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特表2023-528953ＦＧＦＲ３関連の認知欠損の処置のための方法及び医薬組成物。
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-07-06
(54)【発明の名称】ＦＧＦＲ３関連の認知欠損の処置のための方法及び医薬組成物。
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20230629BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230629BHJP
A61P 19/00 20060101ALI20230629BHJP
A61K 31/506 20060101ALI20230629BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00
A61P43/00 111
A61P19/00
A61K31/506
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022575888
(86)(22)【出願日】2021-06-10
(85)【翻訳文提出日】2023-01-27
(86)【国際出願番号】 EP2021065696
(87)【国際公開番号】W WO2021250198
(87)【国際公開日】2021-12-16
(31)【優先権主張番号】20305641.1
(32)【優先日】2020-06-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】591100596
【氏名又は名称】アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル
(71)【出願人】
【識別番号】591140123
【氏名又は名称】アシスタンス ピュブリク－オピトー ドゥ パリ
【氏名又は名称原語表記】ＡＳＳＩＳＴＡＮＣＥ ＰＵＢＬＩＱＵＥ － ＨＯＰＩＴＡＵＸ ＤＥ ＰＡＲＩＳ
(71)【出願人】
【識別番号】515028470
【氏名又は名称】フォンダシオン・イマジネ
【氏名又は名称原語表記】ＦＯＮＤＡＴＩＯＮ ＩＭＡＧＩＮＥ
(71)【出願人】
【識別番号】520053762
【氏名又は名称】ユニヴェルシテ・パリ・シテ
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ ＰＡＲＩＳ ＣＩＴＥ
(71)【出願人】
【識別番号】595040744
【氏名又は名称】サントル・ナショナル・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・シャンティフィク
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＥ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】弁理士法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】ルジェ－マル，ロランス
(72)【発明者】
【氏名】ウーリー，フランク
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA17
4C084NA14
4C084ZA96
4C084ZC20
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC42
4C086GA07
4C086GA12
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA96
4C086ZC20
(57)【要約】
本発明は、ＦＧＦＲ３関連の認知欠損を処置するための方法及び医薬組成物に関する。本発明者らは、脳において発現されるＦＧＦＲ３機能獲得変異によって、頭蓋骨異常とは無関係に、認知欠損及び行動欠損が誘発されるという強力なエビデンスを提供する。ＦＧＦＲ３の構成的活性化がこれらの行動障害に関与するというエビデンスを提供するために、本発明者らは、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスを、ＢＧＪ３９８の脳室内注射を７日間にわたり使用してチロシンキナーゼ阻害剤で処置した。処置によって、短期学習における及び対処戦略における異常がレスキューされる。
本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ３阻害剤を対象に投与することを含む、それを必要とするＦＧＦＲ３関連の骨格疾患に罹患している対象において、ＦＧＦＲ３関連の認知欠損を処置する方法に関する。
本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ３阻害剤を対象に投与することを含む、それを必要とするＦＧＦＲ３関連の骨格疾患に罹患している対象において、ＦＧＦＲ３関連の認知欠損を処置する方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
治療有効量のＦＧＦＲ３阻害剤を対象に投与することを含む、それを必要とするＦＧＦＲ３関連の骨格疾患に罹患している対象において、ＦＧＦＲ３関連の認知欠損を処置する方法。
【請求項2】
ＦＧＦＲ３阻害剤がチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
ＦＧＦＲ３阻害剤がＢＧＪ３９８である、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患が、軟骨低形成症（ＨＣＨ）、軟骨無形成症（ＡＣＨ）、致死性骨異形成症（ＴＤ）、頭蓋骨癒合症、又は低身長症である、請求項１～３に記載の方法。
【請求項5】
ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患が軟骨低形成症（ＨＣＨ）である、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患が軟骨無形成症（ＡＣＨ）である、請求項４に記載の方法。
【請求項7】
ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患が頭蓋癒合症である、請求項４に記載の方法。
【請求項8】
頭蓋骨癒合症が、黒色表皮腫を伴うクルーゾン症候群（ＣＡＮ）である、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患が、対象における構成的に活性なＦＧＦＲ３受容体変異体の発現により起こされる、請求項１～３に記載の方法。
【請求項10】
構成的に活性なＦＧＦＲ３変異体が、Ｎ５４０Ｋ、Ｋ６５０Ｎ、Ｋ６５０Ｑ、Ｍ５２８Ｉ、Ｉ５３８Ｖ、Ｎ５４０Ｓ、又はＮ５４０Ｔ変異体である、請求項５に記載の方法。
【請求項11】
構成的に活性なＦＧＦＲ３変異体がＡ３９１Ｅ変異体である、請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野：
【0002】
本発明は、ＦＧＦＲ３関連の認知欠損を処置するための方法及び医薬組成物に関する。
【0003】
発明の背景：
【0004】
線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）ファミリーは、骨発生及び骨格疾患において重要な役割を果たす。ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、及びＦＧＦＲ３のミスセンス変異は、頭蓋縫合の早期癒合により特徴付けられる一連の症候性頭蓋骨癒合症に関与している（Robin et al.,1993；Twigg and Wilkie,2015）。２つの特定のＦＧＦＲ３優性変異が、黒色表皮腫を伴うクルーゾン症候群（ＣＡＮ［ＭＩＭ ６１２２４７］）、稀な症候性頭蓋骨癒合症、及び最も一般的な症候性頭蓋骨癒合症であるＭｕｅｎｋｅ症候群（ＭＳ［ＭＩＭ ６０２８４９］）の原因となっている（Wilkie et al.,２010）。ＣＡＮ患者は黒色表皮腫を呈するが、しかし、それ以外はＦＧＦＲ２関連のクルーゾン症候群患者に似ている：彼らは頭蓋骨の冠状縫合の早期癒合、短頭症、顔面中心部の低形成、及び頭蓋頚椎移行部病変により特徴付けられる（Arnaud-Lepez et al.,2007；Di Rocco et al.,2011；Meyers et al.,1995；Mir A et al.,2013）。ＣＡＮは、ＦＧＦＲ３の膜貫通ドメイン中に局在化される単一の点変異（ｐ．Ａｌａ３９１Ｇｌｕ）により定義される（Li et al.,２006；Meyers et al.,１995）。異常な頭蓋冠、頭蓋底、及び顔面成長の潜在的な転帰は、増加した頭蓋内圧、聴覚及び視覚障害、障害性の脳血流、後脳奇形、脊髄空洞症、睡眠時無呼吸、及び多因子性発達遅延を含む。いくつかの試験によって、記憶力、注意、不安、及び感情制御の障害により特徴付けられる、ＦＧＦＲ３関連の頭蓋骨癒合症における認知欠損が報告されている（Kruszka et al.,1993；Maliepaard et al.,2014；Yarnell et al.,2015）。ＦＧＦＲ３は、軟骨内骨化の重要な調節因子として広く認識されている。しかし、縫合成長生物学及び膜骨化におけるその役割はあまり知られていない。ｐ．Ａｌａ３９１Ｇｌｕ ＣＡＮ変異の役割は未探索のままである。本発明者らは、優性ｐ．Ａｌａ３８５Ｇｌｕ変異を発現する最初のＣＡＮマウスモデル（Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋）を作製した。Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスは、頭蓋骨癒合症の非存在及び正常な頭蓋脳比率を示した。中枢神経系では、ＦＧＦＲ３は、認知機構のために必須の脳構造である海馬において高度に発現している。本発明者らは、ｐ．Ａｌａ３８５Ｇｌｕ変異が成体の神経発生及び認知能力に影響を及ぼしうるとの仮説を立てた。この仮説をテストし、行動におけるＦＧＦＲ３機能獲得変異の影響を定義するために、本発明者らは、海馬における神経発生を検証し、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスの歯状回における顆粒層の減少したサイズに関連付けられる、減少した増殖を示した。さらに、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスは、海馬依存の学習及び記憶障害ならびに回避不能なストレスに対する異常な対処戦略を示した。
【0005】
本発明者らはまた、ＦＧＦＲ３チロシンキナーゼＩドメイン中に局在化する最も一般的なＨＣＨ変異であるｐ．Ａｓｎ５４０Ｌｙｓを発現するＨｃｈマウスモデルＦｇｆｒ３Ｎ５３４Ｋｓ／＋を試験した。この仮説をテストし、行動におけるＦＧＦＲ３機能獲得変異の影響を定義するために、本発明者らは、Ｆｇｆｒ３Ｎ５３４Ｋ／＋マウス及びそのコントロール同腹仔に対して一連の行動テストを実施した。その結果、彼らは、Ｆｇｆｒ３Ｎ５３４Ｋｓ／＋マウスが海馬依存的な記憶障害及び回避不能なストレスに対する異常な対処戦略を示すことを見出した。
【0006】
本明細書では、本発明者らは、脳において発現されるＦＧＦＲ３機能獲得変異が、頭蓋骨異常とは無関係に認知欠損及び行動欠損を誘発するという強力なエビデンスを提供する。ＦＧＦＲ３の構成的活性化がこれらの行動障害に関与するというエビデンスを提供するために、本発明者らは、ＢＧＪ３９８の脳室内注射を７日間にわたり使用して、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウス及びＦｇｆｒＮ５３Ｋｓ／＋マウスをチロシンキナーゼ阻害剤で処置した。この処置によって、学習及び記憶における、ならびに対処戦略における異常がレスキューされる。このように、ＦＧＦＲ３を標的化することによって、軟骨異形成症及び頭蓋骨癒合症における認知障害を処置するための新規の効率的な治療の展望が与えられる。
【0007】
発明の概要：
【0008】
本発明は、ＦＧＦＲ３関連の認知欠損の処置のための方法及び医薬組成物に関する。特に、本発明を特許請求の範囲により定義する。
【0009】
発明の詳細な説明：
【0010】
線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）機能獲得型変異（ｐ．Ａｌａ３９１Ｇｌｕ）は、稀な形態の頭蓋骨癒合症に関与している：黒色表皮腫を伴うクルーゾン症候群（ＣＡＮ）。ＣＡＮを伴う患者は、頭蓋骨の冠状縫合の早期癒合、顔面中心部の低形成、黒色表皮腫、及び神経障害により特徴付けられる。ＦＧＦＲ３は、長骨成長の負の調節因子として定義される。しかし、頭蓋骨の縫合成長生物学におけるｐ．Ａｌａ３９１Ｇｌｕ ＣＡＮ 変異の役割は未探索のままである。本発明者らは、ＣＡＮ変異がリガンドとは無関係に受容体の過剰活性化を誘発し、タンパク質の成熟を妨げることを観察した。本発明者らは、優性ｐ．Ａｌａ３８５Ｇｌｕ変異を発現する最初のＣＡＮマウスモデル（Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋）及び優性ｐ．Ａｓｎ５４０Ｌｙｓ変異を発現するＨＣＨマウスモデル（Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋）を作製した。Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスは、頭蓋骨癒合症の非存在及び正常な頭蓋脳比率を示した。しかし、これらのマウスの成体海馬を分析し、本発明者らは、ＦＧＦＲ３過剰活性化が、減少した歯状回前駆細胞の増殖及び神経発生に関連付けられることを示した。結果的に、行動テストをＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおいて実施し、海馬依存的な記憶障害及び異常な対処戦略が観察された。最後に、特定のＦＧＦＲ３阻害剤（ＢＧＪ３９８）を使用し、本発明者らは、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスの脳におけるＦＧＦＲ３過剰活性化を阻害し、このように、行動障害及び認知障害を回復させた。これによって、脳におけるＦｇｆｒ３過剰活性化に関連付けられる初めての行動異常が強調される。それによって、頭蓋骨癒合症での学習過程及び感情的応答においてＦＧＦＲ３が果たす役割のより良い理解が可能になる。
【0011】
従って、本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ３阻害剤を対象に投与することを含む、それを必要とする、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患に罹患している対象においてＦＧＦＲ３関連の認知欠損を処置する方法に関する。
【0012】
本発明はまた、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患に罹患している対象における、ＦＧＦＲ３関連の認知欠損の処置における使用のためのＦＧＦＲ３阻害剤に関する。
【0013】
本明細書中で使用するように、用語「対象」は、哺乳動物、例えば齧歯類、ネコ、イヌ、及び霊長類などを表す。特に、本発明による対象はヒトである。本明細書中で使用するように、用語「対象」は「患者」を包含する。
【0014】
一部の実施形態では、本発明の対象は、認知欠損に罹患している、又は罹患するであろう。
【0015】
一部の実施形態では、本発明の対象は、認知欠損及び行動欠損を誘発する、脳において発現されるＦＧＦＲ３機能獲得変異に罹患する、又は罹患するであろう。
【0016】
一部の実施形態では、本発明の対象は、エピソード記憶欠損、抗うつ効果、学習における異常、及びストレス応答を有する、又は有するであろう。
【0017】
本明細書中で使用するように、用語「ＦＧＦＲ３」、「ＦＧＦＲ３チロシンキナーゼ受容体」、及び「ＦＧＦＲ３受容体」は、本明細書を通して互換的に使用され、ＦＧＦＲ３の天然アイソフォームの全てを指す。ＦＧＦＲ３の例示的なヒトアミノ酸配列が、配列番号１により表されている。
【化1】
【0018】
本明細書中で使用するように、表現「構成的に活性なＦＧＦＲ３受容体バリアント」、「ＦＧＦＲ３の構成的に活性な変異体」、又は「構成的活性を呈する変異体ＦＧＦＲ３」は互換的に使用され、生物学的活性（即ち、下流のシグナル伝達を誘発する）を示す前記受容体の変異体を指し、及び／又はＦＧＦリガンドの存在において、対応する野生型受容体の生物学的活性よりも高い生物学的活性を示す。本発明による構成的に活性なＦＧＦＲ３バリアントは、特に、以下からなる群より選択される（残基は、線維芽細胞増殖因子受容体３アイソフォーム１～８０６アミノ酸長の前駆体におけるそれらの位置に従って番号付けされている）：位置８４のセリン残基はリジンで置換されている変異体（本明細書中では以下でＳ８４Ｌと名付けられている）；位置２００のアルギニン残基がシステインで置換されている変異体（本明細書中では以下でＲ２００Ｃと名付けられている）；位置２４８のアルギニン残基がシステインで置換されている変異体（本明細書中では以下でＲ２４８Ｃと名付けられている）；位置２４９のセリン残基がシステインで置換されている変異体（本明細書中では以下でＳ２４９Ｃと名付けられている）；位置２５０のプロリン残基がアルギニンで置換されている変異体（本明細書中では以下でＰ２５０Ｒと名付けられている）；位置２６２のアスパラギン残基がヒスチジンで置換されている変異体（本明細書中では以下でＮ２６２Ｈと名付けられている）；位置２６８のグリシン残基がシステインで置換されている変異体（本明細書中では以下でＧ２６８Ｃと名付けられている）；位置２７８のチロシン残基がシステインで置換されている変異体（本明細書中では以下でＹ２７８Ｃと名付けられている）；位置２７９のセリン残基がシステインで置換されている変異体（本明細書中では以下でＳ２７９Ｃと名付けられている）；位置３７０位のグリシン残基がシステインで置換されている変異体（本明細書中では以下でＧ３７０Ｃと名付けられている）；位置３７１のセリン残基がシステインで置換されている変異体（本明細書中では以下でＳ３７１Ｃと名付けられている）；位置３７３のチロシン残基がシステインで置換されている変異体（本明細書中では以下でＹ３７３Ｃと名付けられている）；位置３８０のグリシン残基がアルギニンで置換されている変異体（本明細書中では以下でＧ３８０Ｒと名付けられている）；位置３８１のバリン残基がグルタミン酸で置換されている変異体（本明細書中では以下でＶ３８１Ｅと名付けられている）；位置３９１のアラニン残基がグルタミン酸で置換されている変異体（本明細書中では以下でＡ３９１Ｅと名付けられている）；位置５４０のアスパラギン残基がリジンで置換されている変異体（本明細書中では以下でＮ５４０Ｋと名付けられている）；終結コドンが塩基置換に起因して除去された変異体、特に終結コドンがアルギニン、システイン、グリシン、セリン、又はトリプトファンコドンにおいて変異している変異体（本明細書中では以下で、それぞれＸ８０７Ｒ、Ｘ８０７Ｃ、Ｘ８０７Ｇ、Ｘ８０７Ｓ、及びＸ８０７Ｗと名付けられている）；位置６５０のリジン残基が別の残基、特にメチオニン、グルタミン酸、アスパラギン、又はグルタミンで置換されている変異体（本明細書中では以下でＫ６５０Ｍ、Ｋ６５０Ｅ、Ｋ６５０Ｎ及びＫ６５０Ｑと名付けられている）；位置５２８のメチオニン残基がイソロイシンで置換されている変異体（本明細書中では以下でＭ５２８Ｉと名付けられている）；位置５３８のイソロイシン残基がバリンで置換されている変異体（本明細書中では以下でＩ５３８Ｖと名付けられている）；位置５４０のアスパラギン残基がセリンで置換されている変異体（本明細書中では以下でＮ５４０Ｓと名付けられている）；位置５４０のアスパラギン残基がスレオニンで置換されている変異体（本明細書中では以下でＮ５４０Ｔと名付けられている）。典型的には、本発明による構成的に活性なＦＧＦＲ３バリアントは、Ｎ５４０Ｋ、Ｋ６５０Ｎ、Ｋ６５０Ｑ、Ｍ５２８Ｉ、Ｉ５３８Ｖ、Ｎ５４０Ｓ、Ｎ５４０Ｔ、又はＡ３９１Ｅ変異体である。
【0019】
本明細書中で使用するように、用語「認知欠損」は、一連の症状（抑うつ、記憶、知覚、緩慢さ、及び問題解決の困難を含む）に関連する。認知欠損は、一部の精神障害（精神病、気分障害、不安障害）における症状として存在しうるが、しかし、それらは主に脳損傷と同義である。
【0020】
本明細書中で使用するように、用語「ＦＧＦＲ３関連の認知欠損」は、特にＦＧＦＲ３受容体の構成的に活性な変異体、特に上に記載するＦＧＦＲ３受容体の構成的に活性な変異体の発現により、脳におけるＦＧＦＲ３の異常な過剰活性化により起こされる認知欠損を意味することを意図する。
【0021】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ３関連の認知欠損を有する対象は、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患に罹患している。
【0022】
本明細書中で使用するように、用語「神経発生」は、当技術分野におけるその一般的な意味を有し、新たなニューロンが脳において形成される過程に関連する。神経発生は、胚が発生する際に重要であるが、しかし、また、出生後及び生涯を通じて特定の脳領域において継続する。成熟した脳は、多くの特殊な機能領域、ならびに構造及び接続において異なるニューロンを有する。海馬は、例えば、記憶及び空間ナビゲーションにおいて重要な役割を果たす脳領域であり、それ単独で、少なくとも２７種類のニューロンを有する。脳におけるニューロンの信じられないほどの多様性は、胚発生の間での調節された神経発生に起因する。その過程の間に、神経幹細胞は分化する、すなわち、それらは、脳における特定の時間及び領域で、多数の特殊な細胞型のいずれか１つになる。
【0023】
本明細書中で使用するように、用語「ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患」は、ＦＧＦＲ３の異常な活性化の増加によって、特にＦＧＦＲ３受容体の構成的に活性な変異体、特に上に記載するようにＦＧＦＲ３受容体の構成的に活性な変異体の発現により起こされる骨格疾患を意味することを意図している。
【0024】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患は、好ましくは、ＦＧＦＲ３関連の軟骨異形成症及びＦＧＦＲ３関連の頭蓋骨癒合症である。
【0025】
本明細書中で使用するように、「ＦＧＦＲ３関連の軟骨異形成症」は、低身長症、例えば軟骨低形成症（ＨＣＨ）、タナトフォリック骨異形成症（ＴＤ）Ｉ型、タナトフォリック骨異形成症ＩＩ型、軟骨無形成症（ＡＣＨ）、及びＳＡＤＤＡＮ（発達遅延及び黒色表皮腫を伴う重度の軟骨無形成症）などを含むが、これらに限定しない。
【0026】
特に、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患は低身長症である。
【0027】
本明細書中で使用するように、用語「低身長症」は、当技術分野における一般的な意味を有し、遺伝的又は医学的な状態に起因する低身長を指す。低身長症は一般的に、１４７cm又はそれ以下の成人の身長として定義される。
【0028】
特に、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患は軟骨形成不全症（ＨＣＨ）である。
【0029】
本明細書中で使用するように、用語「軟骨形成不全症」（ＨＣＨ）は、当技術分野における一般的な意味を有し、不釣合いに低い身長、小肢症、及び身体の未発達部分と比較して大きく見える頭部に関連する。
【0030】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ３関連の軟骨異形成は、ＦＧＦＲ３受容体のＮ５４０Ｋ、Ｋ６５０Ｎ、Ｋ６５０Ｑ、Ｍ５２８Ｉ、Ｉ５３８Ｖ、Ｎ５４０Ｓ、又はＮ５４０Ｔの構成的に活性な変異体の発現により起こされる軟骨低形成症である。
【0031】
特に、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患は軟骨無形成症（ＡＣＨ）である。
【0032】
本明細書中で使用するように、用語「軟骨無形成症」（ＡＣＨ）は、当技術分野における一般的な意味を有し、腕及び脚が短く、胴体が典型的には正常な長さであり、ならびに大きくなった頭部及び突出した額を伴う遺伝的欠損に関連する。
【0033】
特に、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患はタナトフォリック骨異形成症（ＴＤ）である。
【0034】
本明細書中で使用するように、用語「タナトフォリック骨異形成症」（ＴＤ）は、当技術分野におけるその一般的な意味を有し、不釣り合いに小さい胸郭、極端に短い四肢、ならびに腕及び脚での余分な皮膚の襞により特徴付けられる重度の骨格欠損に関連する。
【0035】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患は、ＦＧＦＲ３関連の頭蓋骨癒合症である。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ３関連の頭蓋骨癒合症は、遺伝性又は散発性疾患に対応する。
【0036】
特に、ＦＧＦＲ３関連の頭蓋骨癒合症は、ＦＧＦＲ３受容体のＰ２５０Ｒの構成的に活性な変異体の発現により起こされるムエンケ（Ｍｕｅｎｋｅ）症候群である。
【0037】
特に、ＦＧＦＲ３関連の頭蓋骨癒合症は、ＦＧＦＲ３受容体のＡ３９１Ｅの構成的に活性な変異体の発現により起こされる黒色表皮腫を伴うクルーゾン症候群（ＣＡＮ）である。
【0038】
本明細書中で使用するように、用語「頭蓋骨癒合症」は、当技術分野における一般的な意味を有し、対象の頭蓋骨の１つ以上の線維性縫合糸が、骨に変わる（骨化）ことにより未熟に癒合し、それにより、頭蓋骨の成長パターンが変化する状態に関連する。「黒色表皮腫を伴うクルーゾン症候群」（ＣＡＮ）は、非常に稀な頭蓋骨癒合症である。
【0039】
本明細書中で使用するように、用語「黒色表皮腫」は、皮膚の褐色から黒色の、不十分に明確化されている、ビロードのような色素沈着過剰に関連する。
【0040】
本明細書中で使用するように、用語「ＦＧＦＲ３Ｙ３６７Ｃ／＋」は、ヒトＡＣＨ表現型を再現するマウスモデルに関連する。ＡＣＨの臨床的特徴（例、低身長症、大後頭孔の低下サイズ、下顎骨の形成不全、難聴、椎間板の異常に関連付けられる）（Pannier et al. 2009, 2010、Mugniery et al 2012、Di Rocco et al 2014、Komla Ebri et al 2016）。
【0041】
本明細書中で使用するように、用語「ＦＧＦＲ３Ｎ５３４Ｋ／＋」はＨＣＨマウスモデルに関連する。変異マウスは、成長障害、成長板異常、軟骨結合の部分的喪失、及び脊柱前弯を伴うＨＣＨの臨床的特徴を呈する。
【0042】
本明細書中で使用するように、用語「ＦＧＦＲ３Ａ３８５Ｅ／＋」は、欠損した記憶が観察されたＣＡＮマウスモデルに関連する。
【0043】
本明細書中で使用するように、用語「処置」又は「処置する」は、予防的又は予防処置、ならびに治療的な、患者の状態を改善する、疾患改善処置（疾患に罹るリスクがある、又は疾患に罹った疑いのある患者、ならびに病気である、又は疾患もしくは医学的状態に罹患しているとして診断された患者の処置を含む）を指し、臨床的再発の抑制を含む。この処置は、欠損又は再発性欠損の１つ以上の症状を予防する、治癒させる、その発症を遅らせる、その重症度を減少させる、又は寛解するために、あるいは、そのような処置の非存在における予想を超えて対象の生存を延長させるために、医学的欠損を有する、又は最終的に欠損を獲得しうる対象に投与してもよい。「治療レジメン」により、病気の処置のパターン、例えば、治療の間に使用される投薬のパターンを意味する。治療レジメンは、導入レジメン及び維持レジメンを含みうる。語句「導入レジメン」又は「導入期間」は、疾患の初期処置のために使用される治療レジメン（又は治療レジメンの一部）を指す。導入レジメンの一般的な目標は、処置レジメンの初期期間の間に高レベルの薬物を患者に提供することである。導入レジメンでは、（部分的又は全体的に）「負荷レジメン」を用いてもよく、それは、医師が維持レジメンの間に用いうるよりも多くの用量の薬物を投与すること、医師が維持レジメンの間に薬物を投与しうるよりも頻繁に薬物を投与すること、又はそれらの両方を含みうる。語句「維持レジメン」又は「維持期間」は、病気の処置の間に患者の維持のために、例えば、患者を長期間（月又は年）にわたり寛解状態に保つために使用される治療レジメン（又は治療レジメンの一部）を指す。維持レジメンでは、継続的治療（定期的な間隔で、例えば、毎日、毎週、毎月、毎年などで薬物を投与する）又は間欠的治療（例、中断された処置、間欠的な処置、再発時の処置、又は特定の所定の基準［例、疾患の発現など］の達成時の処置）を用いうる。
【0044】
本明細書中で使用するように、用語「予防する」は、そのような用語が適用される欠損又は状態の発症を遅延させる又は予防することを目的とする予防方法又は過程を特徴付けることを意図する。
【0045】
遺伝子又は核酸の発現の文脈において使用される場合の用語「発現」は、遺伝子産物への、遺伝子中に含まれる情報の変換を指す。遺伝子産物は、遺伝子（例、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、構造ＲＮＡ、又は任意の他の種類のＲＮＡ）の直接転写産物又はｍＲＮＡの翻訳により産生されるタンパク質（即ち、ＦＧＦＲ３）でありうる。
【0046】
本明細書中で使用するように、本明細書中で使用する用語「阻害剤」は、標的分子の活性を阻害するための薬物だけでなく、また、標的分子の発現を阻害するための薬物も含む。
【0047】
本発明による阻害剤は、インビボ及び／又はインビトロでＦＧＦＲ３受容体の機能的活性化を阻害又は排除することが可能である。阻害剤は、ＦＧＦＲ３受容体の機能的活性化を少なくとも約１０%、好ましくは２０、少なくとも約３０%、好ましくは少なくとも約５０%、好ましくは少なくとも約７０、７５、又は８０%、さらに好ましくは８５、９０、９５、又は１００%阻害しうる。
【0048】
本発明による阻害剤は、ＦＧＦＲ３受容体に特異的に結合し、それによりシグナル伝達を低下又は遮断する阻害剤を含む。この種類のアンタゴニストは、ＦＧＦＲ３に結合する抗体（特に上に開示する抗体）又はアプタマー、ＦＧＦＲ３に結合する融合ポリペプチド、ペプチド、小さな化学分子、及びペプチドミメティックを含む。
【0049】
本明細書中で使用するように、用語「ポリペプチド」は、長さ又は翻訳後修飾に関係なく、ペプチド結合により連結されたアミノ酸の任意の鎖を指す。ポリペプチドは、天然タンパク質、合成又は組換えポリペプチド及びペプチド（即ち、５０アミノ酸未満のポリペプチド）ならびにハイブリッド、翻訳後修飾ポリペプチド、及びペプチドミメティックを含む。
【0050】
本明細書中で使用するように、用語「アミノ酸」は、２０の標準的なアルファ－アミノ酸ならびに天然及び合成誘導体を指す。ポリペプチドは、ＬもしくはＤアミノ酸又はそれらの組み合わせを含みうる。
【0051】
本明細書中で使用するように、用語「ペプチドミメティック」は、置換された非アミノ酸構造を有するが、しかし、ペプチドの化学構造を模倣するペプチド様構造を指す。
【0052】
用語「抗体」は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、即ち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指す。そのようなものとして、用語「抗体」は、抗体分子全体だけでなく、抗体フラグメント、ならびに抗体及び抗体フラグメントのバリアント（誘導体を含む）を包含する。
【0053】
特に、本発明による抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（例、キメラ、ヒト化、又はヒト抗体）、ポリクローナルもしくはモノクローナル抗体のフラグメント又はダイアボディに対応しうる。「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合領域又は可変領域を含む。抗体フラグメントの例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｄ、ｄＡｂ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ＣＤＲ、ダイアボディ、及び抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体を含む。
【0054】
本発明による抗体は、当技術分野において公知の任意の技術、例えば、限定しないが、任意の化学的、生物学的、遺伝子的、又は酵素的技術などにより、単独で又は組み合わせのいずれかで産生してもよい。本発明の抗体は、ハイブリドーマを産生及び培養することにより得ることができる。
【0055】
「アプタマー」は、分子認識に関して抗体に対する代替物を表す分子のクラスである。アプタマーは、実質的に任意のクラスの標的分子を高い親和性及び特異性で認識するための能力を伴うオリゴヌクレオチド配列又はオリゴペプチド配列ある。そのようなリガンドは、Tuerk C. and Gold L., Science,1990,249(4968):505-10に記載されているように、ランダム配列ライブラリーの指数関数的濃縮（ＳＥＬＥＸ）によるリガンドの系統的進化を通じて単離されうる。ランダム配列ライブラリーは、ＤＮＡのコンビナトリアル化学合成により入手可能である。このライブラリーでは、各々のメンバーは、最終的に化学的に修飾され、固有の配列の線形オリゴマーである。このクラスの分子の可能な修飾、使用、及び利点が、Jayasena S.D., Clin. Chem.,1999,45(9):1628-50においてレビューされている。ペプチドアプタマーは、ツーハイブリッド法によりコンビナトリアルライブラリーから選択されるプラットフォームタンパク質、例えば大腸菌チオレドキシン Ａ などにより呈示される立体構造的に拘束された抗体可変領域からなる（Colas et al., Nature,1996,380,548-50）。
【0056】
用語「小化学分子」は、好ましくは１，０００ダルトン未満の分子、特に有機又は無機化合物を指す。化学における構造設計は、そのような分子を見出すのに役立つはずである。
【0057】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ３阻害剤はチロシンキナーゼ阻害剤である。
【0058】
本発明は、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を対象に投与することを含む、それを必要とする、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患に罹患している対象においてＦＧＦＲ３関連の認知欠損を処置する方法に関する。
【0059】
本発明はまた、ＦＧＦＲ３関連の骨格疾患に罹患している対象においてＦＧＦＲ３関連の認知欠損の処置又は予防における使用のためのチロシンキナーゼ阻害剤に関する。
【0060】
本明細書中で使用するように、用語「チロシンキナーゼ阻害剤」（ＴＫＩ）は、チロシンキナーゼ活性を阻害するのに有効である化合物（天然又は合成）を指す。また、チロシンキナーゼに対して特異的な活性を伴う阻害剤が好ましいであろう。
【0061】
チロシンキナーゼ阻害剤の例は、ＰＤ１７３０７４（ＣＡＳ Ｎｏ．２１９５８０－１１－７）、ＡＺＤ４５４７（ＣＡＳ Ｎｏ．１０３５２７０－３９－３）、ＢＧＪ３９８（ＣＡＳ Ｎｏ．８７２５１１－３４－７）、ＡＰ２４５３４（ＣＡＳ Ｎｏ．９４３３１９－７０－８）、ＢＩＢＦ１１２０（ＣＡＳ Ｎｏ．６５６２４７－１７－５）、ＪＮＪ－４２７５６４９３（ＣＡＳ Ｎｏ．１３４６２４２－８１－６）、ＴＫＩ－２５８（ＣＡＳ Ｎｏ．４０５１６９－１６－６）、ＰＨＡ－ ７３９３５８（ＣＡＳ Ｎｏ．８２７３１８－９７－８）、ＢＭＳ－５４０２１５（ＣＡＳ Ｎｏ．６４９７３５－４６－６）、ＴＫＩ－２５８二乳酸（ＣＡＳ Ｎｏ．８５２４３３－８４－２）、ＭＫ－２４６１（ＣＡＳ Ｎｏ．９１７８７９－３９－１）、ＢＭＳ－５８２６６４（ＣＡＳ Ｎｏ．６４９７３５－６３－７）、ＳＳＲ１２８１２９Ｅ（ＣＡＳ Ｎｏ．８４８３１８－２５－２）、ＰＲＮ１３７１（ＣＡＳ Ｎｏ．１８０２９２９－４３－６）、ＰＤ１６６８６６（ＣＡＳ Ｎｏ．１９２７０５－７９－６）、ＢＬＵ５５４（ＣＡＳ Ｎｏ．１７０７２８９－２１－１）、Ｓ４９０７６（ＣＡＳ Ｎｏ．１２６５９６５－２２－７）、ＳＵ５４０２（ＣＡＳ Ｎｏ．２１５５４３－９２－３）、ＢＬＵ９９３１（ＣＡＳ Ｎｏ．１５３８６０４－６８－０）、ＦＩＮ－２（ＣＡＳ Ｎｏ．１６３３０４４－５６－０）、ＴＫＩ－２５８乳酸（ＣＡＳ Ｎｏ．９１５７６９－５０－５）、ＣＨ５１８３２８４（ＣＡＳ Ｎｏ．１２６５２２９－２５－１）、ＬＹ２８７４４５５（ＣＡＳ Ｎｏ．１２５４４７３－６４－７）、又はＡＳＰ５８７８（ＣＡＳ Ｎｏ．１４５３２０８－６６－６）を含むが、これらに限定しない。十分に認識しているように、各々の分子に割り当てられた ＣＡＳ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅ）番号は、各々の化合物についての固有の識別子である。
【0062】
特定の実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤はＢＧＪ３９８（ＦＧＦＲファミリーの強力な阻害剤）である。本明細書中で使用するように、用語「ＢＧＪ３９８」は、当技術分野におけるその一般的な意味を有し、３－（２，６－ジクロロ－３，５－ジメトキシフェニル）－１－［６－［４－（４－エチルピペラジン－１－イル）アニリノ］ピリミジン－４－イル］－１－メチル尿素を指す。この用語はまた、インフィグラチニブ、ＮＶＰ－ＢＧＪ３９８、又はＢＧＪ－３９８として公知である。
【0063】
本明細書中で使用するように、用語「投与する」又は「投与」は、例えば脳室内、粘膜、皮内、静脈内、皮下、筋肉内送達及び／又は本明細書中に記載する、もしくは当技術分野において公知の物理的送達の任意の他の方法などにより、体外に存在する物質（例、ＦＧＦＲ３阻害剤）を対象に注射する、又はそうでなければ物理的に送達する行為を指す。疾患、又はその症状が処置されている場合、物質の投与は、典型的には、疾患又はその症状の発症後に起こる。疾患又はその症状が予防されている場合、物質の投与は、典型的には、疾患又はその症状の発症前に起こる。
【0064】
「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために必要な投与量での、及び期間にわたる有効な量を指す。薬物の治療有効量は、要因、例えば個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する薬物の能力などの要因で変動しうる。治療有効量はまた、ＦＧＦＲ３阻害剤の任意の毒性又は有害効果よりも、治療的に有益な効果が上回っている量である。薬物についての効率的な投与量及び投薬レジメンは、処置される疾患又は状態に依存し、当業者により決定されうる。当技術分野における通常の技術を有する医師は、要求される医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方しうる。例えば、医師は、所望の治療効果を達成するために要求されるレベルよりも低いレベルで、医薬組成物中で用いられる薬物の用量を開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させることができる。一般的に、本発明の組成物の適切な用量は、特定の投薬レジメンに従って治療効果を産生するのに有効な最も低い用量である化合物の量である。そのような有効用量は、一般的に、上に記載する要因に依存する。例えば、治療的な使用のための治療有効量は、疾患の進行を安定化させるその能力により計測されうる。当業者は、対象の大きさ、対象の症状の重症度、及び特定の組成物又は選択された投与経路などの要因に基づき、そのような量を決定することができるであろう。薬物の治療有効量についての例示的で、非限定的な範囲は、約０．１～１００mg/kg、例えば約０．１～５０mg/kgなど、例えば、約０．１～２０mg/kg、例えば約０．１～１０mg/kgなど、例えば、約０．５、約０．３、約１、約３mg/kg、約５mg/kg、又は約８mg/kgなどである。投与は、例えば、脳室内、静脈内、筋肉内、腹腔内、又は皮下であり、例えば、標的部位の近位に投与されうる。上の処置の方法及び使用における投薬レジメンは、最適な所望の応答（例、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量で経時的に投与してもよく、又は用量を、治療状況の緊急性により示されるように、比例的に低下又は増加させてもよい。一部の実施形態では、処置の有効性は、治療の間に、例えば、事前定義された時間点でモニターされる。非限定的な例として、本発明による処置は、本発明の薬剤の１日投与量として、１日当たり、約０．１～１００mg/kg、例えば０．２、０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００mg/kgなどの量で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０日目の少なくとも１つに、あるいは、代わりに、処置の開始後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０週の少なくとも１つ、あるいはそれらの任意の組み合わせに、２４時間、１２時間、８時間、６時間、４時間、又は２時間、あるいはそれらの任意の組み合わせ毎に、単一又は分割用量を使用して提供してもよい。
【0065】
したがって、対象は、活性成分としてのＦＧＦＲ３阻害剤及び少なくとも１つの医薬的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を用いて投与される。本明細書中で使用するように、用語「活性成分」又は「活性成分」は互換的に使用される。活性成分は、医学的状態又は疾患を軽減、処置、又は予防するために使用される。本明細書中の用語「医薬的に許容可能な賦形剤」により、活性成分の生物学的活性の有効性に干渉せず、それが投与された濃度で宿主に対して過剰な毒性のない担体媒体を意味する。前記賦形剤は、医薬形態及び所望の投与方法に依存して、当業者により公知の通常の賦形剤から選択される。一部の実施形態では、本発明の医薬組成物は、第２の活性成分を含まない。
【0066】
本発明はまた、本発明のＦＧＦＲ３阻害剤が、例えば、認知欠損を処置するために、少なくとも１つのさらなる治療薬剤との組み合わせにおいて使用される治療適用を提供する。そのような投与は、同時、別々、又は連続的でありうる。同時投与のために、薬剤は、適宜、１つの組成物として、又は別々の組成物として投与されうる。さらなる治療薬剤は、典型的には、処置される欠損について関連している。
【0067】
本明細書中で使用するように、用語「組み合わせ」は、第１の薬物をさらなる（第２、第３…）薬物と一緒に提供する全ての形態の投与を指すことを意図している。薬物は、同時に、別々に、又は連続的に、任意の順序で投与してもよい。本発明によれば、薬物は、薬物が脳に到達することを可能にする任意の適切な方法を使用して対象に投与される。一部の実施形態では、薬物は対象に全身的に（即ち、全身投与を介して）投与される。このように、一部の実施形態では、薬物は、循環系に入り、身体全体に分布するように対象に投与される。一部の実施形態では、薬物は、局所投与により、例えば、視床下部への局所投与により対象に投与される。
【0068】
本明細書中で使用するように、用語「組み合わせ処置」、「組み合わせ治療」、又は「治療の組み合わせ」は、１を上回る医薬を使用する処置を指す。組み合わせ治療は、二重治療又は二治療でありうる。
【0069】
本明細書中で使用するように、用語「同時投与」は、同じ経路による、同時での又は実質的に同時での２つの活性成分の投与を指す。用語「別々の投与」は、異なる経路による、同時での又は実質的に同時での２つの活性成分の投与を指す。用語「連続的な投与」は、異なる時間での２つの活性成分の投与を指し、投与経路は同一である又は異なる。
【0070】
本発明は、以下の図及び実施例によりさらに例証される。しかし、これらの実施例及び図は、本発明の範囲を限定するような任意の方法で解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【0071】
【図1】ＣＡＮ モデルにおける学習障害及び抗うつ様の動作。Ａ．４ヶ月齢の雄の動物において実施された新規物体認識（ＮＯＲ）。識別指標を、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋及びそれらのコントロールについて同腹仔の記憶能力を評価するために、トレーニング段階後の２４時間に測定した。ＮＯＲを、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋の２つの独立した群（ｎ＝１７）及びそれらのコントロール（ｎ＝１４）で実施した。Ｂ．４ヶ月齢の雄の動物（Ｆｇｆｒ３＋／＋、ｎ＝１３；Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋ ｎ＝１２）で実施された文脈的恐怖条件付け（ＣＦＣ）。パーセントフリージング時間を、トレーニング段階（基礎レベルについてのコントロールとして）及びテスト段階（記憶能力を評価するため）について記録した。Ｃ．２つの独立した群における４ヶ月齢の雄の動物において実施された強制水泳テスト（ＦＳＴ）。ＦＳＴを連続２日間にわたり実施した。不動期間を１日目及び２日目の両方にわたり評価した（Ｆｇｆｒ３＋／＋、ｎ＝１７；Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋、ｎ＝１４）。Ｄ．尾懸垂テスト（ＴＳＴ）を連続２日間に４ヶ月齢の雄の動物で実施し、不動期間を両方について評価した。（Ｆｇｆｒ３＋／＋、ｎ＝１７；Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋ ｎ＝１４）。全ての行動分析を、マウスの２つの独立したコホート及び各々の群についての２つの独立した実験で実施した。
【図2】海馬におけるＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋リン酸化の下方調節によって、記憶欠損及び抗うつ様行動が回復した。Ａ．ＢＧＪ３９８又は賦形剤のいずれかでの７日間、４ヶ月齢の雄の動物への局所での１日１回の脳室内注射。ＮＯＲトレーニングセッションは、最後の注射後の１時間に起こった。Ｂ．賦形剤又はＢＧＪ３９８で注射された群で実施されたＮＯＲ。注射及びＮＯＲを、各々の３つの条件で２つの独立した群で実施した（Ｆｇｆｒ３＋／＋＋賦形剤、ｎ＝１５；Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋＋賦形剤、ｎ＝１４；Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋＋ＢＧＪ３９８、ｎ＝１４）。Ｃ．７日間での４ヶ月齢の雄の動物におけるＢＧＪ３９８又は賦形剤のいずれかの局所での１日１回の脳室内注射。最後の注射後の１時間に起こる１つのＦＳＴテストセッション。不動期間をテストの間に評価した。Ｄ．賦形剤又はＢＧＪ３９８で注射された群で実施されたＦＳＴ。注射及びＦＳＴを、各々の３つの条件を伴う２つの独立した群で実施した（Ｆｇｆｒ３＋／＋＋賦形剤、ｎ＝１５；Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋＋賦形剤、ｎ＝１４；Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋＋ＢＧＪ３９８、ｎ＝１４）。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。ＮＳ：Ｔｕｋｅｙの多重比較事後検定及びスチューデントの対応のないｔ検定を用いたＡＮＯＶＡにより有意ではない。
【図3】学習障害は、ＢＧＪ３９８のＦＧＦＲ３チロシンキナーゼ阻害剤の１日１回の皮下注射により逆転される。Ａ．新規物体位置特定（ＮＯＬ）を、４ヶ月齢の雄の動物において実施した。識別指標をトレーニング段階後の２４時間に測定して、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋及びそれらのコントロール同腹仔の記憶能力を評価した。Ｂ．新規物体認識（ＮＯＲ）を、４ヶ月齢の雄の動物において実施した。識別指標をトレーニング段階後の２４時間に測定して、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋＋ＢＧＪ３９８、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋及びそれらのコントロール同腹仔の記憶能力を評価した。ＮＯＲ及びＮＯＬを、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋（ｎ＝１２）Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋＋ＢＧＪ３９８（ｎ＝１４）の２つの独立した群及びそれらのコントロール（ｎ＝１４）で実施した。
【0072】
材料及び方法。
【0073】
全ての手順が、フランス動物管理使用委員会により承認された。ゲノムＤＮＡを、NucleoSpin Tissueキット（Macherey-Nagel）を製造元の指示に従って使用し、尾から単離した。マウスを、以下のプライマーを使用して遺伝子型を同定した：５’－ＧＴＧＧＧＧＧＴＴＣＴＧＣＧＧＴＴＧＧ－３’（配列番号２）及び５’－ＴＧＡＣＡＧＧＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＧＧ－３’（配列番号３）（ＷＴマウス及び変異マウスを単離するため）。全ての分析について、野生型の同腹仔をコントロールとして使用した。
【0074】
脳ＭＲＩ。
【0075】
マウス脳ＭＲＩを、小動物用４．７－Ｔ ＭＲイメージングユニット（Biospec47/40；Bruker、米国マサチューセッツ州ビレリカ）を使用して１００μmの解像度で取得した。Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスならびに５匹のＦｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋雄マウス及び４ヶ月齢の５匹のコントロール同腹仔を、取得の間にイソフルランガス吸入で麻酔した。三次元再構成及び測定を、Imaris（Bitplane）を使用して実施した。
【0076】
手術及び薬物処置。
【0077】
ＢＧＪ３９８は、米国マサチューセッツ州ウォバーンのLC Laboratoriesから購入した。ＢＧＪ３９８注射のために、４ヶ月齢のＦｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウス及びＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスは、６日間にわたるＢＧＪ３９８（２mg/kg）又は賦形剤（ＨｃＬ３．５mM、ＤＭＳＯ２%）の皮下投与を毎日受けた。馴化ならびにＮＯＲ及びＮＯＬをテストするために、注射をテスト段階前の１時間に実施した。
【0078】
行動テスト（Commons et al.2017；Glatigny et al.2019)。
【0079】
３フットショックの文脈的恐怖条件付け（ＣＦＣ）。
【0080】
マウスは、マウス飼育施設からテストルームまで、それらのホームケージ中で短距離移動されて、テストの開始前に少なくとも１時間にわたりそのまま放置された。コンディショニングチャンバーをBioseb（フランス）から得たが、内寸２５×２５×２５cmであった。各々のチャンバーを、外部の光及び騒音からの保護を提供される、より大きな断熱プラスチックキャビネット（６７×５５×５０cm、Bioseb、フランス）内に設置して、マウスをコンディショニングボックス中で個別にテストした。チャンバーの床は、フットショックの送達のための、スクランブラーを伴うショック発生器に配線された２７本のステンレス鋼棒からなった。マウスの動きにより生成されたシグナルを記録し、高感度重量トランスデューサーシステムを通じて分析した。アナログシグナルが、記録の目的のために、ロードセルユニットを通じてフリージングソフトウェアモジュールに伝送され、活動時間／不動時間（フリージング）の分析が実施された。ＣＦＣ手順は連続２日間にわたり行われた。１日目に、マウスが条件付けチャンバー中に置かれて、３回のフットショック（１．５秒、０．５mA）を受けたが、それらは、動物をチャンバー中に置いた後の６０、１２０、及び１８０秒に施された。それらを、最後のショックの６０秒後に、それらのホームケージに戻した。文脈的恐怖記憶を、条件付け後の２４時間に、マウスをコンディショニングチェンバーに戻し、４分間の保持テストの間にフリージング行動を測定することにより評価した。フリージングを、Packwin2.0ソフトウェア（Bioseb、フランス）を使用して自動的にスコア化し分析した。フリージング行動は、動物が少なくとも２秒間にわたりフリージングした場合に、発生したと考えた。行動をフリージングソフトウェアによりスコア化した。
【0081】
新規物体認識パラダイム（ＮＯＲ）。
【0082】
本発明者らは、Glatigny et al.,2019において記載されているように、ＮＯＲタスクの修正バージョンを使用した。マウスは、マウス飼育施設から、それらのホームケージ中のテストルームまで短距離で輸送されて、テストの開始前に少なくとも１時間にわたりそのまま放置された。テストルームは２つの６０W電球で照らされ、行動セッションが、テストアリーナ（灰色プラスチックボックス（６０×４０×３２cm））の上からカメラで記録された。マウスは照射の間に、互いに接触する、又は見ることはできなかった。光強度は、アリーナの全ての部分において等しかった（約２０lx）。２つの異なる物体が使用され、３通りで入手可能であった。物体は、青色セラミック ポット（直径６．５cm、最大高さ７．５cm）及び透明なプラスチック製漏斗（直径８．５cm、最大高さ８．５cm）であった。新規物体としての役割を果たす物体、ならびに物体の左／右局在化は、各々の群内で平衡化された。物体によって、パイロット実験及びトレーニング段階で決定されたのと同じレベルの探索が誘発された。曝露の間に、マウスは標準的なケージ中で個別に飼育され、物体及びアリーナをファゴスフォアで洗浄し、寝床を交換した。
【0083】
ＮＯＲパラダイムは、３つの段階（３日間を上回る）からなる：馴化段階、トレーニング段階、及びテスト段階。マウスは、各々の曝露の開始時に、常にアリーナの中央に置かれた。１日目：馴化段階、マウスは、任意の物体を伴うことなく、アリーナを探索するための５分間を与えられ、次に、それらのホームケージに戻された。２日目、トレーニング段階では、マウスは１０分間にわたりアリーナの中央から対称的な反対側の位置に配置された２つの同一の物体を探索し、次にそれらのホームケージに輸送された。３日目、テスト段階では、マウスは、２つの物体を探索するための１５分間を与えられた：見慣れた物体及び新規物体が同じアリーナ中にあり、同じ物体局在化が保たれている。
【0084】
以下の行動は、物体の探索と考えられた：鼻で又は前足で物体を嗅ぐ、舐める、又は触れる、あるいは物体に≦１cmの距離で鼻を向ける。調査は、マウスが物体の上にいる、又は完全に不動である場合にはスコア化されなかった。識別指標を（新たな物体の探索に費やされた時間－見慣れた物体の探索に費やされた時間）／（両方の物体の探索に費やされた合計時間）として算出した。コントロールとして、新規物体認識（ＮＯＲ）のトレーニング段階の間での（右／左）物体位置について又は物体Ａ対Ｂ についての選好指標を、テストに曝露されたマウスの全ての群において測定した。本発明者らは本明細書で、任意の曝露された物体（ＡもしくはＢ）又は任意の方向（右／左）についての初期選好が、任意の群において観察されなかったことを確認している。移動運動を各々のマウスについて評価した。行動は、処置について盲検化された２人の観察者によりビデオでスコア化され、物体の合計探索時間がテスト段階中に定量化された。
【0085】
新規物体位置（ＮＯＬ）。
【0086】
新規物体位置タスクについて、テスト段階の間に、新規物体を提示するのではなく、マウスが両方の見慣れた物体に遭遇し、１つの物体がアリーナ中の異なる場所に位置付けられたことを除き、全ての手順が、新規物体認識タスクと同一であった。新規の／再配置された物体の探索の時間及び頻度を、記憶の指標として測定する。行動は、処置について盲検化された２人の観察者によりビデオでスコア化され、物体の合計探索時間がテスト段階中に定量化された。
【0087】
明暗移行テスト（Ｄ／ＬＴ）。
【0088】
このテストは、明るく照射された領域に対する齧歯類の生来的な嫌悪及び光が表すストレッサーに応答したそれらの自発的な探索行動に基づいている。テスト装置は、暗い安全なコンパートメント及び照明された嫌悪コンパートメントからなる。点灯コンパートメントは、８W蛍光管（１０００lx）で明るく照射された。未処置マウスを、明るいコンパートメントに対する出入り口から離れて面した暗い領域の中央にあるテストチャンバー中に個別に配置した。マウスを１０分間にわたりテストし、２つのパラメーターを記録した：点灯コンパートメントにおいて費やされた時間及びコンパートメント間の移行の数、不安関連の行動及び探索活動の指標。行動を、actiMot2Software（PhenoMaster Software、ＴＳＥ）を使用した赤外光線活動モニターを使用してスコア化した。
【0089】
オープンフィールドテスト（ＯＦＴ）。
【0090】
このテストは、明るい領域に対する齧歯類の嫌悪を利用している。各々のマウスを ＯＦＴチャンバー（４３×４３cmチャンバー）の中央に置き、３０分間にわたり探索させる。マウスを、actiMot2Software（PhenoMaster Software、ＴＳＥ）を使用した赤外光ビーム活動モニターにより、各々のテストセッションを通してモニターした。全体的な運動活動を総移動距離（歩行運動）として定量化した。不安を、オープンフィールドチャンバーの中央対周辺において費やされた時間及び距離を測定することにより定量化した。
【0091】
尾懸垂テスト（ＴＳＴ）。
【0092】
このテストは、齧歯類が、最初の脱出志向の動き後、回避不能なストレス性の状況に置かれた場合に不動の姿勢を発生させるという観察に基づいている。各々のマウスを、床から２５cmの上の位置でそれらの尻尾により制御不能な様式で吊るす。マウスを５分間にわたりテストして、不動で費やされた時間を定量化した。
【0093】
強制水泳テスト（ＦＳＴ）。
【0094】
このテストは、ＴＳＴと同様の観察に基づいている。各々のマウスを、水（２３～２５℃）で満たされたシリンダー（高さ：２５cm、直径：１０cm）中に置く。マウスを５分間にわたりテストして、不動（行動の絶望）で費やされた時間を定量化した。
【0095】
実施例１：ＣＡＮモデル。
【0096】
黒色表皮腫を伴うクルーゾン症候群の臨床的特徴。
【0097】
ＣＡＮ症候群は、ＦＧＦＲ３変異に関連し、ＦＧＦＲ２変異に起因するクルーゾン症候群［ＭＩＭ１２３５００］に類似した骨格表現型を示す（Coll et al.,2018,2016；Di Rocco et al.,2011）：眼窩不均衡、下顎前突症、顔面中心部の低形成（データは示さず）、及び冠状縫合と矢状縫合の早期癒合（種々の程度で）に続発する短頭症（データは示さず）。頭蓋冠異常によって、脳に機械的圧力が加えられて、頭蓋内圧上昇についてのリスクが増加する（Al-Namnam et al.,2019）（データは示さず）。加えて、脳ＭＲＩによって、３人の無関係のＣＡＮ患者において軽度の一時的な異常が明らかになった。罹患症例は、肥厚した海馬傍溝を呈し、構造の角度の変容を伴った（データは示さず）。クローバー型の頭蓋骨を呈する１例は解釈できなかった。
【0098】
クルーゾン症候群患者における頭蓋底異常は、ＦＧＦＲ２及びＦＧＦＲ３の両方が関連し、前方では顔面中心部の低形成に寄与し、後方では頭蓋椎間接合部異常に寄与する。蝶形後頭軟骨結合の早期癒合は、短縮した頭蓋底に関連付けられる一方で、後頭内軟骨結合の早期癒合は、ＣＡＮ患者における狭小化した大後頭孔に関連付けられる（データは示さず）。
【0099】
骨格表現型は、ＣＡＮマウスモデルＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋において軽度に影響される。
【0100】
骨格に対するＣＡＮ変異の影響を評価するために、本発明者らは、ｐ．Ａｌａ３９１Ｇｌｕヒト変異に対応する遍在性のｐ．Ａｌａ３８５Ｇｌｕミスセンス変異を発現するマウスモデルを作製した（データは示さず）。ＦＧＦＲ３ｐ．Ａｌａ３８５Ｇｌｕ転写物は、線維芽細胞及び頭蓋冠骨芽細胞において検出された（データは示さず）。ヒト疾患と同様に、明らかな四肢短縮表現型は、出生前段階及び新生児段階（データは示さず）から成体段階までのＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおいて観察されなかった（データは示さず）。体重、鼻－肛門及び大腿骨ならびに脛骨の長さは、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウス及びＦｇｆｒ３＋／＋マウスにおいて類似していた（データは示さず）。正常な大腿骨成長が、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋における軟骨評価により確認され、Ｘ型コラーゲン染色で明らかになった肥大ゾーンの異常を伴わない、十分に組織化された成長板を示した（データは示さず）。異常な表現型の非存在を確認するために、骨構造パラメーターを評価した。３ヶ月齢の大腿骨でのマイクロＣＴ画像によって、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおける海綿骨及び皮質骨の正常な構造が明らかになった（データは示さず）。
【0101】
頭蓋顔面の表現型を、マイクロＣＴ頭蓋骨取得を使用して評価した。Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスは、正常な頭蓋顔面特徴を示した（データは示さず）；冠状縫合及び頭蓋底軟骨結合は、コントロールマウスと同様に、出生後２１日目に開存していた（データは示さず）。Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウス及びＦｇｆｒ３＋／＋マウスの目印に基づく幾何学的形態計測（Heuze et al.,2010）によって、頭蓋骨形状においていかなる違いも示されなかった（ｄ＝０．０１４８；ｐ＝０．０９４０）。しかし、下顎骨の形状は、マウスの２群間で有意に異なっていた（ｄ＝０．０１５９；Ｐ＜０．０１）（データは示さず）。前頭－頭頂縫合の早期閉鎖の非存在を確認するために、本発明者らは、頭蓋冠Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋骨芽細胞のインビトロ機能を評価した。ミネラル化能力、増殖、及びマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）活性化における有意差は、コントロールと比較して、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスの骨芽細胞において観察されなかった（データは示さず）。全てのこれらのデータによって、本発明者らは、骨芽細胞中で発現したｐ．Ａｌａ３８５Ｇｌｕ変異は活性ではなく、結果的に、頭蓋顔面発生に影響を及ぼさなかったと結論付けることが可能になった（データは示さず）。これらのデータによって、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおける頭蓋骨癒合症の表現型の非存在が説明される。皮膚に関しては、角化症の徴候又は表皮の厚さ及び色素沈着における変化は、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおいて検出されなかった（データは示さず）。
【0102】
Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスモデルは、歯状回が神経発生を減少させることを示す。
【0103】
構造的な脳異常が、ＣＡＮ患者（Gurbuz et al.,2016）（データは示さず）及びＭｕｅｎｋｅ患者（Abdel-Salam et al.,2011；Grosso et al.,2003；Okubo et al.,2017）において記載されている。これらの異常は、海馬及び側頭葉の異常な形態を含む。頭蓋縫合糸の早期癒合によって頭蓋骨の形状が変化し、正常な脳成長が損なわれ、機能的な問題、例えば増加した頭蓋内圧、視覚障害、難聴、及び認知障害などを起こすことが周知である（Di Rocco et al.,2011）。以前の試験によって、ＭＳを伴う患者が、適応機能及び実行機能において欠損を呈することが示された。この行動表現型は、作業記憶欠損、注意欠損多動性障害、感情制御、及び不安を含んだ（Yarnell et al.,2015）。これらの神経学的障害は、認知機能の制御についての、脳におけるＦＧＦＲ３の影響を示唆する。それ故に、本発明者らは、４ヶ月齢のＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおいて磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を実施し、種々の脳領域の体積を測定した。
【0104】
体積の変化及び任意の圧縮は、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスの種々の脳領域において観察されず、正常な胚脳発生が示唆された（データは示さず）。しかし、ＦＧＦ及びＦＧＦＲ は、中枢神経系における神経幹細胞及び神経前駆細胞の増殖及び分化に含まれることが公知である（Huang et al.,2017；Kang and Hebert,2015、Moldrich et al.,2011；Ohkubo et al. .,2004；Stevens et al.,2012）。従って、本発明者らは、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスの脳において発現されるＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ変異が、成体の神経発生に影響を及ぼしうるという仮説を立てた。頭蓋顔面異常の非存在は、具体的には成体期の間に神経発生を評価するための良い機会である。成体神経発生におけるＦｇｆｒ３の役割を探索し、本発明者らは、免疫蛍光（データは示さず）及びウェスタンブロッティング（データは示さず）によりＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋及びＦｇｆｒ３＋／＋マウス海馬におけるＦＧＦＲ３の同様の発現を観察した。しかし、ＦＧＦＲ３により活性化される正規のＭＡＰＫ経路は、Ｆｇｆｒ３ノックインマウスモデル（Komla-Ebri et al.,2016）及びＦＧＦＲ３ノックアウトマウスモデル（Zhou et al.,2015）両方において調節不全であることが見出されている。実際に、本発明者らは、成体海馬ライセート中でのリン酸化Ｅｒｋ１／２の有意な増加発現を観察しており（データは示さず）、このように、脳におけるＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ変異によって、ＭＡＰＫ経路が活性化されることを確認した。ＦＧＦＲ３は、歯状回における前駆細胞の増殖及びニューロン分化において重要な役割を果たす（Inglis-Broadgate et al.,2005；Kang and Hebert,2015；Moldrich et al.,2011；Thomson et al.,2009）。４ヶ月齢のＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ海馬では、ＮｅｕＮマーカーを使用し、本発明者らは、歯状回顆粒層の成熟ニューロン領域が、コントロールと比較して有意に減少していることを示した（データは示さず）。本発明者らは、この減少したニューロン集団が、減少した前駆細胞増殖により起こされたか否かを評価した。細胞周期ＫＩ６７マーカーについての陽性細胞数は、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおける歯状回顆粒細胞下帯で有意に低下した（データは示さず）。顆粒帯では、ダブルコルチン（ＤＣＸ）免疫標識により明らかにされたニューロンの分化率は、わずかに減少する（データは示さず）。まとめると、これらのデータは、Ｆｇｆｒ３機能獲得変異が主に増殖に影響を及ぼし、このように、歯状回におけるニューロンの成熟分化に影響することを強く示唆した。
【0105】
Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスモデルは、減少した学習能力及び抗うつ効果を示す。
【0106】
海馬構造の低下したサイズ及び低下した増殖は、ヒト及びマウスにおける記憶及び認知の変化に関連付けられることが示された（Kitamura and Inokuchi,2014）。従って、本発明者らは、４ヶ月齢のＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウス及びそれらのコントロール同腹仔を一連の行動テストに供したが、これは、海馬に関連する行動機能を反映すると考えられ、連想（１試行の文脈的恐怖条件付け、ＣＦＣ）及びエピソード（新規物体認識テスト、ＮＯＲ）、ならびに空間（モリス水迷路、ＭＷＭ）学習及び記憶を測定している（図１Ａ～１Ｄ）。ＣＦＣでは、変異マウスは、ベースラインのフリージング時間において差を示さなかった。しかし、Ｆｇｆｒ３機能獲得変異は、それらのコントロール同腹仔と比較し、テスト段階の間に減少した文脈誘発フリージング時間をもたらしたが、文脈的恐怖記憶が変異マウスにおいて損なわれていることを示す（図１Ｂ）。
【0107】
次に、本発明者らは、ＮＯＲパラダイムの修正バージョン（Denny et al.,2012；Ennaceur and Delacour,1988）を使用し、それによって、環境において新たな物体を認識する齧歯類の能力が測定される。野生型マウスは、見慣れた物体から新規物体を区別することが可能であり、新規物体をより長い時間にわたり探索する傾向がある。（図１Ａ）に示すように、４ヶ月齢のＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスは、コントロールよりも有意に少なく新規物体を探索した。しかし、障害は、記憶を、ＭＷＭタスク（齧歯類における空間学習及び記憶を評価する）を通じて分析した場合には観察されなかった。注目すべきことに、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウス及びコントロールは、オープンフィールドテスト（ＯＦＴ）及び明／暗パラダイム（Ｌ／ＤＴ）において同等の成績を有したが（データは示さず）、それらの移動運動及び不安状態がインタクトであったことを示す。
【0108】
次に、本発明者らは、強制水泳テスト（ＦＳＴ）及び尾懸垂テスト（ＴＳＴ）を使用し、回避不能なストレスに対する対処戦略を評価した。（図１Ｃ）において示すように、４ヶ月齢のＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスは、ＦＳＴの間にコントロールマウスよりも有意に少ない時間を不動で費やす。同じ障害がＴＳＴの間に観察された。実際に、変異マウスは、コントロール同腹仔よりも有意に少ない時間を不動で費やす（図１Ｄ）。
【0109】
まとめると、これらのデータによって、Ｆｇｆｒ３機能獲得変異が、海馬依存的なエピソード記憶及び連想恐怖記憶の獲得に有意に影響し、回避不能なストレスに対する対処戦略に影響を及ぼすことが実証される。
【0110】
重要なことに、これらのデータは、マウスにおけるＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ変異によって、作業記憶欠損、ならびに感情制御障害及び注意欠損多動性障害を含む、以前にヒト患者において記載された行動欠損が再現されたことを示す（Yarnell et al.,2015）。
【0111】
ＢＧＪ３９８脳室内注射によって、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスの認知障害がレスキューされる。
【0112】
Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおける認知障害が、受容体の増加したリン酸化に起因することを確認するために、本発明者らは、特定のチロシンキナーゼ阻害剤ＢＧＪ３９８（インフィグラチニブ）でマウスを処置することを決めた（Gudernova et al.,2015；Komla-Ebri et al.,2016）。４ヶ月齢のＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウス及びそれらのコントロール同腹仔は、ＢＧＪ３９８又は賦形剤溶液を用いた７日間にわたる脳室内注射を受け、２つの行動テスト（ＮＯＲ及びＦＳＴ；図２Ａから２Ｃ）に供された。ＢＧＪ３９８の注射によって、コントロール同腹仔と比較して、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスについてのＮＯＲパラダイムにおいて観察された記憶欠損が逆転されて（図２Ｂ）、ＦＳＴにおいて観察された回避不能なストレスに対する対処戦略が再確立された（図２Ｄ）。Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおける頭蓋脳の不均衡の非存在、及び、このように、潜在的に増加した頭蓋内圧の欠如によって、本発明者らは、観察された、報告された行動異常が、脳に対するＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ変異の直接的な影響に起因したと結論付けることが可能である。Ｆｇｆｒ３阻害剤ＢＧＪ３９８を用いたこれらの行動異常のレスキューによって、本発明者らの仮説が確認され、ＦＧＦＲ３過剰活性化が、ＦＧＦＲ３関連の頭蓋骨癒合症を伴う患者の認知表現型において含まれるという事実が支持された。
【0113】
実施例２：ＨＣＨモデル。
【0114】
Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスは脳の形態学的異常を示す。
【0115】
本発明者らは、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスは、大きな頭蓋骨及び頭蓋底軟骨結合の早期癒合を伴う頭蓋骨異常を示すことを以前に記載した（Loisay et al、原稿準備中）。脳異常及び葉形成不全が、Ｆｇｆｒ３機能獲得変異マウスモデルの特徴であることが報告された。従って、本発明者らは、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウス及びそれらのコントロール同腹仔脳のＭＲＩ及び３Ｄ再構成を実施した。本発明者らは、Ｈｃｈマウスにおいて海馬（ｐ＝０，６９０５）及び総脳体積（ｐ＝０，３８１０）の任意の有意な異常を観察しなかった一方で（データは示さず）、ＭＲＩ分析によって、コントロールと比較された場合に、脳形状の変化が示された（データは示さず）。
【0116】
Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスにおける学習欠損及び記憶欠損。
【0117】
成体神経発生は、海馬の記憶能力の維持において重要な役割を果たすことが公知である。本発明者らは、４ヶ月齢の雄Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウス及びそれらのコントロール同腹仔を、空間（新規物体位置、ＮＯＬ）及びエピソード（新規物体認識、ＮＯＲ）学習及び記憶を測定する一連の行動テストに供した。ＮＯＲでは、本発明者らは、Ｈｃｈ変異マウスは、テスト段階の間に、コントロール同腹仔よりも有意に少なく新規物体を探索した（ｐ＜＜０，０００１）ことを見出した（データは示さず）。同じ障害が、空間記憶がＮＯＬテストを通じて分析された場合に観察された。実際に、本発明者らは、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスが、テスト段階の間に、コントロール同腹仔よりも有意に少なく、再配置された物体を探索したことを見出した（ｐ＜０，０００１）（データは示さず）。
【0118】
ＦＧＦＲ３チロシンキナーゼ阻害剤処置は、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスにおいて観察された認知障害を逆転させるのに十分である。
【0119】
チロシンキナーゼ阻害剤であるＢＧＪ３９８（インフィグラチニブ）の皮下注射は、ＦＧＦＲ３過剰活性化を無効にし、軟骨異形成表現型をレスキューするのに十分である（Komla-Ebri et al.2016）。学習障害におけるＦＧＦＲ３機能獲得の影響を確認するために、本発明者らは、ＢＧＪ３９８を用いてＦｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスを６日間処置した。その結果、本発明者らは、ＢＧＪ３９８の注射が、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスにおいて観察された空間（ＮＯＬ）（図３Ａ）及びエピソード記憶欠損（ＮＯＲ）（図３Ｂ）を回復するのに十分であることを見出した。実際に、注射された変異マウスは、再配置された物体（ＮＯＬ）（ｐ＝０，９５３８）及び新規物体（ＮＯＲ）（ｐ＝０，８６９７）をコントロール同腹仔（ｐ＝０，９５３８）と同じレベルまで探索することができた（図３Ａ及び３Ｂ）。まとめると、これらの結果によって、学習及び記憶の調節におけるＦＧＦＲ３の重要性が確認される。
【0120】
ストレス及び記憶行動テスト。
【0121】
本発明者らは次に、連想記憶を評価するために、４ヶ月齢の雄マウスで１回の試行的文脈的恐怖条件付け（ＣＦＣ）を実施する。一方で、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスは、ベースラインのフリージング時間において任意の障害を示さなかったが（ｐ＝０，２３０３）、驚くべきことに、変異マウスは、テスト段階の間に、コントロールマウスと比較し、文脈的誘発フリージング時間における有意な増加を示した（ｐ＝０，０４６６）。この結果は、文脈的恐怖記憶が変異マウスにおいて悪化していることを強く示唆する。
【0122】
ＦＧＦＲ３の抗うつ効果。
【0123】
ＦＧＦ経路は、抑うつ障害において含まれうる。従って、本発明者らは、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスにおいて尾懸垂テスト（ＴＳＴ）及び強制水泳テスト（ＦＳＴ）を実施した（データは示さず）。それらの尾により吊るされる、又は強制的に泳がされたりする短期的で回避不能なストレスに供された動物は、抑うつに関連する行動に特徴的な不動姿勢を発生し、それがスコア化される。これらのテストを実施し、本発明者らは、ＴＳＴ又はＦＳＴのいずれかにおいて、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスが不動姿勢における減少を呈することを見出し、ＦＧＦＲ３における機能獲得変異が抗うつ効果を有しうることを示唆している。
【0124】
Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスでの不安行動における無効果。
【0125】
変異マウス及びＷＴマウスは、オープンフィールドテスト（ＯＦＴ）（データは示さず）及び明／暗パラダイム（Ｌ／ＤＴ）（データは示さず）において同等の成績を有したが、それらの移動運動及び不安状態が影響されなかったことを示している。注目すべきことに、Ｆｇｆｒ３Ａｓｎ５３４Ｌｙｓ／＋マウスの矮化表現型に起因して、変異マウスはコントロール同腹仔よりも動きが遅く（ｐ＝０，０００３）、ＯＦの間での総移動距離が低下していた（ｐ＝０，０００３）。結果的に、ＯＦＴデータ分析を、距離の%（中央における距離／総距離×１００）を考慮して実施した。まとめると、これらの結果によって、ＦＧＦＲ３が不安において重要な役割を果たしていないことが示され、本発明者らの変異マウスにおける学習及び記憶について観察された認知欠損が、任意の不安又は探索関連の行動欠損とは無関係であることが確認される。
【0126】
考察。
【0127】
ＣＡＮ症候群は、ＦＧＦＲ３における特定のｐ．Ａｌａ３９１Ｇｌｕ 機能獲得変異に関連付けられる非常に稀な症候性頭蓋骨癒合症である（Meyers et al.,1995）。ｐ．Ａｌａ３９１Ｇｌｕ変異の効果は、ＦＧＦＲ３の過剰活性化を起こすとして以前に記載された（Chen et al.,2013,2011；Li et al.,2006）。
【0128】
マウスＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋ＣＡＮ モデルは、主要な頭蓋顔面骨格表現型の非存在を示した。興味深いことに、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋の表現型は、Ｍｕｅｎｋｅ症候群についてのマウスモデルであるＦｇｆｒ３Ｐ２４４Ｒ／Ｐ２４４Ｒマウスにおいて観察された表現型と同等であった。縫合及び軟骨結合が、Ｍｕｅｎｋｅ Ｆｇｆｒ３Ｐ２４４Ｒ／Ｐ２４４Ｒ変異体において軽度に影響されていることが見出され、少数の個体において癒合した冠状縫合を伴った（Laurita et al.,2011；Twigg et al.,2008）。
【0129】
ＣＡＮ及びＭｕｅｎｋｅでは、大後頭孔の狭小化に関連付けられる頭蓋底軟骨結合の早期癒合と組み合わされた頭蓋冠縫合の早期癒合は、患者における増加した頭蓋内圧に導く（Di Rocco et al.,2011）。頭蓋冠の早期癒合はまた、異常な海馬発生を含む脳構造異常に関連付けられる（Grosso et al.,2003；Gurbuz et al.,2016；Okubo et al.,2017）。
【0130】
ＨＣＨ患者（１４６００ＭＩＭ）は、近位肢節型低身長症、軽度大頭症、顔面中心部の低形成、短く四角い腸骨、及び、一部の場合では、黒色表皮腫により特徴付けられる（Blomberg et al.2010）。最も一般的なＨＣＨ変異（ｐ．Ａｓｎ５４０Ｌｙｓ）は、ＦＧＦＲ３のチロシンキナーゼ１ドメイン中に局在化している（Bonaventure et al.1996；Rousseau et al.1994）。
【0131】
ＨＣＨ患者は、葉形成不全（Kannu et al.2005）及び異常な海馬構成（Linnankivi et al.2012）を呈する。さらに、ＨＣＨ患者は、学習障害、軽度知的障害、全体的な発育遅延、ならびに時折の発作及びてんかんを呈する（Linnankivi et al.2012）。
【0132】
Ｆｇｆｒ３マウスモデルでは、タナトフォリック骨異形成症に関連付けられ、遍在的に及びネスチンプロモーター下の両方での、マウスモデルＦｇｆｒ３＋／Ｋ６４４Ｅ変異に関する以前の試験によって、大脳及び皮質の重度の過成長が呈された一方で、Ｆｇｆｒ３－／－マウスは未発達の新皮質を呈した（Inglis-Broadgate et al .,2005；Moldrich et al.,2011；Thomson et al.,2009,2007）。頭蓋骨癒合症において観察される頭蓋縫合の早期癒合が、脳形態を変化させ、頭蓋内圧における慢性的な増加を介した認知障害と関連付けられることが一般に受け入れられている（Aldridge et al.,2010；Arnaud-Lepez et al.,2007；Gurbuz et al. .,2016；Martinez-Abadias et al.,2011）。ここでは、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおける異常な頭蓋骨表現型の非存在を利用し、本発明者らは、脳においてＦｇｆｒ３機能獲得変異を活性化することの役割を分析した。Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスの脳は、重度の形態学的変化を呈さなかったが、このように、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ変異が、脳の胚神経発生に対して中程度の影響を有したことを示している。対照的に、成体海馬神経発生の分析によって、歯状回における減少した前駆細胞増殖が示され、歯状回の減少した顆粒帯により裏付けられた。
【0133】
興味深いことに、以前の試験によって、ＦＧＦＲ１、２、３機能喪失変異における減少した前駆細胞増殖が報告された一方で、ＦＧＦＲ３（Ｆｇｆｒ３ＴＤＩＩＫ６５０Ｅ）の過剰活性化によって、歯状回における増加した前駆細胞分化が促進される（Kang and Hebert,2015）。本発明者らの結果は、これらの観察とは対照的である。本発明者らは、ＦＧＦＲ３の過剰活性化が、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスにおける減少した細胞増殖に導いたことを観察した。受容体のリン酸化のレベルが、神経発生を妨げたように見えた：Ｆｇｆｒ３ＴＤＩＩＫ６５０Ｅ変異は過剰な受容体活性化レベルに導いたのに対し、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ変異はより中程度の過剰活性化に導いた。これらのデータは、海馬神経発生のＦＧＦＲ調節が、ＦＧＦＲ３活性化のレベルに関連していることを示唆する。
【0134】
本発明者らは次に、脳の認知機能に対するＦｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ変異の及びＦｇｆｒ３Ｎ５３４Ｋ変異の影響を分析した。本発明者らは、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウスＦｇｆｒ３Ｎ５３４Ｋ／＋マウスが、任意の移動運動、不安関連の行動、又は空間記憶表現型を伴わずに重度の作業障害及びエピソード記憶機能を示すことを観察した。一方で、記憶に対するＦＧＦＲ シグナルの効果は不明であるが、今日まで、本発明者らの試験は、Ｆｇｆｒ３変異をマウスにおける認知異常と関連付けた最初のものである。機械的には、学習及び記憶の成績における欠損は、少なくとも部分的には、本発明者らの変異マウスにおいて観察された減少した海馬神経発生に関連しうる。興味深いことに、胚及び成体マウスにおけるＦｇｆｒ２の欠失は、歯状回における減少した前駆細胞増殖及び分化を示し、連想記憶及び空間記憶容量に対する特定の負の効果を伴った（Stevens et al.,2012）。まとめると、本発明者らのデータは、Ｆｇｆｒ３機能獲得変異が、重度の学習欠損及び記憶欠損ならびに海馬におけるより低い成体神経発生に導くことを実証する。
【0135】
また、回避不能なストレス（以前は「抑うつ様行動」と名付けられた）に対する減少した対処戦略が、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウス及びＦｇｆｒ３Ｎ５３４Ｋ／＋マウスにおいて観察された。ＦＧＦＲ３のこの役割は、受容体の下方調節に関連付けられるヒトにおける大うつ障害において以前に報告された（Evans et al.,2004）。さらに、ＦＧＦＲ３関連の頭蓋骨癒合症症候群を伴う患者は、感情制御及び不安行動の障害を示した（de Jong et al.,2010；Maliepaard et al.,2014；Yarnell et al.,2015）。今日、頭蓋骨癒合症の症例における抑うつ障害又は気分障害を報告した試験はない。動物モデル試験は、また、ＦＧＦ２ノックアウト又は外因性ＦＧＦ２注射におけるＦＧＦ２の抗うつ効果及び抗不安効果を実証した（Elsayed et al.,2012；Salmaso et al.,2016）。ＦＧＦ２とは対照的に、ＦＧＦ９はマウスにおいて抑うつ性効果を発揮する（Aurbach et al.,2015）。ＦＧＦ２及びＦＧＦ９の両方が、主要なＦＧＦＲ３リガンドの間にあり、また、他のＦＧＦＲと結合することができる。これらの観察は本発明者らのデータと一致しており、異なるＦＧＦ及びＦＧＦＲ１、２、３結合の複雑な組み合わせを含みうる。しかし、Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウス及びＦｇｆｒ３Ｎ５３４Ｋ／＋マウスにおいて観察された抗うつ表現型が、ヒトの状態においてどのように置き換えられうるかは不明である。
【0136】
Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウス及びＦｇｆｒ３Ｎ５３４Ｋ／＋マウスで観察された認知障害における脳ＦＧＦＲ３の直接的な関与を確認するために、本発明者らは、選択的な脳注射に続いて、チロシンキナーゼ阻害剤であるＢＧＪ３９８でマウスを処置することに決めた。ＢＧＪ３９８は、ＦＧＦＲ３についてのその最も高い結合特異性のために選択され、以前の研究によって、ＦＧＦＲ３関連の軟骨無形成症マウスモデルでの骨格異常におけるＢＧＪ３９８の有効性が示された（Komla-Ebri et al.,2016）。ここで、成体Ｆｇｆｒ３Ａ３８５Ｅ／＋マウス及びＦｇｆｒ３Ｎ５３４Ｋ／＋マウスにおけるＢＧＪ３９８の脳室内注射によって、作業記憶欠損及びエピソード記憶欠損のレスキューならびに抗うつ効果が示された。これらのデータによって、認知能力に対する、脳におけるＦｇｆｒ３機能獲得変異の直接的な影響が実証される。本発明者らはまた、ＦＧＦＲ３が海馬の成体神経発生において主要な役割を果たすことを実証した、ならびに本発明者らは、海馬異常と学習及びストレス応答の間での直接的な関連を立証した。
【0137】
これらの結果によって、Ｆｇｆｒ３機能獲得変異を発現するマウスモデルにおける頭蓋骨癒合症の表現型を伴わない認知障害の存在が強調された。本発明者らのデータによって、ＦＧＦＲ関連の頭蓋骨癒合症を伴う患者の脳が、頭蓋骨異常とは無関係に、この変異により影響されうることが示唆される。
【0138】
参考文献：
【0139】
本出願を通して、種々の参考文献によって、本発明が関係する最新技術が記載されている。これらの参考文献の開示は、本明細書により、参照により本開示中に組み入れられる。
【表1】
【図1A-1C】
【図1D】
【図2A-2B】
【図2C-2D】
【図3A】
【図3B】
【配列表】
【国際調査報告】