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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-08-01
(54)【発明の名称】エポキシ樹脂の化学酵素分解
(51)【国際特許分類】
C08J 11/18 20060101AFI20230725BHJP
C08J 11/16 20060101ALI20230725BHJP
【ＦＩ】
C08J11/18
C08J11/16 ZAB
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022572361
(86)(22)【出願日】2020-05-29
(85)【翻訳文提出日】2022-11-24
(86)【国際出願番号】 CN2020093274
(87)【国際公開番号】W WO2021237681
(87)【国際公開日】2021-12-02
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517259519
【氏名又は名称】ローディア ポリアミダ エ エスペシアリダデス エス．アー．
(71)【出願人】
【識別番号】591001248
【氏名又は名称】ソルヴェイ（ソシエテ アノニム）
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】フェラオ， ビクトル
(72)【発明者】
【氏名】ストレイフ， ステファン
(72)【発明者】
【氏名】マジエロ， プリシラ
(72)【発明者】
【氏名】チアン， ファン
(72)【発明者】
【氏名】リン， タオ
【テーマコード（参考）】
4F401
【Ｆターム（参考）】
4F401AA21
4F401AB06
4F401AD08
4F401BA13
4F401CA33
4F401CA76
4F401EA07
4F401EA32
4F401EA59
4F401EA77
(57)【要約】
酵素的経路により、特に溶媒におけるエポキシ樹脂の添加、それに続くグルタチオンＳ－トランスフェラーゼでの処理により、エポキシ樹脂を分解する方法が提供される。エポキシ樹脂を含む複合材料をリサイクルする方法並びにエポキシ樹脂を分解するためのグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ及び最終的にパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼの使用も提供される。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
エポキシ樹脂を分解する方法であって、以下の連続する工程：ａ）溶媒中に、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを添加して、混合物ＭＡを得る工程、
ｂ）工程ａ後に得られた前記混合物ＭＡを酵素処理する工程であって、前記混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢを得る工程を含む、工程
を含む方法。
【請求項2】
工程ｂ）後又は工程ｂ）と同時に行われる工程ｃ）をさらに含み、工程ｃ）は、混合物ＭＡ又は混合物ＭＢをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む酵素処理に存する、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
工程ｂ）又は工程ｂ）及び工程ｃ）に存する酵素処理に続いて、混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを化学的に処理することに存する連続する工程ｄ）が行われ、前記化学処理は、混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを強ブレンステッド塩基の水溶液と接触させて、混合物ＭＤを得る工程を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
工程ａ）は、前記溶媒中での前記エポキシ樹脂Ｒの膨潤を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
工程ａ）において、前記溶媒は、リン酸二ナトリウムの水溶液、リン酸の水溶液及びフェノールに存する群の中から選択され、より好ましくは、前記溶媒は、リン酸二ナトリウムの水溶液である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
工程ｂ）において、前記グルタチオンＳ－トランスフェラーゼは、Ｎ．アロマチシボランス（Ｎ．ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）株由来である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
工程ｃ）において、前記パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼは、変異酵素であり、優先的には、少なくとも２つの点変異Ｌ１９９Ｖ又はＬ２００Ｖ及びＹ３８５Ｆを示す変異酵素である、請求項２～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
工程ｄ）における強ブレンステッド塩基の前記水溶液は、水酸化ナトリウム水溶液である、請求項３～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記芳香族化合物Ｒ１は、ビスフェノールのジグリシジルエーテル、特にビスフェノールＡジグリシジルエーテルに対応する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記硬化剤Ｒ２は、アミン又はイミダゾール誘導体である、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
工程ｄ）後に得られた混合物ＭＤは、その後、上記で定義された工程ｂ）～ｄ）にさらに供される、請求項３～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
工程ｄ）後に得られた混合物ＭＤは、上記で定義された工程ａ）～ｄ）にさらに供される、請求項３～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ、特にＮ．アロマチシボランス（Ｎ．ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）株由来のグルタチオンＳ－トランスフェラーゼの、－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを分解するための使用。
【請求項14】
パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼは、前記エポキシ樹脂Ｒを分解するためにさらに使用され、好ましくは、少なくとも２つの点変異：Ｌ１９９Ｖ又はＬ２００Ｖ及びＹ３８５Ｆを示す変異パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼは、－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを分解するためにさらに使用される、請求項１３に記載の使用。
【請求項15】
複合材料ＣＭをリサイクルする方法であって、ａ’）複合材料であって、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを含む複合材料を提供する工程、
ｂ’）工程ａ’）後に得られた前記複合材料ＣＭを処理する工程であって、前記エポキシ樹脂Ｒを、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法で分解する工程を含み、この場合、工程ａ）の前記エポキシ樹脂Ｒは、前記複合材料ＣＭである、工程、
ｃ’）工程ｂ’）後、エポキシ樹脂含有量が減少した前記複合材料を得る工程
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、酵素的経路により、特に溶媒におけるエポキシ樹脂の添加、それに続くグルタチオンＳ－トランスフェラーゼでの処理により、エポキシ樹脂を分解する方法を対象とする。本発明は、エポキシ樹脂を含む複合材料をリサイクルする方法並びにエポキシ樹脂を分解するためのグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ及び最終的にパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼの使用も対象とする。
【背景技術】
【0002】
炭素繊維及びエポキシ樹脂を含む複合材料は、特に航空、航空宇宙及び自動車産業で広く使用されている。
【0003】
このような複合材料を含む製品の開発が進んでいることは、これらの製品の寿命の終了時に廃棄物の量も増加することを意味する。環境を保護するために、複合材料廃棄物の処分に対処する必要がある。
【0004】
複合材料に含まれるエポキシ樹脂の分解を想定することができる。これにより、特に複合材料から炭素繊維を回収できる可能性がある。
【0005】
熱分解（エポキシ樹脂の熱分解）、化学的分解（酸又は超臨界流体によるエポキシ樹脂の分解）又は機械的分解（複合材料の細断、破砕及び粉砕）など、様々な種類の分解がすでに開発されている。しかしながら、これらの手法は、いくつかの欠点を有する。これらは、炭素繊維の品質を低下させる傾向があるか、又はこれらは、非常にエネルギーを消費し、有毒物質を取り扱うことになる。
【0006】
酵素による分解は、一般的に、環境への影響が少ない穏やかで安全な条件を意味する。
【0007】
酵素によるポリマーの分解は、基本的には、リグニン、ポリエステル、ポリアミド又はポリウレタンで評価されている（米国特許出願公開第２０１６／０２８０８８１号明細書、米国特許出願公開第２００９／０１６２３３７号明細書、国際公開第９９／２９８８５号パンフレット、米国特許第６２５５４５１号明細書）ものの、エポキシ樹脂では評価されていない。
【0008】
Ｅｌｉａｚら（Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ２０１８，１１，２１２３）は、エポキシ樹脂の微生物分解を評価した。ロドコッカス・ロドクラウス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ）及びオクロバクトラム・アンスロピ（Ｏｃｈｒｏｂａｃｔｒｕｍ ａｎｔｈｒｏｐｉ）の２種類の細菌種は、エポキシ樹脂を分解できる可能性があると特定された。
【0009】
Ｍｏｅｓｅｒら（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１４，１０１８，１３１－１３６）は、微生物による未硬化エポキシ樹脂の分解の評価も報告している。しかしながら、結果は、明確ではない。
【0010】
これらの文献は、分解の有効性及び分解に使用できる酵素について結論付けていない。
【0011】
本出願人は、エポキシ樹脂が酵素経路によって効果的に分解され得ることを見出した。
【発明の概要】
【0012】
本発明は、エポキシ樹脂を分解する方法であって、以下の連続する工程：
ａ）溶媒において、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを添加して、混合物ＭＡを得る工程、
ｂ）工程ａ）後に得られた混合物ＭＡを酵素処理する工程であって、混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢを得る工程を含む、工程
を含む方法を対象とする。
ａ）溶媒において、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを添加して、混合物ＭＡを得る工程、
ｂ）工程ａ）後に得られた混合物ＭＡを酵素処理する工程であって、混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢを得る工程を含む、工程
を含む方法を対象とする。
【0013】
好ましくは、本発明の方法は、工程ｂ）後又は工程ｂ）と同時に行われる工程ｃ）をさらに含み、工程ｃ）は、混合物ＭＡ又は混合物ＭＢをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む酵素処理に存する。
【0014】
特に、工程ｂ）又は工程ｂ）及び工程ｃ）に存する酵素処理に続いて、混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを化学的に処理することを含む連続する工程ｄ）が行われ、化学処理は、混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを強ブレンステッド塩基の水溶液と接触させて、混合物ＭＤを得る工程を含む。より具体的には、工程ｄ）における強ブレンステッド塩基の水溶液は、水酸化ナトリウム水溶液である。
【0015】
有利には、工程ａ）は、溶媒中でのエポキシ樹脂Ｒの膨潤を含む。より有利には、工程ａ）において、溶媒は、リン酸二ナトリウムの水溶液、リン酸の水溶液及びフェノールに存する群の中から選択され、より好ましくは、溶媒は、リン酸二ナトリウムの水溶液である。
【0016】
特に、工程ｂ）において、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼは、Ｎ．アロマチシボランス（Ｎ．ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）株由来である。
【0017】
好ましくは、工程ｃ）において、パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼは、変異酵素であり、優先的には、少なくとも２つの点変異Ｌ１９９Ｖ又はＬ２００Ｖ及びＹ３８５Ｆを示す変異酵素である。
【0018】
有利には、芳香族化合物Ｒ１は、ビスフェノールのジグリシジルエーテル、特にビスフェノールＡジグリシジルエーテルに対応する。
【0019】
特に、硬化剤Ｒ２は、アミン又はイミダゾール誘導体である。
【0020】
特に、工程ｄ）後に得られた混合物ＭＤは、その後、上記で定義された工程ｂ）～ｄ）にさらに供される。代わりに、工程ｄ）後に得られた混合物ＭＤは、上記で定義された工程ａ）～ｄ）にさらに供される。
【0021】
本発明は、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ、特にＮ．アロマチシボランス（Ｎ．ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）株由来のグルタチオンＳ－トランスフェラーゼの、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを分解するための使用にも関する。
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを分解するための使用にも関する。
【0022】
特に、パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼは、エポキシ樹脂Ｒを分解するためにさらに使用され、好ましくは、少なくとも２つの点変異：Ｌ１９９Ｖ又はＬ２００Ｖ及びＹ３８５Ｆを示す変異パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼは、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを分解するためにさらに使用される。
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを分解するためにさらに使用される。
【0023】
本発明は、複合材料ＣＭをリサイクルする方法であって、
ａ’）複合材料であって、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを含む複合材料を提供する工程、
ｂ’）工程ａ’）後に得られた複合材料ＣＭを処理する工程であって、本発明によるエポキシ樹脂を分解する方法でエポキシ樹脂Ｒを分解する工程を含み、この場合、工程ａ）のエポキシ樹脂Ｒは、複合材料ＣＭである、工程、
ｃ’）工程ｂ’）後、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料を得る工程
を含む方法を対象とする。
ａ’）複合材料であって、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを含む複合材料を提供する工程、
ｂ’）工程ａ’）後に得られた複合材料ＣＭを処理する工程であって、本発明によるエポキシ樹脂を分解する方法でエポキシ樹脂Ｒを分解する工程を含み、この場合、工程ａ）のエポキシ樹脂Ｒは、複合材料ＣＭである、工程、
ｃ’）工程ｂ’）後、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料を得る工程
を含む方法を対象とする。
【0024】
１．エポキシ樹脂を分解する方法
本発明による方法は、以下に記載する少なくとも２つの工程ａ）及びｂ）を含む。
本発明による方法は、以下に記載する少なくとも２つの工程ａ）及びｂ）を含む。
【0025】
１．１工程ａ）
工程ａ）は、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを溶媒に添加して、混合物ＭＡを得る工程を含む。
工程ａ）は、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを溶媒に添加して、混合物ＭＡを得る工程を含む。
【0026】
工程ａ）により、エポキシ樹脂Ｒが添加される溶媒中でエポキシ樹脂Ｒが膨潤する。特に、これにより、エポキシ樹脂Ｒの脱架橋を行うこともできる。より具体的には、溶媒が、リン酸塩を含む水溶液である場合、工程ａ）により、エポキシ樹脂又は部分的に脱架橋されたエポキシ樹脂のリン酸化を行うことができる。
【0027】
本発明において、非極性溶媒は、誘電率が１５未満の溶媒である。
【0028】
本発明において、極性溶媒は、誘電率が１５以上の溶媒である。
【0029】
本発明において、極性プロトン性溶媒は、誘電率が１５以上であり、且つ不安定なプロトンを含む溶媒である。
【0030】
本発明において、極性非プロトン性溶媒は、１５以上の誘電率を有し、且つ不安定なプロトンを含まない溶媒である。
【0031】
溶媒は、ペンタン、シクロペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、トルエン、キシレン、クロロホルム、ジクロロメタン及びこれらの混合物から選択される非極性溶媒であり得、特に、これは、ヘキサンである。
【0032】
溶媒は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチル－２－ピロリドン（ＮＭＰ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、ニトロメタン、１，４－ジオキサン、アセトニトリル、アセトン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、酢酸、ギ酸及びこれらの混合物から選択される非プロトン性極性溶媒であり得、特に、これは、ＤＭＳＯ及びＤＭＦから選択される。
【0033】
溶媒は、アルコール、水溶液及びそれらの混合物から選択されるプロトン性極性溶媒であり得る。
【0034】
本発明において、アルコールは、炭素原子に少なくとも１つのヒドロキシル基を有する有機化合物である。好ましくは、これは、５５℃～９５℃に含まれる温度で液体である。特に、これは、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、ブタノール及びその位置異性体、フェノール、ペンタノール及びその位置異性体、１－ヘキサノール、２，２，２－トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）、ヘキサフルオロプロパン－２－オール（ＨＦＩＰ）であり得る。
【0035】
エポキシ樹脂Ｒが添加される溶媒は、上記の非極性溶媒及び非プロトン性極性溶媒の混合物であり得る。
【0036】
エポキシ樹脂Ｒが添加される溶媒は、上記の非極性溶媒及びプロトン性極性溶媒の混合物であり得る。
【0037】
エポキシ樹脂Ｒが添加される溶媒は、上記の非プロトン性極性溶媒及びプロトン性極性溶媒の混合物であり得る。
【0038】
好ましくは、エポキシ樹脂Ｒが添加される溶媒は、上記の極性プロトン性溶媒、極性非プロトン性溶媒及びこれらの混合物から選択され、より具体的には、これは、上記の極性プロトン性溶媒である。
【0039】
有利には、溶媒は、アルコール、水溶液及びこれらの混合物からなる群の中から選択される。より有利には、水溶液は、Ｈ３ＰＯ４，Ｈ２ＳＯ４、ＨＣｌ、ＨＢｒ又はＨＮＯ３などの１種以上のブレンステッド酸を含むことができる。代わりに、水溶液は、リン酸二ナトリウム、アンモニア、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、Ｎａ２ＣＯ３又はＫ２ＣＯ３などの１種以上のブレンステッド塩基を含むことができる。
【0040】
特に、エポキシ樹脂Ｒが添加される溶媒は、フェノール、リン酸の水溶液、リン酸二ナトリウムの水溶液及びこれらの組み合わせに存する群の中から選択される。より具体的には、工程ａ）の溶媒は、リン酸二ナトリウムの水溶液である。さらに具体的には、工程ａ）で使用されるリン酸二ナトリウムの水溶液は、リン酸二ナトリウムの濃度が１２０～１０００ｇ／ｍＬ、好ましくは１２０～５００ｇ／Ｌのものである。特に、リン酸二ナトリウムは、リン酸二ナトリウム十二水和物の形態で使用される。
【0041】
有利には、リン酸二ナトリウム／エポキシ樹脂の重量比は５～１５０ｇ／ｇである。
【0042】
工程ａ）のエポキシ樹脂Ｒと溶媒との混合物は、２０℃～９５℃、好ましくは４０℃～９５℃、より好ましくは５５℃～９５℃の温度で加熱することができる。
【0043】
工程ａ）は、好ましくは、撹拌下で行われる。
【0044】
工程ａ）は、７２時間～４日間継続することができる。
【0045】
有利には、工程ａ）は、以下の工程を含む：
－ ａ１）エポキシ樹脂Ｒを溶媒に添加する工程、
－ ａ２）撹拌する工程、その後、
－ ａ３）任意選択的に、減圧下で部分的に蒸発させる工程、その後、
－ ａ４）任意選択的に、水で希釈する工程。
－ ａ１）エポキシ樹脂Ｒを溶媒に添加する工程、
－ ａ２）撹拌する工程、その後、
－ ａ３）任意選択的に、減圧下で部分的に蒸発させる工程、その後、
－ ａ４）任意選択的に、水で希釈する工程。
【0046】
４つの工程ａ１）、ａ２）、ａ３）及びａ４）は、連続している。工程ａ２）、ａ３）及び任意選択的にａ４）は、１回又は２回以上、特に１回～３回繰り返すことができる。
【0047】
特に、工程ａ２）において、溶媒中のエポキシ樹脂Ｒの混合物は、７２時間～１９２０時間撹拌される。
【0048】
特に、工程ａ２）において、溶媒中のエポキシ樹脂Ｒの混合物は、２０℃～９５℃、好ましくは４０℃～９５℃、より好ましくは５５℃～９５℃に含まれる温度で撹拌される。
【0049】
好ましくは、溶媒中のエポキシ樹脂との混合物にシクロデキストリンがさらに添加される。
【0050】
本発明において、シクロデキストリンは、α－１，４グリコシド結合によって連結されたα－Ｄ－グルコピラノースサブユニットの大環状環からなる環状オリゴ糖である。これは、特に、１，４グリコシド結合によって連結された５つ以上のα－Ｄ－グルコピラノース単位から構成される。シクロデキストリンαは、６個のα－Ｄ－グルコピラノースサブユニットを含む。シクロデキストリンβは、７個のα－Ｄ－グルコピラノースサブユニットを含む。シクロデキストリンγは、８個のα－Ｄ－グルコピラノースサブユニットを含む。
【0051】
好ましくは、工程ａ）で使用されるシクロデキストリンは、環内に６～８単位の範囲の多数のＤ－グルコピラノースサブユニットを含む。
【0052】
より好ましくは、シクロデキストリンは、シクロデキストリンα、シクロデキストリンβ及びシクロデキストリンγに存する群の中から選択され、さらに好ましくは、シクロデキストリンは、シクロデキストリンβである。
【0053】
有利には、シクロデキストリン／エポキシ樹脂の重量比は、２．５～５０ｇ／ｇに含まれる。
【0054】
有利には、工程ａ）は、以下の工程を含む：
－ ａ５）エポキシ樹脂Ｒと溶媒との混合物にシクロデキストリンを添加する工程、
－ ａ６）得られた混合物を、２０℃～９５℃に含まれる温度で加熱する工程。
－ ａ５）エポキシ樹脂Ｒと溶媒との混合物にシクロデキストリンを添加する工程、
－ ａ６）得られた混合物を、２０℃～９５℃に含まれる温度で加熱する工程。
【0055】
工程ａ５）及びａ６）は、好ましくは、撹拌下で行われる。
【0056】
特に、シクロデキストリンは、工程ａ４）後に添加される。より具体的には、工程ａ４）に続いて工程ａ５）及びａ６）が行われる。
【0057】
好ましくは、工程ａ６）において、エポキシ樹脂と、シクロデキストリンと、溶媒との混合物は、２４時間～数週間、より好ましくは３６時間～７２時間撹拌される。
【0058】
工程ａ）後に得られた混合物を混合物ＭＡと呼ぶ。
【0059】
１．２工程ｂ）
工程ｂ）は、工程ａ）後に得られた混合物ＭＡを酵素処理することを含み、この処理は、混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢを得る工程を含む。
工程ｂ）は、工程ａ）後に得られた混合物ＭＡを酵素処理することを含み、この処理は、混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢを得る工程を含む。
【0060】
本発明の意味において、「グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ」（ＧＳＴ）は、還元型グルタチオン（ＧＳＨ）と異なる基質との結合を触媒する能力を有する酵素である。
【0061】
標準化された命名法では、これらの酵素は、ＥＣ２．５．１．１８のメンバーとして分類される。
【0062】
【0063】
実際、グルタチオン又は（２Ｓ）－２－アミノ－４－｛［（１Ｒ）－１－［（カルボキシメチル）カルバモイル］－２－スルファニルエチル］カルバモイル｝ブタン酸は、１つのチオール基を含む。グルタチオン基は、その硫黄を介して樹脂の構造に結合したグルタチオンの分子に対応する。
【0064】
本発明の方法で使用されるグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）は、真核生物由来又は原核生物由来であり得、優先的には原核生物由来である。
【0065】
ＧＳＴのスーパーファミリーの中でも、β－エーテラーゼと呼ばれる立体特異的グルタチオンＳ－トランスフェラーゼのサブクラスが本発明の方法のために特に興味深いものである。
【0066】
特に、スフィンゴビウム（Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ）種由来の酵素ＬｉｇＥ、ＬｉｇＰ及びＬｉｇＦ並びにそれらの相同体を使用することができる。当業者によって容易に同定される相同体の中でも、ノボスフィンゴビウム（Ｎｏｖｏｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ）種ＰＰ１Ｙ由来の酵素ＬｉｇＥ－ＮＳ（＝ＮｓＬｉｇＥ）及びＬｉｇＦ－ＮＳ、ＬｉｇＥ－ＮＡ（＝ＮａＬｉｇＥ）、ＬｉｇＦ－ＮＡ（＝ＮａＬｉｇＦ１）並びにノボスフィンゴビウム・アロマチシボランス（Ｎｏｖｏｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）ＤＳＭ１２４４４由来のＮａＬｉｇＦ２を挙げることができる。
【0067】
方法の特定の実施では、工程ｂ）で使用されるグルタチオンＳ－トランスフェラーゼは、β－エーテラーゼである。特に、工程ｂ）で使用されるＧＳＴは、スフィンゴビウム（Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ）ｓｐ由来の酵素ＬｉｇＥ、ＬｉｇＰ若しくはＬｉｇＦ又はこれらの酵素の任意の相同体、例えばＬｉｇＤ、ＬｉｇＬ、ＬｉｇＮ、ＬｉｇＯ又はＬｉｇＧである。優先的には、工程ｂ）で使用されるＧＳＴは、ＬｉｇＥ相同体である。
【0068】
本発明の方法の特定の実施では、工程ｂ）におけるグルタチオンＳ－トランスフェラーゼは、ノボスフィンゴビウム・アロマチシボランス（Ｎｏｖｏｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）（Ｎ．アロマチシボランス（Ｎ．ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ））株由来である。グルタチオンＳ－トランスフェラーゼは、特にノボスフィンゴビウム・アロマチシボランス（Ｎｏｖｏｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）株由来のＬｉｇＥ相同体、即ちＬｉｇＥ－ＮＡであり得る。
【0069】
特に、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼは、適切な固体担体上に固定化することができる。
【0070】
有利には、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼは、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼを発現する溶解した細菌の培養液の形態で混合物ＭＡに添加される。細菌は、上述した通りである。溶解した細菌の培養液は、上述したように、細菌を培養し、続いて遠心分離して細胞ペレットを得てから、細胞ペレットをリン酸緩衝液（０．１Ｍ ｐＨ＝７．０）と１ｇ（ペレット）／１０ｍｌ（緩衝液）の割合で混合し、細菌を超音波処理で溶解することによって得られる。
【0071】
細菌の溶解から得られた培養液は、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼを含む。少なくとも１体積％のこの溶液を使用することができ、好ましくは１体積％～２０体積％使用することができる。
【0072】
特に、工程ｂ）において、混合物ＭＡは、適切な媒体中でグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触する。
【0073】
有利には、適切な媒体中のグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ細胞ペレット／混合物ＭＡの重量比は、１ｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇに含まれる。
【0074】
特に、適切な媒体は、グルタチオンを含む水性媒体である。より具体的には、適切な媒体中のグルタチオン／グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ細胞ペレットの重量比は、０．０６ｇ／ｋｇ～３ｇ／ｋｇに含まれる。
【0075】
特に、適切な媒体は、グリシンを含む。より具体的には、適切な媒体中のグリシン／グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ細胞ペレットの重量比は、１ｇ／ｋｇ～５０ｇ／ｋｇに含まれる。
【0076】
好ましくは、適切な媒体は、６～１１、より好ましくは８～１０に含まれるｐＨを有する。
【0077】
好ましくは、混合物ＭＡは、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼと少なくとも５０時間、より好ましくは少なくとも６０時間接触する。
【0078】
特に、混合物ＭＡは、２０℃～４５℃に含まれる温度でグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触する。
【0079】
したがって、工程ｂ）において、混合物ＭＡは、好ましくは、グルタチオン、任意選択的にグリシンを含む水性媒体中、好ましくは６～１１に含まれるｐＨにおいて、好ましくは２０℃～４５℃に含まれる温度で好ましくは少なくとも５０時間、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触する。
【0080】
特に、工程ｂ）は、以下の工程を含む：
－ ｂ１）反応器に混合物ＭＡ、水、グルタチオン、任意選択的にグリシン及びグルタチオンＳ－トランスフェラーゼを好ましくは連続して添加する工程、
－ ｂ２）工程ｂ１）後に得られた混合物を、２０℃～４５℃に含まれる温度で少なくとも５０時間撹拌する工程。
－ ｂ１）反応器に混合物ＭＡ、水、グルタチオン、任意選択的にグリシン及びグルタチオンＳ－トランスフェラーゼを好ましくは連続して添加する工程、
－ ｂ２）工程ｂ１）後に得られた混合物を、２０℃～４５℃に含まれる温度で少なくとも５０時間撹拌する工程。
【0081】
工程ｂ１）後に得られた混合物は、上述した適切な媒体中でグルタチオンＳ－トランスフェラーゼに接触させた混合物ＭＡに対応する。
【0082】
工程ｂ）後に得られた混合物を混合物ＭＢと呼ぶ。
【0083】
得られた混合物ＭＢは、５～７に含まれるｐＨを有する。
【0084】
１．３工程ｃ）
工程ｃ）は、混合物ＭＡ又は混合物ＭＢをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む酵素処理を含む。
工程ｃ）は、混合物ＭＡ又は混合物ＭＢをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む酵素処理を含む。
【0085】
本発明の意味において、ＥＣ１．１４．１３．２として分類されるパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼは、芳香族化合物の分解に関与するフラボタンパク質である。補因子ＮＡＤＰは、水素の受容体として反応に関与し、反応中にＮＡＤＰＨに変換される。工程ｃ）では、この酵素は、以下に概略的に示すように、樹脂構造に高度に存在する芳香族部位へのヒドロキシル基の付加を触媒する。
【化2】
【0086】
したがって、この反応は、樹脂の酸化を可能にする。その場合、樹脂はより親水性になり、水性媒体への溶解性が向上する。さらに、これらのヒドロキシル化部位は、工程ｄ）で行われる切断をより受けやすい。
【0087】
好ましい実施形態では、工程ｃ）で使用されるパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼ（ＰＨＢＨ）は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来である。別の実施形態では、工程ｃ）で使用されるパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼ（ＰＨＢＨ）は、コリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）由来である。
【0088】
工程ｃ）で使用されるＰＨＢＨ酵素は、野生型酵素又は変異型酵素であり得る。
【0089】
この工程ｃ）のために、ＰＨＢＨのいくつかの変異体を評価した（実施例Ｃを参照されたい）。全ての試験した酵素は、樹脂のヒドロキシル化を触媒することができたものの、これらの１つ、Ｌ１９９Ｖ及びＹ３８５Ｆの２つの点変異で修飾された緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来のＰＨＢＨが特に効率的であると特定された。この変異酵素は、特開２００９－２１３３９２号公報（配列番号１０）において以前に報告されている。
【0090】
本発明の好ましい実施形態では、工程ｃ）で使用されるＰＨＢＨは、変異酵素であり、さらにより優先的には、それは、少なくとも２つの点変異Ｌ１９９Ｖ又はＬ２００Ｖ及びＹ３８５Ｆを示す変異酵素であり、より優先的には以下の１つである：
－ ２つの点変異Ｌ１９９Ｖ及びＹ３８５Ｆで修飾された緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の変異ＰＨＢＨ酵素（実施例では「Ｍ０１０」と示す）、又は
－ ２つの点変異Ｌ２００Ｖ及びＹ３８５Ｆで修飾されたコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）由来の変異ＰＨＢＨ酵素（実施例では「ＹＭ３２１」と示す）、又は
－ ３つの点変異Ｌ２００Ｖ、Ｙ３８５Ｆ及びＤ３９Ｙで修飾されたコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）由来の変異ＰＨＢＨ酵素（実施例では「ＹＭ３２２」と示す）。
－ ２つの点変異Ｌ１９９Ｖ及びＹ３８５Ｆで修飾された緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の変異ＰＨＢＨ酵素（実施例では「Ｍ０１０」と示す）、又は
－ ２つの点変異Ｌ２００Ｖ及びＹ３８５Ｆで修飾されたコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）由来の変異ＰＨＢＨ酵素（実施例では「ＹＭ３２１」と示す）、又は
－ ３つの点変異Ｌ２００Ｖ、Ｙ３８５Ｆ及びＤ３９Ｙで修飾されたコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）由来の変異ＰＨＢＨ酵素（実施例では「ＹＭ３２２」と示す）。
【0091】
特に、ＰＨＢＨは、適切な固体担体上に固定化することができる。
【0092】
特に、工程ｃ）において、前の混合物（ＭＡ又はＭＢ）は、適切な媒体中において、特に適切な量の補因子ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）を含む水性媒体中でＰＨＢＨと接触する。
【0093】
有利には、水性媒体は、補因子ＮＡＤＰの再生を可能にする化合物を含む。ＮＡＤＰの再生手段は、当業者に周知である。特に、工程ｃ）のための適切な媒体は、グルコースと、グルコース－６－リン酸を酸化する一方、ＮＡＤＰ＋をＮＡＤＰＨに還元するグルコースデヒドロゲナーゼ活性を有する酵素（ＥＣ１．１．１．４９に分類される）とを含み得る。当業者は、これらの酵素をよく知っており、ＥＴ００４などの１つのグルコースデヒドロゲナーゼを選択することができるであろう。
【0094】
優先的には、水性媒体は、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）を含む。
【0095】
より優先的には、水系は、ＥＴ００４及びＦＡＤなどのグルコースデヒドロゲナーゼを含む。
【0096】
有利には、ＰＨＢＨは、ＰＨＢＨを発現する溶解した細菌の培養液の形態で添加される。細菌は、上述した通りである。溶解した細菌の培養液は、上述したように、細菌を培養し、続いて遠心分離して細胞ペレットを得てから、細胞ペレットをリン酸緩衝液（０．１Ｍ ｐＨ＝７．０）と１ｇ（ペレット）／１０ｍｌ（緩衝液）の割合で混合し、細菌を超音波処理で溶解することによって得られる。
【0097】
細菌の溶解から得られた培養液は、ＰＨＢＨを含む。少なくとも１体積％、好ましくは１体積％～２０体積％のこの溶液を使用することができる。
【0098】
工程ｃ）は、工程ｂ）後又は工程ｂ）と同時に行うことができる。
【0099】
工程ｃ）が工程ｂ）後に行われる場合、工程ｃ）は、混合物ＭＢをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む酵素処理を含む。
【0100】
工程ｃ）が工程ｂ）と同時に行われる場合、工程ｃ）は、混合物ＭＡをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む酵素処理を含む。
【0101】
第１の実施形態では、本発明による方法において、工程ｂ）に続いて、工程ｂ）後に得られた混合物ＭＢを酵素処理することを含む連続する工程ｃ）が行われ、この処理は、混合物ＭＢをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む。
【0102】
この実施形態では、本発明による方法における酵素処理は、工程ｂ）に続いて工程ｃ）を実施することを含む。
【0103】
有利には、適切な媒体中のＰＨＢＨ細胞ペレット／混合物Ｂの重量比は、１ｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇに含まれる。
【0104】
特に、適切な媒体は、ＮＡＤＰを含む水性媒体である。より具体的には、適切な媒体中のＮＡＤＰ／ＰＨＢＨ細胞ペレットの重量比は、０．１ｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇに含まれる。
【0105】
特に、適切な媒体は、グルコースを含む。より具体的には、適切な媒体中のグルコース／ＰＨＢＨ細胞ペレットの重量比は、５０ｇ／ｋｇ～３００ｇ／ｋｇに含まれる。
【0106】
有利には、適切な媒体は、ＦＡＤを含む。より具体的には、適切な媒体中のＦＡＤ／ＰＨＢＨ細胞ペレットの重量比は、０．０００２ｇ／ｋｇ～０．００２ｇ／ｋｇに含まれる。
【0107】
特に、適切な媒体は、ＥＴ００４などのグルコースデヒドロゲナーゼを含む。より具体的には、適切な媒体中のＥＴ００４細胞ペレット／ＰＨＢＨ細胞ペレットの重量比は、０．３ｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇに含まれる。
【0108】
好ましくは、適切な媒体は、６～１１、より好ましくは８～９に含まれるｐＨを有する。
【0109】
好ましくは、混合物ＭＢは、大気圧下で少なくとも５０時間、ＰＨＢＨと接触する。
【0110】
特に、混合物ＭＢは、２０℃～４５℃、より好ましくは３０℃～４０℃に含まれる温度でＰＨＢＨと接触する。
【0111】
したがって、工程ｃ）において、混合物ＭＢは、好ましくは、ＮＡＤＰと、任意選択的にグルコースと、任意選択的にＦＡＤと、任意選択的にＥＴ００４とを含む水性媒体中において、好ましくは８～９に含まれるｐＨで、好ましくは２０℃～４５℃に含まれる温度で好ましくは少なくとも５０時間、ＰＨＢＨと接触する。
【0112】
特に、工程ｃ）は、以下の工程を含む：
－ ｃ１）反応器に混合物ＭＢ、グルコース、ＮＡＤＰ、ＦＡＤ、ＥＴ００４及びＰＨＢＨを好ましくは連続して添加する工程、
－ ｃ２）工程ｃ１）後に得られた混合物を、２０℃～４５℃に含まれる温度で少なくとも５０時間撹拌する工程。
－ ｃ１）反応器に混合物ＭＢ、グルコース、ＮＡＤＰ、ＦＡＤ、ＥＴ００４及びＰＨＢＨを好ましくは連続して添加する工程、
－ ｃ２）工程ｃ１）後に得られた混合物を、２０℃～４５℃に含まれる温度で少なくとも５０時間撹拌する工程。
【0113】
工程ｃ１）後に得られた混合物は、上述した適切な媒体中でＰＨＢＨに接触させた混合物ＭＢに対応する。
【0114】
第２の実施形態では、本発明による方法において、工程ｂ）は、工程ｃ）と同時に行われる。したがって、工程ａ）に続いて、工程ａ）後に得られた混合物ＭＡの酵素処理が行われ、この処理は、混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ及びパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む。
【0115】
この実施形態では、本発明による方法における酵素処理は、工程ｂ）及び工程ｃ）を同時に行うことを含む。
【0116】
特に、工程ｂ）及び工程ｃ）が同時に行われる場合、混合物ＭＡは、適切な媒体中でＧＳＴ及びＰＨＢＨと同時に接触する。
【0117】
有利には、適切な媒体中のＧＳＴ細胞ペレット／混合物Ａの重量比は、１ｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇに含まれる。
【0118】
有利には、適切な媒体中のＰＨＢＨ細胞ペレット／混合物Ａの重量比は、１ｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇに含まれる。
【0119】
特に、適切な媒体は、ＮＡＤＰとグルタチオンとを含む水性媒体である。より具体的には、適切な媒体中のＮＡＤＰ／ＰＨＢＨ細胞ペレットの重量比は、０．１ｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇに含まれる。より具体的には、適切な媒体中のグルタチオン／ＧＳＴ細胞ペレットの重量比は、０．０６ｇ／ｋｇ～３ｇ／ｋｇに含まれる。
【0120】
特に、適切な媒体は、グリシンを含む。より具体的には、適切な媒体中のグリシン／グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ細胞ペレットの重量比は、１ｇ／ｋｇ～５０ｇ／ｋｇに含まれる。
【0121】
特に、適切な媒体は、グルコースを含む。より具体的には、適切な媒体中のグルコース／ＰＨＢＨ細胞ペレットの重量比は、５０ｇ／ｋｇ～３００ｇ／ｋｇに含まれる。
【0122】
有利には、適切な媒体は、ＦＡＤを含む。より具体的には、適切な媒体中のＦＡＤ／ＰＨＢＨ細胞ペレットの重量比は、０．０００２ｇ／ｋｇ～０．０２ｇ／ｋｇに含まれる。
【0123】
特に、適切な媒体は、ＥＴ００４を含む。より具体的には、適切な媒体中のＥＴ００４細胞ペレット／ＰＨＢＨ細胞ペレットの重量比は、０．３ｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇに含まれる。
【0124】
好ましくは、適切な媒体は、６～１１、より好ましくは８～９に含まれるｐＨを有する。
【0125】
好ましくは、混合物ＭＡは、ＧＳＴ及びＰＨＢＨと少なくとも５０時間接触する。
【0126】
特に、混合物ＭＡは、２０℃～４５℃に含まれる温度でＧＳＴ及びＰＨＢＨと接触する。
【0127】
したがって、工程ｂ）及び工程ｃ）が同時に行われる場合、混合物ＭＡは、好ましくは、グルタチオンと、ＮＡＤＰと、任意選択的にグルコースと、任意選択的にＦＡＤと、任意選択的にＥＴ００４とを含む水性媒体中において、好ましくは６～１１に含まれるｐＨで、好ましくは２０℃～４５℃に含まれる温度で好ましくは少なくとも５０時間、ＧＳＴ及びＰＨＢＨと接触する。
【0128】
特に、工程ｂ）及び工程ｃ）は、以下の工程を含む：
－ ｂｃ１）反応器に混合物ＭＡ、水、グルコース、グルタチオン、グリシン、ＮＡＤＰ、ＦＡＤ、ＥＴ００４、ＰＨＢＨ及びＧＳＴを好ましくは連続して添加する工程、
－ ｂｃ２）工程ｂｃ１）後に得られた混合物を、２０℃～４５℃に含まれる温度で少なくとも９６時間撹拌する工程。
－ ｂｃ１）反応器に混合物ＭＡ、水、グルコース、グルタチオン、グリシン、ＮＡＤＰ、ＦＡＤ、ＥＴ００４、ＰＨＢＨ及びＧＳＴを好ましくは連続して添加する工程、
－ ｂｃ２）工程ｂｃ１）後に得られた混合物を、２０℃～４５℃に含まれる温度で少なくとも９６時間撹拌する工程。
【0129】
工程ｂｃ１）後に得られた混合物は、上述した適切な媒体中で同時にＧＳＴ及びＰＨＢＨに接触した混合物ＭＡに対応する。
【0130】
両方の実施形態において、工程ｃ）後に得られた混合物は、混合物ＭＣと呼ばれる。
【0131】
得られる混合物ＭＣは、５～７に含まれるｐＨを有する。
【0132】
１．４工程ｄ）
工程ｄ）は、混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを化学的に処理することを含み、化学的処理は、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを接触させて、混合物ＭＤを得る工程を含む。
工程ｄ）は、混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを化学的に処理することを含み、化学的処理は、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを接触させて、混合物ＭＤを得る工程を含む。
【0133】
実際、工程ｄ）は、酵素処理後に行われる。
【0134】
酵素処理は、工程ｂ）を行って混合物ＭＢを得ること又は工程ｂ）及び工程ｃ）を連続して若しくは同時に行って混合物ＭＣを得ることを含み得る。
【0135】
したがって、工程ｄ）は、工程ｂ）後に行うことができる。その場合、工程ｄ）は、混合物ＭＢを化学的に処理することを含み、化学処理は、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と混合物ＭＢを接触させて、混合物ＭＤを得る工程を含む。この実施形態では、工程ｃ）は、行われない。
【0136】
代わりに、工程ｄ）は、工程ｃ）後に行うことができる。その場合、工程ｄ）は、混合物ＭＣを化学的に処理することを含み、化学的処理は、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と混合物ＭＣを接触させて、混合物ＭＤを得る工程を含む。この実施形態では、工程ｂ）及び工程ｃ）は、連続して又は同時に行われる。
【0137】
特に、両方の実施形態において、強ブレンステッド塩基は、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム又は水酸化カリウムなどのアルカリ金属及びアルカリ土類金属の水酸化物から選択される。好ましくは、強ブレンステッド塩基は、水酸化ナトリウムである。
【0138】
好ましくは、強ブレンステッド塩基は、０．１ｍｏｌ／Ｌ～１０ｍｏｌ／Ｌ、より好ましくは１ｍｏｌ／Ｌ～１０ｍｏｌ／Ｌに含まれる濃度である。
【0139】
有利には、重量比（強ブレンステッド塩基の水溶液）／混合物ＭＢ又は重量比（強ブレンステッド塩基を含む水溶液）／混合物ＭＣは、２０ｇ／ｇ～１ｇ／ｇに含まれる。
【0140】
有利には、各実施形態において、工程ｄ）における混合物ＭＢ又は混合物ＭＣは、２０℃～１００℃に含まれる温度、より有利には６０℃～１００℃の温度で４８時間～２週間、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と接触する。
【0141】
２．ラウンド
本発明による方法は、複数回、好ましくは少なくとも１回、より好ましくは少なくとも２回繰り返して行うことができる。これらの繰り返しの実行では、工程ａ）は、任意選択的である。
本発明による方法は、複数回、好ましくは少なくとも１回、より好ましくは少なくとも２回繰り返して行うことができる。これらの繰り返しの実行では、工程ａ）は、任意選択的である。
【0142】
本発明の方法は、１回～３０回、好ましくは１回～２０回、より好ましくは１回～１０回繰り返して行うことができる。
【0143】
本発明による方法の１回目のラウンドは、以下に対応する：
ａ）溶媒において、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを添加する工程、
ｂ）工程ａ）後に得られた混合物ＭＡを酵素処理する工程であって、混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢを得る工程を含む、工程、
ｃ）任意選択的に、工程ｂ）と同時に混合物ＭＡを酵素処理するか、又は工程ｂ）後に得られた混合物ＭＢを酵素処理する工程であって、混合物ＭＡ又は混合物ＭＢをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む、工程、
ｄ）任意選択的に、混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを化学的に処理する工程であって、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを接触させて、混合物ＭＤを得る工程を含む、工程。
ａ）溶媒において、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを添加する工程、
ｂ）工程ａ）後に得られた混合物ＭＡを酵素処理する工程であって、混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢを得る工程を含む、工程、
ｃ）任意選択的に、工程ｂ）と同時に混合物ＭＡを酵素処理するか、又は工程ｂ）後に得られた混合物ＭＢを酵素処理する工程であって、混合物ＭＡ又は混合物ＭＢをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む、工程、
ｄ）任意選択的に、混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを化学的に処理する工程であって、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを接触させて、混合物ＭＤを得る工程を含む、工程。
【0144】
本発明による方法の１回目のラウンドを行った後に得られた混合物Ｍ１は、本発明による方法に再び供され得、したがって工程ａ）のエポキシ樹脂Ｒ又は工程ｂ）の混合物ＭＡを置き換えることができる。その後、本発明による方法の２回目のラウンドが行われる。
【0145】
その場合、２回目のラウンドは、以下に対応する：
ａ）任意選択的に、本発明による方法の１回目のラウンド後に得られた混合物Ｍ１を溶媒に添加する工程、
ｂ）工程ａ）後に得られた混合物ＭＡ’又は１回目のラウンド後に得られた混合物Ｍ１を酵素処理する工程であって、混合物ＭＡ’又はＭ１をグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢ’を得る工程を含む、工程、
ｃ）任意選択的に、工程ｂ）と同時に混合物ＭＡ’若しくはＭ１を酵素処理するか、又は工程ｂ）後に得られた混合物ＭＢ’を酵素処理する工程であって、混合物ＭＡ’若しくはＭ１又はＭＢ’をパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣ’を得る工程を含む、工程、
ｄ）任意選択的に、混合物ＭＢ’又は混合物ＭＣ’を化学的に処理する工程であって、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と混合物ＭＢ’又は混合物ＭＣ’を接触させて、混合物ＭＤ’を得る工程を含む、工程。
ａ）任意選択的に、本発明による方法の１回目のラウンド後に得られた混合物Ｍ１を溶媒に添加する工程、
ｂ）工程ａ）後に得られた混合物ＭＡ’又は１回目のラウンド後に得られた混合物Ｍ１を酵素処理する工程であって、混合物ＭＡ’又はＭ１をグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢ’を得る工程を含む、工程、
ｃ）任意選択的に、工程ｂ）と同時に混合物ＭＡ’若しくはＭ１を酵素処理するか、又は工程ｂ）後に得られた混合物ＭＢ’を酵素処理する工程であって、混合物ＭＡ’若しくはＭ１又はＭＢ’をパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣ’を得る工程を含む、工程、
ｄ）任意選択的に、混合物ＭＢ’又は混合物ＭＣ’を化学的に処理する工程であって、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と混合物ＭＢ’又は混合物ＭＣ’を接触させて、混合物ＭＤ’を得る工程を含む、工程。
【0146】
本発明による方法の１回目のラウンドを行った後に得られた混合物Ｍ１は、上記で定義された混合物ＭＢ、混合物ＭＣ又は混合物ＭＤであり得る。好ましくは、これは、混合物ＭＤに対応する。
【0147】
有利には、工程ｄ）後に得られた混合物ＭＤは、その後、上記で定義された工程ｂ）～ｄ）にさらに供される。
【0148】
代わりに、工程ｄ）後に得られた混合物ＭＤは、上記で定義された工程ａ）～ｄ）にさらに供される。
【0149】
特に、２回より多くのラウンドを行うことができ、より具体的には３回より多くのラウンドを実行することができる。好ましくは、１～３０回のラウンド、より好ましくは２～２０回のラウンド、さらに好ましくは２～１０回のラウンドを行うことができる。
【0150】
有利には、本発明による方法を１回～１０回行うことができる。
【0151】
３．エポキシ樹脂
本発明による方法は、エポキシ樹脂を分解することを目的とする。
本発明による方法は、エポキシ樹脂を分解することを目的とする。
【0152】
本発明の方法で使用されるエポキシ樹脂は、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２、
－ 任意選択的に、追加の化合物Ｒ３
に基づく。
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２、
－ 任意選択的に、追加の化合物Ｒ３
に基づく。
【0153】
「～に基づくエポキシ樹脂」という表現は、当然のことながら、この組成物に使用される様々な基本成分の混合物及び／又は反応生成物を含有するエポキシ樹脂を意味すると理解されるべきであり、これらの一部は、エポキシ樹脂又はその複合材料若しくはその複合体材料を含む完成品の様々な製造段階、特に硬化工程中、少なくとも部分的に互いに又は周囲の化学的環境と反応することが意図されているか又は反応することが可能である。
【0154】
換言すると、エポキシ樹脂Ｒは、後述する少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、少なくとも１種の硬化剤Ｒ２とから製造される。
【0155】
有利には、エポキシ樹脂Ｒは、１種の芳香族化合物Ｒ１と１種の硬化剤Ｒ２とに基づく。
【0156】
有機化合物に関して本明細書で使用される場合、「芳香族」という用語は、１つ以上のアリール部位を含む有機化合物が、典型的には、酸素、窒素及び硫黄のヘテロ原子から選択される１つ以上のヘテロ原子によってそれぞれ任意選択的に中断され得、１つ以上のアリール部位の１つ以上の炭素原子が、典型的には、アルキル、アルコキシル、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、アリール、アルカリール、アラルキルから選択される１つ以上の有機基で任意に置換され得ることを意味する。
【0157】
本明細書で使用される場合、「アリール」という用語は、非局在化共役π系を有し、ｎが０又は正の整数である４ｎ＋２に等しい複数のπ電子を有する環式の共平面５～１４員の有機基を意味し、環員のそれぞれが炭素原子であるベンゼンなどの化合物、１つ以上の環員がヘテロ原子、典型的には酸素、窒素及び硫黄原子から選択されるヘテロ原子であるフラン、ピリジン、イミダゾール及びチオフェンなどの化合物並びにナフタレン、アントラセン及びフルオレンなどの縮合環系が含まれ、これらの中で、環炭素の１つ以上は、典型的には、アルキル、アルコキシル、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、アリール、アルカリール、ハロ基から選択される１つ以上の有機基で置換され得、例えばフェニル、メチルフェニル、トリメチルフェニル、ノニルフェニル、クロロフェニル又はトリクロロメチルフェニルなどであり得る。
【0158】
本明細書で使用される場合、「エポキシド基」は、隣接エポキシ基、即ち１，２－エポキシ基を意味する。
【0159】
３．１．芳香族化合物Ｒ１
エポキシ樹脂Ｒの第１の必須化合物は、１分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む芳香族化合物Ｒ１である。
エポキシ樹脂Ｒの第１の必須化合物は、１分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む芳香族化合物Ｒ１である。
【0160】
本発明による芳香族化合物Ｒ１は、１分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、少なくとも２つのエポキシド基の１つは、少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する芳香環が有するグリシジルオキシ基由来のエポキシド基であり得る。
【0161】
特に好適な芳香族化合物Ｒ１には、ジグリシジルレゾルシノール、１，２，２－テトラキス（グリシジルオキシフェニル）エタン又は１，１，１－トリス（グリシジルオキシフェニル）メタンなど、フェノール及びポリフェノールのポリグリシジルエーテル；ビスフェノールＡのジグリシジルエーテル（ビス（４－ヒドロキシフェニル）－２，２－プロパン）、ビスフェノールＦのジグリシジルエーテル（ビス（４－ヒドロキシフェニル）メタン）、ビスフェノールＣのジグリシジルエーテル（ビス（４－ヒドロキシフェニル）－２，２－ジクロロエチレン）及びビスフェノールＳのジグリシジルエーテル（４，４’－スルホニルジフェノール）並びにそれらのオリゴマーなどのビスフェノールのジグリシジルエーテル；芳香族アルコールのポリグリシジルエーテル；エポキシ化ノボラック化合物；エポキシ化クレゾールノボラック化合物；トリグリシジルアミノフェノール（ＴＧＡＰ）などのアミノフェノールのポリグリシジルエーテル；トリグリシジルアミノクレゾールが含まれる。
【0162】
好ましくは、適切な芳香族化合物Ｒ１としては、ｐ－アミノフェノールのトリグリシジルエーテル（ＨｕｎｓｔｍａｎのＭＹ ０５１０など）；ｍ－アミノフェノールのトリグリシジルエーテル（ＨｕｎｓｔｍａｎのＭＹ ０６１０など）；２，２－ビス（４，４’－ジヒドロキシフェニル）プロパンなどのビスフェノールＡに基づく物質のジグリシジルエーテル（ＤｏｗのＤＥＲ ６６１又はＭｏｍｅｎｔｉｖｅのＥＰＯＮ ８２８など）；フェノールノボラック樹脂のグリシジルエーテル（ＤｏｗのＤＥＮ ４３１又はＤＥＮ ４３８など）；ジヒドロキシジフェニルメタンのジグリシジル誘導体（ＨｕｎｔｓｍａｎのＰＹ ３０６など）などの公知の市販の化合物が挙げられる。
【0163】
有利には、芳香族化合物Ｒ１は、ビスフェノールＡのジグリシジルエーテル（ビス（４－ヒドロキシフェニル）－２，２－プロパン）、ビスフェノールＦのジグリシジルエーテル（ビス（４－ヒドロキシフェニル）メタン）、ビスフェノールＣのジグリシジルエーテル（ビス（４－ヒドロキシフェニル）－２，２－ジクロロエチレン）及びビスフェノールＳのジグリシジルエーテル（４，４’－スルホニルジフェノール）などのビスフェノールのジグリシジルエーテルに対応する。
【0164】
特に、芳香族化合物Ｒ１は、ビスフェノールＡジグリシジルエーテルに対応する。
【0165】
３．２硬化剤Ｒ２
エポキシ樹脂Ｒの第２の必須化合物は、硬化剤Ｒ２である。
エポキシ樹脂Ｒの第２の必須化合物は、硬化剤Ｒ２である。
【0166】
エポキシ樹脂の硬化剤は、当業者に周知である。
【0167】
これは、一級アミン、二級アミン若しくは三級アミンなどのアミン、ケチミン、ポリアミド樹脂、イミダゾール誘導体、ポリメルカプタン、無水物、三フッ化ホウ素アミン錯体、ジシアンジアミド、有機酸ヒドラジド、光硬化剤又は紫外線硬化剤であり得る。
【0168】
特に、硬化剤としてのアミンは、ポリアミンである。これは、脂肪族ポリアミン又は芳香族アミンであり得る。
【0169】
硬化剤として適切なアミンには、ジエチレントリアミン（ＤＴＡ）、トリエチレンテトラミン（ＴＴＡ）、テトラエチレンペンタミン（ＴＥＰＡ）、ジプロペンジアミン（ＤＰＤＡ）、ジエチルアミノプロピルアミン（ＤＥＡＰＡ）、アミン２４８、Ｎ－アミノエチルピペラジン（Ｎ－ＡＥＰ）、Ｌａｍｉｒｏｎ Ｃ－２６０、Ａｒａｌｄｉｔ ＨＹ－９６４、メンタンジアミン（ＭＤＡ）、イソホロンジアミン（ＩＰＤＡ）、Ｓ ｃｕｒｅ２１１、Ｗａｎｄａｍｉｎ ＨＭ、１．３ＢＡＣ、ｍ－キシレンジアミン（ｍ－ＸＤＡ）、Ｓｈｏ－アミンＸ、アミンブラック、Ｓｈｏ－アミンブラック、Ｓｈｏ－アミンＮ、Ｓｈｏ－アミン１００１、Ｓｈｏ－アミン１０１０、メタフェニレンジアミン（ＭＰＤＡ）、ジアミノジフェニルメタン（ＤＤＭ）、ジアミノジフェニルスルホン（ＤＤＳ）、４，４’－メチレンビス（２，６－ジエチルアニリン）が含まれる。
【0170】
硬化剤Ｒ２として適切なイミダゾール誘導体には、２－メチルイミダゾール、２－フェニル－イミダゾール、３－ベンジル－２－メチルイミダゾール、５－メチル－２－フェニルイミダゾール、２－エチル－４－メチルイミダゾール、５－エチル－２－メチルイミダゾール又は１－シアノエチル－２－ウンデシルイミダゾリウムトリメリテートが含まれる。
【0171】
硬化剤Ｒ２として好適な無水物には、無水フタル酸、無水トリメリット酸、無水ピロメリット酸、無水ベンゾフェノントリカルボン酸、エチレングリコールビストリメリテート、グリセロールトリストリメリテート、無水マレイン酸、無水テトラヒドロフタル酸、無水エノメチレンテトラヒドロフタル酸、無水メチルエンドメチルデンテトラヒドロフタル酸、無水ドデセニルコハク酸、無水ヘキサヒドロフタル酸、無水ヘキサヒドロ－４－メチルフタル酸、無水コハク酸、無水メチルシクロヘキセンジカルボン酸、アルキルスチレン－無水マレイン酸コポリマー、無水クロレンド酸、ポリアゼライン酸無水物が含まれる。
【0172】
好ましくは、硬化剤Ｒ２は、一級アミン及びイミダゾール誘導体から選択される。
【0173】
３．３ 追加の化合物Ｒ３
エポキシ樹脂Ｒは、１分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有する少なくとも１種のエポキシ化合物にも基づき得る。適切なエポキシ化合物としては、芳香族エポキシ化合物、エポキシ化合物、脂環式エポキシ化合物及びエポキシ化合物が挙げられる。
エポキシ樹脂Ｒは、１分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有する少なくとも１種のエポキシ化合物にも基づき得る。適切なエポキシ化合物としては、芳香族エポキシ化合物、エポキシ化合物、脂環式エポキシ化合物及びエポキシ化合物が挙げられる。
【0174】
適切な芳香族エポキシ化合物には、１分子あたり２つ以上のエポキシド基を有する芳香族化合物が含まれ、例えばフェノール及びポリフェノールのポリグリシジルエーテル、例えばジグリシジルレゾルシノール、１，２，２－テトラキス（グリシジルオキシフェニル）エタン又は１，１，１－トリス（グリシジルオキシフェニル）メタン、ビスフェノールＡ（ビス（４－ヒドロキシフェニル）－２，２－プロパン）、ビスフェノールＦ（ビス（４－ヒドロキシフェニル）メタン）、ビスフェノールＣ（ビス（４－ヒドロキシフェニル）－２，２－ジクロロエチレン）及びビスフェノールＳ（４，４’－スルホニルジフェノール）のジグリシジルエーテル、これらのオリゴマーなど、フルオレン環含有エポキシ化合物、ナフタレン環含有エポキシ化合物、ジシクロペンタジエン変性フェノール系エポキシ化合物、エポキシ化ノボラック化合物及びエポキシ化クレゾールノボラック化合物、アミンのポリグリシジル付加物、例えばＮ，Ｎ－ジグリシジアニリン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラグリシジルジアミノジフェニルメタン（ＴＧＤＤＭ）、トリグリシジルアミノフェノール（ＴＧＡＰ）、トリグリシジルアミノクレゾール若しくはテトラグリシジルキシレンジアミン又はアミノアルコール、例えばトリグリシジルアミノフェノール、ポリカルボン酸のポリグリシジル酸付加物、例えばジグリシジルフタレート、ポリグリシジルシアヌレート、例えばトリグリシジルシアヌレート、ビニル化合物と共重合可能なグリシジル（メタ）アクリレートのコポリマー、例えばスチレングリシジルメタクリレートなどの既知の化合物が含まれる。
【0175】
１分子あたり２つ以上のエポキシド基を有する適切なエポキシ化合物としては、公知の市販の化合物、例えばＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラグリシジルジアミノジフェニルメタン（ＨｕｎｔｓｍａｎのＭＹ ９６６３、ＭＹ ７２０及びＭＹ ７２１など）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラグリシジル－ビス（４－アミノフェニル）－１，４－ジイソプロピルベンゼン（ＭｏｍｅｎｔｉｖｅのＥＰＯＮ １０７１など）；Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラクリシジル－ビス（４－アミノ－３，５－ジメチルフェニル）－１，４－ジイソプロピルベンゼン（ＭｏｍｅｎｔｉｖｅのＥＰＯＮ １０７２など）；ｐ－アミノフェノールのトリグリシジルエーテル（ＨｕｎｓｔｍａｎのＭＹ ０５１０など）；ｍ－アミノフェノールのトリグリシジルエーテル（ＨｕｎｓｔｍａｎのＭＹ ０６１０など）；２，２－ビス（４，４’－ジヒドロキシフェニル）プロパンなどのビスフェノールＡに基づく物質のジグリシジルエーテル（ＤｏｗのＤＥＲ ６６１又はＭｏｍｅｎｔｉｖｅのＥＰＯＮ ８２８など）及び好ましくは２５℃で８～２０Ｐａ・ｓの粘度のノボラック樹脂；フェノールノボラック樹脂のグリシジルエーテル（ＤｏｗのＤＥＮ ４３１又はＤＥＮ ４３８など）；ジシクロペンタジエンに基づくフェノールノボラック（ＨｕｎｔｓｍａｎのＴａｃｔｉｘ（登録商標）５５６など）；ジグリシジル１，２－フタレート；ジヒドロキシジフェニルメタンのジグリシジル誘導体（ＨｕｎｔｓｍａｎのＰＹ ３０６など）が挙げられる。
【0176】
１分子あたり２つ以上のエポキシド基を有する適切な脂環式エポキシ化合物には、例えば、ビス（２，３－エポキシシクロペンチル）エーテル、ビス（２，３－エポキシシクロペンチル）エーテルとエチレングリコールとのコポリマー、ジシクロペンタジエンジエポキシド、４－ビニルシクロヘキセンジオキシド、３，４－エポキシシクロヘキシルメチル、３，４－エポキシシクロヘキサンカルボキシレート、１，２，８，９－ジエポキシリモネン（リモネンジオキシド）、３，４－エポキシ－６－メチル－シクロヘキシルメチル、３，４－エポキシ－６－メチルシクロヘキサンカルボキシレート、ビス（３，４－エポキシ－６－メチルシクロヘキシルメチル）アジペート、２－（７－オキサビシクロ［４．１．０］ヘプト－３－イル）スピロ［１，３－ジオキサン－５，３’－［７］オキサビシクロ［４．１．０］ヘプタン］、アリルシクロペンテニルエーテルのジエポキシド、１，４－シクロヘキサジエンジエポキシド、１，４－シクロヘキサンメタノールジグリジカルエーテル、ビス（３，４－エポキシシクロヘキシルメチル）アジペート、３，４－エポキシ－６－メチルシクロヘキサンカルボキシレート、ジグリシジル１，２－シクロヘキサンカルボキシレート、３，４－エポキシシクロヘキシルメチルメタクリレート、３－（オキシラン－２－イル）－７－オキサビシクロ［４．１．０］ヘプタン、ビス（２，３－エポキシプロピル）シクロヘキサ－４－エン－１，２－ジカルボキシレート、４，５－エポキシテトラヒドロフタル酸ジグリシジルエステル、ポリ［オキシ（オキシラニル－１，２－シクロヘキサンジイル）］α－ヒドロ－ω－ヒドロキシ－エーテル、ビ－７－オキサビシクロ［４．１．０］ヘプタンなどの公知の化合物が含まれる。
【0177】
１分子あたり２つ以上のエポキシド基を有する適切な脂肪族エポキシ化合物には、例えば、ブタンジオールジグリシジルエーテル、エポキシ化ポリブタジエン、二酸化ジペンテン、トリメチロールプロパントリグリシジルエーテル、ビス［２－（２－ブトキシエチレンオキシ）エチル）エチル］アジペート、ヘキサンジオールジグリシジルエーテル及び水素化ビスフェノールＡエポキシ樹脂などの公知の化合物が含まれる。
【0178】
適切な脂環式エポキシ化合物及び脂肪族エポキシ化合物には、例えば、３’，４’－エポキシシクロヘキサンメチル－３，４－エポキシシクロヘキシルカルボキシレート（ＣＥＬＬＯＸＩＤＥ（商標）２０２１Ｐ樹脂（Ｄａｉｃｅｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及びＡＲＡＤＩＴＥ ＣＹ １７９（Ｈｕｎｔｓｍａｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ））、ビ－７－オキサビシクロ［４．１．０］ヘプタン（ＣＥＬＬＯＸＩＤＥ（商標）８０１０（Ｄａｉｃｅｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））、ポリ［オキシ（オキシラニル－１，２－シクロヘキサンジイル）］、α－ヒドロ－ω－ヒドロキシ－エーテルと２－エチル－２－（ヒドロキシメチル）－１，３－プロパンジオールの３：１混合物（ＥＨＰＥ ３１５０（Ｄａｉｃｅｌ））などの公知の市販の化合物が含まれる。
【0179】
エポキシ樹脂は、任意選択的に、芳香族モノエポキシ化合物、モノ脂環式エポキシ化合物及び脂肪族モノエポキシ化合物から選択される、１分子あたり１つのエポキシド基を有する１種以上のモノエポキシド化合物にさらに基づき得る。適切なモノエポキシド化合物には、例えば、飽和脂環式モノエポキシド、例えば３，３’－ビス（クロロメチル）オキサシクロブタン、イソブチレンオキシド、スチレンオキシド、オレフィンモノエポキシド、例えばシクロドデカジエンモノエポキシド、３，４－エポキシ－１－ブテンなどの公知の化合物が含まれる。
【0180】
４．使用
本発明は、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ、特にＮ．アロマチシボランス（Ｎ．ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）株由来のグルタチオンＳ－トランスフェラーゼの、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを分解するための使用も対象とする。
本発明は、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ、特にＮ．アロマチシボランス（Ｎ．ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）株由来のグルタチオンＳ－トランスフェラーゼの、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを分解するための使用も対象とする。
【0181】
グルタチオンＳ－トランスフェラーゼは、「工程ｂ）」の段落で上述した通りである。
【0182】
エポキシ樹脂Ｒは、「エポキシ樹脂」の段落で上述した本発明の方法で使用されるエポキシ樹脂に対応する。
【0183】
さらに、本発明は、パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼ、好ましくは緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来のパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼ、より好ましくは配列番号１に示されるペプチド配列を示す変異パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼの、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを分解するための使用に関する。
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを分解するための使用に関する。
【0184】
パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼは、段落「工程ｃ）」で上述した通りである。
【0185】
エポキシ樹脂Ｒは、「エポキシ樹脂」の段落で上述した本発明の方法で使用されるエポキシ樹脂に対応する。
【0186】
５．複合材料をリサイクルする方法
本発明は、複合材料をリサイクルする方法であって、
ａ’）複合材料であって、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを含む複合材料ＣＭを提供する工程、
ｂ’）工程ａ’）後に得られた複合材料ＣＭを処理する工程であって、本発明による方法でエポキシ樹脂Ｒを分解する工程を含み、この場合、工程ａ）のエポキシ樹脂Ｒは、複合材料ＣＭである、工程、
ｃ’）工程ｂ’）後、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料を得る工程
を含む方法を対象とする。
本発明は、複合材料をリサイクルする方法であって、
ａ’）複合材料であって、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを含む複合材料ＣＭを提供する工程、
ｂ’）工程ａ’）後に得られた複合材料ＣＭを処理する工程であって、本発明による方法でエポキシ樹脂Ｒを分解する工程を含み、この場合、工程ａ）のエポキシ樹脂Ｒは、複合材料ＣＭである、工程、
ｃ’）工程ｂ’）後、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料を得る工程
を含む方法を対象とする。
【0187】
その場合、工程ｂ’）において、エポキシ樹脂Ｒを分解する工程は、以下に対応する：
ａ）本発明によるエポキシ樹脂Ｒを含む複合材料を溶媒に添加して、混合物ＭＡを得る工程、
ｂ）工程ａ）後に得られた混合物ＭＡを酵素処理する工程であって、混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢを得る工程を含む、工程、
ｃ）任意選択的に、工程ｂ）と同時に混合物ＭＡを酵素処理するか、又は工程ｂ）後に得られた混合物ＭＢを酵素処理する工程であって、混合物ＭＡ又は混合物ＭＢをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む、工程、
ｄ）任意選択的に、混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを化学的に処理する工程であって、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを接触させて、混合物ＭＤを得る工程を含む、工程。
ａ）本発明によるエポキシ樹脂Ｒを含む複合材料を溶媒に添加して、混合物ＭＡを得る工程、
ｂ）工程ａ）後に得られた混合物ＭＡを酵素処理する工程であって、混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させて、混合物ＭＢを得る工程を含む、工程、
ｃ）任意選択的に、工程ｂ）と同時に混合物ＭＡを酵素処理するか、又は工程ｂ）後に得られた混合物ＭＢを酵素処理する工程であって、混合物ＭＡ又は混合物ＭＢをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させて、混合物ＭＣを得る工程を含む、工程、
ｄ）任意選択的に、混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを化学的に処理する工程であって、強ブレンステッド塩基を含む水溶液と混合物ＭＢ又は混合物ＭＣを接触させて、混合物ＭＤを得る工程を含む、工程。
【0188】
複合材料は、物理的又は化学的特性が大きく異なる２つ以上の構成材料から製造された材料であり、それらを組み合わせると、個々の構成要素と異なる特徴を有する材料がもたらされる。したがって、典型的には、複合材料は、マトリックスと強化材とを含む。
【0189】
本発明では、複合材料は、強化材と、上述した少なくとも１種のエポキシ樹脂Ｒを含むマトリックスとを含む。
【0190】
強化材は、好ましくは、強化繊維である。これは、無機、有機又は植物繊維、特にガラス繊維又は炭素繊維であり得る。より好ましくは、強化材は、炭素繊維である。
【0191】
マトリックスは、上述の少なくとも１種のエポキシ樹脂Ｒを含む。したがって、マトリックスは、上述した１種以上のエポキシ樹脂を含むことができる。
【0192】
マトリックスは、不飽和ポリエステル、ポリビニルエステル、フェノール樹脂及びポリウレタンなどの他の熱硬化性樹脂を含むこともできる。
【0193】
マトリックスは、上述した少なくとも１種の追加の化合物Ｒ３と、上述した少なくとも１種の硬化剤Ｒ２とに基づく別のエポキシ樹脂を含むこともできる。
【0194】
マトリックスは、ポリエーテルイミド（ＰＥＩ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリスルホン、ポリアミドイミド（ＰＡＩ）、ポリアミド（ＰＡ）、ポリイミド、ポリフェニレンスルフィド（ＰＰＳ）、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、ポリオレフィン又はこれらの組み合わせなどの熱可塑性樹脂を含むこともできる。
【0195】
有利には、マトリックスは、ポリアミド粒子、ポリイミド粒子又はこれらの組み合わせを含む。
【0196】
特に、マトリックスは、ポリエーテルイミド、ポリエーテルスルホン又はこれらの組み合わせを含む。これらの熱可塑性樹脂は、強化剤として使用することができる。その場合、マトリックスは、熱可塑性強化エポキシ樹脂である。
【0197】
マトリックスは、エポキシ樹脂の硬化を強化又は促進する促進剤も含むことができる。
【0198】
マトリックスは、コアシェルゴム、難燃剤、湿潤剤、顔料、染料、ＵＶ吸収剤、充填剤、導電性粒子及び粘度調整剤などの性能調整剤を含むことができる。
【0199】
好ましくは、エポキシ樹脂がマトリックスの主成分である。より好ましくは、これは、マトリックスの少なくとも５０重量％を占める。
【0200】
上の「ラウンド」の段落で説明したように、工程ｂ’）後に得られた混合物は、本発明によるエポキシ樹脂を分解する方法の１回目のラウンドを行った後、本発明によるエポキシ樹脂を分解する方法に再び供され得、したがって工程ｂ’）で複合材料ＣＭが置き換えられる。次いで、本発明による方法の２回目のラウンドが行われる。この方法で複数回のラウンドを行うことができる。
【0201】
その場合、複合材料をリサイクルする方法は、以下の工程を含む：
ａ’）複合材料であって、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを含む複合材料ＣＭを提供する工程、
ｂ１’）工程ａ’）後に得られた複合材料ＣＭを処理する工程であって、本発明による方法でエポキシ樹脂Ｒを分解する工程を含み、この場合、工程ａ）のエポキシ樹脂Ｒは、複合材料ＣＭである、工程、
ｂ２’）工程ｂ１’）後に得られる、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料を処理することにより、工程ｂ１’）を繰り返す工程であって、処理は、本発明による方法でエポキシ樹脂Ｒを分解する工程を含み、この場合、工程ａ）のエポキシ樹脂Ｒは、工程ｂ１’）後に得られる、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料である、工程、
ｃ’）工程ｂ’）後、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料を得る工程。
ａ’）複合材料であって、
－ １分子あたり少なくとも２つのエポキシド基を有し、且つ少なくとも１つのグリシジルオキシ基を有する少なくとも１つの芳香環を含む少なくとも１種の芳香族化合物Ｒ１と、
－ 少なくとも１種の硬化剤Ｒ２と
に基づくエポキシ樹脂Ｒを含む複合材料ＣＭを提供する工程、
ｂ１’）工程ａ’）後に得られた複合材料ＣＭを処理する工程であって、本発明による方法でエポキシ樹脂Ｒを分解する工程を含み、この場合、工程ａ）のエポキシ樹脂Ｒは、複合材料ＣＭである、工程、
ｂ２’）工程ｂ１’）後に得られる、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料を処理することにより、工程ｂ１’）を繰り返す工程であって、処理は、本発明による方法でエポキシ樹脂Ｒを分解する工程を含み、この場合、工程ａ）のエポキシ樹脂Ｒは、工程ｂ１’）後に得られる、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料である、工程、
ｃ’）工程ｂ’）後、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料を得る工程。
【0202】
有利には、複合材料ＣＭは、炭素繊維を含む。したがって、工程ｃ’）において、エポキシ樹脂含有量が減少した複合材料が得られ、炭素繊維を単離することができる。
【0203】
本発明による複合材料をリサイクルする方法は、したがって、複合材料から炭素繊維をリサイクルすることを可能にする。
【実施例】
【0204】
実施例で試験したエポキシ樹脂は、以下の通りである：樹脂Ｒ１は、４，４’－メチレンビス（２，６－ジエチルアニリン）の存在下でビスフェノールＡジグリシジルエーテル（ＢＡＤＧＥ又はＤＧＥＢＡとも呼ばれる）を重合することによって得られ、以下の一般構造を有する。
【化3】
【0205】
樹脂Ｒ２は、イミダゾール誘導体（５－エチル－２－メチルイミダゾール）の存在下でビスフェノールＡジグリシジルエーテル（ＢＡＤＧＥ又はＤＧＥＢＡとも呼ばれる）を重合することによって得られ、以下の一般構造を有する。
【化4】
【0206】
実施例では、溶解したＧＳＴ発現細菌の培養液としてＧＳＴが添加される。これは、以下のプロセスに従って製造される：
１．ＧＳＴ発現株を培養し、遠心分離して細胞ペレットを得る；
２．細胞ペレットをリン酸緩衝液（０．１Ｍ ｐＨ＝７．０）と１ｇ（ペレット）／１０ｍｌ（緩衝液）の割合で混合する；
３．リン酸緩衝液中で超音波処理することによって細胞を溶解し、ＧＳＴを含む培養液を得る。
１．ＧＳＴ発現株を培養し、遠心分離して細胞ペレットを得る；
２．細胞ペレットをリン酸緩衝液（０．１Ｍ ｐＨ＝７．０）と１ｇ（ペレット）／１０ｍｌ（緩衝液）の割合で混合する；
３．リン酸緩衝液中で超音波処理することによって細胞を溶解し、ＧＳＴを含む培養液を得る。
【0207】
実施例では、溶解したＰＨＢＨ発現細菌の培養液としてＰＨＢＨを添加する。これは、以下のプロセスに従って製造される：
１．ＰＨＢＨ発現株を培養し、遠心分離して細胞ペレットを得る；
２．細胞ペレットをリン酸緩衝液（０．１Ｍ ｐＨ＝７．０）と１ｇ（ペレット）／１０ｍｌ（緩衝液）の割合で混合する；
３．リン酸緩衝液中で超音波処理することによって細胞を溶解し、ＰＨＢＨを含む培養液を得る。
１．ＰＨＢＨ発現株を培養し、遠心分離して細胞ペレットを得る；
２．細胞ペレットをリン酸緩衝液（０．１Ｍ ｐＨ＝７．０）と１ｇ（ペレット）／１０ｍｌ（緩衝液）の割合で混合する；
３．リン酸緩衝液中で超音波処理することによって細胞を溶解し、ＰＨＢＨを含む培養液を得る。
【0208】
実施例では、溶解したＥＴ００４発現細菌の培養液としてＥＴ００４が添加される。これは、以下のプロセスに従って製造される：
１．ＥＴ００４発現株を培養し、遠心分離して細胞ペレットを得る；
２．細胞ペレットをリン酸緩衝液（０．１Ｍ ｐＨ＝７．０）と１ｇ（ペレット）／１０ｍｌ（緩衝液）の割合で混合する；
３．リン酸緩衝液中で超音波処理することによって細胞を溶解し、ＥＴ００４を含む培養液を得る。
１．ＥＴ００４発現株を培養し、遠心分離して細胞ペレットを得る；
２．細胞ペレットをリン酸緩衝液（０．１Ｍ ｐＨ＝７．０）と１ｇ（ペレット）／１０ｍｌ（緩衝液）の割合で混合する；
３．リン酸緩衝液中で超音波処理することによって細胞を溶解し、ＥＴ００４を含む培養液を得る。
【0209】
Ａ － 工程ａ）溶媒へのエポキシ樹脂の添加
この工程は、次の工程で使用される酵素の鍵となる結合部位への近づきやすさを改善するために、エポキシ樹脂を膨潤させ、潜在的に脱架橋することを目的とする。
この工程は、次の工程で使用される酵素の鍵となる結合部位への近づきやすさを改善するために、エポキシ樹脂を膨潤させ、潜在的に脱架橋することを目的とする。
【0210】
最初に、一連の溶媒を試験した（水、Ｎａ２ＨＰＯ４の水溶液、Ｈ３ＰＯ４の水溶液、アンモニアの水溶液、酢酸、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ヘキサン及びフェノール）。
【0211】
この試験は、０．１ｇ／１ｍｌの樹脂／溶媒比率でエポキシ樹脂Ｒ１又はＲ２を溶媒に室温で８０日間浸漬することを含む。これらの予備分析は、これらの溶媒にさらされた後の材料の挙動を評価するために行った。
【0212】
Ｎａ２ＨＰＯ４の水溶液は、樹脂の変性を促進する能力のみならず、取り扱いが安全であり、安価であり、リサイクル可能であるという理由からも選択した。
【0213】
工程ａ）後に得られた混合物を、この工程中に起こっていることを評価するために調べた。
【0214】
したがって、工程ａ）は、以下の通りに樹脂Ｒ２に対して行った：
第１の工程：０．２１ｇの樹脂Ｒ２＋２０．５６ｇのＮａ２ＨＰＯ４＊１２Ｈ２Ｏ（Ｍ．Ｗ．３５８．１４ｇ／ｍｏｌ）の溶液を調製し、９８．０５ｇの２Ｏを添加し、９０℃で１時間撹拌する；
第２の工程：混合物の重量が１１９ｇから５５ｇになるまで、前の工程からの溶液を８０℃において真空下で蒸発させる；
第３の工程：前の濃縮された溶液を９０℃の脱イオンＨ２Ｏ３００ｇで希釈する；
第４の工程：混合物の重量が４４ｇに減少するまで、８０℃において真空下で蒸発させ、その後、９０℃の水を４５６ｇ添加する；
第５の工程：前の工程からの溶液を遠心分離して、黄色がかった上澄みと、２種類の固体（一方は、黄色味を帯びており、元の樹脂に類似しており、他方は、灰色味を帯びており、脆く、不透明である）を得る。
第１の工程：０．２１ｇの樹脂Ｒ２＋２０．５６ｇのＮａ２ＨＰＯ４＊１２Ｈ２Ｏ（Ｍ．Ｗ．３５８．１４ｇ／ｍｏｌ）の溶液を調製し、９８．０５ｇの２Ｏを添加し、９０℃で１時間撹拌する；
第２の工程：混合物の重量が１１９ｇから５５ｇになるまで、前の工程からの溶液を８０℃において真空下で蒸発させる；
第３の工程：前の濃縮された溶液を９０℃の脱イオンＨ２Ｏ３００ｇで希釈する；
第４の工程：混合物の重量が４４ｇに減少するまで、８０℃において真空下で蒸発させ、その後、９０℃の水を４５６ｇ添加する；
第５の工程：前の工程からの溶液を遠心分離して、黄色がかった上澄みと、２種類の固体（一方は、黄色味を帯びており、元の樹脂に類似しており、他方は、灰色味を帯びており、脆く、不透明である）を得る。
【0215】
得られた混合物のＨＰＬＣ及びＭＳ分析により、最初の工程ａ）が樹脂を分解させることが観察された。樹脂のリン酸化及び／又は樹脂のエーテル結合の切断により得られる生成物を特に同定することができた。
【0216】
Ｂ － 工程ｂ）混合物ＭＡをグルタチオンＳ－トランスフェラーゼと接触させることによる酵素処理
樹脂Ｒ１及びＲ２に対して工程ａ）を行ってＭＡ１及びＭＡ２をそれぞれ得た後、Ｎ．アロマチシボランス（Ｎ．ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）株由来の「ＮａＬｉｇＥ」と名付けられた酵素の活性を評価するために、工程ｂ）を以下に記載の方法に従って行った。
樹脂Ｒ１及びＲ２に対して工程ａ）を行ってＭＡ１及びＭＡ２をそれぞれ得た後、Ｎ．アロマチシボランス（Ｎ．ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）株由来の「ＮａＬｉｇＥ」と名付けられた酵素の活性を評価するために、工程ｂ）を以下に記載の方法に従って行った。
【0217】
エチルバニリンもモデルとしてＭＡ１及びＭＡ２と共に試験した。
【0218】
工程ａ）混合物ＭＡ１及びＭＡ２の調製：
第１の工程：Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ塩が完全に溶解するまで、６０℃で１．９８ｇの樹脂＋５０．６５ｇの脱イオンＨ２Ｏ；＋９０．００ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ、＋１８９ｇの脱イオンＨ２Ｏの溶液を調製する；
第２の工程：前の工程からの溶液を真空下８０℃で蒸発させて水を除去し、次いで３００ｇの脱イオンＨ２Ｏを添加し、その後、完全に水分が除去されるまで再度蒸発させる；
第３の工程：第２の工程を繰り返す；
第４の工程：９０℃の脱イオンＨ２Ｏを、工程３後に得られた乾燥固体に添加する；
第５の工程：９．９６ｇのβ－シクロデキストリンを前の溶液（総重量１４２ｇ）に添加して混合する；
第６の工程：混合物を９０℃で２日間撹拌する；
第７の工程：混合物を希釈して２００ｍｌの体積を得る。
第１の工程：Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ塩が完全に溶解するまで、６０℃で１．９８ｇの樹脂＋５０．６５ｇの脱イオンＨ２Ｏ；＋９０．００ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ、＋１８９ｇの脱イオンＨ２Ｏの溶液を調製する；
第２の工程：前の工程からの溶液を真空下８０℃で蒸発させて水を除去し、次いで３００ｇの脱イオンＨ２Ｏを添加し、その後、完全に水分が除去されるまで再度蒸発させる；
第３の工程：第２の工程を繰り返す；
第４の工程：９０℃の脱イオンＨ２Ｏを、工程３後に得られた乾燥固体に添加する；
第５の工程：９．９６ｇのβ－シクロデキストリンを前の溶液（総重量１４２ｇ）に添加して混合する；
第６の工程：混合物を９０℃で２日間撹拌する；
第７の工程：混合物を希釈して２００ｍｌの体積を得る。
【0219】
樹脂Ｒ１に対して工程１～７を行った後に得られた混合物をＭＡ１と表す。
【0220】
樹脂Ｒ２に対して工程１～７を行った後に得られた混合物をＭＡ２と表す。
【0221】
【表1】
【0222】
表Ａに従い、適切な容積の反応器に成分を以下の順序で入れた：１番目：基質（エチルバニリン又はＭＡ１又はＭＡ２）；２番目：３ＭのＮａＯＨ水溶液；３番目：グルタチオン；４番目：グリシン；５番目：ＧＳＴ酵素。反応は、２５℃／２２０ｒｐｍで５日間行う。クロマトグラフプロファイルの比較のために、サンプルをＨＰＬＣ分析にかけた（サンプルは、０時間、１６時間、４０時間、６６時間及び１２０時間の時点で採取した）。
【0223】
ＨＰＬＣキャラクタリゼーション条件：
（１）移動相
溶液Ａ：メタノール；
溶液Ｂ：１％のギ酸を含むｄｄＨ２Ｏ；
Ａ：Ｂ比＝３５％：６５％
（２）カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃ１８、２５０ｍｍ＊４．６ｍｍ
（３）検出波長：２８０ｎｍ
（４）カラム温度：２５℃
（５）流量：１ｍｌ／分。
（１）移動相
溶液Ａ：メタノール；
溶液Ｂ：１％のギ酸を含むｄｄＨ２Ｏ；
Ａ：Ｂ比＝３５％：６５％
（２）カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃ１８、２５０ｍｍ＊４．６ｍｍ
（３）検出波長：２８０ｎｍ
（４）カラム温度：２５℃
（５）流量：１ｍｌ／分。
【0224】
結果：
ＨＰＬＣクロマトグラフィーにより、混合物ＭＡ１及びＭＡ２の両方で時間と共にピークの変化が観察された。２．７分、３．１分、３．５分の３つの主要なピークが０時間で観察された。２．７分のピークは、時間と共に増加し、ＧＳＴによる酵素処理中の混合物のさらなる分解を示している。
ＨＰＬＣクロマトグラフィーにより、混合物ＭＡ１及びＭＡ２の両方で時間と共にピークの変化が観察された。２．７分、３．１分、３．５分の３つの主要なピークが０時間で観察された。２．７分のピークは、時間と共に増加し、ＧＳＴによる酵素処理中の混合物のさらなる分解を示している。
【0225】
グルタチオンＳ－トランスフェラーゼの作用機序は、アリールエーテル結合の切断であると考えられた。これは、エチルバニリンを用いて以下のモデル反応を実行することによって確認された。
【化5】
【0226】
エチルバニリン基質の消費は、実際にＨＰＬＣによって観察された。
【0227】
グルタチオンＳ－トランスフェラーゼによる酵素処理の工程ｂ）により、樹脂が部分的オリゴマー化された。
【0228】
Ｃ － 工程ｃ）混合物ＭＡをパラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼと接触させることによる酵素処理
樹脂Ｒ１及びＲ２に対して工程ａ）を行い、混合物ＭＡ１及びＭＡ２をそれぞれ得た後、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の変異酵素の活性を評価するために、以下の方法に従って工程ｃ）を行った：
－ Ｍ０１０－２（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来のＬ１９９Ｖ及びＹ３８５Ｆ変異酵素）、
－ Ｍ０１２－２（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来のＬ１９９Ｇ、Ｙ３８５Ｆ変異酵素）、
－ ＹＭ３２２－２（コリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）由来のＬ２００Ｖ、Ｙ３８５Ｆ、Ｄ３９Ｙ変異酵素）、及び
－ Ｍ０２０－１（コリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）由来の野生型酵素）。
樹脂Ｒ１及びＲ２に対して工程ａ）を行い、混合物ＭＡ１及びＭＡ２をそれぞれ得た後、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の変異酵素の活性を評価するために、以下の方法に従って工程ｃ）を行った：
－ Ｍ０１０－２（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来のＬ１９９Ｖ及びＹ３８５Ｆ変異酵素）、
－ Ｍ０１２－２（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来のＬ１９９Ｇ、Ｙ３８５Ｆ変異酵素）、
－ ＹＭ３２２－２（コリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）由来のＬ２００Ｖ、Ｙ３８５Ｆ、Ｄ３９Ｙ変異酵素）、及び
－ Ｍ０２０－１（コリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）由来の野生型酵素）。
【0229】
工程ａ）混合物ＭＡ１及びＭＡ２の調製：
第１の工程：Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ塩が完全に溶解するまで、６０℃で１．９８ｇの樹脂＋５０．６５ｇの脱イオンＨ２Ｏ；＋９０．００ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ、＋１８９ｇの脱イオンＨ２Ｏの溶液を調製する；
第２の工程：真空下８０℃で蒸発させて水を除去し、次いで３００ｇの脱イオンＨ２Ｏを添加し、その後、完全に水分が除去されるまで再度蒸発させる；
第３の工程：第２の工程を繰り返す；
第４の工程：９０℃の脱イオンＨ２Ｏを乾燥固体に添加する；
第５の工程：９．９６ｇのβ－シクロデキストリンを前の溶液（総重量１４２ｇ）に添加して混合する；
第６の工程：混合物を９０℃で２日間撹拌する；
第７の工程：混合物を２００ｍｌに希釈する。
第１の工程：Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ塩が完全に溶解するまで、６０℃で１．９８ｇの樹脂＋５０．６５ｇの脱イオンＨ２Ｏ；＋９０．００ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ、＋１８９ｇの脱イオンＨ２Ｏの溶液を調製する；
第２の工程：真空下８０℃で蒸発させて水を除去し、次いで３００ｇの脱イオンＨ２Ｏを添加し、その後、完全に水分が除去されるまで再度蒸発させる；
第３の工程：第２の工程を繰り返す；
第４の工程：９０℃の脱イオンＨ２Ｏを乾燥固体に添加する；
第５の工程：９．９６ｇのβ－シクロデキストリンを前の溶液（総重量１４２ｇ）に添加して混合する；
第６の工程：混合物を９０℃で２日間撹拌する；
第７の工程：混合物を２００ｍｌに希釈する。
【0230】
樹脂Ｒ１に対して工程１～７を行った後に得られた混合物をＭＡ１と表す。
【0231】
樹脂Ｒ２に対して工程１～７を行った後に得られた混合物をＭＡ２と表す。
【0232】
【表2】
【0233】
表Ｂに従い、適切な容積の反応器に成分を以下の順序で入れた：１番目：基質（工程ａの工程７後に得られたＭＡ１又はＭＡ２）、２番目：グルコース、３番目：ＮＡＤＰ、４番目：ＦＡＤ、５番目：ＥＴ００４、６番目：ＰＨＢＨ。反応は、３５℃／２２０ｒｐｍで９８時間行う。クロマトグラフプロファイルの比較のために、サンプルをＨＰＬＣ分析にかけた（サンプルは、０時間、３０時間、９６時間の時点で採取した）。
【0234】
ＨＰＬＣ分析条件：
（１）移動相
溶液Ａ：メタノール；
溶液Ｂ：１％のリン酸を含むｄｄＨ２Ｏ；
Ａ：Ｂ＝３０％：７０％
（２）カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃ１８、２５０ｍｍ＊４．６ｍｍ
（３）検出波長：２１０ｎｍ
（４）カラム温度：２５℃
（５）流量：１ｍｌ／分。
（１）移動相
溶液Ａ：メタノール；
溶液Ｂ：１％のリン酸を含むｄｄＨ２Ｏ；
Ａ：Ｂ＝３０％：７０％
（２）カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃ１８、２５０ｍｍ＊４．６ｍｍ
（３）検出波長：２１０ｎｍ
（４）カラム温度：２５℃
（５）流量：１ｍｌ／分。
【0235】
結果：
ＨＰＬＣクロマトグラフィーにより、混合物ＭＡ１及びＭＡ２の両方で時間と共にピークの変化が観察され、ＰＨＢＨを用いた酵素処理中に混合物がさらに分解されることが実証された。特に、Ｍ０１０－２を用いたＭＡ１の酵素処理で最も興味深い結果が観察され、ＨＰＬＣにより３．５分及び４．２分におけるピークの経時的な有意な増加が示された（表１及び２を参照されたい）。
ＨＰＬＣクロマトグラフィーにより、混合物ＭＡ１及びＭＡ２の両方で時間と共にピークの変化が観察され、ＰＨＢＨを用いた酵素処理中に混合物がさらに分解されることが実証された。特に、Ｍ０１０－２を用いたＭＡ１の酵素処理で最も興味深い結果が観察され、ＨＰＬＣにより３．５分及び４．２分におけるピークの経時的な有意な増加が示された（表１及び２を参照されたい）。
【0236】
【表3】
【0237】
【表4】
【0238】
パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼ（ＰＨＢＨ）の作用機序は、アリール環のヒドロキシル化であると考えられた。これは、以下のモデル反応を実行することにより確認された。
ａ．モデル反応１ － 基質として３，４－ジヒドロキシ安息香酸を使用：
ｂ．モデル反応２ － 基質としてビスフェノールＡ（ＢＦＡ）を使用：
ａ．モデル反応１ － 基質として３，４－ジヒドロキシ安息香酸を使用：
【化6】
【化7】
【0239】
Ｄ － 同時の工程ｂ）及びｃ）を行うことによる酵素処理
工程ａ）：
（１）Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ塩が完全に溶解するまで、６０℃で１．９８ｇの樹脂＋５０．６５ｇの脱イオンＨ２Ｏ；＋９０．００ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ、＋１８９ｇの脱イオンＨ２Ｏの溶液を調製する；
（２）前の工程からの溶液を真空下８０℃で蒸発させて水を除去し、次いで約３００ｇの脱イオンＨ２Ｏを添加し、その後、完全に水分が除去されるまで再度蒸発させる；
（３）再度第２の工程を繰り返す；
（４）９０℃の脱イオンＨ２Ｏを工程３後に得た乾燥固体に添加する；
（５）９．９６ｇのβ－シクロデキストリンを工程４で得た混合物（総重量１４２ｇ）に添加して混合する；
（６）混合物を９０℃で２日間撹拌する；
（７）混合物を希釈して２００ｍｌの体積を得る。
工程ａ）：
（１）Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ塩が完全に溶解するまで、６０℃で１．９８ｇの樹脂＋５０．６５ｇの脱イオンＨ２Ｏ；＋９０．００ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ、＋１８９ｇの脱イオンＨ２Ｏの溶液を調製する；
（２）前の工程からの溶液を真空下８０℃で蒸発させて水を除去し、次いで約３００ｇの脱イオンＨ２Ｏを添加し、その後、完全に水分が除去されるまで再度蒸発させる；
（３）再度第２の工程を繰り返す；
（４）９０℃の脱イオンＨ２Ｏを工程３後に得た乾燥固体に添加する；
（５）９．９６ｇのβ－シクロデキストリンを工程４で得た混合物（総重量１４２ｇ）に添加して混合する；
（６）混合物を９０℃で２日間撹拌する；
（７）混合物を希釈して２００ｍｌの体積を得る。
【0240】
樹脂Ｒ１に対して工程１～７を行った後に得られた混合物をＭＡ１と表す。
【0241】
樹脂Ｒ２に対して工程１～７を行った後に得られた混合物をＭＡ２と表す。
【0242】
工程ｂ）及びｃ）：
【0243】
【表5】
【0244】
表Ｃに従い、適切な反応器に化合物を以下の順序で入れた：１番目：基質（混合物ＭＡ１又はＭＡ２）、２番目：ＮａＯＨ水溶液（ｐＨ９）、３番目：グルコース、４番目：還元型グルタチオン（ＧＳＨ）、５番目：グリシン、６番目：ＮＡＤＰ、７番目：ＦＡＤ、８番目：ＥＴ００４、９番目：ＰＨＢＨ、１０番目：ＧＳＴ。反応媒体を均一になるまで撹拌する。反応は、３０℃／２２０ｒｐｍで７２～９６時間で行う。反応媒体を０時間、２０時間、４８時間、７２時間及び９６時間の時点でサンプリングした。酵素を使用しない対照実験も行った。
【0245】
ＭＡ１に対して工程ｂ）及びｃ）を行った後に得られた混合物をＭＣ１と表す。
【0246】
ＭＡ２に対して工程ｂ）及びｃ）を行った後に得られた混合物をＭＣ２と表す。
【0247】
ＭＡ１に対して酵素なしで実験を行った後に得られた混合物は、ＭＣ１－ＣＴＲＬと表す。
【0248】
ＭＡ２に対して酵素なしで実験を行った後に得られた混合物は、ＭＣ２－ＣＴＲＬと表す。
【0249】
ＨＰＬＣ分析条件
（１）移動相
溶液Ａ：メタノール；
溶液Ｂ：１％のリン酸を含むｄｄＨ２Ｏ；
Ａ：Ｂ＝３０％：７０％
（２）カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃ１８、２５０ｍｍ＊４．６ｍｍ
（３）検出波長：２１０ｎｍ
（４）カラム温度：２５℃
（５）流量：１ｍｌ／分。
（１）移動相
溶液Ａ：メタノール；
溶液Ｂ：１％のリン酸を含むｄｄＨ２Ｏ；
Ａ：Ｂ＝３０％：７０％
（２）カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃ１８、２５０ｍｍ＊４．６ｍｍ
（３）検出波長：２１０ｎｍ
（４）カラム温度：２５℃
（５）流量：１ｍｌ／分。
【0250】
【表6】
【0251】
上の表３は、酵素ＧＳＴ及びＰＨＢＨの存在の影響並びに併用した場合のそれらの効果を示す。時間に応じたピーク面積の変化は、樹脂Ｒ１及びＲ２に由来し、ＧＳＴ及びＰＨＢＨで処理された混合物ＭＣ１及びＭＣ２の特定の保持時間において溶出又は同時溶出する分子種の濃縮を示している。対照的に、酵素で処理されていない樹脂Ｒ１及びＲ２のサンプル（ＭＣ１－ＣＴＲＬ及びＭ２－ＣＴＲＬ）では、ほとんど何も起こらなかった。
【0252】
Ｅ － スケールアップ
工程ａ）
第１の工程：１０．０４ｇの樹脂Ｒ１＋１０２．０８ｇの脱イオンＨ２Ｏ；＋１００．０１ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏの溶液を調製し、Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ塩が完全に溶解するまで６０℃で混合する；
第２の工程：前の工程からの溶液を真空下８０℃で蒸発させて水を除去し、次いで約３００ｇの脱イオンＨ２Ｏを添加し、その後、完全に水分が除去されるまで再度蒸発させる；
第３の工程：第２の工程を繰り返す；
第４の工程：９０℃の脱イオン水を工程３後の乾燥固体に添加する；
第５の工程：５０．７２ｇのβ－シクロデキストリンを前の溶液に添加して混合する；
第６の工程：混合物を９０℃で２日間撹拌する；
第７の工程：混合物を希釈して反応媒体中で約１２００ｍｌの体積を得る。
工程ａ）
第１の工程：１０．０４ｇの樹脂Ｒ１＋１０２．０８ｇの脱イオンＨ２Ｏ；＋１００．０１ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏの溶液を調製し、Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ塩が完全に溶解するまで６０℃で混合する；
第２の工程：前の工程からの溶液を真空下８０℃で蒸発させて水を除去し、次いで約３００ｇの脱イオンＨ２Ｏを添加し、その後、完全に水分が除去されるまで再度蒸発させる；
第３の工程：第２の工程を繰り返す；
第４の工程：９０℃の脱イオン水を工程３後の乾燥固体に添加する；
第５の工程：５０．７２ｇのβ－シクロデキストリンを前の溶液に添加して混合する；
第６の工程：混合物を９０℃で２日間撹拌する；
第７の工程：混合物を希釈して反応媒体中で約１２００ｍｌの体積を得る。
【0253】
第７の工程の材料希釈後に得られた培養液を実際に使用して、樹脂Ｒ２及びＲ２の分解を調べる。
【0254】
樹脂Ｒ１に対して工程１～７を行った後に得られた混合物をＭＡ１と表す。
【0255】
樹脂Ｒ２に対して工程１～７を行った後に得られた混合物をＭＡ２と表す。
【0256】
工程ｂ）及びｃ）
【0257】
【表7】
【0258】
表Ｄに従い、５Ｌの反応器に化合物を以下の順序で入れた：１番目：基質（ＭＡ１又はＭＡ２）、２番目：３ＭのＮａＯＨ、３番目：グルコース、４番目：ＧＳＨ、５番目：グリシン、６番目：ＮＡＤＰ、７番目：ＦＡＤ、８番目：ＥＴ００４、９番目：ＰＨＢＨ、１０番目：ＧＳＴ。反応媒体は、均一になるまで２００ｒｐｍで撹拌する。圧縮空気を反応器内に１Ｌ／分の速度においてポンプで入れた。反応は、３０℃／２００ｒｐｍで６６時間行う。得られた混合物を濾過及び乾燥した。
【0259】
ＭＡ１から出発して得られた乾燥混合物をＭＣ１と表す。
【0260】
ＭＡ２から出発して得られた乾燥混合物をＭＣ２と表す。
【0261】
ＭＡ１に対して酵素なしで実験を行った後に得られた混合物は、ＭＣ１－ＣＴＲＬと表す。
【0262】
ＭＡ２に対して酵素なしで実験を行った後に得られた混合物は、ＭＣ２－ＣＴＲＬと表す。
【0263】
【表8】
【0264】
【表9】
【0265】
表４及び５は、樹脂Ｒ１及びＲ２の両方をＧＳＴ及びＰＨＢＨで処理した場合、材料の減少が観察されることを示す。
【0266】
工程ｄ）
乾燥した混合物ＭＣ１及びＭＣ２のサンプルを採取し（質量約１ｇ）、９０℃で撹拌しながら９６時間（４日間）２ＭのＮａＯＨ水溶液で処理した。次いで、混合物を濾過し、洗浄し、９０℃で５時間乾燥し、質量の減少を以下の表６に記録した。
乾燥した混合物ＭＣ１及びＭＣ２のサンプルを採取し（質量約１ｇ）、９０℃で撹拌しながら９６時間（４日間）２ＭのＮａＯＨ水溶液で処理した。次いで、混合物を濾過し、洗浄し、９０℃で５時間乾燥し、質量の減少を以下の表６に記録した。
【0267】
ＭＣ１から出発して得られた乾燥混合物をＭＤ１と表す。
【0268】
ＭＣ２から出発して得られた乾燥混合物をＭＤ２と表す。
【0269】
ＭＡ１に対して酵素なしで実験を行った後に得られた混合物は、ＭＤ１－ＣＴＲＬと表す。
【0270】
ＭＡ２に対して酵素なしで実験を行った後に得られた混合物は、ＭＤ２－ＣＴＲＬと表す。
【0271】
【表10】
【0272】
化学酵素処理された樹脂Ｒ１及びＲ２は、未処理の樹脂Ｒ１及びＲ２と比較して、ＮａＯＨの作用の影響を受けやすく、より多くの質量を失う。化学酵素処理は、一部のＲ１及びＲ２のアルカリ性媒体への溶解性を高めることに寄与していた。
【0273】
Ｆ－本発明による方法の２回のラウンド
１回目のラウンド：
－ 工程ａ）
（１）１．９８ｇの樹脂Ｒ２＋５０．６５ｇのｄｄＨ２Ｏ；＋９０．００ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ、＋１８９ｇのｄｄＨ２Ｏの溶液を調製し、Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ塩が完全に溶解するまで、６０℃で混合する；
（２）真空下８０℃で蒸発させて水を除去し、次いで３００ｇの脱イオン水を添加し、その後、完全に水分が除去されるまで再度蒸発させる；
（３）第２の工程を繰り返す；
（４）９０℃の脱イオン水を乾燥固体に添加する；
（５）９．９６ｇのβ－シクロデキストリンを前の溶液（総重量１４２ｇ）に添加して混合する；
（６）混合物を９０℃で２日間撹拌する；
（７）混合物を希釈して２００ｍｌにする；
（８）樹脂Ｒ１を（１）～（７）と同様のプロセスで処理した。
１回目のラウンド：
－ 工程ａ）
（１）１．９８ｇの樹脂Ｒ２＋５０．６５ｇのｄｄＨ２Ｏ；＋９０．００ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ、＋１８９ｇのｄｄＨ２Ｏの溶液を調製し、Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ塩が完全に溶解するまで、６０℃で混合する；
（２）真空下８０℃で蒸発させて水を除去し、次いで３００ｇの脱イオン水を添加し、その後、完全に水分が除去されるまで再度蒸発させる；
（３）第２の工程を繰り返す；
（４）９０℃の脱イオン水を乾燥固体に添加する；
（５）９．９６ｇのβ－シクロデキストリンを前の溶液（総重量１４２ｇ）に添加して混合する；
（６）混合物を９０℃で２日間撹拌する；
（７）混合物を希釈して２００ｍｌにする；
（８）樹脂Ｒ１を（１）～（７）と同様のプロセスで処理した。
【0274】
樹脂Ｒ１に対して工程１～７を行った後に得られた混合物をＭＡ１と表す。
【0275】
樹脂Ｒ２に対して工程１～７を行った後に得られた混合物をＭＡ２と表す。
【0276】
－ 工程ｂ）及びｃ）
【0277】
【表11】
【0278】
表Ｅに従い、適切な反応器に化合物を以下の順序で入れた：１番目：基質（ＭＡ１又はＭＡ２）、２番目：３ＭのＮａＯＨ、３番目：グルコース、４番目：ＧＳＨ（ＧＳＴ酵素の基質）、５番目：グリシン、６番目：ＮＡＤＰ（補因子）、７番目：ＦＡＤ（補因子）、８番目：ＥＴ００４（酵素）、９番目：ＰＨＢＨ（酵素）、１０番目：ＧＳＴ（酵素）。反応媒体を均一になるまで撹拌する。反応は、３０℃／２２０ｒｐｍで７２～９６時間で行う。
（１）得られた混合物をデカンテーションし、上澄みを除去した。
（２）水を添加し、再度デカンテーションし、その後、上澄みを除去した。
（３）上澄みが透明になるまで工程（２）を繰り返した。
（４）上澄みを除去した。
（１）得られた混合物をデカンテーションし、上澄みを除去した。
（２）水を添加し、再度デカンテーションし、その後、上澄みを除去した。
（３）上澄みが透明になるまで工程（２）を繰り返した。
（４）上澄みを除去した。
【0279】
ＭＡ１から出発して得られた混合物をＭＣ１と表す。
【0280】
ＭＡ２から出発して得られた混合物をＭＣ２と表す。
【0281】
－ 工程ｄ）
（１）２ＭのＮａＯＨ溶液５０ｍｌを混合物ＭＣ１又はＭＣ２に添加する；
（２）混合物を９０℃で４日間撹拌する；
（３）混合物から上澄みを除去し、固体を水で３回洗浄する。
（１）２ＭのＮａＯＨ溶液５０ｍｌを混合物ＭＣ１又はＭＣ２に添加する；
（２）混合物を９０℃で４日間撹拌する；
（３）混合物から上澄みを除去し、固体を水で３回洗浄する。
【0282】
ＭＣ１から出発して得られた混合物をＭＤ１と表す。
【0283】
ＭＣ２から出発して得られた混合物をＭＤ２と表す。
【0284】
酵素ＰＨＢＨ及びＧＳＴを含まない対照実験も行った。
【0285】
２回目のラウンド：
－ ２回目のラウンドの酵素処理（工程ｂ及びｃ）：
１回目のラウンドからの固体を以下の順序で他の化学物質及び酵素と再度混合する：１番目：基質（１回目のラウンドからのＭＤ１）、２番目：３ＭのＮａＯＨ、３番目：グルコース、４番目：ＧＳＨ、５番目：グリシン、６番目：ＮＡＤＰ、７番目：ＦＡＤ、８番目：ＥＴ００４、９番目：ＰＨＢＨ、１０番目：ＧＳＴ。反応媒体を均一になるまで撹拌する。反応は、３０℃、２２０ｒｐｍで１２０時間（５日間）行う。
（１）得られた混合物をデカンテーションし、上澄みを除去した。
（２）水を添加し、再度デカンテーションし、上澄みを除去した。
（３）上澄みが透明になるまで工程（２）を繰り返した。
（４）上澄みを除去した。
－ ２回目のラウンドの酵素処理（工程ｂ及びｃ）：
１回目のラウンドからの固体を以下の順序で他の化学物質及び酵素と再度混合する：１番目：基質（１回目のラウンドからのＭＤ１）、２番目：３ＭのＮａＯＨ、３番目：グルコース、４番目：ＧＳＨ、５番目：グリシン、６番目：ＮＡＤＰ、７番目：ＦＡＤ、８番目：ＥＴ００４、９番目：ＰＨＢＨ、１０番目：ＧＳＴ。反応媒体を均一になるまで撹拌する。反応は、３０℃、２２０ｒｐｍで１２０時間（５日間）行う。
（１）得られた混合物をデカンテーションし、上澄みを除去した。
（２）水を添加し、再度デカンテーションし、上澄みを除去した。
（３）上澄みが透明になるまで工程（２）を繰り返した。
（４）上澄みを除去した。
【0286】
ＭＣ１から出発して得られた混合物をＭＤ１’と表す。
【0287】
－ ２回目のラウンドのＮａＯＨ処理（工程ｄ）：
（１）２ＭのＮａＯＨ溶液５０ｍｌをＭＣ１’に添加する；
（２）混合物を９０℃で４日間撹拌する；
（３）混合物から上澄みを除去し、固体を水で３回洗浄する；
（４）固体を７０℃で乾燥する。
（１）２ＭのＮａＯＨ溶液５０ｍｌをＭＣ１’に添加する；
（２）混合物を９０℃で４日間撹拌する；
（３）混合物から上澄みを除去し、固体を水で３回洗浄する；
（４）固体を７０℃で乾燥する。
【0288】
ＭＣ１’から出発して得られた混合物をＭＤ１’と表す。
【0289】
【表12】
【国際調査報告】