特表 2023-529640 治療用コンジュゲート

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-11

(54)【発明の名称】治療用コンジュゲート

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/60 20170101AFI20230704BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20230704BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230704BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230704BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230704BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230704BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230704BHJP

   A61K 51/10 20060101ALI20230704BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230704BHJP

【ＦＩ】

A61K47/60 ZNA

A61K47/64

A61K47/68

A61K39/395 L

A61K39/395 C

A61K39/395 T

A61P35/00

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K51/10 200

A61K51/10

C07K16/28

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022574600

(86)(22)【出願日】2021-06-03

(85)【翻訳文提出日】2023-02-02

(86)【国際出願番号】 AU2021050554

(87)【国際公開番号】W WO2021243415

(87)【国際公開日】2021-12-09

(31)【優先権主張番号】2020901833

(32)【優先日】2020-06-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】521014984

【氏名又は名称】スターファーマ ピーティーワイ エルティーディー

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100181168

【弁理士】

【氏名又は名称】丸山 智裕

(72)【発明者】

【氏名】シェングル，スディール ラムナトラオ

(72)【発明者】

【氏名】オーウェン，デビッド

(72)【発明者】

【氏名】ハフトン，リチャード

(72)【発明者】

【氏名】テュレヒト，クリス

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC27

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF68

4C084AA12

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZC751

4C085AA25

4C085BB11

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC21

4C085EE01

4C085EE03

4C085HH03

4C085KA03

4C085KA07

4C085KA29

4C085KB07

4C085KB12

4C085KB15

4C085KB82

4C085LL18

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA50

4H045BA57

4H045BA71

4H045CA40

4H045DA75

4H045EA20

(57)【要約】

デンドリマー－標的化剤コンジュゲートであって、（ａ）デンドリマーであって、ｉ）コアユニット（Ｃ）、及びｉｉ）構成ユニット（ＢＵ）を含み、デンドリマーが、２～６世代の構成ユニットを有し、コアユニットが、少なくとも２つの構成ユニットに共有結合により付着している、デンドリマーを含み、当該デンドリマーが、ｂ）スペーサー基によりデンドリマーに共有結合により連結している、標的化剤と、ｃ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第１の末端基であって、第１の末端基が、放射性核種を錯体化するための錯体化基を含む、第１の末端基と、ｄ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第２の末端基であって、第２の末端基が、薬物動態修飾部分を含む、第２の末端基と、を更に含む、デンドリマー－標的化剤コンジュゲート又はその塩が本明細書に提供される。また、デンドリマー－標的化剤コンジュゲートを含む組成物、並びに治療用途及び画像化用途においてデンドリマー－標的化剤コンジュゲート及びそれらを含む組成物を使用する方法を提供する。
【選択図】図７

【特許請求の範囲】

【請求項1】

デンドリマー－標的化剤コンジュゲートであって、
ａ）デンドリマーであって
ｉ）コアユニット（Ｃ）、及び
ｉｉ）構成ユニット（ＢＵ）を含み、
前記デンドリマーが、２～６世代の構成ユニットを有し、
前記コアユニットが、少なくとも２つの構成ユニットに共有結合により付着している、デンドリマーと、
ｂ）スペーサー基により前記デンドリマーに共有結合により連結している、標的化剤と、
ｃ）前記デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第１の末端基であって、前記第１の末端基が、放射性核種を錯体化するための錯体化基を含む、第１の末端基と、
ｄ）前記デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第２の末端基であって、前記第２の末端基が、薬物動態修飾部分を含む、第２の末端基と、を含む、コンジュゲート
又はその塩。

【請求項2】

前記標的化剤が、最大約１５０ｋＤａ、又は最大約１１０ＫＤａ、又は最大約８０ＫＤａ、又は最大約５５ＫＤａ、又は最大約１６ｋＤａの分子量を有し、抗原結合部位を含むペプチド部分である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項3】

前記標的化剤が、最大約８０ｋＤａの分子量を有し、抗原結合部位を含むペプチド部分である、請求項２に記載のコンジュゲート。

【請求項4】

前記標的化剤が、抗体、重鎖抗体、ＳｃＦＶ－Ｆｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又は単一ドメイン抗体から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項5】

前記標的化剤が、重鎖可変（Ｖ_Ｈ）ドメインを含むか、又はそれからなる、請求項１～４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項6】

前記標的化剤が、軽鎖可変（Ｖ_Ｌ）ドメインを含むか、又はそれからなる、請求項１～５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項7】

前記標的化剤が、約５ｋＤａ～約３０ｋＤａの分子量を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項8】

前記標的化剤が、約３ｋＤａ～約２０ｋＤａの分子量を有する、請求項７に記載のコンジュゲート。

【請求項9】

前記標的化剤が、１２０未満のアミノ酸残基を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項10】

前記標的化剤が、ＨＥＲ２標的化剤である、請求項１～９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項11】

前記標的化剤が、ＨＥＲ２ナノボディである、請求項１０に記載のコンジュゲート。

【請求項12】

前記標的化剤が、本明細書に記載の標的化剤アミノ酸配列のいずれかを含むか、又はそれらからなる、請求項１～１１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項13】

前記標的化剤が、小分子である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項14】

前記標的化剤が、ＰＳＭＡと結合する小分子である、請求項１３に記載のコンジュゲート。

【請求項15】

前記標的化剤が、ＤＵＰＡ類似体である、請求項１４に記載のコンジュゲート。

【請求項16】

前記標的化剤が、ＦＡＰ結合基である、請求項１３に記載のコンジュゲート。

【請求項17】

前記標的化剤と前記スペーサー基との間の共有結合による連結が、前記標的化剤を含む中間体及び前記デンドリマーを含む中間体上に存在する相補的反応性官能基間の反応によって形成されている、請求項１～１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項18】

前記標的化剤を含む前記中間体が、非天然アミノ酸残基を含み、前記非天然アミノ酸残基が、反応性官能基を含む側鎖を有する、請求項１７に記載のコンジュゲート。

【請求項19】

前記非天然アミノ酸残基が、４－アジドフェニルアラニン残基である、請求項１８に記載のコンジュゲート。

【請求項20】

前記標的化剤を含む前記中間体が、反応性システイン残基を含む、請求項１７に記載のコンジュゲート。

【請求項21】

前記スペーサー基が、ＰＥＧ基を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項22】

前記標的化剤が、前記標的化剤のＣ末端で、又はその近傍で、前記スペーサー基に共有結合により連結している、請求項１～２１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項23】

前記デンドリマーを含む前記中間体が、アルキン基である反応性官能基を含む、請求項１８又は１９に記載のコンジュゲート。

【請求項24】

前記アルキン基が、ジベンゾシクロオクチン基である、請求項２３に記載のコンジュゲート。

【請求項25】

前記第１の末端基が、錯体化基と錯体化した放射性核種を更に含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項26】

前記錯体化基が、ＤＯＴＡ、ベンジル－ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＤＴＰＡ、サルコファジン、マクロパ、ＤＦＯ、ＰＥＰＡ、又はＥＤＴＡ基である、請求項１～２５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項27】

放射性核種含有部分中の前記放射性核種が、ルテチウム、ガリウム、ジルコニウム、アクチニウム、ビスマス、アスタチン、テクネチウム、鉛、イットリウム、又は銅放射性核種である、請求項１～２６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項28】

前記放射性核種が、ガリウム、ジルコニウム、鉛、又はルテチウム放射性核種である、請求項２７に記載のコンジュゲート。

【請求項29】

前記放射性核種が、α放射体である、請求項１～２８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項30】

前記放射性核種が、β放射体である、請求項１～２８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項31】

前記薬物動態修飾部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基、又はポリエチルオキサゾリン（ＰＥＯＸ）基、又はポリ－（２）メチル－（２）－オキサゾールアミン（ＰＯＺ）、又はポリサルコシン、又はポリ（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ｐＨＰＭＡ）基である、請求項１～３０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項32】

前記薬物動態修飾部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基である、請求項３１に記載のコンジュゲート。

【請求項33】

前記薬物動態修飾部分が、４００～２４００ダルトンの範囲の平均分子量を有する、請求項３１に記載のコンジュゲート。

【請求項34】

前記デンドリマーが、２～５世代の構成ユニットを有する、請求項１～３３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項35】

前記コアユニットが、

【化1】

を含むか、又はそれらから選択される、請求項１～３４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項36】

前記構成ユニットが、リジン残基又はそれらの類似体である、請求項１～３５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項37】

前記構成ユニットが、それぞれ、

【化2】

である、請求項１～３６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項38】

前記コンジュゲートが、例示コンジュゲートのいずれかである、請求項１～３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項39】

請求項１～３８のいずれか一項に記載の複数のコンジュゲートを含む組成物。

【請求項40】

薬学的組成物であって、
ｉ）請求項１～３８のいずれか一項に記載のコンジュゲートと、
ｉｉ）薬剤的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。

【請求項41】

療法若しくは画像化において使用するための、請求項１～３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート、又は請求項４０に記載の薬学的組成物。

【請求項42】

がんの治療に使用するための、請求項１～３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート、又は請求項４０に記載の薬学的組成物。

【請求項43】

がんの治療のための医薬品の製造における、請求項１～３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート、又は請求項３９に記載の組成物、又は請求項４０に記載の薬学的組成物の、使用。

【請求項44】

対象におけるがんを治療する方法であって、治療有効量の請求項１～３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート、又は請求項３９に記載の組成物、又は請求項４０に記載の薬学的組成物を、前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項45】

前記がんが、前立腺がん、膵臓がん、胃腸がん、肺がん、乳がん、又は脳がんである、請求項４１～４４のいずれか一項に記載の方法、使用、又は使用のためのコンジュゲート若しくは組成物。

【請求項46】

前記コンジュゲートが、更なる活性剤と組み合わせて投与される、請求項４１～４５のいずれか一項に記載の方法、使用、又は使用のためのコンジュゲート若しくは組成物。

【請求項47】

請求項１～３８のいずれか一項に記載の治療用コンジュゲートを生成するためのキットであって、
ａ）請求項１～２４、２６、及び３１～３８のいずれか一項に記載のコンジュゲートと、
ｂ）放射性核種と、を含む、キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、療法及び画像化（ｉｍａｇｉｎｇ）のための標的化剤－デンドリマーコンジュゲートに関する。コンジュゲートは、治療用途、例えば、腫瘍の治療に使用される。また、本開示は、コンジュゲートを含む薬学的組成物、及びコンジュゲートを用いた治療法に関する。

【背景技術】

【0002】

ＷＨＯによると、がんは世界の死因の第２位であり、２０１８年には推定９６０万人の死亡原因となっている。最も多いがんには、肺、乳房、結腸直腸、前立腺、皮膚、及び胃の組織に影響を及ぼすものが含まれる。

【0003】

新規かつ有効な腫瘍療法の研究開発に大きな努力がなされている。しかしながら、これまでのところ、現代のがん療法は、多くの一般的な種類のがんを有する患者の寿命の治療及び延長に部分的にしか成功していないことが証明されている。この限定された成功は、多くの原発性クラスの抗がん剤及び細胞傷害性技術に見られる相対的な特異性の欠如に大きく起因する。実際、今日利用可能な腫瘍療法の大部分は、制御不能な成長を示す任意の細胞を単に破壊するのみであるという前提で機能している。このように非特異的な細胞分裂に焦点を当てると、急速に分裂する非腫瘍性細胞（例えば、腸内に存在する細胞）を誤って損傷するという非選択的な処理が行われる。結果として、腫瘍療法の投与は、多くの場合、患者の健康な細胞に不可逆的な損傷をもたらし、結果として、患者の生活の質に有害な無数の副作用をもたらす。

【0004】

そのような非特異的腫瘍療法としては、放射性核種療法が挙げられる。放射性核種療法は、放射性核種で標識された分子を使用して、一部のがんを治療するために高レベルの放射線を腫瘍細胞に送達する全身治療である。この療法は、電離放射線を使用して、がん細胞を死滅させ、細胞のＤＮＡを損傷することによって腫瘍を縮小させ、それによってこれらの細胞の成長及び分裂の継続を妨げる。所望の部位に放射線療法を送達する既存の方法としては、Ｘｉｆｉｇｏ（Ｒａ２２３、Ｂａｙｅｒ）放射性ビーズ（ＳＩＲ－Ｓｐｈｅｒｅｓ（Ｙ－９０ Ｓｉｒｔｅｘ）など）などのミメティック、及び標的療法（Ｌｕｔａｔｈｅｒａ（ＡＡＡ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）など）が挙げられる。

【0005】

放射性核種は、がん細胞の成長及び拡散を減少させるのに有効であり得るが、患者の健康な組織も不用意に損傷され得る。放射性核種が有効であるように、標的部位（例えば、腫瘍細胞）で治療上適切なレベルを達成及び維持する安全な放射性核種療法を持続的な期間提供することには依然として大きな課題が残る。安全かつ長期間持続する放射性核種療法のこの課題は、放射性核種そのものの性質によって複合化され、これは、放射性核種に長期間曝露される健康な細胞（例えば、血液細胞及び免疫系の他の細胞）を不用意に損傷する。このような健康な細胞への望ましくない曝露は、しばしば、がん患者において耐えられない副作用として現れ、これにより、当該療法の有効性が更に制限される可能性がある。本質的に、少なくとも一部の放射性核種療法について、放射性核種療法の薬物動態／薬力学的特性及び／又は副作用プロファイルは、最適ではない。

【0006】

したがって、薬物動態／薬力学的特性により、放射性核種が、強力に、選択的に、長時間持続して、かつ全体的に制御されて送達され、その間中ずっと患者への副作用が低減される、安全かつ効果的な放射性核種療法を開発する必要性が依然として存在する。

【発明の概要】

【0007】

第１の態様では、デンドリマー－標的化剤コンジュゲートであって、
ａ）デンドリマーであって、
ｉ）コアユニット（Ｃ）、及び
ｉｉ）構成ユニット（ＢＵ）を含み、各構成ユニットが、リジン残基又はその類似体であり、
デンドリマーが、２～６世代の構成ユニットを有し、コアユニットが、少なくとも２つの構成ユニットに共有結合により付着している、デンドリマーと、
ｂ）スペーサー基によりデンドリマーに共有結合により連結している、標的化剤と、
ｃ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第１の末端基であって、第１の末端基が、放射性核種を錯体化するための錯体化基を含む、第１の末端基と、
ｄ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第２の末端基であって、第２の末端基が、薬物動態修飾部分を含む、第２の末端基と、を含む、コンジュゲート
又はその塩が提供される。

【0008】

第１の態様のデンドリマー－標的化剤コンジュゲートは、錯体化基と錯体化してデンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートを形成する放射性核種を有し得る。

【0009】

第１の態様では、デンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートであって、
ａ）デンドリマーであって、
ｉ）コアユニット（Ｃ）、及び
ｉｉ）構成ユニット（ＢＵ）を含み、各構成ユニットが、リジン残基又はその類似体であり、
デンドリマーが、２～６世代の構成ユニットを有し、コアユニットが、少なくとも２つの構成ユニットに共有結合により付着している、デンドリマーと、
ｂ）スペーサー基によりデンドリマーに共有結合により連結している、標的化剤と、
ｃ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第１の末端基であって、第１の末端基が、放射性核種と錯体化した錯体化基を含む、第１の末端基と、
ｄ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第２の末端基であって、第２の末端基が、薬物動態修飾部分を含む、第２の末端基と、を含む、コンジュゲート
又はその塩が提供される。

【0010】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、最大約１５０ｋＤａ、又は最大約１１０ＫＤａ、又は最大約８０ＫＤａ、又は最大約５５ＫＤａ、又は最大約２０ＫＤａ、又は最大約１６ｋＤａの分子量を有し、抗原結合部位を含むペプチド部分である。

【0011】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、最大約８０ｋＤａの分子量を有し、抗原結合部位を含むペプチド部分である。

【0012】

いくつかの実施形態では、標的化剤が、抗体、重鎖抗体、ＳｃＦＶ－Ｆｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又は単一ドメイン抗体から選択される。いくつかの実施形態では、標的化剤は、重鎖可変（Ｖ_Ｈ）ドメインを含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、標的化剤は、軽鎖可変（Ｖ_Ｌ）ドメインを含むか、又はそれからなる。

【0013】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、約５ｋＤａ～約３０ｋＤａの分子量を有する。いくつかの実施形態では、標的化剤は、約５ｋＤａ～約２０ｋＤａの分子量を有する。

【0014】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、１２０未満のアミノ酸残基を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、ＨＥＲ２標的化剤又はＥＧＦＲ標的化剤である。

【0016】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、本明細書で定義される標的化剤アミノ酸配列のいずれかを含むか、又はそれらからなる。

【0017】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、小分子である。

【0018】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、ＰＳＭＡと結合する小分子である。

【0019】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、ＤＵＰＡ類似体である。

【0020】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、ＦＡＰに結合するものである。

【0021】

いくつかの実施形態では、標的化剤とスペーサー基との間の共有結合による連結は、標的化剤を含む中間体及びデンドリマーを含む中間体上に存在する相補的反応性官能基間の反応によって形成されている。

【0022】

いくつかの実施形態では、標的化剤を含む中間体は、非天然アミノ酸残基を含み、非天然アミノ酸残基は、反応性官能基を含む側鎖を有する。いくつかの実施形態では、非天然アミノ酸残基は、４－アジドフェニルアラニン残基である。

【0023】

いくつかの実施形態では、スペーサー基は、ＰＥＧ基を含む。

【0024】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、ペプチド部分のＣ末端で、又はその近傍で、スペーサー基に共有結合により連結している。

【0025】

いくつかの実施形態では、デンドリマーを含む中間体は、アルキン基である反応性官能基を含む。いくつかの実施形態では、アルキン基は、ジベンゾシクロオクチン－アミン基である。

【0026】

いくつかの実施形態では、上述のように、第１の末端基は、放射性核種と錯体化した錯体化基を含む。これは、放射性核種錯体化部分を形成すると考えられ得る。いくつかの実施形態では、錯体化基は、ＤＯＴＡ、ベンジル－ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＤＴＰＡ、マクロパ、サルコファジン、ＤＦＯ、ＥＤＴＡ、又はＰＥＰＡ基である。

【0027】

いくつかの実施形態では、放射性核種錯体化部分中の放射性核種は、ルテチウム、ガドリニウム、ガリウム、ジルコニウム、アクチニウム、ビスマス、アスタチン、テクネチウム、鉛、イットリウム、又は銅放射性核種である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、ガドリニウム、ガリウム、ジルコニウム、鉛、又はルテチウム放射性核種である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、α放射体である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、β発光体である。

【0028】

いくつかの実施形態では、薬物動態修飾部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基、又はポリエチルオキサゾリン（ＰＥＯＸ）基、又はポリ－（２）メチル－（２）－オキサゾールアミン（ＰＯＺ）、若しくはポリ（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ｐＨＰＭＡ）基、又はポリサルコシンである。いくつかの実施形態では、薬物動態修飾部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基である。いくつかの実施形態では、薬物動態修飾部分は、４００～２４００ダルトン、又は４００～２２００ダルトン、又は４００～１４００ダルトンの範囲の平均分子量を有するＰＥＧ基である。

【0029】

いくつかの実施形態では、デンドリマーは４世代の構成ユニットを有する。いくつかの実施形態では、構成ユニットの世代は、完全な世代である。

【0030】

いくつかの実施形態では、コアユニットは、以下のものである。

【化1】

【0031】

いくつかの実施形態では、コアユニットは、以下の構造を含む。

【化2】

【0032】

いくつかの実施形態では、コアユニットは、以下のものである。

【化3】

【0033】

いくつかの実施形態では、構成ユニットは、リジン残基又はそれらの類似体である。いくつかの実施形態では、構成ユニットはそれぞれ、以下である。

【化4】

【0034】

いくつかの実施形態では、表面構成ユニット中に存在する１～３個の窒素原子は、第１の末端基に付着している。いくつかの実施形態では、表面構成ユニット中に存在する窒素原子の少なくとも３分の１は、第２の末端基に付着している。いくつかの実施形態では、表面構成ユニット中に存在する窒素原子の少なくとも３分の１は、第３の末端基に付着している。

【0035】

いくつかの実施形態では、デンドリマーは、アセチル基でキャップされた窒素原子を含有する表面構成ユニットを含む。

【0036】

いくつかの実施形態では、デンドリマーは、例示コンジュゲートのいずれかである。

【0037】

更なる態様では、本明細書で定義される複数のコンジュゲートを含む組成物が提供される。

【0038】

更なる態様では、薬学的組成物であって、
ｉ）本明細書に記載のコンジュゲートと、
ｉｉ）薬剤的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物が提供される。

【0039】

いくつかの実施形態では、コンジュゲート又は薬学的組成物は、療法において使用するためのものである。いくつかの実施形態では、コンジュゲート又は組成物は、がんの治療に使用するためのものである。このような治療的実施形態では、デンドリマー－標的化剤コンジュゲートは、このような治療を必要とする対象に分配されるデンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートとなるように、放射性核種と錯体化されていてもよい。本明細書における「コンジュゲート」又は「デンドリマーコンジュゲート」への言及は、デンドリマー－標的化剤コンジュゲート及びデンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートの両方を含み得る。

【0040】

更なる態様では、がんの治療のための医薬品の製造における、本明細書に記載のコンジュゲート又は薬学的組成物の使用が提供される。

【0041】

更なる態様では、対象のがんを治療する方法であって、治療有効量の本明細書で定義されるコンジュゲート又は薬学的組成物を、対象に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、がんは、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、又は脳がんである。いくつかの実施形態では、がんは、膠芽腫、髄膜腫、下垂体、神経鞘、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、髄芽腫、又は頭蓋咽頭腫の脳がんである。

【0042】

更なる態様では、コンジュゲートが、更なる活性剤と組み合わせて投与される、本明細書で定義される方法、使用、又は使用のためのコンジュゲート若しくは組成物が提供される。

【0043】

更なる態様では、本明細書で定義される治療用コンジュゲートを生成するためのキットであって、
ａ）本明細書で定義される第１の態様のコンジュゲートと、
ｂ）放射性核種と、を含む、キットが提供される。

【0044】

更なる態様では、本明細書に記載の治療用コンジュゲートを生成するためのプロセスであって、本明細書に定義される第１の態様のコンジュゲートを放射性核種と接触させ、それによって治療用コンジュゲートを生成することを含む、プロセスが提供される。

【図面の簡単な説明】

【0045】

【図1a】ＳＤＳＰＡＧＥ及び蛍光画像化によって可視化されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上のナノボディに連結した生成物デンドリマーの混合物を生成するデンドリマー－ナノボディコンジュゲーション反応（レーン反応混合物）を示す。ＳＤＳＰＡＧＥサイズマーカー（青色）は、おおよそのキロダルトン質量を表す。

【図1b】ＳＤＳＰＡＧＥ及び蛍光画像化によって可視化されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上のナノボディに連結した生成物デンドリマーの混合物を生成するデンドリマー－ナノボディコンジュゲーション反応（レーン反応混合物）を示す。ＳＤＳＰＡＧＥサイズマーカー（青色）は、おおよそのキロダルトン質量を表す。

【図1c】ＳＤＳＰＡＧＥ及び蛍光画像化によって可視化されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上のナノボディに連結した生成物デンドリマーの混合物を生成するデンドリマー－ナノボディコンジュゲーション反応（レーン反応混合物）を示す。ＳＤＳＰＡＧＥサイズマーカー（青色）は、おおよそのキロダルトン質量を表す。

【図1d】ＳＤＳＰＡＧＥ及び蛍光画像化によって可視化されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上のナノボディに連結した生成物デンドリマーの混合物を生成するデンドリマー－ナノボディコンジュゲーション反応（レーンＭ）を示す。ＳＤＳＰＡＧＥサイズマーカー（青色）は、おおよそのキロダルトン質量を表す。

【図1e】ＳＤＳＰＡＧＥ及び蛍光画像化によって可視化されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上のナノボディに連結した生成物デンドリマーの混合物を生成するデンドリマー－ナノボディコンジュゲーション反応（レーンＭ）を示す。ＳＤＳＰＡＧＥサイズマーカー（青色）は、おおよそのキロダルトン質量を表す。

【図1f】ＳＤＳＰＡＧＥ及び蛍光画像化によって可視化されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上のナノボディに連結した生成物デンドリマーの混合物を生成するデンドリマー－ナノボディコンジュゲーション反応（レーンＭ）を示す。ＳＤＳＰＡＧＥサイズマーカー（青色）は、おおよそのキロダルトン質量を表す。

【図1g】ＳＤＳＰＡＧＥ及び蛍光画像化によって可視化されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上のナノボディに連結した生成物デンドリマーの混合物を生成するデンドリマー－ナノボディコンジュゲーション反応（レーンＭ）を示す。ＳＤＳＰＡＧＥサイズマーカー（青色）は、おおよそのキロダルトン質量を表す。

【図1h】サイズ排除から得られた画分のＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。ＳＤＳ－ＰＡＧＥマーカー（青色）は、おおよそのキロダルトン質量を表し、赤色は、デンドリマーから放出されたＣｙ５蛍光を表す。ナノボディ－デンドリマーの予想分子量（約２５ｋＤａ）。

【図1i】サイズ排除から得られた画分のＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。ＳＤＳ－ＰＡＧＥマーカー（青色）は、おおよそのキロダルトン質量を表し、赤色は、デンドリマーから放出されたＣｙ５蛍光を表す。ナノボディ－デンドリマーの予想分子量（約２５ｋＤａ）。

【図2】化合物７１（対照）及び化合物１２３（標的）とＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２及びＳＫＯＶ－３細胞との２４時間にわたる平均蛍光強度値を示す。測定ごとに少なくとも１０，０００個の細胞がカウントされた。値は、平均値±標準偏差（ＳＤ；ｎ＝３）である。

【図3】デンドリマーをＨＥＲ２陽性細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２）及びＨＥＲ２陰性細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）とともに、３．３３ｎＭ、３７℃で２４時間インキュベートしたときのフローサイトメトリー分析を示す。測定ごとに少なくとも１０，０００個の細胞がカウントされた。値は、平均値±標準偏差（ＳＤ；ｎ＝３）である。

【図4】ａ）化合物７１（対照）又はｂ）化合物１２３（標的）を濃度３．３３ｎＭで２４時間処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の共焦点顕微鏡画像を示す。緑色、青色、赤色の蛍光は、それぞれ、ＡＦ－４８８－ＷＧＡで染色した細胞膜、ＤＡＰＩで染色した核、及びＣｙ５で標識したデンドリマーを表す。スケールバー＝５０μｍ。

【図5】ａ）化合物７１（対照）又はｂ）化合物１２３（標的）を濃度３．３３ｎＭで２４時間処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２細胞の共焦点顕微鏡画像を示す。緑色、青色、赤色の蛍光は、それぞれ、ＡＦ－４８８－ＷＧＡで染色した細胞膜、ＤＡＰＩで染色した核、及びＣｙ５で標識したデンドリマーを表す。スケールバー＝５０μｍ。

【図6】ａ）化合物７１（対照）又はｂ）化合物１２３（標的）を濃度３．３３ｎＭで２４時間処理したＳＫＯＶ－３細胞の共焦点顕微鏡画像を示す。緑色、青色、赤色の蛍光は、それぞれ、ＡＦ－４８８－ＷＧＡで染色した細胞膜、ＤＡＰＩで染色した核、及びＣｙ５で標識したデンドリマーを表す。スケールバー＝５０μｍ。

【図7】４８時間後に屠殺した後の、３Ｈ標識した化合物７２及び化合物１２７のデンドリマーの腫瘍及び血液の分布データを示す。全てのデータは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）を表す；（ＮＳ＝有意ではない；＊＝ｐ値＜０．０５）。

【図8】４８時間後に屠殺した後の、化合物７１及び化合物１２３の代表的なエクスビボ腫瘍分布を示す。データは、（ａ）非標的デンドリマー（化合物７１）及び（ｂ）標的デンドリマー（化合物１２３）の典型的な視野を表す。

【図9】標的デンドリマー（化合物１２３）が腫瘍のコア領域及び周辺領域に取り込まれ、対照化合物７１は取り込まれなかったことを示す画像を示す。

【図10】ＳＫＯＶ３細胞を接種し、その後、ビヒクル、対照化合物７１、標的化合物１２３、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）、又はＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で処理したマウスの、経時的な平均腫瘍体積のプロットを示す。

【図11】ＳＫＯＶ３細胞を接種し、その後、ビヒクル、対照化合物７１、標的化合物１２３、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）、又はＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で処理したマウスの、経時的な生存率を示す。

【図12】ＳＫＯＶ３細胞を接種し、その後、ビヒクル、対照化合物７１、標的化合物１２３、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）、又はＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で処理したマウスの、経時的な平均％体重変化を示す。

【図13】第４世代のデンドリマーと、単一（化合物９１、ＭＦＩ単一）又は複数（化合物９２、ＭＦＩ複数）コンジュゲート抗ＨＥＲ２ナノボディの内在化速度を示す。

【図14】化合物９２（複数の２Ｄ３－デンドリマーコンジュゲート）とともに３７℃で、ａ）１時間、ｂ）３時間、ｃ）６時間、又はｄ）２４時間インキュベートした後のＳＫＯＶ－３細胞の共焦点顕微鏡画像を示す。化合物９２をＣｙ５（マゼンタ）で標識し、細胞膜をＡＦ４８８－ＷＧＡ（緑色）で染色し、核をＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２（青色）で標識する。スケールバー＝３０μＭ。

【図15】化合物９１（単一の２Ｄ３－デンドリマーコンジュゲート）とともに３７℃で、ａ）１時間、ｂ）３時間、ｃ）６時間、又はｄ）２４時間インキュベートした後のＳＫＯＶ－３細胞の共焦点顕微鏡画像を示す。化合物９１をＣｙ５（マゼンタ）で標識し、細胞膜をＡＦ４８８－ＷＧＡ（緑色）で染色し、核をＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２（青色）で標識する。スケールバー＝３０μＭ。

【図16】 ^８９Ｚｒがデンドリマーに結合していることを示す、化合物７３の放射性ＴＬＣ画像である。

【図17A】化合物８９、９１及び９３の、９日間にわたる（ａ）腎臓、（ｂ）肝臓及び（ｃ）腫瘍における１ｇ当たりのジルコニウム注入用量パーセンテージのグラフを示す。

【図17B】化合物８９、９１及び９３の、９日間にわたる（ａ）腎臓、（ｂ）肝臓及び（ｃ）腫瘍における１ｇ当たりのジルコニウム注入用量パーセンテージのグラフを示す。

【図17C】化合物８９、９１及び９３の、９日間にわたる（ａ）腎臓、（ｂ）肝臓及び（ｃ）腫瘍における１ｇ当たりのジルコニウム注入用量パーセンテージのグラフを示す。

【図18】４時間後から９日後までの動物の放射性同位元素コンジュゲートのＰＥＴ画像の代表的な最大強度投影図を示す。データは、ベクレル／ボクセル（ｃｍ^３）で表され、腫瘍の取り込みを強調するために閾値が設定されている。

【図19】ＢＴ４７４細胞を接種し、その後、ビヒクル、並びに１５ＭＢｑ^１７７Ｌｕを送達する試験物品（トラスツズマブＫＹ－３－３１０、ＨＥＲ２ナノボディ標的ＳＲＳ－２－３０４、及び非標的ＲＨ－３－１６０）により処理したｂａｌｂ／ｃヌードマウスの、経時的な腫瘍体積の％変化のプロットを示す。

【図20】ＢＴ４７４細胞を接種し、その後、^１７７Ｌｕの用量を変化させて、ビヒクル、トラスツズマブＫＹ－３－３１０、又はＨＥＲ２ナノボディ標的ＳＲＳ－２－３０４により処理したｂａｌｂ／ｃヌードマウスの、経時的な腫瘍体積の％変化のプロットを示す。

【図21】還元されたＫＹ－２ａ及び還元されていないＫＹ－２ａのＳＤＳページゲルを示す。

【図22】デンドリマーコンジュゲートＳＲＳ－１５、ＳＲＳ－１６、ＳＲＳ－１７（及び対応する出発材料）のＳＤＳページゲルを示す。

【図23】デンドリマーコンジュゲートＳＲＳ－２０、ＳＲＳ－２１、及びＳＲＳ－２２（並びに対応する出発材料）のＳＤＳページゲルを示す。

【図24】（化合物８５～９７、１２３～１２７、ＳＲＳ－２０及びＳＲＳ－２２についてのゲルを示す。）

【0046】

配列表の凡例
配列番号１の単一ドメイン抗体は、２Ｄ３アミノ酸配列である。
配列番号２：単一ドメイン抗体アミノ酸配列の例。
配列番号３：単一ドメイン抗体アミノ酸配列の例。
配列番号４：単一ドメイン抗体アミノ酸配列の例。
配列番号５：単一ドメイン抗体アミノ酸配列の例。
配列番号６：単一ドメイン抗体アミノ酸配列の例。
配列番号７：単一ドメイン抗体アミノ酸配列の例。
配列番号８：単一ドメイン抗体アミノ酸配列の例。
配列番号９：単一ドメイン抗体アミノ酸配列の例。
配列番号１０：単一ドメイン抗体アミノ酸配列の例。

【0047】

説明
一般的な定義
特に他のように定義されていない限り、本明細書で使用されている全ての技術的及び科学的用語は、当業者（例えば、化学、生化学、医薬化学、高分子化学など）が一般的に理解しているものと同じ意味を有するものとする。

【0048】

本明細書で使用されるとき、「及び／又は」という用語、例えば「Ｘ及び／又はＹ」は、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」のいずれかを意味するものと理解され、両方の意味又はいずれかの意味を明示的にサポートを提供するものとみなされる。

【0049】

本明細書で使用されるとき、反対の記載がない限り、「約」という用語は、指定された値の±２０％、より好ましくは±１０％を指す。

【0050】

本明細書で使用されるとき、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という用語は、文脈上明らかに他を示す場合を除き、単数及び複数の面を含む。

【0051】

別段の指示がない限り、「第１の」、「第２の」などの用語は、本明細書で使用するとき単にラベルとして使用され、これらの用語が指すアイテムに順序的、位置的、又は階層的要件を課すことを意図するものではない。更に、「第２の」アイテムへの言及は、番号がより小さいアイテム（例えば、「第１の」アイテム）及び／若しくは番号がより大きいアイテム（例えば、「第３の」アイテム）の存在を必要としないか、又は排除しない。

【0052】

本明細書で使用するとき、「～のうちの少なくとも１つ」という語句は、アイテムのリストとともに使用される場合、列挙されたアイテムのうちの１つ以上の様々な組み合わせが使用され得、リスト内のアイテムのうちの１つのみが必要とされ得ることを意味する。アイテムは、特定の物体（ｏｂｊｅｃｔ）、物（ｔｈｉｎｇ）、又はカテゴリであり得る。換言すれば、「～のうちの少なくとも１つ」は、あらゆるアイテムの組み合わせ又はあらゆる数のアイテムがリストから使用され得るが、リスト内の全てのアイテムが必要とされ得るわけではない。例えば、「アイテムＡ、アイテムＢ、及びアイテムＣのうちの少なくとも１つ」は、アイテムＡ；アイテムＡ及びアイテムＢ；アイテムＢ；アイテムＡ、アイテムＢ、及びアイテムＣ；又はアイテムＢ及びアイテムＣを意味し得る。いくつかの場合では、「アイテムＡ、アイテムＢ、及びアイテムＣのうちの少なくとも１つ」は、例えば、限定されないが、アイテムＡのうちの２つ、アイテムＢのうちの１つ、及びアイテムＣのうちの１０；アイテムＢのうちの４つ、及びアイテムＣのうちの７つ；又はいくつかの他の適切な組み合わせを意味し得る。

【0053】

本明細書で使用するとき、「対象」という用語は、疾患又は状態に罹患しやすいあらゆる生物を指す。例えば、対象は、動物、哺乳動物、霊長類、家畜動物（例えば、ヒツジ、ウシ、ウマ、ブタ）、伴侶動物（例えば、イヌ、ネコ）、又は実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、ハムスター）であり得る。一例では、対象は、哺乳動物である。一実施形態では、対象は、ヒトである。一実施形態では、対象は、非ヒト動物である。

【0054】

本明細書では、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、特定の障害又は状態に関連する症状を緩和することを含む。例えば、本明細書で使用するとき、「がんを治療する」という用語は、がんに関連する症状を緩和することを含む。一実施形態では、「がんを治療する」という用語は、がん性腫瘍のサイズを縮小させることを指す。一実施形態では、「がんを治療する」という用語は、無増悪生存期間を延長することを指す。本明細書では、「無増悪生存期間」という用語は、がんの治療中及び治療後に、患者が疾患、すなわちがんを有するが、疾患の再発又は疾患の症状の増加を有さずに生存している期間の長さを指す。

【0055】

本明細書では、「予防」という用語は、特定の障害又は状態を予防することを含む。例えば、本明細書では、「がんを予防する」という用語は、がんに関連する症状の発症又は持続を防ぐことを指す。一実施形態では、「がんを予防する」という用語は、がんの進行を減速させる又は停止させることを指す。一実施形態では、「がんを予防する」という用語は、転移を減速させる又は予防することを指す。

【0056】

本明細書で使用するとき、「治療有効量」とは、治療される障害又は状態の症状のうちの１つ以上をある程度緩和するか又は予防するのに十分な量で、デンドリマーが投与されることを指す。その結果は、疾患又は状態の兆候、症状若しくは原因の軽減及び／若しくは緩和、又は生物学的システムの任意の他の望ましい変化であり得る。一実施形態では、「治療有効量」という用語は、がん性腫瘍のサイズの減少をもたらすのに十分な量で、デンドリマーが投与されることを指す。一実施形態では、「治療有効量」という用語は、無増悪生存期間の延長をもたらすのに十分な量で、デンドリマーが投与されることを指す。本明細書で使用するとき、「有効量」とは、過度の副作用を伴わずに、所望の薬理効果又は治療的改善を達成するために有効なデンドリマーの量を指す。「治療的有効量」とは、例えば、予防的有効量を含む。一実施形態では、予防的有効量とは、転移の予防に十分な量である。「有効量」又は「治療的有効量」は、化合物の代謝の変動、年齢、体重、対象の全身状態、治療される状態、治療される状態の重症度、及び処方医師の判断のいずれかにより、対象によって変動し得ることは理解されている。

【0057】

「診断」という用語は、本明細書で使用するとき、状態、疾患又は障害を有するか又は有する疑いのある対象に、本開示のコンジュゲートを投与し、その後、単光子放射、陽電子放出断層撮影、及び／又は陽電子放出断層撮影－磁気共鳴画像法などの技術を使用して、身体の様々な部分における放射能のレベルに関する情報を提供する、例えば、対象の身体の一部又は複数の部分を画像化して、疾患、障害又は状態（例えば、がん）の存在に関して、並びに／あるいは疾患、障害若しくは状態の状況、病期、及び／又は程度に関して決定することができるようにするプロセスを含み得る。いくつかの実施形態では、「診断」という用語は、兆候又は症状から疾患、障害若しくは状態の状況、病期又は程度を識別する及び／又は分類する行為を含み得る。例えば、本明細書で使用するとき、「がんを診断すること」という用語は、対象におけるがんの状態、病期、又は程度を特定すること及び／又は分類することを含み得る。

【0058】

デンドリマーの好適な塩としては、有機又は無機の酸又は塩基と形成されるものが挙げられる。本明細書では、「薬学的に許容される塩」という表現は、薬学的に許容される有機又は無機の塩を指す。例示的な酸付加塩としては、これらに限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、ビタルト酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩（すなわち、１，１’－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエート））の塩が挙げられる。例示的な塩基付加塩としては、これらに限定されないが、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えば、カリウム及びナトリウムの塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム及びマグネシウムの塩、有機塩基との塩、例えば、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ－メチル－Ｄ－グルコミン、モルホリン、チオモルホリン、ピペリジン、ピロリジン、モノ、ジ、トリの低級アルキルアミン、例えばエチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ジエチル、ジイソプロピル－、トリエチル－、トリブチル－、又はジメチル－プロピルアミン、又はモノ－、ジ－、トリ－ヒドロキシ低級アルキルアミン、例えばモノ－、ジ－、トリエタノールアミンなどが挙げられる。薬学的に許容される塩には、酢酸イオン、コハク酸イオン、又は別の対イオンなど、別の分子が含まれていてもよい。対イオンは、親化合物の電荷を安定化させる任意の有機又は無機の部分であり得る。更に、薬学的に許容される塩は、その構造中に２つ以上の荷電原子を有してもよい。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合、複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に許容される塩は、１つ以上の荷電原子及び／又は１つ以上の対イオンを有することができる。また、非薬学的に許容される塩も、薬学的に許容される塩を調製する際の中間体として有用であり得るか、又は保存若しくは輸送する間に有用であり得るため、本開示の範囲内であることが理解されるであろう。

【0059】

多くの有機化合物は、それらを反応させる、又は沈殿させる、又は結晶化させる溶媒と錯体を形成できることを、有機化学及び医薬化学の当業者であれば、理解するであろう。これらの錯体は「溶媒和物」として知られている。例えば、水との錯体は、「水和物」として知られている。本明細書では、「薬学的に許容される溶媒和物」又は「溶媒和物」という語句は、１つ以上の溶媒分子と本開示の化合物との会合を指す。薬学的に許容される溶媒和物を形成する溶媒の例としては、これらに限定されないが、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸、及びエタノールアミンなどが挙げられる。

【0060】

本明細書で使用するとき、「５～１０員の単環式又は二環式複素環基」という用語は、カルボシクリル基に類似しているが、炭素原子のうちの１つ以上が、窒素、酸素、又は硫黄から独立して選択される１つ以上のヘテロ原子によって置き換えられている、単環式若しくは二環式の芳香族又は非芳香族の環式基を指す。多環式ヘテロシクリルは、例えば、縮合環を含有してもよい。二環式ヘテロシクリル基では、各環に１つ以上のヘテロ原子が存在してもよく、又は環のうちの１つのみにヘテロ原子が存在してもよい。ヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、又はＳであり得る。好適な窒素原子を含有するヘテロシクリル基は、対応するＮ－オキシドを含む。一例では、複素環基は、５～１０個の原子（すなわち、５～１０員の複素環）のものである。単環式非芳香族複素環基の例としては、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、及びアゼパニルが挙げられる。環のうちの１つが非芳香族である二環式複素環基としては、ジヒドロベンゾフラニル、インダニル、インドリニル、イソインドリニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリル、及びベンゾアゼパニルが挙げられる。単環式芳香族複素環基（単環式ヘテロアリール基とも呼ばれる）の例としては、フラニル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、トリアゾリル、トリアジニル、ピリダジル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピラゾリル、及びピリミジニルが挙げられる。二環式芳香族複素環基（二環式ヘテロアリール基とも呼ばれる）の例としては、キノキサリニル、キナゾリヌル、ピリドピラジニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンズイミダゾリル、ナフチリジニル、キノリニル、ベンゾフラニル、インドリル、インダゾリル、ベンゾチアゾリル、オキサゾリル［４，５－ｂ］ピリジル、ピリドピリミジニル、イソキノリニル、及びベンゾヒドロキサゾールが挙げられる。

【0061】

本明細書で使用するとき、「飽和」という用語は、主鎖原子の全ての利用可能な原子価結合が他の原子に付着している基を指す。飽和基の代表的な例としては、ブチル、シクロヘキシル、ピペリジンなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0062】

本明細書で使用するとき、「不飽和」という用語は、２つの隣接する主鎖原子の少なくとも１つの原子価結合が他の原子に付着していない基を指す。代表的な例としては、これらに限定されないが、アルケン（例えば、－ＣＨ_２－ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ）、フェニル、ピロールなどが挙げられる。

【0063】

本明細書で使用するとき、「置換」という用語は、炭素又は好適なヘテロ原子から除去され、更なる基（すなわち、置換基）で置換された１つ以上の水素又は他の原子を有する基を指す。

【0064】

本明細書では、「デンドリマー」という用語は、コア及びそのコアに付着したデンドロンを含む分子を指す。各デンドロンは、分岐した構成ユニットの世代から構成されており、構成ユニットの世代ごとに分岐数が増加する分岐構造になっている。デンドリマーには、上に定義される薬学的に許容される塩又は溶媒和物が含まれてもよい。

【0065】

本明細書で使用するとき、「構成ユニット」という用語は、官能基を含む分岐分子を指す。１つの官能基は、コア又は前世代の構成ユニットに付着するためであり、少なくとも２つの官能基は、次世代の構成ユニットに付着するか又はデンドリマー分子の表面を形成するためのものである。

【0066】

本明細書で使用されるとき、「付着させる（ａｔｔａｃｈｅｄ）」という用語は、共有結合による化学成分間の接続を指す。「共有結合」という用語は、「共有による付着」という用語と互換的に使用される。

【0067】

コンジュゲート
第１の態様では、デンドリマー－標的化剤コンジュゲートであって、
ａ）
ｉ）コアユニット（Ｃ）、及び
ｉｉ）構成ユニット（ＢＵ）を含み、
デンドリマーが、２～６世代の構成ユニットを有し、コアユニットが、少なくとも２つの構成ユニットに共有結合により付着している、デンドリマーと、
ｂ）スペーサー基によりデンドリマーに共有結合により連結している、標的化剤と、
ｃ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第１の末端基であって、第１の末端基が、放射性核種を錯体化するための錯体化基を含む、第１の末端基と、
ｄ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第２の末端基であって、第２の末端基が、薬物動態修飾部分を含む、第２の末端基と、を含む、コンジュゲート
又はその塩が提供される。

【0068】

第１の態様のデンドリマー－標的化剤コンジュゲートは、錯体化基と錯体化されてデンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートを形成する放射性核種を有し得る。デンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートは、治療用途又は画像化／診断用途に使用するためのものであり得る。

【0069】

第１の態様では、デンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートであって、
ａ）デンドリマーであって、
ｉ）コアユニット（Ｃ）、及び
ｉｉ）構成ユニット（ＢＵ）を含み、各構成ユニットが、リジン残基又はその類似体であり、
デンドリマーが、２～６世代の構成ユニットを有し、コアユニットが、少なくとも２つの構成ユニットに共有結合により付着している、デンドリマーと、
ｂ）スペーサー基によりデンドリマーに共有結合により連結している、標的化剤と、
ｃ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第１の末端基であって、第１の末端基が、放射性核種と錯体化した錯体化基を含む、第１の末端基と、
ｄ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第２の末端基であって、第２の末端基が、薬物動態修飾部分を含む、第２の末端基と、を含む、コンジュゲート
又はその塩が提供される。

【0070】

標的化剤を組み込んだデンドリマー骨格と、放射性核種を錯体化するための錯体化基を含む第１の末端基とを含有する本開示のコンジュゲートは、薬学的用途を有する薬剤として、例えば、がんの治療に有用な治療剤として使用される。標的化剤にコンジュゲートされたＰＥＧ又はＰＥＯＸ基などの薬物動態修飾基を有するデンドリマー骨格の特定の組み合わせが、持続的な治療効果を提供することができるような方法での作用部位への放射性核種の送達を提供すると考えられる。コンジュゲートの設計はまた、標的化剤、放射性核種を錯体化するための錯体化基、及び特に放射性核種を後に導入するのを可能にする方法での合成を可能にする。

【0071】

デンドリマー
コアユニット
デンドリマーのコアユニット（Ｃ）は、構成ユニットで形成されたデンドロンのための付着点を提供する。構成ユニット上に存在する官能基と共有結合による連結を形成することができる官能基を含有する任意の好適なコアユニットを利用してもよい。

【0072】

いくつかの実施形態では、コアユニットは、アミド結合を介して少なくとも２つの構成ユニットに共有結合で付着している。いくつかの実施形態では、各アミド結合は、コアユニット内に存在する窒素原子と、構成ユニット内に存在するアシル基の炭素原子との間で形成される。他の実施形態では、各アミド連結は、コアユニット内に存在するアシル基の炭素原子と、構成ユニット内に存在する窒素原子との間で形成される。

【0073】

いくつかの実施形態では、コアユニットは、２つ、３つ又は４つの構成ユニットに、共有結合により付着している。１つの特定の実施形態では、コアユニットは、２つの構成ユニットに共有結合により付着している。コアユニットは、例えば、アミノ基を含むコアユニット前駆体から形成されてもよい。別の例として、コアユニットは、カルボン酸基を含むコアユニット前駆体から形成されてもよい。２つの構成ユニットに付着しているコアユニットの場合、デンドリマーのコアユニットは、例えば、２つのアミノ基を含むコアユニット前駆体から形成されてもよい。

【0074】

いくつかの実施形態では、コアユニットは、３つの反応性窒素原子を有する前駆体から誘導可能であり、そのうちの２つは構成ユニットを付着させるために使用され得、そのうちの１つはスペーサー基を付着させるために使用され得る。いくつかの実施形態では、コアユニットは、

【化5】

である。好適な保護基戦略を使用することにより、末端窒素は、中心窒素とは異なる基で官能化され得、例えば、構成ユニットは、末端窒素に付着され得、中心窒素は、スペーサー基で官能化され得る。

【0075】

いくつかの実施形態では、コアユニットは、２つの反応性窒素原子を有する前駆体から誘導可能であり、これは、構成ユニットを付着させるために使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、コアユニットは、エチレンジアミン、１，４－ジアミノブタン、又は１，６－ジアミノヘキサンから誘導可能であってもよい。

【0076】

いくつかの実施形態では、コアユニットは、

【化6】

であり、すなわち、これによって、コアユニットは、酸部分がベンズヒドリルアミンでキャップされて、対応するアミドを形成するリジン残基（ＢＨＡ－Ｌｙｓ）を含み、例えば、２つの反応性（アミノ）ニトロゲンを有するコアユニット前駆体：

【化7】

から形成され得る。

【0077】

ＢＨＡ－Ｌｙｓなどの２つの反応性窒素原子のみを有するコアユニット前駆体を使用する場合、２つのアミノ基は、典型的には構成ユニットで官能化され、スペーサー基は、典型的には表面構成ユニットに付着されている。

【0078】

本発明のデンドリマーでは、複数の末端基を、制御された方法で、デンドリマーの表面上に提示できるようになる。特に、リジン構成ユニットが使用される場合、構成ユニットのアルファ又はイプシロン窒素原子上の配置は、以下に記載されるとおりに予め決定することができる。いくつかの好ましい実施形態では、錯体化基（放射性核種含有部分）、薬物動態基、標的化剤、及び、存在する場合、薬学的に活性な剤の残基の全ては、構成ユニットを介した付着を介して、デンドリマーの表面に提供される。換言すれば、それらの実施形態では、コアユニットは、構成ユニットを介する以外の末端基の付着点を提供しない。このような実施形態では、構成ユニットへの共有結合による付着のために使用されないコアユニット中に存在する任意の官能基は、未反応であるか（すなわち、コンジュゲートが曝された条件では未反応である）、又は、更なる反応を予防するために好適なキャッピング基でキャップされていることが理解されるであろう。このようなコアユニットの例として、上述のＢＨＡ－Ｌｙｓ基が挙げられる。

【0079】

マレイミドコアユニット
いくつかの実施形態では、コアは、

【化8】

であり、
リジン窒素原子からの結合に隣接する点線は、構成ユニットの付着を示し、マレイミド窒素からの結合に隣接する点線は、例えば、本明細書で論じられる官能部分の付着点を示し得る。

【0080】

このようなコアを利用する利点は、マレイミドに付着しているチオエーテル結合から延びる各アームの性質が同じであり得るか、又は異なり得ることである。これにより、デンドリマーの合成における柔軟性が向上し、例えば、デンドリマーの世代、構成ユニットの種類、及び末端基の調整が可能になる。

【0081】

これは、いくつかの方法で達成され得るが、一実施形態では、スキーム１に示されるように、示されるように、デンドリマーが最初にリジン残基のコンジュゲーションを介して構築される単純なシスタミンコアから出発することが望ましい場合がある。デンドリマーは、シスタミンコアを用いて任意の所望の数の世代に取り込まれ得るが、２、３、４、又は５世代が最も適切であり得る。スキーム２に示されるように、シスタミンデンドリマーは、ジスルフィド結合の還元によって、２つの別個のデンドロンに切断することができる。これは、マレイミド単位への後続のカップリングのためのチオール部分をデンドロンに提供する。

【0082】

このカップリングステップはまた、いくつかの方法で達成され得るが、スキーム２に示される実施形態は、ジブロモマレイミド試薬が提供される場合に有用であることが見出されている。マレイミド環の窒素は、例えば、以下に論じる官能部分、スペーサー基、又はその前駆体若しくは成分による官能化の機会を提供する。スキーム２では、これは、テトラジン官能基で活性化されたＰＥＧ部分として示されているが、広範囲の他のスペーサー基又はリンカー基が使用され得ることが理解されるであろう。デンドロンのチオール基をジブロモマレイミド単位と反応させることにより、新しいデンドリマーコアが効果的に形成される。スキーム２は、次いで、更なる反復が、所望の世代まで追加の構成ユニットを介してデンドリマーに追加され得ることを示す。マレイミド窒素上のスペーサー基は、標的化剤、治療剤、又は他の所望の部分をコンジュゲートするために、適切な時点で更に官能化するか、又はそれ以外の方法で開発することができる。

【0083】

デンドロンがジブロモマレイミド単位に曝露されている場合、異なるデンドロンの混合物を添加することが可能であり、そのため、後に形成されるコア上に異なるデンドリマーアームを有することが理解されるであろう。シスタミンコアからの異なるデンドロンの別々のバッチを合成し、還元を介して除去してから、選択された相対量のデンドロンをマレイミド単位と混合して、マレイミドコアを有する所望のデンドリマーを得ることができる。

【0084】

一実施形態では、コアユニットは、メチルマレイミド単位であってもよく、又はそれを含んでもよく、したがって、環の一方の炭素は、メチルが付着していてもよく、したがって、二重結合は、安定性の利点を有し得る環炭素間に存在する。

【0085】

一実施形態では、マレイミド環の窒素は、単に水素を提示してもよい。一実施形態では、マレイミド環の窒素は、官能部分に付着していてもよい。窒素が官能部分に付着している場合、マレイミドコアは、追加の官能性がコアに導入され得る更なる「合成ハンドル」を本質的に有する。例えば、治療剤、標的化剤、又は薬物動態修飾剤は、官能部分としてコアにコンジュゲートされ得る。

【0086】

官能部分は、マレイミドコアに直接コンジュゲートされ得る。あるいは、官能部分は、本明細書に定義されるように、スペーサー基を介してマレイミドコアにコンジュゲートされてもよい。スペーサー基を介して官能部分をマレイミドコアにコンジュゲートする利点は、官能部分がデンドリマーに遠位に繋がれ、それ以外の場合、官能部分がその機能を発揮する能力（すなわち、治療剤又は標的化剤が標的受容体又は分子と相互作用する能力）を低下させる可能性のあるデンドリマーからのあらゆる立体障害を低減することである。

【0087】

一実施形態では、マレイミド環の窒素は、標的化剤を含む官能部分に付着している。標的化剤は、本明細書に記載されるように、マレイミドコアに直接、又はそれ以外の場合、任意の好適なスペーサー基を介してコンジュゲートされてもよい。一例では、Ｒ^３は、マレイミドコアにコンジュゲートされたＨＥＲ２標的化剤である。一例では、Ｒ^３は、本明細書に記載のスペーサー基を介してマレイミドコアにコンジュゲートされたＨＥＲ２標的化剤である。一例では、Ｒ^３は、マレイミドコアにコンジュゲートされたＦＡＰ結合基である。一例では、Ｒ^３は、本明細書に記載のスペーサー基を介してマレイミドコアにコンジュゲートされたＦＡＰ結合基である。

【化9-1】

【化9-2】

【0088】

スキーム２：［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ_２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ／Ｃｙｓ－ナノボディＳＲＳ－１５（式中、Ｇ２（ＮＨ_２）＝Ｌｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_４（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_４）］、Ｇ３（ＮＨＢｏｃ）＝Ｌｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＰＥＧ_１１００）_８）］、Ｇ３（ＮＨ_２）＝Ｌｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８（α－ＮＨ_２）_８（ε－ＮＨＰＥＧ_１１００）_８）］、Ｇ３（ＤＯＴＡ）＝Ｌｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨ_２）_２．７５（ε－ＮＨＰＥＧ_１１００）_８）］）の合成。

【0089】

構成ユニット
任意の適切な構成ユニット（ＢＵ）は、別の構成ユニット又はコアユニット上に存在する官能基と連結を形成することができる第１の官能基を含有し、別の構成ユニット上に存在する官能基と連結を形成することができる（例えば、以下の脱保護）少なくとも２つの更なる官能基を含有する限り、デンドリマーを生成するために使用されてもよい。

【0090】

いくつかの好ましい実施形態では、異なる世代の構成ユニットは、ある構成ユニット内に存在する窒素原子と別の構成ユニット内に存在するアシル基の炭素原子との間に形成されるアミド連結を介して互いに共有結合により付着している。例えば、いくつかの実施形態では、構成ユニットは、リジン残基又はそれらの類似体であり、好適な構成ユニット前駆体、例えば、適切な保護基を含有するリジン又はリジン類似体から形成されてもよい。リジン類似体は、後世代の構成ユニットに結合するために２つのアミノ窒素原子と、前世代の構成ユニット又はコアに結合するためのアシル基と、を有する。好適な構成ユニットの例としては、

【化10】

が挙げられ、
各構成ユニットのアシル基が、コア又は前世代の構成ユニットに付着させるための共有結合による付着点を提供し、各窒素原子が、後世代の構成ユニット、又は末端基に共有結合により付着させるための共有結合による付着点を提供する。

【0091】

いくつかの好ましい実施形態では、構成ユニットは、それぞれであり；

【化11】

各構成ユニットのアシル基が、コア又は前世代の構成ユニットに付着させるための共有結合による付着点を提供し、各窒素原子が、後世代の構成ユニット、又は末端基に共有結合により付着させるための共有結合による付着点を提供する。

【0092】

いくつかの好ましい実施形態では、構成ユニットは、それぞれである。

【化12】

【0093】

他の実施形態では、構成ユニットは、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、又はそれらの類似体であり、すなわち、好適な保護基を含有する好適な前駆体、例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、又はそれらの類似体から形成される。そのような実施形態では、コアユニットは、カルボン酸基を含むコアユニット前駆体（すなわち、アスパラギン酸／グルタミン酸／類似体内に存在するアミノ基と反応することができる）から形成されてもよい。

【0094】

最外層の世代の構成ユニット（ＢＵ_{ｏｕｔｅｒ}）は、上述の他の世代の構成ユニット（ＢＵ）で使用される構成ユニット、例えば、リジン又はリジン類似体構成ユニットによって形成されてもよい。最外層の世代の構成ユニット（ＢＵ_{ｏｕｔｅｒ}）は、デンドリマーのコアから最も外側にある世代の構成ユニットであり、すなわち、最外層の世代の構成ユニット（ＢＵ_{ｏｕｔｅｒ}）には、それ以降の世代の構成ユニットは付着しない。

【0095】

デンドリマーのデンドロンは、例えば、構成ユニット（ＢＵ）を適宜付着させることにより、必要な世代数に合成され得ることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、各世代の構成ユニット（ＢＵ）が同じ構成ユニットで形成されてもよく、例えば、構成ユニットの全ての世代が、リジン構成ユニットであってもよい。他のいくつかの実施形態では、１つ以上の世代の構成ユニットは、他の世代の構成ユニットに対して、異なる構成ユニットで形成されてもよい。

【0096】

デンドリマーは、２～６世代の構成ユニット、すなわち、２、３、４、５、又は６世代の構成ユニットを有する。

【0097】

いくつかの実施形態では、デンドリマーは３世代の構成ユニットを有する。３世代構成ユニットデンドリマーは、例えば構成ユニットがリジンである場合には、互いに共有結合により連結された３つの構成ユニットを含む構造を有するデンドリマーであり、これには、以下のサブ構造が含まれ得る。

【化13】

【0098】

いくつかの実施形態では、デンドリマーは５世代の構成ユニットを有する。５世代構成ユニットデンドリマーは、例えば構成ユニットがリジンである場合には、互いに共有結合により連結された５つの構成ユニットを含む構造を有するデンドリマーであり、これには、以下のサブ構造が含まれ得る。

【化14】

【0099】

いくつかの実施形態では、デンドリマーは４世代の構成ユニットを有する。４世代構成ユニットデンドリマーは、例えば構成ユニットがリジンである場合には、互いに共有結合により連結された４つの構成ユニットを含む構造を有するデンドリマーであり、これには、以下のサブ構造を含んでもよい。

【化15】

【0100】

いくつかの実施形態では、構成ユニットの世代は、完全な世代である。例えば、デンドリマーが３世代の構成ユニットを有する場合、いくつかの実施形態では、デンドリマーは３世代の完全な構成ユニットを有する。２つの反応性アミン基を有するコアの場合、このようなデンドリマーは、１４の構成ユニット（すなわち、コアユニット＋２ＢＵ＋４ＢＵ＋８ＢＵ）を含むであろう。

【0101】

同様に、例えば、デンドリマーが４世代の構成ユニットを有する場合、いくつかの実施形態では、デンドリマーは４世代の完全な構成ユニットを有する。２つの反応性アミン基を有するコアの場合、このようなデンドリマーは、３０の構成ユニット（すなわち、コアユニット＋２ＢＵ＋４ＢＵ＋８ＢＵ＋１６ＢＵ）を含むであろう。

【0102】

同様に、例えば、デンドリマーが５世代の構成ユニットを有する場合、いくつかの実施形態では、デンドリマーは５世代の完全な構成ユニットを有する。２つの反応性アミン基を有するコアの場合、このようなデンドリマーは、６２の構成ユニット（すなわち、コアユニット＋２ＢＵ＋４ＢＵ＋８ＢＵ＋１６ＢＵ＋３２ＢＵ）を含むであろう。

【0103】

しかし、デンドリマーを生成するための合成過程の性質上、デンドリマーを生成するために行われた１つ以上の反応が、完全には完了しない可能性があることは理解できるだろう。したがって、いくつかの実施形態では、デンドリマーは、不完全な世代の構成ユニットを含んでもよい。例えば、デンドリマーが、デンドリマー当たりの構成ユニットの数の分布を有する、デンドリマーの集団を得ることができる。

【0104】

いくつかの実施形態では、デンドリマーが３世代の構成ユニットを有する場合、デンドリマー当たり、少なくとも８、又は少なくとも９、又は少なくとも１０、又は少なくとも１１、又は少なくとも１２、又は少なくとも１３の平均構成ユニット数を有するデンドリマーの集団が得られる。いくつかの実施形態では、デンドリマーのうち、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％が、１０以上の構成ユニットを有するデンドリマーの集団が得られる。いくつかの実施形態では、デンドリマーのうち、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％が、１２以上の構成ユニットを有するデンドリマーの集団が得られる。

【0105】

いくつかの実施形態では、デンドリマーが４世代の構成ユニットを有する場合、デンドリマー当たり、少なくとも２５、又は少なくとも２６、又は少なくとも２７、又は少なくとも２８、又は少なくとも２９の平均構成ユニット数を有するデンドリマーの集団が得られる。いくつかの実施形態では、デンドリマーのうち、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％が、２５以上の構成ユニットを有するデンドリマーの集団が得られる。いくつかの実施形態では、デンドリマーのうち、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％が、２９以上の構成ユニットを有するデンドリマーの集団が得られる。

【0106】

いくつかの実施形態では、デンドリマーが５世代の構成ユニットを有する場合、デンドリマー当たり、少なくとも５５、又は少なくとも５６、又は少なくとも５７、又は少なくとも５８、又は少なくとも５９、又は少なくとも６０の平均構成ユニット数を有するデンドリマーの集団が得られる。いくつかの実施形態では、デンドリマーの少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％が、５５以上の構成ユニットを有するデンドリマーの集団が得られる。いくつかの実施形態では、デンドリマーの少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％が、６０以上の構成ユニットを有するデンドリマーの集団が得られる。

【0107】

いくつかの実施形態では、コアユニット前駆体の各反応性（アミノ）基は、構成ユニットを含むデンドロンのコンジュゲーション部位を表す。

【0108】

いくつかの実施形態では、各デンドロン（Ｘ）における各世代の構成ユニットは、式［ＢＵ］_２ ^{（ｂ－１）}（式中、ｂは、世代数である）で表されてもよい。３世代の完全な構成ユニットを有するデンドロン（Ｘ）は、［ＢＵ］_１－［ＢＵ］_２－［ＢＵ］_４と表される。４世代の完全な構成ユニットを有するデンドロン（Ｘ）は、［ＢＵ］_１－［ＢＵ］_２－［ＢＵ］_４－［ＢＵ］_８と表される。５世代の完全な構成ユニットを有するデンドロン（Ｘ）は、［ＢＵ］_１－［ＢＵ］_２－［ＢＵ］_４－［ＢＵ］_８－［ＢＵ］_１６と表される。

【0109】

いくつかの実施形態では、デンドリマーは、２つ以上のデンドロンを含む。いくつかの実施形態では、デンドロンは、同じである。いくつかの実施形態では、デンドロンは、異なる。いくつかの実施形態では、デンドロンは、構成ユニット、表面基、世代サイズ（ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｉｚｅ）、第１の端末基、又は第２の端末基のレベルで同じであるか、又は異なる。

【0110】

第１の末端基
第１の末端基（Ｔ１）は、放射性核種を錯体化するための錯体化基を含む。好適な放射性核種に曝露した後、放射性核種を錯体化するための錯体化基は、放射性核種及び錯体化基を含み、放射性核種含有部分と称される場合がある。

【0111】

実施形態では、放射性核種含有部分は、錯体化基でキレートされた放射性核種を含んでもよい。

【0112】

実施形態では、放射性核種含有部分は、錯体化基との配位錯体中に放射性核種を含んでもよい。

【0113】

実施形態では、放射性核種含有部分は、錯体化基の少なくとも２つの異なる原子にキレートされた放射性核種を含んでもよい。

【0114】

実施形態では、放射性核種含有部分は、錯体化基と供与（ｄａｔｉｖｅｌｙ）結合した放射性核種を含んでもよい。

【0115】

放射性核種
任意の好適な放射性核種を、本発明のデンドリマーにおいて利用してもよい。放射性同位体としても知られる放射性核種は、放射性崩壊して、核放射線を放射する化学元素の不安定な形態である。

【0116】

放射性核種は、がんなどの疾患の治療における用途を有する。このような場合、放射性核種を含有する物質を患者に投与すると、放射性核種が腫瘍に送達され、放射性崩壊及び放射線の放射後に、腫瘍細胞が死滅する。

【0117】

好ましくは、放射性核種は、金属又は半金属（例えば、アスタチンは、本発明の目的において半金属とみなされる）放射性核種、例えば、金属イオン又は半金属イオンである。いくつかの実施形態では、放射性核種は、アルファ放射体（α放射体）である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、ベータ放射体（β放射体）である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、ベータ及びガンマ放射体（γ放射体）である。

【0118】

実施形態では、放射性核種は、重水素及び三重水素を含む水素の同位体ではない。

【0119】

いくつかの実施形態では、放射性核種は、アクチニウム（例えば、Ａｃ^２２５）、アスタチン（例えば、Ａｓ^２１１）、ビスマス（例えば、Ｂｉ^２１２、Ｂｉ^２１３）、鉛（例えば、Ｐｂ^２１２）、テクネチウム（例えば、Ｔｃ^９９ｍ）、トリウム（例えば、Ｔｈ^２２７）、ラジウム（例えば、Ｒａ^２２３）、ルテチウム（例えば、Ｌｕ^１７７）、イットリウム（例えば、Ｙ^９０）、インジウム（例えば、Ｉｎ^１１１、Ｉｎ^１１４）、ガドリニウム（例えば、Ｇｄ^１５３）、ガリウム（例えば、Ｇａ^６８）、ジルコニウム（例えば、Ｚｒ^８９）、レニウム（例えば、Ｒｅ^１８６）、ヨウ素（例えば、Ｉ^１３１）、又は銅（例えば、Ｃｕ^６０、Ｃｕ^６１、Ｃｕ^６２、Ｃｕ^６４、Ｃｕ^６７）放射性核種である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、ルテチウム（例えば、Ｌｕ^１７７）、ガリウム（例えば、Ｇａ^６８）、ジルコニウム（例えば、Ｚｒ^８９）、アクチニウム（例えば、Ａｃ^２２５）、ビスマス（例えば、Ｂｉ^２１２、Ｂｉ^２１３）、アスタチン（例えば、Ａｓ^２１１）、テクネチウム（例えば、Ｔｃ^９９ｍ）、又は銅（例えば、Ｃｕ^６０、Ｃｕ^６１、Ｃｕ^６２、Ｃｕ^６４、Ｃｕ^６７）放射性核種である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、ルテチウム（例えば、Ｌｕ^１７７）、ガリウム（例えば、Ｇａ^６８）、ジルコニウム（例えば、Ｚｒ^８９）、又は銅（例えば、Ｃｕ^６０、Ｃｕ^６１、Ｃｕ^６２、Ｃｕ^６４、Ｃｕ^６７）放射性核種である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、ガリウム（例えば、Ｇａ^６８）、ジルコニウム（例えば、Ｚｒ^８９）、又はルテチウム（例えば、Ｌｕ^１７７）放射性核種である。

【0120】

いくつかの実施形態では、放射性核種は、状態（例えば、がん）の治療のためのものである。このような放射性核種の例としては、アクチニウム（例えばＡｃ^２２５）、アスタチン（例えば、Ａｓ^２１１）、ビスマス（例えば、Ｂｉ^２１２、Ｂｉ^２１３）、トリウム（例えば、Ｔｈ^２２７）、ラジウム（例えば、Ｒａ^２２３）、ルテチウム（例えば、Ｌｕ^１７７）、イットリウム（例えば、Ｙ^９０）、ガドリニウム（例えば、Ｇｄ^１５３）、鉛（例えば、Ｐｂ^２１２）、及び銅（例えばＣｕ^６０、Ｃｕ^６１、Ｃｕ^６２、Ｃｕ^６４）が挙げられる。

【0121】

いくつかの実施形態では、放射性核種は、アクチニウム（例えば、Ａｃ^２２５）、アスタチン（例えば、Ａｓ^２１１）、ビスマス（例えば、Ｂｉ^２１２、Ｂｉ^２１３）、及び鉛（例えば、Ｐｂ^２１２）から選択されるアルファ放射体である。

【0122】

いくつかの実施形態では、放射性核種は、ルテチウム（例えば、Ｌｕ^１７７）、イットリウム（例えば、Ｙ^９０）、ヨウ素（例えば、Ｉ^１３１）、銅（例えば、Ｃｕ^６７）、及びレニウム（例えば、Ｒｅ^１８６）から選択されるベータ放射体である。

【0123】

理想的には、治療用放射性核種の放射特性は、腫瘍内のエネルギーを集中させるための病変サイズを考慮し、デンドリマーの延長された送達に合わせるための好適な半減期を有するべきである。いくつかの実施形態では、放射性核種は、２０日未満又は１２日未満の半減期を有するアルファ放射体である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、２～２０日又は５～１０日の半減期を有するベータ放射体である。^１７７Ｌｕは、０．５ＭｅＶの最大エネルギー及び＜２ｍｍの最大組織浸透を有する中エネルギーβ放射体（４９０ｋｅＶ）である。^１７７Ｌｕはまた、２０８及び１１３ｋｅＶで低エネルギーγ線を放射し、これにより、エクスビボ画像化、及び結果として、腫瘍の局在化及び線量測定に関する情報の収集を可能にする。いくつかの実施形態では、治療用放射性核種の注入用量は、１回の注射当たり１～５０ＧＢｑである。他の実施形態では、注入用量は、単回注入（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）／注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）当たり２～２０ＧＢｑである。他の実施形態では、注入用量は、単回注入当たり２～１０ＧＢｑである。個々の患者の用量計算は、疾患負荷、患者の体重、及び腎機能の組み合わせから決定され得る。各治療サイクルにおける画像ベースの線量測定は、例えば、ＳＰＥＣＴ－ＣＴを用いて推奨される。

【0124】

放射性核種は、医学的診断の分野でも利用される。単光子放射、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）画像化、及び陽電子放出断層撮影－磁気共鳴画像法（ＰＥＴ－ＭＲＩ）などの技術を使用して、好適な放射性核種含有物質を投与した対象内の放射性核種を検出し、腫瘍などの疾患の存在及び／又は進行を知らせる画像を生成することができる。

【0125】

いくつかの実施形態では、放射性核種は、状態（例えば、がん）の診断又は画像化のためのものである。このような放射性核種の例としては、ガリウム（例えば、Ｇａ^６８）、インジウム（例えば、Ｉｎ^１１１）、ジルコニウム（例えば、Ｚｒ^８９）、ヨウ素（例えば、^１２３Ｉ、^１３１Ｉ）、テクネチウム（例えば、Ｔｃ^９９ｍ）、イットリウム（例えば、Ｙ^８６）、フッ素（例えば、Ｆ^１８）、及び銅（例えば、Ｃｕ^６０、Ｃｕ^６１、Ｃｕ^６２、Ｃｕ^６４）が挙げられる。いくつかの実施形態では、放射性核種は、ガリウム（例えば、Ｇａ^６８）、テクネチウム（例えば、Ｔｃ^９９ｍ）、ジルコニウム（例えば、Ｚｒ^８９）、及び銅（例えば、Ｃｕ^６０、Ｃｕ^６１、Ｃｕ^６２、Ｃｕ^６４）から選択される画像化剤である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、ガリウム（例えば、Ｇａ^６８）、ジルコニウム（例えば、Ｚｒ^８９）、及び銅（例えば、Ｃｕ^６４）から選択される。

【0126】

いくつかの実施形態では、放射性核種は、ガドリニウムではない。

【0127】

いくつかの実施形態では、放射性核種は、常磁性剤ではない。

【0128】

使用される放射性核種の種類は、対象が受ける放射性曝露のレベルを最適化するために、デンドリマー構造に合わせて調整され得る。例えば、身体は、典型的には、より大きな数の世代の構成ユニットを有するデンドリマーに対してより大きな曝露を有すると考えられる。したがって、このようなデンドリマーを適切な半減期を有する放射性核種と対合させることにより、放射能への身体の曝露に関連する副作用を回避又は低減しながら、最適な治療活性及び／又は診断活性を達成することができる。

【0129】

いくつかの実施形態では、デンドリマーは、４世代又は５世代のデンドリマーであり、放射性核種は、１０日以下、好ましくは５日未満の半減期を有する。いくつかの実施形態では、デンドリマーは、４世代のデンドリマーであり、放射性核種は、１０日以下、好ましくは５日未満の半減期を有する。いくつかの実施形態では、デンドリマーは、５世代のデンドリマーであり、放射性核種は、１０日未満、好ましくは５日未満の半減期を有する。いくつかの実施形態では、デンドリマーは、４世代のデンドリマーであり、放射性核種は、Ｙ^９０、Ｔｃ^９９ｍ、Ｔｈ^２０１、Ｒｂ^８２、Ｌｔ^１７７、Ｇａ^６７、Ｇａ^６８、及びＩｎ^１１１からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、デンドリマーは、３世代のデンドリマーであり、放射性核種は、１０日以下の半減期を有する。いくつかの実施形態では、デンドリマーは、３世代のデンドリマーであり、放射性核種は、Ｙ^９０、Ｔｃ^９９ｍ、Ｔｈ^２０１、Ｒｂ^８２、Ｌｔ^１７７、Ｇａ^６７、Ｇａ^６８、Ａｃ^２２５、及びＩｎ^１１１からなる群から選択される。

【0130】

放射性核種錯体化基
所望の放射性核種と錯体を形成するのに適切である限り、いずれの好適な錯体化基を使用してもよい。放射性核種を錯体化するための錯体化基は、放射性核種を錯体化することができる官能部分を提供する。このような官能部分の例としては、放射性核種と錯体を形成するカルボン酸、アミン、アミド、ヒドロキシル基、チオール基、尿素、チオ尿素、－Ｎ－ＯＨ基、ホスフェート及びホスフィネート基が挙げられる。

【0131】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、放射性核種に直接錯体化される。

【0132】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、放射性核種に直接錯体化して、配位錯体を形成する。すなわち、錯体化基は、放射性核種に配位結合して錯体を形成する。

【0133】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、放射性核種への供与的共有結合のみを形成する。例えば、錯体化基は、放射性核種と少なくとも２つの別個の供与的共有結合を形成し得る。

【0134】

いくつかの実施形態では、放射性核種とキレートを形成する錯体化基が使用される。本明細書で使用するとき、「放射性核種とキレートを形成する錯体化基」という語句は、錯体化基が放射性核種に少なくとも２つの別個の結合（すなわち、錯体化基の少なくとも２つの異なる原子からの結合）を形成することを意味する。

【0135】

好適な錯体化基の例を以下の表に示す：

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【0136】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＤＴＰＡ、サルコファジン、又はＤＦＯである。

【0137】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、マクロパ基である。マクロパ基は、例えば、Ａｃ^２２５放射性核種との使用に特に好適である。いくつかの実施形態では、錯体化基は、マクロパ基であり、放射性核種は、Ａｃ^２２５である。

【0138】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、ＥＤＴＡ又はＰＥＰＡ基である。

【0139】

第１の末端基は、最も外側の構成ユニット、例えば、最も外側の構成ユニットの窒素原子を介して、リジン残基又はそれらの類似体である構成ユニットに付着している。いくつかの実施形態では、錯体化基が、最も外側の構成ユニットとの直接反応に好適な基を含む場合、錯体化基は、構成ユニットと直接反応してもよい。他の実施形態では、装填基は、錯体化基をデンドリマー、すなわち、第１の末端が錯体化基に共有結合により付着しており、第２の末端に最も外側の構成ユニット上に存在する官能基との反応に好適な官能基を有する基（例えば、第１の末端基が最も外側の構成ユニットの窒素原子を介して付着している場合）に装填するために利用されてもよい。例えば、装填基は、アミノ基との反応に好適な官能基を有し得る。

【0140】

最も外側の構成ユニットと第１の末端基との間の付着を形成するために、好適な錯体化前駆体基と、反応に利用可能な官能基（例えば、アミン基）を有するデンドリマー中間体との間で反応を行ってもよい。いくつかの実施形態では、錯体化前駆体は、ＤＯＴＡ含有基、ＮＯＴＡ含有基、ＤＴＰＡ含有基、サルコファジン含有基、又はＤＦＯ含有基である。

【0141】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、構造

【化16】

を有するＤＯＴＡ含有基であり、ＤＯＴＡ含有基は、コンジュゲートに付着している。

【0142】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、構造

【化17】

を有するＮＯＴＡ含有基であり、ＮＯＴＡ含有基は、コンジュゲートに付着している。

【0143】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、構造

【化18】

を有するＤＴＰＡ含有基であり、ＤＴＰＡ含有基は、コンジュゲートに付着している。

【0144】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、構造

【化19】

を有するＤＦＯ含有基であり、ＤＦＯ含有基は、コンジュゲートに付着している。

【0145】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、構造

【化20】

を有するサルコファジン含有基であり、サルコファジン含有基は、コンジュゲートに付着している。

【0146】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、構造

【化21】

を有するサルコファジン含有基であり、サルコファジン含有基は、コンジュゲートに付着している。

【0147】

いくつかの実施形態では、錯体化基は、構造

【化22】

を有するマクロパ含有基であり、マクロパ含有基は、コンジュゲートに付着している。

【0148】

好適な錯体化前駆体基の具体例としては、以下が挙げられる。

【化23-1】

【化23-2】

【0149】

上記のかかる基は、最も外側の構成ユニット上に存在するアミン基と反応して、チオ尿素と連結する第１の末端基を形成することができる。

【0150】

第２の末端基
このコンジュゲートは、複数の第２の末端基（Ｔ２）を含み、各末端基は、薬物動態修飾部分、すなわち、このコンジュゲートの薬物動態プロファイルを修飾又は調節することができる部分を含む。薬物動態修飾部分は、デンドリマーの吸収、分布、代謝、排泄、及び／又は毒性を調節し得る。

【0151】

薬物動態修飾部分（Ｔ２）は、デンドリマーの溶解性プロファイルを変化させ、薬学的に許容される担体におけるデンドリマーの溶解性を増加させるか、又は低減することができる。薬物動態修飾部分（Ｔ２）は、例えば、デンドリマーのクリアランスを低下させ得る。

【0152】

デンドリマーが、薬学的活性剤を含む第３の末端基を含む場合、薬物動態修飾部分（Ｔ２）は、化学的（例えば、加水分解）又は酵素的分解経路のいずれかによって、活性剤がデンドリマーから放出される速度を遅くするか、又は上昇させることによって、薬学的活性剤の放出速度に影響を及ぼし得る。薬物動態修飾部分（Ｔ２）は、デンドリマーが薬学的活性剤を特定の組織（例えば、腫瘍）に送達するのを補助し得る。

【0153】

薬物動態修飾部分は、例えば、生体適合性であり、水溶性であるオリゴマー基又はポリマー基であってもよい。いくつかの実施形態では、薬物動態修飾部分は、３００～５０００ダルトンの範囲の分子量を有する水溶性オリゴマー又はポリマーである。

【0154】

いくつかの好ましい実施形態では、薬物動態修飾部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基、又はポリエチルオキサゾリン（ＰＥＯＸ）基、又はポリ－（２）メチル－（２）－オキサゾラミン（ＰＯＺ）、又はポリサルコシン（ポリ（ｎ－メチル化グリシン））、又はポリ（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ｐＨＰＭＡ）基である。

【0155】

いくつかの実施形態では、第２の末端基は、ＰＥＧ基を含む。ＰＥＧ基は、ポリエチレングリコール基、すなわち、式－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－の繰り返し単位を含む基である。本開示のデンドリマーを生成するために使用されるＰＥＧ材料は、典型的には、分子量にある程度のばらつき（すなわち、±１０％）を有するＰＥＧの混合物を含み、したがって、分子量が指定される場合、それは、典型的には、ＰＥＧ組成物の平均分子量の近似値である。例えば、「ＰＥＧ_{～２１００}」という用語は、平均分子量約２１００ダルトン、すなわち±約１０％（ＰＥＧ_１８９０～ＰＥＧ_２３１０）を有するポリエチレングリコールを指す。「ＰＥＧ_{～２３００}」とは、平均分子量約２３００ダルトンすなわち±約１０％（ＰＥＧ_２０７０～ＰＥＧ_２５３０）のポリエチレングリコールを有するポリエチレングリコールを指す。ＭＷ平均値の算出に一般的に用いられる３つの方法は、数平均、重量平均、Ｚ平均分子量である。本明細書で使用されるとき、「分子量」という語句は、これらに限定されないが、ＮＭＲ、質量分析、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）、ゲル浸透クロマトグラフィー、又は他の液体クロマトグラフィー技術、光散乱技術、超遠心分離、及び粘度測定など、当技術分野において周知である技術を用いて測定できる重量平均分子量を指すことを意図している。

【0156】

いくつかの実施形態では、第２の末端基は、約２００～５０００ダルトン、又は２００～４０００ダルトン、又は３００～３０００ダルトン、又は３００～２０００ダルトン、又は４００～１５００ダルトン、又は４００～１２００ダルトン、又は４００～１０００ダルトン、又は４００～８００ダルトン、又は４００～６００ダルトンの平均分子量を有するＰＥＧ基を含む。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００、約１１００、約１２００、約１３００、約１４００、又は約１５００ダルトンの平均分子量を有するＰＥＧ基を含む。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、約４７０ダルトンの平均分子量を有するＰＥＧ基を含む。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、５００～３０００ダルトン、又は１５００～２５００ダルトンの範囲の平均分子量を有するＰＥＧ基を含む。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、２２０～２５００ダルトン、又は５７０～２５００ダルトン、又は２２０～１１００ダルトン、又は５７０～１１００ダルトン、又は１０００～５５００ダルトン、又は１０００～２５００ダルトン、又は１０００～２３００ダルトンの範囲の平均分子量を有するＰＥＧ基を含む。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、１９００～２３００ダルトンの範囲の平均分子量を有するＰＥＧ基を含む。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、２１００～２５００ダルトンの範囲の平均分子量を有するＰＥＧ基を含む。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、２４００～２８００ダルトンの範囲の平均分子量を有するＰＥＧ基を含む。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、約１９００、約２０００、約２１００、約２２００、約２３００、約２４００、約２５００、約２６００、約２７００、又は約２８００ダルトンの平均分子量を有するＰＥＧ基を含む。

【0157】

いくつかの実施形態では、ＰＥＧ基は、約１．００～約１．５０、約１．００～約１．２５、又は約１．００～約１．１０の多分散性指数（ＰＤＩ）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ基は、約１．０５の多分散性指数（ＰＤＩ）を有する。用語「多分散性指数」とは、あるポリマー試料中の分子量の分布の指標である。多分散性指数（ＰＤＩ）は、重量平均分子量（Ｍ_ｗ）を数平均分子量（Ｍ_ｎ）で割ったものであり、ポリマーのバッチ内での個々の分子量の分布を示す。多分散性指数（ＰＤＩ）は、１以上の値を有するが、ポリマーが、均一な変化長及び平均分子量に近づくと、多分散性指数（ＰＤＩ）は１により近くなる。

【0158】

第２の末端基がＰＥＧ基を含む場合、ＰＥＧ基は、直鎖状であっても分岐状であってもよい。所望であれば、エンドキャップＰＥＧ基を使用し得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ基は、メトキシ末端ＰＥＧである。

【0159】

いくつかの実施形態では、第２の末端基は、ポリサルコシン基、すなわち、下記式の繰り返し単位を含む基を含む。

【化24】

【0160】

いくつかの実施形態では、第２の末端基は、少なくとも７５０ダルトン、少なくとも１０００ダルトン、又は少なくとも１５００ダルトンの平均分子量を有するポリサルコシン基を含む。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、７５０ダルトン～２５００ダルトン、又は１０００ダルトン～２５００ダルトンの範囲の平均分子量を有するポリサルコシン基を含む。

【0161】

いくつかの実施形態では、第２の末端基は、ＰＥＯＸ基を含む。ＰＥＯＸ基とは、ポリエチルオキサゾリン基、すなわち、下記式の繰り返し単位を含む基である。

【化25】

【0162】

ＰＥＯＸ基は、エチルオキサゾリンの重合によって生成できるため、この名前が付けられた。本開示のデンドリマーを生成するために使用されるＰＥＯＸ材料は、典型的には、分子量にある程度のばらつき（すなわち、±１０％）を有するＰＥＯＸの混合物を含み、したがって、分子量が指定される場合、それは、典型的には、ＰＥＯＸ組成物の平均分子量の近似値である。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、少なくとも７５０ダルトン、少なくとも１０００ダルトン、又は少なくとも１５００ダルトンの平均分子量を有するＰＥＯＸ基を含む。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、７５０ダルトン～２５００ダルトン、又は１０００ダルトン～２０００ダルトンの範囲の平均分子量を有するＰＥＯＸ基を含む。所望であれば、エンドキャップＰＥＯＸ基を使用し得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＯＸ基は、メトキシ末端ＰＥＯＸである。

【0163】

いくつかの実施形態では、第２の末端基は、ポリ－（２）メチル－（２）－オキサゾールアミン（ＰＯＺ）基を含む。

【0164】

いくつかの実施形態では、第２の末端基は、ポリ（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ｐＨＰＭＡ）基を含む。

【0165】

第２の末端基は、任意の好適な手段を介して最も外側の構成ユニットに付着されてもよい。第２の末端基が、ＰＥＧ基、ＰＥＯＸ基、ＰＯＺ基、又はｐＨＰＭＡ基を含む、いくつかの実施形態では、ＰＥＧ基、ＰＥＯＸ基、ＰＯＺ基、又はｐＨＰＭＡ基を外側の構成ユニットに付着させるために、連結基が使用される。

【0166】

第２の末端基は、典型的には、反応性アシル基（アミド結合を形成することができる）又はアルデヒド（還元的アミノ化条件下でアミン基を形成することができる）など、アミン基と反応性のある反応性基を含有する第２の末端基前駆体の使用により付着している。

【0167】

いくつかの実施形態では、各第２の末端基は、ＰＥＧ基を含み、ＰＥＧ基は、ＰＥＧ基中に存在する炭素原子とＰＥＧ連結基中に存在する酸素原子との間に形成されるエーテル連結を介してＰＥＧ連結基（Ｌ１）に共有結合により付着しており、各第２の末端基は、構成ユニット中に存在する窒素原子とＰＥＧ連結基中に存在するアシル基の炭素原子との間に形成されるアミド連結を介して、構成ユニットに共有結合により付着している。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、それぞれ

【化26】

であり、ＰＥＧ基は、約５００～３０００ダルトン又は２０００～２７００ダルトンの範囲の平均分子量を有するメトキシ末端ＰＥＧである。

【0168】

いくつかの実施形態では、各第２の末端基は、ＰＥＯＸ基を含み、ＰＥＯＸ基は、ＰＥＯＸ基中に存在する窒素原子とＰＥＯＸ連結基中に存在する炭素原子との間に形成される連結を介してＰＥＯＸ連結基（Ｌ１’）に共有結合により付着しており、各第２の末端基は、構成ユニット中に存在する窒素原子とＰＥＯＸ連結基中に存在するアシル基の炭素原子との間に形成されるアミド連結を介して、構成ユニットに共有結合により付着している。いくつかの実施形態では、第２の末端基は、それぞれ

【化27】

である。

【0169】

いくつかの実施形態では、第２の末端基は、それぞれ、例えば下記式のポリサルコシン基であり、

【化28】

構成ユニット内に存在する窒素原子とポリサルコシン基内に存在するアシル基の炭素原子との間に形成されるアミド連結を介して構成ユニットに付着している。

【0170】

標的化剤
本明細書に記載のデンドリマー－標的化剤コンジュゲートは、体内の目的の部位又は標的におけるコンジュゲートの局在化及び濃縮のための、少なくとも１つの標的化剤を含む。標的化剤としては、抗体、抗体断片、ペプチド配列、及び目的の標的に選択的に結合することができる他のモチーフが挙げられる。

【0171】

この相互作用は、例えば、共有結合、イオン結合、水素結合、及びファンデルワールス力など、あらゆる種類の結合又は会合によって生じ得る。

【0172】

本明細書で使用するとき、「ペプチド」は、ペプチド結合によって連結された２つ以上のアミノ酸を含む分子を指す。

【0173】

本明細書に記載の標的化剤は、開示されたデンドリマー－標的化剤コンジュゲートを、腫瘍、がん細胞、及び／又は腫瘍微小環境などの標的に標的化するために有用である。

【0174】

標的化剤は、例えば、標的分子（本明細書では、「標的」又は「抗原」とも称される）と特異的に結合する、及び／又はそれに対して親和性を有する抗原結合部位又は抗原結合ドメインを含んでもよい。

【0175】

一実施形態では、標的は、以下のもののうちの１つ以上から選択される：ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、血管上皮成長因子（ＶＥＧＦ）受容体、Ｇタンパク質共役型受容体１６１（ＧＰＲ１６１）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ２など）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、肝細胞成長因子受容体（ＨＧＦＲ）、チロシ－プロテインキナーゼｍｅｔ（Ｃ－ｍｅｔ）、非定型ケモカイン受容体３（ＣＸＣＲ７）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）、がん胎児性抗原、ムチン１（ＭＵＣ－１）、ムチン－１６（ＭＵＣ１６）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、栄養膜糖タンパク質（５Ｔ４）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、糖タンパク質（ｇｐＮＭＢ）、シンデカン（Ｓｙｎｄｅｃａｎ）１（ＣＤ１３８）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、がん胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）、溶質キャリアファミリー４４メンバー４（ＣＳＬＣ４４Ａ４）、顆粒球コロニー刺激因子受容体（Ｇ－ＣＳＦＲ）、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ３（ＥＮＰＰ３）、メソテリン、ネクチン細胞接着分子４（ネクチン－４）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、葉酸受容体、ヒアルロン酸受容体、インテグリン受容体（αｖβ３）、レクチン結合糖タンパク質、ＴｆＲ、ＶＥＧＦＲ－１及びＶＥＧＦＲ－２、サイトカイン、ＣＤ５６、ＣＤ１９、ＣＤ１６、ＣＤ７４、ＣＤ３７、ＣＤ７０、ＣＤ５２、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３、及びＣＤ７９ｂ。

【0176】

一実施形態では、標的は、ＥＲＢＢ２としても知られているＨＥＲ２、遺伝子ＩＤ番号２０６４（ＮＣＢＩ）である。

【0177】

一実施形態では、標的は、ＥＲＢＢ１又はＨＥＲ１としても知られている上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、遺伝子ＩＤ番号１９５６（ＮＣＢＩ）である。

【0178】

一実施形態では、標的は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、遺伝子ＩＤ番号２３４６（ＮＣＢＩ）である。

【0179】

一実施形態では、標的は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）である。がんにおけるセリンプロテアーゼ線維芽細胞活性化タンパク質の過剰発現は、腫瘍の選択的標的化を容易にする（Ｌｏｋｔｅｖ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ，２０１９，６０（１０），ｐ１４２１－１４２９）。

【0180】

一実施形態では、標的化剤は、最大で約２００ｋＤａ、又は最大で約１５０ｋＤａ、又は最大で約１１０ＫＤａ、又は最大で約８０ＫＤａ、又は最大で約５５ＫＤａ、又は最大で約１６ｋＤａの分子量を含む。一実施形態では、標的化剤は、最大で約２００ｋＤａの分子量を含む。一実施形態では、標的化剤は、最大で約１５０ｋＤａの分子量を含む。一実施形態では、標的化剤は、最大で約１１０ｋＤａの分子量を含む。一実施形態では、標的化剤は、最大で約８０ｋＤａの分子量を含む。一実施形態では、標的化剤は、最大で約５５ｋＤａの分子量を含む。いくつかの実施形態では、標的化剤は、最大で約１６ｋＤａの分子量を含む。一実施形態では、標的化剤は、約３ｋＤａ～約８０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、標的化剤は、約３ｋＤａ～約６０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、標的化剤は、約３ｋＤａ～約５０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、標的化剤は、約３ｋＤａ～約４０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、標的化剤は、約３ｋＤａ～約３０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、標的化剤は、約３ｋＤａ～約２０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、標的化剤は、約３ｋＤａ～約１５ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、標的化剤は、約３ｋＤａ～約１３ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、標的化剤は、約５ｋＤａ～約１５ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、標的化剤は、約５ｋＤａ～約１２ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、標的化剤は、約５ｋＤａ～約１０ｋＤａの分子量を有する。

【0181】

本明細書で使用するとき、「ｋＤＡ」又は「キロダルトン」とは、１０００ダルトンからなる分子量の単位を指す。

【0182】

一実施形態では、標的化剤は、抗体、重鎖抗体、ＳｃＦＶ－Ｆｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又は単一ドメイン抗体から選択される。一実施形態では、標的化剤は、抗体又は抗体断片から選択される。

【0183】

一実施形態では、標的化剤は、抗体である。本開示の目的において、用語「抗体」は、Ｆｖにより１つ又は少数の密接に関連する抗原に特異的に結合することができる組換え抗体又は改変抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、脱免疫抗体、及びハーフ抗体、二重特異性抗体）など、例えば２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む４つの鎖状タンパク質を含む。抗体は、一般に、定常ドメインを含み、これは、定常領域及び定常断片、結晶化可能断片（Ｆｃ）に配置させ得る。例示的な形態の抗体は、四鎖構造を基本単位として含む。完全長抗体は、共有結合により連結した２つの重鎖（約５０～７０ｋＤａ）及び２つの軽鎖（それぞれ約２３ｋＤａ）を含む。軽鎖は、一般に、可変領域及び定数ドメインを含み、哺乳動物では、κ軽鎖又はλ軽鎖のいずれかである。重鎖は、一般に、ヒンジ領域によって追加の定常ドメインに連結されている可変領域及び１つ又は２つの定常ドメインを含む。哺乳動物の重鎖は、α型、δ型、ε型、γ型、μ型のうちのいずれか１つである。また、それぞれの軽鎖は、重鎖のうちの１つと共有結合により連結している。例えば、２つの重鎖、及び重鎖と軽鎖は、鎖間ジスルフィド結合及び非共有結合による相互作用によって一緒に保持される。鎖間ジスルフィド結合の数は、抗体の種類によって異なり得る。各鎖は、Ｎ－末端可変領域（Ｖ_Ｈ又はＶ_Ｌ、それぞれ約１１０のアミノ酸長）、Ｃ－末端に１つ以上の定常ドメインを有する。軽鎖の定数ドメイン（ＣＬ：長さ約１１０アミノ酸）は、重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ：長さ約３３０～４４０アミノ酸）と整列し、ジスルフィド結合している。軽鎖の可変領域は、重鎖の可変領域と整列している。抗体重鎖は、２つ以上の追加のＣＨドメイン（例えば、ＣＨ２、ＣＨ３など）を含むことができ、ＣＨ１定常ドメインとＣＨ２定常ドメインとの間のヒンジ領域を含むことができる。抗体は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであり得る。一例では、抗体は、ヒト抗体、その脱免疫型、生殖細胞型、又はその親和性成熟型である。用語「完全長抗体」又は「全抗体」は、抗体の抗原結合断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すために同義的に使用される。具体的には、全抗体としては、定常領域などの重鎖及び軽鎖を有する抗体が挙げられる。定常領域は、野生型配列定常領域（例えば、ヒトの野生型配列定常領域）又はそのアミノ酸配列バリアントであってもよい。

【0184】

一実施形態では、標的化剤は、融合タンパク質である。本明細書で使用するとき、「融合タンパク質」は、元々別個のタンパク質又はその一部についてコードされている２つ以上の核酸配列の接合（例えば、タンパク質受容体の一部分と抗体（エタネルセプト）の一部分との融合）によって作製されるタンパク質である。

【0185】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、抗体断片である。本明細書で使用されるとき、「抗体断片」という用語は、抗原に特異的に結合することができる抗体の一部又は断片を意味するものとし、例えば、本明細書で定義されているＦ_Ｖ、Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ又は可変領域が含まれる。この用語は、抗体から直接由来する断片、並びに組換え手段を用いて生成されたタンパク質を包含するものと理解されよう。一実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、重鎖抗体、ドメイン抗体、重鎖抗体、ダイアボディ、又はトリアボディから選択される。

【0186】

本明細書で使用されるとき、「Ｆｖ」という用語は、複数のポリペプチドで構成されているか、単一のポリペプチド（ｓｃＦＶ）であるかにかかわらず、Ｖ_ＬとＶ_Ｈが会合して、抗原結合ドメインを有する錯体を形成する、すなわち抗原に特異的に結合することができる任意のタンパク質を意味するものとする。抗原結合ドメインを形成するＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、単一のポリペプチド鎖であっても、異なるポリペプチド鎖であってもよい。一実施形態では、本開示のＦｖ（本開示の任意のタンパク質も同様）は、同じ抗原を結合してもしなくてもよい複数の抗原結合部位を有し得る。この用語は、抗体から直接由来する断片、並びに組換え手段を用いて生成されたタンパク質を包含するものと理解されよう。いくつかの例では、Ｖ_Ｈは、重鎖定数ドメインＣＨ１に連結されておらず、及び／又はＶ_Ｌは、軽鎖定数ドメイン（ＣＬ）、例えば、ドメイン抗体に連結されていない。例示的なＦｖ含有ポリペプチド又はタンパク質には、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディなどがある。Ｆａｂ断片は、免疫グロブリンの一価の抗原結合断片からなり、全抗体を酵素パパインで消化して、インタクトの軽鎖と重鎖の一部からなる断片を生成するか、又は組換え手段を使用して、生成され得る。Ｆａｂ断片は、一般的に、Ｖ_Ｈ及びＣ_Ｈ１及びＶ_Ｌ及びＣ_Ｌを含むか、これらから構成される。抗体の「Ｆａｂ’断片は、全抗体をペプシンで処理した後、還元することで、インタクトの軽鎖と、Ｖ_Ｈ及び単一の定常ドメインを含む重鎖の一部からなる分子を生成することによって得ることができる。このようにして処理された抗体では、２つのＦａｂ’断片が得られる。Ｆａｂ’断片は、組換え手段によっても生成することができる。「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域とが好適で柔軟なポリペプチドリンカーによって共有結合により連結されている抗体の可変領域断片（Ｆｖ）を含む組換え分子である。

【0187】

いくつかの実施形態では、抗体断片は、重鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又は単一ドメイン抗体から選択される。

【0188】

本明細書で使用されるとき、「ドメイン抗体（ｄＡｂ）」又は「ナノボディ」とも呼ばれる「シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）」は、単一の可変領域の重鎖Ｖ_Ｈ又は軽鎖Ｖ_Ｌからなる。一実施形態では、可変領域は、ラクダ科由来である。一実施形態では、可変領域は、サメ由来する。一実施形態では、Ｖ_Ｈは、ラクダ科由来のＶ_Ｈである。

【0189】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、シングルドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、標的化剤は、ＶＨシングルドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、標的化剤は、ＶＬシングルドメイン抗体である。

【0190】

一実施形態では、単一ドメイン抗体は、例えば、ＥＰ２２１５１２５（Ａ１）、ＵＳ２０１１／００２８６９５、Ｈｕｓｓａｃｋ ｅｔ ａｌ．（２０１８）、Ａｒｅｚｕｍａｎｄ ｅｔ ａｌ．（２０１７）、Ｃｈａｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１９）に記載される単一ドメインアミノ酸配列を含む。一実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＵＳ２０１１／００２８６９５に記載のシングルドメインのアミノ酸配列を含む。

【0191】

一実施形態では、シングルドメイン抗体は、実施例７に開示のシングルドメインのアミノ酸配列を含む。一実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＵＳ２０１１／００２８６９５の配列番号１９８６に示すアミノ酸配列を含む２Ｄ３である。

【0192】

一実施形態では、単一ドメイン抗体は、アミノ酸配列 ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１）を含む。一実施形態では、配列は、コンジュゲーションのための追加のシステイン残基を含む。

【0193】

一実施形態では、単一ドメイン抗体は、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ＃ＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨであって、＃が非天然アミノ酸、好ましくは４－アジドフェニルアラニン残基（配列番号２）を示す、アミノ酸配列を含む。

【0194】

一実施形態では、単一ドメイン抗体は、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ＃であって、＃が非天然アミノ酸、好ましくは４－アジドフェニルアラニン残基（配列番号３）を示す、アミノ酸配列を含む。

【0195】

一実施形態では、単一ドメイン抗体は、アミノ酸配列：ＧＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＥＮＬＹＦＱＧＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号４）を含む。

【0196】

一実施形態では、単一ドメイン抗体は、アミノ酸配列：ＧＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＥＮＬＹＦＱＧＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ＃であって、＃が非天然アミノ酸、好ましくは４－アジドフェニルアラニン残基（配列番号５）を示す、アミノ酸配列を含む。

【0197】

一実施形態では、単一ドメイン抗体は、アミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ［Ｘ］_ｎＣであって、Ｘが任意のアミノ酸であり、ｎ＝０～２０である、アミノ酸配列を含む。一実施形態では、ｎ＝０、１、２、３、４、又は５である。一実施形態では、ｎ＝４（配列番号６）である。

【0198】

一実施形態では、単一ドメイン抗体は、アミノ酸配列：
Ｃ［Ｘ］_ｎＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳであって、Ｘが任意のアミノ酸であり、ｎ＝０～２０である、アミノ酸配列を含む。一実施形態では、ｎ＝０、１、２、３、４、又は５（配列番号７）である。

【0199】

一実施形態では、単一ドメイン抗体は、アミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ［Ｘ］_ｎＣ［Ｘ］_ｍであって、Ｘが任意のアミノ酸であり、ｍ＝０～２０であり、ｎ＝０～２０である、アミノ酸配列を含む。一実施形態では、ｎ＝０、１、２、３、４、又は５（配列番号８）である。

【0200】

一実施形態では、単一ドメイン抗体は、アミノ酸配列：［Ｘ］_ｎＣ［Ｘ］_ｍＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳであって、Ｘが任意のアミノ酸であり、ｍ＝０～２０であり、ｎ＝０～２０である、アミノ酸配列を含む。一実施形態では、ｎ＝０、１、２、３、４、又は５（配列番号９）である。一実施形態では、単一ドメイン抗体は、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＬＧＴＬＣＴＰＳＲＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号１０）を含む。

【0201】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、単一ドメイン抗体であり、約４ｋＤａ～約８０ｋＤａ、又は約５ｋＤａ～約８０ｋＤａ、又は約５ｋＤａ～約６０ｋＤａ、又は約５ｋＤａ～約５０ｋＤａ、又は約５ｋＤａ～約４０ｋＤａ、又は約５ｋＤａ～約３０ｋＤａ、又は約５ｋＤａ～約２０ｋＤａ、又は約５ｋＤａ～約１６ｋＤａ、又は約５ｋＤａ～約１５ｋＤａ、又は約５ｋＤａ～約１２ｋＤａ、又は約１０ｋＤａ～約１６ｋＤａ、又は約１５ｋＤａ～約２０ｋＤａの分子量を有する。

【0202】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、約５００未満、約４００未満、約３００未満、約２００未満、約１５０未満、約１４０未満、約１３０未満、約１２０未満、約１１０未満、約１００未満のアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、標的化剤は、約５０を超える、約７５を超える、約１００を超える、又は約１２０を超えるアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、標的化剤は、１２０未満のアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、標的化剤は、約１００～約１２０のアミノ酸残基を含む。

【0203】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、抗体のミメティックである。本明細書では、「ミメティック（ｍｉｍｅｔｉｃ）」又は「ミメティクス（ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」という用語は、抗体又は抗体断片のように、抗原を結合することができるが、抗体とは構造的に関連しない化合物を指す。この用語は、本明細書に記載の抗体又は抗体断片を包含しないと理解されるものとする。この用語は、合成（インビトロで生成された）ミメティクス、及び組換え手段を用いて生成されたミメティクスを包含すると理解される。この用語は、タンパク質ミメティクスを包含するものと理解される。

【0204】

一実施形態では、ミメティックは、アフィボディ、アプタマー、アフィリン、アフィマー、アフィチン、アンチカリン、アビマー、アルファボディ、モノボディ、ＤＡＲＰｉｎ、アプタマー、Ｆｙｏｍｅｒ、フィブロネクチンＩＩＩ型由来タンパク質スカフォールド、フィトシスタチン由来タンパク質スカフォールド、及びパラトープミメティックペプチドから選択される。抗体と同様に、ミメティックも標的化部分として使用され得る。

【0205】

一実施形態では、ミメティックは、以下のタンパク質スカフォールド：プロテインＡのｚドメイン、γ－Ｂクリスタリン、ユビキチン、シスタチン、ｓａｃ７ｄ、三重らせん、コイルドコイル、リポカリン、シクロチド、膜受容体のＡドメイン、アンキリンリピートモチーフ、Ｆｙｍのｓｈ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤のＫｕｎｉｔｓドミアン、フィブロネクチンのＩＩＩ型ドメイン、ウェルシュ菌のＩｇＧ様、耐熱性炭水化物結合モジュールファミリー３２（ＣＢＭ３２）のうちの１つに由来する。

【0206】

一実施形態では、ミメティックは、約３ｋＤａ～約２０ｋＤａ、又は約４ｋＤａ～約１８ｋＤａ、又は約６ｋＤａ～約１６ｋＤａ、又は約６ｋＤａ～約１４ｋＤａ、又は約６ｋＤａ～約１２ｋＤａ、又は約６ｋＤａ～約１０ｋＤａ、又は約６ｋＤａ～約８ｋＤａである。一実施形態では、ミメティックは、約３ｋＤａ～約２０ｋＤａである。一実施形態では、ミメティックは、約３ｋＤａ～約２０ｋＤａである。一実施形態では、ミメティックは、約４ｋＤａ～約１８ｋＤａである。一実施形態では、ミメティックは、約６ｋＤａ～約１６ｋＤａである。一実施形態では、ミメティックは、約６ｋＤａ～約１４ｋＤａである。一実施形態では、ミメティックは、約６ｋＤａ～約１２ｋＤａである。一実施形態では、ミメティックは、約６ｋＤａ～約１０ｋＤａである。一実施形態では、ミメティックは、約６ｋＤａ～約８ｋＤａである。

【0207】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、アフィボディである。本明細書では、「アフィボディ」という用語は、「Ｚドメイン」として知られる長さ約５８アミノ酸の３つのαヘリックス束のドメインをベースにした、非常に小さい（約６ｋＤａ）ポリペプチド抗体ミメティックのクラスのいずれかを指す。典型的には、アフィボディのスカフォールドは、プロテインＡのＢドメインの改変型をベースにしている。アフィボディは、非常に高い安定性（９０℃の高温に耐性があり、ナノモルからピコモルの範囲の標的親和性を有する）を特徴としている。例えば、Ｎｏｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９９５），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，８：６０１－６０８を参照のこと。既知のアフィボディの例としては、例えば、ＨＥＲ２に対するアフィボディ（例えば、抗体－ＨＥＲ２抗体（登録商標）、ＡＦＦＩＢＯＤＹ ＡＢ、Ｂｒｏｍｍａ，Ｓｗｅｄｅｎ；米国特許第７，９９３，６５０号）が挙げられる。

【0208】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、アフィボディであり、約３ｋＤａ～約１０ｋＤａ、又は約３ｋＤａ～約８ｋＤａ、又は約４ｋＤａ～約８ｋＤａ、又は約４ｋＤａ～約７ｋＤａ、又は約５ｋＤａ～約７ｋＤａ、又は約６ｋＤａの範囲の分子量を有する。

【0209】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、アフィボディであり、８０未満のアミノ酸残基、又は７０未満のアミノ酸残基、又は６５未満のアミノ酸残基、又は６０未満のアミノ酸残基を有する。いくつかの実施形態では、標的化剤は、４０～８０のアミノ酸残基、又は５０～７０のアミノ酸残基、又は５５～６５のアミノ酸残基、又は５６～６０のアミノ酸残基、又は約５８のアミノ酸残基で構成される。

【0210】

本開示の目的において、用語「抗体」は、Ｆｖにより１つ又は少数の密接に関連する抗原に特異的に結合することができる組換え抗体又は改変抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、脱免疫抗体、及びハーフ抗体、二重特異性抗体）など、例えば２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む４つの鎖状タンパク質を含む。抗体は、一般に、定常ドメインを含み、これは、定常領域及び定常断片、結晶化可能断片（Ｆｃ）に配置させ得る。例示的な形態の抗体は、四鎖構造を基本単位として含む。完全長抗体は、共有結合により連結した２つの重鎖（約５０～７０ｋＤａ）及び２つの軽鎖（それぞれ約２３ｋＤａ）を含む。軽鎖は、一般に、可変領域及び定数ドメインを含み、哺乳動物では、κ軽鎖又はλ軽鎖のいずれかである。重鎖は、一般に、ヒンジ領域によって追加の定常ドメインに連結されている可変領域及び１つ又は２つの定常ドメインを含む。哺乳動物の重鎖は、α型、δ型、ε型、γ型、μ型のうちのいずれか１つである。また、それぞれの軽鎖は、重鎖のうちの１つと共有結合により連結している。例えば、２つの重鎖、及び重鎖と軽鎖は、鎖間ジスルフィド結合及び非共有結合による相互作用によって一緒に保持される。鎖間ジスルフィド結合の数は、抗体の種類によって異なり得る。各鎖は、Ｎ－末端可変領域（ＶＨ又はＶＬ、それぞれ約１１０のアミノ酸長）、Ｃ－末端に１つ以上の定常ドメインを有する。軽鎖の定数ドメイン（ＣＬ：長さ約１１０アミノ酸）は、重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ：長さ約３３０～４４０アミノ酸）と整列し、ジスルフィド結合している。軽鎖の可変領域は、重鎖の可変領域と整列している。抗体重鎖は、２つ以上の追加のＣＨドメイン（例えば、ＣＨ２、ＣＨ３など）を含むことができ、ＣＨ１定常ドメインとＣＨ２定常ドメインとの間のヒンジ領域を含むことができる。抗体は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであり得る。一例では、抗体は、ヒト抗体、その脱免疫型、生殖細胞型、又はその親和性成熟型である。

【0211】

用語「完全長抗体」又は「全抗体」は、抗体の抗原結合断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すために同義的に使用される。具体的には、全抗体としては、定常領域などの重鎖及び軽鎖を有する抗体が挙げられる。定常領域は、野生型配列定常領域（例えば、ヒトの野生型配列定常領域）又はそのアミノ酸配列バリアントであってもよい。

【0212】

本明細書で使用されるとき、「可変領域」という用語は、本明細書で定義した抗体の軽鎖及び／若しくは重鎖の部分、又は抗原に特異的に結合できる重鎖のみの抗体（例えば、ラクダ科の抗体又は軟骨魚類の免疫グロブリン新抗原受容体（ＩｇＮＡＲ））の部分を指し、相補的決定領域「ＣＤＲ」；すなわち、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びにフレームワーク領域「ＦＲ」のアミノ酸配列を含む。ＦＲは、ＣＤＲ残基以外の可変領域残基である。例えば、可変領域は、３つのＣＤＲとともに、３つ又は４つのＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及び任意によりＦＲ４）を含む。Ｖ_Ｈは、重鎖の可変領域を指す。Ｖ_Ｌは、軽鎖の可変領域を指す。

【0213】

本明細書で使用するとき、用語「相補性決定領域」（同義語ＣＤＲ、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、抗体の可変領域のアミノ酸残基を指し、その存在は、特異的な抗原結合の主要な寄与因子である。各可変領域は、典型的には、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と認定される３つのＣＤＲ領域を有する。各相補性決定領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９８７及び／又は１９９１）によって定義された「相補性決定領域」のアミノ酸残基を含んでもよい。例えば、重鎖可変領域では、ＣＤＲＨ１は、３１～３５残基、ＣＤＲＨ２は、５０～６５残基、ＣＤＲＨ３は、９５～１０２残基にある。軽鎖では、ＣＤＲＬ１は、２４～３４残基、ＣＤＲＬ２は、５０～５６残基、ＣＤＲＬ３は、８９～９７残基である。これらのＣＤＲは、例えばＫａｂａｔ（１９８７及び／又は１９９１）に記載のとおり、多数の挿入物も含み得る。本開示は、Ｋａｂａｔ付番システム、これらに限定されないが、カノニカル付番システム、又はＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（１９８７）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）、及び／又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）、Ｈｏｎｎｅｇｈｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｋｔｈｕｎ（２００１）の付番システム、Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）で論じられているＩＭＧＴシステム、又はＥｎｈａｎｃｅｄ Ｃｈｏｔｈｉａ Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ Ｓｃｈｅｍｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ｍｄｅｘ．ｈｔｍｌ）など、全ての付番システムによって定義されるＦＲ及びＣＤＲである。一例では、ＣＤＲ及び／又はＦＲは、例えば、図９Ａ～９Ｄに太字で描写しているとおり、Ｋａｂａｔの付番システムに従って定義される。任意により、Ｋａｂａｔ付番システムによる重鎖ＣＤＲ２は、本明細書に記載の５つのＣ末端アミノ酸かを含まないか、又はそれらのアミノ酸のいずれか１つ以上が別の天然由来アミノ酸で置換されている。追加又は代替として、任意では、軽鎖ＣＤＲ１は、本明細書に記載の４つのＮ－末端アミノ酸を含まないか、又はそれらのアミノ酸のいずれか１つ以上が別の天然由来のアミノ酸で置換されている。この点に関して、Ｐａｄｌａｎらは１９９５年に、重鎖ＣＤＲ２の５つのＣ末端アミノ酸及び／又は軽鎖ＣＤＲ１の４つのＮ末端アミノ酸は、一般に抗原結合に関与しないことを確立している。一例では、ＣＤＲ及び／又はＦＲは、例えば、図９Ａ～９Ｄに下線付きテキストで描写しているとおり、Ｃｈｏｔｈｉａの付番システムに従って定義される。

【0214】

本明細書で使用するとき、「Ｋａｂａｔ付番システム」という用語は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９８７及び／又は１９９１）に記載されている、抗体の可変領域に番号を付け、ＣＤＲ（超可変領域）を同定するためのスキームを指す。

【0215】

本明細書で使用するとき「Ｃｈｏｔｈｉａ付番システム」という用語は、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（１９８７）又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９７）に記載されている、抗体の可変領域に番号を付け、ＣＤＲ（構造ループ）を同定するためのスキームを指す。

【0216】

本明細書で使用するとき「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原（例えば、ＨＥＲ２）に特異的に結合することができる標的化剤の領域を意味するものとする。

【0217】

本明細書で使用されるとき、タンパク質又はその抗原結合ドメインと抗原との相互作用に関する「結合する（ｂｉｎｄ）」又は「結合すること（ｂｉｎｄｉｎｇ）」という用語は、その相互作用が、抗原上の特定の構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は、一般的なタンパク質ではなく、特定のタンパク質構造を認識して結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に結合している場合、標識された「Ａ」を含む反応における、エピトープ「Ａ」（又は遊離の非標識「Ａ」）を含む分子及び抗体が存在することにより、抗体に結合する標識された「Ａ」の量が減少する。

【0218】

本明細書で使用するとき、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄ）」、「特異的に結合する（ｂｉｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」、又は類似の語句は、本開示のタンパク質が、特定の抗原（ＨＥＲ２など）又はそれを発現する細胞と、代わりの抗原又は細胞と比較して、より頻繁に、より迅速に、より持続的に、及び／又はより高い親和性で、反応又は会合することを意味するものとする。例えば、ある抗原に特異的に結合するタンパク質は、他の抗原に結合するよりも高い親和性（例えば、２０倍、４０倍、６０倍、８０倍、又は１００倍、又は１５０倍、又は２００倍以上の親和性）、アビディティ、容易さ、及び／又はより長い持続性で、その抗原に結合する。また、この定義を読むことによって、例えば、第一の抗原に特異的に結合するタンパク質は、第二の抗原に特異的に結合し得る又は結合し得ないことが理解される。このような「特異的な結合」は、必ずしも別の抗原との排他的な結合又は検出不可能な結合を必要としないため、これは「選択的な結合」という用語によって意味される。

【0219】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、本明細書で定義される標的化剤アミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

【0220】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、例えば、最大２０個のアミノ酸長のオリゴマーペプチド配列であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、標的化剤は、５～２０個のアミノ酸、７～１８個のアミノ酸、又は９～１５個のアミノ酸のペプチド配列である。いくつかの実施形態では、標的化剤は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、又は１８個のアミノ酸のペプチド配列である。

【0221】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、２０００Ｄａ未満、１０００Ｄａ未満、又は５００Ｄａ未満の分子量を有する。いくつかの実施形態では、標的化剤は、約１，０００Ｄａ未満、又は約７５０Ｄａ未満、又は約５００Ｄａ未満の分子量を有するものとみなされ得る小分子である。

【0222】

一例では、標的化剤は、ＰＳＭＡに結合する小分子である。ＰＳＭＡに結合する小分子は、一実施形態では、ペプチドであってもよい。このような結合ペプチドは、当技術分野で既知である。一例では、標的化剤は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する小分子である。

【0223】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に特異的に結合する標的化剤である。例えば、標的化剤は、ＤＵＰＡ基、又はその類似体であってもよく、又はそれを含有してもよい。ＤＵＰＡは、以下の構造を有する。

【化29】

【0224】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、カルボキシル基を介してコンジュゲートされたＤＵＰＡ基、例えば、以下のものであるか、又はそれを含有する。

【化30】

【0225】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する標的化剤である。いくつかの実施形態では、標的化剤は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を阻害する基であり得るか、又はそれを含有し得る。例えば、標的化剤（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｇｅｎｔ）は、以下の構造を有するＦＡＰ結合基、又はその類似体であってもよく、又はそれを含有し得る：

【化31】

式中、Ｒは、式Ｉの置換基であり、

【化32】

式Ｉ
式中、
Ｘは、Ｏ、ＮＨ、Ｎ（ＣＨ_３）、Ｓ、及びＣＨ_２から選択され、
Ｙは、Ｎ、及びＣから選択され、
ｎは、０、１、２、３、４、５、及び６からなる群から選択される整数であり、
Ａは、５～１０員の単環式又は二環式複素環基であり、
Ｒ^１は、任意選択により１つ以上の５～１０員環式基で置換されたＣ_１－Ｃ_６アルキル基からなる群から選択され、

【化33】

は、デンドリマーへのコンジュゲーション点を表す。

【0226】

いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ｘは、Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ｘは、ＮＨである。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ｘは、Ｎ（ＣＨ_３）である。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ｘは、Ｓである。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ｘは、ＣＨ_２である。

【0227】

いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ｙは、Ｎである。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ｙは、Ｃである。ＹがＣである本実施形態では、Ａは、芳香族又は飽和の５～１０員単環式又は二環式複素環基であり得ることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ｙは、ＣＨである。ＹがＣである本実施形態では、Ａは、部分的又は完全に飽和した５～１０員単環式又は二環式複素環基であることが理解されるであろう。

【0228】

いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、ｎは、０である。本実施形態では、ｎが０であるとき、ＸはＹに直接結合することが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、ｎは、１である。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、ｎは、２である。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、ｎは、３である。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、ｎは、４である。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、ｎは、５である。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、ｎは、６である。

【0229】

いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ａは、５～１０員の単環式又は二環式複素環基である。一例では、Ａは、５員単環式複素環基である。一例では、Ａは、６員単環式複素環基である。一例では、Ａは、７員単環式複素環基である。一例では、Ａは、７員二環式複素環基である。一例では、Ａは、８員二環式複素環基である。一例では、Ａは、９員二環式複素環基である。一例では、Ａは、１０員二環式複素環基である。

【0230】

Ａ基の例としては、

【化34】

が挙げられるが、これらに限定されない。

【0231】

いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ｒ^１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル基である。一例では、Ｒ^１は、Ｃ_１－アルキル基（すなわち、ＣＨ_３）である。いくつかの実施形態では、Ｒは、式Ｉの置換基であり、式中、Ｒ^１は、１つ以上の５～１０員環式基で任意選択的に置換されたＣ_１－Ｃ_６アルキル基である。いくつかの実施形態では、Ｒ^１は、６員環式基で置換されたＣ_１－アルキル基である。一例では、Ｒ^１は、ＣＨ_２－フェニルである。

【0232】

一例では、Ｒは、以下の式Ｉの置換基である。

【化35】

【0233】

一例では、Ｒは、以下の式Ｉの置換基である。

【化36】

【0234】

Ｒ置換基の更なる例としては、Ｌｏｋｔｅｖ ｅｔ ａｌ．（Ｌｏｋｔｅｖ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，６０（１０），２０１９，ｐ１４２１－１４２９）によって公表されたものが挙げられる。

【0235】

したがって、一実施形態では、標的化剤は、以下の構造を有するＦＡＰ結合基である。

【化37】

であって、
式中、Ｘ、Ｙ、ｎ、Ａ、及びＲ^１は、本明細書に記載のとおりである。

【0236】

一例では、標的化剤は、以下の構造を有するＦＡＰ結合基である。

【化38】

【0237】

一例では、標的化剤は、以下の構造を有するＦＡＰ結合基である。

【化39】

【0238】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＰＳＭＡ、又はＦＡＰのうちの１つ以上に対して選択的である標的化剤である。一実施形態では、標的化剤は、ＨＥＲ２に対して選択的である標的化剤である。一実施形態では、標的化剤は、ＥＧＦＲに対して選択的である標的化剤である。一実施形態では、標的化剤は、ＰＳＭＡに対して選択的である標的化剤である。一実施形態では、標的化剤は、ＦＡＰに対して選択的である標的化剤である。

【0239】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、市販のものなどの他の標的化剤との結合に関して競合的である。一例では、標的化剤は、市販の抗体療法との結合に関して競合的である。一例では、標的化剤は、ＨＥＲ２に対して選択的であり、ＨＥＲ２抗体、例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、及びマルゲツキシマブとの結合に関して競合的である。一例では、標的化剤は、ＥＧＦＲに対して選択的であり、ＥＧＦＲ抗体、例えば、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、及びネシツムマブとの結合に対して競合的である。一例では、標的化剤は、ＦＡＰに対して選択的であり、ＦＡＰ抗体、例えば、シブロツズマブとの結合と競合的である。

【0240】

いくつかの実施形態では、当該コンジュゲートは、単一の標的化剤を含む。他の実施形態では、コンジュゲートは、複数の標的化剤、例えば、２つ、３つ、４つ、又は５つの標的化剤を含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、１～３２個の標的化剤を含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、少なくとも５つの標的化剤を含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、５～３０個の標的化剤を含む。

【0241】

標的化剤は、スペーサーを介して、コンジュゲートの残部に付着される。いくつかの実施形態では、標的化剤とスペーサー基との間の共有結合による付着又は連結は、標的化剤を含む中間体及びデンドリマーを含む中間体上に存在する相補的反応性官能基間の反応によって形成されている。

【0242】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、標的化剤のＣ末端においてスペーサー基に共有結合により連結している。

【0243】

一実施形態では、ＦＡＰ結合基は、本明細書に記載されるように、スペーサー基を介してデンドリマーにコンジュゲートされる。したがって、一実施例では、標的化剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むスペーサー基を介してデンドリマーにコンジュゲートされたＦＡＰ結合基である。一実施形態では、標的化剤は、以下の構造を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むスペーサー基を介して、デンドリマーにコンジュゲートされたＦＡＰ結合基である：

【化40】

、
式中、スペーサー基は、スペーサーの末端カルボン酸基を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。

【0244】

標的化剤を、スペーサーに、したがってデンドリマーに付着させるための共有結合による付着部位は、例えば、システイン、リジン、Ｎ－末端アミン、チロシン、炭水化物、非天然アミノ酸若しくはトランスアミナーゼ、又は認識配列であり得る。タンパク質への共有結合による付着のための結合部位は、当技術分野において知られている（例えば、Ｍｉｌｌａ Ｐ．，ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ（２０１２）Ｖ１３，１：１０５－１１９）。いくつかの実施形態では、標的化剤を含む中間体は、スペーサーへの付着のための非天然アミノ酸残基を含む。非天然アミノ酸残基は、スペーサー基上に存在してもよく、又はスペーサー基が付着したデンドリマーを含む中間体上に存在してもよい、反応性官能基と相補的な反応性官能基を有する側鎖を有してもよい。いくつかの実施形態では、非天然アミノ酸残基は、アジド基を含有するものであり、例えば、４－アジドフェニルアラニン残基、例えば、

【化41】

であってもよい。アジド基は、スペーサー前駆体基中に存在し得るアルキン基と環化付加反応を起こすことができる。いくつかの実施形態では、非天然アミノ酸は、ジエン含有アミノ酸、例えば、以下のものなどのスピロシクロペンタジエン含有アミノ酸である。

【化42】

ジエン基は、マレイミドに存在するようなアルケン基との環化付加反応（例えば、ディールス・アルダー反応）を起こすことができる。スペーサーに付着させるために使用され得る非天然アミノ酸の更なる例としては、ケトンなどのカルボニル基を含むもの、及びメチルシクロプロピレン基を含むものが挙げられる。非天然アミノ酸の追加例としては、

【化43】

が挙げられる。

【0245】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、本明細書で定義されているアミノ酸配列のいずれかを含むか、又はアミノ酸配列のいずれかからなる。

【0246】

スペーサー基
本明細書で使用するとき、「スペーサー基」という用語は、標的化剤をデンドリマーに付着させる役割を果たす化学的実体を指す。すなわち、スペーサー基が、標的化剤をデンドリマーに接合させる。いくつかの実施形態では、スペーサーは、単に、標的化剤がデンドリマーに結合する原子又は小化学連結基であってもよい。他の実施形態では、スペーサー基は、より広範なものであり得る。いくつかの実施形態では、スペーサー基は、デンドリマーの他の構成要素からの過度の悪影響を受けることなく、例えば、ＨＥＲ２受容体に結合できるように、標的化剤を位置付けることを目的としている。

【0247】

いくつかの実施形態では、標的化剤は、デンドリマーのコアを介してデンドリマーに付着している。すなわち、抗体断片などの標的化剤は、スペーサー基によってデンドリマーのコアに共有結合により付着している。デンドリマーのコアに付着されているスペーサーを介して標的化剤をデンドリマーに付着させることは、デンドリマーが立体的に密集している場合は、有益であり得、スペーサー基は、デンドリマーの表面を超えて突出するのに十分な長さであり得、それにより、インビボにおいて、標的化剤をその受容体などに結合させることができるようになる。例えば、コアがマレイミド含有コアである場合、標的化剤は、マレイミド環窒素に付着し得、そのような状況では、スペーサー基が有益であるだろう。

【0248】

いくつかの他の実施形態では、標的化剤は、デンドリマーの表面構成ユニットを介して、デンドリマーに付着している。例えば、標的化剤は、リジン残基のアミン基と、標的化剤及びスペーサー基を含む中間体上に存在するカルボン酸基との間に形成されるアミド結合などにより、スペーサー基を介してリジン残基の表面窒素に連結されてもよい。

【0249】

デンドリマーがその標的に結合できるように、デンドリマーから適切な距離で標的化剤を遠ざける役割を果たす任意の好適な化学基を利用してもよい。例示的なスペーサー基としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリアリール、アミド連結、ペプチド、アミノ酸、アルキルオキシ、アルキルアミノ、アルキル及びアルケニル鎖、並びに糖類（モノ、オリゴ、及びポリ）、又はそれらの残基を含むものが挙げられる。いくつかの実施形態では、スペーサー基は、２～６０のエチレンオキシ繰り返し単位、例えば、２～２０又は２０～４８の繰り返し単位などの、１つ以上のＰＥＧ基を含む。一実施形態では、ＰＥＧは、８～３６の繰り返し単位である。更なる実施形態では、ＰＥＧは、１２、１６、２０、２４又は３６の繰り返し単位である。

【0250】

いくつかの実施形態では、スペーサー基は、他の官能基に挟まれた複数のＰＥＧ基を含む。例えば、スペーサー基は、例えば、アミド基又はスペーサー基の部分を接続するために有用な他の官能基を介して連結されたＰＥＧ基を含んでいてもよい。

【0251】

スペーサー基を含む中間体を、標的化剤を含む中間体に付着させる任意の好適な手段を利用してもよい。例えば、共有結合による付着のための部位としては、システイン残基、リジン残基、Ｃ末端アミノ酸残基、Ｎ末端アミン、チロシン残基、炭水化物、好適な非天然アミノ酸残基、又はトランスアミナーゼ、又は認識配列などが挙げられるが、これらに限定されない。標的化剤などのタンパク質への共有結合による付着のための結合部位は、当技術分野において公知である（例えば、Ｍｉｌｌａ Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２）。例えば、スペーサー基を含む中間体は、スペーサー基がＣ末端を介して標的化剤に付着されるように、標的化剤のＣ末端で標的化剤を含む中間体と反応し得る。いくつかの実施形態では、標的化剤は、標的化剤のＣ末端を介してスペーサー基に付着している。一実施形態では、標的化剤は、標的化剤のＣ末端を介して、スペーサー基に共有結合により付着される、又は連結される。

【0252】

したがって、スペーサー基を標的化剤及び／又はデンドリマーに付着させるために、スペーサー基を含む前駆体は、１つ以上の反応性官能基を含んでいてもよい。

【0253】

特定の実施形態では、反応性官能基は、ヒドロキシ、カルボキシ、ＮＨＳ若しくはペンタフルオロフェノールエステルなどの活性エステル、アミノ、アジド、マレイミド（スルホマレイミドなど）、ジエン（シクロペンタジエン、例えば、スピロ［２．４］ヘプタ－４，６－ジエン基）、テトラジン、シトラコンイミド、ＢＣＮ（ビシクル［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）、ＤＢＣＯ（ジベンゾシクロオクチン－アミン）などのアルキン含有基、チオール、アルデヒド及びケトンなどのカルボニル基、アルコキシアミン、ハロアセテート、ビオチン、テトラジン、ＴＣＯ（トランス－シクロオクテン）などのアルケン含有基、メチル－シクロプロピレン基、並びにＰＴＡＤ又は他のチロシン反応性基などの基からなる群から選択される相補的な反応基であってもよい。

【0254】

例えば、いくつかの実施形態では、スペーサー基中間体は、２つの反応性基（例えば、１つは、直交している各末端にある）含み得る。すなわち、反応性基のうちの少なくとも１つは、他の反応性基が安定しており、実質的に反応しない条件下で、標的化剤を含む中間体又はデンドリマーを含む中間体のいずれか上に存在する相補的な基と反応して、スペーサー基をコンジュゲートの構成要素に付着させることができる。これにより、スペーサーをデンドリマー又は標的化剤のいずれかに共有結合により付着させ、その後、標的化剤をデンドリマーに連結させるために、残りの構成要素上に存在する相補的な基と他の反応基を反応させることができる。

【0255】

いくつかの実施形態では、スペーサー基は、アルキン基及びアジド基をそれぞれ含む前駆体の反応により、標的化剤に対して直接的又は間接的に付着している（例えば、標的化基を含む中間体は、アジド基を含んでもよく、スペーサー基を含む中間体は、アルキン基を含んでもよい）。このような反応は、トリアゾール含有基、例えば、以下の形成をもたらし、

【化44】

以下の構造を有する前駆体の反応によって形成され得る。

【化45】

【0256】

別の例として、スペーサー基は、トリアゾール含有基、例えば、以下の形成を介して付着され得、

【化46】

以下の構造を有する前駆体の反応によって形成され得る。

【化47】

【0257】

いくつかの実施形態では、スペーサー基は、アルケン（例えば、トランス－シクロオクテンなどの歪みアルケン）及びテトラジン基をそれぞれ含む前駆体の反応によって、標的化剤に付着している。このような反応は、例えば、以下の窒素の突出を有するピリダジン含有基、例えば、以下の形成をもたらし、

【化48】

以下の構造を有する前駆体の反応によって形成され得る。

【化49】

【0258】

いくつかの実施形態では、スペーサー基は、カルボン酸基及びアミン基を含む前駆体の反応によって、デンドリマーに付着しており、例えば、スペーサー基の中間体は、コアユニットの一部として存在するか、又はコアユニットから延びているアミン基と反応して、例えば、アミド連結を形成することができるカルボン酸基を含有し得る。

【0259】

いくつかの実施形態では、スペーサー基は、カルボン酸基及びアミン基を含む前駆体の反応によって、デンドリマーに付着している。例えば、スペーサー基の中間体は、コアユニットの一部として存在するか、又はコアユニットから延びているアミン基と反応して、例えば、アミド連結を形成可能であるカルボン酸基を含み得、アルキン基及びアジド基をそれぞれ含む前駆体の反応によって標的化剤に付着する（例えば、標的基を含む中間体は、アジド基を含み得、スペーサー基を含む中間体は、アルキン基を含み得る）。

【0260】

上述のとおり、標的化剤を含む前駆体は、非天然アミノ酸残基を含んでもよい。この非天然アミノ酸残基は、例えば、反応性側鎖を示すことができる任意の非天然アミノ酸であってもよく、反応性側鎖は、スペーサー基中間体上に存在する官能基と相補的である官能基を保持している。このようにして、相補的官能基が反応し、その結果、標的化部分のスペーサー基への付着を生じさせることが可能になる。いくつかの実施形態では、非天然アミノ酸残基は、４－アジドフェニルアラニン残基である。いくつかの実施形態では、スペーサー基を含む中間体は、アジド基を含有する非天然アミノ酸残基を含有する標的化部分を含む中間体にコンジュゲートするためのアルキン基を含有する。いくつかの実施形態では、スペーサー基含有中間体は、４－アジドフェニルアラニン残基を含有する標的化剤を含有する中間体にコンジュゲートするためのアルキン基を含有する。いくつかの実施形態では、スペーサー基含有中間体は、４－アジドフェニルアラニン残基を含有する標的化部分を含有する中間体にコンジュゲートするための、ジベンジルシクロオクチン－アミン（ＤＢＣＯ）基であるアルキン基を含有する。

【0261】

いくつかの実施形態では、スペーサー基の一端は、ＤＢＣＯ基と標的化部分の一部を形成する（例えば、以下：

【化50】

のようなトリアゾール含有基を形成する）４－フェニルアラニン残基上のアジド部分との環化付加反応によって、又はＢＣＮ（（ビシクル６．１．０］ノン－４－イン－９－イル））基と、標的化部分の一部を形成する（例えば、以下：

【化51】

のようなトリアゾール含有基を形成する）４－フェニルアラニン残基上のアジド部分との反応によって、標的化部分に付着される。

【0262】

いくつかの実施形態では、スペーサー基の一端は、コア上に存在する又は表面構成ユニット上に存在するアミノ基間、及びスペーサー基上に存在するカルボキシル基間のアミド化反応によって（例えば、活性化エステルの反応による）、デンドリマーに付着される。いくつかの実施形態では、スペーサー基を含有する中間体は、テトラジン基を含有する。いくつかの実施形態では、スペーサー基を含有する中間体は、例えば、ジエン（シクロペンタジエン、例えばスピロ［２．４］ヘプタ－４，６－ジエン基など）にコンジュゲートするためのマレイミド基を含む。

【0263】

いくつかの実施形態では、スペーサー基を含む中間体は、ＰＥＧ基と、デンドリマーのコアの一部を形成するか又はコアから延びるアミンと反応するためのカルボキシル基と、を含み、かつ標的化部分を含有する中間体に存在するアジド基と反応するためのアルキン基を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー基を含む中間体は、デンドリマーのコアでアミンに接合するための反応性カルボキシル基を有するＰＥＧ鎖と、反応性アルキン部分を含有する標的化剤中間体にコンジュゲートするためのアジド基と、を含有する。いくつかの実施形態では、スペーサー基を含む中間体は、ＰＥＧ鎖と、デンドリマーのコアでカルボキシル基に接合するための反応性アミン基と、反応性アルキン部分を含有する標的化剤中間体にコンジュゲートするためのアジド基と、を有する。いくつかの実施形態では、スペーサー基中間体は、デンドリマーのコアでアミンに接合するための反応性カルボキシル基を有するＰＥＧ鎖と、反応性チオール部分を含有する標的化剤中間体にコンジュゲートするためのマレイミド基と、を有する。いくつかの実施形態では、スペーサー基中間体は、デンドリマーのコアでカルボキシル基に結合するための反応性アミン基を有するＰＥＧ鎖と、反応性マレイミド部分を含む標的化剤中間体にコンジュゲートするためのチオール又はマスクされたチオール基と、を有する。いくつかの実施形態では、スペーサー基中間体は、デンドリマーのコアでアミンに結合するための反応性カルボキシル基を有するＰＥＧ鎖と、反応性アルケン部分を含む標的化剤中間体にコンジュゲートするためのテトラジン基と、を含有する。いくつかの実施形態では、スペーサー基中間体は、デンドリマーのコアでアミンに結合するための反応性カルボキシル基を有するＰＥＧ鎖と、反応性ジエン（シクロペンタジエン、例えばスピロ［２．４］ヘプタ－４，６－ジエン基など）を含む標的化剤中間体にコンジュゲートするためのマレイミド基と、を含む。

【0264】

いくつかの実施形態では、標的化剤のデンドリマーへの連結は、第１のスペーサー基を標的化剤の中間体に、第２のスペーサー基をデンドリマーに（例えば、デンドリマーのコアに）付着させ、次いで、標的化剤とデンドリマーを連結するために、第１及び第２のスペーサー基上に存在する相補的官能基を一緒に反応させることによって達成され得る。このようなアプローチは、デンドリマーと標的化を容易に接続するために提供され得る。例えば、第１のスペーサー基中間体は、一端に標的化剤上の反応性基と相補的である第１の反応性基（例えば、アジド基と相補的であるアルキン基であり、一緒に反応してトリアゾール基を形成することができる）と、第２のスペーサー基上の反応性基と相補的である第２の反応性基（例えば、トランス－シクロオクテン－含有基との反応と相補的であるテトラジン含有基）とを含んでもよい。第２のスペーサー基中間体は、例えば、一端にデンドリマー上の反応性基との反応に相補的である第３の反応性基（例えば、アミン基との反応に相補的であるカルボン酸基）、他端に第１のスペーサー基中間体上の反応性基との反応に相補的である第４の反応性基（例えば、テトラジン基との反応に相補的であるトランス－シクロオクテン含有基）を含んでもよい。例えば、トランス－シクロオクテン基とテトラジン基とを反応させることによって生成された基を介して、第１の基及びスペーサー基が付着され得、以下の構造を含み得る。

【化52】

【0265】

いくつかの実施形態では、標的化部分は、標的化剤上に存在するアジド部分とスペーサー基の一端にあるアルキン含有基（例えば、ＤＢＣＯ、ＢＣＮ）との反応、及びデンドリマーに付着したテトラジン部分とスペーサー基（例えば、トランスシクロオクテン）の他端にある歪みアルケン基との反応によって形成されるスペーサー基を介して、デンドリマーに連結されてもよい。

【0266】

第３の末端基
いくつかの実施形態では、デンドリマーは、最も外側の構成ユニットに付着した１つ以上の第３の末端基（Ｔ３）を含み、第３の末端基は、放射性核種含有部分ではない薬学的活性剤の残基を含む。構成ユニットがリジン残基又はその類似体である場合、第３の末端基は、例えば、最も外側の構成ユニットの窒素原子に付着していてもよい。薬学的活性剤をデンドリマーに組み込むと、治療特性が向上し、診断的／治療的画像化の両方及び疾患の療法のために同じデンドリマー剤を利用することが可能になる。例えば、がんの疑いがある、又はがんであると診断された対象の場合、本開示のデンドリマーを最初に投与し、画像化によって患者の状態を診断するため、及び／又はがんが存在する場合、デンドリマーによる療法の過程（ｃｏｕｒｓｅ）に対するがんの感受性の可能性を判定するために、対象の身体の関連部分の画像化を行ってもよい。腫瘍がデンドリマーによる治療に感受性である可能性がある場合には、次いで、同じデンドリマー又は本開示の別のデンドリマー（例えば、異なる放射性核種を含有する）の更なる過程を、例えば、対象に投与してもよい。

【0267】

薬学的活性剤
任意の好適な薬学的活性剤は、例えば、連結基を介して、第３の末端基としてデンドリマーにコンジュゲートされてもよい。いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、抗がん剤である。抗がん剤の例としては、これらに限定されないが、超細胞障害剤、タキサン、及びトポイソメラーゼ阻害剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗がん剤は、超細胞傷害剤である。いくつかの実施形態では、抗がん剤は、アウリスタチンである。いくつかの実施形態では、抗がん剤は、メイタンシノイドである。いくつかの実施形態では、抗がん剤は、タキサンである。いくつかの実施形態では、抗がん剤は、トポイソメラーゼ阻害剤である。

【0268】

本明細書で使用されるとき、「超細胞傷害剤」とは、非常に強力な化学療法特性を呈する剤を指すが、それ自体は、非常に毒性が強いため、抗がん剤として単独で投与できない剤を指す。すなわち、超細胞傷害剤は、化学療法特性を示すが、有害で毒性のある副作用が化学療法の有益性を上回るため、一般には対象に安全に投与することができない。いくつかの実施形態では、超細胞傷害剤は、がん細胞株（例えば、ＳＫＢＲ３細胞及び／又はＨＥＫ２９３細胞及び／又はＭＣＦ７細胞）に対するインビトロＩＣ_５０が、１００ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満、又は５ｎＭ未満、又は３ｎＭ未満、又は２ｎＭ未満、又は１ｎＭ未満、又は０．５ｎＭ未満である。超細胞傷害剤としては、とりわけ、例えば、ドラスタチン類（例えば、ドラスタチン－１０、ドラスタチン－１５）、アウリスタチン類（例えば、モノメチルアウリスタチン－Ｅ、モノメチルアウリスタチン－Ｆ）、メイタンシノイド類（例えば、メイタンシン、メルタンシン／エムタンシン（ＤＭ１、ラブタンシン（ＤＭ４））、カリキアミシン類（例えば、カリキアミシンγ１）、エスペラマイシン類（例えば、エスペラマイシンＡ１）、及びピロロベンゾジアゼピン類（ＰＤＢ）が挙げられる。

【0269】

いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、アウリスタチンである。いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、モノメチルアウリスタチンである。一実施形態では、薬学的活性剤は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。一実施形態では、薬学的活性剤は、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）である。ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦはともに、チューブリンの重合を遮断することによって、細胞分裂を阻害すると理解されている。

【0270】

いくつかの実施形態では、超細胞傷害剤は、メイタンシノイドである。一実施形態では、超細胞傷害剤は、メイタンシンである。一実施形態では、超細胞傷害剤は、アンサミトシンである。一実施形態では、超細胞傷害剤は、エムタンシン／メルタンシン（ＤＭ１）である。一実施形態では、超細胞傷害剤は、ラブタンシン（ＤＭ４）である。メイタンシノイドは、チューブリンに結合することによって、微小管の組み立てを阻害することが理解されている。

【0271】

タキサンとしては、例えば、パクリタキセル、カバジタキセル、及びドセタキセルが挙げられる。いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、パクリタキセルである。いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、カバジタキセルである。いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、ドセタキセルである。

【0272】

トポイソメラーゼ阻害剤としては、これらに限定されないが、カンプトテシン活性剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、カンプトテシン活性剤である。カンプトテシン活性剤の例としては、これらに限定されないが、ＳＮ－３８、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、トポテカン、シラテカン、コシテカン、エキサテカン、ルルトテカン、ギマテカン、ベロテカン、及びルビテカンが挙げられる。いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、ＳＮ－３８である。いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、イリノテカンである。

【0273】

いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、カバジタキセル、ドセタキセル、ＳＮ－３８、モノメチルアウリスタチンＡ及びモノメチルアウリスタチンＦからなる群から選択される抗がん剤である。

【0274】

リンカー
デンドリマーが、薬学的活性剤の残基を含む第３の末端基（Ｔ３）を含む、いくつかの実施形態では、薬学的活性剤の残基は、リンカーを介して最も外側の構成ユニットに付着している。一実施形態では、リンカーは、切断可能リンカーである。一実施形態では、リンカーは、非切断可能リンカーである。リンカー基は、例えば、薬学的活性剤の利用可能な官能性が、構成ユニットへの直接的な付着にとって好適でない場合に、薬学的活性剤をデンドリマーに付着させるための好適な基を提供するために使用することができる。また、若しくはその代わりに、リンカー基は、デンドリマー足場からの薬学的活性剤の制御放出を容易にするために使用することもでき、これにより、好適な期間（例えば、長期間）、薬学的活性剤の治療有効濃度及び望ましい薬物動態プロファイルが提供される。

【0275】

当業者であれば、様々な好適なリンカーのいずれか１つが使用され得ることを理解できるであろう。リンカーは、全身循環中に十分な安定性を提供すると同時に、例えば、がん細胞に内在化されると、その作用部位において、活性形態の細胞傷害性薬物を迅速かつ効率的に放出することが可能であるものとする。

【0276】

いくつかの実施形態では、リンカーは、それ自体が又は薬学的活性剤へのその連結と併せて、エステル基、ヒドラゾン基、オキシム基、イミン基又はジスルフィド基のうちの１つ以上を含む切断可能なリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、腫瘍環境で切断可能であり、酸に不安定である、還元環境に不安定である、加水分解に不安定である、又はプロテアーゼに不安定である。

【0277】

化学的に不安定なリンカーとしては、これらに限定されないが、酸不安定なリンカー（すなわち、ヒドラゾン）及びジスルフィドリンカーが挙げられる。酵素的に切断可能なリンカーとしては、これらに限定されないが、ペプチドリンカー（例えば、Ｖａｌ－Ｃｉｔ又はＰｈｅ－Ｌｙｓ基を含有するものなどのジペプチドリンカー）、及びβ－グルクロニドリンカーが挙げられる。リソソームのタンパク質分解酵素は血中において非常に低い活性を有するため、ペプチドリンカー、及びそのペプチド結合は、有利にも良好な血清安定性を有することが予想されている。Ｖａｌ－Ｃｉｔ及びＰｈｅ－Ｌｙｓリンカーの両方は、カテプシンＢによって速やかに加水分解される。いくつかの実施形態では、リンカーは、酵素的に切断可能なリンカーである。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは、酵素による認識及び切断が可能なアミノ酸残基を含む。

【0278】

いくつかの実施形態では、リンカーはペプチド基を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ジペプチド基を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、例えば、以下の構造を有するバリン－シトルリン－パラアミノベンジルアルコール含有基（Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ）を含む。

【化53】

【0279】

例えば、ＰＡＢ基は、カルボニル基を介して治療剤部分に存在するアミン基と共有結合により付着して、カルバメート連結を形成してもよく、また、バリンアミノ基及び外側の構成ユニットに存在するアミン基によりアミド結合を形成するジアシルリンカーを介して、外側の構成ユニットに存在するアミン基に付着してもよい。

【0280】

いくつかの実施形態では、リンカーは、例えば、以下の構造を有するグルタル酸－バリン－シトルリン－パラアミノベンジルアルコール基を含むか、又はそれからなる。

【化54】

【0281】

いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、ヒドロキシル基を含み、薬学的活性剤の残基は、ヒドロキシル基の酸素原子を介してリンカーに付着している。このアプローチでは、エステル基を介してリンカーに付着させることが可能であり、そのようなエステル基は、インビボで切断可能であり、望ましい速度で薬学的活性剤を放出することが見出されている。

【0282】

いくつかの実施形態では、コアユニットは、アミノ基を含むコアユニット前駆体から形成され、構成ユニットは、リジン残基又はその類似体であり、薬学的活性剤は、ヒドロキシル基を含み、薬学的活性剤の残基は、ヒドロキシル基の酸素原子を介して付着しており、切断可能なリンカーは、ジアシルリンカーであり、これにより、薬剤活性剤の残基とリンカーとの間にエステル連結、及びリンカーと最外層の構成ユニット上に存在する窒素原子との間にアミド連結があるようになる。いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、ヒドロキシル基を含み、薬学的活性剤の残基は、ヒドロキシル基の酸素原子を介して付着しており、切断可能なリンカーは、下記式のジアシルリンカー基であり、

【化55】

式中、Ａは、Ｏ、Ｓ、Ｓ－Ｓ、ＮＨ、又はＮ（Ｍｅ）により中断されたＣ_２～Ｃ_１０アルキレン基であるか、又はＡは、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、及びＮ－メチルピロリジンからなる群から選択される複素環である。

【0283】

本明細書で使用されるとき、「アルキル」という用語は、一価の直鎖（すなわち線状）又は分岐した飽和炭化水素基を指す。一例では、アルキル基は、１～１０の炭素原子（すなわちＣ_１～１０アルキル）を含む。一例では、アルキル基は１～６の炭素原子（すなわち、Ｃ_１～６アルキル）を含む。アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基（例えば、ｎ－プロピル、イソ－プロピル）、ブチル基（例えば、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル）、ペンチル基、及びヘキシル基などが挙げられる。

【0284】

本明細書で使用されるとき、「アルキレン」という用語は、２価の直鎖（すなわち線状）又は分岐した飽和炭化水素基を指す。一例では、アルキレン基は、２～１０の炭素原子（（すなわちＣ_２～１０アルキレン）を含む。一例では、アルキレン基は、２～６の炭素原子（すなわち、Ｃ_２～６アルキレン）を含む。アルキレン基の例としては、例えば、－ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）－、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２－などが挙げられる。

【0285】

いくつかの実施形態では、薬学的活性剤は、ヒドロキシル基を含み、薬学的活性剤の残基は、ヒドロキシル基の酸素原子を介して付着しており、切断可能なリンカーは、下記式のジアシルリンカー基であり、

【化56】

Ａは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、又はＮ（Ｍｅ）によって中断されたＣ_２～Ｃ_１０アルキレン基である。

【0286】

いくつかの実施形態では、薬学的活性剤が、ヒドロキシル基を有し、薬学的活性剤の残基が、ヒドロキシル基の酸素原子を介して付着しており、ジアシルリンカーが、

【化57】

である。

【0287】

切断可能なリンカーの特定の型は、ジスルフィド部分を含むものである。このようなリンカーは、グルタチオンによる切断を受けやすい。例えば、この型のリンカーは、ジスルフィド部分によって中断されたアルキル鎖を介して連結された２つのアシル基を含み得る。

【0288】

いくつかの実施形態では、リンカーは、ジスルフィド部分によって中断されたアルキル鎖を含み、ここで、ジスルフィド基に隣接する炭素原子の１つ又は両方が、１つ以上のメチル基によって置換されている。例えば、ジスルフィド部分に隣接している炭素原子のうちの１つが、ｇｅｍ－ジメチル基で置換されてもよく、例えば、リンカーがその基：を含んでもよい。

【化58】

【0289】

非切断可能リンカーは、必要な期間、インビボ条件に更されても、切断に対して不活性であるか、又は切断に対して実質的に不活性である連結基である。非切断可能リンカーは、生物学的条件下では切断されない。

【0290】

例えば、アルキレン基又はシクロアルキレン基（例えばＣ_１～１０アルキレン基又はＣ_３－１０シクロアルキレン基）によって架橋されたジアシルリンカーが挙げられる。非切断可能リンカーの更なる例としては、チオエーテルリンカーが挙げられる。非切断可能リンカーの具体例としては、ＳＭＣＣ（サクシニミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート）を使用することによって形成されたものが挙げられる。ＳＭＣＣは、マレイミド官能性を、治療剤部分に存在するか又は治療剤部分に付着しているチオール基と反応させ、チオエーテル連結を形成するために使用できる。カルボン酸の官能性は、外側の構成ユニット上に存在するアミノ基との反応に使用できる。

【0291】

組成物
いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、組成物、好ましくは薬学的組成物として提示される。したがって、本明細書で定義される複数のコンジュゲートを含む組成物も提供される。

【0292】

組成物又は薬学的組成物は、複数のデンドリマー－標的化剤コンジュゲート及び／又はデンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートを含み得る。組成物又は薬学的組成物が、デンドリマー－標的化剤コンジュゲートのみを含む場合、組成物は、放射線療法若しくは画像化、又は同様の目的のための投与の前に、好適な放射性核種に曝露されて、デンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートを形成し得る。

【0293】

コンジュゲートを生成するための合成プロセスの性質の結果として、所定の組成物中に存在するコンジュゲート間の分子組成に、若干のばらつきが存在し得ることが理解されるであろう。例えば、上記のとおり、コンジュゲートを生成するために使用される１つ以上の合成ステップは、完了するまで完全には進行しない場合があり、その結果、全てが同数の標的化剤、第１の末端基、第２の末端基、又は第３の末端基を含まない、又はコンジュゲートのデンドリマー成分中に不完全な世代の構成ユニットを含有するコンジュゲートが存在することになり得る。

【0294】

組成物が３世代の構成ユニットを含むコンジュゲートを含むいくつかの実施形態では、コンジュゲート当たりの標的化剤の平均数は、約１である。組成物が３世代の構成ユニットを含むコンジュゲートを含むいくつかの実施形態では、組成物中のコンジュゲート１個当たりの第１の末端基の平均数は、１～４の範囲である。組成物が３世代の構成ユニットを含むコンジュゲートを含むいくつかの実施形態では、組成物中のコンジュゲート１個当たりの第２の末端基の平均数は、４～７の範囲である。組成物が本明細書に定義される３世代の構成ユニットを含むコンジュゲートを含むいくつかの実施形態では、コンジュゲート１個当たりの標的化剤の平均数は、約１であり、組成物中のコンジュゲート１個当たりの第１の末端基の平均数は、１～４の範囲であり、組成物中のコンジュゲート１個当たりの第２の末端基の平均数は、４～７の範囲である。

【0295】

組成物が４世代の構成ユニットを含むコンジュゲートを含むいくつかの実施形態では、コンジュゲート１個当たりの標的化剤の平均数は、約１である。組成物が４世代の構成ユニットを含むコンジュゲートを含むいくつかの実施形態では、組成物中のコンジュゲート１個当たりの第１の末端基の平均数は、１～４の範囲である。組成物が４世代の構成ユニットを含むコンジュゲートを含むいくつかの実施形態では、組成物中のコンジュゲート１個当たりの第２の末端基の平均数は、４～７の範囲である。組成物が本明細書に定義される４世代の構成ユニットを含むコンジュゲートを含むいくつかの実施形態では、コンジュゲート１個当たりの標的化剤の平均数は、約１であり、組成物中のコンジュゲート１個当たりの第１の末端基の平均数は、１～４の範囲であり、組成物中のコンジュゲート１個当たりの第２の末端基の平均数は、４～７の範囲である。

【0296】

いくつかの実施形態では、組成物中のコンジュゲートの少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％は、標的化剤を含有する。

【0297】

いくつかの実施形態では、組成物中のコンジュゲートの少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％は、第１の末端基を含有する。

【0298】

いくつかの実施形態では、組成物中のコンジュゲートの少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％は、第２の末端基を含有する。

【0299】

いくつかの実施形態では、組成物中のコンジュゲートの少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％は、第３の末端基を含有する。

【0300】

本開示はまた、獣医用途及びヒト医療用途の両方用の薬学的製剤又は組成物を提供し、これらは、本開示のコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、及び任意によりあらゆる他の治療成分、安定剤などと一緒に含む。したがって、いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的組成物であり、組成物は、本明細書で定義されるコンジュゲートと、薬学的に許容される賦形剤と、を含む。

【0301】

賦形剤及び／又は担体は、製剤の他の成分と適合し、そのレシピエントに過度に有害ではないという意味で、薬学的に許容されるものでなければならない。本開示の組成物には、高分子賦形剤／添加剤又は担体、例えば、ポリビニルピロリドン、誘導体化セルロース、例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース、フィコール（高分子糖類）、ヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）、デキストレート（例えば、シクロデキストリン（例えば、２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、及びスルホブチルエーテル－β－シクロデキストリンなど）、ポリエチレングリコール、及びペクチンも含まれ得る。組成物としては、更に、希釈剤、緩衝剤、クエン酸塩、トレハロース、結合剤、崩壊剤、増粘剤、滑剤、防腐剤（酸化防止剤など）、無機塩（例えば、塩化ナトリウム）、抗菌剤（例えば、塩化ベンザルコニウム）、甘味料、帯電防止剤、ソルビタンエステル、脂質（レシチンなどのリン脂質、及び他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、脂肪酸、及び脂肪酸エステル、ステロイド（例えば、コレステロールなど））、及びキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ、亜鉛及び他の好適なカチオンなど）を挙げることができる。本開示による組成物中での使用に好適である他の医薬賦形剤及び／又は添加剤は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）、及び“Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”，５２．ｓｕｐ．ｎｄ ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（１９９８）、及び“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ”，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄ．，Ｅｄ．Ａ．Ｈ． Ｋｉｂｂｅ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０００に列挙されている。

【0302】

本開示のコンジュゲートは、例えば非経口（腹腔内、静脈内、皮下、又は筋肉内注射を含む）投与などによる、任意の好適な経路による投与に好適なものを含む組成物に製剤化され得る。

【0303】

組成物は、簡便に単位剤形で提供されてもよく、また薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製されてもよい。全ての方法は、デンドリマーを１つ以上の付属成分を構成する担体と会合させるステップを含む。一般に、組成物は、デンドリマーを液体担体と会合させて溶液又は懸濁液を形成するか、あるいは、デンドリマーを固体、任意に粒子状生成物を形成するのに好適である製剤成分と会合させて、妥当である場合、生成物を所望の送達形態に成形することによって調製される。本開示の固形製剤は、微粒子化されている場合、典型的には、約１ナノメートル～約５００ミクロンの範囲のサイズの粒子を含む。一般に、静脈内投与を目的とした固形製剤の場合、粒子は、直径約１ｎｍ～約１０ミクロンの範囲である。組成物は、１０００ｎｍ以下、例えば、５～１０００ｎｍ、特に５～５００ｎｍ、より特に５～４００ｎｍ、例えば５～５０ｎｍ、特に５～２０ｎｍの粒子径を有するナノ粒子である本開示のデンドリマーを含有してもよい。一例では、組成物は、平均サイズが５～２０ｎｍのデンドリマーを含む。いくつかの実施形態では、デンドリマーは、組成物中に多分散しており、ＰＤＩは、１．０１～１．８、特に１．０１～１．５、より特に１．０１～１．２である。一例では、デンドリマーは、組成物中に単分散されている。

【0304】

いくつかの好ましい実施形態では、本組成物は、非経口送達用に製剤化される。例えば、一実施形態では、製剤は、注射前に水性ビヒクルで再構成するのに好適である滅菌凍結乾燥組成物であってもよい。

【0305】

一実施形態では、非経口投与に好適である製剤は、便利なことに、デンドリマーの滅菌水性調製物を含み、これは、例えば、レシピエントの血液と等張になるように製剤化されてもよい。

【0306】

いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍間（ｉｎｔｅｒｔｕｍｏｕｒａｌ）送達用に製剤化される。他の好適な送達手段を使用してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、洗浄液又はエアロゾルによる送達であってもよい。一実施形態では、組成物は、腹腔内送達用に製剤化され、悪性上皮性腫瘍（例えば、卵巣がん）、及びがん性腹膜炎（例えば、胃腸がん、特に大腸がん、胃がん、婦人科がん、及び原発性腹膜新生物）など、腹腔内のがんの治療のためのものである。

【0307】

また、エアロゾルとして吸入により投与するために好適である薬学的製剤も提供する。これらの製剤は、所望のコンジュゲート若しくはその塩の溶液又は懸濁液を含む。所望の製剤を小チャンバーに入れ、ネブライズしてもよい。デンドリマー又はその塩を含む複数の液滴又は固形粒子を形成するために、圧縮空気又は超音波エネルギーによってネブライジングを行うことができる。

【0308】

後述するとおり、本開示のコンジュゲートは、例えば、１つ以上の追加の薬学的活性剤と組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、更なる活性剤と組み合わせて提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に定義されるコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体と、１つ以上の追加の薬学的活性剤（例えば、小分子細胞傷害剤、チェックポイント阻害剤、若しくは抗体療法などの追加の抗がん／腫瘍剤）と、を含む組成物が提供される。本開示のコンジュゲートは、他の化学療法薬と一緒に投与されることができるだけでなく、コルチコステロイド、抗ヒスタミン剤、鎮痛剤、及び回復に役立つか、又は血液毒性、例えばサイトカインから保護される薬物などの他の医薬品と組み合わせて投与され得る。

【0309】

いくつかの実施形態では、本組成物は、化学療法レジメンの一部として非経口注入するために製剤化される。

【0310】

コンジュゲートの治療的使用
本明細書に記載されるコンジュゲート及び組成物は、医療分野における様々な用途に使用することができる。例えば、コンジュゲートは、がんなどの様々な状態の治療に使用される。

【0311】

したがって、療法に使用するため、及びより具体的にはがんの療法に使用するための、本明細書に記載のコンジュゲート又は薬学的組成物が提供される。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、がんの治療又は予防の方法、例えば腫瘍の成長を抑制するために使用される。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、がんの治療に使用するためのものである。また、がんの治療を必要とする対象に、治療有効量の本明細書で定義されるコンジュゲート又は薬学的組成物を投与することを含む、がんを治療する方法も提供される。また、がんの治療のための医薬品の製造における、本明細書で定義されるコンジュゲート、又は本明細書で定義される組成物の使用も提供する。

【0312】

いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍である。がんは、原発性又は転移性腫瘍であり得る。いくつかの実施形態では、がんは、原発性腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんは、転移性腫瘍である。

【0313】

いくつかの実施形態では、がんは、ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２とも呼ばれる）の異常又は過剰発現を特徴とする。このようなＨＥＲ２の異常発現又は過剰発現は、例えば、乳がん、精巣がん、卵巣がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、肺腺がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、膵がん、唾液管がん、食道がん、及び子宮がん（例えば、子宮体重症子宮内膜がん）などで生じることが知られている。

【0314】

いくつかの実施形態では、がんは、ＥＧＦＲの異常又は過剰発現を特徴とする。いくつかの実施形態では、がんは、ＰＳＭＡの異常又は過剰発現を特徴とする。いくつかの実施形態では、がんは、ＦＡＰの異常又は過剰発現を特徴とする。

【0315】

いくつかの実施形態では、がんは、前立腺がん、脳がん、乳がん、精巣がん、卵巣がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、肺腺がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、膵臓がん、唾液管がん、食道がん、子宮がん（例えば、子宮体重症子宮内膜がん）からなる群から選択される。

【0316】

いくつかの実施形態では、がんは、大腸がん、胃がん、膵臓がん、前立腺がん、及び乳がんからなる群から選択される。

【0317】

いくつかの実施形態では、がんは、前立腺がんである。いくつかの実施形態では、がんは、乳がんである。いくつかの実施形態では、がんは、精巣がんである。いくつかの実施形態では、がんは、卵巣がんである。いくつかの実施形態では、がんは、胃がんである。いくつかの実施形態では、がんは、肺腺がんである。いくつかの実施形態では、がんは、胃がんである。いくつかの実施形態では、がんは、膵がんである。いくつかの実施形態では、がんは、唾液管がんである。いくつかの実施形態では、がんは、食道がんである。いくつかの実施形態では、がんは、子宮体がんである。

【0318】

いくつかの実施形態では、がんは、脳がんである。脳がんとしては、膠芽腫、髄膜腫、下垂体、神経鞘、星状細胞腫、乏突起膠腫、上皮腫、髄芽腫、又は頭蓋咽頭腫が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、がんは、膠芽腫、髄膜腫、下垂体、神経鞘、星状細胞腫、乏突起膠腫、上皮腫、髄芽腫、及び頭蓋咽頭腫からなる群から選択される脳がんである。いくつかの実施形態では、脳がんは、膠芽腫である。いくつかの実施形態では、脳がんは、髄膜腫である。いくつかの実施形態では、脳がんは、下垂体である。いくつかの実施形態では、脳がんは、神経鞘である。いくつかの実施形態では、脳がんは、星細胞腫である。いくつかの実施形態では、脳がんは、乏突起膠腫である。いくつかの実施形態では、脳がんは、上皮腫である。いくつかの実施形態では、脳がんは、髄芽腫である。いくつかの実施形態では、脳がんは、頭蓋咽頭腫である。

【0319】

治療有効量のコンジュゲート又は組成物を、治療方法及び使用に使用する。用語「治療有効量」とは、治療される障害又は状態の症状のうちの１つ以上をある程度まで緩和又は予防するのに十分な量で投与されるコンジュゲート、又は当該コンジュゲートを含む組成物を指すことが理解されるであろう。

【0320】

このデンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートは、例えば、静脈内投与を含む、任意の好適な経路で投与されてもよい。いくつかの実施形態では、デンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートは、ＩＶボーラスとして送達される。いくつかの実施形態では、デンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートは、０．５～６０分の範囲、又は０．５～３０分の範囲、又は０．５～１５分の範囲、又は０．５～５分の範囲の期間にわたってＩＶ投与される。別の例では、デンドリマー－標的化剤治療用コンジュゲートは、腹腔内投与されてもよい。投与経路は、例えば、対象が有する疾患又は障害を標的にしてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、疾患又は障害は、婦人科がん又は胃腸がんなどの腹腔内悪性腫瘍であってもよく、コンジュゲートは、腹腔内投与されてもよい。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、悪性上皮性腫瘍（例えば、卵巣がん）又は腹膜がん腫症（例えば、胃腸特に大腸がん、胃がん、婦人科がん、及び原発性腹膜新生物）など、腹膜腔のがんの治療のためのものであってもよく、コンジュゲートは、腹腔内投与される。

【0321】

治療目的で使用する場合、コンジュゲートは、治療有効用量の放射能を標的（例えば、腫瘍）に送達するのに十分な量で投与されると同時に、身体の他の部分（例えば、他の臓器）の放射線への許容できない曝露を回避する。正確な投薬量は、放射性核種（例えば、アルファ放射体、ベータ放射体）の性質、及び治療される状態に依存し得る。

【0322】

いくつかの実施形態では、コンジュゲートの投薬量は、最大で約１０ＧＢｑ、又は最大で約７．５ＧＢｑ、又は最大で約５ＧＢｑ、又は最大で約２．５ＧＢｑ、又は最大で約１ＧＢｑ、又は最大で約５００ＭＢｑ、又は最大で約２５０ＭＢｑ、又は最大で約１００ＭＢｑ、又は最大で約５０ＭＢｑ、又は最大で約２５ＭＢｑ、又は最大で約１０ＭＢｑ、又は最大で約５ＭＢｑの放射能を有する放射性核種の量を含有する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの投薬量又は各投薬量は、０．１ＭＢｑ～１０ＧＢｑ、０．１ＭＢｑ～７．５ＧＢｑ、０．１ＭＢｑ～５ＧＢｑ、０．１ＭＢｑ～２．５ＧＢｑ、０．１ＭＢｑ～１ＧＢｑ、０．１ＭＢｑ～５００ＭＢｑ、０．１ＭＢｑ～２５０ＭＢｑ、０．１ＭＢｑ～１００ＭＢｑ、０．１ＭＢｑ～５０ＭＢｑ、０．１ＭＢｑ～２５ＭＢｑ、０．１ＭＢｑ～１０ＭＢｑ、０．１ＭＢｑ～５ＭＢｑ、０．１ＭＢｑ～２ＭＢｑ、０．１ＭＢｑ～１ＭＢｑ、０．５ＭＢｑ～１０ＭＢｑ、１～１０ＭＢｑ、１～５ＭＢｑ、５～１０ＭＢｑ、又は約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、若しくは約１０ＭＢｑの範囲の放射能を有する放射性核種の量を含有する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの投薬量又は各投薬量は、０．１ＭＢｑ～１０ＧＢｑ、１ＭＢｑ～１０ＧＢｑ、１０ＭＢｑ～１０ＧＢｑ、１００ＭＢｑ～１０ＧＢｑ、５００ＭＢｑ～１０ＧＢｑ、１ＧＢｑ～１０ＧＢｑ、又は５ＧＢｑ～１０ＧＢｑの範囲の放射能を有する放射性核種の量を含有する。

【0323】

例えば、放射性核種がＬｕ^１７７であるいくつかの実施形態では、コンジュゲートの投薬量又は各投薬量は、１ＧＢｑ～２５ＧＢｑの範囲、より好ましくは４～２５ＧＢｑの範囲、又は４～１０ＧＢｑの範囲の放射能を有する放射性核種の量を含有する。いくつかの実施形態では、Ｌｕ^１７７を含有するコンジュゲートは、対象の体重１ｋｇ当たり５～２０ＭＢｑの範囲の放射能の量を提供するように投薬される。

【0324】

別の例として、放射性核種がＧａ^６８であるいくつかの実施形態では、コンジュゲートの投薬量又は各投薬量は、５０ＭＢｑ～１ＧＢｑの範囲の放射能を有する放射性核種の量を含有する。いくつかの実施形態では、Ｇａ^６８を含有するコンジュゲートは、対象の体重１ｋｇ当たり１～５ＭＢｑの範囲、より好ましくは、１ｋｇ当たり１～３ＭＢｑの範囲、又は１ｋｇ当たり約２ＭＢｑの範囲の量で投薬される。

【0325】

更なる例として、放射性核種がＹ^９０であるいくつかの実施形態では、コンジュゲートの投薬量又は各投薬量は、５００ＭＢｑ～２０ＧＢｑ、又は１０～２０ＧＢｑの範囲の放射能を有する放射性核種の量を含有する。いくつかの実施形態では、Ｙ^９０を含有するコンジュゲートは、対象の体重１ｋｇ当たり５～５０ＭＢｑの範囲、より好ましくは１ｋｇ当たり１０～１５ＭＢｑの範囲の量で投薬される。

【0326】

放射性核種がＡｃ^２２５である場合、コンジュゲートの投薬量又は各投薬量は、例えば、１ＭＢｑ～２０ＭＢｑの範囲の放射能を有する放射性核種の量を含有してもよい。いくつかの実施形態では、Ａｃ^２２５を含有するコンジュゲートは、１ｋｇ体重当たり１５～２００ＫＢｑの範囲の量で投薬される。

【0327】

放射性核種がＡｔ^２１１である場合、コンジュゲートの投薬量又は各投薬量は、例えば、５０ＭＢｑ～４００ＭＢｑの範囲の放射能を有する放射性核種の量を含有し得る。

【0328】

上述したように、投与されるコンジュゲートの用量は、治療有効用量の放射能を標的（例えば、腫瘍）に送達するのに十分であると同時に、身体の他の部分（例えば、他の臓器）への許容できない曝露を回避する。

【0329】

いくつかの実施形態では、単回用量で投薬されるコンジュゲートの量は、肺、脾臓、膀胱、腎臓、心臓、骨髄、肝臓、及び消化管からなる臓器群の臓器当たりに吸収される平均放射線が、５ｍＧｙ未満、又は５ｍＢｑ未満、又は２ｍＧｙ未満、又は２ｍＢｑ未満、又は１ｍＧｙ未満、又は１ｍＢｑ未満、又は０．５ｍＧｙ未満であるような量である。

【0330】

コンジュゲートが、更なる薬学的活剤である第３の末端基を含む場合、いくつかの実施形態では、投与されるコンジュゲートの量は、２～１００ｍｇ／ｍ^２の活性剤、２～５０ｍｇ／ｍ^２の活性剤、２～４０ｍｇ／ｍ^２の活性剤、２～３０ｍｇ／ｍ^２の活性剤、２～２５ｍｇ／ｍ^２の活性剤、２～２０ｍｇ／ｍ^２の活性剤、５～５０ｍｇ／ｍ^２の活性剤、１０～４０ｍｇ／ｍ^２の活性剤、１５～３５ｍｇ／ｍ^２の活性剤、１０～２０ｍｇ／ｍ^２、２０～３０ｍｇ／ｍ^２、又は２５～３５ｍｇ／ｍ^２の活性剤を送達するのに十分である。マウスの活性剤１０ｍｇ／ｋｇの用量は、ヒトの３０ｍｇ／ｍ^２の用量にほぼ対応するものとする（ＦＤＡ ｇｕｉｄａｎｃｅ ２００５）。（ヒトのｍｇ／ｋｇ用量をｍｇ／ｍ^２に変換するには、３７を乗じてもよい（ＦＤＡ Ｇｕｉｄａｎｃｅ ２００５）。

【0331】

いくつかの実施形態では、治療有効量のコンジュゲートを、それを必要とする対象に、所定の頻度で投与する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、１～４週間に１回投与される投与レジメンに従って、それを必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態ではコンジュゲートは、３～４週間に１回投与される投与レジメンに従って、それを必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態では、３～４週間に１回、合計２、３、４、５、６、７、８、８、９、又は１０回の投与を伴う投与レジメンが使用される。

【0332】

組み合わせ
薬物は、多くの場合、特に化学療法の際には、他の薬物と組み合わせて投与される。したがって、いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、１つ以上の更なる薬学的活性剤、例えば１つ以上の更なる抗がん剤／薬物と組み合わせて投与される。デンドリマー－標的化剤コンジュゲート及び１つ以上の更なる薬学的活性剤は、同時に、続いて、又は別々に投与することができる。例えば、同じ組成物の一部として、又は別々の組成物を投与によって投与されてもよい。

【0333】

１つ以上の更なる薬学的活性剤は、例えば、前立腺がん、脳がん、乳がん、精巣がん、卵巣がん、胃がん、肺腺がん、胃がん、膵臓がん、唾液管がん、食道がん、又は子宮がん（例えば、子宮体重症子宮内膜がん）の療法のための抗がん剤であってもよい。

【0334】

１つ以上の更なる薬学的活性剤は、例えば、大腸がん、胃がん、膵がん、前立腺がん、又は乳がんの療法のための抗がん剤であってもよい。

【0335】

更なる薬学的活性剤の例としては、化学療法剤、細胞傷害剤、小分子細胞傷害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、チェックポイント阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、抗体療法、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、ナブ－パクリタキセル）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、ＳＮ－３８、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、トポテカン、シラテカン、コシテカン、エキサテカン、ルルトテカン、ギマテカン、ベロテカン、又はルビテカン）、及びアロマターゼ阻害剤が挙げられる。

【0336】

診断／画像化
本明細書に記載のコンジュゲート及び組成物はまた、診断剤、例えば画像化剤としても使用される。診断用途の例としては、画像化、セラノスティクス、コンパニオン診断療法、疾患進行の監視、療法の有効性の評価、患者群の転帰の決定、及び特定の患者又は患者群のための治療レジメンの開発が挙げられる。

【0337】

したがって、対象ががんを有するかどうかを判定する方法であって、
本明細書で定義されるコンジュゲート又は当該コンジュゲートを含む薬学的組成物を対象に投与することと、
対象の身体又はその一部に対して画像化を行うことと、
画像化結果に基づいて、対象ががんを有するかどうかを判定することと、を含む、方法が提供される。

【0338】

対象のがんを画像化する方法であって、
本明細書で定義されるコンジュゲート又は当該コンジュゲートを含む薬学的組成物を対象に投与することと、
対象の身体又はその一部に対して画像化を行うことと、を含む、方法も提供される。

【0339】

対象におけるがんの進行を判定する方法であって、
第１の量の、本明細書で定義されるコンジュゲート又は当該コンジュゲートを含む薬学的組成物を対象に投与することと、
対象の身体又はその一部に対して第１の画像化ステップを行うことと、
続いて、第２の量の、本明細書で定義されるコンジュゲート又は当該コンジュゲートを含む薬学的組成物を対象に投与することと、
対象の身体又はその一部に対して第２の画像化ステップを行うことと、
第１及び第２の画像化結果に基づいて、がんが進行したかどうかを判定することと、を含む、方法も提供される。

【0340】

がんを有する対象に対する適切な療法を判定する方法であって、
本明細書で定義されるコンジュゲート又は当該コンジュゲートを含む薬学的組成物を対象に投与することと、
対象の身体又はその一部に対して画像化を行うことと、
画像化結果が、療法による治療に対するがんの感受性を示す場合、療法を対象に投与することと、を含む、方法も提供される。

【0341】

がんを有する対象に投与されるがん療法の有効性を判定する方法であって、
第１の量の、本明細書で定義されるコンジュゲート又は本明細書で定義される薬学的組成物を対象に投与することと、
対象の身体又はその一部に対して第１の画像化ステップを行うことと、
対象にがん療法を投与することと、
続いて、第２の量の、本明細書で定義されるコンジュゲート又は本明細書で定義される薬学的組成物を対象に投与することと、
対象の身体又はその一部に対して第２の画像化ステップを行うことと、
第１及び第２の画像化結果に基づいて、がん療法の有効性を判定することと、を含む、方法も提供される。

【0342】

また、対象におけるがんの診断に使用するため、がんを有する対象に対する適切な療法を判定するのに使用するため、対象に投与されるがん療法の有効性を判定するのに使用するため、対象におけるがんの進行を判定するのに使用するため、又はがんの治療に使用するための、本明細書で定義されるコンジュゲート、又は当該コンジュゲートを含有する薬学的組成物も提供される。

【0343】

また、がんの診断のための医薬品の製造において、がんを有する対象に対する適切な療法を判定するため、対象に投与されるがん療法の有効性を判定するため、対象におけるがんの進行を判定するため、又はがんの治療のための、本明細書で定義されるコンジュゲート、又は当該コンジュゲートを含有する薬学的組成物も提供される。

【0344】

がんは、例えば、コンジュゲートの治療用途に関連して上述したがんのいずれかであってもよい。例えば、いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍である。がんは、原発性又は転移性腫瘍であり得る。いくつかの実施形態では、がんは、原発性腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんは、転移性腫瘍である。

【0345】

いくつかの実施形態では、がんは、ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２とも呼ばれる）の異常又は過剰発現を特徴とする。このようなＨＥＲ２の異常発現又は過剰発現は、例えば、乳がん、精巣がん、卵巣がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、肺腺がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、膵がん、唾液管がん、食道がん、及び子宮がん（例えば、子宮体重症子宮内膜がん）などで生じることが知られている。

【0346】

いくつかの実施形態では、がんは、前立腺がん、脳がん、乳がん、精巣がん、卵巣がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、肺腺がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、膵臓がん、唾液管がん、食道がん、子宮がん（例えば、子宮体重症子宮内膜がん）からなる群から選択される。

【0347】

いくつかの実施形態では、がんは、大腸がん、胃がん、膵臓がん、前立腺がん、及び乳がんからなる群から選択される。

【0348】

上記の方法及び使用において、診断的使用に十分な量のコンジュゲート又は組成物を投与するための任意の好適な手段を利用してもよい。例えば、コンジュゲート又は組成物は、対象に対して静脈内に投与され得る。

【0349】

放射性核種を含有する試料、又は放射性核種が投与された対象を画像化するための、及び結果を分析するための好適な技術は、当業者に既知であり、上記の方法及び使用に使用され得る。

【0350】

放射性核種ベースの画像化法、特にＰＥＴ（陽電子放出断層撮影）は、それらの高感度（ピコモルレベル）及び無制限の組織浸透により、診断及び治療用途の両方に対して活性な領域であり続けている。いくつかの実施形態では、ＰＥＴ画像化が使用される。いくつかの実施形態では、ＰＥＴ－ＭＲＩ、ＳＰＥＣＴ、ＳＰＥＣＴ－ＣＴ、ＣＴ、シントグラフィー（ｓｃｉｎｔｏｇｒａｐｈｙ）、又はＰＥＴ－ＣＴ画像化が使用される。

【0351】

典型的には、画像化及び診断目的で使用される場合、コンジュゲートを投与し、次いで、対象、又は対象の関連部分を、好適な期間後に画像化する。投与ステップと画像化ステップとの間の期間は、標的化剤の性質を含む態様に依存し得る。例えば、小分子標的化剤が使用されるいくつかの場合では、投与後２時間以内、１時間以内、又は３０分以内に対象を画像化することが有益であり得る。更なる例として、抗体標的化剤が使用される場合、又はデンダイマー（ｄｅｎｄｉｍｅｒ）が大きい場合、例えば、Ｇ４又はＧ５である場合、投与後、画像化を行う前に追加の時間、例えば、１、２、３、４、５、６、又は７日間の期間を経過させることが好ましい場合がある。いくつかの実施形態では、コンジュゲートを投与し、約２４時間後、又は約４８時間後に画像化を行う。

【0352】

いくつかの実施形態では、診断及び画像化に使用されるコンジュゲートは、２世代又は３世代の構成ユニットを有するコンジュゲートである。

【0353】

本コンジュゲート及びそれらを含む組成物は、目的の標的（例えば、腫瘍組織）に対して良好な選択性を有する。選択性を更に向上させ、腎臓又は肝臓などの他の組織又は臓器に存在するコンジュゲートのレベルを低減させるために、診断及び治療方法は、投与レジメンの一部として追加のステップを含み得る。

【0354】

例えば、腎臓の放射性剤への曝露に関連する腎毒性の可能性を減少させる薬剤の事前投与又は同時投与を行ってもよい。本発明で提供する治療方法及び診断方法のいくつかの実施形態では、コンジュゲート又は当該コンジュゲートを提供する薬学的組成物は、腎毒性の可能性を低減する薬剤と組み合わせて投与される。

【0355】

そのような薬剤の例としては、アミノ酸、例えば、リジン及び／又はアルギニンなどの塩基性アミノ酸が挙げられる。一例では、１．５～２．２Ｌの溶液当たり１８～２４ｇのＬ－リジン及び１８～２４ｇのＬ－アルギニンを含有する水溶液を使用する。このような溶液は、例えば、１２００ｍＯｓｍｏｌ未満、又は１１００ｍＯｓｍｏｌ未満、又は１０６０ｍＯｓｍｏｌ未満のオスモル濃度を有してもよい。好適な薬剤の更なる例としては、スクシニル化ゼラチンが挙げられる（４％ｗ／ｖ溶液は、Ｈａｕｓｍａｎｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄによって商品名Ｇｅｌｏｆｕｓｉｎｅとして販売されている）。このような薬剤の更なる例としては、フロセミド（Ｌａｓｉｘというブランド名で販売）、及びスピロノラクトン（Ａｌｄａｃｔｏｎｅというブランド名で販売）が挙げられる。

【0356】

いくつかの実施形態では、リジン又はアルギニンなどのアミノ酸の事前投与又は同時投与を利用してもよい。したがって、本明細書で提供する治療及び診断方法のいくつかの実施形態では、コンジュゲート又は当該コンジュゲートを提供する薬学的組成物は、アミノ酸、例えば、リジン、又はアルギニンと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、アミノ酸（例えば、リジン、アルギニン）は、コンジュゲート又は当該コンジュゲートを含有する組成物の投与前に投与される。いくつかの実施形態では、アミノ酸（例えば、リジン、アルギニン）は、コンジュゲート又は当該コンジュゲートを含有する組成物と同時に投与される。

【0357】

いくつかの実施形態では、スクシニル化ゼラチンは、コンジュゲート又は当該コンジュゲートを提供する薬学的組成物と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、スクシニル化ゼラチンは、コンジュゲート又は当該コンジュゲートを含有する組成物の投与前に投与される。

【0358】

いくつかの実施形態では、スクシニル化ゼラチンとアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン）との組み合わせは、コンジュゲートの投与の前に、又はそれと同時に投与される。

【0359】

いくつかの実施形態では、フロセミドは、コンジュゲートの投与の前に、又はそれと同時に投与される。

【0360】

いくつかの実施形態では、スピロノラクトンは、コンジュゲートの投与の前に、又はそれと同時に投与される。

【0361】

薬剤（例えば、リジン、アルギニンなどのアミノ酸）は、典型的には、薬学的組成物、例えば、水性組成物の形態で投与される。薬剤は、例えば、注射又は注入によって、静脈内投与されてもよい。

【0362】

放射性核種の存在を必要とする診断、治療、画像化、及び他の目的に好適なコンジュゲートは、最終使用が、本質的には治療的ではなく、むしろ診断的又は他の方法で画像化で使用され得るにもかかわらず、本明細書に記載の治療用コンジュゲートであることが理解されるであろう。

【0363】

治療用コンジュゲートの調製
放射性材料は有害物質であり、そのような材料を使用した取り扱いステップは、理想的には最小限に抑えられる。放射性核種成分をコンジュゲートに導入するのは、後期段階、理想的には、コンジュゲートの使用の直前の時点に限ることが望ましい。

【0364】

したがって、本明細書で定義される治療用コンジュゲートを生成するためのプロセスであって、
上記で定義した好適なデンドリマー－標的化剤コンジュゲートを放射性核種と接触させ、それにより治療用コンジュゲートを生成することを含み、デンドリマー－標的化剤複合体又はその塩が、
ａ）デンドリマーであって、
ｉ）コアユニット（Ｃ）、及び
ｉｉ）構成ユニット（ＢＵ）を含み、
デンドリマーが、２～６世代の構成ユニットを有し、コアユニットが、少なくとも２つの構成ユニットに共有結合により付着している、デンドリマーと、
ｂ）スペーサー基によりデンドリマーに共有結合により連結している、標的化剤と、
ｃ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第１の末端基であって、第１の末端基が、放射性核種を錯体化するための錯体化基を含む、第１の末端基と、
ｄ）デンドリマーの最も外側の構成ユニットに付着している１つ以上の第２の末端基であって、第２の末端基が、薬物動態修飾部分を含む、第２の末端基と、を含む、
プロセスも提供される。

【0365】

また、上記で定義した治療用コンジュゲートを生成するためのキットであって、ａ）上記で定義したデンドリマー－標的化剤コンジュゲートと、ｂ）放射性核種と、を含む、キットも提供する。

【0366】

コンジュゲートに関する、例えば、コアユニット（Ｃ）、構成ユニット（ＢＵ）、末端基、標的化剤、又はデンドリマーに関する、本明細書に記載の任意の１つ以上の様々な実施形態又は実施例も、中間体のために提供され得ることが理解されるであろう。同様に、コンジュゲートに関連して上述した放射性核種のいずれかを、コンジュゲートを生成するためのプロセスで使用してもよい。

【0367】

デンドリマー－標的化剤コンジュゲート及び放射性核種から治療用コンジュゲートを生成する任意の好適な手段を利用してもよい。例えば、デンドリマー－標的化剤コンジュゲート及び放射性核種（例えば、金属塩の形態）を、好適な溶媒、好適には患者への投与に好適な溶媒中に混合してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、水性溶媒を使用してもよい。

【0368】

いくつかの実施形態では、水溶液中の放射性核種（例えば、Ｚｒ^８９シュウ酸塩）の好適な塩形態を、好適な緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ）中のデンドリマー－標的化剤コンジュゲート又は中間体の溶液と混合してもよい。中間体と放射性核種塩との任意の好適なモル比、例えば、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、又は約１００：１を使用してもよい。必要に応じて、非結合放射性核種から分離するための精製を行ってもよい。所望であれば、溶液は、投与前に交換してもよく、例えば、リン酸緩衝生理食塩水への緩衝液交換を行ってもよい。

【0369】

他の金属イオン種が存在する場合（例えば、中間体がかなりのレベルのキレート金属を含有する場合）、これらは、放射性核種で標識する前に必要に応じて除去され得る。例えば、鉄汚染物質は、放射性核種による標識の前に、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）による処理によって除去され得る。

【0370】

デンドリマー－標的化剤コンジュゲート又は中間体の標識は、例えば、Ｖｅｒｅｌ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２００３，４４（８），ｐ１２７１－１２８１に記載の手順に従って行ってもよい。

【0371】

上述のキット、中間体、及びプロセスは、投与の直前に中間体の放射標識及び診療所におけるコンジュゲートの生成を可能にすることによって、診療所における薬学的組成物の効果的な調製を提供するために使用することができる。

【0372】

本開示の広範な一般的範囲から逸脱することなく、上述の実施形態に多数の変形及び／又は改変がなされ得ることが、当業者には理解されるであろう。したがって、本実施形態は、あらゆる点で、例示的であり、限定的ではないとみなされるべきである。

【実施例】

【0373】

本明細書では、デンドリマーコンジュゲートの合成に関連して、以下の命名法を使用している。

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【表2-4】

【表3-1】

【表3-2】

【0374】

分取ＨＰＬＣ
溶媒Ａ（水、ギ酸を含む水、又はＴＦＡを含む水）及び溶媒Ｂ（アセトニトリル、又はギ酸若しくはＴＦＡを含むアセトニトリル）からなる二成分溶媒系を使用して、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）ＢＥＨ３００ Ｐｒｅｐ Ｃ１８５μｍ ＯＢＤ（商標）３０×１５０ｍｍカラムを使用したＧｉｌｓｏｎ ＨＰＬＣシステム上で、分取ＨＰＬＣを実行した。ピークは、波長２１４ｎｍ、２４３ｎｍ又は２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0375】

分取ＨＰＬＣ法
分取ＨＰＬＣ法 ５～６０％ＴＦＡ：溶媒Ａ、水中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；流量：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～５分、５％Ｂ；５～３５分、５～６０％、３５～４７分、６０％Ｂ；４７～５０分、６０～５％Ｂ；５０～６０分、５％。ピークは、波長２１４及び２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0376】

分取ＨＰＬＣ法 ３０～５０％ＴＦＡ：溶媒Ａ、水中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；流速：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～５分、３０％Ｂ；５～３５分、３０～５０％、３５～４７分、５０％Ｂ；４７～５０分、５０～３０％Ｂ、５０～６０分、３０％。ピークは、波長２１４及び２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0377】

分取ＨＰＬＣ法 ４０～７０％ＴＦＡ：溶媒Ａ、水中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；流速：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～５分、４０％Ｂ；５～３５分、４０～７０％、３５～４７分、７０％Ｂ；４７～５０分、７０～４０％Ｂ；５０～６０分、４０％。ピークは、波長２１４及び２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0378】

分取ＨＰＬＣ法 ２０～６０、ＴＦＡ：溶媒Ａ、水中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；流速：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～５分、２０％Ｂ；５～３５分、２０～６０％、３５～４０分、６０～１００％Ｂ；４０～４７分、１００％Ｂ；４７～５０分、１００～１０％Ｂ；５０～６０分、１０％。ピークは、波長２１４及び２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0379】

分取ＨＰＬＣ法 ２０～６０：溶媒Ａ、水；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ；流量：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～７分、２０％Ｂ；７～３７分、２０～６０％、３７～４７分、６０％Ｂ；４７～５４分、６０～２０％Ｂ；５４～６０分、２０％。λ＝２１４ｎｍ及び２５４ｎｍ。

【0380】

分取ＨＰＬＣ法 ２０～６０（２）：溶媒Ａ、水；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ；流量：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～５分、２０％Ｂ；５～５５分、２０～６０％、５５～６０分、６０～２０％Ｂ。λ＝２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでの検出。

【0381】

分取ＨＰＬＣ法 ２０～９０、ＴＦＡ：溶媒Ａ、水中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；流量：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～６分、２０％Ｂ；６～４０分、２０～９０％、４０～４７分、９０％Ｂ；４７～５１分、９０～２０％Ｂ；５１～６０分、２０％Ｂ。ピークは、波長２１４及び２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0382】

分取ＨＰＬＣ法 ３０～９０、ＴＦＡ：溶媒Ａ、水中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；流量：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～５分、３０％Ｂ；５～４０分、３０～９０％、４０～４５分、９０％Ｂ；４５～５０分、９０～３０％Ｂ；５０～６０分、３０％Ｂ。ピークは、波長２１４及び２５４ｎｍｄで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0383】

分取ＨＰＬＣ法 ５～６０：溶媒Ａ、水；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ；流量：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～５分、５％Ｂ；５～４２分、５～６０％、４２～４９．５分、６０～８０％Ｂ；４９．５～５５分、８０％、５５～５７分、８０～５％Ｂ；、５７～６０分、５％。ピークは、波長２１４及び２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0384】

分取ＨＰＬＣ法 ５～６０（２）：溶媒Ａ、水；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ；流量：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～９分、５％Ｂ；９～３８分、５～６０％、３８～４８分、６０％Ｂ；４８～５４分、６０～５％Ｂ；５４～６０分、５％Ｂ。ピークは、波長２１４及び２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0385】

分取ＨＰＬＣ法 ４０～６０：溶媒Ａ、水；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ；流量：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～９分、４０％Ｂ；９～３７分、４０～６０％、３７～４７．５分、６０％Ｂ；４７．５～５４分、６０～４０％Ｂ；５４～６０分、４０％Ｂ。ピークは、波長２１４及び２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0386】

分取ＨＰＬＣ法 ２０～４０：溶媒Ａ、水；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ；流量：８．０ｍＬ／分；勾配： ０～１０分、２０％Ｂ；１０～３８分、２０～４０％、３８～４７．５分、４０％Ｂ；４７．５～５４分、４０～２０％Ｂ；５４～６０分、２０％。λ＝２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでの検出

【0387】

自動フラッシュクロマトグラフィー：
通常相又は逆相シリカカートリッジを使用したＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）Ｓｅｌｅｋｔ５自動フラッシュクロマトグラフィーシステム上で、自動フラッシュ精製を実行した。

【0388】

自動フラッシュクロマトグラフィー法
オートフラッシュ法１： カートリッジ＝Ｂｉｏｔａｇｅ Ｓｆａｒ Ｃ１８ Ｄ（Ｄｕｏ１００ Ａ３０μｍ）１２ｇカートリッジ；溶媒Ａ、水；溶媒Ｂ、メタノール；流量： １２ｍＬ／分；勾配： ０～３ＣＶ、１０％Ｂ；３～５ＣＶ、１０～６０％Ｂ；５～９．８ＣＶ、６０～７４％Ｂ；９．８～１１．４ＣＶ、７４％Ｂ；１１．４～１３．６ＣＶ、７４～８０％Ｂ；１３．６～１５．６ＣＶ、８０～１００％Ｂ；１５．６～２０．６ＣＶ、１００％Ｂ；２０．６～２１．６ＣＶ、１００～１０％Ｂ、及び２１．６～２４．６ＣＶ、１０％Ｂ。λ＝２１４ｎｍ及び２５４ｎｍ及びλ_ａｌｌ１９８～８１０ｎｍでの検出。

【0389】

オートフラッシュ法２： カートリッジ＝Ｂｉｏｔａｇｅ Ｓｆａｒ Ｃ１８ Ｄ（Ｄｕｏ１００ Ａ３０μｍ）１２ｇカートリッジ；溶媒Ａ、水；溶媒Ｂ、メタノール；流量： １２ｍＬ／分；勾配： ０～３ＣＶ、５％Ｂ；３～４ＣＶ、５～３０％Ｂ；４～１４ＣＶ、３０～１００％Ｂ、及び１４～１９ＣＶ、１００％Ｂ。λ＝２１４ｎｍ及び２５４ｎｍ及びλ_ａｌｌ１９８～８１０ｎｍでの検出。

【0390】

分析ＬＣＭＳ
溶媒Ａ（水）、溶媒Ｂ（アセトニトリル）及び溶媒Ｃ［１％ｖ／ｖのギ酸水溶液（ギ酸緩衝液）の１０％又は１％ｖ／ｖのＴＦＡ（ＴＦＡ緩衝液）の１０％］からなる三元溶媒系を使用して、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）３．５μｍ ３×１００ｍｍ Ｃ８カラム又はＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ（登録商標）２．６μｍ ２．１×７５ｍｍ Ｃ１８カラムを使用したＷａｔｅｒｓ ２９９６ダイオードアレイ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ ２７９５ＨＰＬＣで、ＬＣＭＳを記録した。流量は、典型的には０．４ｍＬ／分であり、注入量は、典型的には５～１０μＬであった。ピークは、λ＝２１４ｎｍ、２４３ｎｍ又は２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した（特に明記しない限り）。

【0391】

ＭＳ－Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ４０００（ＥＳＩプローブ付き）、インレットフローは、ＭＳに約５０μＬ／分となるように分岐。質量分析データは、示されているとおり、ポジティブ又はネガティブ・エレクトロスプレー・イオン化モードで得た。生データは、Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎにより提供されたＭａｓｓＬｙｎｘソフトウェアｖ４．０に実装されているＭａｘｉｍｕｍ Ｅｎｔｒｏｐｙアルゴリズム（ＭａｘＥｎｔ）を用いてデコンボリューションを行った。実験の詳細で報告されているデータは、理論上のゼロ電荷状態にデコンボリューションした後の観測値に対応する。

【0392】

ＬＣＭＳ法
ＬＣＭＳ法（親水性（ｐｈｉｌｉｃ）ＴＦＡ／ギ酸緩衝液）：その勾配は、０～１分、５％Ｂ；１～１０分、５～６０％Ｂ；１０～１１分、６０％Ｂ；１１～１３分、６０～５％Ｂ；１３～１５分、５％Ｂであった。

【0393】

ＬＣＭＳ法（疎水性（ｐｈｏｂｉｃ）ＴＦＡ／ギ酸緩衝液）：その勾配は、０～１分、４０％Ｂ；１～７分、４０～９０％Ｂ；７～９分、９０％Ｂ；９～１１分、９０～４０％Ｂ；１１～１５分、４０％Ｂであった。

【0394】

ＬＣＭＳ法 ４０～６５、ＴＦＡ緩衝液：その勾配は、０～１分、４０％Ｂ；１～１０分、４０～６５％Ｂ；１０～１１分、６５％Ｂ；１１～１２分、６０～４５％Ｂ；１２～１５分、４５％Ｂであった。

【0395】

ＬＣＭＳ法（２０～９０、１５分）：その勾配は、０～１分、２０％Ｂ；１～９分、２０～９０％Ｂ；９～１１分、９０％Ｂ；１１～１３分、９０～２０％Ｂ；１３～１５分、２０％Ｂ（０．１％ＨＣＯＯＨ酸を含む）であった。

【0396】

ＬＣＭＳ法 ５～６０、８分、ＴＦＡ：勾配は、０～１分、５％Ｂ；１～５分、５～６０％Ｂ；５～６分、６０％Ｂ；６～６．１分、６０～５％Ｂ；６．１～８分、５％Ｂであった。

【0397】

ＬＣＭＳ法 ２０～９０、８分、ＴＦＡ：勾配は、０～０．５分、５％Ｂ；０．５～１分、５～２０％Ｂ；１～５分、２０～９０％Ｂ；５～６分、９０％Ｂ；６～６．１分、９０～５％Ｂ；６．１～８分、５％Ｂであった。

【0398】

ＬＣＭＳ法 ４０～９０、８分、ＴＦＡ：勾配は、０～０．５分、５％Ｂ；０．５～１分、５～４０％Ｂ；１～５分、４０～９０％Ｂ；５～６分、９０％Ｂ；６～６．１分、９０～５％Ｂ；６．１～８分、５％Ｂであった。

【0399】

ＬＣＭＳ法 ２０～６０、８分、ＴＦＡ：勾配は、０～０．５分、５％Ｂ；０．５～１分、５～２０％Ｂ；１～５分、２０～６０％Ｂ；５～６分、６０％Ｂ；６～６．１分、６０～５％Ｂ；６．１～８分、５％Ｂであった。

【0400】

ＬＣＭＳ法 ６０～９０、８分、ＴＦＡ：勾配は、０～０．５分、５％Ｂ；０．５～１分、５～６０％Ｂ；１～５分、６０～９０％Ｂ；５～６分、９０％Ｂ；６～６．１分、９０～５％Ｂ；６．１～８分、５％Ｂであった。

【0401】

ＬＣＭＳ法 ４０～６０、８分、ＴＦＡ：勾配は、０～０．５分、５％Ｂ；０．５～１分、５～４０％Ｂ；１～５分、４０～６０％Ｂ；５～６分、６０％Ｂ；６～６．１分、６０～５％Ｂ；６．１～８分、５％Ｂであった。

【0402】

ＬＣＭＳ法 ５～８０、８分、ＴＦＡ：勾配は、０～１分、５％Ｂ；１～５分、５～８０％Ｂ；５～６分、８０％Ｂ；６～６．１分、８０～５％Ｂ；６．１～８分、５％Ｂであった。

【0403】

ＬＣＭＳ法 ５～８０、１５分、ＴＦＡ：勾配は、０～１分、５％Ｂ；１～１０分、５～８０％Ｂ；１０～１１分、８０％Ｂ；１１～１３分、８０～５％Ｂ；１３～１５分、５％Ｂ；０．１％ＴＦＡであった。

【0404】

分析ＨＰＬＣ
Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）Ｃ８ ３．５μｍ ３×１００ｍｍカラム又はＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ（登録商標）２．６μｍ ２．１×７５ｍｍ Ｃ１８カラムを使用した２９９６ＰＤＡ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ ２６９５分離モジュールで、ＨＰＬＣデータを記録した。計器制御ソフトウェアは、Ｗａｔｅｒｓ Ｅｍｐｏｗｅｒ３であった。使用した３つの移動相は、ａ）１％ｖ／ｖ ＴＦＡ緩衝液又は１％ｖ／ｖギ酸緩衝液又は１００ｍＭギ酸アンモニウム、ｂ）水、及びｃ）アセトニトリルであった。流量は、典型的には０．４ｍＬ／分であり、注入量は、典型的には５～１０μＬであった。ピークは、λ＝２１４ｎｍ、２４３ｎｍ又は２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した（特に明記しない限り）。

【0405】

ＨＰＬＣ法
ＨＰＬＣ法 ５～８０、１５分、ギ酸塩／ＴＦＡ：勾配は、０．４０ｍＬ／分の流量で、０～１分、５％Ｂ、１～７分、５～８０％Ｂ、７～１２分、８０％Ｂ、１２～１３分、８０～５％Ｂ、１３～１５分、５％Ｂであった。ピークは、波長２１４、２４３及び２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0406】

ＨＰＬＣ－法 ５～８０、８分、ＴＦＡ：その勾配は、０．４０ｍＬ／分の流量で、０～０．５分、５％Ｂ；０．５～３．５分、５～８０％Ｂ；３．５～６分、８０％Ｂ；６～６．５分、８０～５％Ｂ；６．５～８分、５％Ｂであった。ピークは、波長２１４、２４３及び２５４ｎｍで、ＵＶ検出器を使用して検出した。

【0407】

ＨＰＬＣ－親水法、ギ酸塩／ＴＦＡ緩衝液、１５分：その勾配は、０～１分、５％Ｂ；１～１０分、５～６０％Ｂ；１０～１１分、６０％Ｂ；１１～１３分、６０～５％Ｂ；１３～１５分、５％Ｂであった。

【0408】

分析ＵＰＬＣ－ＴｏＦ（超高圧液体クロマトグラフィー－タイム・オブ・フライト）
ＵＰＬＣ－ＴｏＦデータを、Ｗａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ ＰＤＡ検出器及びＷａｔｅｒｓ ＬＣＴ Ｐｒｅｍｉｅｒｅ（ＴｏＦ）質量分析計を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣバイナリ分離モジュールで記録した。使用されたカラムは、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ ＥＶＯ Ｃ１８ ２．６μｍ ２．１×１００ｍｍカラムであった。計器制御ソフトウェアは、Ｗａｔｅｒｓ Ｍａｓｓｌｙｎｘ Ｖｅｒｓｉｏｎ４．１であった。使用した２つの移動相は、ａ）水中０．０１％ｖ／ｖ ＴＦＡ、及びｂ）アセトニトリル中０．０１％ｖ／ｖ ＴＦＡであった。流量は、典型的には０．２ｍＬ／分又は０．４ｍＬ／分であり、注入量は、典型的には２～５μＬであった。ピークは、２００ｎｍ～４００ｎｍ以内で検出された（特に明記しない限り）。

【0409】

ＵＰＬＣ－ＴｏＦ法
方法１：勾配は、１５～３５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１～９分）、３５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（９～１１分）、３５～１５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１１～１２分）、１５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１２～１５分）、０．０１％ＴＦＡ緩衝液）であり、２５４ｎｍでのＵＶ検出であった。
方法２：勾配は、２０～８０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１～１０分）、８０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１０～１１分）、８０～２０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１１～１３分）、２０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１３～１５分）、０．０１％ＴＦＡ緩衝液）であり、２５４ｎｍでのＵＶ検出であった。

【0410】

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
メタノール又はアセトニトリルを溶出剤として、約５０～６０滴／分の流量で重力下でＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）ＬＨ－２０カラム上でサイズ排除クロマトグラフィーを実行した。各画分サイズは、４００～６００滴で構成されていた。ＰＥＧ化化合物を含有する画分を、ＴＬＣにより検出［ＴＬＣプレートを、５％（ｗ／ｖ）ＢａＣｌ_２水溶液、続いてエタノール中のＩ_２溶液中で展開］したか、又はＨＰＬＣにより分析した。

【0411】

タンジェント流ろ過
タンジェント流ろ過は、水を溶出培地として使用する５０ｃｍ^２ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）ＸＬカセットＵｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜、又は水若しくはアセトニトリルを溶出培地として使用するＵｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えた０．１１ｍ^２ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）３ Ｃａｓｓｅｔｔｅのいずれかで行った。

【0412】

遠心限外ろ過
指定された分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心分離フィルタを使用して、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離器５８１０Ｒ上で４０００ｒｐｍ、又は５４１５Ｒ上で１４０００ｒｐｍで行った。

【0413】

ＮＭＲ
ＮＭＲスペクトルを、ＣＤ_３ＯＤ、ＣＤＣｌ_３、Ｄ_２Ｏ、ＣＤ_３ＣＮで記録したか、又はそうでなければＢｒｕｋｅｒ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ Ｉｎｃ．、ＮＳＷ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）３００ ＵｌｔｒａＳｈｉｅｌｄ（商標）３００ＭＨｚ ＮＭＲ器具で記載した。

【0414】

ＩＲ
ＩＲスペクトルを、１６回のスキャンを使用してＣａｒｙ ６３０ ＦＴＩＲ Ａｇｉｌｅｎｔ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓダイヤモンドＡＴＲアクセサリーで記録した。

【0415】

一般手順：
カルボキシ反応性デンドリマー骨格の調製は、以前に記載されており、特に、ＷＯ２００８／０１７１２５を参照されたい。当業者であれば、これらの方法を適合させて、本明細書に概説されている様々なデンドリマーを調製することができる。以下の例では、式中の［Ｌｙｓ］は、デンドリマーの表面層にあるリジン構成ユニットを指す。

【0416】

一般手順Ａ．Ｂｏｃ脱保護
氷冷して撹拌したＢｏｃ化合物（１．０当量）／水懸濁液に、ＴＦＡ（４０～２００当量／Ｂｏｃ基）を加えた。５分後、氷浴を取り除き、反応混合物を室温で一晩撹拌させた。揮発性物質を真空除去し、残った水溶液を更に水で希釈して、凍結乾燥し、定量的な収率で脱保護された生成物を得た。

【0417】

一般手順Ｂ．デンドリマー表面へのリジン層の付加。
窒素雰囲気下においてＴＦＡデンドリマー（１．０当量）／ＤＭＦ撹拌溶液に、ＴＥＡ（６．０当量／ＮＨ_２）を加え、次いでＤＢＬ－ＯＮｐ（２．０当量／ＮＨ_２）を加えた。続いて得られた反応混合物を、室温で一晩撹拌させて放置した。揮発性物質を真空除去し、得られた粗物質を標準方法を用いて精製した。

【0418】

一般手順Ｃ．ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）］ウェッジを用いたデンドリマー表面のＰＥＧ化。
窒素雰囲気下においてＴＦＡデンドリマー（１．０当量）／ＤＭＦ撹拌溶液に、ＰｙＢＯＰ（２．０当量／ＮＨ_２）及びＤＩＰＥＡ（８．０当量／ＮＨ_２）を加えた。１０分後、ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）］（１．３５当量／ＮＨ_２）／ＤＭＦ溶液を加え、続いて得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。揮発性物質を真空除去し、得られた粗物質を標準方法を用いて精製した。

【0419】

一般手順Ｄ．ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］ウェッジによるデンドリマー表面をキャッピング、その後のＦｍｏｃ脱保護。
ステップ１：ＤＭＦ中のＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］（１．５当量／ＮＨ_２）及びＮＭＭ（２．５当量／ＮＨ_２）の撹拌溶液に、ＰｙＢＯＰ（１．４当量／ＮＨ_２）を加えた。その後、得られた反応混合物を室温で１５分間撹拌し、ＴＦＡ－デンドリマー（１．０当量）及びＮＭＭ（２．５当量／ＮＨ_２）／ＤＭＦ溶液を加えた。続いて得られた反応混合物を室温で１時間撹拌させて放置した後、氷冷ＭｅＣＮにゆっくりと加え、１５分間撹拌した。得られた固体をろ過により回収し、ＭｅＣＮで洗浄（３回）後、凍結乾燥した。

【0420】

ステップ２：Ｆｍｏｃ／Ｂｏｃデンドリマー（１．０当量）を含むＤＭＦ溶液に、ピペリジン（２１当量／Ｆｍｏｃ）を加えた。この溶液を室温で９０分間撹拌後、氷冷Ｅｔ_２Ｏにゆっくりと加えた。１５分後、析出固体をろ過により回収し、Ｅｔ_２Ｏで洗浄し、Ｈ_２Ｏに溶解して凍結保存した。

【0421】

一般手順Ｅ．Ｇｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ又はＤＧＡ－ＭＭＡＦ（ＯＭｅ）によるデンドリマー表面のキャッピング
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_{５７０／１１００／２０００}］_８化合物１０、化合物１４又は化合物１６（１．０当量）を、ＤＭＦ及びＮＭＭ（５．０当量／ＮＨ_２）の混合物中に室温で溶解させた。この溶液を、ＨＯ－Ｇｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（Ｌｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）又はＤＧＡ－ＭＭＡＦ（ＯＭｅ）（Ｃｏｎｃｏｒｔｉｓ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）（１．２当量／ＮＨ_２）及びＰｙＢＯＰ（２．０当量／ＮＨ_２）に加え、室温で放置した。得られた粗材料をＳＥＣにより精製した。

【0422】

一般手順Ｆ．ＭＭＡＥ／ＭＭＡＦデンドリマーへのアフィボディのコンジュゲーション
ステップ１：アフィボディタンパク質（ＨＥＲ２、アフィボディ ＡＢ、１．０ｍｇ／ｍＬ ＰＢＳ）の溶液をＴＣＥＰ（５０ｍＭ、３９．０当量）で処理し、反応混合物を６５０ｒｐｍで２時間、室温で振とうさせた。得られた溶液をＳＥＣにより精製した。

【0423】

ステップ２：回収した透過液を、ＤＭＳＯ中の（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）メチル（２－（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド）エチル）カルバメート（Ｍａｌ－ＢＣＮ）（化合物１１７）（２０．０当量）の溶液で処理した。続いて得られた反応混合物を６５０ｒｐｍで２時間、室温で振とうさせた。得られた溶液をＳＥＣにより精製した。

【0424】

ステップ３：アフィボディ－ＢＣＮ溶液を、アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＧｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_{５７０／１１００／２０００}）］_８化合物６４、化合物６５、化合物６６（ＰＢＳ中２４０μｍ）又はアジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＤＧＡ－ＭＭＡＦ（ＯＭｅ））（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）］_８化合物６７（ＰＢＳ中３６５μｍ）（１．３当量のアフィボディ－ＢＣＮ／デンドリマー）の溶液で処理した。続いて得られた混合物を、室温で一晩、６５０ｒｐｍで振とうさせた後、ＤＢＣＯアガロース（５．０当量／デンドリマー）の９．３８ｍＭ（３０％ＥｔＯＨ／水）溶液で処理した。続いて得られた懸濁液を１２００ｒｐｍで室温で一晩振とうした。この懸濁液をＳＥＣより精製した。

【0425】

一般手順Ｇ．ＭＭＡＥデンドリマーへのナノボディのコンジュゲーション
ステップ１：リンカー（１ｍｇ）を２０：８０（ＤＭＳＯ／１０ｍＭ ＰＢＳ、１ｍＬ）に溶解して、リンカー（ＢＣＮ－ＰＥＧ_２ＮＨ－Ｇｌｕ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_３－ＴＣＯ化合物５０又はＤＢＣＯ－Ｇｌｕ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_３－ＴＣＯ）化合物５１の溶液を調製した。

【0426】

ステップ２：ＴＣＯ－リンカー溶液（１当量）を、ＰＢＳ（１）中のテトラジン官能化デンドリマー（１．０当量、８ｍｇ／ｍＬ）の溶液に加えた。反応混合物を室温で３０分間放置した。反応の完了は、ピンクのテトラジン色の消失によって示された。この反応をＨＰＬＣによってモニターした。

【0427】

ステップ３：反応が完了したら、内容物をＰＢＳで希釈した（最終的に０．５ｍＬになるように）。ＢＣＮ／ＤＢＣＯ－ＭＭＡＥ－デンドリマー（１．０当量）の一部を、ナノボディ－Ｎ_３（１．０当量、９．２ｍｇ／ｍｌ）トリス緩衝液（２０ｍＭ、１ｍＬ）の溶液に加えた。得られた溶液を、室温で７時間、その後４℃で一晩放置した。ナノボディ－デンドリマー構築物の精製は、陰イオン交換クロマトグラフィー及びその後のＳＥＣによって行った。

【0428】

一般手順Ｈ．Ｎ_３－ＰＥＧ_{５７０／１１００}－ＮＨＳエステルによるデンドリマー表面のキャッピング、その後のＢｏｃ基の除去
ステップ１：ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨ_２）_３２］（参照１、ＷＯ２００７／０８２３３１Ａ１、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２０１１，１５２，２４１－２４８）及びＤＩＰＥＡ（２．０当量／ＮＨ_２）の撹拌ＤＭＦ溶液に、Ｎ_３－ＰＥＧ_{５７０／１１００}－ＮＨＳエステル（１．５当量／ＮＨ_２）、又はＮ_３－ＰＥＧ_{５７０／１１００}－酸（１．３当量／ＮＨ_２）及びＰｙＢＯＰ（１．３当量／ＮＨ_２）のＤＭＦ溶液を加えた。続いて得られた反応混合物を室温で１５時間撹拌した。脱イオン水を反応混合物に加え、得られた溶液をろ過した（０．４５μｍアクロディスクシリンジフィルタ）。ろ液を、水を循環媒体として使用して、１０ｋＤａ再生セルロースＰｅｌｌｉｃｏｎｅ膜を通して、透過液として２０透析ろ過体積（ＤＶ）が収集されるまで、限外ろ過した。残留物を収集し、ラインウォッシングとともにプールし、凍結乾燥した。

【0429】

ステップ２：アジドデンドリマー（１．０当量）のＤＣＭ溶液に、トリフルオロ酢酸（３２１当量／ＮＨＢｏｃ）（ＴＦＡ／ＤＣＭ １：１ｖ／ｖ）を加えた。溶液を室温で１５時間撹拌し、揮発分を真空除去した。

【0430】

一般手順Ｉ．デンドリマーへのシアニン５のコンジュゲーション、その後のアセチル化
ステップ１：ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_{５７０／１１００}Ｎ_３）_３２］化合物３２及び化合物３３並びにＤＩＰＥＡ（４．０当量／ＮＨ_２）の撹拌ＤＭＦ溶液中に、シアニン５－ＮＨＳエステル（２．０当量）を加えた。反応混合物を周囲温度で３時間撹拌した。揮発分を真空除去し、残渣をステップ２で更に精製せずに使用した。

【0431】

ステップ２：ステップ１で得られた乾燥残渣の撹拌ピリジン（１ｍＬ）溶液に、無水酢酸（２ｍＬ）を加えた。反応混合物を周囲温度で１５時間撹拌した。揮発分を真空除去し、残渣を溶出液としてメタノールを使用してＳＥＣ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０）により精製した。

【0432】

一般手順Ｊ．ＤＵＰＡ－ＢＣＮとアジドデンドリマーとのクリック反応
アセトニトリル及び水（１：１）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_{５７０／１１００}Ｎ_３）_３２］化合物３４及び化合物３５の撹拌溶液に、ＤＵＰＡ－ＢＣＮ（１９）を加えた。反応混合物を周囲温度で１５時間撹拌した。反応混合物を凍結乾燥し、凍結乾燥後に得られた残渣を、溶出液としてメタノールを使用してＳＥＣ（ＬＨ－２０）により精製するか、１０ＫＤａ ＭＷＣＯ Ｐｅｌｌｉｃｏｎｅ再生セルロースＴＦＦ膜上で水を使用して限外ろ過した。

【0433】

一般手順Ｋ．ＤＯＴＡデンドリマーとナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３とのコンジュゲーション
ステップ１：ナノボディ二量体の還元：ナノボディ－Ｃｙｓ二量体（３．３３ｍｇ／ｍＬ、１０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ７．４；１当量）の溶液に、０．５Ｍ ＴＣＥＰ水溶液（１０当量）を加えた。反応混合物を３７℃で２時間インキュベートした。過剰のＴＣＥＰを、１０ｋＤａのＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を用いたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタによって反応混合物から除去し、４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって濃縮した。残留物を、ｐＨ７．４のＰＢＳ、緩衝液（×５）で、４０００ｒｐｍで遠心分離して洗浄し、得られた残留物を、ｐＨ７．２のＰＢＳ緩衝液（ＰＢＳ １０ｍＭ；ＥＤＴＡ ５ｍＭ；窒素で脱気）で交換した。

【0434】

ステップ２：ナノボディ－Ｃｙｓ／Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_３－ＴＣＯ ＳＲＳ－１４の合成。還元されたナノボディ（ステップ１、３．１６ｍｇ／ｍＬ）の水性ＰＢＳ ｐＨ７．２緩衝液（１０ｍＭ ＰＢＳ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）溶液に、Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_３－ＴＣＯ ＳＲＳ－１２（２当量；１０ｍｇ／ｍＬ）の脱イオン水溶液を加えた。得られた溶液を４℃で放置し、ＵＰＬＣ分析により反応を監視した。（ＵＰＬＣ法２）。１８時間後、１０ｋＤａのＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタを使用して、過剰なリンカーＳＲＳ－１２を反応混合物から除去し、４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって濃縮した。残留物を、水性ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）（１０ｍＭ ＰＢＳ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）で、遠心分離により、４０００ｒｐｍ（×５）で洗浄した。

【0435】

ステップ３：コンジュゲーション反応：テトラジン置換デンドリマー（１０ｍｇ／ｍＬ；１当量）の脱イオン水溶液を、ナノボディ－Ｃｙｓ／Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_３－ＴＣＯ ＳＲＳ－１４（１．２当量）の溶液に室温で加えた。１８時間後、ナノボディ－デンドリマー構築物をニッケル親和性カラムクロマトグラフィー及びその後のＳＥＣによって精製した。

【0436】

一般手順Ｌ．Ｃｙ５標識デンドリマー－ナノボディコンジュゲートの定量
精製したコンジュゲートの定量は、対応する非コンジュゲートデンドリマーを使用して作製した標準曲線に対して、測定した試料の６５０ｎｍ吸光度を補間することによって実行した。吸光度測定は、Ｎａｎｏｄｒｏｐ ＮＤ－１０００分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）上で実行した。各デンドリマー－ナノボディコンジュゲートについて、デジタルマイクロバランス（Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｏｌｅｄｏ）で計量した乾燥非コンジュゲートデンドリマーの量を、適切な体積の１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ８緩衝液中に溶解した。既知の濃度１０ｍｇ／ｍｌ～０．０５ｍｇ／ｍｌの標準溶液を、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ８緩衝液中で希釈することによって調製し、その吸光度を６５０ｎｍで測定した。線形回帰によって生成された標準曲線及び補間は、Ｐｒｉｓｍ９ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を用いて実行した。

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【表4-4】

【表4-5】

【表4-6】

【表4-7】

【表4-8】

【表4-9】

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【表5-4】

【表5-5】

【表5-6】

【表6-1】

【表6-2】

【表6-3】

【表6-4】

【表6-5】

【表6-6】

【表6-7】

【表6-8】

【表6-9】

【0437】

実施例１：中間体及び対照の合成
１ａ．二官能性リンカー及びリジンウェッジの合成
１ａ．１ ＢＣＮ－ＰＥＧ_２－Ｇｌｕ－ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ_２Ｈ、化合物４９
水／ＴＨＦ（１：１、４ｍＬ）混合物中のＮＨ_２－ＰＥＧ_２４－ＣＯＯＨ（９３．７ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸水素ナトリウム（１５．２ｍｇ、０．１８１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５分間撹拌した後、ＴＨＦ（２ｍＬ）中のＢＣＮ－ＰＥＧ_２－Ｇｌｕ－ＮＨＳエステル（５０ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）溶液を加えた。得られた反応混合物を室温で１５時間撹拌した。その後、揮発分を減圧除去し、得られた水性懸濁液にＭｅＣＮ（２．５ｍＬ）を加えた。この溶液を分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法 ５～６０％ＴＦＡ）によりＲ_ｔ３２．２～３４．３分間精製して、凍結乾燥後、化合物４９を白色固体として得た（４２ｍｇ、３３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．８５－０．９２（ｍ，２Ｈ）；１．２５－１．３５（ｍ，１Ｈ）；１．４３－１．５７（ｍ，２Ｈ）；１．７３－１．８３（ｍ，２Ｈ）；２．０９－２．２５（ｍ，９Ｈ）；２．３９（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）；３．２１－３．３１（ｍ，６Ｈ）；３．３５－３．８５（ｍ，１０６Ｈ）；４．１０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝１０．２８分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）ｍ／ｚ １５６６．７［Ｍ］^＋。

【0438】

１ａ．２ ＢＣＮ－ＰＥＧ_２－Ｇｌｕ－ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_３－ＴＣＯ、化合物５０
ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中のＢＣＮ－ＰＥＧ_２－Ｇｌｕ－ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４－ＣＯＯＨ、化合物４９（１０．０ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＰｙＢＯＰ（３．６４ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（１．３１μＬ、０．０１２ｍｍｏｌ）、その後ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨ_２（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、２．４１ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）を加えた。続いて得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。その後、溶媒を減圧除去し、得られた残渣をＭｅＣＮ（２ｍＬ）に溶解し、０．４５μｍフィルタでろ過した。収集したろ液を分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法 ３０～５０％ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４０～４２分で精製し、生成物含有画分を減圧濃縮してＭｅＣＮを除去した。残った水溶液を一晩凍結乾燥させて、化合物５０を白色固体として得た（４．７ｍｇ、３９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： ０．８９－１．０５（ｍ，２Ｈ），１．２６－１．４８（ｍ，２Ｈ），１．５２－１．７９（ｍ，５Ｈ），１．８３－２．０６（ｍ，６Ｈ），２．１１－２．３９（ｍ，１２Ｈ），２．４８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．３５－３．４４（ｍ，６Ｈ），３．４７－３．７９（ｍ，１０２Ｈ），３．８３－３．９２（ｍ，１Ｈ），４．１６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），４．２６－４．４１（ｍ，１Ｈ），４．５８（ｂｓ，１０Ｈ），５．３９－５．７４（ｍ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝１１．０分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１８９４．０［Ｍ］^＋；Ｃ_９０Ｈ_１６５Ｎ_５Ｏ_３６［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値：１８９４．２

【0439】

１ａ．３ ＤＢＣＯ－Ｇｌｕ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_３－ＴＣＯ、化合物５１
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＤＢＣＯ－Ｇｌｕ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯＯＴＦＰ（５０．０ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨ_２（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、１０．７ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）を加え、その後ＮＭＭ（４．０８μＬ、０．０３７ｍｍｏｌ）を加えた。続いて得られた反応混合物を室温で３時間撹拌した後、減圧濃縮した。得られた残渣をＭｅＣＮ（２ｍＬ）に溶解し、０．４５μｍフィルタでろ過し、ろ液を分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法 ４０～７０％ＴＦＡ）によりＲｔ＝２７～２９分で精製した。生成物含有画分を減圧濃縮してＭｅＣＮを除去し、残った水溶液を一晩凍結乾燥させて、化合物５１を粘性の無色の液体として得た（２５．０ｍｇ、４２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．３１－１．６２（ｍ，４Ｈ），１．６０－１．８３（ｍ，６Ｈ），１．９２－２．１６（ｍ，４Ｈ），２．２５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），２．９１－３．０３（ｍ，４Ｈ），３．１２－３．５８（ｍ，７８Ｈ），３．５９－３．６９（ｍ，１Ｈ），４．０１－４．１８（ｍ，１Ｈ），４．９２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１５Ｈ），５．１５－５．４９（ｍ，３Ｈ），６．９５－７．５９（ｍ，８Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝７．０分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１７７５．０．０［Ｍ］^＋；Ｃ_８８Ｈ_１４８Ｎ_４Ｏ_３２［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値：１７７５．１２

【0440】

１ａ．４ Ｎ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］、化合物ＳＲＳ－３
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＮ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨ_２（ＱｕａｎｔａＢｉｏｄｅｓｉｇｎ、５１４ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）、ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］（４８８ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（２８６μＬ、２．６０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＰｙＢＯＰ（８１１ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去し、残渣をジクロロメタン：ＭｅＯＨ（１００：０～９０：１０ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＳＲＳ－３を粘性の無色油（４１０ｍｇ、４７％）として得た。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、１５分）：Ｒ_ｔ＝９．３５分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）８４５［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_４２Ｈ_６４Ｎ_６Ｏ_１２［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝８４５；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．１７－１．９４（ｍ，１６Ｈ），３．１２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．３３－３．４４（ｍ，４Ｈ），３．４５－３．７４（ｍ，２８Ｈ），３．８９－４．６５（ｍ，１Ｈ），４．１２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），４．３８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．３３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．４１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．６６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．８１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ）。

【0441】

１ａ．５Ｎ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］、化合物ＳＲＳ－３ａ
Ｎ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］（２００ｍｇ、０．２３６ｍｍｏｌ）化合物ＳＲＳ－３を１．５Ｍ ＨＣｌのメタノール（４ｍＬ）に溶解し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。揮発分を減圧除去し、Ｎ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］ＳＲＳ－３ａを白色固体として得た（１８０ｍｇ、９８％）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、１５分）：Ｒ_ｔ＝６．１３分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）７４５［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_３７Ｈ_５６Ｎ_６Ｏ_１０［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝７４５。

【0442】

１ａ．６ Ｎ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］、化合物ＳＲＳ－４
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＮ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］ＳＲＳ－３ａ（５８ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１６μＬ、０．１４８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｃｙ５ ＮＨＳエステル（５０ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２０時間、室温で撹拌し、揮発物を減圧下で除去した。残渣をＭＱ水：ＭｅＣＮ（２ｍＬ、１：１ｖ／ｖ）に溶解し、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクフィルタ）、分取ＨＰＬＣを使用して精製して、化合物ＳＲＳ－４を青色固体として得た（３０ｍｇ、３３％）。ＨＰＬＣ：３０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１～１０分）、３０～９０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１０～３５分）、９０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（３５～４８分）、９０～３０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（４８～５５分）、０．０５％ギ酸緩衝液）の勾配を有するＣ１８カラム、及び２５４ｎｍでのＵＶ検出。Ｒ_ｔ＝３５～４０分。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、１５分）Ｒ_ｔ＝８．２０分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１２１０［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_６９Ｈ_９３Ｎ_８Ｏ_１１［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１２１０。

【0443】

１ａ．７ Ｎ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ_２）］、化合物ＳＲＳ－４ａ
Ｎ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］化合物ＳＲＳ－４（３０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ：ピペルジン（３．０ｍＬ、４：１ｖ／ｖ）に溶解させ、反応混合物を室温で撹拌した。１８時間後、揮発物を減圧除去し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、Ｎ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ_２）］ＳＲＳ－４ａを青色固体として得た（１８．０ｍｇ、７５％）。ＨＰＬＣ：２０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１～１０分）、２０～６０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１０～３５分）、６０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（３５～４８分）、６０～２０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（４８～５５分）、０．０５％ギ酸緩衝液）の勾配を有するＣ１８カラム、並びに２１４及び２５４ｎｍでのＵＶ検出。Ｒ_ｔ＝２４～２８分。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、１５分）Ｒ_ｔ＝４．９１分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）９８８［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_５４Ｈ_８３Ｎ_８Ｏ_９［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝９８８。

【0444】

１ａ．８ Ｎ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＯＴＡ）］化合物ＳＲＳ－５
ＤＭＦ（４ｍＬ）中のアミンＳＲＳ－４ａ（１８．０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（４μＬ、０．０３６ｍｍｏｌ）及びＤＭＳＯ（５００μＬ）中のｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ（１３ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。１８時間撹拌した後、揮発物を減圧除去し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、ＳＲＳ－５を青色固体として得た（９．０ｍｇ、３２％）。ＨＰＬＣ：４０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１～１０分）、４０～８０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１０～３５分）、８０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（３５～４８分）、８０～４０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（４８～５５分）、０．０５％ギ酸緩衝液）の勾配を有するＣ１８カラム、並びに２１４及び２５４ｎｍでのＵＶ検出。Ｒ_ｔ＝２６～２８分。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、１５分）Ｒ_ｔ＝３．９５分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１５３８［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_７８Ｈ_１１６Ｎ_１３Ｏ_１７Ｓ［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１５３８。

【0445】

１ａ．９ ＤＦＯ－ＰＥＧ_４－スルホ－ＤＢＣＯ、化合物５５
デフェロキサミン－ＳＣＮ（２２．３ｍｇ、２９．７ｍｍｏｌ）及びスルホ－ＰＥＧ_３－ＤＢＣＯ（２０．０ｍｇ、２９．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）懸濁液に、ＮＭＭ（６．５μＬ、５９．１μｍｏｌ）を加えた。超音波処理では、均質な溶液が得られなかった。ＮＭＭ（１０μＬ、９１．０μｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１０μＬ、５７．４μｍｏｌ）を追加しても、反応混合物は更に可溶化しなかった。ＤＭＳＯ（２ｍＬ）を加え、内容物を１分間超音波処理し、最終的に透明溶液を得た。続いて得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。内容物を減圧濃縮し、残留溶液にＭｅＣＮ（１２ｍＬ）を添加した後、内容物をろ過した（０．４５μｍアクロディスク）。ろ液を、分取ＨＰＬＣ；注入量１０００μＬ、５～８０％ＭｅＣＮ、６０分間、０．１％ギ酸、Ｒ_ｔ＝３３．５～３４．５分で精製した。生成物画分を合わせ、ＭｅＣＮを減圧除去し、残った水溶液を凍結乾燥させて、表題生成物を白色固体１２．７ｍｇ（３０％）として得た。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝４．７０分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１４２８［Ｍ］^＋；Ｃ_６５Ｈ_９４Ｎ_１２Ｏ_１８Ｓ_３［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１４２７．７。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ７．７１－６．９８（ｍ，１２Ｈ），５．１１－４．９５（ｍ，１Ｈ），３．９０－３．０１（ｍ，３６Ｈ），２．８７－２．３０（ｍ，１１Ｈ），２．２１－１．９０（ｍ，４Ｈ），１．８０－１．１６（ｍ，１７Ｈ）。

【0446】

１ａ．１０ ＤＦＯ－ＤＢＣＯ化合物５６の合成
ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中のメシル酸デフェロキサミン（Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ、２００．０ｍｇ、０．３０４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（１００．０μＬ、０．９１２ｍｍｏｌ）及びＤＢＣＯ－ＮＨＳエステル（１３０．７ｍｇ、３０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いで溶液に窒素ガス流を２時間吹き付けることによって濃縮した。残渣をＭＱ水：アセトニトリル（３ｍＬ、１：１ｖ／ｖ）の混合物中に溶解し、次いでろ過した（０．４５μｍアクロディスクシリンジフィルタ）。ろ液を分取ＨＰＬＣにより精製した。ＭＱ水中３０～４０％ＭｅＣＮ＋０．１％ギ酸（６０分、Ｒ_ｔ４２～４４分）により、生成物を無色の粘性液体として得た（１９５．０ｍｇ、７３％）。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝５．６４分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）８７６［Ｍ］^＋；Ｃ_４６Ｈ_６５Ｎ_７Ｏ_１０［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝８７６、［Ｍ＋Ｆｅ］^＋＝９２９；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）： ９．９６－９．４６（ｂｓ，２Ｈ），７．９２－７．２４（ｍ，９Ｈ），５．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ），３．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），３．５６－３．４３（ｍ，１０Ｈ），３．１３－２．８７（ｍ，４Ｈ），２．６９－２．５８（ｍ，４Ｈ），２．４０－２．２７（ｍ，３Ｈ），２．１３（ｓ，６Ｈ），２．０２（ｓ，２Ｈ），１．９４－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．６８－１．０９（ｍ，１７Ｈ）。

【0447】

１ａ．１１ ＴＣＯ－ＰＥＧ_８－ジブロモマレイミド化合物５７の合成
ＴＨＦ（２．０ｍＬ）中の３，４－ジブロモ－２，５－ジオキソ－２Ｈ－ピロール－１（５Ｈ）－カルボキシレートエチル（２５．０ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＣＯ－ＰＥＧ_８－ＮＨ_２（Ｂｒｏａｄｐｈａｒｍ；４４．０ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧除去し、残渣を、ジクロロメタン：ＭｅＯＨ（１００：０～９７：３ｖ／ｖの勾配溶出）で溶出するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによって精製し、続いて、ＭＱ水中５０～９０％のＭｅＣＮで６０分かけて溶出する分取ＨＰＬＣにより、無色油として化合物５７を得た（８．０ｍｇ、１３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）５．７９－５．４２（ｍ，２Ｈ），４．７７－４．６２（ｍ，１Ｈ），３．８０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．７０－３．５７（ｍ，２９Ｈ），３．５３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．２７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），２．４８－２．３０（ｍ，１Ｈ），２．２６－１．４６（ｍ，９Ｈ）。

【0448】

１ａ．１２ ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ）］ウェッジ、化合物５８の合成
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］（５７．０ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（５２μＬ、０．４７２ｍｍｏｌ）及びＣｙ５－ＮＨＳエステル（Ｌｕｍｉｐｒｏｂｅｓ、４０．０ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した後、揮発分を真空除去した。残渣をＭｅＣＮ：ＭＱ水（３ｍＬ １：１ｖ／ｖ）に溶解し、溶液をろ過した（０．４５μｍアクロディスクシリンジフィルタ）。ろ液を、分取ＨＰＬＣ；ＭＱ水＋０．１％ギ酸中２０～９０％ ＭｅＣＮ（６０分、Ｒ_ｔ＝３９．０～４２．０分）で精製して、青色固体として化合物５８を３３ｍｇ（６７％）得た。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝１０．５４分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）８３３［Ｍ］^＋；Ｃ_５３Ｈ_６１Ｎ_４Ｏ_５［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝８３３．４６。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ８．２１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ），７．７９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．４９－７．２４（ｍ，１０Ｈ），６．６１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），６．２９－６．２２（ｍ，２Ｈ），４．４９－４．２６（ｍ，２Ｈ），．１８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），４．０７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．６８－３．６０（ｍ，２Ｈ），３．６０（ｓ，３Ｈ），３．１２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），１．９４－１．６１（ｍ，６Ｈ），１．７１（ｓ，１２Ｈ），１．６２－１．１９（ｍ，６Ｈ）。

【0449】

１ａ．１３ ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ_２）］、化合物５９
ＤＭＦ（４ｍＬ）中の化合物５８（３６ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ピペリジン（１．５ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、残渣を分取ＨＰＬＣ；ＭＱ水＋０．１％ギ酸中２０～９０％ＭｅＣＮ（６０分、Ｒ_ｔ＝３２．０～３３．０分）により精製して、青色固体として生成物である化合物５９を１２ｍｇ（４４％）得た。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝７．６５分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）６１１［Ｍ］^＋；Ｃ_３８Ｈ_５１Ｎ_４Ｏ_３［Ｍ］^＋のｍ／ｚ計算値＝６１１。

【0450】

１ａ．１４ ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ）］、化合物６０
ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の化合物５９（２０．０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（３２μＬ、０．２２４ｍｍｏｌ）を加え、その後ｐ－ＳＣＮ－デフェロキサミン（Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ、２４．０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、次いで、溶液に窒素ガス流を数時間吹き付けて濃縮した。その後、得られた残渣を分取ＨＰＬＣによって精製した。ＭＱ水＋０．１％ＴＦＡ中３０～６０％ＭｅＣＮ（６０分、Ｒ_ｔ３９～４２分）により、青色固体として生成物である化合物６０を１５ｍｇ（３４％）得た。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝５．９３分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１３６４［Ｍ］^＋；Ｃ_７１Ｈ_１０３Ｎ_１２Ｏ_１１Ｓ_２［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１３６４。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ８．２５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），７．５６－７．１８（ｍ，９Ｈ），６．６５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），６．３７－６．１５（ｍ，２Ｈ），４．４３－４．３２（ｍ，１Ｈ），４．１１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．７０－３．４６（ｍ，８Ｈ），３．２２－３．１０（ｍ，３Ｈ），２．８６－２．６９（ｍ，３Ｈ），２．５６－２．３８（ｍ，３Ｈ），２．３１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），２．１１（ｓ，２Ｈ），１．９６－１．１８（ｍ，３２Ｈ）。
１ａ．１５ ＤＵＰＡ－ＢＣＮリンカー（１７Ｓ，２１Ｓ）－１－（（１Ｒ，８Ｓ，９Ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノン４－イン－９－イル）－３，１４，１９－トリオキソ－２，７，１０－トリオキサ－４，１３，１８，２０－テトラアザトリコサン－１７，２１，２３－トリカルボン酸、化合物６１の合成

【0451】

テトラヒドロフラン及び水（１：１、４ｍＬ）混合物中の３．３（１３Ｓ，１７Ｓ）－１－アミノ－１０，１５－ジオキソ－３，６－ジオキサ－９，１４，１６－トリアザノナデカン－１３，１７，１９－トリカルボン酸化合物４８（１４９ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１８４μＬ、１．３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノン４－イン－９－イル）メチル（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）カーボネートジクロロメタン（ＢＣＮ－ＮＨＳエステル）（８４ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応混合物を周囲温度で２．５時間撹拌した後、揮発分を真空除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｇｉｌｓｏｎ ＨＰＬＣシステム；カラム：Ｘ－Ｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ３００ Ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５ｕｍ ＯＢＤ ３０×１５０ｍｍ；溶媒： Ａ＝０．０５％ギ酸を含む脱イオン水；Ｂ＝０．０５％ギ酸を含むＭｅＣＮ；流量：８ｍＬ／分）により精製して、凍結乾燥後に表題生成物である化合物６１（１２０ｍｇ、７３％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ０．７７－０．９０（ｍ，２Ｈ）；１．１３－１．３６（ｍ，１Ｈ）；１．４５－１．４９（ｍ，２Ｈ）；１．７９－１．９３（ｍ，２Ｈ）；２．０１－２．１９（ｍ，９Ｈ）；２．２４－２．３１（ｍ，２Ｈ）；２．３９－２．４４（ｍ，２Ｈ）；３．２０－３．３０（ｍ，４Ｈ）；３．４８－３．５２（ｍ，４Ｈ）；３．５６－３．６２（ｍ，４Ｈ）；４．０６－４．１９（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝８．９２分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）６２７［Ｍ＋１］^＋；Ｃ_２８Ｈ_４２Ｎ_４Ｏ_１２［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値：６２６．２８。

【0452】

１ ａ．１６ ＢｏｃＨＮ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ） ＳＲＳ－７
ＤＭＦ（１２．０ｍＬ）中のＨＯ_２Ｃ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）、ＳＲＳ－５ａ（５００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、ＢｏｃＮＨ－ＰＥＧ_３－ＮＨ_２、ＳＲＳ－６（１－２．５ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（５３μＬ、０．４８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温でＰｙＢＯＰ（１６６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１６時間撹拌した後、揮発分を真空除去した。残渣をＭｅＣＮ（３．０ｍＬ）に溶解し、ろ過し（０．４５μｍフィルタディスク）、分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法 ２０～６０、Ｒ_ｔ＝３４～４７分）により精製して、ＢｏｃＨＮ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－７を赤色固体として得た（５５０ｍｇ、９２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．７８（ｑ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），１．９５（ｑ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．４６（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，４Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），３．１３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．２６－３．４３（ｍ，４Ｈ），３．５０－３．５８（ｍ，４Ｈ），３．５８－３．７８（ｍ，１２８Ｈ），３．８９－３．９５（ｍ，２Ｈ），４．２５－４．３２（ｍ，２Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）及び８．５２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～６０、８分、ＴＦＡ）Ｒ^ｔ＝６．１２分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１８８５ ［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ］^＋；Ｃ_８６Ｈ_１５９Ｎ_７Ｏ_３６［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１８８５。

【0453】

１ ａ．１７ ＨＣｌ．Ｈ_２Ｎ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－８
ＢｏｃＨＮ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－７（４５０ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）に、メタノール（４．０ｍＬ）中２．０Ｍ ＨＣｌを室温で加えた。得られた溶液を１８時間撹拌し、揮発分を真空除去した。残渣を水（４．０ｍＬ）に溶解し、凍結乾燥させて、ＨＣｌ．Ｈ_２Ｎ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－８をピンク色の固体４２０ｍｇ（９７％）として得た。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ５～６０、８分、ＴＦＡ）：Ｒ_ｔ＝５．７２分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１７６９［ＭＨ］^＋；Ｃ_８１Ｈ_１５１Ｎ_７Ｏ_３４［ＭＨ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１７６９。

【0454】

１ａ．１８ Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯ_２Ｈ、ＳＲＳ－１０
氷酢酸（１５ｍＬ）中のアミノ－ＰＥＧ_２４－酸ＲＬ－１１（５１０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、シトラコン酸無水物（５０μＬ、０．５３ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を１２０℃で２時間撹拌しながら加熱し、その後室温まで冷却した後、シトラコン酸無水物の追加のアリコート（５０μＬ、０．５３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１２０℃で２時間加熱した後、室温まで冷却した。１６時間後、反応混合物を真空濃縮し、残留褐色油を分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法 ５～６０、Ｒｔ＝３５～３７．５分）により精製して、Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯ_２Ｈ ＳＲＳ－１０を淡褐色固体として得た（２３６ｍｇ、４３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）２．０７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，３Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），３．４８－３．７２（ｍ，９８Ｈ），３．７５（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）及び６．４６（ｑ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ６０～９０、８分、ＴＦＡ）：Ｒ_ｔ＝５．５４分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１２５８［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ］^＋；Ｃ_５６Ｈ_１０７ＮＯ_２９［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ］についてのｍ／ｚ計算値＝１２５８。

【0455】

１ａ．１９ Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_３－ＴＣＯ、ＳＲＳ－１２
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中のＭｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯ_２ Ｈ ＳＲＳ－１０（１３０ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＨ_２－ＰＥＧ_３－ＴＣＯ ＳＲＳ－１１（４７ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（６５ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）、及びＮＭＭ（２３μＬ、０．１２６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。３．５時間撹拌した後、揮発分を真空除去し、残渣をＭｅＣＮ：水（１：２ｖ／ｖ，３ｍＬ）に溶解し、分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法 ５～６０（２）、Ｒ_ｔ＝４１～４３分）により精製して、Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_３－ＴＣＯ ＳＲＳ－１２を無色油として得た（７７ｍｇ、４６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．５３－２．４０（ｍ，１５Ｈ），２．０７（ｄ，Ｊ＝１．８５Ｈｚ，３Ｈ），２．４５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１３－３．２１（ｍ，２Ｈ），３．２８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．４７－３．８１（ｍ，１１８Ｈ），５．４２－５．８４（ｍ，２Ｈ）及び６．４６（ｍ，１Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ５～６０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝６．５１分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１６１２ ［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ］^＋；Ｃ_７５Ｈ_１４１Ｎ_３Ｏ_３３［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１６１２。

【0456】

１ａ．２０ Ｂｒ_２（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）、ＲＬ－１５
ＴＨＦ（２．０ｍＬ）中のＨＣｌ．Ｈ_２Ｎ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－８（１００ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（１５μＬ、０．０６８ｍｍｏｌ）及び１Ｈ－ピロール－１－カルボン酸，３，４－ジブロモ－２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－，エチルエステル ＲＬ－１２（２２ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を１８時間撹拌した後、真空濃縮した。残渣をＭｅＣＮ：水（２．０ｍｌ、１：１ｖ／ｖ）に溶解し、分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法 ４０～６０、Ｒ_ｔ＝２５～２７分）により精製して、Ｂｒ_２（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＲＬ－１５（４２ｍｇ、３７％）を得た。

【0457】

あるいは、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中のＢｒ_２（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_３－ＮＨ_２．ＴＦＡ ＲＬ－１７（２０２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯ_２Ｃ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ） ＳＲＳ－５ａ（４６１ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（１８４ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（８５μＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を１８時間撹拌した後、真空濃縮した。残渣をＭｅＣＮ：水（１：１ｖ／ｖ，４．０ｍＬ）に溶解し、分取ＨＰＬＣ［分取ＨＰＬＣ法 ２０～６０（２）］により精製して、Ｂｒ_２（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＲＬ－１５をピンク色固体として得た（３７ｍｇ、６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．７０－１．８２（ｍ，２Ｈ），１．８２－１．９３（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｍ，４Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），３．２０－３．４３（ｍ，４Ｈ），３．４７－３．８９（ｍ，１３２Ｈ），３．９１（ｍ，２Ｈ），４．２８（ｍ，２Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）及び８．５０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ４０～６０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．１２分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）２０２４ ［Ｍ＋Ｈ_３Ｏ］^＋；Ｃ_８５Ｈ_１４９Ｂｒ_２Ｎ_７Ｏ_３６［Ｍ＋Ｈ_３Ｏ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝２０２４。

【0458】

１ａ．２１ Ｂｒ_２（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_３－ＮＨＢｏｃ、ＲＬ－１６
１Ｈ－ピロール－１－カルボン酸，３，４－ジブロモ－２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－，エチルエステルＲＬ－１２（２１２ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍＬ）溶液に、ＢｏｃＨＮ－ＰＥＧ_３－ＮＨ_２ ＳＲＳ－６溶液を室温で加えた。反応混合物を２日間撹拌してから、揮発分を真空除去した。残渣を、ジクロロメタン中メタノール［勾配溶出；％メタノール（ｖ／ｖ）］：０％～３．３％～６．７％で溶出するシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｂｒ_２（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_３－ＮＨＢｏｃ ＲＬ－１６をオフホワイト固体として得た（２２０ｍｇ、５９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）：δ（ｐｐｍ）１．４１（ｓ，９Ｈ），１．６７（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｍ，２Ｈ），３．１０（ｑ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．４２－４．５８（ｍ，１２Ｈ）及び３．６４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ６０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝３．９９分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）４５９ ［ＭＨ－Ｂｏｃ］^＋；Ｃ_１４Ｈ_２３Ｂｒ_２Ｎ_２Ｏ_５［ＭＨ－Ｂｏｃ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝４５９。

【0459】

１ａ．２２ Ｂｒ_２（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_３－ＮＨ_２．ＴＦＡ、ＲＬ－１７
ジクロロメタン（６．０ｍＬ）中のＢｒ_２（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_３－ＮＨＢｏｃ ＲＬ－１６（２２０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（６０９μＬ、７．７９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を２時間撹拌し、真空濃縮した。残渣を脱イオン水（約２ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を凍結乾燥させて、Ｂｒ_２（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_３－ＮＨ_２．ＴＦＡ ＲＬ－１７をオフホワイト固体として得た（２０２ｍｇ、８８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．８４－１．９８（ｍ，４Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）及び３．４９－３．７４（ｍ，１４Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ６０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝３．１９分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）４５９ ［ＭＨ］^＋；Ｃ_１４Ｈ_２３Ｂｒ_２Ｎ_２Ｏ_５［ＭＨ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝４５９。

【0460】

１ａ．２３ Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）、ＲＬ－１８
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中のＭｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯ_２ Ｈ ＳＲＳ－１０（５０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及び４－（６－メチル－１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンゼンメタンアミンＲＬ－１３（１１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰｙＢＯＰ（２４ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（６μＬ、０．０６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応物を１６時間撹拌してから、４－（６－メチル－１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンゼンメタンアミンＲＬ－１３（５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）中に加え、続いてＰｙＢＯＰ（１２ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（６μＬ、０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後、反応混合物を真空濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法 ２０～４０、Ｒ_ｔ＝４５～４８分）により精製して、Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＬ－１８をピンク色の固体として得た（２４ｍｇ、４２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）２．０６（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，３Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ），３．５８－３．８４（ｍ，９６Ｈ），４．５５（ｓ，２Ｈ），６．４６（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）及び８．５３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ６０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝６．０７分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１４２４［Ｍ］^＋；Ｃ_６６Ｈ_１１４Ｎ_６Ｏ_２７［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１４２４。

【0461】

１ｂ．デンドリマー中間体の合成
１ｂ．１ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮＢｏｃ）_２］、化合物１
Ｎ_２雰囲気下、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のアジド－ＰＥＧ_２４－酸（Ｑｕａｎｔａ Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ、２．００ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（１．３３ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（５６３μＬ、５．１２ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、Ｎ（ＰＮＢｏｃ）_２（６２２ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を加え、続いて得られた反応混合物を室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、得られた油をＭｅＣＮに溶解し、分取ＨＰＬＣ（２７－５０－７０％ＭｅＣＮ、Ｒ_ｔ４７～５０分）により精製して、淡黄色の油状固体（１．３７ｇ，５４％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．４４（ｍ，１８Ｈ）；１．６５－１．８４（ｍ，４Ｈ）；２．６３（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）；３．０５（ｄｔ，Ｊ＝６．９及び１４．７Ｈｚ，４Ｈ）；３．３６－３．４１（ｍ，６Ｈ）；３．６０－３．７８（ｍ，９８Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝９．３２分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１４８６．３［Ｍ］^＋；Ｃ_６７Ｈ_１３２Ｎ_６Ｏ_２９［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値：１４８６．８。

【0462】

１ｂ．２ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮＨ_２．ＴＦＡ）_２］、化合物２
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮＢｏｃ）_２］、化合物１（１．３７ｇ，９２２μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ａに従って調製した。凍結乾燥生成物である化合物２を、淡黄色状油として得た（１．６７ｇ、１１９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．８８－２．０６（ｍ，４Ｈ）；２．７４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．９６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；３．０４（見かけ上のｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）；３．４２－３．５２（ｍ，６Ｈ）；３．６７－３．９５（ｍ，９３Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝８．４７分，ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１２８６．０［Ｍ］^＋；Ｃ_５７Ｈ_１１６Ｎ_６Ｏ_２５［Ｍ］^＋のｍ／ｚ計算値＝１２８６．６。

【0463】

１ｂ．３ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［ＮＨＢｏｃ］_４、Ｇ１、、化合物３
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮＨ_２．ＴＦＡ）_２］、化合物２（１８６ｍｇ、１４５μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｂに従って調製した。粗材料をＭｅＣＮに溶解し、分取ＨＰＬＣ（３０～８０％ＭｅＣＮ，Ｒ_ｔ３３．５～３６分）で精製して、淡黄色状油として化合物３を得た（２２４ｍｇ、８０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．２２－１．８７（ｍ，５６Ｈ）；２．６４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；３．０３（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ）；３．１３－３．２３（ｍ，４Ｈ），３．３６－３．４５（ｍ，６Ｈ）；３．６０－３．６９（ｍ，１００Ｈ）；３．７７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；３．８５－３．８８（ｍ，１Ｈ）；３．９２－４．０２（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（疎水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝６．７４分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１９４２．４［Ｍ］^＋；Ｃ_８９Ｈ_１７２Ｎ_１０Ｏ_３５ ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１９４２．４。

【0464】

１ｂ．４ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［ＮＨ_２．ＴＦＡ］_４、Ｇ１、化合物４
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２［Ｌｙｓ］_２［ＮＨＢｏｃ］_４、化合物３（２２０ｍｇ、１１３μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ａに従って調製した。凍結乾燥生成物である化合物４を、淡黄色状油として得た（２５１ｍｇ、１１１％）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝６．４９分，ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１５４２．１［Ｍ］^＋；Ｃ_６９Ｈ_１４０Ｎ_１０Ｏ_２７［Ｍ］^＋のｍ／ｚ計算値＝１５４１．９０。

【0465】

１ｂ．５ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）］_４、Ｇ２、化合物５
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２［Ｌｙｓ］_２［ＮＨ_２．ＴＦＡ］_４、化合物４（１２０ｍｇ、６０．１μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｃに従って調製した。粗材料をＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１：１）に溶解し、分取ＨＰＬＣ（２０～７０％ＭｅＣＮ、Ｒ_ｔ３１～３２．５分）で精製して、生成物である化合物５を淡黄色状油として得た（２４４ｍｇ、５９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．２４－１．９１（ｍ，７４Ｈ）；２．４２－２．４７（ｍ，８Ｈ）；２．６２－２．６６（ｍ，２Ｈ）；３．１３－３．２５（ｍ，１２Ｈ）；３．３６（ｓ，１２Ｈ）；３．５２－３．７８（ｍ，４９０Ｈ）；３．８５－３．８８（ｍ，４Ｈ）；３．９４－４．１１（ｍ，４Ｈ）；４．２５－４．３１（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝８．７０分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１７１４．０［Ｍ＋４Ｈ］_４＋／４，１３７１．７［Ｍ＋５Ｈ］^５＋／５；１１４３．０［Ｍ＋６Ｈ］^６＋／６，９８０．０［Ｍ＋７Ｈ］^７＋／７。６８５２に変換する。

【0466】

１ｂ．６ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）］_４、Ｇ２、化合物６
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）］_４、化合物５（２４４ｍｇ、３５．６μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ａに従って調製した。凍結乾燥粗材料を水に再溶解し、分取ＨＰＬＣ（２２～７０％ＭｅＣＮ、０．０１％ＴＦＡ、Ｒ_ｔ２７分）により精製して、生成物である化合物６を淡黄色の粘性固体として得た（１７３ｍｇ、６７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．３１－１．９８（ｍ，４０Ｈ）；２．５１－２．５６（ｍ，８Ｈ）；２．７２（ｂｒｏａｄ ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；３．１６－３．３０（ｍ，１６Ｈ）；３．４０（ｓ，１２Ｈ）；３．４６－３．５３（ｍ，４Ｈ）；３．６２－３．９７（ｍ，４９０Ｈ）；４．０３（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）；４．２４－４．２９（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝９．８５分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１６１４．１［Ｍ＋４Ｈ］_４＋／４，１２９１．６［Ｍ＋５Ｈ］^５＋／５；１０７６．５［Ｍ＋６Ｈ］^６＋／６。６４５２に変換する。

【0467】

１ｂ．７ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［ＮＨＢｏｃ］_８、Ｇ２、化合物７
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［ＮＨ_２．ＴＦＡ］_４、化合物６（１１７ｍｇ、５８．６μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｂに従って調製した。粗材料である化合物７を、淡黄色状油として得た（１６７ｍｇ、１００％）。ＬＣＭＳ（疎水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝８．３５分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１３２８．６［Ｍ＋２Ｈ］^２＋／２－Ｂｏｃ；Ｃ_１３３Ｈ_２５２Ｎ_１８Ｏ_４７［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝２８５５．６。

【0468】

１ｂ．８ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［ＮＨ_２．ＴＦＡ］_８、Ｇ２、化合物８
アジド－、ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［ＮＨＢｏｃ］_８、化合物７（１６７ｍｇ、５８．６μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ａに従って調製した。粗水溶液を分取ＨＰＬＣ（１０～６０％ＭｅＣＮ、０．１％ＴＦＡ緩衝液；Ｒ_ｔ２７～２９分）によって精製して、生成物である化合物８を淡黄色の粘性固体として得た（２ステップで１２４ｍｇ、７１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．３０－１．９６（ｍ，４２Ｈ）；２．７１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．９８－３．０４（ｍ，８Ｈ）；３．１３－３．３０（ｍ，８Ｈ）；３．３６－３．５３（ｍ，７Ｈ）；３．６８－３．８４（ｍ，１００Ｈ）；３．９３（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）；４．０４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）；４．２５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝７．７６分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１０２８．３ ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋／２、６８５．９［Ｍ＋３Ｈ］^３＋／３；Ｃ_９３Ｈ_１９０Ｎ_１８Ｏ_３１ ^２＋［Ｍ＋２Ｈ］^２＋／２に対するｍ／ｚ計算値：１０２８．３、Ｃ_９３Ｈ_１９１Ｎ_１８Ｏ_３１ ^３＋［Ｍ＋３Ｈ］^３＋／３に対するｍ／ｚ計算値：６８５．９。

【0469】

１ｂ．９ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ１１００）］_８、Ｇ３、化合物９
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［ＮＨ_２．ＴＦＡ］_８、化合物８（１２３ｍｇ、４１．５μｍｏｌ）を用いて一般手順Ｃに従って調製して、粗材料である化合物９を褐色油として得た。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝１１．５２分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）２１１３［Ｍ＋６Ｈ］^６＋／６，１８１２［Ｍ＋７Ｈ］^７＋／７，１５８５［Ｍ＋８Ｈ］^８＋／８，１４０９［Ｍ＋９Ｈ］^９＋／９，１２６８［Ｍ＋１０Ｈ］^１０＋／１０，１１５３［Ｍ＋１１Ｈ］^１１＋／１１，１０５７［Ｍ＋１２Ｈ］^１２＋／１２。１２，６７３に変換する。

【0470】

１ｂ．１０ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）］_８、Ｇ３、化合物１０
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）］_８、化合物９（５２６ｍｇ、４１．５μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ａに従って調製した。粗水溶液を分取ＨＰＬＣ（３～６０％ＭｅＣＮ、０．１％ＴＦＡ緩衝液；Ｒ_ｔ３８～３９分）によって精製して、生成物である化合物１０を淡黄色の粘性固体として得た（２ステップで３５９ｍｇ、６８％）。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝１０．２７分、１１，８８０に変換。

【0471】

１ｂ．１１ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ－Ｆｍｏｃ）］_８、Ｇ３、化合物１１
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［ＮＨ_２．ＴＦＡ］_８、化合物８（１０５ｍｇ、３５．４μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｄに従って調製した。生成物である化合物１１を、白色固体として得た（１６６ｍｇ、８３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，（ＣＤ_３）_２Ｓ＝Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．２３－１．４９（ｍ，１６０Ｈ）；２．７３－２．９５（ｍ，３６Ｈ）；３．４４－３．６０（ｍ，９４Ｈ）；３．８３（ｍ，８Ｈ）；４．０５－４．２８（ｍ，２９Ｈ）；６．３３－６．９０（ｍ，８Ｈ，ＮＨ）；７．２４－７．８７（ｍ，８４Ｈ）。

【0472】

１ｂ．１２ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε －ＮＨ_２）］_８、Ｇ３、化合物１２
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］_８、化合物１１（１６９ｍｇ、２９．９μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｄに従って調製して、化合物１２を綿毛状固体（９５ｍｇ、８２％）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．４６－１．４９（ｍ，１６０Ｈ）；２．６９（ｂｒ ｓ，１４Ｈ）；３．０９－３．１９（ｍ，１８Ｈ）；３．３８－３．４１（ｍ，８Ｈ）；３．５５－３．７８（ｍ，９６Ｈ），３．８９－４．３３（ｍ，１４Ｈ）。

【0473】

１ｂ．１３ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０）］_８、Ｇ３、化合物１３及びアジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０）］_８、Ｇ３、化合物１４
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のｍＰＥＧ_５７０－ＣＯ_２Ｈ（２０５ｍｇ、３４８μｍｏｌ）、ＮＭＭ（６０μＬ、５４６μｍｏｌ）、及びＰｙＢＯＰ（１７１ｍｇ、３２９μｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のアジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ_２）］_８、化合物１２を加えた。続いて得られた反応混合物を室温で一晩撹拌させ、その後、真空濃縮して、粗化合物１３を得、これを水に溶解させて、ＴＦＡで処理し、室温で一晩撹拌した。混合物を濃縮し、水に取り込んだ後、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎろ過ユニット（３Ｋ ＭＷＣＯ再生セルロース）を用いて精製し、凍結乾燥生成物である化合物１４をオフホワイトの綿毛状材料として得た（２ステップで６８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．３３－１．９０（ｍ，８８Ｈ）；２．５１－２．５５（ｍ，１６Ｈ）；２．６７－２．７５（ｍ，４Ｈ），３．１６－３．２３（ｍ，３２Ｈ）；３．４０－３．５３（ｍ，３２Ｈ），３．６２－４．０３（ｍ，４７０Ｈ）；４．２１－４．３９（ｍ，７Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝７．５０分。

【0474】

１ｂ．１４ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２０００）］_８、Ｇ３、化合物１５
ＤＭＦ（４ｍＬ）中のアジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ_２）］_８、化合物１２（９５．０ｍｇ、２４．５μｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（８５μＬ、４８８μｍｏｌ）、続いてｍＰＥＧ_２０００－ＮＨＳ（７２０ｍｇ、３１３μｍｏｌ）を加えた。続いて得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。粗残渣を水に溶解し、限外ろ過（５Ｋ、Ｐａｌｌ ＰＥＳ膜）により精製した。残留物を収集し、凍結乾燥させて、化合物１５をオフホワイトの綿毛状材料として得た（７６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．３３－１．６３（ｍ，１６０Ｈ）；３．０５－３．１５（ｍ，３５Ｈ）；３．２９（ｓ，２４Ｈ）；３．３５－３．９６（ｍ，１３７０Ｈ）；４．１３－４．１９（ｍ，６Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝１１．２４分。

【0475】

１ｂ．１５ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２０００）］_８、Ｇ３、化合物１６
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２０００）］_８、化合物１５（４０．０ｍｇ、１．８７μｍｏｌ）を使用して、一般手順Ａに従って調製して、オフホワイトの綿毛状材料（３５ｍｇ、８８％）として生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．２８－１．７９（ｍ，８８Ｈ）；２．５１－２．５８（ｍ，４Ｈ）；３．０４－３．１８（ｍ，３５Ｈ）；３．２８（ｓ，２４Ｈ）；３．３５－３．９７（ｍ，１３４８Ｈ），４．１４－４．２５（ｍ，６Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝９．１２分。

【0476】

１ｂ．１６ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_３）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_４］、Ｇ２、化合物１７
反応容器を箔で包んで光を除外したことを除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨ２．ＴＦＡ）_４（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_４］（参照１）（５０．０ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）及びＨＯＯＣＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、１３．３９ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｃに従って調製し、残渣を溶出液としてメタノールを用いてＳＥＣ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（商標）ＬＨ－２０）により精製して、生成物である化合物１７（４４．００ｍｇ、７７％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：８．４２－８．２６（ｍ，２Ｈ），７．４４－７．１１（ｍ，１２Ｈ），６．０４（ｂｓ，１Ｈ），４．４４－４．０７（ｍ，８Ｈ），４．０７－３．３７（ｍ，５５６Ｈ），３．３３（ｓ，１２Ｈ），３．２５－２．９０（ｍ，１７Ｈ），２．６２－２．４３（ｍ，２Ｈ），１．９６－０．９７（ｍ，４８Ｈ）；ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配（ギ酸塩緩衝液）：５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．０８～９．０１分。

【0477】

１ｂ．１７ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_７）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４１２）_８］、Ｇ３、化合物１８
反応容器を箔で包んで光を除外したことを除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４１２）_８］（参照１）（５０．０ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）及びＨＯＯＣ－ＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、１１．２ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従って調製し、メタノールを溶出液として使用して残渣をＳＥＣ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（商標）ＬＨ－２０）により精製して、生成物である化合物１８（２９ｍｇ、５５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：８．４３－８．２０（ｍ，２Ｈ），７．５０－７．０９（ｍ，１０Ｈ），６．０３（ｂｓ，１Ｈ），４．４１－４．０５（ｍ，１０Ｈ），４．０１－３．４１（ｍ，２５８Ｈ），３．３１（ｓ，１６Ｈ），３．２４－２．８３（ｍ，２８Ｈ），２．４１（ｂｓ，１３Ｈ），２．００－０．９８（ｍ，７５Ｈ）；ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配（ギ酸塩緩衝液）：５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．１６～８．９３分。

【0478】

１ｂ．１８ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_７）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］、Ｇ３、化合物１９
反応容器を箔で包んで光を除外したことを除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］（参照１）（１００．０ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）及びＨＯＯＣＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、１５．９７ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｃに従って調製し、残渣を溶出液としてメタノールを用いてＳＥＣ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（商標）ＬＨ－２０）により精製して、生成物である化合物１９（６９ｍｇ、６６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：８．４５－８．２５（ｍ，２Ｈ），７．４７－７．０７（ｍ，１２Ｈ），６．０７（ｂｓ，１Ｈ），４．４５－４．０５（ｍ，１２Ｈ），４．０４－３．３７（ｍ，９３６Ｈ），３．３２（ｓ，２５Ｈ），３．２３－２．８８（ｍ，３２Ｈ），２．５９－２．３２（ｍ，６Ｈ），１．９０－０．９８（ｍ，９０Ｈ）；ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配（ギ酸緩衝液）：５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．２１～９．１５分。

【0479】

１ｂ．１９ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_１５）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］、Ｇ４、化合物２０
反応容器を箔で包んで光を除外したことを除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_１６（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］（参照１）（１００．０ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）及びＨＯＯＣＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、６．７４ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従って調製し、メタノールを溶出液として使用して残渣をＳＥＣ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（商標）ＬＨ－２０）により精製して、生成物である化合物２０（６３ｍｇ、６５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：８．４５－８．２８（ｍ，２Ｈ），７．４７－７．０７（ｍ，１２Ｈ），６．０３（ｂｓ，１Ｈ），４．４０－４．０８（ｍ，２３Ｈ），４．０６－３．３８（ｍ，１９０６Ｈ），３．３３（ｓ，５６Ｈ），３．２９－２．９１（ｍ，７８Ｈ），２．６３－２．４５（ｍ，３Ｈ），１．９８－０．９８（ｍ，２００Ｈ）；ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配（ギ酸塩緩衝液）：５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２４３ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．５１～９．０２分。

【0480】

１ｂ．２０ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_３１）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］、Ｇ５、化合物２１
反応容器を箔で包んで光を除外したことを除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］（参照１）（１００．０ｍｇ、０．００２ ｍｍｏｌ）及びＨＯＯＣＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、３．３８ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従って調製し、メタノールを溶出液として使用して残渣をＳＥＣ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（商標）ＬＨ－２０）により精製して、生成物である化合物２１（６８ｍｇ、７２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：８．４４－８．２９（ｍ，２Ｈ），７．４４－７．０９（ｍ，１２Ｈ），６．０２（ｂｓ，１Ｈ），４．３７－４．１１（ｍ，３１Ｈ），４．０８－３．３７（ｍ，２９３７Ｈ），３．３２（ｓ，８３Ｈ），３．２７－２．８８（ｍ，１１６Ｈ），２．５９－２．４２（ｍ，３Ｈ），２．１８－０．９２（ｍ，３１３Ｈ）；ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配（ギ酸塩緩衝液）：５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．７７分。

【0481】

１ｂ．２１ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨＢｏｃ）_４（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）_４］、Ｇ２、化合物２２
ＤＭＦ中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨＢｏｃ）_４（ε－ＮＨ_２）_４］（参照１）（４６．０ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（６８．０μＬ、０．６２０ｍｍｏｌ）、ＨＯＯＣＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ；４３．０ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（８１．０ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。１６時間後、反応混合物をＭｅＣＮ：ＭＱ水（３ｍＬ，１：１ｖ／ｖ）に溶解し、溶液をろ過した（０．４５μｍアクロディスクシリンジフィルタ）。ろ液を分取ＨＰＬＣ；３０～８０％ＭｅＣＮ、６０分間、移動相：ＭＱ水及びアセトニトリル、Ｒ_ｔ３３．０～３６．０分で精製し、、化合物２２をピンク色の固体５２ｍｇ（２２％）として得た。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝５．６６分、^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ８．５２（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．４０－７．２６（ｍ，１０Ｈ），７．２０（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．２３－６．１７（ｍ，１Ｈ），４．３６－４．２１（ｍ，１０Ｈ），３．９９－３．８３（ｍ，１３Ｈ），３．８２－３．４６（ｍ，４８７Ｈ），３．４６－３．３２（ｍ，２２Ｈ），３．２７－３．０２（ｍ，１５Ｈ），３．０２（ｓ，１２Ｈ），２．５４－２．３８（ｍ，１７Ｈ），１．９２－１．１４（ｍ，８９Ｈ）。

【0482】

１ｂ．２２ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_４（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）_４］、Ｇ２、化合物２３
メタノール（２ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨＢｏｃ）_４（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）_４］、Ｇ２、化合物２２（４８．０ｍｇ）の撹拌溶液に、３Ｍ ＨＣｌのメタノール（２ｍＬ）溶液を加え、反応混合物を室温で２０時間撹拌した。揮発分を減圧下で除去して、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_４（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）_４］、Ｇ２、化合物２３をピンク色固体４１．０ｍｇ（９１％）として得た。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．２７分。

【0483】

１ｂ．２３ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ α－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_３）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）_４］、Ｇ２、化合物２４
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_４（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）_４］、Ｇ２、化合物２３（１１．０ｍｇ、０．００１５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（３．３２μＬ、０．０３９ｍｍｏｌ）、ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ）］化合物６０（２．０６ｍｇ、０．００１５ｍｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（１．１８ｍｇ、０．００２２ｍｍｏｌ）を室温で加えた。１８時間後、揮発物を減圧除去し、青色固体残渣をＭＱ水に溶解し、溶液をろ過した（０．４５μｍアクロディスクシリンジフィルタ）。ろ液をスピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ，０．５ｍＬ，３ｋＤａ ＭＷカットオフ）によって濃縮し、保持液をＭＱ水（１０ｘ４５０μＬ）で繰り返し洗浄して、化合物２４（ＭＱ水での濃度１０ｍｇ／ｍＬ；１．３ｍＬ）を得た。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．６４分；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ８．５２（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．３２（ｓ，１Ｈ），８．２９－８．１７（ｍ，２Ｈ），７．７８－７．７０（ｍ，２Ｈ），７．６９－７．６２（ｍ，２Ｈ），７．５７－７．４７（ｍ，２Ｈ），７．４８－７．２５（ｍ，１６Ｈ），７．２１（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ），７．１５－７．０８（ｍ，１Ｈ），７．０６－７．００（ｍ，１Ｈ），６．７０－６．６０（ｍ，２Ｈ），６．２１－６．１２（ｍ，２Ｈ），４．３７－４．２０（ｍ，１４Ｈ），４．１８－４．０６（ｍ，８Ｈ），３．９８－３．５０（ｍ，４８０Ｈ），３．４８－３．３４（ｍ，１５Ｈ），３．２７－３．０６（ｍ，１８Ｈ），３．０６－２．９７（ｍ，１９Ｈ），２．８８（ｓ，８Ｈ），２．５４－２．４０（ｍ，１９Ｈ），２．０８－１．９８（ｍ，２８Ｈ），１．９３－１．１２（ｍ，９９Ｈ），１．００－０．８２（ｍ，８Ｈ）。

【0484】

１ｂ．２４ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_２）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_４］、Ｇ２、化合物２５
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_３）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_４］、Ｇ２、化合物１７（３．０ｍｇ、０．４１４μｍｏｌ）、及びＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ）］化合物６０（０．５６ｍｇ、０．４１４μｍｏｌ）を使用して、一般手順Ｃに従って調製し、スピンカラム（１０ｋＤａ ＭＷカットオフ、１０×４５０μＬ ＭＱ水で洗浄）によって精製して、所望の生成物である化合物２５（３００μＬ ＭＱ水中３．５６ｍｇの最終濃度）を得た。

【0485】

１ｂ．２５ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_６）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４１２）_８］、Ｇ３、化合物２６
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_７））（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４１２）_８］、Ｇ３、化合物１８（２．９７ｍｇ、０．４５２μｍｏｌ）、及びＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ）］化合物６０（０．６１ｍｇ、０．４５２μｍｏｌ）を使用して、一般手順Ｃに従って調製し、スピンカラム（１０ｋＤａ ＭＷカットオフ、４５０μＬ ＭＱ水で洗浄）によって精製して、生成物である化合物２６（３００μＬ ＭＱ水中３．６０ｍｇの最終濃度）を得た。

【0486】

１ｂ．２６ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_６）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］、Ｇ３、化合物２７
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_７）（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１０００）_８］、Ｇ３、化合物１９（３．１４ｍｇ、０．２３４μｍｏｌ）、及びＨＯ－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ）化合物６０（０．３２ｍｇ、０．２３４μｍｏｌ）を使用して、一般手順Ｃに従って調製し、スピンカラム（１０ｋＤａ ＭＷカットオフ、１０×４５０μＬ ＭＱ水で洗浄）によって精製し、スピンカラム（１０ｋＤａ ＭＷカットオフ、１０×４５０μＬ ＭＱ水で洗浄）によって精製して、生成物である化合物２７（３００μＬ ＭＱ水中３．４５ｍｇの最終濃度）を得た。

【0487】

１ｂ．２７ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_１４）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］、Ｇ４、化合物２８
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８－［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_１５）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］、Ｇ４、化合物２０（１１．８ｍｇ、０．４５４μｍｏｌ）及びＨＯ－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ）化合物６０（０．６２ｍｇ、０．４５４μｍｏｌ）を用いて一般手順Ｃに従って調製し、スピンカラム（１０ｋＤａ ＭＷカットオフ、１０ｘ４５０μＬ ＭＱ水で洗浄）で精製して、９．３ｍｇの化合物２８を青色固体として得た（凍結乾燥後）。

【0488】

１ｂ．２８ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_３０）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］、Ｇ５、化合物２９
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８－［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_３０）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］、Ｇ４、化合物２１（１２．９ｍｇ、０．２７１μｍｏｌ）及びＨＯ－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ）化合物６０（０．３７ｍｇ、０．２７１μｍｏｌ）を用いて一般手順Ｃに従って調製し、スピンカラム（１０ｋＤａ ＭＷカットオフ、１０ｘ４５０μＬ ＭＱ水で洗浄）で精製して、８．４ｍｇの化合物２９を青色固体として得た（凍結乾燥後）。

【0489】

１ｂ．２９ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３）_３２］、化合物３０
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨ_２）_３２］（参照１））、７５ｍｇ、６．５μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｈ、ステップ１に従って調製した。凍結乾燥生成物である化合物３０を、オフホワイト粘着性固体として得た（４０ｍｇ、１９％）。^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ０．３９－２．１１（ｍ，６６６Ｈ）；２．２５－２．５３（ｍ，５８Ｈ）；２．５３－２．７０（ｍ，１２Ｈ）；２．７０－４．４２（ｍ，１５４０Ｈ）；６．８９－７．４８（ｍ，１２Ｈ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法 ５～８０、１５分、ギ酸塩）Ｒ_ｔ＝１０．２１分。

【0490】

１ｂ．３０ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_３２］、化合物３１
ＢＨＡＬｙｓ－［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨ_２）_３２］（参照１）（０，５０ｍｇ、４．４μｍｏｌ）及びＮ_３－ＰＥＧ_１１００－ＣＯＯＨを使用して、一般手順Ｈ、ステップ１に従って調製した。凍結乾燥生成物である化合物３１を、オフホワイト粘着性固体として得た（１５９ｍｇ、７５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： ０．９１－２．０８（ｍ，６６６Ｈ）；２．２７－２．５８（ｍ，６４Ｈ）；３．０１－３．２７（ｍ，１１３Ｈ）；３．３３－３．９２（ｍ，３０１８Ｈ）；３．９５－４．１８（ｍ，３３Ｈ）；４．２０－４．５０（ｍ，３１Ｈ）；７．１０－７．５５（ｍ，１２Ｈ），７．６２－８．１５（ｍ，２４Ｈ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法 ５～８０、１５分、ギ酸塩）Ｒ_ｔ＝９．６２分。

【0491】

１ｂ．３１ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３）_３２］、化合物３２
一般手順Ｈ、ステップ２に従って、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３）_３２］化合物３０（４０ｍｇ、１．３μｍｏｌ）を使用して調製した。生成物である化合物３２を、淡黄色状油として得た（４１ｍｇ、定量的）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ０．８７－１．９３（ｍ，３７８Ｈ）；２．２４－２．５１（ｍ，６７Ｈ）；２．５２－２．６９（ｍ，２０Ｈ）；２．７７－３．２０（ｍ，１２２Ｈ）；３．２０－４．０５（ｍ，１３１２Ｈ）；４．０５－４．３２（ｍ，３４Ｈ）；５．９７（ｓ，１Ｈ）；６．９８－７．３４（ｍ，１０Ｈ）。

【0492】

１ｂ．３２ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_３２］、化合物３３
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_３２］化合物３１（１４５ｍｇ、３．０μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｈ、ステップ２に従って調製した。生成物である化合物３３を、淡黄色の粘着性固体として得た（１４６ｍｇ、定量的）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．２０－２．０３（ｍ，３７８Ｈ）；２．３７－２．５９（ｍ，６３Ｈ）；３．００－３．２８（ｍ，１２１Ｈ）；３．３５－３．９６（ｍ，３０３６Ｈ）；３．９６－４．１３（ｍ，２２Ｈ）；４．１８－４．５６（ｍ，３９Ｈ）；６．１９（ｓ，１Ｈ）；７．２０－７．４２（ｍ，１０Ｈ）。ＨＰＬＣ ＨＰＬＣ法 ５～８０、１５分、ギ酸塩）Ｒ_ｔ＝９．４１分。

【0493】

１ｂ．３３ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３）_３２］、化合物３４
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３）_３２］（４６．１ｍｇ、１．６μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｉ、ステップ１及び２に従って調製した。生成物である化合物３４を、青色固体として得た（３１ｍｇ、７２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ０．９３－１．８５（ｍ，４００Ｈ）；１．８９－２．０２（ｍ，８９Ｈ）；２．０４－２．０９（ｍ，２３Ｈ）；２．３０－２．５２（ｍ，５９Ｈ）；２．５３－２．７３（ｍ，１３Ｈ）；２．９１－３．２１（ｍ，１２１Ｈ）；３．２４－３．９４（ｍ，１３１３Ｈ）；３．９７－４．３７（ｍ，６７Ｈ）；５．８７－６．３１（ｍ，６Ｈ）；６．８３－７．６０（ｍ，２５Ｈ）。ＩＲ（ｃｍ^－１）： ２１００（－Ｎ_３）。

【0494】

１ｂ．３４ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_３２］、化合物３５
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_３２］、化合物３３（１１２．５ｍｇ、２．３μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｉ、ステップ１及び２に従って調製した。生成物である化合物３５を、青色固体として得た（９８ｍｇ、８５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．０４－２．１８（ｍ，５０７Ｈ）；２．３８－２．５５（ｍ，６４Ｈ）；２．９９－３．２７（ｍ，１２２Ｈ）；３．３７－３．９６（ｍ，３０２６Ｈ）；４．１５－４．５１（ｍ，６７Ｈ）；６．１０－６．４８（ｍ，５Ｈ）；７．１５－７．５８（ｍ，２４Ｈ）。ＨＰＬＣ ＨＰＬＣ法 ５～８０、１５分、ギ酸塩）Ｒ_ｔ＝９．５２分。

【0495】

１ｂ．３５ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ）_１０（α－ＮＨ_２）_４（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］、Ｇ４、化合物ＳＲＳ－１
ＤＭＦ（４ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ））_１（α－ＮＨ_２）_１５）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］、Ｇ４、化合物２０（１４８．０ｍｇ、０．００５４ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（３８．０μＬ、０．４７４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｃｙ５－ＮＨＳエステル（Ｌｕｍｉｐｒｏｂｅｓ、３．６６ｍｇ、０．００５４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で撹拌し、ＬＣＭＳによりＣｙ５ ＮＨＳエステルの消費を監視した。１８時間後、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中のｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ（Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ、７５．０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）の溶液を加え、２４時間撹拌を続けた。揮発分を真空除去し、残渣をＭＱ水（１５．０ｍＬ）に溶解し、次いで溶液をろ過した（０．４５μｍのアクロディスクフィルタ）。ろ液をスピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）で精製し、残留物をＭＱ水（５×１５ｍＬ）で繰り返し洗浄した。残留物を凍結乾燥により乾燥させて、ＳＲＳ－１を青色固体として得た（１７３．０ｍｇ、９６％）。ＨＰＬＣ：５～８０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１３－１５分）、１０ｍＭ ＨＣＯＯＮＨ_４）の勾配を有するＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ８カラム、及び２１４ｎｍでのＵＶ検出。Ｒ_ｔ＝５．０７分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ０．３３－２．０８（ｍ，１７７Ｈ），２．２６－４．４６（ｍ，１９７９Ｈ），６．８７－７．６６（ｂｓ，５９Ｈ），８．３４（ｂｓ，２Ｈ）。

【0496】

１ｂ．３６ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２）_３０（α－ＮＨＤＯＴＡ）_２（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_２０００）_３２］、Ｇ５、ＲＨ－２
ＤＭＦ（６．０ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（α－（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_２０００）_３２］（ＷＯ２０２０／００１４７５０の実施例１に記載されるような）ＲＨ－１（３０１ｍｇ、３．９７μｍｏｌ）の撹拌溶液に、ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ（８．１３ｍｇ、１１．８μｍｏｌ、２．９８当量）を加え、続いてＮＭＭ（１１４μＬ、１．０３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を周囲温度で４．５時間撹拌した後、反応混合物の一部（２．０ｍＬ）を除去し、撹拌バーを備えた別の反応フラスコに入れ、撹拌を続けた。２４時間後、反応混合物のより小さなアリコートを真空から乾燥まで濃縮し、ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）に溶解し、ＳＥＣ（固定相＝Ｓｅｐａｈｄｅｘ ＬＨ－２０（商標）、移動相＝アセトニトリル、溶出速度＝約１滴秒^－１、分画サイズ＝４００滴）により精製した。生成物含有画分を合わせて真空濃縮し、得られた残渣をＭＱ水に溶解させ、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクフィルタ）、凍結乾燥させて、化合物ＲＨ－２を白色の固体として得た（８２．５ｍｇ）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ－ｄ_４）δ（ｐｐｍ）： １．１７－２．２９（ｍ，４０１Ｈ），３．３６（ｓ，９６Ｈ），３．３９－３．４３（ｍ，４３Ｈ），３．５０－４．０８（ｍ，５５６４Ｈ），４．２１－４．６７（ｍ，８４Ｈ），６．１７（ブロード，１Ｈ），７．１８－７．６４（ｍ，１８Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ）。^１Ｈ ＮＭＲ分析では、約２．１ＤＯＴＡ／デンドリマー；ＤＯＴＡの％（ｗ／ｗ）＝２．０％が示唆される。

【0497】

１ｂ．３７ ［（ε－ＮＨＢｏｃ）（α－ＮＨＢｏｃ）］［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２、ＲＬ－３
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の塩酸シスタミンＲＬ－１（１．２６ｇ、５．６ｍｍｏｌ）及びＢｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＮｐ ＲＬ－２（５．６８ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＥＡ（５．４４ｍＬ、３９．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３日間撹拌し、脱イオン水（１０ｍＬ）中のグリシン（１．８２ｇ、２４．４ｍｍｏｌ）の溶液を加え、溶液から白色固体を沈殿させた。懸濁液を２時間撹拌し、揮発分を真空除去した。残渣を酢酸エチル（５０ｍＬ）に懸濁し、有機物を飽和炭酸ナトリウム水溶液（５×２０ｍＬ）、０．１Ｍ ＨＣｌ水溶液（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で順次洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、揮発分を真空除去した。残渣をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、０．２ＭのＮａＯＨ水溶液（４×５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、揮発分を真空除去して［（ε－ＮＨＢｏｃ）（α－ＮＨＢｏｃ）］［Ｌｙｓ］－ＮＨＣＯ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－３をオフホワイト固体として得た（３．６６ｇ、８１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．１３－１．８２（ｍ，４８Ｈ），２．８３（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ），３．０２（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ），３．５２（ｍ，４Ｈ），３．９８（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ４０～９０、８分、ＴＦＡ）：Ｒ_ｔ＝５．３６分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）８０９［Ｍ］^＋；Ｃ_３６Ｈ_６８Ｎ_６Ｏ_１０Ｓ_２［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝８０９。

【0498】

１ｂ．３８ ［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）］［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２、ＲＬ－４
［（ε－ＮＨＢｏｃ）（α－ＮＨＢｏｃ）］［Ｌｙｓ］－ＮＨＣＯ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－３（３．６６ｇ、４．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（３０ｍＬ）に、ＴＦＡ（２７．７ｍＬ、３６２．０ｍｍｏｌ）を室温で５分間滴下した。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、真空濃縮した。残渣を脱イオン水（５０ｍＬ）に溶解し、凍結乾燥させて、［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）］［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－４を淡褐色固体として得た（３．９１ｇ、定量的）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．２８－１．４２（ｍ，４Ｈ），１．５４－１．６８（ｍ，４Ｈ），１．７６－１．８８（ｍ，４Ｈ），２．７０－２．８６（ｍ，４Ｈ），２．９０（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），３．３９－３．６２（ｍ，４Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ５～６０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝０．８０分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）４０９［Ｍ］^＋；Ｃ_１６Ｈ_３６Ｎ_６Ｏ_２Ｓ_２［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝４０９。

【0499】

１ｂ．３９ ［［（ε－ＮＨＢｏｃ）_２（α－ＮＨＢｏｃ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２、ＲＬ－５
ＤＭＦ（１８ｍＬ）中の［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）］［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－４（３．９ １ｇ、４．５２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＮｐ ＲＬ－２（１０．１３ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を透明溶液が得られるまで４０℃で加熱後室温まで冷却し、ＴＥＡ（７．５５ｍＬ、５４．２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌した後、グリシン（５０９ｍｇ、４．４６ｍｍｏｌ）の水溶液（１．２８ｍＬ）を加え、反応混合物を撹拌しながら４０℃で加熱した。２時間後、反応混合物を室温まで冷却し、次いで（撹拌しながら）２０分かけて水に滴下した。得られた沈殿物をろ過により回収し、脱イオン水（５×３０ｍＬ）で洗浄し、空気流中で３０分間乾燥させた。固体をＤＭＦ（１８ｍＬ）に溶解し、溶液を撹拌しながら水（１８０ｍＬ）に滴下した。得られた白色固体をろ過により回収し、水（３×３０ｍＬ）で洗浄し、真空オーブンで２０時間、４０℃で乾燥させて、［［（ε－ＮＨＢｏｃ）_２（α－ＮＨＢｏｃ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－５を白色固体として得た（６．４９ｇ、８３．３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．２６－１．９３（ｍ，１０８Ｈ），２．８４（ｍ，４Ｈ），３．０４（ｍ，８Ｈ），３．２０（ｍ，４Ｈ），３．５１（ｍ，４Ｈ），４．００（ｍ，４Ｈ），４．３３（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ４０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝６．３４分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１７２２［Ｍ］^＋；Ｃ_８０Ｈ_１４８Ｎ_１４Ｏ_２２Ｓ_２［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１７２２。

【0500】

１ｂ．４０ ［［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_２（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２、ＲＬ－６
ジクロロメタン（６５ｍＬ）中の［［（ε－ＮＨＢｏｃ）_２（α－ＮＨＢｏｃ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－５（６．４９ｇ、３．８ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、０℃で、ＴＦＡ（３４．６ｍＬ、４５１．２ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下した。得られた溶液を室温まで温め、４時間撹拌した後、揮発分を真空除去した。残渣を最小量の脱イオン水に溶解し、２回凍結乾燥した（注記：第２の凍結乾燥プロセス中に、白濁した水溶液を０．４５μｍフィルタディスクを通してろ過し、ろ液を凍結乾燥した）ことにより、［［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_２（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＲＬ－６を淡褐色フォームとして得た（６．２０ｇ、９６．９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．１３－１．８７（ｍ，３６Ｈ），２．７２（ｍ，４Ｈ），２．８７（ｍ，８Ｈ），３．０９（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４Ｈ），３．３０－３．５３（ｍ，４Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）。

【0501】

１ｂ．４１ ［［（ε－ＮＨＢｏｃ）_４（α－ＮＨＢｏｃ）_４］［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－７
ＤＭＦ（１６ｍＬ）中の［［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_２（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－６（４．０２ｇ、２．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＮｐ ＲＬ－２（９．０２ｇ、１９．３ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を透明溶液が得られるまで４０℃で加熱後室温まで冷却し、ＴＥＡ（７．３５ｍＬ、５２．８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌した後、ＤＭＦ（２５ｍＬ）を添加して任意の沈殿固形物を溶解させ、得られた溶液を５５℃で加熱し、水（１．２０ｍＬ）のグリシン（２５０ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。２時間撹拌した後、反応混合物を室温まで冷却し、次に１０分間撹拌しながら水（２００ｍＬ）に滴下した。得られた沈殿物をろ過により回収し、空気流中で３０分間乾燥させた。固体をＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を撹拌しながら脱イオン水（２００ｍＬ）に滴下した。得られた白色固体をろ過により回収し、空気流で３０分間乾燥させた後、ＭｅＣＮに懸濁し、揮発分を真空除去して［［（ε－ＮＨＢｏｃ）_４－（α－ＮＨＢｏｃ）_４］［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］ _２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－７を白色固体として得た（４．８０ｇ、３７．０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．１７－１．９５（ｍ，２２８Ｈ），２．８６（ｍ，４Ｈ），３．０５（ｍ，１６Ｈ），３．２０（ｍ，１２Ｈ），３．５３（ｍ，４Ｈ），４．０３ ＆ ４．３２（１４Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ４０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝７．６９分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１７７３［Ｍ］^＋；Ｃ_８４Ｈ_１５４Ｎ_１５Ｏ_２３Ｓ_１［Ｍ／２］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１７７３。

【0502】

１ｂ．４２ ［［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_４（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_４］［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２、ＲＬ－８
ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の［［（ε－ＮＨＢｏｃ）_４－（α－ＮＨＢｏｃ）_４］［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］ _２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－７（４．８０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、０℃でＴＦＡ（５０．０ｍＬ、６４８．０ｍｍｏｌ）を１５分間にわたって滴下した。得られた溶液を室温まで温め、４時間撹拌した後、揮発分を真空除去した。残渣を最小量の脱イオン水に溶解し、凍結乾燥して（２回）、淡褐色泡沫（５．３８ｇ）を得、続いてメタノール（約１５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を撹拌しながらジエチルエーテル（３００ｍＬ）に滴下した。このようにして形成された白い析出物をろ過により回収し、メタノールに溶解し、揮発物を真空除去して、［［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_４（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_４］_４［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－８をオフホワイトの吸湿性フォームとして得た（３．５０ｇ、７４．１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．２７－２．０１（ｍ，８４Ｈ），２．８２（ｍ，４Ｈ），２．９０－３．０４（ｍ，１６Ｈ），３．０６－３．２９（ｍ，１２Ｈ），３．５２（ｍ，４Ｈ），３．８７（ｍ，４Ｈ），３．９９（ｔ，Ｊ＝６．３２Ｈｚ，４Ｈ），４．３０（ｍ，４Ｈ），４．３８（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ５～６０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝０．６５分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）９７５（Ｍ／２）＋Ｈ］^＋；Ｃ_４４Ｈ_９１Ｎ_１５Ｏ_７Ｓ_１［（Ｍ／２）＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝９７５。

【0503】

１ｂ．４３ ［［（ε－ＮＨＢｏｃ）_８（α－ＮＨＢｏｃ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２、ＲＬ－９及び［［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２、ＲＬ－１０
ＤＭＦ（１７ｍＬ）中の［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_４（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_４］_４［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－８（１．５ｇ、０．３９８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＮｐ ＲＬ－２（３．２７ｇ、６．９９ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（２．１０ｍＬ、１９．１ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を２日間撹拌した後、水（１．０ｍＬ）中のグリシン（６６ｍｇ）の溶液を加えた。４時間後、反応混合物を撹拌しながら水（２００ｍＬ）に滴下した。得られた黄色沈殿物をろ過により回収し、水（５×５０ｍＬ）で洗浄し、空気流中で乾燥させた。固体をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を水（２００ｍＬ）に添加して、オフホワイト沈殿物を得、これを収集し、上述のように乾燥させた。固体をＤＭＦ（４．０ｍＬ）及びＴＥＡ（２．１ｍＬ）に溶解させ、５５℃で撹拌して加熱し、水（１ｍＬ）中のグリシン（６６ｍｇ）の溶液を加えた。４時間後、反応混合物を室温まで冷却し、２日間撹拌した後、撹拌しながら水（２５０ｍＬ）に滴下した。得られた沈殿物をろ過により回収し、水（３×５０ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥させて、オフホワイト固体である［［（ε－ＮＨＢｏｃ）_８（α－ＮＨＢｏｃ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－９（約０．８ｇ）を得、これを更に精製せずに使用した。

【0504】

ジクロロメタン中の［［（ε－ＮＨＢｏｃ）_８（α－ＮＨＢｏｃ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－９（約０．８ｇ）の溶液に、０℃（１６ｍＬ）でＴＦＡ（１６ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温に温め、１８時間撹拌し、揮発物を真空除去した。残渣を水（２０ｍＬ）に溶解し、３ｋＤａのＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えた１５ｍＬのＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタを用いて、４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離することによって濃縮した。残留物を水で希釈し、遠心分離／濃縮プロセスを繰り返し（１０回）、最終的な残留物を凍結乾燥させて、［［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－１０をオフホワイト固体として得た（６０６ｍｇ、２０％、２ステップ）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．２４－２．００（ｍ，１８０Ｈ），２．８１（ｍ，４Ｈ），２．９０－３．０４（ｍ，３２Ｈ），３．１２－３．３３（ｍ，２８Ｈ），３．５２（ｍ，４Ｈ），３．８３（ｍ，８Ｈ），３．９４（ｍ，８Ｈ）及び４．２３－４．４２（ｍ，１４Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ５～６０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝３．７６分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１０００［Ｍ／４＋Ｈ］^＋；［Ｃ_１８４Ｈ_３７３Ｎ_６２Ｏ_３０Ｓ_２］／４［Ｍ／４＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１０００。

【0505】

１ｂ．４４ ［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＰ－１
水（６．０ｍＬ）中の［［Ｌｙｓ（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）］_８－［Ｌｙｓ］_４－［Ｌｙｓ］_２－［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－１０（１２８ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＣＥＰ０．５Ｍの水溶液（３３５μＬ、０．１７０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を１時間撹拌した後、反応混合物のｐＨを測定し（ｐＨ５．２）、０．１Ｍ ＮａＯＨ水溶液を滴下することによりｐＨ６．５に調整した。次いで、Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＬ－１８（２８．６ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を単一部分で添加し、撹拌を続けた。２時間後、反応混合物を、３ｋＤａ ＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタに移し、４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離して濃縮した。残留物を、４０００ｒｐｍでの遠心分離によって水で洗浄し（×５）、凍結乾燥させて、黄色の固体（１０９ｍｇ）を得た。固体を水（６ｍＬ）に溶解し、空気を溶液を通して１８時間泡立て、ピンク色の溶液を得た。溶液を凍結乾燥させて、ピンク色の固体（１１１ｍｇ）を得、これを分取ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法 ５～８０、８分、ＴＦＡ）により更に精製して、［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－（Ｍｅ）ＭＡＬ－Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＰ－１をピンク色の固体として得た（３２．５ｍｇ、３２．５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．２１－２．０５（ｍ，８７Ｈ），２．９０－３．０４（ｍ，１４Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ），３．０６－３．２６（ｍ，１１Ｈ），３．４８－４．０７（ｍ，８９Ｈ），４．１７－４．５３（ｍ，１１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）及び８．５３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ４０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝３．９８分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１１４１ ［（Ｍ／３）＋Ｈ］^＋；Ｃ_１５８Ｈ_３０１Ｎ_３７Ｏ_４２Ｓ［（Ｍ／３）＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１１４１。

【0506】

１ｂ．４５ ［（ε－ＮＨＢｏｃ）_１６（α－ＮＨＣＯＰＥＧ_２５）_１６］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）、ＲＰ－３
無水ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中の［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－（Ｍｅ）ＭＡＬ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＰ－１（３１．４ｍｇ、６μｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（１０５μＬ、９５５μｍｏｌ）、続いて無水ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中のＰｙＢＯＰ（５９．８ｍｇ、１１５μｍｏｌ）及びＨＯ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（ＰＥＧ_１１００）ＲＰ－２の溶液を加えた。反応混合物を、１８時間撹拌した後、透過液として１０透析ろ過体積を収集するまで、水を循環媒体として使用してＴＦＦ（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ １０ｋＤａ ＭＷＣＯ膜）により精製した。残留物を収集し、ラインウォッシングでプールし、凍結乾燥させて、［（ε－ＮＨＢｏｃ）_１６（α－ＮＨＣＯＰＥＧ_２５）_１６］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－（Ｍｅ）ＭＡＬ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＰ－３をピンク色の固体として得た（１０４ｍｇ、６５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ _３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．１９－１．９７（ｍ，３８３Ｈ），２．３８－２．５４（ｍ，３６Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ），３．０９－３．２９（ｍ，６４Ｈ），３．３８（ｓ，５６Ｈ），３．３９－３．４８（ｍ，８Ｈ），３．５１－３．５９（ｍ，３６Ｈ），３．５９－３．７０（ｍ，１８８９Ｈ），３．７０－３．８０（ｍ，３２Ｈ），３．８５－３．９２（ｍ，６Ｈ），３．９４－４．１５（ｍ，７Ｈ），４．２１－４．４４（ｍ，１０Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）及び８．５３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法 ５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．１０分。

【0507】

１ｂ．４６ ［（ε－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_１６（α－ＮＨＣＯＰＥＧ_２５）_１６］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）、ＲＰ－４
冷却したバイアル中の［（ε－ＮＨＢｏｃ）_１６（α－ＮＨＣＯＰＥＧ_２５）_１６］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－（Ｍｅ）ＭＡＬ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＰ－３（８３ｍｇ、３．３μｍｏｌ）に、メタノール（１．７５ｍＬ）中の３．０Ｍ ＨＣｌを添加した。得られた溶液を１８時間撹拌し、室温まで温めてから、揮発分を真空除去した。残渣を水に溶解させ、凍結乾燥させて、［（ε－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_１６（α－ＮＨＣＯＰＥＧ_２５）_１６］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＰ－４をピンク色の固体として得た（８２．６ｍｇ、定量的）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ _３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．２７－２．０５（ｍ，１９８Ｈ），２．３９－２．５７（ｍ，３６Ｈ），３．１５－３．２９（ｍ，４４Ｈ），３．３８（ｓ，３９Ｈ），３．３９－３．５９（ｍ，９Ｈ），３．５９－３．７３（ｍ，３２Ｈ），３．５９－３．７０（ｍ，１２１７Ｈ），３．７３－３．８３（ｍ，３３Ｈ）及び３．８５－４．１５（ｍ，３１Ｈ）及び４．２１－４．５５（ｍ，２６Ｈ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法 ５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．７８分。

【0508】

１ｂ．４７ ［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ）_８（α－ＮＨ_２）_７］］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－（Ｍｅ）ＭＡＬ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）、ＲＰ－５
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_１６］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－（Ｍｅ）ＭＡＬ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＰ－４（８２．６ｍｇ、３．２μｍｏｌ）及びＮＭＭ（２４μＬ、０．２１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温で、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中のシアニン５ ＮＨＳエステル（２．３ｍｇ、３．２μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、シアニン５ ＮＨＳエステルの消費について、ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、８分、ＴＦＡ）によって監視した。１８時間後、ＤＭＳＯ溶液（１．０ｍＬ）中のｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ（４４．７ｍｇ、６８μｍｏｌ）の溶液を反応混合物に加え、撹拌を続けた。２日後、水（５０ｍＬ）を加え、得られた溶液を、０．４５μｍフィルタディスクを通してろ過し、１１ディアフィルトレーション体積を透過液として収集するまで、水を循環媒体として使用してＴＦＦ（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ １０ｋＤａ ＭＷＣＯ膜）によって精製した。残留物を収集し、ラインウォッシングでプールし、凍結乾燥させて、［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ）_８（α－ＮＨ_２）_７］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－（Ｍｅ）ＭＡＬ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＰ－５を青色固体として得た（７４．５ｍｇ）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．７４－２．２３（ｍ，２３０Ｈ），２．３６－２．６５（ｍ，５３Ｈ），２．９１－３．２８（ｍ，１０２Ｈ），３．３８（ｓ，６３Ｈ），３．４０－３．４６（ｍ，１９Ｈ），３．５２－３．９４（ｍ，１９５９Ｈ），６．１７－６．８６（ｍ，３Ｈ），６．９６－７．７４（ｍ，４６Ｈ）。芳香族領域（δ６．９６～７．７４ｐｐｍ）の積分を内部標準の芳香族プロトン（δ８．６２ｐｐｍ、２Ｈ_ＩＳ）と比較することによって、ＤＯＴＡの負荷を、３，４，５－トリクロロピリジンを内部標準として使用して、ｑＮＭＲによって決定した。このようにして、１分子当たりのＤＯＴＡ基の数は８．６であることが認められた。シアニン５ ＮＨＳエステルの完全消費が観察されたため、デンドリマー１個当たりのシアニン５基の数を１と設定した。デンドリマーの分子量は、２６，６６５Ｄａであると計算された。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法 ５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．７６分。

【0509】

１ｂ．４８ ［［（ε－ＮＨ_２）_４（α－ＮＨ_２）_４］［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－１－Ｍａｌ
水（１．０ｍＬ）中の［［（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_４（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_４］［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ ＲＬ－８（６５ｍｇ、１７．２μｍｏｌ）の溶液に、０．５Ｍ ＴＣＥＰの水溶液（１７．０μＬ、８．５μｍｏｌ、ｐＨ７．０）を室温で加えた。反応混合物をＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法２）により監視し、ジスルフィド結合の完全な還元が観察されるまで、０．５Ｍ ＴＣＥＰ溶液を徐々に加えた（合計で、１７．０μＬ、８．５μｍｏｌのＴＣＥＰを約１時間にわたって加えた）。反応混合物のｐＨを０．１Ｎ ＮａＯＨ（水性）を用いて６．２に調整してから、水（０．５ｍＬ）中のＢｒ_２（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＲＬ－１５（３２ｍｇ、１６．４μｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物を１時間撹拌し、水（３０ｍＬ）で希釈し、ろ過し（０．４５μｍシリンジフィルタディスク）、ろ液を３ｋＤａ ＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えた１５ｍＬ Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心分離フィルタに移し、４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離することにより濃縮した。残留物を水（６×１５ｍＬ）で４０００ｒｐｍで遠心分離により洗浄し、凍結乾燥させて、［［（ε－ＮＨ_２）_４（α－ＮＨ_２）_４］［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＳＲＳ－１－Ｍａｌをオレンジ色の固体として得た（６５ｍｇ、９９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．３１－１．６６（ｍ，３７Ｈ），１．６６－２．０２（ｍ，４５Ｈ），２．０５－２．２６（ｍ，７Ｈ），２．３８－２．５９（１１Ｈ），２．９１－３．０８（ｍ，１８Ｈ），３．１２－３．２６（ｍ，８Ｈ），３．２７－３．４１（ｍ，８Ｈ），３．４０－３．６２（ｍ，２０Ｈ），３．６８－３．８０（ｍ，２０Ｈ），３．８０－４．０５（ｍ，９Ｈ），４．２３－４．４７（ｍ，７Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）及び８．５２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ５～６０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．０４。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１２６５［（Ｍ／３）＋Ｈ］^＋；Ｃ_１７１Ｈ_３２７Ｎ_３９Ｏ_５０Ｓ_２［（Ｍ／３）＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１２６５。

【0510】

１ｂ．４９ ［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）、ＳＲＳ－２
ＤＭＦ（４．０ｍＬ）中の［［（ε－ＮＨ_２）_４（α－ＮＨ_２）_４］［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＳＲＳ－１－Ｍａｌ（６５ｍｇ、１７．１μｍｏｌ）、ＨＯ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（ＰＥＧ_１１００）ＲＰ－２（２８９ｍｇ、２０８μｍｏｌ）及びＮＭＭ（１１９μＬ、１．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でＰｙＢＯＰ（１０８ｍｇ、２０８μｍｏｌ）を加えた。１８時間後、反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ろ過し（０．４５μｍシリンジフィルタディスク）、１０透析ろ過体積を透過液として収集するまで、水を循環媒体として使用してＴＦＦ（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ １０ｋＤａ ＭＷＣＯ膜）によって精製した。残留物を収集し、ラインウォッシングでプールし、凍結乾燥させて、［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－２を濃いオレンジ色の固体（１５８ｍｇ、３６％）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）： １．１９－２．０１（ｍ，３０７Ｈ），２．４０－２．５５（ｍ，３４Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ）３．１０－３．３０（ｍ，５２Ｈ），３．３８（ｓ，４５Ｈ），３．３９－３．４４（ｍ，９Ｈ）３．５３－３．５９（ｍ，３５Ｈ），３．５９－３．７０（ｍ，１５２２Ｈ），３．７０－３．８０（ｍ，３７Ｈ），３．８４－３．９４（ｍ，７Ｈ），３．９５－４．１４（ｍ，８Ｈ），４．２６－４．４４（ｍ，１１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ）及び８．５３（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法 ５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．０９分。

【0511】

１ｂ．５０ ［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）、ＳＲＳ－３－Ｍａｌ
［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－２（１５６ｍｇ、６．１μｍｏｌ）をメタノール（３．２３ｍＬ）中の３．０Ｍ ＨＣｌに室温で溶解した。得られた溶液を１８時間撹拌してから、揮発分を真空除去した。残渣を水（約１０ｍＬ）に溶解し、溶液を凍結乾燥させて、［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－３－Ｍａｌを濃いオレンジ色の固体として得た（１４２ｍｇ、９５％）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法 ５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．７７分。

【0512】

１ｂ．５１ ［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ_２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）、ＳＲＳ－４－Ｍａｌ
ＤＭＦ（ｍＬ）中の［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_８］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－３－Ｍａｌ（１３０ｍｇ、５．３μｍｏｌ）及びＮＭＭ（３７μＬ、３３７μｍｏｌ）の溶液に、シアニン５ ＮＨＳエステル（３．５ｍｇ、５．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、ＤＭＳＯ（５００μＬ）中のｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ（７２ｍｇ、１０５μｍｏｌ）の溶液を加え、更に２４時間撹拌した。揮発分を真空除去し、残渣を水（５０ｍＬ）に溶解した後、溶液をろ過し（０．４５μｍシリンジフィルタディスク）、１０透析ろ過体積を透過液として収集するまで、水を循環媒体として使用してＴＦＦ（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ １０ｋＤａ ＭＷＣＯ膜）により精製した。残留物を収集し、ラインウォッシングでプールし、凍結乾燥させて、［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ_２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－４－Ｍａｌを青色固体（１２０ｍｇ）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）： １．０２－２．１４（ｍ，１１０Ｈ），２．３６－２．６１（ｍ，２６Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ），３．０７－３．３０（ｍ，３９Ｈ），３．３８（ｓ，３２Ｈ），３．３９－３．４５（ｍ，１１Ｈ），３．５３－３．５９（ｍ，３３Ｈ），３．６９－３．９７（ｍ，６１Ｈ），６．８７－７．７９（ｍ，２２Ｈ）及び８．５２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）。芳香族領域（δ６．８０～７．９２ｐｐｍ）の積分を内部標準の芳香族プロトン（δ８．６２ｐｐｍ、２Ｈ_ＩＳ）と比較することによって、ＤＯＴＡの負荷を、３，４，５－トリクロロピリジンを内部標準として使用して、ｑＮＭＲによって決定した。このようにして、１分子当たりのＤＯＴＡ基の数は９．５であることが認められた。シアニン５ ＮＨＳエステルの完全消費が観察されたため、デンドリマー１個当たりのシアニン５基の数を１と設定した。デンドリマーの分子量は、２９，８１７Ｄａであると計算された。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、８分、ＴＦＡ、ＭＳなし）：Ｒ_ｔ＝５．０３分。

【0513】

１ｂ．５２ ［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＤＯＴＡ）_７（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－（ＰＮ）ＮＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）、ＨＨ－２
ＤＭＦ（４．０ｍＬ）中の［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_１６］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－（ＰＮ）ＮＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＨＨ－１（１２９ｍｇ、５．６μｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（３９μＬ、３５７μｍｏｌ）、続いてシアニン５ ＮＨＳエステル（３．７ｍｇ、５．５ ５．５μｍｏｌ）を加えた。１８時間撹拌した後、反応混合物（ＬＣＭＳ法３）の分析では、シアニン５ ＮＨＳエステルの完全な消費が示された。ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ（７７ｍｇ、１１２μｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液（１．０ｍＬ）を加え、更に２４時間撹拌を続けた。次いで、反応混合物を希釈し、得られた溶液を、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタに移し、４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって濃縮した。残留物を４０００ｒｐｍで遠心分離することによって水（×５）で洗浄し、残留物を凍結乾燥して青色ガム（１１７ｍｇ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）： １．０５－２．１６（ｍ，１７２Ｈ），２．３７－２．５８（ｍ，３２Ｈ），２．９８－３．２９（ｍ，６１Ｈ），３．３８（ｓ，４８Ｈ），３．４０－３．４４（ｍ，９Ｈ），３．５８－３．７０（ｍ，１３５１Ｈ），３．７０－３．８３（ｍ，４３Ｈ），３．８３－３．９７（ｍ，１５Ｈ）及び６．９９－７．７０（ｍ，２５Ｈ）。芳香族領域（δ６．９９～７．７０ｐｐｍ）の積分を内部標準の芳香族プロトン（δ８．６２ｐｐｍ、２Ｈ_ＩＳ）と比較することによって、ＤＯＴＡの負荷を、３，４，５－トリクロロピリジンを内部標準として使用して、ｑＮＭＲによって決定した。このようにして、１分子当たりのＤＯＴＡ基の数は７であることが認められた。シアニン５ ＮＨＳエステルの完全消費が観察されたため、デンドリマー１個当たりのシアニン５基の数を１と設定した。デンドリマーの分子量は、２７，４２０Ｄａであると計算された。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、８分、ＴＦＡ、ＭＳなし）：Ｒ_ｔ＝５．１１分。

【0514】

１ｂ．５３ （ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_７）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、Ｇ３、化合物５２
Ｃｙ５－ＮＨＳエステルの溶液（１ｍｇ／ｍＬのＤＭＦ溶液１．０ｍＬ；１．０ｍｇ、１．５９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）の（ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ_２）_８）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、化合物１１３（２０ｍｇ、１．５９μｍｏｌ）の入ったバイアルに添加した。この溶液に、ＮＭＭ（１０μＬ、９１．０μｍｏｌ）を加え、その後得られた反応混合物を光から保護して、室温で撹拌した。３．５時間後、無水酢酸（２０μＬ、２１２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩撹拌させて放置した。反応混合物を減圧濃縮後、ＭＱ水（５ｍＬ）に取り込んで２つに分け、２つの（事前に平衡化させた）ＰＤ１０カラムにより精製した。サンプルがカラム床に入ると、３．５ｍＬのＭＱ水で溶出し、ろ液を回収した。ろ液を合わせて一晩凍結乾燥した。凍結乾燥により、表題生成物を鮮やかな青色の粉末として１９．３ｍｇ（９３％）得られた。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．３０分。

【0515】

１ｂ．５４ （ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_１５）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_１６］、Ｇ４、化合物５３
Ｃｙ５－ＮＨＳエステルの溶液（１ｍｇ／ｍＬのＤＭＦ溶液５２０μＬ；０．５２ｍｇ、８４４ｎｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の（ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_１６）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_１６］、化合物１２０（２０ｍｇ、８４４ｎｍｏｌ）の入ったバイアルに添加した。この溶液に、ＮＭＭ（１０μＬ、９４．５μｍｏｌ）を加え、その後得られた反応混合物を光から保護して、室温で撹拌した。３．５時間後、無水酢酸（２０μＬ、２３０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩撹拌させて放置した。反応混合物を減圧濃縮後、ＭＱ水（５ｍＬ）に取り込んで２つに分け、２つの（事前に平衡化させた）ＰＤ１０カラムにより精製した。サンプルがカラム床に入ると、３．５ｍＬのＭＱ水で溶出し、ろ液を回収した。ろ液を合わせて一晩凍結乾燥した。凍結乾燥により、表題生成物を鮮やかな青色の粉末として１９．９ｍｇ（９８％）得られた。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．４０分。

【0516】

１ｂ．５５ （ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_３２］、Ｇ５、化合物５４
Ｃｙ５－ＮＨＳエステルの溶液（１ｍｇ／ｍＬのＤＭＦ溶液３００μＬ；０．３０ｍｇ、４８７ｎｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．２ｍＬ）中の（ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_３２］、化合物１２２（２０ｍｇ、４３５ｎｍｏｌ）の入ったバイアルに添加した。この溶液に、ＮＭＭ（１１μＬ、９７．５μｍｏｌ）を加え、その後得られた反応混合物を光から保護して、室温で撹拌した。３．５時間後、無水酢酸（２２μＬ、２３７μｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩撹拌させて放置した。反応混合物を減圧濃縮後、ＭＱ水（５ｍＬ）に取り込んで２つに分け、２つの（事前に平衡化させた）ＰＤ１０カラムにより精製した。サンプルがカラム床に入ると、３．５ｍＬのＭＱ水で溶出し、ろ液を回収した。ろ液を合わせて一晩凍結乾燥した。凍結乾燥により、表題生成物を鮮やかな青色の粉末として１８．７ｍｇ（９１％）が得られた。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．５０分。

【0517】

１ｂ．５６ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＧｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０）_８］、Ｇ３、化合物６４
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０）_８］、化合物１４（７．２ｍｇ、８４２ｎｍｏｌ）及びＨＯ－Ｇｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（１０．０ｍｇ、８．０８μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｅに従って調製して、生成物である化合物６４を１４．６ｍｇ／３．５ｍＬの濃度（２４０μＭ）で得た。

【0518】

１ｂ．５７ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＧｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、Ｇ３、化合物６５
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、化合物１０（１０．８ｍｇ、８４２ｎｍｏｌ）及びＨＯ－Ｇｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（１０．０ｍｇ、８．０８μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｅに従って調製し、生成物である化合物６５を１８ｍｇ／３．５ｍＬの濃度（２４０μＭ）で得た。

【0519】

１ｂ．５８ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＧｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２０００）_８］、Ｇ３、化合物６６
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２０００）_８］、化合物１６（１８．１ｍｇ、８４２ｎｍｏｌ）及びＨＯ－Ｇｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（１０．０ｍｇ、８．０８μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｅに従って調製し、生成物である化合物６６を２５．５ｍｇ／３．５ｍＬの濃度（２４０μＭ）で得た。

【0520】

１ｂ．５９ アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＤＧＡ－ＭＭＡＦ（ＯＭｅ））_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、Ｇ３、化合物６７
アジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、化合物１０（１６．３ｍｇ、１．２８μｍｏｌ）及びＤＧＡ－ＭＭＡＦ（ＯＭｅ）（１０．６ｍｇ、１２．３μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｅに従って調製し、生成物である化合物６７を２３．８ｍｇ／３．５ｍＬの濃度（３６５μＭ）で得た。

【0521】

１ｂ．６０ ＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））_１（α－ＮＨ_２）_７）（ ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］、Ｇ３、化合物６９
ＤＭＦ（３００μＬ）中のＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］（参照１）（１００ｍｇ、０．００７８６ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液を室温で調製した。これに（ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ_２Ｈ（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ；１６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、１．３当量）、ＰｙＢＯＰ（８ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、１．６当量）及びＤＭＦ（２００μＬ）を加えた。反応混合物を３分間撹拌した後、ＮＭＭ（４０ｍｇ、５０μＬ、０．３８ｍｍｏｌ、４８当量）を加えた。この内容物を光から保護して、室温で一晩撹拌した。反応混合物をＭＱ水で希釈し、一晩凍結保存した。凍結乾燥材料をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に取り込み、ＳＥＣ（４００滴／チューブ、ＭｅＯＨ ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０、３５滴／分）により精製した。生成物含有画分をＨＰＬＣにより確認し、２つの異なる画分に分けて回収した。各画分を減圧濃縮し、次いで、得られた残渣をＭＱ水に取り込み、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクフィルタ）、凍結乾燥させて、化合物６９をピンク色の固体として得た（６９ｍｇ、６６％）。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．４分（ブロードピーク）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．００－２．００（ｍ，９０Ｈ），２．５１（ｔ，３Ｈ），２．６０（ｂｒ ｓ，３Ｈ），３．００－３．１２（ｍ，６Ｈ），３．１２－３．３５（ｂｒ ｓ，２７Ｈ），３．３５－３．４５（ｍ，２６Ｈ），３．４５－４．１５（ｍ，９３７Ｈ），４．１５－４．４５（ｍ，１２Ｈ），６．１２（ｓ，１Ｈ），７．１５－７．５０（ｍ，１２Ｈ），８．４０－８．５０（ｍ，２Ｈ）。

【0522】

１ｂ．６１ ＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２－ＢＣＮ）_１（α－ＮＨ_２）_７）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］、Ｇ３、化合物７０
ＤＭＦ（２００μＬ）中のＢＣＮ－ＰＥＧ_２ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４－ＣＯ_２Ｈ、化合物１９（９．６ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、１．３当量）の撹拌溶液を室温で調製した。これに、ＰｙＢＯＰ（４ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、１．６当量）及びＮＭＭ（２３ｍｇ、２５μＬ、０．２２６ｍｍｏｌ、４８当量）を加え、５分後にＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］（参照１）（６０ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、１．０当量）、続いてＤＭＦ（２００μＬ）を加えた。内容物を光から保護して、室温で一晩撹拌した。反応混合物をＭｅＣＮ（１０ｍＬ）で希釈し、その後ＳＥＣ（４００滴／チューブ、ＭｅＣＮ ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０、３５滴／分）により精製した。生成物含有画分をＨＰＬＣにより確認し、回収し、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクフィルタ）、減圧濃縮し、一晩凍結乾燥させて、化合物７０を淡黄色の固体として得た（５８ｍｇ、収率９２％）。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．４３分（ブロードピーク）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： ０．７５－１．１２（ｍ，１５Ｈ）、１．１２－２．１５（ｍ，９５Ｈ），２．１５－２．３５（ｍ，７Ｈ）、２．５５（ｂｒ ｓ，３Ｈ），３．００－３．３５（ｍ，９０Ｈ），３．３５－３．３８（ｓ，１７Ｈ），３．３８－４．０９（ｍ，５９２Ｈ），４．１３（ｄ，２Ｈ），４．１８－４．６３（ｂｒ ｓ，７Ｈ），６．１８（ｓ，０．９Ｈ），７．１２－７．４８（ｍ，７Ｈ）。

【0523】

１ｂ．６２ （ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＧｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_７）（ ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、Ｇ３、化合物７１
Ｃｙ５－ＮＨＳ（ＤＭＦ中の４．２ｍｇ／ｍＬ溶液２１４μＬ、１．４３μｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、ニート（ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、化合物１１３（１８ｍｇ、１．４３μｍｏｌ）に添加した。完全に溶解した後、ＮＭＭ（１０μＬ，９１．０μｍｏｌ）を加え、得られた反応混合物を撹拌して、光から保護した。２時間後、ＮＭＭ（１０μＬ、９１．０μｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（７．３ｍｇ、１４．０μｍｏｌ）をデンドリマー溶液、その後ＤＭＦ中のＧｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ溶液（６０ｍｇ／ｍＬの溶液２９０μＬ、１４．０μｍｏｌ、９．８当量）に加えた。続いて得られた反応混合物を光から保護して、室温で一晩撹拌した。反応混合物をＰＢＳ（２．０ｍＬ）で希釈し、最終容量２．５ｍＬとした。その後、希釈溶液をＰＤ１０脱塩カラム（ＰＢＳで事前に平衡化した）に通した。全溶液がカラム床に入った後、ＰＢＳ（３．５ｍＬ）を加えて生成物を溶出させた（青色のバンドとして現れた）。化合物７１の最終理論濃度＝ＰＢＳ中８．７ｍｇ／ｍＬ。材料を、－８０℃で冷凍保存した。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝９５～１０分（ブロードピーク）；１７％ＭＭＡＥ／ＭＭＡＥリンカーを含む８３％コンジュゲート関連ピーク。

【0524】

１ｂ．６３ （ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［^３Ｈ－Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＧｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、Ｇ３、化合物７２
ＮＭＭ／ＤＭＦ（７．８μＬ／０．５ｍＬ）中の（ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［^３Ｈ－Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］（化合物１１４の合成に使用した手順に従って合成したが、Ｇ２層の合成にトリチウム化ＤＢＬ－ＯＰＮＰ（参照１）を使用する）（３６．８ｍｇ、２．９３μｍｏｌ）の溶液に、固体ＰｙＢＯＰ（２４．７ｍｇ、４７．５μｍｏｌ）を加えた。完全に溶解させた後、このデンドリマー溶液を、ＮＭＭ／ＤＭＦ（７．８μＬ／０．５ｍＬ）中のＨＯ－Ｇｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（４０ｍｇ、３２．３μｍｏｌ）の溶液に加えた。続いて得られた反応混合物を光から保護して、室温で一晩撹拌した。反応混合物をＰＢＳ（４．０ｍＬ）で希釈して、最終容量５ｍＬとした。その後、希釈した溶液を２つのＰＤ１０脱塩カラム（ＰＢＳで事前に平衡化、各カラムに２．５ｍＬ）に通した。全ての溶液がカラム床に入ったときに、ＰＢＳ（３．５ｍＬ）を各カラムに加えて生成物を溶出させた。得られた粗混合物を、再生セルロースＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ遠心分離ユニット（１０Ｋ ＭＷＣＯ）を用いて更に精製した。化合物７２の最終理論濃度＝ＰＢＳ中２９～３０ｍｇ／ｍＬ。材料を、－２０℃で冷凍保存した。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝９．５～１２分（ブロードピーク）；８．６％ＭＭＡＥ／ＭＭＡＥリンカー関連ピークを含む９１．４％コンジュゲート関連ピーク。

【0525】

１ｂ．６４ （ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨＤＦＯ）_２（α－ＮＨＧｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_６）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、化合物７３
ＤＭＳＯ（１００μＬ）中のｐ－ＳＣＮ－デフェロキサミン（２．１ｍｇ、２．７９μｍｏｌ）の撹拌溶液を室温で調製した。これに、ＤＭＦ（２００μＬ）中の（ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］化合物１１３（１７．０ｍｇ、１．３５μｍｏｌ）を添加した。その後得られた反応混合物を３分間撹拌した後、ＮＭＭ（１０μＬ、９１．０μｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を光から保護して、室温で４時間撹拌した。ＰｙＢＯＰ（７．０ｍｇ、１３．５μｍｏｌ）を加え、５分後に反応混合物をニートＨＯ－Ｇｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（９．７６ｍｇ、７．８９μｍｏｌ）に加えた。続いて得られた反応混合物を一晩放置した。反応混合物を、ＰＢＳ緩衝液（４．５ｍＬ）で希釈し、４枚のＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心分離フィルタ（１０Ｋ ＭＷＣＯ）に分け、フィルタを遠心分離（１４Ｋ ｒｃｆ、１５分）した。残留物をＰＢＳに対して透析ろ過した（４００μＬ、１４Ｋ ｒｃｆ、１５分×１０回）。保持液を混合してピンク色の溶液を得た。化合物７３の濃度は、２ｍＬ中約１６ｍｇである。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝８．７～９．８分（ブロードピーク）。

【0526】

１ｂ．６５ ＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））_１（α－ＮＨＤＦＯ）_２（α－ＮＨＧｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_５）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、化合物７４
ＤＭＳＯ（１００μＬ）中のｐ－ＳＣＮ－デフェロキサミン（２．０ｍｇ、２．６６μｍｏｌ）の撹拌溶液を室温で調製した。これに、ＤＭＦ（２００μＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））_１（α－ＮＨ_２）_７）（ ε－ＮＨＰＥＧ_１１００）_８］、化合物６９（１７．０ｍｇ、１．２７μｍｏｌ）を加えた。その後得られた反応混合物を３分間撹拌した後、ＮＭＭ（１０μＬ、９１．０μｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を光から保護して、室温で４時間撹拌した。ＰｙＢＯＰ（７．０ｍｇ、１３．５μｍｏｌ）を加え、５分後に反応混合物をニートＨＯ－Ｇｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（９．１７ｍｇ、７．４１μｍｏｌ）に加えた。続いて得られた反応混合物を一晩放置した。反応混合物を、ＰＢＳ緩衝液（４．５ｍＬ）で希釈し、４枚のＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心分離フィルタ（１０Ｋ ＭＷＣＯ）に分け、フィルタを遠心分離（１４Ｋ ｒｃｆ、１５分）した。残留物をＰＢＳに対して透析ろ過した（４００μＬ、１４Ｋ ｒｃｆ、１５分×１０回）。保持液を混合してピンク色の溶液を得た。化合物７４の濃度は、２ｍＬ中約１６ｍｇである。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝９．３～９．７分（ブロードピーク）。

【0527】

１ｂ．６６ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮＢｏｃ）_２］、化合物１０６
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯ_２Ｈ（０．４０２ｇ、０．３０５ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（０．２０５ｇ、０．３９４ｍｍｏｌ）、及びＮＭＭ（１３０μＬ、１．１８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｎ_２雰囲気下でＮＨ（ＰＮＢｏｃ）_２（０．１４７ｇ、０．４４４ｍｍｏｌ）を加えた。続いて得られた反応混合物を室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、得られた油をシリカクロマトグラフィー（５％～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製して、所望の生成物である化合物１０６を赤色の残渣として得た（０．４７４ｇ，９５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．４３－１．４４（ｍ，１８Ｈ）； １．６４－１．８０（ｍ，４Ｈ）； ２．６３（ｔ，Ｊ ６．０Ｈｚ，２Ｈ）； ３．００（ｓ，３Ｈ）； ３．０２－３．０９（ｍ，４Ｈ）； ３．３４－３．４０（ｍ，４Ｈ），３．５８－３．７７（ｍ，９９Ｈ）； ３．８８－３．９１（ｍ，２Ｈ）； ４．２５－４．２８（ｍ，２Ｈ）； ７．１５－７．２０（ｍ，２Ｈ）； ８．４６－８．５１（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（疎水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝６．２０分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１６３１．０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｃ_７６Ｈ_１４０Ｎ_７Ｏ_３０［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値：１６３１．０。

【0528】

１ｂ．６７ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮＨ_２．ＨＣｌ）_２］、化合物１０７
氷／水浴中の（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮＢｏｃ）_２］化合物１０６（０．４２０ｇ，０．２５８ｍｍｏｌ）に、１．２５Ｍ ＨＣｌ／ＭｅＯＨ溶液（８ｍＬ，１０．０ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。５分後、氷浴を取り除き、続いて得られる反応混合物を室温で一晩撹拌させた。揮発分を真空除去し、生成物である化合物１０７を赤色の残渣として得た（０．３８８ｇ，１００％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．９１－２．０７（ｍ，４Ｈ）；２．６８（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．９４－３．０９（ｍ，７Ｈ）；３．５３－３．８０（ｍ，１０８Ｈ）；３．８８－３．９１（ｍ，２Ｈ）；４．２５－４．２８（ｍ，２Ｈ）；７．１６－７．２０（ｍ，２Ｈ）；８．４７－８．５１（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝８．１２分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１４３０．９［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_６６Ｈ_１２４Ｎ_７Ｏ_２６［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値：１４３０．８。

【0529】

１ｂ．６８ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮＨ_２．ＨＣｌ）_２］ 化合物１０８
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中のＨ_２Ｎ－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮＢｏｃ）_２］（０．４１８ｇ、０．２８６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＣＯ_２Ｈ（０．１５ｇ、０．３４４ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（０．１７８ｇ、０．３４２ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（８０μＬ、０．７２７ｍｍｏｌ）を加えた。続いて得られた反応混合物を室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、得られた油を氷／水浴で冷却した後、１．２５Ｍ ＨＣｌ／ＭｅＯＨ溶液（１０．０ｍＬ，１２．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。５分後、氷浴を取り除き、続いて得られる反応混合物を室温で一晩撹拌させた。揮発分を真空除去し、得られた油をＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（８ｍＬ，１：１）に溶解し、分取ＨＰＬＣ（１０～５０％ＭｅＣＮ、０．１％ギ酸緩衝液、ＲＴ３５分）で精製して、赤色の固形化合物１０８（１．３７ｇ、５４％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．９１－２．０４（ｍ，４Ｈ）；２．４３（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．６８（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．９４－３．０７（ｍ，４Ｈ）；３．００（ｓ，３Ｈ）；３．３５（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，２Ｈ）；３．５１－３．８０（ｍ，１１９Ｈ）；３．８８－３．９１（ｍ，２Ｈ）；４．２５－４．２８（ｍ，２Ｈ）；７．１６－７．２０（ｍ，２Ｈ）；８．４６－８．５１（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝８．１５分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１６７７．９［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_７７Ｈ_１４５Ｎ_８Ｏ_３１［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値：１６７８．０。

【0530】

１ｂ．６９ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２［Ｌｙｓ］_２［ＮＨＢｏｃ］_４ Ｇ１ 化合物１０９
Ｎ_２雰囲気下、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中の（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮＨ_２．ＨＣｌ）_２］、化合物１０８（０．１９５ｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）及びＤＢＬ－ＯＰＮＰ（参照１）（０．１４６ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（１２５μＬ、０．８６４ｍｍｏｌ）を加えた。続いて得られた反応混合物を、室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、得られた油状残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（５％－１０％－１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製し、所望の生成物である化合物１０９を赤色の油として得た（０．１８６ｇ，７２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．２８－１．８７（ｍ，５６Ｈ）；２．４３（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．６３（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，４Ｈ）；３．００（ｓ，３Ｈ）；３．０２－３．０６（ｍ，４Ｈ）；３．１０－３．２１（ｍ，４Ｈ）；）。３．３５－３．４１（ｍ，６Ｈ）；３．５１－３．７８（ｍ，１１０Ｈ）；３．８４－３．９９（ｍ，４Ｈ）；４．２５－４．２８（ｍ，４Ｈ）；７．１５－７．２０（ｍ，２Ｈ）；８．４７－８．５１（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（疎水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝６．６８分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）２３３５．３，［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_１０９Ｈ_２０１Ｎ_１２Ｏ_４１＋［Ｍ＋Ｈ］^＋のｍ／ｚ計算値＝２３３５．４。

【0531】

１ｂ．７０ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２［Ｌｙｓ］_２［ＮＨ_２．ＨＣｌ］_４ Ｇ１ 化合物１１０
氷冷した（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２［Ｌｙｓ］_２［ＮＨＢｏｃ］_４、化合物１０９（０．２１５ｇ、０．０９２１ｍｍｏｌ）に、１．２５Ｍ ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（６．０ｍＬ、７．５０ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加えた。５分後、氷浴を取り除き、続いて得られる反応混合物を室温で一晩撹拌させた。揮発物を真空除去し、生成物である化合物１１０を赤色油として得た（０．２０８ｇ、１０８％）。％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．５１－１．９９（ｍ，２０Ｈ）；２．４７（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．６７（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，４Ｈ）；２．９０－３．０４（ｍ，７Ｈ）；３．３５－３．４１（ｍ，７Ｈ）；３．５１－３．７８（ｍ，１０６Ｈ）；４．２５－４．２８（ｍ，２Ｈ）；７．１７－７．２０（ｍ，２Ｈ）；８．４７－８．５１（ｍ，２Ｈ）；ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝７．２８分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１９３４．９［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_８９Ｈ_１６９Ｎ_１２Ｏ_３３［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１９３５．２。

【0532】

１ｂ．７１ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［ＮＨＢｏｃ］_８、Ｇ２、化合物１１１
Ｎ_２雰囲気下、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中の（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２［Ｌｙｓ］_２［ＮＨ_２．ＨＣｌ］_４、化合物１１０（０．１９２ｇ、０．０８２２ｍｍｏｌ）及びＤＢＬ－ＯＰＮＰ（参照１）（０．２１５ｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（２１５μＬ、０．１．９６ｍｍｏｌ）を加えた。続いて得られた反応混合物を、室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、得られた油状残渣をシリカクロマトグラフィー（５％－１０％－１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製して、所望の生成物である化合物１１１を赤色の油として得た（０．２３１ｇ，８７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．２８－１．８７（ｍ，１４０Ｈ）；２．４４（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．６３（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，２Ｈ）；３．００（ｓ，３Ｈ）；３．０２－３．０６（ｍ，１０Ｈ）；３．１０－３．２１（ｍ，１６ｋＨ））。３．３３－３．４０（ｍ，８ｋ Ｈ）；３．５１－３．７７（ｍ，１２０Ｈ）；３．８４－３．９９（ｍ，１４Ｈ）；３．９４－４．１０（ｍ，４Ｈ）；４．２５－４．２８（ｍ，４Ｈ）；７．１５－７．２０（ｍ，２Ｈ）；８．４７－８．５２（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（疎水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝８．１５分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）［Ｍ＋２］^＋＝１６２４．５；［（Ｍ－３Ｂｏｃ）＋３］＝１０１６．６；Ｃ_１５３Ｈ_２８１Ｎ_２０Ｏ_５３ ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝３２４７．９９。

【0533】

１ｂ．７２ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［ＮＨ_２．ＨＣｌ］_８、Ｇ２、化合物１１２
氷冷した（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［ＮＨＢｏｃ］_８ 、化合物１１１（０．２３１ｇ，０．０７１１ｍｍｏｌ）に、１．２５Ｍ ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（９．０ｍＬ，１１．３ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加えた。５分後、氷浴を取り除き、続いて得られる反応混合物を室温で一晩撹拌させた。揮発物を真空除去し、生成物である化合物１１２を赤い油として得た（０．２２６ｇ，１００％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．５１－１．９６（ｍ，４０Ｈ）；２．５３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．９６－３．０４（ｍ，１０Ｈ）；３．１５－３．２０（ｍ，８Ｈ）；３．３９－３．４５（ｍ，７Ｈ）；３．５４－４．１０（ｍ，１０２Ｈ）；４．２５－４．２８（ｍ，２Ｈ）；７．１７－７．２０（ｍ，２Ｈ）；８．４８－８．５１（ｍ，２Ｈ）；ＬＣＭＳ（親水法、ギ酸緩衝液）Ｒ_ｔ＝６．３８分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）２４４７．６［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_１１３Ｈ_２１７Ｎ_２０Ｏ_３７［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝２４４７．６。

【0534】

１ｂ．７２ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）（ε－ＮＨ－ＣＯ ＰＥＧ_１１００）］_８、Ｇ３、化合物１１３
Ｎ_２雰囲気下、ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＨＯ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（ＰＥＧ_１１００）（参照１）（０．５４１ｇ、０．４０２ｍｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（０．１９５ｇ、０．３７５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（２２５μＬ、２．９６ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、その溶液を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［ＮＨ_２．ＨＣｌ］_８、化合物１１２（０．１０９ｇ、０．０３９８ｍｍｏｌ）に添加した。続いて得られた反応混合物を、室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、得られた粗産物を氷／水浴で冷却した。冷却した残渣に、１．２５Ｍ（８．０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。１０分後、冷水浴を除去し、反応物を室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、Ｈ_２Ｏ（１６ｍＬ）に溶解した。この溶液をＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔｓ（４ユニット×１０ｋＤａ ＭＷＣＯ ユニット）を用いた遠心分離＊により精製した。保持液を一晩凍結乾燥し、生成物である化合物１１３（０．３２７ｇ、６５％）を赤色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．４０－１．８７（ｍ，８８Ｈ）；２．４９－２．５６（ｍ，１８Ｈ）；２．６８－２．７２（ｍ，２Ｈ）；３．０８（ｓ，３Ｈ）；３．１７－３．３０（ｍ ３０Ｈ）；３．３７－３．５１（ｍ，１０Ｈ）；３．４１（ｓ，２４Ｈ）；３．５９－４．０１（ｍ，８１６Ｈ）；４．２５－４．４０（ｍ，８Ｈ）；７．２９－７．３３（ｍ，２Ｈ）；８．４４－８．４９（ｍ，２Ｈ）；ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝１０．２８分。

【0535】

＊［ユニットをＨ_２Ｏ（５ｍＬ）で事前にすすぎ洗し、４０００ｒｐｍで５分間回転させた。 このプロセスを繰り返した。この粗液を０．４５μｍのシリンジフィルタでろ過し、遠心分離装置に入れた。その後、ユニットを４０００ｒｐｍで１５分間回転させた。その後、保持液をＨ_２Ｏ（４ｍＬ）で希釈し、再び４０００ｒｐｍで１５分間回転させた。このプロセスを８回繰り返した］。

【0536】

１ｂ．７３ ナノボディ－Ｎ_３／ＤＢＣＯ－ＤＦＯ、化合物１１４
トリス緩衝液（ｐＨ８）中のナノボディ－Ｎ_３（「ナノボディ－Ｎ３－Ｃ末端タグ」）溶液（２２８μｇ、０．０１５μｍｏｌ）に加えた２００μＬのＤＭＳＯ、１２４μＬのＤＢＣＯ－ＤＦＯ溶液（４８μｇ、０．０５４μｍｏｌ）に０．４ｍｇの化合物を溶解させることによってＤＢＣＯ－ＤＦＯ化合物５６の溶液を調製し、この溶液を４℃で一晩放置する。反応混合物のＵＰＬＣ分析では、未反応のアジドナノボディが示され、反応が完了していないことが示唆された。更に２４μｇ（０．０２７μｍｏｌ）のＤＢＣＯ－ＤＦＯ化合物を反応混合物に加え、反応混合物を週末にわたって４℃で放置した。反応混合物のＵＰＬＣ分析では、反応が完了したことが示された。ＵＰＬＣ： ０．０１ ＴＦＡを含む３０～４０％ＭｅＣＮ、１５分間、Ｒ_ｔ： アジドナノボディ－Ｎ_３の場合は９．９１分（ｍ／ｚ１４３０８）及びＲ_ｔ：ＮＢ－ＤＦＯ製品の場合は１０．７９（ｍ／ｚ１５１８４）。

【0537】

トリス緩衝液（ｐＨ８）を使用して１ｍＬに希釈した後、スピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ０．５ｍＬ；１０ｋＤａカットオフ；移動相としてトリス；１０回洗浄（４５０μＬ／洗浄））を使用して精製した。ＮＢ－ＤＦＯ生成物１１４を、トリス緩衝液（ｐＨ８）中で約２５０μｇ／３００μＬの濃度で得た。

【0538】

１ｂ．７４ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４－ＮＨＦｍｏｃ）_８］、Ｇ３、化合物１１５
ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨ_２）_８］（参照１）（１００ｍｇ、０．０３４４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｆｍｏｃ－ＮＨ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＯＨ（４５１ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（１７１ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（９０μＬ、０．０８２６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で一晩撹拌した。反応の進行をＨＰＬＣにより確認し、完了したと判断されたものを真空濃縮し、生成物である化合物１１５を更に精製することなく次のステップに使用した。

【0539】

１ｂ．７５ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４－ＮＨ_２）_８］、Ｇ３、化合物１１６
ＤＭＡ（４ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４－ＮＨＦｍｏｃ）_８］、化合物１１５（４７０ｍｇ、０．０３４３ｍｍｏｌ、先行ステップから１００％収率として処理）の溶液に、ピペリジン（１ｍＬ）を加え、反応をＨＰＬＣ分析によって監視した。出発材料を消費すると、反応物を減圧下で濃縮し、ＳＥＣ（４００滴／チューブ、ＭｅＯＨ ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０、３５滴／分）により精製した。画分をＴＬＣ分析（５％ＢａＣｌ_２溶液、続いてヨウ素染色、暗褐色斑）により確認し、続いてＨＰＬＣにより確認し、生成物を含有するものを合わせ、減圧濃縮した。残渣をＭＱ水に取り込み、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクフィルタ）、凍結乾燥させて、化合物１１６を淡褐色のフィルム（１９０ｍｇ、２つのステップで４６％の収率）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： ０．９－１．９３（ｍ，１６２Ｈ），２．４４（ｍ，１６Ｈ），２．９３－３．２４（ｍ，４６Ｈ），３．４０（ｍ，７Ｈ），３．４８－３．７８（ｍ，８００Ｈ），３．８７（ｍ，６Ｈ），４．００（ｍ，９Ｈ），４．３（ｍ，７Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），６．１９（ｓ，１Ｈ），７．２３－７．３７（ｍ，１０Ｈ）。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝７．９～８．１分（ブロードピーク）

【0540】

１ｂ．７６ （（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノン４－イン－９－イル）メチル（２－（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド）エチル）カルバメート、化合物１１７
ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中のＭＰＳ－ＥＤＡ．ＴＦＡ（０．２０４ｇ、０．６２７ｍｍｏｌ、Ｑｕａｎｔａ ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ製）及びＢＣＮ－ＮＨＳ（０．２２４ｇ、０．７６９ｍｍｏｌ、ＳｙｎＡｆｆｉｘ製）の溶液に、ＮＭＭ（０．２１０ｍＬ、１．９１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を、２時間、室温で撹拌させ、次いで、真空濃縮した。残渣をシリカクロマトグラフィー（１００％ＥｔＯＡｃ、１％Ｅｔ_３Ｎ）で精製して、生成物（０．１４７ｇ、６１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ_６－ＤＭＳＯ）δ（ｐｐｍ）： ０．８５－０．８７（ｍ，２Ｈ）；１．２３－１．２８（ｍ，２Ｈ）；１．４９－１．５１（ｍ，２Ｈ）；２．１５－２．３２（ｍ，８Ｈ）；２．９８－３．０２（ｍ，４Ｈ）；３．５７－３．６１（ｍ ２Ｈ）；）；４．０１－４．０３（ｍ ２Ｈ）；６．９８（ｂｒｓ，２Ｈ）；７．０５（ｂｒｓ，１Ｈ）；７．９７（ｂｒｓ，１Ｈ）。

【0541】

１ｂ．７７ ナノボディ（精製タグを有するプレーン）ＧＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＥＮＬＹＦＱＧＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、化合物１１８
１ｂ．７８ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［ＮＨ_２．ＨＣｌ］_１６、Ｇ３、化合物１１９
Ｎ_２雰囲気下、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［ＮＨ_２．ＨＣｌ］_８、化合物１１２（０．０９８ｇ，０．０３５８ｍｍｏｌ）及びＤＢＬ－ＯＰＮＰ（参照１）（０．２０７ｇ、０．４４３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（１９０μＬ、１．９７３ｍｍｏｌ）を加えた。続いて得られた反応混合物を、室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、得られた油状残渣をシリカクロマトグラフィー（５％－１０％－１５％ ＭｅＯＨ：ジクロロメタン）で精製して、Ｂｏｃ保護された生成物を赤色油として得た（０．１２８ｇ、７０％）。精製材料を氷／水浴で冷却した後、１．２５Ｍ ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（６．５ｍＬ、８．５ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加えた。５分後、氷浴を取り除き、続いて得られる反応混合物を室温で一晩撹拌させた。揮発物を真空除去し、生成物である化合物１１９を赤い油として得た（０．１０７ｇ，１００％）。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝７．４８分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）３４７１［Ｍ＋Ｈ］^＋；［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝３４７２。

【0542】

１ｂ．７９ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（α－ＮＨ_２．ＨＣｌ）（ε－ＮＨ－ＣＯ ＰＥＧ_１１００）］_１６、Ｇ４、化合物１２０
Ｎ_２雰囲気下、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のＨＯ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）ＰＥＧ_１１００）（参照１）（０．１０７ｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（０．０６５ｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（５０μＬ、０．４５５ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、その溶液を（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［ＮＨ_２．ＨＣｌ］_１６、化合物１１９（０．０２２１ｇ、０．００５４５ｍｍｏｌ）に加えた。続いて得られた反応混合物を、室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、得られた粗産物を氷／水浴で冷却した。冷却した残渣に、１．２５Ｍ ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（１．５ｍＬ、１．８８ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。１０分後、冷水浴を除去し、反応物を室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、Ｈ_２Ｏ（５ｍＬ）に溶解した。この溶液をＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）を用いた遠心分離により精製した。残留物を一晩凍結乾燥し、ギルソン計器（単一勾配６０分、１０＞６０％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ緩衝液、ＲＴ３６分）上で分取ＨＰＬＣにより更に精製して、生成物である化合物１２０（０．０２１ｇ、２５％）を赤色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： １．２８－１．８７（ｍ，１８４Ｈ）；２．４２－２４９（ｍ，３５Ｈ）；３．００（ｓ，３Ｈ）；３．１２－３．２３（ｍ ６０Ｈ）；３．３４－３．４０（ｍ，６３Ｈ）；３．５２－４．０１（ｍ，８２６Ｈ）；４．２５－４．３９（ｍ，１６Ｈ）；７．１７－７．２０（ｍ，２Ｈ）；８．４８－８．５１（ｍ，２Ｈ）；ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝８．９６分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）２０９５［Ｍ＋７Ｈ］^＋；１８３４［Ｍ＋８Ｈ］^＋；１６３０［Ｍ＋９Ｈ］^＋。

【0543】

１ｂ．８０ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［ＮＨ_２．ＴＦＡ］_３２、Ｇ４、化合物１２１
化合物１１９と同様に調製し、ＴＦＡ／ＡｃＯＨを用いて脱保護し、化合物１２１（０．０７８ｇ，７８％）を赤色固体として得た。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）ＲＴ＝７．７４分．ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）２０９５［Ｍ＋７Ｈ］^＋；１８３４［Ｍ＋８Ｈ］^＋；１６３０［Ｍ＋９Ｈ］^＋。
１ｂ．８１ （ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）（ ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）］_３２、Ｇ５、化合物１２２

【0544】

Ｎ_２雰囲気下、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中のＨＯ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（ＰＥＧ_１１００）（参照１）（０．４７６ｇ、０．３５４ｍｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（０．１７０ｇ、０．３２７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（１８０μＬ、０．５００ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、その溶液を（ＭｅＴｚＰｈ）－ＰＥＧ_４－ＰＥＧ_２４－ＣＯ［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［ＮＨ_２．ＴＦＡ］_３２、化合物１２１（０．０７８ｇ、０．００８５０ｍｍｏｌ）に加えた。続いて得られた反応混合物を、室温で一晩撹拌させて放置した。揮発成分を真空除去し、得られた粗製品をＨ_２Ｏ（１．０ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）をゆっくりと加えた。この反応を室温で一晩撹拌した。反応物をＨ_２Ｏ（１２ｍＬ）で希釈し、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）を用いた遠心分離によって精製した。保持液を一晩凍結乾燥し、化合物１２２（０．３７４ｇ、９１％）をピンク色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．４１－１．８７（ｍ，３７６Ｈ）；２．５２－２．５６（ｍ，６４Ｈ）；３．０９（ｓ，３Ｈ）；３．１７－３．２４（ｍ，１２６Ｈ）；３．４１（ｓ，９３Ｈ）３．４８－３．９８（ｍ，２９６０Ｈ）；４．２７－４．３９（ｍ，３２Ｈ）；７．３０－７．３３（ｍ，２Ｈ）；８．４６－８．４９（ｍ，２Ｈ）；ＨＰＬＣ分析（ＨＰＬＣ－親水法、ギ酸塩緩衝液、１５分）Ｒ_ｔ＝８．６０分。

【0545】

１ｂ．８２ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＡｃ）_３０（α－ＮＨＤＯＴＡ）_２（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_２０００）_３２］、化合物ＲＨ－３
ＤＭＦ（０．６ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２）_３０（α－ＮＨＤＯＴＡ）_２（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_２０００）_３２］、化合物ＲＨ－２（６３ｍｇ、８６０μｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＥＡ（２５μＬ、２２８μｍｏｌ）、続いて酢酸無水物（４１μＬ、４３０μｍｏｌ）を加えた。続いて得られた反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）に溶解し、ＳＥＣにより精製した。生成物含有画分を合わせて真空濃縮し、得られた残渣をＭＱ水に溶解させ、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクフィルタ）、凍結乾燥させた。得られた固体をＭＱ水（５０ｍＬ）に溶解させ、ＭＱ水を用いた限外ろ過（ｍｉｎｉｍａｔｅ）により精製した。１１ＤＶの透過液を収集した後、残留物を濃縮し、ろ過し（０．２２μｍアクロディスクフィルタ）、凍結乾燥させて、化合物ＲＨ－３－１６０（５２．２ｍｇ）を得た。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ－親油性方法、ギ酸塩緩衝液、１５分）Ｒ_ｔ＝８．５６分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．１６－１．９０（ｍ，３５９Ｈ），２．０２（ｂｒｏａｄ ｓ，１０１Ｈ），３．０１－３．３１（ｍ，１３３Ｈ），３．３８（ｓ，９６Ｈ），３．４５－３．４８（ｍ，４３Ｈ），３．５２－４．４０（ｍ，５２６７Ｈ），６．０９（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），７．１３－７．５４（ｍ，１７Ｈ）。^１Ｈ ＮＭＲ分析により、約１．８ＤＯＴＡ／デンドリマー；ＤＯＴＡの％（ｗ／ｗ）＝１．７％が示唆される。

【0546】

１ｃ．ナノボディ対照の合成
１ｃ．１ ナノボディ－Ｎ_３／ＤＢＣＯ－Ｓｕｌｆｏ－ＰＥＧ_３－ＤＦＯ、化合物８２
ナノボディ－Ｎ_３（「ナノボディ－Ｎ３－Ｃ末端タグ」）（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８の２ｍｌ中５．７８ｍｇ）の溶液を、ＤＢＣＯ－スルホ－ＰＥＧ_４－ＤＦＯ、化合物５５（１ｍｇ／ｍｌの水溶液５３５μｌ、１当量）と反応させた。続いて得られた反応混合物を室温で一晩放置した。過剰の未反応のＤＢＣＯ－スルホ－ＰＥＧ_３－ＤＦＯを、１０ｋ ＭＷＣＯ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心分離フィルタを用いて実行した緩衝液交換によって除去した。次いで、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲートを、放射性標識のために、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ８に緩衝液交換した。未反応のＤＢＣＯ－スルホ－ＰＥＧ_３－ＤＦＯの除去をＨＰＬＣによって確認した。

【0547】

１ｃ．２ ナノボディ－Ｃｙｓ／ＭＡＬ－Ｃｙ５ ＳＲＳ－１９
ＴＣＥＰによる還元後、ナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３をスルホ－シアニン５マレイミド（Ｌｕｍｉｐｒｏｂｅカタログ１３３８０）にコンジュゲートした。１０モル当量のＴＣＥＰを、ｐＨ７．２ １０ｍＭ ＰＢＳ中のナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３に添加した。反応チューブを窒素でフラッシュし、反応混合物を室温で２時間放置した。７ｋのＭＷＣＯ Ｚｅｂａｓｐｉｎ脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒカタログ８９８８２）を用いて脱塩することにより、過剰なＴＣＥＰを除去した。次いで、５モル当量のスルホ－シアニン５マレイミドを加えた。反応チューブを窒素でフラッシュし、反応混合物を室温で２０時間放置した。７ｋのＭＷＣＯゼバスピン脱塩カラムを使用して、任意の未反応のスルホ－シアニン５マレイミドを除去した。

【0548】

１ｄ．トラスツズマブ対照の合成
１ｄ．１ トラスツズマブ－デグリコシル化化合物ＫＹ－１
ＳＣ注射用のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）の溶液（２００μＬの１２０ｍｇ／ｍＬのｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）を、７Ｋ Ｚｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム、０．５ｍＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標））を介して、１０ｍＭ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に緩衝液交換した。濃度を１０ｍＭ ＰＢＳで１０ｍｇ／ｍＬに調整した。ＰＮＧａｓｅ Ｆ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、３．５μＬ）を溶液に添加し、振とう（４００ｒｐｍ）しながら３７℃でインキュベートし、反応をＵＰＬＣによって監視した。ＫＹ－１の還元には、β－メルカプトエタノール１０％ｖ／ｖ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した。β－メルカプトエタノール還元生成物のＵＰＬＣ－ＴｏＦ分析（方法１）：重鎖：ｍ／ｚ４９１５３（反応前：ｍ／ｚ５０５９３）で９．０６分（Ｒ_ｔ）；軽鎖：ｍ／ｚ２３４３９（反応前：ｍ／ｚ２５３７７）で８．５５（Ｒ_ｔ）。２２時間後、ＰＮＧａｓｅ Ｆを遠心分離（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５、５０ｋＤａ ＭＷＣＯ）を用いて除去し、試料を５，０００×ｇで５分間、合計４回洗浄した。

【0549】

１ｄ．２トラスツズマブ－｛ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－スルホ－ＤＢＣＯ｝_２、化合物ＫＹ－２（及びＫＹ－２ａ）
脱グリコシル化トラスツズマブＫＹ－１のＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４（２ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ）に、ＭＱ水（２４０μＬ）中のスルホＤＢＣＯ－ＰＥＧ_４－アミン（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ，７．２ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）の溶液を室温で加えた。反応混合物を３７℃に加熱し、その後、ＭＱ水（３００μＬ）中に再懸濁したトランスグルタミナーゼ（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ－Ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ、［ＭＴＧａｓｅ］、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ）を加えた。最終濃度は、１ｍｇのＫＹ－１当たり６．７単位のＭＴＧａｓｅである。試料を３７℃で１２～１８時間、又は改変の完了までインキュベートした（ＵＰＬＣ－Ｔｏｆ（方法１）を介して監視した反応）。ＫＹ－１の重鎖質量の増加は、９．６２分（Ｒ_ｔ）でのピーク、４９，８８５Ｄａでのｍ／ｚ（反応前のｍ／ｚ４９１５３）を伴うＵＰＬＣ分析によって観察することができる。完了したら、サイズ排除カラム（ＳＥＣ）緩衝液１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８を使用して、ＭＴＧａｓｅ及び未反応リンカーをＳｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ１０／３００ ＧＬ（Ｃｙｔｉｖａ）で除去した。２８０ｎｍの吸光度に基づいて精製を監視した。目的のピークを収集し、５０ｋＤａ ＭＷＣＯ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５遠心フィルタユニット（Ｍｅｒｃｋ）で１ｍＬに濃縮した（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液中１６．４３ｍｇ／ｍＬ）。ＫＹ－２のアリコートをＡＦＤｙｅ ６４７アジド（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ）で処理してＫＹ－２ａを得、続いてＳＤＳページゲルを使用して分析することにより、トランスグルタミン化の証拠を確認した（図２１、レーン１及び３、並びに還元生成物レーン２及び４を参照）。対応する細胞結合データを実施例７に示す。

【0550】

１ｄ．３ トラスツズマブ－｛ＰＥＧ_４－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ＰＥＧ_７－Ｌｙｓ［（α－Ｃｙ５）_１（ε－ＮＨＤＯＴＡ）_１］｝_２、化合物ＫＹ－３－３１０
トラスツズマブ－｛ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－Ｓｕｌｆｏ－ＤＢＣＯ｝_２ ＫＹ－２（１．２ｍＬのトリス緩衝液（ｐＨ８）中１６ｍｇ）の溶液に、ＤＭＳＯ中のＮ_３－ＰＥＧ_７－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＯＴＡ）］、化合物ＳＲＳ－５（０．６５ｍｇ、０．４２μｍｏｌ、１０ｍｇ／ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１８時間放置し、次いでＭＱ水で１５ｍＬの体積に希釈した。得られた溶液を遠心分離（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）により濃縮し、トリス緩衝液ｐＨ８（５×１５ｍＬ）で洗浄して、トリス緩衝液（ｐＨ８）（１６．３ｍｇ／ｍＬ）中のトラスツズマブ－｛ＰＥＧ_４－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ＰＥＧ_７－Ｌｙｓ［（α－Ｃｙ５）_１（ε－ＮＨＤＯＴＡ）_１］｝_２（化合物ＫＹ－３－３１０）の溶液を得た。β－メルカプトエタノール還元生成物のＵＰＬＣ－Ｔｏｆ分析（方法１）：重鎖：ｍ／ｚ５１３４５（反応前：ｍ／ｚ４９８８５）で１０．１９分（Ｒ_ｔ）；軽鎖：ｍ／ｚ２３４３９（反応前：ｍ／ｚ２３４３９）で８．７２（Ｒ_ｔ）。

【0551】

１ｅ．ＦＡＰＩ中間体の合成
１ｅ．１ ＦＡＰＩ－０４－ＮＨ ＲＨａ－２
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中のＦＡＰＩ－０４－ＮＢｏｃ、ＲＨａ－１（４２５ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ－トルエンスルホン酸（２０６ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた白濁した混合物を５０～６０℃で撹拌し、反応の進行をＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、８分、ＴＦＡ）によって監視した。反応混合物を合計３１．５時間加熱し、ｐ－トルエンスルホン酸（１４４ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の追加部分を３．５時間及び３０時間後に加えた。反応混合物を室温まで冷却し、真空濃縮して、ＦＡＰＩ－０４－ＮＨ ，ＲＨａ－２を得た。材料を更に精製することなく使用した。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝０．６６^１分及び３．３６分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）４８７［Ｍ］^＋；Ｃ_２４Ｈ_２８Ｆ_２Ｎ_６Ｏ_３［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝４８７。^１製品の大部分は、この方法を使用して注入時にカラムから直接溶出するように見える（Ｒ_ｔ＝０．６６分）が、また保持される（Ｒ_ｔ＝３．３６分）。

【0552】

１ｅ．２ ＦＡＰＩ－０４－ＮＣ（Ｏ）－ｄＰＥＧ_１１００－ＣＯ_２Ｈ、ＲＨａ－４
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＦＡＰＩ－０４－ＮＨ ＲＨａ－２（０．７２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、酸－ｄＰＥＧ_１１００－ＮＨＳエステルＲＨａ－３（７９５ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。全ての固体を溶解させたら、ＮＭＭ（１．３ｍＬ、１１．１５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物及び撹拌を続けた。１８時間後、反応混合物を真空濃縮した。残渣をＭｅＣＮ（８ｍＬ）に溶解し、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクシリンジフィルタ）、ろ液を分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法２０－６０，ＴＦＡ；Ｒ _ｔ＝２６～２９分）によって精製して、ＦＡＰＩ－０４－ＮＣ（Ｏ）－ｄＰＥＧ_１１００－ＣＯ_２Ｈ ＲＨａ－４を淡黄色状油として得た（１．１ｇ、９９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）２．３３－２．４７（ｍ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６２－３．２２（ｍ，４Ｈ），３．３４－３．５４（ｍ，４Ｈ），３．５６－３．６８（ｍ，１００Ｈ），３．６８－３．９１（ｍ，５Ｈ），３．９２－４．５７（ｍ，７Ｈ），５．１２－５．１６（ｍ，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝３．０，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１５－８．２６（ｍ，２Ｈ）及び９．０２（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ５～６０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．２２分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１６８８［Ｍ］^＋；Ｃ_７８Ｈ_１３２Ｆ_２Ｎ_６Ｏ_３１［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１６８８。

【0553】

１ｅ．３ ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）］、ＲＨａ－７
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中のＣｙ５－ＮＨＳエステルＲＨａ－５（５１ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨ_２）（ε－ＮＨＢｏｃ）］ＲＨａ－６（３８ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）、続いてＮＭＭ（７０μＬ、０．１５４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５分間超音波処理した後、２日間撹拌してから、揮発分を真空除去した。残渣をジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）を室温で加えた。反応混合物を４．５時間撹拌し、ＭｅＣＮ（約５ｍＬ）で希釈し、真空濃縮し、分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法 ３０～９０、ＴＦＡ；Ｒ_ｔ＝２４～２６分）により精製して、ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）］ＲＨａ－７を濃紺色固体として得た（４６ｍｇ、８２％）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．０９分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）６１２［Ｍ］^＋；Ｃ_３８Ｈ_５１Ｎ_４Ｏ_３［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝６１２。

【0554】

１ｅ．４ ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］、ＲＨａ－９
ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）］ ＲＨａ－７（９３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）に、ＤＭＳＯ（２．０ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（１５０μＬ、０．８６ｍｍｏｌ）中のｐ－ＳＣＮ－Ｐｈ－ＤＦＯ ＲＨａ－８（１２０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で加えた。得られた溶液を１８時間撹拌し、次いで、反応混合物の表面（１６時間）に窒素を吹き付けて、体積の約半分まで濃縮した。水（約２０ｍＬ）を濃縮溶液に添加し、続いてＭｅＣＮ（約２ｍＬ）を添加して任意の固体を溶解させた。得られた溶液を凍結乾燥させ、次いで自動フラッシュクロマトグラフィー（オートフラッシュ法１、Ｒ_ＣＶ＝１１～１３ＣＶ）により精製して、ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］ ＲＨａ－９を濃紺色固体として得た（１０８ｍｇ、５７％）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ５～６０、８分、ＴＦＡ）：Ｒ_ｔ＝６．７３分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１３６５［Ｍ］^＋；Ｃ_７１Ｈ_１０３Ｎ_１２Ｏ_１１Ｓ_２［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１３６５。

【0555】

１ｅ．５ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ ＲＨａ－１２
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＦＡＰＩ－０４－ＮＣ（Ｏ）－ＰＥＧ_１１００－ＣＯ_２Ｈ ＲＨａ－４（１００ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及びｍＰＥＧ_１０００－ＣＯ_２Ｈ ＲＨａ－１１の撹拌溶液に、ＰｙＢＯＰ（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を５分間撹拌してから、ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨ_２）_３２］ ＲＨａ－１０（１１０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１５０μＬ、１．３５ｍｍｏｌ）の溶液を得た。得られた溶液を２日間撹拌し、真空濃縮した。残渣に水（２０ｍＬ）を添加し、得られた白濁した溶液をろ過した。ろ液を水で希釈して約７０ｍＬの総量とし、脱イオン水（１０ＤＶ）で溶出するＴＦＦ（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ ＸＬカセット、５０ｃｍ^２、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ膜）にかけた。残留物を更にスピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ、１５ｍＬ）によって濃縮し、凍結乾燥させて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ ＲＨａ－１２を淡黄色のガム（３１７ｍｇ）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ分光法を用いて、ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４基の数（ｎ_ＦＡＰＩ）及びε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００ 基の数（ｎ_ｍＰＥＧ）を決定した。ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ ＲＨａ－１２（２５ｍｇ）をＣＤ_３ＯＤ（６００μＬ）中に溶解させ、得られた溶液を揺さぶり、室温で２４時間静置した。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを記録し［スキャン数＝５００、ｄ１（パルス遅延）＝３０ｓ］、処理し、δ＝７．１６～７．４４ｐｐｍでのベンズヒドリル（ＢＨＡ）プロトンに関連する共鳴の積分を１０Ｈに設定した。δ＝８．７０～８．８６ｐｐｍでの共鳴の積分値は（１Ｈ）×ｎ_ＦＡＰＩキノリンプロトンに起因し、δ＝３．３６ｐｐｍでの共鳴は（３Ｈ）×ｎ_ｍＰＥＧプロトンに起因した。その際、ｎ_ＦＡＰＩ＝１であり、ｎ_ｍＰＥＧ＝３１であった。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ _ｔ＝５．０６分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）： ０．７３－２．１５（ｍ，６４９Ｈ），２．９０－３．２９（ｍ，１００Ｈ），３．３６（ｓ，９３Ｈ），３．３７－３．９２（ｍ，２９９１Ｈ），３．９３－４．６６（ｍ，１０３Ｈ），６．１６－６．２８（ｍ，１Ｈ），７．１６－７．４４（ｍ，１０Ｈ），７．７８－８．０８（ｍ，２６Ｈ）及び８．７０－８．８６（ｍ，１Ｈ）。

【0556】

１ｅ．６ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］、ＲＨａ－１３
ＤＭＦ（５＋３ｍＬ）中のＦＡＰＩ－０４－ＮＣ（Ｏ）－ＰＥＧ_１１００－ＣＯ_２Ｈ ＲＨａ－４（３５５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、ｍＰＥＧ_１０００－ＣＯ_２Ｈ ＲＨａ－１１（２１８ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（２１８ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨ_２）_３２］ ＲＨａ－１０（１２５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１９２μＬ、１．７５ｍｍｏｌ）を使用して、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］ ＲＨａ－１３）を濃黄色ガムとして得た（４６０ｍｇ、８５％、ＭＷ_Ｃａｌｃ＝４９，２１４Ｄａ）ことを除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ ＲＨａ－１２について記載されているように合成した。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．８３分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ＋Ｄ_２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）： １．０１－２．０１（ｍ，６８１Ｈ），２．１４－２．２９（ｍ，１６Ｈ），２．３９－２．５２（ｍ，１９Ｈ），２．５９－２．７７（ｍ，１７Ｈ），２．７７－３．２９（ｍ，１６８Ｈ），３．３６（ｓ，７１Ｈ），３．３８－３．９２（ｍ，３２３９Ｈ），３．９２－４．４８（ｍ，１４９Ｈ），５．０３－５．２１（ｍ，１０Ｈ），７．１２－７．３８（ｍ，１０Ｈ），７．４４－７．５６（ｍ，１０Ｈ），７．５６－７．６４（ｍ，９Ｈ），７．７９－８．２０（ｍ，８８Ｈ）及び８．７３－８．８６（ｍ，１０Ｈ）。ｎ_ＦＡＰＩ＝１０及びｎ_ｍＰＥＧ＝１９。

【0557】

１ｅ．７ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_４（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００）_２８］ ＲＨａ－１４
ＤＭＦ（３．５ｍＬ）中のＦＡＰＩ－０４－ＮＣ（Ｏ）－ＰＥＧ_１１００－ＣＯ_２Ｈ ＲＨａ－４（５３ｍｇ、３１．４μｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温でＰｙＢＯＰ（１６．３ｍｇ、３１．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５分間撹拌し、その後ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨ_２）_３２］ ＲＨａ－１０（７５ｍｇ、６．５μｍｏｌ）、続いてＮＭＭ（２０μＬ、１８．２μｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を１８時間撹拌し、ＤＭＦ（１．７ｍＬ）中のｄＰＥＧ_１１００－ＣＯ_２Ｈ ＲＨａ－３２（２５５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（１１４ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、及びＮＭＭ（１２１μＬ、１．１０ｍｍｏｌ）の溶液を加え、撹拌を続けた。１８時間後、揮発分を真空濃縮し、残渣を脱イオン水（２０ｍＬ）に溶解した。得られた溶液を、４×Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ １５、１０ｋＤａ ＭＷＣＯスピンカラムに均一に分配し、遠心分離によって濃縮した（４０００ｒｐｍ、２０分間）。残留物を水で洗浄し（１０分間、４０００ｒｐｍで１０×３ｍＬ）、最終的な残留物を凍結乾燥させて、淡黄色固体（２７７ｍｇ、８４％、ＭＷ_Ｃａｌｃ＝５０，１５６Ｄａ）を得た。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．９８分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）： １．００－２．０３（ｍ，６９８Ｈ），２．２５－２．５７（ｍ，７０Ｈ），２．６１－２．８１（ｍ，６Ｈ），２．９８－３．２７（ｍ，１１５Ｈ），３．３６（ｓ，９０Ｈ），３．３７－３．９２（ｍ，３３６１Ｈ），３．９２－４．１６（ｍ，２５Ｈ），４．１６－４．５０（ｍ，４６Ｈ），５．０５－５．２０（ｍ，４Ｈ），７．１５－７．４１（ｍ，１０Ｈ），７．４５－７．５４（ｍ，４Ｈ），７．５６－７．６３（ｍ，４Ｈ），７．７３－８．１９（ｍ，３３Ｈ），８．７３－８．８６（ｍ，４Ｈ）；ｎ_ＦＡＰＩ＝４及びｎ_ｍＰＥＧ＝２８。

【0558】

１ｅ．８ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５（ε－ＮＨ_２）_２］、ＲＨａ－１６
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＦＡＰＩ－０４－ＮＣ（Ｏ）－ＰＥＧ_１１００－ＣＯ_２Ｈ ＲＨａ－４（６２７ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、ｍＰＥＧ_１０００－ＣＯ_２Ｈ ＲＨａ－１１（４５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨ_２）_８］ ＲＨａ－１５（２２５ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（３８７ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、及びＮＭＭ（３４０μＬ、３．１０ｍｍｏｌ）を使用して、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５（ε－ＮＨ_２）_２］ ＲＨａ－１６を黄色ガムとして合成した（２２０ｍｇ、２５ ％、ＭＷ_Ｃａｌｃ＝１１，２２５Ｄａ）ことを除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ ＲＨａ－１２について記載されるように合成した。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．０８分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ＋Ｄ_２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）： １．０３－１．９９（ｍ，１６５Ｈ），２．２０－２．３８（ｍ，１Ｈ），２．３８－２．５２（ｍ，２Ｈ），２．６３－２．７６（ｍ，１Ｈ），２．９２－３．２９（ｍ，３３Ｈ），３．３６（ｓ，１９Ｈ），３．３８－３．９２（ｍ，７２１Ｈ），３．９３－４．１１（ｍ，１８Ｈ），４．１１－４．４２（ｍ，９Ｈ），５．０７－５．２０（ｍ，１Ｈ），６．１４－６．２５（ｍ，１Ｈ），７．２０－７．４０（ｍ，１０Ｈ），７．４４－７．５４（ｍ，１Ｈ），７．５６－７．６４（ｍ，１Ｈ），７．７７－８．２１（ｍ，１８Ｈ）及び８．７５－８．８２（ｍ，１１Ｈ）。ｎ_ＦＡＰＩ＝１及びｎ_ｍＰＥＧ＝５。

【0559】

１ｅ．９ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］、ＲＨａ－１７
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５（ε－ＮＨ_２）_２］ ＲＨａ－１６を真空濃縮し、脱イオン水（２４ｍＬ）に溶解し、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ １５遠心分離３ｋＤａ ＭＷＣＯスピンカラム（４０００ｒｐｍ、３０分間）を使用してろ過した。残留物を脱イオン水で洗浄し（１サイクル当たり１５分間、４０００ｒｐｍで１０×１５ｍＬ）、凍結乾燥させて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］ ＲＨａ－１７を黄色ガムとして得た（６７０ｍｇ、６４％、ＭＷ_Ｃａｌｃ＝１３，４５７Ｄａ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．０８分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ＋Ｄ_２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）： ０．８２－２．０５（ｍ，１７０Ｈ），２．２２－２．５４（ｍ，９Ｈ），２．６４－２．７７（ｍ，４Ｈ），３．０１－３．２９（ｍ，３４Ｈ），３．３６（ｓ，１８Ｈ），３．３８－３．８２（ｍ，７６４Ｈ），３．８２－４．１０（ｍ，１８Ｈ），４．１０－４．５２（ｍ，１９Ｈ），５．０７－５．１９（ｍ，２Ｈ），７．１５－７．４２（ｍ，１０Ｈ），７．４２－７．７０（ｍ，５Ｈ），７．８１－８．１２（ｍ，８Ｈ）及び８．７２－８．８７（ｍ，３Ｈ）。ｎ_ＦＡＰＩ＝３及びｎ_ｍＰＥＧ＝５。

【0560】

１ｅ．１０ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_７．４（ε－ＮＨ_２）_０．６］、ＲＨａ－１８
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中のＦＡＰＩ－０４－ＮＣ（Ｏ）－ＰＥＧ_１１００－ＣＯ_２Ｈ ＲＨａ－４（７７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＰｙＢＯＰ（２３ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を５分間撹拌してから、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨ_２）_８］ ＲＨａ－１５（１３ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（２１μＬ、０．１９ｍｍｏｌ）を加えた。１８時間後、揮発分を真空除去し、残渣をＳＥＣにより精製した（静止相＝Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０、移動相＝ＭｅＣＮ、ｈ＝３０ｃｍ、ｄｉａ＝２．５ｍｍ、滴下速度＝約１滴／秒、分画サイズ＝４００滴、分画をＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法１）により分析した）。精製生成物を含有する画分をプールし、真空濃縮した。残渣を脱イオン水に溶解し、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクシリンジフィルタ）、凍結乾燥させて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_７．４（ε－ＮＨ_２）_０．６］ ＲＨａ－１８（２０ｍｇ）を得た。不純物画分を別々にプールし、上記のように（移動相＝ＭｅＯＨを除いて）ＳＥＣに再供給して、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_７．４（ε－ＮＨ_２）_０．６］ ＲＨａ－１８をグミ固体として得た（４７ｍｇ、合計収率＝６７ｍｇ、９８％、ＭＷ_Ｃａｌｃ＝１５，２６５Ｄａ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．６２分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ＋Ｄ_２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）： １．１５－１．９４（ｍ，１７１Ｈ），１．９７－２．２１（ｍ，１４Ｈ），２．３６－２．７４（ｍ，７２Ｈ），２．７４－３．２７（ｍ，３９Ｈ），３．３５－３．９２（ｍ，８１３Ｈ），３．９１－４．７２（ｍ，５８Ｈ），５．０５－５．２９（ｍ，５Ｈ），６．１６－６．２２（ｍ，１Ｈ），７．２０－７．３８（ｍ，１０Ｈ），７．４１－７．５３（ｍ，７Ｈ），７．５３－７．６４（ｍ，７Ｈ），７．８９－８．０６（ｍ，１５Ｈ）及び８．７０－８．８３（ｍ，７．４Ｈ）。ｎ_ＦＡＰＩ＝７．４。

【0561】

１ｅ．１１ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］、ＲＨａ－１９
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］ ＲＨａ－１３（８３ｍｇ、１．６μｍｏｌ）のジクロロメタン（２．５ｍＬ）溶液に、室温でＴＦＡ（１．５ｍＬ）を加えた。反応混合物を１８時間撹拌し、真空濃縮してＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］ ＲＨａ－１９を得、これを更に精製せずに使用した。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．６１分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）： １．２１－２．１８（ｍ，３４８Ｈ），２．２８－２．５４（ｍ，３９Ｈ），３．０３－３．３８（ｍ，８５Ｈ），３．３６（ｓ，６４Ｈ），３．４０－４．１５（ｍ，２１１８Ｈ），４．１５－４．５１（ｍ，７９Ｈ），７．１３－７．４２（ｍ，１０Ｈ），７．４８－７．７３（ｍ，１９Ｈ），７．９０－８．１１（ｍ，２１Ｈ）及び８．６７－８．８８（ｍ，１０Ｈ）。

【0562】

１ｅ．１２ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ ＲＨａ－２０
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ ＲＨａ－１２（８０ｍｇ、１．７μｍｏｌ）を使用して、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］ ＲＨａ－１９について記載した手順に従って調製し、更に精製することなく使用した。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．７４分。

【0563】

１ｅ．１３ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］ ＲＨａ－２３
ＴＦＡ：ジクロロメタン（１．８ｍＬ、１：２ｖ／ｖ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］ ＲＨａ－１７（６０ｍｇ、４．５μｍｏｌ）の溶液を室温で２０時間撹拌し、反応混合物を真空濃縮した。残渣を水（約５ｍＬ）に溶解し、凍結乾燥させて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］ ＲＨａ－２３を黄色ガム（定量的）として得た。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．５２分。

【0564】

１ｆ．ＤＵＰＡ標的中間体の合成
１ｆ．１ ＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３－ＮＨＳ ｅｓｔｅｒ、化合物３９
ＭｅＣＮ（３ｍＬ）中のＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３－ＯＨ（２４８ｍｇ、０．５０７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ’－ジスクシンイミジルカーボネート（２００ｍｇ、０．７７８ｍｍｏｌ）及びピリジン（２５０μＬ、３．２１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を減圧濃縮し、溶出液として１：４～１：１ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物である化合物３９を白色固体として得た（２２３ｍｇ、７５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）： １．４３（２つの重複する一重項、１８Ｈ）、１．４７（ｓ，９Ｈ），１．５８－２．１８（ｍ，４Ｈ），２．２０－２．４４（ｍ，３Ｈ），２．５２－２．６９（ｍ，２Ｈ），２．７２－３．１０（ｍ，４Ｈ），４．３４（ｍ，１Ｈ），４．５４（ｍ，１Ｈ），５．２２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．５３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）。

【0565】

１ｆ．２ ＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ_２Ｈ、化合物４０
ＮＨ_２ＰＥＧ_２４ＣＯ_２Ｈ（１９３ｍｇ、０．１７０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液に、ＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）－ＮＨＳエステル化合物３９（１００ｍｇ、０．１７０ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（２０μＬ、０．１８７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を減圧濃縮し、分取ＨＰＬＣ（２０～９０％ＭｅＣＮ、Ｒ_ｔ＝３３分）を使用して精製した。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）： １．３７－１．４５（ｍ，２７Ｈ），１．７５－２．１１（ｍ，５Ｈ），２．２７（ｍ，４Ｈ），２．５７（ｍ，２Ｈ），３．３２－３．８４（ｍ，１０３Ｈ），４．２６（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝５．４９分、ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１６１７．５［Ｍ］^＋；Ｃ_７４Ｈ_１４１Ｎ_３Ｏ_３４［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１６１６．９。

【0566】

１ｆ．３ ＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３－ＮＨＰＥＧ_２４－ＮＨＳエステル、化合物４１
ＤＣＭ（３ｍＬ）中のＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ_２Ｈ、化合物４０（１１０ｍｇ、０．０５３８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＣ（１１ｍｇ、０．０５３８ｍｍｏｌ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（６ｍｇ、０．０５３８ｍｍｏｌ）を加え、反応をＬＣＭＳによって監視した。出発材料を消費すると、反応物を減圧濃縮した。粗残渣をＭｅＣＮ（約１～２ｍＬ）に懸濁し、０．４５μｍフィルタでろ過し、透明溶液を減圧濃縮し、更に精製せずに化合物４１の粗残渣を使用した。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝５．６６分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１７３６［Ｍ］^＋；Ｃ_７８Ｈ_１４４Ｎ_４ＮａＯ_３６［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１７３５．９５。

【0567】

１ｆ．４ ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３）（ ε－ＮＨＦｍｏｃ）］、化合物４２
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３－ＮＨＰＥＧ_２４－ＮＨＳエステル化合物４１（１１６ｍｇ、０．０６７６ｍｍｏｌ）及びＬｙｓ－α－ＮＨ_２．ＴＦＡ－ε－ＮＨＦｍｏｃ（３０ｍｇ、０．０６７６ｍｍｏｌ）の混合物に、トリエチルアミン（９μＬ、０．２０３ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液は徐々に透明になり、一晩室温で撹拌された。ＬＣＭＳ分析は、生成物の形成を示し、反応物を減圧濃縮し、分取ＨＰＬＣ（２０～９０％ＭｅＣＮ、Ｒ_ｔ＝３７分）により精製した。表題化合物である化合物４２を無色油として収集した（２３ｍｇ、１７％）。ＬＣＭＳ（親水法、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝６．０９。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１９８９［Ｍ］^＋；Ｃ_９５Ｈ_１６３Ｎ_５ＮａＯ_３７［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１９８９．０９。

【0568】

１ｆ．５ ＤＯＴＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_４－ｐ－ＢｎＮＨ－Ｇｌｕ－ＯＨ、化合物４３
ＤＯＴＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_４－ｐ－ＢｎＮＨ_２．ＴＦＡ（５０ｍｇ、０．０５８９ｍｍｏｌ）及びグルタル酸無水物（８ｍｇ、０．０７０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、ＮＭＭ（１０μＬ、０．０８８４ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。この反応をＬＣＭＳによって監視し、出発材料の完全な消費時に、減圧濃縮した。粗残渣をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）に取り込み、ｐＨ３リン酸緩衝液（３×５ｍＬ）、ブライン（３ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮して、化合物４３を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）： １．３９－１．５２（ｍ，３６Ｈ），１．７９－３．５２（ｍ，３６Ｈ），６．９５（ｍ，２Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．３５Ｈｚ，２Ｈ）。

【0569】

１ｆ．６ ＤＯＴＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_４－ＢｎＮＨ－Ｇｌｕ－ＮＨＳエステル、化合物４４
ＤＣＭ（２ｍＬ）中のＤＯＴＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_４－ｐ－ＢｎＮＨ－Ｇｌｕ－ＯＨ、化合物４３（３０ｍｇ、０．０３５４ｍｍｏｌ）の化合物に、ＤＣＣ（７ｍｇ、０．０３５４）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（４ｍｇ、０．０３５４ｍｇ）を加え、室温で一晩撹拌した。この反応を、出発材料の消費及び生成物の形成についてＬＣＭＳによって監視した。反応が完了したとみなされると、反応物を減圧濃縮し、少量のＭｅＣＮ（約１～２ｍＬ）に懸濁し、０．４５μｍのアクロディスクフィルタでろ過し、透明溶液を減圧濃縮した。残渣を、更に精製することなく、次のステップで直接使用した。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ４０～６５、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝５．２９。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）９４４［Ｍ］^＋；Ｃ_４８Ｈ_７７Ｎ_６Ｏ_１３［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝９４４．６。

【0570】

１ｆ．７ ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３）（ε－ＧｌｕＮＨ－ｐ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ（ＯｔＢｕ）_４）］、化合物４５
Ｌｙｓ［（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３）（ε－ＮＨＦｍｏｃ）］化合物４２（３０ｍｇ、１７．６μｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に、ピペリジン（１ｍＬ）を加え、反応物を室温で撹拌した。２時間後、揮発分を真空濃縮し、粗材料Ｌｙｓ［（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３）（ε－ＮＨ_２）］を４℃で必要とされるまで保存した。

【0571】

Ｌｙｓ［（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_３）（ε－ＮＨ_２）］（２６ｍｇ、１５．６μｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、ＤＯＴＡ（Ｏ－ｔＢｕ）_４－ｐ－Ｂｎ－ＮＨ－Ｇｌｕ－ＮＨＳ化合物４４（１４ｍｇ、１５．６μｍｏｌ）及びＮＭＭ（５μＬ、４６．８μｍｏｌ）を加えた。２時間後、反応物をＬＣＭＳにより確認し、出発材料の消費を示し、反応物を減圧濃縮し、分取ＨＰＬＣ（５０～６５％ＭｅＣＮ、Ｒ_ｔ＝４９分）を使用して精製した。表題化合物である化合物４５を無色油として単離した（４ｍｇ、９％）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ４０～６５、ＴＦＡ緩衝液）Ｒ_ｔ＝４．４０。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）２５７５［Ｍ］^＋；Ｃ_１２４Ｈ_２２５Ｎ_１０Ｏ_４５［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝２５７５．６。

【0572】

１ｆ．８ ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－５－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－１，５－ジオキソペンタン－２－イル）カルバモイル）グルタメート、化合物４６
アセトニトリル（５ｍＬ）中の５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－４－（３－（１，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１，５－ジオキソペンタン－２－イル）ウレイド）－５－オキソペンタン酸（Ａｍａｄｉｓ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ピリジン（８０μＬ、０．４５ｍｍｏｌ）中のＮ，Ｎ－ジスクシンイミジルカーボネート（７９ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物を周囲温度で１５時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン１：１）によって監視した。揮発分を真空除去し、粗混合物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、勾配０～６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、化合物４６（８５ｍｇ、７１％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）： １．３０－１．６２（３ ｘ ｂｒ ｓ，２７Ｈ）；１．６４－１．９４（ｍ，４Ｈ）；１．９７－２．２２（ｍ，２Ｈ）；２．２５－２．５２（ｍ，３Ｈ）；２．５５－２．７４（ｍ，２Ｈ）；２．７７－３．１４（ｍ，４Ｈ）；４．２６－４．４４（ｍ，１Ｈ）；４．４８－４．６７（ｍ，１Ｈ）；５．０８－５．８５（２ ｘ ｂｒ ｓ，２Ｈ）。

【0573】

１ｆ．９ トリ－ｔｅｒｔ－ブチル（１８Ｓ，２２Ｓ）－２，２－ジメチル－４，１５，２０－トリオキソ－３，８，１１－トリオキサ－５，１４，１９，２１－テトラアザートテトラコサン－１８，２２，２４－トリカルボキシレート、化合物４７
ジクロロメタン（５ｍＬ）中の化合物４６（８５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（５４ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（２４μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。揮発分を真空除去し、粗混合物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、勾配０～６０％アセトン／ヘキサン）により精製して、化合物４７（９８ｍｇ、２ステップで６７％）を無色の粘性油として得た。^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）： １．１４－１．２０（ｍ，４Ｈ）；１．４２－１．５１（ｍ，３２Ｈ）；１．７６－２．３８（ｍ，８Ｈ）；２．５５－２．８１（ｍ，８Ｈ）；２．９３－３．０９（ｍ，１Ｈ）；３．２４－３．３５（ｍ，２Ｈ）；３．６３－３．７４（ｍ，１Ｈ）；３．８２－３．９４（ｍ，１Ｈ）；４．３０－４．５０（ｍ，２Ｈ）；６．１４－６．３４（ｍ，２Ｈ）；９．２２－９．２８（ｍ，１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法 ２０～９０、１５分、ギ酸）Ｒ_ｔ＝９．５２分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）７１９［Ｍ＋１］^＋；Ｃ_３４Ｈ_６２Ｎ_４Ｏ_１２［Ｍ］^＋に対するｍ／ｚ計算値：７１８．４４。

【0574】

１ ｆ．１０ （１３Ｓ，１７Ｓ）－１－アミノ－１０，１５－ジオキソ－３，６－ジオキサ－９，１４，１６－トリアザノナデカン－１３，１７，１９－トリカルボン酸、化合物４８
ジクロロメタン（３ｍＬ）中のトリ－ｔｅｒｔ－ブチル（１８Ｓ，２２Ｓ）－２，２－ジメチル－４，１５，２０－トリオキソ－３，８，１１－トリオキサ－５，１４，１９，２１－テトラアザトラコサン－１８，２２，２４－トリカルボキシレート（９０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を加えた。反応混合物を周囲温度で４時間撹拌してから、揮発分を真空除去した。残渣に脱イオン水（５ｍＬ）を加え、得られた溶液をろ過し（０．４５μｍのアクロディスクシリンジフィルタ）、ろ液を凍結乾燥させて、化合物４８（７１ｍｇ、定量的）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： １．７８－１．９３（ｍ，２Ｈ）；２．００－２．１３（ｍ，２Ｈ）；２．２５－２．３０（ｍ，２Ｈ）；２．３７－２．４４（ｍ，２Ｈ）；３．０６－３．１１（ｍ，２Ｈ）；３．２５－３．２９（ｍ，２Ｈ）；３．４９－３．５３（ｍ，２Ｈ）；３．５９（ｓ，４Ｈ）；３．６０－３．６６（ｍ，２Ｈ）；４．０９（ｄｄ，Ｊ＝６Ｈｚ及び９Ｈｚ，１Ｈ）；４．１６（ｄｄ，Ｊ＝６Ｈｚ及び９Ｈｚ，１Ｈ）。

【0575】

１ｆ．１１ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ（ＯｔＢｕ）_３）_８］、Ｇ３、化合物３６
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４－ＮＨ_２）_８］、化合物１１６（４４ｍｇ、３．６８μｍｏｌ）及びＤＵＰＡ（ＯｔＢｕ）_３ＯＨ（１７ｍｇ、３５．３μｍｏｌ）を使用して、一般手順Ｄに従って調製した。反応物を減圧下にて濃縮し、ＳＥＣ（４００滴／チューブ、ＭｅＯＨ ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０、３５滴／分）により精製する。画分をＴＬＣ分析（５％ＢａＣｌ_２溶液、続いてヨウ素染色、暗褐色斑）により確認し、ＨＰＬＣにより確認し、生成物を含有するものを合わせ、減圧濃縮した。表題化合物を、非常に薄い褐色のフィルムとして得た（４７ｍｇ、８１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： ０．７６－１．９２（ｍ，４０２Ｈ）１．９９－２．１６（ｍ，１４Ｈ），２．２３－２．３９（ｍ，２６Ｈ），２．４４（ｍ，１６Ｈ），３．０２－３．２６（ｍ，３２Ｈ），３．３４－３．４１（ｍ，２１Ｈ），４．３４－４．３８（ｍ，８６１Ｈ），６．２０（ｓ，１Ｈ），７．２０－７．３９（ｍ，１０Ｈ）。

【0576】

１ｆ．１２ ＤＯＴＡ（ＯｔＢｕ）_４ＧＡ－ＮＨＳエステル、ＲＬ－２０
ジクロロメタン（５ｍＬ）中のＤＯＴＡＧＡ－テトラ（ｔｅｒｔ－ブチルエステル）ＲＬ－１９（３００ｍｇ、０．４２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＣ（８８ｍｇ、０．４２８ｍｍｏｌ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（４９ｍｇ、０．４２８ｍｍｏｌ）を加え、続いて得られた反応物を室温で一晩撹拌した。反応物をＮ_２流下で濃縮し、少量のＭｅＣＮ（約２ｍＬ）に取り込み、ろ過した（０．４５μｍアクロディスクシリンジフィルタ）。ろ液を真空濃縮し、ＤＯＴＡ（ＯｔＢｕ）_４ＧＡ－ＮＨＳエステルＲＬ－２０（３８０ｍｇ、定量的収率）を淡褐色泡沫として得、更に精製することなく使用した。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ４０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．７０分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）７９９［Ｍ］^＋；Ｃ_３９Ｈ_６７Ｎ_５Ｏ_１２［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値：７９９。

【0577】

１ｆ．１３ ＤＯＴＡ（ＯｔＢｕ）_４ＧＡ－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＯＨ、ＲＬ－２１
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＤＯＴＡ（ＯｔＢｕ）_４ＧＡ－ＮＨＳエステルＲＬ－２０（１００ｍｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）の溶液に、アミノ－ＰＥＧ_２４－酸（１６３ｍｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（４７μＬ、０．４２９ｍｍｏｌ）を加え、続いて生じる反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物を減圧濃縮し、分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法２０～９０，ＴＦＡ，Ｒ_ｔ＝２８分）を用いて精製し、表題化合物ＲＬ－２１を無色油状物として得た（４７ｍｇ）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．２７－１．９０（ｍ，３７Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝６．０１，２Ｈ），２．７２（ｍ，４Ｈ），２．９４－２．６２（ｍ，１２０Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ４０～９０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．２０分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１８３０［Ｍ］^＋；Ｃ_８６Ｈ_１６５Ｎ_５Ｏ_３５［Ｍ＋Ｈ^＋］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１８３０。

【0578】

実施例２．標的デンドリマーコンジュゲート
２ａ ＨＥＲ－２ナノボディコンジュゲート
２ａ．１ナノボディの配列情報
ナノボディ２Ｄ３配列化合物１１８（配列番号１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ

【0579】

ナノボディ２Ｄ３ Ｎ末端タグ、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位、Ｃ末端アジド（「Ｎ末端タグ－ナノボディ－Ｎ３」）（配列番号５）
ＧＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＥＮＬＹＦＱＧＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ＃

【0580】

ナノボディ２Ｄ３、Ｃ末端タグ、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位、アジド（「ナノボディ－Ｎ３－Ｃ末端タグ」）（配列番号２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＷＳＧＴＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＮＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＷＲＤＡＧＴＴＷＦＥＫＳＧＳＡＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ＃ＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ
＃＝非天然アミノ酸。

【0581】

２ａ．２ ナノボディ－Ｎ３発現プラスミド
抗ＨＥＲ２ナノボディクローン２Ｄ３のコーディング配列（ＵＳ２０１１／００２８６９５（Ａ１）配列番号：１９８６）を、標準的な分子生物学的手法を用いて、発現プラスミドｐＥＴ－Ｈｉｓ６－ＴＥＶ－１Ｂ（Ａｄｄｇｅｎｅ ｐｌａｓｍｉｄ ２９６５３）に挿入した。Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１２のコドン最適化ＤＮＡ配列を合成し、プラスミドｐＥＴ－Ｈｉｓ６－ＴＥＶ－１Ｂにクローン化した。

【0582】

組換えタンパク質に非天然アミノ酸を取り込むために、ナノボディのコーディング配列の最後の位置にａｍｂｅｒの終止コドン（ＴＡＧ）をインフレームで挿入し、その後、翻訳を終了させるためにｏｃｈｒｅ（ＴＡＡ）又はｏｐａｌ（ＴＧＡ）の終止コドンを挿入した。Ｃ末端にｈｉｓ６タグを使用する場合は、ナノボディコーディング配列の最後の位置にａｍｂｅｒ終止コドン（ＴＡＧ）をインフレームで挿入し、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位及び６ｈｉｓタグをコードし、翻訳終了のためのｏｃｈｒｅ（ＴＡＡ）又はｏｐａｌ（ＴＧＡ）の終止コドンが続く配列を、この配列に付加した。

【0583】

２ａ．３ ナノボディ－Ｎ３の発現及び精製
抗ＨＥＲ２ナノボディ２Ｄ３の発現は、ナノボディ発現プラスミド及び直交ペア発現プラスミドｐＥＶＯＬ－ｐＡｃＦＲＳ．２．ｔ１（Ａｍｉｒａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（２０１５），３３（１２）で形質転換したＥ．ｃｏｌｉ株Ｂ９５（ＤＥ３）（Ｍｕｋａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１５），５，９６９９）で行った。細胞は、３７℃のバッフル付き振とうフラスコに入れたＴｅｒｒｉｆｉｃブロス（２５ｇ／Ｌトリプトン、３０ｇ／Ｌ酵母、及び５ｇ／Ｌグリセロール、０．０１７Ｍ ＫＨ_２ＰＯ_４、０．０７２ＭＫ_２ＨＰＯ_４ 、５０μｇ／ｍＬの硫酸カナマイシン、３０μｇ／ｍＬクロラムフェニコール）で、ＯＤ_６０００．７～１．０の細胞密度に達するまで培養した。組換えタンパク質の発現は、１．５ｍＭ ＩＰＴＧ及び０．０５％ｗ／ｖ Ｌ－（＋）－アラビノースを加え、１．５ｍＭ ｐ－アジド－フェニルアラニンを加えることにより誘導し、２５℃で２０時間進行させた。菌体は遠心分離により採取し、高圧ホモジナイズ後、プロテアーゼ阻害剤カクテル、リゾチームを加え、ＤＮＡｓｅ処理を施して細胞溶解液を生成した。不溶物は、リフォールディング緩衝液（６Ｍ グアニジンＨＣｌ、５０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ イミダゾール、ｐＨ８）に溶解することができる。高速遠心分離による清澄化と０．４５μＭの膜フィルタでのろ過の後、ニッケル荷電ニトリロ三酢酸－アガロースを用いた固定化金属アフィニティクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）により、ｈｉｓ６タグ付きナノボディを精製した。オンカラムリフォールディングは、最初に結合したタンパク質を３ＭグアニジンＨＣｌ、５０ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、ｐＨ８のカラムボリュームで洗浄し、続いて５０ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、ｐＨ８のカラムボリュームを２回行うことにより達成した。結合したタンパク質は、２カラムボリュームの５０ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２５０ｍＭイミダゾール、ｐＨ８で溶出した。ＩＭＡＣ後、－ナノボディ－Ｎ３をＨｉＴｒａｐ Ｑ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ１７１１５３０１）を用いた陰イオン交換クロマトグラフィーにより更に精製した。結合ステップ及び洗浄ステップは、トリス緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ８）を用いて行い、溶出は１Ｍ ＮａＣｌ緩衝液（１Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭトリス、ｐＨ８）の０％～５０％のグラジエントを用いて行った。得られた関連するナノボディ画分は、Ａｍｉｃｏｎ １０ｋ ＭＷＣＯフィルタユニット（Ｍｅｒｃｋ、カタログＵＦＣ９０１００８）を用いて、２０ｍＭトリス、ｐＨ８に緩衝交換した。

【0584】

２ａ．４ デンドリマーへのナノボディ－Ｎ３－Ｃ末端タグのコンジュゲーション
バイオ直交クリック化学を使用して、ナノボディ－Ｎ３－Ｃ末端タグをデンドリマー化合物１２８～１３２、ＳＲＳ－４－Ｍａｌ及びＨＨ－２にコンジュゲートし、リンカーＤＢＣＯ－Ｇｌｕ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_３－ＴＣＯ（化合物５１）を使用したことを除いて、化合物８３及び８４について記載した手順に従って化合物８５、８６、８７、８９、９１、９２、９３、９４、９６、９７、ＳＲＳ－２０及びＳＲＳ－２２を生成した。

【0585】

化合物８５～９７、１２３～１２７、ＳＲＳ－２０及びＳＲＳ－２２（図２４）についてゲルを泳動させたところ、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲートの適切なＭＷにバンドが見られた。各ナノボディ－デンドリマーコンジュゲートの純度は、非還元性ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）を用いて確認した。４～１５％ポリアクリルアミドゲル（Ｂｉｏ－ｒａｄ、カタログ４５６１０８６）上で電気泳動分離させた後、Ｔｙｐｈｏｏｎ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて画像化したときに、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲートは、デンドリマーのサイズにナノボディの追加質量を加えたサイズにほぼ対応する蛍光バンドとして現れる。その後、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ（ＣＢＢ）で染色して、同じ場所にナノボディが存在していることが判明した。ＣＢＢにより他のバンドが検出されることはなく、これは、未反応のナノボディが存在せず、調製物の純度が高いことがわかった。

【0586】

２ａ．４．１ ナノボディ－Ｎ_３／ＤＢＣＯ－Ｇｌｕ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯＮＨＰＥＧ_３－ＴＣＯ／（ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨＤＦＯ）_２（α－ＮＨＧｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_６）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、化合物８３
ＤＢＣＯ－Ｇｌｕ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_３－ＴＣＯ化合物５１（ＤＭＳＯ：ＰＢＳ緩衝液（２０：８０）中１ｍｇ／ｍＬ溶液１６７μＬ、１当量）の溶液を（ＭｅＴｚＰｈ）ＰＥＧ_４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨＤＦＯ）_２（α－ＮＨＧｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_６）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、化合物７３（ＰＢＳ中８ｍｇ／ｍＬ溶液２５０μＬ、１当量）の溶液に加え、混合物を室温で３０分間静置した。反応混合物をＰＢＳ緩衝液で５００μＬに希釈し、得られた溶液をＨＰＬＣによって分析したところ、反応混合物中にリンカーが残っていないことが示された。この反応混合物（１７７μＬ；１当量）の一部分をナノボディ－Ｎ_３（「ナノボディ－Ｎ３－Ｃ－末端タグ」）（９．２ｍｇ／ｍＬの溶液６２．５μＬ／トリス緩衝液；１当量）の溶液に加え、続いて得られる反応混合物を室温で７時間、次いで４℃で一晩放置した。得られたナノボディ－デンドリマーコンジュゲートを、ＨｉＴｒａｐ Ｑ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ１７１１５３０１）を用いて未反応のデンドリマーを除去するための陰イオン交換クロマトグラフィーを用いて精製した。結合ステップ及び洗浄ステップは、トリス緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ８）を用いて行い、溶出は１Ｍ ＮａＣｌ緩衝液（１Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭトリス、ｐＨ８）の０％～５０％のグラジエントを用いて行った。次いで、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、未反応のナノボディを除去した。分離は、カラム緩衝液（５０ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８）で平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １０／３００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ１７５１７４０１）を用いて達成した。次いで、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲートを濃縮し、放射性標識のために１０ｋ ＭＷＣＯ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心フィルタを用いて１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ８に緩衝液交換した。

【0587】

２ａ．４．２ ＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_１（α－ＮＨＤＦＯ）_２（α－ＮＨＧｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_５）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］、Ｇ３、化合物８４
ＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）_１（α－ＮＨＤＦＯ）_２（α－ＮＨＧｌｕ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_５）（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１０００）_８］、化合物７４（２５０μＬの８ｍｇ／ｍＬ ＰＢＳ溶液、１当量）の溶液に、ＤＢＣＯ－Ｇｌｕ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_３－ＴＣＯ（ＤＭＳＯ：ＰＢＳ緩衝液（２０：８０）中１ｍｇ／ｍＬ溶液２０２μＬ、１当量）を加え、混合物を室温で３０分間静置した。

【0588】

反応混合物をＰＢＳ緩衝液で５００μＬまで希釈し、得られた溶液をＨＰＬＣにより分析したところ、反応混合物中にはリンカーが残存していないことが示された。この反応混合物（１７５μＬ；１当量）の一部分をナノボディ－Ｎ_３（「ナノボディ－Ｎ３－Ｃ－末端タグ」）（９．２ｍｇ／ｍＬの溶液６２．５μＬ／トリス緩衝液；１当量）の溶液に加え、続いて得られる反応混合物を室温で７時間、次いで４℃で一晩放置した。得られたナノボディ－デンドリマーコンジュゲートを、ＨｉＴｒａｐ Ｑ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ１７１１５３０１）を用いて未反応のデンドリマーを除去するための陰イオン交換クロマトグラフィーを用いて精製した。結合ステップ及び洗浄ステップは、トリス緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ８）を用いて行い、溶出は１Ｍ ＮａＣｌ緩衝液（１Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭトリス、ｐＨ８）の０％～５０％のグラジエントを用いて行った。次いで、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、未反応のナノボディを除去した。分離は、カラム緩衝液（５０ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８）で平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １０／３００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ１７５１７４０１）を用いて達成した。次いで、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲートを濃縮し、放射性標識のために１０ｋ ＭＷＣＯ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心フィルタを用いて１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ８に緩衝液交換した。

【0589】

２ａ．４．３ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_２）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_４］、Ｇ２、化合物８５、及びＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_２（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２））_１（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１０００）_４］、Ｇ２、化合物８６
以下を除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_１）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_４］、Ｇ２、化合物２５を用いて、一般手順Ｇに従って調製した。
ステップ１：ＴＣＯリンカー溶液５１は、ニートＤＭＳＯで調製した。
ステップ２：デンドリマーをｐＨ８のトリス緩衝液に溶解し、ＴＣＯリンカーとデンドリマーが完全に反応したときに（ＵＰＬＣ又はＬＣＭＳ）、反応混合物をＤＭＳＯの最終濃度が５％（ｖ／ｖ）以下になるようにトリス緩衝液で希釈し、遠心限外ろ過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ再生セルロース膜、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）により精製した。

【0590】

精製方法は、化合物８３及び８４の精製に使用した方法と同じであり、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲート化合物８５（２３２μｇ；ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８）中０．４５μｇ／μＬ；図１ａのレーン６及び７に示される）及びナノボディ－デンドリマーコンジュゲート化合物８６（６０μｇ；ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８）中０．３０μｇ／μＬ；図１ａのレーン９に示される）を得た。

【0591】

２ａ．４．４ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_６）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４１２）_８］、Ｇ３、化合物８７、）及びＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_２（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_５）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４１２）_８］、Ｇ３、化合物８８、以下を除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_６）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４１２）_８］、Ｇ３、化合物２６を使用して、一般手順Ｇに従って調製した。
ステップ１：ＴＣＯリンカー化合物５１の溶液は、ニートＤＭＳＯで調製した。
ステップ２：デンドリマーをｐＨ８のトリス緩衝液に溶解し、ＴＣＯリンカーとデンドリマーが完全に反応したときに（ＵＰＬＣ又はＬＣＭＳ）、反応混合物をＤＭＳＯの最終濃度が５％（ｖ／ｖ）以下になるようにトリス緩衝液で希釈し、遠心限外ろ過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ再生セルロース膜、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）により精製した。

【0592】

精製方法は、化合物８３及び８４の精製に使用した方法と同じであり、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲート化合物８７（１４０μｇ；ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８）中１．４８μｇ／μＬ；図１ｂのレーン６及び７に示される）及び化合物８８（純粋ではない；図１ｂのレーン８及び９に示される）を得た。

【0593】

２ａ．４．５ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_６）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］、Ｇ３、化合物８９、及びＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_２（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_５）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］、Ｇ３、化合物９０
以下を除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_６）（ ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_８］、Ｇ３、化合物２７を用いて、一般手順Ｇに従って調製した。
ステップ１：ＴＣＯリンカー（化合物５１）の溶液は、ニートＤＭＳＯで調製した。
ステップ２：デンドリマーをｐＨ８のトリス緩衝液に溶解し、ＴＣＯリンカーとデンドリマーが完全に反応したときに（ＵＰＬＣ又はＬＣＭＳ）、反応混合物をＤＭＳＯの最終濃度が５％（ｖ／ｖ）以下になるようにトリス緩衝液で希釈し、遠心限外ろ過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ再生セルロース膜、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）により精製した。

【0594】

精製方法は、化合物８３及び８４の精製に使用した方法と同じであり、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲート化合物８９（２４９μｇ；ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８）中２．６８μｇ／μＬ；図１ｃのレーン６及び７に示される）及び化合物９０（純粋ではない；図１ｃのレーン９及び１０に示される）を得た。

【0595】

２ａ．４．６ ＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_１４（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］、Ｇ４、化合物９１、及びＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（ａ－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_２（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_１３（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］、Ｇ４、化合物９２
以下を除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_１４（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］、Ｇ４、化合物２８を使用して、一般手順Ｇに従って調製した：
ステップ１：ＴＣＯリンカー（化合物５１）の溶液は、ニートＤＭＳＯで調製した。
ステップ２：デンドリマーをｐＨ８のトリス緩衝液に溶解し、ＴＣＯリンカーとデンドリマーが完全に反応したときに（ＵＰＬＣ又はＬＣＭＳ）、反応混合物をＤＭＳＯの最終濃度が５％（ｖ／ｖ）以下になるようにトリス緩衝液で希釈し、遠心限外ろ過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ再生セルロース膜、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）により精製した。

【0596】

精製方法は、化合物８３及び８４の精製に使用した方法と同じであり、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲート化合物９１；図１ｄのレーン１及び２に示される）（２０３μｇ；ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８）中の０．９７５μｇ／μＬ及び０．５５６μｇ／μＬ）、並びに化合物９２；図１ｄのレーン３に示される（１０１μｇ；ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８）中０．３４μｇ／μＬ）を得た。

【0597】

２ａ．４．７ ＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_３０（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］、Ｇ５、化合物９３、及びＢＨＡ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_２［α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ ε－ＮＨＤＦＯ）］_１（α－ＮＨ_２）_２９（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］、Ｇ５、化合物９４
以下を除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_３０）（ ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］、Ｇ５、化合物２９を使用して、一般手順Ｇに従って調製した：
ステップ１：ＴＣＯリンカー化合物５１の溶液は、ニートＤＭＳＯで調製した。
ステップ２：デンドリマーをｐＨ８のトリス緩衝液に溶解し、ＴＣＯリンカーとデンドリマーが完全に反応したときに（ＵＰＬＣ又はＬＣＭＳ）、反応混合物をＤＭＳＯの最終濃度が５％（ｖ／ｖ）以下になるようにトリス緩衝液で希釈し、遠心限外ろ過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ再生セルロース膜、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）により精製した。

【0598】

精製方法は、化合物８３及び８４の精製に使用した方法と同じであり、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲート化合物９３；図１ｅのレーン５に示される）（３７０μｇ；ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８）中３．６６μｇ／μＬ）及び生成物化合物９４；図１ｅのレーン７に示される）（１７７μｇ；ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８）中１．７２μｇ／μＬ）を得た。

【0599】

２ａ．４．８ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_３）（ ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））_２）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_２］、Ｇ２、化合物９５、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_３）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））_１（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_３］、Ｇ２、化合物９６、及びＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_３）（ ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_４］、Ｇ２、化合物９７
以下を除いて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨＤＦＯ））_１（α－ＮＨ_２）_３）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＭｅＴｚ））_４］、Ｇ２デンドリマー、化合物２４を用いて、一般手順Ｇに従って調製した：
ステップ１：ＴＣＯリンカー化合物５１の溶液を水で調製した。
ステップ２：デンドリマーをＭＱ水に溶解した。

【0600】

精製方法は、化合物８３及び８４の精製に使用した方法を用いて行って、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲート化合物９７及び化合物９６を分離不可能な混合物として得た（ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８）中の最終濃度は２９４ｕｇ；図１ｆのレーン１に示される）。

【0601】

また、ＤＢＣＯ－Ｇｌｕ－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ－ＮＨＰＥＧ_３－ＴＣＯ化合物５１の溶液（ＭＱ水中１０ｍｇ／ｍＬの溶液５７μＬ、０．３２２μｍｏｌ）をナノボディ－Ｎ_３（「ナノボディ－Ｎ３－Ｃ末端タグ」）（２．５ｍｇ、９００μＬのトリス緩衝液中０．１６１μｍｏｌの溶液にｐＨ８で加えて調製した。この反応混合物を室温で２日間放置した後、反応混合物を、トリス緩衝液ｐＨ８を使用する遠心限外ろ過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ再生セルロース膜、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ；１０×４５０μＬ）によって精製した。この溶液に化合物２４の溶液（５００μＬ ＭＱ水中２３０．０μｇ；０．０２６ｕｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩放置した。精製方法は、化合物８３及び８４の精製に使用した方法と同様にして、ナノボディ－デンドリマー化合物９７、化合物９５及び化合物９６を分離不可能な混合物として得た（ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ８中の最終濃度１２４μｇ；図１ｇのレーン９及び１０に示される）。

【0602】

２ａ．４．９ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_８－ナノボディ）_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）_１（ε－ＮＨＤＦＯ）_１）_１（α－ＮＨ_２）_２）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_４］、Ｇ２、化合物９８
２．０ｍｇを１ｍＬ ＤＭＳＯ（１．０ｍＬ）に溶解することによって、ジブロモマレイミドリンカー化合物５７の溶液を調製した。ナノボディ（「ナノボディ－Ｎ３－Ｃ－末端タグ」）（化合物１１８）（１．０ｍｇ、０．０５８μｍｏｌ／トリス緩衝液７１５μＬ、ｐＨ８）の溶液に、ＴＣＥＰ（０．５Ｍ／ＰＢＳ、ｐＨ７）の溶液（２．３μＬ、１．１７４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を３７℃で１時間加熱後、ＤＭＳＯを加え（６７３μＬ）、その後リンカー化合物５７（９３．０μｇ、０．１１７μｍｍｏｌ）／ＤＭＳＯ溶液（４７．０μＬ）を加えた。１．５時間後、反応混合物を室温まで冷却して遠心分離し、沈殿物に化合物２５（１００μｇ、１７μＬ、１．７８ｍｇ／ＭＱ水３００μＬ）の溶液を加え、溶液を４℃で一晩放置した。化合物８３及び８４の精製に用いた方法と同様の方法で、化合物９８（２９μｇ；図１ｈのレーン２及び３に示される）を、溶液／トリス緩衝液、ｐＨ８（最終濃度＝１．７８ｍｇ／ｍＬ）として得た。

【0603】

２ａ．４．１０ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ナノボディ）_１（α－Ｌｙｓ（α－ＮＨＣｙ５）_１（ε－ＮＨＤＦＯ）_１）_１（α－ＮＨ_２）_２）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_４］、Ｇ２、化合物９９
ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－アルデヒド（コンジュ－プローブ）リンカー溶液（０．７ｍｇ、１．４６μｍｏｌ）／ＤＭＳＯ（５０μＬ）溶液を、ナノボディ（「ナノボディ－Ｎ３－Ｃ－」）（化合物１１８）の溶液（１．０７ｍｇ／ｍＬストック溶液／ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ６．５、９３１μＬ）に加え、その後ＮａＢＨ_３ＣＮ（０．０９ｍｇ、１．５μｍｏｌ）／水（１９μＬ）溶液を加えた。反応混合物を４℃まで冷却し、ＵＰＬＣ分析により反応をモニターした。１６時間後、反応混合物をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ６．５）で希釈して総量２．０ｍＬとし、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ６．５を用いた遠心限外ろ過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ再生セルロース膜、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ；１４×４５０μＬ）により精製した。ＵＰＬＣ：５－２０－３０ＭｅＣＮ％、１５分、０．０１％ＴＦＡ緩衝液を使用；ナノボディ（化合物１１８）Ｒｔ＝８．４６分、ｍ／ｚ１３８０２；生成物：９．９９分ｍ／ｚ１４２６３。ナノボディ－ＰＥＧ_３－ＴＣＯ溶液（５００μＬ ＰＢＳ ｐＨ６．５）に、Ｇ２デンドリマー化合物１７（１７９μｇ、０．０２０μｍｏｌ）／ＭＱ水（１５μＬ）溶液を加えた。４℃で一晩静置した後、反応混合物を、化合物８３及び８４の精製に用いた方法と同じ方法で精製し、化合物９９（１２μｇ；図１ｉ、レーン１に示される）を、溶液／トリス緩衝液、ｐＨ８として得た（最終濃度＝５７５μｇ／ｍＬ）。

【0604】

２ａ．４．１１ ［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ３－ナノボディ、ＳＲＳ－２０
ステップ１：［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ ＳＲＳ－２０ａの合成：［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－４－Ｍａｌ（８．８９ｍｇ；脱イオン水中１０ｍｇ／ｍＬ）］の溶液に、ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ化合物５１（１．０５ｍｇ；２当量；脱イオン水中１０ｍｇ／ｍＬ）を加え、室温で２時間放置した。過剰な過剰リンカーを、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタによって反応混合物から取り除き、４，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって濃縮した。残留物を、４０００ｒｐｍでの遠心分離によって脱イオン水（×５）で洗浄した。過剰のリンカーの除去を、ＬＣＭＳを使用した精製生成物の分析によって確認した（ＬＣＭＳ法３）。

【0605】

ステップ２：コンジュゲーション反応：［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ ＳＲＳ－２０ａ（９．４１ｍｇ、１０ｍｇ／ｍＬ、１当量）の脱イオン水溶液を、ナノボディ－Ｎ３（８．９１ｍｇ、１０ｍｇ／ｍＬのｐＨ８トリス緩衝液、２当量）の溶液に室温で加えた。１８時間後、ナノボディ－デンドリマー構築物を最初に、３０ｋＤａのＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタによって精製し、４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって濃縮した。残留物を、ｐＨ８のＴｒｉｓ緩衝液（×５）で、遠心分離により４０００ｒｐｍで洗浄した。次いで、得られた生成物をｎニッケル親和性カラムクロマトグラフィー、続いてＳＥＣによって精製し、［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ３－ナノボディＳＲＳ－２０（０．４２ｍｇ）を得た。精製生成物のＳＤＳ Ｐａｇｅゲル分析については、図２ａ（レーン６）を参照のこと。反応混合物。

【0606】

２ａ．４．１２ ［（ε－ＮＨＣＯ－ ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＤＯＴＡ）_７（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－（ＰＮ）ＮＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ３－ナノボディＳＲＳ－２２
ステップ１：［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＤＯＴＡ）_７（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－（ＰＮ）ＮＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ ＳＲＳ－２２ａの合成：［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＤＯＴＡ）_７（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－（ＰＮ）ＮＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＨＨ－２（１．５０ｍｇ；脱イオン水中１０ｍｇ／ｍＬ）］の溶液に、ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ化合物５１（０．２０ｍｇ；２当量；脱イオン水中１０ｍｇ／ｍＬ）を加え、室温で２時間放置した。過剰な過剰リンカーを、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタによって反応混合物から取り除き、４，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって濃縮した。残留物を、４０００ｒｐｍでの遠心分離によって脱イオン水（×５）で洗浄した。過剰のリンカーの除去を、ＬＣＭＳを使用した精製生成物の分析によって確認した（ＬＣＭＳ法 ２０～９０、８分、ＴＦＡ）。

【0607】

ステップ２：コンジュゲーション反応：［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＤＯＴＡ）_７（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－（ＰＮ）ＮＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ（１．５９ｍｇ、１０ｍｇ／ｍＬ、１当量）の脱イオン水溶液を、ナノボディ－Ｎ３（１．６４ｍｇ、１０ｍｇ／ｍＬのｐＨ８トリス緩衝液、２当量）の溶液に室温で加えた。１８時間後、反応混合物を最初に、３０ｋＤａのＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタによって精製し、４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって濃縮した。残留物を、ｐＨ８のＴｒｉｓ緩衝液（×５）で、遠心分離により４０００ｒｐｍで洗浄した。次いで、得られた生成物をニッケル親和性カラムクロマトグラフィー、続いてＳＥＣによって精製し、［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＤＯＴＡ）_７（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－（ＰＮ）ＮＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ３－ナノボディＳＲＳ－２２（０．６５ｍｇ）を得た。精製生成物のＳＤＳ Ｐａｇｅゲル分析については、図２３（レーン２）を参照のこと。

【0608】

２．４ａ．１２ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ）_１（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ））_１０（α－ＮＨ_２）_４）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］、Ｇ４、化合物ＳＲＳ－２－３０４
ステップ１：ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ（「ナノボディ－Ｎ_３－Ｃ末端タグ」を使用）化合物ＳＲＳ－２ａの調製：ＭＱ水（４６９μＬ）中のＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ、化合物５１（４．６９ｍｇ、２．６μｍｏｌ）の溶液を、ナノボディ－Ｎ_３（「ナノボディ－Ｎ_３－Ｃ末端タグ」）（ｐＨ８トリス緩衝液中５．８４ｍｇ／ｍＬ溶液３．５ｍＬ；１．３μｍｏｌ）に加えた。反応混合物を室温で１８時間放置した後、スピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）によって濃縮した。残留物を、２０ｍＭのｐＨ８トリス緩衝液（６ ×１５ｍＬ）で繰り返し洗浄し、最後に濃縮して、化合物ＳＲＳ－２ａ（１１．３ｍｇ／ｍＬ）を得た。ＵＰＬＣ－ＴｏＦ（方法２）：Ｒ_ｔ ＝４．７４分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１７２４２［Ｍ］^＋；ｍ／ｚ［Ｍ］^＋計算値：１７２４２

【0609】

ステップ２：ＭＱ水（４．０ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）_１（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ））_１０（α－ＮＨ_２）_４）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］、Ｇ４ 化合物ＳＲＳ－１（３６．０ｍｇ、１．０９μｍｏｌ）の溶液に、ＴＣＯ－ＰＥＧ_３ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－Ｇｌｕ－ＤＢＣＯ／Ｎ_３－ナノボディ（「ナノボディ－Ｎ_３－Ｃ末端タグ」を使用）化合物ＳＲＳ－２ａ（１．２当量、ｐＨ８トリス緩衝液中１１．３ｍｇ／ｍＬの溶液２．０ｍＬ）を加えた。得られた溶液を室温で１８時間放置し、その後、金属親和性クロマトグラフィー、続いてＳＥＣで精製して、化合物ＳＲＳ－２－３０４（３２．２８ｍｇ、６０％；ＳＤＳ－ゲルで確認、図示せず）を得た。Ｈｅｒ２＋細胞結合データについては、実施例７の表を参照のこと。

【0610】

２ａ．４ ナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３発現プラスミド
抗ＨＥＲ２ナノボディクローン２Ｄ３のコーディング配列（ＵＳ２０１１／００２８６９５（Ａ１）配列番号：１９８６）を、標準的な分子生物学的手法を用いて、発現プラスミドｐＥＴ－Ｈｉｓ６－ＴＥＶ－１Ｂ（Ａｄｄｇｅｎｅ ｐｌａｓｍｉｄ ２９６５３）に挿入した。Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１２のコドン最適化ＤＮＡ配列を合成し、プラスミドｐＥＴ－Ｈｉｓ６－ＴＥＶ－１Ｂにクローン化した。

【0611】

組換えタンパク質にＣ末端の非対システイン残基を取り込むために、スルファターゼペプチドモチーフ（ＬＣＴＰＳＲ）の一部としてのシステインコドン（ＴＧＣ）（Ｃａｒｒｉｃｏ ｅｔ．ａｌ，Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ，３，２００７，ｐ３２１－３２２）を、ナノボディコーディング配列の後にインフレームで挿入し、その後、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位をコードする配列、６ｈｉｓタグ、及び翻訳終了のためのｏｐａｌ（ＴＧＡ）停止コドンを挿入した。これらの追加のモチーフは、単にシステインコドンを超えて任意であることが理解されるであろう。

【0612】

２ａ．５ ナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３の発現及び精製
抗ＨＥＲ２ナノボディ２Ｄ３の発現は、ナノボディ発現プラスミドで形質転換したＥ．ｃｏｌｉ株ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で実行した。細胞は、３７℃のバッフル付き振とうフラスコに入れたＴｅｒｒｉｆｉｃブロス（２５ｇ／Ｌトリプトン、３０ｇ／Ｌ酵母、及び５ｇ／Ｌグリセロール、０．０１７Ｍ ＫＨ_２ＰＯ_４、０．０７２ＭＫ_２ＨＰＯ_４、５０μｇ／ｍＬ硫酸カナマイシン）で、ＯＤ_６０００．７～１．０の細胞密度に達するまで培養した。組換えタンパク質の発現は、１．５ｍＭ ＩＰＴＧを加えることにより誘導し、２５℃で２０時間進行させた。菌体は遠心分離により採取し、高圧ホモジナイズ後、プロテアーゼ阻害剤カクテル、リゾチームを加え、ＤＮＡｓｅ処理を施して細胞溶解液を生成した。溶解液を、リフォールディング緩衝液（６Ｍ グアニジンＨＣｌ、５０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ イミダゾール、ｐＨ８）中で一晩インキュベートした。高速遠心分離による清澄化と０．４５μＭの膜フィルタでのろ過の後、ニッケル荷電ニトリロ三酢酸－アガロースを用いた固定化金属アフィニティクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）により、ｈｉｓ６タグ付きナノボディを精製した。オンカラムリフォールディングは、最初に結合したタンパク質を６ＭグアニジンＨＣｌ、５０ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、ｐＨ８のカラムボリュームで洗浄し、その後、同じ緩衝液を使用するが、４Ｍ、３Ｍ、２Ｍ、１Ｍ、及び０．５ＭのグアニジンＨＣｌ濃度で洗浄することにより達成した。これに続き、２カラムボリュームの５０ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、ｐＨ８を加えた。リフォールディングしたタンパク質を、２カラムボリュームの５０ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２５０ｍＭイミダゾール、ｐＨ８で溶出した。ＩＭＡＣ後、ナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３をＨｉＴｒａｐ Ｑ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，カタログ１７１１５３０１）を用いた陰イオン交換クロマトグラフィーにより更に精製した。結合ステップ及び洗浄ステップは、トリス緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ８）を用いて行い、溶出は１Ｍ ＮａＣｌ緩衝液（１Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭトリス、ｐＨ８）の０％～５０％のグラジエントを用いて行った。得られた関連するナノボディ画分は、Ａｍｉｃｏｎ １０ｋ ＭＷＣＯフィルタユニット（Ｍｅｒｃｋ、カタログＵＦＣ９０１００８）を用いて、２０ｍＭトリス、ｐＨ８に緩衝交換した。注記：ナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３は、主に二量体化形態（－Ｓ－Ｓ－結合を介する）であり、コンジュゲーションの前に還元されなければならない）。

【0613】

２ａ．６ ナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３のデンドリマーへのコンジュゲーション
一般手順Ｋに記載の手順に従って、マレイミド／Ｃｙｓコンジュゲーション化学を使用して、ナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３をデンドリマーＳＲＳ－４－Ｍａｌ、ＲＰ－５、ＨＨ－２及びＳＲＳ－１にコンジュゲートして、化合物ＳＲＳ－１５～１７及び２１を生成した。

【0614】

コンジュゲートＳＲＳ－１５～１７及び２１についてゲルを泳動させたところ（図２３）、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲートの適切なＭＷにバンドが見られた。各ナノボディ－デンドリマーコンジュゲートの純度は、非還元性ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）を用いて確認した。４～１５％ポリアクリルアミドゲル（Ｂｉｏ－ｒａｄ、カタログ４５６１０８６）上で電気泳動分離させた後、Ｔｙｐｈｏｏｎ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて画像化したときに、ナノボディ－デンドリマーコンジュゲートは、デンドリマーのサイズにナノボディの追加質量を加えたサイズにほぼ対応する蛍光バンドとして現れる。その後、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ（ＣＢＢ）で染色して、同じ場所にナノボディが存在していることが判明した。ＣＢＢにより他のバンドが検出されることはなく、これは、未反応のナノボディが存在せず、調製物の純度が高いことがわかった。

【0615】

２ａ．６．１ ［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ_２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ／Ｃｙｓ－ナノボディ、ＳＲＳ－１５
ナノボディ－Ｃｙｓ／Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_３－ＴＣＯ ＳＲＳ－１４ （６．５０ｍｇ）及び［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ_２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＳＲＳ－４－Ｍａｌ（９．０ｍｇ）を使用して一般手順Ｋを用いてＳＲＳ－１５を合成して、［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－ＮＨ_２）_２．７５］［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－］_２ＭＡＬ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ／Ｃｙｓ－ナノボディＳＲＳ－１５（０．８０ｍｇ）を得た。反応混合物のＳＤＳ Ｐａｇｅゲル分析については、図２２（レーン２）を参照のこと。

【0616】

２ａ．６．２ ［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ）_８（α－ＮＨ_２）_７］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－（Ｍｅ）ＭＡＬ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）／ＴＣＯ－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ／Ｃｙｓ－ナノボディ、ＳＲＳ－１６
ナノボディ－Ｃｙｓ／Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_３－ＴＣＯ ＳＲＳ－１４（６．６６ｍｇ）及び［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ）_８（α－ＮＨ_２）_７］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－（Ｍｅ）ＭＡＬ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）ＲＰ－５（９．５ｍｇ）を使用して一般手順Ｋを用いてＳＲＳ－１６を合成して［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ）_８（α－ＮＨ_２）_７］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－ＣＯＮＨ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－（Ｍｅ）ＭＡＬ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－Ｂｎ－Ｔｚ（Ｍｅ）／ＴＣＯ－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ／Ｃｙｓ－ナノボディＳＲＳ－１６（０．８１ｍｇ）を得た。反応混合物のＳＤＳ Ｐａｇｅゲル分析については、図２２（レーン４）を参照のこと。

【0617】

２ａ．６．３ ［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＤＯＴＡ）_７（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－（ＰＮ）ＮＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ／Ｃｙｓ－Ｎｂ、ＳＲＳ－１７
ナノボディ－Ｃｙｓ／Ｍｅ（ＭＡＬ）－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_３－ＴＣＯ ＳＲＳ－１４（９．０ｍｇ）及び［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＤＯＴＡ）_７（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－（ＰＮ）ＮＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）ＨＨ－２（１４．２ｍｇ）を使用して一般手順Ｋを用いてＳＲＳ－１７を合成して、［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_１６（α－ＤＯＴＡ）_７（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨ_２）_８］［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］－（ＰＮ）ＮＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＮＨ－ＰＥＧ_４－（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ／Ｃｙｓ－ナノボディＳＲＳ－１７（３．２６ｍｇ）を得た。反応混合物のＳＤＳ Ｐａｇｅゲル分析については、図２２（レーン６）を参照のこと。

【0618】

２ａ．６．４ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ／Ｃｙｓ－ナノボディ）_１（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ））_１０（α－ＮＨ_２）_４）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６、ＳＲＳ－２１
ステップ１：ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ）_１（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ））_１０（α－ＮＨ_２）_４）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］ ＳＲＳ－２１ａの合成：ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）_１（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ））_１０（α－ＮＨ_２）_４）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］ ＳＲＳ－１（１３．０ｍｇ、ｐＨ６．８水中１０ｍｇ／ｍＬ）の溶液に、ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ ＳＲＳ－１２（２当量；１．４０ｍｇ；脱イオン水中１０ｍｇ／ｍＬ））を添加し、反応混合物を室温で２時間放置した。過剰なリンカーを、１０ｋＤａのＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を用いたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタによって反応混合物から取り除き、４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって濃縮した。残留物をｐＨ６．８の水（×５）で４０００ｒｐｍで遠心分離することによって洗浄した。

【0619】

ステップ２：ナノボディ－Ｃｙｓ二量体のナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３への還元：ナノボディ－Ｃｙｓ二量体（３．３３ｍｇ／ｍＬ、１０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ７．２；１当量）の溶液に、０．５Ｍ ＴＣＥＰ水溶液（１０当量）を加えた。反応混合物を３７℃で２時間インキュベートし、更に精製することなく後続ステップで使用した。

【0620】

ステップ３：コンジュゲーション反応：ｐＨ６．８水中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ）_１（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ））_１０（α－ＮＨ_２）_４）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］ ＳＲＳ－２１ａ（１３．６８ｍｇ；１０ｍｇ／ｍＬ；１当量）の溶液を、ナノボディ－Ｃｙｓ ＳＲＳ－１３（７．０ｍｇ；３．３３ｍｇ／ｍＬ、１０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ７．２；１．１当量）溶液に室温で加えた。１８時間後、反応混合物を最初に、３０ｋＤａのＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）再生セルロース膜を備えたＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心フィルタによって精製し、４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって濃縮した。残留物を、ｐＨ７．２のＰＢＳ緩衝液（×５）で、遠心分離により４０００ｒｐｍで洗浄した。次いで、得られた半純粋生成物を、ニッケル親和性カラムクロマトグラフィー、続いてＳＥＣによって精製して、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［（（α－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_４（ＰｈＴｚＭｅ）／ＴＣＯ－ＰＥＧ_３－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－（ＭＡＬ）Ｍｅ／Ｃｙｓ－ナノボディ）_１（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＤＯＴＡ））_１０（α－ＮＨ_２）_４）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１０００）_１６］ ＳＲＳ－２１（０．６５ｍｇ）を得た。精製生成物のＳＤＳ Ｐａｇｅゲル分析については、図２３（レーン４）を参照のこと。

【0621】

２ｂ ＨＥＲ－２アフィボディ－デンドリマーコンジュゲート
２ｂ．１ アフィボディ－ＢＣＮ／Ｎ_３－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＧｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、Ｇ３、化合物７７
アフィボディ－ＢＣＮ （２．０ｍｇ、１．０ｍｇ／ｍＬのＰＢＳで２８６ｎｍｏｌ）及びアジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＧｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］化合物６５（２４０μＭ溶液１．０ｍＬ）を用いて、一般手順Ｆに従って調製した。精製した材料を凍結乾燥させて、白色の綿毛状粉末を得た（２．１９ｍｇ，３１％）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析では、アフィボディ－デンドリマーコンジュゲートに対応するバンドが３０ｋＤａ（７００ｎｍ）付近で示されていた。

【0622】

２ｂ．２ アフィボディ－ＢＣＮ／Ｎ_３－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＧｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２０００）_８］、Ｇ３、化合物７８
アフィボディ－ＢＣＮ（１．０ｍｇ、１．０ｍｇ／ｍＬ ＰＢＳで１４３ｎｍｏｌ）及びアジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＧｌｕ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２０００）_８］化合物６６（２３３μＭ溶液２５０μＬ）を用いて、一般手順Ｆに従って調製した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析では、アフィボディ－デンドリマーコンジュゲートに対応するバンドが４０ｋＤａ（７００ｎｍ）付近で示されていた。

【0623】

２ｂ．３ アフィボディ－ＢＣＮ／Ｎ_３－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＤＧＡ－ＭＭＡＦ（ＯＭｅ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］、Ｇ３、化合物８１
アフィボディ－ＢＣＮ（２．０ｍｇ、１．０ｍｇ／ｍＬのＰＢＳで２８６ｎｍｏｌ）及びアジド－ＰＥＧ_２４ＣＯ－［Ｎ（ＰＮ）_２］［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＤＧＡ－ＭＭＡＦ（ＯＭｅ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００）_８］化合物６７（６００μＬの３６５μＭ溶液）を用いて、一般手順Ｆに従って調製した。精製した材料を凍結乾燥させて、白色の綿毛状粉末を得た（２．０６ｍｇ，３３％）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析では、アフィボディ－デンドリマーコンジュゲートに対応するバンドが３０ｋＤａ（７００ｎｍ）付近で示されていた。

【0624】

２ｃ．ＦＡＰＩ標的化デンドリマー及び対照
２ｃ．１ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］、ＲＨａ－２６
ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ ＲＨａ－２０（１．７μｍｏｌ）の溶液に、室温で、ＤＭＦ（１０μＬ／ｍＬ、３７μＬ、３４μｍｏｌ）中のＮＭＭ、ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］ ＲＨａ－９のＤＭＦ溶液（２０ｍｇ／ｍＬ、１８５μＬ、２．５μｍｏｌ）、及びＰｙＢＯＰのＤＭＦ溶液（１００ｍｇ／ｍＬ、１３μＬ、２．５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物の進行に続いて、ＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］ＲＨａ－９（Ｒ_ｔ＝５．３２分）の消失を監視することにより、ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ－法１）を行った。１８時間後、ＤＭＦ中のＮＭＭ（７０μＬ、５４μｍｏｌ）を加え、続いて新たに調製したＤＭＦ中のＰｙＢＯＰ（５０ｍｇ／ｍＬ、３０μＬ、２．９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１８時間撹拌してから、ＤＭＦ中のＮＭＭ（１００μＬ、１０９μｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（６ｍｇ、１１．５μｍｏｌ）の追加部分を加えた。更に１６時間撹拌した後、反応混合物を真空濃縮し、残渣を脱イオン水（１０ｍＬ）に溶解した。得られた溶液をＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ １，５ １０ｋＤａ ＭＷＣＯスピンカラムに移し、遠心分離によって濃縮した（４０００ｒｐｍ、２０分間）。残留物を水（１５分間、４０００ｒｐｍで１０×５ｍＬ）で洗浄し、最終残留物を凍結乾燥させて、濃紺色ガム（１０８ｍｇ）を得た。ＨＰＬＣによりＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］ＲＨａ－９の完全消費が観察されたため、反応生成物をＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ＲＨａ－２６として割り当てた。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．９９分。

【0625】

２ｃ．２ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］、ＲＨａ－２５
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］ ＲＨａ－１３（１．６μｍｏｌ）から、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ＲＨａ－２６について上述した方法に従って合成した。合計２．４μｍｏｌのＰｙＢＯＰ、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のＮＭＭ９０μｍｏｌを、室温で３日間にわたって少しずつ添加して、全てのＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］ＲＨａ－９（２．２μｍｏｌ）を確実に消費した（ＨＰＬＣにより反応を監視した）。精製後、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］ＲＨａ－２５を濃厚な濃紺色（ｔｈｉｃｋ ｄａｒｋ－ｂｌｕｅ）油として得た（８１ｍｇ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．７３分。

【0626】

２ｃ．３ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_４（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００）_２８（ε－ＮＨ_２）_２］、ＲＨａ－２７
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＢｏｃ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_４（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００）_２８（ε－ＮＨ_２）_２］ ＲＨａ－１４（８２ｍｇ、１．７μｍｏｌ）から、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ＲＨａ－２６について上述した方法に従って合成した。合計１６．９μｍｏｌのＰｙＢＯＰ、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のＮＭＭ１．５８ｍｍｏｌを、室温で３日間にわたって少しずつ添加して、全てのＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］ＲＨａ－９（２．６μｍｏｌ）を確実に消費した（ＨＰＬＣにより反応を監視した）。精製後、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_４（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００）_２８（ε－ＮＨ_２）_２］ＲＨａ－２７を青色ガムとして得た（８３ｍｇ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．７８分。

【0627】

２ｃ．４ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_６．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５（ε－ＮＨ_２）_１］、ＲＨａ－２８
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５（ε－ＮＨ_２）_２］ ＲＨａ－１６（８５ｍｇ、６．９μｍｏｌ）から、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ＲＨａ－２６について上述した方法に従って合成した。合計２０．９μｍｏｌのＰｙＢＯＰ、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のＮＭＭ１．２３ｍｍｏｌを、室温で２日間にわたって少しずつ添加して、全てのＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］ＲＨａ－９（１０．３μｍｏｌ）を確実に消費した（ＨＰＬＣにより反応を監視した）。精製後、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_６．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５（ε－ＮＨ_２）_２］ＲＨａ－２８を青色ガムとして得た（９６ｍｇ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．８９分。

【0628】

２ｃ．５ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_６．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］、ＲＨａ－２９
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］ ＲＨａ－１７（８５ｍｇ、６．９μｍｏｌ）から、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ＲＨａ－２６について上述した方法に従って合成した。合計１９．７μｍｏｌのＰｙＢＯＰ、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のＮＭＭ１．２２ｍｍｏｌを、室温で２日間にわたって少しずつ添加して、全てのＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］ＲＨａ－９（９．５μｍｏｌ）を確実に消費した（ＨＰＬＣにより反応を監視した）。精製後、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_６．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］ＲＨａ－２９を青色ガムとして得た（９４ｍｇ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝５．２３分。

【0629】

２ｃ．６ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_６．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_７．４（ε－ＮＨ_２）_０．６］、ＲＨａ－３０
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_７．４（ε－ＮＨ_２）_０．６］ＲＨａ－１８（４０ｍｇ、２．５μｍｏｌ）から、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_３０．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_３１］ＲＨａ－２６について上述した方法に従って合成した。合計３．９μｍｏｌのＰｙＢＯＰ、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中のＮＭＭ０．１ｍｍｏｌを添加して、全てのＨＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］ＲＨａ－９（３．９μｍｏｌ）を確実に消費した（ＨＰＬＣにより反応を監視した）。精製後、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＣＯ－Ｌｙｓ［（α－ＮＨＣｙ５）（ε－ＮＨ－Ｐｈ－ＤＦＯ）］）_１．５（α－ＮＨ_２）_６．５（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_７．４（ε－ＮＨ_２）_０．６］ＲＨａ－３０を青色ガムとして得た（４５ｍｇ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．６１分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）： １．１０－２．０２（ｍ，１８６Ｈ），２．０８（ｓ，６Ｈ），２．１４－２．３７（ｍ，１８Ｈ），２．３７－２．５９（ｍ，２５Ｈ），２．５９－３．２７（ｍ，１２０Ｈ），３．３６－４０３（ｍ，９０６Ｈ），４．０３－４．５２（ｍ，５４Ｈ），５．０３－５．２３（ｍ，５Ｈ），６．０７－６．４４（ｍ，４Ｈ），６．４４－６．７８（ｍ，１Ｈ），７．１２－７．４３（ｍ，２８Ｈ），７．４３－７．６９（ｍ，２１Ｈ），７．８５－７．９２（ｍ，１Ｈ），７．９２－８．０７（ｍ，ＦＡＰＩ－０４－ＤＦＯ１５Ｈ），８．１５－８．３０（ｍ，４Ｈ）及び８．７０－８．８８（ｍ，８Ｈ）。

【0630】

２ｃ．７ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ－Ｃ（Ｓ）－ＮＨ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ）_４（α－ＮＨ_２）_４（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］、ＲＨａ－３４
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］ＲＨａ－２３に、ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ ＲＨａ－３３のＤＭＦ溶液（１０．３ｍｇ／ｍＬ、１．２ｍＬ、１８μｍｏｌ）を加えた。ＤＭＦ（１．２ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（１００μＬ、０．１７ｍｍｏｌ）で希釈した反応混合物を加えた。１．５時間撹拌した後、反応混合物を真空濃縮し、水（６ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を１×Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ １５ ３ｋ ＭＷＣＯスピンカラムに移し、４０００ｒｐｍで２５分間室温で遠心分離した。濃縮された残留物を水で洗浄し（１０×２．５ｍＬ、４０００ｒｐｍ、１５分）、凍結乾燥させて、ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ－Ｃ（Ｓ）－Ｂｎ－ＤＯＴＡ）_４（α－ＮＨ_２）_４（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_３（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_５］ＲＨａ－３４を淡黄色固体（５９ｍｇ、定量的）として得た。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ－法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．４５分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ _３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．００－２．１０（ｍ，１０４Ｈ），２．１０－２．３７（ｍ，８Ｈ），２．３７－２．５４（ｍ，８Ｈ），２．５４－２．７８（ｍ，１３Ｈ），２．７８－３．２８（ｍ，７４Ｈ），３．３５（ｓ，２１Ｈ），３．３７－３．９２（ｍ，９１４Ｈ），３．９２－４．６０（ｍ，５２Ｈ），５．０７－５．２３（ｍ，３Ｈ），６．１２－６．２３（ｍ，１Ｈ），７．０９－７．４０（ｍ，１９Ｈ），７．４０－７．７２（ｍ，１４Ｈ），７．９２－８．０６（ｍ，６Ｈ），８．７０－８．７４（ｍ，３Ｈ）。

【0631】

２ｃ．８ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ－Ｃ（Ｓ）－ＮＨ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ）_８（α－ＮＨ_２）_２４（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］、ＲＨａ－３５
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］ＲＨａ－１９に、ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ ＲＨａ－３３のＤＭＦ溶液（１０．３ｍｇ／ｍＬ、０．５５ｍＬ、８μｍｏｌ）を加えた。ＤＭＦ（１．４５ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（１００μＬ、０．１７ｍｍｏｌ）で希釈した反応混合物を加えた。１．５時間撹拌した後、反応混合物を真空濃縮し、水（６ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を１×Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ １５ １０ｋ ＭＷＣＯスピンカラムに移し、４０００ｒｐｍで２５分間室温で遠心分離した。濃縮残留物を水で洗浄し（１０×２．５ｍＬ、４０００ｒｐｍ、１５分）、凍結乾燥してＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ－Ｃ（Ｓ）－ＮＨ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ）_８（α－ＮＨ_２）_２４（ε－ＮＨＣＯ－ｄＰＥＧ_１１００－Ｃ（Ｏ）Ｎ－ＦＡＰＩ－０４）_１０（ε－ＮＨＣＯ－ｍＰＥＧ_１０００）_１９（ε－ＮＨ_２）_３］ＲＨａ－３５を淡黄色固体として得た（５１ｍｇ、９８％）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．６１分。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．９５－２．３４（ｍ，４０１Ｈ），２．３４－２．６１（ｍ，３５Ｈ），２．６１－３．２８（ｍ，２３５Ｈ），３．３６Ｈ（ｓ，７６Ｈ），３．３８－３．８１（ｍ，３３５８Ｈ），３．８１－３．９１（ｍ，４６Ｈ），３．９１－４．５５（ｍ，２０３Ｈ），５．０４－５．２１（ｍ，１６Ｈ），７．０３－７．４２（ｍ，２８Ｈ），７．５５－７．７２（ｍ，１７Ｈ），７．９３－８．０６（ｍ，２０Ｈ），８．７２－８．８４（ｍ，１０Ｈ）。

【0632】

２ｃ．９ ＦＡＰＩ－０４－ＤＦＯ、ＲＨａ－３１（ＦＡＰＩ－ＤＦＯ対照）
ＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）中のｐ－ＳＣＮ－Ｐｈ－ＤＦＯ ＲＨａ－８（２４．７ｍｇ、３３μｍｏｌ）の溶液を、室温でＦＡＰＩ－０４－ＮＨ（ＴｓＯＨ塩）ＲＨａ－２（２５．９ｍｇ、３９μｍｏｌ）に加え、続いてＤＩＰＥＡ（５１μＬ、２９３μｍｏｌ）を加えた。１．５時間後、ＦＡＰＩ－０４－ＮＨ（ＴｓＯＨ塩）ＲＨａ－２（１５ｍｇ、２３μｍｏｌ）の別の部分を加えて撹拌を続けた。２日後、反応混合物を自動フラッシュカラムクロマトグラフィー（オートフラッシュ法２、Ｒ_ＣＶ＝１０～１２ＣＶ）によって直接精製し、ＦＡＰＩ－０４－ＤＦＯ ＲＨａ－３１をオフホワイト固体（２９ｍｇ、７１％）として得た。ＬＣＭＳ（ＬＣＭＳ法 ５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝４．５６分。ＥＳＩ ＭＳ（＋ｖｅ）１２４０［Ｍ＋Ｈ］^＋；Ｃ_５７Ｈ_８１Ｆ_２Ｎ_１４Ｏ_１１Ｓ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋に対するｍ／ｚ計算値＝１２４０。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）： １．２４－１．７１（ｍ，２０Ｈ），２．０９－２．１５（ｍ，５Ｈ），２．４１－２．５０（ｍ，４Ｈ），２．６６－３．００（ｍ，１３Ｈ），３．１２－３．１９（ｍ，４Ｈ），３．５４－３．６３（ｍ，８Ｈ），３．９５－４．４０（ｍ，７Ｈ），５．０５－５．２０（ｍ，１Ｈ），７．１９－７．３４（ｍ，４Ｈ），７．４８（ｄｄ，Ｊ＝３．０，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８６－８．０５（ｍ，２Ｈ）及び８．７６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）。

【0633】

２ｄ．ＤＵＰＡ標的化デンドリマー及び対照
２ｄ．１ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ（ＯＨ）_３）_８］、Ｇ３、化合物３７
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨＢｏｃ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ（ＯｔＢｕ）_３）_８］、化合物３６（３６ｍｇ、２．２９μｍｏｌ）を使用して、一般手順Ａに従って調製した。反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を減圧下にて濃縮し、ＳＥＣ（４００滴／チューブ、ＭｅＣＮ ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０、３５滴／分）を使用して精製した。画分をＴＬＣ分析（５％ＢａＣｌ_２溶液、続いてヨウ素染色、暗褐色斑）を用いて確認し、生成物を含有するものを合わせ、減圧濃縮した。表題化合物である化合物３７を無色フィルムとして収集した（２４ｍｇ、７２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： ０．６０－１．９９（ｍ，１３８Ｈ），２．０８－２．２２（ｍ，１６Ｈ），２．２４－２．５２（ｍ，４８Ｈ），３．０７－４．０６（ｍ，８４５Ｈ），４．２７－４．３５（ｍ，１６Ｈ），６．１８（ｓ，１Ｈ），７．２５－７．３９（ｍ，１０Ｈ）。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝６．８０分（ブロードピーク、低強度）。

【0634】

２ｄ．２ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－（ＮＨＤＯＴＡ））_１（ａ－ＮＨＡｃ）_７）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ）_８］、Ｇ３、化合物３８
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－（ＮＨＤＯＴＡ））_１（α－ＮＨ_２）_７）（ ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ）_８］化合物１０６（２３ｍｇ、１．６６μｍｏｌ）を使用して、一般手順Ｉ、ステップ２に従って調製した。反応物をＮ_２流下で濃縮し、ＳＥＣ（４００滴／チューブ、ＭｅＯＨ ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０、３５滴／分）により精製した。画分をＴＬＣ分析（５％ＢａＣｌ_２溶液、続いてヨウ素染色、暗褐色斑）により確認し、続いてＨＰＬＣにより確認し、生成物を含有するものを合わせ、減圧濃縮した。残渣をＭＱ水に取り込み、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクフィルタ）、凍結乾燥させて、表題化合物を褐色蝋状固体として得た（２２ｍｇ、９１％）。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝７．２２分（ブロードピーク）。

【0635】

２ｄ．３ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＮＨ－ＤＵＰＡ）_１５（α－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４ＮＨ－ＧＡＤＯＴＡ）_４（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_１１（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］、ＲＬ－２２
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］（１００ｍｇ、１．９７μｍｏｌ）及びＣｙ５－ＮＨＳエステル（２．６ｍｇ、３．９４μｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（２０μＬ、１８９μｍｏｌ）を加え、続く反応物を室温で一晩撹拌してから、揮発分を真空除去し、青色油を得た。残渣をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解し、ＤＵＰＡ（ＯｔＢｕ）_３－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ_２Ｈ、化合物４０（３０ｍｇ、１８．６μｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（１０ｍｇ、１８．６μｍｏｌ）及びＮＭＭ（１０μＬ、９２．９μｍｏｌ）を順次添加した。続いて得られた反応物を、室温で一晩撹拌させて放置した。反応混合物を半分に分割し、一部分に、ＤＯＴＡ（ＯｔＢｕ）_４ＧＡ－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４－ＣＯＯＨ ＲＬ－２１（３４ｍｇ、１９．９μｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（１０ｍｇ、１８．９μｍｏｌ）を加え、続いて得られた反応物を室温で一晩撹拌させた。揮発分を真空除去し、得られた青色残渣を脱イオン水に溶解した。溶液をスピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、１５ｍＬ、３０ｋＤａ ＭＷカットオフ、４０００ｒｐｍ、２０分間）によって濃縮し、残留物を水で繰り返し洗浄し（２０分間、４０００ｒｐｍで１０×５ｍＬ）、最終的な残留物を凍結乾燥によって乾燥させて濃紺色油を得た。得られた油（２０ｍｇ）の一部分をジクロロメタン（０．５ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）を室温で１回で加えた。続いて得られた反応物を、室温で一晩撹拌させて放置した。反応混合物をＮ_２流下で濃縮し、得られた青色残渣を水に溶解し、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクシリンジフィルタ）、次に凍結乾燥により乾燥させて、表題化合物ＲＬ－２２を青色固体として得た（１５ｍｇ）。

【0636】

ＤＵＰＡ及びＤＯＴＡの数は、単離された中間化合物の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル上の０．０～２．０ｐｐｍと３．４～４．０ｐｐｍ領域との間の共鳴の相対積分の変化を比較することによって決定した。ＰＥＧ_１０００の末端メトキシ基（３．８３ｐｐｍ、９６Ｈ）を基準として使用した。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ _３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．７７－２．０３（ｍ，３８３Ｈ），２．０８－２．２７（ｍ，３６Ｈ），２．２７－２．３７（ｍ，２８Ｈ），２．３６－２．４７（ｍ，２８），２．４８－２．８３（ｍ，６３Ｈ），３．８３（ｓ，９６Ｈ），３．３９－３．９３（ｍ，４５２０），４．０１（ｍ，６２Ｈ）及び６．０－８．５９（ｍ，２４Ｈ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝７．０８分。

【0637】

２ｄ．４ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ）_５（α－ＮＨＤＧＡ－ＳＮ３８）_１６（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_１０（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］、ＲＬ－２３
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］ （２００ｍｇ、３．９４ μｍｏｌ）及びＣｙ５－ＮＨＳエステル（３ｍｇ、４．７３μｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（４２μＬ、３７８μｍｏｌ）を加え、続く反応物を室温で一晩撹拌させた。揮発分を真空除去して青色残渣を得、これを脱イオン水に溶解し、溶液をスピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、１５ｍＬ、３０ｋＤａ ＭＷカットオフ、４０００ｒｐｍ、１５分間）によって濃縮し、残留物を水で繰り返し洗浄し（１５分間、４０００ｒｐｍで６×５ｍＬ）、最終的な残留物を凍結乾燥させて、濃紺色固体（１７１ｍｇ）を得た。得られた固体（４６ｍｇ、０．９６８μｍｏｌ）の一部分をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解させ、ＤＧＡ－（Ｃ－２０）ＳＮ３８ ＲＬ－２４（９．４ｍｇ、１８．６μｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を濃紺色溶液に加え、続いてＰｙＢＯＰ（９．６ｍｇ、１８．６μｍｏｌ）及びＮＭＭ（１０μＬ、９２．２μｍｏｌ）を加え、続いて得られた反応物を室温で一晩撹拌させた。揮発分を真空除去して青色残渣を得、これをサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した（静止相＝Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０（登録商標）、移動相＝ＭｅＣＮ、流量＝約３５滴／分、４００滴／分を収集）。青色画分を収集し、合わせ、真空濃縮して、濃紺色油を得た。得られた油（３３ｍｇ、０．５９３μｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に再溶解し、ＤＵＰＡ（ＯｔＢｕ）_３－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ_２Ｈ化合物４０（１８ｍｇ、１１．４μｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（６ｍｇ、１１．４μｍｏｌ）、続いてＮＭＭ（６．２５μＬ、５６．９μＬ）を加えた。続いて得られた反応物を、室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去して青色残渣を得、これをサイズ排除クロマトグラフィー精製した（静止相＝Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０（登録商標）、移動相＝ＭｅＣＮ、流量＝約３５滴／分、４００滴／分を収集）。青色材料を含有する画分をＬＣＭＳ分析によってチェックし、純粋な生成物を含有するとみなされるものを真空濃縮して、濃紺色の残渣を得た。得られた残渣のジクロロメタン（１ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で一度に加え、得られた明緑色の溶液を一晩撹拌させた。この反応をＮ_２流下で、次いで高真空下で濃縮し、得られた青色／緑色の残渣を、サイズ排除クロマトグラフィー（静止相＝Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０（登録商標）、移動相＝ＭｅＣＮ、流量＝約３５滴／分、４００滴／分を収集）を用いて精製した。青色材料を含有する画分をＨＰＬＣ分析を使用して確認し、生成物を含有するとみなされるものを合わせて真空濃縮した。得られた青色残渣を水に溶解し、ろ過し（０．４５μｍアクロディスクシリンジフィルタ）、次いで凍結乾燥により乾燥させて、表題化合物ＲＬ－２３を青色固体として得た（９ｍｇ）。

【0638】

ＤＵＰＡ及びＳＮ３８の数は、ＰＥＧ_１０００の末端メトキシ基（３．８３ｐｐｍ、９６Ｈ）を基準として、^１Ｈ ＮＭＲスペクトルの分析によって決定した。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）：δ（ｐｐｍ）０．５－１．９（ｍ，５８２Ｈ），２．５１－３．００（ｍ，７６Ｈ），３．３３（ｓ，９６Ｈ），３．４０－５．０（ｍ，３２８２Ｈ），４．４５（ｍ，１６Ｈ），５．３（ｍ，１６Ｈ）及び６．０－８．５９（ｍ，１０２Ｈ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝８．６０分。

【0639】

２ｄ．５ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_１４（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_９（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］、ＲＬ－２５
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３２（ε－ＮＨＣＯＰＥＧ_１０００）_３２］（３００ｍｇ、５．９２μｍｏｌ）及びＣｙ５－ＮＨＳエステル（６ｍｇ、７．１０μｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＭＭ（６２μＬ、５６８μｍｏｌ）を加え、続く反応物を放置して室温で一晩撹拌した。反応物をＬＣＭＳ分析を使用してＣｙ５－ＮＨＳエステルの消費を確認し、揮発分を真空除去して青色油を得た。得られた油（４６ｍｇ、０．９６８μｍｏｌ）の一部分をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、ＤＯＴＡＧＡ－テトラ－（ｔｅｒｔ－ブチルエステル）ＲＬ－１９（１２ｍｇ、１７．４μｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（９ｍｇ、１７．４μｍｏｌ）、及びＮＭＭ（１０μＬ、９２．９ｍｍｏｌ）を順次加えた。（反応混合物のＬＣＭＳ分析により監視した）ＤＯＴＡＧＡ－テトラ（ｔｅｒｔ－ブチルエステル）ＲＬ－１９の完全な消費時に、揮発分を真空除去した。得られた青色残留物を脱イオン水に溶解し、溶液をスピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、１５ｍＬ、３０ｋＤａ ＭＷカットオフ、４０００ｒｐｍ、１５分間）によって濃縮し、残留物を水で繰り返し洗浄し（１５分間、４０００ｒｐｍで６×５ｍＬ）、最終的な残留物を真空濃縮した。残渣をＤＭＦ（２ｍＬ）中に溶解し、ＤＵＰＡ（ＯｔＢｕ）_３－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ_２Ｈ、化合物４０（３０ｍｇ、１８．６μｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（１０ｍｇ、１８．６μｍｏｌ）及びＮＭＭ（１０μＬ、９２．９μｍｏｌ）を順次添加した。続いて得られた反応物を、室温で一晩撹拌させて放置した。揮発分を真空除去し、得られた青色残渣を脱イオン水に溶解し、溶液をスピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、１５ｍＬ、３０ｋＤａ ＭＷカットオフ、４０００ｒｐｍ、１５分間）によって濃縮した。残留物をＭＱ水（１５分間、４０００ｒｐｍで６×５ｍＬ）で繰り返し洗浄し、最終的な残留物を凍結乾燥によって乾燥させて、濃紺色固体を得た。得られた固体をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解させ、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で１回で溶液に加えた。続いて得られた反応物を室温で一晩撹拌させた後、Ｎ_２流下で濃縮し、脱イオン水に溶解させ、溶液をスピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、１５ｍＬ、３０ｋＤａ ＭＷカットオフ、４０００ｒｐｍ、１５分間）によって濃縮した。残留物をＭＱ水（１５分間、４０００ｒｐｍで５×５ｍＬ）で繰り返し洗浄し、最終的な残留物を凍結乾燥により乾燥させて、青色油（１１ｍｇ）を得た。

【0640】

ＤＵＰＡ及びＤＯＴＡの数は、単離された中間体の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル上の０．０～２．０ｐｐｍ領域間を比較することによって決定した。ＰＥＧ_１０００の末端メトキシ基（３．８３ｐｐｍ、９６Ｈ）を基準として使用した。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ _３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．９７－１．９９（ｍ，４１２Ｈ），２．０６－２．９３（ｍ，１８２Ｈ），２．９３－３．２９（ｍ，１４４Ｈ），３．３７（ｓ，９６Ｈ），３．３３－４．７２（ｍ，４２２８Ｈ），７．３２（ｍ，１０Ｈ）及び６．０－８．５９（ｍ，２４Ｈ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法、５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝８．２９分。

【0641】

２ｄ．６ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α／ε－ＮＨＣｙ５）_１（α／ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_２４ＮＨ－ＤＵＰＡ）_５（α／ε－ＮＨ－ＤＯＴＡＧＡ）_７（α／ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_３］、ＲＬ－２６
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８］（５０ｍｇ、２５．１μｍｏｌ）の溶液に、Ｃｙ５－ＮＨＳエステル（２０ｍｇ、３０．１μｍｏｌ）及びＮＭＭ（５２μＬ、０．４８１ｍｍｏｌ）を加え、続く反応物を室温で一晩撹拌した。揮発分を真空除去し、得られた青色残渣の一部分（２５ｍｇ、１６．２μｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に再溶解した。得られた青色溶液に、ＤＯＴＡＧＡ－テトラ－（ｔｅｒｔ－ブチルエステル）ＲＬ－１９（９５ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（７０ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）、及びＮＭＭ（８５μＬ、０．７７８ｍｍｏｌ）を順次加え、反応物を室温で一晩撹拌した。揮発分を真空除去し、残渣をサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製した（静止相＝Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０（登録商標）、移動相＝ＭｅＣＮ、流量＝約３５滴／分、４００滴／分を収集）。濃紺色の物質を含有する画分を合わせて真空濃縮し、残渣を水に再溶解した後、凍結乾燥により乾燥した。得られた青色固体（１４ｍｇ、２．３１μｍｏｌ）の溶液に、ＤＵＰＡ（ＯｔＢｕ）_３－ＮＨＰＥＧ_２４ＣＯ_２Ｈ、化合物４０（３５ｍｇ、２．２μｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（１１ｍｇ、２２．２μｍｏｌ）、続いてＮＭＭ（１２μＬ、１１０μｍｏｌ）を加え、得られた反応物を室温で一晩撹拌した。揮発分を真空除去し、残渣をサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製した（静止相＝Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０（登録商標）、移動相＝ＭｅＣＮ、流量＝約３５滴／分、４００滴／分を収集）。濃紺色の材料を含む画分をＬＣＭＳ分析を用いて確認し、生成物を含むとみなされるものを合わせて真空濃縮した。得られた青色油をジクロロメタン（１ｍＬ）に再溶解させ、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で１回で加え、続いて得られた緑色溶液を一晩撹拌した。反応物をＮ_２流下で濃縮し、その後脱イオン水に溶解し、溶液をスピンカラム（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、１５ｍＬ、３０ｋＤａ ＭＷカットオフ、４０００ｒｐｍ、１５分間）によって濃縮した。残留物を水（１５分間、４０００ｒｐｍで４×５ｍＬ）で繰り返し洗浄し、最終的な残留物を凍結乾燥により乾燥させて、青色油（１１ｍｇ）を得た。

【0642】

ＤＵＰＡ及びＤＯＴＡの数は、単離された中間化合物の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル上の０．０～２．０ｐｐｍ、３．４～４．０ｐｐｍ、及び４．０～４．５ｐｐｍ、及び６．０～８．５ｐｐｍ領域間の共鳴の相対積分の変化を比較することによって決定した。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．６７－２．０３（ｍ，１１２Ｈ），２．０５－２．２３（ｍ，１９Ｈ），２．２４－２．８４（ｍ，６７Ｈ），２．９０－３．２０（ｍ，５８Ｈ），３．３３－３．４８（ｍ，３０Ｈ），３．４８－４．０９（ｍ，５６５Ｈ），４．１０－４．５２（ｍ，３３Ｈ）及び６．０－８．５９（ｍ，２４Ｈ）。ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ法 ５～８０、８分、ＴＦＡ）Ｒ_ｔ＝９．９２分（ブロード）。

【0643】

２ｄ．７ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１）（（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３）_１２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３／ＢＣＮ－ＤＵＰＡ）_２０］、化合物１００
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６－［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３）_３２］、化合物３４（１０．０ｍｇ、０．４μｍｏｌ）、及びＤＵＰＡ－ＢＣＮ（化合物６１（１０．９ｍｇ、１７．４μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｊに従って調製した。ＳＥＣ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０）により精製した後、化合物１００を青色固体として得た（１１．６ｍｇ、８０％）。^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ０．５４－２．５４（ｍ，７９７Ｈ）；２．５４－２．８６（ｍ，４４Ｈ）；２．８８－３．１８（ｍ，１２３Ｈ）；３．１９－４．３２（ｍ，１４０９Ｈ）；４．３４－４．５３（ｍ，４０Ｈ）；６．９２－７．５３（ｍ，２１Ｈ）；７．７６－８．２５（ｍ，１４Ｈ）。ＬＣ（ＬＣＭＳ法 ５～８０、１５分、ＴＦＡ、ＭＳなし）Ｒ_ｔ＝９．１５分。^１ＨＮＭＲ分析は、２０ＤＵＰＡ／デンドリマーを示す。化合物１００のＭＷは、約４０．２ｋＤａである。

【0644】

２ｄ．８ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１）（（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３）_２０（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３／ＢＣＮ－ＤＵＰＡ）_１２］、化合物１０１
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８－［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_５７０Ｎ_３）_３２］、化合物３４（１０．０ｍｇ、０．４μｍｏｌ）、及びＤＵＰＡ－ＢＣＮ（化合物６１（４．２ｍｇ、６．７μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｊに従って調製した。ＳＥＣ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０）により精製した後、化合物１０１を青色固体として得た（１５．４ｍｇ、１２１％）。^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ０．４０－２．５３（ｍ，１４３０Ｈ）；２．５５－２．８３（ｍ，３６Ｈ）；２．９１－３．１７（ｍ，１２３Ｈ）；３．１８－４．３２（ｍ，１３９２Ｈ）；４．３５－４．５５（ｍ，２４Ｈ）；６．９８－７．５０（ｍ，２６Ｈ）；７．７６－８．１７（ｍ，２０Ｈ）。ＬＣ（ＬＣＭＳ法 ５～８０、１５分、ＴＦＡ、ＭＳなし）Ｒ_ｔ＝９．１５分。^１ＨＮＭＲ分析により、１２ＤＵＰＡ／デンドリマーが示される。化合物１０１のＭＷは、約３５．２ｋＤａである。

【0645】

２ｄ．９ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１）（（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_２５（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３／ＢＣＮ－ＤＵＰＡ）_７］、化合物１０２
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_３２］化合物３５（２５．２ｍｇ、０．５μｍｏｌ）、及びＤＵＰＡ－ＢＣＮ（化合物６１（４．２ｍｇ、６．７μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｊに従って調製した。限外ろ過及び凍結乾燥により精製した後、化合物１０２を青色固体として得た（２１．９ｍｇ、７９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： ０．５０－２．５６（ｍ，６６８Ｈ）；２．７６－２．９２（ｍ，１２５Ｈ）；３．０４－３．６２（ｍ，２９８２Ｈ）；３．７４－３．８８（ｍ，２８Ｈ）；３．９１－４．２１（ｍ，９４Ｈ）；６．８５－７．２４（ｍ，２６Ｈ）；７．５７－７．６９（ｍ，４７Ｈ）。ＬＣ（ＬＣＭＳ法 ５～８０、１５分、ＴＦＡ、ＭＳなし）Ｒ_ｔ＝１０．１１分。^１Ｈ ＮＭＲ分析により、７ＤＵＰＡ／デンドリマーが示される。化合物１０２のＭＷは、約５４．６ｋＤａである。

【0646】

２ｄ．１０ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－ＮＨＣｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１）（（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_２２（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３／ＢＣＮ－ＤＵＰＡ）_１０］、化合物１０３
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（α－Ｃｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_３２］（２５．０ｍｇ、０．５μｍｏｌ）、及びＤＵＰＡ－ＢＣＮ（化合物６１（４．２ｍｇ、６．７μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｊに従って調製した。限外ろ過及び凍結乾燥により精製した後、化合物１０３を青色固体として得た（１９．７ｍｇ、７０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）： ０．８２－２．１９（ｍ，７０７Ｈ）；２．４５（ｂｓ，６４Ｈ）；３．０５－３．２１（ｍ，１３５Ｈ）；３．３８－３．９２（ｍ，３０５３Ｈ）；４．０４－４．３０（ｍ，１０１Ｈ）；６．９３－７．５４（ｍ，２６Ｈ）。ＬＣ（ＬＣＭＳ法 ５～８０、１５分、ＴＦＡ、ＭＳなし）Ｒ_ｔ＝１０．４４分。^１Ｈ ＮＭＲ分析により、１０ＤＵＰＡ／デンドリマーが示される。化合物１０３のＭＷは、約５４．６ｋＤａである。

【0647】

２ｄ．１１ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６［Ｌｙｓ］_３２［（（α－Ｃｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_１９（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ３／ＢＣＮ－ＤＵＰＡ）_１３］、化合物１０４
ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［Ｌｙｓ］_１６－［Ｌｙｓ］_３２［（（α－Ｃｙ５）_１（α－ＮＨＡｃ）_３１）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_１１００Ｎ_３）_３２］、化合物３５（２６．３ｍｇ、０．５μｍｏｌ）、及びＤＵＰＡ－ＢＣＮ（化合物６１（１２．６ｍｇ、２０．１μｍｏｌ）を用いて、一般手順Ｊに従って調製した。限外ろ過及び凍結乾燥により精製した後、生成物を青色固体として得た（２８．８ｍｇ、９４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）： ０．７３－２．９０（ｍ，８２３Ｈ）；２．９６－３．２７（ｍ，１３３Ｈ）；３．３４－３．９９（ｍ，２８９４Ｈ）；４．０５－４．２２（ｍ，４０Ｈ）；４．２４－４．４４（ｍ，７８Ｈ）；４．４４－４．５８（ｍ，３４Ｈ）；７．１６－７．５７（ｍ，２２Ｈ）；７．８９－８．０５（ｍ，３８Ｈ）。ＬＣ（ＬＣＭＳ法 ５～８０、１５分、ＴＦＡ、ＭＳなし）Ｒ_ｔ＝９．６２分。^１Ｈ ＮＭＲ分析により、１３ＤＵＰＡ／デンドリマーが示される。化合物１０４のＭＷは、約５８．４ｋＤａである。

【0648】

２ｄ．１２ ［［（ε－ＮＨＣＯ－ＰＥＧ_１１００）_８（α－ＮＨＤＯＴＡ）_４．７５（α－ＮＨＣｙ５）_０．５（α－１．９０ ＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（（α－（ＮＨＤＯＴＡ））_１（α－ＮＨ_２）_７）（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４－Ｎ_３／ＢＣＮ－ＤＵＰＡ）_８］、Ｇ３、化合物１０５
ＤＭＦ（４ｍＬ）中のＢＨＡＬｙｓ［Ｌｙｓ］_２［Ｌｙｓ］_４［Ｌｙｓ］_８［（α－ＮＨ_２．ＴＦＡ）_８（ε－ＮＨ－ＣＯＰＥＧ_２４Ｎ_３／ＢＣＮ－ＤＵＰＡ（ＯＨ）_３）_８］化合物３７（２３ｍｇ、１．６６μｍｏｌ）の溶液に、ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ（２．６ｍｇ、３．８μｍｏｌ）のＤＭＦ溶液を添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、出発材料の消費を示し、反応物を減圧下で濃縮した。更に精製することなく、化合物１０５を使用した。ＨＰＬＣ（Ｃ８ ＸＢｒｉｄｇｅ、３×１００ｍｍ）勾配： ５％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０～１分）、５～８０％ＭｅＣＮ（１～７分）、８０％ＭｅＣＮ（７～１２分）、８０～５％ＭｅＣＮ（１２～１３分）、５％ＭｅＣＮ（１３～１５分）、２１４ｎｍ、０．４ｍＬ／分、Ｒ_ｔ＝６．１５～６．９７分（ブロードピーク）。

【0649】

実施例３．アフィボディ－ＭＭＡＥデンドリマー及びＥｒｂ２ ＥＣＤのＳＰＲ結合試験
ＥｒｂＢ２－ＥＣＤの直接固定化
ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６装置を用いて、ＥｒｂＢ２－ＥＣＤは、ＨＢＳ－Ｐ＋泳動緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）を用いて、２５℃で、ＧＬＣセンサーチップ表面（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に固定化した。この固定化には、アミンカップリングキット（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に記載されている標準的なアミンカップリング方法を用いた。レーン１は、ＥＤＣ（０．５ｍＭ）及びスルホ－ＮＨＳ（０．１２５ｍＭ）の５０：５０の混合液により活性化した。ＥｒｂＢ２タンパク質を１０ｍＭ酢酸ナトリウムで２ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．０に希釈し、活性化された表面チャネル上に注入した。残った活性化部位は、１Ｍエタノールアミン－ＨＣｌ（ｐＨ８．５）で遮断した。平均応答レベル約５９０ＲＵ（１ＲＵ＝１ｐｇタンパク質／ｍｍ^２）のタンパク質結合が観察された。

【0650】

ＳＰＲ実験分析
全てのＳＰＲ結合実験は、ＨＢＳ－ＥＰ＋／ＢＳＡ（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０、０．１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ）を装置の泳動緩衝液（ＲＢ）として使用し、２５℃で行った。固定化手順後、様々な濃度の抗ＥｒｂＢ２アフィボディ及びそれらのＭＭＡＥ－デンドリマーコンジュゲートを、固定化されたＥｒｂＢ２タンパク質上に６０μｌ／分で注入し、それらの会合を９０秒間監視した。その後、泳動緩衝液を、結合したＡｂ－ＥｒｂＢ２コンジュゲートに注入し、解離を最長６０分間監視した。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ及びアフィボディの対照は、泳動緩衝液中でチップ表面から適度な時間枠（６０分以内）では解離しなかった。全ての結合測定は３回行った。

【0651】

ＳＰＲデータの処理及び解析
収集した実験データは、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ－Ｐｒｏソフトウェア（ｗｗｗ．ｂｉｏｌｏｇｉｃ．ｃｏｍ．ａｕ）を用いて処理した。実験データの各セットをＬａｎｇｍｕｉｒ １：１結合モデルに当てはめて、キネティックパラメータ（ｋａ＝会合及びｋｄ＝解離速度定数）及び平衡解離定数（Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｄ／ｋ_ａ）を導出した。全ての結合パラメータは、平均値＋／－標準偏差として報告した。

【0652】

ＳＰＲの結果
アフィボディ－ＭＭＡＥ－デンドリマーコンジュゲートは、あるプロセスにおいてＥｒｂＢ２タンパク質に特異的に結合し、古典的なキネティック結合プロファイルが得られた。その後、用量反応法を用いて、アフィボディ－ＭＭＡＥ－デンドリマーコンジュゲートのキネティック結合解析を行った。ＳＰＲセンサーグラムから得られた速度論的パラメータ及び親和性パラメータを以下にまとめた。このアフィボディは二量体であるため、その結合定数は、デンドリマーコンジュゲートに使用される単量体のアフィボディで観察されるものよりも低いことに留意されたい。化合物６５及び６６には、いかなる結合も観察されなかった。この結果は、ネイティブアフィボディに比べて少ない量にもかかわらず、アフィボディ－デンドリマー標的に対するナノモルの特異的結合を明らかに示している。

【表7】

【0653】

実施例４．アフィボディ－ＭＭＡＥデンドリマーによる細胞成長阻害（ＳＲＢアッセイ）
ＨＥＲ２^－（ＥＳ２）及びＨＥＲ２^＋（ＳＫＯＶ３）細胞株における細胞成長阻害は、７２時間後に様々ながん細胞株に対してＳｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｂ（ＳＲＢ）アッセイ［Ｖｏｉｇｔ Ｗ．”Ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｂ ａｓｓａｙ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ”Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２００５，１１０，３９－４８．］を使用して測定し、各実験を２回実施した。ＧＩ５０は、ＮＣＩの標準プロトコルに従って、全細胞の成長を５０％阻害するのに必要な濃度である。

【0654】

全ての化合物は、同等の薬物負荷に基づいて検査を行った。その結果は、ＰＥＧ１１００を標的化したデンドリマーコンジュゲートが、ＰＥＧ２０００の表面を有するデンドリマーよりも、細胞の成長阻害において有効であることを示している。アフィボディ単独では、ＨＥＲ２＋細胞株、ＨＥＲ２－細胞株のいずれにおいても、このアッセイでは有効でなかった。

【表8】

【0655】

実施例５．アフィボディ－ＭＭＡＥデンドリマーのインビボでの忍容性
デンドリマー（０．１～０．３ｍｌのＰＢＳ溶液）を週１回、３週間（１日目、８日目、及び１５日目）にマウスに静脈内注射した。マウスの体重を毎日測定し、毒性の兆候を観察した。最終薬物投与後、最長１０日間動物をモニターした。倫理的エンドポイントを超えたマウス（２０％以上の体重減少、全身状態不良）はいずれも、直ちに屠殺し、観察結果を記録した。

【0656】

化合物７７の１ｍｇ／ｋｇの投与は、ヌードＳＣＩＤマウス及びｂａｌｂ／ｃマウスのいずれにおいても良好な忍容性を示し、健康状態不良のために屠殺する必要のある動物はいなかった。

【0657】

実施例６．：コンジュゲートのインビトロ効率

【表9】

パート１：ＧＩ_５０パネル：
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＳＫＯＶ－３、ＳＫ－Ｂｒ－３、ＮＣＩ－Ｎ８７、及びＯＥ－１９細胞に対するＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）、ラパチニブ、化合物７１（対照）、及び２Ｄ３ナノボディ標的デンドリマー（化合物１２３）の細胞傷害性をＭＴＴアッセイを用いて評価した。９６ウェルプレートに５×１０３の密度で細胞を播種し、一晩インキュベートした。その後、細胞を試験組成物の１ｌｏｇ単位の連続希釈液で７２時間（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎの場合は６日間）処理した。最後の２時間のインキュベーション中に、１０％培地量のＭＴＴ（チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド（Ｍｅｒｃｋ，Ｃａｔ＃Ｍ５６５５，５ｍｇ／ｍｌ滅菌溶液））を添加した。生細胞内でのＭＴＴの還元により、紫色の不溶性ホルマザン代謝物が生成される。２時間のインキュベーション後、アッセイプレートから全ての培地を取り除き、１００μｌのＤＭＳＯを加え、直ちに５７０ｎｍの吸光度を読み取った。ＧＩ_５０は、細胞の成長／増殖を５０％阻害する濃度と定義されている。細胞生存率及びその後のＧＩ_５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０２で４パラメータ非線形曲線フィットを用いてブランク補正した用量反応曲線から求めた。その結果、本開示の例示のコンジュゲートは、特にＳＫ－ＢＲ－３、ＮＣＩ－Ｎ８７、及びＯＥ１９などのＨＥＲ２を過剰に発現する細胞株に対して、強力な細胞傷害効果を有することが明らかになった。

【表10】

【0658】

パート２：ＨＥＲ２細胞株におけるＩＣ_５０
ペアとなる高／低ＨＥＲ２細胞株についてのＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳がん細胞株におけるＨＥＲ２＋ノックの生成
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳がん細胞は、製造業者の指示に従って、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００を用いて、プラスミドＨＥＲ２ ＷＴ（Ａｄｄｇｅｎｅ，１６２５７）でトランスフェクトした。５００ｕｇ／ｍｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ１０１３１０３５）の存在下で継代後、ＭｏＦｌｏ Ａｓｔｒｉｏｓ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いた蛍光活性化シングルセルソーティングにより、ＨＥＲ２ ＷＴを安定的に過剰発現させた細胞を単離した。この工程で単離されたクローン細胞集団について、Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎで更に継代後、２回目のセルソーティング及び導入遺伝子発現のスクリーニングを行った。その後、選択されたクローンを更に増殖させ、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２と呼ばれるこの細胞株のストックを凍結保存して、安定的に導入された細胞のマスターストックを作成した。

【0659】

低／高発現ＭＤＡ－ＭＢ－２３１モデルでのＩＣ_５０結果：
化合物７１（対照）及び化合物１２３（標的）のＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２トランスフェクション細胞に対する細胞傷害性をａｌａｍａｒＢｌｕｅアッセイで評価した。９６ウェルプレートに５ｘ１０^３の密度で細胞を播種し、一晩インキュベートした。その後、細胞を指示された濃度の試験組成物で４８時間処理した。最後の４時間のインキュベーション中にＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，ＤＡＬ１０２５）を添加した。生細胞内でａｌａｍａｒＢｌｕｅが還元されることにより、赤い蛍光の代謝物が生成され、プレートリーダーで読み取ることができる（励起５６０ｎｍ／発光６１０ｎｍ）。細胞生存率及びその後のＩＣ_５０は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０２で４パラメータ非線形曲線フィット、可変スロープ（４パラメータ）を用いて、ブランク補正した用量反応曲線から求めた。下表は、化合物７１（対照）及び化合物１２３（標的）とＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２細胞とのＩＣ_５０値を示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２に対する化合物７１（対照）及び化合物１２３（標的）のＩＣ_５０値は、それぞれ２．８４２μＭ及び１３．５５ｎＭであった。化合物１２３（標的）は、化合物７１（対照）と比較して、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２細胞の成長阻害効果が約１４０倍になった。

【0660】

化合物７１（対照）及び化合物１２３（標的）の異なるＭＭＡＥ濃度でのＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２に対する用量反応曲線及びＩＣ_５０値を以下に示す。値は、平均±標準偏差（ｓｄ；ｎ＝４）。

【表11】

【0661】

実施例７．２Ｄ３－デンドリマーコンジュゲートのＨＥＲ２＋細胞への結合
シアニン５（Ｃｙ５）で標識された異なるサイズのナノボディ－デンドリマーコンジュゲート、化合物１２４、１２５、及び１２６を用いて、非標的化合物５２、５３、及び５４（Ｇ３、Ｇ４、及びＧ５）に対するＨＥＲ２＋ヒト細胞株への結合を実証した。

【0662】

ＨＥＲ２発現ヒト転移性がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４５３（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－１３１）及びＨＥＲ２－低上皮性腺がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２６）を、１０％ＦＢＳ及びペニシリン－ストレプトマイシン（１００Ｕ／ｍＬ）を含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて、５％ＣＯ_２加湿雰囲気下で３７℃で維持し、トリプシンを使用して、コンフルエントになるまで継代培養した。ヒト腺がん卵巣細胞株ＳＫＯＶ－３（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ－７７）細胞を、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ及びペニシリン－ストレプトマイシン（１００Ｕ／ｍＬ）を加えたＲＰＭＩ培地を用いて、５％ＣＯ_２加湿雰囲気下で３７℃で維持し、コンフルエントになるまで継代培養した。

【0663】

蛍光顕微鏡による細胞会合の測定及び画像化には、８ウェルチャンバースライドに、１ｘ１０^５個／ウェルの細胞を播種し、一晩かけて付着させた。翌日、非コンジュゲートデンドリマー化合物５２、５３、及び５４（対照）又はナノボディデンドリマー化合物１２４、１２５、及び１２６を最終濃度０．５μｇ／ｍｌになるまで培地に添加し、氷上で１時間インキュベートした。細胞を染色し、細胞膜（小麦胚芽凝集素－ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ４８８）及び核（Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２）を可視化した。細胞は、１０％ＦＢＳを添加した４００μｌの冷Ｆｌｕｏｒｏｂｒｉｔｅ培地で３回洗浄した。４０ｘ０．９ＮＡの空気対物レンズが付属しているＯｌｙｍｐｕｓ ＩＸ８３顕微鏡を使用して、標準的な「Ｐｉｎｋｅｌ」ＤＡＰＩ／ＦＩＴＣ／ＣＹ５フィルタセットを用いて細胞を画像化した。

【0664】

インビトロ会合試験
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２（ＨＥＲ２ノックイン）（上記の実施例６に記載されるように）、又はＳＫＯＶ－３細胞を、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加した５００μＬの適切な成長培地で２４ウェルプレート（ウェル当たり１ｘ１０^５細胞）に播種し、インキュベーション時間を１時間から２４時間まで変化させて、化合物３６又は化合物４１を３．３３ｎＭ、３７℃、５％ＣＯ_２加湿雰囲気下でインキュベートした。インキュベーション後、ＤＰＢＳで穏やかに３回洗浄することにより、付着細胞から非結合粒子／非会合粒子を除去した（３００μＬ／ウェル）。ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｅｎｚｙｍｅ（１Ｘ）、ｎｏ ｐｈｅｎｏｌ ｒｅｄ（１５０μＬ／ウェル）を用いて、室温で５～１０分間処理することにより、プレートから細胞を除去した。その後、プレートを氷上に置いた。その後、フローサイトメトリーによりＣｙ５からのシグナルを取得することにより、試料の細胞結合及び会合を決定した。

【0665】

内在化速度を測定するために、３７℃で２４時間、４時間、１時間、０．５時間、０．１時間、ナノボディデンドリマーを細胞とインキュベートした後、結合していないナノボディデンドリマーを洗浄によって除去し、フローサイトメトリーによって分析した。

【0666】

フローサイトメトリーの結果：Ｇ３～Ｇ５デンドリマーのＨＥＲ高／低細胞株への結合：
これらの結果は、ナノボディ－デンドリマー化合物１２４、１２５、及び１２６は、ＨＥＲ２陽性ＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞に結合することを示す。非コンジュゲートデンドリマー化合物５２、５３、及び５４は、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞に結合しなかった。示されているデータは、３つのウェルで処理された細胞の平均ＭＦＩであり、標準偏差とともに示している。統計解析には、ダネット多重比較検定を用いたＡＮＯＶＡを使用した。

【表12】

【0667】

フローサイトメトリーの結果：ＨＥＲ２低及びＨＥＲ２＋細胞株に結合する化合物７１及び化合物１２３
これらの結果は、２４時間にわたる３つの細胞株全てに対する化合物７１（対照）の最小限の結合を明確に示している。化合物１２３（標的）は、細胞株のＨＥＲ２受容体の発現レベルに応じて、結合の増加を示した。フローサイトメトリーにより、２４時間後までに、化合物１２３で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２細胞（１４６．１±９．６）は、化合物７１で処理した細胞（１６．０５±１．８９）と比較して、約９倍強い蛍光を示したことが明らかになった。また、化合物１２３で処理したＳＫＯＶ－３細胞（２７７．５±５．９）は、化合物７１で処理した細胞（１６．４±６．８６）と比較して、約１６倍強い蛍光を示した。その結果を図２に示す。

【0668】

細胞会合：ＨＥＲ２低及びＨＥＲ＋細胞株に結合するデンドリマーサイズＧ３～Ｇ５：
追加のデンドリマー世代を試験した：化合物５２及び１２４（Ｇ３）、化合物５３及び１２５（Ｇ４）、並びに化合物５４及び１２６（Ｇ５）、それぞれ２Ｄ３にコンジュゲートされていない、及びコンジュゲートされている。非コンジュゲート対照デンドリマー化合物５２、５３、及び５４は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＨＥＲ２低）及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２（ＨＥＲ２陽性）との会合が有意に少なかった。２Ｄ３－コンジュゲートデンドリマー化合物１２４、１２５及び１２６は、２４時間にわたってＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２と有意に会合し、化合物１２６（Ｇ５）が、最も高い細胞会合率を有し（７３．４７％±０．９２）、２番目は化合物１２４（Ｇ３、６０．７３±０．２１）及び化合物１２５（Ｇ４、５６．２７±１．０２）であった。デンドリマーの生成にかかわらず、デンドリマーとコンジュゲートされた２Ｄ３ ＨＥＲ２－ナノボディは、ＨＥＲ２受容体を過剰に発現している細胞に対する結合が大幅に改善する。これらのコンジュゲートのフローサイトメトリーの結果を図３に示す。

【0669】

以下の表は、様々なサイズのＧ２、Ｇ３、Ｇ４、及びＧ５ ２Ｄ３コンジュゲートデンドリマーとＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２細胞との２４時間にわたる細胞会合値のパーセントを示す。値は平均±標準偏差（ＳＤ；ｎ＝３）である。

【表13】

【表14】

【表15】

【表16】

【0670】

以下の表は、化合物５２（Ｇ３）、化合物５３（Ｇ４）、及び化合物５４（Ｇ５）とＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２細胞との２４時間にわたる細胞会合値のパーセントを示す。値は平均±標準偏差（ＳＤ；ｎ＝３）である。

【表17】

【表18】

【0671】

化合物１２４（Ｇ３）、化合物１２５（Ｇ４）、化合物１２６（Ｇ５）とＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２細胞との２４時間にわたる平均蛍光強度値。値は平均±標準偏差（ＳＤ；ｎ＝３）である。

【表19】

【表20】

【0672】

化合物５２（Ｇ３）、化合物５３（Ｇ４）、化合物５４（Ｇ５）とＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２細胞との２４時間にわたる平均蛍光強度値。値は平均±標準偏差（ＳＤ；ｎ＝３）である。

【表21】

【0673】

化合物ＳＲＳ－２－３０４とＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２細胞との２４時間にわたる平均蛍光強度値。値は平均±標準偏差（ＳＤ；ｎ＝３）である。

【表22】

【0674】

デンドリマーとコンジュゲートされたＨＥＲ２－ナノボディは、ＨＥＲ２受容体をトラスツズマブと同等のレベルで過剰に発現している細胞への結合を示す。

【0675】

上記結合アッセイもまた、ＢＴ－４７４細胞株を使用して実施した。１時間インキュベーション後の濃度範囲における化合物の平均蛍光強度値を下表に示す。値は、平均値±標準偏差（ＳＤ；ｎ＝３）である。データは、Ｈｅｒ２＋細胞に結合するＨｅｒ２標的デンドリマーを示す。

【表23】

【0676】

実施例８．ＨＥＲ２過剰発現細胞へのコンジュゲートの内在化を示す試験
共焦点細胞取り込み
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２及びＳＫＯＶ－３細胞をμ－スライド８ウェルチェンバーカバースリップ（ｉｂｉｄｉ）に１．０ｘ１０^４細胞／ウェルでプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩接着させた。その後、化合物７１及び化合物１２３（３．３３ｎＭ）を添加し、１、３、６、及び２４時間インキュベートした。細胞を洗浄し、次いで１％パラホルムアルデヒドで２０分間、室温で固定した。細胞膜は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８－小麦胚芽凝集素（ＡＦ４８８－ＷＧＡ、５μｇ ｍＬ^－１）／ＤＰＢＳで、室温で１０分間染色した。細胞核は、４’、６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ，２μｇ ｍＬ^－１）／ＤＰＢＳを用いて、室温で１０分間対比染色した。共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ ＳＰ８）を用いて、蛍光画像及び光学的切片を収集した。画像は、Ｆｉｊｉ（Ｉｍａｇｅ Ｊ １．５２ｎ）で処理した。

【0677】

共焦点顕微鏡画像を、図４～６に示す。共焦点画像では、２４時間インキュベート後も、図４ａ）の化合物７１及び図４ｂ）の化合物１２３はいずれも、ほとんどＭＤＡ－ＭＢ－２３１と会合していない。一方、標的化合物１２３は、２４時間インキュベート後に、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２及びＳＫＯＶ－３細胞によって内在化され（図５ａ及び図６ａ）、化合物７１は、内在化されなかった（図５ｂ及び図６ｂ）。

【0678】

実施例９．トリチウム標識ＭＭＡＥコンジュゲートデンドリマー（化合物７２及び１２７）の腫瘍分布
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２細胞（５０μＬのＰＢＳ：マトリゲルに５ｘ１０^６個）を、雌のＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（５～７週齢）の第４乳腺脂肪パッドに皮下移植した。固形腫瘍は、１００ｍｍ^３まで成長させた（約３～４週間）。マウスを各群６匹の２つの異なる群に分けた。化合物７２（対照群）又は化合物１２７（標的群）（１００μＬ中０．５μＣｉ、ＰＢＳ ｐＨ７）を、イソフルラン鎮静下で尾静脈注射した。マウスは、４８時間後にイソフルラン麻酔させ、頸椎脱臼直前に心臓穿刺により血液を採取した。その後、選択した器官（腫瘍、肝臓、脾臓、腎臓、膵臓、肺、心臓、及び脳など）を摘出し、重量を測定して、トリチウム（^３Ｈ）の体内分布用に処理した。

【0679】

その結果を図７に示す。標的化デンドリマー化合物１２７は、ＨＥＲ２陽性腫瘍に蓄積され（３．５３％用量／ｇ±０．４３）、非コンジュゲート対照化合物７２（１．８８％用量／ｇ±０．２８）よりも広い範囲で、腫瘍への取り込みが約８０％増加したことになる（ｐ＜０．０５）。血中濃度差は、標的デンドリマーと対照デンドリマーとでは有意ではなく、それぞれ４．５２％用量／ｇ±０．２４、及び３．６９％用量／ｇ±０．３１であった。薬物動態の差が腫瘍の保持に影響を与える可能性はないため、２Ｄ３ ＨＥＲ２－ナノボディ標的化により、デンドリマーの保持が改善された。

【0680】

実施例１０．ＳＫＯＶ３腫瘍モデルにおけるＣｙ５標識－ＭＭＡＥコンジュゲートデンドリマー（化合物７１及び１２３）の腫瘍への取り込みの有効性及び共焦点画像化
雌のＮＯＤ ＳＣＩＤマウス（８週齢）の脇腹に、３ｘ１０^６個のＳＫＯＶ３細胞／ＰＢＳ：マトリゲル（１：１）を皮下接種した。固形腫瘍は、２００ｍｍ^３まで成長させた（約３週間）。マウスを５つの異なる群に分け、化合物７１（対照群）又は化合物１２３（標的群）（２５０μＬのＰＢＳ、ｐＨ７中にＭＭＡＥ換算で０．５ｍｇ／ｋｇ）、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）４０ｍｇ／ｋｇ及びＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（４０ｍｇ／ｋｇ）を、イソフルラン鎮静下で尾静脈注射した。

【0681】

（ａ）共焦点画像化
マウスは、４８時間後にイソフルラン麻酔させ、頸椎脱臼直前に心臓穿刺により血液を採取した（ｎ＝２／群））。その後、腫瘍を摘出し、４％パラホルムアルデヒドで一晩固定した後、ＰＢＳで洗浄し、アガロースに包埋した。その後、腫瘍をビブラトームで１００μｍまで切開し、切片には核（ＤＡＰＩ、同時、時間、サプライヤー）及び血管（ＣＤ３１、同時、時間、サプライヤー）の染色を行った。共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ ＳＰ８）を用いて、蛍光画像及び光学的切片を収集した。その結果は、図８及び図９に示す。標的化デンドリマー（化合物１２３）は、腫瘍の中心部及び周辺部に取り込みが示されたが、化合物７１では示されなかった。

【0682】

（ｂ）コンジュゲートの有効性
倫理的エンドポイントが満たされるまで、一定の間隔で腫瘍の測定を行った（ｎ＝６／群）。その結果を、図１０（経時的平均腫瘍体積のプロット）、図１１（経時的生存率のプロット）、及び図１２（経時的平均体重変化のプロット）に示す。標的化デンドリマー化合物１２３は、化合物７１、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）及びＫａｄｃｙｌａ（登録商標）と比較して、腫瘍の完全な退縮を示した。

【0683】

実施例１１．ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２＋細胞株における第４世代複数ナノボディデンドリマー内在化のキネティックス
第４世代では、上述のように分離した１個（単一ナノボディ）又は２～４個（複数ナノボディ）の抗ＨＥＲ２ ２Ｄ３ナノボディ、化合物９１及び化合物９２のいずれかにコンジュゲートされたシデロフォ由来のキレーターであるデスフェリオキサミン（ＤＦＯ）を有するＣｙ５標識ナノボディ－デンドリマーコンジュゲートを用いて、デンドリマー１個当たりに対して異なる数のナノボディが付着しているＨＥＲ２＋ヒト細胞株への結合性を比較した。

【0684】

ＨＥＲ２ノックイン上皮性腺がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＨＥＲ２（実施例６に記載）を、１０％ＦＢＳ及びペニシリン－ストレプトマイシン（１００ＵｍＬ^－１）を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）で、５％ＣＯ^２加湿雰囲気下、３７℃で維持した。

【0685】

フローサイトメトリーによる細胞結合の測定では、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地で、９６ウェルの培養プレートに２０，０００個／ウェルの細胞を一晩かけてプレーティングした。単一又は複数のナノボディデンドリマーを３ｎＭ、６ｎＭ、１２ｎＭ、及び３０ｎＭで細胞に添加し、３７℃で０．５時間、１時間、２時間、４時間、及び６時間インキュベートした。同様にして調製した対照細胞を事前冷却し、３０ｎＭの単一及び複数のナノボディデンドリマーと氷上で６時間インキュベートした。

【0686】

ナノボディコンジュゲートデンドリマーとのインキュベーション後、１％ウシ血清アルブミンを添加した氷冷ＰＢＳで細胞を３回洗浄し、結合していないデンドリマーを除去し、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｅｎｚｙｍｅ（１Ｘ）、ｎｏ ｐｈｅｎｏｌ ｒｅｄ（Ｇｉｂｃｏ，１２６０４０１３）を用いてプレートから遊離させた。フローサイトメトリー（Ｓｔｒａｔｅｄｉｇｍ Ｓ１０００ＥＯＮ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）によって分析するために、細胞を冷ＤＰＢＳに再懸濁し、デンドリマーの存在をＣｙ５からシグナルを得ることによって測定した。各濃度、各時点で内在化したデンドリマーの量を推定するために、氷上でデンドリマーとインキュベートした細胞のＣｙ５シグナルを、内在化がないと仮定した場合の最大の表面結合デンドリマーとした。このシグナルを、３７℃でインキュベートした細胞中で測定したシグナルから差し引き（これは、表面に結合し、内在化したデンドリマーを表す）、内在化したデンドリマーからのシグナルのみを単離した（図１３を参照のこと）。

【0687】

複数（化合物９２）コンジュゲート抗ＨＥＲ２ナノボディデンドリマーは、単一（化合物９１）の場合と比べて、低濃度でより迅速に身体内に内在化される。高濃度の場合、化合物９１は、約２時間後に化合物９２よりも高いレベルの内在化を示す。

【0688】

実施例１２．ＨＥＲ２ Ｈｉ細胞株における単一及び複数のナノボディとのコンジュゲートの共焦点画像化
ＨＥＲ２高，ＳＫＯＶ－３細胞をμ－スライド８ウェルチェンバーカバースリップ（ｉｂｉｄｉ）に１．０ｘ１０^４細胞／ウェルでプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩接着させた。その後、化合物９２（複数の２Ｄ３－デンドリマーコンジュゲート）及び化合物９１（単一の２Ｄ３－デンドリマーコンジュゲート）（３．３３ｎＭ）を加え、１時間、３時間、６時間、及び２４時間インキュベートさせた。細胞をＤＰＢＳで洗浄し、その後、１％パラホルムアルデヒドで２０分間、室温で固定した。細胞膜は、小麦胚芽凝集素のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８（登録商標）コンジュゲート（ＡＦ４８８－ＷＧＡ、５μｇ ｍＬ^－１）／ＤＰＢＳで、室温で１０分間染色した。細胞核は、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（２μｇ ｍＬ^－１）／ＰＢＳで、室温で１０分間対比染色した。共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ ＳＰ８）を用いて、蛍光画像及び光学的切片を収集した。画像は、Ｆｉｊｉ（ＩｍａｇｅＪ １．５２ｐ）で処理した。

【0689】

共焦点顕微鏡画像を図１４及び図１５に示す。化合物９１及び化合物９２は両方とも、２４時間のインキュベーションの後、ＳＫＯＶ－３細胞と結合し、内在化する。注目すべきことに、化合物９２（図１４ｂ、ｃ）は、化合物９１（図１５ｂ、ｃ）と比較して、３時間及び６時間後に、より大きい結合及び内在化の程度を示す。

【0690】

複数（化合物９２）コンジュゲート抗ＨＥＲ２ナノボディＧ４デンドリマーは、この濃度では単一のナノボディＧ４デンドリマー（化合物９１）よりも迅速に内在化し、６時間までは違いが見られるが、２４時間では、違いは現れなくなる。

【0691】

実施例１３．標的化されたＺｒ放射性核種含有デンドリマー－ＳＫＯＶ３乳がん異種移植片を用いた画像化試験
卵巣がんのＳＫＯＶ３マウス異種移植モデルにおける^８９Ｚｒ－標識ＨＥＲ２標的デンドリマー構築物及び非標的デンドリマー構築物の蓄積を調べた。注射後９日目までの体内分布をＰＥＴ－ＣＴによって測定し、２日目及び９日目に摘出した器官のエクスビボガンマ・シンチレーションによって検証した（可能な場合）。試験は、３部構成で行った。

【0692】

腫瘍の発生及び成長
５ｘ１０^６のＳＫＯＶ３細胞（５０：５０のマトリゲル：ＰＢＳ５０μＬ）を、健康な雌のＮＯＤ－ＳＣＩＤ（約２０ｇ）８週齢マウスの右脇腹にＳＣ注射した。画像化化合物を注射する前に、腫瘍を４週間成長させた。

【0693】

全ての腫瘍は画像化時に触知でき、画像化実験時のサイズは約３～５ｍｍであった。

【0694】

試験化合物
以下の表中の化合物を、以下に記載されるように標識した。

【表24】

【0695】

^８９Ｚｒによる試験化合物の放射性標識及びＲａｄｉｏＴＬＣ分析
全ての構築物（必要に応じて鉄除去の前処理を施したもの：ｈｔｔｐ：／／ｊｎｍ．ｓｎｍｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／４４／８／１２７１．ｌｏｎｇ）を、０．１Ｍ ｐＨ７．４ ＨＥＰＥＳ緩衝液中でデンドリマーの過剰量（過剰量については上記の表参照）で^８９Ｚｒと３７℃で４５分間インキュベートした。各溶液の試料を採取し、５０ｍＭ ＤＴＰＡと１：１で混合した。各溶液の５μＬをＴＬＣ紙（シリカゲル含浸Ａｇｉｌｅｎｔ ｉＴＬＣ－ＳＧガラスマイクロファイバークロマトグラフィー紙）にスポットし、５０：５０ Ｈ_２Ｏ：エタノールで実施した。その後、プレートをＥｃｋｅｒｔ＆Ｚｉｅｇｌｅｒ Ｍｉｎｉ－Ｓｃａｎ ａｎｄ Ｆｌｏｗ－Ｃｏｕｎｔ ｉＴＬＣ Ｒｅａｄｅｒで画像化した。必要に応じて、７Ｋ ＭＷＣＯ Ｚｅｂａ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、製造業者のプロトコルに従って精製することによって、結合していないジルコニウムを除去した。全てのサンプルが、９５％を超える標識を示した。品質管理のために、遊離の^８９Ｚｒ及びＤＴＰＡに結合した^８９Ｚｒの溶出挙動を監視するための対照実験を行い、また、^８９Ｚｒで標識された任意の未結合のキレート剤を確認するために、各試料をＤＴＰＡを含めて又はＤＴＰＡを含まずに実施した。代表的なＲａｄｉｏＴＬＣの画像を図１６に示し、これらは、^８９Ｚｒが全てデンドリマーに結合しており、遊離^８９Ｚｒが、存在しなかったことを示す。

【0696】

試験注射詳細
インビボ画像化実験では、２匹のマウスに尾静脈から１００μＬの試験化合物を注射し（２９Ｇ針、約１．５～３．５ＭＢｑ）、様々な時点での腫瘍の蓄積及び生体内分布を観察した。注射後９日目の器官分布を決定するために、ガンマ線計数を用いてエクスビボで定量化を行った。生体内分布実験では、２匹のマウスに構築物を注射して、注射後４８時間後にエクスビボでの腫瘍の蓄積及び生体内分布をガンマ線計数で監視した。

【0697】

結果
ＰＥＴ－ＣＴ画像化
注射後４時間、２４時間、４８時間、５日、７日、及び９日に、３０～９０分の静止画撮影を行った。ＰＥＴ画像は、サブセット化による期待値最大化法（ｏｒｄｅｒｅｄ－ｓｕｂｓｅｔ ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ ｍａｘｉｍｉｚａｔｉｏｎ）（ＯＳＥＭ２Ｄ）アルゴリズムを用いて再構成され、ＣＴ及びＰＥＴ画像の融合及び関心領域（ＲＯＩ）の定義が可能なＩｎｖｅｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗｏｒｋｐｌａｃｅソフトウェア（ＩＲＷ ４．１）（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を用いて分析した。各動物のＣＴ及びＰＥＴデータセットは、ＩＲＷソフトウェア（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を用いてアライメントを行い、目的の器官が確実にオーバーラップするようにした。ボクセル当たりの活性量は、ＰＥＴスキャナの効率を考慮して，既知の活性量の^８９Ｚｒを充填した円筒形ファントムをスキャンすることによって得られた変換係数を用いて、ｎｃｉ／ｃｃに変換した。活性濃度は、組織１ｃｍ^３当たりの減衰補正された注入活性のパーセンテージとして表され、注入用量／ｇパーセント（ＩＤ／ｇ％）として近似させ得る。結果を、化合物８９、９１、９３の９日間にわたる（ａ）腎臓、（ｂ）肝臓、及び（ｃ）腫瘍における１ｇ当たりのジルコニウム注入用量率（パーセンテージ）を示すグラフとして、図１７に示す。代表的なＰＥＴ画像を図１８に示す。放射性同位元素で標識されたコンジュゲートの代表的な最大強度投影図。全てのＰＥＴデータは、ベクレル／ボクセル（ｃｍ^３）で表され、腫瘍の取り込みを強調するために閾値が設定されている。

【0698】

注入後２日目及び９日目に器官を取り出し、エクスビボガンマ解析によってシグナル強度を定量化し、画像化した。更に、４８時間後に各コホートにつきｎ＝２を集め、ガンマ解析により生体内分布を評価した。エクスビボでの生体内分布の結果を、以下の表に示す。

【表25】

【0699】

その結果、特に化合物８７（低分子Ｇ３デンドリマー）の２日目の結果から、非標的と比較して標的の腫瘍対血液の比率が高いことが示されている。９日目には、非標的と比較して、特に化合物９１及び化合物９３（より大きいＧ４及びＧ５のデンドリマー）では、標的の腫瘍対血液の比率がより良好である。

【表26】

【表27】

【表28】

【0700】

その結果は、特に化合物９１及び化合物９３（より大きいＧ４及びＧ５のデンドリマー）では２日目に、また化合物８９（Ｇ３のデンドリマー）では９日目に、非標的と比較して、標的の腫瘍において高いシグナルを示す。

【0701】

結論
１．デンドリマーが大きいほど、腫瘍への蓄積がより良好である。化合物４９（２Ｄ３）は、迅速なクリアランス及び低い蓄積を示した。

【0702】

２．標的化療法では、非標的化デンドリマーよりも、腫瘍への蓄積性が高くなる。

【0703】

３．化合物８７（Ｇ３ １Ｋ－ナノボディ）は、他の低分子デンドリマーと比較して、腫瘍中でのシグナルが有意に増強することを示す。

【0704】

４．化合物９１及び化合物９３（Ｇ４及びＧ５ナノボディ）は、４８時間後に腫瘍中で１２％超のＩＤ／ｇを示し、９日の時点では、８％超のＩＤ／ｇを示した。

【0705】

５．デンドリマーを含む低分子ナノボディ及びナノボディのみは、腎臓の高い滞留性を有する。他のクリアランス器官での異常な蓄積は観察されず、肝臓及び脾臓のシグナルは、ポリマーナノ材料で典型的に観察されるような予想濃度範囲を示した。

【0706】

ＰＥＴ－ＣＴ画像化に基づくヒト線量測定モデリング
線量測定計算は、ＭＩＲＤスキーマに従って実行した。

【0707】

供給された^８９Ｚｒマウスデータに単指数を適合させた。次いで、同位体^１７７Ｌｕ及び^６８ＧａについてΛ_ｐｈｙｓを修正して、各同位体の崩壊の総数を計算した。

【数1】

【0708】

腫瘍用量は、マウス腫瘍のサイズにモデル化した。

【0709】

一般的な観察
－列挙されていない臓器への交差照射による線量は最小限であり、取り込みが顕著な臓器の線量よりも数桁少ない。
－^１７７Ｌｕの腎臓のｍＧｙ／ＭＢｑは、^１Ｌｕｔａｔｈｅｒａ及び^１７７ＬｕＰＳＭＡ－６１７などの他の^１７７Ｌｕ放射性医薬品と同程度の大きさのようである。
－腫瘍用量は、通常の臓器摂取量と比較して比較的多い。

【表29】

【0710】

実施例１４．ＢＴ４７４異種移植モデルにおける放射線治療効果
動物モデル
健康な雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウス（９週齢）を、西オーストラリア州のＡｎｉｍａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｒｅから入手した。投与群当たり合計４匹のマウスに、最初にエストロゲンペレット（１７ベータ－エストラジオール０．７２ｍｇ／ペレット６０日放出；Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ）を移植し、次いで、２日目に、ＰＢＳ：マトリゲル（１：１）中の１０×１０^６ ＢＴ４７４細胞を乳房の脂肪パッドに皮下接種した。マウスの体重を測定し、電子カリパスを使用して腫瘍を毎週２～３回測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）を（（長さ（ｍｍ）×（幅（ｍｍ））^２）／２として計算した。腫瘍が約１００ｍｍ^３の平均体積（細胞の移植から約５週間）に達したため、マウスを、以下の表に概説される８つの投与群に無作為化した。

【0711】

放射線標識及びＴＬＣ分析。
デンドリマー又は修飾トラスツズマブのいずれかを、デンドリマー／トラスツズマブの１００倍過剰量で、０．１Ｍ ｐＨ５．５酢酸アンモニウム緩衝液中で３７℃で４５分間^１７７Ｌｕとインキュベートした。各溶液の試料を採取し、５０ｍＭ ＤＴＰＡと１：１で混合した。各ＤＴＰＡインキュベート試料又はニート溶液の５μＬをＴＬＣ紙（シリカゲル含浸Ａｇｉｌｅｎｔ ｉＴＬＣ－ＳＧガラスマイクロファイバークロマトグラフィー紙）にスポットし、５０：５０ Ｈ２Ｏ：エタノールで実施した。その後、Ｅｃｋｅｒｔ ａｎｄ Ｚｉｅｇｌｅｒ Ｍｉｎｉ－Ｓｃａｎ及びＦｌｏｗ－Ｃｏｕｎｔシステムを使用して、放射性標識種の移動の検出を達成した。全ての試料が、９５％を超える標識を示した。品質管理のために、遊離^１７７Ｌｕ及びＤＴＰＡに結合した^１７７Ｌｕの溶出挙動を監視するための対照実験を行った。

【0712】

必要に応じて、７Ｋ ＭＷＣＯ Ｚｅｂａ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、製造業者のプロトコルに従って精製することによって、結合していない銅を除去した。

【0713】

議論された各分析について、放射性同位体ＴＬＣは、試料を過剰のＤＴＰＡ（５０ｍＭ）と混合して、任意の非結合^１７７Ｌｕをスカベンジすることによって得られた。試験化合物を^１７７Ｌｕで放射標識し、所望の特異的活性及び薬物負荷を達成するために、高温材料を低温材料で希釈することにより、約９又は１５ＭＢｑの放射線測定用量を送達した。

【0714】

処理プロトコル
被験試料は、下記のスケジュールで尾静脈注射（２９Ｇ針）により約０．１ｍＬ／１０ｇの体重でＩＶ投与した。腫瘍が有意なサイズ（＞１ｃｍ^３）に達した場合、又は倫理的要件に従って、マウスを選別した。

【表30】

【0715】

結果
図１９及び下表に示すように、標的放射性核種デンドリマー（化合物ＳＲＳ－２－３０４）及び非標的放射性核種デンドリマー（化合物ＲＨ－３－１６０）は、いずれも腫瘍成長を抑制するのに有効であり、標的デンドリマーが最も効果的であった。図２０は、１５ｍＢｑ及び２×９ＭＢｑの^１７７Ｌｕ用量での、標的（化合物ＳＲＳ－２－３０４）の６７日目の腫瘍再成長を示していない。

【表31】

【図1a】

【図1b】

【図1c】

【図1d】

【図1e】

【図1f】

【図1g】

【図1h】

【図1i】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【配列表】

2023529640000001.app

【国際調査報告】