特表 2023-528826 ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する中和抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-06

(54)【発明の名称】ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する中和抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230629BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230629BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20230629BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20230629BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230629BHJP

   A61K 9/72 20060101ALI20230629BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20230629BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20230629BHJP

   C07K 16/10 20060101ALI20230629BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230629BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230629BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230629BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230629BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230629BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230629BHJP

   C07K 14/165 20060101ALN20230629BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

A61K39/395 D ZNA

A61K39/395 N

A61P31/14

A61K39/00 H

A61P37/04

A61K9/72

A61K9/12

A61P11/00

C07K16/10

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

C07K14/165

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022573673

(86)(22)【出願日】2021-05-28

(85)【翻訳文提出日】2023-01-26

(86)【国際出願番号】 EP2021064326

(87)【国際公開番号】W WO2021239935

(87)【国際公開日】2021-12-02

(31)【優先権主張番号】20177354.6

(32)【優先日】2020-05-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】20182325.9

(32)【優先日】2020-06-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】20213562.0

(32)【優先日】2020-12-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＰＬＵＲＯＮＩＣ

(71)【出願人】

【識別番号】308027710

【氏名又は名称】ウニヴェルジテート・ツー・ケルン

(71)【出願人】

【識別番号】522464481

【氏名又は名称】フィリップス－ウニヴェルジテート マールブルク

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ベッカー シュテファン

(72)【発明者】

【氏名】グリュル ヘニング

(72)【発明者】

【氏名】クライン フロリアン

(72)【発明者】

【氏名】クレーア クリストフ

(72)【発明者】

【氏名】ゼーナー マティアス

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA02

4B064CA05

4B064CA06

4B064CA08

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA01X

4B065AA01Y

4B065AA57X

4B065AA57Y

4B065AA72X

4B065AA72Y

4B065AA83X

4B065AA83Y

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA45

4C076AA24

4C076AA93

4C076BB21

4C076BB25

4C076BB27

4C076CC15

4C076CC35

4C076FF70

4C085AA03

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085EE01

4C085GG10

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する抗体又はその結合断片、かかる抗体又はその結合断片を含む医薬組成物、かかる抗体又はその結合断片を備えるキット、並びに薬剤として、及びＳＡＲＳ関連コロナウイルスにより引き起こされる疾患の処置又は予防において使用されるモノクローナル抗体又はその結合断片及び医薬組成物及びキットに関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対して指向された抗体又はその結合断片であって、前記抗体又はその結合断片が、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６（配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４（配列番号３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０（配列番号５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１（配列番号７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４（配列番号９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５（配列番号１１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６（配列番号１３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３（配列番号１５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３（配列番号１７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４（配列番号１９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４（配列番号２１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９（配列番号２３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ５ｔ２ｐ１＿Ｇ１（配列番号２５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ１２（配列番号２７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｄ６（配列番号２９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｃ５（配列番号３１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ８（配列番号３３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ１ｔ３ｐ１＿Ｇ９（配列番号３５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ｄ５（配列番号３７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ１０（配列番号３９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｇ６（配列番号４１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ１ｐ２＿Ａ５（配列番号４３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｄ１０（配列番号４５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ２＿Ａ４（配列番号４７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１０（配列番号４９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｅ６（配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１１（配列番号５３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、及びＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｆ５（配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）を含む群からの１つの抗体の重鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３及び軽鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、好ましくは、前記抗体又はその結合断片が、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４、及びＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９を含む群から選択される抗体のうちの１つ、より好ましくは、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、及びＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４を含む群からの１つの抗体の重鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３及び軽鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体又はその結合断片。

【請求項2】

前記抗体又はその結合断片が、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６（配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４（配列番号３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０（配列番号５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１（配列番号７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４（配列番号９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５（配列番号１１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６（配列番号１３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３（配列番号１５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３（配列番号１７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４（配列番号１９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４（配列番号２１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９（配列番号２３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ５ｔ２ｐ１＿Ｇ１（配列番号２５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ１２（配列番号２７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｄ６（配列番号２９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｃ５（配列番号３１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ８（配列番号３３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ１ｔ３ｐ１＿Ｇ９（配列番号３５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ｄ５（配列番号３７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ１０（配列番号３９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｇ６（配列番号４１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ１ｐ２＿Ａ５（配列番号４３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｄ１０（配列番号４５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ２＿Ａ４（配列番号４７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１０（配列番号４９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｅ６（配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１１（配列番号５３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、及びＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｆ５（配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）を含む群から選択される１つの抗体、好ましくは、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４、及びＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９を含む群からの１つの抗体、より好ましくは、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、及びＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４を含む群からの１つの抗体の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む、請求項１に記載の抗体又は結合断片。

【請求項3】

前記ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株が、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である、請求項１又は２に記載の抗体又はその結合断片。

【請求項4】

前記抗体又はその結合断片が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の外部ドメインに対して、好ましくは、Wrapp et al．，Science (2020) doi:10.1126/science.Abb2507に記載されているウイルス分離株Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１の融合前安定化バリアントにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）ホモ三量体の外部ドメイン（配列番号５７）に対して、より好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）（配列番号５８）に対して指向される、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体又はその結合断片。

【請求項5】

前記抗体又はその結合断片が、Koch et al., Lancet Infect. Dis. (2020) doi:10.1016/s1473-3099(20)30248-6に従って、ウイルス及び抗体の３７℃で１時間の共インキュベーション後にＶｅｒｏＥ６細胞に適用された１００ＴＣＩＤ_５０のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を使用してウイルス中和試験で試験される場合に、ＶｅｒｏＥ６細胞上の本物のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２分離株であるＢａｖＰａｔ１／２０２０の１０μｇ／ｍｌ未満の中和能（ＩＣ_１００；細胞変性効果の完全な欠如をもたらす抗体の最低用量）を示す、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体又はその結合断片。

【請求項6】

前記抗体又はその結合断片が１μｇ／ｍｌ未満の中和能を示す、請求項５に記載の抗体又はその結合断片。

【請求項7】

前記抗体又はその結合断片が０．５μｇ／ｍｌ未満の中和能を示す、請求項５に記載の抗体又はその結合断片。

【請求項8】

前記抗体又はその結合断片が０．２５μｇ／ｍｌ以下の中和能を示す、請求項５に記載の抗体又はその結合断片。

【請求項9】

前記抗体又はその結合断片が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の外部ドメインの領域１及び領域２の両方に結合する、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体又はその結合断片。

【請求項10】

前記抗体又はその結合断片が、抗核抗体（ＡＮＡ）検査キット（ＮＯＶＡ－Ｌｉｔｅ ＨＥｐ－２ ＡＮＡキット；Inova Diagnostics）を使用して、１００μｇ／ｍｌの前記抗体又はその結合断片の濃度で、透過処理されたＨＥｐ－２細胞に対して試験される場合の検出可能な結合として定義される自己反応性を示さない、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体又はその結合断片。

【請求項11】

前記抗体の重鎖が配列番号２２９のアミノ酸配列を有し、前記抗体の軽鎖が配列番号２３０のアミノ酸配列を有する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項12】

請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体又はその結合断片と少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項13】

前記医薬組成物がヒト対象用のワクチン組成物である、請求項１２に記載の医薬組成物。

【請求項14】

請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体又はその結合断片と容器とを備えるキット。

【請求項15】

薬剤として使用される、好ましくは、ワクチンとして使用される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体若しくはその結合断片、請求項１２若しくは１３に記載の医薬組成物、又は請求項１４に記載のキット。

【請求項16】

ヒト対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスにより引き起こされる疾患の処置又は予防に使用される、好ましくは、ヒト対象における重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）により引き起こされる疾患の処置又は予防に使用される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体若しくはその結合断片、請求項１２若しくは１３に記載の医薬組成物、又は請求項１４に記載のキット。

【請求項17】

ヒト対象のＳＡＲＳ関連コロナウイルス感染、好ましくは、ヒト対象の重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染の予防に使用される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体若しくはその結合断片、請求項１２若しくは１３に記載の医薬組成物、又は請求項１４に記載のキット。

【請求項18】

ヒト及び／又は動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスを処置する方法であって、治療上有効量の請求項１～１１のいずれか１項に記載の少なくとも１種の抗体及び／又はその結合断片を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項19】

前記ＳＡＲＳ関連コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

ヒト及び／又は動物対象のＳＡＲＳ関連コロナウイルス感染を予防する方法であって、治療上有効量の請求項１～１１のいずれか１項に記載の少なくとも１種の抗体及び／又はその抗原結合断片を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項21】

ヒト及び／又は動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスによる疾患の重症度を低減する方法であって、治療上有効量の請求項１～１１のいずれか１項に記載の少なくとも１種の抗体及び／又はその抗原結合断片を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項22】

前記抗体が静脈内注入により投与される、請求項１５～１７のいずれか１項に記載の使用のための抗体、又は請求項１８～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記抗体が１ｍｇ／患者の体重１ｋｇ～１００ｍｇ／患者の体重１ｋｇの用量で投与される、請求項２２に記載の使用のための抗体又は請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記抗体が、２．５ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、５ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、１０ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、２０ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、２５ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、３０ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、４０ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、５０ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、又は１００ｍｇ／患者の体重１ｋｇの用量で投与される、請求項２３に記載の使用のための抗体又は請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記抗体が吸入適用により投与される、請求項１５～１７のいずれか１項に記載の使用のための抗体、又は請求項１８～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記抗体が投与前にメッシュ式ネブライザー又はジェット式ネブライザーにより噴霧化される液体医薬組成物中に提供される、請求項２５に記載の使用のための抗体又は請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記抗体が、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、７５０ｍｇ、又は１０００ｍｇの用量で投与される、請求項２５若しくは２６に記載の使用のための抗体又は請求項２５若しくは２６に記載の方法。

【請求項28】

ＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対して指向された抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号１１９のＣＤＲ１、配列番号１２０のＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、配列番号１２２のＣＤＲ１、配列番号１２３のＣＤＲ２、及び配列番号１２４のＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体又はその抗原結合断片。

【請求項29】

配列番号２１の重鎖可変領域及び配列番号２２の軽鎖可変領域を含む、請求項２８に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項30】

配列番号２２９の重鎖及び配列番号２３０の軽鎖を含む、請求項２８又は２９に記載の抗体。

【請求項31】

配列番号２２９の２つの重鎖及び配列番号２３０の２つの軽鎖のみからなる、請求項２８～３０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項32】

請求項１～１１又は２８～３１のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸。

【請求項33】

発現制御配列と機能的に結合している請求項３２に記載の核酸を含む発現ベクター。

【請求項34】

請求項３２に記載の核酸又は請求項３３に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。

【請求項35】

請求項１～１１又は２８～３１のいずれか１項に記載の抗体を生成する方法であって、
（ａ）前記抗体の発現を可能にする条件下で請求項３４に記載の宿主細胞を培養することと、
（ｂ）前記抗体を回収することと、
を含む、方法。

【請求項36】

異なる結合特異性を有する、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対して指向された少なくとも１種の更なる抗体と組み合わせて医薬品に使用される、請求項１～１１又は２８～３１のいずれか１項に記載の抗体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する抗体又はその結合断片、かかる抗体又はその結合断片を含む医薬組成物、かかる抗体又はその結合断片を含むキット、並びに薬剤として、及びＳＡＲＳ関連コロナウイルスにより引き起こされる疾患の処置又は予防において使用される該抗体又はその結合断片及び該医薬組成物及び該キットに関する。

【背景技術】

【0002】

新規かつ高病原性のコロナウイルス（重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の出現及びその急速な国際的蔓延は、世界的な公衆衛生上の重大な緊急事態をもたらす。２００３年に発生した重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）又は２０１２年に発生した中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）等の他の高病原性コロナウイルス株に感染した個体と同様に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した患者は、乾性咳、熱、頭痛、呼吸困難、及び肺炎が挙げられる様々な症状を示し得て、その推定死亡率は、３％～５％の範囲である。

【0003】

２０１９年１２月の最初の大流行以来、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、世界全体で２１７ヵ所の国、地域、及び領土に広がっている。２０２０年５月２７日時点で、このウイルスによる５４８万８８２５人の感染が全世界で確認されており、３４万９０９５人の感染患者の死亡が確認されている（https://www.who.int/emergencies/diseases/novel-coronavirus-2019）。

【0004】

２０２０年に世界的大流行になり、ＷＨＯによりそのように宣言されたウイルスの蔓延に対応して、世界中の様々な都市及び国が蔓延の継続を最小限にするために、様々な程度でロックダウン下にある。２０２０年のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の世界的流行は、公衆衛生、社会生活、及び世界経済への前例のない影響をもたらした。

【0005】

この大流行に対処するために利用可能な承認された薬物及びワクチンがないため、ＣＯＶＩＤ－１９の処置及び予防のための新規な選択肢が大いに必要とされている。したがって、ワクチン及び強力な抗ウイルス薬を開発するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２免疫を解読する差し迫った保健上の必要性がある。

【0006】

モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、エボラウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、又はヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－１）等のウイルスを効果的に標的とし、中和することが実証されている。抗体により媒介される応答のためのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ビリオン表面上の最も優れた標的は、ホモ三量体スパイク（Ｓ）タンパク質である。Ｓタンパク質は、受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）のアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）との相互作用により細胞への侵入を促進する。したがって、Ｓタンパク質を標的とするモノクローナルヒト抗体は、ＣＯＶＩＤ－１９を予防及び処置するために重要である。

【0007】

近年、異なる実験設定においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する中和活性を示す少数の抗体について（主に、正式な査読を受けていないプレプリントの形態で）有望なデータが発表されたが、これらのデータには、試験された抗体のアミノ酸配列の公衆の利用可能性の欠如、生きているウイルスに対する中和活性の実験的証拠の欠如、上記抗体の自己反応性（autoreactivity or self-reactivity）、又は生きているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに対する比較的低い中和能のいずれかの欠点がある。

【0008】

上述の欠点のため、自己反応性を示さず、十分詳細に公開された一般に入手可能な抗体と比較して生きているウイルスに対して優れた中和能を有する、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対して指向されたヒト抗体が依然として必要とされている。

【0009】

したがって、本発明の目的は、自己反応性を示さず、生きているウイルスに対する優れた中和能を有する、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する新規のモノクローナル抗体を提供することである。本発明の更なる目的は、ヒト又は動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスにより引き起こされる疾患の処置又は予防、及びヒト又は動物対象のＳＡＲＳ関連コロナウイルス感染の予防に使用され得るＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する新規のモノクローナル抗体を提供することである。

【発明の概要】

【0010】

これらの目的は、以下に明記される本発明の態様により達成された。

【0011】

本発明の第１の態様によれば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対して指向された抗体又はその結合断片が提供され、上記抗体又はその結合断片が、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６（配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４（配列番号３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０（配列番号５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１（配列番号７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４（配列番号９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５（配列番号１１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６（配列番号１３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３（配列番号１５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３（配列番号１７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４（配列番号１９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４（配列番号２１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９（配列番号２３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ５ｔ２ｐ１＿Ｇ１（配列番号２５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ１２（配列番号２７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｄ６（配列番号２９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｃ５（配列番号３１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ８（配列番号３３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ１ｔ３ｐ１＿Ｇ９（配列番号３５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ｄ５（配列番号３７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ１０（配列番号３９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｇ６（配列番号４１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ１ｐ２＿Ａ５（配列番号４３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｄ１０（配列番号４５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ２＿Ａ４（配列番号４７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１０（配列番号４９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｅ６（配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１１（配列番号５３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、及びＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｆ５（配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）を含む群からの１つの抗体の重鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３及び軽鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、好ましくは、上記抗体又はその結合断片が、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４、及びＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９を含む群から選択される抗体のうちの１つ、より好ましくは、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、及びＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４を含む群からの１つの抗体の重鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３及び軽鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0012】

本発明の第１の態様の一実施の形態において、上記抗体又はその結合断片は、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６（配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４（配列番号３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０（配列番号５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１（配列番号７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４（配列番号９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５（配列番号１１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６（配列番号１３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３（配列番号１５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３（配列番号１７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４（配列番号１９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４（配列番号２１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９（配列番号２３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ５ｔ２ｐ１＿Ｇ１（配列番号２５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ１２（配列番号２７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｄ６（配列番号２９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｃ５（配列番号３１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ８（配列番号３３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ１ｔ３ｐ１＿Ｇ９（配列番号３５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ｄ５（配列番号３７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ１０（配列番号３９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｇ６（配列番号４１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ１ｐ２＿Ａ５（配列番号４３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｄ１０（配列番号４５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ２＿Ａ４（配列番号４７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１０（配列番号４９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｅ６（配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１１（配列番号５３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、及びＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｆ５（配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）を含む群から選択される１つの抗体、好ましくは、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４、及びＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９を含む群からの１つの抗体、より好ましくは、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、及びＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４を含む群からの１つの抗体の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。

【0013】

本発明の第１の態様の別の実施の形態によれば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。

【0014】

本発明の第１の態様の更に別の実施の形態によれば、上記抗体又はその結合断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の外部ドメインに対して、好ましくは、Wrapp et al., Science (2020) doi：10.1126/science.abb2507に記載されているウイルス分離株Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１の融合前安定化バリアントにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）ホモ三量体の外部ドメイン（配列番号５７）に対して、より好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に対して、更により好ましくは、配列番号５８の配列を有するＲＢＤに対して指向される。

【0015】

中和能に関する本発明の第１の態様の一実施の形態によれば、上記抗体又はその結合断片は、Koch et al., Lancet Infect. Dis. (2020) doi：10.1016/s1473-3099(20)30248-6に記載されたアッセイに基づいて、ウイルス及び抗体の３７℃で１時間の共インキュベーション後にＶｅｒｏＥ６細胞に適用された１００ＴＣＩＤ_５０のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を使用してウイルス中和試験で試験される場合に、ＶｅｒｏＥ６細胞上の本物のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２分離株であるＢａｖＰａｔ１／２０２０に対する１０μｇ／ｍｌ未満の中和能（ＩＣ_１００；細胞変性効果の完全な欠如をもたらす抗体の最低用量）を示す。

【0016】

中和能に関する本発明の第１の態様の更なる実施の形態によれば、上記抗体又はその結合断片は、１μｇ／ｍｌ未満の中和能を示す。

【0017】

中和能に関する本発明の第１の態様の更なる実施の形態によれば、上記抗体又はその結合断片は、０．５μｇ／ｍｌ未満の中和能を示す。

【0018】

中和能に関する本発明の第１の態様の更なる実施の形態によれば、上記抗体又はその結合断片は、０．２５μｇ／ｍｌ以下の中和能を示す。

【0019】

本発明の更なる実施の形態によれば、上記抗体又はその結合断片は、抗核抗体（ＡＮＡ）検査キット（ＮＯＶＡ－Ｌｉｔｅ ＨＥｐ－２ ＡＮＡキット；Inova Diagnostics）を使用して、１００μｇ／ｍｌの上記抗体又はその結合断片の濃度で、透過処理されたＨＥｐ－２細胞に対して試験される場合の検出可能な結合として定義される自己反応性を示さない。

【0020】

本発明の第２の態様によれば、本発明の第１の態様による抗体又はその結合断片と、少なくとも１つの薬学的に許容され得る賦形剤とを含む医薬組成物が提供される。

【0021】

本発明の第２の態様の一実施の形態によれば、医薬組成物はヒト又は動物対象用のワクチン接種組成物である。

【0022】

本発明の第３の態様によれば、本発明の第１の態様による抗体又はその結合断片と容器とを備えるキットが提供される。

【0023】

本発明の第４の態様によれば、医薬として使用される、好ましくはワクチンとして使用される本発明の第１の態様による抗体若しくはその結合断片、本発明の第２の態様による医薬組成物、又は本発明の第３の態様によるキットが提供される。

【0024】

本発明の第５の態様によれば、ヒト又は動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスにより引き起こされる疾患の処置又は予防に使用される、好ましくは、ヒト又は動物対象における重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）により引き起こされる疾患の処置又は予防に使用される、本発明の第１の態様による抗体若しくはその結合断片、本発明の第２の態様による医薬組成物、又は本発明の第３の態様によるキットが提供される。

【0025】

本発明の第６の態様によれば、ヒト又は動物対象のＳＡＲＳ関連コロナウイルス感染、好ましくは、ヒト又は動物対象の重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染の予防に使用される、本発明の第１の態様による抗体若しくはその結合断片、本発明の第２の態様による医薬組成物、又は本発明の第３の態様によるキットが提供される。

【0026】

本発明の第４の態様、第５の態様、又は第６の態様の一実施の形態によれば、抗体は静脈内注入により投与され、ここで、抗体は、１ｍｇ／患者の体重１ｋｇ～１００ｍｇ／患者の体重１ｋｇの用量で投与され得て、抗体は、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、又は１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。

【0027】

本発明の第４の態様、第５の態様、又は第６の態様の他の実施の形態によれば、抗体は、吸入適用により投与され、ここで、抗体は、投与前にメッシュ式ネブライザー又はジェット式ネブライザーにより噴霧化される液体医薬組成物中に提供され得て、及び／又は抗体は、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、７５０ｍｇ、又は１０００ｍｇの用量で投与され得る。

【0028】

別の実施の形態において、本発明の抗体は、初回量として吸入により投与され、続いて、全身投与により、例えば、限定されるものではないが、静脈内及び／又は腹腔内に投与される。

【0029】

別の実施の形態によれば、ヒト又は動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスを処置する方法であって、治療上有効量の本発明の少なくとも１種の抗体及び／又はその抗原結合断片、又は少なくとも１種の抗体及び／又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を上記ヒト又は動物対象に投与することを含む、方法が提供される。

【0030】

別の実施の形態によれば、ヒト又は動物対象のＳＡＲＳ関連コロナウイルス感染を予防する方法であって、治療上有効量の本発明の少なくとも１種の抗体及び／又はその抗原結合断片、又は少なくとも１種の抗体及び／又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を上記ヒト又は動物対象に投与することを含む、方法が提供される。

【0031】

更に別の実施の形態において、ヒト又は動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスによる疾患の重症度を低減する方法であって、治療上有効量の本発明の少なくとも１種の抗体及び／又はその抗原結合断片、又は少なくとも１種の抗体及び／又は抗原結合断片を含む医薬組成物を上記ヒト又は動物対象に投与することを含む、方法が提供される。

【0032】

一実施の形態において、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。別の実施の形態において、対象は、ヒト対象である。

【図面の簡単な説明】

【0033】

【図1】（ａ）ＥＬＩＳＡにより特定される２５５種の単離されたヒトモノクローナル抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ外部ドメインとの相互作用（ＥＣ_５０＜３０μｇ／ｍｌ及びＯＤ_{４１５～６９５}＞０．２５（図示せず）のカットオフ値を定義することにより７９種の結合抗体（黒色から濃い灰色）が同定された）を示す図である。（ｂ）抗体が単離された個々の患者毎の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ外部ドメインと相互作用する抗体のＥＣ_５０値（二重反復の平均）（中和抗体はそれらのＩＣ_１００値に応じて異なる濃淡の灰色でラベル付けされている）を示す図である。（ｃ）２８種の抗体が１００μｇ／ｍｌのＩＣ_１００のカットオフ値以上の中和活性を有することを示す、Ｓ外部ドメイン特異的抗体の本物のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の中和活性（ＶｅｒｏＥ６細胞感染の完全な阻害、ＩＣ_１００、四重反復）を示す図である。

【図2】μｇ／ｍｌでのＩＣ_１００で表現される本物のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する中和効率を示す図である。バーは最も低いｍＡｂの中和濃度を示す。

【図3】ＥＬＩＳＡにより測定されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ外部ドメイン結合（ＥＣ_５０）と本物のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する中和能（ＩＣ_１００）との間の相関を示す図である。相関係数ｒ_Ｓ及び近似ｐ値は、スピアマンの順位相関により算出された。

【図4】ＨＥｐ－２細胞をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ外部ドメイン抗体で染色し、蛍光顕微鏡法（Ｌｅｉｃａ ＤＭＩ６０００顕微鏡）により解析することにより試験される、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に結合し、これを中和する選択された抗体の自己反応性を示す図である。評価法の代表画像を示す。

【図5】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と相互作用する単離された抗体の特性の要約を示す拡張されたデータ表を示す図である。

【図6】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された、ＡＣＥ２が形質導入されたＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＤＺＩＦ－１０ｃの治療有効性を示す図である。（Ａ）実験日を示す数値を示す実験スキーム。（Ｂ）４日目の肺組織中の１ナノグラムのＲＮＡ当たりのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ゲノムコピー。（Ｃ）２５ｍｇの肺組織ホモジェネートからのウイルス単離により決定されるＶｅｒｏ Ｅ６細胞に対するＴＣＩＤ_５０力価。ｉ．ｎ．：鼻腔内。ｉ．ｐ．：腹腔内。

【図7】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露されたゴールデンシリアンハムスターにおけるＤＺＩＦ－１０ｃの治療有効性を示す図である。（Ａ）実験日を示す数値を示す実験スキーム。（Ｂ）鼻スワブのｑＲＴ－ＰＣＲにより決定されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２力価。（Ｃ）肺ホモジェネートのｑＲＴ－ＰＣＲにより決定されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２力価。（Ｄ）異なる肺葉からのウイルス単離により決定される感染性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２力価。

【図8】（Ａ）ＤＺＩＦ－１０ｃ又はアイソタイプ対照抗体との１時間の共インキュベーション後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露されたＣＤ１４^＋ヒトマクロファージ、又はＭＥＲＳ－ＣｏＶに曝露された後のＣＤ１４^＋ヒトマクロファージの細胞培養上澄みの感染性（ＴＣＩＤ_５０）を示す図である。（Ｂ）ＤＺＩＦ－１０ｃ又はアイソタイプ対照抗体との１時間の共インキュベーション後にＣＤ１４^＋ヒトマクロファージをＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露した後のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ゲノムコピーを示す図である。ウイルス曝露後に細胞を４日間インキュベートした。ＬＬＯＤ：検出下限。

【図9】１ｍｇ／ｋｇ用量の気管内投与後のＷｉｓｔａｒラットのＥＬＦ及び血漿中のＤＺＩＦ－１０ｃ濃度を示す図である。

【図10】１ｍｇ／ｋｇの気管内適用の２時間若しくは２４時間後、又は１０ｍｇ／ｋｇ用量の２回目の静脈内適用の２４時間後のＷｉｓｔａｒラットの調査された全ての組織中のＤＺＩＦ－１０ｃ（この図においてＥＸ１４８７０と称される）濃度を示す図である。Ｂｒｏ及びＴｒａ：気管支及び気管。

【図11】製剤Ｆ５～Ｆ８中のＤＺＩＦ－１０ｃの意図される保存条件（５℃）での（Ａ）高分子量種（ＨＭＷ）の百分率（％）及び（Ｂ）単量体の百分率の観点での安定性データを示す図である。

【図12】感染前にＤＺＩＦ－１０ｃ又はビヒクルで事前に処置された動物の鼻咽頭スワブにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２量を示す図である。ＬＯＤ＝検出限界。

【図13】感染前にＤＺＩＦ－１０ｃ又はビヒクルで事前に処置された動物の気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２量を示す図である。ＬＯＤ＝検出限界。

【発明を実施するための形態】

【0034】

本発明がより容易に理解され得るように、幾つかの用語を初めに定義する。付加的な定義は発明を実施するための形態の全体にわたって説明する。

【0035】

用語「或る（a or an）」を付された物は、その物のうちの１つ以上を指すことに留意されたい。例えば、「ヌクレオチド配列（a nucleotide sequence）」は、１つ以上のヌクレオチド配列を表すと理解される。したがって、用語「或る（"a" (or "an")）」、「１つ以上（one or more）」、及び「少なくとも１つ（at least one）」は、本明細書において互換的に使用され得る。

【0036】

さらに、本明細書において使用される場合、「及び／又は」の用語は、２つの指定される特徴又は成分の各々ともう一方とを含む、又はもう一方を含まない具体的な開示として理解される。したがって、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」等の句で使用される「及び／又は」の用語は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ（単独）」、及び「Ｂ（単独）」を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」等の句において使用される「及び／又は」の用語は、Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）の態様の各々を包含することが意図される。

【0037】

本明細書において「含む、含んでいる」の言葉と共に態様が記載される時はいかなる場合でも、「のみからなる」及び／又は「のみから本質的になる」の用語で記載される別の類似する態様も提供されることが理解される。

【0038】

別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、この開示が関係する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press、The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press、及びthe Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、この開示で使用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。

【0039】

単位、接頭辞及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ：Systeme International d'Unites）で容認される形態で表示される。数値範囲は、その範囲を規定する数値を含む。他に指定のない限り、ヌクレオチド配列は左から右に５’→３’方向で記載される。アミノ酸配列は左から右にアミノ→カルボキシ方向で記載される。本明細書で提供される標題は、本開示の様々な態様を限定するものではなく、全体として本明細書を参照することによって理解され得る。したがって、すぐ下に定義される用語は、本明細書全体を参照することによってより完全に定義される。

【0040】

用語「約」は、「ほぼ」、「大まかに」、「およそ」、又は「の範囲で」を意味するように本明細書において使用される。用語「約」が数値の範囲と共に使用される場合、この用語は、記載される数値の上限及び下限を広げることによりその範囲を修正する。一般に、用語「約」は、例えば、１０パーセントの上昇又は下降（より高い又はより低い）の変動により、明示される値の上方及び下方に数値を修正し得る。

【0041】

用語「抗体」は、免疫グロブリン様ドメインを有する分子（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ又はＩｇＥ）を指すように本明細書において最も広義に使用され、モノクローナル抗体、組換え抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体が挙げられる多重特異性抗体、及びヘテロコンジュゲート抗体；単一可変ドメイン（例えば、Ｖ_Ｈ、Ｖ_ＨＨ、Ｖ_Ｌ、ドメイン抗体）、抗原結合抗体断片、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、単鎖Ｆｖ、ジスルフィド結合ｓｃＦｖ、ダイアボディ等、並びに上述のうちのいずれかの改変型を包含する。

【0042】

本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、抗原に特異的に結合することができる、生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来するタンパク質又はその抗原結合部分を指す。この用語は、任意のクラス又はアイソタイプの全長抗体（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＹ）及びそれらの任意の単鎖又は断片を包含する。抗原又はその抗原結合部分に特異的に結合する抗体は、その抗原若しくはその一部に排他的に結合し得るか、又は限られた数の対応抗原若しくはその一部に結合し得る。全長抗体は、通常、以下の少なくとも４つのポリペプチド鎖を含む：ジスルフィド結合により相互に連結されている２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖。

【0043】

医薬品として特に関心対象となる１つの免疫グロブリンサブクラスは、ＩｇＧファミリーである。ヒトにおいて、ＩｇＧクラスは、それらの重鎖定常領域の配列に基づいて以下の４つのサブクラスに細分され得る：ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４。軽鎖は、それらの配列組成の差異に基づいて、κ及びλの２つの種類に分類され得る。ＩｇＧ分子は、２つ以上のジスルフィド結合により連結された２つの重鎖、及び各々がジスルフィド結合により重鎖に結合された２つの軽鎖から構成される。重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び以下の３つまでの重鎖定常領域（ＣＨ）を含み得る：ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３。軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み得る。

【0044】

ＶＨ領域及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域に更に細分され得て、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存的な領域が間に置かれている。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、通常、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置される３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成される。重鎖及び軽鎖の超可変領域は、抗原と相互作用することができる結合ドメインを形成する一方で、抗体の定常領域は、限定されるものではないが、免疫系の様々な細胞（エフェクター細胞）、Ｆｃ受容体、及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）が挙げられる宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。本発明の抗体は、単離されていてもよい。

【0045】

用語「単離抗体」は、それが産生された環境における他の（別の）成分（複数の場合もある）から分離及び／又は回収され、及び／又はそれが産生された環境に存在する成分の混合物から精製された抗体を指す。抗体の或る特定の抗原結合断片は、抗体の抗原結合機能が全長抗体の断片により果たされ得ることが示されているため、本発明の文脈において好適であり得る。

【0046】

抗体の「抗原結合部分」、「結合断片」、又は「抗原結合断片」という用語は、抗原、例えば、本明細書に記載されるようなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１種以上の断片（複数の場合もある）を指す。

【0047】

抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）Ｓ、Ｆｖ（通常、抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメイン）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ；例えば、Bird et al., Science 242:42S-426 (1988)、Huston et al., PNAS 85:5879-5883 (1988)を参照のこと）、ｄｓＦｖ、Ｆｄ（通常、ＶＨ及びＣＨ１ドメイン）、及びｄＡｂ（通常、Ｖ_Ｈドメイン）断片；Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、Ｖ_ＨＨ、及びＶ－ＮＡＲドメイン；単一のＶ_Ｈ鎖及び単一のＶ_Ｌ鎖を含む一価分子；ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及びκボディ（例えば、Ill et al., Protein Eng 10:949-57 (1997)を参照のこと）；ラクダＩｇＧ；ＩｇＮＡＲ；並びに１種以上の単離されたＣＤＲ又は機能的パラトープが挙げられ、ここで、単離されたＣＤＲ又は抗原結合残基又はポリペプチドは、機能的抗体断片を形成するように、互いに会合していてもよく、又は互いに連結されていてもよい。

【0048】

例えば、様々な種類の抗体断片が、Holliger and Hudson, Nat Biotechnol 2S:1126-1136 (2005)；国際公開第２００５／０４０２１９号、並びに米国特許出願公開第２００５／０２３８６４６号及び同第２００２／０１６１２０１号に記載又は概説されている。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来技術を使用して取得され得て、その断片は、インタクトな抗体と同様に有用性についてスクリーニングされ得る。

【0049】

「ヒト」抗体（ＨｕＭＡｂ）は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を指す。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、該定常領域もヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する。本明細書に記載されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダム若しくは部位特異的変異誘発、又はｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞変異により導入された変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用する場合、用語「ヒト抗体」は、マウス等の別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列に移植された抗体を包含することを意図しない。用語「ヒト」抗体及び「完全ヒト」抗体は、同義的に使用される。

【0050】

「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する１つ以上の配列（ＣＤＲ領域又はその一部）を含有するヒト／非ヒトキメラ抗体を指す。したがって、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であって、レシピエントの超可変領域由来の最小限の残基が、所望の特異性、親和性、配列組成、及び機能を有する、非ヒト種、例えば、マウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類由来の抗体（ドナー抗体）の超可変領域の残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリンである。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基が対応する非ヒト残基で置き換えられている。このような改変の例は、通常、ドナー抗体に由来するアミノ酸残基である１つ以上のいわゆる逆変異の導入である。

【0051】

抗体のヒト化は、当業者に既知の組換え技術を使用して実施され得る（例えば、Molecular Biology, vol. 248, Benny K.C.Lo編におけるAntibody Engineering, Methodsを参照のこと）。軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方に好適なヒトレシピエントフレームワークは、例えば、配列相同性又は構造的相同性により同定され得る。あるいは、例えば、構造、生物物理学的特性、及び生化学的特性の知見に基づいて、固定のレシピエントフレームワークが使用され得る。レシピエントフレームワークは、生殖細胞系列由来であるか、又は成熟した抗体の配列に由来する。ドナー抗体由来のＣＤＲ領域は、ＣＤＲ移植により移植され得る。

【0052】

ＣＤＲ移植されたヒト化抗体は、ドナー抗体由来のアミノ酸残基の再導入（逆変異）がヒト化抗体の特性に有益な影響を及ぼす重要なフレームワークの位置を同定することにより、例えば、親和性、機能性、及び生物物理学的特性について更に最適化され得る。ドナー抗体由来の逆変異に加えて、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域又はフレームワーク領域への生殖細胞系列残基の導入、免疫原性エピトープの除去、部位特異的変異誘発、親和性成熟等により遺伝子操作され得る。

【0053】

さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体において見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能を更に改良するために実行される。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全て又はほぼ全てが非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、ＦＲ残基の全て又はほぼ全てがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つの、通常２つの可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常はヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含み得る。用語「ヒト化抗体誘導体」は、ヒト化抗体の任意の改変型、例えば、抗体及び別の薬剤又は抗体のコンジュゲートを意味する。

【0054】

本明細書で使用する場合、用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段により調製、発現、作製、又は単離される全てのヒト抗体、例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニック又はトランスクロモソーマル（transchromosomal）な動物（例えばマウス）、又はその動物から調製されたハイブリドーマから単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するよう形質転換された宿主細胞、例えば、トランスフェクトーマ（transfectoma）から単離された抗体、（ｃ）組換えヒト抗体ライブラリーの組み合わせから単離された抗体、及び（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含む任意の他の手段により調製、発現、作製、又は単離された抗体を包含する。

【0055】

かかる組換えヒト抗体は、生殖細胞系列遺伝子によりコードされる特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列を利用する可変領域及び定常領域を含むが、例えば、抗体成熟の間に生じるその後の再構成及び変異も含む。当該技術分野において既知のように（例えば、Lonberg Nature Biotech. 23 (9):1117-1125 (2005)を参照のこと）、可変領域は抗原結合ドメインを含み、これは、外来抗原に特異的な抗体を形成するために再構成を起こす様々な遺伝子によりコードされる。再構成に加えて、可変領域は、外来性抗原に対する抗体の親和性を増加させるために、複数の単一アミノ酸変化（体細胞変異又は過剰変異と称される）により更に改変され得る。定常領域は抗原に対する更なる反応で変化する（すなわち、アイソタイプスイッチ）。

【0056】

したがって、抗原に応じた軽鎖免疫グロブリンポリペプチド及び重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする、再構成され、体細胞変異した核酸分子は、元の核酸分子との配列同一性を有するはずがないが、その代わりに実質的に同一であるか、又は類似する（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）。

【0057】

「キメラ抗体」は、可変領域が１つの種に由来し、定常領域が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域がマウス抗体に由来し、定常領域がヒト抗体に由来する抗体を指す。

【0058】

代替的な抗体フォーマットとしては、抗原結合部分の１つ以上のＣＤＲが好適な非免疫グロブリンタンパク質足場又は骨格、例えば、アフィボディ、ＳｐＡ足場、ＬＤＬ受容体クラスＡドメイン、アビマー、又はＥＧＦドメインに配置され得る代替足場が挙げられる。

【0059】

用語「ドメイン」は、タンパク質の残部とは関係なくその三次構造を保持する折り畳まれたタンパク質構造を指す。一般に、ドメインは、タンパク質の別々の機能特性を担い、多くの場合、タンパク質及び／又はドメインの残部の機能を喪失することなく付加され得るか、除去され得るか、又は他のタンパク質に移され得る。

【0060】

用語「単一可変ドメイン」は、抗体の可変ドメインに特徴的な配列を含む折り畳まれたポリペプチドドメインを指す。したがって、この用語は、Ｖ_Ｈ、Ｖ_ＨＨ、及びＶ_Ｌ等の完全な抗体可変ドメイン、並びに例えば、１つ以上のループが、抗体可変ドメインに特徴的ではない配列で置き換えられた改変型抗体可変ドメイン、又は短縮されたか、若しくはＮ末端若しくはＣ末端延長を含む抗体可変ドメイン、並びに全長ドメインの少なくとも結合活性及び特異性を保持する可変ドメインの折り畳まれた断片を包含する。

【0061】

単一可変ドメインは、異なる可変領域又はドメインとは独立に抗原又はエピトープと結合することができる。「ドメイン抗体」又は「ｄＡｂ（商標）」は、「単一可変ドメイン」と同じと見なされ得る。単一可変ドメインは、ヒト単一可変ドメインであり得るが、齧歯類、テンジクザメ、及びラクダ科動物のＶ_ＨＨ ｄＡｂ（商標）等の他の種由来の単一可変ドメインも挙げられる。ラクダ科動物Ｖ_ＨＨは、軽鎖を天然に欠く重鎖抗体を産生する、ラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ、及びグアナコが挙げられる種に由来する免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドである。かかるＶ_ＨＨドメインは、当該技術分野において利用可能な標準的技術によりヒト化され得て、かかるドメインも「単一可変ドメイン」と見なされる。本明細書で使用する場合、Ｖ_Ｈは、ラクダ科動物Ｖ_ＨＨドメインを包含する。

【0062】

抗原結合断片は、非抗体タンパク質足場に１つ以上のＣＤＲを配置する手段により提供され得る。本明細書で使用する場合、「タンパク質足場」としては、限定されるものではないが、４本鎖抗体若しくは２本鎖抗体であってもよく、又は抗体のＦｃ領域のみを含んでいてもよく、又は抗体由来の１つ以上の定常領域を含んでいてもよく、その定常領域はヒト若しくは霊長類起源のものであってもよく、又はヒト及び霊長類の定常領域の人工キメラであってもよい、免疫グロブリン（Ｉｇ）足場、例えば、ＩｇＧ足場が挙げられる。

【0063】

本明細書で使用する場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によりコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体）を指す。

【0064】

「アロタイプ」は、特定のアイソタイプ群内に天然に存在するバリアントを指し、そのバリアントは少数のアミノ酸が異なる（例えば、Jefferis et al., mAbs 1:1 (2009)を参照のこと）。

【0065】

語句「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」は、本明細書において用語「抗原に特異的に結合する抗体」と互換的に使用される。

【0066】

用語「処置する」、「処置すること」、又は「処置」（又は文法的に等価な用語）は、対象の状態の重症度が低減されるか、若しくは少なくとも部分的に改善若しくは緩和されること、及び／又は少なくとも１つの臨床症状の幾らかの軽減、緩和、若しくは低減が達成され、及び／又は状態の進行の遅延が生じることを意味する。

【0067】

本明細書で使用する場合、用語「予防する（"prevent", "prevents"）」、又は「予防」、及び「阻害する（"inhibit", "inhibits"）」、又は「阻害」（及びそれらの文法的等価物）は、疾患の完全な消滅を意味することを意図せず、状態の発生率を低減し、状態の発症を遅延させ、及び／又は発症後の状態に関連する症状を低減する任意の種類の予防処置を包含する。

【0068】

本明細書で使用する場合、「有効」量、「予防上有効」量、又は「治療上有効」量は、対象に幾らかの改善又は恩恵をもたらすのに十分な量である。別の言い方をすれば、「有効」量、「予防上有効」量、又は「治療上有効」量は、対象における少なくとも１つの臨床症状の幾らかの遅延、軽減、緩和、又は低減を提供する量である。当業者は、幾らかの恩恵が対象にもたらされる限り、効果が完全又は治癒的である必要はないことを理解するであろう。

【0069】

本明細書で使用する場合、「中和抗体」は、病原体に結合し、該病原体の、細胞に感染し、及び／又は対象における疾患を引き起こす能力を妨害する任意の抗体又はその抗原結合断片である。

【0070】

本明細書で使用する場合、「ペプチド」は、本明細書で具体的に例示されるペプチドの保存的変異であるペプチドを包含する。「保存的変異」及び「保存的アミノ酸置換」は、本明細書で使用する場合、アミノ酸残基の生物学的に類似する別の残基での置換を意味する。保存的変異の例としては、限定されるものではないが、１つの疎水性残基、例えば、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、システイン、グリシン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン、ノルロイシン、若しくはメチオニンの別の疎水性残基との置換、又は１つの極性残基の別の極性残基との置換、例えば、アルギニンのリジンとの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸との置換、若しくはグルタミンのアスパラギンとの置換等が挙げられる。互いに置換され得る中性親水性アミノ酸としては、アスパラギン、グルタミン、セリン、及びトレオニンが挙げられる。

【0071】

「保存的変異」は、非置換の親アミノ酸の代わりに置換アミノ酸を使用することも包含し、ただし、置換ポリペプチドに対して産生された抗体は、非置換ポリペプチドとも免疫反応する。かかる保存的置換は、本発明のペプチドのクラスの定義内である。ペプチドの生物活性は、当業者に既知であり、本明細書に記載される標準的方法により決定され得る。

【0072】

核酸に関し、用語「実質的相同性」は、２つの核酸又はそれらの指定される配列が、最適にアライメントされ、比較される場合に、適切なヌクレオチドの挿入又は欠失を伴い、少なくとも約８０％のヌクレオチド、少なくとも約９０％～９５％、又は少なくとも約９８％～９９．５％のヌクレオチドにおいて同一であることを示す。あるいは、実質的相同性は、セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件下でその鎖の相補鎖にハイブリダイズする場合、存在する。

【0073】

ポリペプチドに関し、用語「実質的相同性」は、２つのポリペプチド又はそれらの指定される配列が、最適にアライメントされ、比較される場合に、適切なアミノ酸の挿入又は欠失を伴い、少なくとも約８０％のアミノ酸、少なくとも約９０％～９５％のアミノ酸、又は少なくとも約９８％～９９．５％のアミノ酸において同一であることを示す。

【0074】

２つの配列間の同一性パーセントは、配列により共有される同一な位置の数の関数であり（すなわち、相同性％＝同一な位置の数／位置の総数×１００）、２つの配列の最適アライメントのために導入される必要があるギャップの数、及び各ギャップの長さを考慮する。配列の比較、及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、下記の非限定的な例に記載されるような数学的アルゴリズムを使用して実施され得る。

【0075】

２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（www.gcg.comで利用可能）のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリクス、及び４０、５０、６０、７０、又は８０のギャップの重み、及び１、２、３、４、５、又は６の長さの重みを使用して決定され得る。また２つのヌクレオチド配列間又はアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれた、E. Meyers及びW. Miller（CABIOS, 4:11-17 (1989)）のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティ及び４のギャップペナルティを使用して決定され得る。

【0076】

さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（www.gcg.comで利用可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれたNeedleman及びWunsch（J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970)）のアルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリクス又はＰＡＭ２５０マトリクスのいずれか、及び１６、１４、１２、１０、８、６、又は４のギャップの重み、及び１、２、３、４、５、又は６の長さ重みを使用して決定され得る。

【0077】

本明細書に記載される核酸配列及びタンパク質配列は、更に、例えば、関連する配列を同定するために、公共データベースに対する検索を実行するための「クエリー配列」として使用され得る。かかる検索は、Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行され得る。本明細書に記載される核酸分子に相同なヌクレオチド配列を取得するために、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２で実行され得る。

【0078】

本明細書に記載されるタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を取得するために、ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で実行され得る。比較目的でギャップ付きアライメントを取得するために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが、Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25 (17):3389-3402に記載されるように利用され得る。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、各プログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータが使用され得る。www.ncbi.nlm.nih.govを参照のこと。

【0079】

核酸は、全細胞に存在してもよく、細胞溶解物中に存在してもよく、又は部分的に精製された形態、若しくは実質的に純粋な形態で存在してもよい。核酸は、他の細胞成分又は他の夾雑物、例えば、他の細胞核酸（例えば、染色体の他の部分）又はタンパク質から、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、及び当該技術分野において既知の他のものが挙げられる、標準的な技術により精製された場合、「単離」されているか、又は「実質的に純粋」となる。F. Ausubel, et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)を参照のこと。

【0080】

核酸、例えば、ｃＤＮＡは、遺伝子配列を得るために、標準的な技術によって変異され得る。コード配列に関し、これらの変異はアミノ酸配列に所望される影響を及ぼし得る。特に、天然のＶ配列、Ｄ配列、Ｊ配列、定常配列、スイッチ配列に対し実質的に相同であるか、又はそれらに由来するＤＮＡ配列、及び本明細書に記載される他のかかる配列が意図される（ここで、「由来する」は、配列が別の配列と同一であるか、又は別の配列から改変されていることを示す）。

【0081】

本明細書で使用する場合、用語「ベクター」は、連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことを意図する。ベクターの一種は「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターは、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得るウイルスベクターである。或る特定のベクターは、それらが導入された宿主細胞内で自己複製が可能である（例えば、細菌の複製開始点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。

【0082】

他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノムに組み込まれ得て、これにより、宿主ゲノムと共に複製される。さらに、或る特定のベクターは、それらが作動可能に連結された遺伝子の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書において「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、多くの場合プラスミドの形態である。プラスミドが最も一般的に用いられるベクターの形態であるため、本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」は互換的に使用され得る。しかしながら、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）等の同等の機能を果たす他の形態の発現ベクターも挙げられる。

【0083】

本明細書で使用する場合、用語「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）は、細胞に天然に存在しない核酸を含む細胞を指すことを意図し、組換え発現ベクターが導入された細胞であり得る。かかる用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の子孫も指すことを意図することを理解すべきである。変異又は環境の影響のいずれかに起因して或る特定の改変がその後の世代に発生する場合があるため、かかる子孫は実際には親細胞と同一であるはずはないが、本明細書で使用する場合、それでも用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。

【0084】

本明細書で使用する場合、用語「連結された」は、２つ以上の分子の会合を指す。連結は、共有結合性又は非共有結合性であり得る。また連結は、遺伝子的であってもよい（すなわち、組換え的に融合されていてもよい）。かかる連結は、当該技術分野において認められた多種多様な技術、例えば、化学的コンジュゲーション及び組換えタンパク質生成を使用して達成され得る。

【0085】

「エフェクター機能」は、抗体Ｆｃ領域のＦｃ受容体若しくはＦｃリガンドとの相互作用、又はそれにより生じる生化学的事象を指す。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）等のＦｃγＲにより媒介されるエフェクター機能、並びに細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方調節が挙げられる。かかるエフェクター機能は、通常、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とする。

【0086】

「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲとしては、ＦｃγＲファミリーの受容体のアレルバリアント及び選択的にスプライシングされた形態を包含する、ＦｃγＲファミリーの受容体が挙げられる。ＦｃγＲファミリーは、３つの活性化受容体（マウスにおけるＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、及びＦｃＲＩＶ；ヒトにおけるＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ、及びＦｃγＲＩＩＩＡ）及び１つの抑制性受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）からなる。ヒトＦｃγＲの様々な特性が当該技術分野において既知である。大部分の自然エフェクター細胞種が、１つ以上の活性化ＦｃγＲ及び抑制性ＦｃγＲＩＩＢを共発現する一方で、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、マウス及びヒトにおいて１つの活性化Ｆｃ受容体（マウスにおけるＦｃγＲＩＩＩ及びヒトにおけるＦｃγＲＩＩＩＡ）を選択的に発現するが、抑制性ＦｃγＲＩＩＢを発現しない。ヒトＩｇＧ１は、殆どのヒトＦｃ受容体に結合し、それが結合する活性化Ｆｃ受容体の種類に関してマウスＩｇＧ２ａと同等であると考えられる。

【0087】

「Ｆｃ領域」（結晶化可能領域）又は「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ」は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）上に存在するＦｃ受容体への結合、又は古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）への結合が挙げられる、免疫グロブリンと宿主組織又は因子との結合を媒介する抗体の重鎖のＣ末端領域を指す。したがって、Ｆｃ領域は、第１定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１又はＣＬ）を除く抗体の定常領域を含む。

【0088】

ＩｇＧにおいて、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンドメインＣＨ２及びＣＨ３並びにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間のヒンジを含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界の定義は様々であり得るが、本明細書で定義されるように、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１についてＤ２２１、ＩｇＧ２についてＶ２２２、ＩｇＧ３についてＬ２２１、及びＩｇＧ４についてＰ２２４のアミノ酸残基から重鎖のカルボキシ末端までの区間と定義され、ここで、番号付けは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従う。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、アミノ酸２３７からアミノ酸３４０に及び、Ｆｃ領域のＣＨ３ドメインは、ＣＨ２ドメインのＣ末端側に位置する。すなわち、ＣＨ３ドメインは、ＩｇＧのアミノ酸３４１からアミノ酸４４７又はアミノ酸４４６（Ｃ末端リジン残基が存在しない場合）又はアミノ酸４４５（Ｃ末端グリシン及びリジン残基が存在しない場合）に及ぶ。本明細書で使用する場合、Ｆｃ領域は、任意のアロタイプのバリアントを包含する天然配列Ｆｃ、又はバリアントＦｃ（例えば、非天然Ｆｃ）であり得る。Ｆｃは、単離されたこの領域、又はＦｃを含むタンパク質ポリペプチド、例えば、「Ｆｃ融合タンパク質」とも称される「Ｆｃ領域を含む結合タンパク質」（例えば、抗体又はイムノアドヘシン）の文脈におけるこの領域も指し得る。

【0089】

「天然配列Ｆｃ領域」又は「天然配列Ｆｃ」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域としては、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、並びに天然に存在するそれらのバリアントが挙げられる。天然配列Ｆｃは、種々のアロタイプのＦｃを包含する（例えば、Jefferis et al., mAbs 1:1 (2009)を参照のこと）。

【0090】

「バリアント配列Ｆｃ領域」又は「非天然Ｆｃ」は、典型的に、その機能特性、例えば、とりわけ血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、タンパク質安定性、及び／又は抗原依存性細胞傷害活性、又はそれらの欠如のうちの１つ以上を変化させるための改変を含む。幾つかの実施形態において、本開示の抗体は、同様に抗体の１つ以上の機能特性を変化させるために、化学修飾され得る（例えば、１つ以上の化学部分が抗体に結合され得る）か、又はそのグリコシル化を変化させるように修飾され得る。

【0091】

用語「ヒンジ」、「ヒンジドメイン」、「ヒンジ領域」、及び「抗体ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに連結し、ヒンジの上部、中部、及び下部を含む重鎖定常領域のドメインを指す（Roux et al., J Immunol 161:4083 (1998)）。ヒンジは、抗体の結合領域とエフェクター領域との間の様々なレベルの柔軟性をもたらし、２つの重鎖定常領域間での分子間ジスルフィド結合のための部位も提供する。本明細書で使用する場合、ヒンジは、全てのＩｇＧアイソタイプについて、Ｇｌｕ２１６から始まり、Ｇｌｙ２３７で終わる（Roux et al., J Immunol 161:4083 (1998)）。野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のヒンジの配列は、当該技術分野において既知である（例えば、ＰＣＴ出願である国際公開第２０１７／０８７６７８号）。一実施形態において、抗体のＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域におけるシステイン残基の数が変化するように、例えば、増加又は減少するように改変される。このアプローチは、例えば、米国特許第５，６７７，４２５号に更に記載されている。

【0092】

定常領域は、抗体を安定化するために、例えば、二価抗体が２つの一価のＶＨ－ＶＬ断片に分離するリスクを低減するために改変され得る。例えば、ＩｇＧ４定常領域における残基Ｓ２２８（ＥＵインデックスによる残基の番号付け）は、ヒンジでの重鎖間ジスルフィド架橋形成を安定化するために、プロリン（Ｐ）残基に変異され得る（例えば、Angal et al., Mol Immunol. 30:105-8 (1995)を参照のこと）。抗体又はその断片は、それらの相補性決定領域（ＣＤＲ）の観点から定義されてもよい。

【0093】

本明細書で使用する場合、用語「相補性決定領域」又は「超可変領域」は、抗原結合に関与するアミノ酸残基が存在する抗体の領域を指す。超可変領域又はＣＤＲは、抗体可変ドメインのアミノ酸アラインメントにおいて最も高い多様性を有する領域として同定され得る。Ｋａｂａｔデータベース等のデータベースが、ＣＤＲ同定に使用され得て、例えば、ＣＤＲは、軽鎖可変ドメインのアミノ酸残基２４～３４（ＣＤＲ１）、５０～５９（ＣＤＲ２）及び８９～９７（ＣＤＲ３）、並びに重鎖可変ドメインの３１～３５（ＣＤＲ１）、５０～６５（ＣＤＲ２）及び９５～１０２（ＣＤＲ３）を含むと定義される（Kabat et al. 1991; Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242）。代替的に、ＣＤＲは、「超可変ループ」由来の残基（軽鎖可変ドメインの残基２６～３３（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、及び９１～９６（Ｌ３）、並びに重鎖可変ドメインの残基２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol 196:901-917 (1987)）として定義され得る。本明細書に記載される抗体配列のＣＤＲ領域は、好ましくは、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けスキームの改変物であるＩＭＧＴの番号付けスキームにより定義される（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（商標）；Lefranc, M.-P. et al. IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Nucleic Acids Res 27, 209-212 (1999);http://imgt.cines.fr）。

【0094】

用語「エピトープ」又は「抗原決定基」は、例えば、これを同定するために使用される特定の方法により定義される、免疫グロブリン又は抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、連続アミノ酸（通常、直鎖状エピトープ）又はタンパク質の三次折りたたみにより並置された非連続アミノ酸（通常、立体構造エピトープ）の両方により形成され得る。連続アミノ酸により形成されたエピトープは、通常、変性溶媒への曝露に際して保持されるがそうでない場合もある一方で、三次折りたたみにより形成されたエピトープは、通常、変性溶媒で処理されると消失する。

【0095】

エピトープは、通常、固有の空間的立体配置の少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、又は１５個のアミノ酸を含む。どのエピトープが所与の抗体により結合されるかを決定する方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当該技術分野において既知であり、例えば、（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質由来の）重複ペプチド又は連続ペプチドが所与の抗体との反応性について試験される、免疫ブロット法及び免疫沈降アッセイが挙げられる。エピトープの空間的立体配置を決定する方法としては、当該技術分野における技術及び本明細書に記載されるもの、例えば、Ｘ線結晶構造解析、抗原変異解析、二次元核磁気共鳴、及びＨＤＸ－ＭＳが挙げられる（例えば、Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)を参照のこと）。

【0096】

２種以上の抗体に関して、用語「同一のエピトープに結合する」は、所与の方法により決定されるように、これらの抗体がアミノ酸残基の同じセグメントに結合することを意味する。抗体が本明細書に記載される抗体と「同一のエピトープ」に結合するかどうかを決定するための技術としては、例えば、エピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線解析及び水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）等のエピトープマッピング方法が挙げられる。

【0097】

他の方法は、抗体の抗原断片又は変異型の抗原への結合をモニタリングし、ここで、抗原配列内のアミノ酸残基の改変に起因する結合の喪失が、多くの場合、エピトープ成分の指標と考えられる。加えて、エピトープマッピングのためのコンピュータによる組み合わせの方法も使用され得る。これらの方法は、ファージディスプレイペプチドライブラリーの組み合わせから特異的な短ペプチドを親和性により単離する関心対象の抗体の能力に依存する。同じＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ、又は同じＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する抗体は、同一のエピトープに結合すると予想される。

【0098】

「標的への結合について別の抗体と競合する」抗体は、他の抗体の標的への結合を（部分的又は完全に）阻害する抗体を指す。２種の抗体が標的への結合について互いに競合するかどうか、すなわち、一方の抗体が他方の抗体の標的への結合を阻害するかどうか、及びどの程度阻害するかは、既知の競合実験、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析を使用して決定され得る。或る特定の実施形態において、抗体は、別の抗体と競合し、別の抗体の標的への結合を少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％阻害する。阻害又は競合のレベルは、どの抗体が「遮断抗体」（すなわち、標的と最初にインキュベートされる寒冷抗体）であるかに応じて異なり得る。

【0099】

競合アッセイは、例えば、Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.prot4277又はEd Harlow及びDavid Laneによる"Using Antibodies"（Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA 1999）の第１１章に記載されるように実施され得る。両方の方法で、すなわち、どちらの抗体が競合実験において抗原と最初に接触されるかどうかにかかわらず、抗体が互いを少なくとも５０％阻害する場合、２種の抗体は「交差競合」する。

【0100】

本明細書で使用する場合、用語「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」、及び「特異的に結合する」は、所定の抗原上のエピトープに結合する抗体を指す。典型的には、抗体は、（ｉ）例えば、分析物として所定の抗原及びリガンドとして抗体を使用したＢＩＡＣＯＲＥ（商標） ２０００機器での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術又は抗体の抗原陽性細胞への結合のスキャッチャード解析により決定される場合に、約１０^－７Ｍ未満、例えば、約１０^－８Ｍ未満、１０^－９Ｍ未満、若しくは１０^－１０Ｍ未満の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）又は更に低い平衡解離定数で結合し、（ｉｉ）所定の抗原又は密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合の親和性よりも少なくとも２倍高い親和性で所定の抗原に結合する。

【0101】

本明細書において、用語「結合親和性」は、２つの分子間、例えば、抗体又はその断片と抗原との間の非共有結合性相互作用の強さの測定値を指す。用語「結合親和性」は、一価相互作用（内因活性）を表現するために使用される。

【0102】

一価相互作用による２つの分子間、例えば、抗体又はその断片と抗原との間の結合親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を決定することにより定量化され得る。そしてまたＫ_Ｄは、例えば、ＳＰＲ法による複合体形成及び解離の動態の測定により決定され得る。一価複合体の会合及び解離に対応する速度定数は、それぞれ、会合速度定数ｋ_ａ（又はｋ_ｏｎ）及び解離速度定数ｋ_ｄ（又はｋ_ｏｆｆ）と称される。Ｋ_Ｄは、式Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｄ／ｋ_ａによりｋ_ａ及びｋ_ｄと関連する。上記の定義に従って、異なる分子相互作用に関連する結合親和性、例えば、所与の抗原に対する異なる抗体の結合親和性の比較は、個々の抗体／抗原複合体のＫ_Ｄ値の比較により比較され得る。

【0103】

本明細書で使用する場合、ＩｇＧ抗体に関する用語「高親和性」は、標的抗原に対する１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、若しくは１０^－１０ＭのＫ_Ｄ、又は更に低いＫ_Ｄを有する抗体を指す。しかしながら、「高親和性」結合は、他の抗体アイソタイプでは異なり得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプの「高親和性」結合は、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、若しくは１０^－１０ＭのＫ_Ｄ、又は更に低いＫ_Ｄを有する抗体を指す。

【0104】

本明細書において、用語「結合特異性」は、抗体又はその断片等の分子の、唯一の排他的抗原との、又は限られた数の相同性の高い抗原（又はエピトープ）との相互作用を指す。対照的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に特異的に結合することができる抗体は、異なる分子に結合することができない。

【0105】

相互作用の特異性及び平衡結合定数の値は、既知の方法により直接決定され得る。リガンド（例えば、抗体）がそれらの標的に結合する能力を評価するための標準的なアッセイは、当該技術分野において既知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、ＲＩＡ、及びフローサイトメトリー解析が挙げられる。抗体の結合動態及び結合親和性は、ＳＰＲ等の当該技術分野において既知の標準的なアッセイによっても評価され得る。

【0106】

本明細書で使用する場合、用語「ビン（bin）」は、参照抗体を使用して定義される。第２の抗体が参照抗体と同時に抗原に結合できない場合、この第２の抗体は、参照抗体と同じ「ビン」に属すると言われる。この場合、参照抗体及び第２の抗体は、抗原の同じ部分に競合的に結合し、作られた「競合抗体」である。第２の抗体が参照抗体と同時に抗原に結合することができる場合、この第２の抗体は、別個の「ビン」に属すると言われる。この場合、参照抗体及び第２の抗体は、抗原の同じ部分に競合的に結合せず、作られた「非競合抗体」である。

【0107】

抗体「ビニング」は、エピトープに関する直接的な情報は提供しない。競合抗体、すなわち同じ「ビン」に属する抗体は、同一のエピトープ、重複するエピトープ、又は更には異なるエピトープを有し得る。後者は、抗原上のエピトープに結合した参照抗体が、第２の抗体が抗原上のそのエピトープに接触するために必要とされる空間を占めている場合である（「立体障害」）。非競合抗体は、一般に異なるエピトープを有する。

【0108】

抗体又はその抗原結合断片を使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏアッセイの文脈において、用語「ＥＣ_５０」は、最大応答の５０％、すなわち、最大応答とベースラインとの間の中間の応答を誘導する抗体又はその抗原結合部分の濃度を指す。

【0109】

本明細書で使用する場合、対象に適用される用語「天然に存在する」は、対象が天然に見出され得るという事実を指す。例えば、自然の供給源から単離することができ、研究室の人によって意図的に改変されていない、生物（ウイルスを包含する）中に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。

【0110】

「ポリペプチド」は、少なくとも２個の連続的に連結されたアミノ酸残基を含む鎖を指し、鎖の長さに上限はない。タンパク質中の１個以上のアミノ酸残基は、限定されるものではないが、グリコシル化、リン酸化、又はジスルフィド結合形成等の修飾を含有し得る。「タンパク質」は、１つ以上のポリペプチドを含み得る。

【0111】

用語「核酸分子」は、本明細書で使用する場合、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を包含することを意図する。核酸分子は、一本鎖又は二本鎖であり得て、ｃＤＮＡであり得る。

【0112】

用語「対象」は、予防的処置又は治療的処置のいずれかを受けるヒト及び他の哺乳動物対象を包含する。本明細書で使用する場合、用語「対象」は、任意のヒト又は非ヒト動物を包含する。用語「非ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物及び非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類等を包含する。

【0113】

本明細書で使用する場合、用語「ｕｇ」及び「ｕＭ」は、それぞれ、「μｇ」及び「μＭ」と互換的に使用される。

【0114】

「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲとしては、ＦｃγＲファミリーの受容体のアレルバリアント及び選択的にスプライシングされた形態を包含する、ＦｃγＲファミリーの受容体が挙げられる。ＦｃγＲファミリーは、３つの活性化受容体（マウスにおけるＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、及びＦｃγＲＩＶ；ヒトにおけるＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ、及びＦｃγＲＩＩＩＡ）及び１つの抑制性受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）からなる。ヒトＦｃγＲの様々な特性が当該技術分野において既知である。大部分の自然エフェクター細胞種が、１つ以上の活性化ＦｃγＲ及び抑制性ＦｃγＲＩＩＢを共発現する一方で、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、マウス及びヒトにおいて１つの活性化Ｆｃ受容体（マウスにおけるＦｃγＲＩＩＩ及びヒトにおけるＦｃγＲＩＩＩＡ）を選択的に発現するが、抑制性ＦｃγＲＩＩＢを発現しない。ヒトＩｇＧ１は、殆どのヒトＦｃ受容体に結合し、それが結合する活性化Ｆｃ受容体の種類に関してマウスＩｇＧ２ａと同等であると考えられる。

【0115】

「Ｆｃ領域」（結晶化可能領域）又は「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ」は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）上に存在するＦｃ受容体への結合、又は古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）への結合が挙げられる、免疫グロブリンと宿主組織又は因子との結合を媒介する抗体の重鎖のＣ末端領域を指す。したがって、Ｆｃ領域は、第１定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１又はＣＬ）を除く抗体の定常領域を含む。

【0116】

ＩｇＧにおいて、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンドメインＣＨ２及びＣＨ３並びにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間のヒンジを含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界の定義は様々であり得るが、本明細書で定義されるように、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１についてＤ２２１、ＩｇＧ２についてＶ２２２、ＩｇＧ３についてＬ２２１、及びＩｇＧ４についてＰ２２４のアミノ酸残基から重鎖のカルボキシ末端までの区間と定義され、ここで、番号付けは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従う。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、アミノ酸２３７からアミノ酸３４０に及び、Ｆｃ領域のＣＨ３ドメインは、ＣＨ２ドメインのＣ末端側に位置する。すなわち、ＣＨ３ドメインは、ＩｇＧのアミノ酸３４１からアミノ酸４４７又はアミノ酸４４６（Ｃ末端リジン残基が存在しない場合）又はアミノ酸４４５（Ｃ末端グリシン及びリジン残基が存在しない場合）に及ぶ。

【0117】

本明細書で使用する場合、Ｆｃ領域は、任意のアロタイプのバリアントを包含する天然配列Ｆｃ、又はバリアントＦｃ（例えば、非天然Ｆｃ）であり得る。Ｆｃは、単離されたこの領域、又はＦｃを含むタンパク質ポリペプチド、例えば、「Ｆｃ融合タンパク質」とも称される「Ｆｃ領域を含む結合タンパク質」（例えば、抗体又はイムノアドヘシン）の文脈におけるこの領域も指し得る。

【0118】

本明細書で使用する場合、「投与する」は、当業者に既知の種々の方法及び送達系のいずれかを使用した、治療薬を含む組成物の対象への物理的導入を指す。本明細書に記載される抗体の種々の投与経路としては、例えば、注射又は注入による、静脈内投与経路、腹腔内投与経路、筋肉内投与経路、皮下投与経路、脊髄投与経路、又は他の非経口投与経路が挙げられる。

【0119】

本明細書で使用する場合、語句「非経口投与」は、通常、注射による、経腸投与及び局所投与以外の投与様式を意味し、限定されるものではないが、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、リンパ腺内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入、並びにｉｎ ｖｉｖｏエレクトロポレーションが挙げられる。

【0120】

あるいは、本明細書に記載される抗体は、局所投与経路、表皮投与経路、又は粘膜投与経路等の非経静脈経路により、例えば、鼻腔内に、経口的に、経膣的に、直腸に、舌下的に、又は局所的に投与され得る。投与はまた、例えば、１回、複数回、及び／又は１つ以上の長期間にわたり実行され得る。

【0121】

用語「Ｃ_ｍａｘ」は、薬剤の投与後に対象において観察される薬剤の最大若しくはピーク血清濃度又は最大若しくはピーク血漿濃度を指す。

【0122】

本明細書で使用する場合、「ワクチン接種組成物」は、能動免疫及び／又は受動免疫をもたらすことができる本発明の少なくとも１種の抗体又はその抗原結合部分を含む医薬組成物を意味する。本明細書で使用する場合、「能動免疫」は、抗原に対する対象の免疫反応を誘発又は増強することを意味する。「受動免疫」は、本明細書で使用する場合、抗原を中和する抗体及び／又はその抗原結合部分を提供することにより、抗原又は病原体に対する対象の免疫反応を補うことを意味する。

【0123】

一実施形態において、本発明の抗体又はその抗原結合部分は、静脈内投与され、約５μｇ／ｍＬ～約２３５μｇ／ｍＬの最高血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）；約５μｇ／ｍＬ～約８μｇ／ｍＬのピーク濃度（Ｃ_ｍａｘ）；約５μｇ／ｍＬ～約１０μｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘ；約５５μｇ／ｍＬ～約９０μｇ／ｍＬのピーク濃度（Ｃ_ｍａｘ）；約１８５μｇ／ｍＬ～約２５０μｇ／ｍＬのピーク濃度（Ｃ_ｍａｘ）；約１９０μｇ／ｍＬ～約２３５μｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘを示す。別の実施形態において、Ｃ_ｍａｘは、約５μｇ／ｍＬ～約５０μｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ～約７５μｇ／ｍＬ、約７５μｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ～約１２５μｇ／ｍＬ、約１２５μｇ／ｍＬ～約１５０μｇ／ｍＬ、約１５０μｇ／ｍＬ～約１７５μｇ／ｍＬ、約１７５μｇ／ｍＬ～約２００μｇ／ｍＬ、又は約２００μｇ／ｍＬ～約２３５μｇ／ｍＬである。

【0124】

用語「Ｔ_ｍａｘ」は、Ｃ_ｍａｘが発生した時間を指す。一実施形態において、本発明の抗体又はその抗原結合部分は、静脈内又は皮下に投与され、約１日～約５日のＴ_ｍａｘ；約３日～約５日のＴ_ｍａｘ；約５日以下のＴ_ｍａｘ；約１日のＴ_ｍａｘ、約２日のＴ_ｍａｘ、約３日のＴ_ｍａｘ、約４日のＴ_ｍａｘ、約５日のＴ_ｍａｘ、約６日のＴ_ｍａｘ、約７日のＴ_ｍａｘ、約８日のＴ_ｍａｘ、約９日のＴ_ｍａｘ、又は約１０日のＴ_ｍａｘを示す。

【0125】

用語「バイオアベイラビリティ」又は「Ｆ％」は、所与の剤形の投与後に吸収され、体循環に入る用量の比率又はパーセントを指す。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合部分は、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約１００％のバイオアベイラビリティを示す。

【0126】

用語「ＡＵＣ」又は「曲線下面積」は、クリアランスに関連する。より高いクリアランス率は、より低いＡＵＣ値に関連し、より低いクリアランス率は、より高いＡＵＣ値に関連する。より高いＡＵＣ値は、より遅いクリアランス率を示す。

【0127】

本発明の発明者らは、本発明の問題を解決することに専念し、既知の抗体の不利な点及び欠点を克服する、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する新規かつ有用なヒトモノクローナル抗体を発見することに成功した。

【0128】

本明細書において、本発明者らは、自己反応性を示さず、従来技術の同様の抗体の中和能を上回る、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に対して指向されるヒト起源の新規モノクローナル抗体を記載する。

【0129】

したがって、本発明の抗体は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス感染及びこのような感染により引き起こされる疾患症状を効果的に処置及び予防するための抗体による戦略のための非常に有望な候補である。

【0130】

したがって、本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対して指向された抗体又はその結合断片を提供し、上記抗体又はその結合断片が、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６（配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４（配列番号３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０（配列番号５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１（配列番号７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４（配列番号９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５（配列番号１１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６（配列番号１３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３（配列番号１５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３（配列番号１７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４（配列番号１９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４（配列番号２１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９（配列番号２３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ５ｔ２ｐ１＿Ｇ１（配列番号２５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ１２（配列番号２７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｄ６（配列番号２９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｃ５（配列番号３１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ８（配列番号３３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ１ｔ３ｐ１＿Ｇ９（配列番号３５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ｄ５（配列番号３７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ１０（配列番号３９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｇ６（配列番号４１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ１ｐ２＿Ａ５（配列番号４３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｄ１０（配列番号４５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ２＿Ａ４（配列番号４７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１０（配列番号４９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｅ６（配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１１（配列番号５３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、及びＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｆ５（配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）を含む群からの１つの抗体の重鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３及び軽鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、好ましくは、上記抗体又はその結合断片が、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４、及びＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９を含む群から選択される抗体のうちの１つ、より好ましくは、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、及びＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４を含む群からの１つの抗体の重鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３及び軽鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0131】

本発明の文脈において、作製され、本明細書に記載された抗体は、モノクローナル完全ヒト抗体として、又はその任意の機能的断片若しくは結合断片として使用され得て、特許請求され得る。好ましくは、抗体又はその任意の種類の機能的断片若しくは結合断片は、少なくとも抗体の重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１～３及び軽鎖のＣＤＲ１～３を含まなければならない。

【0132】

本明細書に記載される抗体配列のＣＤＲ領域は、好ましくは、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けスキームの改変物であるＩＭＧＴの番号付けスキームにより定義される（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（商標）；Lefranc, M.-P. et al. IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Nucleic Acids Res 27, 209-212 (1999); http://imgt.cines.fr）。

【0133】

一般的知識並びに本発明の抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列及び軽鎖可変領域アミノ酸配列に関して本明細書において提供される情報に基づいて、ＣＤＲは、容易かつ明白に当業者により決定され得る。

【0134】

本発明の好ましい一実施形態によれば、本明細書に記載される抗体の軽鎖配列及び重鎖配列のＣＤＲ配列は、以下の通りである。

【0135】

【0136】

好ましくは、本発明は、配列番号１９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖可変領域アミノ酸配列並びに配列番号１１３～配列番号１１８のＣＤＲアミノ酸配列を有する本明細書に記載される抗体ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４の派生物を更に含み、ここで、派生物は、配列番号２２７の重鎖のＣＤＲ２配列を有し、及び／又は派生物は、配列番号２２８の軽鎖のＣＤＲ３配列を有する。

【0137】

別の実施形態において、本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対して、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質に対して指向された抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号１１９のＣＤＲ１、配列番号１２０のＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、配列番号１２２のＣＤＲ１、配列番号１２３のＣＤＲ２、及び配列番号１２４のＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0138】

別の実施形態において、本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対して、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質に対して指向された、配列番号２１の重鎖可変領域及び配列番号２２の軽鎖可変領域を含む抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0139】

本発明の特に好ましい一実施形態によれば、抗体は、配列番号２２９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２３０の軽鎖アミノ酸配列を有する。この抗体は、重鎖定常ドメインの末端リジンが除去された、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４のバリアントである（本明細書において、ＤＺＩＦ－１０ｃと称され、代替的に、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４（－Ｋ）と称される）。本発明の異なる実施形態において、抗体は、配列番号２１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖アミノ酸配列を含む。この実施形態において、抗体ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４（－Ｋ）の重鎖定常領域の末端リジンは、依然として存在する。

【0140】

別の実施形態において、抗体は、配列番号２２９の２つの重鎖、及び配列番号２３０の２つの軽鎖からなる。

【0141】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載される抗体をコードする核酸に関する。別の実施形態において、核酸は、発現制御配列と機能的に結合している本明細書に記載される核酸を含む発現ベクターである。

【0142】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載される核酸を含む宿主細胞に関する。別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載される発現ベクターを含む宿主細胞に関する。

【0143】

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載される抗体を生成する方法であって、
（ａ）抗体の発現を可能にする条件下で記載される宿主細胞を培養することと、
（ｂ）抗体を回収することと、
を含む、方法に関する。

【0144】

別の実施形態において、本発明は、異なる結合特異性を有する、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対して指向された少なくとも１種の更なる抗体と組み合わせて医薬品に使用される、本明細書に記載されるＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する抗体に関する。

【0145】

好ましい一実施形態によれば、本発明は、抗体又はその結合断片であって、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６（配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４（配列番号３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０（配列番号５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１（配列番号７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４（配列番号９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５（配列番号１１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６（配列番号１３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３（配列番号１５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３（配列番号１７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号１８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４（配列番号１９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４（配列番号２１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９（配列番号２３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ５ｔ２ｐ１＿Ｇ１（配列番号２５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ１２（配列番号２７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｄ６（配列番号２９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｃ５（配列番号３１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｅ８（配列番号３３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ１ｔ３ｐ１＿Ｇ９（配列番号３５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＨｂｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ｄ５（配列番号３７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号３８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ１０（配列番号３９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｇ６（配列番号４１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＦｎＣ１ｔ１ｐ２＿Ａ５（配列番号４３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｄ１０（配列番号４５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ２＿Ａ４（配列番号４７の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号４８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１０（配列番号４９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｅ６（配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、ＭｎＣ４ｔ１ｐ１＿Ａ１１（配列番号５３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５４の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）、及びＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｆ５（配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する）を含む群から選択される１つの抗体、好ましくは、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４、ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｃ６、ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３、ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３、ＣｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ｂ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４、及びＨｂｎＣ２ｔ１ｐ２＿Ｄ９を含む群からの１つの抗体、より好ましくは、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｃ６、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｇ４、ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ２＿Ｂ１０、ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１、及びＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４を含む群からの１つの抗体の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む、抗体又はその結合断片も提供する。

【0146】

一般に、本明細書に記載される抗体又はその結合断片は、それらが依然として配列番号５７のようなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に対して指向される限り、好ましくは、それらが依然として配列番号５８のようなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に対して指向される限り、上記に定義した配列と少なくとも８０％同一である抗体アミノ酸配列を更に含む。

【0147】

このことは、構造の折り畳みに干渉せず、抗体のスパイク（Ｓ）タンパク質に対する親和性を損なわない、抗体アミノ酸配列の些細な変異、すなわち、保存的変異を有する配列を含むことを意味する。好ましくは、本明細書において明示的に開示される個別の配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％の全体的同一性をもたらすアミノ酸配列の逸脱は、本発明による抗体のＣＤＲ領域の外側に排他的に存在する。特に、本発明は、抗体の定常領域内に１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの変異を有する抗体アミノ酸配列を包含する。

【0148】

本発明による抗体は、好ましくはヒト起源である。したがって、少なくともＣＤＲの外側の配列、例えば、抗体のフレームワーク及び定常領域は、好ましくは、ヒト起源のものであるか、又はヒト起源のものとみなされ得る。さらに、本発明の抗体は、好ましくはモノクローナルである。

【0149】

好ましい一実施形態において、抗体は、結合特異性及び感染性病原体を中和する能力を保持するモノクローナル抗体又はその断片である。好ましい一実施形態において、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。例えば、抗体は、任意のヒトＩｇＧアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃドメインを含む抗体であり得る。

【0150】

所望により、抗原結合性化合物は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆｖ、ダイアボディ、単鎖抗体断片、又は複数の異なる抗体断片を含む多特異性抗体のみからなるか、又はそれらを含む。

【0151】

本発明において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に対して指向された抗体又は結合断片は、無関係なエピトープ、タンパク質、又はタンパク質領域と比較して少なくとも１０倍、より好ましくは少なくとも５０倍、特に好ましくは少なくとも１００倍に増加した親和性でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に結合する抗体を意味する。

【0152】

上記の知識又は一般的知識に基づいて、特定の同一性の程度を示す抗体がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に対して指向されるかどうかを決定することは、当業者にとって些細な作業である。

【0153】

２つの配列間の同一性パーセントの決定は、本発明に従って、Karlin及びAltschulの数学アルゴリズムを使用することにより達成される（Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993) 90:5873-5877）。かかるアルゴリズムは、Altschulら（J. Mol. Biol. (1990) 215:403-410）のＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＰプログラムの基礎である。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＢＬＡＳＴＮプログラムにより実行される。比較目的でギャップ付きアライメントを取得するために、Altschulら（Nucleic Acids Res. (1997) 25:3389-3402）により記載されるように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが利用される。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、各プログラムのデフォルトのパラメータが使用される。

【0154】

本発明の好適な実施形態によれば、上記に定義され、本明細書において開示される配列と少なくとも８５％同一であり、より好ましくは、少なくとも９０％同一であり、さらにより好ましくは、少なくとも９５％同一である核酸配列のみからなるか、又はそれを含む抗体アミノ酸配列は、本発明の一部をなすものである。

【0155】

本発明の好適な実施形態によれば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株は、当該技術分野においてＳＡＲＳ関連コロナウイルス２と代替的に称され得る重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。本発明の別の好ましい実施形態によれば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）である。

【0156】

本発明の別の好ましい実施形態によれば、抗体又はその結合断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の外部ドメインに対して指向される。

【0157】

本発明のより好ましい実施形態によれば、抗体又はその結合断片は、Wrapp et al., Science (2020) doi:10.1126/science.abb2507に記載されているウイルス分離株Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１の融合前安定化バリアントにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）ホモ三量体の外部ドメイン（配列番号５７）に対して指向される。このウイルス分離株は、集中的に研究されており、出願時に最もよく理解されているウイルス分離株である。

【0158】

しかしながら、好ましくは、抗体又はその結合断片は、他のウイルスバリアントの同等の配列に対しても指向されるはずである。特定の一実施形態によれば、抗体又はその結合断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）（配列番号５８）に対して指向される。

【0159】

本発明の好ましい一実施形態によれば、抗体又はその結合断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）（配列番号５８）の外側の、Wrapp et al., Science (2020) doi:10.1126/science.abb2507に記載されているウイルス分離株Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１の融合前安定化バリアントにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）ホモ三量体の外部ドメイン（配列番号５７）の配列に対して指向される。

【0160】

本発明の好ましい一実施形態によれば、抗体又はその結合断片は、Koch et al., Lancet Infect. Dis. (2020) doi:10.1016/s1473-3099(20)30248-6に従って、ウイルス及び抗体の３７℃で１時間の共インキュベーション後にＶｅｒｏＥ６細胞に適用された１００ＴＣＩＤ_５０のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を使用してウイルス中和試験で試験される場合に、ＶｅｒｏＥ６細胞上の本物のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２分離株であるＢａｖＰａｔ１／２０２０の１０μｇ／ｍｌ未満の中和能（ＩＣ_１００；細胞変性効果の完全な欠如をもたらす抗体の最低用量）を示す。

【0161】

一態様では、上記に記載される中和能は、以下の実施例セクションに開示される「ウイルス中和試験」のプロトコルに従って試験される。本発明の好ましい実施形態によれば、抗体又はその結合断片は、１μｇ／ｍｌ未満、より好ましくは、０．５μｇ／ｍｌ未満、さらにより好ましくは、０．２５μｇ／ｍｌ以下、特に好ましくは、０．１２μｇ／ｍｌ以下の中和能を示す。

【0162】

本発明の好ましい一実施形態によれば、抗体又はその結合断片は、表面プラズモン共鳴により決定されるように、配列番号５８のＲＢＤに対する２０ｎＭ以下、好ましくは、５ｎＭ以下、より好ましくは、１ｎＭ以下、さらにより好ましくは、０．２ｎＭ以下、特に好ましくは０．１ｎＭ以下の結合定数（Ｋ_Ｄ）を示す。

【0163】

本発明の好ましい実施形態によれば、抗体又はその結合断片は、抗核抗体（ＡＮＡ）検査キット（ＮＯＶＡ－Ｌｉｔｅ ＨＥｐ－２ ＡＮＡキット；Inova Diagnostics）を使用して、１００μｇ／ｍｌの抗体又はその結合断片の濃度で、透過処理されたＨＥｐ－２細胞に対して試験される場合の検出可能な結合として定義される、ヒト細胞に対する自己反応性を示さない。好ましくは、代替的に当該技術分野において既知の他のアッセイが、抗体又はその結合断片の自己反応性を決定又は除外するために使用され得る。

【0164】

本出願の記載において、抗体の名称が使用され得る。抗体は重鎖及び軽鎖からなり、これらは同様に本発明の説明の一部をなすことに注意されたい。名称による抗体への参照又は配列番号への参照がなされる場合、これらの参照方法は互換的であることを理解すべきである。

【0165】

さらに本発明は、本明細書において定義され、更に記載される本発明による抗体又はその結合断片と、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物に関する。一態様では、医薬組成物は、ヒト及び／又は動物対象用のワクチン接種組成物である。本発明は、本明細書において定義され、更に記載される本発明による抗体又はその結合断片と容器とを備えるキットも包含する。

【0166】

一態様では、本発明は、薬剤として使用される、好ましくは、ワクチンとして使用される、本明細書において定義され、更に記載される本発明による抗体又はその結合断片、本明細書に記載される医薬組成物、及びキットにも関する。

【0167】

別の態様では、本発明は、ヒト又は動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスにより引き起こされる疾患の処置又は予防に使用される、好ましくは、ヒト又は動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）により引き起こされる疾患の処置又は予防に使用される、本明細書において定義され、更に記載される本発明による抗体又はその結合断片、本明細書に記載される医薬組成物、及びキットにも関する。

【0168】

一態様では、本発明は、ヒト及び／又は動物対象のＳＡＲＳ関連コロナウイルス感染、好ましくは、ヒト及び／又は動物対象のＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染の予防に使用される、本明細書において定義され、更に記載される本発明による抗体又はその結合断片、本明細書に記載される医薬組成物、及びキットに関する。

【0169】

本発明の他の態様では、本発明による抗体は、静脈内注射又は注入により投与が必要とされる患者に投与される。好ましい実施形態において、抗体は、１ｍｇ／患者の体重１ｋｇ～１００ｍｇ／患者の体重１ｋｇの用量で静脈内注入により投与される。好ましい実施形態において、抗体は、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、又は１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。対象に投与される本発明の抗体の投与量は、示される症状の重症度並びに対象の年齢、性別、及び健康状態等に応じて更に異なり得る。

【0170】

本発明の他の態様では、本発明による抗体は、吸入適用により投与が必要とされる患者に投与される。好ましい実施形態において、抗体は、吸入適用により投与され、ここで、抗体は、投与前にメッシュ式ネブライザー又はジェット式ネブライザーにより噴霧化される液体医薬組成物中に提供される。好ましい実施形態において、抗体は、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、７５０ｍｇ、又は１０００ｍｇの用量で吸入適用により投与される。別の実施形態において、抗体は、吸入適用により投与され、その後に、静脈内注射又は注入により投与される２回目投与が続く。

【0171】

本発明の医薬組成物は、その意図される投与経路と適合可能となるように製剤化される。投与経路の例としては、限定されるものではないが、非経口投与、例えば、静脈内投与、皮内投与、皮下投与、経口投与、鼻腔内投与（例えば、吸入及び口腔を通した吸入）、経皮投与（例えば、局所投与）、経粘膜投与、及び直腸投与が挙げられる。

【0172】

特定の実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、経口投与、鼻腔内投与、又は局所投与に適した医薬組成物として定型的な手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、無菌の等張水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、組成物は、溶解剤及び注射部位の痛みを緩和するためのリグノカイン等の局所麻酔薬も含み得る。

【0173】

本発明の方法は、例えば、吸入器又はネブライザーを使用することによる、エアロゾル化剤と共に製剤化された組成物の肺投与を含み得る。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号、同５，９８５，３２０号、同５，９８５，３０９号、同５，９３４，２７２号、同５，８７４，０６４号、同５，８５５，９１３号、同５，２９０，５４０号、及び同４，８８０，０７８号；並びにＰＣＴ出願である国際公開第９２／１９２４４号、国際公開第９７／３２５７２号、国際公開第９７／４４０１３号、国際公開第９８／３１３４６号、及び国際公開第９９／６６９０３号（これらの各々はそれらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす）を参照のこと。特定の実施形態において、本発明の抗体、併用療法、及び／又は本発明の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ（商標）肺薬物送達技術（Alkermes, Inc.、米国マサチューセッツ州ケンブリッジ）を使用して投与される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体、併用療法、及び／又は本発明の組成物は、Ａｅｒｏｇｅｎ Ｓｏｌｏ（商標）肺薬物送達技術（Aerogen GmbH、ドイツ国ラティンゲン）を使用して投与される。

【0174】

本発明の方法は、非経口投与用に製剤化された組成物の注射による（例えば、ボーラス注射又は持続注入による）投与を含み得る。

【0175】

本発明の医薬製剤は、液体形態で提供され得るか、又は凍結乾燥形態で提供され得る。

【0176】

本発明による医薬製剤は、緩衝剤を含み得る。緩衝剤としては、限定されるものではないが、クエン酸、ＨＥＰＥＳ、ヒスチジン、酢酸カリウム、クエン酸カリウム、リン酸カリウム（ＫＨ_２ＰＯ_４）、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム（ＮａＨ_２ＰＯ_４）、Ｔｒｉｓ塩基、及びＴｒｉｓ－ＨＣｌが挙げられる。

【0177】

本明細書で使用する場合、用語「約５．０～約７．０のｐＨをもたらす緩衝剤」は、それを含む溶液が、その共役酸／塩基成分の作用によりｐＨの変化に抵抗することをもたらす薬剤を指す。本発明による製剤で使用される緩衝液は、約５．５～約７．５又は約５．８～約７．０の範囲のｐＨを有し得る。一実施形態において、ｐＨは、約６．０である。一実施形態において、ｐＨは、約７．０である。この範囲でｐＨを制御する緩衝剤の例としては、酢酸塩、コハク酸塩、グルコン酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、グリシルグリシン、及び他の有機酸緩衝剤が挙げられる。

【0178】

本発明による医薬製剤は、等張化剤を含み得る。等張化剤としては、限定されるものではないが、デキストロース、グリセリン、マンニトール、塩化カリウム、及び塩化ナトリウムが挙げられる。一実施形態において、等張化剤は、塩化ナトリウムである。一実施形態において、塩化ナトリウム濃度は、約７０ｍＭ～１７０ｍＭ；約９０ｍＭ～１５０ｍＭ；又は約１１５±１０ｍＭである。

【0179】

「等張」とは、製剤がヒト血液とほぼ同じ浸透圧を有すること意味する。等張製剤は、一般に約２５０ｍＯｓｍ～３５０ｍＯｓｍの浸透圧を有する。等張性は、蒸気圧式浸透圧計又は氷点降下方式浸透圧計を使用して測定され得る。

【0180】

或る特定の実施形態において、本発明による医薬製剤は、安定剤を含む。安定剤としては、限定されるものではないが、ヒト血清アルブミン（ｈｓａ）、ウシ血清アルブミン（ｂｓａ）、α－カゼイン、グロブリン、α－ラクトアルブミン、ＬＤＨ、リゾチーム、ミオグロビン、オボアルブミン、及びＲＮアーゼＡが挙げられる。安定剤としては、アミノ酸及びそれらの代謝産物、例えば、グリシン、アラニン（α－アラニン、β－アラニン）、アルギニン、ベタイン、ロイシン、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、プロリン、４－ヒドロキシプロリン、サルコシン、γ－アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、オパイン（アラノピン、オクトピン、ストロンビン）、及びトリメチルアミンＮ－オキシド（ＴＭＡＯ）も挙げられる。一実施形態において、安定剤は、アミノ酸である。

【0181】

或る特定の実施形態において、本発明による医薬製剤は、非イオン性界面活性剤を含む。非イオン性界面活性剤としては、限定されるものではないが、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０）、ポリエチレン－ポリプロピレンコポリマー、ポリエチレン－ポリプロピレングリコール、ステアリン酸ポリオキシエチレン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、例えば、ポリオキシエチレンモノラウリルエーテル、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（トリトンＸ）、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロキサマー、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が挙げられる。一実施形態において、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０又はポリソルベート８０である。一実施形態において、ポリソルベート濃度は、約０．００５％～０．０２％（ｗ／ｖ）である。一実施形態において、ポリソルベート濃度は、約０．０１％（ｗ／ｖ）である。一実施形態において、ポリソルベート濃度は、約０．０２％（ｗ／ｖ）である。

【0182】

或る特定の実施形態において、本発明による医薬製剤は、金属キレート剤を含む。金属キレート剤としては、限定されるものではないが、ＥＤＴＡ及びＥＧＴＡが挙げられる。一実施形態において、金属キレート剤は、ＥＤＴＡである。一実施形態において、ＥＤＴＡ濃度は、約０．０１ｍＭ～約０．０２ｍＭである。一実施形態において、ＥＤＴＡ濃度は、約０．０５ｍＭである。

【0183】

他の一態様では、本発明は、好ましくは、ヒト又は動物対象におけるＣＯＶＩＤ－１９の処置又は予防に使用される、ヒト又は動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスにより引き起こされる疾患に罹患している患者を処置する方法であって、患者に、有効量の本発明による抗体若しくはその結合断片又は本発明の医薬組成物が投与される、方法にも関する。

【0184】

別の態様では、本発明は、ヒト又は動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスにより引き起こされる疾患の処置のための、好ましくは、ヒト又は動物対象におけるＣＯＶＩＤ－１９の処置又は予防のための薬剤の製造における、本発明による抗体若しくはその結合断片又は本発明の医薬組成物の使用にも関する。

【0185】

本明細書に記載される本発明の全ての実施形態は、任意の組み合わせで組み合わせ可能であると、当業者がこのような組み合わせの技術的意味を理解できないとみなさない限り、みなされる。

【実施例】

【0186】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染個体及び試料収集
ケルン大学の施設内倫理委員会により承認された研究プロトコル下で試料を採取した。全ての参加者は、署名されたインフォームドコンセントを提出し、病院で募集されたか、又は外来患者として募集された。

【0187】

全血からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、血漿、及び全ＩｇＧの単離
ヘパリンが予め充填されたＥＤＴＡチューブ及び／又はシリンジを使用して採血を実行した。到着後直ちに密度勾配分離媒体（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ；Sigma-Aldrich）が予め充填されたＬｅｕｃｏｓｅｐ遠心チューブ（Greiner Bio-one）を製造者の使用説明書に従って使用してＰＢＭＣ単離を実行した。血漿を収集し、別々に保存した。

【0188】

ＩｇＧ単離のために、１ｍｌの収集した血漿を加熱不活性化し（５６℃で４０分間）、プロテインＧセファロース（GE Life Sciences）と共に４℃で一晩インキュベートした。懸濁液をクロマトグラフィーカラムに移し、ＰＢＳで洗浄した。ＩｇＧを０．１Ｍのグリシン（ｐＨ＝３．０）を使用してプロテインＧから溶出させ、１ＭのＴｒｉｓ（ｐＨ＝８．０）で緩衝処理した。ＰＢＳへの緩衝液交換のために、３０ｋＤａのＡｍｉｃｏｎ遠心メンブレン（Millipore）を使用した。精製したＩｇＧの濃度を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（Ａ２８０）を用いて測定し、試料を４℃で保存した。

【0189】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質発現及び精製
融合前安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ外部ドメイン（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓのアミノ酸１～１２０８；ＧｅｎＢａｎｋ：ＭＮ９０８９４７）をコードする構築物は、Jason McLellan（米国テキサス州）より譲り受けた。この構築物は以前に説明されている（Wrapp, D. et al. Cryo-EM structure of the 2019-nCoV spike in the prefusion conformation. Science(80-. ). (2020) doi:10.1126/science.aax0902.）。

【0190】

詳細には、融合前状態安定化のための残基９８６及び９８７での２つのプロリン置換が導入され、フューリン切断部位及びＣ末端Ｔ４フィブリチン三量体形成モチーフを除去するための残基６８２～６８５での「ＧＳＡＳ」置換が導入された。精製のために、このタンパク質は、Ｃ末端がＴｗｉｎＳｔｒｅｐタグ及び８×Ｈｉｓタグに融合されている。タンパク質生成を、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ、Sigma-Aldrich）及び１ｍＬの細胞培養培地当たり１μｇのＤＮＡを用いたＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞での一過性形質移入により、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３培地（Thermo Fisher Scientific）中の０．８×１０^６個細胞／ｍＬの細胞密度で行った。３７℃及び５％ＣＯ_２での７日間の培養後に、上澄みを採取し、０．４５μｍのポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フィルター（Thermo Fisher Scientific）により濾過した。

【0191】

組換えタンパク質を、Ｓｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎアフィニティークロマトグラフィー（IBA lifescience、ドイツ国ゲッティンゲン）によりＳｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎ ＸＴマニュアルに従って精製した。要約すると、１００ｍＬの１０×Ｂｕｆｆｅｒ Ｗ（１ＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１．５ＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、IBA lifescience）を添加することにより、濾過した培地をｐＨ８に調整し、低圧ポンプを用いて１ｍＬ／分で５ｍＬベッドボリュームのＳｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎ樹脂にロードした。カラムを、１５カラム容量（ＣＶ）の１×Ｂｕｆｆｅｒ Ｗ（IBA lifescience）で洗浄し、６×２．５ｍＬの１×Ｂｕｆｆｅｒ ＢＸＴ（IBA lifescience）で溶出させた。溶出分画をプールし、１００ｋＤａカットオフのセルロース遠心フィルター（Merck）を通して４回濾過することにより緩衝液をＰＢＳ（ｐＨ７．４）（Thermo Fisher Scientific）に交換した。

【0192】

異なるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質サブユニット及びエボラ表面糖タンパク質のクローニング及び発現
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＲＢＤ（ＭＮ９０８９４７；ＡＡ：３１９～５４１）をFlorian Krammerより譲り受けたプラスミドから２９３Ｔ細胞で発現させ、以前に公開されたように、Ｎｉ－ＮＴＡアガロース（Macherey-Nagel）を使用して精製した（Stadlbauer, D. et al. SARS-CoV-2 Seroconversion in Humans: A Detailed Protocol for a Serological Assay, Antigen Production, and Test Setup. Curr. Protoc. Microbiol. 57, (2020)）。

【0193】

スパイクＤＮＡの三量体形成ドメイン（ＭＮ９０８９４７；ＡＡ：１～１２０７）を有さないＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ外部ドメイン「単量体」領域及びＳ１サブユニット領域（ＭＮ９０８９４７；ＡＡ：１４～５２９）を合成遺伝子プラスミド（フューリン部位が変異している；Wrapp, D. et al. Cryo-EM structure of the 2019-nCoV spike in the prefusion conformation. Science (80-. ). (2020) doi:10.1126/science.aax0902）からＰＣＲにより増幅した。ＰＣＲ産物を、Ｃ末端トロンビン切断タグ及びダブルＳｔｒｅｐ ＩＩ精製タグを含有する改変されたＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン発現ベクターにクローニングした。Ｓ１サブユニットについては、タグを５’末端に付加し、ＢＭ４０シグナルペプチドが含まれた。

【0194】

組換えタンパク質生成のために、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンシステムを用いてＨＥＫ２９３ ＥＢＮＡ安定細胞株を作成した（Kowarz, E., Loescher, D. & Marschalek, R. Optimized Sleeping Beauty transposons rapidly generate stable transgenic cell lines. Biotechnol. J. 10, 647-653 (2015)）。

【0195】

要約すると、ＦｕＧＥＮＥ ＨＤ形質移入試薬（Promega）を使用して発現構築物をＨＥＫ２９３ ＥＢＮＡ細胞に形質移入した。ピューロマイシンによる選択後、細胞をドキシサイクリンにより誘導した。上澄みを濾過し、組換えタンパク質をＳｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎ（商標）ＸＴ（IBA Lifescience）樹脂により精製した。次いで、ビオチンを含有するＴＢＳ緩衝液（IBA Lifescience）によりタンパク質を溶出させ、ＴＢＳ緩衝液に対して透析した。エボラ表面糖タンパク質（膜貫通ドメイン（Δ６５１～６７６）を欠くＥＢＯＶ Ｍａｋｏｎａ（ＧｅｎＢａｎｋ ＫＪ６６０３４７））及び同様に膜貫通ドメインを欠くＨＩＶ－ｇｐ１４０（ＹＵ２株）（両方がＧＣＮ４三量体形成ドメインを含有する）を以前に記載されたように生成させ、精製した（Ehrhardt, S. A. et al. Polyclonal and convergent antibody response to Ebola virus vaccine rVSV-ZEBOV. Nat. Med. 25, 1589-1600(2019)）。

【0196】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ外部ドメインに特異的なＩｇＧ^＋Ｂ細胞の単離
ＣＤ１９マイクロビーズ（Miltenyi Biotec）を製造者の使用説明書に従って使用してＢ細胞をＰＢＭＣから単離した。ＭＡＣＳ ＬＳカラム（Miltenyi Biotec）を使用してＣＤ１９標識細胞を分離した。単離したＢ細胞を、４’，６－ジアミジン－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ；Thermo Fisher Scientific）、抗ヒトＣＤ２０－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００（ＢＤ）、抗ヒトＩｇＧ－ＡＰＣ（ＢＤ）、抗ヒトＣＤ２７－ＰＥ（ＢＤ）、及びＤｙＬｉｇｈｔ４８８標識ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（１０μｇ／ｍＬ）を含有する蛍光染色ミックスで氷上にて２０分間染色した。

【0197】

Ｄａｐｉ^－、ＣＤ２０^＋、ＩｇＧ^＋、ＳＡＲＣ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質陽性の細胞を、ＦＡＣＳＡｒｉａ Ｆｕｓｉｏｎ（Becton Dickinson）を使用して単一細胞方式で９６ウェルプレートに選別した。全てのウェルは、４μｌの溶解緩衝液を含有していた（０．５×ＰＢＳ、０．５Ｕ／μｌのＲＮＡｓｉｎ（Promega）、０．５Ｕ／μｌのＲＮａｓｅＯＵＴ（Thermo Fisher Scientific）、及び１０ｍＭのＤＴＴ（Thermo Fisher Scientific）。選別後、直ちにプレートを更に処理するまで－８０℃で保存した。

【0198】

抗体重鎖／軽鎖の増幅及び配列解析
抗体重鎖及び軽鎖の単一細胞増幅を、概して以前に記載されたように実行した（Schommers, P. et al. Restriction of HIV-1 Escape by a Highly Broad and Potent Neutralizing Antibody. Cell 180, 471-489. e22 (2020)）。

【0199】

要約すると、ＲＮアーゼ阻害剤であるＲＮａｓｅＯＵＴ（Thermo Fisher Sicentific）及びＲＮａｓｉｎ（Promega）の存在下で、ランダムヘキサマー（Invitrogen）及びＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＶ（Thermo Fisher Scientific）を用いて逆転写を実行した。ＰｌａｔｉｎｕｍＴａｑ ＨｏｔＳｔａｒｔポリメラーゼ（Thermo Fisher Scientific）を、６％のＫＢ Ｅｘｔｅｎｄｅｒ及び最適化されたＶ遺伝子特異的プライマーミックス（Schommers, P. et al. Restriction of HIV-1 Escape by a Highly Broad and Potent Neutralizing Antibody. Cell 180, 471-489. e22 (2020)）と共に使用して、スループットを増加させるために軽微な変更を加えた逐次的セミネステッド法で重鎖及び軽鎖を増幅するために、ｃＤＮＡを用いた。ＰＣＲ産物を正確なサイズについてゲル電気泳動により分析し、サンガーシーケンシングに供した。

【0200】

配列解析のために、クロマトグラムを２８の平均Ｐｈｒｅｄスコア及び２４０ｎｔの最小長でフィルタリングした。ＩｇＢＬＡＳＴで配列を注釈付けし、トリミングして、ＦＷＲ１からＪ遺伝子の末端までの可変領域のみを抽出した。１６未満のＰｈｒｅｄスコアを有する可変領域内のベースコールをマスクし、１５個超のマスクされたヌクレオチド、終止コドン、又はフレームシフトを有する配列を更なる解析から除外した。

【0201】

クローン解析を各患者について別々に実行した。全ての生産的重鎖配列を同一のＶ_Ｈ／Ｊ_Ｈ遺伝子対毎に分類し、それらのＣＤＲＨ３についてペアワイズレーベンシュタイン距離を決定した。ランダム配列から始めて、クローン群を（最も短いＣＤＲＨ３に対して）少なくとも７５％の最小のＣＤＲＨ３アミノ酸同一性を有する４つの配列に割り当てた。１００回の入力配列のランダム化及びクローン割り当てを実行し、最も少数の割り当てられない（非クローン）配列が残存する結果を後続の解析のために選択した。

【0202】

共有される変異も考慮して、全てのクローンが研究者により交差検証された。全ての入力配列について、更にまとめることなく、全てのクローン配列でのＶ遺伝子の使用、ＣＤＲＨ３の長さ、及び生殖細胞系列Ｖ遺伝子同一性分布を決定した。ＣＤＲＨ３疎水性をＥｉｓｅｎｂｅｒｇスケールに基づいて計算した（Eisenberg, D., Schwarz, E., Komaromy, M. & Wall, R. Analysis of membrane and surface protein sequences with the hydrophobic moment plot. J. Mol. Biol. 179, 125-142 (1984)）。中和性抗体及び非中和性抗体について、Ｖ遺伝子統計量をまとめられたクローン配列から計算した。

【0203】

繰り返し出現したクローンの変異頻度の経時的解析のために、Ｂ細胞配列の多重配列アラインメントをＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａにより標準パラメータを使用して算出した（バージョン１．２．３；Sievers, F. et al. Fast, scalable generation of high-quality protein multiple sequence alignments using Clustal Omega. Mol. Syst. Biol. 7, (2011)）。

【0204】

モノクローナル抗体のクローニング及び生成
最初のＰＣＲ産物からの抗体クローニングを以前に記載されたように（Schommers, P. et al. Restriction of HIV-1 Escape by a Highly Broad and Potent Neutralizing Antibody. Cell 180, 471-489. e22 (2020)）、軽微な変更を加えた配列及びライゲーション非依存的クローニング（ＳＬＩＣ；Von Boehmer, L. et al. Sequencing and cloning of antigen-specific antibodies from mouse memory B cells. Nat. Protoc. 11, 1908-1923 (2016)）により実行した。

【0205】

公開されたプロトコルとは対照的に、全ての重鎖Ｖ遺伝子及び軽鎖Ｖ遺伝子の内因性リーダー配列を完全に網羅することに基づいて、延長したプライマーを用いてＳＬＩＣ構築のためのＰＣＲ増幅を実行した（Kreer, C. et al. openPrimeR for multiplex amplification of highly diverse templates. J. Immunol. Methods 480 (2020)）。

【0206】

ＩｇＨ、ＩｇＫ、及びＩｇＬについて、内因性リーダー配列を有する可変領域を哺乳動物発現ベクターに連結し、発現のためにＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞に形質移入し、モノクローナル抗体のプロテインＧ精製を以前に記載されたように行った（Schommers, P. et al. Restriction of HIV-1 Escape by a Highly Broad and Potent Neutralizing Antibody. Cell 180, 471-489. e22 (2020)）。

【0207】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓへの抗体結合活性及びサブユニット結合を測定するためのＥＬＩＳＡ解析
ＥＬＩＳＡプレート（Corning ＃３３６９）を、ＰＢＳ中（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク外部ドメイン、ＲＢＤ、又はＮ末端が切断されたＳ１）又は２Ｍの尿素中（三量体形成ドメインを欠くＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク外部ドメイン「単量体」）２μｇ／ｍｌのタンパク質で４℃にて一晩コーティングした。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク外部ドメインのＥＬＩＳＡのために、プレートをＰＢＳ中５％のＢＳＡで室温にて６０分間ブロッキングし、ＰＢＳ中１％のＢＳＡ中の一次抗体と９０分間インキュベートし、続いて、ＰＢＳ中１％のＢＳＡ中に１：２５００で希釈した抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰ（Southern Biotech、２０４０－０５）と室温で６０分間インキュベートした。

【0208】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクサブユニットのＥＬＩＳＡを公開されたプロトコルに従って実行した（Stadlbauer, D. et al. SARS-CoV-2 Seroconversion in Humans: A Detailed Protocol for a Serological Assay, Antigen Production, and Test Setup. Curr. Protoc. Microbiol. 57, (2020)）。

【0209】

ＥＬＩＳＡの発色をＡＢＴＳ溶液（Thermo Fisher、００２０２４）を用いて行い、吸光度を４１５ｎｍ～６９５ｎｍで測定した。陽性結合をＯＤ＞０．２５かつＥＣ_５０＜３０μｇ／ｍｌと定義した（図１を参照のこと）。免疫グロブリンクラスＧ用の市販の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＥＬＩＳＡキットは、Euroimmun（Euroimmun Diagnostik、ドイツ国リューベック）により提供された。抗体検出を製造者の使用説明書に従って実行し、５０μｇ／ｍｌの抗体濃度を使用した。試料は、自動化プラットフォームであるＥｕｒｏｉｍｍｕｎ Ａｎａｌｙｚｅｒ １を使用して試験した。

【0210】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定
ＳＰＲ測定のために、配列番号５８のようなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）をＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ １０／３００カラム（GE Healthcare）を用いたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）精製により更に精製した。ＲＢＤの様々なｍＡｂへの結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器（GE Healthcare）を用いてシングルサイクルキネティクス実験を使用して測定した。

【0211】

最初に精製したｍＡｂをＰＢＳ及び０．０２％アジ化ナトリウムの緩衝液中でＳｅｒｉｅｓ Ｓセンサーチップ プロテインＡ（GE Healthcare）上に８００～１２００レスポンスユニット（ＲＵ）の結合密度で固定化した。センサーチップ上の４つのフローセルのうちの１つは、ブランクの役割をするために空であった。次いで、可溶性のＲＢＤを、ＰＢＳ中の一連の濃度（すなわち、０．８ｎＭ、４ｎＭ、２０ｎＭ、１００ｎＭ、及び５００ｎＭ）で６０μＬ／分の流速にて注入した。センサーチップを１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ１．５）を使用して再生させた。

【0212】

１：１結合モデルを使用して、実験データを表現し、動態パラメータを導出した。一部のｍＡｂについて、１：１結合モデルは、結合の適切な説明をもたらさなかった。これらの場合、本発明者らは、構造変化による２つの結合定数を仮定する２状態結合モデルにフィッティングした。これらの場合では、本発明者らは、最初の結合定数（Ｋ_Ｄ ^１）を報告する。

【0213】

本発明の以下の抗体について、結合定数をＫ_Ｄ値として決定した。
ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｄ４ ０．２０ｎＭ
ＦｎＣ１ｔ２ｐ１＿Ｇ５ ０．１０ｎＭ
ＭｎＣ２ｔ１ｐ１＿Ａ３ ０．７０ｎＭ
ＭｎＣ２ｔ２ｐ１＿Ｃ１１ ０．０２ｎＭ
ＭｎＣ４ｔ２ｐ１＿Ｂ３ ０．０９ｎＭ
ＭｎＣ４ｔ２ｐ２＿Ａ４ １４ｎＭ
ＭｎＣ５ｔ２ｐ１＿Ｇ１ １７ｎＭ

【0214】

ウイルス中和試験
ポリＩｇＧ試料又はヒトモノクローナル抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和活性を、ＭＥＲＳ－ＣｏＶについて以前に公開されたプロトコルに基づいて調べた（Koch, T. et al. Safety and immunogenicity of a modified vaccinia virus Ankara vector vaccine candidate for Middle East respiratory syndrome: an open-label, phase 1 trial. Lancet Infect. Dis. (2020) doi:10.1016/s1473-3099 (20) 30248-6）。

【0215】

要約すると、モノクローナル抗体について試料を１００μｇ／ｍｌの濃度から始めて９６ウェルプレートで連続希釈した。試料を１００ ５０％組織培養感染量（ＴＣＩＤ_５０）のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＢａｖＰａｔ１／２０２０分離株、European Virus Archive Global、＃０２６Ｖ－０３８８３）と共に３７℃で１時間インキュベートした。

【0216】

感染の４日後にＶｅｒｏＥ６細胞に対する細胞変性効果（ＣＰＥ）を分析した。中和をウイルス対照と比較したＣＰＥの非存在と定義した。各試験について、陽性対照（ＣＯＶＩＤ－１９患者の血漿を中和する）をアッセイ間の中和標準物質として二重反復で使用した。結果を図１～図３及び図５の表に示す。

【0217】

ＨＥｐ－２細胞アッセイ
ＮＯＶＡ Ｌｉｔｅ ＨＥｐ－２ ＡＮＡ Ｋｉｔ（Inova Diagnostics）を、各基質スライドガラス上のキットの陽性及び陰性対照を含め、製造者の使用説明書に従って使用して、モノクローナル抗体をＰＢＳ中１００μｇ／ｍｌの濃度で試験した。既知の反応性プロファイルを有するＨＩＶ－１反応性抗体を追加の対照として含めた。画像を顕微鏡ＤＭＩ３０００ Ｂ（Leica）並びに３．５秒の露光時間、１００％の強度、及び１０のゲインを使用して取得した。自己反応性アッセイの結果を図４に示す。

【0218】

定量化及び統計
フローサイトメトリー解析及び定量化を、ＦｌｏｗＪｏ１０、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ｖ７）、及びマッキントッシュ版Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ（ｖ１４．７．３）により実行した。スピアマン相関係数ｒ_Ｓ及び近似した両側ｐ値をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ｖ７）で算出した。

【0219】

本発明の抗体により得られた結果の概要を図５の表に示す。

【0220】

ＤＺＩＦ－１０ｃのｉｎ ｖｉｖｏでの治療有効性を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体であるヒトアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を発現するように遺伝子改変されたＢＡＬＢ／ｃマウスで調査した。ＤＺＩＦ－１０ｃは、重鎖定常ドメインの末端リジンが除去されたＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４のバリアントである（ＨｂｎＣ３ｔ１ｐ１＿Ｆ４（－Ｋ）；配列番号２２９の重鎖配列及び配列番号２３０の軽鎖配列）。この実験のために、ｈＡＣＥ２をコードする複製欠損性組換えアデノウイルスを気管内に点滴した。このモデルでは、アデノウイルスにより媒介されるｈＡＣＥ２の形質導入、これに続く３日後のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（１．５×１０^４ＴＣＩＤ_５０のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＢａｖＰａｔ１／２０２０）への曝露により、肺でのウイルス複製及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２への曝露の４日後にピークに達する間質性肺炎の発症がもたらされる。

【0221】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された、ＡＣＥ２が形質導入されたマウスのＤＺＩＦ－１０ｃ治療のｉｎ ｖｉｖｏでの効果を調査するために、ＤＺＩＦ－１０ｃをＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２への曝露の１日及び３日後に４０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内又は鼻腔内のいずれかに投与した（図６Ａを参照のこと）。

【0222】

ＤＺＩＦ－１０ｃ治療は、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（図６Ｂ）と比較される場合、ｑＲＴ－ＰＣＲにより決定される４日目の肺組織におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＮＡ総濃度の限定的な変化しかもたらさなかったが、ウイルス単離により決定される場合、いずれの経路によるＤＺＩＦ－１０ｃ処置も検出不可能なウイルス価をもたらした（図６Ｃ）。

【0223】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の別の小動物モデルでは、ゴールデンシリアンハムスターを、１×１０^５プラーク形成単位のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に鼻腔内曝露した。２日後、動物に、４０ｍｇ／ｋｇ用量のＤＺＩＦ－１０ｃ若しくはアイソタイプ対照での腹腔内処置、又は３．６ｍｇ／ｋｇ用量のＤＺＩＦ－１０ｃ若しくはアイソタイプ対照での鼻腔内処置のいずれかを行った。ウイルスへの曝露（図７Ａ）の３日又は５日後に、スワブ試料及び／又は肺組織におけるウイルスＲＮＡ及び感染性ウイルス価を得た。

【0224】

ｈＡＣＥ２が形質導入されたマウスでの観察と同様に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露されたハムスターの気道スワブ及び肺ホモジェネートにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＮＡレベルの変化は、検出されなかった（図７Ｂ～図７Ｃ）。しかしながら、アイソタイプ対照で処置されたハムスターと比較した場合、ＤＺＩＦ－１０ｃを鼻腔内又は腹腔内のいずれかに投与されたハムスターの肺組織における感染性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の力価の減少を検出することができた（図７Ｄ）。

【0225】

抗体が結合したウイルス粒子のＦｃにより媒介される取り込みが感染及び疾患の増加をもたらすことは、デング熱ウイルスにおいて、特に中和抗体力価なし又は低レベルの中和抗体力価で観察される現象である。ＤＺＩＦ－１０ｃがＦｃ受容体を発現する細胞の感染を増強し得るかどうかを調査するために、１人のドナー由来のヒトＣＤ１４^＋末梢血由来マクロファージの感染に対するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２／ＤＺＩＦ－１０ｃの共インキュベーションの効果を調査した。ウイルスに曝露された細胞のｑＲＴ－ＰＣＲ分析は、ＶｅｒｏＥ６細胞と同様に、これらのマクロファージがヒトコロナウイルスに効果的に感染し得ることを示す。

【0226】

中和的濃度（１μｇ／ｍｌ）又は非中和的濃度（０．０１μｇ／ｍｌ）のいずれかのＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体又はＤＺＩＦ－１０ｃとウイルスとの共インキュベーション後のＣＤ１４^＋ヒトマクロファージのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を調査した。ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染を感染性ウイルスの単離により検出することができたが、試験された濃度のいずれでもＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を単離することができなかった（図８Ａ）。さらに、異なる条件で試験されたＣＤ１４^＋マクロファージにおいて測定されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ゲノムコピーは、ＤＺＩＦ－１０ｃの非存在下又は存在下での実質的な差を示さなかった（図８Ｂ）。

【0227】

ＣＤ１４^＋ヒトマクロファージのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する感受性が制限され得る一方で、これらの観察は、ＤＺＩＦ－１０ｃにより引き起こされる、関連するＦｃ受容体により媒介されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の増強を示さない。

【0228】

ＤＺＩＦ－１０ｃの薬物動態プロファイルを決定するために、ラット（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ Ｗｉｓｔａｒ）の静脈内又は気管内のいずれかにＤＺＩＦ－１０ｃを投与した。血漿及び気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中のＤＺＩＦ－１０ｃの濃度を、ヒトＩｇＧ１を標的とするリガンド結合アッセイを使用して決定した。ＢＡＬＦ希釈倍率は血清及びＢＡＬＦ中の尿素の比率として決定されると見なすことにより、気道上皮被覆液濃度をＢＡＬＦ測定値から導出した（尿素が身体内に均一に分布していると仮定する）。

【0229】

４匹のラットへのＤＺＩＦ－１０ｃの１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量での静脈内注射後、０．０８３時間後、０．５時間後、２時間後、８時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、１６８時間後、２４０時間後、３１２時間後、及び３３６時間後に血液試料を採取した。全ての動物におけるＤＺＩＦ－１０ｃ血漿濃度は、十分一致していた。抗体濃度曲線の直線部分は、抗体の低クリアランス、小さい分布容積、及び長い終末相半減期（１９０時間又は７．９日の平均ｔ_１／２）を明らかにした（以下の表を参照のこと）。

【0230】

【0231】

加えて、１３日目の２回目の１０ｍｇ／ｋｇ用量の静脈内投与は、１１５±６．４ｎＭから６６２±４４ｎＭへの血漿濃度増加をもたらした。このことは、抗薬物抗体（ＡＤＡ）が生じなかったことを示唆する。

【0232】

静脈内投与後の気道上皮被覆液中のＤＺＩＦ－１０ｃ濃度を決定するために、２回目の１０ｍｇ／ｋｇの静脈内適用の１日後の１４日目に、気管支肺胞洗浄を実行した。ＢＡＬＦの分析により、血漿／ＥＬＦ比を３３．２と決定した。これは、ＤＺＩＦ－１０ｃのＥＬＦ濃度が血漿において見出される濃度の３％であったことを示す。

【0233】

１ｍｇ／ｋｇ用量の気管内（ｉ．ｔ．）適用後のＤＺＩＦ－１０ｃの薬物動態プロファイルを調査するために、２時間後（ｎ＝４）又は２４時間（ｎ＝４）後のいずれかの後に、異なるコホートのラットの気管支肺胞洗浄を実行した。

【0234】

気管内投与後、ＤＺＩＦ－１０ｃの平均ＥＬＦ濃度は、２時間後及び２４時間後の血漿と比較して、それぞれ、約１０００倍及び約２５０倍の高さであった。ＥＬＦ中のＤＺＩＦ－１０ｃの平均半減期は、約２１時間であると決定された。２．５ｎＭ～５．０ｎＭの濃度で定常に達した血漿濃度の時間依存的増加は、４時間後に到達した（図９）。

【0235】

全ての投薬群（１０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与、１ｍｇ／ｋｇの気管内投与）における下気道組織及び上気道組織における同様の抗体濃度を決定した（図１０）。

【0236】

全体として、Ｗｉｓｔａｒラットにおける異なる投与経路でのＤＺＩＦ－１０ｃの血漿濃度及びＥＬＦ濃度の分析は、気管内適用が、静脈内適用の２時間後及び２４時間後と比較して、それぞれ、約１３００倍及び約６５０倍高いＤＺＩＦ－１０ｃの（用量で正規化した）ＥＬＦ濃度をもたらしたことを明らかにした。

【0237】

ヒト新生児Ｆｃ受容体（ｈｕＦｃＲｎ）は、ヒトＩｇＧのリソソーム分解を低減し、抗体半減期において重要な役割を果たす。したがって、ヒト新生児Ｆｃ受容体を発現するように遺伝子操作されたマウスは、ヒトにおける薬物動態プロファイルとより酷似したヒト抗体の薬物動態を示し得る。

【0238】

ＤＺＩＦ－１０ｃを、遺伝子導入によりヒト新生児Ｆｃ受容体を発現する免疫不全のｓｃｉｄマウス（Ｂ６．Ｃｇ－Ｆｃｇｒｔ^{ｔｍ１Ｄｃｒ} Ｐｒｋｄｃ^{ｓｃｉｄ Ｔｇ}（ＦＣＧＲＴ）３２Ｄｃｒ／ＤｃｒＪ）で調査した。これらのマウスにおいて、ＤＺＩＦ－１０ｃは、マウス１匹当たり０．５ｍｇの単回静脈内注射後に好ましい薬物動態プロファイルを示し、この薬物動態プロファイルは、ヒトにおける２週間～３週間の半減期を有する２つのヒトＩｇＧ１抗体と同程度であった。

【0239】

加えて、Ｉｌ２受容体共通γ鎖を発現せず、Ｒａｇ１遺伝子のノックアウト変異を保有し、マウスリンパ球又はＮＫ細胞を生じない免疫不全ＮＲＧマウスにおけるＤＺＩＦ－１０ｃの薬物動態プロファイルを調査した。同様に、ＤＺＩＦ－１０ｃは、好ましい薬物動態プロファイルを実証し、この薬物動態プロファイルは、臨床試験におけるＩｇＧ１抗体と比較して同程度であるか、又はより延長された。

【0240】

２つの比較抗体に対するＤＺＩＦ－１０ｃのより高い親和性及び代替的結合様式
ＤＺＩＦ－１０ｃの様々な特性をJ. Hansen et al., Science 10.1126/science.abd0827 (2020)により再合成された２つの抗体（ＲＥＧＮ１０９８７、ＲＥＧＮ１０９３３）と比較した。ＤＺＩＦ－１０ｃは、比較抗体より顕著に高い結合親和性及び抗原のより大きな領域を網羅する結合様式を示したため、単一の化合物治療薬としての使用するのにより適している。

【0241】

【0242】

処置方法
本発明の抗体の例として、ＤＺＩＦ－１０ｃが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－感染の処置に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－感染の予防に、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に最近曝露された個体における曝露後の予防として使用され得る。

【0243】

ＤＺＩＦ－１０ｃは、５０ｍｇ／ｍＬ濃度の１回使用の滅菌溶液として提供され得る。ＤＺＩＦ－１０ｃ製剤の各バイアルは、酢酸、酢酸ナトリウム、グリシン、トレハロース、及びポリソルベート２０（表を参照のこと）から構成される２０ｍＬの緩衝液を含有し得る。

【0244】

【0245】

好ましい実施形態において、ＤＺＩＦ－１０ｃは、ｐＨ５．５の２０ｍＭの酢酸塩、２２０ｍＭのグリシン、２０ｍＭのトレハロース、０．４ｇ／Ｌのポリソルベート２０中に５０ｍｇ／ｍｌで製剤化される。

【0246】

ＤＺＩＦ－１０ｃは、静脈内注入又はネブライザーを使用したエアロゾル化後に吸入投与により適用され得る。

【0247】

ＤＺＩＦ－１０ｃは、製剤緩衝液中に希釈された静脈内注入液により２．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、又は４０ｍｇ／ｋｇの用量で、０．２μｍナイロン製インラインフィルターを使用して６０分（＋／－１０分）かけて静脈内投与され得る。上記で例示された製剤は、製剤緩衝液で適切な容量に希釈され得る。

【0248】

吸入投与では、個体は、１回の処置当たり５０ｍｇ、１００ｍｇ、又は２５０ｍｇの用量で、メッシュ式ネブライザー又はジェット式ネブライザーを使用したエアロゾル生成後にマウスピースにより処置され得る。上記で例示された製剤は、製剤緩衝液で適切な容量に希釈され得る。

【0249】

単回の吸入後に単回の静脈内注入が続いてもよい。

【0250】

製剤
本発明に関連して、幾つかの利点を有する製剤が開発された。重要なことに、これは、複数の目的、例えば、静脈内（ｉ．ｖ．）投与、経口及び経鼻による吸入（ｉｎｈ．）投与、及び皮下（ｓ．ｃ．）投与に使用され得る溶液である。加えて、これは小児への投与に使用され得る。特に、これは注射による提供及び例えば、ジェット式ネブライザーによる吸入のための提供の両方に使用され得る。

【0251】

さらに、記載される製剤は、特に、一般的に使用される賦形剤が、多くの場合、患者に対する１日の最大曝露レベルを超過し、したがって、臨界毒性レベルに達する、世界的に流行している状況又は腫瘍学において必要とされる高用量（患者１人１日当たり１ｇ超）の投与に適用可能である。加えて、例えば、静脈内及び皮下適用のために重要であることが既知である溶液の等張性を維持するために、糖及びポリオールが一般的に使用される。しかしながら、高用量投与では、糖又はポリオールが、多くの場合、患者の１日の最大曝露レベルを超過する。

【0252】

この製剤で使用される賦形剤の特定の組み合わせは、患者の１日の最大曝露レベル及び１００ｋｇの患者集団を考慮した患者１人１日当たり５ｇまでの高用量投与で評価される溶液の浸透圧での１日の最大曝露レベルの両方を満たす。

【0253】

したがって、一般に、水溶液中１０ｍｇ／ｍＬ～２６０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体又はその抗原結合断片、１０ｍＭ～２５ｍＭの酢酸塩、１７２．７ｍＭ～２５９．１ｍＭのグリシン、１７．３ｍＭ～２５．９ｍＭのトレハロース、０．２ｇ／Ｌ～０．６ｇ／Ｌのポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）を含み、２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ～３４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの重量オスモル濃度及び５．２～５．８のｐＨを有する医薬組成物が本明細書において提供される。提供される製剤は、異なる抗体でも機能することが示された。

【0254】

一実施形態において、水溶液中１０ｍｇ／ｍＬ～２６０ｍｇ／ｍＬの濃度の配列番号２２９の重鎖及び配列番号２３０の軽鎖を含む抗体又はその抗原結合断片、１０ｍＭ～２５ｍＭの酢酸塩、１７２．７ｍＭ～２５９．１ｍＭのグリシン、１７．３ｍＭ～２５．９ｍＭのトレハロース、０．２ｇ／Ｌ～０．６ｇ／Ｌのポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）を含み、２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ～３４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの重量オスモル濃度及び５．２～５．８のｐＨを有する医薬組成物が提供される。

【0255】

別の実施形態において、抗体、好ましくは、配列番号２２９の重鎖及び配列番号２３０の軽鎖を含む抗体又はその抗原結合断片を、ｐＨ５．５の２０ｍＭの酢酸塩、２２０ｍＭのグリシン、２０ｍＭのトレハロース、０．４ｇ／Ｌのポリソルベート２０中に５０ｍｇ／ｍｌで含む医薬組成物が提供される。

【0256】

製剤は、著しく小さい容量（最高１．５ｍＬ～２．０ｍＬ）のシリンジを通した患者への注射による高用量皮下投与に適合するために重要である高濃度液体製剤（ＨＬＣＦ）として適用可能であることが示された。活性成分（抗体）を含有しない上述の溶液は、専用の希釈剤、希釈のための溶媒、及びプラセボとして使用され得る。さらにこれは、市販の臨床用希釈媒体と互換性があることが示された。

【0257】

記載される医薬組成物は、（ｉ）種々のネブライザーシステム（例えば、メッシュ式ネブライザー、ジェット式ネブライザー）、（ｉｉ）希釈された製剤及び希釈されていない製剤（異なるＡＰＩ濃度）、並びに（ｉｉｉ）種々のマスク（経口及び経鼻）を使用した吸入投与のために、ＤＺＩＦ－１０ｃ及び他の抗体を効率的に安定化することを実証することができた。

【0258】

製剤は、広範囲の技術的パラメータ（例えば、表面積対体積比）を網羅する種々の容器栓システム（２０ｍＬ及び６ｍＬのタイプＩガラスバイアル）中で安定していることが示された。

【0259】

【0260】

製剤Ｆ５は、異なる市販のネブライザーシステム（メッシュ式及びジェット式ネブライザー）で試験される場合に、安定化効果を示した。表２を参照のこと。

【0261】

【0262】

希釈されていない製剤及び希釈された製剤での表１による異なる製剤をＡｅｒｏｇｅｎ Ｓｏｌｏ（商標）ネブライザーで試験した。

【0263】

【0264】

【0265】

意図される保存条件（５℃）でのＦ５～Ｆ８製剤の安定性データは、２４週間までの貯蔵時間にわたる高分子量種の百分率（Ａ中のＨＭＷ（％））により、又は単量体の百分率（Ｂ中の単量体（％））により測定した。この測定の結果を図１１に示す。

【0266】

カニクイザルにおける抗体ＤＺＩＦ－１０ｃの２つの予防的噴霧療法の抗ウイルス効力の評価
抗体ＤＺＩＦ－１０ｃの２つの予防的噴霧療法の抗ウイルス効力をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前の６匹のカニクイザルで評価した。試験のために、６匹のカニクイザル（マカカ・ファシキュラリス（Macaca fascicularis））を２つの処置群に分割した。４匹の動物が感染前に抗体を投与された処置群に含まれた一方で、２匹の動物が感染前にビヒクルのみを投与された。

【0267】

処置群の動物には、感染の４日前（Ｄ－４）及び２日前（Ｄ－２）に、１０ｍｌのＤＺＩＦ－１０ｃ抗体（２０ｍＭの酢酸塩、２２０ｍＭのグリシン、２０ｍＭのトレハロース、０．０４％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０（ｐＨ５．５）中の５０ｍｇ／ｍＬ）の２つの適用が施された。Ａｅｒｏｇｅｎ Ｓｏｌｏ（商標）ネブライザー（Aerogen GmbH、ドイツ国ラティンゲン）及び好適なフェイスマスク（Laerdal Medical GmbH、ドイツ国プッフハイム、Ｓサイズ）を用いて適用を行った。

【0268】

感染日（Ｄ０）に、１ｍＬのルアーロック付きセーフティシリンジに接続されたＭｉｃｒｏＳｐｒａｙｅｒ器具（モデルＩＡ－１Ｂ、ＰｅｎｎＣｅｎｔｕｒｙ（商標））を用いて各鼻腔に５００μＬを鼻腔内（ＩＮ）適用することにより、及び１ｍＬのルアーロック付きセーフティシリンジに接続されたＭｉｃｒｏＳｐｒａｙｅｒ器具（モデルＩＡ－１Ｂ、ＰｅｎｎＣｅｎｔｕｒｙ（商標））を使用して１ｍＬの接種物を気管に噴霧することによる気管内（ＩＴ）感染により、１０^７ＴＣＩＤ_５０のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ｈＣｏＶ－１９／Ｆｒａｎｃｅ／ＯＣＣ－ＮＲＣ０２７６５／２０２０（ＧＩＳＡＩＤアクセッション番号：ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿６４０００２、スパイク置換Ｄ６１４Ｇ、Ｋ１０７３Ｎ）を全ての動物に接種した。

【0269】

血液試料及び唾液試料、鼻咽頭スワブ及び口咽頭スワブを分析のために毎日収集した。気管支肺胞洗浄液をＤ２、Ｄ４、及びＤ６に採取した。臨床モニタリングには、体温、摂食量、及び体重が含まれた。Ｄ６の剖検には、肺の組織病理診断並びに肺、鼻粘膜、口腔咽頭、及び腎臓のウイルス量アッセイが含まれた。

【0270】

感染後に両方の対照動物において、鼻咽頭スワブ及び気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中にウイルスのコピーを見出すことができた。対照的に、処置された動物は、検出限界（ＬＯＤ）未満の結果又は対照動物の結果より数対数下回るレベルの結果のいずれかを示した。全ての動物の鼻咽頭スワブ分析の結果を図１２に示すと共に、気管支肺胞洗浄液の分析の結果を図１３に示す。

【0271】

体温：両方の対照動物がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染後に明白なかつ長期間の高熱を示した。ＤＺＩＦ－１０ｃによる予防処置は、高熱の発生を遅延したか、その期間を短縮し、その程度を減少させたか、又はその発症を完全に予防したかのいずれかであった。

【0272】

肺の肉眼的所見及び顕微鏡的所見：両方の対照動物の肺が、多数の刊行物において肺硬化と記載されている領域と同様の硬化した暗赤色の領域を示した。４匹の処置された動物の肺は、なんらの肺損傷の徴候もなく健康であるように見えた。全てのこれらの所見を顕微鏡観察により確認した：両方の対照動物の殆どのスライドガラスにおいて顕著な広範囲の亜急性気管支間質性炎症が見られ、群２の動物では極めて限定的な気管支間質性炎症が見られたか、又は気管支間質性炎症が見られなかった。

【0273】

要約すると、これらの結果は、吸入適用によるＤＺＩＦ－１０ｃでの予防処置が、ウイルスコピー及び感染性ウイルスの観点でウイルス量を減少させ、臨床症状（高熱）を低減又は予防し、肺症状を予防したことを示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図5-3】

【図5-4】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【配列表】

2023528826000001.app

【国際調査報告】