特表 2023-531251 抗ＣＤ２抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-21

(54)【発明の名称】抗ＣＤ２抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20230713BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230713BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20230713BHJP

   A61K 31/573 20060101ALI20230713BHJP

   A61K 31/675 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 27/16 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20230713BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230713BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230713BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20230713BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20230713BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

A61K39/395 N ZNA

A61K39/395 D

A61K45/00

A61K38/16

A61P37/06

A61P29/00 101

A61P19/02

A61P19/00

A61P29/00

A61P3/10

A61P17/06

A61P1/04

A61P17/00

A61P25/00

A61P13/12

A61P37/08

A61P21/00

A61P1/16

A61P11/06

A61P43/00 121

A61K31/5377

A61K31/573

A61K31/675

A61P9/00

A61P7/06

A61P7/00

A61P5/14

A61P31/00

A61P11/02

A61P27/02

A61P11/00

A61P17/14

A61P27/16

A61P21/04

A61P3/00

C07K16/46

C07K19/00

C07K16/00

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022580094

(86)(22)【出願日】2021-06-22

(85)【翻訳文提出日】2023-02-14

(86)【国際出願番号】 EP2021066989

(87)【国際公開番号】W WO2021259927

(87)【国際公開日】2021-12-30

(31)【優先権主張番号】63/042,844

(32)【優先日】2020-06-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/135,381

(32)【優先日】2021-01-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/182,095

(32)【優先日】2021-04-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522497560

【氏名又は名称】ゼラリオン マルタ リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100097456

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 徹

(72)【発明者】

【氏名】デビッド ベルグランド

(72)【発明者】

【氏名】エリック ベルグランド

(72)【発明者】

【氏名】フェリックス セルバーグ

(72)【発明者】

【氏名】クリスチャン バインダー

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA22

4C084BA41

4C084CA53

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA011

4C084ZA012

4C084ZA331

4C084ZA332

4C084ZA341

4C084ZA342

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA511

4C084ZA512

4C084ZA551

4C084ZA552

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZA681

4C084ZA682

4C084ZA751

4C084ZA752

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZA921

4C084ZA922

4C084ZA941

4C084ZA942

4C084ZA961

4C084ZA962

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB131

4C084ZB132

4C084ZB151

4C084ZB152

4C084ZB311

4C084ZB312

4C084ZC061

4C084ZC062

4C084ZC211

4C084ZC212

4C084ZC351

4C084ZC352

4C084ZC512

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085BB36

4C085BB42

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG02

4C085GG04

4C086AA01

4C086BC73

4C086DA10

4C086DA38

4C086GA02

4C086GA12

4C086MA02

4C086MA03

4C086NA05

4C086ZA01

4C086ZA33

4C086ZA34

4C086ZA36

4C086ZA51

4C086ZA55

4C086ZA59

4C086ZA68

4C086ZA89

4C086ZA92

4C086ZA94

4C086ZA96

4C086ZB08

4C086ZB11

4C086ZB13

4C086ZB15

4C086ZB31

4C086ZC06

4C086ZC21

4C086ZC35

4C086ZC75

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA22

4H045FA74

(57)【要約】

本明細書では、改善された抗ＣＤ２抗体、及び免疫系の慢性または急性障害の治療及び／または予防におけるそれらの使用のための方法を提供する。また、本明細書では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を投与することによって、対象における免疫関連障害または疾患を治療または予防するための方法が提供される。これらの方法及びキットで使用するための組成物も開示される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

組換え抗ＣＤ２抗体であって、前記抗体がＩｇＧ抗体であり、シプリズマブと比較して、前記抗体の免疫調節活性が維持される一方で、抗体依存性細胞傷害を媒介する前記抗体の能力が低下するかまたは排除される、前記抗体。

【請求項2】

組換え抗ＣＤ２抗体であって、前記抗体がＩｇＧ抗体であり、重鎖の定常領域の少なくとも１つのコンセンサスＮグリコシル化部位が、グリコシル化されていない、前記抗体。

【請求項3】

少なくとも１つのコンセンサス配列が、それ以上グリコシル化されないように変異されている、請求項１に記載の抗体。

【請求項4】

組換え抗ＣＤ２抗体であって、前記抗体がＩｇＧ抗体であり、重鎖の定常領域の少なくとも１つのコンセンサスＮ結合型グリコシル化部位が、以下のオリゴ糖のうちの１つを保持する：

【化1】

（ここで、記号は次のとおりである：白三角：フコース、白四角：Ｎ－アセチルグルコサミン、灰色の丸：マンノース、白丸：ガラクトース）、前記抗体。

【請求項5】

組換え抗ＣＤ２抗体であって、前記抗体が、哺乳動物細胞中で発現しているＩｇＧ抗体であり、エンドグリコシダーゼで処理されている、前記抗体。

【請求項6】

前記哺乳動物細胞が、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項５に記載の抗体。

【請求項7】

前記エンドグリコシダーゼが、ＥｎｄｏＳ２である、請求項５に記載の抗体。

【請求項8】

ヒトＣＤ２のＮ１８、Ｋ５５、及びＴ５９のアミノ酸残基が、ヒトＣＤ２に対する前記抗体の親和性を決定する、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項9】

前記抗体の前記免疫調節活性が維持される一方で、抗体依存性細胞傷害を媒介する前記抗体の前記能力は、低下するかまたは排除される、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項10】

前記免疫調節活性が、ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ細胞の誘導を含み得る、請求項９に記載の抗体。

【請求項11】

前記免疫調節活性が、ＦｏｘＰ３発現の増加を含み得る、請求項９に記載の抗体。

【請求項12】

前記免疫調節活性が、ＣＤ６９＋ＮＫ細胞の抑制を含み得る、請求項９に記載の抗体。

【請求項13】

前記抗体が、ＩｇＧ１である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項14】

前記抗体が、ＩｇＧ２である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項15】

前記抗体が、ＩｇＧ４である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項16】

前記抗体が、ヒト化されている、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項17】

前記抗体が、完全ヒトである、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項18】

前記抗体が、ＩｇＧと比較して追加の抗体成分を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項19】

前記追加の抗体成分が、前記組換え抗ＣＤ２抗体の複製領域であり得る、請求項１８に記載の抗体。

【請求項20】

追加の抗体成分が、前記組換え抗ＣＤ２抗体のＦｃ領域のＣ末端に連結している、請求項１８に記載の抗体。

【請求項21】

前記追加の抗体成分が、ＣＤ２、ＣＨ２ドメイン、またはＣＨ３ドメインに結合するｓｃＦｖを含み得る、請求項１８に記載の抗体。

【請求項22】

前記ｓｃＦｖドメインが、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨの配列が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であり、前記ＶＬの配列が、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である、請求項２１に記載の抗体。

【請求項23】

前記ＣＨ２ドメインが、配列番号１８または１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の抗体。

【請求項24】

前記ＣＨ３ドメインが、配列番号２０または２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の抗体。

【請求項25】

ａ．前記抗体の前記重鎖可変領域ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を含み；
ｂ．前記抗体の前記重鎖可変領域ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を含み；
ｃ．前記抗体の前記重鎖可変領域ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を含み；
ｄ．前記抗体の前記軽鎖可変領域ＣＤＲ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含み；
ｅ．前記抗体の前記軽鎖可変領域ＣＤＲ２が、配列番号７のアミノ酸配列を含み；
ｆ．前記抗体の前記軽鎖可変領域ＣＤＲ３が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、
先行請求項のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項26】

前記抗体のＦｃ領域が、Ｆｃサイレンシングをもたらす１つまたは複数の点変異を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項27】

前記抗体が、ＩｇＧ１である、請求項２６に記載の抗体。

【請求項28】

前記抗体が、ＩｇＧ２である、請求項２６に記載の抗体。

【請求項29】

前記抗体が、ＩｇＧ４である、請求項２６に記載の抗体。

【請求項30】

前記抗体が、シプリズマブとは異なるネイティブ定常領域を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項31】

前記抗体が、シプリズマブとは異なるネイティブ定常領域を有し、Ｆｃサイレンシングをもたらす前記Ｆｃ領域内の点変異を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項32】

前記重鎖可変領域が、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含み；前記軽鎖可変領域が、配列番号２のアミノ酸配列、または配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項33】

前記重鎖定常領域が、配列番号９、１０、１１、１２または１３のアミノ酸配列、または配列番号９、１０、１１、１２または１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含み；前記軽鎖定常領域が、配列番号１４または１５のアミノ酸配列、または配列番号１４または１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項34】

前記重鎖が、配列番号１６の核酸配列、または配列番号１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である核酸配列を含み；前記軽鎖が、配列番号１７の核酸配列、または配列番号１７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である核酸配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項35】

配列番号１の重鎖可変領域；配列番号２の軽鎖可変領域；配列番号９、１０、１１、１２、または１３の重鎖定常領域；及び配列番号１４または１５の軽鎖定常領域を含む、組換え抗ＣＤ２抗体。

【請求項36】

配列番号１６及び配列番号１７を含む核酸配列。

【請求項37】

先行請求項のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬製剤。

【請求項38】

前記製剤が、長期投与に好適である、請求項３６に記載の医薬製剤。

【請求項39】

患者における免疫系の慢性障害を治療する方法であって、請求項１～３８のいずれか１項に記載の抗体を前記患者に投与することを含む、前記方法。

【請求項40】

前記患者が、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月、または少なくとも１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、もしくは少なくとも２０年の期間、治療を受けている、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

移植レシピエントにおいて移植に対する免疫寛容を維持する方法であって、請求項１～３８のいずれか１項に記載の抗体を前記移植レシピエントに投与することを含む、前記方法。

【請求項42】

前記抗体が、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月、または少なくとも１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、もしくは少なくとも２０年の期間、前記移植レシピエントに投与される、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記免疫系の前記急性または慢性障害が、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、関節リウマチ、強直性脊椎炎、１型糖尿病、乾癬、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（クローン病）、セリアック病、シェーグレン病、狼瘡、多発性硬化症、巣状分節性糸球体硬化症、アトピー性皮膚炎、筋萎縮性側索硬化症、原発性胆汁性肝硬変、及び原発性硬化性胆管炎、及び重度の喘息である、請求項３９または４０に記載の方法。

【請求項44】

それを必要とする対象において免疫関連障害または疾患を治療または予防する方法であって、
ａ）抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片を前記対象に投与することと；
ｂ）ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を前記対象に投与することと、
を含む、前記方法。

【請求項45】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２抗体、ＢＴＩ－３２２、ＣＢ．２１９、ＬＯ－ＣＤ２ｂ、シプリズマブ、及び／またはその抗原結合断片のうちの少なくとも１つを含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が、
ａ）配列番号３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；
ｂ）配列番号４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；
ｃ）配列番号５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｄ）配列番号６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
ｅ）配列番号７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
ｆ）配列番号８の軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項47】

前記抗ＣＤ２抗体が、ヒト化抗体である、請求項４４～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

前記抗ＣＤ２抗体が、シプリズマブまたはその抗原結合断片である、請求項４４～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が、ヒトＩｇＧ１免疫グロブリンのＦｃ断片及びＣＴＬＡ４の細胞外ドメインを含む融合タンパク質である、請求項４４～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が、配列番号２２と約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む、請求項４４～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が、配列番号２２と同一の配列を含む、請求項４４～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が、ベラタセプトである、請求項４４～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が、配列番号２３と約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む、請求項４４～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が、配列番号２３と同一の配列を含む、請求項４４～４９または５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項55】

前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が、アバタセプトである、請求項４４～４９または５４～５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項56】

前記免疫関連障害または疾患が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、乾癬性関節炎、多関節型若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性強皮症、特発性炎症性筋疾患、シェーグレン症候群、全身性血管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経炎、ギラン・バレー症候群、ライム病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、肝胆道疾患、感染性または自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、グッドパスチャー症候群、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン過敏性腸疾患、ホイップル病、自己免疫または免疫介在性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形紅斑、接触皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症、蕁麻疹、多発性硬化症、ブドウ膜炎、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、臓器移植に伴う疾患、組織移植に伴う疾患、移植片拒絶反応、移植片対宿主病、デビック病、急性散在性脳脊髄炎、急性脱髄性視神経炎、脱髄性横断性脊髄炎、ミラーフィッシャー症候群、脳脊髄根末梢神経炎、急性脱髄性多発神経炎、腫瘤様多発性硬化症、Ｂａｌｏ病型同心円硬化症、円形脱毛症、強直性脊椎炎、メニエール病、抗リン脂質症候群、混合性結合組織病、自己免疫性アジソン病、重症筋無力症、自己免疫性肝炎、尋常性天疱瘡、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、結節性多発動脈炎、心筋症、多発性軟骨炎、セリアックスプルー皮膚炎、多腺性症候群、慢性疲労症候群（ｃｆｉｄ）、リウマチ性多発筋痛症、慢性炎症性脱髄、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、チャーグ・ストラウス症候群、類天疱瘡、クレスト症候群、レイノー現象、寒冷凝集素症、ライター症候群、クローン病、リウマチ熱、円板状皮疹、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症、強皮症、グレーブス病、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、橋本甲状腺炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、潰瘍性大腸炎、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病（Ｉ型）、扁平苔癬、白斑、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項４４～５６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

前記免疫関連障害または疾患が、関節リウマチ、多関節型若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、乾癬性関節炎、またはそれらの組み合わせである、請求項４４～５６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項58】

前記免疫関連障害または疾患が、臓器移植に関連する疾患、組織移植に関連する疾患、またはそれらの組み合わせである、請求項４４～５６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が前記対象に投与されない場合、前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の用量は、治療上有効ではない、請求項４４～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が前記対象に投与されない場合、前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の用量は、治療上有効ではない、請求項４４～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項61】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後に前記対象から得られる生体試料中の細胞の数は、前記対象に、前記抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片が投与された後、または前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が投与された後（両方ではない）に、前記対象から得られる生体試料中の細胞の数と比較して、約１０％または少なくとも約１０％少ない、請求項４４～６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片が投与される及び／または前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与されるうちの少なくとも１つの前に前記対象から得られる生体試料中の細胞数の減少と比較して、前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が前記対象に投与された後に前記対象から得られる生体試料中の細胞数のより大きな減少をもたらす、請求項４４～６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片が投与される及び／または前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与されるうちの少なくとも１つの前に前記対象から得られる生体試料中のＣＤ２レベルの減少と比較して、前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が前記対象に投与された後に前記対象から得られる生体試料中の前記ＣＤ２レベルのより大きな減少をもたらす、請求項４４～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

前記抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片または前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与された後（両方ではない）に前記対象から得られる生体試料中の前記ＣＤ２レベルの減少と比較して、前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が前記対象に投与された後に前記対象から得られる生体試料中の前記ＣＤ２レベルのより大きな減少をもたらす、請求項４４～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記より大きな減少が、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きいか、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きい、請求項６６～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記対象から得られる前記生体試料中の前記細胞数が、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて少ないか、または少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて少ない、請求項６２に記載の方法。

【請求項67】

前記対象が、臓器移植及び／または組織移植を受けた、請求項４４～５６または５８～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が、臓器移植及び／または組織移植後２週間以内に少なくとも１回前記対象に投与される、請求項７０に記載の方法。

【請求項69】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が、前記臓器及び／または組織移植当日、前記臓器及び／または組織移植１日後、及び／または前記臓器及び／または組織移植４日後に前記対象に投与される請求項７０または６８に記載の方法。

【請求項70】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が、前記対象に静脈内または皮下投与される、請求項４４～６９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項71】

追加の薬剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項４４～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項72】

前記追加の薬剤が、ステロイド、カルシニューリン阻害剤、シクロスポリン、シクロホスファミド、代謝拮抗療法、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、関節リウマチを治療するために使用される薬剤、及び／またはｍＴＯＲ阻害剤のうちの１つ以上を含む、請求項７１に記載の方法。

【請求項73】

前記追加の薬剤が、バシリキシマブ誘導、ミコフェノール酸モフェチル、コルチコステロイド、またはそれらの組み合わせを含む、請求項７１に記載の方法。

【請求項74】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の初回用量が、前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の初回用量の前に投与される、請求項４４～７３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項75】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の初回用量が、前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の初回用量の後に投与される、請求項４４～７３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項76】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の初回用量が、前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の初回用量と同時に投与される、請求項４４～７３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項77】

前記対象が、未治療の対象である、請求項４４～７６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項78】

前記対象が、前記免疫関連障害または疾患の治療に対して抵抗性である、請求項４４～７６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項79】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を投与することは、前記対象に前記抗ＣＤ２抗体を投与することまたは前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を投与すること（両方ではない）と比較して、相乗的である、請求項４４～７８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項80】

前記抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の投与は、前記対象への前記抗ＣＤ２抗体の前記投与または前記ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の前記投与（両方ではない）後の同種免疫応答の減少と比較して、前記対象において、同種免疫応答のより大きな減少をもたらす、請求項４４～７９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項81】

前記より大きな減少が、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きいか、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きい、請求項８０に記載の方法。

【請求項82】

前記同種免疫応答が、ｉｎ ｖｉｔｒｏヒトＴ細胞増殖アッセイまたは混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを使用して決定される、請求項８０または８１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年４月３０日に出願された米国仮出願第６３／１８２，０９５号、２０２１年１月８日に出願された米国仮出願第６３／１３５，３８１号、及び２０２０年６月２３日に出願された米国仮出願第６３／０４２，８４４号の利益を主張するものであり、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

電子的に提出した配列表の参照
本願では、２０２１年６月１５日に作成した「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１４５２６－００５－２２８．ＴＸＴ」という名称であり、サイズが３３，８６２バイトであるテキストファイルとして、本願と共に提出した配列表を参照により援用する。

【0003】

１．技術分野
本願は、改善された抗ＣＤ２抗体、及び免疫系の慢性または急性障害の治療及び／または予防におけるそれらの使用に関する。免疫寛容の誘導及び維持におけるこれらの抗体の使用も開示される。また、本明細書では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を投与することによって、対象における免疫関連障害または疾患を治療または予防するための方法が提供される。これらの方法及びキットで使用するための組成物も開示される。

【背景技術】

【0004】

２．背景技術 免疫系の障害（免疫系の慢性炎症性障害など）を有する患者は、その状態を管理するために長期治療を受ける必要がある。したがって、可能性のある治療レジメンでは、疾患の症状を治療し、患者の生活の質を維持しながら、臓器損傷及び他の悪影響を引き起こす免疫抑制剤の使用を最小限に抑えることを優先する必要がある。したがって、標準的な免疫抑制療法の有害な副作用を最小限に抑える治療法が顕著に必要とされている。さらに、臓器移植の長期的な結果が、依然として満足のいくものではないため、自己免疫疾患及び臓器移植に関連する免疫障害などの免疫関連障害の治療のための改善された方法及び組成物が必要とされている。ドナー移植片の慢性的な拒絶反応、及び長期の免疫抑制剤の使用に関連する健康問題は、引き続き、この処置の深刻な合併症である。標準的な免疫抑制療法の有害な副作用なく、数ヶ月または数年にわたって慢性的に患者に投与できる治療法がなにより必要とされている。また、例えば、障害の徴候及び症状を緩和することによって、障害の再発の可能性を低下させる、臓器または組織移植拒絶反応を予防する、及び／または免疫障害を発症する可能性のある対象において、免疫障害が生じるのを防ぐことによって、免疫関連疾患の急性症状を治療できる方法及び組成物も必要とされている。

【0005】

シプリズマブは、ヒトＣＤ２糖タンパク質に対するヒト化ＩｇＧ１κモノクローナル抗体であり、事実上すべての成熟ヒトＴ細胞及び胸腺細胞の大部分に発現する受容体である（Ｂｉｅｒｅｒ ＢＥ，Ｂｕｒａｋｏｆｆ ＳＪ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．１９８９；１１１：２６７－２９４）。ＣＤ２は、リガンドＬＦＡ－３（ＣＤ５８）との相互作用を介して、抗原提示細胞へのＴ細胞の接着を促進する（ｖａｎ ｄｅｒ Ｍｅｒｗｅ ＰＡ，Ｂａｒｃｌａｙ ＡＮ，Ｍａｓｏｎ ＤＷ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９９４；３３（３３）：１０１４９－１０１６０）。ＣＤ２がＬＦＡ－３に結合することにより、Ｔ細胞の活性化に必要な細胞内シグナルのカスケードももたらし、この分子にとって重要な共刺激機能を付与する（Ｂｏｃｋｅｎｓｔｅｄｔ ＬＫ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８８；１４１（６）：１９０４－１９１１）。

【0006】

シプリズマブは、造血細胞移植及び複合腎骨髄移植（ＣＫＢＭＴ）による寛容誘導のためのコンディショニングレジメンで使用されている。シプリズマブは、全身においてＴ細胞を枯渇させる一方で、移植後早期に制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を増強させる。悪性腫瘍を治療するための造血細胞移植のレシピエント（Ｓｈａｆｆｅｒ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ．２００７；３５（７）：１１４０－１１５２）及びＣＫＢＭＴレシピエント（Ａｎｄｒｅｏｌａ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２０１１；１１（６）：１２３６－１２４７）において、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の顕著な早期増強が、Ｔ細胞再構成段階で観察された。

【0007】

モノクローナル抗体が様々な種類の疾患の治療において不可欠になるにつれて、これらの治療用抗体の操作は、特定の目的のために最適化された抗体を設計し、産生するために、より精巧になってきている（Ｋｅｌｌｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｆｕｓ Ｍｅｄ Ｈｅｍｏｔｈｅｒ．２０１７ Ｓｅｐ；４４（５）：３２７－３３６）。Ｆｃの修飾は、そのような操作の例である。抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）などのＦｃ媒介性エフェクター機能は、一部の治療レジメンの重要な要素であるが、他のレジメンでは障害となる。Ｆｃシグナル伝達をサイレンシングする修飾は、ＡＤＣＣがさらなる合併症を引き起こすであろう患者に有益となり得る。長期の免疫抑制を必要とする患者にとって、ＡＤＣＣ活性を有さずに免疫調節活性をもたらすように操作された抗体は有益となる。

【0008】

本開示はまた、対象における免疫関連疾患または障害の治療または予防のための、抗Ｃ２抗体またはその抗原断片とＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤との併用療法についても記載する。ＣＬＴＡ４は、２つの主要な方法で免疫応答を阻害し、すなわち、ＣＬＴＡ４は、Ｂ７リガンドについてＣＤ２８と競合し、これにより共刺激をブロックし、また、Ｔ細胞の活性化を阻害するように負のシグナル伝達を行う（Ｋｒｕｍｍｅｌ ａｎｄ Ａｌｌｉｓｏｎ，１９９５，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８２：４５９－４６５；Ｗａｌｕｎａｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：４０５－４１３）。ＣＴＬＡ－４の細胞外ドメインに融合した免疫グロブリンＩｇＧ１のＦｃ領域から構成される融合タンパク質であるアバタセプトは、ＣＤ８０分子及びＣＤ８６分子に結合し、Ｔ細胞が活性化するのを予防する。ベラタセプトは、ＣＴＬＡ－４の細胞外ドメインに連結したヒトＩｇＧ１免疫グロブリンのＦｃ断片から構成される融合タンパク質であり、２つのアミノ酸がアバタセプトと異なる。アバタセプトと同様に、ベラタセプトは、ＣＤ８０抗原及びＣＤ８６抗原に特異性があり、末梢Ｔ細胞機能の負の調節因子として作用する。本開示は、併用療法（抗Ｃ２抗体またはその抗原断片とＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤との）が、抗Ｃ２抗体もしくはその抗原断片、またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤をその両方ではなく一方のみを対象に投与した場合と比較して、相乗効果を示すように提供する。

【発明の概要】

【0009】

３．発明の概要
本明細書で「抗ＣＤ２抗体」が論じられている場合は常に、同じ開示が、「ＣＤ２結合分子」にも関係し、その逆もまた同様である。本明細書に提供されるのは、組換え抗ＣＤ２抗体であり、ここで、抗体は、ＩｇＧ抗体であり、抗体の免疫調節活性が維持される一方で、抗体依存性細胞傷害を媒介する抗体の能力は、シプリズマブと比較して、低下するかまたは排除される。また、本明細書に提供されるのは、組換え抗ＣＤ２抗体であり、ここで、抗体は、ＩｇＧ抗体であり、重鎖の定常領域の少なくとも１つのコンセンサスＮグリコシル化部位が、グリコシル化されていない。ある実施形態では、抗体の少なくとも１つのコンセンサス配列は、それ以上グリコシル化されないように変異されている。また、本明細書に提供されるのは、組換え抗ＣＤ２抗体であり、ここで、Ｆｃ領域は、抗体がＦｃ受容体及びＣ１ｑに結合する能力を欠くように変異されている。

【0010】

本明細書に開示される「抗ＣＤ２抗体」または「ＣＤ２結合分子」はまた、追加の成分がＦｃ領域に付加される拡大抗ＣＤ２バリアントを含み得る。これらの成分としては、これらに限定されないが、ｓｃＦｖ、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを挙げることができる。

【0011】

また、本明細書に提供されるのは、組換え抗ＣＤ２抗体であり、ここで、抗体は、ＩｇＧ抗体であり、重鎖の定常領域の少なくとも１つのコンセンサスＮ結合型グリコシル化部位が、以下のオリゴ糖のうちのいずれか１つを保持する：

【化1】

記号は、次のとおりである：白三角：フコース；白四角：Ｎ－アセチルグルコサミン；灰色の丸：マンノース；白丸：ガラクトース。

【0012】

また、本明細書に提供されるのは、組換え抗ＣＤ２抗体であり、ここで、抗体は、哺乳動物細胞中で発現しているＩｇＧ抗体であり、抗体は、エンドグリコシダーゼで処理されている。ある実施形態では、哺乳動物細胞は、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。ある実施形態では、エンドグリコシダーゼは、ＥｎｄｏＳ２である。ある実施形態では、ヒトＣＤ２のＮ１８、Ｋ５５、及びＴ５９のアミノ酸残基により、ヒトＣＤ２に対する抗体の親和性が決定する。

【0013】

ある実施形態では、抗体の免疫調節活性が維持される一方で、抗体依存性細胞傷害を媒介する抗体の能力は、低下するかまたは排除される。さらなる実施形態では、免疫調節活性は、ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ細胞の誘導を含み得る。さらなる実施形態では、免疫調節活性は、ＦｏｘＰ３発現の増加を含み得る。さらなる実施形態では、免疫調節活性は、ＣＤ６９＋ＮＫ細胞の抑制を含み得る。ある実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４である。さらなる実施形態では、抗体は、ヒト化されている。さらに別の実施形態では、抗体は、完全ヒトである。

【0014】

ある実施形態では、抗体は、配列番号３の重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４の重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号５の重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び配列番号８の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含み得る。さらなる実施形態では、抗体Ｆｃ領域は、Ｆｃサイレンシングをもたらす点変異を有する。さらなる実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１である。さらなる実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２である。さらなる実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４である。さらなる実施形態では、抗体は、シプリズマブとは異なるネイティブ定常領域を有する。さらに別の実施形態では、抗体は、シプリズマブとは異なるネイティブ定常領域、及びＦｃサイレンシングをもたらすＦｃ領域内の点変異を有する。

【0015】

ある実施形態では、抗体の重鎖可変領域が、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含み；軽鎖可変領域が、配列番号２のアミノ酸配列、または配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0016】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の重鎖定常領域の配列は、配列番号０９、１０、１１、１２、または１３と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の軽鎖定常領域の配列は、配列番号１４または１５と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。

【0017】

さらに別の実施形態では、抗体の重鎖は、配列番号１６のＤＮＡ配列、または配列番号１６のＤＮＡ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるＤＮＡ配列を含み、軽鎖は、配列番号１７のＤＮＡ配列、または配列番号１７のＤＮＡ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるＤＮＡ配列を含む。

【0018】

本明細書において提供されるのは、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬製剤である。ある実施形態では、医薬製剤は、長期投与に好適である。また、患者における免疫系の慢性障害を治療する方法も本明細書に提供され、この方法は、本明細書に記載の抗体を患者に投与することを含む。ある実施形態では、患者は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月、または少なくとも１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、もしくは少なくとも２０年の期間、治療を受けている。

【0019】

本明細書では、移植レシピエントにおいて移植に対する免疫寛容を維持する方法が提供され、この方法は、本明細書に記載の抗体を移植レシピエントに投与することを含む。ある実施形態では、抗体は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月、または少なくとも１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、もしくは少なくとも２０年の期間、移植レシピエントに投与される。さらなる実施形態では、免疫系の急性または慢性障害としては、これらに限定されないが、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、関節リウマチ、強直性脊椎炎、１型糖尿病、乾癬、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（クローン病）、セリアック病、シェーグレン病、狼瘡、多発性硬化症、巣状分節性糸球体硬化症、アトピー性皮膚炎、筋萎縮性側索硬化症、原発性胆汁性肝硬変、及び原発性硬化性胆管炎、及び重度の喘息を挙げることができる。

【0020】

本明細書では、（ａ）抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片を対象に投与することと；（ｂ）ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を対象に投与することとにより、対象における免疫関連障害または疾患を治療するまたは予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片は、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、投与と同時に、またはその後に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、免疫関連障害または疾患の治療に対して抵抗性である。いくつかの実施形態では、対象は、未治療の対象である。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与されない場合、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の用量は、治療上有効ではない。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が対象に投与されない場合、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の用量は、治療上有効ではない。

【0021】

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を対象へ投与することは、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤をその両方ではなく一方を対象に投与した場合と比較して、相乗的である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後に対象から得られる生体試料中の細胞の数は、対象に、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片が投与された後、またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が投与された後（両方ではない）に、対象から得られる生体試料中の細胞の数と比較して、約１０％または少なくとも約１０％少ない。

【0022】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤のうちの少なくとも１つが対象に投与される前に、対象から得られる生体試料中の細胞数の減少と比較して、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が投与された後に、対象から得られる生体試料中の細胞数のより大きな減少をもたらす。いくつかの実施形態では、対象から得られる生体試料中の細胞数は、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて少ないか、または少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて少ない。

【0023】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤のうちの少なくとも１つが対象に投与される前に、対象から得られる生体試料中のＣＤ２レベルの減少と比較して、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が投与された後に、対象から得られる生体試料中のＣＤ２レベルのより大きな減少をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与された後（両方ではない）に、対象から得られる生体試料中のＣＤ２レベルの減少と比較して、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後に、対象から得られる生体試料中のＣＤ２レベルのより大きな減少をもたらす。いくつかの実施形態では、減少は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きいか、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きい。

【0024】

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の投与は、抗ＣＤ２抗体またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方ではなく一方の対象への投与後の同種免疫応答の減少と比較して、対象において、同種免疫応答のより大きな減少をもたらす。いくつかの実施形態では、より大きな減少は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きいか、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きい。いくつかの実施形態では、同種免疫応答は、ｉｎ ｖｉｔｒｏヒトＴ細胞増殖アッセイまたは混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを使用して決定される。

【0025】

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片は、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２抗体、ＢＴＩ－３２２、ＣＢ．２１９、ＬＯ－ＣＤ２ｂ、シプリズマブ、及び／またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片は（ａ）配列番号３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｄ）配列番号８の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、シプリズマブである。

【0026】

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、ヒトＩｇＧ１免疫グロブリンのＦｃ断片及びＣＴＬＡ－４の細胞外ドメインを含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、配列番号２２と約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、配列番号２２と同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、配列番号２３と約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、配列番号２３と同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、アバタセプトである。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、ベラタセプトである。

【0027】

いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、乾癬性関節炎、多関節型若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性強皮症、特発性炎症性筋疾患、シェーグレン症候群、全身性血管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経炎、ギラン・バレー症候群、ライム病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、肝胆道疾患、感染性または自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、グッドパスチャー症候群、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン過敏性腸疾患、ホイップル病、自己免疫または免疫介在性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形紅斑、接触皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症、蕁麻疹、多発性硬化症、ブドウ膜炎、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、臓器移植に伴う疾患、組織移植に伴う疾患、移植片拒絶反応、移植片対宿主病、デビック病、急性散在性脳脊髄炎、急性脱髄性視神経炎、脱髄性横断性脊髄炎、ミラーフィッシャー症候群、脳脊髄根末梢神経炎、急性脱髄性多発神経炎、腫瘤様多発性硬化症、Ｂａｌｏ病型同心円硬化症、円形脱毛症、強直性脊椎炎、メニエール病、抗リン脂質症候群、混合性結合組織病、自己免疫性アジソン病、重症筋無力症、自己免疫性肝炎、尋常性天疱瘡、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、結節性多発動脈炎、心筋症、多発性軟骨炎、セリアックスプルー皮膚炎、多腺性症候群、慢性疲労症候群（ｃｆｉｄ）、リウマチ性多発筋痛症、慢性炎症性脱髄、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、チャーグ・ストラウス症候群、類天疱瘡、クレスト症候群、レイノー現象、寒冷凝集素症、ライター症候群、クローン病、リウマチ熱、円板状皮疹、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症、強皮症、グレーブス病、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、橋本甲状腺炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、潰瘍性大腸炎、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病（Ｉ型）、扁平苔癬、白斑、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患は、関節リウマチ、多関節型若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、乾癬性関節炎、またはそれらの組み合わせである。

【0028】

いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患は、臓器移植に関連する疾患、組織移植に関連する疾患、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片は、臓器移植及び／または組織移植後２週間以内に少なくとも１回対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片は、臓器及び／または組織移植当日、臓器及び／または組織移植１日後、及び／または臓器及び／または組織移植４日後に対象に投与される。抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片は、対象に静脈内または皮下投与される。

【0029】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、追加の薬剤を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、ステロイド、カルシニューリン阻害剤、シクロスポリン、シクロホスファミド、代謝拮抗療法、ＮＳＡＩＤ、関節リウマチを治療するために使用される薬剤、及び／またはｍＴＯＲ阻害剤のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、バシリキシマブ誘導、ミコフェノール酸モフェチル、コルチコステロイド、またはそれらの組み合わせである。

【図面の簡単な説明】

【0030】

４．図面の簡単な説明
上記及びその他の目的、特徴及び利点は、添付の図面に例示されているように、本発明の特定の実施形態の下記の説明から明らかであろう。図面は必ずしも縮尺通りではなく、本発明の様々な実施形態の原理を示すことに重点が置かれている。

【0031】

【図1】抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ（ＭＥＤＩ－５０７））のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）ＩＩＩＡシグナル伝達と比較した、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）によって誘導されるＦｃγＲＩＩＩＡシグナル伝達の欠如を示す。ｉｎ ｖｉｖｏでは、ＦｃγＲＩＩＩＡを発現する細胞は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の主要な媒介因子である。ＦｃγＲＩＩＩＡの結合及びシグナル伝達がない場合には、ＣＤ２結合分子１が結合したＣＤ２発現細胞が、ＡＤＣＣを介して枯渇することはない。

【0032】

【図2】Ａは、ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ細胞の活性化を阻害するＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）及び抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）の同等の能力を示す。Ｂは、ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ細胞の増殖を阻害するＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）及び抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）の同等の能力を示す。

【0033】

【図3】ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）及び抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）が免疫系調節において重要な細胞を誘導する同等の能力を示す。ＣＤ２結合分子１または抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）との相互作用時の制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞のパーセンテージの増加によって測定される、免疫応答を調節する能力。

【0034】

【図4】Ａは、自家移植混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において、抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）と比較した、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）がＮＫ細胞活性化（ＮＫ細胞上でのＣＤ６９発現の誘導）を阻害する能力を示す。Ｂは、同種異系混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において、抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）と比較した、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）がＮＫ細胞活性化（ＮＫ細胞上でのＣＤ６９発現の誘導）を阻害する能力を示す。

【0035】

【図5】抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ（ＭＥＤＩ－５０７））のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）ＩＩＡシグナル伝達と比較した、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）によって誘導されるＦｃγＲＩＩＡシグナル伝達の欠如を示す。ｉｎ ｖｉｖｏでは、ＦｃγＲＩＩＡを発現する細胞は、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の主要な媒介因子である。ＦｃγＲＩＩＡの結合及びシグナル伝達がない場合には、ＣＤ２結合分子１が結合したＣＤ２発現細胞が、ＡＤＣＰを介して枯渇する可能性はない。

【0036】

【図6】ＣＤ６９＋Ｔ細胞の活性化を阻害する能力によって測定された抗体及び断片の免疫調節活性を示す。抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）Ｆａｂ断片は、対照と比較して、ＣＤ６９＋Ｔ細胞の活性化を阻害しなかったが、抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）及びＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）は、両方とも、活性化を阻害した。ＣＤ２結合分子１の免疫調節活性は、維持されるが、ＡＤＣＣ活性は、排除される。

【0037】

【図7】シプリズマブ（ＩｇＧ１）の遺伝子操作されたＩｇＧ２型またはＩｇＧ４型のＦｃ部分にｓｃＦｖ、ＣＨ２－、またはＣＨ３－領域のいずれかを付加することによる拡大抗ＣＤ２バリアントの構築を示す。

【0038】

【図8】拡大抗ＣＤ２バリアントを示す。Ａは、分子５Ａ（ＩｇＧ２）及び分子５Ｂ（ＩｇＧ４）を示す。Ｂは、分子６Ａ（ＩｇＧ２）及び分子６Ｂ（ＩｇＧ４）を示す。Ｃは、分子７Ａ（ＩｇＧ２）及び分子７Ｂ（ＩｇＧ４）を示す。

【0039】

【図9】Ａは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）Ｉを安定して発現するＪｕｒｋａｔレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）を示し、Ｂは、ＦｃγＲＩＩＡを安定して発現するＪｕｒｋａｔレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）を示し、Ｃは、ＦｃγＲＩＩＩＡを安定して発現するＪｕｒｋａｔレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）を示し、それぞれ、抗ＣＤ２抗体の濃度を増加させながらインキュベートした。最も高い濃度の抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）によって誘導される発光に対して正規化したデータ（平均±ＳＤ；ｎ＝３）。レポーター細胞は、標的結合ＩｇＧ抗体のＦｃ断片をそれらのＦｃγＲと結合し、これにより、ルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を誘導し、アッセイ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ）の添加時に発光シグナルが得られる。細胞は、用量を増加させて抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）、ＣＤ２結合分子２（Ｆｃ－サイレント（ＦｃＳ）抗ＣＤ２ ＩｇＧ１）、ＣＤ２結合分子３（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ２）及びＣＤ２結合分子４（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ４）とそれぞれインキュベートした。

【0040】

【図10】異なるリンパ球（亜）集団上でのＣＤ２発現を示す。平均蛍光強度中央値±ＳＥＭとして表示されるデータ（ｎ＝５；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。Ａは、異なるＴ細胞亜集団及びＮＫ細胞亜集団上でのＣＤ２発現を示す。ＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＮＫ細胞は、Ｔ細胞と同等のレベルでＣＤ２を発現する。対照的に、ＣＤ５６^ｄｉｍ及びＣＤ５６^ｎｅｇＮＫ細胞は、有意に低いレベルのＣＤ２を発現する（それぞれ、ｐ＝０．００７４及びｐ＝０．０１１１、反復測定一元配置分散分析及びその後にダネット多重比較検定）。Ｂは、休止及び活性化リンパ球集団上でのＣＤ２発現を示す。ＣＤ２発現は、Ｔ細胞（ｐ＝０．００３４）、ＣＤ５６^ｄｉｍＮＫ細胞（ｐ＝０．００２４）、ＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＮＫ細胞（ｐ＝０．０１７）、及びＣＤ５６^ｎｅｇＣＤ１６＋ＮＫ細胞（０．００２９）上で活性化後に、著しくアップレギュレートされた。Ｂ細胞では差は観察されなかった（対応のある両側ｔ検定）。

【0041】

【図11】ＮＫ細胞上でのＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）ＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）の発現を示す。平均して、ＮＫ細胞の９１．０％がＦｃγＲＩＩＩを発現し、１９．２％がＦｃγＲＩＩを発現する（ｎ＝９）。平均は、水平線として示す（Ａ）。ＮＫ細胞上でのＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩ発現の代表的なプロット（ＣＤ３－ ＣＤ５６＋及び／またはＣＤ１６＋リンパ球）。上段は、ＣＤ３２発現が比較的少ないドナーからのＮＫ細胞の代表的なプロットを示し、下段は、ＣＤ３２発現が比較的多いドナーからのＮＫ細胞の代表的なプロットを示す（Ｂ）。

【0042】

【図12】混合リンパ球反応（ＭＬＲ）及び自己リンパ球培養（ＡＬＣ）における経時的なＮＫ細胞上のＣＤ６９発現を示す。抗体を添加しない場合（抗体なし）及び抗体を添加した場合のＣＤ６９発現を、ベースライン（０日目）及び１、２、４、及び７日後にフローサイトメトリーにより評価した。有意性試験は、未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、二元配置分散分析を介して実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）及びＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）を１０μｇ／ｍＬで使用した。この用量は、７日間で標的抗原を飽和させることが事前に決定されている。データは、平均±ＳＤとして示した（ｎ＝１２）。Ａは、ＭＬＲ中の経時的なＣＤ６９＋ＮＫ細胞のパーセンテージを示す。Ｂは、ＡＬＣ中の経時的なＣＤ６９＋ＮＫ細胞のパーセンテージを示す。

【0043】

【図13】７日間の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）後のＮＫ細胞上でのＣＤ６９及びＣＤ２の発現を示す。有意性試験は、未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一次元配置分散分析を介して実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）、ＣＤ２結合分子２（Ｆｃ－サイレント（ＦｃＳ）抗ＣＤ２ ＩｇＧ１）、ＣＤ２結合分子３（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ２）及びＣＤ２結合分子４（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ４）は、０．０００１～１０μｇ／ｍＬで使用した。データは、ＣＤ６９＋ＮＫ細胞の平均パーセンテージ±ＳＤ（Ａ）または平均ＣＤ２蛍光強度中央値＋ＳＤ（ＣＤ２ ＭＦＩ；ｎ＝９）（Ｂ）として示した。未処置対照（抗体なし）または１０μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２におけるＮＫ細胞上でのＣＤ２及びＣＤ６９の発現の代表的なドットプロット（Ｃ）。

【0044】

【図14】ＮＫ細胞フラトリサイドを示す。精製ＮＫ細胞を、抗体なし、０．００１～１０μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）または０．００１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２結合分子２、３、または４（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ抗体）と共に一晩インキュベートした。有意性試験は、未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一次元配置分散分析を介して実施した（Ｎ＝６；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。Ａは、ＮＫ細胞溶解；７－ＡＡＤ＋ＮＫ細胞の平均パーセンテージ＋ＳＤを示す。Ｂは、ＮＫ細胞数；正規化ＮＫ細胞数の平均＋ＳＤを示す。Ｃは、ＣＤ５６^ｄｉｍＮＫ細胞数；正規化ＣＤ５６^ｄｉｍＮＫ細胞数の平均＋ＳＤを示す。Ｄは、ＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＮＫ細胞数；正規化ＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＮＫ細胞数の平均＋ＳＤを示す。

【0045】

【図15】精製ＮＫ細胞培養物におけるＮＫ細胞脱顆粒及びＡＤＣＣを示す。精製ＮＫ細胞を、抗体なし、０．００１～１０μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）または０．００１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２結合分子２、３、または４（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ抗体）と共にインキュベートした。有意性試験は、未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一次元配置分散分析を介して実施した（Ｎ＝６；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。Ａは、ＮＫ細胞の脱顆粒；ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の平均パーセンテージ＋ＳＤを示す。Ｂは、ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現；ＮＫ細胞上でのＣＤ１６蛍光強度の平均中央値＋ＳＤを示す。Ａは、精製ＮＫ細胞培養物中の抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）の用量を増加させたときのＣＤ１６ダウンレギュレーション及びＮＫ細胞脱顆粒を示す代表的なヒートマップドットプロットを示す。

【0046】

【図16】天然ＮＫ細胞の細胞傷害性を示す。精製されたＮＫ細胞は、抗体なし、０．００１～１０μｇ／ｍＬ抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）または０．００１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２結合分子２、３、または４（Ｆｃサイレント（ＦｃＳ）抗ＣＤ２ ＩｇＧ抗体）を３０分間（Ａ）または２日間（Ｂ）プレインキュベートし、その後ＨＬＡクラスＩ標的細胞（ＳＰＩ－８０１）を添加した。有意性試験は、未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一次元配置分散分析を介して実施した（Ｎ＝６；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。Ｃは、抗体の添加なし（ＮＫ＋ＳＰＩ－８０１）、抗体及びＨＬＡクラスＩ標的細胞（ＮＫ）の添加なし、または抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）／ＣＤ２結合分子２（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ１）の存在下で、ＨＬＡクラスＩ標的細胞に応答したＮＫ細胞の脱顆粒の代表的なヒストグラムを示す。

【0047】

【図17】抗体依存性細胞傷害性を示す。精製ＮＫ細胞は、抗体なしで、または飽和用量の抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）／ＣＤ２結合分子２、３、または４（ＦｃＳ抗ＣＤ２抗体）をプレインキュベートし、その後、滴定量の抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ）及びＣＤ２０＋標的細胞（Ｄａｕｄｉ）を添加した。有意性試験は、未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一次元配置分散分析を介して実施した（Ｎ＝６；（＊）ｐ＜０．１、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。Ａは、ＮＫ細胞の脱顆粒；ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の平均パーセンテージ＋ＳＤを示す。Ｂは、標的細胞の枯渇；平均正規化標的細胞数＋ＳＤを示す。Ｃは、ＣＤ２発現；ＮＫ細胞上でのＣＤ２蛍光強度の平均中央値＋ＳＤを示す。Ｄは、ＡＤＣＣ誘導をもたらすＮＫ細胞上でのＣＤ２発現の増加を示す代表的なドットプロットを示す。

【0048】

【図18A】図１８Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１８Ａ～Ｈのグラフは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における増殖Ｔ細胞の平均パーセンテージ＋標準偏差（ＳＤ）を示す（ｎ＝６）。図１８Ａは、７日間の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）後の平均ＣＤ４Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。抗ＣＤ２抗体１の一連の滴定量（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）に１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたは１００μｇ／ｍＬのベラタセプトを補充した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、生細胞のパーセンテージが低くなった。

【図18B】図１８Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１８Ａ～Ｈは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における増殖Ｔ細胞の平均パーセンテージ＋標準偏差（ＳＤ）を示す（ｎ＝６）。図１８Ｂは、７日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ８Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。抗ＣＤ２抗体１の一連の滴定量（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）に１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたは１００μｇ／ｍＬのベラタセプトを補充した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、生細胞のパーセンテージが低くなった。

【図18C】図１８Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１８Ａ～Ｈは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における増殖Ｔ細胞の平均パーセンテージ＋標準偏差（ＳＤ）を示す（ｎ＝６）。図１８Ｃは、１０日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ４Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。抗ＣＤ２抗体１の一連の滴定量（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）に１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたは１００μｇ／ｍＬのベラタセプトを補充した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、生細胞のパーセンテージが低くなった。

【図18D】図１８Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１８Ａ～Ｈは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における増殖Ｔ細胞の平均パーセンテージ＋標準偏差（ＳＤ）を示す（ｎ＝６）。図１８Ｄは、１０日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ８Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。抗ＣＤ２抗体１の一連の滴定量（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）に１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたは１００μｇ／ｍＬのベラタセプトを補充した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、生細胞のパーセンテージが低くなった。

【図18E】図１８Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１８Ａ～Ｈは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における増殖Ｔ細胞の平均パーセンテージ＋標準偏差（ＳＤ）を示す（ｎ＝６）。図１８Ｅは、７日間の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）後の平均ＣＤ４Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。抗ＣＤ２抗体１の一連の滴定量（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）に１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたは１００μｇ／ｍＬのベラタセプトを補充した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、生細胞のパーセンテージが低くなった。

【図18F】図１８Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１８Ａ～Ｈは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における増殖Ｔ細胞の平均パーセンテージ＋標準偏差（ＳＤ）を示す（ｎ＝６）。図１８Ｆは、７日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ８Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。抗ＣＤ２抗体１の一連の滴定量（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）に１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたは１００μｇ／ｍＬのベラタセプトを補充した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、生細胞のパーセンテージが低くなった。

【図18G】図１８Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１８Ａ～Ｈは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における増殖Ｔ細胞の平均パーセンテージ＋標準偏差（ＳＤ）を示す（ｎ＝６）。図１８Ｇは、１０日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ４Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。抗ＣＤ２抗体１の一連の滴定量（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）に１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたは１００μｇ／ｍＬのベラタセプトを補充した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、生細胞のパーセンテージが低くなった。

【図18H】図１８Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１８Ａ～Ｈは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における増殖Ｔ細胞の平均パーセンテージ＋標準偏差（ＳＤ）を示す（ｎ＝６）。図１８Ｈは、１０日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ８Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。抗ＣＤ２抗体１の一連の滴定量（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）に１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたは１００μｇ／ｍＬのベラタセプトを補充した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、生細胞のパーセンテージが低くなった。

【0049】

【図19A】図１９Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１９Ａ～Ｄは、ＭＬＲ中での増殖したＴ細胞の平均パーセンテージ＋ＳＤを示す（ｎ＝９）。図１９Ａは、７日間の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）後の平均ＣＤ４Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。アバタセプトまたはベラタセプトの滴定シリーズ（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）に、滴定シリーズ全体を通して１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２抗体１を添加した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【図19B】図１９Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１９Ａ～Ｄは、ＭＬＲ中での増殖したＴ細胞の平均パーセンテージ＋ＳＤを示す（ｎ＝９）。図１９Ｂは、７日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ８Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。アバタセプトまたはベラタセプトの滴定シリーズ（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）に、滴定シリーズ全体を通して１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２抗体１を添加した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【図19C】図１９Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１９Ａ～Ｄは、ＭＬＲ中での増殖したＴ細胞の平均パーセンテージ＋ＳＤを示す（ｎ＝９）。図１９Ｃは、１０日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ４Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。アバタセプトまたはベラタセプトの滴定シリーズ（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）に、滴定シリーズ全体を通して１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２抗体１を添加した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【図19D】図１９Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１９Ａ～Ｄは、ＭＬＲ中での増殖したＴ細胞の平均パーセンテージ＋ＳＤを示す（ｎ＝９）。図１９Ｄは、１０日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ８Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。アバタセプトまたはベラタセプトの滴定シリーズ（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）に、滴定シリーズ全体を通して１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２抗体１を添加した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【図19E】図１９Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１９Ｅは、７日間の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）後の平均ＣＤ４Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。アバタセプトまたはベラタセプトの滴定シリーズ（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）に、滴定シリーズ全体を通して１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２抗体１を添加した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【図19F】図１９Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１９Ｆは、７日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ８Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。アバタセプトまたはベラタセプトの滴定シリーズ（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）に、滴定シリーズ全体を通して１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２抗体１を添加した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【図19G】図１９Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１９Ｇは、１０日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ４Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。アバタセプトまたはベラタセプトの滴定シリーズ（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）に、滴定シリーズ全体を通して１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２抗体１を添加した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【図19H】図１９Ａ～Ｈは、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。図１９Ｈは、１０日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ８Ｔ細胞増殖を示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。アバタセプトまたはベラタセプトの滴定シリーズ（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）に、滴定シリーズ全体を通して１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２抗体１を添加した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【0050】

【図20】異なる処置群におけるＭＬＲの１０日後のＣＤ４Ｔ細胞増殖の阻害を示す代表的なヒストグラムを示す。

【0051】

【図21】制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の増強を表すグラフを示す。ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。アバタセプトまたはベラタセプトの滴定シリーズ（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）に、滴定シリーズ全体を通して１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２抗体１を添加した。未処置対照（抗体なし）を比較データセットとして、一元配置分散分析後、ダネット多重比較検定を使用して統計分析を実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。

【0052】

【図22】細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後のＣＤ２平均レベルを示す。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、ＣＤ２レベルが低くなった。

【0053】

【図23】細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後のＴ細胞数を示す。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、Ｔ細胞数が少なくなった。

【0054】

【図24】細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせと共にインキュベートした後のＣＤ２またはＣＤ２８の平均レベルを示す。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、ＣＤ２及びＣＤ２８のレベルが低くなった。

【0055】

【図25】細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトとの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトとの組み合わせと共にインキュベート後、Ｖｉｏｌｅｔ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｄｙｅ ４５０（ＶＰＤ４５０）ｌｏｗ Ｔ細胞を使用したフローサイトメトリーグラフを示す。

【0056】

【図26】細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトとの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトとの組み合わせと共にインキュベート後、Ｖｉｏｌｅｔ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｄｙｅ ４５０（ＶＰＤ４５０）ｈｉｇｈ Ｔ細胞を使用したフローサイトメトリーグラフを示す。

【0057】

【図27】細胞を対照、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２（ＩｇＧ４）、ベラタセプト、アバタセプト、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２抗体１（ＩｇＧ４）とベラタセプトの組み合わせ、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２抗体１（ＩｇＧ４）とアバタセプトの組み合わせと共に７日または１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。Ｆｃサイレント抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトの組み合わせ、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプトまたはアバタセプト単独による処置と比較して、細胞のパーセンテージが低くなった。

【0058】

【図28】細胞ベースのＦｃγＲ結合アッセイを示す。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、及びＦｃγＲＩＩＩＡ結合アッセイについて、抗ＣＤ２抗体（またはシプリズマブ）、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－１、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－２、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－３、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－４、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－６、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７）などのなる濃度の抗体を試験した。

【0059】

【図29】Ａは、細胞を対照、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５、ベラタセプト、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５及びベラタセプトの組み合わせと共に７日インキュベートした後のＴ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖の平均を示す（ｎ＝６；３つの独立したＭＬＲ）。Ｂは、細胞を対照、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５、ベラタセプト、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５及びベラタセプトの組み合わせと共に１０日インキュベートした後のＴ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖の平均を示す（ｎ＝６；３つの独立したＭＬＲ）。

【0060】

【図30】Ａは、細胞を対照、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７、ベラタセプト、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７及びベラタセプトの組み合わせと共に７日インキュベートした後のＴ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖の平均を示す（ｎ＝６；３つの独立したＭＬＲ）。Ｂは、細胞を対照、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７、ベラタセプト、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７及びベラタセプトの組み合わせと共に１０日インキュベートした後のＴ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖の平均を示す（ｎ＝６；３つの独立したＭＬＲ）。

【0061】

【図31】Ａは、細胞を対照、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５、ベラタセプト、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５とベラタセプトの組み合わせと共にインキュベートした後の平均Ｔ細胞活性化（ＣＤ６９＋及びＨＬＡ－ＤＲ＋）を示す（ｎ＝６；３つの独立したＭＬＲ）。Ｂは、細胞を対照、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７、ベラタセプト、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７とベラタセプトの組み合わせと共にインキュベートした後の平均Ｔ細胞活性化（ＣＤ６９＋及びＨＬＡ－ＤＲ＋）を示す（ｎ＝６；３つの独立したＭＬＲ）。

【0062】

【図32】Ａは、細胞を対照、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ７、ベラタセプト、アバタセプト、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ７とベラタセプトの組み合わせ、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ７とアバタセプトの組み合わせと共に７日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。Ｂは、細胞を対照、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ７、ベラタセプト、アバタセプト、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ７とベラタセプトの組み合わせ、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ７とアバタセプトの組み合わせと１０日インキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を示す。Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ７とベラタセプトの組み合わせ、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ７とアバタセプトの組み合わせによる処置は、ベラタセプト単独、アバタセプト単独、またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ７単独による処置と比較して、細胞のパーセンテージが低くなった（ｎ＝６；２つの独立したＭＬＲ）。

【発明の詳細な説明】

【0063】

５．発明の詳細な説明
本明細書に記載されるのは、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）であり、抗体依存性細胞傷害を媒介するこの分子の能力は、分子の免疫調節活性が維持されながら、低下するかまたは排除される。本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、免疫系の慢性疾患を治療するため、または患者に移植を行うために、患者に長期投与することができる。

【0064】

ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）については、セクション５．１に記載されている。具体的には、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の結合特異性は、セクション５．１．１に記載し；ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の非枯渇活性は、セクションＥｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｏｕｒｃｅ ｎｏｔ ｆｏｕｎｄ．に記載し；ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の免疫調節活性は、セクション５．１．３に記載し；ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の機能的修飾は、セクション５．１．４に記載している。ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を生成するための方法は、セクション５．２に記載している。ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の治療的使用及び方法は、セクション５．３に記載している。ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の医薬組成物は、セクション５．４に記載している。キットについては、セクション５．５に記載している。本明細書に記載の方法の臨床転帰を評価する方法は、セクション５．６に記載している。本明細書で提供される方法の実施例は、セクション６に記載している。

【0065】

５．１ ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）
本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、セクション５．１．１に詳述するとおりＣＤ２に結合する。本明細書に記載のとおり、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、抗体であり得る。本明細書に記載のとおり、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、抗原結合断片であり得る。本明細書で定義されるとおり、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＤなどの免疫グロブリンを指す。本明細書に記載の抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体であり得る。特定の実施形態では、抗体は、組換え抗体である。特定の実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧである。ある実施形態では、ＩｇＧは、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、またはＩｇＧ_４であり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、またはＩｇＧ_４である。本明細書に記載のとおり、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、抗原結合断片であり得る。ある実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ（ＶＬに融合されたＶＨ）、またはｓｄＡｂであるか、またはそれらを含み得る。

【0066】

いくつかの実施形態では、「抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片」という用語は、「ＣＤ２結合分子」という用語と同義的に使用される。いくつかの実施形態では、本方法及び組成物で使用するためのＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ラット抗ＣＤ２モノクローナル抗体ＢＴＩ－３２２のＣＤＲ配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＢＴＩ－３２２（シプリズマブ；ＭＥＤＩ－５０７）のヒト化ＩｇＧ１型であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＢＴＩ－３２２またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＣＢ．２１９またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＬＯ－ＣＤ２ｂまたはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブまたはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、抗ＣＤ２抗体１またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ２抗体１は、シプリズマブまたはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも３つを超えるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つまたは複数のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を投与することを含む。ある実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）をＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤と組み合わせて対象に投与することを含む。

【0067】

本明細書に記載の抗体は、ジスルフィド結合によって連結された２つの重鎖及び２つの軽鎖から構成され得る。各重鎖は、可変領域（ＶＨ）及び定常領域を含み得る。各軽鎖は、可変領域（ＶＬ）及び定常領域を含み得る。重鎖及び軽鎖の両方の可変領域が、抗体の抗原への結合を指図する。相補性決定領域（ＣＤＲ）は、重鎖及び軽鎖の可変領域上の可変ループである。各重鎖には３つのＣＤＲが存在し、各軽鎖には３つのＣＤＲが存在する。ある実施形態では、本明細書に記載の抗体はＣＤ２に結合する。セクション５．１．１を参照されたい。

【0068】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の投与は、標的細胞の枯渇をもたらさない。セクション５．１．２を参照されたい。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、免疫調節活性を呈する。セクション５．１．３を参照されたい。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）が、免疫調節活性を保持しながら標的細胞の枯渇を抑える能力は、Ｆｃ領域のグリコシル化を排除することによって達成される；セクション５．１．４を参照されたい。

【0069】

５．１．１ ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の結合特異性
本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＣＤ２（Ｔ１１、ＳＲＢＣ（ヒツジ赤血球受容体）、及びＬＦＡ－２とも呼ばれる）に特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ヒトＣＤ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１３２８６０９．１（アイソフォーム１）；ＮＭ＿００１７６７．５（アイソフォーム２））に結合する。ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと競合的に結合することができる（Ｍｅｄｌｍｍｕｎｅ Ｉｎｃ．；国際公開番号第ＷＯ０２／０９８３７０号）。シプリズマブ（ＭＥＤＩ－５０７）は、ＣＤ２特異的ラット抗体ＢＴＩ－３２２のヒト化型である（Ｍｅｄｌｍｍｕｎｅ Ｉｎｃ．；国際公開番号第ＷＯ０２／０９８３７０号）。シプリズマブは、ＩｇＧ１κクラスのモノクローナル抗体であり、ヒトＴ細胞及びヒトＮＫ細胞に見られるＣＤ２に結合する。シプリズマブは、２つの重鎖（約５０ｋＤａ）及び２つの軽鎖（約２５ｋＤａ）で構成されている。

【0070】

本明細書で定義されるように、エピトープは、抗体または抗原結合断片が結合する抗原の領域である。いくつかの実施形態では、エピトープは、線状であり得る。他の実施形態では、エピトープは、コンフォメーションであり得る。いくつかの実施形態では、エピトープは、連続アミノ酸によって形成され得る。他の実施形態では、エピトープは、非連続アミノ酸によって形成され得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＣＤ２上のエピトープに結合する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと同じＣＤ２のエピトープに結合する。ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、Ｃｌａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９８８ Ｊｕｎ １；１６７（６）：１８６１－７２によって詳述されているものなど、適切なｉｎ ｖｉｔｒｏ競合結合アッセイにおいて、シプリズマブと競合的に結合できる。ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと同じＩＣ_５０値、約１ｎＭを有する（Ｂｒａｎｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．１９９９ Ｎｏｖ ２７；６８（１０）：１５８８－９６）。ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブよりも低いＩＣ_５０値を有する。ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブよりも高いＩＣ_５０値を有する。ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、０．５ｎＭ、０．６ｎＭ、０．７ｎＭ、０．８ｎＭ、０．９ｎＭ、１．０ｎＭ、１．１ｎＭ、１．２ｎＭ、１．３ｎＭ、１．４ｎＭ、１．５ｎＭ、０．５ｎＭ～０．８ｎＭ、０．６ｎＭ～０．９ｎＭ、０．７ｎＭ～１．０ｎＭ、０．８ｎＭ～１．１ｎＭ、０．９ｎＭ～１．２ｎＭ、１．０ｎＭ～１．３ｎＭ、１．１ｎＭ～１．４ｎＭ、または１．２ｎＭ～１．５ｎＭのＩＣ_５０値を有する。

【0071】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＨ領域の配列は、配列番号０１と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＬ領域の配列は、配列番号０２と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＨ ＣＤＲ１の配列は、配列番号０３であり得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＨ ＣＤＲ２の配列は、配列番号０４であり得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＨ ＣＤＲ３の配列は、配列番号０５であり得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＬ ＣＤＲ１の配列は、配列番号０６であり得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＬ ＣＤＲ２の配列は、配列番号０７であり得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＬ ＣＤＲ３の配列は、配列番号０８であり得る。これらの配列は、表１に示す。

【0072】

ある実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、それぞれ配列番号３～５のＶＨ ＣＤＲ及び配列番号２のＶＬを含む重鎖可変領域を有する。ある実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、それぞれ配列番号６～８のＶＬ ＣＤＲ及び配列番号１のＶＨを含む重鎖可変領域を有する。

【0073】

ある実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、配列番号３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ある実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、配列番号３と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％または約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、または約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、または約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、または約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、または約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び／または配列番号８と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、または約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を有する。

【0074】

ある実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、配列番号３に対して、約１個または少なくとも約１個のアミノ酸置換、約２個または少なくとも約２個のアミノ酸置換、約３個または少なくとも約３個のアミノ酸置換、約４個または少なくとも約４個のアミノ酸置換、または少なくとも約４個を超えるアミノ酸置換を有する配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４に対して、約１個または少なくとも約１個のアミノ酸置換、約２個または少なくとも約２個のアミノ酸置換、約３個または少なくとも約３個のアミノ酸置換、約４個または少なくとも約４個のアミノ酸置換、または少なくとも約４個を超えるアミノ酸置換を有する配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５に対して、約１個または少なくとも約１個のアミノ酸置換、約２個または少なくとも約２個のアミノ酸置換、約３個または少なくとも約３個のアミノ酸置換、約４個または少なくとも約４個のアミノ酸置換、または少なくとも約４個を超えるアミノ酸置換を有する配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６に対して、約１個または少なくとも約１個のアミノ酸置換、約２個または少なくとも約２個のアミノ酸置換、約３個または少なくとも約３個のアミノ酸置換、約４個または少なくとも約４個のアミノ酸置換、または少なくとも約４個を超えるアミノ酸置換を有する配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７に対して、約１個または少なくとも約１個のアミノ酸置換、約２個または少なくとも約２個のアミノ酸置換、約３個または少なくとも約３個のアミノ酸置換、約４個または少なくとも約４個のアミノ酸置換、または少なくとも約４個を超えるアミノ酸置換を有する配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び／または配列番号８に対して、約１個または少なくとも約１個のアミノ酸置換、約２個または少なくとも約２個のアミノ酸置換、約３個または少なくとも約３個のアミノ酸置換、約４個または少なくとも約４個のアミノ酸置換、または少なくとも約４個を超えるアミノ酸置換を有する配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を有する。

【0075】

いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、保存的置換である。保存されたアミノ酸交換の具体例は、アミノ酸の側鎖の構造的及び／または機能的特性を維持するアミノ酸置換であり、例えば、芳香族アミノ酸は、別の芳香族アミノ酸に置換され、酸性アミノ酸は、別の酸性アミノ酸に置換され、塩基性アミノ酸は、別の塩基性アミノ酸に置換され、脂肪族アミノ酸は、別の脂肪族アミノ酸に置換される。いくつかの実施形態では、保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基と置換されるものである。同様の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。対照的に、非保存アミノ酸交換の例は、アミノ酸の側鎖の構造的及び／または機能的特性を維持しないアミノ酸置換であり、例えば、芳香族アミノ酸が、塩基性、酸性、または脂肪族アミノ酸に置換され、酸性アミノ酸が、芳香族、塩基性、または脂肪族アミノ酸に置換され、塩基性アミノ酸が、酸性、芳香族または脂肪族アミノ酸に置換され、脂肪族アミノ酸が、芳香族、酸性または塩基性アミノ酸に置換される。

【0076】

ある実施形態では、本方法及び組成物と共に使用するためのＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＢＴＩ－３２２またはシプリズマブの重鎖ＣＤＲの１つ、２つ、または３つを含む。ある実施形態では、本方法及び組成物と共に使用するためのＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＢＴＩ－３２２またはシプリズマブの軽鎖ＣＤＲの１つ、２つ、または３つを含む。ある実施形態では、本方法及び組成物と共に使用するためのＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＢＴＩ－３２２またはシプリズマブのＣＤＲの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてのＣＤＲを含む。ある実施形態では、本明細書に記載の方法で使用するためのＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｏｕｒｃｅ ｎｏｔ ｆｏｕｎｄ．に記載の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つすべてのＣＤＲを含む。ある実施形態では、ＢＴＩ－３２２またはシプリズマブのＣＤＲの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、及び／または６つすべてが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のアミノ酸置換を有する。より具体的な実施形態では、そのようなアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。

【表1】

【0077】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと同じ６つのＣＤＲ配列を有する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブの６つのＣＤＲ配列のうちの５つを共有できる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＣＤＲのうちの１つは、シプリズマブの対応するＣＤＲとは異なり、ＣＤＲ配列は、１つのアミノ酸が異なる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＣＤＲ配列と、シプリズマブの対応するＣＤＲとの差異は、保存的アミノ酸置換である。例えば、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブの６つのＣＤＲのセットと比較して、またはシプリズマブの重鎖内の３つのＣＤＲのセットと比較して、またはシプリズマブの軽鎖内の３つのＣＤＲのセットと比較して、１、２、３、４、５、または６つの保存的アミノ酸置換を有することができる。

【0078】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、またはＶＬ ＣＤＲ３は、そのシプリズマブ対応物とは異なるＣＤＲである。他の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、またはＶＨ ＣＤＲ３は、そのシプリズマブ対応物とは異なるＣＤＲである。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の異なるＣＤＲは、そのシプリズマブ対応物の配列よりも長い。他の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の異なるＣＤＲは、そのシプリズマブ対応物の配列よりも短い。

【0079】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の重鎖定常領域（ＣＨ）の配列は、配列番号０９と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の重鎖定常領域の配列は、配列番号１０と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の重鎖定常領域の配列は、配列番号１１と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の重鎖定常領域の配列は、配列番号１２と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の重鎖定常領域の配列は、配列番号１３と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の軽鎖定常領域（ＣＬ）の配列は、配列番号１４と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の軽鎖定常領域の配列は、配列番号１５と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。

【0080】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、Ｔ１１_１、Ｔ１１_２、及びＴ１１_３として当技術分野で知られているヒトＣＤ２の３つの領域に向けることができる（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ａ．，Ｓｅｅｄ，Ｂ．，１９８７．Ｎａｔｕｒｅ ３２９，８４２－８４６；Ｂｒａｎｃｏ ｅｔ ａｌ．，１９９９．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８，１５８８－１５９６；Ａｒｕｌａｎａｎｄａｍ，Ａ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，１９９３．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０，１１６１３－１１６１７；Ｄａｍｓｃｈｒｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４１，９８５－１０００）。シプリズマブへの結合に重要なヒトＣＤ２の接着ドメイン中の３つの残基は、Ｎ１８、Ｋ５５、及びＴ５である（Ｄａｍｓｃｈｒｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４１，９８５－１０００）。ある実施形態では、細胞外ＣＤ２ドメイン中の残基Ｎ１８、Ｋ５５、及びＴ５９は、ヒトＣＤ２に対する本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の結合親和性において重要な残基である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと同じエピトープを結合する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと競合的にヒトＣＤ２に結合する。

【0081】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＤＮＡ配列は、修飾させて、製造中の産生物収量を最適化することができる。生成されたアミノ酸配列は、表１に記載のものと同じになるため、配列の最適化により、産生中の分子の産生物品質の分泌に影響を与えることなく、産生物収量が増加する。ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の重鎖及び軽鎖の最適化されたＤＮＡ配列を表２に示す。

【表2】

【0082】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の重鎖の配列は、配列番号１６と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の軽鎖の配列は、配列番号１７と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。

【0083】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＣＤ５８／ＣＤ２シグナル伝達カスケードを妨害する。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＣＤ５８を遮断する。ＣＤ５８／ＣＤ２経路を阻害する化合物の例は、アレファセプトである。

【0084】

ある実施形態では、シプリズマブの枯渇型は自己免疫疾患の治療に使用され得る。

【0085】

５．１．２ ＡＤＣＣ活性の低下または欠如
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、抗体依存性細胞傷害（「ＡＤＣＣ」）を有しないか、または低減している。ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、これらに限定されないが、Ｆｃサイレンシング、サブクラススイッチング、脱グリコシル化、及びＦｃ領域の他の変異または修飾などの方法を使用して、ＡＤＣＣの減少または不在を呈するように生成することができる。これらの方法は、本明細書に記載された方法で使用され得るＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の非限定的な例について、例えば、米国仮出願第６３／１３５，３８１号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。これらの方法については、セクション５．１．４、５．２．２、５．２．３及び実施例においても、さらに記載している。

【0086】

ＡＤＣＣ活性は、任意の市販のキット（例えば、Ｐｒｏｍｅｇａ ＡＤＣＣ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ｂｉｏａｓｓａｙ、ＣｏｒｅＫｉｔ（カタログ＃Ｇ７０１０、Ｇ７０１８）、または任意の適切なアッセイによって決定することができる。そのようなアッセイとしては、これらに限定されないが、フローサイトメトリーに基づくアッセイ、蛍光アッセイ、または生物発光レポーターアッセイが挙げられる。

【0087】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいてシプリズマブのＡＤＣＣ活性の最大９０％を呈する。このようなアッセイの例は、Ｇｏｌａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ．Ｊａｎｕａｒｙ ２００３；８８：１００２－１０１２の方法に記載されている。具体的には、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較して、最大で０％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または最大９０％のＡＤＣＣ活性を呈する。

【0088】

ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、ヒト化マウスモデルまたは臨床設定におけるヒト対象において、シプリズマブのｉｎ ｖｉｖｏ投与と比較して、最大９０％のＡＤＣＣ活性を呈する。具体的には、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、ヒト化マウスモデルまたは臨床設定におけるヒト対象において、シプリズマブのｉｎ ｖｉｖｏ投与の最大で０％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または最大９０％のＡＤＣＣ活性を呈する。

【0089】

５．１．３ 免疫調節活性の維持
ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＡＤＣＣが存在しないかまたは低下しているにもかかわらず、免疫調節活性を呈する。ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、これらに限定されないが、Ｆｃサイレンシング、サブクラススイッチング、脱グリコシル化、及びＦｃ領域の他の変異または修飾などの方法を使用して、ＡＤＣＣの減少または不在を呈するように生成することができる。これらの方法については、セクション５．１．４、５．２．２、５．２．３及び実施例において、さらに記載している。

【0090】

本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）によって呈される免疫調節活性としては、これらに限定されないが、ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ細胞の活性化及び増殖の阻害、ＦＯＸＰ３^＋制御性Ｔ細胞の割合（パーセンテージ）の上昇、及びＣＤ６９＋ＮＫ細胞の抑制が挙げられ得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと同じ免疫調節活性（例えば、同じタイプ及び同じレベル）を呈する。免疫調節活性の決定は、当技術分野で知られている任意の適切な方法によって達成することができる。これらの方法としては、これらに限定されないが、細胞増殖アッセイ、Ｔ細胞活性化機能アッセイ、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ、細胞内染色、サイトカイン捕捉、四量体染色、スペクトルタイピングアッセイ、及びバイオセンサーアッセイが挙げられる。一例として、Ｔ細胞活性化は、任意の市販のアッセイキット（例えば、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｔ Ｃｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｂｉｏａｓｓａｙ（ＮＦＡＴまたはＩＬ－２）（カタログ＃Ｊ１６２１またはＪ１６５１））、または任意の適切なアッセイによって決定することができ、簡単に述べると、アッセイプレートを抗ＣＤ３抗体でコーティングし、ヒトＰＢＭＣまたはマウス末梢標的細胞を添加し、抗ＣＤ２８を細胞に添加し、増殖を定量化する。

【0091】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ細胞の活性化及び増殖を、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、シプリズマブによって達成されるレベルの少なくとも５０％であるレベルまで阻害することができる。このようなアッセイの例は、Ｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００１；９８：２７３６－２７４４の方法に記載されている。具体的には、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ細胞の活性化及び増殖を、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、シプリズマブによって達成されるレベルの少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％であるレベルまで阻害することができる。

【0092】

ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、ヒト化マウスモデルまたは臨床設定におけるヒト対象において、シプリズマブのｉｎ ｖｉｖｏ投与と比較して、少なくとも５０％のレベルのＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ細胞の活性化／増殖を呈する。具体的には、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、ヒト化マウスモデルまたは臨床設定におけるヒト対象において、シプリズマブのｉｎ ｖｉｖｏ投与と比較して、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％のレベルのＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ細胞の活性化／増殖を呈する。

【0093】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較して、ＦＯＸＰ３^＋制御性Ｔ細胞の量を増加させることができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、ＦＯＸＰ３^＋制御性Ｔ細胞の量を、シプリズマブによって達成される量の少なくとも５０％のレベルまで増加させることができる。そのようなアッセイの例は、Ｓａｍｂｕｃｃｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ．８：３６７４（２０１８）の方法に記載されている。具体的には、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、ＦＯＸＰ３^＋制御性Ｔ細胞の量を、シプリズマブによって達成されるＦＯＸＰ３^＋制御性Ｔ細胞の量の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％のレベルまで増加させることができる。

【0094】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、ヒト化マウスモデルまたは臨床設定におけるヒト対象において、シプリズマブのｉｎ ｖｉｖｏ投与と比較して、少なくとも５０％のレベルのＦＯＸＰ３^＋制御性Ｔ細胞を呈する。具体的には、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、ヒト化マウスモデルまたは臨床設定におけるヒト対象において、シプリズマブのｉｎ ｖｉｖｏ投与と比較して、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％のレベルのＦＯＸＰ３^＋制御性Ｔ細胞を呈する。

【0095】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較して、ＣＤ６９＋ＮＫ細胞の発現を阻害することができる。ある実施形態では、本明細書において提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、シプリズマブと比較して、最大で５０％のＣＤ６９＋ＮＫ細胞の発現を呈する。そのようなアッセイの例は、Ｔｈｕｍ ｅｔ ｅｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．１９：１０，ｐｐ．２３９５－２４００，２００４の方法に記載されている。具体的には、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、シプリズマブと比較して、最大１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または最大９０％のＣＤ６９＋ＮＫ細胞の発現を呈する。

【0096】

ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、ヒト化マウスモデルまたは臨床設定におけるヒト対象において、シプリズマブのｉｎ ｖｉｖｏ投与と比較して、最大５０％のＣＤ６９＋ＮＫ細胞の発現を呈する。具体的には、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、ヒト化マウスモデルまたは臨床設定におけるヒト対象において、シプリズマブのｉｎ ｖｉｖｏ投与と比較して、最大１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または最大９０％のＣＤ６９＋ＮＫ細胞の発現を呈する。

【0097】

特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、これらの免疫調節活性のうちの１つを行うことができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、これらの免疫調節活性のうちの２つ以上を行うことができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、これらの免疫調節活性をすべて行うことができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の投与は、免疫調節活性を保持しながら、レシピエントにおけるＡＤＣＣ活性を完全に無効にする。

【0098】

５．１．４ Ｆｃ領域の修飾
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ１抗体であり、Ｆｃ領域中に修飾を有する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ２抗体であり、Ｆｃ領域中に修飾を有する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ３抗体であり、Ｆｃ領域中に修飾を有する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ４抗体であり、Ｆｃ領域中に修飾を有する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較して、少なくとも１つの変異（例えば、約１つまたは少なくとも１つ、約２つまたは少なくとも２つ、約３つまたは少なくとも３つ、約４つまたは少なくとも４つ、約５つまたは少なくとも５つ、約６つまたは少なくとも６つ、約７つまたは少なくとも７つ、約８つまたは少なくとも８つ、約９つまたは少なくとも９つ、約１０または少なくとも１０、または約１０を超える変異）を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブに関連して、約１つの変異、約２つの変異、約３つの変異、約４つの変異、約５つの変異、約６つの変異、約７つの変異、約８つの変異、約９つの変異、約１０の変異、または約１０を超える変異（例えば、シプリズマブのＦｃ領域中の変異）を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ１重鎖中にシプリズマブＣＤＲ、及び少なくとも１つの変異（例えば、約１つまたは少なくとも１つ、約２つまたは少なくとも２つ、約３つまたは少なくとも３つ、約４つまたは少なくとも４つ、約５つまたは少なくとも５つ、約６つまたは少なくとも６つ、約７つまたは少なくとも７つ、約８つまたは少なくとも８つ、約９つまたは少なくとも９つ、約１０または少なくとも１０、または約１０を超える変異）を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ２重鎖中にシプリズマブＣＤＲ、及び少なくとも１つの変異（例えば、約１つまたは少なくとも１つ、約２つまたは少なくとも２つ、約３つまたは少なくとも３つ、約４つまたは少なくとも４つ、約５つまたは少なくとも５つ、約６つまたは少なくとも６つ、約７つまたは少なくとも７つ、約８つまたは少なくとも８つ、約９つまたは少なくとも９つ、約１０または少なくとも１０、または約１０を超える変異）を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ３重鎖中にシプリズマブＣＤＲ、及び少なくとも１つの変異（例えば、約１つまたは少なくとも１つ、約２つまたは少なくとも２つ、約３つまたは少なくとも３つ、約４つまたは少なくとも４つ、約５つまたは少なくとも５つ、約６つまたは少なくとも６つ、約７つまたは少なくとも７つ、約８つまたは少なくとも８つ、約９つまたは少なくとも９つ、約１０または少なくとも１０、または約１０を超える変異）を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ４重鎖中にシプリズマブＣＤＲ、及び少なくとも１つの変異（例えば、約１つまたは少なくとも１つ、約２つまたは少なくとも２つ、約３つまたは少なくとも３つ、約４つまたは少なくとも４つ、約５つまたは少なくとも５つ、約６つまたは少なくとも６つ、約７つまたは少なくとも７つ、約８つまたは少なくとも８つ、約９つまたは少なくとも９つ、約１０または少なくとも１０、または約１０を超える変異）を含む。変異は、野生型対応物と比較して、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のアミノ酸配列中に少なくとも１つの改変を含むことができ、改変は、Ｆｃ領域のその同族受容体への結合の減少または排除をもたらす。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、アミノ酸Ｌ２３４位、Ｌ２３５位、Ｐ３２９位、Ｖ２３４位、Ｇ２３７位、Ｐ２３８位、Ｈ２６８位、Ｖ３０９位、Ａ３３０位、Ｐ３３１位、及び／またはＳ２２８位（例えば、Ｅｄｅｌｍａｎ（ＥＵ）ナンバリングに基づく）に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、アミノ酸Ｌ２３４位及び／またはＬ２３５位における変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、アミノ酸Ｌ２３４位、Ｌ２３５位及び／またはＰ３２９位における変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、アミノ酸位置Ｖ２３４位、Ｇ２３７位、Ｐ２３８位、Ｈ２６８位、Ｖ３０９位、Ａ３３０位、及び／またはＰ３３１位における変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、アミノ酸Ｓ２２８位における変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、アミノ酸Ｓ２２８位、Ｐ３２９位及び／またはＬ２３５位における変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｌ２３４Ａ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｌ２３５Ａ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｐ３２９Ｇ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｖ２３４Ａ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｇ２３７Ａ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｐ２３８Ｓ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｈ２６８Ａ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｖ３０９Ｌ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ａ３３０Ｓ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｐ３３１Ｓ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｓ２２８Ｐ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｌ２３５Ｅ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（または他の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（または他の保存的アミノ酸変異）を含む。いくつかの実施形態では、変異は、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ（または他の保存的アミノ酸変異）を含む（例えば、ＩｇＧ２について）。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｓ２２８Ｐ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む（例えば、ＩｇＧ４について）。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上の変異であり、Ｐ３２９Ｇ、Ｓ２２８Ｐ、及びＬ２３５Ｅ（または別の保存的アミノ酸変異）を含む（例えば、ＩｇＧ４について）。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、任意の抗体ナンバリングスキーム（例えば、Ｅｄｅｌｍａｎ（ＥＵ）ナンバリング）に基づく位置である。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、Ｅｄｅｌｍａｎ（ＥＵ）ナンバリングに基づく位置である。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに基づく位置である。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、Ｃｌｏｔｈｉａナンバリングスキームに基づく位置である。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、ＩＭＧＴナンバリングスキームに基づく位置である。修飾は、野生型Ｆｃ領域と比較して、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）Ｆｃ領域のアミノ酸配列中に少なくとも１つの改変を含むことができ、改変は、Ｆｃ領域のその同族受容体への結合の減少または排除をもたらす。Ｆｃ受容体は、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、及び好中球などの免疫エフェクター細胞上にある。理論に拘束されるものではないが、野生型ＩｇＧでは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）とのＦｃ相互作用により、免疫細胞の食作用または細胞傷害活性を刺激することなど、下流のエフェクター細胞機能がもたらされる。Ｆｃ／ＦｃＲ相互作用の減少または排除は、エフェクター機能の排除をもたらす。

【0099】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体への結合の減少を呈する。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較して、ＦｃγＲＩＩＡ受容体への結合の減少を呈する。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較して、ＦｃγＲＩ受容体への結合の減少を呈する。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体への結合の増加を呈する。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較して、ＦｃγＲＩＩＡ受容体への結合の増加を呈する。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較して、ＦｃγＲＩ受容体への結合の増加を呈する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブによって示される結合能力の０％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％で結合する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブによって示される（例えば、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、及び／またはＦｃγＲＩに対する）結合能力と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％高い結合能力（例えば、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、及び／またはＦｃγＲＩに対して）を有する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブによって示される（例えば、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、及び／またはＦｃγＲＩに対する）結合能力と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％低い結合能力（例えば、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、及び／またはＦｃγＲＩに対して）を有する。結合事象を検出するためのアッセイとしては、これらに限定されないが、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、及び／またはＢｉａｃｏｒｅシステムなどの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法を挙げることができる。

【0100】

ある実施形態では、Ｆｃ領域は、当技術分野で知られている任意の適切な方法によって修飾され得る。ある実施形態では、修飾は、Ｆｃサイレンシングをもたらすことができる。ある実施形態では、修飾は、ＩｇＧ Ｆｃのアミノ酸配列の変異を含み得る。ある実施形態では、修飾は、グリコシル化部位（Ｎ２９７）またはＮ２９７を含むコンセンサス配列の変異を含み得る。ある実施形態では、修飾は、ＦｃγＲ及びＣ１ｑ結合を阻害する変異を含み得る。ある実施形態では、これらの変異は、変異Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａのいずれかまたはすべてを含み得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、Ｆｃが存在しないＦａｂであり得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ４抗体である。理論に拘束されるものではないが、ＩｇＧ４サブクラスは、ＡＤＣＣなどのエフェクター機能が欠如しているため、治療目的に望ましい（Ｄａｖｉｅｓ ａｎｄ Ｓｕｔｔｏｎ， Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２０１５ Ｎｏｖ；２６８（１）：１３９－１５）。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ２抗体である。理論に拘束されるものではないが、ＩｇＧ２サブクラスの治療上有益な特徴としては、ＩｇＧ２が胎盤を通過しないこと（Ｅｉｎａｒｓｄｏｔｔｉｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１４ Ｓｅｐ ２４；９（９）：ｅ１０８３１９）、及びＩｇＧ２が、Ｆｃ受容体結合能が非常に低い／全くないこと（Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４；５：５２０）が挙げられる。

【0101】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、抗原結合可変領域及びＦｃ領域を有することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃ領域は、抗体の重鎖のそれぞれにグリコシル化コンセンサス配列を含む。ある実施形態では、グリコシル化コンセンサス配列は、Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒである。ある実施形態では、グリコシル化コンセンサス配列は、Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒである。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、Ａｓｎ２９７でグリコシル化されている。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、脱グリコシル化されている。ある実施形態では、アスパラギン残基に付着した糖鎖は、Ｎ結合型糖鎖であり得る。ある実施形態では、アスパラギン残基に付着した糖鎖は、Ｏ結合型糖鎖であり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、重鎖のＡｓｎ２９７上に単一のＮ結合型グリコシル化部位を含み得る。

【0102】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、Ｆｃグリコシル化コンセンサス配列でグリコシル化され得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、脱グリコシル化される。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の脱グリコシル化は、Ｆｃ領域を修飾することによって、具体的にはＮ２９７位の点変異を導入することによって達成される。ある実施形態では、２９７位に導入される変異（Ｎ２９７）は、これらに限定されないが、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、またはＮ２９７Ａであり得る。理論に拘束されるものではないが、Ｎ２９７点変異は、グリコシル化の欠如及びＦｃシグナル伝達のサイレンシングをもたらす。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の脱グリコシル化は、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）糖鎖構造の化学的または酵素的分解によって達成される。セクション５．２．３を参照されたい。特定の実施形態では、糖鎖分解の化学的方法または酵素的方法は、Ｆｃアミノ酸配列を保存する。

【0103】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の定常領域は、異なるサブクラスの抗体の定常領域でスイッチング可能である。理論に拘束されるものではないが、可変領域は変化しないが、サブクラススイッチ抗体は、異なるエフェクター分子と相互作用しながら、その特異的親和性を保持する（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ ａｎｄ Ｓｃｈａｕｂ，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．２０１８ Ｊａｎ；１０２（１Ｓ Ｓｕｐｐｌ １）：Ｓ７－Ｓ１３）。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の定常領域は、異なる抗体の定常領域でスイッチング可能である。ある実施形態では、このスイッチングにより、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）が、元の抗体とは異なるサブクラスの抗体になる。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の定常領域は、可変領域の特異的結合を保持しながら、異なる抗体でスイッチング可能である。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の定常領域を異なる抗体でスイッチングでき、特定の可変領域が保存され、ここで、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＨ領域は、配列番号０１と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＶＬ領域は、配列番号０２と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である。

【0104】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと同じヒトＣＤ２内のエピトープに特異的に結合する。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、動物特異的抗体、ヒト特異的抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全長抗体、抗体断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、天然抗体、合成抗体、操作抗体、Ｆｃ領域に追加の成分が付加された拡大抗ＣＤ２バリアント（例えば、成分は、ｓｃＦｖ、ＣＨ２ドメイン、及び／またはＣＨ３ドメインを含むことができる）、またはそれらの組み合わせであり得る。ある実施形態では、抗体Ｆｃ領域は、Ｆｃサイレンシングをもたらす点変異を（例えば、Ｎ２９７中に）有する。ある実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１である。ある実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２である。ある実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４である。ある実施形態では、抗体は、シプリズマブとは異なるネイティブ定常領域を有する。ある実施形態では、抗体は、シプリズマブとは異なるネイティブ定常領域、及びＦｃサイレンシングをもたらすＦｃ領域内の点変異を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ヒト化抗ＣＤ２モノクローナル抗体である。特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブである。ある実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、修飾Ｆｃ領域を有することができ、修飾には、これらに限定されないが、Ｆｃサイレンシング、スイッチされたネイティブ定常領域、またはＦｃサイレンシングされスイッチされた新しいネイティブ定常領域をもたらす、点変異が含まれ得る。異なる抗体サブクラスと修飾のこれらの組み合わせは、表３に概説されているＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の異なる型を産生させる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、抗体のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４サブクラスであり得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、修飾Ｆｃ領域を有することができ、修飾には、これらに限定されないが、Ｆｃサイレンシング、スイッチされたネイティブ定常領域、またはＦｃサイレンシングされスイッチされた新しいネイティブ定常領域をもたらす、点変異が含まれ得る。異なる抗体サブクラスと修飾のこれらの組み合わせは、表３に概説されているＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の異なる型を産生させる。

【表3】

【0105】

ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の比較を表４に概説する。

【表4】

【0106】

ある実施形態では、上に提示された例を含む本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと比較してＡＤＣＣ活性をほとんどまたは全く有さず、さらにシプリズマブによって呈される免疫調節効果を保持する。

【0107】

ある実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、未修飾ＩｇＧ１抗体の分子量より高い分子量を有し得る。ある実施形態では、この分子量の増加は、分子の複製領域の追加によって達成することができる。ある実施形態では、これらの領域は、当技術分野で公知である手段、これらに限定されないが、化学的コンジュゲーション、組換え融合、及び共有結合による付着を介して、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）に付着させ得る。

【0108】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）に付着する追加の領域は、これらに限定されないが、追加の可変重鎖（ＶＨ）、追加の可変軽鎖（ＶＬ）、追加のＶＨと追加のＶＬとの融合を含むｓｃＦｖ、追加のＣＨ２ドメイン、または追加のＣＨ３ドメインなど、分子の複製領域を含むことができる。ある実施形態では、追加の領域は、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃ領域に付着させ得る。

【0109】

ある実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃ領域に付着させ得る。ある実施形態では、ｓｃＦｖは、シプリズマブのＶＨとＶＬとの融合を含むことができる。ある実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨとＶＬとの融合を含むことができ、ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むことができ、ＶＬは、配列番号２のアミノ酸配列を含むことができる。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ２に結合する。ある実施形態では、ｓｃＦｖのＣＤＲは、シプリズマブのＣＤＲと同じである。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃ領域に付着しているｓｃＦｖは、ＣＤ２上のエピトープに結合する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃ領域に付着したｓｃＦｖは、シプリズマブと同じＣＤ２のエピトープに結合する。ある実施形態では、ｓｃＦｖは、ＩｇＧ２抗体またはＩｇＧ４抗体から生成することができる。

【0110】

ある実施形態では、追加のＣＨ２ドメインをＦｃに付着させ得る。ある実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号１８または１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むことができる。ある実施形態では、追加のＣＨ２ドメインは、ＩｇＧ２抗体またはＩｇＧ４抗体から生成することができる。ある実施形態では、追加のＣＨ３ドメインをＦｃに付着させ得る。ある実施形態では、ＣＨ３ドメインは、配列番号２０または２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むことができる。ある実施形態では、追加のＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ２抗体またはＩｇＧ４抗体から生成することができる。ある実施形態では、追加のドメインは、ＦｃのＣ末端に付着させ得る。ある実施形態では、これらのドメインは、当技術分野で公知である手段、これらに限定されないが、化学的コンジュゲーション、組換え融合、及び共有結合による付着を介して、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）に付着させ得る。ある実施形態では、これらのドメインは、当技術分野で公知である手段、これらに限定されないが、化学的コンジュゲーション、組換え融合、及び共有結合による付着を介して、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）に付着させ得る。本開示に使用できるＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の例及びその製造は、例えば、米国仮出願第６３／０４２，８４４号に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0111】

５．２ ＣＤ２結合分子の産生
本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を産生するための方法が本明細書に提供され、ここで、シプリズマブと比較して、抗体依存性細胞傷害を媒介する当該分子の能力は低下するかまたは排除されるが、当該分子の免疫調節活性は維持されている。本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を産生するための方法としては、組換え発現技術、選択方法、宿主細胞への形質転換、及びＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の精製が挙げられる。セクション５．２．１を参照されたい。ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の断片（セクション５．２．２参照）；脱グリコシル化ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）（セクション５．２．３を参照）；及び本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を組換え発現するためのベクターを含む細胞（セクション５．２．４を参照）を産生するための方法も本明細書に提供される。

【0112】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、配列番号０１のＶＨの、配列番号０２のＶＬ、配列番号０９のＣＨ、及び配列番号１４のＣＬ；配列番号０１のＶＨ、配列番号０２のＶＬ、配列番号１０のＣＨ、及び配列番号１４のＣＬ；配列番号０１のＶＨ、配列番号０２のＶＬ、配列番号１１のＣＨ、及び配列番号１４のＣＬ；配列番号０１のＶＨ、配列番号０２のＶＬ、配列番号１２のＣＨ、及び配列番号１４のＣＬ；配列番号０１のＶＨ、配列番号０２のＶＬ、配列番号１３のＣＨ、及び配列番号１４のＣＬを含み得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、配列番号０１のＶＨの、配列番号０２のＶＬ、配列番号０９のＣＨ、及び配列番号１５のＣＬ；配列番号０１のＶＨ、配列番号０２のＶＬ、配列番号１０のＣＨ、及び配列番号１５のＣＬ；配列番号０１のＶＨ、配列番号０２のＶＬ、配列番号１１のＣＨ、及び配列番号１５のＣＬ；配列番号０１のＶＨ、配列番号０２のＶＬ、配列番号１２のＣＨ、及び配列番号１５のＣＬ；配列番号０１のＶＨ、配列番号０２のＶＬ、配列番号１３のＣＨ、及び配列番号１５のＣＬを含み得る。

【0113】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、配列番号１６の重鎖；配列番号０２のＶＬ、及び配列番号１４のＣＬ；配列番号１６の重鎖；配列番号０２のＶＬ、及び配列番号１５のＣＬ；配列番号０１のＶＨ；配列番号０９のＣＨ；及び配列番号１７の軽鎖；配列番号０１のＶＨ；配列番号１０のＣＨ；及び配列番号１７の軽鎖；配列番号０１のＶＨ；配列番号１１のＣＨ；及び配列番号１７の軽鎖；配列番号０１のＶＨ；配列番号１２のＣＨ；及び配列番号１７の軽鎖；配列番号０１のＶＨ；配列番号１３のＣＨ；及び配列番号１７の軽鎖；または配列番号１６の重鎖及び配列番号１７の軽鎖を含み得る。

【0114】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、拡大バリアントを含み得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃは、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の分子量が、１０ｋＤａ、１１ｋＤａ、１２ｋＤａ、１３ｋＤａ、１４ｋＤａ、１５ｋＤａ、１６ｋＤａ、１７ｋＤａ、１８ｋＤａ、１９ｋＤａ、２０ｋＤａ、２１ｋＤａ、２２ｋＤａ、２３ｋＤａ、２４ｋＤａ、２５ｋＤａ、２６ｋＤａ、２７ｋＤａ、２８ｋＤａ、２９ｋＤａ、３０ｋＤａ、３１ｋＤａ、３２ｋＤａ、３３ｋＤａ、３４ｋＤａ、３５ｋＤａ、３６ｋＤａ、３７ｋＤａ、３８ｋＤａ、３９ｋＤａ、４０ｋＤａ、４１ｋＤａ、４２ｋＤａ、４３ｋＤａ、４４ｋＤａ、４５ｋＤａ、４６ｋＤａ、４７ｋＤａ、４８ｋＤａ、４９ｋＤａ、５０ｋＤａ、５１ｋＤａ、５２ｋＤａ、５３ｋＤａ、５４ｋＤａ、５５ｋＤａ、５６ｋＤａ、５７ｋＤａ、５８ｋＤａ、５９ｋＤａ、または６０ｋＤａ増加するように、追加の領域を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃは、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の分子量が、１０ｋＤａ～１５ｋＤａ、１１ｋＤａ～１６ｋＤａ、１２ｋＤａ～１７ｋＤａ、１３ｋＤａ～１８ｋＤａ、１４ｋＤａ～１９ｋＤａ、１５ｋＤａ～２０ｋＤａ、１６ｋＤａ～２１ｋＤａ、１７ｋＤａ～２２ｋＤａ、１８ｋＤａ～２３ｋＤａ、１９ｋＤａ～２４ｋＤａ、２０ｋＤａ～２５ｋＤａ、２１ｋＤａ～２６ｋＤａ、２２ｋＤａ～２７ｋＤａ、２３ｋＤａ～２８ｋＤａ、２４ｋＤａ～２９ｋＤａ、２５ｋＤａ～３０ｋＤａ、２６ｋＤａ～３１ｋＤａ、２７ｋＤａ～３２ｋＤａ、２８ｋＤａ～３３ｋＤａ、２９ｋＤａ～３４ｋＤａ、３０ｋＤａ～３５ｋＤａ、３１ｋＤａ～３６ｋＤａ、３２ｋＤａ～３７ｋＤａ、３３ｋＤａ～３８ｋＤａ、３４ｋＤａ～３９ｋＤａ、３５ｋＤａ～４０ｋＤａ、３６ｋＤａ～４１ｋＤａ、３７ｋＤａ～４２ｋＤａ、３８ｋＤａ～４３ｋＤａ、３９ｋＤａ～４４ｋＤａ、４０ｋＤａ～４５ｋＤａ、４１ｋＤａ～４６ｋＤａ、４２ｋＤａ～４７ｋＤａ、４３ｋＤａ～４８ｋＤａ、４４ｋＤａ～４９ｋＤａ、４５ｋＤａ～５０ｋＤａ、４６ｋＤａ～５１ｋＤａ、４７ｋＤａ～５２ｋＤａ、４８ｋＤａ～５３ｋＤａ、４９ｋＤａ～５４ｋＤａ、５０ｋＤａ～５５ｋＤａ、５１ｋＤａ～５６ｋＤａ、５２ｋＤａ～５７ｋＤａ、５３ｋＤａ～５８ｋＤａ、５４ｋＤａ～５９ｋＤａ、または５５ｋＤａ～６０ｋＤａの範囲で増加するように、追加の領域を含む。

【0115】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の複製領域を分子に付着させて、拡大バリアントを産生し得る。ある実施形態では、これらの領域は、当技術分野で公知である手段、これらに限定されないが、化学的コンジュゲーション、組換え融合、及び共有結合による付着を介して、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃ領域に付着させ得る。

【0116】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の拡大バリアントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４に由来することができる。ある実施形態では、追加のｓｃＦｖをＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃに付着させて、拡大バリアントを産生し得る（図７、図８Ａ）。ある実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨ及びＶＬを含むことができ、ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むことができ、ＶＬは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むことができる。

【0117】

ある実施形態では、追加のＣＨ２ドメインをＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃに付着させて、拡大バリアントを産生し得る（図７、図８Ｂ）。ある実施形態では、追加のＣＨ２ドメインは、配列番号１８または１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むことができる。ある実施形態では、追加のＣＨ３ドメインをＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃに付着させて、拡大バリアントを産生し得る（図７、図８Ｃ）。ある実施形態では、追加のＣＨ３ドメインは、配列番号２０または２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むことができる。好ましい実施形態では、追加の断片またはドメインは、ＦｃのＣ末端に付着させ得る。ある実施形態では、拡大抗ＣＤ２バリアントは、ＩｇＧ２抗体であり得る。ある実施形態では、拡大抗ＣＤ２バリアントは、ＩｇＧ４抗体であり得る。拡大抗ＣＤ２バリアントの詳細を表５に示す。

【0118】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）に付着している追加の領域は、無関係のまたは人工のアミノ酸配列を含み得る。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）に付着している追加の領域は、別のヒトタンパク質由来の、構造ドメインなどの断片を含み得る。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）に付着している追加の領域は、別のヒトタンパク質由来のドメインの断片を含み得る。ある実施形態では、そのような追加の領域の付加では、ヒトにおいて、親ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の結合活性に干渉することなく、及び／または親ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）に対する、得られたＣＤ２バインダーの免疫原性を増加させることはない。

【表5】

【0119】

５．２．１ 組換え発現系
ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を産生するための方法が本明細書に記載される。本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、当技術分野で知られている任意の適切な発現方法によって産生することができる。抗体を産生するこれらの方法としては、これらに限定されないが、ハイブリドーマ細胞、細菌、酵母細胞、昆虫細胞、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ、及び哺乳動物細胞株における組換え発現の使用を挙げることができる。ある実施形態では、シプリズマブと同じエピトープにおいて、ＣＤ２に結合する組換え抗体を産生する方法は、抗体のＶＨ及びＶＬ遺伝子を単離、増幅、及びクローニングすること；重鎖断片と軽鎖断片とを結合すること；その後、これらの鎖を特別なファージベクターにクローニングすることを含む。組み込み時に、抗体は、細胞表面上に提示され、当技術分野で知られている任意の適切な選択方法を使用して、所望の結合特異性を有する抗体を選択することができる。これらの方法としては、これらに限定されないが、パニング、常磁性ビーズの使用、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、及び／またはＢｉａｃｏｒｅシステムなどの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法が挙げられる。

【0120】

選択後、抗体の遺伝子を発現ベクターに移動させ得る。ある実施形態では、強力なプロモーターも発現ベクターに挿入される。プロモーターは、ＣＭＶまたはＳＶ４０などのウイルスプロモーター；または伸長因子（ＥＦ）－１プロモーター、ＵＢＣ、ＰＧＫ、またはＣＡＧプロモーターなどの非ウイルスプロモーターであり得る。発現ベクターは、宿主細胞株に形質転換され、宿主細胞ゲノムに組み込まれる。ある実施形態では、宿主細胞株は、細菌、酵母、または哺乳動物細胞株を含むことができる。特定の実施形態では、組換え抗体産生のための宿主細胞株として使用できる哺乳動物細胞株としては、これらに限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、ＮＳ０細胞株、Ｓｐ２／０細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株、及びヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞株が挙げられる。

【0121】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、宿主細胞培養物から回収し、当技術分野で知られている任意の適切な方法によって精製することができる。標準的な抗体精製法としては、これらに限定されないが、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、Ｑ－セファロース陰イオン交換クロマトグラフィー、スルホプロピルセファロース陽イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、プロテインＧ精製、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、及びレクチンクロマトグラフィーが挙げられる。

【0122】

５．２．２ ＣＤ２結合断片の産生
上記の手順ステップに加えて、変形または追加の手順を実行して、ＣＤ２結合断片を産生できる。これらのＣＤ２結合分子断片（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）としては、これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、及びｓｄＡｂを挙げることができる。特定の実施形態では、産生された断片は、シプリズマブと同じエピトープに結合する。ある実施形態では、ＣＤ２結合ｓｃＦｖを産生するための手順は、リンカーに加えて、抗体のＶＨ及びＶＬ遺伝子を単離する、増幅する、及びクローニングすることを含む。ＶＨ断片とＶＬ断片とを結合するには、柔軟なペプチドリンカーを必要とする。ある実施形態では、ＣＤ２結合ｓｄＡｂを産生するための手順は、ラクダまたはサメのＶＨ領域を単離すること、増幅すること、及びクローニングすることを含み、これは、定常領域に付着した対ＶＬ領域を含まないＶＨ領域のみとなる。

【0123】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）をパパインで処理して、Ｆａｂ結合断片を産生することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）をペプシンで処理して、Ｆ（ａｂ’）_２を産生することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂのＶＨ領域の配列は、配列番号０１と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である。特定の実施形態では、本明細書に記載のＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂのＶＬ領域の配列は、配列番号０２と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である。

【0124】

５．２．３ ＣＤ２結合抗体の脱グリコシル化
本明細書に記載されるのは、セクション５．１．４に記載の脱グリコシル化されたＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を産生するための方法である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の糖鎖は、トリフルオロメタンスルホン（ＴＦＭＳ）酸による処理などの化学的方法を使用して修飾することができる。別の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の糖鎖は、酵素的方法を使用して修飾され得る。特定の実施形態では、糖鎖分解の化学的方法または酵素的方法は、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）のＦｃアミノ酸配列を保存する。

【0125】

本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の糖鎖を修飾するために使用できる酵素としては、これらに限定されないが、ペプチド－Ｎ－グリコシダーゼＦ（ＰＮＧａｓｅＦ）、ペプチド－Ｎ－グリコシダーゼＡ（ＰＮＧａｓｅＡ）、エンドグリコシダーゼＨ、エンドグリコシダーゼＦ、エンド－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ（ＥｎｄｏＳ）、エンド－α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ、シアリダーゼＡ、β１－４ガラクトシダーゼＳ、β－Ｎ－アセチルヘキソサミニダーゼ、及びＥｎｄｏＳ２を挙げることができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、エンドグリコシダーゼで処理される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の糖鎖構造を分解するために使用されるエンドグリコシダーゼは、ＥｎｄｏＳである（Ｓｊｏｇｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１５，ｖｏｌ．２５，ｎｏ．１０，１０５３－１０６３）。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の糖鎖構造を分解するために使用されるエンドグリコシダーゼは、ＥｎｄｏＳ２である（Ｓｊｏｇｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（２０１３）４５５，１０７－１１８）。

【0126】

Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓから分泌されるＥｎｄｏＳ及びＥｎｄｏＳ２は、ヒトＩｇＧの重鎖のキトビオースコアからＮ結合型糖鎖を特異的に除去する。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のエンドグリコシダーゼＥｎｄｏＳ２とのインキュベーションにより、Ｎ－糖鎖のキトビオースコア中の２つのＧｌｃＮＡｃ残基が切断されるが、コアＧｌｃＮＡｃは変わらずに残る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子は、ＥｎｄｏＳまたはＥｎｄｏＳ２で処理される。ＥｎｄｏＳ及びＥｎｄｏＳ２は両方とも、複合糖鎖を除去するが、ＥｎｄｏＳ２は、高マンノース糖鎖を除去する。

【0127】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ抗体である。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、重鎖の定常領域の少なくとも１つのコンセンサスＮ結合型グリコシル化部位を有する。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、スキーム１に示される以下のオリゴ糖のうちの少なくとも１つを担持する。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＥｎｄｏＳで処理される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＥｎｄｏＳ２で処理される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、脱グリコシル化される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＩｇＧ抗体であり、シプリズマブと比較して、抗体依存性細胞傷害を媒介する抗体の能力は低下するかまたは排除されるが、抗体の免疫調節活性は維持されている。
スキーム１：

【化2】

白三角：フコース；白四角：Ｎ－アセチルグルコサミン；灰色の丸：マンノース；白丸：ガラクトース。

【0128】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子の脱グリコシル化は、当技術分野で知られている任意の適切な方法によって決定することができる。脱グリコシル化を決定する標準的な方法としては、これらに限定されないが、サイズ排除クロマトグラフィー分析、三次構造分析、熱安定性評価、グアニジン・ＨＣｌによる変性、パパイン消化に対する耐性、及び液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって測定された重鎖の換算質量データが挙げられる。

【0129】

５．２．４ 細胞及びベクター
本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を発現する細胞が本明細書に提供される。本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を組換え発現するｅｘ ｖｉｖｏ細胞が本明細書に提供される。本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターも本明細書に提供される。特定の実施形態では、細胞は、ｅｘ ｖｉｖｏ細胞である。

【0130】

ある実施形態では、遺伝子発現をプロモーターの制御下に置くことができる。プロモーターは、ＣＭＶまたはＳＶ４０などのウイルスプロモーター；または伸長因子（ＥＦ）－１プロモーター、ＵＢＣ、ＰＧＫ、またはＣＡＧプロモーターなどの非ウイルスプロモーターであり得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）をコードするヌクレオチド配列を適切なベクターにクローニングする。ある実施形態では、ベクターは、哺乳動物ベクターであり得る。ある実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターであり得る。ある実施形態では、発現ベクターは、細胞（例えば、ｅｘ ｖｉｖｏ細胞）に形質転換される。ある実施形態では、細胞は、ヌクレオチド配列が宿主細胞によって転写及び翻訳されるようにベクターを発現させる。ある実施形態では、宿主細胞株は、細菌、酵母、または哺乳動物細胞株を含むことができる。特定の実施形態では、宿主細胞株は、哺乳動物細胞である。ある実施形態では、組換え抗体産生のための宿主細胞株として使用できる哺乳動物細胞株としては、これらに限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、ＮＳ０細胞株、Ｓｐ２／０細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株、及びヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞株が挙げられる。

【0131】

ある実施形態では、宿主細胞株は、遺伝子修飾され得る。ある実施形態では、修飾は、組換えタンパク質の発現の生産性を改善する目的で行うことができる。ある実施形態では、修飾は、宿主細胞が発現する組換えタンパク質に作用するように行うことができる。特定の実施形態では、宿主細胞株は、所望のグリコシルトランスフェラーゼを発現するように遺伝子修飾されている。特定の実施形態では、宿主細胞株は、ＥｎｄｏＳまたはＥｎｄｏＳ２を発現するように遺伝子修飾されている。

【0132】

５．３ 治療的使用及び方法
本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を使用するための方法が本明細書に提供され、ここで、シプリズマブと比較して、抗体依存性細胞傷害を媒介する当該分子の能力は低下するかまたは排除されるが、当該分子の免疫調節活性は維持されている。本明細書において提供されるのは、免疫系の慢性または急性炎症性障害を有するヒト対象を治療するための方法である。また、本明細書では、ヒト対象が免疫系の慢性または急性炎症性障害を発症するのを予防するための方法も提供される。さらなる実施形態では、免疫系の急性または慢性障害は、これらに限定されないが、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、関節リウマチ、強直性脊椎炎、１型糖尿病、乾癬、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（クローン病）、セリアック病、シェーグレン病、狼瘡、多発性硬化症、巣状分節性糸球体硬化症、アトピー性皮膚炎、筋萎縮性側索硬化症、原発性胆汁性肝硬変、及び原発性硬化性胆管炎、及び重度の喘息であり得る。ある実施形態では、方法は、免疫系の慢性または急性炎症性障害を有するヒト対象に、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）または本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物を投与することを含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）または本明細書に記載のＣＤ２結合を含む医薬組成物は、患者に長期間投与される。

【0133】

また、本明細書では、臓器または骨髄移植処置を受けているヒト対象を治療するための方法も提供される。ある実施形態では、この方法は、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を移植される臓器に投与することを含む。ある実施形態では、方法は、ヒト対象に、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）または本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物を投与することを含む。

【0134】

本明細書で提供される方法は、対象への抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を投与することを含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、対象における免疫関連障害または疾患を予防または治療するために対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、対象への抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤、及び別の活性剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１つの免疫関連障害または疾患と診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、免疫関連障害または疾患に関連する少なくとも１つの症状を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法を使用して、免疫関連障害または疾患が対象に発症するのを予防する。本明細書で提供される方法はまた、対象に抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を投与することによって、移植対象に対する免疫寛容を維持することを含み得る。いくつかの実施形態では、対象は、免疫関連障害または疾患を発症する素因があるか、または発症する可能性が高い。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１つの免疫関連障害または疾患、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも４つを超える免疫関連障害または疾患と診断されているか、それらを発症する可能性が高いか、またはそれらに関連する症状を有する。いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患は、免疫系の急性または慢性障害である。

【0135】

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片は、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、投与と同時に、またはその後に対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の初回用量は、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の初回用量が対象に投与される前、投与と同時に、またはその後に対象に投与される。治療薬（例えば、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤）の投与量は、これらに限定されないが、影響を受ける組織の種類、治療されている自己免疫疾患の種類、疾患の重症度、及び対象の健康状態及び薬剤による治療への応答など、多くの要因に依存する。したがって、薬剤の投与量は、各対象及び投与様式に応じて変化し得る。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与されない場合、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の用量は、治療上有効ではない。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が対象に投与されない場合、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の用量は、治療上有効ではない。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤も対象に投与される場合、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片のより少ない用量が対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片も対象に投与される場合、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤のより少ない用量が対象に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約２％、５％、７％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、もしくは７０％を超える量少ないか、または少なくとも約２％、５％、７％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、もしくは７０％を超える量少ない。いくつかの実施形態では、用量は、約２倍、５倍、７倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、８０倍、もしくは８０倍を超える量少ないか、または少なくとも約２倍、５倍、７倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、８０倍、もしくは８０倍を超える量少ない。いくつかの実施形態では、用量は、約１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、もしくは２０ｍｇ／ｋｇを超える量少ないか、または少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、もしくは２０ｍｇ／ｋｇを超える量少ない。いくつかの実施形態では、用量は、約５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、もしくは５００ｍｇを超える量少ないか、または少なくとも約５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、もしくは５００ｍｇを超える量少ない。

【0136】

本明細書に記載の方法で治療することができる免疫関連障害または疾患の例としては、これらに限定されないが、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、乾癬性関節炎、多関節型若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性強皮症、特発性炎症性筋疾患、シェーグレン症候群、全身性血管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経炎、ギラン・バレー症候群、ライム病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、肝胆道疾患、感染性または自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、グッドパスチャー症候群、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン過敏性腸疾患、ホイップル病、自己免疫または免疫介在性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形紅斑、接触皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症、蕁麻疹、多発性硬化症、ブドウ膜炎、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、臓器移植に伴う疾患、組織移植に伴う疾患、移植片拒絶反応、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、デビック病、急性散在性脳脊髄炎、急性脱髄性視神経炎、脱髄性横断性脊髄炎、ミラーフィッシャー症候群、脳脊髄根末梢神経炎、急性脱髄性多発神経炎、腫瘤様多発性硬化症、Ｂａｌｏ病型同心円硬化症、円形脱毛症、強直性脊椎炎、メニエール病、抗リン脂質症候群、混合性結合組織病、自己免疫性アジソン病、重症筋無力症、自己免疫性肝炎、尋常性天疱瘡、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、結節性多発動脈炎、心筋症、多発性軟骨炎、セリアックスプルー皮膚炎、多腺性症候群、慢性疲労症候群（ｃｆｉｄ）、リウマチ性多発筋痛症、慢性炎症性脱髄、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、チャーグ・ストラウス症候群、類天疱瘡、クレスト症候群、レイノー現象、寒冷凝集素症、ライター症候群、クローン病、リウマチ熱、円板状皮疹、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症、強皮症、グレーブス病、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、橋本甲状腺炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、潰瘍性大腸炎、巣状分節性糸球体硬化症、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病（Ｉ型）、扁平苔癬、及び白斑が挙げられる。

【0137】

いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患は、関節リウマチ、多関節型若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、及び／または乾癬性関節炎である。いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患は、関節リウマチである。いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患は、臓器移植に関連する障害または疾患、組織移植に関連する障害または疾患である。いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患は、人体における任意の臓器及び／または組織移植に関連する障害または疾患である。いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患は、肺、腎臓、膵臓、心臓、肝臓、皮膚、胃、腸、消化管移植及び／またはそれらからの組織移植に関連する障害または疾患である。いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患は、肝移植及び／または肝組織移植に関連する障害または疾患である。

【0138】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、ドナーから臓器及び／または組織移植を受けた対象への抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を投与することを含む。本明細書で使用される場合、ドナーは、移植される臓器（例えば、肝臓または腎臓）が採取される個体である。ドナーは、レシピエントと同じ種である可能性があり、ドナーは、生きているか死亡している可能性がある。ドナーは、レシピエントと関係がある場合もあれば、レシピエントと関係がない場合もある。本明細書で使用される場合、レシピエントは、移植された臓器（例えば、肝臓または腎臓）及び／または組織を受ける対象である。レシピエントは、ドナーと関係がある場合もあれば、関係がない場合もある。レシピエントは、ドナーとＨＬＡが一致するか、ＨＬＡが不一致であり得る。

【0139】

いくつかの実施形態では、移植臓器（例えば、肝臓または腎臓）は、臓器全体、臓器の一部、臓器に由来する組織または細胞であり得る。いくつかの実施形態では、臓器全体（例えば、肝臓または腎臓）が移植される。いくつかの実施形態では、臓器（例えば、肝臓または腎臓）の一部が移植される。

【0140】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を、脾臓摘出術を受けた対象（例えば、臓器移植を受ける前に脾臓摘出術を受けた対象）に投与することを含む。

【0141】

臓器（例えば、肝臓または腎臓）を得て移植する手順は、当業者に周知である。ドナーからの外科的除去及びレシピエントでの外科的移植のための任意の手順を、本明細書で提供される方法と共に使用することができる。ある実施形態では、臓器（例えば、肝臓または腎臓）は、除去と移植との間に治療することができる。

【0142】

ある実施形態では、患者は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月、または少なくとも１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、または２０年より長い期間、治療を受ける。

【0143】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、細胞増殖の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後に、対象から得られる生体試料中の細胞数の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後の細胞数の減少は、対象への抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の投与前、対象へのＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の投与前、またはその両方の前に、対象から得られる生体試料中での細胞数の減少と比較して大きい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後の細胞数の減少は、同等の対象における免疫関連障害を治療するために使用される同等の方法での細胞数の減少と比較して多く、この同等の方法では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方を投与することを含まない。いくつかの実施形態では、同等の対象は、対象と同じ免疫関連障害と診断されているか、または対象と同じ免疫関連障害を有する疑いを有する。いくつかの実施形態では、同等の対象は、対象と共通の少なくとも１つの症状を有する。いくつかの実施形態では、減少は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きいか、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後に対象から得られた生体試料中の細胞の数は、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与される前、または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の一方（両方ではなく）が対象に投与された後に対象から得られる生体試料中の細胞数と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％，９０％、９５％、１００％、もしくは１００％を超えて少ないか、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％，９０％、９５％、１００％、もしくは１００％を超えて少ない。

【0144】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＣＤ２のレベルの減少をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後に、対象から得られる生体試料中のＣＤ２のレベルの減少をもたらす。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後のＣＤ２のレベルの減少は、対象への抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の投与前、対象へのＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の投与前、またはその両方の前に、対象から得られる生体試料中でのＣＤ２のレベルの減少と比較して大きい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後のＣＤ２のレベルの減少は、同等の対象における免疫関連障害を治療するために使用される同等の方法におけるＣＤ２のレベルの減少と比較して多く、同等の方法では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方の投与を含まない。いくつかの実施形態では、同等の対象は、対象と同じ免疫関連障害と診断されているか、または対象と同じ免疫関連障害を有する疑いを有する。いくつかの実施形態では、同等の対象は、対象と共通の少なくとも１つの症状を有する。いくつかの実施形態では、減少は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きいか、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後に対象から得られた生体試料中のＣＤ２のレベルは、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与される前、または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の一方（両方ではなく）が対象に投与された後に対象から得られる生体試料中のＣＤ２のレベルと比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％，９０％、９５％、１００％、もしくは１００％を超えて少ないか、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％，９０％、９５％、１００％、もしくは１００％を超えて少ない。

【0145】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、相乗効果をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後に、対象内に相乗効果をもたらす。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を対象へ投与することは、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤をその両方ではなく一方を対象に投与した場合と比較して、相乗的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、同種免疫応答の低下をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後に、対象内に同種免疫応答の低下をもたらす。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後の同種免疫応答の低下は、対象への抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片の投与前、対象へのＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の投与前、またはその両方の前の、対象内での同種免疫応答の低下と比較して大きい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後の同種免疫応答の低下は、同等の対象における免疫関連障害を治療するために使用される同等の方法における同種免疫応答の低下と比較して大きく、同等の方法は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方の対象への投与を含まない。いくつかの実施形態では、同等の対象は、対象と同じ免疫関連障害と診断されているか、または対象と同じ免疫関連障害を有する疑いを有する。いくつかの実施形態では、同等の対象は、対象と共通の少なくとも１つの症状を有する。いくつかの実施形態では、減少は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きいか、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、もしくは１００％を超えて大きい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与された後の対象内での同種免疫応答は、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方が対象に投与される前、または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の一方（両方ではなく）が対象に投与された後の対象内での同種免疫応答と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％，９０％、９５％、１００％、もしくは１００％を超えて少ないか、または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％，９０％、９５％、１００％、もしくは１００％を超えて少ない。

【0146】

５．３．１ 炎症性免疫障害患者の治療及び治療に好適である対象
本明細書に記載されるのは、免疫系の慢性または急性炎症性障害を有するヒト対象を治療するための方法である。本明細書に記載されるのは、免疫関連障害または疾患を有するヒト対象を治療するための方法である。本明細書に記載されるのは、対象における免疫関連障害または疾患を予防するための方法である。炎症性免疫障害を有する個体は、障害の症状を治療する目的で、本明細書に記載の方法に従うことができる。ある実施形態では、免疫系の急性または慢性障害は、これらに限定されないが、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、関節リウマチ、強直性脊椎炎、１型糖尿病、乾癬、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（クローン病）、セリアック病、シェーグレン病、狼瘡、多発性硬化症、巣状分節性糸球体硬化症、アトピー性皮膚炎、筋萎縮性側索硬化症、原発性胆汁性肝硬変、及び原発性硬化性胆管炎、及び重度の喘息であり得る。ある実施形態では、シプリズマブの枯渇型を自己免疫疾患の治療に使用することができる。いくつかの実施形態では、枯渇ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤と組み合わせて、及び／または本明細書に記載の別の薬剤と組み合わせて、使用される（例えば、免疫系の慢性または急性炎症性障害などの慢性状態を有する対象を治療するため；またはＣＤ８＋Ｔ細胞駆動状態を有する対象を治療するため）。いくつかの実施形態では、非枯渇ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤と組み合わせて、及び／または本明細書に記載の別の薬剤と組み合わせて、使用される（例えば、免疫系の慢性または急性炎症性障害などの慢性状態を有する対象を治療するため；またはＣＤ８＋Ｔ細胞駆動状態を有する対象を治療するため）。

【0147】

「対象」、「レシピエント」、及び「患者」という用語は、本明細書では同義的に使用される。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象または必要とする対象は、免疫関連障害または疾患を有するか、またはこれらを有するもしくは発症することが予測される対象である。いくつかの実施形態では、対象または必要とする対象は、移植手術を受けたか、または受ける予定の対象である。いくつかの実施形態では、対象または必要とする対象は、免疫系の慢性または急性炎症性障害を有する対象である。いくつかの実施形態では、対象は、霊長類である。ある実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト成年である。いくつかの実施形態では、対象は、小児である。いくつかの実施形態では、対象は、小児患者である。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト未成年である。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも５歳、１０歳、１５歳、１８歳、２１歳、５０歳、６０歳、６５歳、７０歳、または７０歳超である。いくつかの実施形態では、対象は、最大５歳、１０歳、１５歳、１８歳、または２１歳である。いくつかの実施形態では、対象は、免疫関連の障害または疾患の前治療を受けていない。いくつかの実施形態では、対象は、対象への抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を投与する前の１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１年、２年、または２年超において、免疫関連障害または疾患の前治療を受けていない。いくつかの実施形態では、対象は、未治療の対象である。いくつかの実施形態では、対象は、免疫関連障害または疾患について未治療の治療である。いくつかの実施形態では、対象は、メトトレキサートに対して未治療である。いくつかの実施形態では、対象は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤による前治療を受けていない。いくつかの実施形態では、対象は、免疫関連障害または疾患の治療に対して抵抗性がある。いくつかの実施態様では、対象は、抗ＣＤ２抗体又はその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤ではない、免疫関連障害または疾患に対する治療を受けているかまたは治療されている。

【0148】

いくつかの実施形態では、免疫関連疾患または障害と診断された対象、免疫関連疾患もしくは障害を発症する素因があるか、または発症する可能性が高い対象、または免疫関連疾患または障害に関連する少なくとも１つの症状を経験している対象は、本明細書で提供される方法による治療に好適であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも３つを超える免疫関連疾患または障害と診断された。本開示の方法で治療または予防できる免疫関連疾患または障害の非限定的な例は、セクション５．３に記載されている。

【0149】

臓器移植及び／または組織移植を受けた、または受ける予定の対象は、本明細書で提供される方法による治療に好適であり得る。本明細書に記載の方法は、任意の臓器移植及び／または組織移植（例えば、肺、心臓、腎臓、肝臓、胃、腸、膵臓、皮膚、または脾臓）を受けた、または受ける予定の対象に使用することができる。損傷、疾患、または先天性異常などによって臓器が損傷を受けた個体は、臓器（例えば、肝臓または腎臓）移植を受ける基準を満たし得ており、本明細書に記載の方法に従って治療され得る。本明細書に記載の方法に従って治療を受けたレシピエントは、何らかの理由で臓器移植を必要とし得る。一般に、末期臓器疾患に罹患している患者であって、臓器移植によって、臓器移植を行わない場合の余命を超えて、余命が延長されることが予測される患者は、臓器移植を考慮され得る。

【0150】

特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されたレシピエントは、遺伝疾患によって必要とされる臓器移植を受けている。特定の実施形態では、臓器移植は、生体ドナー臓器移植である。特定の実施形態では、臓器移植は、死亡したドナー臓器移植である。いくつかの実施形態では、臓器移植は、ＡＢＯ適合性移植であり得る。いくつかの実施形態では、臓器移植は、ＡＢＯ不適合性移植であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されたレシピエントは、３０未満、２０未満、または１０未満の末期肝疾患モデル（ＭＥＬＤ）スコアを有することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されたレシピエントは、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に対して血清陽性であり得る。いくつかの実施形態では、レシピエントは、移植を受ける前に脾臓摘出術を受けている。いくつかの実施形態では、レシピエントは、移植を受ける前に脾臓摘出術を受けていない。いくつかの実施形態では、対象は、肝移植を必要とするか、または受けている。肝移植の適応症の例は、例えば、ＥＡＳＬ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：Ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ．２０１６ Ｆｅｂ；６４（２）：４３３－４８５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１５．１０．００６）に記載されている。

【0151】

５．３．２ 患者の用量及びレジメン（例えば、炎症性免疫障害の患者）
ある実施形態では、免疫系の慢性または急性炎症性障害を有するヒト対象を治療する方法は、長期治療レジメンの構成要素として、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）または本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。ある実施形態では、免疫関連障害または疾患を有するヒト対象を治療する方法は、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）または本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。ある実施形態では、この方法は、対象における免疫関連障害または疾患を予防することを含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、それを必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、１８００ｍｇ、１９００ｍｇ、２０００ｍｇ、２１００ｍｇ、２２００ｍｇ、２３００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２７００ｍｇ、２８００ｍｇ、２９００ｍｇ、３０００ｍｇ、３１００ｍｇ、３２００ｍｇ、３３００ｍｇ、３４００ｍｇ、３５００ｍｇ、３６００ｍｇ、３７００ｍｇ、３８００ｍｇ、３９００ｍｇ、４０００ｍｇ、４１００ｍｇ、４２００ｍｇ、４３００ｍｇ、４４００ｍｇ、４５００ｍｇ、４６００ｍｇ、４７００ｍｇ、４８００ｍｇ、４９００ｍｇ、５０００ｍｇ、１０００ｍｇ～１６００ｍｇ、１５００ｍｇ～２１００ｍｇ、２０００ｍｇ～２６００ｍｇ、２５００ｍｇ～３１００ｍｇ、３０００ｍｇ～３６００ｍｇ、３５００ｍｇ～４１００ｍｇ、４０００ｍｇ～４６００ｍｇ、または４５００ｍｇ～５０００ｍｇの量で投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、それを必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、２４００ｍｇの量で投与することができる。

【0152】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、０．０１ｍｇ／ｋｇ／回、０．０２ｍｇ／ｋｇ／回、０．０３ｍｇ／ｋｇ／回、０．０４ｍｇ／ｋｇ／回、０．０５ｍｇ／ｋｇ／回、０．１ｍｇ／ｋｇ／回、０．１５ｍｇ／ｋｇ／回、０．２ｍｇ／ｋｇ／回、０．２５ｍｇ／ｋｇ／回、０．３ｍｇ／ｋｇ／回、０．３５ｍｇ／ｋｇ／回、０．４ｍｇ／ｋｇ／回、０．４５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５５ｍｇ／ｋｇ／回、０．６ｍｇ／ｋｇ／回、０．６５ｍｇ／ｋｇ／回、０．７ｍｇ／ｋｇ／回、０．７５ｍｇ／ｋｇ／回、０．８ｍｇ／ｋｇ／回、０．８５ｍｇ／ｋｇ／回、０．９ｍｇ／ｋｇ／回、０．９５ｍｇ／ｋｇ／回、１．０ｍｇ／ｋｇ／回、２．０ｍｇ／ｋｇ／回、３．０ｍｇ／ｋｇ／回、４．０ｍｇ／ｋｇ／回、５．０ｍｇ／ｋｇ／回、６．０ｍｇ／ｋｇ／回、７．０ｍｇ／ｋｇ／回、８．０ｍｇ／ｋｇ／回、９．０ｍｇ／ｋｇ／回、１０ｍｇ／ｋｇ／回、１１ｍｇ／ｋｇ／回、１２ｍｇ／ｋｇ／回、１３ｍｇ／ｋｇ／回、１４ｍｇ／ｋｇ／回、１５ｍｇ／ｋｇ／回、１６ｍｇ／ｋｇ／回、１７ｍｇ／ｋｇ／回、１８ｍｇ／ｋｇ／回、１９ｍｇ／ｋｇ／回、２０ｍｇ／ｋｇ／回、２１ｍｇ／ｋｇ／回、２２ｍｇ／ｋｇ／回、２３ｍｇ／ｋｇ／回、２４ｍｇ／ｋｇ／回、２５ｍｇ／ｋｇ／回、２６ｍｇ／ｋｇ／回、２７ｍｇ／ｋｇ／回、２８ｍｇ／ｋｇ／回、２９ｍｇ／ｋｇ／回、３０ｍｇ／ｋｇ／回、３１ｍｇ／ｋｇ／回、３２ｍｇ／ｋｇ／回、３３ｍｇ／ｋｇ／回、３４ｍｇ／ｋｇ／回、３５ｍｇ／ｋｇ／回、３６ｍｇ／ｋｇ／回、３７ｍｇ／ｋｇ／回、３８ｍｇ／ｋｇ／回、３９ｍｇ／ｋｇ／回、４０ｍｇ／ｋｇ／回、４１ｍｇ／ｋｇ／回、４２ｍｇ／ｋｇ／回、４３ｍｇ／ｋｇ／回、４４ｍｇ／ｋｇ／回、４５ｍｇ／ｋｇ／回、４６ｍｇ／ｋｇ／回、４７ｍｇ／ｋｇ／回、４８ｍｇ／ｋｇ／回、４９ｍｇ／ｋｇ／回、５０ｍｇ／ｋｇ／回の用量で投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、０．１～０．３ｍｇ／ｋｇ／回、０．２～０．４ｍｇ／ｋｇ／回、０．３～０．５ｍｇ／ｋｇ／回、０．４～０．６ｍｇ／ｋｇ／回、０．４５～０．６５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．５５～０．７５ｍｇ／ｋｇ／回、０．６～０．８ｍｇ／ｋｇ／回、０．６５～０．８５ｍｇ／ｋｇ／回、０．７～０．９ｍｇ／ｋｇ／回、０．８～１．０ｍｇ／ｋｇ／回、１．０ｍｇ／ｋｇ／回～６．０ｍｇ／ｋｇ／回、５．０ｍｇ／ｋｇ／回～１０ｍｇ／ｋｇ／回、９．０ｍｇ／ｋｇ／回～１５ｍｇ／ｋｇ／回、１４ｍｇ／ｋｇ／回～２０ｍｇ／ｋｇ／回、１９ｍｇ／ｋｇ／回～２５ｍｇ／ｋｇ／回、２４ｍｇ／ｋｇ／回～３０ｍｇ／ｋｇ／回、２９ｍｇ／ｋｇ／回～３５ｍｇ／ｋｇ／回、３４ｍｇ／ｋｇ／回～４０ｍｇ／ｋｇ／回、３９ｍｇ／ｋｇ／回～４５ｍｇ／ｋｇ／回、または４４ｍｇ／ｋｇ／回～５０ｍｇ／ｋｇ／回の範囲の用量で投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、０．１ｍｇ／ｋｇ／回の用量で投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、０．６ｍｇ／ｋｇ／回の用量で投与することができる。

【0153】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回、２ｍｇ／ｋｇ／回を、６週間、その後４週間ごと；５週間、その後４週間ごと；４週間、その後４週間ごと；３週間、その後４週間ごと；または２週間、その後４週間ごとに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回、２ｍｇ／ｋｇ／回の用量で４週間、その後４週間ごとに投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回、２．５ｍｇ／ｋｇ／回を、６週間、その後４週間ごと；５週間、その後４週間ごと；４週間、その後４週間ごと；３週間、その後４週間ごと；または２週間、その後４週間ごとに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回、２．５ｍｇ／ｋｇ／回の用量で４週間、その後４週間ごとに投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回、３ｍｇ／ｋｇ／回を、６週間、その後４週間ごと；５週間、その後４週間ごと；４週間、その後４週間ごと；３週間、その後４週間ごと；または２週間、その後４週間ごとに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回、３ｍｇ／ｋｇ／回の用量で４週間、その後４週間ごとに投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回、３．５ｍｇ／ｋｇ／回を、６週間、その後４週間ごと；５週間、その後４週間ごと；４週間、その後４週間ごと；３週間、その後４週間ごと；または２週間、その後４週間ごとに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回、３．５ｍｇ／ｋｇ／回の用量で４週間、その後４週間ごとに投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回、３．７５ｍｇ／ｋｇ／回を、６週間、その後４週間ごと；５週間、その後４週間ごと；４週間、その後４週間ごと；３週間、その後４週間ごと；または２週間、その後４週間ごとに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回、３．７５ｍｇ／ｋｇ／回の用量で４週間、その後４週間ごとに投与することができる。

【0154】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、皮下、静脈内、血管内、局所、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口、眼窩内、吸入、経皮、腹腔内、またはレシピエント中でのＴ細胞の枯渇が可能になる投与経路によるなど、当技術分野で知られている適当な方法で対象に投与することができる。特定の実施形態では、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ２結合分子は、静脈内投与される。

【0155】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ヒト化モノクローナル抗体である。特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブ（ＭＥＤＩ－５０７）である。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の投与は、本明細書に記載のとおり変更され得る。いくつかの実施形態では、メチルプレドニゾロンは、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の投与前に与えられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の投与前に、アセトアミノフェン（例えば、１０００ｍｇ）及び／または抗ヒスタミン（例えば、ジフェンヒドラミンなどのＨ１アンタゴニスト２５ｍｇ）を投与する。

【0156】

理論に拘束されるものではないが、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、レシピエントにおける制御性Ｔ細胞のレベルを上昇させるのに十分な用量で投与される。具体的には、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、レシピエントにおけるＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞のレベルが、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）で処理しない場合のＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞と比較して、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、または少なくとも２５０％上昇するような用量で投与される。

【0157】

本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、治療レジメンの構成要素として、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に投与することができる。ある実施形態では、治療レジメンで使用される本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、治療レジメンの唯一の構成要素である。特定の実施形態では、治療レジメンにおいて、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に投与される本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと同じエピトープに結合する。

【0158】

ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性の炎症性免疫障害を有する患者に、寛解を誘導するのに十分高い用量（負荷用量）で投与し、その後、これらに限定されないが、月１回、２ヶ月に１回、または３ヶ月に１回などの低頻度で投与し得る。

【0159】

特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回の間隔で投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、隔週の間隔で投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、疾患の寛解または疾患の静止が誘導されるまで１日１回、その後週１回の間隔で投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、週１回の間隔で１２週間投与し、その後隔週で投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、隔週、次に月１回の間隔で投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、半月に１回の間隔で投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に、３ヶ月ごとの間隔で投与することができる。

【0160】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者に投与することができ、ここで、患者は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月、または少なくとも１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、２１年、２２年、２３年、２４年、または少なくとも２５年の期間、治療を受けている。ある実施形態では、必要とする対象または慢性もしくは急性の炎症性免疫障害を有する患者は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月、または少なくとも１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、２１年、２２年、２３年、２４年、または少なくとも２５年の期間、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）または本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物で治療することができる。

【0161】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、皮下、静脈内、血管内、局所、関節内、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口、眼窩内、硝子体内、吸入、腹腔内、骨内、気管内、舌下、頬側、直腸、皮内、髄腔内、骨髄内、または経皮投与経路用に製剤化され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、慢性または急性炎症性免疫障害を有する患者への静脈内投与のために製剤化される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象、または慢性もしくは急性炎症性免疫障害を有する患者への皮下投与のために製剤化される。

【0162】

ある実施形態では、必要とする対象、または免疫系の慢性もしくは急性炎症性障害を有する患者に、治療有効量の本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物を投与することができる。ある実施形態では、治療有効量の本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物は、必要とする対象または免疫系の慢性もしくは急性炎症性障害を有する患者に投与するためのキットまたはシステムに含まれる。ある実施形態では、キットは、１つ以上の容器中に収容されている、治療有効量の本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物を含む。その中にパッケージングできる医薬組成物を保有する容器としては、これらに限定されないが、ボトル、袋、アンプル、チューブ、吸入器、バッグ、バイアル及び容器を挙げることができる。ある実施形態では、キットは、薬学的投与を行うための指示書を含む。ある実施形態では、本キットは、本発明の医薬組成物を投与するのに使用できるデバイスを含み、そのデバイスとしては、これらに限定されないが、シリンジ、針なし注射器、点滴バッグ、灌流ポンプ、ポンプ、パッチ及び吸入器が挙げられる。

【0163】

ある実施形態では、本明細書に記載のとおり、対象または慢性もしくは急性の炎症性障害を有する患者の罹患臓器に、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を灌流させることができる。より具体的な実施形態では、灌流ポンプを使用して、罹患臓器にＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を灌流させる。ある実施形態では、罹患臓器に灌流されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の濃度は、少なくとも０．００１ｍｇ／リットル、少なくとも０．００５ｍｇ／リットル、少なくとも０．０１ｍｇ／リットル、少なくとも０．０５ｍｇ／リットル、少なくとも０．１ｍｇ／リットル、少なくとも０．５ｍｇ／リットル、少なくとも１．０ｍｇ／リットル、少なくとも５．０ｍｇ／リットル、少なくとも１０ｍｇ／リットル、または少なくとも５０ｍｇ／リットルである。

【0164】

５．３．３ 炎症性免疫障害患者の免疫抑制剤との同時療法
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、長期患者療法の構成要素として、低用量の免疫抑制剤と同時に投与される。理論に拘束されるものでないが、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の投与と組み合わせることができる免疫抑制剤としては、これらに限定されないが、タクロリムス、シクロスポリン、ベラタセプト、抗ＣＤ４０抗体、抗ＯＸ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ１５４抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗またはアゴニスト４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）抗体、ＢＣＬ－２阻害剤、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸誘導体、例えば、Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（腸溶コーティングされたミコフェノール酸ナトリウム）、シロリムス、エベロリムス、抗胸腺細胞グロブリン、バシリキシマブ、プレドニゾン、シクロホスファミド、フルダラビン、及びリツキシマブが挙げられる（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１６，１９７（６）２０４５－２０５０；Ｋｉｎｎｅａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．２０１３ Ｆｅｂ ２７；９５（４）：５２７－５３５；Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｖｉｇｎａｌｉ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０１６ Ｍａｙ １７；４４（５）：１０３４－５１）。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、二重共刺激遮断剤の一部として投与され得る。特定の実施形態では、免疫抑制剤が本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）と同時に投与される場合、治療上有効であるために必要とされる免疫抑制剤の用量は少なくなる。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、１つの免疫抑制剤と同時に投与することができる。他の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、２つ以上の免疫抑制剤と同時に投与することができる。

【0165】

ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）と免疫抑制剤との同時療法を使用して、免疫系の慢性または急性炎症性障害を有する患者を治療することができる。このような障害としては、これらに限定されないが、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎、自己免疫性肝疾患、川崎病、炎症性腸疾患、強直性脊椎炎、乾癬、潰瘍性大腸炎、交感性眼炎、加齢黄斑変性症、非感染性後部ブドウ膜炎、フォークト－小柳－原田病、サルコイドーシス、１型糖尿病、クローン病、セリアック病、狼瘡、シェーグレン症候群、アトピー性皮膚炎、多発性硬化症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、巣状分節性糸球体硬化症を挙げることができる。

【0166】

５．３．４ 臓器移植患者集団
損傷、疾患、先天性異常などによって損傷を受けた１つまたは２つ以上の臓器を有する個体は、臓器移植を受けるための基準を満たし得る。臓器移植を受けるために選択された個人は、レシピエントとドナーの造血細胞がレシピエントで共存する混合キメラ現象の状態を誘導することを目的として、本明細書に記載のこれらの方法に従うことができる。混合キメラ現象の状態が達成されると、長期の免疫抑制療法の必要性が低下する。

【0167】

いくつかの実施形態では、レシピエントは、高度に感作された免疫系を有し得る。高度に感作された免疫系の発達は、外来組織へのこれまでの曝露、及びそれらの組織に対する抗体が発生することによって引き起こされる。この曝露の原因としては、輸血、以前の移植、または妊娠を含むことができる。感作状態では、免疫系は、非常に警戒心が強く、移植された臓器を攻撃するであろう抗体を産生する。ある実施形態では、本明細書に記載のレシピエントは、感作免疫系または非感作免疫系を有することができる。このようなレシピエントでは、リツキシマブと共にＩｄｅＳを投与できる。ＩｇＧの重鎖を切断する酵素であるＩｄｅＳは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を阻害する。ある実施形態では、ＩｄｅＳは、リツキシマブと組み合わせて投与される。ある実施形態では、他の脱感作プロトコールを単独で、またはリツキシマブ、ＩｄｅＳ、または他の脱感作プロトコールと組み合わせて使用することができる。これらとしては、限定されないが、静脈内免疫グロブリン、プラズマフェレシス、免疫吸着、二重ろ過、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、及び補体阻害剤を挙げることができる。

【0168】

５．３．５ 臓器移植の治療
ある実施形態では、方法は、移植される臓器へ本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を直接注入することを含み得る。本明細書で提供される方法を利用して移植することができる臓器は、任意の固形臓器であり得る。いくつかの実施形態では、臓器は、腎臓、心臓、腸、肝臓、肺、膵臓、または本明細書で提供される方法を使用して移植できる他の臓器であり得る。いくつかの実施形態では、臓器は、本明細書で提供される方法を使用して移植することができる手、足、他の四肢、顔、または他の身体部分など、血管複合同種移植片であり得る。いくつかの実施形態では、移植臓器は、臓器全体、臓器の一部、または臓器に由来する細胞であり得る。

【0169】

ある実施形態では、移植臓器に、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を直接注射することができる。この注射は、移植される臓器の１つの部位において行うことができるか、または移植される臓器の複数の部位において行うことができる。ある実施形態では、移植される臓器は、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む浴中でインキュベートされ得る。このインキュベーションは、手術への輸送中または手術場所で発生し得る。このインキュベーションは、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を移植される臓器に取り込むのに十分な時間継続する。このインキュベーションは、１５分、３０分、４５分、１時間、１．２５時間、１．５時間、１．７５時間、２時間、２．２５時間、２．５時間、２．７５時間、３時間、３．２５時間、３．５時間、３．７５時間、４時間、４．２５時間、４．５時間、４．７５時間、５時間、５．２５時間、５．５時間、５．７５時間、６時間、６．５時間、７時間、７．５時間、８時間、８．５時間、９時間、９．５時間、１０時間、１０．５時間、１１時間、１１．５時間、１２時間、１２．５時間、１３時間、１３．５時間、１４時間、１４．５時間、１５時間、１５．５時間、１６時間、１６．５時間、１７時間、１７．５時間、１８時間、１８．５時間、１９時間、１９．５時間、２０時間、２０．５時間、２１時間、２１．５時間、２２時間、２２．５時間、２３時間、２３．５時間、または２４時間行われ得る。ある実施形態では、注射のための本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．０５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである。

【0170】

ある実施形態では、移植される臓器は、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む浴中でインキュベートされる。より具体的な実施形態では、臓器は、臓器がドナーから摘出されてからレシピエントに移植されるまでの時間、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む浴中で維持される。ある実施形態では、臓器浴中の本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の濃度は、少なくとも０．０１ｍｇ／リットル、少なくとも０．０５ｍｇ／リットル、少なくとも０．１ｍｇ／リットル、少なくとも０．５ｍｇ／リットル、少なくとも１ｍｇ／リットル、少なくとも５ｍｇ／リットル、少なくとも１０ｍｇ／リットル、または少なくとも５０ｍｇ／リットルである。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、循環系を介して移植される臓器に投与することができる。具体的には、カテーテルを、隣接する血管に挿入し、ポンプに取り付けることができる。本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、血管を通してポンプで送られ、臓器に送達され得る。

【0171】

ある実施形態では、移植される臓器に、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を灌流させることができる。より具体的な実施形態では、灌流ポンプを使用して、移植臓器にＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を灌流させる。ある実施形態では、臓器に灌流されるＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の濃度は、少なくとも０．００１ｍｇ／リットル、少なくとも０．００５ｍｇ／リットル、少なくとも０．０１ｍｇ／リットル、少なくとも０．０５ｍｇ／リットル、少なくとも０．１ｍｇ／リットル、少なくとも０．５ｍｇ／リットル、少なくとも１．０ｍｇ／リットル、少なくとも５．０ｍｇ／リットル、少なくとも１０ｍｇ／リットル、または少なくとも５０ｍｇ／リットルである。

【0172】

５．３．６ 用量及びレジメン（例えば、臓器移植レシピエントの場合）
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）または本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物を単独で、または１つ以上の他の薬剤（例えば、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤）と組み合わせて投与することによって、それを必要とする対象における免疫関連障害または疾患を治療または予防する方法が本明細書に提供される。ある実施形態では、臓器移植処置を受けているヒト対象を治療する方法は、移植前のコンディショニングレジメンの構成要素として、本明細書に記載の本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）または本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、例えば、Ｍａｓｓａｒｔ，Ａ ｅｔ ａｌ．（Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１７；１８９（２）：１３８－１５７）及びＮｅｗｅｌｌ ＫＡ，Ｔｕｒｋａ ＬＡ．（Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２０１５；２０（４）：４００－４０５）による総説で概説されているアッセイによって決定されるように、移植レシピエント内において寛容を生じさせる目的で投与される。これらのアッセイとしては、これらに限定されないが、Ｔ細胞反応性及びＢ細胞感作を決定する抗原特異的アッセイ、ならびに寛容性バイオマーカーを同定するアッセイが挙げられる。ある実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、対象が免疫関連障害または疾患と診断される前に、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を対象に投与することを含む。ある実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、対象が免疫関連障害または疾患と診断された後に、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を対象に投与することを含む。ある実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、移植前に移植レシピエントにＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植１日前、移植２日前、移植３日前、移植４日前、移植５日前、移植６日前、移植７日前、移植１日前及び２日前、移植２日前及び３日前、移植３日前及び４日前、移植１日前及び２日前及び３日前、または移植１日前及び２日前及び３日前及び４日前にレシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植１日前及び２日前にレシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植１日前及び６日前にレシピエントに投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の試験用量を投与することができる。ある実施形態では、試験用量の投与は、任意である。特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植手術の日に投与される。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、対象に、寛解を誘導するのに十分高い用量（負荷用量）で投与し、その後、これらに限定されないが、月１回、２ヶ月に１回、または３ヶ月に１回などの低頻度で投与し得る。

【0173】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植前の１週間、移植前の２週間、移植前の３週間、または移植前の４週間に、１日１回、レシピエントに投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植前の１週間、移植前の２週間、移植前の３週間、または移植前の４週間に、週２回、レシピエントに投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植前の１週間、移植前の２週間、移植前の３週間、または移植前の４週間に、週３回、レシピエントに投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植前の１週間、移植前の２週間、移植前の３週間、または移植前の４週間に、週４回、レシピエントに投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植前の１週間、移植前の２週間、移植前の３週間、または移植前の４週間に、週５回、レシピエントに投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植前の１週間、移植前の２週間、移植前の３週間、または移植前の４週間に、週６回、レシピエントに投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植当日に投与することができる。

【0174】

特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、週１回の間隔で対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、隔週の間隔で対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、疾患の寛解または疾患の静止が誘導されるまで１日１回、その後週１回対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、週１回の間隔で１２週間投与し、その後、隔週で対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、隔週、その後、月１回の間隔で対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、半月に１回の間隔で対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、３ヶ月に１回の間隔で対象に投与することができる。

【0175】

いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）が投与される１日あたり、１用量あたり、１週あたり、隔週、または１ヶ月あたり、１００ｍｇ、２５０ｍｇ、５００ｍｇ、７００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、１８００ｍｇ、１９００ｍｇ、２０００ｍｇ、２１００ｍｇ、２２００ｍｇ、２３００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２７００ｍｇ、２８００ｍｇ、２９００ｍｇ、３０００ｍｇ、３１００ｍｇ、３２００ｍｇ、３３００ｍｇ、３４００ｍｇ、３５００ｍｇ、３６００ｍｇ、３７００ｍｇ、３８００ｍｇ、３９００ｍｇ、４０００ｍｇ、４１００ｍｇ、４２００ｍｇ、４３００ｍｇ、４４００ｍｇ、４５００ｍｇ、４６００ｍｇ、４７００ｍｇ、４８００ｍｇ、４９００ｍｇ、５０００ｍｇ、１０００ｍｇ～１６００ｍｇ、１５００ｍｇ～２１００ｍｇ、２０００ｍｇ～２６００ｍｇ、２５００ｍｇ～３１００ｍｇ、３０００ｍｇ～３６００ｍｇ、３５００ｍｇ～４１００ｍｇ、４０００ｍｇ～４６００ｍｇ、または４５００ｍｇ～５０００ｍｇの量で対象に投与される。

【0176】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／回、０．０２ｍｇ／ｋｇ／回、０．０３ｍｇ／ｋｇ／回、０．０４ｍｇ／ｋｇ／回、０．０５ｍｇ／ｋｇ／回、０．１ｍｇ／ｋｇ／回、０．１５ｍｇ／ｋｇ／回、０．２ｍｇ／ｋｇ／回、０．２５ｍｇ／ｋｇ／回、０．３ｍｇ／ｋｇ／回、０．３５ｍｇ／ｋｇ／回、０．４ｍｇ／ｋｇ／回、０．４５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５５ｍｇ／ｋｇ／回、０．６ｍｇ／ｋｇ／回、０．６５ｍｇ／ｋｇ／回、０．７ｍｇ／ｋｇ／回、０．７５ｍｇ／ｋｇ／回、０．８ｍｇ／ｋｇ／回、０．８５ｍｇ／ｋｇ／回、０．９ｍｇ／ｋｇ／回、０．９５ｍｇ／ｋｇ／回、１．０ｍｇ／ｋｇ／回、２．０ｍｇ／ｋｇ／回、３．０ｍｇ／ｋｇ／回、４．０ｍｇ／ｋｇ／回、５．０ｍｇ／ｋｇ／回、６．０ｍｇ／ｋｇ／回、７．０ｍｇ／ｋｇ／回、８．０ｍｇ／ｋｇ／回、９．０ｍｇ／ｋｇ／回、１０ｍｇ／ｋｇ／回、１１ｍｇ／ｋｇ／回、１２ｍｇ／ｋｇ／回、１３ｍｇ／ｋｇ／回、１４ｍｇ／ｋｇ／回、１５ｍｇ／ｋｇ／回、１６ｍｇ／ｋｇ／回、１７ｍｇ／ｋｇ／回、１８ｍｇ／ｋｇ／回、１９ｍｇ／ｋｇ／回、２０ｍｇ／ｋｇ／回、２１ｍｇ／ｋｇ／回、２２ｍｇ／ｋｇ／回、２３ｍｇ／ｋｇ／回、２４ｍｇ／ｋｇ／回、２５ｍｇ／ｋｇ／回、２６ｍｇ／ｋｇ／回、２７ｍｇ／ｋｇ／回、２８ｍｇ／ｋｇ／回、２９ｍｇ／ｋｇ／回、３０ｍｇ／ｋｇ／回、３１ｍｇ／ｋｇ／回、３２ｍｇ／ｋｇ／回、３３ｍｇ／ｋｇ／回、３４ｍｇ／ｋｇ／回、３５ｍｇ／ｋｇ／回、３６ｍｇ／ｋｇ／回、３７ｍｇ／ｋｇ／回、３８ｍｇ／ｋｇ／回、３９ｍｇ／ｋｇ／回、４０ｍｇ／ｋｇ／回、４１ｍｇ／ｋｇ／回、４２ｍｇ／ｋｇ／回、４３ｍｇ／ｋｇ／回、４４ｍｇ／ｋｇ／回、４５ｍｇ／ｋｇ／回、４６ｍｇ／ｋｇ／回、４７ｍｇ／ｋｇ／回、４８ｍｇ／ｋｇ／回、４９ｍｇ／ｋｇ／回、もしくは５０ｍｇ／ｋｇ／回または少なくとも約０．０１ｍｇ／ｋｇ／回、０．０２ｍｇ／ｋｇ／回、０．０３ｍｇ／ｋｇ／回、０．０４ｍｇ／ｋｇ／回、０．０５ｍｇ／ｋｇ／回、０．１ｍｇ／ｋｇ／回、０．１５ｍｇ／ｋｇ／回、０．２ｍｇ／ｋｇ／回、０．２５ｍｇ／ｋｇ／回、０．３ｍｇ／ｋｇ／回、０．３５ｍｇ／ｋｇ／回、０．４ｍｇ／ｋｇ／回、０．４５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５５ｍｇ／ｋｇ／回、０．６ｍｇ／ｋｇ／回、０．６５ｍｇ／ｋｇ／回、０．７ｍｇ／ｋｇ／回、０．７５ｍｇ／ｋｇ／回、０．８ｍｇ／ｋｇ／回、０．８５ｍｇ／ｋｇ／回、０．９ｍｇ／ｋｇ／回、０．９５ｍｇ／ｋｇ／回、１．０ｍｇ／ｋｇ／回、２．０ｍｇ／ｋｇ／回、３．０ｍｇ／ｋｇ／回、４．０ｍｇ／ｋｇ／回、５．０ｍｇ／ｋｇ／回、６．０ｍｇ／ｋｇ／回、７．０ｍｇ／ｋｇ／回、８．０ｍｇ／ｋｇ／回、９．０ｍｇ／ｋｇ／回、１０ｍｇ／ｋｇ／回、１１ｍｇ／ｋｇ／回、１２ｍｇ／ｋｇ／回、１３ｍｇ／ｋｇ／回、１４ｍｇ／ｋｇ／回、１５ｍｇ／ｋｇ／回、１６ｍｇ／ｋｇ／回、１７ｍｇ／ｋｇ／回、１８ｍｇ／ｋｇ／回、１９ｍｇ／ｋｇ／回、２０ｍｇ／ｋｇ／回、２１ｍｇ／ｋｇ／回、２２ｍｇ／ｋｇ／回、２３ｍｇ／ｋｇ／回、２４ｍｇ／ｋｇ／回、２５ｍｇ／ｋｇ／回、２６ｍｇ／ｋｇ／回、２７ｍｇ／ｋｇ／回、２８ｍｇ／ｋｇ／回、２９ｍｇ／ｋｇ／回、３０ｍｇ／ｋｇ／回、３１ｍｇ／ｋｇ／回、３２ｍｇ／ｋｇ／回、３３ｍｇ／ｋｇ／回、３４ｍｇ／ｋｇ／回、３５ｍｇ／ｋｇ／回、３６ｍｇ／ｋｇ／回、３７ｍｇ／ｋｇ／回、３８ｍｇ／ｋｇ／回、３９ｍｇ／ｋｇ／回、４０ｍｇ／ｋｇ／回、４１ｍｇ／ｋｇ／回、４２ｍｇ／ｋｇ／回、４３ｍｇ／ｋｇ／回、４４ｍｇ／ｋｇ／回、４５ｍｇ／ｋｇ／回、４６ｍｇ／ｋｇ／回、４７ｍｇ／ｋｇ／回、４８ｍｇ／ｋｇ／回、４９ｍｇ／ｋｇ／回、もしくは５０ｍｇ／ｋｇ／回の用量で対象または移植レシピエントに投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、約０．１～約０．３ｍｇ／ｋｇ／回、約０．２～約０．４ｍｇ／ｋｇ／回、約０．３～約０．５ｍｇ／ｋｇ／回、約０．４～約０．６ｍｇ／ｋｇ／回、約０．４５～約０．６５ｍｇ／ｋｇ／回、約０．５～約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．５５～約０．７５ｍｇ／ｋｇ／回、約０．６～約０．８ｍｇ／ｋｇ／回、約０．６５～約０．８５ｍｇ／ｋｇ／回、約０．７～約０．９ｍｇ／ｋｇ／回、約０．８～約１．０ｍｇ／ｋｇ／回、約１～約１．５ｍｇ／ｋｇ／回、約１．５～約２ｍｇ／ｋｇ／回、約２～約２．５ｍｇ／ｋｇ／回、約２．５～約３ｍｇ／ｋｇ／回、約３～約３．５ｍｇ／ｋｇ／回、約３．５～約４ｍｇ／ｋｇ／回、約４～約４．５ｍｇ／ｋｇ／回、約４．５～約５ｍｇ／ｋｇ／回、約１．０ｍｇ／ｋｇ／回～約６．０ｍｇ／ｋｇ／回、約５．０ｍｇ／ｋｇ／回～約１０ｍｇ／ｋｇ／回、約９．０ｍｇ／ｋｇ／回～約１５ｍｇ／ｋｇ／回、約１４ｍｇ／ｋｇ／回～約２０ｍｇ／ｋｇ／回、約１９ｍｇ／ｋｇ／回～約２５ｍｇ／ｋｇ／回、約２４ｍｇ／ｋｇ／回～約３０ｍｇ／ｋｇ／回、約２９ｍｇ／ｋｇ／回～約３５ｍｇ／ｋｇ／回、約３４ｍｇ／ｋｇ／回～約４０ｍｇ／ｋｇ／回、約３９ｍｇ／ｋｇ／回～約４５ｍｇ／ｋｇ／回、または約４４ｍｇ／ｋｇ／回～約５０ｍｇ／ｋｇ／回の用量範囲で対象または移植レシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、０．１ｍｇ／ｋｇ／回の用量で対象または移植レシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、０．６ｍｇ／ｋｇ／回の用量で対象または移植レシピエントに投与することができる。

【0177】

特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植当日に１０ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇの用量、２日目、６日目、１４日目、２８日目、４２日目、５６日目、及びその後２８日ごとに１０ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、必要とする対象または移植レシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植当日に３０ｍｇ／ｋｇまたは約３０ｍｇ／ｋｇの用量、５日目に１５ｍｇ／ｋｇまたは約１５ｍｇ／ｋｇの用量、その後１４日ごとに７．５ｍｇ／ｋｇまたは約７．５ｍｇ／ｋｇの用量で、必要とする対象または移植レシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植当日に３０ｍｇ／ｋｇまたは約３０ｍｇ／ｋｇの用量、５日目に１５ｍｇ／ｋｇまたは約１５ｍｇ／ｋｇの用量、その後１４日ごとに３．７５ｍｇ／ｋｇまたは約３．７５ｍｇ／ｋｇの用量で、必要とする対象または移植レシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、３０ｍｇ／ｋｇまたは約３０ｍｇ／ｋｇの負荷用量、その後１４日ごとに５．６２５ｍｇ／ｋｇまたは約５．６２５ｍｇ／ｋｇの用量で、必要とする対象または移植レシピエントに投与することができる。

【0178】

理論に拘束されるものではないが、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、レシピエントにおける制御性Ｔ細胞のレベルを上昇させるのに十分な用量で投与される。具体的には、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、レシピエントにおけるＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞のレベルを、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）で処理しない場合のＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞と比較して、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、または少なくとも２５０％上昇することができる。

【0179】

本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、術後治療レジメンの構成要素として、必要とする対象または移植患者に投与することができる。ある実施形態では、術後レジメンで使用される本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、コンディショニングレジメンで投与される分子と同じである。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、コンディショニングレジメンで投与される分子と異なる。特定の実施形態では、術後レジメンで投与される本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、シプリズマブと同じエピトープに結合する。

【0180】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植当日、１日後、２日後、３日後、４日後、移植当日及び１日後、移植当日及び１日後及び２日後、移植当日及び１日後及び２日後及び３日後、移植当日及び１日後及び２日後及び３日後及び４日後、移植当日及び１日後及び２日後及び３日後及び４日後及び５日後、移植当日及び１日後及び２日後及び３日後及び４日後及び５日後６日後、または移植手術当日及び１日後及び２日後及び３日後及び４日後及び５日後及び６日後及び７日後に投与され得る。ある実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、移植後に、必要とする対象または移植レシピエントにＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植１日後、移植２日後、移植３日後、移植４日後、移植５日後、移植６日後、移植７日後、移植８日後、移植９日後、移植１０日後、移植１１日後、移植１２日後、移植１３日後、移植１４日後、移植１５日後、移植１６日後、移植１７日後、移植１８日後、移植１９日後、移植２０日後、移植２１日後、移植２２日後、移植２３日後、移植２４日後、移植２５日後、移植２６日後、移植２７日後、移植２８日後、移植２９日後、及び／または移植３０日後にレシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植当日、移植１日後、移植２日後、及び／または移植４日後に投与される。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、１日１回、隔週または月１回投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、注入または皮下投与よって、投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植手術後１週間、移植手術後２週間、移植手術後３週間、または移植手術後４週間、１日１回投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植当日及び移植１日後にレシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植当日及び移植１日後、及び７日後にレシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植当日及び移植１日後、８日後、及び１３日後にレシピエントに投与することができる。

【0181】

ある実施形態では、術後レジメンでレシピエントに投与される本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の用量は、コンディショニングレジメンで投与される用量と同じであり得る。ある実施形態では、術後レジメンでレシピエントに投与される本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の用量は、コンディショニングレジメンで投与される用量と異なり得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を、０．０１ｍｇ／ｋｇ／回、０．０２ｍｇ／ｋｇ／回、０．０３ｍｇ／ｋｇ／回、０．０４ｍｇ／ｋｇ／回、０．０５ｍｇ／ｋｇ／回、０．１ｍｇ／ｋｇ／回、０．１５ｍｇ／ｋｇ／回、０．２ｍｇ／ｋｇ／回、０．２５ｍｇ／ｋｇ／回、０．３ｍｇ／ｋｇ／回、０．３５ｍｇ／ｋｇ／回、０．４ｍｇ／ｋｇ／回、０．４５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５５ｍｇ／ｋｇ／回、０．６ｍｇ／ｋｇ／回、０．６５ｍｇ／ｋｇ／回、０．７ｍｇ／ｋｇ／回、０．７５ｍｇ／ｋｇ／回、０．８ｍｇ／ｋｇ／回、０．８５ｍｇ／ｋｇ／回、０．９ｍｇ／ｋｇ／回、０．９５ｍｇ／ｋｇ／回、１．０ｍｇ／ｋｇ／回、２．０ｍｇ／ｋｇ／回、３．０ｍｇ／ｋｇ／回、４．０ｍｇ／ｋｇ／回、５．０ｍｇ／ｋｇ／回、６．０ｍｇ／ｋｇ／回、７．０ｍｇ／ｋｇ／回、８．０ｍｇ／ｋｇ／回、９．０ｍｇ／ｋｇ／回、１０ｍｇ／ｋｇ／回、１１ｍｇ／ｋｇ／回、１２ｍｇ／ｋｇ／回、１３ｍｇ／ｋｇ／回、１４ｍｇ／ｋｇ／回、１５ｍｇ／ｋｇ／回、１６ｍｇ／ｋｇ／回、１７ｍｇ／ｋｇ／回、１８ｍｇ／ｋｇ／回、１９ｍｇ／ｋｇ／回、２０ｍｇ／ｋｇ／回、２１ｍｇ／ｋｇ／回、２２ｍｇ／ｋｇ／回、２３ｍｇ／ｋｇ／回、２４ｍｇ／ｋｇ／回、２５ｍｇ／ｋｇ／回、２６ｍｇ／ｋｇ／回、２７ｍｇ／ｋｇ／回、２８ｍｇ／ｋｇ／回、２９ｍｇ／ｋｇ／回、３０ｍｇ／ｋｇ／回、３１ｍｇ／ｋｇ／回、３２ｍｇ／ｋｇ／回、３３ｍｇ／ｋｇ／回、３４ｍｇ／ｋｇ／回、３５ｍｇ／ｋｇ／回、３６ｍｇ／ｋｇ／回、３７ｍｇ／ｋｇ／回、３８ｍｇ／ｋｇ／回、３９ｍｇ／ｋｇ／回、４０ｍｇ／ｋｇ／回、４１ｍｇ／ｋｇ／回、４２ｍｇ／ｋｇ／回、４３ｍｇ／ｋｇ／回、４４ｍｇ／ｋｇ／回、４５ｍｇ／ｋｇ／回、４６ｍｇ／ｋｇ／回、４７ｍｇ／ｋｇ／回、４８ｍｇ／ｋｇ／回、４９ｍｇ／ｋｇ／回、または５０ｍｇ／ｋｇ／回の用量で移植レシピエントに投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、０．１～０．３ｍｇ／ｋｇ／回、０．２～０．４ｍｇ／ｋｇ／回、０．３～０．５ｍｇ／ｋｇ／回、０．４～０．６ｍｇ／ｋｇ／回、０．４５～０．６５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．５５～０．７５ｍｇ／ｋｇ／回、０．６～０．８ｍｇ／ｋｇ／回、０．６５～０．８５ｍｇ／ｋｇ／回、０．７～０．９ｍｇ／ｋｇ／回、０．８～１．０ｍｇ／ｋｇ／回、１．０ｍｇ／ｋｇ／回～６．０ｍｇ／ｋｇ／回、５．０ｍｇ／ｋｇ／回～１０ｍｇ／ｋｇ／回、９．０ｍｇ／ｋｇ／回～１５ｍｇ／ｋｇ／回、１４ｍｇ／ｋｇ／回～２０ｍｇ／ｋｇ／回、１９ｍｇ／ｋｇ／回～２５ｍｇ／ｋｇ／回、２４ｍｇ／ｋｇ／回～３０ｍｇ／ｋｇ／回、２９ｍｇ／ｋｇ／回～３５ｍｇ／ｋｇ／回、３４ｍｇ／ｋｇ／回～４０ｍｇ／ｋｇ／回、３９ｍｇ／ｋｇ／回～４５ｍｇ／ｋｇ／回、または４４ｍｇ／ｋｇ／回～５０ｍｇ／ｋｇ／回の用量範囲で、必要とする対象または移植レシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、０．６ｍｇ／ｋｇ／回の用量で、必要とする対象または移植レシピエントに投与することができる。

【0182】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象、または移植手術後の患者に投与することができ、ここで、患者は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月、または少なくとも１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、２１年、２２年、２３年、２４年、または少なくとも２５年の期間、治療を受けている。ある実施形態では、患者は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月、または少なくとも１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、２１年、２２年、２３年、２４年、または少なくとも２５年の期間、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）または本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物で治療することができる。

【0183】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、皮下、静脈内、血管内、局所、関節内、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口、眼窩内、硝子体内、吸入、腹腔内、骨内、気管内、舌下、頬側、直腸、皮内、髄腔内、骨髄内、または経皮投与経路用に製剤化され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または移植手術患者への静脈内投与のために製剤化される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、必要とする対象または移植手術患者への皮下投与のために製剤化される。

【0184】

ある実施形態では、移植手術患者は、本明細書に記載の治療有効量のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物を投与され得る。ある実施形態では、治療有効量の本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物は、移植手術患者に投与するためのキットまたはシステムに含まれる。ある実施形態では、キットは、１つ以上の容器中に収容されている、治療有効量の本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）を含む医薬組成物を含む。その中にパッケージングできる医薬組成物を保有する容器としては、これらに限定されないが、ボトル、袋、アンプル、チューブ、吸入器、バッグ、バイアル及び容器を挙げることができる。ある実施形態では、キットは、薬学的投与を行うための指示書を含む。ある実施形態では、本キットは、本発明の医薬組成物を投与するのに使用できるデバイスを含み、そのデバイスとしては、これらに限定されないが、シリンジ、針なし注射器、点滴バッグ、ポンプ、灌流ポンプ、パッチ及び吸入器が挙げられる。

【0185】

５．３．７ 臓器移植レシピエントの免疫抑制剤との同時療法
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、臓器移植手術後の長期患者療法の構成要素として、低用量の免疫抑制剤と同時に投与される。理論に拘束されるものでないが、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）の投与と組み合わせることができる免疫抑制剤としては、これらに限定されないが、タクロリムス、シクロスポリン、ベラタセプト、抗ＣＤ４０抗体、抗ＯＸ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ１５４抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗またはアゴニスト４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）抗体、ＢＣＬ－２阻害剤、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸誘導体、例えば、Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（腸溶コーティングされたミコフェノール酸ナトリウム）、シロリムス、エベロリムス、抗胸腺細胞グロブリン、バシリキシマブ、プレドニゾン、シクロホスファミド、フルダラビン、及びリツキシマブが挙げられる（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１６，１９７（６）２０４５－２０５０；Ｋｉｎｎｅａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．２０１３ Ｆｅｂ ２７；９５（４）：５２７－５３５；Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｖｉｇｎａｌｉ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０１６ Ｍａｙ １７；４４（５）：１０３４－５１）。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、二重共刺激遮断剤の一部として投与され得る。特定の実施形態では、免疫抑制剤が本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）と同時に投与される場合、移植後療法レジメンの一部として治療上有効であるために必要とされる免疫抑制剤の用量は少なくなる。

【0186】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植後療法レジメンの一部として、１つの免疫抑制剤と同時に投与することができる。他の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）は、移植後療法レジメンの一部として、２つ以上の免疫抑制剤と同時に投与することができる。

【0187】

５．３．８ ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤
いくつかの実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を対象に投与することによって、対象における免疫関連障害または疾患を治療または予防する方法が本明細書に記載される。具体的には、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）とＣＴＬＡ－４共刺激遮断との組み合わせを使用して、免疫関連障害または疾患を治療または予防する方法が本明細書に提供され、この方法では、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を単独でまたは他方を用いずに使用する場合と比較して、相乗効果が得られる。いくつかの実施形態では、免疫関連障害または疾患を治療または予防する方法は、別の薬剤（例えば、免疫抑制剤）を投与することをさらに含む。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方の投与は、抗ＣＤ２抗体またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤のうちの１つのみを対象に投与した場合と比較して、対象における同種免疫応答のより大きな低下をもたらす。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方の投与は、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤のうちの１つのみを対象に投与した場合と比較して、ＣＤ２のレベルのより大きな減少をもたらす。ある実施形態では、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の両方の対象への投与は、ＣＤ２結合分子（または抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片）またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤のうちの１つのみを対象に投与後に得られる対象からの生体試料中の細胞の数と比較して、対象からの生体試料中の細胞の数が少なくなる。

【0188】

ある実施形態では、本明細書に記載の方法は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片をＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤と組み合わせて対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、ＣＤ８０及び／またはＣＤ８６を標的とするＣＴＬＡ４－Ｉｇである。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、Ｂ７－１及び／またはＢ７－２への結合を増強したＣＴＬＡ４－Ｉｇバリアントである。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、ＣＴＬＡ－４融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、ＣＴＬＡ－４ Ｉｇ（例えば、アバタセプト）である。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、Ｆｃに融合したＣＴＬＡ－４の細胞外ドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃに融合されたＣＴＬＡ－４の細胞外ドメインは、ベラタセプト（Ｎｕｌｏｊｉｘ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、Ｆｃに融合されたＣＴＬＡ－４の細胞外ドメインは、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、ヒトＣＴＬＡ４のＡ２９Ｙ／Ｌ１０４Ｅバリアント型を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、Ｂ７－１及びＢ７－２に対する親和性を高めるために、ＣＴＬＡ－４融合タンパク質のＣＴＬＡ４部分中に少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも４つを超える置換を含む。例えば、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、Ａ２９Ｋ、Ａ２９Ｎ、Ａ２９Ｅ、Ａ２９Ｗ、Ａ２９Ｆ、Ａ２９Ｙ、Ａ２９Ｈ、Ａ２９Ｑ、Ａ２９Ｒ、Ｔ３０Ｄ、Ｔ３０Ｖ、Ｔ３０Ａ、Ｔ３０Ｎ、Ｔ３０Ｅ、Ｔ３０Ｈ、Ｔ３０Ｒ、Ｅ３１Ｉ、Ｅ３１Ｍ、Ｅ３１Ｔ、Ｅ３１Ｖ、Ｅ３１Ｄ、Ｒ３３Ｆ、Ｒ３３Ｔ、Ｒ３３Ｍ、Ｒ３３Ｗ、Ｒ３３１、Ｒ３３Ｙ、Ｒ３３Ｌ、Ｒ３３Ｅ、Ｒ３３Ｑ、Ｔ３５Ｅ、Ｔ３５Ｖ、Ｔ３５Ｍ、Ｔ３５Ｄ、Ｔ３５Ｆ、Ｔ３５Ｙ、Ａ４９Ｔ、Ａ４９Ｆ、Ａ４９Ｙ、Ａ４９Ｗ、Ａ４９Ｄ、Ａ４９Ｅ、Ｔ５１Ｖ、Ｔ５１Ｌ、Ｔ５１Ｎ、Ｔ５１Ｈ、Ｔ５１Ｑ、Ｔ５１Ｅ、Ｔ５１Ｓ、Ｔ５１Ｒ、Ｔ５１Ｄ、Ｍ５３Ｅ、Ｍ５３Ｑ、Ｍ５３Ｙ、Ｍ５３Ｗ、Ｍ５３Ｆ、Ｍ５３Ｈ、Ｔ５９Ｖ、Ｔ５９Ｌ、Ｔ５９Ｎ、Ｔ５９Ｙ、Ｔ５９Ｈ、Ｔ５９Ｑ、Ｔ５９Ｉ、Ｌ６１Ｄ、Ｌ６１Ｅ、Ｌ６１１、Ｌ６１Ａ、Ｌ６１Ｆ、Ｌ６１Ｇ、Ｌ６１Ｈ、Ｌ６１Ｋ、Ｌ６１Ｍ、Ｌ６１Ｎ、Ｌ６１Ｐ、Ｌ６１Ｑ、Ｌ６１Ｒ、Ｌ６１Ｓ、Ｌ６１Ｔ、Ｌ６１Ｖ、Ｌ６１Ｗ、Ｌ６１Ｙ、Ｄ６３Ｅ、Ｓ６４Ｋ、Ｓ６４Ｒ、Ｓ６４Ｙ、Ｋ９３Ｄ、Ｋ９３Ｅ、Ｋ９３Ｆ、Ｋ９３Ｈ、Ｋ９３Ｑ、Ｋ９３Ｒ、Ｋ９３Ｔ、Ｋ９３Ｖ、Ｋ９３Ｗ、Ｋ９３Ｙ、Ｋ９３Ｎ、Ｋ９３Ｓ、Ｅ９５Ｄ、Ｅ９５Ｑ、Ｅ９５Ｙ、Ｅ９５Ｈ、Ｅ９５Ｌ、Ｍ９７Ｆ、Ｍ９７Ｄ、Ｍ９７Ｎ、Ｍ９７１、Ｍ９７Ｖ、Ｙ９８Ｆ、Ｙ９８Ｗ、Ｙ１０２Ｆ、Ｙ１０２Ｗ、Ｙ１０３Ｆ、Ｙ１０３Ｗ、Ｙ１０３Ｈ、Ｙ１０３Ｄ、Ｙ１０３Ｅ、Ｙ１０３Ｎ、Ｙ１０３Ｑ、Ｌ１０４Ｄ、Ｌ１０４Ｅ、Ｌ１０４Ｖ、Ｌ１０４Ｍ、Ｌ１０４Ｙ、Ｌ１０４Ｗ、Ｌ１０４Ｆ、Ｌ１０４Ｈ、Ｇ１０５Ｄ、Ｇ１０５Ｅ、Ｉ１０６Ｅ、及びＩ１０６Ｙのうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない１つ以上の置換を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、Ａ２９Ｈ、Ａ２９Ｋ、Ａ２９Ｙ、Ｔ５１Ｎ、Ｌ６１Ｅ、Ｌ６１Ｑ、Ｋ９３Ｑ、Ｋ９３、Ｌ１０４Ｈ、Ｌ１０４Ｅ、及びＹ１０３Ｑからなる群から選択される少なくとも１つのＣＴＬＡ４置換を含む。

【0189】

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、配列番号２２と同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、配列番号２２と約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、または少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、配列番号２２中に約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、または４０、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、もしくは４０、または最大で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、もしくは４０のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、配列番号２３と同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、配列番号２３と約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、または少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、配列番号２３中に約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、または４０、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、もしくは４０、または最大で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、もしくは４０のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。

【0190】

ある実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、対象が免疫関連障害または疾患と診断される前に、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤を対象に投与することを含む。ある実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、対象が免疫関連障害または疾患と診断された後に、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤を対象に投与することを含む。ある実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、移植前に移植レシピエントにＣＴＬＡ４共刺激遮断剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、移植１日前、移植２日前、移植３日前、移植４日前、移植１日前及び２日前、移植２日前及び３日前、移植３日前及び４日前、移植１日前及び２日前及び３日前、または移植１日前及び２日前及び３日前及び４日前にレシピエントに投与され得る。特定の実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、移植１日前及び２日前にレシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、移植手術当日に投与される。

【0191】

ある実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、移植後に移植レシピエントにＣＴＬＡ４共刺激遮断剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、移植１日後、移植２日後、移植３日後、移植４日後、移植５日後、移植６日後、移植７日後、移植８日後、移植９日後、移植１０日後、移植１１日後、移植１２日後、移植１３日後、移植１４日後、移植１５日後、移植１６日後、移植１７日後、移植１８日後、移植１９日後、移植２０日後、移植２１日後、移植２２日後、移植２３日後、移植２４日後、移植２５日後、移植２６日後、移植２７日後、移植２８日後、移植２９日後、及び／または移植３０日後にレシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、移植当日、移植１日後、移植２日後及び／または移植４日後に投与される。

【0192】

ある実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤の試験用量を投与することができる。ある実施形態では、試験用量の投与は、任意である。ある実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、対象に、寛解を誘導するのに十分高い用量（負荷用量）で投与し、その後、これらに限定されないが、月１回、２ヶ月に１回、または３ヶ月に１回などの低頻度で投与し得る。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、皮下、静脈内、血管内、局所的、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口、眼窩内、吸入、経皮的、または腹腔内を含む当技術分野で公知である適当な方法で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、３０分間の静脈内注入として静脈内投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、最初の注入の約２週間後及び４週間後、及び／またはその後４週間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、週１回の皮下注射によって投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、静脈内負荷用量とともに、または静脈内負荷用量なしで、開始される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、単回の静脈内注入で開始され、その後、最初の皮下（例えば、１２５ｍｇ）注射を行い、これは、静脈内注入の１日以内に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、約５００ｍｇ（例えば、６０ｋｇ未満の対象）、７５０ｍｇ（例えば、６０～１００ｋｇの対象）、または１０００ｍｇ（例えば、１００ｋｇを超える対象）の用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、バイアル（例えば、２５０ｍｇバイアル）で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、凍結乾燥粉末として提供される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤の再構成後、１ミリリットルあたり、２５ｍｇ（２５０ｍｇ／１０ｍＬ）のＣＴＬＡ４共刺激遮断剤を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、１２５ｍｇ／ｍＬの単回投与プレフィルドガラスシリンジとして提供される。

【0193】

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、１日あたり、１回あたり、１週間あたり、または１ヶ月あたり約１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、もしくは１０００ｍｇ超、または少なくとも約１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、もしくは１０００ｍｇ超、または最大約１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、もしくは１０００ｍｇ超の量で投与される。

【0194】

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤の投与量は、０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ体重以上の範囲、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重、または５０ｍｇ／ｋｇ体重である。いくつかの実施形態では、投与量は、１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤の単回用量のみが、対象に投与される。いくつかの実施形態では、複数回用量のＣＴＬＡ４共刺激遮断剤が、対象に投与される。いくつかの実施形態では、投与間の経過時間は、１時間未満、約１時間、約１～２時間、約２～３時間、約３～４時間、約６時間、約１２時間、約２４時間、約４８時間、約２～４日、約４～６日、約１週間、約２週間、または２週間超である。

【0195】

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、１回または複数回の投与により、約１ｎｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤が投与される１日あたり、１用量あたり、１週あたり、または１ヶ月あたり、約１ｎｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｎｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｎｇ／ｋｇ体重～約１００μｇ／ｋｇ体重、約１ｎｇ／ｋｇ体重～約１０μｇ／ｋｇ体重、約１ｎｇ／ｋｇ体重～約１μｇ／ｋｇ体重、約１ｎｇ／ｋｇ体重～約１００ｎｇ／ｋｇ体重、約１ｎｇ／ｋｇ体重～約１０ｎｇ／ｋｇ体重、約１０ｎｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｎｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｎｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｎｇ／ｋｇ体重～約１００μｇ／ｋｇ体重、約１０ｎｇ／ｋｇ体重～約１０μｇ／ｋｇ体重、約１０ｎｇ／ｋｇ体重～約１μｇ／ｋｇ体重、１０ｎｇ／ｋｇ体重～約１００ｎｇ／ｋｇ体重、約１００ｎｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｎｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｎｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｎｇ／ｋｇ体重～約１００μｇ／ｋｇ体重、約１００ｎｇ／ｋｇ体重～約１０μｇ／ｋｇ体重、約１００ｎｇ／ｋｇ体重～約１μｇ／ｋｇ体重、約１μｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１μｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１μｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１μｇ／ｋｇ体重～約１００μｇ／ｋｇ体重、約１μｇ／ｋｇ体重～約１０μｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ／ｋｇ体重～約１００μｇ／ｋｇ体重、約１００μｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１００μｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００μｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で投与される。

【0196】

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤は、患者／日あたり０．１～２０．０ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、０．５～１０．０ｍｇ／ｋｇ／日）の量で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、約０．１～１００ｍｇ／ｋｇ対象体重、約０．５～５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約５～１０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約１０～１５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約１５～２０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約２０～２５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約２５～３０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約３０～３５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約３５～４０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約４０～４５ｍｇ／ｋｇ対象、約４５～５０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約５０～５５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約５５～６０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約６０～６５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約６５～７０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約７０～７５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約７５～８０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約８０～８５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約８５～９０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約９０～９５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約９５～１００ｍｇ／ｋｇ対象体重、約２～１０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約０．１～４ｍｇ／ｋｇ対象体重、約０．１～０．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約１．０～１．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約１．５～２．０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約２．０～２．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約２．５～３．０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約３．０～３．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約３．５～４．０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約４．０～４．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約４．５～５．０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約５．０～５．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約５．５～６．０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約６．０～６．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約６．５～７．０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約７．０～７．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約７．５～８．０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約８．０～８．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約８．５～９．０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約９．０～９．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、約９．５～１０．０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約０．１～２ｍｇ／ｋｇ対象体重、約２～４ｍｇ／ｋｇ対象体重、約４～６ｍｇ／ｋｇ対象体重、約６～８ｍｇ／ｋｇ対象体重、約８～１０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約１０～１２ｍｇ／ｋｇ対象体重、約１２～１４ｍｇ／ｋｇ対象体重、約１４～１６ｍｇ／ｋｇ対象体重、約１６～１８ｍｇ／ｋｇ対象体重、約１８～２０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約０．５ｍｇ／ｋｇ対象体重、２ｍｇ／ｋｇ対象体重、１０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約０．５ｍｇ／ｋｇ～１００対象体重、約０．５～１０ｍｇ／ｋｇ対象体重、約０．１～２０ｍｇ／ｋｇ対象体重、体重６０ｋｇ未満の対象で約５００ｍｇ、体重６０～１００ｋｇの対象で７５０ｍｇ、または体重１００ｋｇ超の対象で１０００ｍｇの量で対象に投与される。

【0197】

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤（例えば、ベラタセプト及び／またはアバタセプト）は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片との併用療法において、１日あたり、ＣＴＬＡ４共刺激遮断剤１投与あたり、１週あたり、または１ヶ月あたり、約１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、もしくは３０ｍｇ／ｋｇ（またはその間の任意の整数量）、または少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、もしくは３０ｍｇ／ｋｇ（またはその間の任意の整数量）、または最大で約１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、もしくは３０ｍｇ／ｋｇ（またはその間の任意の整数量）の量で投与される。

【0198】

５．３．９ 免疫抑制療法
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原断片、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤、及び別の活性剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、別の活性剤は、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、別の活性剤は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、別の活性剤は、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、別の活性剤としては、メトトレキサート、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、疼痛緩和のための薬剤、コルチコステロイド、ＴＮＦ遮断剤、アザチオプリン、クロロキン、金、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、スルファサラジン、及び／またはアナキンラのうちの１つ以上が挙げられる。ＮＳＡＩＤの例としては、これらに限定されないが、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ジクロフェナク、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロモキシカム（ｌｏｍｏｘｉｃａｍ）、イソキシカム、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸、セレコキシカブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｃａｂ）、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、ルミラコキシブ、エトリコキシブ、ニメスリド、リコフェナク（ｌｉｃｏｆｅｎａｃ）、及びニフルム酸が挙げられる。いくつかの実施形態では、別の活性剤は、免疫抑制療法である。免疫抑制療法は、対象における免疫関連障害または疾患を治療または予防するためのＦＤＡ承認の任意の治療であり得る（例えば、移植拒絶反応を減少させることが示されるもの）。免疫抑制療法の非限定的な例としては、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムスまたはシクロスポリン）、抗増殖剤（例えば、ミコフェノール酸、６－メルカプトプリンまたはそのプロドラッグであるアザチオプリンなどの代謝拮抗剤）、シクロホスファミド、ラパマイシン哺乳動物標的阻害剤（ｍＴＯＲ）（例えば、シロリムス、ラパマイシン）、ステロイド（例えば、プレドニゾン）、細胞周期阻害剤（アザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル）、リンパ球除去剤（例えば、抗胸腺細胞グロブリンまたはアレムツズマブまたはバシリキシマブなどの抗体）及び共刺激遮断剤が挙げられる。例えば、Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ（２０２０）．，Ａｎｎ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．Ｍａｒ；８（６）：４０９；ｖａｎ ｄｅｒ Ｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．（２０２０），Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｒｅｖ；２９：１９０１３２及びＢｅｎｖｅｎｕｔｏ ｅｔ ａｌ．（２０１８），Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｄｉｓ １０：３１４１－３１５５を参照されたい。

【0199】

免疫抑制療法は、導入療法（周術期、または手術直後）として、維持用量として、または急性免疫関連疾患（例えば、急性拒絶反応）のために投与することができる。導入療法としては、一般的に、バシリキシマブ、抗胸腺細胞グロブリン、またはアレムツズマブが挙げられる。免疫抑制療法は、多くの場合、対象の生涯にわたって継続することが必要とされる維持療法として投与することもできる。維持免疫抑制療法としては、通常、カルシニューリン阻害剤（タクロリムスまたはシクロスポリン）、抗増殖剤（ミコフェノール酸またはアザチオプリン）、及びコルチコステロイドが挙げられる。急性拒絶反応に対する免疫抑制療法としては、通常、チモグロブリンまたはミコフェノール酸が挙げられる。例えば、Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０２０），Ａｎｎ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．Ｍａｒ；８：４０９及びＢｅｎｖｅｎｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１８）Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｄｉｓ １０：３１４１－３１５５を参照されたい。

【0200】

免疫抑制剤の非限定的な例としては、（１）代謝拮抗剤、例えば、プリン合成阻害剤（例えば、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）阻害剤、例えば、アザチオプリン、ミコフェノール酸、及びミコフェノール酸モフェチル）、ピリミジン合成阻害剤（例えば、レフルノミド及びテリフルノミド）、及び葉酸拮抗剤（例えば、メトトレキサート）；（２）カルシニューリン阻害剤、例えば、タクロリムス、シクロスポリンＡ、ピメクロリムス、及びボクロスポリン；（３）ＴＮＦ－α阻害剤、例えば、サリドマイド及びレナリドマイド；（４）ＩＬ－１受容体アンタゴニスト、例えば、アナキンラ；（５）ラパマイシン哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）阻害剤、例えば、ラパマイシン（シロリムス）、デフォロリムス、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、及びバイオリムスＡ９；（６）コルチコステロイド、例えば、プレドニゾン；及び（７）多数の細胞標的または血清標的（抗リンパ球グロブリン及び抗胸腺細胞グロブリンなど）のいずれか１つに対する抗体が挙げられる。

【0201】

非限定的な例示的細胞標的及びそれらのそれぞれの阻害剤化合物としては、これらに限定されないが、補体成分５（例えば、エクリズマブ）；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、アフェリモマブ及びゴリムマブ）；ＩＬ－５（例えば、メポリズマブ）；ＩｇＥ（例えば、オマリズマブ）；ＢＡＹＸ（例えば、ネレリモマブ）；インターフェロン（例えば、ファラリモマブ（ｆａｒａｌｉｍｏｍａｂ））；ＩＬ－６（例えば、エルシリモマブ）；ＩＬ－１２及びＩＬ－１３（例えば、レブリキズマブ及びウステキヌマブ）；ＣＤ３（例えば、ムロモナブ－ＣＤ３、オテリキシズマブ、テプリズマブ、ビシリズマブ）；ＣＤ４（例えば、クレノリキシマブ、ケリキシマブ、及びザノリムマブ）；ＣＤＩ１ａ（例えば、エファリズマブ）；ＣＤ１８（例えば、エルリズマブ）；ＣＤ２０（例えば、アフツズマブ、オクレリズマブ、パスコリズマブ）；ＣＤ２３（例えば、ルミリキシマブ）；ＣＤ４０（例えば、テネリキシマブ、トラリズマブ）；ＣＤ６２Ｌ／Ｌ－セレクチン（例えば、アセリズマブ（ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ））；ＣＤ８０（例えば、ガリキシマブ）；ＣＤ１４７／バシギン（例えば、ガビリモマブ（ｇａｖｉｌｉｍｏｍａｂ））；ＣＤ１５４（例えば、ルプリズマブ）；ＢＬｙＳ（例えば、ベリムマブ）；ＣＴＬＡ－４（例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ）；ＣＡＴ（例えば、ベルチリムマブ（ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、レルデリムマブ（ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ））；インテグリン（例えば、ナタリズマブ）；ＩＬ－６受容体（例えば、トシリズマブ）；ＬＦＡ－１（例えば、オデュリモマブ）；及びＩＬ－２受容体／ＣＤ２５（例えば、バシリキシマブ、ダクリズマブ、イノリモマブ（ｉｎｏｌｉｍｏｍａｂ））が挙げられる。

【0202】

いくつかの実施形態では、免疫抑制療法は、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤｓ）として知られる非特異的細胞傷害性免疫抑制薬、例えば、メトトレキサート、インフリキシマブ、シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、エタネルセプト、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）または他のサイトカイン遮断剤またはアンタゴニストが挙げられる。いくつかの実施形態では、対象に投与される免疫抑制療法（例えば、ＤＭＡＲＤＳ）の量は、免疫抑制療法が対象に投与された日において、約１～約５０００ｍｇ／日、約１～１０ｍｇ／日、約１０～５０ｍｇ／日、約５０～１００ｍｇ／日、約１００～１５０ｍｇ／日、約１５０～２００ｍｇ／日、約２００～２５０ｍｇ／日、約２５０～３００ｍｇ／日、約３００～３５０ｍｇ／日、約３５０～４００ｍｇ／日、約４００～４５０ｍｇ／日、約４５０～５００ｍｇ／日、約５００～５５０ｍｇ／日、約５５０～６００ｍｇ／日、約６００～６５０ｍｇ／日、約６５０～７００ｍｇ／日、約７００～７５０ｍｇ／日、約７５０～８００ｍｇ／日、約８００～８５０ｍｇ／日、約８５０～９００ｍｇ／日、約９００～９５０ｍｇ／日、約９５０～１０００ｍｇ／日、約１０００～１１００ｍｇ／日、約１１００～１２００ｍｇ／日、約１２００～１３００ｍｇ／日、約１３００～１４００ｍｇ／日、約１４００～１５００ｍｇ／日、約１５００～１６００ｍｇ／日、約１６００～１７００ｍｇ／日、約１７００～１８００ｍｇ／日、約１８００～１９００ｍｇ／日、約１９００～２０００ｍｇ／日、約２０００～２５００ｍｇ／日、約２５００～３０００ｍｇ／日、約３０００～３５００ｍｇ／日、約３５００～４０００ｍｇ／日、約４０００～４５００ｍｇ／日、もしくは約４５００～５０００ｍｇ／日、または少なくとも約１～約５０００ｍｇ／日、約１～１０ｍｇ／日、約１０～５０ｍｇ／日、約５０～１００ｍｇ／日、約１００～１５０ｍｇ／日、約１５０～２００ｍｇ／日、約２００～２５０ｍｇ／日、約２５０～３００ｍｇ／日、約３００～３５０ｍｇ／日、約３５０～４００ｍｇ／日、約４００～４５０ｍｇ／日、約４５０～５００ｍｇ／日、約５００～５５０ｍｇ／日、約５５０～６００ｍｇ／日、約６００～６５０ｍｇ／日、約６５０～７００ｍｇ／日、約７００～７５０ｍｇ／日、約７５０～８００ｍｇ／日、約８００～８５０ｍｇ／日、約８５０～９００ｍｇ／日、約９００～９５０ｍｇ／日、約９５０～１０００ｍｇ／日、約１０００～１１００ｍｇ／日、約１１００～１２００ｍｇ／日、約１２００～１３００ｍｇ／日、約１３００～１４００ｍｇ／日、約１４００～１５００ｍｇ／日、約１５００～１６００ｍｇ／日、約１６００～１７００ｍｇ／日、約１７００～１８００ｍｇ／日、約１８００～１９００ｍｇ／日、約１９００～２０００ｍｇ／日、約２０００～２５００ｍｇ／日、約２５００～３０００ｍｇ／日、約３０００～３５００ｍｇ／日、約３５００～４０００ｍｇ／日、約４０００～４５００ｍｇ／日、または約４５００～５０００ｍｇ／日である。

【0203】

いくつかの実施形態では、対象に投与される免疫抑制療法（例えば、ＤＭＡＲＤＳ）の量は、約０．１～４０ｍｇ／週、約５～３０ｍｇ／週、約０．１～５ｍｇ／週、約５～１０ｍｇ／週、約１０～１５ｍｇ／週、約１５～２０ｍｇ／週、約２０～２５ｍｇ／週、約２５～３０ｍｇ／週、約３０～３５ｍｇ／週、約３５～４０ｍｇ／週、約１０～３０ｍｇ／週、約１０～１００ｍｇ／週、約５０ｍｇ／週、約０．１～５０ｍｇ／ｋｇ体重／週である。

【0204】

５．３．１０ シクロホスファミド
本明細書で使用されるシクロホスファミドは、免疫系を抑制するためにレシピエントに投与される化合物である。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド（２－［ビス（２－クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ－２Ｈ－１，３，２－オキサザホスホリン２－オキシド一水和物）は、移植臓器（例えば、肝臓または腎臓）に対する寛容を誘導するために投与され、シクロホスファミドの商品名としては、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、及びＥｎｄｏｘａｎ（登録商標）が挙げられる。

【0205】

ある実施形態では、本明細書で提供されるレジメンは、移植前にシクロホスファミドを移植レシピエントに投与することを含む。ある実施形態では、本明細書で提供されるレジメンは、シクロホスファミドを投与して、免疫関連障害または疾患を治療または予防することを含む。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、移植３日後、移植４日後、移植５日後、移植６日後、移植３日後及び４日後、移植５日後及び６日後、移植３日後及び４日後及び５日後、または移植４日後及び５日後及び６日後に、レシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、シクロホスファミドは、移植４日後及び５日後にレシピエントに投与することができる。特定の実施形態では、シクロホスファミドは、移植３日後、４日後、５日後、６日後、または７日後に最初にレシピエントに投与される。

【0206】

特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されたレシピエントは、３０以上のＭＥＬＤスコアを有し、この方法は、移植１～２日後、移植２～４日後、移植４～６日後、移植６～８日後、移植８～１０日後、移植１０～１２日後、移植１２～１４日後、移植１４～１６日後、移植１６～１８日後、移植１８～２０日後、移植２０～２２日後、移植２２～２４日後、移植２４～２６日後、移植２６～２８日後、移植２８～３０日後または移植３１日後以降に、レシピエントにシクロホスファミドを最初に投与することを含む。

【0207】

特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されたレシピエントは、３０以下のＭＥＬＤスコアを有し、この方法は、移植１日後、移植２日後、移植３日後、移植４日後、移植５日後、移植６日後、移植７日後、移植８日後、移植９日後、移植１０日後、移植１１日後、移植１２日後、移植１３日後、移植１４日後、または移植１４日後以降に、レシピエントにシクロホスファミドを最初に投与することを含む。

【0208】

ある実施形態では、シクロホスファミドは、２０ｍｇ／ｋｇ／回、２５ｍｇ／ｋｇ／回、３０ｍｇ／ｋｇ／回、３５ｍｇ／ｋｇ／回、４０ｍｇ／ｋｇ／回、４５ｍｇ／ｋｇ／回、５０ｍｇ／ｋｇ／回、５５ｍｇ／ｋｇ／回、５６ｍｇ／ｋｇ／回、５７ｍｇ／ｋｇ／回、５８ｍｇ／ｋｇ／回、５９ｍｇ／ｋｇ／回、６０ｍｇ／ｋｇ／回、６１ｍｇ／ｋｇ／回、６２ｍｇ／ｋｇ／回、６３ｍｇ／ｋｇ／回、６４ｍｇ／ｋｇ／回、６５ｍｇ／ｋｇ／回、７０ｍｇ／ｋｇ／回、７５ｍｇ／ｋｇ／回、８０ｍｇ／ｋｇ／回、８５ｍｇ／ｋｇ／回、または９０ｍｇ／ｋｇ／回の用量で、移植レシピエントに投与することができるか、または対象における免疫関連障害または疾患を治療または予防するために投与することができる。ある実施形態では、シクロホスファミドは、２０～３０ｍｇ／ｋｇ／回、２５～３５ｍｇ／ｋｇ／回、３０～４０ｍｇ／ｋｇ／回、３５～４５ｍｇ／ｋｇ／回、４０～５０ｍｇ／ｋｇ／回、４５～５５ｍｇ／ｋｇ／回、５０～６０ｍｇ／ｋｇ、５５～６５ｍｇ／ｋｇ／回、６０～７０ｍｇ／ｋｇ／回、６５～７５ｍｇ／ｋｇ／回、７０～８０ｍｇ／ｋｇ／回、７５～８５ｍｇ／ｋｇ／回、または８０～９０ｍｇ／ｋｇ／回の用量範囲で投与することができる。特定の実施形態では、シクロホスファミドは、４０ｍｇ／ｋｇ／回の用量で投与することができる。

【0209】

ある実施形態では、シクロホスファミドは、当該技術分野において公知の適当な方法、例えば、皮下、静脈内、血管内、局所的、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口的、眼窩内、吸入による、経皮的、腹腔内、または対象によるシクロホスファミドの適切な作用が可能になる投与経路を介するなどで投与することができる。特定の実施形態では、シクロホスファミドは、静脈内投与である。特定の実施形態では、シクロホスファミドは、１時間かけて静脈内投与する。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。

【0210】

５．３．１１ カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、対象にカルシニューリン阻害剤を投与することをさらに含む。特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、タクロリムスである。本明細書で使用されるタクロリムスは、免疫系を抑制するために対象に投与され得るマクロライド系抗生物質である。タクロリムスは、ＣｙＡ（シクロスポリンＡ、別のカルシニューリン阻害剤）と同様の作用機序を有し、タクロリムスの商品名としては、Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標）、Ａｄｐｏｒｔ（登録商標）、Ａｄｖａｇｒａｆ（登録商標）、Ｐｒｏｔｏｐｉｃ（登録商標）、Ａｓｔａｇｒａｆ ＸＬ（登録商標）、Ｍｏｄｉｇｒａｆ（登録商標）、及びＥｎｖａｒｓｕｓ ＸＲ（登録商標）が挙げられる。カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、免疫関連疾患または障害を治療または予防するために対象に投与することができるか、またはレシピエントにおいて、免疫系を抑制し、移植片対宿主病の発症を阻害するために術後治療レジメンに含めることができる。いくつかの実施形態では、カルシニューリン阻害剤の投与は、その後対象へのカルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）のテーパリング過程を伴う一定の過程を含む。

【0211】

ある実施形態では、本明細書で提供されるレジメンは、シクロホスファミドを投与して、免疫関連障害または疾患を治療または予防することを含む。ある実施形態では、本明細書で提供されるレジメンは、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）を移植レシピエントに投与することを含む。ある実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、移植１日前、移植２日前、移植３日前、移植１日前及び２日前、移植１日前及び３日前、または移植１日前及び２日前及び３日前に最初に投与することができる。特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、移植１日前にレシピエントに最初に投与することができる。特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、移植近くの期間（すなわち、移植手術の前後）に可能な限り早期に投与される。特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、臓器（例えば、肝臓）移植の再灌流後２４時間以内に投与される。ある実施形態では、本明細書で提供される術後治療レジメンは、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）を移植レシピエントに投与することを含む。ある実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、移植当日、移植手術１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後、３０日後、１ヶ月後、２ヶ月後、３ヶ月後、４ヶ月後、５ヶ月後、６ヶ月後、７ヶ月後、８ヶ月後、９ヶ月後、１０ヶ月後、１１ヶ月後、１２ヶ月後、１３ヶ月後、１４ヶ月後、１５ヶ月後、１６ヶ月後、１７ヶ月後、または１８ヶ月後に投与され得る。

【0212】

ある実施形態では、単回用量のタクロリムスを投与することができる。ある実施形態では、複数回用量のカルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）を投与することができる。ある実施形態では、一定用量のカルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）を投与することができる。ある実施形態では、テーパリング過程のカルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）を投与することができる。ある実施形態では、一定用量のカルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）後、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）のテーパリング過程を投与することができる。

【0213】

特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、１日１回の頻度で投与され得る。ある実施形態では、タクロリムスは、１日２回の頻度で投与することができる。ある実施形態では、タクロリムスは、（例えば、移植当日に開始して）１日２回の頻度で投与することができる。ある実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、０．１ｍｇ／ｋｇ／回、０．２ｍｇ／ｋｇ／回、０．３ｍｇ／ｋｇ／回、０．４ｍｇ／ｋｇ／回、０．５ｍｇ／ｋｇ／回、０．６ｍｇ／ｋｇ／回、０．７ｍｇ／ｋｇ／回、０．８ｍｇ／ｋｇ／回、０．９ｍｇ／ｋｇ／回、１ｍｇ／ｋｇ／回、０．１～０．５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５～１ｍｇ／ｋｇ／回、０．２～０．６ｍｇ／ｋｇ／回、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ／回、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ／回、または０．１～１ｍｇ／ｋｇ／回の用量で１日２回投与され得る。特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、タクロリムスであり、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ／回の用量で１日２回経口投与される。

【0214】

ある実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、１～５ｎｇ／ｍｌ、５～１０ｎｇ／ｍｌ、１０～１５ｎｇ／ｍｌ、１～１１ｎｇ／ｍｌ、２～１２ｎｇ／ｍｌ、３～１３ｎｇ／ｍｌ、４～１４ｎｇ／ｍｌ、５～１５ｎｇ／ｍｌ、６～１６ｎｇ／ｍｌ、７～１７ｎｇ／ｍｌ、８～１８ｎｇ／ｍｌ、９～１９ｎｇ／ｍｌ、１０～２０ｎｇ／ｍｌ、または１５～２０ｎｇ／ｍｌの目標血中トラフ濃度を得るのに十分な用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、目標血中トラフ濃度は、１０～１５ｎｇ／ｍｌであり得る。特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、タクロリムスであり、血清トラフ濃度を４～１１ｎｇ／ｍＬの範囲に維持するのに十分な用量で、対象に投与される。

【0215】

ある実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、皮下、静脈内、血管内、局所、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口、眼窩内、吸入による、経皮、腹腔内、またはレシピエントによるカルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）の適切な作用を可能にする投与経路によるなど、当技術分野で知られている適当な方法で対象に投与することができる。特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、経口投与することができる。特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）は、静脈内投与することができる。

【0216】

特定の実施形態では、対象は、対象が臓器移植を受けた後、対象が免疫関連疾患または障害と診断された後、または対象が本明細書に記載の方法に従って免疫関連疾患または障害の治療を受けた後、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１～２ヶ月、２～３ヶ月、３～４ヶ月、４～５ヶ月、５～６ヶ月、６～７ヶ月、７～８ヶ月、８～９ヶ月、９～１０ヶ月、１０～１１ヶ月、１１～１２ヶ月、１２～１３ヶ月、１３～１４ヶ月、１４～１５ヶ月、１５～１６ヶ月、１６～１７ヶ月、１７～１８ヶ月、１８～１９ヶ月、１９～２０ヶ月、２０～２１ヶ月、２１～２２ヶ月、２２～２３ヶ月、または２３～２４ヶ月で、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）から離脱する。特定の実施形態では、離脱は、対象が臓器移植を受けた後、対象が免疫関連疾患もしくは障害と診断された後、または対象が本明細書に記載の方法に従って免疫関連疾患または障害の治療を受けた後、６ヶ月で開始される。特定の実施形態では、離脱は、２０１６ Ｂａｎｆｆ Ｃｒｉｔｅｒｉａ（Ｄｅｍｅｔｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２０１６ Ｏｃｔ；１６（１０）：２８１６－２８３５に記載）によって判定されるように、６ヶ月の時点でレシピエントから採取された生検片に拒絶反応がない場合、及び／またはレシピエントが、安定した移植機能を維持する場合にのみ開始される。

【0217】

特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）の用量は、離脱開始後２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、または６ヶ月ごとに減少させる。

【0218】

特定の実施形態では、離脱プロトコールは、投与頻度を減少させる、例えば、１日２回から１日１回に、１日１回から隔日に、１日１回から週３回に、週３回から週２回に、週２回から週１回に、週１回から隔週に投与頻度を減少させるなど、１つ以上のステップを含む。特定の実施形態では、離脱プロトコールは、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）の１日量を減少させるステップ、例えば、初期１日量を１０～２０％、２０～３０％、３０～４０％、４０～５０％、５０～６０％、６０～７０％、７０～８０％、８０～９０％、または９０％超減少させるステップを含む。特定の実施形態では、離脱プロトコールは、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）の１日量を約２５％減少させるステップを含む。

【0219】

特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）の投与は、対象が臓器移植を受けた後、対象が免疫関連疾患または障害と診断された後、または対象が本明細書に記載の方法に従って免疫関連疾患または障害の治療を受けた後、約１２～１５ヶ月、１５～１８ヶ月、１８～２１ヶ月、または２１～２４ヶ月で停止される。特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）の投与は、対象が臓器移植を受けた後、対象が免疫関連疾患または障害と診断された後、または対象が本明細書に記載の方法に従って免疫関連疾患または障害の治療を受けた後、１８ヶ月で停止される。特定の実施形態では、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）の投与は、Ｄｅｍｅｔｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２０１６ Ｏｃｔ；１６（１０）：２８１６－２８３５に記載のとおり、２０１６ Ｂａｎｆｆ Ｃｒｉｔｅｒｉａによって判定されるように、１８ヶ月の時点でレシピエントから採取された生検片に拒絶反応がない場合にのみ停止される。

【0220】

例示的な離脱プロトコールは、（ｉ）３ヶ月間（例えば、移植後６ヶ月目から９ヶ月目）かけて、タクロリムスの初期の１日２回投与量を１日１回に、１日量を４分の３に減少させる；（ｉｉ）３ヶ月間（例えば、移植後９ヶ月目から１２ヶ月目）かけて、用量を週３回にさらに減少させる；（ｉｉｉ）３ヶ月間（例えば、移植後１２ヶ月目から１５ヶ月目）かけて、用量を週２回にさらに減少させる；（ｉｖ）３ヶ月間（例えば、移植後１５ヶ月目から１８ヶ月目）にかけて、用量を週１回にさらに減少させる；及び（ｖ）対象が臓器移植を受けた後、対象が免疫関連疾患または障害と診断された後、または対象が本明細書に記載の方法に従って免疫関連疾患または障害の治療を受けた後１８ヶ月の時点で、タクロリムスの投与を停止するステップを含む。

【0221】

ある実施形態では、カルシニューリン阻害剤の代わりに代替化合物を使用することができる。これらの化合物としては、シロリムス及びエベロリムスを挙げることができる。ある実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、シクロスポリン（Ｇｅｎｇｒａｆ（登録商標）、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、及びＳａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））であることができ、タクロリムスの代わりに使用することができる。いくつかの実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。

【0222】

５．３．１２ ステロイド
ステロイドは、本明細書で使用される場合、免疫関連免疫障害または疾患を治療または予防するために対象に投与される化合物である。いくつかの実施形態では、免疫系を抑制するために、臓器（例えば、肝臓または腎臓）移植のレシピエントにステロイドが投与される。プレドニゾンは、コルチコステロイドであり、化学名は、１７，２１－ジヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，１１，２０－トリオン（Ｃ_２１Ｈ_２６Ｏ_５）である。プレドニゾンの商品名としては、Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、Ｓｔｅｒａｐｒｅｄ（登録商標）、Ｒａｙｏｓ（登録商標）、Ｐｒｅｄｎｉｃｏｔ（登録商標）、及びＭｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）が挙げられる。

【0223】

ある実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、コルチコステロイドを免疫関連の免疫障害または疾患を治療もしくは予防するために対象に投与すること、または移植レシピエントに投与することを含む。ある実施形態では、コルチコステロイドは、移植当日、移植手術後、１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後、または３０日後に投与することができる。

【0224】

ある実施形態では、コルチコステロイドは、移植手術当日から移植手術５日後まで、移植手術当日から移植手術１０日後まで、移植手術当日から移植手術１５日後まで、移植手術当日から移植手術２０日後まで、移植手術当日から移植手術２５日後まで、または移植手術当日から移植手術３０日後まで投与できる。特定の実施形態では、コルチコステロイドは、移植手術当日及び移植手術２～７日後に投与される。特定の実施形態では、患者に投与されるコルチコステロイドの用量は、移植当日から移植１ヶ月後まで減量される。

【0225】

ある実施形態では、単回用量のコルチコステロイドが投与され得る。ある実施形態では、複数回用量のコルチコステロイドが投与され得る。ある実施形態では、一定用量のコルチコステロイドが投与され得る。ある実施形態では、コルチコステロイドパルスが投与され得る。ある実施形態では、テーパリング過程のコルチコステロイドが投与され得る。ある実施形態では、一定用量のコルチコステロイド後、コルチコステロイドのテーパリング過程が投与され得る。ある実施形態では、一定用量のコルチコステロイドが、コルチコステロイドパルス、及びコルチコステロイドのテーパリング過程と共に投与され得る。

【0226】

ある実施形態では、コルチコステロイドは、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．７ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．２ｍｇ／ｋｇ、２．３ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、２．６ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、２．８ｍｇ／ｋｇ、２．９ｍｇ／ｋｇ、または３．０ｍｇ／ｋｇの用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、ステロイドは、２ｍｇ／ｋｇの用量で、対象に投与され得る。

【0227】

ある実施形態では、コルチコステロイドは、１００ｍｇ／回、２００ｍｇ／回、３００ｍｇ／回、４００ｍｇ／回、５００ｍｇ／回、６００ｍｇ／回、７００ｍｇ／回、８００ｍｇ／回、９００ｍｇ／回、または１０００ｍｇ／回のパルス用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、コルチコステロイドは、５００ｍｇ／回のパルス用量で投与することができる。ある実施形態では、コルチコステロイドパルスは、移植当日、移植１日後、移植２日後、移植３日後、移植４日後、移植５日後、移植６日後、移植７日後、移植８日後、移植９日後、移植１０日後、移植１１日後、移植１２日後、移植１３日後、移植１４日後、移植１５日後、移植当日及び１日及び２日後、移植３日後及び４日後及び５日後、移植６日後及び７日後及び８日後、移植９日後及び１０日後及び１１日後、移植１０日後及び１１日後及び１２日後、移植１１日後及び１２日後及び１３日後、または移植１３日後及び１４日後及び１５日後に投与することができる。特定の実施形態では、コルチコステロイドパルスは、移植当日に投与される。特定の実施形態では、コルチコステロイドパルスは、移植１０日後及び１１日後及び１２日後に投与される。

【0228】

ある実施形態では、ステロイドは、一定用量で、対象に投与することができる。一定用量が投与される期間は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、または１０日であり得る。ある実施形態では、対象に投与されるコルチコステロイドは、テーパリングして、中止することができる。ある実施形態では、このテーパリング過程は、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、または３０日かけて行うことができる。特定の実施形態では、テーパリング過程は、１０日かけて行うことができる。特定の実施形態では、テーパリング過程は、２０日かけて行うことができる。

【0229】

ある実施形態では、テーパリング過程では、対象に投与されるコルチコステロイドを０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、０．０２ｍｇ／ｋｇ／日、０．０３ｍｇ／ｋｇ／日、０．０４ｍｇ／ｋｇ／日、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日、０．０６ｍｇ／ｋｇ／日、０．０７ｍｇ／ｋｇ／日、０．０８ｍｇ／ｋｇ／日、０．０９ｍｇ／ｋｇ／日、０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．２ｍｇ／ｋｇ／日、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、０．４ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．６ｍｇ／ｋｇ／日、０．７ｍｇ／ｋｇ／日、０．８ｍｇ／ｋｇ／日、０．９ｍｇ／ｋｇ／日、１．０ｍｇ／ｋｇ／日、１．１ｍｇ／ｋｇ／日、１．２ｍｇ／ｋｇ／日、１．３ｍｇ／ｋｇ／日、１．４ｍｇ／ｋｇ／日、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、１．６ｍｇ／ｋｇ／日、１．７ｍｇ／ｋｇ／日、１．８ｍｇ／ｋｇ／日、１．９ｍｇ／ｋｇ／日、または２．０ｍｇ／ｋｇ／日減少させることができる。

【0230】

例示的なステロイド投与レジメンは、対象に以下の用量を投与することを含む：（ｉ）移植手術当日に１０００ｍｇのメチルプレドニゾロンを静脈内投与；（ｉｉ）移植手術２日後に２５０ｍｇのステロイドを経口投与；（ｉｉｉ）移植手術３日後に１２５ｍｇのステロイドを経口投与；（ｉｖ）移植手術４日後に７５ｍｇのステロイドを経口投与；及び（ｖ）移植手術５～７日後にそれぞれ６０ｍｇのステロイドを経口投与；及び（ｖｉ）移植手術７日後から１ヶ月まで１日１回２０ｍｇのステロイドを経口投与。

【0231】

ある実施形態では、コルチコステロイドは、皮下、静脈内、血管内、局所、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口、眼窩内、吸入による、経皮、腹腔内、またはレシピエントによるコルチコステロイドの適切な作用を可能にする投与経路によるなど、当技術分野で知られている適当な方法で対象に投与することができる。特定の実施形態では、コルチコステロイドは、経口投与され得る。特定の実施形態では、コルチコステロイドは、静脈内投与され得る。

【0232】

本明細書に記載の方法で使用され得るステロイドの例としては、Ｄｅｌｔｉｓｏｎ（登録商標）、Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ ＥＱＬ Ｐｈａｒｍａ、及びＰｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎ Ａｌｔｅｒｎｏｖａが挙げられる。

【0233】

特定の実施形態では、コルチコステロイドは、プレドニゾンである。特定の実施形態では、コルチコステロイドパルスは、メチルプレドニゾンである。ある実施形態では、コルチコステロイドの投与は、本明細書に記載のとおり変更することができる。いくつかの実施形態では、ステロイドは、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、ステロイドは、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、ステロイドは、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。

【0234】

５．３．１３ シクロスポリン
シクロスポリン（ＣｙＡ）は、対象における免疫関連免疫障害または疾患を治療または予防するために含めることができる。シクロスポリン（ＣｙＡ）は、レシピエントにおいて、免疫系を抑制し、移植片対宿主病の発症を阻害するために、術後治療レジメンに含めることができる。治療レジメンは、対象へのＣｙＡ投与の一定の過程後にテーパリング過程を含むことができる。ある実施形態では、シクロスポリンは、本明細書で提供される方法において、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）の代わりに使用することができる。いくつかの実施形態では、シクロスポリンは、カルシニューリン阻害剤で有害事象を経験した対象に使用され得る。特定の実施形態では、シクロスポリンは、タクロリムス関連有害事象を経験した対象に使用され得る。

【0235】

ある実施形態では、本明細書で提供される術後治療レジメンは、ＣｙＡを移植レシピエントに投与することを含む。ある実施形態では、ＣｙＡは、移植当日、移植手術１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後、３０日後、１ヶ月後、２ヶ月後、３ヶ月後、４ヶ月後、５ヶ月後、６ヶ月後、７ヶ月後、８ヶ月後、９ヶ月後、１０ヶ月後、１１ヶ月後、１２ヶ月後、１３ヶ月後、１４ヶ月後、１５ヶ月後、１６ヶ月後、１７ヶ月後、または１８ヶ月後に投与され得る。

【0236】

ある実施形態では、単回用量のＣｙＡを投与することができる。ある実施形態では、複数回用量のＣｙＡを投与することができる。ある実施形態では、一定用量のＣｙＡが投与され得る。ある実施形態では、テーパリング過程のＣｙＡが投与され得る。ある実施形態では、一定用量のＣｙＡ後、テーパリング過程のＣｙＡが投与され得る。

【0237】

ある実施形態では、ＣｙＡは、２ｍｇ／ｋｇ／日、２．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日、３．５ｍｇ／ｋｇ／日、４ｍｇ／ｋｇ／日、４．５ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、５．５ｍｇ／ｋｇ／日、６ｍｇ／ｋｇ／日、６．５ｍｇ／ｋｇ／日、７ｍｇ／ｋｇ／日、７．５ｍｇ／ｋｇ／日、８ｍｇ／ｋｇ／日、８．５ｍｇ／ｋｇ／日、９ｍｇ／ｋｇ／日、９．５ｍｇ／ｋｇ／日、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１０．５ｍｇ／ｋｇ／日、１１ｍｇ／ｋｇ／日、１１．５ｍｇ／ｋｇ／日、１２ｍｇ／ｋｇ／日、１２．５ｍｇ／ｋｇ／日、１３ｍｇ／ｋｇ／日、１３．５ｍｇ／ｋｇ／日、１４ｍｇ／ｋｇ／日、１４．５ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日、１５．５ｍｇ／ｋｇ／日、１６ｍｇ／ｋｇ／日、１６．５ｍｇ／ｋｇ／日、１７ｍｇ／ｋｇ／日、１７．５ｍｇ／ｋｇ／日、１８ｍｇ／ｋｇ／日、２～６ｍｇ／ｋｇ／日、３～７ｍｇ／ｋｇ／日、４～８ｍｇ／ｋｇ／日、５～９ｍｇ／ｋｇ／日、６～１０ｍｇ／ｋｇ／日、７～１１ｍｇ／ｋｇ／日、８～１２ｍｇ／ｋｇ／日、９～１３ｍｇ／ｋｇ／日、１０～１４ｍｇ／ｋｇ／日、１１～１５ｍｇ／ｋｇ／日、１２～１６ｍｇ／ｋｇ／日、１３～１７ｍｇ／ｋｇ／日、または１４～１８ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、対象に投与され得る。特定の実施形態では、ＣｙＡは、８ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣｙＡは、９ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣｙＡは、１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣｙＡは、１１ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣｙＡは、１２ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣｙＡは、８～１２ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲で、対象に投与することができる。

【0238】

ある実施形態では、ＣｙＡは、１００～２００ｎｇ／ｍｌ、１２５～２２５ｎｇ／ｍｌ、１５０～２５０ｎｇ／ｍｌ、１７５～２７５ｎｇ／ｍｌ、２００～３００ｎｇ／ｍｌ、２２５～３２５ｎｇ／ｍｌ、２５０～３５０ｎｇ／ｍｌ、２７５～３７５ｎｇ／ｍｌ、３００～４００ｎｇ／ｍｌ、３２５～４２５ｎｇ／ｍｌ、３５０～４５０ｎｇ／ｍｌ、３７５～４７５ｎｇ／ｍｌ、または４００～５００ｎｇ／ｍｌの目標血中トラフ濃度を得るのに十分な用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、目標血中トラフ濃度は、２５０～３５０ｎｇ／ｍｌであり得る。

【0239】

ある実施形態では、ＣｙＡは、一定用量で、対象に投与することができる。一定用量が投与される期間は、（例えば、移植後）１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、または３０日であり得る。ある実施形態では、ＣｙＡは、中止するまでテーパリングされ得る。ある実施形態では、このテーパリング過程は、対象が免疫関連疾患または障害と診断された後、対象が抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤での治療を開始後、または臓器もしくは組織の移植後、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、または１８ヶ月にわたって行うことができる。

【0240】

ある実施形態では、ＣｙＡは、皮下、静脈内、血管内、局所、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口、眼窩内、吸入による、経皮、腹腔内、または対象によるＣｙＡの適切な作用を可能にする投与経路によるなど、当技術分野で知られている適当な方法で対象に投与することができる。特定の実施形態では、ＣｙＡは、経口投与され得る。特定の実施形態では、ＣｙＡは、静脈内投与され得る。

【0241】

ある実施形態では、ＣｙＡの代わりに代替化合物を使用することができる。これらの化合物としては、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標）、Ａｄｐｏｒｔ（登録商標）、Ａｄｖａｇｒａｆ（登録商標）、Ｅｎｖａｒｓｕｓ（登録商標）、Ｍｏｄｉｇｒａｆ（登録商標）、Ａｓｔａｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス、及びエベロリムスを挙げることができる。いくつかの実施形態では、シクロスポリンは、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、シクロスポリンは、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、シクロスポリンは、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。

【0242】

代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法

【0243】

いくつかの態様では、本明細書で提供される治療方法は、標準治療の代謝拮抗療法を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、標準治療の代謝拮抗療法は、ミコフェノール酸である。ミコフェノール酸は、本明細書で使用される場合、対象において、免疫系を抑制し、移植片対宿主病の発症を阻害するために、本明細書で提供される治療方法に含めることができる。ミコフェノール酸の商品名としては、ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）、ミコフェノール酸モフェチルＡｃｃｏｒｄ、ミコフェノール酸モフェチルＳａｎｄｏｚ、Ｍｙｆｅｎａｘ、Ｍｙｆｏｒｔｉｃ、ミコフェノール酸モフェチルＡｃｔａｖｉｓ、ミコフェノール酸Ａｃｃｏｒｄ、ミコフェノール酸モフェチル２ｃａｒｅ４、ミコフェノール酸モフェチルＥＱＬ、ミコフェノール酸モフェチルオリファーム、及びＭｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標）ミコフェノール酸を挙げることができる。治療レジメンは、対象へのミコフェノール酸の投与の一定の過程後にテーパリング過程を含むことができる。

【0244】

ある実施形態では、本明細書で提供される術後治療レジメンは、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法を移植レシピエントに投与することを含む。特定の実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法が、移植された肝臓の再灌流２４時間以内に最初にレシピエントに投与される。ある実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法は、移植当日、移植手術１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後、３０日後、１ヶ月後、２ヶ月後、３ヶ月後、４ヶ月後、５ヶ月後、６ヶ月後、７ヶ月後、８ヶ月後、９ヶ月後、１０ヶ月後、１１ヶ月後、１２ヶ月後、１３ヶ月後、１４ヶ月後、１５ヶ月後、１６ヶ月後、１７ヶ月後、または１８ヶ月後に投与され得る。

【0245】

ある実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法の単回用量を投与することができる。ある実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法の複数回用量を投与することができる。ある実施形態では、一定用量の標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法を投与することができる。ある実施形態では、テーパリング過程の標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法を投与することができる。ある実施形態では、一定用量の標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法、その後テーパリング過程の標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法を投与することができる。ある実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法は、１日２回投与される。

【0246】

ある実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法を、１日総用量１００ｍｇ／回、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、１８００ｍｇ、１９００ｍｇ、２０００ｍｇ、２１００ｍｇ、２２００ｍｇ、２３００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、１００～１０００ｍｇ、２００～１２００ｍｇ、３００～１３００ｍｇ、４００～１４００ｍｇ、５００～１５００ｍｇ、６００～１６００ｍｇ、７００～１７００ｍｇ、８００～１８００ｍｇ、９００～１９００ｍｇ、１０００～２０００ｍｇ、１１００～２１００ｍｇ、１２００～２２００ｍｇ、１３００～２３００ｍｇ、１４００～２４００ｍｇ、または１５００～２５００ｍｇで対象に投与することができる。１日総用量は、１、２、３、４回／日またはそれ以上の回数で投与され得る。特定の実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法が、５００～１５００ｍｇ／日の用量範囲で、１日２回対象に投与される。特定の実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法が、２５０～７５０ｍｇ／日の用量範囲で、１日２回対象に投与される。特定の実施形態では、ｍｙｆｏｒｔｉｃが、１日総用量約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、または約２０００ｍｇで、対象に投与される。特定の実施形態では、ｍｙｆｏｒｔｉｃは、１日総用量約１４４０ｍｇで、対象に投与される。

【0247】

ある実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法を一定用量で、対象に投与することができる。一定用量が投与される期間は、対象が免疫関連疾患または障害と診断された後、対象が抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤での治療を開始後、または臓器もしくは組織の移植後、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、または３０日であり得る。ある実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法が対象に投与され、テーパリングして中止することができる。ある実施形態では、このテーパリング過程は、対象が免疫関連疾患または障害と診断された後、対象が抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤での治療を開始後、または臓器もしくは組織の移植後、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、または６ヶ月にわたって行うことができる。

【0248】

ある実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法は、皮下、静脈内、血管内、局所、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口、眼窩内、吸入による、経皮、腹腔内、または対象による標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法の適切な作用を可能にする投与経路によるなど、当技術分野で知られている適当な方法で対象に投与することができる。特定の実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法は、経口投与され得る。特定の実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法は、静脈内投与され得る。ある実施形態では、標準治療の代謝拮抗剤（例えば、ミコフェノール酸）療法の投与は、本明細書に記載のように変更することができる。

【0249】

いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。

【0250】

５．３．１４ ｍＴＯＲ阻害剤
ある実施形態では、本明細書に記載の方法は、対象にｍＴＯＲ阻害剤を投与することをさらに含む。理論に拘束されるものではないが、ｍＴＯＲ阻害剤を対象に投与して、Ｔ細胞及びＢ細胞の活性化を阻害し、対象における免疫関連障害または疾患を治療または予防する、例えば、移植拒絶反応を予防することができる。ある実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）と組み合わせて使用することができ、またはカルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）の代わりに使用することができる。特定の実施形態では、本明細書に提示される方法に記載されるｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシンまたはエベロリムスであり得る。いくつかの実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、本明細書で提供される方法において、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムス）の代わりに使用され得る。いくつかの実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、カルシニューリン阻害剤で有害事象を経験した対象に使用され得る。特定の実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、タクロリムス関連有害事象を経験した対象に使用され得る。

【0251】

ある実施形態では、本明細書で提供される術後レジメンは、移植後にラパマイシンを移植レシピエントに投与することを含む。ある実施形態では、ラパマイシンは、１日１回投与される。ある実施形態では、ラパマイシンの投与は、対象が免疫関連疾患または障害と診断された後、対象が抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤での治療を開始後、または臓器もしくは組織の移植後に、移植直後、１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後、または３０日後に開始し得る。ある実施形態では、ラパマイシンは、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、または少なくとも１２ヶ月の間投与される。ある実施形態では、ラパマイシンは、１日１回、２回、３回、４回、または５回の用量で投与される。

【0252】

ある実施形態では、ラパマイシンの初回用量は、負荷用量であり、その後の１日量より多くなり得る。ある実施形態では、初回用量は、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１～４ｍｇ／ｋｇ、２～６ｍｇ／ｋｇ、４～８ｍｇ／ｋｇ、６～１０ｍｇ／ｋｇ、または８～１２ｍｇ／ｋｇであり得る。ある実施形態では、１日量は、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、１～３ｍｇ／ｋｇ、または１．５～２．５ｍｇ／ｋｇであり得る。特定の実施形態では、ラパマイシンは、初回用量６ｍｇ／ｋｇ、その後、１日量２ｍｇ／ｋｇで投与される。特定の実施形態では、ラパマイシンは、経口投与される。

【0253】

ある実施形態では、ラパマイシンは、１～５ｎｇ／ｍｌ、２～１０ｎｇ／ｍｌ、４～１２ｎｇ／ｍｌ、６～１４ｎｇ／ｍｌ、８～１６ｎｇ／ｍｌ、１０～１８ｎｇ／ｍｌ、１２～２０ｎｇ／ｍｌ、１４～２２ｎｇ／ｍｌ、または１６～２４ｎｇ／ｍｌの目標全血レベルを得るのに十分な用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、目標全血レベルは、４～１２ｎｇ／ｍｌであり得る。

【0254】

ある実施形態では、ラパマイシンは、皮下、静脈内、血管内、局所、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口、眼窩内、吸入による、経皮、腹腔内、またはラパマイシンの適切な作用が対象内で生じ得るようにする投与経路によるなど、当技術分野で知られている適当な方法で対象に投与することができる。特定の実施形態では、ラパマイシンは、経口投与される。

【0255】

ある実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムスである。ある実施形態では、エベロリムスは、１日２回投与される。ある実施形態では、エベロリムスの投与は、対象が免疫関連疾患または障害と診断された後、対象が抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤での治療を開始後、または臓器もしくは組織の移植後に、移植直後、１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後、または３０日後に開始し得る。ある実施形態では、エベロリムスは、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、または少なくとも１２ヶ月の間投与される。

【0256】

ある実施形態では、投与されるエベロリムスの用量範囲は、０．２５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５ｍｇ／ｋｇ／回、０．７５ｍｇ／ｋｇ／回、１．０ｍｇ／ｋｇ／回、１．２５ｍｇ／ｋｇ／回、１．５ｍｇ／ｋｇ／回、１．７５ｍｇ／ｋｇ／回、２．０ｍｇ／ｋｇ／回、０．２５～０．５ｍｇ／ｋｇ／回、０．５～０．７５ｍｇ／ｋｇ／回、０．７５～１．０ｍｇ／ｋｇ／回、１．０～１．２５ｍｇ／ｋｇ／回、１．２５～１．５０ｍｇ／ｋｇ／回、１．５０～１．７５ｍｇ／ｋｇ／回、または１．７５～２．０ｍｇ／ｋｇ／回であり得る。特定の実施形態では、エベロリムスは、０．７５～１．０ｍｇ／ｋｇ／回の用量範囲で１日２回投与される。特定の実施形態では、エベロリムスは、経口投与される。

【0257】

ある実施形態では、エベロリムスは、０．１～５ｎｇ／ｍｌ、１～６ｎｇ／ｍｌ、２～７ｎｇ／ｍｌ、３～８ｎｇ／ｍｌ、４～９ｎｇ／ｍｌ、５～１０ｎｇ／ｍｌ、６～１１ｎｇ／ｍｌ、７～１２ｎｇ／ｍｌ、または８～１３ｎｇ／ｍｌの目標全血レベルを得るのに十分な用量で、対象に投与することができる。特定の実施形態では、目標全血レベルは３～８ｎｇ／ｍｌであり得る。

【0258】

ある実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、テムシロリムス、エベロリムス、シロリムス（ラパマイシン）、リダフォロリムス、非ラパマイシンアナログｍＴＯＲ阻害化合物、例えば、これらに限定されないが、ＬＹ２９４００２、ワートマニン、ケルセチン、ミリセンチン、スタウロスポリン、またはＡＴＰ競合阻害剤であり得る。いくつかの実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される前、間、または後に投与される。いくつかの実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、ＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤が対象に投与される前、間、または後に投与される。

【0259】

５．４ 医薬組成物
本明細書中で提供されるのは、薬学的有効量の本明細書に記載のＣＤ２結合分子を含む医薬組成物である。薬学的有効量の本明細書に記載の抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を含む医薬組成物もまた、本明細書において提供される。ある実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、皮下、静脈内、血管内、局所、関節内、動脈内、頭蓋内、筋肉内、経口、眼窩内、吸入、腹腔内、骨内、気管内、舌下、頬側、直腸、皮内、髄腔内、骨髄内、または経皮投与経路のために製剤化され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子を含む組成物は、静脈内投与用に製剤化される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子を含む組成物は、皮下投与用に製剤化される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を含む組成物は、静脈内投与用に製剤化される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を含む組成物は、皮下投与用に製剤化される。

【0260】

ある実施形態では、静脈内投与または皮下投与用に製剤化された組成物は、溶液、懸濁液、またはエマルジョンであり得る。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子は、本明細書に記載のＣＤ２結合分子を薬学的に適切なビヒクルと組み合わせることにより、静脈内投与または皮下投与用に製剤化され得る。ある実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、本明細書に記載の抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を薬学的に適切なビヒクル組み合わせることにより、静脈内投与または皮下投与用に製剤化され得る。ある実施形態では、使用されるビヒクルは、これらに限定されないが、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、グリセロール、エタノール、１～１０％のヒト血清アルブミン、５％デキストロース含有水、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ＴＷＥＥＮ８０、ＴＷＥＥＮ２０、ポリオキシル－３５ヒマシ油、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、カプリロカプロイルマクロゴール－８－グリセリド、大豆油、ポリオキシエチル化オレイン酸グリセリド、及び中鎖モノ及びジグリセリドであり得る。ある実施形態では、リポソーム及び固定油などの非水性ビヒクルも、本明細書に記載のＣＤ２結合分子を投与するために使用することができる。ある実施形態では、リポソーム及び固定油などの非水性ビヒクルも、本明細書に記載の抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片、及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を投与するために使用することができる。

【0261】

ある実施形態では、ビヒクルは、等張性を維持する添加剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）を含むことができる。ある実施形態では、ビヒクルは、化学的安定性を維持するために添加剤を含むことができる。これらの添加剤としては、これらに限定されないが、緩衝剤（例えば、マレイン酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、酢酸、炭酸水素ナトリウム、及びリン酸ナトリウム）、及び保存剤（例えば、洗浄剤、酸化剤、及びイオン系緩衝剤）を挙げることができる。得られた医薬製剤は、既知のまたは好適な技術によって滅菌される。

【0262】

ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子を含む組成物の静脈内投与は、ボーラス注射、緩徐な静脈内注射、または連続静脈内注入として投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２結合分子を含む組成物の皮下投与は、ボーラス注射として投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を含む組成物の静脈内投与は、ボーラス注射、緩徐な静脈内注射、または連続静脈内注入として投与することができる。ある実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を含む組成物の皮下投与は、ボーラス注射として投与することができる。

【0263】

５．５ キット
本発明で提供するのは、本明細書に記載されている医薬組成物が１つ以上の容器に入ったものを含むキットである。本明細書に提供されるのは、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤、またはその組成物、及び任意により本明細書に記載の別の活性剤を含むキットである。いくつかの実施形態では、キットは、１つ以上の容器に入っている本明細書に記載の医薬組成物を含む。いくつかの実施形態では、キットは、本開示の少なくとも１つの抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片またはその組成物を含む。いくつかの実施形態では、キットは、本開示の１つ以上の抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片またはその組成物を同じまたは異なる容器中に含む。いくつかの実施形態では、キットは、本開示の少なくとも１つのＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を含む。いくつかの実施形態では、キットは、本開示の１つ以上のＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤またはその組成物を同じまたは異なる容器中に含む。いくつかの実施形態では、キットは、少なくとも１つの抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び少なくとも１つのＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を同じまたは異なる容器中に含む。いくつかの実施形態では、キットは、抗ＣＤ２抗体もしくはその抗原結合断片のライブラリ及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤のライブラリを含む。いくつかの実施形態では、キットは、別の活性剤または別の免疫抑制剤を含む。いくつかの実施形態では、キットは、対照抗体及び／または参照抗体を含む。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の化合物及び／または組成物を作製及び／または合成するための試薬及び／または指示書をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、キットは、１つ以上の緩衝液も含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、別の薬剤（例えば、別の活性剤）または第３の薬剤（例えば、セクション５．３の薬剤）を同じまたは異なる容器中に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤を含む容器は、単回投与または複数回投与のために提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤は、複数回の用量、使用、または投与に十分な量で、キット内の容器中に存在する。いくつかの実施形態では、キットは、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤の投与に必要な他の構成要素を含む（例えば、キットは、シリンジ、カテーテル、カニューレ、ポンプ、または任意の注射デバイスを含む）。ある実施形態では、本キットは、本明細書に記載の医薬組成物を投与するのに使用できるデバイスを含み、そのデバイスとしては、これらに限定されないが、シリンジ、針なし注射器、点滴バッグ、灌流ポンプ、ポンプ、パッチ及び吸入器が挙げられる。いくつかの実施形態では、キットは、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片及び／またはＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤のうちの１つ以上を保持する容器と同じまたは別の容器中に、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、及び／または緩衝液を含む。

【0264】

キットの構成要素は、別々の容器中にあってよく、または単一の容器中に組み合わせてあってもよい。いくつかの実施形態では、キット構成要素は、水性媒体、粉末形態、結晶形態、または凍結乾燥形態のいずれかでパッケージングされ得る。その中に医薬組成物をパッケージングできる容器としては、これらに限定されないが、ボトル、袋、アンプル、チューブ、吸入器、バッグ、バイアル及び容器を挙げることができる。キットの容器手段は、バイアル、試験管、フラスコ、ボトル、針なし注射器、点滴バッグ、灌流ポンプ、ポンプ、パッチ、吸入器、アンプル、シリンジ、または他の容器手段のうちの少なくとも１つを含むことができ、この中に構成要素が配置され得る。いくつかの実施形態では、構成要素は、好適に等分される。２つ以上のキット構成要素がある場合、試薬及び対応するラベルを一緒にパッケージ化できる。いくつかの実施形態では、キットは、追加の構成要素を別々に配置させ得る第２、第３、または他の追加の容器を含む。いくつかの実施形態では、キットは、滅菌された薬学的に許容される緩衝液及び／または他の希釈剤を含むための第２の容器手段を含む。いくつかの実施形態では、構成要素の様々な組み合わせが、１つ以上のバイアル中に含まれる。いくつかの実施形態では、キットは、商業販売のための本開示の抗体及び／または化合物及び／または組成物を厳重に収容するための手段を含む。そのような容器としては、所望のバイアルが保持される射出成形またはブロー成形プラスチック容器を挙げることができる。

【0265】

いくつかの実施形態では、キット構成要素は、１つ及び／または複数の液体溶液中で提供される。いくつかの実施形態では、液体溶液は、水溶液または滅菌水溶液である。いくつかの実施形態では、キット構成要素は、乾燥粉末（複数可）として提供される。試薬及び／または構成要素は、乾燥粉末として提供される場合、そのような粉末は、好適な体積の溶媒を加えることによって再構成させ得る。いくつかの実施形態では、溶媒は、別の容器手段で提供される。いくつかの実施形態では、標識色素は、乾燥粉末として提供される。いくつかの実施形態では、標識色素は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００マイクログラム、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００マイクログラム、または最大で約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００マイクログラムの量で提供される。いくつかの実施形態では、色素は、ＤＭＳＯなどの任意の好適な溶媒に再懸濁することができる。

【0266】

いくつかの実施形態では、キットには、キットの構成要素を使用するための指示書が含まれている。いくつかの実施形態では、キットは、投薬量、投与、適用、保存条件、キット構成要素のうちの１つ以上を使用することによって治療または予防することができる疾患のリスト、及び／または構成要素の使用に関連する指示書を含む。いくつかの実施形態では、指示書は、好適な記録媒体に記録される。例えば、指示書は、基材、例えば、紙、タグ（例えば接着タグ）、またはプラスチックなどに印刷することができる。いくつかの実施形態では、指示書は、添付文書としてキット内に存在するか、またはキットの容器または構成要素に取り付けられたラベル上に存在する。いくつかの実施形態では、指示書は、好適なコンピュータ可読記憶媒体、例えば、ＣＤ－ＲＯＭ、ディスケット、ＵＳＢ記憶デバイス、またはフラッシュドライブ上に存在する電子記憶データファイルとして提供される。いくつかの実施形態では、指示書は、キット中に存在しないが、例えばインターネットを介してリモートソースに存在する。

【0267】

５．６ 結果評価
本明細書に記載の方法の結果を評価する例示的な方法は、以下のセクションＥｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｏｕｒｃｅ ｎｏｔ ｆｏｕｎｄ．に記載されている。

【0268】

ある実施形態では、本明細書に記載の治療方法の有効性は、生体試料中の細胞増殖、Ｔ細胞活性化、ＣＤ２レベル、及び／または同種免疫応答によって評価できる。ある実施形態では、本明細書に記載の治療方法の有効性は、当業者に知られている任意の好適なアッセイまたは方法によって、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏヒトＴ細胞増殖アッセイまたは混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを使用することによって、評価することができる。

【0269】

ある実施形態では、本明細書に記載の治療方法の有効性は、移植された移植片（例えば、肝臓または腎臓）の生存を決定することによって評価することができる。ある実施形態では、移植された移植片（例えば、肝臓または腎臓）の生検を実施して、移植された臓器（例えば、肝臓または腎臓）の健康状態を検査し、寛容の誘導または移植片拒絶反応のエビデンスを決定することができる。組織生検は、通常の光学顕微鏡、免疫蛍光、及び電子顕微鏡を使用して調べることができる。

【0270】

ある実施形態では、本明細書に記載の治療方法の有効性は、レシピエントにおいて、治療された生検片で証明された急性拒絶反応（ｔＢＰＡＲ）を検出することによって決定することができる。特定の実施形態では、移植の１０ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２０ヶ月、２５ヶ月、３０ヶ月、３５ヶ月、４０ヶ月、４５ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、または６０ヶ月後に、レシピエントにおいてｔＢＰＡＲは検出されない。

【0271】

ある実施形態では、移植手術の結果の評価は、レシピエントにおける移植された臓器（例えば、肝臓または腎臓）の機能を監視することを含むことができる。例えば、本明細書に記載の治療方法の有効性は、移植の１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７．５ヶ月、９ヶ月、１０．５ヶ月、１２ヶ月、１３．５ヶ月、１５ヶ月、１６．５ヶ月、１８ヶ月、１９．５ヶ月、２１ヶ月、２２．５ヶ月、２４ヶ月、２７ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４２ヶ月、４８ヶ月、もしくは５４ヶ月後、または移植の１～５ヶ月、５～１０ヶ月、１０～１５ヶ月、１５～２０ヶ月、２０～２５ヶ月、２５～３０ヶ月、３０～３５ヶ月、３５～４０ヶ月、４０～４５ヶ月、４５～５０ヶ月、５０～５５ヶ月、もしくは５５～６０ヶ月後に臓器機能を測定することによって評価することができる。肝機能は、例えば、アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、血清ビリルビン、プロトロンビン時間（ＰＴ）、国際正規化比率（ＩＮＲ）及び／またはアルブミンの測定など、肝機能試験を実施することによって決定され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、正常な臓器機能（臓器機能検査によって決定される）を有するレシピエントとなる。特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、臓器移植後の標準治療を受けている患者と比較して、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、より良好な臓器機能（臓器機能検査によって決定される）を有するレシピエントとなる。

【0272】

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、ＡＬＴ値５～６０Ｕ／Ｌ、７～５５Ｕ／Ｌ、１０～５５Ｕ／Ｌ、１５～５０Ｕ／Ｌ、２０～４０Ｕ／Ｌまたは２５～３５Ｕ／Ｌを有するレシピエントとなる。

【0273】

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、ＡＳＴ値５～５０Ｕ／Ｌ、８～４８Ｕ／Ｌ、１０～４５Ｕ／Ｌ、１５～４０Ｕ／Ｌ、または２０～３０Ｕ／Ｌを有するレシピエントとなる。

【0274】

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、ＡＬＰ値３０～１５０Ｕ／Ｌ、４０～１２９Ｕ／Ｌ、５０～１２０Ｕ／Ｌ、６０～１１０Ｕ／Ｌ、７０～１００Ｕ／Ｌ、または８０～９０Ｕ／Ｌを有するレシピエントとなる。

【0275】

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、ＧＧＴ値５～７０Ｕ／Ｌ、８～６１Ｕ／Ｌ、１０～５０Ｕ／Ｌ、１５～４５Ｕ／Ｌ、２０～４０Ｕ／Ｌ、または２５～３５Ｕ／Ｌを有するレシピエントとなる。

【0276】

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、血清ビリルビン値０．０５～２ｍｇ／ｄＬ、０．１～１．５ｍｇ／ｄＬ、０．１～１．２ｍｇ／ｄＬ、０．５～１ｍｇ／ｄＬまたは０．７～１ｍｇ／ｄＬを有するレシピエントとなる。

【0277】

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、７～１５秒、８～１４秒、９～１３秒、９．４～１２．５秒、または１０～１２秒のＰＴを有するレシピエントとなる。

【0278】

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、アルブミン値２～６ｇ／ｄＬ、２．５～５．５ｇ／ｄＬ、３～５ｇ／Ｄｌ、３．５～５ｇ／ｄＬ、または４～４．５ｇ／ｄＬを有するレシピエントとなる。

【0279】

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、ＩＮＲ１～３、１．５～２．５、１．５～２または１．１以下を有するレシピエントとなる。

【0280】

例えば、本明細書に記載の治療方法の有効性は、移植後１０ヶ月、１５ヶ月、２０ヶ月、２５ヶ月、３０ヶ月、３５ヶ月、４０ヶ月、４５ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、または６０ヶ月の時点で腎機能を測定することによって評価され得る。腎機能は、例えば、血清クレアチニン及び／または糸球体濾過率を測定することによって決定され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法は、正常な腎機能（血清クレアチニン及び／または糸球体濾過率（ＧＦＲ）によって決定される）を有するレシピエントとなり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法は、肝移植後の標準治療を受けている患者と比較して、より良好な腎機能（血清クレアチニン及び／または糸球体濾過率によって決定される）を有するレシピエントとなり得る。

【0281】

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、血清クレアチニン値０．５～１．５ｍｇ／ｍＬ、０．６～１．４ｍｇ／ｍＬ、０．７～１．３ｍｇ／ｍＬ、０．８～１．２ｍｇ／ｍＬ、または０．９～１．１ｍｇ／ｍＬを有するレシピエントとなる。

【0282】

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２５ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３５ヶ月、少なくとも４０ヶ月、少なくとも４５ヶ月、少なくとも５０ヶ月、少なくとも５５ヶ月、または少なくとも６０ヶ月の間、ＧＦＲ４０～９０、４５～８５、５０～８０、５５～７５、６０～７０、または９０超を有するレシピエントとなる。

【0283】

ある実施形態では、移植手術の転帰の他の評価は、感染の発生、日和見感染の発生、任意の治療関連有害事象の発症、及び患者の移植後の生活の質を監視することを含み得る。ある実施形態では、本明細書に記載の治療方法の有効性は、免疫抑制療法に対するレシピエントの要件によって決定され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、移植後１０ヶ月、１５ヶ月、２０ヶ月、２５ヶ月、３０ヶ月、３５ヶ月、４０ヶ月、４５ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、または６０ヶ月以内に免疫抑制療法の要件が不要となる。

【0284】

ある実施形態では、ＥＬＩＳＡによって決定することができるレシピエントの血清中の循環ドナー特異的抗体（ＤＳＡ）の存在など、移植拒絶反応を予測するバイオマーカーを検出するために、機能アッセイを使用することができる。ある実施形態では、循環リンパ球に対するフローサイトメトリー分析を実施して、レシピエントの免疫系再構成の状態を決定することができる。ある実施形態では、レシピエントの末梢血単核細胞の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を実施して、ドナー細胞に対するレシピエントの細胞の応答を評価し、移植手術後に応答が変化するかを評価することができる。

【0285】

ある実施形態では、機能アッセイを使用して、移植臓器（例えば、肝臓または腎臓）に対する寛容の誘導が達成されたか否かを判定することができる。これらのアッセイには、制御性Ｔ細胞の存在の指標として、ＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞：ＣＤ４＋Ｔ細胞比を決定するためのフローサイトメトリー分析を含めることができる。

【0286】

５．７ 均等物及び参照による援用
本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。機能的に均等である変形は本発明の範囲内であることが理解されよう。実際、本明細書に示され、記載される修正に加えて、本発明の種々の修正が前述の説明及び添付の図面から当業者に明らかとなるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。当業者は、日常的な実験を使用して、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または確認することができるであろう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって網羅されることが意図される。この本明細書に記述される全ての刊行物、特許及び特許出願は、各個別の刊行物、特許、または特許出願が、明確かつ個別に参照によりその全体が組み込まれることが示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

【実施例】

【0287】

６．実施例
６．１ 方法
６．１．１ ＦｃγＲＩ、ＩＩ、及びＩＩＩの親和性に関するレポーターアッセイ：
Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）の親和性を決定するために、ＲＴ－ＣＤ２及びＲＨ－ＣＤ２の６倍段階希釈液を、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ－ＨまたはＦｃγＲＩＩＩＡ－Ｖ、及びルシフェラーゼレポーター遺伝子（Ｐｒｏｍｅｇａ）で安定にトランスフェクトしたレポーター細胞とインキュベートした。ルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現は、レポーター細胞がそれぞれのＦｃγＲを有する標的結合ＩｇＧ抗体のＦｃ断片に結合した場合にトリガーされた。レポーター細胞は、ヒトＪｕｒｋａｔ ＣＤ２^＋急性Ｔ細胞白血病細胞株由来であった。抗体は、レポーター細胞に対する親和性を有するため、アッセイ中で、標的及びレポーターとして作用し得る。シプリズマブ、ＣＤ２結合分子１、シプリズマブＦｃ断片またはＦａｂ断片を０．０００１～１０μｇ／ｍＬのいくつかの濃度で添加した。シプリズマブＦａｂまたはＦｃ断片は、製造業者の指示に従ってＦｒａｇＩＴキット（Ｇｅｎｏｖｉｓ）を使用して得て、それらを全ＩｇＧ同等物として添加した。３７℃及び５％ＣＯ_２で２３時間インキュベート後、Ｂｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、室温で１０～１５分のインキュベーション後に発光を測定し、Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴＸ Ｍｕｌｔｉ－ｍｏｄｅプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ）を使用して遮光した。発光値は、最も高い濃度の陽性対照で得られた発光シグナルに対して正規化した。各実施には、各抗体の３連段階希釈を含めた。

【0288】

６．１．２ フローサイトメトリーに基づく補体活性化アッセイ：
補体依存性細胞溶解（ＣＤＣ）の評価のために、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心法により単離されたＰＢＭＣを、シプリズマブまたはＣＤ２結合分子を含む１０％超低ＩｇＧＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含むＰＢＳの１０倍段階希釈液と、室温で振盪しながらインキュベートした。その後、等量の再構成ウサギ補体（ＩｎｎｏＴｒａｉｎ）を添加し、振盪しながら室温で６０分間インキュベートした。ＰＢＭＣをＰＢＳで洗浄し、７－ＡＡＤ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、抗ＣＤ５６ ＢＶ４２１（ＢＤ、クローンＮＣＡＭ１６．２）、抗ＣＤ８９ ＰＥ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、クローンＲＥＡ２３４）、抗ＣＤ３ ＡＰＣ及び抗ＣＤ１９ ＡＰＣ－Ｈ７（ＢＤ；クローンＳＪ２５Ｃ１）で染色した。サンプルを氷上でインキュベートし、ＦＡＣＳＶｅｒｓｅフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、サンプルを取得するまで遮光した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ，Ａｓｈｌａｎｄ）及びＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）をサンプル処理及びデータ分析のために使用した。

【0289】

６．１．３ 混合リンパ球反応（ＭＬＲ）：
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、バフィーコートからＦｉｃｏｌｌ（登録商標）Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）密度勾配遠心分離によって単離した。バフィーコートは、Ｕｐｐｓａｌａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ血液バンクを通じて健康なドナーから得て、ＰＢＭＣ単離は、採血の２４時間以内に行った。

【0290】

２名のドナーからのＰＢＭＣをＰＢＳ中濃度１．５＊１０^７細胞／ｍＬで混合し、製造業者の指示に従って、ｖｉｏｌｅｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｄｙｅ ４５０（ＶＰＤ４５０；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。その後、染色されたＰＢＭＣを洗浄し、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ－１６４０（ＡＴＣＣ改変；Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁し、ストレプトマイシン及びペニシリンそれぞれ５０ＩＵ／ｍＬを補充した。再懸濁したＰＢＭＣを丸底９６ウェル組織培養液に分注し、純粋な培地（未処理対照）、シプリズマブ、ＣＤ２結合分子１、またはシプリズマブＦａｂ断片（０．０１～５０μｇ／ｍＬ）（細胞培養培地で希釈）を最終濃度２＊１０^６細胞／ｍＬまで添加した（最終体積２００μＬ；各条件につき４連）。次に、ＰＢＭＣ培養物を３７℃、５％Ｏ_２９５％ＣＯ_２で最大７日間インキュベートした。ＮＫ細胞実験では、濃度１０μｇ／ｍＬを使用した。活性化、増殖及び免疫調節については、濃度０．０１、０．１、１、１０、及び５０μｇ／ｍＬを使用した。

【0291】

６．１．４ ＮＫ細胞の分析：
ＮＫ細胞活性化の分析を目的としたサンプルは、抗ＣＤ１６ ＦＩＴＣ（クローン３Ｇ８）、抗ＣＤ５６ ＰＥ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ；クローンＲＥＡ１９６）、抗ＣＤ３ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（クローンＳＰ３４－２）、抗ＣＤ６９ ＡＰＣ（クローンＦＮ５０）及び抗ＣＤ１４ ＡＰＣ－Ｈ７（クローンＭφＰ－９）で染色した。

【0292】

サンプルは、４℃で３０分間遮光して染色した。特に明記していない限り、すべての抗体は、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。染色後、３レーザーセットアップ（４０５ｎｍ、４８８ｎｍ、６４０ｎｍ）のＦＡＣＳＶｅｒｓｅフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、サンプルを得た。サンプルは、ベースライン（０日目）及び１、２、４日目にフローサイトメトリーによって表現型を決定した。細胞増殖は、ＶＰＤ４５０（ＶＰＤ４５０^ｈｉｇｈ：非増殖；ＶＰＤ４５０_ｌｏｗ：増殖）を使用して評価した。ＮＫ細胞は、ＣＤ３－ＣＤ１４－ＣＤ５６＋及び／またはＣＤ１６＋リンパ球として同定した。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ）を使用して、取得後編集及びデータ分析を実施した。

【0293】

６．１．５ 活性化、増殖、及び免疫調節の分析：
ＰＢＭＣの単離及び双方向ＭＬＲのセットアップは、上記に詳述のとおり実施した。採取は、７日後に行った。細胞は、抗ＣＤ４ ＦＩＴＣ、抗ＣＤ１２７ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５及び抗ＣＤ２５ ＰＥで表面染色し、次いで、抗ＦｏｘＰ３ Ａｌｅｘａ ６４７（クローン２３６Ａ／Ｅ７）で染色するために、製造業者の指示に従って、ＦｏｘＰ３染色キット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、固定し、透過処理した。細胞増殖は、ＶＤＰ４５０（ＶＤＰ４５０^ｈｉｇｈ：非増殖；ＶＰＤ４５０_ｌｏｗ：増殖）を使用して評価した。制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、ＣＤ４＋、ＣＤ１２７_ｌｏｗ、ＣＤ２５^ｈｉｇｈ及びＦｏｘＰ３＋として同定した。活性化された細胞は、ＣＤ４＋及びＣＤ２５^ｈｉｇｈとして同定した。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ）を使用して、取得後編集及びデータ分析を実施した。

【0294】

６．１．６ Ｆｃサイレント抗ＣＤ２抗体の生成
シプリズマブ（ヒト化抗ＣＤ２ ＩｇＧ１κ）は、治験薬であり、製造業者（ＩＴＢ－Ｍｅｄ，Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ，Ｓｗｅｄｅｎ）から提供された。ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）は、製造業者の指示に従って（Ｇｅｎｏｖｉｓ ＡＢ，Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）、ＧｌｙｃＩＮＡＴＯＲ（登録商標）（ＥｎｄｏＳ２；Ｇｅｎｏｖｉｓ ＃Ａ０－ＧＬ１－０２０）を使用して産生した。

【0295】

Ｆｃサイレント（ＦｃＳ）抗ＣＤ２ ｍＡｂは、シプリズマブまたは標準ＩｇＧ２／ＩｇＧ４フレームワークの配列へのアミノ酸置換の導入によって生成した。すべてのＦｃサイレント抗体は、同一の軽鎖及び相補性決定領域を有し、Ｗｕｘｉ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｗｕｘｉ，Ｃｈｉｎａ）によって産生された。各抗体の遺伝子配列をプラスミドにクローニング後、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ－Ｋ１）細胞での一時的なトランスフェクション及び産生を行った。抗ＣＤ２ ｍＡｂは、プロテインＡ及びＩＥＸ／ＳＥＣカラムを使用して、少なくとも９５％の純度及び１ＥＵ／ｍｇ未満のエンドトキシンレベルまで精製した。Ｆｃサイレントシプリズマブ（ＣＤ２結合分子２；ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ１）は、一般的に知られているＬＡＬＡ－ＰＧ変異をシプリズマブ中の同等の部位に導入することによって生成した（Ａｒｄｕｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１７，Ｌｏ ｅｔ ａｌ．２０１７）。ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ２（ＣＤ２結合分子３）は、次の変異を標準的ＩｇＧ２フレームワーク中の同等の部位に導入することによって生成した：Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１８）。ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ４（ＣＤ２結合分子４）は、次の変異を標準的なＩｇＧ４フレームワークの同等の部位に導入することによって生成した：Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３２９Ｇ（Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｓｃｈｌｏｔｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１６）。

【0296】

６．１．７ 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ＣＤ２結合
相互作用実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置（Ｃｙｔｉｖａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して実施した。ＩｇＧは、ｐＨ７．４の１０ｍＭ ＨＥＰＥＳバッファー、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０ランニングバッファーを用いて、標準的なアミンカップリング及びＣＭ５バイオセンサーチップ（Ｃｙｔｉｖａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて、２００～１３００ＲＵの表面密度に固定化した。各抗体は、少なくとも２回固定化した。

【0297】

すべての相互作用実験は、２５℃で実施した。組換え短縮型ヒトＣＤ２（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）を２倍希釈系列で希釈し、最高濃度を５ｎＭとし、固定化ＩｇＧに１８０秒間注入した。１５分間の解離後、１０ｍＭグリシンｐＨ１．７を３０秒間注入してセンサーチップを再生成した。データ分析の前に、参照表面及びブランク注入からのセンサーグラムを生データから差し引いた。Ｔ２００評価ソフトウェアｖ３．０（Ｃｙｔｉｖａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して、２状態（誘導適合）相互作用モデルをデータに適合させ、速度定数及び親和性を決定した。

【0298】

６．１．８ ＳＰＲ ＦｃγＲ結合
組換え短縮型ヒトＣＤ２（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）は、ＣＭ５バイオセンサーチップ（Ｃｙｔｉｖａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）へのアミンカップリングによって共有結合により固定化した。ＩｇＧは、アミン連結ＣＤ２に捕捉させた。すべての実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（商標）装置（Ｃｙｔｉｖａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して２５℃で実施した。化合物相互作用の特性評価は、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む、ｐＨ７．４の１０ｍＭ ＨＥＰＥＳバッファーで行った。Ｆｃγ受容体（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ ＵＳＡ）を、ＣＤ２捕捉ＩｇＧに対して０．５μＭまでの一連の濃度で、複数サイクルまたは単サイクル実験で１２０秒間注入した。ＦｃγＲＩＩＡのＲ１３１アイソフォーム及びＦｃγＲＩＩＩＡのＶ１７６アイソフォームをすべての実験に使用した。ＣＤ２表面は、５０ｍＭ ＮａＯＨを１２０秒間注入することによって再生した。センサーグラムは、グローバル分析の前に、１：１相互作用モデルまたは異種結合モデルを使用して、二重参照させた（参照表面、ブランク）。高速解離を伴う弱い相互作用の場合、親和性は、ラングミュア等温線及び線形項（非特異的相互作用を補償する）の和を使用した定常状態分析によって決定した。動力学的パラメーターは、２～３回の反復実験シリーズに基づく平均値として決定した。

【0299】

６．１．９ 細胞ベースのＦｃγＲシグナル伝達アッセイ
それぞれＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡまたはＦｃγＲＩＩＩＡでトランスフェクトされたＪｕｒｋａｔレポーター細胞系（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｏｎｓｉｎ ＵＳＡ）を、各抗体剤の段階希釈と共に２３時間インキュベートした。それぞれのＦｃγＲを介した標的結合抗体の結合は、レポーター細胞中でのルシフェラーゼの発現を誘導した。ルシフェラーゼ発現は、ルシフェラーゼアッセイ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｏｎｓｉｎ ＵＳＡ）を添加して、３７℃、５％ＣＯ２で２３時間インキュベーション後、Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴＸマルチプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，Ｖｅｒｍｏｎｔ ＵＳＡ）を使用した発光測定により検出した。

【0300】

６．１．１０ 末梢血単核細胞の単離
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（Ｃｙｔｉｖａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）密度勾配遠心分離によってバフィーコートから単離した。バフィーコートは、Ｕｐｐｓａｌａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ血液バンク（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）及びＫａｒｏｌｉｎｓｋａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ血液バンク（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ，Ｓｗｅｄｅｎ）を通じて、健康なドナーから得られ、ＰＢＭＣ単離は、採血の２４時間以内に行った。

【0301】

６．１．１１ ＣＤ２発現解析
休止ＰＢＭＣを染色し、標的抗原発現について分析した。その後、自家培養中ＰＢＭＣは、ＣＤ２８／ＣＤ３ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；ビーズ対細胞比５：１）により、４８時間活性化させ、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ；Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を含むＲＰＭＩ－１６４０ ＡＴＣＣ Ｍｏｄ．（５０Ｕ／ｍＬストレプトマイシン及びペニシリン（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を補充）中で培養し、標的抗原の発現を調査した。

【0302】

ＰＢＭＣを生理食塩水で２回洗浄した。サンプルをＦｃ受容体結合阻害剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）と共にインキュベートし、ＦＢＳ染色バッファー（ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）で２回洗浄後、１０μｇ／ｍＬシプリズマブと共に２０分間インキュベートした。二次抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ ＢＶ４２１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ；クローンＨＰ６０１７）で染色する前に、非結合抗体を除去した。非結合二次抗体は、Ｔ細胞亜集団、制御性Ｔ細胞、またはＢ細胞及びＮＫ細胞の表面染色前に除去させた。以下に列挙しているすべての抗体は、特に明記のない限り、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）から購入した。

【0303】

Ｔ細胞亜集団分布の分析に使用するためのサンプルは、抗ＣＤ３ ＰｅｒＣＰ（クローンＳＫ７）；抗ＣＤ４ ＦＩＴＣ（クローンＳＫ３）及び抗ＣＤ８ ＰＥ（クローンＳＫ１）、抗ＣＣＲ７ Ａｌｅｘａ６４７（クローン３Ｄ１２）及び抗ＣＤ４５ＲＡ ＡＰＣ－Ｈ７（クローンＨＩ１００）（ナイーブＴ細胞：ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ＋；セントラルメモリーＴ細胞：ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ－；エフェクターメモリーＴ細胞：ＣＣＲ７－ＣＤ４５ＲＡ－；終末分化型エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍｒａ）：ＣＣＲ７－ＣＤ４５ＲＡ＋）で染色した。Ｔｒｅｇを分析したサンプルは、抗ＣＤ４ ＦＩＴＣ（クローンＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ２５ ＰＥ（クローンＭ－Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ ＡＰＣ－Ｈ７（クローンＨＩ１００）、抗ＣＤ１２７ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（クローンＨＩＬ－７Ｒ－Ｍ２１）及び抗ＦｏｘＰ３ Ａｌｅｘａ６４７（クローン２５９Ｄ／Ｃ７）で染色した。それらは、供給業者のプロトコールに従って、ＢＤ Ｈｕｍａｎ ＦｏｘＰ３ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔ（ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）を使用して、透過処理した。Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＣＤ１２７－ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋として同定した。

【0304】

ＮＫ／Ｂ細胞パネルは、抗ＣＤ１６ ＦＩＴＣ（クローン３Ｇ８）、抗ＣＤ５６ ＰＥ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ１９６）、抗ＣＤ３ ＡＰＣ（クローンＳＫ７）、抗ＣＤ１４ ＡＰＣ－Ｈ７（クローンＭ５Ｅ２）、及び抗ＣＤ２０ ＰｅｒＣＰ（クローンＳＪ２５Ｃ１）から構成された。サンプルは、４℃の暗所で染色し、ＦＡＣＳＶｅｒｓｅフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）を使用して捕捉した。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）１０．５．３ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ，ＵＳＡ）を使用して、取得後編集及びデータ分析を実施した。

【0305】

６．１．１２ ＦｃγＲ発現解析
ＮＫ細胞は、製造業者の指示に従って、ＮＫ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、磁気ビーズネガティブセレクションによって単離した。ＮＫ細胞の一画分を生理食塩水で２回洗浄し、抗ＣＤ５６ ＢＶ４２１（クローンＮＡＣＭ１６．２）、抗ＣＤ３ ＶｉｏＧｒｅｅｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ６１３）、抗ＣＤ１６ ＦＩＴＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ４２３）、抗ＣＤ３２ ＰＥ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ９９７）及び抗ＣＤ６４ ＡＰＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ９７８）で染色した。サンプルは、４℃の暗所で染色し、ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）を使用して捕捉した。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）１０．６．２ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ，ＵＳＡ）を使用して、取得後編集及びデータ分析を実施した。ＮＫ細胞は、ＣＤ３－ＣＤ５６＋及び／またはＣＤ１６＋リンパ球と定義した。

【0306】

６．１．１３ 自己リンパ球培養（ＡＬＣ）及び混合リンパ球反応（ＭＬＲ）
シプリズマブ及びＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）の存在下で、経時的なＮＫ細胞活性化を分析するために、別の実験用に、各ドナーからの等量のＰＢＭＣをｖｉｏｌｅｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｄｙｅ ４５０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ；ＶＰＤ４５０）で染色した。細胞を、１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を含むＲＰＭＩ－１６４０ ＡＴＣＣ Ｍｏｄ．（５０Ｕ／ｍＬストレプトマイシン及びペニシリン（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）をそれぞれ補充）に再懸濁した。再懸濁ＰＢＭＣを丸底９６ウェル細胞培養プレートに分注し、純粋な培地（抗体なしの対照）または細胞培養培地で希釈したそれぞれの抗体剤のうちの１つ（１０μｇ／ｍＬ）を最終濃度２ｘ１０^６細胞／ｍＬ（最終体積２００μＬ）まで添加した。次に、ＡＬＣ及びＭＬＲを３７℃、５％ＣＯ_２で、それぞれ１日間、２日間、４日間、及び７日間インキュベートした。各日、細胞を生理食塩水で２回洗浄し、Ｆｃ受容体結合阻害剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）とインキュベート後、抗ＣＤ１６ ＦＩＴＣ（クローン３Ｇ８）、抗ＣＤ５６ ＰＥ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ１９６）、抗ＣＤ３ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（クローンＳＰ３４－２）、抗ＣＤ６９ ＡＰＣ（クローンＦＮ５０）、及び抗ＣＤ１４ ＡＰＣ－Ｈ７（クローンＭφＰ－９）で染色した。ＮＫ細胞は、ＣＤ３^－ＣＤ１４^－ＣＤ５６^＋及び／またはＣＤ１６^＋リンパ球として同定した。すべてのフローサイトメトリー抗体は、特に明記のない限り、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）から購入した。サンプルは、４℃の暗所で染色し、ＦＡＣＳＶｅｒｓｅフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＵＳＡ）を使用して捕捉した。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）１０．５．３ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ，ＵＳＡ）を使用して、取得後編集及びデータ分析を実施した。

【0307】

異なる抗ＣＤ２バリアントの存在下での７日後のＮＫ細胞活性化の分析のために、各ドナーからの等量のＰＢＭＣを別の実験のためにＶＰＤ４５０で染色した。細胞は、１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を含むＡＩＭ－Ｖ培地（５０μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシン及び１０μｇ／ｍＬ硫酸ゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ）をそれぞれ補充）に再懸濁した。再懸濁ＰＢＭＣを丸底９６ウェル細胞培養プレートに分注し、純粋な培地（抗体なしの対照）または細胞培養培地で希釈したそれぞれの抗体剤のうちの１つ（１０～０．０００１μｇ／ｍＬ）を最終濃度２ｘ１０^６細胞／ｍＬ（最終体積２００μＬ）まで添加した。次に、ＭＬＲを、３７℃、５％ＣＯ_２で、それぞれ７日間インキュベートした。新鮮な培養液（１００μＬ）を、５日目に各ウェルに追加した。７日目に、細胞を生理食塩水で２回洗浄し、Ｆｃ受容体結合阻害剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）とインキュベート後、抗ＣＤ３ ＶｉｏＧｒｅｅｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ６１３）、抗ＣＤ４５ＲＡ ＢＶ６５０（クローンＨＩ１００）、抗ＣＤ６９ ＢＶ７８６（クローンＦＮ５０）、抗ＣＤ８ ＢＢ５５０（クローンＲＰＡ－Ｔ８）、抗ＣＤ５６ ＰＥ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ１９６）、抗ＣＤ２ ＰＥ－ＣＦ５９４（クローンＲＰＡ－２．１０；注：このクローンは、シプリズマブとは異なるＣＤ２エピトープに結合する）、抗ＣＣＲ７ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ；クローンＧ０４３Ｈ７）、及び抗ＣＤ４ ＡＰＣ－Ｖｉｏ７７０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ６２３）で染色した。ＮＫ細胞は、ＣＤ３^－ＣＤ５６^＋リンパ球として同定した。残りの色は、別の実験のために使用した。すべてのフローサイトメトリー抗体は、特に明記のない限り、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）から購入した。サンプルは、４℃の暗所で染色し、ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）を使用して捕捉した。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）１０．６．２ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ，ＵＳＡ）を使用して、取得後編集及びデータ分析を実施した。

【0308】

６．１．１４ ＮＫフラトリサイド
ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、ＭＡＣＳネガティブセレクションにより、ＰＢＭＣから単離した。ＮＫ細胞は、１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を含むＡＩＭ－Ｖ培地（５０μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシン及び１０μｇ／ｍＬ硫酸ゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ）、ならびに５００ＩＵ／ｍＬヒトＩＬ－２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を補充）に再懸濁し、収量に応じて、最終密度１．２５ｘ１０^６～２．０ｘ１０^６ＮＫ細胞／ｍＬで、丸底９６ウェル細胞培養プレートに分注させた。さらに、純粋な培地（抗体なしの対照）または細胞培養培地で希釈したそれぞれの抗体剤のうちの１つ（最終濃度１０～０．００１μｇ／ｍＬ）を添加し、その後、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。その後、ＮＫ細胞を生理食塩水で洗浄し、Ｆｃ受容体結合阻害剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）とインキュベートし、抗ＣＤ３ ＶｉｏＧｒｅｅｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ６１３）、抗ＣＤ１０７ａ ＢＶ７８６（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ；クローンＨ４Ａ３）、抗ＣＤ１６ ＦＩＴＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ４２３）、抗ＣＤ５６ ＰＥ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ１９６）、７－ＡＡＤ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）及び抗ＣＤ６９ ＡＰＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ８２４）で染色した。ＮＫ細胞は、ＣＤ３－ＣＤ５６＋及び／またはＣＤ１６＋リンパ球として同定した。サンプルは、４℃の暗所で染色し、ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）を使用して捕捉した。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）１０．６．２ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ，ＵＳＡ）を使用して、取得後編集及びデータ分析を実施した。

【0309】

６．１．１５ 自然細胞傷害性アッセイ
ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、ＭＡＣＳネガティブセレクションにより、ＰＢＭＣから単離した。短時間のプレインキュベーションでの実施では、ＮＫ細胞を１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を含むＡＩＭ－Ｖ培地（５０μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシン及び１０μｇ／ｍＬ硫酸ゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ）を補充）に再懸濁し、丸底９６ウェル細胞培養プレートに分注し、その後３７℃、５％ＣＯ_２で、一晩休止させた。次に、純粋な培地（抗体なしの対照）または細胞培養培地で希釈したそれぞれの抗体剤のうちの１つ（最終濃度１０～０．００１μｇ／ｍＬ）を添加し、その後３７℃、５％ＣＯ_２で３０分間インキュベートし、その後、ＨＬＡクラスＩ陰性標的細胞（ＳＰＩ－８０１、ＤＳＭＺ Ｃａｔ．ＡＣＣ８６、ＭＡＣＳ単離の収量に応じて、ＮＫ細胞対標的細胞の比率１：１～１：２）を添加した。標的細胞の添加後、３７℃、５％ＣＯ_２で２時間インキュベーションし、その後ＮＫフラトリサイドのセクションに記載のとおりフローサイトメトリー染色した。

【0310】

ＮＫ細胞と抗体とのプレインキュベーションを実施するために、ＮＫ細胞は、１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を含むＡＩＭ－Ｖ培地（５０μｇ／ｍＬ
硫酸ストレプトマイシン及び１０μｇ／ｍＬ硫酸ゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ）、ならびに５００ＩＵ／ｍＬヒトＩＬ－２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を補充）に再懸濁した。さらに、純粋な培地（抗体なしの対照）または細胞培養培地で希釈したそれぞれの抗体剤のうちの１つ（最終濃度１０～０．００１μｇ／ｍＬ）を添加し、その後、３７℃、５％ＣＯ_２で２日間インキュベートした。２日目に、ＨＬＡクラスＩ陰性標的細胞（ＳＰＩ－８０１；ＭＡＣＳ分離の収量に応じて、ＮＫ細胞と標的細胞の比率１：１～１：２）、その後３７℃、５％ＣＯ_２で２時間インキュベートし、その後ＮＫフラトリサイドのセクションに記載のとおりフローサイトメトリー染色した。

【0311】

６．１．１６ リツキシマブ誘導ＡＤＣＣアッセイ
ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、ＭＡＣＳネガティブセレクションによりＰＢＭＣから単離し、１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を含むＡＩＭ－Ｖ培地（５０μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシン及び１０μｇ／ｍＬ硫酸ゲンタマイシン塩（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ）を補充）に再懸濁し、丸底９６ウェル細胞培養プレートに分注した。さらに、純粋な培地（抗体なしの対照）または細胞培養培地で希釈したそれぞれの抗ＣＤ２抗体剤のうちの１つ（最終濃度１０μｇ／ｍＬ）を添加し、その後、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。翌日、Ｄａｕｄｉ標的細胞（ＤＳＭＺ Ｃａｔ．ＡＣＣ７８；ＣＤ２０＋；ＮＫ対Ｄａｕｄｉ比４：１）及びリツキシマブ（最終濃度０．０００１～１μｇ／ｍＬ）を添加し、その後３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。その後、細胞を生理食塩水で洗浄し、Ｆｃ受容体結合阻害剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）とインキュベート後、抗ＣＤ５６ ＢＶ４２１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ；クローンＮＣＡＭ１６．２）、抗ＣＤ３ ＶｉｏＧｒｅｅｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ６１３）、抗ＣＤ１０７ａ ＢＶ７８６（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ；クローンＨ４Ａ３）、抗ＣＤ１６ ＦＩＴＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ４２３）、抗ＣＤ２ ＰＥ－ＣＦ５９４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ；クローンＲＰＡ－２．１０）、抗ＣＤ６９ ＡＰＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；クローンＲＥＡ８２４）及び抗ＣＤ１９ ＡＰＣ－Ｈ７（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ；クローンＳＪ２５Ｃ１）で染色した。ＮＫ細胞は、ＣＤ３－ＣＤ５６＋及び／またはＣＤ１６＋リンパ球として同定した。サンプルは、４℃の暗所で染色し、ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）を使用して捕捉した。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）１０．６．２ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ，ＵＳＡ）を使用して、取得後編集及びデータ分析を実施した。

【0312】

６．１．１７ グラフ及び統計解析
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）を使用して、結果の視覚化及び基礎となるデータの統計分析を実施した。データは、特に指定がない限り、反復測定一元配置分散分析後にダネット多重比較検定を使用するか、または二元配置分散分析後にダネット多重比較検定を使用して分析した。特に明記しない限り、未処置対照を対照とした。

【0313】

６．２ 実施例１：ＡＤＣＣ及び免疫調節活性に対するＣＤ２結合分子１の効果
Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）ＩＩＩＡは、ＡＤＣＣ活性の重要な媒介因子である。ＦｃγＲＩＩＩＡに対するシプリズマブ及びシプリズマブ断片の親和性を、ＣＤ２結合分子１のＦｃγＲＩＩＩＡ受容体親和性と比較した。図１に示すとおり、シプリズマブは、ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の増加倍率によって測定されるように、ＦｃγＲＩＩＩＡに対して高い親和性を有する。逆に、シプリズマブＦａｂ断片、Ｆｃ断片、及びＣＤ２結合分子１は、ＦｃγＲＩＩＩＡに対していかなる親和性も呈さない（図１）。ＦｃγＲＩＩＩＡを発現する細胞は、ＡＤＣＣの主要媒介因子であるため、ＦｃγＲＩＩＩＡへの結合とシグナル伝達がなければ、ＣＤ２結合分子１が結合したＣＤ２発現細胞は、ＡＤＣＣにより枯渇することはない。

【0314】

ＣＤ２結合分子１がＦｃγＲＩＩＩＡに結合する能力、したがってＡＤＣＣを媒介する能力は阻害されたが、免疫活性を調節するＣＤ２結合分子１の能力は維持されている。図２は、ＣＤ２結合分子１が、シプリズマブと同等の、ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ細胞の活性化（図２Ａ）及び増殖（図２Ｂ）の阻害を呈することを示す。免疫調節活性のさらなる尺度として、ＣＤ２結合分子１は、シプリズマブと同等の、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の発現を誘導する能力を示す（図３）。

【0315】

６．３ 実施例２：ＮＫ細胞に対するＣＤ２結合分子１の効果
ＮＫ細胞に対するＣＤ２結合分子１の効果を調べた。ＮＫ細胞は、自然免疫系の主要なエフェクターであり、そのＦｃγＲＩＩＩＡを介して、免疫複合体ＩｇＧに結合する。ＣＤ２結合分子１は、ＦｃγＲＩＩＩＡに対して親和性を有さなかったが（図１から確認されるとおり）、ＣＤ２結合分子１は、依然としてＮＫ細胞に対して効果を呈した。図４は、自己由来（図４Ａ）または同種異系（図４Ｂ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）の両方において、シプリズマブと比較して、ＣＤ２結合分子１がＣＤ６９＋ＮＫ細胞の発現に対して阻害効果を呈したことを示している。

【0316】

６．４ 実施例３：ＡＤＣＰに対するＣＤ２結合分子１の効果
ｉｎ ｖｉｖｏでは、ＦｃγＲＩＩＡを発現する細胞は、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の主要な媒介因子である。ＣＤ２発現細胞に対するＣＤ２結合分子１の効果を調べて、ＦｃγＲＩＩＡに対するＣＤ２結合分子１の親和性を決定した。図５は、シプリズマブと比較して、ＣＤ２結合分子１によって誘導されるＦｃγＲＩＩＡシグナル伝達がないことを示している。ＦｃγＲＩＩＡの結合及びシグナル伝達がない場合には、ＣＤ２結合分子１が結合したＣＤ２発現細胞が、ＡＤＣＰを介して枯渇する可能性はない。

【0317】

シプリズマブＦａｂ断片を、ＣＤ６９＋Ｔ細胞の活性化を阻害する能力によって測定される免疫調節活性について調べた。Ｆａｂ断片は、対照と比較して、ＣＤ６９＋Ｔ細胞の活性化を阻害しなかったが、シプリズマブ及びＣＤ２結合分子１の両方が活性化を阻害する能力を示した（図６）。ＣＤ２結合分子１は、シプリズマブよりも低い程度までＣＤ６９＋Ｔ細胞の活性化を阻害するように見えたが、重要なことに、ＣＤ２結合分子１は、Ｆａｂ断片と比較して、有意な免疫調節活性を保持していた。まとめると、これらのデータは、免疫調節活性が維持されたまま、ＣＤ２結合分子１のＡＤＣＣ活性を排除されることを示している。

【0318】

６．５ 実施例４：ＣＤ２結合分子の定常領域の修飾の効果
ＣＤ２結合分子は、抗体サブクラスの足場及びＦｃ修飾の様々な組み合わせを使用して構築される。得られるＣＤ２結合分子を、ＡＤＣＣ活性及び免疫調節効果についてテストする。

【0319】

６．５．１ ＩｇＧ１サブクラスのＣＤ２結合分子
ＣＤ２結合分子は、ＩｇＧ１足場、シプリズマブのＶＨ可変領域と１００％同一であるＶＨ可変領域、シプリズマブのＶＬ可変領域と１００％同一であるＶＬ可変領域、及びＮ２９７での点変異を除いてシプリズマブの定常領域と１００％同一である定常領域から構築される。Ｎ２９７での変異としては、これらに限定されないが、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、及びＮ２９７Ａを挙げることができる。Ｎ２９７点変異では、Ｆｃのグリコシル化及びサイレンシングが欠如する。このＣＤ２結合分子のＡＤＣＣ活性は、ＮＦＡＴ経路の活性化の結果として生成されるルシフェラーゼの定量化によってｉｎ ｖｉｔｒｏで決定される。ＣＤ２結合分子のＦｃ領域がＪｕｒｋａｔ細胞上で安定して発現するＦｃγＲＩＩＩＡに結合すると、ルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ活性化応答がシグナル伝達される。エフェクター細胞中のルシフェラーゼ活性は、発光の読み取りにより定量化する。このＣＤ２結合分子の免疫調節活性は、ＣＤ６９＋Ｔ細胞、ＣＤ６９＋ＮＫ細胞、及びＴｒｅｇなど、免疫応答の調節において重要な細胞サブセットを活性化するＣＤ２分子の能力を定量化することによって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで決定される。細胞の活性化及び増殖は、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを使用して決定する。

【0320】

ＣＤ２結合分子は、ＩｇＧ１足場、シプリズマブのＶＨ可変領域と１００％同一であるＶＨ可変領域、シプリズマブのＶＬ可変領域と１００％同一であるＶＬ可変領域、及び異なる抗体から得られたネイティブ定常領域から構成される。このＣＤ２結合分子のＡＤＣＣ活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。このＣＤ２結合分子の免疫調節活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。

【0321】

ＣＤ２結合分子は、ＩｇＧ１足場、シプリズマブのＶＨ可変領域と１００％同一であるＶＨ可変領域、シプリズマブのＶＬ可変領域と１００％同一であるＶＬ可変領域、及び別の抗体から得られ、スイッチ定常領域がＮ２９７において点変異を有するネイティブ定常領域から構築される。Ｎ２９７での変異としては、これらに限定されないが、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、及びＮ２９７Ａを挙げることができる。Ｎ２９７点変異では、Ｆｃのグリコシル化及びサイレンシングが欠如する。このＣＤ２結合分子のＡＤＣＣ活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。このＣＤ２結合分子の免疫調節活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。

【0322】

６．５．２ ＩｇＧ２サブクラスのＣＤ２結合分子
ＩｇＧ２ ＣＤ２結合分子が産生され、ＩｇＧ１ ＣＤ２結合分子と比較して、ＡＤＣＣ活性及び免疫調節効果について評価する。

【0323】

ＣＤ２結合分子は、ＩｇＧ２足場、シプリズマブのＶＨ可変領域と１００％同一であるＶＨ可変領域、シプリズマブのＶＬ可変領域と１００％同一であるＶＬ可変領域、及び異なる抗体から得られたネイティブ定常領域から構成される。このＣＤ２結合分子のＡＤＣＣ活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。このＣＤ２結合分子の免疫調節活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。

【0324】

ＣＤ２結合分子は、ＩｇＧ２足場、シプリズマブのＶＨ可変領域と１００％同一であるＶＨ可変領域、シプリズマブのＶＬ可変領域と１００％同一であるＶＬ可変領域、及び別の抗体から得られ、スイッチ定常領域がＮ２９７において点変異を有するネイティブ定常領域から構築される。Ｎ２９７での変異としては、これらに限定されないが、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、及びＮ２９７Ａを挙げることができる。Ｎ２９７点変異では、Ｆｃのグリコシル化及びサイレンシングが欠如する。このＣＤ２結合分子のＡＤＣＣ活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。このＣＤ２結合分子の免疫調節活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。

【0325】

６．５．３ ＩｇＧ４サブクラスのＣＤ２結合分子
ＩｇＧ４ ＣＤ２結合分子が産生され、ＩｇＧ１ ＣＤ２結合分子と比較して、ＡＤＣＣ活性及び免疫調節効果について評価する。

【0326】

ＣＤ２結合分子は、ＩｇＧ４足場、シプリズマブのＶＨ可変領域と１００％同一であるＶＨ可変領域、シプリズマブのＶＬ可変領域と１００％同一であるＶＬ可変領域、及び異なる抗体から得られたネイティブ定常領域から構成される。このＣＤ２結合分子のＡＤＣＣ活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。このＣＤ２結合分子の免疫調節活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。

【0327】

ＣＤ２結合分子は、ＩｇＧ４足場、シプリズマブのＶＨ可変領域と１００％同一であるＶＨ可変領域、シプリズマブのＶＬ可変領域と１００％同一であるＶＬ可変領域、及び別の抗体から得られ、スイッチ定常領域がＮ２９７において点変異を有するネイティブ定常領域から構築される。Ｎ２９７での変異としては、これらに限定されないが、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、及びＮ２９７Ａを挙げることができる。Ｎ２９７点変異では、Ｆｃのグリコシル化及びサイレンシングが欠如する。このＣＤ２結合分子のＡＤＣＣ活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。このＣＤ２結合分子の免疫調節活性は、上記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。

【0328】

６．６ 実施例５：シプリズマブは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を介してＮＫ細胞フラトリサイドを誘導する
６．６．１ 序論
糖タンパク質ＣＤ２（ＬＦＡ２としても知られる）は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞に発現し、接着及び活性化受容体として機能する（Ｂｉｎｄｅｒ ｅｔ．ａｌ．２０２０ａ）。ヒトでは、ＣＤ２の主要結合パートナーは、リンパ球関連抗原３（ＬＦＡ３；ＣＤ５８としても知られる）であり、特に抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に広く発現している。シプリズマブは、現在移植の分野で臨床試験が行われているモノクローナル抗ＣＤ２ ＩｇＧ１抗体である（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０４３１１６３２）。これまでのエビデンスでは、霊長類（Ｓｅｌｌｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．２０２０）及びヒト患者（Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ ｅｔ ａｌ．２００７）におけるシプリズマブ誘導性ｉｎ ｖｉｖｏＮＫ細胞の枯渇が示されていた。

【0329】

ＮＫ細胞は、活性化受容体及び阻害性受容体を発現する。両方の受容体セットを介したシグナル伝達のバランスが統合され、これにより、成熟ＮＫ細胞が休止状態に留まるか、活性化されるかが決定する（Ｗａｔｚｌ ２０１４）。したがって、ＮＫ細胞の活性化は、阻害性シグナル伝達の減少、活性化シグナル伝達の増加、または両方の組み合わせによって誘発され得る。活性化ＮＫ細胞受容体の中でも、ＣＤ１６は、そのシグナル伝達が単独でＮＫ細胞の活性化を誘導できる受容体である。残りの活性化ＮＫ細胞受容体のほとんどは、ＮＫ細胞の活性化の誘発と併せて、活性化を必要とする。ＣＤ１６ａは、低親和性Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）であり、ＦｃγＲＩＩＩＡとしても知られている。ＣＤ１６ａを介する標的結合ＩｇＧ抗体へのＮＫ細胞の結合は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を促進する。他の活性化ＮＫ細胞受容体としては、それぞれ、腫瘍抗原、外来ＨＬＡ及びウイルスタンパク質に結合するＮＫＧ２Ｄ、特定のキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）及びＮＫｐ４６が挙げられる。阻害性ＮＫ細胞受容体の中で最も顕著なのは、自己ＨＬＡを認識するＫＩＲである（Ｐａｕｌ ａｎｄ Ｌａｌ ２０１７）。ＮＫ細胞による抗体非依存性標的細胞殺傷は、一般に自然または自発的なＮＫ細胞の細胞傷害性と呼ばれる。

【0330】

ＮＫ細胞の細胞傷害性に先行する重要なイベントは、細胞間接着分子を介する安定した標的細胞の結合である（Ｏｒａｎｇｅ ｅｔ．ａｌ．２００３）。安定した標的細胞の結合が起こり、ＮＫ細胞免疫学的シナプス（ＮＫＩＳ）が形成されると、アクチン細胞骨格の再編成が進行し、溶解小胞のＮＫＩＳへの輸送及びその後の放出が促進され、標的細胞の死滅が達成される。ＮＫ標的細胞の結合及びＮＫＩＳ形成に関与する接着分子の例は、それぞれ標的細胞上のＩＣＡＭ－１及びＬＦＡ３に結合するＬＦＡ－１（Ｐａｕｌ ａｎｄ Ｌａｌ ２０１７）及びＣＤ２（Ｏｒａｎｇｅ ｅｔ．ａｌ．２００３）である。自然ＮＫ細胞の細胞傷害性においてさえも、ＣＤ１６は、ＣＤ２との相互作用を介して、ＮＫＩＳ中に豊富に含まれる。ＣＤ２とＣＤ１６との間のこの相互作用を無効にすることにより、自然ＮＫ細胞の細胞傷害性が著しく減少するが、ＮＫ媒介ＡＤＣＣには影響しない（Ｇｒｉｅｒ ｅｔ．ａｌ．２０１２）。ＣＤ２は、２つのＩｇドメイン、１つの膜遠位ドメイン及び１つの膜近位ドメインを有する。Ｔ細胞抗原提示細胞（ＡＰＣ）結合中に観察されたものと同様に、ＣＤ２は、標的細胞結合時にＮＫ細胞が形成する免疫学的シナプス中に蓄積する。

【0331】

ここでは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）及び純粋なＮＫ細胞培養におけるＮＫ細胞活性化に対するシプリズマブの効果の特徴を明らかにし、自然細胞傷害性及びＡＤＣＣに対するＣＤ２遮断の効果を調べた。

【0332】

６．６．２ ＣＤ２及びＦｃガンマ受容体の結合
ＣＤ２への抗ＣＤ２抗体結合及びＦｃγＲ結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって特性評価した。表６に示すように、テストした抗体はすべて、約０．９～１．５ｎＭの親和定数（ＫＤ）で同様のＣＤ２結合親和性を示した。シプリズマブは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、及びＦｃγＲＩＩＩＡに結合する。対照的に、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）はＦｃγＲＩに結合するが、ＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＩＡには結合しない。３つのＦｃサイレント抗ＣＤ２抗体（ＣＤ２結合分子２、３、及び４）はすべて、検出可能なＦｃγＲ親和性を示さなかった。

【表6】

【0333】

ＦｃγＲ結合がＦｃγＲ誘導シグナル伝達をもたらすことを確認するために、各抗体を細胞ベースのＦｃγＲシグナル伝達アッセイで試験した（表７～９）。図９に示すとおり、ＳＰＲの結果と一致して、シプリズマブは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、及びＦｃγＲＩＩＩＡを介してシグナル伝達を誘導した。対照的に、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化されたＣＤ２結合分子）は、ＦｃγＲＩを介したシグナル伝達のみを誘導した。Ｆｃサイレンシングされた抗ＣＤ２バリアントはいずれも、ＦｃγＲ媒介シグナル伝達を誘導しなかった。

【0334】

６．６．３ ＮＫ細胞上でのＣＤ２及びＦｃγＲの発現
ＮＫ細胞上のＣＤ２の発現は、フローサイトメトリーによって測定した。図１０Ａに示すとおり、ＮＫ細胞は、Ｔ細胞よりも少ないＣＤ２発現を有する傾向がある。ＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＮＫ細胞は、平均的Ｔ細胞と同等のレベルでＣＤ２を発現するが、ＣＤ５６^ｄｉｍ及びＣＤ５６^ｎｅｇＣＤ１６^＋ＮＫ細胞は、ＣＤ２を有意に低いレベルで発現する（それぞれｐ＝０．００７４及びｐ＝０．０１１１；反復測定一元配置分散分析及びその後ダネット多重比較検定；（表１０）。それにもかかわらず、ＮＫ細胞は、Ｂ細胞などのＣＤ２^－細胞型と比較した場合、顕著なＣＤ２発現を示す。

【0335】

さらに、Ｔ細胞及びＮＫ細胞上のＣＤ２発現を、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体結合マイクロビーズによるＰＢＭＣの活性化の前及び後に測定した（表１１）。図１０Ｂに示すとおり、Ｔ細胞（ｐ＝０．００３４）、ＣＤ５６^ｄｉｍＮＫ細胞（ｐ＝０．００２４）、ＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＮＫ細胞（ｐ＝０．０１７）及びＣＤ５６^－ＣＤ１６^＋ＮＫ細胞（ｐ＝０．００２９）（両側の対応のあるｔ検定）での活性化後にＣＤ２発現が有意に上昇した。

【0336】

図１１に示すとおり、ほぼすべてのＮＫ細胞（９１．０％）がＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）を発現したが、ＦｃγＲＩＩ発現は、不均一であった（１９．２％，ＣＤ３２）。ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩを発現しなかった（データは示さず）。

【0337】

６．６．４ 自己及び混合リンパ球培養における抗体媒介性及び天然ＮＫ細胞活性化に対するＣＤ２遮断の効果
ＮＫ細胞の活性化に対するシプリズマブの効果を調べるために、飽和用量のシプリズマブを用いて自己リンパ球培養（ＡＬＣ）及びＭＬＲを実施した。図１２に示すとおり、シプリズマブは、ＭＬＲの１日後（ｐ＜０．０００１）及び２日後（ｐ＝０．０００１）、ならびにＡＬＣの１日後（ｐ＜０．０００１）、２日後（ｐ＜０．０００１）、４日後（ｐ＝０．０００６）及び７日後（ｐ＝０．００８２）に、ＣＤ６９＋ＮＫ細胞の割合が有意に増加した（表１２及び１３）。ＭＬＲの４日後及び７日後には、未処置対照（抗体なし）中でのＣＤ６９^＋ＮＫ細胞％の増加が観察された。これは、同種異系ＨＬＡに反応するＮＫ細胞及び／または他のドナー由来のＰＢＭＣに自己ＨＬＡが存在しないことに起因する可能性が高い。図１２に示すとおり、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化されたＣＤ２結合分子）では、４日後（ｐ＝０．００１２）及び７日後（ｐ＝０．００３５）に、ＣＤ６９＋ＮＫ細胞％が有意に減少した（反復測定二元配置分散分析後にダネット多重比較検定）。ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化されたＣＤ２結合分子）の添加は、ＡＬＣ中でのＣＤ６９^＋ＮＫ細胞のパーセンテージを有意に変化させなかった。

【0338】

ＣＤ２遮断によるＭＬＲにおけるＮＫ細胞活性化の阻害の特徴をさらに明らかにするために、０．０００１～１０μｇ／ｍＬの用量滴定を実施し、ＭＬＲの７日後にＮＫ細胞上でのＣＤ６９の発現を分析した。ＭＬＲは、シプリズマブ、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）、ＣＤ２結合分子２、ＣＤ２結合分子３、またはＣＤ２結合分子４とインキュベートした。図１３Ａに示すとおり、シプリズマブの投与により、未処置対照（抗体なし）と比較して、０．１μｇ／ｍＬ（ｐ＝０．０００３）、１μｇ／ｍＬ（ｐ＝０．００１８）及び１０μｇ／ｍＬ（ｐ＝０．０２５６）において、ＣＤ６９^＋ＮＫ細胞％の有意な上昇が誘導された。対照的に、ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）は、１μｇ／ｍＬ（ｐ＝０．００１２）及び１０μｇ／ｍＬ（ｐ＝０．００６）において、ＣＤ６９^＋ＮＫ細胞％の有意な減少を誘導した。ＣＤ２結合分子２、３、及び４は、０．１μｇ／ｍＬ（それぞれ、ｐ＝０．０１７８、ｐ＝０．０１２２、ｐ＝０．０２３４）、１μｇ／ｍＬ（それぞれ、ｐ＝０．０３１１、ｐ＝０．００３９、ｐ＝０．０３８８）及び１０μｇ／ｍＬ（それぞれ、ｐ＝０．０００８、ｐ＝０．００２７、ｐ＝０．００２３）において、ＣＤ６９^＋ＮＫ細胞％を有意に減少させた（反復測定一元配置分散分析及びその後のダネット多重比較検定、表１４）。

【0339】

さらに、ＮＫ細胞上のＣＤ２蛍光強度の中央値（ＣＤ２ ＭＦＩ）を測定して、シプリズマブまたはＣＤ２結合分子２、３、または４（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ｍＡｂ）がＣＤ２発現に影響を及ぼすかを評価した（図１３Ｂ～Ｃ）。シプリズマブは、未処置対照と比較して、０．００１～１０μｇ／ｍＬにおいて、ＮＫ細胞上でのＣＤ２ ＭＦＩの有意な減少（ｐ≦０．０３５４）を誘導した。ＣＤ２結合分子１（脱グリコシル化ＣＤ２結合分子）（ｐ≦０．００６４）、ＣＤ２結合分子２（ｐ≦０．００５０）、ＣＤ２結合分子３（ｐ≦０．００９１）、及びＣＤ２結合分子４（ｐ≦０．０１４２）では、０．０１～１０μｇ／ｍＬにおいて、異なる程度の有意なＣＤ２ダウンレギュレーションが観察された（反復測定一元配置分散分析及びその後のダネット多重比較検定、表１５）。

【0340】

６．６．５ ＮＫフラトリサイド
シプリズマブがＮＫ細胞のフラトリサイドを誘導できるかをテストするために、用量を増加させたシプリズマブまたはＦｃサイレント抗ＣＤ２ ｍＡｂの存在下で、精製ＮＫ細胞を培養した。図１４に示すとおり、シプリズマブは、未処置対照と比較して、０．０１～１０μｇ／ｍＬ（ｐ≦０．００１８）において、精製ＮＫ細胞培養中でのＮＫ細胞の溶解を有意に増加させた。さらに、シプリズマブは、未処置対照と比較して、０．０１～１０μｇ／ｍＬにおいて、総ＮＫ細胞（ｐ≦０．０３０１）、ＣＤ５６^ｄｉｍＮＫ細胞（ｐ≦０．０１９１）、及びＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＮＫ細胞（ｐ≦０．００９３）の有意な用量依存的枯渇を誘導した。対照的に、ＣＤ２結合分子２、３、及び４は、純粋なＮＫ培養中で用量依存的なＮＫ細胞の溶解または枯渇を誘導しなかった。ただし、ＣＤ２結合分子３（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ＩｇＧ２）は、０．１～１０μｇ／ｍＬにおいて、ＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＮＫ細胞の軽度ではあるが統計的に有意な枯渇を誘導した（ｐ≦０．０１３２；反復測定一元配置分散分析及びその後のダネット多重比較検定；表１６～１９）。

【0341】

さらに、図１５は、シプリズマブが、ＮＫ細胞脱顆粒の有意な用量依存的増加（ｐ≦０．０１１４；ＣＤ１０７ａ^＋ＮＫ細胞）及びＮＫ細胞上でのＣＤ１６発現の大幅な減少（ｐ≦０．００２２）（ＡＤＣＣを示す）を誘導したことを示している。ＣＤ２結合分子２、３、または４（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ｍＡｂ）は、いずれも脱顆粒を誘導せず、ＣＤ２結合分子３のみが０．１～１μｇ／ｍＬにおいて、ＣＤ１６ＭＦＩのわずかではあるが統計的に有意な減少を誘導した（ｐ≦０．０２６９；反復測定一元配置分散分析及びその後ダネット多重比較検定；表２０及び２１）。

【0342】

６．６．６ 自然ＮＫ細胞傷害性
自然細胞傷害性に対するＣＤ２遮断の効果を試験するために、精製ＮＫ細胞を、ＳＰＩ－８０１標的細胞（ＨＬＡ）の存在下で、滴定量のシプリズマブまたはＣＤ２結合分子２、３、または４とインキュベートした。図１６に示すとおり、ＣＤ２結合分子２、３、または４によるＣＤ２遮断は、ＳＰＩ－８０１標的細胞に応答したＮＫ細胞の脱顆粒を有意に阻害しなかった。このことは、ＮＫ細胞とＣＤ２結合分子２、３、または４（ＦｃＳ抗ＣＤ２ ｍＡｂ）とのプレインキュベーションが、標的細胞添加前の３０分または２日継続したかについては関係なかった。３０分間のプレインキュベーション後、シプリズマブは、０．１～１０μｇ／ｍＬにおいて、ＮＫ細胞の脱顆粒を有意に増加させた（ｐ≦０．０４８２）が、２日間のプレインキュベーション後では増加はなかった（反復測定一元配置分散分析及びその後のダネット多重比較検定、表２２及び２３）。ＣＤ２遮断は、ＳＰＩ－８０１数のいかなる変化も誘導しなかった（データは示さず）。

【0343】

６．６．７ 抗体依存性細胞傷害性
ＣＤ２遮断がＡＤＣＣに影響を及ぼすかを試験するために、精製ＮＫ細胞をシプリズマブまたはＣＤ２結合分子２、３、または４とプレインキュベート後、滴定量のリツキシマブ及びＣＤ２０^＋標的細胞（Ｄａｕｄｉ）を添加した。図１７Ａ及び１７Ｂに示すとおり、ＣＤ２結合分子２、３、または４によるＣＤ２遮断は、リツキシマブの用量の増加に応答したＮＫ細胞の脱顆粒または標的細胞の死滅に有意な影響を及ぼさなかった（表２４及び２５）。図１７Ｃに示すとおり、リツキシマブは、０．０１～１μｇ／ｍＬでＮＫ細胞上のＣＤ２発現の有意な増加を誘導した（ｐ≦０．０２４８；反復測定一元配置分散分析及びその後のダネット多重比較検定；表２６）。抗ＣＤ２ ｍＡｂは、この設定において異なる程度のＣＤ２ダウンレギュレーションを誘導したが、これはＡＤＣＣに影響を与えないようであった。

【0344】

【表7】

【0345】

【表8】

【0346】

【表9】

【0347】

【表10】

【0348】

【表11】

【0349】

【表12】

【0350】

【表13】

【0351】

【表14】

【0352】

【表15】

【0353】

【表16】

【0354】

【表17】

【0355】

【表18】

【0356】

【表19】

【0357】

【表20】

【0358】

【表21】

【0359】

【表22】

【0360】

【表23】

【0361】

【表24】

【0362】

【表25】

【0363】

【表26】

【0364】

６．７ 実施例６：抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片とＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤との併用療法
この実施例では、細胞増殖、ＣＤ２応答、及びＣＤ２８応答における抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片とＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤との併用療法の効果を記載する。

【0365】

６．７．１ 方法
同種リンパ球反応（ＭＬＲ）：２名のドナーからのＰＢＭＣを、ＰＢＳ中濃度１．５～２．０ｘ１０^７細胞／ｍＬで混合し、製造業者の指示に従って、ｖｉｏｌｅｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｄｙｅ ４５０（ＶＰＤ４５０；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）で染色した。この実験では、双方向同種異系ＭＬＲを使用し、すなわちいずれのドナー由来のＰＢＭＣも、照射／化学処理によって不活化させなかった。したがって、両方のドナー由来のＰＢＭＣは、応答因子及び刺激因子として機能した。

【0366】

ＶＰＤ４５０染色ＰＢＭＣを洗浄し、１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を含むＡＩＭ Ｖ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）に再懸濁した。再懸濁したＰＢＭＣを、丸底９６ウェル細胞培養プレート（フローサイトメトリー用）に分注し、純粋な培地（抗体なしの対照）または抗ＣＤ２抗体１（例えば、シプリズマブ）及び／またはアバタセプトまたはベラタセプトを補充した培地を、最終濃度２ｘ１０^６細胞／ｍＬまで添加した（最終体積２００μＬ）。ＭＬＲを、３７℃、５％ＣＯ_２で７日間及び／または１０日間インキュベートした。６日目に、１００μＬの新鮮培養培地（追加の抗体なし；最終体積＝３００μＬ）を各ウェルに加えた。８日目に、細胞ペレットを乱すことなく１００μＬの培地を各ウェルから吸引し、１００μＬの新鮮培養培地と交換した。

【0367】

抗ＣＤ２抗体１滴定に使用される抗体濃度は、１μｇ／ｍＬ～５０．８ｐｇ／ｍＬであった（培養培地で１０ステップの３倍段階希釈）。ＣＴＬＡ４－Ｉｇを添加した抗ＣＤ２抗体１滴定には、すべての段階希釈ステップで、１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたはベラタセプトを補充した。アバタセプト／ベラタセプト滴定に使用された融合タンパク質濃度は、１００μｇ／ｍＬ～０．１ｐｇ／ｍＬであった（培養培地で１０ステップの１０倍段階希釈）。抗ＣＤ２抗体１を添加したアバタセプト／ベラタセプト滴定には、すべての段階希釈ステップを通じて１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２抗体１を補充した。

【0368】

フローサイトメトリー：ＭＬＲの７日後、サンプルをＦｃ受容体結合阻害剤でブロックし（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）、次いで、抗ＣＤ３ ＶｉｏＧｒｅｅｎ（クローンＲＥＡ６１３；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、抗ＣＤ４５ＲＡ ＢＶ６５０（クローンＨＩ１００；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ２ ＢＶ７８６（クローンＲＰＡ－２．１０；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ８ ＢＢ５５０（クローンＲＰＡ－Ｔ８；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ５６ ＰＥ（クローンＲＥＡ１９６；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、抗ＨＬＡ－ＤＲ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（クローンＧ４６－６；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＣＲ７ ＡＰＣ（クローンＧ４３Ｈ７；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）及び抗ＣＤ４ ＡＰＣ－Ｖｉｏ７７０（クローンＲＥＡ６２３；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で染色した。Ｔ細胞は、ＣＤ３^＋ＣＤ５６^－としてゲーティングした。ＭＬＲの１０日後、サンプルをＦｃ受容体結合阻害剤でブロックし（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）、次いで、抗ＣＤ４５ＲＡ ＢＶ６５０（クローンＨＩ１００；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ３ ＢＶ７８６（クローンＳＫ７；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ８ ＢＢ５５０（クローンＲＰＡ－Ｔ８；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＦｏｘＰ３ ＰＥ（クローン２３６Ａ／Ｅ７；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ１２７ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（クローンＨＩＬ－７Ｒ－Ｍ２１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）；またはＡ０１９Ｄ５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ ＵＳＡ））、抗ＣＣＲ７ ＡＰＣ（クローンＧ４３Ｈ７；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ２５ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００（クローンＭ－Ａ２５１；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）及び抗ＣＤ４ ＡＰＣ－Ｖｉｏ７７０（クローンＲＥＡ６２３；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で染色した。Ｔ細胞は、ＣＤ３^＋としてゲーティングした。細胞増殖は、ＶＰＤ４５０（ＶＰＤ４５０ｈｉｇｈ：非増殖；ＶＰＤ４５０ｌｏｗ：増殖）を使用して評価した。サンプルを暗所で４℃で染色し、生理食塩水で２回洗浄後、ＢＤ Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）を使用して捕捉した。細胞内ＦｏｘＰ３染色は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＦｏｘＰ３／転写因子染色バッファーセット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を使用して、製造業者の指示に従って行った。Ｔｒｅｇは、ＣＤ４^＋ＣＤ１２７^－ＣＤ２５^＋ＦｏｘＰ３^＋として同定した。

【0369】

グラフ及び統計分析：ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）を使用して、結果の視覚化及び基礎となるデータの統計分析を実施した（表２７～３５を参照）。抗体を含まない対照を比較データセットとして、一元配置分散分析、その後、機能するダネット多重比較検定を使用して、データを分析した。

【0370】

６．７．２ 結果
Ｔ細胞増殖：ＭＬＲの７日後及び１０日後にフローサイトメトリーによりＴ細胞増殖を評価し、抗ＣＤ２抗体１（シプリズマブなど）とアバタセプトまたはベラタセプトとの併用による阻害効果を評価した（ｎ＝６；表２７～３０）。図１８Ａに示すとおり、１０～１００μｇ／ｍＬアバタセプト（場合によってはアレファセプト）（ｐ≦０．０３０３）、１～１００μｇ／ｍＬベラタセプト（ｐ≦０．０１５６）及び０．０１２～１μｇ／ｍＬ抗ＣＤ２抗体１（ｐ≦０．０１０５）は、未処置対照と比較して、ＭＬＲ７日後にＣＤ４Ｔ細胞増殖の有意な減少を誘導した。さらに、１００μｇ／ｍＬアバタセプト（場合によっては、アレファセプト）（ｐ≦０．００２８）、１～１００μｇ／ｍＬベラタセプト（ｐ≦０．０４１１）、及び０．１１～１μｇ／ｍＬ抗ＣＤ２抗体１（ｐ≦０．００７１）は、ＭＬＲの１０日後に、ＣＤ４Ｔ細胞増殖の有意な減少を誘導した（図１８Ｃ）。さらに、ＣＤ４Ｔ細胞増殖の有意かつほぼ完全な阻害は、抗ＣＤ２抗体１と１００μｇ／ｍＬアバタセプト（ｐ≦０．０１８３）または１００μｇ／ｍＬベラタセプト（ｐ≦０．００６１）との併用によって媒介された（図１８Ａ及び１８Ｃ）。アバタセプトまたはベラタセプトとの併用療法では、ＭＬＲの７日目の抗ＣＤ２抗体１の抑制効果の半最大阻害濃度（ＩＣ５０）を０．００６８μｇ／ｍＬ（単独療法）からそれぞれ０．００１５μｇ／ｍＬ及び０．００１１μｇ／ｍＬに減少させた。ＭＬＲの１０日後、抗ＣＤ２抗体１単独療法のＩＣ５０は、１００μｇ／ｍＬアバタセプトまたは１００μｇ／ｍＬベラタセプトとの併用で、それぞれ０．０２３５μｇ／ｍＬ及び０．００３５μｇ／ｍＬまたは０．００２５μｇ／ｍＬであった。同様のパターンが、ＣＤ８Ｔ細胞増殖の阻害について観察された（図１８Ｂ及び１８Ｄ）。ＭＬＲの７日後、抗ＣＤ２抗体１単独療法によるＣＤ８Ｔ細胞増殖の阻害では、０．０１０５μｇ／ｍＬのＩＣ５０であったのに対し、アバタセプトまたはベラタセプトとの併用療法では、抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトとの併用及び抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトとの併用の両方で、抗ＣＤ２抗体１のＩＣ５０が、０．００１２μｇ／ｍＬに低下した。ＭＬＲの１０日後、抗ＣＤ２抗体１単独療法のＩＣ５０は、０．０２４μｇ／ｍＬであったが、アバタセプトまたはベラタセプトとの併用では、０．００１７μｇ／ｍＬに低下した。同様の結果が、図１８Ｅ～図１８Ｈに示されるように、別の実験（同じ条件）で観察された。

【表27】

【表28】

【表29】

【表30】

異なる濃度のアバタセプト及びベラタセプトを試験して、抗ＣＤ２抗体１と組み合わせて最大効力に達するのに必要なアバタセプト及びベラタセプトの濃度を決定した（図１９Ａ～１９Ｈ及び図２０）。そのため、抗ＣＤ２抗体１の濃度を一定に保ちながら、アバタセプトまたはベラタセプトの濃度を滴定した（図１９Ａ～１９Ｄについてはｎ＝９、図１９Ｅ～１９Ｈについては、ｎ＝３；表３１～３４）。７日間または１０日間、細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトとの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトとの組み合わせとインキュベートした後の平均Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）増殖を図１９Ａ～図１９Ｈに示す。様々な量（約１～１００μｇ／ｍＬ）のベラタセプト及びアバタセプトを試験した。様々な量のベラタセプト（１～１００μｇ／ｍＬ）を抗ＣＤ２抗体１と組み合わせて使用した場合、及び様々な量のアバタセプト（１０～１００μｇ／ｍＬ）を抗ＣＤ２抗体１と組み合わせて使用した場合の相乗効果を観察した。

【表31】

【表32】

【表33】

【表34】

【0371】

制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）増強：抗ＣＤ２抗体１（例えば、シプリズマブ）とアバタセプトまたはベラタセプトとの併用療法を、ＭＬＲにおけるＴｒｅｇ増強の効果について評価した（図２１）。この実験では、ＭＬＲには、濃度を上昇させて、アバタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）、及び抗ＣＤ２抗体１（５．０８ｘ１０^－５～１μｇ／ｍＬ）を補充した。さらに、アバタセプトまたはベラタセプトの追加滴定シリーズ（１ｘ１０^－７～１００μｇ／ｍＬ）に、滴定シリーズ全体に１μｇ／ｍＬ抗ＣＤ２抗体１を添加した。１０日間のＭＬＲ後、増殖したＣＤ４Ｔ細胞中のＴｒｅｇのパーセンテージをフローサイトメトリーで測定した（ｎ＝９）（表３５）。抗ＣＤ２抗体１は、０．０３７～１μｇ／ｍＬで増殖ＣＤ４Ｔ細胞の中でも、Ｔｒｅｇの有意な増強を誘導したことが観察された（ｐ≦０．０３３８）（図２１）。対照的に、抗ＣＤ２抗体１と用量を増加させたアバタセプトまたはベラタセプトとの組み合わせは、増殖したＣＤ４Ｔ細胞でのＴｒｅｇのパーセンテージの用量依存的減少を誘導した。アバタセプトまたはベラタセプトの濃度が、Ｔ細胞増殖の最大阻害に達するところまで増加すると（１０～１００μｇ／ｍＬアバタセプトまたは１～１００μｇ／ｍＬベラタセプト）、有意なＴｒｅｇ増強が喪失することに留意されたい。

【表35】

【0372】

この実験はまた、Ｔ細胞を抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトとの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトとの組み合わせとインキュベートすることにより、Ｔ細胞をベラタセプトまたはアバタセプト単独とインキュベートしたときと比較して、ＣＤ２のレベルが低くなることも示した（図２２Ａ～図２２Ｂ）。図２２Ａ～図２２Ｂに示すとおり、アバタセプトまたはベラタセプトの存在下で増殖するＴ細胞は、比較的高いＣＤ２発現を示した（７日間のＭＬＲ後の平均ＣＤ２ ＭＦＩ＋ＳＤ（ｎ＝３））。さらに、Ｔ細胞を抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトとの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトとの組み合わせとインキュベートすることにより、Ｔ細胞をベラタセプトまたはアバタセプト単独とインキュベートしたときと比較して、細胞の数が少なくなることも示された（図２３Ａ～図２３Ｄ）。抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトとの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトとの組み合わせによる処置は、増殖したＴ細胞の数をほぼゼロにまで減少させることが観察された（ＭＬＲの７日または１０日後の平均ＶＰＤ４５０ｈｉｇｈ／ｌｏｗＴ細胞数＋ＳＤ（ｎ＝６）を示す図２３Ａ～２３Ｄを参照）。１０日目には、より多くの複製ウェルが存在することも観察された（日数間で絶対細胞数は比較しなかった）（図２３Ａ～図２３Ｄ）。さらに、Ｔ細胞を抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトとの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトとの組み合わせとインキュベートすることにより、Ｔ細胞をベラタセプトまたはアバタセプト単独とインキュベートしたときと比較して、ＣＤ２及びＣＤ２８のレベルが低下した（ＭＬＲの７日後のＴ細胞上の平均ＣＤ２／ＣＤ２８中央値ＦＩ＋ＳＤ（ｎ＝６）を示す図２４Ａ～２４Ｄを参照）。図２４Ａ～図２４Ｄは、抗ＣＤ２抗体１がＣＤ２を下方制御したことを示す。図２４Ａ～図２４Ｄは、ｈｉｇｈ［ＣＴＬＡ４－Ｉｇ］を有するサンプル中のＶＰＤ４５０ｌｏｗ Ｔ細胞が比較的高いＣＤ２ ＭＦＩを示し、ｈｉｇｈ［抗ＣＤ２抗体１］を有するサンプル中のＶＰＤ４５０ｈｉｇｈ Ｔ細胞上のＣＤ２８ ＭＦＩが約ベースライン値に留まることを示した。

【0373】

細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトとの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトとの組み合わせとインキュベート後、Ｖｉｏｌｅｔ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｄｙｅ ４５０（ＶＰＤ４５０）ｌｏｗ Ｔ細胞を使用したフローサイトメトリーのグラフを図２５Ａ～図２５Ｆに示す。細胞を対照、抗ＣＤ２抗体１、ベラタセプト、アバタセプト、抗ＣＤ２抗体１とベラタセプトとの組み合わせ、または抗ＣＤ２抗体１とアバタセプトとの組み合わせとインキュベート後、Ｖｉｏｌｅｔ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｄｙｅ ４５０（ＶＰＤ４５０）ｈｉｇｈ Ｔ細胞を使用したフローサイトメトリーのグラフを図２６Ａ～図２６Ｇに示す。

【0374】

Ｆｃサイレント抗ＣＤ２（ＩｇＧ４）とベラタセプトまたはアバタセプトとの組み合わせによる実験も行った（図２７Ａ～図２７Ｄを参照）。Ｆｃサイレント抗ＣＤ２が、ＣＤ８Ｔ細胞増殖の阻害を改善することが観察された。図２７Ａ～図２７Ｄは、ＭＬＲの７日または１０日後の平均ＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞増殖＋ＳＤを示す（Ｎ＝６）。

【0375】

結論：この実施例は、抗ＣＤ２抗体１及びＣＴＬＡ４－Ｉｇ（アバタセプトまたはベラタセプト）を使用する併用療法が、Ｔ細胞増殖の阻害において相加効果を有することを示した。対照的に、増殖の最大阻害を誘導する濃度での抗ＣＤ２抗体１及びＣＴＬＡ４－Ｉｇの組み合わせは、抗ＣＤ２抗体１単独療法で見られるＴｒｅｇ増強を除去した。ベラタセプトベースのプロトコールを使用して、移植後の免疫抑制薬から移植患者を離脱させると、急性細胞同種移植片拒絶反応が高頻度で起こることが報告されている。これは、同種反応性ＣＤ２８－Ｔ細胞がベラタセプトによる影響を受けていないことに部分的に起因し得る。この例は、抗ＣＤ２抗体１とＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤（例えば、ベラタセプト）とを組み合わせることが、患者を免疫抑制から離脱させながら、抗同種移植免疫を予防するのにより有効であり得ることを示した。抗ＣＤ２抗体１とＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤（例えば、アバタセプトまたはベラタセプト）による併用療法から利益が得られ得る患者を対象とした臨床試験では、併用療法の相乗効果がさらに示され得る。臓器移植レシピエントは、従来の免疫抑制から離脱し、またこれにより関連する副作用を回避するすることを目的として、抗ＣＤ２抗体１及びＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤（例えば、ベラタセプト）で治療することができる。さらに、新たに発症した１型糖尿病または関節リウマチなどの自己免疫疾患に罹患した患者は、抗ＣＤ２抗体１とＣＴＬＡ４－Ｉｇとの併用療法の恩恵を受けることができる。この例は、ＣＤ２／ＣＤ５８及びＣＤ２８／Ｂ７共刺激経路の両方を標的にしている二重共刺激遮断剤が、いずれかの経路のみを標的とするよりも、効率よく自己免疫を抑制するのに役立ち得ることを示している。

【0376】

６．８ 実施例７：ＦＣサイレント抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片とＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤との併用療法
この実施例では、細胞増殖及び活性化におけるＦｃサイレント抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片とＣＴＬＡ－４共刺激遮断剤との併用療法の効果を記載する。この実施例で使用するＦｃサイレント抗ＣＤ２抗体は：Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－１（例えば、ＣＨＯ細胞で発現するシプリズマブ）；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－２（例えば、２つの変異を有するシプリズマブ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ））；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－３（例えば、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－２と同じ２つの変異を有し、さらに追加の変異（Ｐ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）を含むシプリズマブ）；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－４（例えば、ＩｇＧ２重鎖中のシプリズマブＣＤＲ）；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５（例えば、ＩｇＧ２重鎖中のシプリズマブＣＤＲ及び７つの変異（Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ））；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－６（例えば、ＩｇＧ４重鎖中のシプリズマブＣＤＲ及び１つの変異（Ｓ２２８Ｐ））；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７（例えば、ＩｇＧ４重鎖中のシプリズマブＣＤＲ及び３つの変異（Ｐ３２９Ｇ／Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ））である。この実施例で使用されるすべてのＦｃサイレント抗ＣＤ２抗体は、同じ軽鎖を有する。Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ１（例えば、シプリズマブ；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－１ＩｇＧ１）は、一般的に知られているＬＡＬＡ－ＰＧ変異をシプリズマブ中の同等の部位に導入することによって生成した（Ａｒｄｕｉｎ Ｅ，Ａｒｏｒａ Ｓ，Ｂａｍｅｒｔ ＰＲ，Ｋｕｉｐｅｒ Ｔ，Ｐｏｐｐ Ｓ，Ｇｅｉｓｓｅ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｈｉｇｈｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｈｉｇｈ ａｎｄ ｌｏｗ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｍｏｕｓｅ Ｆｃ ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｙ Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ ａｎｄ Ｎ２９７Ａ Ｆｃ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ２ａ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１５）６３：４５６－６３．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｉｍｍ．２０１４．０９．０１７；Ｌｏ ＤＪ，Ｗｅａｖｅｒ ＴＡ，Ｓｔｅｍｐｏｒａ Ｌ，Ｍｅｈｔａ ＡＫ，Ｆｏｒｄ ＭＬ，Ｌａｒｓｅｎ ＣＰ，ｅｔ ａｌ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｌｌｏｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ＣＤ８ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＣＤ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｏｆｆ Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ａｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓｐｌ Ｓｕｒｇ（２０１１）１１：２２．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１６００－６１４３．２０１０．０３３１７．ｘ）。Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５は、標準的なＩｇＧ２フレームワーク中の同等の部位に次の変異：Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓを導入することによって生成した（Ｗａｎｇ Ｘ，Ｍａｔｈｉｅｕ Ｍ，Ｂｒｅｚｓｋｉ ＲＪ．ＩｇＧ Ｆｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｏ ｍｏｄｕｌａｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ（２０１８）９：６３－７３．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１３２３８－０１７－０４７３－８）。Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７は、標準的なＩｇＧ４フレームワーク中の同等の部位に次の変異を導入することによって生成した：Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３２９Ｇ（Ｓｉｌｖａ Ｊ－Ｐ，Ｖｅｔｔｅｒｌｅｉｎ Ｏ，Ｊｏｓｅ Ｊ，Ｐｅｔｅｒｓ Ｓ，Ｋｉｒｂｙ Ｈ．Ｔｈｅ Ｓ２２８Ｐ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＩｇＧ４ Ｆａｂ－ａｒｍ ｅｘｃｈａｎｇｅ ａｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ（２０１５）２９０：５４６２－９．ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ１１４．６００９７３；Ｓｃｈｌｏｔｈａｕｅｒ Ｔ，Ｈｅｒｔｅｒ Ｓ，Ｋｏｌｌｅｒ ＣＦ，Ｇｒａｕ－Ｒｉｃｈａｒｄｓ Ｓ，Ｓｔｅｉｎｈａｒｔ Ｖ，Ｓｐｉｃｋ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｎｏｖｅｌ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ａｎｄ ＩｇＧ４ Ｆｃ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ａｂｏｌｉｓｈｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ（２０１６）２９：４５７－６６．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｐｒｏｔｅｉｎ／ｇｚｗ０４０）。

【0377】

細胞ベースのＦｃγＲ結合アッセイ：簡潔に説明すると、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＩＡに結合する能力について、異なる濃度の抗体（抗ＣＤ２抗体（またはシプリズマブ）；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－１；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－２；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－３；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－４；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５；Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－６；及びＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７）を試験した（図２８参照）。ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩＩＡ結合アッセイの最高濃度は、１μｇ／ｍＬ／６．６７ｎＭであり、ＦｃγＲＩＩＡ結合アッセイでは、１００μｇ／ｍＬ／６６７ｎＭであった（図２８及び表３６を参照）。

【表36】

【0378】

同種混合リンパ球反応（ＭＬＲ）：簡潔に説明すると、２名のドナーからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を１．５～２．０ｘ１０^７細胞／ｍＬの濃度でＰＢＳ中で混合し、製造業者のプロトコールに従って、ｖｉｏｌｅｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｄｙｅ ４５０（ＶＰＤ４５０；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）で染色した。この実施例では、双方向同種異系ＭＬＲを使用し、すなわちいずれのドナー由来のＰＢＭＣも、照射／化学処理によって不活化させなかった。したがって、両方のドナー由来のＰＢＭＣは、応答因子及び刺激因子として機能した。

【0379】

ＶＰＤ４５０染色ＰＢＭＣを洗浄し、１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を含むＡＩＭ Ｖ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）に再懸濁した。再懸濁したＰＢＭＣを、丸底９６ウェル細胞培養プレート（フローサイトメトリー用）に分注し、純粋な培地（抗体なしの対照）またはＦｃサイレント抗ＣＤ２抗体（Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７及び／またはアバタセプトまたはベラタセプトを補充した培地を、最終濃度２ｘ１０^６細胞／ｍＬまで添加した（最終体積２００μＬ）。ＭＬＲを、３７℃、５％ＣＯ２でそれぞれ７日間及び１０日間インキュベートした。６日目に、１００μＬの新鮮培養培地（追加の抗体なし）を各ウェルに加えた。８日目に、細胞ペレットを乱すことなく１００μＬの培地を各ウェルから吸引し、１００μＬの新鮮培養培地と交換した。

【0380】

実験の最初のラウンドでは、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７滴定に使用される抗体濃度は、６７．２ｎＭ～０．６７ｎＭ（１０倍段階希釈）であった。ＣＴＬＡ４－Ｉｇを添加したＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５またはＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７の滴定には、すべての段階希釈ステップで、４３３．４ｎＭのベラタセプトを補充した。ベラタセプト単独療法滴定に使用した濃度は、４３３．４ｎＭ～０．００４３ｎＭ（１０倍段階希釈）であった（図２９Ａ、２９Ｂ、３０Ａ、３０Ｂ、３１Ａ、及び３１Ｂを参照）。

【0381】

２ラウンド目の実験では、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７滴定に使用した抗体濃度は、１０μｇ／ｍＬ～５０．８ｐｇ／ｍＬであった（３倍段階希釈）。ＣＴＬＡ４－Ｉｇを添加したＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７滴定には、すべての段階希釈ステップで、１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたはベラタセプトを補充した。アバタセプト／ベラタセプト滴定に使用された融合タンパク質濃度は、１００μｇ／ｍＬ～０．１ｐｇ／ｍＬ（１０倍段階希釈）であった（図３２Ａ～３２Ｂを参照）。

【0382】

フローサイトメトリー：ＭＬＲの７日後、サンプルをＦｃ受容体結合阻害剤でブロックし（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）、次いで、抗ＣＤ３ ＶｉｏＧｒｅｅｎ（クローンＲＥＡ６１３；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、抗ＣＤ４５ＲＡ ＢＶ６５０（クローンＨＩ１００；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ２ ＢＶ７８６（クローンＲＰＡ－２．１０；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ８ ＢＢ５５０（クローンＲＰＡ－Ｔ８；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ５６ ＰＥ（クローンＲＥＡ１９６；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、抗ＨＬＡ－ＤＲ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（クローンＧ４６－６；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＣＲ７ ＡＰＣ（クローンＧ４３Ｈ７；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）及び抗ＣＤ４ ＡＰＣ－Ｖｉｏ７７０（クローンＲＥＡ６２３；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で染色した（図３２Ａを参照）。Ｔ細胞は、ＣＤ３＋ＣＤ５６－としてゲーティングした。ＭＬＲの１０日後、サンプルをＦｃ受容体結合阻害剤でブロックし（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）、次いで、抗ＣＤ４５ＲＡ ＢＶ６５０（クローンＨＩ１００；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ３ ＢＶ７８６（クローンＳＫ７；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ８ ＢＢ５５０（クローンＲＰＡ－Ｔ８；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＦｏｘＰ３ ＰＥ（クローン２３６Ａ／Ｅ７；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ１２７ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（クローンＨＩＬ－７Ｒ－Ｍ２１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）；またはＡ０１９Ｄ５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ ＵＳＡ））、抗ＣＣＲ７ ＡＰＣ（クローンＧ４３Ｈ７；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）、抗ＣＤ２５ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００（クローンＭ－Ａ２５１；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）及び抗ＣＤ４ ＡＰＣ－Ｖｉｏ７７０（クローンＲＥＡ６２３；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で染色した（図３２Ｂを参照）。Ｔ細胞は、ＣＤ３＋としてゲーティングした。細胞増殖は、ＶＰＤ４５０（ＶＰＤ４５０ｈｉｇｈ：非増殖；ＶＰＤ４５０ｌｏｗ：増殖）を使用して評価した。サンプルを暗所で４℃で染色し、生理食塩水で２回洗浄後、ＢＤ Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＵＳＡ）を使用して捕捉した。

【0383】

結果：Ｆｃサイレント抗ＣＤ２抗体とベラタセプトとの併用による阻害効果を評価するために、ＭＬＲの７日後及び１０日後に、Ｔ細胞増殖をフローサイトメトリーにより評価した。図２９Ａ及び図２９Ｂの右のパネルに示すとおり、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５とベラタセプトとの併用は、単独療法または未処置対照のいずれと比較しても、ＣＤ８Ｔ細胞増殖の減少を誘導した。さらに、Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－５とベラタセプトとの併用は、マーカーＣＤ６９及びＨＬＡ－ＤＲによって測定されるＴ細胞活性化の減少をもたらした（図３１Ａ）。ＩｇＧ４ Ｆｃサイレント抗ＣＤ２抗体Ｆｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７及びベラタセプトの場合、併用療法は、ＣＤ８Ｔ細胞増殖（図３０Ａ及び３０Ｂ）及びＴ細胞活性化（図３１Ｂ）の減少を誘導した。

【0384】

より広い希釈範囲（１０μｇ／ｍＬ～５０．８ｐｇ／ｍＬ）でのＦｃサイレント抗ＣＤ２ Ａｂ－７滴定と、１００μｇ／ｍＬのアバタセプトまたはベラタセプトとの併用による追加調査では、単独療法または未処置対照のいずれと比較しても、ＣＤ８Ｔ細胞増殖の減少を誘導した（図３２Ａ及び図３２Ｂの右パネル）。
配列

【表37】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【図18D】

【図18E】

【図18F】

【図18G】

【図18H】

【図19A】

【図19B】

【図19C】

【図19D】

【図19E】

【図19F】

【図19G】

【図19H】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【手続補正書】

【提出日】2023-04-12

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2023531251000001.app

【国際調査報告】