特表 2023-532536 ｍｉＲＮＡ－４８５ハンチントン病の阻害剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-28

(54)【発明の名称】ｍｉＲＮＡ－４８５ハンチントン病の阻害剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20230721BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20230721BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230721BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230721BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230721BHJP

   A61K 31/712 20060101ALI20230721BHJP

   A61K 31/7125 20060101ALI20230721BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230721BHJP

   A61K 35/761 20150101ALI20230721BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20230721BHJP

   C12N 15/113 20100101ALN20230721BHJP

   C12N 15/864 20060101ALN20230721BHJP

   C12N 5/0797 20100101ALN20230721BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P25/14

A61P29/00

A61P25/00

A61K31/7088

A61K31/712

A61K31/7125

A61K35/76

A61K35/761

A61K47/42

C12N15/113 Z ZNA

C12N15/864 100Z

C12N5/0797

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022581521

(86)(22)【出願日】2021-07-01

(85)【翻訳文提出日】2022-12-28

(86)【国際出願番号】 IB2021055890

(87)【国際公開番号】W WO2022003608

(87)【国際公開日】2022-01-06

(31)【優先権主張番号】63/047,090

(32)【優先日】2020-07-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521564467

【氏名又は名称】バイオーケストラ カンパニー， リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】リュ， ジン－ヒョブ

(72)【発明者】

【氏名】コ， ハン ソク

(72)【発明者】

【氏名】キム， デ フン

(72)【発明者】

【氏名】ミン， ヒュン ス

(72)【発明者】

【氏名】リム， ユ ナ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065AC20

4B065BA01

4B065BD35

4B065BD50

4B065CA44

4C076AA22

4C076AA95

4C076CC01

4C076EE41

4C076FF68

4C084AA17

4C084NA14

4C084ZA011

4C084ZA221

4C084ZB111

4C084ZC412

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA24

4C086NA14

4C086ZA22

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZA22

(57)【要約】

本開示は、ハンチントン病の症状または状態を治療するためのｍｉＲＮＡ阻害剤の使用を含む。本開示に有用なｍｉＲＮＡ阻害剤は、ｍｉＲ－４８５の発現及び／または活性を阻害することができ、次に、ハンチントン病に関連するタンパク質または遺伝子発現のレベルを調節することができる。本開示は、ハンチントン病の治療を必要とする対象においてハンチントン病を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。
【選択図】図２Ｂ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ハンチントン病の治療を必要とする対象において前記ハンチントン病を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項2】

前記対象が、投与前に、神経過敏、抑うつ、不随意運動、協調運動障害、新しい情報の学習または意思決定の困難、制御不能な運動、情緒的問題、及び思考能力（認知）の喪失を含むハンチントン病の１つまたは複数の特徴を示す、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記対象が、前記投与後、ハンチントン病の１つまたは複数の特徴の改善を示す、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記改善が、前記投与前の前記特徴と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍である、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記ハンチントン病が、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルの減少に関連している、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、オートファジーを誘導し、及び／または炎症を治療または予防する、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記ハンチントン病が、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルの減少に関連している、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記対象が、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルの減少に関連した疾患または状態を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が神経発生を誘導する、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

神経発生を誘導することが、神経幹細胞及び／または前駆細胞の増殖、分化、遊走、及び／または生存率の増加を含む、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

神経発生を誘導することが、神経幹細胞及び／または前駆細胞の数の増加を含む、請求項９または１０に記載の方法。

【請求項12】

前記神経発生を誘導することが、軸索、樹状突起、及び／またはシナプスの発生の増加を含む、請求項９～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が食作用を誘導する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤がｍｉＲ－４８５－３ｐを阻害する、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記ｍｉＲ４８５－３ｐが、５’－ｇｕｃａｕａｃａｃｇｇｃｕｃｕｃｃｕｃｕｃｕ－３’（配列番号１）を含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）を含むヌクレオチド配列を含み、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が約７～約３０ヌクレオチドの長さである、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、ＳＩＲＴ１遺伝子の転写及び／またはＳＩＲＴ１タンパク質の発現を増加させる、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記ヌクレオチド配列の５’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記ヌクレオチド配列の３’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号４）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号５）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号６）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１５）、５’－ＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１６）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１７）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１８）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１９）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２０）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）、及び５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）からなる群から選択される配列を有する、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６２）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６３）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６４）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６５）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６６）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７５）、５’－ＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７６）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７７）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７８）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７９）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８０）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）、及び５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８９）からなる群から選択される配列を有する、請求項１～１５または１７～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤の前記配列が、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の配列同一性を有する、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）と少なくとも９０％の類似性を有する配列を有する、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、１個の置換または２個の置換を有するヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）を含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）を含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）を含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、ロックド核酸（ＬＮＡ）、アンロックド核酸（ＵＮＡ）、アラビノ核酸（ＡＢＡ）、架橋核酸（ＢＮＡ）、及び／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）である、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が骨格修飾を含む、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

前記骨格修飾が、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）及び／またはホスホロチオエート（ＰＳ）修飾である、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、送達剤中で送達される、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

前記送達剤が、ミセル、エクソソーム、脂質ナノ粒子、細胞外小胞、または合成小胞である、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤がウイルスベクターによって送達される、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項34】

前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ、アデノウイルス、レトロウイルス、またはレンチウイルスである、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはこれらの任意の組み合わせの血清型を有するＡＡＶである、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、送達剤によって送達される、請求項１～３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

前記送達剤が、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、またはコンジュゲートを含む、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記送達剤が、
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＡＭ］（式Ｉ）
または
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＡＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（式ＩＩ）
（式中、
ＷＰは、水溶性バイオポリマー部分であり、
ＣＣは、正に帯電したキャリア部分であり、
ＡＭは、アジュバント部分であり、
Ｌ１及びＬ２は、独立して、任意選択のリンカーである）を有するカチオン性キャリアユニットを含み、
前記カチオン性キャリアユニットは、約１：１のイオン比で核酸と混合される場合にミセルを形成する、請求項３６または３７に記載の方法。

【請求項39】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、イオン結合を介して前記カチオン性キャリアユニットと相互作用する、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記水溶性バイオポリマーが、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３８または３９に記載の方法。

【請求項41】

前記水溶性バイオポリマーが、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む、請求項３８～４０に記載の方法。

【請求項42】

前記水溶性バイオポリマーが、下式：

【化12】

（式中、ｎは、１～１０００である）を有する、請求項３８～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記ｎが、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記ｎが、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、または約１５０～約１６０である、請求項４２に記載の方法。

【請求項45】

前記水溶性バイオポリマーが、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である、請求項３８～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

カチオン性キャリア部分が、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む、請求項３８～４５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

前記カチオン性キャリア部分が、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２３個、少なくとも２４個、少なくとも２５個、少なくとも２６個、少なくとも２７個、少なくとも２８個、少なくとも２９個、少なくとも３０個、少なくとも３１個、少なくとも３２個、少なくとも３３個、少なくとも３４個、少なくとも３５個、少なくとも３６個、少なくとも３７個、少なくとも３８個、少なくとも３９個、少なくとも４０個、少なくとも４１個、少なくとも４２個、少なくとも４３個、少なくとも４４個、少なくとも４５個、少なくとも４６個、少なくとも４７個、少なくとも４８個、少なくとも４９個、または少なくとも５０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記カチオン性キャリア部分が、約３０個～約５０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

前記塩基性アミノ酸が、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４７または請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記カチオン性キャリア部分が、約４０個のリシンモノマーを含む、請求項３８～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記アジュバント部分が、免疫反応、炎症反応、及び／または組織微小環境を調節することができる、請求項３８～５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記アジュバント部分が、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３８～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

前記アジュバント部分が、下式：

【化13】

（式中、Ｇ１及びＧ２のそれぞれは、Ｈ、芳香環、もしくは１～１０アルキルであるか、またはＧ１とＧ２はともに芳香環を形成し、ｎは１～１０である）を有する、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記アジュバント部分がニトロイミダゾールを含む、請求項５２に記載の方法。

【請求項55】

前記アジュバント部分が、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、ジメトリダゾール、プレトマニド、オルニダゾール、メガゾール、アザニダゾール、ベンズニダゾール、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５２に記載の方法。

【請求項56】

前記アジュバント部分が、アミノ酸を含む、請求項３８～５２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

前記アジュバント部分が、下式：

【化14】

（式中、Ａｒは、

【化15】

Ｚ１及びＺ２のそれぞれは、ＨまたはＯＨである）を有する、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

前記アジュバント部分が、ビタミンを含む、請求項３８～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

前記ビタミンが、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記ビタミンが、下式：

【化16】

（式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）を有する、請求項５８または請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記ビタミンが、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項５８～６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記ビタミンが、ビタミンＢ３である、請求項５８～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記アジュバント部分が、少なくとも約２つ、少なくとも約３つ、少なくとも約４つ、少なくとも約５つ、少なくとも約６つ、少なくとも約７つ、少なくとも約８つ、少なくとも約９つ、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、または少なくとも約２０のビタミンＢ３ユニットを含む、請求項５８～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

前記アジュバント部分が、約１０個のビタミンＢ３ユニットを含む、請求項６３に記載の方法。

【請求項65】

約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、約３０個～約４０個のリシンを有するポリリシンを含むカチオン性キャリア部分と、約５個～約１０個のビタミンＢ３を有するアジュバント部分と、を含む、請求項５８～６４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記送達剤が、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤と会合されることでミセルを形成する、請求項５８～６５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記会合が、共有結合、非共有結合、またはイオン結合である、請求項６６に記載の方法。

【請求項68】

前記ミセル中の前記カチオン性キャリアユニットと前記ｍｉＲＮＡ阻害剤とが、前記カチオン性キャリアユニットの正電荷と前記ｍｉＲＮＡ阻害剤の負電荷とのイオン比が約１：１となるように溶液中で混合される、請求項６６または請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

前記カチオン性キャリアユニットが、酵素分解から前記ｍｉＲＮＡ阻害剤を保護することができる、請求項６６～６８のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年７月１日出願の米国仮特許出願第６３／０４７，０９０号の利益を主張し、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子提出された配列表の参照
本出願とともにＡＳＣＩＩテキストファイル（ファイル名：４３６６＿０３１ＰＣ０１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．．ｔｘｔ、サイズ：７７，４３２バイト、作成日：２０２１年６月２９日）の形で提出される、電子的に提出される配列表の全体を、参照によって本明細書に援用する。

【0003】

本開示は、ハンチントン病を治療するためのｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５結合部位を含むヌクレオチド分子をコードするポリヌクレオチド）の使用を提供するものである。

【背景技術】

【0004】

ハンチントン病は、遺伝性の進行性神経変性障害である。この障害は、異常に長いポリグルタミン配列を持つハンチンチンタンパク質をもたらす、ハンチンチン遺伝子の反復するＣＡＧトリプレットシリーズの拡大によって引き起こされる。ハンチントン病は通常、３０代または４０代で発症する。いくつかのまれなケースでは、ハンチントン病は小児期または青年期に発症し得る。症状には、腕、脚、頭、顔、上半身の不随意の痙攣や単収縮（舞踏病）；記憶力、集中力、判断力、計画力、組織力の低下；気分の変化、特にうつ病、不安、突然の怒り及び過敏性が含まれる。ハンチントン病に罹患した個人は、症状が始まってから約１５～２０年生存する。

【0005】

ハンチントン病の治療法はなく、この病気に関連する脳細胞の変性を遅らせたり止めたりする方法もない。したがって、治療は症状の管理に重点が置かれる。心理療法、言語療法、理学療法、及び作業療法も、症状を管理するために使用され得る。しかし、さまざまな治療法に対する個々の反応は予測不可能であり、効果的な治療計画を見つけることは困難であり、時間がかかる。そのため、ハンチントン病の効果的な治療法が必要とされる。

【発明の概要】

【0006】

本開示は、ハンチントン病の治療を必要とする対象においてハンチントン病を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。

【0007】

いくつかの態様では、対象は、投与前に、神経過敏、抑うつ、不随意運動、協調運動障害、新しい情報の学習または意思決定の困難、制御不能な運動、情緒的問題、及び思考能力（認知）の喪失を含むハンチントン病の１つまたは複数の特徴を示す。いくつかの態様では、対象は、投与後、ハンチントン病の１つまたは複数の特徴の改善を示す。いくつかの態様では、改善は、投与前の特性と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍である。

【0008】

いくつかの態様では、ハンチントン病は、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルの減少に関連している。いくつかの態様では、ハンチントン病は、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルの減少に関連している。いくつかの態様では、対象は、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルの減少に関連した疾患または状態を有する。

【0009】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、オートファジーを誘導し、及び／または炎症を治療もしくは予防する。

【0010】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は神経発生を誘導する。いくつかの態様では、神経発生を誘導することは、神経幹細胞及び／または前駆細胞の増殖、分化、遊走、及び／または生存率の増加を含む。いくつかの態様では、神経発生を誘導することは、神経幹細胞及び／または前駆細胞の数の増加を含む。いくつかの態様では、神経発生を誘導することは、軸索、樹状突起、及び／またはシナプス発生の増加を含む。

【0011】

特定の態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、食作用を誘導する。

【0012】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ｍｉＲ４８５－３ｐを阻害する。いくつかの態様では、ｍｉＲ４８５－３ｐは、５’－ｇｕｃａｕａｃａｃｇｇｃｕｃｕｃｃｕｃｕｃｕ－３’（配列番号１）を含む。

【0013】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）を含むヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ阻害剤は約７～約３０ヌクレオチドの長さである。

【0014】

いくつかの局面において、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ＳＩＲＴ１遺伝子の転写及び／またはＳＩＲＴ１タンパク質の発現を増加させる。

【0015】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列の５’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。

【0016】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列の３’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。

【0017】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号４）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号５）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号６）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１５）、５’－ＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１６）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１７）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１８）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１９）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２０）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）、及び５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）からなる群から選択される配列を有する。

【0018】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６２）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６３）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６４）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６５）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６６）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７５）、５’－ＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７６）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７７）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７８）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７９）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８０）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）、及び５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８９）からなる群から選択される配列を有する。

【0019】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤の配列は５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の配列同一性を有する。

【0020】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）と少なくとも９０％の類似性を有する配列を有する。

【0021】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、１個の置換または２個の置換を有するヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）を含む。

【0022】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）を含む。

【0023】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）を含む。

【0024】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。

【0025】

いくつかの態様では、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、ロックド核酸（ＬＮＡ）、アンロックド核酸（ＵＮＡ）、アラビノ核酸（ＡＢＡ）、架橋核酸（ＢＮＡ）、及び／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）である。

【0026】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、骨格修飾を含む。

【0027】

いくつかの態様では、骨格修飾は、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）及び／またはホスホロチオエート（ＰＳ）修飾である。

【0028】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、送達剤中で送達される。

【0029】

いくつかの態様では、送達剤は、ミセル、エクソソーム、脂質ナノ粒子、細胞外小胞、または合成小胞である。

【0030】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤はウイルスベクターによって送達される。

【0031】

いくつかの態様では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ、アデノウイルス、レトロウイルス、またはレンチウイルスである。

【0032】

いくつかの態様では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはこれらの任意の組み合わせの血清型を有するＡＡＶである。

【0033】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は送達剤によって送達される。

【0034】

いくつかの態様では、送達剤は、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、またはコンジュゲートを含む。

【0035】

いくつかの態様では、送達剤は、下式：
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＡＭ］（式Ｉ）
または
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＡＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（式ＩＩ）
（式中、
ＷＰは、水溶性バイオポリマー部分であり、
ＣＣは、正に帯電したキャリア部分であり、
ＡＭは、アジュバント部分であり、
Ｌ１及びＬ２は、独立して、任意選択のリンカーである）を有するカチオン性キャリアユニットを含み、
カチオン性キャリアユニットは、約１：１のイオン比で核酸と混合される場合にミセルを形成する。

【0036】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、イオン結合を介してカチオン性キャリアユニットと相互作用する。

【0037】

いくつかの態様では、水溶性バイオポリマーは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0038】

いくつかの態様では、水溶性バイオポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む。

【0039】

いくつかの態様では、水溶性バイオポリマーは、下式：

【化1】

（式中、ｎは、１～１０００である）を有する。

【0040】

いくつかの態様では、ｎは、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である。

【0041】

いくつかの態様では、ｎは、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、または約１５０～約１６０である。

【0042】

いくつかの態様では、水溶性バイオポリマーは、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である。

【0043】

いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む。

【0044】

いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７、少なくとも８つ、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、または少なくとも５０の塩基性アミノ酸を含む。

【0045】

いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約３０～約５０の塩基性アミノ酸を含む。

【0046】

いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0047】

いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約４０個のリシンモノマーを含む。

【0048】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、免疫反応、炎症反応、及び／または組織微小環境を調節することができる。

【0049】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0050】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：

【化2】

（式中、Ｇ１及びＧ２のそれぞれは、Ｈ、芳香環、もしくは１～１０アルキルであるか、またはＧ１とＧ２はともに芳香環を形成し、ｎは１～１０である）を有する。

【0051】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、ニトロイミダゾールを含む。

【0052】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、ジメトリダゾール、プレトマニド、オルニダゾール、メガゾール、アザニダゾール、ベンズニダゾール、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0053】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、アミノ酸を含む。

【0054】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：

【化3】

（式中、Ａｒは、

【化4】

であり、
Ｚ１及びＺ２のそれぞれは、ＨまたはＯＨである）を有する。

【0055】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、ビタミンを含む。

【0056】

いくつかの態様では、ビタミンは、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む。

【0057】

いくつかの態様では、ビタミンは、下式：

【化5】

（式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）を有する。

【0058】

いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

【0059】

いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＢ３である。

【0060】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、少なくとも約２つ、少なくとも約３つ、少なくとも約４つ、少なくとも約５つ、少なくとも約６つ、少なくとも約７つ、少なくとも約８つ、少なくとも約９つ、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、または少なくとも約２０のビタミンＢ３ユニットを含む。

【0061】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、約１０のビタミンＢ３ユニットを含む。

【0062】

いくつかの態様では、送達剤は、約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、約３０個～約４０個のリシンを有するポリリシンを含むカチオン性キャリア部分と、約５個～約１０個のビタミンＢ３ユニットを有するアジュバント部分と、を含む。

【0063】

いくつかの態様では、送達剤は、ｍｉＲＮＡ阻害剤と会合されることでミセルを形成する。

【0064】

いくつかの態様では、会合は、共有結合、非共有結合、またはイオン結合である。

【0065】

いくつかの態様では、ミセル中のカチオン性キャリアユニットとｍｉＲＮＡ阻害剤とが、カチオン性キャリアユニットの正電荷とｍｉＲＮＡ阻害剤の負電荷とのイオン比が約１：１となるように溶液中で混合される。

【0066】

いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、酵素分解からｍｉＲＮＡ阻害剤を保護することができる。

【図面の簡単な説明】

【0067】

【図1】本開示のキャリアユニットの例示的な構造を示す。提示される例は、アニオン性ペイロード、例えば、遺伝子を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの核酸、例えば、ｍｉＲＮＡ（ａｎｔｉｍｉｒ）と静電的に相互作用することができるカチオン性キャリア部分を含む。いくつかの態様では、ＡＭは、ＷＰとＣＣとの間に配置することができる。ＣＣ及びＡＭコンポーネントは、簡単に直線的配置で描かれている。しかしながら、本明細書に記述されるように、ＣＣ及びＡＭは、スキャフォールドの形で配置することができる。

【図2A】ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤有りまたは無しで処理されたＮＳＣ３４細胞における集約されたＨｔｔ分析の概略図を示す。

【図2B】ｍｉＲ－４８５－３ｐ阻害剤で処理したＱ７４－ＨｔｔトランスフェクトＮＳＣ－３４細胞における不溶性凝集ハンチンチン（Ｈｔｔ）のレベルの減少を示すウエスタンブロット分析を提供する。ＮＳＣ－３４細胞は、ＧＦＰタグ付き野生型（Ｑ２３）または変異体（Ｑ７４）Ｈｔｔのいずれかでトランスフェクトされた。

【図3A】ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＱ７４－ＨｔｔトランスフェクトＨＥＫ２９３Ｔ細胞における不溶性凝集ハンチンチン（Ｈｔｔ）のレベルの減少を示すウエスタンブロット分析を提供する。

【図3B】図３Ａのウエスタンブロットに基づいて、相対的な凝集したｈｔｔ発現レベルを定量化するグラフを示す。

【図4A】Ｑ－２３－ＨｔｔトランスフェクトＨＥＫ２９３Ｔ細胞と比較して、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＱ７４－ＨｔｔトランスフェクトＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるオートファジータンパク質ＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１ａ、ｐ６２及びＬＣ３－ＩＩのレベルの増加を示すウエスタンブロット分析を提供する。

【図4B】図４Ａのウエスタンブロットから決定されたＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１ａ、ｐ６２及びＬＣ３－ＩＩそれぞれの相対レベルを定量化するグラフを示す。

【図4C】図４Ａのウエスタンブロットから決定されたＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１ａ、ｐ６２及びＬＣ３－ＩＩそれぞれの相対レベルを定量化するグラフを示す。

【図4D】図４Ａのウエスタンブロットから決定されたＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１ａ、ｐ６２及びＬＣ３－ＩＩそれぞれの相対レベルを定量化するグラフを示す。

【図4E】図４Ａのウエスタンブロットから決定されたＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１ａ、ｐ６２及びＬＣ３－ＩＩそれぞれの相対レベルを定量化するグラフを示す。

【図5】Ｑ２３－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞と比較して、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＱ７４－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞における不溶性凝集ハンチンチン（Ｈｔｔ）のレベルの減少を示すウエスタンブロット分析を提供する。

【図6】Ｑ２３－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞と比較して、ｍｉＲ－４８５－３p阻害剤で処理したＱ７４－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるオートファジータンパク質ＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１ａ、ｐ６２及びＬＣ３－ＩＩのレベルの増加、及びカスパーゼ３の切断の減少を示すウエスタンブロット分析を提供する。

【図7A】ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＱ７４－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＧＦＰタグ付きｈｔｔの分布（図７Ｄ及び７Ｅ）、及びＱ２３－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＧＦＰタグ付きＨｔｔの分布（図７Ｂ及び７Ｃ）ならびに対照細胞（図７Ａ）を可視化する画像を示す。

【図7B】ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＱ７４－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＧＦＰタグ付きｈｔｔの分布（図７Ｄ及び７Ｅ）、及びＱ２３－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＧＦＰタグ付きＨｔｔの分布（図７Ｂ及び７Ｃ）ならびに対照細胞（図７Ａ）を可視化する画像を示す。

【図7C】ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＱ７４－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＧＦＰタグ付きｈｔｔの分布（図７Ｄ及び７Ｅ）、及びＱ２３－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＧＦＰタグ付きＨｔｔの分布（図７Ｂ及び７Ｃ）ならびに対照細胞（図７Ａ）を可視化する画像を示す。

【図7D】ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＱ７４－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＧＦＰタグ付きｈｔｔの分布（図７Ｄ及び７Ｅ）、及びＱ２３－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＧＦＰタグ付きＨｔｔの分布（図７Ｂ及び７Ｃ）ならびに対照細胞（図７Ａ）を可視化する画像を示す。

【図7E】ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＱ７４－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＧＦＰタグ付きｈｔｔの分布（図７Ｄ及び７Ｅ）、及びＱ２３－ＨｔｔトランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＧＦＰタグ付きＨｔｔの分布（図７Ｂ及び７Ｃ）ならびに対照細胞（図７Ａ）を可視化する画像を示す。

【図8A】ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理されたＱ７４－Ｈｔｔトランスフェクト（図８Ｃ及び８Ｄ）及びＱ２３－Ｈｔｔトランスフェクト（図８Ａ及び８Ｂ）初代皮質ニューロンにおけるＧＦＰタグ付きｈｔｔの分布を視覚化する画像を示す。左のパネルは対照治療を示し、右のパネルはｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤治療を示している。

【図8B】ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理されたＱ７４－Ｈｔｔトランスフェクト（図８Ｃ及び８Ｄ）及びＱ２３－Ｈｔｔトランスフェクト（図８Ａ及び８Ｂ）初代皮質ニューロンにおけるＧＦＰタグ付きｈｔｔの分布を視覚化する画像を示す。左のパネルは対照治療を示し、右のパネルはｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤治療を示している。

【図8C】ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理されたＱ７４－Ｈｔｔトランスフェクト（図８Ｃ及び８Ｄ）及びＱ２３－Ｈｔｔトランスフェクト（図８Ａ及び８Ｂ）初代皮質ニューロンにおけるＧＦＰタグ付きｈｔｔの分布を視覚化する画像を示す。左のパネルは対照治療を示し、右のパネルはｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤治療を示している。

【図8D】ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理されたＱ７４－Ｈｔｔトランスフェクト（図８Ｃ及び８Ｄ）及びＱ２３－Ｈｔｔトランスフェクト（図８Ａ及び８Ｂ）初代皮質ニューロンにおけるＧＦＰタグ付きｈｔｔの分布を視覚化する画像を示す。左のパネルは対照治療を示し、右のパネルはｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤治療を示している。

【図9A】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ２３（図９Ａ～９Ｉ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9B】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ２３（図９Ａ～９Ｉ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9C】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ２３（図９Ａ～９Ｉ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9D】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ２３（図９Ａ～９Ｉ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9E】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ２３（図９Ａ～９Ｉ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9F】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ２３（図９Ａ～９Ｉ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9G】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ２３（図９Ａ～９Ｉ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9H】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ２３（図９Ａ～９Ｉ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9I】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ２３（図９Ａ～９Ｉ）ランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9J】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ７４（図９Ｊ～９Ｒ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9K】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ７４（図９Ｊ～９Ｒ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9L】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ７４（図９Ｊ～９Ｒ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9M】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ７４（図９Ｊ～９Ｒ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9N】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ７４（図９Ｊ～９Ｒ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9O】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ７４（図９Ｊ～９Ｒ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9P】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ７４（図９Ｊ～９Ｒ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9Q】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ７４（図９Ｊ～９Ｒ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【図9R】ｍｉＲ４８５－３ｐがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強することを示す。それぞれＱ７４（図９Ｊ～９Ｒ）トランスフェクトＰＣ１２細胞におけるＨｔｔタンパク質（左パネル）、ＬＣ３Ｂ（中央パネル）、及びＤＡＰＩ（右パネル）の免疫蛍光標識（スケールバー、２０μｍ）であり、対照（上段）、１００ｎＭ（中段）、または３００ｎＭ（下段）ｍｉＲ４８５－３ｐトランスフェクション。白い矢印は、Ｈｔｔ及びＬＣ３の共局在を示している。

【発明を実施するための形態】

【0068】

記載される特定の組成物またはプロセスステップは無論のこと異なり得ることから、本開示をより詳細に記載するのに先立って、本開示は特定の組成物またはプロセスステップに限定されない点を理解されたい。本開示を読むことにより当業者に明らかとなるように、本明細書において記載及び例示される個々の態様の各々は、本開示の範囲または趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの態様のいずれかから容易に分離され得るか、またはそれらの特徴と組み合わされ得る別個の構成要素及び特徴を有する。記載されるいずれの方法も、記載される事象の順序で、または論理的に可能な他の任意の順序で実施することが可能である。

【0069】

本明細書に示される見出しは本開示の様々な態様を限定するものではなく、本開示の態様は、本明細書の全体を参照することによって定義され得るものである。本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるものであるので、本明細書で使用される用語は、あくまで特定の態様を説明することを目的としたものであって、限定することを目的としたものではない点も理解されるべきである。

【0070】

Ｉ．用語
本開示をより容易に理解し得るようにするために、特定の用語を最初に定義する。本出願で使用される場合、本明細書で明示的に別段の定めがある場合を除き、以下の用語のそれぞれは、以下に示す意味を有するものとする。さらなる定義は本明細書の随所に示される。

【0071】

「ａ」または「ａｎ」なる用語で示される実体は、その実体の１つ以上を指し、例えば、「ａ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ヌクレオチド配列）」は、１つ以上のヌクレオチド配列を表すものとして理解される点に留意されたい。したがって、「ａ」（また「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。特許請求の範囲が任意選択の要素を除外するように作成され得ることにさらに留意されたい。したがって、この記述は、特許請求の範囲の要素の列挙に関連した「単に」、「のみ」（“ｓｏｌｅｌｙ”、“ｏｎｌｙ”）等の排他的な用語の使用のため、または「否定的な」（“ｎｅｇａｔｉｖｅ”）限定の使用のための先行記述となるよう意図される。

【0072】

さらに、「及び／または」は、本明細書において使用される場合、２つの指定された特徴または構成要素の各々の、他方を伴うか、または伴わない具体的な開示とみなされるものである。したがって、本明細書において「Ａ及び／またはＢ」などの表現で使用される用語「及び／または」は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、次の態様：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）の各々を包含することが意図される。

【0073】

態様が「～を含む」という語を用いて本明細書で説明されている場合は常に、「～からなる」及び／または「本質的に～からなる」という用語で説明されている別の形で類似する態様も提供されるものと理解されたい。

【0074】

特に定義しない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する分野の当業者により一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓが、本開示において使用される用語の多くの一般的な辞書を当業者に提供している。

【0075】

単位、接頭辞、及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）で承認された形式で示される。数値範囲は、その範囲を定義する数値を包括する。値の範囲が列挙される場合、その範囲について列挙される上限値と下限値との間の介在する各整数値、及びそれらの各小数部も、そのような値の間の各部分範囲とともに、明確に開示されると理解されたい。あらゆる範囲の上限値及び下限値が、独立して範囲に含まれ得るか、または範囲から除外され得、上限値及び下限値のいずれかが含まれる各範囲、いずれも含まれない各範囲、または両方が含まれる各範囲も本開示に包含される。したがって、本明細書において列挙される範囲は、列挙される端点を含む範囲内の値のすべての省略表現であると理解される。例えば、１～１０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分範囲を含むと理解される。

【0076】

値が明示的に列挙される場合、列挙される値とほぼ同じ数量または量の値も、本開示の範囲内であると理解されたい。組み合わせが開示される場合、その組み合わせの要素の各副組み合せも明確に開示され、本開示の範囲内である。反対に、異なる要素または要素群が個別に開示される場合、それらの組み合わせも開示される。ある開示の任意の要素が複数の代替例を有すると開示される場合、各代替例が単独で、または他の代替例との任意に組み合わせで除外される、その開示の例も本明細書に開示され、ある開示の２つ以上の要素が、そのような除外を有し得、そのような除外を有する要素のすべての組み合わせが本明細書に開示される。

【0077】

ヌクレオチドは、一般的に認められたヌクレオチドの１文字記号により表記される。特に明記しない限り、ヌクレオチド配列は、５’から３’の方向で左から右へ記載される。本明細書においてヌクレオチドは、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される一般的に公知のヌクレオチドの１文字記号により表記される。したがって、「ａ」はアデニンを表し、「ｃ」はシトシンを表し、「ｇ」はグアニンを表し、「ｔ」はチミンを表し、「ｕ」はウラシルを表す。

【0078】

アミノ酸配列はアミノ末端からカルボキシ末端の方向に左から右に記載する。本明細書においてアミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される、一般的に公知のアミノ酸の３文字記号または１文字記号により表記される。

【0079】

「約」という用語は、本明細書では、およそ、大体、おおよそ、またはその範囲内の意味で使用される。「約」という用語を数値範囲と併せて使用する場合、その用語は、示されている数値の前後まで、その境界を広げることによって、その範囲を修飾する。一般に、「約」という用語は、例えば、上または下に１０パーセント（より高いまたはより低い）の変動で、明示される値の上及び下に数値を修正することができる。

【0080】

本明細書で使用する場合、「アデノ随伴ウイルス」（ＡＡＶ）なる用語には、これらに限定されるものではないが、ＡＡＶタイプ１、ＡＡＶタイプ２、ＡＡＶタイプ３（タイプ３Ａ及び３Ｂを含む）、ＡＡＶタイプ４、ＡＡＶタイプ５、ＡＡＶタイプ６、ＡＡＶタイプ７、ＡＡＶタイプ８、ＡＡＶタイプ９、ＡＡＶタイプ１０、ＡＡＶタイプ１１、ＡＡＶタイプ１２、ＡＡＶタイプ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、ヘビＡＡＶ、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、エビＡＡＶ、Ｇａｏｅｔａｌ．（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８：６３８１（２００４））及びＭｏｒｉｓｅｔａｌ．（Ｖｉｒｏｌ．３３：３７５（２００４））に開示されるＡＡＶ血清型及び系統群、ならびに現在知られているかもしくは今後発見される他の任意のＡＡＶが含まれる（例えば、ＦＩＥＬＤＳｅｔａｌ．ＶＩＲＯＬＯＧＹ，ｖｏｌｕｍｅ２，ｃｈａｐｔｅｒ６９（４ｔｈｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）を参照）。いくつかの態様では、「ＡＡＶ」には、既知のＡＡＶの誘導体が含まれる。いくつかの態様では、「ＡＡＶ」には、改変された、または人工ＡＡＶが含まれる。

【0081】

「投与」、「投与すること」なる用語、及びその文法的変化形は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤などの組成物を、薬学的に許容される経路により対象に導入することを指す。本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を含むミセルなどの組成物の対象への導入は、腫瘍内、経口、肺、鼻腔内、非経口（静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、もしくは皮下）、直腸、リンパ内、髄腔内、眼周または局所を含む任意の好適な経路によるものである。投与は、自己投与及び他者による投与を含む。好適な投与経路は、組成物または薬剤がその意図される機能を実行するのを可能にする。例えば、適当な経路が静脈内である場合、組成物は、組成物または薬剤を対象の静脈内に導入することによって投与される。

【0082】

本明細書で使用する場合、関心対象の１つ以上の値に適用される「ほぼ」という用語は、明示される参照値と同程度である値を指す。ある特定の態様では、「ほぼ」という用語は、特に明記しない限り、または他のことが文脈から明らかでない限り、明示される参照値の両方向に（数を超えるか、またはそれ未満の）１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内の値の範囲を指す（かかる数がとり得る値の１００％を超える場合を除く）。

【0083】

本明細書で使用する場合、「保存された」という用語は、比較されている２つ以上の配列の同じ位置において不変に見出されるものである、それぞれポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のヌクレオチドまたはアミノ酸残基を指す。相対的に保存されているヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列の他の部分で出現するヌクレオチドまたはアミノ酸と比べてより関連する配列の間で保存されているものである。

【0084】

いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに１００％同一である場合、「完全に保存されている」または「同一である」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも７０％同一であるか、少なくとも８０％同一であるか、少なくとも９０％同一であるか、または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。いくつかの態様において、２つ以上の配列は、互いに約７０％同一である、約８０％同一である、約９０％同一である、約９５％、約９８％、または約９９％同一である場合、「高度に保存された」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも３０％同一であるか、少なくとも４０％同一であるか、少なくとも５０％同一であるか、少なくとも６０％同一であるか、少なくとも７０％同一であるか、少なくとも８０％同一であるか、少なくとも９０％同一であるか、または少なくとも９５％同一である場合、「保存されている」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに約３０％同一であるか、約４０％同一であるか、約５０％同一であるか、約６０％同一であるか、約７０％同一であるか、約８０％同一であるか、約９０％同一であるか、約９５％同一であるか、約９８％同一であるか、または約９９％同一である場合、「保存されている」と言われる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの全長に適用することができ、または部分、領域、もしくはそれらの特徴に適用することができる。

【0085】

本明細書で使用する場合、「由来する」という用語は、特定の分子もしくは生物または情報（例えば、アミノ酸または核酸の配列）を使用して、特定の分子もしくは生物から単離されるか、製造される構成要素を指す。例えば、第２の核酸配列に由来する核酸配列は、第２の核酸配列のヌクレオチド配列と同一であるか、または実質的に類似するヌクレオチド配列を含み得る。ヌクレオチドまたはポリペプチドの場合、派生した種は、例えば、自然に生じる変異誘発、人為的定方向突然変異誘発、または人為的ランダム変異誘発により得られ得る。ヌクレオチドまたはポリペプチドを派生させるために使用される変異誘発は、意図的に定方向、もしくは意図的にランダムであるか、または各々の組み合わせである。最初のものに由来する異なるヌクレオチドまたはポリペプチドを作製するためのヌクレオチドまたはポリペプチドの変異誘発は、ランダム事象（例えば、ポリメラーゼの不忠実さにより引き起こされる）であり得、派生したヌクレオチドまたはポリペプチドの同定は、例えば、本明細書において述べられる適切なスクリーニング法によりなされ得る。一部の態様では、第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に由来するヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、それぞれ第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対する少なくとも約５０％、少なくとも約５１％、少なくとも約５２％、少なくとも約５３％、少なくとも約５４％、少なくとも約５５％、少なくとも約５６％、少なくとも約５７％、少なくとも約５８％、少なくとも約５９％、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有し、ここで、第１のヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列の生物活性を保持する。

【0086】

本明細書で使用する場合、「コーディング領域」または「コーディング配列」とは、アミノ酸に翻訳可能なコドンからなるポリヌクレオチドの部分である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、またはＴＡＡ）は通常はアミノ酸に翻訳されないがコーディング領域の一部とみなすことができる。ただし、すべてのフランキング配列、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどはコーディング領域の一部ではない。コーディング領域の境界は、得られるポリペプチドのアミノ末端をコードする５’末端の開始コドンと、得られるポリペプチドのカルボキシ末端をコードする３’末端の翻訳終止コドンとによって一般的に決定される。

【0087】

「相補的」及び「相補性」という用語は、ワトソン・クリック型塩基対形成則により互いに関連する２つ以上のオリゴマー（すなわち、それぞれが核酸塩基配列を含む）、またはオリゴマーと標的遺伝子との間を指す。例えば、核酸塩基配列「Ｔ－Ｇ－Ａ（５’→３’）」は、核酸塩基配列「Ａ－Ｃ－Ｔ（３’→５’）」に相補的である。相補性は「部分的」であってよく、その場合、所与の核酸塩基配列の核酸塩基のすべてより少ないものが塩基対形成則に従って他の核酸塩基配列と一致している。例えば、いくつかの態様では、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間の相補性は、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％であり得る。したがって、特定の態様では、「相補性」という用語は、標的核酸配列（例えば、ｍｉＲ－４８５の核酸配列）との少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の一致または相補性を指す。または例のような、「完璧な」または「完全な」（１００％）相補性が、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間に存在し得る。いくつかの態様では、核酸塩基配列間の相補性の程度は、配列間のハイブリダイゼーションの効率及び強度に顕著な影響を与える。

【0088】

「下流」という用語は、参照ヌクレオチド配列の３’側に存在するヌクレオチド配列を指す。ある特定の態様では、下流ヌクレオチド配列は、転写開始点に続く配列に関する。例えば、遺伝子の翻訳開始コドンは、転写開始部位の下流に存在する。

【0089】

「賦形剤」及び「キャリア」という用語は、互換的に使用され、化合物、例えば本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。

【0090】

本明細書で使用する場合、「発現」という用語は、ポリヌクレオチドが遺伝子産物、例えばＲＮＡまたはポリペプチドを生成するプロセスを指す。発現には、マイクロＲＮＡ結合部位、小分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、または他の任意のＲＮＡ産物へのポリヌクレオチドの転写が限定されることなく含まれる。発現には、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）へのポリヌクレオチドの転写、及びｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳が限定されることなく含まれる。発現によって、「遺伝子産物」が生成される。本明細書で使用する場合、遺伝子産物は、例えば遺伝子の転写によって生成されるＲＮＡなどの核酸であってよい。本明細書で使用する場合、遺伝子産物は、核酸、遺伝子の転写によって生成されるＲＮＡもしくはｍｉＲＮＡ、または転写産物から翻訳されたポリペプチドであってよい。本明細書に記載される遺伝子産物には、例えばポリアデニル化またはスプライシングなどの転写後修飾を有する核酸、または、例えばリン酸化、メチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、またはタンパク質分解開裂などの翻訳後修飾を有するポリペプチドがさらに含まれる。

【0091】

本明細書で使用する場合、「相同性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば核酸分子間の全体的関連性を指す。一般に、「相同性」という用語は、２つの分子の進化的関係を意味する。したがって、相同な２つの分子は、共通の進化的祖先を有する。本開示の文脈において、相同性という用語は、同一性及び類似性の両方を包含する。

【0092】

いくつかの態様では、ポリマー分子は、分子における少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％のモノマーが同一（厳密に同じモノマー）であるか、または類似する（保存的置換）場合、互いに「相同である」とみなされる。「相同である」という用語は、必然的に少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチド配列）間の比較を指す。

【0093】

本開示との関連で、置換（それらがアミノ酸置換と称される場合でも）は、核酸レベルで行われ、すなわち、アミノ酸残基を代替アミノ酸残基で置換することは、第１のアミノ酸をコードするコドンを第２のアミノ酸をコードするコドンで置換することによって行われる。

【0094】

本明細書で使用する場合、「同一性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば、ポリヌクレオチド分子間の全体的なモノマー保存性を指す。いかなる追加の修飾語もない「同一である」という用語、例えば、「ポリヌクレオチドＡはポリヌクレオチドＢと同一である」は、ポリヌクレオチド配列同士が１００％同一（１００％の配列同一性）であることを意味する。例えば、「７０％同一である」と２つの配列を表現することは、例えば、「７０％配列同一性」を有するとそれらを表現することに等しい。

【0095】

２つのポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の同一率（％）の計算は、例えば、最適な比較のために２つの配列をアラインメントすることにより実行され得る（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の一方または両方にギャップが導入され得、同一でない配列が比較のために無視され得る）。ある特定の態様において、比較目的のためにアラインメントされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで、対応するアミノ酸位のアミノ酸、またはポリヌクレオチドの場合は塩基が比較される。

【0096】

第１の配列におけるある位置が第２の配列における対応する位置と同じアミノ酸またはヌクレオチドにより占められる場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一率（％）は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列により共有される同一の位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列間の同一率（％）の決定は、数学アルゴリズムを使用して達成され得る。

【0097】

異なる配列同士（例えば、ポリヌクレオチド配列）をアラインするために使用することができる適当なソフトウェアプログラムは様々なソースから入手可能である。配列同一率（％）を決定するための適当なプログラムの１つに、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴパッケージプログラムの一部であるｂｌ２ｓｅｑがある。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムを使用して２つの配列間の比較を実行する。ＢＬＡＳＴＮが核酸配列を比較するために使用されるのに対して、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは、例えば、ＥＭＢＯＳＳバイオインフォマティクスプログラム集の一部であり、またｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａのＥｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）から利用可能である、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒである。

【0098】

配列アラインメントは、当該技術分野において公知の方法、例えば、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、またはＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどを使用して実施され得る。

【0099】

ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列とアラインメントされている単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、それぞれ、それら自身の配列同一性パーセントを有し得る。配列同一性パーセント値は、小数第１位に丸められることが留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に切り捨てられるが、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は、８０．２に切り上げられる。また、長さの数値は常に整数であることに留意されたい。

【0100】

ある特定の態様では、同一性パーセンテージ（％ＩＤ）または第１のアミノ酸配列（または核酸配列）の第２のアミノ酸配列（または核酸配列）に対する同一性パーセンテージ（％ＩＤ）は、％ＩＤ＝１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中、Ｙは、第１及び第２の配列のアラインメント（目視検査または特定の配列アラインメントプログラムによりアラインメントされる）において完全な一致と評価されたアミノ酸残基（または核酸塩基）の数であり、Ｚは、第２の配列における残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列を超える場合、第１の配列の第２の配列に対する同一性パーセントは、第２の配列の第１の配列に対する同一性パーセントより高くなるであろう。

【0101】

当業者は、配列同一性パーセントの計算のための配列アランイメントの作成が、もっぱら一次配列データにより駆動される２つの配列間比較に限定されないことを当業者は理解するであろう。配列アラインメントは、配列データを異種の供給源由来のデータ、例えば、構造データ（例えば、タンパク質結晶構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、または系統学的データと統合することにより生成され得ることも理解されよう。異種のデータを統合して多重配列アラインメントを生成する好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで利用可能であり、代替的に例えば、ＥＢＩから利用可能なＴ－Ｃｏｆｆｅｅである。配列同一率を計算するために使用される最終的なアラインメントは、自動または手動のいずれかで管理され得ることも理解されよう。

【0102】

本明細書で使用する場合、「単離された」、「精製された」、「抽出された」という用語、及びそれらの文法的変化形は、互換的に使用され、１つ以上の精製プロセスを受けた本開示の所望の組成物、例えば、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤の調製状態を指す。いくつかの態様では、本明細書で使用する場合、単離または精製は、夾雑物を含有する試料から本開示の組成物、例えば本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を取り出す、（例えば、画分を）部分的に取り出すプロセスである。

【0103】

いくつかの態様では、単離された組成物は、検出可能な望ましくない活性を有さないか、または代替的に、望ましくない活性のレベルもしくは量が許容可能なレベルまたは量以下である。他の態様では、単離された組成物は、許容可能な量及び／または濃度及び／または活性以上の量及び／または濃度の本開示の所望の組成物を有する。他の態様では、単離された組成物は、組成物が取得される出発物質と比較して濃縮される。この濃縮は、出発物質と比較して少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、少なくとも約９９．９９％、少なくとも約９９．９９９％、少なくとも約９９．９９９９％、または９９．９９９９％超であり得る。

【0104】

いくつかの態様では、単離された調製物は、残留する生物学的産物を実質的に含まない。いくつかの態様では、単離された調製物は、任意の混入している生物学的物質を１００％、少なくとも約９９％、少なくとも約９８％、少なくとも約９７％、少なくとも約９６％、少なくとも約９５％、少なくとも約９４％、少なくとも約９３％、少なくとも約９２％、少なくとも約９１％、または少なくとも約９０％含まない。残留する生物学的産物は、非生物物質（化学物質を含む）または不要な核酸、タンパク質、脂質、もしくは代謝産物を含み得る。

【0105】

本明細書で使用する場合、「連結された」という用語は、共有結合または非共有結合によりそれぞれ第２のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列に結合された、第１のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列を指す。第１のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列は、第２のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列に直接的に結合もしくは並列され得るか、または代替的に介在配列が第１の配列から第２の配列までに共有結合により加わり得る。「連結された」という用語は、第１のポリヌクレオチド配列の第２のポリヌクレオチド配列への５’末端または３’末端での融合を意味するだけでなく、第２のポリヌクレオチド配列（または第１のポリヌクレオチド配列）における任意の２つのヌクレオチドへの第１のポリヌクレオチド配列（またはそれぞれ第２のポリヌクレオチド配列）全体の挿入も含む。第１のポリヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合またはリンカーにより第２のポリヌクレオチド配列に連結され得る。リンカーは、例えば、ポリヌクレオチドであり得る。

【0106】

本明細書で使用する場合、「ｍｉＲＮＡ阻害剤」とは、ｍｉＲＮＡの発現、機能、及び／または活性を減少させるか、変化させるか、及び／または調節することができる化合物を指す。ｍｉＲＮＡ阻害剤は、標的ｍｉＲＮＡ核酸配列と少なくとも部分的に相補的であるポリヌクレオチド配列であってよく、それにより、ｍｉＲＮＡ阻害剤は標的ｍｉＲＮＡ配列とハイブリダイズする。例えば、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、標的ｍｉＲ－４８５核酸配列と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド分子をコードしたヌクレオチド配列を含み、それにより、ｍｉＲ－４８５阻害剤はｍｉＲ－４８５配列とハイブリダイズする。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５配列に対するｍｉＲ－４８５のハイブリダイゼーションは、ｍｉＲ－４８５の発現、機能、及び／または活性を減少させるか、変化させるか、及び／または調節する（例えば、ハイブリダイゼーションによって、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現の増大がもたらされる）。

【0107】

「ｍｉＲＮＡ」、「ｍｉＲ」、及び「マイクロＲＮＡ」という用語は、互換的に使用され、ＲＮＡによる遺伝子調節に関与する真核生物において見出されるマイクロＲＮＡ分子を指す。この用語は、前駆体からプロセシングされた一本鎖ＲＮＡ分子を指すために使用される。いくつかの態様では、「アンチセンスオリゴマー」という用語は、本開示のマイクロＲＮＡ分子を記述するために使用することもできる。本開示に関連するｍｉＲＮＡの名称及びそれらの配列は、本明細書において提供される。マイクロＲＮＡは、不完全な塩基対形成により標的ｍＲＮＡを認識及びそれに結合し、標的ｍＲＮＡの不安定化または翻訳阻害をもたらし、これにより、標的遺伝子発現を下方調節する。逆に、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む分子（一般にｍｉＲＮＡのシード領域に相補的な配列を含む分子）によるｍｉＲＮＡの標的化は、ｍｉＲＮＡにより誘発される翻訳阻害を低減または阻害し得、標的遺伝子の上方調節をもたらす。

【0108】

「ミスマッチ」または「複数のミスマッチ」という用語は、オリゴマー核酸塩基配列（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における塩基対形成則に従って標的核酸配列（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）と一致しない１つ以上の核酸塩基（連続しているまたは離れているにかかわらず）を指す。多くの場合、完全な相補性が所望されるが、いくつかの態様では、標的核酸配列に対する１つ以上（好ましくは６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、または１つ）のミスマッチが生じ得る。オリゴマー内の任意の位置でのバリエーションが含まれる。ある特定の態様では、本開示のアンチセンスオリゴマー（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、末端近くでの核酸塩基配列のバリエーション、内部でのバリエーションを含み、存在する場合、通常、５’及び／または３’末端の約６、５、４、３、２、または１サブユニット以内に存在する。いくつかの態様では、１つ、２つ、または３つの核酸塩基が除去されてもよく、依然としてオンターゲットの結合を与えることができる。

【0109】

本明細書で使用する場合、「調節する」、「修飾する」という用語、及びそれらの文法的変化形は、一般に、特定の濃度、レベル、発現、機能、または行動に適用される場合、例えば、アンタゴニストまたはアゴニストとして作用するために、特定の濃度、レベル、発現、機能、または行動を増加または減少させること、例えば、直接または間接的に、促進すること／刺激すること／上方調節することまたはそれらに干渉すること／それらを阻害すること／それらを下方調節することにより変化させる能力を指す。場合によっては、修飾因子は、ある特定の濃度、レベル、活性、または機能を、コントロールと比較して、または一般に予想される活性の平均レベルと比較して、もしくは活性のコントロールレベルと比較して増加及び／または減少させ得る。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲＮＡ阻害剤、例えばｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５の発現、機能及び／または活性を調節する（例えば減少させる、変化させる、または失わせる）ことができ、それにより、ＳＩＲＴ１タンパク質もしくは遺伝子の発現及び／または活性を調節することができる。

【0110】

「核酸」、「核酸分子」、「ヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド」、及びそれらの文法的変化形は、互換的に使用され、一本鎖形態または二重螺旋のいずれかでのリン酸エステルポリマー形態のリボヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、ウリジン、またはシチジン；「ＲＮＡ分子」）もしくはデオキシリボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、またはデオキシシチジン；「ＤＮＡ分子」）、またはそれらの任意のホスホエステルアナログ、例えば、ホスホロチオエート及びチオエステルを指す。一本鎖核酸配列は、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）または一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を指す。二本鎖ＤＮＡ－ＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＲＮＡ螺旋が可能である。核酸分子及び特にＤＮＡまたはＲＮＡ分子という用語は、分子の一次及び二次構造のみを指し、任意の特定の三次形態に限定されない。したがって、この用語は、とりわけ線形または環状ＤＮＡ分子（例えば、制限フラグメント）、プラスミド、スーパーコイルＤＮＡ、及び染色体に見出される二本鎖ＤＮＡを含む。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造について述べる際、配列は、ＤＮＡの非転写鎖（すなわち、ｍＲＮＡに相同な配列を有する鎖）に沿った５’～３’方向での配列のみを提供する通常の慣例に従って本明細書に記載され得る。「組換えＤＮＡ分子」は、分子生物学的操作を受けたＤＮＡ分子である。ＤＮＡとしては、限定されるものではないが、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、合成ＤＮＡ、及び半合成ＤＮＡが挙げられる。本開示の「核酸組成物」は、本明細書に記載されるような１つ以上の核酸を含む。

【0111】

「薬学的に許容されるキャリア」、「薬学的に許容される賦形剤」という用語、及びそれらの文法的変化形は、ヒトを含む動物に使用するための米国連邦政府の規制機関により承認されたか、または米国薬局方に列挙される薬剤のいずれか、ならびに対象への組成物の投与を禁止する程度まで望ましくない生理作用の発生を引き起こさず、投与される化合物の生物活性及び特性を抑制しない任意のキャリアまたは希釈剤を包含する。医薬組成物を調製するのに有用であり、一般に安全で、非毒性であり、望ましい賦形剤及び担体が含まれる。

【0112】

本明細書で使用する場合、「医薬組成物」という用語は、１種以上の他の化学成分、例えば、薬学的に許容されるキャリア及び賦形剤と混合もしくは混ぜ合わされたか、またはそれらの中に懸濁された、例えば、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤などの本明細書に記載される化合物のうちの１種以上を指す。医薬組成物の１つの目的は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を含む製剤の対象への投与を促進することである。

【0113】

本明細書で使用する場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、それらのアナログ、またはそれらの混合物が挙げられるヌクレオチドの任意の長さのポリマーを指す。

【0114】

いくつかの態様では、この用語は分子の一次構造を指す。したがって、この用語は、三本鎖、二本鎖、及び一本鎖デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、ならびに三本鎖、二本鎖、及び一本鎖リボ核酸（「ＲＮＡ」）を含む。
この用語は、例えば、アルキル化及び／またはキャッピングにより修飾されたポリヌクレオチド及び未修飾形態のポリヌクレオチドも含む。

【0115】

いくつかの態様では、「ポリヌクレオチド」という用語は、ポリデオキシリボヌクレオチド（２－デオキシ－Ｄ－リボースを含有する）、スプライシングされたまたはスプライシングされていないにかかわらず、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ及びｍＲＮＡを含む、ポリリボヌクレオチド（Ｄ－リボースを含有する）、プリンまたはピリミジン塩基のＮ－またはＣ－配糖体である任意の他の種類のポリヌクレオチド、ならびに非ヌクレオチド骨格を含有する他のポリマー、例えば、ポリアミド（例えば、ペプチド核酸「ＰＮＡ」）及びポリモルホリノポリマー、ならびにＤＮＡ及びＲＮＡにおいて見出されるような塩基対形成及び塩基スタッキングを可能にする配置で核酸塩基を含有することを条件とする他の配列特異的合成核酸ポリマーを含む。

【0116】

本開示のいくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドであってよい。いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡである。いくつかの態様では、ＲＮＡは、合成ＲＮＡである。いくつかの態様では、合成ＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。いくつかの態様では、ある特定の種類のすべての核酸塩基が、非天然核酸塩基と置き換えられている（例えば、本明細書において開示されるポリヌクレオチドにおけるすべてのウリジンが、非天然核酸塩基、例えば、５－メトキシウリジンと置き換えられ得る）。

【0117】

「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、例えばＳＩＲＴ１遺伝子によりコードされた、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指して本明細書において互換的に使用される。ポリマーは、修飾アミノ酸を含み得る。これらの用語は、自然に修飾された、または、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合など、他の任意の操作もしくは改変などの介入により修飾されたアミノ酸ポリマーも包含される。例えば、１つ以上のアミノ酸アナログ（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、Ｄ－アミノ酸、及びクレアチンなどの非天然アミノ酸が挙げられる）、及び当該技術分野において公知の他の修飾を含有するポリペプチドも定義の範囲内に含まれる。本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」という用語は、任意のサイズ、構造、または機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを指す。

【0118】

ポリペプチドとしては、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、上述のもののホモログ、オーソログ、パラログ、フラグメント及び他の等価物、バリアント、ならびにアナログが挙げられる。

【0119】

ポリペプチドは、単一のポリペプチドであり得るか、またはダイマー、トリマー、もしくはテトラマーなどの多分子複合体であり得る。それらは、一本鎖または多連鎖ポリペプチドも含み得る。最も一般的に、ジスルフィド結合は、多鎖ポリペプチドに見られる。ポリペプチドという用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学的アナログであるようなアミノ酸ポリマーにも適用され得る。いくつかの態様では、「ペプチド」は、アミノ酸約５０個以下の長さ、例えば、アミノ酸約５個、約１０個、約１５個、約２０個、約２５個、約３０個、約３５個、約４０個、約４５個、または約５０個の長さであり得る。

【0120】

本明細書で使用する場合、「予防する」、「予防すること」という用語、及びそれらの変化形は、疾患、障害、及び／または状態の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または臨床徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の進行を部分的または完全に遅延させること；及び／または疾患、障害、及び／または状態に関連する病理を生じるリスクを減少させることを指す。いくつかの態様では、転帰の予防は、予防的治療によって実現される。

【0121】

本明細書で使用する場合、「プロモーター」及び「プロモーター配列」という用語は互換可能であり、コーディング配列または機能性ＲＮＡの発現を制御することができるＤＮＡ配列を指す。一般的に、コーディング配列は、プロモーター配列の３’側に位置する。プロモーターは、天然遺伝子にその全体が由来してもよく、または自然界にみられる異なるプロモーターに由来する異なるエレメントで構成されてもよく、またはさらには、合成ＤＮＡセグメントを含んでもよい。異なるプロモーターは、異なる組織または細胞タイプにおいて、または発生の異なる段階において、または異なる環境的もしくは生理学的条件に応じて、遺伝子の発現を誘導することができる点は、当業者には理解されよう。ほとんどの細胞タイプでほとんどの時間に遺伝子を発現させるプロモーターは一般的に「構成的プロモーター」と呼ばれる。特定の細胞タイプにおいて遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「細胞特異的プロモーター」または「組織特異的プロモーター」と呼ばれる。発生または細胞分化の特定の段階で遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「発生特異的プロモーター」または「細胞分化特異的プロモーター」と呼ばれる。プロモーターを誘導する薬剤、生物学的分子、化学物質、リガンド、光などによる細胞の曝露または処理後に誘導されて遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「誘導性プロモーター」または「調節可能なプロモーター」と呼ばれる。多くの場合で調節配列の正確な境界は完全には定義されていないことから、異なる長さのＤＮＡフラグメントが同じプロモーター活性を有し得る点もさらに認識されよう。

【0122】

プロモーター配列の境界はその３’末端では転写開始部位であり、バックグラウンドよりも高い検出可能なレベルで転写を開始するのに必要な最小の数の塩基またはエレメントを含むように上流（５’方向）に延びている。プロモーター配列内には、転写開始部位（例えばヌクレアーゼＳ１によるマッピングによって簡便に定義される）ばかりでなく、ＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）も見出される。いくつかの態様では、本開示とともに使用することができるプロモーターには、組織特異的プロモーターが含まれる。

【0123】

本明細書で使用する場合、「予防」とは、疾患もしくは状態の発症を予防するために、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防または遅延させるために使用される治療的行動または行動方針を指す。

【0124】

本明細書で使用する場合、「予防法」は、健康を維持し、疾患または状態を予防するために、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防もしくは遅延させるために取られる手段を指す。

【0125】

本明細書で使用する場合、「遺伝子調節領域」または「調節領域」という用語は、コーディング領域の上流（５’側のノンコーディング配列）、その内部、またはその下流（３’側のノンコーディング配列）に位置して、転写、ＲＮＡプロセシング、または関連するコーディング領域の翻訳に影響を及ぼすヌクレオチド配列を指す。調節領域には、プロモーター、翻訳リーダー配列、イントロン、ポリアデニル化認識配列、ＲＮＡプロセシング部位、エフェクター結合部位、またはステムループ構造が含まれ得る。コーディング領域が真核細胞内での発現のためのものである場合、ポリアデニル化シグナル及び転写終結配列がコーディング配列の３’側に通常は配置される。

【0126】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、１つ以上のｍｉＲ－４８５結合部位を含むＲＮＡをコードしたポリヌクレオチド）は、１つ以上のコーディング領域と機能的に関連付けられたプロモーター及び／または他の発現（例えば、転写）制御エレメントを含むことができる。機能的関連付けにおいて、遺伝子産物のコーディング領域は、１つ以上の調節領域と、その遺伝子産物の発現が調節領域（複数可）の影響または制御下に置かれるようにして関連付けられる。例えば、コーディング領域とプロモーターとは、プロモーター機能の誘導が、そのコーディング領域によってコードされたｍＲＮＡの転写をもたらし、かつプロモーターとコーディング領域との連結の性質が、プロモーターが遺伝子産物の発現を誘導する能力を妨げず、またはＤＮＡ鋳型が転写される能力も妨げない場合に、「機能的に関連付けられている」。プロモーター以外の他の発現制御エレメント、例えば、エンハンサー、オペレーター、リプレッサー、及び転写終結シグナルを、遺伝子産物の発現を誘導するようにコーディング領域と機能的に関連付けることもできる。

【0127】

本明細書で使用する場合、「類似性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えばｍｉＲＮＡ分子）間の全体的関連性を指す。ポリマー分子同士の互いに対する類似率（％）の計算は、類似率（％）の計算が当該技術分野で理解されるところの保存的置換を考慮している点を除いて、同一率（％）の計算と同様にして行うことができる。類似率（％）は、用いられる比較尺度、すなわち、核酸同士が、例えばそれらの進化的な近さ、電荷、体積、柔軟性、極性、疎水性、芳香族性、等電点、抗原性、またはそれらの組み合わせのどれにしたがって比較されるかによって左右されることが理解される。

【0128】

「対象」、「患者」、「個体」、及び「宿主」なる用語、及びそれらの変化形は、本明細書において互換的に使用され、限定されるものではないが、ヒト、家庭用動物（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）、及び実験動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなど）が挙げられる、診断、処置、または治療が所望される任意の哺乳動物対象、特にヒトを指す。本明細書に記載される方法は、ヒトの治療及び獣医学的用途の両方に適用可能である。

【0129】

本明細書で使用する場合、「その必要がある対象」という表現は、例えば、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現レベルを増加させるためなど、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）の投与から恩恵を受ける哺乳動物対象などの対象を含む。

【0130】

本明細書で使用する場合、「治療有効量」という用語は、所望の治療効果、薬理学的、及び／または生理学的効果をもたらす必要がある対象において所望の治療効果、薬理学的、及び／または生理学的効果をもたらすのに十分な、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を含む試薬または医薬化合物の量である。治療上有効量は、予防が治療とみなされ得る場合、「予防上有効量」であり得る。

【0131】

本明細書で使用する場合、「処置する」、「処置」、または「処置すること」という用語は、例えば、疾患または状態の重症度の低減、疾患経過の期間の低減、疾患または状態に関連する１つ以上の症状の改善または除去、疾患または状態を必ずしも治療しない、疾患または状態を有する対象に対する有益な効果の提供を指す。この用語には、疾患もしくは状態またはその症状の予防または防止も含まれる。

【0132】

「上流」という用語は、参照ヌクレオチド配列の５’側に位置するヌクレオチド配列を指す。

【0133】

「ベクター」とは、宿主細胞内に核酸をクローニング及び／または導入するための任意の担体を指す。ベクターは、結合されたセグメントの複製をもたらすように別の核酸セグメントを結合させることができるレプリコンとすることができる。「レプリコン」とは、インビボで自律的な複製ユニットとして機能する（すなわち、それ自身の制御下で複製することができる）任意の遺伝子エレメント（例えば、プラスミド、ファージ、コスミド、染色体、ウイルス）のことを指す。「ベクター」という用語には、細胞に核酸をインビトロ、エクスビボ、またはインビボで導入するためのウイルス性及び非ウイルス性の担体が含まれる。例えば、プラスミド、改変真核生物ウイルス、または改変細菌ウイルスを含む数多くのベクターが当該技術分野で知られており、使用されている。適当なベクターへのポリヌクレオチドの挿入は、適当なポリヌクレオチドフラグメントを、相補的な粘着末端を有する選択されたベクターにライゲートすることによって行うことができる。

【0134】

ベクターは、ベクターを取り込んだ細胞の選択または特定を可能とする選択マーカーまたはレポーターをコードするように操作することができる。選択マーカーまたはレポーターの発現によって、ベクターに含まれる他のコーディング領域を取り込んで発現する宿主細胞を特定し、及び／または選択することが可能となる。当該技術分野において知られ、使用されている選択マーカーの例としては、アンピシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ヒグロマイシン、ビアラホス除草剤、スルホンアミドなどに対する耐性を与える遺伝子、ならびに表現型マーカーとして用いられる遺伝子、すなわち、アントシアン調節遺伝子、イソペンテニル基転移酵素遺伝子などが挙げられる。当該技術分野において知られ、使用されているレポーターの例としては、ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、β－ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、β－グルクロニダーゼ（Ｇｕｓ）などが挙げられる。選択マーカーはレポーターとみなすこともできる。

【0135】

ＩＩ．使用方法
ハンチントン病の治療
いくつかの態様では、本開示は、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を対象に投与することによってハンチントン病の治療を必要とする対象においてハンチントン病を治療する方法を提供する。いくつかの態様では、対象は、投与前に、神経過敏、抑うつ、不随意運動、協調運動障害、新しい情報の学習または意思決定の困難、制御不能な運動、情緒的問題、及び思考能力（認知）の喪失のうちの１つまたは複数の特徴を示す。いくつかの態様では、対象は、投与後、ハンチントン病の１つまたは複数の特徴の改善を示す。いくつかの態様では、改善は、投与前の特性と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍である。

【0136】

ＳＩＲＴ１の調節
いくつかの態様では、ハンチントン病は、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルの減少に関連している。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象におけるＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させる。

【0137】

サーチュイン１（ＳＩＲＴ１）は、ＮＡＤ依存性脱アセチル化酵素サーチュイン１としても知られ、ヒトではＳＩＲＴ１遺伝子によってコードされているタンパク質である。ＳＩＲＴ１遺伝子はヒトの第１０番染色体上に位置している（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００００１０．１１のヌクレオチド６７，８８４，６５６～６７，９１８，３９０（＋鎖の方向））。ＳＩＲＴ１遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「調節タンパク質ＳＩＲ２ホモログ１」、「サイレント接合型情報調節因子２ホモログ１（ｓｉｌｅｎｔ ｍａｔｉｎｇ－ｔｙｐｅ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ２ ｈｏｍｏｌｏｇ１）」、「ＳＩＲ２」、「ＳＩＲ２様タンパク質１」、「ＳＩＲ２Ｌ１」、「ＳＩＲ２α」、「１型サーチュイン」、「ｈＳＩＲＴ１」、または「ｈＳＩＲ２」が挙げられる。

【0138】

ヒトＳＩＲＴ１タンパク質には、選択的スプライシングから生じる少なくとも２種類の既知のアイソフォームがある。ＳＩＲＴ１アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９６ＥＢ６－１）は７４７個のアミノ酸からなり、カノニカル配列として選択されている（配列番号３１）。ＳＩＲＴ１アイソフォーム２（「Δエクソン８」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９６ＥＢ６－２）は、５６１個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：４５４～６３９：欠失（配列番号３２）。下記表１に、２つのＳＩＲＴ１アイソフォームの配列を示す。

【表1-1】

【表1-2】

【0139】

本明細書で使用する場合、「ＳＩＲＴ１」なる用語は、細胞によって天然に発現されるＳＩＲＴ１のあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＩＲＴ１アイソフォーム１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＩＲＴ１アイソフォーム２の発現を増加させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＩＲＴ１アイソフォーム１及びアイソフォーム２の発現を増加させることができる。特に断らない限り、本明細書では、アイソフォーム１及びアイソフォーム２の両方を併せて「ＳＩＲＴ１」と呼ぶ。

【0140】

いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現）と比較してＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％増加させる。

【0141】

いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５、例えばｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることにより、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。

【0142】

いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－３ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。特定の態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－５ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－５ｐの発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。さらなる態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの両方の発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５－３ｐ及び／またはｍｉＲ－４８５－５ｐの発現は、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与後に完全に阻害される。

【0143】

本明細書に記載されるように、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与された場合にＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常な（例えば、減少した）レベルに関連したハンチントン病の治療を必要とする対象において、それを治療する方法を提供する。
ＣＤ３６の調節

【0144】

いくつかの態様では、ハンチントン病は、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルの減少に関連している。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現の増加が必要な対象において、その発現を増加させる。

【0145】

クラスター決定因子３６（ＣＤ３６）は、血小板糖タンパク質４としても知られ、ヒトではＣＤ３６遺伝子によってコードされているタンパク質である。ＣＤ３６遺伝子は第７番染色体上に位置している（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００７．１４のヌクレオチド８０，６０２，６５６～８０，６７９，２７７（＋鎖の方向））。ＣＤ３６遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「血小板糖タンパク質ＩＶ」、「脂肪酸転移酵素」、「スカベンジャー受容体クラスＢメンバー３」、「糖タンパク質８８」、「糖タンパク質ＩＩＩｂ」、「糖タンパク質ＩＶ」、「トロンボスポンジン受容体」、「ＧＰＩＩＩＢ」、「ＰＡＳＩＶ」、「ＧＰ３Ｂ」、「ＧＰＩＶ」、「ＦＡＴ」、「ＧＰ４」、「ＢＤＰＬＴ１０」、「ＳＣＡＲＢ３」、「ＣＨＤＳ７」、「ＰＡＳＩＶ」、または「ＰＡＳ－４」が挙げられる。

【0146】

ヒトＣＤ３６タンパク質には、選択的スプライシングから生じる少なくとも４種類の既知のアイソフォームがある。ＣＤ３６アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ１６６７１－１）は４７２個のアミノ酸からなり、カノニカル配列として選択されている（配列番号３６）。ＣＤ３６アイソフォーム２（「ｅｘ８－ｄｅｌ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ１６６７１－２）は、２８８個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２７４～２８８：ＳＩＹＡＶＦＥＳＤＶＮＬＫＧＩ→ＥＴＣＶＨＦＴＳＳＦＳＶＣＫＳ、及び２８９～４７２：欠失（配列番号３７）。ＣＤ３６アイソフォーム３（「ｅｘ６－７－ｄｅｌ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ１６６７１－３）は、４３３個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２３４～２７２：欠失（配列番号３８）。ＣＤ３６アイソフォーム４（「ｅｘ４－ｄｅｌ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ１６６７１－４）は、４１２個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１４４～２０３：欠失（配列番号３９）。下記表２に、４つのＣＤ３６アイソフォームの配列を示す。

【表2-1】

【表2-2】

【0147】

本明細書で使用する場合、「ＣＤ３６」なる用語は、細胞によって天然に発現されるＣＤ３６のあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６アイソフォーム１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６アイソフォーム２の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６アイソフォーム３の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６アイソフォーム４の発現を増加させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６のアイソフォーム１とアイソフォーム２、及び／またはアイソフォーム３とアイソフォーム４、及び／またはアイソフォーム１とアイソフォーム４、及び／またはアイソフォーム２とアイソフォーム３の両方の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はすべてのＣＤ３６アイソフォームの発現を増加させることができる。特に断らない限り、アイソフォーム１、アイソフォーム２、アイソフォーム３、及びアイソフォーム４を本明細書ではまとめて「ＣＤ３６」と呼ぶ。

【0148】

いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現）と比較してＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％増加させる。

【0149】

いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５の発現及び／または活性を低下させることにより、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させる。ｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの２つの成熟型が知られている。本明細書で開示されるように、いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－５ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの両方の発現及び／または活性を低下させることができる。
ＰＧＣ１の調節

【0150】

いくつかの態様では、ハンチントン病は、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルの減少に関連している。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現の増加が必要な対象において、その発現を増加させる。

【0151】

ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーター１－アルファ（ＰＧＣ１－α）は、ＰＰＡＲＧコアクチベーター１アルファまたはリガンド作用モジュレーター６としても知られ、ヒトではＰＰＡＲＧＣ１Ａ遺伝子によってコードされているタンパク質である。ＰＧＣ－１α遺伝子はヒトの第４番染色体上に位置している（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００４．１２のヌクレオチド２３，７９２，０２１～２４，４７２，９０５（＋鎖の方向））。ＰＧＣ－１α遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「ＰＰＡＲＧＣ１Ａ」、「ＬＥＭ６」、「ＰＧＣ１」、「ＰＧＣ１Ａ」、「ＰＧＣ－１ｖ」、「ＰＰＡＲＧＣ１，「ＰＧＣ１α」、または「ＰＧＣ－１（α）」が挙げられる。

【0152】

ヒトＰＧＣ－１αタンパク質には、選択的スプライシングから生じる少なくとも９種類の既知のアイソフォームがある。ＰＧＣ－１αアイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－１）は７９８個のアミノ酸からなり、カノニカル配列として選択されている（配列番号４０）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム２（「アイソフォームＮＴ－７ａ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－２）は、２７１個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２６９～２７１：ＤＰＫ→ＬＦＬ；２７２～７９８：欠失（配列番号４１）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム３（「アイソフォームＢ５」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－３）は、８０３個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１８：ＭＡＷＤＭＣＮＱＤＳＥＳＶＷＳＤＩＥ→ＭＤＥＴＳＰＲＬＥＥＤＷＫＫＶＬＱＲＥＡＧＷＱ（配列番号４２）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム４（「アイソフォームＢ４」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－４）は、７８６個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１８：ＭＡＷＤＭＣＮＱＤＳＥＳＶＷＳＤＩＥ→ＭＤＥＧＹＦ（配列番号４３）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム５（「アイソフォームＢ４－８ａ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－５）は、２８９個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１８：ＭＡＷＤＭＣＮＱＤＳＥＳＶＷＳＤＩＥ→ＭＤＥＧＹＦ、２９４～３０１：ＬＴＰＰＴＴＰＰ→ＶＫＴＮＬＩＳＫ、３０２～７９８：欠失（配列番号４４）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム６（「アイソフォームＢ５－ＮＴ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－６）は、２７６個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１８：ＭＡＷＤＭＣＮＱＤＳＥＳＶＷＳＤＩＥ→ＭＤＥＴＳＰＲＬＥＥＤＷＫＫＶＬＱＲＥＡＧＷＱ、２６９－２７１：ＤＰＫ→ＬＦＬ、２７２－７９８：欠失（配列番号４５）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム７（「Ｂ４－３ｅｘｔ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－７）は、１３８個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１８：ＭＡＷＤＭＣＮＱＤＳＥＳＶＷＳＤＩＥ→ＭＤＥＧＹＦ、１４４～１５０：ＬＫＫＬＬＬＡ→ＶＲＴＬＰＴＶ、１５１～７９８：欠失（配列番号４６）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム８（「アイソフォーム８ａ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－８）は、３０１個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２９４～３０１：ＬＴＰＰＴＴＰＰ→ＶＫＴＮＬＩＳＫ、３０２～７９８：欠失（配列番号４７）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム９（「アイソフォーム９」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－９）は、６７１個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１２７：欠失（配列番号４８）。下記表３に、９つのＰＧＣ－１αアイソフォームの配列を示す。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【表3-4】

【表3-5】

【0153】

本明細書で使用する場合、「ＰＧＣ－１α」なる用語は、細胞によって天然に発現されるＰＧＣ－１αのあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム２の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム２の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム３の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム４の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム５の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム６の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム７の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム８の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム９の発現を増加させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム１、アイソフォーム２、アイソフォーム３、アイソフォーム４、アイソフォーム５、アイソフォーム６、アイソフォーム７、アイソフォーム８、及びアイソフォーム９の発現を増加させることができる。特に断らない限り、本明細書では、アイソフォーム１及びアイソフォーム２の両方を併せて「ＰＧＣ－１α」と呼ぶ。

【0154】

いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現）と比較してＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％増加させる。

【0155】

いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５の発現及び／または活性を低下させることにより、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現を増加させる。ｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの２つの成熟型のｍｉＲ－４８５が知られている。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－５ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの両方の発現及び／または活性を低下させることができる。

【0156】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連するハンチントン病の１つ以上の症状を改善することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連するハンチントン病の１つ以上の症状を改善することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ＰＧＣ１－αタンパク質及び／またはＰＧＣ１－α遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連するハンチントン病の１つ以上の症状を改善することができる。そのような症状の非限定的な例を以下に記載する。

【0157】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象におけるハンチントン病の１つ以上の症状の発症または発症のリスクを、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低下させる。

【0158】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における記憶喪失を、参照（例えば、投与前の対象における記憶喪失）と比較して低下させる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における記憶喪失または記憶喪失の発症のリスクを、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低下させる。

【0159】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における記憶保持を、参照（例えば、投与前の対象における記憶保持）と比較して改善する。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における記憶保持を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、改善及び／または増加させる。

【0160】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における空間作業記憶を、参照（例えば、投与前の対象における空間作業記憶）と比較して改善する。本明細書で使用する場合、「空間作業記憶」という用語は、短期間にわたる作業記憶における空間情報活動を維持する能力を指す。いくつかの態様では、空間作業記憶は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、改善される。

【0161】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象におけるスカベンジャー細胞（例えば、グリア細胞）の食作用活性を（例えば、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させることにより）、参照（例えば、投与前の対象における食作用活性）と比較して増加させる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における神経細胞の樹状突起スパイン密度を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または約３００％以上、増加させる。

【0162】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象におけるアミロイドベータ（Ａβ）プラーク負荷を（例えば、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させることにより）、参照（例えば、投与前の対象におけるアミロイドベータ（Ａβ）プラーク負荷）と比較して低下させる。本明細書で使用する場合、「アミロイドベータプラーク」とは、大きな凝集体及び数個のアミロイドベータペプチドの小さな会合体を含むアミロイドベータの異常な沈着のあらゆる形態を指し、アミロイドベータペプチドのあらゆる変異を含み得る。アミロイドベータ（Ａβ）プラークは、例えば、シナプス組成の異常、シナプス形状、シナプス密度、シナプス伝導性の喪失、樹状突起径の変化、樹状突起長さの変化、スパイン密度の変化、スパイン面積の変化、スパイン長さの変化、またはスパインヘッド径の変化などの神経細胞変化を引き起こすことが知られている。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象におけるアミロイドベータプラーク負荷を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％、低下させる。

【0163】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における神経発生を（例えば、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させることにより）、参照（例えば、投与前の対象における神経発生）と比較して増加させる。本明細書で使用する場合、「神経発生」という用語は、神経細胞が形成されるプロセスを指す。神経発生は、神経幹細胞及び前駆細胞の増殖、これらの細胞の新たな神経細胞タイプへの分化、ならびに新しい細胞の遊走及び生存を包含する。この用語は、主として出生前及び周産期の発生の正常な発生中に生じる神経発生、ならびに疾患、傷害、または治療介入後に生じる細胞再生を含むものとする。成人の神経発生は、「神経」または「神経系」発生とも呼ばれる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における神経発生を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または約３００％以上、増加させる。

【0164】

いくつかの態様では、神経発生を増加及び／または誘導することは、神経幹細胞及び／または前駆細胞の増殖、分化、遊走、及び／または生存率の増加をともなう。したがって、いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象の神経幹細胞及び／または前駆細胞の増殖を増加させることができる。特定の態様では、神経幹細胞及び／または前駆細胞の増殖は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、増加する。いくつかの態様では、神経幹細胞及び／または前駆細胞の生存率は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、増加する。

【0165】

いくつかの態様では、神経発生を増加及び／または誘導することは、神経幹細胞及び／または前駆細胞の数の増加をともなう。いくつかの態様では、神経幹細胞及び／または前駆細胞の数は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、増加する。

【0166】

いくつかの態様では、神経発生を増加及び／または誘導することは、軸索、樹状突起、及び／またはシナプス発生の増加をともなう。特定の態様では、軸索、樹状突起、及び／またはシナプス発生は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、増加する。

【0167】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における神経細胞の樹状突起スパイン密度を、参照（例えば、投与前の対象における神経細胞の樹状突起スパイン密度）と比較して増加させる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における樹状突起スパイン密度を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、増加させる。

【0168】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における神経細胞の樹状突起スパインの喪失を、参照（例えば、投与前の対象における神経細胞の樹状突起スパインの喪失）と比較して減少させる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、神経変性疾患に罹患している）における神経細胞の樹状突起スパインの喪失を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少させる。

【0169】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における神経炎症を（例えば、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させることにより）、参照（例えば、投与前の対象における神経炎症）と比較して減少させる。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における神経炎症を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少させる。いくつかの態様では、神経炎症の減少は、グリア細胞が産生する炎症性メディエーターの量が減少することを含む。したがって、特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤をハンチントン病に罹患している対象に投与することは、グリア細胞が産生する炎症性メディエーターの量を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少させる。いくつかの態様では、グリア細胞が産生する炎症性メディエーターは、ＴＮＦ－αを含む。いくつかの態様では、炎症性メディエーターは、ＩＬ－１βを含む。いくつかの態様では、グリア細胞が産生する炎症性メディエーターは、ＴＮＦ－α及びＩＬ－１βの両方を含む。

【0170】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象（におけるオートファジーを（例えば、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させることにより）増加させる。本明細書で使用する場合、「オートファジー」という用語は、細胞ストレス応答ならびに細胞恒常性を維持するために長寿命タンパク質、タンパク質凝集体、及び損傷したオルガネラの分解を担う生存経路のことを指す。当然のことながら、オートファジーの異常は、ハンチントン病など多くの神経変性疾患を含む数多くの疾患と関連している。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤をハンチントン病に罹患している対象に投与することは、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較してオートファジーを、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％以上、増加させる。

【0171】

当技術分野で知られているように、ハンチントン病に罹患している対象は、特定の運動及び／または非運動症状を示す。例えば、ハンチントン病に関連した運動症状の非限定的な例としては、休止時振戦、自発運動の低下（動作緩慢）、不随意運動（舞踏病）強直、姿勢不安定性、すくみ足、手書き時の障害（小字症）、表情の減少、遅発（アキネジア）、動作維持困難、不明瞭発語、嚥下障害及び制御不能な激しい動きが挙げられる。ハンチントン病に関連した非運動症状の非限定的な例としては、自律神経機能障害、神経精神障害（気分、認知機能、行動、または思考の変化）、感覚の変化（特に嗅覚の変化）、及び睡眠困難が挙げられる。

【0172】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、神経変性疾患に罹患している）における１つ以上の運動症状を、参照（例えば、投与前の対象における対応する運動症状）と比較して改善する。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における１つ以上の運動症状を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、改善する。

【0173】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における１つ以上の運動症状を、参照（例えば、投与前の対象における１つ以上の運動症状）と比較して改善する。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象における１つ以上の非運動症状を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、改善する。

【0174】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象におけるシナプス機能を、参照（例えば、投与前の対象におけるシナプス機能）と比較して改善する。本明細書で使用する場合、「シナプス機能」という用語は、細胞（例えば、神経細胞）のシナプスが別の細胞（例えば、神経細胞）に電気的または化学的信号を伝達する能力を指す。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象におけるシナプス機能を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、改善する。

【0175】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象におけるシナプス機能の喪失を、参照（例えば、投与前の対象におけるシナプス機能の喪失）と比較して予防、遅延、及び／または改善することができる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ハンチントン病に罹患している対象におけるシナプス機能の喪失を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％予防、遅延、及び／または改善する。

【0176】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、当該技術分野では周知の任意の適当な経路で投与することができる。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、補足的投与、筋肉内投与、皮下投与、点眼、静脈内投与、腹腔内投与、皮内投与、眼窩内投与、脳内投与、頭蓋内投与、脳室内投与、脊髄内投与、心室内投与、髄腔内投与、大槽内投与、嚢内投与、腫瘍内投与、またはそれらの任意の組み合わせで投与される。

【0177】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１つ以上のさらなる治療薬と併用することができる。いくつかの態様では、さらなる治療薬とｍｉＲ－４８５阻害剤とは同時に投与される。特定の態様では、さらなる治療薬とｍｉＲ－４８５阻害剤とは順次投与される。

【0178】

いくつかの態様では、さらなる治療薬は、運動症状または非運動症状を軽減する。いくつかの態様では、さらなる治療薬は、運動を制御するための薬物（例えば、テトラベナジン）、抗精神病薬（例えば、ハロペリドール、リスペリドン、オランザピン及びクエチアピン）、抗うつ薬（例えば、シタロプラム、フルオキセチン、及びセルトラリン）、気分安定薬（例えば、ジバルプロエックス、カルバマゼピン、及びラモトリジン）、マンタジン、レベチラセタム、クロナゼパム、またはそれらの組み合わせである。

【0179】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を使用して、他の治療（例えば、テトラベナジン、ハロペリドール、シタロプラム、ジバルプロエックス、クロナゼパムなど）に反応しなかった対象のハンチントン病を治療することができる。

【0180】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は副作用を生じない。特定の態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与される際に体重に悪影響を及ぼさない。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与される際に死亡率の増加をもたらさず、病理学的異常も引き起こさない。
ＩＩＩ．ｍｉＲＮＡ－４８５阻害剤

【0181】

本開示では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することができる化合物を開示する（ｍｉＲ－４８５阻害剤）。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５結合部位を含むヌクレオチド分子をコードするヌクレオチド配列を含んでおり、ヌクレオチド分子はタンパク質をコードしていない。本明細書に記載されるように、いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、標的ｍｉＲＮＡ核酸配列（すなわち、ｍｉＲ－４８５）と少なくとも部分的に相補的であるため、ｍｉＲ－４８５阻害剤はｍｉＲ－４８５の核酸配列とハイブリダイズする。

【0182】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ阻害剤のｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５の核酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５の核酸配列と完全に相補的である。

【0183】

ｍｉＲ－４８５のヘアピン前駆体はｍｉＲ－４８５－５ｐ及びｍｉＲ－４８５－３ｐの両方を生成することができる。本開示との関連で、「ｍｉＲ－４８５」は、特に断らない限り、ｍｉＲ－４８５－５ｐ及びｍｉＲ－４８５－３ｐの両方を包含する。ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは、配列５’－ＧＵＣＡＵＡＣＡＣＧＧＣＵＣＵＣＣＵＣＵＣＵ－３’（配列番号１；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００２１７６）を有する。ｍｉＲ－４８５－３ｐの５’－ＵＣＡＵＡＣＡ－３’（配列番号４９）の５’末端配列はシード配列である。ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－５ｐは、配列５’－ＡＧＡＧＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＡＵＧＡＡＵＵＣ－３’（配列番号３３；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００２１７５）を有する。ｍｉＲ－４８５－５ｐの５’－ＧＡＧＧＣＵＧ－３’（配列番号５０）の５’末端配列はシード配列である。

【0184】

当業者には明らかであるが、ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは、他の種のものと相当の配列類似性を有している。例えば、マウス成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは、ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐと、５’末端及び３’末端のそれぞれで１個のアミノ酸が異なっている（すなわち、５’末端に余分な「Ａ」があり、３’末端の「Ｃ」がない）。マウス成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは以下の配列を有する：５’－ＡＧＵＣＡＵＡＣＡＣＧＧＣＵＣＵＣＣＵＣＵＣ－３’（配列番号３４；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００３１２９；下線部はヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐとの重複部分に相当する）。マウス成熟ｍｉＲ－４８５－５ｐの配列はヒトの配列と同一である：５’－ａｇａｇｇｃｕｇｇｃｃｇｕｇａｕｇａａｕｕｃ－３’（配列番号３３；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００３１２８）。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ヒト及びマウスのｍｉＲ－４８５－３ｐ及び／またはｍｉＲ－４８５－５ｐに結合することができる。

【0185】

いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの配列（またはその部分配列）と相補的（例えば、完全に相補的）な一本鎖のポリヌクレオチド配列である。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５－３ｐの部分配列は、シード配列を含む。したがって、特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号４９に記載される核酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列相補性を有する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のミスマッチを除いてｍｉＲ－４８５－３ｐと相補的である。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号１に記載される核酸配列と完全に相補的である。

【0186】

いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－５ｐの配列（またはその部分配列）と相補的（例えば、完全に相補的）な一本鎖のポリヌクレオチド配列である。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５－５ｐの部分配列は、シード配列を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号５０に記載される核酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列相補性を有する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のミスマッチを除いてｍｉＲ－４８５－５ｐと相補的である。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号３５に記載される核酸配列と完全に相補的である。

【0187】

ｍｉＲＮＡのシード領域は、標的ｍＲＮＡと緊密な二重鎖を形成する。多くのｍｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡの３’非翻訳領域（ＵＴＲ）と不完全に塩基対合し、ｍｉＲＮＡの５’近位の「シード」領域が対合特異性の大部分を与える。いずれの理論にも束縛されるものではないが、最初の９個のｍｉＲＮＡヌクレオチド（シード配列を含む）がより高い特異性を与えるのに対して、この領域の３’側のｍｉＲＮＡヌクレオチドはより低い配列特異性を与え、それにより、より高度のミスマッチした塩基対合を許容し、２～７位が最も重要であると考えられる。したがって、本開示の特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５のシード配列の全長にわたって完全に相補的（すなわち、１００％の相補性）な配列を含む。

【0188】

本開示との関連で使用することができるｍｉＲＮＡ配列及びｍｉＲＮＡ結合配列としては、これらに限定されるものではないが、本明細書に示される配列表の配列の全部または一部、ならびにｍｉＲＮＡ前駆体配列、またはこれらのｍｉＲＮＡのうちの１つ以上のものの相補体が挙げられる。その配列が、示されるｍｉＲＮＡの成熟配列またはその相補的配列と少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるようなｍｉＲＮＡまたはその相補的配列を含めるために名前による特定のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ結合部位を含む本開示のあらゆる態様も想到される。

【0189】

特定の態様では、本開示のｍｉＲＮＡ結合配列は、改変された配列がｍｉＲ－４８５に依然として特異的に結合できる限り、本明細書で提供される配列表に示される配列の５’末端、３’末端、または５’末端及び３’末端の両方にさらなるヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ結合配列は、改変された配列がｍｉＲ－４８５に依然として特異的に結合できる限り、提供される配列表に示される配列に対して、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のヌクレオチドにおいて異なり得る。

【0190】

ｍｉＲＮＡ結合分子またはｍｉＲＮＡに関して本明細書に記載されるあらゆる方法及び組成物は、合成ｍｉＲＮＡ結合分子に関して実施することができる点も具体的に想到される。本開示のＲＮＡ配列に関連した開示は、対応するＤＮＡ配列に等しく適用できる点も理解されよう。

【0191】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ－４８５阻害剤は、ヌクレオチド配列の５’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ－４８５阻害剤は、ヌクレオチド配列の３’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。

【0192】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、約６～約３０ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、７ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、８ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、９ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１０ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１１ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１２ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、１３ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、１５ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１６ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１９ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、２０ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、２２ヌクレオチドの長さである。

【0193】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、配列番号２～３０から選択される配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、配列番号２～３０からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のミスマッチを場合により含んでもよい。

【0194】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号４）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号５）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号６）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１４）、または５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１５）を含む。

【0195】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１６）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１７）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１８）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１９）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２０）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）、または５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）を有する。

【0196】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６２）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６３）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６４）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６５）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６６）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７５）、５’－ＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７６）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７７）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７８）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７９）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８０）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）、または５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８９）を有する。

【0197】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）と少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）と少なくとも９０％の類似性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、１個の置換または２個の置換を有するヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）を含む。特定の態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）または５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）を含む。

【0198】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３５、または６２～８９のいずれか１つと、Ｎ末端に少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、または少なくとも５個のさらなる核酸、Ｃ末端に少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、または少なくとも５個のさらなる核酸、またはその両方と、を含む。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３５、または６２～８９のいずれか１つと、Ｎ末端に１個のさらなる核酸及び／またはＣ末端に１個のさらなる核酸と、を含む。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３５、または６２～８９のいずれか１つと、Ｎ末端に１個または２個のさらなる核酸及び／またはＣ末端に１個または２個のさらなる核酸と、を含む。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３５、または６２～８９のいずれか１つと、Ｎ末端に１～３個のさらなる核酸及び／またはＣ末端に１～３個のさらなる核酸と、を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）を含む。

【0199】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも２個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、３個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、４個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、５個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、６個以上のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。いくつかの態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は同じである。いくつかの態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は異なる。いくつかの態様では、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５結合部位が異なる。いくつかの態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－３ｐ結合部位である。他の態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－５ｐ結合部位である。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５－３ｐ結合部位と、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５－５ｐ結合部位とを含む。

【0200】

ＩＩＩ．ａ．化学修飾されたポリヌクレオチド
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも１つの化学修飾されたヌクレオシド及び／またはヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを含む。本開示のポリヌクレオチドが化学修飾されている場合、ポリヌクレオチドは、「修飾ポリヌクレオチド」と呼ぶことができる。

【0201】

「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を、有機塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体（本明細書において「核酸塩基」とも称される）とともに含有する化合物を指す。「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドを指す。修飾されたヌクレオチドは、１つ以上の修飾された非天然ヌクレオシドを含むように、任意の有用な方法により、例えば、化学的に、酵素的に、または組換えにより合成され得る。

【0202】

ポリヌクレオチドは、連結されたヌクレオシドの領域または複数の領域を含み得る。かかる領域は、可変的な骨格結合を有し得る。連結は、標準的なホスホジエステル結合であり得、その場合、ポリヌクレオチドはヌクレオチドの領域を含む。

【0203】

本明細書において開示される修飾されたポリヌクレオチドは、様々な異なる修飾を含み得る。いくつかの態様では、修飾されたポリヌクレオチドは、１種、２種、またはそれ以上（任意選択的に異なる）のヌクレオシドまたはヌクレオチド修飾を含有する。いくつかの態様では、修飾されたポリヌクレオチドは、１つ以上の所望の特性、例えば、未修飾ポリヌクレオチドと比較して改善された熱または化学安定性、低減された免疫原性、低減された分解、標的マイクロＲＮＡに対する結合の増加、他のマイクロＲＮＡまたは他の分子に対する低減された非特異的結合を示し得る。

【0204】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、化学修飾されている。本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチドに関して、「化学修飾」または必要に応じて「化学修飾された」という用語は、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、ウリジン（Ｕ）、チミジン（Ｔ）、またはシチジン（Ｃ）リボヌクレオシドまたはデオキシリボヌクレオシドに対する、限定されるものではないが、それらの核酸塩基、糖、骨格、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるそれらの位置、パターン、パーセント、または集団のうちの１つ以上における修飾を指す。

【0205】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかの均一な化学修飾、または同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかにおける同じ出発修飾の漸減滴定（ｄｏｗｎｗａｒｄ ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）によって生成される修飾の群、またはランダムな組み込みを伴うことを除いて同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかの測定されたパーセントの化学修飾を有し得る。さらなる態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、ポリヌクレオチド全体にわたって同じヌクレオシド種類のうちの２つ、３つ、または４つの均一な化学修飾を有し得る（例えば、すべてのウリジン及びすべてのシトシンなどが、同じように修飾される）。

【0206】

修飾されたヌクレオチドの塩基対形成は、標準的なアデニン－チミン、アデニン－ウラシル、またはグアニン－シトシン塩基対だけでなく、ヌクレオチド及び／または非標準的もしくは修飾塩基を含む修飾ヌクレオチドの間で形成される塩基対も包含し、ここで、水素結合ドナー及び水素結合アクセプターの配置が、非標準的塩基と標準的塩基との間、または２つの相補的な非標準的塩基構造間の水素結合を可能にする。かかる非標準的塩基対形成の１つの例は、修飾された核酸塩基イノシンとアデニン、シトシン、またはウラシルとの間の塩基対形成である。塩基／糖またはリンカーの任意の組み合わせが、本開示のポリヌクレオチドに組み込まれ得る。

【0207】

当業者は、特に注記される場合を除き、本出願に記載されるポリヌクレオチド配列は、代表的なＤＮＡ配列において「Ｔ」を列挙するが、配列がＲＮＡを表す場合、「Ｔ」は「Ｕ」と置換されることを理解するであろう。例えば、本開示のＴＤは、ＲＮＡとして、ＤＮＡとして、またはＲＮＡ及びＤＮＡユニットの両方を含むハイブリッド分子として投与され得る。

【0208】

いくつかの態様では、ポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、８つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１８、２０以上）の修飾された核酸塩基の組み合わせを含む。

【0209】

いくつかの態様では、ポリヌクレオチドにおける核酸塩基、糖、骨格結合、またはそれらの任意の組み合わせは、少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％修飾される。

【0210】

（ｉ）塩基修飾
特定の態様では、化学修飾は、本開示（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）のポリヌクレオチド内の核酸塩基に存在する。いくつかの態様では、少なくとも１つの化学修飾ヌクレオシドは、修飾されたウリジン（例えば、シュードウリジン（ψ）、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）、１－エチル－シュードウリジン（ｅ１ψ）、または５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ））、修飾されたシトシン（例えば、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ））、修飾されたアデノシン（例えば、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、または２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ））、修飾されたグアノシン（例えば、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）または１－メチルグアノシン（ｍ１Ｇ））、またはそれらの組み合わせである。

【0211】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、特定の修飾について均一に修飾される（例えば、完全に修飾される、配列全体にわたって修飾される）。例えば、ポリヌクレオチドは、同じ種類の塩基修飾、例えば、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）により均一に修飾され得、これは、ポリヌクレオチド配列におけるすべてのシトシン残基が、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）と置き換えられることを意味する。同様に、ポリヌクレオチドは、配列に存在する任意の種類のヌクレオシド残基について、修飾されたヌクレオシド、例えば、上記に記載されるもののいずれかとの置換により均一に修飾され得る。

【0212】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）の修飾された核酸塩基の組み合わせを含む。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における１種類の核酸塩基の少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％が、修飾された核酸塩基である。

【0213】

（ｉｉ）骨格修飾
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤）は、ヌクレオシド間に任意の有用な結合を含むことができる。本開示の組成物において有用な、骨格修飾を含むそのような結合としては、これらに限定されるものではないが、以下のものが挙げられる：３’－アルキレンホスホネート、３’－アミノホスホロアミダート、アルケン含有骨格、アミノアルキルホスホロアミダート、アミノアルキルホスホトリエステル、ボラノホスフェート、－ＣＨ_２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_３）－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－ＮＨ－ＣＨ_２－、キラルホスホネート、キラルホスホロチオエート、ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレン（メチルイミノ）、メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格、モルホリノ結合、－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－ＣＨ_２－、ヘテロ原子ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオシド、ホスフィナート、ホスホロアミダート、ホスホロジチオエート、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、ＰＮＡ、シロキサン骨格、スルファメート骨格、スルフィド、スルホキシド、及びスルホン骨格、スルホネート及びスルホンアミド骨格、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびにチオノホスホロアミダート。

【化6】

【0214】

いくつかの態様では、上記に開示される骨格結合の存在は、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）の安定性及び分解に対する耐性を増加させる。

【0215】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の骨格結合が修飾される（例えば、それらのすべてがホスホロチオエートである）。

【0216】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）に含めることができる骨格修飾は、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）及び／またはホスホロチオエート（ＰＳ）修飾を含む。
（ｉｉｉ）糖修飾

【0217】

本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）に組み込まれ得る修飾されたヌクレオシド及びヌクレオチドは、核酸の糖に対して修飾され得る。いくつかの態様では、糖修飾は、ｍｉＲ－４８５核酸配列に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の結合の親和性を増加させる。ＬＮＡまたは２’－置換糖などの親和性改善ヌクレオチド類似体をｍｉＲ－４８５阻害剤に組み込むことによって、ｍｉＲ－４８５阻害剤の長さ及び／またはサイズを小さくすることができる。

【0218】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のヌクレオチドが糖修飾（例えば、ＬＮＡ）を含有する。

【0219】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドにおける１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２ヌクレオチドユニットが糖修飾される（例えば、ＬＮＡ）。

【0220】

一般に、ＲＮＡは、酸素を有する五員環である糖基リボースを含む。非限定的な例示的修飾ヌクレオチドとしては、リボースにおける酸素の（例えば、Ｓ、Ｓｅ、またはアルキレン、例えば、メチレンまたはエチレンとの）置換；二重結合の付加（例えば、リボースのシクロペンテニルまたはシクロヘキセニルとの置換）；リボースの環縮小（例えば、シクロブタンまたはオキセタンの四員環の形成）；リボースの環拡大（例えば、追加の炭素またはヘテロ原子を有し、６または七員環の形成、例えば、アンヒドロヘキシトール、アルトリトール、マンニトール、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、及びホスホロアミダート骨格も有するモルホリノ）；多環式形態（例えば、トリシクロ）；及び「アンロックド」形態、例えば、グリコール核酸（ＧＮＡ）（例えば、Ｒ－ＧＮＡまたはＳ－ＧＮＡ、ここで、リボースは、ホスホジエステル結合に結合されたグリコールユニットと置き換えられる）、トレオース核酸（ＴＮＡ、ここで、リボースは、α－Ｌ－トレオフラノシル－（３’→２’）と置き換えられる）、及びペプチド核酸（ＰＮＡ、ここで、２－アミノ－エチル－グリシン結合が、リボース及びホスホジエステル骨格と置き換わる）が挙げられる。糖基は、リボースにおける対応する炭素と反対の立体化学配置を有する１つ以上の炭素も含有し得る。したがって、ポリヌクレオチド分子は、糖として、例えば、アラビノースを含有するヌクレオチドを含み得る。

【0221】

リボースの２’ヒドロキシ基（ＯＨ）は、いくつかの異なる置換基で修飾または置換され得る。２’－位での例示的な置換としては、限定されるものではないが、Ｈ、ハロ、任意選択的に置換されたＣ_１～６アルキル；任意選択的に置換されたＣ_１～６アルコキシ；任意選択的に置換されたＣ_６～１０アリールオキシ；任意選択的に置換されたＣ_３～８シクロアルキル；任意選択的に置換されたＣ_３～８シクロアルコキシ；任意選択的に置換されたＣ_６～１０アリールオキシ；任意選択的に置換されたＣ_６～１０アリール－Ｃ_１～６アルコキシ、任意選択的に置換されたＣ_１～１２（ヘテロシクリル）オキシ；糖（例えば、リボース、ペントース、または本明細書に記載されるいずれか）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＣＨ_２ＣＨ_２ＯＲ（ここで、Ｒは、Ｈまたは任意選択的に置換されたアルキルであり、ｎは、０～２０（例えば、０～４、０～８、０～１０、０～１６、１～４、１～８、１～１０、１～１６、１～２０、２～４、２～８、２～１０、２～１６、２～２０、４～８、４～１０、４～１６、及び４～２０）の整数である）；「ロックド」核酸（ＬＮＡ）（２’－ヒドロキシが、Ｃ_１～６アルキレンまたはＣ_１～６ヘテロアルキレン架橋により、同じリボース糖の４’－炭素に連結されており、ここで、例示的な架橋としては、メチレン、プロピレン、エーテル、アミノ架橋、アミノアルキル、アミノアルコキシ、アミノ、及びアミノ酸が挙げられる）が挙げられる。

【0222】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）に存在するヌクレオチド類似体は、例えば、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡユニット、２’－ＯＭｅ－ＲＮＡユニット、２’－Ｏ－アルキル－ＳＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡユニット、２’－フルオロ－ＤＮＡユニット、ＬＮＡユニット、アラビノ核酸（ＡＮＡ）ユニット、２’－フルオロ－ＡＮＡユニット、ＨＮＡユニット、ＩＮＡ（インターカレーティング核酸）ユニット、２’ＭＯＥユニット、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＬＮＡは、例えば、オキシＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－オキシ－ＬＮＡ）、アミノＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－アミノ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－アミノ－ＬＮＡ）、チオＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－チオ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－チオ－ＬＮＡ）、ＥＮＡ（例えば、β－Ｄ－ＥＮＡまたはα－Ｌ－ＥＮＡ）、またはそれらの任意の組み合わせである。さらなる態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤）に含めることができるヌクレオチド類似体は、ロックド核酸（ＬＮＡ）、アンロックド核酸（ＵＮＡ）、アラビノ核酸（ＡＢＡ）、架橋核酸（ＢＮＡ）、及び／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。

【0223】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、修飾されたＲＮＡヌクレオチド類似体（例えば、ＬＮＡ）及びＤＮＡユニットの両方を含み得る。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤はギャップマーである。例えば、米国特許第８，４０４，６４９号、同第８，５８０，７５６号、同第８，１６３，７０８号、及び同第９，０３４，８３７号（これらのすべてが参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤はマイクロマーである。米国特許公開第ＵＳ２０１８０２０１９２８号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。

【0224】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（少なくとも、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、エンドヌクレアーゼ及びエキソヌクレアーゼによる速やかな分解を防止するための修飾を含むことができる。修飾としては、これらに限定されるものではないが、例えば、（ａ）末端修飾、例えば、５’末端修飾（リン酸化、脱リン酸化、共役化、反転結合など）、３’末端修飾（共役化、ＤＮＡヌクレオチド、反転結合など）、（ｂ）塩基修飾、例えば、修飾塩基、安定化塩基、不安定化塩基、または広範なパートナーのレパートリーと塩基対合する塩基、または共役化塩基による置換、（ｃ）糖修飾（例えば、２’位または４’位における）または糖の置換、ならびに（ｄ）ホスホジエステル結合の修飾または置換を含む、ヌクレオシド間結合の修飾が挙げられる。

【0225】

ＩＶ．ベクター及び送達システム
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、例えば、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または条件に罹患した対象に、当該技術分野では周知のあらゆる関連する送達システムを用いて投与することができる。特定の態様では、送達システムはベクターである。したがって、いくつかの態様では、本開示は、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を含むベクターを提供する。

【0226】

いくつかの態様では、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの態様では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターである。いくつかの態様では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはこれらの任意の組み合わせの血清型を有するＡＡＶである。いくつかの態様では、アデノウイルスベクターは、第３世代アデノウイルスベクターである。ＡＤＥＡＳＹ（商標）は、アデノウイルスベクターコンストラクトを作製するうえで圧倒的に最も一般的な方法である。このシステムは、シャトル（または導入）ベクター及びアデノウイルスベクターの２つのタイプのプラスミドで構成される。目的の導入遺伝子は、シャトルベクターにクローニングされ、検証され、制限酵素ＰｍｅＩで線形化される。次いで、この構築物は、ＰＡＤＥＡＳＹ（商標）を含有するＢＪ５１８３Ｅ．ｃｏｌｉ細胞であるＡＤＥＡＳＩＥＲ－１細胞に形質転換される。ＰＡＤＥＡＳＹ（商標）は、ウイルス産生に必要なアデノウイルス遺伝子を含む約３３Ｋｂのアデノウイルスプラスミドである。シャトルベクター及びアデノウイルスプラスミドは、アデノウイルスプラスミドへのトランスジーンの相同組換えを促進する一致する左右の相同性アームを有する。標準的なＢＪ５１８３をスーパーコイルＰＡＤＥＡＳＹ（商標）及びシャトルベクターで同時形質転換することもできるが、この方法では非組換えアデノウイルスプラスミドのバックグラウンドが高くなる。次いで、組換えアデノウイルスプラスミドは、サイズ及び適切な制限消化パターンについて検証され、導入遺伝子がアデノウイルスプラスミドに挿入されていること、及び組換えの他のパターンが発生していないことが確認される。検証後、組換えプラスミドをＰａｃＩで線形化し、ＩＴＲが隣接する線形ｄｓＤＮＡコンストラクトを作製する。２９３または９１１細胞は線形化されたコンストラクトでトランスフェクトされ、約７～１０日後にウイルスを回収することができる。この方法以外にも、本明細書に開示される方法を実施するために、本願が出願された時点で当該技術分野において周知のアデノウイルスベクターコンストラクトを作製するための方法を用いることができる。

【0227】

いくつかの態様では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクター（例えば第３または第４世代のレンチウイルスベクター）である。レンチウイルスベクターは、１つの細胞株に３つの別々のプラスミド発現システムをトランスフェクトする一過性トランスフェクションシステムで通常は作製される。これらには、トランスファーベクタープラスミド（ＨＩＶプロウイルスの一部）、パッケージングプラスミドまたは構築物、及び異なるウイルスの異種エンベロープ遺伝子（ｅｎｖ）を含むプラスミドが含まれる。ベクターの３つのプラスミド成分は、ＨＩＶシェルに挿入されるパッケージング細胞に入れられる。ベクターのウイルス部分には挿入配列が含まれているため、ウイルスは細胞系内で複製できない。現在の第３世代のレンチウイルスベクターは、９つのＨＩＶ－１タンパク質（Ｇａｇ、Ｐｏｌ、Ｒｅｖ）のうち３つだけをエンコードし、複製可能なウイルスの組換えを介した生成を避けるために、別々のプラスミドから発現する。第４世代レンチウイルスベクターでは、レトロウイルスゲノムはさらに減らされている（例えば、ＴＡＫＡＲＡ（登録商標）ＬＥＮＴＩ－Ｘ（商標）第４世代パッケージングシステムを参照）。

【0228】

当該技術分野では周知の任意のＡＡＶベクターを本明細書に開示される方法で使用することができる。ＡＡＶベクターは既知のベクターを含んでよく、それらのバリアント、フラグメント、または融合体を含んでよい。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶタイプ１（ＡＡＶ１）、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

【0229】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されたＡＡＶベクターから誘導される。

【0230】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも２つのＡＡＶベクターから誘導されるキメラベクターである。

【0231】

特定の態様では、ＡＡＶベクターは、当該技術分野では周知の少なくとも２つの異なるＡＡＶベクターの領域を含む。

【0232】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、第１のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、またはこれらの任意の組み合わせ）に由来する末端逆位配列と、第２のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、またはこれらの任意の組み合わせ）に由来する第２の末端逆位配列と、を含む。

【0233】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されたＡＡＶベクターの部分を含む。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２を含む。

【0234】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、スプライスアクセプター部位を含む。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、プロモーターを含む。当該技術分野では周知の任意のプロモーターを本開示のＡＡＶベクターで使用することができる。いくつかの実施態様では、プロモーターはＲＮＡＰｏｌＩＩＩプロモーターである。いくつかの態様では、ＲＮＡＰｏｌＩＩＩプロモーターは、Ｕ６プロモーター、Ｈ１プロモーター、７ＳＫプロモーター、５Ｓプロモーター、アデノウイルス２（Ａｄ２）ＶＡＩプロモーター、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、プロモーターは、サイトメガロウイルス前初期遺伝子（ＣＭＶ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、Ｓｖ４０プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、Ｕｂｃプロモーター、ヒトβアクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＴＲＥプロモーター、ＵＡＳプロモーター、Ａｃ５プロモーター、ポリヘドリンプロモーター、ＣａＭＫＩＩａプロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ１０プロモーター、ＴＥＦプロモーター、ＧＤＳプロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、ＣａＭＶ３５Ｓプロモーター、またはＵｂｉプロモーターである。特定の態様では、プロモーターは、Ｕ６プロモーターを含む。

【0235】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、構成的に活性なプロモーター（構成的プロモーター）を含む。いくつかの態様では、構成的プロモーターは、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、βアクチンプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス（例えば、ＳＶ４０）、パピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、レトロウイルス末端反復配列（ＬＴＲ）、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、及び単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターからなる群から選択される。

【0236】

いくつかの態様では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。いくつかの態様では、誘導性プロモーターは、組織特異的プロモーターである。特定の態様では、組織特異的プロモーターは、神経細胞、グリア細胞、または神経細胞及びグリア細胞の両方において、ＡＡＶベクターのコーディング領域の転写を誘導する。

【0237】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、１つ以上のエンハンサーを含む。いくつかの態様では、１つ以上のエンハンサーはＡＡＶ内に単独で、または本明細書に開示されるプロモーターとともに存在する。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、３’ＵＴＲのポリ（Ａ）テール配列を含むいくつかの態様では、３’ＵＴＲのポリ（Ａ）テール配列は、ｂＧＨポリ（Ａ）、アクチンポリ（Ａ）、ヘモグロビンポリ（Ａ）、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、３’ＵＴＲのポリ（Ａ）テール配列はｂＧＨポリ（Ａ）を含む。

【0238】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、送達剤とともに投与される。使用することができる送達剤の非限定的な例としては、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、ミセル、またはコンジュゲートが挙げられる。

【0239】

したがって、いくつかの態様では、本開示は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤）と、送達剤と、を含む組成物も提供する。いくつかの態様では、送達剤は、下式：
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＡＭ］（式Ｉ）
または
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＡＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（式ＩＩ）
（式中、
ＷＰは、水溶性バイオポリマー部分であり、
ＣＣは、正に帯電したキャリア部分であり、
ＡＭは、アジュバント部分であり、
Ｌ１及びＬ２は、独立して、任意選択のリンカーである）を有するカチオン性キャリアユニットを含み、
カチオン性キャリアユニットは、約１：１のイオン比で核酸と混合される場合にミセルを形成する。

【0240】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を含む組成物は、イオン結合を介してカチオン性キャリアユニットと相互作用する。

【0241】

いくつかの態様では、本開示のカチオン性キャリアユニットは、少なくとも１つの水溶性バイオポリマーを含む。本明細書で使用する場合、「水溶性バイオポリマー」という用語は、生体適合性、生物学的に不活性、非免疫原性、非毒性、かつ親水性のポリマー、例えば、ＰＥＧを指す。

【0242】

いくつかの態様では、水溶性バイオポリマーは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、水溶性バイオポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、下式：

【化7】

（式中、ｎは、１～１０００である）を有する。

【0243】

いくつかの態様では、ｎは、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である。いくつかの態様では、ｎは、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、または約１５０～約１６０である。

【0244】

いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む。

【0245】

いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、少なくとも３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約２６、少なくとも約２７、少なくとも約２８、少なくとも約２９、少なくとも約３０、少なくとも約３１、少なくとも約３２、少なくとも約３３、少なくとも約３４、少なくとも約３５、少なくとも約３６、少なくとも約３７、少なくとも約３８、少なくとも約３９、少なくとも約４０、少なくとも約４１、少なくとも約４２、少なくとも約４３、少なくとも約４４、少なくとも約４５、少なくとも約４６、少なくとも約４７、少なくとも約４８、少なくとも約４９、少なくとも約５０、少なくとも約５１、少なくとも約５２、少なくとも約５３、少なくとも約５４、少なくとも約５５、少なくとも約５６、少なくとも約５７、少なくとも約５８、少なくとも約５９、少なくとも約６０、少なくとも約６１、少なくとも約６２、少なくとも約６３、少なくとも約６４、少なくとも約６５、少なくとも約６６、少なくとも約６７、少なくとも約６８、少なくとも約６９、少なくとも約７０、少なくとも約７１、少なくとも約７２、少なくとも約７３、少なくとも約７４、少なくとも約７５、少なくとも約７６、少なくとも約７７、少なくとも約７８、少なくとも約７９、少なくとも約８０の塩基性アミノ酸、例えば、リジン、アルギニン、またはそれらの組み合わせを含む。

【0246】

いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約４０の塩基性アミノ酸、例えば、リジンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約４５の塩基性アミノ酸、例えば、リジンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約５０の塩基性アミノ酸、例えば、リジンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約５５の塩基性アミノ酸、例えば、リジンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約６０の塩基性アミノ酸、例えば、リジンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約６５の塩基性アミノ酸、例えば、リジンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約７０の塩基性アミノ酸、例えば、リジンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約７５の塩基性アミノ酸、例えば、リジンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約８０の塩基性アミノ酸、例えば、リジンを含む。

【0247】

いくつかの態様では、塩基性アミノ酸、例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン、またはそれらの組み合わせの数は、アニオン性ペイロードの長さに基づいて調整され得る。本明細書で使用する場合、「ペイロード」という用語は、それ自体で、もしくはアダプターを介して本開示のカチオン性キャリアユニットと相互作用的であり得、本開示のミセルの核内に含まれ得る生物活性分子、例えば、治療薬（例えば、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤）を指す。例えば、より長い配列を有するアニオン性ペイロードは、より多い数の塩基性アミノ酸（例えば、リジン）と組み合され得る。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットにおける塩基性アミノ酸、例えば、リジンの数は、ポリマーにおけるプロトン化アミン対アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒにおけるリン酸のモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３となるように計算され得る。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットにおける塩基性アミノ酸、例えば、リジンの数は、ポリマーにおけるプロトン化アミン対アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒにおけるリン酸のモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．３～約１．７、例えば、約１．５となるように計算され得る。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットにおける塩基性アミノ酸、例えば、リジンの数は、ポリマーにおけるプロトン化アミン対アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒにおけるリン酸のモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．４となるように計算される。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットにおける塩基性アミノ酸、例えば、リジンの数は、ポリマーにおけるプロトン化アミン対アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒにおけるリン酸のモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．６となるように計算される。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットにおける塩基性アミノ酸、例えば、リジンの数は、ポリマーにおけるプロトン化アミン対アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒにおけるリン酸のモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．３となるように計算される。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットにおける塩基性アミノ酸、例えば、リジンの数は、ポリマーにおけるプロトン化アミン対アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒにおけるリン酸のモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．７となるように計算される。

【0248】

当業者は、カチオン性キャリア部分の役割はペイロードの負電荷（例えば、ｍｉＲＮＡ阻害剤のリン酸骨格における負電荷）を静電的相互作用により中性化することであるため、いくつかの態様では（例えば、ペイロードがａｎｔｉｍｉｒなどの核酸である場合）、カチオン性キャリアの長さ、カチオン性キャリアの正に荷電した基の数、ならびにカチオン性キャリアに存在する電荷の分布及び配置は、ペイロード分子の長さ及び電荷分布に依存することを理解するであろう。

【0249】

いくつかの態様では、カチオン性キャリアは、約５～約１０、約１０～約１５、約１５～約２０、約２０～約２５、約２５～約３０、約３０～約３５、約３５～約４０、約４０～約４５、約４５～約５０、約５０～約５５、約５５～約６０、約６０～約６５、約～約７０、約７０～約７５、または約７５～約８０の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約３０～約５０の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約７０～約８０の塩基性アミノ酸を含む。

【0250】

いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、Ｄ－アミノ酸である。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸である。いくつかの態様では、正に荷電したキャリアは、Ｄ－アミノ酸及びＬ－アミノ酸を含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、少なくとも１つの非天然アミノ酸またはその誘導体を含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リジン、ヒスチジン、Ｌ－４－アミノメチル－フェニルアラニン、Ｌ－４－グアニジン－フェニルアラニン、Ｌ－４－アミノメチル－Ｎ－イソプロピル－フェニルアラニン、Ｌ－３－ピリジル－アラニン、Ｌ－ｔｒａｎｓ－４－アミノメチルシクロヘキシル－アラニン、Ｌ－４－ピペリジニル－アラニン、Ｌ－４－アミノシクヘキシル－アラニン、４－グアニジノ酪酸、Ｌ－２－アミノ－３－グアニジノプロピオン酸、ＤＬ－５－ヒドロキシリジン、ピロリジン、５－ヒドロキシ－Ｌ－リジン、メチルリジン、ヒプシン、またはそれらの任意の組み合わせである。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約４０のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約５０のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約６０のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約７０のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約８０のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約３０のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約４０のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約３８のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約３２のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約３５のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約６４のリジンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約６３のリジンを含む。

【0251】

いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、単一のペイロード分子に結合する。他の態様では、カチオン性キャリア部分は、同一であり得るか、または異なり得る複数のペイロード分子に結合し得る。

【0252】

いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の正電荷及び核酸ペイロードの負電荷は、約５：１、約４：１、約３：１、約２．９：１、約２．８：１、約２．７：１、約２．６：１、約２．５：１、約２．４：１、約２．３：１、約２．２：１、約２：１、約２：１、約１．９：１、約１．８：１、約１．７：１、約１．６：１、約１．５：１、約１．４：１、約１．３：１、約１．２：１、約１．１：１、約１：１、約１：１．１、約１：１．２、約１：１．３、約１：１．４、約１：１．５、約１：１．６、約１：１．７、約１：１．８、約１：１．９、約１：２、約１：２．１、約１：２．２、約１：２．３、約１：２．４、約１：２．５、約１：２．６、約１：２．７、約１：２．８、約１：２．９、約１：３、約１：４または約１：５のイオン比率である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の正電荷及び核酸ペイロードの負電荷は、１：１の電荷比率である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の正電荷及び核酸ペイロードの負電荷は、３：２の電荷比率である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の正電荷及び核酸ペイロードの負電荷は、２：３の電荷比率である。

【0253】

いくつかの態様では、本開示のカチオン性キャリアユニットは、少なくとも１つの架橋部分（ＣＭ）を含む。「架橋部分」という用語は、架橋を形成することができる複数の薬剤を含むポリマーブロックの部分または一部を指す。いくつかの態様では、架橋を形成することができるいくつかの薬剤は、架橋剤の側鎖を有するアミノ酸を含む。いくつかの態様では、ＣＭは、架橋剤に連結したバイオポリマー、例えば、ペプチド（例えば、ポリリジン）を含む。

【0254】

いくつかの態様では、架橋部分は、１つ以上のアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン、またはそれらの組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、少なくとも約３つ、少なくとも約４つ、少なくとも約５つ、少なくとも約６つ、少なくとも約７つ、少なくとも約８つ、少なくとも約９つ、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約２６、少なくとも約２７、少なくとも約２８、少なくとも約２９、少なくとも約３０、少なくとも約３５のアミノ酸、例えば、リジン、アルギニン、またはそれらの組み合わせを含み、その各々は架橋剤に連結している。

【0255】

いくつかの態様では、架橋部分のリジンは中性電荷を有する（例えば、第三級アミンを含む）。いくつかの態様では、架橋部分のリジンは、チオール（例えば、リジンチオール）、及び第三級アミンを含み、それにより、リジンは中性電荷を有する。いくつかの態様では、架橋部分は、第三級アミンを介して架橋を形成する。いくつかの態様では、架橋部分は、チオールを介して架橋を形成する。本明細書で使用される場合、架橋部分の文脈における「リジン」は、架橋部分のリジンが担体単位の全体的な電荷に寄与しないような中性電荷を有する（例えば、第三級アミンを含む）リジンを指す。いくつかの態様では、架橋部分のリジンは、アミド結合を介して架橋剤に連結している。

【0256】

いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約１０個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約１１個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約１２個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約１３個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約１４個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約１５個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約１６個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約１７個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約１８個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約１９個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約２０個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約２３個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤に連結している。いくつかの態様では、架橋部分は少なくとも約３５個のアミノ酸、例えばリジンを含み、その各々は架橋剤（例えば、リジンチオール）に連結している。

【0257】

いくつかの態様では、架橋剤はチオールである。いくつかの態様では、架橋剤はチオール誘導体である。

【0258】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、免疫反応、炎症反応、及び／または組織微小環境を調節することができる。いくつかの態様では、アジュバント部分は、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：

【化8】

（式中、Ｇ１及びＧ２のそれぞれは、Ｈ、芳香環、もしくは１～１０アルキルであるか、またはＧ１とＧ２はともに芳香環を形成し、ｎは１～１０である）を有する。

【0259】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、ニトロイミダゾールを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、ジメトリダゾール、プレトマニド、オルニダゾール、メガゾール、アザニダゾール、ベンズニダゾール、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、アミノ酸を含む。

【0260】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：

【化9】

（式中、Ａｒは、

【化10】

Ｚ１及びＺ２のそれぞれは、ＨまたはＯＨである）を有する。

【0261】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、ビタミンを含む。いくつかの態様では、ビタミンは、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む。いくつかの態様では、ビタミンは、下式：

【化11】

（式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）を有する。

【0262】

いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＢ３である。

【0263】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、少なくとも約２つ、少なくとも約３つ、少なくとも約４つ、少なくとも約５つ、少なくとも約６つ、少なくとも約７つ、少なくとも約８つ、少なくとも約９つ、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約２６、少なくとも約２７、少なくとも約２８、少なくとも約２９、少なくとも約３０、少なくとも約３１、少なくとも約３２、少なくとも約３３、少なくとも約３４、少なくとも約３５、少なくとも約３６、少なくとも約３７、少なくとも約３８、少なくとも約３９、または少なくとも約４０のアミノ酸（例えば、リジン）を含み、それらの各々はビタミンＢ３に連結している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約３０個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約３１個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約３２個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約３３個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約３４個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約３５個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約３６個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約３７個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約３８個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約３９個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約４０個のアミノ酸（例えばリジン）を含み、その各々はビタミンＢ３に結合している。

【0264】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、それぞれがビタミンＢ３に結合している約２０～約２５個のアミノ酸（例えば、リジン）、それぞれがビタミンＢ３に結合している約２５～約３０個のアミノ酸（例えば、リジン）、それぞれがビタミンＢ３に結合している約３０～約３５個のアミノ酸（例えば、リジン）、それぞれがビタミンＢ３に結合している約３５～約４０個のアミノ酸（例えば、リジン）、それぞれがビタミンＢ３に結合している約４０～約４５個のアミノ酸（例えば、リジン）、またはそれぞれがビタミンＢ３に結合している約４５～約５０個のアミノ酸（例えば、リジン）を含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、それぞれがビタミンＢ３に結合している約２０～約３０個のアミノ酸（例えば、リジン）、それぞれがビタミンＢ３に結合している約３０～約４０個のアミノ酸（例えば、リジン）、それぞれがビタミンＢ３に結合している約４０～約５０個のアミノ酸（例えば、リジン）、それぞれがビタミンＢ３に結合している約２５～約３５個のアミノ酸（例えば、リジン）、または、それぞれがビタミンＢ３に結合している約３５～約４５個のアミノ酸（例えば、リジン）を含む。

【0265】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、少なくとも約２つ、少なくとも約３つ、少なくとも約４つ、少なくとも約５つ、少なくとも約６つ、少なくとも約７つ、少なくとも約８つ、少なくとも約９つ、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、または少なくとも約２０のビタミンＢ３ユニットを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約１０のビタミンＢ３ユニットを含む。

【0266】

いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、任意選択的にリンカーにより水溶性ポリマーに連結されている標的化部分を含む。本明細書で使用する場合、「標的化部分」という用語は、特定の生体物質または部位に結合する生体認識分子を指す。いくつかの態様では、標的化部分は、ある特定の標的分子に対して特異的（例えば、受容体を標的とするリガンドまたは表面タンパク質を標的とする抗体）であるか、組織に対して特異的（例えば、特定の器官または組織、例えば、肝臓、脳、または内皮にミセルを優先的に輸送する分子）であるか、または生理学的バリアを通した輸送を促進する（例えば、血液脳関門または形質膜を通した輸送を促進し得るペプチドまたは他の分子）。

【0267】

ペイロード（例えば、ヌクレオチド分子、例えば、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤）を本開示に従って標的化するために、標的化部分は、カチオン性キャリアユニットに連結され得、これによって、ミセルの外面に連結され得る一方で、ミセルは、その核内に封入されたペイロードを有する。

【0268】

いくつかの態様では、標的化部分は、本開示のミセルを組織に標的化することができる標的化部分である。いくつかの態様では、組織は、肝臓、脳、腎臓、肺、卵巣、膵臓、甲状腺、胸部、胃、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、組織は、がん組織、例えば、肝臓癌、脳癌、腎臓癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺癌、乳癌、胃癌、またはそれらの任意の組み合わせである。

【0269】

いくつかの態様では、組織は、中枢神経系の組織、例えば、神経組織である。いくつかの態様では、中枢神経系を標的とする標的化部分は、大型中性アミノ酸輸送体１（ＬＡＴ１）により輸送されることができる。ＬＡＴ１（ＳＬＣ７Ａ５）は、大型中性アミノ酸及びいくつかの医薬品の両方の取り込みのための輸送体である。ＬＡＴ１は、Ｌ－ドーパまたはガバペンチンなどの薬物を輸送し得る。ＬＡＴ１は、脳微小血管内皮細胞において一貫して高レベルで発現される。溶質輸送体が主にＢＢＢに存在するため、本開示のミセルのＬＡＴ１への標的化により、ＢＢＢを通した送達を可能となる。いくつかの態様では、本開示のミセルをＬＡＴ１輸送体に標的化する標的化部分は、アミノ酸、例えば、分枝鎖または芳香族アミノ酸である。いくつかの態様では、アミノ酸は、バリン、ロイシン、及び／またはイソロイシンである。いくつかの態様では、アミノ酸は、トリプトファン及び／またはチロシンである。いくつかの態様では、アミノ酸は、トリプトファンである。他の態様では、アミノ酸は、チロシンである。

【0270】

いくつかの態様では、標的化部分は、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン、チロキシン、メルファラン、Ｌ－ドーパ、ガバペンチン、３，５－Ｉ－ジヨードチロシン、３－ヨード－Ｉ－チロシン、フェンクロニン、アシビシン、ロイシン、ＢＣＨ、メチオニン、ヒスチジン、バリン、またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＬＡＴ１リガンドである。いくつかの態様では、標的化部分は、ＬＡＴ１に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるチロシンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＬＡＴ１に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるリジンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＬＡＴ１に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるグルタミンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体、ＬＡＴ１、ＣＮＳ逆転写酵素阻害剤、及び／またはドーパミン（ＤＡ）受容体に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるフェニルアラニンを含む。ドーパミン受容体は、脊椎動物中枢神経系（ＣＮＳ）において顕著であるＧタンパク質共役受容体のクラスである。ドーパミン受容体は、Ｇタンパク質カップリングによってだけでなく、異なるタンパク質（ドーパミン受容体－相互作用タンパク質）相互作用によるシグナル伝達によっても異なるエフェクターを活性化する。神経伝達物質ドーパミンは、ドーパミン受容体の主要な内因性リガンドである。

【0271】

ドーパミン受容体は、動機付け、快感、認知、記憶、学習、及び細かい運動制御、ならびに神経内分泌シグナル伝達の調節を含む多数の神経プロセスに関与するとされる。異常なドーパミン受容体シグナル伝達及びドーパミン作動性神経機能は、いくつかの神経精神障害に関係付けられている。したがって、ドーパミン受容体は、神経薬の一般的な標的であり、抗精神病薬が、多くの場合、ドーパミン受容体アンタゴニストである一方で、精神刺激薬が、通常、ドーパミン受容体の間接的アゴニストである。

【0272】

いくつかの態様では、標的化部分は、ＣＮＳ逆転写酵素阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるバリンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体及び／またはＣＮＳ逆転写酵素阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるトリプトファンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体及び／またはＣＮＳ逆転写酵素阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるロイシンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体及び／またはＣＮＳ逆転写酵素阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるメチオニンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるヒスチジンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＣＮＳ逆転写酵素阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるイソロイシンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＳＨ輸送体に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるグルタチオンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＳＨ輸送体に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるグルタチオン－Ｍｅｔを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）に結合することができ、ＢＢＢに結合することができる尿素／チオ尿素を含む。いくつかの態様では、標的化部分は、酸化還元機構によりＢＢＢを通過することができるＮＡＤ＋／ＮＡＤＨを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、プリンを含み、ＢＢＢを通過することができる。ＣＮＳ標的化のためのさらなる標的化部分の例は、Ｓｕｔｅｒａ ｅｔ ａｌ．（２０１６）：Ｓｍａｌｌ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｓ ｍｏｉｅｔｙ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ＣＮＳ ｄｒｕｇｓ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ＤＯＩ：１０．１０８０／１７４２５２４７．２０１６．１２０８６５１に示されており、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0273】

いくつかの態様では、組成物は、約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、約３０個～約４０個のリシンを有するポリリシンを含むカチオン性キャリア部分と、約５個～約１０個のビタミンＢ３ユニットを有するアジュバント部分と、を含む。

【0274】

本開示は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤）を含むミセルであって、ｍｉＲＮＡ阻害剤と送達剤とが互いに会合した、ミセルも提供する。

【0275】

いくつかの態様では、会合は、共有結合、非共有結合、またはイオン結合である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷は、溶液中で本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤と混合される際にミセルを形成するのに十分であり、溶液中のカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷とｍｉＲ－４８５阻害剤（または阻害剤を含むベクター）の負電荷の全体的イオン比は、約１：１である。

【0276】

いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、酵素分解から本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を保護することができる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０２０２６１２２７Ａ１を参照されたい。

【0277】

いくつかの態様では、カチオン性担体ユニットは、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤）と関連している。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤）に関連するカチオン性担体単位は、８０個のリジン残基を含み、６４個のリジン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば－ＮＨ３＋を含む）、１６個のリジン残基は架橋のために修飾されている（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリジン－チオールに連結している）。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤）に関連するカチオン性担体単位は、８０個のリジン残基を含み、４０個のリジン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミンを含む）、３５個のリジン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリジン－チオールに連結している）、５個のリジン残基はアジュバント部分（例えば、ビタミン）を含むために修飾されている。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤）に関連するカチオン性担体単位は、８０個のリジン残基を含み、３８個のリジン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電した第四級アミンを含む）、２３個のリジン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリジンチオールに連結している）、１９個のリジン残基はアジュバント部分（例えば、ビタミン）を含むために修飾されている。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤）に関連するカチオン性担体単位は、８０個のリジン残基を含み、３２個のリジン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば－ＮＨ３＋を含む）、１６個のリジン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリジンチオールに連結している）、３２個のリジン残基はアジュバント部分（例えば、ビタミン）を含むために修飾されている。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤）に関連するカチオン性担体単位は、８０個のリジン残基を含み、６３個のリジン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電した第四級アミンを含む）、１７個のリジン残基はアジュバント部分（例えば、ビタミン）を含むために修飾されている。

【0278】

ＶＩ．医薬組成物
いくつかの態様では、本開示は、対象に投与するのに適した本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を含むポリヌクレオチドまたはベクター）を含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、一般的に、本明細書に記載されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、ポリヌクレオチドまたはベクター）と、薬学的に許容される賦形剤またはキャリアとを、対象への投与に適した形態で含む。薬学的に許容される賦形剤またはキャリアは、投与される特定の組成物、及び組成物を投与するために使用される特定の方法により部分的に決定される。

【0279】

したがって、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を含む医薬組成物の多種多様な適当な製剤が存在する（（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８ｔｈ ｅｄ．（１９９０）を参照）。医薬組成物は一般に、無菌状態で、米国食品医薬品局の適正製造基準（ＧＭＰ）規制のすべてに完全に準拠したものとして製剤化される。
ＶＩＩ．キット

【0280】

本開示は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、本明細書に開示されるポリヌクレオチド、ベクター、または医薬組成物）と、必要に応じて使用説明書、例えば本明細書に開示される方法に従った使用説明書と、を含むキットまたは製品も提供する。いくつかの態様では、キットまたは製品は、ｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、本開示のベクター、例えばＡＡＶベクター、ポリヌクレオチド、または医薬組成物）を１つ以上の容器に含む。いくつかの態様では、キットまたは製品は、ｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、本開示のベクター、例えばＡＡＶベクター、ポリヌクレオチド、または医薬組成物）と、パンフレットと、を含む。本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、本開示のベクター、ポリヌクレオチド、及び医薬組成物、またはこれらの組み合わせ）は、当該技術分野では周知の確立されたキット形式の１つに容易に組み込むことができる点は当業者には容易に認識されよう。

【0281】

以下の実施例は、例示のために示すものであって、限定のために示すものではない。

【実施例】

【0282】

実施例１：ｍｉＲ－４８５阻害剤の調製
（ａ）アルキン修飾チロシンの合成：本開示のミセルをＢＢＢのＬＡＴ１輸送体に誘導するためのカチオン性キャリアユニットの組織特異的標的化部分（ＴＭ、図１を参照）の合成のための中間体として、アルキン修飾されたチロシンを調製した。

【0283】

アセトニトリル（４．０ｍｌ）中、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－チロシンメチルエステル（Ｂｏｃ－Ｔｙｒ－ＯＭｅ）（０．５ｇ，１．６９ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（１．５当量，２．５４ｍｍｏｌ）の混合物を、臭化プロパルギル（１．２当量，２．０３ｍｍｏｌ）に滴下した。反応混合物を６０℃で一晩加熱した。反応後、反応混合物を、水：酢酸エチル（ＥＡ）を使用して抽出した。次いで、有機層を、ブライン溶液を使用して洗浄した。粗製物を、フラッシュカラム（ヘキサン中、１０％ＥＡ）により精製した。次に、得られた生成物を、１，４－ジオキサン（１．０ｍｌ）及び６．０ＭのＨＣｌ（１．０ｍｌ）中に溶解した。反応混合物を１００℃で一晩加熱した。次に、ジオキサンを除去し、ＥＡにより抽出した。水性ＮａＯＨ（０．５Ｍ）溶液をｐＨ値が７になるまで混合物に加えた。反応物質をエバポレーターで濃縮し、１２０００ｒｐｍで０℃で遠心分離した。沈殿物を脱イオン水で洗浄して凍結乾燥した。

【0284】

（ｂ）ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）（ＰＥＧ－ＰＬＬ）の合成：この合成ステップにより、本開示のカチオン性キャリアユニットの水溶性バイオポリマー（ＷＰ）及びカチオン性キャリア（ＣＣ）を調製した（図１を参照）。

【0285】

ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）を、モノメトキシＰＥＧ（ＭｅＯ－ＰＥＧ）を高分子開始剤として用いてＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡの開環重合により合成した。要約すると、ＭｅＯ－ＰＥＧ（６００ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ（２５７４ｍｇ、９．６ｍｍｏｌ）を、１Ｍのチオ尿素を含有するＤＭＦ及びＤＭＦ（またはＮＭＰ）中に別々に溶解した。Ｌｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ溶液を、マイクロシリンジによりＭｅＯ－ＰＥＧ溶液に滴下し、反応混合物を３７℃で４日間撹拌した。反応ボトルをアルゴン及び真空によりパージした。すべての反応をアルゴン雰囲気下で行った。反応後、混合物を過剰量のジエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿物をメタノールに再溶解し、冷ジエチルエーテル中で再び沈殿させた。次いで、沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥後に白色粉末を得た。ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＴＦＡ）のＴＦＡ基の脱保護を行うため、次のステップを行った。

【0286】

ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＴＦＡ）（５００ｍｇ）をメタノール（６０ｍＬ）に溶解し、１ＮのＮａＯＨ（６ｍＬ）をポリマー溶液に撹拌下で滴下した。混合物を撹拌しながら３７℃で１日維持した。反応混合物を１０ｍＭのＨＥＰＥＳに対して４回及び蒸留水に対して透析した。凍結乾燥後にＰＥＧ－ＰＬＬの白色粉末を得た。

【0287】

（ｂ）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）（Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ）の合成：この合成ステップにより、本開示のカチオン性キャリアユニットの水溶性バイオポリマー（ＷＰ）及びカチオン性キャリア（ＣＣ）を調製した（図１を参照）。

【0288】

アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）を、アジド－ＰＥＧ（Ｎ_３－ＰＥＧ）を用いてＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡの開環重合により合成した。要約すると、Ｎ_３－ＰＥＧ（３００ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）及びＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ（１２８７ｍｇ，４．８ｍｍｏｌ）を、１Ｍのチオ尿素を含んだＤＭＦ及びＤＭＦ（またはＮＭＰ）に別々に溶解した。Ｌｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ溶液を、マイクロシリンジによりＮ_３－ＰＥＧ溶液に滴下し、反応混合物を３７℃で４日間撹拌した。反応ボトルをアルゴン及び真空によりパージした。すべての反応をアルゴン雰囲気下で行った。反応後、混合物を過剰量のジエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿物をメタノールに再溶解し、冷ジエチルエーテル中で再び沈殿させた。次いで、沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥後に白色粉末を得た。ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＴＦＡ）のＴＦＡ基の脱保護を行うため、次のステップを行った。

【0289】

Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（５００ｍｇ）をメタノール（６０ｍＬ）に溶解し、１ＮのＮａＯＨ（６ｍＬ）を撹拌しながらポリマー溶液に滴下した。混合物を撹拌しながら３７℃で１日維持した。反応混合物を１０ｍＭのＨＥＰＥＳに対して４回及び蒸留水に対して透析した。凍結乾燥後にＮ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬの白色粉末を得た。

【0290】

（ｃ）（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ））の合成：このステップでは、組織特異的アジュバント部分（ＡＭ、図１を参照）を本開示のカチオン性キャリアユニットのＷＰ－ＣＣコンポーネントに結合させた。カチオン性キャリアユニットに使用した組織特異的アジュバント部分（ＡＭ）は、ニコチンアミド（ビタミンＢ３）とした。このステップにより、図１に示されるカチオン性キャリアユニットのＷＰ－ＣＣ－ＡＭコンポーネントが得られる。

【0291】

アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リジン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ））を、Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ及びニコチン酸のＥＤＣ／ＮＨＳの存在下での化学修飾により合成した。Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（３７２ｍｇ，２５．８μｍｏｌ）及びニコチン酸（５５６．７ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して１．０２当量）を、脱イオン水及びメタノール（１：１）の混合物に別々に溶解した。ＥＤＣ・ＨＣｌ（５５６．７ｍｇ，Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ_２に対して１．５当量）をニコチン酸溶液に加え、ＮＨＳ（３３４．２ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して１．５当量）を混合物に段階的に加えた。

【0292】

反応混合物をＮ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ溶液に加えた。反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。１６時間後、３，３’－ジチオジプロピオン酸（３６．８ｍｇ，０．１当量）をメタノールに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４０．３ｍｇ，０．１５当量）、及びＮＨＳ（２４．２ｍｇ，０．１５当量）を脱イオン水にそれぞれ溶解した。次いで、ＮＨＳ及びＥＤＣ・ＨＣｌを、３，３’－ジチオジプロピオン酸溶液に順次加えた。粗製のＮ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）溶液を加えた後、混合液を３７℃で４時間撹拌した。

【0293】

精製を行うため、混合物をメタノールに対して２時間透析し、ＤＬ－ジチオトレイトール（ＤＴＴ，４０．６ｍｇ，０．１５当量）を加えた後、３０分間活性化した。

【0294】

ＤＴＴを除去するため、混合物を、メタノール、脱イオン水中５０％のメタノール、脱イオン水に対して順次透析した。

【0295】

ｄ）フェニルアラニン－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（Ｐｈｅ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ））の合成：このステップでは、組織特異的標的化部分（ＴＭ）を上記のステップで合成したＷＰ－ＣＣ－ＡＭコンポーネントに結合させた。ＴＭコンポーネント（フェニルアラニン）は、ステップ（ａ）で調製した中間体とステップ（ｃ）の生成物との反応によって調製した。

【0296】

血管内の脳の内皮組織を標的化するため、ＬＡＴ１を標的とするアミノ酸としてフェニルアラニンを、銅触媒の存在下でのＮ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ）とアルキン修飾されたチロシンとの間のクリック反応により導入した。要約すると、Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ）（１３０ｍｇ、６．５μｍｏｌ）及びアルキン修飾フェニルアラニン（５．７ｍｇ、４．０ｅｑｕｉｖ．）を脱イオン水（または５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液）に溶解した。次いで、ＣｕＳＯ_４・Ｈ２Ｏ（０．４ｍｇ，２５ｍｏｌ％）及びＴｒｉｓ（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ，３．４ｍｇ，１．２当量）を脱イオン水に溶解し、Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ）溶液を加えた。次いで、アスコルビン酸ナトリウム（３．２ｍｇ，２．５当量）を混合液に加えた。反応混合物を、室温で１６時間撹拌しながら維持した。反応後、混合物を透析膜（ＭＷＣＯ＝７，０００）に移し、脱イオン水に対して１日間透析した。最終生成物を凍結乾燥後に得た。

【0297】

（ｅ）ポリイオン複合体（ＰＩＣ）ミセル製剤－上記に記載したようにして本開示のカチオン性キャリアユニットを調製した後、ミセルを作製した。本実施例に記載されるミセルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドペイロードと組み合わされたカチオン性キャリアユニットからなるものである。

【0298】

ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）またはＰｈｅ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）とｍｉＲＮＡを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）を、０．５ｍｇ／ｍＬの濃度でＨＥＰＥＳ緩衝液（１０ｍＭ）に溶解した。次いで、ＲＮＡｓｅ非含有水中のｍｉＲＮＡ溶液（２２．５μＭ）を、ｍｉＲＮＡ阻害剤（配列番号２～３０）（例えば、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）とポリマーとの比が２：１（ｖ／ｖ）となるようにポリマー溶液と混合した。

【0299】

ポリマーと抗ｍｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件、すなわち、ポリマー（本開示のキャリア）中のアミンと抗ｍｉＲＮＡ（ペイロード）中のリン酸との比を最適化することにより決定した。ポリマー（キャリア）と抗ｍｉＲＮＡ（ペイロード）との混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで９０秒間はげしく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。

【0300】

使用に先立ち、ミセル（１０μＭの抗ｍｉＲＮＡ濃度）を４℃で保存した。ＭｅＯ－ミセルまたはＰｈｅ－ミセルを同じ方法を用いて調製し、ミセル調製時に両方のポリマーを混合することにより異なる量のＰｈｅ（２５％～７５％）を含有するミセルも調製した。

【0301】

実施例２：ＮＳＣ－３４細胞のＨｔｔ分解に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の効果

【0302】

細胞培養
マウス運動ニューロン様ハイブリッド細胞株（ＮＳＣ－３４）細胞を、ＣｅｄａｒｌａｎｅＬａｂｓから購入した。ＮＳＣ－３４細胞を培養液（１０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）、１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ）で維持し、加湿した５％ＣＯ_２インキュベーター内で３７℃に維持した。

【0303】

ウエスタンブロット（不溶性画分）
ＮＳＣ－３４細胞から不溶性画分を得るため、細胞ペレットをプロテアーゼ／フォスファターゼ阻害剤カクテルを含んだ不溶性抽出バッファー［５０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）＋２％ＳＤＳ］中、氷上で３０分間、溶解した。ライセートを４℃で１３，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。タンパク質を、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイキット（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号５０００１１６）を使用して定量し、同じ最終濃度に調整した。変性後、ライセートをウエスタンブロット用に処理して不溶性Ｈｔｔを測定した。試料をＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し、ＰＶＤＦ膜に移し、マウス抗Ｈｔｔ一次抗体（Ｍｅｒｃｋ、カタログ番号ＭＡＢ５３７４、１：１０００）とインキュベートした。結果を強化された化学発光システムを使用して視覚化した。

【0304】

結果
ハンチンチン（Ｈｔｔ）分解に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の効果を調べるために、ＮＳＣ－３４細胞（マウス運動ニューロン様細胞）にＧＦＰタグ付き野生型（Ｑ２３）（ｐＥＧＦＰ－Ｑ２３）または変異体（Ｑ７４）（ｐＥＧＦＰ－Ｑ７４）Ｈｔｔをトランスフェクトした。ＧＦＰタグ付き野生型Ｑ２３（ｐＥＧＦＰ－Ｑ２３）Ｈｔｔまたは変異体Ｑ７４（ｐＥＧＦＰ－Ｑ７４）Ｈｔｔでトランスフェクトした後、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤をトランスフェクトされたＮＳＣ３４で共処理した。不溶性画分を前述のように取得し（４８時間後）、Ｑ７４－ＧＦＰタグ付きＮＳＣ－３４細胞及びＱ２４－ＧＦＰタグ付きＮＳＣ－３４細胞における不溶性の凝集Ｈｔｔのレベルを分析した。不溶性の凝集Ｈｔｔは、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤（５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８））処理ＮＳＣ－３４細胞を含有する変異Ｈｔｔを発現するミセルにおいて有意に減少した（図２Ａ及び２Ｂ）。

【0305】

実施例３：ＨＥＫ２９３Ｔ、ＰＣ１２、及び一次皮質ニューロンのＨｔｔ分解に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の効果
ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯ処理がＨｔｔ凝集を減弱できるかどうかを判断するために、ＨＥＫ２９３Ｔ及びＰＣ１２細胞を６ウェルプレートに一晩播種し、ＪＥＴＯＰＴＩＭＵＳ（登録商標）トランスフェクション試薬（ポリプラス）を使用して２μｇＱ２３－ＥＧＦＰ、Ｑ７４－ＥＧＦＰでトランスフェクトし、ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯ（すなわち、配列番号：２８）で、５０、１００、及び３００ｎＭの最終濃度で４８時間処理した。図３Ａ及び３Ｂに示すように、ウエスタンブロット分析により、Ｈｔｔ－Ｑ７４の過剰発現がＨｔｔ凝集を増加させることが明らかになった。細胞を蛍光顕微鏡で分析し、ライセートをウエスタンブロット分析用に採取した。

【0306】

トランスフェクション後４８時間でのＨｔｔ凝集（斑点）を、増強された緑色蛍光遺伝子（ＥＧＦＰ）発現に基づいて蛍光顕微鏡下で評価した。

【0307】

上記の処理後、細胞を採取し、プロテアーゼ／フォスファターゼ阻害剤カクテル（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号５８７２）を含んだ氷冷したＲＩＰＡバッファー（ｉＮｔＲＯＮ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）中、氷上で３０分間溶解した。ライセートを４℃にて１３，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、上澄みを回収した。試料をＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し、ＰＶＤＦ膜に移し、次の一次抗体とインキュベートした：マウス抗ＨＴＴクローンＥＭ４８（１：１０００，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）マウス抗ＳＩＲＴ１（１：１０００；Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）、マウス抗ＰＧＣ－１ａ（１：１０００；Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）、マウス抗ｐ６２（１：１０００；Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）、ウサギ抗切断型カスパーゼ－３（１：１０００；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ，ＵＳＡ）、マウス抗ＧＦＰ（１：１０００；ａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ウサギ抗ＬＣ３Ｂ（１：１０００；Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｃｅｎｔｅｎｎｉａｌ，ＣＯ，ＵＳＡ）、及びマウス抗β－アクチン（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）。その後、膜を二次抗体と室温で１時間インキュベートし、ウエスタンブロット試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）を使用してバンドを検出した。定量的分析を行うため、各バンドの密度をＣｏｍｐｕｔｅｒＩｍａｇｉｎｇＤｅｖｉｃｅ及び付属のソフトウェア（Ｆｕｊｉ Ｆｉｌｍ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を使用して測定し、そのレベルを各試料についてハウスキーピングタンパク質のバンドに正規化した密度として定量的に表した。

【0308】

ウエスタンブロット分析により、ＨＴＴ－Ｑ７４の過剰発現がＨＴＴ凝集を増加させることが明らかになった。しかしながら、ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯ処理はＨＴＴ凝集を減少させ、ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯ処理がＨＴＴ－Ｑ７４過剰発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞においてＨｔｔ凝集を抑制できることを示した（図３Ａ及び３Ｂ）。

【0309】

オートファジーはＨｔｔ凝集体などの細胞内の誤って折りたたまれたタンパク質を除去できるため、オートファジー関連タンパク質をウエスタンブロット分析で分析した。図４Ａ～４Ｅは、ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯ処置が、ＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１ａ、ｐ６２及びＬＣ３－ＩＩなどのオートファジー刺激因子を著しくアップレギュレートしたことを示し、ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯがオートファジー機構を通じてＨｔｔ凝集を減少させたことを実証する。Ｈｔｔ凝集の減少は、ＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１ａ、ｐ６２、及びＬＣ３の発現増加を介してオートファジーを刺激することにより、ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯで処理したＰＣ１２細胞でも観察された。（図５及び６）。さらに、ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯ処理は、アポトーシスのマーカーであるカスパーゼ－３の切断を減少させ（図６）、Ｈｔｔ誘導ニューロンアポトーシスがｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯによって遮断されたことを実証した。

【0310】

Ｈｔｔ凝集体の減少に対するｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯ処理の効果をさらに検証するために、ＧＦＰタグ付き野生型（Ｑ２３）または変異体（Ｑ７４）Ｈｔｔを発現するＰＣ１２及び一次皮質ニューロンをｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯで処理した。制御された条件下で、Ｑ２３－Ｈｔｔを発現する細胞は、ＰＣ１２細胞（図７Ａ～７Ｅ）または一次皮質ニューロン（図８Ａ～８Ｄ）のいずれにおいても検出可能な凝集体を伴わずにびまん性ＧＦＰ分布を示した。対照的に、Ｑ７４－Ｈｔｔを発現する両方の細胞型はＨｔｔ凝集体を示し、ｍｉＲ－４８５－３ｐＡＳＯ処理は、対照ＰＣ１２細胞（図７Ａ～７Ｅ）及び一次皮質ニューロン（図８Ａ～８Ｄ）と比較してＨｔｔ凝集を減少させた。

【0311】

初代皮質神経細胞を１７日目のマウス胎児から培養した。簡単に述べると、皮質を摘出し、氷冷したＨＢＳＳ（Ｗｅｌｇｅｎｅ，ＬＢ００３－０２）溶液中でインキュベートし、ａｃｃｕｍａｘ（ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ａ７０８９）中、３７℃で１５分間、解離させた。培養物をＨＢＳＳ中で２回、洗浄した。マウス神経細胞を、２％Ｂ２７（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１７５０４）、１％ピルビン酸ナトリウム、及び１％Ｐ／Ｓを含むｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号２１１０３０４９）に再懸濁した。細胞を、７０μＭのセルストレイナー（ＳＰＬ，９３０７０）に通して濾過し、加湿した５％ＣＯ_２インキュベーター内で３７℃に維持した。培地を３日毎に換え、その後１０日間インビトロで培養した後、細胞を実験に使用した。

【0312】

全てのデータは平均値±ｓ．ｄとして表わす。事後比較（Ｓｔｕｄｅｎｔ－Ｎｅｗｍａｎ－Ｋｅｕｌｓ検定）をＰｒｉｓｍ ８を使用して実行した。

【0313】

実施例４：ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯがオートファジーの調節によってＨｔｔ凝集体の分解を増強する
ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯ処理がＨｔｔ凝集体の分解を促進できることをさらに検証するために、ＰＣ１２細胞に、ｍｉＲ４８５－３ｐ（５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号：２８））と組み合わせてＨｔｔＱ２３またはＨｔｔＱ７４をトランスフェクトした。Ｑ２３（図９Ａ～９Ｉ）トランスフェクト細胞と比較して、Ｑ７４トランスフェクトＰＣ１２細胞（ＰＪ－９Ｒ）ではＨｔｔタンパク質の凝集の増加が検出可能であり、ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯトランスフェクション後に劇的に減少した（図９Ａ～９Ｒ）。オートファジー液胞の量が多いことも観察され（例えば、Ｑ７４－Ｃｏｎｒｏｌと比較して、Ｑ７４－ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯでＬＣ３Ｂと共局在するＨｔｔタンパク質を含むＬＣ３Ｂ）、ｍｉＲ－４８５－３ｐＡＳＯがＱ７４－ｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯトランスフェクト細胞でＨｔｔ凝集のレベルを大幅に低下させることができることを示している。

【0314】

ＰＣ１２細胞（８×１０^４）を１２ウェルプレートに一晩播種した。Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡ）から入手したＰＣ１２細胞を、１０％ウシ胎児血清、１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ；Ｗｅｌｇｅｎｅ）で維持し、５％ＣＯ２加湿雰囲気で３７℃に保った。細胞を２４ウェルプレートで培養し、２μｇのｐＥＧＦＰＨＴＴ（Ｑ２３）／ｍＨＴＴ（Ｑ７４）プラスミドで２４時間培養した後、ＴｒａｎｓＩＴ－Ｘ２（商標）（Ｍｉｒｕｓ）をトランスフェクトした。トランスフェクションと培地交換の後、細胞にｍｉＲ４８５－３ｐＡＳＯをトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、カバースリップ上で増殖した細胞を４％パラホルムアルデヒド溶液で修正し、ブロックし、一次及び対応する蛍光標識二次抗体と共にインキュベートした。ＨＴＴタンパク質の凝集及びオートファジーを、増強された緑色蛍光遺伝子（ＥＧＦＰ）発現及びＬＣ３Ｂ斑点に基づいて蛍光顕微鏡下で評価した。
＊＊＊

【0315】

特許請求の範囲を解釈するうえで、「発明の概要」及び「要約」のセクションではなく、「発明の詳細な説明」のセクションを用いることが意図されている点は認識されるべきである。発明の概要及び要約セクションは、本発明者（複数可）により意図される１つ以上であるが、すべてではない本開示の例示的態様を示し得、したがって、本開示及び添付の特許請求の範囲を如何様にも限定することを意図しない。

【0316】

本開示は、特定の機能及びそれらの関係の実施を示す機能的構成単位を用いて上記された。これらの機能的構成単位の境界は、説明の便宜上、本明細書において任意に定められたものである。特定の機能及びそれらの関係性が適切に実施されている限り、代替的な境界を定義することもできる。

【0317】

具体的な態様の上記の具体的な説明は本開示の一般的な性質を余すところなく示しているため、他者は、当業者の技能の範囲内の知識を適用することで、不要な実験を行うことなく、本開示の一般的概念から逸脱せずに、かかる具体的な態様を容易に改変し、及び／またはさまざまな用途に適合させることができる。したがって、そのような適合及び改変は、本明細書に示される教示及び助言に基づき、開示される態様の均等物の意味及び範囲内に包含されるものとする。本明細書における語句または用語は、説明を目的としたものであって、限定を目的とするものではなく、本明細書における語句または用語は本明細書の教示及び助言を考慮することで当業者によって理解されるはずである。

【0318】

本開示の幅及び範囲は、上記に記載した例示的な態様のいずれによっても限定されるべきでなく、下記の請求項及びそれらの均等物のみにしたがって定義されるべきものである。

【0319】

本出願全体を通じて引用され得る全ての引用参考文献（参考文献、特許、特許出願、及びウェブサイトを含む）の内容の全体を、あらゆる目的で、参照によって本明細書に明示的に援用し、また、それらに引用される文献も同様に援用する。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図9F】

【図9G】

【図9H】

【図9I】

【図9J】

【図9K】

【図9L】

【図9M】

【図9N】

【図9O】

【図9P】

【図9Q】

【図9R】

【配列表】

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【国際調査報告】