特表 2023-528341 低メチル化剤を含むがんを治療するための併用療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-04

(54)【発明の名称】低メチル化剤を含むがんを治療するための併用療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/17 20060101AFI20230627BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230627BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230627BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230627BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230627BHJP

   A61K 31/706 20060101ALI20230627BHJP

   A61K 31/496 20060101ALI20230627BHJP

   A61K 45/06 20060101ALI20230627BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20230627BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20230627BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20230627BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20230627BHJP

【ＦＩ】

A61K38/17

A61P35/00 ZNA

A61P43/00 121

A61K45/00

A61P35/02

A61K31/706

A61K31/496

A61K45/06

C07K14/705

C07K19/00

C12N15/12

C12N15/62 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022572558

(86)(22)【出願日】2021-05-28

(85)【翻訳文提出日】2023-01-23

(86)【国際出願番号】 US2021034967

(87)【国際公開番号】W WO2021247430

(87)【国際公開日】2021-12-09

(31)【優先権主張番号】63/033,074

(32)【優先日】2020-06-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/106,285

(32)【優先日】2020-10-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/109,083

(32)【優先日】2020-11-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/114,959

(32)【優先日】2020-11-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/145,925

(32)【優先日】2021-02-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＥＦＬＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】516237639

【氏名又は名称】エーエルエックス オンコロジー インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ポンズ， ジャウメ

(72)【発明者】

【氏名】ワン， ホン

(72)【発明者】

【氏名】ランドルフ， ソフィア

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA19

4C084AA23

4C084BA01

4C084BA41

4C084MA66

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC412

4C084ZC751

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA52

4C086MA66

4C086NA05

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC20

4C086ZC41

4C086ZC75

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA50

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

がん（例えば、骨髄異形成症候群などの血液癌）を治療する方法であって、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含むポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を低メチル化剤（例えば、アザシチジン）と組み合わせて投与することを含む、方法が提供される。関連するキットも提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

個体のがんを治療する方法であって、前記個体に、有効量の（ａ）ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体とＦｃドメイン変異体とを含む融合ポリペプチド、及び（ｂ）低メチル化剤を投与することを含み、
前記融合ポリペプチドの前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、前記Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に連結される、前記方法。

【請求項2】

個体のがんを治療する方法であって、前記個体に、有効量の（ａ）ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体とＦｃドメイン変異体とを含む融合ポリペプチド、（ｂ）低メチル化剤、及び（ｃ）Ｂｃｌ－２阻害剤を投与することを含み、
前記融合ポリペプチドの前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、前記Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に連結される、前記方法。

【請求項3】

前記融合ポリペプチドの前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体が、配列番号８１または配列番号８５のアミノ酸配列を含み、
前記融合ポリペプチドの前記Ｆｃドメイン変異体が、
（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；
（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；
（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または
（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）である、
請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記がんが、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、請求項１または３に記載の方法。

【請求項5】

前記ＭＤＳが、高リスクＭＤＳである、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記個体が、ＭＤＳの前治療を受けたことがある、請求項１及び３～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記個体が、ＭＤＳの前治療を受けたことがない、請求項１及び３～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

治療が、導入期及び維持期を含み、前記導入期は、（ａ）ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体とＦｃドメイン変異体とを含む前記融合ポリペプチド、及び（ｂ）前記低メチル化剤を投与することを含み、前記維持期は、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体とＦｃドメイン変異体とを含む前記融合ポリペプチドを前記低メチル化剤なしで投与することを含む、請求項１及び３～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記がんが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項２または３に記載の方法。

【請求項10】

前記個体が、以下の特徴のうちの１つ以上を有する、請求項９に記載の方法：
（ａ）再発／難治性または新規診断ＡＭＬの細胞学的または組織学的確定診断；
（ｂ）再発／難治性または前治療のない、集中導入療法に適していないと考えられるＡＭＬ；
（ｃ）ＨＭＡ系レジメンによる前治療後の再発／難治性であるＡＭＬ；
（ｄ）前治療のないＡＭＬであって、集中導入療法に適した候補とみなされないＡＭＬ；ならびに
（ｅ）適切な腎機能及び肝機能。

【請求項11】

前記低メチル化剤が、アザシチジン、デシタビン、５－フルオロ－２’－デオキシシチジン、ゼブラリン、ＣＰ－４２００、ＲＧ１０８、ナナオマイシンＡ、グアデシタビン、ＲＸ－３１１７、ＥＰＩ０１、アントロキノノール、ＣＣ－４８６、またはＡＳＴＸ７２７である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記低メチル化剤が、アザシチジンである、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記アザシチジンが、１回以上の２８日サイクルで前記個体に投与され、前記アザシチジンは、各２８日サイクルのうち７日間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で前記個体に投与される、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記アザシチジンが、１回以上の２８日サイクルで投与され、前記アザシチジンは、各２８日サイクルの間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で５日間前記個体に投与され、アザシチジンの投与のない２日間が続き、次いで、更に２日間、７５ｍｇ／ｍ^２の用量で前記個体に投与される、請求項１２に記載の方法。

【請求項15】

前記アザシチジンが、静脈内または皮下投与される、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項16】

前記Ｂｃｌ－２阻害剤が、ベネトクラクス、ＡＢＴ－７３７、ナビトクラックス、ＢＣＬ２０１、またはＡＺＤ－０４６６である、請求項２～３及び９～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記Ｂｃｌ－２阻害剤が、ベネトクラクスである、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記ベネトクラクスが、１日目に１００ｍｇの用量で、２日目に２００ｍｇの用量で、２日目を過ぎたら毎日４００ｍｇの用量で投与される、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記ベネトクラクスが、１日目に１００ｍｇの用量で、２日目に２００ｍｇの用量で、３日目に４００ｍｇの用量で、３日目を過ぎたら毎日６００ｍｇの用量で投与される、請求項１７に記載の方法。

【請求項20】

前記ベネトクラクスが、経口投与される、請求項１７～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記融合ポリペプチドが、最大約６０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

前記融合ポリペプチドが、約６０ｍｇ／ｋｇの用量で４週間に１回（ｑ４ｗ）投与される、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

個体のがんを治療する方法であって、前記個体に、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含む、有効量の融合ポリペプチドを投与することを含み、前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、前記Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に連結され、
前記融合ポリペプチドは、最大約６０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、
前記方法。

【請求項24】

前記融合ポリペプチドが、約６０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記融合ポリペプチドが、約６０ｍｇ／ｋｇの用量で４週間に１回（ｑ４ｗ）投与される、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記融合ポリペプチドが、約４５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項２３に記載の方法。

【請求項27】

前記融合ポリペプチドが、約４５ｍｇ／ｋｇの用量で３週間に１回（ｑ３ｗ）投与される、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記融合ポリペプチドの前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体が、配列番号８１または配列番号８５のアミノ酸配列を含み、
前記融合ポリペプチドの前記Ｆｃドメイン変異体が、
（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；
（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；
（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または
（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）である、
請求項２２～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記がんが、血液癌である、請求項２２～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

前記がんが、固形腫瘍である、請求項２２～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体が、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体が、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項33】

前記Ｆｃドメイン変異体が、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり、番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従うものである、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項34】

前記Ｆｃドメイン変異体が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記融合ポリペプチドが、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む、請求項１～３１及び３３～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記融合ポリペプチドが、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む、請求項１～３０及び３２～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

前記融合ポリペプチドが、ホモ二量体を形成する、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記融合ポリペプチドが、静脈内投与される、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

前記個体が、ヒトである、請求項１～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

がんを治療するために、それを必要とする個体において、アザシチジンと組み合わせて使用するための、薬学的に許容される担体中の融合ポリペプチドを含むキットであって、
前記融合ポリペプチドは、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含み、前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、前記Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に融合され、
前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８１または配列番号８５のアミノ酸配列を含み、
前記Ｆｃドメイン変異体は、
（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；
（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；
（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または
（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）であり、
前記個体は、ヒトである、
前記キット。

【請求項41】

前記がんが、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、請求項４０に記載のキット。

【請求項42】

前記ＭＤＳが、高リスクＭＤＳである、請求項４１に記載のキット。

【請求項43】

がんを治療するために、それを必要とする個体において、アザシチジン及びベネトクラクスと組み合わせて使用するための、薬学的に許容される担体中の融合ポリペプチドを含むキットであって、
前記融合ポリペプチドは、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含み、前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、前記Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に融合され、
前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８１または配列番号８５のアミノ酸配列を含み、
前記Ｆｃドメイン変異体は、
（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；
（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；
（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または
（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、
及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）であり、
前記個体は、ヒトである、
前記キット。

【請求項44】

前記がんが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項４３に記載のキット。

【請求項45】

１回以上の２８日サイクルで、アザシチジンをＩＶ注入または皮下投与するための説明を更に含み、前記アザシチジンは、各２８日サイクルのうち７日間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で前記個体に投与される、請求項４０～４４のいずれか１項に記載のキット。

【請求項46】

１回以上の２８日サイクルで、アザシチジンをＩＶ注入または皮下投与するための説明を更に含み、前記アザシチジンは、各２８日サイクルの間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で５日間前記個体に投与され、アザシチジンの投与のない２日間が続き、次いで、更に２日間、７５ｍｇ／ｍ^２の用量で前記個体に投与される、請求項４０～４４のいずれか１項に記載のキット。

【請求項47】

ベネトクラクスを１日目に１００ｍｇ、２日目に２００ｍｇ、２日目を過ぎたら毎日４００ｍｇの用量で経口投与するための説明を更に含む、請求項４３～４６のいずれか１項に記載のキット。

【請求項48】

ベネトクラクスを１日目に１００ｍｇ、２日目に２００ｍｇ、３日目に４００ｍｇ、３日目を過ぎたら毎日６００ｍｇの用量で経口投与するための説明を更に含む、請求項４３～４６のいずれか１項に記載のキット。

【請求項49】

前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体が、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、請求項４０～４８のいずれか１項に記載のキット。

【請求項50】

前記ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体が、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、請求項４０～４８のいずれか１項に記載のキット。

【請求項51】

前記Ｆｃドメイン変異体が、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり、番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従うものである、請求項４０～５０のいずれか１項に記載のキット。

【請求項52】

前記Ｆｃドメイン変異体が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、請求項５１に記載のキット。

【請求項53】

前記融合ポリペプチドが、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む、請求項４０～４９及び５１～５２のいずれか１項に記載のキット。

【請求項54】

前記融合ポリペプチドが、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む、請求項４０～４８及び５０～５２のいずれか１項に記載のキット。

【請求項55】

前記融合ポリペプチドが、ホモ二量体を形成する、請求項４０～５４のいずれか１項に記載のキット。

【請求項56】

前記融合ポリペプチドを最大６０ｍｇ／ｋｇの用量で前記個体に投与するための説明を更に含む、請求項４０～５５のいずれか１項に記載のキット。

【請求項57】

前記融合ポリペプチドを６０ｍｇ／ｋｇの用量で前記個体に４週間に１回（ｑ４ｗ）投与するための説明を更に含む、請求項４０～５６のいずれか１項に記載のキット。

【請求項58】

前記融合ポリペプチドをＩＶ注入によって投与するための説明を更に含む、請求項４０～５７のいずれか１項に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年６月１日に出願された米国仮出願第６３／０３３，０７４号；２０２０年１０月２７日に出願された米国仮出願第６３／１０６，２８５号；２０２０年１１月３日に出願された米国仮出願第６３／１０９，０８３号；２０２０年１１月１７日に出願された米国仮出願第６３／１１４，９５９号；及び２０２１年２月４日に出願された米国仮出願第６３／１４５，９２５号の優先権を主張するものであり、これらのそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出内容は、その全体が参照により本明細書に援用される：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５７９７２００１２４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年５月２８日、サイズ：２９７ＫＢ）。

【背景技術】

【0003】

本発明は、がんを治療する方法に関する方法であって、それを必要とする個体に、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を阻害する剤を、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）と組み合わせて投与することを含む、方法に関する。

【0004】

利用可能な治療法で治療した場合であっても、予後が不良ながんが多くある。例えば、米国には、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）と診断された人がおよそ７０，０００名いる。ＭＤＳの患者は、予想される転機の幅が広く、改訂国際予後スコアリングシステム（Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ）、すなわち、ＩＰＳＳ－Ｒのリスク分類から予測することができる。ＩＰＳＳ－Ｒが非常に低い患者では全生存期間の中央値が８．８年であるが、ＩＰＳＳ－Ｒが非常に高い患者では全生存期間の中央値が１０ヶ月未満である。高リスクＭＤＳの患者（ＩＰＳＳ－Ｒが中間、高い及び非常に高い）に対する標準治療には、幹細胞移植（ＳＣＴ）、高強度及び低強度の化学療法レジメン、ならびに低メチル化剤（またはＨＭＡ）が含まれる。治癒の可能性のある治療法は、ＳＣＴのみであるが、この処置は、特に高齢患者にとっては負担が大きく、全ＭＤＳ患者の２００日時点の非再発死亡率はおよそ４０％である。

【0005】

患者の７５％近くが７０歳以上で診断を受けていることから、治療選択肢を考慮する際には、予後における患者の年齢と、治療に関連して生じ得る生活の質への影響とのバランスが重要である。年齢を問わず、ＭＤＳ患者の治療目標は、生存率の向上、症状の緩和及び生活の質のバランスである。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）患者（高リスクＭＤＳ患者を含む）に対して、更なる治療選択肢を提供し、転帰を改善するための新しい治療法が当該技術分野において必要とされている。

【0006】

腫瘍細胞は、骨髄コンパートメントを操作して、抗腫瘍宿主免疫応答を回避し得る（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１２）１２（４）：２５３－６８）。例えば、正常細胞の表面上に発現されるＣＤ４７は、マクロファージ上のＳＩＲＰαに結合し、「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ（私を食べないで）」というシグナルをもたらすが、腫瘍細胞もまたＣＤ４７を過剰発現して、免疫を監視するマクロファージ成分を回避することがわかっている（Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ，ＩＳＲＮ Ｈｅｍａｔｏｌ（２０１３）６１４６１９）。

【0007】

マクロファージによるがん細胞の破壊は、「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナル（例えば、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα）の破壊と「ｅａｔ ｍｅ（私を食べて）」シグナルの活性化を同時に行うことによって最適化される。腫瘍細胞に対して最大限の食作用を誘発するには、どちらの要素も単独では十分でない。上記のように、ＣＤ４７は、マクロファージ上のＳＩＲＰαとの相互作用を通じて、基本的な「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルをもたらす。食作用を促進する「ｅａｔ ｍｅ」シグナルは、マクロファージの活性化Ｆｃガンマ受容体に結合することによって、同じマクロファージに与えることができる。例えば、食作用を促進する「ｅａｔ ｍｅ」シグナルは、抗腫瘍抗体のＦｃドメインがマクロファージ上のＦｃ受容体に結合することによって生じ得る。食作用促進性シグナル伝達は、腫瘍細胞の表面上のカルレティキュリンタンパク質がマクロファージ上のＬＲＰ受容体に結合することなどの他の刺激因子によっても生じ得る。

【0008】

骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）において、異形成細胞におけるＣＤ４７の過剰発現及び異常発現が報告されており、生存率との逆相関が示唆されている（Ｍａｊｅｔｉ ｅｔ ａｌ．２００９；Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１３；Ｇａｌｌｉ ｅｔ ａｌ．２０１５）。

【0009】

本明細書において引用される全ての参考文献は、特許出願、特許公報、及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号を含め、それぞれの個々の参考文献が参照により援用されることが具体的かつ個別に示される場合と同様に、その全体が参照により本明細書に援用される。

【発明の概要】

【0010】

いくつかの実施形態において、個体のがん（例えば、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））を治療する方法であって、個体に、有効量の（ａ）ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体とＦｃドメイン変異体とを含む融合ポリペプチド、及び（ｂ）低メチル化剤を投与することを含み、ここで、融合ポリペプチドのＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に連結される、方法が提供される。いくつかの実施形態において、個体のがん（例えば、ＡＭＬ）を治療する方法であって、個体に、有効量の（ａ）ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体とＦｃドメイン変異体とを含む融合ポリペプチド、及び（ｂ）低メチル化剤を投与することを含み、ここで、融合ポリペプチドのＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に連結される、方法が提供される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドのＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８１または配列番号８５のアミノ酸配列を含み、融合ポリペプチドのＦｃドメイン変異体は、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）である。いくつかの実施形態において、がんは、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。いくつかの実施形態において、ＭＤＳは、高リスクＭＤＳである。いくつかの実施形態において、個体は、ＭＤＳの前治療を受けたことがある。いくつかの実施形態において、個体は、ＭＤＳの前治療を受けたことがない。いくつかの実施形態において、ＭＤＳの治療は、導入期及び維持期を含み、導入期は、（ａ）ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体とＦｃドメイン変異体とを含む融合ポリペプチド、及び（ｂ）低メチル化剤を投与することを含み、維持期は、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体とＦｃドメイン変異体とを含む融合ポリペプチドを低メチル化剤なしで投与することを含む。いくつかの実施形態において、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、最大約６０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、約６０ｍｇ／ｋｇの用量で４週間に１回（ｑ４ｗ）投与される。いくつかの実施形態において、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。いくつかの実施形態において、個体は、ＷＨＯ２０１６分類による再発／難治性または新規診断ＡＭＬの細胞学的（ｓｕｂｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ）または組織学的確定診断を有する。いくつかの実施形態において、個体は、集中導入療法に適していないと考えられる患者の再発/難治性または前治療のないＡＭＬを有する。いくつかの実施形態において、個体は、ＨＭＡ系レジメンによる前治療後の再発／難治性であるＡＭＬを有する。いくつかの実施形態において、個体は、前治療のないＡＭＬを有し、集中導入療法に適した候補とみなされない。いくつかの実施形態において、個体は、適切な腎機能及び肝機能を有する。いくつかの実施形態において、個体は、１８歳以上である。いくつかの実施形態において、個体は、適切なパフォーマンスステータスを有する。いくつかの実施形態において、個体は、以前に同種造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けていない。いくつかの実施形態において、個体は、ＨＣＳＴ後少なくとも３ヶ月であり、制御されていない移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）がない。いくつかの実施形態において、個体は、以前に同種ＨＳＣＴを受けていない。いくつかの実施形態において、個体は、全米総合がん情報ネットワーク（ＮＣＣＮ）のＡＭＬガイドライン２０１９年第３版によるｔ（８；２１）、ｉｎｖ（１６）、またはｔ（１６；１６）などの良好なリスク細胞遺伝学的所見のある新規診断ＡＭＬを有していない。いくつかの実施形態において、個体は、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）を有していない。いくつかの実施形態において、個体は、いかなる抗ＣＤ４７または抗ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質アルファ）剤による前治療を受けていない。いくつかの実施形態において、個体は、Ｂ型及びＣ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連疾病、またはｓａｒｓ－ｃｏｖ－２（重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２）を含む既知の活性ウイルス感染を有していない。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、最大約６０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、約６０ｍｇ／ｋｇの用量で４週間に１回（ｑ４ｗ）投与される。

【0011】

いくつかの実施形態において、低メチル化剤は、アザシチジン、デシタビン、５－フルオロ－２’－デオキシシチジン、ゼブラリン、ＣＰ－４２００、ＲＧ１０８、ナナオマイシンＡ、グアデシタビン、ＲＸ－３１１７、ＥＰＩ０１、アントロキノノール、ＣＣ－４８６、またはＡＳＴＸ７２７である。いくつかの実施形態において、低メチル化剤は、アザシチジンである。いくつかの実施形態において、アザシチジンは、１回以上の２８日サイクルで個体に投与され、アザシチジンは、各２８日サイクルのうち７日間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で個体に投与される。いくつかの実施形態において、アザシチジンは、１回以上の２８日サイクルで投与され、アザシチジンは、各２８日サイクルの間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で５日間個体に投与され、アザシチジンの投与のない２日間が続き、次いで、更に２日間、７５ｍｇ／ｍ^２の用量で個体に投与される。いくつかの実施形態において、アザシチジンは、静脈内または皮下投与される。

【0012】

いくつかの実施形態において、Ｂｃｌ－２阻害剤は、ベネトクラクス、ＡＢＴ－７３７、ナビトクラックス、ＢＣＬ２０１、またはＡＺＤ－０４６６である。いくつかの実施形態において、Ｂｃｌ－２阻害剤は、ベネトクラクスである。いくつかの実施形態において、ベネトクラクスは、１日目に１００ｍｇの用量で、２日目に２００ｍｇの用量で、２日目を過ぎたら毎日４００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ベネトクラクスは、１日目に１００ｍｇの用量で、２日目に２００ｍｇの用量で、３日目に４００ｍｇの用量で、３日目を過ぎたら毎日６００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ベネトクラクスは、経口投与される。

【0013】

いくつかの実施形態において、個体のがんを治療する方法であって、個体に、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含む、有効量の融合ポリペプチドを投与することを含み、ここで、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に連結され、融合ポリペプチドは、最大約６０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、方法が提供される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、約６０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、約６０ｍｇ／ｋｇの用量で４週間に１回（ｑ４ｗ）投与される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、約４５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、約４５ｍｇ／ｋｇの用量で３週間に１回（ｑ３ｗ）投与される。いくつかの実施形態において、がんは、血液癌である。いくつかの実施形態において、がんは、固形腫瘍である。

【0014】

いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドのＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８１または配列番号８５のアミノ酸配列を含み、融合ポリペプチドのＦｃドメイン変異体は、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）である。

【0015】

本明細書で提供される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインバリアントは、配列番号８１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり、ここで、番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従うものである。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、静脈内投与される。いくつかの実施形態において、個体は、ヒトである。

【0016】

いくつかの実施形態において、がんを治療するために、それを必要とする個体において、アザシチジンと組み合わせて使用するための、薬学的に許容される担体中の融合ポリペプチドを含むキットであって、ここで、融合ポリペプチドは、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含み、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に融合され、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８１または配列番号８５のアミノ酸配列を含み、Ｆｃドメイン変異体は、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）であり、個体は、ヒトである、キットが提供される。いくつかの実施形態において、がんは、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。いくつかの実施形態において、がんは、ＭＤＳである。いくつかの実施形態において、ＭＤＳは、高リスクＭＤＳである。

【0017】

いくつかの実施形態において、がんを治療するために、それを必要とする個体において、アザシチジン及びベネトクラクスと組み合わせて使用するための、薬学的に許容される担体中の融合ポリペプチドを含むキットであって、ここで、融合ポリペプチドは、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含み、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に融合され、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８１または配列番号８５のアミノ酸配列を含み、Ｆｃドメイン変異体は、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）であり、個体は、ヒトである、キットが提供される。いくつかの実施形態において、がんは、ＡＭＬである。

【0018】

いくつかの実施形態において、キットは、１回以上の２８日サイクルで、アザシチジンをＩＶ注入または皮下投与するための説明を更に含み、アザシチジンは、各２８日サイクルのうち７日間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で個体に投与される。いくつかの実施形態において、キットは、１回以上の２８日サイクルで、アザシチジンをＩＶ注入または皮下投与するための説明を更に含み、アザシチジンは、各２８日サイクルの間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で５日間個体に投与され、アザシチジンの投与のない２日間が続き、次いで、更に２日間、７５ｍｇ／ｍ^２の用量で個体に投与される。

【0019】

いくつかの実施形態において、キットは、ベネトクラクスを１日目に１００ｍｇ、２日目に２００ｍｇ、２日目を過ぎたら毎日４００ｍｇの用量で経口投与するための説明を更に含む。いくつかの実施形態において、キットは、ベネトクラクスを１日目に１００ｍｇ、２日目に２００ｍｇ、３日目に４００ｍｇ、３日目を過ぎたら毎日６００ｍｇの用量で経口投与するための説明を更に含む。

【0020】

キットのいくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり、ここで、番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従うものである。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドはホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態において、キットは、融合ポリペプチドを最大６０ｍｇ／ｋｇの用量で個体に投与するための説明を更に含む。いくつかの実施形態において、キットは、融合ポリペプチドを６０ｍｇ／ｋｇの用量で個体に４週間に１回（ｑ４ｗ）投与するための説明を更に含む。いくつかの実施形態において、キットは、融合ポリペプチドをＩＶ注入によって投与するための説明を更に含む。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1A】マクロファージによるヒトＨＬ６０細胞の食作用に対する薬物Ａ、アザシチジン、及び薬物Ａ＋アザシチジンの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図1B】マクロファージによるヒトＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞の食作用に対する薬物Ａ、アザシチジン、及び薬物Ａ＋アザシチジンの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図2】ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）培養物におけるＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞の生存率に対する薬物Ａ、アザシチジン、及び薬物Ａ＋アザシチジンの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図3A】ＨＬ６０、ＯＣＩ－ＡＭＬ３、及びＭＶ４－１１のヒト急性骨髄性白血病細胞株の表面上におけるカルレティキュリンの発現に対するアザシチジンの影響を評価するために実施したｉｎ ｖｉｔｒｏ実験の結果を示す。

【図3B】ＭＶ４－１１ヒト急性骨髄性白血病細胞株及び２名のヒトドナーに由来する初代ＡＭＬ芽球の表面上におけるカルレティキュリンの発現に対するアザシチジンまたはベネトクラクスの影響を評価するために実施したｉｎ ｖｉｔｒｏ実験の結果を示す。

【図3C】ＭＶ４－１１ヒト急性骨髄性白血病細胞株及び２名のヒトドナーに由来する初代ＡＭＬ芽球の表面上におけるＣＤ４７の発現に対するアザシチジンまたはベネトクラクスの影響を評価するために実施したｉｎ ｖｉｔｒｏ実験の結果を示す。

【図4A】ＨＬ６０腫瘍異種移植片を担持するマウスにおける腫瘍成長に対する薬物Ａ、アザシチジン、及び薬物Ａ＋アザシチジンの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図4B】ＯＣＩ－ＡＭＬ３腫瘍異種移植片を担持するマウスにおける腫瘍成長に対する薬物Ａ、アザシチジン、及び薬物Ａ＋アザシチジンの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図4C】ＭＶ４－１１腫瘍異種移植片を担持するマウスにおける腫瘍成長に対する薬物Ａ、アザシチジン、及び薬物Ａ＋アザシチジンの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図4D】各治療群のＭＶ４－１１異種移植マウスのうち、腫瘍退縮を示した数を示す。

【図5A】ＨＬ６０－ＬＵＣ２を７．５Ｅ６細胞／マウスの濃度で尾静脈注射介して移植したマウスにおける腫瘍成長に対する薬物Ａ、アザシチジン、及び薬物Ａ＋アザシチジンの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図5B】接種後３、８、１１、１４、１８、及び２２日目に撮像したマウスにおける総発光強度（発光量）対時間（すなわち、腫瘍サイズ対時間）に関するデータを示す。治療は、ＩＶ接種後４日目に開始した。

【図5C】ＨＬ６０－ＬＵＣ２を移植したマウスにおける腫瘍成長に対する１４７日目の試験終了までの薬物Ａ、アザシチジン、または薬物Ａ＋アザシチジンの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図5D】１４用量の薬物Ａ＋アザシチジン（例えば、導入療法）を既に受けたＨＬ６０－ＬＵＣ２を移植したマウスにおける腫瘍成長に対する薬物Ａ単剤療法（例えば、維持療法）の効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図6A】ＨＬ６０－ＬＵＣ２を１０×１０^６細胞／マウスの濃度で尾静脈注射を介して移植したマウスにおける腫瘍成長に対する薬物Ａ、アザシチジン、ベネトクラクス、アザシチジン＋ベネトクラクス、または薬物Ａ＋アザシチジン＋ベネトクラクスの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図6B】ＰＢＳ（対照）、アザシチジン、ベネトクラクス、薬物Ａ、アザシチジン＋ベネトクラクス、またはアザシチジン＋ベネトクラクス＋薬物Ａによる治療を受けた異種移植ヒトＨＬ－６０ＬＵＣ２腫瘍を担持するマウスの生存率（日数）を示す。

【図7A】ヒト単球由来マクロファージによるＡＭＬ細胞の食作用に対する薬物Ａ、アザシチジン、及び薬物Ａ＋アザシチジンの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図7B】ヒト単球由来マクロファージによるＡＭＬ細胞の食作用に対する薬物Ａ、ベネトクラクス、及び薬物Ａ＋ベネトクラクスの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【図8】８０日の評価期間において、ＨＬ６０－ＬＵＣ２を移植したマウスにおける腫瘍成長に対する薬物Ａ、ベネトクラクス、または薬物Ａ＋ベネトクラクスの効果を評価するために実施した実験の結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0022】

以下の説明は、例示的な方法、パラメーターなどについて記載する。しかしながら、そのような説明は、本開示の範囲を制限することを意図するものではなく、むしろ、例示的な実施形態の説明として提供されることを認識されたい。

【0023】

定義
「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定されるような特定の値についての許容可能な誤差範囲内であることを意味し、値を測定するまたは決定する方法、すなわち、測定システムの限界に部分的に依存する。例えば、「約」は、当該技術分野における慣例に従って、１以内または１より大きい標準偏差を意味することができる。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、最大１０％、最大５％、または最大１％の範囲を意味し得る。あるいは、特に生物学的システムまたはプロセスに関して、この用語は、値の１０倍以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味し得る。別段に記載されない限り、本出願及び特許請求の範囲に特定の値が記載される場合、「約」という用語は、特定の値について許容可能な誤差範囲内にあることを意味するとみなされる。

【0024】

本明細書に使用される用語は、特定の事例を説明することのみを目的にしており、限定することを意図するものではない。本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈により別途明示される場合を除き、複数形も含むことが意図される。更に、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「含む（ｗｉｔｈ）」という用語またはそれらの変形が詳細な説明または特許請求の範囲のいずれかで使用される限りにおいて、かかる用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同様に包括的であることが意図される。

【0025】

本明細書で使用される場合、「治療」、「治療すること」などの用語は、ある作用を得る目的で、剤を投与すること、または手順を実施することを指す。いくつかの実施形態において、作用は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に防ぐという点で予防的である。いくつかの実施形態において、作用は、疾患または疾患の症状の部分的または完全な治癒をもたらすという点で治療的である。

【0026】

本明細書で使用される場合、「リンカー」という用語は、２つの要素、例えば、タンパク質ドメインの間の連結を指す。いくつかの実施形態において、リンカーは、共有結合またはスペーサーであり得る。「スペーサー」という用語は、２つのポリペプチドまたはポリペプチドドメインの間にスペースまたは柔軟性（またはスペースと柔軟性の両方）を与えるために、２つのポリペプチドまたはポリペプチドドメインの間に存在する部分（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー）またはアミノ酸配列（例えば、１～２００個のアミノ酸配列）を指す。いくつかの実施形態において、アミノ酸スペーサーは、ポリペプチドの一次配列の一部である（例えば、ポリペプチド主鎖を介して間隔をあけたポリペプチドまたはポリペプチドドメインに接続されている）。

【0027】

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、本明細書に記載されるポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインまたはその変異体を有するポリペプチド、またはポリペプチドを含有する医薬組成物の量であって、がん、例えば、固形腫瘍または血液がんなどの疾患を有する患者を治療する際に、所望の治療効果を達成するのに十分かつ有効である量を指す。いくつかの実施形態において、ポリペプチドの有効量は、有害な副作用を回避するものである。

【0028】

本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、有効成分及び賦形剤または希釈剤（または賦形剤と希釈剤の両方）を含み、有効成分を好適な投与方法によって投与することを可能にする、医療または医薬製剤を指す。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される医薬組成物は、ポリペプチドに適合する薬学的に許容される構成成分を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、経口投与用の錠剤またはカプセル剤の形態、あるいは、例えば、注射による静脈内または皮下投与用の水性形態である。

【0029】

本明細書で使用される場合、「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、脊椎動物、例えば、哺乳動物を指すために区別なく使用される。哺乳動物には、ネズミ、サル、ヒト、家畜、競技用動物及び愛玩動物が含まれるが、これらに限定されない。ｉｎ ｖｉｖｏで得られるまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養された生物学的実体の組織、細胞、それらの子孫も包含される。いずれの用語も医療専門家の監督を伴うものではない。

【0030】

本明細書で使用される場合、「親和性」または「結合親和性」という用語は、２つの分子間の結合相互作用の強さを指す。一般に、結合親和性は、分子とその結合パートナー、例えば、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体とＣＤ４７との間の非共有結合性相互作用の合計の強さを指す。別段に指示されない限り、結合親和性は、結合ペアのメンバー間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。２分子間の結合親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）または会合定数（ＫＡ）によって記述される。互いに低い結合親和性を有する２つの分子は、一般にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があり、大きなＫＤを示す。互いに高い結合親和性を有する２つの分子は、一般に容易に結合し、結合を長く維持する傾向があり、小さなＫＤを示す。いくつかの実施形態において、２つの相互作用分子のＫＤは、既知の方法及び技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定される。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として算出することができる。

【0031】

本明細書で使用される場合、「～未満のＫ_Ｄ」という用語は、列挙されるＫＤ値に対して、数値的に小さいＫ_Ｄ値及び結合親和性の増加を指す。本明細書で使用される場合、「～より大きいＫＤ」という用語は、列挙されるＫＤ値に対して、数値的に大きいＫＤ値及び結合親和性の減少を指す。

【0032】

本明細書で使用される場合、「～と併せて」とは、１つの治療法に加えた別の治療法の施行を指す。したがって、「～と併せて」とは、個体への１つの治療法の施行前、施行中、または施行後の別の治療法の施行を指す。

【0033】

概説
個体（例えば、ヒト個体）のがん（例えば、骨髄異形成症候群（「ＭＤＳ」）などの骨髄癌を治療する方法であって、個体に、有効量の（ａ）ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤、及び（ｂ）低メチル化剤を投与することを含む、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、急性骨髄性白血病（「ＡＭＬ」）を治療する方法が提供される。

【0034】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰａ経路の低分子阻害剤（例えば、ＲＲＸ－００１など）である。例えば、Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１９）“Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＳＩＲＰα－ＣＤ４７ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．” ＰＬｏＳ ＯＮＥ １４（７）：ｅ０２１８８９７及びＳａｓｉｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．ＡＣＲ－ＮＣＩ－ＥＯＲＴＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；Ｏｃｔｏｂｅｒ ２６－３０，２０１７；Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ；Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｂ００７を参照されたい。

【0035】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤は、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する。いくつかの実施形態において、この剤は、約１０ｎＭまたはそれより優れたＫ_Ｄ（少なくとも約９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、７５０ｐＭ、５００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ １０ｐＭまたは１０ｐＭ未満などのいずれか１つ）でＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する剤は、ヒト対象において、少なくとも約５０％のＣＤ４７受容体占有率（例えば、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または約１００％のいずれか１つ）を呈する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する剤は、約８０ｎｇ／ｍｌ以下、例えば、約７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、または５ｎｇ／ｍｌのいずれか１つのＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する剤は、抗ＣＤ４７抗体（例えば、治療用抗ＣＤ４７抗体）またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ワンアーム抗体、またはダイアボディである。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７抗体は、単一特異性抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７抗体は、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体である。いくつかの実施形態において、「抗ＣＤ４７抗体」という用語は、限定するものではないが、トリオマブ、ＤＡＲＴ（すなわち、二重親和性再標的化抗体）、ＴａｎｄＡｂ（すなわち、タンデムダイアボディ）、タンデムｓｃＦｖ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＤＮＬ（すなわち、ドック・アンド・ロック（抗体）、ＤＶＤ－Ｉｇ（すなわち、二重可変ドメイン免疫グロブリン）、４価の二重特異性ＩｇＧ、ナノボディ、二重標的化ドメイン、及びＡＲＴ－Ｉｇ（すなわち、非対称型工学技術免疫グロブリン）を含む、抗体ベースのコンストラクト（多重特異性コンストラクトなど）を包含する。例示的な抗体コンストラクト（単一特異性と多重特異性の両方）に関する追加の詳細は、Ｈｕｓａｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｂｉｏｄｒｕｇｓ ３２（５）：４４１－４６４及びＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２）：９５－１０６に提供されている。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７抗体は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４、Ｂ６Ｈ１２．２、ＢＲＩＣ１２６、ＣＣ－９０００２、ＳＲＦ２３１、またはＩＢＩ１８８（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）である（これらの抗ＣＤ４７抗体の更なる情報については、例えば、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２０１１），ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０８：１８３４２－１８３４７；Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｃｅｌｌ １４２：６９９－７１３，Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２６：２５３８－２５４５；Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｂｌｏｏｄ １１８：４８９０－４８９１；Ｇｏｔｏ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｅｕｒ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５０：１８３６－１８４６；及びＥｄｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（２０１２）ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０９：６６５６－６１を参照されたい）。

【0036】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤は、ＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）に結合する。いくつかの実施形態において、この剤は、約１０ｎＭまたはそれより優れたＫ_Ｄ（少なくとも約９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、７５０ｐＭ、５００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ １０ｐＭまたは１０ｐＭ未満などのいずれか１つ）でＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）に結合する剤は、ヒト対象において、少なくとも約５０％のＳＩＲＰα受容体占有率（例えば、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または約１００％のいずれか１つ）を呈する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）に結合する剤は、約８０ｎｇ／ｍｌ以下、例えば、約７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、または５ｎｇ／ｍｌのいずれか１つのＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）に結合する剤は、抗ＳＩＲＰα抗体（例えば、治療用抗ＳＩＲＰα抗体）またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ワンアーム抗体、またはダイアボディである。いくつかの実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体は、単一特異性抗体または単一特異性抗体コンストラクト（上記のものを含むが、これらに限定されない）である。いくつかの実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体は、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体または多重特異性抗体コンストラクト（上記のものを含むが、これらに限定されない）である。いくつかの実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体は、ＫＷＡＲ２３、ＳＥ１２Ｃ３、０４０、またはＭＹ－１である（これらの抗ＳＩＲＰα抗体の更なる情報については、例えば、Ｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１７）ＰＮＡＳ ＵＳＡ １１４（４９）：Ｅ１０５７８－Ｅ１０５８５）；Ｍｕｒａｔａ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ １０９（５）：１３００－１３０８；及びＹａｎｉｇａｔａ ｅｔ ａｌ．（２０１７）ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ ２：ｅ８９１４０を参照されたい）。いくつかの実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体は、ＷＯ２０１８／０５７６６９；ＵＳ－２０１８－０１０５６００－Ａ１；ＵＳ２０１８０３１２５８７；ＷＯ２０１８１０７０５８；ＷＯ２０１９０２３３４７；ＵＳ２０１８００３７６５２；ＷＯ２０１８２１０７９５；ＷＯ２０１７１７８６５３；ＷＯ２０１８１４９９３８；ＷＯ２０１７０６８１６４；及びＷＯ２０１６０６３２３３に記載されている抗体であり、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0037】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤は、抗ＳＩＲＰβ抗体もしくは抗ＳＩＲＰγ抗体（例えば、ＳＩＲＰαに結合することが可能な抗ＳＩＲＰβ抗体または抗ＳＩＲＰγ抗体）、またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、この剤は、ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ、及びＳＩＲＰγのうちの２つ以上に結合することが可能な抗体（またはその抗原結合断片）である。いくつかの実施形態において、そのような抗体は、約１０ｎＭまたはそれより優れたＫ_Ｄ（少なくとも約９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、７５０ｐＭ、５００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ １０ｐＭまたは１０ｐＭ未満などのいずれか１つ）でＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）に結合する。いくつかの実施形態において、この抗体は、ヒト対象において、少なくとも約５０％のＳＩＲＰα受容体占有率（例えば、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または約１００％のいずれか１つ）を呈する。いくつかの実施形態において、抗体は、約８０ｎｇ／ｍｌ以下、例えば、約７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、または５ｎｇ／ｍｌのいずれか１つのＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ワンアーム抗体、またはダイアボディである。いくつかの実施形態において、抗体は、単一特異性抗体または単一特異性抗体コンストラクト（上記のものを含むが、これらに限定されない）である。いくつかの実施形態において、抗体は、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体または多重特異性抗体コンストラクト（上記のものを含むが、これらに限定されない）である。

【0038】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤は、ＣＤ４７に結合する部分を含む融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、抗体Ｆｃ領域及びＣＤ４７に結合する部分を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する融合ポリペプチドの部分は、約１０ｎＭまたはそれより優れたＫ_Ｄ（少なくとも約９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、７５０ｐＭ、５００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ １０ｐＭまたは１０ｐＭ未満などのいずれか１つ）でＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ヒト対象において、少なくとも約５０％のＣＤ４７受容体占有率（例えば、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または約１００％のいずれか１つ）を呈する。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、約８０ｎｇ／ｍｌ以下、例えば、約７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、または５ｎｇ／ｍｌのいずれか１つのＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ＷＴヒト抗体Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ＷＴ Ｆｃ領域と比較して、エフェクター機能の低下（例えば、消失など）を呈するＦｃ変異体（例えば、ＷＴヒト抗体Ｆｃ領域の変異体）を含む。例示的なＦｃ変異体は、ＷＯ２０１７／０２７４２２及びＵＳ２０１７／０１０７２７０に記載され、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する部分は、ＷＴ ＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）、またはＷＴ ＳＩＲＰγ（例えば、ｈＳＩＲＰγ）である。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する部分は、ＷＴ ＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）、またはＷＴ ＳＩＲＰγ（例えば、ｈＳＩＲＰγ）のＣＤ４７結合断片（例えば、ｄ１ドメイン）である。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する部分は、ＳＩＲＰα変異体、ＳＩＲＰγ変異体、ＳＩＲＰβ変異体、またはそのＣＤ４７結合断片（例えば、ｄ１ドメイン）である。例示的なＳＩＲＰγ変異体、ＳＩＲＰβ１変異体、及びＳＩＲＰβ２変異体は、例えば、ＷＯ２０１３／１０９７５２；ＵＳ２０１５／００７１９０５；ＵＳＰ９，９４４，９１１；ＷＯ２０１６／０２３０４０；ＷＯ２０１７／０２７４２２；ＵＳ２０１７／０１０７２７０；ＵＳＰ１０，２５９，８５９；ＵＳ９８４５３４５；ＷＯ２０１６１８７２２６；ＵＳ２０１８０１５５４０５；ＷＯ２０１７１７７３３３；ＷＯ２０１４０９４１２２；ＵＳ２０１５３２９６１６；ＵＳ２０１８０３１２５６３；ＷＯ２０１８１７６１３２；ＷＯ２０１８０８１８９８；ＷＯ２０１８０８１８９７；ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４８９２１；ＵＳ２０１８０１４１９８６Ａ１；及びＥＰ３２８７４７０Ａ１に記載されており、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0039】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤は、抗体Ｆｃ領域及びＳＩＲＰα変異体を含む融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα変異体は、約１０ｎＭまたはそれより優れたＫ_Ｄ（少なくとも約９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、７５０ｐＭ、５００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ １０ｐＭまたは１０ｐＭ未満などのいずれか１つ）でＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）に結合する。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ヒト対象において、少なくとも約５０％のＣＤ４７受容体占有率（例えば、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または約１００％のいずれか１つ）を呈する。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、約８０ｎｇ／ｍｌ以下、例えば、約７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、または５ｎｇ／ｍｌのいずれか１つのＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ＷＴヒト抗体Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ＷＴ Ｆｃ領域と比較して、エフェクター機能の低下（例えば、消失など）を呈するＦｃ変異体（例えば、ＷＴヒト抗体Ｆｃ領域の変異体）、例えば、本明細書に引用される参考文献に記載されているものなどを含む。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ＷＯ２０１３／１０９７５２；ＵＳ２０１５／００７１９０５；ＷＯ２０１６／０２３０４０；ＷＯ２０１７／０２７４２２；ＵＳ２０１７／０１０７２７０；ＵＳＰ１０，２５９，８５９；ＵＳ９８４５３４５；ＷＯ２０１６１８７２２６；ＵＳ２０１８０１５５４０５；ＷＯ２０１７１７７３３３；ＷＯ２０１４０９４１２２；ＵＳ２０１５３２９６１６；ＵＳ２０１８０３１２５６３；ＷＯ２０１８１７６１３２；ＷＯ２０１８０８１８９８；ＷＯ２０１８０８１８９７；ＵＳ２０１８０１４１９８６Ａ１；及びＥＰ３２８７４７０Ａ１に記載されているＳＩＲＰα変異体を含み、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。いくつかの実施形態において、抗体Ｆｃ領域及びＳＩＲＰα変異体を含む融合ポリペプチドは、ＴＴＩ－６２１、ＴＴＩ－６２２、またはＩＭＭ０１である（例えば、Ｐｅｔｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２３：１０８６－１０７９；Ｒｕｓｓ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖ Ｓ０２６８－９６０Ｘ（１７）３００９３－０；Ｚｈａｎｇ，Ｘ，Ｃｈｅｎ，Ｗ，Ｆａｎ，Ｊ ｅｔ ａｌ．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ＣＤ４７－ＳＩＲＰα ａｘｉｓ ａｌｏｎｅ ｏｒ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ２０１８；３９：６８９－９９参照）。

【0040】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤は、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体）及びＦｃドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体）を含む融合ポリペプチドである。

【0041】

ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含むポリペプチドによる治療方法に関する更なる詳細は、以下に記載される。また、ＷＯ２０１７／０２７４２２及び米国特許第１０，２５９，８５９号も参照されたく、これらのそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0042】

また、個体のがんを治療する方法であって、個体に、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含む、有効量のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を投与することを含み、ここで、ポリペプチドは、約６０ｍｇ／ｋｇの用量で４週間に１回（ｑ４ｗ）投与される、方法が本明細書で提供される。また、個体のがんを治療する方法であって、個体に、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含む、有効量のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を投与することを含み、ここで、ポリペプチドは、約４５ｍｇ／ｋｇの用量で３週間に１回（ｑ３ｗ）投与される、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、少なくとも１つの追加の抗がん剤と組み合わせて投与される。

【0043】

シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）Ｄ１ドメイン及びその変異体
いくつかの実施形態において、野生型シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ－α）Ｄ１ドメイン（例えば、配列番号１または２に記載される野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン）に対して残基８０におけるアミノ酸変異；ならびに野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン（例えば、配列番号１または２に記載される野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン）に対して残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基における少なくとも１つの追加のアミノ酸変異を含む、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインまたはその断片を含むＳＩＲＰα Ｄ１変異体を含む、ポリペプチドが本明細書で開示される。

【0044】

また、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体を含むポリペプチドが本明細書で開示され、ここで、Ｆｃドメイン変異体二量体は、２つのＦｃドメイン変異体を含み、各Ｆｃドメイン変異体は、独立して、（ｉ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；（ｉｉ）変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；または（ｉｉｉ）変異Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域から選択される。

【0045】

シグナル調節タンパク質α（「ＳＩＲＰ－α」または「ＳＩＲＰ－アルファ」）は、Ｉｇスーパーファミリーに属する膜貫通糖タンパク質であり、骨髄系細胞の膜上に広く発現している。ＳＩＲＰαは、体内の多くの細胞種に広く発現しているタンパク質ＣＤ４７と相互作用する。ＳＩＲＰαとＣＤ４７の相互作用により、免疫系によって認識され得る「自己」細胞の飲み込みが阻害される。腫瘍細胞におけるＣＤ４７の高発現は、急性骨髄性白血病及びいくつかの固形腫瘍癌において、生存の予後不良因子として働くことが観察されている。

【0046】

天然型ＳＩＲＰαは、３つの相同性の高い免疫グロブリン（Ｉｇ）様細胞外ドメインＤ１、Ｄ２、及びＤ３を含んでいる。ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン（「Ｄ１ドメイン」）は、ＳＩＲＰαの膜遠位の細胞外ドメインを指し、ＳＩＲＰαのＣＤ４７への結合を媒介する。本明細書で使用される場合、「ＳＩＲＰαポリペプチド」という用語は、ＣＤ４７に結合することが可能な任意のＳＩＲＰαポリペプチドまたはその断片を指す。野生型ヒトＳＩＲＰαには、少なくとも１０個の変異体がある。表１は、天然に生じる野生型ヒトＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（配列番号１及び２）のＤ１ドメインのアミノ酸配列を示す。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰαポリペプチドは、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１及び２に記載されるものなどの野生型Ｄ１ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰαポリペプチドは、野生型ヒトＳＩＲＰαのＤ２またはＤ３ドメイン（またはＤ２とＤ３ドメインの両方）（表３参照）を含む。

【表1】

【0047】

本明細書で使用される場合、「ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体」という用語は、野生型ＳＩＲＰαよりもＣＤ４７に対して高い親和性を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメインまたはＳＩＲＰαポリペプチドのＣＤ４７結合部分を含むポリペプチドを指す。ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型ＳＩＲＰαに対して、少なくとも１つのアミノ酸の置換、欠失、または挿入（またはこれらの組み合わせ）を含む。

【0048】

いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインまたはその変異体を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号１及び２に示される野生型Ｄ１ドメインに対して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、付加、または欠失を含む。表２は、各ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（配列番号１３～１４）における例示的なアミノ酸置換を列挙する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインポリペプチドまたはＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、Ｄ１ドメインの断片を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰαポリペプチド断片またはＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体断片は、１０アミノ酸長未満、約１０アミノ酸長、約２０アミノ酸長、約３０アミノ酸長、約４０アミノ酸長、約５０アミノ酸長、約６０アミノ酸長、約７０アミノ酸長、約８０アミノ酸長、約９０アミノ酸長、約１００アミノ酸長、または約１００アミノ酸長超のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン断片は、ＣＤ４７に結合する能力を保持している。

【0049】

いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む本開示のポリペプチドは、野生型ヒトＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、天然に生じるＤ１ドメインの親和性よりも少なくとも１倍（例えば、少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、５倍または５倍より大きい）の親和性でヒトＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、天然に生じるＤ１ドメインの親和性よりも少なくとも１倍（例えば、少なくとも１０倍、１００倍、１０００倍または１０００倍より大きい）の親和性でヒトＣＤ４７に結合する。

【0050】

本明細書で使用される場合、「最適化された親和性」または「最適化された結合親和性」という用語は、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む本明細書で開示されるポリペプチドとＣＤ４７との間の結合相互作用の最適化された強さを指す。例えば、いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、がん細胞上のＣＤ４７に主に結合するか、またはより高い親和性で結合し、非がん細胞上のＣＤ４７に実質的に結合しないか、より低い親和性で結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドとＣＤ４７との間の結合親和性は、その相互作用が臨床的に関係のある毒性を引き起こさないように、または最大の親和性で結合する変異体と比較して毒性が低くなるように最適化される。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるポリペプチドとＣＤ４７との間の最適化された結合親和性を達成するために、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含むポリペプチドは、ＣＤ４７に対する結合親和性が最大に達成可能なものよりも低くなるように開発される。いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、齧歯類、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）、及びヒトＣＤ４７と交差反応する。

【0051】

本明細書で使用される場合、「免疫原性」という用語は、外来抗原であるかのように、宿主において免疫応答を引き起こすタンパク質（例えば、治療用タンパク質）の特性を指す。タンパク質の免疫原性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞増殖アッセイなどの多種多様な方法でｉｎ ｖｉｔｒｏでアッセイすることができる。

【0052】

本明細書で使用される場合、「最小の免疫原性」という用語は、例えば、アミノ酸置換により修飾されたタンパク質（例えば、治療用タンパク質）の免疫原性が、アミノ酸置換が導入される前の免疫原性（例えば、非修飾タンパク質）よりも低くなる（例えば、少なくとも１０％、２５％、５０％、または１００％低い）ことを指す。いくつかの実施形態において、タンパク質（例えば、治療用タンパク質）は、最小の免疫原性を有するように修飾され、外来抗原であっても、宿主の免疫応答を全くまたはほとんど引き起こさない。

【0053】

いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、最小の免疫原性を示す。いくつかの実施形態において、対象に投与される本開示のＳＩＲＰαポリペプチドは、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体の親和性を増加させるアミノ酸変化を除き、対象の生体試料中のＳＩＲＰαポリペプチドのアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるポリペプチド変異体は、抗ＣＤ４７抗体または野生型ＳＩＲＰαと比較して、副作用のリスクを低下させる。いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるポリペプチド変異体は、抗ＣＤ４７抗体または野生型ＳＩＲＰαと比較して、貧血のリスクを低下させる。いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるポリペプチド変異体は、齧歯類または非ヒト霊長類（ＮＨＰ）の研究において、急性貧血を引き起こさない。

【0054】

表２は、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体中の各Ｄ１ドメイン配列に対する具体的なアミノ酸置換を列挙する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、表２に列挙される置換の１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４またはそれ以上）を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大１４個のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大１０個のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大７個のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型Ｄ１ドメインの配列に対して、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９５％、９７％または９７％より大きい）のアミノ酸配列同一性を有する。

【0055】

いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、２つ以上の野生型Ｄ１ドメインまたはその変異体の部分（例えば、ある野生型Ｄ１ドメインまたはその変異体の部分及び別の野生型Ｄ１ドメインまたはその変異体の部分）を含むキメラＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体である。いくつかの実施形態において、キメラＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型Ｄ１ドメインまたはその変異体の少なくとも２つの部分（例えば、３、４、５またはそれ以上の部分）を含み、ここで、部分のそれぞれは、異なる野生型Ｄ１ドメインに由来する。いくつかの実施形態において、キメラＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、表２に列挙される１つ以上のアミノ酸置換を更に含む。

【表2】

【0056】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ＥＥＥＸ_１ＱＸ_２ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＸ_３ＴＬＲＣＴＸ_４ＴＳＬＸ_５ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ_６ＬＩＹＮＱＸ_７Ｘ_８ＧＸ_９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ_１０ＴＸ_１１ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_１２ＫＸ_１３ＲＫＧＳＰＤＤＶＥＸ_１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１３）の配列を含むＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ_１はＬ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ_２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_３はＡまたはＶであり、Ｘ_４はＡ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ_５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ_６はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ_７はＫまたはＲであり、Ｘ_８はＥまたはＱであり、Ｘ_９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ_１１はＫまたはＲであり、Ｘ_１２はＶまたはＩであり、Ｘ_１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ_１４はＦまたはＶであり、変異体は、配列番号１の配列を含む野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0057】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１３の配列を含むＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ_１は、Ｌ、Ｉ、またはＶである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、またはＩである。いくつかの実施形態において、Ｘ_３は、ＡまたはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_４は、Ａ、Ｉ、またはＬである。いくつかの実施形態において、Ｘ_５は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。いくつかの実施形態において、Ｘ_６は、Ｅ、Ｖ、またはＬである。いくつかの実施形態において、Ｘ_７は、ＫまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_８は、ＥまたはＱである。いくつかの実施形態において、Ｘ_９は、Ｈ、Ｐ、またはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１０は、Ｌ、Ｔ、またはＧである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１１は、ＫまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１２は、ＶまたはＩである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１３は、Ｆ、Ｌ、Ｖである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１４は、ＦまたはＶである。いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチド は、配列番号１の配列を含む野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、６個以下のアミノ酸置換を含む。

【0058】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を含む野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を含む野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を含む野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫＤでＣＤ４７に結合する。

【0059】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ＥＥＥＸ_１ＱＸ_２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ_３ＩＬＨＣＴＸ_４ＴＳＬＸ_５ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ_６ＬＩＹＮＱＸ_７Ｘ_８ＧＸ_９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ_１０ＴＸ_１１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_１２ＫＸ_１３ＲＫＧＳＰＤＴＥＸ_１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１４）の配列を含むＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ_１はＬ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ_２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_３はＡまたはＶであり、Ｘ_４はＶ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ_５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ_６はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ_７はＫまたはＲであり、Ｘ_８はＥまたはＱであり、Ｘ_９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_１０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ_１１はＫまたはＲであり、Ｘ_１２はＶまたはＩであり、Ｘ_１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ_１４はＦまたはＶであり、変異体は、配列番号２の配列を含む野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0060】

いくつかの実施形態において、本開示の本態様において、ポリペプチドは、配列番号１４の配列を含み、ここで、Ｘ_１は、Ｌ、Ｉ、またはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、またはＩである。いくつかの実施形態において、Ｘ_３は、ＡまたはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_４は、Ｖ、Ｉ、またはＬである。いくつかの実施形態において、Ｘ_５は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。いくつかの実施形態において、Ｘ_６は、Ｅ、Ｖ、またはＬである。いくつかの実施形態において、Ｘ_７は、ＫまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_８は、ＥまたはＱである。いくつかの実施形態において、Ｘ_９は、Ｈ、Ｐ、またはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１０は、Ｓ、Ｔ、またはＧである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１１は、ＫまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１２は、ＶまたはＩである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１３は、Ｆ、Ｌ、またはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１４は、ＦまたはＶである。いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号２の配列を含む野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、６個以下のアミノ酸置換を含む。

【0061】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。

【0062】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ＥＥＸ_１Ｘ_２ＱＸ_３ＩＱＰＤＫＸ_４ＶＸ_５ＶＡＡＧＥＸ_６Ｘ_７Ｘ_８ＬＸ_９ＣＴＸ_１０ＴＳＬＸ_１１ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ_１２ＲＸ_１３ＬＩＹＮＱＸ_１４Ｘ_１５ＧＸ_１６ＦＰＲＶＴＴＶＳＸ_１７Ｘ_１８ＴＸ_１９ＲＸ_２０ＮＭＤＦＸ_２１ＩＸ_２２ＩＸ_２３ＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_２４ＫＸ_２５ＲＫＧＳＰＤＸ_２６Ｘ_２７ＥＸ_２８ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＸ_２９ＫＰＳ（配列番号２３）の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ_１はＥまたはＧであり、Ｘ_２はＬ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ_３はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_４はＳまたはＦであり、Ｘ_５はＬまたはＳであり、Ｘ_６はＳまたはＴであり、Ｘ_７はＡまたはＶであり、Ｘ_８はＩまたはＴであり、Ｘ_９はＨまたはＲであり、Ｘ_１０はＡ、Ｖ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ_１１はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ_１２はＡまたはＧであり、Ｘ_１３はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ_１４はＫまたはＲであり、Ｘ_１５はＥまたはＱであり、Ｘ_１６はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_１７はＤまたはＥであり、Ｘ_１８はＳ、Ｌ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ_１９はＫまたはＲであり、Ｘ_２０はＥまたはＤであり、Ｘ_２１はＳまたはＰであり、Ｘ_２２はＳまたはＲであり、Ｘ_２３はＳまたはＧであり、Ｘ_２４はＶまたはＩであり、Ｘ_２５はＦ、Ｌ、Ｖであり、Ｘ_２６はＤまたは不在であり、Ｘ_２７はＴまたはＶであり、Ｘ_２８はＦまたはＶであり、Ｘ_２９はＡまたはＧであり、変異体は、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0063】

前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_２は、Ｌ、Ｉ、またはＶである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３は、Ｖ、Ｌ、またはＩである。実施形態において、Ｘ_４は、ＳまたはＦである。いくつかの実施形態において、Ｘ_５は、ＬまたはＳである。いくつかの実施形態において、Ｘ_６は、ＳまたはＴである。いくつかの実施形態において、Ｘ_７は、ＡまたはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_８は、ＩまたはＴである。いくつかの実施形態において、Ｘ_９は、ＨまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１０は、Ａ、Ｖ、Ｉ、またはＬである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１１は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１２は、ＡまたはＧである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１３は、Ｅ、Ｖ、またはＬである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１４は、ＫまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１５は、ＥまたはＱである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１６は、Ｈ、Ｐ、またはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１７は、ＤまたはＥである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１８は、Ｓ、Ｌ、Ｔ、またはＧである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１９は、ＫまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２０は、ＥまたはＤである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２１は、ＳまたはＰである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２２は、ＳまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２３は、ＳまたはＧである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２４は、ＶまたはＩである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２５は、Ｆ、Ｌ、Ｖである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２６は、Ｄまたは不在である。いくつかの実施形態において、Ｘ_２７は、ＴまたはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２８は、ＦまたはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２９は、ＡまたはＧである。いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、６個以下のアミノ酸置換を含む。

【0064】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。

【0065】

いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む本開示のポリペプチドは、表３に示される野生型ヒトＳＩＲＰαの配列番号２４の配列を有するＤ２ドメイン、配列番号２５の配列を有するＤ３ドメイン、または配列番号２４の配列を有するＤ２ドメインと配列番号２５の配列を有するＤ３ドメインを更に含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、Ｄ２ドメインの断片もしくは変異体またはＤ３ドメインの断片もしくは変異体を更に含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、Ｄ２ドメインの断片または変異体及びＤ３ドメインの断片または変異体を更に含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、リンカーによってＤ２またはＤ３ドメインに接続される。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、リンカーによってＤ２及びＤ３ドメインに接続される。

【表3】

【0066】

いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む本開示のポリペプチドは、ポリペプチドの薬物動態特性を改善するために、例えば、血清半減期を増加させるために、Ｆｃドメイン変異体に結合される。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、二量体化が不可能なＦｃドメイン変異体に結合される。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、本明細書に記載されるポリペプチドの血清半減期を増加させる働きがある。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む本開示のポリペプチドは、表４に示される配列番号２６～３６のいずれか１つの配列を含まない。

【表4】

【0067】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリペプチド及びポリペプチドコンストラクトは、免疫アッセイなどの結合アッセイのために、ｉｎ ｖｉｔｒｏで利用される。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリペプチド及びポリペプチドコンストラクトは、液相で利用されるか、または固相担体に結合される。いくつかの実施形態において、イムノアッセイに利用されるポリペプチドは、様々な方法で検出可能に標識される。

【0068】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリペプチド及びポリペプチドコンストラクトは、様々な担体に結合され、特定の抗原発現細胞の存在を検出するために使用される。担体の例としては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然及び変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびにマグネタイトが挙げられる。担体の性質は、可溶性でも不溶性もよい。

【0069】

様々な異なる標識及び標識方法が知られている。標識の例としては、酵素、放射性同位体、蛍光化合物、コロイド金属、化学発光化合物及び生物発光化合物が挙げられる。本明細書で開示されるポリペプチドに標識を結合するには、様々な技術が利用可能である。

【0070】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、低分子量のハプテンに結合される。これらのハプテンは、次いで、第２の反応によって特異的に検出される。例えば、いくつかの実施形態において、ハプテンであるビオチンがアビジンとともに使用されるか、あるいは、ハプテンであるジニトロフェニル、ピリドキサールまたはフルオレセインが特定の抗ハプテン抗体（例えば、それぞれ抗ジニトロフェニル抗体、抗ピリドキサール抗体、及び抗フルオレセイン抗体）により検出される。

【0071】

グリコシル化パターンを変更したＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体
いくつかの実施形態において、野生型シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ－α）Ｄ１ドメイン（例えば、配列番号１または２に記載される野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン）に対して残基８０におけるアミノ酸変異；ならびに野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン（例えば、配列番号１または２に記載される野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン）に対して残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基における少なくとも１つの追加のアミノ酸変異を有する、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインまたはその断片を含むＳＩＲＰα Ｄ１変異体を含む、ポリペプチドが本明細書で開示される。

【0072】

また、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体を含むポリペプチドが本明細書で開示され、ここで、Ｆｃドメイン変異体二量体は、２つのＦｃドメイン変異体を含み、各Ｆｃドメイン変異体は、独立して、（ｉ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；（ｉｉ）変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；または（ｉｉｉ）変異Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域から選択される。

【0073】

いくつかの実施形態において、本明細書で開示される組成物中のポリペプチドは、グリコシル化が減少したまたは最小であるＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む。表１中の配列番号１及び２のＤ１ドメインは、配列Ｎ８０ＩＴＰのアミノ酸Ｎ８０に単一の潜在的なＮ結合型グリコシル化部位をそれぞれ含有している。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞におけるＳＩＲＰα Ｄ１ドメインの発現は、１６ｋＤａのメジャーバンド（非グリコシル化）と、Ｅｎｄｏ Ｈｆによって取り除かれた高分子量のマイナーバンドをもたらす。Ｅｎｄｏ Ｈｆは、エンドグリコシダーゼＨとマルトース結合タンパク質の組み換えタンパク質融合体である。Ｅｎｄｏ Ｈｆは、高マンノースのキトビオースコア内部及びＮ結合型糖タンパク質のいくつかのハイブリッドオリゴ糖内部を切断する。これは、アミノ酸位置８３のプロリンがグリコシル化の効率を低下させ、グリコシル化の程度が異なるタンパク質をもたらすことから、不均一性が生じることを示唆している。薬物の開発において、不均一性は、プロセス開発において課題となり得る。したがって、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体の均一な非グリコシル化形態を生成する可能性を調べるために、いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１変異体のアミノ酸Ｎ８０がＡｌａに変異される。いくつかの実施形態において、非グリコシル化ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を作製するために、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のアミノ酸Ｎ８０が、任意の天然及び非天然に生じるアミノ酸、例えば、Ｎ８０Ａ及びＮ８０Ｑを含む、任意のアミノ酸で置き換えられる。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、Ｎ８０Ａ変異及び少なくとも１つの追加の変異（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個の更なる変異またはそれ以上）を含む。いくつかの実施形態において、追加の変異は、ＣＤ４７結合部位にある。いくつかの実施形態において、追加の変異は、Ｄ１ドメインの疎水性コアにある。

【0074】

いくつかの実施形態において、本明細書で開示される組成物中のポリペプチドは、野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインと比べてグリコシル化が増加しているＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む。最終生成物の均一性を高めるための別の選択肢は、アミノ酸Ｎ８０におけるグリコシル化の効率を高め、野生型と比べてグリコシル化が増加したＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を生成することである。いくつかの実施形態において、配列ＮＩＴＰ８３中のアミノ酸Ｐ８３は、アミノ酸Ｎ８０におけるグリコシル化の程度に影響を与える。いくつかの実施形態において、Ｐ８３を任意のアミノ酸に変更すると、Ｎ８０におけるグリコシル化の効率が増加する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のアミノ酸Ｐ８３は、天然及び非天然に生じるアミノ酸、例えば、Ｐ８３Ｖ、Ｐ８３Ａ、Ｐ８３Ｉ、及びＰ８３Ｌを含む、任意のアミノ酸で置き換えられる。いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドは、例えば、細胞株の遺伝子操作（例えば、遺伝子操作された酵母または哺乳動物の宿主）もしくはキフネンシンの添加などの細胞培養条件の変更によって、または原核生物（Ｅ．ｃｏｌｉなど）などの天然で非グリコシル化である宿主を使用することによって、そのような細胞によって発現されるタンパク質をグリコシル化しないように最適化された細胞で発現される。

【0075】

表５は、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体中の各Ｄ１ドメイン変異体配列に対する具体的なアミノ酸置換を列挙する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、表５に列挙される置換の１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４またはそれ以上）を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、グリコシル化されていないか、または最小のグリコシル化である。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、完全にグリコシル化されているか、またはほぼ完全にグリコシル化されている。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大１４個のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大１０個のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大７個のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型Ｄ１ドメインの配列に対して、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９５％、９７％または９７％より大きい）のアミノ酸配列同一性を有する。

【0076】

いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、２つ以上の野生型Ｄ１ドメインまたはその変異体の部分（例えば、ある野生型Ｄ１ドメインまたはその変異体の部分及び別の野生型Ｄ１ドメインまたはその変異体の部分）を含むキメラＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体である。いくつかの実施形態において、キメラＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、野生型Ｄ１ドメインまたはその変異体の少なくとも２つの部分（例えば、３、４、５またはそれ以上の部分）を含み、ここで、部分のそれぞれは、異なる野生型Ｄ１ドメインに由来する。いくつかの実施形態において、キメラＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、表５に列挙される１つ以上のアミノ酸置換を更に含む。

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【0077】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ＥＥＥＸ_１ＱＸ_２ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＸ_３ＴＬＲＣＴＸ_４ＴＳＬＸ_５ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ_６ＬＩＹＮＱＸ_７Ｘ_８ＧＸ_９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ_１０ＴＸ_１１ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ_１２ＩＴＸ_１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_１４ＫＸ_１５ＲＫＧＳＰＤＤＶＥＸ_１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号３７）の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ_１はＬ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ_２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_３はＡまたはＶであり、Ｘ_４はＡ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ_５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ_６はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ_７はＫまたはＲであり、Ｘ_８はＥまたはＱであり、Ｘ_９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ_１１はＫまたはＲであり、Ｘ_１２はＮ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ_１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ_１４はＶまたはＩであり、Ｘ_１５はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ_１６はＦまたはＶであり、変異体は、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0078】

いくつかの実施形態において、本開示の本態様において、ポリペプチドは、配列番号３７の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ_１は、Ｌ、Ｉ、またはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、またはＩである。いくつかの実施形態において、Ｘ_３は、ＡまたはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_４は、Ａ、Ｉ、またはＬである。いくつかの実施形態において、Ｘ_５は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。いくつかの実施形態において、Ｘ_６は、Ｅ、Ｖ、またはＬである。いくつかの実施形態において、Ｘ_７は、ＫまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_８は、ＥまたはＱである。いくつかの実施形態において、Ｘ_９は、Ｈ、Ｐ、またはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１０は、Ｌ、Ｔ、またはＧである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１１は、ＫまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１２は、Ｎ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１３は、Ｐ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１４は、ＶまたはＩである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１５は、Ｆ、Ｌ、Ｖである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１６は、ＦまたはＶである。

【0079】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミノ酸置換を含む。

【0080】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。

【0081】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ＥＥＥＸ_１ＱＸ_２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ_３ＩＬＨＣＴＸ_４ＴＳＬＸ_５ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ_６ＬＩＹＮＱＸ_７Ｘ_８ＧＸ_９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ_１０ＴＸ_１１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＸ_１２ＩＴＸ_１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_１４ＫＸ_１５ＲＫＧＳＰＤＴＥＸ_１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号３８）の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ_１はＬ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ_２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_３はＡまたはＶであり、Ｘ_４はＶ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ_５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ_６はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ_７はＫまたはＲであり、Ｘ_８はＥまたはＱであり、Ｘ_９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_１０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ_１１はＫまたはＲであり、Ｘ_１２はＮ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ_１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ_１４はＶまたはＩであり、Ｘ_１５はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ_１６はＦまたはＶであり、変異体は、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0082】

いくつかの実施形態において、本開示の本態様において、ポリペプチドは、配列番号３８の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ_１は、Ｌ、Ｉ、またはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、またはＩである。いくつかの実施形態において、Ｘ_３は、ＡまたはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_４は、Ｖ、Ｉ、またはＬである。いくつかの実施形態において、Ｘ_５は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。いくつかの実施形態において、Ｘ_６は、Ｅ、Ｖ、またはＬである。いくつかの実施形態において、Ｘ_７は、ＫまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_８は、ＥまたはＱである。いくつかの実施形態において、Ｘ_９は、Ｈ、Ｐ、またはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１０は、Ｓ、Ｔ、またはＧである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１１は、ＫまたはＲである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１２は、Ｎ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１３は、Ｐ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１４は、ＶまたはＩである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１５は、Ｆ、Ｌ、またはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１６は、ＦまたはＶである。

【0083】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置換を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミノ酸置換を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む。

【0084】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。

【0085】

別の態様において、本開示は、ＥＥＸ_１Ｘ_２ＱＸ_３ＩＱＰＤＫＸ_４ＶＸ_５ＶＡＡＧＥＸ_６Ｘ_７Ｘ_８ＬＸ_９ＣＴＸ_１０ＴＳＬＸ_１１ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ_１２ＲＸ_１３ＬＩＹＮＱＸ_１４Ｘ_１５ＧＸ_１６ＦＰＲＶＴＴＶＳＸ_１７Ｘ_１８ＴＸ_１９ＲＸ_２０ＮＭＤＦＸ_２１ＩＸ_２２ＩＸ_２３Ｘ_２４ＩＴＸ_２５ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_２６ＫＸ_２７ＲＫＧＳＰＤＸ_２８Ｘ_２９ＥＸ_３０ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＸ_３１ＫＰＳ（配列番号４７）の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含むポリペプチドを特徴とし、ここで、Ｘ_１はＥまたはＧであり、Ｘ_２はＬ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ_３はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_４はＳまたはＦであり、Ｘ_５はＬまたはＳであり、Ｘ_６はＳまたはＴであり、Ｘ_７はＡまたはＶであり、Ｘ_８はＩまたはＴであり、Ｘ_９はＨ、Ｒ、またはＬであり、Ｘ_１０はＡ、Ｖ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ_１１はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ_１２はＡまたはＧであり、Ｘ_１３はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ_１４はＫまたはＲであり、Ｘ_１５はＥまたはＱであり、Ｘ_１６はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_１７はＤまたはＥであり、Ｘ_１８はＳ、Ｌ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ_１９はＫまたはＲであり、Ｘ_２０はＥまたはＮであり、Ｘ_２１はＳまたはＰであり、Ｘ_２２はＳまたはＲであり、Ｘ_２３はＳまたはＧであり、Ｘ_２４は任意のアミノ酸であり、Ｘ_２５は任意のアミノ酸であり、Ｘ_２６はＶまたはＩであり、Ｘ_２７はＦ、Ｌ、Ｖであり、Ｘ_２８はＤまたは不在であり、Ｘ_２９はＴまたはＶであり、Ｘ_３０はＦまたはＶであり、Ｘ_３１はＡまたはＧであり、変異体は、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0086】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号４７の配列を含み、ここで、Ｘ_１は、ＥまたはＧである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_２は、Ｌ、Ｉ、またはＶである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３は、Ｖ、Ｌ、またはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_４は、ＳまたはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_５は、ＬまたはＳである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_６は、ＳまたはＴである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、ＡまたはＶである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、ＩまたはＴである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_９は、ＨまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１０は、Ａ、Ｖ、Ｉ、またはＬである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１１は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１２は、ＡまたはＧである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１３は、Ｅ、Ｖ、またはＬである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１４は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１５は、ＥまたはＱである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１６は、Ｈ、Ｐ、またはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１７は、ＤまたはＥである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１８は、Ｓ、Ｌ、Ｔ、またはＧである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１９は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２０は、ＥまたはＮである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２１は、ＳまたはＰである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２２は、ＳまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２３は、ＳまたはＧである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２４は、Ｎ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２５は、Ｐ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２６は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２７は、Ｆ、Ｌ、Ｖである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２８は、Ｄまたは不在である。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_２９は、ＴまたはＶである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３０は、ＦまたはＶである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３１は、ＡまたはＧである。

【0087】

いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミノ酸置換を含む。

【0088】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１または２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。

【0089】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ＥＥＥＬＱＸ_１ＩＱＰＤＫＳＶＸ_２ＶＡＡＧＥＸ_３ＡＸ_４ＬＸ_５ＣＴＸ_６ＴＳＬＸ_７ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ_８ＲＸ_９ＬＩＹＮＱＸ_１０Ｘ_１１ＧＸ_１２ＦＰＲＶＴＴＶＳＸ_１３Ｘ_１４ＴＫＲＸ_１５ＮＭＤＦＳＩＸ_１６ＩＸ_１７Ｘ_１８ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_１９ＫＦＲＫＧＸ_２０Ｘ_２１Ｘ_２２ＤＸ_２３ＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４８）の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ_１はＶまたはＩであり、Ｘ_２はＬまたはＳであり、Ｘ_３はＴまたはＳであり、Ｘ_４はＴまたはＩであり、Ｘ_５はＲまたはＨであり、Ｘ_６はＡ、Ｖ、またはＩであり、Ｘ_７はＩ、Ｒ、Ｙ、ＫまたはＦであり、Ｘ_８はＧまたはＡであり、Ｘ_９はＥまたはＶであり、Ｘ_１０はＫまたはＲであり、Ｘ_１１はＥ、ＤまたはＱであり、Ｘ_１２はＨまたはＰであり、Ｘ_１３はＤまたはＥであり、Ｘ_１４はＳ、ＬまたはＴであり、Ｘ_１５はＮまたはＥであり、Ｘ_１６はＲまたはＳであり、Ｘ_１７はＧまたはＳであり、Ｘ_１８はＮまたはＡであり、Ｘ_１９はＶまたはＩであり、Ｘ_２０はＳ、ＩまたはＭであり、Ｘ_２１はＰまたは不在であり、Ｘ_２２はＤまたはＰであり、Ｘ_２３はＶまたはＴであり、あるいはその断片である。

【0090】

別の態様において、本開示は、ＥＥＥＬＱＸ_１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ_２ＴＳＬＸ_３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ_４ＬＩＹＮＱＸ_５Ｘ_６ＧＸ_７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ_８ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ_９ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_１０ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４９）の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含むポリペプチドを特徴とし、ここで、Ｘ_１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_２はＡ、Ｉ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ_３はＩ、Ｆ、Ｓ、またはＴであり、Ｘ_４はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ_５はＫまたはＲであり、Ｘ_６はＥまたはＱであり、Ｘ_７はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_８はＬ、Ｔ、Ｓ、またはＧであり、Ｘ_９はＡであり、Ｘ_１０はＶまたはＩであり、変異体は、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0091】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号４９の配列を含み、ここで、Ｘ_１は、Ｖ、ＬまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_２は、Ａ、Ｉ、Ｖ、またはＬである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３は、Ｉ、Ｆ、Ｓ、またはＴである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_４は、Ｅ、Ｖ、またはＬである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_５は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_６は、ＥまたはＱである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ｈ、Ｐ、またはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ｌ、Ｔ、ＳまたはＧである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_９は、Ａである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１０は、ＶまたはＩである。

【0092】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号４９に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を含むＳＩＲＰα Ｄ１ドメインを含み、ここで、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５、Ｘ_６、Ｘ_７、Ｘ_８、Ｘ_９、及びＸ_１０のそれぞれは、野生型アミノ酸ではない。

【0093】

いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミノ酸置換を含む。

【0094】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。

【0095】

別の態様において、本開示は、ＥＥＥＬＱＸ_１ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＸ_２ＴＳＬＸ_３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ_４ＬＩＹＮＱＸ_５Ｘ_６ＧＸ_７ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ_８ＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＸ_９ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_１０ＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５０）の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含むポリペプチドを特徴とし、ここで、Ｘ_１はＶまたはＩであり、Ｘ_２はＶまたはＩであり、Ｘ_３はＩまたはＦであり、Ｘ_４はＥまたはＶであり、Ｘ_５はＫまたはＲであり、Ｘ_６はＥまたはＱであり、Ｘ_７はＨまたはＰであり、Ｘ_８はＳまたはＴであり、Ｘ_９はＮまたはＡであり、Ｘ_１０ ＶまたはＩであり、変異体は、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0096】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号５０の配列を含み、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_２は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３は、ＩまたはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_４は、ＥまたはＶである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_５は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_６は、ＥまたはＱである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、ＨまたはＰである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、ＳまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_９は、ＮまたはＡである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_１０は、ＶまたはＩである。

【0097】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号５０に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を含むＳＩＲＰα Ｄ１ドメインを含み、ここで、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５、Ｘ_６、Ｘ_７、Ｘ_８、Ｘ_９、及びＸ_１０のそれぞれは、野生型アミノ酸ではない。

【0098】

いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミノ酸置換を含む。

【0099】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。

【0100】

別の態様において、本開示は、ＥＥＥＬＱＸ_１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ_２ＴＳＬＸ_３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ_４ＬＩＹＮＱＸ_５ＥＧＸ_６ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ_７ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ_８ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_９ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５１）の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含むポリペプチドを特徴とし、ここで、Ｘ_１はＶまたはＩであり、Ｘ_２はＡまたはＩであり、Ｘ_３はＩまたはＦであり、Ｘ_４はＥまたはＶであり、Ｘ_５はＫまたはＲであり、Ｘ_６はＨまたはＰであり、Ｘ_７はＬまたはＴであり、Ｘ_８はＮまたはＡであり、Ｘ_９はＶまたはＩであり、変異体は、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0101】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号５１の配列を含み、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_２は、ＡまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３は、ＩまたはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_４は、ＥまたはＶである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_５は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_６は、ＨまたはＰである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、ＬまたはＴである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、ＮまたはＡである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_９は、ＶまたはＩである。いくつかの実施形態において、Ｘ_４は、Ｖではない。

【0102】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号５１の配列を含み、ここで、Ｘ_８は、Ａである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_１は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_２は、ＡまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_３は、ＩまたはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_４は、ＥまたはＶである。いくつかの実施形態において、Ｘ_４は、Ｖではない。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_５は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_６は、ＨまたはＰである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_７は、ＡまたはＶである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_９は、ＶまたはＩである。

【0103】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号５１の配列を含み、ここで、Ｘ_８は、Ａである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_１は、Ｉである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_２は、Ｉである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_３は、Ｆである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_４は、Ｖである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_５は、Ｒである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_６は、Ｐである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_７は、Ｔである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_８は、Ａであり、Ｘ_９は、Ｉである。

【0104】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号５１に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を含むＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５、Ｘ_６、Ｘ_７、Ｘ_８、及びＸ_９のそれぞれは、野生型アミノ酸ではない。

【0105】

いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミノ酸置換を含む。

【0106】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。

【0107】

別の態様において、本開示は、ＥＥＥＬＱＸ_１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ_２ＴＳＬＸ_３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＸ_４ＥＧＸ_５ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ_６ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ_７ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２２２）の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含むポリペプチドを特徴とし、ここで、Ｘ_１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_２はＡ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ_３はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ_４はＫまたはＲであり、Ｘ_５はＨまたはＰであり、Ｘ_６はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ_７はＮまたはＡであり、変異体は、配列番号１に従う配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0108】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２２２の配列を含み、ここで、Ｘ_１は、Ｖ、Ｌ、またはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_２は、Ａ、Ｉ、またはＬである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_４は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_５は、ＨまたはＰである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_６は、Ｌ、Ｔ、またはＧである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、ＮまたはＡである。

【0109】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２２２の配列を含み、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_２は、ＡまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３は、ＩまたはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_４は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_５は、ＨまたはＰである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_６は、ＬまたはＴである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、ＮまたはＡである。

【0110】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２２２の配列を含み、ここで、Ｘ_７は、Ａである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_１は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_２は、ＡまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_３は、ＩまたはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_４は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_５は、ＨまたはＰである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_６は、ＬまたはＴである。

【0111】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２２２の配列を含み、ここで、Ｘ_７は、Ａである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_１は、Ｉである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_２は、Ｉである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_３は、Ｆである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_４は、Ｒである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_５は、Ｐである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_６は、Ｔである。

【0112】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２２２に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を含むＳＩＲＰα Ｄ１ドメインを含み、ここで、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５、Ｘ_６、及びＸ_７のそれぞれは、野生型アミノ酸ではない。

【0113】

いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミノ酸置換を含む。

【0114】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、断片は、１０未満のアミノ酸長、約１０アミノ酸長、約２０アミノ酸長、約３０アミノ酸長、約４０アミノ酸長、約５０アミノ酸長、約６０アミノ酸長、約７０アミノ酸長、約８０アミノ酸長、約９０アミノ酸長、約１００アミノ酸長、または約１００アミノ酸長超のポリペプチドを含む。断片は、ＣＤ４７に結合する能力を保持している。好ましくは、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチド及びその断片は、ＳＩＲＰαポリペプチドがＣＤ４７に結合するよりも高い親和性でＣＤ４７に結合する。例えば、いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０－^１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。

【0115】

別の態様において、本開示は、ＥＥＥＬＱＸ_１ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＸ_２ＴＳＬＸ_３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＸ_４ＥＧＸ_５ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ_６ＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＸ_７ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２１２）の配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含むポリペプチドを特徴とし、ここで、Ｘ_１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_２はＶ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ_３はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ_４はＫまたはＲであり、Ｘ_５はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_６はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ_７はＮまたはＡであり、変異体は、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。

【0116】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２１２の配列を含み、ここで、Ｘ_１は、Ｖ、Ｌ、またはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_２は、Ｖ、Ｉ、またはＬである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_４は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_５は、ＨまたはＰである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_６は、Ｓ、Ｔ、またはＧである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、ＮまたはＡである。

【0117】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２１２の配列を含み、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_２は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_３は、ＩまたはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_４は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_５は、ＨまたはＰである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_６は、ＳまたはＴである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、ＮまたはＡである。

【0118】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２１２の配列を含み、ここで、Ｘ_７は、Ａである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_１は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_２は、ＶまたはＩである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_３は、ＩまたはＦである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_４は、ＫまたはＲである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_５は、ＨまたはＰである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_６は、ＳまたはＴである。

【0119】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２１２の配列を含み、ここで、Ｘ_７は、Ａである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_１は、Ｉである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_２は、Ｉである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_３は、Ｆである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_４は、Ｒである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_５は、Ｐである。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ_７は、Ａであり、Ｘ_６は、Ｔである。

【0120】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２１２に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメインを含み、ここで、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５、Ｘ_６、及びＸ_７のそれぞれは、野生型アミノ酸ではない。

【0121】

いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミノ酸置換を含む。

【0122】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインよりも少なくとも１０００倍大きい結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、断片は、１０未満のアミノ酸長、約１０アミノ酸長、約２０アミノ酸長、約３０アミノ酸長、約４０アミノ酸長、約５０アミノ酸長、約６０アミノ酸長、約７０アミノ酸長、約８０アミノ酸長、約９０アミノ酸長、約１００アミノ酸長、または約１００アミノ酸長超のポリペプチドを含む。断片は、ＣＤ４７に結合する能力を保持している。好ましくは、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチド及びその断片は、ＳＩＲＰαポリペプチドがＣＤ４７に結合するよりも高い親和性でＣＤ４７に結合する。例えば、いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ～１００ｎＭ、約１００ｎＭ～５０ｎＭ、約５０ｎＭ～１０ｎＭ、約１０ｎＭ～５ｎＭ、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～５００ｐＭ、約５００ｐＭ～１００ｐＭ、約１００ｐＭ～５０ｐＭ、または約５０ｐＭ～１０ｐＭのＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。

【0123】

いくつかの実施形態において、ＥＥＥＬＱＸ_１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ_２ＴＳＬＸ_３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ_４ＬＩＹＮＱＸ_５Ｘ_６ＧＸ_７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ_８ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_１３ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２１８）に従う配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含むポリペプチドが本明細書に記載され、ここで、Ｘ_１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_２はＡ、Ｖ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_３はＩ、Ｓ、Ｔ、またはＦであり、Ｘ_４はＥ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ_５はＫまたはＲであり、Ｘ_６はＥまたはＱであり、Ｘ_７はＨ、Ｒ、またはＰであり、Ｘ_８はＳ、Ｇ、Ｌ、またはＴであり、Ｘ_９は任意のアミノ酸であり、Ｘ_１０は任意のアミノ酸であり、Ｘ_１１は任意のアミノ酸であり、Ｘ_１２は任意のアミノ酸であり、Ｘ_１３はＶまたはＩであり、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号１に従う配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも２つのアミノ酸置換を含む。

【0124】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号２１２の配列を含み、ここで、Ｘ_１、Ｘ_９は、Ａである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_９は、Ｎである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_１０は、Ｉである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_９は、Ｎであり、Ｘ１０は、Ｐである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_９は、Ｎであり、Ｘ１１は、Ｓ、Ｔ、またはＣ以外の任意のアミノ酸である。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様におい、Ｘ_１１は、Ｔである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_１１は、Ｔ以外のアミノ酸である。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_１２は、Ｐである。前述の実施形態のいずれかにおいて、本開示の本態様において、Ｘ_９は、Ｎであり、Ｘ_１２は、Ｐ以外の任意のアミノ酸である。

【0125】

いくつかの実施形態において、ＥＥＥＬＱＸ_１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ_２ＴＳＬＸ_３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ_４ＬＩＹＮＱＸ_５Ｘ_６ＧＸ_７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ_８ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ_９ＩＴＸ_１０ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_１１ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２１９）に従う配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含むポリペプチドが本明細書に記載され、ここで、Ｘ_１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_２はＡ、Ｖ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_３はＩ、Ｓ、Ｔ、またはＦであり、Ｘ_４はＥ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ_５はＫまたはＲであり、Ｘ_６はＥまたはＱであり、Ｘ_７はＨ、Ｒ、またはＰであり、Ｘ_８はＳ、Ｇ、Ｌ、またはＴであり、Ｘ_９はＮであり、Ｘ_１０はＰ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ_１１はＶまたはＩであり、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号１に従う配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して、少なくとも２つのアミノ酸置換を含む。

【0126】

本開示の別の態様において、配列番号４８のアミノ酸配列を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片を含む組成物が本明細書で開示される。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたはその断片は、ＳＩＲＰαポリペプチドがＣＤ４７に結合する親和性と比較して、より高い親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドは、１×１０^－８Ｍ未満、または１×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満または１×１０^－１１Ｍ未満のＫ_ＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、上述のＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドは、第２のポリペプチドに結合または融合される。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドは、限定するものではないが、Ｆｃポリペプチド、Ｆｃ変異体または前述の断片を含む。

【0127】

前述に限定されることなく、いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドは、表６に示される配列番号５３～８７及び２１３のいずれか１つから選択される。

【表6-1】

【表6-2】

【表6-3】

【表6-4】

【表6-5】

【0128】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、表６に提供される任意の変異体に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を有するＳＩＲＰα Ｄ１変異体ドメインを含む。

【0129】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、表６中の配列番号８０、８１、または８５に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメインを含む。

【0130】

Ｆｃドメイン変異体及びそれを含む融合ポリペプチド
いくつかの実施形態において、野生型シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ－α）Ｄ１ドメイン（例えば、配列番号１または２に記載される野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン）に対して残基８０におけるアミノ酸変異；ならびに野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン（例えば、配列番号１または２に記載される野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン）に対して残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基における少なくとも１つの追加のアミノ酸変異を有する、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインまたはその断片を含むＳＩＲＰα Ｄ１変異体を含む、ポリペプチドが本明細書で開示される。

【0131】

また、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体二量体が本明細書で開示され、ここで、Ｆｃドメイン変異体二量体は、２つのＦｃドメイン変異体を含み、各Ｆｃドメイン変異体は、独立して、（ｉ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；（ｉｉ）変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；または（ｉｉｉ）変異Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域から選択される。

【0132】

細胞表面抗原を標的とする抗体は、免疫細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に付随する免疫活性化及びエフェクター機能を誘発し得る。ＩｇＧ（ガンマ受容体）、ＩｇＥ（イータ受容体）、ＩｇＡ（アルファ受容体）及びＩｇＭ（ミュー受容体）を含む、特定の抗体クラスに特異的であるＦｃ受容体が多数存在する。細胞表面上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合は、多数の生物学的反応を誘発し得、当該反応には、抗体被覆粒子の食作用（抗体依存性細胞媒介性食作用またはＡＤＣＰ）、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体被覆細胞の溶解（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害またはＡＤＣＣ）及び炎症性メディエーターの放出、胎盤通過、及び免疫グロブリン産生の制御が含まれる。更に、補体のＣ１成分の抗体への結合は、補体系を活性化し得る。補体の活性化は、細胞病原体の溶解にとって重要であり得る。しかしながら、補体の活性化はまた、炎症反応を刺激することもあり、自己免疫過敏症または他の免疫疾患に関与することもある。ある特定のＦｃ受容体に結合する能力を減少または消失させた変異Ｆｃ領域は、局所細胞または局所組織を損傷も破壊もさせずに、リガンド機能を標的化、活性化または中和することによって作用する治療用抗体及びＦｃ融合ポリペプチドコンストラクトの開発に有用である。

【0133】

いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ポリペプチドコンストラクトは、エフェクター機能を消失または減少させたＦｃドメインを形成するＦｃドメイン変異体に連結された非天然に生じるＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む。

【0134】

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、第２及び第３の抗体定常ドメイン（例えば、ＣＨ２及びＣＨ３）を含むポリペプチド鎖を指す。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体はまた、ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、及びＩｇＤを含む、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプのものである。更に、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、任意のＩｇＧサブタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）のものである。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、野生型Ｆｃドメイン単量体配列に対して、ＦｃドメインとＦｃ受容体との間の相互作用を変化させる１０個ものアミノ酸修飾（例えば、挿入、欠失及び／または置換）（例えば、１～１０、１～８、１～６、１～４個のアミノ酸の置換、付加もしくは挿入、欠失、またはこれらの組み合わせ）を含む。

【0135】

本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメイン二量体」という用語は、２つのＦｃドメインの二量体を指す。野生型Ｆｃドメイン二量体において、２つの野生型Ｆｃドメインは、２つのＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用、及び２つの二量体化Ｆｃドメインのヒンジドメイン間に形成される１つ以上のジスルフィド結合によって、二量体化される。

【0136】

本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメイン二量体変異体」という用語は、少なくとも１つのＦｃドメイン変異体を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体は、エフェクター機能を欠くように変異されたＦｃドメイン変異体、例えば、「デッドＦｃドメイン二量体変異体」を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体中のＦｃドメインのそれぞれは、ＣＨ２抗体定常ドメイン中に、Ｆｃドメイン二量体変異体とＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）、Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）、またはＦｃε（ＦｃεＲ）などのＦｃ受容体との間の相互作用または結合を減少させるアミノ酸置換を含む。

【0137】

いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、表２、５、及び６に記載される変異体のいずれか）は、免疫グロブリンのＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン変異体の断片に融合される。いくつかの実施形態において、免疫グロブリンのＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン変異体の断片は、別のＦｃドメイン変異体とともにＦｃドメイン二量体を形成することができる。いくつかの実施形態において、免疫グロブリンのＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン変異体の断片は、別のＦｃドメイン変異体とともにＦｃドメイン二量体を形成することができない。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン変異体の断片は、ポリペプチドの血清半減期を増加させるために、本開示のポリペプチドに融合される。いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドに融合されたＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン変異体の断片は、第２のＦｃドメイン変異体と二量体化して、Ｆｃ受容体に結合するＦｃドメイン二量体変異体を形成するか、あるいは、Ｆｃドメイン変異体は、Ｆｃ受容体に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドの血清半減期を増加させるためにポリペプチドに融合されたＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン変異体の断片は、いかなる免疫系関連反応も誘導しない。

【0138】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＳＩＲＰαポリペプチドまたはコンストラクトは、第１のＦｃドメイン変異体に接続されたＳＩＲＰα Ｄ１ドメインまたはその変異体、及び第２のＦｃドメイン変異体に接続された抗体可変ドメインを含み、ここで、第１及び第２のＦｃドメイン変異体が結合してＦｃドメイン二量体変異体（例えば、ヘテロ二量体Ｆｃドメイン二量体変異体）を形成する。Ｆｃドメイン二量体は、免疫グロブリンのＣ末端に認められるタンパク質構造である。Ｆｃドメイン二量体は、ＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用によって二量体化される２つのＦｃドメインを含む。野生型Ｆｃドメイン二量体は、Ｆｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、及びＦｃγＲＩＶに結合する最小構造を形成する。

【0139】

Ｆｃドメイン二量体は、抗体のその標的への結合に直接関与しないが、抗体依存性の細胞毒性における抗体の関与などの様々なエフェクター機能に関与することができる。いくつかの実施形態において、本開示のＳＩＲＰαポリペプチドまたはコンストラクト中のＦｃドメインは、エフェクター機能の低下、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低下、補体依存性細胞溶解（ＣＤＣ）の低下、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）の低下、またはこれらの任意の組み合わせをもたらす、アミノ酸の置換、付加もしくは挿入、欠失、またはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本開示のＳＩＲＰαポリペプチドまたはコンストラクトは、ヒトＦｃ受容体に対する結合の低下（例えば、最小の結合または結合がないこと）及び補体タンパク質Ｃ１ｑに対する結合の低下（例えば、最小の結合または結合がないこと）を特徴とする。いくつかの実施形態において、本開示のＳＩＲＰαコンストラクトは、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、またはこれらの任意の組み合わせ、及びＣ１ｑに対する結合の低下（例えば、最小の結合または結合がないこと）を特徴とする。ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰ、またはこれらの任意の組み合わせなどの抗体依存性エフェクター機能を変更または減少させるために、いくつかの実施形態において、本開示のＳＩＲＰαコンストラクト中のＦｃドメインは、ＩｇＧクラスのものであり、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３６、Ｇ２３７、Ｄ２６５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ａ３２７、Ａ３３０、Ｐ３３１、またはＰ３２９における１つ以上のアミノ酸置換を含む（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う番号付け（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）））。

【0140】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される非天然型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトは、天然型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、Ｆｃγ受容体ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４のうちの少なくとも１つへの結合の低下または消失を呈する。いくつかの場合において、本明細書に記載されるポリペプチドコンストラクトは、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４のＦｃγ受容体に対する結合の低下または消失を呈する。

【0141】

ＣＤＣは、抗体Ｆｃドメインに補体成分Ｃ１ｑが結合することによって補体カスケードが活性化される、細胞傷害の一形態を指す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される非天然型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上のＣ１ｑ結合の減少を呈する。いくつかの場合において、本明細書に記載される非天然型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、ＣＤＣの減少を呈する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される非天然型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上のＣＤＣの減少を呈する。いくつかの場合において、本明細書に記載される非天然型Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、無視できる程度のＣＤＣを呈する。

【0142】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体は、野生型配列に対して、最小のグリコシル化であるか、減少したグリコシル化を有する。いくつかの実施形態において、脱グリコシル化は、Ｎ２９７Ａの変異、またはＮ２９７をＮではない任意のアミノ酸に変異させることによって達成される。いくつかの実施形態において、脱グリコシル化は、モチーフＮ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３（Ｎ＝アスパラギン；Ｘａａ１＝Ｐ（プロリン）を除く任意のアミノ酸；Ｘａａ２＝Ｔ（トレオニン）、Ｓ（セリン）またはＣ（システイン）；及びＸａａ３＝Ｐ（プロリン）を除く任意のアミノ酸）を壊すことによって達成される。一実施形態において、Ｎ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３モチーフは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１に従って指定される残基２９７～３００を指す。いくつかの実施形態において、Ｎ、Ｘａａ１、Ｘａａ２、またはＸａａ３のうちいずれかの１つ以上に対する変異は、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体の脱グリコシル化をもたらす。

【0143】

いくつかの実施形態において、抗体ＩｇＧ定常領域の変異体（例えば、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体）は、Ｆｃγ受容体に特異的に結合する能力が減少しているか、または食作用を誘導する能力が減少している。いくつかの実施形態において、抗体ＩｇＧ定常領域の変異体（例えば、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体）は、Ｆｃγ受容体に特異的に結合する能力が減少しており、食作用を誘導する能力が減少している。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、エフェクター機能を欠くように変異され、これは、「デッド」Ｆｃドメイン変異体の典型である。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、Ｆｃドメイン二量体とＦｃγ受容体との間の相互作用を最小にすることが知られている特定のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、ＩｇＧ１抗体に由来し、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の変異が、そのようなＩｇＧ１ Ｆｃドメイン変異体に含まれる。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン変異体に対するそのような追加の変異の非限定的な例としては、Ｅ３１８Ａ及びＫ３２２Ａが挙げられる。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン変異体は、野生型ヒトＩｇＧ１配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下の変異を有する。いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の欠失が、そのようなＩｇＧ１ Ｆｃドメイン変異体に含まれる。例えば、いくつかの実施形態において、例えば、ポリペプチドが細菌または哺乳動物細胞中で産生される場合、ポリペプチドの均一性を高めるために、表７中の配列番号８８に提供されるＦｃドメインＩｇＧ１重鎖定常領域のＣ末端リシンが欠失される。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン変異体は、野生型ヒトＩｇＧ１配列（例えば、以下の配列番号１６１参照）と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下の欠失を有する。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン変異体は、配列番号１３５、配列番号１３６または配列番号１３７のいずれか１つに従う配列を有する。
配列番号１６１：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ

【0144】

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４抗体に由来し、アミノ酸置換Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、またはＡ３３０ＳとＰ３３１Ｓの両方を含む。前述のアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）に従って定義される。所与の抗体に対するアミノ酸残基のＫａｂａｔ番号付けは、抗体の配列と「標準的な」Ｋａｂａｔ番号付け配列との相同領域でのアラインメントによって決定され得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａのアミノ酸置換（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）のうちの１つ以上を含む、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の変異が、そのようなＩｇＧ２ Ｆｃドメイン変異体に含まれる。ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン変異体に対するそのような追加の変異の非限定的な例としては、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ３０９Ｌ及びＨ２６８Ａ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）が挙げられる。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン変異体は、野生型ヒトＩｇＧ２配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３個またはそれ以下の変異を有する。いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の欠失が、そのようなＩｇＧ２ Ｆｃドメイン変異体に含まれる。例えば、いくつかの実施形態において、例えば、ポリペプチドが細菌または哺乳動物細胞中で産生される場合、ポリペプチドの均一性を高めるために、表７中の配列番号８９に提供されるＦｃドメインＩｇＧ２重鎖定常領域のＣ末端リシンが欠失される。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン変異体は、野生型ヒトＩｇＧ２配列（例えば、以下の配列番号１６２参照）と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下の欠失を有する。
配列番号１６２：
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ

【0145】

Ｆｃドメイン変異体がＩｇＧ４ Ｆｃドメイン変異体である場合、いくつかの実施形態において、そのようなＦｃドメイン変異体は、Ｓ２２８Ｐの変異（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）に従って指定）を含む。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメイン変異体は、野生型ヒトＩｇＧ４配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個の変異（複数可）を有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６のアミノ酸置換（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）のうちの１つ以上を含む、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａのアミノ酸置換（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）のうちの１つ以上を含む、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ配列を含む。

【0146】

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域の変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡもしくはＮ２９７Ａのうちの少なくとも１つ、またはＩｇＧ２ Ｆｃ領域の変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＳもしくはＮ２９７Ａのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域の変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡもしくはＮ２９７Ａのうちの少なくとも２つ、またはＩｇＧ２ Ｆｃ領域の変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＳもしくはＮ２９７Ａのうちの少なくとも２つを含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域の変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡもしくはＮ２９７Ａのうちの少なくとも３つを含むか、またはＩｇＧ２ Ｆｃ領域の変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａからなる。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａからなる。

【0147】

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体に対する結合の低下を呈する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体に対する結合の消失を呈する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の低下を呈する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の消失を呈する。

【0148】

配列番号８８及び配列番号８９は、ＦｃドメインＩｇＧ１及びＩｇＧ２重鎖定常領域のアミノ酸配列を提供する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、表７に示される配列番号９０～９５の任意の変異体である。

【表7-1】

【表7-2】

【0149】

抗体依存性細胞媒介性細胞傷害は、本明細書においてＡＤＣＣとも呼ばれ、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び好中球）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に分泌型Ｉｇが結合し、これにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて、その標的細胞を死滅させることを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。抗体依存性細胞媒介性食作用は、本明細書においてＡＤＣＰとも呼ばれ、ある特定の食細胞（例えば、マクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に分泌型Ｉｇが結合し、これにより、食作用エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて、その標的細胞を取り込み、消化することを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。標的細胞の表面に対するリガンド特異的高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞または食細胞を刺激することができ、かかる死滅に使用することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの減少を呈する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上のＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの減少を呈する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの消失を呈する。

【0150】

補体依存性細胞傷害は、本明細書においてＣＤＣとも呼ばれ、抗体Ｆｃドメインに補体成分Ｃ１ｑが結合することによって補体カスケードが活性化される、細胞傷害の一形態を指す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上のＣ１ｑ結合の減少を呈する。いくつかの場合において、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、ＣＤＣの減少を呈する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上のＣＤＣの減少を呈する。いくつかの場合において、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、無視できる程度のＣＤＣを呈する。

【0151】

本明細書におけるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃγ受容体に対する結合の減少を呈するものを含む。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体は、実施例に記載されるように、Ｆｃγ受容体への結合が、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＦｃγ受容体によって示される結合よりも小さい。いくつかの場合において、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体は、Ｆｃγ受容体に対する結合を、１０％、２０％ ３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％（エフェクター機能が完全に消失）低下させる。いくつかの実施形態において、結合の低下は、いずれか１つ以上のＦｃγ受容体、例えば、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、またはＣＤ６４に対するものである。

【0152】

いくつかの場合において、本明細書で開示されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体は、その野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の低下を呈する。そのようなＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体は、その野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の低下を呈し、ここで、食作用活性の低下は、例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％である。いくつかの場合において、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体は、その野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の消失を呈する。

【0153】

いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体は、１つ以上の融合パートナーに結合される。場合によって、融合パートナーは、治療用部分である。いくつかの場合において、融合パートナーは、発現されるタンパク質の標的化、精製、スクリーニング、ディスプレイなどを可能にするように選択される。いくつかの実施形態において、融合パートナーはまた、Ｆｃ受容体への結合の程度または食作用の低下の程度に影響する。本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体が融合パートナーに結合される場合、以下に記載されるようなポリペプチドコンストラクトを形成する。

【0154】

いくつかの実施形態において、融合パートナーは、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体配列にリンカー配列を介して連結される。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、一般に、１０アミノ酸未満などの少数のアミノ酸を含むが、それより長いリンカーも利用される。いくつかの場合において、リンカーは、１０、９、８、７、６、もしくは５アミノ酸長またはそれより短いアミノ酸長を有する。いくつかの場合において、リンカーは、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０もしくは３５アミノ酸長またはそれより長いアミノ酸長を有する。任意選択により、いくつかの実施形態において、切断可能なリンカーが利用される。

【0155】

いくつかの実施形態において、融合パートナーは、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体タンパク質及び任意の関連する融合パートナーを、所望の細胞位置または細胞外培地に誘導する、ターゲット配列またはシグナル配列である。いくつかの実施形態において、ある特定のシグナル伝達配列は、タンパク質を成長培地中、または細胞膜の内膜と外膜との間に位置するペリプラズム中に分泌されるようにする。いくつかの実施形態において、融合パートナーは、精製またはスクリーニングを可能にするペプチドまたはタンパク質をコードする配列である。そのような融合パートナーには、ポリヒスチジンタグ（Ｈｉｓタグ）（例えば、Ｈｉｓ６（配列番号２２３）及びＨｉｓ１０（配列番号２２４））または固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）システム（例えば、Ｎｉ＋２アフィニティーカラム）で使用される他のタグ、ＧＳＴ融合物、ＭＢＰ融合物、Ｓｔｒｅｐタグ、細菌酵素ＢｉｒＡのＢＳＰビオチン化標的配列、及び抗体の標的になるエピトープタグ（例えば、ｃ－ｍｙｃタグ、ｆｌａｇタグなど）が含まれるが、これらに限定されない。

【0156】

いくつかの実施形態において、そのようなタグは、精製、スクリーニング、またはその両方に有用である。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体は、Ｈｉｓタグを使用してＮｉ＋２アフィニティーカラムに固定化することによって精製し、次に、精製した後、同じＨｉｓタグを使用して、Ｎｉ＋２をコーティングしたプレートに抗体を固定化し、ＥＬＩＳＡまたは本明細書に別途記載される他の結合アッセイを実施する。いくつかの実施形態において、融合パートナーにより、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体をスクリーニングするための選択方法の使用が可能になる。

【0157】

様々な選択方法を可能にする様々な融合パートナーが利用可能である。例えば、Ｆｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体ライブラリーのメンバーをｇｅｎｅ ＩＩＩタンパク質に融合させることによる、ファージディスプレイを利用することができる。いくつかの実施形態において、融合パートナーＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体は標識される。あるいは、いくつかの実施形態において、融合パートナーは、発現ベクター上の特定の配列に結合し、これにより、融合パートナー及び関連するＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体が、それらをコードする核酸と共有結合または非共有結合的に連結可能となる。

【0158】

いくつかの実施形態において、融合パートナーが治療用部分である場合、治療用部分は、例えば、ペプチド、タンパク質、抗体、ｓｉＲＮＡ、または低分子である。本開示のＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体に結合される治療用抗体の非限定的な例としては、ＣＤ４７を認識する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。本開示のＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体に結合される治療用ポリペプチドの非限定的な例としては、ＳＩＲＰαポリペプチドを含むＣＤ４７結合ポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。そのような場合、ＣＤ４７結合ポリペプチドは、本開示のＦｃドメイン変異体またはＦｃドメイン二量体変異体に結合または融合される。ＣＤ４７結合ポリペプチドの例としては、抗ＣＤ４７抗体またはその断片、及びＳＩＲＰαまたはその断片などのＣＤ４７のリガンドが挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ４７結合ポリペプチドの更なる例としては、ＳＩＲＰαの天然に生じる形態及びその変異体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0159】

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体を含むポリペプチドが本明細書で開示され、ここで、Ｆｃドメイン二量体変異体は、２つのＦｃドメイン変異体を含み、各Ｆｃドメイン変異体は、独立して、（ｉ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；（ｉｉ）変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；または（ｉｉｉ）変異Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域から選択される。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、同一である（すなわち、ホモ二量体）。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、異なる（すなわち、ヘテロ二量体）。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体のＦｃドメイン変異体のうちの少なくとも１つは、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体のＦｃドメイン変異体のうちの少なくとも１つは、変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の野生型バージョンと比較して、Ｆｃγ受容体に対する結合の消失または減少を呈する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の野生型バージョンと比較して、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４のＦｃγ受容体に対する結合の消失または減少を呈する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ融合体の野生型バージョンと比較して、Ｃ１ｑに対する結合の消失または減少を呈する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体のＦｃドメイン変異体のうちの少なくとも１つは、変異Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａを含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体は、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃγ受容体に対する結合の消失または減少を呈する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体は、そのヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域の野生型バージョンと比較して、ＣＤ１６ａ及びＣＤ３２ｂのＦｃγ受容体に対する結合の消失または減少を呈する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体は、約５×１０－６Ｍよりも大きいＫＤでＦｃγ受容体に結合する。

【0160】

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体は、ＣＤ４７結合ポリペプチドを更に含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体変異体は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の野生型バージョンと比較して、Ｆｃγ受容体に対する結合の消失または減少を呈する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ポリペプチドは、齧歯類及び非ヒト霊長類において、急性貧血を引き起こさない。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ポリペプチドは、ヒトにおいて、急性貧血を引き起こさない。

【0161】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ポリペプチドは、シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ－α）ポリペプチドまたはその断片である。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰαポリペプチドは、アミノ酸配列ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５ＥＧＸ６ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ７ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ８ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ９ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２２１）を含むＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、Ｘ１はＶまたはＩであり、Ｘ２はＡまたはＩであり、Ｘ３はＩまたはＦであり、Ｘ４はＥまたはＶであり、Ｘ５はＫまたはＲであり、Ｘ６はＨまたはＰであり、Ｘ７はＬまたはＴであり、Ｘ８はＮ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ９はＶまたはＩである。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰαポリペプチドは、Ｘ１がＶまたはＩであり、Ｘ２がＡまたはＩであり、Ｘ３がＩまたはＦであり、Ｘ４がＥであり、Ｘ５がＫまたはＲであり、Ｘ６がＨまたはＰであり、Ｘ７がＬまたはＴであり、Ｘ８がＮではなく、Ｘ９がＶである、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む。

【0162】

いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体であって、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、非天然に生じる高親和性ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、天然に生じるＤ１ドメインの親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体と、Ｆｃドメイン変異体であって、Ｆｃドメイン変異体は、第２のＦｃドメイン変異体を含む第２のポリペプチドと連結されてＦｃドメイン二量体変異体を形成し、Ｆｃドメイン二量体変異体は、エフェクター機能の消失または減少を有する、Ｆｃドメイン変異体とを含む、ポリペプチドが本明細書で開示される。いくつかの実施形態において、非天然に生じる高親和性ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインは、残基８０にアミノ酸変異を含む。

【0163】

いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体が本明細書で開示され、ここで、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、２５０ｎＭ未満のＫＤで第１の種に由来するＣＤ４７に結合し、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、２５０ｎＭ未満のＫＤで第２の種に由来するＣＤ４７に結合し、第１の種に由来するＣＤ４７のＫＤ及び第２の種に由来するＣＤ４７のＫＤは、互いに１００倍以内であり、第１の種及び第２の種は、ヒト、齧歯類、及び非ヒト霊長類からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、少なくとも３つの異なる種に由来するＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、非ヒト霊長類は、カニクイザルである。

【0164】

いくつかの実施形態において、（ａ）２５０ｎＭ未満のＫＤでヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰα Ｄ１ドメインと、（ｂ）ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインのＮ末端またはＣ末端に連結されたＦｃドメインまたはその変異体とを含む、ポリペプチドであって、齧歯類及び非ヒト霊長類で急性貧血を引き起こさないポリペプチドが本明細書で開示される。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、非天然に生じるヒトＳＩＲＰ－αの変異体である。いくつかの実施形態において、ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏでの投与は、投与後の最初の１週間の間、５０％未満のヘモグロビン減少をもたらす。いくつかの実施形態において、ポリペプチドのヒトでの投与は、投与後の最初の１週間の間、５０％未満のヘモグロビン減少をもたらす。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、少なくとも１つのＦｃドメイン二量体変異体を更に含み、ここで、Ｆｃドメイン二量体変異体は、（ｉ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；（ｉｉ）変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；または（ｉｉｉ）変異Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域から選択されるＦｃドメイン変異体を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域である。

【0165】

本開示のＳＩＲＰαコンストラクトは、従来の遺伝子的または化学的手段、例えば、化学コンジュゲーションを使用して、リンカーにより、Ｆｃドメインまたはその変異体のＮ末端にＣ末端が接続されたＳＩＲＰαドメインまたはその変異体を含む。いくつかの実施形態において、リンカー（例えば、スペーサー）は、ポリペプチドとＦｃドメインまたはその変異体との間に挿入される。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む本開示のポリペプチドは、二量体の形成が不可能なＦｃドメイン変異体に融合される。いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドは、別のＦｃドメインまたはその変異体との二量体、例えば、ヘテロ二量体を形成することが可能なＦｃドメインまたはその変異体に融合される。いくつかの実施形態において、本発明のポリペプチドは、Ｆｃドメインまたはその変異体に融合され、この融合タンパク質は、ホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドは、第１のＦｃドメインまたはその変異体に融合され、異なるタンパク質またはペプチド（例えば、抗体可変領域）は、第２のＦｃドメインまたはその変異体に融合される。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインまたはその変異体は、第１のＦｃドメインまたはその変異体に接続され、治療用タンパク質（例えば、サイトカイン、インターロイキン、抗原、ステロイド、抗炎症剤、または免疫調節剤）は、第２のＦｃドメインまたはその変異体に接続される。いくつかの実施形態において、第１及び第２のＦｃドメインまたはその変異体は、ヘテロ二量体を形成する。

【0166】

前述に限定されることなく、いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチド（例えば、表２、５、及び６に記載される変異体のいずれか）は、Ｆｃドメインまたはその変異体などのＦｃポリペプチドまたはＦｃ変異体ポリペプチドに融合される。ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチド及び融合されたＦｃドメイン変異体ポリペプチドを含むポリペプチドの例としては、表８に示される配列番号９６～１３７、２１４、及び２１６が挙げられるが、これらに限定されない。

【表8-1】

【表8-2】

【表8-3】

【表8-4】

【表8-5】

【表8-6】

【表8-7】

【表8-8】

【表8-9】

【表8-10】

【0167】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、表８に提供される任意の変異体に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を有するＳＩＲＰα Ｄ１変異体ドメインを含む。

【0168】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、表８中の配列番号９８～１０４、１０７～１１３、１１６～１２２、または１３５～１３７に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む。

【0169】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、（ａ）シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ－α）Ｄ１変異体であって、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、アミノ酸配列ＥＥＸ_１Ｘ_２ＱＸ_３ＩＱＰＤＫＸ_４ＶＸ_５ＶＡＡＧＥＸ_６Ｘ_７Ｘ_８ＬＸ_９ＣＴＸ_１０ＴＳＬＸ_１１ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ_１２ＲＸ_１３ＬＩＹＮＱＸ_１４Ｘ_１５ＧＸ_１６ＦＰＲＶＴＴＶＳＸ_１７Ｘ_１８ＴＸ_１９ＲＸ_２０ＮＭＤＦＸ_２１ＩＸ_２２ＩＸ_２３Ｘ_２４ＩＴＸ_２５ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ_２６ＫＸ_２７ＲＫＧＳＰＤＸ_２８Ｘ_２９ＥＸ_３０ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＸ_３１ＫＰＳ（配列番号４７）を含み、ここで、Ｘ_１はＥ、またはＧであり、Ｘ_２はＬ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ_３はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ_４はＳ、またはＦであり、Ｘ_５はＬ、またはＳであり、Ｘ_６はＳ、またはＴであり、Ｘ_７はＡ、またはＶであり、Ｘ_８はＩ、またはＴであり、Ｘ_９はＨ、Ｒ、またはＬであり、Ｘ_１０はＡ、Ｖ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ_１１はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ_１２はＡ、またはＧであり、Ｘ_１３はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ_１４はＫ、またはＲであり、Ｘ_１５はＥ、またはＱであり、Ｘ_１６はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_１７はＤ、またはＥであり、Ｘ_１８はＳ、Ｌ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ_１９はＫ、またはＲであり、Ｘ_２０はＥ、またはＮであり、Ｘ_２１はＳ、またはＰであり、Ｘ_２２はＳ、またはＲであり、Ｘ_２３はＳ、またはＧであり、Ｘ_２４は任意のアミノ酸であり、Ｘ_２５は任意のアミノ酸であり、Ｘ_２６はＶ、またはＩであり、Ｘ_２７はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ_２８はＤまたは不在であり、Ｘ_２９はＴ、またはＶであり、Ｘ_３０はＦ、またはＶであり、Ｘ_３１はＡ、またはＧであり、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号１～１０のいずれか１つによる配列を有する野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して少なくとも２つのアミノ酸置換を含む、ＳＩＲＰα Ｄ１変異体と、（ｂ）２つのＦｃドメイン変異体を有するＦｃドメイン二量体変異体であって、各Ｆｃドメイン変異体は、独立して、（ｉ）Ｎ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；（ｉｉｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；（ｉｖ）Ｎ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；（ｖ）Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；（ｖｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；（ｖｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域；または（ｖｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、Ｆｃドメイン二量体変異体とを含む。

【0170】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含み、ここで、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号４７に従うアミノ酸配列を含み、２つのＦｃドメインを有するＦｃドメイン二量体であって、Ｆｃドメインの１つは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含むＦｃドメイン変異体である。

【0171】

Ｆｃドメインの二量体化
いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチド（例えば、表２、５、及び６に記載される変異体のいずれか）は、Ｎ末端またはＣ末端のいずれかで、第１のＦｃドメイン（例えば、Ｆｃドメイン変異体）に融合される。いくつかの実施形態において、第１のＦｃドメインは、二量体を形成することができない変異体である。いくつかの実施形態において、第１のＦｃドメインは、第２のＦｃドメインと二量体を形成する。いくつかの実施形態において、第１及び第２のＦｃドメインは、第１と第２のドメインＦｃドメイン間のヘテロ二量体化を促進するアミノ酸置換を含む。

【0172】

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン二量体の２つのＦｃドメインのそれぞれは、２つの単量体のヘテロ二量体化を促進するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰαコンストラクトは、例えば、第１のＦｃドメインに融合されたＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドを含む第１のサブユニット、及び第２のＦｃドメインを含む第２のサブユニット（例えば、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドまたは任意の他のポリペプチドを含まない）から形成される。いくつかの実施形態において、コンストラクトは、Ｆｃドメイン二量体に連結された単一のＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドを有する（例えば、シングルアーム）。いくつかの実施形態において、コンストラクトは、Ｆｃドメイン二量体に連結された２つのＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体ポリペプチドを有する（例えば、ダブルアーム）。いくつかの実施形態において、約５００ｎＭのＫＤを有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、ダブルアームコンストラクトに特に有用である。いくつかの実施形態において、約５０ｎＭのＫＤを有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、ダブルアームコンストラクトに特に有用である。いくつかの実施形態において、約５ｎＭのＫＤを有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、ダブルアームコンストラクト及びシングルアームコンストラクトに有用である。いくつかの実施形態において、約５００ｐＭのＫＤを有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、ダブルアームコンストラクト及びシングルアームコンストラクトに有用である。いくつかの実施形態において、約１００ｐＭのＫＤを有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、ダブルアームコンストラクト及びシングルアームコンストラクトに有用である。いくつかの実施形態において、約５０ｐＭのＫＤを有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、ダブルアームコンストラクト及びシングルアームコンストラクトに有用である。いくつかの実施形態において、約１０ｐＭのＫＤを有するＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、ダブルアームコンストラクト及びシングルアームコンストラクトに有用である。

【0173】

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインのヘテロ二量体化は、「ノブ・イントゥ・ホール」残基ペア及び電荷残基ペアなど、２つのＦｃドメインに、異なるが適合する置換を導入することによって促進される。ノブとホールの相互作用は、ヘテロ二量体形成に有利であるが、ノブとノブ及びホールとホールの相互作用は、立体的衝突及び好ましい相互作用の欠如により、ホモ二量体形成を妨害する。ホールは、タンパク質中の元のアミノ酸を、より小さい側鎖体積を有する異なるアミノ酸で置き換えたときに生じる空隙を指す。ノブは、タンパク質中の元のアミノ酸を、より大きい側鎖体積を有する異なるアミノ酸で置き換えたときに生じる突起を指す。例えば、いくつかの実施形態において、置き換えられるアミノ酸は、ＦｃドメインのＣＨ３抗体定常ドメイン中にあり、２つのＦｃドメインの二量体化に関与する。いくつかの実施形態において、一方のＣＨ３抗体定常ドメイン中に、他方のＣＨ３抗体定常ドメイン中のノブを収容するようにホールを形成する。これにより、ノブとホールのアミノ酸が２つのＦｃドメインのヘテロ二量体化を促進または支持するように作用する。いくつかの実施形態において、一方のＣＨ３抗体定常ドメイン中のホールは、他方のＣＨ３抗体定常ドメイン中の元のアミノ酸をより良好に収容するように作成される。いくつかの実施形態において、一方のＣＨ３抗体定常ドメイン中のノブは、他方のＣＨ３抗体定常ドメイン中の元のアミノ酸と更なる相互作用を形成するように作成される。

【0174】

いくつかの実施形態において、ホールは、ＣＨ３抗体定常ドメイン中のチロシンまたはトリプトファンなどのより大きな側鎖を有するアミノ酸を、アラニン、バリンまたはトレオニンなどのより小さな側鎖を有するアミノ酸で置き換えることによって構築される（例えば、Ｙ４０７Ｖ変異）。同様に、いくつかの実施形態において、ノブは、ＣＨ３抗体定常ドメイン中のより小さな側鎖を有するアミノ酸を、より大きな側鎖を有するアミノ酸で置き換えることによって構築される（例えば、Ｔ３６６Ｗ変異）。いくつかの実施形態において、一方のＦｃドメインは、ノブ変異Ｔ３６６Ｗを含み、他方のＦｃドメインは、ホール変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３５８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体を含む本開示のポリペプチドは、ノブ変異Ｔ３６６Ｗを含むＦｃドメインに融合させて、望ましくないノブ－ノブホモ二量体形成を制限する。ノブ・イントゥ・ホールアミノ酸ペアの例としては、限定するものではないが、表９のものが挙げられ、ノブ・イントゥ・ホールＦｃドメイン変異体及びＳＩＲＰα－Ｆｃ融合体の例は、表１０に記載される。

【表9】

【表10-1】

【表10-2】

【表10-3】

【0175】

ノブ・イントゥ・ホール戦略に加えて、いくつかの実施形態において、静電的ステアリングもＦｃドメインの二量体化を制御するために使用される。静電的ステアリングは、ペプチド、タンパク質ドメイン、及びタンパク質中の相反する荷電アミノ酸間の好ましい静電相互作用を利用して、より高次のタンパク質分子の形成を制御することを指す。特に、静電的ステアリングを使用して、Ｆｃドメインの二量体化を制御するためには、ＣＨ３－ＣＨ３界面を構成する１つ以上のアミノ酸残基を正または負に荷電したアミノ酸残基に置き換え、それにより、導入される特定の荷電アミノ酸に応じて、相互作用が静電的に有利または不利になるようにする。いくつかの実施形態において、界面上のリシン、アルギニン、またはヒスチジンなどの正に荷電したアミノ酸は、アスパラギン酸またはグルタミン酸などの負に荷電したアミノ酸で置き換えられる。いくつかの実施形態において、界面上の負に荷電したアミノ酸が正に荷電したアミノ酸で置き換えられる。いくつかの実施形態において、荷電アミノ酸は、相互作用するＣＨ３抗体定常ドメインの一方、または両方に導入される。いくつかの実施形態において、相互作用する２つのＦｃドメインのＣＨ３抗体定常ドメインに荷電アミノ酸を導入すると、荷電アミノ酸間の相互作用から生じる静電的ステアリング作用によって制御され、Ｆｃドメインのヘテロ二量体の選択的形成が促進される。静電的ステアリングアミノ酸ペアの例としては、限定するものではないが、表１１のものが挙げられる。

【表11】

【0176】

特に、二重特異性抗体を構築する文脈においては、Ｆｃドメインのヘテロ二量体化を制御するために使用される他の方法も利用可能である。

【0177】

いくつかの実施形態において、第１のＦｃドメイン及び第２のＦｃドメインは、それぞれ、ヒトＩｇＧ１の配列に対して、次のアミノ酸置換：Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｖ、Ｌ３５１Ｔ、Ｌ３５１Ｈ、Ｌ３５１Ｎ、Ｌ３５１Ｋ、Ｐ３５３Ｓ、Ｓ３５４Ｄ、Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｒ、Ｄ３５６Ｓ、Ｅ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｒ、Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ａ、Ｔ３６６Ｅ、Ｌ３６８Ｔ、Ｌ３６８Ｙ、Ｌ３６８Ｅ、Ｋ３７０Ｅ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３９２Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｔ３９４Ｎ、Ｐ３９５Ｎ、Ｐ３９６Ｔ、Ｖ３９７Ｔ、Ｖ３９７Ｑ、Ｌ３９８Ｔ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｎ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｈ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ｈ、Ｙ４０７Ｉ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｔ、及びＫ４０９Ｉのうちの１つ以上を含む。

【0178】

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、（ａ）野生型ヒトＩｇＧ１に対して、次のアミノ酸置換：Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｖ、Ｌ３５１Ｔ、Ｌ３５１Ｈ、Ｌ３５１Ｎ、Ｌ３５１Ｋ、Ｐ３５３Ｓ、Ｓ３５４Ｄ、Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｒ、Ｄ３５６Ｓ、Ｅ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｒ、Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ａ、Ｔ３６６Ｅ、Ｌ３６８Ｔ、Ｌ３６８Ｙ、Ｌ３６８Ｅ、Ｋ３７０Ｅ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３９２Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｔ３９４Ｎ、Ｐ３９５Ｎ、Ｐ３９６Ｔ、Ｖ３９７Ｔ、Ｖ３９７Ｑ、Ｌ３９８Ｔ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｎ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｈ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ｈ、Ｙ４０７Ｉ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｔ、もしくはＫ４０９Ｉのうちの１つ、または（ｂ）（ｉ）ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変異；（ｉｉ）ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａの変異；（ｉｉｉ）ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異；（ｉｖ）ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変異；（ｖ）ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの変異；（ｖｉ）ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異；（ｖｉｉ）ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異；もしくは（ｖｉｉｉ）ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、（ａ）野生型ヒトＩｇＧ１に対して、次のアミノ酸置換：Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｖ、Ｌ３５１Ｔ、Ｌ３５１Ｈ、Ｌ３５１Ｎ、Ｌ３５１Ｋ、Ｐ３５３Ｓ、Ｓ３５４Ｄ、Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｒ、Ｄ３５６Ｓ、Ｅ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｒ、Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ａ、Ｔ３６６Ｅ、Ｌ３６８Ｔ、Ｌ３６８Ｙ、Ｌ３６８Ｅ、Ｋ３７０Ｅ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３９２Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｔ３９４Ｎ、Ｐ３９５Ｎ、Ｐ３９６Ｔ、Ｖ３９７Ｔ、Ｖ３９７Ｑ、Ｌ３９８Ｔ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｎ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｈ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ｈ、Ｙ４０７Ｉ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｔ、もしくはＫ４０９Ｉのうちの１つを含み、（ｂ）（ｉ）ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変異；（ｉｉ）ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａの変異；（ｉｉｉ）ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異；（ｉｖ）ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変異；（ｖ）ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの変異；（ｖｉ）ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異；（ｖｉｉ）ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異；もしくは（ｖｉｉｉ）ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を更に含む。

【0179】

いくつかの実施形態において、第１及び第２のＦｃドメインは、異なるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、第１のＦｃドメインは、Ｔ３６６Ｗを含む。いくつかの実施形態において、第２のＦｃドメインは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。いくつかの実施形態において、第１のＦｃドメインは、Ｄ３９９Ｋを含む。いくつかの実施形態において、第２のＦｃドメインは、Ｋ４０９Ｄを含む。

【0180】

リンカー
いくつかの実施形態において、野生型シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ－α）Ｄ１ドメインに対して残基８０におけるアミノ酸変異；ならびに野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基における少なくとも１つの追加のアミノ酸変異を有する、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインまたはその断片を含むＳＩＲＰα Ｄ１変異体を含む、ポリペプチドが本明細書で開示される。

【0181】

また、いくつかの実施形態において、Ｆｃ変異体を含むポリペプチドが本明細書で開示され、ここで、Ｆｃ変異体は、２つのＦｃドメイン変異体を含むＦｃドメイン二量体を含み、各Ｆｃドメイン変異体は、独立して、（ｉ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；（ｉｉ）変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；または（ｉｉｉ）変異Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａを含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域から選択される。

【0182】

本開示において、リンカーは、ポリペプチドまたはタンパク質ドメインまたは関連する非タンパク質部分の間の連結または接続を記載するために使用される。いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｆｃドメイン（またはその変異体）とＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体との間の連結または接続である。いくつかの実施形態において、リンカーは、２つのポリペプチドが互いにタンデム状に接続されるように、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端とＦｃドメイン変異体のＮ末端とを接続する。

【0183】

いくつかの実施形態において、リンカーは、単純な共有結合、例えば、ペプチド結合、合成ポリマー、または化学反応、例えば、化学コンジュゲーションから生成される任意の種類の結合である。リンカーがペプチド結合である場合、いくつかの実施形態において、あるタンパク質ドメインのＣ末端のカルボン酸基が別のタンパク質ドメインのＮ末端のアミノ基と縮合反応して、ペプチド結合を結合する。いくつかの実施形態において、ペプチド結合は、従来の有機化学反応を介した合成手段、または宿主細胞からの自然産生によって形成され、ここで、タンデム状の両方のタンパク質（例えば、Ｆｃドメイン変異体及びＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体）のＤＮＡ配列をコードする核酸分子は、宿主細胞において、必要な分子機序（例えば、ＤＮＡポリメラーゼ及びリボソーム）によって、直接転写され、両方のタンパク質をコードする連続したポリペプチドに翻訳され得る。

【0184】

リンカーが合成ポリマーである場合、いくつかの実施形態において、ポリマーは、２つのタンパク質の接続末端が末端アミノ酸と反応するように、両端が反応性化学官能基で官能化される。

【0185】

リンカー（上述のペプチド結合を除く）が化学反応から形成される場合、いくつかの実施形態において、化学官能基（例えば、アミン、カルボン酸、エステル、アジド、または他の官能基）が、あるタンパク質のＣ末端及び別のタンパク質のＮ末端のそれぞれに合成的に結合される。いくつかの実施形態において、２つの官能基は、次いで、合成化学手段を介した反応により化学結合が形成され、それにより、２つのタンパク質が一緒に接続される。

【0186】

スペーサー
本開示において、いくつかの実施形態において、本開示のＦｃドメイン単量体とＳＩＲＰα Ｄ１変異体ポリペプチドとの間のリンカーは、約１～２００個のアミノ酸を含むアミノ酸スペーサーである。好適なペプチドスペーサーには、グリシン及びセリンなどの柔軟性のあるアミノ酸残基を含有するペプチドリンカーが含まれる。リンカー配列の例は、表１２に提供される。いくつかの実施形態において、スペーサーは、ＧＳ、ＧＧ、ＧＧＳ、ＧＧＧ、ＧＧＧＧＳ（配列番号：１６３）、ＧＧＳＧ（配列番号：１６４）、またはＳＧＧＧ（配列番号１６５）のモチーフ、例えば、複数または繰り返しのモチーフを含有する。いくつかの実施形態において、スペーサーは、ＧＳのモチーフ、例えば、ＧＳ、ＧＳＧＳ（配列番号１６６）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号１６７）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１６８）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１６９）、またはＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１７０）を含む、２～１２個のアミノ酸を含有する。いくつかの実施形態において、スペーサーは、ＧＧＳのモチーフ、例えば、ＧＧＳ、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１７１）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１７２）、及びＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１７３）を含む、３～１２個のアミノ酸を含有する。いくつかの実施形態において、スペーサーは、ＧＧＳＧ（配列番号１６４）のモチーフ、例えば、ＧＧＳＧ（配列番号１６４）、ＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１７４）、またはＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１７５）を含む、４～１２個のアミノ酸を含有する。いくつかの実施形態において、スペーサーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号１６３）のモチーフ、例えば、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７６）を含有する。いくつかの実施形態において、スペーサーは、グリシン及びセリン以外のアミノ酸、例えば、ＡＡＳ（配列番号１７７）、ＡＡＡＬ（配列番号１７８）、ＡＡＡＫ（配列番号１７９）、ＡＡＡＲ（配列番号１８０）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１８１）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号１８２）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１８３）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１８４）、ＧＧＧＧＡＧＧＧＧ（配列番号１８５）、ＧＥＮＬＹＦＱＳＧＧ（配列番号１８６）、ＳＡＣＹＣＥＬＳ（配列番号１８７）、ＲＳＩＡＴ（配列番号１８８）、ＲＰＡＣＫＩＰＮＤＬＫＱＫＶＭＮＨ（配列番号１８９）、ＧＧＳＡＧＧＳＧＳＧＳＳＧＧＳＳＧＡＳＧＴＧＴＡＧＧＴＧＳＧＳＧＴＧＳＧ（配列番号１９０）、ＡＡＡＮＳＳＩＤＬＩＳＶＰＶＤＳＲ（配列番号１９１）、またはＧＧＳＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１９２）を含有する。

【0187】

いくつかの実施形態において、スペーサーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９３）のモチーフ、例えば、複数または繰り返しのモチーフを含有する。いくつかの実施形態において、スペーサーは、（ＸＰ）ｎ（ここで、Ｘは任意のアミノ酸（例えば、Ａ、Ｋ、またはＥ）であり、ｎは１～５である）及びＰＡＰＡＰ（配列番号：１９４）などのプロリンリッチ配列のモチーフ、例えば、複数または繰り返しのモチーフを含有する。

【表12】

【0188】

いくつかの実施形態において、使用されるペプチドスペーサー及びアミノ酸の長さは、関与する２つのタンパク質及び最終タンパク質融合ポリペプチドに望まれる柔軟性の程度に応じて調整される。いくつかの実施形態において、スペーサーの長さは、適切なタンパク質の折り畳みを確実にし、凝集の形成を回避するように調整される。いくつかの実施形態において、スペーサーは、ＡまたはＡＡＡＬ（配列番号：１７８）である。

【0189】

ベクター、宿主細胞、及びタンパク質産生
いくつかの実施形態において、野生型シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ－α）Ｄ１ドメインに対して残基８０におけるアミノ酸変異；ならびに野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対して残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基における少なくとも１つの追加のアミノ酸変異を有する、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインまたはその断片を含むＳＩＲＰα Ｄ１変異体を含む、ポリペプチドが本明細書で開示される。

【0190】

また、いくつかの実施形態において、Ｆｃ変異体を含むポリペプチドが本明細書で開示され、ここで、Ｆｃ変異体は、２つのＦｃドメイン単量体を含むＦｃドメイン二量体を含み、各Ｆｃドメイン単量体は、独立して、（ｉ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域；（ｉｉ）変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７ＡからなるヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域；または（ｉｉｉ）変異Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａを含むヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域から選択される。

【0191】

いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドは、宿主細胞から産生される。宿主細胞は、本明細書に記載されるポリペプチド及び融合ポリペプチドを対応する核酸から発現させるために求められる必要な細胞成分、例えば、オルガネラを含む媒体を指す。いくつかの実施形態において、核酸は、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、感染などによって宿主細胞に導入される核酸ベクターに含まれる。いくつかの実施形態において、核酸ベクターの選択は、使用される宿主細胞に依存する。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、原核生物（例えば、細菌）または真核生物（例えば、哺乳動物）のいずれかを起源とする。

【0192】

いくつかの実施形態において、ポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、表２、５、及び６に提供される任意の変異体）及びＦｃ変異体などの融合パートナーを含むポリペプチドコンストラクトは、核酸、好ましくは、ポリペプチドコンストラクト（例えば、Ｆｃ変異体、リンカー、及び融合パートナー）をコードする核酸を含有する発現ベクターで形質転換された宿主細胞を、ポリペプチドコンストラクトの発現を誘導または引き起こすために適切な条件下で培養することによって産生される。いくつかの実施形態において、発現に適した条件は、選択された発現ベクター及び宿主細胞によって異なる。いくつかの実施形態において、多種多様な適切な宿主細胞が使用され、哺乳動物細胞、細菌、昆虫細胞、及び酵母が含まれるが、これらに限定されない。例えば、本開示での使用が見出される様々な細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手可能なＡＴＣＣ（登録商標）細胞株カタログに記載されている。いくつかの実施形態において、本開示のＦｃドメイン変異体は、細胞株の遺伝子操作もしくはキフネンシンの添加などの細胞培養条件の変更によって、または原核生物（Ｅ．ｃｏｌｉなど）などの天然で非グリコシル化である宿主を使用することのいずれかによって、そのような細胞によって発現されるタンパク質をグリコシル化しないように最適化された細胞で発現される。いくつかの場合において、Ｆｃにおけるグリコシル化配列の修飾は、必要ではない。

【0193】

核酸ベクターの構築及び宿主細胞
本開示のポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸配列は、様々な方法によって調製することができる。これらの方法には、オリゴヌクレオチドを介した変異導入（または部位特異的変異導入）及びＰＣＲ変異導入が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドをコードする核酸分子は、標準的な技術、例えば、遺伝子合成を使用することで得られる。あるいは、野生型ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインをコードする核酸分子を、標準的な技術、例えば、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（商標）変異導入を使用して、特定のアミノ酸置換を含むように変異させる。いくつかの場合において、核酸分子は、ヌクレオチドシンセサイザーまたはＰＣＲ技術を使用して合成される。

【0194】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドコンストラクト、例えば、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、表２、５、及び６に提供される任意の変異体）及びＦｃ変異体などの融合パートナーを含むポリペプチドコンストラクトをコードする核酸は、タンパク質を発現させるために、発現ベクターに組み込まれる。タンパク質の発現には、様々な発現ベクターを利用することができる。発現ベクターは、自己複製する染色体外ベクターまたは宿主ゲノムに統合されるベクターを含み得る。ベクターはまた、様々な要素またはエレメントを含み得る。例えば、いくつかの実施形態において、ベクター要素には、プロモーター配列、リボソーム結合部位、シグナル配列、転写開始及び停止配列、翻訳開始及び停止配列、３’及び５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、及びエンハンサーまたは活性化配列などの転写及び翻訳調節配列；複製起点；選択マーカー遺伝子；ならびに目的のポリペプチドをコードする核酸配列、及び転写終結配列が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、発現ベクターは、制御配列もしくは調節配列、選択マーカー、任意の融合パートナー、追加のエレメント、または任意のこれらの組み合わせと作動可能に連結されたタンパク質を含む。「作動可能に連結」という用語は、核酸が別の核酸配列と機能的な関係性に置かれていることを意味する。一般に、これらの発現ベクターは、Ｆｃ変異体をコードする核酸に作動可能に連結された転写及び翻訳調節核酸を含み、典型的には、タンパク質を発現するために使用される宿主細胞に適したものである。限定するものではないが、抗生物質耐性遺伝子または蛍光タンパク質遺伝子などの選択遺伝子またはマーカーを使用して、例えば、抗生物質または蛍光の発現によって、発現ベクターを含有する宿主細胞を選択することができる。様々な選択遺伝子が利用可能である。

【0195】

いくつかの実施形態において、ベクターの要素またはエレメントは、発現ベクターが宿主細胞のタイプに適合するように最適化される。本開示での使用が見出される発現ベクターには、哺乳動物細胞、細菌、昆虫細胞、酵母、及びｉｎ ｖｉｔｒｏ系でのタンパク質発現を可能にするものが含まれるが、これらに限定されない。

【0196】

いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞は、本開示のポリペプチドを産生するための宿主細胞として使用される。哺乳動物細胞のタイプの例としては、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）（例えば、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｆ）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ、ＣＯＳ、ＰＣ３、Ｖｅｒｏ、ＭＣ３Ｔ３、ＮＳ０、Ｓｐ２／０、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０、Ｔ４７Ｄ、ＮＳ０（いかなるの免疫グロブリン鎖も内因性に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、及びＨｓＳ７８Ｂｓｔの細胞が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞は、本開示のポリペプチドを産生するための宿主細胞として使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ株の例としては、Ｅ．ｃｏｌｉ ２９４（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ λ １７７６（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，５３７、Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）（ＡＴＣＣ（登録商標）ＢＡＡ－１０２５）、及びＥ．ｃｏｌｉ ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，６０８）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0197】

異なる宿主細胞は、タンパク質産物の翻訳後プロセシング及び修飾（例えば、グリコシル化）について、特徴的かつ特定の機構を有している。いくつかの実施形態において、発現されるポリペプチドの正しい修飾及びプロセシングを確実にするように、適切な細胞株または宿主系が選択される。ベクターをタンパク質産生のための宿主細胞に導入した後、宿主細胞は、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適宜変更した従来の栄養素培地中で培養される。

【0198】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドコンストラクト、例えば、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、表２、５、及び６に提供される任意の変異体）及びＦｃ変異体などの融合パートナーを含むポリペプチドコンストラクトは、レトロウイルスまたはアデノウイルスなどのウイルスを使用して発現コンストラクトが哺乳動物細胞に導入される系を含む、哺乳動物発現系で発現される。いくつかの実施形態において、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、または霊長類の細胞が利用される。好適な細胞には、限定するものではないが、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３、ＣＨＯ、ＣＯＳ、及び２９３細胞を含む、既知の研究用細胞も含まれる。あるいは、いくつかの実施形態において、タンパク質は、細菌細胞で発現される。細菌発現系は、当該技術分野においてよく知られており、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ （Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ、及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌｉｖｉｄａｎｓが含まれる。いくつかの場合において、Ｆｃドメイン変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、限定するものではないが、Ｓｆ９及びＳｆ２１細胞などの昆虫細胞で産生されるか、限定するものではないが、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ及びＹａｒｒｏｗｉａ属の生物などの酵母細胞で産生される。いくつかの場合において、Ｆｃドメイン変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、無細胞翻訳系を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで発現される。原核生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）と真核生物（例えば、小麦胚、ウサギ網状赤血球）の両方の細胞に由来するｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳系が利用可能であり、いくつかの実施形態において、目的のタンパク質の発現レベル及び機能特性に基づいて選択される。例えば、当業者によって認識されるように、ｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳は、いくつかのディスプレイ技術、例えば、リボソームディスプレイが必要である。加えて、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、限定するものではないが、液相ペプチド合成及び固相ペプチド合成などの化学合成方法によって生成される。細菌抽出物などの非グリコシル化系を使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ転写の場合、Ｆｃは、天然のグリコシル化部位が存在していてもグリコシル化されることはないことから、Ｆｃの不活性化が同様に得られる。

【0199】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドコンストラクトは、天然に生じるアミノ酸と同様に機能する、非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、アミノ酸模倣体、または任意のこれらの組み合わせを含む。天然にコードされているアミノ酸は、一般に、２０個の通常のアミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリン）及びピロリシン及びセレノシステインを指す。アミノ酸類似体は、天然に生じるアミノ酸と同じ基本化学構造、例えば、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合する炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。いくつかの実施形態において、そのような類似体は、修飾されたＲ基（ノルロイシンなど）または修飾されたペプチド骨格を有するが、一般に、天然に生じるアミノ酸と同じ基本化学構造を保持している。

【0200】

タンパク質の産生、回収、及び精製
いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドを産生するために使用される宿主細胞は、選択された宿主細胞の培養に好適な培地で成長される。哺乳動物の宿主細胞に好適な培地の例としては、最小必須培地（ＭＥＭ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現培地、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＤＭＥＭ、及びＲＰＭＩ－１６４０が挙げられる。細菌の宿主細胞に好適な培地の例としては、選択剤、例えば、アンピシリンなどの必要な添加物を加えたルリア培地（ＬＢ）が挙げられる。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、約２０℃～約３９℃、例えば、約２５℃～約３７℃、好ましくは、３７℃などの好適な温度、約５％～１０％などのＣＯ_２レベルで培養される。いくつかの実施形態において、培地のｐＨは、ｐＨ約６．８～ｐＨ７．４、例えば、ｐＨ７．０であり、主に、宿主生物に依存する。誘導性プロモーターが発現ベクターに使用される場合、タンパク質の発現は、プロモーターの活性化に好適な条件下で誘導することができる。

【0201】

いくつかの実施形態において、タンパク質の回収は、例えば、浸透圧ショック、超音波処理、または溶解によって、宿主細胞を破壊することを含む。細胞を破壊したら、細胞デブリを遠心分離または濾過によって除去する。次いで、タンパク質を更に精製することができる。いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドは、様々なタンパク質精製方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、及びサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、較差溶解度によって、またはタンパク質の精製に関する任意の他の標準的な技術によって精製される。例えば、いくつかの実施形態において、タンパク質は、プロテインＡカラム（例えば、ＰＯＲＯＳプロテインＡクロマトグラフィー）などのアフィニティーカラムとクロマトグラフィーカラム（例えば、ＰＯＲＯＳ ＨＳ－５０カチオン交換クロマトグラフィー）、濾過、限外濾過、脱塩及び透析手順を適切に選択及び組み合わせることによって、単離及び精製される。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、精製を容易にするためのペプチドなどのマーカー配列にコンジュゲートされる。マーカーアミノ酸配列の一例は、ヘキサヒスチジンペプチド（Ｈｉｓ６タグ）であり、マイクロモルの親和性でニッケル官能化アガロースアフィニティーカラムに結合することができる。代替としては、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質由来のエピトープに対応するヘマグルチニン「ＨＡ」タグを使用することができる。

【0202】

いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、表２、５、及び６に提供される任意の変異体）及びＦｃ変異体などの融合パートナーを含むポリペプチドコンストラクトは、例えば、遺伝子療法の文脈において、本開示のポリペプチドをコードする核酸分子を含有するウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）などのワクシニアウイルスベクター）、アデノ随伴ウイルスベクター、及びアルファウイルスベクター）などのベクターを投与することによって、対象（例えば、ヒト）の細胞によって産生される。ベクターは、対象の細胞の内部に入ることで（例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、感染などによって）、本明細書で開示されるポリペプチドの発現に使用することができる。いくつかの場合において、ポリペプチドは、細胞から分泌される。いくつかの実施形態において、疾患または障害の治療が所望の結果であれば、更なる処置は必要ではない。いくつかの実施形態において、タンパク質の回収が望ましい場合、対象から血液を採取し、様々な方法によって血液からタンパク質を精製する。

【0203】

がんの治療方法
骨髄癌の治療方法
いくつかの実施形態において、個体（例えば、ヒト個体）のがん（例えば、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの骨髄癌）を治療する方法であって、個体に、有効量の（ａ）ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤、及び（ｂ）低メチル化剤を投与することを含む、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、がんは、ＡＭＬである。いくつかの実施形態において、がんは、ＴＰ５３変異ＡＭＬ及び／またはＦＬＴ３変異ＡＭＬである。いくつかの実施形態において、がんは、ＭＤＳである。いくつかの実施形態において、方法は、導入期及び維持期を含み、ここで、導入期は、（ａ）ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤、及び（ｂ）低メチル化剤の投与を含み、維持期は、低メチル化剤を伴わない、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤の投与を含む（例えば、ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤による単剤療法）。

【0204】

いくつかの実施形態において、個体（例えば、ヒト個体）のがん（例えば、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの骨髄癌）を治療する方法であって、個体に、有効量の（ａ）ＣＤ４７（例えば、ｈＣＤ４７）とＳＩＲＰα（例えば、ｈＳＩＲＰα）との間の相互作用を遮断する剤、（ｂ）低メチル化剤、及び（ｃ）Ｂｃｌ－２阻害剤（例えば、選択的Ｂｃｌ－２阻害剤）を投与することを含む、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、がんは、ＡＭＬである。いくつかの実施形態において、がんは、ＴＰ５３変異ＡＭＬ及び／またはＦＬＴ３変異ＡＭＬである。いくつかの実施形態において、がんは、ＭＤＳである。

【0205】

ＭＤＳは、細胞の成熟異常（脊髄形成異常症）及び／または特徴的な細胞遺伝学的異常を伴う慢性的な血液減少症（例えば、貧血、好中球減少症、血小板減少症）を特徴とする一連の血液状態を包含する。その結果、ＭＤＳの個体は、症候性貧血、感染症、及び出血のリスクのみならず、標準治療に対して抵抗性となることが多い急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）へ進行するリスクがある。ＭＤＳの個体の最も一般的な死因は、ＡＭＬへの移行ではなく、骨髄不全である。いくつかの実施形態において、ＭＤＳは、高リスクＭＤＳである。いくつかの実施形態において、ＭＤＳは、個体が改訂国際予後スコアリングシステム（ＩＰＳＳ－Ｒ）で３を超えるスコアを有する場合、高リスクであるとみなされる。いくつかの実施形態において、ＭＤＳは、個体が改訂国際予後スコアリングシステム（ＩＰＳＳ－Ｒ）で３．５を超えるスコアを有する場合、高リスクであるとみなされる。ＩＰＳＳ－Ｒは、（１）個体の骨髄中の芽球（血液細胞の非常に初期の形態）の割合；（２）細胞遺伝学的異常の種類及び数（存在する場合）；（３）個体の血液中の赤血球レベル（ヘモグロビンで測定）；（４）個体の血液中の血小板レベル；ならびに（５）個体の血液中の好中球レベルの５つの因子に基づいて検証される予後予測ツールである。各因子にスコアが付けられ、スコアが３以下の個体は、予後が良好である見通しを得られる可能性が高い。ＩＰＳＳ－Ｒに関する更なる詳細及び個体のＭＤＳのリスク状態を決定するためのスコアの計算方法については、例えば、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．（２０１２）“Ｒｅｖｉｓｅｄ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｃｏｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ．” Ｂｌｏｏｄ，１２０（１２），２４５４－２４６５；及びＳｃｈａｎｚ ｅｔ ａｌ．（２０１２）．“Ｎｅｗ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃ ｓｃｏｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｐｒｉｍａｒｙ ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ（ＭＤＳ）ａｎｄ ｏｌｉｇｏｂｌａｓｔｉｃ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｆｔｅｒ ＭＤＳ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄａｔａｂａｓｅ ｍｅｒｇｅ．” Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，３０（８），８２０－８２９を参照されたい。いくつかの実施形態において、個体は、約３以上または約３．５以上のＩＰＳＳ－Ｒスコアを有する。いくつかの実施形態において、個体は、約３未満または約３．５未満のＩＰＳＳ－Ｒスコアを有する。いくつかの実施形態において、個体は、ＭＤＳの前治療を受けたことがある。ＭＤＳの現在の標準治療には、例えば、造血幹細胞移植及びアザシチジンが含まれる。いくつかの実施形態において、個体は、ＭＤＳの前治療を受けたことがない。

【0206】

ＡＭＬは、造血系のクローナルに増殖する異常分化した、時には分化が不完全な細胞による骨髄、血液、及び他の組織の浸潤を特徴とするがんの形態である。ＡＭＬは、成人の急性白血病のなかで最も一般的な形態の１つである。米国では、毎年、推定１９，５２０人が医師によりＡＭＬと診断されている。この疾患のために、毎年、推定１０，６７０人が死亡している。いくつかの実施形態において、個体は、ＷＨＯ２０１６分類による再発／難治性または新規診断ＡＭＬの細胞学的または組織学的確定診断を有する。いくつかの実施形態において、個体は、集中導入療法に適していないと考えられる患者の再発／難治性または前治療のないＡＭＬを有する。いくつかの実施形態において、個体は、ＨＭＡ系レジメンによる前治療後の再発／難治性であるＡＭＬを有する。いくつかの実施形態において、個体は、前治療のないＡＭＬを有し、集中導入療法に適した候補とみなされない。いくつかの実施形態において、個体は、適切な腎機能及び肝機能を有する。いくつかの実施形態において、個体は、１８歳以上である。いくつかの実施形態において、個体は、適切なパフォーマンスステータスを有する。いくつかの実施形態において、個体は、以前に同種ＨＳＣＴを受けていない。いくつかの実施形態において、個体は、ＨＣＳＴ後少なくとも３ヶ月であり、制御されていない移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）がない。いくつかの実施形態において、個体は、以前に同種ＨＳＣＴを受けていない。いくつかの実施形態において、個体は、ＮＣＣＮのＡＭＬガイドライン２０１９年第３版によるｔ（８；２１）、ｉｎｖ（１６）、またはｔ（１６；１６）などの良好なリスク細胞遺伝学的所見のある新規診断ＡＭＬを有していない。いくつかの実施形態において、個体は、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）を有していない。いくつかの実施形態において、個体は、いかなる抗ＣＤ４７または抗ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質アルファ）剤による前治療を受けていない。いくつかの実施形態において、個体は、Ｂ型及びＣ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連疾病、またはｓａｒｓ－ｃｏｖ－２（重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２）を含む既知の活性ウイルス感染を有していない。

【0207】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断する剤は、ＳＩＲＰαＤ１ドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＳＩＲＰαＤ１ドメイン変異体）及びＦｃドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体）を含むポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）である。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドのＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体）のＣ末端は、Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、配列番号８１または配列番号８５のアミノ酸配列を含む、ＳＩＲＰα １ドメイン変異体を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）である（例えば、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に融合される）。いくつかの実施形態において、個体に投与されるポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、配列番号１３６または配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、ホモ二量体を形成する。

【0208】

低メチル化剤
低メチル化剤は、（ｉ）ＤＮＡ損傷応答の誘導をもたらすＲＮＡ及び／またはＤＮＡへの組み込みによる細胞毒性、ならびに（ｉｉ）正常な細胞成長及び分化の回復を可能にするＤＮＡメチルトランスフェラーゼの阻害を介したＤＮＡの低メチル化という、主に２つの抗がん活性機構を持つことがこれまでに示されている抗がん薬物の一種である。低メチル化剤に関する追加の詳細については、例えば、Ｄｉｅｓｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０１６）“Ａ ｃｌｉｎｉｃａｌ－ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ａｚａｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ－ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｃａｎｃｅｒｓ．” Ｃｌｉｎ Ｅｐｉｇｅｎｅｔ，８：７１；Ｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．（２０１７）“ＤＮＡ Ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｎｇ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ．” Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，７（５），ａ０２６９４８；及びＤａｔｔａ ｅｔ ａｌ．（２０１２）“Ｎｏｖｅｌ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ Ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ：Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｃ δ ｉｎ Ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ Ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ １．” Ｇｅｎｅｓ ＆ ｃａｎｃｅｒ，３（１），７１－８１を参照されたい。

【0209】

いくつかの実施形態において、低メチル化剤は、アザシチジン（５－アザ－２’－デオキシシチジン、５－アザシチジン、アザシチジン、ラダカマイシン、４－アミノ－１－β－Ｄ－リボフラノシル－ｓ－トリアジン－２（１Ｈ）－オン、及びＵ－１８４９６としても知られている）である。シチジンのピリミジンヌクレオシド類似体であるアザシチジンは、実験式Ｃ_８Ｈ_１２Ｎ_４Ｏ_５の白色結晶性粉末であり、２４４．２ｇ／ｍｏｌの分子量である。アザシチジンは、化学的には４－アミノ－１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）オキソラン－２－イル］－１，３，５－トリアジン－２－オンと記載され、以下の化学構造を有する：

【化1】

【0210】

アザシチジンのＣＡＳ登録番号は、３２０－６７－２である。アザシチジンは、皮下または静脈内投与され、ＰＲＥＭＩＥＲＰＲＯ ＲＸ ＡＺＡＣＩＴＩＤＩＮＥ（登録商標）、ＶＩＤＡＺＡ（登録商標）、ＡＺＡＣＩＴＩＤＩＮＥ ＮＯＶＡＰＬＵＳ（登録商標）などの商品名で販売されている。アザシチジンの調製、調剤、用量、及び投与スケジュールについての完全な情報は、各地の添付文書に見出すことができる（米国については、例えば、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ（ｄｏｔ）ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２００８／０５０７９４ｓ０１１ｌｂｌ（ｄｏｔ）ｐｄｆを参照されたい；欧州については、例えば、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｅｍａ（ｄｏｔ）Ｅｕｒｏｐａ（ｄｏｔ）ｅｕ／ｅｎ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ｐｒｏｄｕｃｔ－ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／ｖｉｄａｚａ－ｅｐａｒ－ｐｒｏｄｕｃｔ－ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ＿ｅｎ（ｄｏｔ）ｐｄｆを参照されたい。いくつかの実施形態において、アザシチジンは、各地の添付文書において推奨されている投与量及び回数に従って投与される。

【0211】

いくつかの実施形態において、低メチル化剤は、デシタビン（５－アザ－２’－デオキシシチジン、４－アミノ－１－（２－デオキシ－β－Ｄ－ｅｒｙｔｈｒｏ－ペントフラノシル）－ｓ－トリアジン－２（１Ｈ）－オン、及び５－アザデオキシシチジンとしても知られている）。デシタビンはまた、シチジンのピリミジンヌクレオシド類似体である。デシタビンは、実験式Ｃ_８Ｈ_１２Ｎ_４Ｏ_４及び２１８．２１ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。デシタビンは、化学的には４－アミノ－１－［（２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）オキソラン－２－イル］－１，３，５－トリアジン－２－オンと記載され、以下の化学構造を有する：

【化2】

【0212】

デシタビンのＣＡＳ登録番号は、２３５３－３３－５である。デシタビンは、静脈内投与され、ＤＡＣＯＧＥＮ（登録商標）（及びその他）の商品名で販売されている。デシタビンの調製、調剤、用量、及び投与スケジュールについての完全な情報は、各地の添付文書に見出すことができる（米国については、例えば、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ａｃｃｅｓｓｄａｔａ（ｄｏｔ）ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２０１０／０２１７９０ｓ００６ｌｂｌ（ｄｏｔ）ｐｄｆを参照されたい；欧州については、例えば、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｅｍａ（ｄｏｔ）ｅｕｒｏｐａ（ｄｏｔ）ｅｕ／ｅｎ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ｐｒｏｄｕｃｔ－ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／ｄａｃｏｇｅｎ－ｅｐａｒ－ｐｒｏｄｕｃｔ－ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ＿ｅｎ（ｄｏｔ）ｐｄｆを参照されたい。いくつかの実施形態において、デシタビンは、各地の添付文書において推奨されている投与量及び回数に従って投与される。

【0213】

いくつかの実施形態において、低メチル化剤は、ＦｄＣｙｄ（５－フルオロ－２’－デオキシシチジン）、ゼブラリン、ＣＰ－４２００（すなわち、アザシチジンのエライジン酸誘導体）、ＲＧ１０８、ナナオマイシンＡ、グアデシタビン、ＲＸ－３１１７、ＥＰＩ０１、アントロキノノール、ＣＣ－４８６、またはＡＳＴＸ７２７である（例えば、ａｓｔｘ（ｄｏｔ）ｃｏｍ／ｒｅｓｅａｒｃｈ－ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ／ｃｌｉｎｉｃａｌ－ｐｉｐｅｌｉｎｅ／ａｓｔｘ７２７－ｏｒａｌ－ｄｎｍｔ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ－ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ／参照）。本方法での使用が見出される他の例示的な低メチル化剤は、例えば、Ｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．（２０１７）．“ＤＮＡ Ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｎｇ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ．” Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ，７（５），ａ０２６９４８及びＤｕｃｈｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．（２０１９）．“Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ．” Ｉｎｔ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ １１０，１６１－１６９に記載されている。

【0214】

Ｂｃｌ－２阻害剤
Ｂｃｌ－２阻害剤は、アポトーシス促進性のＢｃｌ２と競合して抗アポトーシスファミリーメンバーの表面上にあるＢＨ３結合溝を占有することによって細胞毒性作用を発揮すると考えられている抗がん薬物の一種である。これらの阻害剤は、１つ以上のＢｃｌ２ファミリーメンバーに結合することによって、ＢＣＬ－２及び他の関連タンパク質の天然アンタゴニストの活性を模倣し、アポトーシスを回復することにより、腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導する。

【0215】

いくつかの実施形態において、Ｂｃｌ－２阻害剤は、ベネトクラクス（ＧＤＣ－０１９９、ＡＢＴ－１９９、及びＲＧ７６０１としても知られている）であり、本明細書に記載される方法において使用される例示的な選択的Ｂｃｌ２阻害剤である。ベネトクラクスは、実験式Ｃ_４５Ｈ_５０ＣｌＮ_７Ｏ_７Ｓの淡黄色から濃黄色の固体であり、８６８．４４ｇ／ｍｏｌの分子量である。ベネトクラクスは、水溶性が極めて低い。ベネトクラクスは、化学的には４－（４－｛［２－（４－クロロフェニル）－４，４ジメチルシクロヘキサ－１－エン－１－イル］メチル｝ピペラジン－１－イル）－Ｎ－（｛３－ニトロ－４－［（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）－２－（１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－５－イルオキシ）ベンズアミド）と記載され、以下の化学構造を有する：

【化3】

【0216】

ベネトクラクスのＣＡＳ登録番号は、１２５７０４４－４０－８である。ベネトクラクスは、経口投与され、Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ及びＶｅｎｃｌｙｘｔｏの商品名で販売されている。ベネトクラクスの調製、調剤、用量、及び投与スケジュールについての完全な情報は、各地の添付文書に見出すことができる（米国については、例えば、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ａｃｃｅｓｓｄａｔａ（ｄｏｔ）ｆｄａ（ｄｏｔ）ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２０１６／２０８５７３ｓ０００ｌｂｌ（ｄｏｔ）を参照されたい；欧州については、例えば、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｅｍａ（ｄｏｔ）ｅｕｒｏｐａ（ｄｏｔ）ｅｕ／ｅｎ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｈｕｍａｎ／ＥＰＡＲ／ｖｅｎｃｌｙｘｔｏ＃ｐｒｏｄｕｃｔ－ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ－ｓｅｃｔｉｏｎを参照されたい）。いくつかの実施形態において、ベネトクラクスは、各地の添付文書において推奨されている投与量及び回数に従って投与される。

【0217】

いくつかの実施形態において、Ｂｃｌ－２阻害剤は、ＡＢＴ－７３７である。ＡＢＴ－７３７は、本明細書に記載される方法において使用される別の例示的な選択的Ｂｃｌ２阻害剤である。Ｂｃｌ２とＢｃｌ－ｘＬの両方を阻害するＡＢＴ－７３７は、実験式Ｃ_４２Ｈ_４５ＣｌＮ_６Ｏ_５Ｓ_２を有し、８１３．４３ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。ＡＢＴ－７３７のＣＡＳ登録番号は、８５２－８０８－０４－９である。ＡＢＴ－７３７は、化学的には４－｛４－［（４’－クロロ－２－ビフェニルイル）メチル］－１－ピペラジニル｝－Ｎ－［（４－｛［（２Ｒ）－４－（ジメチルアミノ）－１－（フェニルスルファニル）－２－ブタニル］アミノ｝－３－ニトロフェニル）スルホニル］ベンズアミドと記載され、以下の化学構造を有する：

【化4】

【0218】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法において使用されるＢｃｌ－２阻害剤は、ナビトクラックスである。Ｂｃｌ２、Ｂｃｌ－ｘＬ、及びＢｃｌ－ｗのいずれも阻害するナビトクラックス（ＡＢＴ－２６３としても知られている）は、実験式Ｃ_４７Ｈ_５５ＣｌＦ_３Ｎ_５Ｏ_６Ｓ_３を有し、９７４．６ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。ナビトクラックスのＣＡＳ登録番号は、９２３５６４－５１－６である。ＡＢＴ－７３７は、化学的には４－［４－［［２－（４－クロロフェニル）－５，５－ジメチルシクロヘキセン－１－イル］メチル］ピペラジン－１－イル］－Ｎ－［４－［［（２Ｒ）－４－モルホリン－４－イル－１－フェニルスルファニルブタン－２－イル］アミノ］－３－（トリフルオロメチルスルホニル）フェニル］スルホニルベンズアミドと記載され、以下に提供される化学構造を有する。ナビトクラックスに関する更なる詳細は、例えば、Ｔｓｅ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８（９）：３４２１－３４２９に提供されている。

【化5】

【0219】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法において使用されるＢｃｌ２阻害剤は、Ｓ５５７４６（ＢＣＬ２０１及びＳｅｒｖｉｅｒ－１としても知られている）である。Ｓ５５７４６は、ＢＣＬ－２の疎水性の溝を占有する。Ｓ５５７４６は、ＭＣＬ－１、ＢＦＬ－１には有意な結合を示さず、ＢＣＬ－２の疎水性の溝を占有するという選択性プロファイルを示す。その選択性プロファイルでは、ＭＣＬ－１、ＢＦＬ－１（ＢＣＬ２Ａ１／Ａ１）に有意な結合を示さず、ＢＣＬ－ＸＬには低い親和性であることが示されている。Ｓ５５７４６は、血小板などのＢＣＬ－ＸＬ依存性細胞に対する細胞毒性活性を持たない（例えば、Ｃａｓａｒａ ｅｔ ａｌ．（２００８） Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．９（２８）： ２９９７５－２００８８参照）。Ｓ５５７４６は、実験式Ｃ_４３Ｈ_４２Ｎ_４Ｏ_６を有し、７１０．８２ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。Ｓ５５７４６のＣＡＳ登録番号は、１４４８５８４－１２－０である。Ｓ５５７４６は、化学的には（Ｓ）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－３－（６－（３－（モルホリノメチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－２－カルボニル）ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－イル）－Ｎ－フェニル－５，６，７，８－テトラヒドロインドリジン－１－カルボキサミドと記載され、以下の化学構造を有する：

【化6】

【0220】

いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）及び低メチル化剤（例えば、アザシチジン）は、同時投与、併用投与、または逐次投与される。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）、及びＢｃｌ－２阻害剤（例えば、ベネトクラクス）は、同時投与、併用投与、または逐次投与される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、静脈内注入を介して投与される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、最大６０ｍｇ／ｋｇの用量で（例えば、静脈内注入を介して）投与される。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、６０ｍｇ／ｋｇの用量で、４週間に１回（すなわち、ｑ４ｗ）または２８日に１回（例えば、静脈内注入を介して）投与される。いくつかの実施形態において、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）は、静脈内注入または皮下を介して投与される。いくつかの実施形態において、アザシチジンは、１回以上の２８日サイクルで投与される。いくつかの実施形態において、アザシチジンは、各２８日サイクルのうち７日間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で投与される。いくつかの実施形態において、アザシチジンは、各２８日サイクルの間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で５日間個体に投与され、アザシチジンの投与のない２日間が続き、次いで、更に２日間、７５ｍｇ／ｍ^２の用量で個体に投与される。いくつかの実施形態において、Ｂｃｌ－２阻害剤（例えば、ベネトクラクス）は、経口投与される。いくつかの実施形態において、ベネトクラクスは、ある用量で投与される。いくつかの実施形態において、ベネトクラクスは、治療の１日目に１００ｍｇ、治療の２日目に２００ｍｇ、治療の３日目以降は毎日４００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ベネトクラクスは、治療の１日目に１００ｍｇ、治療の２日目に２００ｍｇ、治療の３日目に４００ｍｇ、３日目を過ぎたら毎日６００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ベネトクラクスは、低メチル化剤（例えば、アザシチジンまたはデシタビン）と組み合わせて、各２８日サイクルで１日１回４００ｍｇが投与される。

【0221】

いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、２０ｍｍのＴｅｆｌｏｎ被覆ゴムセプタム栓及びアルミニウムシールで密封された１００ｍｇ／５ｍｌのタイプＩ透明ガラスバイアルでの使用に供給される（例えば、静脈内投与）。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、２０ｍｍのＴｅｆｌｏｎ被覆ゴムセプタム栓及びアルミニウムシールで密封された４００ｍｇ／２０ｍｌのタイプＩ透明ガラスバイアルでの使用に供給される（例えば、静脈内投与）。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、使用するまで、その元の容器中、２～８℃（３６～４６°Ｆ）で保管される（例えば、静脈内投与）。

【0222】

がんを治療するための併用療法
いくつかの実施形態において、個体（例えば、ヒト個体）のがんを治療する方法であって、個体に、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体）及びＦｃドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体）を含む、有効量のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を投与することを含み、ここで、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、最大約６０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９または６０ｍｇ／ｋｇのいずれか１つなど；これらの値の間の任意の範囲を含む）の用量で個体に（例えば、静脈内注入を介して）投与される、方法が提供される。いくつかの実施形態において、個体（例えば、ヒト個体）のがんを治療する方法であって、個体に、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体）及びＦｃドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体）を含む、有効量のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を投与することを含み、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、約６０ｍｇ／ｋｇの用量で個体に投与される、方法が提供される。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、約６０ｍｇ／ｋｇの用量で、４週間に１回（例えば、ｑ４ｗ）または２８日に１回（例えば、静脈内注入を介して）投与される。いくつかの実施形態において、個体（例えば、ヒト個体）のがんを治療する方法であって、個体に、ＳＩＲＰαＤ１ドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＳＩＲＰαＤ１ドメイン変異体）及びＦｃドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体）を含む、有効量のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を投与することを含み、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、約４５ｍｇ／ｋｇの用量で個体に（例えば、静脈内注入を介して）投与される、方法が提供される。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、約４５ｍｇ／ｋｇの用量で、３週間に１回（例えば、ｑ３ｗ）または２１日に１回、個体に（例えば、静脈内注入を介して）投与される。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）のＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、配列番号８１または配列番号８５のアミノ酸配列を含む、ＳＩＲＰα １ドメイン変異体を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）である（例えば、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体のＣ末端は、Ｆｃドメイン変異体のＮ末端に融合される）。いくつかの実施形態において、個体に投与されるポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、配列番号１３６または配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、ホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態において、個体は、ヒトである。

【0223】

いくつかの実施形態において、方法は、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体）及びＦｃドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体）を含むポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を、少なくとも１つの追加の剤（例えば、抗がん剤）、例えば、少なくとも２、３、４、または５つの追加の剤（例えば、抗がん剤）と組み合わせて投与することを含む。いくつかの実施形態において、本明細書の方法との使用が見出される例示的な抗がん剤（複数可）としては、限定するものではないが、治療用抗体、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、低分子阻害剤、ペプチド阻害剤、コルチコステロイド、メトトレキサート、免疫調節剤、抗腫瘍抗生物質、免疫療法剤、抗がんワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、または化学療法剤（例えば、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗物質、有糸分裂阻害薬、低メチル化剤、白金系化合物、アントラサイクリン、アルキル化剤、植物アルカロイドなど）、及びこれらの組み合わせが挙げられる。

【0224】

追加的または代替的に、いくつかの実施形態において、方法は、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体）及びＦｃドメイン変異体（例えば、本明細書に記載されるＦｃドメイン変異体）を含むポリペプチドを、少なくとも１つの追加の治療様式と併せて投与することを含む。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドの投与と併せて実施される例示的な治療様式（複数可）には、限定するものではないが、養子細胞療法（例えば、キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法（ＣＡＲ－Ｔ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＴＣＲ改変Ｔ細胞、ＴＣＲ改変ＮＫ細胞、及びマクロファージ細胞産物）、自家幹細胞移植、同種幹細胞移植、放射線照射、手術、遺伝子治療、冷凍アブレーション、及び骨髄移植が挙げられる。

【0225】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法によって治療されるがんは、固形腫瘍である。本明細書で提供される方法によって治療される例示的ながんとしては、限定するものではないが、例えば、乳癌、肺癌、肺腺癌、扁平上皮細胞肺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、頭頸部癌、中皮腫、脳癌、脳腫瘍、腹部癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、副咽頭間隙癌、胃腸癌、神経膠腫、肝臓癌、胃癌、口腔癌、舌癌、神経芽細胞腫、骨肉腫、卵巣癌、腎癌、膀胱癌、尿路癌、膵癌、網膜芽細胞腫、子宮頸癌、子宮癌、ウィルムス腫瘍、多発性骨髄腫、皮膚癌、リンパ腫、白血病、血液癌、甲状腺癌、骨癌、腺様嚢胞癌、軟骨肉腫、膵島細胞腫瘍、神経内分泌腫瘍、前立腺癌、膠芽腫、子宮内膜癌腫、子宮内膜癌、平滑筋肉腫、胆嚢癌、肝細胞癌、黒色腫、または他の固形腫瘍が挙げられる。

【0226】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法によって治療されるがんは、血液癌である。本明細書で提供される方法によって治療される例示的ながんとしては、限定するものではないが、例えば、多発性骨髄腫、または白血病、限定するものではないが、例えば、急性もしくは慢性骨髄性白血病、急性もしくは慢性リンパ芽球性白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、大顆粒リンパ球性（ＬＧＬ）白血病、形質細胞腫、芽球形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病（Ｂ－ＰＬＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及び非ホジキンリンパ腫（例えば、びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）及び濾胞性リンパ腫（ＦＬ）が挙げられる。

【0227】

キット及び製造品
本発明の別の実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含むポリペプチド（例えば、本明細書に記載される融合ポリペプチド）を含む、製造品またはキットが提供される。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、個体（例えば、ヒト個体）の骨髄異形成疾患（ＭＤＳ）または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療のために、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）と組み合わせて使用するためのものである。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、個体（例えば、ヒト個体）のＡＭＬの治療のために、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）及びＢｃｌ－２阻害剤（例えば、ｖｅｎｅｏｔｃｌａｘ）と組み合わせて使用するためのものである。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８１及び配列番号８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）である。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１３５または配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含むポリペプチドは、ホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態において、キットまたは製造品は、本明細書で提供される治療方法に従って使用するためのものである。

【0228】

いくつかの実施形態において、キットまたは製造品は、低メチル化剤を更に含む。いくつかの実施形態において、低メチル化剤は、アザシチジンである。いくつかの実施形態において、キットは、個体（ヒト個体など）のがん（例えば、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの骨髄癌）の治療またはその進行遅延のために、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）と組み合わせて使用するための説明を含む添付文書またはラベルを含む。いくつかの実施形態において、キットまたは製造品は、ＡＭＬ、例えば、ＴＰ５３変異型ＡＭＬ及び／またはＦＬＴ３変異型ＡＭＬの治療に使用するためのものである。いくつかの実施形態において、キットまたは製造品は、ＭＤＳ、例えば、高リスクＭＤＳの治療に使用するためのものである。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）及び低メチル化剤（例えば、アザシチジン）は、キットにおいて、一緒に提供される。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）及び低メチル化剤（例えば、アザシチジン）は、同じ容器または別個の容器で提供される。

【0229】

いくつかの実施形態において、キットまたは製造品は、Ｂｃｌ－２阻害剤を更に含む。いくつかの実施形態において、Ｂｃｌ－２阻害剤は、ベネトクラクスである。いくつかの実施形態において、キットは、個体（ヒト個体など）のがん（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの骨髄癌）の治療またはその進行遅延のために、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）及びＢｃｌ－２阻害剤（例えば、ベネトクラクス）と組み合わせて使用するための説明を含む添付文書またはラベルを含む。いくつかの実施形態において、キットまたは製造品は、ＡＭＬ、例えば、ＴＰ５３変異型ＡＭＬ及び／またはＦＬＴ３変異型ＡＭＬの治療に使用するためのものである。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）、及びＢｃｌ－２阻害剤（例えば、ベネトクラクス）は、キットにおいて、一緒に提供される。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）、及びＢｃｌ－２阻害剤（例えば、ベネトクラクス）は、同じ容器または別個の容器で提供される。

【0230】

本発明の別の実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含むポリペプチド（例えば、本明細書に記載される融合ポリペプチド）を含む、製造品またはキットが提供される。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体は、配列番号８１及び配列番号８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）；または（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）である。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメイン変異体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１３５または配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰα Ｄ１ドメイン変異体及びＦｃドメイン変異体を含むポリペプチドは、ホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態において、キットは、個体（ヒト個体など）のがん（例えば、本明細書に別途記載されるがん）の治療のためにポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を使用するための説明を含む添付文書またはラベルを含む。いくつかの実施形態において、添付文書またはラベルは、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を、それを必要とする個体に最大６０ｍｇ／ｋｇの用量で投与するための説明を提供する。いくつかの実施形態において、添付文書またはラベルは、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を個体に６０ｍｇ／ｋｇの用量で４週間に１回（ｑ４ｗ）または２８日に１回投与するための説明を提供する。いくつかの実施形態において、添付文書またはラベルは、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を、それを必要とする個体に４５ｍｇ／ｋｇの用量で３週間に１回（ｑ３ｗ）または２１日に１回投与するための説明を提供する。いくつかの実施形態において、キットは、少なくとも１つの追加の抗がん剤（例えば、本明細書に別途記載される抗がん剤）を更に含む。いくつかの実施形態において、キットは、個体（ヒト個体など）のがん（例えば、本明細書に記載されるがん）の治療またはその進行遅延のために、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を、少なくとも１つの追加の抗がん剤と組み合わせて使用するための説明を含む添付文書またはラベルを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）及び少なくとも１つの追加の抗がん剤は、同じ容器または別個の容器で提供される。追加的または代替的に、いくつかの実施形態において、キットは、ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を、少なくとも１つの追加の治療様式（例えば、本明細書に記載される治療様式）と併せて使用するための説明を含む添付文書またはラベルを含む。

【0231】

好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグ及びシリンジが挙げられる。容器は、様々な材料、例えば、ガラス、プラスチック（ポリ塩化ビニルもしくはポリオレフィンなど）、または合金（ステンレス鋼もしくはハステロイなど）から形成され得る。いくつかの実施形態において、容器は、製剤を保持し、容器上のラベルまたは容器に付随するラベルは、使用上の指示を示し得る。製造品またはキットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、及び使用上の指示を含む添付文書を含め、商業的視点及び使用者の視点から望ましい他の材料を更に含み得る。いくつかの実施形態において、製造品は、別の剤（例えば、化学療法剤、抗新生物薬、治療用抗体など）のうちの１つ以上を更に含む。１つ以上の剤に好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグ及びシリンジが挙げられる。

【0232】

本明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分なものであるとみなされる。本明細書中に示され、かつ記載される変更に加えて、本発明の様々な変更が前述の記述から当業者に明らかになり、添付の特許請求の範囲内に含まれる。本明細書に引用される全ての公開物、特許、及び特許出願は、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に援用される。

【実施例】

【0233】

本開示は、以下の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しかしながら、実施例は、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載される実施例及び実施形態は、例示のみを目的とするものであり、それらを考慮した様々な変形または変更が当業者に想起され、本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれることを理解されたい。

【0234】

実施例１：実施例２Ａ～２Ｅの材料及び方法
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の単離
Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃまたは血小板分離白血球除去フィルター（ＬＲＳチャンバー）（Ｖｉｔａｌａｎｔ）からのトリマ残留物をＰＢＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で希釈した。希釈した血液を２つのチューブに分け、１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の上に重ねた。チューブを４００×ｇで３０分間遠心分離した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を界面から回収し、４０ｍＬのＰＢＳを加えて２回洗浄し、４００×ｇで１０分間遠心分離し、ＭＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、２ｍＭ ＥＤＴＡ（Ｔｅｋｎｏｖａ））中に再懸濁した。

【0235】

食作用のためのヒト単球由来マクロファージの誘導及び培養
ＣＤ１４^＋単球を、Ｃｌａｓｓｉｃａｌ Ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）及びＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を製造元のプロトコルに従って使用して、ネガティブ選択により精製した。５０ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、１０％ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、及び１％ＧｌｕｔａＭＡＸを加えたＲＰＭＩ完全培地で構成される２５ｍＬの培地が入った１５０ｍｍの組織培養皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に、ＣＤ１４^＋単球を６００万細胞／皿で播種した。細胞を７～１１日間培養した。

【0236】

ｉｎ ｖｉｔｒｏ食作用アッセイ
標的細胞であるＨＬ６０細胞及びＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞は、ＰＢＳで１回洗浄し、Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ ＣＦＳＥ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造元の説明書に従って３００ｎＭ ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル）との懸濁液中で標識し、ＲＰＭＩ完全培地中に再懸濁した。標的細胞を、ＲＰＭＩ完全培地中で、３９ｎＭ～２．５μＭのアザシチジンの２倍連続希釈とともに一晩インキュベートした。マクロファージとのインキュベーションの前に、ＲＰＭＩ中に細胞を再懸濁した。マクロファージをＰＢＳで１回洗浄し、ＴｒｙｐＬＥ Ｓｅｌｅｃｔ中で３７℃で２０分間インキュベーションすることによって、培養プレートから剥離した。細胞をセルスクレーパー（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で取り出し、ＰＢＳで洗浄し、ＲＰＭＩ中に再懸濁した。

【0237】

ＣＦＳＥで標識した標的細胞をアザシチジンで４８時間処理し、遠心し、超低Ｕ底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に１００，０００細胞／ウェルで加えた。次いで、薬物Ａを加えた。５％二酸化炭素の加湿インキュベーター内で、プレートを３７℃で３０分間インキュベートし、次いで、５０，０００個のマクロファージを加えた。５％二酸化炭素の加湿インキュベーター内で、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。細胞を４００×ｇで５分間遠心分離することによってペレット化し、ＰＢＳで１：４０００に希釈したＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ｅＦｌｕｏｒ ７８０（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で４℃で３０分間染色した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ）で洗浄し、ヒトＦｃＲ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、ＢＶ４２１抗ＣＤ３３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＡＰＣ抗ＣＤ１４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びＰＥ－Ｃｙａｎｉｎｅ７抗ＣＤ１１ｂ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有するＦＡＣＳ緩衝液中、４℃で４５分間染色した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＰＢＳで希釈した０．５％パラホルムアルデヒド中４℃で一晩固定した。細胞をＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で解析し、続いて、Ｆｌｏｗｊｏ １０．６．１（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＆ Ｃｏｍｐａｎｙ）によりデータを解析した。死細胞は、ｅ７８０陰性集団でゲーティングすることにより除外した。マクロファージは、系統マーカーＣＤ３３、ＣＤ１１ｂ及びＣＤ１４に対して陽性である細胞として同定した。この集団のうち、腫瘍細胞を貪食したマクロファージを、ＣＦＳＥが陽性である細胞として同定した。

【0238】

ヒトＰＢＭＣ生存率アッセイ
ＰＢＭＣをカウントし、完全ＲＰＭＩ中にプレーティングした。薬物Ａを、単独でまたはアザシチジンとの組み合わせで、ＰＢＭＣに加えた。３７℃で７２時間または５日間インキュベーションした後、細胞を固定可能な生存率色素で染色し、続いて、細胞表面マーカー：ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ５６、ＣＤ１６、ＣＤ１１ｃ、及びＨＬＡＤＲ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。細胞を処理してＡｔｔｕｎｅ ＮｘＴ によるフローサイトメトリーを行い、ＦｌｏｗＪｏ１０．３によって解析した。生存率のゲーティング戦略には、ＦＳＣ高さ及びＦＳＣ幅によるダブルシングレット除去、それに続く、細胞型表面マーカー、次いで、生存率ゲーティングが含まれた。ＣＤ１１ｃ ＤＣは、陰性系統（ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ１６及びＣＤ５６）のＨＬＡＤＲ^＋ ＣＤ１１ｃ^＋として同定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８を使用して、生細胞を集計した。

【0239】

カルレティキュリン発現の分析
ヒト急性骨髄性白血病細胞株ＨＬ６０におけるカルレティキュリン発現レベルの変化を検出するために、ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞及びＭＶ４－１１細胞を、完全成長培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％ＦＢＳ）中、２．５μＭまたは７５ｎＭのいずれかのアザシチジン（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ）とともに３７℃の５％ＣＯ_２インキュベーター内で７２時間インキュベートした。完全成長培地で成長した細胞をカルレティキュリンベースライン発現の対照として使用した。インキュベーション後、細胞を採取し、染色緩衝液（ＰＢＳ、２％ＦＢＳ）で１回洗浄し、ＰＢＳ中で固定可能な生／死染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と４℃で１時間染色し、染色緩衝液で１回洗浄し、５００ｎｇ／ｍＬのカルレティキュリン－ＡＦ６４７（クローン１Ｇ６Ａ７、Ｎｏｖｕｓ）とともにインキュベートした。４℃で１時間インキュベーションした後、細胞を染色緩衝液で２回洗浄し、０．５％パラホルムアルデヒドで固定した。細胞をＡｔｔｕｎｅ（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で解析し、続いて、Ｆｌｏｗｊｏ １０．６を使用してデータを解析した。

【0240】

ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性
ＮＯＤ－ＳＣＩＤ雌マウスの右脇腹に、１：１のマトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ）とＲＰＭＩ１６４０の比を使用して、ＨＬ６０（ＡＴＣＣ）、ＭＶ４－１１（ＡＴＣＣ）、ＯＣＩ－ＡＭＬ３（ＤＳＭＺ）の急性骨髄性白血病細胞を５×１０^６細胞／マウスの濃度で注射することによって、皮下腫瘍異種移植片を誘発させた。全腫瘍の平均サイズがＨＬ６０で１０５ｍｍ^３、ＭＶ４－１１で７５ｍｍ^３、ＯＣＩ－ＡＭＬ３で１１２ｍｍ^３に到達するまで、腫瘍をモニタリングした。ＰＢＳ、アザシチジン（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ）、薬物Ａ、及びアザシチジン＋薬物Ａ併用のコホートにマウスを無作為に割り付け、ＨＬ６０及びＯＣＩ－ＡＭＬ３については、コホートあたりマウス４～５匹、ＭＶ４－１１については、コホートあたりマウス１０匹とした。ＨＬ６０及びＯＣＩ－ＡＭＬ３の腫瘍モデルのマウスには、アザシチジンを５ｍｇ／ｋｇで３日の間隔をあけて５回、薬物Ａを１０ｍｇ／ｋｇで３日の間隔をあけて６回、腹腔内（ＩＰ）投与した。ＭＶ４－１１腫瘍担持マウスには、アザシチジンを５ｍｇ／ｋｇ及び薬物Ａを１０ｍｇ／ｋｇ、週３回ＩＰ投与した。腫瘍をノギスで二次元測定し、腫瘍体積を長さ×幅×幅×０．５で算出した。ここで、長さは、２回の測定でより大きいほうとした。腫瘍が約２０００ｍｍ^３の体積に達したら、動物を屠殺した。

【0241】

全身性白血病モデルにおけるＢＬＩ連続イメージング
ＨＬ６０ＬＵＣ２（ＡＴＣＣ）細胞株を、ＲＰＭＩ１６４０中、７．５×１０^６細胞の濃度でＮＯＤ－ＳＣＩＤ雌マウスの尾静脈を介して注射した。ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、生物発光イメージング（ＢＬＩ）の取得及び分析を行い、腫瘍成長をモニタリングした。ホタルＤ－ルシフェリン（Ｒｅｇｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を１５ｍｇ／ｍｌのストックのリン酸緩衝生理食塩水中に希釈し、使用する前に濾過した。マウス群を試料室に入れ、２００μｌのＤ－ルシフェリンを腹腔内（ＩＰ）注射した。注射後およそ１０分でＢＬＩ全身シグナルを取得した。ＢＬＩ発光強度の値は、マウス接種３日後に最初のスキャンを取得し、連続的に週２回モニタリングした。Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、マウス全身にわたる関心領域を手動で設定し、ＢＬＩの平均総発光強度（光子／秒、ｐ／ｓ）を定量した。平均２．６Ｅ６の総発光強度（光子／秒）で、ＰＢＳ、アザシチジン（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ）、薬物Ａ、及びアザシチジンと薬物Ａの併用のコホートにマウスを無作為に割り付け、コホートあたりマウス１０匹とした。アザシチジン製剤は、ＰＢＳ中２％ＤＭＳＯであった。アザシチジン治療マウスには、５ｍｇ／ｋｇのアザシチジンをＩＰ注射によって、３日の間隔をあけて５回投与した。薬物Ａ治療マウスには、３０ｍｇ／ｋｇのＩＰ注射によって、３日の間隔をあけて５回投与した。総発光強度が１Ｅ１１到達するか、体重が２０％を超えて減少したとき、動物を屠殺した。

【0242】

実施例２Ａ：ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルにおけるマクロファージによる食作用に対する薬物Ａとアザシチジンの併用による効果
本実施例において、マクロファージによるＨＬ６０及びＯＣＩ－ＡＭＬ３ヒト急性骨髄性白血病細胞の食作用に対する薬物Ａ単独、アザシチジン単独、及び薬物Ａとアザシチジンの併用による効果をｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（詳細については実施例１参照）で評価した。ＨＬ６０は、ＴＰ５３ｎｕｌｌ ＦＬＴ３ｗｔ細胞株であり、ＯＣＩ－ＡＭＬ３は、ＴＰ５３ｗｔ及びＦＬＴ３ｗｔである。

【0243】

簡潔に述べると、ＨＬ６０細胞及びＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞（すなわち、「標的細胞」）をＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル）で標識し、アザシチジン（ａｚａ）で４８時間処理した。次いで、標的細胞を遠心し、９６ウェルプレートのウェルに１００，０００細胞／ウェルで加えた。次いで、薬物Ａを加えた。未処理の対照標的細胞、及びアザシチジンのみ、または薬物Ａのみで処理した対照標的細胞を並行して調製した。マクロファージをウェルに加え、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。マクロファージ細胞をペレット化し、染色し、フローサイトメトリーを介して分析した。死細胞は、ｅ７８０陰性集団でゲーティングすることにより除外した。マクロファージは、系統マーカーＣＤ３３、ＣＤ１１ｂ及びＣＤ１４に対して陽性である細胞として同定した。この集団のうち、腫瘍細胞を貪食したマクロファージを、ＣＦＳＥが陽性である細胞として同定した。

【0244】

図１Ａに示されるように、アザシチジン（ａｚａ）は、単剤として、ＨＬ６０細胞のマクロファージ媒介生食作用をわずかに刺激したが、薬物Ａは、単剤として、食作用にほとんど影響しなかった。（薬物Ａ処理細胞と未処理細胞の比較。）１．６ｎＭの薬物Ａと１５６ｎＭのａｚａの組み合わせは、薬物Ａ単独またはａｚａ単独のいずれかよりも大きく、マクロファージによるＨＬ６０細胞の食作用を刺激した。同様の結果が、ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞において、４０ｎＭの薬物Ａ及び２．５μＭのａｚａで観察された。図１Ｂを参照されたい。

【0245】

実施例２Ｂ：ヒトＰＢＭＣ培養物におけるＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞の生存率に対する薬物Ａとアザシチジンの併用による効果
本実施例において、ヒト末梢血単核細胞培養物におけるＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞の生存率に対する薬物Ａ単独、アザシチジン単独、及び薬物Ａとアザシチジンの併用による効果をｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（詳細については実施例１参照）で評価した。樹状細胞（ＤＣ）は、哺乳動物の免疫系の抗原提示細胞（アクセサリー細胞としても知られている）である。樹状細胞は、自然免疫系と適応免疫系との間のメッセンジャーとして働くと考えられている。

【0246】

ＰＭＢＣ細胞を１．２５μＭのアザシチジン（ａｚａ）単独とインキュベーションすると、ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞の生存率が約４０％減少したが、ＰＢＭＣを２００ｎＭの薬物Ａ単独とインキュベーションすると、ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞の生存率が約４０％増加した。図２を参照されたい。１．２５μＭのａｚａと２００ｎＭの薬物Ａの両方とともにインキュベートしたＰＢＭＣ培養物中におけるＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞の生存率は、薬物Ａ単独とインキュベートしたＰＢＭＣ培養物中におけるＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞の生存率とほぼ同等であった。図２を参照されたい。かかる結果は、ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞に対するアザシチジンの効果を薬物Ａが救済することを示している。

【0247】

実施例２Ｃ：ヒト急性骨髄性白血病細胞株におけるカルレティキュリン発現に対するアザシチジンまたはベネトクラクスの効果
本実施例において、ＨＬ６０、ＯＣＩ－ＡＭＬ３、及びＭＶ４－１１ヒト急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞の細胞表面上におけるカルレティキュリンの発現レベルに対するアザシチジンの効果をｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（詳細については実施例１参照）で評価した。ＨＬ６０は、ＴＰ５３ｎｕｌｌＦＬＴ３ｗｔ細胞株であり、ＯＣＩ－ＡＭＬ３は、ＴＰ５３ｗｔ及びＦＬＴ３ｗｔであり、ＭＶ４－１１は、ＴＰ５３ｗｔ及びＦＬＴ３－ＩＴＤである。

【0248】

カルレティキュリンは、Ｃａ^２＋結合及び小胞体に存在する貯蔵に関与する多機能性タンパク質である。カルレティキュリンはまた、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）においてこれまでに記載されている細胞表面食作用促進マーカーである。図３Ａに示されるように、ＨＬ６０、ＯＣＩ－ＡＭＬ３、及びＭＶ４－１１細胞の表面上のカルレティキュリンの発現は、アザシチジンの濃度が増えるにつれて増加した。細胞表面のカルレティキュリン発現のベースラインは、培地のみでインキュベートした細胞で示されたものである。

【0249】

ＭＶ４－１１及び２名の異なるヒト患者に由来する初代ＡＭＬ細胞の細胞表面上のカルレティキュリンの発現レベルに対するアザシチジンまたはベネトクラクスの効果についても試験した。図３Ｂに示されるように、アザシチジンとベネトクラクスはいずれもＭＶ４１１ ＡＭＬ細胞株と初代ＡＭＬ芽球の両方において、食作用促進シグナルであるカルレティキュリンの発現を増加させた。

【0250】

別のアッセイにおいて、ＭＶ４－１１及び２名の異なるヒト患者に由来する初代ＡＭＬ細胞の細胞表面上のＣＤ４７の発現レベルに対するアザシチジンまたはベネトクラクスの効果について試験した。図３Ｃに示されるように、アザシチジンとベネトクラクスはいずれもＭＶ４１１ＡＭＬ細胞株と初代ＡＭＬ芽球の両方において、抗食作用シグナルであるＣＤ４７の発現を増加させた。

【0251】

実施例２Ｄ：ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＡＭＬ細胞株及び初代ＡＭＬ芽球の食作用に対する薬物Ａとアザシチジンまたはベネトクラクスの併用による効果
ＡＭＬ細胞（ＨＬ６０、ＯＣＩＡＭＬ３、またはヒトドナー由来初代ＡＭＬ芽球）をアザシチジンまたはベネトクラクスと２４～４８時間インキュベートし、次いで、薬物Ａの存在下または非存在下で、ヒト単球由来マクロファージと２時間共培養した。ＡＭＬ細胞の食作用を、ＡＭＬ細胞を飲み込んだマクロファージ（ＣＦＳＥ＋）の数対マクロファージ総数として、フローサイトメトリーによって決定した。図７Ａ及び７Ｂに示されるように、薬物Ａとアザシチジン（７Ａ）またはベネトクラクス（７Ｂ）の併用は、薬物Ａ、アザシチジン、またはベネトクラクスによる単剤処理と比較して、ヒトマクロファージによるＡＭＬ細胞の食作用による除去を促進した。

【0252】

実施例２Ｅ：白血病異種移植モデルにおける薬物Ａとアザシチジンの併用による抗腫瘍活性
本実施例において、薬物Ａとアザシチジン（ａｚａ）の併用による抗腫瘍活性を、ＨＬ６０、ＯＣＩ－ＡＭＬ３及びＭＶ４－１１ヒト白血病腫瘍異種移植片のいずれかを担持するマウスで評価した（実験の詳細は実施例１参照）。ＨＬ６０は、ＴＰ５３ｎｕｌｌ ＦＬＴ３ｗｔ細胞株であり、ＯＣＩ－ＡＭＬ３は、ＴＰ５３ｗｔ及びＦＬＴ３ｗｔであり、ＭＶ４－１１は、ＴＰ５３ｗｔ及びＦＬＴ３－ＩＴＤである。

【0253】

ＨＬ６０異種移植腫瘍を担持するマウスを、マウス４～５匹ずつの４群に無作為に割り付けた。マウス１群に、（ａ）薬物Ａを１０ｍｇ／ｋｇでＩＰ投与（Ｑ３Ｄ、合計６用量）、（ｂ）ａｚａを５ｍｇ／ｋｇでＩＰ投与（Ｑ３Ｄ、合計５用量）、（ｃ）薬物Ａとａｚａの両方の投与（単剤それぞれの場合の用量及び投与スケジュール）、または（ｄ）ビヒクルの投与を行った。ＯＣＩ－ＡＭＬ３異種移植片を担持するマウスも同様に無作為に割り付け、治療した。

【0254】

ＭＶ４－１１異種移植片を担持するマウスは、９～１０匹ずつの４群に無作為に割り付けた。マウス１群に、薬物Ａを１０ｍｇ／ｋｇでＩＰ投与し（週３回）、第２の群のマウスに、ａｚａを５ｍｇ／ｋｇでＩＰ投与し（週３回）、第３の群に、薬物Ａとａｚａの両方を投与し（単剤それぞれの場合の用量及び投与スケジュール、第４の群に、ビヒクルを投与した。

【0255】

腫瘍成長阻害率（％）（ＴＧＩ）を（１－（治療腫瘍の平均体積）／（対照腫瘍の平均体積））×１００％として算出した。２０日目において、ａｚａ単剤で治療したマウスのＨＬ６０腫瘍成長は、最小限の阻害であり（すなわち、ビヒクル対照を投与したマウスと比較して）、一方、薬物Ａによる治療は、マウスの腫瘍成長に著しい影響を与えなかった（すなわち、ビヒクルによる治療と比較して）。図４Ａを参照されたい。ａｚａと薬物Ａの併用による治療は、いずれかの薬物単独よりも大きく、マウスのＨＬ６０腫瘍成長を遅らせた。２０日目において、ａｚａ単独で治療したマウスでは、４２％のＴＧＩが観察され、薬物Ａ単独で治療したマウスでは、１０％のＴＧＩが観察され、薬物Ａとａｚａの併用で治療したマウスでは、６７％のＴＧＩが観察された。ＯＣＩ－ＡＭＬ３モデルでも同様の結果が観察され、ａｚａと薬物Ａの併用による治療は、いずれかの薬物単独よりも大きく、マウスのＯＣＩ－ＡＭＬ３腫瘍成長を遅らせた。図４Ｂを参照されたい（＊ｐ＜０．０５、テューキーの通常の一元配置ＡＮＯＶＡ）。２０日目において、ａｚａ単独で治療したマウスでは、３３％のＴＧＩが観察され、薬物Ａ単独で治療したマウスでは、－３．７％のＴＧＩが観察され、薬物Ａとａｚａの併用で治療したマウスでは、６９％のＴＧＩが観察された。

【0256】

薬物Ａ１０ｍｇ／ｋｇをアザシチジン５ｍｇ／ｋｇと併用して投与すると、各単剤またはビヒクル対照による治療と比較して、ＭＶ４－１１異種移植片の腫瘍成長が消失した。２６日目において、ａｚａ単独で治療したマウスでは、４９％のＴＧＩが観察され、薬物Ａ単独で治療したマウスでは、３５％のＴＧＩが観察され、薬物Ａとａｚａの併用で治療したマウスでは、８６％のＴＧＩが観察された。図４Ｃを参照されたい（＊＊＊ｐ＜０．００１、２６日目におけるテューキーの通常の一元配置ＡＮＯＶＡ）。薬物Ａ＋ａｚａで治療したマウスの５／１０が完全な腫瘍消失を示した。図４Ｄを参照されたい。

【0257】

実施例２Ｆ：全身性白血病モデルにおける薬物Ａとアザシチジンの併用による抗腫瘍活性
薬物Ａ単独及びアザシチジンとの併用による抗腫瘍活性を、播種性ＨＬ６０－ＬＵＣ２急性骨髄性白血病モデルで試験した。免疫不全ＮＳＧマウスにＨＬ６０－ＬＵＣ２細胞（７．５Ｅ６細胞／動物）を尾静脈内注射により移植した後、生物発光イメージングによって生着を確認し、マウスを４群（１０マウス／群）に無作為に割り付けた。治療を以下の表Ａに示すように実施した。

【表13】

【0258】

生物発光シグナルについて、３日目からマウスを週２回イメージングした。図５Ａ及び５Ｂに示されるように、薬物Ａ３０ｍｇ／ｋｇをアザシチジン５ｍｇ／ｋｇと併用して投与すると、各単剤またはビヒクル対照による治療と比較して、腫瘍成長がなくなった。

【0259】

マウスが薬物Ａの単剤投与、アザシチジンの単剤投与、または薬物Ａとアザシチジンの併用投与を１４用量受けるまで、治療を継続した。薬物Ａの単剤療法及びアザシチジンの単剤療法は、中程度の腫瘍成長阻害をもたらしたが、薬物Ａの単剤療法またはアザシチジンの単剤療法を投与したマウスの全てが治療８５日目までに疾患で死亡した。図５Ｃを参照されたい。対照的に、薬物Ａとアザシチジンの併用は、１４７日目の試験終了まで、１００％の動物生存で、腫瘍成長を完全に排除した。図５Ｃを参照されたい。

【0260】

播種性ＨＬ６０－ＬＵＣ２急性骨髄性白血病モデルで実施した第２の実験においては、アザシチジン及び薬物Ａの治療法を生着後４日目に開始し、３日ごとに合計１４用量を腹腔内投与した。以下の表Ａ２を参照されたい。

【表14】

【0261】

薬物Ａ＋アザシチジンを投与されたマウスの半数で、薬物Ａの単剤療法を更に１６用量継続した。図５Ｄに示されるように、アザシチジン単剤で治療したマウスの全てがほぼ８５日目までに治療で死亡した。１４用量の薬物Ａ＋アザシチジンで治療したマウスにおいて、腫瘍阻害は、１０５日目まで観察された。対照的に、１４用量の薬物Ａ＋アザシチジン、続いて、追加の１６用量の薬物Ａの単剤療法で治療したマウスの４匹中３匹では、試験終了（１４７日目）まで腫瘍阻害が観察された。図５Ｄを参照されたい。

【0262】

実施例３：全身性白血病モデルにおける薬物Ａとベネトクラクスの併用による抗腫瘍活性
薬物Ａ単独及びベネトクラクスとの併用による抗腫瘍活性を、実施例２に記載される播種性ＨＬ６０－ＬＵＣ２急性骨髄性白血病モデルにおいて試験した。ベネトクラクス及び薬物Ａの治療法を生着後４日目に開始し、３日ごとに合計５用量を投与した。以下の表Ｂを参照されたい。

【表15】

【0263】

ベネトクラクス単剤療法及び薬物Ａ単剤療法はそれぞれ中程度の腫瘍成長阻害をもたらしたが、持続的な応答を維持しなかった。ベネトクラクス単剤療法または薬物Ａ単剤療法を行ったマウスの全てが４０日目までに疾患で死亡した。図８を参照されたい。対照的に、ベネトクラクスと薬物Ａの併用で治療したマウスの８匹のうち６匹では、８０日の評価期間中、腫瘍成長が完全になくなった。

【0264】

実施例４：全身性白血病モデルにおける薬物Ａとアザシチジン及びベネトクラクスの併用による抗腫瘍活性
異種移植したヒトＨＬ－６０Ｌｕｃ２白血病腫瘍を担持するマウスにおける腫瘍成長の阻害に対する薬物Ａとアザシチジン及びベネトクラクスの併用による効果。週齢６の雌のＮＯＤＳＣＩＤ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）マウスを異種移植実験に使用した。各マウスの尾静脈にＨＬ－６０Ｌｕｃ２細胞（１０×１０^６細胞／マウス）を静脈内注射した。接種後４日目から、ＩＶＩＳ Ｃａｌｉｐｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、腫瘍の進行をモニタリングした。白血病負荷が約１×１０^６光子／秒に達したら、マウスを無作為に群に割り付け、（ａ）ＰＢＳ（対照）、（ｂ）アザシチジン、（ｃ）ベネトクラクス、（ｄ）薬物Ａ、（ｅ）アザシチジン＋ベネトクラクス、または（ｆ）アザシチジン＋ベネトクラクス＋薬物Ａを腹腔内投与した。アザシチジンは、５ｍｇ／ｋｇの用量で３日ごとに合計５用量で腹腔内投与し、薬物Ａは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で３日ごとに合計５用量で腹腔内投与し、ベネトクラクスは、１００ｍｇ／ｋｇの用量で毎日１４日間強制経口投与した。治療開始後３～４日ごとに、Ｄ－ルシフェリン（Ｒｅｇｉｓ）をマウスに注射し、小動物用ｉｎ ｖｉｖｏイメージングシステム（ＩＶＩＳ）を使用して腫瘍生物発光を測定し、記録した。ＩＶＩＳソフトウェア（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）により、関心領域をマウス全身でゲーティングし、放射輝度（光子／ｓ／ｃｍ^２／ステラジアン）によって定義される発光量強度面積（光子／秒）として報告した。

【0265】

図６Ａに示されるように、薬物Ａとベネトクラクス及びアザシチジンの併用は、薬物Ａ単独、アザシチジン単独、ベネトクラクス単独、またはアザシチジンとベネトクラクスの併用よりも大きく腫瘍成長を阻害した。図６Ｂに示されるように、薬物Ａとベネトクラクス及びアザシチジンの併用で治療したマウスは、アザシチジン単独、ベネトクラクス単独、またはアザシチジンとベネトクラクスの組み合わせで治療したマウスよりも、生存率の増加を示した。薬物Ａとベネトクラクス及びアザシチジンの併用により、８０日の評価期間中、９匹のマウスのうち７匹で、腫瘍成長が完全になくなった。図６Ｂを参照されたい。

【0266】

実施例５：薬物Ａは複数の急性骨髄性白血病治療薬に対する応答の深さ及び持続性を増強させる
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、標準療法の後であっても、ほとんどの患者で再発する進行性の血液悪性腫瘍である。最近の治療の進歩にもかかわらず、有効な新規治療の開発は依然としてアンメットニーズである。

【0267】

ＣＤ４７は、腫瘍細胞によって上方制御される、宿主の免疫応答を回避するための骨髄チェックポイントであり、その遮断は、抗腫瘍免疫性を増強させる（Ｗｅｉｓｋｏｐｆ（２０１７）Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，７６：１００－１０９）。薬物Ａは、不活性なヒト免疫グロブリンＦｃ領域に連結された高親和性ＣＤ４７遮断剤を含む、人工融合タンパク質である。前臨床試験において、薬物Ａは、マクロファージの食作用、樹状細胞の活性化及び腫瘍関連マクロファージの炎症表現型へのシフトを促進することによって、自然免疫と適応免疫を橋渡しし、様々な抗がん療法と組み合わせることで、抗腫瘍活性を増加させる（Ｋａｕｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１８）ＰＬｏＳ ＯＮＥ １３（８）：ｅ０２０１８３２）。薬物Ａは、固形腫瘍の患者及び血液悪性腫瘍の患者で良好な忍容性をこれまでに示している。薬物Ａと抗がん療法の併用で、抗腫瘍応答が助長されることが報告されている（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．Ａｂｓｔｒａｃｔ ＃ＥＰ１２４７、２５ｔｈ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＥＨＡ）２０２０におけるポスター発表及びＣｈｏｗ ｅｔ ａｌ．Ａｂｓｔｒａｃｔ ＃３０５６、２０２０ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｖｉｒｔｕａｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｒｏｇｒａｍにおけるポスター発表）。最近、ＡＭＬ患者において、アザシチジンとＢＣＬ２阻害剤ベネトクラクスの併用は、アザシチジン単独と比較して有効性の増加を示した（ＤｉＮａｒｄｏ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ｂｌｏｏｄ，１３３（１）：７－１７。アザシチジンまたはベネトクラクスによるｉｎ ｖｉｔｒｏ治療は、白血病悪性腫瘍において、ＣＤ４７と食作用促進マーカーのカルレティキュリンの両方の細胞表面発現を増加させた。

【0268】

薬物Ａとアザシチジンまたはベネトクラクスのいずれかの併用によりＡＭＬに対する治療有効性が増強するという仮説を検証するために、実験を実施した。薬物Ａによるｉｎ ｖｉｔｒｏ治療は、アザシチジンまたはベネトクラクスで治療した、ＴＰ５３及びＦＬＴ３変異を有する細胞を含む複数のＡＭＬ細胞株において、いずれかの治療単独と比較して、ヒト単球由来マクロファージによる食作用の飲み込みを増強させた。実施例２Ｂ～２Ｃを参照されたい。ｉｎ ｖｉｔｒｏの所見は、いくつかのマウスＡＭＬ異種移植モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ抗白血病活性の増強と相関した。実施例２Ｃ～２Ｄを参照されたい。ＡＭＬ細胞をマウスに尾静脈を介して接種するか、または皮下に移植し、腫瘍が指数関数的な成長に達したら、マウスを無作為に割り付け、ビヒクル対照、アザシチジン、ベネトクラクス、薬物Ａ単独または薬物Ａと化学療法の併用を投与した。薬物Ａの併用療法を受けたコホートは、腫瘍消失の証拠とともに、有意に大きな腫瘍進行の阻害を示し、任意の単剤療法よりも極めて生存が増強された。

【0269】

実施例６：高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）のヒト患者における薬物Ａとアザシチジンの併用の安全性、忍容性及び有効性を評価するための例示的な臨床試験
高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の患者における薬物Ａとアザシチジン（ａｚａ）の併用の安全性、認容性、及び有効性を評価するために、第１／２相臨床試験を実施する。第１相は、高リスクＭＤＳ患者において、漸増量の薬物Ａと標準用量のａｚａの併用で安全性を評価して第２相の推奨用量を特定することを含み、第２相は、薬物Ａ＋ａｚａの併用の有効性を評価する。

【0270】

約６３名の患者を登録する。例示的な組み入れ基準は、（ａ）第１相：前治療なしまたは再発／難治性のいずれかである高リスクＭＤＳの診断；第２相：前治療のない高リスクＭＤＳの診断；（ｂ）適切な腎機能及び肝機能；（ｃ）１８歳以上；ならびに（ｄ）適切なパフォーマンスステータス（例えば、米国東海岸がん臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ）（ＥＣＯＧ）スケールによるもの、ｅｃｏｇ－ａｃｒｉｎ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ｅｃｏｇ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ－ｓｔａｔｕｓ参照）である。例示的な除外基準は、（ａ）ＭＤＳまたは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に対する同種造血幹細胞移植（同種ＨＳＣＴ）の実施歴；（ｂ）任意の抗ＣＤ４７または抗ＳＩＲＰα剤による前治療；（ｃ）Ｂ型及びＣ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連疾病、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む既知の活性ウイルス感染である。

【0271】

第１相において、薬物Ａは、最大６０ｍｇ／ｋｇ、例えば、６０ｍｇ／ｋｇを４週間に１回（Ｑ４Ｗ）、ａｚａと組み合わせて投与する。ａｚａは、各２８日サイクルのうち７日間、毎日７５ｍｇ／ｍ^２の用量で（典型的に「７－０レジメン」と呼ばれる）、または各２８日サイクルで、７５ｍｇ／ｍ^２の用量を毎日５日間、続いて、治療なし２日間（すなわち、アザシチジン投与なし）、次いで、７５ｍｇ／ｍ^２を毎日２日間静脈内または皮下投与する（典型的に「５－２－２レジメン」と呼ばれる）。第２相において、薬物Ａは、第２相の推奨用量でａｚａと併用投与される（７５ｍｇ／ｍ^２の用量で各２８日サイクルの最初の７日間毎日静脈内または皮下投与）。

【0272】

第１相の主要評価項目は、用量制限毒性（ＤＬＴ）を示す試験参加者数である。第２相の主要評価項目は、全奏効率（ＯＲＲ）であり、これは、奏効に達した試験参加者数である（例えば、国際作業部会（ＩＷＧ）基準による完全奏効（ＣＲ）または部分奏効（ＰＲ）（例えば、，Ｃｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０００；９６：３６７１ ３６７４及びＣｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００６；１０８：４１９－４２５参照）。

【0273】

実施例７：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のヒト患者における薬物Ａとベネトクラクス及びアザシチジンの併用の安全性、認容性、及び有効性を評価するための例示的な臨床試験
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者における薬物Ａ、ベネトクラクス及びアザシチジン（Ａｚａ）の併用の安全性、認容性、及び有効性を評価するために、第１／２相臨床試験を実施する。第１ａ相において、参加者は、漸増用量の薬物Ａをベネトクラクス及びアザシチジンと併用で投与される。第１相の主要評価項目は、用量制限毒性を経験した参加者数である。第１ｂ／２相において、参加者は、薬物Ａを第２相の推奨用量でベネトクラクス及びアザシチジンと併用で投与される。第１ｂ／２相の主要評価項目は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｎｅｔ（ＥＬＮ）２０１７基準による完全寛解（ＣＲ）及び造血機能の回復が不十分な完全寛解（ＣＲｉ）に達した参加者数である。これらの試験は、併用の安全性及び有効性ならびに推奨用量を特定するものである。

【0274】

例示的な組み入れ基準には、（ａ）ＷＨＯ２０１６分類による再発／難治性または新規診断ＡＭＬの細胞学または組織学的確定診断；（ｂ）第１ａ相：集中導入療法に適していないと考えられる患者の再発／難治性または前治療のないＡＭＬ；（ｃ）第１ｂ相：ＨＭＡ系レジメンによる前治療後の再発／難治性であるＡＭＬ；（ｄ）第２相：集中導入療法に適した候補とみなされない患者の前治療のないＡＭＬ；（ｅ）適切な腎機能及び肝機能；（ｆ）１８歳以上；ならびに（ｇ）適切なパフォーマンスステータスが含まれるが、これらに限定されない。

【0275】

例示的な除外基準には、（ａ）第１ａ相及び第１ｂ相については、以前に同種ＨＳＣＴを受けた患者は、ＨＣＳＴ後少なくとも３ヶ月でなければならず、制御されていない移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）がない；（ｂ）第２相については、以前に同種ＨＳＣＴを受けた患者は除外される；（ｃ）ＮＣＣＮのＡＭＬガイドライン２０１９年第３版によるｔ（８；２１）、ｉｎｖ（１６）、またはｔ（１６；１６）などの良好なリスク細胞遺伝学的所見のある新規診断ＡＭＬ患者；（ｄ）急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）患者；（ｅ）任意の抗ＣＤ４７または抗ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質アルファ）剤による前治療；（ｆ）Ｂ型及びＣ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連疾病、またはｓａｒｓ－ｃｏｖ－２（重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２）を含む既知の活性ウイルス感染が含まれるが、これらに限定されない。

【0276】

前述の実施例は、例示のみを目的に提供されており、決して、本発明の範囲を限定することを意図していない。本明細書中に示され、かつ記載される変更に加えて、本発明の様々な変更が前述の記述から当業者に明らかになり、添付の特許請求の範囲内に含まれる。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【配列表】

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【国際調査報告】