特表2023-532287 | 知財ポータル「IP Force」

知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」

青山学院大学 (神奈川県相模原市中央区淵野辺)

▶ イーライ　リリー　アンド　カンパニーの特許一覧

特表2023-532287疼痛の治療における使用のためのＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合する抗体

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

目に優しい文字サイズ小中大 PDF Top

< >

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-27

(54)【発明の名称】疼痛の治療における使用のためのＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合する抗体

(51)【国際特許分類】

A61K 39/395 20060101AFI20230720BHJP

A61P 29/00 20060101ALI20230720BHJP

C12N 15/13 20060101ALN20230720BHJP

C07K 16/22 20060101ALN20230720BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61P29/00

C12N15/13 ZNA

C07K16/22

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022580029

(86)(22)【出願日】2021-06-22

(85)【翻訳文提出日】2023-02-20

(86)【国際出願番号】 US2021038394

(87)【国際公開番号】W WO2021262662

(87)【国際公開日】2021-12-30

(31)【優先権主張番号】63/044,455

(32)【優先日】2020-06-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/070,507

(32)【優先日】2020-08-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】594197872

【氏名又は名称】イーライリリーアンドカンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山英二

(74)【代理人】

【識別番号】100103182

【弁理士】

【氏名又は名称】日野真美

(74)【代理人】

【識別番号】100186897

【弁理士】

【氏名又は名称】平川さやか

(72)【発明者】

【氏名】シェディッド，マルシオ

(72)【発明者】

【氏名】ホイヤー，ジョセフジー．

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA14

4C085BB11

4C085BB31

4C085CC03

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045DA76

4H045EA21

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、慢性疼痛、特に慢性変形性関節症疼痛、慢性糖尿病性神経障害性疼痛、又は慢性腰痛症の治療における、ヒトＴＧＦ－α及びヒトエピレグリンに結合する抗体の治療的使用を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

慢性疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法であって、軽鎖及び重鎖を含む抗体の治療有効量を前記対象に投与することを含み、前記軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、前記重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である、慢性疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法。

【請求項2】

慢性変形性関節症疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法であって、軽鎖及び重鎖を含む抗体の治療有効量を前記対象に投与することを含み、前記軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、前記重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である、慢性変形性関節症疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法。

【請求項3】

慢性糖尿病性末梢神経障害疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法であって、軽鎖及び重鎖を含む抗体の治療有効量を前記対象に投与することを含み、前記軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、前記重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である、慢性糖尿病性末梢神経障害疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法。

【請求項4】

慢性腰痛症疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法であって、軽鎖及び重鎖を含む抗体の治療有効量を前記対象に投与することを含み、前記軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、前記重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である、慢性腰痛症疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法。

【請求項5】

前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号９又は配列番号１０である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号７である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号９であり、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号７である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１３又は配列番号１４である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記抗体が、各軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１３である２つの軽鎖と、各重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である２つの重鎖と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記抗体が、各軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１４である２つの軽鎖と、各重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である２つの重鎖と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

抗体の用量が７５０ｍｇの開始用量であり、患者が疼痛の治療を必要とする限り、その後２週間ごとに５００ｍｇの用量である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記慢性疼痛が２つ以上の以前の単剤療法及び／又は２剤療法の治療レジメンに対して不応性である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

慢性疼痛の治療における使用のための、軽鎖及び重鎖を含む抗体であって、前記軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、前記重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である、慢性疼痛の治療における使用のための、軽鎖及び重鎖を含む抗体。

【請求項15】

前記慢性疼痛が、慢性変形性関節症疼痛、慢性糖尿病性神経障害性疼痛、及び慢性腰痛症からなる群から選択される、請求項１４に記載の使用のための抗体。

【請求項16】

前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号９又は配列番号１０である、請求項１４又は１５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項17】

前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号７である、請求項１４又は１５に記載の使用。

【請求項18】

前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号９であり、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号７である、請求項１４又は１５に記載の使用。

【請求項19】

前記軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１３又は配列番号１４である、請求項１４に記載の使用。

【請求項20】

前記重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である、請求項１４に記載の使用。

【請求項21】

各軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１３である２つの軽鎖と、各重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である２つの重鎖と、を含む請求項１４に記載の使用。

【請求項22】

各軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１４である２つの軽鎖と、各重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である２つの重鎖と、を含む請求項１４に記載の使用。

【請求項23】

前記慢性疼痛が慢性変形性関節症疼痛である、請求項１４～２２の１つ又は複数に記載の使用。

【請求項24】

前記慢性疼痛が慢性糖尿病性末梢神経障害性疼痛である、請求項１４～２２の１つ又は複数に記載の使用。

【請求項25】

前記慢性疼痛が慢性腰痛症疼痛である、請求項１４～２２の１つ又は複数に記載の使用。

【請求項26】

抗体の用量が７５０ｍｇの開始用量であり、患者が疼痛の治療を必要とする限り、その後２週間ごとに５００ｍｇの用量である、請求項１４～２５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項27】

前記慢性疼痛が２つ以上の以前の単剤療法及び／又は２剤療法の治療レジメンに対して不応性である、請求項１４～２５のいずれか一項に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、侵害受容性、神経障害性、及び混合性疼痛を含む慢性疼痛の治療における、特に慢性変形性関節症（ＯＡ）疼痛又は慢性糖尿病性末梢神経障害疼痛（ＤＰＮＰ）、又は慢性腰痛症の治療における、ヒトＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合する抗体の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

慢性疼痛は、そのメカニズムに基づいて、侵害受容性、神経障害性、及び混合性の様々なカテゴリに分類される。侵害受容性疼痛は、神経細胞以外の組織に損傷を与える可能性がある、又は実際に損傷を引き起こす刺激によって引き起こされる。これにより、末梢感覚系の侵害受容性受容器が活性化される。変形性関節症（ＯＡ）による疼痛は、体性侵害受容性疼痛の典型的な一例である。神経障害性疼痛は、中枢神経系又は末梢神経系の損傷又は疾患によって引き起こされ、感覚神経系の不適応過敏症を導く。糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮＰ）による疼痛は、末梢神経障害性疼痛の典型的な一例である。慢性腰痛症等の、侵害受容性疼痛及び神経障害性疼痛の両方の特徴を示す状態は、混合性疼痛に分類される。

【0003】

慢性疼痛は、非常に広まっている状態であり、社会に大きな影響を及ぼす。２０１６年には、米国の成人人口の推定２０．４％が、国民健康調査のデータに基づいて、過去６ヶ月間のほとんどの日又は毎日の疼痛として定義される慢性疼痛を経験していた。人口の推定８％が、過去６か月間、ほぼ毎日、又は毎日、生活又は仕事の活動を制限する慢性疼痛を有していた。その結果、慢性疼痛は医療費の主な原因となっており、２０１０年の米国における慢性疼痛管理の年間費用は約６，３５０億ドルと推定された。高い疾患負荷及び社会的影響にもかかわらず、慢性疼痛の管理は現在満足のいくものではない。非薬物療法だけでは、疼痛緩和又は機能改善に十分とは言えず、利用可能な薬物療法の利点はわずかであり、重大な安全上のリスクがある。現在、最も一般的なタイプの慢性疼痛を緩和するために最も頻繁に使用されている薬物は、アセトアミノフェン、非ステロイド性抗炎症薬、及びオピオイドである。ガバペンチノイド、その他の抗けいれん薬（ジバルプロ酸ナトリウム、カルバマゼピン、又はラモトリギン等）、及び一部の抗うつ薬（三環系薬又はデュロキセチン等）は、特定の疼痛障害に使用できる。現在の薬理学的医療設備は、通常、低レベルの有効性、忍容性の問題、及び／又は有害な副作用を示している。オピオイドは急性疼痛には効果的であるが、乱用のリスクが高く、重篤な有害反応の可能性があるため、慢性疼痛の治療選択肢は制限されている。患者及び社会に対する慢性疼痛の身体的、感情的、及び経済的影響は、効果的かつ許容可能な治療選択肢の欠如と相まって、満たされていない重大な医療ニーズとなっている。

【0004】

データは、ＥＧＦＲ経路が神経障害性疼痛の病因に関与していることを示唆している（Ｋｅｒｓｔｅｎ，Ｃ，ＣａｍｅｒｏｎＭＧ，ＬａｉｒｄＢ，ＭｊａｌａｎｄＳ．Ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（ＥＧＦＲ－Ｉ）ｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃｐａｉｎ．ＢｒＪＡｎａｅｓｔｈ．２０１５；１１５（５）：７６１－７６７）。しかし、ＥＧＦＲ抗体又はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤により受容体を標的することは、胃腸（ＧＩ）及び皮膚の有害反応の高い発生率に関連し、これは、慢性疼痛を伴う非腫瘍集団における使用の可能性を制限する。ＥＧＦＲに結合し、活性化するリガンドには、エピレグリン（ＥＲＥＧ）、トランスフォーミング増殖因子α（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒα：ＴＧＦα）、上皮増殖因子、ヘパリン結合上皮様増殖因子、ベータセルリン、アンフィレグリン、及びエピゲンが含まれる（ＳｃｈｎｅｉｄｅｒＭＲ，ＷｏｌｆＥ．Ｔｈｅｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｌｉｇａｎｄｓａｔａｇｌａｎｃｅ．ＪＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ．２００９；２１８（３）：４６０－４６６）。ＥＧＦＲリガンドの２つであるＴＧＦα及びエピレグリンは、受容体の分解を誘導できず、結果として受容体の再利用及び持続的なＥＧＦＲ経路の活性化を促進するという点で独特である（ＲｏｅｐｓｔｏｒｆｆＫ，ＧｒａｎｄａｌＭＶ，ＨｅｎｒｉｋｓｅｎＬ，ＫｎｕｄｅｓｅｎＳＬ，ＬｅｒｄｒｕｐＭ，ＧｒｏｖｄａｌＬ，ＷｉｌｌｕｍｓｅｎＢＭ，ｖａｎＤｅｕｒｓＢ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆＥＧＦＲｌｉｇａｎｄｓｏｎｅｎｄｏｃｙｔｉｃｓｏｒｔｉｎｇｏｆｔｈｅｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｔｒａｆｆｉｃ．２００９；１０（８）：１１１５－１１２７）。

【0005】

抗体Ｉは、高親和性ヒト化免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）モノクローナル抗体であり、ヒトＴＧＦα及びエピレグリンのＣ末端領域の重要な残基に結合し、それらのＥＧＦＲへの結合及び活性化を防止する。抗体Ｉ、並びにこの抗体及び製剤を調製する方法は、糖尿病性腎症の治療方法と共に国際公開第２０１２／１３８５１０号に開示されている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

侵害受容性疼痛、神経障害性疼痛、及び混合性疼痛を含む慢性疼痛、特に変形性関節症（ＯＡ）、又は糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮＰ）、又は慢性腰痛症の治療における、代替及び／又は改善された治療法に対する満たされていないニーズが残っている。更に、２つ以上の以前の単剤療法及び／又は２剤療法治療レジメンに対して不応性である疼痛として本明細書で定義される治療抵抗性疼痛を治療するための、侵害受容性、神経障害性、及び混合性疼痛を含む慢性疼痛、特に変形性関節症（ＯＡ）、又は糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮＰ）、又は慢性腰痛症の治療の、代替及び／又は改善された治療法に対する満たされていないニーズが残っている。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明は、侵害受容性、神経障害性、及び混合性疼痛を含む慢性疼痛の治療、特に慢性変形性関節症（ＯＡ）疼痛、又は慢性糖尿病性末梢神経障害性疼痛（ＤＰＮＰ）、又は慢性腰痛症の治療のためのＴＧＦ－α及びエピレグリンに対する抗体を提供する。更に、本発明は、２つ以上の以前の単剤療法及び／又は２剤療法治療レジメンに不応性の慢性変形性関節症（ＯＡ）疼痛、又は慢性糖尿病性末梢神経障害疼痛（ＤＰＮＰ）、又は慢性腰痛症の治療のためのＴＧＦ－α及びエピレグリンに対する抗体を提供する。

【0008】

一実施形態では、本発明は、慢性疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法を提供し、軽鎖及び重鎖を含む抗体の治療有効量を対象に投与することを含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である。

【0009】

一実施形態では、本発明は、慢性変形性関節症疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法を提供し、軽鎖及び重鎖を含む抗体の治療有効量を対象に投与することを含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である。

【0010】

一実施形態では、本発明は、慢性糖尿病性末梢神経障害疼痛の治療が必要な対象においてそれを治療する方法を提供し、軽鎖及び重鎖を含む抗体の治療有効量を対象に投与することを含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である。

【0011】

一実施形態では、本発明は、慢性腰痛症の治療が必要な対象においてそれを治療する方法を提供し、軽鎖及び重鎖を含む抗体の治療有効量を対象に投与することを含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である。

【0012】

一実施形態では、本発明は、ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号９又は配列番号１０である、上記実施形態のいずれか１つによる方法を提供する。

【0013】

一実施形態では、本発明は、ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号７である、上記実施形態のいずれか１つに記載の方法を提供する。

【0014】

一実施形態では、本発明は、ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号９であり、ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号７である、上記実施形態のいずれか１つに記載の方法を提供する。

【0015】

一実施形態では、本発明は、軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１３又は配列番号１４である、上記実施形態のいずれか１つに記載の方法を提供する。

【0016】

一実施形態では、本発明は、重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である、上記実施形態のいずれか１つに記載の方法を提供する。

【0017】

一実施形態では、本発明は、各軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１３である２つの軽鎖と、各重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である２つの重鎖と、を含む、上記実施形態のいずれか１つによる方法を提供する。

【0018】

一実施形態では、本発明は、各軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１４である２つの軽鎖と、各重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である２つの重鎖と、を含む、上記実施形態のいずれか１つによる方法を提供する。

【0019】

一実施形態では、本発明は、抗体の用量が７５０ｍｇの開始用量であり、患者が疼痛の治療を必要とする限り、その後、２週間ごとに５００ｍｇの用量である、上記の実施形態のいずれか１つによる方法を提供する。

【0020】

一実施形態では、本発明は、慢性疼痛が２つ以上の以前の単剤療法及び／又は２剤療法の治療レジメンに対して不応性である、上記の実施形態のいずれか１つによる方法を提供する。

【0021】

一実施形態では、本発明は、慢性疼痛の治療における使用のための、軽鎖及び重鎖を含む抗体を提供し、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である。一実施形態では、本発明は更に、慢性疼痛が、慢性変形性関節症疼痛、慢性糖尿病性神経障害性疼痛、及び慢性腰痛症からなる群から選択される上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号９又は配列番号１０である、上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号７である上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号９であり、ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号７である上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１３又は配列番号１４である上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、各軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１３である２つの軽鎖と、各重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である２つの重鎖と、を含む上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、各軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１４である２つの軽鎖と、各重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である２つの重鎖と、を含む上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、慢性疼痛が慢性変形性関節症疼痛である上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、慢性疼痛が慢性糖尿病性末梢神経障害疼痛である上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、慢性疼痛が慢性腰痛症である上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、抗体の用量が７５０ｍｇの開始用量であり、患者が疼痛の治療を必要とする限り、その後２週間ごとに５００ｍｇの用量である、上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は更に、慢性疼痛が２つ以上の以前の単剤療法及び／又は２剤療法の治療レジメンに対して不応性である、上記使用を提供する。一実施形態では、本発明は、慢性疼痛を治療するための医薬品を製造するための上記実施形態による抗体の使用を提供する。一実施形態では、本発明は、慢性変形性関節症疼痛、慢性糖尿病性神経障害性疼痛、及び慢性腰痛症から選択される慢性疼痛の治療のための医薬品の製造のための上記の実施形態による抗体の使用を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】ラット半月板損傷モデルにおける抗体ＩＩＩの疼痛有効性の図である。データは平均±ＳＥＭとして表され、群サイズはｎ＝６である。統計的比較：対照ＩｇＧ１との比較のためのＡＮＯＶＡ及びダネットの検定（＊ｐ＜０．００１）、及び１～１０ｍｇ／ｋｇの抗体ＩＩＩの比較のためのテューキーの検定（＊ｐ＜．０５）。略語：ＡＮＯＶＡ＝分散分析。ＩｇＧ１＝免疫グロブリンＧ１；ＳＥＭ＝平均値の標準誤差。

【図2】抗体Ｉとプラセボとを比較する２６週間の第２相無作為化二重盲検プラセボ対照試験の概要の図である。

【発明を実施するための形態】

【0023】

本明細書において使用される場合、慢性疼痛とは、１日を超えて持続する疼痛、又は月に数回再発する疼痛を指す。慢性変形性関節症疼痛、慢性糖尿病性神経障害性疼痛、及び慢性腰痛症、並びにこれらの状態に苦しむ患者の同定は、本明細書に記載のものを含む確立された基準を使用して、当業者に知られている方法によって決定することができる。本明細書で使用される場合、患者は、本明細書に記載の抗体による治療を必要とする状態又は障害を有すると診断されたヒトである。本発明の方法によって治療することができる障害が、変形性関節症疼痛、糖尿病性神経障害性疼痛、又は腰痛症等の確立され、受け入れられている分類によって知られている場合、それらの分類は様々な情報源に見出すことができ、国際疾病分類、第１０改訂版（ＩＣＤ－１０）は、本明細書に記載の障害の分類を提供する。当業者は、ＤＳＭ－ＩＶ及びＩＣＤ－１０に記載のものを含む、本明細書に記載の障害についての代替的な命名法、疾病分類学、及び分類系統があること、並びに用語及び分類系統が医科学の進歩と共に進化することを認識することになる。

【0024】

本明細書で使用される場合、変形性関節症疼痛は、非神経根性（非神経障害性）疼痛を明確に含む。本明細書で使用される場合、神経障害性疼痛には、神経根性疼痛ＣＬＢＰ、ＤＮＰ、及びＬＳＲが明示的に含まれる。いくつかの実施形態では、疼痛は、本発明の方法によって治療される、例えば、筋骨格性及び神経障害性起源の両方の慢性疼痛等の慢性疼痛である。他の実施形態では、本発明の方法によって治療される疼痛は、内臓痛（例えば、慢性前立腺炎、間質性膀胱炎（膀胱痛）又は慢性骨盤痛等）である。

【0025】

他の実施形態は、侵害受容性／炎症性、神経障害性、侵害形成性（ｎｏｃｉｐｌａｓｔｉｃ）、又は混合性病因の疼痛を治療する方法を提供する。他の実施形態では、疼痛は、起源が筋骨格性又は神経障害性である慢性疼痛である。本方法によって治療される他のタイプの疼痛には、手術後の疼痛、関節リウマチの疼痛、神経障害性疼痛、及び変形性関節症疼痛が含まれる。

【0026】

例示的な種類の疼痛としては、神経障害性疼痛、例えば、疼痛を伴う糖尿病性神経障害、化学療法誘導性末梢神経障害、腰痛、三叉神経痛、ヘルペス後神経痛、坐骨神経痛、及び複合性局所疼痛症候群；例えば、リウマチ性関節炎、骨関節炎、変形性関節症からの炎症性疼痛；ＰＤＮ又はＣＩＰＮ；例えば、膵炎、炎症性腸疾患、大腸炎、クローン病、子宮内膜症、骨盤痛、及びアンギナからの内臓痛；癌性疼痛、火傷性疼痛、口腔内疼痛、圧挫及び損傷によって誘発された疼痛、切開疼痛、骨痛、鎌状赤血球病に伴う疼痛、線維筋痛、及び筋骨格系疼痛のような群から選択される疼痛；又は痛覚過敏症若しくは異痛症からの疼痛が挙げられる。

【0027】

本明細書で定義されるように、疼痛は、筋骨格性及び神経障害性起源の両方の慢性疼痛を明確に含む。「術後疼痛」（「切開後」又は「外傷後疼痛」と交換可能に呼ばれる）は、個体の組織への切り傷、刺し傷、切開、裂傷、又は創傷等の外的外傷（侵襲的又は非侵襲的にかかわらず、すべての外科的処置から生じるものを含む）から生じる又は起因する疼痛を指す。本明細書で使用される場合、術後疼痛は、外部の身体的外傷なしに発生する（生じる又は由来する）疼痛を含まない。いくつかの実施形態では、術後疼痛は内的又は外的（末梢を含む）疼痛であり、創傷、切り傷、外傷、裂傷、又は切開は、偶発的に（外傷性創傷と同様に）又は故意に（外科的切開と同様に）発生し得る。本明細書で使用される場合、「疼痛」は、侵害受容及び痛覚を含み、疼痛スコア及び当該技術分野で周知の他の方法を使用して、疼痛を客観的及び主観的に評価することができる。本明細書で使用される場合、術後疼痛には、異痛症（すなわち、通常は非有害な刺激に対する反応の増加）及び痛覚過敏（すなわち、通常の有害又は不快な刺激に対する反応の増加）が含まれ、これは、熱的又は機械的（触覚）であり得る。いくつかの実施形態では、疼痛は、熱的感受性、機械的感受性、及び／又は安静時痛を特徴とする。いくつかの実施形態では、術後疼痛は、機械的に誘導される疼痛又は安静時痛を含む。他の実施形態では、術後疼痛は、安静時痛を含む。当該技術分野で周知のように、疼痛は、一次性又は二次性疼痛であり得る。

【0028】

本明細書で互換的に使用される場合、「患者」、「対象」、及び「個体」という用語は、ヒトを指す。特定の実施形態では、患者は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンの阻害から恩恵を受けるであろう疾患、障害、又は状態（例えば、疼痛）を更に特徴とする。

【0029】

用語「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」（あるいは「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療」（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）は、症状、障害、状態又は疾患の進行又は重症度を緩徐化、中断、低減、又は逆転させるプロセスを指す。

【0030】

有効量は、既知技法の使用によって、かつ同様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者により容易に決定され得る。患者の有効量を決定する際に、患者の人種、患者のサイズ、年齢、及び全般的な健康状態、関与する特定の疾患又は障害、疾患又は障害の関与度又は重症度、個々の患者の応答、投与される特定の化合物、投与様式、投与される調製物のバイオアベイラビリティ特性、選択される投薬レジメン、併用薬の使用、並びに他の関連状況を含むが、これらに限定されない、いくつかの要因が考慮される。

【0031】

「治療有効量」という用語は、患者への単回又は複数回投与により、所望の治療を提供する本発明の抗体の量又は用量を指す。いくつかの実施形態では、有効量は、臨床的に有意な疼痛の低減をもたらす。毎週、２週間ごと、毎月、又は四半期ごとの非経口（皮下、筋肉内、及び／又は静脈内を含むがこれらに限定されない）用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇであり得る。

【0032】

毎週、２週間ごと、毎月、又は四半期ごとの非経口（皮下、筋肉内、及び／又は静脈内を含むがこれらに限定されない）用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ約８ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約６ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約６ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ～約６ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ～約６ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約６ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約４ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約４ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ～約４ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、又は約４ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇであり得る。

【0033】

毎週、２週間ごと、毎月、又は四半期ごとの非経口（皮下、筋肉内、及び／又は静脈内を含むがこれらに限定されない）用量は、例えば、約５０ｍｇ～約５００ｍｇ、約７５ｍｇ～約５００ｍｇ、約１００ｍｇ～約５００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約５００ｍｇ、約２５０ｍｇ～約５００ｍｇ、約３００ｍｇ～約５００ｍｇ、約３５０ｍｇ～約５００ｍｇ、約４００ｍｇ～約５００ｍｇ、約４５０ｍｇ～約５００ｍｇ、約５０ｍｇ～約４００ｍｇ、約７５ｍｇ～約４００ｍｇ、約１００ｍｇ～約４００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約４００ｍｇ、約２５０ｍｇ～約４００ｍｇ、約３００ｍｇ～約４００ｍｇ、約３５０ｍｇ～約４００ｍｇ、約５０ｍｇ～約３００ｍｇ、約７５ｍｇ～約３００ｍｇ、約１００ｍｇ～約３００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約３００ｍｇ、約１５０ｍｇ～約３００ｍｇ、約１７５ｍｇ～約３００ｍｇ、約２００ｍｇ～約３００ｍｇ、約２５０ｍｇ～約３００ｍｇ、約５０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約７５ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１００ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１２５ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１５０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１７５ｍｇ～約２５０ｍｇ、約２００ｍｇ～約２５０ｍｇ、約７５ｍｇ～約２５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約２００ｍｇ、約７５ｍｇ～約２００ｍｇ、約１００ｍｇ～約２００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約２００ｍｇ、約１５０ｍｇ～約２００ｍｇ、約１７５ｍｇ～約２００ｍｇ、約５０ｍｇ～約１７５ｍｇ、約７５ｍｇ～約１７５ｍｇ、約１００ｍｇ～約１７５ｍｇ、約１２５ｍｇ～約１７５ｍｇ、又は約１５０ｍｇ～約１７５ｍｇであり得る。

【0034】

しかしながら、特に当業者に知られている及び／又は本明細書に記載されている投与量の考慮事項を考慮して、本明細書に記述されている用量よりも少ない又は多い用量も想定される。治療中の患者の進行は定期的な評価によって監視され、必要に応じて用量がそれに応じて調整される。

【0035】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域を含み（ＨＣＶＲ）、ここで、ＬＣＶＲはアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲはアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３である。

【0036】

更に、本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ここでＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号９又は配列番号１０である。

【0037】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号７である。

【0038】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ここで、ＬＣＶＲのアミノ酸配列及びＨＣＶＲのアミノ酸配列は、以下からなる群から選択される。
（７）ＬＣＶＲは配列番号９であり、ＨＣＶＲは配列番号７である；及び
（ｉｉ）ＬＣＶＲは配列番号１０であり、ＨＣＶＲは配列番号７である。

【0039】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号９であり、ＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号７である。

【0040】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号１０であり、ＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号７である。

【0041】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖のアミノ酸配列は配列番号１３又は配列番号１４である。

【0042】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖のアミノ酸配列は配列番号１２である。

【0043】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖のアミノ酸配列及び軽鎖のアミノ酸配列は、以下からなる群から選択される。
（ｉ）重鎖は配列番号１２であり、軽鎖は配列番号１３である：及び
（ｉｉ）重鎖は配列番号１２であり、軽鎖は配列番号１４である。

【0044】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、各軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１３である２つの軽鎖と、各重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である２つの重鎖と、を含む。

【0045】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、各軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１４である２つの軽鎖と、各重鎖のアミノ酸配列が配列番号１２である２つの重鎖と、を含む。

【0046】

本発明の方法で使用される抗体は、ＴＧＦ－α及びエピレグリンに結合し、本明細書に記載の抗体と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む薬学的組成物を含む。

【0047】

本発明の方法で使用される抗体は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤、及び任意に他の治療成分と共に、本明細書に記載の抗体を含む、薬学的組成物を含み得る。

【0048】

本発明はまた、患者の慢性疼痛を治療する方法を提供し、本明細書に記載の本発明の抗体を、標準治療と別々に、同時に、又は逐次的に組み合わせて患者に投与することを含む。

【0049】

更に、本発明は、治療に使用するための本明細書に記載の抗体を使用する方法を提供し、ここで抗体は、標準治療と同時又は連続的に組み合わせて投与される。好ましくは、本発明は、慢性疼痛の治療に使用するための本明細書に記載の抗体を使用する方法を提供し、ここで抗体は、標準治療と同時又は連続的に組み合わせて投与される。

【0050】

「抗体」の一般的な構造は、当該技術分野で周知である。ＩｇＧタイプの抗体には、鎖内及び鎖間ジスルフィド結合を介して架橋された４つのアミノ酸鎖（２つの「重」鎖及び２つの「軽」鎖）がある。ある特定の生物系で発現される場合、非修飾ヒトＦｃ配列を有する抗体はＦｃ領域においてグリコシル化される。抗体は、他の位置でもグリコシル化され得る。抗体のサブユニット構造及び三次元配置は、当技術分野で周知である。各重鎖は、Ｎ末端重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」）及び重鎖定常領域（「ＨＣＣＲ」）から構成される。重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＤ、及びＩｇＡの３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）、並びにＩｇＭ及びＩｇＥの４つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４）から構成される。軽鎖は各々、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」）及び軽鎖定常領域（「ＬＣＣＲ」）からなる。

【0051】

各軽鎖／重鎖対の可変領域は、抗体結合部位を形成する。ＨＣＶＲ領域及びＬＣＶＲ領域は、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と呼ばれるより保存された領域が散在している相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に更に細分され得る。ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲはそれぞれ、以下の順番、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置している３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。本明細書では、重鎖の３つのＣＤＲは、「ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３」と称され、軽鎖の３つのＣＤＲは、「ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３」と称される。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含む。各ドメインへのアミノ酸の割当ては、周知の慣習に従っている［例えば、Ｋａｂａｔ，´´ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，´´ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）］。

【0052】

本発明で使用される抗体は、免疫グロブリンクラス（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、及びＩｇＥ）のいずれかから選択される重鎖定常領域を有し得る。更に、本発明で使用される抗体は、他のＩｇＧサブタイプと比較して補体因子に結合する能力が低いため、ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域に由来するＦｃ部分を含む。

【0053】

抗体は、例えば、任意の真核生物、原核生物、又はファージのクローンを含む、単一のコピー又はクローンに由来し得る。好ましくは、本発明で使用される抗体は、均一又は実質的に均一な抗体分子集団に存在する。全長抗体は、Ｆｃ領域を含む全長又は実質的に全長の定常領域を含む。そのような抗体の「抗原結合フラグメント」は、抗原結合部分を含み、抗原結合能力を保持する全長抗体の任意の短縮形である。このような短縮形には、例えば、開示された抗体のＣＤＲ又は可変領域を含むＦａｂフラグメント、Ｆａｂ´フラグメント又はＦ（ａｂ´）２フラグメントが含まれる。更に、そのような短縮された抗体形態は、ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲをコードするＤＮＡをリンカー配列と結合させることによって産生され得る単鎖Ｆｖフラグメントであり得る（Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇａｎｄＭｏｏｒｅｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ｐｐ２６９－３１５，１９９４を参照されたい）。「抗体」という用語は、別段の指示がない限り、そのようなフラグメントを含まない。本発明で使用される抗体は、当技術分野で周知の技術、例えば組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、又はそのような技術の組合わせ、あるいは当技術分野で容易に知られている他の技術を使用して産生することができる。

【0054】

本発明で使用される抗体は、ヒトゲノム配列に由来するフレームワーク及び定常領域と同一又は実質的に同一（実質的にヒト）であるヒト起源のフレームワーク、ヒンジ領域、及び定常領域を有するように設計された改変抗体である。完全ヒトフレームワーク、ヒンジ領域、及び定常領域は、それらのヒト生殖細胞系列配列並びに自然発生体細胞突然変異を有する配列及び改変突然変異を有する配列である。本発明で使用される抗体は、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、又は付加を含有する完全ヒトフレームワーク、ヒンジ、又は定常領域から誘導されたフレームワーク、ヒンジ、又は定常領域を含み得る。更に、本発明で使用される抗体は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。

【0055】

本発明で使用される抗体の基礎として、様々な異なるヒトフレームワーク配列を単独で又は組み合わせて使用することができる。好ましくは、本発明の抗体のフレームワーク領域は、ヒト起源のものであるか、又は実質的にヒト（ヒト起源の少なくとも９５％、９７％又は９９％）である。ヒト起源のフレームワーク領域の配列は、ＴｈｅＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＦａｃｔｓｂｏｏｋ，ｂｙＭａｒｉｅ－ＰａｕｌｅＬａｆｒａｎｃ，ＧｅｒａｒｄＬｅｆｒａｎｃ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ２００１，ＩＳＢＮ０１２４４１３５１．から入手され得る。

【0056】

本発明で使用される抗体のフレームワーク配列は、「ドナー」可変フレームワーク領域として機能し、当技術分野で知られている方法論を使用して、本明細書で特定される同じＣＤＲを有する追加の抗体を作成するために使用することができる。更に、本発明で使用される抗体のフレームワーク配列を他の既知のヒトフレームワーク配列と比較して、追加の抗体を生成することができる。したがって、この情報を使用して、別の選択された相同なヒトフレームワーク領域をこれらの位置でドナーアミノ酸残基に「逆突然変異」させることができる。更に、コンセンサス又はドナーアミノ酸残基を関連する位置で使用できるように、任意の「希少な」アミノ酸を追加のヒトフレームワークで検出することができる。

【0057】

「ＴＧＦ－α」又は「ヒトＴＧＦ－α」は、ヒトＴＧＦ－αタンパク質（配列番号１８）を指す。

【0058】

「エピレグリン」又は「ヒトエピレグリン」は、ヒトエピレグリンタンパク質（配列番号３３）を指す。Ｍｅｔ－ヒトエピレグリン（配列番号２２）は、本明細書のインビトロ実験で使用される。本明細書に記載の抗体の、ヒトエピレグリンに結合又は中和する能力への言及は、インビトロ実験においてヒトｍｅｔ－エピレグリンに結合し、中和するそれらの能力にも関係する。

【0059】

以下の実施例は、本質的に以下に記載するように実施することができる。

【0060】

実施例
実施例１：抗体の産生
抗体Ｉ及びＩＩは、以下のように作製及び精製することができる。ＨＥＫ２９３又はＣＨＯ等の適切な宿主細胞は、最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター比を使用して抗体を分泌するための発現系、又は配列番号１５等のＨＣ、及び配列番号１６若しくは１７等のＬＣの両方をコードする単一のベクター系で、一過性に又は安定的のいずれかでトランスフェクトすることができる。抗体が分泌された清澄化培地を、多くの一般的に使用される技術のいずれかを使用して精製する。例えば、培地は、適合する緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４））で平衡化されたプロテインＡ又はプロテインＧに都合よく適用され得る。カラムを洗浄して、非特異的結合構成成分を除去する。結合した抗体を、例えば、ｐＨ勾配（例えば、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）から０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）へ）によって、溶出される。抗体断片をＳＤＳ－ＰＡＧＥ等により検出し、次いでプールする。意図する使用に応じて、更なる精製は任意選択的である。抗体を、一般的な技術を使用して濃縮及び／又は滅菌濾過し得る。可溶性凝集体及び多量体を、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技術によって効果的に除去し得る。これらのクロマトグラフィーステップ後の抗体の純度は、９９％を上回る。生成物は、－７０℃ですぐに凍結されてもよいか、又は凍結乾燥されてもよい。これらの抗体のアミノ酸配列を以下に提供する。

【表1】

【表2】

【0061】

製剤：
抗体Ｉの製剤は、ガラスバイアルに入った凍結乾燥粉末として臨床試験使用用に提供される。バイアルの内容物は、滅菌０．９％塩化ナトリウム（ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（ＵＳＰ））で再構成／希釈される。凍結乾燥製剤の抗体Ｉは、抗体Ｉ及び賦形剤のクエン酸ナトリウム、クエン酸、ポリソルベート８０、及びスクロースで構成されている。バイアルは７５ｍｇの抗体Ｉを送達するように製造されている。バイアルの内容物を３．２ｍＬの無菌０．９％塩化ナトリウム（ＵＳＰ）で再構成／希釈すると、ｐＨ６．０で２５ｍｇ／ｍＬの抗体Ｉからなる透明な溶液が生成される。

【0062】

実施例２：抗体Ｉについての表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）による親和性結合測定
ＢｉａｃｏｒｅＴ２０００機器（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ，Ｕｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、試薬及びＢｉａｃｏｒｅＴ２０００評価ソフトウェアＶｅｒ４．１を表面プラズモン共鳴分析に使用する。ＣＭ５チップは、製造業者のＥＤＣ／ＮＨＳアミンカップリング法を使用して調製する。４つのフローセルすべての表面は、ＥＤＣ／ＮＨＳの１：１混合物を１０μＬ／ｍｉｎで７分間注入することによって活性化される。ヤギ抗ヒトＦｃγ特異的抗体を１０ｍＭアセタート、ｐＨ４．０緩衝液で５０μｇ／ｍｌに希釈し、流速１０μＬ／分で７分間注入することにより、４つのフローセルすべてに約１００００ＲＵ固定する。エタノールアミンを１０μＬ／ｍｉｎで７分間注入して、未反応部位をブロックする。３０μＬ／ｍｉｎのグリシンｐＨ１．５の３ｘ２０秒間注入を使用して、非共有結合タンパク質を除去する。ランニング緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＰ［１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％ポリソルベート２０］である。

【0063】

試験１では、抗体Ｉをランニング緩衝液に５０μｇ／ｍＬに希釈し、フローセル２で約４００～６００ＲＵを捕捉する。ヒトＴＧＦ－α（配列番号１８）、ラットＴＧＦ－α（配列番号２０）、ｍｅｔ－ヒトエピレグリン（配列番号２２）、及びカニクイザルエピレグリン（配列番号２４）をランニング緩衝液で１００μｇ／ｍＬ～２００ｎＭに希釈し、次いで、ランニング緩衝液で６．２５ｎＭまで２倍連続希釈した。マウスエピレグリン（配列番号２３）をランニング緩衝液で１００μｇ／ｍＬ～４μＭに希釈し、次いでランニング緩衝液で１２５ｎＭまで２倍連続希釈する。各リガンド濃度の２回注入は、３０μＬ／ｍｉｎで３００秒間注入され、続いて解離相が続く。解離相は、ヒト及びラットのＴＧＦ－αで１８００秒、ヒト及びカニクイザルのエピレグリンで１２００秒、マウスのエピレグリンで１２０秒である。再生を、１０ｍＭのグリシンｐＨ１．５を３０μＬ／分で、すべてのフローセルに３ｘ２０秒間注入することによって実施する。

【0064】

試験２では、抗体ＩＩＩをランニング緩衝液で１００μｇ／ｍＬに希釈し、フローセル２で約４００～６００ＲＵを捕捉する。マウスＴＧＦ－α（配列番号１９）をランニング緩衝液で１００μｇ／ｍＬ～２００ｎＭまで希釈し、次いで、ランニング緩衝液で６．２５ｎＭまで２倍連続希釈する。マウスエピレグリン（配列番号２３）をランニング緩衝液で１００μｇ／ｍＬ～４μＭに希釈し、次いでランニング緩衝液で１２５ｎＭまで２倍連続希釈する。各リガンド濃度の２回注入は、３０μＬ／ｍｉｎで３００秒間注入され、続いて解離相が続く。解離相は、マウスＴＧＦ－αでは１８００秒、マウスエピレグリンでは１２０秒である。再生を、１０ｍＭのグリシンｐＨ１．５を３０μＬ／分で、すべてのフローセルに３０秒間注入することによって実施する。

【0065】

参照減算データは、Ｆｃ２－Ｆｃ１として回収する。測定値は２５℃で取得する。各リガンドについてオンレート（ｋ_ｏｎ）及びオフレート（ｋ_ｏｆｆ）を「１：１（ラングミュア）結合」結合モデルを使用して評価する。親和性（Ｋ_Ｄ）を、関係Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎに従って結合キネティクスから算出する。

【表3】

【表4】

【0066】

したがって、抗体ＩはＴＧＦα及びエピレグリンに特異的に結合し、エピゲンには非常に弱く結合する。様々な種由来のＴＧＦα、エピレグリン、及びエピゲンに対する抗体Ｉの見かけの結合動態及び親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した。

【0067】

様々な種の成長因子α、エピレグリン、及びエピゲンを形質転換すると、ヒト及びラットのＴＧＦαに強い親和性を有する抗体Ｉとの濃度依存的な結合応答が生じた（２５℃でそれぞれ９７．６±２０．６ｐＭ及び７０．５±１９．４ｐＭのＫ_ｄ）。カニクイザル及びマウスＴＧＦαの結合動態は、それぞれヒト及びラットＴＧＦαと１００％同一であるため、別々に測定しなかった。抗体Ｉエピトープはウサギ及びヒトＴＧＦαにおいて同一であるため、ウサギＴＧＦαの結合動態を個別に測定しなかった。抗体Ｉはヒト及びカニクイザルエピレグリンに強い親和性を示し、マウスエピレグリンに親和性を示した（２５℃でそれぞれ１．２９±０．０３ｎＭ、１．０５±０．０９ｎＭ、及び３４２±１３６ｎＭのＫ_ｄ）。抗体Ｉエピトープはラット及びマウスのエピレグリンで同一であるため、ラットエピレグリンの結合動態は個別に測定しなかった。抗体Ｉは、ヒト及びマウスのエピゲンに対して非常に弱い親和性を示した（２５℃でそれぞれＫ_ｄ＞２μＭ及び４９３±２０５ｎＭ）。

【0068】

抗体Ｉはヒト化モノクローナル抗体であるため、動物により化合物に対して免疫応答を起こす可能性があるため、薬理学の動物モデルでの評価への使用は制限されている。したがって、マウスモノクローナル抗体、抗体ＩＩＩは、ＯＡ疼痛の動物モデルにおけるＴＧＦα及びエピレグリンの中和の効果を決定するために使用した。抗体ＩＩＩのマウスＴＧＦα、エピレグリン、及びエピゲンへの結合動態もＳＰＲによって測定した。抗体ＩＩＩは、ＴＧＦαに対して強い親和性を示し、エピレグリン及びエピゲンに対して弱い親和性を示し、関連するＫ_ｄ値は、２５℃でそれぞれ３８．０±１３．６ｐＭ、２１５±１５ｎＭ、及び３６５±３９ｎＭであった。

【0069】

実施例３：ヒト結腸癌細胞株ＨＴ－２９におけるＥＧＦ標的リガンドの内在化
ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８の抗体へのコンジュゲーション
ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８は、製造業者のプロトコルに従って、抗体Ｉ及び対照ＩｇＧに結合している。タンパク質をＰＢＳで２ｍｇ／ｍＬに希釈する。この２ｍｇ／ｍＬ溶液０．５ｍＬに、５０μＬの１Ｍ炭酸水素ナトリウムｐＨ９を加える。次いで、タンパク質溶液を色素のバイアルに移し、室温で１時間撹拌する。標識タンパク質を、標識キットに含まれるＢｉｏ－ＲａｄＢｉｏＧｅｌＰ－３０樹脂を使用して精製する。

【0070】

インビトロ内在化アッセイ
試験１では、ＴＧＦ－α及びエピレグリンを発現することが知られている結腸腺癌細胞株である１０，０００個のＨＴ－２９細胞を９６ウェルプレートのウェルに播種し、完全培地で一晩培養する［Ｌ－グルタミン、１０％熱不活化ウシ胎児血清（「ＦＢＳ」）、１ｘ抗生物質、及び２．４３８ｇ／Ｌの炭酸水素ナトリウムを含有する、ダルベッコ改変イーグル培地／Ｆ１２（Ｈａｍ）培地（１：１）（「ＤＭＥＭ／Ｆ１２」）］。翌日、細胞を０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで洗浄し、次いで、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８コンジュゲート抗体Ｉ又は対照ＩｇＧと共に、３７℃で２時間、０～８８ｕｇ／ｍＬの範囲の濃度で、０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中、組織培養インキュベーターでインキュベートした。インキュベーション期間の後、細胞を０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで数回洗浄し、分析のために４％ホルムアルデヒドで固定する。内在化の定量化は次のように行う。５００細胞／ウェルをＣｅｌｌｏｍｉｃｓＡｒｒａｙｓｃａｎＶＴＩ（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で回収する。画像解析は、システムの「Ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌａｎａｌｙｓｉｓ」Ｂｉｏａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓで実行する。細胞核は、ヘキスト染色（青）で同定する。２つの対象領域（ＲＯＩ）は、マスクされた画像から得られた細胞内スポット（赤）と総緑色蛍光（赤と青の両方）から蛍光シグナルを回収するように設定されている。各スポット及び細胞からの数、面積、及び蛍光強度を計算する。細胞内スポット（赤）の平均スポット総強度を、抗体Ｉ誘発内在化の測定のために選択する。

【0071】

試験２では、前述のように１０，０００個のＨＴ－２９細胞を調製し、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８コンジュゲート抗体Ｉ又は０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中の対照ＩｇＧを４０ｕｇ／ｍＬで細胞に添加する。細胞を３７℃で組織培養インキュベーターで０～１２０分の範囲の様々な時間でインキュベーションし、次いで、０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで数回洗浄し、分析のために４％ホルムアルデヒドで固定する。シグナルの定量化は、本質的に前述のように実行する。

【表5】

【表6】

【0072】

試験１の画像解析の結果、蛍光シグナルが細胞内に内在化し、抗体Ｉと用量依存的であるが、対照ＩｇＧではそうではないことが決定された（表３ａ及び表３ｂ）。

【表7】

【0073】

試験２の結果は、抗体Ｉは急速に内在化され、内在化は細胞への添加後２時間までに完了した（表４）。抗体Ｉは、インビトロで時間依存的にＨＴ－２９細胞上の標的の内在化を誘導した（表４）。上記の結果は、抗体Ｉが膜結合リガンドに結合し、用量及び時間依存的にそれらの内在化を促進し、３７℃のインキュベーションの２時間以内に抗体Ｉ（及びおそらくリガンド）の完全な内在化を伴うことを示している。

【0074】

実施例４：筋線維芽細胞株におけるＥＧＦＲリガンド刺激細胞増殖の中和の測定
クローンマウス筋線維芽細胞系（「ＭＦｃ７」）を使用して、ＥＧＦＲリガンドの増殖活性をブロックする本発明の抗体の能力を試験する。ＥＧＦＲを活性化できる７つのリガンドは、ＴＧＦ－α（ＴＧＦＡ）、エピレグリン（ＥＲＥＧ）、ＥＧＦ、ヘパリン結合ＥＧＦ（ＨＢ－ＥＧＦ）、エピゲン（ＥＰＧＮ）、アンフィレグリン（ＡＲＥＧ）、及びベータセルリン（ＢＴＣ）である。ＥＧＦＲリガンドは構造モチーフであるＥＧＦ様ドメインを共有しており、これは６つの保存された同じ間隔のシステイン残基によって形成される３つの分子内ジスルフィド結合によって特性決定される。増殖活性を、ブロモデオキシウリジン（「ＢｒＤＵ」）の取込みによって決定し、製造者の指示に従って比色ＢｒＤＵＥＬＩＳＡキットで測定する。

【0075】

最初に、２，０００ＭＦｃ７細胞／ウェルを、Ｌ－グルタミン、１０％熱不活化ＦＢＳ、１ｘ抗生物質、及び２．４３８ｇ／Ｌ炭酸水素ナトリウムを含有するダルベッコ改変イーグル培地／Ｆ１２（Ｈａｍ）培地（１：１）（「ＤＭＥＭ／Ｆ１２」）０．１ｍＬ中の組織培養処理した９６ウェルマイクロプレートにプレーティングする。細胞を６時間付着させた後、培地を除去し、０．１％ＢＳＡを含む０．１ｍＬの無血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２と交換して、一晩血清飢餓状態にする。翌日、０．００１～３０００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度から０．１２ｍＬ／ウェルの容量で９６ウェルポリプロピレンプレートに０．１％ＢＳＡを含む無血清培地でＥＧＦＲリガンドの段階希釈を行う。希釈後、血清欠乏細胞から培地を除去し、ＥＧＦＲリガンドで２４時間刺激する。刺激後、細胞をＢｒＤＵで４時間パルスし、次いで製造者の指示に従って比色ＢｒＤＵＥＬＩＳＡキットで分析する。

【0076】

ＥＧＦＲリガンドに対する抗体Ｉの特異性を試験する際、抗体の２倍又は３倍の段階希釈を、９６ウェルポリプロピレンプレートで、３０００ｎＭ～０．０５９ｎＭの範囲の濃度で０．０６ｍＬ／ウェルの体積で行う。抗体の連続希釈に続いて、０．０６ｍＬのＥＧＦＲリガンドをウェルごとに追加する。次いで、プレートを加湿組織培養インキュベーター内で３７℃で３０分間インキュベートする。インキュベーション後、ウェル当たり０．１ｍＬの溶液を細胞に移す。細胞を２４時間刺激する。刺激後、細胞をＢｒＤＵで４時間パルスし、次いで比色ＢｒＤＵＥＬＩＳＡキットで分析する。吸光度値（４５０ｎＭ～６９０ｎＭ）を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ１９０プレートリーダ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）で生成し、データが分析する。

【表8】

【0077】

マウスエピレグリン及びラットＴＧＦ－ａｌｐｈａ、並びにエピゲン及びアンフィレグリンを除くすべてのヒトＥＧＦＲリガンドは、アッセイで細胞増殖の強力な刺激因子であることが見出された（表５）。抗体Ｉ及び抗体ＩＩＩは、ヒト及びラットのＴＧＦ－α及びヒトエピレグリン活性に対して高い親和性を有する（表５）。

【0078】

表５は、試験したＥＧＦＲリガンドの計算されたＥＣ５０値、及びそれらのリガンドに対する抗体の絶対ＩＣ５０値を要約する。抗体Ｉについて計算された平均ＩＣ５０は、ヒトＴＧＦ－αに対して０．４６±０．０３ｎＭであり、ヒトエピレグリンに対して３．１５±１．０４ｎＭであった。抗体ＩＩＩの計算されたＩＣ５０平均は、ヒトＴＧＦ－αに対して０．５２±０．０４ｎＭであり、ヒトエピレグリンに対して１．１２±０．３６ｎＭであった。抗体ＩＩＩの計算された平均ＩＣ５０値は、ラットＴＧＦ－αに対して０．１３±０．０１ｎＭであり、マウスエピレグリンに対して２１４±４９ｎＭであった。したがって、抗体Ｉ及び抗体ＩＩＩは高い親和性を有し、ヒトＴＧＦ－α及びヒトエピレグリンに対して完全な中和活性を伴って選択的である。

【0079】

要約すると、上皮成長因子受容体リガンドは、線維芽細胞を含む多くの系統の細胞にとって強力な細胞分裂促進因子である。抗体Ｉの中和効果及び特異性を決定するために、筋線維芽細胞の増殖に対するその効果をインビトロで評価した。個々の組換えリガンドを使用して、筋線維芽細胞の増殖を刺激し、その相対５０％有効濃度（ＥＣ_５０）を決定した。続いて、個々のリガンドの最大下濃度及び様々な濃度の抗体Ｉをアッセイで評価して、特定のリガンドに対する阻害活性を定量化した。抗体Ｉは、ヒト、マウス、ラット、及びカニクイザルのＴＧＦに対してα（５０％阻害濃度［ＩＣ_５０］値＜０．５ｎＭ）及びヒト及びカニクイザルのエピレグリン（ＩＣ_５０値＜３．５ｎＭ）に対して強力な中和活性を有する。抗体Ｉは、マウス及びラットのエピレグリン（ＩＣ_５０値＜３５０ｎＭ）及びヒト、カニクイザル、及びラットのエピゲン（ＩＣ_５０値＜８５０ｎＭ）に対する中和活性がより弱く、試験した他のＥＧＦＲリガンドに対する測定可能な活性はない（ＩＣ_５０値＞２０００ｎＭ）。

【0080】

同様に、マウス抗体、抗体ＩＩＩの中和活性を筋線維芽細胞増殖アッセイで評価した。抗体ＩＩＩはまた、ヒト及びラットのＴＧＦα及びヒトエピレグリン（それぞれＩＣ_５０値０．５２１±０．０３７ｎＭ、０．１３１±０．０１２ｎＭ、及び１．１２±０．３６ｎＭ）及びマウスエピレグリンに対する活性（ＩＣ_５０値２１４±４９ｎＭ）を強力に阻害した。試験した他のマウスＥＧＦＲリガンドに対する測定可能な活性は存在しなかった。

【0081】

したがって、抗体Ｉは高親和性ヒト化免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）モノクローナル抗体であり、ヒトＴＧＦα及びエピレグリンのＣ末端領域の重要な残基に結合し、ＥＧＦＲへの結合及びＥＧＦＲの活性化を防止する。抗体Ｉの結合により、ＴＧＦα及びエピレグリンの両方の膜結合型プロフォームが内在化し、成熟（可溶性）リガンド活性が中和される。臨床データは、抗体Ｉが最大７５０ｍｇの単回投与後に健康な対象に十分に許容され、３か月間にわたる３週間ごとの最大７５０ｍｇの静脈内（ＩＶ）の複数回投与後、中等度から重度の糖尿病性腎症（ＤＮ）患者に許容可能な忍容性プロファイルを有していたことを示している。抗体Ｉの安全性プロファイルは、ＥＧＦＲ抗体又はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の安全性プロファイルとは異なり、皮膚及びＧＩ有害事象（Ａｅｓ）の発生率が低い。抗体Ｉ注入後の総エピレグリン濃度の用量／濃度依存的な増加は、それがインビボでエピレグリンに結合することを示唆している。抗体Ｉの分子的、薬理学的、及び臨床的特性は、この抗体が、ＴＧＦα及びエピレグリンの両方の阻害に応答する疾患及び障害を有利に治療するための活性、利用可能性、安全性、及び耐性を有するという概念を支持している。

【0082】

本開示は、侵害受容性、神経障害性、及び混合性疼痛を含む慢性疼痛の治療、特に変形性関節症（ＯＡ）、又は糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮＰ）、又は慢性腰痛症の治療に有用な抗体Ｉを提供する。更に、本開示は、変形性関節症（ＯＡ）、又は糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮＰ）、又は慢性腰痛症の治療に有用である抗体Ｉを提供する。抗体Ｉと同じＣＤＲを共有する抗体ＩＩＩが、変形性関節症の疼痛の前臨床モデルで試験され、以下に記載するように、このモデルで疼痛の治療に有効であることが発見された。これは、抗体Ｉが本明細書に記載の慢性疼痛障害の治療に有用であるという概念を支持する。

【0083】

実施例５：ラットの変形性関節症性膝痛の半月板損傷モデルにおける抗ＴＧＦアルファ抗体抗体ＩＩＩのインビボ効果
ＯＡは慢性の衰弱性関節疾患であり、影響を受けた関節に疼痛が生じる。この試験では、抗体ＩＩＩを、ＯＡのラットＭＴモデルで、疾患の進行を防ぎ、変形性関節症様膝の疼痛を軽減する能力について試験した。ＭＴは、内側側副靭帯及び内側半月板のトランザクションによる膝関節の外科的不安定化の後に関節破壊及び疼痛が発生するＯＡのよく説明されたモデルである。ＯＡ疾患の進行は、組織学によって評価した。疼痛は、ＯＡを誘発した手術膝と同じ動物の手術していない反対側の膝の間の体重負荷の差として測定した。１及び１０ｍｇ／ｋｇでの抗体ＩＩＩ治療はＯＡ疾患の進行に影響を与えなかったが、対照ＩｇＧ１抗体と比較して用量依存的に統計的に有意な疼痛の軽減を示した。

【0084】

この試験では、２８～２９週齢、体重３４５～４３０グラムの４８匹のオスのＬｅｗｉｓラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用した。ラットは、１ケージ当たり３匹ずつの群で収容し、１２時間明／１２時間暗サイクルの一定温度に維持した。データ収集中を除いて、動物はいつでも餌及び水を自由に摂取できた。ラットは、体重によって１６匹ずつ３群に無作為に分けられ、右膝関節の内側側副靭帯及び半月板の外科的切片によってラットにＯＡを誘発した。左膝関節の外科的切除は行わなかった。ラットには、１０ｍｇ／ｋｇの対照マウスＩｇＧ１抗体又は１又は１０ｍｇ／ｋｇの抗体ＩＩＩのいずれかのＳＣ用量を投与した。投与は手術当日、手術の直前に開始し、試験終了まで週に１回ラットに投与した。投与体積は２ｍＬ／ｋｇであり、手術後４週間で試験が終了するまで、週１回皮下注射により投与を続けた。最後の投与は、剖検の１週間前に行い、剖検は手術の４週間後に行った。剖検では、左右の膝関節を採取し、１０％亜鉛ホルマリンで固定し、委員会認定の獣医病理学者による包埋、切片化、組織染色、及び採点のためにＢｏｌｄｅｒＢｉｏＰＡＴＨに送った。このモデルの疼痛を評価するために、各治療群から６匹のラットを無作為に選択し、試験の２４日目に、無力試験（静的差動体重負荷）を使用して疼痛を評価した。これにより、手術を受けた膝と手術を受けていない膝の間の後ろ足の体重負荷の差を測定した。この試験では、報告された値は３つの別々の測定値の平均であり、それぞれが各ラットについて１秒間にわたって測定した。オペレータは、選択されたラットの治療群を知らされていなかった。

【0085】

疼痛のデータは、平均値の標準誤差（±ＳＥＭ）を含む平均値として表示される。データは、平均の一元配置分析によって評価した。Ｄｕｎｎｅｔｔ検定を使用して群を比較し、Ｔｕｋｅｙ－ＫｒａｍｅｒＨＳＤ検定をＪＭＰ統計分析プログラム（ＳＡＳＩｎｓｔｉｔｕｔｅＩｎｃ．，ＮＣ）とのペアワイズ比較に使用した。ｐ値が．０５未満（ｐ＜．０５）の場合、差は有意であると見なした。

【0086】

組織学データについては、ＢｏｌｄｅｒＢｉｏＰＡＴＨが分析を行った。スチューデントのｔ検定又はマンホイットニーのＵ検定（ノンパラメトリック）を使用してデータを分析した。必要に応じて、適切な多重比較事後検定と共に、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）又はＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ検定（ノンパラメトリック）によって、すべての群にわたってデータを更に分析した。ｐ値が．０５未満（ｐ＜．０５）の場合、差は有意であると見なした。

【0087】

この試験からの膝関節の組織学的スコアリングは、抗体ＩＩＩ（１又は１０ｍｇ／ｋｇ）による処置には、対照ＩｇＧ１と比較した場合、ラットの内側半月板損傷誘発ＯＡの病変に有意な影響は存在しなかった。しかし、抗体ＩＩＩは、１及び１０ｍｇ／ｋｇの両方で、対照ＩｇＧ１と比較して有意に疼痛を軽減した（ダネット検定によるｐ＜．００１；（エラー！参照元が見つからない）。抗体ＩＩＩの１０ｍｇ／ｋｇ用量はまた、１ｍｇ／ｋｇの用量とは有意に異なっていた（ｐ＜．０５、ＴｕｋｅｙＫｒａｍｅｒＨｏｎｅｓｔＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｔＤｉｆｆｅｒｅｎｃｅ検定）。データは、抗体ＩＩＩがラットの半月板損傷モデルにおける体重負荷の違いによって測定されるように、疼痛を軽減するのに有効であるという驚くべき予想外の証拠を提供する。

【0088】

ヒトへの影響
このセクションに示されている臨床試験データは、ＧｏｏｄＣｌｉｎｉｃａｌＰｒａｃｔｉｃｅ（ＧＣＰ）の原則に従って生成した。２つの臨床試験が完了しており、現在までに９３名の対象が抗体Ｉに曝露されている。Ｉ５Ｖ－ＭＣ－ＴＧＡＡ試験（ＴＧＡＡ）では、４２名の健康な対象が単回投与（ＩＶ又はＳＣ）を受けた。Ｉ５Ｖ－ＭＣ－ＴＧＡＢ試験（ＴＧＡＢ）では、５１名の患者がＩＶ注入による複数回投与を受けた。これらの試験の設計を、表６に要約する。

【表9】

【0089】

実施例６：臨床薬理学
薬物動態
単回及び複数回のＩＶ投与後、抗体Ｉは非線形の薬物動態を示し、これは標的を介した薬物動態を示している（表６．１、６．２、及び６．３）。低用量では、抗体Ｉの見かけの血漿クリアランスは有意に大きく、Ｔ_１／２は比較的短かった。抗体Ｉの用量が増加するにつれて、抗体ＩのＴ_１／２は４３２時間（１８日）に近づき、膜結合タンパク質を標的とするモノクローナル抗体で一般的に観察されるものと一致した。ＤＮ患者では、抗体Ｉの平均暴露（時間０から時間ｔまでのＡＵＣ、ここでｔは測定可能な濃度の最後の時点［ＡＵＣ_{０－ｔｌａｓｔ}］）は、単回投与後の２２５０μｇ＊日／ｍＬから（表）７５０ｍｇＩＶ注入の場合、５回目の投与後の４８８０μｇ＊ｄａｙ／ｍＬまで（表６．）増加し、３週間ごとに投与した場合、約２倍の蓄積となる。７５０ｍｇの単回ＩＶ注入後、最大濃度（Ｃ_ｍａｘ）及び曝露（ＡＵＣ_{０－ｔｌａｓｔ}）は健康な対象及びＤＮ患者で同等であった（平均Ｃ_ｍａｘは２６５μｇ／ｍＬ及び３６８μｇ／ｍＬ；平均ＡＵＣ_{０－ｔｌａｓｔ}は、健康な対象及びＤＮ患者でそれぞれ３０４０μｇ・日／ｍＬ及び２２５０μｇ・日／ｍＬである）。集団ＰＫモデリングは、抗体Ｉの薬物動態が健康な対象及びＤＮ患者で類似していることを示した。

【0090】

ＳＣ用量投与後の抗体Ｉの計算されたバイオアベイラビリティは３８％であったが、評価された用量（５０ｍｇ）は、薬物動態が非線形である用量の範囲にある。したがって、臨床的に関連する線形ＰＫ範囲でのバイオアベイラビリティは、より高くなる可能性がある。

【表10】

【表11】

【表12】

【0091】

薬物動力学：
総エピレグリン及び総ＴＧＦα濃度の測定による標的エンゲージメント：
薬剤耐性エピレグリン及びＴＧＦαアッセイを臨床プログラムで使用して、総エピレグリン濃度を測定した（総エピレグリン又はＴＧＦα＝抗体Ｉ結合エピレグリン又はＴＧＦα±遊離エピレグリン又はＴＧＦα）。抗体Ｉを投与すると、エピレグリン／ＴＧＦαが抗体Ｉに結合し、ＥＧＦＲとの相互作用に利用できる遊離のエピレグリン／ＴＧＦαの量が減少することを前提とする。抗体Ｉに結合したエピレグリンＴＧＦαは、遊離のエピレグリン／ＴＧＦαよりもクリアランスが低いと予想され、抗体Ｉの投与により総エピレグリン／ＴＧＦα濃度が増加する。

【0092】

抗体Ｉを投与すると、健康な対象及びＤＮ患者において、血清総エピレグリンレベルが用量依存的に増加した。総血清エピレグリンレベルは、典型的には、抗体Ｉの単回投与後１週間～４週間でピークに達し、その後の投与後も蓄積し続けた。これは、血清コンパートメント内の総エピレグリンの隔離、及びそのクリアランスの減少、したがってその血清濃度の漸進的な蓄積と一致している。これは、エピレグリンへの標的エンゲージメントと一致している。

【0093】

血清ＴＧＦαレベルは、健康な対象における抗体Ｉの単回投与ＩＶで変化するようには見えず、ＤＮ患者の複数回投与後に、血清総ＴＧＦα濃度の用量依存的な増加を観察した。しかし、血清総ＴＧＦα増加の大きさは、エピレグリンのものよりも小さく、より可変的であった。

【0094】

総血清エピレグリン及びＴＧＦαのデータは、抗体Ｉがエピレグリン及びＴＧＦαの両方に結合することを示唆しており、抗体Ｉがインビボでヒトにおいてエピレグリン及びＴＧＦαの両方にエンゲージできるという前臨床データを裏付ける。

【0095】

臨床試験全体の安全性データの要約
ＴＧＡＡ試験：この試験では、抗体Ｉ投与に関連する重大な有害事象（ＳＡＥ）は発生しなかった。抗体Ｉに関連すると考えられるＡＥのために中止又は中断された対象はいなかった。抗体Ｉを投与された後に少なくとも２名の対象（又は≧５％）により報告されたすべての因果関係の治験関連Ａｅｓ（ＴＥＡＥ）は、プラセボを投与された対象よりもより頻度が多く報告され、鼻炎、くしゃみ、背中の疼痛、咳、熱感、感覚異常、及び鼻漏が含まれていた。治験薬に関連すると考えられるＴＥＡＥはいずれも、抗体Ｉに無作為に割り付けられた２名を超える対象では観察されなかった。１ｍｇの抗体を投与された後、中度の１２日間のそう痒性斑状丘疹状皮疹を経験した。発疹は、１０日間続き、自然に消散した。治験責任医師は、発疹は治験薬の投与に関連しており、ｐａｎ－ＥＧＦＲ阻害剤の投与に通常関連する発疹と一致していると考えた。血圧、心拍数、ＱＴｃ、臨床検査、又は肺拡散能に臨床的に重大な異常は存在しなかった。

【0096】

ＴＧＡＢ試験：パートＡでは、治験薬の中止、ＳＡＥ、又は治験中の死亡につながるＴＥＡＥを経験した患者はいなかった。プラセボを投与された３名の患者のうち１名、１０ｍｇの抗体Ｉを投与された４人の患者のうち３名、１００ｍｇを投与された４人の患者のうち４人、及び７５０ｍｇを投与された４人の患者のうち２名が治験関連Ａｅｓを経験した。各治療群の１名の患者は、少なくとも１つの薬物関連のＴＥＡＥを有していた。

【0097】

パートＢでは、プラセボを投与された１名の患者が試験中に死亡した。少なくとも１つのＳＡＥを経験した患者の数には、プラセボを投与された患者６名中１名（１６．７％）、５０ｍｇ群の患者１４人中３名（２１．４％）、２５０ｍｇ群の患者１３名中６名（４６．２％）、及び７５０ｍｇ群の患者１２名中１名（８．３％）が含まれていた。パートＢで抗体Ｉを投与された患者の合計２５．６％がＳＡＥを報告した。試験で観察されたＳＡＥのいずれも、治験薬の投与に関連すると判断されず、治療に関係なく、１名を超える患者が経験したＳＡＥは存在しなかった。

【0098】

治験薬の中止に至ったＴＥＡＥを経験した患者の数には、プラセボを投与された患者６名中１名（１６．７％）、５０ｍｇ群の患者１４人中２名（１４．３％）、２５０ｍｇ群の患者１３名中３名（２３．１％）、及び７５０ｍｇ群の１２名中１名（８．３％）の患者が含まれていた。１つの例外を除いて、治験薬の中止につながったすべてのＴＥＡＥは、治験薬とは無関係であると見なした。治験薬の中止につながった１つの関連ＴＥＡＥは、７５０ｍｇの抗体Ｉを投与された患者の全身のかゆみであった。

【0099】

パートＢで抗体Ｉ治療患者が経験した５つの最も一般的なＴＥＡＥは、下痢、浮腫の悪化、頭痛、高血圧の悪化、及び吐き気であった（それぞれ１０．３％）。プラセボを投与された患者が経験した２つの最も一般的なＴＥＡＥは、頭痛及び慢性腎臓病であった（それぞれ３３．３％）。ＴＥＡＥ及び抗体Ｉの頻度に用量関係の証拠は存在しなかった。試験ＴＧＡＢパートＢからの治験関連Ａｅｓ（因果関係に関係なく）は、表６．４に要約されている。薬剤関連のＴＥＡＥは、パートＢで１名以上の患者から報告されたものは存在しなかった。バイタルサイン値又は臨床検査値について、経時的なベースラインからの一貫した変化は存在しなかった。

【表13】

【0100】

実施例７：変形性関節症の治療のための抗体Ｉを評価するための無作為化プラセボ対照第２相臨床試験。
この試験の目的は、変形性関節症（ＯＡ）による膝の疼痛の緩和における抗体Ｉの有効性に関するヒトの臨床的証拠を提供することである。この試験集団における抗体Ｉの安全性及び忍容性を評価するためにデータを収集する。薬物動態（ＰＫ）特性、薬力学（ＰＤ）効果、及び免疫原性プロファイルも調査する。この概念実証試験からのデータの全体は、抗体Ｉに関連する利点及びリスクを評価し、抗体Ｉの臨床開発に情報を提供する。

【0101】

全体的な設計：
これは、膝にＯＡを有する参加者の抗体Ｉとプラセボとを比較する、２６週間の第２相無作為化二重盲検プラセボ対照試験である。これは、ランダム化された、試験者及び参加者を盲検化した、プラセボ対照の第２相臨床試験である。約１２５名の参加者が無作為に試験介入に割り当てられる（８４抗体Ｉ及び４１プラセボ）。この２６週間の試験には、８週間の二重盲検治療期間及び１８週間のフォローアップ期間が含まれる。この試験設計を図２に示す。

【0102】

試験介入は、盲検化された施設職員によって約１時間にわたってゆっくりとした静脈内（ＩＶ）注入によって投与する。注入反応が観察された場合、必要に応じて注入速度を下げることができる。用量は７５０ｍｇから開始し、続いて５００ｍｇを２週間ごとにＩＶで合計４回投与する。用量製剤は、滅菌水０．９％塩化ナトリウム溶液で再構成された凍結乾燥粉末である。参加者は、合計４回の注入のために２週間ごとにＩＶ注入を受ける。参加者は、各注入の完了後、少なくとも４時間監視される。

【0103】

患者の来院時に、すべての治療後のサンプル収集及び安全性の監視が完了し、参加者は、来院退院前に試験制限及び数値評価スケール（ＮＲＳ）日誌エントリを続行するように指示される。有効性データは、長いＰＫ半減期及び抗体Ｉの潜在的な持続的標的エンゲージメントに基づいて、最終投与後６週間まで収集される。安全性、薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）及び免疫原性サンプルは介入の最後の投与の２０週間後まで回収されて、安全性及び臨床免疫原性プロファイルを特性決定する。参加者は、最後に予定された手順を含む、試験の必要なすべてのフェーズを完了した場合、この試験を完了したと見なされる。

【0104】

目的及びエンドポイント
主要目的及び副次的目的及びエンドポイントを以下に説明する。

【表14】

【0105】

【0106】

数値評価スケール（ＮＲＳ）：ＮＲＳは、予備データ入力期間（ＰＤＥＰ）中及び試験全体を通して毎日使用されて、疼痛の重症度を説明する。これは、参加者が過去２４時間の平均及び最悪の疼痛を０から１０のスケールで説明するように求められる数値の単一項目スケールである。０＝疼痛なし、１０＝想像できる最悪の疼痛．参加者は、持ち帰り用のデバイスを使用して毎日ＮＲＳを完了する。参加者のコンプライアンスは、診療所を訪れるたびに確認する。ＮＲＳの最悪の疼痛は毎日回収される。他の二次測定のスコアは、来院スケジュールで指定されているように、各来院で収集される。主要な結果の測定は、ＮＲＳ項目で評価された平均疼痛強度のベースラインからエンドポイントまでの平均変化である。「過去２４時間［試験下の領域］のあなたの疼痛の平均レベルを説明する１つの番号［０～１０］を選択することによって自身の疼痛を点数付けしてください。］このスケールは、疼痛の変化を検出する実証された能力、及び疾患状態全体での一般的な使用に基づいて選択された。二次的なスケールは、ＮＲＳ項目で測定された最悪の疼痛強度のベースラインからエンドポイントまでの平均変化である。「過去２４時間［試験下の領域］のあなたの疼痛の最も悪いレベルを説明する１つの番号［０～１０］を選択することによって自身の疼痛を点数付けしてください。］過去２４時間の平均的な疼痛及び最悪の疼痛のＮＲＳ値は、参加者ごとに毎日収集される。統計分析では、過去２４時間の平均及び最悪の疼痛の平均ＮＲＳ値が、１週間間隔及び２週間間隔の両方で計算される。参加者が試験のプラセボ対照部分を完了した場合、ＮＲＳの週間隔の平均は８回のベースライン後の観察となり、隔週間隔の平均は各参加者のベースライン後の４回の観察となる。ＮＲＳの週間隔の平均は、分析計画で特に指定されていない限り、一次有効性分析及び以下に説明するその他の分析で使用される。参加者は、平均ＮＲＳ値を計算するために、事前に指定された時間間隔中に５０％以上の毎日のＮＲＳ値を有している必要があり、それ以外の場合、その来院の平均ＮＲＳ値は欠落していると見なされる。

【0107】

全体的な改善に対する参加者の評価：患者の全体的な変化の印象（ＰＧＩ）は、病状全体で使用される。それは、一般的な改善のサブ側面とは別に、参加者の治療の視点を捉えている。これは、１～７の数値スケールである。１＝非常により良い、７＝非常により悪い。参加者は、「この薬の服用を開始する前と比較して、現在の疼痛の症状を最もよく表しているボックスに印を付ける」よう求められる。

【0108】

情緒機能評価：ＥＱ－５Ｄ－５Ｌ健康状態質問票は、病状全体で使用される。ＥＱ－５Ｄ－５Ｌは、生活の質に対処するための最も人気のある患者完成手段の１つである（ＢｕｃｈｈｏｌｚＩ，ＪａｎｓｓｅｎＭＦ，ＫｏｈｌｍａｎｎＴ，ＦｅｎｇＹＳ．Ａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗｏｆｓｔｕｄｉｅｓｃｏｍｐａｒｉｎｇｔｈｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅ－ｌｅｖｅｌａｎｄｆｉｖｅ－ｌｅｖｅｌｖｅｒｓｉｏｎｓｏｆｔｈｅＥＱ－５Ｄ．ＰｈａｒｍａｃｏＥｃｏｎｏｍｉｃｓ．２０１８；３６（６）：６４５－６６１．）。これは、可動性、セルフケア、通常の活動、疼痛／不快感、及び不安／抑うつの５つの次元を含む記述システムである。参加者は、「今日のあなたの健康状態を最もよく表す１つのボックスにチェックを入れる」よう求められ、各項目の下にある５つの選択肢から選択する。５つの次元のスコアは、健康プロファイルとして表示することができるか、又は単一の要約インデックス番号に変換できる。ＥＱ－５Ｄ－５ＬにはＥＱＶＡＳも含まれており、参加者の自己評価による健康状態を０から１００の垂直ＶＡＳで記録する：０＝想像できる最悪の健康状態、１００＝想像できる最高の健康状態。そのＥＱ－５Ｄ－５Ｌバージョンで使用される器具は、短く、信頼性が高く、検証済みで、完了しやすいスケールであり、再試験の信頼性に優れており、いくつかの疾患による疼痛に関連する生活の質に対処する。

【0109】

睡眠の質：睡眠障害は、疼痛の研究において重要な問題である。利用可能な様々な手段の中で、ＭｅｄｉｃａｌＯｕｔｃｏｍｅＳｔｕｄｙ（ＭＯＳ）ＳｌｅｅｐＳｃａｌｅは、睡眠障害について心理測定的に検証された独自のスコアを提供する。このスケールは、過去１週間に対処する１２の質問からなる。参加者は、それぞれの睡眠症状又は問題がどのくらいの頻度で存在するかを、「常に」から「まったくない」までの６段階のカテゴリスケールで報告する。入眠時間及び睡眠量に関する質問は、毎晩の平均睡眠時間として報告される。このスケールは投与負担が少なく、様々な疼痛試験で使用されており、神経障害性疼痛の患者で検証されている。

【0110】

安全性評価：安全性評価の計画された時点は、一般的な慣行に従って決定され、身体検査、バイタルサイン及び体重測定、１２誘導心電図、臨床検査、肝臓の安全性モニタリング、Ｃ－ＳＳＲＳ、及び自発的に報告されたＡｅｓが含まれる。

【0111】

有効性評価：

【表15】

【0112】

慢性疼痛を特性決定する際には、評価及びドメインのコアセットが使用され、これらは、疼痛、身体機能、感情機能、全体的な改善の参加者評価、有害事象（Ａｅｓ）、及び参加者の性質である。ＮＲＳは、疼痛の変化を検出する実証された能力、及び試験中の疾患状態全体での一般的な使用に基づいて、主要エンドポイントとして選択される。

【0113】

西オンタリオおよびマクマスター大学の変形性関節症指数（ＷｅｓｔｅｒｎＯｎｔａｒｉｏａｎｄＭｃＭａｓｔｅｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＩｎｄｅｘ）：ＴｈｅＷｅｓｔｅｒｎＯｎｔａｒｉｏａｎｄＭｃＭａｓｔｅｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＩｎｄｅｘ（ＷＯＭＡＣ（登録商標））（ＢｅｌｌａｍｙＮ．ＴｈｅＷＯＭＡＣＫｎｅｅａｎｄＨｉｐＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＩｎｄｉｃｅｓ：Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ，ｇｌｏｂａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅＡＵＳＣＡＮＨａｎｄＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＩｎｄｉｃｅｓ．ＣｌｉｎＥｘｐＲｈｅｕｍａｔｏｌ．２００５；２３（Ｓｕｐｐｌ．３９）：１４８－１５３）は、変形性関節症の疼痛の治療薬に対する反応を評価するために広く使用されている検証済みの手段である。ＷＯＭＡＣバージョンＬＫ３．１は、試験のスケジュール（ｓｃｈｅｄｕｌｅｏｆａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ）に従って管理される。

【0114】

この表は、２４問のＷＯＭＡＣ及びサブスケールについて説明している。

【表16】

【0115】

参加者は、質問ごとに０～４のリッカート尺度を使用して回答を記録する。
０＝疼痛なし、４＝極度の疼痛。各サブスケールのスコアは、各時点での各参加者のそれぞれのサブスケールの質問のスコアを合計することによって計算される。各サブスケールの採点可能範囲は、「疼痛＝０～２０」、「こわばり＝０～８」、及び「身体機能＝０～６８」である。Ｂａｙｅｓｉａｎ縦断混合モデル反復測定分析（ＭＭＲＭ）を実行して、ＷＯＭＡＣ疼痛サブスケール及び身体機能サブスケールのベースラインからベースライン後の各来院までの変化を評価する。事前に指定されたバイナリ有効性結果を満たす各治療群の参加者の割合は、ベースライン後の各時点で推定され、治療群の比較に使用される。推定値は、すべてのベースライン後の観察を含むＢａｙｅｓｉａｎ縦断モデルのフィッティングから提供される。事前に指定されたバイナリ有効性結果には、ＷＯＭＡＣ疼痛サブスケール、及びＷＯＭＡＣ身体機能サブスケールで測定したベースラインからの３０％、５０％、及び７０％を超える減少によって測定されるように、ベースラインから３０％、５０％、及び７０％を超える減少を伴う、ＩＳＡ内の参加者の割合が含まれる。

【0116】

このモデルには、上記の連続有効性分析モデルで説明したカテゴリ共変量及び連続共変量が含まれるが、ベースラインと来院との相互作用は使用されない。追加のモデル項が考慮され、統計分析計画で指定される場合がある。ＷＯＭＡＣの疼痛及び身体機能のサブスケールのベースラインからエンドポイントまでのパーセント変化の累積分布関数は、各治療群に提供される。

【0117】

試験スケジュール（ｓｃｈｅｄｕｌｅｏｆａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ：ＳｏＡ）：
試験スケジュールは、抗体Ｉの試験のための特定の来院及び手順を示している。「マスタープロトコル」とは、所与の疾患状態又は複数の疾患状態におけるいくつかの潜在的な試験を導くためのプロトコル設定を指し、介入固有の補遺とは、試験中の所与の介入に特に関連するプロトコルの部分を指す。

【表17】

【表18】

【0118】

試験集団：
男性及び女性の参加者は、患者の報告又は病歴に基づいて毎日の疼痛の病歴がある場合、試験に含める資格がある。

【0119】

組入れ基準：
以下の基準のすべてが当てはまる場合にのみ、患者は、試験への組入れに適格である。
彼らは、インフォームドコンセントに署名した時点で年齢が４０歳以上である。
来院１で１２週間を超える指標となる膝の疼痛がある。
Ｋｅｌｌｇｒｅｎ－Ｌａｗｒｅｎｃｅグレード２～４の指標となる膝のレントゲン写真分類を伴う、ＡｍｅｒｉｃａｎＣｏｌｌｅｇｅｏｆＲｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙによる、変形性関節症の診断を裏付けるＸ線を有している。
スクリーニング時に糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）が１０以下であることによって示されるように、安定した血糖対照を有している。
彼らは、提供された生殖及び避妊の要件を順守する男性又は女性である
彼らは、フォローアップ期間のＶ８０１まで許可されたレスキュー治療を除いて、試験中の状態に対するすべての鎮痛薬を中止する意思がある。
ＩＶ注入及びサンプル収集のために、両腕に静脈アクセスを有さなければならない。

【0120】

ベースライン特徴
来院１及び２で視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）の疼痛の値が４０を超、及び９５未満である。
患者の報告又は病歴に基づいて、少なくとも１２週間の毎日の疼痛の病歴を有する。
壊滅的な疼痛のスケールで３０以下の値を有している。
体重：ボディ・マス指数＜４０ｋｇ／ｍ２（包括的）を有する

【0121】

インフォームドコンセント
彼らは、インフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）及びプロトコルに記載されている要件及び制限への準拠を含む、インフォームドコンセントを提供することができる。

【0122】

彼らは、試験期間中、必要なすべてのプロトコル手順に参加することに対して信頼でき、その意思があり、それが可能である。
彼らは、進行中の非薬理学的鎮痛療法（例えば、理学療法等）の一貫したレジメンを維持する意思があり、試験参加中に新しい非薬理学的鎮痛療法を開始しない。
彼らは、試験期間中、プロトコルごとに許可されたレスキュー治療を除いて、試験中の状態のためにすべての鎮痛剤を中止する意思がある。
無作為化の７日前、少なくとも５つの項目について、ＰＤＥＰの期間中、必要な毎日の評価を入力する必要がある。

【0123】

除外基準：
以下の基準のいずれかが当てはまる場合、参加者は、研究から除外される。
彼らは、すべてのプロトコル手順に完全に参加することが、大部分又は完全に不能、及びできない、例えば、寝たきり又は車椅子、セルフケアがほとんど又はまったく許可されない。
彼らは、指標となる膝に外科用ハードウェア又はその他の異物が存在する。
不安定な指標となる関節（前十字靭帯の断裂等）を有している。
ウォッシュアウト期間を開始する前の３か月以内に、影響を受けた膝に外科的処置又は治療注射を受けた。
線維筋痛症、慢性疼痛症候群、又は指標膝の評価を妨げる可能性のある他の併発する医学的又は関節炎の状態を有している。
ライター症候群、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患に伴う関節炎、サルコイドーシス、又はアミロイドーシスの病歴を有する。
指標となる膝の活動性膝感染症又は結晶性疾患の臨床徴候及び症状を有する。
指標となる関節に感染歴を有する。
結晶による関節炎の病歴を有する（例えば、痛風、偽痛風）。
同側性股関節変形性関節症を有する。あるいはその他の病状：来院２から２４週間以内にヒアルロン酸の関節内注射を受けた。来院１又は来院２でのＣＫＤ－ＥＰＩ式に基づくｅＧＦＲが７０ｍｌ／分／１．７３ｍ２未満である。臨床的に重篤又は不安定な心血管、筋骨格障害、胃腸、内分泌、血液、肝臓、代謝、泌尿器、肺、皮膚、免疫、又は眼科の疾患を来院３の３か月以内に有している。

【0124】

以前／併用療法：神経成長因子（ＮＧＦ）に対する抗体、又はＥＧＦＲに対する抗体、又はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を受けている。モノクローナル抗体に対するアレルギー反応の病歴があるか、又は臨床的に重大な多発性又は重度の薬物アレルギーの病歴があり、これには多形性紅斑、線状免疫グロブリンＡ皮膚症、中毒性表皮壊死融解症、又は剥脱性皮膚炎が含まれるがこれらに限定されない。制御されていない喘息、湿疹、重大なアトピー、重大な遺伝性血管性浮腫又は一般的な変性の免疫不全の病歴又は存在を有する。及び
生殖性：彼らは、妊娠中又は授乳中の女性である。

【0125】

参加者は、二重盲検試験期間中、同様のレベルの活動を維持する必要がある。新しい運動プログラム又は新しい激しい活動を開始することは許可されていない。

【0126】

指標となる膝のＯＡの理学療法を受けている参加者は、同じ治療プログラム（強度及び頻度）を継続する必要がある。

【0127】

試験評価及び手順
薬物動態
抗体Ｉ濃度の測定のために、約４ｍＬの静脈血サンプルを採取する。サンプルは、抗体ＩのＰＫを評価するために使用される。

【0128】

施設担当者は、抗体Ｉの投与（注入の開始及び終了）の日時（２４時間）、及び各ＰＫサンプルの日時（２４時間）を記録する。

【0129】

薬物動力学：
エピレグリンの測定のために、それぞれ約４ｍＬの静脈血サンプルを採取する。残りの血液サンプルいずれも、ＴＧＦ－αを含むがこれに限定されない他の潜在的なＰＤエンドポイントを試験するために使用できる。

【0130】

免疫原性評価：
免疫原性は、スポンサーによって承認された試験所で、抗体Ｉの存在下でＡＤＡを検出するように設計された検証済みのアッセイによって評価される。抗体は、抗体Ｉの活性を中和する能力について更に特性決定され得る。指定された来院及び時間に、投与前の静脈血サンプルを採取して、抗体Ｉに対する抗体産生を決定する。各サンプル採取の実際の日付及び時刻（２４時間）を記録する。前回の予定された評価又は中止の来院時の免疫原性サンプルが、治療下で発現した（ＴＥ）抗薬物抗体（ＡＤＡ）陽性である場合、シグナルがベースラインに戻るまで（すなわち、ＴＥ－ＡＤＡ陽性でなくなるまで）又は最後の投与から最大１年間、追加のサンプルを採取することができる。これらの結果の解釈を支援するために、ＰＫ分析用の投与前の血液サンプルを同じ時点で投与する。

【0131】

統計的過程
Ｂａｙｅｓｉａｎ重要成功要因（ＣＳＦ）が定義され、抗体Ｉが主要エンドポイントを達成したかどうかを評価するために使用される。ＣＳＦは、本明細書に記載され、当業者に知られている方法論を使用して、一次有効性エンドポイントであるＮＲＳによって測定される平均疼痛強度について評価され、各試験の二重盲検部分の終了時に計算される。ＣＳＦは、
確率（治療効果＜目的の効果）＞確率しきい値の一般的な形式を有する。治療効果は、エンドポイントにおいてベースラインから抗体Ｉ推定値－プラセボ推定値の変化として定義される。

【0132】

目的の効果は、通常、文献検索又は臨床判断を通して見出される。確率のしきい値は、一般に、治療効果の信頼性の望ましいレベルを有するように、又はヌル効果を含む、妥当性があり想定される真の薬物効果シナリオの範囲の下で望ましい動作特性を有するように、設定される。追加の仮説には、本明細書で定義された事前に指定された目的及びエンドポイントに対する積極的介入とプラセボとの比較が含まれる。試験は、複数の試験が企図され、プラセボデータが必要に応じて共有されるプロトコルで実施されてもよい。

【0133】

一次仮説の決定基準は、ＮＲＳで測定した平均疼痛強度において、抗体Ｉがプラセボよりも少なくとも０．５５単位優れていることを少なくとも７０％確信していることとして定義される。主要な二次帰無仮説は、主要二次エンドポイント、つまりＷＯＭＡＣ（登録商標）疼痛サブスケールスコアのベースラインからエンドポイントまでの平均変化について、抗体Ｉとプラセボとの間に差がないことである。主要二次仮説の決定基準は、抗体ＩがＷＯＭＡＣ（登録商標）疼痛サブスケールでプラセボよりも少なくとも０．３５単位優れているという確信が少なくとも７０％あることとして定義される。

【0134】

サンプルサイズの決定：
約１２５名の参加者が、それぞれ抗体Ｉ及びプラセボに対して２：１の比率で無作為化される。約１０７名の参加者が試験の二重盲検治療期間を完了すると予想される。このサンプルサイズは８０％を超える検出力を提供して、実際の治療群がＷＯＭＡＣ（登録商標）疼痛サブスケール（ＷＯＭＡＣ＝西オンタリオおよびマクマスター大学の変形性関節症指数（ＷｅｓｔｅｒｎＯｎｔａｒｉｏａｎｄＭｃＭａｓｔｅｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＩｎｄｅｘ））で少なくとも０．３５単位、プラセボよりも優れている０．７以上の事後確率を有することを示す。

【0135】

検出力計算の仮定は、ＷＯＭＡＣ疼痛サブスケールで測定したベースラインからの疼痛強度の平均減少が、エンドポイントにおいて、プラセボ及び抗体Ｉでそれぞれ約３単位と４単位であり、共通の標準偏差は２．２５であると仮定している。プラセボと抗体Ｉとの間に治療上の違いがない場合、上記の有効性基準に合格する確率（すなわち、偽陽性）は約０．１である。検出力計算及びサンプルサイズ決定のシミュレーションは、ＦＡＣＴＳバージョン６．０で実行した。

【0136】

分析の集団：
薬物動態学的集団には、例えば、来院３で抗体Ｉの全用量が投与され、来院４での投薬前又は投薬後に少なくとも１つの評価可能なＰＫサンプルが回収されたすべての無作為化された参加者が含まれる。

【0137】

実施例８：糖尿病性末梢性神経障害性疼痛の治療のための抗体Ｉを評価するための無作為化プラセボ対照第２相臨床試験
この試験の目的は、糖尿病性末梢神経障害性疼痛（ＤＰＮＰ）の緩和における抗体Ｉの有効性に関するヒトの臨床的証拠を提供することである。この試験集団における抗体Ｉの安全性及び忍容性を評価するためにデータを収集する。薬物動態（ＰＫ）特性、薬力学（ＰＤ）効果、及び免疫原性プロファイルも調査する。この概念実証試験からのデータの全体は、抗体Ｉに関連する利点及びリスクを評価し、抗体Ｉの臨床開発に情報を提供する。

【0138】

全体的な設計：
これは２６週間の第２相無作為化二重盲検プラセボ対照試験であり、ＤＰＮＰの参加者の抗体Ｉ及びプラセボを比較する。これは、ランダム化された、試験者及び参加者を盲検化した、プラセボ対照の第２相臨床試験である。約１２５名の参加者が無作為に試験介入に割り当てられる（８４抗体Ｉ及び４１プラセボ）。この２６週間の試験には、８週間の二重盲検治療期間及び１８週間のフォローアップ期間が含まれる。この試験設計を図２に示す。

【0139】

【0140】

【0141】

目的及びエンドポイント
主要目的及び副次的目的及びエンドポイントを以下に説明する。

【表19】

【0142】

【0143】

数値評価スケール（ＮＲＳ）：ＮＲＳは、予備データ入力期間（ＰＤＥＰ）中及び試験全体を通して毎日使用されて、疼痛の重症度を説明する。これは、参加者が過去２４時間の平均及び最悪の疼痛を０から１０のスケールで説明するように求められる数値の単一項目スケールである。０＝疼痛なし、１０＝想像できる最悪の疼痛。参加者は、持ち帰り用のデバイスを使用して毎日ＮＲＳを完了する。参加者のコンプライアンスは、診療所を訪れるたびに確認する。ＮＲＳの最悪の疼痛は毎日回収される。他の二次測定のスコアは、来院スケジュールで指定されているように、各来院で収集される。主要な結果の測定は、ＮＲＳ項目で評価された平均疼痛強度のベースラインからエンドポイントまでの平均変化である。「過去２４時間［試験下の領域］のあなたの疼痛の平均レベルを説明する１つの番号［０～１０］を選択することによって自身の疼痛を点数付けしてください。］このスケールは、疼痛の変化を検出する実証された能力、及び疾患状態全体での一般的な使用に基づいて選択された。二次的なスケールは、ＮＲＳ項目で測定された最悪の疼痛強度のベースラインからエンドポイントまでの平均変化である。「過去２４時間［試験下の領域］のあなたの疼痛の最も悪いレベルを説明する１つの番号［０～１０］を選択することによって自身の疼痛を点数付けしてください。］過去２４時間の平均的な疼痛及び最悪の疼痛のＮＲＳ値は、参加者ごとに毎日収集される。統計分析では、過去２４時間の平均及び最悪の疼痛の平均ＮＲＳ値が、１週間間隔及び２週間間隔の両方で計算される。参加者が試験のプラセボ対照部分を完了した場合、ＮＲＳの週間隔の平均は８回のベースライン後の観察となり、隔週間隔の平均は各参加者のベースライン後の４回の観察となる。ＮＲＳの週間隔の平均は、分析計画で特に指定されていない限り、一次有効性分析及び以下に説明するその他の分析で使用される。参加者は、平均ＮＲＳ値を計算するために、事前に指定された時間間隔中に５０％以上の毎日のＮＲＳ値を有している必要があり、それ以外の場合、その来院の平均ＮＲＳ値は欠落していると見なされる。

【0144】

【0145】

【0146】

【0147】

【0148】

有効性評価：

【表20】

【0149】

【0150】

簡易疼痛質問票－改変短縮版（ＢＰＩ－ＳＦ）
ＢＰＩ－ＳＦは、様々な疾患状態における疼痛の重症度（重症度スケール）、日常機能への影響（干渉スケール）、及び疼痛のその他の側面（例えば、疼痛の場所、治療による緩和）を評価する数値評価スケールである（ＣｌｅｅｌａｎｄＣＳ，ＲｙａｎＫＭ．Ｐａｉｎａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ：ｇｌｏｂａｌｕｓｅｏｆｔｈｅＢｒｉｅｆＰａｉｎＩｎｖｅｎｔｏｒｙ．ＡｎｎＡｃａｄＭｅｄ

【0151】

Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ．１９９４Ｍａｒ；２３（２）：１２９－１３８）。この表は、糖尿病性多発ニューロパチーの疼痛について検証された、ＢＰＩの改変版で使用される疼痛のスケール及び対応する数値評価スケールを示している。参加者は、疼痛の重症度、及び過去２４時間に、この表に記載されている活動が疼痛によってどのように妨げられたかを評価する。

【表21】

【0152】

試験スケジュール（ｓｃｈｅｄｕｌｅｏｆａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ：ＳｏＡ）：
試験スケジュールは、抗体Ｉの試験のための特定の来院及び手順を示している。「マスタープロトコル」とは、所与の疾患状態又は複数の疾患状態におけるいくつかの潜在的な試験を導くためのプロトコル設定を指し、疾患状態の補遺は特定の疾患状態のガイダンスを指し、介入固有の補遺とは、試験中の所与の介入に特に関連するプロトコルの部分を指す。

【表22】

【表23】

【0153】

試験集団：
男性及び女性の参加者は、患者の報告又は病歴に基づいて毎日の疼痛の病歴がある場合、試験に含める資格がある。推定ＧＦＲは、腎効果の分析のために参加者のバランスの取れた数を確保するために層別化に使用される。測定値は来院２で回収され、サブセットは９０以上及び９０未満である。

【0154】

ミシガン神経障害スクリーニング手段は、糖尿病患者の脚及び足の神経障害を評価するために使用される（ＴｈｅＭｉｃｈｉｇａｎＮｅｕｒｏｐａｔｈｙＳｃｒｅｅｎｉｎｇＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ．ミシガン大学のウェブサイト．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｄ．ｕｍｉｃｈ．ｅｄｕ／ｂｏｒｃ／ｐｒｏｆｓ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ｓｖｉ／ＭＮＳＩ＿ｐａｔｉｅｎｔ．ｐｄｆ．２０００年公開．

【0155】

２０１９年１２月１１日アクセス）。試験のスケジュールに合わせて実施する。この表は、手段に含まれる評価を示している。

【表24】

【0156】

パートＡ及びパートＢの両方が実施される。試験への組入れを決定するためにパートＢのみが使用される。

【0157】

組入れ基準：
以下の基準のすべてが当てはまる場合にのみ、患者は、試験への組入れに適格である。
彼らは、インフォームドコンセントに署名した時点で年齢が１８歳以上である。
末梢神経障害に続発し、少なくとも６か月間存在し、ミシガン神経障害スクリーニング手段パートＢ≧３（（著作権）ミシガン大学［ＷＷＷ］）を使用して診断された毎日の対称的な足の疼痛を有している
１型又は２型糖尿病の病歴及び現在の診断を有している。
スクリーニング時に、糖化ヘモグロビン≦１１で示されるように、安定した血糖対照を有している
彼らは、提供された生殖及び避妊の要件を順守する男性又は女性である
彼らは、フォローアップ期間のＶ８０１まで許可されたレスキュー治療を除いて、試験中の状態に対するすべての鎮痛薬を中止する意思がある。
ＩＶ注入及びサンプル収集のために、両腕に静脈アクセスを有さなければならない。

【0158】

ベースライン特徴
来院１及び２で視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）の疼痛の値が４０を超、及び９５未満である。
患者の報告又は病歴に基づいて、少なくとも１２週間の毎日の疼痛の病歴を有する。
壊滅的な疼痛のスケールで３０以下の値を有している。
体重：ボディ・マス指数＜４０ｋｇ／ｍ２（包括的）を有する。

【0159】

【0160】

彼らは、試験期間中、必要なすべてのプロトコル手順に参加することに対して信頼でき、その意思があり、それが可能である。

【0161】

彼らは、進行中の非薬理学的鎮痛療法（例えば、理学療法等）の一貫したレジメンを維持する意思があり、試験参加中に新しい非薬理学的鎮痛療法を開始しない。
彼らは、試験期間中、プロトコルごとに許可されたレスキュー治療を除いて、試験中の状態のためにすべての鎮痛剤を中止する意思がある。
無作為化の７日前、少なくとも５つの項目について、ＰＤＥＰの期間中、必要な毎日の評価を入力する必要がある。

【0162】

除外基準：
以下の基準のいずれかが当てはまる場合、参加者は、研究から除外される。
彼らは、例えば、いくつかのタイプの化学療法、又は他のタイプの末梢神経障害のために、現在の薬物誘発性神経障害を有している
既知の遺伝性の運動神経障害、感覚神経障害、又は自律神経障害を有する。
その他の病状：
来院１又は来院２におけるＣＫＤ－ＥＰＩ式に基づくｅＧＦＲが７０ｍｌ／分／１．７３ｍ２未満である。

【0163】

臨床的に重篤又は不安定な心血管、筋骨格障害、胃腸、内分泌、血液、肝臓、代謝、泌尿器、肺、皮膚、免疫、又は眼科の疾患を来院３の３か月以内に有している。

【0164】

【0165】

生殖性：彼らは、妊娠中又は授乳中の女性である。

【0166】

【0167】

薬物動態
抗体Ｉ濃度の測定のために、約４ｍＬの静脈血サンプルを採取する。サンプルは、抗体ＩのＰＫを評価するために使用される。

【0168】

施設担当者は、抗体Ｉの投与（注入の開始及び終了）の日時（２４時間）、及び各ＰＫサンプルの日時（２４時間）を記録する。

【0169】

【0170】

【0171】

【0172】

【0173】

一次仮説の決定基準は、ＮＲＳで測定した平均疼痛強度において、抗体Ｉがプラセボよりも少なくとも０．４単位優れていることを少なくとも７０％確信していることとして定義される。

【0174】

ＢＰＩ－ＳＦ連続有効性分析：Ｂａｙｅｓｉａｎ縦断混合効果モデル反復測定（ＭＭＲＭ）分析を実行して、ベースラインからベースライン後の各来院までの変化を評価し、合計の疼痛の干渉スケールを評価する。分析は、個々の疼痛の干渉、合計の疼痛の干渉（７つの応答の合計）、及び個々の疼痛の重症度スケールについて、ベースラインからベースライン後の各来院までの変化を分析するために使用される。事前に指定されたバイナリ有効性結果を満たす各治療群の参加者の割合は、ベースライン後の各時点で推定され、治療群の比較に使用される。推定値は、すべてのベースライン後の観察を含むＢａｙｅｓｉａｎ縦断モデルのフィッティングから提供される。事前に指定されたバイナリ効果の結果には、ＢＰＩ－ＳＦの個々の重症度スコアによって測定されるベースラインからの３０％、５０％、及び７０％の減少、ＢＰＩ－ＳＦ総干渉スコアによって測定されるベースラインからの３０％、５０％、及び７０％の減少を伴う参加者の割合が含まれる。

【0175】

サンプルサイズの決定：
約１２５名の参加者が、それぞれ抗体Ｉ及びプラセボに対して２：１の比率で無作為化される。約１０７名の参加者が試験の二重盲検治療期間を完了すると予想される。このサンプルサイズは８０％を超える検出力を提供し、ＮＲＳで測定した平均疼痛強度において、実薬治療群がプラセボよりも少なくとも０．４単位優れているという０．７以上の事後確率であることを示す。

【0176】

検出力計算の仮定は、ＮＲＳによって測定される平均疼痛強度の平均減少が、エンドポイントで、プラセボ及び抗体Ｉでそれぞれ約１．５８単位及び２．５８単位であり、共通の標準偏差は２であるというものである。プラセボと抗体Ｉの間に治療上の違いがない場合、上記の有効性基準に合格する確率（つまり、偽陽性）は約０．０６である。検出力計算及びサンプルサイズ決定のシミュレーションは、ＦＡＣＴＳバージョン６．０で実行した。

【0177】

【0178】

実施例９：慢性腰痛症の治療のための抗体Ｉを評価するための無作為化プラセボ対照第２相臨床試験
この試験の目的は、慢性腰痛症（ＣＬＢＰ）による疼痛の緩和における抗体Ｉの有効性に関するヒトの臨床的証拠を提供することである。この試験集団における抗体Ｉの安全性及び忍容性を評価するためにデータを収集する。薬物動態（ＰＫ）特性、薬力学（ＰＤ）効果、及び免疫原性プロファイルも調査する。この概念実証試験からのデータの全体は、抗体Ｉに関連する利点及びリスクを評価し、抗体Ｉの臨床開発に情報を提供する。

【0179】

全体的な設計：
これは２６週間の第２相無作為化二重盲検プラセボ対照試験であり、ＣＬＢＰの参加者の抗体Ｉ及びプラセボを比較する。これは、ランダム化された、試験者及び参加者を盲検化した、プラセボ対照の第２相臨床試験である。約１５０名の参加者が無作為に試験介入に割り当てられる（１００抗体Ｉ及び５０プラセボ）。この２６週間の試験には、８週間の二重盲検治療期間及び１８週間のフォローアップ期間が含まれる。この試験設計を図２に示す。方法及び仕様及び手順は、実施例７、８及び９と共通であり得、当業者は、各実施例でそれらを繰り返す必要がないことを認識することに留意されたい。同様に、臨床試験に典型的であるように、健康及び有害事象に関する追加の日常的な試験は、実施例７、８、及び９の試験の設計及び実行の一部であると理解されている。

【0180】

【0181】

【0182】

目的及びエンドポイント
有効性結果測定：主要な結果測定には、数値評価スケール（ＮＲＳ）で測定した平均疼痛強度のベースラインからの変化、ＮＲＳで測定した平均疼痛強度のベースラインからの変化［時間枠：ベースライン、最大８週目］。副次結果測定には、ローランド・モリス障害質問票（ＲｏｌａｎｄＭｏｒｒｉｓＤｉｓａｂｉｌｉｔｙＱｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ：ＲＭＤＱ）のベースラインからの変化、ＲＭＤＱのベースラインからの変化［時間枠：ベースライン、８週目まで］、患者の全体的な印象によって測定される全体的な改善のベースラインからの変化、患者の全体的な変化の印象によって測定される全体的な改善のベースラインからの変化［時間枠：ベースライン、８週まで］、ＮＲＳによって測定される最悪の疼痛強度のベースラインからの変化、ＮＲＳによって測定される最悪の疼痛強度のベースラインからの変化［時間枠：ベースライン、８週まで］、疼痛のビジュアルアナログスケール（ＶＡＳ）のベースラインからの変化、疼痛のＶＡＳのベースラインからの変化［時間枠：ベースライン、８週まで］、ＭｅｄｉｃａｌＯｕｔｃｏｍｅｓＳｔｕｄｙの睡眠スケール（ＭＯＳＳｌｅｅｐＳｃａｌｅ）のベースラインからの変化、ＭＯＳＳｌｅｅｐＳｃａｌｅの睡眠スケールのベースラインからの変化［時間枠：ベースライン、８週目まで］、レスキュー治療の総量、レスキュー治療の総量［時間枠：ベースライン、８週目まで］、ＥｕｒｏＱｏｌ－５Ｄ５レベル質問票（ＥＱ－５Ｄ－５Ｌ）のベースラインからの化、ＥＱ－５Ｄ－５Ｌのベースラインからの変化が含まれる。

【0183】

【表25】

【表26】

【0184】

【0185】

ＶｉｓｕａｌＡｎａｌｏｇＳｃａｌｅ（ＶＡＳ）：疼痛のＶＡＳは、スクリーニング時及び各診療所来院時に使用される。これは、参加者が過去１週間の調査対象領域の疼痛の強さを０から１００のスケールで説明するように求められるグラフィックの単一項目スケールである。０＝疼痛なし、１００＝想像できる最悪の疼痛。参加者は、疼痛の強さを表すポイントにＶＡＳラインに垂直なラインを配置して、ＶＡＳを完成させる。数値評価スケール（ＮＲＳ）：ＮＲＳは、予備データ入力期間（ＰＤＥＰ）中及び試験全体を通して毎日使用されて、疼痛の重症度を説明する。これは、参加者が過去２４時間の平均及び最悪の疼痛を０から１０のスケールで説明するように求められる数値の単一項目スケールである。０＝疼痛なし、１０＝想像できる最悪の疼痛．参加者は、持ち帰り用のデバイスを使用して毎日ＮＲＳを完了する。参加者のコンプライアンスは、診療所を訪れるたびに確認する。ＮＲＳの最悪の疼痛は毎日回収される。他の二次測定のスコアは、来院スケジュールで指定されているように、各来院で収集される。主要な結果の測定は、ＮＲＳ項目で評価された平均疼痛強度のベースラインからエンドポイントまでの平均変化である。「過去２４時間［試験下の領域］のあなたの疼痛の平均レベルを説明する１つの番号［０～１０］を選択することによって自身の疼痛を点数付けしてください。］このスケールは、疼痛の変化を検出する実証された能力、及び疾患状態全体での一般的な使用に基づいて選択された。二次的なスケールは、ＮＲＳ項目で測定された最悪の疼痛強度のベースラインからエンドポイントまでの平均変化である。「過去２４時間［試験下の領域］のあなたの疼痛の最も悪いレベルを説明する１つの番号［０～１０］を選択することによって自身の疼痛を点数付けしてください。］過去２４時間の平均的な疼痛及び最悪の疼痛のＮＲＳ値は、参加者ごとに毎日収集される。統計分析では、過去２４時間の平均及び最悪の疼痛の平均ＮＲＳ値が、１週間間隔及び２週間間隔の両方で計算される。参加者が試験のプラセボ対照部分を完了した場合、ＮＲＳの週間隔の平均は８回のベースライン後の観察となり、隔週間隔の平均は各参加者のベースライン後の４回の観察となる。ＮＲＳの週間隔の平均は、分析計画で特に指定されていない限り、一次有効性分析及び以下に説明するその他の分析で使用される。参加者は、平均ＮＲＳ値を計算するために、事前に指定された時間間隔中に５０％以上の毎日のＮＲＳ値を有している必要があり、それ以外の場合、その来院の平均ＮＲＳ値は欠落していると見なされる。

【0186】

【0187】

【0188】

【0189】

【0190】

ローランド・モリス障害質票：ローランド・モリス障害質問票（ＲＭＤＱ）は、腰痛患者の障害を測定するためのシンプルで感度が高く、信頼できる方法である。ＲＭＤＱは、身体能力／活動、睡眠／休息、心理社会的要因、家庭での管理、食事、及び疼痛の頻度に基づいて、背中の疼痛及び関連する障害に対する個人の認識に関連する２４の提示からなる。参加者は、提示がその日の自分自身の状況を説明していると思うかどうか尋ねられる。合計スコアは、次の範囲の「はい」の回答数をカウントすることによって得られる。
０＝障害なし～２４＝最大の障害。

【0191】

ＰａｉｎＤＥＴＥＣＴ：ｐａｉｎＤＥＴＥＣＴ質問票は、神経障害性疼痛症状の質に関する７つの質問からなる。当初、腰痛症患者の神経障害性疼痛の表現型を捉えるために提案された（Ｆｒｅｙｎｈａｇｅｎ２００６）。参加者によって簡単に答えられ、身体検査は必要ない。１９以上のスコアは、疼痛が表現型的に神経障害性である可能性が高いことを示す（＞９０％）。

【0192】

統計分析
この表は、慢性腰痛症の層別化係数を定義している。

【表27】

【0193】

追加の階層化要因は、ＩＳＡで定義できる。

【0194】

エンドポイント分析－ＲＭＤＱ
連続有効性分析：ベイジアン縦断混合効果モデル反復測定（ＭＭＲＭ）分析を実行して、ＲＭＤＱスコアのベースラインから各ベースライン来院までの変化を評価する。マスタープロトコルで説明されているように、同じプラセボ借入戦略が実装されるが、他のＤＳＡから借用した処理効果は実行されない。追加のベイジアンＭＭＲＭ分析も、プラセボ情報の借用を利用しない、それぞれのＩＳＡからのデータのみを使用して実施される。分析は、ＲＭＤＱスコアのベースラインからベースライン後の各来院への変化を分析するために使用される（ＦｒｅｙｎｈａｇｅｎＲ，ＢａｒｏｎＲ，ＧｏｃｋｅｌＵ，ＴｏｌｌｅＴＲ．ｐａｉｎＤＥＴＥＣＴ：ａｎｅｗｓｃｒｅｅｎｉｎｇｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｂａｃｋｐａｉｎ．ＣｕｒｒＭｅｄＲｅｓＯｐｉｎ．２００６；２２（１０）：１９１１－１９２０．）。

【0195】

この表は、モデルに含まれる情報を示している。

【表28】

【0196】

カテゴリ有効性分析：
事前に指定されたバイナリ有効性結果を満たす各治療群の参加者の割合は、ベースライン後の各時点で推定され、治療群の比較に使用される。推定値は、すべてのベースライン後の観察を含むＢａｙｅｓｉａｎ縦断モデルのフィッティングから提供される。

【0197】

事前に指定されたバイナリ有効性結果には、ＲＭＤＱスコアで測定したベースラインからの３０％、５０％、及び７０％を超える減少、及びＲＭＤＱスコアスコアにおけるベースラインからの少なくとも３．５ポイントの減少を伴う、ＩＳＡ内の参加者の割合が含まれる。

【0198】

このモデルには、上記の連続有効性分析モデルで説明したカテゴリ共変量及び連続共変量が含まれるが、ベースラインと来院との相互作用は使用されない。ＲＭＤＱスコアのベースラインからエンドポイントまでの変化率の累積分布関数が、各治療群に提供される。

【0199】

【表29】

【表30】

【0200】

試験集団：男性及び女性の参加者は、患者の報告又は病歴に基づいて毎日の疼痛の病歴がある場合、試験に含める資格がある。

【0201】

インフォームドコンセント：インフォームドコンセントを提供することができ、これには、インフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）及びプロトコルに記載されている要件及び制限への準拠が含まれ、彼らは試験中に必要なすべてのプロトコル手順に参加することに信頼性があり、その意思があり、それができ、彼らは、進行中の非薬理学的鎮痛療法（理学療法等）の一貫したレジメンを維持する意思があり、試験参加中に新しい非薬理学的鎮痛療法を開始せず、彼らは、試験期間中、プロトコルごとに許可されたレスキュー薬を除いて、試験中の状態に対するすべての鎮痛薬を中止する意思があり、彼らは、無作為化前の７日間のうち少なくとも５日間、ＰＤＥＰ中に必要な毎日の評価を入力しなければならない。

【0202】

組入れ基準：
以下の基準のすべてが当てはまる場合にのみ、患者は、試験への組入れに適格である。
・インフォームドコンセントに署名した時点で年齢が１８歳以上である。
・スクリーニング中の視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）の疼痛の値が４０以上及び９５未満。
・参加者の報告又は病歴に基づいて、少なくとも１２週間、毎日の疼痛の病歴を有する。
・壊滅的な疼痛のスケールで値が３０以下を有する。
・体重・ボディ・マス指数４０キログラム／平方メートル（ｋｇ／ｍ^２）未満（包括的）を有する。
・進行中の非薬理学的鎮痛療法（例えば、理学療法等）の一貫したレジメンを維持する意思があり、試験参加中に新しい非薬理学的鎮痛療法を開始しない。
・試験期間中、プロトコルごとに許可されているレスキュー薬を除いて、試験中の状態に対するすべての鎮痛薬を中止する意思がある。
・放射線療法の有無にかかわらず、第１２胸椎と臀部下部との間で少なくとも３か月間の腰痛症病歴を有する。
・ケベック・タスクフォースのカテゴリ１～３に分類される腰痛症の病歴を有する。
・スクリーニング時の糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）が１０以下であることで示されるように、安定した血糖対照を有する。
・スクリーニング中の推定糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）が７０ｍｌ／分／１．７３ｍ^２未満を有する。
・男性、又は女性は、生殖及び避妊の要件を順守することができる。

【0203】

除外基準：
以下の基準のいずれかが当てはまる場合、参加者は、研究から除外される。
・臨床的に重篤又は不安定な心血管、筋骨格障害、胃腸（ＧＩ）、内分泌、血液、肝臓、代謝、泌尿器、肺、皮膚、免疫、又は眼科の疾患をベースラインの３か月以内に有している。
・神経成長因子（ＮＧＦ）に対する抗体、ＥＧＦＲに対する抗体、又はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を受けている。
・モノクローナル抗体に対するアレルギー反応の病歴があるか、又は多形性紅斑、線状免疫グロブリンＡ皮膚病、中毒性表皮壊死融解症、又は剥脱性皮膚炎を含むがこれらに限定されない、臨床的に重大な複数又は重度の薬物アレルギーを有する。
・制御されていない喘息、湿疹、重大なアトピー、重大な遺伝性血管性浮腫、又は一般的な変数の免疫不全の病歴又は存在を有する。
・ウォッシュアウト期間開始の３か月で治療注射（ボツリヌス毒素又はコルチコステロイド）を使用した
－骨粗鬆症性圧迫骨折の病歴又は現在有する；最近大きな外傷を負ったことがある（Ｖ３の６か月以内）；
－過去６か月間に腰痛症の治療のために外科的介入を受けた。
－生殖性：彼らは、妊娠中又は授乳中の女性である。
・以前／併用療法：神経成長因子（ＮＧＦ）に対する抗体、又はＥＧＦＲに対する抗体、又はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を受けている。モノクローナル抗体に対するアレルギー反応の病歴があるか、又は臨床的に重大な多発性又は重度の薬物アレルギーの病歴があり、これには多形性紅斑、線状免疫グロブリンＡ皮膚症、中毒性表皮壊死融解症、又は剥脱性皮膚炎が含まれるがこれらに限定されない。制御されていない喘息、湿疹、重大なアトピー、重大な遺伝性血管性浮腫又は一般的な変性の免疫不全の病歴又は存在を有する。

【0204】

試験評価及び手順
薬物動態：抗体Ｉ濃度の測定のために、約４ｍＬの静脈血サンプルを採取する。サンプルを使用して、抗体ＩのＰＫを評価する。施設担当者は、抗体Ｉの投与（注入の開始及び終了）の日時（２４時間）、及び各ＰＫサンプルの日時（２４時間）を記録する。

【0205】

薬力学：エピレグリンの測定のために、それぞれ約４ｍＬの静脈血サンプルを採取する。残りの血液サンプルいずれも、ＴＧＦ－αを含むがこれに限定されない他の潜在的なＰＤエンドポイントを試験するために使用できる。

【0206】

免疫原性評価：免疫原性は、スポンサーによって承認された試験所で、抗体Ｉの存在下でＡＤＡを検出するように設計された検証済みのアッセイによって評価される。抗体は、抗体Ｉの活性を中和する能力について更に特性決定され得る。指定された来院及び時間に、投与前の静脈血サンプルを採取して、抗体Ｉに対する抗体産生を決定する。各サンプル採取の実際の日付及び時刻（２４時間）を記録する。前回の予定された評価又は中止の来院時の免疫原性サンプルが、治療下で発現した（ＴＥ）抗薬物抗体（ＡＤＡ）陽性である場合、シグナルがベースラインに戻るまで（すなわち、ＴＥ－ＡＤＡ陽性でなくなるまで）又は最後の投与から最大１年間、追加のサンプルを採取することができる。これらの結果の解釈を支援するために、ＰＫ分析のための投与前の血液サンプルが同じ時点で回収される。

【0207】

【0208】

確率（治療効果＜目的の効果）＞確率しきい値の一般的な形式を有する。治療効果は、エンドポイントにおいてベースラインから抗体Ｉ推定値－プラセボ推定値の変化として定義される。目的の効果は、通常、文献検索又は臨床判断を通して見出される。確率のしきい値は、一般に、治療効果の信頼性の望ましいレベルを有するように、又はヌル効果を含む、妥当性があり想定される真の薬物効果シナリオの範囲の下で望ましい動作特性を有するように、設定される。追加の仮説には、本明細書で定義された事前に指定された目的及びエンドポイントに対する積極的介入とプラセボとの比較が含まれる。試験は、複数の試験が企図され、プラセボデータが必要に応じて共有されるプロトコルで実施されてもよい。

【0209】

一次仮説の決定基準は、ＮＲＳで測定した平均疼痛強度において、抗体Ｉがプラセボよりも少なくとも０．５５単位優れていることを少なくとも７０％確信していることとして定義される。主要な二次帰無仮説は、主要二次エンドポイント、つまり関連する疼痛スコアのベースラインからエンドポイントまでの平均変化について、抗体Ｉとプラセボとの間に差がないことである。主要二次仮説の決定基準は、抗体Ｉが関連する疼痛スコアでプラセボよりも少なくとも０．３５単位優れているという確信が少なくとも７０％あることとして定義される。

【0210】

分析のための集団：薬物動態学的集団には、例えば、来院３で抗体Ｉの全用量が投与され、来院４での投薬前又は投薬後に少なくとも１つの評価可能なＰＫサンプルが回収されたすべての無作為化された参加者が含まれる。

【0211】

アミノ酸配列及び核酸配列のリスト
重鎖ＣＤＲ

【表31】