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特表2023-532080Ｃ８２５を発現する免疫細胞およびこれを使用する診断法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-07-26
(54)【発明の名称】Ｃ８２５を発現する免疫細胞およびこれを使用する診断法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/62 20060101AFI20230719BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20230719BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20230719BHJP
C12N 15/867 20060101ALI20230719BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230719BHJP
C12N 5/078 20100101ALI20230719BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20230719BHJP
C07K 16/44 20060101ALI20230719BHJP
A61K 51/02 20060101ALI20230719BHJP
A61K 51/04 20060101ALI20230719BHJP
A61K 51/10 20060101ALI20230719BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230719BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20230719BHJP
A61P 13/10 20060101ALI20230719BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230719BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20230719BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20230719BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20230719BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20230719BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20230719BHJP
A61P 11/04 20060101ALI20230719BHJP
A61P 27/16 20060101ALI20230719BHJP
A61P 1/02 20060101ALI20230719BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20230719BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20230719BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20230719BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230719BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20230719BHJP
A61P 13/08 20060101ALI20230719BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20230719BHJP
A61P 15/02 20060101ALI20230719BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20230719BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20230719BHJP
C07K 16/28 20060101ALN20230719BHJP
【ＦＩ】
C12N15/62 Z
C12N15/13 ZNA
C12N15/12
C12N15/867 Z
C12N5/10
C12N5/078
C07K19/00
C07K16/44
A61K51/02 200
A61K51/04 200
A61K51/10 200
A61P35/00
A61P13/12
A61P13/10
A61P35/02
A61P19/08
A61P25/00
A61P15/00
A61P1/04
A61P11/02
A61P11/04
A61P27/16
A61P1/02
A61P1/16
A61P11/00
A61P17/00
A61P43/00 105
A61P1/18
A61P13/08
A61P21/00
A61P15/02
A61P9/00
A61K35/17
C07K16/28
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022580784
(86)(22)【出願日】2021-06-28
(85)【翻訳文提出日】2023-02-21
(86)【国際出願番号】 US2021039418
(87)【国際公開番号】W WO2022005994
(87)【国際公開日】2022-01-06
(31)【優先権主張番号】63/045,641
(32)【優先日】2020-06-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】500213834
【氏名又は名称】メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター
(74)【代理人】
【識別番号】100094569
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 伸一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100123777
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 さつき
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100123766
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 七重
(74)【代理人】
【識別番号】100111501
【弁理士】
【氏名又は名称】滝澤 敏雄
(72)【発明者】
【氏名】ラーソン スティーヴン
(72)【発明者】
【氏名】ヴィーチ ダレン
(72)【発明者】
【氏名】チール サラ
(72)【発明者】
【氏名】オウエルフェリ オウアセク
(72)【発明者】
【氏名】ヤン グアンビン
(72)【発明者】
【氏名】クレブス シモーネ
(72)【発明者】
【氏名】ダチェク メーガン
(72)【発明者】
【氏名】シェインバーグ デヴィッド
(72)【発明者】
【氏名】チュン ナイ－コン
(72)【発明者】
【氏名】サンティッチ ブライアン
【テーマコード（参考）】
4B065
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA01
4B065CA24
4B065CA44
4B065CA46
4C085HH03
4C085KA04
4C085KA05
4C085KA09
4C085KA29
4C085KB03
4C085KB07
4C085KB09
4C085KB11
4C085KB12
4C085KB56
4C085KB82
4C085LL18
4C087AA01
4C087AA03
4C087BB37
4C087CA04
4C087CA12
4C087MA56
4C087MA58
4C087MA59
4C087MA66
4C087NA20
4C087ZA01
4C087ZA34
4C087ZA36
4C087ZA59
4C087ZA66
4C087ZA67
4C087ZA75
4C087ZA81
4C087ZA89
4C087ZA94
4C087ZA96
4C087ZB26
4C087ZB27
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA50
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA51
4H045FA74
(57)【要約】
本明細書では、腫瘍抗原ターゲティングキメラ抗原受容体と、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する操作された免疫細胞を含む組成物が提示される。本技術の操作された免疫細胞は、診断用放射性薬剤（例えば、111Ｉｎ）と錯体化されうるＤＯＴＡハプテンに結合するように構成される。本明細書ではまた、本明細書で記載される、操作された免疫細胞の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける生体内分布、生存率、および増殖を決定する（ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｉｎｇ）ための方法も開示される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）配列番号３５～３９、４１、若しくは４２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、および／または前記抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸；並びに（ｂ）標的抗原に結合する受容体、および／または前記受容体をコードする核酸
を含む操作された免疫細胞。
【請求項2】
受容体がＴ細胞受容体である、請求項１に記載の操作された免疫細胞。
【請求項3】
受容体が天然の細胞受容体である、請求項１または２に記載の操作された免疫細胞。
【請求項4】
受容体が非天然の細胞受容体である、請求項１または２に記載の操作された免疫細胞。
【請求項5】
受容体がキメラ抗原受容体である、請求項１～４のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項6】
抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸が、前記抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の分泌のためのリーダー配列を含む、請求項５に記載の操作された免疫細胞。
【請求項7】
抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸がプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１～６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項8】
プロモーターが構成的プロモーターである、請求項７に記載の操作された免疫細胞。
【請求項9】
プロモーターが条件的プロモーターである、請求項７に記載の操作された免疫細胞。
【請求項10】
条件的プロモーターが、受容体の標的抗原への結合により誘導される、請求項９に記載の操作された免疫細胞。
【請求項11】
標的抗原が腫瘍抗原である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項12】
受容体をコードする核酸が構成的プロモーターに作動可能に連結されている、請求項１～１１のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項13】
キメラ抗原受容体が、（ｉ）細胞外抗原結合性ドメイン；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、請求項５～１２のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項14】
細胞外抗原結合性ドメインが標的抗原に結合する、請求項１３に記載の操作された免疫細胞。
【請求項15】
腫瘍抗原が、５Ｔ４、アルファ５β１インテグリン、７０７－ＡＰ、Ａ３３、ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ－２、β－カテニン、ＢＣＭＡ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ ＩＸ抗体、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳ－１、ＣＴ、Ｃｙｐ－Ｂ、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＤＡＭ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合性タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０、ＧＤ－２、ＧＭ２、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ*０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｋｉ－６７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＬＲＰ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ、ＭＡＲＴ－１／ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、メソテリン、ＭＵＣ、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ－１－Ｂ、ｍｙｃ、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹＥＳＯ－１、ＮＹ－Ｅｓｏ－Ｂ、ｐ５３、プロテイナーゼ３、ｐ１９０、ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＲＯＲＩ、ＳＡＲＴ－１またはＳＡＲＴ－３、スルビビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、テネイシン、ＴＳＴＡチロシナーゼ、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１からなる群から選択される、請求項１１～１４のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項16】
細胞外抗原結合性ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１３～１５のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項17】
細胞外抗原結合性ドメインがヒトｓｃＦｖを含む、請求項１３～１６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項18】
細胞外抗原結合性ドメインが配列番号３または配列番号４のＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、請求項１３～１７のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項19】
細胞外抗原結合性ドメインが、配列番号３または配列番号４に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、請求項１３～１８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項20】
細胞外抗原結合性ドメインが、前記細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端へ共有結合的に結合されたシグナルペプチドを含む、請求項１３～１９のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項21】
膜貫通ドメインが、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む、請求項１３～２０のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項22】
細胞内ドメインが、１つまたは複数の共刺激ドメインを含む、請求項１３～２１のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項23】
１つまたは複数の共刺激ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメイン、ＣＤ３ζ鎖、４－１ＢＢＬ共刺激ドメイン、またはこれらの任意の組合せから選択される、請求項２２に記載の操作された免疫細胞。
【請求項24】
操作された免疫細胞がリンパ球である、請求項１～２３のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項25】
リンパ球が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項２４に記載の操作された免疫細胞。
【請求項26】
Ｔ細胞が、ＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＣＤ８＋ Ｔ細胞である、請求項２５に記載の操作された免疫細胞。
【請求項27】
操作された免疫細胞が腫瘍浸潤リンパ球である、請求項１～２６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項28】
操作された免疫細胞が自家ドナーまたは同種ドナーに由来する、請求項１～２７のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項29】
キメラ抗原受容体と、配列番号３５～３９、４１、または４２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、とを含むポリペプチド。
【請求項30】
抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とキメラ抗原受容体との間に配置された自己切断型ペプチドとをさらに含む、請求項２９に記載のポリペプチド。
【請求項31】
自己切断型ペプチドがＰ２Ａ自己切断型ペプチドである、請求項３０に記載のポリペプチド。
【請求項32】
抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片が抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の分泌のためのリーダー配列を含む、請求項２９～３１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項33】
キメラ抗原受容体が、（ｉ）細胞外抗原結合性ドメイン；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、請求項２９～３２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項34】
細胞外抗原結合性ドメインが腫瘍抗原に結合する、請求項３３に記載のポリペプチド。
【請求項35】
腫瘍抗原が、ＭＵＣ１６、メソテリン、ＣＤ１９、ＷＴ１、ＰＳＣＡ、およびＢＣＭＡの中から選択される、請求項３４に記載のポリペプチド。
【請求項36】
細胞外抗原結合性ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、請求項３３～３５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項37】
細胞外抗原結合性ドメインが配列番号３または配列番号４のＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、請求項３３～３６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項38】
細胞外抗原結合性ドメインが、配列番号３または配列番号４に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、請求項３３～３７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項39】
膜貫通ドメインがＣＤ８膜貫通ドメインを含む、請求項３３～３８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項40】
細胞内ドメインが１つまたは複数の共刺激ドメインを含む、請求項３３～３９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項41】
１つまたは複数の共刺激ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメイン、ＣＤ３ζ鎖、４－１ＢＢＬ共刺激ドメイン、またはこれらの任意の組合せから選択される、請求項４０に記載のポリペプチド。
【請求項42】
請求項２９～４１のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする核酸。
【請求項43】
ポリペプチドをコードする核酸がプロモーターに作動可能に連結されている、請求項４２に記載の核酸。
【請求項44】
プロモーターが構成的プロモーターである、請求項４３に記載の核酸。
【請求項45】
プロモーターが条件的プロモーターである、請求項４３に記載の核酸。
【請求項46】
条件的プロモーターが、抗原へのキメラ抗原受容体の結合により誘導可能である、請求項４５に記載の核酸。
【請求項47】
請求項４２～４６のいずれか１項に記載の核酸を含むベクター。
【請求項48】
ウイルスベクターまたはプラスミドである、請求項４７に記載のベクター。
【請求項49】
レトロウイルスベクターである、請求項４７に記載のベクター。
【請求項50】
請求項４２～４６のいずれか１項に記載の核酸、または請求項４７～４９のいずれか１項に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項51】
請求項１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞とＤＯＴＡハプテンとを含み、前記操作された免疫細胞が前記ＤＯＴＡハプテンと腫瘍抗原とに結合するように構成されている、複合体。
【請求項52】
ＤＯＴＡハプテンが、ベンジル－ＤＯＴＡ、ＮＨ２－ベンジル（Ｂｎ）ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－デスフェリオキサミン、ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２；ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ２、Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－ＲＧＤ、ＤＯＴＡ－ＰＥＧ－Ｅ（ｃ（ＲＧＤｙＫ））２、ＤＯＴＡ－８－ＡＯＣ－ＢＢＮ、ＤＯＴＡ－ＰＥＳＩＮ、ｐ－ＮＯ２－ベンジル－ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－ビオチン－サルコシン（ＤＯＴＡ－ビオチン）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸モノ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）（ＤＯＴＡ－ＮＨＳ）、またはＤＯＴＡＴｙｒＬｙｓＤＯＴＡである、請求項５１に記載の複合体。
【請求項53】
ＤＯＴＡハプテンが、式ＩＩ【化1】
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり；
Ｍ2は、放射性核種のカチオンであり；
Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々、独立に、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンをもたらす）またはＨであり；
Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々、独立に、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンをもたらす）またはＨであり；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２である］
の構造を有する、請求項５１に記載の複合体。
【請求項54】
Ｍ2が、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、89Ｚｒ、68Ｇａ、または64Ｃｕである、請求項５１～５３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項55】
腫瘍の検出を必要とする対象における腫瘍を検出するための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、請求項５４に記載の複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記複合体の操作された免疫細胞により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されているステップ；および
（ｂ）前記複合体により放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における腫瘍の存在を検出するステップ
を含む、前記方法。
【請求項56】
腫瘍の検出を必要とする対象における腫瘍を検出するための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、請求項１１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されているステップ；
（ｂ）対象に、有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；および
（ｃ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における腫瘍の存在を検出するステップ
を含む、前記方法。
【請求項57】
複合体または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、陽電子放射型断層撮影法、または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法を使用して検出される、請求項５５または５６に記載の方法。
【請求項58】
複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、複合体または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが投与された４～２４時間後の間に検出される、請求項５５～５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項59】
複合体または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、組織１グラム当たりの注入用量百分率（％ＩＤ／ｇ）として表される、請求項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項60】
腫瘍組織の放射線のレベルと正常組織の放射線のレベルとの比が、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、または１００：１である、請求項５５～５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項61】
対象が、がんを有すると診断されているか、またはこれを有することが疑われている、請求項５５～６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項62】
がんが、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）部がん、耳鼻咽喉科（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、消化器がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎がん、喉頭がん、白血病、肝がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫、およびこれらの転移からなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項63】
複合体、操作された免疫細胞、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、静脈内投与、腫瘍内投与、筋内投与、動脈内投与、髄腔内投与、関節包内投与、眼窩内投与、皮内投与、腹腔内投与、経気管投与、皮下投与、脳室内投与、経口投与、または鼻腔内投与される、請求項５５～６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項64】
複合体、操作された免疫細胞、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、対象の脳脊髄液または血液へ投与される、請求項５５～６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項65】
対象における、操作された免疫細胞の生体内分布をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、請求項１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；
（ｂ）対象に、有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；および
（ｃ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における、操作された免疫細胞の生体内分布を決定するステップ
を含む、前記方法。
【請求項66】
対象における、操作された免疫細胞の生体内分布をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、請求項１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；および
（ｂ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における、前記操作された免疫細胞の生体内分布を決定するステップ
を含む、前記方法。
【請求項67】
対象における操作された免疫細胞の生存率をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、請求項１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；
（ｂ）対象に、有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；
（ｃ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；
（ｄ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および
（ｅ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと同等である場合に、対象における前記操作された免疫細胞が、生存可能であることを決定するステップ
を含む、前記方法。
【請求項68】
ステップ（ｄ）の前に、対象にと、第２の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップをさらに含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項69】
対象における操作された免疫細胞の生存率をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、請求項１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；
（ｂ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；
（ｃ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および
（ｄ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと同等である場合に、対象における前記操作された免疫細胞が、生存可能であることを決定するステップ
を含む、前記方法。
【請求項70】
対象における操作された免疫細胞の増殖をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、請求項１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；
（ｂ）対象に、第１の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；
（ｃ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；
（ｄ）ステップ（ｃ）の後で、対象に、第２の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップ；
（ｅ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および
（ｆ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと比べて高値である場合に、対象における前記操作された免疫細胞が、増殖していることを決定するステップ
を含む、前記方法。
【請求項71】
複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、陽電子放射型断層撮影法、または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法を使用して検出される、請求項６５～７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項72】
操作された免疫細胞、放射性標識化ＤＯＴＡハプテン、または複合体が、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋内投与、または腫瘍内投与される、請求項６５～７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項73】
がんが、癌腫、肉腫、黒色腫、または血液（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ）がんである、請求項６５～７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項74】
がんが、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）部がん、耳鼻咽喉科（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、消化器がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎がん、喉頭がん、白血病、肝がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫、およびこれらの転移の中から選択される、請求項６５～７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項75】
請求項１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、がんの進行を診断またはモニタリングするための指示書とを含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、その内容が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、２０２０年６月２９日に出願された、米国特許仮出願第６３／０４５，６４１号に対する利益および優先権を主張する。
技術分野
本技術は、一般に、腫瘍抗原ターゲティングキメラ抗原受容体と、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する操作された免疫細胞を含む組成物に関する。本明細書ではまた、本明細書で開示される組成物の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける生体内分布、生存率、および増殖を決定する（ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｉｎｇ）ための方法も開示される。
連邦政府による後援についての言明
本発明は、米国国立衛生研究所／米国国立がん研究所により支給された、助成金第ＣＡ５５３４９号および同第ＣＡ２３７６６号の下にある政府助成によりなされた。米国連邦政府は、本発明において、一定の権利を有する。
本出願は、その内容が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、２０２０年６月２９日に出願された、米国特許仮出願第６３／０４５，６４１号に対する利益および優先権を主張する。
技術分野
本技術は、一般に、腫瘍抗原ターゲティングキメラ抗原受容体と、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する操作された免疫細胞を含む組成物に関する。本明細書ではまた、本明細書で開示される組成物の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける生体内分布、生存率、および増殖を決定する（ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｉｎｇ）ための方法も開示される。
連邦政府による後援についての言明
本発明は、米国国立衛生研究所／米国国立がん研究所により支給された、助成金第ＣＡ５５３４９号および同第ＣＡ２３７６６号の下にある政府助成によりなされた。米国連邦政府は、本発明において、一定の権利を有する。
【背景技術】
【0002】
本技術の背景についての以下の記載は、本技術を理解する一助としてのみ提示されるものであり、本技術に対する先行技術について記載したり、これを構成するとは認められない。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法は、抗原発現細胞の存在下で活性化し、その後、抗原発現細胞を死滅させるようにＴ細胞をリダイレクトする。これは、抗原特異的単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を内因性Ｔ細胞活性化シグナル伝達ドメインとカップリングさせることにより達成される。ＣＡＲ Ｔ細胞は、個々のがん細胞を認識し、破壊する免疫細胞の能力を増強する。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法は、抗原発現細胞の存在下で活性化し、その後、抗原発現細胞を死滅させるようにＴ細胞をリダイレクトする。これは、抗原特異的単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を内因性Ｔ細胞活性化シグナル伝達ドメインとカップリングさせることにより達成される。ＣＡＲ Ｔ細胞は、個々のがん細胞を認識し、破壊する免疫細胞の能力を増強する。
【0003】
ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、血液およびリンパ節の腫瘍、すなわち、白血病およびリンパ腫に対して、とりわけ強力であった。しかし、多くの腫瘍、とりわけ、結腸、肺、および乳腺の充実性腫瘍は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法に対する応答が良好ではない（D’Aloia et al., Cell Death & Disease 9, 282 (2018); Singh et al., Semin Cancer Biol. S1044-579X(19)30398-0 (2019)）。１つの理由は、免疫監視および免疫による攻撃を回避する腫瘍微小環境を含む様々な耐性機構のために、ＣＡＲ－Ｔ細胞が腫瘍に到達しないことであろう。他の難題は、標的である腫瘍抗原の異種発現、およびＣＡＲ Ｔ細胞の腫瘍部位における長期存続の不全を含む。
したがって、患者の体内のＣＡＲ－Ｔ細胞を正確に、かつ、確実に「跡を辿る」か、または「追跡する」ための方法が火急に必要とされている。
したがって、患者の体内のＣＡＲ－Ｔ細胞を正確に、かつ、確実に「跡を辿る」か、または「追跡する」ための方法が火急に必要とされている。
【発明の概要】
【0004】
本明細書では、何らかの免疫特異性を有する、操作された免疫細胞の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける生体内分布、生存率、および増殖を決定するための方法が開示される。
本明細書のある特定の実施形態では、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片と、腫瘍抗原に結合する受容体とを発現する操作された免疫細胞を含む組成物が提示される。一部の実施形態では、受容体は、Ｔ細胞受容体である。一部の実施形態では、受容体は、天然の受容体（例えば、天然のＴ細胞受容体）である。一部の実施形態では、受容体は、非天然の受容体（例えば、非天然のＴ細胞受容体）、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの操作された受容体である。一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、および／または抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、操作された免疫細胞はキメラ抗原受容体、および／またはキメラ抗原受容体をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸はプロモーターに作動可能に連結されている。プロモーターは、構成的プロモーターの場合もあり、条件的プロモーターの場合もある。一部の実施形態では、条件的プロモーターは受容体（例えば、ＣＡＲ）の、腫瘍抗原などの抗原への結合により誘導可能である。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、（ｉ）細胞外抗原結合性ドメイン；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは腫瘍抗原に結合する。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、５Ｔ４、アルファ５β１インテグリン、７０７－ＡＰ、Ａ３３、ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ－２、β－カテニン、ＢＣＭＡ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ ＩＸ抗体、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳ－１、ＣＴ、Ｃｙｐ－Ｂ、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＤＡＭ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合性タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０、ＧＤ－２、ＧＭ２、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ*０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｋｉ－６７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＬＲＰ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ、ＭＡＲＴ－１／ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、メソテリン、ＭＵＣ、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ－１－Ｂ、ｍｙｃ、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹＥＳＯ－１、ＮＹ－Ｅｓｏ－Ｂ、ｐ５３、プロテイナーゼ３、ｐ１９０、ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＲＯＲＩ、ＳＡＲＴ－１またはＳＡＲＴ－３、スルビビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、テネイシン、ＴＳＴＡ チロシナーゼ、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１の中から選択される。
本明細書のある特定の実施形態では、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片と、腫瘍抗原に結合する受容体とを発現する操作された免疫細胞を含む組成物が提示される。一部の実施形態では、受容体は、Ｔ細胞受容体である。一部の実施形態では、受容体は、天然の受容体（例えば、天然のＴ細胞受容体）である。一部の実施形態では、受容体は、非天然の受容体（例えば、非天然のＴ細胞受容体）、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの操作された受容体である。一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、および／または抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、操作された免疫細胞はキメラ抗原受容体、および／またはキメラ抗原受容体をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸はプロモーターに作動可能に連結されている。プロモーターは、構成的プロモーターの場合もあり、条件的プロモーターの場合もある。一部の実施形態では、条件的プロモーターは受容体（例えば、ＣＡＲ）の、腫瘍抗原などの抗原への結合により誘導可能である。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、（ｉ）細胞外抗原結合性ドメイン；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは腫瘍抗原に結合する。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、５Ｔ４、アルファ５β１インテグリン、７０７－ＡＰ、Ａ３３、ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ－２、β－カテニン、ＢＣＭＡ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ ＩＸ抗体、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳ－１、ＣＴ、Ｃｙｐ－Ｂ、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＤＡＭ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合性タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０、ＧＤ－２、ＧＭ２、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ*０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｋｉ－６７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＬＲＰ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ、ＭＡＲＴ－１／ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、メソテリン、ＭＵＣ、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ－１－Ｂ、ｍｙｃ、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹＥＳＯ－１、ＮＹ－Ｅｓｏ－Ｂ、ｐ５３、プロテイナーゼ３、ｐ１９０、ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＲＯＲＩ、ＳＡＲＴ－１またはＳＡＲＴ－３、スルビビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、テネイシン、ＴＳＴＡ チロシナーゼ、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１の中から選択される。
【0005】
一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外抗原結合性ドメインは単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外抗原結合性ドメインは、ヒトｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外抗原結合性ドメインは配列番号３または配列番号４のＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号３または配列番号４に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外抗原結合性ドメインは、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に共有結合的に結合されたシグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、１つまたは複数の共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、ＣＤ３ζ鎖、４－１ＢＢＬ共刺激ドメイン、またはこれらのいずれかの組合せから選択される。一部の実施形態では、免疫細胞はリンパ球である。一部の実施形態では、リンパ球は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４+ Ｔ細胞またはＣＤ８+ Ｔ細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞は、腫瘍浸潤リンパ球である。一部の実施形態では、免疫細胞は、自家ドナーまたは同種ドナーに由来する。
【0006】
また、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片と、キメラ抗原受容体とを含むポリペプチドも提供される。一部の実施形態では、ポリペプチドは、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とキメラ抗原受容体との間に配置された自己切断型ペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、自己切断型ペプチドはＰ２Ａ自己切断型ペプチドである。一部の実施形態では、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片は、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の分泌のためのシグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片は配列番号３５～３９、４１、または４２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片はｓｃＦｖである。加えて、または代替的に、一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、（ｉ）抗原結合性ドメイン；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の抗原結合性ドメインは腫瘍抗原に結合する。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＷＴ１、およびＰＲＡＭＥの中から選択される。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の抗原結合性ドメインは単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号３または配列番号４のＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号３または配列番号４に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、１つまたは複数の共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の、１つまたは複数の共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、ＣＤ３ζ鎖、４－１ＢＢＬ共刺激ドメイン、またはこれらのいずれかの組合せから選択される。
【0007】
また、本明細書で開示されるポリペプチドのうちのいずれかをコードする核酸も提供される。一部の実施形態では、ポリペプチドをコードする核酸は、プロモーターに作動可能に連結されている。プロモーターは、構成的プロモーターの場合もあり、条件的プロモーターの場合もある。一部の実施形態では、条件的プロモーターは、ＣＡＲの抗原への結合により誘導可能である。また、本明細書で開示される核酸のうちのいずれかを含むベクターも提供される。一部の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターまたはプラスミドである。一部の実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクターである。
また、本明細書で開示されるポリペプチド、核酸、またはベクターを含む宿主細胞も提供される。
また、本明細書で開示されるポリペプチド、核酸、またはベクターを含む宿主細胞も提供される。
【0008】
別の態様では、本開示は、操作された免疫細胞が、ＤＯＴＡハプテンと腫瘍抗原とに結合するように構成されている、本明細書で記載される、操作された免疫細胞のうちのいずれかと、ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を提示する。例示的なＤＯＴＡハプテンは、ベンジル－ＤＯＴＡ、ＮＨ2－ベンジル（Ｂｎ）ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－デスフェリオキサミン、ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2、Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－ＲＧＤ、ＤＯＴＡ－ＰＥＧ－Ｅ（ｃ（ＲＧＤｙＫ））2、ＤＯＴＡ－８－ＡＯＣ－ＢＢＮ、ＤＯＴＡ－ＰＥＳＩＮ、ｐ－ＮＯ２－ベンジル－ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－ビオチン－サルコシン（ＤＯＴＡ－ビオチン）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸モノ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）（ＤＯＴＡ－ＮＨＳ）、およびＤＯＴＡＴｙｒＬｙｓＤＯＴＡを含むがこれらに限定されない。本技術の複合体についての、ある特定の実施形態では、ＤＯＴＡハプテンは、式ＩＩ
【0009】
【化1】
または薬学的に許容されるその塩［式中、
Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり；
Ｍ2は、放射性核種のカチオンであり；
Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々、独立に、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンをもたらす）またはＨであり；
Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々、独立に、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンをもたらす）またはＨであり；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２である］
の構造を有する。
【0010】
本明細書で開示される複合体についての、ありとあらゆる実施形態では、Ｍ2は、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、89Ｚｒ、68Ｇａ、または64Ｃｕを含む。
【0011】
一態様では、本開示は、腫瘍の検出を必要とする対象において、腫瘍（例えば、充実性腫瘍または液性腫瘍）を検出するための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本技術のいずれかの複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記複合体の操作された免疫細胞により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されているステップ；および（ｂ）前記複合体により放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における腫瘍の存在を検出するステップを含む、前記方法を提示する。また、腫瘍の検出を必要とする対象において、腫瘍（例えば、充実性腫瘍または液性腫瘍）を検出するための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で記載される、いずれかの操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；および（ｃ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における腫瘍の存在を検出するステップを含む方法も開示される。本明細書で開示される方法についての、一部の実施形態では、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルは、陽電子放射型断層撮影法、または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法を使用して検出される。
【0012】
加えて、または代替的に、一部の実施形態では、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルは、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが投与された４～２４時間後の間に検出される。ある特定の実施形態では、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルは、組織１グラム当たりの注入用量百分率（％ＩＤ／ｇ）として表される。加えて、または代替的に、一部の実施形態では、腫瘍組織の放射線のレベルと、正常組織の放射線のレベルとの比は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、または１００：１である。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
【0013】
本明細書で開示される方法についての、前出の実施形態のうちのいずれかでは、複合体、操作された免疫細胞、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンは、静脈内投与、腫瘍内投与、筋内投与、動脈内投与、髄腔内投与、関節包内投与、眼窩内投与、皮内投与、腹腔内投与、経気管投与、皮下投与、脳室内投与、経口投与、または鼻腔内投与される。加えて、または代替的に、一部の実施形態では、複合体、操作された免疫細胞、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンは、対象の脳脊髄液または血液へ投与される。
【0014】
一態様では、本開示は、対象における、操作された免疫細胞の生体内分布をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で開示される、いずれかの操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；および（ｃ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における、操作された免疫細胞の生体内分布を決定するステップを含む、前記方法を提示する。別の態様では、本開示は、対象における、操作された免疫細胞の生体内分布をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本技術の、いずれかの操作された免疫細胞と、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；および（ｂ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における、操作された免疫細胞の生体内分布を決定するステップを含む方法を提示する。
【0015】
さらに別の態様では、本開示は、対象における操作された免疫細胞の生存率をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で開示される、いずれかの操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；（ｃ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；（ｄ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および（ｅ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと同等である場合に、対象における前記操作された免疫細胞が生存可能であることを決定するステップを含む、前記方法を提示する。一部の実施形態では、方法は、ステップ（ｄ）の前に、対象に、第２の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップをさらに含む。本明細書ではまた、対象における操作された免疫細胞の生存率をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で記載される、いずれかの操作された免疫細胞と、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；（ｃ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および（ｄ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと同等である場合に、対象における前記操作された免疫細胞が生存可能であることを決定するステップを含む方法も開示される。
【0016】
さらに別の態様では、本開示は、対象における操作された免疫細胞の増殖をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で記載される、いずれかの操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、第１の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；（ｃ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；（ｄ）ステップ（ｃ）の後で、対象に、第２の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップ；（ｅ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および（ｆ）第２の時点における、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと比べて高値である場合に、対象における操作された免疫細胞が、増殖していることを決定するステップを含む、前記方法を提示する。
【0017】
本明細書で開示される方法についての、ありとあらゆる実施形態では、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルは、陽電子放射型断層撮影法、または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法を使用して検出される。加えて、または代替的に、本明細書で開示される方法についての、前出の実施形態のうちのいずれかでは、操作された免疫細胞、放射性標識化ＤＯＴＡハプテン、または複合体は、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋内投与、または腫瘍内投与される。
【0018】
本明細書で開示される方法についての、ありとあらゆる実施形態では、対象は、がんまたは腫瘍を患っているか、またはこの危険性がある。一部の実施形態では、がんまたは腫瘍は、癌腫、肉腫、黒色腫、または血液（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ）がんである。一部の実施形態では、がんまたは腫瘍は、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）部がん、耳鼻咽喉科（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、消化器がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎がん、喉頭がん、白血病、肝がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫、およびこれらの転移の中から選択される。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
【0019】
本明細書ではまた、患者におけるがんの進行を診断またはモニタリングするために適する構成要素を含有するキットも開示される。ある特定の実施形態では、キットは、少なくとも１つの、本技術の操作された免疫細胞と、使用のための指示書とを含む。一部の実施形態では、キットは、ＤＯＴＡハプテン（例えば、本明細書で開示される、ＤＯＴＡハプテンのうちのいずれか）、少なくとも１つの、本技術の操作された免疫細胞、および使用のための指示書を含む。
【図面の簡単な説明】
【0020】
【図1】例示的なＤＯＴＡハプテン：ベンジル－ＤＯＴＡおよびＰｒｏｔｅｕｓ－ＤＯＴＡ（Ｐｒ）の構造を示す図である。
【図2A-2C】Ｃ８２５（結合アフィニティーがピコモル単位である、ハプテン捕捉ｓｃＦｖ抗体）を膜発現するＣ８２５－ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞による、放射性ハプテンの捕捉についてのイメージング結果を示す図である。図２Ａは、［111Ｉｎ］Ｐｒ－ＤＯＴＡへの結合を使用する、ｉｎ ｖｉｔｒｏ飽和結合曲線が、Ｃ８２５－ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞におけるＣ８２５の発現を定量することを示す。図２Ｂは、右肩のｓ．ｃ．において、Ｒａｊｉ ＧＦＰ－ｆｌｕｃ腫瘍を施されたＮＳＧマウスを示す。ＣＡＲ－Ｔ細胞（２．５×１０6個）のｉ．ｖ．注入の１０日後、ＣＡＲ Ｔ細胞（ＣＤ１９ ＣＡＲ＋Ｃ８２５、または対照であるＣＤ１９ ＣＡＲのみ）のｉｎ ｖｉｖｏ追跡のために、マウスに、111Ｉｎ放射性ハプテンを注入した。図２Ｃは、111Ｉｎ放射性ハプテンの注射の１８時間後に収集されたＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を示す。Ｃ８２５＋ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞、または対照であるＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞のみで処置された動物についてのＭＩＰ画像を示す。
【図3A-3C】ウイルスにより、Ｃ８２５およびＣＤ１９－ＣＡＲの両方を、初代ヒトＴ細胞へ形質導入する、３種の異なる戦略を示す図である。図３Ａは、１種が、Ｃ８２５を、ＧＦＰレポーターと共にコードし（上）、１種が、ＣＤ１９ ＣＡＲをコードする（下）、２種の単一構築物の形質導入を示す。図３Ｂは、Ｐ２Ａ切断部位により隔てられた、膜貫通ドメインを有するＣ８２５およびＧＦＰレポーター、並びにＣＤ１９ ＣＡＲをコードする、二シストロン性の構築物を示す。図３Ｃは、Ｐ２Ａ切断部位により隔てられた、Ｔｈｙ１由来ＧＰＩ連結配列を有するＣ８２５およびＨｉｓタグレポーターと、ＣＤ１９ ＣＡＲとをコードする、二シストロン性の構築物を示す。初代ヒトＴ細胞への形質導入についての代表的流れ図を、右図に示す。
【図4A】レトロウイルスベクターである、ＳＦＧ－Ｔｈｏｒ、ＳＦＧ－１９ＢＢｚ（ＣＡＲ）、およびＳＦＧ－Ｃ８２５の構造の概略を示す図である。
【図4B】４時間にわたるｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害作用アッセイにより測定される通り、ＳＦＧ－Ｔｈｏｒ Ｔ細胞と、ＳＦＧ－１９ＢＢｚ（ＣＡＲ）Ｔ細胞との間では、ＣＤ１９（＋）Ｒａｊｉ腫瘍細胞の殺滅の点で、差違が見られないことを示す図である。ＳＦＧ－Ｃ８２５および非形質導入（ＮＴ）Ｔ細胞を、陰性対照として組み入れる（ドナーのｎ＝３～４）。
【図4C】１時間後のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、［111Ｉｎ］Ｐｒ（［111Ｉｎ］ＩｎＰｒ）への結合を示す図である。この代表的データセットが、放射性標識化ＤＯＴＡプローブの、Ｃ８２５発現Ｔ細胞への特異的結合を示す一方、ＳＦＧ－１９ＢＢｚ（ＣＡＲ）Ｔ細胞およびＮＴ Ｔ細胞では、有意な取込みは観察されなかった（全ての実験は、３７℃、三連で実施した）。データは、平均値±ＳＤである。
【図4D】［111Ｉｎ］Ｐｒ（［111Ｉｎ］ＩｎＰｒ）の、ＳＦＧ－Ｔｈｏｒ Ｔ細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏにおける結合反応速度を示す図である（ｎ＝３の独立アッセイ；代表例が示される）。
【図4E】Ｔ細胞の、腫瘍細胞へのターゲティングを評価するためのｉｎ ｖｉｖｏ研究についての、例示的スキームを示す図である。68Ｇａ－ＮＯＤＡＧＡ－Ｐｒ（１００ｍＣｕ、７００ピコモル）を、放射性トレーサーとして使用し、Ｔ細胞の投与（１×１０6）の１０日後に投与した。
【図4F】
68Ｇａ－ＮＯＤＡＧＡ－Ｐｒの注射（ｐ．ｉ．）の１時間後における、例示的ＭＩＰ（ｍａｘｉｍｕｍ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）画像であって、腫瘍における、ＳＦＧ－Ｔｈｏｒ Ｔ細胞のホーミングおよび蓄積を描示する画像を示す図である（右肩、赤矢印）。ＳＦＧ－１９ＢＢｚ（ＣＡＲ）Ｔ細胞の投与後には、腫瘍部位における、バックグラウンドを上回る取込みは見られない（青矢印）。
【図4G】画像ベースの生体内分布を使用して、腫瘍内取込み平均値と、腫瘍組織対正常組織比（ＴＮＲ）（ＳＦＧ－Ｔｈｏｒ：ｎ＝４；ＳＦＧ－１９ＢＢｚ（ＣＡＲ）：ｎ＝２）とを示す図である。**Ｐ＜０．０１である。
【図5A-5B】
86Ｙ－ＤＯＴＡＢｎによる、本技術の操作されたＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ追跡を示す図である。図５Ａは、処置の失敗が確立されたＲａｊｉ腫瘍マウスモデルのｓ．ｃ．における、ｉｎ ｖｉｖｏの操作されたＴ細胞（細胞３×１０6個）を追跡するための例示的スキームを示す。腫瘍接種の７日後、マウスにｈｕＣ８２５－Ｃ１９ＢＢｚ Ｔ細胞３×１０6個または１９ＢＢｚ Ｔ細胞３×１０6個を、ｉ．ｖ．注入した。Ｔ細胞の投与後１７日目に、処置の失敗を指し示す、腫瘍量の増殖の遷延を示すマウスに、移植されたＴ細胞の存続および局在について評価するために86Ｙ－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（３．７ＭＢｑ；４０ピコモル）を、ｉ．ｖ．注射した。図５Ｂは、注入の１、３、および１６時間後におけるＭＩＰ（ｍａｘｉｍｕｍ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）画像および軸位断ＰＥＴ／ＣＴ画像が、腫瘍におけるｈｕＣ８２５－１９ＢＢｚ－ＣＡＲ Ｔ細胞の蓄積を描示することを示す（オレンジ丸）。Ｔ細胞の腫瘍内取込みの最高値４．９％ＩＤ／ｇ（対照における０．８％ＩＤ／ｇと対比される）は、注入の３時間後において見られた。対照マウスでは、腫瘍における、バックグラウンドを上回る取込みは見られない（１９ＢＢｚ ＣＡＲ；緑丸）。急速で顕著な、トレーサーの腎クリアランスが見られた。
【発明を実施するための形態】
【0021】
下記では、本技術についての、実質的な理解をもたらすために、本方法の、ある特定の態様、方式、実施形態、変化形、および特色が、多様なレベルの詳細さで記載されることを理解されたい。
【0022】
本開示は、個々の態様についての単一の例示として意図される、本出願において記載される特定の実施形態の観点に限定されないものとする。本明細書では、本開示の全ての多様な実施形態について記載されるわけではない。当業者に明らかなように、その精神および範囲から逸脱しない限りにおいて、本開示の、多くの改変および変動がなされうる。当業者には、前出の記載から本明細書に列挙された方法および装置に加えて、本開示の範囲内にある機能的に均等な方法および装置が明らかであろう。このような改変および変動は、付属の特許請求の範囲内に収まることが意図される。本開示は、このような特許請求の範囲がそれに対する権利を付与された均等物の全範囲と共に、付属の特許請求の範囲のみにより限定されるものとする。
本開示は、特定の使用、方法、試薬、化合物、組成物、または生体系に限定されず、これらは、当然ながら変動しうることが理解されるものとする。また、本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態のみについて記載することを目的とし、限定的であることが意図されないことも理解されるものとする。
本開示は、特定の使用、方法、試薬、化合物、組成物、または生体系に限定されず、これらは、当然ながら変動しうることが理解されるものとする。また、本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態のみについて記載することを目的とし、限定的であることが意図されないことも理解されるものとする。
【0023】
本方法の実施では、分子生物学、タンパク質生化学、細胞生物学、微生物学、および組換えＤＮＡにおける、多くの常套的な技法が使用される。例えば、Sambrook and Russell eds. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition； Ausubel et al. eds. (2007) Current Protocols in Molecular Biologyのシリーズ； Methods in Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.)のシリーズ；MacPherson et al. (1991) PCR 1: A Practical Approach (IRL Press at Oxford University Press)；MacPherson et al. (1995) PCR 2: A Practical Approach；Harlow and Lane eds. (1999) Antibodies, A Laboratory Manual；Freshney (2005) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 5th edition；Gait ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis；米国特許第４，６８３，１９５号；Hames and Higgins eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization；Anderson (1999) Nucleic Acid Hybridization；Hames and Higgins eds. (1984) Transcription and Translation; Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press (1986))；Perbal (1984) A Practical Guide to Molecular Cloning; Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (Cold Spring Harbor Laboratory)；Makrides ed. (2003) Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells； Mayer and Walker eds. (1987) Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, London)；およびHerzenberg et al. eds (1996) Weir’s Handbook of Experimental Immunologyを参照されたい。
【0024】
本技術の組成物は、腫瘍抗原ターゲティングキメラ抗原受容体と、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、とを発現する操作された免疫細胞であって、本明細書で記載される、操作された免疫細胞のｉｎ ｖｉｖｏにおける生体内分布、生存率、および増殖を決定する（ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｉｎｇ）ために有用である、操作された免疫細胞を含む。
【0025】
定義
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される、全ての技術用語および学術用語は、本開示が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。以下の参考文献Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2nd ed. 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al. (eds.), Springer Verlag (1991);およびHale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991)は、当業者に、本開示において使用される用語のうちの多くについての一般的定義を与える。そうでないことが指定されない限り、本明細書で使用される、以下の用語は、下記において、これらに帰せられる意味を有する。本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態について記載することのみを目的とするものであり、本開示に対して、限定的であることは意図されない。
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される、全ての技術用語および学術用語は、本開示が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。以下の参考文献Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2nd ed. 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al. (eds.), Springer Verlag (1991);およびHale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991)は、当業者に、本開示において使用される用語のうちの多くについての一般的定義を与える。そうでないことが指定されない限り、本明細書で使用される、以下の用語は、下記において、これらに帰せられる意味を有する。本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態について記載することのみを目的とするものであり、本開示に対して、限定的であることは意図されない。
【0026】
文脈が、そうでないことを明確に指示しない限りにおいて、本明細書で使用される、単数形の「ある（ａ）」「ある（ａｎ）」、および「その」は、複数形の指示対象も含むことが意図される。
【0027】
本明細書で使用される、「約」または「およそ」という用語は、当業者により決定される特定の値について、許容可能な誤差の範囲内にあることを意味し、これは、値がどのようにして測定または決定されるのか、すなわち、測定システムの限界に部分的に依存するであろう。例えば、「約」とは、当技術分野における慣行に従い、３標準偏差またはこれを超える範囲内を意味しうる。代替的に、「約」とは、所与の値の２０％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下の範囲を意味しうる。代替的に、特に、生体系または生物学的過程に関して述べると、用語は、値の桁数の範囲内を意味する場合もあり、５倍以内を意味する場合もあり、２倍以内を意味する場合もある。
本明細書で使用される、対象への薬剤の「投与」という用語は、その意図される機能を果たすように、対象へ薬剤を導入または送達する、いずれかの経路を含む。投与は、静脈内経路、筋内経路、腹腔内経路、皮下経路、および本明細書で記載される、他の適切な経路を含むがこれらに限定されない、いずれかの適切な経路により実施されうる。投与は、自己投与および別人による投与を含む。
本明細書で使用される、対象への薬剤の「投与」という用語は、その意図される機能を果たすように、対象へ薬剤を導入または送達する、いずれかの経路を含む。投与は、静脈内経路、筋内経路、腹腔内経路、皮下経路、および本明細書で記載される、他の適切な経路を含むがこれらに限定されない、いずれかの適切な経路により実施されうる。投与は、自己投与および別人による投与を含む。
【0028】
「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸のほか、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する、アミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を指す。天然でコードされるアミノ酸は、２０の一般的アミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン）、並びにピロリシンおよびセレノシステインである。アミノ酸類似体とは、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムなど、天然に存在するアミノ酸と同じ、基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基に結合されたα炭素を有する薬剤を指す。このような類似体は、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）または改変ペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ、基本化学構造を保持する。一部の実施形態では、ポリペプチドを形成するアミノ酸は、Ｄ形態にある。一部の実施形態では、ポリペプチドを形成するアミノ酸は、Ｌ形態にある。一部の実施形態では、ポリペプチドを形成する、第１の複数のアミノ酸は、Ｄ形態にあり、第２の複数のアミノ酸は、Ｌ形態にある。
本明細書では、アミノ酸は一般に公知であり、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨されている３文字記号または１文字記号により言及される。ヌクレオチドも同様に、一般に許容されている、それらのコードである１文字コードにより言及される。
本明細書では、アミノ酸は一般に公知であり、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨されている３文字記号または１文字記号により言及される。ヌクレオチドも同様に、一般に許容されている、それらのコードである１文字コードにより言及される。
【0029】
本明細書で使用される「類似体」という用語は、参照ポリペプチドまたは参照核酸分子の機能を有する、構造的に類縁のポリペプチドまたは核酸分子を指す。
本明細書で使用される「抗体」という用語は、無傷抗体分子だけでなく、また、免疫原への結合能を保持する、抗体分子の断片も意味する。当技術分野では、このような断片もまた周知であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏのいずれにおいても、常套的に利用されている。したがって、本明細書で使用される「抗体」という用語は、無傷免疫グロブリン分子だけでなく、また、周知の活性断片であるＦ（ａｂ’）2およびＦａｂも意味する。無傷抗体のＦｃ断片を欠くＦ（ａｂ’）2およびＦａｂ断片は、循環からより急速に消失し、非特異的組織への結合が無傷抗体より弱くなりうる（Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:316-325 (1983)）。抗体は、天然抗体全体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、多特異性抗体、二特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、単鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディーおよび単一ドメインラクダ科動物抗体）、ＶＮＡＲ断片、ＢｉＴＥ（Ｂｉ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｅｒ）抗体、ミニボディー、ジスルフィド連結型Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、イントラボディー、融合ポリペプチド、従来型抗体以外の抗体、および上記のうちのいずれかの抗原結合性断片を含みうる。特に、抗体は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫活性断片、すなわち、抗原結合性部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、いずれかの種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１（ＩｇＧｌ）、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１（ＩｇＡｌ）、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子でありうる。
本明細書で使用される「抗体」という用語は、無傷抗体分子だけでなく、また、免疫原への結合能を保持する、抗体分子の断片も意味する。当技術分野では、このような断片もまた周知であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏのいずれにおいても、常套的に利用されている。したがって、本明細書で使用される「抗体」という用語は、無傷免疫グロブリン分子だけでなく、また、周知の活性断片であるＦ（ａｂ’）2およびＦａｂも意味する。無傷抗体のＦｃ断片を欠くＦ（ａｂ’）2およびＦａｂ断片は、循環からより急速に消失し、非特異的組織への結合が無傷抗体より弱くなりうる（Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:316-325 (1983)）。抗体は、天然抗体全体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、多特異性抗体、二特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、単鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディーおよび単一ドメインラクダ科動物抗体）、ＶＮＡＲ断片、ＢｉＴＥ（Ｂｉ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｅｒ）抗体、ミニボディー、ジスルフィド連結型Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、イントラボディー、融合ポリペプチド、従来型抗体以外の抗体、および上記のうちのいずれかの抗原結合性断片を含みうる。特に、抗体は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫活性断片、すなわち、抗原結合性部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、いずれかの種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１（ＩｇＧｌ）、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１（ＩｇＡｌ）、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子でありうる。
【0030】
ある特定の実施形態では、抗体はジスルフィド結合により相互接続された、少なくとも２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖とを含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＶHと略記される）と重鎖定常領域（ＣH）とから構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインであるＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、ＶLと略記される）と軽鎖定常領域であるＣLとから構成される。軽鎖定常領域は１つのドメインであるＣLから構成される。ＶH領域およびＶL領域は、より保存的な、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される領域を散在させた、超可変性を有し相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される領域へさらに細分されうる。各ＶHおよび各ＶLは、アミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲと４つのＦＲとから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合性ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の多様な細胞（例えば、エフェクター細胞）、および古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介しうる。本明細書で互換的に使用される、抗体の「抗原結合性部分」、「抗原結合性断片」、または「抗原結合性領域」という用語は、抗原に結合し、抗原特異性を抗体に付与する、抗体の領域または部分を指し；抗原結合性タンパク質、例えば、抗体の断片は、抗原（例えば、ペプチド／ＨＬＡ複合体）に特異的に結合する能力を保持する、１種または複数種の抗体断片を含む。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片により果たされうることが示されている。抗体のうちの、「抗体断片」という用語の中に包含される抗原結合性部分の例は、ＶLドメイン、ＶHドメイン、ＣLドメイン、およびＣH１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋により連結された、２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ）2断片；ＶHドメインおよびＣH１ドメインからなる、Ｆｄ断片；抗体の単一のアームのＶLドメインおよびＶHドメインからなる、Ｆｖ断片；ＶHドメインからなる、ｄＡｂ断片（Ward et al., Nature 341 : 544-546 (1989)）；並びに単離相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。「単離抗体」または「単離抗原結合性タンパク質」とは、それが、その天然環境の構成要素から同定され、分離および／または回収されている、抗体または抗原結合性タンパク質である。「合成抗体」または「組換え抗体」は、一般に、組換え技術を使用してまたは当業者に公知のペプチド合成法を使用して作出される。
【0031】
抗体および抗体断片は、哺乳動物の抗体産生動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長動物、ヤギ、モルモット、ハムスター、ウマ、マウス、ラット、ウサギ、およびヒツジ）、または哺乳動物以外の抗体産生動物（例えば、ニワトリ、アヒル、カモ、ヘビ、および有尾類の両生動物）に、全体的に、または部分的に由来しうる。抗体および抗体断片は、動物において産生される場合もあり、酵母またはファージなどから動物の外部において（例えば、単一抗体若しくは抗体断片として、または抗体ライブラリーの一部として）作製される場合もある。
【0032】
さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶLおよびＶHは、個別の遺伝子によりコードされるが、組換え法を使用してＶL領域とＶH領域とが対合して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖となることを可能とする合成リンカーにより接続されうる。これらは、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知であり、例えば、Bird et al., Science 242:423-426 (1988)；およびHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 85 : 5879-5883 (1988)を参照されたい。これらの抗体断片は、当業者に公知の常套的技法を使用して得られ、断片も無傷抗体と同じ形で有用性についてスクリーニングされる。
【0033】
本明細書で使用される「抗原」とは、抗体が選択的に結合しうる分子を指す。標的抗原は、タンパク質（例えば、抗原ペプチド）、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、または他の天然に存在する化合物若しくは合成の化合物でありうる。抗原はまた、対象において、免疫応答を発生させるように、動物対象へ投与される場合もある。
「結合アフィニティー」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合性部位と、その結合パートナー（例えば、抗原）との、非共有結合的相互作用全体の強度を意味する。理論に束縛されずに述べると、アフィニティーは、抗体の結合性部位と抗原決定基との間の立体化学的適合の緊密さ、それらの間の接触面積の大きさ、並びに帯電基および疎水性基の分布に依存する。アフィニティーはまた、可逆性の複合体の形成の後における抗原－抗体間の結合（例えば、一価または多価の結合）の強度を指す「アビディティー」という用語も含む。当技術分野では、抗体の抗原に対するアフィニティーを計算するための方法であって、アフィニティーを計算する結合実験の使用を含む方法が公知である。分子Ｘの、そのパートナーＹに対するアフィニティーは、一般に解離定数（Ｋd）により表されうる。低アフィニティーの複合体が一般に抗原からたやすく解離する傾向がある抗体を含有するのに対し、高アフィニティーの複合体は一般に長期間にわたり抗原への結合を維持する傾向がある抗体を含有する。機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）における抗体活性も、また、抗体のアフィニティーを反映する。抗体およびアフィニティーは、機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）を使用して、表現型的に特徴づけ、比較されうる。
「結合アフィニティー」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合性部位と、その結合パートナー（例えば、抗原）との、非共有結合的相互作用全体の強度を意味する。理論に束縛されずに述べると、アフィニティーは、抗体の結合性部位と抗原決定基との間の立体化学的適合の緊密さ、それらの間の接触面積の大きさ、並びに帯電基および疎水性基の分布に依存する。アフィニティーはまた、可逆性の複合体の形成の後における抗原－抗体間の結合（例えば、一価または多価の結合）の強度を指す「アビディティー」という用語も含む。当技術分野では、抗体の抗原に対するアフィニティーを計算するための方法であって、アフィニティーを計算する結合実験の使用を含む方法が公知である。分子Ｘの、そのパートナーＹに対するアフィニティーは、一般に解離定数（Ｋd）により表されうる。低アフィニティーの複合体が一般に抗原からたやすく解離する傾向がある抗体を含有するのに対し、高アフィニティーの複合体は一般に長期間にわたり抗原への結合を維持する傾向がある抗体を含有する。機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）における抗体活性も、また、抗体のアフィニティーを反映する。抗体およびアフィニティーは、機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）を使用して、表現型的に特徴づけ、比較されうる。
【0034】
本明細書で使用される「ＣＤＲ」は、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の超可変領域である、抗体の相補性決定領域のアミノ酸配列と規定される。例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th U. S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)を参照されたい。一般に、抗体は、可変領域内に３つの重鎖ＣＤＲまたは重鎖ＣＤＲ領域と、３つの軽鎖ＣＤＲまたは軽鎖ＣＤＲ領域とを含む。ＣＤＲは、抗体の、抗原またはエピトープへの結合のための接触残基のうちの大部分をもたらす。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ領域はＫａｂａｔシステム（Kabat, E. A., et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242(1991)）を使用して詳述される。
【0035】
本明細書で使用される「細胞集団」という用語は、同様の表現型または異なる表現型を発現する、少なくとも２種の細胞の群を指す。非限定例では、細胞集団は同様の表現型または異なる表現型を発現する、少なくとも約１０、少なくとも約１００、少なくとも約２００、少なくとも約３００、少なくとも約４００、少なくとも約５００、少なくとも約６００、少なくとも約７００、少なくとも約８００、少なくとも約９００、少なくとも約１０００個の細胞、少なくとも約１０，０００個の細胞、少なくとも約１００，０００個の細胞、少なくとも約１×１０6個の細胞、少なくとも約１×１０7個の細胞、少なくとも約１×１０8個の細胞、少なくとも約１×１０9個の細胞、少なくとも約１×１０10個の細胞、少なくとも約１×１０11個の細胞、少なくとも約１×１０12個の細胞、またはこれを超える個数の細胞を含みうる。
本明細書で使用される「キメラ共刺激受容体」または「ＣＣＲ」という用語は、抗原に結合し共刺激シグナルをもたらすが、Ｔ細胞活性化シグナルは提示しない、キメラ受容体を指す。
本明細書で使用される「キメラ共刺激受容体」または「ＣＣＲ」という用語は、抗原に結合し共刺激シグナルをもたらすが、Ｔ細胞活性化シグナルは提示しない、キメラ受容体を指す。
【0036】
本明細書で使用される「保存的配列改変」という用語は、アミノ酸配列を含む、本明細書で開示されるＣＡＲ（例えば、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメイン）の結合特徴に顕著に影響を及ぼしたりこれを変更したりしないアミノ酸改変を指す。保存的改変は、アミノ酸の置換、付加、および欠失を含みうる。改変は、部位指向突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発など、当技術分野で公知の標準的技法により、本明細書で開示されるＣＡＲのヒトｓｃＦｖへ導入されうる。アミノ酸は、電荷および極性など、それらの物理化学的特性に従い群に分類されうる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同じ群内のアミノ酸で置きかえられる置換である。例えば、アミノ酸は電荷により分類されうる：正帯電アミノ酸は、リシン、アルギニン、ヒスチジンを含み；負帯電アミノ酸は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含み；中性電荷アミノ酸は、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンを含む。加えて、アミノ酸は、極性により分類されうる：極性アミノ酸は、アルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リシン（塩基性極性）、セリン、トレオニン、およびチロシンを含み；非極性アミノ酸は、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、およびバリンを含む。したがって、ＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基は、同じ群に由来する他のアミノ酸残基で置きかえられる場合があり、変更された抗体は、本明細書で記載される機能的アッセイを使用して、機能（すなわち、上記で明示された機能）の保持について調べられうる。ある特定の実施形態では、指定された配列内またはＣＤＲ領域内の１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下の残基が変更される。
【0037】
本明細書で使用される「対照」とは、比較を目的として実験において使用される、代替的試料である。対照は、「陽性」の場合もあり、「陰性」の場合もある。
本明細書で使用される、「共刺激シグナル伝達ドメイン」または「共刺激ドメイン」という用語は、共刺激分子の細胞内ドメインを含む、ＣＡＲの部分を指す。共刺激分子とは、抗原への結合時における、Ｔリンパ球の効率的な活性化および機能に要求される二次シグナルをもたらす、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子である。このような共刺激分子の例は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＤ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ２、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドを含む。したがって、本開示は、ＣＤ２８および４－１ＢＢに由来する例示的共刺激ドメインを提示するが、他の共刺激ドメインも本明細書で記載されるＣＡＲを伴う使用のために想定される。１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインの組入れは、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性および増殖を増強しうる。細胞内シグナル伝達ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の順序において、タンデムで、膜貫通ドメインのカルボキシル末端へ連結されうる。
本明細書で使用される、「共刺激シグナル伝達ドメイン」または「共刺激ドメイン」という用語は、共刺激分子の細胞内ドメインを含む、ＣＡＲの部分を指す。共刺激分子とは、抗原への結合時における、Ｔリンパ球の効率的な活性化および機能に要求される二次シグナルをもたらす、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子である。このような共刺激分子の例は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＤ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ２、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドを含む。したがって、本開示は、ＣＤ２８および４－１ＢＢに由来する例示的共刺激ドメインを提示するが、他の共刺激ドメインも本明細書で記載されるＣＡＲを伴う使用のために想定される。１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインの組入れは、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性および増殖を増強しうる。細胞内シグナル伝達ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の順序において、タンデムで、膜貫通ドメインのカルボキシル末端へ連結されうる。
【0038】
本明細書で使用される「疾患」という用語は、細胞、組織、または臓器の正常な機能を損傷させるか、またはこれに干渉する、いずれかの状態または障害を指す。疾患の例は、新生物または細胞の病原体感染を含む。
本明細書で使用される、「有効量」という用語は、投与時に、有益な結果または所望の結果を達成するのに十分な数量の薬剤を指す。対象に投与される薬剤の量は、全般的健康状態、年齢、性別、体重など、個体の特徴、投与される操作された免疫細胞の有効濃度、および薬物に対する忍容性に依存しうる。当業者は、これらの因子および他の因子に応じて、適切な投与量を決定することができるであろう。有効量は、１回または複数回の投与により対象に投与されうる。
本明細書で使用される、「有効量」という用語は、投与時に、有益な結果または所望の結果を達成するのに十分な数量の薬剤を指す。対象に投与される薬剤の量は、全般的健康状態、年齢、性別、体重など、個体の特徴、投与される操作された免疫細胞の有効濃度、および薬物に対する忍容性に依存しうる。当業者は、これらの因子および他の因子に応じて、適切な投与量を決定することができるであろう。有効量は、１回または複数回の投与により対象に投与されうる。
【0039】
本明細書で使用される「発現」という用語は、ポリヌクレオチドが、ｍＲＮＡへ転写される過程および／または転写されたｍＲＮＡが、その後、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質へ翻訳される過程を指す。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合、発現は真核細胞におけるｍＲＮＡのスプライシングを含みうる。遺伝子の発現レベルは、細胞試料中または組織試料中のｍＲＮＡまたはタンパク質の量を測定することにより決定されうる。一態様では、１つの試料に由来する遺伝子の発現レベルは、対照試料または参照試料に由来する、この遺伝子の発現レベルと直接比較されうる。別の態様では、１つの試料に由来する遺伝子の発現レベルは、本明細書で開示される組成物の投与後における同じ試料に由来する、この遺伝子の発現レベルと直接比較されうる。「発現」という用語はまた、以下のイベント：（１）細胞におけるＲＮＡ鋳型のＤＮＡ配列からの産生（例えば、転写による）；（２）細胞におけるＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップの形成、および／または３’末端の形成による）；（３）細胞におけるＲＮＡ配列のポリペプチドまたはタンパク質への翻訳；（４）細胞におけるポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾；（５）ポリペプチドまたはタンパク質の、細胞表面における提示；および（６）ポリペプチドまたはタンパク質の、細胞からの分泌または提示または放出のうちの１つまたは複数も指す。ポリペプチドの発現レベルは、例えば、宿主細胞から産生されるポリペプチドの量を決定する方法を含む、当技術分野で公知である、￥いずれかの方法を使用して評価されうる。このような方法は、ＥＬＩＳＡ、ゲル電気泳動後におけるクーマシーブルー染色、ローリータンパク質アッセイ、およびブラッドフォードタンパク質アッセイによる、細胞溶解物中のポリペプチドの定量を含みうるがこれらに限定されない。
【0040】
本明細書で使用される「Ｆ（ａｂ）」とは、抗体構造の断片であって、抗原に結合するが、一価であり、Ｆｃ部分を有さない断片を指し、例えば、酵素であるパパインにより消化された抗体は、２つのＦ（ａｂ）断片およびＦｃ断片（例えば、重（Ｈ）鎖定常領域；抗原に結合しないＦｃ領域）をもたらす。
本明細書で使用される、「Ｆ（ａｂ’）2」とは、全ＩｇＧ抗体のペプシン消化により作出される抗体断片を指し、この場合、この断片は、２つの抗原結合性（ａｂ’）（二価）領域を有し、各（ａｂ’）領域は、抗原への結合のために、Ｓ－Ｓ結合により連結されたＨ鎖の一部および軽（Ｌ）鎖である、２つの個別のアミノ酸鎖を含み、残りのＨ鎖部分は、一体に連結されている。「Ｆ（ａｂ’）2」断片は、２つの個々のＦａｂ’断片へ分割されうる。
本明細書で使用される、「Ｆ（ａｂ’）2」とは、全ＩｇＧ抗体のペプシン消化により作出される抗体断片を指し、この場合、この断片は、２つの抗原結合性（ａｂ’）（二価）領域を有し、各（ａｂ’）領域は、抗原への結合のために、Ｓ－Ｓ結合により連結されたＨ鎖の一部および軽（Ｌ）鎖である、２つの個別のアミノ酸鎖を含み、残りのＨ鎖部分は、一体に連結されている。「Ｆ（ａｂ’）2」断片は、２つの個々のＦａｂ’断片へ分割されうる。
【0041】
本明細書で使用される「異種核酸分子または異種ポリペプチド」という用語は、通常は細胞内または細胞から得られた試料中に存在しない核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ分子、ＤＮＡ分子、またはＲＮＡ分子）またはポリペプチドを指す。この核酸は、別の生物に由来する場合もあり、例えば、通常は細胞内または試料中で発現しないｍＲＮＡ分子の場合もある。
本明細書で使用される「宿主細胞」とは、ベクターを受容し、維持し、これを繁殖させ、増幅するのに使用される細胞である。宿主細胞はまた、ベクターによりコードされるポリペプチドを発現させるのにも使用されうる。ベクター内に含有される核酸は、宿主細胞が分裂し、これにより、核酸を増幅する場合に複製される。
本明細書で使用される「宿主細胞」とは、ベクターを受容し、維持し、これを繁殖させ、増幅するのに使用される細胞である。宿主細胞はまた、ベクターによりコードされるポリペプチドを発現させるのにも使用されうる。ベクター内に含有される核酸は、宿主細胞が分裂し、これにより、核酸を増幅する場合に複製される。
【0042】
本明細書で使用される「免疫細胞」という用語は、対象の免疫応答において役割を果たすあらゆる細胞を指す。免疫細胞は造血細胞由来であり、Ｂ細胞およびＴ細胞などのリンパ球；ナチュラルキラー細胞；単球、マクロファージ、樹状細胞、好酸球、好中球、マスト細胞、好塩基球、および顆粒球などの骨髄細胞を含む。本明細書で使用される、「操作された免疫細胞」という用語は、遺伝的に改変された免疫細胞を指す。本明細書で使用される、「天然免疫細胞」という用語は、免疫系において天然に存在するする免疫細胞を指す。
本明細書で使用される「～を増大させる」という用語は、少なくとも約５％正に変更することであって、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、または約１００％正に変更することを含むがこれらに限定されない、正に変更することを意味する。
本明細書で使用される「～を増大させる」という用語は、少なくとも約５％正に変更することであって、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、または約１００％正に変更することを含むがこれらに限定されない、正に変更することを意味する。
【0043】
本明細書で使用される「単離（された）細胞」という用語は、天然において細胞に随伴する、分子成分および／または細胞成分から分離された細胞を指す。
本明細書で使用される「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」という用語は、その天然の状態で見出される通り、通常それに随伴する成分が、様々な程度で非含有である素材を指す。「～を単離する」とは、元の供給源または環境からのある程度の分離を表す。「～を精製する」とは、単離より高度な程度の分離を表す。「精製」タンパク質または「生物学的に純粋な」タンパク質は、いかなる不純物もタンパク質の生物学的特性に実質的に影響を及ぼさないか、または他の有害な帰結を引き起こさないように他の物質が十分に除かれている。すなわち、本明細書で開示される主題の核酸またはポリペプチドは、細胞素材、ウイルス素材、または、組換えＤＮＡ法により作製される場合の、培養培地、または、化学合成する場合の、化学的前駆体若しくは他の化学物質が実質的に非含有である場合、精製されているという。純度および均質性は、典型的に、分析化学法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。「精製された」という用語は、核酸またはタンパク質が、電気泳動ゲル内で、本質的に１つのバンドをもたらすことを表す場合がある。修飾、例えば、リン酸化またはグリコシル化にかけられうるタンパク質では、異なる修飾は、個別に精製されうる、異なる単離タンパク質をもたらしうる。
本明細書で使用される「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」という用語は、その天然の状態で見出される通り、通常それに随伴する成分が、様々な程度で非含有である素材を指す。「～を単離する」とは、元の供給源または環境からのある程度の分離を表す。「～を精製する」とは、単離より高度な程度の分離を表す。「精製」タンパク質または「生物学的に純粋な」タンパク質は、いかなる不純物もタンパク質の生物学的特性に実質的に影響を及ぼさないか、または他の有害な帰結を引き起こさないように他の物質が十分に除かれている。すなわち、本明細書で開示される主題の核酸またはポリペプチドは、細胞素材、ウイルス素材、または、組換えＤＮＡ法により作製される場合の、培養培地、または、化学合成する場合の、化学的前駆体若しくは他の化学物質が実質的に非含有である場合、精製されているという。純度および均質性は、典型的に、分析化学法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。「精製された」という用語は、核酸またはタンパク質が、電気泳動ゲル内で、本質的に１つのバンドをもたらすことを表す場合がある。修飾、例えば、リン酸化またはグリコシル化にかけられうるタンパク質では、異なる修飾は、個別に精製されうる、異なる単離タンパク質をもたらしうる。
【0044】
本明細書で使用される「リガンド」という用語は、受容体に結合する分子を指す。特に、リガンドは、別の細胞上の受容体に結合し、細胞間の認識および／または相互作用を可能とする。
「リンカー」という用語は、２つの配列を接続または連結する、例えば、２つのポリペプチドドメインを連結する、合成配列（例えば、アミノ酸配列）を指す。一部の実施形態では、リンカーは１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、または１０のアミノ酸残基を含有する。
「リンパ球」という用語は、組織特異的白血球集団および特化白血球集団を含む、リンパ系前駆細胞に由来する、全ての未成熟白血球集団、成熟白血球集団、未分化白血球集団、および分化白血球集団を指し、非限定例を目的として述べると、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、およびＮＫ細胞を包含する。一部の実施形態では、リンパ球は、プレＢ細胞、前駆Ｂ細胞、初期プロＢ細胞、後期プロＢ細胞、大型プレＢ細胞、小型プレＢ細胞、未成熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞、形質Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、Ｂ－１細胞、Ｂ－２細胞、およびアネルギーＡＮ１／Ｔ３細胞集団を含む、全てのＢ細胞系統を含む。
「リンカー」という用語は、２つの配列を接続または連結する、例えば、２つのポリペプチドドメインを連結する、合成配列（例えば、アミノ酸配列）を指す。一部の実施形態では、リンカーは１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、または１０のアミノ酸残基を含有する。
「リンパ球」という用語は、組織特異的白血球集団および特化白血球集団を含む、リンパ系前駆細胞に由来する、全ての未成熟白血球集団、成熟白血球集団、未分化白血球集団、および分化白血球集団を指し、非限定例を目的として述べると、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、およびＮＫ細胞を包含する。一部の実施形態では、リンパ球は、プレＢ細胞、前駆Ｂ細胞、初期プロＢ細胞、後期プロＢ細胞、大型プレＢ細胞、小型プレＢ細胞、未成熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞、形質Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、Ｂ－１細胞、Ｂ－２細胞、およびアネルギーＡＮ１／Ｔ３細胞集団を含む、全てのＢ細胞系統を含む。
【0045】
本明細書で使用される「～をモジュレートする」という用語は、正または負に変更することを意味する。例示的なモジュレーションは、約１％、約２％、約５％、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％、または約１００％の変化を含む。
本明細書で使用される、「新生物」という用語は、細胞または組織の病理学的増殖、およびその後における、他の組織または臓器への、それらの遊走または浸潤により特徴づけられる疾患を指す。新生物の増殖は、典型的に、コントロール不能、かつ、進行性であり、正常細胞の繁殖を誘発しないか、またはこの停止を引き起こす条件下で生じる。新生物は、膀胱、結腸、骨、脳、乳腺、軟骨、神経膠、食道、卵管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、胸膜、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿生殖路、尿管、尿道、子宮、および膣からなる群から選択される臓器、またはこれらの組織若しくは細胞型を含むがこれらに限定されない、様々な細胞型、組織、または臓器に影響を及ぼしうる。新生物は、肉腫、癌腫、または形質細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）などのがんを含む。
本明細書で使用される、「新生物」という用語は、細胞または組織の病理学的増殖、およびその後における、他の組織または臓器への、それらの遊走または浸潤により特徴づけられる疾患を指す。新生物の増殖は、典型的に、コントロール不能、かつ、進行性であり、正常細胞の繁殖を誘発しないか、またはこの停止を引き起こす条件下で生じる。新生物は、膀胱、結腸、骨、脳、乳腺、軟骨、神経膠、食道、卵管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、胸膜、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿生殖路、尿管、尿道、子宮、および膣からなる群から選択される臓器、またはこれらの組織若しくは細胞型を含むがこれらに限定されない、様々な細胞型、組織、または臓器に影響を及ぼしうる。新生物は、肉腫、癌腫、または形質細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）などのがんを含む。
【0046】
核酸配列、核酸領域、核酸エレメント、または核酸ドメインに言及して、本明細書で使用される、「作動可能に連結された」とは、核酸領域が、互いと、機能的に関連することを意味する。例えば、リーダーペプチドをコードする核酸は、ポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結される場合があり、これにより、核酸は機能的な融合タンパク質を発現するように転写および翻訳が可能であり、この場合、リーダーペプチドは、融合ポリペプチドの分泌をもたらす。一部の場合に、第１のポリペプチドをコードする核酸（例えば、リーダーペプチド）は、第２のポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されており、核酸は単一のｍＲＮＡ転写物として転写されるが、ｍＲＮＡ転写物の翻訳は、発現される２種のポリペプチドのうちの１種を結果としてもたらしうる。例えば、アンバー終止コドンは、部分的にアンバー抑制性である細胞へ導入された場合に結果として得られる単一のｍＲＮＡ転写物が第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを含有する融合タンパク質をもたらすように翻訳されるか、または第１のポリペプチドのみをもたらすように翻訳されるよう、第１のポリペプチドをコードする核酸と第２のポリペプチドをコードする核酸との間に配置されうる。別の例では、プロモーターは、ポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結される場合があり、これにより、プロモーターは、核酸の転写を調節または媒介する。
【0047】
本明細書で使用される、２つのアミノ酸配列の間の「相同性パーセント」は、２つの配列の間の同一性パーセントと同等である。２つの配列の間の同一性パーセントとは、２つの配列の、最適のアライメントのために導入される必要があるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮するときに、配列により共有される、同一な位置の数の関数（すなわち、相同性％＝同一な位置の数／位置の総数×１００）である。２つの配列の間の配列の比較、および同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達せられうる。
【0048】
２つのアミノ酸配列の間の相同性パーセントは、ギャップ長ペナルティーを１２とし、ギャップペナルティーを４として、ＰＡＭ１２０重み付け残基表を使用する、ＡＬＩＧＮプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）へ組み込まれた、E. Meyers and W. Miller（Comput. Appl. Biosci., 4: 1 1-17 (1988)）によるアルゴリズムを使用して決定されうる。加えて、２つのアミノ酸配列の間の相同性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックス、並びに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重み、および１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用する、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能である）内のＧＡＰプログラムへ組み込まれた、Needleman and Wunsch（J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970)）によるアルゴリズムを使用しても決定されうる。
【0049】
加えて、または代替的に、本明細書で開示される主題のアミノ酸配列は、例えば、公開データベースに対して、検索を実施して、類縁の配列を同定するための、「クエリー配列」として、さらに使用されうる。このような検索は、Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215 :403-10による、ＸＢＬＡＳＴプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）を使用して実施されうる。ＢＬＡＳＴによるタンパク質検索は、スコア＝５０、ワード長＝３とするＸＢＬＡＳＴプログラムにより、本明細書で開示される指定配列と相同なアミノ酸配列を得るように実施されうる。比較を目的として、ギャップ付きアライメントを得るために、Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402において記載されている通りに、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが活用されうる。ＢＬＡＳＴプログラムおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを活用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータが使用されうる。
【0050】
本明細書では、「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すように互換的に使用される。この用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマーのほか、１つまたは複数のアミノ酸残基が天然に存在しないアミノ酸、例えば、アミノ酸類似体であるアミノ酸ポリマーへ適用される。この用語は、アミノ酸残基が共有結合的ペプチド結合により連結された、全長タンパク質を含む、あらゆる長さのアミノ酸鎖を包含する。
本明細書で使用される、「～を低減する」という用語は、少なくとも約５％負に変更することであって、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、または約１００％負に変更することを含むがこれらに限定されない、負に変更することを意味する。
本明細書で使用される、「～を低減する」という用語は、少なくとも約５％負に変更することであって、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、または約１００％負に変更することを含むがこれらに限定されない、負に変更することを意味する。
【0051】
本明細書で使用される、核酸分子の「調節領域」とは、作動可能に連結された遺伝子の発現に、正または負の影響を及ぼす、シス作用型ヌクレオチド配列を意味する。調節領域は、遺伝子の誘導性（すなわち、転写の増大のための物質または刺激を要求する）発現を付与するヌクレオチドの配列を含む。誘導因子が存在するか、または濃度を増大させられる場合、遺伝子の発現は、増大させられうる。調節領域はまた、遺伝子発現の抑制を付与する配列も含む（すなわち、物質または刺激は、転写を低下させる）。抑制因子が存在するか、または濃度を増大させられる場合、遺伝子の発現は、低下させられうる。調節領域は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける多くの生体活性であって、細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）および死、細胞の分化、並びに免疫のモジュレーションを含む生体活性に影響を及ぼすか、これをモジュレートまたは制御することが公知である。調節領域は、典型的に、１種または複数種のトランス作用型タンパク質に結合する結果として、遺伝子の転写の増大または低下をもたらす。
【0052】
遺伝子調節領域の特定の例は、プロモーターおよびエンハンサーである。プロモーターは、転写開始部位または翻訳開始部位の近傍に配置され、典型的に、翻訳開始部位の５’側に位置する配列である。プロモーターは、通例、翻訳開始部位から１Ｋｂ以内に配置されるが、さらに遠隔に、例えば、２Ｋｂ、３Ｋｂ、４Ｋｂ、５Ｋｂ、またはこれを超え、１０Ｋｂ以下である位置に配置される場合もある。エンハンサーは、遺伝子の５’側または３’側に位置するか、或いはエクソン内若しくはイントロン内に、またはエクソン若しくはイントロンの一部として位置する場合に、遺伝子の発現に影響を及ぼすことが公知である。エンハンサーはまた、遺伝子からかなりの距離、例えば、約３Ｋｂ、５Ｋｂ、７Ｋｂ、１０Ｋｂ、１５Ｋｂ、またはこれを超える距離においても機能しうる。調節領域はまた、プロモーター領域に加えて、翻訳を容易とする配列、イントロンのためのスプライシングシグナル、ｍＲＮＡの、インフレームにおける翻訳を可能とする、遺伝子の正確なリーディングフレームを維持するための配列、並びに終止コドン、リーダー配列、および融合パートナー配列、多重遺伝子メッセージまたはポリシストロニックメッセージを創出するための、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）エレメント、目的の遺伝子の転写物の、適正なポリアデニル化のためのポリアデニル化シグナル、並びに終止コドンも含むがこれらに限定されず、発現ベクター内に組み入れられてもよい。
【0053】
本明細書で使用される「試料」という用語は、対象から得られる臨床試料を指す。ある特定の実施形態では、試料は、対象から回収される組織、体液、または微生物など、生物学的供給源（すなわち、「生体試料」）から得られる。試料供給源は、粘液、痰、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）、気管支洗浄液（ＢＷ）、全血液、体液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿、血漿、血清、または組織を含むがこれらに限定されない。
ポリペプチドに言及して、本明細書で使用される、「分泌された」という用語は、小胞体、ゴルジ装置を通る分泌経路を介して、細胞から放出されるポリペプチドであり、細胞原形質膜に一過性に融合し、細胞の外側にタンパク質を放出する小胞としてのポリペプチドを意味する。薬物などの低分子もまた、膜を介する拡散により、細胞の外側へ分泌されうる。
ポリペプチドに言及して、本明細書で使用される、「分泌された」という用語は、小胞体、ゴルジ装置を通る分泌経路を介して、細胞から放出されるポリペプチドであり、細胞原形質膜に一過性に融合し、細胞の外側にタンパク質を放出する小胞としてのポリペプチドを意味する。薬物などの低分子もまた、膜を介する拡散により、細胞の外側へ分泌されうる。
【0054】
本明細書で使用される「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、ＶH：：ＶLヘテロ二量体を形成するように共有結合的に連結された、免疫グロブリン（例えば、マウスまたはヒト）の重鎖（ＶH）および軽鎖（ＶL）の可変領域の融合タンパク質である。重鎖（ＶH）および軽鎖（ＶL）は、直接接続されるかまたはペプチドをコードするリンカー（例えば、約１０、１５、２０、２５アミノ酸）であって、ＶHのＮ末端をＶLのＣ末端とつなぐか、若しくはＶHのＣ末端をＶLのＮ末端とつなぐリンカーにより接続される。リンカーは、通例、可撓性のためにグリシンに富むほか、可溶性のためにセリンまたはトレオニンにも富む。リンカーは、細胞外抗原結合性ドメインの、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域とを連結しうる。ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１）に提示される配列番号１に明示された配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、下記：ｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇａｔｃｔｇｇａｇｇｔｇｇｔｇｇｃｔｃａｇｇｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｔｃｃ（配列番号２）に提示される配列番号２に明示されている。リンカーの他の例は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（すなわち、［Ｇ4Ｓ］4）（配列番号３３）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（すなわち、［Ｇ4Ｓ］6）（配列番号３４）を含む。
【0055】
定常領域の除去およびリンカーの導入にも拘らず、ｓｃＦｖタンパク質は、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。単鎖Ｆｖポリペプチド抗体は、Huston, et al.（Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883 (1988)）により記載されている通り、ＶHコード配列およびＶLコード配列を含む核酸から発現させることができる。また、米国特許第５，０９１，５１３号、同第５，１３２，４０５号、および同第４，９５６，７７８号；並びに米国特許公開第２００５０１９６７５４号および同第２００５０１９６７５４号も参照されたい。阻害活性を有する、アンタゴニスト性ｓｃＦｖについても記載されている（例えば、Zhao et al., Hybridoma (Larchmt) 27(6):455-51 (2008); Peter et al., J Cachexia Sarcopenia Muscle (2012); Shieh et al., J Imunol 183(4):2277-85 (2009); Giomarelli et al., Thromb Haemost 97(6):955-63 (2007); Fife eta., J Clin Invst 116(8):2252-61 (2006); Brocks et al., Immunotechnology 3(3): 173-84 (1997); Moosmayer et al., Ther Immunol 2(10):31- 40 (1995)を参照されたい）。刺激活性を有する、アゴニスト性ｓｃＦｖについても記載されている（例えば、Peter et al., J Biol Chem 25278(38):36740-7 (2003); Xie et al., Nat Biotech 15(8):768-71 (1997); Ledbetter et al., Crit Rev Immunol 17(5-6):427-55 (1997); Ho et al., Bio Chim Biophys Acta 1638(3):257-66 (2003)を参照されたい）。
【0056】
本明細書で使用される、「～に特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」または「～に特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ ｔｏ）」または「～を特異的にターゲティングする」という用語は、目的の分子（例えば、抗原）を認識し、これに結合するが、他の分子は実質的に認識せず、これに実質的に結合しない分子（例えば、ポリペプチドまたはその断片）を指す。本明細書で使用される、特定の分子（例えば、抗原）「に特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」、これ「に特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ ｔｏ）」、またはこれ「に特異的」であるという用語は、例えば、それが結合する分子に対して、約１０-4Ｍ、１０-5Ｍ、１０-6Ｍ、１０-7Ｍ、１０-8Ｍ、１０-9Ｍ、１０-10Ｍ、１０-11Ｍ、または１０-12ＭのＫdを有する分子により呈されうる。
【0057】
本明細書で使用される、「対象」、「個体」または「患者」という用語は、互換的に使用され、個別の生物、脊椎動物、または哺乳動物を指し、ヒト、非ヒト霊長動物、齧歯動物など（例えば、特定の医療介入のレシピエントとなる動物、または細胞が採取される動物）を含みうる。ある特定の実施形態では、個体、患者、または対象は、ヒトである。
【0058】
「実質的に相同な」または「実質的に同一な」という用語は、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書で記載されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つ）または参照核酸配列（例えば、本明細書で記載される核酸配列のうちのいずれか１つ）に対して、少なくとも５０％、またはこれを超える相同性若しくは同一性を呈するポリペプチドまたは核酸分子を意味する。例えば、このような配列は、アミノ酸レベルまたは核酸において、比較のために使用される配列（例えば、野生型配列または天然配列）と、少なくとも約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９９％相同または同一である。一部の実施形態では、実質的に相同なポリペプチド、または実質的に同一なポリペプチドは、比較のために使用される配列と比べて、１カ所または複数のアミノ酸における、アミノ酸の置換、挿入、または欠失を含有する。一部の実施形態では、実質的に相同なポリペプチド、または実質的に同一なポリペプチドは、相同配列を置きかえる、Ｄ－アミノ酸およびレトロインベルソ型アミノ酸を含む、１種または複数種の非天然アミノ酸またはアミノ酸類似体を含有する。
【0059】
配列相同性または配列同一性は、典型的に、配列解析ソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ、１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴプログラム、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム、ＧＡＰプログラム、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用して測定される。このようなソフトウェアは、相同性の程度を、多様な置換、欠失、および／または他の改変へ割り当てることにより、同一な配列または同様の配列をマッチさせる。同一性の程度の決定のための例示的な手法では、ＢＬＡＳＴプログラムが、近縁の配列を指し示す、１０-3～１０-100の間の確率スコアで使用される場合がある。
【0060】
本明細書で開示される主題において有用な核酸分子は、ポリペプチドまたはその断片をコードする、いずれかの核酸分子を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で開示される主題において有用な核酸分子は、抗体またはその抗原結合性部分をコードする核酸分子を含む。このような核酸分子は、内因性核酸配列と１００％同一である必要はなく、実質的な同一性を呈することが典型的であろう。内因性配列に対する、「実質的な相同性」または「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子のうちの、少なくとも一方の鎖とハイブリダイズすることが可能である。「ハイブリダイズする」とは、多様なストリンジェンシーの条件下で、相補的なポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書で記載される遺伝子）、またはそれらの部分の間で対合して、二本鎖分子を形成することを意味する（例えば、Wahl, G. M. and S. L. Berger, Methods Enzymol. 152:399 (1987); Kimmel, A. R. Methods Enzymol. 152:507 (1987)を参照されたい）。例えば、ストリンジェントな塩濃度は、通例、約７５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、約５００ｍＭ未満のＮａＣｌおよび５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、または約２５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび２５ｍＭのクエン酸三ナトリウムであろう。低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションが、有機溶媒、例えば、ホルムアミドの非存在下で得られうるのに対し、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５質量／体積％のホルムアミドの存在下で、または少なくとも約５０質量／体積％のホルムアミドの存在下で得られうる。ストリンジェントな温度条件は、通例、少なくとも約３０℃、少なくとも約３７℃、または少なくとも約４２℃の温度を含むであろう。当業者には、ハイブリダイゼーション時間、界面活性剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、および担体ＤＮＡの組入れまたは除外など、さらなるパラメータを変動させることも周知である。必要に応じて、これらの多様な条件を組み合わせることにより、多様なレベルのストリンジェンシーが達せられる。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および１質量／体積％のＳＤＳ中、３０℃で生じるであろう。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１質量／体積％のＳＤＳ、３５質量／体積％のホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中、３７℃で生じるであろう。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１質量／体積％のＳＤＳ、５０質量／体積％のホルムアミド、および２００μｇのｓｓＤＮＡ中、４２℃で生じるであろう。当業者には、これらの条件における、有用な変動がたやすく明らかであろう。
【0061】
大半の適用では、ハイブリダイゼーションに後続する洗浄ステップもまた、ストリンジェンシーにおいて変動する。洗浄のストリンジェンシー条件は、塩濃度および温度により規定されうる。上記の通り、洗浄のストリンジェンシーは、塩濃度を減少させることにより増大させられる場合もあり、温度を上昇させることにより増大させられる場合もある。例えば、洗浄ステップのためのストリンジェントな塩濃度は、約３０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、または約１５ｍＭ未満のＮａＣｌおよび１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウムであろう。洗浄ステップのためのストリンジェントな温度条件は、通例、少なくとも約２５℃、少なくとも約４２℃、または少なくとも約６８℃の温度を含むであろう。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１質量／体積％のＳＤＳ中、２５℃で生じるであろう。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１質量／体積％のＳＤＳ中、４２℃で生じるであろう。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１質量／体積％のＳＤＳ中、６８℃で生じるであろう。当業者には、これらの条件における、さらなる変動がたやすく明らかであろう。当業者には、ハイブリダイゼーション法が周知であり、例えば、Benton and Davis（Science 196: 180 (1977)）; Grunstein and Rogness（Proc. Natl. Acad. Sci., USA 72:3961 (1975)）; Ausubel et al.（Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, 2001）; Berger and Kimmel（Guide to Molecular Cloning Techniques, 1987, Academic Press, New York）；およびSambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New Yorkにおいて記載されている。
【0062】
例えば、合成核酸分子または合成遺伝子または合成ペプチドに言及して、本明細書で使用される、「合成」とは、組換え法および／または化学的合成法により作製される核酸分子またはポリペプチド分子を指す。本明細書で使用される、「組換えＤＮＡ方法を使用することによる、組換え手段を介する産生」とは、クローニングされたＤＮＡによりコードされるタンパク質を発現させるための周知の分子生物学法の使用を意味する。
【0063】
本明細書で使用される「Ｔ細胞」という用語は、ナイーブＴ細胞、ＣＤ４+Ｔ細胞、ＣＤ８+Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、活性化Ｔ細胞、アネルギーＴ細胞、寛容性Ｔ細胞、キメラＢ細胞、および抗原特異的Ｔ細胞を含む。
本明細書で使用される、「腫瘍浸潤リンパ球」または「ＴＩＬ」とは、血流を離れ、腫瘍へ遊走した白血球を指す。
本明細書で使用される、「腫瘍浸潤リンパ球」または「ＴＩＬ」とは、血流を離れ、腫瘍へ遊走した白血球を指す。
【0064】
本明細書で使用される「ベクター」とは、適切な宿主細胞が、ベクターにより形質転換される場合に、１種または複数種の異種タンパク質が発現されうる、複製可能な核酸である。ベクターへの言及は、ポリペプチドをコードする核酸またはその断片が、典型的に、制限消化およびライゲーションにより導入されうるベクターを含む。ベクターへの言及はまた、ポリペプチドをコードする核酸を含有するベクターも含む。ベクターは、核酸の増幅のために、または核酸によりコードされるポリペプチドの発現／提示のために、ポリペプチドをコードする核酸を宿主細胞へ導入するのに使用される。ベクターは、典型的に、エピソームベクターのままでとどまるが、遺伝子または遺伝子の一部のゲノムの染色体への組込みをもたらすようにデザインされうる。また、酵母人工染色体および哺乳動物人工染色体などの人工染色体であるベクターも想定される。このような媒体の選択および使用は、当業者に周知である。ベクターはまた、「ウイルスベクター」または「ウイルス性ベクター」も含む。ウイルスベクターは、外因性遺伝子を細胞へ導入する（媒体またはシャトルとして）ように、外因性遺伝子に作動可能に連結された、操作されたウイルスである。本明細書で使用される「発現ベクター」は、このようなＤＮＡ断片の発現をもたらすことが可能な、プロモーター領域などの調節配列と作動可能に連結された、ＤＮＡを発現させることが可能なベクターを含む。このようなさらなるセグメントは、プロモーター配列およびターミネーター配列を含む場合があり、１種または複数種の複製起点、１種または複数種の選択用マーカー、エンハンサー、ポリアデニル化シグナルなどを含んでもよい。発現ベクターは、一般に、プラスミドまたはウイルスＤＮＡに由来するか、または両方のエレメントを含有しうる。したがって、発現ベクターとは、適切な宿主細胞へ導入されるとクローニングされたＤＮＡの発現を結果としてもたらす、プラスミド、ファージ、組換えウイルス、または他のベクターなどの、組換えＤＮＡ構築物または組換えＲＮＡ構築物を指す。適切な発現ベクターは、当業者に周知であり、真核細胞内および／または原核細胞内で複製可能であり、エピソームベクターのままでとどまるか、または宿主細胞ゲノムへ組み込むベクターを含む。
【0065】
概観
本明細書で記載される通り、免疫細胞は、ＤＯＴＡハプテンに結合する、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片を、構成的にまたは条件付きで発現するように操作されうる。一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、加えて、免疫細胞を、標的部位へ送達するためのキメラ抗原受容体も発現する。抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の発現は、ＣＡＲ Ｔ細胞の追跡、および腫瘍細胞部位の同定を可能とする。理論に束縛されることを望まずに述べると、本技術の操作された免疫細胞は、時間経過にわたる、操作された免疫細胞の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける分布をモニタリングするために有用であると考えられる。
本明細書で記載される通り、免疫細胞は、ＤＯＴＡハプテンに結合する、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片を、構成的にまたは条件付きで発現するように操作されうる。一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、加えて、免疫細胞を、標的部位へ送達するためのキメラ抗原受容体も発現する。抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の発現は、ＣＡＲ Ｔ細胞の追跡、および腫瘍細胞部位の同定を可能とする。理論に束縛されることを望まずに述べると、本技術の操作された免疫細胞は、時間経過にわたる、操作された免疫細胞の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける分布をモニタリングするために有用であると考えられる。
【0066】
本明細書で提示される方法は、所望の適用に応じた、広範にわたるＣＡＲと、腫瘍特異的抗体との組合せのモジュール的使用を可能とする。本明細書で記載される、操作された免疫細胞は、多種多様な腫瘍特異的抗体と組み合わせて利用されうる。当技術分野では、腫瘍特異的抗体が公知である。例示的腫瘍特異的抗体は、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＰＳＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、またはＷＴ１へターゲティングされる抗体を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、腫瘍特異的抗体は、トラスツズマブ、セツキシマブ、ＥＳＫ１、リツキシマブ、ダラツムマブ、またはリンツズマブである。
【0067】
一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、腫瘍抗原などの標的抗原又に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）または他の細胞表面リガンドと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する。一部の実施形態では、Ｔ細胞受容体は野生型または天然のＴ細胞受容体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞受容体はキメラＴ細胞受容体（ＣＡＲ）である。
本明細書で提示される、例示的実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、腫瘍抗原であるＣＤ１９に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）、または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＣＤ１９に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）、または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＣＤ１９に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。
本明細書で提示される、例示的実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、腫瘍抗原であるＣＤ１９に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）、または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＣＤ１９に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）、または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＣＤ１９に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。
【0068】
本明細書で提示される、例示的実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、腫瘍抗原であるＰＲＡＭＥ（「ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ」）に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＲＡＭＥに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＲＡＭＥ。ＰＲＡＭＥタンパク質は、分化、増殖の停止、およびアポトーシスに関与するが、現在のところ創薬不可能な、レチノイン酸受容体結合性タンパク質である。プロテアソームプロセシングの後、ＰＲＡＭＥ300-309ペプチド（ＡＬＹＶＤＳＬＦＦＬ）（配列番号３２）は、ＨＬＡ－Ｉのハプロタイプである、ＨＬＡ*Ａ０２：０１（ＨＬＡ－Ａ２）との関連で、細胞表面に提示される。
【0069】
本明細書で提示される、例示的実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、腫瘍抗原であるウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＷＴ１に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＷＴ１に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。
本明細書で提示される、例示的実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、腫瘍抗原であるメソテリンに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるメソテリンに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるメソテリンに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。
本明細書で提示される、例示的実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、腫瘍抗原であるメソテリンに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるメソテリンに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるメソテリンに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。
【0070】
本明細書で提示される、例示的実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、腫瘍抗原であるＭＵＣ１６に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＭＵＣ１６に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＭＵＣ１６に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。
本明細書で提示される、例示的実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、腫瘍抗原である、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＳＣＡに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＳＣＡに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。
本明細書で提示される、例示的実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、腫瘍抗原である、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＳＣＡに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＳＣＡに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。
【0071】
本明細書で提示される、例示的実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、腫瘍抗原である、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＢＣＭＡに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＢＣＭＡに結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＡＲ）または他の細胞表面リガンドを発現する。
【0072】
抗原受容体、例えば、キメラ抗原受容体を、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片と組み合わせて発現する、本明細書で提示される操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）は、時間経過にわたる、操作された免疫細胞のｉｎ ｖｉｖｏにおける分布をモニタリングするために有用である。
加えて、操作された免疫細胞は、腫瘍部位において腫瘍特異的抗原に遭遇すると、大幅に増殖し（例えば、１００倍またはこれを超えて）、これにより、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の産生を著明に増大させる。操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、キメラ抗原と、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とをコードする核酸の、免疫細胞への形質導入により容易に作出されうる。
加えて、操作された免疫細胞は、腫瘍部位において腫瘍特異的抗原に遭遇すると、大幅に増殖し（例えば、１００倍またはこれを超えて）、これにより、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の産生を著明に増大させる。操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、キメラ抗原と、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とをコードする核酸の、免疫細胞への形質導入により容易に作出されうる。
【0073】
抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片のＶHのアミノ酸配列は、
ＨＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＴＤＹＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＳＧＧＧＴＡＹＮＴＡＬＩＳＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＳＹＰＹＮＹＦＤＡＷＧＣＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５）
でありうる。
抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片のＶLのアミノ酸配列は、
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＡＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＣＰＲＧＬＩＧＧＨＮＮＲＰＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＬＧＡＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＤＨＷＶＩＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号３６）
でありうる。
ＨＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＴＤＹＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＳＧＧＧＴＡＹＮＴＡＬＩＳＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＳＹＰＹＮＹＦＤＡＷＧＣＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５）
でありうる。
抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片のＶLのアミノ酸配列は、
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＡＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＣＰＲＧＬＩＧＧＨＮＮＲＰＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＬＧＡＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＤＨＷＶＩＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号３６）
でありうる。
【0074】
抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片は、
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含みうる。
*（Ｇ４Ｓ）３リンカー配列は、太字で示される。
一部の実施形態では、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、または（Ｆａｂ）2である。
本技術の例示的構築物は、図３Ａに記載された構築物などの二重形質導入構築物を含む。図３Ａに記載された構築物のアミノ酸配列は、下記に示される：
【化2】
*（Ｇ４Ｓ）３リンカー配列は、太字で示される。
一部の実施形態では、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、または（Ｆａｂ）2である。
本技術の例示的構築物は、図３Ａに記載された構築物などの二重形質導入構築物を含む。図３Ａに記載された構築物のアミノ酸配列は、下記に示される：
【0075】
Ｃ８２５－ヒンジ－ＧＦＰ
*Ｃ８２５ ｓｃＦＶのＶH配列およびＶL配列は、下線を付され、（Ｇ４Ｓ）３リンカー配列は、斜字体で示され、膜貫通ドメインは、太字で示される。
【化3】
【0076】
１９ＢＢｚ ＣＡＲ
*ＣＤ１９ ｓｃＦｖのＶH配列およびＶL配列は、下線を付され、（Ｇ４Ｓ）３リンカー配列は、斜字体で示され、膜貫通ドメインは、太字で示され、４１ＢＢは、斜字体で示され、かつ、下線を付され、ＣＤ３ζポリペプチドは、下線を付され、かつ、太字で示される。
【化4】
【0077】
本技術の、他の例示的構築物は、図３Ｂ～３Ｃに記載された構築物を含む。図３Ｂ～３Ｃに記載された構築物のアミノ酸配列は、下記に示される：
*Ｃ８２５ ｓｃＦＶおよびＣＤ１９ ｓｃＦｖのＶH配列およびＶL配列は、下線を付され、（Ｇ４Ｓ）３リンカー配列は、斜字体で示され、膜貫通ドメインは、太字で示され、４１ＢＢは、斜字体で示され、かつ、下線を付され、ＣＤ３ζポリペプチドは、下線を付され、かつ、太字で示される。
【化5】
【0078】
リガンドおよび標的抗原のターゲティング
一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、腫瘍抗原などの標的抗原に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、または他の細胞表面リガンドを発現する。細胞表面リガンドは、免疫細胞を、標的部位（例えば、腫瘍部位）へ方向付ける、いずれかの分子でありうる。例示的細胞表面リガンドは、免疫細胞の、標的部位へのターゲティングを達成するように、例えば、内因性受容体、操作された受容体、または他の特異的リガンドを含む。一部の実施形態では、受容体はＴ細胞受容体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞受容体は、標的抗原に結合する、野生型または天然のＴ細胞受容体である。一部の実施形態では、受容体、例えば、Ｔ細胞受容体は、非天然の受容体（例えば、免疫細胞に内因性ではない）である。一部の実施形態では、受容体は、標的抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、例えば、Ｔ細胞ＣＡＲである。
一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は、腫瘍抗原などの標的抗原に結合する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、または他の細胞表面リガンドを発現する。細胞表面リガンドは、免疫細胞を、標的部位（例えば、腫瘍部位）へ方向付ける、いずれかの分子でありうる。例示的細胞表面リガンドは、免疫細胞の、標的部位へのターゲティングを達成するように、例えば、内因性受容体、操作された受容体、または他の特異的リガンドを含む。一部の実施形態では、受容体はＴ細胞受容体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞受容体は、標的抗原に結合する、野生型または天然のＴ細胞受容体である。一部の実施形態では、受容体、例えば、Ｔ細胞受容体は、非天然の受容体（例えば、免疫細胞に内因性ではない）である。一部の実施形態では、受容体は、標的抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、例えば、Ｔ細胞ＣＡＲである。
【0079】
一部の実施形態では、標的抗原は、腫瘍細胞により発現される。一部の実施形態では、標的抗原は、腫瘍細胞の表面上で発現される。一部の実施形態では、標的抗原は、細胞表面受容体である。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面糖タンパク質である。一部の実施形態では、標的抗原は、腫瘍細胞により分泌される。一部の実施形態では、標的抗原は、腫瘍微小環境に局在する。一部の実施形態では、標的抗原は細胞外マトリックスまたは腫瘍微小環境の間質に局在する。一部の実施形態では、標的抗原は、細胞外マトリックス内または腫瘍微小環境の間質内に位置する、１つまたは複数の細胞により発現される。
【0080】
一部の実施形態では、標的抗原は、５Ｔ４、アルファ５β１インテグリン、７０７－ＡＰ、Ａ３３、ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ－２、β－カテニン、ＢＣＭＡ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ ＩＸ抗体、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳ－１、ＣＴ、Ｃｙｐ－Ｂ、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＤＡＭ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合性タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０、ＧＤ－２、ＧＭ２、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ*０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｋｉ－６７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＬＲＰ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ、ＭＡＲＴ－１／ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、メソテリン、ＭＵＣ、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ－１－Ｂ、ｍｙｃ、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹＥＳＯ－１、ＮＹ－Ｅｓｏ－Ｂ、ｐ５３、プロテイナーゼ－３、ｐ１９０、ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＲＯＲＩ、ＳＡＲＴ－１またはＳＡＲＴ－３、スルビビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、テネイシン、ＴＳＴＡ チロシナーゼ、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１の中から選択される腫瘍抗原である。ある特定の実施形態では、標的抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＷＴ１、およびＰＲＡＭＥの中から選択される腫瘍抗原である。
【0081】
一部の実施形態では、標的抗原は、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原である。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質はＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ分子、ＨＬＡ－Ｂ分子、またはＨＬＡ－Ｃ分子である。一部の実施形態では、標的抗原は、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原である。ＩｇＧ１、脱フコシル化Ｆｃ形態、二特異的、ＢｉＴＥ、およびＣＡＲ Ｔ細胞フォーマット、またはこれらの部分は、本明細書で記載される通り、ＭＨＣ分子との関連で、標的細胞（例えば、腫瘍細胞）の表面上に存在する標的抗原の認識のために利用されうる。
【0082】
キメラ抗原受容体
一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する。ＣＡＲは、目的の特異性を免疫エフェクター細胞へ移植するかまたは付与する、操作された受容体である。例えば、ＣＡＲは、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞などの免疫細胞へ移植するのに使用されうる。一部の実施形態では、ＣＡＲのコード配列の導入はレトロウイルスベクターなどの核酸ベクターにより容易とされる。
一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する。ＣＡＲは、目的の特異性を免疫エフェクター細胞へ移植するかまたは付与する、操作された受容体である。例えば、ＣＡＲは、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞などの免疫細胞へ移植するのに使用されうる。一部の実施形態では、ＣＡＲのコード配列の導入はレトロウイルスベクターなどの核酸ベクターにより容易とされる。
【0083】
現在のところ、３世代のＣＡＲが存在する。一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は「第１世代」のＣＡＲを発現する。「第１世代」のＣＡＲは、典型的に、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）鎖の細胞質／細胞内ドメインへ融合された膜貫通ドメインへ融合された、細胞外抗原結合性ドメイン（例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ））から構成される。「第１世代」のＣＡＲは、典型的に、内因性ＴＣＲに由来する主要なシグナル伝達因子であるＣＤ３ζ鎖に由来する細胞内ドメインを有する。「第１世代」のＣＡＲは、デノボの抗原認識をもたらし、単一の融合分子内の、それらのＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介して、ＨＬＡ媒介型抗原提示に依存せずにＣＤ４+Ｔ細胞およびＣＤ８+Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こしうる。
【0084】
一部の実施形態では、本明細書で提示される、操作された免疫細胞は「第２世代」のＣＡＲを発現する。「第２世代」のＣＡＲは、多様な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０）に由来する細胞内ドメインをＣＡＲの細胞質テールへ付加して、Ｔ細胞へさらなるシグナルをもたらす。「第２世代」のＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８または４－１ＢＢ）および活性化（例えば、ＣＤ３ζ）の両方をもたらすＣＡＲを含む。
一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、「第３世代」のＣＡＲを発現する。「第３世代」のＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８および４－１ＢＢ）および活性化（例えば、ＣＤ３ζ）をもたらすＣＡＲを含む。
一部の実施形態では、本明細書で提示される操作された免疫細胞は、「第３世代」のＣＡＲを発現する。「第３世代」のＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８および４－１ＢＢ）および活性化（例えば、ＣＤ３ζ）をもたらすＣＡＲを含む。
【0085】
本明細書で開示される主題に従い、本明細書で提示される、操作された免疫細胞のＣＡＲは、細胞外抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含む。
ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメイン：ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは腫瘍抗原に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）に由来する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインはｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは架橋されていてもよいＦａｂを含む。一部の実施形態では、細胞外結合性ドメインはＦ（ａｂ）2を含む。一部の実施形態では、前出の分子のうちのいずれかは、細胞外抗原結合性ドメインを形成するように、異種配列と共に融合タンパク質内に組み入れられる。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する、ヒトｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、腫瘍抗原－Ｆｃ融合タンパク質でｓｃＦｖファージライブラリーをスクリーニングすることにより同定される。
ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメイン：ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは腫瘍抗原に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）に由来する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインはｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは架橋されていてもよいＦａｂを含む。一部の実施形態では、細胞外結合性ドメインはＦ（ａｂ）2を含む。一部の実施形態では、前出の分子のうちのいずれかは、細胞外抗原結合性ドメインを形成するように、異種配列と共に融合タンパク質内に組み入れられる。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する、ヒトｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、腫瘍抗原－Ｆｃ融合タンパク質でｓｃＦｖファージライブラリーをスクリーニングすることにより同定される。
【0086】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原（例えば、ヒト腫瘍抗原などの哺乳動物腫瘍抗原）に対する、高結合特異性および高結合アフィニティーを有する。例えば、一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメイン（例えば、ヒトｓｃＦｖ内またはその類似体内で具体化される）は、特定の腫瘍抗原に、約１×１０-5Ｍまたはこれ未満の解離定数（Ｋd）で結合する。ある特定の実施形態では、Ｋdは、約５×１０-6Ｍ若しくはこれ未満、約１×１０-6Ｍ若しくはこれ未満、約５×１０-7Ｍ若しくはこれ未満、約１×１０-7Ｍ若しくはこれ未満、約５×１０-8Ｍ若しくはこれ未満、約１×１０-8Ｍ若しくはこれ未満、約５×１０-9若しくはこれ未満、約４×１０-9若しくはこれ未満、約３×１０-9若しくはこれ未満、約２×１０-9若しくはこれ未満、または約１×１０-9Ｍ若しくはこれ未満である。ある特定の非限定的実施形態では、Ｋdは、約３×１０-9Ｍまたはこれ未満である。ある特定の非限定的実施形態では、Ｋdは、約３×１０-9～約２×１０-7である。
【0087】
本明細書で開示される腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメイン（例えば、ヒトｓｃＦｖ内またはその類似体内で具体化される（ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ））の結合は、例えば、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ解析、バイオアッセイ（例えば、増殖阻害）、またはウェスタンブロットアッセイにより確認されうる。これらのアッセイの各々は、一般に、目的の複合体に特異的な標識化試薬（例えば、抗体、またはｓｃＦｖ）を利用することにより、特に目的である、タンパク質－抗体複合体の存在を検出する。例えば、ｓｃＦｖは放射性標識化され、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）において使用されうる（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Weintraub, B., Principles of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, March, 1986を参照されたい）。放射性同位体はγカウンター若しくはシンチレーションカウンターの使用やオートラジオグラフィーにより検出することができる。ある特定の実施形態では、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、蛍光マーカーで標識化される。蛍光マーカーの非限定的例は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（例えば、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、Ａｚｕｒｉｔｅ、およびｍＫａｌａｍａｌ）、シアン蛍光タンパク質（例えば、ＥＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、およびＣｙＰｅｔ）、および黄色蛍光タンパク質（例えば、ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、およびＹＰｅｔ）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で開示される腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲのヒトｓｃＦｖは、ＧＦＰで標識化される。
【0088】
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍細胞により発現される腫瘍抗原に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍細胞の表面上で発現される腫瘍抗原に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍細胞の表面上で、ＭＨＣタンパク質と組み合わされて発現される腫瘍抗原に結合する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質はＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ分子、ＨＬＡ－Ｂ分子、またはＨＬＡ－Ｃ分子である。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍細胞の表面上でＭＨＣタンパク質と組み合わされずに発現される腫瘍抗原に結合する。
【0089】
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの、細胞外抗原結合性ドメインは、５Ｔ４、アルファ５β１インテグリン、７０７－ＡＰ、Ａ３３、ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ－２、β－カテニン、ＢＣＭＡ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ ＩＸ抗体、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳ－１、ＣＴ、Ｃｙｐ－Ｂ、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＤＡＭ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合性タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０、ＧＤ－２、ＧＭ２、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ*０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｋｉ－６７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＬＲＰ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ、ＭＡＲＴ－１／ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、メソテリン、ＭＵＣ、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ－１－Ｂ、ｍｙｃ、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹＥＳＯ－１、ＮＹ－Ｅｓｏ－Ｂ、ｐ５３、プロテイナーゼ－３、ｐ１９０、ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＲＯＲＩ、ＳＡＲＴ－１またはＳＡＲＴ－３、スルビビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、テネイシン、ＴＳＴＡ チロシナーゼ、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１の中から選択される腫瘍抗原に結合する。ある特定の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＷＴ１、およびＰＲＡＭＥの中から選択される腫瘍抗原に結合する。例示的な、細胞外抗原結合性ドメイン、並びにこのようなドメインを作出する方法、および関連するＣＡＲについては、例えば、参照により、それらの中に提示されている配列表を含む、それらの全体において組み込まれる、ＷＯ２０１６／１９１２４６、ＷＯ２０１７／０２３８５９、ＷＯ２０１５／１８８１４１、ＷＯ２０１５／０７００６１、ＷＯ２０１２／１３５８５４、ＷＯ２０１４／０５５６６８において記載されている。
【0090】
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原であるＣＤ１９に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＣＤ１９に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＣＤ１９に結合する。
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原であるＰＲＡＭＥ（「ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ」）に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＲＡＭＥに結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＲＡＭＥに結合する。
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原であるＷＴ１（ウィルムス腫瘍タンパク質１）に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＷＴ１に結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＷＴ１に結合する。
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原であるＰＲＡＭＥ（「ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ」）に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＲＡＭＥに結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＲＡＭＥに結合する。
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原であるＷＴ１（ウィルムス腫瘍タンパク質１）に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＷＴ１に結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＷＴ１に結合する。
【0091】
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原であるＭＵＣ１６に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＭＵＣ１６に結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＭＵＣ１６に結合する。
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは腫瘍抗原であるメソテリンに結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるメソテリンに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるメソテリンに結合する。
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原であるＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＢＣＭＡに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＢＣＭＡに結合する。
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは腫瘍抗原であるメソテリンに結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるメソテリンに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるメソテリンに結合する。
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原であるＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＢＣＭＡに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＢＣＭＡに結合する。
【0092】
一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原であるＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）に結合する。一部の実施形態では、発現されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＭＨＣ分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＳＣＡに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２分子との関連で提示される腫瘍抗原であるＰＳＣＡに結合する。
【0093】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメイン（例えば、ヒトｓｃＦｖ）は、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域との間で、リンカー配列、例えば、リンカーペプチド（例えば、配列番号１）により連結されてもよい、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域とを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ヒトｓｃＦｖ－Ｆｃ融合タンパク質、またはＶH領域およびＶL領域を有する、全長ヒトＩｇＧである。
【0094】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、抗原であるＣＤ１９に結合する、ヒトｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは配列番号３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
ＥＶＫＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＤＴＮＹＮＧＫＦＫＧＱＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＧＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＫＴＩＳＳＶＶＤＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＬＴＱＳＰＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＶＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＰＬＩＹＳＡＴＹＲＮＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＴＮＶＱＳＫＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＮＲＹＰＹＴＳＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号３）
ＥＶＫＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＤＴＮＹＮＧＫＦＫＧＱＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＧＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＫＴＩＳＳＶＶＤＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＬＴＱＳＰＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＶＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＰＬＩＹＳＡＴＹＲＮＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＴＮＶＱＳＫＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＮＲＹＰＹＴＳＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号３）
【0095】
一部の実施形態では、ｓｃＦｖは配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＥＶＫＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＤＴＮＹＮＧＫＦＫＧＱＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＧＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＫＴＩＳＳＶＶＤＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＬＴＱＳＰＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＶＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＰＬＩＹＳＡＴＹＲＮＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＴＮＶＱＳＫＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＮＲＹＰＹＴＳＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）
一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３または配列番号４と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。例えば、ｓｃＦｖは、配列番号３または配列番号４と、約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＥＶＫＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＤＴＮＹＮＧＫＦＫＧＱＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＧＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＫＴＩＳＳＶＶＤＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＬＴＱＳＰＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＶＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＰＬＩＹＳＡＴＹＲＮＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＴＮＶＱＳＫＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＮＲＹＰＹＴＳＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）
一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３または配列番号４と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。例えば、ｓｃＦｖは、配列番号３または配列番号４と、約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【0096】
一部の実施形態では、ｓｃＦｖは配列番号５の核酸配列を有する核酸によりコードされる。
ＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＴＧＣＡＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＡＡＣＴＡＣＡＡＴＧＧＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＴＣＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＧＧＣＣＴＡＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＡＧＡＣＣＡＴＴＡＧＴＴＣＧＧＴＡＧＴＡＧＡＴＴＴＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＣＡＴＴＧＡＧＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＡＴＴＣＡＴＧＴＣＣＡＣＡＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＧＧＧＴＡＣＴＡＡＴＧＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＡＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＣＡＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＣＧＧＣＡＡＣＣＴＡＣＣＧＧＡＡＣＡＧＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＡＡＣＧＴＧＣＡＧＴＣＴＡＡＡＧＡＣＴＴＧＧＣＡＧＡＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＡＡＣＡＧＧＴＡＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＣＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡ（配列番号５）
ＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＴＧＣＡＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＡＡＣＴＡＣＡＡＴＧＧＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＴＣＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＧＧＣＣＴＡＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＡＧＡＣＣＡＴＴＡＧＴＴＣＧＧＴＡＧＴＡＧＡＴＴＴＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＣＡＴＴＧＡＧＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＡＴＴＣＡＴＧＴＣＣＡＣＡＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＧＧＧＴＡＣＴＡＡＴＧＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＡＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＣＡＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＣＧＧＣＡＡＣＣＴＡＣＣＧＧＡＡＣＡＧＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＡＡＣＧＴＧＣＡＧＴＣＴＡＡＡＧＡＣＴＴＧＧＣＡＧＡＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＡＡＣＡＧＧＴＡＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＣＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡ（配列番号５）
【0097】
一部の実施形態では、ｓｃＦｖは配列番号６の核酸配列を有する核酸によりコードされる。
ＡＴＧＧＣＴＣＴＣＣＣＡＧＴＧＡＣＴＧＣＣＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＣＣＣＴＡＧＣＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡＴＧＣＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＴＧＣＡＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＡＡＣＴＡＣＡＡＴＧＧＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＴＣＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＧＧＣＣＴＡＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＡＧＡＣＣＡＴＴＡＧＴＴＣＧＧＴＡＧＴＡＧＡＴＴＴＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＣＡＴＴＧＡＧＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＡＴＴＣＡＴＧＴＣＣＡＣＡＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＧＧＧＴＡＣＴＡＡＴＧＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＡＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＣＡＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＣＧＧＣＡＡＣＣＴＡＣＣＧＧＡＡＣＡＧＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＡＡＣＧＴＧＣＡＧＴＣＴＡＡＡＧＡＣＴＴＧＧＣＡＧＡＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＡＡＣＡＧＧＴＡＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＣＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧ（配列番号６）
ＡＴＧＧＣＴＣＴＣＣＣＡＧＴＧＡＣＴＧＣＣＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＣＣＣＴＡＧＣＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡＴＧＣＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＴＧＣＡＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＡＡＣＴＡＣＡＡＴＧＧＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＴＣＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＧＧＣＣＴＡＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＡＧＡＣＣＡＴＴＡＧＴＴＣＧＧＴＡＧＴＡＧＡＴＴＴＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＣＡＴＴＧＡＧＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＡＴＴＣＡＴＧＴＣＣＡＣＡＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＧＧＧＴＡＣＴＡＡＴＧＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＡＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＣＡＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＣＧＧＣＡＡＣＣＴＡＣＣＧＧＡＡＣＡＧＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＡＡＣＧＴＧＣＡＧＴＣＴＡＡＡＧＡＣＴＴＧＧＣＡＧＡＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＡＡＣＡＧＧＴＡＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＣＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧ（配列番号６）
【0098】
一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５または配列番号６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一である核酸配列を有する核酸によりコードされる。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５または配列番号６の核酸配列を有する核酸によりコードされる。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５または配列番号６と、約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する核酸によりコードされる。
【0099】
ある特定の非限定的実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、細胞外抗原結合性ドメインの重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを接続するリンカーを含みうる。本明細書で使用される、「リンカー」という用語は、それらが、互いと接続されるように、２つまたはこれを超えるポリペプチドまたは核酸を共有結合的に結合する機能グループ（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｇｒｏｕｐ）（例えば、化学物質またはポリペプチド）を指す。本明細書で使用される、「ペプチドリンカー」とは、２つのタンパク質を一体にカップリングさせる（例えば、ＶHドメインと、ＶLドメインとをカップリングさせる）のに使用される、１つまたは複数のアミノ酸を指す。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号１、配列番号３３または配列番号３４に明示された配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は配列番号２に明示されている。
【0100】
加えて、細胞外抗原結合性ドメインは、新生タンパク質を小胞体へ方向付けるリーダーペプチドまたはシグナルペプチドを含みうる。シグナルペプチドまたはリーダーペプチドは、ＣＡＲが、グリコシル化され細胞膜内にアンカリングされる場合に不可欠でありうる。シグナル配列またはリーダー配列は、新たに合成されたタンパク質のＮ末端に存在するペプチド配列（約５、約１０、約１５、約２０、約２５、または約３０アミノ酸長）であって、それらの分泌経路への参入を方向付けるペプチド配列でありうる。
ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に共有結合的に結合される。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、下記：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号７）に提示される、配列番号７に明示された配列を有するアミノ酸を含む、ＣＤ８シグナルポリペプチドを含む。
ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に共有結合的に結合される。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、下記：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号７）に提示される、配列番号７に明示された配列を有するアミノ酸を含む、ＣＤ８シグナルポリペプチドを含む。
【0101】
配列番号７のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、下記：ａｔｇｇｃｃｃｔｇｃｃａｇｔａａｃｇｇｃｔｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｃａｃｔｔｇｃｔｃｔｇｃｔｃｃｔｃｃａｔｇｃａｇｃｃａｇｇｃｃｔ（配列番号８）に提示される配列番号８に明示されている。
ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、下記：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡ（配列番号９）に提示される、配列番号９に明示された配列を有するアミノ酸を含む、ＣＤ８シグナルポリペプチドを含む。
配列番号９のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、下記：ＡＴＧＧＣＴＣＴＣＣＣＡＧＴＧＡＣＴＧＣＣＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＣＣＣＴＡＧＣＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡＴＧＣＡ（配列番号１０）に提示される配列番号１０に明示されている。
ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、下記：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡ（配列番号９）に提示される、配列番号９に明示された配列を有するアミノ酸を含む、ＣＤ８シグナルポリペプチドを含む。
配列番号９のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、下記：ＡＴＧＧＣＴＣＴＣＣＣＡＧＴＧＡＣＴＧＣＣＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＣＣＣＴＡＧＣＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡＴＧＣＡ（配列番号１０）に提示される配列番号１０に明示されている。
【0102】
ＣＡＲの膜貫通ドメイン：ある特定の非限定的実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜の少なくとも一部にわたる疎水性アルファヘリックスを含む。異なる膜貫通ドメインは異なる受容体の安定性を結果としてもたらす。抗原認識の後、受容体はクラスター化し、シグナルが細胞へ伝達される。本明細書で開示される主題に従い、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＰＤ－１ポリペプチド、ＬＡＧ－３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド（例えば、免疫応答と関連するタンパク質に基づかない、膜貫通ペプチド）、またはこれらの組合せを含みうる。
【0103】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ２８ポリペプチドを含む。ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＰＩ０７４７若しくはＮＰ００６１３０（配列番号１１）を有する配列若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０アミノ酸、または少なくとも３０アミノ酸、または少なくとも４０アミノ酸、または少なくとも５０アミノ酸の長さであり、かつ、２２０アミノ酸以下の長さである、配列番号１１の連続部分であるアミノ酸配列を有しうる。代替的に、または加えて、多様な非限定的実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１１の、アミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメインと、ＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメインとを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインに含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸１１４～２２０のアミノ酸配列を有する。
【0104】
配列番号１１は、下記：
ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬＦＰＳＩＱＶＴＧＮＫＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号１１）
に提示される。
ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬＦＰＳＩＱＶＴＧＮＫＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号１１）
に提示される。
【0105】
本明細書で開示される主題に従い、「ＣＤ２８核酸分子」とは、ＣＤ２８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲの膜貫通ドメインおよび細胞内ドメイン（例えば、共刺激シグナル伝達領域）（配列番号１１のアミノ酸１１４～２２０）内に含まれるＣＤ２８ポリペプチドをコードするＣＤ２８核酸分子は、下記に提示される配列番号１２に明示された配列を有する核酸を含む。
ａｔｔｇａａｇｔｔａｔｇｔａｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｔａｃｃｔａｇａｃａａｔｇａｇａａｇａｇｃａａｔｇｇａａｃｃａｔｔａｔｃｃａｔｇｔｇａａａｇｇｇａａａｃａｃｃｔｔｔｇｔｃｃａａｇｔｃｃｃｃｔａｔｔｔｃｃｃｇｇａｃｃｔｔｃｔａａｇｃｃｃｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇｔｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｇｃｔａｔａｇｃｔｔｇｃｔａｇｔａａｃａｇｔｇｇｃｃｔｔｔａｔｔａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｔｇａｇｇａｇｔａａｇａｇｇａｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｃａｃａｇｔｇａｃｔａｃａｔｇａａｃａｔｇａｃｔｃｃｃｃｇｃｃｇｃｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｃｃｃｇｃａａｇｃａｔｔａｃｃａｇｃｃｃｔａｔｇｃｃｃｃａｃｃａｃｇｃｇａｃｔｔｃｇｃａｇｃｃｔａｔｃｇｃｔｃｃ（配列番号１２）
ａｔｔｇａａｇｔｔａｔｇｔａｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｔａｃｃｔａｇａｃａａｔｇａｇａａｇａｇｃａａｔｇｇａａｃｃａｔｔａｔｃｃａｔｇｔｇａａａｇｇｇａａａｃａｃｃｔｔｔｇｔｃｃａａｇｔｃｃｃｃｔａｔｔｔｃｃｃｇｇａｃｃｔｔｃｔａａｇｃｃｃｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇｔｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｇｃｔａｔａｇｃｔｔｇｃｔａｇｔａａｃａｇｔｇｇｃｃｔｔｔａｔｔａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｔｇａｇｇａｇｔａａｇａｇｇａｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｃａｃａｇｔｇａｃｔａｃａｔｇａａｃａｔｇａｃｔｃｃｃｃｇｃｃｇｃｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｃｃｃｇｃａａｇｃａｔｔａｃｃａｇｃｃｃｔａｔｇｃｃｃｃａｃｃａｃｇｃｇａｃｔｔｃｇｃａｇｃｃｔａｔｃｇｃｔｃｃ（配列番号１２）
【0106】
ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ８ポリペプチドを含む。ＣＤ８ポリペプチドは、下記に提示される配列番号１３（本明細書における相同性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡなどの標準的ソフトウェアを使用して決定されうる）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも２０アミノ酸、または少なくとも３０アミノ酸、または少なくとも４０アミノ酸、または少なくとも５０アミノ酸の長さであり、かつ、２３５アミノ酸以下の長さである、配列番号１３の連続部分であるアミノ酸配列を有しうる。代替的に、または加えて、多様な実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸１～２３５、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、または２００～２３５のアミノ酸配列を有する。
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＳＱＦＲＶＳＰＬＤＲＴＷＮＬＧＥＴＶＥＬＫＣＱＶＬＬＳＮＰＴＳＧＣＳＷＬＦＱＰＲＧＡＡＡＳＰＴＦＬＬＹＬＳＱＮＫＰＫＡＡＥＧＬＤＴＱＲＦＳＧＫＲＬＧＤＴＦＶＬＴＬＳＤＦＲＲＥＮＥＧＹＹＦＣＳＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶＫＳＧＤＫＰＳＬＳＡＲＹＶ（配列番号１３）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＳＱＦＲＶＳＰＬＤＲＴＷＮＬＧＥＴＶＥＬＫＣＱＶＬＬＳＮＰＴＳＧＣＳＷＬＦＱＰＲＧＡＡＡＳＰＴＦＬＬＹＬＳＱＮＫＰＫＡＡＥＧＬＤＴＱＲＦＳＧＫＲＬＧＤＴＦＶＬＴＬＳＤＦＲＲＥＮＥＧＹＹＦＣＳＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶＫＳＧＤＫＰＳＬＳＡＲＹＶ（配列番号１３）
【0107】
ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、下記：
ＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮ（配列番号１４）
に提示される配列番号１４に明示された配列を有するアミノ酸を含むＣＤ８ポリペプチドを含む。
本明細書で開示される主題に従い、「ＣＤ８核酸分子」とは、ＣＤ８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲの膜貫通ドメイン（配列番号１４）内に含まれるＣＤ８ポリペプチドをコードするＣＤ８核酸分子は、下記に提示される配列番号１５に明示された配列を有する核酸を含む。
ＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮ（配列番号１４）
に提示される配列番号１４に明示された配列を有するアミノ酸を含むＣＤ８ポリペプチドを含む。
本明細書で開示される主題に従い、「ＣＤ８核酸分子」とは、ＣＤ８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲの膜貫通ドメイン（配列番号１４）内に含まれるＣＤ８ポリペプチドをコードするＣＤ８核酸分子は、下記に提示される配列番号１５に明示された配列を有する核酸を含む。
【0108】
ＣＣＣＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＧＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＣＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＡＣ（配列番号１５）
【0109】
ある特定の非限定的実施形態では、ＣＡＲはまた、細胞外抗原結合性ドメインを膜貫通ドメインに連結するスペーサー領域も含みうる。スペーサー領域は、ＣＡＲの活性化活性を保存しながら、抗原認識を容易とするように、抗原結合性ドメインが異なる方向を向くことを可能とするのに十分に可撓性でありうる。ある特定の非限定的実施形態では、スペーサー領域は、ＩｇＧ１（ＩｇＧｌ）に由来するヒンジ領域、免疫グロブリンのＣＨ2ＣＨ3領域、およびＣＤ３ポリペプチドの部分、ＣＤ２８ポリペプチドの部分（例えば、配列番号１１）、ＣＤ８ポリペプチドの部分（例えば、配列番号１３）、これらと、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％相同である、前出のうちのいずれかの変異体、または合成スペーサー配列でありうる。ある特定の非限定的実施形態では、スペーサー領域は、約１～５０（例えば、５～２５、１０～３０、または３０～５０）アミノ酸の間の長さを有しうる。
【0110】
ＣＡＲの細胞内ドメイン：ある特定の非限定的実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、細胞（例えば、リンパ系列の細胞、例えば、Ｔ細胞）を活性化させるか、またはこれを刺激しうる、ＣＤ３ζポリペプチドを含みうる。ＣＤ３ζは３つのＩＴＡＭを含み、抗原が結合した後、活性化シグナルを、細胞（例えば、リンパ系列の細胞、例えば、Ｔ細胞）へ伝達する。ＣＤ３ζポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿９３２１７０（配列番号１６）を有する配列またはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、少なくとも２０アミノ酸、または少なくとも３０アミノ酸、または少なくとも４０アミノ酸、または少なくとも５０アミノ酸の長さであり、かつ、１６４アミノ酸以下の長さである、配列番号１７の連続部分であるアミノ酸配列を有しうる。代替的に、または加えて、多様な実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号１７のアミノ酸１～１６４、１～５０、５０～１００、１００～１５０、または１５０～１６４のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは配列番号１７の、アミノ酸５２～１６４のアミノ酸配列を有する。
【0111】
配列番号１７は、下記：
ＭＫＷＫＡＬＦＴＡＡＩＬＱＡＱＬＰＩＴＥＡＱＳＦＧＬＬＤＰＫＬＣＹＬＬＤＧＩＬＦＩＹＧＶＩＬＴＡＬＦＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１７）
に提示される。
ＭＫＷＫＡＬＦＴＡＡＩＬＱＡＱＬＰＩＴＥＡＱＳＦＧＬＬＤＰＫＬＣＹＬＬＤＧＩＬＦＩＹＧＶＩＬＴＡＬＦＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１７）
に提示される。
【0112】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、下記：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＥＰＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１８）
に提示される、配列番号１８に明示されたアミノ酸配列を有する。
ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、下記：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１９）
に提示される、配列番号１９に明示されたアミノ酸配列を有する。
ＲＶＫＦＳＲＳＡＥＰＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１８）
に提示される、配列番号１８に明示されたアミノ酸配列を有する。
ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、下記：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１９）
に提示される、配列番号１９に明示されたアミノ酸配列を有する。
【0113】
本明細書で開示される主題に従い、「ＣＤ３ζ核酸分子」とは、ＣＤ３ζポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲの細胞内ドメイン内に含まれるＣＤ３ζポリペプチド（配列番号１８）をコードする、ＣＤ３ζ核酸分子は、下記に提示される配列番号２０に明示されたヌクレオチド配列を含む。
ａｇａｇｔｇａａｇｔｔｃａｇｃａｇｇａｇｃｇｃａｇａｇｃｃｃｃｃｃｇｃｇｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａｇｃｔｃｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａａｔｃｔａｇｇａｃｇａａｇａｇａｇｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｔｔｇｇａｃａａｇａｇａｃｇｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｇａｇａａｇｇａａｇａａｃｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔａｃａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａａｇａｔａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｃｔａｃａｇｔｇａｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｇａｇｇｇｇｃａａｇｇｇｇｃａｃｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃｇ（配列番号２０）
ａｇａｇｔｇａａｇｔｔｃａｇｃａｇｇａｇｃｇｃａｇａｇｃｃｃｃｃｃｇｃｇｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａｇｃｔｃｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａａｔｃｔａｇｇａｃｇａａｇａｇａｇｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｔｔｇｇａｃａａｇａｇａｃｇｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｇａｇａａｇｇａａｇａａｃｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔａｃａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａａｇａｔａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｃｔａｃａｇｔｇａｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｇａｇｇｇｇｃａａｇｇｇｇｃａｃｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃｇ（配列番号２０）
【0114】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲの細胞内ドメイン内に含まれる、ＣＤ３ζポリペプチド（配列番号１９）をコードする、ＣＤ３ζ核酸分子は下記に提示される配列番号２１に明示されたヌクレオチド配列を含む。
ＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＡ（配列番号２１）
ＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＡ（配列番号２１）
【0115】
ある特定の非限定的実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは少なくとも１つのシグナル伝達領域をさらに含む。少なくとも１つのシグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、ＰＤ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＬＡＧ－３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド（免疫応答と関連するタンパク質に基づかない）、またはこれらの組合せを含みうる。
ある特定の実施形態では、シグナル伝達領域は共刺激シグナル伝達領域である。
ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、最適のリンパ球活性化をもたらしうる、少なくとも１つの共刺激分子を含む。本明細書で使用される、「共刺激分子」とは、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に要求される、抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子を指す。少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、またはこれらの組合せを含みうる。共刺激分子は、細胞表面上に発現されるタンパク質であって、その受容体に結合すると、共刺激応答、すなわち、抗原が、そのＣＡＲ分子に結合することを条件として、刺激をもたらす細胞内応答をもたらすタンパク質である、共刺激リガンドに結合しうる。共刺激リガンドは、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、およびＰＤ－ Ｌ１（ＰＤ－Ｌｌ）を含むがこれらに限定されない。一例として述べると、４－１ＢＢのリガンド（すなわち、４－１ＢＢＬ）は、ＣＡＲ+Ｔ細胞のエフェクター細胞機能を誘導する、ＣＡＲシグナルと組み合わされた、細胞内シグナルをもたらすための、４－１ＢＢ（また、「ＣＤ１３７」としても公知である）に結合しうる。４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、またはＤＡＰ－１０を含む、共刺激シグナル伝達領域を含む、細胞内ドメインを含むＣＡＲについては、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４４６，１９０号において開示されている。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、２種の共刺激分子：ＣＤ２８および４－１ＢＢまたはＣＤ２８およびＯＸ４０を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。
ある特定の実施形態では、シグナル伝達領域は共刺激シグナル伝達領域である。
ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、最適のリンパ球活性化をもたらしうる、少なくとも１つの共刺激分子を含む。本明細書で使用される、「共刺激分子」とは、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に要求される、抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子を指す。少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、またはこれらの組合せを含みうる。共刺激分子は、細胞表面上に発現されるタンパク質であって、その受容体に結合すると、共刺激応答、すなわち、抗原が、そのＣＡＲ分子に結合することを条件として、刺激をもたらす細胞内応答をもたらすタンパク質である、共刺激リガンドに結合しうる。共刺激リガンドは、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、およびＰＤ－ Ｌ１（ＰＤ－Ｌｌ）を含むがこれらに限定されない。一例として述べると、４－１ＢＢのリガンド（すなわち、４－１ＢＢＬ）は、ＣＡＲ+Ｔ細胞のエフェクター細胞機能を誘導する、ＣＡＲシグナルと組み合わされた、細胞内シグナルをもたらすための、４－１ＢＢ（また、「ＣＤ１３７」としても公知である）に結合しうる。４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、またはＤＡＰ－１０を含む、共刺激シグナル伝達領域を含む、細胞内ドメインを含むＣＡＲについては、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４４６，１９０号において開示されている。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、２種の共刺激分子：ＣＤ２８および４－１ＢＢまたはＣＤ２８およびＯＸ４０を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。
【0116】
４－１ＢＢポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：Ｐ４１２７３若しくはＮＰ＿００１５５２（配列番号２２）を有する配列若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
【0117】
配列番号２２は、下記：
ＭＧＮＳＣＹＮＩＶＡＴＬＬＬＶＬＮＦＥＲＴＲＳＬＱＤＰＣＳＮＣＰＡＧＴＦＣＤＮＮＲＮＱＩＣＳＰＣＰＰＮＳＦＳＳＡＧＧＱＲＴＣＤＩＣＲＱＣＫＧＶＦＲＴＲＫＥＣＳＳＴＳＮＡＥＣＤＣＴＰＧＦＨＣＬＧＡＧＣＳＭＣＥＱＤＣＫＱＧＱＥＬＴＫＫＧＣＫＤＣＣＦＧＴＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳＬＤＧＫＳＶＬＶＮＧＴＫＥＲＤＶＶＣＧＰＳＰＡＤＬＳＰＧＡＳＳＶＴＰＰＡＰＡＲＥＰＧＨＳＰＱＩＩＳＦＦＬＡＬＴＳＴＡＬＬＦＬＬＦＦＬＴＬＲＦＳＶＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ（配列番号２２）
に提示される。
ＭＧＮＳＣＹＮＩＶＡＴＬＬＬＶＬＮＦＥＲＴＲＳＬＱＤＰＣＳＮＣＰＡＧＴＦＣＤＮＮＲＮＱＩＣＳＰＣＰＰＮＳＦＳＳＡＧＧＱＲＴＣＤＩＣＲＱＣＫＧＶＦＲＴＲＫＥＣＳＳＴＳＮＡＥＣＤＣＴＰＧＦＨＣＬＧＡＧＣＳＭＣＥＱＤＣＫＱＧＱＥＬＴＫＫＧＣＫＤＣＣＦＧＴＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳＬＤＧＫＳＶＬＶＮＧＴＫＥＲＤＶＶＣＧＰＳＰＡＤＬＳＰＧＡＳＳＶＴＰＰＡＰＡＲＥＰＧＨＳＰＱＩＩＳＦＦＬＡＬＴＳＴＡＬＬＦＬＬＦＦＬＴＬＲＦＳＶＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ（配列番号２２）
に提示される。
【0118】
ある特定の実施形態では、共刺激ドメインである４－１ＢＢは、下記：ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ（配列番号２３）に提示される配列番号２３に明示されたアミノ酸配列を有する。
本明細書で開示される主題に従い、「４－１ＢＢ核酸分子」とは、４－１ＢＢポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲの細胞内ドメイン内に含まれる４－１ＢＢポリペプチド（配列番号２３）をコードする４－１ＢＢ核酸分子は、下記に提示される配列番号２４に明示されたヌクレオチド配列を含む。
ＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＧＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧ（配列番号２４）
本明細書で開示される主題に従い、「４－１ＢＢ核酸分子」とは、４－１ＢＢポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲの細胞内ドメイン内に含まれる４－１ＢＢポリペプチド（配列番号２３）をコードする４－１ＢＢ核酸分子は、下記に提示される配列番号２４に明示されたヌクレオチド配列を含む。
ＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＧＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧ（配列番号２４）
【0119】
ＯＸ４０ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：Ｐ４３４８９若しくはＮＰ００３３１８（配列番号２５）を有する配列若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
【0120】
配列番号２５は、下記：
ＭＣＶＧＡＲＲＬＧＲＧＰＣＡＡＬＬＬＬＧＬＧＬＳＴＶＴＧＬＨＣＶＧＤＴＹＰＳＮＤＲＣＣＨＥＣＲＰＧＮＧＭＶＳＲＣＳＲＳＱＮＴＶＣＲＰＣＧＰＧＦＹＮＤＶＶＳＳＫＰＣＫＰＣＴＷＣＮＬＲＳＧＳＥＲＫＱＬＣＴＡＴＱＤＴＶＣＲＣＲＡＧＴＱＰＬＤＳＹＫＰＧＶＤＣＡＰＣＰＰＧＨＦＳＰＧＤＮＱＡＣＫＰＷＴＮＣＴＬＡＧＫＨＴＬＱＰＡＳＮＳＳＤＡＩＣＥＤＲＤＰＰＡＴＱＰＱＥＴＱＧＰＰＡＲＰＩＴＶＱＰＴＥＡＷＰＲＴＳＱＧＰＳＴＲＰＶＥＶＰＧＧＲＡＶＡＡＩＬＧＬＧＬＶＬＧＬＬＧＰＬＡＩＬＬＡＬＹＬＬＲＲＤＱＲＬＰＰＤＡＨＫＰＰＧＧＧＳＦＲＴＰＩＱＥＥＱＡＤＡＨＳＴＬＡＫＩ（配列番号２５）
に提示される。
本明細書で開示される主題に従い、「ＯＸ４０核酸分子」とは、ＯＸ４０ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
ＩＣＯＳポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０３６２２４（配列番号２６）を有する配列若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
ＭＣＶＧＡＲＲＬＧＲＧＰＣＡＡＬＬＬＬＧＬＧＬＳＴＶＴＧＬＨＣＶＧＤＴＹＰＳＮＤＲＣＣＨＥＣＲＰＧＮＧＭＶＳＲＣＳＲＳＱＮＴＶＣＲＰＣＧＰＧＦＹＮＤＶＶＳＳＫＰＣＫＰＣＴＷＣＮＬＲＳＧＳＥＲＫＱＬＣＴＡＴＱＤＴＶＣＲＣＲＡＧＴＱＰＬＤＳＹＫＰＧＶＤＣＡＰＣＰＰＧＨＦＳＰＧＤＮＱＡＣＫＰＷＴＮＣＴＬＡＧＫＨＴＬＱＰＡＳＮＳＳＤＡＩＣＥＤＲＤＰＰＡＴＱＰＱＥＴＱＧＰＰＡＲＰＩＴＶＱＰＴＥＡＷＰＲＴＳＱＧＰＳＴＲＰＶＥＶＰＧＧＲＡＶＡＡＩＬＧＬＧＬＶＬＧＬＬＧＰＬＡＩＬＬＡＬＹＬＬＲＲＤＱＲＬＰＰＤＡＨＫＰＰＧＧＧＳＦＲＴＰＩＱＥＥＱＡＤＡＨＳＴＬＡＫＩ（配列番号２５）
に提示される。
本明細書で開示される主題に従い、「ＯＸ４０核酸分子」とは、ＯＸ４０ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
ＩＣＯＳポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０３６２２４（配列番号２６）を有する配列若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
【0121】
配列番号２６は、下記：
ＭＫＳＧＬＷＹＦＦＬＦＣＬＲＩＫＶＬＴＧＥＩＮＧＳＡＮＹＥＭＦＩＦＨＮＧＧＶＱＩＬＣＫＹＰＤＩＶＱＱＦＫＭＱＬＬＫＧＧＱＩＬＣＤＬＴＫＴＫＧＳＧＮＴＶＳＩＫＳＬＫＦＣＨＳＱＬＳＮＮＳＶＳＦＦＬＹＮＬＤＨＳＨＡＮＹＹＦＣＮＬＳＩＦＤＰＰＰＦＫＶＴＬＴＧＧＹＬＨＩＹＥＳＱＬＣＣＱＬＫＦＷＬＰＩＧＣ
に提示される。
本明細書で開示される主題に従い、「ＩＣＯＳ核酸分子」とは、ＩＣＯＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
本明細書で開示される主題に従い、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ参照番号：Ｐ１６４１０．３（配列番号２７）（本明細書における相同性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡなどの標準的ソフトウェアを使用して決定されうる）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
ＭＫＳＧＬＷＹＦＦＬＦＣＬＲＩＫＶＬＴＧＥＩＮＧＳＡＮＹＥＭＦＩＦＨＮＧＧＶＱＩＬＣＫＹＰＤＩＶＱＱＦＫＭＱＬＬＫＧＧＱＩＬＣＤＬＴＫＴＫＧＳＧＮＴＶＳＩＫＳＬＫＦＣＨＳＱＬＳＮＮＳＶＳＦＦＬＹＮＬＤＨＳＨＡＮＹＹＦＣＮＬＳＩＦＤＰＰＰＦＫＶＴＬＴＧＧＹＬＨＩＹＥＳＱＬＣＣＱＬＫＦＷＬＰＩＧＣ
に提示される。
本明細書で開示される主題に従い、「ＩＣＯＳ核酸分子」とは、ＩＣＯＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
本明細書で開示される主題に従い、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ参照番号：Ｐ１６４１０．３（配列番号２７）（本明細書における相同性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡなどの標準的ソフトウェアを使用して決定されうる）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
【0122】
配列番号２７は、下記：
ＭＡＣＬＧＦＱＲＨＫＡＱＬＮＬＡＴＲＴＷＰＣＴＬＬＦＦＬＬＦＩＰＶＦＣＫＡＭＨＶＡＱＰＡＶＶＬＡＳＳＲＧＩＡＳＦＶＣＥＹＡＳＰＧＫＡＴＥＶＲＶＴＶＬＲＱＡＤＳＱＶＴＥＶＣＡＡＴＹＭＭＧＮＥＬＴＦＬＤＤＳＩＣＴＧＴＳＳＧＮＱＶＮＬＴＩＱＧＬＲＡＭＤＴＧＬＹＩＣＫＶＥＬＭＹＰＰＰＹＹＬＧＩＧＮＧＴＱＩＹＶＩＤＰＥＰＣＰＤＳＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴＡＶＳＬＳＫＭＬＫＫＲＳＰＬＴＴＧＶＹＶＫＭＰＰＴＥＰＥＣＥＫＱＦＱＰＹＦＩＰＩＮ（配列番号２７）
に提示される。
本明細書で開示される主題に従い、「ＣＴＬＡ－４核酸分子」とは、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
本明細書で開示される主題に従い、ＰＤ－１ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００５００９．２（配列番号２８）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
ＭＡＣＬＧＦＱＲＨＫＡＱＬＮＬＡＴＲＴＷＰＣＴＬＬＦＦＬＬＦＩＰＶＦＣＫＡＭＨＶＡＱＰＡＶＶＬＡＳＳＲＧＩＡＳＦＶＣＥＹＡＳＰＧＫＡＴＥＶＲＶＴＶＬＲＱＡＤＳＱＶＴＥＶＣＡＡＴＹＭＭＧＮＥＬＴＦＬＤＤＳＩＣＴＧＴＳＳＧＮＱＶＮＬＴＩＱＧＬＲＡＭＤＴＧＬＹＩＣＫＶＥＬＭＹＰＰＰＹＹＬＧＩＧＮＧＴＱＩＹＶＩＤＰＥＰＣＰＤＳＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴＡＶＳＬＳＫＭＬＫＫＲＳＰＬＴＴＧＶＹＶＫＭＰＰＴＥＰＥＣＥＫＱＦＱＰＹＦＩＰＩＮ（配列番号２７）
に提示される。
本明細書で開示される主題に従い、「ＣＴＬＡ－４核酸分子」とは、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
本明細書で開示される主題に従い、ＰＤ－１ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００５００９．２（配列番号２８）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
【0123】
配列番号２８は、下記：
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号２８）
に提示される。
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号２８）
に提示される。
【0124】
本明細書で開示される主題に従い、「ＰＤ－１核酸分子」とは、ＰＤ－１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
本明細書で開示される主題に従い、ＬＡＧ－３ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ参照番号：Ｐ１８６２７．５（配列番号２９）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
本明細書で開示される主題に従い、ＬＡＧ－３ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ参照番号：Ｐ１８６２７．５（配列番号２９）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
【0125】
配列番号２９は、下記：
ＭＷＥＡＱＦＬＧＬＬＦＬＱＰＬＷＶＡＰＶＫＰＬＱＰＧＡＥＶＰＶＶＷＡＱＥＧＡＰＡＱＬＰＣＳＰＴＩＰＬＱＤＬＳＬＬＲＲＡＧＶＴＷＱＨＱＰＤＳＧＰＰＡＡＡＰＧＨＰＬＡＰＧＰＨＰＡＡＰＳＳＷＧＰＲＰＲＲＹＴＶＬＳＶＧＰＧＧＬＲＳＧＲＬＰＬＱＰＲＶＱＬＤＥＲＧＲＱＲＧＤＦＳＬＷＬＲＰＡＲＲＡＤＡＧＥＹＲＡＡＶＨＬＲＤＲＡＬＳＣＲＬＲＬＲＬＧＱＡＳＭＴＡＳＰＰＧＳＬＲＡＳＤＷＶＩＬＮＣＳＦＳＲＰＤＲＰＡＳＶＨＷＦＲＮＲＧＱＧＲＶＰＶＲＥＳＰＨＨＨＬＡＥＳＦＬＦＬＰＱＶＳＰＭＤＳＧＰＷＧＣＩＬＴＹＲＤＧＦＮＶＳＩＭＹＮＬＴＶＬＧＬＥＰＰＴＰＬＴＶＹＡＧＡＧＳＲＶＧＬＰＣＲＬＰＡＧＶＧＴＲＳＦＬＴＡＫＷＴＰＰＧＧＧＰＤＬＬＶＴＧＤＮＧＤＦＴＬＲＬＥＤＶＳＱＡＱＡＧＴＹＴＣＨＩＨＬＱＥＱＱＬＮＡＴＶＴＬＡＩＩＴＶＴＰＫＳＦＧＳＰＧＳＬＧＫＬＬＣＥＶＴＰＶＳＧＱＥＲＦＶＷＳＳＬＤＴＰＳＱＲＳＦＳＧＰＷＬＥＡＱＥＡＱＬＬＳＱＰＷＱＣＱＬＹＱＧＥＲＬＬＧＡＡＶＹＦＴＥＬＳＳＰＧＡＱＲＳＧＲＡＰＧＡＬＰＡＧＨＬＬＬＦＬＩＬＧＶＬＳＬＬＬＬＶＴＧＡＦＧＦＨＬＷＲＲＱＷＲＰＲＲＦＳＡＬＥＱＧＩＨＰＰＱＡＱＳＫＩＥＥＬＥＱＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＱＬ（配列番号２９）
に提示される。
ＭＷＥＡＱＦＬＧＬＬＦＬＱＰＬＷＶＡＰＶＫＰＬＱＰＧＡＥＶＰＶＶＷＡＱＥＧＡＰＡＱＬＰＣＳＰＴＩＰＬＱＤＬＳＬＬＲＲＡＧＶＴＷＱＨＱＰＤＳＧＰＰＡＡＡＰＧＨＰＬＡＰＧＰＨＰＡＡＰＳＳＷＧＰＲＰＲＲＹＴＶＬＳＶＧＰＧＧＬＲＳＧＲＬＰＬＱＰＲＶＱＬＤＥＲＧＲＱＲＧＤＦＳＬＷＬＲＰＡＲＲＡＤＡＧＥＹＲＡＡＶＨＬＲＤＲＡＬＳＣＲＬＲＬＲＬＧＱＡＳＭＴＡＳＰＰＧＳＬＲＡＳＤＷＶＩＬＮＣＳＦＳＲＰＤＲＰＡＳＶＨＷＦＲＮＲＧＱＧＲＶＰＶＲＥＳＰＨＨＨＬＡＥＳＦＬＦＬＰＱＶＳＰＭＤＳＧＰＷＧＣＩＬＴＹＲＤＧＦＮＶＳＩＭＹＮＬＴＶＬＧＬＥＰＰＴＰＬＴＶＹＡＧＡＧＳＲＶＧＬＰＣＲＬＰＡＧＶＧＴＲＳＦＬＴＡＫＷＴＰＰＧＧＧＰＤＬＬＶＴＧＤＮＧＤＦＴＬＲＬＥＤＶＳＱＡＱＡＧＴＹＴＣＨＩＨＬＱＥＱＱＬＮＡＴＶＴＬＡＩＩＴＶＴＰＫＳＦＧＳＰＧＳＬＧＫＬＬＣＥＶＴＰＶＳＧＱＥＲＦＶＷＳＳＬＤＴＰＳＱＲＳＦＳＧＰＷＬＥＡＱＥＡＱＬＬＳＱＰＷＱＣＱＬＹＱＧＥＲＬＬＧＡＡＶＹＦＴＥＬＳＳＰＧＡＱＲＳＧＲＡＰＧＡＬＰＡＧＨＬＬＬＦＬＩＬＧＶＬＳＬＬＬＬＶＴＧＡＦＧＦＨＬＷＲＲＱＷＲＰＲＲＦＳＡＬＥＱＧＩＨＰＰＱＡＱＳＫＩＥＥＬＥＱＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＱＬ（配列番号２９）
に提示される。
【0126】
本明細書で開示される主題に従い、「ＬＡＧ－３核酸分子」とは、ＬＡＧ－３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
本明細書で開示される主題に従い、２Ｂ４ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ参照番号：Ｑ９ＢＺＷ８．２（配列番号３０）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
配列番号３０は、下記：
ＭＬＧＱＶＶＴＬＩＬＬＬＬＬＫＶＹＱＧＫＧＣＱＧＳＡＤＨＶＶＳＩＳＧＶＰＬＱＬＱＰＮＳＩＱＴＫＶＤＳＩＡＷＫＫＬＬＰＳＱＮＧＦＨＨＩＬＫＷＥＮＧＳＬＰＳＮＴＳＮＤＲＦＳＦＩＶＫＮＬＳＬＬＩＫＡＡＱＱＱＤＳＧＬＹＣＬＥＶＴＳＩＳＧＫＶＱＴＡＴＦＱＶＦＶＦＥＳＬＬＰＤＫＶＥＫＰＲＬＱＧＱＧＫＩＬＤＲＧＲＣＱＶＡＬＳＣＬＶＳＲＤＧＮＶＳＹＡＷＹＲＧＳＫＬＩＱＴＡＧＮＬＴＹＬＤＥＥＶＤＩＮＧＴＨＴＹＴＣＮＶＳＮＰＶＳＷＥＳＨＴＬＮＬＴＱＤＣＱＮＡＨＱＥＦＲＦＷＰＦＬＶＩＩＶＩＬＳＡＬＦＬＧＴＬＡＣＦＣＶＷＲＲＫＲＫＥＫＱＳＥＴＳＰＫＥＦＬＴＩＹＥＤＶＫＤＬＫＴＲＲＮＨＥＱＥＱＴＦＰＧＧＧＳＴＩＹＳＭＩＱＳＱＳＳＡＰＴＳＱＥＰＡＹＴＬＹＳＬＩＱＰＳＲＫＳＧＳＲＫＲＮＨＳＰＳＦＮＳＴＩＹＥＶＩＧＫＳＱＰＫＡＱＮＰＡＲＬＳＲＫＥＬＥＮＦＤＶＹＳ（配列番号３０）
に提示される。
本明細書で開示される主題に従い、２Ｂ４ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ参照番号：Ｑ９ＢＺＷ８．２（配列番号３０）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
配列番号３０は、下記：
ＭＬＧＱＶＶＴＬＩＬＬＬＬＬＫＶＹＱＧＫＧＣＱＧＳＡＤＨＶＶＳＩＳＧＶＰＬＱＬＱＰＮＳＩＱＴＫＶＤＳＩＡＷＫＫＬＬＰＳＱＮＧＦＨＨＩＬＫＷＥＮＧＳＬＰＳＮＴＳＮＤＲＦＳＦＩＶＫＮＬＳＬＬＩＫＡＡＱＱＱＤＳＧＬＹＣＬＥＶＴＳＩＳＧＫＶＱＴＡＴＦＱＶＦＶＦＥＳＬＬＰＤＫＶＥＫＰＲＬＱＧＱＧＫＩＬＤＲＧＲＣＱＶＡＬＳＣＬＶＳＲＤＧＮＶＳＹＡＷＹＲＧＳＫＬＩＱＴＡＧＮＬＴＹＬＤＥＥＶＤＩＮＧＴＨＴＹＴＣＮＶＳＮＰＶＳＷＥＳＨＴＬＮＬＴＱＤＣＱＮＡＨＱＥＦＲＦＷＰＦＬＶＩＩＶＩＬＳＡＬＦＬＧＴＬＡＣＦＣＶＷＲＲＫＲＫＥＫＱＳＥＴＳＰＫＥＦＬＴＩＹＥＤＶＫＤＬＫＴＲＲＮＨＥＱＥＱＴＦＰＧＧＧＳＴＩＹＳＭＩＱＳＱＳＳＡＰＴＳＱＥＰＡＹＴＬＹＳＬＩＱＰＳＲＫＳＧＳＲＫＲＮＨＳＰＳＦＮＳＴＩＹＥＶＩＧＫＳＱＰＫＡＱＮＰＡＲＬＳＲＫＥＬＥＮＦＤＶＹＳ（配列番号３０）
に提示される。
【0127】
本明細書で開示される主題に従い、「２Ｂ４核酸分子」とは、２Ｂ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
本明細書で開示される主題に従い、ＢＴＬＡポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ参照番号：Ｑ７Ｚ６Ａ９．３（配列番号３１）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％＞、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
本明細書で開示される主題に従い、ＢＴＬＡポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ参照番号：Ｑ７Ｚ６Ａ９．３（配列番号３１）若しくはこの断片と、少なくとも約８５％＞、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるアミノ酸配列を有する場合もあり、および／または１カ所以下または２カ所以下、若しくは３カ所以下の保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
【0128】
配列番号３１は、下記：
ＭＫＴＬＰＡＭＬＧＴＧＫＬＦＷＶＦＦＬＩＰＹＬＤＩＷＮＩＨＧＫＥＳＣＤＶＱＬＹＩＫＲＱＳＥＨＳＩＬＡＧＤＰＦＥＬＥＣＰＶＫＹＣＡＮＲＰＨＶＴＷＣＫＬＮＧＴＴＣＶＫＬＥＤＲＱＴＳＷＫＥＥＫＮＩＳＦＦＩＬＨＦＥＰＶＬＰＮＤＮＧＳＹＲＣＳＡＮＦＱＳＮＬＩＥＳＨＳＴＴＬＹＶＴＤＶＫＳＡＳＥＲＰＳＫＤＥＭＡＳＲＰＷＬＬＹＲＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬＲＲＨＱＧＫＱＮＥＬＳＤＴＡＧＲＥＩＮＬＶＤＡＨＬＫＳＥＱＴＥＡＳＴＲＱＮＳＱＶＬＬＳＥＴＧＩＹＤＮＤＰＤＬＣＦＲＭＱＥＧＳＥＶＹＳＮＰＣＬＥＥＮＫＰＧＩＶＹＡＳＬＮＨＳＶＩＧＰＮＳＲＬＡＲＮＶＫＥＡＰＴＥＹＡＳＩＣＶＲＳ（配列番号３１）
に提示される。
本明細書で開示される主題に従い、「ＢＴＬＡ核酸分子」とは、ＢＴＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
ＭＫＴＬＰＡＭＬＧＴＧＫＬＦＷＶＦＦＬＩＰＹＬＤＩＷＮＩＨＧＫＥＳＣＤＶＱＬＹＩＫＲＱＳＥＨＳＩＬＡＧＤＰＦＥＬＥＣＰＶＫＹＣＡＮＲＰＨＶＴＷＣＫＬＮＧＴＴＣＶＫＬＥＤＲＱＴＳＷＫＥＥＫＮＩＳＦＦＩＬＨＦＥＰＶＬＰＮＤＮＧＳＹＲＣＳＡＮＦＱＳＮＬＩＥＳＨＳＴＴＬＹＶＴＤＶＫＳＡＳＥＲＰＳＫＤＥＭＡＳＲＰＷＬＬＹＲＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬＲＲＨＱＧＫＱＮＥＬＳＤＴＡＧＲＥＩＮＬＶＤＡＨＬＫＳＥＱＴＥＡＳＴＲＱＮＳＱＶＬＬＳＥＴＧＩＹＤＮＤＰＤＬＣＦＲＭＱＥＧＳＥＶＹＳＮＰＣＬＥＥＮＫＰＧＩＶＹＡＳＬＮＨＳＶＩＧＰＮＳＲＬＡＲＮＶＫＥＡＰＴＥＹＡＳＩＣＶＲＳ（配列番号３１）
に提示される。
本明細書で開示される主題に従い、「ＢＴＬＡ核酸分子」とは、ＢＴＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
【0129】
例示的なＣＡＲ／Ｃ８２５抗原結合性断片構築物
ある特定の実施形態では、ＣＡＲと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とは、Ｐ２Ａリンカーなどの自己切断型リンカーにより連結された単一ポリペプチドとして発現される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とは、２つの個別ポリペプチドとして発現される。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ヒト腫瘍抗原に特異的に結合するヒトｓｃＦｖを含む細胞外抗原結合性領域、ＣＤ２８ポリペプチドおよび／またはＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、並びにＣＤ３ζポリペプチド並びに４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメインを含む。ＣＡＲはまた、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に共有結合的に結合されたシグナルペプチドまたはリーダーペプチドも含む。シグナルペプチドは、配列番号７または配列番号９に明示された配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、ヒトｓｃＦｖは、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、抗メソテリンｓｃＦｖ、抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ、抗ＰＳＣＡ ｓｃＦｖ、抗ＷＴ１ ｓｃＦｖ、および抗ＰＲＡＭＥ ｓｃＦｖからなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とは、Ｐ２Ａリンカーなどの自己切断型リンカーにより連結された単一ポリペプチドとして発現される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とは、２つの個別ポリペプチドとして発現される。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ヒト腫瘍抗原に特異的に結合するヒトｓｃＦｖを含む細胞外抗原結合性領域、ＣＤ２８ポリペプチドおよび／またはＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、並びにＣＤ３ζポリペプチド並びに４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメインを含む。ＣＡＲはまた、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に共有結合的に結合されたシグナルペプチドまたはリーダーペプチドも含む。シグナルペプチドは、配列番号７または配列番号９に明示された配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、ヒトｓｃＦｖは、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、抗メソテリンｓｃＦｖ、抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ、抗ＰＳＣＡ ｓｃＦｖ、抗ＷＴ１ ｓｃＦｖ、および抗ＰＲＡＭＥ ｓｃＦｖからなる群から選択される。
【0130】
一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸、および抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸は誘導可能なプロモーターに作動可能に連結される。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸、および抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸は、構成的プロモーターに作動可能に連結される。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸、および抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸は、２つの個別のプロモーターに作動可能に連結される。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸は、構成的プロモーターに作動可能に連結され、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片は構成的プロモーターに作動可能に連結される。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸は構成的プロモーターに作動可能に連結され、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片は誘導可能なプロモーターに作動可能に連結される。
一部の実施形態では、誘導可能なプロモーターは、ＣＡＲ Ｔ細胞内で活性化可能な合成Ｎｏｔｃｈプロモーターであり、この場合、ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＡＲと腫瘍抗原との会合が膜内タンパク質分解を誘導すると膜から放出される転写調節因子を含有する（例えば、Morsut et al., Cell 164(4): 780-791 (2016)を参照されたい）。したがって、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の転写は、操作された免疫細胞と腫瘍抗原との結合時に誘導される。
一部の実施形態では、誘導可能なプロモーターは、ＣＡＲ Ｔ細胞内で活性化可能な合成Ｎｏｔｃｈプロモーターであり、この場合、ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＡＲと腫瘍抗原との会合が膜内タンパク質分解を誘導すると膜から放出される転写調節因子を含有する（例えば、Morsut et al., Cell 164(4): 780-791 (2016)を参照されたい）。したがって、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の転写は、操作された免疫細胞と腫瘍抗原との結合時に誘導される。
【0131】
本明細書で開示される主題はまた、本明細書で記載されるＣＡＲ／抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片構築物、またはこれらの機能的部分をコードする単離核酸分子ももたらす。ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、ヒトＣＤ１９ポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、および、ＣＤ３ζポリペプチド、および４－１ＢＢポリペプチを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメイン、を含む抗ＣＤ１９ターゲティングＣＡＲ、Ｐ２Ａ自己切断型ペプチド、並びに、明細書で提示される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、合成Ｎｏｔｃｈ膜貫通ドメインに融合したヒトＣＤ１９ポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、および、細胞内切断性転写因子を含む抗ＣＤ１９ターゲティングＣＡＲをコードする。ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、合成Ｎｏｔｃｈ系の転写因子の放出により誘導可能である、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、合成Ｎｏｔｃｈ膜貫通ドメインに融合したヒトＣＤ１９ポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、および、細胞内切断性転写因子を含む抗ＣＤ１９ターゲティングＣＡＲをコードする。ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、合成Ｎｏｔｃｈ系の転写因子の放出により誘導可能である、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
【0132】
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、および、ＣＤ３ζポリペプチド、および４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域、を含む細胞内ドメイン、を含む抗ＭＵＣ１６ターゲティングＣＡＲ、Ｐ２Ａ自己切断型ペプチド、並びに本明細書で提示される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、ヒトメソテリンポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、および、Ｄ３ζポリペプチド、および４－１ＢＢポリペプチドを含む刺激シグナル伝達領域、を含む細胞内ドメイン、を含む抗メソテリンターゲティングＣＡＲ、Ｐ２Ａ自己切断型ペプチド、並びに、本明細書で提示される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、ヒトＷＴ１ポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、および、ＣＤ３ζポリペプチド、および４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域、を含む細胞内ドメイン、を含む抗ＷＴ１ターゲティングＣＡＲ、Ｐ２Ａ自己切断型ペプチド、並びに本明細書で提示される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、ヒトメソテリンポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、および、Ｄ３ζポリペプチド、および４－１ＢＢポリペプチドを含む刺激シグナル伝達領域、を含む細胞内ドメイン、を含む抗メソテリンターゲティングＣＡＲ、Ｐ２Ａ自己切断型ペプチド、並びに、本明細書で提示される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、ヒトＷＴ１ポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、および、ＣＤ３ζポリペプチド、および４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域、を含む細胞内ドメイン、を含む抗ＷＴ１ターゲティングＣＡＲ、Ｐ２Ａ自己切断型ペプチド、並びに本明細書で提示される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
【0133】
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、ヒトＰＳＣＡポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、およびＣＤ３ζポリペプチド、および４－１ＢＢポリペプチド共刺激シグナル伝達領域、を含む細胞内ドメイン、を含む抗ＰＳＣＡターゲティングＣＡＲ、Ｐ２Ａ自己切断型ペプチド、並びに本明細書で提示される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、およびＣＤ３ζポリペプチド、および４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域、を含む細胞内ドメイン、を含む抗ＢＣＭＡターゲティングＣＡＲ、Ｐ２Ａ自己切断型ペプチド、並びに本明細書で提示される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに特異的に結合するヒトｓｃＦｖ、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、およびＣＤ３ζポリペプチド、および４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域、を含む細胞内ドメイン、を含む抗ＢＣＭＡターゲティングＣＡＲ、Ｐ２Ａ自己切断型ペプチド、並びに本明細書で提示される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする。
【0134】
ある特定の実施形態では、単離核酸分子は、本明細書で開示されるＣＡＲ構築物の機能的部分をコードする。本明細書で使用される、「機能的部分」という用語は、ＣＡＲのいずれかの部分、一部、または断片であって、ターゲティングＣＡＲ（親ＣＡＲ）の生物学的活性を保持する部分、一部、または断片を指す。ある特定の実施形態では、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲの機能的部分をコードする単離核酸分子は、親ＣＡＲのうちの、例えば、約１０％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、および約９５％、またはこれを超えるタンパク質を含むタンパク質をコードしうる。
【0135】
免疫細胞
本明細書で開示される主題は、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、および、細胞外抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含むＴ細胞受容体（例えば、ＣＡＲ）または他のリガンを発現するように操作された免疫細胞をもたらし、この場合、細胞外抗原結合性ドメインは、上記のように、腫瘍受容体または腫瘍リガンドを含む腫瘍抗原に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、細胞が、ＣＡＲと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現するように、本明細書で開示されるＣＡＲ／抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片構築物が免疫細胞へ形質導入されうる。
本明細書で開示される主題は、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、および、細胞外抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含むＴ細胞受容体（例えば、ＣＡＲ）または他のリガンを発現するように操作された免疫細胞をもたらし、この場合、細胞外抗原結合性ドメインは、上記のように、腫瘍受容体または腫瘍リガンドを含む腫瘍抗原に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、細胞が、ＣＡＲと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現するように、本明細書で開示されるＣＡＲ／抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片構築物が免疫細胞へ形質導入されうる。
【0136】
本明細書で開示される主題の操作された免疫細胞は、リンパ系列の細胞の場合もあり、骨髄系列の細胞の場合もある。Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、リンパ系列は、抗体の産生、細胞免疫系の調節、血液中の外来作用物質の検出、宿主に対して外来である細胞の検出などをもたらす。リンパ系列の免疫細胞の非限定的例は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、胚性幹細胞、および多能性幹細胞（例えば、それからリンパ細胞を分化させうる多能性幹細胞）を含む。Ｔ細胞は、胸腺内で成熟し、細胞媒介性免疫の主因となるリンパ球でありうる。Ｔ細胞は、適応免疫系に関与する。本明細書で開示される主題のＴ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（ｓｔｅｍ－ｃｅｌｌ－ｌｉｋｅ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ（または幹細胞様メモリーＴ細胞（ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ））、並びに２種のエフェクターメモリーＴ細胞：例えば、ＴEM細胞およびＴＥＭＲＡ細胞を含む）、調節性Ｔ細胞（また、抑制性Ｔ細胞としても公知である）、ナチュラルキラーＴ細胞、ＭＡＩＴ（ｍｕｃｏｓａｌ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｉｎｖａｒｉａｎｔ Ｔ ｃｅｌｌ）、およびγδＴ細胞を含むがこれらに限定されない、いずれかの種類のＴ細胞でありうる。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染体細胞または腫瘍細胞の死を誘導することが可能な、Ｔリンパ球のサブセットである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ発現Ｔ細胞は、Ｔ調節性表現型を達成および維持するように、Ｆｏｘｐ３を発現する。
【0137】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は細胞媒介性免疫の一部であり、自然免疫応答時に作用するリンパ球でありうる。ＮＫ細胞は、それらの細胞傷害性作用を標的細胞に対して及ぼすために事前の活性化を要求しない。
本明細書で開示される主題の操作された免疫細胞は、腫瘍抗原に特異的に結合する、細胞外抗原結合性ドメイン（例えば、ヒトｓｃＦｖ、架橋されてもよいＦａｂ、またはＦ（ａｂ）2）を発現しうる。一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球である。ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、ＣＤ４+Ｔ細胞またはＣＤ８+Ｔ細胞でありうる。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４+Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８+Ｔ細胞である。
本明細書で開示される主題の操作された免疫細胞は、腫瘍抗原に特異的に結合する、細胞外抗原結合性ドメイン（例えば、ヒトｓｃＦｖ、架橋されてもよいＦａｂ、またはＦ（ａｂ）2）を発現しうる。一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球である。ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、ＣＤ４+Ｔ細胞またはＣＤ８+Ｔ細胞でありうる。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４+Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８+Ｔ細胞である。
【0138】
本明細書で開示される操作された免疫細胞は、少なくとも１つの組換え共刺激リガンドまたは外因性共刺激リガンドをさらに含みうる。例えば、操作された免疫細胞が、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲと、少なくとも１つの共刺激リガンドとを共発現するか、またはこれらを共発現するよう誘導されるように、少なくとも１つの共刺激リガンドが、本明細書で開示される操作された免疫細胞へさらに形質導入されうる。腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲと、少なくとも１つの共刺激リガンドとの相互作用は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の完全な活性化に重要な非抗原特異的シグナルをもたらす。共刺激リガンドは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーリガンド、および免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーリガンドのメンバーを含むがこれらに限定されない。ＴＮＦは、全身炎症に関与し、急性期反応を刺激するサイトカインである。その主要な役割は、免疫細胞の調節にある。ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーは、多数の共通の特色を共有する。ＴＮＦスーパーファミリーメンバーの大部分は、短い細胞質セグメントと、比較的長い細胞外領域とを含有するＩＩ型膜貫通タンパク質（細胞外Ｃ末端）として合成される。ＴＮＦスーパーファミリーメンバーは、限定せずに述べると、神経増殖因子（ＮＧＦ）、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０Ｌ）／ＣＤ１５４、ＣＤ１３７Ｌ／４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ－α、ＣＤ１３４Ｌ／ＯＸ４０Ｌ／ＣＤ２５２、ＣＤ２７Ｌ／ＣＤ７０、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３０Ｌ／ＣＤ１５３、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦＰ）／リンホトキシン－アルファ（ＬＴ－α）、リンホトキシン－ベータ（ＬΤ－β）、ＣＤ２５７／Ｂ細胞－活性化因子（ＢＡＦＦ）／ＢＬＹＳ／ＴＨＡＮＫ／ＴＡＬＬ－１、グルココルチコイド－誘導されたＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、およびＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４）を含む。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーは、細胞の認識過程、結合過程、または接着過程に関与する、細胞表面タンパク質および可溶性タンパク質の大規模群である。これらのタンパク質は、免疫グロブリンと、構造的特色を共有する（これらのタンパク質は、免疫グロブリンドメイン（フォールド）を保有する）。免疫グロブリンスーパーファミリーリガンドは、いずれも、ＣＤ２８に対するリガンドである、ＣＤ８０およびＣＤ８６、またはＰＤ－１に対するリガンドである、ＰＤ－Ｌ１／（Ｂ７－Ｈ１）を含むがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激リガンドは、４－１ＢＢＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＰＤ－Ｌ１、およびこれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は、４－１ＢＢＬである、１種の組換え共刺激リガンドを含む。ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は、４－１ＢＢＬおよびＣＤ８０である、２種の組換え共刺激リガンドを含む。少なくとも１つの共刺激リガンドを含むＣＡＲについては、参照によりそれらの全体において組み込まれる、米国特許第８，３８９，２８２号において記載されている。
【0139】
さらに、本明細書で開示される操作された免疫細胞は、少なくとも１つの外因性サイトカインをさらに含みうる。例えば、操作された免疫細胞は、少なくとも１つのサイトカインを分泌するほか、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲを発現するように、少なくとも１つのサイトカインが本明細書で開示される操作された免疫細胞へさらに形質導入されうる。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、およびＩＬ－２１からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１２である。
【0140】
操作された免疫細胞は、末梢ドナーリンパ球から作出されうる。操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、自家細胞の場合もあり、非自家（例えば、同種）の場合もあり、またはｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、操作された前駆細胞または操作された幹細胞から導出される場合もある。
【0141】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示される操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、細胞１個当たり、約１～約５、約１～約４、約２～約５、約２～約４、約３～約５、約３～約４、約４～約５、約１～約２、約２～約３、約３～約４、または約４～約５のベクターコピー数の、本明細書で開示される腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲ、および／または抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片を発現する。
例えば、操作された免疫細胞内のＣＡＲの発現レベルが高度であるほど、操作された免疫細胞は大きな細胞傷害作用およびサイトカイン産生を呈する。腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲの発現レベルが高度である、操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲの発現レベルが低度である、例えば、細胞１個当たりの腫瘍抗原結合性部位が約２，０００またはこれ未満、約１，０００またはこれ未満、約９００またはこれ未満、約８００またはこれ未満、約７００またはこれ未満、約６００またはこれ未満、約５００またはこれ未満、約４００またはこれ未満、約３００またはこれ未満、約２００またはこれ未満、約１００またはこれ未満である、組織または細胞に対して、抗原特異的サイトカインの産生若しくは分泌を誘導することが可能であり、および／または細胞傷害作用を呈しうる。加えて、または代替的に、本明細書で開示される操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の細胞傷害作用およびサイトカイン産生は、標的組織内または標的細胞における腫瘍抗原の発現レベルと比例する。例えば、標的内のヒト腫瘍抗原の発現レベルが高度であるほど、操作された免疫細胞は、大きな細胞傷害作用およびサイトカイン産生を呈する。
例えば、操作された免疫細胞内のＣＡＲの発現レベルが高度であるほど、操作された免疫細胞は大きな細胞傷害作用およびサイトカイン産生を呈する。腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲの発現レベルが高度である、操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲの発現レベルが低度である、例えば、細胞１個当たりの腫瘍抗原結合性部位が約２，０００またはこれ未満、約１，０００またはこれ未満、約９００またはこれ未満、約８００またはこれ未満、約７００またはこれ未満、約６００またはこれ未満、約５００またはこれ未満、約４００またはこれ未満、約３００またはこれ未満、約２００またはこれ未満、約１００またはこれ未満である、組織または細胞に対して、抗原特異的サイトカインの産生若しくは分泌を誘導することが可能であり、および／または細胞傷害作用を呈しうる。加えて、または代替的に、本明細書で開示される操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の細胞傷害作用およびサイトカイン産生は、標的組織内または標的細胞における腫瘍抗原の発現レベルと比例する。例えば、標的内のヒト腫瘍抗原の発現レベルが高度であるほど、操作された免疫細胞は、大きな細胞傷害作用およびサイトカイン産生を呈する。
【0142】
免疫細胞の非精製供給源は、骨髄、胎児、新生児、若しくは成人、または他の造血細胞供給源、例えば、胎児肝臓、末梢血、または臍帯血など、当技術分野で公知である、いずれかの供給源でありうる。個々の細胞に対して多様な技法が利用されうる。例えば、陰性選択法は、まず、非免疫細胞を除去しうる。モノクローナル抗体は、陽性選択および陰性選択のいずれのためにも、特定の細胞系統および／または分化段階と関連するマーカーを同定するために、特に有用である。
終末分化細胞の大部分は、まず、比較的大まかな分離により除去されうる。例えば、磁気ビーズによる分離は、まず、多数の無関係の細胞を除去するのに使用されうる。全造血細胞のうちの、適切には、少なくとも約８０％、通例、少なくとも７０％は、細胞分離の前に除去されるであろう。
終末分化細胞の大部分は、まず、比較的大まかな分離により除去されうる。例えば、磁気ビーズによる分離は、まず、多数の無関係の細胞を除去するのに使用されうる。全造血細胞のうちの、適切には、少なくとも約８０％、通例、少なくとも７０％は、細胞分離の前に除去されるであろう。
【0143】
分離のための手順は、密度勾配遠心分離；リセッティング；細胞密度を改変する粒子へのカップリング；抗体コーティング磁気ビーズによる磁気分離；アフィニティークロマトグラフィー；ｍＡｂへ結合されるか、またはこれと共に使用される細胞傷害因子であって、補体および細胞毒素を含むがこれらに限定されない細胞傷害因子；並びに固相マトリックス、例えば、プレート、チップへ結合された抗体によるパニング、エルトリエーション、または他のいずれかの常套的技法を含むがこれらに限定されない。
分離および解析のための技法は、様々な程度の精緻化、例えば、複数の色チャネル、低角／鈍角光散乱検出チャネル、インピーダンスチャネルを有しうる、フローサイトメトリーを含むがこれらに限定されない。
分離および解析のための技法は、様々な程度の精緻化、例えば、複数の色チャネル、低角／鈍角光散乱検出チャネル、インピーダンスチャネルを有しうる、フローサイトメトリーを含むがこれらに限定されない。
【0144】
細胞は、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）など、死細胞と関連する染料を利用することにより、死細胞に対して選択されうる。通例、細胞は、２％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）若しくは０．２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む培地中、または他のいずれかの適切な（例えば、滅菌）等張性培地中で回収される。
一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、１種または複数種のさらなる改変を含む。例えば、一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、選択された腫瘍抗原以外の、第２の抗原に結合する抗原認識受容体を含み、これを発現する（これを発現するように形質導入されている）。本明細書で開示されるＣＡＲに加えた、抗原認識受容体の、操作された免疫細胞上の組入れは、ＣＡＲ、またはこれを含む操作された免疫細胞の、標的細胞に対するアビディティーを増大させることが可能であり、とりわけ、ＣＡＲは、特定の腫瘍抗原に対する結合アフィニティーが小さい、例えば、Ｋdが、約２×１０-8Ｍ若しくはこれを超える、約５×１０-8Ｍ若しくはこれを超える、約８×１０-8Ｍ若しくはこれを超える、約９×１０-8Ｍ若しくはこれを超える、約１×１０-7Ｍ若しくはこれを超える、約２×１０-7Ｍ若しくはこれを超える、または約５×１０-7Ｍ若しくはこれを超えるＣＡＲである。
一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、１種または複数種のさらなる改変を含む。例えば、一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、選択された腫瘍抗原以外の、第２の抗原に結合する抗原認識受容体を含み、これを発現する（これを発現するように形質導入されている）。本明細書で開示されるＣＡＲに加えた、抗原認識受容体の、操作された免疫細胞上の組入れは、ＣＡＲ、またはこれを含む操作された免疫細胞の、標的細胞に対するアビディティーを増大させることが可能であり、とりわけ、ＣＡＲは、特定の腫瘍抗原に対する結合アフィニティーが小さい、例えば、Ｋdが、約２×１０-8Ｍ若しくはこれを超える、約５×１０-8Ｍ若しくはこれを超える、約８×１０-8Ｍ若しくはこれを超える、約９×１０-8Ｍ若しくはこれを超える、約１×１０-7Ｍ若しくはこれを超える、約２×１０-7Ｍ若しくはこれを超える、または約５×１０-7Ｍ若しくはこれを超えるＣＡＲである。
【0145】
ある特定の実施形態では、抗原認識受容体はキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）である。ＣＣＲについては、それらの内容が、参照によりそれらの全体において組み込まれる、Krause, et al., J. Exp. Med. 188(4):619-626(1998)、およびＵＳ２００２００１８７８３において記載されている。ＣＣＲは共刺激シグナルを模倣するが、ＣＡＲと異なり、Ｔ細胞活性化シグナルをもたらさない、例えば、ＣＣＲはＣＤ３ζポリペプチドを欠く。ＣＣＲは、抗原提示細胞上の天然の共刺激リガンドの非存在下で、共刺激、例えば、ＣＤ２８様シグナルをもたらす。コンビナトリアルの抗原認識、すなわち、ＣＡＲと組み合わせた、ＣＣＲの使用は、二重抗原を発現するＴ細胞に対するＴ細胞反応性を強化し、これにより、選択的な腫瘍ターゲティングを改善しうる。Ｋｌｏｓｓらは、コンビナトリアルの抗原認識、シグナル伝達の分割、および、これが極めて重要なことであるが、各抗原を個別に発現する細胞は看過しながら、抗原の組合せを発現する標的細胞は消失させるＴ細胞を作出する、Ｔ細胞の活性化の強度と、共刺激の強度との平衡を組み込む戦略について記載している（Kloss et al., Nature Biotechnology 31(l):71-75 (2013)）。この手法により、Ｔ細胞の活性化が１種の抗原のＣＡＲ媒介型認識を要求するのに対し、共刺激は第２の抗原に特異的なＣＣＲにより独立に媒介される。腫瘍選択性を達成するために、コンビナトリアルの抗原認識法は、第２の抗原に対するＣＣＲによる共時的認識によるレスキューを伴わない限りにおいて、Ｔ細胞活性化効率を、それが無効となるレベルまで減衰させる。ある特定の実施形態では、ＣＣＲは選択された腫瘍抗原と異なる抗原に結合する細胞外抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、およびＢＴＬＡを含むがこれらに限定されない、少なくとも１つの共刺激分子を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＣＲの共刺激シグナル伝達領域は、１種の共刺激シグナル伝達分子を含む。ある特定の実施形態では、１種の共刺激シグナル伝達分子は、ＣＤ２８である。ある特定の実施形態では、１種の共刺激シグナル伝達分子は４－１ＢＢである。ある特定の実施形態では、ＣＣＲの共刺激シグナル伝達領域は２種の共刺激シグナル伝達分子を含む。ある特定の実施形態では、２種の共刺激シグナル伝達分子はＣＤ２８および４－１ＢＢである。第２の抗原は、選択された腫瘍抗原および第２の抗原の両方の発現が、標的細胞（例えば、がん性組織またはがん性細胞）へ制限されるように選択される。ＣＡＲと同様に、細胞外抗原結合性ドメインは、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）2；または細胞外抗原結合性ドメインを形成する、異種配列との融合タンパク質でありうる。ある特定の実施形態では、ＣＣＲは、ＣＤ１３８に結合するｓｃＦｖ、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、およびＣＤ２８および４－１ＢＢである２種の共刺激シグナル伝達分子を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。
【0146】
ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は短縮型ＣＡＲである。「短縮型ＣＡＲ」は、細胞内シグナル伝達ドメインを欠くことによりＣＡＲと異なる。例えば、短縮型ＣＡＲは、細胞外抗原結合性ドメインおよび膜貫通ドメインを含むが、細胞内シグナル伝達ドメインを欠く。本明細書で開示される主題に従い、短縮型ＣＡＲは、標的細胞上、例えば、骨髄腫細胞上で発現される、第２の抗原に対する結合アフィニティーが大きい。短縮型ＣＡＲは、本明細書で開示されるＣＡＲ、とりわけ、腫瘍抗原に対する結合アフィニティーが小さいＣＡＲのアビディティーを増強し、これにより、本明細書で開示されるＣＡＲ、またはこれを含む操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の有効性を改善する接着分子として機能する。ある特定の実施形態では、短縮型ＣＡＲは、ＣＤ１３８に結合する細胞外抗原結合性ドメイン、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメインを含む。本明細書で開示されるＴ細胞は、腫瘍抗原をターゲティングする本明細書で開示されるＣＡＲと、ＣＤ１３８をターゲティングする短縮型ＣＡＲとを発現するように、これらを含むか、またはこれらを形質導入される。ある特定の実施形態では、標的細胞は、充実性腫瘍細胞である。一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、１つまたは複数の遺伝子の発現を抑制するように、さらに修飾される。一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、ゲノム編集を介して、さらに改変される。ゲノムＤＮＡのターゲティング型切断のための、多様な方法および組成物については記載されている。このようなターゲティング型切断イベントは、例えば、所定の染色体遺伝子座における、ターゲティング型突然変異誘発を誘導し、細胞内ＤＮＡ配列のターゲティング型欠失を誘導し、ターゲティング型組換えを容易とするのに使用されうる。それらの開示が、参照によりそれらの全体において組み込まれる、例えば、米国特許第７，８８８，１２１号；同第７，９７２，８５４号；同第７，９１４，７９６号；同第７，９５１，９２５号；同第８，１１０，３７９号；同第８，４０９，８６１号；同第８，５８６，５２６号；米国特許公開第２００３０２３２４１０号；同第２００５０２０８４８９号；同第２００５００２６１５７号；同第２００５００６４４７４号；同第２００６００６３２３１号；同第２０１０００２１８２６４号；同第２０１２００１７２９０号；同第２０１１０２６５１９８号；同第２０１３０１３７１０４号；同第２０１３０１２２５９１号；同第２０１３０１７７９８３号；および同第２０１３０１７７９６０号を参照されたい。これらの方法は、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）または修復鋳型を使用する修復（相同性指向修復またはＨＤＲ）など、エラーボーン工程（ｅｒｒｏｒ ｂｏｒｎ ｐｒｏｃｅｓｓ）による切断の修復が、遺伝子のノックアウト、または目的の配列の挿入（ターゲティング型組込み）を結果としてもたらしうるよう、標的ＤＮＡ配列内の二本鎖切断（ＤＳＢ）またはニックを誘導するように、操作された切断系の使用を伴うことが多い。切断は、操作されたジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、ＴＡＬＥＮ（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｌｉｋｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ）など、特異的ヌクレアーゼの使用を介して行われる場合もあり、特異的切断を誘導するように、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを、操作されたｃｒＲＮＡ／ｔｒａｃｒ ＲＮＡ（「単一ガイドＲＮＡ」）と共に使用して行われる場合もある。一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、内因性Ｔ細胞受容体遺伝子の発現を破壊または低減するように改変される（例えば、参照によりそれらの全体において組み込まれる、ＷＯ２０１４１５３４７０を参照されたい）。一部の実施形態では、操作された免疫細胞は、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、またはＣＴＬＡ－４（例えば、米国特許公開第２０１４０１２０６２２号を参照されたい）、または当技術分野で公知である、他の免疫抑制因子（Wu et al. (2015) Oncoimmunology 4(7): e1016700；Mahoney et al. (2015) Nature Reviews Drug Discovery 14, 561-584）の破壊または阻害を結果としてもたらすように改変される。
【0147】
ベクター
多くの発現ベクターは、当業者に利用可能であり、かつ公知であり、本明細書で提示されるポリペプチドの発現のために使用されうる。発現ベクターの選択は、宿主発現系の選択の影響を受けるであろう。このような選択は、十分に、当業者の技術の水準内にある。一般に、発現ベクターは、転写プロモーターを含む場合があり、エンハンサー、翻訳シグナル、並びに転写終結シグナルおよび翻訳の終結シグナルを含んでもよい。安定的な形質転換のために使用される発現ベクターは、典型的に、形質転換細胞の選択および維持を可能とする、選択用マーカーを有する。場合によって、細胞内のベクターのコピー数を増幅するのに複製起点を使用することができる。
多くの発現ベクターは、当業者に利用可能であり、かつ公知であり、本明細書で提示されるポリペプチドの発現のために使用されうる。発現ベクターの選択は、宿主発現系の選択の影響を受けるであろう。このような選択は、十分に、当業者の技術の水準内にある。一般に、発現ベクターは、転写プロモーターを含む場合があり、エンハンサー、翻訳シグナル、並びに転写終結シグナルおよび翻訳の終結シグナルを含んでもよい。安定的な形質転換のために使用される発現ベクターは、典型的に、形質転換細胞の選択および維持を可能とする、選択用マーカーを有する。場合によって、細胞内のベクターのコピー数を増幅するのに複製起点を使用することができる。
【0148】
ベクターはまた、ライゲーションされた核酸分子に作動可能に連結された、さらなるヌクレオチド配列であって、例えば、局在化のためのタグ、例えば、ヘキサｈｉｓタグ若しくはｍｙｃタグ、ヘマグルチニンタグなどのエピトープタグ、または精製のためのタグ、例えば、ＧＳＴ融合タグ、およびタンパク質の分泌および／または膜への会合を方向付けるための配列などのヌクレオチド配列も含有しうる。
【0149】
抗体またはその抗原結合性断片の発現は、当技術分野で公知である、いずれかのプロモーター／エンハンサーにより制御されうる。当技術分野では、適切な細菌プロモーターが周知であり、本明細書の下記で記載される。当技術分野では、哺乳動物細胞、酵母細胞、および昆虫細胞に適する、他のプロモーターも周知であり、下記に例示される。異種核酸の発現を方向付けるのに使用されるプロモーターの選択は、特定の適用に依存し、当業者の技術の水準内にある。使用されうるプロモーターは、ＳＶ４０早期プロモーターを含有する真核発現ベクター（Bernoist and Chambon, Nature 290:304-310(1981)）、ラウス肉腫ウイルスの３’側ＬＴＲ（ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ）内に含有されるプロモーター（Yamamoto et al., Cell 22:787-797(1980)）、ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター（Wagner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 1441-1445 (1981)）、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Brinster et al., Nature 296:39-42 (1982)）；β－ラクタマーゼプロモーターなどの原核発現ベクター（Jay et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75:5543 (1981)）またはｔａｃプロモーター（DeBoer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 50:21-25(1983)；また、“Useful Proteins from Recombinant Bacteria”: in Scientific American 242:79-94 (1980)も参照されたい）；ノパリンシンテターゼプロモーターを含有する、植物発現ベクター（Herrera- Estrella et al., Nature 505:209-213(1984)）またはカリフラワーモザイクウイルス３５Ｓ ＲＮＡプロモーター（Gardner et al., Nucleic Acids Res. 9:2871(1981)）、および光合成酵素であるリブロース二リン酸カルボキシラーゼのプロモーター（Herrera-Estrella et al., Nature 510: 1 15-120(1984)）；Ｇａｌ４プロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼプロモーター、アルカリホスファターゼプロモーターなど、酵母および他の真菌に由来するプロモーターエレメント、並びに組織特異性を呈し、トランスジェニック動物において使用されている、以下の動物転写制御領域：膵腺房細胞において活性であるエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Swift et al., Cell 55:639-646 (1984); Ornitz et al., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409(1986); MacDonald, Hepatology 7:425-515 (1987)）；膵ベータ細胞において活性であるインスリン遺伝子制御領域（Hanahan et al., Nature 515: 115-122 (1985)）、リンパ細胞において活性である免疫グロブリン遺伝子制御領域（Grosschedl et al., Cell 55:647-658 (1984); Adams et al., Nature 515:533-538 (1985); Alexander et al., Mol. Cell Biol. 7: 1436-1444 (1987)）、精巣細胞内、乳腺細胞内、リンパ細胞内、およびマスト細胞内で活性であるマウス乳腺腫瘍ウイルス制御領域（Leder et al., Cell 15:485-495 (1986)）、肝臓内で活性であるアルブミン遺伝子制御領域（Pinckert et al., Genes and Devel. 1:268-276 (1987)）、肝臓内で活性であるアルファ－フェトタンパク質遺伝子制御領域（Krumlauf et al., Mol. Cell. Biol. 5:1639-403 (1985); Hammer et al., Science 255:53-58 (1987)）、肝臓内で活性であるアルファ１アンチトリプシン遺伝子制御領域（Kelsey et al., Genes and Devel. 7:161-171 (1987)）、骨髄細胞内で活性であるベータグロブリン遺伝子制御領域（Magram et al., Nature 515:338-340 (1985); Kollias et al., Cell 5:89-94 (1986)）、脳の希突起膠細胞内で活性であるミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Readhead et al., Cell 15:703-712 (1987)）、骨格筋内で活性であるミオシン軽鎖２遺伝子制御領域（Shani, Nature 514:283-286 (1985)）、並びに視床下部の性腺刺激ホルモン分泌細胞内で活性である性腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子制御領域（Mason et al., Science 254: 1372- 1378 (1986)）を含むがこれらに限定されない。
【0150】
プロモーターに加えて、発現ベクターは、典型的に、宿主細胞において、抗体またはその部分の発現に要求される全てのさらなるエレメントを含有する転写単位または発現カセットを含有する。典型的な発現カセットは、抗体鎖をコードする核酸配列、転写物の効率的なポリアデニル化に要求されるシグナル、リボソーム結合性部位、および翻訳終結に作動可能に連結されたプロモーターを含有する。カセットのさらなるエレメントはエンハンサーを含みうる。加えて、カセットは、典型的に、効率的な終結をもたらすために、構造的遺伝子の下流に転写終結領域を含有する。終結領域は、プロモーター配列と同じ遺伝子から得られる場合もあり、異なる遺伝子から得られる場合もある。
一部の発現系は、チミジンキナーゼおよびジヒドロ葉酸レダクターゼなど、遺伝子の増幅をもたらすマーカーを有する。代替的に、昆虫細胞内、ポリヘドリン（ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｎ）プロモーターまたは他の強力なバキュロウイルスプロモーターの統制下で、生殖細胞系列抗体鎖をコードする核酸配列と共に、バキュロウイルスベクターを使用する発現系など、遺伝子の増幅を伴わない高収量発現系もまた適する。
一部の発現系は、チミジンキナーゼおよびジヒドロ葉酸レダクターゼなど、遺伝子の増幅をもたらすマーカーを有する。代替的に、昆虫細胞内、ポリヘドリン（ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｎ）プロモーターまたは他の強力なバキュロウイルスプロモーターの統制下で、生殖細胞系列抗体鎖をコードする核酸配列と共に、バキュロウイルスベクターを使用する発現系など、遺伝子の増幅を伴わない高収量発現系もまた適する。
【0151】
ＤＮＡ断片の、ベクターへの挿入のための、当業者に公知である、いずれの方法も、本明細書で提示されるポリペプチドのうちのいずれかをコードする核酸を含有する発現ベクターを構築するのに使用されうる。これらの方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ法および合成法、並びにｉｎ ｖｉｖｏ組換体（遺伝子組換え）を含みうる。クローニングベクターへの挿入は、例えば、ＤＮＡ断片を、相補性の接着末端を有するクローニングベクターにライゲーションすることにより達せられうる。ＤＮＡを断片化するのに使用される相補性の制限部位がクローニングベクター内に存在しない場合、ＤＮＡ分子の末端が酵素により改変される場合がある。代替的に、所望のいずれかの部位が、ヌクレオチド配列（リンカー）を、ＤＮＡ末端にライゲーションすることにより作製されうる場合、ライゲーションされたこれらのリンカーは、制限エンドヌクレアーゼ認識配列をコードする特異的化学合成核酸を含有しうる。
本明細書で提示されるポリペプチドを作製するのに有用な、例示的プラスミドベクターは、ＨＣＭＶ即初期エンハンサー／プロモーターまたはＭＨＣクラスＩプロモーターなどの強力なプロモーター、ＨＣＭＶ即初期遺伝子イントロンＡなど、転写物のプロセシングを増強するイントロン、および後期ＳＶ４０ポリＡシグナルなどのポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含有する。
本明細書で提示されるポリペプチドを作製するのに有用な、例示的プラスミドベクターは、ＨＣＭＶ即初期エンハンサー／プロモーターまたはＭＨＣクラスＩプロモーターなどの強力なプロモーター、ＨＣＭＶ即初期遺伝子イントロンＡなど、転写物のプロセシングを増強するイントロン、および後期ＳＶ４０ポリＡシグナルなどのポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含有する。
【0152】
操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の遺伝的改変は、組換えＤＮＡ構築物または組換えＲＮＡ構築物を実質的に同種の細胞組成物へ形質導入することにより達せられうる。ベクターは、ＤＮＡ構築物またはＲＮＡ構築物の、宿主細胞ゲノムへの導入のために利用されるレトロウイルスベクター（例えば、ガンマレトロウイルス）でありうる。例えば、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とをコードするポリヌクレオチドは、レトロウイルスベクターにクローニングされる場合があり、発現は、その内因性プロモーターである、レトロウイルスＬＴＲ（ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ）、または代替的内因性プロモーターから駆動されうる。
【0153】
非ウイルス性のベクターまたはＲＮＡも同様に使用されうる。染色体のランダム型組込み若しくはターゲティング型組込み（例えば、ヌクレアーゼである、ＴＡＬＥＮ（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｌｉｋｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、および／若しくはＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔｓ）を使用する）、またはトランス遺伝子発現（例えば、天然ＲＮＡまたは化学修飾ＲＮＡを使用する）が使用されうる。
【0154】
腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する細胞を生じさせる細胞の初期遺伝子改変について、レトロウイルスベクターが一般に形質導入のために利用されるが、他のいずれかの適切なウイルスベクターまたは非ウイルス送達系も使用されうる。少なくとも２種の共刺激リガンドを含む、抗原提示複合体を含む細胞をもたらすための、続く細胞の遺伝子改変にもレトロウイルスによる遺伝子導入（形質導入）は同様に有効であることが分かっている。レトロウイルスベクターと適切なパッケージング細胞株との組合せはまた、カプシドタンパク質がヒト細胞への感染のために機能的である場合にも適する。ＰＡ１２（Miller, et al., Mol. Cell. Biol. 5:431-437 (1985)）；ＰＡ３１７（Miller, et al., Mol. Cell. Biol. 6:2895-2902 (1986)）；およびＣＲＩＰ（Danos, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:6460-6464 (1988)）を含むがこれらに限定されない、多様な広宿主性ウイルス産生細胞株が公知である。非広宿主性粒子、例えば、ＶＳＶＧ、ＲＤ１１４、またはＧＡＬＶのエンベロープ、および当技術分野で公知である他のいずれかのエンベロープで偽型化された粒子もまた適する。
【0155】
可能な形質導入法はまた、例えば、Bregni, et al., Blood 80: 1418-1422(1992)の方法による、細胞の産生細胞との直接的な共培養、または、ウイルス上清単独、若しくは、例えば、Xu, et al., Exp. Hemat. 22:223-230 (1994)；およびHughes, et al., J. Clin. Invest. 89: 1817 (1992)の方法による、適切な増殖因子およびポリカチオンを含むか、またはこれを含まない、濃縮ベクター原液との培養も含む。
【0156】
ウイルスベクターの形質導入は、操作された免疫細胞において共刺激リガンドを発現させ、および／またはサイトカインを分泌する（例えば、４－１ＢＢＬおよび／またはＩＬ－１２）のに使用されうる。一部の実施形態では、選び出されたベクターは、高効率の感染、並びに安定的な組込みおよび発現を呈する（例えば、Cayouette et al., Human Gene Therapy 8:423-430 (1997); Kido et al., Current Eye Research 15:833-844 (1996); Bloomer et al., Journal of Virology 71 :6641-6649, 1997; Naldini et al., Science 272:263 267 (1996); およびMiyoshi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94: 10319, (1997)を参照されたい）。使用されうる、他のウイルスベクターは、例えば、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ウシパピローマウイルスベクター、またはエプスタイン－バーウイルスなどのヘルペスウイルスベクターを含む（また、例えば、Miller, Human Gene Therapy 15-14, (1990); Friedman, Science 244: 1275-1281 (1989); Eglitis et al., BioTechniques 6:608-614, (1988); Tolstoshev et al., Current Opinion in Biotechnology 1:55-61(1990); Sharp, The Lancet 337: 1277-1278 (1991); Cornetta et al., Nucleic Acid Research and Molecular Biology 36:311-322 (1987); Anderson, Science 226:401-409 (1984); Moen, Blood Cells 17:407-416 (1991); Miller et al., Biotechnology 7:980-990 (1989); Le Gal La Salle et al., Science 259:988-990 (1993); およびJohnson, Chest 107:77S-83S (1995)のベクターも参照されたい）。レトロウイルスベクターは特に開発が進んでおり、臨床状況で使用されている（Rosenberg et al., N. Engl. J. Med 323:370 (1990)；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４６号）。
【0157】
ある特定の非限定的実施形態では、本明細書で開示される腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲを発現させるベクターは、レトロウイルスベクター、例えば、オンコレトロウイルスベクターである。
【0158】
非ウイルス法もまた、細胞におけるタンパク質の発現のために利用されうる。例えば、核酸分子は、リポフェクション（Feigner et al., Proc. Nat’l. Acad. Sci. U.S.A. 84:7413, (1987); Ono et al., Neuroscience Letters 17:259 (1990); Brigham et al., Am. J. Med. Sci. 298:278, (1989); Staubinger et al., Methods in Enzymology 101 :512 (1983)）、アシアロオロソムコイド－ポリリシンコンジュゲーション（Wu et al., Journal of Biological Chemistry 263 : 14621 (1988); Wu et al., Journal of Biological Chemistry 264: 16985 (1989)）の存在下で、核酸を投与することにより、細胞へ導入される場合もあり、手術条件下におけるマイクロインジェクション（Wolff et al., Science 247: 1465 (1990)）により細胞へ導入される場合もある。遺伝子導入のための他の非ウイルス手段は、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、電気穿孔、およびプロトプラスト融合を使用する、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるトランスフェクションを含む。リポソームもまた、ＤＮＡの細胞への送達のために潜在的に有益でありうる。正常遺伝子の対象の罹患組織への移入もまた、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて正常核酸を培養可能な細胞型（例えば、自家初代細胞若しくは異種初代細胞またはこれらの後代）へ導入し、この後、細胞（またはその子孫細胞）を標的組織へ注入するかまたは全身注入することにより達せられうる。組換え受容体もまた、トランスポザーゼまたはターゲティング型ヌクレアーゼ（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはＴＡＬＥヌクレアーゼ）を使用して、導出されうるかまたは得られうる。一過性発現はＲＮＡ電気穿孔により得られうる。
【0159】
ｃＤＮＡ発現は、いずれかの適切なプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス４０（ＳＶ４０）、またはメタロチオネインプロモーター）から方向付けられ、いずれかの適切な哺乳動物調節エレメントまたはイントロン（例えば、伸長因子１ａ（ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｌａ）のエンハンサー／プロモーター／イントロン構造）により調節されうる。例えば、所望の場合、特異的細胞型内の遺伝子発現を、優先的に方向付けることが公知のエンハンサーは、核酸の発現を方向付けるのに使用されうる。使用されるエンハンサーは、限定せずに述べると、組織特異的エンハンサーまたは細胞特異的エンハンサーとして特徴づけられるエンハンサーを含みうる。代替的に、ゲノムクローンが使用される場合、調節は、コグネイトの調節配列、または、所望の場合、上記で記載されたプロモーターまたは調節的エレメントのうちのいずれかを含む異種供給源に由来する調節配列により媒介されうる。
結果として得られる細胞は未改変細胞のための条件と同様の条件下で増殖させることができ、様々な目的に使用することができる。
結果として得られる細胞は未改変細胞のための条件と同様の条件下で増殖させることができ、様々な目的に使用することができる。
【0160】
ポリペプチドおよび類似体並びにポリヌクレオチド
本明細書で開示される主題にはまた、腫瘍抗原（例えば、ヒト腫瘍抗原）に特異的に結合する細胞外抗原結合性ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ（例えば、ヒトｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、または（Ｆａｂ）2）、ＣＤ３ζ、ＣＤ８、ＣＤ２８などのポリペプチドまたはこれらの断片、および、操作された免疫細胞内で発現されるこれらをコードするポリヌクレオチドも含まれる。本明細書で開示される主題は、配列内に変更をもたらすことにより、アミノ酸配列または核酸配列を最適化するための方法をもたらす。このような変更は、ある特定の突然変異、欠失、挿入、または翻訳後修飾を含みうる。本明細書で開示される主題は、本明細書で開示される主題の、任意の天然に存在するポリペプチドの類似体をさらに含む。類似体は、アミノ酸配列変異、翻訳後修飾、またはこれらの両方により、本明細書で開示される主題の、天然に存在するポリペプチドと異なりうる。本明細書で開示される主題の類似体は、一般に、本明細書で開示される主題の、天然に存在するアミノ酸配列の全部または一部に対して、少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはこれを超える、同一性または相同性を呈しうる。配列比較の長さは、少なくとも、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約５０、約７５、約１００、またはこれを超えるアミノ酸残基の長さである。ここでもまた、同一性の程度の決定のための例示的な手法では、ＢＬＡＳＴプログラムが、近縁の配列を指し示す、１０-3～１０-100の間の確率スコアで使用される場合がある。改変は、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、ポリペプチドの化学的誘導、例えば、アセチル化、カルボキシル化、リン酸化、またはグリコシル化を含み、このような改変は、ポリペプチドの合成時またはプロセシング時に生じる場合もあり、単離修飾酵素による処置後に生じる場合もある。類似体はまた、一次配列内の変更によっても、本明細書で開示される主題の、天然に存在するポリペプチドと異なりうる。類似体は、天然の遺伝子変異体および誘導遺伝子変異体のいずれでもある、遺伝子変異体（例えば、照射、若しくは硫酸エタンメチルへの曝露による、ランダム突然変異誘発から、またはSambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.), CSH Ｐｒess, 1989、またはAusubel et al., supraにおいて記載されている、部位特異的突然変異誘発により得られる）を含む。また、環化ペプチド、分子、およびＬ－アミノ酸以外の残基、例えば、Ｄ－アミノ酸、または天然に存在しないアミノ酸若しくは合成アミノ酸、例えば、ベータ（β）アミノ酸若しくはガンマ（γ）アミノ酸を含有する類似体も含まれる。
本明細書で開示される主題にはまた、腫瘍抗原（例えば、ヒト腫瘍抗原）に特異的に結合する細胞外抗原結合性ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ（例えば、ヒトｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、または（Ｆａｂ）2）、ＣＤ３ζ、ＣＤ８、ＣＤ２８などのポリペプチドまたはこれらの断片、および、操作された免疫細胞内で発現されるこれらをコードするポリヌクレオチドも含まれる。本明細書で開示される主題は、配列内に変更をもたらすことにより、アミノ酸配列または核酸配列を最適化するための方法をもたらす。このような変更は、ある特定の突然変異、欠失、挿入、または翻訳後修飾を含みうる。本明細書で開示される主題は、本明細書で開示される主題の、任意の天然に存在するポリペプチドの類似体をさらに含む。類似体は、アミノ酸配列変異、翻訳後修飾、またはこれらの両方により、本明細書で開示される主題の、天然に存在するポリペプチドと異なりうる。本明細書で開示される主題の類似体は、一般に、本明細書で開示される主題の、天然に存在するアミノ酸配列の全部または一部に対して、少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはこれを超える、同一性または相同性を呈しうる。配列比較の長さは、少なくとも、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約５０、約７５、約１００、またはこれを超えるアミノ酸残基の長さである。ここでもまた、同一性の程度の決定のための例示的な手法では、ＢＬＡＳＴプログラムが、近縁の配列を指し示す、１０-3～１０-100の間の確率スコアで使用される場合がある。改変は、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、ポリペプチドの化学的誘導、例えば、アセチル化、カルボキシル化、リン酸化、またはグリコシル化を含み、このような改変は、ポリペプチドの合成時またはプロセシング時に生じる場合もあり、単離修飾酵素による処置後に生じる場合もある。類似体はまた、一次配列内の変更によっても、本明細書で開示される主題の、天然に存在するポリペプチドと異なりうる。類似体は、天然の遺伝子変異体および誘導遺伝子変異体のいずれでもある、遺伝子変異体（例えば、照射、若しくは硫酸エタンメチルへの曝露による、ランダム突然変異誘発から、またはSambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.), CSH Ｐｒess, 1989、またはAusubel et al., supraにおいて記載されている、部位特異的突然変異誘発により得られる）を含む。また、環化ペプチド、分子、およびＬ－アミノ酸以外の残基、例えば、Ｄ－アミノ酸、または天然に存在しないアミノ酸若しくは合成アミノ酸、例えば、ベータ（β）アミノ酸若しくはガンマ（γ）アミノ酸を含有する類似体も含まれる。
【0161】
全長ポリペプチドに加えて、本明細書で開示される主題はまた、本明細書で開示される主題のポリペプチドドメインまたはペプチドドメインのうちのいずれか１つの断片ももたらす。この断片は、少なくとも約５、約１０、約１３、または約１５アミノ酸でありうる。一部の実施形態では、断片は、少なくとも約２０連続アミノ酸、少なくとも約３０連続アミノ酸、または少なくとも約５０連続アミノ酸である。一部の実施形態では、断片は、少なくとも約６０～約８０、約１００、約２００、約３００、またはこれを超える連続アミノ酸である。本明細書で開示される主題の断片は、当業者に公知の方法により作出される場合もあり、正常なタンパク質プロセシング（例えば、新生ポリペプチドからの、生体活性に要求されないアミノ酸の除去、または代替的ｍＲＮＡスプライシングイベント、若しくは代替的タンパク質プロセシングイベントによるアミノ酸の除去）から生じる場合もある。
【0162】
非タンパク質類似体は、本技術のタンパク質の機能活性を模倣するようにデザインされた化学構造を有する。このような類似体は、本明細書で開示される主題の方法に従い投与される。このような類似体は、元のポリペプチドの生理活性を上回りうる。当技術分野では、類似体のデザイン法が周知であり、類似体の合成は、このような方法に従い、結果として得られる類似体が、操作された免疫細胞内で発現されると、元のポリペプチドの機能を増強するような、改変化学構造により実行されうる。これらの化学改変は、代替的Ｒ基による置換、および参照ポリペプチドの特異的炭素原子における飽和度の変動を含むがこれらに限定されない。タンパク質の類似体は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける分解に対して、比較的耐性でありうる結果として、投与されると、より持続的な効果をもたらす。機能活性を測定するためのアッセイは、下記の実施例に記載されるアッセイを含むがこれらに限定されない。
【0163】
本明細書で開示される主題に従い、腫瘍抗原（例えば、ヒト腫瘍抗原）に特異的に結合する細胞外抗原結合性ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ（例えば、ヒトｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、または（Ｆａｂ）2）、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ２８をコードするポリヌクレオチドは、コドンの最適化により改変されうる。コドンの最適化は、所与のいずれかの発現系における生産性の可能な最高レベルを達成するように、天然に存在する遺伝子配列および組換え遺伝子配列の両方を変更しうる。タンパク質発現の異なる段階に関与する因子は、コドン適応性、ｍＲＮＡ構造、および転写および翻訳における、多様なシスエレメントを含む。ＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（商標）、Ｅｎｃｏｒ最適化法、およびＢｌｕｅ Ｈｅｒｏｎを含むがこれらに限定されない、当業者に公知である、いずれの適切なコドン最適化法またはコドン最適化技術も本明細書で開示される主題のポリヌクレオチドを改変するのに使用されうる。
【0164】
投与
本明細書で開示される主題の、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲと抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する操作された免疫細胞は、新生物の進行を診断またはモニタリングするために、対象に、全身において、または直接施される。ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は、目的の臓器（例えば、新生物に罹患した臓器）へ、直接注入される。代替的に、または加えて、操作された免疫細胞は、例えば、循環系（例えば、腫瘍血管系）、または充実性腫瘍への投与により、目的の臓器へ間接的に施される。増殖因子および分化因子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおけるＴ細胞の産生を増大させるように、細胞および組成物の投与の前に施される場合もあり、投与時に施される場合もあり、投与の後で施される場合もある。
本明細書で開示される主題の、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲと抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する操作された免疫細胞は、新生物の進行を診断またはモニタリングするために、対象に、全身において、または直接施される。ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は、目的の臓器（例えば、新生物に罹患した臓器）へ、直接注入される。代替的に、または加えて、操作された免疫細胞は、例えば、循環系（例えば、腫瘍血管系）、または充実性腫瘍への投与により、目的の臓器へ間接的に施される。増殖因子および分化因子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおけるＴ細胞の産生を増大させるように、細胞および組成物の投与の前に施される場合もあり、投与時に施される場合もあり、投与の後で施される場合もある。
【0165】
本明細書で開示される主題の操作された免疫細胞は、骨、または細胞が、再生および分化に適切な部位を見出しうる、他の常套的な部位（例えば、胸腺）へもまた導入されうるが、生理学的に許容されるいずれかの媒体に投与される場合もあり、全身投与、または領域内投与、通常、血管内投与、腹腔内投与、髄腔内投与、または胸膜内投与される場合もある。ある特定の実施形態では、少なくとも１×１０5個の細胞、最終的に、１×１０10、またはこれを超える個数に達する細胞が投与されうる。ある特定の実施形態では、少なくとも１×１０6個の細胞が投与されうる。操作された免疫細胞を含む細胞集団は、精製細胞集団を含みうる。当業者は、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）など、周知の多様な方法を使用して、細胞集団内の、操作された免疫細胞の百分率をたやすく決定しうる。操作された免疫細胞を含む細胞集団内の純度の範囲は、約５０％～約５５％、約５５％～約６０％、約６５％～約７０％、約７０％～約７５％、約７５％～約８０％、約８０％～約８５％；約８５％～約９０％、約９０％～約９５％、または約９５～約１００％でありうる。用量は、当業者により、たやすく調整されうる（例えば、純度の低下は、投与量の増大を必要としうる）。操作された免疫細胞は、注射、カテーテルなどにより導入されうる。所望の場合、インターロイキン、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ ６、ＩＬ－１１、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１のほか、他のインターロイキン、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦなどのコロニー刺激因子、インターフェロン、例えば、γ－インターフェロンを含むがこれらに限定されない因子もまた、組み入れられうる。
【0166】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示される主題の組成物は、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する操作された免疫細胞を、薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物を含む。投与は、自家投与の場合もあり、非自家投与の場合もある。例えば、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲと、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する操作された免疫細胞、およびこれを含む組成物は、１つの対象から得られ、同じ対象、または異なる、適合性の対象に投与されうる。本明細書で開示される主題の末梢血由来Ｔ細胞、またはこれらの後代（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて導出された）は、カテーテル投与、全身注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与を含む、局所注射を介して投与されうる。本明細書で開示される主題の医薬組成物（例えば、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲを発現する操作された免疫細胞を含む医薬組成物）を投与する場合、これは、単位用量注射用剤形（溶液、懸濁液、エマルジョン）に製剤化されうる。
【0167】
製剤
腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲと抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する操作された免疫細胞およびこれを含む組成物は、常套的に、選択されたｐＨに緩衝処理されうる、滅菌液体調製物、例えば、等張性水溶液、懸濁液、エマルジョン、分散液、または粘性組成物として提供されうる。液体調製物は、通常、ゲル、他の粘性組成物、および固相組成物より調製が容易である。加えて、液体組成物は、とりわけ、注射により投与するのに、ある程度、より常套的である。他方、粘性組成物は、特異的組織との接触時間を長くするように適切な粘性範囲内で製剤化されうる。液体組成物または粘性組成物は、例えば、水、生理食塩液、リン酸緩衝生理食塩液、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適切な混合物を含有する、溶媒または分散媒でありうる担体を含みうる。
腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲと抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを発現する操作された免疫細胞およびこれを含む組成物は、常套的に、選択されたｐＨに緩衝処理されうる、滅菌液体調製物、例えば、等張性水溶液、懸濁液、エマルジョン、分散液、または粘性組成物として提供されうる。液体調製物は、通常、ゲル、他の粘性組成物、および固相組成物より調製が容易である。加えて、液体組成物は、とりわけ、注射により投与するのに、ある程度、より常套的である。他方、粘性組成物は、特異的組織との接触時間を長くするように適切な粘性範囲内で製剤化されうる。液体組成物または粘性組成物は、例えば、水、生理食塩液、リン酸緩衝生理食塩液、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適切な混合物を含有する、溶媒または分散媒でありうる担体を含みうる。
【0168】
滅菌注射用溶液は、本明細書で開示される主題の組成物、例えば、操作された免疫細胞を含む組成物を、要求量の、適切な溶媒中に、所望に応じて、多様な量の、他の成分と共に組み込むことにより調製されうる。このような組成物は、滅菌水、生理食塩液、ブドウ糖、デキストロースなど、適切な担体、希釈剤、または賦形剤と混合されうる。組成物はまた、凍結乾燥させられる場合もある。組成物は、所望の投与経路および調製物に応じて、保湿剤、分散剤、または乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化添加剤または粘性増強添加剤、保存剤、芳香剤、着色剤などの補助物質を含有しうる。過度な実験を伴わずに適切な調製物を調製するのに、参照により本明細書に組み込まれる、”REMINGTON’ S PHARMACEUTICAL SCIENCE”, 17th edition, 1985などの標準的教科書が参考とされうる。
【0169】
組成物の安定性および無菌性を増強する多様な添加剤であって、抗微生物性保存剤、抗酸化剤、キレート剤、および緩衝剤を含む添加剤が添加されうる。微生物作用の防止は、多様な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などにより確保されうる。吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用により、注射用医薬形態の持続吸収がもたらされうる。しかし、本明細書で開示される主題に従い、使用される、いずれの媒体、希釈剤、または添加剤も、本明細書で開示される主題の操作された免疫細胞と適合性でなければならないであろう。
組成物は等張性でありうる、すなわち、組成物は血液および涙液と同じ浸透圧を有しうる。本明細書で開示される主題の組成物の所望の張性は、塩化ナトリウム、またはデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、または他の無機溶質若しくは有機溶質など、他の薬学的に許容される薬剤を使用して達せられうる。塩化ナトリウムは、特に、ナトリウムイオンを含有する緩衝剤に適する。
組成物は等張性でありうる、すなわち、組成物は血液および涙液と同じ浸透圧を有しうる。本明細書で開示される主題の組成物の所望の張性は、塩化ナトリウム、またはデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、または他の無機溶質若しくは有機溶質など、他の薬学的に許容される薬剤を使用して達せられうる。塩化ナトリウムは、特に、ナトリウムイオンを含有する緩衝剤に適する。
【0170】
組成物の粘性は、所望の場合、薬学的に許容される増粘剤を使用して選択されたレベルで維持されうる。メチルセルロースは入手がたやすく、廉価であり、加工が容易であるために使用されうる。他の適切な増粘剤は、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーなどを含む。増粘剤の濃度は選択される薬剤に依存しうる。重要な点は、選択された粘性を達成する量を使用することである。適切な担体および他の添加剤の選択は、正確な投与経路、および特定の剤形、例えば、液体剤形の性格（例えば、組成物が、溶液へ製剤化されるのか、懸濁液へ製剤化されるのか、ゲルへ製剤化されるのか、徐放形態または液体充填形態など、別の液体形態へ製剤化されるのか）に依存することが明らかである。
【0171】
当業者は、組成物の成分は、化学的に不活性であるように選択され、本明細書で開示される主題において記載される、操作された免疫細胞の生存率または有効性に影響を及ぼさないことを認識するであろう。これは、化学的原則および薬学的原則による技術分野の当業者に問題を提示しないか、または問題は、標準的教科書の参照により若しくは本開示および本明細書で引用される文献を典拠とする、簡単な実験（過度な実験を伴わない）によりたやすく回避されうる。
【0172】
本明細書で開示される主題の操作された免疫細胞の使用に関する、１つの検討事項は、最適の効果を達成するのに必要な細胞の数量である。投与される細胞の数量は、対象に従い変動するであろう。ある特定の実施形態では、約１０2～約１０12個、約１０3～約１０11個、約１０4～約１０10個、約１０5～約１０9個、または約１０6～約１０8個の、本明細書で開示される主題の操作された免疫細胞が、対象に投与される。有効性の大きな細胞は、さらに少数で投与される場合もある。一部の実施形態では、少なくとも約１×１０8個、約２×１０8個、約３×１０8個、約４×１０8個、約５×１０8個、約１×１０9個、約５×１０9個、約１×１０10個、約５×１０10個、約１×１０11個、約５×１０11個、約１×１０12個、またはこれを超える個数の、本明細書で開示される主題の操作された免疫細胞がヒト対象に投与される。有効用量と考えられる用量の正確な決定は、特定の対象の体格、年齢、性別、体重、および健康状態を含む、各対象に個別の因子に基づきうる。用量は、本開示および当技術分野における知見から、当業者により、たやすく確認されうる。一般に、本操作された免疫細胞は患者に非毒性であるかまたは忍容性である用量で投与される。
【0173】
当業者は、本明細書で開示される主題の方法において投与される組成物中の、細胞、並びに、任意の添加剤、媒体、および／または担体の量をたやすく決定しうる。典型的に、任意の添加剤（活性細胞および／または薬剤に加えて）が、リン酸緩衝生理食塩液中に、溶液質量に対して、約０．００１％～約５０質量％の量で存在し、有効成分は、約０．０００１質量％～約５質量％、約０．０００１質量％～約１質量％、約０．０００１質量％～約０．０５質量％、約０．００１質量％～約２０質量％、約０．０１質量％～約１０質量％、または約０．０５質量％～約５質量％など、マイクログラム～ミリグラムのオーダーで存在する。動物またはヒトに投与される、いずれかの組成物、およびいずれかの特定の投与法について、適切な動物モデル、例えば、マウスなどの齧歯動物における致死用量（ＬＤ）およびＬＤ５０を決定することなどにより、毒性を決定し、適切な応答を誘発する、組成物の投与量、その中の成分の濃度、および組成物を投与するタイミングを決定するものとする。当業者の知見、本開示、および本明細書で引用される文献から、このような決定に過度な実験を必要としない。かつ、逐次的投与のための時間も、過度な実験を伴わずに確認されうる。
【0174】
ＤＯＴＡハプテンの組成物
ＤＯＴＡは、不可逆性である安定的な金属錯体を生理学的条件下で形成する、大環状キレート剤である。ＤＯＴＡは４０５ダルトンの分子量を有し、急速な拡散および腎クリアランスを呈する。
ＤＯＴＡは、不可逆性である安定的な金属錯体を生理学的条件下で形成する、大環状キレート剤である。ＤＯＴＡは４０５ダルトンの分子量を有し、急速な拡散および腎クリアランスを呈する。
【0175】
ＤＯＴＡハプテンの例は、ベンジル－ＤＯＴＡ、ＮＨ2－ベンジル（Ｂｎ）ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－デスフェリオキサミン、ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2、Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－ＲＧＤ、ＤＯＴＡ－ＰＥＧ－Ｅ（ｃ（ＲＧＤｙＫ））2、ＤＯＴＡ－８－ＡＯＣ－ＢＢＮ、ＤＯＴＡ－ＰＥＳＩＮ、ｐ－ＮＯ２－ベンジル－ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－ビオチン－サルコシン（ＤＯＴＡ－ビオチン）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸モノ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）（ＤＯＴＡ－ＮＨＳ）、およびＤＯＴＡＴｙｒＬｙｓＤＯＴＡを含むがこれらに限定されない。Orcutt et al., Mol Imaging Biol. (2011) Apr; 13(2): 215-221；Cheal SM, et al. (2017) J Nucl Med, 58(11):1735-42（β放射体を伴うＤＯＴＡハプテンについて記載する）；Cheal SM, et al. (2018) J Nucl Med, 59:123（α放射体）を参照されたい。ＤＯＴＡおよびその変種は、常磁性金属および放射性核種を含む、広範にわたる金属をキレートする。例示的金属は、インジウム、ガリウム、ガドリニウム、ユーロピウム、テルビウム、銅、ビスマスなどを含む。
一部の実施形態では、ＤＯＴＡハプテンは、式Ｉ
一部の実施形態では、ＤＯＴＡハプテンは、式Ｉ
【0176】
【化6】
または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり；Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々、独立に、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンをもたらす）またはＨであり；Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々、独立に、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンをもたらす）またはＨであり；ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２である］の構造を有する。ある特定の実施形態では、ｎは３である。
【0177】
ＤＯＴＡハプテンについての、一部の実施形態では、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4のうちの少なくとも２つは、各々、独立に孤立電子対である。ＤＯＴＡハプテンについての、ある特定の実施形態では、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4のうちの３つは、各々、独立に孤立電子対であり、残りのＸ1、Ｘ2、Ｘ3、またはＸ4は、Ｈである。
【0178】
加えて、または代替的に、一部の実施形態では、本開示は、上記の式ＩのＤＯＴＡハプテンのうちのいずれかと、放射性核種のカチオンとを含むビスキレート剤を提示する。一部の実施形態では、式ＩのＤＯＴＡハプテンは、約１ｐＭ～１ｎＭ（例えば、約１～１０ｐＭ；１～１００ｐＭ；５～５０ｐＭ；１００～５００ｐＭ；または５００ｐＭ～１ｎＭ）のＫdで、放射性核種のカチオンに結合しうる。一部の実施形態では、Ｋdは、約１ｎＭ～約１ｐＭ、例えば、約１ｎＭ、９５０ｐＭ、９００ｐＭ、８５０ｐＭ、８００ｐＭ、７５０ｐＭ、７００ｐＭ、６５０ｐＭ、６００ｐＭ、５５０ｐＭ、５００ｐＭ、４５０ｐＭ、４００ｐＭ、３５０ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０ｐＭ、７０ｐＭ、６０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、９ｐＭ、８ｐＭ、７ｐＭ、６ｐＭ、５ｐＭ、４ｐＭ、３ｐＭ、２．５ｐＭ、２ｐＭ、または１ｐＭ以下の範囲内にある。一部の実施形態では、ビスキレート剤は、式ＩＩ
【0179】
【化7】
または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり；Ｍ2は、放射性核種のカチオンであり；Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々、独立に、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンをもたらす）またはＨであり；Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々、独立に、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンをもたらす）またはＨであり；ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２である］のビスキレート剤である。ある特定の実施形態では、ｎは、３である。ビスキレート剤についての、一部の実施形態では、Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7のうちの少なくとも２つは、各々、独立に、孤立電子対である。加えて、または代替的に、ビスキレート剤についての、一部の実施形態では、放射性核種のカチオンは、二価カチオンまたは三価カチオンである。
【0180】
本明細書で開示される、ＤＯＴＡハプテンについての、ありとあらゆる実施形態では、Ｍ2は、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、89Ｚｒ、68Ｇａ、または64Ｃｕである。
【0181】
別の態様では、本開示は、操作された免疫細胞が、ＤＯＴＡハプテンおよび腫瘍抗原とに結合するように構成されている、本明細書で提示される、操作された免疫細胞およびＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を提示する。本開示はまた、ビスキレート剤（例えば、式ＩＩのビスキレート剤）と、操作された免疫細胞とを含む複合体も提供するが、この場合、操作された免疫細胞は、ＤＯＴＡハプテンと腫瘍抗原とに結合するように構成されている。本明細書で開示される複合体についての、上記の実施形態のうちのいずれかでは、操作された免疫細胞は、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片（Cheal et al., Mol Cancer Ther. 13(7):1803-12 (2014)を参照されたい）を発現する。加えて、または代替的に、本明細書で開示される複合体についての、上記の実施形態のうちのいずれかでは、操作された免疫細胞は、Ｇ５４Ｃ置換を有する抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片を発現する。
【0182】
本明細書で開示される複合体についての、上記の実施形態のうちのいずれかでは、腫瘍抗原は、５Ｔ４、アルファ５β１インテグリン、７０７－ＡＰ、Ａ３３、ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ－２、β－カテニン、ＢＣＭＡ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ ＩＸ抗体、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳ－１、ＣＴ、Ｃｙｐ－Ｂ、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＤＡＭ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合性タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０、ＧＤ－２、ＧＭ２、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ*０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｋｉ－６７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＬＲＰ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ、ＭＡＲＴ－１／ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、メソテリン、ＭＵＣ、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ－１－Ｂ、ｍｙｃ、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹＥＳＯ－１、ＮＹ－Ｅｓｏ－Ｂ、ｐ５３、プロテイナーゼ－３、ｐ１９０、ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＲＯＲＩ、ＳＡＲＴ－１またはＳＡＲＴ－３、スルビビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、テネイシン、ＴＳＴＡ チロシナーゼ、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１からなる群から選択される。加えて、または代替的に、複合体についての、一部の実施形態では、操作された免疫細胞の、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片は、１００ｎＭ～９５ｎＭ、９５～９０ｎＭ、９０～８５ｎＭ、８５～８０ｎＭ、８０～７５ｎＭ、７５～７０ｎＭ、７０～６５ｎＭ、６５～６０ｎＭ、６０～５５ｎＭ、５５～５０ｎＭ、５０～４５ｎＭ、４５～４０ｎＭ、４０～３５ｎＭ、３５～３０ｎＭ、３０～２５ｎＭ、２５～２０ｎＭ、２０～１５ｎＭ、１５～１０ｎＭ、１０～５ｎＭ、５～１ｎＭ、１ｎＭ～９５０ｐＭ、９５０ｐＭ～９００ｐＭ、９００ｐＭ～８５０ｐＭ、８５０ｐＭ～８００ｐＭ、８００ｐＭ～７５０ｐＭ、７５０ｐＭ～７００ｐＭ、７００ｐＭ～６５０ｐＭ、６５０ｐＭ～６００ｐＭ、６００ｐＭ～５５０ｐＭ、５５０ｐＭ～５００ｐＭ、５００ｐＭ～４５０ｐＭ、４５０ｐＭ～４００ｐＭ、４００ｐＭ～３５０ｐＭ、３５０ｐＭ～３００ｐＭ、３００ｐＭ～２５０ｐＭ、２５０ｐＭ～２００ｐＭ、２００ｐＭ～１５０ｐＭ、１５０ｐＭ～１００ｐＭ、１００ｐＭ～５０ｐＭ、５０ｐＭ～４０ｐＭ、４０ｐＭ～３０ｐＭ、３０ｐＭ～２０ｐＭ、２０ｐＭ～１０ｐＭ、９ｐＭ、８ｐＭ、７ｐＭ、６ｐＭ、５ｐＭ、４ｐＭ、３ｐＭ、２．５ｐＭ、２ｐＭ、１．５ｐＭ、または１ｐＭ以下であるＫdで、ＤＯＴＡハプテンに結合する。
【0183】
本技術の診断法
一態様では、本開示は、腫瘍の検出を必要とする対象において、腫瘍（例えば、充実性腫瘍または液性腫瘍）を検出するための方法であって、（ａ）対象に、有効量の本技術のいずれかの複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記複合体の操作された免疫細胞により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されているステップ；および（ｂ）前記複合体により放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における腫瘍の存在を検出するステップを含む、前記方法を提示する。また、腫瘍の検出を必要とする対象において、腫瘍（例えば、充実性腫瘍または液性腫瘍）を検出するための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で記載されるいずれかの操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、有効量の、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；および（ｃ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における腫瘍の存在を検出するステップを含む、前記方法も開示される。
加えて、または代替的に、本明細書で開示される方法についての一部の実施形態では、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルは、陽電子放射型断層撮影法、または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法を使用して検出される。
一態様では、本開示は、腫瘍の検出を必要とする対象において、腫瘍（例えば、充実性腫瘍または液性腫瘍）を検出するための方法であって、（ａ）対象に、有効量の本技術のいずれかの複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記複合体の操作された免疫細胞により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されているステップ；および（ｂ）前記複合体により放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における腫瘍の存在を検出するステップを含む、前記方法を提示する。また、腫瘍の検出を必要とする対象において、腫瘍（例えば、充実性腫瘍または液性腫瘍）を検出するための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で記載されるいずれかの操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、有効量の、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；および（ｃ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における腫瘍の存在を検出するステップを含む、前記方法も開示される。
加えて、または代替的に、本明細書で開示される方法についての一部の実施形態では、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルは、陽電子放射型断層撮影法、または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法を使用して検出される。
【0184】
本明細書で開示される方法についての、一部の実施形態では、対象は、がんを有すると診断されているか、またはこれを有することが疑われている。がんの例は、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）部がん、耳鼻咽喉科（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、消化器がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎がん、喉頭がん、白血病、肝がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫、およびこれらの転移を含むがこれらに限定されない。
【0185】
本明細書で開示される方法についての、前出の実施形態のうちのいずれかでは、複合体、操作された免疫細胞、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンは、静脈内投与、腫瘍内投与、筋内投与、動脈内投与、髄腔内投与、関節包内投与、眼窩内投与、皮内投与、腹腔内投与、経気管投与、皮下投与、脳室内投与、経口投与、または鼻腔内投与される。加えて、または代替的に、一部の実施形態では、複合体、操作された免疫細胞、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンは、対象の脳脊髄液または血液へ投与される。
【0186】
加えて、または代替的に、一部の実施形態では、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルは、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが投与された２～１２０時間後の間に検出される。ある特定の実施形態では、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルは、組織１グラム当たりの注入用量百分率（％ＩＤ／ｇ）として表される。参照値は、非腫瘍（正常）組織内に存在する放射線のレベルを測定し、非腫瘍（正常）組織内に存在する平均放射線レベル±標準偏差を計算することにより計算されうる。一部の実施形態では、参照値は、標準取込み値（ＳＵＶ）である。Thie JA, J Nucl Med. 45(9):1431-4 (2004)を参照されたい。加えて、または代替的に、一部の実施形態では、腫瘍組織の放射線のレベルと、正常組織の放射線のレベルとの比は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、または１００：１である。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
【0187】
放射性標識化ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合性断片を発現する操作された免疫細胞の投与の、１分間～４日間の間、またはこれを超える日数後のいずれかの時点において投与されうる。例えば、一部の実施形態では、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片を発現する操作された免疫細胞の投与の、１分間、２分間、３分間、４分間、５分間、１０分間、１５分間、２０分間、２５分間、３０分間、３５分間、４０分間、４５分間、５０分間、５５分間、１時間、１．２５時間、１．５時間、１．７５時間、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、６．５時間、７時間、７．５時間、８時間、８．５時間、９時間、９．５時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、またはこれらの中のいずれかの範囲の時間後に投与される。代替的に、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片を発現する操作された免疫細胞の投与の、４日間またはこれを超える日数後のいずれかの時点において投与されうる。
【0188】
一態様では、本開示は、対象における、操作された免疫細胞の生体内分布をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で開示されるいずれかの操作された免疫細胞を投与するステップであって、操作された前記免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；および（ｃ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における、前記操作された免疫細胞の生体内分布を決定するステップを含む、前記方法を提示する。別の態様では、本開示は、対象における、操作された免疫細胞の生体内分布をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本技術のいずれかの操作された免疫細胞と放射性標識化ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；および（ｂ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における、前記操作された免疫細胞の生体内分布を決定するステップを含む、前記方法を提示する。
【0189】
さらに別の態様では、本開示は、対象における操作された免疫細胞の生存率をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で開示されるいずれかの操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された前記免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；（ｃ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；（ｄ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および（ｅ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと同等である場合に、対象における前記操作された免疫細胞が生存可能であることを決定するステップを含む、前記方法を提示する。一部の実施形態では、方法は、ステップ（ｄ）の前に、対象に、第２の有効量の、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップをさらに含む。本明細書ではまた、対象における操作された免疫細胞の生存率をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で記載されるいずれかの操作された免疫細胞と、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；（ｃ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および（ｄ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと同等である場合に、対象における前記操作された免疫細胞が生存可能であることを決定するステップを含む、前記方法も開示される。
【0190】
さらに別の態様では、本開示は、対象における操作された免疫細胞の増殖をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、本明細書で記載されるいずれかの操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、第１の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現され、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；（ｃ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；（ｄ）ステップ（ｃ）の後で、対象に、第２の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップ；（ｅ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および（ｆ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと比べて高値である場合に、対象における前記操作された免疫細胞が増殖していることを決定するステップを含む、前記方法を提示する。
【0191】
本明細書で開示される方法についての、ありとあらゆる実施形態では、複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルは、陽電子放射型断層撮影法、または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法を使用して検出される。加えて、または代替的に、本明細書で開示される方法についての、前出の実施形態のうちのいずれかでは、操作された免疫細胞、放射性標識化ＤＯＴＡハプテン、または複合体は、腫瘍内投与、静脈内投与、筋内投与、動脈内投与、髄腔内投与、関節包内投与、眼窩内投与、皮内投与、腹腔内投与、経気管投与、皮下投与、脳室内投与、経口投与、または鼻腔内投与される。本明細書で開示される方法についての、一部の実施形態では、操作された免疫細胞、放射性標識化ＤＯＴＡハプテン、または複合体は、静脈内投与、腫瘍内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋内投与、または腫瘍内投与される。
【0192】
本明細書で開示される方法についての、ありとあらゆる実施形態では、対象は、癌腫、肉腫、黒色腫、または血液（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ）がんの中から選択される、がんまたは腫瘍を有する。一部の実施形態では、がんまたは腫瘍は、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）部がん、耳鼻咽喉科（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、消化器がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎がん、喉頭がん、白血病、肝がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫、およびこれらの転移の中から選択される。
【0193】
キット
本技術は、患者におけるがんを診断するために適する構成要素を含有するキットを提供する。
一態様では、キットは、腫瘍抗原ターゲティング受容体（例えば、ＣＡＲ）と、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを、単位剤形内に含む、操作された免疫細胞を含む組成物を含む。特定の実施形態では、細胞は、少なくとも１つの共刺激リガンドをさらに発現する。一部の実施形態では、キットは、滅菌容器を含み、このような容器は、ボックス、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、バリスターパック、または当技術分野で公知である、他の適切な容器形態でありうる。このような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属フォイル、または医薬を保持するのに適する、他の材料から作られる。
本技術は、患者におけるがんを診断するために適する構成要素を含有するキットを提供する。
一態様では、キットは、腫瘍抗原ターゲティング受容体（例えば、ＣＡＲ）と、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とを、単位剤形内に含む、操作された免疫細胞を含む組成物を含む。特定の実施形態では、細胞は、少なくとも１つの共刺激リガンドをさらに発現する。一部の実施形態では、キットは、滅菌容器を含み、このような容器は、ボックス、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、バリスターパック、または当技術分野で公知である、他の適切な容器形態でありうる。このような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属フォイル、または医薬を保持するのに適する、他の材料から作られる。
【0194】
所望の場合、操作された免疫細胞は、操作された免疫細胞を、新生物（例えば、充実性腫瘍）を有するか、またはこれを発症する危険性がある対象に投与するための指示書と併せて提供されうる。ある特定の実施形態では、指示書は、以下：診断剤についての記載；新生物（例えば、充実性腫瘍）若しくはその症状の進行を診断またはモニタリングするための投与スケジュールおよび投与量；注意事項；警告；適応；禁忌；過剰用量情報；有害反応；動物薬理学；臨床研究；並びに／または参考文献のうちの少なくとも１つを含む。指示書は、容器（存在する場合）に直接印刷される場合もあり、容器に貼付されたラベルとしての指示書の場合もあり、別紙、小冊子、カード、または容器内に、若しくは容器と共に供給されるフォルダーとしての指示書の場合もある。
【0195】
別の態様では、本技術のキットは、ＤＯＴＡハプテン（例えば、Ｂｎ－ＤＯＴＡ、ＮＨ2－ベンジル（Ｂｎ）ＤＯＴＡ、式ＩＩのビスキレート剤、または本明細書で記載されるＤＯＴＡハプテンのうちのいずれかなど）、少なくとも１つの、本技術の操作された免疫細胞、および使用のための指示書を含む。キットは、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、89Ｚｒ、68Ｇａ、または64Ｃｕなど、１つまたは複数の放射性核種をさらに含みうる。
【0196】
一部の実施形態では、少なくとも１つの、本技術の操作された免疫細胞は、腫瘍抗原標的（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＷＴ１、およびＰＲＡＭＥ）に結合する。少なくとも１つの、本技術の操作された免疫細胞は、抗体の、滅菌液体製剤または滅菌凍結乾燥調製物を含有する、プレフィルドシリンジまたはペン型オートインジェクターの形態で提供されうる（例えば、Kivitz et al., Clin. Ther. 28:1619-29 (2006)）。
投与経路を介して、キットの構成要素を送達することが可能なデバイスも組み入れられる場合がある。このようなデバイスの例は、シリンジ（非経口投与のための）または吸入デバイスを含む。
キットの構成要素は、一体にパッケージングされる場合もあり、２つまたはこれを超える容器に分けられる場合もある。一部の実施形態では、容器は、再構成に適する、ＤＯＴＡハプテン、および／または操作された免疫細胞組成物の、滅菌、凍結乾燥製剤を含有するバイアルでありうる。キットはまた、他の試薬の再構成および／または希釈に適する、１つまたは複数の緩衝剤も含有しうる。使用されうる、他の容器は、パウチ、トレー、ボックス、チューブなどを含むがこれらに限定されない。キットの構成要素は、容器内に、無菌状態で、パッケージングされ、維持されうる。
投与経路を介して、キットの構成要素を送達することが可能なデバイスも組み入れられる場合がある。このようなデバイスの例は、シリンジ（非経口投与のための）または吸入デバイスを含む。
キットの構成要素は、一体にパッケージングされる場合もあり、２つまたはこれを超える容器に分けられる場合もある。一部の実施形態では、容器は、再構成に適する、ＤＯＴＡハプテン、および／または操作された免疫細胞組成物の、滅菌、凍結乾燥製剤を含有するバイアルでありうる。キットはまた、他の試薬の再構成および／または希釈に適する、１つまたは複数の緩衝剤も含有しうる。使用されうる、他の容器は、パウチ、トレー、ボックス、チューブなどを含むがこれらに限定されない。キットの構成要素は、容器内に、無菌状態で、パッケージングされ、維持されうる。
【実施例】
【0197】
（実施例１）
材料および方法
ＣＡＲ Ｔ細胞への形質導入：図３Ａ～３Ｃは、ウイルスにより、Ｃ８２５およびＣＤ１９－ＣＡＲの両方を初代ヒトＴ細胞へ形質導入する、３種の異なる戦略を示す。図３Ａは２種の単一構築物の形質導入を示し、１種がＣ８２５をＧＦＰレポーターと共にコードし（上）、もう１種がＣＤ１９ ＣＡＲをコードする（下）。図３Ｂは、Ｐ２Ａ切断部位により隔てられた、膜貫通ドメイン有するＣ８２５およびＧＦＰレポーターとＣＤ１９ ＣＡＲ、とをコードする二シストロン性の構築物を示す。図３Ｃは、Ｐ２Ａ切断部位により隔てられた、Ｔｈｙ１由来ＧＰＩ連結配列を有するＣ８２５およびＨｉｓタグレポーターとＣＤ１９ ＣＡＲとをコードする、二シストロン性の構築物を示す。初代ヒトＴ細胞への形質導入についての代表的流れ図を右図に示す。
材料および方法
ＣＡＲ Ｔ細胞への形質導入：図３Ａ～３Ｃは、ウイルスにより、Ｃ８２５およびＣＤ１９－ＣＡＲの両方を初代ヒトＴ細胞へ形質導入する、３種の異なる戦略を示す。図３Ａは２種の単一構築物の形質導入を示し、１種がＣ８２５をＧＦＰレポーターと共にコードし（上）、もう１種がＣＤ１９ ＣＡＲをコードする（下）。図３Ｂは、Ｐ２Ａ切断部位により隔てられた、膜貫通ドメイン有するＣ８２５およびＧＦＰレポーターとＣＤ１９ ＣＡＲ、とをコードする二シストロン性の構築物を示す。図３Ｃは、Ｐ２Ａ切断部位により隔てられた、Ｔｈｙ１由来ＧＰＩ連結配列を有するＣ８２５およびＨｉｓタグレポーターとＣＤ１９ ＣＡＲとをコードする、二シストロン性の構築物を示す。初代ヒトＴ細胞への形質導入についての代表的流れ図を右図に示す。
【0198】
（実施例２）
異種移植モデルにおける、本技術の操作されたＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ追跡
ハプテン捕捉抗体であるＣ８２５を発現する特化した超高アフィニティー膜を、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞へ形質導入した。ｉｎ ｖｉｖｏにおける使用の前に、図２Ａに示される飽和結合アッセイにより、放射性ハプテン系である［111Ｉｎ］Ｐｒ－ＤＯＴＡを使用して、これらの細胞を表面ベクターの発現について精製し調べた。ヒトＢ細胞（バーキット型）リンパ腫であるＣＤ１９発現Ｒａｊｉリンパ腫を、免疫不全マウスにおけるＣＤ１９のターゲティングのためのリンパ腫性腫瘍として使用した。図２Ｂは、右肩のｓ．ｃ．において、Ｒａｊｉ ＧＦＰ－ｆｌｕｃ腫瘍を施されたＮＳＧマウスを示す。ＣＡＲ－Ｔ細胞（２．５×１０6個）のｉ．ｖ．注入の１０日後、ＣＡＲ Ｔ細胞（ＣＤ１９ ＣＡＲ＋Ｃ８２５、または対照であるＣＤ１９ ＣＡＲのみ）のｉｎ ｖｉｖｏ追跡のために、マウスに放射性ハプテンである［111Ｉｎ］Ｐｒ－ＤＯＴＡを注入した。図２Ｃに示される通り、ｓｃＦｖであるＣ８２５を発現するＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置された動物は、Ｒａｊｉ腫瘍を保有する異種移植片内において有効な腫瘍ターゲティングを示した。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、放射性ハプテンであるキレート剤を効率的に捕捉して、腎クリアランスを介する薬理学反応を最適化した（データは示さない）。
異種移植モデルにおける、本技術の操作されたＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ追跡
ハプテン捕捉抗体であるＣ８２５を発現する特化した超高アフィニティー膜を、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞へ形質導入した。ｉｎ ｖｉｖｏにおける使用の前に、図２Ａに示される飽和結合アッセイにより、放射性ハプテン系である［111Ｉｎ］Ｐｒ－ＤＯＴＡを使用して、これらの細胞を表面ベクターの発現について精製し調べた。ヒトＢ細胞（バーキット型）リンパ腫であるＣＤ１９発現Ｒａｊｉリンパ腫を、免疫不全マウスにおけるＣＤ１９のターゲティングのためのリンパ腫性腫瘍として使用した。図２Ｂは、右肩のｓ．ｃ．において、Ｒａｊｉ ＧＦＰ－ｆｌｕｃ腫瘍を施されたＮＳＧマウスを示す。ＣＡＲ－Ｔ細胞（２．５×１０6個）のｉ．ｖ．注入の１０日後、ＣＡＲ Ｔ細胞（ＣＤ１９ ＣＡＲ＋Ｃ８２５、または対照であるＣＤ１９ ＣＡＲのみ）のｉｎ ｖｉｖｏ追跡のために、マウスに放射性ハプテンである［111Ｉｎ］Ｐｒ－ＤＯＴＡを注入した。図２Ｃに示される通り、ｓｃＦｖであるＣ８２５を発現するＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置された動物は、Ｒａｊｉ腫瘍を保有する異種移植片内において有効な腫瘍ターゲティングを示した。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、放射性ハプテンであるキレート剤を効率的に捕捉して、腎クリアランスを介する薬理学反応を最適化した（データは示さない）。
【0199】
図４Ａは、レトロウイルスベクターである、ＳＦＧ－Ｔｈｏｒ、ＳＦＧ－１９ＢＢｚ（ＣＡＲ）、およびＳＦＧ－Ｃ８２５の構造の概略を示す。図４Ｂは、４時間にわたるｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害作用アッセイにより測定される通り、ＳＦＧ－Ｔｈｏｒ Ｔ細胞と、ＳＦＧ－１９ＢＢｚ（ＣＡＲ）Ｔ細胞との間では、ＣＤ１９（＋）Ｒａｊｉ腫瘍細胞の殺滅の点で、差違が見られないことを示す。これらの結果は、ヒト化ｓｃＦｖであるＣ８２５の、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ Ｔ細胞への形質導入が、ＣＤ１９（＋）標的腫瘍細胞をターゲティングしこれを溶解させるそれらの能力に負の影響を与えなかったことを裏付ける。図４Ｃは、１時間後のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、［111Ｉｎ］Ｐｒ（［111Ｉｎ］ＩｎＰｒ）への結合を示す。この代表的データセットが、放射性標識化ＤＯＴＡプローブのＣ８２５発現Ｔ細胞への特異的結合を示す一方、ＳＦＧ－１９ＢＢｚ（ＣＡＲ）Ｔ細胞およびＮＴ Ｔ細胞では有意な取込みは観察されなかった（全ての実験は、３７℃、三連で実施した）。データは、平均値±ＳＤである。図４Ｄは、［111Ｉｎ］Ｐｒ（［111Ｉｎ］ＩｎＰｒ）の、ＳＦＧ－Ｔｈｏｒ Ｔ細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏにおける結合反応速度を示す（ｎ＝３の独立アッセイ；代表例が示される）。図４Ｅは、Ｔ細胞の、腫瘍細胞へのターゲティングを評価するためのｉｎ ｖｉｖｏ研究についての、例示的スキームを示す。68Ｇａ－ＮＯＤＡＧＡ－Ｐｒ（１００ｍＣｕ、７００ピコモル）を放射性トレーサーとして使用し、ＣＤ１９（＋）Ｒａｊｉ異種移植片を保有するＮＳＧマウスにおける、Ｔ細胞の投与（Ｔ細胞１×１０6個）の１０日後に投与した。図４Ｆは、68Ｇａ－ＮＯＤＡＧＡ－Ｐｒの注射（ｐ．ｉ．）の１時間後における例示的ＭＩＰ（ｍａｘｉｍｕｍ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）画像であって、腫瘍における、ＳＦＧ－Ｔｈｏｒ Ｔ細胞のホーミングおよび蓄積を描示する画像を示す（右肩、赤矢印）。ＳＦＧ－１９ＢＢｚ（ＣＡＲ）Ｔ細胞の投与後には、腫瘍部位における、バックグラウンドを上回る取込みは見られない（青矢印）。図４Ｇは、画像ベースの生体内分布を使用して、腫瘍内取込み平均値と、腫瘍組織対正常組織比（ＴＮＲ）（ＳＦＧ－Ｔｈｏｒ：ｎ＝４；ＳＦＧ－１９ＢＢｚ（ＣＡＲ）：ｎ＝２）とを示す。**Ｐ＜０．０１である。
【0200】
図５Ａは、処置の失敗が確立されたＲａｊｉ腫瘍マウスモデルのｓ．ｃ．における、ｉｎ ｖｉｖｏの操作されたＴ細胞（細胞３×１０6個）を追跡するための例示的スキームを示す。腫瘍接種の７日後、マウスに、ｈｕＣ８２５－Ｃ１９ＢＢｚ Ｔ細胞３×１０6個または１９ＢＢｚ Ｔ細胞３×１０6個を、ｉ．ｖ．注入した。Ｔ細胞の投与後１７日目に、腫瘍量の持続的増殖（処置の失敗を指し示す）を示すマウスに、移植されたＴ細胞の存続および局在について評価するために、86Ｙ－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（３．７ＭＢｑ；４０ピコモル）をｉ．ｖ．注射した。図５Ｂは、注入の１、３、および１６時間後におけるＭＩＰ（ｍａｘｉｍｕｍ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）画像および軸位断ＰＥＴ／ＣＴ画像は、腫瘍におけるｈｕＣ８２５－Ｃ１９ＢＢｚ－ＣＡＲ Ｔ細胞の蓄積を描示することを示す（オレンジ丸）。Ｔ細胞の腫瘍内取込みの最高値４．９％ＩＤ／ｇ（対照における０．８％ＩＤ／ｇと対比される）は、注入の３時間後において見られた。対照マウスでは、腫瘍における、バックグラウンドを上回る取込みは見られない（１９ＢＢｚ ＣＡＲ；緑丸）。急速で顕著なトレーサーの腎クリアランスが見られた。
これらの結果は、本技術の操作された免疫細胞が、操作された免疫細胞の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける生体内分布、生存率、および増殖を決定する（ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｉｎｇ）ための方法において有用であることを裏付ける。
これらの結果は、本技術の操作された免疫細胞が、操作された免疫細胞の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける生体内分布、生存率、および増殖を決定する（ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｉｎｇ）ための方法において有用であることを裏付ける。
【0201】
例示的実施形態
本開示は、以下の非限定的実施形態に関して記載されうる：
実施形態１：一態様における本出願は、（ａ）配列番号３５～３９、４１、若しくは４２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、および／または抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸；並びに（ｂ）標的抗原に結合する受容体、および／または受容体をコードする核酸を含む操作された免疫細胞を提示する。
実施形態２：受容体が、Ｔ細胞受容体である、実施形態１に記載の操作された免疫細胞。
実施形態３：受容体が、天然の細胞受容体である、実施形態１または２に記載の操作された免疫細胞。
実施形態４：受容体が、非天然の細胞受容体である、実施形態１または２に記載の操作された免疫細胞。
実施形態５：受容体が、キメラ抗原受容体である、実施形態１～４のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
本開示は、以下の非限定的実施形態に関して記載されうる：
実施形態１：一態様における本出願は、（ａ）配列番号３５～３９、４１、若しくは４２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、および／または抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸；並びに（ｂ）標的抗原に結合する受容体、および／または受容体をコードする核酸を含む操作された免疫細胞を提示する。
実施形態２：受容体が、Ｔ細胞受容体である、実施形態１に記載の操作された免疫細胞。
実施形態３：受容体が、天然の細胞受容体である、実施形態１または２に記載の操作された免疫細胞。
実施形態４：受容体が、非天然の細胞受容体である、実施形態１または２に記載の操作された免疫細胞。
実施形態５：受容体が、キメラ抗原受容体である、実施形態１～４のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【0202】
実施形態６：抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸が、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の分泌のためのリーダー配列を含む、実施形態５に記載の操作された免疫細胞。
実施形態７：抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸がプロモーターに作動可能に連結されている、実施形態１～６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態８：プロモーターが構成的プロモーターである、実施形態７に記載の操作された免疫細胞。
実施形態９：プロモーターが条件的プロモーターである、実施形態７に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１０：条件的プロモーターが、受容体の標的抗原への結合により誘導される、実施形態９に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１１：標的抗原が腫瘍抗原である、実施形態１～１０のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態７：抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片をコードする核酸がプロモーターに作動可能に連結されている、実施形態１～６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態８：プロモーターが構成的プロモーターである、実施形態７に記載の操作された免疫細胞。
実施形態９：プロモーターが条件的プロモーターである、実施形態７に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１０：条件的プロモーターが、受容体の標的抗原への結合により誘導される、実施形態９に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１１：標的抗原が腫瘍抗原である、実施形態１～１０のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【0203】
実施形態１２：受容体をコードする核酸が構成的プロモーターに作動可能に連結されている、実施形態１～１１のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１３：キメラ抗原受容体が、（ｉ）細胞外抗原結合性ドメイン；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、実施形態５～１２のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１４：細胞外抗原結合性ドメインが、標的抗原に結合する、実施形態１３に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１５：腫瘍抗原が、５Ｔ４、アルファ５β１インテグリン、７０７－ＡＰ、Ａ３３、ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ－２、β－カテニン、ＢＣＭＡ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ ＩＸ抗体、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳ－１、ＣＴ、Ｃｙｐ－Ｂ、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＤＡＭ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合性タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０、ＧＤ－２、ＧＭ２、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ*０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｋｉ－６７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＬＲＰ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ、ＭＡＲＴ－１／ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、メソテリン、ＭＵＣ、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ－１－Ｂ、ｍｙｃ、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹＥＳＯ－１、ＮＹ－Ｅｓｏ－Ｂ、ｐ５３、プロテイナーゼ３、ｐ１９０、ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＲＯＲＩ、ＳＡＲＴ－１またはＳＡＲＴ－３、スルビビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、テネイシン、ＴＳＴＡチロシナーゼ、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１からなる群から選択される、実施形態１１～１４のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１３：キメラ抗原受容体が、（ｉ）細胞外抗原結合性ドメイン；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、実施形態５～１２のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１４：細胞外抗原結合性ドメインが、標的抗原に結合する、実施形態１３に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１５：腫瘍抗原が、５Ｔ４、アルファ５β１インテグリン、７０７－ＡＰ、Ａ３３、ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ－２、β－カテニン、ＢＣＭＡ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ ＩＸ抗体、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳ－１、ＣＴ、Ｃｙｐ－Ｂ、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＤＡＭ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合性タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０、ＧＤ－２、ＧＭ２、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ*０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｋｉ－６７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＬＲＰ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ、ＭＡＲＴ－１／ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、メソテリン、ＭＵＣ、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ－１－Ｂ、ｍｙｃ、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹＥＳＯ－１、ＮＹ－Ｅｓｏ－Ｂ、ｐ５３、プロテイナーゼ３、ｐ１９０、ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＲＯＲＩ、ＳＡＲＴ－１またはＳＡＲＴ－３、スルビビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、テネイシン、ＴＳＴＡチロシナーゼ、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１からなる群から選択される、実施形態１１～１４のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【0204】
実施形態１６：細胞外抗原結合性ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１３～１５のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１７：細胞外抗原結合性ドメインがヒトｓｃＦｖを含む、実施形態１３～１６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１８：細胞外抗原結合性ドメインが配列番号３または配列番号４のＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、実施形態１３～１７のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１９：細胞外抗原結合性ドメインが配列番号３または配列番号４に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、実施形態１３～１８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１７：細胞外抗原結合性ドメインがヒトｓｃＦｖを含む、実施形態１３～１６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１８：細胞外抗原結合性ドメインが配列番号３または配列番号４のＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、実施形態１３～１７のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態１９：細胞外抗原結合性ドメインが配列番号３または配列番号４に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、実施形態１３～１８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【0205】
実施形態２０：細胞外抗原結合性ドメインが、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端へ共有結合的に結合されたシグナルペプチドを含む、実施形態１３～１９のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２１：膜貫通ドメインがＣＤ８膜貫通ドメインを含む、実施形態１３～２０のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２２：細胞内ドメインが１つまたは複数の共刺激ドメインを含む、実施形態１３～２１のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２３：１つまたは複数の共刺激ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメイン、ＣＤ３ζ鎖、４－１ＢＢＬ共刺激ドメイン、またはこれらのいずれかの組合せから選択される、実施形態２２に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２４：操作された免疫細胞がリンパ球である、実施形態１～２３のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２１：膜貫通ドメインがＣＤ８膜貫通ドメインを含む、実施形態１３～２０のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２２：細胞内ドメインが１つまたは複数の共刺激ドメインを含む、実施形態１３～２１のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２３：１つまたは複数の共刺激ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメイン、ＣＤ３ζ鎖、４－１ＢＢＬ共刺激ドメイン、またはこれらのいずれかの組合せから選択される、実施形態２２に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２４：操作された免疫細胞がリンパ球である、実施形態１～２３のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【0206】
実施形態２５：リンパ球が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態２４に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２６：Ｔ細胞がＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＣＤ８＋ Ｔ細胞である、実施形態２５に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２７：操作された免疫細胞が腫瘍浸潤リンパ球である、実施形態１～２６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２８：操作された免疫細胞が自家ドナーまたは同種ドナーに由来する、実施形態１～２７のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２９：キメラ抗原受容体と、配列番号３５～３９、４１、または４２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、とを含むポリペプチド。
実施形態２６：Ｔ細胞がＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＣＤ８＋ Ｔ細胞である、実施形態２５に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２７：操作された免疫細胞が腫瘍浸潤リンパ球である、実施形態１～２６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２８：操作された免疫細胞が自家ドナーまたは同種ドナーに由来する、実施形態１～２７のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
実施形態２９：キメラ抗原受容体と、配列番号３５～３９、４１、または４２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片、とを含むポリペプチド。
【0207】
実施形態３０：抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片とキメラ抗原受容体との間に配置された自己切断型ペプチドをさらに含む、実施形態２９に記載のポリペプチド。
実施形態３１：自己切断型ペプチドがＰ２Ａ自己切断型ペプチドである、実施形態３０に記載のポリペプチド。
実施形態３２：抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片が、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の分泌のためのリーダー配列を含む、実施形態２９～３１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３３：キメラ抗原受容体が、（ｉ）細胞外抗原結合性ドメイン；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメイン、を含む、実施形態２９～３２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３４：細胞外抗原結合性ドメインが腫瘍抗原に結合する、実施形態３３に記載のポリペプチド。
実施形態３１：自己切断型ペプチドがＰ２Ａ自己切断型ペプチドである、実施形態３０に記載のポリペプチド。
実施形態３２：抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片が、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片の分泌のためのリーダー配列を含む、実施形態２９～３１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３３：キメラ抗原受容体が、（ｉ）細胞外抗原結合性ドメイン；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメイン、を含む、実施形態２９～３２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３４：細胞外抗原結合性ドメインが腫瘍抗原に結合する、実施形態３３に記載のポリペプチド。
【0208】
実施形態３５：腫瘍抗原が、ＭＵＣ１６、メソテリン、ＣＤ１９、ＷＴ１、ＰＳＣＡ、およびＢＣＭＡの中から選択される、実施形態３４に記載のポリペプチド。
実施形態３６：細胞外抗原結合性ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態３３～３５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３７：細胞外抗原結合性ドメインが配列番号３または配列番号４のＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、実施形態３３～３６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３８：細胞外抗原結合性ドメインが、配列番号３または配列番号４に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、実施形態３３～３７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３９：膜貫通ドメインがＣＤ８膜貫通ドメインを含む、実施形態３３～３８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３６：細胞外抗原結合性ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態３３～３５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３７：細胞外抗原結合性ドメインが配列番号３または配列番号４のＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、実施形態３３～３６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３８：細胞外抗原結合性ドメインが、配列番号３または配列番号４に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む、実施形態３３～３７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態３９：膜貫通ドメインがＣＤ８膜貫通ドメインを含む、実施形態３３～３８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【0209】
実施形態４０：細胞内ドメインが１つまたは複数の共刺激ドメインを含む、実施形態３３～３９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
実施形態４１：１つまたは複数の共刺激ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメイン、ＣＤ３ζ鎖、４－１ＢＢＬ共刺激ドメイン、またはこれらのいずれかの組合せから選択される、実施形態４０に記載のポリペプチド。
実施形態４２：実施形態２９～４１のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする核酸。
実施形態４３：ポリペプチドをコードする核酸がプロモーターに作動可能に連結されている、実施形態４２に記載の核酸。
実施形態４４：プロモーターが構成的プロモーターである、実施形態４３に記載の核酸。
実施形態４５：プロモーターが条件的プロモーターである、実施形態４３に記載の核酸。
実施形態４６：条件的プロモーターが、抗原へのキメラ抗原受容体の結合により誘導可能である、実施形態４５に記載の核酸。
実施形態４７：実施形態４２～４６のいずれか１項に記載の核酸を含むベクター。
実施形態４８：ウイルスベクターまたはプラスミドである、実施形態４７に記載のベクター。
実施形態４９：レトロウイルスベクターである、実施形態４７に記載のベクター。
実施形態４１：１つまたは複数の共刺激ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメイン、ＣＤ３ζ鎖、４－１ＢＢＬ共刺激ドメイン、またはこれらのいずれかの組合せから選択される、実施形態４０に記載のポリペプチド。
実施形態４２：実施形態２９～４１のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする核酸。
実施形態４３：ポリペプチドをコードする核酸がプロモーターに作動可能に連結されている、実施形態４２に記載の核酸。
実施形態４４：プロモーターが構成的プロモーターである、実施形態４３に記載の核酸。
実施形態４５：プロモーターが条件的プロモーターである、実施形態４３に記載の核酸。
実施形態４６：条件的プロモーターが、抗原へのキメラ抗原受容体の結合により誘導可能である、実施形態４５に記載の核酸。
実施形態４７：実施形態４２～４６のいずれか１項に記載の核酸を含むベクター。
実施形態４８：ウイルスベクターまたはプラスミドである、実施形態４７に記載のベクター。
実施形態４９：レトロウイルスベクターである、実施形態４７に記載のベクター。
【0210】
実施形態５０：実施形態４２～４６のいずれか１項に記載の核酸、または実施形態４７～４９のいずれか１項に記載のベクターを含む宿主細胞。
実施形態５１：操作された免疫細胞が、ＤＯＴＡハプテンおよび腫瘍抗原に結合するように構成されている、実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体。
実施形態５１：操作された免疫細胞が、ＤＯＴＡハプテンおよび腫瘍抗原に結合するように構成されている、実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体。
【0211】
実施形態５２：ＤＯＴＡハプテンが、ベンジル－ＤＯＴＡ、ＮＨ２－ベンジル（Ｂｎ）ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－デスフェリオキサミン、ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２；ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ２、Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－ＲＧＤ、ＤＯＴＡ－ＰＥＧ－Ｅ（ｃ（ＲＧＤｙＫ））２、ＤＯＴＡ－８－ＡＯＣ－ＢＢＮ、ＤＯＴＡ－ＰＥＳＩＮ、ｐ－ＮＯ２－ベンジル－ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－ビオチン－サルコシン（ＤＯＴＡ－ビオチン）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸モノ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）（ＤＯＴＡ－ＮＨＳ）、またはＤＯＴＡＴｙｒＬｙｓＤＯＴＡである、実施形態５１に記載の複合体。
実施形態５３：ＤＯＴＡハプテンが、式ＩＩ
実施形態５３：ＤＯＴＡハプテンが、式ＩＩ
【0212】
【化8】
または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり；Ｍ2は、放射性核種のカチオンであり；Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々、独立に、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンをもたらす）またはＨであり；Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々、独立に、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンをもたらす）またはＨであり；ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２である］の構造を有する、実施形態５１に記載の複合体。
実施形態５４：Ｍ2が、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、89Ｚｒ、68Ｇａ、または64Ｃｕである、実施形態５１～５３のいずれか１項に記載の複合体。
【0213】
実施形態５５：腫瘍の検出を必要とする対象における腫瘍を検出するための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、実施形態５４に記載の複合体を投与するステップであって、前記複合体が、複合体の操作された免疫細胞により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されているステップ；および（ｂ）複合体により放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における腫瘍の存在を検出するステップを含む、前記方法。
【0214】
実施形態５６：腫瘍の検出を必要とする対象における腫瘍を検出するための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、実施形態１１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞を投与するステップであって、操作された前記免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、有効量の、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；および（ｃ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における腫瘍の存在を検出するステップを含む、前記方法。
実施形態５７：複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、陽電子放射型断層撮影法または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法を使用して検出される、実施形態５５または５６に記載の方法。
実施形態５７：複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、陽電子放射型断層撮影法または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法を使用して検出される、実施形態５５または５６に記載の方法。
【0215】
実施形態５８：複合体または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、複合体または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが投与された４～２４時間後の間に検出される、実施形態５５～５７のいずれか１項に記載の方法。
実施形態５９：複合体または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、組織１グラム当たりの注入用量百分率（％ＩＤ／ｇ）として表される、実施形態５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６０：腫瘍組織の放射線のレベルと、正常組織の放射線のレベルとの比が、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、または１００：１である、実施形態５５～５９のいずれか１項に記載の方法。
実施形態５９：複合体または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、組織１グラム当たりの注入用量百分率（％ＩＤ／ｇ）として表される、実施形態５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６０：腫瘍組織の放射線のレベルと、正常組織の放射線のレベルとの比が、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、または１００：１である、実施形態５５～５９のいずれか１項に記載の方法。
【0216】
実施形態６１：対象が、がんを有すると診断されているか、またはこれを有することが疑われている、実施形態５５～６０のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６２：がんが、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）部がん、耳鼻咽喉科（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、消化器がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎がん、喉頭がん、白血病、肝がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫、およびこれらの転移からなる群から選択される、実施形態６１に記載の方法。
実施形態６３：複合体、操作された免疫細胞、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、静脈内投与、腫瘍内投与、筋内投与、動脈内投与、髄腔内投与、関節包内投与、眼窩内投与、皮内投与、腹腔内投与、経気管投与、皮下投与、脳室内投与、経口投与、または鼻腔内投与される、実施形態５５～６２のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６４：複合体、操作された免疫細胞、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、対象の脳脊髄液または血液に投与される、実施形態５５～６３のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６２：がんが、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）部がん、耳鼻咽喉科（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、消化器がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎がん、喉頭がん、白血病、肝がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫、およびこれらの転移からなる群から選択される、実施形態６１に記載の方法。
実施形態６３：複合体、操作された免疫細胞、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、静脈内投与、腫瘍内投与、筋内投与、動脈内投与、髄腔内投与、関節包内投与、眼窩内投与、皮内投与、腹腔内投与、経気管投与、皮下投与、脳室内投与、経口投与、または鼻腔内投与される、実施形態５５～６２のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６４：複合体、操作された免疫細胞、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、対象の脳脊髄液または血液に投与される、実施形態５５～６３のいずれか１項に記載の方法。
【0217】
実施形態６５：対象における、操作された免疫細胞の生体内分布をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された前記免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；および（ｃ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における操作された免疫細胞の生体内分布を決定するステップを含む、前記方法。
実施形態６６：対象における、操作された免疫細胞の生体内分布をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；および（ｂ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における操作された免疫細胞の生体内分布を決定するステップを含む、前記方法。
実施形態６６：対象における、操作された免疫細胞の生体内分布をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；および（ｂ）前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出することにより、対象における操作された免疫細胞の生体内分布を決定するステップを含む、前記方法。
【0218】
実施形態６７：対象における操作された免疫細胞の生存率をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；（ｃ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；（ｄ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および（ｅ）第２の時点における前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと同等である場合に、対象における操作された免疫細胞が生存可能であることを決定するステップを含む、前記方法。
【0219】
実施形態６８：ステップ（ｄ）の前に、対象に、第２の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップをさらに含む、実施形態６７に記載の方法。
実施形態６９：対象における操作された免疫細胞の生存率をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；（ｃ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および（ｄ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと同等である場合に、対象における操作された免疫細胞が生存可能であることを決定するステップを含む、前記方法。
実施形態６９：対象における操作された免疫細胞の生存率をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、放射性標識化ＤＯＴＡハプテンとを含む複合体を投与するステップであって、前記複合体が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；（ｃ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および（ｄ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと同等である場合に、対象における操作された免疫細胞が生存可能であることを決定するステップを含む、前記方法。
【0220】
実施形態７０：対象における操作された免疫細胞の増殖をモニタリングするための方法であって、（ａ）対象に、有効量の、実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞を投与するステップであって、前記操作された前記免疫細胞が、前記操作された免疫細胞により認識される標的抗原を発現する組織に局在するように構成されているステップ；（ｂ）対象に、第１の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップであって、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンが、前記操作された免疫細胞により発現される抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５抗原結合断片に結合するように構成されているステップ；（ｃ）第１の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；（ｄ）ステップ（ｃ）の後で、対象に、第２の有効量の放射性標識化ＤＯＴＡハプテンを投与するステップ；（ｅ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線の、参照値より高値であるレベルを検出するステップ；および（ｆ）第２の時点における、前記放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、第１の時点において観察されるレベルと比べて高値である場合に、対象における操作された免疫細胞が増殖していることを決定するステップを含む、前記方法。
【0221】
実施形態７１：複合体、または放射性標識化ＤＯＴＡハプテンにより放射される放射線のレベルが、陽電子放射型断層撮影法、または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法を使用して検出される、実施形態６５～７０のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７２：操作された免疫細胞、放射性標識化ＤＯＴＡハプテン、または複合体が、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋内投与、または腫瘍内投与される、実施形態６５～７１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７３：がんが、癌腫、肉腫、黒色腫、または血液（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ）がんである、実施形態６５～７２のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７４：がんが、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）部がん、耳鼻咽喉科（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、消化器がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎がん、喉頭がん、白血病、肝がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫、およびこれらの転移の中から選択される、実施形態６５～７３のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７５：実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、がんの進行を診断またはモニタリングするための指示書とを含むキット。
実施形態７２：操作された免疫細胞、放射性標識化ＤＯＴＡハプテン、または複合体が、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋内投与、または腫瘍内投与される、実施形態６５～７１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７３：がんが、癌腫、肉腫、黒色腫、または血液（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ）がんである、実施形態６５～７２のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７４：がんが、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）部がん、耳鼻咽喉科（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、消化器がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎がん、喉頭がん、白血病、肝がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫、およびこれらの転移の中から選択される、実施形態６５～７３のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７５：実施形態１～２８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞と、がんの進行を診断またはモニタリングするための指示書とを含むキット。
【0222】
均等物
本技術は、本技術の、個々の態様についての、単一の例示として意図される、本出願において記載される、特定の実施形態の観点に限定されないものとする。当業者には明らかであるように、その精神および範囲から逸脱しない限りにおいて、本技術の多くの改変および変動がなされうる。当業者には、前出の記載から、本明細書に列挙された方法および装置に加えて、本技術の範囲内にある機能的に均等な方法および装置が明らかであろう。このような改変および変動は、本技術の範囲内に収まることが意図される。本技術は、特定の方法、試薬、化合物、組成物、または生体系に限定されず、これらは、当然ながら、変動しうることが理解されるものとする。また、本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態のみについて記載することを目的とし、限定的であることが意図されないことも理解されるものとする。
本技術は、本技術の、個々の態様についての、単一の例示として意図される、本出願において記載される、特定の実施形態の観点に限定されないものとする。当業者には明らかであるように、その精神および範囲から逸脱しない限りにおいて、本技術の多くの改変および変動がなされうる。当業者には、前出の記載から、本明細書に列挙された方法および装置に加えて、本技術の範囲内にある機能的に均等な方法および装置が明らかであろう。このような改変および変動は、本技術の範囲内に収まることが意図される。本技術は、特定の方法、試薬、化合物、組成物、または生体系に限定されず、これらは、当然ながら、変動しうることが理解されるものとする。また、本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態のみについて記載することを目的とし、限定的であることが意図されないことも理解されるものとする。
【0223】
加えて、本開示の特色または態様がマーカッシュ群との関係で記載される場合、当業者は、これにより、本開示はまた、マーカッシュ群のいずれかの個別のメンバー、またはメンバーの亜群との関係でも記載されることを認識するであろう。
【0224】
当業者により理解される通り、あらゆる目的について、特に、書面による記載に関して、本明細書で開示される全ての範囲はまた、あらゆる可能な部分範囲、並びにこれらの部分範囲の組合せも包含する。列挙される、あらゆる範囲は、同じ範囲について十分に記載し、これらが、少なくとも同等の２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などへ分割されることを可能とするものとして、容易に認識されうる。非限定例として述べると、本明細書で論じられる各範囲は、下位の３分の１、中間の３分の１、および上位の３分の１などへたやすく分割されうる。これもまた、当業者により理解される通り、「～以下」、「少なくとも」、「～を超える」、「～未満」などの、全ての表現は、列挙される数を含み、その後、上記で論じられた部分範囲に分割されうる範囲を指す。最後に、当業者により理解される通り、範囲は、各個別のメンバーを含む。したがって、例えば、１～３個の細胞を有する群とは、１、２、または３個の細胞を有する群を指す。同様に、１～５個の細胞を有する群とは、１、２、３、４、または５個の細胞を有する群を指すなどである。
【0225】
本明細書で参照または引用される、全ての特許、特許出願、特許仮出願、および特許公開は、それらが、本明細書の明示的な教示と矛盾しない範囲で、参照により、全ての図および表を含む、それらの全体において組み込まれる。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図4E】
【図4F】
【図4G】
【図5A】
【図5B】
【配列表】
【国際調査報告】