▶ サピエンス・セラピューティクス・インコーポレーテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-07-25
(54)【発明の名称】ＣＥＢＰ－βアンタゴニストの投与及び使用方法
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20230718BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230718BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20230718BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20230718BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20230718BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20230718BHJP
C07K 14/47 20060101ALN20230718BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00 ZNA
A61P35/00
A61K38/16
A61P35/04
A61K47/12
A61K47/26
C07K14/47
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022579019
(86)(22)【出願日】2021-06-21
(85)【翻訳文提出日】2023-01-30
(86)【国際出願番号】 US2021038264
(87)【国際公開番号】W WO2021262604
(87)【国際公開日】2021-12-30
(31)【優先権主張番号】63/041,989
(32)【優先日】2020-06-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/041,986
(32)【優先日】2020-06-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/041,991
(32)【優先日】2020-06-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/041,988
(32)【優先日】2020-06-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/172,560
(32)【優先日】2021-04-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/041,990
(32)【優先日】2020-06-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】520243444
【氏名又は名称】サピエンス・セラピューティクス・インコーポレーテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(72)【発明者】
【氏名】カッペル，バリー・ジェイ
(72)【発明者】
【氏名】メルトゥカ，ジーン
(72)【発明者】
【氏名】ロトロ，ジミー・アンドリュー
(72)【発明者】
【氏名】ミシェル，ロバート・イー
(72)【発明者】
【氏名】ベクソン，アリス・スザンナ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076BB13
4C076CC27
4C076DD43Z
4C076DD67
4C076FF04
4C076FF61
4C084AA01
4C084AA02
4C084AA17
4C084AA19
4C084BA01
4C084BA09
4C084BA18
4C084BA23
4C084CA59
4C084DA27
4C084MA02
4C084MA05
4C084MA16
4C084MA55
4C084MA66
4C084NA05
4C084NA12
4C084NA14
4C084ZA712
4C084ZB112
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZC442
4C084ZC452
4C084ZC751
4H045AA10
4H045BA17
4H045CA40
4H045EA28
4H045FA20
(57)【要約】
ＣＣＡＡＴ／エンハンサータンパク質β（Ｃ／ＥＢＰβ）のペプチドアンタゴニストの投与方法、及びＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを投与することによる固形腫瘍の治療方法を提供する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒト患者における固形腫瘍の治療方法であって、前記方法が、有効量のＣＣＡＡＴエンハンサー結合タンパク質β（Ｃ／ＥＢＰβ）のペプチドアンタゴニストを含む医薬組成物を前記患者に非経口投与することを含む、前記治療方法。
【請求項2】
前記固形腫瘍が、黒色腫、がん腫、または肉腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記患者が、局所進行／転移乳癌（ＬＡ／ＭＢＣ）、黒色腫、神経膠芽腫（ＧＢＭ）、または去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）と診断されている、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
前記患者が、化学療法、ホルモン療法、免疫療法、標的療法、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される前治療を受けている、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
前記ペプチドアンタゴニストが、Ｄ－アミノ酸配列ＶＡＥＡＲＥＥＬＥＲＬＥＡＲＬＧＱＡＲＧＥＬ（配列番号４）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
前記ペプチドアンタゴニストが、アミノ酸配列ＬＥＧＲＡＱＧＬＲＡＥＬＲＥＬＥＥＲＡＥＡＶ（配列番号３）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項7】
前記ペプチドアンタゴニストが、細胞透過性ペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
前記ペプチドアンタゴニストが、ＳＴ１０１である、請求項１に記載の方法。
【請求項9】
前記ペプチドアンタゴニストを、約０．５～１６ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与する、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記医薬組成物を、静脈内に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項11】
前記医薬組成物を、注入によって投与する、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記医薬組成物を、全注入時間約３０～約３６０分の静脈内注入によって投与する、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記全注入時間が約６０～約１８０分である、請求項１２に記載の方法または組成物。
【請求項14】
前記医薬組成物を、週１回投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項15】
前記医薬組成物を、２週に１回投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項16】
前記医薬組成物を、少なくとも４週間投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項17】
抗ヒスタミン剤、ロイコトリエン阻害剤、非ステロイド性抗炎症剤、アセトアミノフェン、コルチコステロイド、制吐剤、静脈内生理食塩水、及び電解質からなる群から選択される１つ以上の二次薬剤を、前記医薬組成物の投与と同時に、投与前に、または投与後に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項18】
抗ヒスタミン剤及び／またはロイコトリエン阻害剤を、前記医薬組成物の投与前の約４８時間以内に前記対象に投与する、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記医薬組成物が、緩衝剤及び増量剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項20】
前記医薬組成物が、乳酸及びトレハロースを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項21】
前記医薬組成物が、約３．０～８．０のｐＨを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項22】
ヒト患者におけるＨＲｐｏｓ ＬＡ／ＭＢＣの治療方法であって、前記方法が、有効量のＳＴ１０１を含む医薬組成物を静脈内注入により前記患者に投与することを含む、前記治療方法。
【請求項23】
ヒト患者における黒色腫の治療方法であって、前記方法が、有効量のＳＴ１０１を含む医薬組成物を静脈内注入により前記患者に投与することを含み、前記患者が、ＳＴ１０１の投与前に少なくとも１つの治療を受けている、前記治療方法。
【請求項24】
前記患者が、免疫チェックポイント阻害剤による治療後または治療中に進行している黒色腫を有し、前記患者が、進行性／転移性黒色腫を有する、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
前記患者がＢＲＡＦ変異を含む黒色腫を有し、前記患者が少なくとも１つの標的療法を受けている、請求項２３に記載の方法。
【請求項26】
ヒト患者における原発性ＧＢＭの治療方法であって、前記方法が、有効量のＳＴ１０１を含む医薬組成物を静脈内注入により前記患者に投与することを含む、前記治療方法。
【請求項27】
前記ＧＢＭが、最大の外科的切除、放射線療法、及び放射線療法と併用するテモゾロミドまたはテモゾロミドによる補助化学療法による前治療後に再発または進行している、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
ヒト患者におけるＣＲＰＣの治療方法であって、前記方法が、有効量のＳＴ１０１を含む医薬組成物を静脈内注入により前記患者に投与することを含む、前記治療方法。
【請求項29】
前記患者が、タキサン、アビラテロン、ダラルタミド、及び／またはエンザルタミド／アパルタミドによる前治療の後に進行しているＣＲＰＣを有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
ＳＴ１０１を約０．５～１６ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与する、請求項２２～２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項31】
前記医薬組成物を、少なくとも３週間にわたって週１回投与する、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記医薬組成物を、少なくとも４週間にわたって２週に１回投与する、請求項３０に記載の方法。
【請求項33】
前記医薬組成物が、トレハロース及び乳酸を含む、請求項２２～３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項34】
前記医薬組成物を、全注入時間約６０～約３６０分の静脈内注入によって投与する、請求項２２～３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項35】
ＳＴ１０１のクリアランスが、１時間あたり０．７５～３．５リットルである、請求項２２～３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項36】
ＳＴ１０１の半減期（ｔ１／２）が１０～７０時間である、請求項２２～３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項37】
ヒト患者における固形腫瘍の治療に使用するための有効量のＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを含む非経口投与用の医薬組成物。
【請求項38】
ヒト患者における黒色腫、ＨＲｐｏｓ ＬＡ／ＭＢＣ、原発性ＧＢＭ、またはＣＲＰＣの治療において使用するための有効量のＳＴ１０１を含む静脈内注入用の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年６月２１日に出願された米国仮出願第６３／０４１，９８６号、第６３／０４１，９８８号、第６３／０４１，９８９号、第６３／０４１，９９０号、及び第６３／０４１，９９１号ならびに２０２１年４月８日に提出された米国仮出願第６３／１７２，５６０号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。
本出願は、２０２０年６月２１日に出願された米国仮出願第６３／０４１，９８６号、第６３／０４１，９８８号、第６３／０４１，９８９号、第６３／０４１，９９０号、及び第６３／０４１，９９１号ならびに２０２１年４月８日に提出された米国仮出願第６３／１７２，５６０号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【0002】
ＣＣＡＡＴエンハンサー結合タンパク質β（Ｃ／ＥＢＰβ）は、分化、炎症、細胞生存、及び代謝などの細胞プロセスに関与する転写因子である。Ｃ／ＥＢＰβは、上方制御または過剰活性化されて、腫瘍の生存と増殖を促進し、乳癌、神経膠芽腫、前立腺癌、及び多発性骨髄腫を含む多くの異なるがんの分化を阻害する（Ｈｏｍｍａ ２００６，Ｋｉｍ ２００８，Ｐａｌ ２００９，Ｚａｈｎｏｗ ２００９，Ａｇｕｉｌａｒ－Ｍｏｒａｎｔｅ ２０１１）。さらに、Ｃ／ＥＢＰβは、疾患の予後及び生存率と逆相関することが示されている。細胞の増殖と分化の調節におけるその役割（Ｌｅｋｓｔｒｏｍ－Ｈｉｍｅｓ １９９８；Ｌａｍｂ ２００３）、及び多くの種類のがんにおける発現または活性化の増加（Ｏｙａ ２００３；Ｈｏｍｍａ ２００６；Ｚａｈｎｏｗ ２００９）により、Ｃ／ＥＢＰβは、治療介入の潜在的な標的と考えられている。しかしながら、部分的には転写因子を標的とすることが困難なため、効果的ではないＣ／ＥＢＰβ阻害剤が、本発明の前に臨床開発に入っていた。
【0003】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に援用される。ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年６月１８日に作成され、名称はＳａｐｉｅｎｃｅ＿０１３＿ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔ、サイズは２，０４７バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に援用される。ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年６月１８日に作成され、名称はＳａｐｉｅｎｃｅ＿０１３＿ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔ、サイズは２，０４７バイトである。
【発明の概要】
【0004】
本発明の主な態様のいくつかを以下に要約する。本開示の発明の詳細な説明、実施例、図面、及び特許請求の範囲の節に、追加の態様が記載されている。本開示の各節の説明は、他の節と併せて読まれることを意図している。さらに、本開示の各節に記載された様々な実施形態を、様々な異なる方法で組み合わせることができ、そのような組み合わせのすべてが本発明の範囲内にあることが意図される。
【0005】
本開示は、患者における固形腫瘍の治療方法を提供し、この方法は、有効量のＣＣＡＡＴエンハンサー結合タンパク質β（Ｃ／ＥＢＰβ）のペプチドアンタゴニストを含む医薬組成物を患者に非経口投与することを含む。また、患者の固形腫瘍の治療に使用するための有効量のＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを含む非経口投与用の医薬組成物も提供する。好ましくは、約０．５～１６ｍｇ／ｋｇの用量でペプチドアンタゴニストを患者に投与する。
【0006】
一実施形態では、固形腫瘍は、黒色腫、がん腫、または肉腫である。特定の実施形態では、患者は、局所進行／転移乳癌（ＬＡ／ＭＢＣ）、黒色腫、神経膠芽腫（ＧＢＭ）、または去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）と診断されている。
【0007】
いくつかの例では、患者は、化学療法、ホルモン療法、免疫療法、標的療法、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される前治療を受けている。一実施形態では、前治療は、患者の診断のための標準治療（ｓｔａｎｄａｒｄ－ｏｆ－ｃａｒｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）である。
【0008】
一実施形態では、Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、Ｄ－アミノ酸配列ＶＡＥＡＲＥＥＬＥＲＬＥＡＲＬＧＱＡＲＧＥＬ（配列番号４）を含む。一実施形態では、ペプチドアンタゴニストは、アミノ酸配列ＬＥＧＲＡＱＧＬＲＡＥＬＲＥＬＥＥＲＡＥＡＶ（配列番号３）を含む。ペプチドアンタゴニストは、細胞透過性ペプチドであり得る。特定の実施形態では、ペプチドアンタゴニストはＳＴ１０１である。
【0009】
本発明の特定の方法には、患者の黒色腫、ＨＲｐｏｓ ＬＡ／ＭＢＣ、原発性ＧＢＭ、またはＣＲＰＣの治療方法が含まれ、この方法は、有効量のＳＴ１０１を含む医薬組成物を静脈内注入によって患者に投与することを含む。また、患者の黒色腫、ＨＲｐｏｓ ＬＡ／ＭＢＣ、原発性ＧＢＭ、またはＣＲＰＣの治療において使用するための有効量のＳＴ１０１を含む静脈内注入用の医薬組成物も提供する。
【0010】
好ましい実施形態では、患者はヒト患者である。
【0011】
特定の実施形態では、患者は、ＳＴ１０１の投与前に少なくとも１系統の治療を受けている。
【0012】
一実施形態では、患者は、免疫チェックポイント阻害剤による治療後または治療中に進行した進行性／転移性黒色腫を有する。一実施形態では、患者はＢＲＡＦ変異を含む黒色腫を有し、患者は少なくとも１系統の標的療法を受けている。
【0013】
一実施形態では、ＧＢＭは、最大の外科的切除、放射線療法、及び放射線療法と併用するテモゾロミドまたはテモゾロミドによる補助化学療法による前治療後に再発または進行している。
【0014】
一実施形態では、患者は、タキサン、アビラテロン、ダラルタミド、及び／またはエンザルタミド／アパルタミドによる前治療の後に進行したＣＲＰＣを有する。
【0015】
特定の実施形態では、医薬組成物を、例えば、注入を介して患者に静脈内投与する。いくつかの実施形態では、全注入期間は、約３０分間～約３６０分間、または約６０分間～約３６０分間、または約６０分間～約１８０分間である。
【0016】
一態様では、医薬組成物を、週１回投与する。別の態様では、医薬組成物を、２週間に１回投与する。医薬組成物は、少なくとも約３週間または少なくとも約４週間投与することができる。
【0017】
本発明のいくつかの実施形態は、１つ以上の二次薬剤の投与を含む。例えば、二次薬剤は、抗ヒスタミン剤、ロイコトリエン阻害剤、非ステロイド性抗炎症剤、アセトアミノフェン、コルチコステロイド、制吐剤、静脈内生理食塩水、電解質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。１つ以上の二次薬剤は、医薬組成物の投与と同時に、投与前、または投与後に対象に投与することができる。特定の実施形態では、抗ヒスタミン剤及び／またはロイコトリエン阻害剤を、医薬組成物の投与前の約４８時間以内に対象に投与する。
【0018】
特定の実施形態では、医薬組成物は、緩衝剤及び増量剤を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、乳酸及びトレハロースを含む。医薬組成物のｐＨは、例えば、約３．０～８．０であり得る。
【0019】
本発明のいくつかの実施形態では、ＳＴ１０１のクリアランスは、１時間あたり０．７５～３．５リットルである。いくつかの実施形態では、ＳＴ１０１の半減期（ｔ１／２）は、１０～７０時間である。
【図面の簡単な説明】
【0020】
【図1】ＳＴ１０１の作用機序を示す。Ｃ／ＥＢＰβは、腫瘍細胞の増殖と生存を促進し、多くの細胞型の分化を阻害する。ＳＴ１０１は、Ｃ／ＥＢＰβとＡＴＦ５などの補因子との相互作用を妨害し、細胞から発がん性シグナルを取り除き、選択的な腫瘍細胞死をもたらす。
【図2】Ｃ／ＥＢＰβ（下部）に結合したＳＴ１０１（上部）のモデル化構造を示す。この構造は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）のモデル（ＰＤＢ ＩＤ １ｃｉ６）として、Ｃ／ＥＢＰβに結合したＡＴＦ４の結晶構造を使用して生成された。
【図3】円偏光二色性（ＣＤ）分光法を示し、ＳＴ１０１がＣ／ＥＢＰβ（パネルＡ）とは相互作用するが、ＡＴＦ５（パネルＢ）とは相互作用しないことを示す。ＳＴ１０１（上の灰色の線、パネルＡ及びＢ）、Ｃ／ＥＢＰβ（薄い灰色の線、パネルＡ）及びＡＴＦ５（薄い灰色の線、パネルＢ）の個々のスペクトルを示す。黒の線は、実際のＳＴ１０１＋Ｃ／ＥＢＰβ（パネルＡ）またはＳＴ１０１＋ＡＴＦ５（パネルＢ）の観察結果と、２つのそれぞれの個々のスペクトルの平均を表す破線との比較を示す。
【図4】Ｕ２５１ヒト神経膠芽腫細胞において、ＳＴ１０１がＣ／ＥＢＰβと会合することを示す細胞サーマルシフトアッセイを示す。Ｃ／ＥＢＰβ／β－チューブリンのウエスタンブロット（パネルＡ）及びデンシトメトリー定量化（パネルＢ）を示す。
【図5】波長範囲にわたるモル残基楕円率（ＭＲＥ）で表されるように、Ｃ／ＥＢＰβがＡＴＦ５よりもＳＴ１０１と優先的に相互作用することを示す。パネルＡの２２０ｎｍでの最も低い線は、ＳＴ１０１＋Ｃ／ＥＢＰβのスペクトルを示し；パネルＢの最も高い線は、ＳＴ１０１＋ＡＴＦ５のスペクトルを示す。薄い灰色の線は、ＡＴＦ５（パネルＡの２２０ｎｍでの上部の線）またはＣ／ＥＢＰβ（パネルＢの２２０ｎｍでの底部の線）の個々のスペクトルを示す。黒の線は、ＡＴＦ５と共にインキュベートしたＳＴ１０１＋Ｃ／ＥＢＰβの実際のスペクトルを、ＳＴ１０１＋Ｃ／ＥＢＰβとＡＴＦ５スペクトルの平均（パネルＡ）またはＳＴ１０１＋ＡＴＦ５とＣ／ＥＢＰβスペクトルの平均（パネルＢ）を表す破線と比較して示す。
【図6】ＳＴ１０１がＣ／ＥＢＰβとＡＴＦ５との相互作用を妨害することを示す。Ｃ／ＥＢＰβへのＡＴＦ５の結合をパネルＡに示す。Ｃ／ＥＢＰβへのＡＴＦ５の結合のＳＴ１０１による阻害をパネルＢに示す。
【図7】ＳＴ１０１がマウスの血液脳関門を通過することを示す。代表的な画像は、微小血管及びグリア細胞のＤＡＢ（３，３－ジアミノベンジジン）染色によって識別されるＳＴ１０１を示しており（矢印、パネルＢ）、ビヒクル処置対照（パネルＡ）では染色は存在していない。
【図8】実施例６に記載される研究の状況を示す。ＰＲ＝部分奏効（少なくとも３０％の減少）；ＳＤ＝不変（３０％未満の減少及び２０％の増加）。
【図9】実施例６に記載される、サイクル１及び２についてのコホート１～４の患者における１日目の注入後のＳＴ１０１血漿濃度を示す。ＳＴ１０１を、０．５ｍｇ／ｋｇ（コホート１）、１ｍｇ／ｋｇ（コホート２）、２ｍｇ／ｋｇ（コホート３）、または４ｍｇ／ｋｇ（コホート４）の用量で投与した。
【図10】実施例６に記載される、コホート１～４の１日目の注入後の個々の患者のＳＴ１０１のＣｍａｘ（パネルＡ）及びＡＵＣ０－ｔ（パネルＢ）を示す。ＳＴ１０１を、０．５ｍｇ／ｋｇ（コホート１）、１ｍｇ／ｋｇ（コホート２）、２ｍｇ／ｋｇ（コホート３）、または４ｍｇ／ｋｇ（コホート４）の用量で投与した。
【図11】実施例６に記載されるように、コホート１～４の患者における注入の４時間後のＳＴ１０１血漿濃度を示す。ＳＴ１０１を、０．５ｍｇ／ｋｇ（コホート１）、１ｍｇ／ｋｇ（コホート２）、２ｍｇ／ｋｇ（コホート３）、または４ｍｇ／ｋｇ（コホート４）の用量で投与した。
【図12】ＳＴ１０１の用量漸増に伴う腫瘍生検におけるＳＴ１０１取り込みの増加を示す（パネルＡ～Ｃ）。治療のサイクル２中に患者から採取した生検試料を処理し、ウサギポリクローナル抗ＳＴ１０１抗体を使用してＳＴ１０１のイムノアッセイを行った。ＳＴ１０１染色を示す細胞の割合は、委員会認定の病理学者が測定した（パネルＤ）。スコアは、試料中のＳＴ１０１陽性染色細胞数に基づいて割り当てた：０＝陰性；１＝１～１０％；２＝１１～２５％；３＝２６～５０％；４＝５１～７５％；５＝７６～１００％。
【図13】ＳＴ１０１による処置後の患者生検における腫瘍細胞増殖の減少を示す。処置前（スクリーニング）及び処置のサイクル２後に患者から採取した生検試料を処理し、Ｋｉ６７についてイムノアッセイを行った。パネルＡの画像は、処置前（上の画像）と処置のサイクル２（下の画像）後のコホート３の患者由来の生検試料の染色を示す。Ｋｉ６７の発現が高いほど、腫瘍細胞の増殖が大きいことを示している。各コホート１～３の患者由来のＫｉ６７染色を示す細胞の割合を、委員会認定の病理学者が測定した（パネルＢ）。スコアは、Ｋｉ６７シグナルの強度に基づいて、０～３のスケールで割り当てた：０＝陰性；１＝軽度；２＝中等度；３＝高度。
【発明を実施するための形態】
【0021】
本発明の実施は、特に明記されない限り、薬学、製剤科学、タンパク質化学、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、免疫学、臨床薬理学、及び臨床診療の従来の技術を使用することができ、これらは当技術分野の範囲内である。
【0022】
本発明が、より容易に理解できるように、特定の用語を最初に定義する。さらなる定義は、本開示の全体を通して記載されている。特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明に関連する当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。
【0023】
本明細書で提供される見出しは、本明細書全体を参照することによって得られる本発明の様々な態様または実施形態を限定するものではない。したがって、以下に定義される用語は、本明細書全体を参照することによってより完全に定義される。
【0024】
本開示に引用されるすべての参考文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。さらに、本明細書で引用または言及する製品の製造元の指示書またはカタログは、参照により援用される。参照により本明細書に援用される文書、またはその中の任意の教示を、本発明の実施において使用することができる。参照により本明細書に援用される文書は、先行技術であると認めるものではない。
【0025】
Ｉ．定義
本開示における表現または用語は、説明を目的としており、制限するものではなく、ゆえに本明細書の用語または表現は、その教示及び指針に鑑み、当業者によって解釈されるべきである。
本開示における表現または用語は、説明を目的としており、制限するものではなく、ゆえに本明細書の用語または表現は、その教示及び指針に鑑み、当業者によって解釈されるべきである。
【0026】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈により別様に明確に示されない限り、複数形の指示対象を含む。用語「ａ」（または「ａｎ」）、ならびに用語「１つ以上の」及び「少なくとも１つ」は、同じ意味で使用され得る。
【0027】
さらに、「及び／または」は、２つの指定された機能または構成要素の、他方の存在下または非存在下での、それぞれの特定の開示とみなされる。したがって、「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される用語「及び／または」は、Ａ及びＢ、ＡまたはＢ、Ａ（単独）、及びＢ（単独）を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される用語「及び／または」は、Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＢ；ＡまたはＣ；ＢまたはＣ；Ａ及びＢ；Ａ及びＣ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）を含むことを意図している。
【0028】
実施形態が文言「含む」で記述される場合は常に、用語「からなる」及び／または「から本質的になる」で記述され、それ以外の点では類似する実施形態が包含される。
【0029】
単位、接頭辞、及び記号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄ’Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）で承認された形式で示される。数値範囲は、範囲を定義する数値を包含し、本明細書で提供される任意の個々の値は、本明細書で提供される他の個々の値を含む範囲の端点として機能し得る。例えば、１、２、３、８、９、及び１０などの値のセットは、１～１０、１～８、３～９などの数の範囲の開示でもある。同様に、開示される範囲は、整数及び分数を含む、範囲に包含される個々の値（すなわち、中間値）の開示である。例えば、５～１０の記載範囲は、個別に５、６、７、８、９、及び１０の開示でもあり、５．２、７．５、８．７などの開示でもある。
【0030】
特に明記されない限り、一連の要素に先行する用語「少なくとも」または「約」は、一連の要素のすべてを指すものと理解される。数値の前にある用語「約」には、記載される値の±１０％が含まれる。例えば、約１ｍｇ／ｍＬの濃度は、０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、約１％～１０％（ｗ／ｖ）は、０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。
【0031】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマー及びそれらの塩を指す。ポリマーは、直鎖状であっても分岐状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されていてもよい。他に示されている場合を除き、例えば、本明細書に記載の一般的でないまたは非天然のアミノ酸の略語について、当技術分野で使用されている３文字及び１文字の略語が、本明細書においてアミノ酸残基を表すために使用される。「Ｄ」または小文字で始まる場合を除き、アミノ酸はＬ－アミノ酸である。アミノ酸の略語の群または文字列は、ペプチドを表すために使用される。特に明記しない限り、ペプチドは左側がＮ末端で示され、配列はＮ末端からＣ末端に向かって記述される。
【0032】
「レトロインベルソ」ペプチドは、参照Ｌ－アミノ酸配列と比較して逆のアミノ酸配列を有し、すべてＤアミノ酸で構成され（アミノ酸サブユニットのα中心のキラリティーを反転させる）、元のＬ－アミノ酸ペプチドと同様の側鎖トポロジーを維持しやすくする。
【0033】
「単離された」分子とは、精製されている分子を含む、天然には見出されない形態の分子である。
【0034】
「結合親和性」とは、一般に、分子の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、受容体とそのリガンド、抗体とその抗原、二量体を形成する２つの単量体など）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。特に明記されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性結合パートナーは、一般に、ゆっくり結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性結合パートナーは、一般に、より早く結合し、より長く結合したままである傾向がある。
【0035】
その結合パートナーに対する分子の親和性または結合活性は、当技術分野で公知の任意の好適な方法、例えば、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または動力学（例えば、ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）もしくはＢＩＡＣＯＲＥ（商標）もしくはＯＣＴＥＴ（登録商標）分析）を使用して実験的に測定することができる。直接結合アッセイ及び競合結合アッセイ形式を容易に使用することができる（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，ＷＥ，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＷＨ Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）を参照のこと）。測定される特定の結合対相互作用の親和性は、異なる条件（例えば、塩濃度、ｐＨ、温度）で測定した場合、様々に異なり得る。したがって、親和性及び他の結合パラメータ（例えば、ＫＤまたはＫｄ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定は、当技術分野で公知のように、結合パートナーの標準化された溶液及び標準化された緩衝液を使用して行う。
【0036】
「活性薬剤」は、生物学的活性を与えることを意図した成分である。活性薬剤は、１つ以上の他の成分と併用することができる。ペプチドである活性薬剤は、「活性ペプチド」と呼ばれ得る。
【0037】
活性薬剤の「有効量」は、具体的に述べられた目的を実行するのに十分な量である。
【0038】
用語「医薬組成物」とは、活性成分の生物学的活性を有効にさせる形態であり、組成物を投与する対象に許容しがたい程度に毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。そのような組成物は無菌であり得、生理食塩水などの薬学的に許容される担体を含み得る。好適な医薬組成物は、緩衝剤（例えば、酢酸塩、リン酸塩、またはクエン酸塩緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、安定化剤（例えば、ポリオールまたはアミノ酸）、防腐剤（例えば、安息香酸ナトリウム）、及び／または他の従来の可溶化剤または分散剤を含み得る。
【0039】
「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」は、診断、予後、または治療が望まれる任意の対象、特に哺乳動物対象である。哺乳動物対象には、ヒト、飼育動物、家畜、競技動物、及び実験動物が含まれ、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ウマ、ラット及びマウスを含むげっ歯類、ウサギなどが挙げられる。
【0040】
「治療する」または「治療」または「治療すること」または「緩和する」または「緩和すること」などの用語は、症状を治癒、減速、軽減し、及び／または診断された疾病状態または障害の進行を止める治療手段を指す。特定の実施形態では、患者が疾患または障害に関連する少なくとも１つの症状または測定可能な身体パラメータの全体的、部分的、または一時的な緩和または除去を示す場合、対象は、疾患または障害を成功裏に「治療」される。
【0041】
「対照患者」は、本発明の治療を受けていない対象である。「対照集団」または「対照患者の集団」は、本発明の治療を受けていない対象の群である。対照集団中の対照患者または対象は、対照患者または対照集団と比較される対象と同じ疾患または障害を有する。例えば、本発明の医薬組成物または方法を投与したがん患者の臨床転帰を、本発明の医薬組成物または方法を投与しなかった同じタイプのがんを有する対象の平均（中央値）転帰と比較する。いくつかの実施形態では、対照患者または対照集団中の患者は、本発明の治療以外の治療、例えば標準治療を受けている。
【0042】
「アンタゴニスト」とは、受容体またはリガンドなどの別の分子の生物学的活性または効果を防止、遮断、阻害、中和、または低減する物質である。
【0043】
用語「阻害する」、「遮断する」、及び「抑制する」は同じ意味で使用され、発生または活動の完全な遮断を含む、発生または活動の統計的に有意な減少を指す。例えば、「阻害」は、活動または発生の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％の減少を指し得る。「阻害剤」とは、プロセス、経路、または分子の発生または活性を統計的に有意に減少させる分子、因子、または物質である。
【0044】
「新生物細胞」または「新生物」は、通常、何らかの形態の変異／形質転換を受けており、同じタイプの正常な細胞または組織と比較して、異常な増殖を引き起こす。新生物には、形態学的不規則性、及び病理学的増殖が含まれる。新生物細胞は、良性または悪性であり得る。悪性新生物、すなわちがんは、細胞の分化及び配向の喪失を示し、浸潤及び転移の特性を有するという点で良性とは区別される。
【0045】
「腫瘍」または「固形腫瘍」は、がん細胞などの腫瘍細胞の塊である。用語「進行」、「転移」、及び「進行／転移」は、同じ意味で使用され、悪性細胞が元の腫瘍から患者の体内の別の場所、例えば、別の臓器に移行したがんを説明する。
【0046】
「薬物動態」または「ＰＫ」とは、投与した物質が対象の身体によってどのように処理されるかの研究を指す。ＰＫの決定には、物質がどのように血液循環に入り（吸収）、体液及び体組織全体に分散または拡散（分布）し、体によって認識され、変換（代謝）され、体から除去（排泄）されるかが含まれる。物質は、薬物、例えばＳＴ１０１であってもよい。薬物動態は、様々な測定基準を使用して評価してもよく、その多くは、物質の投与後の様々な時点での体内（例えば、血漿中）の物質の量に基づいて計算される。
【0047】
投与後の時間は、物質の単回投与を開始する時間であるＴ０から測定される。医薬組成物の投与が全注入期間中に１回以上一時停止及び再開される場合、Ｔ０は全注入期間の開始時である。
【0048】
「全注入時間」または「全注入期間」とは、医薬組成物の単回投与の開始から投与終了までの時間であり、注入期間と中断期間の両方が含まれる。
【0049】
「Ｃｍａｘ」は、投与後の物質のピーク血漿濃度を指す薬物動態測定基準である。
【0050】
「Ｔｍａｘ」は、物質の投与開始（Ｔ０）からＣｍａｘに達するまでの時間を指す薬物動態測定基準である。
【0051】
「Ｔｌａｓｔ」は、物質の最後の定量化可能な濃度の時間を指す薬物動態測定基準である。
【0052】
「ＡＵＣ」または「曲線下面積」は、血漿中の物質の濃度の変動を時間の関数として表す薬物動態測定基準である。ＡＵＣは、例えば、時間ゼロから指定された時間ｔまで（ＡＵＣｔまたはＡＵＣ０－ｔ）、時間ゼロから無限大まで（ＡＵＣ∞またはＡＵＣ０－∞）など、様々な期間について計算され得る。
【0053】
「排出半減期」または「半減期」または「ｔ１／２」とは、物質の濃度がその元の値の半分に達するのに必要な時間を指す薬物動態測定基準である。
【0054】
「クリアランス」は、単位時間あたりの物質が除去された血漿の容積を指す薬物動態測定基準である。
【0055】
「Ｖｚ」は、終末期の分布容積を指す薬物動態測定基準である。
【0056】
ＩＩ．ペプチド及び組成物
Ｃ／ＥＢＰβ
転写因子（ＴＦ）は、すべての既知のがん遺伝子のおよそ２０％を占め、多くのヒトのがんに関与している（Ｌａｍｂｅｒｔ ２０１８）。それにもかかわらず、ＴＦは、低分子ではその活性に影響を与えることができず、あるいは大きな分子では細胞内に到達することができないために、歴史的に「手に負えない」標的と見なされてきた（Ｙａｎ ２０１３；Ｂｕｓｈｗｅｌｌｅｒ ２０１９）。ＴＦは通常、αヘリックス塩基性ロイシンジッパー（ｂＺＩＰ）ドメインを介して二量体化し、ＤＮＡ結合ドメインをまとめて、ＤＮＡ内の重要なコンセンサス配列との効率的な相互作用を可能にする（Ａｓａｄａ ２０１１；Ｐｏｔａｐｏｖ ２０１５）。これらのＴＦタンパク質間相互作用（ＰＰＩ）の破壊は、この捉えどころのないクラスの標的に薬物を投与するための強力なアプローチとなり得る。最近、ペプチドは、高い親和性と特異性でＴＦ相互作用を標的にして破壊することができる治療クラスとして浮上しており、実証実験の拮抗作用が、以前は「手に負えなかった」複数の標的に対して示されている（Ｔａｋａｄａ ２０１２；Ｗａｌｅｎｓｋｙ ２０１４；Ｂｒｕｚｚｏｎｉ－Ｇｉｏｖａｎｅｌｌｉ ２０１８；Ｌａｔｈｂｒｉｄｇｅ ２０１８；Ｄｅｍｍａ ２０１９；Ｌａｔｈｂｒｉｄｇｅ ２０１９）。
Ｃ／ＥＢＰβ
転写因子（ＴＦ）は、すべての既知のがん遺伝子のおよそ２０％を占め、多くのヒトのがんに関与している（Ｌａｍｂｅｒｔ ２０１８）。それにもかかわらず、ＴＦは、低分子ではその活性に影響を与えることができず、あるいは大きな分子では細胞内に到達することができないために、歴史的に「手に負えない」標的と見なされてきた（Ｙａｎ ２０１３；Ｂｕｓｈｗｅｌｌｅｒ ２０１９）。ＴＦは通常、αヘリックス塩基性ロイシンジッパー（ｂＺＩＰ）ドメインを介して二量体化し、ＤＮＡ結合ドメインをまとめて、ＤＮＡ内の重要なコンセンサス配列との効率的な相互作用を可能にする（Ａｓａｄａ ２０１１；Ｐｏｔａｐｏｖ ２０１５）。これらのＴＦタンパク質間相互作用（ＰＰＩ）の破壊は、この捉えどころのないクラスの標的に薬物を投与するための強力なアプローチとなり得る。最近、ペプチドは、高い親和性と特異性でＴＦ相互作用を標的にして破壊することができる治療クラスとして浮上しており、実証実験の拮抗作用が、以前は「手に負えなかった」複数の標的に対して示されている（Ｔａｋａｄａ ２０１２；Ｗａｌｅｎｓｋｙ ２０１４；Ｂｒｕｚｚｏｎｉ－Ｇｉｏｖａｎｅｌｌｉ ２０１８；Ｌａｔｈｂｒｉｄｇｅ ２０１８；Ｄｅｍｍａ ２０１９；Ｌａｔｈｂｒｉｄｇｅ ２０１９）。
【0057】
Ｃ／ＥＢＰβは、それが補因子との塩基性ロイシンジッパー相互作用に依存していることから、ペプチドアンタゴニストを開発するための主要な標的となっている。ＤＮＡと結合し、遺伝子発現をトランス活性化するために、Ｃ／ＥＢＰβは、それらのｂＺＩＰドメイン間の相互作用を介して結合パートナーと二量体化する。ホモ二量体化に加えて、Ｃ／ＥＢＰβは、ｂＺＩＰを含む転写因子、例えば、Ｊｕｎ／Ｆｏｓ、Ｃ／ＥＢＰγ（Ｈｕｇｇｉｎｓ ２０１３）、δ相互作用タンパク質Ａ（Ｂｅｚｙ ２００５）、及びＣＲＥＢ／ＡＴＦファミリーとヘテロ二量体を形成する（Ｚｈａｏ ２０１４）。
【0058】
活性化転写因子５（ＡＴＦ５）は、ＨＥＫ２９３及びＨＣＴ１１６がん細胞においてＣ／ＥＢＰβと結合して活性化することが決定されているＣＲＥＢ／ＡＴＦ因子であり、生存促進表現型のトランス活性化をもたらす（Ｚｈａｎｇ ２０１５）。ＡＴＦ５は、神経膠腫を含む多くのがんで高度に発現しており、Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質とサバイビンの過剰発現を促進することで発がん性表現型に寄与するが、分化した細胞型ではほとんど認められない（Ｓｈｅｎｇ ２０１０）。神経膠腫及び他の腫瘍細胞において、ＤＮＡ結合ドメインを欠失したＡＴＦ５の短縮型ｂＺＩＰドメインを過剰発現させると、がん細胞に細胞傷害性がもたらされ（Ａｎｇｅｌａｓｔｒｏ ２００６）；短縮型ｂＺＩＰドメインを含むペプチドを投与すると、同様の結果が得られた（Ｃａｔｅｓ ２０１６；Ｋａｒｐｅｌ－Ｍａｓｓｌｅｒ ２０１６）。
【0059】
Ｃ／ＥＢＰβアンタゴニストペプチド
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、固形腫瘍を有する患者を有効量のＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストで治療することを含む。一実施形態では、Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、野生型ＡＴＦ５ ｂＺＩＰドメインのレトロインベルソバリアントであるＤ－アミノ酸配列ＶＡＥＡＲＥＥＬＥＲＬＥＡＲＬＧＱＡＲＧＥＬ（配列番号１）を含む。Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、例えば、実施例１に記載されているように設計することができる。
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、固形腫瘍を有する患者を有効量のＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストで治療することを含む。一実施形態では、Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、野生型ＡＴＦ５ ｂＺＩＰドメインのレトロインベルソバリアントであるＤ－アミノ酸配列ＶＡＥＡＲＥＥＬＥＲＬＥＡＲＬＧＱＡＲＧＥＬ（配列番号１）を含む。Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、例えば、実施例１に記載されているように設計することができる。
【0060】
Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、細胞透過性ペプチドであり得る。一実施形態では、ペプチドは、細胞透過性ドメインを含む。多数の細胞透過性ペプチド配列が文献に記載され、特徴付けられている（ＷＯ２０１９／１３６１２５を参照のこと）。一実施形態では、ペプチドは環状ペプチドである。例えば、炭化水素ステープル（Ｂｅｒｎａｌ ２００７；Ｂｉｒｄ ２０１６）または当技術分野で公知の他の環化方法を使用した環化ペプチドは、受動拡散、エンドサイトーシス／エンドソーム脱出、または他の機構により細胞に進入することができる（Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ ２０１９）。ペプチドは、細胞受容体、例えばインテグリンを標的とするＲＧＤ様配列を利用するメカニズムを介して細胞に送達することもできる。あるいは、ペプチドをカプセル化して、エキソソームまたはリポソームなどの小胞、またはミセルで細胞に送達することができる。
【0061】
天然ＡＴＦ５ ｂＺＩＰドメインに基づくペプチドがＣ／ＥＢＰβの活性をアンタゴナイズする能力を、本明細書、例えば実施例２に記載の方法によって測定することができる。Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストの細胞傷害性を、既知のアッセイによりｉｎ ｖｉｔｒｏで、及び／または既知の腫瘍モデルを使用してｉｎ ｖｉｖｏで測定することができ；例えば、ＷＯ２０１９／１３６１２５は、そのようなアッセイとモデルについて記載している。
【0062】
ＳＴ１０１は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの強力な抗腫瘍活性とタンパク質分解に対する耐性を示す、すべてＤ－アミノ酸ペプチドである。特に、ＨＬ６０（前骨髄球性白血病）、ＡＭＬ１４（急性骨髄性白血病）、ＳＥＴ２（巨核芽球性白血病）、Ａ３７５（黒色腫）、ＭＣＦ７（乳癌）、Ｕ８７（膠芽腫）、Ｕ２５１（神経膠芽腫）、ＤＵ１４５（前立腺癌）、Ａ５４９（肺癌）、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、及び骨髄単核球（ＢＭＭＣ）において、ＳＴ１０１の細胞毒性を以前に示した（ＷＯ２０１９／１３６１２５を参照のこと）。さらに、Ａ３７５、ＨＬ６０、ＭＣＦ７、及びＵ２５１細胞を使用した異種移植マウスモデルにＳＴ１０１を皮下投与すると、腫瘍体積が有意に減少した（ＷＯ２０１９／１３６１２５を参照のこと）。
【0063】
ＳＴ１０１は、細胞透過を可能にするために、ＡＴＦ５ ｂＺＩＰドメイン及びアンテナペディアペネトラチンドメインに基づく修飾ドメインからなる。ＳＴ１０１のＤ－アミノ酸配列は、ＶＡＥＡＲＥＥＬＥＲＬＥＡＲＬＧＱＡＲＧＥＬＫＫＷＫＭＲＲＮＱＦＷＬＫＬＱＲ（配列番号２）であり、細胞透過領域は斜体で示されている。本明細書で示すように、ＳＴ１０１は、Ｃ／ＥＢＰβと抗アポトーシス転写因子との会合を崩壊させることにより、腫瘍細胞の細胞傷害活性を促進する（図１；実施例２）。
【0064】
組成物及び投与
特定の態様では、本発明は、組成物、例えば、ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、ＳＴ１０１は、酢酸塩などの塩形態であり得る。好ましくは、組成物は、１つ以上の担体、希釈剤、賦形剤、または他の添加剤を含む。例えば、組成物は、１つ以上の増量剤（例えば、デキストラン４０、グリシン、ラクトース、マンニトール、トレハロース）、１つ以上の緩衝剤（例えば、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、乳酸塩、リン酸塩、Ｔｒｉｓ）、１つ以上のｐＨ調整剤（例えば、塩酸、酢酸、硝酸、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム）、及び／または１つ以上の希釈剤（例えば、水、生理食塩水）を含み得る。組成物のｐＨは、好ましくは約３．０～８．０である。一実施形態では、ｐＨは、約３．５～６．５、または約５．０～７．５である。
特定の態様では、本発明は、組成物、例えば、ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、ＳＴ１０１は、酢酸塩などの塩形態であり得る。好ましくは、組成物は、１つ以上の担体、希釈剤、賦形剤、または他の添加剤を含む。例えば、組成物は、１つ以上の増量剤（例えば、デキストラン４０、グリシン、ラクトース、マンニトール、トレハロース）、１つ以上の緩衝剤（例えば、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、乳酸塩、リン酸塩、Ｔｒｉｓ）、１つ以上のｐＨ調整剤（例えば、塩酸、酢酸、硝酸、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム）、及び／または１つ以上の希釈剤（例えば、水、生理食塩水）を含み得る。組成物のｐＨは、好ましくは約３．０～８．０である。一実施形態では、ｐＨは、約３．５～６．５、または約５．０～７．５である。
【0065】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、トレハロースなどの増量剤を含み、増量剤の量は、ＳＴ１０１の量に対して特定の比率、例えば、増量剤：ＳＴ１０１が重量で約６：１～約２：１の比率である。
【0066】
本発明の態様は、Ｃ／ＥＢＰｂのペプチドアンタゴニストを対象に投与する方法に関する。Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、非経口投与される。非経口投与経路には、静脈内（ＩＶ）、筋肉内、腹腔内、くも膜下腔内、及び皮下が含まれる。好ましい実施形態では、ＳＴ１０１を含む医薬組成物を、ＩＶ注入によって投与する。医薬組成物は、例えば、生理食塩水（０．９％）、半生理食塩水（０．４５％）、５％デキストロース水溶液（Ｄ５Ｗ）を含むＩＶ液で提供され得る。
【0067】
Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、患者の体重に基づいて投与する。ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１６ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与することができる。特定の実施形態では、ＳＴ１０１を、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、または約１６ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。これらの量は、例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～４ｍｇ／ｋｇなど、投与する用量の範囲の端点としても機能する。
【0068】
本発明の実施形態では、医薬組成物を静脈内注入によって対象に投与し、その場合、全注入時間は約３６０分以下である。いくつかの実施形態では、全注入時間は、約３０分～約２４０分である。例えば、全注入時間は、３０分間、６０分間、９０分間、１２０分間、１５０分間、もしくは１８０分間、または４５分間、１００分間などの中間的な時間であり得る。特定の実施形態では、全注入時間は、約６０分間～約９０分間、または約６０分間～約１２０分間、または約９０分間～約１２０分間、または約６０分間～約１８０分間である。
【0069】
いくつかの実施形態では、医薬組成物の注入を中断してもよく、すなわち、一時的に停止し、その後再開してもよい。中断時間は変動し得、例えば、約１５分以下、または約３０分以下、または約１時間以下、または約２時間以下、または約３時間以下、または約４時間以下であり得る。
【0070】
いくつかの実施形態では、医薬組成物を、ヒスタミン放出を遮断し、注入関連反応（ＩＲＲ）を予防または改善し、発熱または炎症を軽減し、及び／またはかゆみ及び／または蕁麻疹を緩和することを意図した１つ以上の二次薬剤と共に投与してもよい。１つ以上の二次薬剤を、医薬組成物の投与と同時に、投与前、及び／または投与後に投与してもよい。１つ以上の二次薬剤を、医薬組成物とは別個の組成物で投与してもよく、または医薬組成物と組み合わせてもよい。さらに、１つ以上の二次薬剤を、医薬組成物と同じ経路によって投与してもよく、または異なる経路（例えば、経口）によって投与してもよい。
【0071】
医薬組成物と共に投与するための１つ以上の二次薬剤の例として、Ｈ１アンタゴニスト、Ｈ２アンタゴニストを含む抗ヒスタミン剤、及びマスト細胞脱顆粒阻害剤（例えば、アクリバスチン、アステミゾール、アザタジン、アゼラスチン、ベポタスチン、ブロモフェニラミン、バルフォロリン、セチリジン、クロルゾキサゾン、クロルフェニラミン、クロモリン、シプロヘプタジン、デスロラタジン、デクスブロムフェニルアミン、ジフェンヒドラミン、ドキサントロゾール、エピナスチン、エトドロキシジン、ファモチジン、フェキソフェナジン、フォルスコリン、ヒドロキシジン、イソプロテレノール、ケトチフェン、レボセチリジン、ロラタジン、ロドキサミド、メキタジン、メトジラジン、ミゾラスチン、ネドクロミル、オロパタジン、オキサトミド、ペミロラスト、ピメクロリムス、ピルブテロール、ピゾチフェン、プロキシクロミル、ラニチジン、テルフェナジン、テルブタリン）；ロイコトリエン阻害剤（例えば、モンテルカスト、ザフィルルカスト、ジロートン）；非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、アスピリン）；アセトアミノフェン／パラセタモール；コルチコステロイド（例えば、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン）；制吐剤（例えば、プロクロルペラジン、オンダンセトロン）；ならびに生理食塩水及び／または電解質が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい一実施形態では、二次薬剤は、クロルフェニラミンまたはジフェンヒドラミンなどの抗ヒスタミン剤である。特定の実施形態では、二次薬剤は：アセトアミノフェン／パラセタモール、Ｈ１アンタゴニスト、及びＨ２アンタゴニスト、モンテルカスト、制吐剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0072】
特定の実施形態では、二次薬剤を、注入期間中などの医薬組成物の投与中に投与する。特定の実施形態では、抗ヒスタミン剤などの二次薬剤を、医薬組成物の投与前、例えば、約７日以内、または約６日以内、または約５日以内、または約４日以内、または約７２時間以内、または約４８時間以内、または約２４時間以内、または約８～１２時間以内、または約６～８時間以内、または約４～６時間以内、または約２～４時間以内、または約１～２時間以内、または約１時間以内、または直前に対象に投与する。いくつかの実施形態では、二次薬剤は、医薬組成物の投与後２４時間以内に投与する。例えば、二次薬剤を、医薬組成物の投与終了の直後、約０．５～１時間後、約１～２時間後、約２～４時間後、約４～６時間後、約６～８時間後、約８～１２時間後、または約２４時間後に投与することができる。
【0073】
二次薬剤は、医薬組成物の投与前、投与中、及び／または投与後に複数回投与することができる。二次薬剤の組み合わせを、同時にまたは異なる時間に投与することができる。例えば、医薬組成物の投与前に抗ヒスタミン剤を投与することができ、医薬組成物の投与後にコルチコステロイドを投与することができる。
【0074】
一実施形態では、Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストの投与を、週１回を少なくとも３週間（すなわち、３回の投与）、６週間（すなわち、６回の投与）、９週間、１２週間、３か月間、６か月間、９か月間、または１２か月間にわたって実施することができる。別の実施形態では、投与を、２週に１回を少なくとも４週間（すなわち、２回の投与）、８週間（すなわち、４回の投与）、１２週間、３か月間、６か月間、９か月間、または１２か月間にわたって実施することができる。いくつかの実施形態では、患者に、Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを週１回、少なくとも３週間、６週間、９週間、１２週間、３か月間、６か月間、９か月間、または１２か月間投与し、続いて２週に１回、少なくとも４週間、８週間、１２週間、３か月間、６か月間、９か月間、または１２か月間にわたって投与することができる。
【0075】
Ｃ／ＥＢＰβのアンタゴニストの薬物動態（ＰＫ）を、標準的な方法によって、実施例に記載されているように評価することができる。いくつかの実施形態では、Ｃ／ＥＢＰβのアンタゴニストはＳＴ１０１である。ＳＴ１０１のクリアランスは、約０．７５Ｌ／時間～約３．５Ｌ／時間または約１Ｌ／時間～約３Ｌ／時間または約１Ｌ／時間～約２．５Ｌ／時間であり得る。ＳＴ１０１の半減期（ｔ１／２）は、約１０時間～約７０時間または約２０時間～約６０時間または約２５時間～約４５時間であり得る。
【0076】
いくつかの実施形態では、ＰＫは用量比例的である。例えば、０．５ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を投与した患者では、Ｃｍａｘは、約１，０００ｎｇ／ｍＬ～約２，０００ｎｇ／ｍＬまたは約１，３００ｎｇ／ｍＬ～約１，８００ｎｇ／ｍＬまたは約１，３７０ｎｇ／ｍＬ～約１，７７０ｎｇ／ｍＬであり得る。１．０ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を投与した患者では、Ｃｍａｘは、約２，５００ｎｇ／ｍＬ～約５，５００ｎｇ／ｍＬまたは約２，６７０ｎｇ／ｍＬ～約５，３００ｎｇ／ｍＬまたは約２，８４０ｎｇ／ｍＬ～約５，１１０ｎｇ／ｍＬであり得る。２．０ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を投与した患者では、Ｃｍａｘは、約８，０００ｎｇ／ｍＬ～約１３，０００ｎｇ／ｍＬまたは約８，５００ｎｇ／ｍＬ～約１２，５００ｎｇ／ｍＬまたは約９，０００ｎｇ／ｍＬ～約１１，９００ｎｇ／ｍＬであり得る。４．０ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を投与した患者では、Ｃｍａｘは、約７，０００ｎｇ／ｍＬ～約３５，０００ｎｇ／ｍＬまたは約７，６５０ｎｇ／ｍＬ～約３２，９００ｎｇ／ｍＬまたは約９，１５０ｎｇ／ｍＬ～約３０，０００ｎｇ／ｍＬ、あるいは約１５，０００ｎｇ／ｍＬ～約２８，０００ｎｇ／ｍＬであり得る。
【0077】
ＩＩＩ．治療方法
本発明の方法による治療を必要とする対象は、固形腫瘍を有すると診断された患者である。例えば、対象は、局所的に進行した固形腫瘍または転移性の手術不能な腫瘍を有し得る。いくつかの実施形態では、対象は、黒色腫、がん腫、または肉腫を有する。一実施形態では、黒色腫は、皮膚黒色腫または粘膜黒色腫である。一実施形態では、がん腫は、膀胱腺癌、結腸直腸腺癌、膵臓腺癌、胃腺癌／印環細胞癌、または小腸腺癌などの腺癌である。一実施形態では、肉腫は、腹部肉腫または筋線維芽細胞肉腫である。本発明の特定の実施形態では、ＳＴ１０１の投与は、腫瘍増殖を阻害するか、腫瘍体積を減少させるか、またはそれらの組み合わせを可能にする。
本発明の方法による治療を必要とする対象は、固形腫瘍を有すると診断された患者である。例えば、対象は、局所的に進行した固形腫瘍または転移性の手術不能な腫瘍を有し得る。いくつかの実施形態では、対象は、黒色腫、がん腫、または肉腫を有する。一実施形態では、黒色腫は、皮膚黒色腫または粘膜黒色腫である。一実施形態では、がん腫は、膀胱腺癌、結腸直腸腺癌、膵臓腺癌、胃腺癌／印環細胞癌、または小腸腺癌などの腺癌である。一実施形態では、肉腫は、腹部肉腫または筋線維芽細胞肉腫である。本発明の特定の実施形態では、ＳＴ１０１の投与は、腫瘍増殖を阻害するか、腫瘍体積を減少させるか、またはそれらの組み合わせを可能にする。
【0078】
一実施形態では、患者は、局所進行／転移乳癌（ＬＡ／ＭＢＣ）を有する。一実施形態では、ＬＡ／ＭＢＣは、ホルモン受容体陽性（ＨＲｐｏｓ）である。一実施形態では、患者は、１つまたは２つのホルモン系の前治療を受けた後に進行したＬＡ／ＭＢＣを有する。一実施形態では、患者は、標的療法、例えば、サイクリン依存性キナーゼ４／６（ＣＤＫ４／６）阻害剤、またはｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ（ｍＴＯＲ）阻害剤、または化学療法、またはそれらの組み合わせによる前治療を受けている。
【0079】
一実施形態では、患者は、黒色腫と診断されている。一実施形態では、患者は、黒色腫に対する１つまたは２つの前治療を受けた後に進行した黒色腫、特に、進行性／転移性黒色腫を有する。
【0080】
一実施形態では、患者は、免疫チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）またはＣＰＩの組み合わせによる治療後に／または治療時に進行した黒色腫を有する。免疫ＣＰＩには、例えば、イピリムマブ及びトレメリムマブなどのＣＴＬＡ－４阻害剤；セミプリマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、及びスパルタリズマブなどのＰＤ－１阻害剤；アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブなどのＰＤ－Ｌ１阻害剤；レラトリマブなどのＬＡＧ－３阻害剤；チラゴルマブなどのＴＩＧＩＴ阻害剤；ならびにＴＬＲ９アゴニストなどのＴｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）を標的とする薬剤が含まれる。
【0081】
一実施形態では、患者はＢＲＡＦ変異疾患を有し、ＢＲＡＦ阻害剤及び／またはＭＥＫ阻害剤、例えば、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、エンコラフェニブ、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、またはそれらの組み合わせなどの少なくとも１つの標的療法を受けている。
【0082】
一実施形態では、患者は、神経膠芽腫（ＧＢＭ）と診断されている。一実施形態では、ＧＢＭが、前治療を受けた後に再発または進行している。前治療には、例えば、手術、放射線、化学療法、標的療法、電場療法、及びそれらの組み合わせが含まれる。化学療法化合物として、例えば、テモゾロミド、カルムスチン、及びロムスチンが挙げられる。標的療法には、例えば、ベバシズマブが含まれる。
【0083】
一実施形態では、ＧＢＭは、１回の標準治療レジメン後に再発または進行した（修正ＲＡＮＯ基準による）原発性（新規）ＧＢＭである。「標準治療レジメン」は、最大の外科的切除、放射線療法、及び放射線療法と併用するテモゾロミドまたはテモゾロミドによる補助化学療法と定義される。一実施形態では、患者は、第一選択治療の補助として腫瘍電場療法を受けている。
【0084】
一実施形態では、患者は前立腺癌と診断されている。一実施形態では、前立腺癌は去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）である。「去勢抵抗性前立腺癌」（ＣＲＰＣ）は、アンドロゲン枯渇療法にもかかわらず、例えば、前立腺癌臨床試験ワーキンググループ３（ＰＣＷＧ３）基準（Ｓｃｈｅｒ ２０１６）による疾患の進行によって定義される。いくつかの実施形態では、患者は、任意選択でプレドニゾンまたはプレドニゾロンなどのコルチコステロイドと併用した、ドセタキセル及びカバジタキセルを含むタキサンなどの化学療法；シプロイセル－Ｔを含む免疫療法；アビラテロン、エンザルタミド、ダラルタミド、及びアパルタミドを含むホルモン系の療法；及びそれらの併用からなる群から選択される治療の後に進行したＣＲＰＣを有する。一実施形態では、患者は、タキサン、アビラテロン、ダラルタミド、及び／またはエンザルタミド／アパルタミドによる前治療の後に進行したＣＲＰＣを有する。
【0085】
治療の有効性は、１つ以上の既知の尺度によって評価することができる。例えば、本発明の方法を受けた患者は、本発明の方法を受けていない患者、すなわち対照患者における同じ転帰（複数可）と比較して、生存期間の延長、無増悪生存期間の向上、奏効期間の向上、寛解期間の延長、再発リスクの低減、及び／またはＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストによる治療に対する腫瘍縮小効果の向上を経験し得る。本発明の方法によって治療された患者の転帰を、例えば、対照患者集団の転帰の中央値と比較することができる。対照患者集団には、例えば、プラセボ、手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン系療法、標的療法、及びそれらの併用からなる群から選択されるレジメンを投与することができる。比較は、例えば、Ｗｉｌｃｏｘｏｎの符号順位検定またはＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法を使用して統計的に分析することができる。
【0086】
一実施形態では、Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニスト、例えばＳＴ１０１を、任意選択で標準治療と併用して受けている患者の転帰を、プラセボを投与した対照患者の転帰の中央値と比較する。一実施形態では、Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニスト、例えばＳＴ１０１を受けている患者の転帰を、標準治療を受けている対照患者の転帰の中央値と比較する。
【0087】
一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択で化学療法と併用して受けているＬＡ／ＭＢＣ患者の転帰を、化学療法を受けているＬＡ／ＭＢＣ患者の転帰の中央値と比較する。一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択でホルモン系療法と併用して受けているＬＡ／ＭＢＣ患者の転帰を、ホルモン系療法を受けているＬＡ／ＭＢＣ患者の転帰の中央値と比較する。一実施形態では、ＳＴ１０１を投与されているＬＡ／ＭＢＣ患者の転帰を、標的療法を受けているＬＡ／ＭＢＣ患者の転帰の中央値と比較する。
【0088】
一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択で化学療法と併用して受けている黒色腫患者の転帰を、化学療法を受けている黒色腫患者の転帰の中央値と比較する。一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択で免疫療法と併用して受けている黒色腫患者の転帰を、免疫療法を受けている黒色腫患者の転帰の中央値と比較する。一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択で標的療法と併用して受けている黒色腫患者の転帰を、標的療法を受けている黒色腫患者の転帰の中央値と比較する。
【0089】
一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択で手術、放射線、化学療法、及び標的療法の１つ以上と併用して受けているＧＢＭ患者の転帰を、手術、放射線、化学療法、標的療法、またはそれらの併用を受けたＧＢＭ患者の転帰中央値と比較する。一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択で標準治療レジメンと併用して受けているＧＢＭ患者の転帰を、標準治療レジメンを受けているＧＢＭ患者の転帰の中央値と比較する。
【0090】
一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択で化学療法と併用して受けている前立腺癌患者の転帰を、化学療法を受けている前立腺癌患者の転帰の中央値と比較する。一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択で免疫療法と併用して受けている前立腺癌患者の転帰を、免疫療法を受けている前立腺癌患者の転帰の中央値と比較する。一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択でホルモン系療法と併用して受けている前立腺癌患者の転帰を、ホルモン系療法を受けている前立腺癌患者の転帰の中央値と比較する。一実施形態では、ＳＴ１０１を、任意選択でタキサン、アビラテロン、ダラルタミド、及び／またはエンザルタミド／アパルタミドと併用して投与されている前立腺癌患者の転帰を、タキサン、アビラテロン、ダラルタミド、及び／またはエンザルタミド／アパルタミドを投与されている前立腺癌患者の転帰の中央値と比較する。
【0091】
治療に対する応答は、例えば、ＳＴ１０１による治療前のベースラインと比較して、治療レジメン後の効力の１つ以上の尺度を比較する。ベースライン評価は、好ましくは、Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストによる最初の治療前の２４、４８、または７２時間以内、または１、２、３、または４週間以内に実施する。好ましい一実施形態では、ベースライン評価を、最初のＳＴ１０１治療前の２４時間以内に実施する。
【0092】
対象が前立腺癌患者である実施形態では、ベースライン及び治療に対する応答は、血液ベースのバイオマーカーの評価、例えば、テストステロン、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、及び血清サイトカインイメージング、例えば、造影ＣＴを含むコンピュータ断層撮影（ＣＴ）、または断面ＭＲＩを含む磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）；生検／組織学的解析；ならびに患者報告因子、例えば疼痛、鎮痛剤の使用、身体機能、生活の質などを含む因子によって測定することができる。これらのパラメータは、例えば、ＰＣＷＧ３ガイドライン（Ｓｃｈｅｒ ２０１６）に従って測定することができる。
【0093】
ＰＣＷＧ３パラダイムは、治療応答の２つの一般的なカテゴリーを定義する：（１）治療がベースラインで存在していた疾患の症状を制御、緩和、または排除する程度；及び（２）治療が将来の疾患の発症を予防または遅延できる程度（Ｓｃｈｅｒ ２０１６；Ｓｃｈｅｒ ２０１１）。したがって、一態様では、本発明は、ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを患者に投与することを含む、ＣＲＰＣ患者を含む患者における前立腺癌の少なくとも１つの徴候を制御、緩和、または排除する方法を提供する。別の態様では、本発明は、ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを患者に投与することを含む、ＣＲＰＣ患者を含む患者における前立腺癌の少なくとも１つの徴候を予防または遅延させる方法を提供する。一実施形態では、前立腺癌の徴候は、少なくとも４、６、８、１０、もしくは１２週間、少なくとも４、６、８、１０、１２、１６、１８、もしくは２４か月間、または少なくとも３年、４年、もしくは５年間にわたって予防または遅延される。予防期間または遅延期間は、対照集団における予防期間または遅延期間の中央値と比較して測定する。前立腺癌の徴候には、例えば、腫瘍量、新規転移性病変、ＰＳＡ値の上昇、骨折の発生率を含む骨の病状、痛み、アヘン剤を含む鎮痛剤の使用、及び生活の質の低下が含まれる（Ｓｃｈｅｒ ２０１６；Ｓｃｈｅｒ ２０１１）。
【0094】
「腫瘍量」とは、患者の体内のがん組織の総質量または総サイズである。腫瘍縮小効果は、奏効率、病勢制御率、及び反応の持続時間を含む尺度によって評価することができる。これらのパラメータは、腫瘍の種類に応じて異なり、例えば、固形がん治療効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ １．１）（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ２００９）、神経腫瘍学における修正応答評価（ｍＲＡＮＯ）（Ｅｌｌｉｎｇｓｏｎ ２０１７）、またはＰＣＷＧ３ガイドライン（Ｓｃｈｅｒ ２０１６）によって決定することができる。
【0095】
奏効率は、腫瘍サイズの縮小を評価する。例えば、腫瘍の直径は、臨床検査及び／または画像化によって決定することができる。患者が複数の腫瘍を有する場合、腫瘍サイズは任意選択で、すべての腫瘍の平均直径として、またはすべての腫瘍の直径の合計によって表すことができる。表在性腫瘍は、例えばノギスを使用して、または写真と定規測定によって、臨床的に測定することができる。画像化方法には、通常、造影剤を使用したコンピュータ断層撮影（ＣＴ）；Ｘ線；磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）；及び（１８）Ｆ－フルオロデオキシグルコースＰＥＴなどの陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）が含まれる。好ましい一実施形態では、ＬＡ／ＭＢＣ患者または黒色腫患者において、ＣＴを利用して腫瘍縮小効果を評価する。別の好ましい実施形態では、ガドリニウム増強ＭＲＩなどのＭＲＩを利用して、例えばＧＢＭ患者における腫瘍縮小効果を評価する。したがって、一態様では、本発明は、ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを患者に投与することを含む、腫瘍量、すなわち、腫瘍の質量及び／または腫瘍のサイズを減少させる方法を提供する。腫瘍量の減少は、ベースラインと比較して測定する。
【0096】
特定の実施形態、特に評価がＲＥＣＩＳＴ１．１による実施形態では、病勢制御率は、腫瘍縮小効果のレベルを、完全奏効（ＣＲ）（腫瘍（複数可）の消失である）；部分奏効（ＰＲ）（腫瘍（複数可）のサイズにおける少なくとも３０％の減少である）；不変（腫瘍（複数可）のサイズに変化がない）；または疾患の進行（腫瘍サイズにおける少なくとも２０％の増加及び／または新規病変である）として定義する。
【0097】
いくつかの実施形態では、病勢制御率は、腫瘍縮小効果のレベルを、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、疾患進行（ＰＤ）、または不変（ＳＤ）として定義する。表Ｉに、ベースラインと比較した腫瘍測定値の変化に基づいて、少なくとも４週間持続した、これらの疾患状態に対する修正されたＲＡＮＯガイドラインを記載する。追加のパラメータと詳細は、Ｅｌｌｉｎｇｓｏｎ ２０１７に記載されている。
【表1】
【0098】
奏効期間は、応答の達成から疾患の進行までの時間の長さ、すなわち、腫瘍が増殖も転移もしない、または死亡しない期間である。ＳＴ１０１治療を受けている患者における奏効期間は、例えば、少なくとも４、６、８、１０、または１２週間、少なくとも４、６、８、１０、１２、１６、１８、または２４か月間、または少なくとも３年、４年、または５年間である。したがって、一態様では、本発明は、ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを患者に投与することを含む、患者の奏効期間の延長方法を提供する。奏効期間の増加は、対照集団における奏効期間の中央値と比較して測定する。
【0099】
生存期間は、全生存期間、すなわち患者が生存している期間として、または無増悪生存期間、すなわち疾患の進行または悪化なしに患者が治療される期間として評価することができる。生存期間は、診断日または治療開始日から測定することができる。全生存期間、全生存期間の中央値、無増悪生存期間、及び無増悪生存期間の中央値は、例えば、治療に対する応答に基づいてカプラン・マイヤー分析によって計算することができる。したがって、一態様では、本発明は、ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを患者に投与することを含む、患者の全生存期間の延長方法を提供する。全生存期間の増加は、対照集団の全生存期間の中央値と比較して測定する。別の態様では、本発明は、ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを患者に投与することを含む、患者の無増悪生存期間の延長方法を提供する。無増悪生存期間の増加は、対照集団における無増悪生存期間の中央値と比較して測定されます。
【0100】
ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストの投与後に、患者が以下の転帰の少なくとも１つを経験または示す場合、その患者は、本発明の方法に従って首尾よく治療される：
－腫瘍が検出不可能（または、ベースラインで複数の腫瘍が存在する場合は、少なくとも１つの腫瘍）；
－腫瘍サイズが、ベースラインと比較して少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の減少；
－腫瘍サイズが、ベースラインと比較して有意な増加がない（例えば、２０％未満）；
－任意選択で、対照患者集団の奏効期間の中央値と比較して、奏効期間の有意な延長；
－任意選択で、対照患者集団の無増悪生存期間の中央値と比較して、無増悪生存期間の有意な増加；
－任意選択で、対照患者集団の全生存期間の中央値と比較して、全生存期間の有意な増加。
－腫瘍が検出不可能（または、ベースラインで複数の腫瘍が存在する場合は、少なくとも１つの腫瘍）；
－腫瘍サイズが、ベースラインと比較して少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の減少；
－腫瘍サイズが、ベースラインと比較して有意な増加がない（例えば、２０％未満）；
－任意選択で、対照患者集団の奏効期間の中央値と比較して、奏効期間の有意な延長；
－任意選択で、対照患者集団の無増悪生存期間の中央値と比較して、無増悪生存期間の有意な増加；
－任意選択で、対照患者集団の全生存期間の中央値と比較して、全生存期間の有意な増加。
【0101】
ＩＶ．調製方法
Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、例えば、固相ペプチド合成もしくは液相ペプチド合成、または両者を併用して化学的に合成することができる。任意選択で、その後に化学的または酵素的に結合させるペプチドの断片として合成を行ってもよい。
Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストは、例えば、固相ペプチド合成もしくは液相ペプチド合成、または両者を併用して化学的に合成することができる。任意選択で、その後に化学的または酵素的に結合させるペプチドの断片として合成を行ってもよい。
【0102】
あるいは、Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストを、組換え法を使用して発現させることができる。例えば、ＳＴ１０１をコードする核酸分子を、オリゴヌクレオチド合成機を用いた化学合成によって構築することができる。核酸分子は、ＳＴ１０１のアミノ酸配列、及び組換えＳＴ１０１を産生する宿主細胞で好まれるコドンの選択に基づいて設計することができる。標準的な方法を適用して、ＳＴ１０１などのＣ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストをコードする核酸分子を合成することができる。
【0103】
一旦調製されると、ペプチドをコードする核酸を発現ベクターに挿入し、所望の宿主におけるペプチドの発現に適切な発現制御配列に作動可能に連結することができる。ペプチドの高発現レベルを得るために、核酸を、選択された発現宿主において機能する転写及び翻訳発現制御配列に作動可能に連結または結合することができる。
【0104】
当業者であれば、多種多様な発現宿主／ベクターの組合せを利用することができる。真核宿主に有用な発現ベクターとして、例えば、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、アデノウイルス、及びサイトメガロウイルス由来の発現制御配列を含むベクターが挙げられる。細菌宿主に有用な発現ベクターとして、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９及びそれらの誘導体を含むＥ．ｃｏｌｉ由来プラスミドなどの既知の細菌プラスミド、Ｍ１３などのより広い宿主範囲のプラスミド、及び繊維状の一本鎖ＤＮＡファージが挙げられる。
【0105】
好適な宿主細胞として、適切なプロモーターの制御下にある原核生物、酵母、昆虫、または高等真核生物の細胞が含まれる。原核生物には、Ｅ．ｃｏｌｉまたは桿菌などのグラム陰性菌またはグラム陽性菌が含まれる。高等真核細胞または哺乳動物由来細胞株を確立することができる（その例として、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、２９３細胞、ＣＯＳ－７細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、及びＢＨＫ細胞が挙げられる）。無細胞翻訳系も利用可能である。
【0106】
例えば、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）、マルチカラム向流溶媒勾配精製（ＭＣＳＧＰ）、及びイオン交換クロマトグラフィーを含む方法を使用してペプチドを精製することができる。
【実施例】
【0107】
本開示の実施形態は、以下の非限定的な実施例を参照してさらに定義され得る。材料及び方法の両方に対する多くの修正形態が、本開示の範囲から逸脱することなく実施され得ることが当業者には明らかである。
【0108】
実施例１．Ｃ／ＥＢＰβのペプチドアンタゴニストの設計
天然のＡＴＦ５ ｂＺＩＰドメインの２２アミノ酸部分ＬＥＧＥＣＱＧＬＥＡＲＮＲＥＬＫＥＲＡＥＳＶ（配列番号３）、及び１６アミノ酸のペネトラチンドメインを含む前駆体ペプチドの初期設計は、ＨＬ－６０前骨髄球性白血病細胞の用量依存的な細胞傷害性をもたらし、ＥＣ５０値は１７．４±０．５μＭであった。ペプチドとＣ／ＥＢＰβ間の静電相互作用を強化するように設計された修飾により、効力が高まるという仮説を立てた。ペプチドアンタゴニストの非ロイシンアミノ酸とＣ／ＥＢＰβ ｂＺＩＰドメインの分子パッキングを調べる、合理的に設計された４６のペプチドのパネルを合成し、細胞傷害活性についてスクリーニングした。最大の細胞傷害性を示す「勝者」のペプチドは、５．５±０．５μＭのＥＣ５０値、または親ペプチドに対して３．２倍の効力の増加をもたらし、導入した合理的な変化がｉｎ ｖｉｔｒｏペプチド抗腫瘍活性を向上させることが示された。「勝者」のペプチドは、アミノ酸配列ＬＥＧＲＡＱＧＬＲＡＥＬＲＥＬＥＥＲＡＥＡＶ（配列番号４）及びペネトラチンドメインを有するｂＺＩＰドメイン配列を含む。
天然のＡＴＦ５ ｂＺＩＰドメインの２２アミノ酸部分ＬＥＧＥＣＱＧＬＥＡＲＮＲＥＬＫＥＲＡＥＳＶ（配列番号３）、及び１６アミノ酸のペネトラチンドメインを含む前駆体ペプチドの初期設計は、ＨＬ－６０前骨髄球性白血病細胞の用量依存的な細胞傷害性をもたらし、ＥＣ５０値は１７．４±０．５μＭであった。ペプチドとＣ／ＥＢＰβ間の静電相互作用を強化するように設計された修飾により、効力が高まるという仮説を立てた。ペプチドアンタゴニストの非ロイシンアミノ酸とＣ／ＥＢＰβ ｂＺＩＰドメインの分子パッキングを調べる、合理的に設計された４６のペプチドのパネルを合成し、細胞傷害活性についてスクリーニングした。最大の細胞傷害性を示す「勝者」のペプチドは、５．５±０．５μＭのＥＣ５０値、または親ペプチドに対して３．２倍の効力の増加をもたらし、導入した合理的な変化がｉｎ ｖｉｔｒｏペプチド抗腫瘍活性を向上させることが示された。「勝者」のペプチドは、アミノ酸配列ＬＥＧＲＡＱＧＬＲＡＥＬＲＥＬＥＥＲＡＥＡＶ（配列番号４）及びペネトラチンドメインを有するｂＺＩＰドメイン配列を含む。
【0109】
Ｌ－アミノ酸ペプチドは通常、生物学的マトリックスでの安定性を欠き、その薬物動態が制限され、したがって治療の可能性が制限されるため、最適化されたＡＴＦ５ ｂＺＩＰドメインの全Ｄ－アミノ酸ペプチドバージョンＶＡＥＡＲＥＥＬＥＲＬＥＡＲＬＧＱＡＲＧＥＬ（配列番号１）（さらにペネトラチンドメインを含む）を生成した。このペプチドＳＴ１０１は、ペプシンとトリプシンの存在下で３７℃にて１７時間インキュベートすると、タンパク質分解耐性を示したが、Ｌ－鏡像異性体ペプチドは５分以内に１００％分解された。未処理対照で観察されたＳＴ１０１の最小限の損失は、これらの条件下で発生する一般的なペプチド化学分解に起因していた。
【0110】
ＳＴ１０１の細胞傷害性試験では、ＨＬ－６０前骨髄球性白血病細胞で４．９±０．２μＭのＥＣ５０が明らかになり、同じアミノ酸配列のＬ－鏡像異性体ペプチドに匹敵する活性が示され、Ｄ－アミノ酸バリアントでは安定性が有意に向上した一方で、抗腫瘍活性が失われなかったことが示された。
【0111】
ＳＴ１０１とＣ／ＥＢＰβ ｂＺＩＰドメイン間の相互作用を、Ｃ／ＥＢＰβ及びＣＲＥＢ／ＡＴＦファミリー補因子ＡＴＦ４４０の結晶構造に基づいてモデル化した。ＳＴ１０１は、溶液中でらせん状であると仮定した。Ｃ／ＥＢＰβに結合したＳＴ１０１のモデルは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）ソフトウェアを使用して、ＳＴ１０１結合配列をαヘリックス構造に制約し、最も高い配列類似性を共有するＡＴＦ４の部分でオーバーレイし、側鎖相互作用を優先するように最小化することによって生成した。このモデルは、ＳＴ１０１が主に疎水性接触を介していくつかの電荷間（ＳＴ１０１ Ｅ１２～Ｃ／ＥＢＰβ Ｒ２７９及びＳＴ１０１ Ｅ２１～Ｃ／ＥＢＰβ Ｋ２６７）、及びカチオン－ｐｉ相互作用（ＳＴ１０１ Ｒ５～Ｃ／ＥＢＰβ Ｆ２８２）で相互作用する可能性が高いことを示している（図２）。
【0112】
実施例２．ＳＴ１０１はＣ／ＥＢＰβと相互作用するが、ＡＴＦ５とは相互作用しない
円二色性（ＣＤ）分光法を使用して、ＳＴ１０１がＣ／ＥＢＰβとｉｎ ｓｉｌｉｃｏで相互作用することが示された。ＣＤ分光法では、ペプチド／タンパク質が相互作用する場合、結合させた試料の観測スペクトルは、各構成要素の個々のスペクトルの平均とは異なる。ＣＤは、経路長１ｍｍのＣＤセル中の２００μｌの試料を使用して、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｈｏｔｏｐｈｙｓｉｃｓ Ｃｈｉｒａｓｃａｎ ＣＤ装置（Ｌｅａｔｈｅｒｈｅａｄ，ＵＫ）を使用して実施した。試料は、ヘテロ二量体溶液の等モル濃度で１５０μＭの全ペプチド濃度（すなわち、ペプチドあたり７５μＭ）を含有しており、分析前にｐＨ７．０で１０ｍＭリン酸カリウム及び１００ｍＭフッ化カリウムに懸濁した。試料のＣＤスペクトルは、２６０ｎｍ～２００ｎｍで１ｎｍ刻みでスキャンし、各波長で平均０．５秒であった。３回のスキャンを２０℃で平均化した。
円二色性（ＣＤ）分光法を使用して、ＳＴ１０１がＣ／ＥＢＰβとｉｎ ｓｉｌｉｃｏで相互作用することが示された。ＣＤ分光法では、ペプチド／タンパク質が相互作用する場合、結合させた試料の観測スペクトルは、各構成要素の個々のスペクトルの平均とは異なる。ＣＤは、経路長１ｍｍのＣＤセル中の２００μｌの試料を使用して、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｈｏｔｏｐｈｙｓｉｃｓ Ｃｈｉｒａｓｃａｎ ＣＤ装置（Ｌｅａｔｈｅｒｈｅａｄ，ＵＫ）を使用して実施した。試料は、ヘテロ二量体溶液の等モル濃度で１５０μＭの全ペプチド濃度（すなわち、ペプチドあたり７５μＭ）を含有しており、分析前にｐＨ７．０で１０ｍＭリン酸カリウム及び１００ｍＭフッ化カリウムに懸濁した。試料のＣＤスペクトルは、２６０ｎｍ～２００ｎｍで１ｎｍ刻みでスキャンし、各波長で平均０．５秒であった。３回のスキャンを２０℃で平均化した。
【0113】
Ｃ／ＥＢＰβのｂＺＩＰドメイン由来のペプチドと組み合わせたＳＴ１０１は、個々のスペクトルの平均とは有意に異なるスペクトルを生成したが、これは、２つの構成要素間の構造的相互作用を示している（図３、パネルＡ）。対照的に、ＡＴＦ５のｂＺＩＰドメイン由来のペプチドと組み合わせたＳＴ１０１の観察されたスペクトルは、２つのペプチドの個々のスペクトルの平均から変化しておらず（図３、パネルＢ）、これらのペプチドがこれらの条件下では相互作用しないことを示している。これらのデータは、ＳＴ１０１がＣ／ＥＢＰβと特異的に相互作用することを示している。
【0114】
ＳＴ１０１とＣ／ＥＢＰβとの相互作用は、細胞熱シフトアッセイ（ＣＥＴＳＡ）を使用して、Ｕ２５１ヒト神経膠芽腫細胞の生物学的設定でさらに実証された。細胞を、ビヒクルまたは１０μＭのＳＴ１０１に１時間曝露した。細胞から溶解物を調製し、続いて５２～６０℃の熱勾配に供してタンパク質を変性させた。次いで、溶解物をスピンダウンして変性タンパク質凝集体を除去し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離した。加熱後の細胞溶解物に残留しているＣ／ＥＢＰβ及びβ－チューブリンを検出するためにウエスタンブロット分析を実施した。
【0115】
未処理のＵ２５１細胞由来の熱変性細胞溶解物のウエスタンブロット分析では、ウエスタンブロット上のＣ／ＥＢＰβタンパク質バンドの喪失によって示されるように、変性Ｃ／ＥＢＰβは５８℃で溶液から脱落した（図４、パネルＡ）。１０μＭのＳＴ１０１で処理した細胞は、Ｃ／ＥＢＰβの検出の増加（ＳＴ１０１とＣ／ＥＢＰβとの相互作用を示す）で示されるように、５８℃でのＣ／ＥＢＰβの安定性の増加を示した（図４、パネルＡ及びＢ）。対照実験では、ＳＴ１０１は、ＣＥＴＳＡアッセイにおいてＡＴＦ５の安定性を増加させないことが示され、Ｃ／ＥＢＰβとの相互作用の特異性が示され、これはＣＤデータと一致している。
【0116】
二量体交換を評価するためにＣＤ分光法を使用した追加の実験では、Ｃ／ＥＢＰβは、ＡＴＦ５よりもＳＴ１０１に対して高い親和性を示す。これらの実験では、ＳＴ１０１をＣ／ＥＢＰβのｂＺＩＰドメインを含むペプチドとあらかじめ混合した場合、ＡＴＦ５のｂＺＩＰドメインを含むペプチドの添加は、シグナルの増加がないことによって示されるように、ＳＴ１０１を置換することができなかった（図５、パネルＡ）。対照的に、ＳＴ１０１をＡＴＦ５ ｂＺＩＰペプチドと事前に混合した場合、Ｃ／ＥＢＰβ ｂＺＩＰペプチドはシグナルの増加をもたらし、Ｃ／ＥＢＰβ ｂＺＩＰペプチドと相互作用するＳＴ１０１のピークと同一のピークを生成した（図５、パネルＢ）。これらのデータは、ＳＴ１０１を添加した場合のＣ／ＥＢＰβ＋ＡＴＦ５スペクトルのシフトによって示されるように、ＡＴＦ５に勝る、Ｃ／ＥＢＰβとＳＴ１０１との優先的な相互作用を示している。
【0117】
Ｃ／ＥＢＰβとＡＴＦ５との相互作用のＳＴ１０１阻害を定量化するために、競合酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）形式を使用した。Ｃ／ＥＢＰβ（３．６ｎｇ／ウェル）を、４℃で一晩インキュベーションすることにより、３８４ウェルプレート（Ｎｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐ，ＴｈｅｒｍｏＳｃｉ）に固定化した。トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）＋０．１％Ｔｗｅｅｎ（ＴＢＳＴ）で３回洗浄して非結合タンパク質を除去し、次いでＴＢＳ中の５％ウシ血清アルブミンでウェルを４℃にて１時間ブロッキングした。ブロッキング緩衝液を除去した後、ＳＴ１０１をＴＢＳで希釈し、４℃で１時間、適切なウェルに添加し、ウェルをＴＢＳＴで３回洗浄した。
【0118】
次に、１ｎｇの組換えＡＴＦ５を各ウェルに添加した後、４℃で１８時間インキュベートし、ＴＢＳＴで３回洗浄して未結合タンパク質を除去した。プレートに結合したＡＴＦ５を、１：１０００希釈ウサギ抗ＡＴＦ５抗体（ａｂ６０１２６，Ａｂｃａｍ）、続いて１：１０００ヤギ抗ウサギＩｇＧ－ＨＲＰ抗体（ａｂ６７２１，Ａｂｃａｍ）の存在下、４℃にて１時間インキュベーションし、各抗体インキュベーション後にＴＢＳＴで３回洗浄し、５０μＬのＴＭＢ基質を用いることにより検出した。２．５Ｍの硫酸２５μＬを添加して反応を停止させ、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ３プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて４５０ｎｍで吸光度を検出した。ＳＴ１０１のＩＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８．３．０ソフトウェアを使用して、４つのパラメータと可変勾配を使用した非線形回帰によって計算した。
【0119】
初期の実験では、３．６ｎｇのＣ／ＥＢＰβをプレートに結合させ、ＡＴＦ５結合により、１．０ｎＭのＫｄが得られた（図６、パネルＡ）。その後の実験では、漸増濃度のＳＴ１０１を一定濃度の１ｎＭ ＡＴＦ５に加えたところ、ＡＴＦ５の検出が用量依存的に減少した（図６、パネルＢ）。非線形４パラメータ解析により、ＡＴＦ５とＣ／ＥＢＰβの結合のＳＴ１０１による阻害のＩＣ５０は、２４．６±０．９ｎＭであると決定された。これらのデータは、ＣＤ二量体交換実験を支持するものである。
【0120】
実施例３．ＳＴ１０１はナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスの血液脳関門を通過する
ＳＴ１０１の全身投与が、インタクトな血液脳関門を有する動物の脳に進入することができるかどうかを判断するために、単回全身投与後のナイーブＣ５７ＢＬ／６脳切片において、ＳＴ１０１の免疫組織化学（ＩＨＣ）分析を実施した。ＳＴ１０１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクルを外側尾静脈への静脈内注射によって投与した（ｎ＝３／群）。注射の２時間後、マウスを安楽死させた。脳を採取し、４％パラホルムアルデヒド中に保存した。ＤＡＢ標識抗ウサギ二次試薬で検出するウサギポリクローナル抗ＳＴ１０１抗体を使用した、２μＭ切片でのＩＨＣ染色のために、組織を処理した。
ＳＴ１０１の全身投与が、インタクトな血液脳関門を有する動物の脳に進入することができるかどうかを判断するために、単回全身投与後のナイーブＣ５７ＢＬ／６脳切片において、ＳＴ１０１の免疫組織化学（ＩＨＣ）分析を実施した。ＳＴ１０１（２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクルを外側尾静脈への静脈内注射によって投与した（ｎ＝３／群）。注射の２時間後、マウスを安楽死させた。脳を採取し、４％パラホルムアルデヒド中に保存した。ＤＡＢ標識抗ウサギ二次試薬で検出するウサギポリクローナル抗ＳＴ１０１抗体を使用した、２μＭ切片でのＩＨＣ染色のために、組織を処理した。
【0121】
ＳＴ１０１を投与したマウス由来の脳切片は、ＳＴ１０１の細胞染色及び微小血管染色のエビデンスを示した（図７、パネルＢ）が、ビヒクルを投与したマウス由来の脳切片ではＳＴ１０１染色のエビデンスはなかった（図７、パネルＡ）。これらのデータは、ＳＴ１０１が、全身ペプチド投与後のナイーブＣ５７ＢＬ／６で血液脳関門を通過することを示している。
【0122】
実施例４．ＳＴ１０１は安全である
安全性薬理学
中枢神経系、心血管系、及び呼吸器系に対するＳＴ１０１の潜在的な薬理学的効果を、カニクイザルにおける２８日間の毒性、毒物動態学（ＴＫ）及び安全性薬理試験（ＧＬＰ）の下で調査した。以下でより詳細に説明するように、これらの系のいずれに対してもＳＴ１０１の影響は観察されなかった。
安全性薬理学
中枢神経系、心血管系、及び呼吸器系に対するＳＴ１０１の潜在的な薬理学的効果を、カニクイザルにおける２８日間の毒性、毒物動態学（ＴＫ）及び安全性薬理試験（ＧＬＰ）の下で調査した。以下でより詳細に説明するように、これらの系のいずれに対してもＳＴ１０１の影響は観察されなかった。
【0123】
心電図（ＥＣＧ）検査を、投与前及び最終投与の近くで実施した。取り扱いに関連するストレスを最小限に抑えるために、１００ｍｇ／ｍＬのケタミン塩酸塩をおよそ１０ｍｇ／ｋｇの用量で筋肉内注射してサルを鎮静させた。委員会認定の獣医心臓専門医により、心電図を定性的及び定量的に評価した（例えば、ＱＴ＆ＨＲ；ＱＴｃ）。心電図は、誘導Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ａＶＲ、ａＶＬ、及びａＶＦを使用して記録した。心電図の評価では、ＳＴ１０１関連の変化は認められなかった。
【0124】
補助的なＥＣＧ及び呼吸評価のために、ＥＣＧ波形及び換気中の胸部及び腹部拡張に由来する波形を使用して、ＩＶボーラスを介して対照（０ｍｇ／ｋｇ）または３０ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１のいずれかを投与した動物に誘発された定性的な心電図及び換気の変化を比較した。全体として、合計１６匹（オス８匹、メス８匹；ｎ＝４／群／性別）のサルに由来するＥＣＧトレースを評価した。定性的評価では、心電図におけるリズム及び／または形態異常、ならびに胸部及び腹部の呼吸誘導について、各動物に由来するトレースを目視で検査した。定性分析では、他の要因の中でも、トレースの解釈品質、筋肉振戦または６０Ｈｚアーティファクトの有無、経時的な電圧の一般的な変化、ＳＴ－Ｔの構成、及びリズムを評価した。対照動物と高用量動物の間で、及び対照群と高用量群について投与後とベースラインの間でデータを比較した。
【0125】
すべてのサルは、（多くの場合）、心電図と肺造影を主観的に分析することができる短時間の記録期間を有していた。ＳＴ１０１に起因する心電図または肺電図のいずれにも主観的な変化は認められなかった。
【0126】
研究への割り当て前及び治療期間の終わりに向かって、鎮静されたサルに対して委員会認定の獣医眼科医によって間接的な眼底検査を実施した。群平均の眼科の評価では、ＳＴ１０１関連の変化は明らかにならなかった。
【0127】
順化期間中（治療前のベースライン）及び治療及び回復期間の終わり近くに、スタッフの獣医師または訓練を受けた被指名者がサルから呼吸を記録した。呼吸数を３０秒間記録し、２を掛けて呼吸数／分を求めた。群の平均呼吸の評価では、ＳＴ１０１関連の変化は明らかにならなかった。
【0128】
研究への割り当て前、及び治療及び回復期間の終わり近くに、血圧（収縮期、拡張期及び平均動脈圧）をサルで採取した。呼吸検査と同時に血圧を測定した。取り扱いに関連するストレスを最小限に抑えるために、サルを鎮静させた。群の平均血圧の評価では、ＳＴ１０１関連の変化は明らかにならなかった。
【0129】
偽アレルギー反応の評価
疑似アレルギー反応の臨床徴候には、体温の低下、活動の低下、及び立毛が含まれ得る。１０ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を２～３分間にわたってカニクイザルに静脈内（ＩＶ）ボーラス投与した後、疑似アレルギー反応の臨床的徴候は観察されなかったが、一方、３０ｍｇ／ｋｇの投与では、中等度の活動低下をもたらし、動物は２４時間以内に回復した。注入速度を２～３分から１～２時間に延長すると、３０ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１用量で良好な忍容性が得られた。
疑似アレルギー反応の臨床徴候には、体温の低下、活動の低下、及び立毛が含まれ得る。１０ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を２～３分間にわたってカニクイザルに静脈内（ＩＶ）ボーラス投与した後、疑似アレルギー反応の臨床的徴候は観察されなかったが、一方、３０ｍｇ／ｋｇの投与では、中等度の活動低下をもたらし、動物は２４時間以内に回復した。注入速度を２～３分から１～２時間に延長すると、３０ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１用量で良好な忍容性が得られた。
【0130】
１時間にわたる５０ｍｇ／ｋｇの、または３０分にわたる３０ｍｇ／ｋｇのＩＶ注入では、活動低下と潮紅が生じ、動物は数時間以内に回復した。その後の研究では、１１日間にわたって、７．５、１５及び３０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでの１時間注入による４回の投与で、サルに疑似アレルギーの徴候がないことが示された（ｎ＝２／性別／群）。
【0131】
サルでの２８日間のＧＬＰ毒性試験（実施例５を参照のこと）では、６匹のメスのうちの１匹が、３０ｍｇ／ｋｇ群のＳＴ１０１への最初の曝露後に疑似アレルギー反応の徴候を示し、オスは徴候を示さなかった。この動物は回復しているように見え、数時間後には食べたり動き回ったりし始めたため、介入は行わなかった。ＳＴ１０１曝露のおよそ４８時間後、動物の状態が悪化し、不活発で心拍が遅くなり、その後まもなく死亡した。この研究では、偽アレルギー反応の他の徴候はなかった（ｎ＝４コア＋２回復サル／性別／群、合計３６匹のＳＴ１０１処置動物）。これらの研究で忍容されるＳＴ１０１曝露レベルは、臨床で試験されるレベルよりも有意に高くなっている。したがって、疑似アレルギーは、ヒト対象では発生しないと予想される。
【0132】
実施例５．ＳＴ１０１は忍容性が高い
試験１
７．５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、及び３０ｍｇ／ｋｇの用量で１時間のＩＶ注入を繰り返した後のＳＴ１０１の忍容性を、１２日間試験においてカニクイザルで評価した。表１に示す試験デザインは、４つの群（ＳＴ１０１の各用量の群、及びビヒクル対照）のそれぞれが、４匹のサル（性別ごとに２匹のサル）からなり、これらに、１１日間にわたって４回、ＳＴ１０１またはビヒクル対照を投与したことを示している。
試験１
７．５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、及び３０ｍｇ／ｋｇの用量で１時間のＩＶ注入を繰り返した後のＳＴ１０１の忍容性を、１２日間試験においてカニクイザルで評価した。表１に示す試験デザインは、４つの群（ＳＴ１０１の各用量の群、及びビヒクル対照）のそれぞれが、４匹のサル（性別ごとに２匹のサル）からなり、これらに、１１日間にわたって４回、ＳＴ１０１またはビヒクル対照を投与したことを示している。
【表2】
【0133】
１日目及び１１日目に、投与前後の複数の時点で血液検体を採取した。脳、膀胱、心臓、腸、腎臓、肝臓、及び肺を含む様々な臓器から組織を採取し、評価し、評価のために処理した。
【0134】
結果は、臨床観察、体重、臨床化学、または血液学に有意な変化がないことを示した。７．５ｍｇ／ｋｇ用量を投与した両方のオス、１５ｍｇ／ｋｇ用量を投与した１匹のオス、３０ｍｇ／ｋｇ用量を投与した１匹のオス、及び治療したすべてのメスについて、１つ以上の注射部位で透明な液体が観察された。ＳＴ１０１投与に関連する他の肉眼的所見は観察されなかった。
【0135】
ＳＴ１０１を、７．５ｍｇ／ｋｇ用量で投与した１匹のオス、１５ｍｇ／ｋｇ用量で投与した１匹のオス、及び３０ｍｇ／ｋｇ用量を投与した両方のオス、ならびに治療したすべてのメスについて、最後の注射部位において軽度～重度の血栓症が認められた。他の顕微鏡的なＳＴ１０１関連の所見は観察されなかった。
【0136】
カニクイザルにおける７．５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、及び３０ｍｇ／ｋｇ用量の投与は、注射部位での血栓症、急性炎症、赤血球の蓄積、線維症、及び浮腫を引き起こした。これらの所見は、ＳＴ１０１の投与によって引き起こされた局所刺激と一致していた。他のＳＴ１０１関連の肉眼的または顕微鏡的所見はなかった。
【0137】
この試験の結果に基づいて、３０ｍｇ／ｋｇの用量が、ＳＴ１０１の重篤な毒性が発現しない最大用量（ＨＮＳＴＤ）及び無毒性量（ＮＯＡＥＬ）であると考えられた。
【0138】
試験２
この試験では、オスとメスのカニクイザルに被験物質ＳＴ１０１を、７．５、１５、及び３０ｍｇ／ｋｇの用量で（それぞれ群２、３、及び４に対応する）、またはビヒクル対照（群１）を１時間の静脈内（ＩＶ）注入として、週２回、合計８回投与した。最後の投与は、メスは２４日目、オスは２５日目に実施した。表２に示す試験デザインは、４つの群（ＳＴ１０１の各用量の群、及びビヒクル対照）のそれぞれが、回復群のコア試験の８匹のサル（性別ごとに４匹）と４匹のサル（各性別の２匹）からなっていたことを示している。ＳＴ１０１への最終曝露後、回復群を２週間の無治療期間に供した。
この試験では、オスとメスのカニクイザルに被験物質ＳＴ１０１を、７．５、１５、及び３０ｍｇ／ｋｇの用量で（それぞれ群２、３、及び４に対応する）、またはビヒクル対照（群１）を１時間の静脈内（ＩＶ）注入として、週２回、合計８回投与した。最後の投与は、メスは２４日目、オスは２５日目に実施した。表２に示す試験デザインは、４つの群（ＳＴ１０１の各用量の群、及びビヒクル対照）のそれぞれが、回復群のコア試験の８匹のサル（性別ごとに４匹）と４匹のサル（各性別の２匹）からなっていたことを示している。ＳＴ１０１への最終曝露後、回復群を２週間の無治療期間に供した。
【表3】
【0139】
定量範囲が２０．０～２０００ｎｇ／ｍＬの検証済みＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析法を使用してＳＴ１０１の血漿濃度を分析するために、１日目と２４／２５日目に血液試料を採取した。群２（７．５ｍｇ／ｋｇ）、３（１５ｍｇ／ｋｇ）、及び４（３０ｍｇ／ｋｇ）について、ＳＴ１０１の毒物動態学（ＴＫ）パラメータを１日目と２４／２５日目に測定した。肉眼観察及び臓器秤量を伴う剖検をすべての動物で実施し、３０ｍｇ／ｋｇ用量及び対照コア試験動物のすべてで病理組織診断を実施した。
【0140】
治療関連の所見には、注射部位の腫脹／浮腫、かさぶた、うろこ状の皮膚、及びびらん／潰瘍化が含まれていた。これらの観察の重症度と発生率は、用量レベルに比例して増加した。群の平均体重と体重増加の評価では、ＳＴ１０１に関連した変化は明らかにならなかった。
【0141】
ＳＴ１０１に関連する臨床化学的変化は３０ｍｇ／ｋｇ用量の群でのみ発生し、７．５ｍｇ／ｋｇ用量または１５ｍｇ／ｋｇ用量の群では観察されなかった。同様に、血小板の増加やフィブリノゲンの増加などの血液学的変化は、３０ｍｇ／ｋｇ用量の群に限定されていた。血小板及びフィブリノゲンレベルの増加、ならびにクレアチニンホスホキナーゼの増加は、注射部位の血管刺激と相関している。
【0142】
胸部バンドを備えたＤＳＩ Ｊａｃｋｅｔｅｄ（非侵襲的）外部遠隔測定系を利用して収集した従来の心電図及び呼吸データの評価では、治療に関連する変化は認められなかった。
【0143】
ＳＴ１０１に関連した臓器重量パラメータの変化には、３０ｍｇ／ｋｇ用量でのオスの最終剖検時の肝臓及び腎臓（絶対重量及び脳重量と体重に対する相対重量）の重量の増加、及び３０ｍｇ／ｋｇ用量でのメスの最終剖検時の肝臓及び腎臓（絶対重量及び体重に対する相対重量）の重量の増加が含まれていた。副腎と腎臓の絶対重量は、１５ｍｇ／ｋｇ用量のメスで増加していた。肝臓と腎臓（絶対重量及び脳重量と体重に対する相対重量）重量の増加と胸腺（絶対重量及び脳重量と体重に対する相対重量）重量の減少は、回復剖検時の３０ｍｇ／ｋｇ用量の動物においても依然として明らかであった。
【0144】
顕微鏡検査では、３０ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を投与した２匹のオスと３匹のメスにおいて、最小限～中等度の腎臓の尿細管壊死が認められ、３０ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を投与した１匹のメスにおいて腎尿細管の軽度のタンパク性円柱形成が認められた。１５ｍｇ／ｋｇを投与した２匹のオスと１匹のメスにおいて、最小限～重度の腎臓の尿細管壊死が認められた。回復した動物では、７．５ｍｇ／ｋｇ用量の１匹のオス、１５ｍｇ／ｋｇ用量の２匹のオス、３０ｍｇ／ｋｇ用量の１匹のオス及び１５ｍｇ／ｋｇ用量の１匹のメスの腎臓に、最小限～軽度の尿細管壊死が認められた。尿細管の変化は、この試験に割り当てられた期間中に部分的に可逆的であった。腎病変の頻度と重症度は、用量との明確な関係を示さず、コア動物と回復動物において低い重症度で散発的に発生した。
【0145】
末期の剖検では、肉眼的病変には、３０ｍｇ／ｋｇを投与したオス４匹のうちの２匹及びメス４匹のうちの２匹について、１つ以上の注射部位に認められた透明な液体が含まれていた。７．５ｍｇ／ｋｇを投与したオス４匹のうちの１匹及びメス４匹のうちの１匹、１５ｍｇ／ｋｇを投与したオス４匹のうちの３匹及びメス４匹のうちの１匹、ならびに３０ｍｇ／ｋｇを投与したオス４匹のうち３匹及びすべてのメスに、１つ以上の注射部位における痂皮／病変／赤色色素沈着が認められた。最後の注射部位での軽度～重度の血栓症も、各用量群の一部の動物で認められ、３０ｍｇ／ｋｇ用量の群でより高い頻度で発生した。回復剖検では、１５ｍｇ／ｋｇを投与したメス２匹のうちの１匹、及び３０ｍｇ／ｋｇを投与した両方のオスにおいて、１つ以上の注射部位での痂皮／病変／赤色色素沈着が認められた。
【0146】
これらの結果に照らして、ＨＮＳＴＤは１５ｍｇ／ｋｇ用量であると考えられ、ＮＯＡＥＬは７．５ｍｇ／ｋｇであると考えられた。
【0147】
実施例６：固形腫瘍患者へのＳＴ１０１の投与
非盲検第１～２相用量設定試験を実施して、進行した切除不能及び転移性固形腫瘍の患者に静脈内投与したＳＴ１０１の安全性、忍容性、ＰＫ、薬力学（ＰＤ）、及び実証実験の有効性を判定する。この試験は：（１）用量漸増段階、及び（２）拡大段階の２段階からなる。
非盲検第１～２相用量設定試験を実施して、進行した切除不能及び転移性固形腫瘍の患者に静脈内投与したＳＴ１０１の安全性、忍容性、ＰＫ、薬力学（ＰＤ）、及び実証実験の有効性を判定する。この試験は：（１）用量漸増段階、及び（２）拡大段階の２段階からなる。
【0148】
用量漸増段階
試験デザイン
用量漸増段階では、生存期間に影響を与え得るすべての利用可能な治療法に対して難治性または不耐性である、局所進行性または転移性の黒色腫、がん腫、または任意の腫瘍タイプの肉腫と診断された患者へのＳＴ１０１の静脈内投与が含まれる。用量コホートは、すべてのコホートで週１回（ＱＷ）、０．５、１、２、４、６、８、及び１６ｍｇ／ｋｇを投与し；最高用量レベルは隔週（Ｑ２Ｗ）で投与してもよい。投与は、少なくとも９０分間の合計注入時間のＩＶ注入によって行う。ＳＴ１０１は、０．９％生理食塩水で希釈された、トレハロース及び乳酸を含む医薬組成物で提供される。
試験デザイン
用量漸増段階では、生存期間に影響を与え得るすべての利用可能な治療法に対して難治性または不耐性である、局所進行性または転移性の黒色腫、がん腫、または任意の腫瘍タイプの肉腫と診断された患者へのＳＴ１０１の静脈内投与が含まれる。用量コホートは、すべてのコホートで週１回（ＱＷ）、０．５、１、２、４、６、８、及び１６ｍｇ／ｋｇを投与し；最高用量レベルは隔週（Ｑ２Ｗ）で投与してもよい。投与は、少なくとも９０分間の合計注入時間のＩＶ注入によって行う。ＳＴ１０１は、０．９％生理食塩水で希釈された、トレハロース及び乳酸を含む医薬組成物で提供される。
【0149】
注入関連反応（ＩＲＲ）が、ＳＴ１０１の投与中に、及び／または投与後に発生する可能性がある。そのような反応には、発熱、悪寒／硬直、頻脈、頻呼吸、低血圧、気管支痙攣、及び他の認められた症状が含まれ得る。関連する症状が２日以上続く場合を除き、ＩＲＲはＤＬＴとは見なされない。ＩＲＲは、投与経路と投与期間の実現可能性を評価するためにＤＲＣによって使用される。
【0150】
標準的な医療管理を通じて患者の快適さを維持するために、支持療法を実施してもよい。そのような措置には、注入の停止または遅延、ジフェンヒドラミン、アセトアミノフェン、及びＮＳＡＩＤ、クリスタロイド液、酸素、気管支拡張薬、及び臨床的に必要な他の薬物療法が含まれ、例えば、以下のとおりである：
ａ． ＩＶまたは経口（ＰＯ）投与によるアセトアミノフェン／パラセタモール６５０～１０００ｍｇ；
ｂ． ＩＶまたはＰＯ投与によるジフェンヒドラミン２５～５０ｍｇ；
ｃ． ＩＶまたはＰＯ投与によるクロルフェナミン５～１０ｍｇ；
ｄ． ＩＶまたはＰＯ投与によるラニチジン５０ｍｇ；
ｅ． ＰＯ投与によるイブプロフェン２００～４００ｍｇ；
ｆ． ＰＯ投与によるナプロキセン５００ｍｇ；
ｇ． ＩＶ（加温）投与による生理食塩水０．９％、１ＬまたはＰＲＮ；
ｈ． ＩＶまたはＰＯ投与によるプロクロルペラジン５～１０ｍｇ；
ｉ． ＩＶまたはＰＯ投与によるオンダンセトロン４～１６ｍｇ；
ｊ． ＩＶ投与によるデキサメタゾン５～１０ｍｇ；
ｋ． ＩＶ投与によるヒドロコルチゾン１００ｍｇ １回；
ｌ． ＩＶ投与によるヒドロコルチゾン５０ｍｇ ｑ６ｈ。
ａ． ＩＶまたは経口（ＰＯ）投与によるアセトアミノフェン／パラセタモール６５０～１０００ｍｇ；
ｂ． ＩＶまたはＰＯ投与によるジフェンヒドラミン２５～５０ｍｇ；
ｃ． ＩＶまたはＰＯ投与によるクロルフェナミン５～１０ｍｇ；
ｄ． ＩＶまたはＰＯ投与によるラニチジン５０ｍｇ；
ｅ． ＰＯ投与によるイブプロフェン２００～４００ｍｇ；
ｆ． ＰＯ投与によるナプロキセン５００ｍｇ；
ｇ． ＩＶ（加温）投与による生理食塩水０．９％、１ＬまたはＰＲＮ；
ｈ． ＩＶまたはＰＯ投与によるプロクロルペラジン５～１０ｍｇ；
ｉ． ＩＶまたはＰＯ投与によるオンダンセトロン４～１６ｍｇ；
ｊ． ＩＶ投与によるデキサメタゾン５～１０ｍｇ；
ｋ． ＩＶ投与によるヒドロコルチゾン１００ｍｇ １回；
ｌ． ＩＶ投与によるヒドロコルチゾン５０ｍｇ ｑ６ｈ。
【0151】
最初の注入で関連するＩＲＲを経験している患者は、その後のすべての注入において最小量のジフェンヒドラミンとアセトアミノフェンによる予防を受けるが、これは、注入中にＩＲＲが発生することを想定して、ＳＴ１０１投与の前に投与する必要がある。
【0152】
結果
用量漸増段階が進行中である。コホート１～４のすべての患者（それぞれ、用量レベル０．５、１、２、及び４ｍｇ／ｋｇ；コホート１～３のそれぞれについてｎ＝３；コホート４ではｎ＝６）は、２１日間のＤＬＴ期間を完了したが、コホート４の１人の患者は、疾患の進行のためにすべての投与を受けなかった。コホート５（６ｍｇ／ｋｇ）では、１人の患者がＤＬＴ期間を完了し、２人の患者がＤＬＴ期間中である。コホート５の患者には、投与の２日前と投与日に１０ｍｇのモンテルカストをＰＯ投与し、投与日に２０ｍｇファモチジンをＰＯまたはＩＶ投与し、投与日に１０ｍｇクロルフェナミンをＰＯ投与するか、または５０ｍｇジフェンヒドラミンをＩＶ投与する。アレルギーなどの他の病態の患者には、モンテルカストなどの二次薬剤を毎日投与することができる。
用量漸増段階が進行中である。コホート１～４のすべての患者（それぞれ、用量レベル０．５、１、２、及び４ｍｇ／ｋｇ；コホート１～３のそれぞれについてｎ＝３；コホート４ではｎ＝６）は、２１日間のＤＬＴ期間を完了したが、コホート４の１人の患者は、疾患の進行のためにすべての投与を受けなかった。コホート５（６ｍｇ／ｋｇ）では、１人の患者がＤＬＴ期間を完了し、２人の患者がＤＬＴ期間中である。コホート５の患者には、投与の２日前と投与日に１０ｍｇのモンテルカストをＰＯ投与し、投与日に２０ｍｇファモチジンをＰＯまたはＩＶ投与し、投与日に１０ｍｇクロルフェナミンをＰＯ投与するか、または５０ｍｇジフェンヒドラミンをＩＶ投与する。アレルギーなどの他の病態の患者には、モンテルカストなどの二次薬剤を毎日投与することができる。
【0153】
コホート１の１人の患者とコホート３の２人の患者は、少なくとも１８週間を通じて、腫瘍の放射線学的評価（サイズの３０％減～２０％増）による判定で、不変を示した。特に、コホート１の患者は、４６週間を通じて不変を示している。患者の疾患の状態を図８に示す。
【0154】
利用可能なすべての治療法に難治性の転移性皮膚黒色腫の６２歳の女性が、４ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１による９週間の治療後に部分奏効に達した。患者は以前に４回の局所再発を経験しており、それらは切除され、メルファランの分離式肢灌流で治療された。肺への転移は、イピリムマブとニボルマブの併用療法、次いでニボルマブの単独療法で治療されたが、下垂体炎のために中止された。その後の前頭葉脳転移は、進行性疾患ＰＤまで、完全切除、放射線療法、及びニボルマブで治療された。その後の粟粒肺転移は、大きな腹部腫瘤の切除後、ＰＤまでおよそ１６か月間テモゾロミドで治療された。患者は、本試験を開始する直前に梨状筋転移と診断された。造影ＣＴで測定したＳＴ１０１療法に対する患者の応答の評価を表３に示す。
【表4】
【0155】
患者の病変の１つを除いてすべてが縮小し、最大の病変は実質的な縮小を示した。さらに、非標的の複数の肺病変はサイズが縮小し、新規病変は検出されなかった。
【0156】
患者が経験したほとんどのＡＥは、最初の６時間に発生したＩＲＲであり、これらはアンチヒスタミン剤／抗炎症剤によって制御された。ＩＲＲを管理するために、以下の手段を患者に使用した：抗ヒスタミン剤（１２人の患者の５８％）、ＮＳＡＩＤ（１７％、コホート１、３、または４の患者ではなし）、アセトアミノフェン／パラセタモール（５０％）、コルチコステロイド（４２％、コホート１または２の患者にはなし）、ファモチジン（８％、コホート１、２または４の患者にはなし）、中断注入（４２％、コホート１または２の患者ではなし）、及び減速注入（４２％、コホート１または２の患者ではなし）。
【0157】
投与前及び最初のサイクル中の全注入期間後の様々な時点で、さらにそれ以降ではより少ない頻度で、血液試料を採取した。ＱＷ投薬コホートに属し、したがって２１日間の治療サイクルに従っていた患者については、表４に示す以下の時点で血液試料を採取した。
【表5】
【0158】
Ｑ２Ｗ投薬コホートに属し、したがって２８日間の治療サイクルに従っている患者については、表５に示す以下の時点で血液試料を採取する。
【表6】
【0159】
血漿中のＳＴ１０１薬物動態（ＰＫ）を、液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＳ）により評価した。コホート１～４のＰＫの結果は、Ｃｍａｘ及びＡＵＣｔが用量に比例することを示し（図９；図１０、パネルＡ及びＢ）、各コホートは、注入の４時間後にＳＴ１０１の最小限の蓄積を示した（図１１）。さらに、平均排泄半減期はコホート間で異なっていたが、各コホートのＴｍａｘは注入の終了時または終了間近であった。ＰＫの結果を表６にまとめる。
【表7】
【0160】
ＳＴ１０１の腫瘍への取り込みを、免疫組織化学分析によって測定した。スクリーニング中、すなわちＳＴ１０１による治療前、及び治療のサイクル２中に患者から採取した生検試料を処理し、ウサギポリクローナル抗ＳＴ１０１抗体を使用してＳＴ１０１についてイムノアッセイを行った。委員会認定の病理学者によって切片を分析し、ＳＴ１０１の取り込みを示す細胞の出現率に基づいてスコア化した。データは、ＳＴ１０１用量の増加と共に、腫瘍へのＳＴ１０１の取り込みが増加することを示している（図１２）。ＳＴ１０１に曝露する前のスクリーニング中に患者から採取したすべての生検は、ＳＴ１０１免疫染色について陰性であった。
【0161】
ＳＴ１０１が腫瘍細胞増殖に及ぼす影響を、免疫組織化学分析によって決定した。スクリーニング中及び治療のサイクル２中に患者から採取した生検試料を処理し、Ｋｉ６７の存在についてイムノアッセイを行った。委員会認定の病理学者によって切片を分析し、Ｋｉ６７シグナルの強度に基づいてスコア化した。データは、Ｋｉ６７染色の減少によって証明されるように、ＳＴ１０１曝露後にＫｉ６７シグナルが減少したことを示している（図１３）。
【0162】
薬力学評価には、機構的に関連する遺伝子異常と経時変化の循環無細胞デオキシ核酸（ＤＮＡ）分析、ならびに定量的逆転写酵素（ｑＲＴ）－ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ナノストリング、及び免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用したベースライン及びオントリートメントでの腫瘍分析が含まれる。
【0163】
拡大段階
最高の漸増コホートに到達するか、または所与の用量レベルで顕著な効力が観察され、推奨される第２相用量（ＲＰ２Ｄ）が選択されると、試験は拡大段階に進む。ＲＰ２Ｄの選択は、安全性、ＰＫ、ＰＤ、及び効力のデータに基づく。ＲＰ２Ｄは、最大耐用量（ＭＴＤ）、「活性用量」（前臨床、安全性、ＰＫ、ＰＤ、及び効力データに基づいて選択された、抗腫瘍活性があると考えられるＳＴ１０１の用量）、またはＭＴＤと活性用量の間の別の用量であり得る。拡大段階は、以下に記載する４つの特定の腫瘍タイプのコホートからなる。
最高の漸増コホートに到達するか、または所与の用量レベルで顕著な効力が観察され、推奨される第２相用量（ＲＰ２Ｄ）が選択されると、試験は拡大段階に進む。ＲＰ２Ｄの選択は、安全性、ＰＫ、ＰＤ、及び効力のデータに基づく。ＲＰ２Ｄは、最大耐用量（ＭＴＤ）、「活性用量」（前臨床、安全性、ＰＫ、ＰＤ、及び効力データに基づいて選択された、抗腫瘍活性があると考えられるＳＴ１０１の用量）、またはＭＴＤと活性用量の間の別の用量であり得る。拡大段階は、以下に記載する４つの特定の腫瘍タイプのコホートからなる。
【0164】
拡大段階のコホートの少なくとも１０人の患者は、登録前の２８日以内のスクリーニング時に強制的なコア生検または切除生検を受けている。可能である場合、かつスクリーニング生検を受けた患者で腫瘍が残存している場合、同じ病変の治療後生検を実施する。他の病変について、追加の任意選択での生検を実施することができる。
【0165】
乳癌患者へのＳＴ１０１の投与
１～２種類のホルモン系の前治療後に進行した、ホルモン受容体陽性（ＨＲｐｏｓ）、局所進行／転移乳癌（ＬＡ／ＭＢＣ）と診断された患者に、０．５、１、２、４、６、８、１２、もしくは１６ｍｇ／ｋｇの用量のＳＴ１０１を週１回、または１６ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を隔週で投与した。サイクリン依存性キナーゼ４／６（ＣＤＫ４／６）阻害剤、ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ（ｍＴＯＲ）阻害剤、または化学療法による前治療は、単剤療法または併用療法として許可される。
１～２種類のホルモン系の前治療後に進行した、ホルモン受容体陽性（ＨＲｐｏｓ）、局所進行／転移乳癌（ＬＡ／ＭＢＣ）と診断された患者に、０．５、１、２、４、６、８、１２、もしくは１６ｍｇ／ｋｇの用量のＳＴ１０１を週１回、または１６ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を隔週で投与した。サイクリン依存性キナーゼ４／６（ＣＤＫ４／６）阻害剤、ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ（ｍＴＯＲ）阻害剤、または化学療法による前治療は、単剤療法または併用療法として許可される。
【0166】
ＲＥＣＩＳＴ１．１（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ２００９）は、腫瘍縮小効果、病勢制御率（ＤＣＲ）、奏効期間（ＤＯＲ）、及び／または無増悪生存期間（ＰＦＳ）を評価するために使用される。計算されたＣＴまたはＭＲＩのいずれかが腫瘍縮小効果を評価するために利用されるが、ＣＴが好ましい画像技術である。ＣＲまたはＰＲの放射線学的評価には、応答の最初の評価が観察されてから少なくとも４週間後に確認用の画像が必要である。ＳＤの放射線学的評価には、応答の最初の評価が観察されてから少なくとも６週間後に確認用の画像が必要である。ＰＦＳは、最初の治療投与時から最初に記録された疾患の進行まで、または死亡までと判定される。ＤＯＲは、最初に応答が観察された時点から最初に記録された疾患の進行まで、または死亡までと判定される。
【0167】
黒色腫患者へのＳＴ１０１の投与
免疫チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）による治療後または治療中に進行しており、１～２種類の前治療を受けている進行性／転移性黒色腫と診断された患者に、０．５、１、２、４、６、８、１２、もしくは１６ｍｇ／ｋｇの用量のＳＴ１０１を週１回、または１６ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を隔週で投与する。ＢＲＡＦ変異疾患を有する患者はまた、適切な標的療法のうちの１つを受けている必要がある。
免疫チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）による治療後または治療中に進行しており、１～２種類の前治療を受けている進行性／転移性黒色腫と診断された患者に、０．５、１、２、４、６、８、１２、もしくは１６ｍｇ／ｋｇの用量のＳＴ１０１を週１回、または１６ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を隔週で投与する。ＢＲＡＦ変異疾患を有する患者はまた、適切な標的療法のうちの１つを受けている必要がある。
【0168】
ＲＥＣＩＳＴ１．１（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ２００９）は、腫瘍縮小効果、病勢制御率（ＤＣＲ）、奏効期間（ＤＯＲ）、及び／または無増悪生存期間（ＰＦＳ）を評価するために使用される。計算されたＣＴまたはＭＲＩのいずれかが腫瘍縮小効果を評価するために利用されるが、ＣＴが好ましい画像技術である。ＣＲまたはＰＲの放射線学的評価には、応答の最初の評価が観察されてから少なくとも４週間後に確認用の画像が必要である。ＳＤの放射線学的評価には、応答の最初の評価が観察されてから少なくとも６週間後に確認用の画像が必要である。ＰＦＳは、最初の治療投与時から最初に記録された疾患の進行まで、または死亡までと判定される。ＤＯＲは、最初に応答が観察された時点から最初に記録された疾患の進行まで、または死亡までと判定される。
【0169】
神経膠芽腫患者へのＳＴ１０１の投与
１回の標準治療レジメン後に再発または進行した（修正ＲＡＮＯ基準による）原発性（新規）ＧＢＭと診断された患者に、０．５、１、２、４、６、８、１２、もしくは１６ｍｇ／ｋｇの用量のＳＴ１０１を週１回、または１６ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を隔週で投与する。「標準治療」は、最大の外科的切除、放射線療法、及び放射線療法と併用するテモゾロミドまたはテモゾロミドによる補助化学療法と定義される。第一選択治療の補助として腫瘍電場療法を受けている患者は適格である。
１回の標準治療レジメン後に再発または進行した（修正ＲＡＮＯ基準による）原発性（新規）ＧＢＭと診断された患者に、０．５、１、２、４、６、８、１２、もしくは１６ｍｇ／ｋｇの用量のＳＴ１０１を週１回、または１６ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を隔週で投与する。「標準治療」は、最大の外科的切除、放射線療法、及び放射線療法と併用するテモゾロミドまたはテモゾロミドによる補助化学療法と定義される。第一選択治療の補助として腫瘍電場療法を受けている患者は適格である。
【0170】
修正ＲＡＮＯ（Ｅｌｌｉｎｇｓｏｎ ２０１７）は、腫瘍縮小効果、病勢制御率（ＤＣＲ）、奏効期間（ＤＯＲ）、及び／または無増悪生存期間（ＰＦＳ）を評価するために使用される。ガドリニウム造影ＭＲＩは、腫瘍縮小効果を評価するために利用される。ＣＲまたはＰＲの放射線学的評価には、応答の最初の評価が観察されてから少なくとも４週間後に確認用の画像が必要である。ＳＤの放射線学的評価には、応答の最初の評価が観察されてから少なくとも６週間後に確認用の画像が必要である。ＰＦＳは、最初の治療投与時から最初に記録された疾患の進行まで、または死亡までと判定される。ＤＯＲは、最初に応答が観察された時点から最初に記録された疾患の進行まで、または死亡までと判定される。
【0171】
前立腺癌患者へのＳＴ１０１の投与
タキサン、アビラテロン及びエンザルタミド／アパルタミドによる前治療後に進行している、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）と診断された患者（禁忌または患者がこれらの薬剤に不耐性でない限り）に、０．５、１、２、４、６、８、１２、もしくは１６ｍｇ／ｋｇの用量のＳＴ１０１を週１回、または１６ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を隔週で投与する。
タキサン、アビラテロン及びエンザルタミド／アパルタミドによる前治療後に進行している、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）と診断された患者（禁忌または患者がこれらの薬剤に不耐性でない限り）に、０．５、１、２、４、６、８、１２、もしくは１６ｍｇ／ｋｇの用量のＳＴ１０１を週１回、または１６ｍｇ／ｋｇのＳＴ１０１を隔週で投与する。
【0172】
ＰＣＷＧ３ガイドライン（Ｓｃｈｅｒ ２０１６）を使用して、応答を採点する。ＣＴまたはＭＲＩのいずれかを利用して腫瘍縮小効果を評価する。画像評価は、疾患進行（ＰＤ）になるまで実行する。ＣＲまたはＰＲの放射線学的評価には、応答の最初の評価が観察されてから少なくとも４週間後に確認用の画像が必要である。不変（ＳＤ）の放射線学的評価には、応答の最初の評価が観察されてから少なくとも６週間後に確認用の画像が必要である。ＤＣＲ、ＤＯＲ、及びＰＦＳの評価は、ＰＣＷＧ３の測定値に基づく。最初の試験治療投与から最初に記録された疾患の進行または死亡までの時間は、ＰＦＳを決定する。最初に応答が観察された時点から最初に記録された疾患の進行まで、または死亡までの時間は、ＤＯＲを決定する。
参考文献
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本発明は、以下の特許請求の範囲によってさらに説明される。
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＊＊＊
本発明は、以下の特許請求の範囲によってさらに説明される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【配列表】
【国際調査報告】