特表 2023-528087 ミトコンドリア機能不全、癌、及び線維症の治療に使用されるＵＳＰ３０阻害剤としての１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-03

(54)【発明の名称】ミトコンドリア機能不全、癌、及び線維症の治療に使用されるＵＳＰ３０阻害剤としての１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20230626BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20230626BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20230626BHJP

【ＦＩ】

C07D487/04 137

A61K31/4439

A61P35/00

A61P43/00 105

A61P43/00

A61P25/00

A61P3/00

A61P9/00

A61P21/00

A61P25/28

A61P25/16

A61P25/14

A61P1/16

A61P13/12

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022575399

(86)(22)【出願日】2021-06-07

(85)【翻訳文提出日】2022-12-07

(86)【国際出願番号】 EP2021065112

(87)【国際公開番号】W WO2021249909

(87)【国際公開日】2021-12-16

(31)【優先権主張番号】2008598.1

(32)【優先日】2020-06-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】2016758.1

(32)【優先日】2020-10-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】517299582

【氏名又は名称】ミッション セラピューティクス リミティド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(72)【発明者】

【氏名】クリストファー アンドリュー ラックハースト

(72)【発明者】

【氏名】マーク イアン ケンプ

(72)【発明者】

【氏名】ポール ウィリアム トンプソン

(72)【発明者】

【氏名】マーティン リー ストックリー

【テーマコード（参考）】

4C050

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C050AA01

4C050BB04

4C050CC04

4C050EE02

4C050FF02

4C050GG01

4C050HH04

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB03

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA15

4C086ZA16

4C086ZA22

4C086ZA36

4C086ZA75

4C086ZA81

4C086ZA94

4C086ZB21

4C086ZB26

4C086ZC21

4C086ZC51

(57)【要約】

本発明は、ミトコンドリア機能不全に関係する健康状態、癌、及び線維症を含む様々な治療分野に有用な脱ユビキチン化酵素ＵＳＰ３０の阻害剤としての活性を有する以下のヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリルに関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【化1】

【請求項2】

以下の式（ＩＡ）を有する請求項１に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【化2】

【請求項3】

以下の式（ＩＢ）を有する請求項１に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【化3】

【請求項4】

（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリルである、請求項１に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【請求項5】

医薬品として使用される、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【請求項6】

ミトコンドリア機能不全に関係する健康状態、癌、又は線維症の治療又は予防に使用される、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【請求項7】

ミトコンドリア機能不全に関係する健康状態、癌、又は線維症の治療又は予防に使用される医薬品の製造における、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩の使用。

【請求項8】

必要とする患者に対して請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩の有効量を投与する工程を含む、ミトコンドリア機能不全に関係する健康状態、癌、又は線維症を治療又は予防するための方法。

【請求項9】

ミトコンドリア機能不全に関係する前記症状が、ＣＮＳ障害、神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、ハンチントン病、虚血、脳卒中、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、ミトコンドリア脳症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群、難聴を伴う母性遺伝糖尿病、レーバー遺伝性視神経症；神経障害・運動失調・網膜色素変性症・母性遺伝リー症候群、ダノン病、糖尿病、糖尿病性腎症、代謝障害、心不全、心筋梗塞につながる虚血性心疾患、精神疾患、精神分裂病、マルチプルスルファターゼ欠損症、ムコリピドーシスＩＩ型、ムコリピドーシスＩＩＩ型、ムコリピドーシスＩＶ型、ＧＭ１－ガングリオシドーシス、神経セロイドリポフスチン症、アルパーズ病、バース症候群、β酸化欠損、カルニチン－アシル－カルニチン欠乏症、カルニチン欠乏症、クレアチン欠乏症候群、コエンザイムＱ１０欠乏症、ミトコンドリア複合体Ｉ欠損症、ミトコンドリア複合体ＩＩ欠損症、ミトコンドリア複合体ＩＩＩ欠損症、ミトコンドリア複合体ＩＶ欠損症、ミトコンドリア複合体Ｖ欠損症、チトクロームＣオキシダーゼ（ＣＯＸ）欠損症、慢性進行性外眼筋麻痺症候群、カルニチンパルミチントランスフェラーゼ（ＣＰＴ）Ｉ欠損症、カルニチンパルミチントランスフェラーゼ（ＣＰＴ）ＩＩ欠損症、グルタル酸尿症ＩＩ型、カーンズ・セイヤー症候群、乳酸アシドーシス、長鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症、リー病又はリー症候群、リー症候群フランス系カナダ人変異型、致死性幼児心筋症；ルフト病；中鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症、ミオクロニーてんかん・赤色ぼろ線維症候群、ミトコンドリア細胞症、ミトコンドリア劣性運動失調症候群、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群、筋神経胃腸障害・脳症、ピアソン症候群、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ欠損症、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、ＰＯＬＧ遺伝子変異、中鎖／短鎖３－ヒドロキシアシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症、超長鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症、ペルオキシソーム病、マロン酸メチル血症、メバロン酸キナーゼ欠損症、加齢による認知機能と筋力の低下、並びにあらゆる神経変性及び神経精神障害に付随する認知障害から選択される、請求項６に記載の化合物、請求項７に記載の使用、又は請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、ハンチントン病、虚血、脳卒中、レビー小体型認知症、多系統委縮症、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、前頭側頭型認知症、並びにα－シヌクレイン、パーキン、ＰＩＮＫ１、ＧＢＡ、及びＬＲＲＫ２の中の変異に関連するパーキンソン病、並びにパーキン又はＰＩＮＫ１に変異、短縮化、又は欠失がある場合の常染色体劣性若年性パーキンソン病又は早期発症パーキンソン病（ＥＯＰＤ）から選択される、請求項９に記載の化合物、使用、又は方法。

【請求項11】

前記神経変性疾患がリー症候群若しくはリー病、Ｘ連鎖性リー病、リー症候群フランス系カナダ人変異型、及び／又はリー病に付随する症状である、請求項９に記載の化合物、使用、又は方法。

【請求項12】

前記癌が、乳房癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、腎臓癌、胃癌、結腸癌、精巣癌、頭頚部癌、膵臓癌、脳癌、黒色腫、骨癌、肝臓癌、軟組織癌、組織器官の癌、血液細胞の癌、ＣＭＬ、ＡＭＬ、マントル細胞リンパ腫、神経芽細胞腫、黒色腫、軟組織肉腫、脂肪肉腫、線維芽細胞肉腫、平滑筋肉腫、肝細胞癌、骨肉腫、食道癌、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、転移性癌、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、鼻咽頭癌、大腸癌、大腸癌、非小細胞肺癌、アポトーシス経路が調節不全になっているところの癌、及びＢＣＬ－２ファミリーのタンパク質に変異があるか又は同タンパク質が過剰発現若しくは過少発現しているところの癌から選択される、請求項６に記載の化合物、請求項７に記載の使用、又は請求項８に記載の方法。

【請求項13】

前記線維症が、外傷、炎症、組織修復、免疫反応、細胞過形成、及び細胞新形成の後に起こる細胞外マトリックス成分の蓄積に付随する線維症又は線維化障害から選択される、請求項６に記載の化合物、請求項７に記載の使用、又は請求項８に記載の方法。

【請求項14】

前記線維症が、主要臓器疾患、線維増殖性疾患、及び外傷に伴う瘢痕形成に付随する線維症又は線維化障害から選択される、請求項１３に記載の化合物、使用、又は方法。

【請求項15】

前記線維症が、間質性肺疾患、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、及び非アルコール性脂肪性肝炎、腎臓病、急性腎臓病、急性腎障害、慢性腎臓疾患、腎移植片機能遅延、心臓疾患又は血管疾患、眼病、全身性強皮病及び限局性強皮病、ケロイド、肥厚性瘢痕、アテローム性硬化症、再狭窄、デュピュイトラン拘縮、外科手術合併症、化学療法剤誘発性線維症、放射線誘発性線維症、事故による損傷及び火傷、後腹膜線維症、並びに腹膜線維症／腹膜瘢痕形成に付随する線維症又は線維化障害から選択される、請求項１４に記載の化合物、使用、又は方法。

【請求項16】

間質性肺疾患に付随する前記線維症が、サルコイドーシス、ケイ肺症、薬物反応、感染症、膠原血管病、リウマチ性関節炎、全身性硬化症、強皮病、肺線維症、特発性肺線維症、通常の間質性肺炎、間質性肺疾患、特発性線維化肺胞炎、閉塞性細気管支炎、及び気管支拡張症から選択される、請求項１５に記載の化合物、使用、又は方法。

【請求項17】

前記腎臓病が急性腎臓病、急性腎障害、又は慢性腎臓疾患である、請求項１５に記載の化合物、使用、又は方法。

【請求項18】

請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を１種類以上の薬学的に許容可能な賦形剤と共に含む医薬組成物。

【請求項19】

以下の式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、及び式（Ｖ）から選択される化合物であって、ＰＧが、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｐ－メトキシベンジルカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル、アセチル、ベンゾイル、ベンジル、カルバメート、ｐ－メトキシベンジル、３，４－ジメトキシベンジル、ｐ－メトキシフェニル、トシル、トリクロロエトキシカルボニル、４－ニトロベンゼンスルホニル、及び２－ニトロフェニルスルフェニルから選択されることが好ましい保護基である前記化合物又は前記化合物の塩。

【化4】

【化5】

【請求項20】

以下の式（ＩＩＡ）、式（ＩＩＩＡ）、式（ＩＶＡ）、及び式（ＶＡ）から選択される請求項１９に記載の化合物又は前記化合物の塩。

【化6】

【化7】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３０（ＵＳＰ３０）としても知られる脱ユビキチン化酵素ユビキチンＣ末端ヒドロラーゼ３０の阻害剤としての活性を有するヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、前記阻害剤の使用、前記阻害剤を調製するための方法、及び前記阻害剤を含有する組成物に関する。この阻害剤は、ミトコンドリア機能不全に関係する健康状態、癌、及び線維症を含む様々な治療分野に有用である。

【0002】

以下において引用される又は依拠される全ての文献は、参照により本明細書に明示的に援用される。

【背景技術】

【0003】

ユビキチンは、細胞内のタンパク質機能の制御に重要な７６アミノ酸から構成される小タンパク質である。ユビキチン化及び脱ユビキチン化は、ユビキチンが共有結合し又はユビキチンが脱ユビキチン化酵素（ＤＵＢ）により標的タンパク質から切断される酵素介在過程であり、そのうちヒト細胞には約１００種類のＤＵＢが存在し、それらのＤＵＢは配列相同性に基づいて複数のサブファミリーに分類される。ＵＳＰファミリーは、ユビキチン特異的ペプチダーゼのＤＵＢ活性にとって重要なＣｙｓ残基及びＨｉｓ残基を含有する共通のＣｙｓボックス及びＨｉｓボックスを特徴とする。ユビキチン化過程及び脱ユビキチン化過程は、細胞周期の進行、アポトーシス、細胞表面受容体の修飾、ＤＮＡ転写の制御、及びＤＮＡ修復の制御を含む多くの細胞機能の制御に関与するとされている。したがって、ユビキチンシステムは、炎症、ウイルス感染、代謝機能不全、ＣＮＳ障害、及び発癌を含む多くの疾患状態の発病に関係するとされている。

【0004】

ユビキチンはミトコンドリア動態の主要制御因子である。ミトコンドリアは、マイトフュージンなどの多数の重要な因子のユビキチン化を介した翻訳後調節により発生、融合、及び分裂が制御される活動的なオルガネラである。ヒトではＵＳＰ３０は、ミトコンドリア外膜中に見られる５１７アミノ酸のタンパク質である（Ｎａｋａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ， ２００８， Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９：１９０３－１１）。このタンパク質はミトコンドリア移行シグナルを担持する唯一の脱ユビキチン化酵素であり、多くのミトコンドリアタンパク質を脱ユビキチン化することが示されている。ＵＳＰ３０はパーキン介在性マイトファジーを妨害すること、及びパーキンが介在するマイトファジーの欠損がＵＳＰ３０活性の低下により救済されること（Ｂｉｎｇｏｌ ｅｔ ａｌ， ２０１５， Ｎａｔｕｒｅ ５１０：３７０－５； Ｇｅｒｓｃｈ ｅｔ ａｌ， ２０１７， Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２４（１１）： ９２０－９３０； Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ， ２０１５， Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １７（２）： １６０－１６９）が実証されている。ＵＳＰ３０の不活化は、おそらくＴＯＭタンパク質のユビキチン化を介してミトコンドリアタンパク質の移入を増加させることもできる（Ｊａｃｏｕｐｙ ｅｔ ａｌ， ２０１９， Ｓｃｉ Ｒｅｐ ９（１）： １１８２９）。ＵＳＰ３０の少ない割合がミトコンドリアとＥＲ小胞の融合を介して発生するペルオキシソームに局在しており、ＵＳＰ３０は、おそらくＰｅｘ２／ペキソファジー経路を妨害する（Ｒｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ， ２０１９， Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２１８（３）： ７９８－８０７）。Ｅ３ユビキチンリガーゼのＭａｒｃｈ５と脱ユビキチン化酵素のＵＳＰ３０は前記トランスロカーゼと結合し、ミトコンドリア移入を制御する。Ｍａｒｃｈ５はミトコンドリア移入を妨害し、基質を分解させる一方で、ＵＳＰ３０は基質を脱ユビキチン化してそれらの基質の移入を促進する（Ｐｈｕ ｅｔ ａｌ， ２０２０， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ ７７， １１０７－１１２３）。

【0005】

ミトコンドリア機能不全は、ミトコンドリア量（マイトファジー又はミトコンドリア発生）の減少、ミトコンドリア活性及び酸化的リン酸化の低下として定義可能であるが、活性酸素種（ＲＯＳ）生成の調節としても定義可能である。したがって、ミトコンドリア機能不全には非常に多くの老化プロセス及び病態に役割がある。

【0006】

例えば、パーキンソン病は世界中で１０００万人近くに発症しており（パーキンソン病財団）、黒質内のドーパミン作動性ニューロンの喪失を特徴とする。ＰＤの根底にある正確な機序は不明であるが、ミトコンドリアの機能不全がＰＤにおけるドーパミン作動性ニューロンの感受性の重要な決定因子として認識されることが多くなっており、ミトコンドリア機能不全は、毒物誘発パーキンソニズムにおける特徴であるのと同様に家族性と孤発性の両方のパーキンソン病の特徴でもある。パーキンは、早期発症ＰＤと関係があるとされている多数のタンパク質のうちの１つである。大半のＰＤの事例がα－シヌクレインの欠損と関連付けられているが、パーキンソン病の事例の１０％は特定の遺伝的欠損と関連付けられており、それらの欠損のうちの１つがユビキチンＥ３リガーゼであるパーキンの欠損である。パーキン及びタンパク質キナーゼであるＰＴＥＮ誘導推定キナーゼ１（ＰＩＮＫ１）は、損傷したミトコンドリアのミトコンドリア膜タンパク質をユビキチン化するために共同作用し、それによりマイトファジーを引き起こす。マイトファジーの調節不全は酸化ストレスを増加させ、酸化ストレスの増加はＰＤの特徴として説明されている。したがって、ＵＳＰ３０の阻害はＰＤ治療の有望な戦略であり得る。例えば、活性低下を引き起こすパーキン遺伝子変異を有するＰＤ患者は、ＵＳＰ３０の阻害によって治療処置され得る。

【0007】

ＵＳＰ３０の減耗によってマイトファジーによるミトコンドリアのクリアランスが増加し、パーキン誘導細胞死も増加することが報告されている。ＵＳＰ３０は、パーキンの過剰発現と無関係にＢＡＸ／ＢＡＫ依存性アポトーシスを制御することも示されている。ＵＳＰ３０の減耗は、癌細胞をＡＢＴ－７３７などのＢＨ－３模倣物に対して感受性にし、それにはパーキンを過剰発現させる必要はない。このように抗アポトーシス的な役割がＵＳＰ３０について実証されており、したがって、ＵＳＰ３０は抗癌治療の潜在的な標的である。

【0008】

ユビキチン・プロテアソーム系は、プロテアソーム阻害剤のボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標））が多発性骨髄腫の治療用に認可された後に癌治療の標的として関心を持たれている。ボルテゾミブを使用する長期間の治療は、ボルテゾミブに付随する毒性と薬物耐性によって制限される。しかしながら、プロテアソームの上流に位置するユビキチン・プロテアソーム経路の特定の態様、例えばＤＵＢを標的とする治療戦略は、忍容性がより良好であると予測される（Ｂｅｄｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ， ２０１１， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ １０：２９－４６）。

【0009】

腎線維症、肝線維症、及び肺線維症を含む線維化疾患は、罹病及び死亡の主要な原因であり、あらゆる組織及び器官系を侵し得る。線維症は組織又は器官に対する急性の又は慢性的なストレスの結果と考えられており、細胞外マトリックスの沈着、血管／尿細管／導管／気道の開通性の低下、及び最終的には臓器不全を引き起こす機能障害を特徴とする。多くの線維化症状が生活様式因子又は環境因子によって促進されるが、一部の線維化症状は、遺伝的誘因を介して始まる可能性があり、又は実際には特発性である（すなわち、原因が知られていない）と考えられている。ある特定の線維化疾患、例えば特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、非特異的なキナーゼ阻害剤（ニンテダニブ）又は作用機序がよく分かっていない薬剤（ピルフェニドン）を使用して治療され得る。臓器線維症、例えば腎線維症又は肝線維症の他の治療法はその臓器自体に対する圧力を改善する（例えば、肝硬変にはβ遮断薬、慢性腎臓疾患にはアンジオテンシン受容体遮断薬）。生活様式因子に対する注意、例えば血糖管理及び食事管理も疾患の経過と重篤度に影響し得る。

【0010】

ミトコンドリア機能不全は多くの線維化疾患に関係するとされており、機能不全の下流に位置する酸化ストレスがＡＴＰ産生の低下と並行して重要な病原性メディエーターである。前臨床モデルでは（パーキン又はＰＩＮＫ１のどちらかの遺伝子変異又はノックアウトを介した）マイトファジー経路の破壊が、酸化ストレス増加の証拠を示すと共に肺線維症及び腎線維症を悪化させる。

【0011】

Ｋｕｒｉｔａ ｅｔ ａｌ， ２０１７， Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １８：１１４は、線維化促進性筋線維芽細胞の蓄積がＩＰＦにおける線維化リモデリングにとって重要な過程であることを開示している。近年の発見はリソソーム分解機構の一部であるオートファジー／マイトファジーがＩＰＦの発病に関与していることを示していると言われており、マイトファジーがミトコンドリア活性酸素種（ＲＯＳ）介在性血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）活性化を介して筋線維芽細胞の分化に関係するとされている。Ｋｕｒｉｔａの結果はピルフェニドンがＰＡＲＫ２介在性マイトファジーを誘導し、且つ、マイトファジーが不充分である背景では肺線維症の発症の抑制もすることを示唆しており、このことは少なくとも部分的にはＩＰＦ治療の線維化抑制機構を説明している可能性がある。

【0012】

Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ， ２０１５， Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ． Ｄｅｃｅｍｂｅｒ； １０２： ２６４－２６９は、損傷したミトコンドリアをマイトファジーによって取り除くことによるアルコール誘発肝臓損傷予防及びアセトアミノフェン誘発肝臓損傷予防におけるＰＩＮＫ１／パーキン介在性オートファジーの役割を考察している。ＵＳＰ８の薬理学的安定化又はＵＳＰ１５及びＵＳＰ３０の不活化は、パーキン誘導マイトファジーの上方制御及びそれによる薬物誘発肝臓損傷の予防のための有望な治療標的である可能性があることが示唆されている。しかしながら、ＤＵＢは転写段階でも翻訳後段階でも調節を受け、このことがこれらの特定の酵素を標的とする薬剤の開発を困難にする可能性があることが特筆されており、加えて、リン酸化ユビキチンはＤＵＢに対抗することが示された。筆者らの結論は、ＰＩＮＫ１安定化又はキナーゼ活性の上方制御はＤＵＢの阻害よりも有効な標的であり得るというものである。

【0013】

Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ， ２０１５， Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ５， ２６１９－２６４２、及びＷｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ， ２０１５， Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ ３０９： Ｇ３２４－Ｇ３４０は、肝臓におけるミトコンドリア恒常性の制御機構、及びこれらの機構がアルコール誘発肝臓疾患を予防し得る方法について説明している。

【0014】

Ｌｕｃｉａｎｉ ｅｔ ａｌ， ２０２０， Ｎａｔ． Ｃｏｍｍｕｎ． １１， ９７０は、最終分化細胞内のミトコンドリアネットワークの脱制御がマロン酸メチル血症（ＭＭＡ）をはじめとする広範囲の障害の一因になることを報告している。ＭＭＡは最も一般的な遺伝性代謝障害のうちの１つであり、ミトコンドリアのメチルマロニルコエンザイムＡムターゼ（ＭＭＵＴ）の欠損に起因する。ＭＭＵＴ欠損は、ＰＩＮＫ１／パーキン介在性マイトファジーの異常によって悪化する代謝変調及びミトコンドリア変調を誘発し、上皮ストレス及び最終的には細胞死を誘発する機能不全ミトコンドリア蓄積の原因となる。最初のＭＭＵＴ欠損、ミトコンドリア異常、マイトファジー機能不全、及び上皮ストレスの間の関連が示唆されており、ＭＭＡの潜在的な治療展望が提示されている。

【0015】

Ｋｌｕｇｅ ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ２０１８， ２８ ２６５５－２６５９は、ＵＳＰ３０の選択的阻害剤がマイトファジーを促進することを報告している。

【0016】

一連のＮ－シアノ置換複素環式誘導体が、各々が参照により本明細書に明示的に援用されるＰＣＴ出願の国際公開第２０１６／０４６５３０号パンフレット（米国特許出願第１５／５１３１２５号明細書、米国特許出願第１５／８９４０２５号明細書、米国特許出願第１６／４４８０６６号明細書）、国際公開第２０１６／１５６８１６号パンフレット（米国特許出願第１５／５５８６３２号明細書、米国特許出願第１６／２９７９３７号明細書、米国特許出願第１６／４１９５５８号明細書、米国特許出願第１６／４１９７４７号明細書、米国特許出願第１６／７８８４４６号明細書）、国際公開第２０１７／００９６５０号パンフレット（米国特許出願第１５／７３８９００号明細書）、国際公開第２０１７／０９３７１８号パンフレット（米国特許出願第１５／７７６１４９号明細書）、国際公開第２０１７／１０３６１４号パンフレット（米国特許出願第１５／７８１６１５号明細書）、国際公開第２０１７／１４９３１３号パンフレット（米国特許出願第１６／０７８５１８号明細書）、国際公開第２０１７／１０９４８８号パンフレット（米国特許出願第１６／０６０２９９号明細書）、国際公開第２０１７／１４１０３６号パンフレット（米国特許出願第１６／０７０９３６号明細書）、国際公開第２０１７／１６３０７８号パンフレット（米国特許出願第１６／０８７５１５号明細書）、国際公開第２０１７／１５８３８１号パンフレット（米国特許出願第１６／０８０２２９号明細書）、国際公開第２０１７／１５８３８８号パンフレット（米国特許出願第１６／０８０５０６号明細書）、国際公開第２０１８／０６５７６８号パンフレット（米国特許出願第１６／３３６６８５号明細書）、国際公開第２０１８／０６０７４２号パンフレット（米国特許出願第１６／３３６２０２号明細書）、国際公開第２０１８／０６０６８９号パンフレット（米国特許出願第１６／３３４８３６号明細書）、国際公開第２０１８／０６０６９１号パンフレット（米国特許出願第１６／３３６３６３号明細書）、国際公開第２０１８／２２０３５５号パンフレット（米国特許出願第１６／６１５０４０号明細書）、国際公開第２０１８／２３４７５５号パンフレット（米国特許出願第１６／６１５７０９号明細書）、国際公開第２０２０／２１２３５０号パンフレット、国際公開第２０２０／２１２３５１号パンフレット、国際公開第２０２１／０４３８７０号パンフレット、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０２１／０５９０３２号明細書及び国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０２１／０６４１６６号明細書の中で脱ユビキチン化酵素阻害剤として開示されている。参照により本明細書に明示的に援用されるＰＣＴ出願国際公開第２０１９／１７１０４２号パンフレット（米国特許出願第１６／９７７０１９号明細書）は、線維化疾患の治療のためのＵＳＰ３０の阻害剤としてＮ－シアノピロリジンを使用することを開示している。

【0017】

Ｆａｌｇｕｅｙｒｅｔ ｅｔ ａｌ， ２００１， Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ． ４４， ９４－１０４、及びＰＣＴ出願国際公開第０１／７７０７３号パンフレットは、骨粗鬆症及び他の骨吸収関連症状の治療に利用される可能性があるカテプシンＫ及びカテプシンＬの阻害剤としてのシアノピロリジンについて言及している。ＰＣＴ出願国際公開第２０１５／１７９１９０号パンフレットは、潰瘍性大腸炎及びクローン病の治療に利用される可能性があるＮ－アシルエタノールアミン加水分解性酸アミダーゼの阻害剤について言及している。ＰＣＴ出願国際公開第２０１３／０３０２１８号パンフレットは、癌、神経変性疾患、炎症性疾患、及びウイルス感染症の治療に利用される可能性があるユビキチン特異的プロテアーゼの阻害剤、例えばＵＳＰ７の阻害剤としてのキナゾリン－４－オン化合物について言及している。ＰＣＴ出願の国際公開第２０１５／０１７５０２号パンフレット及び国際公開第２０１６／０１９２３７号パンフレットは、自己免疫疾患、炎症性疾患、及び癌などの疾患の治療に利用される可能性があるブルトン型チロシンキナーゼの阻害剤について言及している。ＰＣＴ出願の国際公開第２００９／０２６１９７号パンフレット、国際公開第２００９／１２９３６５号パンフレット、国際公開第２００９／１２９３７０号パンフレット、及び国際公開第２００９／１２９３７１号パンフレットは、ＣＯＰＤの治療に利用される可能性があるカテプシンＣの阻害剤としてのシアノピロリジンについて言及している。米国特許出願米国特許出願第２００８／０３００２６８号明細書は、チロシンキナーゼ受容体ＰＤＧＦＲの阻害剤としての多環芳香族化合物ついて言及している。ＰＣＴ出願の国際公開第２０１９／２２２４６８号パンフレット、国際公開第２０１９／０７１０７３号パンフレット、国際公開第２０２０／０３６９４０号パンフレット、及び国際公開第２０２０／０７２９６４号パンフレット、Ｒｕｓｉｌｏｗｉｃｚ－Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ， ２０２０， ｂｉｏＲｘｉｖ ２０２０．０４．１６．０４４２０６（２０２０年４月２０日）、及びＴｓｅｆｏｕ ｅｔ ａｌ， ｂｉｏＲｘｉｖ ２０２１．０２．０２．４２９３４４（２０２１年２月２日）は、ＵＳＰ３０阻害剤としてのシアナミド含有化合物ついて言及している。Ｙｕｅ ｅｔ ａｌ， ２０１４， Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２４， ４８２－４９６は、ミトコンドリア融合を誘導するＵＳＰ３０阻害剤としてのジテルペノイド誘導体１５－オキソスピラミラクトンついて言及している。

【0018】

ＰＣＴ出願国際公開第２０１５／１８３９８７号パンフレットは、癌、線維症、自己免疫疾患若しくは自己免疫症状、炎症性疾患若しくは炎症性症状、神経変性疾患若しくは神経変性症状、又は感染症の治療方法における脱ユビキチン化酵素阻害剤及びヒト血清アルブミンを含む医薬組成物について言及している。ＵＣＨＬ５／ＵＣＨ３７、ＵＳＰ４、ＵＳＰ９Ｘ、ＵＳＰ１１、及びＵＳＰ１５をはじめとする脱ユビキチン化酵素はＴＧＦ－βシグナル伝達経路の制御に関係するとされていると言われており、この経路の混乱によって神経変性及び線維化疾患、自己免疫機能不全、並びに癌が生じることが特筆されている。

【0019】

ＰＣＴ出願国際公開第２００６／０６７１６５号パンフレットは、インドリノン系キナーゼ阻害剤を使用して線維化疾患を治療するための方法について言及している。ＰＣＴ出願国際公開第２００７／１１９２１４号パンフレットは、エンドセリン受容体アンタゴニストを使用して早期肺線維症を治療するための方法について言及している。ＰＣＴ出願国際公開第２０１２／１７０２９０号パンフレットは、ＴＨＣ酸を使用して線維化疾患を治療するための方法について言及している。ＰＣＴ出願国際公開第２０１８／２１３１５０号パンフレットは、ミトコンドリア欠損に関係する症状の治療に利用される可能性があるスルホンアミド系ＵＳＰ３０阻害剤について言及している。Ｌａｒｓｏｎ－Ｃａｓｅｙ ｅｔ ａｌ， ２０１６， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４４， ５８２－５９６は、マクロファージＡｋｔ１キナーゼ介在性マイトファジー、アポトーシス耐性、及び肺線維症に関係する。Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ， ２０１５， Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅｓ １， ７１－７９は、腎臓の病態生理におけるマイトファジーの潜在的な役割を説明している。

【0020】

ミトコンドリア機能不全が関係する症状、癌、及び線維症、並びにそれらに関連する様々な症状及び状態の治療又は予防のための安全で代替的及び／又は改善された方法及び組成物が必要とされている。何か特別の理論又は機序に捉われることを望むものではないが、本発明の化合物はＵＳＰ３０酵素を阻害するように作用し、それによりパーキン誘導マイトファジーを上方制御すると考えられる。

【0021】

急性腎障害（ＡＫＩ）は、７日又はそれ以下の日数にわたる腎機能の急激な低下の発生として定義され、傷害の重症度は、国際的腎臓病ガイドライン機構（ＫＤＩＧＯ）のガイドラインに記載されるように血清クレアチニン（ＳＣｒ）の上昇及び尿量の減少に基づいてステージ分類される。ＡＫＩは毎年約１３３０万人に発生し、その８５％が発展途上国に暮らしており、毎年約１７０万件の死亡件数に寄与していると考えられている（Ｍｅｈｔａ ｅｔ ａｌ， ２０１５， Ｌａｎｃｅｔ ３８５（９９８７）： ２６１６－２６４３）。ＡＫＩはほぼ間違いなく恒久的な腎臓損傷（すなわち、慢性腎臓疾患、ＣＫＤ）を引き起こし、腎臓ではない臓器に損傷を与える可能性もある。ＡＫＩは、特に偶発性ＣＫＤ、進行性ＣＫＤ、末期腎不全、及び心血管系イベントを発症している患者の絶対数を考慮するときに重大な公衆衛生上の懸念である。ＡＫＩは、ＣＯＶＩＤ－１９のために入院している患者の間で広まっていることが分かっており、院内死亡率と強く関連し、ミトコンドリアの損傷及び機能不全が病態生理学的機序及び治療標的として報告されている（Ｋｅｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ， Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ （２０２０） ３５： １６５２－１６６２）。

【0022】

ＡＫＩ及びＣＫＤは、同じ疾患スペクトラム上の連続体として見られている（Ｃｈａｗｌａ ｅｔ ａｌ， ２０１７， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｐｈｒｏｌ １３（４）： ２４１－２５７）。冠動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ）を受けている患者には腎障害の高いリスクがある。ＡＫＩの治療及び／又は予防のための医薬品の開発には明らかに満たされていない医学的要求が存在する。

【0023】

腎臓は代謝要求が高い部位であり、高いマイトファジー速度がインビボで示されている（ＭｃＷｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ， ２０１８， Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ ２７（２）： ４３９－４４９ ｅ４３５）。溶質／イオンの交換のためにかなりのＡＴＰを必要とする細胞種である腎臓近位尿細管上皮細胞（ＲＰＴＥＣ）はミトコンドリアを多く含み、腎臓近位尿細管上皮細胞は腎臓内の急性腎障害（ＡＫＩ）の一次エフェクター細胞である。ＡＫＩ機序／ＣＫＤ機序の両方とも前臨床ＡＫＩモデル及び前臨床ＣＫＤモデルに由来する複数の系統の証拠から、並びに患者生検中の異常なミトコンドリア表現型を示すデータからもミトコンドリア機能不全と関係があるとされている（Ｅｍｍａ ｅｔ ａｌ， ２０１６， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｐｈｒｏｌ １２（５）： ２６７－２８０、Ｅｉｒｉｎ ｅｔ ａｌ， ２０１７， Ｈａｎｄｂ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２４０： ２２９－２５０）。さらに、主要ミトコンドリア病は、ＭＥＬＡＳ／ＭＩＤＤの患者では腎臓の症状、例えば巣状分節性糸球体硬化症として現れることが多く（Ｋａｗａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ， ２０１５， Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ ２６（５）： １０４０－１０５２）、コエンザイムＱ欠乏症の患者では主要腎尿細管病理として現れることも多い。ミトコンドリアＤＮＡ中の遺伝子変異が母性遺伝する尿細管間質障害の原因になる可能性がある（Ｃｏｎｎｏｒ ｅｔ ａｌ， ２０１７， ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔ １３（３）： ｅ１００６６２０）。

【0024】

腎臓損傷におけるミトコンドリアの品質管理に関し（Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ， ２０１８， Ａｕｔｏｐｈａｇｙ １４（５）： ８８０－８９７）、ＰＩＮＫ１ノックアウトマウスとＰＡＲＫ２ノックアウトマウスの両方で虚血性ＡＫＩの後に腎臓損傷が悪化することが示され、腎臓ではＰＩＮＫ１／ＰＡＲＫＩＮ介在性マイトファジーがＩＲＩ後に予防的役割を果たすことが示唆された。また、パーキン／ＰＩＮＫ１マイトファジーはシスプラチン誘発腎障害を予防する（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ， ２０１８， Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓ ９（１１）： １１１３）。マイトファジーの研究に利用可能なＣＫＤのモデルは限られており、線維症におけるミトコンドリアの品質管理についての裏付けとなる証拠がＣＯＰＤ及びＩＰＦなどの肺線維症状の研究に由来する。パーキンノックアウト動物はブレオマイシンに応答して肺線維症の悪化を示す（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ， ２０１６， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ， １９７：５０４－５１６）。同様に、パーキンノックアウト（ＫＯ）動物由来の気道上皮細胞はタバコの煙に対する線維化・老化応答の悪化を示す（Ａｒａｙａ ｅｔ ａｌ， ２０１９， Ａｕｔｏｐｈａｇｙ １５（３）： ５１０－５２６）。

【0025】

前記ヒト健康状態と合致する線維症の病理（例えば、コラーゲン沈着）をモデル化する能力を通して潜在的な新規治療薬を研究するために前臨床モデルが利用可能である。前臨床モデルは毒素介在性モデル（例えば、肺線維症及び皮膚線維症にはブレオマイシン）、外科的モデル（例えば、急性尿細管間質線維症には虚血再灌流傷害モデル及び片側尿管結紮モデル）、及び遺伝的モデル（例えば、糖尿病性腎症には糖尿病（ｄｂ／ｄｂ）マウス）であり得る。例えば、表示されたＩＰＦ治療について以前に提示された両方の例（ニンテダニブ及びピルフェニドン）がブレオマイシン肺線維症モデルにおいて有効性を示す。

【0026】

以上より、ＵＳＰ３０の阻害を適応する健康状態の治療又は予防のためのＵＳＰ３０の阻害剤である化合物が必要とされる。具体的には、この標的疾患に対する有効性を最大にするために適切な及び／又は改善された特性を有するＵＳＰ３０阻害剤が必要とされる。

【発明の概要】

【0027】

本発明は以下の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。

【0028】

【化1】

【0029】

本発明は、式（Ｉ）の前記化合物の使用、特にミトコンドリア機能不全が関係する症状の治療、癌の治療、及び線維症の治療における使用も対象とし、前記化合物の調製のための方法及び前記化合物を含む医薬組成物も対象とする。

【発明を実施するための形態】

【0030】

本発明は、前記標的疾患に対する有効性を最大にするために適切な及び／又は改善された特性を有するＵＳＰ３０阻害剤を対象とする。このような特性には効力、選択性、物理化学的特性、ＰＫ（薬物動態学的）プロファイルを含むＡＤＭＥ（吸収、分布、代謝、及び排出）特性、及び安全性プロファイル等が含まれる。

【0031】

患者に投与される効果的な／有効な投与量を下げるためには前記標的酵素に対する薬品分子の効力を適切なアッセイにおいて最大にすることが一般的に望ましい。本発明の化合物は、本明細書に記載されるインビトロ生化学的蛍光偏光（ＦＰ）アッセイを用いてＵＳＰ３０に対する親和性について検査され得る。

【0032】

ＵＳＰ３０は、細胞内に存在するエネルギー産生オルガネラであるミトコンドリアの外膜中に位置する膜貫通タンパク質である。したがって、ＵＳＰ３０は、生理学的設定、すなわちＵＳＰ３０阻害剤化合物が細胞に浸透することができる設定において標的と結合する高い能力を示し得る多くの成分のうちの１つであるので、インビトロで細胞活性を実証できることが有利である。ＵＳＰ３０の細胞ウェスタンブロット（ＷＢ）アッセイは、ＵＳＰ３０活性を監視するための不可逆的活性プローブを使用して細胞内のＵＳＰ３０に対する化合物の活性を検査することを目指している。この細胞ウェスタンブロットアッセイと同様に、（生体外）標的結合アセスメントが、化合物投与動物に由来する脳組織試料又は腎臓組織試料について実施され得る。

【0033】

標的への結合についての知識を下流の薬力学にまで拡大するためにＴＯＭ２０（ミトコンドリア外膜タンパク質）のユビキチン化が評価されることがある。

【0034】

一般に、薬品はその所望の標的酵素に対してできるだけ選択的であることが重要であり、それ以外の活性は副作用の可能性を生み出す。しかしながら、多くのＤＵＢの的確な生理学的役割はまだ充分に分かっておらず、あらゆる薬品は生理学的機能が未知の近縁機械論的標的に対する選択性を有するということは、これらのＤＵＢがどのような役割を果たし、果たさない可能性があるのかと無関係に、守るべき根拠がある医薬品化学の格言である。本発明の化合物についてスクリーニングされ得るＤＵＢ酵素の代表例は、ＵＣＨＬ１、ＵＣＨＬ３、ＵＣＨＬ５、ＹＯＤ１、ＳＥＮＰ２、ＳＥＮＰ６、ＴＲＡＢＩＤ、ＢＡＰ１、Ｃｅｚａｎｎｅ、ＭＩＮＤＹ２／ＦＡＭ６３Ｂ、ＯＴＵ１、ＯＴＵＤ３、ＯＴＵＤ５、ＯＴＵＤ６Ａ、ＯＴＵＤ６Ｂ、ＯＴＵＢ１／ＵＢＣＨ５Ｂ、ＯＴＵＢ２、ＣＹＬＤ、ＶＣＰＩＰ、ＡＭＳＨ－ＬＰ、ＪＯＳＤ１、ＪＯＳＤ２、ＵＳＰ１／ＵＡＦ１、ＵＳＰ２、ＵＳＰ４、ＵＳＰ５、ＵＳＰ６、ＵＳＰ７、ＵＳＰ８、ＵＳＰ９ｘ、ＵＳＰ１０、ＵＳＰ１１、ＵＳＰ１２／ＵＡＦ１、ＵＳＰ１３、ＵＳＰ１４、ＵＳＰ１５、ＵＳＰ１６、ＵＳＰ１９、ＵＳＰ２０、ＵＳＰ２１、ＵＳＰ２２、ＵＳＰ２４、ＵＳＰ２５、ＵＳＰ２８、ＵＳＰ３２、ＵＳＰ３４、ＵＳＰ３５、ＵＳＰ３６、ＵＳＰ４５、ＵＳＰ４６／ＵＡＦ１、ＵＳＰ４７、及びＵＳＰ４８である。本発明の化合物は、これらのＤＵＢ酵素のうちの１つ以上よりも良好な選択性をＵＳＰ３０について有していることが好ましい。

【0035】

他のＤＵＢ酵素に対する選択性より高い選択性とは別に、薬品には他の標的への低い親和性を有することが重要であり、潜在的な標的外効果の可能性を評価し、潜在的な標的外効果を最小限にするために薬理学的プロファイリングが一群の標的に対して実施される場合がある。本発明の化合物についてスクリーニングされ得る標的の例は業界標準であるＥｕｒｏｆｉｎｓ－Ｃｅｒｅｐ ＳａｆｅｔｙＳｃｒｅｅｎ４４パネルの標的であり、このパネルは選ばれた代表的なＧＰＣＲ受容体、輸送体、イオンチャネル、核内受容体、並びにキナーゼ及び非キナーゼ酵素として４４標的を含む。本発明の化合物はこのスクリーニングパネルの標的に対してわずかな親和性しか持たないことが好ましい。本発明の化合物についてスクリーニングされ得る標的のその他の例はＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＳｅｌｅｃｔＳｃｒｅｅｎキナーゼプロファイリングパネルのキナーゼであり、このパネルは選ばれた代表的なキナーゼ酵素として３９標的を含む。本発明の化合物はこのスクリーニングパネルの標的に対してわずかな親和性しか持たないことが好ましい。また、本発明の化合物についてスクリーニングされ得る特定の酵素分類の例はカテプシン（例えば、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＨ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カテプシンＬ２、カテプシンＳ、カテプシンＶ、及びカテプシンＺ）である。本発明の化合物は、これらの酵素のうちの１つ以上よりも良好な選択性をＵＳＰ３０について有していることが好ましい。

【0036】

経口投与に適切であるように好ましい薬物動態学的特性を有する化合物も必要とされる。経口投与される薬品は良好な生物学的利用率を有することが必要であり、この生物学的利用率とは、容易に胃腸（ＧＩ）管を通過し、ＧＩ管から体循環中に通過するときに徹底的な代謝の対象とならない能力のことである。薬品が体循環に入ると、代謝速度も身体内でのこの薬品の滞留時間の決定に重要である。

【0037】

したがって、容易にＧＩ管を通過することができ、身体内でゆっくりとしか代謝されない特性を有することが薬品分子にとって明らかに好ましい。Ｃａｃｏ－２アッセイは、所与の分子のＧＩ管を通過する能力を予測するための広く受け入れられているモデルである。薬品分子の代謝の大部分は肝臓で起こることが一般的であり、（動物又はヒトの）肝細胞の全細胞を使用するインビトロアッセイが、所与の分子の肝臓内での代謝されやすさを測定するための広く受け入れられている方法である。このようなアッセイは、肝細胞クリアランス計算値からインビボクリアランスを予測することを目指している。

【0038】

良好なＣａｃｏ－２透過を有し、且つ、肝細胞に対しては安定な化合物は、良好な経口生物学的利用率（ＧＩ管全体での良好な吸収及び化合物が肝臓に向かって通過するときの最小限の浸出）、及びこの薬品が有効であるために充分な身体内での長期滞留時間を有することが予測される。

【0039】

化合物の溶解性は、予期される薬理学的応答のために体循環中で所望の薬品濃度を達成する点で重要な因子である。低い水溶性は新しい化学成分の製剤開発に関して直面する問題であり、薬品は、吸収されるためには吸収される場所で溶液の形態で存在しなければならない。化合物の動態学的溶解度は、濁度測定溶解度アッセイを用いて測定されることがあり、このアッセイのデータは、用量依存的なヒト腸管吸収を予測するためにＣａｃｏ－２透過性データと併用される場合もある。

【0040】

化合物の曝露プロファイルを示す標準的なアッセイを用いて測定され得る他のパラメータには血漿中安定性値（半減期測定値）、血中ＡＵＣ値、Ｃ_ｍａｘ値、Ｃ_ｍｉｎ値、及びＴ_ｍａｘ値等が含まれる。

【0041】

アルツハイマー病、パーキンソン病、及び本明細書に記載される他の障害を含むＣＮＳ障害の治療は脳を標的とする薬品分子を必要とし、血液脳関門の適切な通過を必要とする。したがって、効果的な血液脳関門通過特性を有し、且つ、有効であるために脳内での適切な滞留時間を実現するＵＳＰ３０阻害剤が必要とされる。化合物が血液脳関門を通過し得る可能性は、ＭＤＲ１－ＭＤＣＫ細胞単層（ヒト排出輸送体Ｐ－糖タンパク質の過剰発現を引き起こすＭＤＲ－１を形質移入されたマディン・ダービーイヌ腎臓細胞）を利用するインビトロ透過アッセイにより判定され得る。また、インビボ動物モデルを使用して脳及び血漿において直接的に曝露を測定する場合もある。

【0042】

様々な標準的なインビトロ方法及びインビボ方法によって測定され得る好ましい安全性プロファイルを有する化合物も必要とされる。ミトコンドリア活性に応答したレザスリン（ａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標））のレゾフリンへの変化の蛍光定量検出により特定の細胞系列（例えば、ＨＣＴ１１６）における増殖抑制効果／細胞傷害効果をアッセイするために細胞毒性カウンタースクリーニングを用いることができる。

【0043】

毒性試験及び安全性試験も、有害効果の潜在的な標的器官を特定し、且つ、治療時の初期開始用量を設定するための治療指数を定義するために実施され得る。規制上の要件から、一般に、１種類はげっ歯類動物（ラット又はマウス）及び１種類は非げっ歯類動物（ウサギ、イヌ、非ヒト霊長類動物、又は他の適切な種）の少なくとも２種類の実験動物種において試験を行うことが必要とされる。

【0044】

細菌復帰突然変異アッセイ（エームズ試験）を用い、一般的にアミノ酸であるヒスチジンの生合成についての変異体であるサルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の菌株を使用することにより本発明の化合物の変異原性を評価することができる。

【0045】

小核アッセイを用い、小核の存在を評価することにより化合物に遺伝毒性があるか判定することができる。小核は、ＤＮＡ切断（染色体異常誘発物質）により作り出される染色体断片又は有糸分裂装置の混乱（異数性誘発物質）により作り出される染色体全体を含み得る。

【0046】

ｈＥＲＧプレディクターアッセイは、検査化合物のカリウムチャネルへの結合可能性及びエコー図上でのＱＴ延長の可能性についての価値ある情報を提供する。ｈＥＲＧ電流の抑制によりＱＴ間隔の長期化が引き起こされ、それにより致命的である可能性がある心室性頻脈（トルサード・ド・ポワント）が生じる。典型的には、アッセイデータは、自動パッチクランプアッセイプラットフォームから生成され得る。

【0047】

したがって、本発明は、前記標的疾患に対する有効性を最大にするために適切な及び／又は改善された特性を有するＵＳＰ３０阻害剤を対象とする。このような特性には効力、選択性、物理化学的特性、ＰＫ（薬物動態学的）プロファイルを含むＡＤＭＥ（吸収、分布、代謝、及び排出）特性、及び安全性プロファイル等が含まれる。

【0048】

本発明の最も好ましい化合物は、本明細書に記載される生化学的アッセイにおいて測定されるとＵＳＰ３０に対して非常に効力を有し、且つ、他のＤＵＢ及びカテプシンよりもＵＳＰ３０に対して有意に選択的である。本発明の前記化合物の顕著で予期せぬ特性のため、これらの化合物はＵＳＰ３０活性に関連のある疾患の治療及び／又は予防での使用に特に適切である。

【0049】

第１の態様によると、本発明は以下の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。

【0050】

【化2】

【0051】

第１の好ましい態様では本発明は以下の式（ＩＡ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。

【0052】

【化3】

【0053】

第２の好ましい態様では本発明は以下の式（ＩＢ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。

【0054】

【化4】

【0055】

第３の好ましい態様では本発明は以下の式（ＩＣ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。

【0056】

【化5】

【0057】

第４の好ましい態様では本発明は以下の式（ＩＤ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。

【0058】

【化6】

【0059】

式（Ｉ）の好ましい化合物は、
（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＳ，４Ｓ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＳ，４Ｒ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、及び
（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
又は薬学的に許容可能なこれらの塩から選択される。

【0060】

式（Ｉ）のより好ましい化合物は、
（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＳ，４Ｓ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、及び
（３ａＳ，４Ｒ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
又は薬学的に許容可能なこれらの塩から選択される。

【0061】

式（Ｉ）の最も好ましい化合物は（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル又は薬学的に許容可能なその塩である。

【0062】

実施例１は本発明の最も好ましい化合物である。

【0063】

式（Ｉ）のこの最も好ましい化合物は単一の右旋性立体異性体として存在し、以下に示される絶対立体配置を有する構造を有するものとして特定されている。

【0064】

【化7】

【0065】

（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル

【0066】

式（Ｉ）の前記化合物は３か所の不斉中心を有し、したがって、同化合物は８通りの立体化学的配置で存在し得る。以下の実施例に従うこの二環式環の合成により、ｃｉｓ融合環系が生み出され、４種類の可能な立体異性体が発生すると考えられる。式（Ｉ）のこの最も好ましい化合物の立体化学的配置は実施例１の立体化学的配置であり、それは前記生化学的アッセイにおいてＵＳＰ３０に対して最も活性が有る化合物である。

【0067】

以下に記載される実験、すなわち実施例１～実施例４によって４種類の立体異性体が調製された。実験条件下（ｃ＝０．０５ｇ／１００ｃｍ^３、ＭｅＯＨ）で測定されると実施例１と実施例３は右旋性であり、実施例２及び実施例４は左旋性である。２種類の異なる方法により調製されたとき、実施例１は［α］_Ｄ ^２５＝＋２０８°及び＋２０４°という旋光性測定値を生じた。このわずかな変化は実験の差異又は光学純度の差異によるものであり得る。実施例３は［α］_Ｄ ^２５＝＋１６６°という旋光性測定値を生じた。

【0068】

また、本発明は、記載されているように測定されると右旋性であり、且つ、おおよその旋光を＋２０４°～＋２０８°の領域に有する前記ｃｉｓ融合立体異性体に関する。この光学純度に依存して、この立体異性体は、実質的に純粋であるときに旋光を＋１９０°～＋２２０°の領域で生み出し得る。このような旋回は、本発明の化合物を同様に右旋性である他のｃｉｓ融合立体異性体から明確に区別する。

【0069】

また、本発明は（＋）－（３ａＲ^＊，４Ｒ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル（Ｉ）又は薬学的に許容可能なその塩に関する。

【0070】

また、本発明は実施例１の実験手順によって生み出される前記主要立体異性体に関する。

【0071】

薬学的に許容可能な式（Ｉ）の前記化合物の塩には前記化合物の酸付加塩及び塩基塩（二付加塩）が含まれる。

【0072】

適切な酸付加塩は、無毒の塩を形成する酸から形成される。酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、リン酸水素塩、イセチオン酸塩、Ｄ－乳酸塩及びＬ－乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸酸塩、２－ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロト酸塩、リシノール酸塩、リン酸塩、糖酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、Ｄ－酒石酸塩及びＬ－酒石酸塩、並びにトシル酸塩が例に挙げられる。

【0073】

適切な塩基塩、無毒の塩を形成する塩基から形成される。アルミニウム塩、アンモニウム塩、アルギニン塩、ベンザチン塩、カルシウム塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、ジオラミン塩、グリシン塩、リジン塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、オラミン塩、カリウム塩、ナトリウム塩、トロメタミン塩、及び亜鉛塩が例に挙げられる。

【0074】

適切な塩の概要についてはＳｔａｈｌ ａｎｄ Ｗｅｒｍｕｔｈ， Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ： Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ｕｓｅ， Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ， Ｗｅｉｎｈｅｉｍ， Ｇｅｒｍａｎｙ （２００２）を参照されたい。

【0075】

式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容可能な塩は、式（Ｉ）の前記化合物と所望の酸又は塩基の溶液を適宜混合することにより容易に調製され得る。この塩は、溶液から析出され、濾過により収集されても、又はこの溶媒を蒸発させることにより回収されてもよい。

【0076】

本発明に従う薬学的に許容可能な溶媒和化合物には水和物及び溶媒和化合物が挙げられ、結晶化溶媒が同位体、例えばＤ_２Ｏ、アセトン－ｄ_６、ＤＭＳＯ－ｄ_６で置換される場合もある。

【0077】

また、前述の溶媒和化合物と対照的に、薬品とホストが非化学量論的な量で存在している薬品・ホスト封入複合体であるクラスレートも本発明の範囲内である。このような複合体の概要についてはＨａｌｅｂｌｉａｎ， Ｊ． Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ， ６４ （８）， １２６９－１２８８（１９７５年８月）を参照されたい。

【0078】

以後、式（Ｉ）の化合物へのあらゆる言及は、それらの塩への言及、並びに式（Ｉ）の化合物の溶媒和化合物及びクラスレート及びそれらの塩への言及を含む。

【0079】

本発明は、これまでに定義されたような式（Ｉ）の前記化合物の全ての多形体を含む。

【0080】

また、式（Ｉ）の前記化合物のいわゆる「プロドラッグ」も本発明の範囲内である。したがって、それ自体には薬理学的活性がほとんど又は全くない式（Ｉ）の化合物のある特定の誘導体が体の中又は体の上に投与されて代謝されると前記所望の活性を有する式（Ｉ）の化合物になり得、このような誘導体が「プロドラッグ」と呼ばれる。

【0081】

本発明に従うプロドラッグは、Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄの「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５年）等の中に記載されるような「プロ部分」として当業者に知られるある特定の部分で式（Ｉ）の前記化合物の中に存在する適切な官能基を置き換えること等によって作製され得る。

【0082】

そして、式（Ｉ）のある特定の化合物は、それ自体が式（Ｉ）の他の化合物のプロドラッグとして作用する場合がある。

【0083】

窒素原子を含有する式（Ｉ）の化合物のある特定の誘導体も対応するＮ－オキシドを形成する場合があり、このような化合物も本発明の範囲内にある。

【0084】

本発明の範囲内には式（Ｉ）の前記化合物の全ての互変異性体が含まれる。

【0085】

個々のエナンチオマーの調製／単離のための従来技術にはキラル高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等を用いる適切な光学的に純粋な前駆体からのキラル合成又はラセミ体（若しくは塩ラセミ体若しくは誘導体ラセミ体）の分離が含まれる。あるいは、ラセミ体（又はラセミ前駆体）を適切な光学活性化合物、例えばアルコールと反応させてよく、式（Ｉ）の前記化合物が酸部分又は塩基部分を含有している場合には１－フェニルエチルアミン又は酒石酸などの塩基又は酸と反応させてよい。その結果生じるジアステレオ異性体の混合物は、クロマトグラフィー及び／又は分別晶析法によって分離される場合があり、当業者によく知られている方法によってそれらのジアステレオ異性体の一方又は両方が対応する純粋なエナンチオマーに転換される。本発明のキラル化合物（及びそれらのキラル前駆体）は、０体積％～５０体積％、典型的には２％～２０％のプロパン－２－オールと０体積％～５体積％のアルキルアミン、典型的には０．１％のジエチルアミンを含有する炭化水素、典型的にはヘプタン又はヘキサンから成る移動相を使用する非対称性樹脂上でのクロマトグラフィー、典型的にはＨＰＬＣを用いてエナンチオマー濃縮体として得られることがある。この溶離液の濃縮によって前記濃縮混合物が生じる。本発明は、式（Ｉ）の前記化合物のラセミ体及びラセミ混合物（集成体）を含む式（Ｉ）の前記化合物の全ての結晶体を含む。立体異性集成体は、当業者に知られている従来技術によって分離され得る。例えば、Ｅ． Ｌ． Ｅｌｉｅｌ及びＳ． Ｈ． Ｗｉｌｅｎの「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」（Ｗｉｌｅｙ、ニューヨーク、１９９４年）を参照されたい。

【0086】

本発明の式（Ｉ）の最も好ましい化合物は、式（Ｉ）の前記好ましい化合物の１種類以上の他の立体異性体との混合物として存在し得る。例えば、この化合物はそのエナンチオマーと共に存在する場合、すなわちラセミ体として存在する場合があり、又はジアステレオマーと共に存在する場合がある。

【0087】

本発明の式（Ｉ）の前記好ましい化合物は、単一の立体異性体として存在することが好ましい。式（Ｉ）の前記好ましい化合物は単一の立体異性体として単離され、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、例えば９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の立体異性体過剰率で存在する場合がある。この立体異性体過剰率はエナンチオマー過剰の尺度であり得、又はジアステレオマー比率の尺度であり得る。

【0088】

本発明は、式（Ｉ）の化合物の全ての薬学的に許容可能な同位体変種も含む。同位体変種は、少なくとも１個の原子が、同じ原子番号を有するが、自然界で通常見られる原子質量とは異なる原子質量を有する原子によって置き換えられている変種として定義される。

【0089】

本発明の前記化合物の中に含めるのに適切な同位体の例には水素の同位体、例えば^２Ｈ及び^３Ｈ等、炭素の同位体、例えば^１３Ｃ及び^１４Ｃ等、窒素の同位体、例えば^１５Ｎ等、酸素の同位体、例えば^１７Ｏ及び^１８Ｏ等、リンの同位体、例えば^３２Ｐ等、硫黄の同位体、例えば^３５Ｓ等、フッ素の同位体、例えば^１８Ｆ等、及び塩素の同位体、例えば^３６Ｃｌ等が挙げられる。

【0090】

重水素などの同位体を使用する本発明の前記化合物の置換によって代謝安定性の増強、例えばインビボ半減期の増加又は必要投与量の減少の結果生じる特定の治療上の利点が生じる場合があり、したがってそのような置換が幾つかの状況では好ましい場合がある。

【0091】

式（Ｉ）の前記化合物のある特定の同位体変種、例えば放射性同位体が組み入れられている変種は、薬品及び／又は基質の組織分布研究において有用である。放射性同位体であるトリチウム及び^１４Ｃは、これらの組み込みやすさと検出手段の便利さを考えるとこの目的にとって特に有用である。

【0092】

式（Ｉ）の前記化合物の同位体変種は、概して、当業者に知られている従来技術によって、又は適切な試薬の適切な同位体変種を使用する添付実施例及び調製例に記載される方法と類似の方法によって調製され得る。

【0093】

式（Ｉ）の前記化合物は脱ユビキチン化酵素ＵＳＰ３０の阻害剤である。

【0094】

その他の態様によると、本発明は、医薬品として使用される本明細書において定義される式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは前記互変異性体の薬学的に許容可能な塩を提供する。

【0095】

その他の態様によると、本発明は、ＵＳＰ３０の阻害によって哺乳類動物において有益な効果が生じることが知られている、又は有益な効果が生じることを示すことができる障害又は健康状態を治療又は予防する方法であって、治療有効量の本明細書において定義される式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは前記互変異性体の薬学的に許容可能な塩を前記哺乳類動物に投与することを含む前記方法を提供する。

【0096】

その他の態様によると、本発明は、ＵＳＰ３０の阻害によって有益な効果が生じることが知られている、又は有益な効果が生じることを示すことができる障害又は健康状態の治療又は予防のための医薬品の製造における本明細書において定義される式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは前記互変異性体の薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。医薬品の製造は、式（Ｉ）の前記化合物又はその塩の化学合成、又は前記化合物若しくは前記塩を含む組成物若しくは製剤の調剤、又は前記化合物を含むあらゆる医薬品の包装を特に含み得る。

【0097】

その他の態様によると、本発明は、患者におけるＵＳＰ３０の阻害方法であって、治療有効量の本明細書において定義される式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは前記互変異性体の薬学的に許容可能な塩を前記患者に投与することを含む前記方法を提供する。

【0098】

ＵＳＰ３０活性から利益を得る前記障害又は健康状態は、ミトコンドリア機能不全に関係する健康状態、癌、及び線維症から選択される。

【0099】

本発明の全ての態様の１つの好ましい実施形態ではＵＳＰ３０活性から利益を得る前記障害又は健康状態は、ミトコンドリア機能不全に関係する健康状態である。

【0100】

ミトコンドリア機能不全は、赤血球を除いて身体の全ての細胞に存在する特別な区画であるミトコンドリアの欠損の結果として生じる。ミトコンドリアに欠損があると細胞内で作られるエネルギーが少なくなり、細胞損傷、又は細胞死さえもそれに続くことになる。この過程が全身で反復する場合、この過程が起きている対象の生命が著しく損なわれる。ミトコンドリア病は、非常にエネルギーを必要とする脳、心臓、肝臓、骨格筋、腎臓、内分泌系、及び呼吸器系などの器官において現れることが最も多い。

【0101】

ミトコンドリア機能不全に関係する前記症状は、マイトファジー欠損に関係する症状、ミトコンドリアＤＮＡ中の遺伝子変異に関係する症状、ミトコンドリア酸化ストレスに関係する症状、ミトコンドリア膜電位の欠損に関係する症状、ミトコンドリア発生の欠損に関係する症状、ミトコンドリアの形状又は形態の欠損に関係する症状、及びリソソーム蓄積の欠損に関係する症状から選択され得る。

【0102】

具体的には、ミトコンドリア機能不全に関係する前記症状は、神経変性疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、ミトコンドリア脳症、乳酸アシドーシス及び脳卒中様発作（ＭＥＬＡＳ）症候群、難聴を伴う母性遺伝糖尿病（ＭＩＤＤ）、レーバー遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）、癌（例えば、乳房癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、腎臓癌、胃癌、結腸癌、精巣癌、頭頚部癌、膵臓癌、脳癌、黒色腫、骨癌、又は他の組織器官の癌、並びにリンパ腫及び白血病などの血液細胞の癌、多発性骨髄腫、転移性癌、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、鼻咽頭癌、大腸癌、並びに非小細胞肺癌を含む）、神経障害・運動失調・網膜色素変性症・母性遺伝リー症候群（ＮＡＲＰ－ＭＩＬＳ）、ダノン病、糖尿病、糖尿病性腎症、代謝障害、心不全、心筋梗塞につながる虚血性心疾患、精神疾患、例えば精神分裂病、マルチプルスルファターゼ欠損症（ＭＳＤ）、ムコリピドーシスＩＩ型（ＭＬ ＩＩ）、ムコリピドーシスＩＩＩ型（ＭＬ ＩＩＩ）、ムコリピドーシスＩＶ型（ＭＬ ＩＶ）、ＧＭ１－ガングリオシドーシス（ＧＭ１）、神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ１）、アルパーズ病、バース症候群、β酸化欠損、カルニチン－アシル－カルニチン欠乏症、カルニチン欠乏症、クレアチン欠乏症候群、コエンザイムＱ１０欠乏症、ミトコンドリア複合体Ｉ欠損症、ミトコンドリア複合体ＩＩ欠損症、ミトコンドリア複合体ＩＩＩ欠損症、ミトコンドリア複合体ＩＶ欠損症、ミトコンドリア複合体Ｖ欠損症、チトクロームＣオキシダーゼ（ＣＯＸ）欠損症、慢性進行性外眼筋麻痺症候群（ＣＰＥＯ）、カルニチンパルミチントランスフェラーゼ（ＣＰＴ）Ｉ欠損症、カルニチンパルミチントランスフェラーゼ（ＣＰＴ）ＩＩ欠損症、グルタル酸尿症ＩＩ型、カーンズ・セイヤー症候群、乳酸アシドーシス、長鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症（ＬＣＨＡＤ）、リー病又はリー症候群、リー症候群フランス系カナダ人（ＬＳＦＣ）変異型、致死性幼児心筋症（ＬＩＣ）、ルフト病、中鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症（ＭＣＡＤ）、ミオクロニーてんかん・赤色ぼろ線維（ＭＥＲＲＦ）症候群、ミトコンドリア細胞症、ミトコンドリア劣性運動失調症候群、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群、筋神経胃腸障害・脳症、ピアソン症候群、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ欠損症、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、ＰＯＬＧ遺伝子変異、中鎖／短鎖３－ヒドロキシアシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（Ｍ／ＳＣＨＡＤ）欠損症、超長鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＶＬＣＡＤ）欠損症、ペルオキシソーム病、マロン酸メチル血症、メバロン酸キナーゼ欠損症、加齢による認知機能と筋力の低下、並びに神経変性及び神経精神障害に付随する認知障害から選択され得る。

【0103】

ミトコンドリア機能不全に関係する前記症状はＣＮＳ障害、例えば神経変性疾患であってよい。

【0104】

神経変性疾患にはパーキンソン病、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、虚血、脳卒中、レビー小体型認知症、多系統委縮症（ＭＳＡ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、及び前頭側頭型認知症が挙げられるがこれらに限定されない。

【0105】

具体的には、本発明の前記化合物は、限定されないが、α－シヌクレイン、パーキン、ＰＩＮＫ１、ＧＢＡ、及びＬＲＲＫ２の中の遺伝子変異に関連するＰＤ並びにパーキン又はＰＩＮＫ１に変異、短縮化、又は欠失がある場合の常染色体劣性若年性パーキンソン病（ＡＲ－ＪＰ）又は早期発症パーキンソン病（ＥＯＰＤ）を含むパーキンソン病の治療又は予防に有用であり得る。

【0106】

具体的には、本発明の前記化合物は、アルツハイマー病及びパーキンソン病に付随する認知障害、ＡＤ及びＰＤの前臨床症状又は前駆症状、ハンチントン病、レビー小体型認知症、精神分裂病に付随する認知障害、気分障害に付随する認知障害、双極性障害に付随する認知障害、及び大うつ病性障害に付随する認知障害等を含む神経変性及び神経精神障害に付随する認知障害の治療に有用であり得る。

【0107】

本発明の前記化合物又は本明細書に記載されるようなそれらの医薬組成物は、ミトコンドリア機能不全が関係する症状の治療又は予防に使用されるときに１種類以上の追加の薬剤と組み合わせられる場合がある。これらの化合物は、レボドパ、ドーパミンアゴニスト、モノアミノオキシゲナーゼ（ＭＡＯ）Ｂ阻害剤、カテコールＯ－メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤、抗コリン作動薬、リルゾール、アマンタジン、コリンエステラーゼ阻害剤、メマンチン、テトラベナジン、抗精神病薬、ジアゼパム、クロナゼパム、抗うつ薬、及び抗けいれん薬から選択される１種類以上の追加の薬剤と組み合わせられる場合がある。これらの化合物は、神経変性疾患での病原性のタンパク質凝集物を減らす／取り除く薬剤、例えばパーキンソン病、多系統委縮症、又はレビー小体型認知症でのα－シヌクレインを減らす／取り除く薬剤、アルツハイマー病又は進行性核上性麻痺でのＴａｕを減らす／取り除く薬剤、又はＡＬＳ若しくは前頭側頭型認知症でのＴＤＰ－４３を減らす／取り除く薬剤等と組み合わせられる場合がある。

【0108】

本発明の全ての態様の別の好ましい実施形態ではＵＳＰ３０活性から利益を得る前記障害又は健康状態は癌である。この癌は、ミトコンドリア機能不全に関連付けられる場合がある。好ましい癌には、例えば、乳房癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、腎臓癌、胃癌、結腸癌、精巣癌、頭頚部癌、膵臓癌、脳癌、黒色腫、骨癌、又は他の組織器官の癌、並びにリンパ腫及び白血病などの血液細胞の癌、多発性骨髄腫、転移性癌、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、鼻咽頭癌、大腸癌、大腸癌、並びに非小細胞肺癌が挙げられる。

【0109】

具体的には、本発明の前記化合物は、アポトーシス経路が調節不全になっているところの癌、より具体的にはＢＣＬ－２ファミリーのタンパク質に変異があるか又は同タンパク質が過剰発現若しくは過少発現しているところの癌の治療又は予防に有用であり得る。

【0110】

線維症とは、外傷、炎症、組織修復、免疫反応、細胞過形成、及び細胞新形成の後に起こる細胞外マトリックス成分の蓄積のことをいう。本発明の前記化合物及び組成物によって治療され得る線維化障害には間質性肺疾患（ＩＬＤ）、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）（肝線維症）、腎臓病（腎線維症）、急性腎障害（ＡＫＩ）、急性腎臓病（ＡＫＤ）、慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）、腎移植片機能遅延、心臓疾患又は血管疾患（心線維症）及び眼病などの主要臓器疾患に付随する線維症／線維化障害、全身性強皮病及び限局性強皮病、ケロイド及び肥厚性瘢痕、アテローム性硬化症、再狭窄、及びデュピュイトラン拘縮などの線維増殖性疾患、並びに外科手術合併症、化学療法剤誘発性線維症（例えば、ブレオマイシン誘発線維症）、放射線誘発性線維症、事故による損傷及び火傷、後腹膜線維症（オーモンド病）、及び通常は腎臓移植の後に腹膜透析を受ける患者における腹膜線維症／腹膜瘢痕形成などの外傷に伴う瘢痕形成が特に挙げられる。例えば、Ｗｙｎｎ ｅｔ ａｌ， ２００４， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ８月； ４（８）： ５８３－５９４を参照されたい。したがって、本発明は、肺、肝臓、腎臓、心臓、皮膚、眼、胃腸管、腹膜、及び骨髄等を含む主要器官の、及び／又は主要器官に付随する線維症／線維化障害並びに本明細書において記載される他の疾患／障害を治療又は予防する方法、並びに前記方法において使用される化合物及び組成物に関連する。

【0111】

これらの化合物は、抗糖尿病薬、抗心血管疾患薬、並びに酸化ストレス経路（限定されないが、ｎｒｆ２／ｋｅａｐ－１経路を含む）及び抗アポトーシス経路（限定されないが、抗ｐ５３薬を含む）などの疾患関連経路を標的とする新規薬剤を含む腎臓病の治療法として使用される薬剤と組み合わせられる場合がある。

【0112】

間質性肺疾患（ＩＬＤ）は、肺炎症及び肺線維症が疾患状態の共通する最終経路である障害、例えば、サルコイドーシス、ケイ肺症、薬物反応、感染症、及び例えばリウマチ性関節炎及び全身性硬化症（強皮病）などの膠原血管病を含む。肺の線維化障害は、例えば、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、通常の間質性肺炎（ＵＩＰ）、間質性肺疾患、特発性線維化肺胞炎（ＣＦＡ）、閉塞性細気管支炎、及び気管支拡張症を含む。

【0113】

特発性肺線維症（ＩＰＦ）は最も一般的な種類のＩＬＤであり、原因が不明である。

【0114】

これらの化合物は、ＩＰＦの治療法であり、潜在的にＩＬＤの治療法でもあるニンテダニブ及びピルフェニドンを含む薬剤と組み合わせられる場合がある。

【0115】

肝硬変の原因はＩＬＤの原因と類似しており、肝硬変には、例えば、ウイルス性肝炎、住血吸虫症、及び慢性アルコール中毒症に関連する肝硬変が含まれる。

【0116】

腎臓病は糖尿病を伴う場合があり、この糖尿病が、進行性の機能喪失を引き起こし、高血圧疾患をも引き起こすことになる損傷や瘢痕を腎臓に発生させる可能性がある。腎線維症は、受傷後の急性腎臓病（ＡＫＤ）及び慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）、例えば偶発性ＣＫＤ及び進行性ＣＫＤ等から末期腎不全（ＥＳＲＤ）までの腎臓病のどのステージでも発生し得る。腎線維症は、高血圧又は糖尿病などの心血管疾患の結果として生じる可能性があり、高血圧又は糖尿病のどちらも腎機能に対して大変な負担をかけ、その負担が線維化応答を促進する。しかしながら、腎線維症は特発性（原因が知られていない）である場合もあり、ある特定の遺伝的ミトコンドリア病も腎線維症の兆候及び随伴症状を呈する。

【0117】

心臓疾患は、心臓のポンプ能力を弱める可能性がある瘢痕組織を生じさせる場合がある。

【0118】

眼病には黄斑変性症、網膜網膜症、及び硝子体網膜症等が含まれ、それらの眼病は視力を弱める可能性がある。

【0119】

好ましい実施形態では本発明は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の治療又は予防を対象とする。

【0120】

別の好ましい実施形態では本発明は、腎線維症の治療又は予防を対象とする。

【0121】

別の好ましい実施形態では本発明は、急性腎障害（ＡＫＩ）の治療又は予防、特にハイリスク患者での治療又は予防を対象とする。術後ＡＫＩ、例えば臓器移植後の虚血再灌流傷害、移植片機能遅延などに起因するＡＫＩ、腫瘍学、例えば化学療法起因するＡＫＩ、直接的尿細管細胞傷害、血行力学性虚血、及び浸透圧作用などの造影剤腎症、薬物又は感染症などに起因する急性間質性腎炎、腎結石などの閉塞に起因するＡＫＩ、並びにＣＯＶＩＤ－１９誘発性ＡＫＩが例に挙げられる。特定のハイリスク患者小集団は、心臓手術、例えば冠動脈バイパス移植及び／又は心臓弁手術を受けている患者の小集団である。ＡＫＩには６５歳以上の年齢、インスリン依存性糖尿病、ＣＫＤ（推定糸球体濾過量［ｅＧＦＲ］が６０ｍｌ／分／１．７３ｍ^２未満の成人には特別なリスクがある）、心不全、肝臓病、ＡＫＩの履歴といった確立した静的リスク因子が存在する。

【0122】

別の好ましい実施形態では本発明は、急性腎臓病（ＡＫＤ）又はそのようなＡＫＩから生じる尿細管間質線維症及び糖尿病性腎症等を含む慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）の治療又は予防を対象とする。

【0123】

別の好ましい実施形態では本発明は、限定されないが、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝硬変、門脈高血圧症、急性肝不全、及び肝細胞癌を含む肝臓病の治療又は予防を対象とする。ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨなどの肝臓病は、代謝症候群及びＩＩ型糖尿病などの様々な代謝症状を伴う場合があり、それらの代謝症状は、糖尿病網膜症及び末梢神経障害を含む様々な糖尿病随伴症状のリスクを上昇させることにもなる。

【0124】

本発明の前記化合物又は本明細書に記載されるような前記化合物の医薬組成物は、肝臓病及び代謝機能不全に関係する健康状態の治療又は予防に使用されるとき、メトホルミン、スルホニル尿素、ＤＰＰ－４阻害剤、ＧＬＰ－１アゴニスト、ＰＰＡＲアゴニスト、ＳＧＬＴ２阻害剤、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、及びアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）を含む１種類以上の追加の薬剤と組み合わせられる場合がある。

【0125】

リー症候群は、中枢神経系に影響する希少遺伝性神経代謝障害である。この進行性の障害は、幼児が３か月齢と２歳の間に発生する。１０代の若者及び成人においてこの疾患が発生することは稀である。リー症候群は、ミトコンドリアタンパク質をコードする核ＤＮＡ中の遺伝子突然変異、ミトコンドリアＤＮＡ中の遺伝子突然変異（母性遺伝リー症候群、すなわちＭＩＬＳ）、又はＸ染色体の短腕上に位置するピルビン酸デヒドロゲナーゼと呼ばれる酵素の欠損（Ｘ連鎖リー症候群）によって引き起こされ得る。リー症候群の症状は、通常、急速に進行する。最も早い兆候は吸乳能力不足並びに頭部制御及び運動能力の喪失であり得る。これらの症状には食欲不振、嘔吐、過敏、連続的啼泣、及び発作が伴う場合がある。この疾患が進行するにつれ、全身性脱力、筋緊張の喪失、及び乳酸アシドーシスエピソードも症状に含まれる場合があり、これにより呼吸機能障害及び腎臓機能障害が引き起こされることがある。

【0126】

母性遺伝リー症候群（ＭＩＬＳ）ではミトコンドリアＤＮＡ中の遺伝子突然変異（９０％を超える高い割合）により、運動において役割を果たす脳の領域中の細胞を働かせるエネルギー源が妨害される。ミトコンドリアＤＮＡ中の遺伝子突然変異によってこれらの細胞においてエネルギーが慢性的に不足し、この不足が次に中枢神経系に影響し、運動機能の進行性変性の原因になる。ＭＩＬＳの原因になるミトコンドリアＤＮＡ中の遺伝子突然変異があまり多くない（９０％未満）であるとき、この症状は神経障害・運動失調・網膜色素変性症（ＮＡＲＰ）として知られる。細胞代謝に重要な別のグループの物質を産生する遺伝子の中の遺伝子突然変異の結果であるリー病の一形態（Ｘ連鎖性リー病と呼ばれる）も存在する。ＬＲＰＰＲＣと呼ばれる遺伝子の中の突然変異を特徴とする、フランス系カナダ人変異型と呼ばれるリー症候群のその他の変種が存在する。リー症候群の神経症状と同様の神経症状が現れるが、脂肪肝も共通してフランス系カナダ人変異型に見られる。

【0127】

好ましい実施形態では本発明は、Ｘ連鎖性リー病、リー症候群フランス系カナダ人変異型、及び／又はリー病に付随する症状等を含むリー症候群又はリー病の治療又は予防を対象とする。

【0128】

前記化合物は、限定されないが、ニコチンアミドリボシドを含むミトコンドリア病の治療法として使用され得る新規薬剤と組み合わせられる場合がある。

【0129】

「治療」への言及は、一時的又は恒久的な前記症状の改善のための方法、前記症状の緩和のための方法、前記症状の原因の除去のための方法を含む。本発明の前記化合物は、ヒト及び他の哺乳類動物における本明細書において開示される前記疾患の治療に有用である。

【0130】

別の実施形態では本発明は、本明細書において開示される前記疾患の予防治療を包含し、前記指定障害又は健康状態の症状の出現を防止又は遅延化する方法を含む。本発明の前記化合物は、ヒト及び他の哺乳類動物における本明細書において開示される前記疾患の予防に有用である。

【0131】

治療又は予防を必要とする患者は、前記健康状態に苦しんでいる又は前記健康状態に苦しむリスクがあるヒト又は他の哺乳類動物等であってよい。

【0132】

その他の態様によると、本発明は、本明細書において定義される式（Ｉ）の化合物又は前記化合物若しくは前記互変異性体の薬学的に許容可能な塩を薬学的に許容可能な希釈剤又は担体と共に含む医薬組成物を提供する。

【0133】

本発明の医薬組成物は、本発明の前記化合物のいずれかをあらゆる薬学的に許容可能な担体、アジュバント又はベヒクルと組み合わせて含む。薬学的に許容可能な担体の例は当業者に知られており、投与モード及び剤形の性質に応じて保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、殺細菌剤、殺真菌剤、滑沢剤、及び分散剤が例に挙げられるがこれらに限定されない。前記組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、エリキシル剤、ロゼンジ剤、坐剤、シロップ剤、並びに懸濁液剤及び溶液剤を含む液剤の形態であってよい。本発明の文脈の中の「医薬組成物」という用語は、活性薬剤を含み、且つ、その他に１種類以上の薬学的に許容可能な担体を含む組成物を意味する。前記組成物は、投与モード及び剤形の性質に応じて、例えば、希釈剤、アジュバント、賦形剤、ベヒクル、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、殺細菌剤、殺真菌剤、滑沢剤、及び分散剤から選択される成分をさらに含んでよい。

【0134】

本発明の前記化合物又は本明細書に記載されるような前記化合物の医薬組成物は単独で使用されてもよく、１種類以上のそれ以外の医薬剤と組み合わせて使用されてもよい。これらの化合物は、追加の抗腫瘍治療薬、例えば、化学療法薬又は他の調節性タンパク質の阻害剤と組み合わせられる場合がある。１つの実施形態ではその追加の抗腫瘍治療薬はＢＨ－３模倣物である。その他の実施形態ではＢＨ－３模倣物は、限定されないが、ＡＢＴ－７３７、ＡＢＴ－１９９、ＡＢＴ－２６３、及びオバトクラックスのうちの１つ以上から選択され得る。その他の実施形態ではその追加の抗腫瘍薬は化学療法剤である。化学療法剤は、限定されないが、オラパリブ、マイトマイシンＣ、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、電離放射線（ＩＲ）、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、テモゾロミド、タキサン、５－フルオロピリミジン、ゲムシタビン、及びドキソルビシンから選択され得る。

【0135】

線維化障害の治療又は予防のため、例えば、本発明の前記化合物又は本明細書に記載されるような前記化合物の医薬組成物は単独で使用されてもよく、抗コリン作用薬、β－２模倣物、ステロイド、ＰＤＥ－ＩＶ阻害剤、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＮＫ１アンタゴニスト、ＬＴＤ４アンタゴニスト、ＥＧＦＲ阻害剤、及びエンドセリンアンタゴニストからなる群より選択される１種類以上のそれ以外の医薬剤と組み合わせて使用されてもよい。

【0136】

具体的には、本発明の前記化合物又は本明細書に記載されるような前記化合物の医薬組成物は単独で使用されてもよく、コルチコステロイド、免疫抑制剤、若しくは細胞傷害剤などの総合免疫抑制薬又はピルフェニドン若しくは非特異的キナーゼ阻害剤（例えば、ニンテダニブ）などの抗線維化剤からなる群より選択される１種類以上のそれ以外の医薬剤と組み合わせて使用されてもよい。

【0137】

本発明の前記医薬組成物は、あらゆる適切で有効な方式で投与されてよく、例えば経口投与されてよく、非経口投与されてよく、局所投与されてよく、吸入により投与されてよく、鼻内投与されてよく、直腸投与されてよく、膣内投与されてよく、眼に投与されてよく、及び耳に投与されてよい。本発明の化合物の送達に適切な医薬組成物及びそれらの医薬組成物の調製方法は簡単に当業者に明らかになる。このような組成物及びそれらの組成物の調製方法は、例えば「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１９版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ社、１９９５年）の中に見出され得る。

【0138】

経口投与
本発明の前記化合物は、経口投与される場合がある。経口投与は嚥下を伴う場合があり、それによって前記化合物は胃腸管の中に入り、又は前記化合物を口腔から直接的に血流の中に入れるバッカル投与若しくは舌下投与が用いられる場合がある。

【0139】

経口投与に適切な製剤としては錠剤、顆粒剤含有、液剤含有、又は粉剤含有カプセル剤、ロゼンジ剤（液剤充填ロゼンジ剤を含む）、チュワブル剤、マルチ粒子剤、及びナノ粒子剤などの固形製剤、ゲル剤、フィルム剤（粘膜接着フィルム剤を含む）、膣座薬、スプレー剤、並びに液体製剤が挙げられる。

【0140】

液体製剤には懸濁液剤、溶液剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が含まれる。このような製剤は軟質カプセル剤又は硬質カプセル剤の中の充填成分として用いられる場合があり、担体、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、メチルセルロース、又は適切な油と１種類以上の乳化剤及び／又は懸濁化剤を含むことが典型的である。液体製剤は、固形物の再構成、例えばサシェ剤からの再構成によって調製される場合がある。

【0141】

本発明の前記化合物は、Ｌｉａｎｇ ａｎｄ Ｃｈｅｎ、（２００１）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐａｔｅｎｔｓ， １１ （６）， ９８１－９８６に記載される剤形などの急速溶解急速崩壊剤形の形で使用されてもよい。

【0142】

典型的な錠剤は、製剤化学者に知られている標準的な方法を用いて、例えば直接打錠、（乾式、湿式、又は溶融）造粒、溶融凝固造粒、又は押出しによって調製され得る。錠剤製剤は１層以上の層を含む場合があり、被覆されていても被覆されていなくてもよい。

【0143】

経口投与に適切な賦形剤の例にはセルロース、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、マンニトール、及びクエン酸ナトリウムなどの担体、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びゼラチンなどの造粒結合剤、デンプングリコール酸ナトリウム及びケイ酸塩などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム及びステアリン酸などの滑沢剤、ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤、保存剤、抗酸化剤、香味剤、並びに着色剤が挙げられる。

【0144】

経口投与用の固形製剤は、即時放出及び／又は放出調節するように製剤される場合がある。放出調節製剤には遅延放出、持続放出、パルス放出、制御デュアル放出、標的放出、及びプログラム放出が挙げられる。高エネルギー分散、浸透圧、及び粒子被覆などの適切な放出調節技術の詳細は、Ｖｅｒｍａ ｅｔ ａｌ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｏｎ－ｌｉｎｅ， ２５ （２）， １－１４ （２００１）の中に見出される。他の放出調節製剤は、米国特許第６１０６８６４号明細書の中で説明されている。

【0145】

非経口投与
本発明の前記化合物は、血流中に、筋肉内に、又は内臓内に直接的に投与される場合もある。非経口投与のための適切な方法には静脈内方法、動脈内方法、腹腔内方法、髄腔内方法、脳室内方法、尿道内方法、胸骨内方法、頭蓋内方法、筋肉内方法、及び皮下方法が挙げられる。非経口投与用の適切な器具には針（マイクロニードルを含む）式注射器、針不使用注射器、及び輸液技術が挙げられる。

【0146】

非経口製剤は、塩、炭水化物、及び緩衝剤（好ましくは３～９のｐＨにするための緩衝剤）などの賦形剤を含んでもよい水溶液であることが典型的であるが、幾つかの用途では非経口製剤は、無菌非水性溶液として又は無菌発熱性物質非含有水などの適切なベヒクルと併用される乾燥形態として適切に製剤される場合もある。

【0147】

無菌条件下での、例えば凍結乾燥による非経口製剤の調製は、当業者によく知られている標準的な製剤技術を用いて容易に達成される場合がある。

【0148】

非経口溶液剤の調製に使用される式（Ｉ）の化合物の溶解性は、適切な加工、例えば高エネルギースプレー乾燥分散の使用及び／又は適切な製剤技術の使用、例えば溶解性向上剤の使用等によって上昇する場合がある。

【0149】

非経口投与用の製剤は、即時放出及び／又は放出調節するように製剤される場合がある。放出調節製剤には遅延放出、持続放出、パルス放出、制御デュアル放出、標的放出、及びプログラム放出が挙げられる。

【0150】

本発明の医薬組成物は、血液脳関門を迂回するための当技術分野において知られている組成物及び方法も含み、又は脳内に直接注入され得る。注射に適切な領域には大脳皮質、小脳、中脳、脳幹、視床下部、脊髄及び脳室組織、並びに頸動脈小体及び副腎髄質を含むＰＮＳ領域が挙げられる。

【0151】

投与量
化合物の有効用量の程度は、治療する健康状態の重症度及び投与経路といった性質によって変化することはもちろんである。適切な投与量の選択は医師の権限の範囲内にある。一日用量の範囲はヒト及び非ヒト動物のｋｇ体重当たり約１０μｇ～約１００ｍｇであり、一般的には１回の投与、１ｋｇの体重当たり約１０μｇ～約３０ｍｇであり得る。上記用量は一日に１回～３回の頻度で投与され得る。

【0152】

例えば、経口投与は５ｍｇ～１０００ｍｇ、例えば５ｍｇ～５００ｍｇの合計一日用量を必要とする場合があり、一方で静脈内投与はわずかに０．０１ｍｇ／ｋｇ体重～３０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ体重～１ｍｇ／ｋｇ体重を必要とする場合がある。この合計一日用量は一回の投与又は複数の分割投与で投与され得る。

【0153】

当業者は、ある特定の健康状態の治療又は予防では本発明の化合物が要求に応じて（すなわち、必要に応じて又は所望により）一回の投与で受領され得ることも理解する。

【0154】

合成方法
式（Ｉ）の化合物は、反応スキームの概略として以下で説明される方法及び代表例を用いて調製され得る。適切な場合、スキーム内の個々の変形を異なる順序で完成させてよい。本発明は、以下の略語及び定義を使用する次の非限定的な例によって例示される。液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣＭＳ）若しくは^１Ｈ ＮＭＲ又はそれらの両方によって化合物の特徴を解析した。

【0155】

その他の態様によると、本発明は、式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であって、標準的な方法を用いてＰＧが保護基である式（ＩＩＩ）の化合物を脱保護して次に臭化シアンと反応し得るアミン（ＩＩ）を提供し、それにより式（Ｉ）の当該化合物を生じさせることを含む前記方法を提供する。

【0156】

【化8】

【0157】

その他の態様では本発明は、式（ＩＩ）及びＰＧが保護基である式（ＩＩＩ）から選択される化合物又は前記化合物の塩を提供する。

【0158】

好ましい実施形態では本発明は、式（ＩＩＡ）及びＰＧが保護基である式（ＩＩＩＡ）から選択される化合物又は前記化合物の塩を提供する。

【0159】

【化9】

【0160】

その他の態様によると、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物を調製するための方法であって、標準的な方法を用いて、例えばｍ－クロロ過安息香酸を使用してＰＧが保護基である式（ＩＶ）の化合物を酸化して次にトリメチルシリルシアニド及びジメチルカルバモイルクロリドと反応し得るＰＧが保護基であるＮ－オキシド（Ｖ）を提供し、それにより式（ＩＩＩ）の当該化合物を提供することを含む前記方法を提供する。

【0161】

【化10】

【0162】

その他の態様では本発明は、ＰＧが保護基である式（ＩＶ）及び式（Ｖ）から選択される化合物又は前記化合物の塩を提供する。

【0163】

好ましい実施形態では本発明は、ＰＧが保護基である式（ＩＶＡ）及び式（ＶＡ）から選択される化合物又は前記化合物の塩を提供する。

【0164】

【化11】

【0165】

保護基は、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｐ－メトキシベンジルカルボニル（ＭｅＯＺ）、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ベンジル（Ｂｎ）、カルバメート、ｐ－メトキシベンジル（ＰＭＢ）、３，４－ジメトキシベンジル（ＤＭＰＭ）、ｐ－メトキシフェニル（ＰＭＰ）、トシル（Ｔｓ）、トリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）、４－ニトロベンゼンスルホニル（Ｎｏｓｙｌ）、及び２－ニトロフェニルスルフェニル（Ｎｐｓ）から選択されることが好ましい。ＢＯＣ及びＣｂｚが最も好ましい。

【0166】

【表1】

【0167】

ＬＣＭＳ方法／ＨＰＬＣ方法／ＳＦＣ方法

【0168】

【表2】

【0169】

【表3】

【0170】

【表4】

【0171】

【表5】

【0172】

【表6】

【0173】

【表7】

【0174】

【表8】

【0175】

【表9】

【0176】

【表10】

【0177】

【表11】

【0178】

【表12】

【0179】

【表13】

【0180】

【表14】

【0181】

【表15】

【0182】

【表16】

【0183】

【表17】

【0184】

【表18】

【0185】

【表19】

【0186】

【表20】

【0187】

【表21】

【0188】

【表22】

【0189】

中間産物Ａ
５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル

【0190】

【化12】

【0191】

（ｉ）ｉ－ＰｒＭｇＣｌ、ＴＨＦ、ｒｔ、（ｉｉ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、０℃～ｒｔ、（ｉｉｉ）ＴＥＡ、ＤＣＭ、０℃～ｒｔ

【0192】

工程（ｉ）
（２－オキソ－２－（ピリジン－４－イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル
４－ブロモピリジン塩酸塩（ＣＡＳ番号１９５２４－０６－２、ＣｏｍｂｉＢｌｏｃｋｓ社より、８．０ｇ、４１．２ｍｍｏｌ）を５％Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液（３００ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下において濃縮した。この残留物を直ぐに乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）の中に溶解し、イソプロピルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中の２Ｍ、２０．５７ｍＬ、４１．２ｍｍｏｌ）をＮ_２下において室温で滴下して添加した。それにより生じた暗色溶液を室温で１．５時間にわたって撹拌し、その時間の間に沈殿物が形成した。一方、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の（２－（メトキシ（メチル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（７．１ｇ、３２．９ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液にイソプロピルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中の２Ｍ、１６．４ｍＬ、３２．９ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して添加した。この溶液を１０分間にわったって撹拌した後にピリジルグリニャール試薬に対して室温で滴下して添加した。この混合物を室温で１６時間にわたって撹拌した後に水（２００ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下において濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン中の３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して（２－オキソ－２－（ピリジン－４－イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルを得た（４．８ｇ、２０．３ｍｍｏｌ、４９％の収率）。

【0193】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ、１．４０分、ＭＳ： ＥＳ＋ ２３７．１； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ８．８８ － ８．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７７ － ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．４９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．６９ － ４．７１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．５２ （ｓ， ９Ｈ）。

【0194】

工程（ｉｉ）
２－アミノ－１－（ピリジン－４－イル）エタン－１－オンＴＦＡ塩
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の（２－オキソ－２－（ピリジン－４－イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（４．８ｇ、２０．３４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＴＦＡ（２．４ｍＬ、５ｖｏｌ）を０℃で滴下して添加した。この混合物をゆっくりと室温まで温め、そして２時間にわたって撹拌した後に減圧下においてＤＣＭ（３×１００ｍＬ）と共に濃縮して２－アミノ－１－（ピリジン－４－イル）エタン－１－オンＴＦＡ塩を得た（７．０ｇ、収量）。

【0195】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ、０．２９分、ＭＳ： ＥＳ＋ １３６．９６； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ８．９１ － ８．９３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ８．３６ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ７．９２ － ７．９４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）。

【0196】

工程（ｉｉｉ）
５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル
この反応は、２回にわたり実施された。ＤＣＭ（８０ｍＬ）中の２－アミノ－１－（ピリジン－４－イル）エタン－１－オンＴＦＡ塩（３．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＴＥＡ（３．７５ｇ、５．１７ｍＬ、３７．２ｍｍｏｌ）を室温で滴下して添加した。クロロシュウ酸エチル（１．６３ｇ、１．３３ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して添加した。この混合物をゆっくりと室温まで温め、そして２４時間にわたって撹拌した。これらの２バッチを混合し、水（２００ｍＬ）の中に投入し、そしてＤＣＭ（２×２００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下において濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン中の４０％ＥｔＯＡｃ）により精製して５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボン酸エチルを得た（０．４５ｇ、２．０６ｍｍｏｌ、２工程で１０％の収率）。

【0197】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ、１．２９分、ＭＳ： ＥＳ＋ ２１９．２５； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ８．７４ － ８．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ８．２９ （ｓ， １Ｈ）， ７．７９ － ７．８０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４０－４．４５ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２， Ｈｚ， ２Ｈ）， １．３７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0198】

中間産物Ｂ
ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート

【0199】

【化13】

【0200】

（ｉ）ＥｔＯＣ（Ｏ）Ｃｌ、ＮａＯＨ、ＤＣＭ、０℃～ｒｔ、（ｉｉ）ＮａＨ、ＤＭＦ、３－クロロブタ－１－エン、０℃～ｒｔ、（ｉｉｉ）ＨＣＯ_２Ｈ、０℃の後に１００℃、（ｉｖ）Ｎ－ベンジルグリシン、トルエン、１１０℃、（ｖ）濃ＨＣｌ、１１０℃、（ｖｉ）（ＢＯＣ）_２Ｏ、ＴＥＡ、４－ジメチルアミノピリジン、ＤＣＭ、０℃～ｒｔ、（ｖｉｉ）クロマトグラフィーによる分離、（ｖｉｉｉ）Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＭｅＯＨ、Ｈ_２、ｒｔ

【0201】

工程（ｉ）
（２，２－ジメトキシエチル）カルバミン酸エチル
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の２，２－ジメトキシエタン－１－アミン（ＣＡＳ番号２２４８３－０９－６、Ｃｏｍｂｉ－ｂｌｏｃｋｓ社より、１２．５ｇ、１１８．９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に水酸化ナトリウム（５．２ｇ、１３０．８ｍｍｏｌ）の水溶液（３１ｍＬ）を０℃で滴下して添加した。クロロギ酸エチル（１４．２ｇ、１３０．８ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温で１６時間にわたって撹拌した。この混合物及び２回目の反応の混合物を水（５００ｍＬ）の中に投入し、そしてＤＣＭ（３×５００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮して（２，２－ジメトキシエチル）カルバミン酸エチルを得た（３６．５ｇ、収量）。

【0202】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ７．１５ （ｓ， １Ｈ）， ４．３４ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９８ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．２４ （ｓ， ６Ｈ）， ３．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．１５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0203】

工程（ｉｉ）
ブタ－３－エン－２－イル－（２，２－ジメトキシエチル）カルバミン酸エチル
ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の（２，２－ジメトキシエチル）カルバミン酸エチル（１２．１ｇ、６８．３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａＨ（鉱物油中の６０％、６．８４ｇ、１７０．９ｍｍｏｌ）を０℃で２時間かけて少しずつ添加した。この混合物を０℃で２時間にわたって撹拌した後に３－クロロブタ－１－エン（７．６ｍＬ、７５．２ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温で２０時間にわたって撹拌した。この混合物及び２回の複製反応の混合物を氷冷水（３００ｍＬ）の中に入れて反応を止め、そしてＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を冷却水（３×１５０ｍＬ）及び塩水（２×１５０ｍＬ）で洗浄した。この有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下において濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（塩基性酸化アルミニウム、ｎ－ヘキサン中の５％ＥｔＯＡｃ）により精製してブタ－３－エン－２－イル－（２，２－ジメトキシエチル）カルバミン酸エチルを得た（１５．５ｇ、６７．０ｍｍｏｌ、２工程で２８％の収率）。

【0204】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ５．８８ － ５．９４ （ｍ， １ Ｈ）， ５．０８ － ５．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４１ － ４．４８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０５ － ４．０６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１８ － ３．３５ （ｍ， ８Ｈ）， １．１８ － １．２４ （ｍ， ６Ｈ）。

【0205】

工程（ｉｉｉ）
ブタ－３－エン－２－イル－（２－オキソエチル）カルバミン酸エチル
ブタ－３－エン－２－イル－（２，２－ジメトキシエチル）カルバミン酸エチル（１５．５ｇ、６７．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にギ酸（３６ｍＬ）を０℃で滴下して添加した。この混合物を１００℃で２時間にわたって加熱した後に室温まで冷却し、氷冷水（２００ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（３×３００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（３×１００ｍＬ）で洗浄した。この有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、及び減圧下において濃縮してブタ－３－エン－２－イル－（２－オキソエチル）カルバミン酸エチルを得た（１１．３ｇ、６１．１ｍｍｏｌ、９１％の収率）。

【0206】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ９．４７ （ｓ， １Ｈ）， ５．７５ － ５．８５ （ｍ， １Ｈ）， ５．１０ － ５．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６５ － ４．７７ （ｍ， １Ｈ）， ３．８０ － ４．０７ （ｍ， ４Ｈ）， １．１０ － １．１８ （ｍ， ６Ｈ）。

【0207】

工程（ｉｖ）
ｒａｃ－エチル－（３ａＲ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
トルエン（１００ｍＬ）中のブタ－３－エン－２－イル－（２－オキソエチル）カルバミン酸エチル（４．７ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮ－ベンジルグリシン（ＣＡＳ番号１７１３６－３６－６、Ｃｏｍｂｉ－ｂｌｏｃｋｓ社より、４．２ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）を室温で添加した。この混合物を１１０℃で１６時間にわたって加熱した後に減圧下において濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（塩基性酸化アルミニウム、ｎ－ヘキサン中の７％ＥｔＯＡｃ）により精製してｒａｃ－エチル－（３ａＲ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを得た（３．２ｇ、１１．１ｍｍｏｌ、４３％の収率）。

【0208】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ、１．３３分、２つの幅広のピークが合同し、２種類のジアステレオマーのベースラインが分離しない、ＭＳ： ＥＳ＋ ２８９．３。

【0209】

工程（ｖ）
ｒａｃ－（３ａＲ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール塩酸塩
濃ＨＣｌ（４０ｍＬ、１２．５ｖｏｌ）中のｒａｃ－エチル（３ａＲ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（３．２ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を１００℃で１６時間にわたって加熱した。この混合物を室温まで冷却し、そして減圧下において濃縮してｒａｃ－（３ａＲ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール塩酸塩を得た（３．７２ｇ、収量）。

【0210】

ＬＣＭＳ：方法Ｆ、４．４５分及び４．９２分、２種類のジアステレオマー、ＭＳ： ＥＳ＋ ２１７．３。

【0211】

工程（ｖｉ）
ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
ＤＣＭ（４０ｍＬ）中のｒａｃ－（３ａＲ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール塩酸塩（３．７ｇ、１４．６５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にトリエチルアミン（１０．３ｍＬ、７３．５ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン（０．０９ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）、及び二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（３．８３ｇ、１７．５８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。この混合物を放置して室温まで温め、５時間にわたって撹拌した後に水（１００ｍＬ）の中に投入し、そしてＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下において濃縮した。この残留物に対して工程（ｖｉｉ）でクロマトグラフィーによる分離を実施した。

【0212】

工程（ｖｉｉ）
ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（主要異性体）及びｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（非主要異性体）
工程（ｖｉ）の残留物をカラムクロマトグラフィー（塩基性酸化アルミニウム、ｎ－ヘキサン中の２％ＥｔＯＡｃ）により精製して４．２：１の比率で２種類の分離した画分を得た。

【0213】

１番目に溶出する画分、すなわち画分１であるｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを無色の油として単離した（非主要異性体、０．５０ｇ）。ＴＬＣ：Ｒｆ０．５（３０％ＥｔＯＡｃ／ｎ－ヘキサン）。

【0214】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ、１．４６分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３１７．４、及び方法Ｘ、１３．７０分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３１７．３。

【0215】

２番目に溶出する画分、すなわち画分２であるｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを無色の油として単離した（主要異性体、２．１０ｇ、６．６３ｍｍｏｌ、４５％の収率）。ＴＬＣ：Ｒｆ０．４（３０％ＥｔＯＡｃ／ｎ－ヘキサン）。

【0216】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ、１．４６分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３１７．４、及び方法Ｘ、１３．３７分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３１７．３、方法Ｘによるｄ．ｒ．＝９９：１

【0217】

画分２を次の工程（ｖｉｉｉ）に送った。

【0218】

工程（ｖｉｉｉ）
ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］－ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（画分２、主要異性体、０．５０ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に２０％Ｐｄ（ＯＨ）_２（５０％の水分、２５０ｍｇ、５０％（重量／重量））を添加し、そして室温で４時間にわたってＨ_２ガスでパージした。この混合物をセライトベッドに通して濾過し、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）で洗浄し、そして減圧下において濃縮してｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを得た（０．３３ｇ、１．４６ｍｍｏｌ、９２％の収率）。

【0219】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ、１．２９分、ＭＳ： ＥＳ＋ ２２７．３２。

【0220】

中間産物Ｃ
ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート

【0221】

【化14】

【0222】

工程（ｉ）
（２，２－ジメトキシエチル）－Ｄ－アラニン酸メチル
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中の２，２－ジメトキシアセトアルデヒド（９７．０１ｇ、９３１．８９ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にメチルＤ－アラニン酸ＨＣｌ（１００．０ｇ、７１６．８４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。この混合物を室温で２時間にわたって撹拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（５８．５２ｇ、９３１．８９ｍｍｏｌ）をＮ_２雰囲気下において０℃で少しずつ添加し、そして室温で１８時間にわたって撹拌した。この混合物をセライトに通して濾過し、そしてＭｅＯＨ（２×２００ｍＬ）で洗浄した。この濾液を減圧下において濃縮し、残留物を水（１０００ｍＬ）の中に投入し、そしてＤＣＭ（２×１０００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下において４０℃で濃縮して（２，２－ジメトキシエチル）－Ｄ－アラニン酸メチルを薄黄色の油として得た（１３５．０ｇ、７０５．９５ｍｍｏｌ、９８％の収率）。

【0223】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ４．４１ － ４．５４ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４７ － ３．５０ （ｍ， １Ｈ）， ３．３８ － ３．４６ （ｍ， ６Ｈ）， ２．７６ － ２．８１ （ｍ， １Ｈ）， ２．６４ － ２．６８ （ｍ， １Ｈ）， １．３１ － １．３５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0224】

メチルＤ－アラニン酸ＨＣｌ（５００ｇ、１２００ｇ、及び１２００ｇの規模）を使用して前記方法を同様に３回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ６８０ｇ、１６２５ｇ、及び１６２５ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は４０６５ｇであり、２１．２５ｍｏｌであった。

【0225】

工程（ｉｉ）
Ｎ－（２，２－ジメトキシエチル）－Ｎ－（エトキシカルボニル）－Ｄ－アラニン酸メチル
水（８１０ｍＬ）中の炭酸水素ナトリウム（８８．９５ｇ、１０５８ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にＴＨＦ（８１０ｍＬ）中の（２，２－ジメトキシエチル）－Ｄ－アラニン酸メチル（１３５ｇ、７０５．９５ｍｍｏｌ）の溶液を室温で添加した。クロロギ酸エチル（９１．９３ｇ、８４７．１４ｍｍｏｌ）をこの冷却二相溶液（－５℃～５℃）に添加し、この混合物を室温で２時間にわたって撹拌した。この混合物を水（１．３５Ｌ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×６７５ｍＬ）で抽出した。混合した有機相をＫＨＳＯ_４の飽和溶液（６７５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下において４０℃で濃縮してＮ－（２，２－ジメトキシエチル）－Ｎ－（エトキシカルボニル）－Ｄ－アラニン酸メチルを油として得た（１５０．０ｇ、５６９．７１ｍｍｏｌ、８０％の収率）。

【0226】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ４．５２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１５ － ４．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４０ － ３．６３ （ｍ， ９Ｈ）， １．５０ － １．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．２３ － １．３９ （ｍ， ３Ｈ）。

【0227】

（２，２－ジメトキシエチル）－Ｄ－アラニン酸メチル（６８０ｇ、１０００ｇ、１０００ｇ、及び１２５０ｇの規模）を使用して前記方法を同様に４回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ７７５ｇ、１３６０ｇ、１３６５ｇ、及び１３７５ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は５０２５ｇであり、１９．０９ｍｏｌであった。

【0228】

工程（ｉｉｉ）
（Ｒ）－（２，２－ジメトキシエチル）（１－ヒドロキシプロパン－２－イル）カルバミン酸エチル
エタノール（１．８Ｌ）とＴＨＦ（２００ｍＬ）の中のＮ－（２，２－ジメトキシエチル）－Ｎ－（エトキシカルボニル）－Ｄ－アラニン酸メチル（１００ｇ、３７９．８ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にＬｉＢＨ_４（ＴＨＦ中の２Ｍ、９４９．５ｍＬ、１８９９．０４ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して添加した。この混合物を室温で１８時間にわたって撹拌した後に水（５００ｍＬ）中の塩化アンモニウム（５０ｇ）の冷却溶液を２回にわたって添加することにより反応を止め、そして減圧下において濃縮して揮発性が高い有機溶媒を除去した。この残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）の中に溶解した。有機相を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下において４０℃で濃縮して（Ｒ）－（２，２－ジメトキシエチル）（１－ヒドロキシプロパン－２－イル）カルバミン酸エチルを油として得た（７２．０ｇ、３０６．０１ｍｍｏｌ、８１％の収率）。

【0229】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ４．８５ － ４．８６ （ｍ， １Ｈ）， ４．６５ （ｍ， １Ｈ）， ４．１５ － ４．２４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７１ － ３．７２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４１ － ３．５６ （ｍ， ６Ｈ）， ３．１４ －３．１９ （ｍ， １Ｈ）， ２．９９ － ３．０５ （ｍ， ２Ｈ）， １．２８ － １．３４ （ｍ， ３Ｈ）， １．１３ － １．１５ （ｍ， １Ｈ）， １．０３ － １．０５ （ｍ， １Ｈ）。

【0230】

Ｎ－（２，２－ジメトキシエチル）－Ｎ－（エトキシカルボニル）－Ｄ－アラニン酸メチル（５００ｇ、５００ｇ，１２００ｇ、１２００ｇ、及び１２００ｇの規模）を使用して前記方法を同様に５回にわたって繰り返して小見出しの化合物（それぞれ３３６ｇ、３３６ｇ、９２９ｇ、９３０ｇ、及び９３０ｇ）を得た。３バッチ全てを混合した重量は３５３３ｇであり、１５．０１ｍｏｌであった。

【0231】

工程（ｉｖ）
（Ｒ）－（２，２－ジメトキシエチル）（１－オキソプロパン－２－イル）カルバミン酸エチル
ＤＣＭ：水の混液（１．０４Ｌ、１：１）中の（Ｒ）－（２，２－ジメトキシエチル）（１－ヒドロキシプロパン－２－イル）カルバミン酸エチル（４００．０ｇ、１７００．１ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にＮａＨＣＯ_３（４２８ｇ、５１００ｍｍｏｌ）及びＴＥＭＰＯ（２．６ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）を室温で添加した。次亜塩素酸ナトリウムの溶液（３９１．１ｇ、２２１０．１３ｍｍｏｌの固体ＮａＯＣｌ：５Ｈ_２Ｏを４．９８Ｌの水で希釈して１ＭのＮａＯＣｌ溶液を新しく調製した）をこの二相溶液に０℃で添加した。この混合物を室温まで温め、１８時間にわたって撹拌した後に１０％（重量／体積）チオ硫酸ナトリウム水溶液（２．８Ｌ）を使用して注意深く反応を停止し、そしてＤＣＭ（２×４．０Ｌ）で抽出した。この有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下において４０℃で濃縮して（Ｒ）－（２，２－ジメトキシエチル）（１－ヒドロキシプロパン－２－イル）カルバミン酸エチルを油として得た（３６０ｇ、１５４３．３ｍｍｏｌ、９０．７８％の収率）。

【0232】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ９．５９ （ｓ， １Ｈ）， ４．４６ － ４．４８ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６ － ４．２４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８４ － ３．８９ （ｍ， １Ｈ）， ３．５２ － ３．５６ （ｍ， １Ｈ）， ３．４２ － ３．４７ （ｍ， ６Ｈ）， ３．３０ － ３．４０ （ｍ， １Ｈ）， １．３８ － １．４１ （ｍ， ３Ｈ）， １．２２ － １．３４ （ｍ， ３Ｈ）。

【0233】

（Ｒ）－（２，２－ジメトキシエチル）（１－ヒドロキシプロパン－２－イル）カルバミン酸エチル（１１００ｇ、８４０ｇ、及び１２００ｇ）を使用して前記方法を同様に３回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ１０２６ｇ、８２０ｇ、及び１０２０ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は３２２６ｇであり、１３．８３ｍｏｌであった。

【0234】

工程（ｖ）
（Ｒ）－ブタ－３－エン－２－イル（２，２－ジメトキシエチル）カルバミン酸エチル
ＴＨＦ（１．８Ｌ）中のメチルトリフェニルホスホニウムブロミド（１３７．７ｇ、３８５．８ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にＫＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の１Ｍ、４０１．２６ｍｌ、４０１．２ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して添加した。この混合物を室温で１時間にわたって撹拌した後にＴＨＦ（５７６ｍＬ）中の（Ｒ）－（２，２－ジメトキシエチル）（１－ヒドロキシプロパン－２－イル）カルバミン酸エチル（７２．０ｇ、３０８．６ｍｍｏｌ）の溶液をＮ_２雰囲気下において－７８℃で滴下して添加した。この混合物を室温で１８時間にわたって撹拌した後にＭｅＯＨ（２．２ｍＬ）を使用して反応を停止し、そして室温で３０分間にわたって撹拌した。この混合物を濃縮し、ヘキサン（３×１５００ｍＬ）と共に共蒸留し、０℃まで冷却し、そして濾過してＭｅＰＰｈ_２Ｏ沈殿物とＰＰｈ_３Ｏ沈殿物を取り除いた。この有機相を濃縮し、冷却し、そして再度濾過した。それにより生じた濾液を減圧下において４０℃で濃縮し（Ｒ）－ブタ－３－エン－２－イル（２，２－ジメトキシエチル）カルバミン酸エチルを黄褐色の油として得た（６５ｇ、１５４３．３ｍｍｏｌ、９１％の収率）。

【0235】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） ｐｐｍ： δ ５．９２ － ６．０３ （ｍ， １Ｈ）， ５．１１ － ５．１６ （ｍ， １Ｈ）， ４．５２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１７ － ４．２３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ６Ｈ）， ３．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６７ － ２．７２ （ｍ， １Ｈ）， １．２６ － １．３３ （ｍ， ６Ｈ）。

【0236】

（Ｒ）－（２，２－ジメトキシエチル）（１－ヒドロキシプロパン－２－イル）カルバミン酸エチル（７３５ｇ、１４１７ｇ、及び１０２０ｇ）を使用して前記方法を同様に３回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ６４４ｇ、１２６２ｇ、及び８６０ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は２８３１ｇであり、１２．２４ｍｏｌであった。

【0237】

工程（ｖｉ）
（Ｒ）－ブタ－３－エン－２－イル（２－オキソエチル）カルバミン酸エチル
アセトン（６．０Ｌ）及び水（６００ｍＬ）中の（Ｒ）－ブタ－３－エン－２－イル（２，２－ジメトキシエチル）カルバミン酸エチル（３００．０ｇ、１２９７．０７ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にｐ－トルエンスルホン酸一水和物（７８．９ｇ、４１５．０６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。この混合物を６０℃で１８時間にわたって加熱し、放置して室温まで冷却し、そして減圧下において濃縮した。この混合物を濃縮し、残留物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１５００ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×１０００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮し（Ｒ）－ブタ－３－エン－２－イル（２－オキソエチル）カルバミン酸エチルを薄黄色の油として得た（２３０ｇ、１２４２．５ｍｍｏｌ，９６％の収率）。

【0238】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ９．５５ （ｓ， １Ｈ）， ５．７９ － ５．８６ （ｍ， １Ｈ）， ５．０５ － ５．２５ （ｍ， ２Ｈ）， ５．００ － ５．０５ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ － ４．２２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７０ － ３．９２ （ｍ， ２Ｈ）， １．２４ － １．３１ （ｍ， ６Ｈ）。

【0239】

（Ｒ）－ブタ－３－エン－２－イル（２，２－ジメトキシエチル）カルバミン酸エチル（１０２０ｇ、６７０ｇ、及び８６０ｇ）を使用して前記方法を同様に３回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ７９５ｇ、４８０ｇ、６０５ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は２１１０ｇであり、１１．３９ｍｏｌであった。

【0240】

工程（ｖｉｉ）
（３ａＳ，４Ｒ，６ａＳ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボン酸エチルとの混合物（約７０：約３０のジアステレオマー混合物）である（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボン酸エチル
ディーン・スターク装置を取り付けた１０Ｌの丸底フラスコの中でトルエン（７．２Ｌ、３６ｖｏｌ）中の（Ｒ）－ブタ－３－エン－２－イル－（２－オキソエチル）カルバミン酸エチル（２００．０ｇ、１０７９．７ｍｍｏｌ）の混合物を室温で撹拌した。Ｎ－ベンジルグリシン（２１４．０２ｇ、１２９５．７ｍｍｏｌ）をこの混合物に添加し、その後でこの混合物を１２０℃で１８時間にわたって加熱し、放置して室温まで冷却し、そして減圧下において濃縮した。この残留物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２０００ｍＬ）の中に投入し、そしてＤＣＭ（２×１０００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮して小見出しの化合物（約７０：約３０のジアステレオマー混合物）を褐色の油として得た（３０６．０ｇ、１０６１．０６ｍｍｏｌ、９８％の収率）。

【0241】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ３、３．４６分、ジアステレオマー混合物、ＭＳ： ＥＳ＋ ２８９．２； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ７．１６ － ７．４０ （ｍ， ５Ｈ）， ４．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６５ （ｍ， １Ｈ）， ３．４９ （ｍ， １Ｈ）， ３．３２ （ｍ， １Ｈ）， ３．１８ （ｍ， １Ｈ）， ２．９２ （ｍ， １Ｈ）， ２．６４ － ２．７２ （ｍ， １Ｈ）， ２．４０ （ｓ， １Ｈ）， ２．３３ （ｍ， １Ｈ）， ２．１０ （ｍ， １Ｈ）， １．３０ （ｔ， ３Ｈ）， １．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ３Ｈ）；キラルＨＰＬＣ、方法Ｙ２６、５．２３分が主要ピーク、５．６１分が非主要ピーク

【0242】

（Ｒ）－ブタ－３－エン－２－イル－（２－オキソエチル）カルバミン酸エチル（５１５ｇ、６００ｇ、及び７６０ｇ）を使用して前記方法を同様に３回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ７５１ｇ、８８０ｇ、及び９７０ｇ）。４バッチ全てを混合した重量は２９０７ｇであり、１０．０９ｍｏｌであった。

【0243】

工程（ｖｉｉｉ）
（３ａＳ，４Ｒ，６ａＳ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロールとの混合物である（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール
ＨＢｒ水溶液（４８重量％、１９８８ｍＬ、１６６４４．１２ｍｍｏｌ）中の工程（ｖｉｉ）の生成物（約７０：約３０のジアステレオマー混合物、３００．０ｇ、１０４０．２５ｍｍｏｌ）の撹拌混合物を６時間にわたって加熱還流した。この混合物を水（１．５Ｌ、５ｖｏｌ）の中に投入し、そしてトルエン（３×６００ｍＬ、２ｖｏｌ）で洗浄した。この水層をＫ_２ＣＯ_３（約２．０ｋｇ、１４５６３．５ｍｍｏｌ）で約１０のｐＨまで塩基性にし、そしてＤＣＭ（３×１．５Ｌ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮した。この残留物をＤＣＭ（５００ｍＬ）の中に溶解し、そして１ＮのＮａＯＨ溶液（１５０ｍＬ）で徹底的に洗浄した。この水層をＤＣＭ（２００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮して小見出しの化合物（約７０：約３０のジアステレオマー混合物）を褐色の油として得た（１５５．０ｇ、７１６．４９ｍｍｏｌ、６９％の収率）。

【0244】

ＬＣＭＳ：方法Ｆ、３．０５分、ジアステレオマー混合物、ＭＳ： ＥＳ＋ ２１７．２； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ７．２１ － ７．４０ （ｍ， ５Ｈ）， ３．６３ － ３．８７ （ｍ， １Ｈ）， ３．４２ － ３．５９ （ｍ， １Ｈ）， ３．０８ － ３．２３ （ｍ， １Ｈ）， ２．８３ － ３．０９ （ｍ， ３Ｈ）， ２．７７ （ｍ， １Ｈ）， ２．６５ （ｓ， １Ｈ）， ２．２０ － ２．３６ （ｍ， ２Ｈ）， １．９９ （ｍ， １Ｈ）， １．４９ （ｍ， １Ｈ）， １．０２ － １．２１ （ｍ， ３Ｈ）；キラルＨＰＬＣ、方法Ｙ２６、４．９８分及び５．５５分、２つの別々のピークだけが見られた。

【0245】

（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボン酸エチル（約７０：約３０のジアステレオマー混合物、１１００ｇ、及び１７００ｇ）を使用して前記方法を同様に２回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ５７５ｇ、及び８３８ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は１５６８ｇであり、７．２４ｍｏｌであった。

【0246】

工程（ｉｘ）
（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール．０．５（Ｌ）－ＤＢＴＡ塩
工程（ｖｉｉｉ）の生成物（約７０：約３０のジアステレオマー混合物、２．５ｇ、１１．５６ｍｍｏｌ）にＴＨＦ中の２．５％の水（１９．２ｍＬ）を添加した。ＴＨＦ中の２．５％の水（６．８ｍＬ、２．７５ｖｏｌ）の中の（２Ｒ，３Ｒ）－２，３－ビス（ベンゾイルオキシ）コハク酸水和物（１．２８ｇ、３．５７ｍｍｏｌ、Ａｎｇｅｎｅ社より）の溶液を室温で添加し、この溶液を室温で２．５時間にわたって撹拌した。沈殿した固形物を減圧下において濾過により収集し、フィルターケークをＴＨＦ中の２．５％の水（２×１０ｍＬ）で洗浄して白色の固形物を得た（３．０ｇ）。

【0247】

ＴＨＦ中の２．５％の水（３６ｍＬ）の中のこの白色の固形物（３．０ｇ）の懸濁液を１時間にわたって加熱還流して透明な溶液を得た。その後、この混合物を１時間にわたって放置して室温まで冷却した後にこの混合物を撹拌せずに１時間にわたってｒｔに維持した。結晶化した固形物を減圧下において濾過により収集し、フィルターケークをＴＨＦ中の２．５％の水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、そして減圧下において４０℃で乾燥して（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール．０．５Ｌ－ＤＢＴＡを白色の固形物として得た（２．４ｇ、３．０３ｍｍｏｌ、２６％の収率）。

【0248】

キラルＨＰＬＣ：方法Ｙ２２、５．３５分

【0249】

工程（ｉｘ）：代替法
工程（ｖｉｉｉ）の生成物（約７０：約３０のジアステレオマー混合物、１５０．０ｇ、６９３．３８ｍｍｏｌ）にＴＨＦ中の２．５％の水（１．２Ｌ）を添加した。この溶液に前もって合成したバッチに由来する（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール．０．５（Ｌ）－ＤＢＴＡ塩（７００ｍｇ）を添加した。ＴＨＦ中の２．５％の水（４１２ｍＬ、２．７５ｖｏｌ）の中の（２Ｒ，３Ｒ）－２，３－ビス（ベンゾイルオキシ）コハク酸水和物（７９．５０ｇ、２２１．８８ｍｍｏｌ、Ａｎｇｅｎｅ社より）の溶液を室温で添加し、この溶液を室温で３時間にわたって撹拌した。この反応混合物を３時間にわたって室温に維持した。沈殿した固形物を減圧下において濾過により収集し、フィルターケークをＴＨＦ中の２．５％の水（２×１５００ｍＬ）で洗浄して黄色の固形物を得た（１７８．０ｇ）。

【0250】

第１の結晶化：ＴＨＦ中の２．５％の水（２６７０ｍＬ）の中のこの黄色の固形物（１７８．０ｇ）の懸濁液を１時間にわたって加熱還流して透明な溶液を得た。その後、この混合物を１時間にわたって放置して室温まで冷却した後にこの混合物を撹拌せずにそのようなものとして１時間にわたって室温に維持した。結晶化した固形物を減圧下において濾過により収集し、フィルターケークをＴＨＦ中の２．５％の水（２×１７８０ｍＬ）で洗浄し、そして減圧下において４０℃で乾燥して（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール．０．５Ｌ－ＤＢＴＡを白色の固形物として得た（１１３．０ｇ、１４２．０ｍｍｏｌ）。

【0251】

第２の結晶化：第１の結晶化に由来する固形物（１１３．０ｇ）をＴＨＦ中の２．５％の水（１６９５ｍＬ）の中に再懸濁し、そして１時間にわたって加熱還流して溶液を形成した。その後、この混合物を放置して室温まで冷却し、そして撹拌せずにそのようなものとして１時間にわたって室温に維持した。結晶化した固形物を減圧下において濾過により収集し、フィルターケークをＴＨＦ中の２．５％の水（２×１１３０ｍＬ）で洗浄し、そして減圧下において４０℃で乾燥して（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール．０．５Ｌ－ＤＢＴＡ塩を白色の固形物として得た（１０３．０ｇ、１３０．２２ｍｍｏｌ、１８％の収率）。

【0252】

キラルＨＰＬＣ：方法Ｙ２２、５．３１分

【0253】

（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロ－ピロロ［３，４－ｂ］ピロール（約７０：約３０のジアステレオマー混合物、５７０ｇ、及び８３８ｇ）を使用して前記方法を同様に２回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ４７８ｇ、及び７７８ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は１３５９ｇであり、１．７２ｍｏｌであった。

【0254】

工程（ｘ）
ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
ＴＨＦ：水の混液（１８００ｍＬ、１：１．２５）の中の（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ－［３，４－ｂ］ピロール．０．５Ｌ－ＤＢＴＡ塩（１００．０ｇ、１２６．４２ｍｍｏｌ）の撹拌混合物を５０℃で加熱した。ＮａＨＣＯ_３（３１．８６ｇ、３７９．２８ｍｍｏｌ）を５０℃で少しずつ添加した。この混合物を２５℃まで冷却し、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（６６．１４ｇ、３０３．４２ｍｍｏｌ）を添加し、この二相混合物を室温で１６時間にわたって激しく撹拌した。この混合物を水（５００ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×１Ｌ）で抽出した。混合した有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２×３００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮した。カラムクロマトグラフィー（１００～２００サイズのシリカゲル、ｎ－ヘキサン中の２０％ＥｔＯＡｃ）を使用してこの残留物を精製してｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを灰色の粘性のある油として得た（４５．０ｇ、１４２．２０ｍｍｏｌ、６１％の収率）。

【0255】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ３、３．９６分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３１７．２； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ７．２３ － ７．３６ （ｍ， ５Ｈ）， ３．７９ （ｓ， １Ｈ）， ３．６２ （ｓ， １Ｈ）， ３．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．０９ － ３．１４ （ｍ， １Ｈ）， ３．０２ － ３．０５ （ｍ， １Ｈ）， ２．８１ （ｓ， １Ｈ）， ２．３４ （ｓ， １Ｈ）， ２．１８ － ２．２５ （ｍ， １Ｈ）， １．９６ － ２．０４ （ｍ， １Ｈ）， １．４６ － １．５５ （ｍ， １Ｈ）， １．４０ （ｓ， ９Ｈ）， １．０８ － １．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）；キラルＨＰＬＣ、方法Ｙ２３、４．３１分、９９．６％のｅ．ｅ．、ｄ．ｒ．＝９９．５：０．５

【0256】

（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ－［３，４－ｂ］ピロール．０．５Ｌ－ＤＢＴＡ塩（２００ｇ及び１０００ｇ）を使用して前記方法を同様に２回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ１３４ｇ及び６８５ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は８６４ｇであり、２．７３ｍｏｌであった。

【0257】

工程（ｘｉ）
（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
エタノール（１．６Ｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（２００．０ｇ、６３２．０１ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％の水分、１００．０ｇ、０．５％（重量／重量））を添加した後に室温で４時間にわたってＨ_２ガスでパージした。この混合物をセライトＨｙｆｌｏｗ（登録商標）ベッドに通して濾過し、ＭｅＯＨ（２×５００ｍＬ）で洗浄し、そして減圧下において濃縮して（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルを無色の油として得た（１３４．０ｇ、５９２．０８ｍｍｏｌ、９６％の収率）。

【0258】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ３、２．２２分、ＭＳ： ＥＳ＋ ２２７．２； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ３．７５ － ３．８２ （ｍ， １Ｈ）， ３．４８ － ３．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０４ － ３．０８ （ｍ， １Ｈ）， ２．８５ － ２．９１ （ｍ， １Ｈ）， ２．３２ － ２．３８ （ｍ， １Ｈ）， ２．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ２．００ － ２．０５ （ｍ， １Ｈ）， １．６４ － １．７０ （ｍ， １Ｈ）， １．４５ （ｓ， ９Ｈ）， １．１５ － １．１９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）；キラルＨＰＬＣ、方法Ｙ１３、４．５５分

【0259】

ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（５７０ｇ）を使用して前記方法を同様に繰り返して小見出しの化合物を得た（４００ｇ）。２バッチ全てを混合した重量は５３４ｇであり、２．３６ｍｏｌであった。

【0260】

実施例１
（＋）－（３ａＲ^＊，４Ｒ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル及び
実施例２
（－）－（３ａＲ^＊，４Ｒ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル

【0261】

【化15】

【0262】

【化16】

【0263】

（ｉ）ＴＢＤ、ＴＨＦ、０℃～ｒｔ、（ｉｉ）ｍ－ＣＰＢＡ、０℃～ｒｔ、（ｉｉｉ）ＴＭＳＣＮ、ジメチルカルバモイルクロリド、ＭｅＣＮ、０℃～ｒｔ、（ｉｖ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、０℃～ｒｔ、（ｖ）Ｋ_２ＣＯ_３、ＢｒＣＮ、ＴＨＦ、０℃～ｒｔ、（ｖｉ）キラル分取ＨＰＬＣ精製

【0264】

工程（ｉ）
ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチル－１－（５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル（５．０ｇ、２２．９３ｍｍｏｌ）とｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（４．１５ｇ、１８．３５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＴＢＤ（４．７８ｇ、３４．３９ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。この混合物を放置して室温まで温め、１時間にわたって撹拌した後に水（５０ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮した。この残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ中の２％ＭｅＯＨ）により精製してｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチル－１－（５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを得た（５．５ｇ、１３．８２ｍｍｏｌ、６０％の収率）。

【0265】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ１、１．１４分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３９９．４。

【0266】

工程（ｉｉ）
ｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピリジン１－オキシド
ＤＣＭ（６０ｍＬ）中のｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチル－１－（５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（５．５ｇ、１３．８２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にｍ－クロロ過安息香酸（４．７７ｇ、２７．６４ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。この混合物を放置して室温まで温め、そして２４時間にわたって撹拌した。この反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２００ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×３００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（３×１００ｍＬ）で洗浄し、１０％チオ硫酸ナトリウム（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、そして減圧下において濃縮してｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－メチル－オクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピリジン１－オキシドを得た（４．８０ｇ、１１．５８ｍｍｏｌ、８３％の収率）。

【0267】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ１、１．１５分、ＭＳ： ＥＳ＋ ４１５．６。

【0268】

工程（ｉｉｉ）
ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
アセトニトリル（５０ｍＬ）中のｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－メチル－オクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピリジン１－オキシド（４．８０ｇ、１１．５８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にジメチルカルバモイルクロリド（３．１１ｇ，２．６８ｍＬ、２８．９７ｍｍｏｌ）及びＴＭＳＣＮ（３．４５ｇ、３４．７４ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して添加した。この混合物を放置して室温まで温め、１６時間にわたって撹拌した後に水（２００ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×３００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮した。この残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ中の２％ＭｅＯＨ）により精製してｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを得た（５．１ｇ、１２．０５ｍｍｏｌ、収量）。

【0269】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ１、１．２８分、ＭＳ： ＥＳ＋ ［Ｍ＋１８］ ４４１．４。

【0270】

工程（ｉｖ）
ｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリル
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（５．１ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＴＦＡ（１０ｍＬ、２ｖｏｌ）を０℃で滴下して添加した。この混合物を放置して室温まで温め、そして２時間にわたって撹拌した後に減圧下において濃縮してｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリルＴＦＡ塩を得た（５．０ｇ、１１．４４ｍｍｏｌ、２工程で９８％の収率）。

【0271】

ＬＣＭＳ：方法Ｃ１、０．９１分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３２４．３。

【0272】

工程（ｖ）
ｒａｃ－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル
ＴＨＦ（６ｍＬ）中のｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリルＴＦＡ塩（０．１４ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＫ_２ＣＯ_３（０．１４ｇ、１．００ｍｍｏｌ）を室温で添加し、そして１０分間にわったって撹拌した。臭化シアン（０．０３ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。この混合物を０℃で１５分間にわたって撹拌した後に水（１０ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。混合した有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下において濃縮した。この残留物をｎ－ペンタン（２×１０ｍＬ）を使用する研和により精製してｒａｃ－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］－ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリルを得た（０．０８ｇ、０．２３ｍｍｏｌ、２工程で８８％の収率）。

【0273】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ、２．４９分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３４９．１； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ８．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３６ （ｓ， ０．７Ｈ）， ８．３４ （ｓ， ０．３Ｈ）， ８．０５ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１１ － ５．１９ （ｍ， ０．４Ｈ）， ４．５７ － ４．６３ （ｍ， ０．７Ｈ）， ４．２４ － ４．２９ （ｍ， ０．８Ｈ）， ３．８９ － ４．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４２ － ３．５７ （ｍ， ２．６Ｈ）， ２．５１ － ２．６１ （ｍ， ０．５Ｈ， 不明瞭）， １．８５ － ２．０５ （ｍ， ２Ｈ）， １．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， 回転異性体混合物

【0274】

小見出しの化合物（１．９ｇ、５．４５ｍｍｏｌ、４７％の収率）をｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）－オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリルＴＦＡ塩（５．０ｇ）からも同様に調製した。

【0275】

工程（ｖｉ）
実施例１：（＋）－（３ａＲ^＊，４Ｒ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル及び
実施例２：（－）－（３ａＲ^＊，４Ｒ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル
実施例１及び実施例２のエナンチオマーへのラセミ体の分離
Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ ２５０ｍｍ×２１．０ｍｍ、５μｍカラムとＵＶ式検出器を取り付けたＳｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－２０ＡＰ装置を使用するＨＰＬＣ クロマトグラフィーによる分離によりラセミ化合物であるｒａｃ－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル（１．５ｇ）から２種類のエナンチオマーの各々を単離した。流速を２０．０ｍＬ／分に設定した。移動相は（Ａ）ｎ－ヘキサン中の０．１％ＤＥＡ及び（Ｂ）７０：３０ＩＰＡ／ＭｅＣＮ混液中の０．１％ＤＥＡであった。２９５ｎｍの最大吸収波長においてＵＶスペクトルを記録した。７０分間の期間にわたって移動相のＢとＡが４０：６０の均一濃度を用いてクロマトグラフィーを実施して以下に記載される２種類のエナンチオマーをそれぞれ４０．０分及び５５．６分の溶出時間で供給した。

【0276】

早い方の溶出画分（実施例２）
（－）－（３ａＲ^＊，４Ｒ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル
収量（０．４４ｇ、１．２６ｍｍｏｌ）、白色の固形物
ＬＣＭＳ：方法Ｈ、２．５６分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３４９．２。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ８．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３５ － ８．３７ （ｍ， １Ｈ）， ８．０６ － ８．０７ （ｍ， １Ｈ）， ５．１２ － ５．１７ （ｍ， ０．４Ｈ）， ４．５９ － ４．６２ （ｍ， ０．７Ｈ）， ４．２５ － ４．２９ （ｍ， ０．７Ｈ）， ３．９１ － ４．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４２ － ３．５９ （ｍ， ２．７Ｈ）， ２．５７ － ２．６１ （ｍ， ０．５Ｈ， 不明瞭）， １．８５ － ２．０５ （ｍ， ２Ｈ）， １．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， 回転異性体混合物
キラルＨＰＬＣ：方法Ｙ１１、１２．８９分；＞９９％のｅｅ．
融点＝１４２℃～１４６℃
［α］_Ｄ ^２５＝－２０８°（ｃ＝０．０５ｇ／１００ｃｍ^３、ＭｅＯＨ）

【0277】

遅い方の溶出画分（実施例１）
（＋）－（３ａＲ^＊，４Ｒ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル
収量（０．４８ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）、白色の固形物
ＬＣＭＳ：方法Ｈ、２．５６分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３４９．２。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ８．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３６ － ８．３８ （ｍ， １Ｈ）， ８．０６ － ８．０７ （ｍ， １Ｈ）， ５．１２ － ５．１６ （ｍ， ０．４Ｈ）， ４．５７ － ４．６５ （ｍ， ０．７Ｈ）， ４．２２ － ４．３０ （ｍ， ０．７Ｈ）， ３．９１ － ４．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４１ － ３．５８ （ｍ， ２．７Ｈ）， ２．６１ － ２．６３ （ｍ， ０．５Ｈ， 不明瞭）， １．８２ － ２．０７ （ｍ， ２Ｈ）， １．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， 回転異性体混合物
キラルＨＰＬＣ：方法Ｙ１１、１５．０９分；＞９９％のｅｅ．
［α］_Ｄ ^２５＝＋２０８°（ｃ＝０．０５ｇ／１００ｃｍ^３、ＭｅＯＨ）。
類似の方法により調製された物質のバッチ：融点＝１４４℃～１４６℃

【0278】

実施例１．代替的合成法
（＋）－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル

【0279】

【化17】

【0280】

工程（ｉ）
ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチル－１－（５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
ＴＨＦ（３７０ｍＬ）中の５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル（３７．０ｇ、１６９．７２ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（３０．７０ｇ、１３５．６４ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にＴＢＤ（２８．３２ｇ、２０３．４７ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。この混合物を放置して室温まで温め、そして２時間にわたって撹拌した後に水（３７０ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×３７０ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮した。この残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ）により精製してｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチル－１－（５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを薄黄色の固形物として得た（２９．０ｇ、７２．７８ｍｍｏｌ、４３％の収率）。

【0281】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ３、２．７９分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３９９．２； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ８．７２ － ８．８２ （ｍ， ２Ｈ）， ８．２０ － ８．２４ （ｍ， １Ｈ）， ７．７６ － ７．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１０ － ５．１１ （ｍ， １Ｈ）， ４．５６ （ｓ， １Ｈ）， ４．０３ （ｓ， １Ｈ）， ３．５７ － ３．８５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．０９ － ２．１４ （ｍ， １Ｈ）， １．７３ － １．８６ （ｍ， １Ｈ）， １．３６ （ｓ， ９Ｈ）， １．２１ － １．１０ （ｍ， ３Ｈ）；キラルＨＰＬＣ、方法Ｙ２４、５．３５分

【0282】

ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（１６５ｇ及び４５７ｇ）を使用して前記方法を同様に２回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ２５５ｇ及び６２０ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は９０４ｇであり、２．２７ｍｏｌであった。

【0283】

工程（ｉｉ）
４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピリジン１－オキシド
ＤＣＭ（４３５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチル－１－（５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（２９．０ｇ、７２．８２ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にｍ－クロロ過安息香酸（３７．６９ｇ、２１８．４６ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。この混合物を放置して室温まで温め、２０時間にわたって撹拌した後に飽和ＮａＯＨ溶液（７２５ｍＬ、２５ｖｏｌ）の中に投入し、そしてＤＣＭ（２×２９０ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を１０％チオ硫酸ナトリウム（２９０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、そして減圧下において濃縮して４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピリジン１－オキシドを黄色の固形物として得た（２８．３０ｇ、６８．３２ｍｍｏｌ、９４％の収率）。

【0284】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ３、２．４１分、ＭＳ： ＥＳ＋ ２５９．０ （Ｍ－５６）； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ｐｐｍ： ８．２５ － ８．２６ （ｍ， ２Ｈ）， ８．０８ － ８．１１ （ｍ， １Ｈ）， ７．７８ －７．７９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．０８ － ５．０９ （ｍ， ０．４ Ｈ）， ４．５４ （ｍ， ０．６ Ｈ）， ４．０２ － ４．０９ （ｍ， １Ｈ）， ３．６６ － ３．８２ （ｍ， ４Ｈ）， ２．０７ － ２．１２ （ｍ， ２Ｈ）， １．６４－１．８４ （ｍ， １Ｈ）， １．３８ （ｓ， ９Ｈ）， １．１５ －１．１９ （ｍ， ３Ｈ）；キラルＨＰＬＣ、方法Ｙ２５、６．１３分

【0285】

ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチル－１－（５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（２５５ｇ及び６２０ｇ）を使用して前記方法を同様に２回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ２３５ｇ及び５５０ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は８１３．３ｇであり、１．９６ｍｏｌであった。

【0286】

工程（ｉｉｉ）
ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ－［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
アセトニトリル（１１３２ｍＬ）中の４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］－ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピリジン１－オキシド（２８．３０ｇ、６８．３２ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にジメチルカルバモイルクロリド（２２．０４ｇ、１８．８７ｍＬ、２０４．９６ｍｍｏｌ）及びＴＭＳＣＮ（２０．３３ｇ、２０４．９６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して添加した。この混合物を８０℃で２時間にわたって加熱し、放置して室温まで冷却した後に水（２８０ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×２８０ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮してｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ－［３，４－ｂ］－ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを褐色の油として得た（２８．０ｇ、６６．１６ｍｍｏｌ、９７％の収率）。

【0287】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ３、３．０６分、 ＭＳ： ＥＳ＋ ３６８．０ （Ｍ－５６）； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ８．８７ － ８．８８ （ｍ， １Ｈ）， ８．４８ （ｓ， １Ｈ）， ８．３４ － ８．３６ （ｍ， １Ｈ）， ８．０３ － ８．０５ （ｍ， １Ｈ）， ４．５５ （ｓ， １Ｈ）， ４．０２ （ｓ， １Ｈ）， ３．５５ － ３．８４ （ｍ， ３Ｈ）， ２．７４ （ｓ， ２Ｈ）， ２．０８ － ２．１３ （ｍ， １Ｈ）， １．７５ － １．８３ （ｍ， １Ｈ）， １．３８ （ｓ， ９Ｈ）， １．１６ － １．２０ （ｍ， ３Ｈ）；キラルＨＰＬＣ、方法Ｙ４、４．６７分

【0288】

４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピリジン１－オキシド（２３５ｇ及び５５０ｇ）を使用して前記方法を同様に２回にわたって繰り返して小見出しの化合物を得た（それぞれ１８０ｇ及び４７０ｇ）。３バッチ全てを混合した重量は６７８ｇであり、１．６０ｍｏｌであった。

【0289】

工程（ｉｖ）
４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリルｐ－ＴＳＡ塩
アセトニトリル（５６０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（２８．０ｇ、６６．１６ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にｐ－ＴＳＡ（６６．０７ｇ、３８３．７２ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。この混合物を放置して室温まで温め、５時間にわたって撹拌した後に減圧下において濃縮して４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリルｐ－ＴＳＡ塩を黄色の油として得た（１１５．０ｇ、収量）。

【0290】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ３、１．９７分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３２４．０；キラルＨＰＬＣ、方法Ｙ２０， ５．１７分

【0291】

ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（６５０ｇ）を使用して前記方法を同様に繰り返して小見出しの化合物を得た（１０００ｇ）。２バッチ全てを混合した重量は１１１５ｇであり、３．４４ｍｏｌであった。

【0292】

工程（ｖ）
（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル
ＴＨＦ：水の混液（５．４Ｌ、２：１）の中の４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）－オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリルｐ－ＴＳＡ塩（１８０．０ｇ、３６３．２２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＫ_２ＣＯ_３（１４５．２６ｇ、１０５２．６３ｍｍｏｌ）を室温で添加し、そして５分間にわたって撹拌した。臭化シアン（２６．０ｇ、２４５．６１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。この混合物を放置して室温まで温め、そして１時間にわたって撹拌した後にこの混合物を減圧下において濃縮し、残留物を氷冷水（２Ｌ）の中に投入して沈殿を形成した。この固形物を減圧下において濾過により収集した。この固形物を水（２Ｌ）の中に再懸濁し、室温で２時間にわたって撹拌した後に減圧下において濾過した。この固形物を冷却水（１Ｌ）で洗浄し、続いてｎ－ヘキサン（５００ｍＬ）、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）、及びＩＰＡ（１００ｍＬ）で洗浄して（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリルを得た（４０．０ｇ、１１４．８３ｍｍｏｌ、３２％の収率）。

【0293】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ３、２．５０分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３４９．０； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ８．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５０ （ｓ， １Ｈ）， ８．３５ － ８．３７ （ｍ， １Ｈ）， ８．０５ － ８．０６ （ｍ， １Ｈ）， ５．１２ － ５．１３ （ｍ， ０．４Ｈ）， ４．５７ － ４．６１ （ｍ， ０．６Ｈ）， ４．２３ － ４．２８ （ｍ， ０．７Ｈ）， ３．８９ － ４．００ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４１ － ３．５８ （ｍ， ２．４Ｈ）， ２．５４ － ２．６７ （ｍ， １Ｈ， 不明瞭）， １．８９ － ２．０６ （ｍ， ２Ｈ）， １．２７ － １．３０ （ｍ， ３Ｈ）， 回転異性体混合物； ＨＰＬＣ：方法Ｘ２、１９．７８分、９９．９６％；キラルＨＰＬＣ、方法Ｙ１５、１５．２９分；＞９９％のｅ．ｅ．、融点＝１４７℃～１４９℃；［α］_Ｄ ^２５＝＋２０２°（ｃ＝０．０５ｇ／１００ｃｍ^３、ＭｅＯＨ）。

【0294】

工程（ｖ）（代替的合成法）
（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル
ＴＨＦ：水の混液（８０４ｍＬ、９：５）の中の４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）－オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリルｐ－ＴＳＡ塩（１１５．０ｇ、２３２．０６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＫ_２ＣＯ_３（９８．２２ｇ、７１１．７６ｍｍｏｌ）を室温で添加し、そして１０分間にわったって撹拌した。臭化シアン（１８．８６ｇ、１７７．９４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。この混合物を放置して室温まで温め、そして２時間にわたって撹拌した後に水（１１５０ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×１１５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下において濃縮した。この残留物をＩＰＡ（５７５ｍＬ）の中に懸濁し、８０℃で２時間にわたって加熱して透明な溶液を形成した。この混合物を放置してゆっくりと室温まで冷却して結晶固形物を形成し、この結晶固形物を減圧下において濾過により収集し、冷ＩＰＡ（１１５ｍＬ）で洗浄し、そして減圧下において乾燥して（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］－ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリルを得た（１５．０ｇ、４３．０８ｍｍｏｌ、１９％の収率）。

【0295】

４－（２－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－４－メチル－オクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）－オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリルｐ－ＴＳＡ塩（１０００ｇ）を使用して前記方法を同様に繰り返して標記化合物（２８８ｇ）を得た。ＴＨＦ（９０９ｍＬ、３ｖｏｌ）中の２８８ｇ及び１５ｇの（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］－ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリルの溶液を室温で２時間にわたって撹拌して透明な溶液を形成した。溶媒を減圧下において除去して白色の固形物を得て、この固形物をさらにペンタン（３００ｍＬ、１ｖｏｌ）で洗浄し、そして減圧下において４５℃以下で４時間にわたって乾燥して（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］－ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリルを得た（３０３．０ｇ）。

【0296】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ３、２．５２分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３４９．０； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ８．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４８ （ｓ， １Ｈ）， ８．３０ － ８．３８ （ｍ， １Ｈ）， ８．０４ － ８．０５ （ｍ， １Ｈ）， ５．１２ － ５．１３ （ｍ， ０．４Ｈ）， ４．５９ － ４．６０ （ｍ， ０．６Ｈ）， ４．２３ － ４．２７ （ｍ， ０．６Ｈ）， ３．９１ － ４．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４１ － ３．５６ （ｍ， ２．４Ｈ）， ２．５４ － ２．６１ （ｍ， １Ｈ， 不明瞭）， １．８４ － ２．０４ （ｍ， ２Ｈ）， １．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， 回転異性体混合物；キラルＨＰＬＣ、方法Ｙ１５、１５．１１分； ＨＰＬＣ：方法Ｅ、２７．８７分； ＞９９％のｅ．ｅ．、ｄ．ｒ．＝９９．５：０．５；融点＝１６１°Ｃ～１６２℃； ［α］_Ｄ ^２５＝＋２０４°（ｃ＝０．０５ｇ／１００ｃｍ^３、ＭｅＯＨ）。

【0297】

実施例３及び実施例４
（＋）－（３ａＲ^＊，４Ｓ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、及び
（－）－（３ａＲ^＊，４Ｓ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル

【0298】

【化18】

【0299】

【化19】

【0300】

工程（ｉ）
ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（非主要異性体）及びｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（主要異性体）
ＤＣＭ（７００ｍＬ）中のｒａｃ－（３ａＲ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール塩酸塩（（中間産物Ｂの途中の工程（ｖ）の生成物，６８．０ｇ、２６９．３１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にトリエチルアミン（１３６．０ｇ、１８７．３ｍＬ、１３４６．５５ｍｍｏｌ）、４－ジメチルピリジン（１．６４ｇ、１３．４６ｍｍｏｌ）、及び二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（７０．５１ｇ、３２３．１７ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。この混合物を放置して室温まで温め、そして６時間にわたって撹拌した後に水（１０００ｍＬ）の中に投入し、そしてＤＣＭ（２×１０００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下において濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（１００～２００サイズのシリカゲル、ｎ－ヘキサン中の７％～９％ＥｔＯＡｃ）により精製して２つの分離した画分である画分１（非主要異性体、０．８ｇ、２．５３ｍｍｏｌ、０．９４％の収率）及び画分２（主要異性体、３８．０ｇ、１２０．２５ｍｍｏｌ、４５％の収率）として小見出しの化合物を得た。

【0301】

画分１のＬＣＭＳ：方法Ｈ１、４．１９分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３１７．２． 画分２のＬＣＭＳ：方法Ｈ１、３．８７分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３１７．０． 非主要異性体画分１を次の工程（ｉｉ）に送った。

【0302】

工程（ｉｉ）
ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
エタノール（１０ｍＬ）中のｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－ベンジル－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］－ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（画分１、非主要異性体、０．８ｇ、２．５３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％の水分、０．８ｇ）を添加し、そして室温で１６時間にわたって水素ガスでパージした。この混合物をセライト（登録商標）に通して濾過し、エタノール（５０ｍＬ）で洗浄し、そして減圧下において濃縮してｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを得た（０．４２ｇ、１．８５ｍｍｏｌ、７３％の収率）。

【0303】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ１、２．２５分、ＭＳ： ＥＳ＋ ２２７．２。

【0304】

工程（ｉｉｉ）
ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－４－メチル－１－（５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
トルエン（７ｍＬ）中の５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル（０．４９ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）及びｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（０．４１ｇ、１．７９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を４０℃で１０分間にわったって加熱して両方の出発物質を溶解し、その後に０℃まで冷却し、続いてトルエン（２ｍＬ）中のＴＢＤ（０．１５ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下して添加した。この混合物を放置して室温まで温め、３時間にわたって撹拌した後に水（５０ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下において濃縮した。この残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ－ヘキサン中の８０％～９０％ＥｔＯＡｃ）により精製してｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－４－メチル－１－（５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを得た（０．４３ｇ、１．０９ｍｍｏｌ、４８％の収率）。

【0305】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ１、２．８８分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３９９．２。

【0306】

工程（ｉｖ）
ｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピリジン１－オキシド
ＤＣＭ（７ｍＬ）中のｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－４－メチル－１－（５－（ピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（０．４３ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にｍ－クロロ過安息香酸（０．３７ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。この混合物を放置して室温まで温め、そして１６時間にわたって撹拌した。この混合物を水（１００ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２×１００ｍＬ）で洗浄し、１０％チオ硫酸ナトリウム（２×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、そして減圧下において濃縮してｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピリジン１－オキシドを得た（０．３９ｇ、０．９５ｍｍｏｌ、８７％の収率）。

【0307】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ１、２．５０分、ＭＳ： ＥＳ＋ ［Ｍ－５６］ ３５９．０。

【0308】

工程（ｖ）
ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート
ＭｅＣＮ（７ｍＬ）中のｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピリジン１－オキシド（０．３９ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にジメチルカルバモイルクロリド（０．３０ｇ、０．２６ｍＬ、２．８３ｍｍｏｌ）及びトリメチルシリルシアニド（０．２８ｇ、０．３６ｍＬ、２．８３ｍｍｏｌ）を室温で滴下して添加した。この混合物を８０℃で２時間にわたって加熱した後に１０％Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液（５０ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下において濃縮した。この残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ－ヘキサン中の８０％～９０％ＥｔＯＡｃ）により精製してｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］－ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラートを得た（０．３８ｇ、０．８９ｍｍｏｌ、９５％の収率）。

【0309】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ１、３．１５分、ＭＳ： ＥＳ＋ ［Ｍ－５６］ ３６８．０。

【0310】

工程（ｖｉ）
ｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリル
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボキシラート（０．３８ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にｐ－トルエンスルホン酸一水和物（０．８４ｇ、４．４５ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。この混合物を放置して室温まで温め、そして６時間にわたって撹拌した後に減圧下において濃縮してｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリルｐ－ＴＳＡ塩を得た（０．５２ｇ、収量）。

【0311】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ１、１．９３分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３２４．０。

【0312】

工程（ｖｉｉ）
ｒａｃ－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル
ＴＨＦ（１０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）の混液中のｒａｃ－４－（２－（（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－４－メチルオクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボニル）オキサゾール－５－イル）ピコリノニトリルｐ－ＴＳＡ塩（０．５２ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＫ_２ＣＯ_３（０．７０ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）を室温で添加し、そして５分間にわたって撹拌し。臭化シアン（０．１３ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。この混合物を放置して室温まで温め、１時間にわたって撹拌した後に水（５０ｍＬ）の中に投入し、そしてＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下において濃縮した。この残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ－ヘキサン中の９０％～９５％ＥｔＯＡｃ）により精製してｒａｃ－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリルを得た（０．１８ｇ、０．５２ｍｍｏｌ、２工程で５７％の収率）。

【0313】

ＬＣＭＳ：方法Ｈ１、２．４８分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３４９．０； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ ８．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５０ （ｓ， １Ｈ）， ８．３５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．２， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．０６ － ５．１０ （ｍ， ０．６Ｈ）， ４．５６ － ４．６０ （ｍ， ０．７Ｈ）， ４．１６ － ４．２１ （ｍ， ０．７Ｈ）， ３．４４ － ３．９５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８１ － ２．９３ （ｍ， １Ｈ）， １．７７ － １．９９ （ｍ， ２Ｈ）， １．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， 回転異性体混合物； ＨＰＬＣ：方法Ｅ、２８．５８分；ｄ．ｒ．＝９８．８：１．２

【0314】

工程（ｖｉｉｉ）
実施例３：（＋）－（３ａＲ^＊，４Ｓ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、及び
実施例４：（－）－（３ａＲ^＊，４Ｓ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル
Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＧ ２５０ｍｍ×２１．０ｍｍ、５μｍカラムとＵＶ式検出器を取り付けたＳｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－２０ＡＰ装置を使用するクロマトグラフィーによる分離によりラセミ化合物であるｒａｃ－（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル（０．１０ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）から２種類のエナンチオマーの各々を単離した。流速を２０．０ｍＬ／分に設定した。移動相は（Ａ）ＭｅＯＨ中の０．１％ＤＥＡ及び（Ｂ）ＭｅＣＮ中の０．１％ＤＥＡであった。２９２ｎｍの最大吸収波長においてＵＶスペクトルを記録した。３５分間の期間にわたって移動相のＢとＡが５０：５０の均一濃度を用いてクロマトグラフィーを実施して以下に記載される２種類のエナンチオマーをそれぞれ８．０３分及び１２．９５分の溶出時間で供給した。

【0315】

早い方の溶出画分（実施例３）
（＋）－（３ａＲ^＊，４Ｓ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル
収量（２３ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）。ＬＣＭＳ：方法Ｈ１、２．４９分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３４９．０； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ ８．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５０ （ｓ， １Ｈ）， ８．３５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．２， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．０６ － ５．１１ （ｍ， ０．６Ｈ）， ４．５６ － ４．６１ （ｍ， ０．７Ｈ）， ４．１６ － ４．２２ （ｍ， ０．７Ｈ）， ３．４３ － ３．９５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８１ － ２．９５ （ｍ， １Ｈ）， １．７７ － １．９８ （ｍ， ２Ｈ）， １．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， 回転異性体混合物； キラルＨＰＬＣ：方法Ｙ１７、８．１１分

【0316】

遅い方の溶出画分（実施例４）
（－）－（３ａＲ^＊，４Ｓ^＊，６ａＲ^＊）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル
収量（１９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）。ＬＣＭＳ：方法Ｈ１、２．４９分、ＭＳ： ＥＳ＋ ３４９．０； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ ８．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５０ （ｓ， １Ｈ）， ８．３５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０５ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．０６ － ５．１１ （ｍ， ０．６Ｈ）， ４．５６ － ４．６０ （ｍ， ０．７Ｈ）， ４．１６ － ４．２１ （ｍ， ０．７Ｈ）， ３．４３ － ３．９５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８１ － ２．９５ （ｍ， １Ｈ）， １．７７ － １．９９ （ｍ， ２Ｈ）， １．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， 回転異性体混合物； キラルＨＰＬＣ：方法Ｙ１７、１３．１７分

【0317】

実施例３：白色の固形物；キラルＨＰＬＣ：方法Ｙ１７、８．１１分；＞９９％のｅ．ｅ．；ｄ．ｒ．＝９９．５：０．５；融点＝２０６℃～２０７℃；［α］_Ｄ ^２５＝＋１６６°（ｃ＝０．０５ｇ／１００ｃｍ^３、ＭｅＯＨ）。

【0318】

実施例４：白色の固形物；キラルＨＰＬＣ：方法Ｙ１７、１３．１７分；＞９９％のｅ．ｅ．；ｄ．ｒ．＝９９．５：０．５；融点＝２０６℃～２０７℃；［α］_Ｄ ^２５＝－１５６°（ｃ＝０．０５ｇ／１００ｃｍ^３、ＭｅＯＨ）。

【0319】

実施例１～実施例４のキラルＨＰＬＣ
ＨＰＬＣ方法及びキラルＨＰＬＣ方法を用いて実施例１～実施例４を分析した。これらの４種類の異性体のベースライン分離は単一の系では観察されず、そのためキラルＨＰＬＣ（方法Ｙ２８）を用いてエナンチオマーの純度を決定し、一方でキラルＨＰＬＣ（方法Ｅ）を用いてジアステレオマー比率を決定した。

【0320】

本発明の化合物の生物活性

【0321】

【表23】

【0322】

ＵＳＰ３０生化学的ＩＣ_５０アッセイ
５０％ＤＭＳＯ中に終濃度の２１倍（１００μＭの終濃度では２１００μＭ）の倍率で希釈プレートを９６ウェルポリプロピレンＶ字底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ番号６５１２０１）に調製した。典型的な８点希釈シリーズは１００μＭ、３０μＭ、１０μＭ、３μＭ、１μＭ、０．３μＭ、０．１μＭ、及び最終的に０．０３μＭになる。黒色３８４ウェルプレート（少量用、Ｇｒｅｉｎｅｒ番号７８４０７６）の中で２１μｌの最終反応体積の反応を２組実施した。１μｌの５０％ＤＭＳＯ又は希釈化合物のどちらかをこのプレートに添加した。ＵＳＰ３０（Ｂｏｓｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ、番号Ｅ５８２）を反応緩衝液（４０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ２０、０．５ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、５ｍＭ β－メルカプトエタノール）の中に希釈して４ｎＭの最終アッセイ濃度を実現し、１０μｌの希釈ＵＳＰ３０をこの化合物に添加した。酵素及び化合物を室温で３０分間にわたってインキュベートした。５０ｎＭのイソペプチド結合を介してＴＡＭＲＡ標識ペプチドに連結したユビキチン蛍光偏光基質として添加することにより反応を開始した。基質を添加したすぐ後とその後の２時間にわたって室温でインキュベートしている間に反応を読んだ。Ｐｈｅｒａｓｔａｒ Ｐｌｕｓ （ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）上で読み取りを行った。励起光波長は５４０ｎｍであり、放射光波長は５９０ｎｍであった。

【0323】

ＵＳＰ３０生化学的ＩＣ_５０アッセイにおける例となる化合物の活性

【0324】

【表24】

【0325】

参照例
ＵＳＰ３０生化学的ＩＣ_５０アッセイにおける例となる化合物の活性

【0326】

【表25】

【0327】

オフターゲット薬理学
実施例１をＥｕｒｏｆｉｎｓ ＣＥＲＥＰ ＳａｆｅｔｙＳｃｒｅｅｎ４４パネル中の薬理学的プロファイリングの対象とした。１０μＭという単一の濃度ではこのパネルの中の全ての標的に対して５０％未満の結合阻害又は酵素活性阻害が観察された。このアッセイの標的に対するこの低い親和性のため、実施例１はオフターゲット相互作用の可能性が低い。

【0328】

安全性薬理学
ｈＥＲＧカリウムチャネルを安定的に発現するＣＨＯ細胞においてこのカリウムチャネルに対する実施例１の効果について０．０１μＭと３０μＭとの間の濃度で評価した。実施例１は、３０μＭで２７％というｈＥＲＧ電流振幅の最大阻害値を生じ、ＱＴ間隔に影響する傾向がほとんどないことを示した。

【0329】

遺伝毒性学
実施例１を細菌復帰突然変異アッセイ（エームズ試験）及びインビトロ小核アッセイにおいて評価した。細胞毒性又は不溶性によって制限されるまでの濃度を用いて、外因性代謝活性化を行い、又は行わずに全てのインビトロ試験を実施した。実施例１は、サルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ＴＡ９８株、ＴＡ１００株、ＴＡ１５３５株、及びＴＡ９７ａ株、並びに大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＷＰ２ ｕｖｒＡ ｐＫＭ１０１株の復帰突然変異アッセイにおいて外因性代謝活性化を行い、又は行わずに５０００μｇ／プレートの濃度まで検査されたときに突然変異を誘導しなかった。

【0330】

ＴＫ６細胞でのインビトロ小核アッセイを用いて染色体損傷の誘発を評価した。実施例１は、外因性代謝活性化が存在する状態で３時間にわたってインキュベートし、続いて２７時間の回復期にわたってインキュベートしたときに小核の誘発についてネガティブであり、及びａｌｓｏ外因性代謝活性化が存在しない状態で２７時間にわたってインキュベートし、続いて２７時間の回復期にわたってインキュベートしたときにも小核の誘発についてネガティブであった。

【0331】

ＴＯＭ２０ユビキチン化アッセイ
ＴＯＭ２０のユビキチン化を誘導するためにヒト細胞株にミトコンドリア脱分極剤（イオノフォア（例えば、ＣＣＣＰ、バリノマイシン）、ミトコンドリア複合体阻害剤（オリゴマイシン、アンチマイシンＡ））を負荷することができ、続いてＵＳＰ３０阻害剤が存在する状態でこのユビキチン化をさらに促進する。この後、ＴＯＭ２０ユビキチン化を細胞溶解物のウエスタンブロッティングにより評価し、付加された各ユビキチン分子について８ｋＤａの分子量の増加があるためＴＯＭ２０ユビキチン化付加物の検出が可能になり、その結果としてＴＯＭ２０免疫反応バンドのラダーが生じる。標識された免疫反応バンドの化学発光強度測定を用いてＴＯＭ２０のユビキチン化レベルを定量することができる。

【0332】

ＵＳＰ３０内在性細胞標的結合アッセイ
ＹＦＰ－パーキンを安定して発現するＨｅｌａ細胞を６ウェルディッシュの中に播種した。細胞が接着したところで３７℃、５％ＣＯ_２において細胞を適切な濃度の被験化合物又はベヒクル対照で１時間にわたって処理した。これらの細胞を冷ＰＢＳの中に採取し、遠心分離し、そして溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓベース、ｐＨ７．５、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ－４０／Ｉｇｅｐａｌ ＣＡ－６３０、２ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１０％ グリセロール、５ｍＭ β－メルカプトエタノール、ｃＯｍｐｌｅｔｅ（商標）ミニタブレットＥＤＴＡフリー（Ｒｏｃｈｅ）、ＰｈｏｓＳｔｏｐタブレット（Ｒｏｃｈｅ））の中で１０分間にわったって溶解することにより全細胞溶解物を調製した。清澄化した細胞溶解物の２０μｇに等しい量のタンパク質を２．５μＭの終濃度のＨＡ－Ａｈｘ－Ａｈｘ－Ｕｂ－ＶＭＥプローブと共に室温でインキュベートした。５×ＳＤＳサンプル負荷緩衝液を添加することによりこの反応を停止し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びウエスタンブロッティングによりタンパク質を分離した。抗ＵＳＰ３０ヒツジＳ７４６Ｄ抗体（ＭＲＣ ＰＰＵ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）及びホースラディッシュペルオキシダーゼ結合ウサギ抗ヒツジＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体（Ｔｈｅｒｍｏ番号３１４８０）を使用してＵＳＰ３０を検出し、ＥＣＬ試薬（ＧＥ番号ＲＰＮ２１０９）を使用してＧＥ ＬＡＳ４０００イメージャー上で画像撮影した。ＵＳＰ３０及びＵｂ－ＶＭＥプローブに結合したＵＳＰ３０に対応するバンドを定量することにより標的の結合を測定し、ベヒクル処理対照と比較した割合を表した。

【0333】

インビトロ細胞毒性（Ｃｅｌｌ Ｔｏｘ）
アッセイエンドポイントとしてａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）を使用してＨＣＴ１１６ヒト大腸癌細胞において測定した。９６時間の連続化合物曝露期間にわたって化合物の細胞毒性を測定した。

【0334】

その他の試験
ｌｏｇＰ：分配係数；親油性測定
ｌｏｇＤ：分配係数；親油性測定
ＴＰＳＡ：トポロジカル極性表面積
濁度測定溶解性：ＤＭＳＯ中に被験化合物溶液を調製し、水性緩衝液中に希釈する。濁度測定法を６２０ｎｍでの吸光度測定によりエンドポイントとして使用する。
ＦａＳＳＩＦ：ｐＨ６．５で測定される人工空腹時腸液
マウス肝細胞Ｃｌ：マウス細胞におけるインビトロ肝細胞クリアランス
ヒト肝細胞Ｃｌ：ヒト細胞におけるインビトロ肝細胞クリアランス
血漿ｆ_ｕ，ｐ：インビトロ平衡透析により決定される血漿調製物中の化合物の遊離画分。未結合（遊離）化合物のみが標的と結合できると理解される。
脳ｆ_ｕ，ｂｒ：インビトロ平衡透析により決定される脳ホモジネート調製物中の化合物の遊離画分。未結合（遊離）化合物のみが標的と結合できると理解される。
Ｃｌ_ｕ：インビトロクリアランス。本明細書において定義されるＣｌ_ｕは、固有のクリアランスから計算されるスケール変更後のクリアランスである。固有のクリアランスは肝臓代謝反応から予測されるクリアランスであり、肝細胞調製物中で化合物をインキュベートすることから決定される。ｍＬ／分／ｋｇ単位の値が小さいほど化合物はより安定である。
Ｃｌ：インビボクリアランス。ある物質が単位時間当たりで完全に除去される血漿（又はあらゆるマトリックス）の体積の薬物動態測定値である。ｍＬ／分／ｋｇ単位の値が小さいほど化合物はより安定である。
Ｏｒａｌ Ｆ：経口生物学的利用率
ＭＤＲ１－ＭＤＣＫ（マディン・ダービーイヌ腎臓細胞単層）（インビトロ）透過アッセイ
ＷＴ－ＭＤＣＫ（野生型）インビトロ透過アッセイ
Ｋｐ_ｕｕは血漿中の未結合薬品に対する脳内の未結合薬品の比率であり、末梢適応症及び／又はＣＮＳ適応症に対する治療効力を表し得る。

【0335】

【表26】

【0336】

【表27】

【0337】

実施例１は、他の化合物よりも優れている可能性を示す有益な特性を有している。例えば、マウスで測定された場合の１９ｍＬ／分／ｋｇというＩＶ投与時の血漿クリアランス観察値は、価値ある血漿中安定性を証明する低い値であり、この化合物は、８７％という例外的な経口生物学的利用率を有する。

【0338】

実施例１は、マウス及びラットにおける３０ｍｇ／ｋｇの用量の投与後の脳の領域の微小透析試料採取によって決定される場合、経口投与後の優れたインビボＣＮＳ分布を示す。高濃度の実施例１が投与後数時間にわたって未結合状態で観察されたことからＣＮＳ内の標的適用期間が適切に推定されることになる。また、３０ｍｇ／ｋｇの用量でイヌに経口投与されたとき、実施例１は脳脊髄液（ＣＳＦ）への高い分配率を示した。

【0339】

【表28】

【0340】

【表29】

【0341】

比較データ
参照例Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは、ＵＳＰ３０の阻害剤と同程度に活性を有するものとして特定されており、且つ、シアナミド構造の特徴を有する本発明の前記化合物と構造的類似性を幾らか有する公知のＤＵＢ阻害剤である。参照例Ｄ及びＥは、ＵＣＨＬ１阻害活性を有するものとして国際公開第２０１６／０４６５３０号パンフレットに開示されている。

【0342】

実施例１は、（マウス肝細胞において測定した場合に）参照例Ａ、Ｂ、及びＣと比較して、著しく改善された肝細胞代謝安定性を示す。実施例１は、（マウス血漿において測定した場合に）参照例Ａ、Ｂ、及びＣと比較して、著しく（少なくとも２～８倍）改善された血漿中安定性を示す。

【0343】

ＵＳＰ３０に対する効力
本発明の実施例１は、前記生化学的アッセイにおいて測定した場合に参照例Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥよりも有意にＵＳＰ３０に対して効力がある。実施例１は、参照例Ｂ及びＣよりも６倍の効力があり、参照例Ａ及びＤよりも２４倍の効力があり、参照例Ｅよりも４００倍の効力がある。

【0344】

他のＤＵＢを超えるＵＳＰ３０への選好性
提示されたデータは、実施例１が、参照例Ａ、Ｂ及びＣと比較して、有意に高い選好性を７種類のＤＵＢ（ＵＳＰ２、ＵＳＰ６、ＵＳＰ１０、ＵＳＰ１６、ＵＳＰ２１、ＵＳＰ２５、及びＵＳＰ２８）よりもＵＳＰ３０対して有することを示している。実施例１は、これらの７種類のＤＵＢの各々に対するよりもＵＳＰ３０に対して２２６０倍を超える高い効力を有する。これは、それぞれ３．３倍の効力及び７．７倍の効力という低い効力を有する参照例Ａ及びＢを超える著しく有利な選好性である。参照例Ｃは５６倍高い効力を別のＤＵＢに対するよりもＵＳＰ３０に対して有し、参照例Ａ及びＢよりも高い選好性を有するが、それでも実施例１よりも著しく劣っている。

【0345】

ＵＣＨＬ１を超えるＵＳＰ３０への選好性
提示されたデータは、実施例１が、参照例Ｄ及びＥと比較して、有意に高い選好性をＵＣＨＬ１よりもＵＳＰ３０に対して有することを示している。実施例１は、ＵＣＨＬ１に対するよりもＵＳＰ３０に対して２７０００倍を超える高い効力を有し、一方で参照例Ｄ及びＥはそれぞれわずかに０．８倍及び１．５倍である。

【0346】

カテプシンＢ、Ｋ、Ｌ、Ｓ及びＶを超えるＵＳＰ３０への選好性
提示されたデータは、実施例１が、参照例Ａ、Ｂ、及びＣと比較して、有意に高い選好性をカテプシン（Ｂ、Ｋ、Ｌ、Ｓ、及びＶ）よりもＵＳＰ３０に対して有することを示している。実施例１は、これらのカテプシンに対するよりもＵＳＰ３０に対して３８００倍を超える高い効力を有する。これは、参照例Ａ、Ｂ、及びＣを超える著しく有利な選好性である。

【0347】

具体的には、実施例１は、効力がそれぞれ２０倍及び１６．７倍高いだけの参照例Ｂ及びＣと比較して、カテプシンＢに対するよりもＵＳＰ３０に対して１８０００倍を超える高い効力を有する。実施例１は、効力がそれぞれ２倍及び６．１倍高いだけの参照例Ａ及びＣと比較して、カテプシンＫに対するよりもＵＳＰ３０に対して９９００倍を超える高い効力を有する。

【0348】

先行技術の参照例を超える本発明の実施例１の上で特定された利点はどちらも有意であり、且つ予期せぬものである。これらの利点が単独のとき、特に組み合わせられたとき、この優越性がこの化合物をＵＳＰ３０活性に関連する疾患の治療又は予防での使用に特に適切なものとしている

【0349】

前臨床インビボモデル
本発明の化合物の有効性について、例えば以下の文献を含む公開文献の標準的試験方法を用いて代表的なインビボ疾患モデルにおいて検査することができる。

【0350】

（ａ）特発性肺線維症の主要前臨床インビボモデルであるブレオマイシン誘発肺線維症モデル［Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ， ２０１６， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ， １９７（２）：５０４－５１６］

【0351】

（ｂ）ＮＡＦＬＤ及びブドウ糖恒常性の食事誘発モデル［Ｎｉｓｈｉｄａ ｅｔ ａｌ， ２０１３， Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ； Ｆｅｂ；９３（２）：２３０－４１］

【0352】

（ｃ）化学誘発ミトコンドリア機能不全によって引き起こされる脳ドーパミン作動系の神経変性を観察するための一般的に使用されるパラダイムであるパーキンソン病のＭＰＴＰモデル［Ｋａｒｕｐｐａｇｏｕｎｅｒ ｅｔ ａｌ， ２０１４， Ｓｃｉ Ｒｅｐ． ２０１４ Ｍａｙ ２；４：４８７４］

【0353】

（ｄ）Ｎｄｕｆｓ４ＫＯリー症候群モデル．［Ｋｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ， ２００８， Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ． Ａｐｒ；７（４）：３１２－２０］

【0354】

（ｅ）海馬・認知・運動機能に対する効果の加齢げっ歯類モデル［Ｋｏｂｉｌｏ ｅｔ ａｌ， ２０１４， Ｌｅａｒｎ Ｍｅｍ． Ｊａｎ １７；２１（２）：１１９－２６； Ｃｒｅｅｄ ｅｔ ａｌ， ２０１９， Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ． Ｊｕｎ １５；４０９：１６９－１７９； Ｖａｎ Ｓｋｉｋｅ ｅｔ ａｌ， ２０２０， Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ． １９； ｅ１３０５７］

【0355】

加齢したげっ歯類動物は、認知能力の生化学的及び機能的変化を裏付ける海馬の神経変性を自然に発生させる。ミトコンドリアエネルギー産生の一部としての神経細胞におけるグルタミン利用との間の緊密な関係を考慮すると、グルタミン／グルタミン酸軸を海馬の健康状態の代用として捉えることができる。

【0356】

（ｆ）一側性尿管閉塞性腎臓病モデル（ＵＵＯ）［Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ， ２００９， Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ７５（１１）： １１４５－１１５２］。

【0357】

ＵＵＯは、尿細管細胞傷害、間質性炎症、及び線維症を特徴とする腎臓損傷を引き起こす。これは不可逆的腎後性急性腎障害（ＡＫＩ）のモデルとして機能する。実験的ＵＵＯによってアポトーシス、炎症、及び線維症の分子機構が示されており、これらの全てが、一次侵襲とはかかわりなく、腎臓損傷の重要な過程である。その結果、研究者はＵＵＯモデルから閉塞以外にも情報を得る（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ， ２００９， Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ７５（１１）： １１４５－１１５２）。

【0358】

実施例１をＵＵＯモデルにおいて評価して進行性尿細管間質線維症及び慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）を緩和する前記化合物の能力を決定した。

【0359】

試験の１日目に以下の投与計画のうちの１つ、すなわち１日に２回（ＢＩＤ）のベヒクル、１．５ｍｇ／ｋｇの実施例１、又は５ｍｇ／ｋｇの実施例１（経口投与）に従って強制経口投与によって成体Ｃ５７ＢＬ／６マウスに投与を行った。１日目の投与から２時間後に試験マウスは左側の尿管を２点において結索するための手術を受けた。成功したＵＵＯ手術は後に水腎症に起因する腎盂の膨張の観察により確認された。処方計画に従って１０日間にわたってこれらの動物に投与を行い、この時点で腎臓を組織病理学評価及びタンパク質／ＲＮＡ評価のために採取した。ピクロシリウスレッド染色を実施してコラーゲン沈着の程度を評価し、ＩＨＣを用いてα－平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ）の相対的発現を評価した。

【0360】

１日に２回（ＢＩＤ）投与された１．５ｍｇ／ｋｇの実施例１と５ｍｇ／ｋｇの実施例１（経口投与）の両方が、結索手術を受けた腎臓でのピクロシリウスレッド染色の減少によって実証されるように、コラーゲン沈着を統計学的に減少させたことが結果から示された。１日に２回（ＢＩＤ）の１．５ｍｇ／ｋｇの実施例１の経口投与によりベヒクル処理対照と比較するとＵＵＯ傷害腎臓においてα－ＳＭＡレベルの統計学的減少が引き起こされることがα－ＳＭＡ染色の評価によって示された。

【0361】

（ｇ）ＡＫＩは、腎機能の多大な損害、尿細管損傷、及び炎症を生じる虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）を引き起こす両側腎茎クランプによって誘発可能である［Ｌｕ ｅｔ ａｌ． ２０１２． Ｊ Ｎｅｐｈｒｏｌ． ２５ （５）： ７３８－４５］。

【0362】

本発明のパラグラフ

【0363】

１． 以下の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【0364】

【化20】

【0365】

２． 以下の式（ＩＡ）を有するパラグラフ１に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【0366】

【化21】

【0367】

３． 以下の式（ＩＢ）を有するパラグラフ１に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【0368】

【化22】

【0369】

４． 以下の式（ＩＣ）を有するパラグラフ１に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【0370】

【化23】

【0371】

５． 以下の式（ＩＤ）を有するパラグラフ１に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【0372】

【化24】

【0373】

６． 以下の
（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＳ，４Ｓ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＳ，４Ｒ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、及び
（３ａＳ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
から選択されるパラグラフ１に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【0374】

７． 以下の
（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＳ，４Ｓ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、及び
（３ａＳ，４Ｒ，６ａＳ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリル、
から選択されるパラグラフ６に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【0375】

８． （３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）－１－（５－（２－シアノピリジン－４－イル）オキサゾール－２－カルボニル）－４－メチルヘキサヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピロール－５（１Ｈ）－カルボニトリルであるパラグラフ７に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【0376】

９． 医薬品として使用されるパラグラフ１～８のいずれか１つのパラグラフに記載の化合物 又は薬学的に許容可能なその塩。

【0377】

１０． ミトコンドリア機能不全に関係する健康状態、癌、又は線維症の治療又は予防に使用されるパラグラフ１～８のいずれか１つのパラグラフに記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。

【0378】

１１． ミトコンドリア機能不全に関係する健康状態、癌、又は線維症の治療又は予防に使用される医薬品の製造におけるパラグラフ１～８のいずれか１つのパラグラフに記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩の使用。

【0379】

１２． 必要とする患者に対してパラグラフ１～８のいずれか１つのパラグラフに記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩の有効量を投与する工程を含む、ミトコンドリア機能不全に関係する健康状態、癌、又は線維症を治療又は予防するための方法。

【0380】

１３． ミトコンドリア機能不全に関係する前記症状が、ＣＮＳ障害、神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、ハンチントン病、虚血、脳卒中、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、ミトコンドリア脳症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群、難聴を伴う母性遺伝糖尿病、レーバー遺伝性視神経症；神経障害・運動失調・網膜色素変性症・母性遺伝リー症候群、ダノン病、糖尿病、糖尿病性腎症、代謝障害、心不全、心筋梗塞につながる虚血性心疾患、精神疾患、精神分裂病、マルチプルスルファターゼ欠損症、ムコリピドーシスＩＩ型、ムコリピドーシスＩＩＩ型、ムコリピドーシスＩＶ型、ＧＭ１－ガングリオシドーシス、神経セロイドリポフスチン症、アルパーズ病、バース症候群、β酸化欠損、カルニチン－アシル－カルニチン欠乏症、カルニチン欠乏症、クレアチン欠乏症候群、コエンザイムＱ１０欠乏症、ミトコンドリア複合体Ｉ欠損症、ミトコンドリア複合体ＩＩ欠損症、ミトコンドリア複合体ＩＩＩ欠損症、ミトコンドリア複合体ＩＶ欠損症、ミトコンドリア複合体Ｖ欠損症、チトクロームＣオキシダーゼ（ＣＯＸ）欠損症、慢性進行性外眼筋麻痺症候群、カルニチンパルミチントランスフェラーゼ（ＣＰＴ）Ｉ欠損症、カルニチンパルミチントランスフェラーゼ（ＣＰＴ）ＩＩ欠損症、グルタル酸尿症ＩＩ型、カーンズ・セイヤー症候群、乳酸アシドーシス、長鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症、リー病又はリー症候群、リー症候群フランス系カナダ人変異型、致死性幼児心筋症；ルフト病；中鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症、ミオクロニーてんかん・赤色ぼろ線維症候群、ミトコンドリア細胞症、ミトコンドリア劣性運動失調症候群、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群、筋神経胃腸障害・脳症、ピアソン症候群、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ欠損症、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、ＰＯＬＧ遺伝子変異、中鎖／短鎖３－ヒドロキシアシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症、超長鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症、ペルオキシソーム病、マロン酸メチル血症、メバロン酸キナーゼ欠損症、加齢による認知機能と筋力の低下、並びにあらゆる神経変性及び神経精神障害に付随する認知障害から選択される、パラグラフ１０に記載の化合物、パラグラフ１１に記載の使用、又はパラグラフ１２に記載の方法。

【0381】

１４． 前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、ハンチントン病、虚血、脳卒中、レビー小体型認知症、多系統委縮症、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、前頭側頭型認知症、並びにα－シヌクレイン、パーキン、ＰＩＮＫ１、ＧＢＡ、及びＬＲＲＫ２の中の変異に関連するパーキンソン病、並びにパーキン又はＰＩＮＫ１に変異、短縮化、又は欠失がある場合の常染色体劣性若年性パーキンソン病又は早期発症パーキンソン病（ＥＯＰＤ）から選択される、パラグラフ１３に記載の化合物、使用、又は方法。

【0382】

１５． 前記神経変性疾患がリー症候群若しくはリー病、Ｘ連鎖性リー病、リー症候群フランス系カナダ人変異型、及び／又はリー病に付随する症状である、パラグラフ１３に記載の化合物、使用、又は方法。

【0383】

１６． 前記癌が、乳房癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、腎臓癌、胃癌、結腸癌、精巣癌、頭頚部癌、膵臓癌、脳癌、黒色腫、骨癌、肝臓癌、軟組織癌、組織器官の癌、血液細胞の癌、ＣＭＬ、ＡＭＬ、マントル細胞リンパ腫、神経芽細胞腫、黒色腫、軟組織肉腫、脂肪肉腫、線維芽細胞肉腫、平滑筋肉腫、肝細胞癌、骨肉腫、食道癌、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、転移性癌、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、鼻咽頭癌、大腸癌、大腸癌、非小細胞肺癌、アポトーシス経路が調節不全になっているところの癌、及びＢＣＬ－２ファミリーのタンパク質に変異があるか又は同タンパク質が過剰発現若しくは過少発現しているところの癌から選択される、パラグラフ１０に記載の化合物、パラグラフ１１に記載の使用、又はパラグラフ１２に記載の方法。

【0384】

１７． 前記線維症が、外傷、炎症、組織修復、免疫反応、細胞過形成、及び細胞新形成の後に起こる細胞外マトリックス成分の蓄積に付随する線維症又は線維化障害から選択される、パラグラフ１０に記載の化合物、パラグラフ１１に記載の使用、又はパラグラフ１２に記載の方法。

【0385】

１８． 前記線維症が、主要臓器疾患、線維増殖性疾患、及び外傷に伴う瘢痕形成に付随する線維症又は線維化障害から選択される、パラグラフ１７に記載の化合物、使用、又は方法。

【0386】

１９． 前記線維症が、間質性肺疾患、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、及び非アルコール性脂肪性肝炎、腎臓病、急性腎臓病、急性腎障害、慢性腎臓疾患、腎移植片機能遅延、心臓疾患又は血管疾患、眼病、全身性強皮病及び限局性強皮病、ケロイド、肥厚性瘢痕、アテローム性硬化症、再狭窄、デュピュイトラン拘縮、外科手術合併症、化学療法剤誘発性線維症、放射線誘発性線維症、事故による損傷及び火傷、後腹膜線維症、並びに腹膜線維症／腹膜瘢痕形成に付随する線維症又は線維化障害から選択される、パラグラフ１８に記載の化合物、使用、又は方法。

【0387】

２０． 間質性肺疾患に付随する前記線維症が、サルコイドーシス、ケイ肺症、薬物反応、感染症、膠原血管病、リウマチ性関節炎、全身性硬化症、強皮病、肺線維症、特発性肺線維症、通常の間質性肺炎、間質性肺疾患、特発性線維化肺胞炎、閉塞性細気管支炎、及び気管支拡張症から選択される、パラグラフ１９に記載の化合物、使用、又は方法。

【0388】

２１． 前記腎臓病が急性腎臓病、急性腎障害、又は慢性腎臓疾患である、パラグラフ１９に記載の化合物、使用、又は方法。

【0389】

２２． パラグラフ１～８のいずれか１つのパラグラフに記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を１種類以上の薬学的に許容可能な賦形剤と共に含む医薬組成物。

【0390】

２３． 以下の式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、及び式（Ｖ）から選択される化合物であって、ＰＧが、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｐ－メトキシベンジルカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル、アセチル、ベンゾイル、ベンジル、カルバメート、ｐ－メトキシベンジル、３，４－ジメトキシベンジル、ｐ－メトキシフェニル、トシル、トリクロロエトキシカルボニル、４－ニトロベンゼンスルホニル、及び２－ニトロフェニルスルフェニルから選択されることが好ましい保護基である前記化合物又は前記化合物の塩。

【0391】

【化25】

【0392】

【化26】

【0393】

２４． 以下の式（ＩＩＡ）、式（ＩＩＩＡ）、式（ＩＶＡ）、及び式（ＶＡ）から選択されるパラグラフ２３に記載の化合物又は前記化合物の塩。

【0394】

【化27】

【0395】

【化28】

【国際調査報告】