(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-07-06
(54)【発明の名称】ウイルスベクターの製造方法
(51)【国際特許分類】
C12N 7/02 20060101AFI20230629BHJP
C12M 1/00 20060101ALI20230629BHJP
C12N 15/864 20060101ALN20230629BHJP
C12N 15/867 20060101ALN20230629BHJP
【ＦＩ】
C12N7/02
C12M1/00 A
C12N15/864 100Z
C12N15/867 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022572331
(86)(22)【出願日】2021-06-10
(85)【翻訳文提出日】2022-11-24
(86)【国際出願番号】 US2021036840
(87)【国際公開番号】W WO2021252782
(87)【国際公開日】2021-12-16
(31)【優先権主張番号】63/037,777
(32)【優先日】2020-06-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521438515
【氏名又は名称】２セブンティ バイオ インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】コイスマン， ブレント ジュリアン
【テーマコード（参考）】
4B029
4B065
【Ｆターム（参考）】
4B029AA27
4B029BB13
4B029DG08
4B029GB09
4B065AA95X
4B065AA97X
4B065BA01
4B065BD14
4B065BD18
4B065CA44
(57)【要約】
本開示は、レンチウイルス組成物を精製及び／又は濃縮するための改善されたシステム及び方法を提供する。本開示は、一般的に、部分的には、ウイルスベクター組成物の精製及び濃縮のための改善された方法及びシステムに関する。特に、本発明は、シングルパス接線流濾過を含む、ウイルスベクター組成物を精製及び／又は濃縮する方法を提供する。より具体的には、本方法及びシステムは、ウイルスベクター組成物の大規模産生（例、連続及び／又はバッチ供給産生）のために有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ウイルスベクター組成物を精製する方法であって、（ａ）ＳＰＴＦＦシステムを通じてウイルスベクターを含む組成物を供給する工程であって、前記システムは、
（ｉ）供給ポンプ、及び
（ｉｉ）前記ウイルスベクター組成物を精製するＳＰＴＦＦ濾過モジュールを含む、供給する工程、及び
（ｂ）精製ウイルスベクター組成物を収集する工程を含む、方法。
【請求項2】
ウイルスベクター組成物を濃縮する方法であって、（ａ）ＳＰＴＦＦシステムを通じてウイルスベクターを含む組成物を供給する工程であって、前記システムは、
（ｉ）供給ポンプ、及び
（ｉｉ）前記ウイルスベクター組成物を濃縮するＳＰＴＦＦ濾過モジュールを含む、供給する工程、及び
（ｂ）濃縮ウイルスベクター組成物を収集する工程を含む、方法。
【請求項3】
前記ウイルスベクターがアデノ随伴ウイルス又はレンチウイルスから由来する、請求項１又は請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記ウイルスベクターがレンチウイルスから由来する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記ＳＰＴＦＦシステムが親和性クロマトグラフィー構成要素を含まない、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記ＳＰＴＦＦシステムが一個以上のＳＰＴＦＦ濾過モジュールを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが三個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが四個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが五個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが六個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが七個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが八個以上、九個以上、十個以上、十一個以上、十二個以上、又は十三個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記ＴＦＦカセットが一つ以上のフラットシート膜を含む、請求項７～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記中空繊維カートリッジが一つ以上の中空繊維膜を含む、請求項７～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記一つ以上の膜が、約１ｋＤａ、約５ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約４００ｋＤａ、及び約５００ｋＤａからなる群から選択される平均分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を含む、請求項１３又は請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記一つ以上の膜が約３０ｋＤａのＭＷＣＯを含む、請求項１３又は請求項１４に記載の方法。
【請求項17】
前記一つ以上の膜が約３００ｋＤａのＭＷＣＯを含む、請求項１３又は請求項１４に記載の方法。
【請求項18】
二つ以上のＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジが、並列処理のために構成される、請求項７～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
二つ以上のＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジが、直列処理のために構成される、請求項７～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記ＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジが、並列及び直列処理のために構成される、請求項７～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記ウイルスベクター組成物が、前記ＳＰＴＦＦシステム及び／又はＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通る流路に従う、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記ＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジが有効膜面積を有する、請求項７～２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
前記有効膜面積が、前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュール内の前記流路に沿って減少する、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記システムが、（ａ）前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入るウイルスベクター組成物供給液流量及び（ｂ）前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出るウイルスベクター組成物保持液流量を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る前記ウイルスベクター組成物供給液流量が、前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る前記ウイルスベクター組成物保持液流量の少なくとも約１０倍である、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールから出る前記ウイルスベクター組成物保持液流量が、前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る前記ウイルスベクター組成物供給液流量よりも少なくとも約１０倍少ない、請求項２４に記載の方法。
【請求項27】
前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが、約１０ｐｓｉ以下、約９ｐｓｉ以下、約８ｐｓｉ以下、約７ｐｓｉ以下、約６ｐｓｉ以下、約５ｐｓｉ以下、約４ｐｓｉ以下、約３ｐｓｉ以下、又は約２ｐｓｉ以下の平均膜貫通圧（ＴＭＰ）を有する、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが、約５ｐｓｉ以下の平均膜貫通圧（ＴＭＰ）を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記供給ポンプが、前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールの直前に位置付けられ、前記流路と連続している、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記システムが、前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールの後に、前記流路と連続的に保持液ポンプをさらに含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記システムが、廃棄液ポンプ又は透過液ポンプをさらに含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記ＳＰＴＦＦシステムが遠心分離を含まない、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記ウイルスベクター組成物が、前記ＳＰＴＦＦシステム、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール、及び／又は前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュール内の任意のＴＦＦカセットもしくは中空繊維カートリッジを通して再循環されない、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
前記システムが、前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに続くシングルパス透析濾過（ＳＰＤＦ）構成要素をさらに含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
前記システムが、前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュール後の研磨クロマトグラフィー構成要素をさらに含む、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項36】
前記研磨クロマトグラフィー構成要素が、疎水性相互作用樹脂、サイズ排除樹脂、及び／又はイオン交換樹脂を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
前記研磨クロマトグラフィー構成要素がアニオン交換樹脂を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項38】
前記研磨クロマトグラフィー構成要素によって、前記ウイルスベクター組成物から宿主細胞タンパク質及び／又は宿主ｇＤＮＡが除去される、請求項３５～３７に記載の方法。
【請求項39】
前記ＳＰＴＦＦシステムが、０．２２μＭの最終フィルターをさらに含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
前記ＳＰＴＦＦシステムが、ヌクレアーゼを前記ウイルスベクター組成物に加えるための機構をさらに含む、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項41】
前記ヌクレアーゼが、前記ウイルスベクター組成物を前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通して供給する前に、前記ウイルスベクター組成物に加えられる、請求項４０に記載の方法。
【請求項42】
前記ヌクレアーゼが、前記ウイルスベクター組成物が前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通過した後に前記ウイルスベクター組成物に加えられる、請求項４０に記載の方法。
【請求項43】
前記ヌクレアーゼがデナラーゼＤＮＡエンドヌクレアーゼなどである、請求項４０～４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項44】
前記システムがバイオリアクターをさらに含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項45】
前記バイオリアクターがウイルスベクター産生細胞を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項46】
前記ウイルスベクター産生細胞がレンチウイルスベクター産生細胞である、請求項４５に記載の方法。
【請求項47】
前記産生細胞が懸濁液中で維持される、請求項４５又は請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記産生細胞がＨＥＫ２９３細胞である、請求項４５～４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項49】
前記ＨＥＫ２９３細胞がＨＥＫ２９３Ｔ細胞又はＨＥＫ２９３Ｆ細胞である、請求項４８に記載の方法。
【請求項50】
前記ウイルスベクターが、治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項１～４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項51】
前記治療用タンパク質が、操作されたαβＴＣＲ、操作されたγδＴＣＲ、二量体化剤調節免疫受容体複合体（ＤＡＲＩＣ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）、二重特異的Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）、ゼタカイン受容体、βグロビンタンパク質、ＡＢＣＤ１ポリペプチド、エリスロポエチン受容体もしくはその断片、エンドヌクレアーゼ、又はｍｅｇａＴＡＬである、請求項５０に記載の方法。
【請求項52】
前記ウイルスベクターが、ｓｈＲＮＡ、ｓｈｍｉＲ、又はガイドＲＮＡをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる、２０２０年６月１１日に出願された米国仮出願第６３／０３７，７７７号の３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§ １１９（ｅ）に基づく利益を主張する。
本出願は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる、２０２０年６月１１日に出願された米国仮出願第６３／０３７，７７７号の３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§ １１９（ｅ）に基づく利益を主張する。
【0002】
本開示は、ウイルスベクターを精製及び／又は濃縮するための改善されたシステム及び方法に関する。より具体的には、本開示は、ウイルスベクター組成物を精製及び／又は濃縮するためにシングルパス接線流濾過を使用した、改善されたシステム及び方法に関する。
【背景技術】
【0003】
関連分野に関する記載
これまでに、生物学的産物、例えばモノクローナル抗体、治療用タンパク質、ワクチン、及び他の生物学的産物などを精製するための主要な手段は、捕捉クロマトグラフィー、例えば、親和性クロマトグラフィーの使用を通じてきた。ウイルスについては、精製過程はまた、超遠心分離、イオン交換、ならびに親和性及びサイズ排除クロマトグラフィー方法を含んでもよい。これらの精製方法及び／又は濃縮方法は、遅く、高価であり、治療用産物での使用のための大規模なウイルスベクター産生に容易に適合しない。さらに、これらの方法は、産生細胞を含むバイオリアクターから供給されるベクターを連続的に精製及び／又は濃縮するそれらの能力において制限される。
これまでに、生物学的産物、例えばモノクローナル抗体、治療用タンパク質、ワクチン、及び他の生物学的産物などを精製するための主要な手段は、捕捉クロマトグラフィー、例えば、親和性クロマトグラフィーの使用を通じてきた。ウイルスについては、精製過程はまた、超遠心分離、イオン交換、ならびに親和性及びサイズ排除クロマトグラフィー方法を含んでもよい。これらの精製方法及び／又は濃縮方法は、遅く、高価であり、治療用産物での使用のための大規模なウイルスベクター産生に容易に適合しない。さらに、これらの方法は、産生細胞を含むバイオリアクターから供給されるベクターを連続的に精製及び／又は濃縮するそれらの能力において制限される。
【0004】
したがって、本明細書中にさらに記載するように、特に連続ベクター産生システムと使用するための、高純度及び濃縮ウイルスベクター組成物の大規模産生のための改善された方法及びシステムについてのニーズがある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0005】
本開示は、一般的に、部分的には、ウイルスベクター組成物の精製及び濃縮のための改善された方法及びシステムに関する。特に、本発明は、シングルパス接線流濾過を含む、ウイルスベクター組成物を精製及び／又は濃縮する方法を提供する。より具体的には、本方法及びシステムは、ウイルスベクター組成物の大規模産生（例、連続及び／又はバッチ供給産生）のために有用である。
【0006】
様々な実施形態では、以下の工程を含む、ウイルスベクター組成物を精製及び／又は濃縮する方法：（ａ）ＳＰＴＦＦシステムを通じてウイルスベクターを含む組成物を供給すること、このシステムは（ｉ）供給ポンプ；及び（ｉｉ）ＳＰＴＦＦ濾過モジュール（前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが前記ウイルスベクター組成物を精製する）を含み；ならびに（ｂ）精製ウイルスベクター組成物を収集すること。一部の実施形態では、ウイルスベクターはアデノ随伴ウイルス又はレンチウイルスから由来する。一部の実施形態では、ウイルスベクターはレンチウイルスから由来する。
【0007】
特定の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステムは親和性クロマトグラフィー構成要素を含まない。
【0008】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦシステムは一個以上のＳＰＴＦＦ濾過モジュールを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは三個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは四個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは五個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは六個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは七個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは八個以上、九個以上、十個以上、十一個以上、十二個以上、又は十三個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセット又は中空繊維カートリッジを含む。
【0009】
様々な実施形態では、ＴＦＦカセットは一つ以上のフラットシート膜を含む。様々な実施形態では、中空繊維カートリッジは一つ以上の中空繊維膜を含む。一部の実施形態では、一つ以上の膜は、約１ｋＤａ、約５ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約４００ｋＤａ、および約５００ ｋＤａからなる群から選択される平均分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を含む。一部の実施形態では、一つ以上の膜は約３０ｋＤａのＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、一つ以上の膜は約３００ｋＤａのＭＷＣＯを含む。
【0010】
様々な実施形態では、二つ以上のＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジは、並列で処理するように構成される。一部の実施形態では、二つ以上のＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジは、直列で処理するよう構成される。一部の実施形態では、ＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジは、並列及び直列で処理するよう構成される。
【0011】
様々な実施形態では、ウイルスベクター組成物は、ＳＰＴＦＦシステム及び／又はＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通る流路に従う。
【0012】
様々な実施形態では、ＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジは有効な膜面積を有する。一部の実施形態では、有効膜面積は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール内の流路に沿って減少する。
【0013】
様々な実施形態では、システムは、（ａ）ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入るウイルスベクター組成物供給液流量、及び（ｂ）ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出るウイルスベクター組成物保持液流量を含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入るウイルスベクター組成物供給液流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出るウイルスベクター組成物保持液流量よりも少なくとも約１０倍大きい。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出るウイルスベクター組成物保持液流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入るウイルスベクター組成物供給液流量よりも少なくとも約１０倍少ない。
【0014】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１０ｐｓｉ以下、約９ｐｓｉ以下、約８ｐｓｉ以下、約７ｐｓｉ以下、約６ｐｓｉ以下、約５ｐｓｉ以下、約４ｐｓｉ以下、約３ｐｓｉ以下、又は約２ｐｓｉ以下の平均膜貫通圧（ＴＭＰ）を有する。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは約５ｐｓｉ以下の平均膜貫通圧（ＴＭＰ）を有する。
【0015】
様々な実施形態では、供給ポンプは、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールの直前に、流路と連続的に配置される。一部の実施形態では、システムは、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールの後に、流路と連続的に保持液ポンプをさらに含む。一部の実施形態では、システムは廃棄液又は透過液ポンプをさらに含む。
【0016】
一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステムは遠心分離を含まない。
【0017】
様々な実施形態では、ウイルスベクター組成物は、ＳＰＴＦＦシステム、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール、及び／又はＳＰＴＦＦ濾過モジュール内の任意のＴＦＦカセットもしくは中空繊維カートリッジを通して再循環されない。
【0018】
様々な実施形態では、システムは、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに続くシングルパス透析濾過（ＳＰＤＦ）構成要素をさらに含む。
【0019】
様々な実施形態では、システムは、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールの後に研磨クロマトグラフィー構成要素をさらに含む。一部の実施形態では、研磨クロマトグラフィー構成要素は、疎水性相互作用樹脂、サイズ排除樹脂、及び／又はイオン交換樹脂を含む。一部の実施形態では、研磨クロマトグラフィー構成要素はアニオン交換樹脂を含む。一部の実施形態では、研磨クロマトグラフィー構成要素は、ウイルスベクター組成物から宿主細胞タンパク質及び／又は宿主ｇＤＮＡを除去する。
【0020】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦシステムは、０．２２μｍの最終フィルターをさらに含む。
【0021】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦシステムは、ウイルスベクター組成物にヌクレアーゼを加える機構をさらに含む。一部の実施形態では、ヌクレアーゼは、ウイルスベクター組成物にＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通して供給する前に、ウイルスベクター組成物に加えられる。一部の実施形態では、ヌクレアーゼが、ウイルスベクター組成物がＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通過した後に、ウイルスベクター組成物に加えられる。一部の実施形態では、ヌクレアーゼはデナラーゼＤＮＡエンドヌクレアーゼなどである。
【0022】
様々な実施形態では、システムはバイオリアクターをさらに含む。一部の実施形態では、バイオリアクターはウイルスベクター産生細胞を含む。一部の実施形態では、ウイルスベクター産生細胞はレンチウイルスベクター産生細胞である。一部の実施形態では、産生細胞は懸濁液中で維持される。一部の実施形態では、産生細胞はＨＥＫ２９３細胞である。一部の実施形態では、ＨＥＫ２９３細胞はＨＥＫ２９３Ｔ細胞又はＨＥＫ２９３Ｆ細胞である。
【0023】
様々な実施形態では、ウイルスベクターは、治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、治療用タンパク質は、操作されたαβＴＣＲ、操作されたγδＴＣＲ、二量体化剤調節免疫受容体複合体（ＤＡＲＩＣ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）、二重特異的Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）、ゼタカイン受容体、βグロビンタンパク質、ＡＢＣＤ１ポリペプチド、エリスロポエチン受容体もしくはその断片、エンドヌクレアーゼ、又はｍｅｇａＴＡＬである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、ｓｈＲＮＡ、ｓｈｍｉＲ、又はガイドＲＮＡをコードするポリヌクレオチドを含む。
【図面の簡単な説明】
【0024】
【発明を実施するための形態】
【0025】
Ａ．概要
本開示は、一般的に、部分的に、医薬品の製造における使用のためのウイルスベクター組成物を精製及び濃縮するための改善されたシングルパス接線流濾過（ＳＰＴＦＦ）方法に関する。様々な実施形態では、これらの方法は、大量バッチ（例、バルク供給）又は連続的な精製／濃縮システム、例えば、バイオリアクター中で産生されるウイルスベクターでの使用のために特に適している。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、産生細胞を使用して産生される。
本開示は、一般的に、部分的に、医薬品の製造における使用のためのウイルスベクター組成物を精製及び濃縮するための改善されたシングルパス接線流濾過（ＳＰＴＦＦ）方法に関する。様々な実施形態では、これらの方法は、大量バッチ（例、バルク供給）又は連続的な精製／濃縮システム、例えば、バイオリアクター中で産生されるウイルスベクターでの使用のために特に適している。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、産生細胞を使用して産生される。
【0026】
本発明者らは、ＳＰＴＦＦシステムの使用が、業界標準の捕捉又は親和性クロマトグラフィーを使用したシステムと比較し、ウイルスベクター組成物の大量バッチ又は連続的な精製／濃縮のための主要手段として驚くほど効果的であることを発見した。加えて、本発明者らは、ＳＰＴＦＦシステム内の膜貫通圧（ＴＭＰ）の減少が、驚くべきことに、ウイルスベクター組成物の改善された精製及び濃縮をもたらすことを発見した。
【0027】
一態様では、ウイルスベクターを精製及び／又は濃縮するための方法が提供される。一部の実施形態では、方法は以下の工程を含む：（ａ）ＳＰＴＦＦシステムを通じてウイルスベクターを含む組成物を供給すること、このシステムは（ｉ）供給ポンプ；及び（ｉｉ）ＳＰＴＦＦ濾過モジュール（前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが前記ウイルスベクター組成物を精製する）を含み；ならびに（ｂ）精製ウイルスベクター組成物を収集すること。
【0028】
別の態様では、ウイルスベクターを精製及び／又は濃縮するためのＳＰＴＦＦシステムが提供される。一部の実施形態では、システムは、供給ポンプ及びＳＰＴＦＦ濾過モジュールを含み、前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールはウイルスベクター組成物を精製する。
【0029】
特定の実施形態では、ウイルスベクターはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）又はレンチウイルスから由来する。
【0030】
好ましい実施形態では、本明細書中に記載する方法又はＳＰＴＦＦシステムは、特に大量バッチ及び／又は連続的な様式の操作で、製造過程におけるウイルスベクターの精製及び濃縮のための主要手段として使用される。様々な実施形態では、本明細書中に記載するシステム及び方法は、捕捉又は親和性クロマトグラフィーの構成要素又は工程を含まない。一部の実施形態では、ウイルスベクター組成物は、ＳＰＴＦＦシステム又はＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通じて再循環されない。一部の実施形態では、本明細書において企図する方法は、遠心分離を含まない。
【0031】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、四個以上、五個以上、六個以上、七個以上、八個以上、九個以上、十個以上、十一個以上、十二個以上、又は十三個以上の接線流濾過（ＴＦＦ）カセットを含む。様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、四個以上、五個以上、六個以上、七個以上、八個以上、九個以上、十個以上、十一個以上、十二個以上、又は十三個以上の中空繊維ＴＦＦカートリッジを含む。
【0032】
一部の実施形態では、ＴＦＦカセット又は中空繊維ＴＦＦカートリッジは、直列及び／又は並列で作動する。したがって、ＳＰＴＦＦシステムでは、供給液（例、ウイルスベクター組成物）は、一つのカセットもしくはカートリッジ（又はカセットもしくはカートリッジのグループ）上に一度に流れることができ（別名、連続作動）、又はいくつかのカセットもしくはカートリッジの間で分割することができる（別名、並列作動）。一部の実施形態では、供給を、いくつかのカセット又はカートリッジの間で並列に（例、グループ又は段階で）分割し、カセット又はカートリッジのいくつかのグループを直列に連結する。
【0033】
様々な実施形態では、連続及び／又は並列で作動するＴＦＦカセット及び／又は中空繊維ＴＦＦカートリッジは、有効膜面積を有する。例えば、連続モードで作動するカセット又はカートリッジの有効膜面積は、膜のサイズと等しくなりうる。しかし、並列モードで作動するいくつかのカセット又はカートリッジの有効膜面積は、流路に沿った任意の所与の工程で、全てのカセット又はカートリッジの膜面積の総和に等しい有効膜面積を有しうる（例、図１Ａ及び図１Ｂを参照のこと）。特定の実施形態では、有効膜面積は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール内の流路に沿って減少する。
【0034】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る組成物（例、供給液）の流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る保持液流量よりも１０倍大きい。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る組成物保持液流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量よりも１０倍少ない。
【0035】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１０ｐｓｉ以下、約９ｐｓｉ以下、約８ｐｓｉ以下、約７ｐｓｉ以下、約６ｐｓｉ以下、約５ｐｓｉ以下、約４ｐｓｉ以下、約３ｐｓｉ以下、又は約２ｐｓｉ以下の平均膜貫通圧（ＴＭＰ）を有する。一部の実施形態では、システムは、供給ポンプ、保持液ポンプ、及び／又は透過液／廃棄液ポンプを含む。
【0036】
様々な実施形態では、システムは、バイオリアクター、シングルパス透析濾過（ＳＰＤＦ）構成要素、研磨クロマトグラフィー構成要素、及び／又は最終フィルターをさらに含む。一部の実施形態では、研磨クロマトグラフィー構成要素は、疎水性相互作用樹脂、サイズ排除樹脂、及び／又はイオン交換樹脂を含む。一部の実施形態では、研磨クロマトグラフィー構成要素はアニオン交換樹脂を含む。一部の実施形態では、バイオリアクターは産生細胞を含む。一部の実施形態では、方法は、ヌクレアーゼを組成物に加える工程をさらに含む。
【0037】
様々な実施形態では、ウイルスベクターは、治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。様々な実施形態では、ウイルスベクターは、操作されたαβ ＴＣＲ、操作されたγδ ＴＣＲ、二量体化剤調節免疫受容体複合体（ＤＡＲＩＣ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）、二重特異的Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）、ゼタカイン受容体、キメラＴＧＦβ受容体（ＣＴＢＲ）、βグロビンタンパク質、ＡＢＣＤ１ポリペプチド、エリスロポエチン受容体もしくはその断片、エンドヌクレアーゼ、又は ｍｅｇａＴＡＬをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、ｓｈＲＮＡ、ｓｈｍｉＲ、又はガイドＲＮＡをコードするポリヌクレオチドを含む。
【0038】
組み換え（すなわち、操作された）ＤＮＡ、ペプチド及びオリゴヌクレオチド合成、免疫アッセイ、組織培養、形質変換（例、エレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応、精製ならびに関連する技術及び手法は、本明細書を通じて引用され、考察される、微生物学、分子生物学、生化学、分子遺伝学、細胞生物学、ウイルス学及び免疫学における様々な一般的及びより具体的な参考文献に記載されるように一般的に行われてもよい。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ３ｄ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、２００８年７月に更新）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ＆ＩＩ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ ＵＳＡ，１９８５）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ：Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ Ｓｔｒｏｂｅｒ ２００１ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ）、Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｊｕｌｉｅ Ｌｏｇａｎ，Ｋｉｒｓｔｉｎ Ｅｄｗａｒｄｓ ａｎｄ Ｎｉｃｋ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，２００９，Ｃａｉｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｒｆｏｌｋ，ＵＫ、Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｇｅｎｏｍｅｓ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２）、Ｇｕｔｈｒｉｅ ａｎｄ Ｆｉｎｋ，Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，Ｅｄ．，１９８４）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８５）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｅｄ．，１９８６）、Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、Ｎｅｘｔ－Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（Ｊａｎｉｔｚ，２００８ Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ）、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｐａｒｋ，Ｅｄ．，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１０ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）、ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．，１９８７，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ ＣＣ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９８６）、Ｒｏｉｔｔ，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８８）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｑ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ ａｎｄ Ｗ．Ｓｔｒｏｂｅｒ，ｅｄｓ．，１９９１）、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、並びにＡｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙなどの専門誌の研究論文を参照されたい。
【0039】
Ｂ．定義
本開示をより詳細に記載する前に、本明細書において使用されるべきある特定の用語の定義を提供することは、その理解に役立ちうる。
本開示をより詳細に記載する前に、本明細書において使用されるべきある特定の用語の定義を提供することは、その理解に役立ちうる。
【0040】
他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書中に記載するものと類似した、又は均等の方法及び材料を、特定の実施形態の実施又は検証に使用することができるが、本明細書においては好ましい組成物、方法及び材料の実施形態を開示している。本開示の目的に対し、以下の用語を、以下に規定する。
【0041】
冠詞「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、本明細書において、当該冠詞の文法上の対象の一つ又は複数（すなわち少なくとも一つ、又は一つもしくは複数）を指すために使用される。例示として、「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ」とは、一つの要素、又は一つもしくは複数の要素を意味する。
【0042】
選択肢（例、「又は」）の使用は、いずれか一つ、両方、又はその選択肢の任意の組み合わせを意味すると理解されたい。
【0043】
用語「及び／又は」は、いずれか一つ、又はその選択肢の両方を意味すると理解されたい。
【0044】
本明細書中で使用するように、用語「約」又は「およそ」は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、又は長さに対し、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％変化する数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、又は長さを指す。一実施形態では、用語「約」又は「およそ」は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、又は長さに関し、±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、又は±１％の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、又は長さの範囲を指す。
【0045】
一実施形態では、例えば、１～５、約１～５、又は約１～約５といった範囲は、当該範囲に包含される各数値を指す。例えば、一つの非限定的かつ単に例示的な実施形態では、範囲「１～５」は、表現１、２、３、４、５、又は１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、もしくは５．０、又は１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、もしくは５．０と同等である。
【0046】
本明細書中で使用するように、用語「実質的に」は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、又は長さと比較して、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上である数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量、又は長さを指す。一実施形態では、「実質的に同じ」は、参照の量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量又は長さとほぼ同じである効果、例えば、生理学的効果を生じる量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、又は長さを指す。
【0047】
本明細書全体を通じて、文脈が別段要求しない限り、語句「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含むこと」は、規定される工程もしくは要素又は工程もしくは要素のグループを含むことを暗示するが、任意の他の工程もしくは要素又は工程もしくは要素のグループを除外することを暗示しないことは理解されるだろう。「～からなる」とは、語句「からなる」に先行するもの全てを含み、それらに限定されることを意味する。このように、文言「～からなる」は、列記される要素が必要又は義務であり、他の要素は存在し得ないことを示す。「本質的に～からなる」とは、当該文言の後に列記される任意の要素、及び列記される要素に関して本開示中に特定される活性もしくは作用に干渉しない、又は寄与しない他の要素に限定される任意の要素を含むことを意味する。このように、文言「本質的に～からなる」は、列記される要素が必須又は義務であり、しかし列記される要素の活性又は作用に実質的に影響を与える他の要素は存在しないことを示す。
【0048】
本明細書全体を通じて「一実施形態」、「実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「ある実施形態」、「追加的な実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」、又はそれらの組み合わせに対する参照は、当該実施形態と関連付けて記載される特定の性質、構造又は特徴が、少なくとも一つの実施形態に含まれることを意味する。このように、本明細書全体の様々な箇所での前述の文言の出現は、必ずしも全てが同じ実施形態を指しているわけではない。さらに、特定の性質、構造、又は特徴は、一つ以上の実施形態において任意の適切な様式で組み合わされうる。また、一実施形態でのある特徴の肯定的な列挙は、特定の実施形態での当該特徴を除外するための根拠として機能することが理解される。
【0049】
用語「ＳＰＴＦＦ濾過モジュール」は、一つ以上のＴＦＦカセット又は中空繊維ＴＦＦカートリッジを含むＳＰＴＦＦシステム中の構成要素を指す。ＳＰＴＦＦ濾過モジュールはまた、ＴＦＦカセットのための「ホルダ」を含みうる。ＳＰＴＦＦ濾過モジュールはまた、ＴＦＦカセット及び／又は中空繊維ＴＦＦカートリッジへの、及び／又はそれらからの供給液、保持液、透過液、及び／又は廃棄液を運ぶように構成された一つ以上のマニホールド又はマニホールドセグメントを含んでもよい。
【0050】
用語「マニホールドセグメント」は、供給液を運ぶためのマニホールド、保持液を運ぶためのマニホールド、及び透過液を運ぶためのマニホールドを含む、複数のマニホールドを有するブロックを指す。
【0051】
「ＴＦＦカセット」又は「カセット」は、濾過膜（例、限外濾過膜、マイクロ濾過膜）ならびにＳＰＴＦＦ過程のために適切な別々の供給液／保持液及び透過液のフローチャネルを含む、プレート及びフレーム構造を指す。
【0052】
用語「中空繊維ＴＦＦカートリッジ」、「中空繊維カートリッジ」、又は「カートリッジ」は、中空繊維（膜）の束により形成されるチャネルを含む構造（例、管様構造）を指す。そのようなカートリッジは、典型的には、キャップ付き端部を含み、前記カートリッジは、供給サンプル又は溶液（例、ウイルスベクター組成物）用の入口、ならびに保持液及び透過液用の一つ以上の別々の出口を含む。
【0053】
用語「中空繊維膜」は、中空繊維の形態で半浸透性バリアを含む人工濾過膜のクラスを指す。
【0054】
用語「濾過膜」は、ＳＰＴＦＦ過程を使用して、透過液流及び保持液流に供給液を分離するための選択的透過性膜を指す。濾過膜は、限外濾過（ＵＦ）膜、マイクロ濾過（ＭＦ）膜、逆浸透（ＲＯ）膜、及びナノ濾過（ＮＦ）膜を含むが、これらに限定しない。濾過膜はフラットシート又は中空繊維でありうる。
【0055】
用語「マイクロ濾過膜」及び「ＭＦ膜」は、約０．１マイクロメートル～約１０マイクロメートルの間の範囲の細孔サイズを有する膜を指す。
【0056】
用語「限外濾過膜」及び「ＵＦ膜」は、約１０ナノメートル～約１００ナノメートル（即ち、約０．０１マイクロメートル～約０．１マイクロメートル）の間の範囲の細孔サイズを有する膜を指す。
【0057】
用語「ナノ濾過膜」及び「ＮＦ膜」は、約１ナノメートル～約１０ナノメートル（即ち、約０．００１マイクロメートル～約０．０１マイクロメートル）の間の範囲の細孔サイズを有する膜を指す。
【0058】
追加の定義は、本開示全体を通じて記載されている。
【0059】
Ｃ．シングルパス接線流濾過（ＳＰＴＦＦ）システム
接線流濾過（ＴＦＦ）は、膜を使用して、サイズ、分子量、又は他の差異に基づいて、液体溶液又は懸濁液（例、供給サンプル）中の構成要素を分離する過程である。これらの過程では、供給サンプルは、膜表面に沿って接線方向にポンプ注入され、膜を通過するには大き過ぎる粒子又は分子は保持され、供給サンプルが十分に明らかにされ、濃縮され、又は精製されるまで、膜を横切る追加の通過（即ち、再循環）のために過程タンクに戻される。ＴＦＦのクロスフローの性質は、膜の汚損を最小限にし、バッチ当たり大量処理を可能にする。
接線流濾過（ＴＦＦ）は、膜を使用して、サイズ、分子量、又は他の差異に基づいて、液体溶液又は懸濁液（例、供給サンプル）中の構成要素を分離する過程である。これらの過程では、供給サンプルは、膜表面に沿って接線方向にポンプ注入され、膜を通過するには大き過ぎる粒子又は分子は保持され、供給サンプルが十分に明らかにされ、濃縮され、又は精製されるまで、膜を横切る追加の通過（即ち、再循環）のために過程タンクに戻される。ＴＦＦのクロスフローの性質は、膜の汚損を最小限にし、バッチ当たり大量処理を可能にする。
【0060】
従来のバッチ供給再循環ＴＦＦ過程は、しかし、既存のＴＦＦシステムのサイズ及び最小作業量のために制限される。シングルパスＴＦＦ（ＳＰＴＦＦ）によって、再循環の非存在下における産物（例、タンパク質）の直接フロースルー濃縮が可能になり、それよって、機械的な構成要素の除去を通して全体的なシステムサイズが低下し、高変換レベルでの連続的な作動が可能になる。しかし、バイオマニュファクチャリングにおけるウイルスベクター精製／濃縮のための主要手段としてのそのようなＳＰＴＦＦシステムの使用は、完全には実現されていない。
【0061】
任意の特定の理論により束縛されるものではないが、ＳＰＴＦＦシステムは、ウイルスベクターを効果的に精製／濃縮することができるＳＰＴＦＦシステムを、薬物製造のために要求される高い基準で構築する固有の困難さのために、大規模バイオマニュファクチャリングシステム（例、大規模バッチ供給又は連続ウイルスベクター製造システム）においてウイルス粒子を精製／濃縮するための主要な手段として使用されていないことが企図される。さらに、ウイルスベクターを数日間（数週間は言うまでもなく）にわたり連続的に産生できる産生細胞を作製することは困難であり、それによって、ウイルスベクターの精製／濃縮のための連続又は大規模バッチ供給ＳＰＴＦＦシステムの使用が可能となる。本発明者らは、ウイルスベクターの精製／濃縮に驚くほど効果的であるＳＰＴＦＦシステム及び方法を（例、連続又は大量バッチ供給の様式で）開発しているが、こうして、ウイルスベクター製造におけるコスト、処理時間、ならびに産物の収率及び回収を低下させた。
【0062】
様々な実施形態では、シングルパス接線流濾過（ＳＰＴＦＦ）を使用してウイルスベクター組成物を精製及び／又は濃縮するための改善されたシステム及び方法が提供される。特定の実施形態では、本明細書において企図されるシステム及び方法は、連続又は大量バッチ供給様式でのウイルスベクター組成物の製造のために有用である。
【0063】
本明細書中で使用するように、用語「ＳＰＴＦＦシステム」は、シングルパスモードでの作動のために構成されるシングルパス接線流濾過（ＳＰＴＦＦ）システムを指し、即ち、供給サンプル（例、ウイルスベクター組成物）が、システムを通して一度だけ通過し、システム又はＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通して再循環されない。一部の実施形態では、供給サンプル（例、ウイルスベクター組成物）は、精製及び／又は濃縮のために使用されるＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通して再循環されないが、しかし、他の目的（例、透析濾過）のために使用される一つ以上のＴＦＦ濾過モジュールを通して再循環される。一部の実施形態では、供給サンプル（例、ウイルスベクター組成物）は、ＳＰＴＦＦシステム内の任意のＴＦＦ濾過モジュールを通して再循環されない。
【0064】
様々な実施形態では、ウイルスベクターを精製及び／又は濃縮するためのＳＰＴＦＦシステム、及び関連方法が提供される。一部の実施形態では、方法は以下の工程を含む：（ａ）ＳＰＴＦＦシステムを通じてウイルスベクターを含む組成物を供給すること、このシステムは（ｉ）供給ポンプ；及び（ｉｉ）ＳＰＴＦＦ濾過モジュール（前記ＳＰＴＦＦ濾過モジュールが前記ウイルスベクター組成物を精製する）を含み；ならびに（ｂ）精製ウイルスベクター組成物を収集すること。特定の実施形態では、ウイルスベクターはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）又はレンチウイルスから由来する。一部の実施形態では、ウイルスベクターはアネロベクターである。
【0065】
様々な実施形態では、本明細書において企図されるシステム及び方法は、親和性又は捕捉クロマトグラフィーの構成要素又は工程を含まない。好ましい実施形態では、ウイルスベクター組成物は、ＳＰＴＦＦシステム又はＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通じて再循環されない。一部の実施形態では、方法又はシステムは遠心分離を含まない。
【0066】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム又は関連する方法は、処理を支援するために異なる構成要素（例、ユニット及び／又はモジュール）を含んでもよい。一般的に、本明細書において企図される方法を実施するのに有用なＳＰＴＦＦシステムは、標準的な既存のＴＦＦシステム構成要素を使用して組み立てて操作することができる。市販されているＴＦＦシステム構成要素の例は、 限定しないが、一つ以上のバイオリアクター、保持タンク又は容器、廃棄タンク又は容器、供給ライン、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール、濾過膜を含むＴＦＦカセット、カセットホルダ、中空繊維カートリッジ、クロマトグラフィー構成要素、 透析濾過構成要素、限外濾過膜／フィルターマイクロ濾過膜／フィルター、供給用の導管（例、チューブ、管）、保持液及び透過液、筐体又はエンクロージャ、バルブ、ガスケット、ポンプモジュール（例、ポンプ筐体、ダイアフラム、及びチェックバルブを含むポンプモジュール）、サンプリングポート、Ｔライン（例、インライン緩衝液の添加用）、バルブセンサー、流量計、一つ以上のリザーバ（例、バイオ過程コンテナ）、圧力計、及びバイアル充填構成要素を含む（例、 図３及び図４を参照のこと）。
【0067】
様々な実施形態では、構成要素の一つ以上が、構成要素間の供給サンプル（例、ウイルスベクター組成物）の連続的な流れを達成するために流体接続される。語句「流体接続」は、一つ以上の導管（例、供給液チャネル、保持液チャネル、透過液チャネル）により接続されて、供給サンプルが一つの構成要素から他へ流れることができるようにする、ＳＰＴＦＦシステムの二つ以上の構成要素（例、二つ以上のマニホールドセグメント、二つ以上のマニホールドセグメント、二つ以上のＴＦＦカセット、二つ以上の中空繊維ＴＦＦカートリッジ、又はそれらの任意の組み合わせ）を指す。
【0068】
用語「プロセシング」は、ウイルスベクター組成物を含む供給流を（例、ＳＰＴＦＦにより）濾過し、その後、濃縮及び／又は精製された形態でウイルスベクターを回収する作用を指す。濃縮ウイルスベクターは、ウイルスベクターのサイズ及び濾過膜の細孔サイズに依存して、保持液流又は透過液流のいずれかで、濾過システム（例、ＳＰＴＦＦシステム）から回収することができる。好ましい実施形態では、ウイルスベクターは、保持液流中の濾過システムから回収される。
【0069】
用語「精製」、「精製する」、「精製された」、及び「精製している」は、サンプル（例、宿主細胞タンパク質）の一つ以上の他の構成要素に対して、目的の一つ以上の構成要素（例、ウイルスベクター）の量を濃縮する手順を指す。例えば、特定の実施形態では、本明細書において企図されるＳＰＴＦＦシステムは、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）を組成物から除去し、それにより宿主細胞タンパク質濃度を低下させる一方で、ウイルスベクターを濃縮する。本明細書中で使用するように、用語「精製」、「精製する」、「精製された」、及び「精製している」は、サンプルから目的の成分以外の全ての材料を除去することを意味するものではない。
【0070】
用語「供給」、「供給サンプル」、及び「供給流」は、濾過されるＳＰＴＦＦ濾過モジュールに送達される溶液（例、ウイルスベクター組成物）を指す。濾過のためにＳＰＴＦＦ濾過モジュールに送達される供給は、例えば、ＳＰＴＦＦシステムの外側又はＳＰＴＦＦシステム内に統合された供給容器（例、容器、タンク、又はバイオリアクター）からの供給であることができる。
【0071】
用語「濾過」は、膜を使用して、供給サンプルを透過液及び保持液の二つの流れに分離する作用を一般的に指す。
【0072】
用語「透過液」及び「濾過液」は、膜を通じて透過した供給液のその部分を指す。
【0073】
用語「保持液」は、膜により保持された供給液の部分を指し、保持液は、保持された種が濃縮された流れである。
【0074】
用語「供給ライン」又は「供給チャネル」は、供給源（例、供給コンテナ、容器、タンク、又はバイオリアクター）からの供給液を、濾過アセンブリ（例、ＳＰＴＦＦシステム又はＳＰＴＦＦ濾過モジュール）内の一つ以上の処理構成要素に運搬するための導管を指す。
【0075】
用語「保持液ライン」又は「保持液チャネル」は、保持液を運ぶための濾過アセンブリ内の導管を指す。
【0076】
用語「透過液ライン」又は「透過液チャネル」は、透過液を運ぶための濾過アセンブリ内の導管を指す。
【0077】
様々な実施形態では、本明細書において企図されるＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、インビトロ及び／又はインビボ用途のために適切な精製及び／又は濃縮されたウイルスベクター組成物を取得するために有用である。特定の実施形態では、精製及び／又は濃縮されたウイルスベクター組成物は、限定しないが、細胞遺伝子治療産物及びワクチンを含む、遺伝子治療産物のインビボ投与及び／又は製造のために適切である。好ましい実施形態では、精製及び／又は濃縮されたウイルスベクター組成物は、細胞治療の製造のために適切である。さらなる好ましい実施形態では、精製及び／又は濃縮されたウイルスベクター組成物は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボでの遺伝子治療のために有用である。
【0078】
様々な実施形態では、本明細書中で提供するＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、流動的に接続される一つ以上のＳＰＴＦＦ濾過モジュール又は構成要素を含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、第一のＳＰＴＦＦ濾過モジュール上の供給入口及び最後のＳＰＴＦＦ濾過モジュール上の保持液出口を含む。一部の実施形態では、第一及び最後のＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、同じモジュールであり、即ち、システムは、一つのＳＰＴＦＦ濾過モジュールのみを含む。
【0079】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、一つ以上の流路を含む。表現「流路」は、ＳＰＴＦＦシステムの全て又は一部を介した溶液（例、供給液、保持液、透過液、又は組成物）の流れを支持するチャネルを指す。このように、ＳＰＴＦＦシステムは複数の流路を有することができ、供給液入口から保持液出口までのシステム全体を通じた流路、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール内の流路（例、ＴＦＦカセットを通じた流路）、二つ以上の隣接するＳＰＴＦＦ濾過モジュール間の流路（例、隣接するＳＰＴＦＦ濾過モジュール内のマニホールドセグメント間の流路）、及び二つ以上の隣接するＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジ間の流路（例、隣接するＳＰＴＦＦ濾過モジュール内のマニホールドセグメント間の流路）を含む。流路は、接線流を支持する任意のトポロジー（例、直線、コイル状、ジグザグ様式で配置）を有しうる。流路は並列又は直列であることができる。さらに、流路は、中空繊維膜により形成されるチャネルの実施例のように開放であることができ、あるいは、例えば、織布もしくは不織布のスペーサー、又はガスケット（例、シリコンガスケット）により間隔があけられた平坦シート膜により形成される一つ以上の流れ障害物を有することができる。
【0080】
一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、一つ以上のバイオリアクターを含む。例えば、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、一つ、二つ、三つ、四つ、又は五つのバイオリアクターを含む。
【0081】
本明細書中で使用するように、用語「バイオリアクター」は、生物学的に活性な環境を支持する任意の製造又は操作された装置又はシステムを指す。一部の例では、バイオリアクターは、細胞培養過程を行う容器である。そのような過程は、好気性又は嫌気性のいずれかであってもよい。一般的に使用されるバイオリアクターは、典型的には、リットルから立方メートルまでのサイズに及ぶ円筒形であり、しばしば、ステンレス鋼で作製されている。本明細書中で記載する一部の実施形態では、バイオリアクターは、鋼鉄以外の材料で作製され、使い捨て又は単回使用である。バイオリアクターの総体積は、特定の過程に依存して、１００ｍＬから最大１０，０００リットル又はそれ以上に及ぶ任意の体積であってもよいことが企図される。本明細書中で記載する過程及びシステムによる一部の実施形態では、バイオリアクターは、ユニット作動、例えばデプスフィルターなどに接続される。本明細書中に記載する一部の実施形態では、バイオリアクターは、細胞培養ならびに沈殿の両方に使用されるが、沈殿物はバイオリアクターに直接加えられて、一つ以上の不純物を沈殿させうる。
【0082】
一部の実施形態では、バイオリアクターは、ＳＰＴＦＦシステム内の一つ以上の構成要素に流動的に接続される。例えば、一部の実施形態では、バイオリアクターは、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに流動的に接続される。一部の実施形態では、バイオリアクターは、保持タンク又は容器に流体接続され、それはまた、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール（例、供給液入口を介して）に流体接続されてもよい。
【0083】
バイオリアクターは、バッチもしくはフェドバッチバイオリアクターのような任意のタイプのバイオリアクター、又は連続灌流発酵バイオリアクターのような連続バイオリアクターでありうる。バイオリアクターは、任意の適切な材料で作製することができ、任意のサイズであることができる。典型的な材料はステンレス鋼又はプラスチックである。好ましい実施形態では、バイオリアクターは、使い捨てバイオリアクターであり、例えば、単回使用のために設計された、可動性の折り畳み式バッグの形態である。バイオリアクター内で増殖している細胞は、液体培地中に浸漬されてもよく、又は固体培地の表面に付着されてもよい。液内培養物は懸濁又は固定させてもよい。一部の実施形態では、バイオリアクターはＳＰＴＦＦシステムに流体接続させる。一部の実施形態では、バイオリアクターは保持タンク（例、中間保持タンク）に流体接続させる。
【0084】
一部の実施形態では、バイオリアクターは産生細胞を含む。本明細書中で使用するように、用語「産生細胞」又は「産生細胞株」は、パッケージング細胞株及びパッケージングシグナルを含むトランスファーベクター構築物を含む、組換えレトロウイルス粒子を産生することが可能である細胞又は細胞株を指す。感染性ウイルス粒子及びウイルスストック溶液の生成は、従来的な技術を使用して行ってもよい。ウイルスストック溶液を調製する方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｙ．Ｓｏｎｅｏｋａ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：６２８－６３３、及びＮ．Ｒ．Ｌａｎｄａｕ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：５１１０－５１１３により例示されている。感染性ウイルス粒子は、従来の技術を使用して産生細胞から収集されうる。例えば、感染性粒子を、当技術分野で公知のように、細胞溶解、又は細胞培養の上清の収集により収集することができる。場合により、収集されたウイルス粒子を、望ましい場合、精製してもよい。適切な精製技術は当業者に周知である。
【0085】
一部の実施形態では、産生細胞は、バイオリアクター内の懸濁液中で維持される。一部の実施形態では、産生細胞は、ＡＡＶベクター産生細胞、アネロベクター産生細胞、又はレンチウイルスベクター産生細胞である。特定の実施形態では、産生細胞はレンチウイルスベクター産生細胞である。一部の実施形態では、産生細胞はＨＥＫ２９３細胞である。一部の実施形態では、ＨＥＫ２９３細胞はＨＥＫ２９３Ｔ細胞又はＨＥＫ２９３Ｆ細胞である。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、治療用導入遺伝子又は治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。
【0086】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム又は方法における第一の構成要素は、出発材料を含むバイオリアクターであり、例えば、精製されるタンパク質又はウイルスベクターを発現する細胞を培養する。
【0087】
様々な実施形態では、本明細書において企図する方法を実施するために有用なＳＰＴＦＦシステムは、一つ以上のポンプをさらに含む。一部の実施形態では、ポンプは供給ポンプである。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステムは、一つ以上の供給ポンプを含む。一部の実施形態では、供給ポンプは、流路内のＳＰＴＦＦ濾過モジュールの前に位置付けられる。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム又は方法は、一つ以上の保持液ポンプを含む。一部の実施形態では、保持液ポンプは、流路内のＳＰＴＦＦ濾過モジュールの後に位置付けられる。
【0088】
様々な実施形態では、保持液ポンプは、供給ポンプよりも遅い流速を有する。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステムは、一つ以上の廃棄液ポンプ又は透過液ポンプを含む。一部の実施形態では、廃棄液ポンプ又は透過液ポンプは、供給ポンプ及び／又は保持液ポンプよりも遅い流速を有する。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る保持液流量よりも少なくとも７倍大きい。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る保持液流量よりも少なくとも８倍大きい。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る保持液流量よりも少なくとも９倍大きい。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る保持液流量よりも少なくとも１０倍大きい。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る保持液流量よりも少なくとも１１倍大きい。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る保持液流量よりも少なくとも１２倍大きい。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る保持液流量よりも少なくとも７倍～１２倍大きい。
【0089】
一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る組成物保持液の流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量よりも少なくとも７倍少ない。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る組成物保持液の流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量よりも少なくとも８倍少ない。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る組成物保持液の流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量よりも少なくとも９倍少ない。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る組成物保持液の流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量よりも少なくとも１０倍少ない。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る組成物保持液の流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量よりも少なくとも１１倍少ない。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る組成物保持液の流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量よりも少なくとも１２倍少ない。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを出る組成物保持液の流量は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給液流量よりも少なくとも７ｘ～１２ｘ少ない。
【0090】
本発明者らはまた、驚くべきことに、ＴＦＦシステム（ＳＰＴＦＦシステムを含む）の特定の第三者プロバイダ／ベンダーにより提案されたものよりも低い流量、ひいては低い膜貫通圧によって、ウイルスベクター組成物についての増加した体積及び産物濃縮倍率がもたらされたことを発見した。特定の膜貫通圧力をもたらすために要求される流量は、膜総面積、膜の種類、細孔サイズ、膜流束、流路の合計長さ、保持液及び／又は透過液ライン上の追加のポンプの存在、ラインクランプなどを含む多くの要因の結果である。したがって、一部の実施形態では、供給ポンプは、約７５ｍｌ／分以下、約１００ｍｌ／分以下、約１５０ｍｌ／分以下、約２００ｍｌ／分以下、約２５０ｍｌ／分以下、約３００ｍｌ／分以下、約３５０ｍｌ／分以下、約４００ｍｌ／分以下、約４５０ｍｌ／分以下、又は約５００ｍｌ／分以下の流量を有する。一部の実施形態では、供給ポンプは、約７５ｍｌ／分～約１００ｍｌ／分、約７５ｍｌ／分～約１５０ｍｌ／分、約７５ｍｌ／分～約２００ｍｌ／分、約７５ｍｌ／分～約２５０ｍｌ／分、約７５ｍｌ／分～約３００ｍｌ／分、約７５ｍｌ／分～約３５０ｍｌ／分、約７５ｍｌ／分～約４００ｍｌ／分、約７５ｍｌ／分～約４５０ｍｌ／分、又は約７５ｍｌ／分～約５００ｍｌ／分の流量を有する。一部の実施形態では、供給ポンプは、約５０ｍｌ／分～約１００ｍｌ／分、約５０ｍｌ／分～約１５０ｍｌ／分、約５０ｍｌ／分～約２００ｍｌ／分、約５０ｍｌ／分～約２５０ｍｌ／分、約５０ｍｌ／分～約３００ｍｌ／分、約５０ｍｌ／分～約３５０ｍｌ／分、約５０ｍｌ／分～約４００ｍｌ／分、約５０ｍｌ／分～約４５０ｍｌ／分、又は約５０ｍｌ／分～約５００ｍｌ／分の流量を有する。一部の実施形態では、供給ポンプは、約２５ｍｌ／分～約１００ｍｌ／分、約２５ｍｌ／分～約１５０ｍｌ／分、約２５ｍｌ／分～約２００ｍｌ／分、約２５ｍｌ／分～約２５０ｍｌ／分、約２５ｍｌ／分～約３００ｍｌ／分、約２５ｍｌ／分～約３５０ｍｌ／分、約２５ｍｌ／分～約４００ｍｌ／分、約２５ｍｌ／分～約４５０ｍｌ／分、又は約２５ｍｌ／分～約５００ｍｌ／分の流量を有する。
【0091】
一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、膜貫通圧を減少させるために透過液ライン上のクランプを含む。一部の実施形態では、クランプは部分クランプである。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、保持液ライン上のクランプを含み、膜貫通圧を増加させる。一部の実施形態では、クランプは部分クランプである。部分クランプによって、保持液又は透過液の低下した体積が、クランプされたラインを通って流れることが可能になる。
【0092】
一部の実施形態では、膜を横切る供給液流量（例、ウイルスベクター組成物）が停止されて、それが透過する、又は浸透により膜を通して後方に拡散することを可能にしない。
【0093】
様々な実施形態では、本明細書において企図されるＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、保持タンク又は容器をさらに含む。保持タンク又は容器は、供給サンプル（例、ウイルスベクター組成物）が、システムの別の構成要素中に供給される前に保持されるシステム内の任意の位置に位置付けられてもよい。例えば、システムは、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール中に供給される前にウイルスベクター組成物を保持するように設計された中間保持タンクを含んでもよい。保持タンク又は容器はまた、限定しないが、媒質、緩衝剤、及び／又は添加剤を含む他の構成要素を保持するために使用されうる。
【0094】
様々な実施形態では、本明細書において企図する方法を実施するために有用なＳＰＴＦＦシステムは、ヌクレアーゼ及び／又は緩衝剤をウイルスベクター組成物に加えるための機構をさらに含む。一部の実施形態では、ヌクレアーゼ及び／又は緩衝液は、保持タンク又は容器中に保持される。一部の実施形態では、ヌクレアーゼ及び／又は緩衝液は、中間保持タンク（例、図３及び図４を参照）中のウイルスベクター組成物に加えられる。一部の実施形態では、トレハロース又はポロキサマーは、中間保持タンク中のウイルスベクター組成物に加えられる。一部の実施形態では、ポロキサマーはポロキサマー１８８である。一部の実施形態では、中間保持タンクは、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールの前に位置付けられる。一部の実施形態では、ヌクレアーゼ／緩衝液保持タンクは、中間保持タンクに流体接続される。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステムは、中間保持タンクに流体接続されたフィルター（例、限外濾過膜又はマイクロ濾過膜）を含む。一部の実施形態では、フィルターは、ヌクレアーゼ／緩衝液保持タンクと中間保持タンクの間に流体接続される。様々な実施形態では、ヌクレアーゼはエンドヌクレアーゼである。一部の実施形態では、ヌクレアーゼはセラチア・マルセセンスから由来している。好ましい実施形態では、ヌクレアーゼはＤｅｎｅｒａｓｅ（登録商標）である。
【0095】
様々な実施形態では、本明細書において企図する方法を実施するために有用なＳＰＴＦＦシステムは、透析濾過構成要素をさらに含む。一部の実施形態では、透析濾過構成要素はシングルパス透析濾過（ＳＰＤＦ）構成要素である。一部の実施形態では、透析濾過緩衝液（例、製剤緩衝液）は、透析濾過構成要素に流体接続されたタンク又は容器中に保持される。一部の実施形態では、透析濾過構成要素は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールの後に位置付けられる。一部の実施形態では、透析濾過構成要素は、ＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジを含む。
【0096】
様々な実施形態では、本明細書において企図する方法を実施するために有用なＳＰＴＦＦシステムは、クロマトグラフィー構成要素をさらに含む。好ましい実施形態では、クロマトグラフィー構成要素は、研磨クロマトグラフィー構成要素及び／又は工程である。本明細書中で使用する用語「研磨クロマトグラフィー」は、ＳＰＴＦＦシステム構成要素及び関連する方法を指し、それらはクロマトグラフィーを使用し、組成物が他の精製／濾過工程（例、任意のＳＰＴＦＦ濾過モジュール／工程）を通過した後、ウイルスベクター組成物中の任意の残留不純物又は凝集体を除去する。
【0097】
一部の実施形態では、研磨クロマトグラフィー構成要素及び／又は方法工程は、フロースルークロマトグラフィーを含む。本明細書中で使用する用語「フロースルークロマトグラフィー」は、溶液が、不純物を結合するカラム上を流れる一方で、所望の産物／分子／ベクターがカラムに実質的に結合しない（即ち、カラムを通じて流れる）、産物を精製又は濃縮するためのクロマトグラフィー構成要素又は関連する方法工程を指す。一部の実施形態では、フロースルークロマトグラフィー又は研磨クロマトグラフィーは、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、もしくは疎水性相互作用クロマトグラフィー、又はそれらの組み合わせを含むが、これに限定しない、不純物を結合及び除去するための一つ以上の分離機構を含む。
【0098】
一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、一つを上回る研磨クロマトグラフィー工程を含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、二つ以上の研磨クロマトグラフィー工程を含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、三つ以上の研磨クロマトグラフィー工程を含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、一つ、二つ、又は三つの研磨クロマトグラフィー工程を含む。
【0099】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、一次精製及び／又は濃縮工程又は構成要素としての捕捉又は親和性クロマトグラフィー工程又は構成要素を含まない。典型的な精製／濃縮システムでは、一次精製／濃縮工程は、精製／濃縮システム又は方法内の第一濾過工程である。したがって、一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、第一濾過工程又は構成要素としての捕捉又は親和性クロマトグラフィー工程又は構成要素を含まない。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、捕捉又は親和性クロマトグラフィー工程又は構成要素を含まない。
【0100】
本明細書中で使用するように、用語「捕捉クロマトグラフィー」又は「親和性クロマトグラフィー」は、カラムへの、及びカラムからの所望の産物（例、ウイルス粒子）の結合及び溶出を含む、クロマトグラフィー構成要素、又は関連する方法工程を指す。捕捉又は親和性クロマトグラフィーは、典型的には、分析物と特定の分子（例、クロマトグラフィー媒質に結合された特定のリガンド）の間での選択的な非共有結合性相互作用を使用する。例えば、捕捉又は親和性クロマトグラフィーは、プロテインＧ、抗体、特異的基質、リガンド又は抗原を捕捉試薬として使用しうる。
【0101】
様々な実施形態では、本明細書において企図するＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、追加のフィルターを含む。一部の実施形態では、フィルターは最終フィルター（即ち、システム又は方法における最後のフィルター）である。一部の実施形態では、フィルターは滅菌フィルターである。一部の実施形態では、フィルターはマイクロ濾過膜を含む。一部の実施形態では、フィルターは限外濾過膜を含む。一部の実施形態では、フィルターはナノ濾過膜を含む。一部の実施形態では、フィルターは０．２２μｍのフィルターである。
【0102】
様々な実施形態では、本明細書において企図するＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、バイアル充填構成要素及び／又は方法工程を含む。
【0103】
Ｄ．ＳＰＴＦＦ濾過モジュール
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、一つ以上のＳＰＴＦＦ濾過モジュールを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、ＴＦＦカセット及び／又は中空繊維カートリッジを含む。一部の実施形態では、カセット及び／又はカートリッジは、１）並列、２）直列、又は３）並列及び直列の両方（例、バルブ、ガスケット、ダイバータープレート、マニホールド、マニホールドセグメント、あるいは、及び／又は導管を使用して）を処理するために構成される。
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、一つ以上のＳＰＴＦＦ濾過モジュールを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、ＴＦＦカセット及び／又は中空繊維カートリッジを含む。一部の実施形態では、カセット及び／又はカートリッジは、１）並列、２）直列、又は３）並列及び直列の両方（例、バルブ、ガスケット、ダイバータープレート、マニホールド、マニホールドセグメント、あるいは、及び／又は導管を使用して）を処理するために構成される。
【0104】
表現「並列処理」、「並列で処理している」、「並列操作」、「並列で操作する」、「並列で操作している」、「並列での操作」、「並列で組み立てる」、「並列での処理用に構成される」、及び「並列構成」は、ＳＰＴＦＦシステム中の供給サンプル（例、ウイルスベクター組成物）を、その後の接線流濾過のために同時にアセンブリにおいて二つ以上の濾過構成要素（例、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール、ＴＦＦカセット、中空繊維カートリッジ）に分配させることを指す。
【0105】
表現「直列処理」、「直列で処理している」、「直列操作」、「直列で操作する」、及び「直列で操作している」、「直列での操作」、「直列で組み立てる」、「直列での処理用に構成される」、及び「直列構成」は、ＳＰＴＦＦシステム中の供給サンプル（例、ウイルスベクター組成物）を、一つの濾過構成要素（例、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール、ＴＦＦカセット、中空繊維カートリッジ）を一度に分配させることを指し、前述の構成要素の前記保持液流が、その後の隣接した構成要素のための供給流としての役割を果たすようにする。
【0106】
一部の実施形態では、供給を、いくつかのカセット又はカートリッジの間で並列に（例、グループ又は段階で）分割し、カセット又はカートリッジのいくつかのグループを直列に連結する。
【0107】
好ましくは、並列での処理のために構成されるカセット又はカートリッジは、直列での処理のために構成されるカセット又はカートリッジの前にある。特定の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム中のＳＰＴＦＦ濾過モジュールの全てが、直列（例、図１Ａ及び図１Ｂを参照）での処理のために構成される最後の二つのカセット又はカートリッジを除いて、並列での処理のために構成されるカセット（例、並列で構成された、及び直列で連結されたカセット又はカートリッジの一つ以上のグループ又は段階）を有する。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム中のＳＰＴＦＦ濾過モジュールの全てが、直列での処理のために構成される最後のカセット又はカートリッジを除いて、並列での処理のために構成されたカセット（例、並列で構成された、及び直列で連結されたカセット又はカートリッジの一つ以上のグループ又は段階）を有する。好ましい実施形態では、有効膜面積は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールを通じた流路に沿って減少する。
【0108】
用語「有効膜面積」は、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール内の流路に沿った任意の所与の段階／点でのＴＦＦ膜の総面積を指す。例えば、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールがＴＦＦカセットを含む、又は中空繊維カートリッジが並列での処理のために構成される場合（例、図１Ａ中の段階１～２、及び図１Ｂ中の段階１～４を参照）、次に有効膜面積は、流路に沿った任意の所与の段階又は工程での全てのカセット又はカートリッジの膜面積の総和である。
【0109】
図１Ａに示すように、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、４つの段階を含む流路を有する。第一段階では、組成物は、並列での処理のために構成された三つのＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジを通じて流れる。このように、段階１での有効膜面積は、全ての三つのＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジの膜面積の総和である。第二段階では、組成物は、並列での処理のために構成された二つのＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジを通じて流れる。段階２での有効膜面積は、二つのＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジの膜面積の総和である。第三段階及び第四段階で、組成物は、連続的に処理するよう構成された二つの単一のＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジを通じて流れる。段階３及び４の各々での有効膜面積は、各ＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジの膜面積と等しい。したがって、図１Ａ及び１Ｂに示すように、有効膜面積は、一般的に、ＳＰＴＦＦ濾過モジュール内の供給サンプル（例、ウイルスベクター組成物）の流路に沿って減少する。
【0110】
あるいは、一つ以上のＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジは、異なる有効膜面積を有してもよく、減少する順序で組み立ててもよい。例えば、図２Ａ及び図２Ｂに示すように、ＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジは、直列で、及び各段階での有効膜面積の減少する順序で処理するよう構成される。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、図１Ａ－１Ｂ及び図２Ａ－２Ｂに示す両方のシステムの態様を含んでもよい。例えば、一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、異なる有効膜サイズ及び並列アセンブリを有するＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジの両方を含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、異なる有効な膜サイズを有し、並列及び直列で組み立てられたＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジを含む。
【0111】
様々な実施形態では、構成（即ち、並列又は直列構成）に依存して、一つ以上のＴＦＦカセット及び／又は中空繊維カートリッジは、約０．０１ｍ２、約０．０１５ｍ２、約０．０２ｍ２、約０．０２５ｍ２、約０．０３ｍ２、約０．０３５ｍ２、約０．０４ｍ２、約０．０４５ｍ２、約０．０５ｍ２、約０．０５５ｍ２、約０．０６ｍ２、約０．０６５ｍ２、約０．０７ｍ２、約０．０７５ｍ２、約０．０８ｍ２、約０．０８５ｍ２、約０．０９ｍ２、約０．０９５ｍ２、約０．１ｍ２、約０．１１ｍ２、約０．１２ｍ２、約０．１３ｍ２、約０．１４ｍ２、約０．１５ｍ２、約０．１６ｍ２、約０．１７ｍ２、約０．１８ｍ２、約０．１９ｍ２、約０．２０ｍ２、約０．２１ｍ２、約０．２２ｍ２、約０．２３ｍ２、約０．２４ｍ２、約０．２５ｍ２、約０．２６ｍ２、約０．２７ｍ２、約０．２８ｍ２、約０．２９ｍ２、約０．３０ｍ２、約０．３１ｍ２、約０．３２ｍ２、約０．３３ｍ２、約０．３４ｍ２、約０．３５ｍ２、約０．４０ｍ２、約０．４５ｍ２、約０．５０ｍ２、約０．５５ｍ２、約０．６０ｍ２、約０．６５ｍ２、約０．７０ｍ２、約０．７５ｍ２、約０．８０ｍ２、約０．８５ｍ２、約０．９０ｍ２、約０．９５ｍ２、約１．０ｍ２、約１．１ｍ２、約１．２ｍ２、約１．３ｍ２、約１．４ｍ２、約１．５ｍ２、約１．６ｍ２、約１．７ｍ２、約１．８ｍ２、約１．９ｍ２、約２．０ｍ２、約２．１ｍ２、約２．２ｍ２、約２．３ｍ２、約２．４ｍ２、約２．５ｍ２、約３．０ｍ２、約３．５ｍ２、約４．０ｍ２、約４．５ｍ２、約５．０ｍ２、約６．０ｍ２、約６．５ｍ２、約７．０ｍ２、約７．５ｍ２、約８．０ｍ２、約８．５ｍ２、約９．０ｍ２、約９．５ｍ２、約又は１０ｍ２であるの有効膜面積を含む。
【0112】
様々な実施形態では、 構成（即ち、並列又は直列構成）に依存して、一つ以上のＴＦＦカセット及び／又は中空繊維カートリッジは、約０．０１ｍ２～約１０ｍ２、約０．０１５ｍ２～約１０ｍ２、約０．０２ｍ２～約１０ｍ２、約０．０２５ｍ２～約１０ｍ２、約０．０３ｍ２～約１０ｍ２、約０．０３５ｍ２～約１０ｍ２、約０．０４ｍ２～約１０ｍ２、約０．０４５ｍ２～約１０ｍ２、約０．０５ｍ２～約１０ｍ２、約０．０５５ｍ２～約１０ｍ２、約０．０６ｍ２～約１０ｍ２、約０．０６５ｍ２～約１０ｍ２、約０．０７ｍ２～約１０ｍ２、約０．０７５ｍ２～約１０ｍ２、約０．０８ｍ２～約１０ｍ２、約０．０８５ｍ２～約１０ｍ２、約０．０９ｍ２～約１０ｍ２、約０．０９５ｍ２～約１０ｍ２、約０．１ｍ２～約１０ｍ２、約０．１１ｍ２～約１０ｍ２、約０．１２ｍ２～約１０ｍ２、約０．１３ｍ２～約１０ｍ２、約０．１４ｍ２～約１０ｍ２、約０．１５ｍ２～約１０ｍ２、約０．１６ｍ２～約１０ｍ２、約０．１７ｍ２～約１０ｍ２、約０．１８ｍ２～約１０ｍ２、約０．１９ｍ２～約１０ｍ２、約０．２０ｍ２～約１０ｍ２、約０．２１ｍ２～約１０ｍ２、約０．２２ｍ２～約１０ｍ２、約０．２３ｍ２～約１０ｍ２、約０．２４ｍ２～約１０ｍ２、約０．２５ｍ２～約１０ｍ２、約０．２６ｍ２～約１０ｍ２、約０．２７ｍ２～約１０ｍ２、約０．２８ｍ２～約１０ｍ２、約０．２９ｍ２～約１０ｍ２、約０．３０ｍ２～約１０ｍ２、約０．３１ｍ２～約１０ｍ２、約０．３２ｍ２～約１０ｍ２、約０．３３ｍ２～約１０ｍ２、約０．３４ｍ２～約１０ｍ２、約０．３５ｍ２～約１０ｍ２、約０．４０ｍ２～約１０ｍ２、約０．４５ｍ２～約１０ｍ２、約０．５０ｍ２～約１０ｍ２、約０．５５ｍ２～約１０ｍ２、約０．６０ｍ２～約１０ｍ２、約０．６５ｍ２～約１０ｍ２、約０．７０ｍ２～約１０ｍ２、約０．７５ｍ２～約１０ｍ２、約０．８０ｍ２～約１０ｍ２、約０．８５ｍ２～約１０ｍ２、約０．９０ｍ２～約１０ｍ２、約０．９５ｍ２～約１０ｍ２、約１．０ｍ２～約１０ｍ２、約１．１ｍ２～約１０ｍ２、約１．２ｍ２～約１０ｍ２、約１．３ｍ２～約１０ｍ２、約１．４ｍ２～約１０ｍ２、約１．５ｍ２～約１０ｍ２、約１．６ｍ２～約１０ｍ２、約１．７ｍ２～約１０ｍ２、約１．８ｍ２～約１０ｍ２、約１．９ｍ２～約１０ｍ２、約２．０ｍ２～約１０ｍ２、約２．１ｍ２～約１０ｍ２、約２．２ｍ２～約１０ｍ２、約２．３ｍ２～約１０ｍ２、約２．４ｍ２～約１０ｍ２、約２．５ｍ２～約１０ｍ２、約３．０ｍ２～約１０ｍ２、約３．５ｍ２～約１０ｍ２、約４．０ｍ２～約１０ｍ２、約４．５ｍ２～約１０ｍ２、約５．０ｍ２～約１０ｍ２、約６．０ｍ２～約１０ｍ２、約６．５ｍ２～約１０ｍ２、約７．０ｍ２～約１０ｍ２、約７．５ｍ２～約１０ｍ２、約８．０ｍ２～約１０ｍ２、約８．５ｍ２～約１０ｍ２、約９．０ｍ２～約１０ｍ２、約９．５ｍ２～約１０ｍ２、約又は１０ｍ２の有効膜面積を含む。
【0113】
様々な実施形態では、構成（即ち、並列又は直列構成）に依存して、一つ以上のＴＦＦカセット及び／又は中空繊維カートリッジは、約０．０１ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０１５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０２ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０２５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０３ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０３５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０４ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０４５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０５５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０６ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０６５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０７ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０７５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０８ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０８５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０９ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．０９５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．１ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．１１ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．１２ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．１３ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．１４ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．１５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．１６ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．１７ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．１８ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．１９ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．２０ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．２１ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．２２ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．２３ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．２４ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．２５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．２６ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．２７ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．２８ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．２９ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．３０ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．３１ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．３２ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．３３ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．３４ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．３５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．４０ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．４５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．５０ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．５５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．６０ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．６５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．７０ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．７５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．８０ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．８５ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．９０ｍ２、約０．０１ｍ２～約０．９５ｍ２、約０．０１ｍ２～約１．０ｍ２、約０．０１ｍ２～約１．１ｍ２、約０．０１ｍ２～約１．２ｍ２、約０．０１ｍ２～約１．３ｍ２、約０．０１ｍ２～約１．４ｍ２、約０．０１ｍ２～約１．５ｍ２、約０．０１ｍ２～約１．６ｍ２、約０．０１ｍ２～約１．７ｍ２、約０．０１ｍ２～約１．８ｍ２、約０．０１ｍ２～約１．９ｍ２、約０．０１ｍ２～約２．０ｍ２、約０．０１ｍ２～約２．１ｍ２、約０．０１ｍ２～約２．２ｍ２、約０．０１ｍ２～約２．３ｍ２、約０．０１ｍ２～約２．４ｍ２、約０．０１ｍ２～約２．５ｍ２、約０．０１ｍ２～約３．０ｍ２、約０．０１ｍ２～約３．５ｍ２、約０．０１ｍ２～約４．０ｍ２、約０．０１ｍ２～約４．５ｍ２、約０．０１ｍ２～約５．０ｍ２、約０．０１ｍ２～約６．０ｍ２、約０．０１ｍ２～約６．５ｍ２、約０．０１ｍ２～約７．０ｍ２、約０．０１ｍ２～約７．５ｍ２、約０．０１ｍ２～約８．０ｍ２、約０．０１ｍ２～約８．５ｍ２、約０．０１ｍ２～約９．０ｍ２、約０．０１ｍ２～約９．５ｍ２、約又は１０ｍ２の有効膜面積を含む。
【0114】
一部の実施形態では、構成（即ち、並列又は直列構成）に依存して、ＴＦＦカセット及び／又は中空繊維カートリッジは、０．０１ｍ２、０．０１５ｍ２、０．０２ｍ２、０．０２５ｍ２、０．０３ｍ２、０．０３５ｍ２、０．０４ｍ２、０．０４５ｍ２、０．０５ｍ２、０．０５５ｍ２、０．０６ｍ２、０．０６５ｍ２、０．０７ｍ２、０．０７５ｍ２、０．０８ｍ２、０．０８５ｍ２、０．０９ｍ２、０．０９５ｍ２、０．１ｍ２、０．１１ｍ２、０．１２ｍ２、０．１３ｍ２、０．１４ｍ２、０．１５ｍ２、０．１６ｍ２、０．１７ｍ２、０．１８ｍ２、０．１９ｍ２、０．２０ｍ２、０．２１ｍ２、０．２２ｍ２、０．２３ｍ２、０．２４ｍ２、０．２５ｍ２、０．２６ｍ２、０．２７ｍ２、０．２８ｍ２、０．２９ｍ２、０．３０ｍ２、０．３１ｍ２、０．３２ｍ２、０．３３ｍ２、０．３４ｍ２、０．３５ｍ２、０．４０ｍ２、０．４５ｍ２、０．５０ｍ２、０．５５ｍ２、０．６０ｍ２、０．６５ｍ２、０．７０ｍ２、０．７５ｍ２、０．８０ｍ２、０．８５ｍ２、０．９０ｍ２、０．９５ｍ２、１．０ｍ２、１．１ｍ２、１．２ｍ２、１．３ｍ２、１．４ｍ２、１．５ｍ２、１．６ｍ２、１．７ｍ２、１．８ｍ２、１．９ｍ２、２．０ｍ２、２．１ｍ２、２．２ｍ２、２．３ｍ２、２．４ｍ２、２．５ｍ２、３．０ｍ２、３．５ｍ２、４．０ｍ２、４．５ｍ２、５．０ｍ２、６．０ｍ２、６．５ｍ２、７．０ｍ２、７．５ｍ２、８．０ｍ２、８．５ｍ２、９．０ｍ２、９．５ｍ２、又は１０ｍ２の有効膜面積を含む。
【0115】
本明細書において企図する特定の実施形態での使用のために適切な膜（例、フラットシート又は中空繊維）は、当技術分野において公知の様々な異なる基材又はポリマーで作製されてもよい。例えば、一部の実施形態では、ＴＦＦカセット又は中空繊維カートリッジは、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリビニリデンフルオリド、修飾セルロース、再生セルロース、デルタ再生セルロース、セルロースアセテート、及び／又は当業者に公知の他のポリマーもしくは基材で作製された膜を含む。一部の実施形態では、膜はポリスルホン膜である。一部の実施形態では、膜はポリエーテルスルホン膜である。一部の実施形態では、膜はポリ（メチルメタクリレート）膜である。一部の実施形態では、膜はポリフッ化ビニリデン膜である。一部の実施形態では、膜は修飾セルロース膜である。一部の実施形態では、膜は再生セルロース膜である。一部の実施形態では、膜はデルタ再生セルロース膜である。一部の実施形態では、膜はセルロースアセテート膜である。
【0116】
様々な実施形態では、膜は、約１ｋＤａ、約５ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約２００ ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約４００ｋＤａ、又は約５００ｋＤａの平均分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を含む。一部の実施形態では、膜は、約３０ｋＤａの平均分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を含む。一部の実施形態では、膜は、約３００ｋＤａの平均分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を含む。
【0117】
一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を含む。一部の実施形態では、膜は、約５ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１０ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約２０ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約３０ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約４０ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約５０ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約６０ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約７０ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約８０ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約９０ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１００ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約２００ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約３００ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約４００ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。
【0118】
一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約５ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約１０ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約２０ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約３０ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約４０ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約５０ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約６０ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約７０ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約９０ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約１００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約２００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約３００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約４００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。一部の実施形態では、膜は、約１ｋＤａ～約５００ｋＤａの平均ＭＷＣＯを含む。
【0119】
様々な実施形態では、膜は、約０．０１μｍ、約０．０２μｍ、約０．０３μｍ、約０．０４μｍ、約０．０５μｍ、約０．０６μｍ、約０．０７μｍ、約０．０８μｍ、約０．０９μｍ、約０．１μｍ、約０．１５μｍ、約０．２μｍ、約０．２５μｍ、約０．３μｍ、約０．３５μｍ、約０．４μｍ、約０．４５μｍ、約０．５μｍ、約０．５５μｍ、約０．６μｍ、約０．６５μｍ、約０．７μｍ、約０．７５μｍ、約０．８μｍ、約０．８５μｍ、約０．９μｍ、約０．９５μｍ、又は約１．０μｍの平均細孔径を含む。様々な実施形態では、膜は、０．０１μｍ、０．０２μｍ、０．０３μｍ、０．０４μｍ、０．０５μｍ、０．０６μｍ、０．０７μｍ、０．０８μｍ、０．０９μｍ ０．１μｍ、０．１５μｍ、０．２μｍ、０．２５μｍ、０．３μｍ、０．３５μｍ、０．４μｍ、０．４５μｍ、０．５μｍ、０．５５μｍ、０．６μｍ、０．６５μｍ、０．７μｍ、０．７５μｍ、０．８μｍ、０．８５μｍ、０．９μｍ、０．９５μｍ、又は１．０μｍの平均細孔径を含む。
【0120】
様々な実施形態では、膜は、約０．０１μｍ～約１．０μｍ、約０．０２μｍ～約１．０μｍ、約０．０３μｍ～約１．０μｍ、約０．０４μｍ～約１．０μｍ、約０．０５μｍ～約１．０μｍ、約０．０６μｍ～約１．０μｍ、約０．０７μｍ～約１．０μｍ、約０．０８μｍ～約１．０μｍ、約０．０９μｍ～約１．０μｍ、約０．１μｍ～約１．０μｍ、約０．１５μｍ～約１．０μｍ、約０．２μｍ～約１．０μｍ、約０．２５μｍ～約１．０μｍ、約０．３μｍ～約１．０μｍ、約０．３５μｍ～約１．０μｍ、約０．４μｍ～約１．０μｍ、約０．４５μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約１．０μｍ、約０．５５μｍ～約１．０μｍ、約０．６μｍ～約１．０μｍ、約０．６５μｍ～約１．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．７５μｍ～約１．０μｍ、約０．８μｍ～約１．０μｍ、約０．８５μｍ～約１．０μｍ、約０．９μｍ～約１．０μｍ、又は約０．９５μｍ～約１．０μｍの平均細孔径を含む。
【0121】
様々な実施形態では、膜は、約０．０１μｍ～約０．０２μｍ、約０．０１μｍ～約０．０３μｍ、約０．０１μｍ～約０．０４μｍ、約０．０１μｍ～約０．０５μｍ、約０．０１μｍ～約０．０６μｍ、約０．０１μｍ～約０．０７μｍ、約０．０１μｍ～約０．０８μｍ、約０．０１μｍ～約０．０９μｍ、約０．０１μｍ～約０．１μｍ、約０．０１μｍ～約０．１５μｍ、約０．０１μｍ～約０．２μｍ、約０．０１μｍ～約０．２５μｍ、約０．０１μｍ～約０．３μｍ、約０．０１μｍ～約０．３５μｍ、約０．０１μｍ～約０．４μｍ、約０．０１μｍ～約０．４５μｍ、約０．０１μｍ～約０．５μｍ、約０．０１μｍ～約０．５５μｍ、約０．０１μｍ～約０．６μｍ、約０．０１μｍ～約０．６５μｍ、約０．０１μｍ～約０．７μｍ、約０．０１μｍ～約０．７５μｍ、約０．０１μｍ～約０．８μｍ、約０．０１μｍ～約０．８５μｍ、約０．０１μｍ～約０．９μｍ、約０．０１μｍ～約０．９５μｍ、又は約０．０１μｍ～約１．０μｍの平均細孔径を含む。
【0122】
一部の実施形態では、膜はマイクロ濾過膜である。
【0123】
一部の実施形態では、膜は限外濾過膜である。
【0124】
一部の実施形態では、膜はナノ濾過膜である。
【0125】
本明細書中の特定の実施形態において企図される方法のために有用である例示的なＴＦＦカセットには、限定しないが、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（マサチューセッツ州バーリントン）、Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ニューヨーク州ポートワシントン）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ニュージャージー州ピスカタウェイ）、及びＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ（ニューヨーク州ボヘミア）により供給されるＴＦＦカセットが含まれる。例示的なＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ＴＦＦカセットには、限定しないが、Ｂｉｏｍａｘ（商標）膜、Ｕｌｔｒａｃｅｌ（商標）膜、又はＤｕｒａｐｏｒｅ（登録商標）膜を伴うＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）カセット（例、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）２カセット、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）２ミニカセット、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）２Ｍａｘｉカセット、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）３カセット）が含まれる。Ｐａｌｌ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのＴＦＦカセットの例には、限定しないが、Ｃｅｎｔｒａｓｅｔｔｅ（商標）カセット及びＣａｄｅｎｃｅ（商標）単回使用カセットが含まれる。例示的なＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＴＦＦカセットには、限定しないが、Ｋｖｉｃｋ（商標）フローカセットが含まれる。例示的なＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧカセットには、限定しないが、Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ（登録商標）カセットが含まれる。
【0126】
エンドプレート又はカセットホルダは、一般的に、ＴＦＦカセットをＳＰＴＦＦ濾過モジュール内に保持又は密封するために使用される。エンドプレート及びカセットホルダは、特定のカセットと使用するために取り付けることができる。本明細書中の特定の実施形態において企図する方法で用いられるＳＰＴＦＦシステムでの使用に適した市販のエンドプレート及びカセットホルダの例としては、限定しないが、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）カセットホルダ（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マサチューセッツ州バーリントン）、例えば、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）２ミニホルダ、アクリルＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）ホルダ、ステンレス鋼Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）ホルダ、過程スケールＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）ホルダなどが含まれる。他の適したカセットホルダとして、以下に限定しないが、Ｃｅｎｔｒａｍａｔｅ（商標）ＴＦＦ膜カセットホルダ、Ｃｅｎｔｒａｓｅｔｔｅ（商標）ＴＦＦ膜カセットホルダ、Ｍａｘｉｍａｔｅ（商標）ＴＦＦ膜カセットホルダ、及びＭａｘｉｓｅｔｔｅ（商標）ＴＦＦ膜カセットホルダ（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ニューヨーク州ポートワシントン）が含まれる。一部の実施形態では、既存のカセットホルダ（例、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）カセットホルダ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を、特定の実施形態での使用のために、本明細書中に記載するＳＰＴＦＦシステムで機能するように改変することができる。
【0127】
本明細書において企図する特定の実施形態で有用な中空繊維ＴＦＦカートリッジの例として、限定しないが、Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ニューヨーク州ポートワシントン）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ニュージャージー州ピスカタウェイ）、及びＲｅｐｌｉｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（マサチューセッツ州ウォルサム）により供給される中空繊維カートリッジが含まれる。Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの中空繊維カートリッジの例として、限定しないが、Ｍｉｃｒｏｚａ（商標）カートリッジが含まれる。例示的なＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ中空繊維ＴＦＦカートリッジには、限定しないが、ＭａｘＣｅｌｌ（商標）カートリッジ、ＰｒｏＣｅｌｌ（商標）カートリッジ、ＭｉｄＧｅｅ（商標）カートリッジ、Ｘａｍｐｌｅｒ（商標）カートリッジ、ＲｅａｄｙＴｏＰｒｏｃｅｓｓ（商標）使い捨てカートリッジ、ならびに様々な他の実験室及び過程スケールカートリッジが含まれる。例示的なＲｅｐｌｉｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの中空繊維カートリッジには、限定しないが、ＭｉｃｒｏＫｒｏｓ（商標）、ＭｉｄｉＫｒｏｓ（商標）、ＭｉｄｉＫｒｏｓ ＴＣ（商標）、ＭｉｎｉＫｒｏｓ（商標）、ＫｒｏｓＦｌｏ（商標）、又は ＫｒｏｓＦｌｏｗ Ｍａｘ（商標）カートリッジが含まれる。
【0128】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦシステム構成要素は、使い捨てであることができる。ＳＰＴＦＦアセンブリの使い捨て構成要素の例として、限定しないが、ＴＦＦ用Ｍｏｂｉｕｓ（登録商標）ＦｌｅｘＲｅａｄｙ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マサチューセッツ州バーリントン）用のＦｌｅｘｗａｒｅ（登録商標）アセンブリの構成要素が含まれる。ＳＰＴＦＦアセンブリのその他の使い捨て構成要素として、例えば、Ａｌｌｅｇｒｏ（商標）ＴＦＦアセンブリ（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ニューヨーク州ポートワシントン）の構成要素が含まれる。
【0129】
任意の特定の理論により束縛されることを望まないが、本明細書において企図するＳＰＴＦＦシステム及び方法の一つの利点は、低膜貫通圧（ＴＭＰ）によって体積及び産物濃縮倍率（それぞれＶＣＦ及びＰＣＦ）が改善される（例、増加される）という驚くべき発見である。
【0130】
用語「膜貫通圧」又は「ＴＭＰ」は、膜の二つの側面間での圧力における差を指す。ＴＭＰ圧力は、例えば、気圧バー又は平方インチ当たりのポンド（ｐｓｉ）で測定することができる。平均ＴＭＰは、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールに入る供給圧力及びＳＰＴＦＦ濾過モジュールから出る保持圧力の合計を２で割り、透過圧力を減算することにより算出することができる。ＴＭＰ＝供給圧力＋保持圧力）／２－透過圧力。
【0131】
用語「体積濃縮倍率」又は「ＶＣＦ」は、体積における倍率変化（例、低下）を指す。ＶＣＦは、初期組成物体積を最終組成物体積で割ることによって算出することができる。ＶＣＦ＝初期体積／最終体積。
【0132】
用語「産物濃縮倍率」、「産物ＣＦ」、「ＰＣＦ」、「粒子濃縮倍率」、又は「ウイルス粒子濃縮倍率」は、産物濃度（例、ウイルス粒子濃度）の倍率変化（例、増加）を指す。ＰＣＦは、最終産物濃度を初期産物濃度で割ることによって算出することができる。ＰＣＴ＝最終産物濃度／初期産物濃度。
【0133】
様々な実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１０ｐｓｉ以下、約９ｐｓｉ以下、約８ｐｓｉ以下、約７ｐｓｉ以下、約６ｐｓｉ以下、約５ｐｓｉ以下、約４ｐｓｉ以下、約３ｐｓｉ以下、又は約２ｐｓｉ以下のＴＭＰを含む。
【0134】
一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１０ｐｓｉ以下の平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約９ｐｓｉ以下の平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約８ｐｓｉ以下の平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過は、約７ｐｓｉ以下の平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約６ｐｓｉ以下の平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約５ｐｓｉ以下の平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約４ｐｓｉ以下の平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約３ｐｓｉ以下の平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約２ｐｓｉ以下の平均ＴＭＰを含む。
【0135】
一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１ｐｓｉ～約１０ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１ｐｓｉ～約９ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１ｐｓｉ～約８ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１ｐｓｉ～約７ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１ｐｓｉ～約６ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１ｐｓｉ～約５ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１ｐｓｉ～約４ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１ｐｓｉ～約３ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約１ｐｓｉ～約２ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。
【0136】
一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約２ｐｓｉ～約１０ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約２ｐｓｉ～約９ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約２ｐｓｉ～約８ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約２ｐｓｉ～約７ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約２ｐｓｉ～約６ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約２ｐｓｉ～約５ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約２ｐｓｉ～約４ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。一部の実施形態では、ＳＰＴＦＦ濾過モジュールは、約２ｐｓｉ～約３ｐｓｉの平均ＴＭＰを含む。
【0137】
Ｅ．ウイルスベクター
特定の実施形態では、本明細書において企図するＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、精製及び／又は濃縮されたウイルスベクターを製造するために使用される。特定の実施形態では、この組成物は、治療用導入遺伝子又はタンパク質、例えば、グロビン又は操作された抗原受容体をコードする一つ以上のウイルスベクターを含む。ウイルスベクターの例示的な例には、限定しないが、以下から由来するベクターが含まれる：アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、例えば、レンチウイルス（例、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２）、単純ヘルペスウイルス、例えば、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２）、アネロベクター、又はワクシニアウイルス。特定の実施形態では、ウイルスベクターは、治療用導入遺伝子又は治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。
特定の実施形態では、本明細書において企図するＳＰＴＦＦシステム及び関連する方法は、精製及び／又は濃縮されたウイルスベクターを製造するために使用される。特定の実施形態では、この組成物は、治療用導入遺伝子又はタンパク質、例えば、グロビン又は操作された抗原受容体をコードする一つ以上のウイルスベクターを含む。ウイルスベクターの例示的な例には、限定しないが、以下から由来するベクターが含まれる：アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、例えば、レンチウイルス（例、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２）、単純ヘルペスウイルス、例えば、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２）、アネロベクター、又はワクシニアウイルス。特定の実施形態では、ウイルスベクターは、治療用導入遺伝子又は治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。
【0138】
様々な実施形態では、ウイルスベクターは、治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。様々な実施形態では、ウイルスベクターは、操作されたαβＴＣＲ、操作されたγδＴＣＲ、二量体化剤調節免疫受容体複合体（ＤＡＲＩＣ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）、二重特異的Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）、ゼタカイン受容体、キメラＴＧＦβ受容体（ＣＴＢＲ）、βグロビンタンパク質、ＡＢＣＤ１ポリペプチド、エリスロポエチン受容体又はその断片、エンドヌクレアーゼ、あるいはｍｅｇａＴＡＬをコードするポリヌクレオチドを含む。
【0139】
様々な実施形態では、ウイルスベクターは、グロビン、ヒトグロビン、ヒトβグロビン、ヒトδグロビン、ヒトγグロビン、ヒト抗シッキングβグロビン、又はヒトβＡ－Ｔ８７Ｑ－グロビン、ヒトβＡ－Ｇ１６Ｄ／Ｅ２２Ａ／Ｔ８７Ｑ－グロビン、及びヒト βＡ－Ｔ８７Ｑ／Ｋ９５Ｅ／Ｋ１２０Ｅ－グロビンをコードするポリヌクレオチドを含む。
【0140】
様々な実施形態では、治療用タンパク質は、アルファ葉酸受容体（ＦＲα）、αｖβ６インテグリン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ６、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＣＣＲ１、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５（ｆｍｃ様チロシンキナーゼ３としても公知である；ＦＬＴ３）、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、クローディン－６（ＣＬＤＮ６）、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）、ＣＤ２サブセット１（ＣＳ－１）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４（ＣＳＰＧ４）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫関連抗原１（ＣＴＡＧＥ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、上皮糖タンパク質２（ＥＧＰ２）、上皮糖タンパク質４０（ＥＧＰ４０）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、エフリンＡ型受容体２（ＥＰＨＡ２）、繊維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、胎児アセチルコリンエステラーゼ受容体（ＡｃｈＲ）、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を含むＥＧＦＲファミリー、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１３Ｒα２、カッパ、がん／精巣抗原２（ＬＡＧＥ－１Ａ）、ラムダ、ルイス－Ｙ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１－ＣＡＭ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、黒色腫抗原遺伝子（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥＡ１０、Ｔ細胞１（ＭｅｌａｎＡ又はＭＡＲＴ１）によって認識される黒色腫抗原、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、がん／精巣抗原１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）、ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、黒色腫で優位に発現された抗原（ＰＲＡＭＥ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＭＡ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）、サバイビン、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ－３）、ＴＰ５３（Ｐ５３）、腫瘍抗原ｐ５３、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、トロホブラスト糖タンパク質（ＴＰＢＧ）、ＮＫＧ２Ｄリガンド、血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、並びにウィルムス腫瘍１（ＷＴ－１）からなる群から選択される、標的抗原と結合する、操作された抗原受容体である。
【0141】
様々な実施形態では、ウイルスベクターは、ｓｈＲＮＡ、ｓｈｍｉＲ、又はガイドＲＮＡをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ｓｈＲＮＡ、ｓｈｍｉＲ、又はガイドＲＮＡは、ＢＣＬ１１Ａ遺伝子、例えば、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子中の標的配列に結合する。
【0142】
様々な実施形態では、ウイルスベクターは、ベクターをウイルス粒子中にパッケージングするための補助タンパク質を含む産生細胞によって産生される。一部の実施形態では、産生細胞は、バイオリアクター内の懸濁液中で維持される。一部の実施形態では、産生細胞は、接着性産生細胞である。一部の実施形態では、産生細胞はＨＥＫ２９３細胞である。一部の実施形態では、ＨＥＫ２９３細胞はＨＥＫ２９３Ｔ細胞又はＨＥＫ２９３Ｆ細胞である。
【0143】
本明細書において引用される全ての刊行物、特許出願、及び登録された特許は、あたかも個々の刊行物、特許出願、又は登録された特許が、参照により組み込まれることを具体的かつ個別に示したかのように、参照により本明細書中に組み込まれる。
【0144】
前述の実施形態は、明確性及び理解を目的として、図及び実施例により詳細に記載されているが、本明細書において企図される教示に照らし、特定の変化及び改変が、添付の請求の範囲の主旨又は範囲から逸脱することなく実施されうることが当業者には容易に明らかであろう。以下の実施例は、解説のみを目的として提供されるものであり、限定ではない。当業者であれば、本質的に類似した結果をもたらすために変更又は修正されうる様々な非臨界パラメータを容易に認識するであろう。
【実施例】
【0145】
実施例１
シングルパス接線流濾過システム
例示的なシングルパス接線流濾過（ＳＰＴＦＦ）システムを組み立て、テストした。具体的には、改変ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、十分な細胞濃度に達するまで撹拌タンクバイオリアクター中で培養した。細胞培養物を誘導培地に灌流して、レンチウイルスベクター産生を誘導した。レンチウイルスベクターを含む細胞培養培地を、保持タンクへの交互接線流濾過を使用してバイオリアクターから連続的に採取し、新鮮な培地をバイオリアクターに引き込み、一定の培養容量を維持した。
シングルパス接線流濾過システム
例示的なシングルパス接線流濾過（ＳＰＴＦＦ）システムを組み立て、テストした。具体的には、改変ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、十分な細胞濃度に達するまで撹拌タンクバイオリアクター中で培養した。細胞培養物を誘導培地に灌流して、レンチウイルスベクター産生を誘導した。レンチウイルスベクターを含む細胞培養培地を、保持タンクへの交互接線流濾過を使用してバイオリアクターから連続的に採取し、新鮮な培地をバイオリアクターに引き込み、一定の培養容量を維持した。
【0146】
十分なレンチウイルスベクターが回収されると、図１Ａに示すように組み立てられたＴＦＦカセットを含むＳＰＴＦＦ濾過モジュールをプライミングし、採取された材料をヌクレアーゼで処理して、図３に示すようにＤＮＡ不純物を消化した。材料をＳＰＴＦＦモジュール中にゆっくりとポンプ注入し、５ｐｓｉの膜貫通圧を標的とした。レンチウイルスベクターを欠く過剰な培養培地を、透過液ラインから廃棄容器中に収集し、濃縮レンチウイルスベクターを保持液ラインから収集した。濃縮レンチウイルスベクターを次に、０．２２μｍ滅菌フィルターを使用して濾過し、バイアル化前に滅菌を確保した。
【0147】
組み立てられ、テストされた他のＳＰＴＦＦシステムは、図４に示すように、追加の透析濾過（例、ＳＰＴＦＦ及び／又は再循環ＴＦＦを使用して）及び研磨クロマトグラフィー工程（例、サイズ排除、疎水性相互作用、及び／又はアニオン交換クロマトグラフィー）をＳＰＴＦＦ後に実施して、望ましくない不純物をさらに低減し、レンチウイルスベクターを最終滅菌濾過前に適切に製剤化することを含む。
【0148】
実施例２
ＳＰＴＦＦシステムの使用によって、ウイルスベクター濃縮、精製、及びベクターコピー数が改善される。
ＳＰＴＦＦシステムの使用によって、ウイルスベクター濃縮、精製、及びベクターコピー数が改善される。
【0149】
レンチウイルスベクターを含む、採取された細胞培養培地を、改変ＨＥＫ２９３レンチウイルスベクター産生細胞を含む撹拌タンクバイオリアクターから収集した。この材料を次に完全に混合し、いくつかのプールに分割し、それを並列処理した。複数のプールを、実施例１に記載するＳＰＴＦＦ精製過程を使用して処理する一方で、最終プールを、以下からなる標準ベクター精製過程を使用して処理した：０．４５μｍの濾過、捕捉クロマトグラフィー、限外濾過及び透析濾過を実施するための再循環接線流濾過、ならびに最終０．２２μｍの滅菌濾過を使用した清澄化。
【0150】
各最終レンチウイルスベクター産物を次に使用して、ＣＤ３４＋細胞を形質導入し、これを次に凍結保存した。形質導入した細胞を解凍し、１４日間培養した後、採取し、ｑＰＣＲを実施して、細胞当たりの総ベクターコピー数（ＶＣＮ）を決定した。
【0151】
図５Ａに示すように、ＳＰＴＦＦ過程によって、体積濃度が増加し、感染性力価が増加し（最終力価／初期力価）、ウイルス粒子濃度が増加し、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）レベルが減少した。図５Ｂでは、ＳＰＴＦＦ精製過程によって、標準ベクター精製過程と比較して、薬物産物のベクターコピー数が３倍増加した。
【0152】
実施例３
流量の減少によって、体積濃度及び産物濃度が改善される。
流量の減少によって、体積濃度及び産物濃度が改善される。
【0153】
レンチウイルスベクターを含む、採取された細胞培養培地を、改変ＨＥＫ２９３レンチウイルスベクター産生細胞を含む撹拌タンクバイオリアクターから収集した。この材料を、ＳＰＴＦＦを使用した処理期間全体を通して完全に混合させた。材料をＳＰＴＦＦモジュール中にポンプ注入し、材料が保持液ラインから流出し始めるまで流量を徐々に増加させた。体積濃縮倍率及び膜貫通圧を次に、表１に示すように、テストした各流量で記録した。保持液プールをその後、レンチウイルスベクター含量についてテストし、産物濃縮倍率をこれらの値から遡及的に算出した。
【0154】
膜貫通圧を最大化させて、濃縮倍率を改善するために、より高い流量で作動するよう製造元が推奨しているにもかかわらず、表１は、驚くべきことに、体積濃縮倍率がより遅い流量に伴い増加し、産物濃縮倍率がそれに伴い特定の点まで増加したことを示す。
【表1】
【0155】
概して、以下の特許請求の範囲において、使用された用語は、特許請求の範囲を、本明細書及び特許請求の範囲に開示されている特定の実施形態に限定させるものと解釈されるべきではないが、かかる特許請求の範囲が権利を与える等価物の完全な範囲とともに全ての可能な実施形態を含むものと解釈されるべきである。したがって、請求の範囲は、本開示により限定されない。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【国際調査報告】