特表 2023-532290 コロナウイルスに対する免疫応答を誘導するための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-27

(54)【発明の名称】コロナウイルスに対する免疫応答を誘導するための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/215 20060101AFI20230720BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230720BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20230720BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230720BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20230720BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20230720BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20230720BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20230720BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230720BHJP

   C12N 15/50 20060101ALI20230720BHJP

   C07K 14/165 20060101ALI20230720BHJP

【ＦＩ】

A61K39/215

A61K48/00

A61P31/14

A61P37/04

A61K39/39

A61K31/7105

A61K47/54

A61K47/60

A61P43/00 121

C12N15/50 ZNA

C07K14/165

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022580180

(86)(22)【出願日】2021-06-25

(85)【翻訳文提出日】2023-02-22

(86)【国際出願番号】 US2021039134

(87)【国際公開番号】W WO2021263131

(87)【国際公開日】2021-12-30

(31)【優先権主張番号】63/145,200

(32)【優先日】2021-02-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/044,773

(32)【優先日】2020-06-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/124,200

(32)【優先日】2020-12-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/064,836

(32)【優先日】2020-08-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520332357

【氏名又は名称】エリシオ セラピューティクス， インク．

【氏名又は名称原語表記】ＥＬＩＣＩＯ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ， ＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】Ｏｎｅ Ｋｅｎｄａｌｌ Ｓｑｕａｒｅ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ １４００ Ｗｅｓｔ， Ｓｕｉｔｅ １４３０３ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＭＡ ０２１３９ （ＵＳ）

(74)【代理人】

【識別番号】110001139

【氏名又は名称】ＳＫ弁理士法人

(74)【代理人】

【識別番号】100130328

【弁理士】

【氏名又は名称】奥野 彰彦

(74)【代理人】

【識別番号】100130672

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 寛之

(72)【発明者】

【氏名】スタインバック， マーティン ピー．

(72)【発明者】

【氏名】シナッパ， ラーキャナ エム．

(72)【発明者】

【氏名】デムース， ピーター シー．

(72)【発明者】

【氏名】ハック， クリストファー エム．

(72)【発明者】

【氏名】マクニール， リサ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA93

4C076BB16

4C076BB21

4C076BB25

4C076CC35

4C076EE59

4C076FF70

4C084AA13

4C084MA02

4C084MA05

4C084NA14

4C084ZB09

4C084ZB33

4C084ZC75

4C085AA03

4C085AA38

4C085BA71

4C085EE01

4C085EE06

4C085FF17

4C085GG04

4C085GG10

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA06

4C086NA14

4C086ZB09

4C086ZB33

4C086ZC75

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA01

4H045DA86

4H045EA31

4H045FA74

(57)【要約】

対象において免疫応答を誘導するためのＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質、そのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）の使用、並びにＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を投与して対象において免疫応答を誘導する方法が開示される。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象においてコロナウイルス抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、
前記方法は、前記対象に（１）ＣｐＧ両親媒性物質、及び（２）コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列を投与するステップを含む、方法。

【請求項2】

前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、又は前記コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチドをコードする核酸配列である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ＣｐＧ両親媒性物質は、脂質に結合したＣｐＧ配列を含む、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

前記ＣｐＧ両親媒性物質は、リンカーを介して脂質に結合したＣｐＧ配列を含む、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項5】

前記リンカーは、ポリマー、アミノ酸鎖、核酸鎖、多糖又はそれらの組み合わせを含む、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記リンカーは、核酸鎖を含む、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記核酸鎖は、１から５０個の核酸残基を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記核酸鎖は、５から３０個の核酸残基を含む、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

前記核酸鎖は、「Ｎ」個のグアニンを含み、前記Ｎは、１から１０である、請求項５から８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記リンカーは、連続したポリエチレングリコールユニットを含む、請求項５に記載の方法。

【請求項11】

前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、２０から８０である、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、３０から７０である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、４０から６０である、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、４５から５５である、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記リンカーは、４８個の連続したポリエチレングリコールユニットを含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記脂質は、ジアシル脂質である、請求項１から１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記ジアシル脂質は、下記の構造

【化1】

又はその塩を有し、式中、Ｘは、Ｏ又はＳである、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記ＣｐＧ配列は、ヌクレオチド配列：５'－ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ－３'（配列番号１）を含む、請求項１から１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記ＣｐＧ配列は、ヌクレオチド配列：５'－ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ－３'（配列番号２）を含む、請求項１から１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

前記ＣｐＧ配列におけるヌクレオシドを結合するヌクレオシド間基は、全てホスホロチオエートである、請求項１８又は１９に記載の方法。

【請求項21】

前記コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質又はそのペプチドである、請求項１から２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）に特異的に結合する受容体結合ドメインである、請求項１から２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、
ＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳ（配列番号３）
と少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項１から２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、
ＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳ（配列番号３）
のポリペプチド配列を含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドである、請求項１、３から２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質抗原は、
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡ（配列番号６８）
と少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質抗原は、
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号６３）
のポリペプチド配列を含む、請求項２５に記載の方法。

【請求項28】

前記コロナウイルス抗原は、１つ又は複数のタグを含む、請求項１から２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記タグは、Ａｖｉタグである、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記タグは、ヒスチジンタグである、請求項２８に記載の方法。

【請求項31】

前記コロナウイルス抗原は、Ａｖｉタグ及びヒスチジンタグを含む、請求項２８から３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

前記コロナウイルス抗原は、前記ポリペプチド配列と、１つ又は複数の前記タグとの間にリンカーを含む、請求項２８から３１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項33】

前記コロナウイルススパイクタンパク質は、投与される、請求項１から２４及び２８から３１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項34】

前記コロナウイルススパイクタンパク質のトリマーは、投与される、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記トリマーは、
ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）
の配列を含むタンパク質構築物のトリマーである、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチド、及びコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドが投与される、請求項１から３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）
の配列を含むコロナウイルススパイクタンパク質構築物のトリマー、及び
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号６３）
のポリペプチド配列を有するコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質構築物は、投与される、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡが、投与される、請求項１から２５、２８から３１及び３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

前記ＣｐＧ両親媒性物質、及び前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列は、同時に投与される、請求項１から３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

前記ＣｐＧ両親媒性物質、及び前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列は、順次投与される、請求項１から３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記ＣｐＧ両親媒性物質が投与された後、前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列が投与される、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列が投与された後、前記ＣｐＧ両親媒性物質が投与される、請求項４０に記載の方法。

【請求項43】

前記方法は、前記対象に第２アジュバントを投与するステップを含む、請求項１から４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記方法は、前記対象にコロナウイルスワクチンをプライム又はブーストとして投与するステップを含む、請求項１から４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

前記ＣｐＧ両親媒性物質は、皮下、鼻腔内、気管内、又は機械換気中の吸入により投与される、請求項１から４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

前記ＣｐＧ両親媒性物質は、皮下投与される、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記コロナウイルス抗原は、皮下、鼻腔内、気管内、又は機械換気中の吸入により投与される、請求項１から４６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

前記対象は、哺乳類である、請求項１から４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記対象は、ヒトである、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

ＣｐＧ両親媒性物質、コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項51】

前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドである、請求項５０に記載の医薬組成物。

【請求項52】

前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドを含む、請求項５０に記載の医薬組成物。

【請求項53】

前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチド、及びコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドを含む、請求項５０に記載の医薬組成物。

【請求項54】

ＣｐＧ両親媒性物質、及びコロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列を含む、キット。

【請求項55】

前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドである、請求項５４に記載のキット。

【請求項56】

前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドである、請求項５４に記載のキット。

【請求項57】

前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチド、及びコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドを含む、請求項５４に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、米国仮出願第６３／０４４，７７３号（出願日：２０２０年６月２６日）、米国仮出願第６３／０６４，８３６号（出願日：２０２０年８月１２日）、米国仮出願第６３／１２４，２００号（出願日：２０２０年１２月１１日）、及び米国仮出願第６３／１４５，２００号（出願日：２０２１年２月３日）の優先権を主張し、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

コロナウイルスは、哺乳類や鳥類に感染可能なウイルスの大きなファミリーである。コロナウイルスファミリーには、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタコロナウイルスの4つの属が含まれる。コロナウイルスがヒトに感染すると、通常、風邪のような軽度から中等度の上気道疾患を引き起こす。最近、人獣共通感染症のスピルオーバーから発生したコロナウイルスの爆発は、深刻な疾患と世界的な感染の懸念を引き起こしている。

【0003】

２０１９年まで、アルファコロナウイルス（例えば、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）及びヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３））及びベータコロナウイルス（例えば、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）関連コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、及び中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ））を含む６つのヒトコロナウイルスが知られていた。ＣＯＶＩＤ－１９として知られる感染性の高い疾患を引き起こす２０１９年の新型ベータコロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、最近中国で出現し、急速に世界中に広がり、２０２０年６月１４日の時点で７，６９０，７０８人を超える症例及び４２７，６３０人の死亡が確認された。

【0004】

入院患者のデータによると、ＣＯＶＩＤ－１９症例の大部分（約８０％）は無症候性及び軽度の症状を示し、残りは重度及び重篤である（Huang et al., Lancet 395:497（2020)；Chan et al., Lancet 395:514（2020)）。大多数の患者は軽度の疾患しか経験していないが、患者の約１５％は、補助換気と酸素化を必要とする重度の疾患を経験している。現在、ＣＯＶＩＤ－１９の重症度と致死率は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１やＭＥＲＳのほどではないが、感染力が非常に高い。ＣＯＶＩＤ－１９の臨床症状は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１やＭＥＲＳと同様であり、最も一般的な症状は、発熱、疲労、及び呼吸器症状（咳、喉の痛み、息切れなど）である。４１人の入院患者を対象とした研究では、ＣＯＶＩＤ－１９の重症例で高レベルの炎症誘発性サイトカインが観察された（Huang et al., Lancet 395:497（2020)）。これらの調査結果は、リンパ球減少症と「サイトカインストーム」の存在がＣＯＶＩＤ－１９の病因に大きな役割を果たしている可能性が高いという点でＳＡＲＳ及びＭＥＲＳと一致する（例えば、Nicholls et al., Lancet 361(9371):1773（2003)；Mahallawi et al., Cytokine 104:8（2018);Wong et al., Clin Exp Immunol.136(1):95（2004)）。このいわゆる「サイトカインストーム」は、ウイルス性敗血症や炎症性肺損傷の起因であり、これらは、さらに、他の合併症（肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、呼吸不全、敗血症性ショック、臓器不全、及び死亡を含む）を引き起こす可能性がある。その結果、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２や関連ウイルスなどのコロナウイルス感染に対する免疫応答を生成する安全で効果的な方法が緊急に必要とされている。

【発明の概要】

【0005】

本発明は、対象において免疫応答を誘導するためのＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれらをコードする核酸配列）の使用を開示する。また、本発明は、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれらをコードする核酸配列）を投与して対象において免疫応答を誘導する方法をさらに開示する。

【0006】

一態様において、本開示は、対象においてコロナウイルス抗原に対する免疫応答を誘導する方法を提供する。この方法は、（１）ＣｐＧ両親媒性物質及び（２）コロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列を前記対象に投与するステップを含む。対応する組成物及びキットも提供される。

【0007】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、又は前記コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチドをコードする核酸配列である。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、脂質に結合したＣｐＧ配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、リンカーを介して脂質に結合したＣｐＧ配列を含む。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、ポリマー、アミノ酸鎖、核酸鎖、多糖又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、核酸鎖を含む。いくつかの実施形態において、前記核酸鎖は、１から５０（例えば、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０）個の核酸残基を含む。いくつかの実施形態において、前記核酸鎖は、５から３０（例えば、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、２６、２７、２８、２９又は３０）個の核酸残基を含む。いくつかの実施形態において、前記核酸鎖は、「Ｎ」個のグアニンを含み、Ｎは１から１０（例えば、２、３、４、５、６、７、８又は９）である。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、連続したポリエチレングリコールユニットを含む。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、Ｎは２０から８０（例えば、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５又は８０）である。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、Ｎは３０から７０（例えば、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、５０、５５、６０、６５又は７０）である。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、Ｎは４０から６０（例えば、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５又は６０）である。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、Ｎは４５から５５（例えば、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４又は５５）である。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、４８個の連続したポリエチレングリコールユニットを含む。

【0008】

いくつかの実施形態において、前記脂質は、ジアシル脂質である。いくつかの実施形態において、前記ジアシル脂質は、下記の構造及びその塩を有する。

【化1】

式中、Ｘは、Ｏ又はＳである。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ配列は、ヌクレオチド配列５'－ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ－３'（配列番号１）を含む。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ配列は、ヌクレオチド配列：５'－ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ－３'（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態において、ＣｐＧ配列におけるヌクレオシドを結合する全てのヌクレオシド間基は、ホスホロチオエートである。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質又はそのペプチドである。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）に特異的に結合する受容体結合ドメインである。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、
ＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳ（配列番号３）と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。
いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、ポリペプチド配列：
ＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳ（配列番号３）を含む。

【0009】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドである。

【0010】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質は、
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡ（配列番号６８）と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。

【0011】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質は、配列番号６８の配列を含む。

【0012】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質は、ポリペプチド配列：
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号６３）を含む。

【0013】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、１つ又は複数のタグを含む。いくつかの実施形態において、前記タグは、Ａｖｉタグである。いくつかの実施形態において、前記タグは、ヒスチジンタグである。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、Ａｖｉタグ及びヒスチジンタグを含む。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、ポリペプチド配列と、１つ又は複数のタグとの間にリンカーを含む。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、ポリペプチド配列と、１つ又は複数のタグとの間にプロテアーゼ切断部位を含む。いくつかの実施形態において、前記プロテアーゼ切断部位は、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼの切断部位（例えば、配列ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号６４）を有する）である。

【0014】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質は投与される。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質のトリマーは投与される。いくつかの実施形態において、前記トリマーは、
ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の配列同一性を有するポリペプチド配列を含むタンパク質構築物のトリマーである。

【0015】

いくつかの実施形態において、前記トリマーは、配列番号６６の配列を含む。

【0016】

いくつかの実施形態において、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチド、及びコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドは、投与される。いくつかの実施形態において、
ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の配列同一性を有するポリペプチド配列を含むコロナウイルススパイクタンパク質構築物のトリマー；及び
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号６３）と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の配列同一性を有するポリペプチド配列を含むコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質構築物は、投与される。

【0017】

いくつかの実施形態において、配列番号６６のポリペプチド配列を含むコロナウイルススパイクタンパク質構築物のトリマー及び配列番号６３のポリペプチド配列を含むコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質構築物は、投与される。

【0018】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡは、投与される。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質及び前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸は、同時に投与される。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質及び前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸はは、順次投与される。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質が投与された後、前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸が投与される。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸が投与された後、前記ＣｐＧ両親媒性物質が投与される。

【0019】

いくつかの実施形態において、前記方法は、前記対象に第２アジュバントを投与するステップを含む。

【0020】

いくつかの実施形態において、前記方法は、プライム又はブーストとして前記対象にコロナウイルスワクチンを投与するステップを含む。

【0021】

いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、皮下、鼻腔内、気管内及び機械換気中の吸入により投与される。一実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、皮下投与される。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原（例えば、スパイクタンパク質、そのペプチド、ヌクレオカプシドタンパク質又はそれをコードする核酸）は、皮下、鼻腔内、気管内及び機械換気中の吸入により投与される。いくつかの実施形態において、前記対象は、哺乳類である。いくつかの実施形態において、前記対象は、ヒトである。

【0022】

別の態様では、本開示は、前記方法について記載された構成要素を使用する組成物及びキットを提供する。

【0023】

別の態様において、本開示は、ＣｐＧ両親媒性物質、コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドである。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドである。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドと、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドとの組み合わせである。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、本明細書で提供される実施形態においてより具体的に記載される通りであり、及び／又は前記コロナウイルス抗原は、本明細書で提供される実施形態においてより具体的に記載される通りである。

【0024】

いくつかの実施形態において、前記対象には、約１０μｇから約１．０ｍｇのコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれらをコードする核酸配列）が投与される。他の実施形態において、コロナウイルス抗原の投与量は、約１０μｇから１ｍｇ、約４０μｇから６０μｇ、約５０μｇから７０μｇ、約５０μｇから１５０μｇ、約７０μｇから１５０μｇ、約１００μｇから１５０μｇ、約１００μｇから２００μｇ、約１４０μｇから２５０μｇ、約２００μｇから３００μｇ、約２５０μｇから５００μｇ、約３００μｇから６００μｇ又は約５００μｇから１．０ｍｇである。他の実施形態において、前記対象への前記コロナウイルス抗原の投与量は、約１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０，μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ又は１．０ｍｇである。

【0025】

いくつかの実施形態において、前記対象には、約０．１ｍｇから２０ｍｇのＣｐＧ両親媒性物質が投与される。他の実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質の投与量は、約０．１ｍｇから１．０ｍｇ、約０．５ｍｇから３．０ｍｇ、約１．０ｍｇから５．０ｍｇ、約２．０ｍｇから５．０ｍｇ、約３．０ｍｇから５．０ｍｇ、約３．０ｍｇから１０．０ｍｇ、約４．０ｍｇから１２．０ｍｇ、約５．０ｍｇから１５．０ｍｇ又は約５０ｍｇから２０．０ｍｇである。他の実施形態において、前記対象への前記ＣｐＧ両親媒性物質の投与量は、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、２．０ｍｇ、３．０ｍｇ、４．０ｍｇ、５．０ｍｇ、６．０ｍｇ、７．０ｍｇ、８．０ｍｇ、９．０ｍｇ、１０．０ｍｇ、１１．０ｍｇ、１２．０ｍｇ、１３．０ｍｇ、１４．０ｍｇ、１５．０ｍｇ、１６．０ｍｇ、１７，０ｍｇ、１８．０ｍｇ、１９．０ｍｇ又は２０．０ｍｇである。

【0026】

別の態様において、本開示は、ＣｐＧ両親媒性物質、及びコロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列を含むキットを提供する。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドである。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドである。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドと、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドとの組み合わせである。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1】図１Ａから図１Ｃは、Ｃ５７Ｂｌ６マウスに対して酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により測定された血清ＩｇＧ／ＩｇＭ抗体の量を示すグラフである。前記マウスは、希釈範囲で１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇの可溶性ＣｐＧ（図１Ａ）又はＣｐＧ両親媒性物質（図１Ｂ）を２回投与された。図１Ｃでは、左から右へ、ＰＢＳ（Ｍｏｃｋ）、可溶性ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（Ｓｏｌｕｂｌｅ ＣｐＧ）又はＡＭＰ－ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（ＡＭＰ－ＣｐＧ）である。

【0028】

【図2】図２Ａから図２Ｃは、Ｃ５７Ｂｌ６マウス（１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇの可溶性ＣｐＧ又はＣｐＧ両親媒性物質を３回投与された）に対してＥＬＩＳＡアッセイにより測定された血清ＩｇＧ／ＩｇＭ抗体の量を示すグラフである。図２Ａは、可溶性ＣｐＧを投与されたマウスからの血清のＯＤ４５０を示すグラフである。図２Ｂは、ＣｐＧ両親媒性物質を投与されたマウスから血清のＯＤ４５０を示すグラフである。図２Ｃは、（左から右へ）対照とするＰＢＳ（Ｍｏｃｋ）、可溶性ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（Ｓｏｌｕｂｌｅ ＣｐＧ）又はＡＭＰ－ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（ＡＭＰ－ＣｐＧ）を投与されたマウスのＩｇＧ／Ｍ力価の量を示すグラフである。

【0029】

【図3】図３Ａから図３Ｄは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇの可溶性ＣｐＧ（図３Ａ）又はＣｐＧ両親媒性物質（図３Ｂ）を３回投与されたＣ５７Ｂｌ６マウスにおいて、コロナウイルススパイクタンパク質がアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）受容体と相互作用する能力を遮断するために産生された中和抗体の濃度（ヒト回復期血清（図３Ｃ）と比較）を示すグラフである。図３Ｄは、（左から右へ）対照とするＰＢＳ（Ｍｏｃｋ）、可溶性ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（Ｓｏｌｕｂｌｅ ＣｐＧ）又はＡＭＰ－ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（ＡＭＰ－ＣｐＧ）を投与されたマウスで産生された中和抗体の濃度（ヒト回復期血清と比較）を示すグラフである。

【0030】

【図4】図４Ａから図４Ｃは、（左から右へ）対照とするＰＢＳ（Ｍｏｃｋ）、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇの可溶性ＣｐＧ（Ｓｏｌｕｂｌｅ ＣｐＧ）又は１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇのＣｐＧ両親媒性物質（ＡＭＰ－ＣｐＧ）を３回投与されたＣ５７Ｂｌ６マウスで産生されたＩＦＮγ（ＩＦＮｇとも呼ばれる）（図４Ａ）、ＴＮＦａ（ＴＮＦαとも呼ばれる）（図４Ｂ）及びＩＬ６（図４Ｃ）の量を示すグラフである。

【0031】

【図5】図５Ａ及び図５Ｂは、（左から右へ）対照とするＰＢＳ（Ｍｏｃｋ）、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇの可溶性ＣｐＧ（Ｓｏｌｕｂｌｅ ＣｐＧ）、又は１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇのＣｐＧ両親媒性物質（ＡＭＰ－ＣｐＧ）を３回投与されたＣ５７Ｂｌ６マウス（図５Ａ）及びＢａｌｂ／Ｃマウス（図５Ｂ）で産生されたＩＦＮｇの濃度を示すグラフである。

【0032】

【図6】図６Ａから図６Ｃは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスに対してＥＬＩＳＡアッセイにより測定された血清ＩｇＧ／ＩｇＭ抗体の量を示すグラフである。前記マウスは、希釈範囲で１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇの可溶性ＣｐＧ（図６Ａ）又はＣｐＧ両親媒性物質（図６Ｂ）を２回投与された。図６Ｃは、左から右へ、対照とするＰＢＳ（Ｍｏｃｋ）、可溶性ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（Ｓｏｌｕｂｌｅ ＣｐＧ）又はＡＭＰ－ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（ＡＭＰ－ＣｐＧ）である。

【0033】

【図7】図７Ａから図７Ｃは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇの可溶性ＣｐＧ又はＣｐＧ両親媒性物質を３回投与されたＢａｌｂ／Ｃマウスに対してＬＩＳＡアッセイによって測定された血清ＩｇＧ／ＩｇＭ抗体の量を示すグラフである。図７Ａは、可溶性ＣｐＧを投与されたマウスからの血清のＯＤ４５０を示す。図７Ｂは、ＣｐＧ両親媒性物質を投与されたマウスからの血清のＯＤ４５０を示すグラフである。図７Ｃは、（左から右へ）対照とするＰＢＳ（Ｍｏｃｋ）、可溶性ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（Ｓｏｌｕｂｌｅ ＣｐＧ）又はＡＭＰ－ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（ＡＭＰ－ＣｐＧ）を投与されたマウスのＩｇＧ／Ｍ力価の量を示すグラフである。

【0034】

【図8】図８Ａから図８Ｄは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇの可溶性ＣｐＧ（図８Ａ）又はＣｐＧ両親媒性物質（図８Ｂ）を３回投与されたＢａｌｂ／Ｃマウスにおいて、コロナウイルススパイクタンパク質がＡＣＥ２受容体と相互作用する能力を遮断するために産生された中和抗体の濃度（ヒト回復期血清（図８Ｃ）と比較）を示すグラフである。図８Ｄは、（左から右へ）ＰＢＳ対照（Ｍｏｃｋ）、可溶性ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（Ｓｏｌｕｂｌｅ ＣｐＧ）又はＡＭＰ－ＣｐＧを有するコロナウイルススパイクタンパク質（ＡＭＰ－ＣｐＧ）が投与されたマウスで産生された中和抗体の量（ヒト回復期血清と比較）を示すグラフである。

【0035】

【図9】図９Ａから図９Ｃは、（左から右へ）ＰＢＳ対照（Ｍｏｃｋ）、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇの可溶性ＣｐＧ（Ｓｏｌｕｂｌｅ ＣｐＧ）、又は１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇのＣｐＧ両親媒性物質（ＡＭＰ－ＣｐＧ）を３回投与されたＢａｌｂ／Ｃマウスで産生されたＩＦＮγ（図９Ａ）、ＴＮＦａ（図９Ｂ）及びＩＬ６（図９Ｃ）の量を示すグラフである。

【0036】

【図10】１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇの可溶性ＣｐＧ又はＣｐＧ両親媒性物質を２回投与されたマウスで産生されたＴＮＦａ、ＩＦＮｇ、ＩＬ－６、ＩＬ－２及びＩＬ－４（各列の左から右へ）の量（ミョウバン（Ａｌｕｍ）、ＩＦＡ又は対照を投与されたマウスと比較）を示すグラフである。

【0037】

【図11】１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇのＣｐＧ両親媒性物質、可溶性ＣｐＧ又はＭｏｃｋ Ｔｘを４回投与されたＣ５７Ｂｌ６マウス及びＢａｌｂ／Ｃマウスの脾細胞ＩＦＮγ共培養ＥＬＩＳｐｏｔ応答（陽性及び陰性対照と比較）を示すグラフである。

【0038】

【図12】図１２Ａから図１２Ｄは、（左から右へ）ＰＢＳ対照（Ｍｏｃｋ）、ミョウバン、ＩＦＡ、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇ可溶性ＣｐＧ（Ｓｏｌｕｂｌｅ ＣｐＧ）又は１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び８μｇのＣｐＧ両親媒性物質（ＡＭＰ－ＣｐＧ）を３回投与されたＣ５７Ｂｌ６マウスのＩｇＧ１（図１２Ａ）、ＩｇＧ２ｂｃ（図１２Ｂ）、ＩｇＧ３（図１２Ｃ）の量及びＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１比（図１２Ｄ）を示すグラフである。図１２ＤにおけるＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１の比は、Ａｍｐ－ＣｐＧについては、Ｔｈ２ではなく、Ｔｈ１に対する免疫応答が強いことを示す。Ｔｈ２応答は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して有害な場合がある。

【0039】

【図13】図１３Ａから図１３Ｄは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び８μｇのＣｐＧ両親媒性物質、可溶性ＣｐＧ、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ、ＩＦＡ又はＭｏｃｋ Ｔｘを２回投与されたマウスで産生されたＩＦＮγ（図１３Ａ）、ＴＮＦａ（図１３Ｂ）、ＩＬ－２（図１３Ｃ）及びＩＬ－６（図１３Ｄ）の量（陽性及び陰性対照と比較）を示すグラフである。

【0040】

【図14】図１４Ａから図１４Ｄは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び８μｇのＣｐＧ両親媒性物質、可溶性ＣｐＧ、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ、ＩＦＡ又はＭｏｃｋ Ｔｘを３回投与されたマウスで産生されたＩＦＮγ（図１４Ａ）、ＴＮＦａ（図１４Ｂ）、ＩＬ－２（図１４Ｃ）及びＩＬ－６（図１４Ｄ）の量（陽性及び陰性対照と比較）を示すグラフである。

【0041】

【図15】は、を示すグラフである。１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）及び８μｇのＣｐＧ両親媒性物質、可溶性ＣｐＧ、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ、ＩＦＡ又はＭｏｃｋ Ｔｘを３回投与されたマウスのＣＤ８Ｔ細胞におけるＩＦＮγとＴＮＦαの両方、ＴＮＦαのみ、及びＩＦＮγのみ（各列の上から下へ）の百分率（陽性及び陰性対照と比較）を示す。

【0042】

【図16】図１６Ａ－図１６Ｂは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）と、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又はＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせを４回投与されたＣ５７ＢＩ／６Ｊマウス（図１６Ａ）及びＢＡＬＢ／ｃマウス（図１６Ｂ）（ｎ＝５／群）における５０％阻害希釈倍率（ｐＶＮＴ_５０）での偽ウイルス（Ｐｓｅｕｄｏｖｉｒｕｓ）中和力価の量（回復期血清と比較）を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。検出されなかった値はベースラインに表示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１，ｎｓ＝有意でない（両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。偽ウイルスのＬＯＤ（点線で示される）は、模擬治療について計算された平均値＋９０％ＣＩとして決定された。図１６Ｃ－図１６Ｄは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）と、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又はＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせを４回投与されたＣ５７ＢＩ／６Ｊマウス（図１６Ｃ）又はＢＡＬＢ／ｃマウス（図１６Ｄ）（ｎ＝５／群）で産生されたＩＦＮγの量を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。検出されなかった値はベースラインに表示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１，ｎｓ＝有意でない（両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。偽ウイルスのＬＯＤ（点線で示される）は、模擬治療について計算された平均値＋９０％ＣＩとして決定された。

【0043】

【図17】図１７Ａは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）と、１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせを３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）における重複（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）コロナウイルススパイクペプチドで再刺激された１×１０^６脾細胞あたりのＩＦＮγスポット形成細胞の数を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１（サイトカイン＋Ｔ細胞の頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。図１７Ｂ及び図１７Ｃは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）と、１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせを３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）において、重複コロナウイルススパイクペプチドで再刺激された末梢血細胞から単離されたＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１７Ｂ）又はＣＤ４^＋Ｔ細胞（図１７Ｃ）での細胞内サイトカイン（各列の上から下へ、ＩＦＮγとＴＮＦα、ＴＮＦαのみ、及びＩＦＮγのみ）の産生頻度を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎｓ＝有意でない（サイトカイン^＋Ｔ細胞の頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）

【0044】

【図18】図１８Ａ及び図１８Ｂは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）と、１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせを３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）において、重複コロナウイルススパイクペプチドで再刺激された灌流肺組織から単離されたＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１８Ａ）又はＣＤ４^＋Ｔ細胞（図１８Ｂ）での細胞内サイトカイン（各列の上から下へ、ＩＦＮγとＴＮＦα、ＴＮＦαのみ、及びＩＦＮγのみ）の産生頻度を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１，ｎｓ＝有意でない（サイトカイン^＋Ｔ細胞頻度及びサイトカイン濃度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。図１８Ｃ及び図１８Ｄは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）と、１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせを３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）において、重複コロナウイルススパイクペプチドで再刺激された灌流肺組織の上清に見られたサイトカイン（ＩＦＮγ（図１８Ｃ）、ＴＦＮα、ＩＬ－６、ＩＬ－４、ＩＬ－１０及びＩＬ１７（図１８Ｄ））濃度を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１，ｎｓ＝有意でない（サイトカイン^＋Ｔ細胞頻度及びサイトカイン濃度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。

【0045】

【図19】図１９Ａから図１９Ｆは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）と、（左から右へ）１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせを３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）の気管支肺胞洗浄液から採取されたＣＤ８^＋（図１９Ａ）及びＣＤ４^＋（図１９Ｄ）Ｔ細胞数、ナイーブＣＤ８^＋（図１９Ｂ）及びナイーブＣＤ４^＋（図１９Ｅ）Ｔ細胞の百分率、並びにエフェクターメモリーＣＤ８^＋（図１９Ｃ）及びＣＤ４^＋（図１９Ｆ）Ｔ細胞の百分率を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎｓ＝有意でない（Ｔ細胞頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。

【0046】

【図20】図２０Ａ－図２０Ｇは、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）と、１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせを３回投与されたＣ５７Ｂ１／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）の体液性応答を示すグラフである。体液性応答は、血清において中和力価について偽ウイルス中和アッセイ又はＥＬＩＳＡアッセイにより回復期血清（図２０Ａ）、ＩｇＭ（図２０Ｂ）、ＩｇＧ（図２０Ｃ）、ＩｇＧ１（図２０Ｄ）、ＩｇＧ２ｂｃ（図２０Ｅ）、ＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１９の比（図２０Ｆ）、及びＩｇＧ３（図２０Ｇ）と比較して評価された。示される値は、平均±標準偏差である。検出されなかった値はベースラインに表示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１，ｎｓ＝有意でない（両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）

【0047】

【図21】図２１Ａは、１×１０^６個の脾細胞あたりのＩＦＮγスポット形成細胞の頻度を示すグラフである。前記脾細胞は、１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）が３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）からの重複コロナウイルススパイクペプチドで再刺激されたものである。示される値は、平均±標準偏差である。検出されなかった値はベースラインに表示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎｓ＝有意でない（サイトカイン^＋Ｔ細胞の頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定） 図２１Ｂ及び図２１Ｃは、１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバンと、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）から採取された末梢血細胞に見られるＣＤ８^＋Ｔ細胞（図２１Ｂ）及びＣＤ４^＋Ｔ細胞（図２１Ｃ）のＩＦＮγとＴＮＦα、ＴＮＦαのみ、及びＩＦＮγのみ（各列の上から下へ）を含むサイトカインの頻度を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。検出されなかった値はベースラインに表示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎｓ＝有意でない（サイトカイン^＋Ｔ細胞の頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。 図２１Ｄ－図２１Ｅは、１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）から採取された重複コロナウイルススパイクペプチドで再刺激された灌流肺組織細胞におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞（図２１Ｄ）及びＣＤ４^＋（図２１Ｅ）のＩＦＮγとＴＮＦα、ＴＮＦαのみ、及びＩＦＮγのみ（各列の上から下へ）を含むサイトカインの頻度を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。検出されなかった値はベースラインに表示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎｓ＝有意でない（サイトカイン^＋Ｔ細胞の頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。

【0048】

【図22】図２２Ａから図２２Ｇは、体液性応答を示すグラフである。体液性応答は、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）のみと、１００μｇミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μgのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）との組み合わせを３回投与されたＣ５７Ｂ１／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）において、血清中で中和力価について偽ウイルス中和アッセイ又はＥＬＩＳＡアッセイにより回復期血清（図２２Ａ）、ＩｇＭ（図２２Ｂ）、ＩｇＧ（図２２Ｃ）、ＩｇＧ１（図２２Ｄ）、ＩｇＧ２ｂｃ（図２２Ｅ）、ＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１９比（図２２Ｆ）、及びＩｇＧ３（図２２Ｇ）と比較して評価された。示される値は、平均±標準偏差である。検出されなかった値はベースラインに表示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１（両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。

【0049】

【図23】図２３Ａ及び図２３Ｂは、１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を３回投与された３７週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）（図２３Ａ）；並びに１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）（左から右へ）を３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（図２３Ｂ）から採取された末梢血細胞に見られるＩＦＮγとＴＮＦα、ＴＮＦαのみ、及びＩＦＮγのみ（各列の上から下へ）を含むサイトカインの頻度を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎｓ＝有意でない（サイトカイン^＋Ｔ細胞の頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。 図２３Ｃ及び図２３Ｄは、１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）（左から右へ）を３回投与された３７週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）（図２３Ｃ）；並びに１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）（左から右へ）を３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（図２３Ｄ）から採取された灌流肺組織細胞に見られるＩＦＮγとＴＮＦα、ＴＮＦαのみ、及びＩＦＮγのみ（各列の上から下へ）を含むサイトカインの頻度を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎｓ＝有意でない（サイトカイン^＋Ｔ細胞の頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。 図２３Ｅ及び図２３Ｆは、１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）（左から右へ）を３回投与された３７週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）（図２３Ａ）；１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）（左から右へ）を３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（図２３Ｆ）から採取され、重複コロナウイルススパイクペプチドで再刺激された灌流肺組織細胞に見られるＩＦＮγとＴＮＦα、ＴＮＦαのみ、及びＩＦＮγのみ（上から下へ）を含むサイトカインの頻度を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎｓ＝有意でない（サイトカイン^＋Ｔ細胞の頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。

【0050】

【図24】図２４Ａは、１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を３回投与された３７週齢のＣ５７ＢＩ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）における50%阻害希釈倍率（ｐＶＮＴ_５０）での偽ウイルス中和力価の量（回復期血清と比較）を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。検出されなかった値はベースラインに表示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１（両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。 図２４Ｂは、１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を３回投与された３７週齢のＣ５７ＢＩ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）における50%阻害希釈倍率（ｐＶＮＴ_５０）での偽ウイルス中和力価の量（回復期血清と比較）を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。検出されなかった値はベースラインに表示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；ｎｓ＝有意でない（両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。 図２４Ｃから図２４Ｇは、１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバンと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、及び１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を３回投与された３７週齢のＣ５７Ｂ１／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）の体液性応答を示すグラフである。体液性応答は、偽ウイルス中和アッセイ又はＥＬＩＳＡアッセイにより血清ではＩｇＧ（図２４Ｃ）、ＩｇＧ１（図２４Ｄ）、ＩｇＧ２ｂｃ（図２４Ｅ）、ＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１９比（図２４Ｆ）、及びＩｇＧ３（図２４Ｇ）について評価された。示される値は、平均±標準偏差である。検出されなかった値はベースラインに表示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１，ｎｓ＝有意でない（両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。

【0051】

【図25】図２５Ａから図２５Ｄは、一連のグラフである。老齢マウスにＡＭＰ－ＣｐＧをワクチン接種することにより、血液、脾臓、及び肺組織に耐久性のあるスパイクＲＢＤ特異的Ｔ細胞が産生することを示す。３７週齢のＣ５７Ｂｌ／６マウス（ｎ＝５－１０／群）を、０、１４及び２８日目に１００ｕｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又はＡＭＰ－ＣｐＧと混合した１０ｕｇのスパイクＲＢＤタンパク質で免疫化された。アジュバント対照動物は、ＡＭＰ－ＣｐＧアジュバントのみを投与された。スパイクＲＢＤに特異的な体液性応答は、３５、４９及び７０に日目にＥＬＩＳＡにより免疫化された動物からの血清中で評価された。示されているのは、決定されたＩｇＧのエンドポイント力価である（図２５Ａ）。Ｔ細胞応答は、２１、３５、４９及び７０日目に分析された。２１、３５、４９及び７０日目に末梢血から細胞を採取し（図２５Ｂ）、重複スパイクＲＢＤペプチドで再刺激し、細胞内サイトカイン産生をアッセイして抗原特異的Ｔ細胞応答を検出した。末梢血ＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＩＦＮγ陽性細胞の頻度を示し（図２５Ａ）、細胞を脾臓（図２５Ｃ）及び肺臓（図２５Ｄ）から細胞を採取し、重複スパイクＲＢＤペプチドで再刺激し、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによりＩＦＮγ産生をアッセイした。スポット形成細胞（ＳＦＣ）／１×１０^６細胞（ｎ＝５マウス／群）のＩＦＮγの頻度を示した。示される値は、平均±標準偏差である。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１（サイトカイン＋Ｔ細胞の頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）。図２５Ａでは、３５、４９及び７０日目のデータは、左から右へ（１）ミョウバン、（２）可溶性ＣｐＧ及び（３）ＡＭＰ－ＣｐＧである。図２５Ｂでは、示されるデータは、下から上へ（１）ミョウバン、（２）可溶性ＣｐＧ及び（３）ＡＭＰ－ＣｐＧである。図２５Ｃ及び図２５Ｄでは、示されるデータは、左から右へ（１）アジュバント対照、（２）ミョウバン、（３）可溶性ＣｐＧ及び（４）ＡＭＰ－ＣｐＧである。

【0052】

【図26】図２６Ａから図２６Ｅは、ＡＭＰ－ＣｐＧ－７９０９での２回ワクチン接種が血液と肺で強力なスパイクＲＢＤ特異的細胞性免疫、血液で体液性免疫を誘導することを示す一連のグラフである。Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（ｎ＝５／群）を０及び１４日目に１．０、２．５又は５．０ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと混合した０．５、１．０又は５．０ｕｇのスパイクＲＢＤタンパク質で免疫化し、２１日目にＴ細胞及びＩｇＧ応答を分析した。末梢血細胞（図２６Ａ及び図２６Ｂ）又は灌流肺から採取された細胞（図２６Ｃ及び図２６Ｄ）を重複スパイクＲＢＤペプチドで再刺激し、フローサイトメトリーにより細胞内サイトカイン産生をアッセイして抗原特異的Ｔ細胞応答を検出した。ＣＤ８^＋（図２６Ａ及び図２６Ｃ）及びＣＤ４^＋（図２６Ｂ及び図２６Ｄ）Ｔ細胞中のＩＦＮγ、ＴＮＦα及び二重陽性Ｔ細胞の頻度を示す。ＥＬＩＳＡによりスパイクＲＢＤに特異的な体液性応答を免疫化された動物からの血清中で評価した。３５日目にＩｇＧのエンドポイント力価を示す（ｎ＝５マウス／群；図２６Ｅ）。示される値は、平均±標準偏差である。図２６Ａから図２６Ｄでは、各バーについて、ＩＮＦγ^＋及びＴＮＦα^＋はバーの頂部にあり、ＴＮＦα^＋はバーの中部にあり、ＩＮＦγ^＋はバーの底部にある。

【0053】

【図27】ＡＭＰ－ＣｐＧがＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を標的とする強力な多機能ＣＤ８Ｔ細胞応答を誘導することを示す一連のグラフである。モックワクチン又は１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを含むワクチンを投与した。観察されたサイトカイン陽性細胞の百分率は、ｍｏｃｋ（０％）、ミョウバン（０％）、可溶性ＣｐＧ（５％）、及びＡＭＰ－ＣｐＧ（３４％）であった。ＣＤ８^＋Ｔ細胞のサイトカイン陽性率を示す棒グラフでは、各バーの頂部はＩＦＮγ^＋及びＴＮＦα^＋を示し、各バーの中部はＴＮＦα^＋を示し、各バーの底部はＩＦＮγ^＋細胞を示す。

【0054】

【図28】ＡＭＰ－ＣｐＧがＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を標的とする強力な多機能ＣＤ４Ｔ細胞応答を誘導することを示すグラフである。モックワクチン又は１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを含むワクチンを投与した。観察されたサイトカイン陽性細胞の百分率は、ｍｏｃｋ（０．２％）、ミョウバン（０．５％）、可溶性ＣｐＧ（０．５％）及びＡＭＰ－ＣｐＧ（１２％）であった。ＣＤ４^＋Ｔ細胞のサイトカイン陽性率を示す棒グラフでは、各バーの頂部はＩＦＮγ^＋及びＴＮＦα^＋を示し、各バーの中部はＴＮＦα^＋を示し、各バーの底部はＩＦＮγ^＋細胞を示す。

【0055】

【図29】モックワクチン又は１０μｇの全長コロナウイルススパイクタンパク質構築物（配列番号６６）と、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質構築物（配列番号６３）及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせを投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）において重複コロナウイルススパイクペプチドで再刺激された１×１０^６個の脾細胞あたりのスポット形成細胞のＩＦＮγ数を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。このグラフは、ＡＭＰ－ＣｐＧがＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を標的とする強力なＴ細胞応答を誘導することを示す。

【0056】

【図30】ＡＭＰ－ＣｐＧがＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を標的とする強力な肺常在性多機能ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を誘導することを示す一連のグラフである。モックワクチン又は１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを含むワクチンを投与した。観察されたサイトカイン陽性細胞の百分率は、ｍｏｃｋ（０％）、ミョウバン（０％）、可溶性ＣｐＧ（３％）及びＡＭＰ－ＣｐＧ（２６％）であった。ＣＤ８^＋Ｔ細胞のサイトカイン陽性率を示す棒グラフでは、各バーの頂部はＩＦＮγ^＋及びＴＮＦα^＋を示し、各バーの中部はＴＮＦα^＋を示し、各バーの底部はＩＦＮγ^＋細胞を示す。

【0057】

【図31】ＡＭＰ－ＣｐＧがＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を標的とする強力な肺常在性多機能ＣＤ４^＋Ｔ細胞応答を誘導することを示す一連のグラフである。モックワクチン又は１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質、及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを含むワクチンを投与した。観察されたサイトカイン陽性細胞の百分率は、ｍｏｃｋ（０．２％）、ミョウバン（０．２％）、可溶性ＣｐＧ（１％）、及びＡＭＰ－ＣｐＧ（７％）であった。ＣＤ４^＋Ｔ細胞のサイトカイン陽性率を示す棒グラフでは、各バーの頂部はＩＦＮγ^＋及びＴＮＦα^＋を示し、各バーの中部はＴＮＦα^＋を示し、各バーの底部はＩＦＮγ^＋細胞を示す。

【0058】

【図32】ＡＭＰ－ＣｐＧがＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ ヌクレオカプシドタンパク質を標的とする強力な末梢血多機能ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞応答を誘導することを示す一連のグラフである。モックワクチン又は１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを含むワクチンを投与した。ＣＤ８^＋Ｔ細胞又はＣＤ４^＋Ｔ細胞のサイトカイン陽性率を示す棒グラフでは、各バーの頂部はＩＦＮγ^＋及びＴＮＦα^＋を示し、各バーの中部はＴＮＦα^＋を示し、各バーの底部はＩＦＮγ^＋細胞を示す。

【0059】

【図33】モックワクチン、又は１０μｇの全長コロナウイルススパイクタンパク質構築物（配列番号６６）と、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質構築物（配列番号６３）及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせを投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）において重複コロナウイルスヌクレオキャプシドペプチドで再刺激された１×１０^６個の脾細胞あたりのＩＦＮγスポット形成細胞の数を示すグラフである。示される値は、平均±標準偏差である。このグラフは、ＡＭＰ－ＣｐＧがＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を標的とする強力なＴ細胞応答を誘導することを示す。

【0060】

【図34】再構成された（reformulated）ＡＭＰ－ＣｐＧワクチンが非ヒト霊長類においてＧｅｎｓｃｒｉｐｔ ＲＢＤに対して強力な抗体応答を誘導することを示すグラフである。点線はアッセイの検出限界（ＬＯＤ）を示す。

【0061】

【図35】再構成されたＡＭＰ－ＣｐＧワクチンがＵＫ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアント（右の列）に対してＩｇＧ抗体を誘導することを示すグラフである。野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、左の列に示される。点線はアッセイＬＯＤを示す。

【0062】

【図36】図３６Ａ及び図３６Ｂは、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧワクチンがスパイクＲＢＤに対してＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を誘導することを示すグラフである。

【0063】

【図37】図３７Ａ及び図３７Ｂは、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧワクチンがスパイクＲＢＤに対してＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を誘導することを示すグラフである。各列では、％ＴＮＦαは頂部に示され、％ＩＬ２は中部に示され、％ＩＦＮγは底部に示される。

【0064】

【図38】アジュバント対照（Ａｄｊのみ）、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧデュアルＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤワクチン（１００μＬ注入あたり各ＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤ抗原を５ｍｇ有する）（Ｄｕａｌ Ｖａｘ）、又は再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧ Ｂ．１．３５１ＲＢＤワクチン（１００μＬ注入あたりＢ．１．３５１ＲＢＤ抗原を５ｍｇ有する）（Ａｍｐ Ｖａｘ）を２回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスのテトラマー解析の結果を示す。

【0065】

【図39】図３９Ａ、図３９Ｂ及び図３９Ｃは、アジュバント対照（Ａｄｊのみ）、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧデュアルＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤワクチン（１００μＬ注入あたり各ＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤ抗原を５ｍｇ有する）（Ｄｕａｌ Ｖａｘ）、又は再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧ Ｂ．１．３５１ワクチン（１００μＬ注入あたりＢ．１．３５１抗原を５ｍｇ有する）（Ｂ．１．３５１）を２回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの細胞内染色（ＩＣＳ）分析の結果を示すグラフである。図３９Ａは、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧデュアルＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤワクチン、並びに再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧ Ｂ．１．３５１ワクチンは、２回投与後、アジュバントのみワクチンと比較してＣＤ８^＋肺細胞がより多くのサイトカインＩＦＮγ及びＴＮＦαを分泌するように誘導することを示す。図３９Ｂは、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧデュアルＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤワクチン、並びに再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧ Ｂ．１．３５１ワクチンは、２回投与後、アジュバントのみワクチンと比較してＣＤ４^＋ 肺細胞がより多くのサイトカインＩＦＮγ及びＴＮＦαを分泌するように誘導することを示す。図３９Ｃは、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧデュアルＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤワクチン、並びに再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧ Ｂ．１．３５１ワクチンは、２回投与後、アジュバントのみワクチンと比較してＣＤ８^＋血球が多くのサイトカインＩＦＮγ及びＴＮＦαを分泌するように誘導することを示す。各列では、％ＩＦＮγ＋ＴＮＦαは頂部に示され、％ＴＮＦαは中部に示され、％ＩＦＮγは底部に示される。

【0066】

【図40】アジュバント対照（Ａｄｊのみ）、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧデュアルＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤワクチン（１００μＬ注入あたり各ＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤ抗原を５ｍｇ有する）（Ｄｕａｌ Ｖａｘ）又は再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧ Ｂ．１．３５１ワクチン（１００μＬ注入あたりＢ．１．３５１ＲＢＤ抗原を５ｍｇ有する）（Ｂ．１．３５１）を２回投与されたＣ５７ＢＬ／６ＪマウスのＥＬＩＳｐｏｔ分析の結果を示すグラフである。

【0067】

【図41】アジュバント対照（Ａｄｊのみ）、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧデュアルＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤワクチン（１００μＬ注入あたり各ＷＴ ＲＢＤ及びＢ．１．３５１ＲＢＤ抗原を５ｍｇ有する）（Ｄｕａｌ Ｖａｘ）又は再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧ Ｂ．１．３５１ワクチン（１００μＬ注入あたりＢ．１．３５１ＲＢＤ抗原を５ｍｇ有する）（Ｂ．１．３５１）を２回投与されたＣ５７ＢＬ／６ＪマウスについてＥＬＩＳＡ分析により測定された抗体血清の量を示すグラフである。

【0068】

定義

【0069】

特許請求の範囲及び明細書で使用される用語は、特に明記しない限り、以下のように定義されまる。

【0070】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含むことに注意しなければならない。

【0071】

本明細書で使用される「約」という用語は、記載されている値の上下10%以内の値を指す。

【0072】

本明細書において、「アジュバント」という用語は、特定の免疫原及び抗原とともに、結果として生じる免疫応答を増強及び変更及び改変する化合物を指す。免疫応答の改変には、抗体及び細胞性免疫応答のいずれか及び両方の特異性の増強及び拡大が含まれる。免疫応答の改変は、特定の抗原特異的免疫応答を減少及び抑制することも意味する。特定の実施形態では、アジュバントは環状ジヌクレオチドである。

【0073】

本明細書において、「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸及び合成アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるアミノ酸、及び後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンである。「アミノ酸類似体」という用語は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造（即ち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合したα炭素）を持つ化合物を指し、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムが挙げられる。このような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）及び修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持している。「アミノ酸模倣体」という用語は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化合物を指す。アミノ酸は、本明細書では、一般的に知られている三文字記号及びＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名委員会が推奨する一文字記号のいずれかによって言及することができる。同様に、ヌクレオチドは、一般的に受け入れられている一文字コードで記載することができる。

【0074】

本明細書において、「両親媒性物質」及び「両親媒性」という用語は、親水性頭部及び疎水性尾部を含むことで両親媒性複合体を形成する複合体を指す。いくつかの実施形態において、両親媒性複合体は、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）及び１つ及び複数の疎水性脂質尾部を含み、本明細書では「ＣｐＧ両親媒性物質」と呼ばれる。

【0075】

本明細書において、「複合体」とは、ＣｐＧ－両親媒性物質の脂質への共有結合及び架橋を指す。ＣｐＧ両親媒性物質は、ＣｐＧ両親媒性物質及び脂質上の相補的反応基の反応による共有結合を介して脂質に結合され得る。

【0076】

本明細書において、「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」及び「ＣｐＧモチーフ」という用語は、ホスホジエステルヌクレオチド間結合及びホスホジエステル誘導体ヌクレオチド間結合を介して３'Ｇヌクレオチドに接続された５'Ｃヌクレオチドを含む短い一本鎖ＤＮＡ分子を指す。いくつかの実施形態において、ＣｐＧモチーフは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態において、ＣｐＧモチーフは、ホスホジエステル誘導体のヌクレオチド間結合を含む。

【0077】

本明細書において、「コロナウイルススパイクタンパク質」及び「コロナウイルススパイクペプチド」という用語は、大きな１型膜貫通タンパク質全長又は断片を指し、Ｓ１及びＳ２ドメインを含む「Ｓタンパク質」と呼ばれることもある。コロナウイルスのスパイクタンパク質は高度にグリコシル化されており、ＳＡＲ－ＣｏＶ－２ビリオンの表面などのビリオン表面でトリマーにアセンブルする。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の場合、前記スパイクタンパク質は、ヒトアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）受容体に結合してヒト細胞に感染する。前記ヒト細胞は、例えば、呼吸上皮細胞（例えば、ＩＩ型肺胞細胞）、及び他の多くの組織や器官（例えば、心臓、血管、腎臓、肝臓、消化管、神経系（例えば、脳及び末梢神経系））における細胞（例えば、上皮細胞、内皮細胞、ニューロン、グリア細胞、平滑筋細胞、及び腸細胞）である。いくつかの実施形態において、前記スパイクタンパク質ペプチドは、配列番号３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質ペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を有する。

【0078】

本明細書において、「免疫応答」とは、外来及び自己タンパク質を含むがこれらに限定されない物質に対して生物の免疫系によって行われる応答を指す。「免疫応答」の３つの一般的なタイプには、粘膜、液性、及び細胞性免疫応答が含まれる。免疫応答には、抗体産生、炎症、免疫の形成、抗原に対する過敏症の発症、抗原に対する抗原特異的リンパ球の応答、及び移植及び移植片拒絶の少なくとも１つが含まれる。

【0079】

本明細書において、「免疫原性」とは、例えば、抗体力価によって測定される、免疫応答を誘導する薬剤（例えば、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルススパイクタンパク質及びペプチド）の能力を指す。

【0080】

本明細書において、「免疫原量」という用語は、対象において免疫応答を誘導する（例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）などの従来の技術によって決定される、対象の抗体力価の増加によって反映される）ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルススパイクタンパク質及びペプチドの量を指す。

【0081】

本明細書において、「感染性因子」という用語は、感染及び／及び疾患を引き起こす因子を指す。感染性因子には、ウイルス、細菌、真菌、及び寄生虫が含まれます。いくつかの実施形態において、前記感染性因子は、ウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などのコロナウイルス）である。

【0082】

「核酸」とは、一本鎖及び二本鎖形態のデオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチド及びそのポリマーを指す。特に限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと同様に代謝される天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を包含する。特に限定されない限り、特定の核酸配列はまた、その保存的に改変されたバリアント（例えば、縮重コドン置換）及び相補的配列、ならびに明示的に示された配列を黙示的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ及び複数の選択された（及びすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／及びデオキシイノシン残基で置換されている配列を生成することによって達成することができる（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１，１９９１；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８，１９８５）；Ｃａｓｓｏｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ８：９１－９８，１９９４）。アルギニンとロイシンの場合、２番目の塩基での修飾も保守的である。核酸という用語は、遺伝子、ｃＤＮＡ、及び遺伝子によってコードされるｍＲＮＡと互換的に使用される。

【0083】

参照ポリヌクレオチド及びポリペプチド配列に関する「パーセント（％）配列同一性」は、参照ポリヌクレオチド及びポリペプチド配列中の核酸及びアミノ酸と同一である候補配列中の核酸及びアミノ酸のパーセンテージとして定義され、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後、最大のパーセント配列同一性を達成する。パーセント核酸及びアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、当業者の能力の範囲内である様々な方法で達成することができ、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｍｅｇａｌｉｇｎソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメーターを決定することができる。例えば、パーセント配列同一性値は、配列比較コンピュータープログラムＢＬＡＳＴを使用して生成することができる。例として、所与の核酸及びアミノ酸配列Ｂに対する所与の１核酸及びアミノ酸配列Ａのパーセント配列同一性（所与の核酸及びアミノ酸配列Ｂに対して特定のパーセントの配列同一性を有する所与の核酸及びアミノ酸配列Ａとして言い換えることもできる）は次のように計算される。
１００×（分数Ｘ／Ｙ）
ここで、Ｘは、配列アラインメントプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）によってＡとＢのアラインメントで同一の一致としてスコア付けされたヌクレオチド及びアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂの核酸の総数である。核酸及びアミノ酸配列Ａの長さが核酸及びアミノ酸の長さと等しくないことは理解されるべきである。

【0084】

本明細書において、「薬学的に許容される」とは、健全な医学的判断の範囲内で、ヒト及び動物の組織、器官、及び／及び体液と接触して使用するのに適するとともに、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、その他の問題や合併症がなく、妥当なベネフィット／リスク比に見合った化合物、材料、組成物、及び／及び剤形を指す。

【0085】

本明細書において、「薬学的に許容される担体」とは、活性化合物を懸濁及び溶解することができ、患者において非毒性及び非炎症性であるという特性を有するビヒクルを指す。さらに、薬学的に許容される担体は、活性剤の生物学的活性の治療効果を著しく妨げず、患者に対して無毒であるとともに、製剤の分野で知られているか使用される防腐剤、抗酸化剤、芳香剤、乳化剤、染料、及び賦形剤などの薬学的に許容される添加剤を含んでもよい。

【0086】

本明細書において、「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、対象において非毒性及び非炎症性であるという特性を有する任意の不活性成分を指す。典型的な賦形剤には、例えば、担体、結合剤、充填剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、香料、防腐剤、緩衝剤、湿潤剤、崩壊剤、発泡剤、その他の従来の賦形剤及び添加剤；及び／又は安定性、送達、吸収、半減期、有効性、薬物動態を向上可能であり、及び／又は薬力学、有害な副作用を軽減し、及び医薬品の使用に他の利点を提供するその他の添加剤が含まれる。

【0087】

本発明のポリヌクレオチドは、任意のポリリボヌクレオチド及びポリデオキシリボヌクレオチドから構成することができ、これらは非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ、又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡであり得る。例えば、ポリヌクレオチドは、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖と二本鎖のＲＮＡ、一本鎖と二本鎖の領域が混在したＲＮＡ、一本鎖になりうるＤＮＡとＲＮＡを含むハイブリッド分子、或いは、より典型的には、二本鎖及び一本鎖領域と二本鎖領域の混合物から構成され得る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ、及びＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチドは、安定性及び他の理由のために修飾された１つ及び複数の修飾塩基、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ骨格を含んでもよい。「修飾された」塩基には、例えば、トリチル化塩基及びイノシンなどの異常な塩基が含まれる。ＤＮＡ及びＲＮＡにはさまざまな修飾を加えることができるため、「ポリヌクレオチド」は、化学的、酵素的、及び代謝的に修飾された形態を含む。

【0088】

本明細書において、「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書に開示される複合体、オリゴヌクレオチド、及びペプチドの薬学的に許容される塩を意味する。本明細書に記載の任意の化合物の薬学的に許容される塩は、健全な医学的判断の範囲内にあり、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに適するとともに、過度の毒性、刺激、アレルギー反応がなく、合理的なベネフィット／リスク比に見合ったものを含み得る。薬学的に許容される塩は、当技術分野で周知である。例えば、薬学的に許容される塩は文献Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ６６：１－１９，１９７７及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ（Ｅｄｓ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８．に記載されている。塩は、本明細書に記載の化合物の最終的な単離及び精製中にその場で、及び遊離塩基を適切な酸と反応させることによって別々に調製することができる。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。代表的なアルカリ及びアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、非毒性のアンモニウム、第４級アンモニウム、及びアミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンが含まれるが、これらに限定されない）などが含まれる。複合体、オリゴヌクレオチド、及びペプチドへの言及は、別段の指示がない限り、及び該当しない場合を除き、薬学的に許容されるその塩を含む。

【0089】

「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、本明細書では交換可能に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。この用語は、１つ及び複数のアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然アミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーに適用される。

【0090】

本明細書において、「予防する」及び「感染のリスクを低減する」という用語は、感染症、例えばウイルス感染、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などのベータコロナウイルス及び関連ウイルスによる感染にかかるリスクを減少させる（例えば、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９９％又は約１００％）ことを意味する。予防が有効であるかどうかを決定するために、本発明の組成物を投与された対象と、組成物を投与されなかった同様の状況にある対象（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染などのウイルス感染、及び関連ウイルスによる感染のリスクがある対象）との間で比較を行うことができる。組成物を投与された対象と、対照、ベースライン、及び既知の測定レベルとの間で比較を行うこともできる。

【0091】

本明細書において、「対象」及び「哺乳動物」及び「患者」という用語は、ヒト及び非ヒトの両方を含み、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、マウス、ウシ、ウマ、及びブタを含むが、これらに限定されない。

【0092】

本明細書において、「治療有効量」という用語は、疾患の症状を改善するのに有効な量である。予防は治療と見なすことができるので、治療有効量は「予防有効量」であり得る。

【0093】

「治療する」、「治療」及び「治療している」という用語は、疾患及び障害（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９）に関連する状態の進行及び重症度を逆転、緩和、改善、阻害、遅延及び停止することを目標とする治療アプローチを指す。これらの用語には、病状、疾患、及び障害の少なくとも１つの悪影響及び症状を軽減及び緩和することが含まれる。治療は一般に、１つ及び複数の症状若しくは臨床マーカーが減少する場合、及び望ましい反応（例えば、特異的な免疫反応）が誘導される場合に「有効」である。或いは、疾患の進行が軽減及び停止した場合、治療は「有効」である。

【0094】

本明細書において、「ワクチン」及び「免疫原性組成物」という用語は、本明細書に記載のＣｐＧ両親媒性物質及び／又はコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質、そのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含み、選択的に、アジュバントと併用される処方を指し、この処方は、脊椎動物に投与可能な形態であり、免疫を誘導して感染若しくは疾患を予防及び／及び改善し、及び／及び感染若しくは疾患の少なくとも１つの症状を軽減するのに十分な防御的及び治療的免疫応答を誘導する。典型的には、ワクチン及び免疫原性組成物は、本明細書に記載の組成物が懸濁及び溶解されている従来の生理食塩水及び緩衝水溶液媒体を含む。この形態では、本明細書に記載の組成物は、感染症及び疾患を予防、改善、及び治療するために使用される。宿主に導入されると、ワクチン及び免疫原性組成物は、免疫応答（抗体及び／及びサイトカインの産生；及び／及び細胞傷害性Ｔ細胞、抗原提示細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞及び／及び他の細胞応答の活性化を含むがこれらに限定されない）を誘導する。

【0095】

本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明、図面、及び特許請求の範囲から明らかになるである。

【発明を実施するための形態】

【0096】

本発明は、対象において免疫応答を誘導する組成物を提供する。前記組成物は、脂質にリンカーを介して又はリンカーを介せずに（直接）結合してＣｐＧ両親媒性物質を形成するＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮｓ）と、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）とを含む。本明細書に記載の化合物は、同時に及び別々に投与されると、ヒト対象などの対象において免疫応答を誘導する。前記ＣｐＧ両親媒性物質は、アジュバントとして対象において免疫応答、例えば、コロナウイルス抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質若しくはそのペプチド、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質若しくはそのペプチド）に対する免疫応答を誘導することができる。

【0097】

ＣｐＧ
ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）は、特定の配列コンテキストでメチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドを含む短い合成一本鎖ＤＮＡ分子である。ＣｐＧ ＯＤＮは、ＤＮＡ分子の天然のホスホジエステル（ＰＯ）骨格とは対照的に、部分的及び完全にホスホロチオ化（ＰＳ）骨格を持っている。刺激性ＣｐＧ ＯＤＮの３つの主要なクラスは、構造的特徴とヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、特にＢ細胞及び形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）に対する活性に基づいて特定されている。この３つのクラスは、クラスＡ（タイプＤ）、クラスＢ（タイプＫ）、及びクラスＣである。

【0098】

いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡ ＯＤＮであってもよい。例えば、クラスＡ ＯＤＮは、ＧＧＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＧＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ１５８５、ＧＧＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧＧＧＧＧＧ（配列番号６）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ２２１６、及びＧＧＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ２３３６を含む群から選択され得る。

【0099】

いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＢ ＯＤＮであってもよい。クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮは、１つ及び複数のＣｐＧジヌクレオチドを持つ完全なＰＳバックボーンを含む。それらはＢ細胞とＴＬＲ９依存性ＮＦ－κＢシグナル伝達を強く活性化するが、ＩＦＮ－α分泌を弱く刺激する。例えば、クラスＢ ＯＤＮは、ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＴＧＣＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ１６６８、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ（配列番号１）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ７９０９（ＣｐＧ２００６としても知られている）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ（配列番号８）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ２００７、ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＴＣＧＴＴＣＧＴＣＧＴＴＣ（配列番号９）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ ＢＷ００６、ＴＣＧＣＧＡＣＧＴＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ Ｄ－ＳＬ０１、ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ（配列番号１５）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ１０１８、及びＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ（配列番号２）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ１８２６を含む群から選択され得る。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ ＯＤＮは、ＣｐＧ ７９０９（配列番号１）である。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ ＯＤＮは、ＣｐＧ １８２６（配列番号２）である。

【0100】

いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＣ ＯＤＮであってもよい。例えば、前記クラスＣ ＯＤＮは、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（配列番号１１）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ２３９５、ＴＣＧＴＣＧＴＣＧＴＴＣＧＡＡＣＧＡＣＧＴＴＧＡＴ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ Ｍ３６２、及びＴＣＧＣＧＡＡＣＧＴＴＣＧＣＣＧＣＧＴＴＣＧＡＡＣＧＣＧＧ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有するＣｐＧ Ｄ－ＳＬ０３を含む群から選択され得る。

【0101】

いくつかの実施形態において、ＣｐＧ配列のヌクレオシドを結合する全てのヌクレオシド間基はホスホロチオエートである。

【0102】

いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、両親媒性複合体を含む。両親媒性複合体は、アルブミン結合ドメイン（例えば、脂質）に共有結合したＣｐＧ ＯＤＮを含む複合体を指す。いくつかの実施形態において、両親媒性複合体は、アルブミン結合ドメイン（例えば、脂質）に直接共有結合したＣｐＧ ＯＤＮを含む。いくつかの実施形態において、両親媒性複合体は、リンカーを介してアルブミン結合ドメイン（例えば、脂質）に共有結合したＣｐＧ ＯＤＮを含む。アルブミン結合ドメインに直接及びリンカーを介して結合したＣｐＧ ＯＤＮを含む両親媒性複合体では、アルブミン結合ドメインは、内因性アルブミンに結合し、これにより、ＣｐＧ両親媒性物質が血流に急速に流れ込むのを防ぎ、代わりに、抗原提示細胞によるアルブミンのフィルタリングにより蓄積するリンパ管及び排出リンパ節に再標的化する。

【0103】

ＣｐＧ ＯＤＮは、脂質に直接結合するか、及びリンカーを介して結合してＣｐＧ両親媒性物質を形成することができる。これらの化合物は、当技術分野で知られている通常のホスホルアミダイト化学により生成することができる。いくつかの実施例において、ＣｐＧ ＯＤＮ又はＣｐＧ ＯＤＮ－ＧＧは、下記の化合物と反応して中間体を生成することができ、例えば、当技術分野で知られているホスファイト酸化法、例えば３－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン）などの硫化剤による酸化及びシアノエチル基の加水分解により、本発明の化合物を生成することができる。

【0104】

本明細書におけるＣｐＧ分子、及びＣｐＧ分子を含む両親媒性物質への言及は、その薬学的に許容される塩を含むと理解されるべきである。

【0105】

脂質
本発明のＣｐＧ両親媒性物質は、疎水性脂質を含み、アルブミン結合ドメインであってもよい。前記脂質は、直鎖状、分岐状、及び環状であってもよい。脂質は、長さが少なくとも１７～１８個の炭素であることが好ましいが、良好なアルブミン結合及びリンパ節への適切な標的化を示す場合、より短くてもよい。いくつかの実施形態において、この活性は、ＣｐＧ両親媒性物質が対象の血液中のアルブミンと結合する能力に部分的に依存する。したがって、リンパ節を標的とするＣｐＧ両親媒性物質は、通常、生理学的条件下でアルブミンに結合可能な脂質を含む。リンパ節を標的とするのに適した脂質は、アルブミンへの脂質又はＣｐＧ ＯＤＮに結合した脂質の結合能力に基づいて選択することができる。アルブミンへの脂質又はＣｐＧ ＯＤＮに結合した脂質の結合能力を試験するための適切な方法は、当技術分野で知られている。

【0106】

ＣｐＧ両親媒性物質によるリンパ節の標的化に適用される好ましい脂質の例には、炭素数８～３０の脂肪族尾部を持つ脂肪酸（直鎖状不飽和及び飽和脂肪酸、分岐状飽和及び不飽和脂肪酸、脂肪酸誘導体（例えば、脂肪酸エステル、脂肪酸アミド、脂肪酸チオエステル、ジアシル脂質）など）、コレステロール、コレステロール誘導体、ステロイド酸（例えば、胆汁酸）、脂質Ａ又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

【0107】

いくつかの実施形態において、前記脂質は、ジアシル脂質又は２尾部脂質である。いくつかの実施形態において、前記ジアシル脂質における尾部は、約８から約３０個の炭素を含み、飽和、不飽和、及びそれらの組み合わせであってもよい。いくつかの実施形態において、前記ジアシル脂質は、

【0108】

【化2】

の構造又はその塩を有する。
式中、Ｘは、Ｏ又はＳである。脂質の尾部は、エステル結合、アミド結合、チオエステル結合、及びそれらの組み合わせを介して頭部基に結合することができる。特定の実施形態では、ジアシル脂質は、リン酸脂質、糖脂質、スフィンゴ脂質、及びそれらの組み合わせである。

【0109】

リンパ節を標的とする複合体は、典型的には、長さが８以上の炭素ユニットである脂質を含む。脂質単位の数を増やすと、細胞の原形質膜への脂質の挿入が減少し、これによって、脂質複合体が自由にアルブミンに結合し、リンパ節に移動可能になる。例えば、脂質は、２つのＣ１８炭化水素尾部からなるジアシル脂質であってもよい。いくつかの実施形態において、リンパ節を標的とする脂質複合体の調製に使用する脂質は、一本鎖炭化水素（例えば、Ｃ１８）やコレステロールではない。コレステロール結合は、ＣｐＧなどの分子アジュバントの免疫調節及びペプチドの免疫原性を高めるために調査されている。

【0110】

本明細書における脂質、及び脂質を含む両親媒性物質への言及は、その薬学的に許容される塩を含むと理解されるべきである。
リンカー
ＣｐＧ両親媒性物質がリンパ節に効率的に輸送されるためには、ＣｐＧ ＯＤＮは可溶性に維持されなければならない。したがって、ＣｐＧ ＯＤＮの溶解度を高めるために、ＣｐＧ ＯＤＮと脂質との間に極性ブロックリンカーを含めることができる。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、リンカーを介して脂質に結合したＣｐＧ配列を含む。前記リンカーは、脂質が注射部位に隣接する組織内の細胞などの細胞の原形質膜に挿入する脂質の能力を低減及び防止することができる。前記リンカーは、ＣｐＧ ＯＤＮが投与部位で細胞外マトリックスタンパク質と非特異的に結合する能力を低減及び防止することもできる。前記リンカーは、アルブミンに結合する能力を妨げることなく、ＣｐＧ ＯＤＮの溶解度を高めることができる。この特性の組み合わせにより、ＣｐＧ ＯＤＮは、血清及び間質液に存在するアルブミンに結合し、アルブミンがリンパ節に移動して保持されるまで循環に留まることができる。

【0111】

リンカーの長さと組成は、選択した脂質とＣｐＧ ＯＤＮに基づいて調整することができる。例えば、いくつかのＣｐＧ ＯＤＮでは、オリゴヌクレオチド（例えば、長さが１０、１５、２０及びそれ以上のヌクレオチドのオリゴヌクレオチド）自体が溶解性を確保するのに十分な極性を持っている場合がある。したがって、いくつかの実施形態において、追加のリンカーは必要とされない。しかし、アミノ酸配列によっては、いくつかの脂質化ペプチドは本質的に不溶性である可能性がある。この場合、極性オリゴヌクレオチドの効果を模倣するリンカーを含めることが望ましい。リンカーは、本明細書に記載の細胞膜挿入／アルブミンへの優先的結合を減少させる脂質複合体のいずれか（例えば、脂質－オリゴヌクレオチド複合体及び脂質－ペプチド複合体）の一部として使用することができる。

【0112】

適切なリンカーには、上記のような核酸鎖を含むオリゴヌクレオチド、親水性ポリマー（ポリエチレングリコール（ＭＷ：５００Ｄａから２０，０００Ｄａ）、ポリアクリルアミド（ＭＷ：５００Ｄａから２０，０００Ｄａ）、ポリアクリル酸を含むがこれらに限定されない）、親水性アミノ酸（例えば、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン又はそれらの組み合わせ）の鎖、多糖（デキストラン（ＭＷ：１，０００Ｄａから２，０００，０００Ｄａ）を含むがこれに限定されない）又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。疎水性脂質とリンカー／ＣｐＧ ＯＤＮとは、共有結合される。共有結合は、切断不可能な結合及び切断可能な結合であってもよい。切断不可能な結合は、アミド結合及びリン酸結合を含むことができ、切断可能な結合は、ジスルフィド結合、酸切断可能な結合、エステル結合、無水物結合、生分解性結合、及び酵素切断可能な結合を含んでもよい。

【0113】

いくつかの実施形態において、前記リンカーは、１つ又は複数のエチレングリコール（ＥＧ）ユニット、より好ましくは、２つ以上のＥＧユニット（即ち、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））である。例えば、いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子又はその誘導体若しくは類似体を介して結合したＣｐＧと疎水性脂質を含む。

【0114】

いくつかの実施形態において、本発明のＣｐＧ両親媒性物質は、ＰＥＧに結合したＣｐＧ ＯＤＮを含み、ＰＥＧは、共有結合又はオリゴミセルにハイブリダイズするタンパク質－オリゴ複合体の形成を介して疎水性脂質又は脂質－Ｇｎ－ＯＮ複合体に結合する。ＰＥＧユニットの正確な数は、脂質及びカーゴに依存するが、典型的に、リンカーは、約１から約１００、約２０から約８０、約３０から約７０又は約４０から約６０個のＰＥＧユニットを有してもよい。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、約４５から約５５個のＰＥＧユニットを有する。例えば、いくつかの実施形態において、前記リンカーは、４８個のＰＥＧユニットを有する。

【0115】

上記のように、いくつかの実施形態において、前記リンカーは、核酸鎖を含むオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、本発明のＣｐＧ両親媒性物質は、疎水性脂質に結合した核酸鎖に結合したＣｐＧ ＯＤＮを含む。前記リンカーは、任意の配列を有してもよい。例えば、前記オリゴヌクレオチドの配列は、ランダム配列、及びその分子的若しくは生化学的特性（例えば、高極性）のために特別に選択された配列であってもよい。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、１つ及び複数のシリーズの連続したアデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、ウラシル（Ｕ）及びそれらの類似体を含む。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、一連の連続したアデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、ウラシル（Ｕ）及びその類似体で構成される。

【0116】

いくつかの実施形態において、前記核酸鎖は、１から５０個の核酸残基を含む。いくつかの実施形態において、前記核酸鎖は、５から３０個の核酸残基を含む。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、１つ又は複数のグアニン、例えば、１－１０個のグアニンを含む。ＣｐＧ ＯＤＮと脂質尾部の間のグアニンの数を変更することにより、血清タンパク質の存在下でのミセルの安定性を制御できることが見出された。したがって、リンカーにおけるグアニンの数は、アルブミンなどの血清タンパク質に対するＣｐＧ ＯＤＮの望ましい親和性に応じて選択することができる。

【0117】

いくつかの実施形態において、前記リンカーは、アミノ酸鎖を含むオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、疎水性脂質に結合したアミノ酸鎖に結合したＣｐＧ ＯＤＮを含む。前記リンカーは、任意のアミノ酸配列を有してもよい。例えば、オリゴヌクレオチドの配列は、ランダム配列、及びその分子的若しくは生化学的特性（例えば、高い柔軟性）のために選択された配列であり得る。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、ポリグリシンリンカーを形成する一連のグリシン残基を含む。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、（Ｇｌｙ）_ｎのアミノ酸配列を含み、ここで、ｎは、２から２０個の残基であってもよい。ポリグリシンリンカーの例には、ＧＧＧ、ＧＧＧＡ（配列番号１８）、ＧＧＧＧ（配列番号１９）、ＧＧＧＡＧ（配列番号２０）、ＧＧＧＡＧＧ（配列番号２１）、ＧＧＧＡＧＧＧ（配列番号２２）、ＧＧＡＧ（配列番号２３）、ＧＧＳＧ（配列番号２４）、ＡＧＧＧ（配列番号２５）、ＳＧＧＧ（配列番号２６）、ＧＧＡＧＧＡ（配列番号２７）、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２８）、ＧＧＡＧＧＡＧＧＡ（配列番号２９）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号３０）、ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡ（配列番号３１）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号３２）、ＧＧＡＧＧＧＡＧ（配列番号３３）、ＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号３４）、ＧＧＡＧＧＧＡＧＧＧＡＧ（配列番号３５）、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号３６）、ＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡ（配列番号３７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３８）、及びＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号６２）．が含まれるが、これらに限定されない。

【0118】

本発明のリンカー（例えば、ポリグリシンリンカー）は、ポリペプチド配列（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド）をタグ（例えば、ヒスチジンタグ及び／又はＡｖｉタグ）に結合させるためにも使用され得る。

【0119】

コロナウイルス抗原

【0120】

一態様では、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質の全長又は断片（このスパイクタンパク質の免疫原断片及び多量体（例えば、トリマー）として同定された）を提供する（Ｇｒｉｆｏｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ．２０２０；２７（４）：６７１－８０；Ｏｕ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．２０２０，１１（１）：１６２０；Ｗａｌｌｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ．２０２０；１８１（２）：２８１－９２）。さらに、前記抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質、膜タンパク質など又はそのペプチドに対応し得る。前記抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質の特定の機能領域（即ち、タンパク質サブユニット）にも対応し得る。例えば、前記抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質又はＳタンパク質のＳ１、Ｓ２又は受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）領域に対応するか又は含み得る。

【0121】

前記抗原は、目的感染性因子における免疫原性配列に対応するペプチド（又はいくつかのペプチド）である。前記ペプチドは、さまざまな免疫応答を誘導できるエピトープとして機能する。例えば、前記ペプチドは、細胞性免疫原性と体液性免疫原性の両方で予測されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質のさまざまな位置を表すことができる（Ｆａｓｔ ｅｔ ａｌ．ｂｉｏＲｘｉｖ．２０２０：２０２０．０２．１９．９５５４８４）。複数のペプチドからなる抗原については、前記抗原は、タンパク質全体及びその機能領域を包含する重複ペプチドのカクテルであってもよく、及び異なるタンパク質の免疫原性領域に対応するペプチドの混合物であってもよい。例えば、前記抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質及び膜タンパク質を含むペプチドの混合物であってもよい。前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、アミノ酸配列：
ＭＦＩＦＬＬＦＬＴＬＴＳＧＳＤＬＤＲＣＴＴＦＤＤＶＱＡＰＮＹＴＱＨＴＳＳＭＲＧＶＹＹＰＤＥＩＦＲＳＤＴＬＹＬＴＱＤＬＦＬＰＦＹＳＮＶＴＧＦＨＴＩＮＨＴＦＧＮＰＶＩＰＦＫＤＧＩＹＦＡＡＴＥＫＳＮＶＶＲＧＷＶＦＧＳＴＭＮＮＫＳＱＳＶＩＩＩＮＮＳＴＮＶＶＩＲＡＣＮＦＥＬＣＤＮＰＦＦＡＶＳＫＰＭＧＴＱＴＨＴＭＩＦＤＮＡＦＮＣＴＦＥＹＩＳＤＡＦＳＬＤＶＳＥＫＳＧＮＦＫＨＬＲＥＦＶＦＫＮＫＤＧＦＬＹＶＹＫＧＹＱＰＩＤＶＶＲＤＬＰＳＧＦＮＴＬＫＰＩＦＫＬＰＬＧＩＮＩＴＮＦＲＡＩＬＴＡＦＳＰＡＱＤＩＷＧＴＳＡＡＡＹＦＶＧＹＬＫＰＴＴＦＭＬＫＹＤＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＳＱＮＰＬＡＥＬＫＣＳＶＫＳＦＥＩＤＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＶＰＳＧＤＶＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＫＦＰＳＶＹＡＷＥＲＫＫＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＴＦＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＡＴＫＬＮＤＬＣＦＳＮＶＹＡＤＳＦＶＶＫＧＤＤＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＶＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＭＧＣＶＬＡＷＮＴＲＮＩＤＡＴＳＴＧＮＹＮＹＫＹＲＹＬＲＨＧＫＬＲＰＦＥＲＤＩＳＮＶＰＦＳＰＤＧＫＰＣＴＰＰＡＬＮＣＹＷＰＬＮＤＹＧＦＹＴＴＴＧＩＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＮＡＰＡＴＶＣＧＰＫＬＳＴＤＬＩＫＮＱＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＰＳＳＫＲＦＱＰＦＱＱＦＧＲＤＶＳＤＦＴＤＳＶＲＤＰＫＴＳＥＩＬＤＩＳＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＡＳＳＥＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＤＶＳＴＡＩＨＡＤＱＬＴＰＡＷＲＩＹＳＴＧＮＮＶＦＱＴＱＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＤＴＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＨＴＶＳＬＬＲＳＴＳＱＫＳＩＶＡＹＴＭＳＬＧＡＤＳＳＩＡＹＳＮＮＴＩＡＩＰＴＮＦＳＩＳＩＴＴＥＶＭＰＶＳＭＡＫＴＳＶＤＣＮＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＡＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＳＧＩＡＡＥＱＤＲＮＴＲＥＶＦＡＱＶＫＱＭＹＫＴＰＴＬＫＹＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＬＫＰＴＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＭＫＱＹＧＥＣＬＧＤＩＮＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＤＭＩＡＡＹＴＡＡＬＶＳＧＴＡＴＡＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＱＩＡＮＱＦＮＫＡＩＳＱＩＱＥＳＬＴＴＴＳＴＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＡＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＳＱＥＲＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＥＧＫＡＹＦＰＲＥＧＶＦＶＦＮＧＴＳＷＦＩＴＱＲＮＦＦＳＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＩＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＶＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＬＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＡＣＳＣＧＳＣＣＫＦＤＥＤＤＳＥＰＶＬＫＧＶＫＬＨＹＴ（配列番号１４）
を有してもよい。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質は、アミノ酸配列：
ＭＦＩＦＬＬＦＬＴＬＴＳＧＳＤＬＤＲＣＴＴＦＤＤＶＱＡＰＮＹＴＱＨＴＳＳＭＲＧＶＹＹＰＤＥＩＦＲＳＤＴＬＹＬＴＱＤＬＦＬＰＦＹＳＮＶＴＧＦＨＴＩＮＨＴＦＧＮＰＶＩＰＦＫＤＧＩＹＦＡＡＴＥＫＳＮＶＶＲＧＷＶＦＧＳＴＭＮＮＫＳＱＳＶＩＩＩＮＮＳＴＮＶＶＩＲＡＣＮＦＥＬＣＤＮＰＦＦＡＶＳＫＰＭＧＴＱＴＨＴＭＩＦＤＮＡＦＮＣＴＦＥＹＩＳＤＡＦＳＬＤＶＳＥＫＳＧＮＦＫＨＬＲＥＦＶＦＫＮＫＤＧＦＬＹＶＹＫＧＹＱＰＩＤＶＶＲＤＬＰＳＧＦＮＴＬＫＰＩＦＫＬＰＬＧＩＮＩＴＮＦＲＡＩＬＴＡＦＳＰＡＱＤＩＷＧＴＳＡＡＡＹＦＶＧＹＬＫＰＴＴＦＭＬＫＹＤＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＳＱＮＰＬＡＥＬＫＣＳＶＫＳＦＥＩＤＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＶＰＳＧＤＶＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＫＦＰＳＶＹＡＷＥＲＫＫＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＴＦＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＡＴＫＬＮＤＬＣＦＳＮＶＹＡＤＳＦＶＶＫＧＤＤＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＶＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＭＧＣＶＬＡＷＮＴＲＮＩＤＡＴＳＴＧＮＹＮＹＫＹＲＹＬＲＨＧＫＬＲＰＦＥＲＤＩＳＮＶＰＦＳＰＤＧＫＰＣＴＰＰＡＬＮＣＹＷＰＬＮＤＹＧＦＹＴＴＴＧＩＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＮＡＰＡＴＶＣＧＰＫＬＳＴＤＬＩＫＮＱＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＰＳＳＫＲＦＱＰＦＱＱＦＧＲＤＶＳＤＦＴＤＳＶＲＤＰＫＴＳＥＩＬＤＩＳＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＡＳＳＥＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＤＶＳＴＡＩＨＡＧＱＬＴＰＡＷＲＩＹＳＴＧＮＮＶＦＱＴＱＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＤＴＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＨＴＶＳＬＬＲＳＴＳＱＫＳＩＶＡＹＴＭＳＬＧＡＤＳＳＩＡＹＳＮＮＴＩＡＩＰＴＮＦＳＩＳＩＴＴＥＶＭＰＶＳＭＡＫＴＳＶＤＣＮＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＡＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＳＧＩＡＡＥＱＤＲＮＴＲＥＶＦＡＱＶＫＱＭＹＫＴＰＴＬＫＹＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＬＫＰＴＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＭＫＱＹＧＥＣＬＧＤＩＮＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＤＭＩＡＡＹＴＡＡＬＶＳＧＴＡＴＡＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＱＩＡＮＱＦＮＫＡＩＳＱＩＱＥＳＬＴＴＴＳＴＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＡＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＳＱＥＲＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＥＧＫＡＹＦＰＲＥＧＶＦＶＦＮＧＴＳＷＦＩＴＱＲＮＦＦＳＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＩＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＶＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＬＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＡＣＳＣＧＳＣＣＫＦＤＥＤＤＳＥＰＶＬＫＧＶＫＬＨＹＴ（配列番号１６）
を有してもよい。

【0122】

いくつかの実施形態において、コロナウイルススパイクタンパク質構築物は、下記の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有する配列を含む。
ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）

【0123】

いくつかの実施形態において、コロナウイルススパイクタンパク質構築物は、下記の配列を含む。
ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）

【0124】

このタンパク質構築物は、ＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号６２）リンカーを介してスパイクタンパク質配列に結合した１０－ヒスチジンタグ（ＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ；配列番号６７）を含む。前記スパイクタンパク質は、トリマーを安定化するために変異Ｒ６８３Ａ、Ｒ６８５Ａを有する。この構築物は、ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓから製品番号ＳＰＮ－Ｃ５２Ｈ２で入手することができる。

【0125】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）に特異的に結合するコロナウイルススパイクタンパク質の受容体結合ドメインに対応する。ＡＣＥ２受容体と相互作用することが知られている前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の領域は、アミノ酸配列ＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＫＦＰＳＶＹＡＷＥＲＫＫＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＴＦＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＡＴＫＬＮＤＬＣＦＳＮＶＹＡＤＳＦＶＶＫＧＤＤＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＶＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＭＧＣＶＬＡＷＮＴＲＮＩＤＡＴＳＴＧＮＹＮＹＫＹＲＹＬＲＨＧＫＬＲＰＦＥＲＤＩＳＮＶＰＦＳＰＤＧＫＰＣＴＰＰＡＬＮＣＹＷＰＬＮＤＹＧＦＹＴＴＴＧＩＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥ（配列番号１７）を有する１２５５アミノ酸タンパク質（配列番号１４）上のアミノ酸３２３－５０２に対応するため、領域結合ドメイン（ＲＢＤ）として機能する。

【0126】

いくつかの実施形態において、本発明のコロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質ＲＢＤの断片と同じアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、本発明のコロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドは、
ＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳ（配列番号３）
と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質ペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を有する。

【0127】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質又はそのスパイクＲＢＤは、１つ又は複数の変異を含む。変異は、イギリスのバリアント（２０２０１２／０１）で検出されたＮ５０１Ｙ変異；イギリスとナイジェリアのバリアント（２０Ａ／Ｓ：４８４Ｋバリアント）で検出されたＡ６７Ｖ、６９ｄｅｌ、７０ｄｅｌ、１４４ｄｅｌ、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｑ６７７Ｈ及びＦ８８８Ｌ変異；イギリスのバリアント（Ｂ．１．１．７バリアント；αバリアント又は２０Ｉ／５０１Ｙ．Ｖ１バリアントとしても知られている）で検出された６９ｄｅｌ、７０ｄｅｌ、１４４ｄｅｌ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｈ、Ｔ７１６Ｉ、Ｓ９８２Ａ及びＤ１１１８Ｈ変異；アメリカのバリアントで検出されたＴ９５Ｉ、Ｄ２５３Ｇ及びＤ６１４Ｇ変異；アメリカのバリアント（２０Ｃバリアント）で検出されたＤ８０Ｇ、１４４ｄｅｌ、Ｆ１５７Ｓ、Ｌ４５２Ｒ、Ｄ６１４Ｇ、Ｄ９５０Ｈ変異；アメリカ（Ｂ．１．４７２バリアント；２０Ｃ／Ｓ：４５２Ｒバリアントとしても知られている）で発見されたＬ４５２Ｒ及びＤ６１４Ｇ変異；アメリカのバリアント（Ｂ．１．４２９バリアント；２０Ｃ／Ｓ：４５２Ｒバリアントとしても知られている）で検出されたＳ１３Ｉ、Ｗ１５２Ｃ、Ｌ４５２Ｒ、Ｄ６１４Ｇ変異；ブラジルのバリアント（Ｐ．１バリアント；γバリアント又は２０Ｊ／５０１Ｙ．Ｖ３バリアントとしても知られている）で検出されたＬ１８Ｆ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｄ１３８Ｙ、Ｒ１９０Ｓ、Ｋ４１７Ｔ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ及びＴ１０２７Ｉ変異；ブラジルのバリアント（２０Ｊバリアント）で検出されたＥ４８４Ｋ、Ｄ６１４Ｇ及びＶ１１７６Ｆ変異；インドのバリアント（２０Ａバリアント）で発見されたＬ１８Ｆ、Ｌ４５２Ｒ、Ｅ４８４Ｑ及びＤ６１４Ｇ変異；インドのバリアント（２０Ａ／Ｓ：１５４Ｋバリアント）で発見されたＧ１４２Ｄ、Ｅ１５４Ｋ、Ｌ４５２Ｒ、Ｅ４８４Ｑ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｒ及びＱ１０７１Ｈ変異；インドのバリアント（Ｂ．１．６１７．２バリアント；δバリアント、２０Ａ／Ｓ：４７８Ｋバリアント又は２０Ｊバリアントとしても知られている）で発見されたＴ１９Ｒ、Ｇ１４２Ｄ、Ｌ４５２Ｒ、Ｅ４８４Ｑ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｒ及びＤ９５０Ｎ変異；又は南アフリカのバリアント（Ｂ．１．３５１バリアント；βバリアント、５０１．Ｖ２バリアント又は５０１．Ｖ２，２０Ｈ／５０１Ｙ．Ｖ２としても知られている）で検出されたＮ５０１＆、Ｋ４１７Ｎ及びＥ４８４Ｋ変異の組み合わせ（Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、２４１ｄｅｌ、２４２ｄｅｌ、２４３ｄｅｌ、Ｄ６１４Ｇ及びＡ７０１Ｖ変異の有無にかかわらず）出会ってもよい。バリアント変異の番号付けは、完全長のスパイクタンパク質に関連する。

【0128】

前記スパイクＲＢＤは、いずれかのＳＡＲＳ－ＣｏＶ２バリアント変異を含んでもよい。いくつかの実施形態において、前記スパイクＲＢＤは、いずれかの前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２バリアントの配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の配列同一性を有する。一実施形態において、前記スパイクＲＢＤは、Ｂ．１．３５１バリアントの配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の配列同一性を有する。

【0129】

いくつかの実施形態において、前記スパイクＲＢＤは、Ｎ５０１Ｙ変異を含み、下記の配列を有する。
ＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＹＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦ（配列番号６９）

【0130】

いくつかの実施形態において、ヒスチジンタグは、配列番号６９の配列のＣ末端に追加される。いくつかの実施形態において、前記ヒスチジンタグの配列は、ＡＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号７０）である。

【0131】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドである。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質は、下記のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有する配列を含む。
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡ（配列番号６８）

【0132】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む。

【0133】

いくつかの実施形態において、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質構築物は、下記の配列を含む。
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号６３）

【0134】

前記構築物は、前記ヌクレオカプシドタンパク質配列と６－ヒスチジンタグ（ＨＨＨＨＨＨ；配列番号６５）との間にタバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼ（ＥＮＬＹＦＱＧ；配列番号６４）の切断部位を含み、製品番号ＮＵＮ－Ｃ５２２７でＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓから入手することができる。

【0135】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、又は前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチドは、１つ又は複数のタグ（例えば、ヒスチジンタグ又はＡｖｉタグ）を含む。

【0136】

タグは、例えば、タンパク質精製（例えば、アフィニティータグ）、タンパク質の溶解度の増加、クロマトグラフィー特性の変更、蛍光読み取り、及び別の目的のために使用され得る。 タンパク質タグには、キチン結合タンパク質（ＣＢＰ）タグ、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ、Ｓｔｒｅｐタグ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ、ヒスチジンタグ、Ａｖｉタグ、Ｃタグ、カルモジュリンタグ、Ｅタグ、ＦＬＡＧタグ、ヒトインフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、Ｍｙｃ、Ｓタグ、ＮＥタグが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質又はペプチドは、ヒスチジンタグを有する。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質は、Ａｖｉタグを有する。他の実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質又はペプチドは、ヒスチジンタグ及びＡｖｉタグの両方を有する。

【0137】

いくつかの実施形態において、前記コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチドは、プロテアーゼ切断部位を含む。いくつかの実施形態において、前記プロテアーゼ切断部位は、コロナウイルススパイクタンパク質、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はペプチド配列と、タグとの間にある。いくつかの実施形態において、前記プロテアーゼ切断部位は、ＴＥＶのためのものである。いくつかの実施形態において、前記ＴＥＶ切断部位は、アミノ酸配列ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号６４）を有する。

【0138】

免疫応答を引き起こす可能性のある予測される免疫原性エピトープの他の例は、文献全体（Ｇｒｉｆｏｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ．２０２０；２７（４）：６７１－８０；Ｐｒａｃｈａｒ ｅｔ ａl.ｂｉｏＲｘｉｖ．２０２０：２０２０．０３．２０．０００７９４；Ｃｈｏｕｒ ｅｔ ａｌ．ｍｅｄＲｘｉｖ．２０２０；２０２０．０５．０４．２００８５７７９）及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原のベンダーのウェブサイト（例えば、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｓｅｎｇｅｎｉｃｓ，ＡＢｃｌｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で見つけることができる。ＭＨＣ結合能力に基づいて免疫原性領域を特定するための予測ツールも広く利用可能である。

【0139】

或いは、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド）をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）などの核酸は、投与される。注入されると、ｍＲＮＡ は細胞の細胞質に入り、そこで目的のタンパク質及びペプチドに翻訳され、最終的に細胞性及び体液性免疫応答を活性化することができる。コロナウイルススパイクタンパク質及びペプチドの効果的な発現のために、ｍＲＮＡは、５'キャップ－５'未翻訳領域（ＵＴＲ）－抗原－コード配列－３'未翻訳領域（ＵＴＲ）－ポリＡ尾部を含むように合成される。５'ＵＴＲと３'ＵＴＲの設計は、ｍＲＮＡの安定性、翻訳、タンパク質産生、及び構造にとって重要である。目的ｍＲＮＡに応じて５'ＵＴＲ及び３'ＵＴＲの設計を最適化するオンラインツールがいくつかある。前記コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドをコードする配列は、特定のタンパク質又はタンパク質サブユニットをコードする任意のｍＲＮＡ配列（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質、スパイクＲＢＤドメイン、スパイクＳ１ドメインなどをコードするｍＲＮＡ）であってもよい。ｍＲＮＡは、非修飾、ヌクレオシド修飾、及び自己増幅であってもよい。効力、安定性、及びタンパク質収量を増加させるために、ｍＲＮＡにコドン最適化及び修飾ヌクレオシドの使用を行うことができる。例えば、自然免疫分子による認識が早すぎることを回避し、翻訳効率を改善するために、修飾ウリジン及び修飾シチジンの組み込みを行うことができる。

【0140】

いくつかの実施形態において、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド）をコードするｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に配合される。脂質ナノ粒子は、通常、イオン化可能なカチオン性脂質、非カチオン性脂質、ステロール、及びＰＥＧ脂質成分を目的のｍＲＮＡ（例えば、コロナウイルス抗原、例えば、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドをコードするｍＲＮＡ）と共に含む。脂質ナノ粒子は、当技術分野（例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５２３５２、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６８３００、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０３７５５１、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２７４００、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０４７４０６、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６０００１２９、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０１４２８０、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０１４２８０、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０３８４２６、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２７０７７、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５５３９４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／５２１１７、ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６９６１０、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２７４９２、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５９５７５及びＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６９４９１を参照。これらはすべて、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）で一般的に知られている成分、組成物、及び方法を使用して生成することができる。前記コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子に配合することができる。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、少なくとも１つのイオン化可能なカチオン性脂質、少なくとも１つの非カチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、及び／及び少なくとも１つのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾脂質を含む。

【0141】

コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡを配合した脂質ナノ粒子組成物の脂質組成物は、１つ及び複数のリン脂質、例えば、１つ及び複数の飽和若しくは（ポリ）不飽和リン脂質及びそれらの組み合わせを含んでもよい。一般に、リン脂質には、リン脂質部分及び１つ及び複数の脂肪酸部分が含まれる。

【0142】

リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択することができる。

【0143】

コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡを配合した脂質組成物は、１つ及び複数の構造脂質を含んでもよい。本明細書において、構造脂質という用語は、ステロールを指し、ステロール部分を含む脂質も指す。

【0144】

脂質ナノ粒子への構造脂質の組み込みは、粒子内の他の脂質の凝集を緩和するのに役立つことができる。構造脂質は、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、α－トコフェロール、ホパノイド、植物ステロール、ステロイド、及びそれらの混合物からなる群より選択され得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、前記構造脂質は、ステロールである。
-

【0145】

コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡを配合した脂質組成物は、１つ又は複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）脂質を含んでもよい。いくつかの実施形態において、前記ＰＥＧ－脂質には、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＰＥＧ－ＤＳＰＥ）、ＰＥＧ－ジステリルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＳＧ）、ＰＥＧ－ジパルメトロレイル、ＰＥＧ－ジオレイル、ＰＥＧ－ジステアリル、ＰＥＧ－ジアシルグリカミド（ＰＥＧ－ＤＡＧ）、ＰＥＧ－ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＤＰＰＥ）又はＰＥＧ－ｌ，２－ジミリスチロキシルプロピル－３－アミン（ＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡ）．が含まれるが、これらに限定されない。

【0146】

コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡは、組換えベクター内でコードされ得る。前記ベクターは、コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡの送達に使用され得る。前記ベクターは、哺乳動物、ウイルス、及び細菌の発現ベクターであってもよい。

【0147】

前記ベクターは、例えば、プラスミド、人工染色体（例えば、ＢＡＧ、ＰＡＣ又はＹＡＣ）、ウイルス及びファージベクターであってもよく、任意に、ポリヌクレオチドの発現のためのプロモーター、エンハンサー、及びレギュレーターを含んでもよい。前記ベクターは、１つ又は複数の選択マーカー遺伝子、例えば、アンピシリン、ネオマイシン及び／又はカナマイシン耐性遺伝子（細菌プラスミド及び真菌ベクターの耐性遺伝子の場合）を含んでもよい。ベクターは、例えば、ＤＮＡ及びＲＮＡの産生のためにインビトロで使用され得るか、及び例えばベクターによってコードされるタンパク質の産生のために、例えば哺乳動物宿主細胞などの宿主細胞をトランスフェクト及び形質転換するために使用され得る。ベクターは、例えば、ＤＮＡワクチン接種、ＲＮＡワクチン接種、及び遺伝子治療の方法においてインビボでの使用にも適合される。

【0148】

ウイルスゲノムは、コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡを細胞（真核細胞及び原核細胞など）のゲノムに効率的に送達するために使用できるベクターの豊富なソースを提供する。ウイルスゲノムは、そのようなゲノム内に含まれるポリヌクレオチドが通常、一般化及び特殊化された形質導入によって標的細胞のゲノムに組み込まれるため、遺伝子送達に特に有用なベクターである。これらのプロセスは、自然なウイルス複製サイクルの一部として発生し、遺伝子統合を誘導するためにタンパク質や試薬を追加する必要はない。コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡの送達に使用可能なウイルスベクターの例には、レトロウイルス、アデノウイルス（例えば、Ａｄ２、Ａｄ５、Ａｄ１１、Ａｄ１２、Ａｄ２４、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５、Ａｄ４０、Ａｄ４８、Ａｄ４９、Ａｄ５０、Ａｄ５２（例えば、ＲｈＡｄ５２）、Ａｄ５９（例えば、ＲｈＡｄ５９）及びＰａｎ９（ＡｄＣ６８としても知られている））、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、マイナス鎖ＲＮＡウイルス（例えば、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹及びセンダイ））、プラス鎖ＲＮＡウイルス（例えば、ピコルナウイルス及びアルファウイルス）、及び二本鎖ＤＮＡウイルス（例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型及び２型、エプスタイン－バーウイルス、サイトメガロウイルス）、及びポックスウイルス（例えば、ワクシニア、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、鶏痘及びカナリア痘）が含まれる。免疫原をコードするポリヌクレオチドを送達するのに有用な他のウイルス（例えば、ポリペプチド）は、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、コロナウイルス、レオウイルス、パポバウイルス、ヘパドナウイルス、肝炎ウイルスを含む。レトロウイルスの例には、トリ白血病肉腫、哺乳類のＣ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶ群、レンチウイルス、スプマウイルス（Coffin, J. M., Retroviridae:The viruses and their replication, In Fundamental Virology, Third Edition, B. N. Fields, et al., Eds., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996）。これらのアデノウイルスベクターは、例えば、ヒト、チンパンジー又はアカゲザルアデノウイルスに由来することができる。他の例には、マウス白血病ウイルス、マウス肉腫ウイルス、マウス乳腺腫瘍ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒヒ内因性ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、メイソンファイザーサルウイルス、サル免疫不全ウイルス、サル肉腫ウイルス、ラウス肉腫ウイルス及びレンチウイルスが含まれる。ベクターの他の例は、例えば、ＭｃＶｅｙ ｅｔ ａｌ．，（米国特許第５，８０１，０３０号）に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ウイルスベクターの核酸材料（例えば、核酸分子を含む）は、例えば、脂質膜に、及び１つ以上のウイルスポリペプチド（例えば、糖タンパク質）を含み得る構造タンパク質（例えば、キャプシドタンパク質）によってカプセル化され得る。ウイルスベクターは、対象の細胞を感染させるために使用することができ、これにより、ウイルスベクターの異種遺伝子の免疫原への翻訳が促進される。

【0149】

国際特許出願公開ＷＯ２００６／０４０３３０及びＷＯ２００７／１０４７９２（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているアデノウイルスベクターは、ベクターとして特に有用である。これらのアデノウイルスベクターは、１つ及び複数の免疫原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ポリペプチド）をコード及び／及び送達してウイルス感染（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染）に関連する病的状態を有する対象を治療することができる。いくつかの実施形態において、複数のタイプの免疫原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ポリペプチド）を発現させるために、１つ及び複数の組換えアデノウイルスベクターを対象に投与することができる。アデノウイルスベクターに加えて、被験体（例えば、ヒト）における１つ及び複数の免疫原の送達及び／及び発現を促進するために使用できる他のウイルスベクター及び技術が当技術分野で知られている。これらのウイルスは、ポックスウイルス（例えば、ワクシニアウイルス及び改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）；例えば、米国特許第４，６０３，１１２号及び第５，７６２，９３８号（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる））、ヘルペスウイルス、トガウイルス（例えば、ベネズエラウマ脳炎ウイルス；例えば、米国特許第５，６４３，５７６号（参照により本明細書に組み込まれる））、ピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルス；例えば、米国特許第５，６３９，６４９号（参照により本明細書に組み込まれる））、ＷａｔｔａｎａｐｉｔａｙａｋｕｌとＢａｕｅｒによって記述されたバキュロウイルスなど（Ｂｉｏｍｅｄ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．５４：４８７（２０００）（参照により本明細書に組み込まれる））を含む。

【0150】

いくつかの実施形態において、コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡは、細胞への導入を容易にするために、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクター及び／及びビリオンに組み込まれる。本明細書に記載の組成物及び方法に有用なｒＡＡＶベクターは、組換えポリヌクレオチド構築物である。前記組換えポリヌクレオチド構築物は、（１）発現される異種配列（例えば、発現されるコロナウイルス抗原をコードするポリヌクレオチド）及び（２）異種遺伝子の安定性と発現を促進するウイルス配列を含む。ウイルス配列は、ビリオンへのＤＮＡの複製及びパッケージング（例えば、機能的ＩＴＲ）のためにシスで必要とされるＡＡＶの配列を含み得る。このようなｒＡＡＶベクターはまた、マーカー及びレポーター遺伝子を含み得る。有用なｒＡＡＶベクターは、１つ及び複数のＡＡＶ ＷＴ遺伝子が全体的及び部分的に欠失しているが、機能的なフランキングＩＴＲ配列を保持している。ＡＡＶ ＩＴＲは、特定の適用に適した任意の血清型のものであり得る。ｒＡＡＶ ベクターの使用方法は、例えば、Ｔａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．７：２７９（２０００）及びＭｏｎａｈａｎ ａｎｄ Ｓａｍｕｌｓｋｉ，Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ７：２４（２０００）に記載されており、それらの開示は、遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関連するので、参照により本明細書に組み込まれる。

【0151】

コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡは、コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡの細胞への導入を容易にするために、ｒＡＡＶビリオンに組み込むことができる。ＡＡＶのキャプシドタンパク質は、ビリオンの外側の非核酸部分を構成し、ＡＡＶ ｃａｐ遺伝子によってコードされる。ｃａｐ遺伝子は、ビリオンアセンブリに必要な３つのウイルスコートタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３をコードする。ｒＡＡＶビリオンの構築は、例えば、ＵＳ５，１７３，４１４、ＵＳ５，１３９，９４１、ＵＳ５，８６３，５４１、ＵＳ５，８６９，３０５、ＵＳ６，０５７，１５２、ＵＳ６，３７６，２３７、Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６：７９１（２００２）、及びＢｏｗｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ７７：４２３（２００３）に記載されている。それらの開示は、遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関連するので、参照により本明細書に組み込まれる。

【0152】

有用なｒＡＡＶビリオンには、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０，ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、及びＡｎｃ８０などのさまざまなＡＡＶ血清型に由来するものが含まれる。異なる血清型のＡＡＶベクター及びＡＡＶタンパク質の構築と使用は、例えば、Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２：６１９（２０００）；Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：３４２８（２０００）；Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：２２２４（１９９８）；Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：１５２４（２０００）；Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：６６１５（２００１）；及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１０：３０７５（２００１）に開示されている。それらの開示は、遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関連するので、参照により本明細書に組み込まれる。

【0153】

ＡＡＶベクターは、シュードタイプのベクターであり得る。シュードタイプベクターには、所定の血清型以外の血清型（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９など）に由来するキャプシド遺伝子でシュードタイプ化された所定の血清型（例えば、ＡＡＶ９）のＡＡＶベクターが含まれる。シュードタイプ化されたｒＡＡＶビリオンの構築及び使用に関する技術は、当技術分野で知られており、例えば、Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：７６６２（２００１）；Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：１５２４（２０００）；Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２８：１５８（２００２）；及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１０：３０７５（２００１）に開示されている。

【0154】

ビリオンキャプシド内に変異を有するＡＡＶビリオンを使用して、変異していないキャプシドビリオンよりも効果的に特定の細胞型に感染させることができる。例えば、適切なＡＡＶ変異体は、特定の細胞型へのＡＡＶの標的化を促進するためのリガンド挿入変異を有し得る。挿入変異体、アラニンスクリーニング変異体、及びエピトープタグ変異体を含むＡＡＶキャプシド変異体の構築と特性評価は、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：８６３５（２０００）に開示されている。本明細書に記載の方法で使用できる他のｒＡＡＶビリオンには、ウイルスの分子育種及びエクソンシャフリングによって生成されるキャプシドハイブリッドが含まれる（例えば、Ｓｏｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．，２５：４３６（２０００）及びＫｏｌｍａｎ ａｎｄ Ｓｔｅｍｍｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：４２３（２００１）をご参照）。

【0155】

これらのウイルスを用いた遺伝子導入技術は当業者に知られている。例えば、レトロウイルスベクターを使用してポリヌクレオチドを宿主ゲノムに安定に組み込むことができるが、そのような組換えは好ましくない。対照的に、複製欠損アデノウイルスベクターはエピソームのままであるため、一過性発現が可能である。

【0156】

昆虫細胞（バキュロウイルスベクターなど）、ヒト細胞、酵母及び細菌で発現を駆動できるベクターは、例えば、サブユニットワクチンとして、及びイムノアッセイで使用するために、ｍＲＮＡによってコードされるコロナウイルス抗原を多量に産生するために使用することができる。

【0157】

アジュバント
いくつかの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、１つ又は複数のアジュバントを含んでもよい。アジュバントとは、免疫系の刺激を引き起こす物質を指す。本明細書において、アジュバントは、１つ又は複数の抗原（例えば、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列））に対する免疫応答を強化するために使用される。アジュバントは、抗原（例えば、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列））の投与前、投与時又は投与後に対象に投与され得る。いくつかの実施形態において、追加のアジュバントは、本明細書に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）と共に対象に投与される。いくつかの実施形態において、アジュバントは、脂質に結合されてもよい。前記アジュバントは、脂質（例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ））、ミョウバン（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）、フロイントアジュバント、Ｑ．サポナリアの木の樹皮から精製されたサポニン、例えば、ＱＳ２１（ＨＰＬＣ分画で２１番目のピークに溶出する糖脂質；Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，Ｍａｓｓ．）、ポリジ（カルボキシラトフェノキシ）ホスファゼン（ＰＣＰＰポリマー；米国ウイルス研究所）、Ｆｌｔ３リガンド、リーシュマニア伸長因子（精製リーシュマニアタンパク質；Ｃｏｒｉｘａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ．）、ＩＳＣＯＭＳ（混合サポニン、脂質を含み、抗原を保持できる細孔を持つウイルスサイズの粒子を形成する免疫刺激複合体；ＣＳＬ，Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＳＢ－ＡＳ４（ミョウバンとＭＰＬを含むＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍアジュバントシステム＃４；ＳＢＢ、ベルギー）、ミセルを形成する非イオン性ブロック共重合体、例えば、ＣＲＬ１００５（これらは、ポリオキシエチレンの鎖が隣接する疎水性ポリオキシプロピレンの直鎖を含む。Ｖａｘｃｅｌ，Ｉｎｃ．，Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，Ｇａ．）、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＭＳ（例えば、ＩＭＳ１３１２、水溶性免疫刺激剤と組み合わせた水性ナノ粒子、Ｓｅｐｐｉｃ）、及びＣＤＮ（環状ジヌクレオチド）であり得るが、これらに限定されない。

【0158】

アジュバントは、トール様受容体（ＴＬＲ）リガンドであってもよい。ＴＬＲ３を介して作用するアジュバントには、二本鎖ＲＮＡが含まれるがこれに限定されない。ＴＬＲ４を介して作用するアジュバントには、リポ多糖類の誘導体、例えば、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ；Ｒｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔ．）及びムラミルジペプチド（ＭＤＰ；Ｒｉｂｉ）アンドスレオニル－ムラミルジペプチド（ｔ－ＭＤＰ；Ｒｉｂｉ）、ＯＭ－１７４（脂質Ａに関連するグルコサミン二糖類；ＯＭ Ｐｈａｒｍａ ＳＡ，Ｍｅｙｒｉｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）が含まれるが、これらに限定されない。ＴＬＲ５を介して作用するアジュバントには、フラジェリンが含まれるが、これに限定されない。ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８を介して作用するアジュバントには、一本鎖 ＲＮＡ、オリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）、イミダゾキノリンアミンなどの合成低分子化合物（例えば、イミキモド（Ｒ－８３７）、レシキモド（Ｒ－８４８））が含まれるが、これらに限定されない。ＴＬＲ９を介して作用するアジュバントには、ウイルス若しくは細菌由来のＤＮＡ、及び合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、例えば、ＣｐＧ ＯＤＮが含まれるが、これらに限定されない。別のアジュバントクラスは、ホスホロチオエートヌクレオチド類似体及びホスホロチオエート主鎖結合含有核酸などの分子を含むホスホロチオエートである。

【0159】

医薬組成物及び製剤
本発明の医薬組成物は、ＣｐＧ両親媒性物質と、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）とを含む。治療量のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）に加えて、前記医薬組成物は、当業者に知られている方法によって配合可能な薬学的に許容される担体又は賦形剤を含んでもよい。他の実施形態において、本発明の医薬組成物は、１つ又は複数のコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド）をコードする（例えば、ウイルスベクターなどのベクターにおいて）核酸分子を含んでもよい。本発明のコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド）をコードする核酸分子は、遺伝子治療における周知の方法により送達され得る適切な発現ベクターにクローニングされ得る。

【0160】

ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）の医薬組成物における許容される担体及び賦形剤は、使用される投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒である。特定の実施形態において、処方材料は、皮下（ｓ．ｃ．）及び／及び静脈内（ｉ．ｖ．）投与用である。いくつかの実施形態において、投与は、吸入及び鼻腔内投与により実行される。いくつかの実施形態において、処方材料は気管内投与用である。いくつかの実施形態において、処方材料は、機械換気中の吸入による投与用である。いくつかの実施形態において、前記医薬組成物は、修飾、維持、保存するための処方材料（例えば、ｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、組成物の溶解速度及び放出速度、吸着速度、及び浸透速度）を含んでもよい。いくつかの実施形態において、適切な処方材料は、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン及びリジン）、抗菌剤、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、亜硫酸ナトリウム及び亜硫酸水素ナトリウム）、バッファー（例えば、ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ、ＴＡＥ、リン酸塩、その他の有機酸）、増量剤（例えば、マンニトール、グリシン）、キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））、錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、β－シクロデキストリン及びヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン）、フィラー、単糖類、二糖類、その他の炭水化物（例えば、グルコース、スクロースマンノース及びデキストラン）、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン、デキストラン、及び免疫グロブリン）、着色料、香料、希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）、低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン（ナトリウムなど）、防腐剤（例えば、塩化ヘキサメトニウム、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、レゾルシノール、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸及び過酸化水素）、溶剤（例えば、グリセリン、プロピレングリコール及びポリエチレングリコール）、糖アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、懸濁剤、界面活性剤及び湿潤剤（例えば、プルロニクス、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパール）、安定性向上剤（例えば、スクロース又はソルビトール）、張性増強剤（例えば、アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウム及び塩化カリウム、マンニトールソルビトール）、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤及び／又は医薬アジュバントを含むが、これらに限定されない（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９５）。いくつかの実施形態において、最適な医薬組成物は、例えば、投与経路、送達形式、及び所望の投与量に応じて、当業者によって決定される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｓｕｐｒａをご参照）。いくつかの実施形態において、このような組成物は、両親媒性複合体の物理的状態、安定性、インビボ放出速度及びインビボクリアランス速度に影響を与える可能性がある。

【0161】

いくつかの実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含む医薬組成物における主なビヒクル及び担体は、本質的に水性及び非水性のいずれかであってもよい。例えば、いくつかの実施形態において、適切なビヒクル及び担体は、注射用水、生理食塩水、及び人工脳脊髄液であり、非経口投与用の組成物に一般的な他の材料が補充されていてもよい。いくつかの実施形態において、生理食塩水には、等張リン酸緩衝生理食塩水が含まれる。特定の実施形態において、中性緩衝生理食塩水及び血清アルブミンと混合した生理食塩水は、さらなる例示的なビヒクルである。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、医薬組成物は、ソルビトール及びその適切な代替物をさらに含んでもよい約ｐＨ７．０～８．５のトリスバッファー及び約ｐＨ４．０～５．５の酢酸塩バッファーを含む。いくつかの実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質又はコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）は、所望の純度を有する選択された組成物を、凍結乾燥ケーキ及び水溶液の形態の任意の配合剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）と混合することにより、保存用に調製することができる。さらに、いくつかの実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質又はコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含む組成物は、スクロースなどの適切な賦形剤を使用して凍結乾燥物として製剤化することができる。

【0162】

いくつかの実施形態において、医薬組成物は、非経口送達用に選択することができる。このような薬学的に許容される組成物の調製は、当業者の能力の範囲内である。

【0163】

いくつかの実施形態において、処方成分は、投与部位に許容される濃度で存在する。いくつかの実施形態において、組成物を生理的ｐＨ及びわずかに低いｐＨ、典型的には約５から約８のｐＨ範囲内に維持するためにバッファーが使用される。

【0164】

いくつかの実施形態において、非経口投与が考えられる場合、治療用組成物は、薬学的に許容されるビヒクルにＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含む、発熱物質を含まない非経口的に許容される水溶液の形態であり得る。いくつかの実施形態において、非経口注射用のビヒクルは、ＣｐＧ両親媒性物質又はコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を無菌等張液として配合した滅菌蒸留水であり、適切に保存される。いくつかの実施形態において、調製は、所望の分子（例えば、デポ注射を介して送達可能な製品の制御放出及び持続放出を提供できる注射可能なミクロスフェア、生体侵食性粒子、高分子化合物（ポリ乳酸やポリグリコール酸など）、ビーズ及びリポソーム）を薬剤と共に配合することを含むことができる。いくつかの実施形態において、ヒアルロン酸も使用でき、循環の持続を促進する効果がある。いくつかの実施形態において、移植可能な薬物送達デバイスを使用して目的の分子を導入することができる。

【0165】

薬学的組成物は、免疫応答を誘導するために、治療上有効な量で投与され得る。医薬製剤に含まれるＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルスタンパク質及びペプチドの治療有効量は、投与量（例えば、体重１ｋｇ当たり０．０１から１００ｍｇの範囲内の投与量）が対象において免疫応答を誘導するように当業者によって決定することができる。

【0166】

インビボで核酸送達ビヒクルとして使用可能なベクターは、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）などのワクシニアウイルスベクター）、アデノ随伴ウイルスベクター、及びアルファウイルスベクターを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ベクターは、本発明の複数のコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）の発現を可能にする内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を含んでもよい。核酸送達のための他のビヒクル及び方法は、米国特許第５，９７２，７０７号、第５，６９７，９０１号及び第６，２６１，５５４号に開示されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。医薬組成物を製造する他の方法は、例えば、米国特許第第５，４７８，９２５号、第８，６０３，７７８号、７，６６２，３６７号及び第７，８９２，５５８号に開示されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0167】

投与経路・用法・用量
ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含む本発明の医薬組成物は、治療剤として非経口投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、吸入、気管内投与又は機械換気中の吸入による投与のための製剤化され得る。治療用タンパク質を投与する方法は、当技術分野で知られている（例えば、米国特許第６，１７４，５２９号、第６，６１３，３３２号、第８，５１８，８６９号、第７，４０２，１５５号、第６，５９１，１２９号、米国特許出願公開ＵＳ２０１４００５１６３４、ＷＯ１９９３００００７７、及びＵＳ２０１１０１８４１４５をご参照。その開示は、その全体が参照により組み込まれる）。

【0168】

これらの方法の１つ及び複数を使用して、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含む本発明の医薬組成物を投与することができる。注射可能な製剤については、様々な有効な薬学的担体が当技術分野で知られている（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，Ｂａｎｋｅｒ ａｎｄ Ｃｈａｌｍｅｒｓ，ｅｄｓ．，ｐａｇｅｓ２３８－２５０（１９８２）及びＡＳＨＰ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｎ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｄｒｕｇｓ，Ｔｏｉｓｓｅｌ，４ｔｈ ｅｄ．，ｐａｇｅｓ６２２－６３０（１９８６）をご参照）。本発明の医薬組成物の投与量は、投与経路や身体的特徴（例えば、対象の年齢、体重、一般的な健康状態）などの要因に依存する。典型的には、単回投与量に含まれる本発明のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）の量は、有意な毒性を誘導することなく対象において免疫応答を効果的に誘導する量であり得る。本発明の医薬組成物は、０．００１から５００ｍｇ（例えば、０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７、０．８、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ又は５００ｍｇ）、具体的な実施形態において約０．１から約１００ｍｇの本発明のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）の投与量を含み得る。投与量は、対象の異なるパラメータに従って臨床医によって調製することができる。

【0169】

特定の実施形態では、対象は、約１０μｇから約１．０ｍｇの投与量のコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を受ける。特に、投与されるコロナウイルス抗原の投与量は、約４０μｇから６０μｇ、約５０μｇから７０μｇ、約５０μｇから１５０μｇ、約７０μｇから１５０μｇ、約１００μｇから１５０μｇ、約１００μｇから２００μｇ、約１４０μｇから２５０μｇ、約２００μｇから３００μｇ、約２５０μｇから５００μｇ、約３００μｇから６００μｇ、又は約５００μｇから１．０ｍｇである。特に、対象に投与されるコロナウイルス抗原の投与量は、約１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０，μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ又は１ｍｇであってもよい。対象に、これらの特定の投与量のうちの任意の２つの間の範囲内の投与量のコロナウイルス抗原を投与してもよい。

【0170】

特定の実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質の投与量は、約０．１ｍｇから２０ｍｇである。特に、投与されるＣｐＧ両親媒性物質の投与量は、約０．１ｍｇから１．０ｍｇ、約０．５ｍｇから３．０ｍｇ、約１．０ｍｇから５．０ｍｇ、約２．０から５．０ｍｇ、約３．０から５．０ｍｇ、約３．０ｍｇから１０．０ｍｇ、約４．０ｍｇから１２．０ｍｇ、約５．０ｍｇから１５．０ｍｇ又は約５．０ｍｇから２０ｍｇである。対象に投与されるＣｐＧ両親媒性物質の特定の投与量は、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、２．０ｍｇ、３．０ｍｇ、４．０ｍｇ、５．０ｍｇ、６．０ｍｇ、７．０ｍｇ、８．０ｍｇ、９．０ｍｇ、１０．０ｍｇ、１１．０ｍｇ、１２．０ｍｇ、１３．０ｍｇ、１４．０ｍｇ、１５．０ｍｇ、１６．０ｍｇ、１７．０ｍｇ、１８．０ｍｇ、１９．０ｍｇ又は２０．０ｍｇであってもよい。対象は、ＣｐＧ両親媒性物質のこれらの特定の投与量のうちの任意の２つの間の範囲内の投与量を受けてもよい。

【0171】

ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含む本発明の医薬組成物は、例えば、毎日、毎週、毎月、半年、毎年、及び医学的必要に応じて１回以上（例えば、１から１０回以上）、投与を必要とする対象に投与され得る。

【0172】

いくつかの実施形態において、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドのトリマーは、対象に投与される。いくつかの実施形態において、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）をコードするｍＲＮＡは、対象に投与される。いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）及びＣｐＧ両親媒性物質は、同時及び本質的に同時に対象に投与される。ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）は、共製剤化するか、又は２つの別々の製剤として投与することができる。いくつかの実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）は、順次投与される。例えば、ＣｐＧ両親媒性物質が投与された後、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）が投与されてもよいか、或いはいくつかの実施形態において、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）が投与された後、ＣｐＧ両親媒性物質が投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）は、第２アジュバントと共に投与される。

【0173】

免疫応答を誘導する方法
本発明は、対象にＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を投与することにより対象において免疫応答を誘導する方法を提供する。対象は、哺乳類（例えば、ヒト、イヌ又はネコ）であってもよい。いくつかの実施形態において、対象は、ヒト対象であってもよい。免疫応答は、対象に治療有効量の本発明の免疫原性組成物又は医薬組成物を投与することにより対象において誘導される。免疫原性組成物又は医薬組成物は、本発明のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含む。いくつかの実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）は、１つ又は複数の追加のアジュバントと共に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）は、１つ又は複数の追加のアジュバントがないしで投与されてもよい。いくつかの実施形態において、本方法は、対象に１）治療有効量の本発明のＣｐＧ両親媒性物質、及び２）コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）は、ほぼ同時に投与される。いくつかの実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）は、別々に投与される。いくつかの実施形態において、ＣｐＧ両親媒性物質が投与された後、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドが投与される。いくつかの実施形態において、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）が投与された後、ＣｐＧ両親媒性物質が投与される。

【0174】

いくつかの実施形態において、前記免疫応答は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対して保護的である。

【0175】

いくつかの実施形態において、前記免疫応答は、Ｃｏｖｉｄ－１９疾患に対して保護的である。

【0176】

いくつかの実施形態において、前記免疫応答は、補助換気と酸素化を必要とする重度のＣｏｖｉｄ－１９疾患にたいして保護的である。これらの患者は、急性呼吸窮迫症候群に苦しんでいる。一部の患者は、深刻な心血管障害を発症する。他の合併症には、例えば、急性心損傷、急性腎損傷、敗血症性ショック、多臓器不全、及び死亡リスクの増加が含まれる。

【0177】

いくつかの実施形態において、免疫応答は、発熱、咽頭痛、鼻水、くしゃみ、鼻づまり、いびき、せき、空咳、息切れ、呼吸困難、持続的な胸の痛みや圧迫感、ディスプニア、肺炎、急性呼吸器症候群、チアノーゼ、筋肉痛、頭痛、脳症、心筋障害、心不全、不整脈、凝固障害、急性腎障害、錯乱及び覚醒不能、疲労、胃腸症状からなる群より選択される１つ及び複数のＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の発症に対して保護的である。

【0178】

いくつかの実施形態において、免疫応答は、発熱、咽頭痛、鼻水、くしゃみ、鼻づまり、いびき、せき、空咳、息切れ、呼吸困難、持続的な胸の痛みや圧迫感、ディスプニア、肺炎、急性呼吸器症候群、チアノーゼ、筋肉痛、頭痛、脳症、心筋障害、心不全、不整脈、凝固障害、急性腎障害、錯乱及び覚醒不能、疲労、胃腸症状からなる群より選択される１つ及び複数のＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の発生率を低下させる。

【0179】

いくつかの実施形態において、免疫応答は、発熱、咽頭痛、鼻水、くしゃみ、鼻づまり、いびき、せき、空咳、息切れ、呼吸困難、持続的な胸の痛みや圧迫感、ディスプニア、肺炎、急性呼吸器症候群、チアノーゼ、筋肉痛、頭痛、脳症、心筋障害、心不全、不整脈、凝固障害、急性腎障害、錯乱及び覚醒不能、疲労、胃腸症状からなる群より選択される１つ又は複数のＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状に対して治療的である。免疫応答は、ＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の進行及び重症度を逆転、緩和、改善、阻害、遅延及び停止する場合、治療的である。

【0180】

いくつかの実施形態において、免疫応答は、ＣＯＶＩＤ－１９の再発及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の再感染の可能性を低減する。

【0181】

いくつかの実施形態において、免疫応答は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の伝染の可能性を低減する。

【0182】

いくつかの実施形態において、前記対象は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の無症候性キャリアである。

【0183】

いくつかの実施形態において、前記対象は、発熱、咽頭痛、鼻水、くしゃみ、鼻づまり、いびき、せき、空咳、息切れ、呼吸困難、持続的な胸の痛みや圧迫感、ディスプニア、肺炎、急性呼吸器症候群、チアノーゼ、筋肉痛、頭痛、脳症、心筋障害、心不全、不整脈、凝固障害、急性腎障害、錯乱及び覚醒不能、疲労、胃腸症状からなる群より選択されるＣＯＶＩＤ－１９の１つ又は複数の症状を有する。

【0184】

いくつかの実施形態において、対象は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症と診断されている。

【0185】

いくつかの実施形態において、対象は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のリスクが高い（例えば、医療関係者及び／及び初期対応者）。

【0186】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫原性組成物及び薬学的組成物は、コロナウイルス感染症（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９）と診断された人と接触した対象、或いはＣＯＶＩＤ－１９若しくは他のコロナウイルス感染症のアウトブレイクを経験している地域に最近旅行した及び旅行を計画している対象に投与される。

【0187】

いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質又はそのペプチドは、不活化及び死滅ウイルスワクチンの調製物に含まれる。

【0188】

いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質又はその断片は、サブユニット型である。

【0189】

いくつかの実施形態において、コロナウイルススパイクタンパク質をコードする核酸は、スパイクタンパク質の融合前安定化型をコードする。

【0190】

いくつかの実施形態において、コロナウイルススパイクタンパク質及びそのペプチドをコードする核酸は、アデノウイルスベクター内に含まれる。

【0191】

併用療法
本発明は、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原を１つ又は複数の追加の治療薬と共に対象に投与することを含む対象において免疫応答を誘導する方法をさらに提供する。併用レジメンで使用できる治療薬の特定の組み合わせは、所望の治療薬及び／及び処置の適合性、ならびに達成される所望の治療効果を考慮に入れる。採用される治療法が、同じ障害に対して所望の効果を達成し得ること、及び異なる効果（例えば、１つ以上の副作用の制御）を達成し得ることも理解され得る。ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原は、抗ウイルス剤（例えば、レムデシビル）、抗ウイルスワクチン（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するワクチンなどのコロナウイルスワクチン）、抗生剤、抗真菌剤、抗炎症剤、抗寄生虫剤及び免疫療法剤と組み合わせて投与され得る。

【0192】

いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤は、レムデシビル、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、バリシチニブ、ロピナビル/リトナビル、インターフェロンベータ、ウミフェノビル、ファビピラビル、トシリズマブ、リバビリン及びその他の薬剤であってもよい。いくつかの実施形態において、前記抗ウイルス剤は、レムデシビルである。

【0193】

いくつかの実施形態において、前記抗ウイルスワクチンは、対象においてコロナウイルスに対する免疫応答を誘導する任意の組成物を含み、例えば、ＨＣｏＶ－ＮＬ３ワクチン、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１ワクチン、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン又はＭＥＲＳワクチンが挙げられる。いくつかの実施形態において、前記抗ウイルスワクチンは、不活化及び死滅したウイルス（例えば、ＨＣｏＶ－ＮＬ３ウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１ウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス、又はＭＥＲＳウイルス）を含む。いくつかの実施形態において、前記抗ウイルスワクチンは、異種プライム若しくはブーストとして、及び本明細書に記載のＣｐＧ両親媒性物質を含む免疫原性組成物と組み合わせて投与される。

【0194】

いくつかの実施形態において、前記抗生剤は、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、スペクチノマイシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、リファキシミン、ロラカルベフ、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、メロペネム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファレキシン、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル、セフトビプロール、テイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ダプトマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン、スピラマイシン、アズトレオナム、フラゾリドン、ニトロフラントイン、リネゾリド、ポジゾリド、ラデゾリド、トレゾリド、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンｇ、ペニシリンｖ、ピペラシリン、テモシリン、チカルシリン、クラブラン酸アモキシシリン、アンピシリン／スルバクタム、ピペラシリン／タゾバクタム、チカルシリン／クラブラン酸塩、バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンｂ、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、マフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリム－スルファメトキサゾール（ｔｍｐ－ｓｍｘ）、スルホンアミドクリソイジン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、クロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、サイクロセリン、エタンブトール（ｂｓ）、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピシン、リファブチン、リファペンチン、ストレプトマイシン、アルスフェナミン、クロラムフェニコール、ホスホマイシン、フシジン酸、メトロニダゾール、ムピロシン、プラテンシマイシン、キヌプリスチン／ダルフォプリスチン、チアンフェニコール、チゲサイクリン、チニダゾール、トリメトプリムから選択され得る。

【0195】

いくつかの実施形態において、前記抗真菌剤は、アンホテリシンＢ、カンジシジン、フィリピン、ハマイシン、ナタマイシン、ナイスタチン、リモシジン、ビフォナゾール、ブトコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、フェンチコナゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ルリコナゾール、ミコナゾール、オモコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール、トリアゾール、アルバコナゾール、エフィナコナゾール、エポキシコナゾール、フルコナゾール、イサブコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、プロピコナゾール、ラブコナゾール、テルコナゾール、ボリコナゾール、チアゾール、アバファンギン、アモロルフィン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン、アニデュラファンギン、カスポファンギン、ミカファンギン、シクロピロックス、フルシトシン、グリセオフルビン、トルナフテート、ウンデシレン酸から選択され得る。いくつかの実施形態において、抗寄生虫剤は、クロロキン及びヒドロキシクロロキンであってもよい。

【0196】

いくつかの実施形態において、抗炎症剤はデキサメタゾンであってもよい。いくつかの実施形態において、抗炎症剤は、セレコキシブ、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、メトホルミン、デキサメタゾンから選択され得る。

【0197】

いくつかの実施形態において、前記免疫療法剤は、ターグレチン、インターフェロンα、インターフェロンβ、クロベタゾール、ペグインターフェロン（例えば、ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））、プレドニゾン、ロミデプシン、ベキサロテン、メトトレキサート、トリアムシノロンクリーム、抗ケモカイン、ボリノスタット、ガバペンチン、リンパ細胞表面受容体に対する抗体及び／又はリンホカイン、表面がんタンパク質に対する抗体、及び／又はボリノスタットのような小分子療法剤から選択され得る。いくつかの実施形態において、前記免疫療法剤は、インターフェロンベータ、トシリズマブ又はバリシチニブである。いくつかの実施形態において、前記免疫療法剤は、抗体を含み得る。いくつかの実施形態において、前記免疫療法剤は、回復期血漿（例えば、ヒト回復期血漿）であってもよい。

【0198】

ＣｐＧ両親媒性物質、コロナウイルス抗原、及び１つ及び複数の追加の治療剤は、順次（例えば、１日間隔、２日間隔、３日間隔、１週間間隔、１か月間隔、６か月間隔、及びそれ以上）及び実質的に同時に（たとえば、１日以内に）投与され得る。ＣｐＧ両親媒性物質、コロナウイルス抗原、及び１つ及び複数の追加の治療剤は、単一の薬学的組成物に製剤化されてもよいし、別個の薬学的組成物として投与されてもよい。ＣｐＧ両親媒性物質、コロナウイルス抗原、及び１つ及び複数の追加の治療剤は、同じ投与経路及び異なる投与経路で投与され得る。２つ以上の薬剤は、同じ頻度及び異なる頻度で投与され得る。

【0199】

追加の治療剤は、経口、局所的、静脈内、筋肉内、経皮、皮内、動脈内、頭蓋内、皮下、眼窩内、脳室内、脊髄内、腹腔内、鼻腔内、気管内又は機械換気中の吸入で投与され得る。特定の実施形態では、追加の治療剤は静脈内投与されるか、及び追加の治療剤はその規制承認された形態で投与され得る。追加の治療剤及びその薬学的に許容される塩は、１つ及び複数の薬学的に許容される担体、賦形剤、及び希釈剤を含む薬学的組成物において投与することができる。適切な担体、賦形剤、及び希釈剤の例には、例えば、生理食塩水、滅菌水、ポリアルキレングリコール、植物由来の油、水素化ナフタレン、適切なバッファー、１，３－ブタンジオール、リンゲル液及び／又は塩化ナトリウム溶液が含まれる。非経口投与のための例示的な製剤には、界面活性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）と適切に混合された水中で調製された溶液が含まれ得る。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、ＤＭＳＯ、及びアルコールを含む及び含まないそれらの混合物、及び油中で調製することもできる。通常の保管及び使用条件下では、これらの製剤は微生物の増殖を防ぐ防腐剤を含んでもよい。他の例示的な適切な担体、賦形剤、及び希釈剤は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２００９）に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。追加の治療剤は、本発明の方法において有用な薬学的組成物で投与できるとともに、錠剤、ゲルキャップ、カプセル、丸薬、粉末、顆粒、懸濁液、エマルジョン、滅菌溶液若しくは懸濁液、及び／又は徐放性製剤の形態であってもよい。

【0200】

キット
キットは、本明細書に記載のＣｐＧ両親媒性物質、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）、及び使用説明書が含み得る。キットは、１つ又は複数の適切な容器、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）、１つ又は複数の対照、並びにさまざまなバッファー、試薬、酵素及び当技術分野でよく知られているその他の標準成分を含んでもよい。いくつかの実施形態において、キットは、アジュバントをさらに含む。

【0201】

容器は、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を入れることができる、１つ及び複数のバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ボトル、注射器、及び他の容器手段を含んでもよく、場合によっては、適切に分注する。追加の成分が提供される場合、キットは、この化合物を入れることができる追加の容器を含むことができる。キットはまた、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含有するための手段、ならびに商業販売のために密閉された他の試薬容器を含んでもよい。このような容器には、所望のバイアルが保持される射出成形及びブロー成形のプラスチック容器が含まれ得る。容器及び／及びキットには、使用説明書及び／及び警告を記載したラベルが含まれてもよい。

【0202】

いくつかの実施形態において、本開示は、ＣｐＧ両親媒性物質を含む組成物、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含む組成物、任意の薬学的に許容される担体、免疫応答を誘導するための組成物の投与説明書を含む添付文書を含む１つ又は複数の容器を含むキットを提供する。いくつかの実施形態において、前記キットは、追加のアジュバントをさらに含む。アジュバントの投与に関する指示をさらに含む。

【0203】

いくつかの実施形態において、本開示は、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を含む組成物と、任意の薬学的に許容される担体とを含む医薬品、並びに免疫応答を誘導するために前記医薬品を単独で及び追加のアジュバント及び任意の薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせて投与するための説明書を含む添付文書を含むキットを提供する。

【0204】

いくつかの実施形態において、本開示は、ＣｐＧ両親媒性物質を含む組成物、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）、任意の薬学的に許容される担体、及び対象において免疫応答を誘導するための組成物ワクチンの投与のための説明書を含む添付文書を含む容器を含むキットを提供する。いくつかの実施形態において、前記キットは、追加のアジュバントと、対象において免疫応答を誘導するためのアジュバントの投与に関する説明書とをさらに含む。

【0205】

本明細書に記載の組成物に加えて、前記キットは、他の成分又は材料（例えば、溶媒及びバッファーの容器、安定剤、防腐剤、矯味剤（例えば、苦味拮抗薬及び甘味料）、香料、キット内の１つ及び複数の成分に着色するための染料及び着色剤）を含んでもよい。前記キットは、本明細書に記載の病状及び障害（例えば、コロナウイルス感染）を治療するための第２薬剤も含んでもよい。あるいは、キットに他の成分を含んでもよいが、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）の組成物とは異なる組成物及び容器に含まれる。このような実施形態において、キットは、本明細書に記載の化合物と他の成分を混合するため、及び本明細書に記載の化合物（例えば、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列））を他の成分と一緒に使用するための説明書を含むことができる。

【0206】

本明細書に記載の組成物は、任意の形態、例えば、液体、乾燥及び凍結乾燥形態で提供することができる。本明細書に記載の化合物は、実質的に純粋及び／及び無菌であることが好ましい。本明細書に記載の化合物が液体溶液で提供される場合、液体溶液は好ましくは水溶液であり、より好ましくは滅菌水溶液である。本明細書に記載の化合物が乾燥形態として提供される場合、一般的に、適切な溶媒の添加により再構成する。溶媒、例えば滅菌水及びバッファーは、任意でキットに提供することができる。

【0207】

キットの容器は、気密性、防水性（例えば、水分及び蒸発の変化に対して不透過性）、及び／及び遮光性であり得る。

【0208】

キットは任意に、組成物の送達に適した装置、例えば注射器を含む。

【0209】

番号付きの実施形態
本明細書に記載の技術のいくつかの実施形態は、以下の番号付きの実施形態のいずれかに従って定義することができる。本明細書に記載の方法で使用される構成要素を含む組成物及びキットも含まれる。

【0210】

１、対象においてコロナウイルス抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、
前記方法は、前記対象に（１）ＣｐＧ両親媒性物質、及び（２）コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列を投与するステップを含む、方法。

【0211】

２、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列は、対象への投与のために製剤化される対象においてコロナウイルス抗原に対する免疫応答を誘導するためのＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0212】

３、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、又は前記コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチドをコードする核酸配列である、実施形態１に記載の方法。

【0213】

４、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、脂質に結合したＣｐＧ配列を含む、実施形態１又は３に記載の方法。

【0214】

５、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、リンカーを介して脂質に結合したＣｐＧ配列を含む、実施形態１又は３に記載の方法。

【0215】

６、前記リンカーは、ポリマー、アミノ酸鎖、核酸鎖、多糖又はそれらの組み合わせを含む、実施形態５に記載の方法。

【0216】

７、前記リンカーは、核酸鎖を含む、実施形態６に記載の方法。

【0217】

８、前記核酸鎖は、１から５０個の核酸残基を含む、実施形態７に記載の方法。

【0218】

９、前記核酸鎖は、５から３０個の核酸残基を含む、実施形態８に記載の方法。

【0219】

１０、前記核酸鎖は、「Ｎ」個のグアニンを含み、前記Ｎは、１から１０である、実施形態５から９のいずれか１つに記載の方法。

【0220】

１１、前記リンカーは、連続したポリエチレングリコールユニットを含む、実施形態６に記載の方法。

【0221】

１２、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、２０から８０である、実施形態１１に記載の方法。

【0222】

１３、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、３０から７０である、実施形態１２に記載の方法。

【0223】

14、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、４０から６０である、実施形態１３に記載の方法。

【0224】

１５、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、４５から５５である、実施形態１４に記載の方法。

【0225】

１６、前記リンカーは、４８個の連続したポリエチレングリコールユニットを含む、実施形態１５に記載の方法。

【0226】

１７、前記脂質は、ジアシル脂質である、実施形態１及び３から１６のいずれか１つに記載の方法。

【0227】

１８、前記ジアシル脂質は、

【化3】

の構造又はその塩を有し、
式中、Ｘは、Ｏ又はＳである、実施形態１７に記載の方法。

【0228】

１９、前記ＣｐＧ配列は、ヌクレオチド配列：５'－ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ－３'（配列番号１）を含む、実施形態１及び３から１８のいずれか１つに記載の方法。

【0229】

２０、前記ＣｐＧ配列は、ヌクレオチド配列：５'－ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ－３'（配列番号２）を含む、実施形態１及び３から１８のいずれか１つに記載の方法。

【0230】

２１、前記ＣｐＧ配列におけるヌクレオシドを結合するヌクレオシド間基は、全てホスホロチオエートである、実施形態１９又は２０に記載の方法。

【0231】

２２、前記コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質又はそのペプチドである、実施形態１及び３から２１のいずれか１つに記載の方法。

【0232】

２３、前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）に特異的に結合する受容体結合ドメインである、実施形態１及び３から２２のいずれか１つに記載の方法。

【0233】

２４、前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、
ＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳ（配列番号３）
と少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチド配列を含む、実施形態１及び３から２３のいずれか１つに記載の方法。

【0234】

２５、前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、
ＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳ（配列番号３）
のポリペプチド配列を含む、実施形態２４に記載の方法。

【0235】

２６、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドである、実施形態１及び４から２２のいずれか１つに記載の方法。

【0236】

２７、前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質抗原は、
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡ（配列番号６８）
と少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチド配列を含む、実施形態２６に記載の方法。

【0237】

２８、前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質抗原は、
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号６３）
のポリペプチド配列を含む、実施形態２６に記載の方法。

【0238】

２９、前記コロナウイルス抗原は、１つ又は複数のタグを含む、実施形態１及び３から２８のいずれか１つに記載の方法。

【0239】

３０、前記タグは、Ａｖｉタグである、実施形態２９に記載の方法。

【0240】

３１、前記タグは、ヒスチジンタグである、実施形態２９に記載の方法。

【0241】

３２、前記コロナウイルス抗原は、Ａｖｉタグ及びヒスチジンタグを含む、実施形態２９から３１のいずれか１つに記載の方法。

【0242】

３３、前記コロナウイルス抗原は、前記ポリペプチド配列と、１つ又は複数の前記タグとの間にリンカーを含む、実施形態２９から３２のいずれか１つに記載の方法。

【0243】

３４、前記コロナウイルススパイクタンパク質は、投与される、実施形態１、３から２５、及び２９から３２のいずれか１つに記載の方法。

【0244】

３５、前記ロナウイルススパイクタンパク質のトリマーは、投与される、実施形態３４に記載の方法。

【0245】

３６、前記トリマーは、配列：
ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）
を含むタンパク質構築物のトリマーである、実施形態３５に記載の方法。

【0246】

３７、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチド、及びコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドが投与される、実施形態１及び３から３６のいずれか１つに記載の方法。

【0247】

３８、ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）
の配列を含むコロナウイルススパイクタンパク質構築物のトリマー、及び
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号６３）
のポリペプチド配列を有するコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質構築物は、投与される、実施形態３７に記載の方法。

【0248】

３９、前記コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡは、投与される、実施形態１、３から２６、２９から３２及び３７のいずれか１つに記載の方法。

【0249】

４０、前記ＣｐＧ両親媒性物質、及び前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列は、同時に投与される、実施形態１及び３から３９のいずれか１つに記載の方法。

【0250】

４１、前記ＣｐＧ両親媒性物質、及び前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列は、順次投与される、実施形態１及び３から３９のいずれか１つに記載の方法。

【0251】

４２、前記ＣｐＧ両親媒性物質が投与された後、前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列が投与される、実施形態４１に記載の方法。

【0252】

４３、前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列が投与された後、前記ＣｐＧ両親媒性物質が投与される、実施形態４１に記載の方法。

【0253】

４４、前記方法は、対象に第２アジュバントを投与するステップを含む、実施形態１及び３から４３のいずれか１つに記載の方法。

【0254】

４５、前記方法は、前記対象にコロナウイルスワクチンをプライム又はブーストとして投与するステップを含む、実施形態１及び３から４４のいずれか１つに記載の方法。

【0255】

４６、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、皮下、鼻腔内、気管内、又は機械換気中の吸入により投与される、実施形態１及び３から４５のいずれか１つに記載の方法。

【0256】

４７、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、皮下投与される、実施形態４６に記載の方法。

【0257】

４８、前記コロナウイルス抗原は、皮下、鼻腔内、気管内、又は機械換気中の吸入により投与される、実施形態１及び３から４７のいずれか１つに記載の方法。

【0258】

４９、前記対象は、哺乳類である、実施形態１及び３から４８のいずれか１つに記載の方法。

【0259】

５０、前記対象は、ヒトである、実施形態４９に記載の方法。

【0260】

５１、ＣｐＧ両親媒性物質、コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【0261】

５２、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドである、実施形態５１に記載の医薬組成物。

【0262】

５３、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドである、実施形態５１に記載の医薬組成物。

【0263】

５４、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチド及びコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドを含む、実施形態５１に記載の医薬組成物。

【0264】

５５、ＣｐＧ両親媒性物質、及びコロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列を含む、キット。

【0265】

５６、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドである、実施形態５５に記載のキット。

【0266】

５７、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドである、実施形態５５に記載のキット。

【0267】

５８、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチド及びコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドを含む、実施形態５５に記載のキット。

【0268】

５９、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、又は前記コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチドをコードする核酸配列である、実施形態２に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0269】

６０、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、脂質に結合したＣｐＧ配列を含む、実施形態２又は５９に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0270】

６１、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、リンカーを介して脂質に結合したＣｐＧ配列を含む、実施形態２又は５９に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0271】

６２、前記リンカーは、ポリマー、アミノ酸鎖、核酸鎖、多糖又はそれらの組み合わせを含む、実施形態６１に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0272】

６３、前記リンカーは、核酸鎖を含む、実施形態６２に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0273】

６４、前記核酸鎖は、１から５０個の核酸残基を含む、実施形態６３に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0274】

６５、前記核酸鎖は、５から３０個の核酸残基を含む、実施形態６４に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0275】

６６、前記核酸鎖は、「Ｎ」個のグアニンを含み、前記Ｎは、１から１０である、実施形態６１から６５のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0276】

６７、前記リンカーは、連続したポリエチレングリコールユニットを含む、実施形態６３に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0277】

６８、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、２０から８０である、実施形態６７に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0278】

６９、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、３０から７０である、実施形態６８に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0279】

７０、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、４０から６０である、実施形態６９に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0280】

７１、前記リンカーは、「Ｎ」個の連続したポリエチレングリコールユニットを含み、前記Ｎは、４５から５５である、実施形態７０に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0281】

７２、前記リンカーは、４８個の連続したポリエチレングリコールユニットを含む、実施形態７１に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0282】

７３、前記脂質は、ジアシル脂質である、実施形態2、５９－７２のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0283】

７４、前記ジアシル脂質は、

【化4】

の構造又はその塩を有し、
式中、Ｘは、Ｏ又はＳである、実施形態７３に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0284】

７５、前記ＣｐＧ配列は、ヌクレオチド配列：５'－ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ－３'（配列番号１）を含む、実施形態2、５９から７４のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0285】

７６、前記ＣｐＧ配列は、ヌクレオチド配列：５'－ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ－３'（配列番号２）を含む、実施形態2、５９から７５のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0286】

７７、前記ＣｐＧ配列におけるヌクレオシドを結合するヌクレオシド間基は、全てホスホロチオエートである、実施形態７５又は７６に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0287】

７８、前記コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ スパイクタンパク質又はそのペプチドである、実施形態2、５９から７７のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0288】

７９、前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）に特異的に結合する受容体結合ドメインである、実施形態2、５９から７８のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0289】

８０、前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、
ＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳ（配列番号３）
と少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチド配列を含む、実施形態２、５９から７９のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0290】

８１、前記コロナウイルススパイクタンパク質のペプチドは、
ＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳ（配列番号３）
のポリペプチド配列を含む、実施形態８０に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0291】

８２、前記コロナウイルス抗原は、コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドである、実施形態２、６１から７９のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0292】

８３、前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質抗原は、
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡ（配列番号６８）
と少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチド配列を含む、実施形態８２に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0293】

８４、前記コロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質抗原は、
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号６３）
のポリペプチド配列を含む、実施形態８２に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0294】

８５、前記コロナウイルス抗原は、１つ又は複数のタグを含む、実施形態２、５９から８３のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0295】

８６、前記タグは、Ａｖｉタグである、実施形態８５に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0296】

８７、前記タグは、ヒスチジンタグである、実施形態８５に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0297】

８８、前記コロナウイルス抗原は、Ａｖｉタグ及びヒスチジンタグを含む、実施形態８５又は８６に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0298】

８９、前記コロナウイルス抗原は、前記ポリペプチド配列と、１つ又は複数の前記タグとの間にリンカーを含む、実施形態８５から８８のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0299】

９０、前記コロナウイルススパイクタンパク質は、投与される、実施形態２、５９－８９のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0300】

９１、前記コロナウイルススパイクタンパク質のトリマーは、投与される、実施形態９０に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0301】

９２、前記トリマーは、
ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）
の配列を含むタンパク質構築物のトリマーである、実施形態９１に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0302】

９３、コロナウイルススパイクタンパク質又はそのペプチド、及びコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質又はそのペプチドは、投与される、実施形態２、５９から９２のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0303】

９４、ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）
の配列を含むコロナウイルススパイクタンパク質構築物のトリマー、及び
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号６３）
のポリペプチド配列を有するコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質構築物は、投与される実施形態９３に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0304】

９５、前記コロナウイルス抗原をコードするｍＲＮＡは、投与される、実施形態２、５９から９４のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0305】

９６、前記ＣｐＧ両親媒性物質、及び前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列は、同時に投与される、実施形態２、５９から９５のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0306】

９７、前記ＣｐＧ両親媒性物質、及び前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列は、順次投与される、実施形態２及び５９から９６のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0307】

９８、前記ＣｐＧ両親媒性物質が投与された後、前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列が投与される、実施形態９７に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0308】

９９、前記コロナウイルス抗原又は前記コロナウイルス抗原をコードする核酸配列が投与された後、前記ＣｐＧ両親媒性物質が投与される、実施形態９７に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0309】

１００、第２アジュバントは、対象に投与される、実施形態２、５９から９９のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0310】

１０１、コロナウイルスワクチンは、プライム又はブーストとして対象に投与される、実施形態２、５９から１００のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0311】

１０２、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、皮下、鼻腔内、気管内、又は機械換気中の吸入により投与される、実施形態２、５９－１０１のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0312】

１０３、前記ＣｐＧ両親媒性物質は、皮下投与される、実施形態１０２に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0313】

１０４、前記コロナウイルス抗原は、皮下、鼻腔内、気管内、又は機械換気中の吸入により投与される、実施形態２、５９から１０３のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0314】

１０５、前記対象は、哺乳類である、実施形態２、５９－１０４のいずれか１つに記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0315】

１０６、前記対象は、ヒトである、実施形態１０５に記載のＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原又はコロナウイルス抗原をコードする核酸配列。

【0316】

実施例
以下の実施例は、本開示を限定するのではなく説明することを意図しており、当業者に、本明細書に記載の組成物及び方法がどのように使用、製造、及び評価され得るかについての説明を提供するために提示される。実施例は、単なる本開示の例示であることを意図しており、発明者が発明とみなすものの範囲を限定することを意図していない。

【0317】

実施例１：マウスにおける免疫応答の誘導

【0318】

ＣｐＧ両親媒性物質をカブトガニアメボサイトライセート（ＬＡＬ）Ｈ２Ｏに再懸濁することによって遊離ＣｐＧ（ＣｐＧ１８２６）、ＣｐＧ両親媒性物質（ａＣｐＧ１８２６）のストック溶液を調製した。最終注射液は、ＣｐＧの最終濃度が１ｎｍｏｌ／１００μＬ注射となるように、１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２スパイクＳ１ ＲＢＤタンパク質（配列番号：３）（表１）のストック溶液を１．２ｍｇ／ｍｌの濃度でＰＢＳに溶解した。最終注射液は、１×ＰＢＳで１０μｇ／１００μＬ注射液に希釈した。

【0319】

ＰＢＳに懸濁した５０μＬの抗原と５０μＬのＩＦＡの１：１混合物を使用してＩＦＡ（フロイント不完全アジュバント）溶液を調製した後、３０秒間激しくピペットで上下させた。

【0320】

ＰＢＳに懸濁した抗原１０μｇとミョウバン１００μｇ（１０μＬに相当）の１：９混合物を使用してＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ ２％（１０ｍｇ／ｍｌ）溶液を調製した。この溶液に、ＰＢＳで１００μＬとなるように抗原を添加した。５分間激しくピペッティングして溶液を混合した。

【0321】

雌Ｃ５７Ｂｌ６マウスに対して尾の付け根の両側にそれぞれ５０μＬ皮下（ＳＣ）投与して免疫化した。ブースター投与は、約２週間間隔で実行された。

【0322】

ＳＣ注射により、ワクチンが自然なリンパドレナージを介してリンパ節に最適に送達されることが保証された。以前のマウス研究では、隔週の注射が免疫応答の生成に最適であると確定された。

【0323】

表１：ワクチン成分

【表1】

【0324】

投与の７日後に末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に対してＴＮＦα及びＩＦＮγについての細胞内染色（ＩＣＳ）アッセイを行った。細胞は、ＣＤ４及びＣＤ８、場合によってはＣＤ３について表面染色された。ＩＣＳ＃１については１回目の投与後、ＩＣＳ＃２については２回目の投与後、ＰＢＭＣを１μｇ／ウェルのペプチドで５時間（ブレフェルジンＡの存在下で４時間）活性化した（表２）。Ｄｂ／Ｋｂに対して計算された親和性を有するペプチドでＣ５７Ｂｌ６細胞を再刺激した。Ｄｄ／Ｋｄに対して計算された親和性を有するペプチドでＢａｌｂ／ｃ細胞を再刺激した。

【0325】

表２：再刺激ペプチド

【0326】

投与の７日後に、脾細胞に対してサイトメトリービーズアレイ（ＣＢＡ）によりＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＩＬ１７、ＴＮＦα及びＩＦＮγを分析した。ＣＢＡ＃１の場合、１回目の投与後、ＰＢＭＣを５μｇ／ウェルのペプチドで一晩活性化した（表２）。ＣＢＡ＃２の場合、２回目の投与後、ＰＢＭＣを０．４２μｇ／ウェルのＰｅｐＭｉｘ^ＴＭＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質（３１５個のペプチド、それぞれ０．４２μｇ／ウェル）で一晩活性化した（表３）。ＣＢＡ＃３の場合、３回目の投与後、ＰＢＭＣを１μｇ／ウェルのＰｅｐＭｉｘ^ＴＭＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質（３１５個のペプチド、１μｇ／ウェル）で一晩活性化した（表３）。

【0327】

表３：再刺激ＰｅｐＭｉｘ

【表3】

【0328】

ＲＢＤ 特異的抗体応答を検出するために、各投与の７日後にマウス血清でＳＡＲＳ－ＣｏＶ２特異的血清抗体酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を実施した。全血は、Ｓｅｒ－ｇｅｌチューブ（ＮＣ９４３６３６３、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してスピンダウンした。血清は新鮮な状態で使用するか、又は使用するまで－８０℃で保存した。９６ウェルプレートに２００ｎｇ／１００μｌ（２μｇ／ｍｌ）のＣｏＶ２ ＲＢＤタンパク質（Ｚ０３４８３、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を４℃一晩コーティングした。次いで、プレートをＰＢＳ＋２％ＢＳＡで室温で２時間プレブロッキングした。マウス血清を１：１０に希釈し、ダミープレートで段階希釈（１：４→８濃度）した。サンプルをＥＬＩＳＡプレートに移し、室温で２時間インキュベートした。陽性対照として２つの抗体（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（ＣＡＢＴ－ＣＳ０３５；クローン２１１１８４）：マウスαＲＢＤ Ｍａｂ及びＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ（ＭＢＳ４３４２４７）：マウスαＲＢＤ Ｍａｂ）を使用した。プレートを洗浄バッファー（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ４２１１６０１）で４回洗浄した。二次検出Ａｂｓとして、以下をＰＢＳ＋において１：２０００で使用し、室温で１時間インキュベートした（ＲＴ）。最初の実験では、ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｒａｂｂｉｔ Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ＋ＩｇＭ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰ（３１５－０３５－０４８，Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を使用し、その後の実験では、ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｒａｂｂｉｔ Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＭ（μ鎖）ＨＲＰ（３１５－０３５－０４９，Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｒａｂｂｉｔ Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ（Ｆｃγ）ＨＲＰ（３１５－０３５－０４６，Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を使用しました。プレートを洗浄バッファーで４回洗浄した。基質３，３'，５，５'－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を室温で１０分間添加することにより反応を可視化し、Ｈ_２ＳＯ_４（１Ｎ）により停止させた。４５０ｎｍでの吸光度をＥＬＩＳＡプレートリーダーで測定した。

【0329】

抗ＨｉｓタグＥＬＩＳＡアッセイを実施して、ＲＢＤ－Ｈｉｓタンパク質構築物によるワクチン接種時に生成された免疫応答の一部が、スパイクＲＢＤ自体ではなくＨｉｓタグに対して向けられているかどうかを決定した。プレートにＨｉｓタグ（ＰＤＬ１－Ｈｉｓ）付きの無関係なタンパク質をコーティングした。血清を未希釈の濃度でのみ試験した。二次抗体では、Ｒａｂｂｉｔ Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ（Ｆｃγ）ＨＲＰ（３１５－０３５－０４６）を使用した。陽性対照として、ＴＨＥ Ｈｉｓ Ｔａｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ［ＨＲＰ］（Ａ００６１２、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を使用した。そうでなければ、ＥＬＩＳＡは上記のように行った。

【0330】

ＧｅｎＳｃｒｉｐｔのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２サロゲートウイルス中和試験キット（カタログ番号Ｌ００８４７）を使用して中和抗体アッセイを実施した。ＨＲＰ希釈バッファーにおいて１０００のＲＢＤ１を結合することによって西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）－ＲＢＤ調製した。プレート全体の調製には、５９９４μｌのバッファー＋６μｌのＨＲＰ結合ＲＢＤを使用した。５５μｌの希釈したＨＲＰ－ＲＢＤを「血清インキュベーションプレート」と呼ばれる新しいプレートに移した。段階希釈されたサンプル血清を「段階希釈プレート」と呼ばれる別のＶ底プレートに入れた。最初の行には、２０μｌの原液血清を加えた。原液の血清８μｌを２４μｌのＰＢＳを含む次のウェルに移した（１：４段階希釈）。希釈サンプル血清（陽性及び陰性対照と同様）をサンプル希釈バッファーで１：１０で希釈した。これは、「最終血清希釈プレート」と呼ばれる新しいプレートに５４μｌのバッファーを加え、このプレートに段階希釈した血清６μｌを移すことによって行われた。５５μＬの最終希釈血清（及び対照）を５５μｌのＨＲＰ結合ＲＢＤが含まれる血清インキュベーションプレートに移した結果、ＲＢＤと血清が１：１で混合され、その後１：４段階希釈を行って、１：２０の最終希釈となった。

【0331】

血清インキュベーションプレートを３７℃で３０分間インキュベートした。培養した血清とＲＢＤの混合液１００μＬを、ＡＣＥ２プレコートアッセイプレートに移した。プレートを付属のシーラーで覆い、３７℃で１５分間インキュベートした。次いで、プレートを、脱イオン水で希釈した２０×洗浄バッファーからなる２００μｌの１×洗浄溶液で４回洗浄した。１００μｌのＴＭＢ溶液を各ウェルに加え、室温で１０分間インキュベートした。５０μｌの停止液を各ウェルに加えて反応をクエンチした。吸光度を４５０ｎｍで直ちに読み取った。

【0332】

４回目の投与の９日後に脾細胞に対してＩＦＮγのＥＬＩスポット分析を実施した。脾細胞（０．５ｘ１０^６細胞／ウェル）を５μｇ／ウェルのペプチド（表２及び表４）及び０．８４μｇ／ウェルのＰｅｐＭｉｘ（表３）で活性化した。ＩＦＮγプレートを一晩刺激した。

【0333】

表４：再刺激ペプチド（第２バッチ）

【表4】

【0334】

ＧｅｎＳｃｒｉｐｔの手順とプロトコル（ＳＣ１９９３－８）に従って偽ウイルス中和アッセイを行った。４回投与後血清の６０個のマウスサンプルを全て２２個のヒトサンプルとともにドライアイス上でＧｅｎＳｃｒｉｐｔに送った。

【0335】

免疫応答を誘導するために、Ｃ５７Ｂｌ６又はＢａｌｂ／Ｃマウスに１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質ペプチド（配列番号３）及び８μｇ当量の可溶性ＣｐＧ又はＣｐＧ両親媒性物質を含むワクチンに製剤化された医薬組成物を投与した。前記マウスには、０日目に１回目投与し、１４日目に２回目投与した。２１日目に、血清ＥＬＩＳＡアッセイにより血清ＩｇＧ／ＩｇＭ抗体の量を測定した（図１Ａ～図１Ｃ及び図６Ａ～図６Ｃ）。ＣｐＧ両親媒性物質とコロナウイルススパイクタンパク質ペプチドの別の投与は、２８日目に行われた。可溶性ＣｐＧ及びＣｐＧ両親媒性物質を投与したマウスのＩｇＧ／ＩｇＭ抗体の量を、対照と比較して血清ＥＬＩＳＡアッセイにより３５日後に測定した（図２Ａ～図２Ｃ及び図７Ａ～図７Ｃ）。また、３５日後、３回投与後、末梢血単核細胞サイトカインアッセイを行ってＣ５７Ｂｌ６マウス（図３Ａ及び図３Ｂ）及びＢａｌｂ／Ｃマウス（図８Ａ及び図８Ｂ）のコロナウイルススパイクタンパク質とＡＣＥ２受容体との間の相互作用をブロックする中和抗体の存在量を、ＣＯＶＩＤ－１９に感染した患者からのヒト回復期血清中の中和抗体の濃度 （図３Ｃ及び図３Ｄならびに図８Ｃ及び図８Ｄ）と比較して同定した。さらに、３５日目に、Ｃ５７Ｂｌ６マウス（図４Ａ～図４Ｃ）及びＢａｌｂ／Ｃマウス（図９Ａ～図９Ｃ）のＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ６について多機能性サイトカイン分泌Ｔ細胞応答を測定した。また、３５日目に、Ｃ５７Ｂｌ６及びＢａｌｂ／Ｃマウスに対してコロナウイルススパイクタンパク質及びＣｐＧを３回投与した後に存在するＩＦＮｇの量を評価した（図５Ａ及び図５Ｂ）。２１日後及び２回投与後に存在するＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ－６、ＩＬ－２及びＩＬ－４の濃度を図１０に示す。ＥＬＩＳｐｏｔアッセイは、図１１に示されるように、ＣｐＧ両親媒性物質を投与されたものにおいて最大量である脾細胞ＩＦＮγの量を評価するために、４回投与された後に、Ｃ５７Ｂｌ６及びＢａｌｂ／Ｃマウスで実施された。Ｔｈ１及びＴｈ２応答の量を理解するために、３回投与されたＣ５７Ｂｌ６マウスのＩｇＧ１（図１２Ａ）、ＩｇＧ２ｂｃ（図１２Ｂ）、ＩｇＧ３（図１２Ｃ）の量、及びＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１比（図１２Ｄ）を分析した。図１２ＤのＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１比は、ＣｐＧ両親媒性物質を投与されたマウスについて、免疫応答がＴｈ２ではなくＴｈ１に強く寄ることを示しており、有利である。これは、Ｔｈ２応答がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に有害な場合があるためである。

【0336】

ＣｐＧ両親媒性物質と他のアジュバントとを比較するために、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質及び８μｇのＣｐＧ両親媒性物質、可溶性ＣｐＧ、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ、ＩＦＡ、及びＭｏｃｋ Ｔｘのいずれかを２回（図１３Ａから図１３Ｄ）及び３回（図１４Ａから図１４Ｄ）投与されたマウスが産生するＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－２、及びＩＬ－６の量を、陽性及び陰性対照と比較して測定した。結果は、ＣｐＧ両親媒性物質が他の試験アジュバントと比較して優れた免疫応答をもたらすことを示した（図１５）。

【0337】

さらに、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（メイン州バーハーバー）から購入した６～８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ及びＢＡＬＢ／ｃマウスに、１ｎｍｏｌのＣｐＧ（可溶性ＣｐＧ）、１ｎｍｏｌの脂質結合ＣｐＧ（ＡＭＰ－ＣｐＧ）若しくは１００μｇのリン酸緩衝生理食塩水を混合したミョウバン（ＰＢＳ）のみ（アジュバント対照）、又は１－１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｃａｔ：４０５９２－Ｖ０８Ｈ又はＧｅｎＳｃｒｉｐｔ，Ｃａｔ：Ｚ０３４８３）を注射した。「モック」群にＰＢＳのみを投与した。実験の０、１４、及び２８日目に尾の付け根に注射（１００μＬ）液を皮下投与（５０μＬ両側）した。７、２１、及び３５日目に血液サンプルを採取した。３５日目にマウスを安楽死させ、肺を採取し、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）を収集した。マウスのセット（図１６Ａから図１６Ｄ）のみに４２日目に４回目投与し、４９日目にサンプルを採取した。

【0338】

ＡＣＥ２－ＨＥＫ２９３組換え細胞株（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃａｔ：７９９５１）又は対照ＨＥＫ２９３細胞株（ＡＴＣＣ）、及びルシフェラーゼレポーター遺伝子とＳＡＲＳ－ＣｏＶ２スパイクエンベロープ糖タンパク質を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ２スパイク偽型レンチウイルス（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃａｔ：７９９４２）を用いて偽ウイルス中和アッセイを実行することでＡＣＥ２発現細胞を特異的に形質導入した。９６ウェル白色透明底発光プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃａｔ：３６１０）のＴｈａｗ Ｍｅｄｉｕｍ１（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｃａｔ：６０１８７）においてマウス及びヒト血清を希釈した後、１０μＬのウイルスと共にＲＴで３０分間プレインキュベートした。次に、ＡＣＥ２－ＨＥＫ２９３又は対照ＨＥＫ２９３細胞（４０μＬ）（１０，０００個の細胞を含む）をウェルに加え、３７℃で４８ｈインキュベートした。対照ウェルには、ＡＣＥ２－ＨＥＫ２９３細胞又は対照ＨＥＫ２９３及びウイルスがあるが、血清がなく、それぞれ、最大形質導入レベルとバックグラウンドを提供した。調製したばかりの ＯＮＥ－Ｓｔｅｐルシフェラーゼ試薬（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：６０６９０）７０μＬを室温で１５分間添加してルシフェラーゼ活性を検出し、Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１ Ｈｙｂｒｉｄリーダー（ＢｉｏＴｅｋ）で発行を測定した。実験用の偽ウイルス中和データは、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（南京、中国）によって同じプロトコルに従って実行されましたが、社内のＡＣＥ２－ＨＥＫ２９３細胞とスパイクＲＢＤ－ＨＲＰ組換えタンパク質を使用した。１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又はＡＭＰ－ＣｐＧと共に４回投与されたＣ５７ＢＩ／６Ｊマウス（図１６Ａ）及びＢＡＬＢ／ｃマウス（図１６Ｃ）に対して、５０％阻害希釈倍率（ｐＶＮＴ_５０）での偽ウイルス中和力価を、ＲＬＵがウイルス対照ウェルのＲＬＵと比較して５０％減少した血清希釈率として計算した（回復期血清と比較）。回復期血清サンプル（ｎ＝７）及び血漿サンプル（ｎ＝１５）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染（ＣＯＶＩＤ－１９）から回復した患者から入手し、それぞれＵＳ Ｂｉｏｌａｂ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）及びＡＬＬＣＥＬＬＳ（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）から入手した。

【0339】

さらに、Ｃ５７ＢＩ／６Ｊマウス（図１６Ｃ）又はＢＡＬＢ／ｃマウス（図１６Ｄ）によって産生されたＩＦＮγの量は、１０％ＦＢＳ及びペニシリン、ストレプトマイシン、非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、β－メルカプトエタノールを添加したＲＰＭＩ １６４０培地（完全培地）で個別にマウス脾臓を収集し、その後、単一細胞懸濁液に処理し、７０μｍのナイロンフィルターを通過させることにより分析された。細胞ペレットを氷で３ｍＬのＡＣＫ溶解バッファー（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ：１１８１５６１０１）に５分間再懸濁した後、ＰＢＳを加えて反応を停止した。サンプルを４００×ｇで、４℃で５分間遠心分離し、細胞ペレットを完全培地に再懸濁した。Ｍｏｕｓｅ ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ Ｓｅｔ（ＢＤ、Ｃａｔ：ＢＤ５５１０８３）を用いてＥＬＩＳｐｏｔアッセイを行った。４℃で捕捉抗体で一晩プレコートした９６ウェルＥＬＩＳｐｏｔプレートを完全培地中で室温で２時間ブロッキングした。５００，０００個のマウス脾細胞を各ウェルに播種し、スパイク由来の重複ペプチドのウェルあたり１μｇ／ペプチドで一晩刺激した。スポットは、製造元の指示に基づいて作成された。ＰＭＡ（５０ｎｇ／ｍＬ）とイオノマイシン（１μＭ）を陽性対照として、完全培地のみを陰性対照として使用した。スポットをスキャンし、ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ ＣＴＬリーダーで定量化しました。ＡＭＰ－ＣｐＧ を含む免疫を受けたＣ５７ＢＬ／６Ｊ及びＢＡＬＢ／Ｃマウスでの初期評価では、ヒト回復期血清（回復したＣＯＶＩＤ－１９患者から取得；図１６Ａ及び図１６Ｃ）に存在する天然の抗体応答よりも１０倍から３０倍高い偽ウイルス中和力価が得られた。これは、ＡＭＰ－ＣｐＧ が自然免疫よりも強力な中和抗体応答を生成する可能性を示している。比較した結果、未修飾（可溶性）ＣｐＧを含む投与量一致レジメンで免疫化された動物は、ヒトの回復期患者で観察されたものに匹敵する中和力価を示した。脾細胞ＥＬＩＳｐｏｔアッセイの結果として、可溶性ＣｐＧと比較して、ＡＭＰ－ＣｐＧと混合したコロナウイルススパイクタンパク質で免疫化されたマウスは、約４倍高い頻度で抗原特異的機能性Ｔ細胞を誘導し、コロナウイルススパイクタンパク質由来の重複ペプチドで再刺激するとＩＦＮγを産生した（図１６Ｂ及び図１６Ｄ）。

【0340】

同様に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスからの脾細胞及び末梢血中のサイトカイン産生細胞を決定した。１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ（図１７Ａ）と共に３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０／群）からの１×１０^６個の脾細胞（重複コロナウイルススパイクペプチドで再刺激された）あたりのＩＦＮγスポット形成細胞の数を分析した。コロナウイルススパイクタンパク質とＡＭＰ－ＣｐＧとの組み合わせで免疫化されたマウスは、コロナウイルススパイクタンパク質と可溶性ＣｐＧ、ミョウバン又はＭｏｃｋ（ＰＢＳ）との組み合わせを投与されたマウスよりも、実質的に高いＩＦＮγスポット形成細胞を有した。

【0341】

実施例２：マウスにおける体液性免疫応答の誘導

【0342】

１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと組み合わせて３回投与されたＣ５７Ｂ１／６Ｊマウスに対してマウスにおいて誘導された体液性免疫応答を測定した。体液性応答は、回復期血清（図２０Ａ）、ＩｇＭ（図２０Ｂ）、ＩｇＧ（図２０Ｃ）、ＩｇＧ１（図２０Ｄ）、ＩｇＧ２ｂｃ（図２０Ｅ）、ＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１９比（図２０Ｆ）、及びＩｇＧ３（図２０Ｇ）と比較して中和力価の観点から偽ウイルス中和アッセイ又はＥＬＩＳＡアッセイにより評価された。

【0343】

コロナウイルススパイクタンパク質に対する中和抗体応答は、ＥＬＩＳＡベースのサロゲートアッセイにおけるコロナウイルススパイクタンパク質とＡＣＥ２の相互作用の阻害によって測定された。免疫化されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスのコホートについて３５日目に採取した血清の結果を図２０Ａに示す。同等レベルの中和活性が、ＡＭＰ－ＣｐＧ、可溶性ＣｐＧ、及びミョウバンで免疫化された動物で誘導された。回復期ヒトコホートから得られたサンプルとの比較は、ワクチンによって誘導された反応が、自然感染に対する反応によって発生した反応よりも顕著に高いことを示した。

【0344】

最初の免疫化の７日後、モック免疫化を受けた対照を除くすべてのコホートは、強力なコロナウイルススパイクタンパク質特異的ＩｇＭ応答を示し（図２０Ｂ）、その後の追加免疫後に、アイソタイプ切り替えにより同様の力価を有するＩｇＧ応答を生成した（図２０Ｃ）。

【0345】

免疫化によって誘導されたコロナウイルススパイクタンパク質特異的ＩｇＧ応答におけるＴｈ１／Ｔｈ２バイアスを評価するために、存在するＩｇＧサブクラスを評価した結果、ＡＭＰ－ＣｐＧ及び可溶性ＣｐＧで免疫化されたマウスは、ミョウバンで免疫化されたマウスよりも顕著に低いＴｈ２関連ＩｇＧ１力価（約１０倍）を有することを示した（図２０Ｄ）。Ｔｈ１関連ＩｇＧ２ｂｃの場合は、逆であった。具体的には、ＡＭＰ－ＣｐＧ及び可溶性ＣｐＧで免疫化されたマウスでは、力価は顕著に高かった（約５０倍）（図２０Ｅ）。ＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１力価の比率は、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物のＴｈ１への強い偏りを示し、一方、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンは、バランスの取れたＴｈ１／Ｔｈ２プロファイル及びＴｈ２優性応答をそれぞれ生成した（図２０Ｆ）。さらなる分析により、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物は、可溶性ＣｐＧ（約３倍）及びミョウバン（＞８００倍）処理群と比較してＩｇＧ３力価が顕著に高いことが示されており、これは、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫に起因する観察されたＴｈ１バイアスと一致する（図２０Ｇ）。

【0346】

さらに、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）のみを１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバン及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）と組み合わせて３回投与されたＣ５７Ｂ１／６Ｊマウスに対して、体液性応答について回復期血清（図２２Ａ）、ＩｇＭ（図２２Ｂ）、ＩｇＧ（図２２Ｃ）、ＩｇＧ１（図２２Ｄ）、ＩｇＧ２ｂｃ（図２２Ｅ）、ＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１９の比（図２２Ｆ）、及びＩｇＧ３（図２２Ｇ）と比較して偽ウイルス中和アッセイ又はＥＬＩＳＡアッセイにより血清中で中和力価を評価した。反復投与免疫化後の３５日目に、各特定のコロナウイルススパイクタンパク質投与量レベルでのＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物間のコロナウイルス特異的抗体応答の誘導を評価し、１０μｇ投与量の可溶性ＣｐＧ及びミョウバンのいずれかによる免疫化によって生成された応答と比較した。実施例１に記載のように、５０％阻害希釈倍率（ｐＶＮＴ_５０）での偽ウイルス中和力価の測定により中和活性を評価した。ＡＭＰ－ＣｐＧ、可溶性ＣｐＧ、及びミョウバン免疫マウスについて、回復期ヒトサンプルで観察されたものよりも２６５、２３０、及び９４倍高いレベルで、すべての治療群で同様のレベルの偽ウイルス中和力価が観察された（図２２Ａ）。これらのレベルは、より低いコロナウイルススパイクタンパク質用量レベルでＡＭＰ－ＣｐＧで免疫化された動物において維持され、平均ｐＶＮＴ_５０は、回復中のＣＯＶＩＤ－１９患者で測定されたものよりも少なくとも１１５倍高かった（図２２Ｂ）。

【0347】

総ＩｇＧ力価は、ＡＭＰ－ＣｐＧを投与された群間で同様であり、これらは、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンアジュバントワクチンを投与された群間で測定された力価と比較して約２倍減少した（図２２Ｃ）。アイソタイプ分析は、１０μｇ投与量レベルでの比較で最初に観察されたものと同様の傾向を示した（図２２Ｃ）。ミョウバン及び可溶性ＣｐＧ免疫は、ＡＭＰ－ＣｐＧと混合したすべてのコロナウイルススパイクタンパク質投与量レベルと比較して、顕著に高いＴｈ２関連ＩｇＧ１力価（約１００倍）をもたらした（図２２Ｄ）。Ｔｈ１関連ＩｇＧ２ｂｃレベルは、可溶性ＣｐＧ及びミョウバン免疫化群と比較して、すべてのＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物で約２０倍上昇し、コロナウイルススパイクタンパク質の投与量レベルを下げても有意差は観察されなかった。これらの傾向は、ＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１力価比の比較においてさらに明白であり（図２２Ｆ）、ＡＭＰ－ＣｐＧ含有レジメンは、可溶性ＣｐＧ（ＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１が約２）及びミョウバン（ＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１＜１）でそれぞれワクチン接種された動物における、よりバランスのとれたＴｈ２歪んだ応答と比較して高度にＴｈ１優位なアイソタイププロファイルを誘導した（ＩｇＧ２ｂｃ：ＩｇＧ１＞１０）。最後に、ＡＭＰ ＣｐＧで免疫化された動物のみがコロナウイルススパイクタンパク質特異的ＩｇＧ３力価の証拠を示し、すべてのコロナウイルススパイクタンパク質用量レベルで同等のレベルが検出された（バックグラウンドの約５００倍）。さらなる分析により、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物は、可溶性ＣｐＧ（約４０倍）及びミョウバン（＞２０倍）処理群よりも顕著に高いＩｇＧ３力価を生成し、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化に起因する観察されたＴｈ１バイアスと一致することが示された（図２２Ｇ）。これらのデータから分かるように、ＡＭＰ－ＣｐＧは、コロナウイルススパイクタンパク質に対する中和、高力価及び最適なＴｈ１プロファイル抗体応答を誘導するためのコロナウイルススパイクタンパク質抗原の投与量を少なくとも１０倍節約することができる。可溶性ＣｐＧとミョウバンはわずかに高い総ＩｇＧ応答を誘導したが、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化と比較して中和活性に有意差をもたらさなかった。ミョウバン及び可溶性ＣｐＧ（程度が比較的低い）応答は、Ｔｈ２関連ＩｇＧ１アイソタイプによって支配されており、ＳＡＲＳ及びＭＥＲＳワクチン開発における以前の結果に基づいて、ヒト翻訳における毒性のリスクの可能性を高めている。

【0348】

実施例３：マウスにおける細胞性免疫応答の誘導

【0349】

細胞内サイトカイン染色実験により、コロナウイルススパイクタンパク質をアジュバント（ミョウバン、可溶性ＣｐＧ及びＡＭＰ－ＣｐＧを含む）と組み合わせ投与されたマウスにおける細胞性免疫応答を評価した。各ブースター投与の７日後に採取された末梢血細胞及び最終ブースター投与後に収集された肺常在性白血球は、実施例１に記載のように、ブレフェルジンＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｔ：００－４５０６－１５）及びモネンシン（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ：４２０７０１）の存在下、３７℃、５％ＣＯ_２で、１ウェルあたり１μｇの重複コロナウイルススパイクペプチドで一晩刺激した。細胞をＰＥ抗マウスＩＦＮγ（ＢＤ，Ｃａｔ：５５４４１２）、ＦＩＴＣ抗マウスＴＮＦα（ＢＤ，Ｃａｔ：５５４４１８）、ＡＰＣ－Ｃｙ^ＴＭ７抗マウスＣＤ３（ＢＤ，Ｃａｔ：５６０５９０）、ＰＥ－Ｃｙ７抗マウスＣＤ４^＋（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｔ：２５－００４１－８２）及びＡＰＣ抗マウスＣＤ８ａ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃａｔ：１７－００８１－８３）で染色した。ＰＭＡ（５０ｎｇ／ｍＬ）とイオノマイシン（１μＭ）を陽性対照として、完全培地のみを陰性対照として使用した。細胞を透過処理し、固定した（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｔ：００－５５２３－００）。ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ ｆｉｘａｂｌｅ（ａｑｕａ）死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｔ：Ｌ３４９６６）を用いてフローサイトメトリー中の細胞の生存率を評価した。ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤ）でサンプル取得を行い、ＦｌｏｗＪｏ Ｖ１０ソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）でデータを解析した。

【0350】

１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと組み合わせて３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに対して、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１７Ｂ）及びＣＤ４^＋Ｔ細胞（図１７Ｃ）におけるＩＦＮγ及びＴＮＦα（二重陽性Ｔ細胞）の両方、ＴＮＦαのみ、及びＩＦＮγのみの頻度を末梢血細胞中で分析した。ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化マウスの末梢血由来のＣＤ８^＋Ｔ細胞の約４３％は、サイトカイン（ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及び二重陽性Ｔ細胞）産生性であったのに対し、可溶性ＣｐＧ免疫化マウス及びミョウバン免疫化マウスに由来のＣＤ８^＋Ｔ細胞の約１３％及び＜２％は、それぞれサイトカイン産生性であった（図１７Ｂ）。百分率が比較的小さかったが、ＣＤ４＋Ｔ細胞においても同様の傾向が観察された。具体的には、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化マウスの末梢血中の約１．５％のＴ細胞がサイトカイン産生性であったのに対し、ＣｐＧ免疫化マウスでは１％未満、ミョウバン免疫化マウス及びモック免疫化マウスでは０．５％未満であった（図１７Ｃ）。

【0351】

同様に、予防接種がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２曝露の可能性が高い部位で組織常駐在性Ｔ細胞応答を誘導できるかどうかを判断するために、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと組み合わせて３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて重複コロナウイルススパイクペプチドで再刺激されたＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１８Ａ）又はＣＤ４^＋Ｔ細胞（図１８Ｂ）灌流肺組織で発見されたＩＦＮγ及びＴＮＦα、ＴＮＦαのみ、ＩＦＮγのみの頻度を分析した。肺組織のＴ細胞は、末梢血で観察されるよりもサイトカイン産生細胞の割合が高かった。ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化マウスを観察した結果、灌流肺組織からのＣＤ８^＋Ｔ細胞の約７３％がサイトカイン産生性であり、約４０％がＴｈ１サイトカインＩＦＮγとＴＮＦαの両方の多機能性分泌を示した。比較すると、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンによる免疫化は、それぞれ＞５倍及び＞２５倍低い応答を誘導した。ＣＤ４^＋Ｔ細胞を同様に評価した結果、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物のみがバックグラウンドを超える応答を生成し、約６％のＣＤ４＋Ｔ 細胞がＩＦＮγ及び／及びＴＮＦαを産生し、これらの細胞の大部分は、抗原再刺激時にＩＦＮγとＴＮＦαの両方を産生することができ、強力な多機能性エフェクター機能をさらに示した。これらの結果は、ＡＭＰ－ＣｐＧのより強力なリンパ節作用が、潜在的に有益な組織ホーミング特性を備えた抗原特異的Ｔ細胞の増強された拡大を誘導し、最初のウイルス曝露の主要部位に保護組織常在性細胞を確立することをサポートしている。

【0352】

誘導されたＴ細胞応答のＴｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７プロファイルをより包括的に理解するために、多重サイトカインアッセイを使用して、コロナウイルススパイク重複ペプチドによる再刺激後の灌流肺から収集された細胞の上清からのさまざまなサイトカイン濃度を評価した。具体的には、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと組み合わせて３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに対して、サイトメトリービーズアレイフローサイトメトリーによりＩＦＮγ（図１８Ｃ）、ＴＦＮα、ＩＬ－６、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、及びＩＬ１７（図１８Ｄ）を含むサイトカイン産生を決定した。肺常在性白血球（最後のブースター投与後に収集）を、ウェル（３１５個のペプチドで構成され、ペプチドスキャンに由来し、１１個のアミノ酸重複を有する１５ｍｅｒが得られる）あたり１μｇ／ペプチドの重複コロナウイルススパイクペプチドで一晩活性化した（ＪＰＴ，Ｃａｔ：ＰＭ－ＷＣＰＶ－５又はＧｅｎＳｃｒｉｐｔ，Ｃａｔ：ＲＰ３００２０）。ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ、５０ｎｇ／ｍＬ）とイオノマイシン（１μＭ）を陽性対照として使用し、完全培地のみを陰性対照として使用した。培養上清を収集し、Ｔｈ１／Ｔｈ２サイトカイン産生を測定した（ＣＢＡ Ｍｏｕｓｅ Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｋｉｔ：ＢＤ，Ｃａｔ：ＢＤＢ５６０４８５）。簡単に言えば、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、及びＩＬ－１７を含むさまざまなサイトカインに特異的な捕捉抗体でコーティングされた、異なる蛍光強度を有するビーズ集団を培養上清とともにインキュベートした。サンプル中の異なるサイトカインは、対応するビーズによって捕捉された。次に、サイトカイン捕捉ビーズをフィコエリトリン（ＰＥ）結合検出抗体と混合しました。インキュベーション後、サンプルを洗浄し、ビーズ上のＰＥの蛍光強度をフローサイトメトリー（ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ）により測定して分析した。ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ）を使用して平均蛍光強度（ＭＦＩ）を計算し、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌを使用してタンパク質濃度を推定した。ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化マウスは、フローサイトメトリーによる以前の評価と一致するＴｈ１エフェクター プロファイルを示し、ＩＦＮγ及びＴＮＦα濃度が可溶性ＣｐＧやミョウバン及びモックなどの他のアジュバントで免疫化されたコホートよりも顕著に高かった。ＩＦＮγ濃度は、他のアジュバント及びモックで観察されたものよりも少なくとも２００倍高く、ＴＮＦα濃度は、他のアジュバント及びモックよりも少なくとも７倍高かった（図１８Ｃ）。一般的なＴｈ２及びＴｈ１７関連サイトカインＩＬ４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、及びＩＬ－１７の濃度は、すべてのコホートで検出できなかった（図１８Ｄ）。これらの結果は、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンのいずれかと比較して、ＡＭＰ ＣｐＧによる免疫化によって誘導されたＴ細胞の効力及びＴｈ１バイアスが大幅に増強されたことをさらに示している。

【0353】

免疫によって誘導された肺常在性Ｔ細胞応答が肺分泌物に局在するかどうかをさらに評価するために、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を１００μｇのミョウバン、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと組み合わせて３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスから気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）を収集した。ＣＤ８^＋（図１９Ａ）及びＣＤ４^＋（図１９Ｄ）Ｔ細胞数、ナイーブＣＤ８^＋（図１９Ｂ）及びナイーブＣＤ４^＋（図１９Ｅ）Ｔ細胞の割合、並びにエフェクターメモリーＣＤ８^＋（図１９Ｃ）及びＣＤ４^＋（図１９Ｆ）Ｔ細胞の割合を決定した。ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化マウスのＢＡＬ液において、他の処理群よりも顕著に多くのＣＤ８^＋Ｔ細胞が発見された（図１９Ａ）。さらに、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物から収集されたＢＡＬで検出された細胞の有意に低い割合は、ナイーブ表現型（ＣＤ４４^－，ＣＤ６２Ｌ^＋；図１９Ｂ）を示し、エフェクターメモリー表現型（Ｔ_ＥＭ；ＣＤ４４^＋，ＣＤ６２Ｌ－；図１９Ｃ）の頻度の対応する増加を示した。ＣＤ４^＋Ｔ細胞数はモック治療と比較して増加し、すべての処理群でほぼ同じであったが（図１９Ｄ）、ＡＭＰ－ＣｐＧコホートは、ＢＡＬ常在性ＣＤ４＋Ｔ細胞がナイーブ表現型からＴＥＭ表現型に分化した割合が他の処理群よりも顕著に高い証拠を示した（図９Ｆ）。ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物に存在するＢＡＬ常在性Ｔ細胞の数と表現型の改善は、ウイルス曝露の時点での早期の免疫学的検出と制御の可能性が高いことを示している。

【0354】

脾臓、末梢血、及び肺組織における３５日目のＴ細胞応答を評価した。その結果、ＡＭＰ－ＣｐＧで免疫化されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスから採取した脾細胞中のＩＦＮγ産生細胞数は、抗原濃度とともに増加する傾向が見られた。しかし、ＡＭＰ－ＣｐＧと混合した最小の抗原量でも、ＩＦＮγ産生細胞の数は、可溶性ＣｐＧ（約４倍）及びミョウバン（＞３０倍）のいずれかと共に最高の抗原用量（１０μｇ）を受けたコホートで観察されたよりも有意に高かった（図２１Ａ）。さらに、（左から右へ）１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバン及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスから採取された末梢血細胞に見出されたＣＤ８^＋Ｔ細胞（図２１Ｂ）及びＣＤ４^＋Ｔ細胞（図２１Ｃ）のＩＦＮγ及びＴＮＦα、ＴＮＦαのみ、ＩＦＮγのみを含むサイトカインの頻度を決定した。同様に、（左から右へ）１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバン及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を３回投与されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスから採取された重複コロナウイルススパイクペプチドで再刺激された灌流肺組織細胞に見出されたＣＤ８^＋Ｔ細胞（図２１Ｄ）及びＣＤ４^＋Ｔ細胞（図２１Ｅ）のＩＦＮγ及びＴＮＦα、ＴＮＦαのみ、ＩＦＮγのみの頻度を決定した。末梢血（図２１Ｂ及び図２１Ｃ）及び肺組織（図２１Ｄ及び図２１Ｅ）の両方において、ＡＭＰ－ＣｐＧ処理マウスでは、サイトカインを産生するＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合は、試験した他のアジュバントと比較してあらゆる濃度の抗原でも顕著に高かった。特に、１０、５、及び１μｇの投与量レベルで抗原と混合したＡＭＰ－ＣｐＧで免疫化された動物の末梢血では、サイトカイン産生ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞の頻度の顕著な減少は観察されなかった。これらはＣＤ８^＋の約４０－５０％及びＣＤ４^＋Ｔ細胞の２－４％で維持された。ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物では、肺常在性サイトカイン産生ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度に減少傾向が観察されたが、１μｇの投与量レベルであっても、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンで免疫化された動物よりもそれぞれ３倍及び１８倍高い頻度が得られた。これは、ＡＭＰ－ＣｐＧがコロナウイルススパイクタンパク質の投与量を少なくとも１０倍節約できること実証している。

【0355】

ＡＭＰ－ＣｐＧ－７９０９による２回のワクチン接種は、血液と肺において強力なスパイクＲＢＤ特異的細胞性免疫、及び血液において体液性免疫を誘発する。０日目と１４日目にＣ５７Ｂｌ／６マウス（ｎ＝５／群）を１．０、２．５、及び５．０ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧと混合した０．５、１．０、及び５．０ｕｇのスパイクＲＢＤタンパク質で免疫化し、２１日目にＴ細胞とＩｇＧ応答を分析した。末梢血細胞（図２６Ａ及び図２６Ｂ）又は灌流肺から収集された細胞（図２６Ｃ及び図２６Ｄ）を重複スパイクＲＢＤペプチドで再刺激し、細胞内サイトカイン産生をフローサイトメトリーによりアッセイして抗原特異的Ｔ細胞応答を検出した。ＣＤ８^＋（図２６Ａ及び図２６Ｃ）及びＣＤ４^＋（図２６Ｂ及び図２６Ｄ）Ｔ細胞中のＩＦＮγ、ＴＮＦα、及び二重陽性Ｔ細胞の頻度が示されている。免疫動物からの血清においてＥＬＩＳＡによりスパイクＲＢＤに特異的な体液性応答を評価した。３５日目のＩｇＧのエンドポイント力価が示されている（図２６Ｅ；ｎ＝５マウス／群）。示される値は、平均±標準偏差である。

【0356】

これらの結果は、ＡＭＰ－ＣｐＧを用いた２回投与レジメンが、血液及び肺において強力な多機能性ＣＤ８及びＣＤ４Ｔ細胞応答を誘導することを示している。

【0357】

実施例4：老齢マウスにおける免疫応答の誘導

【0358】

２１及び３５日目に、１００μｇのミョウバンのみ、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧのみ、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧのみ、１００μｇのミョウバン及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌの可溶性ＣｐＧ及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）、１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）又は１ｎｍｏｌのＡＭＰ－ＣｐＧ及び１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質（配列番号３）を３回投与された３７週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ老齢マウスにおけるＴ細胞応答を評価した。スパイク由来の重複ペプチド再刺激後の末梢血中のサイトカイン産生ＣＤ８^＋Ｔ細胞の２１日目の評価は、ＡＭＰ－ＣｐＧが強力な応答（ＣＤ８^＋Ｔ細胞の約１５％）を誘導し、可溶性ＣｐＧ（ＣＤ８^＋Ｔ細胞の約２．５％）及びミョウバン（ＣＤ８＋Ｔ細胞の＜０．５％）を大きく上回った（図２３Ａ）ことを示している。これらの応答は、若い健康なマウスで観察された応答と比較して約２倍減少したが、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンのコンパレータによって生成された応答をそれぞれ７倍及び３０倍超えた。ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化は、１０μｇ及び５μｇのコロナウイルススパイクタンパク質投与量で同等の反応をさらに可能にし、１μｇでの応答は減少したが、これらは依然としてミョウバンで観察された応答を上回り（２０倍）、１０μｇの投与量レベルでの可溶性ＣｐＧによる免疫化により生成されたものと同様であった（図２３Ｂ）。

【0359】

老齢マウスの肺組織におけるＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞の３５日目の分析では、同様の傾向が示され、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物はサイトカイン産生ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞を高頻度で産生した。具体的には、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化は、肺常在性ＣＤ８＋Ｔ細胞の約６０％においてＴｈ１サイトカイン産生を誘導し、可溶性ＣｐＧ及びミョウバン免疫よりも約７倍及び＞１２０倍高かった（図２３Ｃ）。以前の研究で観察されたように、誘導されたＴ細胞は非常に多機能であり、誘導された細胞の半分以上がＩＦＮγとＴＮＦαを同時に産生した。末梢血での応答とは異なり、肺常在性サイトカインを産生するＣＤ８^＋Ｔ細胞の頻度は、若い健康な動物の反応と比較して、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化後の老齢マウスでは低下せず、５μｇ及び１μｇのコロナウイルススパイクタンパク質投与群と統計的に匹敵するレベルに維持された（図２３Ｄ）。肺常在性ＣＤ４^＋Ｔ細胞応答は、可溶性ＣｐＧ（ＣＤ４＋Ｔ細胞の約０．６％）及びミョウバン（ＣＤ４＋Ｔ細胞の＜０．５％）と比較してＴｈ１サイトカイン産生細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞の約１０％）のより高い頻度を誘導するＡＭＰ－ＣｐＧと同様のパターンを示した（図２３Ｅ）。また、これらの応答レベルは、若い健康なマウスで観察されたものと同等であり、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化が若いマウスと老齢マウスにおいて同等の肺常在性Ｔ細胞応答を引き起こすことができることを示している。最後に、肺常在性ＣＤ４^＋Ｔ細胞応答は、試験されたすべてのコロナウイルススパイクタンパク質投与量レベルで同等のレベルに維持され、最小濃度のコロナウイルススパイクタンパク質（１μｇ）でのＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化は、１０倍高い抗原投与量（１０μｇ）での可溶性ＣｐＧ及びミョウバンの両方を上回った（図２３Ｆ）。

【0360】

コロナウイルススパイクタンパク質特異的抗体応答は、老齢マウスにおけるコンパレータワクチンによる反復投与免疫後３５日目に評価された。偽ウイルス中和は、１０μｇの抗原投与量レベルでのＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化が、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンコンパレーターで観察されたものよりも少なくとも５倍、ヒト回復期血清／血漿で観察されたものよりも＞５０倍高い増強された中和力価を誘導したことを示している（図２４Ａ）。ＡＭＰ－ＣｐＧではコロナウイルススパイクタンパク質の投与量を減らすと、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンに匹敵する低い中和力価が得られた（図２４Ｂ）。特に興味深いのは、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンを用いた１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質で免疫された動物の力価が、ＡＭＰ－ＣｐＧを用いた低用量（１μｇ）のコロナウイルススパイクタンパク質を投与された動物の力価と同等であることであった。総ＩｇＧの評価は、ＡＭＰ－ＣｐＧ及びミョウバンが同等のコロナウイルススパイクタンパク質特異的ＩｇＧ力価を生成し、両方とも可溶性ＣｐＧ免疫化動物で生成されたものを上回ったことを示した（図２４Ｃ）。ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫動物では、コロナウイルススパイクタンパク質用量の減少に伴い、ＩｇＧ力価の有意な低下が観察されたが、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質を与えられたＡＭＰ－ＣｐＧとミョウバンの間に統計的な差はなかった。アイソタイプ分析では、若い健康なマウスで行われたものと同様の観察結果が得られ、つまり、ＡＭＰ－ＣｐＧは、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンと比較してより多くのＴｈ１、ＩｇＧ２ｂｃ優性応答を駆動し、よりバランスの取れた及びＴｈ１、ＩｇＧ１に偏ったプロファイルをもたらした（図２４Ｄから図２４Ｇ）。ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化マウスで観察されたＴｈ１バイアスの強度は、若い健康なマウスと比較して老齢マウスで低下したが、コロナウイルススパイクタンパク質の様々な投与量レベルで、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化動物の間で有意差は観察されなかった（図２４Ｆ）。若い健康なマウスで以前に観察されたように、可溶性ＣｐＧ及びミョウバンと比較して、ＡＭＰ－ＣｐＧ免疫化動物ではＩｇＧ３力価が増強された（図２４Ｇ）。まとめると、これらの結果から分かるように、ＡＭＰ－ＣｐＧは、老齢マウスにおいて可溶性ＣｐＧ及びミョウバンワクチンコンパレーターで観察されたものよりも強力かつ機能的なコロナウイルススパイクタンパク質特異的な体液性免疫を誘導することができるとともに、最適なＴｈ１バイアスアイソタイププロファイルを生成し、抗原の投与量を少なくとも１０倍節約することができる。

【0361】

老齢マウスにＡＭＰ－ＣｐＧを接種すると、血液、脾臓、及び肺組織において耐久性のあるスパイクＲＢＤ特異的Ｔ細胞を生成することができる。０、１４及び２８日目に、３７週齢のＣ５７Ｂｌ／６マウス（ｎ＝５－１０／群）を、１００ｕｇのミョウバン又は１ｎｍｏｌの可溶性又はＡＭＰ－ＣｐＧを混合した１０ｕｇのスパイクＲＢＤタンパク質で免疫化した。アジュバント対照動物に、ＡＭＰ－ＣｐＧアジュバントのみを投与した。３５、４９及び７０日目に、ＥＬＩＳＡにより免疫化動物から血清におけるスパイクＲＢＤ特異的体液性応答を評価した。示されているのは、ＩｇＧについて決定されたエンドポイント力価である（図２５Ａ）。２１、３５、４９及び７０日目にＴ細胞応答を分析した。２１、３５、４９及び７０日目に末梢血から細胞を収集し（図２５Ｂ）、重複スパイクＲＢＤペプチドで再刺激し、細胞内サイトカイン産生をアッセイして抗原特異的Ｔ細胞応答を検出した。末梢血ＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＩＦＮγ陽性細胞の頻度を示す（図２５Ａ）。脾臓（図２５Ｃ）及び肺臓（図２５Ｄ）から細胞を収集し、重複スパイクＲＢＤペプチドで再刺激し、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによりＩＦＮγ産生についてアッセイした。示されているのは、１ｘ１０^６個の細胞あたりのＩＦＮγスポット形成細胞（ＳＦＣ）の頻度である（ｎ＝５マウス／群）。示される値は、平均±標準偏差である。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１（サイトカイン＋Ｔ細胞の頻度に適用される両側Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定による）。

【0362】

これらの結果は、老齢マウスにおいて、ＡＭＰ－ＣｐＧが高頻度のＴ細胞応答を誘導し、それが投与後数ヶ月持続することを示している。

【0363】

実施例５：全長スパイクタンパク質抗原及びヌクレオカプシドタンパク質 抗原を用いた免疫応答の誘導

【0364】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の分子量は約１３８ｋＤａであり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質の分子量は約５０ｋＤａである。これらのサイズに基づいて、スパイクタンパク質とヌクレオキャプシドタンパク質の両方がリンパ節を標的とするのに適していると予測される。

【0365】

以下のヌクレオキャプシドタンパク質構築物を使用して、図２７～図３３に示されるデータを生成した。
ＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡＥＮＬＹＦＱＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号６３）．

【0366】

このタンパク質は、ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓから製品番号ＮＵＮ－Ｃ５２２７で入手でき、ヌクレオカプシドタンパク質配列と、６－ヒスチジンタグ（ＨＨＨＨＨＨ；配列番号６５）との間にタバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼの切断部位（ＥＮＬＹＦＱＧ；配列番号６４）を有する。

【0367】

以下の全長スパイクタンパク質構築物を使用して図２７～図３３に示されるデータを生成した。
ＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＡＡＡＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＧＧＧＳＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号６６）

【0368】

このタンパク質は、ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓから製品番号ＳＰＮ－Ｃ５２Ｈ２で入手できる。１０－ヒスチジンタグ（ＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ；配列番号６７）は、ＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号６２）リンカーを介して前記スパイクタンパク質配列に結合される。前記スパイクタンパク質は、トリマーを安定化するための次の変異Ｒ６８３Ａ、Ｒ６８５Ａを有する。

【0369】

図２７に示すように、ＡＭＰ－ＣｐＧは、ＳＡＲＳＣｏＶ－２スパイクタンパク質を標的とする強力な多機能ＣＤ８Ｔ細胞応答を誘導する。モックワクチン又は、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを含むワクチンを投与した。観察されたサイトカイン陽性細胞の割合は、モック（０％）、ミョウバン（０％）、可溶性ＣｐＧ（５％）及びＡＭＰ－ＣｐＧ（３４％）であった。

【0370】

図２８に示すように、ＡＭＰ－ＣｐＧは、ＳＡＲＳＣｏＶ－２スパイクタンパク質を標的とする強力な多機能ＣＤ４Ｔ細胞応答も誘導する。モックワクチン又は、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを含むワクチンを投与した。観察されたサイトカイン陽性細胞の割合は、モック（０．２％）、ミョウバン（０．５％）、可溶性ＣｐＧ（０．５％）及びＡＭＰ－ＣｐＧ（１２％）であった。

【0371】

１０μｇの全長コロナウイルススパイクタンパク質構築物（配列番号６６）を１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質構築物（配列番号６３）及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧと組み合わせて投与されたマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス；ｎ＝１０／群）を、重複コロナウイルススパイク ペプチドで再刺激することにより、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に対する強力なＴ細胞応答をもたらした（図２９）。

【0372】

ＡＭＰ－ＣｐＧは、ＳＡＲＳＣｏＶ－２スパイクタンパク質を標的とする強力な肺常在性多機能ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を誘導する（図３０）。モックワクチン又は、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを含むワクチンを投与した。観察されたサイトカイン陽性細胞の割合は、モック（０％）、ミョウバン（０％）、可溶性ＣｐＧ（３％）及びＡＭＰ－ＣｐＧ（２６％）であった。

【0373】

ＡＭＰ－ＣｐＧは、ＳＡＲＳＣｏＶ－２スパイクタンパク質を標的とする強力な肺常在性多機能ＣＤ４^＋Ｔ細胞応答も誘導する（図３１）。モックワクチン又は、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを含むワクチンを投与した。観察されたサイトカイン陽性細胞の割合は、モック（０．２％）、ミョウバン（０．２％）、可溶性ＣｐＧ（１％）及びＡＭＰ－ＣｐＧ（７％）であった。

【0374】

ＡＭＰ－ＣｐＧは、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を標的とする強力な末梢血多機能ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞応答を誘導する（図３２）。モックワクチン又は、１０μｇのコロナウイルススパイクタンパク質、１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを含むワクチンを投与した。

【0375】

１０μｇの全長コロナウイルススパイクタンパク質構築物（配列番号６６）を１０μｇのコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質構築物（配列番号６３）及び（１）１００μｇのミョウバン、（２）６μｇの可溶性ＣｐＧ又は（３）６μｇのＡＭＰ－ＣｐＧと組み合わせて投与されたマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス；ｎ＝１０／群）を、重複コロナウイルスヌクレオキャプシドペプチドで再刺激することにより、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を標的とする強力なＴ細胞応答を誘導した（図３３）。

【0376】

実施例６：非ヒト霊長類における免疫応答の誘導

【0377】

ヒト以外の霊長類（ＮＨＰ）で研究を開始してワクチン中のスパイクＲＢＤとＡＭＰ－ＣｐＧを試験した。ワクチンにおけるＲＢＤ＋ミョウバンの使用をＲＢＤ＋ＡＭＰ－ＣｐＧと比較した。皮下免疫の２回投与スケジュール（０週目と４週目）では５００μｇのＡＭＰ－ＣｐＧの初期投与量を試験した。評価には、各投与後の毎週の臨床検査、ＣＢＣ（完全血球計算）パネル、及び免疫原性のための血液と血清の収集が含まれた。これらの試験において、ＡＭＰ－ＣｐＧは、ＢｉｏＥスパイクＲＢＤに対して抗体又はＴ細胞応答を誘導しなかった。２回の投与後にＡＭＰ－ＣｐＧに対する応答が見られなかったので、新しいワクチン製剤で同じ動物を免疫化した。ここで、３，０００μｇのＡＭＰ－ＣｐＧを使用し、１４０μｇのＧｅｎｓｃｒｉｐｔ ＲＢＤを使用した（ロットが異なり、ＡＭＰ－ＣｐＧの濃度が高くなり、ＲＢＤのソースが異なり、濃度が高くなった）。比較群は同じままであった（１．５ｍｇミョウバン＋７０μｇＢｉｏＥ ＲＢＤ）。

【0378】

再構成されたＡＭＰ－ＣｐＧワクチンは、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ ＲＢＤに対する強力な抗体応答を誘導した（図３４）。再構成されたＡＭＰ－ＣｐＧワクチンは、Ｎ５０１Ｙ変異（配列番号６９）を有するＵＫ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントに対してＩｇＧ抗体も誘導する（図３５）。さらに、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧワクチンは、スパイクＲＢＤに対するＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を誘導し（図３６Ａ及び図３６Ｂ）、スパイクＲＢＤに対するＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を誘導する（図３７Ａ及び図３７Ｂ）。

【0379】

再構成されたＲＢＤ及びＡＭＰ－ＣｐＧワクチンについて、有害な安全性シグナル（温度、反応原性、化学、及び血液学）は観察されなかった。

【0380】

実施例７：Ｂ．１．３５１バリアントに対する免疫応答の誘導

【0381】

ＣＯＶＩＤのＢ．１．３５１及び南アフリカのバリアントは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２株である。抗原がＢ．１．３５１ＲＢＤバリアントに変更された場合、及びＷＴ ＲＢＤ抗原と組み合わせて使用された場合の、ワクチン中のスパイクＲＢＤ及びＡＭＰ－ＣｐＧの免疫原性を決定するための研究がマウスで開始された。異なるバリアントに対する免疫応答の交差反応性も、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧデュアルＲＢＧ及びＢ．１．３５１ワクチンと、再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧ Ｂ．１．３５１ワクチンについて決定された。

【0382】

対照ＷＴ ＲＢＧ、Ｂ．１．３５１ ＲＧＢ、並びにデュアルＷＴ ＲＢＧ及びＢ．１．３５１ストック溶液を調製した。対照アジュバントストック溶液をカブトガニ変形細胞溶解物（ＬＡＬ）水に再懸濁した。最終注射液は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１倍希釈した。ＷＴ及びＢ．１．３５１抗原を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ２スパイクＳ１ ＲＢＤタンパク質ストック溶液を、それぞれ０．８８及び０．９５ｍｇ／ｍｌの濃度（１００μｌ注射液あたり５μｇを有する）でＰＢＳに溶解した。最終注射液を１ｘＰＢＳで希釈した。デュアルＷＥＴ及びＢ．１．３５１ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２スパイクＳ１ ＲＢＤタンパク質ストック溶液も、１００μｌ注射液あたり５μｇの各抗原で調製した。

【0383】

表５:実験設計

【表5】

【0384】

５群の５匹Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスをそれぞれ使用した。尾の付け根の両側に、片側あたり５０μｌで皮下（ＳＣ）投与して雌Ｂ６マウスを免疫化した。ブースター投与は、およそ２週間間隔で行われた。皮下注射は、自然なリンパドレナージを介してワクチンをリンパ節に送達するのに役立つ可能性がある。隔週の注射は、以前のマウス研究に基づいてマウスでの最適な応答の生成に役立つ可能性がある。

【0385】

表６：ワクチン成分

【表6】

【0386】

テトラマー解析を実施し、結果を図３８に示す。ＴＮＦα及びＩＦＮγの細胞内染色（ＩＣＳ）アッセイを、投与の７日後にＰＢＭＣで実施した。２回目投与の７日後に肺サンプルに対してＩＣＳを実施した。ＣＤ４、ＣＤ８及びＣＤ３について表面染色された。抗体情報を表７に示す。１ウェルあたり１ｍｇのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質ペプチドプールミックス（１ウェルあたり１ｍｇの３１５個のペプチド）でＩＣＳサンプルを一晩（ブレフェルジンＡ及びモネンシンの存在下で）活性化した。２回目投与後のＣＤ８^＋肺細胞、ＣＤ４^＋肺細胞及びＣＤ８^＋肺細胞の結果をそれぞれ図３９Ａ、図３９Ｂ及び図３９Ｃに示す。ペプチド情報を表８に示す。

【0387】

表７：ＩＣＳ用抗体

【表7】

【0388】

表８：再刺激ペプチド

【表8】

【0389】

３回目投与後に脾細胞でＩＦＮγのＥＬＩＳｐｏｔ分析を実施した。脾細胞（０．２ｘ１０^６細胞／ウェル）を１ウェルあたり１μｇのＰｅｐＭｉｘで活性化した。ペプチド情報を表８に示す。ＩＦＮγプレートを一晩刺激した。結果を図４０に示す。

【0390】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２特異的血清ＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定法）は、ＲＢＤ特異的抗体反応を検出するために、各投与の７日後にマウス血清で実施された。Ｓｅｒ－ｇｅｌチューブ（ＮＣ９４３６３６３，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて全血を遠心分離した。血清を新鮮な状態で使用するか又は使用まで－８０℃で保存した。９６ウェルプレートに２００ｎｇ／１００μｌ（２μｇ／ｍｌ）のＣｏＶ２ ＲＢＤタンパク質（ＷＴ，Ｂ．１．３５１及びＢ．１．１．７）を４℃で一晩コーティングした。次いで、プレートを室温で２時間、２％ＢＳＡでプレブロックした。マウス血清を１：２０に希釈し、ダミープレートで段階希釈（１：５から８濃度）した。ＥＬＩＳＡプレートをＥＬＩＳＡ洗浄バッファー（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ４２１１６０１）で１回洗浄した。サンプルをＥＬＩＳＡプレートに移し、室温で２時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで４回洗浄した。血清抗体検出のために、表９の二次ＨＲＰ結合抗体をＰＢＳ＋中１：２０００で使用し、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで４回洗浄した。基質３，３'，５，５'－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を室温で１０分間添加することにより反応を可視化し、Ｈ_２ＳＯ_４（１Ｎ）で停止した。４５０ｎｍでの吸光度をＥＬＩＳＡプレートリーダーで測定した。結果を図４１に示す。

【0391】

表９：二次ＨＲＰ結合抗体

【表9】

【0392】

再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧデュアルＷＴ ＲＢＤ、Ｂ．１．３５１ＲＢＤワクチン及び再構成されたＡＭＰ－ＣＰＧ Ｂ．１．３５１ＲＢＤワクチンは、以前の実験で見られたＷＴ ＲＢＤ抗原のみを使用するワクチンと同様の免疫応答を誘導する。Ｔ細胞応答と抗体応答は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ＲＢＤのすべての試験されたバリアントに対して同等の交差反応性を有する。

【0393】

実施例８：ヒト対象における免疫応答の誘導

【0394】

本開示の方法によれば、対象、例えば、ヒト対象にＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、例えば、ＲＢＤペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を投与して前記対象において免疫応答を誘導することができる。この目的を達成するために、患者にＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、例えば、ＲＢＤペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）を投与する。ＣｐＧ両親媒性物質又はその医薬組成物は、ワクチンとして対象に皮下投与される。ＣｐＧ両親媒性物質又はその医薬組成物は、鼻腔内、気管内及び機械換気中の吸入により投与されてもよい。前記対象に、コロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、例えば、ＲＢＤペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）又はその医薬組成物もワクチンとして皮下投与される。コロナウイルス抗原又はその医薬組成物は、鼻腔内、気管内及び機械換気中の吸入により投与されてもよい。ＣｐＧ両親媒性物質とコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、例えば、ＲＢＤペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）は、内腿の両側に投与されてもよい。ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、例えば、ＲＢＤペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）は、対象に別々に及び同時に投与することができる。前記対象は、ＣｐＧ両親媒性物質及びコロナウイルス抗原（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質若しくはそのペプチド、例えば、ＲＢＤペプチド、及び／又はコロナウイルスヌクレオキャプシドタンパク質若しくはそのペプチド、又はそれをコードする核酸配列）の投与を０、４及び１０週目、又は０及び４週目に受ける事ができる。前記対象は、約０．１ｍｇから２０．０ｍｇの投与量を受けてもよい。特に、投与量は、約０．１ｍｇから１．０ｍｇ、約０．５ｍｇから３．０ｍｇ、約１．０ｍｇから５．０ｍｇ、約２．０から５．０ｍｇ、約３．０から５．０ｍｇ、約３．０ｍｇから１０．０ｍｇ、約４．０ｍｇから１２．０ｍｇ、約５．０ｍｇから１５．０ｍｇ又は約５．０から２０．０ｍｇであってもよい。対象に投与される特定の投与量は、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、２．０ｍｇ、３．０ｍｇ、４．０ｍｇ、５．０ｍｇ、６．０ｍｇ、７．０ｍｇ、８．０ｍｇ、９．０ｍｇ、１０．０ｍｇ、１１．０ｍｇ、１２．０ｍｇ、１３．０ｍｇ、１４．０ｍｇ、１５．０ｍｇ、１６．０ｍｇ、１７．０ｍｇ、１８．０ｍｇ、１９．０ｍｇ又は２０．０ｍｇのＣｐＧ両親媒性物質であってもよい。対象はまた、ＣｐＧ両親媒性物質のこれらの特定の投与量のうちの任意の２つの間の範囲の投与量を受けてもよい。前記対象は、約１０μｇから約１．０ｍｇのコロナウイルス抗原を受けてもよい。特に、前記対象は、約４０μｇから６０μｇ、約５０μｇから７０μｇ、約５０μｇから１５０μｇ、約７０μｇから１５０μｇ、約１００μｇから１５０μｇ、約１００μｇから２００μｇ、約１４０μｇから２５０μｇ、約２００μｇから３００μｇ、約２５０μｇから５００μｇ、約３００μｇから６００μｇ又は約５００μｇから１．０ｍｇのコロナウイルス抗原を受けてもよい。特に、対象に投与される特定の投与量は、約１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０，μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ又は１．０ｍｇのコロナウイルス抗原（例えば、スパイクタンパク質又はスパイクタンパク質ＲＢＤ）であってもよい。対象は、コロナウイルス抗原のこれらの特定の投与量のうちの任意の２つの間の範囲の投与量を受けてもよい。

【0395】

他の実施形態
本発明の記載された組成物、方法、及び使用の様々な修正及び変形は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本発明を特定の実施形態に関連して説明してきたが、特許請求される本発明はそのような特定の実施形態に過度に限定されるべきではないことを理解されたい。実際、当業者に明らかな、本発明を実施するための記載されたモードの様々な変更は、本発明の範囲内にあることが意図されている。

【0396】

すべての刊行物、特許、及び特許出願は、個々の刊行物、特許、及び特許出願が全体として参照によって組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同じ程度に、参照によって全体が本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18-1】

【図18-2】

【図19-1】

【図19-2】

【図19-3】

【図20-1】

【図20-2】

【図20-3】

【図21-1】

【図21-2】

【図21-3】

【図22-1】

【図22-2】

【図22-3】

【図23-1】

【図23-2】

【図23-3】

【図24-1】

【図24-2】

【図24-3】

【図25-1】

【図25-2】

【図26-1】

【図26-2】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36-1】

【図36-2】

【図37-1】

【図37-2】

【図38】

【図39-1】

【図39-2】

【図39-3】

【図40】

【図41】

【配列表】

2023532290000001.app

【国際調査報告】