｔｔｉｇａｎ ＳＥ， Ｃａｓａｄｏ－Ｍｅｄｒａｎｏ Ｖ， Ｋａｗａｌｅｋａｒ ＯＵ， Ｕｒｉｂｅ－Ｈｅｒｒａｎｚ Ｍ， Ｓｏｎｇ Ｄ， Ｍｅｌｅｎｈｏｒｓｔ ＪＪ， Ｌａｃｅｙ ＳＦ， Ｓｃｈｏｌｌｅｒ Ｊ， Ｋｅｉｔｈ Ｂ， Ｙｏｕｎｇ ＲＭ， Ｊｕｎｅ ＣＨ （２０１８） Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ＩＣＯＳ ａｎｄ ４－１ＢＢ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ． ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ． ３（１）， ９６９７６．
Ｇｕｅｄａｎ Ｓ， Ｍａｄａｒ Ａ， Ｃａｓａｄｏ－Ｍｅｄｒａｎｏ Ｖ， Ｓｈａｗ ＣＥ， Ｗｉｎｇ Ａ， Ｌｉｕ Ｆ， Ｙｏｕｎｇ ＲＭ， Ｊｕｎｅ ＣＨ， Ｐｏｓｅｙ ＡＤ （２０２０） Ｓｉｎｇｌｅ ｒｅｓｉｄｕｅ ｉｎ ＣＤ２８－ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｌｉｍｉｔｓ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ａｎｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｄｕｒａｂｉｌｉｔｙ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． １３３２１５．
Ｈｏｍｂａｃｈ ＡＡ， Ａｂｋｅｎ Ｈ （２０１１） Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｂｅｎｅｆｉｔｓ ｆｒｏｍ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ＣＤ２８－ＯＸ４０ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ． Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ． １２９ （１２）， ２９３５－２９４４．
Ｈｏｍｂａｃｈ ＡＡ， Ａｂｋｅｎ Ｈ （２０１３） Ｏｆ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： ＯＸ４０ ａｎｄ ４１ＢＢ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｓｈａｒｐｅｎ ｕｐ Ｔ ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． ５ （７）， ６７７－６８１．
Ｈｏｍｂａｃｈ ＡＡ， Ｋｏｆｌｅｒ Ｄ， Ｈｏｍｂａｃｈ Ａ， Ｒａｐｐｌ Ｇ， Ａｂｋｅｎ Ｈ （２００７） Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ａ ｓｔｒｏｎｇ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ＣＤ２８ ｓｉｇｎａｌ ｔｈａｔ ｃａｎｎｏｔ ｂｅ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｂｙ ＩＬ－２． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７９ （１１）， ７９２４－７９３１．
Ｈｏｍｂａｃｈ Ａ， Ｓｅｎｔ Ｄ， Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ Ｃ， Ｈｅｕｓｅｒ Ｃ， Ｋｏｃｈ Ｄ， Ｐｏｈｌ Ｃ， Ｓｅｌｉｇｅｒ Ｂ， Ａｂｋｅｎ Ｈ （２００１） Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ： ＣＤ２８ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｔ－ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｕｔ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ａｆｆｅｃｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔａｒｇｅｔ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６１ （５）， １９７６－１９８２．
Ｋａｇｏｙａ Ｙ， Ｔａｎａｋａ Ｓ， Ｇｕｏ Ｔ， Ａｎｃｚｕｒｏｗｓｋｉ Ｍ， Ｗａｎｇ ＣＨ， Ｓａｓｏ Ｋ， Ｂｕｔｌｅｒ ＭＯ， Ｍｉｎｄｅｎ ＭＤ， Ｈｉｒａｎｏ Ｎ （２０１８） Ａ ｎｏｖｅｌ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａ ＪＡＫ－ＳＴＡＴ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ． Ｎａｔ Ｍｅｄ． ２４（３）， ３５２－３５９．
Ｋｅｒｓｈａｗ ＭＨ， Ｗｅｓｔｗｏｏｄ ＪＡ， Ｐａｒｋｅｒ ＬＬ， ｅｔ ａｌ． （２００６） Ａ ｐｈａｓｅ Ｉ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｕｓｉｎｇ ｇｅｎｅ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ． Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １２ （２０）， ６１０６－６１１５．
Ｌａｍｅｒｓ ＣＨ， Ｓｌｅｉｊｆｅｒ Ｓ， Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ ＲＡ， Ｄｅｂｅｔｓ Ｒ， Ｋｒｕｉｔ ＷＨＪ， Ｇｒａｔａｍａ ＪＷ， Ｓｔｏｔｅｒ Ｇ （２００４） Ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏ－ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ［ｓｃＦｖ（Ｉｇ）］ ｇｅｎｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ． Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｒｅｇｕｌ． Ｈｏｍｅｏｓｔ． Ａｇｅｎｔｓ． １８ （２）， １３４－１４０．
Ｌａｍｅｒｓ ＣＨ， Ｓｌｅｉｊｆｅｒ Ｓ， Ｖｕｌｔｏ ＡＧ， Ｋｒｕｉｔ ＷＨ， Ｋｌｉｆｆｅｎ Ｍ， Ｄｅｂｅｔｓ Ｒ， Ｇｒａｔａｍａ ＪＷ， Ｓｔｏｔｅｒ Ｇ， Ｏｏｓｔｅｒｗｉｊｋ Ｅ （２００６） Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｒｅｔａｒｇｅｔｅｄ ａｇａｉｎｓｔ ｃａｒｂｏｎｉｃ ａｎｈｙｄｒａｓｅ ＩＸ： ｆｉｒｓｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． ２４， ｅ２０ － ｅ２２．
Ｍａｈｅｒ Ｊ， Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ＲＪ， Ｇｕｎｓｅｔ Ｇ， Ｒｉｖｉｅｒｅ Ｉ， Ｓａｄｅｌａｉｎ Ｍ （２００２） Ｈｕｍａｎ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｂｙ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ＴＣＲｚｅｔａ ／ＣＤ２８ ｒｅｃｅｐｔｏｒ． Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２０ （１）， ７０－７５．
Ｍａｕｄｅ ＳＬ， Ｂａｒｒｅｔｔ ＤＭ， Ｔｅａｃｈｅｙ ＤＴ， Ｇｒｕｐｐ ＳＡ （２０１４） Ｍａｎａｇｉｎｇ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｎｏｖｅｌ Ｔ Ｃｅｌｌ－Ｅｎｇａｇｉｎｇ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ． Ｃａｎｃｅｒ Ｊ． ２０ （２）， １１９－１２２．
Ｍｉｌｏｎｅ ＭＣ， Ｆｉｓｈ ＪＤ， Ｃａｒｐｅｎｉｔｏ Ｃ， Ｃａｒｒｏｌｌ ＲＧ， Ｂｉｎｄｅｒ ＧＫ， Ｔｅａｃｈｅｙ Ｄ， Ｓａｍａｎｔａ Ｍ， Ｌａｋｈａｌ Ｍ， Ｇｌｏｓｓ Ｂ， Ｄａｎｅｔ－Ｄｅｓｎｏｙｅｒｓ Ｇ， Ｃａｍｐａｎａ Ｄ， Ｒｉｌｅｙ ＪＬ， Ｇｒｕｐｐ ＳＡ， Ｊｕｎｅ ＣＨ （２００９） Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＣＤ１３７ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎｓ ｍｅｄｉａｔｅ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉｃ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｉｎ ｖｉｖｏ． Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． １７ （８）， １４５３－１４６４．
Ｍｏｒｇａｎ ＲＡ， Ｙａｎｇ ＪＣ， Ｋｉｔａｎｏ Ｍ， Ｄｕｄｌｅｙ ＭＥ， Ｌａｕｒｅｎｃｏｔ ＣＭ， Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ＳＡ （２０１０） Ｃａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ａ Ｓｅｒｉｏｕｓ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔ Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｈｅ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ Ｃｅｌｌｓ Ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ Ｗｉｔｈ ａ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ ＥＲＢＢ２． Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． １８， ８４３－８５１．
Ｐｉｎｔｈｕｓ ＪＨ， Ｗａｋｓ Ｔ， Ｋａｕｆｍａｎ－Ｆｒａｎｃｉｓ Ｋ， Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ ＤＧ， Ｈａｒｍｅｌｉｎ Ａ， Ｋａｎｅｔｙ Ｈ， Ｒａｍｏｎ Ｊ， Ｅｓｈｈａｒ Ｚ （２００３） Ｉｍｍｕｎｏ－ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｔｕｍｏｒｓ ｕｓｉｎｇ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ ｈｕｍａｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６３ （１０）， ２４７０－２４７６．
Ｐｉｎｔｈｕｓ ＪＨ， Ｗａｋｓ Ｔ， Ｍａｌｉｎａ Ｖ， Ｋａｕｆｍａｎ－Ｆｒａｎｃｉｓ Ｋ， Ｈａｒｍｅｌｉｎ Ａ， Ａｉｚｅｎｂｅｒｇ Ｉ， Ｋａｎｅｔｙ Ｈ， Ｒａｍｏｎ Ｊ， Ｅｓｈｈａｒ Ｚ （２００４） Ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｂｏｎｅ ｌｅｓｉｏｎｓ ｕｓｉｎｇ ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． １１４（１２）， １７７４－１７８１．
Ｐｒｏｓｓｅｒ ＭＥ， Ｂｒｏｗｎ ＣＥ， Ｓｈａｍｉ ＡＦ， Ｆｏｒｍａｎ ＳＪ， Ｊｅｎｓｅｎ ＭＣ （２０１２） Ｔｕｍｏｒ ＰＤ－Ｌ１ ｃｏ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ ＣＤ８ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓ ａ ＰＤ１：ＣＤ２８ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５１ （３）， ２６３－２７２．
Ｒｅｉｎｋｅ ＡＷ， Ｇｒａｎｔ ＲＡ， Ｋｅａｔｉｎｇ ＡＥ （２０１０） Ａ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｉｌｅｄ－Ｃｏｉｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔｏｍｅ Ｐｒｏｖｉｄｅｓ Ｈｅｔｅｒｏｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｏｄｕｌｅｓ ｆｏｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ． ＪＡＣＳ １３２， ６０２５－６０３１．
Ｒａｆｉｑ Ｓ， Ｙｅｋｕ ＯＯ， Ｊａｃｋｓｏｎ ＨＪ， Ｐｕｒｄｏｎ ＴＪ， ｖａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎ ＤＧ， Ｄｒａｋｅｓ ＤＪ， Ｓｏｎｇ Ｍ， Ｍｉｅｌｅ ＭＭ， Ｌｉ Ｚ， Ｗａｎｇ Ｐ， Ｙａｎ Ｓ， Ｘｉａｎｇ Ｊ， Ｍａ Ｘ， Ｓｅｓｈａｎ ＶＥ， Ｈｅｎｄｅｒｉｃｋｓｏｎ ＲＣ， Ｌｉｕ Ｃ， Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ＲＪ （２０１８） Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａ ＰＤ－１－ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｓｃＦｖ ｂｙ ＣＡＲ－Ｔ ｃｅｌｌｓ ｅｎｈａｎｃｅｓ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｉｎ ｖｉｖｏ． Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３６ （９）， ８４７－８５６．
Ｓｏｔｉｌｌｏ Ｅ， Ｂａｒｒｅｔｔ ＤＭ， Ｂｌａｃｋ Ｋ．， Ｂａｇａｓｈｅｖ Ａ， Ｏｌｄｒｉｄｇｅ Ｄ， Ｗｕ Ｇ， Ｓｕｓｓｍａｎ Ｒ， Ｌａｎａｕｚｅ Ｃ， Ｒｕｅｌｌａ Ｍ， Ｇａｚｚａｒａ ＭＲ， Ｍａｒｔｉｎｅｚ ＮＭ， Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ ＣＴ， Ｃｈｕｎｇ ＥＹ， Ｐｅｒａｚｚｅｌｌｉ Ｊ， Ｈｏｆｍａｎｎ ＴＪ， Ｍａｕｄｅ ＳＬ， Ｒａｍａｎ Ｐ， Ｂａｒｒｅｒａ Ａ， Ｇｉｌｌ Ｓ， Ｌａｃｅｙ ＳＦ， Ｍｅｌｅｎｈｏｒｓｔ ＪＪ， Ａｌｌｍａｎ Ｄ， Ｊａｃｏｂｙ Ｅ， Ｆｒｙ Ｔ， Ｍａｃｋａｌｌ Ｃ， Ｂａｒａｓｈ Ｙ， Ｌｙｎｃｈ ＫＷ， Ｍａｒｉｓ ＪＭ， Ｇｒｕｐｐ ＳＡ， Ｔｈｏｍａｓ－Ｔｉｋｈｏｎｅｎｋｏ Ａ （２０１５） Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ Ａｃｑｕｉｒｅｄ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｏｆ ＣＤ１９ Ｅｎａｂｌｅｓ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ＣＡＲＴ－１９ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ． ５， １２８２－１２９５．
Ｔｉｔｏｖ Ａ， Ｐｅｔｕｋｈｏｖ Ａ， Ｓｔａｌｉａｒｏｖａ Ａ， Ｍｏｔｏｒｉｎ Ｄ， Ｂｕｌａｔｏｖ Ｅ， Ｓｈｕｖａｌｏｖ Ｏ， Ｓｏｏｎｄ ＳＭ， Ｐｉａｃｅｎｔｉｎｉ Ｍ， Ｍｅｌｉｎｏ Ｇ， Ｚａｒｉｔｓｋｅｙ Ａ， Ｂａｒｌｅｖ ＮＡ （２０１８） Ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ＣＡＲ－Ｔ ｔｈｅｒａｐｙ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｏｘｉｃｉｔｅｓ． Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓ ９， ８９７．
Ｔｏｅｐｆｅｒ Ｋ， Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉ Ｍ， Ｍｉｃｈｅｎ Ｓ， Ｗｉｅｄｅｍｕｔｈ Ｒ， Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｎ， Ｌｉｎｄｅｍａｎｎ Ｄ， Ｂａｃｈｍａｎｎ Ｍ， Ｆｕｅｓｓｅｌ Ｍ， Ｓｃｈａｃｋｅｒｔ Ｇ， Ｔｅｍｍｅ Ａ （２０１５） ＤＡＰ１２－ｂａｓｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ＮＫ ｃｅｌｌ ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９４ （７）， ３２０１－３２１２．
Ｗａｎｇ Ｊ， Ｊｅｎｓｅｎ Ｍ， Ｌｉｎ Ｙ， Ｓｕｉ Ｘ， Ｃｈｅｎ Ｅ， Ｌｉｎｄｇｒｅｎ ＣＧ， Ｔｉｌｌ Ｂ， Ｒａｕｂｉｔｓｃｈｅｋ Ａ， Ｆｏｒｍａｎ ＳＪ， Ｑｉａｎ Ｘ， Ｊａｍｅｓ Ｓ， Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ Ｐ， Ｒｉｄｄｅｌｌ Ｓ， Ｐｒｅｓｓ ＯＷ （２００７） Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ａｄｏｐｔｉｖｅ ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ， ｕｓｉｎｇ ａ ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ ＣＤ２８ ａｎｄ ＣＤ１３７ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｄｏｍａｉｎｓ． Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． １８ （８）， ７１２－７２５．
Ｙｕ Ｓ， Ｙｉ Ｍ， Ｑｉｎ Ｓ， Ｗｕ Ｋ （２０１９） Ｎｅｘｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ： ｓａｆｅｔｙ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｔｏ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ． １８ （１）．Ｚｈａｎｇ Ｔ， Ｌｅｍｏｉ ＢＡ， Ｓｅｎｔｍａｎ ＣＬ （２００５） Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ＮＫ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｍｅｄｉａｔｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｂｌｏｏｄ． １０６ （５）， １５４４－１５５１．
Ｚｈａｎｇ Ｔ， Ｂａｒｂｅｒ Ａ， Ｓｅｎｔｍａｎ ＣＬ （２００６） Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ＮＫＧ２Ｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６６ （１１）， ５９２７－５９３３．
Ｚｈａｎｇ Ｙ， Ｈｕｏ Ｍ， Ｚｈｏｕ Ｊ， Ｘｉｅ Ｓ （２０１０） ＰＫＳｏｌｖｅｒ： Ａｎ ａｄｄ－ｉｎ ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ ｄａｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ． Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｇｒａｍｓ ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ９９ （３）， ３０６－３１４．
Ｚｈａｏ Ｙ， Ｗａｎｇ ＱＪ， Ｙａｎｇ Ｓ， Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ＪＮ， Ｚｈｅｎｇ Ｚ， Ｚｈｏｎｇ Ｘ， Ｓａｄｅｌａｉｎ Ｍ， Ｅｓｈｈａｒ Ｚ， Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ＳＡ， Ｍｏｒｇａｎ ＲＡ （２００９） Ａ ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－ｂａｓｅｄ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｗｉｔｈ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｄｏｍａｉｎｓ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １８３ （９）， ５５６３－５５７４．

【符号の説明】

【0262】

１ 第１のドメイン、タグ結合ドメインまたはタグ
２ 第２のドメイン、細胞外ヒンジおよび膜貫通ドメイン
３ 第３のドメイン、シグナル変換ドメイン
４ 任意選択的な第４のドメイン、短いペプチドリンカー

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【配列表】

2023527621000001.app

【国際調査報告】