特表 2023-532675 ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣの治療に使用するための、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤およびＥＧＦＲ阻害剤の組合せ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-31

(54)【発明の名称】ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣの治療に使用するための、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤およびＥＧＦＲ阻害剤の組合せ

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/08 20060101AFI20230724BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230724BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230724BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20230724BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20230724BHJP

   A61K 31/454 20060101ALI20230724BHJP

   A61K 31/4738 20060101ALI20230724BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20230724BHJP

【ＦＩ】

A61K45/08

A61P35/00 ZNA

A61P43/00 121

A61K31/5377

A61K31/506

A61K31/454

A61K31/4738

C12N15/12

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022580178

(86)(22)【出願日】2021-06-24

(85)【翻訳文提出日】2023-02-08

(86)【国際出願番号】 EP2021067346

(87)【国際公開番号】W WO2021260109

(87)【国際公開日】2021-12-30

(31)【優先権主張番号】20182364.8

(32)【優先日】2020-06-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】21167277.9

(32)【優先日】2021-04-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522132856

【氏名又は名称】トルレモ・セラピューティクス・アクチェンゲゼルシャフト

【氏名又は名称原語表記】ＴＯＬＲＥＭＯ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＡＧ

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】フリュッキガー－マングアル，シュテファニ

(72)【発明者】

【氏名】グルーバー，ドロテーア

(72)【発明者】

【氏名】ボーナッカー，トーマス

(72)【発明者】

【氏名】シュビル，マルティン

(72)【発明者】

【氏名】シュミッツ－ローマー，デボラ

(72)【発明者】

【氏名】ファブリティウス，シャルル－ヘンリー

(72)【発明者】

【氏名】ラウダト，サラ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA20

4C084ZB261

4C084ZC202

4C084ZC412

4C084ZC751

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC30

4C086BC42

4C086BC67

4C086BC73

4C086GA02

4C086GA07

4C086GA09

4C086GA12

4C086GA16

4C086MA02

4C086MA05

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZC20

4C086ZC75

(57)【要約】

本発明は、とりわけ、ＮＳＣＬＣに罹患している患者の治療に使用するための、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤およびＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、組合せに関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、前記ＮＳＣＬＣは前記ＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、組合せ。

【請求項2】

前記ＥＧＦＲにおける前記発がん性変更は、前記ＥＧＦＲの過剰活性化をもたらす、請求項１に記載の使用のための組合せ。

【請求項3】

前記発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１８またはエクソン１９またはエクソン２０における欠失および／または挿入；ＥＧＦＲ遺伝子におけるキナーゼドメイン重複；ＥＧＦＲ遺伝子の増幅；Ｌ８５８Ｒ、Ｇ７１９Ｓ、Ｇ７１９Ａ、Ｇ７１９Ｃ、Ｖ７６５Ａ、Ｔ７８３Ａ、Ｓ７６８Ｉ、Ｓ７６８Ｖ、Ｌ８６１Ｑ、Ｅ７０９Ｘ、Ｌ８１９Ｑ、Ａ７５０Ｐ、およびそれらの組合せからなる群から選択され、Ｘは任意のアミノ酸を示すアミノ酸置換を前記ＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；ならびに上述のもののいずれかの組合せにより引き起こされる、請求項１または２に記載の使用のための組合せ。

【請求項4】

前記発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失、好ましくは前記ＥＧＦＲにＥ７４６～Ａ７５０またはＬ７４７～Ｅ７４９の欠失をもたらす欠失；前記ＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｌ８５８ＲまたはＡ７５０ＰをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；およびそれらの組合せにより引き起こされる、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のための組合せ。

【請求項5】

但し、前記ＮＳＣＬＣが、ＥＧＦＲ阻害剤の以前の投与により前記ＥＧＦＲに耐性変更をさらに呈する場合、前記組合せの前記ＥＧＦＲ阻害剤は、以前に投与された前記ＥＧＦＲ阻害剤ではない、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のための組合せ。

【請求項6】

前記ＥＧＦＲにおける前記耐性変更は、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｘ、Ｌ７９２Ｘ、Ｇ７９６Ｘ、Ｌ７１８Ｑ、Ｌ７１８Ｖ、Ｇ７２４Ｓ、Ｄ７６１Ｙ、Ｖ８３４Ｌ、Ｔ８５４Ａ、およびそれらの組合せからなる群から選択され、Ｘは任意のアミノ酸を示すアミノ酸置換を前記ＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異により引き起こされる、請求項５に記載の使用のための組合せ。

【請求項7】

前記ＥＧＦＲにおける前記耐性変更は、前記ＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｔ７９０ＭをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異により引き起こされる、請求項５または６に記載の使用のための組合せ。

【請求項8】

前記ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、化合物Ａ、化合物Ｃ、化合物０００３０、化合物０００７１、ＣＣＳ１４７７、ＧＮＥ－７８１、ＧＮＥ－０４９、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０、ＣＰＩ－６３７、ＦＴ－６８７６、化合物４６２、化合物４２４、および化合物５１５からなる群から選択される、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のための組合せ。

【請求項9】

前記ＥＧＦＲ阻害剤は、ＡＢＢＶ－３２１、アビベルチニブ、アファチニブ、アルフルチニブ、アルモネルチニブ、アパチニブ、ＡＺＤ３７５９、ブリガチニブ、Ｄ０３１６、Ｄ０３１７、Ｄ０３１８、ダコミチニブ、ＤＺＤ９００８、エルロチニブ、ＦＣＮ－４１１、ゲフィチニブ、イコチニブ、ラパチニブ、ラゼルチニブ、モボセルチニブ、ナザルチニブ、ネラチニブ、オラフェルチニブ、オシメルチニブ、ポジオチニブ、ピロチニブ、レジベルチニブ、ＴＡＳ６４１７、バンデタニブ、バルリチニブ、ＸＺＰ－５８０９、アミバンタマブ、ＣＤＰ１、セツキシマブ、ＧＣ１１１８、ＨＬＸ０７、ＪＭＴ１０１、Ｍ１２３１、ネシツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、パニツムマブ、ＳＣＴ２００、ＳＩ－Ｂ００１、ＳＹＮ００４、ザルツムマブ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のための組合せ。

【請求項10】

前記組合せは、各治療サイクル中に前記患者に投与される、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のための組合せ。

【請求項11】

（ｉ）および（ｉｉ）は、別々の剤形として投与されるか、または単一の剤形に含まれている、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のための組合せ。

【請求項12】

（ｉ）および（ｉｉ）が別々の剤形として投与される場合、各治療サイクル中の投与は、同時的または逐次的である、請求項１１に記載の使用のための組合せ。

【請求項13】

前記治療は、唯一の活性作用剤として投与された場合の前記ＥＧＦＲ阻害剤の療法効果の持続時間と比較して、療法効果の持続時間の延長をもたらす、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のための組合せ。

【請求項14】

前記治療は、唯一の活性作用剤として投与された場合の前記ＥＧＦＲ阻害剤の療法有効性と比較して、療法有効性の増加をもたらす、請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用のための組合せ。

【請求項15】

前記治療は、前記ＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性の予防をもたらす、請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用のための組合せ。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）治療の分野である。したがって、本発明は、ＮＳＣＬＣに罹患している患者の治療に使用するための、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤およびＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、組合せに関する。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
非小細胞肺がん（ＮＣＳＬＣ）は、世界で最も一般的な悪性腫瘍であり、がん死亡の主要原因であり、５年生存率は５％以下である。

【0003】

最近、Ｈｏｕらは、ｐ３００が、ＮＳＣＬＣ細胞において上皮間葉転換を誘導することにより、増殖、遊走、および侵襲を促進することを報告している（Ｈｏｕら、ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ（２０１８年）１８巻：６４１頁を参照）。こうした結果は、ｐ３００がＲＮＡｉにより下方制御されたＮＳＣＬＣ細胞株で得られた。このように、ｐ３００タンパク質の発現は、核酸誘導機序により下方制御された。

【0004】

ｐ３００（ＥＰ３００およびＫＡＴ３Ｂとしても知られている）は、多数の異なるドメインを有し、多数のＤＮＡ結合転写因子を含む多様なタンパク質に結合する大型タンパク質である。サイクリックＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）結合タンパク質ＣＢＰ（ＣＲＥＢＢＰおよびＫＡＴ３Ａとしても知られている）は、ｐ３００と非常に密接に関連するタンパク質であり、この２つのタンパク質は、広範な配列同一性および機能的類似性に照らして、一般的にパラログと呼ばれている。

【0005】

ＣＢＰ／ｐ３００は、ヒストンおよび他のタンパク質のリジン側鎖へのアセチル基の付着を触媒することが示されているリジンアセチルトランスフェラーゼである。ＣＢＰ／ｐ３００は、転写を活性化することが提唱されており、その作用機序は、ＤＮＡ結合転写因子をＲＮＡポリメラーゼ機構へと橋渡しすることによるものであるか、または転写開始前複合体のアセンブリを支援することによると考えられる。そのため、異なるＣＢＰ／ｐ３００ドメインは、異なる遺伝子を転写するためにプロモーターおよびエンハンサーにおいてアセンブリされる様々な異なる転写因子と相互作用すると考えられている（ＤｙｓｏｎおよびＷｒｉｇｈｔ、ＪＢＣ ２９１巻、１３号、６７１４～６７２２頁、図２を参照）。

【0006】

ＣＢＰ／ｐ３００の複数ドメインの１つは、ブロモドメインである。ブロモドメイン自体は、１９９２年にショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）で始めて識別され、約１０年後にはアセチル－リジンとの結合モジュールであることが報告された。ヒトでは、配列類似性および構造類似性に基づき８つのグループに分類することができる多数のブロモドメイン含有タンパク質が存在する。すべてのブロモドメイン含有タンパク質が転写プログラムの調節に関与していると考えられる。発がん性再編成（Ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）は、ブロモドメイン含有タンパク質、より具体的にはそれらのブロモドメインを標的とすることが、特にがんの治療に有益であり得ることを示唆する。

【0007】

そのため、ブロモドメイン含有タンパク質の１つのグループを構成する、典型的にはＢＥＴタンパク質と呼ばれるいわゆる「ブロモドメインおよびエクストラターミナルモチーフ」タンパク質を標的とする幾つかの薬物候補が開発されており、現在臨床試験が行われている。ＢＥＴタンパク質標的薬物の例は、ＩＮＣＢ０５４３２９（Ｉｎｃｙｔｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＡＢＢＶ－０７５（ＡｂｂＶｉｅ）、およびＩ－ＢＥＴ７６２（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）である。ブロモドメイン含有タンパク質の別々のグループの一部であるＣＢＰおよびｐ３００のブロモドメインを選択的に標的とする薬物も存在する。そのような阻害剤としては、例えば、転移性去勢抵抗性前立腺がんおよび血液学的悪性腫瘍の治療について現在臨床研究が行われているＣＣＳ１４７７（ＣｅｌｌＣｅｎｔｒｉｃ）、または転移性去勢抵抗性前立腺がんの治療について現在研究が行われているＦＴ－７０５１（Ｆｏｒｍａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．）が挙げられる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

上記で考察されているＨｏｕらによる結果に照らすと、効果的なＮＳＣＬＣ治療を提供するためには、ＮＳＣＬＣにおけるｐ３００の役割、特にその様々なドメインをさらに解明する必要がある。

【課題を解決するための手段】

【0009】

発明の目的および概要
本発明の発明者らは、驚くべきことに、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤、つまり、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに選択的に結合するブロモドメイン阻害剤は、単独で投与した場合、ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせて投与すると、ＥＧＦＲに発がん性変更を呈するＮＳＣＬＣの効果的な治療を提供することを見出した。言い換えると、本発明者らは、驚くべきことに、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤およびＥＧＦＲ阻害剤の組合せが、ＥＧＦＲに発がん性変更を呈するＮＳＣＬＣに対してこの２つの活性物質のいずれかがそれ自体で呈する効果と比較して、ＥＧＦＲに発がん性変更を呈するＮＳＣＬＣの治療により効果的であることを見出した。したがって、上記で記述されているように、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、単独で投与した場合は効果がなく（「効果がない」とは、特に、対象の標的病変または非標的病変に対して、ＲＥＣＩＳＴ １．１応答基準により規定される客観的応答が存在しないことを意味する）、単独で投与した場合のＥＧＦＲ阻害剤の効果は、ＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性が発生する可能性が高いため経時的に減少する。

【0010】

第１の態様では、本発明は、ＮＳＣＬＣに罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、組合せに関する。第１の態様は、ＮＳＣＬＣに罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣは、この組合せで使用されるＥＧＦＲ阻害剤のラベルの１つもしくは複数の適応症に示されているＥＧＦＲ突然変異プロファイルにより特徴付けられるか、またはＮＳＣＬＣは、この組合せで使用されるＥＧＦＲ阻害剤により臨床治験設定で標的とされるＥＧＦＲ突然変異プロファイルにより特徴付けられる、組合せであるとみなすこともできる。

【0011】

第１の態様の好ましい実施形態では、ＥＧＦＲにおける発がん性変更は、ＥＧＦＲの過剰活性化をもたらす。ＥＧＦＲにおける発がん性変更は、構成的に活性なＥＧＦＲ（ＥＧＦＲの酵素活性、すなわちプロテインキナーゼ活性が構成的に活性であるという意味で）をもたらす可能性さえある。

【0012】

第１の態様のさらに好ましい実施形態では、ＥＧＦＲにおける発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１８またはエクソン１９またはエクソン２０における欠失および／または挿入；ＥＧＦＲ遺伝子におけるキナーゼドメインの重複；ＥＧＦＲ遺伝子の増幅；Ｌ８５８Ｒ、Ｇ７１９Ｓ、Ｇ７１９Ａ、Ｇ７１９Ｃ、Ｖ７６５Ａ、Ｔ７８３Ａ、Ｓ７６８Ｉ、Ｓ７６８Ｖ、Ｌ８６１Ｑ、Ｅ７０９Ｘ、Ｌ８１９Ｑ、Ａ７５０Ｐ、およびそれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸置換をＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；ならびに上述のいずれかの組合せにより引き起こされる。発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失；ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン２０における挿入；Ｌ８５８Ｒ、Ｇ７１９Ｓ、Ｇ７１９Ａ、Ｇ７１９Ｃ、Ｖ７６５Ａ、Ｔ７８３Ａ、Ｓ７６８Ｉ、Ｓ７６８Ｖ、Ｌ８６１Ｑ、Ｅ７０９Ｘ、Ｌ８１９Ｑ、Ａ７５０Ｐ、およびそれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸置換をＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；ならびに上述のいずれかの組合せにより引き起こされることが好ましい場合がある。また、発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失；ＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｌ８５８ＲをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；およびそれらの組合せにより引き起こされることが好ましい場合がある。ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１８における欠失および挿入は、特に、ＥＧＦＲにＥ７０９～Ｔ７１０の欠失をもたらす欠失およびＥＧＦＲのこの位置におけるＤの挿入である。ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失は、特に、ＥＧＦＲにＥ７４６～Ａ７５０またはＬ７４７～Ｅ７４９の欠失をもたらす欠失である。ＥＧＦＲのエクソン１９における欠失および挿入は、特に、ＥＧＦＲにＬ７４７～Ａ７５０の欠失をもたらす欠失およびＥＧＦＲのこの位置におけるＰの挿入、またはＥＧＦＲにＬ７４７～Ｔ７５１の欠失をもたらす欠失およびＥＧＦＲのこの位置におけるＳの挿入である。ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン２０における挿入は、特に、Ｄ７６１～Ｅ７６２、Ａ７６３～Ｙ７６４、Ｙ７６４～Ｖ７６５、Ａ７６７～Ｓ７６８、Ｓ７６８～Ｖ７６９、Ｖ７６９～Ｄ７７０、Ｄ７７０～Ｎ７７１、Ｎ７７１～Ｐ７７２、Ｐ７７２～Ｈ７７３、Ｈ７７３～Ｖ７７４、Ｖ７７４～Ｃ７７５、Ｖ７６５～Ｍ７６６、およびこれらの組合せからなる群から選択される２つのアミノ酸間のＥＧＦＲの位置にアミノ酸の挿入（任意のアミノ酸すなわちＸという意味での）をもたらす挿入である。発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失（特に、ＥＧＦＲにＥ７４６～Ａ７５０またはＬ７４７～Ｅ７４９の欠失をもたらす欠失）；ＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｌ８５８ＲまたはＡ７５０ＰをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；およびそれらの組合せにより引き起こされることが最も好ましい場合がある。また、発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失またはＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｌ８５８ＲをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異により引き起こされることが非常に好ましい場合もある。本明細書にて「Ｘ」がアミノ酸として参照される場合、「Ｘ」は、任意のアミノ酸（しかしながら、無論のこと、該当する場合、例えばＥ７０９Ｘの場合、対応する位置の野生型アミノ酸とは異なるアミノ酸）を示す。

【0013】

第１の態様の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲにおける耐性変更をさらに呈していない。したがって、本発明に使用するための組合せは、第一選択治療として使用されることになり、この組合せのＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲに発がん性変更を呈するＮＳＣＬＣを治療するために投与される（または適応が指示される）任意のＥＧＦＲ阻害剤であってもよい。

【0014】

第１の態様の別の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲに耐性変更をさらに呈する。ＥＧＦＲにおける耐性変更は、特に、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｘ（主にＣ７９７Ｓ）、Ｌ７９２Ｘ、Ｇ７９６Ｘ、Ｌ７１８Ｑ、Ｌ７１８Ｖ、Ｇ７２４Ｓ、Ｄ７６１Ｙ、Ｖ８３４Ｌ、Ｔ８５４Ａ、およびそれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸置換をＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異により引き起こされてもよい。ＥＧＦＲにおける耐性変更は、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｘ（主にＣ７９７Ｓ）、Ｌ７１８Ｑ、Ｌ７１８Ｖ、Ｔ８５４Ａ、およびそれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸置換をＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異により引き起こされることが好ましい場合がある。ＥＧＦＲにおける耐性変更は、アミノ酸置換Ｔ７９０ＭをＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異により引き起こされることが最も好ましい。本明細書にて「Ｘ」がアミノ酸として参照される場合、「Ｘ」は、任意のアミノ酸（しかしながら、無論のこと、該当する場合、例えばＣ７９７Ｘの場合、対応する位置の野生型アミノ酸とは異なるアミノ酸）を示す。

【0015】

ＮＳＣＬＣがＥＧＦＲに耐性変更をさらに呈する場合、患者は、初期には効果的だったが、その後耐性の発生のため、特にＥＧＦＲ耐性変更の発生のため無効になった（第１の）ＥＧＦＲ阻害剤で以前に治療されていた。本発明の使用のための組合せでは、そのようなシナリオでのＥＧＦＲ阻害剤は、以前に投与された（第１の）ＥＧＦＲ阻害剤ではなく、少なくとも１つの耐性変更にも関わらず単独で投与した場合に初期には療法的に効果的である（第２または第３の）ＥＧＦＲ阻害剤であることを理解することが重要である。本発明らがここで「初期には療法的に効果的であること」と言うのは、この（第２または第３の）ＥＧＦＲ阻害剤に対してさえさらなる耐性が発生し、この（第２または第３の）ＥＧＦＲ阻害剤も最終的には無効になることが一般的に観察されるためである。そのようなシナリオでは、本発明の使用のための組合せは、第二選択治療または第三選択治療として使用されることになる。例を挙げると、発がん性変更を呈するＮＳＣＬＣに罹患している患者にゲフィチニブが以前に投与されたことがあってもよく（第一選択治療として単独で）、ゲフィチニブ治療は経時的に（典型的には約１０～約１２か月の期間後に）無効になり、ゲフィチニブ治療中にＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ耐性変更が腫瘍に発生したことが見出された（例えば、ＥＧＦＲ突然変異を検出するための生検および対応する検査により）。そのような状況では、ゲフィチニブは、本発明の使用のための組合せに使用されることはないが、特に、ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ突然変異陽性ＮＳＣＬＣを有し、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）療法時にまたは療法後に疾患が進行した患者の治療に効果的であることが示されている（および適応が指示されている）オシメルチニブが使用されることになる。

【0016】

上記を考慮に入れると、本発明は、一実施形態では、ＮＳＣＬＣに罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲに発がん性変更を呈しており、但し、ＮＳＣＬＣが、ＥＧＦＲ阻害剤の以前の投与のためＥＧＦＲに耐性変更をさらに呈する場合、この組合せのＥＧＦＲ阻害剤は、以前に投与されたＥＧＦＲ阻害剤ではなく、特に、ＥＧＦＲにおけるこの耐性変更（すなわち、以前に投与されたＥＧＦＲ阻害剤を療法的に無効にした耐性変更）にも関わらず療法的に効果的なＥＧＦＲ阻害剤である、組合せに関する。また、ＮＳＣＬＣが、ＥＧＦＲ阻害剤の以前の投与のためＥＧＦＲに耐性変更をさらに呈する場合、この組合せのＥＧＦＲ阻害剤が、以前に投与されたＥＧＦＲ阻害剤ではなく、この耐性変更にも関わらず単独で投与した場合に第１の治療サイクル中に療法的に効果的なＥＧＦＲ阻害剤である限り、またはＮＳＣＬＣが、ＥＧＦＲ阻害剤の以前の投与のためＥＧＦＲに耐性変更をさらに呈する場合、この組合せのＥＧＦＲ阻害剤が、以前に投与されたＥＧＦＲ阻害剤ではなく、ＥＧＦＲにこの耐性変更をさらに呈するＮＳＣＬＣの治療に適応が指示されているＥＧＦＲ阻害剤である限り、本発明の第１の態様による使用のための組合せであるとみなすことができる。

【0017】

２つの特定のＥＧＦＲ阻害剤（すなわち、「Ｘ」および「本組合せのＥＧＦＲ阻害剤」）を考慮する場合の例を挙げると、上記の段落は、一実施形態では、ＮＳＣＬＣに罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲに発がん性変更を呈しており、但し、ＮＳＣＬＣがＥＧＦＲ阻害剤Ｘの以前の投与のためＥＧＦＲに耐性変更をさらに呈する場合、この組合せのＥＧＦＲ阻害剤はＥＧＦＲ阻害剤Ｘではない、組合せを指すと理解される。この組合せのＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲにおける耐性変更（つまり、以前に投与されたＥＧＦＲ阻害剤Ｘを療法的に無効にした耐性変更）にも関わらず、療法的に効果的であることに留意されたい。

【0018】

第１の態様の別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、小分子阻害剤である。したがって、そのような実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、例えばＣＢＰおよび／またはｐ３００に対するｓｈＲＮＡまたはＲＮＡｉなどの核酸ベース阻害剤ではない。

【0019】

第１の態様の別の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、小分子阻害剤または抗体である。したがって、そのような実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、例えばＥＧＦＲに対するｓｈＲＮＡまたはＲＮＡｉなどの核酸ベース阻害剤ではない。第１の態様のさらに別の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、小分子阻害剤である。第１の態様のさらなる実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲのチロシンキナーゼ活性を阻害する。

【0020】

ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、化合物Ａ、化合物Ｃ、化合物０００３０、化合物０００７１、ＣＣＳ１４７７、ＧＮＥ－７８１、ＧＮＥ－０４９、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０、ＣＰＩ－６３７、ＦＴ－６８７６、化合物４６２、化合物４２４、および化合物５１５からなる群から選択してもよい。こうした化合物は、市販されているかもしくは下記でさらに概説されているように公的に開示されているかのいずれか、またはそれらの合成および構造は本出願の実施例に示されている。ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、化合物Ａ、化合物Ｃ、ＣＣＳ１４７７、ＧＮＥ－７８１、ＧＮＥ－０４９、ＣＰＩ－６３７、化合物４６２、化合物４２４、および化合物５１５からなる群から選択されることが好ましい場合がある。

【0021】

ＥＧＦＲ阻害剤は、ＡＢＢＶ－３２１、アビベルチニブ、アファチニブ、アルフルチニブ、アルモネルチニブ、アパチニブ、ＡＺＤ３７５９、ブリガチニブ、Ｄ０３１６、Ｄ０３１７、Ｄ０３１８、ダコミチニブ、ＤＺＤ９００８、エルロチニブ、ＦＣＮ－４１１、ゲフィチニブ、イコチニブ、ラパチニブ、ラゼルチニブ、モボセルチニブ、ナザルチニブ、ネラチニブ、オラフェルチニブ（ｏｌａｆｅｒｔｉｎｉｂ）、オシメルチニブ、ポジオチニブ、ピロチニブ、レジベルチニブ、ＴＡＳ６４１７、バンデタニブ、バルリチニブ、ＸＺＰ－５８０９、アミバンタマブ、ＣＤＰ１、セツキシマブ、ＧＣ１１１８、ＨＬＸ０７、ＪＭＴ１０１、Ｍ１２３１、ネシツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、パニツムマブ、ＳＣＴ２００、ＳＩ－Ｂ００１、ＳＹＮ００４、ザルツムマブ、およびそれらの組合せからなる群から選択してもよい。また、ＥＧＦＲ阻害剤は、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、ネラチニブ、バンデタニブ、ネシツムマブ、オシメルチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ブリガチニブ、ポジオチニブ、およびそれらの組合せからなる群から選択してもよい。好ましい実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、アビベルチニブ、アファチニブ、アルフルチニブ、アルモネルチニブ、アパチニブ、ＡＺＤ３７５９、ブリガチニブ、Ｄ０３１６、Ｄ０３１７、Ｄ０３１８、ダコミチニブ、ＤＺＤ９００８、エルロチニブ、ＦＣＮ－４１１、ゲフィチニブ、イコチニブ、ラパチニブ、ラゼルチニブ、モボセルチニブ、ナザルチニブ、ネラチニブ、オラフェルチニブ、オシメルチニブ、ポジオチニブ、ピロチニブ、レジベルチニブ、ＴＡＳ６４１７、バンデタニブ、バルリチニブ、ＸＺＰ－５８０９、およびそれらの組合せからなる群から選択される。より好ましい実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、ゲフィチニブまたはオシメルチニブである。ＥＧＦＲ阻害剤は、オシメルチニブであることが最も好ましい場合がある。

【0022】

第１の態様の好ましい実施形態では、本組合せは、各治療サイクル中に患者に投与される。

【0023】

第１の態様のさらに別の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、第１の治療サイクル中に唯一の活性作用剤として投与され、続いて後の治療サイクル中にＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤が追加投与され、その場合、第１の治療サイクル中（つまり、本発明の組合せの投与前）のＥＧＦＲ阻害剤単独の投与に応答したＥＧＦＲにおける耐性変更は、まだ発生していない。上記に記述されているように、耐性変更の発生は、例えば、ＥＧＦＲ突然変異を検出するための生検および対応する検査により評価することができる。本発明による使用のための組合せを使用すると、耐性の発生を防止することができるため、本組合せを各治療サイクル中に投与することが好ましい。

【0024】

第１の態様の別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤およびＥＧＦＲ阻害剤は、別々の剤形として投与されるか、または単一の剤形に含まれている。ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤およびＥＧＦＲ阻害剤が別々の剤形として投与される場合、各治療サイクル中の投与は、同時であってもよくまたは逐次であってもよい。これには、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤をまず投与し、続いてＥＧＦＲ阻害剤を投与するという選択肢が含まれる。

【0025】

第１の態様のさらに別の実施形態では、治療は、唯一の活性作用剤として投与した場合のＥＧＦＲ阻害剤の療法効果の持続時間と比較して、ＥＧＦＲ阻害剤の療法効果の持続時間の延長をもたらす。さらに別の実施形態では、治療は、唯一の活性作用剤として投与した場合のＥＧＦＲ阻害剤の療法有効性と比較して、ＥＧＦＲ阻害剤の療法有効性の増加をもたらす。別の実施形態では、治療は、ＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性の防止をもたらす。

【0026】

第１の態様の別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、約１ｍｇ～約３０００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ～約２０００ｍｇ、より好ましくは約１５ｍｇ～約１０００ｍｇの１日量で投与される。ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２５００ｍｇ、または約３０００ｍｇの１日量で投与することが好ましい場合がある。投与は、断続的に行ってもよく、つまり毎日でなくともよいが、投与が行われる当日には上述の１日量を投与してもよい。ＣＣＳ１４７７、化合物４６２、化合物４２４、または化合物５１５を、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤として使用する場合、それぞれの化合物は、約１０ｍｇ～約６００ｍｇの１日量で投与することができる。

【0027】

第１の態様の別の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤が唯一の活性作用剤として投与される場合、ＥＧＦＲ阻害剤は、典型的な１日量（特に、利用可能な場合、ラベルに言及されているＥＧＦＲ阻害剤の１日量）の範囲内の１日量で投与される。典型的な１日量（または利用可能な場合は、適応が指示されている１日量）は、使用されることになる特定のＥＧＦＲ阻害剤に依存する。したがって、ゲフィチニブは、例えば、本発明の使用のための組合せでは、約５０～約３００ｍｇ、好ましくは約１００ｍｇ～約２５０ｍｇ、最も好ましくは約１５０ｍｇ～約２５０ｍｇの１日量で投与してもよい。オシメルチニブは、例えば、本発明の使用のための組合せでは、約５～約１５００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ～約１００ｍｇ、最も好ましくは約５０ｍｇ～約８０ｍｇの１日量で投与してもよい。エルロチニブは、例えば、本発明の使用のための組合せでは、約１０～約３００ｍｇ、好ましくは約２５ｍｇ～約２００ｍｇ、最も好ましくは約１００ｍｇ～約１５０ｍｇの１日量で投与してもよい。アファチニブは、例えば、本発明の使用のための組合せでは、約５～約１００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ～約８０ｍｇ、最も好ましくは約２０ｍｇ～約４０ｍｇの１日量で投与してもよい。ダコミチニブは、例えば、本発明の使用のための組合せでは、約５～約１００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ～約８０ｍｇ、最も好ましくは約１５ｍｇ～約５０ｍｇの１日量で投与してもよい。

【0028】

第１の態様の別の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤が唯一の活性作用剤として投与される場合、上述の典型的な１日量よりも低い１日量で投与される。言い換えると、ＥＧＦＲ阻害剤が唯一の活性作用剤としてではなく、本発明による使用のための組合せにて投与される場合、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤が唯一の活性作用剤として投与される場合に使用される量よりも低い量で投与してもよい。これは、例えば、上記で示されている例の場合、１日量は、示されている範囲の下限であるか、そうした範囲を下回ることになることさえあることを意味する。

【0029】

第１の態様のなおさらなる実施形態では、本発明は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）化合物Ａおよび（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、組合せに関する。この実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤はオシメルチニブであり、発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失（特に、ＥＧＦＲにＥ７４６～Ａ７５０またはＬ７４７～Ｅ７４９の欠失をもたらす欠失）；ＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｌ８５８ＲまたはＡ７５０ＰをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；およびそれらの組合せにより引き起こされることが好ましい場合がある。ＥＧＦＲにおける耐性変更に対応するアミノ酸置換Ｔ７９０ＭをＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異は、ＥＧＦＲ阻害剤がオシメルチニブである実施形態では、存在してもよくまたはしなくてもよい。

【0030】

第１の態様のなおさらなる実施形態では、本発明は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）化合物Ａまたは化合物Ｃおよび（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、組合せに関する。この実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤はオシメルチニブであり、発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失（特に、ＥＧＦＲにＥ７４６～Ａ７５０またはＬ７４７～Ｅ７４９の欠失をもたらす欠失）；ＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｌ８５８ＲまたはＡ７５０ＰをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；およびそれらの組合せにより引き起こされることが好ましい場合がある。ＥＧＦＲにおける耐性変更に対応するアミノ酸置換Ｔ７９０ＭをＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異は、ＥＧＦＲ阻害剤がオシメルチニブである実施形態では、存在してもよくまたはしなくてもよい。

【0031】

第１の態様のなおさらなる実施形態では、本発明は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）ＣＣＳ１４７７および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、組合せに関する。この実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤はオシメルチニブであり、発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失（特に、ＥＧＦＲにＥ７４６～Ａ７５０またはＬ７４７～Ｅ７４９の欠失をもたらす欠失）；ＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｌ８５８ＲまたはＡ７５０ＰをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；およびそれらの組合せにより引き起こされることが好ましい場合がある。ＥＧＦＲにおける耐性変更に対応するアミノ酸置換Ｔ７９０ＭをＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異は、ＥＧＦＲ阻害剤がオシメルチニブである実施形態では、存在してもよくまたはしなくてもよい。

【0032】

第１の態様のなおさらなる実施形態では、本発明は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）ＧＮＥ－７８１またはＧＮＥ－０４９および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、組合せに関する。この実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤はオシメルチニブであり、発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失（特に、ＥＧＦＲにＥ７４６～Ａ７５０またはＬ７４７～Ｅ７４９の欠失をもたらす欠失）；ＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｌ８５８ＲまたはＡ７５０ＰをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；およびそれらの組合せにより引き起こされることが好ましい場合がある。ＥＧＦＲにおける耐性変更に対応するアミノ酸置換Ｔ７９０ＭをＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異は、ＥＧＦＲ阻害剤がオシメルチニブである実施形態では、存在してもよくまたはしなくてもよい。

【0033】

第１の態様のなおさらなる実施形態では、本発明は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）ＣＰＩ－６３７および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、組合せに関する。この実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤はオシメルチニブであり、発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失（特に、ＥＧＦＲにＥ７４６～Ａ７５０またはＬ７４７～Ｅ７４９の欠失をもたらす欠失）；ＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｌ８５８ＲまたはＡ７５０ＰをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；およびそれらの組合せにより引き起こされることが好ましい場合がある。ＥＧＦＲにおける耐性変更に対応するアミノ酸置換Ｔ７９０ＭをＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異は、ＥＧＦＲ阻害剤がオシメルチニブである実施形態では、存在してもよくまたはしなくてもよい。

【0034】

第１の態様のなおさらなる実施形態では、本発明は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に罹患している患者の治療に使用するための、（ｉ）化合物４６２または化合物４２４または化合物５１５および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤の組合せであって、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、組合せに関する。この実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤はオシメルチニブであり、発がん性変更は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９における欠失（特に、ＥＧＦＲにＥ７４６～Ａ７５０またはＬ７４７～Ｅ７４９の欠失をもたらす欠失）；ＥＧＦＲにアミノ酸置換Ｌ８５８ＲまたはＡ７５０ＰをもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異；およびそれらの組合せにより引き起こされることが好ましい場合がある。ＥＧＦＲにおける耐性変更に対応するアミノ酸置換Ｔ７９０ＭをＥＧＦＲにもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異は、ＥＧＦＲ阻害剤がオシメルチニブである実施形態では、存在してもよくまたはしなくてもよい。

【0035】

第２の態様では、本発明は、それを必要とする患者のＮＳＣＬＣを治療するための方法であって、有効量の（ｉ）ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および有効量の（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤を患者に投与することを含み、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、方法に関する。

【0036】

第３の態様では、本発明は、それを必要とする患者においてＥＧＦＲ阻害剤の療法効果の持続期間を延長するための方法であって、有効量の（ｉ）ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および有効量の（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤を患者に投与することを含み、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、方法に関する。言い換えると、ＥＧＦＲ阻害剤の療法効果の持続時間は（本組合せで投与した場合）、ＮＳＣＬＣ治療の唯一の活性作用剤として投与した場合のＥＧＦＲ阻害剤の療法効果の持続時間と比較して延長される。

【0037】

第４の態様では、本発明は、それを必要とする患者においてＥＧＦＲ阻害剤の療法有効性を増加させるための方法であって、有効量の（ｉ）ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および有効量の（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤を患者に投与することを含み、ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、方法に関する。言い換えると、ＥＧＦＲ阻害剤の療法有効性は（本組合せで投与した場合）、ＮＳＣＬＣ治療の唯一の活性作用剤として投与した場合のＥＧＦＲ阻害剤の療法有効性と比較して増加される。

【0038】

第５の態様では、本発明は、ＮＳＣＬＣ細胞の増殖を阻止するための方法であって、有効量の（ｉ）ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および有効量の（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤を細胞に投与することを含み、ＮＳＣＬＣ細胞はＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、方法に関する。

【0039】

第６の態様では、本発明は、ＮＳＣＬＣ細胞の増殖を遅らせるための方法であって、有効量の（ｉ）ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および有効量の（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤を細胞に投与することを含み、ＮＳＣＬＣ細胞はＥＧＦＲに発がん性変更を呈する、方法に関する。

【0040】

第１の態様に関して上記で概説した実施形態は、第２～第６の態様の方法に等しく適用される。

【図面の簡単な説明】

【0041】

【図1-1】ブロモドメイン（化合物Ａ、ＣＣＳ１４７７）またはＨＡＴドメイン（Ａ４８５）に結合するＣＢＰ／ｐ３００阻害剤のみが、ＥＧＦＲ突然変異非小細胞肺がん細胞（ＮＳＣＬＣ）のＥＧＦＲ阻害剤誘導性遺伝子発現を鈍化させるが、ＣＢＰとβ－カテニンとの相互作用を妨げる阻害剤（ＩＣＧ００１）は鈍化させないことを示す図である。耐性を引き起こすゲートキーパー突然変異Ｔ７９０Ｍを有するかまたは有しない細胞株に２つの異なるＥＧＦＲ阻害剤が使用されている。示されている調節遺伝子の例は、ＡＬＰＰ（アルカリホスファターゼ、胎盤型；ＡおよびＣ）およびＨＯＰＸ（ホメオドメインのみのタンパク質；ＢおよびＤ）である。ｑＰＣＲを用いた二重重複での２つの独立実験のデータ（平均±ＳＤ）。

【図1-2】ブロモドメイン（化合物Ａ、ＣＣＳ１４７７）またはＨＡＴドメイン（Ａ４８５）に結合するＣＢＰ／ｐ３００阻害剤のみが、ＥＧＦＲ突然変異非小細胞肺がん細胞（ＮＳＣＬＣ）のＥＧＦＲ阻害剤誘導性遺伝子発現を鈍化させるが、ＣＢＰとβ－カテニンとの相互作用を妨げる阻害剤（ＩＣＧ００１）は鈍化させないことを示す図である。耐性を引き起こすゲートキーパー突然変異Ｔ７９０Ｍを有するかまたは有しない細胞株に２つの異なるＥＧＦＲ阻害剤が使用されている。示されている調節遺伝子の例は、ＡＬＰＰ（アルカリホスファターゼ、胎盤型；ＡおよびＣ）およびＨＯＰＸ（ホメオドメインのみのタンパク質；ＢおよびＤ）である。ｑＰＣＲを用いた二重重複での２つの独立実験のデータ（平均±ＳＤ）。

【図2A】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメイン（ＢＲＤ）に結合するエナンチオマー（化合物Ａ）のみが、ＥＧＦＲ阻害剤媒介性ＮＳＣＬＣ細胞増殖阻害を濃度依存的な様式で増強するが、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合しないエナンチオマー（化合物Ｂ）は増強しないことを示す図である。ＥＧＦＲ突然変異ＨＣＣ８２７細胞の細胞数を経時的にモニターした。（Ａ）細胞を、ＤＭＳＯ単独で（黒丸）、２０ｎＭ ＥＧＦＲ阻害剤単独で（ゲフィチニブ；第１世代ＥＧＦＲ阻害剤、白丸）、またはＣＢＰ／ｐ３００ ＢＲＤ阻害剤のブロモドメイン結合エナンチオマー（化合物Ａ）と組み合わせて処理した。（Ｂ）ＨＣＣ８２７細胞を、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で、化合物ＡおよびＢに曝露した。ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、化合物Ａは、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の増殖に対する効果を喪失し、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合しない化合物Ｂのような挙動を示す。提示されているグラフは、各時点および条件を三重重複した１つの実験からものである（平均±ＳＤ）。

【図2B】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメイン（ＢＲＤ）に結合するエナンチオマー（化合物Ａ）のみが、ＥＧＦＲ阻害剤媒介性ＮＳＣＬＣ細胞増殖阻害を濃度依存的な様式で増強するが、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合しないエナンチオマー（化合物Ｂ）は増強しないことを示す図である。ＥＧＦＲ突然変異ＨＣＣ８２７細胞の細胞数を経時的にモニターした。（Ａ）細胞を、ＤＭＳＯ単独で（黒丸）、２０ｎＭ ＥＧＦＲ阻害剤単独で（ゲフィチニブ；第１世代ＥＧＦＲ阻害剤、白丸）、またはＣＢＰ／ｐ３００ ＢＲＤ阻害剤のブロモドメイン結合エナンチオマー（化合物Ａ）と組み合わせて処理した。（Ｂ）ＨＣＣ８２７細胞を、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で、化合物ＡおよびＢに曝露した。ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、化合物Ａは、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の増殖に対する効果を喪失し、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合しない化合物Ｂのような挙動を示す。提示されているグラフは、各時点および条件を三重重複した１つの実験からものである（平均±ＳＤ）。

【図3A】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤（化合物Ａ、ＣＣＳ１４７７）のみが、ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では細胞増殖に影響を及ぼさないことを示す図である。ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）ドメインを阻害するＣＢＰ／ｐ３００阻害剤（Ａ４８５）は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下でさえ、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼす。（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、および（Ｅ） ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞株ＨＣＣ８２７の細胞数が、核蛍光染色を使用して９６ウェルプレートで経時的に［日数］測定した薬物処理（グラフ凡例の記号）の関数としてプロットされている。図３（Ａ）および（Ｂ）および（Ｃ）左側：化合物Ａ（図３Ａ）、ＣＣＳ１４７７（図３Ｂ）、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０（図３Ｃ）、またはＡ４８５による細胞の単一作用剤処理を示す図である。ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを標的とする化合物Ａ ＣＣＳ１４７７、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさない。図３（Ａ）および３（Ｂ）および３（Ｃ）右側ならびに図３（Ｄ）および３（Ｅ）：３００ｎＭゲフィチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤）の存在下における、化合物Ａ（Ａ）およびＣＣＳ１４７７（ＣＢＰ／ｐ３００ ＢＲＤ－Ｉ）（Ｂ）およびＳＧＣ－ＣＢＰ３０（Ｃ）および化合物０００７１（Ｄ）および化合物０００３０（Ｅ）およびＡ４８５（ＣＢＰ／ｐ３００ ＨＡＴ－Ｉ）の抗増殖活性。ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを標的とする化合物ＡおよびＣＣＳ１４７７およびＳＧＣ－ＣＢＰ３０および化合物０００７１および化合物０００３０は、化合物がＥＧＦＲ阻害剤を伴わずに使用される場合は抗増殖効果が存在しないにも関わらず、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞におけるＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強する（左）。提示されている曲線は、三重重複の１つの実験からのものである（平均±ＳＤ）。

【図3B】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤（化合物Ａ、ＣＣＳ１４７７）のみが、ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では細胞増殖に影響を及ぼさないことを示す図である。ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）ドメインを阻害するＣＢＰ／ｐ３００阻害剤（Ａ４８５）は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下でさえ、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼす。（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、および（Ｅ） ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞株ＨＣＣ８２７の細胞数が、核蛍光染色を使用して９６ウェルプレートで経時的に［日数］測定した薬物処理（グラフ凡例の記号）の関数としてプロットされている。図３（Ａ）および（Ｂ）および（Ｃ）左側：化合物Ａ（図３Ａ）、ＣＣＳ１４７７（図３Ｂ）、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０（図３Ｃ）、またはＡ４８５による細胞の単一作用剤処理を示す図である。ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを標的とする化合物Ａ ＣＣＳ１４７７、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさない。図３（Ａ）および３（Ｂ）および３（Ｃ）右側ならびに図３（Ｄ）および３（Ｅ）：３００ｎＭゲフィチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤）の存在下における、化合物Ａ（Ａ）およびＣＣＳ１４７７（ＣＢＰ／ｐ３００ ＢＲＤ－Ｉ）（Ｂ）およびＳＧＣ－ＣＢＰ３０（Ｃ）および化合物０００７１（Ｄ）および化合物０００３０（Ｅ）およびＡ４８５（ＣＢＰ／ｐ３００ ＨＡＴ－Ｉ）の抗増殖活性。ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを標的とする化合物ＡおよびＣＣＳ１４７７およびＳＧＣ－ＣＢＰ３０および化合物０００７１および化合物０００３０は、化合物がＥＧＦＲ阻害剤を伴わずに使用される場合は抗増殖効果が存在しないにも関わらず、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞におけるＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強する（左）。提示されている曲線は、三重重複の１つの実験からのものである（平均±ＳＤ）。

【図3C】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤（化合物Ａ、ＣＣＳ１４７７）のみが、ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では細胞増殖に影響を及ぼさないことを示す図である。ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）ドメインを阻害するＣＢＰ／ｐ３００阻害剤（Ａ４８５）は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下でさえ、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼす。（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、および（Ｅ） ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞株ＨＣＣ８２７の細胞数が、核蛍光染色を使用して９６ウェルプレートで経時的に［日数］測定した薬物処理（グラフ凡例の記号）の関数としてプロットされている。図３（Ａ）および（Ｂ）および（Ｃ）左側：化合物Ａ（図３Ａ）、ＣＣＳ１４７７（図３Ｂ）、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０（図３Ｃ）、またはＡ４８５による細胞の単一作用剤処理を示す図である。ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを標的とする化合物Ａ ＣＣＳ１４７７、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさない。図３（Ａ）および３（Ｂ）および３（Ｃ）右側ならびに図３（Ｄ）および３（Ｅ）：３００ｎＭゲフィチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤）の存在下における、化合物Ａ（Ａ）およびＣＣＳ１４７７（ＣＢＰ／ｐ３００ ＢＲＤ－Ｉ）（Ｂ）およびＳＧＣ－ＣＢＰ３０（Ｃ）および化合物０００７１（Ｄ）および化合物０００３０（Ｅ）およびＡ４８５（ＣＢＰ／ｐ３００ ＨＡＴ－Ｉ）の抗増殖活性。ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを標的とする化合物ＡおよびＣＣＳ１４７７およびＳＧＣ－ＣＢＰ３０および化合物０００７１および化合物０００３０は、化合物がＥＧＦＲ阻害剤を伴わずに使用される場合は抗増殖効果が存在しないにも関わらず、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞におけるＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強する（左）。提示されている曲線は、三重重複の１つの実験からのものである（平均±ＳＤ）。

【図3D】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤（化合物Ａ、ＣＣＳ１４７７）のみが、ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では細胞増殖に影響を及ぼさないことを示す図である。ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）ドメインを阻害するＣＢＰ／ｐ３００阻害剤（Ａ４８５）は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下でさえ、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼす。（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、および（Ｅ） ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞株ＨＣＣ８２７の細胞数が、核蛍光染色を使用して９６ウェルプレートで経時的に［日数］測定した薬物処理（グラフ凡例の記号）の関数としてプロットされている。図３（Ａ）および（Ｂ）および（Ｃ）左側：化合物Ａ（図３Ａ）、ＣＣＳ１４７７（図３Ｂ）、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０（図３Ｃ）、またはＡ４８５による細胞の単一作用剤処理を示す図である。ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを標的とする化合物Ａ ＣＣＳ１４７７、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさない。図３（Ａ）および３（Ｂ）および３（Ｃ）右側ならびに図３（Ｄ）および３（Ｅ）：３００ｎＭゲフィチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤）の存在下における、化合物Ａ（Ａ）およびＣＣＳ１４７７（ＣＢＰ／ｐ３００ ＢＲＤ－Ｉ）（Ｂ）およびＳＧＣ－ＣＢＰ３０（Ｃ）および化合物０００７１（Ｄ）および化合物０００３０（Ｅ）およびＡ４８５（ＣＢＰ／ｐ３００ ＨＡＴ－Ｉ）の抗増殖活性。ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを標的とする化合物ＡおよびＣＣＳ１４７７およびＳＧＣ－ＣＢＰ３０および化合物０００７１および化合物０００３０は、化合物がＥＧＦＲ阻害剤を伴わずに使用される場合は抗増殖効果が存在しないにも関わらず、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞におけるＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強する（左）。提示されている曲線は、三重重複の１つの実験からのものである（平均±ＳＤ）。

【図3E】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤（化合物Ａ、ＣＣＳ１４７７）のみが、ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では細胞増殖に影響を及ぼさないことを示す図である。ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）ドメインを阻害するＣＢＰ／ｐ３００阻害剤（Ａ４８５）は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下でさえ、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼす。（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、および（Ｅ） ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞株ＨＣＣ８２７の細胞数が、核蛍光染色を使用して９６ウェルプレートで経時的に［日数］測定した薬物処理（グラフ凡例の記号）の関数としてプロットされている。図３（Ａ）および（Ｂ）および（Ｃ）左側：化合物Ａ（図３Ａ）、ＣＣＳ１４７７（図３Ｂ）、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０（図３Ｃ）、またはＡ４８５による細胞の単一作用剤処理を示す図である。ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを標的とする化合物Ａ ＣＣＳ１４７７、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさない。図３（Ａ）および３（Ｂ）および３（Ｃ）右側ならびに図３（Ｄ）および３（Ｅ）：３００ｎＭゲフィチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤）の存在下における、化合物Ａ（Ａ）およびＣＣＳ１４７７（ＣＢＰ／ｐ３００ ＢＲＤ－Ｉ）（Ｂ）およびＳＧＣ－ＣＢＰ３０（Ｃ）および化合物０００７１（Ｄ）および化合物０００３０（Ｅ）およびＡ４８５（ＣＢＰ／ｐ３００ ＨＡＴ－Ｉ）の抗増殖活性。ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを標的とする化合物ＡおよびＣＣＳ１４７７およびＳＧＣ－ＣＢＰ３０および化合物０００７１および化合物０００３０は、化合物がＥＧＦＲ阻害剤を伴わずに使用される場合は抗増殖効果が存在しないにも関わらず、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞におけるＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強する（左）。提示されている曲線は、三重重複の１つの実験からのものである（平均±ＳＤ）。

【図4-1】（Ａ）［時間］での経時的なＨＣＣ８２７細胞数の評価を示す図である。化合物Ａは、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下ではＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると薬物耐性の発生を防止する。処理：凡例に従って、ＤＭＳＯ、１μＭ化合物Ａ、３００ｎＭゲフィチニブ、または３００ｎＭゲフィチニブおよび１μＭ化合物Ａの組合せ。例示グラフは、ＤＭＳＯおよび化合物Ａについては６ウェルの、またはゲフィチニブもしくはゲフィチニブ＋化合物Ａ処理については２４ウェルの細胞数（平均±ＳＤ）を示す。（Ｂ）ゲフィチニブまたはゲフィチニブ＋化合物Ａで０日間または２２日間処理した、ドットプロットとしての１ウェル当たりの細胞数（Ａと同様の２つの実験プレートから、１条件当たり４８ウェル）。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、ダンの多重比較付きクラスカル－ワリス検定。（Ｃ）２２日後の処理に対する応答が、特定のウェルの初期細胞数の倍数変化の対数として示されている、（Ａ）と同様に分析した２つのプレート（４８ウェル／１条件当たり）の、３００ｎＭゲフィチニブまたは３００ｎＭゲフィチニブ＋１μＭ化合物Ａで処理したウェルのウォーターフォールプロット。ウェルを、倍数変化の対数が最も高いものから最も低いものへと並べ替えた。中空バーはゲフィチニブ処理ウェルであり、黒塗りバーは、ゲフィチニブ＋化合物Ａ処理ウェルを表す。細胞は化合物Ａ単独には応答しないが、化合物Ａは、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、ＥＧＦＲ阻害剤に対する応答を有意に増加させる。

【図4-2】（Ａ）［時間］での経時的なＨＣＣ８２７細胞数の評価を示す図である。化合物Ａは、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下ではＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると薬物耐性の発生を防止する。処理：凡例に従って、ＤＭＳＯ、１μＭ化合物Ａ、３００ｎＭゲフィチニブ、または３００ｎＭゲフィチニブおよび１μＭ化合物Ａの組合せ。例示グラフは、ＤＭＳＯおよび化合物Ａについては６ウェルの、またはゲフィチニブもしくはゲフィチニブ＋化合物Ａ処理については２４ウェルの細胞数（平均±ＳＤ）を示す。（Ｂ）ゲフィチニブまたはゲフィチニブ＋化合物Ａで０日間または２２日間処理した、ドットプロットとしての１ウェル当たりの細胞数（Ａと同様の２つの実験プレートから、１条件当たり４８ウェル）。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、ダンの多重比較付きクラスカル－ワリス検定。（Ｃ）２２日後の処理に対する応答が、特定のウェルの初期細胞数の倍数変化の対数として示されている、（Ａ）と同様に分析した２つのプレート（４８ウェル／１条件当たり）の、３００ｎＭゲフィチニブまたは３００ｎＭゲフィチニブ＋１μＭ化合物Ａで処理したウェルのウォーターフォールプロット。ウェルを、倍数変化の対数が最も高いものから最も低いものへと並べ替えた。中空バーはゲフィチニブ処理ウェルであり、黒塗りバーは、ゲフィチニブ＋化合物Ａ処理ウェルを表す。細胞は化合物Ａ単独には応答しないが、化合物Ａは、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、ＥＧＦＲ阻害剤に対する応答を有意に増加させる。

【図5A】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤は、Ｔ７９０Ｍゲートキーパー突然変異を有するＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞において、第３世代ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では細胞増殖に影響を及ぼさないことを示す図である。（Ａ）ＤＭＳＯ、５０ｎＭオシメルチニブ、２μＭ化合物Ａ、または５０ｎＭオシメルチニブと２．０、０．５、もしくは０．１２５μＭ化合物Ａの組合せの存在下での、時間［時］の関数としてのＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞数の評価。化合物Ａは、第３世代ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、Ｔ７９０Ｍゲートキーパー突然変異を有するＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると薬物耐性の発生を防止する。（Ｂ）ＤＭＳＯ、５０ｎＭオシメルチニブ、２μＭ ＣＣＳ１４７７、または５０ｎＭオシメルチニブと２．０、０．５、もしくは０．１２５μＭ ＣＣＳ１４７７との組合せの存在下でのＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞増殖の評価。ＣＣＳ１４７７は、第３世代ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、Ｔ７９０Ｍゲートキーパー突然変異を有するＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると薬物耐性の発生を防止する。（例示グラフは、各データおよび時点の二重重複を示し、ロジスティック増殖曲線フィッティングはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍで計算されている）。

【図5B】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤は、Ｔ７９０Ｍゲートキーパー突然変異を有するＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞において、第３世代ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では細胞増殖に影響を及ぼさないことを示す図である。（Ａ）ＤＭＳＯ、５０ｎＭオシメルチニブ、２μＭ化合物Ａ、または５０ｎＭオシメルチニブと２．０、０．５、もしくは０．１２５μＭ化合物Ａの組合せの存在下での、時間［時］の関数としてのＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞数の評価。化合物Ａは、第３世代ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、Ｔ７９０Ｍゲートキーパー突然変異を有するＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると薬物耐性の発生を防止する。（Ｂ）ＤＭＳＯ、５０ｎＭオシメルチニブ、２μＭ ＣＣＳ１４７７、または５０ｎＭオシメルチニブと２．０、０．５、もしくは０．１２５μＭ ＣＣＳ１４７７との組合せの存在下でのＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞増殖の評価。ＣＣＳ１４７７は、第３世代ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、Ｔ７９０Ｍゲートキーパー突然変異を有するＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると薬物耐性の発生を防止する。（例示グラフは、各データおよび時点の二重重複を示し、ロジスティック増殖曲線フィッティングはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍで計算されている）。

【図6A】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で使用した場合は、ｉｎ ｖｉｖｏで効果を示さないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、より良好な経時的腫瘍制御および療法に対するより良好な奏効率を提供する。（Ａ）ＥＧＦＲ突然変異ＮＣＩ－Ｈ１９７５異種移植片の平均腫瘍容積（＋ＳＥＭ）が経時的にプロットされている。４つの異なる処置群が図示されている：ビヒクル（３０％ ＰＥＧ３００／Ｈ２Ｏ；交差丸；ｎ＝４）、２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７（白丸；ｎ＝４）、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（黒丸；ｎ＝９）、または２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７と組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（半黒丸；ｎ＝１０）。ＣＣＳ１４７７は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で使用した場合、腫瘍増殖に効果を示さない。しかしながら、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、療法に対する応答が増加され、療法の経過にわたって腫瘍サイズが良好に制御される。（Ｂ）４つの処置群すべての最良平均応答が、ウォーターフォールプロットで示されている（ビヒクルは灰色、２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７は白色、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは黒色、および２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７と組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは四角）。破線は、初期腫瘍容積の３０％の低減を示す。ブロモドメイン結合阻害剤（ＣＣＳ１４７７）単独に対する応答が存在しないにも関わらず、ブロモドメイン結合阻害剤（ＣＣＳ１４７７）をＥＧＦＲ阻害剤（オシメルチニブ）と組み合わせると、療法に対する奏効率が増加する。

【図6B】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で使用した場合は、ｉｎ ｖｉｖｏで効果を示さないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、より良好な経時的腫瘍制御および療法に対するより良好な奏効率を提供する。（Ａ）ＥＧＦＲ突然変異ＮＣＩ－Ｈ１９７５異種移植片の平均腫瘍容積（＋ＳＥＭ）が経時的にプロットされている。４つの異なる処置群が図示されている：ビヒクル（３０％ ＰＥＧ３００／Ｈ２Ｏ；交差丸；ｎ＝４）、２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７（白丸；ｎ＝４）、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（黒丸；ｎ＝９）、または２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７と組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（半黒丸；ｎ＝１０）。ＣＣＳ１４７７は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で使用した場合、腫瘍増殖に効果を示さない。しかしながら、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、療法に対する応答が増加され、療法の経過にわたって腫瘍サイズが良好に制御される。（Ｂ）４つの処置群すべての最良平均応答が、ウォーターフォールプロットで示されている（ビヒクルは灰色、２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７は白色、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは黒色、および２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７と組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは四角）。破線は、初期腫瘍容積の３０％の低減を示す。ブロモドメイン結合阻害剤（ＣＣＳ１４７７）単独に対する応答が存在しないにも関わらず、ブロモドメイン結合阻害剤（ＣＣＳ１４７７）をＥＧＦＲ阻害剤（オシメルチニブ）と組み合わせると、療法に対する奏効率が増加する。

【図7】化合物００００４と複合体化したヒトＣＲＥＢＢＰのブロモドメインの結晶構造決定に際してＲＥＦＭＡＣ５を用いて化合物をモデル化する前の初期モデルの精密化から得られたモデルの初期Ｆｏ－Ｆｃ差電子密度マップ（等高線は４．０σ）を示す図である。

【図8】ＥＧＦＲ阻害剤ゲフィチニブと組み合わせた化合物Ａは、ＨＣＣ４００６長期細胞増殖の阻害を媒介することを示す図である。詳細は実施例９に提供されている。

【図9】ＥＧＦＲ阻害剤オシメルチニブと組み合わせた、化合物Ａ、化合物Ｃ、および構造的に関連しない選択的ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤（ＣＣＳ１４７７、ＦＴ－６８７６、およびＧＮＥ－７８１）は、ＨＣＣ８２７長期細胞増殖の阻害を媒介することを示す図である。詳細は実施例１０に提供されている。

【図10】ＥＧＦＲ阻害剤オシメルチニブと組み合わせた、化合物Ａ、化合物Ｃ、および構造的に関連しない選択的ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤（ＣＣＳ１４７７、ＦＴ－６８７６、およびＧＮＥ－７８１）は、ＨＣＣ４００６長期細胞増殖の阻害を媒介することを示す図である。詳細は実施例１１に提供されている。

【図11A】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で使用した場合は、ｉｎ ｖｉｖｏで効果を示さないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、より良好な経時的腫瘍制御および療法に対するより良好な奏効率を提供することを示す図である。（Ａ）ＥＧＦＲ突然変異ＮＣＩ－Ｈ１９７５異種移植片の平均腫瘍容積（＋ＳＥＭ）が経時的にプロットされている。４つの異なる処置群が図示されている：ビヒクル（交差丸）、９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃ（白丸）、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（黒丸）、および９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃと組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（半黒丸）。（Ｂ）４つの処置群すべての最良平均応答が、ウォーターフォールプロットで示されている（ビヒクルは灰色、９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃは白色、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは黒色、および９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃと組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは四角）。破線は、初期腫瘍容積の３０％の低減を示す。詳細は実施例１２に提供されている。

【図11B】ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合する阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で使用した場合は、ｉｎ ｖｉｖｏで効果を示さないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強し、より良好な経時的腫瘍制御および療法に対するより良好な奏効率を提供することを示す図である。（Ａ）ＥＧＦＲ突然変異ＮＣＩ－Ｈ１９７５異種移植片の平均腫瘍容積（＋ＳＥＭ）が経時的にプロットされている。４つの異なる処置群が図示されている：ビヒクル（交差丸）、９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃ（白丸）、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（黒丸）、および９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃと組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（半黒丸）。（Ｂ）４つの処置群すべての最良平均応答が、ウォーターフォールプロットで示されている（ビヒクルは灰色、９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃは白色、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは黒色、および９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃと組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは四角）。破線は、初期腫瘍容積の３０％の低減を示す。詳細は実施例１２に提供されている。

【発明を実施するための形態】

【0042】

発明の詳細な説明
本発明をより詳細に説明する前に、下記の定義を導入する。

【0043】

１． 定義
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、「ａ」および「ａｎ」という単数形は、状況が明確に別様の指示をしない限り、対応する複数形も含む。

【0044】

「約」という用語は、本発明の状況では、当該特徴の技術的効果が依然として保証されると当業者が理解することになる正確性の間隔を指す。この用語は、典型的には、示されている数値から±１０％、好ましくは±５％の逸脱を示す。

【0045】

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、限定的ではないことを理解する必要がある。本発明の目的では、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語の好ましい実施形態であるとみなされる。以下において、群が、少なくともある特定の数の実施形態を含むと規定されている場合、これは、好ましくはそうした実施形態のみからなる群を包含することも意味する。

【0046】

「ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤」という用語は、本明細書で使用される場合、ＣＢＰのブロモドメインおよびｐ３００のブロモドメインに強力におよび選択的に結合する小分子を意味する。この用語は、「ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに選択的に結合するブロモドメイン阻害剤」および「ＣＢＰ／ｐ３００の阻害に選択的なブロモドメイン阻害剤」という用語と同義である。この場合の「強力に結合する」とは、ＣＢＰのブロモドメインおよびｐ３００のブロモドメインに結合する際のＫｄが、約３００ｎＭ未満、好ましくは約１００ｎＭ未満であることを意味する。この場合の「選択的に結合する」とは、小分子が、実施例４に示されているＢＲＯＭＯｓｃａｎ（商標）を実施した際に、ＢＲＯＭＯｓｃａｎ（商標）の任意の他のブロモドメイン含有タンパク質またはブロモドメインの結合のＫｄよりも、好ましくは、本出願の実施例４の表中のＤｉｓｃｏｖｅＲｘ遺伝子記号により示されているさらなるブロモドメイン含有タンパク質またはブロモドメインと比較して、少なくとも約２０分の１よりも低い、好ましくは少なくとも約３０分の１よりも低い、より好ましくは少なくとも約５０分の１よりも低い、最も好ましくは少なくとも約７０分の１よりも低いＫｄで、ＣＢＰのブロモドメインおよびｐ３００のブロモドメインに結合することを意味する。比較のために、ＣＢＰおよびｐ３００を除く、ＢＲＯＭＯｓｃａｎ（商標）の任意のブロモドメイン含有タンパク質またはブロモドメインの最も低いＫｄを、ＣＢＰおよびｐ３００の最も高いＫｄと比較する。したがって、例えば、ＢＲＤ４（全長、短鎖－ｉｓｏ．）のＫｄが、ＣＢＰおよびｐ３００を除くすべてのブロモドメイン含有タンパク質またはブロモドメインの中で最も低いＫｄであり、７１００ｎＭである場合、それを、２９ｎＭであるＣＢＰのＫｄと比較する（１２ｎＭであり、したがってＣＢＰのＫｄよりも低いｐ３００のＫｄとではない）。上述の例は、下記の実施例４の表の化合物Ａに対してなされている。

【0047】

上記に概説されている強力で選択的な結合により、通常はＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを介して生じる、細胞内の相互作用パートナーとの相互作用が阻害されるため、この分子は「阻害剤」と呼ばれる。「相互作用を阻害する」という用語は、好ましくは、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインと相互作用パートナーとの相互作用が全く生じない（少なくとも検出可能なレベルではない）ことを意味する。しかしながら、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインと相互作用パートナーとの所与の相互作用（１００％に設定）が、大幅に、例えば、約５０％、約４０％、約３０％、好ましくは約２０％、より好ましくは約１０％、または最も好ましくは約５％もしくはそれよりも低いレベルに低減された場合、そのような相互作用の低減は、依然として「相互作用を阻害する」という用語に包含される。相互作用を阻害する化合物の医学的使用に関しては、十分な療法効果を達成するために相互作用を完全に阻害する必要はない可能性がある。したがって、「阻害する」という用語は、本明細書で使用される場合、所望の効果を達成するのに十分な相互作用の低減も指すことを理解する必要がある。

【0048】

「ＥＧＦＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、タンパク質「上皮増殖因子受容体」を指す。ＥＧＦＲは、上皮増殖因子を含む、その特定のリガンドの結合により活性化される膜貫通タンパク質である。増殖因子リガンドにより活性化されると、ＥＧＦＲは、不活性単量体から活性ホモ二量体への転換を起こす。リガンド結合後にホモ二量体を形成することに加えて、ＥＧＦＲは、ＥｒｂＢ２／Ｈｅｒ２／ｎｅｕなどのＥｒｂＢ受容体ファミリーの別のメンバーと対になって、活性化ヘテロ二量体を作出することができる。ＥＧＦＲ二量体化は、その固有の細胞内タンパク質チロシンキナーゼ活性を刺激する。その結果、ＥＧＦＲのＣ末端ドメインにある幾つかのチロシン残基の自己リン酸化が生じ、それにより、それら自体のホスホチロシン結合ＳＨ２ドメインを介してリン酸化チロシンと付随する幾つかの他のタンパク質により下流活性化およびシグナル伝達が誘発される。こうした下流シグナル伝達タンパク質は、幾つかのシグナル伝達カスケード、主にＭＡＰＫ、Ａｋｔ、およびＪＮＫ経路を開始させ、ＤＮＡ合成および細胞増殖に結び付く。ＥＧＦＲ過剰活性化に結び付く突然変異は、肺がんを含む少なからぬがんに関連付けられており、とりわけ、その定常的活性化をもたらし、制御不能な細胞分裂をもたらす可能性がある。

【0049】

「ＥＧＦＲ阻害剤」という用語は、本明細書で使用される場合、最終的に細胞増殖をもたらす細胞内下流シグナル伝達が阻害されるように、ＥＧＦＲに対して作用することが可能な分子を指す。この状況での「阻害された」という用語は、好ましくは、下流シグナル伝達がそれ以降は生じないことを意味する。しかしながら、所与の下流シグナル伝達（１００％に設定）が大幅に、例えば、約７０％、約６０％、約５０％、約４０％、約３０％、好ましくは約２０％、より好ましくは１０％、または最も好ましくは約５％もしくはそれよりも低いレベルに低減された場合、そのような下流シグナル伝達の低減は、依然として「細胞内下流シグナル伝達を阻害する」という用語に包含される。下流シグナル伝達を阻害する化合物の医学的使用に関しては、十分な療法効果を達成するためにシグナル伝達を完全に阻害する必要はない可能性がある。したがって、「阻害する」という用語は、本明細書で使用される場合、所望の効果を達成するのに十分な下流シグナル伝達の低減もこの状況で指すことを理解する必要がある。ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲの細胞外リガンド結合ドメインに結合し、したがってそれを阻止することができる。そのようなＥＧＦＲ阻害剤は、典型的には、抗体、特に、アミバンタマブ、ＣＤＰ１、セツキシマブ、ＧＣ１１１８、ＨＬＸ０７、ＪＭＴ１０１、Ｍ１２３１、ネシツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、パニツムマブ、ＳＣＴ２００、ＳＩ－Ｂ００１、ＳＹＮ００４、ザルツズマブ（ｚａｌｕｔｕｚｕｍａｂ）、およびそれらの組合せからなる群から選択されるモノクローナル抗体である。また、ＥＧＦＲ阻害剤は、受容体の細胞質側に結合し、それによりＥＧＦＲチロシンキナーゼ活性を阻害することができる。そのようなＥＧＦＲ阻害剤は、典型的には、小分子、特に、アビベルチニブ、アファチニブ、アルフルチニブ、アルモネルチニブ、アパチニブ、ＡＺＤ３７５９、ブリガチニブ、Ｄ０３１６、Ｄ０３１７、Ｄ０３１８、ダコミチニブ、ＤＺＤ９００８、エルロチニブ、ＦＣＮ－４１１、ゲフィチニブ、イコチニブ、ラパチニブ、ラゼルチニブ、モボセルチニブ、ナザルチニブ、ネラチニブ、オラフェルチニブ、オシメルチニブ、ポジオチニブ、ピロチニブ、レジベルチニブ、ＴＡＳ６４１７、バンデタニブ、バルリチニブ、ＸＺＰ－５８０９、およびそれらの組合せからなる群から選択される小分子である。

【0050】

「ＮＳＣＬＣはＥＧＦＲに発がん性変更を呈する」という用語は、本明細書で使用される場合、ＮＳＣＬＣ腫瘍が、ＥＧＦＲの突然変異型を有し、ＥＧＦＲのこの突然変異型は、ＮＳＣＬＣの発症に関与が示唆されることを意味する。言い換えると、ＥＧＦＲの突然変異型は、任意選択で他の要因の中でも、ＮＳＣＬＣの発症に関連するかまたは発症の原因であるとみなすことができる。ＥＧＦＲの突然変異型は、ＥＧＦＲ遺伝子に変更があるためＮＳＣＬＣ腫瘍に存在し、そのような変更は、特に、ＥＧＦＲ遺伝子における欠失、ＥＧＦＲ遺伝子における挿入、ＥＧＦＲ遺伝子における欠失および挿入、ＥＧＦＲ遺伝子の重複、ＥＧＦＲ遺伝子の増幅、ならびに／またはＥＧＦＲにアミノ酸置換をもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異である。対応する具体的な変更は、上記で概説されている。多くの場合、ＥＧＦＲ遺伝子にはそのような変更の組合せが見出される。「ＥＧＦＲにおける発がん性変更」は、下記で規定される「ＥＧＦＲにおける耐性変更」ではない。

【0051】

「ＥＧＦＲにおける耐性変更」という用語は、本明細書で使用される場合、ＥＧＦＲ阻害剤で治療した際に、ＮＳＣＬＣ腫瘍が（発がん性変更に加えて）ＥＧＦＲにおいてさらなる変更を獲得し、ＥＧＦＲにおけるこのさらなる変更は、上記ＥＧＦＲ阻害剤（つまり、治療のために使用され、初期にはＮＳＣＬＣが感受性であったＥＧＦＲ阻害剤）による治療をＮＳＣＬＣ耐性にすることを意味する。耐性は、ＥＧＦＲ遺伝子における変更により媒介され、この変更は、特に、ＥＧＦＲにアミノ酸置換をもたらすＥＧＦＲ遺伝子における少なくとも１つの塩基突然変異であり得る。したがって、上記で規定した「ＥＧＦＲにおける発がん性変更」とは対照的に、「耐性変更」は、ＮＳＣＬＣの初期発症に関連しているとも、原因であるともみなされない。むしろ、耐性変更は、つまり、以前に投与された（およびこの治療に対する腫瘍の応答として耐性変更が発生する前はＮＳＣＬＣの治療に効果的だった）特定のＥＧＦＲ阻害剤による治療に対する耐性をＮＳＣＬＣに付与するという点で、ＮＳＣＬＣにさらなる増殖優位性を提供する。顕著な「ＥＧＦＲにおける耐性変更」は、ゲートキーパー突然変異とも呼ばれる、ＥＧＦＲにおけるアミノ酸置換Ｔ７９０Ｍである。「ＥＧＦＲにおける耐性変更」は、上記で規定した「ＥＧＦＲにおける発がん性変更」ではない。しかしながら、無論のこと、両タイプの変更が、ＮＳＣＬＣ腫瘍のＥＧＦＲに存在する可能性があり、患者において頻繁に検出され、対応する細胞株がモデル系として存在する（例えば、細胞株ＮＣＩ－Ｈ１９７５を参照）。

【0052】

ＥＧＦＲの「過剰活性化」という用語は、本明細書で使用される場合、ＥＧＦＲが、野生型状況と比較してより活性であり、特に下流活性化およびシグナル伝達に関してより活性であり、したがってがん性細胞増殖をもたらすことを意味する。

【0053】

「小分子」という用語は、本明細書で使用される場合、低分子量を有する小型有機化合物を指す。本発明の状況での小分子は、好ましくは、５０００ダルトン未満、より好ましくは４０００ダルトン未満、より好ましくは３０００ダルトン未満、より好ましくは２０００ダルトン未満、またはさらにより好ましくは１０００ダルトン未満の分子量を有する。特に好ましい実施形態では、本発明の状況での小分子は、８００ダルトン未満の分子量を有する。別の好ましい実施形態では、本発明の状況での小分子は、５０～３０００ダルトン、好ましくは１００～２０００ダルトン、より好ましくは１００～１５００ダルトン、さらにより好ましくは１００～１０００ダルトンの分子量を有する。

【0054】

「治療」という用語は、本明細書で使用される場合、疾患を治癒または改善し、疾患の再発を予防し、疾患の症状を緩和し、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的帰結を縮小させ、疾患の安定（つまり悪化しない）状態を達成し、転移を予防し、疾患進行速度を減少させ、および／または治療を受けていない場合に予想される生存と比較して生存を延長するための臨床介入を指す。

【0055】

「治療サイクル」という用語は、本明細書で使用される場合、患者の状態を初期評価した後で薬剤が一定期間投与され、次いで患者の状態が、典型的には別の治療サイクルを開始する前に再評価されることを意味する。

【0056】

本明細書で参照されているＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤の詳細は以下の通りであり、化合物Ａ、化合物Ｃ、化合物０００３０、および化合物０００７１の構造は、本出願の実施例セクションに示されている。さらに、こうした化合物の合成経路は、本出願の実施例のセクションに示されている。ＣＣＳ１４７７は、例えば、Ａｏｂｉｏｕｓから市販されており、そのＣＡＳ番号は２２２２９４１－３７－７である。ＧＮＥ－７８１は、例えばＭＣＥ（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ）から市販されており、そのＣＡＳ番号は１９３６４２２－３３－１である。ＧＮＥ－０４９は、例えばＭＣＥ（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ）から市販されており、そのＣＡＳ番号は１９３６４２１－４１－８である。ＳＧＣ－ＣＢＰ３０は、例えばＭＣＥ（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ）から市販されており、そのＣＡＳ番号は１６１３６９５－１４－９である。ＣＰＩ－６３７は、例えばＭＣＥ（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ）から市販されており、そのＣＡＳ番号は１８８４７１２－４７－３である。ＦＴ－６８７６は、例えばＭＣＥ（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ）から市販されており、そのＣＡＳ番号は２３０４４１６－９１－７である（ＦＴ－６８７６は、「ＣＢＰ／ｐ３００－ＩＮ－８）」とも呼ばれる）。化合物４６２、４２４、および５１５の構造は下記に図示されており、こうした構造および合成経路は、国際公開第２０２０／００６４８３号パンフレットに示されている（特に、化合物４２４については３３および３４頁、化合物４６２については４２および４３頁、ならびに化合物５１５については４７および４８頁を参照）。

【0057】

【化1】

【0058】

２． 本発明者らによる驚くべき知見
本発明者らは、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインと強力に結合する新規化合物を特定し、ブロモドメインを含むタンパク質は多数存在することが周知であるため、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに対する結合が選択的であることも示した。

【0059】

ＣＢＰ／ｐ３００は、真核生物転写調節ネットワークの中心ノードであること、ならびに４００個よりも多くの転写因子および他の調節タンパク質と相互作用することが特定されている。ＣＢＰ／ｐ３００は、数多くの細胞内シグナル伝達経路間のクロストークおよび干渉を調節しており、細胞内調節機構を乗っ取るために腫瘍ウイルスにより標的とされる（ＤｙｓｏｎおよびＷｒｉｇｈｔ、前掲、６７１４頁、右欄を参照）。ＣＢＰ／ｐ３００は、ＤｙｓｏｎおよびＷｒｉｇｈｔ、前掲の図１から導き出すことができるように、幾つかのドメインを含む大型タンパク質である。こうしたドメインは、ＮＲＩＤ、ＴＡＺ１、ＴＡＺ２、ＫＩＸ、ＣＲＤ１、ＢＲＤ、ＣＨ２（ＰＨＤドメインおよびＲＩＮＧフィンガードメインを有する）、ＨＡＴ、ＺＺ、およびＮＣＢＤドメインである。こうしたタンパク質のサイズおよびそれらのドメインが様々であることから、例えば、ＣＢＰ／ｐ３００が可能である相互作用が多岐にわたるため、多数の異なる相互作用パートナーと相互作用することによるそれらの細胞機能が非常に多様であることがすでに明らかになっている。ヒストンアセチルトランスフェラーゼとしてのＣＢＰ／ｐ３００の酵素活性は、ＨＡＴドメインに位置している。上記に記述されているように、この酵素機能は、主に転写活性化に関与することが示唆されている。また、ＣＢＰ／ｐ３００は、翻訳後修飾、特にリン酸化を受ける。それら自体の酵素活性ならびにこうしたタンパク質が翻訳後修飾を受けることは、ＣＢＰ／ｐ３００の種々の機能および効果に対して、さらに別のレベルの複雑性を導入する。こうした機能および効果が相反する可能性さえあることは、ＧｏｏｄｍａｎおよびＳｍｏｌｋ、Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２０００年、１４巻：１５５３～１５７７頁の導入セクションに見事に要約されており、そこには、ＣＢＰ／ｐ３００機能の主要なパラドックスの１つは、こうしたタンパク質が、正反対の細胞プロセスに寄与することが可能であると考えられること、およびＣＢＰ／ｐ３００がアポトーシスを促進するかまたは細胞増殖を促進するかは、状況に大きく依存すると考えられることであると記述されている。疾患、特にがんとの関連で言えば、これは、そもそもＣＢＰ／ｐ３００が関与している場合は、ＣＢＰ／ｐ３００がどのように関与するかに関して、特定の疾患および特定のがんタイプの状況が決定的な影響を及ぼすことになることを意味する。

【0060】

上記に照らせば、例えば一般的な「ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤」により影響を受ける可能性がある細胞プロセスにおいて単一の機能をＣＢＰ／ｐ３００に帰属させることが可能ではないことは驚くべきことではない。むしろ、複雑性のレベルが甚大であるため、ＣＢＰ／ｐ３００の種々の機能の精査は、ＣＢＰ／ｐ３００の特定のドメインを調査する場合にのみ、つまり例えば、ＨＡＴドメインにおけるＣＢＰ／ｐ３００の酵素活性を阻害する場合に達成される効果を分析することによってのみ、またはある特定のドメインを阻止（または「阻害」）することにより相互作用パートナーとの特定の相互作用を不可能にする場合にのみ可能であると考えられる。さらに、これは、上記で概説したように、それぞれの状況、例えば、特定の疾患またはがんタイプなどの状況で理解しなければならない。

【0061】

したがって、本発明者らは、阻害剤が、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインを介した相互作用パートナーとの相互作用を不可能にする特定の状況において、阻害剤の効果を研究することに移行した。現在、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインは、ヒストン尾部の、ならびにｐ５３およびＣＲＥＢの転写因子ＩＤＲ（天然変性領域）を含む転写因子ＩＤＲのアセチル－リジン残基を認識することが知られている（ＤｙｓｏｎおよびＷｒｉｇｈｔ、前掲、６７１７頁、右欄を参照）。本発明者らは、Ｈｏｕら（Ｈｏｕら、前掲）による最近の刊行物に照らして、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞におけるそれらの阻害剤の効果を調査することに着手した。この刊行物では、ｐ３００は、ｐ３００のｓｈＲＮＡ媒介性下方制御に基づき、重要な腫瘍プロモーターとして、ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖、遊走、および侵襲を促進すると結論付けられている。しかしながら、本発明者らは、阻害剤を単独で適用した場合、試験したＮＳＣＬＣ細胞株の増殖に対する効果を観察することができなかった。このように、例えば前立腺がんなどの他のがんタイプとは対照的に、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、ＮＳＣＬＣ細胞の増殖に対して効果を示すことができず、ＣＢＰ／ｐ３００の異なるドメインを標的とする阻害剤が、ＮＳＣＬＣ細胞内で完全なｐ３００タンパク質がＲＮＡｉにより下方制御される場合に観察される効果を示すことができるか否かは依然として判明していない。

【0062】

本発明者らは、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤の試験に移行し、驚くべきことに、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤が、ＥＧＦＲに発がん性変更を呈するＮＳＣＬＣ細胞におけるＥＧＦＲ阻害剤の効果を、ＥＧＦＲ阻害剤単独の投与と比較して延長したことを見出した。言い換えると、本発明者らのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、ＥＧＦＲに発がん性変更を呈するＮＳＣＬＣの増殖に対してそれ自体で効果を示すことはできないが、ＥＧＦＲ阻害剤と共に用いると効果を呈した。さらに言い換えると、本発明者らのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤およびＥＧＦＲ阻害剤の組合せは、試験したＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の顕著な増殖阻害を経時的にもたらした。

【0063】

こうした実験のため、本発明者らは、発がん性変更としてＥＧＦＲ遺伝子のエクソン１９に欠失を有するが（エクソン１９に欠失を有するＨＣＣ８２７は、ＥＧＦＲのＥ７４６～Ａ７５０の欠失をもたらし、エクソン１９に欠失を有するＨＣＣ４００６は、ＥＧＦＲにＬ７４７～Ｅ７４９の欠失をもたらす）、ＥＧＦＲに耐性変更を有しないＮＳＣＬＣ細胞株を使用した。したがって、こうした細胞株は、腫瘍が「ＥＧＦＲエクソン１９欠失」を有するＮＳＣＬＣを有する患者の第一選択治療のモデル系とみなすことができる。ゲフィチニブおよびオシメルチニブを、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤と組み合わせて、対応するＥＧＦＲ阻害剤として使用した（下記の実施例を参照）。また、本発明者らは、発がん性変更Ｌ８５８Ｒならびに耐性変更Ｔ７９０Ｍを呈するＥＧＦＲを有するＮＳＣＬＣ細胞株（ＮＣＩ－Ｈ１９７５）を使用した。ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍは、例えば、ゲフィチニブ治療に応答した耐性変更として発生し、ゲフィチニブ治療を無効にすることが知られている。したがって、この細胞株は、腫瘍が、初期ＥＧＦＲ阻害剤治療に対する耐性を発生させたＮＳＣＬＣを有する患者の第二選択治療のためのモデル系とみなすことができる。この細胞株では、本発明者らは、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤と組み合わせてオシメルチニブのみを使用した（オシメルチニブは、ゲフィチニブを無効にする、ＥＧＦＲにおける耐性変更Ｔ７９０Ｍにも関わらず、効果的であることが示されているため）。ゲフィチニブとＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤との組合せの試験は、Ｔ７９０Ｍ突然変異を考慮すると無意味だった。

【0064】

すべての試験した細胞株において、長期間のインキュベーションにわたって顕著な増殖阻害が観察されたことは特に注目に値する。それは、ＥＧＦＲ阻害剤を単独で使用した場合、耐性の発生により、経時的な増殖阻害は完全であることを維持しないことになるからである。下記の実験セクションのデータが示すように、これは、ゲフィチニブを単独で適用した場合だけでなく、オシメルチニブを単独で適用した場合も該当する。したがって、オシメルチニブは、初期には突然変異ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍにより提供される耐性を克服することが可能であるため、初期には効果的であるが（ＮＳＣＬＣがそれに対して既に耐性であるゲフィチニブとは対照的に）、これも経時的にはオシメルチニブに対する耐性を発生させ、それにより最終的にはオシメルチニブが無効になる。ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤の結果を考慮して、本発明者らは、観察された効果がＣＢＰ／ｐ３００阻害剤それら自体に一般化することができるか否かの調査を行った。この目的のため、さらなるＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤、すなわちＣＣＳ１４７７、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０、ＦＴ－６８７６、およびＧＮＥ－７８１を試験した。本発明者らが試験した様々なセットのＣＢＰ／ｐ３００阻害剤の構造は関連しておらず、それらの共通特徴は、こうした阻害剤により達成される効果、すなわちＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメインの選択的阻害のみに関することに留意されたい。すべての試験したＣＢＰ／ｐ３００阻害剤の構造は、以下の通りである。

【0065】

【化2】

【0066】

試験したＥＧＦＲ阻害剤ゲフィチニブおよびオシメルチニブは、構造および作用がまったく異なるが（ゲフィチニブは「非共有結合阻害剤」であるのに対し、オシメルチニブは「共有結合阻害剤」である）、ＥＧＦＲのキナーゼ活性に対する阻害機能を共通して有することも言及されるべきである。さらに、ゲフィチニブおよびオシメルチニブは、それらの開発に関する点で、すなわち、ＮＳＣＬＣを治療するための第１世代の薬物（つまりゲフィチニブ）およびＮＳＣＬＣを治療するための第３世代の薬物（つまりオシメルチニブ）という点で、全く異なる。

【0067】

さらに、本発明者らは、単一のＮＳＣＬＣ細胞株を試験しただけでなく、３つの異なるＮＳＣＬＣ細胞株（ＨＣＣ８２７、ＨＣＣ４００６、およびＮＣＩ－Ｈ１９７５）を使用した。所与の疾患の単一の細胞株を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ実験では信頼性の低い結果が提供される可能性があるが、所与の疾患の少なくとも２つの異なる細胞株で同一の結果が得られれば、得られた結果が信頼できるものであることを示す非常により強力な指標となるため、これは特に重要である。さらに、そのようなアッセイでは、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤の効果をより信頼性高く分析する立場に立てるように、ＥＧＦＲ阻害剤により初期に、特に処理の数日後に十分に増殖が阻害されたＮＳＣＬＣ細胞株を使用することが好ましいと考えられる。無論、異種移植モデルに基づく結果、およびＮＳＣＬＣ細胞株を使用した場合の初期知見と一致する結果は、実験から導き出すことができる全体的な結論をさらにより良好に裏付ける。そのような異種移植データは、本明細書の下記の実施例セクションに示されているように、本発明者らによっても同様に得られた。

【0068】

３． 本発明の化合物の医薬組成物
「ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤」および「ＥＧＦＲ阻害剤」は、本明細書で特許請求されている使用のための「薬学的活性作用剤」である。上記に記述されているように、それらは、別々の剤形で存在するかまたは単一の剤形に含まれているかのいずれであってもよい。

【0069】

「薬学的活性作用剤」は、本明細書で使用される場合、化合物が、患者、つまりヒトまたは動物の応答をｉｎ ｖｉｖｏでモジュレートすることができることを意味する。「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、本明細書で使用される場合、医薬組成物に一般的に含まれる、当業者に公知の賦形剤を指す。そのような賦形剤は、下記において例示的に列挙されている。上記に示されている「薬学的活性作用剤」の規定に照らして、薬学的に許容される賦形剤は、薬学的に不活性であると規定することができる。

【0070】

市販のＥＧＦＲ阻害剤を、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤と組み合わせて使用する場合、投与は、別々の剤形により行われ、ＥＧＦＲ阻害剤は、認可されている剤形および投与経路により投与されることが好ましい。ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、以下に示されている剤形で投与してもよく、または現在臨床試験が行われている剤形で投与してもよい。

【0071】

本発明による使用のための剤形は、経口、頬側、経鼻、直腸、局所、経皮、または非経口適用のために製剤化することができる。経口適用が好ましい場合がある。非経口適用が好ましい場合もあり、非経口適用としては、静脈内、筋肉内、または皮下投与が挙げられる。また、本発明の剤形は、製剤または医薬組成物と称される場合がある。

【0072】

一般に、本発明による医薬組成物は、組成物に関して達成されるべき機能に応じて選択されることになる、種々の薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。本発明の意味での「薬学的に許容される賦形剤」は、コーティング材料、膜形成材料、増量剤、崩壊剤、放出調節材料、担体材料、希釈剤、結合剤、および他のアジュバントを含む、薬学的剤形を調製するために使用される任意の物質であってもよい。典型的な薬学的に許容される賦形剤としては、スクロース、マンニトール、ソルビトール、デンプンおよびデンプン誘導体、ラクトース、ならびにステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、崩壊剤、ならびに緩衝剤のような物質が挙げられる。

【0073】

「担体」という用語は、適用を容易にするために活性成分と組み合わせる、薬学的に許容される有機または無機担体物質を指す。好適な薬学的に許容される担体としては、例えば、水、塩溶液、アルコール、油、好ましくは植物油、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、界面活性剤、香油、脂肪酸モノグリセリドおよびジグリセリド、石油エーテル性脂肪酸エステル（ｐｅｔｒｏｅｔｈｒａｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｅｓｔｅｒ）、ヒドロキシメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンなどが挙げられる。医薬組成物は、滅菌することができ、必要に応じて、活性化合物と有害な反応をしない、潤滑剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼす塩、緩衝剤、着色剤、香味物質、および／または芳香物質などのような助剤と混合することができる。

【0074】

本発明のために液体剤形が考慮される場合、液体剤形としては、水などの、当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含む、薬学的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁物、およびシロップを挙げることができる。こうした剤形は、例えば、かさを付与するための微結晶性セルロース、懸濁剤としてのアルギン酸またはアルギン酸ナトリウム、増粘剤としてのメチルセルロース、および甘味料／香味料を含んでいてもよい。

【0075】

非経口適用の場合、特に好適なビヒクルとしては、溶液、好ましくは油性溶液または水性溶液、ならびに懸濁物、エマルジョン、または移植片が挙げられる。非経口投与用の医薬製剤が特に好ましく、非経口投与用の医薬製剤としては、水溶性形態の水溶液が挙げられる。加えて、懸濁物は、適切な油性注射用懸濁物として調製することができる。好適な親油性溶媒またはビヒクルとしては、ゴマ油などの脂肪油、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームが挙げられる。水性注射用懸濁物は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなど、懸濁物の粘度を増加させる物質を含んでいてもよい。

【0076】

特に好ましい剤形は、本発明の医薬組成物の注射用調製物である。したがって、滅菌注射用水性または油質懸濁物は、例えば、好適な分散剤、湿潤剤、および／または懸濁剤を使用して、公知の技術に従って製剤化することができる。また、滅菌注射用調製物は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌注射用溶液または懸濁物であってもよい。使用することができる許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水および等張性塩化ナトリウム溶液がある。溶媒または懸濁媒体として、滅菌油も従来から使用されている。

【0077】

本発明の医薬組成物を直腸投与するための坐剤は、例えば、化合物を、室温では固体であるが直腸温度では液体である、ココアバター、合成トリグリセリド、およびポリエチレングリコールなどの好適な非刺激性賦形剤と混合することにより、直腸で溶融して、坐剤から活性作用剤が放出されることになるように調製することができる。

【0078】

吸入による投与の場合、本発明による化合物を含む医薬組成物は、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の好適なガスを使用することにより、加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾル噴霧の形態で便利に送達することができる。加圧エアロゾルの場合、投薬量単位は、計量された量を送達するための弁を提供することにより決定することができる。化合物およびラクトースまたはデンプンなどの好適な粉末基剤の粉末混合物を含む、インヘラーまたは吸入器で使用するための例えばゼラチンのカプセルおよびカートリッジを製剤化することができる。

【0079】

経口剤形は、液体であってもよくまたは固体であってもよく、例えば、錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤、散剤、発泡製剤、糖衣錠、および顆粒剤が挙げられる。経口使用のための医薬調製物は、固体賦形剤として得ることができ、任意選択で、得られた混合物を粉砕し、必要に応じて好適な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して、錠剤または糖衣錠コアを得ることができる。好適な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖；例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース調製物、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの増量剤である。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤を添加してもよい。経口剤形は、活性作用剤の即時放出または活性作用剤の持続放出を保証するように製剤化することができる。

【0080】

４． さらなる開示および実施形態
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤および他のキナーゼ阻害剤の臨床的抗腫瘍効果は耐久性ではない。通常、こうした阻害剤に対する耐性が発生する。より具体的には、ＥＧＦＲ阻害剤（ＥＧＦＲｉ）の臨床的抗腫瘍効果は耐久性ではない。ＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性は、療法剤および臨床状況に応じて、通常は９～１９か月以内に発生する。したがって、がん患者の薬物耐性を防止することになるがん治療の様式を開発することが望ましい。歴史的に、薬物耐性に取り組むためのほとんどの手法は、再発腫瘍の遺伝的駆動因子に着目してきた。既に確立されている薬物耐性を克服する努力の一環として、腫瘍再増殖を駆動する新たに突然変異したタンパク質を、単独でまたは主要ながん薬物と組み合わせて療法的に標的にすることになる。ＥＧＦＲｉ治療に対する１つの耐性機序は、ＥＧＦＲｉを無効にする突然変異であるゲートキーパー突然変異がＥＧＦＲタンパク質に発生することである。最も一般的には、このゲートキーパー突然変異は、Ｔ７９０Ｍ突然変異である。オシメルチニブなどの突然変異特異的阻害剤は、突然変異ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍを阻害しない第１世代ＥＧＦＲ阻害剤に対して確立された薬物耐性を克服するために使用される。ＥＧＦＲｉ治療に対する別の耐性機序は、他の受容体チロシンキナーゼを介して、例えば、ＭＥＴ、ＥｒｂＢ２、ＨＧＦ、ＥｒｂＢ３、ＩＧＦ１Ｒ、ＡＸＬ、ＮＴＲＫ１、ＢＲＡＦ、ＦＧＦＲ３、またはＦＧＦＲ１の増幅、過剰発現、または活性化により活性化されるバイパスシグナル伝達である。バイパスシグナル伝達を阻害するための療法的介入が臨床で試験されているが、結果は様々である。

【0081】

国際公開第２０１８０２２６３７号パンフレットなどの以前の開示には、特に、ｐ３００突然変異を有するがんを治療するための新規がん療法としてのＣＢＰ／ｐ３００阻害剤の使用が記載されている。国際公開第２０１１０８５０３９号パンフレットには、ＣＢＰ／ｐ３００ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）の活性を阻害することを含む、がんを治療するための方法、およびがんを有する対象を治療するための、特にＤＮＡ損傷化学療法抗がん剤と組み合わせた、ＣＢＰ／ｐ３００ ＨＡＴ阻害剤の使用が記載されている。

【0082】

がん薬物耐性の発生を防止するための新しい効果的な方法および組成物が必要とされている。これは、とりわけ、本セクション４の実施形態により対処される。

【0083】

実施形態１：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤、ならびにＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＭＥＴ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＲＥＴ、ＮＴＲＫ１、およびＡＸＬ阻害剤からなる群から選択される受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓ（カーステンラット肉腫（Ｋｉｒｓｔｅｎ Ｒａｔ Ｓａｒｃｏｍａ））もしくはＢＲＡＦ（がん原遺伝子Ｂ－Ｒａｆおよびｖ－Ｒａｆマウス肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログＢ）阻害剤を、それを必要とする動物に投与することを含む、動物のがんを治療するための方法に使用するためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤であって、がんは、対応する受容体チロシンキナーゼにまたはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦに変更を含み、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤単独は、がんの進行を緩徐させない、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤。

【0084】

実施形態２：がんを有する動物に、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、動物における、受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤がん療法に対する応答の持続時間を延長するための方法に使用するためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤であって、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩を投与した場合のがん療法に対する応答の持続時間は、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与の非存在下でのがん療法に対する応答の持続時間と比較して延長され、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＭＥＴ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＲＥＴ、ＮＴＲＫ１、およびＡＸＬ阻害剤からなる群から選択される、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤。

【0085】

実施形態３：がんの治療に使用するための組成物であって、組成物は、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩、ならびにＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＭＥＴ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＲＥＴ、ＮＴＲＫ１、およびＡＸＬの阻害剤からなる群から選択される受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の相乗的組合せを含み、がんは、対応する受容体チロシンキナーゼまたはＫＲａｓまたはＢＲＡＦに変更を含み、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤単独はがんの進行を緩徐させない、組成物。

【0086】

実施形態４：がん細胞の増殖を阻害するための方法であって、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤、ならびにＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＭＥＴ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＲＥＴ、ＮＴＲＫ１、およびＡＸＬ阻害剤からなる群から選択される受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤を投与することを含み、がん細胞は、対応する受容体チロシンキナーゼまたはＫＲａｓまたはＢＲＡＦに変更を含み、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤単独は、がん細胞の増殖を阻害しない、方法。

【0087】

実施形態５：受容体チロシンキナーゼまたはＫＲａｓまたはＢＲＡＦに対する変更は、発がん性変更である、任意の先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0088】

実施形態６：受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤である、任意の先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0089】

実施形態７：受容体チロシンキナーゼに対する変更は、ＥＧＦＲにおける突然変異である、実施形態６に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0090】

実施形態８：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩、および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の組成物または組合せは、ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤単独あるいは受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤単独と比較して、がん治療において相乗的である、任意の先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0091】

実施形態９：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の組成物または組合せは、受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤に対するがんの耐性のリスクを遅延または低減させる、任意の先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0092】

実施形態１０：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤に対するがん細胞の耐性を防止するための有効量で投与される、任意の先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0093】

実施形態１１：ＥＧＦＲ阻害剤は、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ダコミチニブ、ラパチニブ、ネラチニブ、バンデタニブ、ネシツムマブ、オシメルチニブ、アファチニブ、ＡＰ２６１１３、ＥＧＦＲ阻害剤（ＣＡＳ番号８７９１２７－０７－８）、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ－４阻害剤（ＣＡＳ番号８８１００１－１９－０）、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ－２阻害剤（ＣＡＳ番号１７９２４８６１－４）、ＥＧＦＲ阻害剤ＩＩ（ＢＩＢＸ１３８２、ＣＡＳ番号１９６６１２－９３－８）、ＥＧＦＲ阻害剤ＩＩＩ（ＣＡＳ番号７３３００９－４２－２）、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ－２／ＥｒｂＢ－４阻害剤ＩＩ（ＣＡＳ番号９４４３４１－５４－２）、またはＰＫＣβＩＩ／ＥＧＦＲ阻害剤（ＣＡＳ番号１４５９１５－６０－２）からなる群から選択される、任意の先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0094】

実施形態１２：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、式（Ｉ）の化合物：

【0095】

【化3】

【0096】

であり、式中、
Ｒ^１は、ハロゲン、および－（１～２０個の炭素原子ならびに任意選択でＯ、Ｎ、およびＳから選択される１～１５個のヘテロ原子を含む、任意選択で置換された炭化水素基）から選択され；
Ｒ^２１は、水素、炭素原子間に１～３つの酸素原子を含んでいてもよい－（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキル）、および－（任意選択で置換されたＣ_３～６シクロアルキル）から選択され；
Ｒ^３は、－（任意選択で置換されたヘテロシクリル）、－（任意選択で置換されたカルボシクリル）、－（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキレン）－（任意選択で置換されたヘテロシクリル）、および－（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキレン）－（任意選択で置換されたカルボシクリル）から選択され；
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３の各々は、Ｎ、ＣＨ、およびＣＲ^ｘから独立して選択され、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３の少なくとも１つはＮであり；
Ｒ^３１は、－水素、－Ｃ_１～６－アルキル、および－（１つまたは複数のＦで置換されているＣ_１～６－アルキル）から選択され；Ｒ^３および任意のＲ^３１は、任意選択で連結されていてもよく；
Ｅは、存在しないか、または－ＣＨ_２－、－ＣＨＲ^ｘ－、－ＣＲ^ｘ _２－、－ＮＨ－、－ＮＲ^ｘ－、－Ｏ－、－Ｌ^１－Ｌ^２－、および－Ｌ^２－Ｌ^１－から選択されるかのいずれかであり、Ｌ^１は、－ＣＨ_２－、－ＣＨＲ^ｘ－、－ＣＲ^ｘ _２－、－ＮＨ－、－ＮＲ^ｘ－、および－Ｏ－から選択され、Ｌ^２は、－ＣＨ_２－、－ＣＨＲ^ｘ－、および－ＣＲ^ｘ _２－から選択され；
Ｒ^６ｘは、－ハロゲン、－ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６ハロアルキル、１つまたは複数のＯＨで置換されたＣ_１～６アルキル、任意選択で１つまたは複数のＲ^ｘｂで置換された単環式アリール、任意選択で１つまたは複数のＲ^ｘｂで置換された単環式へテロアリール、任意選択で１つまたは複数のＲ^ｘｂで置換された単環式シクロアルキル、任意選択で１つまたは複数のＲ^ｘｂで置換された単環式ヘテロシクロアルキル、任意選択で１つまたは複数のＲ^ｘｂで置換された単環式シクロアルケニル、任意選択で１つまたは複数のＲ^ｘｂで置換された単環式ヘテロシクロアルケニルであり、Ｒ^ｘｂは、－ハロゲン、－ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ_１～４アルキル、Ｃ_１～２ハロアルキル、１つまたは２つのＯＨで置換されたＣ_１～２アルキルから独立して選択され；
環Ａは、１つまたは複数の基Ｒ^ｘでさらに置換されていてもよく、環Ａの任意の２つのＲ^ｘ基は、任意選択でＲ^２１基と連結されていてもよく、および／もしくは環Ａの任意Ｒ^ｘ基は、任意選択でＲ^２１と連結されていてもよく；ならびに／または環Ａは、Ｒ^６ｘと一緒になって、以下の部分構造：

【0097】

【化4】

【0098】

を有する二環式部分を形成するように、１つの基Ｒ^ｘでさらに置換されていてもよく、
式中、環Ｂは、－（任意選択で置換された複素環）または－（任意選択で置換された炭素環）であり；
各Ｒ^ｘは、－ハロゲン、－ＯＨ、－Ｏ－（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキル）、－ＮＨ－（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキル）、－Ｎ（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキル）_２、＝Ｏ、－（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキル）、－（任意選択で置換されたカルボシクリル）、－（任意選択で置換されたヘテロシクリル）、－（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキレン）－（任意選択で置換されたカルボシクリル）、－（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキレン）－（任意選択で置換されたヘテロシクリル）－Ｏ－（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキレン）－（任意選択で置換されたカルボシクリル）、および－Ｏ－（任意選択で置換されたＣ_１～６アルキレン）－（任意選択で置換されたヘテロシクリル）から独立して選択され、
任意選択で置換された炭化水素基、任意選択で置換されたＣ_３～６シクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換された複素環、任意選択で置換されたカルボシクリル、任意選択で置換された炭素環、および任意選択で置換されたＣ_１～６アルキレンの任意選択の置換基は、－（任意選択で１つまたは複数のハロゲンで置換されたＣ_１～６アルキル）、－ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２、オキソ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^＊、－ＣＯＯＲ^＊、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^＊Ｒ^＊、－ＮＲ^＊Ｒ^＊、－Ｎ（Ｒ^＊）－Ｃ（Ｏ）Ｒ^＊、－Ｎ（Ｒ^＊）－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ^＊、－Ｎ（Ｒ^＊）－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ^＊Ｒ^＊、－Ｎ（Ｒ^＊）－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^＊、－ＯＲ^＊、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）Ｒ^＊、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ^＊Ｒ^＊、－ＳＲ^＊、－Ｓ（Ｏ）Ｒ^＊、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^＊、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ^＊Ｒ^＊、－Ｎ（Ｒ^＊）－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ^＊Ｒ^＊、任意選択でハロゲンまたはＣ_１～６アルキルで置換されたヘテロシクリル、および任意選択でハロゲンまたはＣ_１～６アルキルで置換されたカルボシクリルから独立して選択され；各Ｒ^＊は、Ｈ、任意選択でハロゲンで置換されたＣ_１～６アルキル、任意選択でハロゲンまたはＣ_１～６アルキルで置換されたヘテロシクリル、および任意選択でハロゲンまたはＣ_１～６アルキルで置換されたカルボシクリルから独立して選択され、同じ窒素原子に接続されている任意の２つのＲ^＊は、任意選択で連結されていてもよく、
任意選択で置換されたＣ_１～６アルキルおよび任意選択で置換されたＣ_１～６アルキレンの任意選択の置換基は、－ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２、オキソ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^＊＊、－ＣＯＯＲ^＊＊、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^＊＊Ｒ^＊＊、－ＮＲ^＊＊Ｒ^＊＊、－Ｎ（Ｒ^＊＊）－Ｃ（Ｏ）Ｒ^＊＊、－Ｎ（Ｒ^＊＊）－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ^＊＊、－Ｎ（Ｒ^＊＊）－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ^＊＊Ｒ^＊＊、－Ｎ（Ｒ^＊＊）－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^＊＊、－ＯＲ^＊＊、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）Ｒ^＊＊、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ^＊＊Ｒ^＊＊、－ＳＲ^＊＊、－Ｓ（Ｏ）Ｒ^＊＊、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^＊＊、－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ^＊＊Ｒ^＊＊、および－Ｎ（Ｒ^＊＊）－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ^＊＊Ｒ^＊＊から独立して選択され；各Ｒ^＊＊は、Ｈ、任意選択でハロゲンで置換されたＣ_１～６アルキル、任意選択でハロゲンまたはＣ_１～６アルキルで置換されたヘテロシクリル、および任意選択でハロゲンまたはＣ_１～６アルキルで置換されたカルボシクリルから独立して選択され、同じ窒素原子に接続されている任意の２つのＲ^＊＊は、任意選択で連結されていてもよい、
任意の先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0099】

実施形態１３：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、式（Ａ）のアリールイミダゾリルイソキサゾール：

【0100】

【化5】

【0101】

またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ°およびＲは、同じであるかまたは異なり、各々は、Ｈ、あるいは非置換であるかまたはＯＨ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、もしくはＯＲ’で置換されたＣ_１～Ｃ_６アルキルであり、Ｒ’は、非置換Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり；
Ｗは、ＮまたはＣＨであり；
Ｒ^１は、非置換であるかまたは置換された基であり、Ｃ連結４員～６員ヘテロシクリル；Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル；非置換であるかまたはＣ_６～Ｃ_１０アリール、５員～１２員Ｎ含有へテロアリール、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル、ＯＨ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、もしくはＯＲ’で置換されたＣ_１～Ｃ_６アルキル（式中、Ｒ’は、上記で規定の通りである）；および以下の式のスピロ基：

【0102】

【化6】

【0103】

から選択され、
Ｙは、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＣＨ_２－、または－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－であり；
ｎは、０または１であり；
Ｒ^２は、Ｃ_６～Ｃ_１０アリール、５員～１２員Ｎ含有へテロアリール、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル、およびＣ_５～Ｃ_６シクロアルケニルから選択される基であり、基は、非置換であるかまたは置換されており、Ｃ_６～Ｃ_１０アリールは、任意選択で５員または６員複素環式環に融合されており；
好ましくは、アリールイミダゾリルイソオキサゾールは、式（Ａａ^＊）：

【0104】

【化7】

【0105】

を有する、任意の先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0106】

実施形態１４：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、式（Ｂａ）の化合物

【0107】

【化8】

【0108】

であり、式中、
Ｒ^１は、－Ｏ（Ｃ_１～Ｃ_３アルキル）であり；
Ｒ^６は、任意選択で独立して１つまたは複数のＲ^Ｂで置換されたフェニルであり、Ｒ^Ｂは、－Ｏ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｏ－Ｃ_３～６シクロアルキル、－Ｏ－アリール、または－Ｏ－へテロアリールから選択され、各アルキル、シクロアルキル、アリール、またはへテロアリールは、任意選択で独立して１つまたは複数のハロゲンで置換されているか；
またはＣＢＰ／ｐ３００阻害剤は、式（Ｂｃ）の化合物

【0109】

【化9】

【0110】

であり、式中、
Ｒ^１は、－ＯＲ^５であり；
Ｒ^５は、－Ｃ_１～６アルキル、－Ｃ_３～８シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはへテロアリールであり；
Ｒ^６は、－ＯＨ、ハロゲン、オキソ、－ＮＯ_２、－ＣＮ、－ＮＨ２、－Ｃ_１～６アルキル、－Ｃ_３～８シクロアルキル、－Ｃ_４～８シクロアルケニル、ヘテロシクリル、アリール、スピロシクロアルキル、スピロヘテロシクリル、へテロアリール、－ＯＣ_３～６シクロアルキル、－Ｏアリール、－Ｏヘテロアリール、－（ＣＨ_２）ｎ－ＯＲ^８、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^８’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^８、または－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^８Ｒ^９、－ＮＨＣ_１～６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）２、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）ＳＯ_２Ｃ_１～６アルキル、－Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、または－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）であり、各アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、スピロシクロアルキル、スピロヘテロシクリル、へテロアリール、またはアリールは、任意選択で１つまたは複数のＲ^１０で置換されており；
Ｒ^７は、各出現において独立して、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＨ、－ＣＮ、－ＯＣ_１～６アルキル、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｈ（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｓ（Ｏ）_２（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｓ（Ｏ）_２ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルキ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１～６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）ＳＯ_２Ｃ_１～６アルキル、－Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ_２、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）、またはテトラゾールであり；
Ｒ^１０は、各出現において独立して、－Ｃ_１～６アルキル、－Ｃ_２～６アルケニル、－Ｃ_２～６アルキニル、－Ｃ_３～８シクロアルキル、－Ｃ_４～８シクロアルケニル、ヘテロシクリル、へテロアリール、アリール、－ＯＨ、ハロゲン、オキソ、－ＮＯ_２、－ＣＮ、－ＮＨ_２、－ＯＣ_１～６アルキル、－ＯＣ_３～６シクロアルキル、－Ｏアリール、－Ｏへテロアリール、－ＮＨＣ_１～６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｃ_１～６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルキル、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ_１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１～６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）ＳＯ２－Ｃ_１～６アルキル、－Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、または－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）であり、各アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、へテロアリール、またはアリールは、任意選択で１つまたは複数の－Ｒ^１２で置換されており；
Ｒ^１２は、各出現において独立してハロゲンであり；
ｍは、０～５の整数であり；
ｒは、０～５の整数である、
任意の先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0111】

実施形態１５：がんの進行緩徐は、動物における標的病変または非標的病変のＲＥＣＩＳＴ １．１．応答基準を使用して測定される、先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0112】

実施形態１６：がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である、任意の先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0113】

実施形態１７：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、実施形態１２に記載の式（Ｉ）の化合物であり、受容体チロシンキナーゼ阻害剤はＥＧＦＲ阻害剤であり、受容体チロシンキナーゼはＥＧＦＲであり、がんはＮＳＣＬＣであり、より好ましくはＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ突然変異を含み、より好ましくは受容体チロシンキナーゼ阻害剤はオシメルチニブである、先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0114】

実施形態１８：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、実施形態１３に記載の式（Ａ）の化合物、好ましくはＣＣＳ１４７７（ＣＡＳ ２２２２９４１－３７－７）であり、受容体チロシンキナーゼ阻害剤はＥＧＦＲ阻害剤であり、受容体チロシンキナーゼはＥＧＦＲであり、がんはＮＳＣＬＣであり、より好ましくはＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ突然変異を含み、より好ましくは受容体チロシンキナーゼ阻害剤はオシメルチニブである、先行する実施形態に記載の使用のためのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤もしくは組成物または方法。

【0115】

上記の実施形態１３に関して、式（Ａ）の化合物は、国際公開第２０１６１７０３２４号パンフレット、国際公開第２０１８０７３５８６号パンフレット、および国際公開第２０１９２０２３３２号パンフレットに記載されていることに留意されたい。すべての出願およびそれらの開示は、それらの全体が、特に式（Ａ）の化合物に関して、参照により本明細書に組み込まれる。

【0116】

別の実施形態では、動物のがんを治療するための方法であって、それを必要とする動物に、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤、ならびにＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＭＥＴ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＲＥＴ、ＮＴＲＫ１、およびＡＸＬ阻害剤からなる群から選択される受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤を投与することを含み、がんは、対応する受容体チロシンキナーゼまたはＫＲａｓまたはＢＲＡＦに変更を含み、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤単独は、がんの進行を緩徐させない、方法が提供される。

【0117】

別の実施形態では、組成物を用いてがんを治療するための方法であって、組成物は、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩、ならびにＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＭＥＴ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＲＥＴ、ＮＴＲＫ１、およびＡＸＬの阻害剤からなる群から選択される受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の相乗的組合せを含み、がんは、対応する受容体チロシンキナーゼまたはＫＲａｓまたはＢＲＡＦに変更を含み、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤単独はがんの進行を緩徐させない、方法が提供される。

【0118】

別の実施形態では、動物における、受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤がん療法に対する応答の持続時間を延長するための方法であって、がんを有する動物に、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤またはその薬学的に許容される塩を投与した場合のがん療法に対する応答の持続時間は、ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与の非存在下でのがん療法に対する応答の持続時間と比較して延長され、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＭＥＴ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＲＥＴ、ＮＴＲＫ１、およびＡＸＬからなる群から選択されるか、またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤である、方法が提供される。

【0119】

別の実施形態では、がん細胞の増殖を阻害するための方法であって、がん細胞に、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤、ならびにＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＭＥＴ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＲＥＴ、ＮＴＲＫ１、およびＡＸＬ阻害剤からなる群から選択される受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤を投与することを含み、がん細胞は、対応する受容体チロシンキナーゼまたはＫＲａｓまたはＢＲＡＦに変更を含み、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤単独は、がん細胞の増殖を阻害せず、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、キナーゼ阻害剤に対するがん細胞の耐性を防止するための有効量で投与される、方法が提供される。

【0120】

別の実施形態では、がん細胞において細胞死を誘導するための方法であって、がん細胞に、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤、ならびにＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＭＥＴ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＲＥＴ、ＮＴＲＫ１、およびＡＸＬ阻害剤からなる群から選択される受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤を投与することを含み、がん細胞は、対応する受容体チロシンキナーゼまたはＫＲａｓまたはＢＲＡＦに変更を含み、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤単独は、がん細胞において細胞死を誘導しない、方法が提供される。

【0121】

一実施形態では、受容体チロシンキナーゼに対する変更は、発がん性変更であってもよく、セクション４のこの実施形態での「発がん性変更」という用語は、細胞がん原遺伝子に対する遺伝子変化を指す場合がある。こうした遺伝子変化／変更の帰結は、細胞に増殖優位性を付与する可能性がある。一実施形態では、突然変異、遺伝子増幅、遺伝子融合、および／または染色体再編成の遺伝的機序は、ヒト新生物のがん遺伝子を活性化する可能性がある。

【0122】

別の実施形態では、発がん性変更は、ＥＧＦＲ－エクソン１９欠失、ＥＧＦＲ－Ｌ８５８Ｒ、ＥＧＦＲ－Ｔ７９０Ｍ、ＥＧＦＲ－Ｔ８５４Ａ、ＥＧＦＲ－Ｄ７６１Ｙ、ＥＧＦＲ－Ｌ７４７Ｓ、ＥＧＦＲ－Ｇ７９６Ｓ／Ｒ、ＥＧＦＲ－Ｌ７９２Ｆ／Ｈ、ＥＧＦＲ－Ｌ７１８Ｑ、ＥＧＦＲ－エクソン２０挿入、ＥＧＦＲ－Ｇ７１９Ｘ（Ｘは任意の他のアミノ酸）、ＥＧＦＲ－Ｌ８６１Ｘ、ＥＧＦＲ－Ｓ７６８Ｉ、またはＥＧＦＲ増幅を含む群から選択されるＥＧＦＲ遺伝子突然変異である。好ましい実施形態では、変更は、ＥＧＦＲ－Ｔ７９０Ｍである。別の実施形態では、がんはＮＳＣＬＣであり、変更は、ＥＧＦＲエクソン１９欠失、Ｌ８５８Ｒ、またはＴ７９０Ｍを含む突然変異である。

【0123】

別の実施形態では、発がん性変更は、ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ、ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ、ＮＣＯＡ４－ＲＥＴ、ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ、ＲＥＴ－Ｖ８０４Ｌ、ＲＥＴ－Ｌ７３０、ＲＥＴ－Ｅ７３２、ＲＥＴ－Ｖ７３８、ＲＥＴ－Ｇ８１０Ａ、ＲＥＴ－Ｙ８０６、ＲＥＴ－Ａ８０７、またはＲＥＴ－Ｓ９０４Ｆを含む群から選択されるＲＥＴ遺伝子突然変異または再編成である。

【0124】

別の実施形態では、発がん性変更は、ＨＥＲ２エクソン２０挿入または突然変異、およびＨＥＲ２－Ｃ８０５Ｓ、ＨＥＲ２ Ｔ７９８Ｍ、ＨＥＲ２ Ｌ８６９Ｒ、ＨＥＲ２ Ｇ３０９Ｅ、ＨＥＲ２ Ｓ３１０Ｆ、またはＨＥＲ２増幅を含む群から選択されるＨＥＲ２遺伝子突然変異である。

【0125】

別の実施形態では、発がん性変更は、ＣＤ７４－ＲＯＳ１、ＧＯＰＣ－ＲＯＳ１、ＥＺＲ－ＲＯＳ１、ＣＥＰ８５Ｌ－ＲＯＳ１、ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１、ＳＤＣ４－ＲＯＳ１、ＦＩＧ－ＲＯＳ１、ＴＰＭ３－ＲＯＳ１、ＬＲＩＧ３－ＲＯＳ１、ＫＤＥＬＲ２－ＲＯＳ１、ＣＣＤＣ６－ＲＯＳ１、ＴＭＥＭ１０６Ｂ－ＲＯＳ１、ＴＰＤ５２Ｌ１－ＲＯＳ１、ＣＬＴＣ－ＲＯＳ１、およびＬＩＭＡ１－ＲＯＳ１、またはＲＯＳ１ Ｇ２０３２Ｒ、Ｄ２０３３Ｎ、Ｓ１９８６Ｙ／Ｆ、Ｌ２０２６Ｍ、および／またはＬ１９５１Ｒを含む突然変異を含む群から選択されるＲＯＳ１遺伝子融合または再編成である。

【0126】

別の実施形態では、発がん性変更は、ＭＥＴ遺伝子増幅、ＭＥＴ Ｙ１２３０Ｃ、Ｄ１２２７Ｎ、Ｄ１２２８Ｖ、Ｙ１２４８ＨなどのＭＥＴ遺伝子突然変異、ならびにＭＥＴエクソン１４スキッピング、またはＴＰＲ－ＭＥＴ、ＣＬＩＰ２－ＭＥＴ、ＴＦＧ－ＭＥＴ融合、ＫＩＦ５Ｂ－ＭＥＴ融合を含む群から選択される遺伝子融合もしくは再編成である。

【0127】

別の実施形態では、発がん性変更は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１ＨまたはＬまたはＲ、Ｋ１１７Ｎを含む群から選択されるＫＲａｓ遺伝子突然変異である。

【0128】

別の実施形態では、発がん性変更は、ＮＳＣＬＣにおけるＥＭＬ４－ＡＬＫ、ＴＦＧ－ＡＬＫ、ＫＩＦ５Ｂ－ＡＬＫ、ＫＬＣ１－ＡＬＫ、ＳＴＲＮ－ＡＬＫ、ＥＭＬ４－ＡＬＫ、Ｃ２ｏｒｆ４４－ＡＬＫ、ＥＭＬ４－ＡＬＫ、ＴＰＭ－ＡＬＫ、ＶＣＬ－ＡＬＫ、ＴＰＭ３－ＡＬＫ、ＥＭＬ４－ＡＬＫ、またはＶＣＬ－ＡＬＫを含む群から選択されるＡＬＫ遺伝子突然変異または遺伝子融合または再編成である。

【0129】

別の実施形態では、発がん性変更は、Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋを含む群から選択されるＢＲＡＦ遺伝子突然変異である。

【0130】

別の実施形態では、発がん性変更は、ＴＰＭ３－ＮＴＲＫ１、ＥＴＶ６－ＮＴＲＫ３、ＴＰＭ３－ＮＴＲＫ１、ＴＰＲ－ＮＴＲＫ１、ＴＦＧ－ＮＴＲＫ１、ＰＰＬ－ＮＴＲＫ１、ＥＴＶ６－ＮＴＲＫ３、ＴＰＲ－ＮＴＲＫ１、ＭＰＲＩＰ－ＮＴＲＫ１、ＣＤ７４－ＮＴＲＫ１、ＳＱＳＴＭ１－ＮＴＲＫ１、ＴＲＩＭ２４－ＮＴＲＫ２、ＬＭＮＡ－ＮＴＲＫ、ＥＴＶ６－ＮＴＲＫ３、ＢＣＡＮ－ＮＴＲＫ１、ＥＴＶ６－ＮＴＲＫ３、ＡＭＬ、ＧＩＳＴ、ＮＦＡＳＣ－ＮＴＲＫ１、ＢＣＡＮ－ＮＴＲＫ１、ＡＧＢＬ４－ＮＴＲＫ２、ＶＣＬ－ＮＴＲＫ２、ＥＴＶ６－ＮＴＲＫ３、ＢＴＢＤ１－ＮＴＲＫ３、ＲＦＷＤ２－ＮＴＲＫ１、ＲＡＢＧＡＰ１Ｌ－ＮＴＲＫ１、ＴＰ５３－ＮＴＲＫ１、ＡＦＡＰ１－ＮＴＲＫ２、ＮＡＣＣ２－ＮＴＲＫ２、ＯＫＩ－ＮＴＲＫ２、ＰＡＮ３－ＮＴＲＫ２、またはＦ５８９Ｌ、Ｇ５９５Ｒ、Ｇ６６７Ｃ／Ｓ、Ａ６０８Ｄを含む群から選択されるＮＴＫＲ１遺伝子突然変異、またはＧ６２３Ｒ、Ｇ６９６Ａを含む群から選択されるＮＴＲＫ３遺伝子突然変異を含む群から選択されるＮＴＫＲ遺伝子融合または再編成である。

【0131】

別の実施形態では、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤である。別の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、ネラチニブ、バンデタニブ、ネシツムマブ、オシメルチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＡＰ２６１１３、ポジオチニブ、ＥＧＦＲ阻害剤（ＣＡＳ番号８７９１２７－０７－８）、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ－４阻害剤（ＣＡＳ番号８８１００１－１９－０）、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ－２阻害剤（ＣＡＳ番号１７９２４８６１－４）、ＥＧＦＲ阻害剤ＩＩ（ＢＩＢＸ１３８２、ＣＡＳ番号１９６６１２－９３－８）、ＥＧＦＲ阻害剤ＩＩＩ（ＣＡＳ番号７３３００９－４２－２）、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ－２／ＥｒｂＢ－４阻害剤ＩＩ（ＣＡＳ番号９４４３４１－５４－２）、またはＰＫＣβＩＩ／ＥＧＦＲ阻害剤（ＣＡＳ番号１４５９１５－６０－２）群から選択される。

【0132】

別の実施形態では、受容体チロシンキナーゼに対する変更は、ＥＧＦＲ遺伝子における突然変異である。

【0133】

別の実施形態では、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ＲＥＴ阻害剤である。別の実施形態では、ＲＥＴ阻害剤は、カボザンチニブ、バンデタニブ、レンバチニブ、アレクチニブ、アパチニブ、ポナチニブ、ＬＯＸＯ－２９２、ＢＬＵ－６６７、またはＲＸＤＸ－１０５を含む群から選択される。

【0134】

別の実施形態では、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ＨＥＲ２阻害剤である。別の実施形態では、ＨＥＲ２阻害剤は、トラスツズマブ、ヒアルロニダーゼ／トラスツズマブ ｆａｍ－トラスツムズマブデルクステカン、ａｄｏ－トラスツズマブエムタンシン、ラパチニブ、ネラチニブ、ペルツズマブ、ツカチニブ、ポジオチニブ、またはダコミチニブを含む群から選択される。

【0135】

別の実施形態では、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ＲＯＳ１阻害剤である。別の実施形態では、ＲＯＳ１阻害剤は、クリゾチニブ、セリチニブ、ブリガチニブ、ロルラチニブ、エトレクチニブ（Ｅｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）、カボザンチニブ、ＤＳ－６０５１ｂ、ＴＰＸ－０００５を含む群から選択される。

【0136】

別の実施形態では、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ＭＥＴ阻害剤である。別の実施形態では、ＭＥＴ阻害剤は、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ＭＧＣＤ２６５、ＡＭＧ２０８、アルチラチニブ、ゴルバチニブ、グレサンチニブ（ｇｌｅｓａｎｔｉｎｉｂ）、ホレチニブ、アブマチニブ（ａｖｕｍａｔｉｎｉｂ）、チバチニブ（ｔｉｖａｔｉｎｉｂ）、サボリチニブ、ＡＭＧ３３７、カプマチニブおよびテポチニブ、ＯＭＯ－１［ＪＮＪ３８８７７６１８］または抗ＭＥＴ抗体オナルツズマブおよびエミベツズマブ（ｅｍｉｂｅｔｕｚｕｍａｂ）［ＬＹ２８７５３５８］または抗ＨＧＦ抗体フィクラツズマブ（ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）［ＡＶ－２９９］およびリロツムマブ［ＡＭＧ１０２］を含む群から選択される。

【0137】

別の実施形態では、阻害剤は、ＫＲａｓ阻害剤である。別の実施形態では、ＫＲａｓ阻害剤は、ＡＭＧ５１０、ＭＲＴＸ８４９、ＪＮＪ－７４６９９１５７／ＡＲＳ－３２４８、ＢＩ１７０１９６３、ＢＡＹ－２９３、または「ＲＡＳ（ＯＮ）」阻害剤を含む群から選択される。

【0138】

別の実施形態では、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ＡＬＫ阻害剤である。別の実施形態では、ＡＬＫ阻害剤は、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ロラチニブ（Ｌｏｒａｔｉｎｉｂ）、またはブリガチニブを含む群から選択される。

【0139】

別の実施形態では、阻害剤は、ＢＲＡＦ阻害剤である。別の実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、エンコラフェニブ、または任意の非特異的ＲＡＦ阻害剤を含む群から選択される。

【0140】

別の実施形態では、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ＮＴＲＫ阻害剤である。別の実施形態では、ＮＴＲＫ阻害剤は、エントレクチニブ、ラロトレクチニブ（ＬＯＸＯ－１０１）、ＬＯＣＯ－１９５、ＤＳ－６０５１ｂ、カボザンチニブ、メレスチニブ、ＴＳＲ－０１１、ＰＬＸ７４８６、ＭＧＣＤ５１６、クリゾチニブ、レゴラフェニブ、ドビチニブ、レスタウルチニブ、ＢＭＳ－７５４８０７、ダヌセルチブ、ＥＮＭＤ－２０７６、ミドスタウリン、ＰＨＡ－８４８１２５ ＡＣ、ＢＭＳ－７７７６０７、アルトリラチニブ（ａｌｔｒｉｒａｔｉｎｉｂ）、ＡＺＤ７４５１、ＭＫ５１０８、ＰＦ－０３８１４７３５、ＳＮＳ－３１４、ホレチニブ、ニンテダニブ、ポナチニブ、ＯＮＯ－５３９０５５６、またはＴＰＸ－０００５を含む群から選択される。

【0141】

別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩、および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の組成物または組合せは、ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤単独あるいは受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤単独と比較して、がんの治療に相乗的である。セクション４の実施形態の状況で使用される場合、「相乗的」という用語は、薬物の総効果を各薬物の個々の効果の合計よりも大きくする、２つまたはそれよりも多くの薬物間の相互作用を指す。好ましい実施形態では、相乗効果は、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の組合せに対する、動物の奏効率の増加である。別の実施形態では、奏効率の増加は、がんの治療における有効性の増加として測定される。

【0142】

別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩、および受容体チロシンキナーゼまたはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の組成物または組合せにより提供される抗がん効果は、ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤あるいは受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の同じ容量による単剤療法により提供される抗がん効果よりも大きい。セクション４の実施形態の状況で使用される場合、「抗がん」という用語は、悪性またはがん性疾患の治療を指す。別の実施形態では、本発明は、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩、および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫｒａｓもしくはＢＲＡＦの組成物または組合せにより提供される抗がん効果は、単剤療法単独よりも少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも５倍大きい、または少なくとも１０倍大きい、使用のための組成物または方法を提供する。

【0143】

別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤またはその薬学的に許容される塩、および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の組成物または組合せは、受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤に対するがんの耐性のリスクを遅延または低減する。セクション４の実施形態の状況で使用される場合、「がんの耐性」という用語は、薬剤の有効性の低減を指し；より具体的には、この用語は、がん細胞による薬物耐性の発生を指すことができる。別の実施形態では、がんは、少なくとも３か月間、６か月間、９か月間、１２か月間、２４か月間、４８か月間、または６０か月間、受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤に対して耐性にならない。別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤に対するがん細胞の耐性を防止するための有効量で投与される。

【0144】

別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、ＣＢＰおよび／またはｐ３００のブロモドメインを阻害する。ｐ３００（ヒストンアセチルトランスフェラーゼｐ３００、Ｅ１Ａ結合タンパク質ｐ３００、Ｅ１Ａ関連タンパク質ｐ３００とも呼ばれる）およびＣＢＰ（ＣＲＥＢ結合タンパク質またはＣＲＥＢＢＰとしても知られている）は、２つの構造的に非常に類似した転写共活性化タンパク質である。

【0145】

セクション４の実施形態の状況で使用される場合、「ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤」という用語は、ＣＢＰブロモドメインおよび／またはｐ３００ブロモドメインに結合し、ＣＢＰおよび／またはｐ３００の生物学的活性または機能を阻害および／または低減させる化合物を指すとみなすことができる。一部の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、ＣＢＰブロモドメインおよび／またはｐ３００ブロモドメインとの接触および／または相互作用により、一次的に（例えば、単独で）ＣＢＰおよび／またはｐ３００に結合することができる。一部の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、ＣＢＰブロモドメインおよび／またはｐ３００ブロモドメイン、ならびに追加のＣＢＰおよび／またはｐ３００残基および／またはドメインとの接触および／または相互作用により、ＣＢＰおよび／またはｐ３００に結合することができる。一部の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、ＣＢＰおよび／またはｐ３００の生物学的活性を実質的または完全に阻害することができる。一部の実施形態では、生物学的活性は、クロマチン（例えば、ＤＮＡに付随したヒストン）および／または別のアセチル化タンパク質に対する、ＣＢＰおよび／またはｐ３００のブロモドメインの結合であってもよい。セクション４の実施形態の状況でのある特定の実施形態では、阻害剤は、約５０μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＩＣ５０または結合定数を有してもよい。一部の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、ＣＢＰブロモドメインに結合および阻害することができる。一部の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、ｐ３００ブロモドメインに結合および阻害することができる。一部の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、ＣＢＰ／ｐ３００のヒストンアセチルトランスフェラーゼ活性を阻害しなくてもよい。

【0146】

一実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、式（Ｉ）の化合物である。一実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、式（Ａ）の化合物、好ましくはＣＣＳ１４７７（ＣＡＳ ２２２２９４１－３７－７）である。別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、ＦＴ－７０５１である。別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物、式（Ａ）の化合物、好ましくはＣＣＳ１４７７、またはＦＴ－７０５１は、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、または２００ｍｇを含むリストから選択される濃度の１日用量の薬物である。別の実施形態では、ＣＣＳ１４７７は、週に２、３、４、５、６、または７日投与される。別の実施形態では、ＣＣＳ１４７７は、１日２回投与される。別の実施形態では、がん細胞への投与は、がん細胞を、ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤と接触させることを含む。

【0147】

別の実施形態では、投薬量は、患者の年齢、体重、および状態、ならびに投与経路を含む、様々な要因に依存する。１日投薬量は、幅広い範囲内で様々であってもよく、各々の特定の場合の個々の要件に合わせて調整されることになる。しかしながら、典型的には、化合物を単独で成体ヒトに投与する場合の各投与経路に適合させた投薬量は、０．０００１～５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、最も一般的には０．００１～１０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。このような投与量は、例えば１日１回～５回で投与することができる。静脈内注射の場合、好適な１日用量は、０．０００１～１ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０００１～０．１ｍｇ／ｋｇ体重であってもよい。１日投薬量は、単一投薬量として投与してもよく、または分割用量スケジュールに従って投与してもよい。

【0148】

別の実施形態では、がんの進行またはがん治療に対する応答の持続時間は、対象／動物における標的病変または非標的病変のＲＥＣＩＳＴ １．１．応答基準を使用して測定することができる。

【0149】

別の実施形態では、「がんの進行を緩徐させない」という用語は、セクション４の実施形態では、対象がいかなるＲＥＣＩＳＴ １．１臨床応答も達成していないことであると規定することができる。別の実施形態では、「がんの進行を緩徐させない」という用語は、セクション４の実施形態では、対象／動物がＲＥＣＩＳＴ １．１臨床応答を部分的に達成していないことであると規定することができる。別の実施形態では、「がんの進行を緩徐させない」という用語は、ＲＥＣＩＳＴ １．１に従って客観的奏効率がないことおよび／または無増悪生存期間が増加しないこととして測定される。別の実施形態では、「がんの進行を緩徐させない」という用語は、標的病変の最長直径の基線合計を基準として、標的病変の最長直径の合計の３０％未満の減少として測定される。

【0150】

ある特定の実施形態では、がんは、聴神経腫、急性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、急性ｔ細胞白血病、基底細胞癌、胆管癌、膀胱がん、脳がん、乳がん、気管支原性癌、子宮頸がん、軟骨肉腫、脊索腫、絨毛癌、慢性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、慢性骨髄性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、結腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、嚢胞腺癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、増殖異常性変化、胚性癌、子宮内膜がん、内皮肉腫、上衣腫、上皮癌、赤白血病、食道がん、エストロゲン受容体陽性乳がん、本態性血小板血症、ユーイング腫瘍、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、生殖細胞精巣がん、神経膠腫、神経膠芽腫、神経膠肉腫、重鎖病、頭頸部がん、血管芽腫、ヘパトーマ、肝細胞がん、ホルモン非感受性前立腺がん、平滑筋肉腫、白血病、脂肪肉腫、肺がん、リンパ管内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ芽球性白血病、リンパ腫、Ｔ細胞またはＢ細胞起源のリンパ性悪性腫瘍、髄様癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄性白血病、骨髄腫、粘液肉腫、神経芽腫、ＮＵＴ正中癌（ＮＭＣ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、乏突起膠腫、口腔がん、骨原性肉腫、卵巣がん、膵臓がん、乳頭腺癌、乳頭癌、松果体腫、真性赤血球増加症、前立腺がん、直腸がん、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、皮脂腺癌、セミノーマ、皮膚がん、小細胞肺癌、固形腫瘍（癌および肉腫）、小細胞肺がん、胃がん、扁平上皮がん、滑膜腫、汗腺癌、甲状腺がん、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、精巣腫瘍、子宮がん、およびウィルムス腫瘍から選択される。ある特定の実施形態では、がんは、黒色腫、ＮＳＣＬＣ、腎臓がん、卵巣がん、結腸がん、膵臓がん、肝細胞がん、または乳がんである。本方法のいずれかのある特定の実施形態では、がんは、肺がん、乳がん、膵臓がん、結腸直腸がん、および／または黒色腫である。ある特定の実施形態では、がんは肺である。ある特定の実施形態では、肺がんは、非小細胞肺がんＮＳＣＬＣである。ある特定の実施形態では、がんは乳がんである。ある特定の実施形態では、がんは黒色腫である。ある特定の実施形態では、がんは結腸直腸である。

【0151】

別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤は、単一組成物として同時に動物に投与される。別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤は、別々に動物に投与される。別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤は、同時的に動物に投与される。別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の前に動物に投与される。別の実施形態では、動物はヒトである。

【0152】

一実施形態では、作用剤、例えば医薬製剤の「有効量」という用語は、所望の療法結果または予防結果を達成するために必要な投薬量および期間で有効な量を指すことができる。一部の実施形態では、有効量は、（ｉ）特定の疾患、状態、もしくは障害を治療するか、（ｉｉ）特定の疾患、状態、もしくは障害の１つもしくは複数の症状を減弱、改善、もしくは排除するか、または（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態、もしくは障害の１つもしくは複数の症状の発症を予防もしくは遅延させる、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の量を指す。一部の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤の有効量は、がん細胞の数を低減させることができ；腫瘍のサイズを低減させることができ；末梢器官へのがん細胞の浸潤を阻害する（つまり、ある程度緩徐させ、好ましくは停止させる）ことができ；腫瘍転移を阻害する（つまり、ある程度緩徐させ、好ましくは停止させる）ことができ；腫瘍増殖をある程度阻害することができ；および／またはがんに関連付けられる症状の１つもしくは複数をある程度軽減することができる。がん療法の場合、有効性は、例えば、疾患進行停止時間（ＴＴＰ）を評価することおよび／または奏効率（ＲＲ）を決定することにより測定することができる。一部の実施形態では、有効量は、薬物抵抗性または薬物抵抗性持続性がん細胞の活性または数を著しく減少させるのに十分な、本明細書に記載のＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤実体の量である。

【0153】

一実施形態では、本開示の化合物は、がんを治療するための放射線療法または別の化学療法剤と併用して、ヒトまたは動物患者に投与してもよい。別の実施形態では、ＣＢＰ／Ｐ３００阻害剤またはＲＴＫ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤が放射線療法と同時的にまたは逐次的に投与されるか；またはがんを治療するための１つまたは複数の別の化学療法剤との組合せ調製物として同時的にまたは逐次的に投与される組合せ療法を提供することができる。このまたは各々他の化学療法剤は、典型的には、治療されるがんのタイプに従来から使用されている作用剤だろう。組合せのための化学療法剤のクラスは、一実施形態では、例えば、前立腺がんアンドロゲン受容体アンタゴニストの、例えばエンザルタミド、およびＣＹＰ１７Ａ１（１７ａ－ヒドロキシラーゼ／Ｃ１７，２０リアーゼ）の阻害剤、例えばアビラテロンの治療のためであってもよい。他の実施形態では、組合せ療法での他の化学療法剤は、ドセタキセルを含んでいてもよい。

【0154】

一実施形態では、「組合せ」という用語は、セクション４では、同時投与、別々の投与、または逐次投与を指すことができる。投与が逐次的または別々である場合、第２の成分の投与の遅延は、組合せの有益な効果を喪失させるようなものであってはならない。

【0155】

別の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤またはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤に対する応答は、持続的応答である。一実施形態では、「持続的応答」は、治療の中止後の腫瘍増殖の低減に対する持続的効果を指すことができる。例えば、腫瘍サイズは、投与段階の開始時のサイズと比較して、同じかまたはより小さいままであり得る。

【0156】

別の実施形態では、「治療」という用語（および「治療する」または「治療すること」などの変化形）は、治療されている個体または細胞の自然な経過を変更することを試みる臨床的介入を指すことができ、予防のためにまたは臨床病理の過程中のいずれでも実施することができる。治療の望ましい効果としては、疾患の発症または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的帰結の縮小、疾患の状態の安定化（つまり、悪化しないこと）、転移の予防、疾患進行速度の減少、疾患状態の改善または緩和、治療を受けていない場合の予想生存期間と比較した生存期間の延長、および寛解または予後向上の１つまたは複数を挙げることができる。ある特定の実施形態では、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤および受容体チロシンキナーゼまたはＫＲａｓもしくはＢＲＡＦ阻害剤を使用して、疾患もしくは障害の発症を遅延させるか、または疾患もしくは障害の進行を緩徐させることができる。一実施形態では、治療を必要とする個体としては、状態もしくは障害をすでに有するもの、ならびに状態もしくは障害を有し易いもの（例えば、遺伝子突然変異または遺伝子もしくはタンパク質の異常発現により）、または状態もしくは障害を予防しようとするものが挙げられる。

【0157】

一実施形態では、「遅延」という用語は、疾患（がんなど）の発症または疾患の耐性を先送りする、妨げる、緩徐させる、遅らせる、安定させる、および／または延期することを指すことができる。この遅延は、疾患の履歴および／または治療されている個体に応じて、様々な時間の長さであり得る。当業者であれば明らかであるように、十分なまたは著しい遅延は、事実上、個体が疾患を発症しないという点で予防を包含することができる。例えば、転移の発症などの末期がんを遅延させることができる。

【0158】

５． 実施例
以下の実施例は単なる例示であり、本発明をさらに説明するためのものである。こうした実施例は、本発明をそれらに限定するものではないと解釈されるものとする。

【0159】

化合物００００３（化合物Ｂ）、００００４（化合物Ａ）、０００３０、０００７１、および化合物Ｃの調製を以下に記載する。参考になると思われる場合は、中間体化合物および／または上述の化合物に近い化合物の合成経路が示されている。

【0160】

基本的実験方法
ＬＣＭＳ法：
方法Ａ：装置：Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ 二連ポンプ：Ｇ１３１２Ｂ、脱気器；オートサンプラー、ＣｏｌＣｏｍ、ＤＡＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１３１５Ｄ、２２０～３２０ｎｍ、ＭＳＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣ／ＭＳＤ Ｇ６１３０Ｂ ＥＳＩ、ｐｏｓ／ｎｅｇ １００～８００、ＥＬＳＤ Ａｌｌｔｅｃｈ ３３００ ガス流速１．５ｍＬ／分、ガス温度：４０℃；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）Ｃ１８、３０×２．１ｍｍ、３．５μ、温度：３５℃、流速：１ｍＬ／分、勾配：ｔ_０＝５％Ａ、ｔ_１．６分＝９８％Ａ，ｔ_３分＝９８％Ａ、ポストタイム（Ｐｏｓｔｔｉｍｅ）：１．３分、溶出液Ａ：アセトニトリル中０．１％ギ酸、溶出液Ｂ：水中０．１％ギ酸）。

【0161】

方法Ｂ：装置：Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ 二連ポンプ：Ｇ１３１２Ｂ、脱気器；オートサンプラー、ＣｏｌＣｏｍ、ＤＡＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１３１５Ｄ、２２０～３２０ｎｍ、ＭＳＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣ／ＭＳＤ Ｇ６１３０Ｂ ＥＳＩ、ｐｏｓ／ｎｅｇ １００～８００、ＥＬＳＤ Ａｌｌｔｅｃｈ ３３００ ガス流速１．５ｍＬ／分、ガス温度：４０℃；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、３．５μ、温度：３５℃、流速：０．８ｍＬ／分、勾配：ｔ_０＝５％Ａ、ｔ_３．５分＝９８％Ａ，ｔ_６分＝９８％Ａ、ポストタイム：２分；溶出液Ａ：アセトニトリル中０．１％ギ酸、溶出液Ｂ：水中０．１％ギ酸）。

【0162】

方法Ｃ：装置：Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ 二連ポンプ：Ｇ１３１２Ｂ、脱気器；オートサンプラー、ＣｏｌＣｏｍ、ＤＡＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１３１５Ｃ、２２０～３２０ｎｍ、ＭＳＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣ／ＭＳＤ Ｇ６１３０Ｂ ＥＳＩ、ｐｏｓ／ｎｅｇ １００～８００；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ Ｃ１８、３０×２．１ｍｍ、３．５μ、温度：２５℃、流速：１ｍＬ／分、勾配：ｔ_０＝５％Ａ、ｔ_１．６分＝９８％Ａ，ｔ_３分＝９８％Ａ、ポストタイム：１．３分、溶出液Ａ：９５％アセトニトリル＋５％水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム、溶出液Ｂ：水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ９．５）。

【0163】

方法Ｄ：装置：Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ 二連ポンプ：Ｇ１３１２Ｂ、脱気器；オートサンプラー、ＣｏｌＣｏｍ、ＤＡＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１３１５Ｃ、２２０～３２０ｎｍ、ＭＳＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣ／ＭＳＤ Ｇ６１３０Ｂ ＥＳＩ、ｐｏｓ／ｎｅｇ １００～８００；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、３．５μ、温度：２５℃、流速：０．８ｍＬ／分、勾配：ｔ_０＝５％Ａ、ｔ_３．５分＝９８％Ａ，ｔ_６分＝９８％Ａ、ポストタイム：２分、溶出液Ａ：９５％アセトニトリル中＋５％水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム、溶出液Ｂ：水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ９．５）。

【0164】

ＵＰＬＣ法：
方法Ａ：装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ；二連ポンプ：Ｇ７１２０Ａ、マルチサンプラー、ＶＴＣ、ＤＡＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ７１１７Ｂ、２２０～３２０ｎｍ、ＰＤＡ：２１０～３２０ｎｍ、ＭＳＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ６１３５Ｂ ＥＳＩ、ｐｏｓ／ｎｅｇ １００～１０００、ＥＬＳＤ Ｇ７１０２Ａ Ｅｖａｐ ４０℃、Ｎｅｂ ５０℃、ガス流速１．６ｍＬ／分、カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、２．５μｍ、温度：２５℃、流速：０．６ｍＬ／分、勾配：ｔ_０＝５％Ｂ、ｔ_２分＝９８％Ｂ，ｔ_２．７分＝９８％Ｂ、ポストタイム：０．３分、溶出液Ａ：水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ９．５）、溶出液Ｂ：アセトニトリル）。

【0165】

方法Ｂ：装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ；二連ポンプ：Ｇ７１２０Ａ、マルチサンプラー、ＶＴＣ、ＤＡＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ７１１７Ｂ、２２０～３２０ｎｍ、ＰＤＡ：２１０～３２０ｎｍ、ＭＳＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ６１３５Ｂ ＥＳＩ、ｐｏｓ／ｎｅｇ １００～１０００、ＥＬＳＤ Ｇ７１０２Ａ：Ｅｖａｐ ４０℃、Ｎｅｂ ４０℃、ガス流速１．６ｍＬ／分、カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、２．５μｍ、温度：４０℃、流速：０．６ｍＬ／分、勾配：ｔ_０＝５％Ｂ、ｔ_２分＝９８％Ｂ，ｔ_２．７分＝９８％Ｂ、ポストタイム：０．３分、溶出液Ａ：水中０．１％ギ酸、溶出液Ｂ：アセトニトリル中０．１％ギ酸）。

【0166】

ＧＣＭＳ法：
方法Ａ：機器：ＧＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ ６８９０Ｎ Ｇ１５３０ＮおよびＭＳ：ＭＳＤ ５９７３ Ｇ２５７７Ａ、ＥＩ－ポジティブ、検出温度：２８０℃ 質量範囲：５０～５５０；カラム：ＲＸｉ－５ＭＳ ２０ｍ，ＩＤ １８０μｍ，ｄｆ ０．１８μｍ；平均速度：５０ｃｍ／秒；注入容積：１μｌ；注入器温度：２５０℃；分割比：１００／１；キャリアガス：Ｈｅ；初期温度：１００℃；初期時間：１．５分；溶媒遅延：１．０分；速度 ７５℃／分；最終温度 ２５０℃；保持時間 ４．３分。

【0167】

方法Ｂ：機器：ＧＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ ６８９０Ｎ Ｇ１５３０Ｎ、ＦＩＤ：検出温度：３００℃およびＭＳ：ＭＳＤ ５９７３ Ｇ２５７７Ａ、ＥＩ－ポジティブ、検出温度：２８０℃ 質量範囲：５０～５５０；カラム：Ｒｅｓｔｅｋ ＲＸｉ－５ＭＳ ２０ｍ，ＩＤ １８０μｍ，ｄｆ ０．１８μｍ；平均速度：５０ｃｍ／秒；注入容積：１μｌ；注入器温度：２５０℃；分割比：２０／１；キャリアガス：Ｈｅ；初期温度：６０℃；初期時間：１．５分；溶媒遅延：１．３分；速度 ５０℃／分；最終温度 ２５０℃；保持時間 ３．５分。

【0168】

方法Ｃ：機器：ＧＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ ６８９０Ｎ Ｇ１５３０Ｎ、ＦＩＤ：検出温度：３００℃およびＭＳ：ＭＳＤ ５９７３ Ｇ２５７７Ａ、ＥＩ－ポジティブ、検出温度：２８０℃ 質量範囲：５０～５５０；カラム：Ｒｅｓｔｅｋ ＲＸｉ－５ＭＳ ２０ｍ，ＩＤ １８０μｍ，ｄｆ ０．１８μｍ；平均速度：５０ｃｍ／秒；注入容積：１μｌ；注入器温度：２５０℃；分割比：２０／１；キャリアガス：Ｈｅ；初期温度：１００℃；初期時間：１．５分；溶媒遅延：１．３分；速度 ７５℃／分；最終温度 ２５０℃；保持時間 ４．５分。

【0169】

キラルＬＣ：
方法Ａ：（装置：Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ 四連ポンプ：Ｇ１３１１Ｃ、オートサンプラー、ＣｏｌＣｏｍ、ＤＡＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ４２１２Ｂ、２２０～３２０ｎｍ、カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ（登録商標）ＯＤ－Ｈ ２５０×４．６ｍｍ、温度：２５℃、流速：１ｍＬ／分、定組成：９０／１０、時間：３０分、溶出液Ａ：ヘプタン、溶出液Ｂ：エタノール）。

【0170】

分取逆相クロマトグラフィー：
方法Ａ：機器タイプ：Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（商標）分取ＭＰＬＣ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＬＵＮＡ Ｃ１８（１５０×２５ｍｍ、１０μ）；流速：４０ｍＬ／分；カラム温度：室温；溶出液Ａ：水中０．１％（容積／容積）ギ酸、溶出液Ｂ：アセトニトリル中０．１％（容積／容積）ギ酸；勾配：ｔ＝０分 ５％Ｂ、ｔ＝１分 ５％Ｂ、ｔ＝２分 ３０％Ｂ、ｔ＝１７分 ７０％Ｂ、ｔ＝１８分 １００％Ｂ、ｔ＝２３分 １００％Ｂ；検出ＵＶ：２２０／２５４ｎｍ。適切な画分を一緒にして凍結乾燥した。

【0171】

方法Ｂ：機器タイプ：Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（商標）分取ＭＰＬＣ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ Ｃ１８（１４５×２５ｍｍ、１０μ）；流速：４０ｍＬ／分；カラム温度：室温；溶出液Ａ：水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ＝９．０）；溶出液Ｂ：９９％アセトニトリル＋１％水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム；勾配：ｔ＝０分 ５％Ｂ、ｔ＝１分 ５％Ｂ、ｔ＝２分 ３０％Ｂ、ｔ＝１７分 ７０％Ｂ、ｔ＝１８分 １００％Ｂ、ｔ＝２３分 １００％Ｂ；検出ＵＶ：２２０／２５４ｎｍ。適切な画分を一緒にして凍結乾燥した。

【0172】

キラル（分取）ＳＦＣ
方法Ａ：（カラム：ＳＦＣ機器モジュール：Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒｅｐ１００ｑ ＳＦＣシステム、ＰＤＡ：Ｗａｔｅｒｓ２９９８、フラクションコレクター：Ｗａｔｅｒｓ２７６７；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ Ａｍｙｌｏｓｅ－１（２５０×２０ｍｍ、５μｍ）、カラム温度：３５℃；流速：１００ｍＬ／分；ＡＢＰＲ：１７０ｂａｒ；溶出剤Ａ：ＣＯ_２、溶出液Ｂ：メタノール中２０ｍＭアンモニア；定組成１０％Ｂ、時間：３０分、検出：ＰＤＡ（２１０～３２０ｎｍ）；ＰＤＡに基づく分画収集）。

【0173】

方法Ｂ：（カラム：ＳＦＣ機器モジュール：Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒｅｐ１００ｑ ＳＦＣシステム、ＰＤＡ：Ｗａｔｅｒｓ２９９８、フラクションコレクター：Ｗａｔｅｒｓ２７６７；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ Ｃｅｌｕｌｏｓｅ－１（２５０×２０ｍｍ、５μｍ）、カラム温度：３５℃；流速：１００ｍＬ／分；ＡＢＰＲ：１７０ｂａｒ；溶出剤Ａ：ＣＯ_２、溶出液Ｂ：メタノール中２０ｍＭアンモニア；定組成１０％Ｂ、時間：３０分、検出：ＰＤＡ（２１０～３２０ｎｍ）；ＰＤＡに基づく分画収集）。

【0174】

方法Ｃ：（カラム：ＳＦＣ機器モジュール：Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒｅｐ１００ｑ ＳＦＣシステム、ＰＤＡ：Ｗａｔｅｒｓ２９９８；カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ（１００×４．６ｍｍ、５μｍ）、カラム温度：３５℃；流速：２．５ｍＬ／分；ＡＢＰＲ：１７０ｂａｒ；溶出剤Ａ：ＣＯ_２、溶出液Ｂ：２０ｍＭアンモニアを有するメタノール；ｔ＝０分 ５％Ｂ、ｔ＝５分 ５０％Ｂ、ｔ＝６分 ５０％Ｂ、検出：ＰＤＡ（２１０～３２０ｎｍ）；ＰＤＡに基づく分画収集）。

【0175】

方法Ｄ：（カラム：ＳＦＣ機器モジュール：Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒｅｐ１００ｑ ＳＦＣＵＶ／ＭＳ ｄｉｒｅｃｔｅｄシステム；Ｗａｔｅｒｓ２９９８フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器；Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＱＤａ ＭＳ検出器；Ｗａｔｅｒｓ２７６７試料管理装置；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｔｏｒｕｓ２－ＰＩＣ １３０Ａ ＯＢＤ（２５０×１９ｍｍ、５μｍ）；カラム温度：３５℃；流速：７０ｍＬ／分；ＡＢＰＲ：１２０ｂａｒ；溶出剤Ａ：ＣＯ２、溶出液Ｂ：メタノール中２０ｍＭアンモニア；線形勾配：ｔ＝０分 １０％Ｂ、ｔ＝４分 ５０％Ｂ、ｔ＝６分 ５０％Ｂ、検出：ＰＤＡ（２１０～４００ｎｍ）；ＰＤＡ ＴＩＣに基づく分画収集）。

【0176】

出発物質
標準試薬および溶媒は、最も高い商業的純度のものを入手し、そのまま使用した。購入した具体的な試薬を以下に記載する。

【0177】

【表1-1】

【0178】

【表1-2】

【0179】

重要な中間体の合成手順
中間体１：１－（５－（４，６－ジクロロピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン

【0180】

【化10】

【0181】

１Ｌ鋼製オートクレーブ中の６－メチルニコチン酸メチル（１００ｇ、６６２ｍｍｏｌ）の酢酸（２５０ｍＬ）溶液に、白金（ＩＶ）酸化物（０．５ｇ、２．２０２ｍｍｏｌ）を添加し、その後６０℃の１０ｂａｒ水素雰囲気下で反応混合物を撹拌した。迅速な水素消費が観察された。水素消費が停止し還元が完了するまで、オートクレーブを数回再充填した。混合物を室温に冷却し、セライトで濾過した。濾過液を濃縮して、メチル６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセテートをジアステレオ異性体の混合物（１４３．８ｇ、１００％）として得、それを次のステップでそのまま使用した。ＧＣＭＳ（方法Ａ）：ｔＲ ２．４０（８０％）および２．４８分（２０％）、１００％、ＭＳ（ＥＩ）１５７．１（Ｍ）＋、１４２．１（Ｍ－Ｍｅ）＋。水（５００ｍＬ）およびジクロロメタン（５００ｍＬ）の混合物中のメチル６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセテート（５３ｇ、２４４ｍｍｏｌ）の溶液に、重炭酸ナトリウム（８２ｇ、９７６ｍｍｏｌ）を注意深く添加し（泡立ち！！）、その後無水酢酸（２９．９ｇ、２９３ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。反応混合物を、室温で２時間撹拌した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、メチル１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレート（４９ｇ、１００％）を黄色油状物として得た。メタノール中アンモニア（７Ｎ、５００ｍＬ、３．５ｍｏｌ）中のメチル１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレート（４９ｇ、２４６ｍｍｏｌ）の溶液を、圧力容器中で４０時間１２０℃にて撹拌した。混合物を室温に冷却し、濃縮して、淡黄色固形物を得た。この固形物をジクロロメタンに溶解し、シリカ栓で濾過した。濾過液を濃縮して、１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキサミドを白色に近い固形物として得、それを次のステップでそのまま使用した。前ステップに由来する１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキサミド（２６６ｍｍｏｌ）の、オキシ塩化リン（５００ｍＬ、５．３７ｍｏｌ）溶液を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を減圧下で蒸発させて、濃縮油状物を得た。この油状物をトルエンと共に２回共蒸発させ、冷却飽和炭酸ナトリウム（泡立ち！）および酢酸エチル間で注意深く分割した。有機層を塩基性水層から分離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、生成物を、静置時に固化した濃縮油状物として得た。粗産物を、ジクロロメタンに溶解し、シリカ栓で濾過した（ジクロロメタン中１０％メタノールで溶出した）。これにより、１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボニトリル（２８ｇ、６３％）を、静置時に固化した油状物として得た。ＧＣＭＳ（方法Ａ）：ｔＲ ３．７８（６３％）および３．８９分（３７８％）、１００％、ＭＳ（ＥＩ）１６６．１（Ｍ）＋。１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボニトリル（２３ｇ、１３８ｍｍｏｌ）のエタノール（３００ｍｌ）溶液に、ヒドロキシルアミン溶液（５０％水溶液、２５．４ｍＬ、４１５ｍｍｏｌ）を添加し、その後反応混合物を１６時間還流しながら撹拌した。反応混合物を濃縮し、酢酸エチルと共に３回共蒸発させて乾燥し、１－アセチル－Ｎ－ヒドロキシ－６－メチルピペリジン－３－カルボキシミドアミドを粘着性固形物として得た。ＬＣＭＳ（方法Ａ）：ｔＲ ０．１３分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）２００．２（Ｍ＋Ｈ）＋。収率が定量的であると仮定して、生成物を、次のステップでそのまま使用した。前ステップに由来する１－アセチル－Ｎ－ヒドロキシ－６－メチルピペリジン－３－カルボキシミドアミド（２３ｇ、１３８ｍｍｏｌ）のエタノール（５００ｍＬ）溶液に、酢酸（２３．７９ｍＬ、４１６ｍｍｏｌ）および水（５ｍＬ）中５０％Ｒａｎｅｙ（登録商標）－ニッケルスラリーを添加し、その後反応混合物を、水素雰囲気下で２日間５０℃にて撹拌した。混合物をセライトで濾過し、ある程度の量のエタノールで洗浄し、濃縮して、７０ｇの濃縮油状物を得た。これを、酢酸エチルと共に２回共蒸発させ、減圧下でよく乾燥して、１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシミドアミドアセテート（３３ｇ、９８％）を緑黄色油状物を得、それを次のステップでそのまま使用した。ＬＣＭＳ（方法Ａ）：ｔＲ ０．１４分、９０％、ＭＳ（ＥＳＩ）１８４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。ナトリウム（１８．１４ｇ、７８９ｍｍｏｌ）の窒素雰囲気下乾燥メタノール（６０ｍＬ）溶液に、１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシミドアミドアセテート（３２ｇ、１３２ｍｍｏｌ）およびマロン酸ジメチル（２６．１ｇ、１９７ｍｍｏｌ）を添加し、その後反応混合物を５０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、水（３００ｍＬ）に入れ、６Ｎ塩酸を使用してｐＨ４まで酸性化し、沈殿させた。沈殿物を濾過し、１－（５－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オンを黄色固形物（１０．４ｇ、３１％）として得、それを次のステップでそのまま使用した。オキシ塩化リン（２００ｍＬ、２１４６ｍｍｏｌ）中の１－（５－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（１０．４ｇ、４１．４ｍｍｏｌ）の懸濁物を、５０℃で撹拌した。固形物は、ゆっくりと、およそ３時間後に溶解した。５時間後、反応合物を減圧下で濃縮し、トルエンと共に２回共蒸発させた。残留油状物を、氷で注意深くクエンチし、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で中和し、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して、１－（５－（４，６－ジクロロピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（中間体１、６．８ｇ、５７％）を、静置時に固化した黄色油状物として得た。ＬＣＭＳ（方法Ａ）：ｔＲ １．８８分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）２８８．１（Ｍ＋Ｈ）＋。

【0182】

中間体２：１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４，６－ジクロロピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン

【0183】

【化11】

【0184】

Ｎ－アセチル－Ｄ－ロイシン（１ｋｇ、５．７７ｍｏｌ）のエタノール（１．５Ｌ）溶液に、メチル６－メチルピペリジン－３－カルボキシレート（９３４ｇ、２．３８ｍｏｌ、中間体１の段落にて調製）の酢酸エチル（３Ｌ）溶液を添加し、混合物を４０℃に加熱した。得られた溶液を、１６時間かけて室温に到達させた。その間に沈殿が生じた。沈殿物を濾過し、ジエチルエーテル（５００ｍＬ）で洗浄し、空気乾燥して、粗メチル（３Ｒ，６Ｓ）－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセチル－Ｄ－ロイシネート（２８７ｇ、３４％）を白色固形物として得た。粗メチル（３Ｒ，６Ｓ）－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセチル－Ｄ－ロイシネート（２８７ｇ、８６９ｍｍｏｌ）を、エタノールおよび酢酸エチル１：２の高温混合物（１Ｌ）から結晶化させた。沈殿物を濾過し、濾過ケーキを、ジエチルエーテルおよびｎ－ペンタン１：１の混合物（５００ｍＬ）中ですり潰した。沈殿物を濾過し、空気乾燥して、メチル（３Ｒ，６Ｓ）－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセチル－Ｄ－ロイシネート（１２８ｇ、４４％）を白色固形物として得た。メチル（３Ｒ，６Ｓ）－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセチル－Ｄ－ロイシネート（１２８ｇ、３８７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１Ｌ）溶液に、飽和炭酸ナトリウム溶液（１Ｌ）を添加した。２相系を１０分間激しく撹拌し、層を分離した。有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して清澄溶液を得た。次に、トリエチルアミン（６５ｍＬ、４６５ｍｍｏｌ）および無水酢酸（４４ｍＬ、４６５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、メチル（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレート（９３ｇ）を淡黄色固形物として得た。オートクレーブに、メタノール中７Ｎアンモニア（６００ｍＬ、４２００ｍｍｏｌ）中のメチル（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレート（９３ｇ、３８７ｍｍｏｌ）を投入し、３日間６０℃に加熱した。混合物を濃縮して、（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキサミド（１０２ｇ）を淡黄色油状物として得た。収率が定量的であると仮定して、生成物を、次のステップでそのまま使用した。キラルＬＣ（方法Ａ）ｔＲ＝１２．３５分、＞９８％ｅｅ。（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキサミド（５０ｇ、２７１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５００ｍＬ）溶液に、トリエチルオキソニウムテトラフルオロボレート（７７ｇ、４０７ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加し、混合物を室温で４時間撹拌した。メタノール中７Ｎのアンモニア（２００ｍｌ、９．１５ｍｏｌ）をゆっくりと添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮して、（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシミドアミド（５０ｇ）をピンク色固形物として得、それを次のステップでそのまま使用した。メタノール中５．４Ｍナトリウムメトキシド（９９ｍＬ、５３５ｍｍｏｌ）のメタノール（２００ｍＬ）溶液に、メタノール（４００ｍＬ）およびマロン酸ジメチル（６１．４ｍＬ、５３５ｍｍｏｌ）中の（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシミドアミド（４９ｇ、２６７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、５０℃に加熱し、２４時間撹拌した。混合物を、濃塩酸で酸性化し（約ｐＨ３）、より少ない容積に濃縮した。残留物を、シリカで濾過し（ジクロロメタン中２０％メタノール）、濃縮してオレンジ色油状物を得た。粗生成物を、シリカカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０％～２０％のメタノール）で精製して、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（１２ｇ、１７％）を無色ゴム状物として得た。ＬＣＭＳ（方法Ｃ）：ｔＲ ０．１７分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）２５２．１（Ｍ＋Ｈ）＋。１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（１２ｇ、４７．８ｍｍｏｌ）のオキシ塩化リン（８０ｍＬ、８５８ｍｍｏｌ）溶液を、６０℃で２４時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、トルエンと共に２回共蒸発させて、黄色油状物を得た。油状物を、酢酸エチルに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。水性層を、酢酸エチルで２回抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して黄色油状物を得た。油状物を、シリカカラムクロマトグラフィー（トルエン中０％～２０％のテトラヒドロフラン）で精製して、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４，６－ジクロロピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（中間体２、１．５ｇ、１１％）を無色ゴム状物として得た。ＬＣＭＳ（方法Ｂ）：ｔＲ ３．３４分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）２８８．０（Ｍ＋Ｈ）＋；キラルＵＰＬＣ（方法：Ａ）ｔＲ ２．５４分、＞９５％ｅｅおよびｄｅ。

【0185】

中間体３：１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４－クロロ－６－（ピラジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オンの合成

【0186】

【化12】

【0187】

１Ｌ鋼製オートクレーブ中の６－メチルニコチン酸メチル（１００ｇ、６６２ｍｍｏｌ）の酢酸（２５０ｍＬ）溶液に、白金（ＩＶ）酸化物（０．５ｇ、２．２０２ｍｍｏｌ）を添加し、その後反応混合物を、６０℃の１０ｂａｒ水素雰囲気下で撹拌した。迅速な水素消費が観察された。水素消費が停止するまで、オートクレーブを数回再充填した。混合物を室温に冷却し、セライトで濾過した。濾過液を注意深く濃縮して、メチル６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセテートをジアステレオ異性体の混合物（１４３．８ｇ、１００％）として得、それを次のステップでそのまま使用した。ＧＣＭＳ（方法Ａ）：ｔ_Ｒ ２．４０（８０％）および２．４８分（２０％）、１００％、ＭＳ（ＥＩ）１５７．１（Ｍ）^＋。ジアステレオ異性体の混合物としてのメチル６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセテート（２．１ｋｇ、９９２４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（４Ｌ）で希釈し、４Ｍ水酸化ナトリウム溶液を、約ｐＨ９になるまでゆっくりと添加した。層を分離し、水性層を、ジクロロメタンで２回抽出した（各抽出後に、水性層を、約ｐＨ９になるまで４Ｍ水酸化ナトリウム溶液で再塩基性化した）。一緒にした有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥し、より少ない容積（約２Ｌ）へと濃縮して（３５℃、４５０ｍｂａｒ）、メチル６－メチルピペリジン－３－カルボキシレート（２．８ｋｇ、８９０５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中約５０％の黄色溶液として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 回転異性体の混合物) δ 5.10 (s,.3H), 3.63 (s, 1H), 3.49 - 3.42 (m, 2.2H), 3.41 - 3.34 (m, 0.8H), 3.18 - 3.10 (m, 0.8H), 3.09 - 3.03 (m, 0.2H), 2.64 - 2.54 (m, 0.8H), 2.53 - 2.34 (m, 1.2H), 2.30 - 2.20 (m, 1H), 1.95 - 1.76 (m, 1H), 1.53 - 1.36 (m, 1H), 1.35 - 1.21 (m, 1H), 1.04 - 0.90 (m, 1H), 0.89 - 0.84 (m, 0.8H), 0.83 - 0.76 (m, 2.2H).Ｎ－アセチル－Ｄ－ロイシン（１ｋｇ、５．７７ｍｏｌ）のエタノール（１．５Ｌ）溶液に、メチル６－メチルピペリジン－３－カルボキシレート（９３４ｇ、２．３８ｍｏｌ）の酢酸エチル（３Ｌ）溶液を添加し、混合物を４０℃に加熱した。得られた溶液を、１６時間かけて室温に到達させた。その間に沈殿が生じた。沈殿物を濾過し、ジエチルエーテル（５００ｍＬ）で洗浄し、空気乾燥して、粗メチル（３Ｒ，６Ｓ）－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセチル－Ｄ－ロイシネート（２８７ｇ、３４％）を白色固形物として得た。粗メチル（３Ｒ，６Ｓ）－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセチル－Ｄ－ロイシネート（２８７ｇ、８６９ｍｍｏｌ）を、エタノールおよび酢酸エチル１：２の高温混合物（１Ｌ）から結晶化させた。沈殿物を濾過し、濾過ケーキを、ジエチルエーテルおよびｎ－ペンタン１：１の混合物（５００ｍＬ）中ですり潰した。沈殿物を濾過し、空気乾燥して、メチル（３Ｒ，６Ｓ）－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセチル－Ｄ－ロイシネート（１２８ｇ、４４％）を白色固形物として得た。¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.80 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.80 - 5.00 (s, 2H), 4.20 - 4.04 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.32 - 3.21 (m, 1H), 2.93 - 2.80 (m, 2H), 2.73 - 2.65 (m, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.68 - 1.49 (m, 3H), 1.49 - 1.37 (m, 2H), 1.30 - 1.15 (m, 1H), 1.02 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.85 (m, 6H).メチル（３Ｒ，６Ｓ）－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレートアセチル－Ｄ－ロイシネート（１２８ｇ、３８７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１Ｌ）溶液に、飽和炭酸ナトリウム溶液（１Ｌ）を添加した。２相系を１０分間激しく撹拌し、層を分離した。有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して清澄溶液を得た。次に、トリエチルアミン（６５ｍＬ、４６５ｍｍｏｌ）および無水酢酸（４４ｍＬ、４６５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、メチル（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレート（９３ｇ）を淡黄色固形物として得た。¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃, 回転異性体の混合物) δ 5.02 - 4.87 (m, 0.5H), 4.84 - 4.68 (m, 0.5H), 4.18 - 4.05 (m, 0.5H), 3.89 - 3.77 (m, 0.5H), 3.71 (d, J = 11.6 Hz, 3H), 3.31 - 3.18 (m, 0.5H), 2.79 - 2.67 (m, 0.5H), 2.51 - 2.31 (m, 1H), 2.11 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 2.01 - 1.90 (m, 1H), 1.88 - 1.55 (m, 3H), 1.33 - 1.21 (m, 1.5H), 1.20 - 1.06 (m, 1.5H).オートクレーブに、メタノール中７Ｎアンモニア（６００ｍＬ、４２００ｍｍｏｌ）中のメチル（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシレート（９３ｇ、３８７ｍｍｏｌ）を投入し、３日間６０℃に加熱した。混合物を濃縮して、（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキサミド（１０２ｇ）を淡黄色油状物として得た。収率が定量的であると仮定して、生成物を、次のステップでそのまま使用した。¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, 回転異性体の混合物) δ 7.38 (s, 1H), 6.89 (d, J = 24.7 Hz, 1H), 4.76 - 4.59 (m, 0.5H), 4.39 - 4.24 (m, 0.5H), 4.16 - 4.01 (m, 0.5H), 3.72 - 3.51 (m, 0.5H), 3.14 - 2.99 (m, 0.5H), 2.68 - 2.51 (m, 0.5H), 2.30 - 2.12 (m, 0.5H), 2.11 - 1.92 (m, 3.5H), 1.78 - 1.38 (m, 4H), 1.23 - 1.11 (m, 1.5H), 1.09 - 0.94 (m, 1.5H); キラルLC (方法A) t_R= 12.35分, >98% ee.（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキサミド（５０ｇ、２７１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５００ｍＬ）溶液に、トリエチルオキソニウムテトラフルオロボレート（７７ｇ、４０７ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加し、混合物を、室温で４時間撹拌した。メタノール中７Ｎのアンモニア（２００ｍｌ、９．１５ｍｏｌ）をゆっくりと添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮して、（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシミドアミド（５０ｇ）をピンク色固形物として得、それを次のステップでそのまま使用した。メタノール中５．４Ｍナトリウムメトキシド（９９ｍＬ、５３５ｍｍｏｌ）のメタノール（２００ｍＬ）溶液に、メタノール（４００ｍＬ）およびマロン酸ジメチル（６１．４ｍＬ、５３５ｍｍｏｌ）中の（３Ｒ，６Ｓ）－１－アセチル－６－メチルピペリジン－３－カルボキシミドアミド（４９ｇ、２６７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、５０℃に加熱し、２４時間撹拌した。混合物を、濃塩酸で酸性化し（約ｐＨ３）、より少ない容積に濃縮した。残留物を、シリカで濾過し（ジクロロメタン中２０％メタノール）、濃縮してオレンジ色油状物を得た。粗生成物を、シリカカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０％～２０％のメタノール）で精製して、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（１２ｇ、１７％）を、無色ゴム状物として得た。ＬＣＭＳ（方法Ｃ）：ｔ_Ｒ ０．１７分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）２５２．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（１２ｇ、４７．８ｍｍｏｌ）のオキシ塩化リン（８０ｍＬ、８５８ｍｍｏｌ）溶液を、６０℃で２４時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、トルエンと共に２回共蒸発させて、黄色油状物を得た。油状物を、酢酸エチルに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。水性層を、酢酸エチルで２回抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して黄色油状物を得た。油状物を、シリカカラムクロマトグラフィー（トルエン中０％～２０％のテトラヒドロフラン）で精製して、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４，６－ジクロロピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（１．５ｇ、１１％）を無色ゴム状物として得た。¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, 回転異性体の混合物) δ 7.95 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.85 - 4.72 (m, 1H), 4.69 - 4.62 (m, 1H), 4.23 - 4.13 (m, 1H), 4.07 - 3.98 (m, 1H), 3.97 - 3.88 (m, 1H), 3.00 - 2.89 (m, 1H), 2.81 - 2.67 (m, 1H), 2.09 - 1.72 (m, 7H), 1.71 - 1.58 (m, 2H), 1.25 - 1.14 (m, 3H), 1.12 - 1.05 (m, 2H); LCMS (方法B): t_R 3.34分, MS (ESI) 288.0 (M+H)⁺; キラルUPLC (方法: A) t_R 2.54分, >95% eeおよびde.アルゴン下で、１，４－ジオキサン（２０ｍＬ）中の２－トリブチルスタンニルピラジン（６０７ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４，６－ジクロロピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（５００ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）、およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（２４４ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を、１００℃に加熱し、３２時間撹拌した。混合物を、１％トリエチルアミンを含むジクロロメタンで希釈し、シリカにコーティングした。これを、シリカカラムクロマトグラフィー（１％トリエチルアミンを含むジクロロメタン中０％～４０％のアセトニトリル）で精製して、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４－クロロ－６－（ピラジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（中間体３、１３４ｍｇ、１８％）を、オレンジ色ゴム状物として得た。¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, 回転異性体の混合物) δ 9.46 - 9.41 (m, 1H), 8.80 - 8.76 (m, 1H), 8.65 - 8.59 (m, 1H), 8.33 - 8.29 (m, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 1H), 4.86 - 4.70 (m, 0.5H), 4.27 - 4.17 (m, 0.5H), 4.09 - 3.97 (m, 0.5H), 3.55 - 3.41 (m, 0.5H), 3.06 - 2.98 (m, 0.5H), 2.88 - 2.82 (m, 0.5H), 2.10 - 1.90 (m, 6H), 1.89 - 1.76 (m, 0.5H), 1.75 - 1.61 (m, 1.5H), 1.29 - 1.20 (m, 1.5H), 1.17 - 1.10 (m, 1.5H); LCMS (方法C): t_R 1.81分, MS (ESI) 331.1 (M+H)⁺.
最終生成物の合成手順
実施例１：１－（（２Ｓ，５Ｒ）－２－メチル－５－（４－（（５－メチルピリジン－３－イル）アミノ）－６－（ピラジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（００００１）および１－（（２Ｒ，５Ｓ）－２－メチル－５－（４－（（５－メチルピリジン－３－イル）アミノ）－６－（ピラジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（００００２）の合成

【0188】

【化13】

【0189】

３－アミノ－５－メチルピリジン（０．７５１ｇ、６．９４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液に、テトラヒドロフラン中１Ｍのリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（６．９４ｍＬ、６．９４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中の１－（５－（４，６－ジクロロピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（中間体１、１ｇ、３．４７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を、飽和塩化アンモニウム溶液に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで１回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して黄色固形物を得た。固形物を、シリカカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０％～５％のメタノール）で精製して、１－（５－（４－クロロ－６－（（５－メチルピリジン－３－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（７８８ｍｇ、６０％）を黄色発泡体として得た。ＬＣＭＳ（方法Ｂ）：ｔＲ １．８１分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）３６０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。窒素下で、２－（トリブチルスタンニル）ピラジン（１０３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、１－（５－（４－クロロ－６－（（５－メチルピリジン－３－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（９．７５ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解した。混合物を、２４時間８０℃に加熱し、室温に冷却した。混合物を、アセトニトリルを使用してＣ１８栓から溶出し、濾過液を、逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ）で精製し、凍結乾燥して、１－（２－メチル－５－（４－（（５－メチルピリジン－３－イル）アミノ）－６－（ピラジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（２２ｍｇ、３７％）を白色固形物として得た。得られたシスエナンチオマー混合物を、キラル分取ＳＦＣ（方法Ａ）に供し、凍結乾燥して、両立体異性体を得た。１－（（２Ｓ，５Ｒ）－２－メチル－５－（４－（（５－メチルピリジン－３－イル）アミノ）－６－（ピラジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（５ｍｇ、２２％）ＬＣＭＳ（方法Ｄ）：ｔＲ ３．１７分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）４０４．１（Ｍ＋Ｈ）＋；キラルＵＰＬＣ（方法：Ａ）：ｔＲ ３．１７分、＞９５％ｅｅおよびｄｅ。１－（（２Ｒ，５Ｓ）－２－メチル－５－（４－（（５－メチルピリジン－３－イル）アミノ）－６－（ピラジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（６ｍｇ、２７％）ＬＣＭＳ（方法Ｄ）：ｔＲ ３．１７分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）４０４．２（Ｍ＋Ｈ）＋；キラルＵＰＬＣ（方法Ａ）：ｔＲ ４．６０分、＞９５％ｅｅおよびｄｅ。

【0190】

化合物００００３（本明細書では化合物Ｂとも呼ばれる）および００００４（本明細書では化合物Ａとも呼ばれる）を、適切な出発物質を用いて実施例１と類似の手順を使用して調製した。

【0191】

【化14】

【0192】

実施例２：１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４－（イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－イルアミノ）－６－（ピリジン－３－イル）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（０００１３）の合成

【0193】

【化15】

【0194】

アルゴン下で、１，４－ジオキサン（２０ｍＬ）中の３－（トリブチルスタンニル）ピリジン（６０７ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４，６－ジクロロピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（中間体２、５００ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）、およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（２４４ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を、１００℃に加熱し、３２時間撹拌した。混合物を、１％トリエチルアミンを含むジクロロメタンで希釈し、シリカにコーティングした。これを、シリカカラムクロマトグラフィー（１％トリエチルアミンを含むジクロロメタン中０％～４０％のアセトニトリル）で精製して、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４－クロロ－６－（ピリジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（１３４ｍｇ、１８％）を、オレンジ色ゴム状物として得た。ＬＣＭＳ（方法Ｃ）：ｔＲ １．８１分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）３３１．１（Ｍ＋Ｈ）＋。１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４－クロロ－６－（ピリジン－３－イル）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（３０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の２－プロパノール（２ｍＬ）溶液に、イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－アミン（３６．２ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）および塩酸（０．０２ｍＬ、０．２７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、６０℃で１６時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出した。一緒にした有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して黄色油状物を得た。油状物を、逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ）で精製し、凍結乾燥して、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４－（イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－イルアミノ）－６－（ピリジン－３－イル）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン１－オンを、青みがかった固形物として得た。ＬＣＭＳ（方法Ｂ）：ｔＲ ２．１９分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）４２８．１（Ｍ＋Ｈ）＋。

【0195】

化合物０００３０を、適切な出発物質を用いて実施例２と類似の手順に従って調製した。

【0196】

【化16】

【0197】

実施例３Ａ：１－（（２Ｓ，５Ｒ）－２－メチル－５－（４－（（２－メチルピリジン－４－イル）アミノ）－６－（ピリジン－３－イル）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（０００７１）の合成

【0198】

【化17】

【0199】

２－メチルピリジン－４－アミン（３．１９ｇ、２９．５ｍｍｏｌ）の乾燥テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）溶液に、テトラヒドロフラン中１Ｍのリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（２９．５ｍＬ、２９．５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。次に、乾燥テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中の１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４，６－ジクロロピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（中間体２、８５０ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）を、１０分間かけて添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を、飽和塩化アンモニウム溶液に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで１回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して褐色油状物を得た。油状物を、シリカカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中８０％～１００％の酢酸エチル、続いてジクロロメタン中０％～１０％のメタノール）で精製して、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４－クロロ－６－（（２－メチルピリジン－４－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（２７５ｍｇ ２５％）を黄色油状物として得た。ＬＣＭＳ（方法Ａ）：ｔＲ １．４９分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）３６０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。窒素下で、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４－クロロ－６－（（２－メチルピリジン－４－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（２７５ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１６２ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）、ピリジン－３－ボロン酸（１８８ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）、およびＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）－ＣＨ２Ｃｌ２付加物（６２．４ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を、１，２－ジメトキシエタン（６ｍＬ）および水（２ｍＬ）の混合物に溶解した。混合物を、１時間８０℃に加熱し、Ｃ１８栓で濾過し、濃縮して、暗色残留物を得た。残留物を、逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ）で精製し、凍結乾燥して、淡黄色固形物を得た。生成物を、キラル分取ＳＦＣ（方法Ｂ）によりさらに精製し、凍結乾燥して、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－２－メチル－５－（４－（（２－メチルピリジン－４－イル）アミノ）－６－（ピリジン－３－イル）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（１３５ｍｇ、４１％）をベージュ色固形物として得た。ＬＣＭＳ（方法Ｄ）：ｔＲ ３．０６分、１００％、ＭＳ（ＥＳＩ）４０３．２（Ｍ＋Ｈ）＋；キラルＳＦＣ（方法Ｂ）：ｔＲ ３．６０分、＞９５％ｅｅおよびｄｅ。

【0200】

実施例３Ｂ：１－（（２Ｓ，５Ｒ）－２－メチル－５－（４－（（３－（１－メチル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）フェニル）アミノ）－６－（ピラジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（化合物Ｃ）の合成

【0201】

【化18】

【0202】

１－（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（４－クロロ－６－（ピラジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）－２－メチルピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（中間体３、１２０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の２－プロパノール（２ｍＬ）溶液に、３－（１－メチル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）アニリン（１８８ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）および塩酸（０．０８ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、７０℃で１６時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出した。一緒にした有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して黄色油状物を得た。油状物を、逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ）で精製し、凍結乾燥して、１－（（２Ｓ，５Ｒ）－２－メチル－５－（４－（（３－（１－メチル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）フェニル）アミノ）－６－（ピラジン－２－イル）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン（化合物Ｃ、１０２ｍｇ、６０％）を白色固形物として得た。¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, 回転異性体の混合物)δ 10.01 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 9.56 (dd, J = 11.0, 1.1 Hz, 1H), 8.80 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 8.54 - 8.42 (m, 2H), 7.72 - 7.54 (m, 2H), 7.53 - 7.39 (m, 2H), 4.86 - 4.76 (m, 1H), 4.27 - 4.16 (m, 0.5H), 4.15 - 4.03 (m, 3.5H), 3.58 - 3.42 (m, 0.5H), 3.00 - 2.86 (m, 1H), 2.86 - 2.68 (m, 0.5H), 2.17 - 1.96 (m, 5H), 1.93 - 1.77 (m, 0.5H), 1.76 - 1.64 (m, 1.5H), 1.27 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.13 (d, J = 7.0 Hz, 1.5H); LCMS (方法D): t_R 3.31分, MS (ESI) 470.2 (M+H)⁺.
実施例４：化合物００００４と複合体化したヒトＣＲＥＢＢＰのブロモドメインの結晶構造、および化合物Ａ、化合物Ｃ、およびＣＣＳ１４７７のＢＲＯＭＯｓｃａｎ（商標）結果
結晶化
実験セットアップ：結晶化に使用した構築物は、残基１０８１～１１９７を含んでいた。ハンギングドロップ蒸気拡散セットアップを使用して、化合物００００４と複合体化したＣＲＥＢＢＰの結晶を得た。２０．３ｍｇ／ｍｌの濃度（１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、５００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、０．５ｍＭ ＴＣＥＰ、ｐＨ７．４）のＣＲＥＢＢＰを、４．３ｍＭ（３．０倍モル過剰）の００００４（ＤＭＳＯ中１５０ｍＭ）と共に１時間事前インキュベートした。次いで、１μｌのタンパク質溶液を、１μｌのレザバー溶液（０．１Ｍ ＭｇＣｌ２、０．１Ｍ ＭＥＳ／ＮａＯＨ ｐＨ６．３、１８％（重量／容積）ＰＥＧ６０００、および１０％（容積／容積）エチレングリコール）と混合し、０．４ｍｌのレザバー溶液上方で４℃にて平衡化させた。良好に回折する結晶が出現し、４日間で十分なサイズに成長した。

【0203】

データ収集
結晶を、取付け前に１０％グリセロール（最終濃度）結晶化液滴に添加することにより凍結保護した。ＣＲＥＢＢＰ／００００４結晶の完全な１．６Åデータセットを、ダイヤモンド光源（ジドコット、英国、ビームラインｉ０３）で収集し、ａｕｔｏＰＲＯＣパイプライン内のＸＤＳ、Ｐｏｉｎｔｌｅｓｓ ａｎｄ Ａｉｍｌｅｓｓにより、データを統合し、分析し、スケーリングした（表１）。

【0204】

【表2】

【0205】

構造決定および精密化
以前に決定されたＣＲＥＢＢＰの構造を開始モデルとして使用して、分子置換を行った。手動での再構築およびＲＥＦＭＡＣ５による精密化を交互に数ラウンド繰り返すことにより、最終モデルを完成させた（表２）。単一の等方性温度因子（ｉｓｏｔｒｏｐｉｃ Ｂ－ｆａｃｔｏｒ）を用いて１原子ごとに原子置換係数をモデル化した。

【0206】

【表3】

【0207】

結果：本発明者らは、１．６Å分解能まで回折したＣＲＥＢＢＰ／００００４の結晶を生成し、タンパク質－リガンド複合体の３次元構造を決定した。ＣＲＥＢＢＰの各鎖の化合物結合部位の初期モデルのＦｏ－Ｆｃオミットマップの明瞭な電子密度は、化合物全体の結合を明らかにし（図７）、その明確な配置を可能にした。加えて、この構造により、化合物００００４の絶対立体化学（ピペリジン部分の２Ｓ、５Ｒ）も確認される。

【0208】

ＢｒｏｍｏＫｄＭＡＸ－アッセイ
ＢｒｏｍｏＫｄＭＡＸをＤｉｓｃｏｖｅｒＸで実施した。このアッセイは、化合物が特定の（例えば、１００ｎＭまたはそれよりも低い）Ｋｄでｐ３００のブロモドメインおよび／またはＣＢＰのブロモドメインに結合するか否かを決定するために使用することができる。

【0209】

アッセイ原理は以下の通りである。ＢＲＯＭＯｓｃａｎ（商標）は、小分子ブロモドメイン阻害剤を識別するための、新規で業界をリードするプラットフォームである。実績のあるＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（商標）技術に基づき、ＢＲＯＭＯｓｃａｎ（商標）では、独占所有のリガンド結合部位特異的競合アッセイを使用して、試験化合物とブロモドメインとの相互作用が定量的に測定される。このロバストで信頼性の高いアッセイパネルは、ハイスループットスクリーニングに好適であり、定量的リガンド結合データを提供して、強力で選択的な小分子ブロモドメイン阻害剤の識別および最適化を容易にする。ＢＲＯＭＯｓｃａｎ（商標）アッセイは、微量ブロモドメイン濃度（＜０．１ｎＭ）を含み、それにより幅広い範囲の親和性（＜０．１ｎＭ～＞１０ｕＭ）にわたって真の熱力学的阻害剤Ｋｄ値が報告される。

【0210】

アッセイを以下のように実施した。ブロモドメインアッセイでは、ブロモドメインを提示するＴ７ファージ株を、２４ウェルブロックにてＢＬ２１菌株由来の大腸菌宿主中で並行して増殖させた。大腸菌を対数期まで増殖させ、凍結ストックからのＴ７ファージに感染させ（感染多重度＝０．４）、３２℃で振盪しながら溶菌するまでインキュベートした（９０～１５０分間）。ライセートを遠心分離し（５，０００×ｇ）、濾過して（０．２μｍ）、細胞残渣を除去した。ストレプトアビジンコーティング磁気ビーズを、ビオチン化小分子またはアセチル化ペプチドリガンドで３０分間室温にて処理して、ブロモドメインアッセイ用の親和性レジンを生成した。リガンド化ビーズを過剰ビオチンでブロッキングし、ブロッキング緩衝液（ＳｅａＢｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）、１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０、１ｍＭ ＤＴＴ）で洗浄して、未結合リガンドを除去し、非特異的ファージ結合を低減させた。ブロモドメイン、リガンド化親和性ビーズ、および試験化合物（つまり、化合物Ａ、化合物Ｃ、またはＣＣＳ１４７７のいずれか）を、１×結合緩衝液（１７％ＳｅａＢｌｏｃｋ、０．３３×ＰＢＳ、０．０４％Ｔｗｅｅｎ２０、０．０２％ＢＳＡ、０．００４％アジ化ナトリウム、７．４ｍＭ ＤＴＴ）中で一緒にすることにより、結合反応をアセンブリした。試験化合物を、１００％ＤＭＳＯ中の１０００×ストックとして調製した。１１点３倍化合物希釈系列および１つＤＭＳＯ対照点を使用して、Ｋｄを決定した。Ｋｄを測定するための化合物はすべて、１００％ＤＭＳＯ中での音響伝達（非接触分注）で分配する。次いで、ＤＭＳＯの最終濃度が０．０９％になるように、化合物を直接希釈してアッセイにした。すべての反応は、ポリプロピレン３８４ウェルプレートで実施した。各々の最終容量は０．０２ｍｌだった。アッセイプレートを振盪しながら室温で１時間インキュベートし、親和性ビーズを、洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄した。次いで、ビーズを、溶出緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、２μＭ未ビオチン化親和性リガンド）に再懸濁し、振盪しながら室温で３０分間インキュベートした。溶出液中のブロモドメイン濃度を、ｑＰＣＲにより測定した。

【0211】

結果は、以下の通りである。

【0212】

【表4】

【0213】

対応するデータは、ｉ）ＳＧＣ－ＣＢＰ３０については、例えばＷｕら、ＮＡＴＵＲＥ ＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮＳ（２０１９年）１０巻：１９１５頁 ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１４６７－０９６７２－２の補足情報において、ｉｉ）ＧＮＥ－７８１については、例えば、Ｒｏｍｅｒｏら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１７年、６０巻、９１６２～９１８３頁において、およびｉｉｉ）ＦＴ－６８７６については、例えば、ＡＡＣＲ年次集会２０２０、バーチャル集会ＩＩ、２０２０年６月２２～２４日のポスター＃３０７９（表題は、「ＦＴ－６８７６，ａ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ＣＢＰ／ｐ３００ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ＡＲ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ」）において公的に入手可能である。

【0214】

実施例５
物質および方法
遺伝子発現分析：
２５００００個のＨＣＣ８２７（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ２８６８；ＥＧＦＲエクソン１９欠失Ｅ７４６～Ａ７５０を有する）細胞／ウェルまたは２０００００個のＮＣＩ－Ｈ１９７５（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ５９０８；ＥＧＦＲ Ｌ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍを有する）細胞／ウェルを、薬物処理の前日に、６ウェルディッシュ（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－１、７６５７１６０）の１０％ＦＣＳおよび２ｍＭ Ｌ－グルタミンを含むＲＰＭＩ培地に播種した。次いで、１μＭ化合物Ａ（化合物Ａは、本明細書では化合物００００４とも呼ばれる）、ＣＣＳ１４７７（Ｃｈｅｍｇｏｏｄ；Ｃ１５０５）、Ａ－４８５（Ｌｕｃｅｒｎａ－Ｃｈｅｍ；ＨＹ－１０７４５５）、またはＩＣＧ－００１（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ、Ｓ２６６２）を含むかまたは含まないＤＭＳＯ、ＥＧＦＲ阻害剤（ＨＣＣ８２７の場合、ゲフィチニブ［最終１００ｎＭ、ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｇ－４４０８］；ＮＣＩ－Ｈ１９７５の場合、オシメルチニブ［最終２０ｎＭ、ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｏ－７２００］）のいずれかで、細胞を２４時間処理した。その後、細胞を、２ｍｌのＰＢＳで３回洗浄し、３００μｌの溶解緩衝液（ＲＡ１＋１％ＴＣＥＰ［Ｓｉｇｍａ ６４６５４７］）で溶解した。ＲＮＡを抽出するための吸引用のＭａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ８ ＲＮＡキットプロトコール（７４０６９８．５）に従ってＲＮＡを抽出し、ＲＮＡをＨ２Ｏで溶出した。０．５～２μｇのＲＮＡを、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ高容量ｃＤＮＡ逆転写キット（４３６８８１３）を使用して逆転写した。次いで、等量のｃＤＮＡを、３８４ウェル形式のＫａｐａ ＳＹＢＲ ｆａｓｔキット（ＫＫ４６１１）をＲｏｃｈｅ Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ ４８０で使用してｑＰＣＲ分析に供した。遺伝子の遺伝子発現は、ハウスキーピング遺伝子ＣＴ値（ｂ－アクチン）を目的の遺伝子のＣＴから差し引くことにより、およびＤＭＳＯ対照値を目的の試料から差し引くことによりΔΔＣＴを算出して、最終的に処理試料と対照処理試料との間の倍数変化差を算出することにより評価した。

【0215】

プライマー：
ＡＣＴＢ（ｂ－アクチン）：ｆｗｄ ５’ＧＣＣ ＣＣＡＧＣＴＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴ３’（配列番号１）、ｒｅｖ ５’ＴＧＧＧＣＣＴＣＧＴＣＧＣＣＣＡＣＡＴＡ３’（配列番号２）；
ＡＬＰＰ：ｆｗｄ ５’ＡＧＡＡＡＧＣＡＧＧＧＡＡＧＴＣＡＧＴＧＧ３’（配列番号３）、ｒｅｖ ５’ＣＧＡＧＴＡＣＣＡＧＴＴＧＣＧＧＴＴＣＡ３’（配列番号４）；
ＨＯＰＸ：ｆｗｄ ５’ＧＡＣＣＡＴＧＴＣＧＧＣＧＧＡＧＡＣＣ３’（配列番号５）、ｒｅｖ ５’ＧＣＧＣＴＧＣＴＴＡＡＡＣＣＡＴＴＴＣＴＧＧＧ３’（配列番号６）。

【0216】

ブロモドメイン結合ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤およびＨＡＴドメイン結合ＣＢＰ／ｐ３００阻害剤は、ＥＧＦＲ突然変異非小細胞肺がん細胞（ＮＳＣＬＣ）におけるＥＧＦＲ阻害剤誘導性遺伝子発現を鈍化させるが、ＣＢＰとβ－カテニンとの相互作用を妨げる阻害剤は鈍化させない。

【0217】

異なる作用様式（つまり、ＣＢＰ／ｐ３００の異なるタンパク質ドメインとの結合）を有する他のＣＢＰ／ｐ３００阻害剤（ＣＢＰ－Ｉ）と並行して、化合物Ａの遺伝子発現を評価した。化合物ＡおよびＣＣＳ１４７７は、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合し（ＢＲＤ－Ｉ）、Ａ－４８５は、ＣＢＰ／ｐ３００の触媒ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）活性を標的とし（ＨＡＴ－Ｉ）、ＩＣＧ－００１は、ＣＢＰとβ－カテニンとの相互作用を妨害する（ＣＢＰ／β－Ｃａｔ－Ｉ）。

【0218】

図１は、結果を示し、示されている調節された遺伝子は、ＡＬＰＰ（アルカリホスファターゼ、胎盤型；図１Ａおよび図１Ｃ）およびＨＯＰＸ（ホメオドメインのみのタンパク質；図１Ｂおよび図１Ｄ）である。２０ｎＭゲフィチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤）に、または２０ｎＭゲフィチニブの存在下で１μＭの異なるＣＢＰ阻害剤に２４時間曝露したＨＣＣ８２７での遺伝子発現（図１Ａ～１Ｂ）。ＮＣＩ－Ｈ１９７５（ゲフィチニブ耐性をもたらすＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ突然変異を有する）での遺伝子発現を、２０ｎＭオシメルチニブ（第３世代ＥＧＦＲ阻害剤）に、または２０ｎＭオシメルチニブの存在下で１μＭの異なるＣＢＰ／ｐ３００阻害剤に２４時間曝露した。データは、二重重複のｑＰＣＲを用いた２つの独立した実験からのものである（平均±ＳＥＭ）（図１Ｃ～１Ｄ）。

【0219】

結果：ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞株は両方とも、２つの異なるＥＧＦＲ阻害剤（第１世代ゲフィチニブおよび第３世代オシメルチニブ）による処理に応答して、例示遺伝子ＡＬＰＰおよびＨＯＰＸを上方制御する。化合物ＡおよびＣＣＳ１４７７（両方ともＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン結合物質）およびＡ－４８５（ＣＢＰ／ｐ３００の触媒阻害）は、ＥＧＦＲ阻害剤誘導性遺伝子発現を逆転させる。ＣＢＰとβ－カテニンとの相互作用を阻害する異なる作用様式の化合物（ＩＣＧ００１）は、ＥＧＦＲ誘導性遺伝子発現を鈍化させない。

【0220】

実施例６
物質および方法
細胞計数：
２０００個のＨＣＣ８２７（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ２８６８）細胞／ウェルを、１０％ＦＣＳおよび２ｍＭ Ｌ－グルタミンを含むＲＰＭＩ培地中での薬物処理の１日前に、９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ＢｉｏＯｎｅ ６５５０９０）に播種した。幾つかのプレートに播種し、細胞計数の各時点で１つのプレートを固定し、分析のために染色した。翌日、細胞を、ＤＭＳＯまたはゲフィチニブと組み合わせて（図２では２０ｎＭ、図３では３００ｎＭ）、表記の化合物および濃度で処理した［図２は化合物ＡおよびＢを示し；図３は、化合物Ａ、ＣＣＳ１４７７（Ｃｈｅｍｇｏｏｄ；Ｃ１５０５）、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ；Ｓ７２５６；ＣＡＳ番号１６１３６９５－１４－９）、Ａ－４８５（Ｌｕｃｅｒｎａ－Ｃｈｅｍ；ＨＹ－１０７４５５）、化合物０００７１、および化合物０００３０を示す］。各プレートを固定および分析する時まで細胞培養を継続した。時点を延長する場合は、培地および薬物を週２回補充した。

【0221】

固定および画像化：
所定の時間にプレートをＰＢＳで３回洗浄し、細胞を、８０μｌの４％ＰＦＡで１０分間室温にて固定した。ＰＢＳでの３回の洗浄ステップ後、細胞を、１００μｌのＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌのＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈ１２４９２）を用いて、室温で暗所にて２時間染色した。３×ＰＢＳ洗浄ステップ後、電動Ｘ／Ｙステージおよび５×対物レンズを有するＺｅｉｓｓＡｐｏｔｏｍｅを自動画像化モードで使用して、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２シグナルを取得した。Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２スポット（核）の画像分析および決定は、ＩｍａｇｅＪ を使用して行った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、核の個数を時間の関数としてプロットした。

【0222】

細胞増殖の無標識決定：
２０００個のＨＣＣ８２７（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ２８６８）細胞／ウェルまたは２０００個のＮＣＩ－Ｈ１９７５（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ５９０８）を、１０％ＦＣＳおよび２ｍＭ Ｌ－グルタミンを含むＲＰＭＩ培地中での薬物処理の１日前に、９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ＢｉｏＯｎｅ ６５５０９０）に播種した。翌日、ウェルを、ＣＥＬＩＧＯ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒの明視野画像化を使用して無標識で画像化し、初期細胞数を決定した。その後、細胞を、ＤＭＳＯ、単一の薬物、または薬物組合せのいずれかで処理し、明視野モード（ＣＥＬＩＧＯ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を使用して数週間にわたって定期的に画像化して、各ウェルの細胞増殖を経時的に追跡した。増殖培地および処理物質を、週２回補充した。ＨＣＣ８２７の薬物および濃度：３００ｎＭゲフィチニブ、１μＭ化合物Ａ、および３００ｎＭゲフィチニブ＋１μＭ化合物Ａ。薬物および濃度 ＮＣＩ－Ｈ１９７５：５０ｎＭオシメルチニブ（ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｏ－７２００）、０．１２５、０．５、もしくは２μＭ ＣＣＳ１４７７（Ｃｈｅｍｇｏｏｄ；Ｃ１５０５）および０．１２５、０．５、もしくは２μＭ化合物Ａ、または図に表記されている組合せ。細胞数は、ＣＥＬＩＧＯソフトウェアに組み込まれている「直接細胞計数」分析ツールを使用して明視野モードで決定した。

【0223】

ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合するエナンチオマー（化合物Ａ）のみが、ＥＧＦＲ阻害剤媒介性ＮＳＣＬＣ細胞増殖阻害を濃度依存的様式で増強するが、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合しないエナンチオマー（化合物Ｂ）は増強しない。

【0224】

ＥＧＦＲ突然変異ＨＣＣ８２７細胞の細胞数を経時的にモニターした。図２Ａは、ＤＭＳＯ単独（黒丸）で、２０ｎＭ ＥＧＦＲ阻害剤単独（ゲフィチニブ；第１世代ＥＧＦＲ阻害剤、白丸）で、または表記の化合物濃度のＣＢＰ／ｐ３００ ＢＲＤ阻害剤化合物Ａの活性エナンチオマー（上段）もしくはＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメインに結合しないそのエナンチオマー化合物Ｂ（化合物Ｂは、本明細書では化合物００００３とも呼ばれる）との組合せで処理した細胞を示す。図２Ｂ ＨＣＣ８２７細胞を、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で、化合物ＡおよびＢに曝露した。提示されているグラフは、各時点および条件を三重重複した１つの実験からのものである（平均±ＳＤ）。

【0225】

結果：ＨＣＣ８２７細胞数は、２０ｎＭゲフィチニブで処理すると初期には減少するが、継続的なゲフィチニブ暴露下では再増殖し始める。再増殖は、ＢＲＤ－Ｉ化合物Ａを使用したＣＢＰ／ｐ３００の阻害により調査期間にわたって阻害されたが、対応する非ブロモドメイン結合エナンチオマー化合物Ｂでは阻害されなかった。興味深いことには、組合せ療法において再増殖を防止するＢＲＤ－Ｉ効果は、ＢＲＤ－Ｉが単一作用剤としては活性ではないにも関わらず生じる。

【0226】

ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせた化合物ＡおよびベンチマークＣＢＰ／ｐ３００阻害剤は、ＨＣＣ８２７細胞増殖阻害を媒介した。

【0227】

図３（Ａ）および（Ｂ）および（Ｃ）および（Ｄ）および（Ｅ）は、核蛍光染色を使用して９６ウェルプレートで経時的に［日数］測定した薬物処理（グラフ凡例の記号）の関数としてのＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞株ＨＣＣ８２７の細胞数を示す。図３（Ａ）および（Ｂ）および（Ｃ）左側グラフ：化合物Ａ（図３Ａ）、ＣＣＳ１４７７（図３Ｂ）、ＳＧＣ－ＣＢＰ３０（図３Ｃ）、またはＡ４８５による細胞の単一作用剤処理。図３（Ａ）および（Ｂ）および（Ｃ）右側グラフならびに図３（Ｃ）および（Ｄ）：３００ｎＭゲフィチニブの存在下での化合物Ａ（図３Ａ）およびＣＣＳ１４７７（ＣＢＰ／ｐ３００ ＢＲＤ－Ｉ）（図３Ｂ）および化合物ＳＧＣ－ＣＢＰ３０（図３Ｃ）および化合物０００７１（図３Ｄ）および化合物０００３０（図３Ｅ）およびＡ４８５（ＣＢＰ／ｐ３００ ＨＡＴ－Ｉ）の抗増殖活性。提示されている曲線は、三重重複の１つの実験からのものであり（平均±ＳＤ）、同様の実験で同様の結果が繰り返し得られた。

【0228】

図４Ａは、［時間］での経時的なＨＣＣ８２７細胞数の評価を示す。化合物Ａは、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下ではＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、薬物耐性の発生を防止する（１つの例示プレートが、ゲフィチニブの場合はｎ＝２４ウェル、およびゲフィチニブ＋化合物Ａ処理の場合はｎ＝２４ウェル、ＤＭＳＯ：ｎ＝６、化合物Ａ：ｎ＝６、平均±ＳＤで示されている）。図４Ｂは、ゲフィチニブまたはゲフィチニブ＋化合物Ａで０日間または２２日間処理した、１ウェル当たりの細胞数（Ａと同様の２つの実験プレートから、１条件当たりｎ＝４８ウェル）をドットプロットとして図示する。図４Ｃは、図４Ａと同様に分析した、３００ｎＭゲフィチニブまたは３００ｎＭゲフィチニブ＋１μＭ化合物Ａで処理した２つのプレート（１条件当たりｎ＝４８ウェル）のウェルのウォーターフォールプロットを示す。２２日目の細胞数の増加は、薬物処理前（０日目）の各ウェルの初期細胞数からの倍数変化の対数として算出した。

【0229】

結果：
図３Ａおよび３Ｂおよび３Ｃおよび３Ｄおよび３Ｅ：ＨＣＣ８２７細胞数は、３００ｎＭゲフィチニブによる処理後、初期には減少するが、継続的なゲフィチニブ曝露下では再増殖し始める。５つの独立したＢＲＤ－ＩまたはＨＡＴ－Ｉを使用してＣＢＰ／ｐ３００を阻害することにより、調査期間にわたって再増殖が阻害される。興味深いことには、組合せ療法において再増殖を防止するＢＲＤ－Ｉ効果は、ＢＲＤ－Ｉが単一作用剤としては活性ではないにも関わらず生じる。

【0230】

図４Ａ、４Ｂ、および４Ｃ：化合物Ａは、それ自体では細胞数に対する効果が弱い／効果を示さないが、３００ｎＭゲフィチニブは、初期には細胞増殖を完全に阻止する。しかしながら、長期間培養では、ゲフィチニブのみで処理した場合、細胞は再増殖するが、化合物Ａとの同時処理は、調査期間（＞２２日）にわたって再増殖を有意に遅延させるかまたは完全に防止する。

【0231】

ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせた化合物ＡおよびベンチマークＣＢＰ／ｐ３００阻害剤は、ＮＳＣＬＣ細胞増殖阻害を媒介した － ＮＣＩ－Ｈ１９７５。

【0232】

図５（Ａ）は、ＤＭＳＯ、５０ｎＭオシメルチニブ、２μＭ化合物Ａ、または５０ｎＭオシメルチニブと２．０、０．５、もしくは０．１２５μＭ化合物Ａとの組合せの存在下での、時間［時］の関数としてのＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞数の評価を示す。図５（Ｂ）は、ＤＭＳＯ、５０ｎＭオシメルチニブ、２μＭ ＣＣＳ１４７７、または５０ｎＭオシメルチニブと２．０、０．５、もしくは０．１２５μＭ ＣＣＳ１４７７との組合せの存在下での、ＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞増殖の評価を示す。（例示グラフは、各データおよび時点の二重重複を示し、ロジスティック増殖曲線フィッティングはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍで計算した）。

【0233】

結果：図５：ＣＢＰ／ｐ３００ ＢＲＤ－ＩおよびＥＧＦＲ－Ｉの組合せ効果は、さらなるＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞株および異なるＥＧＦＲ－Ｉ化合物に当てはまる。化合物ＡおよびＣＣＳ１４７７は、それら自体では細胞数に対する効果が弱いかまたは効果を示ないが、５０ｎＭオシメルチニブは、初期には細胞増殖を阻止する。しかしながら、長期的には、細胞は、５０ｎＭオシメルチニブの存在下でさえ、ゆっくりとした速度で増殖を継続し、増殖の継続は、化合物ＡまたはＣＣＳ１４７７との同時処理により用量依存的に遅延される。

【0234】

実施例７
異種移植片：２００万個のＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ５９０８）を、ＮＭＲＩ－ヌードマウス（Ｊａｎｖｉｅｒ）の両脇腹に注射した。より大きな腫瘍が約２００ｍｍ^３の容積に達した際に、マウスを処置群に分配した。マウスを、ビヒクル（３０％ＰＥＧ３００／Ｈ２Ｏ；２０２３７１ Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７（ＣｈｅｍｉｅＴｅｋ；ＣＴ－ＣＣＳ１４７７）、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（Ｏ－７２００ ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、または２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７と組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（事前に混合されたＤＭＳＯストック）で１日１回経口処置した。手動ノギスを使用して、腫瘍容積を週２～３回測定した。腫瘍容積は、以下の式を使用して算出した：より大きな腫瘍直径×より小さな腫瘍直径の２乗÷２。平均腫瘍容積の線形フィッティングに基づき、曲線の傾きを回帰分析（両側）で比較した。オシメルチニブ群とオシメルチニブ／ＣＣＳ１４７７群との間に有意差が検出された。ビヒクル処置とＣＣＳ１４７７単一作用剤処置との間には有意差を観察することができなかった。

【0235】

応答は、時間ｔにおける腫瘍容積変化をその基線と比較することにより決定した：腫瘍容積変化％＝Δ電圧＝１００％×（（Ｖｔ－Ｖ初期）／Ｖ初期）。最良応答は、ｔ≧１０日のΔ電圧の最小値だった。各時間ｔについて、ｔ＝０～ｔのΔ電圧の平均も算出した。最良平均応答は、ｔ≧１０日でのこの平均の最小値であると定義される。この指標は、応答の速さ、強さ、および耐久性の組合せを単一の値で捉えるものである。応答基準（ｍＲＥＣＩＳＴ）は、ＲＥＣＩＳＴ基準２１から取ったものであり、以下のように定義した：（この順序で適用される）：ｍＣＲ、最良応答＜－９５％および最良平均応答＜－４０％；ｍＰＲ、最良応答＜－５０％および最良平均応答＜－２０％；ｍＳＤ、最良応答＜３５％および最良平均応答＜３０％；ｍＰＤ、他の未分類のもの。１４日間の治験を完了する前に有害事象のために犠牲にしたマウスは、データセットから削除した。

【0236】

ＥＧＦＲｉおよびＣＢＰ／ｐ３００ｉの組合せのｉｎ ｖｉｖｏ有効性
図６（Ａ）は、ＥＧＦＲ突然変異ＮＣＩ－Ｈ１９７５異種移植片の平均腫瘍容積（＋ＳＥＭ）が経時的にプロットされていることを示す。４つの異なる処置群が図示されている：ビヒクル（３０％ ＰＥＧ３００／Ｈ２Ｏ；交差丸；ｎ＝４）、２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７（白丸；ｎ＝４）、２ｍｇ／ｋｇ オシメルチニブ（黒丸；ｎ＝９）、または２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７と組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（半黒丸；ｎ＝１０）。図６（Ｂ）は、４つの処置群すべての最良平均応答が、ウォーターフォールプロットに示されていることを示す（ビヒクルは灰色、２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７は白色、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは黒色、および２０ｍｇ／ｋｇ ＣＣＳ１４７７と組み合わせた２ｍｇ／ｋｇ オシメルチニブは四角）。破線は、初期腫瘍容積の３０％の低減を示す。

【0237】

結果：図６：ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメイン阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で使用する場合、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ異種移植腫瘍増殖に対して効果を示さない。しかしながら、ＣＢＰ／ｐ３００のブロモドメイン阻害剤をＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、療法に対する応答が増加し、療法の経過にわたって腫瘍サイズが良好に制御される。驚くべきことに、ブロモドメイン結合阻害剤（ＣＣＳ１４７７）単独に対する応答が存在しないにも関わらず、ブロモドメイン結合阻害剤（ＣＣＳ１４７７）をＥＧＦＲ阻害剤（オシメルチニブ）と組み合わせると、療法に対する奏効率が増加する。

【0238】

実施例８
物質および方法：
ＣＢＰブロモドメイン結合アッセイ（ＴＲ－ＦＲＥＴ）：
ＤＭＳＯ中１０ｍＭの化合物溶液を、ＤＳＭＯで事前に希釈して、２５×ＤＭＳＯストック溶液にした。次いで、それらをアッセイ緩衝液で４×希釈した。ＤＭＳＯ濃度を安定に保ちながら、アッセイ緩衝液で系列希釈を実施した。アッセイ緩衝液中５μｌの化合物を、アッセイプレート（アッセイキットに提供されていた）に移し、ＴＲ－ＦＲＥＴアッセイ（Ｃａｙｍａｎ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ６００８５０）を、製造業者の説明書を使用して実施した。暗所で室温にて１時間インキュベーションした後、Ｔｅｃａｎ Ｍ１０００プレートリーダーのＴＲ－ＦＲＥＴモードを使用して、アッセイプレートを読み取った（トップリード；励起３４０ｎＭ バンド幅２０ｎＭ；発光６２０ｎＭ バンド幅７ｎＭ；最初のウェルで最適なゲインを決定、点滅回数：５回；点滅周波数１００Ｈｚ；積分時間：５００μｓ、遅延時間：１００μｓ、室温）。ＴＲ－ＦＲＥＴ比は、６７０ｎｍ発光を６２０ｎｍ発光で除算することにより算出した。ＥＣ５０の算出は、正規化された値（ＤＭＳＯ＝１）および陽性対照（０）で行った。値を対数に変換し、傾きが可変である非線形回帰（４パラメーター）を使用して、値を用量応答曲線にフィッティングして、ＥＣ５０値を評価した（下記の表３を参照）。

【0239】

【表5】

【0240】

＞１０μＭのＥＣ５０を有する化合物００００３が、本明細書で規定のＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤に対応しないことは、ＴＲ－ＦＲＥＴデータから明らかである。

【0241】

実施例９
物質および方法
細胞増殖の無標識決定：
１０％ＦＣＳおよび２ｍＭ Ｌ－グルタミンを含むＲＰＭＩ培地中で薬物処理する１日前に、２０００個のＨＣＣ４００６（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ２８７１；ＥＧＦＲエクソン１９欠失Ｌ７４７～Ｅ７４９を有する）を９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ＢｉｏＯｎｅ ６５５０９０）に播種した。翌日、ＣＥＬＩＧＯ ＩｍａｇｅＣｙｔｏｍｅｔｅｒの明視野画像化を使用してウェルを無標識で画像化し、初期細胞数を決定した。その後、細胞を、ＤＭＳＯ、単一の薬物、または薬物組合せのいずれかで処理し、明視野モード（ＣＥＬＩＧＯ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を使用して数週間にわたって定期的に画像化して、各ウェルの細胞増殖を経時的に追跡した。増殖培地および処理物質を、週２回補充した。ＨＣＣ４００６の薬物および濃度：３００ｎＭゲフィチニブ（ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｇ－４４０８）、１μＭ化合物Ａ、および３００ｎＭゲフィチニブ＋１μＭ化合物Ａ。細胞数は、ＣＥＬＩＧＯソフトウェアに組み込まれている「直接細胞計数」分析ツールを使用して明視野モードで決定した。

【0242】

図８Ａは、ＨＣＣ４００６細胞数の経時的な［日数での］評価を示す。化合物Ａは、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下ではＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせると、薬物耐性の発生を防止する（ＤＭＳＯ：ｎ＝６、化合物Ａ：ｎ＝６、ゲフィチニブ：ｎ＝２４、ゲフィチニブ＋化合物Ａ：ｎ＝２４、平均±ＳＤ）。図８Ｂは、ゲフィチニブまたはゲフィチニブ＋化合物Ａで０日間または２０日間処理した１ウェル当たりの細胞数をドットプロットとして示す（Ａでの実験から、１条件当たり２４ウェル、ｘ軸に表記されている「＋」は、ゲフィチニブ＋化合物Ａを示す）。図８Ｃは、３００ｎＭゲフィチニブまたは３００ｎＭゲフィチニブ＋１μＭ化合物Ａ（１条件当たり２４ウェル）で処理し、図４Ａと同様に分析したウェルのウォーターフォールプロットを示す。各ウェルの２０日目の細胞数増加を、薬物処理前（０日目）の各ウェルの初期細胞数からの倍数変化の対数として算出した。

【0243】

結果：図８Ａ、８Ｂ、および８Ｃ：化合物Ａは、それ自体ではＨＣＣ４００６細胞数に対して効果を示さない／効果があっても非常に弱いが、３００ｎＭゲフィチニブは、細胞増殖を初期には完全に阻止する。長期間培養では、ＨＣＣ４００６細胞は、ゲフィチニブのみで処理した場合、再増殖するが、化合物Ａとの同時処理は、調査期間（＞２０日）にわたって再増殖を完全に防止する。

【0244】

実施例１０
物質および方法
細胞増殖の無標識決定：
２０００個のＨＣＣ８２７（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ２８６８）を、１０％ＦＣＳおよび２ｍＭ Ｌ－グルタミンを含むＲＰＭＩ培地中での薬物処理の１日前に、９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ＢｉｏＯｎｅ ６５５０９０）に播種した。翌日、ＣＥＬＩＧＯ Ｉｍａｇｅ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒの明視野画像化を使用してウェルを無標識で画像化し、初期細胞数を決定した。その後、細胞を、ＤＭＳＯ、単一の薬物（オシメルチニブおよびＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤の各々）、または１００ｎＭのオシメルチニブおよび１つのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤の薬物組合せで処理した。薬物濃度は、下記に示されている。プレートを、明視野モード（ＣＥＬＩＧＯ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を使用して数週間にわたって定期的に画像化して、各ウェルの細胞増殖を経時的に追跡した。増殖培地および処理物質を、週２回補充した。ＨＣＣ８２７の薬物および濃度：１００ｎＭオシメルチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤、ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｏ－７２００）、およびＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤については：１μＭ化合物Ａ、０．２μＭ化合物Ｃ、０．２μＭ ＣＣＳ１４７７（ＣｈｅｍｉＴｅｋ；ＣＴ－ＣＣＳ１４７７）、１μＭ ＦＴ－６８７６（「ＣＢＰ／Ｐ３００－ＩＮ－８」、ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ；ＨＹ－１３６９２０）、および０．２μＭ ＧＮＥ－７８１（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ；ＨＹ－１０８６９６）。細胞数は、ＣＥＬＩＧＯソフトウェアに組み込まれている「直接細胞計数」分析ツールを使用して明視野モードで決定した。

【0245】

図９Ａ～９Ｅは、２１日間にわたるＨＣＣ８２７細胞数の評価を示す。ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤［（Ａ）化合物Ａ、（Ｂ）化合物Ｃ、（Ｃ）ＣＣＳ１４７７、（Ｄ）ＦＴ－６８７６、および（Ｅ）ＧＮＥ－７８１）］は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、オシメルチニブと組み合わせると、１００ｎＭオシメルチニブに対する薬物耐性の発生を防止する。ＤＭＳＯ曲線および１００ｎＭオシメルチニブ処理の時間経過は、すべての条件が並行して実行されたため、パネル９Ａ～９Ｅでは同一であることに留意されたい（ＤＭＳＯ：１８ウェル、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤：各々６ウェル、オシメルチニブ：１２ウェル、およびオシメルチニブ＋ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤のすべての組合せ：１２ウェル、平均±ＳＤ）。

【0246】

結果：図９Ａ～９Ｅ：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、それ自体ではＨＣＣ８２７細胞数に対して効果を示さない／効果があったとしても弱いが、１００ｎＭオシメルチニブは、細胞増殖を初期には阻止する。長期間培養では、オシメルチニブのみで処理した場合、ＨＣＣ８２７細胞は再増殖するが、様々なＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤との同時処理は、２１日間の調査時間にわたって再増殖を完全に防止する。

【0247】

実施例１１
物質および方法
細胞増殖の無標識決定：
２０００個のＨＣＣ４００６（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ２８７１）を、１０％ＦＣＳおよび２ｍＭ Ｌ－グルタミンを含むＲＰＭＩ培地中での薬物処理の１日前に、９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ＢｉｏＯｎｅ ６５５０９０）に播種した。翌日、ウェルを、ＣＥＬＩＧＯ Ｉｍａｇｅ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒの明視野画像化を使用して無標識で画像化して、初期細胞数を決定した。その後、細胞を、ＤＭＳＯ、単一の薬物（オシメルチニブおよびＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤の各々）、または１００ｎＭのオシメルチニブおよび１つのＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤の薬物組合せで処理した。薬物濃度は、下記に示されている。プレートを、明視野モード（ＣＥＬＩＧＯ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を使用して数週間にわたって定期的に画像化して、各ウェルの細胞増殖を経時的に追跡した。増殖培地および処理物質を、週２回補充した。ＨＣＣ８２７の薬物および濃度：１００ｎＭオシメルチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤、ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｏ－７２００）、およびＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤については：１μＭ化合物Ａ、０．２μＭ化合物Ｃ、０．２μＭ ＣＣＳ１４７７（ＣｈｅｍｉＴｅｋ；ＣＴ－ＣＣＳ１４７７）、１μＭ ＦＴ－６８７６（「ＣＢＰ／Ｐ３００－ＩＮ－８」、ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ；ＨＹ－１３６９２０）、および０．２μＭ ＧＮＥ－７８１（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ；ＨＹ－１０８６９６）。細胞数は、ＣＥＬＩＧＯソフトウェアに組み込まれている「直接細胞計数」分析ツールを使用して明視野モードで決定した。

【0248】

図１０Ａ～１０Ｅは、２１日間にわたるＨＣＣ４００６細胞数の評価を示す。ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤［（Ａ）化合物Ａ、（Ｂ）化合物Ｃ、（Ｃ）ＣＣＳ１４７７、（Ｄ）ＦＴ－６８７６、および（Ｅ）ＧＮＥ－７８１）］は、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下では、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ細胞の細胞増殖に影響を及ぼさないが、オシメルチニブと組み合わせると、１００ｎＭオシメルチニブに対する薬物耐性の発生を防止する。ＤＭＳＯ曲線および１００ｎＭオシメルチニブ処理の時間経過は、すべての条件が並行して実行されたため、パネル（Ａ～Ｅ）では同一であることに留意されたい（ＤＭＳＯ：１８ウェル、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤：各々６ウェル、オシメルチニブ：１２ウェル、およびオシメルチニブ＋ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤のすべての組合せ：１２ウェル、平均±ＳＤ）。

【0249】

結果：図１０Ａ～１０Ｅ：ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤は、それ自体ではＨＣＣ４００６細胞数に対して効果を示さない／効果があったとしても弱いが、１００ｎＭオシメルチニブは、細胞増殖を初期には阻止する。長期間培養では、オシメルチニブのみで処理した場合、ＨＣＣ４００６細胞は再増殖するが、様々なＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤との同時処理は、２１日間の調査時間にわたって再増殖を有意に遅延させるかまたは完全に防止する。

【0250】

実施例１２
この異種移植例は、上記の実施例７に沿って実施した。したがって、２００万個のＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ５９０８）を、ＮＭＲＩ－ヌードマウス（Ｊａｎｖｉｅｒ）の両脇腹に注射した。より大きな腫瘍が約２００ｍｍ^３の容積に達した際に、マウスを処置群に分配した。マウスを、ビヒクル（ｐＨ４酢酸塩緩衝液０．１Ｍ中０．８％（容積）ＤＭＳＯ（ＣＡＳ［６７－６８－５］）；５％（容積）ＮＭＰ（ＣＡＳ［８７２－５０－４］）、４．２％（容積）ＤＭＡ（ＣＡＳ［１２７－１９－５］）、９０％（容積）の４０％（重量／容積）Ｃａｐｔｉｓｏｌ（ＣＡＳ［１８２４１０－００－０］））、９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃ、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（Ｏ－７２００ ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、または９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃと組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（事前混合）で１日１回経口処置した。ノギスを使用して、腫瘍容積を週２～３回測定した。腫瘍容積は、以下の式を使用して算出した：より大きな腫瘍直径×より小さな腫瘍直径の２乗÷２。平均腫瘍容積の線形フィッティングに基づき、曲線の傾きを回帰分析（両側）で比較した。オシメルチニブ群とオシメルチニブ／化合物Ｃ群との間に有意差が検出された。ビヒクル処置と化合物Ｃ単一作用剤処置との間には有意差を観察することができなかった。

【0251】

応答は、時間ｔにおける腫瘍容積変化をその基線と比較することにより決定した：腫瘍容積変化％＝Δ電圧＝１００％×（（Ｖｔ－Ｖ初期）／Ｖ初期）。最良応答は、ｔ≧６日のΔ電圧の最小値だった。各時間ｔについて、ｔ＝０～ｔのΔ電圧の平均も算出した。最良平均応答は、ｔ≧１０日でのこの平均の最小値であると定義される。この指標は、応答の速さ、強さ、および耐久性の組合せを単一の値で捉えるものである。応答基準（ｍＲＥＣＩＳＴ）は、ＲＥＣＩＳＴ基準２１から取ったものであり、以下のように定義した：（この順序で適用される）：ｍＣＲ、最良応答＜－９５％および最良平均応答＜－４０％；ｍＰＲ、最良応答＜－５０％および最良平均応答＜－２０％；ｍＳＤ、最良応答＜３５％および最良平均応答＜３０％；ｍＰＤ、他の未分類のもの。１４日間の治験を完了する前に有害事象のために犠牲にしたマウスは、データセットから削除した。

【0252】

図１１（Ａ）は、経時的にプロットされた、ＥＧＦＲ突然変異ＮＣＩ－Ｈ１９７５異種移植片の平均腫瘍容積（＋ＳＥＭ）を示す。４つの異なる処置群が図示されている：ビヒクル；交差丸；ｎ＝８、９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃ（白丸；ｎ＝６）、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（黒丸；ｎ＝９）、または９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃと組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブ（半黒丸；ｎ＝１２）。処置期間にわたる平均腫瘍容積の線形回帰フィッティングを実施し、オシメルチニブおよび化合物Ｃと組み合わせたオシメルチニブの傾きを比較した。２群間の傾きに有意差を検出することができた。傾きは、それぞれ、オシメルチニブ群では正（＋６．４）であり、組合せ群では負（－７．４）であった。図１１（Ｂ）には、４つの処置群すべての最良平均応答がウォーターフォールプロットで示されている（ビヒクルは灰色、９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃは白色、２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは黒色、および９０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｃと組み合わせた２ｍｇ／ｋｇオシメルチニブは四角）。破線は、初期腫瘍容積の３０％の低減を示す。

【0253】

結果：結果は、上記の実施例７で得られた結果を裏付ける。今回は、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤として、ＣＣＳ１４７７の代わりに化合物Ｃを使用した。２つの阻害剤は、構造的には関連していないが、同じ機能を有する。したがって、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤を、ＥＧＦＲ阻害剤の非存在下で使用する場合、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ異種移植腫瘍増殖には効果を示さない。しかしながら、ＣＢＰ／ｐ３００ブロモドメイン阻害剤（実施例７ではＣＣＳ１４７７、本実施例では化合物Ｃ）を、ＥＧＦＲ阻害剤（ここではオシメルチニブ）と組み合わせると、療法に対する応答が有意に増加し、腫瘍サイズは療法の経過にわたって非常により良好に制御される。

【図1-1】

【図1-2】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図4-1】

【図4-2】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【配列表】

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【国際調査報告】