特表 2023-528036 ＴＩＧＩＴに対する抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-03

(54)【発明の名称】ＴＩＧＩＴに対する抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20230626BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230626BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20230626BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230626BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20230626BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20230626BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P43/00 121

A61P37/04

A61K39/00 H

A61K45/00

C12P21/08

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022573465

(86)(22)【出願日】2021-06-01

(85)【翻訳文提出日】2022-11-29

(86)【国際出願番号】 US2021035268

(87)【国際公開番号】W WO2021247591

(87)【国際公開日】2021-12-09

(31)【優先権主張番号】63/033,609

(32)【優先日】2020-06-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518242226

【氏名又は名称】アーカス バイオサイエンシズ インコーポレイティド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ゴティエ， ケルシー シビック

(72)【発明者】

【氏名】ウォーカー， ナイジェル ペラム クリントン

(72)【発明者】

【氏名】ジャオ， シャオニン

(72)【発明者】

【氏名】リッピンコット， ジョン

【テーマコード（参考）】

4B064

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA20

4B064CC15

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA05

4C084AA19

4C084AA22

4C084NA05

4C084ZB091

4C084ZB092

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C085AA03

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB01

4C085BB36

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG06

4C085GG08

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本開示は、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体を提供する。抗体は、ＣＤ１５５へのＴＩＧＩＴの結合を阻害することによって、Ｔ細胞及びナチュラルキラー細胞を実質的に活性化する能力を有する。抗体は、他の用途の中でも、がん及び感染性疾患の治療に使用できる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であって、
（ａ）配列番号３６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号３９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、配列番号４０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号４２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号４５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号４８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号５１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号５４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号５７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号６０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｆ）配列番号６０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号６９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号７０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号７１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号７２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、あるいは
（ｉ）配列番号７４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、を含む、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

（ａ）配列番号３６を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３７を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３８を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号３９に対する同一性を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４０を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４１を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号４２を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４３を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４４を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号４５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４６を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４７を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号４８を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４９を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５０を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号５１を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５２を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５３を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号５４を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５５を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５６を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号５７を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５８を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５９を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号６０を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６１を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６２を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６４を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｆ）配列番号６０を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号６９を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５５を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号７０を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号７１を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号７２を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７３を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、あるいは
（ｉ）配列番号７４を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７５を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、を含む、請求項１に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項3】

（ａ）配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｆ）配列番号１１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号１３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号１５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号１７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｊ）配列番号７６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｋ）配列番号７８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、
（ｌ）配列番号７６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、あるいは
（ｍ）配列番号７８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、を含む、請求項１又は２に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項4】

前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片が、モノクローナル抗体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項5】

前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片が、キメラ、ヒト化、又はベニア化抗体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項6】

前記キメラ抗体が、ヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメインを含む、請求項５に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項7】

前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片が、ヒト抗体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項8】

前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片が、ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５への結合を阻害し、任意選択的に、前記ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、実施例１のように測定される、約０．１ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．１ｎＭ～約５ｎＭ、約０．２ｎＭ～約２ｎＭ、約０．２ｎＭ～約０．８ｎＭ、約０．４ｎＭ～約０．８ｎＭ、又は約０．６ｎＭ～約０．８ｎＭのＩＣ_５０で結合を阻害する、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項9】

前記抗体が、変異型ヒトＩｇＧ１、変異型ヒトＩｇＧ２、変異型ヒトＩｇＧ３、又は変異型ヒトＩｇＧ４から選択される変異型重鎖定常領域と、任意選択的に、ヒト軽鎖定常領域と、を更に含む、請求項１～５又は７～８のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項10】

前記変異型重鎖定常領域が、野生型重鎖定常領域と比較して、増強又は低減したエフェクター機能を有する、請求項９に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項11】

前記変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域が、配列番号９７、配列番号９９、又は配列番号１０１を含む、請求項１０に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項12】

前記抗体が、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域と、任意選択的に、ヒト軽鎖定常領域と、を更に含む、請求項１～５又は７～８のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項13】

前記野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域が、配列番号９４を含む、請求項１２に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項14】

ヒト軽鎖カッパ定常領域を含み、任意選択的に、前記ヒト軽鎖定常領域が配列番号９５を含む、請求項１２又は１３に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項15】

前記抗体が、重鎖及び軽鎖を有し、
（ａ）前記重鎖は配列番号９２を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖は配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する、あるいは
（ｂ）前記重鎖は配列番号９６を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖は配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する、あるいは
（ｃ）前記重鎖は配列番号９８を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖は配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する、あるいは
（ｄ）前記重鎖は配列番号１００を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖は配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する、請求項１～５又は７～８のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項16】

前記抗体又はその結合断片が、
（ａ）表面プラズモン共鳴によって測定される、約０．０１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ、約０．１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ、約０．１×１０^－１１Ｍ～約１０×１０^－１１Ｍ、約１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ又は約１×１０^－１１Ｍ～約１０×１０^－１１Ｍの平衡結合定数（ＫＤ）を有する、
（ｂ）実施例１のように測定される、約０．２ｎＭ～約２ｎＭ、約０．２ｎＭ～約０．８ｎＭ、約０．６ｎＭ～約０．８ｎＭ、又は約０．６ｎＭ～約０．８ｎＭの半数阻害濃度（ＩＣ５０）で、細胞表面ヒトＴＩＧＩＴへの可溶性ヒトＣＤ１５５リガンドの結合を遮断する、
（ｃ）少なくともＴＩＧＩＴの次の残基を含むエピトープに結合する、
（ｉ）配列番号８０のＤ７２、並びに配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、
（ｉｉ）配列番号８０のＥ６０及びＤ７２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、
（ｉｉｉ）配列番号８０のＤ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、
（ｉｖ）配列番号８０のＥ６０、Ｄ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、又は、
（ｖ）配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２、あるいは
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）の任意の組み合わせである、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項17】

前記抗体又はその抗原結合断片が、実請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と、ＴＩＧＩＴへの結合について競合する、請求項１６に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項18】

過剰の前記抗体又はその抗原結合断片が、競合結合アッセイにおいて測定するとき、参照抗体と、ＴＩＧＩＴへの結合について少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％競合し、前記参照抗体は、配列番号９２を含むアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、請求項１６又は１７に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項19】

ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号９２を含むアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項20】

ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５への結合を阻害する方法であって、ＴＩＧＩＴを、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含む、方法。

【請求項21】

がんの治療又は効果的な予防の方法であって、がんを有する又はがんのリスクがある対象に、有効なレジメン又は治療有効量の、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片のうちのいずれか１つを投与することを含む、方法。

【請求項22】

前記がんが、血液悪性腫瘍、固形腫瘍、メルケル細胞がん、尿路上皮がん、頭頸部扁平上皮がん、Ｂ細胞リンパ腫、子宮がん、子宮頸がん、精巣がん、消化管がん、膀胱がん、骨がん、骨髄、皮膚がん、胆嚢がん、心臓がん、肺がん、唾液腺がん、副腎がん、甲状腺がん、神経節がん、中枢神経系（ＣＮＳ）及び末梢神経系（ＰＮＳ）のがん、並びに、造血系のがん、免疫系のがんである、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記対象に、前記抗体又はその抗原結合断片によって活性化される腫瘍浸潤Ｔ細胞が投与される、請求項２１又は２２に記載の方法。

【請求項24】

前記対象に、前記がんに対する免疫応答を誘導するワクチンが投与され、前記抗体又はその抗原結合断片によって増強される、請求項２１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記ワクチンが、がん細胞の表面上に発現する抗原又はその断片を含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記対象に、前記がんに対する細胞傷害性が前記抗体又はその抗原結合断片によって増強されるナチュラルキラー細胞が投与される、請求項２１～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記対象に、がんの細胞の表面上に発現する抗原に対する第２の抗体が更に投与され、それによって、前記がんに対する前記第２の抗体のエフェクター媒介性細胞傷害性が、前記抗体又はその抗原結合断片によって増強される、請求項２１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記対象に、免疫細胞の表面上に発現する抗原に対する第２の抗体が更に投与される、請求項２１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記免疫細胞が、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞である、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記抗原が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１である、請求項２７又は２８に記載の方法。

【請求項31】

前記対象に、化学療法、放射線、細胞系療法、及び手術からなる群から選択される１つ以上の治療法が更に施される、請求項２１～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記対象に、１つ以上の免疫チェックポイント受容体又はリガンドの阻害剤が更に投与される、請求項２１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記１つ以上の免疫チェックポイント受容体又はリガンドが、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＰＶＲＩＧ、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、Ａ_２ａＲ，Ａ_２ｂＲ、Ａ_２ａ／Ａ_２ｂＲ、アルギナーゼ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＩＤＯ、及びＴＤＯからなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。

【請求項34】

前記阻害剤が、イピリムマブ、トレメリムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ランブロリズマブ、セミプリマブ、チスレリズマブ、ジムベレリマブ、デュルバルマブ、及びアテゾリズマブからなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。

【請求項35】

請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。

【請求項36】

配列番号８０の次のアミノ酸残基、すなわち、Ｔ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つを含むヒトＴＩＧＩＴのエピトープに結合する、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項37】

前記抗体又はその抗原結合断片が、少なくともＴＩＧＩＴの次の残基、すなわち、
（ｉ）配列番号８０のＤ７２、並びに配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、
（ｉｉ）配列番号８０のＥ６０及びＤ７２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、
（ｉｉｉ）配列番号８０のＤ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、
（ｉｖ）配列番号８０のＥ６０、Ｄ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、あるいは
（ｖ）配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２、を含むエピトープに結合する、請求項３６に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項38】

前記抗体又はその抗原結合断片が、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と、ＴＩＧＩＴへの結合について競合する、請求項３６又は３７に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項39】

過剰の前記抗体又はその抗原結合断片が、競合結合アッセイにおいて測定するとき、参照抗体と、ＴＩＧＩＴへの結合について少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％競合し、前記参照抗体は、配列番号９２を含むアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、請求項３６又は３７に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【請求項40】

前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号８０の次のアミノ酸残基、すなわち、Ｔ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つを含むヒトＴＩＧＩＴのエピトープに結合する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本明細書で提供されるのは、とりわけ、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体、並びに、他の用途の中でも、がん及び感染性疾患の治療のためのその使用である。

【0002】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年６月２日に出願された米国特許仮出願第６３／０３３，６０９号の優先権を主張するものであり、この開示は、あらゆる図面を含むその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

配列表の組み込み
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。０５０６５８＿５３１００１ＷＯ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５と名付けられた添付の配列表テキストファイルは、２０２１年５月３１日に作成され、１４３ＫＢである。

【背景技術】

【0004】

腫瘍では、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の機能が細胞表面チェックポイント受容体によって調節され、がん細胞が免疫系を回避することを可能にする高度に抑制性の微小環境が存在する。細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）及びプログラム細胞死１（ＰＤ－１）などの抑制性チェックポイント受容体の機能的遮断は、患者にとって有望な結果をもたらしており、潜在的な干渉標的として作用し得る更なる共抑制性分子の探索において大きな関心が生じている。

【0005】

ＴＩＧＩＴ（Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）は、細胞質側末端において免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を有する免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、活性化Ｔ細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって発現される共阻害受容体である。いくつかのグループが、様々な腫瘍において、ＣＤ８^＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）及びＴｒｅｇでＴＩＧＩＴ発現が上昇したことを報告している。また、血液におけるＨＩＶ感染、及びリンパ組織におけるＳＩＶ感染中のエフェクターＣＤ８^＋Ｔ細胞が、より高いレベルのＴＩＧＩＴを示すことも報告されている。更に、ＴＩＧＩＴの遮断は、ヒトＴ細胞培養物における活性化活性、及び異なる腫瘍の動物モデルにおける治療的利益を示した。したがって、ＴＩＧＩＴは、抗腫瘍免疫において重要な役割を果たし、がん並びに他の様々な疾患及び状態の管理に対する有望な治療標的として機能する可能性がある。したがって、有益な治療目的のためＴＩＧＩＴ結合を妨げ得る分子が必要とされている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0006】

本開示は、とりわけ、抗ＴＩＧＩＴ抗体に関する。

【0007】

本明細書で提供されるのは、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であって、（ａ）配列番号３６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号３９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、配列番号４０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号４２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号４５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号４８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号５１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｄ）配列番号５４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号５７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｅ）配列番号６０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｆ）配列番号６０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｇ）配列番号６９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号７０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号７１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｈ）配列番号７２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、又は、（ｉ）配列番号７４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、を含む、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。

【0008】

いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、（ａ）配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｄ）配列番号７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｅ）配列番号９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｆ）配列番号１１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｇ）配列番号１３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｈ）配列番号１５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｉ）配列番号１７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｊ）配列番号７６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｋ）配列番号７８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｌ）配列番号７６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、又は、（ｍ）配列番号７８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、を含む。

【0009】

本明細書に提供されるのは、ＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合する、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、少なくともＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、配列番号８０のＤ７２、並びに配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、少なくともＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、配列番号８０のＥ６０及びＤ７２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、少なくともＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、配列番号８０のＤ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、及びＳ８０のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、少なくともＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、配列番号８０のＥ６０、Ｄ７２、及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、及びＳ８０のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に記載のＣＤＲの構造的特徴及び可変配列を有する。

【0010】

本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、単離された抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はベニア化抗体である。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、ヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５への結合を阻害する。

【0011】

本明細書に提供されるのは、本開示に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物である。

【0012】

本明細書で提供されるのは、がんを有する又はがんのリスクがある対象に、有効なレジメン又は治療有効量の本開示に記載の任意の抗ＴＩＧＩＴ抗体を投与することを含む、がんの治療又は効果的な予防の方法である。いくつかの実施形態では、がんは、血液がんである。いくつかの実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病又は成人Ｔ細胞白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍、非小細胞肺がん、黒色腫、子宮頸がん、多発性骨髄腫、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胃がん、胃食道接合部腺がん、又は食道がんである。いくつかの実施形態では、対象はまた、腫瘍浸潤Ｔ細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象はまた、がんに対する免疫応答を誘導するワクチンを投与される。いくつかの実施形態では、ワクチンは、がん細胞の表面上に発現する抗原又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、対象はまた、がんに対する細胞傷害性が抗体によって増強されるナチュラルキラー細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象は更に、がんの細胞の表面上に発現する抗原に特異的に結合する第２の抗体を投与され、それにより、がんに対する第２の抗体のエフェクター媒介性細胞傷害性が、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体によって増強される。いくつかの実施形態では、対象は更に、免疫細胞の表面上に発現する抗原に特異的に結合する第２の抗体を投与される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞である。いくつかの実施形態では、抗原は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、対象は更に、化学療法、放射線、細胞系療法、及び手術からなる群から選択される１つ以上の治療法を施される。いくつかの実施形態では、対象に、１つ以上の免疫チェックポイント受容体又はリガンドの阻害剤が更に投与される。いくつかの実施形態では、１つ以上の免疫チェックポイント受容体又はリガンドは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＰＶＲＩＧ、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、Ａ_２ａＲ，Ａ_２ｂＲ、Ａ_２ａ／Ａ_２ｂＲ、アルギナーゼ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＩＤＯ、及びＴＤＯからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の免疫チェックポイント受容体又はリガンドは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ａ_２ａＲ，Ａ_２ｂＲ、Ａ_２ａ／Ａ_２ｂＲ、アルギナーゼ、ＣＤ３９、及びＣＤ７３からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、阻害剤は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ランブロリズマブ、セミプリマブ、チスレリズマブ、ジムベレリマブ、デュルバルマブ、及びアテゾリズマブからなる群から選択される。

【0013】

本明細書に提供されるのは、がんを有する対象に、治療有効量の本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれかを投与することを含む、がんの治療を支援する方法である。いくつかの実施形態では、がんは、血液がんである。いくつかの実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病又は成人Ｔ細胞白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍、非小細胞肺がん、黒色腫、子宮頸がん、多発性骨髄腫、リンパ腫、非ホジキン（hon-hodgkin）リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胃がん、胃食道接合部腺がん、又は食道がんである。いくつかの実施形態では、対象はまた、抗体によって活性化される腫瘍浸潤Ｔ細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象はまた、抗体によって増強されるがんに対する免疫応答を誘導するワクチンを投与される。いくつかの実施形態では、ワクチンは、がん細胞の表面上に発現する抗原又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、対象はまた、がんに対する細胞傷害性が本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体によって増強されるナチュラルキラー細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象はまた、がんの細胞の表面上に発現する抗原に特異的に結合する第２の抗体を投与され、それにより、がんに対する第２の抗体のエフェクター媒介性細胞傷害性が、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体によって増強される。いくつかの実施形態では、対象は更に、免疫細胞の表面上に発現する抗原に特異的に結合する第２の抗体を投与される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞である。いくつかの実施形態では、抗原は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、対象は更に、化学療法、放射線、細胞系療法、及び手術からなる群から選択される１つ以上の治療法を施される。いくつかの実施形態では、対象に、１つ以上の免疫チェックポイント受容体又はリガンドの阻害剤が更に投与される。いくつかの実施形態では、１つ以上の免疫チェックポイント受容体又はリガンドは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＰＶＲＩＧ、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、Ａ_２ａＲ，Ａ_２ｂＲ、Ａ_２ａ／Ａ_２ｂＲ、アルギナーゼ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＩＤＯ、及びＴＤＯからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の免疫チェックポイント受容体又はリガンドは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ａ_２ａＲ，Ａ_２ｂＲ、Ａ_２ａ／Ａ_２ｂＲ、アルギナーゼ、ＣＤ３９、及びＣＤ７３からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、阻害剤は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ランブロリズマブ、セミプリマブ、チスレリズマブ、ジムベレリマブ、デュルバルマブ、及びアテゾリズマブからなる群から選択される。

【0014】

本明細書に記載の態様及び実施形態の各々は、実施形態又は態様の文脈から明示的又は明確に除外されない限り、一緒に使用することができる。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1A】２１Ｆ８の成熟ＶＨ（配列番号１）及び２１Ｆ８の成熟ＶＬ（配列番号２）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号３６）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号３７）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号３８）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号３９）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号４０）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号４１）として特定される。

【図1B】３０Ｍ１８の成熟ＶＨ（配列番号３）及び３０Ｍ１８の成熟ＶＬ（配列番号４）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号４２）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号４３）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号４４）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号４５）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号４６）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号４７）として特定される。

【図1C】２４Ｆ８の成熟ＶＨ（配列番号５）及び２４Ｆ８の成熟ＶＬ（配列番号６）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号４８）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号４９）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号５０）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号５１）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号５２）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号５３）として特定される。

【図1D】５Ｊ２４の成熟ＶＨ（配列番号７）及び５Ｊ２４の成熟ＶＬ（配列番号８）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号５４）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号５５）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号５６）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号５７）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号５８）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号５９）として特定される。

【図1E】２１Ｂ９の成熟ＶＨ（配列番号９）及び２１Ｂ９の成熟ＶＬ（配列番号１０）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号６０）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号６１）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号６２）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号６３）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号６４）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号６５）として特定される。

【図1F】２２Ｂ２２の成熟ＶＨ（配列番号１１）及び２２Ｂ２２の成熟ＶＬ（配列番号１２）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号６０）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号６６）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号６７）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号６３）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号６８）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号６５）として特定される。

【図1G】２８Ｐ２４の成熟ＶＨ（配列番号１３）及び２８Ｐ２４の成熟ＶＬ（配列番号１４）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号６９）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号５５）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号７０）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号７１）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号６８）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号６５）として特定される。

【図1H】２１Ｂ１６の成熟ＶＨ（配列番号１５）及び２１Ｂ１６の成熟ＶＬ（配列番号１６）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号７２）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号７３）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号６７）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号６３）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号６８）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号６５）として特定される。

【図1I】２８Ｏ１２の成熟ＶＨ（配列番号１７）及び２８Ｏ１２の成熟ＶＬ（配列番号１２）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号７４）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号７５）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号６７）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号６３）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号６８）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号６５）として特定される。

【図1J】Ｈｕ２４Ｆ８．１の成熟ＶＨ（配列番号７６）及びＨｕ２４Ｆ８．１の成熟ＶＬ（配列番号７７）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号４８）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号４９）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号５０）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号５１）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号５２）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号５３）として特定される。

【図1K】Ｈｕ２４Ｆ８．２の成熟ＶＨ（配列番号７８）及びＨｕ２４Ｆ８．２の成熟ＶＬ（配列番号７７）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号４８）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号４９）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号５０）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号５１）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号５２）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号５３）として特定される。

【図1L】Ｈｕ２４Ｆ８．３の成熟ＶＨ（配列番号７８）及びＨｕ２４Ｆ８．３の成熟ＶＬ（配列番号７９）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号４８）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号４９）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号５０）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号５１）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号５２）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号５３）として特定される。

【図1M】Ｈｕ２４Ｆ８．４の成熟ＶＨ（配列番号７６）及びＨｕ２４Ｆ８．４の成熟ＶＬ（配列番号７９）のアミノ酸配列を示す。ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号４８）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号４９）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号５０）として特定される。ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ下線が引かれ、ＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号５１）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号５２）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号５３）として特定される。

【図2】Ｃｈ２４Ｆ８、Ｃｈ２８Ｏ１２、及びＣｈ２２Ｂ２２が、カニクイザルＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋細胞上に発現したｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴに結合できたことを示す。蛍光強度の幾何平均（ｇＭＦＩ）を得て、データをアイソタイプ対照に対するｇＭＦＩの倍率として示した。

【図3A】ヒトＴＩＧＩＴを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞へのヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合を示すグラフである。

【図3B】カニクイザルＴＩＧＩＴを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞へのヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合を示すグラフである。

【図4A】マウスＴＩＧＩＴを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞へのヒト化抗ＴＩＧＩＴの結合を示すグラフである。

【図4B】ラットＴＩＧＩＴを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞へのヒト化抗ＴＩＧＩＴの結合を示すグラフである。

【図5A】ヒトの活性化されていないＣＤ８^＋Ｔ細胞へのヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合を示すグラフである。

【図5B】ヒトの活性化ＣＤ８^＋Ｔ細胞へのヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合を示すグラフである。

【図6】ヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体による、ヒトＴＩＧＩＴを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞へのヒトＣＤ１５５結合の阻害を示すグラフである。

【図7】Ｊｕｒｋａｔ Ｄｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ａｓｓａｙにおける、ヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体によるヒトＴＩＧＩＴへのヒトＣＤ１５５結合の阻害を示すグラフである。

【図8】Ｆａｂ２４Ｆ８のＴＩＧＩＴへの結合を示す。

【図9】Ｆａｂ２４Ｆ８と水素結合、塩架橋、及びファンデルワールス相互作用を有するＴＩＧＩＴ残基を示す。

【図10A】ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合がＦａｂ２４Ｆ８によって遮断されることを示す。ヒトＴＩＧＩＴ（分子表面として表される）に結合したヒトＣＤ１５５（リボン状）の複合体構造の概略図を示す。

【図10B】ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合がＦａｂ２４Ｆ８によって遮断されることを示す。ＴＩＧＩＴに結合したＦａｂ２４Ｆ８（各々が分子表面によって表される）の結晶構造複合体の概略図上にある、図１０Ａと同じ向きのＣＤ１５５の重ね合わせ図を示す。

【図11】Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１、ＡＢ１２２、ＡＢ１２２、及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１、又はアイソタイプ対照の存在下における、１人の対象のＳＥＡに対するＩＬ－２応答を示す。バー及び誤差は、平均±標準誤差平均を示す。^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、Ｓｉｄａｋの多重比較検定を伴う一元配置分散分析（Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１対各濃度のＩｇＧ１、及びＡＢ１２２＋Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１対ＡＢ１２２単独又はＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１単独）。

【図12A】Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１又はアイソタイプ対照の存在下における、ＳＥＡに対する健康対象又はがん対象ＰＢＭＣのＩＬ－２応答を示す。各記号は個々の対象を表す。^＊ｐ＜０．０５、対応のあるｔ検定。

【図12B】ＡＢ１２２及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１と比較するＡＢ１２２の存在下における、ＳＥＡに対する健康対象ＰＢＭＣのＩＬ－２応答を示す。各記号は個々の対象を表す。^＊ｐ＜０．０５、対応のあるｔ検定。

【発明を実施するための形態】

【0016】

本開示は、とりわけ、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体を提供する。本開示の抗体は、本明細書で「抗ＴＩＧＩＴ抗体」とも称し、ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５への結合を阻害し、それによってＴ細胞及び／又はＮＫ細胞を活性化できる。抗体はまた、他の用途の中でも、がん及び感染性疾患の治療に使用できる。本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体の追加の構造的及び機能的特徴を、以下で更に詳細に説明する。

【0017】

Ｉ．定義
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術分野、表記、及び他の科学用語又は専門用語は、本開示が関係する当業者によって一般に理解される意味を有することが意図される。いくつかの場合において、一般に理解される意味を有する用語は、明確にするため及び／又はすぐに参照できるように本明細書で定義され、本明細書におけるそのような定義の包含は、当該技術分野で理解されているものに対する実質的な違いを表すものと必ずしも解釈されるものではない。本明細書で説明又は参照される技術及び手順の多くは、当業者によって従来の方法論を使用して十分に理解され、一般的に用いられる。

【0018】

「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、文脈上他に明確に示されない限り、複数の指示を含む。例えば、「細胞（a cell）」という用語は、それらの混合物を含む１つ以上の細胞を含む。「Ａ及び／又はＢ」は、本明細書では、以下の代替物：「Ａ」、「Ｂ」、「Ａ又はＢ」、及び「Ａ及びＢ」の全てを含むように使用される。

【0019】

「抗体」という用語は、単一の抗原に特異的に結合するか、又は複数の抗原に特異的に結合する（例えば、二重特異性抗体、三重特異性抗体などの多重特異性抗体）、完全な抗体及びその結合断片を含む。したがって、抗体へのいかなる言及も、文脈が別途必要としない限り、完全形の抗体又は結合断片を指すと理解されるべきである。本開示の文脈において企図される追加の機能（例えば、抗原結合）は、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－ＬＩ、抗ＴＩＭ－３、抗ＬＡＧ－３、抗ＰＶＲＩＧ、抗ＶＩＳＴＡ、抗ＣＴＬＡ－４、抗４－１ＢＢ、抗ＢＴＬＡ、抗ＣＤ３９、抗ＣＤ７３、抗ＯＸ４０Ｌ、及び抗ＯＸ４０断片を含む。

【0020】

「抗原結合断片」と互換的に使用され得る「結合断片」という用語は、本明細書において、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部から形成された抗体断片、又は抗原に特異的に結合するが、完全な天然抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を指す。抗原結合断片の例として、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）_ｃ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、トリアボディ、テトラボディ、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体、多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ミニボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、ＩｇＮＡＲ、Ｖ－ＮＡＲ、及びｈｃＩｇＧが挙げられるが、これらに限定されない。典型的には、結合断片は、特異的結合について由来する完全な抗体と競合する。結合断片は、組換えＤＮＡ技術によって、又は完全な免疫グロブリンの酵素的又は化学的分離によって生成することができる。

【0021】

抗体に関する「Ｆａｂ」とは、ジスルフィド結合によって単一の重鎖の可変領域及び第１の定常領域に結合した単一の軽鎖（可変領域及び定常領域の両方）からなる抗体の部分を指す。

【0022】

「Ｆａｂ’」は、ヒンジ領域の一部を含むＦａｂ断片を指す。

【0023】

「Ｆ（ａｂ’）_２」は、Ｆａｂ’の二量体を指す。

【0024】

抗体に関する「Ｆｃ」とは、ジスルフィド結合を介して第２の重鎖の第２及び第３の定常領域に結合した第１の重鎖の第２及び第３の定常領域からなる抗体の部分を指す。抗体のＦｃ部分は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣなどの様々なエフェクター機能に関与するが、抗原結合において機能しない。

【0025】

抗体に関する「Ｆｖ」とは、完全な抗原結合部位を有する抗体の最小の断片を指す。Ｆｖ断片は、単一の重鎖の可変領域に結合した単一の軽鎖の可変領域からなる。

【0026】

「単鎖Ｆｖ抗体」又は「ｓｃＦｖ」は、直接又はペプチドリンカー配列を介して互いに連結した軽鎖可変領域及び重鎖可変領域からなる遺伝子操作された抗体を指す（Ｈｕｓｔｏｎ Ｊ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８５：５８７９（１９８８））。

【0027】

「単鎖Ｆｖ－Ｆｃ抗体」又は「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」は、抗体のＦｃ領域に連結したｓｃＦｖからなる遺伝子操作された抗体を指す。

【0028】

「ラクダ化された単一ドメイン抗体」、「重鎖抗体」、又は「ＨＣＡｂ」は、２つのＶ_Ｈを含有し、軽鎖を含まない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １０；２３１（１－２）：２５－３８（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊｕｎｅ；７４（４）：２７７－３０２（２００１）；国際公開第９４／０４６７８号；同９４／２５５９１号；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体は、ラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、及びラマ）に由来した。軽鎖がないが、ラクダ化抗体は、標準的な抗原結合レパートリーを有する（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｊｕｎｅ ３；３６３（６４２８）：４４６－８（１９９３）；Ｎｇｕｙｅｎ Ｖ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．「Ｈｅａｖｙ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃａｍｅｌｉｄａｅ；ａ ｃａｓｅ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，」Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．Ａｐｒｉｌ；５４（１）：３９－４７（２００２）；Ｎｇｕｙｅｎ Ｖ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｍａｙ；１０９（１）：９３－１０１（２００３））。重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）は、適応免疫応答によって生成される最小の既知の抗原結合ユニットを表す（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．Ｎｏｖｅｍｂｅｒ；２１（１３）：３４９０－８．Ｅｐｕｂ ２００７ Ｊｕｎ．１５（２００７））。

【0029】

「ナノボディ」は、重鎖抗体由来のＶＨＨドメイン、並びに２つの定常ドメイン、ＣＨ２及びＣＨ３からなる抗体断片を指す。

【0030】

「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を含み、断片は、同一ポリペプチド鎖中のＶ_Ｌドメインに連結したＶ_Ｈドメイン（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ又はＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ）を含む（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．Ｊｕｌｙ １５；９０（１４）：６４４４－８（１９９３）；ＥＰ４０４０９７；国際公開第９３／１１１６１号）。同一鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、強制的に別の鎖の相補ドメインと対になり、それによって２つの抗原結合部位を作成する。抗原結合部位は、同じ又は異なる抗原（又はエピトープ）を標的とすることができる。

【0031】

「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域又は軽鎖の可変領域のみを含有する抗体断片を指す。場合によっては、２つ以上のＶ_Ｈドメインは、ペプチドリンカーと共有結合して、二価又は多価ドメイン抗体を作成する。二価ドメイン抗体の２つのＶ_Ｈドメインは、同じ又は異なる抗原を標的とすることができる。

【0032】

特定の実施形態では、「（ｄｓＦｖ）_２」は、３つのペプチド鎖：ペプチドリンカーによって連結され、ジスルフィド架橋によって２つのＶ_Ｌ部分に結合した２つのＶ_Ｈ部分を含む。

【0033】

特定の実施形態では、「二重特異性ｄｓダイアボディ」は、Ｖ_Ｌ１－Ｖ_Ｈ２（ペプチドリンカーによって連結）に、Ｖ_Ｈ１とＶ_Ｌ１との間のジスルフィド架橋を介して結合したＶ_Ｈ１－Ｖ_Ｌ２（これもペプチドリンカーによって連結）を含む。

【0034】

特定の実施形態では、「二重特異性ｄｓＦｖ」又はｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’」は、３つのペプチド鎖：重鎖がペプチドリンカー（例えば、長い可動性リンカー）によって連結し、それぞれジスルフィド架橋を介して、Ｖ_Ｌ１及びＶ_Ｌ２部分に結合したＶ_Ｈ１－Ｖ_Ｈ２部分を含み、各ジスルフィド対重鎖及び軽鎖は、異なる抗原特異性を有する。

【0035】

特定の実施形態では、「ｓｃＦｖ二量体」は、別のＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ部分と共に二量体化されたＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ（ペプチドリンカーによって連結）を含む二価ダイアボディ又は二価ＳｃＦｖ（ＢｓＦｖ）であり、１つの部分のＶ_Ｈが別の部分のＶ_Ｌと配位、同じ抗原（又はエピトープ）又は異なる抗原（又はエピトープ）を標的とすることができる２つの結合部位を形成する。他の実施形態では、「ｓｃＦｖ二量体」は、Ｖ_Ｌ１－Ｖ_Ｈ２（ペプチドリンカーによって連結）と関連付けられたＶ_Ｈ１－Ｖ_Ｌ２（これもペプチドリンカーによって連結）を含む二重特異性ダイアボディであり、Ｖ_Ｈ１及びＶ_Ｌ１が配位し、Ｖ_Ｈ２及びＶ_Ｌ２が配位し、各配位した対は異なる抗原特異性を有する。「単離された」抗体は、その自然環境の構成成分から分離されているものである。いくつかの実施形態では、単離された抗体は、当該技術分野で既知の方法によって決定されるように、９５％超又は９９％超の純度に精製される。

【0036】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」は、例えば、任意の真核生物、原核生物、又はファージクローンを含む単一のコピー又はクローン由来の抗体を指す。「モノクローナル抗体」は、任意の特定の方法によって産生された抗体に限定されない。例えば、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術、並びに組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、又はそのような技術の組み合わせ、及び当技術分野で容易に既知の他の技術を使用して生成することができる。

【0037】

本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、ヒト及び非ヒト（例えば、マウス又はラット）の両方の抗体由来の配列を含む抗体を指す。

【0038】

本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、抗体が、ヒト又はヒト免疫細胞によって産生される、又はヒト抗体レパートリー若しくは他のヒト抗体コード配列を利用するトランスジェニック非ヒト動物などの非ヒト源に由来する抗体のものに対応する、アミノ酸配列、特に抗原結合残基を有するか、又はそれらからなることを意味する。特定の実施形態では、完全ヒト抗体は、非ヒト抗体に由来するアミノ酸残基（特に抗原結合残基）を含まない。

【0039】

例えば、天然の完全な抗体によって例示されるような基本の抗体構造単位は、サブユニットの四量体である。各四量体は２つの同一のポリペプチド鎖対を含み、各対は、１つの「軽」（約２５ｋＤａ）鎖及び１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０個又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。この可変領域は、まずは、切断可能なシグナルペプチドと連結されている状態で発現される。シグナルペプチドのない可変領域は、成熟可変領域と呼ばれることもある。したがって、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドのない軽鎖可変領域を意味する。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を定義する。

【0040】

軽鎖はカッパ又はラムダのいずれかとして分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、又はイプシロンとして分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥとして定義する。軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合され、重鎖はまた、約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。（一般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、１９８９）、第７章を参照）（全ての目的のために参照によりその全体が組み込まれる）。

【0041】

各軽鎖／重鎖対の成熟可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、完全な天然抗体は、２つの同一の結合部位を有する、二重特異性抗体は、２つの非同一の結合部位を有する、三重特異性抗体は、３つの非同一の結合部位を有する重鎖及び軽鎖の成熟可変領域は全て、相補性決定領域又はＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域によって結合された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。各対の２本の鎖からのＣＤＲは、フレームワーク領域によって整列され、特定のエピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖及び重鎖の両方が、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９８７及び１９９１）、又はＣｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３（１９８９）の定義に従う。Ｋａｂａｔはまた、広く使用されている番号付け規則（Ｋａｂａｔ番号付け）を提供し、この規則では、異なる重鎖間又は異なる軽鎖間の対応する残基に同じ番号が割り当てられる。

【0042】

「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、１つ以上のタンパク質の三次元フォールディングによって並置された連続アミノ酸又は非連続アミノ酸から形成され得る。連続アミノ酸から形成されるエピトープ（線状エピトープとしても知られる）は、通常、変性溶媒への曝露時に保持されるのに対し、三次元フォールディングによって形成されるエピトープ（立体配座エピトープとしても知られる）は、通常、変性溶媒による処理で失われる。エピトープは、通常、固有の空間的立体配座において、少なくとも３個、より通常は少なくとも５個、又は８～１０個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的立体配座を決定する方法は、例えば、Ｘ線結晶解析及び２次元核磁気共鳴を含む。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい。

【0043】

同じ又は重複するエピトープを認識する抗体は、１つの抗体が別の抗体の標的抗原への結合と競合する能力を示す単純な免疫測定法において同定することができる。抗体のエピトープはまた、接触残基を同定するために、その抗原に結合した抗体のＸ線結晶解析によって定義することができる。あるいは、一方の抗体の結合を減少又は排除する抗原における全てのアミノ酸変異が、他方の結合を減少又は排除する場合、２つの抗体は同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を減少又は排除する全てではないが一部のアミノ酸変異が、他方の結合を減少又は排除する場合、２つの抗体は重複するエピトープを有する。

【0044】

抗体間の競合は、試験条件下の抗体が共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイによって決定される（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０を参照）。過剰の試験抗体（例えば、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、又はそれ以上、これらの値の間に含まれる数を含む）が、参照抗体の結合を少なくとも約５０％、例えば少なくとも約７５％、９０％、又は９９％阻害する場合、試験抗体は参照抗体と競合する。他の実施形態では、競合結合アッセイにおいて測定するとき、過剰の試験抗体が、参照抗体の結合を少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかで阻害する場合、試験抗体は参照抗体と競合する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体と、立体障害が生じるために参照抗体によって結合されたエピトープに十分に近くにある隣接エピトープに結合する抗体とを含む。参照抗体は、治療用抗体候補と同様の機能を有する市販のモノクローナル抗体、対象となる標的タンパク質と機能的に相互作用するポリクローナル抗体、又はパブリックドメインにおいて利用可能な配列から再構成された抗体であり得る。例えば、限定するものではないが、ＴＩＧＩＴに結合する参照抗体は、配列番号９２を含むアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む。

【0045】

本明細書で使用される場合、「特異的結合」及び「特異的に結合する」という用語は、抗原（例えば、ＴＩＧＩＴ）と抗体との間の結合など、測定可能かつ再現可能な相互作用を指す。例えば、抗原に特異的に結合する抗体は、他の抗原に結合するよりも、より高い親和性、結合力、より容易に、及び／又はより長い持続時間でこの標的に結合する抗体である。抗原に対する親和性及び分子の平衡解離定数（ＫＤ）は反比例する。抗原に対する高い親和性は、低いＫＤ値によって測定される。本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合する抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定される、１０^－６Ｍ以下、あるいは１０^－７Ｍ以下、あるいは１０^－８Ｍ以下、あるいは１０^－９Ｍ以下、あるいは１０^－１０Ｍ以下、あるいは１０^－１１Ｍ以下の抗原に対するＫＤ；又は、１０^－６Ｍ～１０^－１３Ｍ、若しくは１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ、若しくは１０^－９Ｍ～１０^－１２Ｍ、若しくは１０^－１０Ｍ～１０^－１３Ｍ、若しくは１０^－１０Ｍ～１０^－１２Ｍ、若しくは１０^－１１Ｍ～１０^－１３Ｍ、若しくは１０^－１０Ｍ～１０^－１１Ｍ、若しくは１０^－１１Ｍ～１０^－１２Ｍの範囲のＫＤを有する。一実施形態では、「特異的結合」という用語は、任意の他のポリペプチド又はポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく、分子が特定のポリペプチド上の特定のポリペプチド又はエピトープに結合する結合を指す。

【0046】

本明細書で使用される場合、「個体」又は「対象」は、ヒト（例えば、ヒト個体）及び非ヒト動物などの動物を含む。いくつかの実施形態では、「個体」又は「対象」は、医師の治療下の患者である。したがって、対象は、目的の疾患（例えば、がん）、及び／又はその疾患の１つ以上の症状を有する、又はそれを有するリスクがある、又はそれを有する疑いがある、ヒト患者又は個体であり得る。対象はまた、診断時以降に目的の状態のリスクを有すると診断された個体であり得る。「非ヒト動物」という用語は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物、例えば、げっ歯類、例えば、マウス、非ヒト霊長類、及び、例えば、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリなどの他の哺乳動物、及び、両生類、爬虫類などの非哺乳動物が挙げられる。

【0047】

本明細書で使用される場合、参照アミノ酸配列のアミノ酸残基と「対応する」又は「対応している」又は「対応した」目的のアミノ酸配列のアミノ酸残基は、目的の配列のアミノ酸残基が、参照アミノ酸配列中の列挙された残基と相同又は同等の場所にあることを示す。当業者は、ＴＩＧＩＴポリペプチドなどのポリペプチド中の特定のアミノ酸残基位置が、相同参照配列に対応するかどうかを決定することができる。例えば、ＴＩＧＩＴポリペプチドの配列は、既知の技術（例えば、ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｂａｓｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｐｒｏｇｒａｍ（ＳＴＲＡＰ）など）を使用して参照配列の配列と整列させることができる。更に、参照配列の結晶構造座標は、相同ポリペプチド残基の三次元構造の決定支援として使用され得る（Ｓｔｅｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０９：５３９９－５４０４，２０１２）。別の態様では、同等の残基は、三次構造のレベルで相同性を決定することによって特定することができる。そのような方法を使用すると、ＴＩＧＩＴポリペプチド変異体のアミノ酸残基は、参照配列の対応するアミノ酸残基位置の番号付けに従って番号付けされ得る。例えば、配列番号８０のアミノ酸配列は、目的のヒトＴＩＧＩＴ変異体又はエピトープの各アミノ酸残基のアミノ酸残基位置の番号付けを決定するために使用され得る。いくつかの実施形態では、１つのアミノ酸配列が、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を共有する場合、別のアミノ酸配列に対応する。

【0048】

アミノ酸置換を保存的又は非保存的に分類する目的で、アミノ酸は次のようにグループ分けされる：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ、グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ、グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ、グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ、グループＶ（鎖配向に影響する残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ、及び、グループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換には、同じクラスのアミノ酸間の置換が含まれる。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換する性質のものである。

【0049】

配列同一性のパーセンテージは、Ｋａｂａｔ番号付け規則によって最大限に整列された抗体配列で決定される。整列後、対象抗体領域（例えば、重鎖又は軽鎖の成熟可変領域全体）を参照抗体の同じ領域と比較する場合、対象と参照抗体領域との間の配列同一性のパーセンテージは、対象抗体領域及び参照抗体領域の両方で同じアミノ酸によって占有される位置の数を、ギャップがカウントされていない２つの領域の整列された位置の総数で割り、１００を乗算してパーセンテージに変換したものである。

【0050】

１つ以上の列挙された要素を「含む（comprising）」若しくは「含む（including）」（又はその任意の文法的変化型）組成物又は方法は、具体的に列挙されていない他の要素を含んでもよい。例えば、抗体を含む組成物は、抗体を単独で、又は他の成分と組み合わせて含んでもよい。

【0051】

ある特定の範囲は、数値に「約」という用語が先行して本明細書に提示される。「約」という用語は、本明細書では、近似という元々の意味を有し、それが先行する正確な数、及びその用語が先行する数の付近又は近似である数の逐語的な支持を提供するために使用される。数が具体的に列挙された数の付近又は近似であるかどうかを決定する際に、付近又は近似である列挙されていない数は、数が提示される文脈において、具体的に列挙された数の実質的な同等物を提供する数であり得る。例えば、近似度が文脈から明らかではない場合、「約」は、提供された値の±１０％以内、又は最も近い有効数字に丸められるかのいずれかを意味し、全ての場合において提供された値を含む。範囲が提供される場合、それらは境界値を含む。

【0052】

本明細書で使用される場合、用語「実質的に」及びその任意の文法的変化型は、広範な用語であり、ほぼ全面的又は大部分であるが、完全ではないことを非限定的に含む、その通常の意味で使用される。例えば、この用語は、１００％完全な数値でなくてもよい数値を指し得、数値は、完全な数値の０．１％未満、０．５％未満、約１％未満、約２％未満、約３％未満、約４％未満、約５％未満、約６％未満、約７％未満、約８％未満、約９％未満、約１０％未満、約１１％未満、約１２％未満、約１３％未満、約１４％未満、約１５％未満、約１６％未満、約１７％未満、約１８％未満、約１９％未満、又は約２０％未満であり得る。例えば、対象抗体又はその抗原結合断片が、対応する参照抗体又はその抗原結合断片に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、又は９９．９％の配列同一性を有するとき、対象抗体又はその抗原結合断片は、対応する参照抗体又はその抗原結合断片に実質的に由来し得る。別の例では、対象抗体中のＣＤＲが、参照抗体中の対応するＣＤＲに対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、又は９９．９％の配列同一性を有するとき、対象抗体中のＣＤＲは、参照抗体中の対応するＣＤＲに実質的に由来し得る。更に別の例では、限定するものではないが、対象抗体中のＣＤＲにおいて、参照抗体中の対応するＣＤＲに対して、２つ以下のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されているとき、対象抗体中のＣＤＲは、参照抗体中の対応するＣＤＲに実質的に由来し得る。

【0053】

明確にするために、別個の実施形態の文脈で説明される本開示の特定の特徴はまた、単一の実施形態において組み合わせて提供され得ることが理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈で説明される本開示の様々な特徴はまた、別々に又は任意の好適な部分組み合わせで提供され得る。本開示に関連する実施形態の全ての組み合わせは、本開示によって具体的に包含され、それぞれ及び全ての組み合わせが個別にかつ明示的に開示されているかのように本明細書に開示される。更に、様々な実施形態及びその要素の全ての部分組み合わせもまた、本開示によって具体的に包含され、本明細書にはそれぞれ及び全てのそのような部分組み合わせが個別にかつ明示的に本明細書に開示されているかのように本明細書に開示される。

【0054】

ＩＩ．標的分子
別段の指示がない限り、ＴＩＧＩＴは、ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ）を意味する。ｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴ又はｃＴＩＧＩＴは、カニクイザルＴＩＧＩＴを指す。

【0055】

代表的なｈＴＩＧＩＴ配列は、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ４９５Ａ１が割り当てられている。完全なｈＴＩＧＩＴ配列は、アミノ酸１～２１がシグナルペプチドであり、２２～２４４が成熟タンパク質（配列番号８１）を構成する２４４アミノ酸（配列番号８０）を有する。およそ残基２２～１４１は、ｈＴＩＧＩＴの細胞外ドメイン（配列番号８２）を構成する。およそ残基１４２～１６２は、ｈＴＩＧＩＴの膜貫通ドメインを構成し、およそ残基１６３～２４４は、ｈＴＩＧＩＴの細胞質ドメインを構成する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインｈＴＩＧＩＴは、ＨＩＳタグ付き（配列番号８３）である。代表的なｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴ配列は、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ａ０Ａ２Ｋ５ＵＷ９２が割り当てられている。完全なｃｙｎｏＴＩＧＩＴ配列は、３１２個のアミノ酸（配列番号８４）を有する。いくつかの実施形態では、ｃｙｎｏＴＩＧＩＴの細胞外ドメインは、ＨＩＳタグ付き（配列番号８５）である。

【0056】

特に指示がない限り、ＣＤ１５５は、このタンパク質のヒト形態を指す。ヒトＣＤ１５５の代表的なヒト配列はＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ｐ１５１５１であり、これは、４１７アミノ酸のタンパク質であり、そのおよそ残基１～２０はシグナルペプチドであり、２１～３４３は細胞外ドメイン（配列番号８６）を構成し、３４４～３６７は膜貫通ドメインを構成し、３６８～４１７は細胞質ドメインを構成する。

【0057】

文脈から別途明らかでない限り、上記のタンパク質のうちの１つへの言及は、少なくともタンパク質の細胞外ドメイン、及び通常は切断可能なシグナルペプチド以外の完全なタンパク質を意味する。

【0058】

ＩＩＩ．本開示の抗体
Ａ．結合特異性及び機能的特性
本開示は、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体、より具体的にはＴＩＧＩＴタンパク質の細胞外ドメイン内のエピトープを提供する。特定の実施形態では、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される、１０^－８Ｍ以下（例えば、１０^－８、１０^－９、１０^－１０など）のＴＩＧＩＴのＫＤを有する。様々な実施形態では、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、約１×１０^－９Ｍ～約１×１０^－１３Ｍ、又は約１×１０^－９Ｍ～約１×１０^－１２Ｍ、又は約１×１０^－１０Ｍ～約１×１０^－１３Ｍ、又は約１×１０^－１０Ｍ～約１×１０^－１２Ｍ、又は約１×１０^－１１Ｍ～約１×１０^－１３Ｍ、又は約１×１０^－１０Ｍ～約１×１０^－１１Ｍ、又は約１×１０^－１１Ｍ～約１×１０^－１２Ｍの範囲内のＴＩＧＩＴに対するＫＤを有する。２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、及び２８Ｏ１２と称される抗体は、９つのそのような代表的なマウス抗体である。Ｃｈ２２Ｂ２２、Ｃｈ２１Ｂ１６、Ｃｈ２８Ｏ１２、Ｃｈ５Ｊ２４、Ｃｈ２１Ｂ９、Ｃｈ２４Ｆ８、及びＣｈ３０Ｍ１８と称される抗体は、７つのそのような代表的なキメラ抗体である。Ｈｕ２４Ｆ８．１、Ｈｕ２４Ｆ８．２、Ｈｕ２４Ｆ８．３及びＨｕ２４Ｆ８．４と称される抗体は、代表的なヒト化抗体である。マウス及びヒト化抗体の重鎖及び軽鎖成熟可変領域及びＣＤＲの配列を、表１及び表２にそれぞれ示す。

【表1】

【表2】

【0059】

本開示のいくつかの抗体は、２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、若しくは２８Ｏ１２と称する抗体、又はＨｕ２４Ｆ８．１、Ｈｕ２４Ｆ８．２、Ｈｕ２４Ｆ８．３、若しくはＨｕ２４Ｆ８．４と称する抗体と同じ又は重複するエピトープに結合する。そのような結合特異性を有する他の抗体は、マウスを、ＴＩＧＩＴ又は所望のエピトープを含むその一部で免疫化し、任意選択的に２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、２８Ｏ１２、Ｈｕ２４Ｆ８．１、Ｈｕ２４Ｆ８．２、Ｈｕ２４Ｆ８．３、又はＨｕ２４Ｆ８．４との競合において、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインへの結合について得られた抗体をスクリーニングすることによって生成され得る。抗体はまた、ＴＩＧＩＴ抗原の変異誘発形態に対してスクリーニングされ、突然変異変化群に対して２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、２８Ｏ１２、Ｈｕ２４Ｆ８．１、Ｈｕ２４Ｆ８．２、Ｈｕ２４Ｆ８．３、又はＨｕ２４Ｆ８．４と同じ又は同様の結合プロファイルを示す抗体を特定することができる。変異は、ＴＩＧＩＴ抗体の細胞外ドメイン全体に、又はエピトープが存在することが知られているセクション全体に、一度に１つの残基、又はより広く離間した間隔で、アラニン（又は既にアラニンが存在する場合はセリン）により系統的に置換することができる。いくつかの実施形態では、本開示のいくつかの抗体は、ＴＩＧＩＴの次のエピトープ残基、すなわち、配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つに結合する。いくつかの実施形態では、本開示のいくつかの抗体は、ＴＩＧＩＴの次のエピトープ残基、すなわち、配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つに結合する。いくつかの実施形態では、本開示のいくつかの抗体は、ＴＩＧＩＴの次のエピトープ残基、すなわち、Ｔ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、少なくともＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、配列番号８０のＤ７２、並びに配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、少なくともＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、配列番号８０のＥ６０及びＤ７２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、少なくともＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、配列番号８０のＤ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、及びＳ８０のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、少なくともＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、配列番号８０のＥ６０、Ｄ７２、及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、及びＳ８０のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合する。

【0060】

選択されたマウス抗体（例えば、２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、又は２８Ｏ１２）、又は選択されたヒト化抗体（例えば、Ｈｕ２４Ｆ８．１、Ｈｕ２４Ｆ８．２、Ｈｕ２４Ｆ８．３、又はＨｕ２４Ｆ８．４）の結合特異性を有する抗体はまた、ファージディスプレイ法の変法を使用して生成することもできる。Ｗｉｎｔｅｒ、国際公開第９２／２０７９１号を参照されたい。この方法は、ヒト抗体の産生に特に好適である。この方法では、選択されたマウス抗体の重鎖又は軽鎖可変領域のいずれかを、出発物質として使用する。例えば、軽鎖可変領域が出発物質として選択される場合、メンバーが、同じ軽鎖可変領域（すなわち、マウス出発物質）及び異なる重鎖可変領域を提示するファージライブラリーが構築される。重鎖可変領域は、例えば、再構成したヒト重鎖可変領域のライブラリーから得ることができる。ＴＩＧＩＴに対する強い特異的結合（例えば、少なくとも１０^８、又は少なくとも１０^９Ｍ^－１）、を示すファージを選択する。続いて、このファージ由来の重鎖可変領域は、更なるファージライブラリーを構築するための出発物質として機能する。このライブラリーでは、各ファージは、同じ重鎖可変領域（すなわち、第１のディスプレイライブラリーから同定された領域）及び異なる軽鎖可変領域を提示する。軽鎖可変領域は、例えば、再構成したヒト可変軽鎖領域のライブラリーから得ることができる。この場合も、ＴＩＧＩＴに対する強い特異的結合を示すファージが選択される。得られた抗体は通常、マウス出発物質と同じ又は同様のエピトープ特異性を有する。

【0061】

いくつかの抗体は、ｍＡｂ ２１Ｆ８に完全に又は実質的に由来する、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む成熟重鎖可変領域と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む成熟軽鎖領域を有する。いくつかの抗体は、ｍＡｂ ３０Ｍ１８に完全に又は実質的に由来する、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む成熟重鎖可変領域と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む成熟軽鎖領域を有する。いくつかの抗体は、ｍＡｂ ２４Ｆ８に完全に又は実質的に由来する、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む成熟重鎖可変領域と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む成熟軽鎖領域を有する。いくつかの抗体は、ｍＡｂ ５Ｊ２４に完全に又は実質的に由来する、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む成熟重鎖可変領域と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む成熟軽鎖領域を有する。いくつかの抗体は、ｍＡｂ ２１Ｂ９に完全に又は実質的に由来する、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む成熟重鎖可変領域と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む成熟軽鎖領域を有する。いくつかの抗体は、ｍＡｂ ２２Ｂ２２に完全に又は実質的に由来する、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む成熟重鎖可変領域と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む成熟軽鎖領域を有する。いくつかの抗体は、ｍＡｂ ２８Ｐ２４に完全に又は実質的に由来する、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む成熟重鎖可変領域と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む成熟軽鎖領域を有する。いくつかの抗体は、ｍＡｂ ２１Ｂ１６に完全に又は実質的に由来する、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む成熟重鎖可変領域と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む成熟軽鎖領域を有する。いくつかの抗体は、ｍＡｂ ２８Ｏ１２に完全に又は実質的に由来する、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む成熟重鎖可変領域と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む成熟軽鎖領域を有する。ＣＤＲは、以下の表３に示されるように、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ混合、ＡｂＭ又はＣｏｎｔａｃｔ定義を含む任意の従来の定義によって規定され得る。

【表3】

【0062】

他の抗体は、２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、又は２８Ｏ１２などの、代表的な抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｃＤＮＡの突然変異誘発によって得ることができる。成熟重鎖及び／若しくは軽鎖可変領域のアミノ酸配列において、２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、若しくは２８Ｏ１２と、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％のいずれかで同一であり、その機能的特性を維持している抗体、並びに／又は、少数の機能的に重要度が低いアミノ酸置換（例えば、保存的置換）、欠失、又は挿入によってそれぞれの抗体とは異なる抗体もまた、本開示に含まれる。結合にとって重要である可能性が高い可変領域フレームワーク中のアミノ酸は、以下のヒト化のセクションに記載されているように特定することができる。２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、又は２８Ｏ１２の対応するＣＤＲと、約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のいずれかで同一である、Ｋａｂａｔによって定義される、少なくとも１つ、及びいくつかの実施形態では、６つ全てのＣＤＲを有する抗体も含まれる。

【0063】

いくつかの実施形態では、抗体は、次の特徴、すなわち、（ｉ）ヒトＣＤ１５５へのヒトＴＩＧＩＴの結合を阻害する、（ｉｉ）ＣＤ１１２及びＣＤ１１３などの他のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を阻害する、（ｉｉｉ）抗原特異的Ｔ細胞応答を亢進する、（ｉｖ）ナチュラルキラー細胞を活性化する、（ｖ）内因性のＴ細胞活性化を刺激する、並びに（ｖｉ）Ｔ細胞及び免疫系の他の細胞による１つ以上の免疫刺激性サイトカインの生成を刺激する及び／又は１つ以上の免疫抑制サイトカインの生成を低下する、のうちの１つ以上を有する。

【0064】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＣＤ１５５へのＴＩＧＩＴの結合を完全に又は部分的に阻害する。本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、実施例１のように測定される、約０．１ｎＭ～約１０ｎＭ、又は約０．１ｎＭ～約８ｎＭ、又は約０．１ｎＭ～約５ｎＭ、又は約０．１ｎＭ～約４ｎＭ、又は約０．１ｎＭ～約３ｎＭ、又は約０．１ｎＭ～約２ｎＭ、又は約０．１ｎＭ～約１ｎＭの半数阻害濃度（ＩＣ５０）で、このような相互作用を阻害できる。特定の実施形態では、本開示のいくつかの抗ＴＩＧＩＴ抗体は、実施例１のように測定される、約０．１ｎＭ～約２ｎＭ、又は約０．２ｎＭ～約２ｎＭのＩＣ５０で、ＣＤ１５５へのＴＩＧＩＴの結合を阻害できる。特定の実施形態では、本開示のいくつかの抗ＴＩＧＩＴ抗体は、実施例１のように測定される、約０．２ｎＭ～約２ｎＭ、約０．２ｎＭ～約０．８ｎＭ、約０．４ｎＭ～約０．８ｎＭ、又は約０．６ｎＭ～約０．８ｎＭのＩＣ５０で、ＣＤ１５５へのＴＩＧＩＴの結合を阻害できる。いくつかの抗体は、実施例１のように測定される、約２５～３００ｎｇ／ｍＬ、２５～７５ｎｇ／ｍＬ、２５～５０ｎｇ／ｍＬ、４０～７５ｎｇ／ｍＬ、５０～７５ｎｇ／ｍＬ、５０～９０ｎｇ／ｍＬ、５０～１００ｎｇ／ｍＬ、７５～１００ｎｇ／ｍＬ、５０～１５０、７５～１７５ｎｇ／ｍＬ、１００～２００ｎｇ／ｍＬ、１２５～２２５ｎｇ／ｍＬ、１００～２５０ｎｇ／ｍＬ、１５０～３００ｎｇ／ｍＬ、１７５～２５０ｎｇ／ｍＬ、２００～３００ｎｇ／ｍＬ、２５～２７５ｎｇ／ｍＬ、２５０～３００ｎｇ／ｍＬ、４９＋／－１０％ｎｇ／ｍＬ、６５＋／－１０％ｎｇ／ｍＬ、又は７６＋／－１０％ｎｇ／ｍＬのうちいずれかの半数阻害濃度（（ＩＣ_５０）で、このような相互作用を阻害できる。他の実施形態では、抗体は、少なくとも約２５ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１２５ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１７５ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２２５ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２７５ｎｇ／ｍＬ、又は３００ｎｇ／ｍＬ、又はそれ以上（これらの値の間に含まれる濃度数を含む）のうちいずれかのＩＣ_５０で、ＣＤ１５５へのＴＩＧＩＴの結合を完全に又は部分的に阻害できる。更に、いくつかの抗体は、１．５～３倍、例えば約１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、又は３倍、又はそれ以上のうちいずれか、抗原特異的Ｔ細胞応答を亢進できる。あるいは又は加えて、いくつかの抗体は、１．５～３倍、例えば約１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、又は３倍、又はそれ以上のうちいずれか、ＮＫ細胞及び／又はＴ細胞によるＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＦα及びＩＦＮγのうち１つ、２つ、３つ、又は全ての産生を増加できる。あるいは又は加えて、いくつかの抗体は、１．５～３倍、例えば約１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、又は３倍、又はそれ以上のうちいずれか、内因性Ｔ細胞活性化を亢進できる。あるいは又は加えて、いくつかの抗体は、動物モデル又は臨床試験において示されるように、がん又は感染性疾患を阻害できる。ヒトがん細胞をマウス又はラットなどの免疫不全実験動物に注入するがんの動物モデルは、広く利用可能である。

【0065】

例示的な実施形態では、抗体は、ＴＩＧＩＴに特異的に結合し、抗体２４Ｆ８に完全に又は実質的に由来する、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む成熟重鎖可変領域と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む成熟軽鎖領域とを含む。様々な実施形態では、抗体は、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定される、約０．０１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ、約０．１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ、約０．１×１０^－１１Ｍ～約１０×１０^－１１Ｍ、約１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍの平衡結合定数（ＫＤ）を有する、及び／又は（ｉｉ）実施例１のように測定される、約０．２ｎＭ～約２ｎＭ、約０．２ｎＭ～約０．８ｎＭ、約０．４ｎＭ～約０．８ｎＭ、又は約０．６ｎＭ～約０．８ｎＭの半数阻害濃度（ＩＣ５０）で、細胞表面ヒトＴＩＧＩＴへの可溶性ヒトＣＤ１５５リガンドの結合を遮断する、ことができる。あるいは、又は上記若しくはこれらの組み合わせの個々の結合及び遮断特性に加えて、いくつかの実施形態では、抗体は、少なくともＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、（ｉ）配列番号８０のＤ７２、並びに配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、（ｉｉ）配列番号８０のＥ６０及びＤ７２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、（ｉｉｉ）配列番号８０のＤ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、（ｉｖ）配列番号８０のＥ６０、Ｄ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、又は（ｖ）配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２を含む、エピトープに結合する。

【0066】

抗体のヒト化又はキメラ化により、出発したマウス抗体に対してインビボ半減期が増加する。得られた半減期は、例えばヒトにおいて１０～５０日であり得る。半減期は、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｊ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：５４２（１９９４）によって記載されているような薬物動態研究によって測定することができる。

【0067】

Ｂ．非ヒト抗体
ＴＩＧＩＴに対する他の非ヒト抗体、例えば、マウス、モルモット、霊長類、ウサギ、ニワトリ又はラットの産生は、例えば、動物をＴＩＧＩＴ若しくはその断片、又はＴＩＧＩＴを有する細胞で免疫化することによって達成することができる。Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（ＣＳＨＰ ＮＹ、１９８８）（参照により全ての目的のために組み込まれる）を参照されたい。このような免疫原は、天然源から、ペプチド合成によって、又は組換え発現によって得ることができる。任意選択的に、免疫原は、担体タンパク質と融合されるか又は他の方法で複合体化されて投与され得る。任意選択的に、免疫原は、アジュバントと共に投与することができる。以下に記載されるように、いくつかの種類のアジュバントを使用することができる。実験動物の免疫化には、完全フロイントアジュバントとそれに続く不完全アジュバントを使用できる。ウサギ又はモルモットは、典型的には、ポリクローナル抗体を作製するために使用される。マウスは、典型的には、モノクローナル抗体を作製するために使用される。抗体は、ＴＩＧＩＴへの特異的結合についてスクリーニングされる。任意選択的に、抗体は、ＴＩＧＩＴの特定の領域への結合について更にスクリーニングされる。そのようなスクリーニングは、ＴＩＧＩＴの一連の欠失変異体に対する抗体の結合を決定し、どの欠失変異体が抗体に結合するかを決定することによって達成することができる。結合は、例えば、ウエスタンブロット、ＦＡＣＳ、又はＥＬＩＳＡによって評価することができる。

【0068】

Ｃ．ヒト化抗体
ＨＡＭＡ（ヒト抗マウス（ヒト抗ラット又はヒト抗ウサギ又はヒト抗ハムスターなどにも適用可能）抗体）応答の低減又は排除は、好適な治療薬の臨床開発の重要な要素である。例えば、Ｋｈａｘｚａｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．（１９８８），８０：９３７；Ｊａｆｆｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（１９８６），４１：５７２；Ｓｈａｗｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８５），１３５：１５３０；Ｓｅａｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｍｏｄ．（１９８４），３：１３８；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（１９８３），６２：９８８；Ｈａｋｉｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９１），１４７：１３５２；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８８），３３２：３２３；Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９０），５０：１４９５を参照されたい。本明細書に記載されるように、本開示は、ＨＡＭＡ応答が低減又は排除されるようにヒト化された抗体を提供する。これらの抗体の変異体は、当該技術分野で既知の通常の方法を使用して更に得ることができ、そのいくつかを以下に更に記載する。

【0069】

ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体からのＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列に移植される、遺伝子操作された抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ、米国特許第５，５３０，１０１号及び同第５，５８５，０８９号、Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｃａｒｔｅｒ、米国特許第６，４０７，２１３号、Ａｄａｉｒ、米国特許第５，８５９，２０５号、同６，８８１，５５７号、Ｆｏｏｔｅ、米国特許第６，８８１，５５７号参照）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、そのような配列の複合体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、又は生殖細胞系列領域配列であり得る。したがって、ヒト化抗体は、完全に又は実質的にドナー抗体由来の一部又は全てのＣＤＲと、存在する場合に完全に又は実質的にヒト抗体配列由来の可変領域フレームワーク配列及び定常領域とを有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、完全に又は実質的にドナー抗体重鎖由来の少なくとも１つ、２つ、通常は３つ全てのＣＤＲと、存在する場合に実質的にヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列由来の重鎖可変領域フレームワーク配列及び重鎖定常領域とを有する。同様に、ヒト化軽鎖は、完全に又は実質的にドナー抗体軽鎖由来の少なくとも１つ、２つ、通常は３つ全てのＣＤＲと、存在する場合に実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列由来の軽鎖可変領域フレームワーク配列及び軽鎖定常領域とを有する。本出願の他の箇所のようにここでは、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の対応する残基（Ｋａｂａｔによる定義）が、それぞれのＣＤＲ間で同一であるとき、対象抗体中のＣＤＲは、参照抗体中の対応するＣＤＲに実質的に由来し、しかしながら、少なくとも約６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の対応する残基（Ｋａｂａｔによる定義）が、それぞれのＣＤＲ間で同一であるとき、対象抗体中のＫａｂａｔにより定義されるＣＤＲ Ｈ２は、参照抗体中の対応するＣＤＲに実質的に由来する。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列又は抗体鎖の定常領域は、Ｋａｂａｔによって定義された対応する残基の少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％が同一である場合、それぞれ、実質的にヒト可変領域フレームワーク配列又はヒト定常領域に由来する。

【0070】

ヒト化抗体は、多くの場合、非ヒト（例えば、マウス）抗体由来の６つ全てのＣＤＲ（例えば、Ｋａｂａｔによって定義される）を組み込むが、それらは、非ヒト抗体由来の全てのＣＤＲ（例えば、少なくとも３、４、又は５つの）ＣＤＲより少ない数で作製することもできる（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２；Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３２０：４１５－４２８，２００２；Ｉｗａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９－１０９１，１９９９；Ｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６４：１４３２－１４４１，２０００）。

【0071】

いくつかの抗体では、ＣＤＲの一部のみ、すなわちＳＤＲと呼ばれる結合に必要なＣＤＲ残基のサブセットは、ヒト化抗体において結合を保持するために必要である。抗原に接触しておらず、かつＳＤＲ中にないＣＤＲ残基は、Ｃｈｏｔｈｉａの超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１，１９８７）の外側にあるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から、分子モデリング及び／若しくは経験的に、又はＧｏｎｚａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：８６３，２００４に記載されているように、これまでの研究に基づいて同定することができる（例えば、ＣＤＲ Ｈ２中の残基Ｈ６０～Ｈ６５は多くの場合必要ではない）。１つ以上のドナーＣＤＲ残基が存在しないか、又はドナーＣＤＲ全体が省略されている位置でのそのようなヒト化抗体では、その位置を占めるアミノ酸は、アクセプター抗体配列における対応する位置（Ｋａｂａｔ番号付けによる）を占めるアミノ酸であり得る。含めるべきＣＤＲ中のドナーアミノ酸に対するアクセプターのそのような置換の数は、競合する考慮事項のバランスを反映する。そのような置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させ、結果として潜在的な免疫原性を減少させるのに有利である可能性がある。しかしながら、置換もまた親和性の変化を引き起こす可能性があり、親和性の顕著な低下を回避することができる。ＣＤＲ内の置換の位置及び置換すべきアミノ酸もまた、経験的に選択することができる。

【0072】

アクセプターは、ヒト免疫グロブリン又はヒトコンセンサスフレームワーク由来であるかどうかに関わらず、選択されたヒトフレームワーク配列と配列において同一であり得るが、本開示は、アクセプター配列がヒト免疫グロブリン配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に対する既存のアミノ酸置換を含み得ることを企図する。これらの既存の置換は、最低限であり得、一般に、ヒト免疫グロブリン配列又はコンセンサスフレームワーク配列と比較して、４つ、３つ、２つ、又は１つのみのアミノ酸の違いがある。

【0073】

ヒトアクセプター抗体配列は、多くの既知のヒト抗体配列の中から任意選択的に選択されて、ヒトアクセプター配列可変領域フレームワークとドナー抗体鎖の対応する可変領域フレームワークとの間の、高度の配列同一性（例えば、６５～８５％同一）を提供することができる。

【0074】

ヒト可変領域フレームワーク残基由来の特定のアミノ酸は、ＣＤＲ立体配座及び／又は抗原への結合に対するそれらの可能な影響に基づいて置換について選択することができる。そのような可能な影響の探索は、モデリング、特定の位置におけるアミノ酸の特徴の研究、又は特定のアミノ酸の置換若しくは突然変異誘発の影響の経験的観察による。

【0075】

例えば、アミノ酸が非ヒト可変領域フレームワーク残基と選択されたヒト可変領域フレームワーク残基との間で異なる場合、そのアミノ酸が、
（１） 抗原に直接共有結合しない、
（２） ＣＤＲ領域に隣接する、
（３） そうでなければ、ＣＤＲ領域と相互作用する（例えば、ＣＤＲ領域の約６Å以内である）とき、ヒトフレームワークアミノ酸は、非ヒト抗体由来の同等のフレームワークアミノ酸によって置換され得る。

【0076】

置換についての他の候補は、その位置においてヒト免疫グロブリンにとっては通常ではないアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。これらのアミノ酸は、非ヒトドナー抗体の同等の位置由来、又はより典型的なヒト免疫グロブリンの同等の位置由来のアミノ酸で置換され得る。置換についての他の候補は、その位置においてヒト免疫グロブリンにとっては通常ではないアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。

【0077】

いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ゼロ～２個のアミノ酸置換又は欠失を有する配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、ゼロ～２個のアミノ酸置換又は欠失を有する配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、ゼロ～２個のアミノ酸置換又は欠失を有する配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＶ４０１０２．１のフレームワーク領域又はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＤＸ６５３３４．１のフレームワーク領域と少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するフレームワーク領域と、を含む成熟重鎖可変領域を有し、ゼロ～２個のアミノ酸置換又は欠失を有する配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、ゼロ～２個のアミノ酸置換又は欠失を有する配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、ゼロ～２個のアミノ酸置換又は欠失を有する配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＣＹ７８４１６．１のフレームワーク領域又はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＤＵ３２６１１．１のフレームワーク領域と少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するフレームワーク領域と、を含む成熟軽鎖可変領域を有する。ＡＡＶ４０１０２．１、ＡＤＸ６５３３４．１、ＡＣＹ７８４１６．１、及びＡＤＵ３２６１１．１のフレームワーク領域は、Ｋａｂａｔ定義に従って決定され、実施例２参照、又は配列番号７６～７９参照であり、ＡＡＶ４０１０２．１、ＡＤＸ６５３３４．１、ＡＣＹ７８４１６．１、及びＡＤＵ３２６１１．１及びドナーＣＤＲのフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、成熟重鎖可変領域は、重鎖定常領域の少なくとも一部に連結され、成熟軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域の少なくとも一部に連結されている。いくつかの実施形態では、完全長抗体の発現のために、成熟重鎖可変領域は重鎖定常領域に連結され、成熟軽鎖可変領域は軽鎖定常領域に連結されている。適切な定常領域は、セクションＩＩＩ（Ｆ）において更に詳細に記載されている。上記の特定の実施形態では、重鎖定常領域は、機能的ＦｃγＲ結合能を有する。なお更なる実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９４を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる（comprises of consists of）。上記の特定の実施形態では、重鎖定常領域は、低下した機能的ＦｃγＲ結合能を有する。更なる実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９７を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。なお更なる実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号１０１を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。上記の特定の実施形態では、重鎖定常領域は、増強した機能的ＦｃγＲ結合能を有する。更なる実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９９を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。

【0078】

いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号７６に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％未満の同一性を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号７７に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％未満の同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを有する。いくつかの実施形態では、任意の変異は、結合にとって重要であり得ると特定されたもの以外の可変領域フレームワーク残基で生じる。いくつかの実施形態では、任意の変異は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７６を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号７７を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。本開示のＨｕ２４Ｆ８．１抗体は、配列番号７６の配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号７７の配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。上記のいくつかの実施形態では、成熟重鎖可変領域は、重鎖定常領域の少なくとも一部に連結され、成熟軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域の少なくとも一部に連結されている。いくつかの実施形態では、完全長抗体の発現のために、成熟重鎖可変領域は重鎖定常領域に連結され、成熟軽鎖可変領域は軽鎖定常領域に連結されている。適切な定常領域は、セクションＩＩＩ（Ｆ）において更に詳細に記載されている。上記の特定の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導することができる。なお更なる実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９４を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。他の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導しない。

【0079】

いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号７８に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％未満の同一性を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号７７に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％未満の同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを有する。いくつかの実施形態では、任意の変異は、結合にとって重要であり得ると特定されたもの以外の可変領域フレームワーク残基で生じる。いくつかの実施形態では、任意の変異は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７８を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号７７を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。本開示のＨｕ２４Ｆ８．２抗体は、配列番号７８の配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号７７の配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。上記のいくつかの実施形態では、成熟重鎖可変領域は、重鎖定常領域の少なくとも一部に連結され、成熟軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域の少なくとも一部に連結されている。いくつかの実施形態では、完全長抗体の発現のために、成熟重鎖可変領域は重鎖定常領域に連結され、成熟軽鎖可変領域は軽鎖定常領域に連結されている。適切な定常領域は、セクションＩＩＩ（Ｆ）において更に詳細に記載されている。上記の特定の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導することができる。なお更なる実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９４を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。他の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導しない。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９７を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。他の実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号１０１を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。他の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、増強したＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導する。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９９を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。

【0080】

いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号７６に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％未満の同一性を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号７９に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％未満の同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを有する。いくつかの実施形態では、任意の変異は、結合にとって重要であり得ると特定されたもの以外の可変領域フレームワーク残基で生じる。いくつかの実施形態では、任意の変異は、保存的アミノ酸置換である。任意選択的に、抗体は、配列番号７６を含む配列を有する重鎖可変領域と、配列番号７９を含む配列を有する軽鎖可変領域とを含む。本開示のＨｕ２４Ｆ８．３抗体は、配列番号７８の配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号７９の配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。上記のいくつかの実施形態では、成熟重鎖可変領域は、重鎖定常領域の少なくとも一部に連結され、成熟軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域の少なくとも一部に連結されている。いくつかの実施形態では、完全長抗体の発現のために、成熟重鎖可変領域は重鎖定常領域に連結され、成熟軽鎖可変領域は軽鎖定常領域に連結されている。適切な定常領域は、セクションＩＩＩ（Ｆ）において更に詳細に記載されている。上記の特定の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導することができる。なお更なる実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９４を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。他の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導しない。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９７を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。他の実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号１０１を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。他の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、増強したＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導する。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９９を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。

【0081】

いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号７８に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％未満の同一性を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号７９に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％未満の同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを有する。いくつかの実施形態では、任意の変異は、結合にとって重要であり得ると特定されたもの以外の可変領域フレームワーク残基で生じる。いくつかの実施形態では、任意の変異は、保存的アミノ酸置換である。任意選択的に、抗体は、配列番号７８を含む配列を有する重鎖可変領域と、配列番号７９を含む配列を有する軽鎖可変領域とを含む。本開示のＨｕ２４Ｆ８．４抗体は、配列番号７６の配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号７９の配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。上記のいくつかの実施形態では、成熟重鎖可変領域は、重鎖定常領域の少なくとも一部に連結され、成熟軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域の少なくとも一部に連結されている。いくつかの実施形態では、完全長抗体の発現のために、成熟重鎖可変領域は重鎖定常領域に連結され、成熟軽鎖可変領域は軽鎖定常領域に連結されている。適切な定常領域は、セクションＩＩＩ（Ｆ）において更に詳細に記載されている。上記の特定の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導することができる。なお更なる実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９４を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。他の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導しない。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９７を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。他の実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号１０１を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。他の実施形態では、重鎖定常領域は、市販の抗体依存性細胞媒介性傷害を報告するバイオアッセイキットにおいて製造元の指示に従って測定するとき、増強したＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）媒介シグナル伝達を誘導する。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号９９を含むか又はそれからなり、軽鎖定常領域は、配列番号９５を含むか又はそれからなる。

【0082】

上記それぞれについて更なる実施形態では、ヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定される、約０．０１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ、約０．１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ、約０．１×１０^－１１Ｍ～約１０×１０^－１１Ｍ、約１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ、若しくは更に約１×１０^－１１Ｍ～約１０×１０^－１１Ｍの平衡結合定数（ＫＤ）を有する、及び／又は（ｉｉ）実施例１のように測定される、約０．２ｎＭ～約２ｎＭ、約０．２ｎＭ～約０．８ｎＭ、約０．４ｎＭ～約０．８ｎＭ、又は約０．６ｎＭ～約０．８ｎＭの半数阻害濃度（ＩＣ５０）で、細胞表面ヒトＴＩＧＩＴへの可溶性ヒトＣＤ１５５リガンドの結合を遮断する、ことができる。あるいは、又は上記若しくはこれらの組み合わせの個々の結合及び遮断特性に加えて、いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、少なくともＴＩＧＩＴの次のアミノ酸残基、すなわち、（ｉ）配列番号８０のＤ７２、並びに配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、（ｉｉ）配列番号８０のＥ６０及びＤ７２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、（ｉｉｉ）配列番号８０のＤ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、（ｉｖ）配列番号８０のＥ６０、Ｄ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、又は（ｖ）配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２を含む、エピトープに結合する。

【0083】

Ｄ．キメラ及びベニア化抗体
本開示は更に、実施例のキメラ及びベニア形態の非ヒト抗体、特に２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、及び２８Ｏ１２抗体を提供する。

【0084】

キメラ抗体は、非ヒト抗体（例えば、マウス）の軽鎖及び重鎖の成熟可変領域が、ヒト軽鎖及び重鎖定常領域と組み合わされている抗体である。このような抗体は、非ヒト抗体の結合特異性を実質的に又は完全に保持し、約３分の２のヒト配列である。

【0085】

ベニア化抗体は、ＣＤＲの一部、通常は全て、及び非ヒト抗体の非ヒト可変領域フレームワーク残基の一部を保持するが、Ｂ細胞エピトープ又はＴ細胞エピトープに寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基、例えば、曝露された残基（Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９、１９９１）をヒト抗体配列の対応する位置からの残基で置き換えるヒト化抗体の一種である。その結果、ＣＤＲが完全に又は実質的に非ヒト抗体に由来し、非ヒト抗体の可変領域フレームワークが、置換によってよりヒト様になる抗体が得られる。２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、又は２８Ｏ１２抗体のベニア化形態が本開示に含まれる。

【0086】

いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴキメラ抗体は、マウス可変ドメインとヒトＩｇＧ１／カッパ定常ドメインとを有するマウスヒトキメラである。ある実施形態では、ＴＩＧＩＴキメラ抗体は、マウス２１Ｆ８ＶＨ（配列番号１）及び２１Ｆ８ＶＬ（配列番号２）ドメイン、並びにヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメイン（Ｃｈ２１Ｆ８）から構築されたキメラＦａｂｍＶＨ＋ｍＶＬである。ある実施形態では、ＴＩＧＩＴキメラ抗体は、マウス３０Ｍ１８ＶＨ（配列番号３）及び３０Ｍ１８ＶＬ（配列番号４）ドメイン、並びにヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメイン（Ｃｈ３０Ｍ１８）から構築されたキメラＦａｂｍＶＨ＋ｍＶＬである。ある実施形態では、ＴＩＧＩＴキメラ抗体は、マウス２４Ｆ８ＶＨ（配列番号５）及び２４Ｆ８ＶＬ（配列番号６）ドメイン、並びにヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメイン（Ｃｈ２４Ｆ８）から構築されたキメラＦａｂｍＶＨ＋ｍＶＬである。ある実施形態では、ＴＩＧＩＴキメラ抗体は、マウス５Ｊ２４ＶＨ（配列番号７）及び５Ｊ２４ＶＬ（配列番号８）ドメイン、並びにヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメイン（Ｃｈ５Ｊ２４）から構築されたキメラＦａｂｍＶＨ＋ｍＶＬである。ある実施形態では、ＴＩＧＩＴキメラ抗体は、マウス２１Ｂ９ＶＨ（配列番号９）及び２１Ｂ９ＶＬ（配列番号１０）ドメイン、並びにヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメイン（Ｃｈ２１Ｂ９）から構築されたキメラＦａｂｍＶＨ＋ｍＶＬである。ある実施形態では、ＴＩＧＩＴキメラ抗体は、マウス２２Ｂ２２ＶＨ（配列番号１１）及び２２Ｂ２２ＶＬ（配列番号１２）ドメイン、並びにヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメイン（Ｃｈ２２Ｂ２２）から構築されたキメラＦａｂｍＶＨ＋ｍＶＬである。ある実施形態では、ＴＩＧＩＴキメラ抗体は、マウス２８Ｐ２４ＶＨ（配列番号１３）及び２８Ｐ２４ＶＬ（配列番号１４）ドメイン、並びにヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメイン（Ｃｈ２８Ｐ２４）から構築されたキメラＦａｂｍＶＨ＋ｍＶＬである。ある実施形態では、ＴＩＧＩＴキメラ抗体は、マウス２１Ｂ１６ＶＨ（配列番号１５）及び２１Ｂ１６ＶＬ（配列番号１６）ドメイン、並びにヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメイン（Ｃｈ２１Ｂ１６）から構築されたキメラＦａｂｍＶＨ＋ｍＶＬである。ある実施形態では、ＴＩＧＩＴキメラ抗体は、マウス２８Ｏ１２ＶＨ（配列番号１７）及び２８Ｏ１２ＶＬ（配列番号１２）ドメイン、並びにヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメイン（Ｃｈ２８Ｏ１２）から構築されたキメラＦａｂｍＶＨ＋ｍＶＬである。

【0087】

Ｅ．ヒト抗体
ＴＩＧＩＴに対するヒト抗体は、以下に記載される様々な技術によって提供される。いくつかのヒト抗体は、競合結合実験によって、Ｗｉｎｔｅｒのファージディスプレイ方法によって、又は他の方法によって選択され、実施例に記載されるマウスモノクローナル抗体のうちの１つなどの特定のマウス抗体と同じエピトープ特異性を有する。ヒト抗体はまた、標的抗原としてＴＩＧＩＴの断片のみを使用することによって、及び／又は一連のＴＩＧＩＴの欠失変異体に対する抗体をスクリーニングすることによって、特定のエピトープ特異性についてスクリーニングされ得る。

【0088】

ヒト抗体を産生するための方法としては、Ｏｅｓｔｂｅｒｇら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：３６１－３６７（１９８３）、Ｏｅｓｔｂｅｒｇ、米国特許第４，６３４，６６４号、及びＥｎｇｌｅｍａｎら、米国特許第４，６３４，６６６号のトリオーマ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックマウスの利用（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら、国際公開第９３／１２２２７号（１９９３）、米国特許第５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号、同第５，８１４，３１８号、同第５，７８９，６５０号、同第５，７７０，４２９号、同第５，６６１，０１６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５４５，８０６号、Ｎａｔｕｒｅ １４８，１５４７－１５５３（１９９４）、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８２６（１９９６）、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ、国際公開第９１／１０７４１号（１９９１）参照、並びに、ファージディスプレイ法（例えば、Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９１／１７２７１号及びＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、国際公開第９２／０１０４７号、米国特許第５，８７７，２１８号、同第５，８７１，９０７号、同第５，８５８，６５７号、同第５，８３７，２４２号、同第５，７３３，７４３号、及び同第５，５６５，３３２号参照）が挙げられる。

【0089】

Ｆ．定常領域の選択
キメラ、ヒト化（ベニア化を含む）、又はヒト抗体の重鎖及び軽鎖可変領域は、各々ヒト定常領域の少なくとも一部に連結され得る。いくつかの実施形態では、上記セクションに記載される重鎖可変ドメインは、ヒト重鎖定常領域の一部に連結され、上記セクションに記載される軽鎖可変ドメインは、ヒト軽鎖定常領域の一部に連結されている。いくつかの実施形態では、上記セクションに記載される重鎖可変ドメインは、ヒト重鎖定常領域の一部に連結され、上記セクションに記載される軽鎖可変ドメインは、完全長のヒト軽鎖定常領域に連結されている。重鎖定常領域は、Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域を含み、これは、細胞表面受容体（Ｆｃ受容体）と補体系の一部のタンパク質と相互作用する抗体の尾部領域である。いくつかの実施形態では、上記セクションに記載される重鎖可変ドメインは、完全長のヒト重鎖定常領域に連結され、上記セクションに記載される軽鎖可変ドメインは、完全長のヒト軽鎖定常領域に連結されている。

【0090】

定常領域（又はその切断部位）の選択は、部分的に、エフェクター機能が所望されるかどうか、又は更に強化される必要があるかに依存する。「エフェクター機能」とは、抗体アイソタイプに依存して変化する抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の非限定例としては、Ｃ１複合体上のＣ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity、ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）、並びにＢ細胞活性化が挙げられる。ヒト抗体は、それらの重鎖に従って５つのアイソタイプ（ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥ）に分類され、各々が異なる機能を提供する。ＩｇＧは、各々が異なる重鎖を含む４つのヒトサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）からなる。これらの相同性は高く、主にヒンジ領域と、宿主免疫系を活性化する程度において異なる。例えば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、補体依存性細胞傷害性を媒介でき、ヒトアイソタイプＩｇＧ２及びＩｇＧ４は媒介しないか、又は媒介しても非常に低レベルである。軽鎖定常領域は、サブクラスがラムダ又はカッパであり得る。ＴＩＧＩＴを発現しないがん又は病原体に対する免疫療法では、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３に加えて、ヒトＩｇＧ２若しくはＩｇＧ４、又は、エフェクター機能が低下しているヒトＩｇＧ１の減弱化形態を使用できる。ヒトＩｇＧ４の場合、Ｆａｂアーム交換を防止するため、重鎖にＳ２２８Ｐ（Ｅｕ番号付け）の操作した突然変異を含めることを利用できる。しかしながら、免疫抑制のためにＴＩＧＩＴを発現するがん細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞の腫瘍）の排除については、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３を使用できる。例えば、ＴＩＧＩＴを発現するがん細胞（例えば、一部の血液悪性腫瘍）の直接的な殺滅、又は免疫抑制については、Ｆｃエフェクター機能を有する抗体（例えば、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３）を使用できる。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３の好適な配列は、当該技術分野で既知であり、例えば、配列番号９４及び米国特許第５，６２４，８２１号に開示されているヒトＩｇＧ３が挙げられる。

【0091】

ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ変異及びアイソアロタイプ変異を示し、即ち、定常領域は、１つ以上の多型位置で異なる個体において異なる可能性がある。アイソアロタイプは、アイソアロタイプを認識する血清が１つ以上の他のアイソタイプの非多型領域に結合するという点でアロタイプとは異なる。ヒト定常領域への言及は、任意の天然アロタイプ、又は天然アロタイプの多型位置を占める残基の任意の順列を有する定常領域を含む。

【0092】

重鎖のＣ末端リジンなどの軽鎖及び／又は重鎖のアミノ末端又はカルボキシ末端における１つ又はいくつかのアミノ酸は、分子の一部又は全てにおいて欠落しているか、又は誘導体化されている可能性がある。重鎖又は軽鎖のＮ末端グルタミンは、ピログルタミン酸の形成を防ぐために、グルタミン酸残基で置換され得る。置換を定常領域内に起こして、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）又は抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）などのエフェクター機能を低減若しくは増大させる（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏら、米国特許第５，８３４，５９７号；及び、Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：４００５，２００６参照）、又は、ヒトにおける半減期を延長することができる（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４参照）。代表的な置換は、抗体の半減期を増加させるための、位置２５０のＧｌｎ及び／又は位置４２８（Ｅｕ番号付け）のＬｅｕを含む。

【0093】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、上記の野生型重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、野生型重鎖定常領域は、配列番号９４である。配列番号９２は、配列番号９４の野生型定常領域を含む代表的な重鎖アミノ酸配列である。他の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、変異型ヒトＩｇＧ１、変異型ヒトＩｇＧ２、変異型ヒトＩｇＧ３、又は変異型ヒトＩｇＧ４から選択される野生型重鎖定常領域（又はその切断部）の変異体を有する。いくつかの実施形態では、変異型重鎖定常領域は、配列番号９７、配列番号９９、又は配列番号１０１である。配列番号９６、９８、及び１００は、変異型重鎖定常領域を含む代表的な重鎖アミノ酸配列である。

【0094】

本開示のいくつかの抗体は、変異を含まない同じ抗体と比較して、ＣＤＣ及びＡＤＣＣ又は抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）などのエフェクター機能が低減するように、定常領域の変異を導入することによって操作される。いくつかの実施形態では、これらのエフェクター機能の各々又は全ては、変異を含まない抗体と比較して、少なくとも５０％、７５％、９０％、又は９５％低減される。他のアッセイは、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ，２００１ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７６，ｐ ６５９１－６６０４；Ｃｈａｐｐｅｌ ｅｔ ａｌ，１９９３ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ ２６８，ｐ ２５１２４－２５１３１；Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ，２００６ ＰＮＡＳ，１０３；４００５－４０１０によって説明されている。

【0095】

位置２３４、２３５、２３６、及び／又は２３７のいずれか又は全ての置換は、Ｆｃγ受容体、特にＦｃγＲＩ受容体に対する親和性を低下させる（例えば、米国特許第６，６２４，８２１号を参照）。いくつかの実施形態では、アラニン残基を、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ二重変異などの置換に使用して、エフェクター機能を低減する。エフェクター機能の低下を伴う変異の他の組み合わせとして、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／ΔＧ２３６、Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ，Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（Ｅｕ番号付け）が挙げられる。任意選択的に、ヒトＩｇＧ２における２３４位、２３６位、及び／又は２３７位はアラニンで置換され、２３５位はグルタミンで置換される。（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号を参照）。Ｅｕインデックス位置３３０及び３３１の補体Ｃ１ｑ結合部位における２つのアミノ酸置換は、補体結合を低下させる（Ｔａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：６６１（１９９３）及びＣａｎｆｉｅｌｄ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３（１９９１）参照）。位置２３３～２３６のＩｇＧ２残基のヒトＩｇＧ１、並びに位置３２７、３３０、及び３３１のＩｇＧ４残基への置換は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを低減させる（例えば、Ａｒｍｏｕｒ ＫＬ．ｅｔ ａｌ．，１９９９ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３－２４；及びＳｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ｅｔ ａｌ．，２００１．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４参照）。Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、又はＮ２９７Ｇ（Ｅｕ番号付け）変異は、グリコシル化を低下させ、それによってエフェクター機能を低下させる。

【0096】

本開示の抗体は、いくつかの実施形態では、Ｆｃエフェクター機能を増強するために操作され得る。例えば、ＦｃγＲ結合は、アミノ酸操作によって増強され得る。いくつかの実施形態では、これは、Ｆｃ領域中の１つ以上のアミノ酸を置換することによって行うことができる。望ましい変異は、例えば、アラニンスキャニング又は合理的設計のいずれか、及びライブラリースクリーニングによって決定することができる。ＦｃＲへの結合が増強され、エフェクター機能が増強されたＩｇＧ変異体は、これらの手法を使用して特定することができる。あるいは、Ｆｃ受容体領域に対するいくつかの突然変異は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｓｍｉｔｈ Ｐ．ｅｔ ａｌ（２０１２）ＰＮＡＳ ６１８１－６１８６に記載されている。

【0097】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、修飾を含まない野生型ＩｇＧ１と比較して、抗体がＡＤＣＣを媒介する能力を増加させる修飾型ＩｇＧ１定常ドメインを含む。修飾型ＩｇＧ１ドメインは、Ｌ２３５Ｖ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｐ３９６Ｌ（Ｅｕ番号付け）のうちの１つ以上でのアミノ酸置換によって特徴付けることができる。他の実施形態では、修飾型ＩｇＧ１ドメインは、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、及びＩ３３２Ｅ（Ｅｕ番号付け）での置換によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、治療有効量の本明細書に記載の抗体は、当該技術分野で説明される方法によって評価されるとき、１、２、又は３時間以内に、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、又は少なくとも６５％のＴＩＧＩＴ発現細胞において細胞死を誘導することができる。

【0098】

あるいは、グリコフォーム摂動を使用して、Ｆｃ媒介治療用抗体機能を増強することができる。ＩｇＧ１抗体上のＮ結合型Ｆｃグリコシル化は、エフェクター機能にとって重要である。シアリル化、ガラクトシル化、バイセクト糖、及びフコシル化は全て、ＩｇＧ分子の結合及び活性に影響を及ぼし得る。治療用抗体上のグリコシル化パターンを制御することは、多くの異なる方法で行うことができる。組換え抗体を産生する細胞の種類及びその培養条件は、治療用抗体のグリコシル化及び活性に影響を及ぼし得る。更に、バイオリアクター条件及び下流処理はまた、グリカンの微小不均一性に影響を及ぼし得る。低フコシル化又は無フコシル化抗体は、Ｆｃ媒介特性を増強することが示されている。糖鎖工学によってこのフコースレベルの低減を達成するための多数の方法は、当該技術分野において周知である。１つの方法は、抗体の翻訳後修飾に関与する酵素を操作することである。これは、β－１－４－Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩなどのグルコシダーゼの過剰発現、フコシルトランスフェラーゼのノックアウト、又は天然のフコース欠損細胞株若しくは低フコシル化レベルを発現するように変異している細胞株の使用を含み得る。更に、カスタノスペルミンなどのＮ結合型グルコシダーゼの阻害剤を使用して、低フコースのＩｇＧ分子を得ることもできる。

【0099】

いくつかの実施形態では、アミノ酸が操作された変異体は、複数のＦｃγＲに対してより広範に増強された親和性を有することができるが、グリコフォームが操作された抗体は、一般に、増強したＦｃγＲＩＩＩａ結合についてより特異的な親和性を有することができる。グリコフォームは、Ｆｃ部分上の近位アミノ酸と相互作用し、Ｉｇオリゴ糖と接触するアミノ酸の置換は、異なるグリコフォーム構造をもたらし得る。

【0100】

Ｇ．組換え抗体の発現
キメラ、ヒト化（ベニア化を含む）及びヒト抗体は、典型的には、組換え発現によって産生される。したがって、本開示はまた、このセクションＩＩＩＡ～Ｇの抗ＴＩＧＩＴ抗体をコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクター、及びベクターを含む宿主細胞も提供する。

【0101】

本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体をコードするポリヌクレオチドは、増幅、発現、又は更なる最適化のためにベクターに挿入され得る。多くのベクターが利用可能である。いくつかの実施形態では、ベクター系は、哺乳動物、細菌、酵母系などを含み、例えば、限定されないが、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ、ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ－Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ４２０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２などのプラスミド、及び他の実験的に利用可能なベクター及び市販のベクターを含む。好適なベクターは、プラスミド、又はウイルスベクターを含み得る（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）。ベクター構成要素として、一般に、シグナル配列、複製開始点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、及び転写終結配列のうちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。発現において、組換えポリヌクレオチド構築物は、典型的には、天然に会合した、又は異種のプロモーター領域を含む、抗体鎖のコード配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む。いくつかの実施形態では、発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換又はトランスフェクトすることができる、ベクター中の真核生物プロモーター系である。ベクターが適切な宿主に組み込まれると、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベル発現、並びに組換え抗体の回収及び精製に好適な条件下で維持される。

【0102】

本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターは、クローニング又は遺伝子発現のために宿主細胞に導入され得る。本明細書のベクター中のポリヌクレオチド配列をクローニング又は発現するための好適な宿主細胞には、原核生物細胞及び真核生物細胞が含まれる。好適な原核生物の非限定例としては、グラム陰性菌又はグラム陽性菌などの真正細菌、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、及びＳｈｉｇｅｌｌａなどの腸内細菌、並びに、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ及びＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓなどの桿菌、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａなどのシュードモナス、並びに、ストレプトマイセスが挙げられる。原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核微生物は、抗ＴＩＧＩＴ抗体をコードするベクターの好適なクローニング又は発現宿主である。非限定例としては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ；Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ宿主、例えば、Ｋ．ｌａｃｔｉｓ、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ（ＡＴＣＣ １２，４２４）、Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（ＡＴＣＣ １６，０４５）、Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ（ＡＴＣＣ ２４，１７８）、Ｋ．ｗａｌｔｉｉ（ＡＴＣＣ ５６，５００）、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ（ＡＴＣＣ ３６，９０６）、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、及びＫ．ｍａｒｘｉａｎｕｓなど；ｙａｒｒｏｗｉａ（欧州特許第４０２，２２６号）；Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ（欧州特許第１８３，０７０号）；Ｃａｎｄｉｄａ；Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ（欧州特許第２４４，２３４号）；Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ；Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ、例えば、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ；並びに、糸状菌、例えば、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍなど、並びに、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ宿主、例えば、Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ及びＡ．ｎｉｇｅｒが挙げられる。好適な宿主細胞はまた、多細胞生物に由来し得る。無脊椎動脈細胞の例として、植物及び昆虫細胞が挙げられる。多くのバキュロウイルス株及び変異体、並びに、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（イモムシ）、Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ（蚊）、Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ（蚊）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（ショウジョウバエ）、及びＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉなどの宿主由来の対応する許容昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための様々なウイルス株、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ＮＰＶのＬ－１変異体、及びＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ ＮＰＶのＢｍ－５株が公的に入手可能であり、かかるウイルスは、本発明による本明細書のウイルスとして、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションに使用できる。綿、トウモロコシ、ジャガイモ、大豆、ｐｅｔｕｎｉａ、トマト、及びタバコの植物細胞培養物も、宿主として利用できる。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、免疫グロブリン又はその断片をコードするヌクレオチドセグメントを発現するための宿主細胞として使用される。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ、「Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ」（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、ＮＹ、１９８７年）を参照されたい。インタクトな異種タンパク質を分泌することができるいくつかの好適な宿主細胞株が当該技術分野において開発されており、ＣＨＯ細胞株、様々なＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、並びにＳｐ２／０及びＮＳ０を含む非抗体産生骨髄腫が含まれる。いくつかの実施形態では、細胞は、非ヒトである。これらの細胞のための発現ベクターは、発現制御配列、例えば、複製開始点、プロモーター、エンハンサー（Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））、並びにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位及び転写終止配列などの必要なプロセシング情報部位が含まれ得る。いくつかの実施形態では、発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、及びウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Ｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。

【0103】

宿主細胞は、抗ＴＩＧＩＴ抗体産生のために上記の発現又はクローニングベクターによって形質転換され、プロモーターを誘導する、形質転換体を選択する、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適切に変更された従来の栄養培地で培養される。発現させると、抗体を、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィ、及びゲル電気泳動などを含む、当技術分野の標準的な手順に従って精製することができる（概して、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）を参照のこと）。

【0104】

ＩＶ．治療用途
本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、がん及び感染症の治療における免疫応答を増強するために使用できる。本開示の抗体によって治療可能な疾患として、血液悪性腫瘍、固形腫瘍、メルケル細胞がん、尿路上皮がん、頭頸部扁平上皮がん、Ｂ細胞リンパ腫、子宮がん、子宮頸がん、精巣がん、消化管がん（例えば、食道がん、胃食道接合部のがん、中咽頭がん、胃がん、小腸又は大腸がん、結腸がん、又は直腸がん）、膀胱がん、骨髄のがん、皮膚がん、胆嚢がん、心臓がん、肺がん、唾液腺がん、副腎がん、甲状腺がん、中枢神経系（ＣＮＳ）のがん、及び末梢神経系（ＰＮＳ）のがん、並びに、造血系及び免疫系のがん（例えば、脾臓又は胸腺）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0105】

本開示はまた、例えば、免疫原性腫瘍、非免疫原性腫瘍、休眠状態の腫瘍、ウイルス誘発性がん（例えば、上皮細胞がん、内皮細胞がん、扁平上皮がん、及びパピローマウイルス）、腺がん、奇形がん、化学物質誘発性がん、転移、及び血管新生を含む、他のがん関連疾患、障害、又は状態を治療又は予防する方法を提供する。特定の実施形態では、腫瘍又はがんは、結腸がん、卵巣がん、乳がん、黒色腫、肺がん、神経膠芽腫、又は白血病である。がん関連疾患、障害、及び状態という用語の使用は、がんと直接的又は間接的に関連する状態を広く指すことを意味し、例えば、血管新生及び異形成などの前がん状態を含む。特定の実施形態では、がんは、転移性又は転移性になるリスクであり得るか、又は拡散組織で発生し得、血液又は骨髄のがん（例えば、白血病）を含む。

【0106】

そのようながんは、ＴＩＧＩＴ又はＣＤ１５５を発現してもしなくてもよい。ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５との相互作用の阻害がそのようながんに対する免疫応答を刺激するため、ＴＩＧＩＴに対する抗体は、ＴＩＧＩＴを発現していないがんに対して有効である。血液悪性腫瘍の例として、急性骨髄性白血病、成人Ｔ細胞白血病、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性単球性白血病、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、及び多発性骨髄腫を含む、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫が挙げられる。固形腫瘍の例として、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、肺がん（小細胞若しくは非小細胞）、結腸がん、前立腺がん、子宮頸がん、膵臓がん、胃がん、食道がん、肝細胞がん（肝臓がん）、腎細胞がん（腎臓がん）、頭頸部腫瘍、中皮腫、黒色腫、肉腫、及び脳腫瘍（例えば、神経膠芽腫などのグリオーマ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0107】

本開示の方法は、アジュバント環境で実施することができる。「アジュバント環境」は、対象が増殖性疾患、特にがんの既往歴を有し、一般に（必ずしも必須ではない）、手術、放射線療法、及び／又は化学療法を含むが、これらに限定されない治療に応答している臨床環境を指す。しかしながら、増殖性疾患の既往歴のため、これらの対象は、その疾患を発症するリスクがあると考えられる。「アジュバント環境」における治療又は投与は、治療の後続形態を指す。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、がんを有する又はがんのリスクがある対象に、治療有効量の本明細書に開示される任意の抗体をアジュバント環境で投与することを含む、がんの治療又は効果的な予防の方法である。

【0108】

本明細書で提供される方法はまた、「ネオアジュバント環境」でも実施することができ、すなわち、方法は、一次／根治治療の前に実施することができる。いくつかの態様では、対象は、以前に治療されている。他の態様では、対象は、以前に治療されていない。いくつかの態様では、治療は、第１選択治療である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、がんを有する又はがんのリスクがある対象に、治療有効量の本明細書に開示される任意の抗体をネオアジュバント環境で投与することを含む、がんの治療又は効果的な予防の方法である。

【0109】

本開示の抗体によって治療可能な他の疾患には、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、及び他の病原体（例えば、肝炎（Ａ型、Ｂ型、又はＣ型）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ－１、ＨＡＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩ、及びＣＭＶ、エプスタインバーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、ｃｏｒｎｏｖｉｒｕｓ、ＲＳウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、ＨＩＶ、ＳＩＶ、及びアルボウイルス脳炎ウイルス、クラミジア、リケッチア菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、ｔｒｅｐｔｏｃｃｉ、肺炎球菌、髄膜炎菌及びｃｏｎｏｃｏｃｃｉ、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ、桿菌、コレラ、破傷風、ボツリヌス、炭疽菌、ペスト、レプトスピラ、及びライム病菌の感染性疾患が挙げられる。

【0110】

Ａ．抗体の投与
本明細書に記載される抗体は、発症を遅延させ、重症度を低減させ、更なる悪化を阻害し、及び／又は疾患の少なくとも１つの徴候若しくは症状を改善する、投与量、投与経路、及び投与頻度を意味する、有効なレジメンで投与される。対象が既に障害に罹患している場合、レジメンは、治療的に有効なレジメンと称することができる。対象が一般集団と比較して疾患のリスクが高いが、まだ症状を経験していない場合、レジメンは予防効果的レジメンと称することができる。いくつかの例では、治療的又は予防的有効性は、同じ対象における歴史的対照又は過去の経験と比較し、個々の対象において観察され得る。他の例では、治療的又は予防的有効性は、未治療対象の対照集団と比較して、治療対象の集団における前臨床試験又は臨床試験で実証することができる。

【0111】

場合によっては、対象は、ＰＤ－Ｌ１陽性、ＣＤ１５５陽性、ＴＩＧＩＴ陽性、高頻度ＭＳＩ、浸潤Ｔ細胞を有する、活性化Ｔ細胞を有する、抗原プロセシング及び提示に関連する高レベルの分子を有する、ＴＭＢ高値、又はそれらの任意の組み合わせとして特定される。いくつかの実施形態では、患者は、対照集団と比較して、例えば、ＣＤ８＋細胞及び／又はＣＤ４＋細胞及び／又はＮＫ細胞上のＴＩＧＩＴの高発現に基づいて、本明細書に記載の抗体による治療のために選択される。場合によっては、対象は、がん遺伝子が引き起こすがんを有するものとして特定され、ＴＰ５３、ＶＨＬ、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＭＥＴ、ＦＵＢＰ１、ＲＡＣ１、ＥＧＦＲ、ＣＤＫ４、ＣＴＣＦ、ＰＧＲ、ＲＥＴ、ＲＡＳＡ１、ＪＡＫ１、ＰＨＦ６、ＮＦ１、ＣＩＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＺＦＨＸ３、ＺＣＣＨＣ１２、ＧＮＡ１１、ＳＭＡＤ４、ＵＳＰ９Ｘ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＦＡＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＳＣＡＦ４、ＰＭＳ２、ＲＮＦ４３、ＳＭＣ１Ａ、ＢＣＯＲ、ＦＧＦＲ２、ＣＯＬ５Ａ１、ＡＴＭ、ＫＭＴ２Ｂ、ＣＴＮＮＢ１、ＭＹＣ、ＲＡＤ２１、ＰＴＥＮ、ＡＸＬ、ＨＩＦ１Ａ、ＥＰＡＳ１、ＰＡＫ４、ＲＨＯＢ、ＴＢＬ１ＸＲ１、ＫＥＡＰ１、ＺＦＰ３６Ｌ２、ＦＧＦＲ３、ＦＯＸＡ１、ＦＬＴ３、ＴＲＡＦ３、ＲＮＦ１１１、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＴＸＮＩＰ、ＳＴＡＧ２、ＲＩＴ１、ＴＧＩＦ１、ＦＯＸＱ１、ＡＴＲ、ＣＹＳＬＴＲ２、ＰＣＢＰ１、ＰＩＫ３Ｒ２、ＡＳＸＬ１、ＨＩＳＴ１Ｈ１Ｃ、ＫＬＦ５、ＰＩＫ３ＣＢ、ＳＰＯＰ、ＭＥＣＯＭ、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＴＮＮＤ１、ＤＡＣＨ１、ＸＰＯ１、ＺＮＦ７５０、ＦＢＸＷ７、ＭＵＣ６、ＫＤＭ６Ａ、ＧＡＴＡ３、ＺＢＴＢ２０、ＰＩＫ３ＣＡ、ＲＢ１、ＳＯＸ１７、ＳＭＡＲＣＡ４、ＫＩＴ、ＣＨＤ８、ＣＨＤ４、及びＡＰＯＢからなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子中に変異を有する。

【0112】

いくつかの態様では、本明細書に記載の方法のうちのいずれかは、治療有効量の本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体のうちの１つ以上を、それを必要とする対象に投与することを含む。本明細書で使用される場合、抗がん療法（本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体のうちのいずれかなど）の「治療有効量」又は「治療有効投与量」は、有益な又は所望の結果をもたらすのに十分な量である。治療的使用における、有益な又は所望の結果としては、がんによる１つ以上の症状が減少する、がんに罹患している対象の生活の質が向上する、がんの治療に必要な他の薬剤の用量が減少する、標的化などによって別の薬剤の効果が増強する、疾患の進行が遅れる、及び／又は生存期間が延長することが挙げられるが、これらに限定されない。有効投与量は、１回以上の投与で投与され得る。本開示の目的のために、抗がん療法の有効投与量は、直接的又は間接的のいずれかで治療的又は予防的処置を達成するのに十分な量である。臨床文脈において理解されるように、抗がん療法の治療有効投与量は、別の抗がん療法と併せて達成されてもよく、又は達成されなくてもよい。

【0113】

本明細書に記載の抗体のうちのいずれかの代表的な投与量は、約０．１～２０ｍｇ／ｋｇ又は０．５～５ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、又は２０ｍｇ／ｋｇ）、又は固定容量として１０～１６００ｍｇ（例えば、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、又は１６００ｍｇ未満のうちいずれか、又はそれ以上、これらの間の値を含む）である。一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、３週間毎に約３００～１５００ｍｇの量で投与される。別の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、４週間毎に約３００～１８００ｍｇの量で投与される。投与量は、他の要因の中でも、対象の状態、及び以前の治療に対する応答（もし存在する場合）、治療が予防的又は治療的であるかどうか、及び障害が急性又は慢性であるかどうかに依存する。

【0114】

投与は、非経口、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、腫瘍内、局所、鼻腔内、又は筋肉内であり得る。いくつかの実施形態では、全身循環への投与は、静脈内又は皮下投与によるものである。静脈内投与は、例えば、３０～９０分などの期間にわたる注入によるものであり得る。

【0115】

投与の頻度は、とりわけ、循環中の抗体の半減期、対象の状態、及び投与経路に依存する。頻度は、対象の状態の変化、又は治療されている障害の進行に応じて、毎日、毎週、毎月、四半期毎、又は不規則な間隔であり得る。ある実施形態では、頻度は、２週間サイクルであり得る。別の実施形態では、頻度は、３週間サイクルであり得る。別の実施形態では、頻度は、４週間サイクルである。別の実施形態では、頻度は、６週間サイクルである。静脈内投与の例示的な頻度は、治療の連続的な原因により毎週～四半期の間であるが、より多い又はより少ない頻度の投与も可能である。皮下投与の場合、例示的な投与頻度は毎日～毎月であるが、より多い又はより少ない頻度の投与も可能である。

【0116】

投与の数量は、障害が急性又は慢性であるかどうか、及び治療に対する障害の応答に依存する。急性障害又は慢性障害の急性増悪については、１～１０回の用量で充分であることが多い。場合によっては、単回ボーラス用量は、任意に分割形態で、急性障害又は慢性障害の急性増悪に充分である。急性障害の再発又は急性増悪に対して治療を繰り返すことができる。慢性障害の場合、抗体は、一定の間隔、例えば、少なくとも１、５、若しくは１０年間、又は対象の生涯にわたり、毎週、隔週、四半期毎、６ヶ月毎で投与することができる。

【0117】

抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む治療は、がんを有する対象の無増悪生存期間又は全生存期間の中央値を、対照対象と比較して、少なくとも約３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは更には１００％延長させる、又は、これらの期間のいずれかを２週間、１、２、若しくは３ヶ月、若しくは４若しくは６ヶ月、若しくは更には９ヶ月、若しくは１年延長させることによって、疾患を軽減することができる。追加的又は代替的に、抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む治療は、対象の完全奏効率、部分奏効率、客観的奏効率（完全＋部分）を、対照対象と比較して、少なくとも約３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は更には１００％増加させることができる。対照対象は、抗ＴＩＧＩＴ抗体以外は、抗ＴＩＧＩＴ抗体を受けた対象と同じ治療を受ける。したがって、対照対象は、プラセボ単独か、又は、プラセボと、抗ＴＩＧＩＴ抗体以外のいくつかの化学療法剤を抗ＴＩＧＩＴ抗体を受けた対象も投与されている場合はその化学療法剤との組み合わせを受けることができる。

【0118】

本明細書に開示される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＣＤ１５５発現細胞（例えば、非限定的にＫ５６２細胞）のＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を、本明細書に開示される抗ＴＩＧＩＴ抗体のうちの１つの非存在下のＣＤ１５５発現細胞のＮＫ細胞媒介性細胞傷害の量に対して、約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％のいずれか、又はそれ以上、増強することができる。

【0119】

典型的には、臨床試験（例えば、第ＩＩ相、第ＩＩ／ＩＩＩ相、又は第ＩＩＩ相試験）において、対照群の対象と比較して、抗ＴＩＧＩＴ抗体で治療された対象の無増悪生存期間及び／又は奏効率の増加は、例えば、ｐ＝０．０５又は０．０１又は更には０．００１のレベルで統計的に有意である。完全奏効率及び部分奏効率は、がんの臨床試験で一般的に使用される客観的基準により、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ及び／又はＦｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎによって列挙されているように決定され、例えば、とりわけ、腫瘍体積、腫瘍の数、転移、生存期間、及び生活の質の尺度を挙げることができる。

【0120】

非経口投与用の医薬組成物は、無菌で、実質的に等張であり、ＧＭＰ条件下で製造され得る。医薬組成物は、単位剤形（すなわち、単回投与のための投与量）で提供することができる。医薬組成物は、１つ以上の生理学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、又は補助剤を用いて製剤化することができる。製剤は選択される投与経路に依存する。注射用に、抗体を、水溶液中、例えば生理学的に適合性の緩衝液、例えばハンクス液、リンゲル液、又は生理食塩水若しくは酢酸緩衝液などにおいて製剤化することができる（注射部位の不快感を低減するため）。溶液は、懸濁化剤、安定化剤、及び／又は分散剤などの配合剤を含有することができる。あるいは、抗体は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、発熱性物質除去蒸留水で構成するための凍結乾燥形態であってもよい。液体製剤中の抗体の濃度は、例えば、約１０～１５０ｍｇ／ｍＬで変わり得る。いくつかの製剤では、濃度は約２０～８０ｍｇ／ｍＬである。

【0121】

Ｂ．併用療法
本開示は、抗ＴＩＧＩＴ抗体の、単独での、又は１つ以上の活性治療薬と組み合わせての使用を企図する。追加の活性治療薬は、小化学分子；タンパク質、抗体、ペプチボディ、ペプチド、ＤＮＡ、ＲＮＡなどの高分子、又はそのような高分子の断片；又は細胞療法若しくは遺伝子療法であってよい。併用療法は、異なるが補完的な作用機序を標的とし、それによって、基礎となる疾患、障害、又は状態に対して相乗的な治療効果又は予防効果を有することができる。加えて、又は代替的に、併用療法は、薬剤のうちの１つ以上の用量低減を可能にし、それによって、薬剤のうちの１つ以上に関連する有害作用を改善、低減、又は排除することができる。

【0122】

そのような併用療法における活性治療薬は、単一の組成物として、又は別個の組成物として製剤化することができる。別々に投与される場合、併用における各治療薬は、同時若しくはほぼ同時に、又は異なる時間に投与され得る。更に、治療薬は、異なる投与形態（例えば、経口カプセル及び静脈内）を有する、異なる投与間隔で与えられる、一方の治療薬は一定の投与レジメンで与えられ、別の治療薬は漸増、漸減、若しくは中止される、又は併用における各治療薬は、患者の治療過程中に独立して漸増、漸減、若しくは用量増加若しくは減少、若しくは中止及び／若しくは再開される場合であっても、「併用」投与される。併用薬が別個の組成物として製剤化される場合、いくつかの実施形態では、別個の組成物は、キットで一緒に提供される。

【0123】

特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれかは、追加の活性治療薬のうちの１つ以上と順次投与又は適用され、例えば、このとき、追加の活性治療薬のうちの１つ以上は、本開示による抗ＴＩＧＩＴ抗体の投与前又は投与後に投与される。他の実施形態では、抗体は、追加の活性治療薬のうちの１つ以上と同時に投与され、例えば、このとき、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、追加の治療薬のうちの１つ以上と同時又はほぼ同時に投与され、抗ＴＩＧＩＴ抗体、及び追加の治療薬のうちの１つ以上は、２つ以上の別個の製剤中に存在し得るか、又は単一の製剤（すなわち、共製剤）に組み合わされ得る。追加の薬剤が抗ＴＩＧＩＴ抗体と連続的又は同時に投与されるかどうかに関係なく、本開示の目的において併用して投与されると考えられる。

【0124】

本開示の抗体は、その状況下における適切な任意の方法で、少なくとも１つの他の（活性）薬剤と組み合わせて使用できる。一実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤及び本開示の少なくとも１つの抗ＴＩＧＩＴ抗体による治療は、一定期間にわたって維持される。別の実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤による治療は、低減又は中止される（例えば、対象が安定している場合）が、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体による治療は一定の投与レジメンで維持される。更なる実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤による治療は、低減又は中止される（例えば、対象が安定している場合）が、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体による治療は低減される（例えば、用量低減、投与頻度低減、又は治療レジメン短縮）。更に別の実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤による治療は、低減又は中止され（例えば、対象が安定している場合）、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体による治療は増加される（例えば、用量増加、投与頻度増加、又は治療レジメン延長）。更に別の実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤による治療は維持され、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体による治療は低減又は中止される（例えば、用量低減、投与頻度低減、又は治療レジメン短縮）。更に別の実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤による治療及び本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体による治療は、低減又は中止される（例えば、用量低減、投与頻度低減、又は治療レジメン短縮）。

【0125】

本開示の抗体による治療は、治療される障害に対して有効な他の治療と組み合わせることができる。増殖性状態、がん、腫瘍、又は前がん性疾患、障害、又は状態の治療に使用されるとき、本開示の抗体は、化学療法、放射線（例えば、局所放射線療法又は全身放射線療法）、幹細胞治療、手術、又は他の生物製剤による治療と組み合わせることができる。

【0126】

本開示の抗体は、がんに対する免疫応答を誘発するワクチンと共に投与することができる。そのような免疫応答は、本開示の抗体によって増強される。ワクチンは、任意選択的に担体分子に連結された、免疫応答を誘発するのに有効ながん性細胞及び／又は腫瘍の表面上に発現する抗原、その断片を含み得る。

【0127】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬のうち１つ以上は、免疫調節剤である。本開示で使用できる好適な免疫調節剤としては、ＣＤ４０Ｌ、Ｂ７、及びＢ７ＲＰ１；抗ＣＤ４０、抗ＣＤ３８、抗ＩＣＯＳ、及び４－ＩＢＢリガンドなどの刺激性受容体に対する活性化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）；樹状細胞抗原負荷（インビボ又はインビトロ）；樹状細胞がんワクチンなどの抗がんワクチン；ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＥＬＣ／ＣＣＬ１９、ＳＬＣ／ＣＣＬ２１、ＭＣＰ－１、ＩＬ－４、ＩＬ－１８、ＴＮＦ、ＩＬ－１５、ＭＤＣ、ＩＦＮα／β、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１３、及び抗ＩＬ－１０などのサイトカイン／ケモカイン；細菌リポ多糖（ＬＰＳ）；インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ１）阻害剤及び免疫刺激性オリゴヌクレオチドが挙げられる。

【0128】

特定の実施形態では、本開示は、腫瘍成長の相加的又は相乗的抑制を達成するために、シグナル伝達阻害剤（ＳＴＩ）と併用して本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体を投与することを含む、腫瘍成長の抑制のための方法を提供する。本明細書で使用される場合、「シグナル伝達阻害剤」という用語は、シグナル伝達経路において１つ以上の工程を選択的に阻害する薬剤を指す。本開示によって企図されるシグナル伝達阻害剤（ＳＴＩ）として、（ｉ）ｂｃｒ／ａｂｌキナーゼ阻害剤（例えば、イマチニブメシル酸塩、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））、（ｉｉ）キナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ及びオシメルチニブ）を含む上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体阻害剤及び抗体、（ｉｉｉ）ｈｅｒ－２／ｎｅｕ受容体阻害剤（例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、（ｉｖ）Ａｋｔファミリーキナーゼ又はＡｋｔ経路の阻害剤（例えば、ラパマイシン）、（ｖ）細胞周期キナーゼ阻害剤（例えば、フラボピリドール）、及び（ｖｉ）ホスファチジルイノシトールキナーゼ阻害剤が挙げられる。免疫調節に関与する薬剤はまた、がん患者における腫瘍増殖の抑制のために、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と併用して使用され得る。

【0129】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬のうちの１つ以上は、化学療法剤である。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びシクロホスファミド；アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メトレドパ、ウレドパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチロールメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；ナイトロジェンマスタード類、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロフォスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン（caminomycin）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトレビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポマリドミド、ポルフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフル、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵ；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗アドレナリン、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミド配糖体；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル、ｎａｂ－パクリタキセル、及びドセタキセル；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金及び白金配位錯体、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、及びオキサリプラチン；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼロダ；イバンドロネート；ＣＰＴ１１；トポイソメラーゼ阻害剤；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラマイシン；カペシタビン；アントラサイクリン；及び上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0130】

化学療法剤としてはまた、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）－イミダゾール、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、オナプリストン、及びトレミフェンを含む、抗エストロゲン、並びに、アビラテロン、エンザルタミド、アパルタミド、ダロルタミド、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン、並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、又は誘導体などの、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤が挙げられる。特定の実施形態では、併用療法は、１つ以上の化学療法剤を含む化学療法レジメンを含む。特定の実施形態では、併用療法は、ホルモン又は関連するホルモン剤の投与を含む。

【0131】

抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせて使用できる追加の治療モダリティには、放射線療法、腫瘍抗原に対する抗体、抗体と毒素との複合体、Ｔ細胞アジュバント、骨髄移植、又は、かかる抗原提示細胞を刺激するために使用されるＴＬＲアゴニストを含む抗原提示細胞（例えば、樹状細胞療法）が挙げられる。

【0132】

特定の実施形態では、本開示は、遺伝子発現を停止させるためのＲＮＡ干渉ベースの療法と組み合わせた本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体の使用を企図する。ＲＮＡｉは、長い二本鎖ＲＮＡをより小さい干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）に切断することから始まる。ｓｉＲＮＡの１つの鎖は、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）として知られるリボ核タンパク質複合体に組み込まれ、次いで、組み込まれたｓｉＲＮＡ鎖に少なくとも部分的に相補的なｍＲＮＡ分子を特定するために使用される。ＲＩＳＣはｍＲＮＡに結合するか、又はｍＲＮＡを切断することができ、それらの両方が翻訳を阻止する。

【0133】

特定の実施形態では、本開示は、アデノシンのレベルを調節する薬剤と組み合わせた本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体の使用を企図する。そのような治療薬は、ＡＴＰのアデノシンへの変換を触媒するエクトヌクレオチドに作用することができ、ＡＴＰからＡＤＰ、及びＡＤＰからＡＭＰに加水分解するエクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＥＮＴＰＤ１、ＣＤ３９又は表面抗原分類３９としても知られる）、並びに、ＡＭＰをアデノシンに変換する５’－ヌクレオチダーゼ、エクト（ＮＴ５Ｅ又は５ＮＴ、ＣＤ７３又は表面抗原分類７３としても知られる）を含む。一実施形態では、本開示は、国際公開第２０１７／１２０５０８号、同第２０１８／０９４１４８号、及び同第２０１８／０６７４２４号に記載されているものなどのＣＤ７３阻害剤との併用を企図する。一実施形態では、ＣＤ７３阻害剤は、ＡＢ６８０である。別のアプローチでは、アデノシンＡ２ａ及びＡ２ｂ受容体が標的化される。Ａ２ａ及び／又はＡ２ｂ受容体のアンタゴニストとの併用も企図される。一実施形態では、本開示は、国際公開第２０１８／１３６７００号又は同第２０１８／２０４６６１号に記載のアデノシン受容体アンタゴニストとの併用を企図する。一実施形態では、アデノシン受容体アンタゴニストは、ＡＢ９２８（エトルマデナント）である。

【0134】

特定の実施形態では、本開示は、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、特にＰＩ３Ｋγアイソフォームの阻害剤と組み合わせた本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体の使用を企図する。ＰＩ３Ｋγ阻害剤は、骨髄細胞の調節を通じて、例えば、抑制性骨髄細胞を阻害する、免疫抑制性腫瘍浸潤性マクロファージを弱める、又はマクロファージ及び樹状細胞を刺激することによって抗がん免疫応答を刺激し、有効なＴ細胞応答に寄与するサイトカインを作製でき、がん発生及び拡散の減少をもたらす。本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と併用できる代表的なＰＩ３Ｋγ阻害剤には、国際公開第２０２０／０２４７４９６（Ａ１）号に記載されているものが含まれる。一実施形態では、ＰＩ３Ｋγ阻害剤は、ＩＰＩ－５４９である。

【0135】

特定の実施形態では、本開示は、炎症誘発性免疫機能不全、腫瘍免疫逃避、感染性疾患の免疫抑制及び免疫病理の原因であるか、又は関与することが示されているアルギナーゼの阻害剤と併用する、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体の使用を企図する。代表的なアルギナーゼ化合物は、例えば、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２０５０７号及び国際公開第２０２０／１０２６４６号に見出すことができる。

【0136】

特定の実施形態では、本開示は、低酸素利用率に対する細胞応答において重要な役割を果たす、ＨＩＦ－２αの阻害剤との本開示による抗ＴＩＧＩＴ抗体の使用を企図する。低酸素条件下では、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）転写因子は、代謝、血管新生、細胞増殖、及び生存、免疫回避、及び炎症反応を調節する遺伝子の発現を活性化できる。ＨＩＦ－２αの過剰発現は、様々ながん患者における臨床転帰不良と関連しており、低酸素症はまた、炎症性腸疾患及び関節リウマチなどの多くの急性及び慢性の炎症性疾患においても一般的である。

【0137】

本開示はまた、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と１つ以上のＲＡＳシグナル伝達阻害剤との併用を企図する。ＲＡＳファミリー遺伝子、例えば、ＨＲＡＳ、ＫＲＡＳ、及びＮＲＡＳにおける発がん性変異は、様々ながんに関連している。例えば、ＫＲＡＳファミリー遺伝子において、とりわけ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１３Ｃ、及びＧ１２Ｓの変異は、複数の腫瘍タイプで観察されている。変異体ＲＡＳシグナル伝達の阻害について、直接的及び間接的な阻害戦略が研究されてきた。間接的阻害剤は、ＲＡＳシグナル伝達経路におけるＲＡＳ以外のエフェクターを標的とし、ＲＡＦ、ＭＥＫ、ＥＲＫ、ＰＩ３Ｋ、ＰＴＥＮ、ＳＯＳ（例えば、ＳＯＳ１）、ｍＴＯＲＣ１、ＳＨＰ２（ＰＴＰＮ１１）、及びＡＫＴの阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。開発中の間接的阻害剤の非限定例として、ＲＭＣ－４６３０、ＲＭＣ－５８４５、ＲＭＣ－６２９１、ＲＭＣ－６２３６、ＪＡＢ－３０６８、ＪＡＢ－３３１２、ＴＮＯ１５５、ＲＬＹ－１９７１、ＢＩ１７０１９６３が挙げられる。ＲＡＳ変異体の直接的阻害剤も探索されており、一般にＫＲＡＳ－ＧＴＰ複合体又はＫＲＡＳ－ＧＤＰ複合体を標的とする。開発中の代表的な直接的ＲＡＳ阻害剤としては、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）、ＭＲＴＸ８４９、ｍＲＮＡ－５６７１、及びＡＲＳ１６２０が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、１つ以上のＲＡＳシグナル伝達阻害剤は、ＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＰＴＥＮ阻害剤、ＳＯＳ１阻害剤、ｍＴＯＲＣ１阻害剤、ＳＨＰ２阻害剤、及びＡＫＴ阻害剤からなる群から選択される。他の実施形態では、１つ以上のＲＡＳシグナル伝達阻害剤は、ＲＡＳ変異体を直接阻害する。

【0138】

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示による抗ＴＩＧＩＴ抗体と、１つ以上のａｎｅｘｅｌｅｋｔｏ（すなわち、ＡＸＬ）の阻害剤との併用を目的とする。ＡＸＬシグナル伝達経路は、腫瘍成長及び転移に関連しており、様々ながん療法に対する耐性を媒介すると考えられている。ＴＡＭファミリーにおける他のキナーゼ（すなわち、ＴＹＲＯ３、ＭＥＲＴＫ）、並びに、とりわけ、ＭＥＴ、ＦＬＴ３、ＲＯＮ、及びＡＵＲＯＲＡなどの他の受容体チロシンキナーゼも阻害する、開発中の様々なＡＸＬ阻害剤が存在する。代表的な多種キナーゼ阻害剤として、ギルテリチニブ、メレスチニブ、カボザンチニブ、ＢＭＳ７７７６０７、及びフォレチニブが挙げられる。ＡＸＬ特異的阻害剤、例えば、ＳＧＩ－７０７９、ＴＰ－０９０３（すなわち、デュベルマチニブ）、ＢＧＢ３２４（すなわち、ベムセンチニブ）及びＤＰ３９７５もまた開発されている。

【0139】

特定の実施形態では、本開示は、抗腫瘍活性を有する免疫細胞をがん患者に投与する、新しく有望な形態の個別化免疫療法である養子細胞療法と組み合わせる、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体の使用を企図する。養子細胞療法は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように操作された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）及びＴ細胞を使用して研究されている。養子細胞療法は、一般に、個体からＴ細胞を回収すること、特定の抗原を標的とする、又はそれらの抗腫瘍効果を増強するようにそれらを遺伝子改変すること、それらを十分な数まで増幅すること、及び、遺伝子改変したＴ細胞をがん患者に注入することを含む。Ｔ細胞は、増殖した細胞を後に再注入する患者から回収することができ（例えば、自家）、又はドナー患者から回収することができる（例えば、同種異系）。

【0140】

Ｔ細胞媒介性免疫は、それぞれが、応答を最適化するために刺激シグナル及び阻害シグナルを釣り合わせることによって制御される、複数の逐次的な工程を含む。免疫応答におけるほぼ全ての阻害シグナルは、最終的に細胞内シグナル伝達経路を調節するが、膜受容体を通して多くが開始され、そのリガンドは膜結合又は可溶性（サイトカイン）のいずれかである。Ｔ細胞活性化を調節する共刺激受容体及び抑制性受容体及びリガンドは、通常の組織と比較してがんにおいて過剰発現されていないが、組織におけるＴ細胞エフェクター機能を調節する阻害性リガンド及び受容体は、腫瘍細胞又は腫瘍微小環境に関連する非形質転換細胞上で一般的に過剰発現する。可溶性及び膜結合受容体（リガンド免疫チェックポイント）の機能は、アゴニスト抗体（共刺激経路）又はアンタゴニスト抗体（阻害経路）を使用して調節することができる。したがって、がん療法に対して現在承認されているほとんどの抗体とは対照的に、免疫チェックポイントを遮断又は刺激する抗体は、腫瘍細胞を直接標的とせず、むしろリンパ球受容体又はそれらのリガンドを標的として、内因性抗腫瘍活性を増強する。［Ｐａｒｄｏｌｌ，（Ａｐｒｉｌ ２０１２）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ １２：２５２－６４参照］。

【0141】

免疫チェックポイント（リガンド及び受容体）の例、その一部は、様々な種類の腫瘍細胞で選択的に上方調節され、遮断の候補として、ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム細胞死１リガンド１）、ＢＴＬＡ（Ｂ及びＴリンパ球減衰因子）、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４）、ＴＩＭ－３（Ｔ細胞免疫グロブリンムチンタンパク質３）、ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子３）、ＴＩＧＩＴ（Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）、及びキラー細胞抑制受容体（それらの構造的特徴に基づいて、ｉ）キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、及びｉｉ）Ｃ型レクチン受容体（ＩＩ型膜貫通受容体ファミリーのメンバー）の２つのクラスに分割できる）が挙げられる。受容体（例えば、２Ｂ４（ＣＤ２４４としても知られる）受容体）及びリガンド（例えば、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）及びＢ７－Ｈ４（Ｂ７－Ｓ１、Ｂ７ｘ及びＶＣＴＮ１としても知られる）などの特定のＢ７ファミリー阻害性リガンド）の両方を含む、他のあまりよく分かっていない免疫チェックポイントは、文献に記載されている。［Ｐａｒｄｏｌｌ，（Ａｐｒｉｌ ２０１２）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ １２：２５２－６４参照］。

【0142】

本開示は、前述の免疫チェックポイント受容体及びリガンド、並びにまだ説明されていない免疫チェックポイント受容体及びリガンドの阻害剤と併用する、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体の使用を企図する。免疫チェックポイントの特定の修飾薬は現在承認されており、他の多くは開発中である。２０１１年に黒色腫の治療について承認されたとき、完全ヒト化ＣＴＬＡ４モノクローナル抗体であるイピリムマブ（例えば、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）は、米国で薬事承認を得た最初の免疫チェックポイント阻害剤となった。ＣＴＬＡ４及び抗体（ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、ａｂａｔｃｅｐｔ（例えば、ＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ））を含む融合タンパク質は、関節リウマチの治療に使用されており、他の融合タンパク質は、エプスタインバーウイルスに感作される腎移植患者において有効であることが示されている。薬事承認を得た次のクラスの免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１及びそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に対するものであった。承認された抗ＰＤ－１抗体としては、扁平上皮がん、古典的ホジキンリンパ腫、及び尿路上皮がんを含む様々ながんに対する、ニボルマブ（例えば、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）及びペンブロリズマブ（例えば、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ）が挙げられる。承認された抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、尿路上皮がんを含む特定のがんに対する、アベルマブ（例えば、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）、ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ及びＰｆｉｚｅｒ）、アテゾリズマブ（例えば、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、及びデュルバルマブ（例えば、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）が挙げられる。本明細書で提供されるいくつかの組み合わせでは、免疫チェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ－０６８０、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、ブディジャリマブ、ＢＩ－７５４０９１、カムレリズマブ、コシベリマブ、デュルバルマブ、ドスタルリマブ、セミプリマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、レチファンリマブ、ササンリマブ、及びジムベレリマブ（ＡＢ１２２）から選択される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４、国際公開第２０１２／１４５４９３号）又はピジリズマブ（ＣＴ－０１１）である。ＰＤ－１受容体を標的とする別の方法は、ＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したＰＤ－Ｌ２の細胞外ドメイン（Ｂ７－ＤＣ）から構成される、ＡＭＰ－２２４と呼ばれる組換えタンパク質である。一実施形態では、本開示は、ＰＤ－１抗体との本開示による抗ＴＩＧＩＴ抗体の使用を企図する。一実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ジムベレリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、３週間毎に約２００～１５００ｍｇの量で提供され、抗ＰＤ－１抗体は、３週間毎に約１００～１２００ｍｇの量で提供される。別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、４週間毎に約３００～１８００ｍｇの量で与えられ、抗ＰＤ－１抗体は、４週間毎に約２００～１５００ｍｇの量で提供される。更に別の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ジムベレリマブであり、３週間又は４週間毎に約３６０ｍｇ又は４８０ｍｇの量で提供される。

【0143】

別の態様では、本開示は、免疫応答を刺激するため、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ、及び他の免疫抑制サイトカイン）、又はＴ細胞活性化を刺激するサイトカインとの組み合わせを企図する。

【0144】

更に別の態様では、Ｔ細胞応答は、開示された抗ＴＩＧＩＴ抗体と、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）のアンタゴニスト、例えばＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＰＶＲＩＧ、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、及びＴＩＭ－４、及び／又は（ｉｉ）Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト、例えばＢ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３及びＣＤ２のうちの１つ以上との組み合わせによって刺激され得る。がんの治療のために本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体と併用され得る他の薬剤として、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニスト、又はＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニストが挙げられる。例えば、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、リリルマブなどのＫＩＲのアンタゴニストと併用され得る。

【0145】

併用療法のための更に他の薬剤としては、マクロファージ又は単球を阻害又は枯渇させる薬剤が挙げられ、ＲＧ７１５５（国際公開第１１／７００２４号、同第１１／１０７５５３号、Ｗ）１１／１３１４０７号、同第１３／８７６９９号、同第１３／１１９７１６号、同第１３／１３２０４４号）又はＦＰＡ－００８（国際公開第１１／１４０２４９号、同第１３１６９２６４号、同第１４／０３６３５７号）を含むＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト抗体などのＣＳＦ－１Ｒアンタゴニストを含むがこれらに限定されない。

【0146】

別の態様では、開示された抗ＴＩＧＩＴ抗体は、陽性共刺激受容体を結合するアゴニスト剤、阻害性受容体を介したシグナル伝達を弱める遮断剤、アンタゴニスト、及び抗腫瘍Ｔ細胞の出現頻度を全身的に増加させる１つ以上の薬剤、腫瘍微小環境内の別個の免疫抑制経路を克服する薬剤（例えば、阻害性受容体係合（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１相互作用）の遮断、Ｔｒｅｇの枯渇又は阻害（例えば、抗ＣＤ２５モノクローナル抗体（例えば、ダクリズマブ）の使用、又はエクスビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇）、又は、Ｔ細胞アネルギー若しくは疲弊の逆転／予防）、並びに腫瘍部位での自然免疫活性化及び／又は炎症を誘発する薬剤のうち、１つ以上と併用できる。

【0147】

一態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、アンタゴニストＣＴＬＡ－４抗体などのＣＴＬＡ－４アンタゴニストである。好適なＣＴＬＡ－４抗体として、例えば、イピリムマブ（例えば、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）又はトレメリムマブが挙げられる。別の態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、アンタゴニストＰＤ－Ｌ１抗体などのＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。好適なＰＤ－Ｌ１抗体としては、例えば、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、国際公開第２０１０／０７７６３４号）（例えば、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９（国際公開第２００７／００５８７４号）、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃ（国際公開第２０１３／７９１７４号）が挙げられる。別の態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、アンタゴニストＬＡＧ－３抗体などのＬＡＧ－３アンタゴニストである。好適なＬＡＧ－３抗体としては、例えば、ＢＭＳ－９８６０１６（国際公開第１０／１９５７０号、同第１４／０８２１８号）、又はＩＭＰ－７３１若しくはＩＭＰ－３２１（国際公開第０８／１３２６０１号、同第０９／４４２７３号）が挙げられる。別の態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、アゴニストＣＤ１３７抗体などのＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニストである。好適なＣＤ１３７抗体としては、例えば、ウレルマブ及びＰＦ－０５０８２５６６（国際公開第１２／３２４３３号）が挙げられる。別の態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、アゴニストＧＩＴＲ抗体などのＧＩＴＲアゴニストである。好適なＧＩＴＲ抗体としては、例えば、ＢＭＳ－９８６１５３、ＢＭＳ－９８６１５６、ＴＲＸ－５１８（国際公開第０６／１０５０２１号、同第０９／００９１１６号）及びＭＫ－４１６６（国際公開第１１／０２８６８３号）が挙げられる。別の態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、アゴニストＯＸ４０抗体などのＯＸ４０アゴニストである。好適なＯＸ４０抗体としては、例えば、ＭＥＤＩ－６３８３又はＭＥＤＩ－６４６９が挙げられる。別の態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、アンタゴニストＯＸ４０抗体などのＯＸ４０Ｌアンタゴニストである。好適なＯＸ４０Ｌアンタゴニストとしては、例えば、ＲＧ－７８８８（国際公開第０６／０２９８７９号）が挙げられる。別の態様では、免疫腫瘍学的は、アゴニストＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アゴニストである。更に別の実施形態では、免疫腫瘍学的薬剤は、アンタゴニストＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アンタゴニストである。好適なＣＤ４０抗体としては、例えば、ルカタムマブ又はダセツズマブが挙げられる。別の態様では、免疫腫瘍学的は、アゴニストＣＤ２７抗体などのＣＤ２７アゴニストである。好適なＣＤ２７抗体としては、例えば、バルリルマブが挙げられる。別の態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）（国際公開第１１／１０９４００号）である。更に別の実施形態では、本開示による抗ＴＩＧＩＴ抗体と、Ｔｒｏｐ－２に対する薬剤、例えば、抗体薬物複合体であるサシツズマブゴビテカン－ｈｚｉｙとの組み合わせが企図される。更に別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα経路を阻害する薬剤との組み合わせが企図される。抗ＣＤ４７抗体の例は、マグロリマブである。

【0148】

心血管及び／又は代謝関連疾患、障害、及び状態の治療のための併用療法に有用な治療薬の例として、コレステロールの酵素的合成を阻害するスタチン（例えば、ＣＲＥＳＴＯＲ（登録商標）、ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）、ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）、ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）、ＰＲＡＶＡＣＯＬ（登録商標）、及びＺＯＣＯＲ（登録商標））、コレストロールを捕捉し、その吸収を阻害する胆汁酸樹脂（例えば、ＣＯＬＥＳＴＩＤ（登録商標）、ＬＯ－ＣＨＯＬＥＳＴ（登録商標）、ＰＲＥＶＡＬＩＴＥ（登録商標）、ＱＵＥＳＴＲＡＮ（登録商標）、及びＷＥＬＣＨＯＬ（登録商標））、コレステロールの吸収を遮断するエゼチミブ（ＺＥＴＩＡ（登録商標））、トリグリセリドを低下させ、ＨＤＬをやや増加させることができるフィブリン酸（例えば、ＴＲＩＣＯＲ（登録商標））、ＬＤＬコレステロール及びトリグリセリドをやや低下させるナイアシン（例えば、ＮＩＡＣＯＲ（登録商標））、並びに／又は前述の組み合わせ（例えば、ＶＹＴＯＲＩＮ（登録商標）（エゼチミブとシンバスタチン）が挙げられる。本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせて使用するための候補であり得る代替コレステロール治療として、様々なサプリメント及びハーブ（例えば、ニンニク、ポリコサノール、及びグッグル）が挙げられる。

【0149】

免疫及び炎症関連疾患、障害、又は状態に対する併用療法において有用な治療薬の例として、アスピリン、イブプロフェン、及び他のプロピオン酸誘導体（アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ブクロキシ酸、カプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルプロフェン、フルルビプロフェン、インドプロフェン、ケトプロフェン、ミロプロフェン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、スプロフェン、チアプロフェン酸、及びチオキサプロフェン）、酢酸誘導体（インドメタシン、アセメタシン、アルクロフェナク、クリダナク、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、フェンクロジン酸、フェンチアザク、ｆｕｉｒｏｆｅｎａｃ、イブフェナク、イソキセパック、ｏｘｐｉｎａｃ、スリンダク、チオピナック、トルメチン、ジドメタシン、及びゾメピラック）、フェナム酸誘導体（フルフェナム酸、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ニフルミン酸及びトルフェナム酸）、ビフェニルカルボン酸誘導体（ジフルニサル及びフルフェニサール）、オキシカム（イソキシカム、ピロキシカム、スドキシカム及びテノキシカム）、サリチル酸塩（アセチルサリチル酸、スルファサラジン）並びにピラゾロン（アパゾン、ｂｅｚｐｉｐｅｒｙｌｏｎ、フェプラゾン、モフェブタゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン）などの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が挙げられるが、これらに限定されない。他の組み合わせには、シクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ－２）阻害剤が含まれる。

【0150】

組み合わせのための他の活性薬剤としては、プレドニゾロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、又はヒドロコルチゾンなどのステロイドが挙げられる。そのような組み合わせは、必要なステロイド用量を漸減することによって、ステロイドの１つ以上の有害作用を低減又は更に排除することができるため、特に有利であり得る。

【0151】

例えば、関節リウマチを治療するために併用して使用できる活性薬剤の追加の例としては、サイトカイン抑制抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）、他のヒトサイトカイン又は成長因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ－１０、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１８、ＥＭＡＰ－ＩＩ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＦＧＦ、又はＰＤＧＦに対する抗体又はアンタゴニストが挙げられる。

【0152】

活性薬剤の特定の組み合わせは、自己免疫及びその後の炎症カスケードの異なる点を妨害でき、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、キメラ、ヒト化、又はヒトＴＮＦ抗体である、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）、ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）、抗ＴＮＦ抗体断片（例えば、ＣＤＰ８７０）、及び可溶性ｐ５５又はｐ７５ ＴＮＦ受容体、それらの誘導体、ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）又はｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（レネルセプト）、可溶性ＩＬ－１３受容体（ｓＩＬ－１３）、更にＴＮＦα－変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤を含み、同様に、ＩＬ－１阻害剤（例えば、インターロイキン－１変換酵素阻害剤）が有効であり得る。他の組み合わせとして、インターロイキン１１、抗Ｐ７ｓ、及びｐ－セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）が挙げられる。本明細書に記載のＡ２ＡＲ／Ａ２ＢＲ阻害剤と組み合わせて有用な薬剤の他の例としては、インターフェロン－１３１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（登録商標））、インターフェロン－１３ｌｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標））、コパキソン、高圧酸素、静脈内免疫グロブリン、ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ、及び他のヒトサイトカイン又は成長因子の抗体又はアンタゴニスト（例えば、ＣＤ４０リガンド及びＣＤ８０に対する抗体）が挙げられる。

【0153】

いくつかの実施形態では、組み合わせは、本開示の抗体と、対照正常組織と比較して、がん細胞上で優先的に発現される表面抗原に対する第２の抗体である。がんの治療のための本開示の抗体との併用療法で投与され得る抗体のいくつかの例としては、ＨＥＲ２抗原に対するＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＶＥＧＦに対するＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）、又はＥＧＦ受容体に対する抗体、例えば、（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、セツキシマブ）、及びＶｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）（パニツムマブ）が挙げられる。投与され得る他の薬剤としては、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、４－１ＢＢ、ＢＴＬＡ、ＰＶＲＩＧ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３、及びＬＡＧ－３のいずれかの抗体又は他の阻害剤、又は他の下流のシグナル伝達阻害剤、例えば、ｍＴＯＲ及びＧＳＫ３β阻害剤、並びにサイトカイン、例えば、インターフェロンγ、ＩＬ－２、及びＩＬ－１５が挙げられる。追加の薬剤のいくつかの特定の例としては、イピリムマブ、パゾパニブ、スニチニブ、ダサチニブ、ペンブロリズマブ、ＩＮＣＲ０２４３６０、ダブラフェニブ、トラメチニブ、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、エルロチニブ（例えば、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、コビメチニブ、ニボルマブ、及びジムベレリマブが挙げられる。併用療法のための第２の抗体又は他の薬剤の選択は、治療されるがんに依存する。任意選択的に、がんは、適切な抗体の選択を導くために抗原の発現又は優先的発現について試験される。いくつかの実施形態では、第２の抗体のアイソタイプは、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び食作用などのエフェクター機能を促進するためのヒトＩｇＧ１である。

【0154】

同様の併用療法は、感染性疾患、例えばウイルス、細菌、真菌、及び寄生虫感染性疾患、障害及び状態、並びにそれに関連する障害などの治療又は予防に使用できる。例えば、本開示の抗体は、病原体に対する抗体、又は病原体に対するワクチン、例えば、ラウス肉腫ウイルスに対するパリビズマブなどと組み合わせられ得る。ワクチンは、免疫応答を誘発するのに有効な病原体のタンパク質又はその断片であり得る。本開示の抗体は、病原体に対する抗体又はワクチンの免疫応答を増強する。本開示の抗体はまた、エクスビボで増殖させたＴ細胞又はナチュラルキラー細胞と投与することもできる。

【0155】

そのような併用療法には、ウイルスの様々な生活環ステージを標的とし、異なる作用機序を有する抗ウイルス剤が含まれ、ウイルス脱殻の阻害剤（例えば、アマンタジン及びリマンチジン）、逆転写酵素阻害剤（例えば、アシクロビル、ジドブジン、及びラミブジン）、インテグラーゼを標的とする薬剤、ウイルスＤＮＡへの転写因子の結合を遮断する薬剤、翻訳に影響を与える薬剤（例えば、アンチセンス分子）（例えば、ホミビルセン）、翻訳／リボザイム機能を調節する薬剤、プロテアーゼ阻害剤、ウイルス構築調節剤（例えば、リファンピシン）、例えば、ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤などの抗レトロウイルス薬（例えば、アジドチミジン（ＡＺＴ）、ｄｄｌ、ｄｄＣ、３ＴＣ、ｄ４Ｔ）、非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（例えば、エファビレンツ、ネビラピン）、ヌクレオチド系逆転写酵素阻害剤、及びウイルス粒子の放出を防止する薬剤（例えば、ザナミビル及びオセルタミビル）が挙げられるが、これらに限定されない。特定のウイルス感染（例えば、ＨＩＶ）の治療及び／又は予防は、しばしば、抗ウイルス剤の群（「カクテル」）を伴う。

【0156】

本明細書に開示される抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれかと組み合わせて使用するために企図される他の抗ウイルス剤としては、アバカビル、アデホビル、アマンタジン、アンプレナビル、ａｍｐｌｉｇｅｎ、ａｒｂｉｄｏｌ、アタザナビル、ＡＴＲＩＰＬＡ（登録商標）、ｂｏｃｅｐｒｅｖｉｒｅｒｔｅｔ、シドホビル、コンビビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、ファムシクロビル、ホスアンプレナビル、ホスカルネット、ホスホネット、ガンシクロビル、イバシタビン、ｉｍｕｎｏｖｉｒ、イドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、種々インターフェロン（例えば、ペグインターフェロンα－２ａ）、ロピナビル、ロビリド、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ｎｅｘａｖｉｒ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、ラルテグラビル、リバビリン、リトナビル、ｐｙｒａｍｉｄｉｎｅ、サキナビル、スタブジン、テラプレビル、テノホビル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ＴＲＵＶＡＤＡ（登録商標）、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロック、ビダラビン、ｖｉｒａｍｉｄｉｎｅ、及びザルシタビンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0157】

本開示は、抗寄生虫剤と併用する本明細書に開示される抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれかの使用を企図する。そのような薬剤としては、チアベンダゾール、ピランテルパモ酸塩、メベンダゾール、プラジカンテル、ニクロサミド、ビチオノール、オキサムニキン、メトリホナート、イベルメクチン、アルベンダゾール、エフロルニチン、メラルソプロール、ペンタミジン、ベンズニダゾール、ニフルチモックス、及びニトロイミダゾールが挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、寄生障害の治療に有用性を見出すことができる他の薬剤を認識している。

【0158】

本開示の実施形態は、細菌障害の治療又は予防に有用な薬剤と併用する、本明細書に開示される抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれかの使用を企図する。抗菌剤は、作用機序、化学構造、及び活性スペクトルなどに基づいて、様々な方法で分類することができる。抗菌剤の例としては、細菌細胞壁を標的とするもの（例えば、セファロスポリン及びペニシリン）又は細胞膜を標的とするもの（例えば、ポリミキシン）、又は必須細菌酵素を妨害するもの（例えば、スルホンアミド、リファマイシン、及びキノリン）が挙げられる。タンパク質合成を標的とするほとんどの抗菌剤（例えば、テトラサイクリン及びマクロライド）は静菌性であるが、アミノグリコシドなどの薬剤は殺菌性である。抗菌剤を分類する別の手段は、それらの標的特異性に基づき、「狭域」薬剤は、特定のタイプの細菌を標的とする（例えば、連鎖球菌などのグラム陽性菌）、一方、「広域」薬剤は、より広範囲の細菌に対する活性を有する。当業者は、特定の細菌感染症における使用に適した抗菌剤の種類を認識している。

【0159】

本開示の実施形態は、真菌障害の治療又は予防に有用な薬剤と併用する、本明細書に開示される抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれかの使用を企図する。抗真菌剤としては、ポリエン（例えば、アンホテリシン、ナイスタチン、及びピマリシン）、アゾール（例えば、フルコナゾール、イトラコナゾール、及びケトコナゾール）、アリルアミン（例えば、ナフチフィン、及びテルビナフィン）及びモルホリン（例えば、アモロルフィン）、及び代謝拮抗薬（例えば、５－フルオロシトシン）が挙げられる。

【0160】

本開示は、上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体を包含する。

【0161】

Ｖ．他の用途
本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、臨床診断又は治療の文脈で、又は研究においてＴＩＧＩＴを検出するために使用できる。例えば、抗体は、対象が治療に適したがん又は感染性疾患に罹患していることの指標として、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞及びがん細胞上のＴＩＧＩＴの存在を検出するために使用され得る。がん又は感染性疾患に罹患している対象のＴ細胞、ナチュラルキラー細胞及び／又はがん細胞上のＴＩＧＩＴの発現はまた、がん又は感染性疾患が本開示の抗体による治療に適しているという指標を提供する。抗体はまた、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、及びがん細胞、並びに様々な刺激に対するそれらの応答を検出する際の実験室での研究のための研究用試薬としても販売できる。そのような使用において、抗体は、蛍光分子、スピン標識分子、酵素、又は放射性同位体を含むがこれらに限定されない１つ以上の検出可能なシグナルで標識することができ、ＴＩＧＩＴに対するアッセイを実施するための全ての必要な試薬と共にキットの形態で提供することができる。本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、例えば、アフィニティークロマトグラフィーによって、ＴＩＧＩＴを精製するためにも使用できる。

【0162】

ＶＩ．キット
ＴＩＧＩＴに対する抗体は、キットの構成要素として、併用療法で使用するために記載された第２の抗体又は薬剤のいずれかと組み合わせることができる。本明細書に開示される開示は、本明細書に開示される抗体のうちの１つ以上、並びに１つ以上の薬学的に許容される賦形剤又は担体（限定されないが、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、滅菌水、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、落花生油、ゴマ油、油／水エマルション又は水／油エマルションなどのエマルション、ミクロエマルション、ナノ担体、及び様々な種類の湿潤剤など）を含有する１つ以上のキットを提供する。アルコール、油、グリコール、防腐剤、香味剤、着色剤、懸濁剤などの添加剤も、担体、希釈剤、又は賦形剤と共に本開示のキットに含めることができる。一実施形態では、本明細書に開示される抗体組成物における使用に適切な薬学的に許容される担体は、無菌で、病原体を含まず、かつ／又は関連する感染及び他の過度の有害な副作用のリスクなしに対象に投与するのに安全である。キットにおいて、それぞれの薬剤は、組み合わせた後に投与するための説明書、又は別々の投与のための説明書と共に、別個のバイアルにおいて提供され得る。キットはまた、本明細書に開示される抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれかの適切な取り扱い及び保管のための書面による説明書を含むことができる。

【0163】

ＶＩＩ．実施形態
実施形態１．ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であって、（ａ）配列番号３６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号３９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、配列番号４０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号４２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号４５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号４８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号５１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｄ）配列番号５４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号５７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｅ）配列番号６０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｆ）配列番号６０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｇ）配列番号６９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号７０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号７１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｈ）配列番号７２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、又は、（ｉ）配列番号７４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、を含む、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0164】

実施形態２．（ａ）配列番号３６を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３７を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３８を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号３９に対する同一性を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４０を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４１を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号４２を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４３を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４４を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号４５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４６を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４７を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号４８を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４９を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５０を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号５１を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５２を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５３を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｄ）配列番号５４を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５５を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５６を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号５７を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５８を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号５９を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｅ）配列番号６０を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６１を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６２を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６４を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｆ）配列番号６０を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｇ）配列番号６９を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５５を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号７０を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号７１を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、（ｈ）配列番号７２を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７３を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、又は、（ｉ）配列番号７４を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７５を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６７を含むアミノ配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域；並びに、配列番号６３を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６８を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むアミノ配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域、を含む、実施形態１に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0165】

実施形態３．（ａ）配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｄ）配列番号７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｅ）配列番号９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｆ）配列番号１１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｇ）配列番号１３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｈ）配列番号１５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｉ）配列番号１７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｊ）配列番号７６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｋ）配列番号７８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、（ｌ）配列番号７６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、又は、（ｍ）配列番号７８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態１又は２に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0166】

実施形態４．抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片が、モノクローナル抗体である、実施形態１～３のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0167】

実施形態５．抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片が、キメラ、ヒト化、又はベニア化抗体である、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0168】

実施形態６．キメラ抗体が、ヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメインを含む、実施形態５に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0169】

実施形態７．抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片が、ヒト抗体である、実施形態１～３のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0170】

実施形態８．抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片が、ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５への結合を阻害し、任意選択的に、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片が、実施例１のように測定される、約０．１ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．１ｎＭ～約５ｎＭ、約０．２ｎＭ～約２ｎＭ、約０．２ｎＭ～約０．８ｎＭ、約０．４ｎＭ～約０．８ｎＭ、又は約０．６ｎＭ～約０．８ｎＭのＩＣ_５０で結合を阻害する、実施形態１～７のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0171】

実施形態９．抗体が、変異型ヒトＩｇＧ１、変異型ヒトＩｇＧ２、変異型ヒトＩｇＧ３、又は変異型ヒトＩｇＧ４から選択される変異型重鎖定常領域と、任意選択的に、ヒト軽鎖定常領域と、を更に含む、実施形態１～５又は７～８のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0172】

実施形態１０．変異型重鎖定常領域が、野生型重鎖定常領域と比較して、増強又は低減したエフェクター機能を有する、実施形態９に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0173】

実施形態１１．変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域が、配列番号９７、配列番号９９、又は配列番号１０１を含む、実施形態１０に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0174】

実施形態１２．抗体が、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域と、任意選択的に、ヒト軽鎖定常領域と、を更に含む、実施形態１～５又は７～８のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0175】

実施形態１３．野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域が、配列番号９４を含む、実施形態１２に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0176】

実施形態１４．ヒト軽鎖カッパ定常領域を含み、任意選択的に、ヒト軽鎖定常領域が配列番号９５を含む、実施形態１２又は１３に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0177】

実施形態１５．抗体が、重鎖及び軽鎖を有し、（ａ）重鎖は配列番号９２を含むアミノ酸配列を有し、軽鎖は配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する、又は（ｂ）重鎖は配列番号９６を含むアミノ酸配列を有し、軽鎖は配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する、又は（ｃ）重鎖は配列番号９８を含むアミノ酸配列を有し、軽鎖は配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する、又は（ｄ）重鎖は配列番号１００を含むアミノ酸配列を有し、軽鎖は配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する、実施形態１～５又は７～８のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0178】

実施形態１６．抗体又はその結合断片が、（ａ）表面プラズモン共鳴によって測定される、約０．０１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ、約０．１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ、約０．１×１０^－１１Ｍ～約１０×１０^－１１Ｍ、約１×１０^－１１Ｍ～約１００×１０^－１１Ｍ又は約１×１０^－１１Ｍ～約１０×１０^－１１Ｍの平衡結合定数（ＫＤ）を有する、（ｂ）実施例１のように測定される、約０．２ｎＭ～約２ｎＭ、約０．２ｎＭ～約０．８ｎＭ、約０．６ｎＭ～約０．８ｎＭ、又は約０．６ｎＭ～約０．８ｎＭの半数阻害濃度（ＩＣ５０）で、細胞表面ヒトＴＩＧＩＴへの可溶性ヒトＣＤ１５５リガンドの結合を遮断する、（ｃ）少なくともＴＩＧＩＴの次の残基、すなわち、（ｉ）配列番号８０のＤ７２、並びに配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、（ｉｉ）配列番号８０のＥ６０及びＤ７２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、（ｉｉｉ）配列番号８０のＤ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、（ｉｖ）配列番号８０のＥ６０、Ｄ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、若しくは（ｖ）配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２、を含む、エピトープに結合する、又は（ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）の任意の組み合わせである、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0179】

実施形態１７．抗体又はその抗原結合断片が、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体又はその抗原結合断片と、ＴＩＧＩＴへの結合について競合する、実施形態１６に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0180】

実施形態１８．過剰の抗体又はその抗原結合断片が、競合結合アッセイにおいて測定するとき、参照抗体と、ＴＩＧＩＴへの結合について少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％競合し、参照抗体は、配列番号９２を含むアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、実施形態１６又は１７に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0181】

実施形態１９．ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号９２を含むアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0182】

実施形態２０．ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５への結合を阻害する方法であって、ＴＩＧＩＴを、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含む、方法。

【0183】

実施形態２１．病原体に感染した対象を治療する方法であって、有効なレジメン又は治療有効量の実施形態１～２０のいずれか１つに記載の抗体を対象に投与することを含む、方法。

【0184】

実施形態２２．病原体が、ウイルス、細菌、真菌、又は原生動物である、実施形態２１に記載の方法。

【0185】

実施形態２３．病原体が、ＨＩＶ、ＳＩＶ、肝炎、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、ｃｏｒｎｏｖｉｒｕｓ、ＲＳウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、アルボウイルス脳炎ウイルス、クラミジア、リケッチア菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、ｔｒｅｐｔｏｃｃｉ、肺炎球菌、髄膜炎菌、ｃｏｎｏｃｏｃｃｉ、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ、桿菌、コレラ、破傷風、ボツリヌス、炭疽菌、ペスト、レプトスピラ、及びライム病菌である、実施形態２２に記載の方法。

【0186】

実施形態２４．対象が、抗体によって増強される病原体に対する免疫応答を誘導するワクチンで治療される、実施形態２１～２３のいずれか１つに記載の方法。

【0187】

実施形態２５．ワクチンが、病原体のタンパク質又はその断片を含む、実施形態２４に記載の方法。

【0188】

実施形態２６．対象に、病原体に対する第２の抗体が更に投与され、病原体に対する第２の抗体のエフェクター媒介性細胞傷害性が、抗体によって増強される、実施形態２１～２５のいずれか１つに記載の方法。

【0189】

実施形態２７．対象に、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤、抗菌剤、又は抗真菌剤のうちの１つ以上が更に投与される、実施形態２１～２６のいずれか１つに記載の方法。

【0190】

実施形態２８．がんの治療又は効果的な予防の方法であって、がんを有する又はがんのリスクがある対象に、有効なレジメン又は治療有効量の、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片のうちのいずれか１つを投与することを含む、方法。

【0191】

実施形態２９．がんが、血液悪性腫瘍、固形腫瘍、メルケル細胞がん、尿路上皮がん、頭頸部扁平上皮がん、Ｂ細胞リンパ腫、子宮がん、子宮頸がん、精巣がん、消化管がん、膀胱がん、骨がん、骨髄、皮膚がん、胆嚢がん、心臓がん、肺がん、唾液腺がん、副腎がん、甲状腺がん、神経節がん、中枢神経系（ＣＮＳ）及び末梢神経系（ＰＮＳ）のがん、並びに、造血系のがん、免疫系のがんである、実施形態２８に記載の方法。

【0192】

実施形態３０．対象に、抗体又はその抗原結合断片によって活性化される腫瘍浸潤Ｔ細胞が投与される、実施形態２８又は２９に記載の方法。

【0193】

実施形態３１．対象に、がんに対する免疫応答を誘導するワクチンが投与され、抗体又はその抗原結合断片によって増強される、実施形態２８～３０のいずれか１つに記載の方法。

【0194】

実施形態３２．ワクチンが、がん細胞の表面上に発現する抗原又はその断片を含む、実施形態３１に記載の方法。

【0195】

実施形態３３．対象に、がんに対する細胞傷害性が抗体又はその抗原結合断片によって増強されるナチュラルキラー細胞が投与される、実施形態２８～３２のいずれか１つに記載の方法。

【0196】

実施形態３４．対象に、がんの細胞の表面上に発現する抗原に対する第２の抗体が更に投与され、それによって、がんに対する第２の抗体のエフェクター媒介性細胞傷害性が、抗体又はその抗原結合断片によって増強される、実施形態２８～３３のいずれか１つに記載の方法。

【0197】

実施形態３５．対象に、免疫細胞の表面上に発現する抗原に対する第２の抗体が更に投与される、実施形態２８～３３のいずれか１つに記載の方法。

【0198】

実施形態３６．免疫細胞が、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞である、実施形態３５に記載の方法。

【0199】

実施形態３７．抗原が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１である、実施形態３５又は３６に記載の方法。

【0200】

実施形態３８．対象に、化学療法、放射線、細胞系療法、及び手術からなる群から選択される１つ以上の治療法が更に施される、実施形態２８～３７のいずれか１つに記載の方法。

【0201】

実施形態３９．対象に、１つ以上の免疫チェックポイント受容体又はリガンドの阻害剤が更に投与される、実施形態２８～３８のいずれか１つに記載の方法。

【0202】

実施形態４０．１つ以上の免疫チェックポイント受容体又はリガンドが、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＰＶＲＩＧ、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、Ａ_２ａＲ，Ａ_２ｂＲ、Ａ_２ａ／Ａ_２ｂＲ、アルギナーゼ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＩＤＯ、及びＴＤＯからなる群から選択される、実施形態３９に記載の方法。

【0203】

実施形態４１．阻害剤が、イピリムマブ、トレメリムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ランブロリズマブ、セミプリマブ、チスレリズマブ、ジムベレリマブ、デュルバルマブ、及びアテゾリズマブからなる群から選択される、実施形態３９に記載の方法。

【0204】

実施形態４２．実施形態１～１９のいずれか１つに記載の抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。

【0205】

実施形態４３．配列番号８０の次のアミノ酸残基、すなわち、Ｔ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つを含むヒトＴＩＧＩＴのエピトープに結合する、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0206】

実施形態４４．抗体又はその抗原結合断片が、少なくともＴＩＧＩＴの次の残基、すなわち、（ｉ）配列番号８０のＤ７２、並びに配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、（ｉｉ）配列番号８０のＥ６０及びＤ７２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つ、（ｉｉｉ）配列番号８０のＤ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、（ｉｖ）配列番号８０のＥ６０、Ｄ７２及びＫ８２、並びに任意選択的に配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、及びＳ８０のうちの少なくとも１つ、又は（ｖ）配列番号８０のＴ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２、を含む、エピトープに結合する、実施形態４３に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0207】

実施形態４５．抗体又はその抗原結合断片が、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の抗体又はその抗原結合断片と、ＴＩＧＩＴへの結合について競合する、実施形態４３又は４４に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0208】

実施形態４６．過剰の抗体又はその抗原結合断片が、競合結合アッセイにおいて測定するとき、参照抗体と、ＴＩＧＩＴへの結合について少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％競合し、参照抗体は、配列番号９２を含むアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号９３を含むアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、実施形態４３又は４４に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0209】

実施形態４７．抗体又はその抗原結合断片が、配列番号８０の次のアミノ酸残基、すなわち、Ｔ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｅ６０、Ｄ７２、Ｓ８０、及びＫ８２のうちの少なくとも１つを含むヒトＴＩＧＩＴのエピトープに結合する、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。

【0210】

本明細書の全体を通して与えられる全ての最大数値限定は、それよりも小さい全ての数値限定を、かかるより小さい数値限定があたかも本明細書に明確に記載されているかのように含むことが意図される。本明細書の全体を通して与えられる全ての最小数値限定は、それよりも高い全ての数値限定を、かかるより高い数値限定があたかも本明細書に明確に記載されているかのように含む。本明細書の全体を通して与えられる全ての数値範囲は、かかるより広い数値範囲内に含まれるより狭い全ての数値範囲を、かかるより狭い数値範囲があたかも全て本明細書に明確に記載されているかのように含む。

【0211】

上記又は下記に引用される全ての特許出願、ウェブサイト、他の刊行物、受託番号などは、個々の項目が参照によりそのように組み込まれることが具体的かつ個別に示された場合と同程度に、全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれる。配列の異なるバージョンが異なる時点で受託番号と関連付けられる場合、本出願の有効出願日での受託番号と関連付けられているバージョンを意味する。有効出願日とは、実際の出願日、又は該当する場合、受託番号を言及する優先権出願の出願日のいずれか早い方を意味する。同様に、刊行物、ウェブサイトなどの異なるバージョンが異なる時点で公開されている場合、特に明記しない限り、本出願の有効出願日において最も近く公開されたバージョンを意味する。本発明の任意の特徴、工程、要素、実施形態、又は態様は、特に明記しない限り、他の任意のものと組み合わせて使用することができる。

【0212】

本発明は、明確さ及び理解の目的のために説明及び例示としてある程度詳細に説明されているが、特定の変更及び修正が添付の特許請求の範囲内で実施され得ることは明らかであろう。

【実施例】

【0213】

以下の実施例は、ヒトＴＩＧＩＴに対する抗体の産生、特性評価、及びヒト化について考察し、本出願に記載の抗体が決定され得る結合特性による代表的な方法も提供する。

【0214】

実施例１．抗ＴＩＧＩＴ抗体の生成
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、免疫化マウスから得た。配列番号８３を有するＨｉｓタグ付きヒトＴＩＧＩＴタンパク質（ｈＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓ）及び配列番号８５を有するｃｙｎｏＴＩＧＩＴタンパク質（ｃＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓ）の細胞外ドメインを、ＨＥＫ２９３細胞内で一過性に発現させ、抗Ｈｉｓ親和性クロマトグラフィーによって精製した。ＢＡＬＢ／ｃマウスのＲＩＭＭＳ免疫化を、組換えｈＴＩＧＩＴ－ＨｉｓとｃＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓタンパク質の混合物を用いて行った。免疫原に対するＥＬＩＳＡアッセイによる最終追加免疫の前に、血漿力価を試験し、良好な力価を確認した。最終追加免疫後、脾臓、鼠径部、腕部、腋窩、及び頸部リンパ節と共に末梢血を採取した。採取した材料をＢ細胞精製にかけた後、初期スクリーニングのため融合させてハイブリドーマを生成した。

【0215】

融合１０日後のＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ハイブリドーマの一次スクリーニングを行った。３８４ウェルのＥＬＩＳＡプレートを１μｇ／ｍＬのｈＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓタンパク質でコーティングし、プレートをブロッキングした後、２０μＬのハイブリドーマ上清を添加し、ＴＩＧＩＴをコーティングしたプレートに結合させた。室温でインキュベートした後、プレートを洗浄し、ＴＩＧＩＴをコーティングしたプレートに結合した抗体を、ＨＲＰ共役ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体を使用して検出した。

【0216】

次いで、陽性ハイブリドーマ細胞を４８ウェルプレートで増殖させ、上清を回収して、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて抗体特異性を試験した。ＥＬＩＳＡプレートをｈＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓタンパク質、又はｃＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓタンパク質でコーティングし、免疫原タンパク質のＨｉｓタグを認識する抗体の選択を解除するため、ＣＤ４７－Ｈｉｓタンパク質（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＣＤ７－Ｈ５２２７）を対照カウンターアッセイとして使用した。次いで、ヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴ両方への陽性結合を示すが、ヒトタグ付き対照タンパク質には陰性である抗体を、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５結合の機能的遮断について試験した。

【0217】

ヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメインをマウスＦｃ配列に融合し、このｈＴＩＧＩＴ－ｍＦｃ（配列番号８７）タンパク質をＨＥＫ２９３細胞で発現させ、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーによって精製した。Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（カタログ番号９１７４－ＣＤ－０１Ｍ）のヒトＦｃ配列に融合した細胞外ドメインを含む組換えヒトＣＤ１５５（ｈＣＤ１５５－ｈＦｃ）を使用して、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ相互作用の遮断アッセイを確立した。抗体の機能的遮断活性を試験するために、０．５μｇ／ｍＬのｈＴＩＧＩＴ－ｍＦｃタンパク質を使用してＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、ブロッキング後、ハイブリドーマ上清を０．５μｇ／ｍＬのｈＣＤ１５５－ｈＦｃタンパク質と一緒に添加した。インキュベーション後、ＥＬＩＳＡプレートを洗浄し、結合したｈＣＤ１５５－ｈＦｃをＨＲＰ共役ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して検出した。ヒト及びカニクイザル－ＴＩＧＩＴの両方に結合することができ、抗体結合がＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ相互作用を遮断することができたクローンを同定した。

【0218】

これらのクローンを更に増殖させ、プロテインＧカラムを使用して抗体を精製した。これらの精製抗体を、細胞表面上に発現したヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴへの結合について、フローサイトメトリーによって試験した。完全長ヒトＴＩＧＩＴクローン２Ａ７を発現する安定なＣＨＯ－Ｋ１細胞株（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ｑ４９５Ａ１、配列番号８０）又は完全長ｃｙｎｏＴＩＧＩＴクローンＣ１０（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ａ０Ａ２Ｋ５ＵＷ９２、配列番号８４）が開発された。フローアッセイの場合、細胞を回収し、様々な濃度の抗体の存在下（又は非存在火）で１００μＬのＨＢＳＳ緩衝液中で４℃にて１時間インキュベートした。ＨＢＳＳで洗浄した後、細胞上の抗体結合を２μｇ／ｍＬのＡｌｅｘａ４８８標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ－１１００１）で４℃にて３０分間検出した。次いで、細胞を洗浄し、ＰＢＳ中に再懸濁し、Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴフローサイトメーター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ））を使用するフローサイトメトリーに供した。蛍光強度の幾何平均は、単一のホールセル集団について得られた。細胞表面上に発現したヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴの両方に結合することができる抗体を、ＣＨＯ細胞の表面上のヒトＴＩＧＩＴに結合する組換えヒトＣＤ１５５に対するそれらの阻止活性について更に試験した。ＣＨＯ－ｈＴＩＧＩＴ細胞（１０^５細胞）を、様々な濃度の抗体の存在下、室温で１時間、２．５μｇ／ｍＬのｈＣＤ１５５－Ｆｃタンパク質とインキュベートした。ＨＢＳＳ緩衝液で洗浄後、ｈＴＩＧＩＴ－ＣＨＯ細胞へのｈＣＤ１５５－Ｆｃ結合をＰｅｒＣＰ－ｅＦｌｕｏｒ ７１０共役抗ＣＤ１５５抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号１５５０－４２）で検出した。次いで、細胞を洗浄し、フローサイトメトリー分析に供した。表４は、ヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴに結合する抗体の半数有効濃度（ＥＣ_５０）（ｎ＝２）、並びにＴＩＧＩＴに結合するＣＤ１５５の阻害についてのＩＣ_５０を示す。

【表4】

【0219】

上位のハイブリドーマ細胞株を、ヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴの両方に対する結合親和性、並びにＴＩＧＩＴとのＣＤ１５５結合を遮断する能力に基づいて選択した。これらのクローンのハイブリドーマを増殖し、マウス抗ＴＩＧＩＴ抗体の重鎖及び軽鎖可変領域（それぞれＶＨ及びＶＬ）配列決定を、標準的な手順に従って行った。抗体２１Ｆ８、３０Ｍ１８、２４Ｆ８、５Ｊ２４、２１Ｂ９、２２Ｂ２２、２８Ｐ２４、２１Ｂ１６、及び２８Ｏ１２の成熟ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を、下線を付けたＣＤＲと共に図１Ａ～１Ｉに示す。ＣＤＲ配列の割り当て及びアミノ酸位置の番号付けは、Ｋａｂａｔ定義に従う。

【0220】

図１Ａ～図１Ｉに示される抗体のうち７つは、マウス可変ドメイン及びヒトＩｇＧ１／カッパ定常ドメインを有するマウスヒトキメラとして組換えで発現した。組換えタンパク質をＨＥＫ２９３細胞から発現させ、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーによって精製した。

【0221】

これらのキメラ抗ＴＩＧＩＴ抗体の細胞表面に過剰発現したヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴへの結合能は、前述のフローサイトメトリーアッセイを利用して確認された。キメラ抗ＴＩＧＩＴ抗体をｈＴＩＧＩＴ－ＣＨＯ又はｃＴＩＧＩＴ－ＣＨＯと共にインキュベートした後、Ａｌｅｘａ ４８８共役ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ－１１０１３）を使用して、結合抗体を検出した。ｈＴＩＧＩＴ－ＣＨＯ－Ｋ１細胞への組換えｈＣＤ１５５－ｈＦｃ結合を阻害する抗体機能活性もまた、前述のフローアッセイを使用して決定した。ヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴに結合する抗ＴＩＧＩＴキメラ抗体のＥＣ_５０、並びに、ｈＴＩＧＩＴ発現細胞へのｈＣＤ１５５結合の阻害についてのＩＣ_５０を決定し、表５に示した。

【表5】

【0222】

単離されたヒトＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋上で内因的に発現するＴＩＧＩＴへのキメラ抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合能を、フローサイトメトリーアッセイを使用して細胞を試験した。ヒトＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋Ｔ細胞を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞濃縮カクテル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ、カタログ番号１５０２２）又はヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞濃縮カクテル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ、カタログ番号１５０２２）をそれぞれ使用して、ヒト全血から単離した。表６に示されるように、同等のＥＣ_５０が、ヒトＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋細胞に結合する組換え抗ＴＩＧＩＴ抗体について観察され、ＣＨＯ－Ｋ１細胞上の過剰発現した完全長ヒトＴＩＧＩＴへの結合親和性と同様であった。しかしながら、クローン間で最大結合活性（ＭＦＩｍａｘ）の違いが観察された。

【表6】

【0223】

カニクイザル全血に対する組換え抗ＴＩＧＩＴキメラ抗体の結合について試験し、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋細胞上の内因性ｃｙｎｏＴＩＧＩＴタンパク質に対する抗体の結合能を確認した。カニクイザル全血を、２０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、及び０．２μｇ／ｍＬで組換え抗ＴＩＧＩＴキメラ抗体と共にインキュベートした。４℃で３０分間インキュベートした後、ＲＢＣ溶解を室温で１５分間行った。次いで、細胞を洗浄し、遠心分離によって回収し、Ｆｃブロック（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６４２１９）及びＬｉｖｅ－ｄｅａｄ ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｌ３４９５７）を含有するカクテルでブロッキングした。細胞が結合した抗ＴＩＧＩＴ抗体を、４℃で３０分間、抗ヒトＩｇＧＦｃ－ビオチン（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号９０４０－０８）で検出し、続いて、細胞を洗浄して遠心分離し、ＰＥ－共役ストレプトアビジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１２－４３１７－８７）と共に４℃にて３０分間、２回目のインキュベーションを行った。野生型ヒトＩｇＧ１抗体をアイソタイプ対照として使用し、直接共役した抗ヒトＴＩＧＩＴ－ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号１２－９５００－４２）を陽性対照として使用した。図２は、Ｃｈ２４Ｆ８、Ｃｈ２８Ｏ１２、及びＣｈ２２Ｂ２２が、カニクイザルＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋細胞上に発現したｃｙｎｏＴＩＧＩＴに結合できたことを示す。蛍光強度の幾何平均（ｇＭＦＩ）を得て、データをアイソタイプ対照に対するｇＭＦＩの倍率として示した。

【0224】

これらの組換え抗ＴＩＧＩＴ抗体のヒトＴＩＧＩＴへの動的結合は、Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６機器を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定した。組換え抗体を、プロテインＡでコーティングされたＧＬＣセンサチップを使用して固定化し、可溶性Ｈｉｓタグ付きＴＩＧＩＴ（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＴＩＴ－Ｈ５２Ｈ３）を分析物として使用した。結合定数を２５℃で決定した。表７に示されるように、試験した７つの組換え抗ＴＩＧＩＴキメラ抗体の中で、クローン２４Ｆ８は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）によって測定される最も高い結合親和性を有する。

【表7】

【0225】

実施例２．ヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体の生成
マウス抗体２４Ｆ８を、ＣＤＲグラフト化技術を使用するヒト化のために選択した（Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８６：１００２９－１００３３，１９８９）。２４Ｆ８のマウス可変重鎖（ＶＨ）配列及び可変軽鎖（ＶＬ）配列を使用して、各鎖について最も近い２つのヒト生殖系列を特定した。ＶＨについては、７０％の配列同一性を有するＩＧＨＶ４－３４^＊０９、及び６６％の同一性を有するＩＧＨＶ４－４^＊０２が見出された。ＶＬについては、７０％の配列同一性を有するＩＧＫＶ１－３３^＊０１、及び６７％の同一性を有するＩＧＫＶ３－１５^＊０１が見出された（表８）。

【表8】

【0226】

ＶＨ鎖中の３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣ－ＣＤＲ）配列及びＶＬ鎖中の３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣ－ＣＤＲ）配列の位置決めは、Ｋａｂａｔに従って定義された。

【0227】

ＶＨ及びＶＬフレームワークのヒトアクセプターを、ＧｅｎＢａｎｋデータベース内で検索し（Ｂｅｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００５，３３，Ｄ３４－Ｄ３８）、ヒトｃＤＮＡをコードするＶＨ及びＶＬ配列を特定した（表８参照）。

【0228】

各ヒトアクセプターのＣＤＲグラフト化を、ＶＨアクセプターについてＨＣ－ＣＤＲ１（配列番号４８）、ＨＣ－ＣＤＲ２（配列番号４９）、及びＨＣ－ＣＤＲ３（配列番号５０）、並びにＶＬアクセプターについてＬＣ－ＣＤＲ１（配列番号５１）、ＬＣ－ＣＤＲ２（配列番号５２）、及びＬＣ－ＣＤＲ３（配列番号５３）を使用して行った。得られた配列を、任意の潜在的な翻訳後修飾の導入又は化学分解部位について調べ、そのような可能性がないことを確認した。マウス逆突然変異に対する推定残基も、抗体相同性グラフィックモデリングを使用して同定した。

【0229】

２つのＶＨ及び２つのＶＬをグラフト化したヒトアクセプターについて、ヒトＩｇＧ１／カッパ定常ドメインを有するＦａｂ断片としてオリゴヌクレオチドを設計して合成し、タンパク質精製を必要としない、発現レベル及び生物物理学的特性の高スループットスクリーニングのためベクター系に挿入した（Ｚｈａｎｇ ＆ Ｈｉｒａｍａ、米国特許出願公開第２０１２／０１７８１１０号）。ＶＨ１（配列番号７６）又はＶＨ２（配列番号７８）の、ＶＬ１（配列番号７９）又はＶＬ２（配列番号７７）との４つ全ての組み合わせ（図１Ｊ～図１Ｍ）を、マウス２４Ｆ８ＶＨ（配列番号５）及び２４Ｆ８ＶＬ（配列番号６）ドメイン及びヒトＩｇＧ１／カッパＦａｂ定常ドメインから構築されたキメラＦａｂ ｍＶＨ＋ｍＶＬと共にスクリーニングした。ＳＡＳＡ（血清アルブミンに対する単一ドメイン抗体）融合タンパク質として分泌されたＦａｂの上清を、ＢＳＡコーティングされたチップ及び分析物としての可溶性Ｈｉｓタグ付きＴＩＧＩＴを使用するＦａｂ捕捉によって、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって分析した。ヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴの動的結合データを、５つのＦａｂ断片について表９に示す。

【表9】

【0230】

これらのデータは、ＶＨ１＋ＶＬ２とＶＨ２＋ＶＬ２のヒト化可変ドメインの組み合わせが、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）によって測定されるとき、ヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴの両方に最も強く結合し、またマウス／ヒトキメラＦａｂの結合親和性の大部分を保持したことを示した。この結果として、マウスフレームワーク残基の逆突然変異を含む構築物は検討しなかった。これらの２つのＶＨ／ＶＬの組み合わせ（図１Ｊ及び図１Ｋ）は、それぞれ完全長のＨｕ２４Ｆ８．１及びＨｕ２４Ｆ８．２ ＩｇＧ１／カッパ抗体の構築物設計に選択した。

【0231】

Ｈｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡ及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡは、配列番号９７のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を有するＩｇＧ１／カッパ抗体である。「ＩｇＧ１．ＡＡ」の表記は、重鎖定常領域が位置２３４及び２３５（Ｅｕ番号付け）においてロイシンからアラニンへのアミノ酸置換を有することを示す。対照的に、「ＩｇＧ１」の表記は、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を示す。例えば、Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１は、配列番号９４のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を有するＩｇＧ１／カッパ抗体である。これらの実施例で使用されたＨｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡ、Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡ及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１抗体は、ＨＥＫ２９３又はＣＨＯ細胞中で組換えにより産生され、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーによって精製された。

【0232】

精製された完全長抗体であるＨｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡ（ＶＨ１＋ＶＬ２を含む）及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡ（ＶＨ２＋ＶＬ２を含む）は、２４Ｆ８マウスＶＨ＋ＶＬ及びヒトＩｇＧ１／カッパ定常ドメイン（Ｃｈ２４Ｆ８）の完全長キメラ抗体と共に、抗ヒトＩｇＧコーティングしたチップ及び可溶性ｈＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓ又はｃＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓを分析物として使用する抗体捕捉によって、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器を用いてＳＰＲによって分析した。ヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴの動的結合データを、表１０に示す。

【表10】

【0233】

両方の完全長ヒト化抗体の動的結合親和性データにより、マウス抗体の結合親和性が完全に保持されており、任意のマウスフレームワーク残基の逆突然変異を導入する必要がないことが確認された。

【0234】

実施例３．抗ＴＩＧＩＴ抗体のインビトロ結合研究
細胞表面上に発現したＴＩＧＩＴに対する抗体Ｈｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡ及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡの結合を、フローサイトメトリーによって調べた。細胞表面上にＴＩＧＩＴを発現する細胞を回収し、様々な濃度の抗体の存在下（又は非存在火）で１００μＬのＨＢＳＳ緩衝液中で４℃にて１時間インキュベートした。ＨＢＳＳで洗浄した後、細胞上の抗体結合を２μｇ／ｍＬのＡｌｅｘａ４８８標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ－１１０１３）で４℃にて３０分間検出した。次いで、細胞を洗浄し、ＰＢＳ中に再懸濁し、Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴフローサイトメーター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ））を使用するフローサイトメトリーに供した。蛍光強度の幾何平均は、単一のホールセル集団について得られ、一過性トランスフェクションの場合、トランスフェクトされていない細胞を用いて、陽性細胞の割合を得るために陽性結合細胞集団をゲーティングした。データは、標準的な４パラメータ曲線適合を使用するＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍによって計算した。

【0235】

ヒトＴＩＧＩＴ（クローン２Ａ７）及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴ（クローンＣ１０）を発現する安定したＣＨＯ－Ｋ１細胞株を使用して、Ｈｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡ及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡを、それぞれ、ヒトＴＩＧＩＴ及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴへの結合について上記のように試験した。Ｈｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡは、０．４４７±０．２２ｎＭ（ｎ＝８）のＥＣ_５０でヒトＴＩＧＩＴに（図３Ａ）、０．２３７±０．３３ｎＭ（ｎ＝６）のＥＣ_５０でｃｙｎｏＴＩＧＩＴに（図３Ｂ）結合した。Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡは、０．２９±０．１５ｎＭ（ｎ＝８）のＥＣ_５０でヒトＴＩＧＩＴに（図３Ａ）、０．３５±０．１６ｎＭ（ｎ＝６）のＥＣ_５０でｃｙｎｏＴＩＧＩＴに（図３Ｂ）結合した。これらの結果は、Ｈｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡ及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡの両方が、細胞表面上に発現するヒト及びｃｙｎｏＴＩＧＩＴに強く結合することを示している。

【0236】

Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡのマウスＴＩＧＩＴ（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ｑ８６１７６、配列番号８８）及びラットＴＩＧＩＴ（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ｄ３ＺＴＱ２、配列番号８９）への結合は、完全長マウス又はラットＴＩＧＩＴ発現構築物を一過性にトランスフェクトしたＣＨＯ－Ｋ１細胞を使用して調べた。マウスＴＩＧＩＴ発現は、対照抗体ＧＮＥ１０Ａ７（米国特許第９，４９９，５９６号、Ｃｌａｒｋら、２０１６）を用いて確認し、ラットＴＩＧＩＴ発現は、対照抗体ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）Ｇ１ＧＤ７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１２－９５０１－８２）を使用して確認した。最大３０ｎＭの抗体で試験するとき、Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡは、マウスＴＩＧＩＴ（図４Ａ）又はラットＴＩＧＩＴ（図４Ｂ）のいずれにも結合しない。

【0237】

Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡの単離されたヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞への結合を、フローサイトメトリーによって調べた。ＣＤ８^＋Ｔ細胞を、製造元の推奨に従い、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞濃縮カクテル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ、カタログ番号１５０２３）を使用して単離した。次いで、細胞を、２０Ｕ／ｍＬのｒｈＩＬ－２を添加された抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで７～９日間活性化した。活性化又は非活性化ＣＤ８^＋細胞を、ヒトＦｃブロック（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６４２１９）でブロッキングし、その後フローサイトメトリー抗体結合アッセイに供した。図５Ａ及び図５Ｂに示されるように、Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡは、非活性か細胞であるＣＤ８^＋細胞に０．０９８±０．０１３ｎＭ（ｎ＝２）のＥＣ_５０で、活性化ＣＤ８^＋細胞に０．１４±０．０３６ｎＭ（ｎ＝２）でそれぞれ結合する。結合のＥＣ_５０は、活性化及び非活性化ＣＤ８^＋細胞で類似しているが、最大結合シグナルにおいて有意差があり、これは、活性化時に細胞表面上のＣＤ８^＋におけるＴＩＧＩＴ発現の上昇と一致する。

【0238】

実施例４．抗ＴＩＧＩＴ抗体のインビトロ遮断研究
Ｈｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡ及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡの、ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５との相互作用を遮断する活性を、実施例１に記載されるように、ヒトＴＩＧＩＴ（ＣＨＯ－ｈＴＩＧＩＴ）及びヒトＣＤ１５５－Ｆｃ融合組換え可溶性タンパク質（ｈＣＤ１５５－Ｆｃ）を安定的に過剰発現するＣＨＯ細胞を使用してフローサイトメトリーにより分析した。図６に示されるように、Ｈｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡ及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡの両方が、用量依存的に、細胞表面上のｈＣＤ１５５－ＦｃとＣＨＯ－ｈＴＩＧＩＴとの間の相互作用を遮断した。ＴＩＧＩＴ－ＣＤ１５５相互作用の遮断のＩＣ_５０は、Ｈｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡについて０．６８ｎＭ、Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡについて０．６７ｎＭであった。

【0239】

実施例５．抗ＴＩＧＩＴ抗体のＪｕｒｋａｔ Ｄｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅによる特性評価
Ｈｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡ及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡの、ヒトＴＩＧＩＴ受容体遮断に対する機能的活性を、ＰｒｏｍｅｇａのＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｂｉｏａｓｓｅｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｊ２２０５）を使用してアッセイした。このアッセイでは、エフェクター細胞株は、ＴＩＧＩＴを過剰発現し、並びにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の下流で活性化されるルシフェラーゼレポーターを有するジャーカット細胞株である。別の安定した細胞株は、ＴＣＲに結合して活性化するＴ細胞活性化タンパク質に加えて、ヒトＣＤ１５５を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株である。このＣＤ１５５ ａＡＰＣ／ＣＨＯ－Ｋ１細胞株は、人工抗原提示細胞として機能する。これらの２つの細胞株を共培養すると、ＣＨＯ－Ｋ１細胞上のａＡＰＣによってＴＣＲ活性化がもたらされ、これによりレポーター構築物が活性化し、その経路活性化は、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用によって阻害されて、低いルシフェラーゼ信号をもたらす。抗ＴＩＧＩＴ抗体が存在すると、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用を阻害し、ＴＩＧＩＴ阻害効果が得られ、ルシフェラーゼ信号の増加をもたらす。アッセイは、製造業者のプロトコルに従って行ったが、簡潔には、エフェクタージャーカット細胞を、細胞培養インキュベーター内の９６ウェルプレートで一晩回収し、試験抗体を段階希釈してエフェクター細胞、続いて抗原提示ＣＤ１５５ ａＡＰＣ／ＣＨＯ－Ｋ１細胞に添加する。３７℃、５％ＣＯ_２での６時間の共培養後、ルシフェラーゼの基質であるＢｉｏ－Ｇｌｏ試薬を添加し、発光シグナルをＥｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で読み取った。図７に示されるように、Ｈｕ２４Ｆ８．１－ＩｇＧ１．ＡＡは、３．３５±０．２６ｎＭ（ｎ＝３）のＥＣ_５０で用量依存的にレポーター活性を増強でき、一方、Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡは２．７８±０．８３ｎＭ（ｎ＝３）のＥＣ_５０を示した。ヒトＩｇＧ１対照は、いかなる効果も示さなかった。

【0240】

実施例６．抗ＴＩＧＩＴ抗体の分子分析
ＴＩＧＩＴ及びＦａｂの発現、精製、結晶化
ヒトＴＩＧＩＴの成熟細胞外ドメイン（残基２２～１３０）の可溶性タンパク質を、ＨＥＫ２９３細胞において組換え発現させた。構築物（配列番号９０）は、（Ｇｌｙ）_４－Ａｌａ－（Ｇｌｙ）_４リンカーを有するＣ末端ヘキサヒスチジンタグを含み、アスパラギン残基３２及び１０１をグルタミンに変異させて、Ｎ－グリコシル化部位を除去した。清澄化した上清を、Ｎｉｃｋｅｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｅｘｃｅｌ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）カラムを使用した親和性クロマトグラフィー、続くＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ｐｇ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）カラムを使用したサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製した。８．４ｍｇ／ｍＬの濃度のＴＩＧＩＴタンパク質は、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．０、１００ｍＭ ＮａＣｌの最終緩衝剤配合物中にあり、液体窒素で急速凍結した。

【0241】

ヒトＩｇＧ１抗体Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１．ＡＡの可溶性Ｆａｂ断片（Ｆａｂ２４Ｆ８）を、リン酸緩衝生理食塩水中、３７℃にて３時間パパイン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２０３４１）消化し、続いて室温で一晩消化することによって調製した。切断されたＦｃ断片をＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）カラムを使用して除去し、通過画分をＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ｐｇ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）カラムを使用するＳＥＣによって更に精製した。２８ｍｇ／ｍＬの濃度のＦａｂ２４Ｆ８タンパク質は、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．０、１００ｍＭ ＮａＣｌの最終緩衝剤配合物中にあり、液体窒素で急速凍結した。

【0242】

ＴＩＧＩＴを、４℃で６０分間撹拌しながら１：１のモル比でＦａｂ２４Ｆ８タンパク質と混合して、Ｆａｂ－ＴＩＧＩＴ複合体を形成し、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ｐｇ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）カラムを使用する最終ＳＥＣ精製を行い、タンパク質溶出液の濃度を４４ｍｇ／ｍＬにした。精製した複合体を、約１５００の異なる条件の標準的スクリーニングを用いて、２０℃で結晶化試験に使用した。最初に得られた条件は、標準的な戦略、結晶化に顕著に影響を及ぼす体系的に変化するパラメータを用いて最適化した。これらの条件は、体系的に変化するｐＨ又は沈殿物濃度によって更に精密化した。構造解明に適したＦａｂ－ＴＩＧＩＴ複合体の結晶を、シッティングドロップ蒸気拡散法を使用して、０．１μＬのタンパク質溶液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．０中１５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍＭ ＮａＣｌ）を、０．１μＬのリザーバー溶液（２０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ３３５０、０．２０Ｍ ＬｉＳＯ４）と混合することによって得た。

【0243】

データ収集及び構造解析
結晶を急速凍結し、１００Ｋの温度で測定した。Ｘ線回折データを、極低温条件を使用して、Ｃａｎａｄｉａｎ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ（ＣＬＳ、Ｓａｓｋａｔｏｏｎ，Ｃａｎａｄａ）にてＦａｂ－ＴＩＧＩＴ複合体の結晶から収集した。結晶は、空間群Ｐ１に属する。データは、コンピュータソフトウェアプログラムである、ａｕｔｏＰＲＯＣ、ＸＤＳ、及びＡＩＭＬＥＳＳ（Ｔｈｅ ＣＣＰ４ Ｓｕｉｔｅ：Ｐｒｏｇｒａｍｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ”．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．Ｄ５０，７６０－７６３）を使用して処理した、表１１参照。

【表11】

^１ 括弧内の値は、ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｂｉｎの最高値を指す。

【0244】

構造を決定し分析するために必要な相情報は、分子置換によって得られた。以前に解明されたＦａｂ（Ｂｏｈｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ．２８：４９－６９，２０１２）及びＴＩＧＩＴ（Ｓｔｅｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１２）の構造を、探索モデルとして使用した。結晶学的非対称単位中に、Ｆａｂ－ＴＩＧＩＴ複合体の３つの分子がある。その後のモデル構築及び精密化は、それぞれプログラムＣＯＯＴ及びソフトウェアパッケージＣＣＰ４を用いる標準的プロトコルに従って実施した。最終モデルの正確さを交差検証するための尺度であるｆｒｅｅ Ｒ因子の計算には、測定された反射の約４．６％を精密化手順から除外した。ＴＬＳ精密化（ＣＣＰ４プログラムＲＥＦＭＡＣ５を使用）を実行することにより、より低いＲ因子とより高い品質の電子密度マップが得られた。自動的に生成された局所的なＮＣＳ制限を適用した。水モデルは、３．０σで輪郭形成されたＦｏ－Ｆｃマップのピークに水分子を置くことによってＣＯＯＴの「Ｆｉｎｄ ｗａｔｅｒｓ」アルゴリズムを用いて構築され、その後、ＲＥＦＭＡＣ５で精密化されて、ＣＯＯＴの検証ツールで全ての水をチェックした。疑わしい水のリストの基準は、Ｂ因子が８０Å^２超、２Ｆｏ－Ｆｃマップが１．２σ未満、最も近い接触までの距離が２．３Å未満又は３．５Å超とした。７３．５～２．２４Åの分解能範囲のデータは、精密化の最終サイクルにあり、Ｒ_{ｃｒｙｓｔ}及びＲ_ｆｒｅｅのＲ因子は、それぞれ２２．３及び２６．８％であった。最終モデルのラマチャンドランプロットは、全ての残基の８９．８％が最も好ましい領域に、８．８％が追加的に許容される領域に、０．７％が一般的に許容される領域にあることを示す。精密化の概要については、表１２を参照されたい。

【表12】

^１ 試験セットは、測定された反射の４．６％を含む
^２ 幾何学的目標値からの平均二乗偏差
^３ ＭＯＬＥＭＡＮによる計算
^４ ＰＲＯＣＨＥＣＫによる計算
ヒトＴＩＧＩＴに結合したＦａｂ２４Ｆ８の構造

【0245】

結晶学的非対称単位中に複合体の３つの独立した分子があり、その原子座標は、全ての非水素原子について、０．５３～１．１３Åの平均二乗偏差で互いに対で重ね合わされる。最終モデルは、Ｆａｂ重鎖の残基Ｇｌｎ１～Ｓｅｒ２２３、Ｆａｂ軽鎖のＧｌｕ１～Ｃｙｓ２１４、及びＴＩＧＩＴのＭｅｔ２２～Ｓｅｒ１２９を含む。いくつかの短いループ領域は、電子密度によって完全には定義されず、最終モデルには含まれない。

【0246】

Ｆａｂ重鎖のＨＣ－ＣＤＲ２ ＆ ＨＣ－ＣＤＲ３及び軽鎖の３つ全てのＬＣ－ＣＤＲは、ＴＩＧＩＴの大きなβシート構造、すなわち、配列番号８０のポリペプチド鎖^５５ＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ^８２及び^１０９ＩＹＨ^１１１から構成される、βストランドＣ、Ｃ’、Ｃ’’及びＦ、並びにループＣ’Ｃ’’及びＣ’’Ｄと広範な相互作用を形成する（図８及び９）。この結合相互作用は、ＦａｂフラグメントとＴＩＧＩＴ（ＰＩＳＡ、ＥＭＢＬ－ＥＢＩ）との間に、７９０±１０Å^２（ｎ＝３）の表面積を有するタンパク質－タンパク質界面をもたらす。この相互作用の分子的性質は、親水性と疎水性の両方である。ＴＩＧＩＴ残基のＴｈｒ５５、Ｇｌｎ５６、Ａｓｎ５８、Ｇｌｕ６０、Ａｓｐ７２、Ｓｅｒ８０、及びＬｙｓ８２（図９中で棒状で示される）は、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖ＣＤＲの残基と、直接又は水媒介水素結合相互作用（ドナー／アクセプター間の原子間距離３．１Å以下）を形成する。更に、ＴＩＧＩＴ残基のＧｌｕ６０は、Ｆａｂ軽鎖上のＡｒｇ３０と塩架橋を形成する（表１３）。ＴＩＧＩＴの疎水性残基Ｌｅｕ６５、Ｉｌｅ６８、Ｌｅｕ７３、Ｐｒｏ７９、及びＩｌｅ１０９（図９中で四角で示される）は、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の残基とファンデルワールス接触を行う。

【表13】

^＊水媒介水素結合

【0247】

図１０Ａは、Ｓｔｅｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１２で報告されるように、ヒトＴＩＧＩＴ（分子表面として表される）に結合したヒトＣＤ１５５（リボン状）のＮ末端Ｉｇ様ドメイン（配列番号９１）の複合体構造の概略図を示す。図１０Ｂは、ＴＩＧＩＴに結合したＦａｂ２４Ｆ８（各々が分子表面によって表される）の結晶構造複合体の概略図上にある、図１０Ａと同じ向きのＣＤ１５５の重ね合わせ図を示す。ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインに結合しているＨｕ２４Ｆ８．２又はマウス抗体２４Ｆ８に由来する他の抗体が、ＣＤ１５５のＴＩＧＩＴへの結合を遮断することが明確に実証され得る。

【0248】

実施例７．抗ＴＩＧＩＴ抗体は、単独又は抗ＰＤ－１抗体と併用の両方でＴ細胞応答を促進する
この実施例は、Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１が、単独で又はＡＢ１２２などの抗ＰＤ－１抗体との併用で、健康な対象又はがん対象のヒト一次Ｔ細胞応答を増強することを実証する。０．１、１、又は１０μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１で処理した健康及びがん対象のＰＢＭＣは、アイソタイプ対照と比較して、ＩＬ－２濃度を有意に増加させた。健康な対象由来のＰＢＭＣでは、１０μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１と１μｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体（ＡＢ１２２、ジムベレリマブ）の組み合わせで処理すると、ＡＢ１２２単独と比較して、ＩＬ－２レベルが有意に高かった。

【0249】

健康な対象由来のＰＢＭＣを、Ｌｅｕｋｏｒｅｄｕｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＲＳ）チャンバから単離し、がん対象由来のＰＢＭＣをＣＰＴチューブから単離し、０．１、１、又は１０μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２、１μｇ／ｍＬのＡＢ１２２、又は１０μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１と１μｇ／ｍＬのＡＢ１２２の組み合わせのいずれかと共に、１ｎｇ／ｍＬのＳＥＡの存在下、インビトロで培養した。４日後、上清中のＩＬ－２濃度をｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ｂｅａｄ ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）によって測定した。ＩｇＧ１アイソタイプを陰性対照として含めた。

【0250】

方法
健康な対象のＰＢＭＣをＬＲＳチャンバから単離し、一方、がん対象のＰＢＭＣをＣＰＴチューブから単離した。ＰＢＭＣを、１ｍＬ当たり２×１０^６細胞の濃度で再懸濁し、ウェルあたり１００μＬを９６ウェル丸底プレートに分注した。ウェルあたり５０μＬのＣＴＳ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ培地に再懸濁した４倍濃縮抗体を、適切なウェルに添加した：Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照を、０．１、１及び１０μｇ／ｍＬの最終濃度に添加し、ＡＢ１２２又はヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照を、１μｇ／ｍＬの最終濃度に添加した。アッセイプレートを３７℃、５％ＣＯ_２で１時間インキュベートした。ウェル当たりの５０μＬのＣＴＳ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ培地に再懸濁した４倍濃縮Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ Ａ（ＳＥＡ）を、１ｎｇ／ｍＬの最終濃度で適切なウェルに添加した。最終ウェル量が２００μＬのアッセイプレートを、３７℃、５％ＣＯ_２で４日間インキュベートし、その後の分泌されたＩＬ－２の定量化のため上清を回収した。上清を、Ｈｕｍａｎ Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｂｕｆｆｅｒ Ｋｉｔのアッセイ用希釈剤中で１：２に希釈した。アッセイの実行、データ取得、及び定量化は、製造業者の指示に従って、Ｈｕｍａｎ ＩＬ－２ Ｆｌｅｘ ＳｅｔをＨｕｍａｎ Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｂｕｆｆｅｒ Ｋｉｔと共に使用して実施した。

【0251】

結果
試験で使用した全てのドナー由来のＰＢＭＣは、ＣＤ１４＋単球集団へのＳＥＡ刺激及びＣＤ１５５（ＴＩＧＩＴのリガンド）に応答する、非Ｔ調節性細胞であるＣＤ４＋Ｔ細胞集団上で、ＴＩＧＩＴを発現することが確認された。１０例の健康な対象及び７例のがん対象から単離されたＰＢＭＣを、各々０．１、１、又は１０μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１単独、１μｇ／ｍＬのＡＢ１２２単独、又は１０μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１と１μｇ／ｍＬのＡＢ１２２との組み合わせと共に、１ｎｇ／ｍＬのＳＥＡの存在下で培養した。ＩＬ－２濃度を、４日後の上清中で測定した。Ｈｕ２４Ｆ８．２処理群のＩＬ－２レベルを、それぞれのＩｇＧ１アイソタイプ対照処理群のＩＬ－２レベルと比較し、一方、ＡＢ１２２及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１併用処理群のＩＬ－２レベルを、ＡＢ１２２単独処理群のＩＬ－２レベルと比較した（表１４及び表１５）。１例の健康な対象（＃５６６）のＩＬ－２レベルの例を、試験した全ての濃度のＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１について図１１中に示す。これらの２例の対象について、それぞれのＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較して、試験したＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１の全ての濃度においてＩＬ－２分泌が統計的に有意に増加した。健康な対象＃５６６についても、ＡＢ１２２処理単独と比較して、ＡＢ１２２及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１併用処理によるＩＬ－２分泌が統計的に有意に増加した。コホートレベルでは、健康な対象及びがん対象の両方のＰＢＭＣにおいて、ＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較して、１０μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１処理によりＩＬ－２分泌が統計的に有意に増加し（図１２Ａ）、健康な対象のＰＢＭＣにおいて、ＡＢ１２２の処理単独と比較して、ＡＢ１２２及びＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１併用処理によりＩＬ－２分泌が統計的に有意な増加した（図１２Ｂ）。要約すると、０．１μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１は、６／１０例の健康な対象のＰＢＭＣ試料において（１．１～３．４倍）、及び２／５例のがん対象のＰＢＭＣ試料（１．６～１．７倍）において、ＩＬ－２濃度を有意に増加させ（対アイソタイプ）、１μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１は、７／１０例の健康な対象のＰＢＭＣ試料において（１．４～４．０倍）、及び４／７例のがん対象のＰＢＭＣ試料において（１．６～２．０倍）、ＩＬ－２濃度を有意に増加させ（対アイソタイプ）、１０μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１は、７／１０例の健康な対象のＰＢＭＣ試料において（１．２～４．０倍）、及び４／７例のがん対象のＰＢＭＣ試料において（１．３～２．０倍）、ＩＬ－２濃度を有意に増加させ（対アイソタイプ）、１０μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１＋ＡＢ１２２は、６／１０例の健康な対象のＰＢＭＣ試料において（１．９～８．３倍）、ＩＬ－２濃度を増加させた（対ＡＢ１２２単独）。

【表14】

^ａ ｎ＝３実験回数
^ｂ Ｓｉｄａｋの多重比較検定を伴う一元配置分散分析（アイソタイプ対Ｈｕ２４Ｆ８．２、又はＡＢ１２２＋Ｈｕ２４Ｆ８．２対ＡＢ１２２）、ＮＳ、有意でない、ｎｔ、試験せず、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【表15】

^ａ ｎ＝３ 実験回数
^ｂ Ｓｉｄａｋの多重比較検定を伴う一元配置分散分析（アイソタイプ対Ｈｕ２４Ｆ８．２）、ＮＳ、有意でない、ｎｔ、試験せず、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊ｐ＜０．０００１

【0252】

これらのデータは、Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１が、単独で又はＡＢ１２２などの抗ＰＤ－１抗体との併用で、健康な対象又はがん対象のヒト一次Ｔ細胞応答を増強することを実証する。

【0253】

実施例８．インビトロ補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）アッセイによる抗体特性評価
ＣＤＣは、抗体のフラグメント結晶化可能（Ｆｃ）領域への補体成分１ｑ（Ｃ１ｑ）の結合によって、補体系が抗体依存性細胞殺滅に関与する免疫応答である。これにより、補体カスケード反応が開始され、抗体のＦａｂ領域によって認識される標的タンパク質を発現する標的細胞の細胞膜を損傷する膜侵襲複合体の形成をもたらす。この実施例では、Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１のＣＤＣ活性を、正常なヒト血清補体（ＮＨＳＣ、Ｑｕｉｄｅｌ）の存在下でＧＳ－Ｊ１／ＴＩＧＩＴ細胞（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ Ｍ００６９３）を使用して確認した。

【0254】

ＣＤＣによる細胞溶解を、ＡＴＰの定量に基づいて培養中の生存細胞の数を決定するＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって決定した。簡潔に説明すると、ＧＳ－Ｊ１／ＴＩＧＩＴ細胞（５０００細胞／ウェル）を、５％、１０％、又は２０％のＮＨＳＣの存在下において、１０μｇ／ｍＬのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ１（Ａｂｃａｍ）陰性対照で、３７℃、５％ＣＯ_２で４時間処理し（ＮＨＳＣ％最適化アッセイ）、又はＧＳ－Ｊ１／ＴＩＧＩＴ細胞（５０００細胞／ウェル）を、５％ＮＨＳＣの存在下において、連続希釈したＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１（１０μｇ／ｍＬ）又はヒトＩｇＧ１（１０μｇ／ｍＬ）で、３７℃、５％ＣＯ_２で４時間処理した（ＣＤＣ濃度応答試験）。陽性対照として、ラージ細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－８６、（５０００細胞／ウェル））を、５％ＮＨＳＣの存在下において、連続希釈したリツキシマブ（１０μｇ／ｍＬ）で、３７℃、５％ＣＯ_２で４時間処理した。試験抗体又は対照抗体とのインキュベーション後、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬を添加し、試料を室温で更に１０～３０分間インキュベートし、ＰＨＥＲＡｓｔａｒ ＦＳＸ（ＢＭＧ ＬａｂＴｅｃｈ）で発光を読み取った。ＣＤＣによる細胞溶解を、以下の式で計算した。細胞溶解％＝１００％×（１－（ＲＬＵ_{ｓａｍｐｌｅ}－ＲＬＵ_ＮＨＳＣ）／（ＲＬＵ_{ｃｅｌｌ＋ＮＨＳＣ}－ＲＬＵ_ＮＨＳＣ））。

【0255】

システム対照（ラージ細胞に対するリツキシマブ）の結果は、両方の試験において品質管理基準を満たした。しかしながら、試験試料（Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１）又は陰性対照（ヒトＩｇＧ１）の濃度依存的ＣＤＣ活性は、ＮＨＳＣ％最適化アッセイ又はＣＤＣ濃度応答試験のいずれにおいても観察されなかった。結果を、それぞれ表１６及び１７に要約する。ＧＳ－Ｊ１／ＴＩＧＩＴ細胞へのＨｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１結合のＦＡＣＳ分析を使用して、ＣＤＣが見られないことが、標的細胞に結合していないためではないことを確認した（データは示さず）。

【表16】

【表17】

【0256】

実施例９．ＳＰＲによる抗体特性評価
Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１は、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたチップ又はプロテインＡをコーティングしたチップを６つの異なる密度で使用する抗体捕捉によって、ＢｉｏＲａｄ ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６機器を用いてＳＰＲによって分析した。分析物は、最高濃度として３３ｎＭに希釈した可溶性ｈＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓ（３３．３μＭで調製したストック溶液）とし、Ｈｕ２４Ｆ８．２－ＩｇＧ１表面において３倍希釈系列で３回試験した。泳動緩衝液は、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０５％ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０及び０．２ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡを含有した。全てのデータを２５℃で収集した。６つの表面密度全てからのデータを、ローカルＲｍａｘを使用する１：１の相互作用モデルに全体的に適合させた。結果を、表１８に示す。

【表18】

注：括弧内の数字は、６つの異なる密度表面の全体的適合由来の最後に報告された桁における標準誤差を表す。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図1F】

【図1G】

【図1H】

【図1I】

【図1J】

【図1K】

【図1L】

【図1M】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【配列表】

2023528036000001.app

【国際調査報告】