ホーム > 特許ランキング > デューク ユニバーシティ
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-07-11
(54)【発明の名称】自家脂肪移植片を増強するための組成物および方法
(51)【国際特許分類】
A61K 35/35 20150101AFI20230704BHJP
A61P 9/14 20060101ALI20230704BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20230704BHJP
A61P 19/04 20060101ALI20230704BHJP
A61P 41/00 20060101ALI20230704BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20230704BHJP
A61K 9/02 20060101ALI20230704BHJP
A61K 47/42 20170101ALI20230704BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230704BHJP
C12N 5/071 20100101ALI20230704BHJP
C07K 14/00 20060101ALN20230704BHJP
【ＦＩ】
A61K35/35
A61P9/14
A61P17/02
A61P19/04
A61P41/00
A61K9/08
A61K9/02
A61K47/42
C12N5/10 ZNA
C12N5/071
C07K14/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022574163
(86)(22)【出願日】2021-06-04
(85)【翻訳文提出日】2023-01-20
(86)【国際出願番号】 US2021035823
(87)【国際公開番号】W WO2021247952
(87)【国際公開日】2021-12-09
(31)【優先権主張番号】63/035,173
(32)【優先日】2020-06-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】507189666
【氏名又は名称】デューク ユニバーシティ
(74)【代理人】
【識別番号】100094569
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 伸一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100123777
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 さつき
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100123766
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 七重
(74)【代理人】
【識別番号】100137626
【弁理士】
【氏名又は名称】田代 玄
(72)【発明者】
【氏名】ロバーツ ステファン
(72)【発明者】
【氏名】チルコティ アシュトッシュ
(72)【発明者】
【氏名】クリッツマン ブルース
(72)【発明者】
【氏名】ホレンベック スコット
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA44
4C076AA11
4C076AA36
4C076BB11
4C076BB32
4C076CC50
4C076EE41
4C076FF32
4C076FF67
4C076GG11
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB63
4C087MA05
4C087MA16
4C087MA27
4C087MA34
4C087MA66
4C087MA67
4C087NA05
4C087NA06
4C087ZA44
4C087ZA96
4C087ZC80
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
自家脂肪組織移植のための組成物および方法が本明細書に記載される。１つの実施形態において、組成物は、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）または「フラクトマー」、および対象由来の脂肪組織を含む。１つの態様において、フラクトマーは、［（ＧＸＧＶＰ）n－α－ヘリックス］mの一般構造を有する（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸であり得、α－ヘリックスは、約５～５０個のアラニン残基を有する任意のポリアラニンベースのα－ヘリックスである）。別の態様において、フラクトマーは、構造［（ＧＸＧＶＰ）n－ＧＸ1（Ａ）25Ｘ1］mを有する（式中、ＸはＡまたはＶであり；Ｘ1はＫまたはＤであり；ｎは１０～２０の整数であり；ｍは４～８の整数である）。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）；および脂肪組織
を含む組織マトリックス組成物。
【請求項2】
フラクトマーは、複数の無秩序ドメイン；および
複数の構造化ドメイン
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
無秩序ドメインは、複数の（ＧＸＧＶＰ）n（配列番号１）のアミノ酸配列を含み（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸であり、ｎは１よりも大きいまたは１に等しい整数である）；構造化ドメインはポリアラニンドメインを含む、
請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
無秩序ドメインは、複数の（ＧＸＧＶＰ）n（配列番号２）のアミノ酸配列を含む（式中、ＸはＶａｌ（配列番号３）もしくはＡｌａ（配列番号４）、またはＡｌａとＶａｌとの混合物であり、ｎは１～５０の整数である）、請求項２に記載の組成物。
【請求項5】
Ｘは、１０：１～１：１０（Ａｌａ：Ｖａｌ）の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である、請求項４に記載の組成物。
【請求項6】
Ｘは、１：１（配列番号５）または１：４（配列番号６）の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である、請求項５に記載の組成物。
【請求項7】
ポリアラニンドメインは（Ａｌａ）mを含む（式中、ｍは５～５０の整数である）、請求項３に記載の組成物。
【請求項8】
ポリアラニンドメインは、（Ａ）25 （配列番号７）；
Ｋ（Ａ）25Ｋ （配列番号８）；
Ｄ（Ａ）25Ｋ （配列番号９）；
ＧＤ（Ａ25）Ｋ （配列番号１０）；または
ＧＫ（Ａ25）Ｋ （配列番号１１）
のうちの１種または複数を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項9】
ポリペプチドは、［（ＧＸＧＶＰ）n－ＧＸ1（Ａ）25Ｘ1］m
を含む（式中、ＸはＡまたはＶであり；Ｘ1はＫまたはＤであり；ｎは１０～２０の整数であり；ｍは４～８の整数である）（［（配列番号２）n－（配列番号１０または１１）］m）、請求項３に記載の組成物。
【請求項10】
ポリペプチドは、Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１２）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１３）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１４）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１５）；
Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１６）；
Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１７）；
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１８）；または
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１９）
のうちの１種または複数を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項11】
ポリペプチドは、Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１２）；または
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１８）
うちの１種または複数を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項12】
フラクトマーは、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）を有する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項13】
冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は濃度非依存的である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項14】
加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は約１０℃～約４５℃に及ぶ、請求項１２に記載の組成物。
【請求項15】
フラクトマーは、Ｔt-加熱より上で固体凝集体を形成する、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項16】
固体凝集体は、Ｔt-冷却より下に冷却された場合に再可溶化する、請求項１５に記載の組成物。
【請求項17】
固体凝集体は安定な３次元マトリックスである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項18】
固体凝集体は複数の微小孔を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項19】
複数の微小孔は、サイズが約１μｍ～約１５０μｍに及ぶ、請求項１８に記載の組成物。
【請求項20】
約２００μＭ～約２ｍＭのフラクトマーを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項21】
脂肪組織は吸引脂肪組織を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項22】
約１０容積％～約９０容積％の範囲の吸引脂肪組織を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項23】
約２５容積％～約７５容積％の範囲の吸引脂肪組織を含む、請求項２１または２２に記載の組成物。
【請求項24】
約５０容積％の吸引脂肪組織を含む、請求項２２または２３に記載の組成物。
【請求項25】
約１：９～約９：１に及ぶ比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項26】
約１：３～約３：１に及ぶ比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項27】
約１：１の比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項28】
成形可能な液体または半固体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項29】
注射可能または埋め込み可能である、請求項１に記載の組成物。
【請求項30】
２または３次元の形状、エリア、または容積部に成形可能または成型可能である、請求項１に記載の組成物。
【請求項31】
フラクトマーは、細胞浸潤および脂肪組織の血管新生を可能にする、請求項１に記載の組成物。
【請求項32】
自家脂肪移植片が対象において増強されるように、請求項１に記載の組成物の治療有効量を対象に投与する工程を含む、対象において自家脂肪移植片を増強する方法。
【請求項33】
組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）の治療有効量および脂肪組織の治療有効量を対象に共投与する工程を含む、対象において自家脂肪移植片を増強する方法。
【請求項34】
脂肪組織は吸引脂肪組織を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項35】
フラクトマーおよび脂肪組織は同時にまたは逐次的に投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項36】
フラクトマーおよび脂肪組織は逐次的に投与され、フラクトマーは脂肪組織の投与の前に投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
フラクトマーおよび脂肪組織は逐次的に投与され、脂肪組織はフラクトマーの投与の前に投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項38】
フラクトマーおよび脂肪組織は、インビトロで組み合わされ、２または３次元の形状、エリア、または容積部に成形されまたは成型され、対象においてインサイチューで埋め込まれる、請求項３５に記載の方法。
【請求項39】
フラクトマーおよび脂肪組織は、投与の前に、成形可能な液体、半固体、または成型された半固体であり、投与の後に、固体凝集体を形成する、請求項３３に記載の方法。
【請求項40】
フラクトマーおよび脂肪組織は、フラクトマーのＴt-加熱より下で対象に共投与され、フラクトマーおよび脂肪組織は、対象の体温への曝露後に固体を形成する、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
フラクトマーは、細胞浸潤および脂肪組織の血管新生を可能にする、請求項３３に記載の方法。
【請求項42】
（ａ）対象から脂肪組織を得る工程；および（ｂ）組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）と工程（ａ）の脂肪組織とをフラクトマーのＴt-加熱より下で組み合わせて混合物を形成する工程
を含む、自家脂肪移植片組成物を調製するための方法。
【請求項43】
（ｃ）混合物を形状、エリア、または容積部に成形する工程をさらに含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項44】
（ｄ）注射または埋め込みによって対象に混合物を共投与する工程をさらに含む、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項45】
混合物は、フラクトマーのＴt-加熱より上の温度で固体凝集体を形成する、請求項４４に記載の方法。
【請求項46】
組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）と、組み合わせのための容器、特異的な容積寸法のための型、または脂肪組織吸引および／もしくは投与のための手段のうちの１種または複数とを含むキット。
【請求項47】
それを必要とする対象における自家脂肪移植のための、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）の治療有効量および脂肪組織の治療有効量の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年６月５日に出願された米国仮特許出願第６３／０３５，１７３号に対する優先権を主張するものであり、それは本明細書における参照によりその全体として組み入れられる。
連邦支援による研究
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与された助成金番号１Ｒ４１ＣＡ２４４１１０－０１Ａ１の下で政府援助により行われた。政府は、本発明におけるある特定の権利を有する。
配列表への言及
本出願は、米国特許規則１．８２１（ｃ）に従って、コンピューター可読形式の配列表とともに出願される。ＥＦＳによって提出されるテキストファイル「０２８１９３－９３６６－ＷＯ０１＿ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ＿２－ＪＵＮ－２０２１＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」は、２０２１年６月２日に作成され、２３種の配列を含有し、３７．４キロバイトのファイルサイズを有し、参照によりその全体として本明細書によって組み入れられる。
本出願は、２０２０年６月５日に出願された米国仮特許出願第６３／０３５，１７３号に対する優先権を主張するものであり、それは本明細書における参照によりその全体として組み入れられる。
連邦支援による研究
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与された助成金番号１Ｒ４１ＣＡ２４４１１０－０１Ａ１の下で政府援助により行われた。政府は、本発明におけるある特定の権利を有する。
配列表への言及
本出願は、米国特許規則１．８２１（ｃ）に従って、コンピューター可読形式の配列表とともに出願される。ＥＦＳによって提出されるテキストファイル「０２８１９３－９３６６－ＷＯ０１＿ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ＿２－ＪＵＮ－２０２１＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」は、２０２１年６月２日に作成され、２３種の配列を含有し、３７．４キロバイトのファイルサイズを有し、参照によりその全体として本明細書によって組み入れられる。
【0002】
自家脂肪組織移植のための組成物および方法が本明細書に記載される。１つの実施形態において、組成物は、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー（Ｆｒａｃｔｏｍｅｒ））または「フラクトマー」、および対象由来の脂肪組織を含む。１つの態様において、フラクトマーは、［（ＧＸＧＶＰ）n－α－ヘリックス］mの一般構造を有する（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸であり得、α－ヘリックスは、約５～５０個のアラニン残基を有する任意のポリアラニンベースのα－ヘリックスである）。別の態様において、フラクトマーは、構造［（ＧＸＧＶＰ）n－ＧＸ1（Ａ）25Ｘ1］mを有する（式中、ＸはＡまたはＶであり；Ｘ1はＫまたはＤであり；ｎは１０～２０の整数であり；ｍは４～８の整数である）。
【背景技術】
【0003】
自家脂肪移植は、再建形成手術を受ける毎年６００万人近くの米国人において、輪郭の不規則および容積欠損を治療するための貴重な選択肢である。それらの永続性および固有の生体適合性のために好まれるものの、脂肪移植片、とりわけ、乳房切除後の患者において使用されるもの等の大容積の移植片は、収集される組織の不十分な使用可能容積に起因して、複数回の手術を日常的に要する。それゆえ、組織移植片に関する新規の革新の必要性がある。
【発明の概要】
【0004】
本明細書に記載される１つの実施形態は、組み換え部分的秩序（ｐａｒｔｉａｌｌｙ ｏｒｄｅｒｅｄ）ポリペプチド（フラクトマー）；および脂肪組織、を含む組織マトリックス組成物である。１つの態様において、フラクトマーは、複数の無秩序（ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ）ドメイン；および複数の構造化（ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ）ドメインを含む。別の態様において、無秩序ドメインは、複数の（ＧＸＧＶＰ）n（配列番号１）のアミノ酸配列を含み（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸であり、ｎは１よりも大きいまたは１に等しい整数である）；構造化ドメインはポリアラニンドメインを含む。別の態様において、無秩序ドメインは、複数の（ＧＸＧＶＰ）n（配列番号２）のアミノ酸配列を含む（式中、ＸはＶａｌ（配列番号３）もしくはＡｌａ（配列番号４）、またはＡｌａとＶａｌとの混合物であり、ｎは１～５０の整数である）。別の態様において、Ｘは、１０：１～１：１０（Ａｌａ：Ｖａｌ）の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である。別の態様において、Ｘは、１：１（配列番号５）または１：４（配列番号６）の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である。別の態様において、ポリアラニンドメインは（Ａｌａ）mを含む（式中、ｍは５～５０の整数である）。別の態様において、ポリアラニンドメインは、（Ａ）25（配列番号７）；Ｋ（Ａ）25Ｋ（配列番号８）；Ｄ（Ａ）25Ｋ（配列番号９）；ＧＤ（Ａ25）Ｋ（配列番号１０）；またはＧＫ（Ａ25）Ｋ（配列番号１１）のうちの１種または複数を含む。別の態様において、ポリペプチドは［（ＧＸＧＶＰ）n－ＧＸ1（Ａ）25Ｘ1］mを含む（式中、ＸはＡまたはＶであり；Ｘ1はＫまたはＤであり；ｎは１０～２０の整数であり；ｍは４～８の整数である）（［（配列番号２）n－（配列番号１０または１１）］m）。別の態様において、ポリペプチドは、Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１２）；Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ（配列番号１３）；Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１４）；Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ（配列番号１５）；Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１６）；Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ（配列番号１７）；Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１８）；またはＭ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ（配列番号１９）のうちの１種または複数を含む。別の態様において、ポリペプチドは、Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１２）；またはＭ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１８）うちの１種または複数を含む。別の態様において、フラクトマーは、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）を有する。別の態様において、冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は濃度非依存的である。別の態様において、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は約１０℃～約４５℃に及ぶ。別の態様において、フラクトマーは、Ｔt-加熱より上で固体凝集体を形成する。別の態様において、固体凝集体は、Ｔt-冷却より下に冷却された場合に再可溶化する。別の態様において、固体凝集体は安定な３次元マトリックスである。別の態様において、固体凝集体は複数の微小孔を含む。別の態様において、複数の微小孔は、サイズが約１μｍ～約１５０μｍに及ぶ。約２００μＭ～約２ｍＭのフラクトマーを含む、項目１の組成物。別の態様において、脂肪組織は吸引脂肪組織（ｌｉｐｏａｓｐｉｒａｔｅ）を含む。別の態様において、組成物は、約１０容積％～約９０容積％の範囲の吸引脂肪組織を含む。別の態様において、組成物は、約２５容積％～約７５容積％の範囲の吸引脂肪組織を含む。別の態様において、組成物は、約５０容積％の吸引脂肪組織を含む。別の態様において、組成物は、約１：９～約９：１に及ぶ比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む。別の態様において、組成物は、約１：３～約３：１に及ぶ比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む。別の態様において、組成物は、約１：１の比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む。別の態様において、組成物は、成形可能な液体または半固体である。別の態様において、組成物は、注射可能または埋め込み可能である。別の態様において、組成物は、２または３次元の形状、エリア、または容積部に成形可能または成型可能である。別の態様において、フラクトマーは、細胞浸潤および脂肪組織の血管新生を可能にする。
【0005】
本明細書に記載される別の実施形態は、対象において自家脂肪移植片を増強する方法であって、方法は、自家脂肪移植片が対象において増強されるように、本明細書に記載される、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）；および脂肪組織、を含む組成物の治療有効量を対象に投与する工程を含む方法である。
【0006】
本明細書に記載される別の実施形態は、対象において自家脂肪移植片を増強する方法であって、方法は、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）の治療有効量および脂肪組織の治療有効量を対象に共投与する工程を含む方法である。１つの態様において、脂肪組織は吸引脂肪組織を含む。別の態様において、フラクトマーおよび脂肪組織は同時にまたは逐次的に投与される。別の態様において、フラクトマーおよび脂肪組織は逐次的に投与され、フラクトマーは脂肪組織の投与の前に投与される。別の態様において、フラクトマーおよび脂肪組織は逐次的に投与され、脂肪組織はフラクトマーの投与の前に投与される。別の態様において、フラクトマーおよび脂肪組織は、インビトロで組み合わされ、２または３次元の形状、エリア、または容積部に成形されまたは成型され、対象においてインサイチューで埋め込まれる。別の態様において、フラクトマーおよび脂肪組織は、投与の前に、成形可能な液体、半固体、または成型された半固体であり、投与の後に、固体凝集体を形成する。別の態様において、フラクトマーおよび脂肪組織は、フラクトマーのＴt-加熱より下で対象に共投与され、フラクトマーおよび脂肪組織は、対象の体温への曝露後に固体を形成する。別の態様において、フラクトマーは、細胞浸潤および脂肪組織の血管新生を可能にする。
【0007】
本明細書に記載される別の実施形態は、自家脂肪移植片組成物を調製するための方法であって、方法は、（ａ）対象から脂肪組織を得る工程；および（ｂ）組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）と工程（ａ）の脂肪組織とをフラクトマーのＴt-加熱より下で組み合わせて混合物を形成する工程を含む方法である。別の態様において、方法は、（ｃ）混合物を形状、エリア、または容積部に成形する工程をさらに含む。別の態様において、方法は、（ｄ）注射または埋め込みによって対象に混合物を共投与する工程をさらに含む。１つの態様において、混合物は、フラクトマーのＴt-加熱より上の温度で固体凝集体を形成する。
【0008】
本明細書に記載される別の実施形態は、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）と、組み合わせのための容器、特異的な容積寸法のための型、または脂肪組織吸引および／もしくは投与のための手段のうちの１種または複数とを含むキットである。
本明細書に記載される別の実施形態は、それを必要とする対象における自家脂肪移植のための、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）の治療有効量および脂肪組織の治療有効量の使用である。
本明細書に記載される別の実施形態は、それを必要とする対象における自家脂肪移植のための、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）の治療有効量および脂肪組織の治療有効量の使用である。
【0009】
本特許または出願ファイルは、カラーで実行された少なくとも１つの図面を含有する。カラーの図面を有する本特許または特許出願公開のコピーは、請求および必要な料金の支払いがあれば該庁によって提供されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図1】再注射のための、組み換え部分的秩序ペプチドまたは「フラクトマー」（マトリックス）と収集された脂肪（吸引脂肪組織）とを組み合わせる提案される方法を示した図である。収集された吸引脂肪組織は、フラクトマー溶液と組み合わされかつ混合され、混合物は、対象の欠損エリアに注射される。体温は、封入された吸引脂肪組織を有するフラクトマー足場形成を開始して、移植片を安定化する。
【図2】未処理の脂肪対吸引脂肪組織の構造的な差の例を示した図である。脂肪吸引および処理の後、脂肪は、その固体様特性を喪失し、形状または容積を維持するための機械的完全性を有しない。
【図3A-B】フラクトマー（配列番号１２）は熱に反応性であり、加熱された場合に多孔質ネットワークを形成することを示した図である。図３Ａは、調整可能な閾値温度（例えば、２０℃～３７℃）で、フラクトマーは、多孔質の固体ネットワークへの相分離を受ける（左および中央のパネル）。３次元の再建された共焦点画像は、フラクトマーが加熱された場合の複雑なエラスチン様ネットワークを明らかにしている（右のパネル）。図３Ｂは、５質量％のフラクトマー溶液への緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の添加により、多孔性が、伝統的な（例えば、ヒアルロン酸）ヒドロゲルと比較して、より大きな栄養素の流れを可能にすることが示されることを示している。
【図4A-B】フラクトマー（配列番号１２）転移温度およびタンパク質分解に対する保管の効果を示した図である。図４Ａは、凍結乾燥ならびに１、２、５、および６カ月間の－２０℃での保管の後に再懸濁されたフラクトマーの光学密度（ＯＤ）測定結果を示している。フラクトマー転移温度の変化は、どの時点においても観察されなかった。図４Ｂは、凍結乾燥ならびに１、５、および６カ月間の－２０℃での保管の後に再懸濁されたフラクトマーのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示している。フラクトマータンパク質レベルの変化または分解の兆しは、どの時点においても観察されなかった。
【図5A-C】フラクトマーは、健常な脂肪細胞をカプセル化し得、形状および突出を向上させ得ることを示した図である。図５Ａは、吸引脂肪組織単独（上のパネル）、５０容積％の吸引脂肪組織：フラクトマー溶液（配列番号１２）（２５０μＭ）（中央のパネル）、および５０容積％の吸引脂肪組織：フラクトマー溶液（配列番号１２）（７５０μＭ）（下のパネル）の混合物についての共焦点顕微鏡法分析を示している。１：１の比で種々のフラクトマー濃度（低＝２５０μＭ、高＝７５０μＭ）と混合されかつＬｉｐｉｄＴＯＸ（赤色、フラクトマーも染色する）およびＤＡＰＩ（青色）で染色された吸引脂肪組織は、脂肪細胞の大きなエリアを結び付ける、個々の脂肪細胞の細胞周辺のフラクトマーの存在を示す。図５Ｂは、脂肪単独についての組織学的Ｈ＆Ｅ染色分析を示しており、図５Ｃは、フラクトマー（配列番号１８）（２５０μＭ）と混合された吸引脂肪組織についての組織学的Ｈ＆Ｅ染色分析を示している。図５Ｃにおいて、フラクトマーは、より濃縮された脂肪細胞のエリアの間に散在して見られ得る。
【図6A-D】フラクトマー単独および脂肪＋フラクトマーを使用して３Ｄの型を創出する、例となる方法および分析を示した図である。図６Ａは、３Ｄプリントされた型に注射され、３７℃に置いてフラクトマーを凝集させた、脂肪：フラクトマー（配列番号１２）の混合物の図解を示している。図６Ｂは、低（５００μＭ、左のパネル）、中（７５０μＭ、中央のパネル）、および高（２ｍＭ、右のパネル）濃度のフラクトマー単独（配列番号１２）の例となる成型形状を示しており、増加するフラクトマー濃度とともに形状保護の増加を示す。図６Ｃは、脂肪（ヒト吸引脂肪組織）＋フラクトマー溶液（配列番号１２）混合物のエクスビボの型を示している。種々の比の吸引脂肪組織とフラクトマー溶液（７５０μＭ）との混合物は、フラクトマー：吸引脂肪組織比の増加が、脂肪単独と比較して、型の形状および突出維持をかなり増加させることを実証している。図６Ｄは、３Ｄプリントされた型に注射され、３７℃に置いてフラクトマーを凝集させた、豚脂肪単独と豚脂肪＋フラクトマー溶液（配列番号１８）の混合物との間の比較を示している。豚吸引脂肪組織とフラクトマーとの混合物は、豚脂肪単独と比較して、型からの取り外し後に、形状保持を向上させることが見出された。
【図7】フラクトマーの形状は注射時に制御され得ることを示した図である。マウスに、３種の異なる形状パターン：球体（左の列）、分散した点（中央の列）、および細長い棒（右の列）、の赤外標識されたフラクトマー（配列番号１２）を後部脇腹に注射した。注射後１カ月（上のパネル）および４カ月（下のパネル）の時点におけるＩＶＩＳスペクトルイメージングは、３種すべての注射形状パターンに関して形状保護を示す。
【図8A-C】フラクトマー（配列番号１２）タンパク質安定性および分解は、濃度で制御可能であることを示した図である。図８Ａは、種々のフラクトマー溶液濃度（低＝２５０μＭ、中＝７５０μＭ、高＝１５００μＭ）に関する、ＢＬ／６マウスにおける注射後６カ月の時点における標識されたフラクトマーの正規化された蛍光強度を示している。図８Ｂは、６カ月の間にわたる、種々のフラクトマー濃度製剤（低＝２５０μＭ、中＝７５０μＭ、高＝１５００μＭ）を注射されたＢＬ／６マウスの例となる蛍光分光法画像を示している。高いフラクトマー濃度を有する製剤の注射は、インサイチューで６カ月時点終わりまで持続することが見出された（下の行のパネル）。図８Ｃは、注射後の長期フラクトマー再吸収プロファイルを示している。低（２５０μＭ）、中（７５０μＭ）、および高（１５００μＭ）濃度のフラクトマー注射物に関して、正規化された蛍光強度（左の軸）および容積（右の軸）を測定した。低フラクトマー濃度を有する製剤の注射は、数カ月後に完全に再吸収されるように見え、一方で、中および高フラクトマー濃度を有する製剤の注射は、蛍光および容積の両方に関して長期持続性を示した。
【図9A-F】フラクトマー（配列番号１２）は脂肪容積保持を向上させることを示した図である。図９Ａは、ｎｕ／ｎｕマウスへの注射のために実験群において使用された、例となる脂肪：フラクトマー溶液（２５０μＭ）比の図解である。図９Ｂは、ｎｕ／ｎｕマウスへの注射後の経時的な容積保持に対する脂肪：フラクトマー比の効果を示している。１週間の期間にわたる容積分布は、フラクトマーの使用に伴う容積保持の増加を示している。図９Ｃは、各脂肪：フラクトマー溶液（マトリックス）混合物比に関する、１週間の時点における容積分布のスナップ写真を示している。図９Ｄは、種々の脂肪：フラクトマー混合物に関する、注射後６週間の時点における正規化された容積を示している。安定化フラクトマーマトリックスの内包なしで、低下した脂肪量（５０容積％の脂肪）を使用した場合、容積保持は有意に低かった。図９Ｅは、３カ月の期間にわたる、脂肪単独および５０容積％の脂肪＋フラクトマー溶液（７５０μＭ）注射物の容積保持を示している。フラクトマーは、このより長い期間にわたって脂肪容積保持を向上させることが見出された。図９Ｆは、脂肪単独の注射と脂肪＋フラクトマー（７５０μＭ）の注射との間の、移植された脂肪の有効容積を示している。注射される脂肪のｍＬあたり、より高い濃度のフラクトマー製剤（７５０μＭ）は、脂肪単独移植片の有効容積の３倍になることが見出された。
【図10A-C】血管系供給は、脂肪単独から作製された移植片と比較して、フラクトマー（配列番号１２）とともに作製された脂肪移植片内で高いことを示した図である。図１０Ａは、脂肪単独移植片（上のパネル）対１：１比の脂肪：フラクトマー溶液（２５０μＭ）移植片（下のパネル）についての組織学的分析を示しており、脂肪細胞の群の間の、フラクトマーの持続性および支持的フラクトマー区域における血管系（ＣＤ３１＋）区域の高い普及を示す。図１０Ｂは、脂肪単独と１：１の脂肪：フラクトマー溶液（２５０μＭ）混合物との間の、注射後１カ月の時点における脂肪分布についての組織学的比較を示している。５０容積％弱の脂肪が脂肪＋フラクトマー実験群において使用されたにもかかわらず、２種の異なる移植片群の間で、細胞組成の差は観察されなかった。図１０Ｃは、３０日の時点における、吸引脂肪組織とフラクトマー溶液（２５０μＭ）との１：１混合物の拡大された写真を示している。実線の矢印は、残余のフラクトマーの証拠を指し示し、点線の矢印は、移植片内の新しく形成された血管供給を指し示す。
【図11A-B】脂肪単独を注射されたマウスにおいて嚢胞が形成され、一方で、脂肪＋フラクトマー（配列番号１２）の混合物を注射されたマウスにおいては嚢胞形成は観察されないことを示した図である。図１１Ａは、３カ月の期間にわたる、脂肪単独を注射されたマウスにおける嚢胞形成を示している。脂肪単独、または吸引脂肪組織とフラクトマー溶液（７５０μＭ）との１：１混合物を含む移植片の超音波を３カ月間にわたって捕捉した。矢印は、脂肪単独群における大きな油嚢胞の発達を指し示す（上の行、中央右および一番右のパネル）。脂肪単独を注射されたマウスの５０％を上回る割合が嚢胞を発達させ、一方で、脂肪＋フラクトマーの混合物を注射されたマウスの０％が嚢胞を形成した。図１１Ｂは、注射後３カ月の時点における、脂肪単独および１：１の脂肪：フラクトマー溶液（７５０μＭ）移植片からの細胞組成についての代表的な組織学的比較を示している。脂肪単独群は、嚢胞形成の明確な証拠を示しており、一方で、脂肪：フラクトマー群においては嚢胞形成は観察されなかった。フラクトマーは、脂肪細胞を支持すると見られ得る。
【発明を実施するための形態】
【0011】
詳細な説明
別様に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術的および科学的用語は、当業者によって共通に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーションと関連して使用される任意の命名法ならびにその技法は、当技術分野において周知でありかつよく使用される。矛盾する場合には、定義を含む本開示が支配するであろう。例示的な方法および材料が下で記載されるが、とはいえ、本明細書に記載されるものと同様または等価の方法および材料が、本明細書に記載される実施形態および態様の実践または試験において使用され得る。
別様に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術的および科学的用語は、当業者によって共通に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーションと関連して使用される任意の命名法ならびにその技法は、当技術分野において周知でありかつよく使用される。矛盾する場合には、定義を含む本開示が支配するであろう。例示的な方法および材料が下で記載されるが、とはいえ、本明細書に記載されるものと同様または等価の方法および材料が、本明細書に記載される実施形態および態様の実践または試験において使用され得る。
【0012】
本明細書において使用するとき、「アミノ酸」、「ヌクレオチド」、「ポリヌクレオチド」、「ベクター」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は、当技術分野における通常の技能を有する生化学者によって理解されるであろうそれらの共通の意味を有する。標準的な１文字ヌクレオチド（Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ、Ｕ）および標準的な１文字アミノ酸（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹ）が本明細書において使用される。
【0013】
本明細書において使用するとき、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」等の用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を意味する。本開示は、明示的に記載されるか否かにかかわらず、本明細書において提示される実施形態または要素を「含む」、「からなる」、および「から本質的になる」他の実施形態も企図する。
本明細書において使用するとき、本開示の文脈において（とりわけ特許請求の範囲の文脈において）使用される「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という用語、および同様の用語は、本明細書において別様に示されないまたは文脈によってはっきりと否定されない限り、単数形および複数形の両方を網羅すると解釈されるべきである。加えて、「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」は、別様に指定されない限り、「１つまたは複数」を意味する。
本明細書において使用するとき、本開示の文脈において（とりわけ特許請求の範囲の文脈において）使用される「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という用語、および同様の用語は、本明細書において別様に示されないまたは文脈によってはっきりと否定されない限り、単数形および複数形の両方を網羅すると解釈されるべきである。加えて、「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」は、別様に指定されない限り、「１つまたは複数」を意味する。
【0014】
本明細書において使用するとき、「または」という用語は、接続的または離接的であり得る。
本明細書において使用するとき、「実質的に」という用語は、大きなまたは相当な程度にではあるが完全にではないことを意味する。
本明細書において使用するとき、関心対象の１つまたは複数の値に適用される「約」または「およそ」という用語は、記述された参照値と同様である、または当業者によって決定される、特定の値に対して許容される誤差域内にある値を指し、それは一部には、測定システムの制限等、値がどのように測定されるまたは決定されるかに依存するであろう。１つの態様において、「約」という用語は、「約」という用語によって修飾される値の最高±１０％の変動内にある整数および分数の構成要素の両方を含めた、任意の値を指す。代替的に、「約」とは、当技術分野における実践を通じて、３以上の標準偏差以内を意味し得る。代替的に、生物学的システムまたは過程等に関して、「約」という用語は、値の１桁以内、一部の実施形態では５倍以内、および一部の実施形態では２倍以内を意味し得る。本明細書において使用するとき、「～」という記号は、「約」または「およそ」を意味する。
本明細書において使用するとき、「実質的に」という用語は、大きなまたは相当な程度にではあるが完全にではないことを意味する。
本明細書において使用するとき、関心対象の１つまたは複数の値に適用される「約」または「およそ」という用語は、記述された参照値と同様である、または当業者によって決定される、特定の値に対して許容される誤差域内にある値を指し、それは一部には、測定システムの制限等、値がどのように測定されるまたは決定されるかに依存するであろう。１つの態様において、「約」という用語は、「約」という用語によって修飾される値の最高±１０％の変動内にある整数および分数の構成要素の両方を含めた、任意の値を指す。代替的に、「約」とは、当技術分野における実践を通じて、３以上の標準偏差以内を意味し得る。代替的に、生物学的システムまたは過程等に関して、「約」という用語は、値の１桁以内、一部の実施形態では５倍以内、および一部の実施形態では２倍以内を意味し得る。本明細書において使用するとき、「～」という記号は、「約」または「およそ」を意味する。
【0015】
本明細書に開示されるすべての域は、個別の値としての終点と、域内に指定されるすべての整数および分数との両方を含む。例えば、０．１～２．０という域は、０．１、０．２、０．３、０．４．．．２．０を含む。終点が「約」という用語によって修飾される場合、指定される域は、域内の任意の値の最高±１０％、または終点を含めた３以上の標準偏差以内の変動分拡張される。
本明細書において使用するとき、「活性成分」または「活性薬学的成分」という用語は、薬理学的な、しばしば有益な、効果を提供する、薬学的作用物質、活性成分、化合物、もしくは物質、組成物、またはその混合物を指す。
本明細書において使用するとき、「対照」または「参照」という用語は、本明細書において互換可能に使用される。「参照」または「対照」レベルは所定の値または域であり得、それをベースラインまたはベンチマークとして採用して、それに対して、測定された結果を査定する。「対照」とは、対照実験または対照細胞も指す。
本明細書において使用するとき、「活性成分」または「活性薬学的成分」という用語は、薬理学的な、しばしば有益な、効果を提供する、薬学的作用物質、活性成分、化合物、もしくは物質、組成物、またはその混合物を指す。
本明細書において使用するとき、「対照」または「参照」という用語は、本明細書において互換可能に使用される。「参照」または「対照」レベルは所定の値または域であり得、それをベースラインまたはベンチマークとして採用して、それに対して、測定された結果を査定する。「対照」とは、対照実験または対照細胞も指す。
【0016】
本明細書において使用するとき、「用量」という用語は、少なくとも１回または複数の投与を用いて治療効果を起こすまたはもたらすのに十分な量を含有する、細胞を含めた、任意の形態の活性成分製剤または組成物を表す。「製剤」および「組成物」は、本明細書において互換可能に使用される。
本明細書において使用するとき、「予防」という用語は、統計的に有意な程度まで、または当業者によって検出可能な程度まで、障害の進行を阻止することまたは低下させることを指す。
本明細書において使用するとき、「予防」という用語は、統計的に有意な程度まで、または当業者によって検出可能な程度まで、障害の進行を阻止することまたは低下させることを指す。
【0017】
本明細書において使用するとき、「有効量」または「治療有効量」という用語は、経験されている疾患もしくは病態の症状の１種もしくは複数をある程度阻止する、治療する、もしくは改善するであろう、または対象が縮小を起こしやすい、対象に投与される作用物質、組成物、または細胞の実質的に非毒性であるが十分な量を指す。結果は、疾患の兆候、症状、もしくは原因の低下もしくは軽減、または生物学的システムの任意の他の所望の変更であり得る。有効量は、対象の年齢、サイズ、疾患のタイプまたは程度、疾患のステージ、投与の経路、使用される補足的療法のタイプまたは程度、進行中の疾患過程、および所望される治療のタイプを含むがそれらに限定されない、各対象にとって個々の因子に基づき得る。
【0018】
本明細書において使用するとき、「対象」という用語は動物を指す。典型的に、対象は哺乳類である。対象は、霊長類（例えば、ヒト、男性または女性；幼児、青年、または成人）、非ヒト霊長類、ラット、マウス、ウサギ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、魚類、鳥類等も指す。１つの実施形態において、対象は霊長類である。１つの実施形態において、対象はヒトである。
本明細書において使用するとき、対象は、そのような対象がそのような治療から生物学的に、医学的に、または生命の質において利益を得るであろう場合、「治療の必要がある」。治療の必要がある対象は、特に阻止的または予防的な（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）治療の場合、必ずしも症状を提示するわけではない。
本明細書において使用するとき、対象は、そのような対象がそのような治療から生物学的に、医学的に、または生命の質において利益を得るであろう場合、「治療の必要がある」。治療の必要がある対象は、特に阻止的または予防的な（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）治療の場合、必ずしも症状を提示するわけではない。
【0019】
本明細書において使用するとき、「治療」、「療法」、および／または「治療レジメン」とは、患者によって示される、または患者がかかりやすくあり得る疾患、障害、または生理学的病態に応じて行われる臨床的介入を指す。治療の目的は、症状の軽減もしくは阻止、疾患、障害、もしくは病態の進行もしくは悪化を遅らせることもしくは止めること、および／または疾患、障害、もしくは病態の寛解を含む。一部の実施形態において、疾患、障害、または病態は、自家脂肪移植片の増強を要する。適切な治療／病態は、根本的な乳房切除術後および乳腺腫瘤摘出術後の乳房再建、美容的増強、顔面再建／インプラント、鼻形成術、ならびに足の脂肪体萎縮、手の再建、パリー・ロンベルグ（Ｐａｒｒｙ－Ｒｏｍｂｅｒｇ）症候群、および頭蓋顔面外傷等、自家脂肪移行の使用を要する他の治療を含むが、それらに限定されるわけではない。
【0020】
本明細書において使用するとき、「阻害する」、「阻害」、または「阻害すること」という用語は、所与の生物学的過程、病態、症状、障害、もしくは疾患の低下もしくは抑制、または生物学的活性もしくは過程のベースライン活性の有意な減少を指す。
本明細書において使用するとき、「治療」または「治療すること」とは、障害もしくは疾患を含めた生物学的過程の進行の予防、それを阻止すること、抑制すること、抑えること、好転させること、軽減すること、改善すること、もしくは阻害すること、または疾患を完全に排除することを指す。治療は、急性または慢性のやり方で実施され得る。「治療」という用語は、疾患に伴う苦痛の前に、疾患またはそのような疾患と関連した症状の重症度を低下させることも指す。疾患、障害、またはその症状を「抑えること」または「改善すること」は、そのような疾患、障害、またはその症状の臨床的出現の後に、対象に本明細書に記載される細胞、組成物、または化合物を投与することを伴う。疾患、障害、またはその症状「の予防」またはそれを「阻止すること」は、疾患、障害、またはその症状の発生の前に、対象に本明細書に記載される細胞、組成物、または化合物を投与することを伴う。疾患または障害を「抑制すること」は、疾患またはその障害の誘導の後であるが、その臨床的出現またはその症状が現れる前に、対象に本明細書に記載される細胞、組成物、または化合物を投与することを伴う。
本明細書において使用するとき、「治療」または「治療すること」とは、障害もしくは疾患を含めた生物学的過程の進行の予防、それを阻止すること、抑制すること、抑えること、好転させること、軽減すること、改善すること、もしくは阻害すること、または疾患を完全に排除することを指す。治療は、急性または慢性のやり方で実施され得る。「治療」という用語は、疾患に伴う苦痛の前に、疾患またはそのような疾患と関連した症状の重症度を低下させることも指す。疾患、障害、またはその症状を「抑えること」または「改善すること」は、そのような疾患、障害、またはその症状の臨床的出現の後に、対象に本明細書に記載される細胞、組成物、または化合物を投与することを伴う。疾患、障害、またはその症状「の予防」またはそれを「阻止すること」は、疾患、障害、またはその症状の発生の前に、対象に本明細書に記載される細胞、組成物、または化合物を投与することを伴う。疾患または障害を「抑制すること」は、疾患またはその障害の誘導の後であるが、その臨床的出現またはその症状が現れる前に、対象に本明細書に記載される細胞、組成物、または化合物を投与することを伴う。
【0021】
本明細書に記載される「アミノ酸」とは、天然に存在するおよび天然に存在しないアミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を指す。天然に存在するアミノ酸とは、遺伝子コードによってコードされるものである。アミノ酸は、本明細書において、それらの一般に知られる３文字記号によって、またはｌＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名委員会（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）によって推奨される１文字記号によって言及され得る。アミノ酸は、側鎖およびポリペプチド骨格部分を含む。
【0022】
「発現ベクター」という用語は、所望のタンパク質をコードする核酸配列が挿入され得るまたは導入され得る、当技術分野において公知のプラスミド、ウイルス、または別の媒体を示す。
「宿主細胞」という用語は、核酸構築物または発現ベクターを用いた形質転換、トランスフェクション、形質導入、コンジュゲーション等を受けやすい細胞である。
宿主細胞は、植物、細菌、酵母、真菌、昆虫、動物等に由来し得る。一部の実施形態において、宿主細胞は大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）を含む。
「宿主細胞」という用語は、核酸構築物または発現ベクターを用いた形質転換、トランスフェクション、形質導入、コンジュゲーション等を受けやすい細胞である。
宿主細胞は、植物、細菌、酵母、真菌、昆虫、動物等に由来し得る。一部の実施形態において、宿主細胞は大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）を含む。
【0023】
「対照」、「参照レベル」、および「参照」という用語は、本明細書において互換可能に使用される。参照レベルは所定の値または域であり得、それをベンチマークとして採用して、それに対して、測定された結果を査定する。本明細書において使用される「対照群」とは、対照の対象の群を指す。所定のレベルは、対照群からのカットオフ値であり得る。所定のレベルは、対照群からの平均であり得る。カットオフ値（または所定のカットオフ値）は、適応的指標モデル（ＡＩＭ）方法論によって決定され得る。カットオフ値（または所定のカットオフ値）は、患者群の生物学的サンプルからの受信者操作曲線（ＲＯＣ）分析によって決定され得る。生物学の技術分野において一般的に知られるように、ＲＯＣ分析は、一方の条件ともう一方とを識別する、例えばＣＲＣを有する患者を同定することにおける各マーカーの性能を決定する、検査の能力の決定である。代替的に、カットオフ値は、患者群の生物学的サンプルについての四分位分析によって決定され得る。例えば、カットオフ値は、２５～７５パーセンタイル域における任意の値に相当する値、好ましくは２５パーセンタイル、５０パーセンタイル、または７５パーセンタイルに相当する値、より好ましくは７５パーセンタイルに相当する値を選択することによって決定され得る。そのような統計分析は、当技術分野において公知の任意の方法を使用して実施され得、任意の数の市販のソフトウェアパッケージにより遂行され得る。標的に対するまたはタンパク質活性に対する健常なまたは通常のレベルまたは域は、標準的な実践に従って規定され得る。
対照は、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）なしの作用物質または細胞であり得る。対照は、本明細書に詳述されるフラクトマーとは異なるポリペプチドまたはポリマーを有する、それとコンジュゲートした、またはその中にカプセル化された、分子または分子を含むサンプルであり得る。対照は、疾患状態が既知である対象またはそれ由来のサンプルであり得る。対象またはそれ由来のサンプルは、健常、罹患した、治療前に罹患した、治療中に罹患した、もしくは治療後に罹患した、またはその組み合わせであり得る。対照は、例えば作用物質または細胞単独またはそれだけを含み得る。
対照は、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）なしの作用物質または細胞であり得る。対照は、本明細書に詳述されるフラクトマーとは異なるポリペプチドまたはポリマーを有する、それとコンジュゲートした、またはその中にカプセル化された、分子または分子を含むサンプルであり得る。対照は、疾患状態が既知である対象またはそれ由来のサンプルであり得る。対象またはそれ由来のサンプルは、健常、罹患した、治療前に罹患した、治療中に罹患した、もしくは治療後に罹患した、またはその組み合わせであり得る。対照は、例えば作用物質または細胞単独またはそれだけを含み得る。
【0024】
本明細書において使用される「ポリヌクレオチド」は、一本鎖もしくは二本鎖であり得る、または二本鎖および一本鎖配列の両方の部分を含有し得る。ポリヌクレオチドは、核酸、天然もしくは合成ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、またはハイブリッドであり得、ポリヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドの組み合わせ、ならびにウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、イソシトシン、およびイソグアニンを含めた塩基の組み合わせを含有し得る。ポリヌクレオチドは、化学合成法によってまたは組み換え法によって得ることができる。
【0025】
「ペプチド」または「ポリペプチド」とは、ペプチド結合によって連結された２個以上のアミノ酸の連結された配列である。ポリペプチドは、天然、合成、もしくは改変、または天然と合成との組み合わせであり得る。ペプチドおよびポリペプチドは、結合タンパク質、受容体、および抗体等のタンパク質を含む。「ポリペプチド」、「タンパク質」、および「ペプチド」という用語は、本明細書において互換可能に使用される。「一次構造」とは、特定のペプチドのアミノ酸配列を指す。「二次構造」とは、ポリペプチド内の局所的に秩序立った３次元構造を指す。これらの構造は、ドメイン、例えば酵素的ドメイン、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ポアドメイン、および細胞質尾部（ｔａｌｌ）ドメインとして一般に知られている。「ドメイン」とは、ポリペプチドの小型ユニットを形成し、典型的に１５～３５０アミノ酸長である、ポリペプチドの部分である。例示的なドメインは、酵素活性またはリガンド結合活性を有するドメインを含む。典型的なドメインは、一続きのベータ－シートおよびアルファ－ヘリックス等のより低い組織化の区域から作り上げられる。「三次構造」とは、ポリペプチド単量体の完全な３次元構造を指す。「四次構造」とは、独立した三次ユニットの非共有結合性会合によって形成される３次元構造を指す。「モチーフ」は、ポリペプチド配列の一部分であり、少なくとも２個のアミノ酸を含む。モチーフは、長さが２～２０、２～１５、または２～１０個のアミノ酸であり得、一部の実施形態において、モチーフは、３、４、５、６、または７個の逐次的アミノ酸を含む。ドメインは、同様であり得るまたは異なり得る一連のモチーフから構成され得る。
【0026】
「組み換え」とは、例えば細胞、または核酸、タンパク質、またはベクターを参照して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質、またはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質の導入、または天然核酸もしくはタンパク質の変更によって改変されていること、あるいは細胞が、そのように改変された細胞に由来することを示す。ゆえに、例えば、組み換え細胞は、天然（非組み換え）形態の細胞内に見出されない遺伝子を発現する、または別様に異常に発現される、低発現される、もしくは全く発現されない天然遺伝子を発現する。
【0027】
本明細書において使用される「サンプル」または「試験サンプル」とは、標的の存在および／もしくはレベルが検出されるもしくは決定される対象となる任意のサンプル、または本明細書に記載される作用物質、細胞、もしくはフラクトマーを含む任意のサンプルを意味し得る。サンプルは、液体、溶液、乳濁液、または懸濁液を含み得る。サンプルは医学的サンプルを含み得る。サンプルは、血液、全血、血漿および血清等の血液の画分、筋肉、間質液、汗、唾液、尿、涙液、滑液、骨髄、脳脊髄液、鼻汁、痰、羊水、気管支肺胞洗浄液、胃洗浄物、嘔吐、糞便物質、肺組織、末梢血単核細胞、総白血球、リンパ節細胞、脾臓細胞、扁桃腺細胞、癌細胞、腫瘍細胞、胆汁、消化液、皮膚、またはその組み合わせ等、任意の生物学的流体または組織を含み得る。一部の実施形態において、サンプルはアリコートを含む。他の実施形態において、サンプルは生物学的流体を含む。サンプルは、当技術分野において公知の任意の手段によって得ることができる。サンプルは、患者から得られるものとして直接使用され得る、または本明細書において論じられるようにもしくはそうでなければ当技術分野において公知であるように、ある様式でサンプルの特徴を改変するために、濾過、蒸留、抽出、濃縮、遠心分離、妨害構成要素の不活性化、試薬の添加等によって前処理され得る。
【0028】
「実質的に同一の」とは、第１および第２のアミノ酸配列が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００個のアミノ酸の領域にわたって、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であることを意味し得る。
【0029】
ポリヌクレオチドを参照して本明細書において使用される「変種」とは、（ｉ）参照ヌクレオチド配列の一部分もしくはフラグメント；（ｉｉ）参照ヌクレオチド配列もしくはその一部分の相補体；（ｉｉｉ）参照ポリヌクレオチドもしくはその相補体と実質的に同一であるポリヌクレオチド；または（ｉｖ）参照ポリヌクレオチド、その相補体、もしくはそれと実質的に同一な配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド、を意味する。
【0030】
「変種」とは、アミノ酸の挿入、欠失、または保存的置換によってアミノ酸配列が異なるが、少なくとも１種の生物学的活性を保持するペプチドまたはポリペプチドとしてさらに定義され得る。「生物学的活性」の代表的な例は、特異的抗体もしくはポリペプチドによって結合される能力、または免疫反応を促進する能力を含む。変種は、実質的に同一な配列を意味し得る。変種は、その機能的フラグメントを意味し得る。変種は、ポリペプチドの多コピーも意味し得る。多コピーは、直列にあり得るまたはリンカーによって分離され得る。変種は、少なくとも１種の生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照ポリペプチドと実質的に同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドも意味し得る。アミノ酸の保存的置換、すなわちアミノ酸を同様の特性（例えば、親水性、荷電領域の程度または分布）の異なるアミノ酸で置き換えることは、わずかな変化を典型的に伴うものとして当技術分野において認識される。これらのわずかな変化は、一部には、アミノ酸のハイドロパシー指数を考慮することによって同定され得る。Kyte et al., J. Mol, Biol. 157: 105-132 (1982)を参照されたい。アミノ酸のハイドロパシー指数は、その疎水性および電荷の考慮に基づく。同様のハイドロパシー指数のアミノ酸が置換され得、タンパク質機能を依然として保持し得ることは当技術分野において公知である。１つの態様において、±２のハイドロパシー指数を有するアミノ酸は置換される。アミノ酸の疎水性を使用して、生物学的機能を保持するポリペプチドをもたらすであろう置換を明らかにもし得る。ポリペプチドの背景におけるアミノ酸の親水性の考慮は、参照により本明細書に完全に組み入れられる米国特許第４，５５４，１０１号において論じられるように、抗原性および免疫原性とよく相関することが報告されている有用な評価基準である、そのポリペプチドの最大局所平均親水性の算出を可能にする。同様の親水性値を有するアミノ酸の置換は、当技術分野において理解されるように、生物学的活性、例えば免疫原性を保持するポリペプチドをもたらし得る。置換は、互いの±２以内の親水性値を有するアミノ酸を用いて実施され得る。アミノ酸の疎水性指数および親水性値の両方とも、そのアミノ酸の特定の側鎖によって影響される。その観察結果と符号して、生物学的機能と適合するアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ、および他の特性によって明らかにされる、アミノ酸の、特にそうしたアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存すると理解される。
【0031】
変種は、遺伝子配列全体の全長またはそのフラグメントにわたって実質的に同一であるポリヌクレオチド配列であり得る。ポリヌクレオチド配列は、遺伝子配列の全長またはそのフラグメントにわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８８％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。変種は、アミノ酸配列の全長またはそのフラグメントにわたって実質的に同一であるアミノ酸配列であり得る。アミノ酸配列は、アミノ酸配列の全長またはそのフラグメントにわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８８％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。
【0032】
本明細書において使用するとき、「増強された」とは、自家脂肪組織または脂肪移植片の容積、形状、生存期間の向上、血液供給の向上、および壊死の低下を指す。１つの態様において、自家脂肪組織または脂肪移植片は、脂肪組織とフラクトマーとの組み合わせによって増強され、それは、脂肪移植片の容積および形状の保存、血管新生の向上、生存期間の増進、ならびに壊死の低下を含めた、脂肪移植片の長期維持および生存期間の増進につながる。
本明細書において使用するとき、「同時に投与される」とは、フラクトマーと脂肪組織または吸引脂肪組織との組み合わせ、フラクトマーのＴt-加熱点より下で混合すること、対象に組み合わせを投与することを指し、次いで、フラクトマーのＴt-加熱点より上への対象の身体からの加熱があると、フラクトマーは、吸引脂肪組織をインサイチューで取り囲みかつカプセル化する。
本明細書において使用するとき、「共投与される」とは、フラクトマーおよび脂肪組織または吸引脂肪組織の投与を指す。共投与は、「同時投与」（本明細書に記載されるように、投与前のフラクトマーと脂肪組織との組み合わせ）または「逐次的投与」であり得る。本明細書において使用するとき、「逐次的投与」とは、フラクトマーまたは脂肪組織のいずれかが最初に投与され、その後にそれぞれ脂肪組織またはフラクトマーのいずれかの投与が続く投与を指す。逐次的（ｓｅｑｕｅｎｃｅ）投与において、フラクトマーと脂肪組織との組み合わせは、投与後にインサイチューで生じる。
本明細書において使用するとき、「同時に投与される」とは、フラクトマーと脂肪組織または吸引脂肪組織との組み合わせ、フラクトマーのＴt-加熱点より下で混合すること、対象に組み合わせを投与することを指し、次いで、フラクトマーのＴt-加熱点より上への対象の身体からの加熱があると、フラクトマーは、吸引脂肪組織をインサイチューで取り囲みかつカプセル化する。
本明細書において使用するとき、「共投与される」とは、フラクトマーおよび脂肪組織または吸引脂肪組織の投与を指す。共投与は、「同時投与」（本明細書に記載されるように、投与前のフラクトマーと脂肪組織との組み合わせ）または「逐次的投与」であり得る。本明細書において使用するとき、「逐次的投与」とは、フラクトマーまたは脂肪組織のいずれかが最初に投与され、その後にそれぞれ脂肪組織またはフラクトマーのいずれかの投与が続く投与を指す。逐次的（ｓｅｑｕｅｎｃｅ）投与において、フラクトマーと脂肪組織との組み合わせは、投与後にインサイチューで生じる。
【0033】
本明細書において使用するとき、「成形可能な」とは、様々な２または３次元の形状、エリア、または容積部に成形されるまたは成型されるフラクトマーおよび脂肪組織組成物の能力、ならびに長期間にわたってこの形状、エリア、または容積部を維持する能力を指す。具体的な例示的な形状または容積部は、乳房、臀部、手、膝、皮膚もしくは皮膚移植片の下に置くための２次元層、または対象の身体に存在する他の不規則なもしくは不定の形状もしくは容積部を含む。
【0034】
組成物
本明細書に記載される１つの実施形態は、自家脂肪移植片を増強するための注射可能な組織マトリックス組成物であって、組成物は、組み換え部分的秩序ポリペプチドまたは「フラクトマー」および脂肪組織を含む、それからなる、またはそれから本質的になる、注射可能な組織マトリックス組成物である。一部の実施形態において、脂肪組織は吸引脂肪組織を含む。１つの実施形態において、組成物は、指定される域内のすべての整数を含めた、約１０～９０容積％の吸引脂肪組織を含む。別の実施形態において、組成物は、指定される域内のすべての整数を含めた、約２５～９０容積％の吸引脂肪組織を含む。一部の実施形態において、組成物は、少なくとも２５容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも３５容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも４５容積％の吸引脂肪組織を含む。さらに他の実施形態において、組成物は、少なくとも５０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも６０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも７０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも８０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも９０容積％の吸引脂肪組織を含む。脂肪または吸引脂肪組織の容積部を、特異的濃度のフラクトマーの溶液と組み合わせて、本明細書に記載される様々な脂肪：フラクトマー比を提供する。例として、１００μＬのフラクトマー溶液と組み合わされた９００μＬの脂肪または吸引脂肪組織は、容積で９：１比または容積で９０％脂肪であろう。
本明細書に記載される１つの実施形態は、自家脂肪移植片を増強するための注射可能な組織マトリックス組成物であって、組成物は、組み換え部分的秩序ポリペプチドまたは「フラクトマー」および脂肪組織を含む、それからなる、またはそれから本質的になる、注射可能な組織マトリックス組成物である。一部の実施形態において、脂肪組織は吸引脂肪組織を含む。１つの実施形態において、組成物は、指定される域内のすべての整数を含めた、約１０～９０容積％の吸引脂肪組織を含む。別の実施形態において、組成物は、指定される域内のすべての整数を含めた、約２５～９０容積％の吸引脂肪組織を含む。一部の実施形態において、組成物は、少なくとも２５容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも３５容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも４５容積％の吸引脂肪組織を含む。さらに他の実施形態において、組成物は、少なくとも５０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも６０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも７０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも８０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも９０容積％の吸引脂肪組織を含む。脂肪または吸引脂肪組織の容積部を、特異的濃度のフラクトマーの溶液と組み合わせて、本明細書に記載される様々な脂肪：フラクトマー比を提供する。例として、１００μＬのフラクトマー溶液と組み合わされた９００μＬの脂肪または吸引脂肪組織は、容積で９：１比または容積で９０％脂肪であろう。
【0035】
本明細書において使用される「フラクトマー」という用語は、熱に反応性であり、それらが液体として注射され、しかし体温で多孔質の固体ネットワークを迅速に形成することを可能にする、天然エラスチンを模倣するように設計された組み換え人工タンパク質のクラスを指す。例示的なフラクトマーは、本明細書における参照によりその全体として組み入れられる国際特許出願公開第ＷＯ２０１９００６３７４号に記載される。一部の実施形態において、フラクトマーは、組み換え部分的秩序ポリペプチド（ＰＯＰ）を含む。各ＰＯＰは、複数の無秩序ドメインおよび複数の構造化ドメインを含み得る。ＰＯＰは、溶解度を変化させることによる相転移挙動、および温度に伴う凝集体溶解／形成を呈し得る。
【0036】
フラクトマーは、完璧なα－ヘリックスを形成し、（ＧＸＧＶＰ）nペンタペプチドモチーフ（約３０～５０ｋＤａ）（配列番号１）（式中、Ｘはプロリンを除く任意の標準的アミノ酸である）の典型的に８０～１２０個の総繰り返しから構成される非構造化エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）に周期的に挿入される、オリゴアラニンアミノ酸（５～５００個、しかし典型的にはＡ25）の構造化ドメインからなる。１つの態様において、非構造化ポリペプチドまたは「無秩序ドメイン」は、（ＧＸＧＶＰ）nモチーフ（配列番号２）である（式中、ＸはＶａｌ（配列番号３）もしくはＡｌａ（配列番号４）、またはＡｌａとＶａｌとの混合物であり、ｎは１～５０の整数である）。１つの態様において、Ｘは、１０：１～１：１０（Ａｌａ：Ｖａｌ）の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である。別の態様において、Ｘは、１：１（配列番号５）または１：４（配列番号６）の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である。フラクトマーは、フラクトマーをコードするプラスミド媒介性遺伝子の過剰発現によって、大腸菌において組み換えで合成される。
【0037】
フラクトマーは、伝統的なヒドロゲルと比べていくつかの利点を有する。α－ヘリックス（Ａｌａ）25ドメイン間の疎水性相互作用だけを介して、皮下注射時に自然発生的に架橋するフラクトマーの能力は大きい。ヒドロゲルにエラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）または他の合成ポリマーを架橋するために要される化学的架橋技法の大多数は、大きな短所を有する。小分子架橋剤はしばしば有毒であり得、注射されたポリマー溶液の化学的または酵素的架橋の反応速度論をインサイチューで制御することは困難である。さらに、ほとんどのヒドロゲルは無孔質である、またはインビボでの材料組み込みに必要な多孔性を導入するために、ポロゲン（ｐｏｒｏｇｅｎ）もしくは鋳型法の使用を要する。これらの材料は、その後、所望の部位に埋め込まれなければならない。これらの障壁は乗り越えられ得るものの、物理的架橋の簡潔性、および体熱の単純な作用の下での機械的に安定な多孔質ネットワークの自然発生的形成は、他の注射可能な材料と比較して、脂肪移植におけるフラクトマーの使用の、先例がない利点である。
【0038】
フラクトマーの無秩序ドメインおよび構造化ドメインは、任意の数の考え得るやり方で編成され得、一部の実施形態において、１つまたは複数の無秩序ドメインは、フラクトマーの少なくとも２つの隣接する構造化ドメインの間に置かれる。一部の実施形態において、フラクトマーは、直列に繰り返した複数の構造化ドメインおよび直列に繰り返した複数の無秩序ドメインを含み、一部の実施形態において、直列に繰り返した複数の構造化ドメインは、直列に繰り返した複数の無秩序ドメインに対してＣ末端に置かれ、一部の実施形態において、直列に繰り返した複数の構造化ドメインは、直列に繰り返した複数の無秩序ドメインに対してＮ末端に置かれる。一部の実施形態において、フラクトマーは、［無秩序ドメイン］ｑ－［構造化ドメイン］ｒ［無秩序ドメイン］ｓ－［構造化ドメイン］ｔとして編成される（式中、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔは、独立して、１～１００、２～１００、１～５０、または２～５０等、０～１００の整数である）。一部の実施形態において、フラクトマーは、［無秩序ドメイン］ｑ－［構造化ドメイン］ｒとして編成される（式中、ｑおよびｒは、独立して１～１００の整数である）。一部の実施形態において、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔは、独立して、０～１０、０～２０、０～３０、０～４０、０～５０、０～６０、０～７０、０～８０、０～９０、０～１００、１～１０、１～２０、１～３０、１～４０、１～１５０、１～６０、１～７０、１～８０、１～９０、または１～１００の整数である。
【0039】
フラクトマーは、複数の無秩序ドメインを含み得る。無秩序ドメインは、ＣＤによって観察される最小限の二次構造を有するまたは二次構造を有しない任意のポリペプチドを含み得、相転移挙動を有し得る。無秩序ドメインは、繰り返しのアミノ酸、繰り返さないアミノ酸、またはその組み合わせのアミノ酸配列を含み得る。
一部の実施形態において、フラクトマーの約２５％～約９７％、約３５％～約９５％、または約５０％～約９４％等の約２０％～約９９％は、無秩序ドメインを含む。フラクトマーの少なくとも約２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％は、無秩序ドメインを含み得る。
一部の実施形態において、フラクトマーの約２５％～約９７％、約３５％～約９５％、または約５０％～約９４％等の約２０％～約９９％は、無秩序ドメインを含む。フラクトマーの少なくとも約２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％は、無秩序ドメインを含み得る。
【0040】
一部の実施形態において、無秩序ドメインは、（ＧＸＧＶＰ）n（配列番号１）のアミノ酸配列を含む（式中、Ｘは任意のアミノ酸であり、ｎは１よりも大きいまたは１に等しい整数である）。一部の実施形態において、ｍは１～５００の整数である。一部の実施形態において、ｍは、少なくとも、多くとも、またはちょうど１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、または５００である。一部の実施形態において、ｍは、５００未満、４００未満、３００未満、２００未満、または１００未満であり得る。一部の実施形態において、ｍは、１～５００、１～４００、１～３００、１～２００、または６０～１８０である。一部の実施形態において、ｍは、６０、１２０、または１８０である。一部の実施形態において、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である。一部の実施形態において、Ｘは、ＶａｌもしくはＡｌａ、またはＡｌａおよびＶａｌの交互反復である。一部の実施形態において、ＸはＶａｌである。一部の実施形態において、ＸはＡｌａである。一部の実施形態において、Ｘは、ＡｌａおよびＶａｌの交互反復である。一部の実施形態において、Ｘは、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または１０：１の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である。一部の実施形態において、Ｘは、１：１または１：４の比のＡｌａとＶａｌとの混合物である。一部の実施形態において、Ｘは、５：１～１：５または１：１～１：４等、１０：１～１：１０（Ａｌａ：Ｖａｌ）の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である。
【0041】
構造化ドメイン
フラクトマーは、複数の構造化ドメインを含み得る。構造化ドメインは、例えばアルファヘリックス等、ＣＤによって観察される二次構造を有し得る。構造化ドメインは、ポリプロリンドメインおよびポリアラニンドメインの少なくとも一方を含み得、一部の実施形態において、フラクトマーは、交互の無秩序ドメインおよび構造化ドメインを含む。一部の実施形態において、構造化ドメインは、ポリアラニンドメインのみを含む。一部の実施形態において、構造化ドメインは、ポリプロリンドメインのみを含む。
フラクトマーは、複数の構造化ドメインを含み得る。構造化ドメインは、例えばアルファヘリックス等、ＣＤによって観察される二次構造を有し得る。構造化ドメインは、ポリプロリンドメインおよびポリアラニンドメインの少なくとも一方を含み得、一部の実施形態において、フラクトマーは、交互の無秩序ドメインおよび構造化ドメインを含む。一部の実施形態において、構造化ドメインは、ポリアラニンドメインのみを含む。一部の実施形態において、構造化ドメインは、ポリプロリンドメインのみを含む。
【0042】
一部の実施形態において、フラクトマーの約５％～約７０％、約６％～約６０％、または約７％～約５０％等の約４％～約７５％は、構造化ドメインを含む。フラクトマーの少なくとも約２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％は、構造化ドメインを含み得る。
【0043】
一部の実施形態において、構造化ドメインはポリアラニンドメインを含む。各ポリアラニンドメインは、少なくとも５個のアラニン残基を含み得る。各ポリアラニンドメインは、アルファ－ヘリックス立体構造におけるアミノ酸の少なくとも約６０％を有し得る。１つの態様において、構造化ドメインは、ポリアラニンドメイン（Ａｌａ）mを含む（式中、ｍは５～５００の整数である）。別の態様において、ポリアラニンドメインは、（Ａ）25（配列番号７）；Ｋ（Ａ）25Ｋ（配列番号８）；Ｄ（Ａ）25Ｋ（配列番号９）；ＧＤ（Ａ25）Ｋ（配列番号１０）；またはＧＫ（Ａ25）Ｋ（配列番号１１）のうちの１種または複数を含む。
【0044】
１つの実施形態において、フラクトマーは、それぞれが、ＰＧ、Ｐ（Ｘ）nＧ（配列番号２０）、および（Ｂ）mＰ（Ｘ）nＧ（Ｚ）p（配列番号２１）、またはその組み合わせから選択されるアミノ酸配列を含むＰＧモチーフを含む（式中、ｍ、ｎ、およびｐは、独立して１～１５の整数であり、Ｂ、Ｘ、およびＺは、独立して任意のアミノ酸である）、複数の無秩序ドメインと；それぞれがポリアラニンドメインを含み、各ポリアラニンドメインが、少なくとも５個のアラニン残基を含み、α－ヘリックス立体構造におけるアミノ酸の少なくとも約５０％を有する、複数の構造化ドメインとを含み；フラクトマーは相転移挙動を呈する。１つの態様において、少なくとも１つの無秩序ドメインは、（ＧＸＧＶＰ）n（配列番号１）のアミノ酸配列を含む（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸であり、ｎは１よりも大きいまたは１に等しい整数である）。別の態様において、各ポリアラニンドメインにおけるアミノ酸の少なくとも約６０％はα－ヘリックス立体構造にある。別の態様において、各ポリアラニンドメインは、［Ｂp（Ａ）qＺr］n（配列番号２２）または［（ＢＡs）tＺｒ］n（配列番号２３）のアミノ酸配列を含む（式中、Ｂは、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；ＡはＡｌａであり；Ｚは、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；ｎは１～５０の整数であり；ｐは０～２の整数であり；ｑは１～５０の整数であり；ｒは０～２の整数であり；ｓは１～５の整数であり；ｔは１～５０の整数である）。別の態様において、構造化ドメインは、（Ａ）25（配列番号７）；Ｋ（Ａ）25Ｋ（配列番号８）；Ｄ（Ａ）25Ｋ（配列番号９）；ＧＤ（Ａ25）Ｋ（配列番号１０）；またはＧＫ（Ａ25）Ｋ（配列番号１１）うちの１種または複数を含む。別の態様において、フラクトマーの約４％～約７５％は、構造化ドメインを含む。別の態様において、フラクトマーは、下限臨界溶液温度（ｌｏｗｅｒ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）（ＬＣＳＴ）より下で可溶性である。別の態様において、フラクトマーは、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）を有し、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は同一である、または加熱の転移温度（Ｔt-加熱）は、冷却の転移温度（Ｔt-冷却）よりも大きい。
【0045】
別の実施形態において、フラクトマーは、複数の無秩序ドメイン；および複数の構造化ドメインを含む。１つの態様において、フラクトマーは、［（ＧＸＧＶＰ）n－α－ヘリックス］mの一般構造を有する（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸であり得、α－ヘリックスは、約５～５０個のアラニン残基を有する任意のポリアラニンベースのα－ヘリックスである）。別の態様において、フラクトマーは、構造［（ＧＸＧＶＰ）n－ＧＸ1（Ａ）25Ｘ1］mを有する（式中、ＸはＡまたはＶであり；Ｘ1はＫまたはＤであり；ｎは１０～２０の整数であり；ｍは４～８の整数である）（例えば、［（配列番号２）n－（配列番号１０または１１）］m）。別の態様において、フラクトマーは、以下の構造：
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１２）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１３）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１４）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１５）；
Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１６）；
Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１７）；
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１８）；または
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１９）
のうちの１種または複数を含む。
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１２）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１３）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１４）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１５）；
Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１６）；
Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１７）；
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１８）；または
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１９）
のうちの１種または複数を含む。
【0046】
１つの態様において、フラクトマーは、以下の構造：
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１２）；または
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１８）
を含む。
本明細書に記載される例示的な配列、配列モチーフ、およびフラクトマー構築物が下の表１に示されている。
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１２）；または
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１８）
を含む。
本明細書に記載される例示的な配列、配列モチーフ、およびフラクトマー構築物が下の表１に示されている。
【0047】
【表1】
【0048】
フラクトマーは、ＵＶ架橋可能なアミノ酸誘導体等、天然に存在しないアミノ酸誘導体も含み得る。非天然アミノ酸誘導体を使用して、異なるフラクトマー間および同じフラクトマー内に共有結合性架橋を導入し得る。例えば、ＵＶ架橋可能なアミノ酸誘導体を含むフラクトマーはＵＶ光に曝露され得、それは、アミノ酸誘導体と別のフラクトマーのアミノ酸の側鎖との間に形成される、または同じフラクトマー（アミノ酸誘導体を有する）のアミノ酸の側鎖を用いて形成される、共有結合性架橋をもたらし得る。ＵＶ架橋可能なアミノ酸誘導体は、アジド基で官能化されている任意のアミノ酸であり得る。一部の実施形態において、アミノ酸誘導体はパラ－アジドフェニルアラニンである。
ＵＶ架橋可能なアミノ酸誘導体は、種々の温度で転移するフラクトマーの能力に影響を及ぼすことなく、様々な量で含まれ得る。例えば、ＵＶ架橋可能なアミノ酸誘導体は、（フラクトマーの）約０．５％～約１５％または約１％～約１０％等、（フラクトマーの）約０．１％～約２０％でフラクトマー内に含まれ得る。
フラクトマーは、溶解度を変化させることによる相転移挙動、および温度に伴う凝集体形成を示し得る。フラクトマーの相転移挙動は、フラクトマーの無秩序ドメインの相転移挙動に由来し得る。「相転移」または「転移」とは、特異的温度で急激に生じる、ポリペプチドの凝集を指し得る。相転移は可逆的であり得るが、とはいえ、溶解の特異的温度は、凝集の特異的温度と同じであり得るまたは異なり得る。
ＵＶ架橋可能なアミノ酸誘導体は、種々の温度で転移するフラクトマーの能力に影響を及ぼすことなく、様々な量で含まれ得る。例えば、ＵＶ架橋可能なアミノ酸誘導体は、（フラクトマーの）約０．５％～約１５％または約１％～約１０％等、（フラクトマーの）約０．１％～約２０％でフラクトマー内に含まれ得る。
フラクトマーは、溶解度を変化させることによる相転移挙動、および温度に伴う凝集体形成を示し得る。フラクトマーの相転移挙動は、フラクトマーの無秩序ドメインの相転移挙動に由来し得る。「相転移」または「転移」とは、特異的温度で急激に生じる、ポリペプチドの凝集を指し得る。相転移は可逆的であり得るが、とはいえ、溶解の特異的温度は、凝集の特異的温度と同じであり得るまたは異なり得る。
【0049】
一部の実施形態において、フラクトマーは、下限臨界溶液温度（ＬＣＳＴ）より下で可溶性である。ＬＣＳＴは、それより下でポリペプチドが混和性である温度である。
転移温度（Ｔt）とは、フラクトマーが一方の状態から別の状態に変化する温度である。状態は、例えば可溶性ポリペプチド、ゲル、ならびに様々なサイズおよび寸法の凝集体を含み得る。フラクトマーは、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）を有し得る。一部の実施形態において、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）は濃度依存的である。一部の実施形態において、冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は濃度非依存的である。Ｔt-加熱は、主として無秩序ドメインによって決定され得る。Ｔt-冷却は、主として構造化ドメインによって決定され得る。
転移温度（Ｔt）とは、フラクトマーが一方の状態から別の状態に変化する温度である。状態は、例えば可溶性ポリペプチド、ゲル、ならびに様々なサイズおよび寸法の凝集体を含み得る。フラクトマーは、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）を有し得る。一部の実施形態において、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）は濃度依存的である。一部の実施形態において、冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は濃度非依存的である。Ｔt-加熱は、主として無秩序ドメインによって決定され得る。Ｔt-冷却は、主として構造化ドメインによって決定され得る。
【0050】
転移温度（ＬＣＳＴまたはＴt）より下で、フラクトマーは高度に可溶性であり得る。転移温度より上に加熱すると、フラクトマーは疎水的に崩壊し得かつ凝集し得、別個の相を形成する。
フラクトマーは、様々な温度で相転移し得る。フラクトマーは、約０℃～約１００℃、約１０℃～約５０℃、または約２０℃～約４２℃の転移温度（Ｔt）を有し得る。加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は同一であり得る。本明細書において使用するとき、温度が互いの２．０℃、１．０℃、０．５℃、または０．１℃以内にある場合、温度は「同一」であり得る。一部の実施形態において、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）は、冷却の転移温度（Ｔt-冷却）よりも大きい。フラクトマーが、Ｔt-冷却よりも大きいＴt-加熱を有する実施形態において、２種の転移温度間の差はヒステリシス（ｈｙｓｔｅｒｅｓｉｓ）と称され得、一部の実施形態において、フラクトマーは、約５℃～約６０℃または約１０℃～約５０℃等、約５℃～約７０℃のヒステリシスを有する。
フラクトマーは、様々な温度で相転移し得る。フラクトマーは、約０℃～約１００℃、約１０℃～約５０℃、または約２０℃～約４２℃の転移温度（Ｔt）を有し得る。加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は同一であり得る。本明細書において使用するとき、温度が互いの２．０℃、１．０℃、０．５℃、または０．１℃以内にある場合、温度は「同一」であり得る。一部の実施形態において、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）は、冷却の転移温度（Ｔt-冷却）よりも大きい。フラクトマーが、Ｔt-冷却よりも大きいＴt-加熱を有する実施形態において、２種の転移温度間の差はヒステリシス（ｈｙｓｔｅｒｅｓｉｓ）と称され得、一部の実施形態において、フラクトマーは、約５℃～約６０℃または約１０℃～約５０℃等、約５℃～約７０℃のヒステリシスを有する。
【0051】
フラクトマーの可逆的な相転移挙動を使用して、可溶性および不溶性の相で溶液を循環させる「逆転移循環（ｉｎｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｃｙｃｌｉｎｇ）」と称される方法に従ったフラクトマーの精製において、フラクトマーの相転移挙動は利用され得る。相転移は、例えば硫酸アンモニウムまたは塩化ナトリウム等のコスモトロピック塩を使用しても誘発され得る。コスモトロピック塩は、フラクトマーを含む溶液に添加され得、コスモトロピック塩は、フラクトマーが凝集体を形成するまたは溶液から沈殿するまで添加される。凝集体は、遠心分離によってペレットにされ得、第２の溶液またはバッファーに再懸濁され得る。フラクトマーの凝集体は、それらのＴtより下に冷却されるとまたはコスモトロピック塩が溶液から取り除かれた場合、溶液に再可溶化し得る。一部の実施形態において、フラクトマーは、いかなるクロマトグラフィー精製もなしで精製される。一部の実施形態において、フラクトマーは、組み換えで作出され、例えば大腸菌等の細菌培養物から精製される。
【0052】
一部の実施形態において、温度がＴt-加熱よりも大きい場合、フラクトマーは凝集体を形成し得る。Ｔt-冷却未満の温度に冷却された場合、凝集体は再可溶化し得る。
複数のフラクトマーによって形成される凝集体は、フラクトマーの構造から生じ得る有利な特性を有し得る。例えば、凝集体は、物理的な非共有結合性架橋を有し得る。これらの物理的な非共有結合性架橋は、互いと相互作用する構造化ドメインのヘリックス束から生じ得る。凝集体は、物理的な非共有結合性架橋に加えて、共有結合性架橋（例えば、化学的架橋）も有し得る。共有結合性架橋を凝集体に含めて、それらの多孔質アーキテクチャーを変更することなく、それらの機械的安定性を増加させ得、一部の実施形態において、凝集体は複数のフラクトマーから形成され得、次いで共有結合性架橋によってさらに安定化され得る（凝集体の形成の後）。共有結合性架橋は、本明細書に記載される、アジド官能性を有するＵＶ架橋可能なアミノ酸誘導体を介して導入され得る。凝集体に組み入れられ得る架橋のさらなる例は、小分子架橋およびシステインジスルフィド橋を含むが、それらに限定されるわけではない。化学的な小分子架橋の例はテトラキス（ヒドロキシメチル）ホスホニウムクロリド（ＴＭＰＣ）であり、それはフラクトマー内のリジンを架橋し得る。
複数のフラクトマーによって形成される凝集体は、フラクトマーの構造から生じ得る有利な特性を有し得る。例えば、凝集体は、物理的な非共有結合性架橋を有し得る。これらの物理的な非共有結合性架橋は、互いと相互作用する構造化ドメインのヘリックス束から生じ得る。凝集体は、物理的な非共有結合性架橋に加えて、共有結合性架橋（例えば、化学的架橋）も有し得る。共有結合性架橋を凝集体に含めて、それらの多孔質アーキテクチャーを変更することなく、それらの機械的安定性を増加させ得、一部の実施形態において、凝集体は複数のフラクトマーから形成され得、次いで共有結合性架橋によってさらに安定化され得る（凝集体の形成の後）。共有結合性架橋は、本明細書に記載される、アジド官能性を有するＵＶ架橋可能なアミノ酸誘導体を介して導入され得る。凝集体に組み入れられ得る架橋のさらなる例は、小分子架橋およびシステインジスルフィド橋を含むが、それらに限定されるわけではない。化学的な小分子架橋の例はテトラキス（ヒドロキシメチル）ホスホニウムクロリド（ＴＭＰＣ）であり、それはフラクトマー内のリジンを架橋し得る。
【0053】
加えて、複数のフラクトマーによって形成される凝集体は、それと液体様コアセルベート構造とを区別する固体様特性を有し得る。例えば、凝集体は、その損失弾性率（ｌｏｓｓ ｍｏｄｕｌｕｓ）（Ｇ’’）よりも２×大きい、５×大きい、１０×大きい、１５×大きい、２０×大きい、２５×大きい、３０×大きい、３５×大きい、５０×大きい、または１００×大きいＧ’を有する等、そのＧ’’よりも大きい貯蔵弾性率（ｓｔｏｒａｇｅ ｍｏｄｕｌｕｓ）（Ｃ）を有し得る。一部の実施形態において、凝集体は、そのＧ’’よりも１０×大きい～５０×大きいまたは２０×大きい～３５×大きい等、そのＧ’’よりも２×大きい～１００×大きいＧ’を有する。
【0054】
複数のフラクトマーから形成される凝集体は、多様なサイズおよび寸法であり得る。一部の実施形態において、凝集体は安定な３次元マトリックスである。一部の実施形態において、凝集体はフラクタル様であり、一部の実施形態において、凝集体はゲル様であり、一部の実施形態において、凝集体は、空隙容積を有した多孔質、例えば凝集体の非タンパク質に富む相である。一部の実施形態において、空隙容積は調整可能である。例えば、凝集体は、（凝集体の容積の）約６０％～約９０％の空隙容積を有し得、加えて、凝集体は、約１μｍ～約１０μｍ、約３μｍ～約５μｍ、約２５μｍ～約６０μｍ、約３０μｍ～約５０μｍ、または約３μｍ～約５０μｍ等、約１μｍ～約１００μｍの直径を有する細孔を含み得る。
【0055】
本明細書に記載されるフラクトマーをコードするポリヌクレオチドがさらに提供される。ベクターは、本明細書に詳述されるフラクトマーをコードするポリヌクレオチドを含み得る。ポリペプチドの発現を得るために、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、転写を指揮するプロモーター、転写／翻訳ターミネーター、およびタンパク質をコードする核酸に関する場合には翻訳開始のためのリボソーム結合部位、を含有する発現ベクターにサブクローニングし得る。ベクターの例はｐＥＴ２４である。適切な細菌プロモーターは当技術分野において周知である。本明細書に記載されるフラクトマーをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを用いて形質転換されたまたはトランスフェクトされた宿主細胞がさらに提供される。タンパク質を発現させるための細菌発現システムは、例えば大腸菌、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種、およびサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）において使用可能である。Paiva et al., Gene 22: 229-235 (1983)；Mosbach et al., Nature 302: 543-545 (1983)を参照されたい。そのような発現システムのためのキットは市販されている。哺乳類細胞、酵母、および昆虫細胞に対する真核生物発現システムは、当技術分野において周知であり、また市販されている。レトロウイルス発現システムが本発明において使用され得る。
【0056】
フラクトマーは、当業者に従って宿主細胞において組み換えで発現され得る。フラクトマーは、当業者に公知の任意の手段によって精製され得る。例えば、フラクトマーは、液体クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、もしくはアフィニティークロマトグラフィー、またはその組み合わせ等のクロマトグラフィーを使用して精製され得、一部の実施形態において、フラクトマーは、クロマトグラフィーなしで精製され、一部の実施形態において、フラクトマーは、逆転移循環を使用して精製される。
他の実施形態において、本開示は、複数のフラクトマーを含む足場を本明細書においてさらに提供する。ポリペプチドが凝集体を形成するように、足場は、フラクトマーの転移温度よりも大きい温度で形成され得る。足場は注射可能であり得る。
他の実施形態において、本開示は、複数のフラクトマーを含む足場を本明細書においてさらに提供する。ポリペプチドが凝集体を形成するように、足場は、フラクトマーの転移温度よりも大きい温度で形成され得る。足場は注射可能であり得る。
【0057】
細胞性足場が、１つの実施形態に従ってさらに提供される。細胞性足場は、足場および複数の細胞を含む。細胞は、多様なタイプを含み得る。一部の実施形態において、細胞は、幹細胞、細菌細胞、もしくはヒト組織細胞、またはその組み合わせを含む。
足場は、低い免疫原性もしくは低い抗原性、またはその両方を有し得る。足場は、細胞成長、細胞動員、および細胞分化、またはその組み合わせのうちの少なくとも１種を促進し得る。足場または細胞性足場は、細胞移植術、組織再生、細胞培養、および細胞ベースのインビトロアッセイに適切であり得る。加えて、足場および／または細胞性足場は、血管系の形成、創傷治癒、またはその組み合わせを促進し得る。
足場は、低い免疫原性もしくは低い抗原性、またはその両方を有し得る。足場は、細胞成長、細胞動員、および細胞分化、またはその組み合わせのうちの少なくとも１種を促進し得る。足場または細胞性足場は、細胞移植術、組織再生、細胞培養、および細胞ベースのインビトロアッセイに適切であり得る。加えて、足場および／または細胞性足場は、血管系の形成、創傷治癒、またはその組み合わせを促進し得る。
【0058】
薬物送達組成物が、１つの実施形態に従ってさらに提供される。薬物送達組成物は、Ｔt-加熱より上で凝集体に自己会合される本明細書に詳述される複数のフラクトマー、および凝集体内にカプセル化された作用物質を含み得る。作用物質は治療薬であり得る。一部の実施形態において、作用物質は、小分子、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、タンパク質、ポリペプチド、炭水化物、脂質、およびその組み合わせから選択される。一部の実施形態において、作用物質は脂肪組織を含む。一部の実施形態において、脂肪組織は吸引脂肪組織を含む。１つの実施形態において、薬物送達組成物は、指定される域内のすべての整数を含めた、約１０～９０容積％の吸引脂肪組織を含む。別の実施形態において、組成物は、指定される域内のすべての整数を含めた、約２５～９０容積％の吸引脂肪組織を含む。一部の実施形態において、組成物は、少なくとも２５容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも３５容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも４５容積％の吸引脂肪組織を含む。さらに他の実施形態において、組成物は、少なくとも５０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも６０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも７０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも８０容積％の吸引脂肪組織を含む。他の実施形態において、組成物は、少なくとも９０容積％の吸引脂肪組織を含む。
【0059】
さらに他の実施形態において、上で詳述されるフラクトマーおよび／または薬物送達組成物は、薬学の技術分野における当業者に周知の標準的技法に従って薬学的組成物に製剤化され得る。したがって、組成物は、１種または複数の薬学的に許容される担体、賦形剤、または活性薬学的成分（ＡＰＩ）とともに、フラクトマーもしくはその凝集体、および／またはフラクトマーもしくはその凝集体、ならびに有効量の脂肪組織（例えば、吸引脂肪組織）を含み得る。組成物は、対象への投与のために調製され得る。そのような組成物は、特定の対象の年齢、性別、質量、および病態、ならびに投与の経路等の因子を考慮に入れて、医学の技術分野における当業者に周知の投薬量でかつ技法によって投与され得る。
【0060】
組成物は、予防的にまたは治療的に投与され得る。予防的投与において、それらは、反応を誘導するのに十分な量で投与され得る。治療的適用において、それらは、治療効果を引き出すのに十分な量で、それを必要とする対象に投与される。これを成し遂げるのに充分な量は、「治療有効用量」と定義される。この使用に有効な量は、例えば投与されるフラクトマーレジメンの特定の組成物、投与の様式、疾患のステージおよび重症度、患者の健康の全般的状態、ならびに処方医師の判断に依存すると考えられ、一部の実施形態において、フラクトマーは、作用物質、細胞、脂肪組織（例えば、吸引脂肪組織）、またはその組み合わせとともに共投与され得る。
【0061】
本明細書において提供される組成物は、そのすべてについての内容が参照によりそれらの全体として本明細書に組み入れられる、Donnelly et al., Ann. Rev. Immunol. 15: 617-648 (1997)；ＦｅＬｇｎｅｒら、米国特許第５，５８０，８５９号；Ｆｅｉｇｎｅｒ、米国特許第５，７０３，０５５号；およびＣａｒｓｏｎら、米国特許第５，６７９，６４７号に記載される当技術分野において周知の方法によって投与され得る。フラクトマーは、例えばワクチン銃（ｖａｃｃｉｎｅ ｇｕｎ）を使用して個体に投与され得る粒子またはビーズに複合され得る。当業者であれば、生理学的に許容される化合物を含めた薬学的に許容される担体の選定は、例えば投与の経路に依存することを承知しているであろう。
組成物は、多様な経路を介して送達され得る。典型的な送達経路は、非経口投与、例えば皮内、筋肉内、または皮下送達を含む。他の経路は、経口投与、鼻腔内、膣内、経皮、静脈内、動脈内、腫瘍内、腹腔内、および表皮経路を含む。一部の実施形態において、フラクトマーは、対象へ、静脈内に、動脈内に、または腹腔内に投与される。
組成物は、多様な経路を介して送達され得る。典型的な送達経路は、非経口投与、例えば皮内、筋肉内、または皮下送達を含む。他の経路は、経口投与、鼻腔内、膣内、経皮、静脈内、動脈内、腫瘍内、腹腔内、および表皮経路を含む。一部の実施形態において、フラクトマーは、対象へ、静脈内に、動脈内に、または腹腔内に投与される。
【0062】
方法
本明細書において提供される方法は、数々の方法において使用され得る。本開示の１つの態様は、対象において自家脂肪移植片を増強する方法であって、方法は、自家脂肪移植片が対象において増強されるように、本明細書において提供される組成物の治療有効量を対象に投与する工程を含む、それからなる、またはそれから本質的になる方法を提供する。
本開示のさらに別の態様は、対象において自家脂肪移植片を増強する方法であって、方法は、本明細書において提供されるフラクトマーの治療有効量および脂肪組織の治療有効量を含む、それからなる、またはそれから本質的になる方法を提供する。一部の実施形態において、脂肪組織は吸引脂肪組織を含む。１つの実施形態において、フラクトマーおよび脂肪組織は同時に投与される。別の実施形態において、フラクトマーは、脂肪組織の前に投与される。別の実施形態において、フラクトマーは、脂肪組織の後に投与される。
本明細書において提供される方法は、数々の方法において使用され得る。本開示の１つの態様は、対象において自家脂肪移植片を増強する方法であって、方法は、自家脂肪移植片が対象において増強されるように、本明細書において提供される組成物の治療有効量を対象に投与する工程を含む、それからなる、またはそれから本質的になる方法を提供する。
本開示のさらに別の態様は、対象において自家脂肪移植片を増強する方法であって、方法は、本明細書において提供されるフラクトマーの治療有効量および脂肪組織の治療有効量を含む、それからなる、またはそれから本質的になる方法を提供する。一部の実施形態において、脂肪組織は吸引脂肪組織を含む。１つの実施形態において、フラクトマーおよび脂肪組織は同時に投与される。別の実施形態において、フラクトマーは、脂肪組織の前に投与される。別の実施形態において、フラクトマーは、脂肪組織の後に投与される。
【0063】
任意の実施形態またはその態様の範囲から逸脱することなく、本明細書に記載される組成物、製剤、方法、過程、および適用にとって適切な改変および適応がなされ得ることは関連する技術分野における当業者に明らかであろう。提供される組成物および方法は例示的であり、指定される実施形態のいずれかの範囲を限定することを意図されるわけではない。本明細書に開示される様々な実施形態、態様、および選択肢のすべては、任意のバリエーションまたは反復で組み合わされ得る。本明細書に記載される組成物、製剤、方法、および過程の範囲は、本明細書に記載される実施形態、態様、選択肢、実施例、および選好性の実際のまたは潜在的なすべての組み合わせを含む。本明細書に記載される例示的な組成物および製剤は、任意の構成要素を省略し得る、本明細書に開示される任意の構成要素を置換し得る、または本明細書における他の箇所に開示される任意の構成要素を含み得る。製剤における任意の他の構成要素の質量に対する、または製剤における他の構成要素の総質量に対する、本明細書に開示される組成物または製剤のいずれかの任意の構成要素の質量の比は、あたかもそれらが明示的に開示されるかのように、本明細書によって開示される。参照により組み入れられる特許または刊行物のいずれかにおける任意の用語の意味が、本開示において使用される用語の意味と矛盾すれば、本開示における用語または語句の意味が支配的である。さらに、先の記述は、単に例示的な実施形態を開示しかつ記載するにすぎない。本明細書において引用されるすべての特許および刊行物は、その具体的な教示に関して、本明細書における参照により組み入れられる。
【0064】
本明細書に記載される本発明の様々な実施形態および態様は、以下の項目によって要約される。
項目１．組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）；および
脂肪組織
を含む組織マトリックス組成物。
項目２．フラクトマーは、
複数の無秩序ドメイン；および
複数の構造化ドメイン
を含む、項目１に記載の組成物。
項目３．無秩序ドメインは、複数の（ＧＸＧＶＰ）n（配列番号１）のアミノ酸配列を含み（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸であり、ｎは１よりも大きいまたは１に等しい整数である）；
構造化ドメインはポリアラニンドメインを含む、
項目２に記載の組成物。
項目４．無秩序ドメインは、複数の（ＧＸＧＶＰ）n（配列番号２）のアミノ酸配列を含む（式中、ＸはＶａｌ（配列番号３）もしくはＡｌａ（配列番号４）、またはＡｌａとＶａｌとの混合物であり、ｎは１～５０の整数である）、
項目２に記載の組成物。
項目１．組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）；および
脂肪組織
を含む組織マトリックス組成物。
項目２．フラクトマーは、
複数の無秩序ドメイン；および
複数の構造化ドメイン
を含む、項目１に記載の組成物。
項目３．無秩序ドメインは、複数の（ＧＸＧＶＰ）n（配列番号１）のアミノ酸配列を含み（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸であり、ｎは１よりも大きいまたは１に等しい整数である）；
構造化ドメインはポリアラニンドメインを含む、
項目２に記載の組成物。
項目４．無秩序ドメインは、複数の（ＧＸＧＶＰ）n（配列番号２）のアミノ酸配列を含む（式中、ＸはＶａｌ（配列番号３）もしくはＡｌａ（配列番号４）、またはＡｌａとＶａｌとの混合物であり、ｎは１～５０の整数である）、
項目２に記載の組成物。
【0065】
項目５．Ｘは、１０：１～１：１０（Ａｌａ：Ｖａｌ）の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である、項目４に記載の組成物。
項目６．Ｘは、１：１（配列番号５）または１：４（配列番号６）の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である、項目５に記載の組成物。
項目７．ポリアラニンドメインは（Ａｌａ）mを含む（式中、ｍは５～５０の整数である）、項目３に記載の組成物。
項目８．ポリアラニンドメインは、
（Ａ）25 （配列番号７）；
Ｋ（Ａ）25Ｋ （配列番号８）；
Ｄ（Ａ）25Ｋ （配列番号９）；
ＧＤ（Ａ25）Ｋ （配列番号１０）；または
ＧＫ（Ａ25）Ｋ （配列番号１１）
のうちの１種または複数を含む、項目３に記載の組成物。
項目９．ポリペプチドは、
［（ＧＸＧＶＰ）n－ＧＸ1（Ａ）25Ｘ1］m
を含む（式中、ＸはＡまたはＶであり；Ｘ1はＫまたはＤであり；ｎは１０～２０の整数であり；ｍは４～８の整数である）（［（配列番号２）n－（配列番号１０または１１）］m）、項目３に記載の組成物。
項目６．Ｘは、１：１（配列番号５）または１：４（配列番号６）の比のＡｌａおよびＶａｌの交互反復である、項目５に記載の組成物。
項目７．ポリアラニンドメインは（Ａｌａ）mを含む（式中、ｍは５～５０の整数である）、項目３に記載の組成物。
項目８．ポリアラニンドメインは、
（Ａ）25 （配列番号７）；
Ｋ（Ａ）25Ｋ （配列番号８）；
Ｄ（Ａ）25Ｋ （配列番号９）；
ＧＤ（Ａ25）Ｋ （配列番号１０）；または
ＧＫ（Ａ25）Ｋ （配列番号１１）
のうちの１種または複数を含む、項目３に記載の組成物。
項目９．ポリペプチドは、
［（ＧＸＧＶＰ）n－ＧＸ1（Ａ）25Ｘ1］m
を含む（式中、ＸはＡまたはＶであり；Ｘ1はＫまたはＤであり；ｎは１０～２０の整数であり；ｍは４～８の整数である）（［（配列番号２）n－（配列番号１０または１１）］m）、項目３に記載の組成物。
【0066】
項目１０．ポリペプチドは、
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１２）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１３）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１４）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１５）；
Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１６）；
Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１７）；
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１８）；または
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１９）
のうちの１種または複数を含む、項目３に記載の組成物。
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１２）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１３）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１４）；
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＫ（Ａ２５）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１５）；
Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１６）；
Ｍ［（Ｇ［Ａ１：Ｖ１］ＧＶＰ）16－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１７）；
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ （配列番号１８）；または
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］4－ＧＷＰ （配列番号１９）
のうちの１種または複数を含む、項目３に記載の組成物。
【0067】
項目１１．ポリペプチドは、
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１２）；または
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１８）
うちの１種または複数を含む、項目３に記載の組成物。
項目１２．フラクトマーは、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）を有する、項目１～１１のいずれか１項に記載の組成物。
項目１３．冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は濃度非依存的である、項目１２に記載の組成物。
項目１４．加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は約１０℃～約４５℃に及ぶ、項目１２に記載の組成物。
Ｍ［（ＧＶＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１２）；または
Ｍ［（Ｇ［Ｖ４：Ａ１］ＧＶＰ）15－ＧＤ（Ａ25）Ｋ］6－ＧＷＰ（配列番号１８）
うちの１種または複数を含む、項目３に記載の組成物。
項目１２．フラクトマーは、加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）を有する、項目１～１１のいずれか１項に記載の組成物。
項目１３．冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は濃度非依存的である、項目１２に記載の組成物。
項目１４．加熱の転移温度（Ｔt-加熱）および冷却の転移温度（Ｔt-冷却）は約１０℃～約４５℃に及ぶ、項目１２に記載の組成物。
【0068】
項目１５．フラクトマーは、Ｔt-加熱より上で固体凝集体を形成する、項目１２～１４のいずれか１項に記載の組成物。
項目１６．固体凝集体は、Ｔt-冷却より下に冷却された場合に再可溶化する、項目１５に記載の組成物。
項目１７．固体凝集体は安定な３次元マトリックスである、項目１５に記載の組成物。
項目１８．固体凝集体は複数の微小孔を含む、項目１５に記載の組成物。
項目１９．複数の微小孔は、サイズが約１μｍ～約１５０μｍに及ぶ、項目１８に記載の組成物。
項目１６．固体凝集体は、Ｔt-冷却より下に冷却された場合に再可溶化する、項目１５に記載の組成物。
項目１７．固体凝集体は安定な３次元マトリックスである、項目１５に記載の組成物。
項目１８．固体凝集体は複数の微小孔を含む、項目１５に記載の組成物。
項目１９．複数の微小孔は、サイズが約１μｍ～約１５０μｍに及ぶ、項目１８に記載の組成物。
【0069】
項目２０．約２００μＭ～約２ｍＭのフラクトマーを含む、項目１に記載の組成物。
項目２１．脂肪組織は吸引脂肪組織を含む、項目１に記載の組成物。
項目２２．約１０容積％～約９０容積％の範囲の吸引脂肪組織を含む、項目２１に記載の組成物。
項目２３．約２５容積％～約７５容積％の範囲の吸引脂肪組織を含む、項目２１または２２に記載の組成物。
項目２４．約５０容積％の吸引脂肪組織を含む、項目２２または２３に記載の組成物。
項目２１．脂肪組織は吸引脂肪組織を含む、項目１に記載の組成物。
項目２２．約１０容積％～約９０容積％の範囲の吸引脂肪組織を含む、項目２１に記載の組成物。
項目２３．約２５容積％～約７５容積％の範囲の吸引脂肪組織を含む、項目２１または２２に記載の組成物。
項目２４．約５０容積％の吸引脂肪組織を含む、項目２２または２３に記載の組成物。
【0070】
項目２５．約１：９～約９：１に及ぶ比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む、項目２１に記載の組成物。
項目２６．約１：３～約３：１に及ぶ比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む、項目２１に記載の組成物。
項目２７．約１：１の比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む、項目２１に記載の組成物。
項目２８．成形可能な液体または半固体である、項目１に記載の組成物。
項目２９．注射可能または埋め込み可能である、項目１に記載の組成物。
項目２６．約１：３～約３：１に及ぶ比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む、項目２１に記載の組成物。
項目２７．約１：１の比のフラクトマーと吸引脂肪組織との混合物を含む、項目２１に記載の組成物。
項目２８．成形可能な液体または半固体である、項目１に記載の組成物。
項目２９．注射可能または埋め込み可能である、項目１に記載の組成物。
【0071】
項目３０．２または３次元の形状、エリア、または容積部に成形可能または成型可能である、項目１に記載の組成物。
項目３１．フラクトマーは、細胞浸潤および脂肪組織の血管新生を可能にする、項目１に記載の組成物。
項目３２．自家脂肪移植片が対象において増強されるように、項目１に記載の組成物の治療有効量を対象に投与する工程を含む、対象において自家脂肪移植片を増強する方法。
項目３３．組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）の治療有効量および脂肪組織の治療有効量を対象に共投与する工程を含む、対象において自家脂肪移植片を増強する方法。
項目３４．脂肪組織は吸引脂肪組織を含む、項目３３に記載の方法。
項目３５．フラクトマーおよび脂肪組織は同時にまたは逐次的に投与される、項目３３に記載の方法。
項目３６．フラクトマーおよび脂肪組織は逐次的に投与され、フラクトマーは脂肪組織の投与の前に投与される、項目３５に記載の方法。
項目３７．フラクトマーおよび脂肪組織は逐次的に投与され、脂肪組織はフラクトマーの投与の前に投与される、項目３５に記載の方法。
項目３８．フラクトマーおよび脂肪組織は、インビトロで組み合わされ、２または３次元の形状、エリア、または容積部に成形されまたは成型され、対象においてインサイチューで埋め込まれる、項目３５に記載の方法。
項目３９．フラクトマーおよび脂肪組織は、投与の前に、成形可能な液体、半固体、または成型された半固体であり、投与の後に、固体凝集体を形成する、項目３３に記載の方法。
項目３１．フラクトマーは、細胞浸潤および脂肪組織の血管新生を可能にする、項目１に記載の組成物。
項目３２．自家脂肪移植片が対象において増強されるように、項目１に記載の組成物の治療有効量を対象に投与する工程を含む、対象において自家脂肪移植片を増強する方法。
項目３３．組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）の治療有効量および脂肪組織の治療有効量を対象に共投与する工程を含む、対象において自家脂肪移植片を増強する方法。
項目３４．脂肪組織は吸引脂肪組織を含む、項目３３に記載の方法。
項目３５．フラクトマーおよび脂肪組織は同時にまたは逐次的に投与される、項目３３に記載の方法。
項目３６．フラクトマーおよび脂肪組織は逐次的に投与され、フラクトマーは脂肪組織の投与の前に投与される、項目３５に記載の方法。
項目３７．フラクトマーおよび脂肪組織は逐次的に投与され、脂肪組織はフラクトマーの投与の前に投与される、項目３５に記載の方法。
項目３８．フラクトマーおよび脂肪組織は、インビトロで組み合わされ、２または３次元の形状、エリア、または容積部に成形されまたは成型され、対象においてインサイチューで埋め込まれる、項目３５に記載の方法。
項目３９．フラクトマーおよび脂肪組織は、投与の前に、成形可能な液体、半固体、または成型された半固体であり、投与の後に、固体凝集体を形成する、項目３３に記載の方法。
【0072】
項目４０．フラクトマーおよび脂肪組織は、フラクトマーのＴt-加熱より下で対象に共投与され、フラクトマーおよび脂肪組織は、対象の体温への曝露後に固体を形成する、項目３９に記載の方法。
項目４１．フラクトマーは、細胞浸潤および脂肪組織の血管新生を可能にする、項目３３に記載の方法。
項目４２．（ａ）対象から脂肪組織を得る工程；および
（ｂ）組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）と工程（ａ）の脂肪組織とをフラクトマーのＴt-加熱より下で組み合わせて混合物を形成する工程
を含む、自家脂肪移植片組成物を調製するための方法。
項目４３．（ｃ）混合物を形状、エリア、または容積部に成形する工程
をさらに含む、項目４４に記載の方法。
項目４４．（ｄ）注射または埋め込みによって対象に混合物を共投与する工程
をさらに含む、項目４２または４３に記載の方法。
項目４１．フラクトマーは、細胞浸潤および脂肪組織の血管新生を可能にする、項目３３に記載の方法。
項目４２．（ａ）対象から脂肪組織を得る工程；および
（ｂ）組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）と工程（ａ）の脂肪組織とをフラクトマーのＴt-加熱より下で組み合わせて混合物を形成する工程
を含む、自家脂肪移植片組成物を調製するための方法。
項目４３．（ｃ）混合物を形状、エリア、または容積部に成形する工程
をさらに含む、項目４４に記載の方法。
項目４４．（ｄ）注射または埋め込みによって対象に混合物を共投与する工程
をさらに含む、項目４２または４３に記載の方法。
【0073】
項目４５．混合物は、フラクトマーのＴt-加熱より上の温度で固体凝集体を形成する、項目４４に記載の方法。
項目４６．組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）と、組み合わせのための容器、特異的な容積寸法のための型、または脂肪組織吸引および／もしくは投与のための手段のうちの１種または複数とを含むキット。
項目４７．それを必要とする対象における自家脂肪移植のための、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）の治療有効量および脂肪組織の治療有効量の使用。
項目４６．組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）と、組み合わせのための容器、特異的な容積寸法のための型、または脂肪組織吸引および／もしくは投与のための手段のうちの１種または複数とを含むキット。
項目４７．それを必要とする対象における自家脂肪移植のための、組み換え部分的秩序ポリペプチド（フラクトマー）の治療有効量および脂肪組織の治療有効量の使用。
【実施例】
【0074】
（実施例１）
フラクトマーと脂肪組織（脂肪）とを混合する方法
脂肪移植は、患者の身体の一方の部分から脂肪組織を取り出し、同じ処置の間に、再建または美容的増進のために、その材料を新しいエリアへ注射する、脂肪吸引を使用する臨床的工程である。脂肪吸引された脂肪を処理して、過度の血液、油、および非脂肪組織を取り除き、処理された組織（吸引脂肪組織と呼ばれる）は、患者への（別の身体エリアにおける）戻し注射のためにシリンジに回収される。
フラクトマーと脂肪組織（脂肪）とを混合する方法
脂肪移植は、患者の身体の一方の部分から脂肪組織を取り出し、同じ処置の間に、再建または美容的増進のために、その材料を新しいエリアへ注射する、脂肪吸引を使用する臨床的工程である。脂肪吸引された脂肪を処理して、過度の血液、油、および非脂肪組織を取り除き、処理された組織（吸引脂肪組織と呼ばれる）は、患者への（別の身体エリアにおける）戻し注射のためにシリンジに回収される。
【0075】
精製された吸引脂肪組織は、再建されるエリアへの注射のために液体フラクトマーと組み合わされ得る。図１は、安定化された脂肪移植片の再注射のために、フラクトマーと収集された脂肪とを組み合わせる提案される方法を示している。収集された吸引脂肪組織は、フラクトマーマトリックス溶液と混合され、次いで吸引脂肪組織：フラクトマー混合物は、患者の欠損エリアに注射される。体温の増加は、フラクトマーに固体足場構造を形成させ、それは移植片安定化につながる。精製された吸引脂肪組織は、また、加熱されたエクスビボの型において液体フラクトマーと組み合わされ得、加熱された場合にフラクトマーは凝集し、成型された脂肪形状を安定化し、それは次いで、患者の所望のエリアに埋め込まれ得る。
図２は、未処理の脂肪と処理された吸引脂肪組織との間の構造的な差を図解する。脂肪吸引および処理の後、脂肪は、その固形様特性を喪失し、形状または容積を維持するための機械的完全性を有しない。吸引脂肪組織とフラクトマーとを混合することによって、脂肪移植片の形状および容積保持を維持するように、構造的および機械的完全性が強化され得る。
図２は、未処理の脂肪と処理された吸引脂肪組織との間の構造的な差を図解する。脂肪吸引および処理の後、脂肪は、その固形様特性を喪失し、形状または容積を維持するための機械的完全性を有しない。吸引脂肪組織とフラクトマーとを混合することによって、脂肪移植片の形状および容積保持を維持するように、構造的および機械的完全性が強化され得る。
【0076】
フラクトマー（配列番号１２）は熱に反応性であり、加熱された場合に固体の多孔質エラスチン様ネットワークを形成する（図３Ａ）。フラクトマーは、室温で液体でありかつ注射可能であるが、体温で凝集しかつ固体の多孔質ネットワークを形成し、より高い温度ほど、封入された吸引脂肪組織を有するフラクトマー足場形成を開始する。フラクトマーが、固体の多孔質ネットワークへの相分離を受ける閾値温度は調整可能である。フラクトマーの組成およびセグメント組織化を調整することによって、高い表面対容積比、および天然エラスチンと同様のフラクタル次元を有する、機械的に安定なネットワークを設計することが可能である。より高い温度でのフラクトマー（配列番号１２）の多孔質ネットワークは、伝統的なヒドロゲルと比較して、より大きな栄養素の流れを可能にもする（図３Ｂ）。
【0077】
（実施例２）
フラクトマーは、いくつかの保管条件において常温貯蔵可能（ｓｈｅｌｆ－ｓｔａｂｌｅ）である
フラクトマーの貯蔵寿命を評価するために、高精製フラクトマー（配列番号１２）の少なくとも３つのバッチ（再現性を確保するため）を、アリコートに解剖し（ｐａｒｓｅ）、３種の異なる条件下で保管した：（１）凍結乾燥し、室温で保管する、（２）凍結乾燥し、－２０℃で保管する、（３）ＰＢＳに再懸濁し、－２０℃で保管する。６カ月終わりまでの周期的な時点で、タンパク質分解の発生を、ＵＶ分光測色法光学密度およびＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して評価した（図４Ａ～Ｂ）。フラクトマータンパク質は非常に無秩序であり、それゆえ常に機能的に変性しているため、それらは、ほとんどのタンパク質と比較して、著しく低下した保管要件を有する。凍結乾燥されかつ－２０℃で保管されたフラクトマーサンプルは、精確なＴt-加熱またはＴt-冷却相転移のシフトを経時的に示さず（図４Ａ）、他の２種の条件下で保管されたサンプルは、同様の結果を示した。付加的に、標的フラクトマータンパク質バンドの喪失またはシフトは、どの時点においてもＳＤＳ－ＰＡＧＥによって観察されず、短縮／分解産物、不純物、または他の付加的なバンドは観察されなかった（図４Ｂ）。
フラクトマーは、いくつかの保管条件において常温貯蔵可能（ｓｈｅｌｆ－ｓｔａｂｌｅ）である
フラクトマーの貯蔵寿命を評価するために、高精製フラクトマー（配列番号１２）の少なくとも３つのバッチ（再現性を確保するため）を、アリコートに解剖し（ｐａｒｓｅ）、３種の異なる条件下で保管した：（１）凍結乾燥し、室温で保管する、（２）凍結乾燥し、－２０℃で保管する、（３）ＰＢＳに再懸濁し、－２０℃で保管する。６カ月終わりまでの周期的な時点で、タンパク質分解の発生を、ＵＶ分光測色法光学密度およびＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して評価した（図４Ａ～Ｂ）。フラクトマータンパク質は非常に無秩序であり、それゆえ常に機能的に変性しているため、それらは、ほとんどのタンパク質と比較して、著しく低下した保管要件を有する。凍結乾燥されかつ－２０℃で保管されたフラクトマーサンプルは、精確なＴt-加熱またはＴt-冷却相転移のシフトを経時的に示さず（図４Ａ）、他の２種の条件下で保管されたサンプルは、同様の結果を示した。付加的に、標的フラクトマータンパク質バンドの喪失またはシフトは、どの時点においてもＳＤＳ－ＰＡＧＥによって観察されず、短縮／分解産物、不純物、または他の付加的なバンドは観察されなかった（図４Ｂ）。
【0078】
（実施例３）
フラクトマーは、健常な脂肪細胞をカプセル化し得、形状および突出を向上させ得る
廃棄されたヒト吸引脂肪組織を、種々のフラクトマー濃度と混合し、共焦点顕微鏡法および組織学を使用して分析した（図５Ａ～Ｃ）。すべての場合において、吸引脂肪組織は、脂肪吸引カニューラを通過するのに十分に小さなフラグメントである、５０～５００個細胞の群に塊になった＞９０％の大きな脂肪細胞から構成された。２５０μＭ～１ｍＭに及ぶフラクトマー濃度を吸引脂肪組織と１：１比で室温にて混合し、次いで３７℃のインキュベーターに３０分間置き、その後、（ａ）染色、および共焦点顕微鏡法を使用したイメージング、または（ｂ）１０％ホルマリン中での一晩の固定、それに続く組織学的分析のためのパラフィン包埋およびＨ＆Ｅ染色。
フラクトマーは、健常な脂肪細胞をカプセル化し得、形状および突出を向上させ得る
廃棄されたヒト吸引脂肪組織を、種々のフラクトマー濃度と混合し、共焦点顕微鏡法および組織学を使用して分析した（図５Ａ～Ｃ）。すべての場合において、吸引脂肪組織は、脂肪吸引カニューラを通過するのに十分に小さなフラグメントである、５０～５００個細胞の群に塊になった＞９０％の大きな脂肪細胞から構成された。２５０μＭ～１ｍＭに及ぶフラクトマー濃度を吸引脂肪組織と１：１比で室温にて混合し、次いで３７℃のインキュベーターに３０分間置き、その後、（ａ）染色、および共焦点顕微鏡法を使用したイメージング、または（ｂ）１０％ホルマリン中での一晩の固定、それに続く組織学的分析のためのパラフィン包埋およびＨ＆Ｅ染色。
【0079】
図５Ａは、吸引脂肪組織：フラクトマー（配列番号１２）混合物についての共焦点顕微鏡法分析を示している。吸引脂肪組織を、１：１の比で種々のフラクトマー濃度（低＝２５０μＭ、高＝７５０μＭ）と混合し、ＬｉｐｉｄＴＯＸ（赤色、フラクトマーも染色する）およびＤＡＰＩ（青色）で染色した。イメージングは、脂肪細胞の構造または生存率の変化を示さなかった。フラクトマーは、個々の脂肪細胞の間の小さな間隙に観察されたものの、フラクトマーは、主として、脂肪細胞の塊を結び付ける高度に多孔質の「のり」の１タイプとして機能する。
図５Ｂ～Ｃは、吸引脂肪組織：フラクトマー（配列番号１８）の１：１比の混合物と比較した、脂肪単独についての組織学的分析を示している。吸引脂肪組織単独、およびフラクトマー（２５０μＭ）と混合された吸引脂肪組織を固定し、Ｈ＆Ｅで染色した。フラクトマーは、より濃縮された脂肪細胞のエリアの間に散在して見られ得る。
図５Ｂ～Ｃは、吸引脂肪組織：フラクトマー（配列番号１８）の１：１比の混合物と比較した、脂肪単独についての組織学的分析を示している。吸引脂肪組織単独、およびフラクトマー（２５０μＭ）と混合された吸引脂肪組織を固定し、Ｈ＆Ｅで染色した。フラクトマーは、より濃縮された脂肪細胞のエリアの間に散在して見られ得る。
【0080】
（実施例４）
フラクトマー単独および脂肪＋フラクトマーを使用して３Ｄの型を創出する
脂肪と共注射された場合に形状および突出を維持するフラクトマーの能力も、３Ｄプリントされた半球状の型を使用して評価した。フラクトマー（配列番号１２）を液体状態で型に注射し、型からの取り出しの前に、３７℃で５分間凝集させた（図６Ａ）。２００μＭ～２ｍＭに及ぶ濃度のフラクトマー単独（配列番号１２）を使用した場合、突出維持がスケーリングされ、約５００μＭの最小濃度が、形状を保護するために必要とされた（図６Ｂ）。図６Ｂは、低（５００μＭ）、中（７５０μＭ）、および高（２ｍＭ）濃度のフラクトマー単独を成型することが、増加する濃度とともに形状保護の増加を示すことを実証している。フラクトマー溶液（７５０μＭ）（配列番号１２）を様々な比でヒト吸引脂肪組織とさらに混合して、脂肪形状安定性に対するその効果を決定した（図６Ｃ）。フラクトマーは、単独では単に油性液体として挙動するにすぎない吸引脂肪組織の形状保護を著しく向上させ得た（図６Ｃ）。フラクトマー溶液（７５０μＭ）（配列番号１８）を、３Ｄプリントされた型において、脂肪吸引された豚脂肪と１：１比で混合し、３７℃に置いてフラクトマーを凝集させた場合に、等価の結果が観察された（図６Ｄ）。これらの結果は、脂肪をフラクトマーと混合した場合の驚くべきかつ予想外の相補的な機械的相互作用を示唆する。
フラクトマー単独および脂肪＋フラクトマーを使用して３Ｄの型を創出する
脂肪と共注射された場合に形状および突出を維持するフラクトマーの能力も、３Ｄプリントされた半球状の型を使用して評価した。フラクトマー（配列番号１２）を液体状態で型に注射し、型からの取り出しの前に、３７℃で５分間凝集させた（図６Ａ）。２００μＭ～２ｍＭに及ぶ濃度のフラクトマー単独（配列番号１２）を使用した場合、突出維持がスケーリングされ、約５００μＭの最小濃度が、形状を保護するために必要とされた（図６Ｂ）。図６Ｂは、低（５００μＭ）、中（７５０μＭ）、および高（２ｍＭ）濃度のフラクトマー単独を成型することが、増加する濃度とともに形状保護の増加を示すことを実証している。フラクトマー溶液（７５０μＭ）（配列番号１２）を様々な比でヒト吸引脂肪組織とさらに混合して、脂肪形状安定性に対するその効果を決定した（図６Ｃ）。フラクトマーは、単独では単に油性液体として挙動するにすぎない吸引脂肪組織の形状保護を著しく向上させ得た（図６Ｃ）。フラクトマー溶液（７５０μＭ）（配列番号１８）を、３Ｄプリントされた型において、脂肪吸引された豚脂肪と１：１比で混合し、３７℃に置いてフラクトマーを凝集させた場合に、等価の結果が観察された（図６Ｄ）。これらの結果は、脂肪をフラクトマーと混合した場合の驚くべきかつ予想外の相補的な機械的相互作用を示唆する。
【0081】
全体として、吸引脂肪組織とフラクトマーとの混合物は、型からの取り外し後に、形状保持を向上させることが見出された。最も驚くべきかつ予想外の発見は、脂肪＋フラクトマー混合物の成形可能性であった。形成した後でさえ、カプセル化された脂肪は、構造的完全性の喪失なく、成型され得、成形され得、切断され得、かつ概して操作され得る。この材料をインビボで所望の形状に操作する能力は、患者における欠陥を埋めかつ再構築するために吸引脂肪組織を使用する外科医に、先例がない量の制御を提供する。
【0082】
（実施例５）
フラクトマーの形状は注射時に制御され得る
フラクトマー注射物の形状は、注射物のパターンに基づいても制御され得る。蛍光標識されたフラクトマー溶液（７５０μＭ）（配列番号１２）を、３種の異なる形状パターンでマウスの後部脇腹に注射し、注射後１カ月および４カ月の時点で、形状をＩＶＩＳスペクトルイメージングを使用してモニターした。球体、細長い棒、および分散した点という３種すべての形状に関して、注射物は、注射物の存続期間を通じてそれらの所望の形状を維持した（図７）。
フラクトマーの形状は注射時に制御され得る
フラクトマー注射物の形状は、注射物のパターンに基づいても制御され得る。蛍光標識されたフラクトマー溶液（７５０μＭ）（配列番号１２）を、３種の異なる形状パターンでマウスの後部脇腹に注射し、注射後１カ月および４カ月の時点で、形状をＩＶＩＳスペクトルイメージングを使用してモニターした。球体、細長い棒、および分散した点という３種すべての形状に関して、注射物は、注射物の存続期間を通じてそれらの所望の形状を維持した（図７）。
【0083】
（実施例６）
フラクトマーは長期安定性を示し、その分解は濃度で制御可能である
脂肪移植を増強するために使用される場合、フラクトマーは、脂肪増殖と同調するスケジュールで分解しかつ再吸収するように設計されるべきであり、脂肪細胞がフラクトマー容積部を、それが非毒性のアミノ酸に壊れていくにつれて置き換えることを可能にする。フラクトマーは永続的な埋め込みであることを意図されないことから、完全に患者自身の組織から構成される組織移植片を最終的にもたらす制御された分解は、異物反応の長期リスクを回避する。
フラクトマーは長期安定性を示し、その分解は濃度で制御可能である
脂肪移植を増強するために使用される場合、フラクトマーは、脂肪増殖と同調するスケジュールで分解しかつ再吸収するように設計されるべきであり、脂肪細胞がフラクトマー容積部を、それが非毒性のアミノ酸に壊れていくにつれて置き換えることを可能にする。フラクトマーは永続的な埋め込みであることを意図されないことから、完全に患者自身の組織から構成される組織移植片を最終的にもたらす制御された分解は、異物反応の長期リスクを回避する。
【0084】
フラクトマーの長期安定性を評価するために、フラクトマー（配列番号１２）の種々の製剤を近赤外色素で蛍光標識し、免疫能力のあるＢＬ／６マウスに注射した。ＢＬ／６マウスの使用は、免疫調節性の分解を、存在する場合には捕捉するであろうことを確保した。その後、フラクトマータンパク質の分解の速度およびインビボ安定性を、ＩＶＩＳスペクトルインビボイメージングを使用して１０カ月間にわたって追跡した。６カ月の時点における蛍光保持のスナップ写真は、蛍光強度が、低濃度と比較して中および高濃度のフラクトマーに関して有意に高かったことから、フラクトマー分解が濃度（低＝２５０μＭ、中＝７５０μＭ、高＝１５００μＭ）で制御され得ることを実証している（図８Ａ）。種々のフラクトマー濃度製剤を注射されたＢＬ／６マウスにおける代表的な蛍光分光法画像は図８Ｂに示されている。
フラクトマー（２５０μＭ）の低濃度製剤の使用は、３カ月終わりまで再吸収され続けた（図８Ｃ）。フラクトマーの存在は、蛍光スキャンにおいて明白であったものの、目に見えるまたは触知可能な容積部は明白ではなかった（図８Ｃ）。フラクトマーの中（７５０μＭ）および高（１５００μＭ）濃度製剤は、より長いインビボ持続性を有してより安定であることが見出された（図８Ｃ）。
フラクトマー（２５０μＭ）の低濃度製剤の使用は、３カ月終わりまで再吸収され続けた（図８Ｃ）。フラクトマーの存在は、蛍光スキャンにおいて明白であったものの、目に見えるまたは触知可能な容積部は明白ではなかった（図８Ｃ）。フラクトマーの中（７５０μＭ）および高（１５００μＭ）濃度製剤は、より長いインビボ持続性を有してより安定であることが見出された（図８Ｃ）。
【0085】
（実施例７）
フラクトマーは脂肪生存性および容積保持を向上させる
フラクトマー（配列番号１２）の低濃度（２５０μＭ）溶液を使用して、脂肪：フラクトマー比を最初にスクリーニングして、移植片において脂肪を低下させる効果を決定した。脂肪単独（１００％脂肪）、９０容積％の脂肪＋フラクトマー溶液、７５容積％の脂肪＋フラクトマー溶液、５０容積％の脂肪＋フラクトマー溶液、および５０容積％の脂肪＋ＰＢＳ対照、の注射混合物をｎｕ／ｎｕマウス系統において６週間にわたって評価した。ヒト脂肪組織の拒絶を阻止するために、ｎｕ／ｎｕマウスを選択した。ｎｕ／ｎｕマウスへの注射のために実験群において使用された種々の脂肪：フラクトマー溶液（２５０μＭ）混合物の例となる図式が図９Ａに示されている。
フラクトマーは脂肪生存性および容積保持を向上させる
フラクトマー（配列番号１２）の低濃度（２５０μＭ）溶液を使用して、脂肪：フラクトマー比を最初にスクリーニングして、移植片において脂肪を低下させる効果を決定した。脂肪単独（１００％脂肪）、９０容積％の脂肪＋フラクトマー溶液、７５容積％の脂肪＋フラクトマー溶液、５０容積％の脂肪＋フラクトマー溶液、および５０容積％の脂肪＋ＰＢＳ対照、の注射混合物をｎｕ／ｎｕマウス系統において６週間にわたって評価した。ヒト脂肪組織の拒絶を阻止するために、ｎｕ／ｎｕマウスを選択した。ｎｕ／ｎｕマウスへの注射のために実験群において使用された種々の脂肪：フラクトマー溶液（２５０μＭ）混合物の例となる図式が図９Ａに示されている。
【0086】
注射後、５０容積％の脂肪＋ＰＢＳ対照群に関して、最初の２４時間以内に最大の容積喪失が観察された（図９Ｂ）。これは、診療所においてよく見られる、手術室における脂肪精製工程の間に取り除かれなかった脂肪混合物における残余の油の存在に起因する可能性があった。脂肪移植片は、種々の比のフラクトマーマトリックスと混合された場合、１週間にわたる容積保持の向上を示した（図９Ｂ～Ｃ）。注射後６週間の時点で、少なくとも５０％弱の脂肪組織を使用して、脂肪単独と同じ最終容積を達成し得た（図９Ｄ）。安定化フラクトマーマトリックスの内包なしで、低下した脂肪量（５０容積％の脂肪）を使用した場合、容積保持は有意に低かった（図９Ｄ）。
脂肪容積保持向上をさらに調べるために、より高い濃度（７５０μＭ）のフラクトマーを使用し、観察時間を延長した（図９Ｅ）。５０容積％の脂肪＋フラクトマー溶液の注射を、脂肪単独注射と３カ月間にわたって比較し、その時点で、脂肪単独対照群における有害な嚢胞形成に起因して実験を中止した。フラクトマーのこのより高い濃度製剤の使用は、より高い容積保持を示した（図９Ｅ）。注射された初回脂肪の量に対して正規化すると、脂肪とフラクトマーとを組み合わせることによって、３カ月の時点における移植された脂肪の有効容積は３倍になった（図９Ｆ）。
脂肪容積保持向上をさらに調べるために、より高い濃度（７５０μＭ）のフラクトマーを使用し、観察時間を延長した（図９Ｅ）。５０容積％の脂肪＋フラクトマー溶液の注射を、脂肪単独注射と３カ月間にわたって比較し、その時点で、脂肪単独対照群における有害な嚢胞形成に起因して実験を中止した。フラクトマーのこのより高い濃度製剤の使用は、より高い容積保持を示した（図９Ｅ）。注射された初回脂肪の量に対して正規化すると、脂肪とフラクトマーとを組み合わせることによって、３カ月の時点における移植された脂肪の有効容積は３倍になった（図９Ｆ）。
【0087】
埋め込み物についての組織学的分析は、血管系供給が、脂肪単独から作製された移植片と比較して、フラクトマー（２５０μＭ）とともに作製された脂肪移植片内で高いことを明らかにした（図１０Ａ）。脂肪細胞の群の間の支持的フラクトマー区域においてＣＤ３１＋血管系マーカーの高い普及が観察された（図１０Ａ、小さな赤色の矢印）。ＣＤ３１＋染色は、生存する脂肪細胞群および移植片のフラクトマーの多い区域の両方において、血管形成の高い普及を明らかにし、フラクトマーが、埋め込まれた脂肪の生存を向上させ得る可能性があることを示唆する。
【0088】
脂肪単独と１：１の脂肪：フラクトマー（２５０μＭ）混合物との間の、注射後１カ月の時点における脂肪分布についての組織学的比較は、脂肪＋フラクトマー実験群において使用される５０容積％弱の脂肪にもかかわらず、移植片細胞組成の差を示さなかった（図１０Ｂ）。これは、脂肪：フラクトマー移植片の良好な組み入れを示し、脂肪増殖がフラクトマーマトリックス内で高レベルで生じている可能性があることを示唆する。さらに、残余のフラクトマーの証拠が、異物反応なしで注射後３０日目に観察され、それは慢性炎症を暗示するであろう（図１０Ｃ）。インビトロ混合物からの組織学的結果と同様に、新しいＥＣＭ、細胞浸潤物、および血管新生は形成するのに時間を取られるものの、フラクトマーは、脂肪細胞群の間で容積を維持する「のり」タンパク質の１タイプとして持続するように見える。
【0089】
（実施例８）
脂肪単独注射における嚢胞形成および壊死は、脂肪＋フラクトマー混合物においては観察されない
脂肪組織の有効容積を増加させることは、フラクトマーを使用する場合の成功の主要な測定基準であるが、その増加した脂肪容積の正確な生物学的組成は等しく重要である。例えば、嚢胞形成、石灰化、および壊死の回避は、健常な脂肪組織の発達に非常に重要である。健常な脂肪形成におけるこれらの異常の証拠を、超音波、組織学、およびマイクロ－ＣＴの組み合わせを使用することによってスクリーニングした。脂肪移植片の超音波を、脂肪単独、または吸引脂肪組織とフラクトマー溶液（７５０μＭ）（配列番号１２）との１：１混合物を注射されたマウスにおいて３カ月間にわたって捕捉した（図１１Ａ）。脂肪壊死の主要なマーカーである大きな油嚢胞の形成が、脂肪単独群の移植片において、注射後１カ月および３カ月の時点で観察され（図１１Ａ、上の行のパネル、白い矢印）、一方で、脂肪＋フラクトマー溶液を注射されたどのマウスに関しても嚢胞形成は観察されなかった（図１１Ａ、下の行のパネル）。これらの嚢胞は、脂肪単独を注射されたマウスの＞５０％において１カ月までに観察された。付加的に、これらの嚢胞は、３カ月間の時間経過を通じて容積が拡張することが見出され、数匹のマウスにおいて、嚢胞は、注射物全体の容積を独占した。さらに、３カ月の時点における、脂肪単独、および１：１の脂肪：フラクトマー溶液（７５０μＭ）移植片の細胞組成についての組織学的比較は、脂肪単独群における大きな油嚢胞形成の明確な証拠を示している（図１１Ｂ、左のパネル）。しかしながら、組織学的分析によってどのフラクトマー移植片においても嚢胞形成は観察されなかった（図１１ｂ、右のパネル）。目立ったことには、より高い濃度のフラクトマー溶液（７５０μＭ）ほど、３カ月の時点でフラクトマーのより高い保持につながり、フラクトマーは脂肪細胞を支持すると見られ得る。これらの結果は、より高い濃度のフラクトマーを使用した再吸収調査からのデータと符号している。
脂肪単独注射における嚢胞形成および壊死は、脂肪＋フラクトマー混合物においては観察されない
脂肪組織の有効容積を増加させることは、フラクトマーを使用する場合の成功の主要な測定基準であるが、その増加した脂肪容積の正確な生物学的組成は等しく重要である。例えば、嚢胞形成、石灰化、および壊死の回避は、健常な脂肪組織の発達に非常に重要である。健常な脂肪形成におけるこれらの異常の証拠を、超音波、組織学、およびマイクロ－ＣＴの組み合わせを使用することによってスクリーニングした。脂肪移植片の超音波を、脂肪単独、または吸引脂肪組織とフラクトマー溶液（７５０μＭ）（配列番号１２）との１：１混合物を注射されたマウスにおいて３カ月間にわたって捕捉した（図１１Ａ）。脂肪壊死の主要なマーカーである大きな油嚢胞の形成が、脂肪単独群の移植片において、注射後１カ月および３カ月の時点で観察され（図１１Ａ、上の行のパネル、白い矢印）、一方で、脂肪＋フラクトマー溶液を注射されたどのマウスに関しても嚢胞形成は観察されなかった（図１１Ａ、下の行のパネル）。これらの嚢胞は、脂肪単独を注射されたマウスの＞５０％において１カ月までに観察された。付加的に、これらの嚢胞は、３カ月間の時間経過を通じて容積が拡張することが見出され、数匹のマウスにおいて、嚢胞は、注射物全体の容積を独占した。さらに、３カ月の時点における、脂肪単独、および１：１の脂肪：フラクトマー溶液（７５０μＭ）移植片の細胞組成についての組織学的比較は、脂肪単独群における大きな油嚢胞形成の明確な証拠を示している（図１１Ｂ、左のパネル）。しかしながら、組織学的分析によってどのフラクトマー移植片においても嚢胞形成は観察されなかった（図１１ｂ、右のパネル）。目立ったことには、より高い濃度のフラクトマー溶液（７５０μＭ）ほど、３カ月の時点でフラクトマーのより高い保持につながり、フラクトマーは脂肪細胞を支持すると見られ得る。これらの結果は、より高い濃度のフラクトマーを使用した再吸収調査からのデータと符号している。
【0090】
脂肪単独群における嚢胞の形成は、ヒトにおける脂肪壊死の臨床観察と符号している。５０容積％の脂肪＋フラクトマー溶液の注射物は、脂肪細胞と残余のフラクトマーとの不均一な混合物であり、造影ＣＴ下で血管新生のはっきりとした兆候を有する（脂肪単独では見られない）。さらに、マウスにおいて点状の白い印として出現するであろう石灰化は、脂肪＋フラクトマー移植片において観察されなかった。フラクトマーを用いた移植片の健常性の向上は、使用される脂肪組織の量の低下によるものである可能性があり得、それはより少ない初回代謝要求を要する。付加的に、フラクトマーの多孔質の性質および迅速な血管新生は、脂肪細胞生存および成長のための栄養素を急速に提供し得る。
【0091】
（実施例９）
自家脂肪移植の豚モデルにおけるフラクトマー
齧歯類モデルは主要な変数の最適化に十分であるが、小動物は皮下脂肪組織をほとんど所有せず、それらの軟組織構造はヒトと解剖学的に異なる。加えて、ヌードマウスは免疫不全であり、ヒト細胞を許容し得るものの、ヒト脂肪の使用は、身体反応および注射物の使用可能な容積の両方において、自家移植からの重要な差異である。それゆえ、ミニブタモデルにおける長期フラクトマー増進脂肪移植がさらに評価されるであろう。この提案される実験は、フラクトマーが、自家脂肪移植の認められた豚モデルにおいて、容積を拡張させ得、臨床的に関連する容積で健常な脂肪組織を創出し得ることを実証するであろう。
自家脂肪移植の豚モデルにおけるフラクトマー
齧歯類モデルは主要な変数の最適化に十分であるが、小動物は皮下脂肪組織をほとんど所有せず、それらの軟組織構造はヒトと解剖学的に異なる。加えて、ヌードマウスは免疫不全であり、ヒト細胞を許容し得るものの、ヒト脂肪の使用は、身体反応および注射物の使用可能な容積の両方において、自家移植からの重要な差異である。それゆえ、ミニブタモデルにおける長期フラクトマー増進脂肪移植がさらに評価されるであろう。この提案される実験は、フラクトマーが、自家脂肪移植の認められた豚モデルにおいて、容積を拡張させ得、臨床的に関連する容積で健常な脂肪組織を創出し得ることを実証するであろう。
【0092】
ミニブタは麻酔され、脊椎に３～４ｃｍ隣接した背部高くに小さな正中切開がもたらされるであろう。皮下脂肪蓄積は、４ｍｍカニューラを用いて電動アシスト式脂肪吸引を使用して吸引されるであろう。目標は、およそ５０ｃｍ3の脂肪組織を収集することである。必要な場合には、後部脇腹近くの脂肪吸引を可能にするために、付加的な切開がもたらされるであろう。脂肪は、移植のためのヒト脂肪を調製するために使用されるＲｅｖｏｖｌｅ（商標）システムを使用して洗浄されかつ処理されるであろう。次いで、吸引脂肪組織は、それぞれ約２５ｃｍ3容積の４種の異なる注射製剤混合物に分けられ、それは、乳房再建形状のための外科的修正および小さな乳腺腫瘤摘出術に臨床的に使用される可能性があるであろう：１００容積％の吸引脂肪組織（脂肪単独）、５０容積％の吸引脂肪組織＋フラクトマー溶液、２５容積％の吸引脂肪組織＋フラクトマー溶液、またはフラクトマー単独。各２５ｃｍ3混合物は、乳房脂肪における固有の部位に注射されるであろう。これらの群は、非乳房適用におけるフラクトマーの使用を模倣するために、ブタの脇腹に沿って約３ｍＬの注射物を用いて重複して行われるであろう。この仕事の非常に重要な構成要素は、診療所を模倣する環境におけるフラクトマーの「使用しやすい」分析であると考えられ、既存の外科的実践との両立性を確保する、最終産物送達技法のタイプについての洞察を可能にする。次いで、ブタは回復し、収容され、モニターされる。
【0093】
目標は、フラクトマーを用いて安定化された脂肪移植片の容積保持、およびその容積の細胞健康状態／組成を決定することである。自家脂肪移植片に関する臨床的な脂肪容積保持は、埋め込みの技法に応じて、６カ月の時点で３０～６０％であることが報告されており、同様の保持がミニブタモデルにおいて見られている。フラクトマーと組み合わされた脂肪の容積は、初回注射液の継続的生存能力、ならびに注射された脂肪細胞の増殖または肥大により長期間維持されるであろう。脂肪がフラクトマーマトリックスに希釈された場合、注射液の単位容積あたりの酸素および他の栄養素の消費は、純粋な脂肪よりも低いであろうため、これは合理的期待である。単位容積あたりの消費が低いほど、拡散が、注射された脂肪細胞に対して要される栄養性滋養を充分に送達するであろう可能性を増加させるであろう。これらの成果は、３Ｄ超音波および定期的生検の組み合わせを使用して評価されているところである。イメージングは、移植片による嚢胞形成の可能性の決定を可能にするであろう。１０、６０、および１８０日目に、細胞組成、線維症、新血管形成、壊死、および慢性炎症についての組織学的検討のために、組織は、針生検を使用して抽出されるであろう（または１８０日目に全切除）。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図9D】
【図9E】
【図9F】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図11A】
【図11B】
【配列表】
【国際調査報告】