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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-07-24
(54)【発明の名称】がん治療における使用のためのベルバラフェニブ
(51)【国際特許分類】
A61K 31/519 20060101AFI20230714BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230714BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230714BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230714BHJP
C07D 495/04 20060101ALN20230714BHJP
【ＦＩ】
A61K31/519
A61P35/00
A61K45/00
A61P43/00 121
C07D495/04 105Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022573226
(86)(22)【出願日】2021-05-17
(85)【翻訳文提出日】2023-01-26
(86)【国際出願番号】 US2021032667
(87)【国際公開番号】W WO2021242547
(87)【国際公開日】2021-12-02
(31)【優先権主張番号】63/030,171
(32)【優先日】2020-05-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】515182071
【氏名又は名称】ハンミ ファーム．カンパニー リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＨＡＮＭＩ ＰＨＡＲＭ．ＣＯ．，ＬＴＤ．
(71)【出願人】
【識別番号】509012625
【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】キム， テ ウォン
(72)【発明者】
【氏名】ホン， ユン－ヒ
(72)【発明者】
【氏名】ノ， ヨン ス
(72)【発明者】
【氏名】チャン， マシュー ツン－ウェイ
(72)【発明者】
【氏名】マレク， シヴァ
(72)【発明者】
【氏名】ヤン， イビン
(72)【発明者】
【氏名】イェン， イヴァナ イェン イェン
【テーマコード（参考）】
4C071
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C071AA01
4C071BB01
4C071CC02
4C071CC21
4C071DD40
4C071EE13
4C071FF05
4C071HH17
4C071HH28
4C071JJ01
4C071JJ05
4C071LL01
4C084AA19
4C084MA02
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZB26
4C084ZC75
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB26
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC75
(57)【要約】
ベルバラフェニブの使用のための方法であって、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｒ変異、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＮＲＡＳＧ１３Ｄ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異、及びＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異から選択される少なくとも１つの変異を有するがんを処置するための、ベルバラフェニブの使用のための方法が提供される。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒト対象におけるがんを処置するための方法であって、有効量のベルバラフェニブを前記ヒト対象に投与することを含み、前記がんが、ＢＲＡＦ変異、ＫＲＡＳ変異、及びＮＲＡＳ変異から選択される少なくとも１つの変異を有する、方法。
【請求項2】
前記がんが、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異、ＢＲＡＦＧ４６８Ｒ変異、ＢＲＡＦＶ５９９Ｅ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｒ変異、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＮＲＡＳＧ１３Ｄ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異、及びＮＲＡＳＧ１３Ｄ変異から選択される少なくとも１つの変異を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記がんが、黒色腫、腎芽細胞腫、ＧＩＳＴ、ＣＲＣ、肉腫、胆嚢がん、膀胱がん、甲状腺がん、及びそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１又は請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する腎芽細胞腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する胆嚢がん、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する膀胱がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する膀胱がん、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する甲状腺がん、ＢＲＡＦＧ４６８Ｒ変異を有する甲状腺がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｒ変異を有する甲状腺がん、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する腎芽細胞腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する胆嚢がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する膀胱がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する膀胱がん、及びそれらのいずれかの組み合わせである、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異、及びＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異から選択される少なくとも１つの変異を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
１日当たり２００ｍｇのベルバラフェニブ～１日当たり１３００ｍｇのベルバラフェニブが前記ヒト対象に投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
４５０ｍｇ ＢＩＤのベルバラフェニブを前記対象に投与することを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
がんを治療するための前記方法が、前記ヒト対象における扁平上皮がん腫の発生の非存在を特徴とする、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記がんが黒色腫であり、前記ベルバラフェニブ治療の前に、前記ヒト対象が、免疫療法、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ療法、又は免疫療法とＢＲＡＦＶ６００Ｅ療法との組み合わせによる処置後に疾患進行を経験した、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
対象においてがんを治療するための方法であって、有効量のベルバラフェニブを前記対象に投与することを含み、前記がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する腎芽細胞腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する胆嚢がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する膀胱がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する膀胱がん、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する甲状腺がん、ＢＲＡＦＧ４６８Ｒ変異を有する甲状腺がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｒ変異を有する甲状腺がん、及びそれらのいずれかの組み合わせである、方法。
【請求項13】
前記がんが、黒色腫、腎芽細胞腫、ＧＩＳＴ、ＣＲＣ、肉腫、胆嚢がん、膀胱がん、及びそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される、請求項１２又は請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
１日当たり２００ｍｇのベルバラフェニブ～１日当たり１３００ｍｇのベルバラフェニブが前記対象に投与される、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
４５０ｍｇ ＢＩＤのベルバラフェニブを前記対象に投与することを含む、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
がんを治療するための前記方法が、前記対象における扁平上皮がん腫の発生の非存在を特徴とする、請求項１２～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記がんが黒色腫であり、前記ベルバラフェニブ治療の前に、前記対象が、免疫療法、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ療法、又は免疫療法とＢＲＡＦＶ６００Ｅ療法との組み合わせによる治療後に疾患進行を経験した、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【0001】
本出願は、２０２０年５月２６日に出願された米国仮出願第６３／０３０，１７１号の優先権利益を主張し、その全体が本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【0002】
本開示の分野は、概して、がん治療に関する。
【背景技術】
【0003】
ＲＡＳ遺伝子は、ヒトがんにおいて最も頻繁に変異したがん遺伝子である。ＲＡＳアイソフォームの中で、ＫＲＡＳが最も頻繁に変異しており（８６％）、ＮＲＡＳがこれに続き（１１％）、これは主に皮膚黒色腫で変異している（２８％）。Ｃｏｘ ＡＤ，Ｆｅｓｉｋ ＳＷ，Ｋｉｍｍｅｌｍａｎ ＡＣ，ｅｔ ａｌ，“Ｄｒｕｇｇｉｎｇ ｔｈｅ ｕｎｄｒｕｇｇａｂｌｅ ＲＡＳ：Ｍｉｓｓｉｏｎ ｐｏｓｓｉｂｌｅ？”，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ １３：８２８－５１，２０１４；Ｈｉｌｍｉ Ｋｏｄａｚ，Ｏｓｍａｎ Ｋｏｓｔｅｋ，Ｍｕｈａｍｍｅｔ Ｂｅｋｉｒ Ｈａｃｉｏｇｌｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ＲＡＳ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ（ＫＲＡＳ，ＮＲＡＳ，ＨＲＡＳ）ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｏｌｉｄ Ｃａｎｃｅｒ“，ＥＪＭＯ １：１－７，２０１７；ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ Ｎ，“Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｍｅｌａｎｏｍａ”，Ｃｅｌｌ １６１：１６８１－９６，２０１５を参照されたい。ＲＡＳ変異体駆動型がんの前臨床モデルは、腫瘍の開始及び維持におけるＫＲＡＳ及びＮＲＡＳの役割を実証している。しかしながら、今日まで、ＰＩ３Ｋ及びＭＥＫの阻害等のその下流エフェクター経路を標的とすることによるＲＡＳ変異体腫瘍の処置における臨床的成功は限られていた。
【0004】
３つのサブタイプ（Ａ－ＲＡＦ、Ｂ－ＲＡＦ、Ｃ－ＲＡＦ）からなるＲＡＦキナーゼファミリーは、ＲＡＳの下流のＭＡＰＫシグナル伝達経路の重要な構成要素である。ＲＡＦ遺伝子、特にコドンＶ６００のＢＲＡＦにおける変異は、悪性黒色腫、結腸直腸がん、甲状腺がん、及び肺がんを含む様々ながんにおいて同定されている。Ｄａｖｉｅｓ Ｈ，Ｂｉｇｎｅｌｌ ＧＲ，Ｃｏｘ Ｃ，ｅｔ ａｌ．，“Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ＢＲＡＦ ｇｅｎｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ”，Ｎａｔｕｒｅ ４１７：９４９－５４，２００を参照されたい。ＢＲＡＦ Ｖ６００変異は、ＢＲＡＦが単量体としてシグナル伝達することを可能にし、それによって下流のＭＡＰＫシグナル伝達経路を構成的に活性化する。
【0005】
ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、及びエンコラフェニブ等のＢＲＡＦ単量体阻害剤の発見は、ＢＲＡＦＶ６００変体腫瘍を有する患者の治療の著しい進歩をもたらしたが、それにもかかわらず、治療応答の持続性は、ＢＲＡＦ二量体化に大きく収束するＢＲＡＦ増幅、ＢＲＡＦスプライスバリアント及びＲＡＳ変異を含む様々な耐性機構、並びにＢＲＡＦ Ｖ６００単量体療法に対する耐性のために制限されている。Ｓｕｌｌｉｖａｎ ＲＪ，Ｆｌａｈｅｒｔｙ ＫＴ，“Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ＢＲＡＦ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ”Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ４９：１２９７－３０４，２０１３を参照されたい。さらに、これらのＢＲＡＦＶ６００阻害剤はまた、ＢＲＡＦ野生型及びＫＲＡＳ変異体細胞株においてＭＡＰＫシグナル伝達経路を逆説的に活性化し、その結果、ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦの二量体化、並びにＲＡＳ依存的様式でのＭＥＫ及びＥＲＫシグナル伝達の活性化をもたらすことが示されている。Ｈｅｉｄｏｒｎ ＳＪ，Ｍｉｌａｇｒｅ Ｃ，Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，“Ｋｉｎａｓｅ－ｄｅａｄ ＢＲＡＦ ａｎｄ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ＲＡＳ ｃｏｏｐｅｒａｔｅ ｔｏ ｄｒｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ＣＲＡＦ”，Ｃｅｌｌ １４０：２０９－２１，２０１０；及びＢｌａｓｃｏ ＲＢ，Ｆｒａｎｃｏｚ Ｓ，Ｓａｎｔａｍａｒｉａ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，“ｃ－Ｒａｆ，ｂｕｔ ｎｏｔ Ｂ－Ｒａｆ，ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｋ－Ｒａｓ ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｄｒｉｖｅｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ１９：６５２－６３，２０１１を参照されたい。問題なことに、Ｖ６００療法を受けている患者の５～２０％が扁平上皮がん腫（ＳＣＣ）を発症し、これはおそらくＭＡＰＫ経路の逆説的な活性化を介して引き起こされる。
【0006】
進行性黒色腫の治療選択肢は、単剤療法（例えば、ペンブロリズマブ又はニボルマブ）又は併用（例えば、イピリムマブ＋ニボルマブ）として使用され得るいくつかの免疫療法剤の承認によって有意に改善されている（Ｒａｅｄｌｅｒ ２０１５；Ｒｉｂａｓ ｅｔ ａｌ．２０１５；Ｒｏｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．２０１９）。複数の第ＩＩＩ相試験（Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．２０２０）からのデータに基づいて、これらの治療法は、進行した疾患状況において、ＮＲＡＳ変異体黒色腫を含むＢＲＡＦ ＷＴ黒色腫について推奨される初期処置である。しかしながら、抗ＰＤ－１剤単独又は併用での進行後の明確な標準治療はなく、患者は典型的には更なる免疫療法又は化学療法で処置される。
【0007】
ＮＲＡＳ変異陽性黒色腫は２９％の有病率を有し、ＢＲＡＦ ＷＴ黒色腫のサブセットである。現在のところ、ＮＲＡＳ変異を有する黒色腫の患者に対する特異的標的療法はない。したがって、この患者集団は、上記のように治療選択肢が限られており、抗ＰＤ－１治療の進行後又はその後に満たされていないニーズが高い。
【0008】
したがって、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ及びＲＡＦ変異を有するがんの改善された処置が必要とされている。
【発明の概要】
【0009】
いくつかの態様では、本開示は、ヒト対象におけるがんを処置するための方法であって、有効量のベルバラフェニブをヒト対象に投与することを含み、がんが、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異、ＢＲＡＦＧ４６８Ｒ変異、ＢＲＡＦＶ５９９Ｅ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｒ変異、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異、ＮＲＡＳＧ１３Ｄ変異、及びＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異から選択される少なくとも１つの変異を有する方法に関する。
【0010】
他の幾つかの態様では、本開示は、対象においてがんを治療するための方法であって、有効量のベルバラフェニブを対象に投与することを含み、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する腎芽細胞腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する胆嚢がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する膀胱がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する膀胱がん、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する甲状腺がん、ＢＲＡＦＧ４６８Ｒ変異を有する甲状腺がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｒ変異を有する甲状腺がん、及びそれらのいずれかの組み合わせである、方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【0012】
【0013】
【0014】
【0015】
【0016】
【0017】
【0018】
【0019】
【0020】
【0021】
【0022】
【図12A】図１２Ａは、ダブラフェニブによる毎日の治療及びベルバラフェニブによる毎日の治療についての２９日間の治療期間にわたるＡ３７５腫瘍体積（ｍｍ３）の変異体黒色腫同系モデル研究の結果のプロットである。
【0023】
【0024】
【0025】
【0026】
【0027】
【図17A】図１７Ａは、ベルバラフェニブ療法が安定した疾患若しくは部分奏効を達成したか、又は疾患が進行した、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ結腸がん、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ黒色腫及びＢＲＡＦＶ６００Ｅ腎芽細胞腫を有する患者についての、ベルバラフェニブ治療サイクル時間に対するＢＲＡＦＶ６００Ｅ ＭＡＦ ｃｔＤＮＡの結果を示す。
【0028】
【0029】
【図19A】１９Ａは、ＲＡＦ阻害剤ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、及びエンコラフェニブのＢＲＡＦへの結合を示す共結晶構造の描写である。
【発明を実施するための形態】
【0030】
本開示によれば、化合物ベルバラフェニブは、ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦのアイソフォームの選択的阻害を提供する非常に強力かつ選択的なＩＩ型ＲＡＦ二量体阻害剤（ｐａｎ－ＲＡＦ阻害剤）であることが発見された。ＢＲＡＦＶ６００選択的単量体阻害剤とは対照的に、ベルバラフェニブは、非ＢＲＡＦＶ６００変異体細胞ではＭＡＰＫ経路を活性化しないが、代わりに、ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦ二量体を阻害することによってＭＡＰＫシグナル伝達の抑制を維持し、ＢＲＡＦＶ６００変異及びＲＡＳ変異体の両方の腫瘍で細胞増殖の減少及び抗腫瘍活性の増加をもたらすことが発見された。ベルバラフェニブがヒト対象において良好に忍容されることが更に発見された。ベルバラフェニブ療法が扁平上皮がん腫の発症の非存在下で行われ得ることが更に発見された。ベルバラフェニブは、当該ベルバラフェニブ治療の前に、対象が免疫療法、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ療法、又は免疫療法とＢＲＡＦＶ６００Ｅ療法との組み合わせによる治療後に疾患進行を経験した黒色腫の治療に有効であることが更に発見された。
【0031】
特定の結合理論に束縛されるものではないが、図１８及び図１９Ｂは、ＢＲＡＦに結合したｐａｎ－ＲＡＦ阻害剤ベルバラフェニブの特定の共結晶構造を示す。１９Ａは、ＲＡＦ阻害剤ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、及びエンコラフェニブのＢＲＡＦへの結合を示す共結晶構造の描写である。
【0032】
ベルバラフェニブは、ＰＣＴ出願国際公開第２０１３／１００６３２号に開示されており、化学名４－アミノ－Ｎ－（１－（（３－クロロ－２－フルオロフェニル）アミノ）－６－メチルイソキノリン－５－イル）チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－７－カルボキサミド（本明細書では式（Ｉ）と呼ばれる）を有し、以下の化学構造を有する：
【0033】
ベルバラフェニブは、対象における特定のがんの治療に有効であることが発見されている。本開示の範囲内の対象は、ヒト又は非ヒト哺乳動物、例えばウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ又はネコを含むがこれらに限定されない哺乳動物である。いくつかの態様では、対象はヒトである。
【0034】
ベルバラフェニブは、好適には、その立体異性体、幾何異性体及び互変異性体、並びに溶媒和物、代謝産物、同位体、薬学的に許容され得る塩又はプロドラッグの形態であり得る。いくつかの特定の態様では、ベルバラフェニブは、その薬学的に許容される塩である。本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される塩」は、遊離塩基又は遊離酸の生物学的有効性と特性を保持する塩を指し、生物学的にもその他の点でも望ましくないものではない。ベルバラフェニブの例示的な酸塩としては、限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシル酸塩」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、及びｐ－トルエンスルホン酸塩が挙げられる。いくつかの態様では、塩は、ビス－塩酸塩、ビス－硫酸水素塩、ビス－ｐ－トルエンスルホン酸塩、ビス－エタンスルホン酸塩、及びビス－メタンスルホン酸塩からなる群から選択される。いくつかの態様では、塩は、ビス－塩酸塩又はビス－メタンスルホン酸塩である。一態様では、塩はビス－メタンスルホン酸塩である。
【0035】
ベルバラフェニブは、適切には、非晶質形態又は結晶形態のいずれかであり得る。いくつかの態様では、塩は結晶性である。いくつかのそのような態様では、塩はビス－メタンスルホン酸塩である。いくつかの特定の態様では、ビス－メタンスルホン酸塩は、Ｃｕ－Ｋα光源で照射したときに、５．６°、７．１°、７．６°、１１．４°、１５．１°、１５．４°、１６．６°、１８．２°、２０．４°、２１．５°、２２．３°、２２．７°、２３．１°、２４．４°、２４．９°及び２５．６°の回折角２０±０．２°の値のピークから選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ若しくは１０のピーク、３つ以上のピーク、又は５つ以上のピークを有する粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする。いくつかの態様では、塩はビス－塩酸塩である。いくつかの特定の態様では、ビス塩酸塩は、Ｃｕ－Ｋα光源で照射した場合に、５．８９°±０．２°、７．７７°±０．２°、８．３１°±０．２°、１１．８０°±０．２°、１６．６８°±０．２°、２３．２２°±０．２°、２３．６９°±０．２°、２６．８９°±０．２°、２７．５１°±０．２°、及び２９．５３°±０．２°の回折角２θ値におけるピークから選択される３つ以上のピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とするＩ型多形である。固体形態（結晶性又は非晶質）は、ＣｕＫα（１．５４０５６Å）線及び回転を使用して、２５°Ｃ、並びに４０．０ＫＶ及び１００ｍＡで動作する、ドイツのＢＲＵＫＥＲ ＡＸＳ製のＤ８ ＡＤＶＡＮＣＥに記録されたＰＸＲＤによって適切に決定することができる。
【0036】
ベルバラフェニブは、１つ以上の薬学的に許容され得る担体、アジュバント、及び／又は賦形剤と共に、カプセル、錠剤（丸剤）、粉末、シロップ、分散液、懸濁液、エマルジョン、溶液等の形態で適切に製剤化され得る。適切な液体担体の非限定的な例としては、水；生理食塩水；水性デキストロース；グリコール；エタノール；石油、動物、植物又は合成起源のものを含む油；及びそれらの組み合わせが挙げられる。適切な医薬アジュバント／賦形剤の非限定的な例としては、デンプン、セルロース（例えば、微結晶セルロース）、ポリビニルピロリドン、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、タルク、Ｄ－マンニトール、グルコース、ラクトース、タルク、ゼラチン、フマル酸、フマル酸塩、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等、及びそれらの組み合わせが挙げられる。ベルバラフェニブはまた、保存剤、安定剤、湿潤剤又は乳化剤、浸透圧を調整するための塩、緩衝剤等の更なる従来の医薬添加剤と共に適切に製剤化され得る。このような組成物は、いかなる事象においても、対象への適切な投与のために適切な薬用量を調製するように、有効量のベルバラフェニブを含有するであろう。ベルバラフェニブは、経口的に対象に適切に投与され得る。
【0037】
いくつかの態様では、ベルバラフェニブは、経口投与用のフィルムコーティング錠の形態であり得る。そのような適切な錠剤は、遊離塩基当量基準で５０ｍｇ、１００ｍｇ又は１５０ｍｇのベルバラフェニブを含み得る。いくつかのこのような態様では、錠剤は、ベルバラフェニブ及び不活性成分Ｄ－マンニトール、フマル酸、クロスポビドン、ステアリン酸マグネシウム（野菜）、フマル酸ステアリルナトリウム及びフィルムコーティング混合物を含む。いくつかのそのような態様では、錠剤は、ベルバラフェニブ及び不活性成分微結晶性セルロース、ラクトース、クロスカルメロースナトリウム、ステアリン酸マグネシウム及びフィルムコーティング混合物を含む。フィルムコーティングは当技術分野で公知である。いくつかの態様では、フィルムコーティング混合物は、ポリビニルアルコール、二酸化チタン、マクロゴール／ポリエチレングリコール、タルク、及び黄色酸化鉄を適切に含み得る。いくつかの態様では、活性成分は、例えばベルバラフェニブ２ＨＣｌ等のベルバラフェニブを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【0038】
本開示の様々な態様のいずれかにおいて、がんは、黒色腫、腎芽細胞腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肉腫、胆嚢がん、膀胱がん、及びそれらの任意の組み合わせであり得る。一態様では、がんは黒色腫である。一態様では、がんは腎芽細胞腫である。一態様では、がんはＧＩＳＴである。一態様では、がんはＣＲＣである。一態様では、がんは肉腫である。一態様では、がんは胆嚢がんである。一態様では、がんは膀胱がんである。
【0039】
いくつかの態様では、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する腎芽細胞腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する胆嚢がん、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する膀胱がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する膀胱がん、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する甲状腺がん、ＢＲＡＦＧ４６８Ｒ変異を有する甲状腺がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｒ変異を有する甲状腺がん、及びそれらの任意の組み合わせである。
【0040】
いくつかの態様では、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する腎芽細胞腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する胆嚢がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する膀胱がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する膀胱がん、及びそれらのいずれかの組み合わせである。
【0041】
いくつかの態様では、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、及びそれらの任意の組み合わせである。
【0042】
いくつかの態様では、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｒ変異、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＮＲＡＳＧ１３Ｄ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異、ＢＲＡＦＧ４６８Ｒ変異、ＢＲＡＦＶ５９９Ｅ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異、及びＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異から選択される少なくとも１つの変異を有する。幾つかの態様では、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＫＲＡＧ１２Ｃ変異、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異、及びＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異から選択される少なくとも１つの変異を有する。
【0043】
いくつかの態様では、がんは、ＢＲＡＦ変異とＮＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異とＫＲＡＳ変異、又はＫＲＡＳ変異とＮＲＡＳ変異等の２つの変異を有する。一態様では、がんは、ＢＲＡＦ変異とＮＲＡＳ変異を有する。そのような一態様では、がんは、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異及びＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異を有する。
【0044】
本開示のいくつかの態様では、有効量のベルバラフェニブを含む、がんを処置するための医薬組成物が提供される。いくつかのそのような態様では、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する腎芽細胞腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する胆嚢がん、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する膀胱がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する膀胱がん、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する甲状腺がん、ＢＲＡＦＧ４６８Ｒ変異を有する甲状腺がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｒ変異を有する甲状腺がん、及びそれらの任意の組み合わせから選択される少なくとも１つの変異を有する。。いくつかのそのような態様では、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する腎芽細胞腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する胆嚢がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異を有するＣＲＣ、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する膀胱がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する膀胱がん、及びそれらのいずれかの組み合わせである。いくつかのそのような態様では、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異を有する肉腫、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有する黒色腫、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する黒色腫、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＧＩＳＴ、及びそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｒ変異、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＮＲＡＳＧ１３Ｄ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｒ変異、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異、ＢＲＡＦＧ４６８Ｒ変異、ＢＲＡＦＶ５９９Ｅ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異、及びＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異．から選択される少なくとも１つの変異を有する。幾つかの態様では、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異、ＫＲＡＳＱ６１Ｈ変異、ＮＲＡＳＧ１２Ｄ変異、ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異、ＮＲＡＱ６１Ｒ変異、及びＮＲＡＳＧ１２Ｃ変異から選択される少なくとも１つの変異を有する。いくつかのそのような態様では、がんは、ＢＲＡＦ変異とＮＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異とＫＲＡＳ変異、又はＫＲＡＳ変異とＮＲＡＳ変異等の２つの変異を有する。一態様では、がんは、ＢＲＡＦ変異とＮＲＡＳ変異を有する。そのような一態様では、がんは、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異及びＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異を有する。任意のそのような組成物の態様では、がんは、黒色腫、腎芽細胞腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肉腫、胆嚢がん、膀胱がん、及びそれらの任意の組み合わせであり得る。一態様では、がんは黒色腫である。そのような一態様では、がんは腎芽細胞腫である。そのような一態様では、がんはＧＩＳＴである。そのような一態様では、がんはＣＲＣである。そのような一態様では、がんは肉腫である。そのような一態様では、がんは胆嚢がんである。そのような一態様では、がんは膀胱がんである。
【0045】
ベルバラフェニブの用量は、最大耐量に対する応答を誘発するのに十分な用量の範囲であり得る。例えば、特定の用量に拘束されることなく、１日用量は、適切には１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１００ｍｇ、１１５０ｍｇ、１２００ｍｇ、１２５０ｍｇ、又は１３００ｍｇ、及びそれから構築される任意の範囲、例えば１００ｍｇ～１３００ｍｇ、２００ｍｇ～１３００ｍｇ、６００ｍｇ～１３００ｍｇ、７００ｍｇ～１２００ｍｇ、又は８００ｍｇ～１０００ｍｇであり得る。ベルバラフェニブは、１日１回、１日２回、１日３回、又は１日４回投与することができる。いくつかの態様では、ベルバラフェニブは１日１回投与される。いくつかの態様では、ベルバラフェニブは１日２回投与される。一態様では、ベルバラフェニブは、４５０ｍｇ ＢＩＤで投与され得る。投与は、食物と共に、又は食物なしで行うことができる。投与スケジュールは、適切には、２８日間のスケジュールの毎日であってもよく、又は２８日間のスケジュールの２１日間以上であってもよい。
【実施例】
【0046】
実施例１
【0047】
第Ｉ相用量漸増試験（ＮＣＴ０２４０５０６５）及び用量拡大試験（ＮＣＴ０２４０５０６５）を、ＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ、及び／又はＮＲＡＳ遺伝子に変異を有する局所進行性及び／又は転移性固形腫瘍を有する患者で行った。これらの研究は、ＲＡＳ及び／又はＢＲＡＦ変異を有する複数のタイプのがんにおけるベルバラフェニブの安全性、耐容性及び早期臨床的有効性を実証した。
【0048】
適格患者は、固形腫瘍応答評価基準バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１）に従って測定可能又は評価可能な疾患を有していた。Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ＥＡ，Ｔｈｅｒａｓｓｅ Ｐ，Ｂｏｇａｅｒｔｓ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｅｗ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ：ｒｅｖｉｓｅｄ ＲＥＣＩＳＴ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ １．１）”，Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ４５：２２８－４７，２００９を参照されたい。全ての患者は、１つ以上の先行治療ラインで進行していたか、又は研究登録時に利用可能な標準治療を有していなかった。追加の適格基準には、米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータス≦２及び平均余命≧１２週間が含まれた。心血管異常を平均ＱＴｃＦ＞４４０ｍｓｅｃとして有する患者を用量拡大期から除外した。
【0049】
ベルバラフェニブの用量漸増を、最初の用量制限毒性（ＤＬＴ）が観察されるまでＰＫ誘導急速漸増法を使用して行い、続いてローリング６（ｒｏｌｌｉｎｇ ｓｉｘ）デザインの修正フィボナッチ法を使用した（図１）。最大耐量（ＭＴＤ）を超えない用量レベルで、治療中の腫瘍生検を提供することができた追加の患者をバックフィルコホートに登録して、追加の薬力学（ＰＤ）データを取得した。
【0050】
患者は、１日１回５０ｍｇ（ＱＤ）から１日２回８００ｍｇ（ＢＩＤ）までに割り当てられた用量レベルでの経口投与によってベルバラフェニブを受けた。ベルバラフェニブの開始用量は、５０ｍｇ ＱＤとして選択され、これは、前臨床試験によるラットにおける動物の１０％（ＳＴＤ１０）の重度の毒性用量の１／１０のヒト等価用量である。Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ＵＳＤｏＨａＨＳＦａＤ，“Ｓ９ Ｎｏｎｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”，２０１０を参照されたい。サイクル１は、患者が１日目に割り当てられた用量レベルでベルバラフェニブの単回用量を受け、その後７日間のウォッシュアウト期間が続く薬物動態（ＰＫ）評価から開始した。その後の治療サイクルは２１日間の連続投与であった。
【0051】
最初のサイクル中にＤＬＴを決定した。各用量コホートの最後に、安全性及びＰＫデータをＤＬＴ評価について再検討し、次の用量レベルへの用量漸増を継続するかどうかを決定した。本明細書で使用される場合、ＤＬＴは、調査中の疾患又は疾患進行と無関係であると評価された毒性として定義され、ＤＬＴ評価は、ＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ、バージョン４．０３に従ってサイクル１（用量漸増コホート）で実施された。サイクル１の２１連続日の間の薬物コンプライアンスが少なくとも８０％である場合、評価は許容可能であると考えられる。
【0052】
非血液学的毒性は、以下によって示される：脱毛症を除くグレード３以上の毒性。最高用量の制吐薬治療にもかかわらず、グレード３以上の悪心又は嘔吐。最高用量での下痢止め治療にもかかわらず、グレード３以上の下痢。グレード４の好中球減少症を伴うグレード３以上の感染（ＡＮＣ＜５００／ｍｍ３）。ＱＴｃ延長（＞５００ｍｓｅｃ又はベースラインから＞６０ｍｓｅｃの増加）。
【0053】
血液学的毒性は、以下によって示される：グレード４の好中球減少症（ＡＮＣ＜５００／ｍｍ３）が７日間以上持続。３８．５℃以上の発熱を伴うグレード４の好中球減少症（ＡＮＣ＜５００／ｍｍ３）。グレード４の血小板減少症（ＰＬＴ＜２５，０００／ｍｍ３）が＞４日間持続。
【0054】
治療への不十分な曝露は、以下によって示される。毒性による２週間以上の用量遅延。２１日間連続したベルバラフェニブの毒性による８０％未満の薬物コンプライアンス。
【0055】
他の毒性を以下に示す。確認された角膜潰瘍。ベースラインレベルよりも重度であり、臨床的に関連性があり、支持療法に対して難治性であり、ＳＲＭでのＤＬＴとして決定される毒性。
【0056】
用量拡大期は、特定のがん型を有する患者におけるベルバラフェニブの抗腫瘍活性を更に評価するように設計され、６つのコホートから構成された：ＮＲＡＳ変異体（ＮＲＡＳｍ）黒色腫、ＢＲＡＦ変異体（ＢＲＡＦｍ）黒色腫、ＢＲＡＦｍ結腸直腸がん（ＣＲＣ）、ＫＲＡＳ変異体（ＫＲＡＳｍ）非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、ＫＲＡＳｍ膵管腺がん（ＰＤＡＣ）、及び他のＢＲＡＦ又はＲＡＳ変異陽性がんを有する患者のバスケットコホート（図２）。患者は、用量漸増期で決定された推奨用量（ＲＤ）ある、２８日間の連続サイクルで４５０ｍｇ ＢＩＤの経口用量でベルバラフェニブを投与された。全ての患者は、疾患進行又は忍容できない毒性等の中止基準を満たすまで試験にとどまった。
【0057】
この試験は、ヘルシンキ宣言、臨床試験実施基準ガイドライン、及び地元の保健局に提出され承認された保証の規定に従って実施した。プロトコルは、各参加施設の施設内審査委員会によって承認された。任意の研究手順の開始前に、全参加者から書面によるインフォームドコンセントを得た。
【0058】
用量漸増では、プロトコルで指定された定義によってＤＬＴを評価した。プロトコルに従って、３人の患者においてＤＬＴがなかった場合、又は６人の患者において１人未満のＤＬＴがあった場合、用量漸増が許可された。６人の患者のうち２人を超える患者がＤＬＴを経験した場合、用量レベルは忍容されないと考えられ、次に低い用量をＭＴＤとして決定した。ＲＤ決定は、用量漸増期の患者からの有効性、安全性、忍容性及びＰＫ／ＰＤの累積データの包括的評価に基づいて行った。
【0059】
有害事象（ＡＥ）をＡＥの発生率、重症度及び関連性によって記録し、国立がん研究所－有害事象共通用語規準（ＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ）バージョン４．０３に従って等級付けした。ベルバラフェニブの安全性及び忍容性を、ＡＥ、バイタルサイン、身体検査、心電図、心エコー図（ＥＣＨＯ）／マルチゲート収集（ＭＵＧＡ）スキャン、及び実験室試験に基づいて評価した。
【0060】
腫瘍応答評価を、ベースライン及び中断までの２回の治療サイクルごとの終了時にＲＥＣＩＳＴバージョン１．１を使用して治験責任医師によってＸ線写真で実施した。安全性評価（安全性セット）には、ベルバラフェニブの１回以上の用量を受けた全ての患者が含まれ、有効性評価（完全解析セット）には、少なくとも１回の用量のベルバラフェニブを受け、少なくとも１回の用量後腫瘍応答評価を受けた対象が含まれた。
【0061】
ベルバラフェニブのＰＫ評価のためのプロトコルで定義された時点で、投与前及び投与後に血液試料を収集した。完全ＰＫ分析を実施して、ＡＵＣ０－ｌａｓｔ、ＡＵＣ０－∞、ＡＵＣ０－２４、Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、Ｖｓｓ／Ｆ、ＣＬ／Ｆ、及びｔ１／２を含むＰＫパラメータを推定した。薬力学（ＰＤ）評価を、患者から採取した保管組織又は新鮮腫瘍組織及び血液試料に対して遡及的に行った。ベルバラフェニブによるＭＡＰＫ経路阻害を、ＭＡＰＫ経路遺伝子の発現並びに腫瘍組織における免疫組織化学によるｐＭＥＫ及びｐＥＲＫレベルの変化を測定することによって決定した。
【0062】
用量漸増期の７２人の患者及び用量拡大期の６３人の患者を含む合計１３５人の患者が第Ｉ相試験に登録された。患者の基本情報及びベースライン特性を表１に要約する。表１中：「ＥＣＯＧ」は、米国東海岸がん臨床試験グループを指す；「ＣＲＣ」は結腸直腸がんを指す；「ＰＤＡＣ」は膵管腺がんを指す；「ＮＳＣＬＣ」は非小細胞肺がん腫を指す；「ＧＩＳ」は消化管間質腫瘍を指す；「その他」は、胆嚢（ｎ＝２）、悪性新生物（ｎ＝１）、腎芽細胞腫（ｎ＝１）、胸腺（ｎ＝１）、ファーター膨大部（ｎ＝２）、胆管細胞がん（ｎ＝２）、乳房（ｎ＝１）及び子宮内膜（ｎ＝１）を含む。「変異、ｎ（％）」では、各相の１名の患者がＢＲＡＦ遺伝子とＮＲＡＳ遺伝子の両方に変異を有していた。
【0063】
【表1】
【0064】
用量漸増期の７２人の患者のうち、５７人の患者が用量漸増コホートに登録され、１５人の患者がバックフィルコホートに登録された（図１）。以前の治療の数の中央値は３（範囲０～７）であった。変異に関しては、２９人の患者がＢＲＡＦに変異を有する腫瘍を有し、３０人の患者がＫＲＡＳに変異を有し、１４人の患者がＮＲＡＳに変異を有し、１人の患者がＢＲＡＦとＮＲＡＳの両方の変異を有し、両方の群についてカウントした。がんの最も一般的なタイプは、結腸直腸がん（４２人の患者）及び黒色腫（２５人の患者）であった。
【0065】
用量拡大期では、局所的に試験された変異状態及び腫瘍タイプに基づいて、６３人の患者を６つの事前に指定されたコホートに登録した（図２）：ＮＲＡＳｍ黒色腫（１０人の患者）、ＢＲＡＦｍ黒色腫（７人の患者）、ＢＲＡＦｍ ＣＲＣ（７人の患者）、ＫＲＡＳｍ ＰＤＡＣ（９人の患者）、ＫＲＡＳｍ ＮＳＣＬＣ（２人の患者）、及び任意の他のＲＡＳ又はＲＡＦ変異体固形腫瘍のバスケットコホート（２８人の患者）。
【0066】
用量漸増期では、５０人の患者をプロトコルごとの用量決定のために評価可能であるとみなした。用量漸増コホートの５７人の患者のうち、サイクル１中に試験から離脱した患者を含む、毒性なしに８０％未満のコンプライアンスを有した７人の患者をＤＬＴ評価から除外した。５０人の患者のうち４人がＤＬＴを経験し、グレード３の発疹が３人の患者で（２００ｍｇ ＢＩＤ、６５０ｍｇ ＢＩＤ及び８００ｍｇ ＢＩＤにおいて）、グレード２のざ瘡様皮膚炎が１人の患者（８００ｍｇ ＢＩＤ）で８０％未薬の満物コンプライアンスをもたらした。全てのＤＬＴは、ベルバラフェニブの中断及び／又は併用薬投与後に可逆的であった。８００ｍｇ ＢＩＤでは、６名の患者のうち２名がＤＬＴを経験し、したがって、６５０ｍｇ ＢＩＤをベルバラフェニブのＭＴＤとみなした。耐容性、安全性、有効性及びＰＫデータの全体的評価の後、更なる研究における単一薬剤ベルバラフェニブのＲＤを、４５０ｍｇ、１日２回（ＢＩＤ）と決定した。
【0067】
用量漸増及び用量拡大の全体的な安全性の概要（ｎ＝１３５）を表２に示す。全用量にわたって最も頻繁に報告された治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、ざ瘡様皮膚炎（３７．０％）、発疹（２３．７％）及び掻痒症（２２．２％）であった。４５０ｍｇ ＢＩＤのＲＤでは、７４名の患者のうち１５名（２０．３％）で用量減少が発生し、そのうち１２名（１６．２％）が薬物有害反応（ＡＤＲ）によるものであり、７４名の患者のうち２１名（２８．４％）が用量中断を必要とし、そのうち１７名（２３．０％）がＡＤＲによるものであった。３人の患者（４．１％）は、グレード３の胆管炎、グレード４の高カリウム血症、又はグレード４のざ瘡様皮膚炎のために治療を恒久的に中止した。表２中：「ＴＥＡＥ」は、治療下で発現した有害事象を指す；「ＡＤＲ」は、薬物関連有害物質を指す。グレード３／４のＡＤＲの大部分は、支持療法で可逆的かつ管理可能な皮膚科学的毒性であった。扁平上皮がん腫（ＳＣＣ）の症例は報告されなかった。重篤なＴＥＡＥが３０名の患者（２２．２％）で発生し、そのうち１２名（８．９％）がベルバラフェニブに関連していた。
【0068】
【表2】
【0069】
ベルバラフェニブのＰＫパラメータを、用量漸増期の４８名の患者及び用量拡大期の３５名の患者において推定した。結果を以下の表３及び表４に示す。表中：「ＡＵＣｌａｓｔ」は、０時間から最後の測定可能な濃度までの血漿中濃度－時間曲線下面積を指す；「ＡＵＣ０－∞」は、０時間から無限大までの血漿中濃度－時間曲線下面積を指す；「ＡＵＣ２４」は、Ｔ０からＴ２４までの曲線下面積を指す；「Ｃｍａｘ」は最大濃度を指す；「Ｔｍａｘ」は、Ｃｍａｘに達するまでの時間を指す；「ｔ１／２β」は最終排出半減期を指す；「ＱＤ」は、１日１回を指す；「ＢＩＤ」は１日２回を指す。ＡＵＣは、コホート１では０（投与前）から４８時間まで、他のコホートでは０から１６８時間まで測定された濃度に基づいて計算した。中央値及び範囲が提示されているＴｍａｘを除いて、平均及び変動係数が提示されている。リファンピンを併用した２００ ＱＤ投薬レジメンの一人の患者は、その患者のＡＵＣ及びＣｍａｘが同じコホートの他の患者のＡＵＣ及びＣｍａｘよりもはるかに低かったため、分析から除外され、これは、いかなる特定の理論にも拘束されないが、ベルバラフェニブが生体内変換されるリファンピンによる薬物代謝酵素の誘導から生じた可能性がある。
【0070】
ベルバラフェニブ血漿標的曝露は、２００ｍｇ ＢＩＤから達成され、平均血漿濃度は、５０ｍｇ ＱＤから６５０ｍｇ ＢＩＤまで用量比例様式で線形性を示した。単回用量のＴｍａｘ中央値は３．０～４．５時間（ＱＤ）及び１５．５～２４．０時間（ＢＩＤ）であり、定常状態でのｔ１／２中央値は６５．１～１０６．１時間（ＱＤ）及び３２．３～６６．４時間（ＢＩＤ）であった。用量拡大期における４５０ｍｇのＢＩＤにおいて、３５名の患者の曝露の中央値は、用量漸増における同じ用量レベルについて観察された中央値と類似しており、４５０ｍｇのＢＩＤにおいて有効な曝露に達したという知見と一致していた。ベルバラフェニブによるオンターゲット阻害及び経路阻害を確認するために、患者組織を、ｐＭＥＫ及びｐＥＲＫを含むＭＡＰＫ経路エフェクターについて分析したところ、結果として、ベルバラフェニブで処置した患者においてｐＭＥＫ及びｐＥＲＫの低下が観察された（データは示していない）。
【0071】
【表3】
【0072】
【表4】
【0073】
用量漸増期において、ベルバラフェニブに対する腫瘍応答を、少なくとも１つの投与後腫瘍応答評価を受けた６７名の患者において評価した。腫瘍応答を、２００ｍｇ ＱＤの用量レベルから観察した。７名の患者（１０．４％）が部分奏効（ＰＲ）の最良全奏効を達成し、２７名の患者（４０．３％）が安定疾患（ＳＤ）を達成した（表３、図３）。図３からの部分奏効結果を以下の表５に要約する。
【0074】
【表5】
【0075】
７人のレスポンダーの中で、４人の患者が、２５週間の無増悪生存期間（ｍＰＦＳ）中央値を有する（９５％ＣＩ、４．８推定不能）を有する、ＮＲＡＳ変異体黒色腫であった（９人の登録したＮＲＡＳｍ黒色腫患者のうち４４％）。以下の表６及び図４を参照されたい。表６中：「ｐｔｓ」は患者を指す；「ｍｅｌ」は黒色腫を指す」；「ｕｎｃｏｎｆ．」は未確認を指す；「ｃｏｎｆ．」は確認を指す；「ＢＯＲＲ」は、最良総合効果率を指す；「ＰＦＳ」は無増悪生存を指す；「ＤＯＲ」は応答の持続時間を指す；「ＮＥ」は推定不能を示す。ＢＯＲＲ（％）＝（ＣＲ又はＰＲとして最良総合効果を示した対象の数／対象の総数）＊１００。ＯＲＲ（％）＝（ＣＲ又はＰＲとして確認された最良総合効果を有する対象の数／対象の総数）＊１００。ＤＣＲ（％）＝（ＣＲ、ＰＲ又はＳＤとして最良総合効果を有する対象の数／対象の総数）＊１００。表６のＤＯＲの行において：ａは、１人の患者がＡＥのために中断したことを示す（Ｇ２ 疲労、Ｇ２ 鬱）；ｂは２人の患者が進行中であることを示す；及びｃは１人の患者が進行中であることを示す。
【0076】
【表6】
【0077】
ＮＲＡＳｍ黒色腫の４人中３人のレスポンダーが以前の免疫療法で進行し、ベルバラフェニブに応答した。以下の表７を参照されたい。表７中：「ＰＲ」は部分奏効を指す；「ＳＤ」は安定疾患を指す；「ＰＤ」は進行性疾患を指す；「ＢＯＲ」は最良総合効果を指す。
【0078】
【表7】
【0079】
用量拡大期では、ＮＲＡＳｍ黒色腫の１０人の患者のうち、２人の患者（２０％）がＰＲを達成し、４人の患者（４０％）がＳＤを有した。疾患制御率（ＤＣＲ：ＰＲ＋ＳＤ）は６０％であった（上記表５及び図５を参照されたい）。図５からの部分奏効結果を以下の表８に要約する。
【0080】
【表8】
【0081】
ＰＲを有する２名の患者もまた、免疫療法における以前の進行について注目され、ベルバラフェニブに応答した。ＢＲＡＦｍ黒色腫コホートでは、６人の患者のうち２人（３３％）がＰＲを達成し、ＤＣＲは８３％であった。ＢＲＡＦｍ ＣＲＣコホートでは、６人の患者のうち２人（３３％）がＰＲを達成した。ベルバラフェニブによる疾患制御（ＰＲ又はＳＤ）が、以前のＢＲＡＦＶ６００Ｅ阻害剤において進行した（用量漸増及び用量拡大からの）ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体黒色腫又はＣＲＣを有する６人の患者において観察された。表９を参照されたい。表中、「ＢＲＡＦｉ」はＢＲＡＦ阻害剤を指す；「ｕＰＲ」は、折り畳まれていないタンパク質応答を指す；「ｃＰＲ」は確認された部分奏効を指す。表９において、各患者の相は用量漸増相であり、状況は緩和的であった。
【0082】
【表9】
【0083】
ＢＲＡＦｍ ＧＩＳＴ、ＫＲＡＳｍ肉腫及びＫＲＡＳｍ膀胱がんを有する患者（それぞれｎ＝１）でも応答が認められ、腫瘍応答期間はそれぞれ３６週間、１８週間及び３３週間であった。さらに、６人の患者（ＢＲＡＦＶ６００Ｅ黒色腫［ｎ＝３］、ＮＲＡＳＧ１２Ｃ黒色腫［ｎ＝１］、ＢＲＡＦＶ６００ＥＧＩＳＴ［ｎ＝１］、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ［ｎ＝１］）が１年を超えて治療を維持した。図６及び図７は、用量漸増期及び用量拡大期におけるＰＲまでの時間で治療期間を示す。
【0084】
図６の１０回の最長期間の処置を以下の表１０に要約する。
【0085】
【表10】
【0086】
図７の７つの最長期間の処置を以下の表１１に要約する。
【0087】
【表11】
【0088】
結果は、ベルバラフェニブが４５０ｍｇ ＢＩＤのＲＤで一般に良好に忍容され、臨床的に示されるように、ＡＤＲが主にグレード１／２であり、管理可能であり、治療中断及び／又は支持療法で可逆的であったことを示している。最も頻繁に報告されたＴＥＡＥは、ざ瘡様皮膚炎、発疹、及び掻痒症を含む皮膚科学的毒性であった。ベルバラフェニブの安全性プロファイルは、それら又は他のＭＡＰＫ経路標的化阻害剤に匹敵すると予想される。ベルバラフェニブ治療でＳＣＣの症例が観察されなかった。ＳＣＣの発症は、臨床的に承認されたＢＲＡＦ阻害剤で観察される。
【0089】
ベルバラフェニブの第Ｉ相試験は、ＮＲＡＳｍ及びＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体腫瘍を有する患者において臨床活性を実証した。特に、ＮＲＡＳｍ黒色腫患者（用量漸増における４４％の最良総合効果率［ＢＯＲＲ］及び２４．９週間のＰＦＳ並びに用量拡大における２０％のＢＯＲＲ、表５）で観察されたベルバラフェニブの有効性は、ＮＲＡＳ駆動型ＭＡＰＫ活性化がＲＡＦ二量体阻害によって効果的に阻害され得るという臨床的証拠を提供する。この結果はまた、ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦ二量体を効果的に遮断するＩＩ型ＲＡＦ二量体阻害剤が、ＲＡＳ変異体に関連して逆説的活性化を誘導する、ＢＲＡＦＶ６００阻害剤、すなわちベムラフェニブ、ダブラフェニブ及びエンコラフェニブとは異なる臨床活性プロファイルを有することを示唆する。ビニメチニブで処置されたＮＲＡＳ変異体黒色腫患者における最近の臨床データは、ダカルバジン対照と比較して、１５％の全奏効率、２．８ヶ月のｍＰＦＳ、及びＯＳにおける有意差のないことを報告した（ＮＥＭＯ研究）。Ｄｕｍｍｅｒ Ｒ，Ｓｃｈａｄｅｎｄｏｒｆ Ｄ，Ａｓｃｉｅｒｔｏ ＰＡ，ｅｔ ａｌ．，“Ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂ ｖｅｒｓｕｓ ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ＮＲＡＳ－ｍｕｔａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ（ＮＥＭＯ）：ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ，ｏｐｅｎ－ｌａｂｅｌ，ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ，ｐｈａｓｅ ３ ｔｒｉａｌ”，Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １８：４３５－４４５，２０１７を参照されたい。黒色腫のこの亜集団における中程度の応答は、ＭＡＰＫシグナル伝達のより強い抑制が全生存利益のために必要であり、複数のリンパ節でＭＡＰＫ経路を標的化することがより永続的な有効性を提供し得ることを示唆している。Ｒｙａｎ ＭＢ，Ｃｏｒｃｏｒａｎ ＲＢ，“Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｔｏ ｔａｒｇｅｔ ＲＡＳ－ｍｕｔａｎｔ ｃａｎｃｅｒｓ”，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １５：７０９－７２０，２０１８を参照されたい。さらに、ベルバラフェニブに対する顕著な応答が、以前に免疫療法で処置されたか、又は以前のＢＲＡＦＶ６００Ｅ療法で処置され、進行した黒色腫患者においてさえも観察された（表６及び７）。１９人のＮＲＡＳ変異体黒色腫患者のうち、１２人は事前の免疫療法レジメンを受けており、５人は免疫療法で進行した後にベルバラフェニブに応答した。したがって、ベルバラフェニブは、標準的な免疫療法レジメンに失敗した黒色腫患者にとって有益なその後の戦略であり得る。
【0090】
ＮＲＡＳ変異体黒色腫で観察された応答に加えて、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体黒色腫を有する３名の患者において応答が観察され、したがって、ＭＡＰＫ変化型黒色腫腫瘍におけるベルバラフェニブの活性が裏付けられた。これらの患者の一部は、ベムラフェニブ及びダブラフェニブを含む事前のＢＲＡＦ治療を受けており、進行していた。１つの症例では、患者がＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異とＮＲＡＳ変異の両方を保有していることが観察され、この症例を更に詳しく調べると、ＮＲＡＳ変異が、ＢＲＡＦ標的化療法による４１ヶ月の治療後に獲得されたことが観察された。この患者は、最初にＢＲＡＦ標的化療法に対して完全奏効を達成したが、その後のＮＲＡＳ変異の獲得によって証明されるように、後に耐性を発症した。この患者は、ベルバラフェニブで９ヶ月にわたって処置され、部分奏効を達成した。ＢＲＡＦ阻害単独は、腫瘍におけるＮＲＡＳｍサブクローンの濃縮をもたらすことが知られており、ＢＲＡＦＶ６００阻害剤で処置された患者の１４％でＮＲＡＳ変異が同時に起こる。Ｔｒｕｎｚｅｒ Ｋ，Ｐａｖｌｉｃｋ ＡＣ，Ｓｃｈｕｃｈｔｅｒ Ｌ，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ”，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３１：１７６７－７４，２０１３を参照されたい。ＢＲＡＦ治療に対する耐性の機序が、ＢＲＡＦ治療耐性細胞株に対するベルバラフェニブの裏付けとなる前臨床データと一致して、ＲＡＦ二量体化に大きく収束することを考えると（Ｎａｍｇｏｏｎｇ Ｇ，Ｓ．Ｈ．Ｋｉｍ ＴＨＳ，Ｂａｅ ＩＨ，ｅｔ ａｌ：Ａ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔ ｐａｎ－ＲＡＦ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＨＭ９５５７３ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｈｉｇｈ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｓ ａ ｎｅｘｔ－ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ＲＡＦ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｂｙ ｄｉｒｅｃｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＲＡＦ ｋｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ＢＲＡＦ ｏｒ ＲＡＳ ｍｕｔａｎｔ ｃａｎｃｅｒｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ６９：Ｓ１２７，２０１６を参照されたい）、１つの理論の下で、特定の理論に縛られることなく、前述の患者におけるベルバラフェニブの活性は、ＲＡＦ二量体の阻害を介して駆動された可能性がある。
【0091】
重度に前処置されたＢＲＡＦ変異体ＣＲＣ患者（６人中２人の患者；ＢＯＲＲ３３％）で観察された応答は、非黒色腫ＢＲＡＦ変異体腫瘍におけるベルバラフェニブの強力な阻害機能を裏付けている。これらの結果はまた、５％～９％の奏効率を示したＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ腫瘍におけるＢＲＡＦ阻害剤単独療法の履歴データと対照的である。Ｃｏｒｃｏｒａｎ ＲＢ，Ａｔｒｅｙａ ＣＥ，Ｆａｌｃｈｏｏｋ ＧＳ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ＢＲＡＦ ａｎｄ ＭＥＫ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｗｉｔｈ Ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ ａｎｄ Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ ｉｎ ＢＲＡＦ Ｖ６００－Ｍｕｔａｎｔ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３３：４０２３－４０３１，２０１５；Ｋｏｐｅｔｚ Ｓ，Ｄｅｓａｉ Ｊ，Ｃｈａｎ Ｅ，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｓｅ ＩＩ Ｐｉｌｏｔ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ＢＲＡＦ－Ｍｕｔａｔｅｄ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３３：４０３２－４０３８，２０１５；及びＦａｌｃｈｏｏｋ ＧＳ，Ｌｏｎｇ ＧＶ，Ｋｕｒｚｒｏｃｋ Ｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｌａｎｏｍａ，ｕｎｔｒｅａｔｅｄ ｂｒａｉｎ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ，ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ：ａ ｐｈａｓｅ １ ｄｏｓｅ－ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｔｒｉａｌ”，Ｌａｎｃｅｔ ３７９：１８９３－９０１，２０１２を参照されたい。これらの違いはまた、ベルバラフェニブと臨床的に承認されたＢＲＡＦ阻害剤との間の作用機序の違いを強調している可能性が高い。ＢＲＡＦＶ６００変異体ＣＲＣにおけるエンコラフェニブと、ビニメチニブと、セツキシマブとの三重の組み合わせの臨床結果の改善（１１１人の患者においてＯＲＲ２６％）が最近報告された。Ｋｏｐｅｔｚ Ｓ，Ｇｒｏｔｈｅｙ Ａ，Ｙａｅｇｅｒ Ｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ｅｎｃｏｒａｆｅｎｉｂ，Ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂ，ａｎｄ Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ－Ｍｕｔａｔｅｄ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ”，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，２０１９を参照されたい。しかしながら、三重の組み合わせを受けた患者の５８％がグレード３以上のＡＥを経験した。対照的に、単一薬剤としてのベルバラフェニブは、好ましい安全性プロファイルで同じ患者集団において中程度の有効性を示しており、ＭＥＫ及びＥＧＦＲの阻害剤との組み合わせの適切な候補となっている。
【0092】
ベルバラフェニブは、ＫＲＡＳ変異体腫瘍を有する患者において限られた疾患制御を提供することが観察された。
【0093】
本実験データは、ベルバラフェニブによる連続１日２回経口治療が、ＮＲＡＳ－及びＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体黒色腫並びにＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ腫瘍において有望な臨床治療活性を提供することを示している。
【0094】
実施例２
【0095】
ベルバラフェニブを評価して、ＲＡＦ単量体及び二量体の阻害能力を測定した。結果を表１２及び１３に報告する。表１２において：「Ａ３７５」は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＡ３７５ヒト黒色腫細胞株を指す；「ＩＰＣ２９８」とは、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異を有するＩＰＣ２９８皮膚黒色腫細胞株のことを指す；「Ａ５４９」は、ＫＲＡＳ変異を有するＡ５４９肺腺がん細胞株を指す；「ＣＳＦＲ１」は、ＣＳＦＲ１遺伝子を指す；「ＤＤＲ１」は、ジスコイジンドメイン受容体ＤＤＲ１を指す；「ＤＤＲ２」は、ジスコイジンドメイン受容体ＤＤＲ２を指す。表１３において：「％Ｐ／Ｔ－ＭＥＫ」は、Ｐ－ＭＥＫと総ＭＥＫの比を指す；「コーン１」は、阻害剤の第１の（最低の）濃度を指す；「コーン２」は、阻害剤の第２の（中間）濃度を指す；「コーン３」は、第３（最高）の阻害剤濃度を指す。表１３において、ＬＸＨ２５４は、ＣＡＳ番号：１８００３９８－３８－２及び以下の構造を指す：
【0096】
【表12】
【0097】
【表13】
【0098】
実施例３
【0099】
以下の変異を有するＢＲＡＦ及びＮＲＡＳ変異体腫瘍株におけるｐａｎ－ＲＡＦ二量体阻害能力について、ベムラフェニブに対してベルバラフェニブを評価した：ＢＲＡＦＶ６００；ＫＲＡＳホットスポット；ＮＲＡＳホットスポット；及びＲＡＳ／ＲＡＦ野生型。細胞スクリーニングを、３日間の細胞生存率研究においてベムラフェニブ又はベルバラフェニブで処置したＢＲＡＦＶ６００変異体、ＮＲＡＳ変異体、ＫＲＡＳ変異体、及びＲＡＳ／ＲＡＦ野生型細胞を含む１４２の細胞株（肺、卵巣、結腸、乳房、脳、胃、及び子宮）のパネルにわたって行った。ＩＣ５０値（μＭ）は、非線形回帰分析を使用して４パラメータフィットを使用して決定した。ベムラフェニブの結果を図８Ａに示し、ベルバラフェニブの結果を図８Ｂに示す。結果は、ベルバラフェニブが、ＢＲＡＦＶ６００変異体腫瘍細胞株及びＮＲＡＳ変異体腫瘍細胞株を阻害するｐａｎ－ＲＡＦ二量体阻害剤であることを示す。したがって、ベルバラフェニブは、ＢＲＡＦ及びＮＲＡＳ変異体黒色腫において活性である。
【0100】
実施例４
【0101】
ベルバラフェニブをクローン原性アッセイにおいてＮＲＡＳ及びＢＲＡＦに対する阻害能力について評価した。細胞を、ある濃度範囲にわたって４つの濃度のベルバラフェニブで処置し、８日間培養し、次いで、クリスタルバイオレットで染色した。結果を図９に示し、図中、「ＨＴ２９」は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するヒト結腸直腸腺がん細胞株ＨＴ－２９を指す；「Ａ３７５」は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するヒト黒色腫細胞株を指す；「ＭＥＬ－ＪＵＳＯ」は、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異を有するヒト黒色腫細胞株ＭＥＬ－ＪＵＳＯを指す；「ＩＰＣ－２９８」は、ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異を有するヒト黒色腫細胞株を指す。図９の最高濃度の染色された細胞は、図８と相関する。結果は、ベルバラフェニブがｉｎ ｖｉｔｒｏでＢＲＡＦＶ６００Ｅ及びＮＲＡＳ変異体細胞株におけるコロニー細胞増殖を阻害することを示している。
【0102】
実施例５
【0103】
ベムラフェニブ及びベルバラフェニブを、ＢＲＡＦＶ６００変異を有する、ＮＲＡＳ変異を有する、ＫＲＡＳ変異を持有する、及びＲＡＳ／ＲＡＦ野生型変異を有する細胞株に対して濃度範囲にわたって評価した。細胞スクリーニングを、３日間の細胞生存率研究においてベムラフェニブ又はベルバラフェニブで処置したＢＲＡＦＶ６００変異体、ＮＲＡＳ変異体、ＫＲＡＳ変異体、及びＲＡＳ／ＲＡＦ野生型細胞下部を含む２７の皮膚細胞株のパネルにわたって行った。ＩＣ５０値（μＭ）は、非線形回帰分析を使用して４パラメータフィットを使用して決定した。ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体、ＮＲＡＳ変異体及び野生型の黒色腫細胞株についての細胞生存率データを、ベルバラフェニブによる３日間の治療の後で評価した。
【0104】
【0105】
ベルバラフェニブの結果の第２のセットを図１１に示す。ベルバラフェニブを、以下の細胞株に対して１ｎＭ～４０，０００ｎＭの濃度範囲にわたって評価した：ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するヒト黒色腫細胞株であるＷＭ－２６６－４；ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するヒト黒色腫細胞株であるＳＫ－ＭＥＬ－２８；ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するヒト黒色腫細胞株であるＩＧＲ－３７；ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するヒト黒色腫細胞株であるＡ３７５；ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異を有するヒト黒色腫細胞株であるＩＰＣ－２９８；ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異を有するヒト黒色腫細胞株であるＭｅｌＪｕＳｏ；ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有するヒト黒色腫細胞株であるＳＫ－ＭＥＬ－３０；ＮＲＡＳＱ６１Ｌ変異を有するヒト黒色腫細胞株であるＧＡＫ；及びヒト黒色腫細胞野生型細胞株であるＭｅｗｏ。結果を、濃度に対するＤＭＳＯに正常な対照の％で報告する。
【0106】
図１０Ａ、図１０Ｂ及び図１１は、ベルバラフェニブがｉｎ ｖｉｔｒｏでＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体及びＮＲＡＳ変異体の黒色腫腫瘍細胞株において単剤活性を示すという結果を示す。結果は、ベムラフェニブはＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体細胞株を阻害することができるが、ＮＲＡＳ変異体、ＫＲＡＳ変異体、又はＲＡＳ／ＲＡＦ野生型の細胞株を阻害することができないことを更に示す。
【0107】
実施例６
【0108】
変異体黒色腫同系モデル研究では、ダブラフェニブ及びベルバラフェニブを、Ａ３７５、ＨＣＴ－１１６及びＳＫ－ＭＥＬ－３０の細胞株の対照について経時的に評価した。ＨＣＴ－１１６は、ＫＲＡＳＧ１３Ｄ変異を有するヒト結腸がん細胞株である。
【0109】
図１２Ａは、以下を用いた２９日間の治療期間にわたるＡ３７５腫瘍体積（ｍｍ３）の結果を表す：対照の１日１回の２９日間の経口投与（ｎ＝８）；２９日間にわたる１日１回の１００ｍｇ／ｋｇのダブラフェニブの経口投与（ｎ＝８）；２９日間にわたる１日１回の３ｍｇ／ｋｇのベルバラフェニブ（ＨＭ９５５７３）の経口投与（ｎ＝８）；２９日間にわたる１日１回の１０ｍｇ／ｋｇベルバラフェニブ（ＨＭ９５５７３）の経口投与（ｎ＝８）；及び２９日間にわたる１日１回の３０ｍｇ／ｋｇのベルバラフェニブ（ＨＭ９５５７３）の経口投与（ｎ＝８）。
【0110】
図１２Ｂは、以下を用いた１４日間の治療期間にわたるＨＣＴ－１１６腫瘍体積（ｍｍ３）の結果を表す：対照の１日１回の１４日間の経口投与（ｎ＝７）；１４日間にわたる１日１回の１００ｍｇ／ｋｇのダブラフェニブの経口投与（ｎ＝７）；１４日間にわたる１日１回の１０ｍｇ／ｋｇベルバラフェニブ（ＨＭ９５５７３）の経口投与（ｎ＝７）；及び１４日間にわたる１日１回の３０ｍｇ／ｋｇのベルバラフェニブ（ＨＭ９５５７３）の経口投与（ｎ＝７）。
【0111】
図１２Ｃは、以下を用いた２８日間の治療期間にわたるＳＫ－ＭＥＬ－３０腫瘍体積（ｍｍ３）の結果を表す：対照の１日１回の２８日間の経口投与（ｎ＝８）；２８日間にわたる１日１回の１００ｍｇ／ｋｇのダブラフェニブの経口投与（ｎ＝８）；２８日間にわたる１日１回の１５ｍｇ／ｋｇベルバラフェニブ（ＨＭ９５５７３）の経口投与（ｎ＝８）；及び２８日間にわたる１日１回の３０ｍｇ／ｋｇのベルバラフェニブ（ＨＭ９５５７３）の経口投与（ｎ＝８）。
【0112】
結果は、ベルバラフェニブがＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ及びＮＲＡＳ変異体に対して強力なｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示すことを示している。ベルバラフェニブは、Ａ３７５（ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体）又はＳＫ－ＭＥＬ－３０（ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異体）異種移植マウスモデルにおいて、ビヒクル又はダブラフェニブのいずれよりも腫瘍体積を減少させるのに有効である（ｎ＝８／群、平均腫瘍体積±ＳＥＭ）。
【0113】
実施例７
【0114】
循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）の臨床評価では、ベルバラフェニブを、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体のがんを有する患者で評価した。結果を以下の表１４及び図１３に示す。図１３は、Ｃ１Ｄ１（サイクル１、１日目）におけるＢＲＡＦＶ６００Ｅ ＭＡＦと比較した、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体対立遺伝子頻度（ＭＡＦ）の変化％の結果を示す。ｃｔＤＮＡは、Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅから入手可能なＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ ＡＣＴ（登録商標）血液ベースの循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）アッセイによって測定した。
【0115】
【表14】
【0116】
結果は、臨床応答を有した全ての患者においてＢＲＡＦＶ６００Ｅ対立遺伝子が減少することを示している。結果は、安定疾患（ＳＤ）を有する患者においてＣ１Ｄ１５（サイクル１、１５日目）後に対立遺伝子頻度が再び増加することを更に示す。
【0117】
実施例８
【0118】
循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）の臨床評価では、ベルバラフェニブを、ＮＲＡＳ変異体のがんを有する患者で評価した。結果を以下の表１５及び図１４に示す。図１４は、Ｃ１Ｄ１（サイクル１、１日目）におけるＫＲＡＳ／ＮＲＡＳ ＭＡＦと比較した、ＫＲＡＳ／ＮＲＡＳ ＭＡＦの変化％の結果を表す。
【0119】
【表15】
【0120】
結果は、ＲＡＳ対立遺伝子が治療により安定であるか又は増加することを示す。
【0121】
実施例９
【0122】
循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）の臨床評価では、ベルバラフェニブを、ＢＲＡＦ、ＮＲＡＳ及びＫＲＡＳ変異体がんを有する患者で評価した。結果を図１５Ａ（ＢＲＡＦ変異）、１５Ｂ（ＮＲＡＳ変異）及び１５Ｃ（ＫＲＡＳ変異体）に示す。図では、結果を、それぞれ患者スクリーニングで測定された値と比較した、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ ＭＡＦ（図１５Ａ）、ＮＲＡＳ変異体ＭＡＦ（図１５Ｂ）及びＫＲＡＳ変異体ＭＡＦ（図１５Ｃ）における変化％で示す。図中、「ＣＲＣ」は結腸がんを指す；「Ｍｅｌ」は黒色腫を指す；「Ｎｅｐｈ」は腎芽細胞腫を指す；「ＭＵＯ」及び「？」はそれぞれ、未知の起源の転移を指す；「Ｅｎｄ」は内分泌を指す；「Ｐａｎｅ」は膵臓を指す；「ＰＤ」は進行性疾患を指す；「ＰＲ」は部分奏効を指す；及び「ＳＤ」は安定疾患を指す。
【0123】
結果は、ＰＤ患者よりもＰＲ／ＳＤにおいて対立遺伝子頻度のより顕著な減少があることを示す。結果は、ＢＲＡＦ変異体患者及びＮＲＡＳ変異体患者では明らかな効果を更に示すが、ＫＲＡＳ変異体患者では効果がより弱い。データは更に、ｃｔＤＮＡが進行に関するバイオマーカーであることを示す。
【0124】
実施例１０
【0125】
図５及び関連する表８に示すように、臨床試験で応答した患者のうちの２人のｃｔＤＮＡを、患者スクリーニング時のｃｔＤＮＡと比較して、治療期間にわたって評価した。ｃｔＤＮＡは、Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅから入手可能なＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ ＡＣＴ（登録商標）血液ベースの循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）アッセイによって測定した。
【0126】
図１６Ａは、治療開始時のＮＲＡＳＱ６１Ｒ黒色腫を有する患者のＣＴスキャンを示し、図１６Ｂは、４５０ｍｇ ＢＩＤの用量のベルバラフェニブによる８週間の治療後の患者のＣＴスキャンを示す。図１６Ｃは、治療開始時のＢＲＡＦＶ６００Ｅ結腸がんを有する患者のＣＴスキャンを示し、図１６Ｄは、４５０ｍｇ ＢＩＤの用量のベルバラフェニブによる８週間の治療後の患者のＣＴスキャンを示す。データは、レスポンダー症例が血漿ＮＲＡＳＱ６１Ｒ又はＢＲＡＦＶ６００ＥのｃｔＤＮＡの減少と相関することを示す。
【0127】
図１７Ａ～１７Ｃは、ＫＲＡＳ変異体患者に対するＢＲＡＦＶ６００Ｅ及びＮＲＡＳｍｕｔ患者の血漿ｃｔＤＮＡレベルにおけるドライバー変異の縦断的変化を示す。図１７Ａは、ベルバラフェニブ療法が安定した疾患若しくは部分奏効を達成したか、又は疾患が進行した、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ結腸がん、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ黒色腫及びＢＲＡＦＶ６００Ｅ腎芽細胞腫を有する患者についての、ベルバラフェニブ治療サイクル時間に対するＢＲＡＦＶ６００Ｅ ＭＡＦ ｃｔＤＮＡの結果を示す。図１７Ｂは、ベバラフェニブ処置が安定した疾患又は部分奏効を達成した、ＮＲＡＳｍｕｔ黒色腫及びＮＲＡＳｍｕｔ粘膜黒色腫を有する患者についての、ベルバラフェニブ治療サイクル時間に対するＮＲＡＳ変異体ＭＡＦ ｃｔＤＮＡの結果を示す。図１７Ｃは、ベルバラフェニブ治療が安定した疾患を達成したか、又は疾患が進行した、ＫＲＡＳｍｕｔ結腸がん、ＫＲＡＳｍｕｔ膵臓がん、ＫＲＡＳｍｕｔ子宮内膜がんを有する患者についての、ベルバラフェニブ治療サイクル時間に対するＫＲＡＳ変異体ＭＡＦ ｃｔＤＮＡの結果を示す図である。データは、ＰＲ／ＳＤにおける対立遺伝子頻度の低下がＰＤ患者よりも顕著であることを示す。
【0128】
実施例１１
【0129】
ベルバラフェニブのｉｎ ｖｉｔｒｏキナーゼ阻害選択性及び活性を、１８９種のキナーゼに対するキナーゼパネルアッセイ、並びにＺ’－ｌｙｔｅ（登録商標）生化学アッセイ、Ｌａｎｔｈａ（登録商標）結合アッセイ、及びＡｄａｐｔｅｒ（登録商標）アッセイを使用することによる選択されたキナーゼに対するその後の確認アッセイにおいて評価した。
【0130】
下記の表１６に報告されるように、ベルバラフェニブは、１０種のキナーゼ、すなわち、ＢＲＡＦ、ＢＲＡＦＶ５９９Ｅ、ＲＡＦ－１（ＣＲＡＦ）Ｙ３４０Ｄ Ｙ３４１Ｄ、ＣＳＦ１Ｒ（ＦＭＳ）、ＤＤＲ１、ＤＤＲ２、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８及びＥＰＨＢ２に対して１μＭで９０％超の酵素活性阻害を示した。６種の選択されたキナーゼに対する確認アッセイ（表１６）において、ベルバラフェニブは、（ＩＣ５０＝４１ｎＭ）、ＢＲＡＦＶ５９９Ｅ（７ｎＭ）、ＲＡＦ－１（ＣＲＡＦ）、Ｙ３４０Ｄ Ｙ３４１Ｄ（２ｎＭ）、ＣＳＦ１Ｒ（ＦＭＳ）（４４ｎＭ）、ＤＤＲ１（７７ｎＭ）及びＤＤＲ２（１８２ｎＭ）に対して強力な阻害効果を示した。ＢＲＡＦ（４１ｎＭ）及びＢＲＡＦＶ５９９Ｅ（７ｎＭ）に対するベルバラフェニブの阻害効果は、ベムラフェニブの阻害効果（それぞれ３８及び１１ｎＭ）に匹敵したが、ＲＡＦ－１（ＣＲＡＦ）Ｙ３４０Ｄ Ｙ３４１Ｄについては、ベルバラフェニブ（２ｎＭ）は、ベムラフェニブ（１２ｎＭ）よりも６倍強力であった。
【0131】
【表16】
†Ｔｙｒ３４０／Ｔｙｒ３４１のアスパラギン酸への保存された活性化変異（ＲＡＦ－１ Ｙ３４０Ｄ Ｙ３４１Ｄ）は、ＲＡＦ－１活性を構成的に増加させる。ＲＡＦ－１活性化には、Ｐａｋ（ｐ６５Ｐａｋ）によるＳｅｒ３３８での、及びＳｒｃファミリーキナーゼによるＴｙｒ３４０／Ｔｙｒ３４１でのＲＡＦ－１のリン酸化が必要である。
【0132】
実施例１２
【0133】
ＢＲＡＦＶ６００変異を有する黒色腫におけるそれらの有効性にもかかわらず、ベムラフェニブ及びダブラフェニブは、ＲＡＳ変異体及びＲＡＳ／ＲＡＦ野生型に対して無効であるだけでなく、ＥＲＫ活性化も誘導することが知られている。このため、ベムラフェニブに対するベルバラフェニブの間のＭＡＰＫシグナル伝達経路阻害プロファイルを、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体（ＳＫ－ＭＥＬ－２８及びＡ３７５）及びＮＲＡＳ変異体（ＳＫ－ＭＥＬ－２及びＳＫ－ＭＥＬ－３０）の黒色腫細胞を用いて調べた。
【0134】
表１７に示されるように、ＳＫ－ＭＥＬ－２８及びＡ３７５ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体の黒色腫細胞において、ベルバラフェニブ及びベムラフェニブの両方がＭＥＫ及びＥＲＫのリン酸化を阻害した。これに対して、ＮＲＡＳ変異体黒色腫細胞（ＳＫ－ＭＥＬ－２及びＳＫ－ＭＥＬ－３０）では、ベムラフェニブではなく、ベルバラフェニブのみがＭＥＫ及びＥＲＫのリン酸化に対する阻害効果を示した。ＭＥＫ及びＥＲＫリン酸化に対するベルバラフェニブのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞ＩＣ５０値は、ＳＫ－ＭＥＬ－２ではそれぞれ３３５ｎＭ及び２０４ｎＭであり、ＳＫ－ＭＥＬ－３０細胞株ではそれぞれ３８８ｎＭ及び２５８ｎＭであり、ベムラフェニブの対応する値は、ＳＫ－ＭＥＬ－２及びＳＫ－ＭＥＬ－３０細胞株の両方において１０μＭ超であった。
【0135】
【表17】
【0136】
実施例１３
【0137】
黒色腫細胞株におけるベムラフェニブ対他のＢＲＡＦ阻害剤、ベムラフェニブ及びダブラフェニブのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞増殖阻害活性を、ベムラフェニブ／ダブラフェニブ感受性ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＳＫ－ＭＥＬ－２８及びＡ３７５細胞株、並びにＮＲＡＳ変異を有するベムラフェニブ／ダブラフェニブ耐性黒色腫細胞株、ＳＫ－ＭＥＬ－２（ＮＲＡＳＱ６１Ｒ）及びＳＫ－ＭＥＬ－３０（ＮＲＡＳＱ６１Ｋ）の両方において評価した。結果は表１８に報告されており、ベルバラフェニブは、ベムラフェニブ／ダブラフェニブ感受性ＢＲＡＦ変異体黒色腫細胞株だけでなく、ベムラフェニブ／ダブラフェニブ耐性ＮＲＡＳ変異体黒色腫細胞株も強力に阻害したことを示している。ＳＫ－ＭＥＬ－２８、Ａ３７５、ＳＫ－ＭＥＬ－２及びＳＫ－ＭＥＬ－３０細胞株について、それぞれ６９、５７、５３及び２４ｎＭのＧＩ５０が決定された。予想通り、ベムラフェニブ及びダブラフェニブは、ＳＫ－ＭＥＬ－２８及びＡ３７５黒色腫細胞株において阻害活性を示したが、ＳＫ－ＭＥＬ－２及びＳＫ－ＭＥＬ－３０黒色腫細胞株では示さなかった。
【0138】
【表18】
【0139】
実施例１４
【0140】
ＫＲＡＳ変異体細胞株に対するベルバラフェニブ対他のＢＲＡＦ阻害剤（ベムラフェニブ及びダブラフェニブ）のｉｎ ｖｉｔｒｏ ＭＡＰＫシグナル伝達阻害活性を、ＣＲＣ細胞株ＨＣＴ１１６（ＫＲＡＳＧ１３Ｄ）及びＬｏｖｏ（ＫＲＡＳＧ１３Ｄ）、並びにＮＳＣＬＣ細胞株Ｃａｌｕ－６（ＫＲＡＳＱ６１Ｋ）で更に調査した。表１９に示されるように、ベムラフェニブ及びダブラフェニブではなく、ベルバラフェニブのみが、ＨＣＴ１１６、Ｌｏｖｏ及びＣａｌｕ－６細胞株においてＭＥＫ及びＥＲＫのリン酸化に対する阻害効果を示した。ＭＥＫ及びＥＲＫリン酸化に対するベルバラフェニブのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞ＩＣ５０値は、それぞれ、ＨＣＴ１１６において２，６９８ｎＭ及び２５３ｎＭであり、Ｌｏｖｏにおいて１０μＭ超（１０μＭで３７％阻害）及び２６７ｎＭであり、Ｃａｌｕ－６細胞株において３６７ｎＭ及び５９０ｎＭであった。ベムラフェニブ及びダブラフェニブの対応するＩＣ５０値は、ＨＣＴ１１６、Ｌｏｖｏ、及びＣａｌｕ－６細胞株において１０μＭ超であった。
【0141】
【表19】
【0142】
実施例１５
【0143】
他のＢＲＡＦ阻害剤、ベムラフェニブ及びダブラフェニブに対するベルバラフェニブのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞増殖阻害活性を、ＢＲＡＦ変異体ＣＲＣ細胞株：ＨＴ－２９及びＣｏｌｏ－２０５（両方ともＢＲＡＦＶ６００Ｅ）；ＫＲＡＳ変異体ＣＲＣ細胞株：ＬＳ１７４Ｔ（ＫＲＡＳＧ１２Ｄ）、ＬＳ５１３（ＫＲＡＳＧ１２Ｄ）、ＨＣＴ１１６（ＫＲＡＳＧ１３Ｄ）及びＬｏｖｏ（ＫＲＡＳＧ１３Ｄ）；並びにＫＲＡＳ変異体ＮＳＣＬＣ細胞株：Ｃａｌｕ－６（ＫＲＡＳＱ６１Ｋ）及びＣａｌｕ－１（ＫＲＡＳＧ１２Ｃ）で更に調査した。結果を表２０及び２１に報告する。
【0144】
ベルバラフェニブ及びベムラフェニブは、ＢＲＡＦ変異体ＣＲＣ細胞株ＨＴ－２９及びＣｏｌｏ－２０５（ＧＩ５０範囲＝４７～１１８ｎＭ）において細胞増殖阻害に対して同等の活性を示したが、ダブラフェニブは、ＧＩ５０＜０．１ｎＭでそれらの細胞において最も強力な細胞増殖阻害効果を示した。ベルバラフェニブは、ＬＳ１７４Ｔ、ＬＳ５１３、ＨＣＴ１１６及びＬｏｖｏを含むｉｎ ｖｉｔｒｏで試験した全てのＫＲＡＳ変異体ＣＲＣ細胞株においてＧＩ５０値がそれぞれ２５８、６２、１７７及び５１ｎＭで細胞増殖を阻害した（表２０）。ＫＲＡＳ変異体ＮＳＣＬＣ細胞株の細胞増殖阻害に対するベルバラフェニブの活性も、Ｃａｌｕ－６及びＣａｌｕ－１（それぞれ１７９ｎＭ及び７４９ｎＭのＧＩ５０）で観察された（表２１）。ダブラフェニブはまた、Ｌｏｖｏ（ＫＲＡＳ変異体、ＣＲＣ）細胞株（ＧＩ５０＝２１４ｎＭ）、並びにＣａｌｕ－６及びＣａｌｕ－１（ＫＲＡＳ変異体、ＮＳＣＬＣ）細胞株（それぞれ６１８ｎＭ及び９０４ｎＭのＧＩ５０）において、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞増殖阻害を示した。しかしながら、ダブラフェニブの活性は、Ｃａｌｕ－１細胞を除いて、ベルバラフェニブよりも約３～４倍弱かった。ベムラフェニブは、ＫＲＡＳ変異体細胞における増殖の阻害に対して活性を示さなかった。
【0145】
【表20】
【0146】
【表21】
【0147】
実施例１６
【0148】
ＢＲＡＦ又はＫＲＡＳ変異細胞株に対するベルバラフェニブ対他のＢＲＡＦ阻害剤、ベムラフェニブ及びダブラフェニブのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞増殖阻害活性を、ＢＲＡＦ変異体甲状腺細胞株：ＳＮＵ７９０、ＦＲＯ、Ｂ－ＣＰＡＰ、ＮＰＡ、８５０５Ｃ、ＡＲＯ（全てＢＲＡＦＶ６００Ｅ）、及びＳＮＵ８０（ＢＲＡＦＧ４６８Ｒ）；並びにＫＲＡＳ変異体甲状腺がん細胞株、ＣＡＬ－６２（ＫＲＡＳＧ１２Ｒ）で更に調査した。結果を表２２に要約する。
【0149】
ベルバラフェニブ及びダブラフェニブは、７つ全てのＢＲＡＦ変異体甲状腺がん細胞株において細胞増殖阻害に対する活性を示した（ＧＩ５０、＜１μＭ）。ベムラフェニブは、ＳＮＵ７９０、Ｂ－ＣＰＡＰ及びＮＰＡ、ＢＲＡＦ変異体甲状腺がん細胞株において、ＧＩ５０値＜１μＭで細胞増殖阻害効果を示した。さらに、ベムラフェニブ又はダブラフェニブではなく、ベルバラフェニブのみが、ＣＡＬ－６２（ＫＲＡＳＧ１２Ｒ）甲状腺がん細胞における細胞増殖阻害に対して活性を示し、ＧＩ５０値は４７９ｎＭであった。
【0150】
【表22】
【0151】
実施例１７
【0152】
ベルバラフェニブのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を、ＮＲＡＳＧ１３Ｄ変異体Ｋ１７３５同系マウス黒色腫モデルにおいて調べた。１群あたり７匹の動物を、ビヒクル（対照）、及び７．５又は１５ｍｇ／ｋｇの用量のベルバラフェニブを強制経口投与により１日１回処置した。表２３に示されるように、２２日目において、ベルバラフェニブに対する最大阻害率（ｍＩＲ）は、７．５ｍｇ／ｋｇにおいて４８．２％であり、１５ｍｇ／ｋｇにおいて５４．７％であった。阻害率（％）＝（処置群の１平均相対腫瘍重量／対照群の平均相対腫瘍重量）×１００。
【0153】
【表23】
【0154】
実施例１８
【0155】
ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有するＳＫ－ＭＥＬ－３０ヒト黒色腫細胞株を異種移植したマウスモデルにおいて、ベルバラフェニブのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を調べた。１群あたり５匹の動物を、ビヒクル（対照）、及び１０又は３０ｍｇ／ｋｇの用量のベルバラフェニブで、１４日目まで強制経口投与により１日１回処置した。
【0156】
表２４に示されるように、ベルバラフェニブの経口投与は、用量依存的な抗腫瘍活性をもたらし、それぞれ、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ、ｑ．ｄ．で７０．３％（１５日目）及び８０．０％（１５日目）の最大阻害率をもたらした。ベルバラフェニブによる治療は、体重減少を伴わずに忍容性が高かった。背部の発毛の臨床兆候が観察された。
【0157】
【表24】
【0158】
実施例１９
【0159】
ＮＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有するＳＫ－ＭＥＬ－３０ヒト黒色腫細胞株を異種移植したマウスモデルで、第２の実験において、ベルバラフェニブのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を調べた。１群あたり５匹の動物を、ビヒクル（対照）、及び１０又は３０ｍｇ／ｋｇの用量のベルバラフェニブで、２１日目まで強制経口投与により１日１回処置した。
【0160】
表２５に示されるように、ベルバラフェニブの経口投与は、用量依存的な抗腫瘍活性をもたらし、それぞれ、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ、ｑ．ｄ．で３６．７％（２１日目）及び７４．６％（２１日目）の最大阻害率をもたらした。
【0161】
【表25】
【0162】
実施例２０
【0163】
ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するＨＴ－２９ＣＲＣ細胞株を異種移植したマウスモデルの実験において、ベルバラフェニブのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を調べた。１群あたり５匹の動物を、ビヒクル（対照）、及び３０ｍｇ／ｋｇの用量のベルバラフェニブで、２１日目まで強制経口投与により１日１回処置した。
【0164】
表２６に示すように、ベルバラフェニブの経口投与では、３０ｍｇ／ｋｇで５９．８％（２２日目）の最大阻害率の抗腫瘍活性が得られた。
【0165】
【表26】
【0166】
実施例２１
【0167】
ＫＲＡＳＱ６１Ｋ変異を有するＣａｌｕ－６ＮＳＣＬＣ細胞株で異種移植されたマウスモデルの実験において、ベルバラフェニブのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を調べた。１群あたり５匹の動物を、ビヒクル（対照）、及び３、１０又は３０ｍｇ／ｋｇの用量のベルバラフェニブで、１７日目間強制経口投与により１日１回処置した。
【0168】
表２７に示されるように、ベルバラフェニブの経口投与は、用量依存的な抗腫瘍活性をもたらし、３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ、ｑ．ｄ．でそれぞれ５３．５％（１８日目）、７９．３％（１５日目）及び８６．３％（１２日目）の最大阻害率を示した。
【0169】
【表27】
【0170】
実施例２２
【0171】
抗ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１療法を含む最大２種類の全身抗がん療法を受けたＮＲＡＳ変異体転移性又は切除不能な局所進行性皮膚黒色腫を有する患者における単剤としてのベルバラフェニブの安全性、薬物動態及び活性を評価するために、第Ｉｂ相多施設試験を行う。
【0172】
この研究には、ＮＲＡＳ活性化変異を有する、測定可能な疾患（ＲＥＣＩＳＴ ｖｌ．１に従う）である、米国がん合同委員会、第８改訂版（Ａｍｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１７）によって定義される進行性黒色腫を有する患者が登録されるであろう。
【0173】
患者は、スクリーニング前の５年以内に、地元の保健局によって承認された臨床変異試験（例えば、米国食品医薬品局［ＦＤＡ］が承認した試験、米国病理医協会、Ｅ．Ｕ．各国でのＣＥマーキング［欧州適合性］ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断、又は等価物）の使用を通じて、地元の検査室によって決定されたように、黒色腫腫瘍組織におけるＮＲＡＳ突然変異陽性状態の記録（保管されているか、又は新規に取得される）を有するであろう。ＮＲＡＳ変異陽性状態は、エクソン２のＮＲＡＳ遺伝子コドン１２、１３及びエクソン３のコドン６１に生じる変異として定義される。
【0174】
最大１５人の患者が登録され、各２８日間サイクルの１～２８日目に錠剤形態の３００ｍｇ又は４００ｍｇのベルバラフェニブを１日２回（ＢＩＤ）投与される。ベルバラフェニブは、食事から３０分以内に投与される。
【0175】
試験治療のＰＫプロファイル及び免疫原性応答を特徴付けるため、投与前後の様々な時点で血液試料を採取する。ＰＫパラメータは、サイクル１、１日目及び定常状態に適切な場合、非コンパートメント法を使用して、投薬からの時間に対するベルバラフェニブの血漿中濃度から導出される：Ｃｍａｘ、ｔｍａｘ、公称時間０から時間ｔまでの濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ）（ＡＵＣ０－ｔ）。さらに、ベルバラフェニブの血漿中濃度を個々の値として報告し、適切な場合及びデータが許す場合に要約する。個々の及び平均のベルバラフェニブ濃度を治療群及び日ごとにプロットする。ベルバラフェニブ濃度データを、確立された集団ＰＫモデルを使用して他の試験からのデータと共にプールして、データによって保証されるクリアランス、分布容積及びＡＵＣ等のＰＫパラメータを導出することができる。関連するＰＫパラメータと用量、安全性、有効性又はバイオマーカーの結果との潜在的な相関関係を調べることができる。
【0176】
スクリーニング時（他の適格基準が満たされた後）、試験治療開始６週間後、及び疾患進行時の時点で、最低５人の患者が３回の連続生検を受ける必要がある。これらの患者からの追加の生検は、調査者の裁量で収集することができる。
【0177】
この明細書は、最良の様式を含む本発明を開示するため、かつ任意の当業者による任意のデバイス又はシステムの作製及び使用、並びに任意の組み込まれる方法の実行を含む、本発明の実施を可能にするために、実施例を使用する。本発明の特許取得の対象となる範囲は、特許請求の範囲によって定義され、当業者に想起される他の実施例を含み得る。そのような他の実施例は、それらが特許請求の範囲の文言と異ならない構造的要素を有する場合、又はそれらが特許請求の範囲の文言と実質的な差異を有さない同等の構造的要素を含む場合、特許請求の範囲内であることが意図される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【図13】
【図14】
【図15A】
【図15B】
【図15C】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図17C】
【図18】
【図19A】
【図19B】
【国際調査報告】