特表 2023-532852 ＭＩＣ抗体及び結合剤ならびにそれらの使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-01

(54)【発明の名称】ＭＩＣ抗体及び結合剤ならびにそれらの使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230725BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20230725BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230725BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230725BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230725BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230725BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230725BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230725BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230725BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230725BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230725BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20230725BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230725BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230725BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230725BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/18 ZNA

C07K16/28

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N1/21

C12N1/19

C12N1/15

C12P21/08

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K45/00

A61K35/17

A61K39/395 T

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 121

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022578860

(86)(22)【出願日】2021-07-06

(85)【翻訳文提出日】2023-02-07

(86)【国際出願番号】 US2021040445

(87)【国際公開番号】W WO2022010847

(87)【国際公開日】2022-01-13

(31)【優先権主張番号】63/049,012

(32)【優先日】2020-07-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522492233

【氏名又は名称】キャンキュア， エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ウー， ジェニファー トンラン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B064DA03

4B065AA93X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA45

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB01

4C085BB36

4C085BB41

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG02

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087CA04

4C087MA02

4C087MA66

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZC75

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA09

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、がんの治療用のＭＩＣ抗体、その抗原結合部分、及びそのＭＩＣ結合剤を提供する。
【選択図】図３Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む結合剤であって、前記重鎖及び前記軽鎖のフレームワーク領域が、任意選択で、前記フレームワーク領域における１～８個のアミノ酸の置換、欠失または挿入によって改変されている、前記結合剤。

【請求項2】

（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、結合剤。

【請求項3】

重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む結合剤であって、前記ＶＨ領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域ＨＣＤＲ１配列、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１配列、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、前記ＶＨ領域及び前記ＶＬ領域がそれぞれヒト化フレームワーク領域配列を含む、前記結合剤。

【請求項4】

前記ヒト化ＶＨフレームワーク領域は、ＩＭＧＴ ＩＧＨＶ４－５９＊１１、ＩＧＨＶ４－３０－４＊０１またはＩＧＨＶ４－３０－４＊０８で表されるアミノ酸配列を有するヒト生殖細胞遺伝子に由来する、請求項３に記載の結合剤。

【請求項5】

前記ヒト化ＶＬフレームワーク領域は、ＩＭＧＴ ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０２またはＩＧＫＶ１－５＊０３で表されるアミノ酸配列を有するヒト生殖細胞遺伝子に由来する、請求項３または請求項４に記載の結合剤。

【請求項6】

重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む結合剤であって、前記ＶＨ領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域ＨＣＤＲ１配列、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１配列、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、前記結合剤。

【請求項7】

前記結合剤は、ＭＩＣに特異的に結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項8】

前記結合剤は、抗体またはその抗原結合部分である、請求項１～７のいずれかに記載の結合剤。

【請求項9】

前記結合剤は、ＭＩＣに結合する抗体またはその抗原結合部分である、請求項１～８のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項10】

前記結合剤は、モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｃ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である、請求項８または請求項９に記載の結合剤。

【請求項11】

前記結合剤は、前記ＶＨ領域と重鎖定常領域とを含む重鎖を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項12】

前記重鎖定常領域はＩｇＧアイソタイプである、請求項１１に記載の結合剤。

【請求項13】

前記重鎖定常領域はＩｇＧ１定常領域である、請求項１２に記載の結合剤。

【請求項14】

前記重鎖定常領域はＩｇＧ４定常領域である、請求項１２に記載の結合剤。

【請求項15】

前記重鎖定常領域は、少なくともヒトＦｃガンマＲＩＩＩに対する結合アフィニティーを増加させるアミノ酸改変を含む、請求項１１～１４のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項16】

前記重鎖定常領域は、ＣＤＣ活性を増加させる少なくとも１つのアミノ酸改変を含む、請求項１１～１５のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項17】

前記重鎖定常領域は、１つ以上のＦｃガンマレセプターへの結合を減少させる少なくとも１つのアミノ酸改変を含む、請求項１１～１６のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項18】

前記重鎖は、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の結合剤。

【請求項19】

前記結合剤は、前記ＶＬ領域と軽鎖定常領域とを含む軽鎖を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項20】

前記軽鎖定常領域はカッパアイソタイプである、請求項１９に記載の結合剤。

【請求項21】

前記軽鎖は、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の結合剤。

【請求項22】

前記結合剤は単一特異性である、先行請求項のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項23】

前記結合剤は二価である、請求項１～２２のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項24】

前記結合剤は第２の結合ドメインを含み、前記結合剤は二重特異性である、請求項２３に記載の結合剤。

【請求項25】

ＭＩＣに結合する結合剤であって、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む抗体である、前記結合剤。

【請求項26】

前記結合剤は、可溶型ＭＩＣに特異的に結合する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項27】

前記結合剤は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合し、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ領域とを含む、請求項１～２６のいずれか１項に記載の結合剤。

【請求項28】

先行請求項のいずれか１項に記載の結合剤と、薬学的に許容されるキャリヤーとを含む、医薬組成物。

【請求項29】

配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域をコードする、核酸。

【請求項30】

配列番号２１で表される核酸配列を含む、請求項２９に記載の核酸。

【請求項31】

配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域をコードする、核酸。

【請求項32】

配列番号２２で表される核酸配列を含む、請求項３１に記載の核酸。

【請求項33】

請求項１～２４のいずれか１項に記載の結合剤をコードする、核酸。

【請求項34】

配列番号２１及び配列番号２２で表される核酸配列を含む、請求項３３に記載の核酸。

【請求項35】

請求項２９～３４のいずれか１項に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項36】

請求項２９～３４のいずれか１項に記載の核酸、または請求項３５に記載のベクターを含む、細胞株。

【請求項37】

請求項１～２２のいずれか１項に記載の結合剤を発現する、細胞株。

【請求項38】

請求項３６または請求項３７に記載の細胞株を、前記結合剤を発現させるのに適した条件下で培養することを含む、結合剤の製造方法。

【請求項39】

前記培養から前記結合剤を回収することをさらに含む、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

ＭＩＣ＋癌を治療する方法であって、治療を必要とする対象者に、治療有効量の、請求項１～２７のいずれかに記載の結合剤、または請求項２８に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項41】

前記がんは、癌腫、肉腫、神経内分泌腫瘍、または悪性血液疾患である、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記がんは癌腫である、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記癌腫は、任意選択で、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、結腸癌、腎臓癌、及び頭頸部癌から選択される固形腫瘍である、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記がんは悪性血液疾患である、請求項４１に記載の方法。

【請求項45】

前記悪性血液疾患は、リンパ腫または多発性骨髄腫である、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記対象者に免疫療法を投与することをさらに含む、請求項４０～４５のいずれかに記載の方法。

【請求項47】

前記免疫療法は、養子細胞療法またはチェックポイント阻害剤を含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記免疫療法は、養子細胞療法を含む、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

前記養子細胞療法は、自己ＮＫ細胞、同種ＮＫ細胞、自己Ｔ細胞、ＣＡＲ改変Ｔ細胞及びＣＡＲ改変ＮＫ細胞から選択される、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記免疫療法はチェックポイント阻害剤を含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項51】

前記チェックポイント阻害剤は、ヒトＰＤ－１、ヒトＰＤ－Ｌ１、またはヒトＣＴＬＡ４に特異的に結合する抗体から選択される、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブまたはイピリムマブである、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記結合剤の前記投与より前に、少なくとも４週間、前記対象者に化学療法が投与されない、請求項４０～５２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

前記結合剤は静脈内に投与される、請求項４０～５３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項55】

前記結合剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４０～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項56】

がんを有する対象者における循環ｓＭＩＣのレベルを低下させる方法であって、治療有効量の、請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合剤、または請求項２８に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項57】

前記がんは、癌腫、肉腫、神経内分泌腫瘍、または悪性血液疾患である、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

前記がんは癌腫である、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記癌腫は、任意選択で、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、結腸癌、腎臓癌、及び頭頸部癌から選択される固形腫瘍である、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記がんは悪性血液疾患である、請求項５７に記載の方法。

【請求項61】

前記悪性血液疾患は、リンパ腫または多発性骨髄腫である、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

ＭＩＣ＋癌に対する免疫療法を受ける対象者の治療成績を改善させる方法であって、
ａ）がんを有する前記対象者に有効量の免疫療法を投与することと、
ｂ）前記対象者に、治療有効量の、請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合剤、または請求項２８に記載の医薬組成物を投与することとを含み、
前記対象者の少なくとも１つの治療成績が、前記免疫療法単独の投与と比べて改善される、前記方法。

【請求項63】

前記少なくとも１つの改善された治療成績は、安定、部分奏効または完全奏効から選択される客観的応答である、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記少なくとも１つの改善された治療成績は、腫瘍量の減少である、請求項６２または請求項６３に記載の方法。

【請求項65】

前記少なくとも１つの改善された治療成績は、無増悪生存期間または無病生存期間である、請求項６２～６４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記免疫療法は、養子細胞療法またはチェックポイント阻害剤である、請求項６２～６５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記免疫療法は養子細胞療法である、請求項６６に記載の方法。

【請求項68】

前記養子細胞療法は、自己ＮＫ細胞、同種ＮＫ細胞、自己Ｔ細胞、ＣＡＲ改変Ｔ細胞及びＣＡＲ改変ＮＫ細胞を含む、請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

前記免疫療法はチェックポイント阻害剤である、請求項６６に記載の方法。

【請求項70】

前記チェックポイント阻害剤は、ヒトＰＤ－１、ヒトＰＤ－Ｌ１、またはＣＴＬＡ４に特異的に結合する抗体を含む、請求項６９に記載の方法。

【請求項71】

前記チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブまたはイピリムマブである、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記結合剤の前記投与より前に、少なくとも４週間、前記対象者に化学療法が投与されない、請求項６２～７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

前記結合剤は静脈内に投与される、請求項６２～７２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

前記結合剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項６２～７３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項75】

対象者におけるＭＩＣ＋癌の治療のための、請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合剤または請求項２８に記載の医薬組成物の使用。

【請求項76】

免疫療法を受ける対象者におけるｓＭＩＣ＋癌の治療のための、請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合剤または請求項２８に記載の医薬組成物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年７月７日に出願された米国仮出願第６３／０４９，０１２号の優先権の利益を主張するものであり、この米国仮出願の全体をあらゆる目的のために参照により本明細書に援用する。

【0002】

支援資金についての記載
本発明は、米国連邦中小企業庁によって与えられた中小企業技術移転助成１Ｒ４１ＣＡ２０６６８８－０１Ａ１に基づく政府支援を受けてなされたものである。政府は、本発明に一定の権利を有している。

【背景技術】

【0003】

主要組織適合複合体クラスＩ鎖関連分子Ａ及びＢ（それぞれＭＩＣＡ及びＭＩＣＢ、一般にＭＩＣと呼ばれる）は、ＮＫＧ２Ｄに結合するタンパク質のファミリーである。ＮＫＧ２Ｄは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞のサブセット、及びヒトＣＤ８Ｔ細胞によって発現される活性化免疫レセプターである。ＭＩＣがＮＫ細胞またはＴ細胞のＮＫＧ２Ｄに結合すると、他にも効果があるが、インビトロで、ＮＫ細胞が活性化され、ＣＤ８Ｔ細胞及びガンマデルタＴ細胞が共刺激される。

【0004】

ＭＩＣファミリー分子は、腫瘍細胞に発現され、腫瘍細胞に対する免疫応答の抑制に関与していると考えられていることが報告されている。ＭＩＣＡは、ＭＩＣＢよりも頻繁かつ多量に腫瘍細胞表面に発現する。ＭＩＣタンパク質は、膜結合型及び可溶型（ｓＭＩＣ）の両方で見られ、後者の型は腫瘍細胞から脱落したものである。ｓＭＩＣの血清レベルの上昇は、固形腫瘍、例えば、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、結腸癌、腎臓癌、胃腸（ＧＩ）癌、及び頭頸部癌などの癌腫、ならびにリンパ腫及び多発性骨髄腫などの血液癌、ならびに肉腫などの骨及び軟部組織由来の癌を含む、多くの種類のがんに関連している。膜制限型のＭＩＣ（Ｂ）は、マウスでＮＫＧ２Ｄを介した保護的な抗腫瘍免疫を維持することが報告されているが、可溶型は、ＮＫ細胞及びＣＤ８Ｔ細胞でのＮＫＧ２Ｄ発現の低下とＮＫ細胞の末梢維持障害とによってもたらされる腫瘍の進行と相関した。したがって、ｓＭＩＣに結合する薬剤は、患者のための治療アプローチになる可能性がある。また一方、ヒトにおけるＭＩＣ＋癌の治療用に最適化された薬剤が依然として求められている。

【発明の概要】

【0005】

本明細書に開示された発明は、一部、可溶型ＭＩＣ（ｓＭＩＣ）及び／または細胞膜結合型ＭＩＣ（膜結合型ＭＩＣとも呼ばれる）に特異的に結合し、治療特性の改善を示すＭＩＣ結合抗体、その抗原結合部分、及び関連する結合剤に基づく。ＭＩＣ、及び特にｓＭＩＣは、特定のがんの治療の重要かつ有利な治療標的である。これらのＭＩＣ結合抗体、その抗原結合部分、及び結合剤は、ＭＩＣ＋癌の治療におけるそのような抗体、抗原結合部分及び関連する結合剤の使用に基づく組成物及び方法を提供する。したがって、本発明は、ＭＩＣ結合剤に関連する方法、組成物、キット、及び製品を提供する。

【0006】

いくつかの実施形態では、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む結合剤であって、重鎖及び軽鎖のフレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個のアミノ酸の置換、欠失または挿入によって改変されている、結合剤が提供される。本結合剤は、ＭＩＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、結合剤は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、結合剤は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。本結合剤は、ＭＩＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、結合剤は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する。

【0007】

いくつかの実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む結合剤であって、ＶＨ領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域ＨＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、ＶＨ領域及びＶＬ領域がそれぞれヒト化フレームワーク領域を含む、結合剤が提供される。いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＨフレームワーク領域は、ＩＭＧＴ ＩＧＨＶ４－５９＊１１（配列番号２９）及びＩＧＨＪ４＊０１（配列番号３０）またはＩＧＨＶ４－３０－４＊０１（配列番号３１）及びＩＧＨＪ４＊０１（配列番号３０）で表されるアミノ酸配列を有するヒト生殖細胞遺伝子に由来する。いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＬフレームワーク領域は、ＩＭＧＴ ＩＧＫＶ１－ＮＬ１＊０１（配列番号３２）及びＩＭＧＴ ＩＧＫＪ１＊０１（配列番号３３）、ＩＭＧＴ ＩＧＫＶ１－３３＊０１（配列番号３４）及びＩＭＧＴ ＩＧＫＪ１＊０１（配列番号３３）、またはＩＭＧＴ ＩＧＫＶ１－５＊０１（配列番号３５）及びＩＭＧＴ ＩＧＫＪ１＊０１（配列番号３３）で表されるアミノ酸配列を有するヒト生殖細胞遺伝子に由来する。本結合剤は、ＭＩＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、結合剤は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する。

【0008】

いくつかの実施形態では、結合剤は、抗体またはその抗原結合部分である。いくつかの実施形態では、結合剤は、モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｃ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。

【0009】

いくつかの実施形態では、結合剤は、重鎖定常領域に連結した重鎖可変領域を有する。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域はＩｇＧアイソタイプである。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域はＩｇＧ１定常領域である。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域はＩｇＧ４定常領域である。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域及び重鎖定常領域は、配列番号３で表されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、結合剤は、軽鎖定常領域に連結した軽鎖可変領域を有する。いくつかの実施形態では、軽鎖定常領域はカッパアイソタイプである。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域は、配列番号４で表されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、少なくともヒトＦｃガンマＲＩＩＩに対する結合アフィニティーを増加させるアミノ酸改変をさらに含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、少なくとも抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増加させるアミノ酸改変をさらに含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、ＣＤＣ活性を増加させる少なくとも１つのアミノ酸改変をさらに含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、結合剤は単一特異性である。いくつかの実施形態では、結合剤は、単一特異性及び二価である。いくつかの実施形態では、結合剤は二価である。いくつかの実施形態では、結合剤は、二価及び二重特異性または多価及び多重特異性である。

【0011】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかの結合剤と、薬学的に許容されるキャリヤーとを含む医薬組成物が提供される。

【0012】

いくつかの実施形態では、配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する結合剤の重鎖可変領域をコードする核酸であって、任意選択で、配列番号２１で表される核酸配列を有する核酸が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する結合剤の軽鎖可変領域をコードする核酸であって、任意選択で、配列番号２２で表される核酸配列を有する核酸が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかの結合剤をコードする核酸であって、任意選択で、配列番号２１及び配列番号２２で表される核酸配列を有する核酸が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＩＣ結合剤ポリペプチドをコードする核酸のいずれかを含むベクターが提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される結合剤ポリペプチドのいずれかをコードする核酸、またはそのような核酸（複数可）を含むベクターを含む細胞が提供される。

【0013】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ＋癌を治療する方法であって、治療を必要とする対象者に、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む結合剤であって、重鎖及び軽鎖のフレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個のアミノ酸の置換、欠失または挿入によって改変されており、結合剤がｓＭＩＣ及び／または膜結合型ＭＩＣに特異的に結合する、治療有効量の結合剤を投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、結合剤は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する。

【0014】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ＋癌を治療する方法であって、治療を必要とする対象者に、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む結合剤であって、結合剤がＭＩＣに特異的に結合する、治療有効量の結合剤を投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、結合剤は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する。

【0015】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ＋癌を治療する方法であって、治療を必要とする対象者に、治療有効量の、本明細書に記載される結合剤実施形態のいずれかを投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、薬学的に許容されるキャリヤーを含む医薬組成物として結合剤を投与することを含む。

【0016】

いくつかの実施形態では、がんは、癌腫、肉腫、神経内分泌腫瘍、または悪性血液疾患である。いくつかの実施形態では、癌腫は、任意選択で、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、結腸癌、腎臓癌、及び頭頸部癌から選択される固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、悪性血液疾患は、リンパ腫、白血病、または多発性骨髄腫である。

【0017】

いくつかの実施形態では、方法は、対象者に免疫療法を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫療法は、養子細胞療法またはチェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、養子細胞療法は、自己ＮＫ細胞、同種ＮＫ細胞、自己Ｔ細胞、ＣＡＲ改変Ｔ細胞及びＣＡＲ改変ＮＫ細胞から選択される。いくつかの実施形態では、免疫療法はチェックポイント阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ヒトＰＤ－１、ヒトＰＤ－Ｌ１、またはヒトＣＴＬＡ４に特異的に結合する抗体から選択される。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブまたはイピリムマブである。

【0018】

いくつかの実施形態では、方法は、結合剤の投与より前に、少なくとも４週間、少なくとも６週間、または少なくとも８週間、対象者に化学療法を投与しないステップを含む。いくつかの実施形態では、結合剤は静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、結合剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0019】

いくつかの実施形態では、がんを有する対象者における循環ｓＭＩＣのレベルを低下させる方法であって、治療有効量の、本明細書に記載される実施形態のいずれかの結合剤、または本明細書に記載される結合剤実施形態のいずれかの医薬組成物を投与することであって、結合剤が循環ｓＭＩＣに特異的に結合する、投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、がんは、癌腫、肉腫、神経内分泌腫瘍、または悪性血液疾患である。いくつかの実施形態では、癌腫は、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、結腸癌、腎臓癌、及び頭頸部癌を含むがこれらに限定されない固形腫瘍から選択される。いくつかの実施形態では、悪性血液疾患は、リンパ腫、白血病、または多発性骨髄腫である。

【0020】

いくつかの実施形態では、免疫療法を受ける対象者の治療成績を改善させる方法であって、がんを有する対象者に有効量の免疫療法を投与することと、対象者に、治療有効量の、本明細書に記載される実施形態のいずれかの結合剤、または本明細書に記載される結合剤の実施形態のいずれかの医薬組成物を投与することとを含み、結合剤が循環ｓＭＩＣ及び／または細胞膜結合型ＭＩＣに特異的に結合し、対象者の治療成績が免疫療法単独の投与と比べて改善される、方法が提供される。いくつかの実施形態では、改善された治療成績は、安定、部分奏効または完全奏効から選択される客観的応答である。いくつかの実施形態では、改善された治療成績は、腫瘍量の減少である。いくつかの実施形態では、改善された治療成績は、無増悪生存期間または無病生存期間である。いくつかの実施形態では、免疫療法は、養子細胞療法またはチェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、養子細胞療法は、自己ＮＫ細胞、同種ＮＫ細胞、自己Ｔ細胞、ＣＡＲ改変Ｔ細胞及びＣＡＲ改変ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ヒトＰＤ－１、ヒトＰＤ－Ｌ１、またはＣＴＬＡ４に特異的に結合する抗体を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブまたはイピリムマブである。

【0021】

いくつかの実施形態では、結合剤の投与より前に、少なくとも４週間、少なくとも６週間または少なくとも８週間、対象者に化学療法が投与されない。いくつかの実施形態では、結合剤は静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、結合剤は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0022】

本発明のこれら及び他の態様は、以下の詳細な説明、特定の実施形態の非限定的な例、及び添付の図面を参照することによって、より完全に理解することができる。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1】（ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に連結した）抗体Ｂ１０Ｇ５のヒト化バリアントのＦＡＣＳによる結合アフィニティーの分析を示す。２つのヒト化バリアント、抗体Ｇ及び抗体Ｋは、抗体Ｊ（Ａｂ－Ｊ、マウスＢ１０Ｇ５抗体のＦ（ａｂ）_２及びヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに構成されたＢ１０Ｇ５キメラ抗体）よりも高い平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示した。

【図2A】抗体Ｂ１０Ｇ５（図２Ａ）は、抗体Ｋ（Ａｂ－Ｋ、図２Ｂ）よりも低い（弱い）結合アフィニティーを有し、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いたバイオレイヤー干渉法で決定して、それぞれＫｄ＝１２．１ｎＭ対７．２ｎＭであることを示す。

【図2B】抗体Ｂ１０Ｇ５（図２Ａ）は、抗体Ｋ（Ａｂ－Ｋ、図２Ｂ）よりも低い（弱い）結合アフィニティーを有し、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いたバイオレイヤー干渉法で決定して、それぞれＫｄ＝１２．１ｎＭ対７．２ｎＭであることを示す。

【図3A】抗体Ｋ（Ａｂ－Ｋ）は、ＭＩＣ^＋甲状腺オンコサイトーマＵＣ１腫瘍細胞（図３Ａ）及び膵臓ＰＬ１２細胞（図３Ｂ）のＩＬ－２活性化初代ＮＫ細胞による殺傷の増強において、Ａｂ－Ｊ（キメラＢ１０Ｇ５）よりも高い活性を示すことを示す。

【図3B】抗体Ｋ（Ａｂ－Ｋ）は、ＭＩＣ＋甲状腺オンコサイトーマＵＣ１腫瘍細胞（図３Ａ）及び膵臓ＰＬ１２細胞（図３Ｂ）のＩＬ－２活性化初代ＮＫ細胞による殺傷の増強において、Ａｂ－Ｊ（キメラＢ１０Ｇ５）よりも高い活性を示すことを示す。

【図4A】動的光散乱（ＤＬＳ）アッセイで決定した、マウス抗体Ｂ１０Ｇ５（図４Ａ）、キメラＡｂ－Ｋ抗体（ｃｈ－Ａｂ－Ｋ、Ａｂ－Ｋ可変ドメイン及びマウスＩｇＧ１－ＦＣ、図４Ｂ）、及び抗体Ｋ（Ａｂ－Ｋ、ヒト化、図４Ｃ）の抗体モノマー及び凝集体のレベルを示す。

【図4B】動的光散乱（ＤＬＳ）アッセイで決定した、マウス抗体Ｂ１０Ｇ５（図４Ａ）、キメラＡｂ－Ｋ抗体（ｃｈ－Ａｂ－Ｋ、Ａｂ－Ｋ可変ドメイン及びマウスＩｇＧ１－ＦＣ、図４Ｂ）、及び抗体Ｋ（Ａｂ－Ｋ、ヒト化、図４Ｃ）の抗体モノマー及び凝集体のレベルを示す。

【図4C】動的光散乱（ＤＬＳ）アッセイで決定した、マウス抗体Ｂ１０Ｇ５（図４Ａ）、キメラＡｂ－Ｋ抗体（ｃｈ－Ａｂ－Ｋ、Ａｂ－Ｋ可変ドメイン及びマウスＩｇＧ１－ＦＣ、図４Ｂ）、及び抗体Ｋ（Ａｂ－Ｋ、ヒト化、図４Ｃ）の抗体モノマー及び凝集体のレベルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0024】

定義
便宜上、明細書、実施例、及び特許請求の範囲の特定の用語をここで定義する。別段の記載がない限り、または文脈から暗に示されていない限り、以下の用語及び語句は、以下に提供される意味を有する。定義は、特定の実施形態を説明するのを補助するために提供され、本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ限定されるため、特許請求された発明を限定することを意図するものではない。別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての専門用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。

【0025】

本明細書で使用するとき、特に明記しない限り、用語「ａ」及び「ａｎ」は、「１つ」、「少なくとも１つ」または「１つ以上」を意味するものと解釈される。別段文脈によって要求されない限り、本明細書で使用される単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。

【0026】

文脈上明らかに別の解釈を必要とする場合を除き、明細書及び特許請求の範囲全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の用語は、排他的または網羅的な意味ではなく、包括的な意味で解釈されるべきであり、すなわち、「～を含むが～に限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ，ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」という意味で解釈されるべきである。

【0027】

本明細書では、「減少させる」、「低減させる」、「低減された」、「低減」、「減少する」、及び「抑制する」という用語は全て、基準に対して統計的に有意な量だけ減少することを意味するために一般的に使用される。

【0028】

本明細書では、「増加した」、「増加する」または「増強する」または「活性化する」という用語は全て、基準に対して静的に有意な量だけ増加することを意味するために一般的に使用される。

【0029】

本明細書で使用される「単離された」または「部分的に精製された」という用語は、核酸、ポリペプチドまたはタンパク質の場合、その天然源に見られるような核酸、ポリペプチドまたはタンパク質と共に存在する、及び／または細胞によって発現されたときに、または分泌ポリペプチド及び分泌タンパク質の場合には分泌されたときに、核酸、ポリペプチドまたはタンパク質と共に存在するであろう、少なくとも１つの他の成分（例えば、核酸またはポリペプチドまたはタンパク質）から分離した核酸、ポリペプチドまたはタンパク質を指す。化学的に合成された核酸、ポリペプチドもしくはタンパク質、またはインビトロの転写／翻訳を用いて合成されたものが「単離された」と見なされる。「精製された」または「実質的に精製された」という用語は、対象の核酸、ポリペプチドまたはタンパク質が、重量で、例えば、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上を含む、少なくとも９５％である、単離された核酸、ポリペプチドまたはタンパク質を指す。

【0030】

本明細書で使用するとき、「タンパク質」及び「ポリペプチド」という用語は、隣接する残基のアルファアミノ基とカルボキシル基との間のペプチド結合によって互いに接続された一連のアミノ酸残基を示すために、本明細書では交換可能なようにして使用される。「タンパク質」及び「ポリペプチド」という用語はまた、そのサイズまたは機能に関係なく、修飾アミノ酸（例えば、リン酸化、糖化、グリコシル化など）及びアミノ酸類似体を含むタンパク質アミノ酸のポリマーを指す。「タンパク質」及び「ポリペプチド」は、比較的大きなポリペプチドに関して使用されることが多いのに対して、「ペプチド」という用語は、小さなポリペプチドに関して使用されることが多いが、当技術分野におけるこれらの用語の使用は重複する。「タンパク質」及び「ポリペプチド」という用語は、コードされた遺伝子産物及びそのフラグメントを指す場合には、本明細書では交換可能なようにして使用される。したがって、例示的なポリペプチドまたはタンパク質には、遺伝子産物、天然に存在するタンパク質、ホモログ、オルソログ、パラログ、フラグメント及び他の同等物、バリアント、フラグメント、ならびに前述の類似体が含まれる。

【0031】

主要組織適合複合体クラスＩ鎖関連（ＭＩＣ）ポリペプチドは、細胞表面膜貫通タンパク質である。ＭＩＣポリペプチドには、ヒトＭＩＣＡアイソフォーム（例えばアイソフォーム１、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００２３８．１（配列番号９）及び００１１７０９９０）（これらの配列は、参照により本明細書に組み込まれる）ならびに他のＭＩＣＡアイソフォーム）、及びヒトＭＩＣＢアイソフォーム（例えばアイソフォーム１、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００５９２２．２（配列番号１０）（この配列は、参照により本明細書に組み込まれる）及び他のＭＩＣＢアイソフォーム）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＭＩＣポリペプチドはＭＩＣＡを指す。いくつかの実施形態では、ＭＩＣポリペプチドはＭＩＣＢを指す。いくつかの実施形態では、ＭＩＣポリペプチドは、ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢの共有される構造的特徴、すなわち、ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢによって共有されるエピトープ（複数可）を指す。

【0032】

本明細書で使用するとき、「可溶型ＭＩＣ」または「ｓＭＩＣ」は、アルファ１及びアルファ２ドメインならびにアルファ３ドメインまたはアルファ３ドメインのタンパク質分解的切断部位までの部分を含み、膜貫通ドメイン（例えば、ＭＩＣの細胞外部分）を欠く、ＭＩＣポリペプチド（ＭＩＣＡまたはＭＩＣＢ）の部分を指す。いくつかの実施形態では、可溶型ＭＩＣＡは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ７７０３１．１（配列番号２７）で表されるアミノ酸配列、あるいはそのバリアント、例えばＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＵ９５０７２．１、ＡＡＯ４５８２２．１、ＡＦＲ６９３１８．１、ＡＦＲ６９３１９．１もしくはＡＡＨ１６９２９．１のアミノ酸残基２４～２９７または参照配列ＮＰ＿０００２３８．１、またはＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＣＡＥ４５５８１．１のアミノ酸１～２７４、またはＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＤ５２０６９．１、ＡＡＤ５２０７０．１、もしくはＱＤＷ６５４９４．１のアミノ酸１～２７３で表されるアミノ酸配列など（これらの開示内容は参照により本書に組み込まれる）を含むことができる。いくつかの実施形態では、可溶型ＭＩＣＢは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＲＢ０８５３９．１（配列番号２８）、ＡＡＢ７１６４６．１、ＡＡＢ７１６４７．１もしくはＡＡＢ７１６４４．１で表されるアミノ酸配列、あるいはそのバリアント、例えばＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＢＯ１６４７０．１、ＡＢＢ５１８０２．１、ＡＡＢ４２０１１．１、ＡＡＢ７１６４３．１、もしくはＱ２９９８０．１のアミノ酸残基２４～２９７、または参照配列ＮＰ＿００５９２２．２、またはＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＣ３９８４８．１、ＡＥＫ６７４８３．１、ＡＦＲ７７７３．１、ＡＸＹ９３６６６．１、ＣＡＢ７２０９８．１、もしくはＡＡＣ３９８４９．１のアミノ酸１～２７３で表されるアミノ酸配列など（これらの開示内容は参照により本書に組み込まれる）を含むことができる。特に明記しない限り、用語「ＭＩＣ」の使用は、ＭＩＣの細胞膜結合型及び可溶型の両方を指すことを意図している。

【0033】

本明細書で使用される場合、抗体Ｂ１０Ｇ５は、米国特許第９，８０３，０１７号（その開示は、全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる）に記載される同じ名称のＭＩＣ抗体を指す。

【0034】

本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、本明細書に記載の抗体及び結合剤など、免疫グロブリンＶＨ／ＶＬ対によって通常結合されるアミノ酸を指す。エピトープは、隣接アミノ酸、またはタンパク質の三次フォールディングによって並列される非隣接アミノ酸からポリペプチド上に形成され得る。隣接アミノ酸から形成されたエピトープは、通常、変性溶媒にさらされても保持されるが、三次フォールディングによって形成されたエピトープは、通常、変性溶媒で処理されると失われる。エピトープは、通常は少なくとも３個、より一般的には、少なくとも５個、約９個、または約８～１０個のアミノ酸を固有の空間コンホメーションに含む。エピトープは、抗体または他の結合剤の最小結合部位を定め、したがって、抗体、その抗原結合部分、または他の免疫グロブリン系結合剤の特異性の標的を表す。単一ドメイン抗体の場合、エピトープは、孤立した可変ドメインによって結合された構造単位を表す。

【0035】

本明細書で使用するとき、「特異的に結合する」とは、本明細書に記載される結合剤（例えば、抗体またはその部分）が、１０^－５Ｍ（１００００ｎＭ）以下、例えば、１０^－６Ｍ、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、１０^－１２Ｍ、またはそれ以下のＫＤでＭＩＣなどの標的に結合する能力を指す。特異的結合は、例えば、結合剤のアフィニティー及びアビディティー、ならびに標的ポリペプチドの濃度によって影響を受ける可能性がある。当業者は、適切な細胞結合アッセイにおける結合剤の滴定などの任意の適切な方法を使用して、本明細書に記載の抗体及び他の結合剤がＭＩＣに選択的に結合する適切な条件を決定することができる。ＭＩＣに特異的に結合した結合剤は、非類似の競合物によって置換されることはない。特定の実施形態において、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分は、タンパク質及び／または高分子の複合混合物において、その標的抗原であるＭＩＣを優先的に認識するとき、ＭＩＣに特異的に結合すると言われる。

【0036】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、１０^－５Ｍ（１００００ｎＭ）以下、例えば、１０^－６Ｍ、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、１０^－１２Ｍ、またはそれ以下の解離定数（ＫＤ）でＭＩＣポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、約１０^－５Ｍ～１０^－６Ｍの解離定数（ＫＤ）でＭＩＣポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、約１０^－６Ｍ～１０^－７Ｍの解離定数（ＫＤ）でＭＩＣポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、約１０^－７Ｍ～１０^－８Ｍの解離定数（ＫＤ）でＭＩＣポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、約１０^－８Ｍ～１０^－９Ｍの解離定数（ＫＤ）でＭＩＣポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、約１０^－９Ｍ～１０^－１０Ｍの解離定数（ＫＤ）でＭＩＣポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、約１０^－１０Ｍ～１０^－１１Ｍの解離定数（ＫＤ）でＭＩＣポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、約１０^－１１Ｍ～１０^－１２Ｍの解離定数（ＫＤ）でＭＩＣポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、１０^－１２Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）でＭＩＣポリペプチドに特異的に結合する。

【0037】

本明細書で使用される場合、「抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する」という語句は、可溶型ＭＩＣに対する結合アフィニティーを意味する。

【0038】

本明細書で使用するとき、用語「本質的に～からなる」は、所与の実施形態に必要である要素を指す。この用語は、その実施形態の基本的かつ新規なまたは機能的な特徴（複数可）に実質的な影響を及ぼさない要素の存在を許容する。

【0039】

「～からなる」という用語は、本明細書に記載の組成物、方法、及びこれらのそれぞれの構成要素を指し、実施形態の記述に挙げられていない要素はいずれも除外される。

【0040】

実施例、または他に指示がある場合を除き、本明細書で使用される成分量または反応条件を表す全ての数字は、全ての場合において「約」という用語によって修飾されると理解されるべきである。パーセンテージに関連して使用される「約」という用語は、＋／－１％を意味する場合がある。

【0041】

「統計的に有意な」または「有意に」という用語は、統計的有意性を指し、一般に、基準値を上回るまたは下回る２標準偏差（２ＳＤ）の差を意味する。

【0042】

他の用語は、本発明の様々な態様の説明内で定義される。

【0043】

本明細書では、ＭＩＣに特異的に結合するＭＩＣ結合抗体（ＭＩＣ抗体またはＭＩＣ結合抗体とも呼ばれる）及びその抗原結合部分が提供される。ＭＩＣ抗体は、驚くべきことに、抗体Ｂ１０Ｇ５と比較して改善された特性を示す。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体は、対象者内で循環している遊離ｓＭＩＣのレベルを低下させる。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含み、重鎖及び軽鎖の可変フレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個、１～６個、１～４個または１～２個の保存的アミノ酸置換によって改変されており、重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲが改変されていない。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含み、重鎖及び軽鎖の可変フレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個、１～６個、１～４個または１～２個のアミノ酸の置換、欠失または挿入によって改変されており、重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲが改変されていない。これらの実施形態のいずれかのさらなる態様において、ＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する。

【0044】

いくつかの実施形態では、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む結合剤であって、結合剤がＭＩＣに特異的に結合する、結合剤が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む結合剤であって、重鎖及び軽鎖の可変フレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個、１～６個、１～４個または１～２個の保存的アミノ酸置換によって改変されており、重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲが改変されていない、結合剤が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む結合剤であって、重鎖及び軽鎖の可変フレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個、１～６個、１～４個または１～２個のアミノ酸の置換、欠失または挿入によって改変されており、重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲが改変されていない、結合剤が本明細書で提供される。本明細書に記載のように、結合剤は、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分（複数可）を含み、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分に共有結合した他のペプチドまたはポリペプチドを含むことができる。これらの実施形態のいずれにおいても、結合剤はＭＩＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、結合剤は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する。

【0045】

いくつかの実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む結合剤であって、ＶＨ領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域ＨＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、各ＶＨ及びＶＬがヒト化フレームワーク領域を含む、結合剤が提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨフレームワーク領域は、ＩＭＧＴ ＩＧＨＶ４－５９＊１１（配列番号２９）及びＩＧＨＪ４＊０１（配列番号３０）またはＩＧＨＶ４－３０－４＊０１（配列番号３１）及びＩＧＨＪ４＊０１（配列番号３０）で表されるアミノ酸配列を有するヒト生殖細胞遺伝子に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＬフレームワーク領域は、ＩＭＧＴ ＩＧＫＶ１－ＮＬ１＊０１（配列番号３２）及びＩＭＧＴ ＩＧＫＪ１＊０１（配列番号３３）、ＩＭＧＴ ＩＧＫＶ１－３３＊０１（配列番号３４）及びＩＭＧＴ ＩＧＫＪ１＊０１（配列番号３３）、またはＩＭＧＴ ＩＧＫＶ１－５＊０１（配列番号３５）及びＩＭＧＴ ＩＧＫＪ１＊０１（配列番号３３）で表されるアミノ酸配列を有するヒト生殖細胞遺伝子に由来する。

【0046】

いくつかの実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む結合剤であって、ＶＨ領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域ＨＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み、ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、結合剤が提供される。

【0047】

いくつかの実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む結合剤であって、ＶＬ領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、結合剤が提供される。

【0048】

いくつかの実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む結合剤であって、ＶＨ領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域ＨＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み、ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬ領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、結合剤が提供される。

【0049】

いくつかの実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）領域を含む重鎖、及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む軽鎖を含む結合剤であって、ＶＨ領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域ＨＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み、ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＶＬ領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、重鎖が、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、結合剤が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む結合剤が提供される。いくつかのそのような実施形態では、結合剤は抗体である。

【0050】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体などの本明細書で提供される結合剤は、良好な熱安定性、及び／または低レベルの凝集体（高分子量（ＨＭＷ）凝集体など）を示す。ＭＩＣ抗体の熱安定性は、例えば、固有タンパク質蛍光（ＩＰＦ）（２６６ｎｍ励起、２８０～４５０ｎｍ放射スキャン）、及びＵｎｃｌｅシステム（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ）を使用した４７３ｎｍでの静的光散乱（ＳＬＳ）によってそれぞれ得ることができるＴｍ及びＴａｇｇによって評価することができる。ＭＩＣ抗体の凝集体のレベルは、例えば、ＨＰＬＣ－ＳＥＣを使用することによって、または動的光散乱（ＤＬＳ）を使用することによって測定され得る。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体のＨＭＷ凝集体のレベルは、ＭＩＣ抗体の総量のパーセンテージとして、抗体のモノマー及びＨＭＷ凝集体のピーク面積に基づいて、１０％、９．５％、９％、８．５％、８％、７．５％、７％、６．５％、６％、５．５％、５％、４．５％、４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．５％、１％、または０．５％未満であり得る。つまり、ＭＩＣ抗体の少なくとも９０％、９０．５％、９１％、９１．５％、９２％、９２．５％、９３％、９３．５％、９４％、９４．５％、９５％、９５．５％、９６％、９６．５％、９７％、９７．５％、９８％、９８．５％、９９％、または９９．５％は、溶液中にある場合、モノマー形態で存在する。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体の多分散指数（ＰＤＩ）は、ＤＬＳによって決定されて、０．１未満であり得る。

【0051】

特定の実施形態では、ＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、配列番号２７または２８で表されるアミノ酸配列の約６６～７７、１３６～１４４及び２４７～２５８のアミノ酸位置の範囲内に位置するＭＩＣＡ及びＭＩＣＢ上の立体構造エピトープに特異的に結合する。特定の実施形態では、ＭＩＣ抗体もしくは抗原結合部分または他の結合剤は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを有し、本明細書に記載される任意選択で置換されたフレームワーク領域を有し、配列番号２７及び２８で表されるアミノ酸配列の約６６～７７、１３６～１４４及び２４７～２５８のアミノ酸の範囲内に位置するＭＩＣＡ及びＭＩＣＢ上の立体構造エピトープに特異的に結合する抗体Ｂ１０Ｇ５との特異的結合を競合する。

【0052】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物及び方法は、インビボでのＭＩＣ抗体、その抗原結合部分または他の結合剤によるｓＭＩＣの免疫抑制効果（例えば、細胞レセプターＮＫＧ２Ｄとの相互作用に利用できるｓＭＩＣのレベル及び／または活性を低下させる）の抑制に関する。いくつかの実施形態では、ｓＭＩＣの抑制は、結合していないＭＩＣの血清レベルの低減、ならびにＮＫ及びＣＤ８ Ｔ細胞上の細胞表面ＮＫＧ２Ｄ発現の回復であり得る。いくつかの実施形態では、ｓＭＩＣの抑制は、ＭＩＣのレベル（例えば、循環中のｓＭＩＣのレベル）の低減であり得る。

【0053】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を指す。この用語は、一般に、完全長抗体（重鎖及び軽鎖定常領域を有する）及びその抗原結合部分を含む、２つの免疫グロブリン重鎖可変領域及び２つの免疫グロブリン軽鎖可変領域からなる抗体を指す。例えば、無傷モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）^２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、多重特異性抗体、デュアル特異性抗体、二重特異性抗体、及び単鎖（例えば、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５，５８７９－５８８３（１９８８）及びＢｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２，４２３－４２６（１９８８）を参照されたい（これらは参照により本明細書に組み込まれる））を含む。

【0054】

各重鎖は、可変領域（ＶＨと略される）及び定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３、ならびに任意選択で第４のドメインＣＨ４を含み得る。各軽鎖は、可変領域（ＶＬと略される）及び定常領域で構成される。軽鎖定常領域はＣＬドメインである。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに分割され得、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる保存領域が組み入れられ得る。したがって、各ＶＨ及びＶＬ領域は、Ｎ末端からＣ末端へ次の順序で、すなわち、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順序で配列した３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。この構造は、当業者には周知である。

【0055】

ＭＩＣ抗体のＶＨ ＣＤＲのアミノ酸配列は、アミノ酸２６～３４（ＧＹＳＩＴＳＤＹＡ、ＨＣＤＲ１、配列番号１１）、５０～５８（ＧＹＩＳＹＳＧＳＴ、ＨＣＤＲ２、配列番号１２）及び９７～１０５（ＡＲＧＧＴＹＦＤＹ、ＨＣＤＲ３、配列番号１３）で配列番号１に記述される。ＭＩＣ抗体のＶＬ ＣＤＲのアミノ酸配列は、アミノ酸２４～３２（ＲＡＳＡＨＩＮＮＷ、ＬＣＤＲ１、配列番号１４）、５０～５６（ＤＡＴＳＬＥＳ、ＬＣＤＲ２、配列番号１５）及び９８～１０７（ＱＨＹＷＳＴＰＷＴ、ＬＣＤＲ３、配列番号１６）で配列番号２に記述される。「重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲが改変されていない」という語句は、これらのＶＨ及びＶＬ ＣＤＲ（配列番号１１～１６）を指し、これらにはアミノ酸の置換、欠失または挿入がない。

【0056】

本明細書で使用される場合、ＭＩＣ抗体の「抗原結合部分」は、ＭＩＣ抗体のＶＨ及びＶＬ配列を有する本明細書に記載のＭＩＣ抗体の部分を指す（配列番号１及び配列番号２で表され、任意選択で、本明細書に記載のように改変される）。抗体の「抗原結合部分」という用語によれば、抗原結合部分の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）^２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、及び単鎖が含まれる。本明細書で使用するとき、用語Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ′）２及びＦｖは、以下の、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインで構成される一価フラグメント、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ′）２フラグメント、すなわち、ジスルフィド架橋を介してヒンジ領域で互いに連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント、及び（ｉｉｉ）ＭＩＣ抗体のＶＬ及びＶＨドメインで構成されるＦｖフラグメントを指す。Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、すなわちＶＬ及びＶＨは、別個のコード領域によってコードされているが、これらは、さらに合成リンカー、例えばポリＧ４Ｓアミノ酸配列（配列番号１７として開示される「（Ｇ４Ｓ）ｎ」、ここでｎ＝１～５）を用いて互いに連結することができ、ＶＬ及びＶＨ領域が一価分子（単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）として知られている）を形成するために結合する単一タンパク質鎖としてそれらを調製することを可能にする。抗体の「抗原結合部分」という用語は、そのような単鎖抗体を含むことも意図されている。「ダイアボディ」などの単鎖抗体の他の形態も同様にここに含まれる。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現されるが、ＶＨドメインとＶＬドメインとを接続するリンカーが、２つのドメインが同じ鎖上で結合できるようにするには短いため、ＶＨドメインとＶＬドメインとを別々の鎖（それぞれＶＬ及びＶＨ）の相補的ドメインと対にさせ、２つの抗原結合部位を形成させる、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｒ，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照されたい）。

【0057】

免疫グロブリン定常領域は、重鎖または軽鎖の定常領域を指す。ヒト重鎖定常領域アミノ酸配列及びヒト軽鎖定常領域アミノ酸配列は、当技術分野で周知である。定常領域は、免疫グロブリン、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのクラスから選択できる任意の適切なタイプであり得る。いくつかの免疫グロブリンクラスは、アイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域（Ｆｃ）は、それぞれα、δ、ε、γ、及びμであり得る。軽鎖は、カッパすなわちκ及びラムダすなわちλのいずれかであり得る。

【0058】

いくつかの実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１アイソタイプを有することができる。いくつかの実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ２アイソタイプを有することができる。いくつかの実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ３アイソタイプを有することができる。いくつかの実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ４アイソタイプを有することができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、２つ以上のアイソタイプからの定常領域を含むハイブリッドアイソタイプを有することができる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域であり得る。

【0059】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体重鎖は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、配列番号７で表されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体軽鎖は、カッパアイソタイプであり、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有する。

【0060】

さらに、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分は、抗体または抗体部分と１つ以上の他のタンパク質またはペプチドとの共有結合または非共有結合によって形成される、より大きな結合剤の一部であり得る。そのような結合剤は、四量体ｓｃＦｖ分子を調製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ６：９３－１０１）、及び二価及びビオチン化ｓｃＦｖ分子を製造するためのシステイン残基、マーカーペプチド及びＣ末端ポリヒスチジニルペプチド、例えばヘキサヒスチジニル（ｈｅｘａｈｉｓｔｉｄｉｎｙｌ）タグ（配列番号１８として開示される「ヘキサヒスチジニルタグ」）の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７１０５８）に関連する。

【0061】

ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列に関しては、ＶＨまたはＶＬをコードする核酸に対する個々の置換、欠失または付加（挿入）、あるいはコードされた配列中の単一のアミノ酸または少数のアミノ酸の割合を変更するポリペプチド中のアミノ酸は、「保存的改変バリアント」であると当業者は認識する。この改変は、アミノ酸を化学的に類似したアミノ酸で置換すること（保存的アミノ酸置換）をもたらし、改変されたポリペプチドは、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも大きな結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する能力を保持する。

【0062】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分の保存的改変バリアントは、ＦＲにおいて（すなわち、ＣＤＲ以外において）変更を有し得、例えば、ＭＩＣ抗体の保存的改変バリアントは、ＶＨ及びＶＬ ＣＤＲのアミノ酸配列（配列番号１１～１６で表される）を有し、ＦＲにおいて少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）は、ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２）と比較して、集合的に、ＦＲに８または６または４または２または１以下の保存的アミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）は、ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）と比較して、ＦＲに８～１、６～１、４～１、または２～１の保存的アミノ酸置換を有する。これらの実施形態のいずれかのさらなる態様において、ＭＩＣ抗体、その抗原結合部分または他の結合剤の保存的改変バリアントは、抗体Ｂ１０Ｇ５の結合アフィニティーよりも大きい結合アフィニティーをＭＩＣに対して示す。

【0063】

保存的アミノ酸置換では、所与のアミノ酸が類似の生理化学的特性を有する残基によって置換され、例えば、ある脂肪族残基を別の脂肪族残基に置換すること（Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＡｌａなどの互いの置換）、またはある極性残基を他の残基に置換すること（ＬｙｓとＡｒｇとの置換、ＧｌｕとＡｓｐとの置換、もしくはＧｌｎとＡｓｎとの置換など）が可能である。他のそのような保存的アミノ酸置換、例えば類似の疎水性特性を有する全領域の置換がよく知られている。保存的アミノ酸置換を含むポリペプチドは、天然型ポリペプチドまたは参照ポリペプチドの所望の活性、例えば抗原結合活性及び特異性が保持されていること、すなわちＭＩＣ（ｓＭＩＣ及び／または膜結合型ＭＩＣ）に対して保持されていることを確認するために、本明細書に記載のアッセイのいずれか１つで試験することが可能である。

【0064】

保存的置換の場合、アミノ酸を側鎖の特性の類似性に従ってグループ化することができる（Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄ．，ｐｐ．７３－７５，Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７５））。すなわち、（１）非極性のＡｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、（２）非荷電極性のＧｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、（３）酸性のＡｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、及び（４）塩基性のＬｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）である。

【0065】

あるいは、保存的置換の場合、天然に存在する残基を、共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる。すなわち、（１）疎水性のノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、（２）中性親水性のＣｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、（３）酸性のＡｓｐ、Ｇｌｕ、（４）塩基性のＨｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、（５）鎖の向きに影響を与える残基のＧｌｙ、Ｐｒｏ、及び（６）芳香族のＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅである。非保存的置換では、これらのクラスのいずれかのまたは別のクラスのメンバーを交換することを伴うようになる。

【0066】

特定の保存的置換には、例えば、ＡｌａからＧｌｙまたはＳｅｒへの置換、ＡｒｇからＬｙｓへの置換、ＡｓｎからＧｌｎまたはＨｉｓへの置換、ＡｓｐからＧｌｕへの置換、ＣｙｓからＳｅｒへの置換、ＧｌｎからＡｓｎへの置換、ＧｌｕからＡｓｐへの置換、ＧｌｙからＡｌａまたはＰｒｏへの置換、ＨｉｓからＡｓｎまたはＧｌｎへの置換、ＩｌｅからＬｅｕまたはＶａｌへの置換、ＬｅｕからＩｌｅまたはＶａｌへの置換、ＬｙｓからＡｒｇ、Ｇｌｎ、またはＧｌｕへの置換、ＭｅｔからＬｅｕ、Ｔｙｒ、またはＩｌｅへの置換、ＰｈｅからＭｅｔ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒへの置換、ＳｅｒからＴｈｒへの置換、ＴｈｒからＳｅｒへの置換、ＴｒｐからＴｙｒへの置換、ＴｙｒからＴｒｐへの置換、及び／またはＰｈｅからＶａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕへの置換が含まれる。

【0067】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分上の保存的改変バリアントは、好ましくは、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれ以上が、参照ＶＨまたはＶＬ配列と同一であり、ＶＨ及びＶＬ ＣＤＲ（配列番号１１～１６）は改変されていない。参照配列と改変配列との間の相同性の程度（同一性パーセント）は、例えば、ワールドワイドウェブ上でこの目的のために一般的に使用される自由に入手可能なコンピュータープログラム（例えば、デフォルト設定のＢＬＡＳＴｐまたはＢＬＡＳＴｎ）を使用して２つの配列を比較することによって決定することができる。

【0068】

いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）は、ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）と比較して、集合的に、フレームワーク領域に８または６または４または２または１以下の保存的アミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）は、ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）と比較して、集合的に、フレームワーク領域に８～１、または６～１、または４～１、または２～１の保存的アミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）は、ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）と比較して、集合的に、フレームワーク領域に８または６または４または２または１以下のアミノ酸の置換、欠失または挿入を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）は、ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）と比較して、フレームワーク領域に８～１、６～１、４～１、または２～１の保存的アミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）は、ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２で表される）と比較して、集合的に、８または６または４または２または１以下のアミノ酸の置換、欠失または挿入を有する。

【0069】

天然型（または参照）アミノ酸配列の改変は、当業者に知られている多数の技術のいずれかによって達成することができる。変異は、例えば、天然型配列のフラグメントへのライゲーションを可能にする制限部位が隣接する、所望の変異配列を含むオリゴヌクレオチドを合成することにより、特定の遺伝子座に導入することができる。ライゲーションの後、得られた再構築された配列は、所望のアミノ酸の挿入、置換、または欠失を有するバリアントをコードする。あるいは、オリゴヌクレオチド標的化部位特異的変異誘発手順を使用して、所望の置換、欠失、または挿入に従って変更された特定のコドンを有する変更されたヌクレオチド配列を提供することができる。そのような変更を行うための手法は、非常に確立されており、例えば、Ｗａｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｇｅｎｅ ４２：１３３，１９８６）、Ｂａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｇｅｎｅ ３７：７３，１９８５）、Ｃｒａｉｋ（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｊａｎｕａｒｙ １９８５，１２－１９）、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．（Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９８１）、ならびに米国特許第４，５１８，５８４号及び第４，７３７，４６２号によって開示されたものが挙げられ、これらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0070】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分は、完全ヒト定常領域を有する。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分は、非ヒト定常領域を有する。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体重鎖は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、配列番号７で表されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体軽鎖は、カッパアイソタイプであり、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有する。

【0071】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分は、改変された定常領域（Ｆｃ領域）またはＦｃドメインを有する。Ｆｃドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及び任意選択でＣＨ４）は、Ｆｃ領域の一部である。ＦｃドメインまたはＦｃ領域の一部は、細胞上のＦｃレセプター（ＦｃＲ）に結合できる。ＦｃＲは、ＦｃＲが認識する抗体のクラスに基づいてクラス（例えば、ガンマ（γ）、アルファ（α）及びイプシロン（ε））に編成される。ＦｃａＲクラスは、ＩｇＡに結合でき、ＦｃａＲＩ（ＣＤ８９）などのいくつかのアイソフォームを含む。ＦｃｙＲクラスは、ＩｇＧに結合でき、いくつかのアイソフォーム、ＦｃｙＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃｙＲＩＩＡ（ＣＤ３２ａ）、ＦｃｙＲＩＩＢ（ＣＤ３２ｂ）、ＦｃｙＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及びＦｃｙＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）を含む。ＦｃｙＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）には、Ｆ１５８またはＶ１５８という２つの主要なバリアントがある。

【0072】

ＦｃドメインまたはＦｃ領域のＦｃＲへの結合は、参照と比較して、免疫応答を修正することができる。同様に、ＦｃドメインのＦｃＲへの結合の欠如は、参照と比較して、免疫応答を修正することができる。

【0073】

ＭＩＣ抗体は、野生型または参照配列と比較して、対応する野生型配列または参照配列と関連した、少なくとも１つの定常ドメインまたは定常領域を介する生物学的エフェクター機能を変更するように改変された配列を有するＦｃドメインを有することができる。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインを修飾して、未改変Ｆｃドメインと関連した、少なくとも１つの定常ドメインまたは定常領域を介する生物学的エフェクター機能を低減または増大させることができ、例えば、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）への結合を低減または増大させることができる。ＦｃＲ結合は、例えば、ＦｃＲ相互作用に関与する（例えば、必要である、または影響を及ぼす）特定の部位（複数可）で抗体の免疫グロブリン定常領域セグメントを改変することによって低減または増大させることができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、１つ以上のＦｃガンマレセプター（例えば、ＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩＡ、ＦｃｙＲＩＩＢ、ＦｃｙＲＩＩＩＡ、ＦｃｙＲＩＩＩＢ、及び／またはＦｃＲＮの１つ以上）への結合を低減させるように変更されている。

【0074】

いくつかの実施形態では、抗体の定常領域または定常ドメインは、未改変Ｆｃドメインに関連した、少なくとも１つの定常領域を介する生物学的エフェクター機能を獲得または改善するように、例えば、ＦｃｙＲ相互作用を強化するように改変されている。例えば、抗体の定常領域または定常ドメインは、対応する野生型ＦｃドメインまたはＦｃ領域よりも高いアフィニティーで、ＦｃｙＲＩＩＡ、ＦｃｙＲＩＩＢ及び／またはＦｃｙＲＩＩＩＡに結合するように改変することが可能である。

【0075】

アミノ酸配列Ｆｃドメインにおける改変は、ＦｃドメインまたはＦｃ領域に対するＦｃＲの認識を変更し得る。ただし、そのような改変をしてもＦｃＲを介したシグナル伝達は可能である。改変（複数可）は、ある残基におけるアミノ酸を、その残基における異なるアミノ酸へ置換することであり得る。改変（複数可）は、ＦｃＲが普通なら結合できないＦｃドメインまたはＦｃ領域上の部位へのＦｃＲの結合を可能にすることができる。改変（複数可）は、参照配列の結合と比較して、ＦｃドメインまたはＦｃ領域に対するＦｃＲの結合アフィニティーを増加させることができる。改変（複数可）は、参照配列の結合と比較して、Ｆｃドメイン上の部位に対するＦｃＲの結合アフィニティーを低下させることができる。

【0076】

いくつかの実施形態では、アミノ酸配列Ｆｃドメインにおける改変（複数可）は、ＦｃドメインまたはＦｃ領域に対する１つのＦｃＲ、または複数のＦｃＲの認識を変更し得る。そのような改変（複数可）は、抗体または抗原結合部分が免疫細胞と相互作用する能力を変化させることができる。ＦｃドメインまたはＦｃ領域に対するそのような改変または一連の改変は、免疫細胞上のＦｃＲへのＦｃドメインの選択的結合を可能にし、あるいは改変ドメインを有する抗体または抗原結合部分と免疫細胞との相互作用を低減させる、または排除することができる。例えば、Ｆｃドメインへの改変は、ＦｃドメインのＦｃガンマレセプターへの結合を低減させるが、ＦｃドメインがＦｃＲｎに結合する能力を保持することができる。

【0077】

改変Ｆｃ領域またはドメインは、野生型Ｆｃ領域またはドメインの配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸変化を有することができる。Ｆｃ領域におけるアミノ酸変化は、抗体またはその抗原結合部分が、野生型または参照Ｆｃ領域と比較してより高いアフィニティーで、少なくとも１つのＦｃレセプターに結合することを可能にすることができる。Ｆｃドメインにおけるアミノ酸変化は、野生型または参照Ｆｃドメインと比較してより高いアフィニティーで、抗体が少なくとも１つのＦｃレセプターに結合することを可能にすることができる。Ｆｃ領域におけるアミノ酸変化は、野生型または参照Ｆｃ領域と比較してより低いアフィニティーで、抗体が少なくとも１つのＦｃレセプターに結合することを可能にすることができる。Ｆｃドメインにおけるアミノ酸変化は、野生型または参照Ｆｃドメインと比較してより低いアフィニティーで、抗体が少なくとも１つのＦｃレセプターに結合することを可能にすることができる。

【0078】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分は、野生型ＩｇＧ１配列から改変されたＩｇＧ１アイソフォームの配列を含むＦｃドメインまたはＦｃ領域を有することができる。改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ（ＩｇＧ１ＶＬＰＬＬ）を含む５つの異なるアミノ酸残基などのＦｃドメインの１つ以上のアミノ酸残基における置換を含むことができる。改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ（ＩｇＧ１ＤＥ）を含むＦｃドメインの２つの異なるアミノ酸残基などの１つ以上のアミノ酸残基における置換を含むことができる。改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ（ＩｇＧ１ ＡＡＡ）を含むＦｃドメインの３つの異なるアミノ酸残基などの１つ以上のアミノ酸残基における置換を含むことができる。

【0079】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分のＦｃドメインまたはＦｃ領域は、１つ以上のＦｃレセプターに対しての結合アフィニティーの低下を示し得る。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインまたはＦｃ領域は、１つ以上のＦｃガンマレセプターに対しての結合アフィニティーの低下を示し得る。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインまたはＦｃ領域は、ＦｃＲｎレセプターに対しての結合アフィニティーの低下を示し得る。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインまたはＦｃ領域は、Ｆｃガンマレセプター及びＦｃＲｎレセプターに対しての結合アフィニティーの低下を示し得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＦｃヌルドメインまたはＦｃヌル領域である。本明細書で使用される場合、「Ｆｃヌル」は、Ｆｃガンマレセプターのいずれに対しても、弱い結合～非結合、を示すドメインを指す。いくつかの実施形態では、ＦｃヌルドメインまたはＦｃヌル領域は、少なくとも１０００倍の、Ｆｃガンマレセプターに対する結合アフィニティーの低下（例えば、Ｋｄの増加）を示す。

【0080】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体のＦｃドメインまたはＦｃ領域は、ＧＧＧＳなどのフレキシブル配列を含むＦｃヌルドメインまたはＦｃヌル領域である。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体はＩｇＧ１アイソフォームであり、フレキシブル配列はヒトＩｇＧ１重鎖のＧ２３７とＧ２３８との間に挿入される。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体へのフレキシブル配列の組み入れは、抗体の結合アフィニティーに対して、ほとんど影響を及ぼさない～全く影響を及ぼさない、結果となる。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体にフレキシブル配列を含めると、抗体のＡＤＣＣ活性が低下する。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体へのフレキシブル配列への組み入れは、グリコシル化の損失を、ほとんど生じさせない～全く生じさせない、結果をもたらし、及び／または抗体のグリカンプロファイルの大幅な変更（複数可）をもたらす。抗体のグリコシル化及び／またはグリカンプロファイルは、例えば、抗体をＰＮＧａｓｅＦ消化に供し、蛍光検出器を備えた親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）を使用して酵素生成物を分析することによって測定することができる。

【0081】

特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＦｃｙＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃｙＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃｙＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃｙＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、またはそれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上に対して、減少した結合アフィニティーを有する。ＦｃドメインまたはＦｃ領域のＦｃレセプターへの結合アフィニティーを低下させるために、ＦｃドメインまたはＦｃ領域は、ＦｃドメインまたはＦｃ領域のＦｃレセプターへの結合アフィニティーを低減させる１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。

【0082】

いくつかの実施形態では、１つ以上の置換は、ＫａｂａｔナンバリングのＥＵ指数による、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、ＡＧ２３６、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及び／またはＰ３３１Ｓに対応するＩｇＧ１重鎖置換のうちの任意の１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５ＡまたはＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／ＡＧ２３６などの、Ｅ２３３、Ｌ２３４及びＬ２３５の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｐ２３８ＡなどのＰ２３８の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｄ２６５ＡなどのＤ２６５の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｎ２９７ＡなどのＮ２９７の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ａ３２７ＱなどのＡ３２７の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｐ２３９ＡなどのＰ３２９の置換であり得る。

【0083】

いくつかの実施形態では、ＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域は、野生型または参照ＩｇＧ Ｆｃドメインと比較して、そのＦｃｙＲＩへの結合アフィニティーを低減させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｆ２４１ＡなどのＦ２４１での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｆ２４３ＡなどのＦ２４３での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｖ２６４ＡなどのＶ２６４での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｄ２６５ＡなどのＤ２６５での置換を含み得る。

【0084】

いくつかの実施形態では、ＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域は、野生型または参照ＩｇＧ Ｆｃドメインと比較して、そのＦｃｙＲＩへの結合アフィニティーを増大させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ａ３２７Ｑ／Ｐ３２９ＡなどのＡ３２７及びＰ３２９での置換を含み得る。

【0085】

いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃ改変（複数可）は、ＦｃｙＲＩＩ及びＦｃｙＲＩＩＩＡレセプターに対するＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域の結合アフィニティーを低減させる１つ以上のアミノ酸の置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｄ２７０ＡなどのＤ２７０の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｑ２９５ＡなどのＱ２９５の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ａ２３７ＳなどのＡ３２７の置換であり得る。

【0086】

いくつかの実施形態では、改変は、ＦｃｙＲＩＩ及びＦｃｙＲＩＩＩＡレセプターに対するＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域の結合アフィニティーを増大させる１つ以上のアミノ酸の置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｔ２５６ＡなどのＴ２５６の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｋ２９０ＡなどのＫ２９０の置換であり得る。

【0087】

いくつかの実施形態では、改変は、ＦｃｙＲＩＩレセプターに対するＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域の結合アフィニティーを増大させる１つ以上のアミノ酸の置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｒ２５５ＡなどのＲ２５５の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｅ２５８ＡなどのＥ２５８の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｓ２６７ＡなどのＳ２６７の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｅ２７２ＡなどのＥ２７２の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｎ２７６ＡなどのＮ２７６の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｄ２８０ＡなどのＤ２８０の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｈ２８５ＡなどのＨ２８５の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｎ２８６ＡなどのＮ２８６の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｔ３０７ＡなどのＴ３０７の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｌ３０９ＡなどのＬ３０９の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｎ３１５ＡなどのＮ３１５の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｋ３２６ＡなどのＫ３２６の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｐ３３１ＡなどのＰ３３１の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｓ３３７ＡなどのＳ３３７の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ａ３７８ＡなどのＡ３７８の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｅ４３０などのＥ４３０の置換であり得る。

【0088】

いくつかの実施形態では、改変は、ＦｃｙＲＩＩレセプターに対するＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域の結合アフィニティーを増大させ、ＦｃｙＲＩＩＩＡレセプターに対する結合アフィニティーを低減させる、１つ以上のアミノ酸の置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｈ２６８ＡなどのＨ２６８の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｒ３０１ＡなどのＲ３０１の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｋ３２２ＡなどのＫ３２２の置換であり得る。

【0089】

いくつかの実施形態では、改変は、ＦｃｙＲＩＩレセプターに対するＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域の結合アフィニティーを低下させるが、ＦｃｙＲＩＩＩＡレセプターに対する結合アフィニティーには有意に影響を及ぼさない、１つ以上のアミノ酸の置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｒ２９２ＡなどのＲ２９２の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｋ４１４ＡなどのＫ４１４の置換であり得る。

【0090】

いくつかの実施形態では、改変は、ＦｃｙＲＩＩレセプターに対するＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域の結合アフィニティーを低下させ、ＦｃｙＲＩＩＩＡレセプターに対する結合アフィニティーを増大させる、１つ以上のアミノ酸の置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｓ２９８ＡなどのＳ２９８の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌなどの、Ｓ２３９、Ｉ３３２及びＡ３３０の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅなどの、Ｓ２３９及びＩ３３２の置換であり得る。

【0091】

いくつかの実施形態では、改変は、ＦｃｙＲＩＩＩＡレセプターに対するＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域の結合アフィニティーを低下させる１つ以上のアミノ酸の置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｆ２４１Ｓ／Ｆ２４３ＳまたはＦ２４１Ｉ／Ｆ２４３Ｉなどの、Ｆ２４１及びＦ２４３の置換であり得る。

【0092】

いくつかの実施形態では、改変は、ＦｃｙＲＩＩＩＡレセプターに対するＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域の結合アフィニティーを低下させ、ＦｃｙＲＩＩレセプターに対する結合アフィニティーには有意に影響を及ぼさない、１つ以上のアミノ酸の置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｓ２３９ＡなどのＳ２３９の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｅ２６９ＡなどのＥ２６９の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｅ２９３ＡなどのＥ２９３の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｙ２９６ＦなどのＹ２９６の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｖ３０３ＡなどのＶ３０３の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ａ３２７ＧなどのＡ３２７の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｋ３３８ＡなどのＫ３３８の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｄ３７６ＡなどのＤ３７６の置換であり得る。

【0093】

いくつかの実施形態では、改変は、ＦｃｙＲＩＩＩＡレセプターに対するＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域の結合アフィニティーを増大させ、ＦｃｙＲＩＩレセプターに対する結合アフィニティーには影響を及ぼさない、１つ以上のアミノ酸の置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｅ３３３ＡなどのＥ３３３の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｋ３３４ＡなどのＫ３３４の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ａ３３９ＴなどのＡ３３９の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅなどの、Ｓ２３９及び１３３２の置換であり得る。

【0094】

いくつかの実施形態では、改変は、ＦｃｙＲＩＩＩＡレセプターに対するＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域の結合アフィニティーを増大させる１つ以上のアミノ酸の置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ（ＩｇＧ１ ＶＬＰＬＬ）などの、Ｌ２３５、Ｆ２４３、Ｒ２９２、Ｙ３００及びＰ３９６の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａなどの、Ｓ２９８、Ｅ３３３及びＫ３３４の置換であり得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｋ２４６ＦなどのＫ２４６の置換であり得る。

【0095】

ＩｇＧ Ｆｃドメインにおける、その１つ以上のＦｃガンマレセプターとの相互作用に影響を与える他の置換は、米国特許第７，３１７，０９１号及び第８，９６９，５２６号に開示されている（これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）。

【0096】

いくつかの実施形態では、ＩｇＧ ＦｃドメインまたはＩｇＧ Ｆｃ領域は、野生型または参照ＩｇＧ Ｆｃドメインと比較して、ＦｃＲｎへの結合アフィニティーを低減させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｈ４３５ＡなどのＨ４３５での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｉ２５３ＡなどのＩ２５３での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｈ３１０ＡなどのＨ３１０での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｉ２５３Ａ／Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ａなどの、Ｉ２５３、Ｈ３１０及びＨ４３５での置換を含み得る。

【0097】

いくつかの実施形態では、改変は、野生型または参照ＩｇＧ Ｆｃドメインと比較して、ＦｃＲｎに対するＩｇＧ Ｆｃドメインの結合アフィニティーを増加させる１つのアミノ酸残基の置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｖ３０８ＰなどのＶ３０８での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｍ４２８ＬなどのＭ４２８での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数によるＮ４３４Ａ、またはＫａｂａｔのＥＵ指数によるＮ４３４Ｈなどの、Ｎ４３４での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｔ２５０Ｑ及びＭ４２８Ｌなどの、Ｔ２５０及びＭ４２８での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ、Ｎ４３４ＡまたはＮ４３４Ｈなどの、Ｍ４２８及びＮ４３４での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅなどの、Ｍ２５２、Ｓ２５４及びＴ２５６での置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変は、Ｐ２５７Ｌ、Ｐ２５７Ｎ、Ｐ２５７Ｉ、Ｖ２７９Ｅ、Ｖ２７９Ｑ、Ｖ２７９Ｙ、Ａ２８１Ｓ、Ｅ２８３Ｆ、Ｖ２８４Ｅ、Ｌ３０６Ｙ、Ｔ３０７Ｖ、Ｖ３０８Ｆ、Ｑ３１ＩＶ、Ｄ３７６Ｖ、及びＮ４３４Ｈから選択される１つ以上のアミノ酸の置換であり得る。ＩｇＧ Ｆｃドメインにおける、そのＦｃＲｎとの相互作用に影響を及ぼす他の置換は、米国特許第９，８０３，０２３号に開示されている（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）。

【0098】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を改変する、改変された定常領域（Ｆｃ領域）またはＦｃドメインを有する。ＣＤＣは、抗体によって指示できる細胞殺傷法である。ＩｇＭは、補体活性化に最も効果的なアイソタイプである。ＩｇＧ１とＩｇＧ３とはどちらも、古典的補体活性化経路を介してＣＤＣを誘導するのに非常に効果的である。

【0099】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｐ３２９Ａ及び／またはＰ３３１ＡなどのＩｇＧ１のアミノ酸位置Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３２９、及び／またはＰ３３１の１つ以上において、ＣＤＣ活性を低減させる改変を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｅ４３０Ｇ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ及び／またはＳ４４０Ｗの１つ以上など、ＫａｂａｔのＥＵ指数による、ＩｇＧ１のアミノ酸位置Ｅ４３０、Ｅ３４５及びＳ４４０の１つ以上において、ＣＤＣ活性を増加させる改変を有する。

【0100】

様々な実施形態において、ＭＩＣ抗体、その抗原結合部分及び他の結合剤は、ヒト、マウスまたは他の動物由来の細胞株で産生され得る。組み換えＤＮＡ発現を使用して、ＭＩＣ抗体、その抗原結合部分及び他の結合剤を産生することができる。これにより、選択した宿主種において、ＭＩＣ抗体だけでなく、ＭＩＣ抗原結合部分及び他の結合剤（融合タンパク質を含む）のスペクトルの産生が可能になる。細菌、酵母、トランスジェニック動物及び鶏卵におけるＭＩＣ抗体、その抗原結合部分及び他の結合剤の産生も、細胞ベースの産生系の代替である。トランスジェニック動物の主な利点は、再生可能資源からの潜在的高収量である。

【0101】

いくつかの実施形態では、配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＭＩＣ ＶＨポリペプチドは、核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＭＩＣ ＶＬポリペプチドは、核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＭＩＣ ＶＨポリペプチドは、配列番号２１で表される配列を有する核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＭＩＣ ＶＬポリペプチドは、配列番号２２で表される配列を有する核酸によってコードされる。

【0102】

本明細書で使用するとき、「核酸」または「核酸配列」または「ポリヌクレオチド配列」または「ヌクレオチド」という用語は、リボ核酸、デオキシリボ核酸またはその類似体の単位を組み込んだ高分子を指す。核酸は、一本鎖または二本鎖のいずれかであり得る。一本鎖核酸は、変性二本鎖ＤＮＡの一本鎖核酸であり得る。いくつかの実施形態では、核酸は、ｃＤＮＡ、例えば、イントロンを欠く核酸であり得る。

【0103】

ＭＩＣ抗体、その抗原結合部分、及び他の結合剤のアミノ酸配列をコードする核酸分子は、当技術分野で知られている様々な方法によって調製することができる。これらの方法には、ＭＩＣ抗体、抗原結合部分または他の結合剤（複数可）をコードする合成ヌクレオチド配列の調製が含まれるが、これに限定されない。さらに、オリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ媒介変異誘発、及びカセット式変異誘発を使用して、ＭＩＣ抗体または抗原結合部分及び他の結合剤をコードするヌクレオチド配列を調製することができる。本明細書に記載される少なくともＭＩＣ抗体、その抗原結合部分、結合剤、またはそのポリペプチドをコードする核酸配列は、例えば、ライゲーションのためのブラントエンド末端またはスタッガード末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、適宜の付着端の充填、望ましくない接合を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、及び適切なリガーゼによるライゲーションなどの従来の技術に従って、ベクターＤＮＡに組み換えることができる。そのような操作のための技術は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｌａｂ．Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ．Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８２ ａｎｄ １９８９）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ），１９８７－１９９３によって開示されており、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分またはそのＶＨもしくはＶＬポリペプチドをコードする核酸配列及びベクターを作成するために使用することができる。

【0104】

ＤＮＡなどの核酸分子は、転写及び翻訳の調節情報を含むヌクレオチド配列を含み、そのような配列が、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に「作動可能に連結」されている場合、ポリペプチドを「発現できる」と言われる。作動可能な連結とは、調節ＤＮＡ配列と発現させようとするＤＮＡ配列（例えば、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分）とが、回収可能な量のポリペプチド（複数可）または抗原結合部分の遺伝子発現を可能にするように連結されている連結である。遺伝子発現に必要な調節領域の正確な性質は、類似技術において周知であるように、生物によって異なり得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８７－１９９３を参照されたい。

【0105】

したがって、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分の発現は、原核細胞または真核細胞のいずれかで起こり得る。適切な宿主には、インビボまたはインサイチュの酵母、昆虫、菌類、鳥及び哺乳類細胞を含む細菌または真核宿主、あるいは哺乳類、昆虫、鳥または酵母由来の宿主細胞が含まれる。哺乳類細胞または組織は、ヒト、霊長類、ハムスター、ウサギ、齧歯動物、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ヤギ、イヌまたはネコ由来のものであり得るが、他の任意の哺乳類細胞を使用してもよい。さらに、例えば、酵母ユビキチンヒドロラーゼ系を使用することにより、ユビキチン－膜貫通ポリペプチド融合タンパク質のインビボ合成を達成することができる。そのように産生された融合タンパク質は、インビボで処理するか、またはインビトロで精製及び処理することができ、特定のアミノ末端配列を有する本明細書に記載のＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分の合成を可能にする。さらに、直接的な酵母（または細菌）発現における開始コドン由来のメチオニン残基の保持に関連する問題を回避することができる。（例えば、Ｓａｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，７ Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．７０５（１９８９）；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，７ Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．６９８（１９８９）を参照されたい。）酵母がグルコースに富む培地で生育された場合に大量に産生される解糖酵素をコードする活発に発現される遺伝子からのプロモーター及び終結エレメントを組み込む一連の酵母遺伝子発現系のいずれかを利用して、組み換えＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分を得ることができる。既知の解糖系遺伝子は、非常に効率的な転写制御シグナルを提供することもできる。例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子のプロモーター及びターミネーターシグナルを利用することができる。

【0106】

昆虫におけるＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分の産生は、例えば、当業者に公知の方法によってポリペプチドを発現するように操作されたバキュロウイルスを昆虫宿主に感染させることによって達成することができる。Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８７－１９９３を参照されたい。

【0107】

いくつかの実施形態では、導入される核酸配列（ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分またはそのポリペプチドをコードする）は、レシピエント宿主細胞において自律複製可能なプラスミドまたはウイルスベクターに組み込まれる。多種多様なベクターのいずれもこの目的のために使用することができ、当業者に知られており、利用可能である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８７－１９９３を参照されたい。特定のプラスミドまたはウイルスベクターを選択する際の重要な要因には、ベクターを含むレシピエント細胞を、ベクターを含まないレシピエント細胞から認識し選択できることが容易であること、特定の宿主において望まれるベクターのコピー数、及び異なる種の宿主細胞間でベクターを「シャトル」できることが望ましいかどうかが含まれる。

【0108】

当技術分野で知られている代表的な原核ベクターには、Ｅ．ｃｏｌｉで複製ができるようなプラスミドが含まれる。ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分をコードするＤＮＡの発現に有用な他の遺伝子発現エレメントとしては、（ａ）ＳＶ４０初期プロモーター（Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，３ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３））、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ（Ｇｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，７９ ＰＮＡＳ ６７７７（１９８２））、及びモロニーマウス白血病ウイルスＬＴＲ（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ ｅｔ ａｌ．，４１ Ｃｅｌｌ ８８５（１９８５））などのウイルス転写プロモーター及びそのエンハンサーエレメント、（ｂ）ＳＶ４０後期領域（Ｏｋａｙａｒｅａ ｅｔ ａｌ．，１９８３）に由来するようなスプライス領域及びポリアデニル化部位、ならびに（ｃ）ＳＶ４０（Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，１９８３）などにおけるポリアデニル化部位などがあるが、これらに限定されない。免疫グロブリンコード化ＤＮＡ遺伝子は、発現エレメントのＳＶ４０初期プロモーター及びそのエンハンサー、マウス免疫グロブリンＨ鎖プロモーターエンハンサー、ＳＶ４０後期領域ｍＲＮＡスプライシング、ウサギＳ－グロビン介在配列、免疫グロブリン及びウサギＳ－グロビンポリアデニル化部位、ならびにＳＶ４０ポリアデニル化エレメントを用いて、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ｉｎｆｒａ，ａｎｄ Ｗｅｉｄｌｅ ｅｔ ａｌ．，５１ Ｇｅｎｅ ２１（１９８７）によって記載されたように、発現することが可能である。

【0109】

免疫グロブリンをコードするヌクレオチド配列の場合、転写プロモーターは、例えば、ヒトサイトメガロウイルスとすることができ、プロモーターエンハンサーは、サイトメガロウイルス及びマウス／ヒト免疫グロブリンとすることができる。

【0110】

いくつかの実施形態では、齧歯類細胞におけるＤＮＡコード領域の発現のために、転写プロモーターをウイルスＬＴＲ配列とすることができ、転写プロモーターエンハンサーをマウス免疫グロブリン重鎖エンハンサー及びウイルスＬＴＲエンハンサーのいずれかまたは両方、ならびにポリアデニル化領域及び転写終結領域とすることができる。他の実施形態では、他のタンパク質をコードするＤＮＡ配列を上記の発現エレメントと組み合わせて、哺乳類細胞におけるタンパク質の発現を達成する。

【0111】

各コード領域または遺伝子融合は、発現ベクターに組み立てられるか、または挿入される。ＭＩＣ可変領域（複数可）またはその抗原結合部分を発現することができるレシピエント細胞（例えば、本明細書に記載される配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び／または配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＶＬまたはそのバリアント）は、次に、ＭＩＣ抗体または抗体ポリペプチドまたはその抗原結合部分をコードするヌクレオチドを単独にトランスフェクトされ、あるいはＶＨ及びＶＬ鎖コード領域をコードするポリヌクレオチド（複数可）をコトランスフェクトされる。トランスフェクトされたレシピエント細胞は、組み込まれたコード領域の発現を可能にする条件下で培養され、発現された抗体鎖または無傷の抗体もしくは抗原結合部分が培養から回収される。

【0112】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び／または配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＶＬまたはそのバリアント）をコードするコード領域を含む核酸は、別々の発現ベクターに組み立てられ、その後、レシピエント宿主細胞をコトランスフェクトするために使用される。各ベクターは、１つ以上の選択可能な遺伝子を含むことができる。例えば、いくつかの実施形態では、２つの選択可能遺伝子、細菌系での選択のために設計された第１の選択可能遺伝子及び真核細胞系での選択のために設計された第２の選択可能遺伝子が使用され、各ベクターがコード領域のセットを有する。この戦略は、細菌系におけるヌクレオチド配列の産生を最初に指示し、増幅を可能にするベクターをもたらす。このように細菌宿主中で産生され増幅されたＤＮＡベクターは、その後、真核細胞をコトランスフェクトするために使用され、所望のトランスフェクトされた核酸（例えば、ＭＩＣ抗体の重鎖及び軽鎖を含む）を担持するコトランスフェクトされる細胞の選択を可能にする。細菌系で使用するための選択可能な遺伝子の非限定的な例は、アンピシリンに対する耐性を付与する遺伝子及びクロラムフェニコールに対する耐性を付与する遺伝子である。真核トランスフェクタントで使用するための選択可能な遺伝子には、キサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子（ｇｐｔと命名）及びＴｎ５由来のホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｎｅｏと命名）が含まれる。あるいは、ＶＨ及びＶＬ鎖をコードする融合ヌクレオチド配列を、同じ発現ベクター上で組み立てることができる。

【0113】

発現ベクターのトランスフェクション及びＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分の産生のために、レシピエント細胞株は、チャイニーズハムスター卵巣細胞株（例えば、ＤＧ４４）または骨髄腫細胞であり得る。骨髄腫細胞は、トランスフェクトされた免疫グロブリン遺伝子によってコードされる免疫グロブリンを合成、組み立て、及び分泌し、免疫グロブリンのグリコシル化のメカニズムを保有することができる。例えば、いくつかの実施形態では、レシピエント細胞は組み換えＩｇ産生骨髄腫細胞ＳＰ２／０（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ ８２８７）である。ＳＰ２／０細胞は、トランスフェクトされた遺伝子によってコードされる免疫グロブリンのみを産生する。骨髄腫細胞は、培養中またはマウスの腹腔内で増殖させることができ、分泌された免疫グロブリンを腹水から得ることができる。

【0114】

ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び／または配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＶＬまたはそのバリアント）をコードする発現ベクターは、形質転換、トランスフェクション、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、及びジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）デキストランなどのポリカチオンを用いたアプリケーションのような生化学的手段、ならびにエレクトロポレーション、直接マイクロインジェクション及びマイクロプロジェクタイルボンバードメントのような機械的手段を含む、様々な好適な手段のいずれかによって、適切な宿主細胞に導入することができる。当業者に知られている、Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２４０ Ｓｃｉｅｎｃｅ １５３８（１９８８）を参照されたい。

【0115】

酵母は、免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の産生に関して細菌よりも優れた利点を提供する。酵母は、グリコシル化を含む翻訳後ペプチド修飾を実行する。強力なプロモーター配列と高コピー数のプラスミドとを利用する組み換えＤＮＡ戦略がいくつか存在し、酵母で所望のタンパク質を産生するために使用することができる。酵母は、クローン化された哺乳動物遺伝子産物のリーダー配列を認識し、リーダー配列を持つポリペプチド（すなわち、プレポリペプチド）を分泌する。例えば、Ｈｉｔｚｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１１ｔｈ Ｉｎｔｌ．Ｃｏｎｆ．Ｙｅａｓｔ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ＆ Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．（Ｍｏｎｔｐｅｌｉｅｒ，Ｆｒａｎｃｅ，１９８２）を参照されたい。

【0116】

酵母遺伝子発現系は、抗体の産生、分泌、及び安定性のレベル、ならびに組み立てられたＭＩＣ抗体及びその抗原結合部分について規定どおりに評価することができる。酵母がグルコースに富む培地中で増殖される場合に、大量に産生される解糖酵素をコードする活発に発現される遺伝子からのプロモーター及び終結エレメントを組み込む、様々な酵母遺伝子発現系を利用することができる。既知の解糖系遺伝子は、非常に効率的な転写制御シグナルを提供することもできる。例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）遺伝子のプロモーター及びターミネーターシグナルを利用することができる。別の例は、翻訳伸長因子１アルファプロモーターである。酵母における免疫グロブリンの発現に最適な発現プラスミドを評価するために、いくつかのアプローチを取ることができる。ＩＩ ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ ４５，（Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８５）及び例えば、米国公開第ＵＳ２００６／０２７００４５Ａ１号を参照されたい。

【0117】

本明細書に記載の抗体分子またはその抗原結合部分の産生のための宿主として、細菌株を利用することもでき、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ ２７３２５）などのＥ．ｃｏｌｉ Ｋ１２株、バチルス種、サルモネラチフィムリウムまたはセラチアマルセセンスなどの腸内細菌、及び種々のシュードモナス種を使用することができる。これらの細菌宿主に関連して、宿主細胞と適合性のある種に由来するレプリコン及び制御配列を含有するプラスミドベクターが使用される。このベクターは、複製部位だけでなく、形質転換細胞において表現型の選択を提供することができる特定の遺伝子を持つ。細菌におけるＭＩＣ抗体及びその抗原結合部分の産生のための発現プラスミドを評価するために、いくつかのアプローチを取ることができる（Ｇｌｏｖｅｒ，１９８５；Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７，１９９３；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，１９９２－１９９６を参照されたい）。

【0118】

宿主哺乳類細胞は、インビトロまたはインビボで増殖させることができる。哺乳類細胞は、リーダーペプチドの除去、ＶＨ鎖及びＶＬ鎖のフォールディング及び組み立て、抗体分子のグリコシル化、ならびに機能性抗体及び／またはその抗原結合部分の分泌を含む翻訳後修飾を免疫グロブリン分子に提供する。

【0119】

抗体タンパク質の産生のための宿主として有用であり得る哺乳類細胞には、上記のリンパ系起源の細胞に加えて、Ｖｅｒｏ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８１）またはＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ６１）細胞などの線維芽細胞起源の細胞が含まれる。免疫グロブリンポリペプチドを発現するために使用できる例示的な真核細胞には、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞、２９３－６Ｅ細胞を含む２９３細胞、ＣＨＯ－－Ｓ及びＤＧ４４細胞を含むＣＨＯ細胞、ＰＥＲＣ６（商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、ならびにＮＳＯ細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、特定の真核生物宿主細胞は、重鎖及び／または軽鎖に対して所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で産生される同じポリペプチドよりも高いシアリル化レベルを有するポリペプチドを産生する。

【0120】

いくつかの実施形態では、任意の適切な方法に従って、ポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子を操作またはトランスフェクトされた動物において、１つ以上のＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び／または配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＶＬまたはそのバリアント）をインビボで産生することができる。

【0121】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び／または配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＶＬまたはそのバリアント）は、無細胞系で産生される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９－４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８－４５（２００４）；Ｅｎｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５－７１３（２００３）に記載されている。

【0122】

哺乳類細胞でのＶＨ鎖及びＶＬ鎖（例えば、本明細書に記載される配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び／または配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＶＬまたはそのバリアント）の発現には、多くのベクター系が利用可能である（Ｇｌｏｖｅｒ，１９８５を参照されたい）。無傷の抗体を得るために、様々なアプローチに従うことができる。上述のように、ＶＨ鎖及びＶＬ鎖、ならびに任意選択で関連する定常領域を同じ細胞内で同時発現させて、ＶＨ鎖及びＶＬ鎖の細胞内会合及び連結を達成して、完全な四量体Ｈ_２Ｌ_２抗体またはその抗原結合部分にすることが可能である。同時発現は、同じホストで同じまたは異なるプラスミドを使用することによって起こり得る。ＶＨ鎖及びＶＬ鎖またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＶＬまたはそのバリアント）をコードする核酸を同じプラスミドに配置し、次いでこれらを細胞にトランスフェクトし、それによって両方の鎖を発現する細胞を直接選択することができる。あるいは、細胞は、１つの鎖、例えばＶＬ鎖をコードするプラスミドを最初にトランスフェクトされ、その後、得られた細胞株に第２の選択可能マーカーを含むＶＨ鎖プラスミドがトランスフェクトされ得る。抗体やその抗原結合部分を産生する細胞株には、いずれかの経路を介して、ペプチド、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨプラスＶＬ鎖（例えば、本明細書に記載される配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び／または配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＶＬまたはそのバリアント）の追加のコピーをコードするプラスミドが、追加の選択可能マーカーと併せてトランスフェクトされて、組み立てられたＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分のより高い産生、またはトランスフェクトされた細胞株の安定性の向上など、特性が強化された細胞株を生成することができる。

【0123】

さらに、植物が、微生物または動物細胞の大規模培養に基づく組み換え抗体産生のための便利で安全かつ経済的な代替発現系として浮上している。ＭＩＣ結合抗体または抗原結合部分を、植物細胞培養、または通常に生育された植物で発現させることができる。植物における発現は、全身性であるか、細胞内色素体に限定されているか、または種子（胚乳）に限定されている場合がある。例えば、米国特許公開第２００３／０１６７５３１号、米国特許第６，０８０，５６０号、米国特許第６，５１２，１６２号、ＷＯ０１２９２４２を参照されたい。いくつかの植物由来抗体は、臨床試験を含む開発の進んだ段階に達している（例えば、Ｂｉｏｌｅｘ，Ｎ．Ｃ．を参照）。

【0124】

無傷の抗体の場合、ＭＩＣ抗体（例えば、本明細書に記載される配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び／または配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するＶＬまたはそのバリアント）の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）は、典型的には免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部に連結される。ヒト定常領域ＤＮＡ配列は、不死化Ｂ細胞などの様々なヒト細胞から周知の手順に従って単離され得る（ＷＯ８７／０２６７１；この全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ＭＩＣ結合抗体は、軽鎖と重鎖の両方の定常領域を含むことができる。重鎖定常領域には、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及び場合によってはＣＨ４領域が含まれ得る。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインを欠失または省略することができる。

【0125】

あるいは、単鎖抗体の産生のために説明された手法（例えば米国特許第４，９４６，７７８号；Ｂｉｒｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３（１９８８）；及びＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４４－５４（１９８９）を参照されたい；これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を、ＭＩＣに特異的に結合する単鎖抗体を産生するように適合させることができる。単鎖抗体は、Ｆｖ領域の重鎖及び軽鎖可変領域（本明細書に記載の配列番号１及び２で表されるアミノ酸配列、またはそのバリアント（例えば、任意選択で１～８個のアミノ酸の置換、欠失及び／または挿入によって改変されている）を有する）を、アミノ酸架橋を介して連結することによって形成され、単鎖ポリペプチドが得られる。Ｅ．ｃｏｌｉにおける機能的Ｆｖフラグメントの組み立ての手法も使用できる（例えばＳｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８－１０４１（１９８８）を参照されたい；この全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0126】

無傷の（例えば、完全な）抗体、それらの二量体、個々の軽鎖及び重鎖、またはそれらの抗原結合部分は、既知の手法、例えば、免疫吸着または免疫アフィニティークロマトグラフィー、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）などのクロマトグラフィー法、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、またはこれらの任意の組み合わせによって回収及び精製することができる。一般に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，１９８２）を参照されたい。少なくとも約９０％～９５％の均一性を有する実質的に純粋なＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分は、９８％～９９％以上の均一性を有するものと同様に、特に薬学的用途に有利である。部分的または所望の均一性まで精製されると、その後、無傷のＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分を治療に、またはアッセイ手順の開発及び実施、免疫蛍光染色などに使用することができる。一般に、Ｖｏｌｓ．Ｉ＆ＩＩ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．（Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ ＆ Ｐｅｒｎｉｓ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄ．Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９７９ ａｎｄ １９８１）を参照されたい。

【0127】

さらに、本明細書に記載のように、ヒトでの治療のために、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分は、機能活性を維持しながら潜在的な免疫原性を低下させるように、さらに最適化することができる。いくつかの実施形態では、最適化されたＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むＭＩＣ抗体であって、重鎖及び軽鎖の可変フレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個、１～６個、１～４個または１～２個の保存的アミノ酸置換によって改変されており、重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲが改変されていない、ＭＩＣ抗体に由来する。いくつかの実施形態では、最適化されたＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むＭＩＣ結合抗体であって、重鎖及び軽鎖の可変フレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個、１～６個、１～４個または１～２個のアミノ酸の置換、欠失または挿入によって改変されており、重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲが改変されていない、ＭＩＣ結合抗体に由来する。この関連で、機能活性とは、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分に関連する１つ以上の既知の機能活性を示すことができるＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分を意味する。これらの実施形態のいずれかにおいて、ＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分の機能活性は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも大きい結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合することを含む。追加の機能活性には、ＭＩＣの抑制、及び／または抗癌活性が含まれる。さらに、機能活性を有するＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分は、用量依存性を伴うかまたは伴わずに、例えば生物学的アッセイなどの特定のアッセイで測定したときに、ポリペプチドが、本明細書に記載の参照抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域またはそのバリアントとを含むＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分）の活性と同様の、またはそれよりも優れた活性を示すことを意味する。用量依存性が存在する場合、参照抗体またはその抗原結合部分の用量依存性と同一である必要はなく、むしろ本明細書に記載の参照抗体またはその抗原結合部分と比較して、所与の活性における用量依存性と実質的に同様またはそれよりも優れている（すなわち、候補ポリペプチドは参照抗体に対してより大きな活性を示すことになる）。

【0128】

ＭＩＣ抗体及びその抗原結合部分または他の結合剤の他の態様は、活性成分（すなわち、本明細書に記載のＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤、あるいは本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードする核酸を含む）を含む組成物に関するものである。いくつかの実施形態では、本組成物は医薬組成物である。本明細書で使用するとき、「医薬組成物」という用語は、製薬業界での使用が認められている薬学的に許容されるキャリヤーと組み合わせた活性剤を指す。本明細書で用いられる「薬学的に許容される」という語句は、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症のないヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに適した、安全な医学的判断の範囲内にあり、妥当な利益／リスク比に見合う、化合物、材料、組成物及び／または剤形を指す。

【0129】

その中に溶解または分散された活性成分を含む薬理学的組成物の調製は、当技術分野でよく理解されており、特定の製剤に基づいて少しも限定される必要はない。典型的に、このような組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかの注射剤として調製され、また一方、使用前に液体中に再水和または懸濁するのに好適な固体形態を調製することもできる。調製物は、乳化するか、リポソーム組成物として提供することもできる。ＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、薬学的に許容され活性成分に適合性である賦形剤と、本明細書に記載の治療方法での使用に適した量で、混合することができる。好適な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールまたはこれらに類するもの、及びそれらの組み合わせである。さらに、必要に応じて、医薬組成物は、活性成分（例えば、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分）の効果を増強または維持する湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤及びこれらに類するものなどの少量の補助物質を含有することができる。本明細書に記載の医薬組成物は、その中の成分の薬学的に許容される塩を含むことができる。薬学的に許容される塩としては、例えば塩酸もしくはリン酸などの無機酸、または酢酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸で形成された（ポリペプチドの遊離アミノ基で形成された）酸付加塩が挙げられる。また、遊離カルボキシル基で形成された塩は、無機塩基（例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄など）、及び有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなど）に由来してもよい。生理的に認容性のキャリヤーは当技術分野において周知である。例示的な液体キャリヤーは、活性成分（例えば、ＭＩＣ抗体及び／またはその抗原結合部分）及び水を含有する無菌水性溶液、ならびに生理的ｐＨ値のリン酸ナトリウムなどの緩衝液、生理食塩水、またはその両方（例えば、リン酸緩衝食塩水）を含有できる無菌水性溶液である。またさらに、水性キャリヤーは２つ以上の緩衝塩、さらに塩化ナトリウム及び塩化カリウムなどの塩、ブドウ糖、ポリエチレングリコール、ならびに他の溶質を含有することができる。また液体組成物は、水に加えて及び水以外に、液相も含有することができる。このような追加の液相の例示としては、グリセリン、綿実油などの植物油、及び水－油エマルジョンがある。特定の障害または状態の治療に有効となる活性剤の量は、障害または状態の性質に依存し、標準的な臨床技術により決定され得る。

【0130】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分、または本明細書に記載のＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分をコードする核酸を含む医薬組成物は、凍結乾燥物であり得る。

【0131】

いくつかの実施形態では、治療有効量のＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分、または本明細書に記載の医薬組成物を含む注射器が提供される。

【0132】

がんの治療
いくつかの態様では、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、本明細書に記載されるＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤を、それを必要とする対象者に投与することを含む方法（複数可）で使用することができる。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含み、重鎖及び軽鎖の可変フレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個、１～６個、１～４個または１～２個の保存的アミノ酸置換によって改変されており、重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲが改変されていない。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含み、重鎖及び軽鎖の可変フレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個、１～６個、１～４個または１～２個のアミノ酸の置換、欠失または挿入によって改変されており、重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲが改変されていない。これらの実施形態のいずれかでは、ＭＩＣ結合抗体は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する。

【0133】

いくつかの実施形態では、対象者は、がん及び／または悪性腫瘍の治療を必要としている。いくつかの実施形態では、対象者は、例えば、上皮細胞癌、ＭＩＣ＋固形腫瘍またはＭＩＣ＋造血器悪性腫瘍などの、ＭＩＣ＋癌またはＭＩＣ＋悪性腫瘍の治療を必要としている。いくつかの実施形態では、この方法は、ＭＩＣ＋癌または悪性腫瘍を有する対象者を治療するためのものである。いくつかの実施形態では、この方法は、対象者における上皮細胞癌または造血器悪性腫瘍を治療するためのものである。いくつかの実施形態では、この方法は、対象者におけるＭＩＣ＋上皮細胞癌またはＭＩＣ＋造血器悪性腫瘍を治療するためのものである。本明細書で使用するとき、「上皮細胞癌」とは、上皮細胞から発生する癌をいう。

【0134】

本明細書に記載の方法は、治療有効量のＭＩＣ結合抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤を投与することを含む。本明細書で使用される場合、語句「治療有効量」、「有効量」または「有効量」は、腫瘍または悪性腫瘍の治療、管理または再発の予防において治療的有用性を提供する本明細書に記載のＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤の量、例えば腫瘍または悪性腫瘍の少なくとも一つの症状、兆候またはマーカーにおける統計的に有意な減少を提供する量を指す。治療有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。一般に、治療有効量は、対象者の病歴、年齢、状態、性別のみならず、対象者の医学的状態の重症度及び種類、ならびに他の薬学的に活性な薬剤の投与によって変えることができる。

【0135】

「がん」及び「悪性腫瘍」という用語は、身体器官及び系の正常な機能を妨げる細胞の無制御な増殖を指す。がんまたは悪性腫瘍は、原発性または転移性である場合があり、つまり、侵襲性になり、元の腫瘍部位から離れた組織に腫瘍増殖を播種する。「腫瘍」とは、身体器官及び系の正常な機能を妨げる細胞の無制御な増殖を指す。がんを有する対象者は、対象の体内に存在する客観的に測定可能ながん細胞を有する対象者である。この定義には、良性腫瘍及び悪性がん、ならびに潜在的に休止状態の腫瘍及び微小転移が含まれる。元の場所から移動し、他の重要な臓器に播種するがんは、影響を受けた臓器の機能低下により、最終的に対象者の死に至る可能性がある。白血病及びリンパ腫などの血液悪性腫瘍（血液癌）は、例えば、対象者の正常な造血コンパートメントを打ち負かし、それによって（貧血、血小板減少症及び好中球減少症の形で）造血不全を引き起こし、最終的には死に至る可能性がある。

【0136】

がんの例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。このようながんのより具体的な例には、基底細胞癌腫、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳癌及びＣＮＳ癌、乳癌、腹膜癌、子宮頸癌；絨毛癌、結腸直腸癌（大腸癌）、結合組織癌、消化器系癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）（胃腸癌及び胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）を含む）、神経膠芽腫（ＧＢＭ）、肝細胞癌、肝癌、上皮内腫瘍、腎臓癌、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌）、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、口唇、舌、口腔、及び咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、呼吸器系癌、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、扁平上皮癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌または子宮内膜癌、泌尿器系癌、外陰癌；ならびに他の癌腫及び肉腫、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非開裂細胞性ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンストームマクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛状細胞白血病、慢性骨髄性白血病、及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に伴う異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍性浮腫）、及びメイグス症候群が含まれるが、これらに限定されない。

【0137】

いくつかの実施形態では、癌腫は、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、結腸癌、腎臓癌、及び頭頸部癌を含むがこれらに限定されない固形腫瘍から選択される。

【0138】

いくつかの実施形態では、がんまたは悪性腫瘍はＭＩＣ陽性（ＭＩＣ＋）である。本明細書で使用するとき、「ＭＩＣ陽性」または「ｓＭＩＣ＋」という用語は、細胞表面にＭＩＣを発現し（膜結合型ＭＩＣ）、及び／またはがん細胞（複数可）から放出されるｓＭＩＣタンパク質を産生する、がん細胞、がん細胞集団、腫瘍塊、または転移細胞を説明するために使用される。これらの用語は、ＭＩＣタンパク質の細胞外ドメインの全部または一部を腫瘍内空間または循環系もしくはリンパ系に放出する全てのがん細胞及び／または腫瘍塊を包含することを意図している。したがって、これらの細胞は、その表面上に短期間だけＭＩＣタンパク質を示し得る。すなわち、この用語は、検出可能なＭＩＣタンパク質がその細胞表面に存在するか否かにかかわらず、エクソソームまたは他の機構を介して、ｓＭＩＣタンパク質を排出するか、またはｓＭＩＣを分泌するがん細胞及び腫瘍細胞を包含する。しかし、ＭＩＣを脱落させることによって自然免疫拒絶を回避することができる任意の癌細胞または腫瘍は、本明細書でその用語が使用される「ＭＩＣ陽性癌」であると見なされる。ＭＩＣ陽性癌のいくつかの非限定的な例には、上皮細胞癌及び造血器悪性腫瘍が含まれる。いくつかの実施形態では、ＭＩＣ陽性癌または悪性腫瘍は、ＭＩＣ陽性前立腺癌及び／またはその転移であり得る。

【0139】

本明細書で使用するとき、「対象者」は、ヒトまたは動物を指す。通常、動物は、霊長類、齧歯類、家畜または狩猟動物などの脊椎動物である。霊長類には、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、及びマカク、例えば、アカゲザルが含まれる。齧歯類には、マウス、ラット、ウッドチャック、フェレット、ウサギ及びハムスターが含まれる。家畜及び狩猟動物には、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、バッファロー、ネコ科の種、例えば、イエネコ、イヌ科の種、例えば、イヌ、キツネ、オオカミ、鳥類、例えば、ニワトリ、エミュー、ダチョウ、及び魚、例えば、マス、ナマズ及びサーモンが含まれる。特定の実施形態では、対象者は、哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトである。本明細書では「患者」、「個人」及び「対象者」という用語は、交換可能なようにして使用される。

【0140】

好ましくは、対象者は哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒトの霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得るが、これらの例に限定されない。ヒト以外の哺乳動物は、例えば、様々ながんの動物モデルを代表する対象者として有利に使用することができる。さらに、本明細書に記載の方法は、家畜及び／またはペットを治療するために使用することができる。対象者は男性でも女性でもよい。特定の実施形態では、対象者はヒトである。

【0141】

対象者は、ｓＭＩＣ＋癌またはＭＩＣ＋癌であると以前に診断されたか、またはこれに罹患していると同定され、治療を必要としているが、ｓＭＩＣ＋癌またはＭＩＣ＋癌の治療をすでに受けている必要はない。あるいは、対象者はまた、治療を必要とするｓＭＩＣ＋癌またはＭＩＣ＋癌を有すると以前に診断されていない対象者であり得る。対象者は、ｓＭＩＣ＋癌またはＭＩＣ＋癌に関連する状態または１つ以上の合併症に対する１つ以上の危険因子を示す者、あるいは危険因子を示さない対象者であり得る。特定のｓＭＩＣ＋癌の治療を「必要とする対象者」は、その状態を有するか、またはその状態を有すると診断された対象者であり得る。他の実施形態では、状態を「発症するリスクがある」対象者は、状態（例えば、ｓＭＩＣ＋癌またはＭＩＣ＋癌）を発症するリスクがあると診断された対象者を指す。

【0142】

本明細書で使用するとき、用語「治療する」、「治療」、「治療すること」、または「改善」は、疾患、障害または医学的状態に関して使用される場合、症状または状態の進行または重症度を逆転、緩和、改善、抑制、減速または停止させることが目的である、状態のための治療的処置を意味する。「治療する」という用語は、状態の少なくとも１つの有害事象または症状を軽減または緩和することを含む。治療は一般に、１つ以上の症状または臨床マーカーが減少した場合に「有効」である。あるいは、状態の進行が減少または停止した場合、治療は「有効」である。つまり、「治療」には、症状またはマーカーの改善だけでなく、治療を行わない場合に予想される症状の進行の停止もしくは少なくとも減速または悪化も含まれる。有益なまたは望ましい臨床結果には、対象者の遊離ｓＭＩＣレベルの低下、１つ以上の症状の緩和、欠損の範囲の縮小、がんまたは悪性腫瘍の状態の安定化（すなわち、悪化しない）、腫瘍の成長及び／または転移の遅延または減速、ならびに治療しない場合に予想される状態と比較しての寿命の延長があるが、これらに限定されない。本明細書で使用するとき、「投与すること」という用語は、本明細書に記載のＭＩＣ結合抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤、あるいは本明細書に記載のＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードする核酸を、ＭＩＣ結合抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤とＭＩＣとの結合をもたらす方法または経路によって、対象者に提供することを意味する。同様に、本明細書に記載のＭＩＣ結合抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤、あるいは本明細書に開示のＭＩＣ抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードする核酸を含む医薬組成物は、対象者において有効な治療をもたらす任意の適切な経路で投与され得る。

【0143】

ＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分の投与量範囲は効力に依存し、所望の効果、例えばＭＩＣレベルの低下、腫瘍増殖の減速または腫瘍サイズの縮小を生じるのに十分な量を含む。投与量は、許容できない有害な副作用を引き起こすほど多くすべきではない。一般に、投与量は、対象者の年齢、状態、及び性別によって異なり、当業者によって決定され得る。投与量は、合併症が発生した場合に、個々の医師が調整することもできる。いくつかの実施形態では、投与量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。いくつかの実施形態では、用量範囲は、０．０５ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重である。いくつかの実施形態では、投与量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。いくつかの実施形態では、用量範囲は、０．０５ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重である。あるいは、血清レベルを１ｐｇ／ｍＬ～１０００ｕｇ／ｍＬの間に維持するように用量範囲を決めることができる。全身投与では、対象者は、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上などの治療量を投与されることが可能である。

【0144】

上記用量の投与を、繰り返し行うことができる。実際には、遊離または未結合のＭＩＣを除去することで、腫瘍、がん細胞または悪性細胞に対する免疫攻撃を促進できる程度まで、例えば、最初に腫瘍、がんまたは悪性腫瘍自体を治療し、その後、ＭＩＣを放出する能力を獲得する腫瘍細胞の発生に対して継続的な監視を提供するために、長期投与が企図される。好ましい実施形態では、上記の用量は、毎週、隔週、３週間ごと、または毎月、数週間または数ヶ月にわたって投与される。治療期間は、対象者の臨床的経過と治療に対する反応性とに依存する。

【0145】

いくつかの実施形態では、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は約２ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は約４ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は約５ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は約６ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は約８ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は約１０ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は約１５ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、約１００ｍｇ／ｍ^２～約７００ｍｇ／ｍ^２であり得る。いくつかの実施形態では、用量は約２５０ｍｇ／ｍ^２であり得る。いくつかの実施形態では、用量は約３７５ｍｇ／ｍ^２であり得る。いくつかの実施形態では、用量は約４００ｍｇ／ｍ^２であり得る。いくつかの実施形態では、用量は約５００ｍｇ／ｍ^２であり得る。

【0146】

いくつかの実施形態では、用量は静脈内に投与され得る。いくつかの実施形態では、静脈内投与は、約１０分～約４時間の期間にわたって行われる注入であり得る。いくつかの実施形態では、静脈内投与は、約３０分～約９０分の期間にわたって行われる注入であり得る。

【0147】

いくつかの実施形態では、用量は毎週投与され得る。いくつかの実施形態では、用量は隔週で投与され得る。いくつかの実施形態では、用量は約２週間ごとに投与され得る。いくつかの実施形態では、用量は約３週間ごとに投与され得る。いくつかの実施形態では、用量は３週間ごとに投与され得る。いくつかの実施形態では、用量は４週間ごとに投与され得る。

【0148】

いくつかの実施形態では、合計約２～約１０の用量が対象者に投与される。いくつかの実施形態では、合計４用量が投与される。いくつかの実施形態では、合計５用量が投与される。いくつかの実施形態では、合計６用量が投与される。いくつかの実施形態では、合計７用量が投与される。いくつかの実施形態では、合計８用量が投与される。いくつかの実施形態では、合計９用量が投与される。いくつかの実施形態では、合計１０用量が投与される。いくつかの実施形態では、合計１０を超える用量が投与される。

【0149】

ＭＩＣ結合抗体もしくはその抗原結合部分または他のＭＩＣ結合剤を含有する医薬組成物は、単位用量で投与することができる。医薬組成物に関して使用される場合、用語「単位用量」は、対象者への単位投与として適した物理的に離散した単位を指し、各単位は、所要の生理学的に許容される希釈剤、すなわちキャリヤーまたはビヒクルとの関連で所望の治療効果をもたらすように算出された所定の量の活性物質（例えば、ＭＩＣ結合抗体またはその抗原結合部分）を含有する。

【0150】

いくつかの実施形態では、ＭＩＣ結合抗体もしくはその抗原結合部分、またはこれらのいずれかもしくは両方の医薬組成物は、免疫療法と共に投与される。本明細書で使用される場合、「免疫療法」は、対象者自身の免疫系を誘導または増強して、がんまたは悪性腫瘍と闘うように設計された治療戦略を指す。免疫療法の例には、養子細胞療法（例えば、自己ＮＫ細胞、同種ＮＫ細胞、自己Ｔ細胞、ＣＡＲ改変Ｔ細胞及びＣＡＲ改変ＮＫ細胞）、チェックポイント阻害剤などの抗体、ならびに代謝シグナルを撹乱する抗体、ガンマ鎖ファミリーサイトカインＩＬ－２、ＩＬ１５及びそのバリアントなどの免疫サイトカイン、ケモトキシン（ｃｈｅｍｏｔｏｘｉｎ）、放射線療法、及びエピジェネティック修飾因子などがあるが、これらに限定されない。例えば、Ｒｏｈａａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈｉｖ ４７４：４４９－４６１（２０１９）；Ｍａｇａｌｈａｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ １９：８，８１１－８２７（２０１９）及びＯｔｔ ｅｔ ａｌ．，２０１９ ＡＳＣＯ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｂｏｏｋ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｅ７０－７８（２０２０）を参照されたい。これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0151】

いくつかの実施形態では、養子細胞療法は、Ｔ細胞を対象者の血液から取り出し、がん細胞上の適切な標的に対してキメラ抗原レセプターを発現するように遺伝子改変し）、その後対象者に再投与するＣＡＲ Ｔ細胞療法などのＴ細胞療法である。例えば、ＷＯ２０１９／０１８６０３；ＷＯ２０１９／０９０００３；ＷＯ２０２０／０３３９２７；ＷＯ２０１９０８９９６９；ＷＯ２０１５／１６４６７５；ＷＯ２０１６０６４９２９；ＷＯ２０１９／０３２９２９；ＷＯ２０１６／１１５５５９；ＷＯ２０１６／０３３５７０；ＷＯ２０１４／１３０６５７；ＷＯ２０１６０２８８９６；ＷＯ２０１５／０９０２３０；及びＷＯ２０１４／１５３２７０を参照されたい。

【0152】

いくつかの実施形態では、養子細胞療法は、ＰＢＭＣが対象者の血液から取り出され、特定の抗原に応答するようにプライミングされ、その後対象者に再投与される細胞療法である（例えば、シプロイセルＴ）。（例えば、ＷＯ２００１／０３９５９４；ＷＯ２００１／０７４８５５；及びＷＯ１９９９／０６３０５０を参照されたい。）

【0153】

いくつかの実施形態では、養子細胞療法はＮＫ細胞療法である。ＮＫ細胞は、がん細胞上の適切な標的に対してキメラ抗原レセプターを発現するように操作され得、その後、操作されたＮＫ細胞が対象者に投与される。（例えば、ＷＯ２００６／１０３５６９；ＷＯ２０１８／１６５２９１；ＷＯ２０１６／２０１３０４；ＷＯ２０１７／１００７０９；ＷＯ２０１９／０２８３３７；ＷＯ２０１６／１７６６５１及びＷＯ２０１８／１８３３８５を参照されたい。）

【0154】

いくつかの実施形態では、免疫療法は、チェックポイント阻害剤の投与を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、阻害剤またはＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＭＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＣＤ４７、ＣＤ１３７、ＣＤ７０、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、ＳＩＧＬＥＣ－１５、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、Ａ２ＡＲ、及びＡ２ＢＲから選択される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤には、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１などを阻害する薬剤が含まれる。好適な抗ＣＴＬＡ－４療法剤には、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体、ヒト抗ＣＴＬＡ－４抗体、マウス抗ＣＴＬＡ－４抗体、哺乳動物抗ＣＴＬＡ－４抗体、ヒト化抗ＣＴＬＡ－４抗体、モノクローナル抗ＣＴＬＡ－４抗体、ポリクローナル抗ＣＴＬＡ－４抗体、キメラ抗ＣＴＬＡ－４抗体、イピリムマブ、トレメリムマブ、抗ＣＴＬＡ－４アドネクチン、抗ＣＴＬＡ－４ドメイン抗体、単鎖抗ＣＴＬＡ－４ ｍＡｂｓ、重鎖抗ＣＴＬＡ－４ ｍＡｂｓ、軽鎖抗ＣＴＬＡ－４ ｍＡｂｓ、共刺激経路を刺激するＣＴＬＡ－４の阻害剤、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００１／０１４４２４号に開示された抗体、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００４／０３５６０７号に開示された抗体、米国公開第２００５／０２０１９９４号に開示された抗体、及び欧州特許第ＥＰ１２１２４２２Ｂ １号に開示されている抗体が含まれる。追加の抗ＣＴＬＡ－４抗体は、米国特許第５，８１１，０９７号、第５，８５５，８８７号、第６，０５１，２２７号、及び第６，９８４，７２０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ０１／１４４２４号及び第ＷＯ００／３７５０４号、ならびに米国公開第２００２／００３９５８１号及び第２００２／０８６０１４号に記述されている。本発明の方法に用いることができる他の抗ＣＴＬＡ－４抗体としては、例えば、ＷＯ９８／４２７５２、米国特許第６，６８２，７３６号及び第６，２０７，１５６号、Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５（１７）：１００６７－１００７１（１９９８）、Ｃａｍａｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２２（１４５）：Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．２５０５（２００４）（抗体ＣＰ－６７５２０６）、Ｍｏｋｙｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，５８：５３０１－５３０４（１９９８）、米国特許第５，９７７，３１８号、第６，６８２，７３６号、第７，１０９，００３号、及び第７，１３２，２８１号に開示されているものが挙げられる。

【0155】

好適な抗ＰＤ－１及び抗ＰＤ－Ｌ１療法剤には、例えば、抗ＰＤ－１及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ヒト抗ＰＤ－１及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、マウス抗ＰＤ－１及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、哺乳動物抗ＰＤ－１及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ヒト化抗ＰＤ－１及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、モノクローナル抗ＰＤ－１及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ポリクローナル抗ＰＤ－１及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、キメラ抗ＰＤ－１及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－１アドネクチン及び抗ＰＤ－Ｌ１アドネクチン、抗ＰＤ－１ドメイン抗体及び抗ＰＤ－Ｌ１ドメイン抗体、単鎖抗ＰＤ－１ ｍＡｂｓ及び単鎖抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂｓ、重鎖抗ＰＤ－１ ｍＡｂｓ及び重鎖抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂｓ、及び軽鎖抗ＰＤ－１ ｍＡｂｓ及び軽鎖抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂｓが含まれる。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１療法剤には、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、及びそれらの組み合わせが含まれる。他の特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１療法剤には、アテゾリズマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、及びそれらの組み合わせが含まれる。

【0156】

好適な抗ＰＤ－１抗体及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｔｏｐａｌｉａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ Ｂｌｏｃｋａｄｅ：Ａ Ｃｏｍｍｏｎ Ｄｅｎｏｍｉｎａｔｏｒ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：４５０－６１（Ａｐｒｉｌ １３，２０１５）にも記載されている。

【0157】

いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ（ヤーボイ）、ニボルマブ（オプジーボ）、ペンブロリズマブ（キイトルーダ）、アテゾリズマブ（テセントリク）、アベルマブ（バベンシオ）、またはデュルバルマブ（インフィンジ）である。

【0158】

いくつかの実施形態では、免疫療法を受ける対象者における治療成績を改善させる方法が提供される。この方法は、一般に、がんを有する対象者に有効量の免疫療法を投与することと、治療有効量の結合剤またはその医薬組成物を対象者に投与することであって、結合剤が循環ＭＩＣに特異的に結合する、投与することとを含み、対象者の治療成績が、免疫療法単独の投与と比べて改善される。いくつかの実施形態では、結合剤は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含み、重鎖及び軽鎖のフレームワーク領域が、任意選択で、フレームワーク領域における１～８個のアミノ酸の置換、欠失または挿入によって改変されており、結合剤は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、結合剤は、（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含み、結合剤は、ＭＩＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、結合剤は、抗体またはその抗原結合部分である。いくつかの実施形態では、結合剤は、モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｃ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。

【0159】

いくつかの実施形態では、改善された治療成績は、治療されるがんの標準的な医学的基準によって決定される、安定、部分奏効または完全奏効から選択される客観的応答である。いくつかの実施形態では、改善された治療成績は、腫瘍量の減少である。いくつかの実施形態では、改善された治療成績は、無増悪生存期間または無病生存期間である。

【0160】

いくつかの実施形態では、方法は、内在性ＮＫ細胞もしくはＴ細胞またはそれらの前駆体を枯渇させることによって免疫系を損なう化学療法または他の治療を投与してから、少なくとも４週間、少なくとも６週間または少なくとも８週間の後に、ＭＩＣ抗体またはその抗原結合部分をさらに投与する。いくつかのそのような実施形態では、化学療法または治療は、放射線療法または化学療法からなる群から選択される。化学療法剤の非限定的な例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮ（商標）シクロホスファミド、スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン、アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ、エチレンイミン及びメチルアメラミン、例えば、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチローロメラミン、アセトゲニン（具体的には、ブラタシン及びブラタシノン）、カンプトテシン（合成類似体トポテカン等）、ブリオスタチン、カリスタチン、ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びバイゼレシン合成類似体等）、クリプトフィシン（具体的には、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１等）、エリュテロビン、パンクラチスタチン、サルコジクチイン、スポンギスタチン、ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、及びウラシルマスタード、ニトロソウレア、例えば、カムルスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン、抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、具体的には、カリケアマイシンガンマｌｌ及びカリケアマイシンオメガｌｌ（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４））；ダイネミシン（ダイネミシンＡを含む）；ビスホスホネート（クロドロネートなど）；エスペラミシン、ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン類、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ．ＲＴＭ．ドキソルビシン（モルフォリノ－ドキソルビシン、シアノモルフォリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（マイトマイシンＣなど）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝剤（メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）など）；葉酸類似体（デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなど）；プリン類似体（フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど）；ピリミジン類似体（アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど）；アンドロゲン類（カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど）；抗副腎剤（アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど）；葉酸補充剤（フロリン酸など）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド（メイタンシン及びアンサマイトシンなど）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダムノール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（商標）多糖類複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン、リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（特に、Ｔ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド（例えば、ＴＡＸＯＬ（商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ．ＲＴＭ．パクリタキセルのクレモフォールアルブミン操作されたナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌ．）、及びＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）ドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）、クロランブシル、ＧＥＭＺＡＲ（商標）ゲムシタビン、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチン、ビンブラスチン、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（商標）ビノレルビン、ノバントロン、テニポシド、エダトレキサート、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ－１１）（イリノテカンの５－ＦＵ及びロイコボリンでの治療レジメン等）、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイド、例えば、レチノイン酸、カペシタビン、コンブレタスタチン、ロイコボリン（ＬＶ）、オキサリプラチン、例えば、オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（商標））、細胞増殖を低減するＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標）））及びＶＥＧＦ－Ａ阻害剤、ならびに上述のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が挙げられ得る。

【0161】

「放射線療法」とは、正常に機能するか、または細胞を完全に破壊するその能力を制限するように細胞に十分な損傷を誘導するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を意味する。

【0162】

本開示の実施形態の説明は、網羅的であること、または本開示を開示された正確な形式に限定することを意図していない。本開示の特定の実施形態、及びそれに対する実施例が、例解目的で本明細書において説明されるが、関連分野の当業者が認識するように、種々の同等の修正が、本開示の範囲内において可能である。本明細書で提供される開示の教示は、必要に応じて他の手順または方法に適用することができる。本明細書に記載の様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。本開示の態様は、必要に応じて修正して、上記の参考文献及び出願の構成、機能、及び概念を採用して、本開示のさらなる実施形態を提供することができる。これらの変更及び他の変更を、詳細な説明に照らして本開示に加えることができる。

【0163】

前述の実施形態のいずれかの特定の要素を組み合わせたり、他の実施形態の要素に置き換えたりすることができる。さらに、本開示の特定の実施形態に関連する利点が、これらの実施形態の文脈において説明されるが、他の実施形態もそのような利点を呈することができ、全ての実施形態が必ずしも本開示の範囲内に入るように、そのような利点を呈する必要はない。

【0164】

全ての特許及び他の認定された出版物は、例えば、本発明と関連して使用され得る、かかる出版物において記述される手順を記述及び開示する目的で参照することにより、明示的に本明細書に組み込まれる。これらの出版物は、本出願の出願日以前のそれらの開示にのみ提供される。この点のいかなる内容も、先行発明、または任意の他の理由によって、発明者らがかかる開示に先行する権利がないことを承認すると、解釈するべきではない。日付に関する記載、または、これらの文書の内容の描写の全ては、出願人が利用可能な情報に基づき、日付または、これらの文書の内容の正確性のいかなる承認も構成しない。

【0165】

非限定的な例示的な実施形態
本発明は、次の実施形態によってさらに説明されるが、これらは限定と解釈されるべきではない。
１．（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む結合剤であって、前記重鎖及び前記軽鎖のフレームワーク領域が、任意選択で、前記フレームワーク領域における１～８個のアミノ酸の置換、欠失または挿入によって改変されている、前記結合剤。

【0166】

２．（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、結合剤。

【0167】

３．重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む結合剤であって、前記ＶＨ領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域ＨＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、前記ＶＨ領域及び前記ＶＬ領域がそれぞれヒト化フレームワーク領域を含む、前記結合剤。

【0168】

４．前記ヒト化ＶＨフレームワーク領域は、ＩＭＧＴ ＩＧＨＶ４－５９＊１１（配列番号２９）及びＩＧＨＪ４＊０１（配列番号３０）またはＩＧＨＶ４－３０－４＊０１（配列番号３１）及びＩＧＨＪ４＊０１（配列番号３０）で表されるアミノ酸配列を有するヒト生殖細胞遺伝子に由来する、実施形態３に記載の結合剤。

【0169】

５．前記ヒト化ＶＬフレームワーク領域は、ＩＭＧＴ ＩＧＫＶ１－ＮＬ１＊０１（配列番号３２）及びＩＭＧＴ ＩＧＫＪ１＊０１（配列番号３３）、ＩＭＧＴ ＩＧＫＶ１－３３＊０１（配列番号３４）及びＩＭＧＴ ＩＧＫＪ１＊０１（配列番号３３）、またはＩＭＧＴ ＩＧＫＶ１－５＊０１（配列番号３５）及びＩＭＧＴ ＩＧＫＪ１＊０１（配列番号３３）で表されるアミノ酸配列を有するヒト生殖細胞遺伝子に由来する、実施形態３または実施形態４に記載の結合剤。

【0170】

６．前記結合剤は、ＭＩＣに特異的に結合する、実施形態１～５のいずれか１つに記載の結合剤。

【0171】

７．前記結合剤は、抗体またはその抗原結合部分である、実施形態１～６のいずれか１つに記載の結合剤。

【0172】

８．前記結合剤は、モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｃ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である、実施形態７に記載の結合剤。

【0173】

９．前記重鎖可変領域は、重鎖定常領域をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の結合剤。

【0174】

１０．前記重鎖定常領域はＩｇＧアイソタイプである、実施形態９に記載の結合剤。

【0175】

１１．前記重鎖定常領域はＩｇＧ１定常領域である、実施形態１０に記載の結合剤。

【0176】

１２．前記重鎖定常領域はＩｇＧ４定常領域である、実施形態１０に記載の結合剤。

【0177】

１３．前記重鎖可変領域及び前記重鎖定常領域は、配列番号３で表されるアミノ酸配列を有する、実施形態１１に記載の結合剤。

【0178】

１４．前記軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の結合剤。

【0179】

１５．前記軽鎖定常領域はカッパアイソタイプである、実施形態１４に記載の結合剤。

【0180】

１６．前記軽鎖可変領域及び前記軽鎖定常領域は、配列番号４で表されるアミノ酸配列を有する、実施形態１５に記載の結合剤。

【0181】

１７．前記重鎖定常領域は、少なくともヒトＦｃガンマＲＩＩＩに対する結合アフィニティーを増加させるアミノ酸改変をさらに含む、実施形態９～１６のいずれか１つに記載の結合剤。

【0182】

１８．前記重鎖定常領域は、１つ以上のＦｃガンマレセプターへの結合を減少させる少なくとも１つのアミノ酸改変をさらに含む、実施形態９～１７のいずれか１つに記載の結合剤。

【0183】

１９．前記重鎖定常領域は、ＣＤＣ活性を増加させる少なくとも１つのアミノ酸改変をさらに含む、実施形態９～１７のいずれか１つに記載の結合剤。

【0184】

２０．前記結合剤は単一特異性である、実施形態のいずれか１つに記載の結合剤。

【0185】

２１．前記結合剤は二価である、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の結合剤。

【0186】

２２．前記結合剤は第２の結合ドメインを含み、前記結合剤は二重特異性である、実施形態２１に記載の結合剤。

【0187】

２３．前記結合剤は、可溶型ＭＩＣ（ｓＭＩＣ）に特異的に結合する、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の結合剤。

【0188】

２４．前記結合剤は、抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い結合アフィニティーでＭＩＣに特異的に結合する、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の結合剤。

【0189】

２５．先行実施形態のいずれかに記載の結合剤と、薬学的に許容されるキャリヤーとを含む、医薬組成物。

【0190】

２６．配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域をコードする核酸であって、任意選択で、配列番号２１で表される核酸配列を有する、前記核酸。

【0191】

２７．配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域をコードする核酸であって、任意選択で、配列番号２２で表される核酸配列を有する、前記核酸。

【0192】

２８．実施形態１～２４のいずれか１つに記載の結合剤をコードする核酸であって、任意選択で、配列番号２１及び配列番号２２で表される核酸配列を有する、前記核酸。

【0193】

２９．実施形態２６～２８のいずれか１つに記載の核酸を含む、ベクター。

【0194】

３０．実施形態２６～２８のいずれか１つに記載の核酸、または実施形態２９に記載のベクターを含む、細胞株。

【0195】

３１．ＭＩＣ＋癌を治療する方法であって、治療を必要とする対象者に、治療有効量の、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の結合剤、または実施形態２５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【0196】

３２．前記がんは、癌腫、肉腫、神経内分泌腫瘍、または悪性血液疾患である、実施形態３１に記載の方法。

【0197】

３３．前記がんは癌腫である、実施形態３３に記載の方法。

【0198】

３４．前記癌腫は、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、結腸癌、及び頭頸部癌から選択される、実施形態３３に記載の方法。

【0199】

３５．前記がんは悪性血液疾患である、実施形態３２に記載の方法。

【0200】

３６．前記悪性血液疾患は、リンパ腫または多発性骨髄腫である、実施形態３３に記載の方法。

【0201】

３７．前記対象者に免疫療法を投与することをさらに含む、実施形態３１～３６のいずれか１つに記載の方法。

【0202】

３８．前記免疫療法は、養子細胞療法またはチェックポイント阻害剤を含む、実施形態３７に記載の方法。

【0203】

３９．前記免疫療法は、養子細胞療法を含む、実施形態３８に記載の方法。

【0204】

４０．前記養子細胞療法は、自己ＮＫ細胞、同種ＮＫ細胞、自己Ｔ細胞、ＣＡＲ改変Ｔ細胞及びＣＡＲ改変ＮＫ細胞から選択される、実施形態３９に記載の方法。

【0205】

４１．前記免疫療法はチェックポイント阻害剤を含む、実施形態３８に記載の方法。

【0206】

４２．前記チェックポイント阻害剤は、ヒトＰＤ－１、ヒトＰＤ－Ｌ１、またはヒトＣＴＬＡ４に特異的に結合する抗体から選択される、実施形態４１に記載の方法。

【0207】

４３．前記チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブまたはイピリムマブである、実施形態４２に記載の方法。

【0208】

４４．前記結合剤の前記投与より前に、少なくとも４週間、前記対象者に化学療法が投与されない、実施形態３１～４３のいずれか１つに記載の方法。

【0209】

４５．前記結合剤は静脈内に投与される、実施形態３１～４４のいずれか１つに記載の方法。

【0210】

４６．前記結合剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態３１～４５のいずれか１つに記載の方法。

【0211】

４７．がんを有する対象者における循環ｓＭＩＣのレベルを低下させる方法であって、治療有効量の、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の結合剤、または実施形態２５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【0212】

４８．前記がんは、癌腫、肉腫、神経内分泌腫瘍、または悪性血液疾患である、実施形態４７に記載の方法。

【0213】

４９．前記がんは癌腫である、実施形態４８に記載の方法。

【0214】

５０．前記癌腫は、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、結腸癌、及び頭頸部癌から選択される、実施形態４９に記載の方法。

【0215】

５１．前記がんは悪性血液疾患である、実施形態４８に記載の方法。

【0216】

５２．前記悪性血液疾患は、リンパ腫または多発性骨髄腫である、実施形態５１に記載の方法。

【0217】

５３．免疫療法を受ける対象者の治療成績を改善させる方法であって、
ａ．がんを有する前記対象者に有効量の免疫療法を投与することと、
ｂ．前記対象者に、治療有効量の、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の結合剤、または実施形態２５に記載の医薬組成物を投与することであって、前記結合剤がＭＩＣに特異的に結合する、前記結合剤または前記医薬組成物を前記投与することとを含み、
前記対象者の前記治療成績が、前記免疫療法単独の投与と比べて改善される、前記方法。

【0218】

５４．前記改善された治療成績は、安定、部分奏効または完全奏効から選択される客観的応答である、実施形態５３に記載の方法。

【0219】

５５．前記改善された治療成績は、腫瘍量の減少である、実施形態５３に記載の方法。

【0220】

５６．前記改善された治療成績は、無増悪生存期間または無病生存期間である、実施形態５３に記載の方法。

【0221】

５７．前記免疫療法は、養子細胞療法またはチェックポイント阻害剤である、実施形態５３に記載の方法。

【0222】

５８．前記免疫療法は養子細胞療法である、実施形態５７に記載の方法。

【0223】

５９．前記養子細胞療法は、自己ＮＫ細胞、同種ＮＫ細胞、自己Ｔ細胞、ＣＡＲ改変Ｔ細胞及びＣＡＲ改変ＮＫ細胞を含む、実施形態５８に記載の方法。

【0224】

６０．前記免疫療法はチェックポイント阻害剤である、実施形態５７に記載の方法。

【0225】

６１．前記チェックポイント阻害剤は、ヒトＰＤ－１、ヒトＰＤ－Ｌ１、またはＣＴＬＡ４に特異的に結合する抗体を含む、実施形態６０に記載の方法。

【0226】

６２．前記チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブまたはイピリムマブである、実施形態６１に記載の方法。

【0227】

６３．前記結合剤の前記投与より前に、少なくとも４週間、前記対象者に化学療法が投与されない、実施形態５３～６２のいずれか１つに記載の方法。

【0228】

６４．前記結合剤は静脈内に投与される、実施形態５３～６３のいずれか１つに記載の方法。

【0229】

６５．前記結合剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態５３～６４のいずれか１つに記載の方法。

【0230】

６６．対象者におけるＭＩＣ＋癌の治療のための、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の結合剤または実施形態２５に記載の医薬組成物の使用。

【0231】

６７．免疫療法を受ける対象者におけるＭＩＣ＋癌の治療のための、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の結合剤または実施形態２５に記載の医薬組成物の使用。

【0232】

６８．前記ＶＨは、配列番号１、２３及び２４で表されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域から選択され、前記ＶＬは、配列番号２、２５及び２６で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域から選択される、実施形態１及び３～２４のいずれか１つに記載の結合剤。

【0233】

６９．前記ＶＨは、配列番号２４で表されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬは、配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する、実施形態６８に記載の結合剤。

【実施例】

【0234】

実施例１：ヒト化抗体の作製
以下の実施例では、抗体Ｂ１０Ｇ５のヒト化バージョンの調製について説明する。２つの異なる重鎖及び軽鎖のヒトアクセプターフレームワークに基づいて、３つのヒト化軽鎖及び３つのヒト化重鎖を設計した。各親鎖の第１のヒト化鎖は、最初のフレームワークを利用し、最少の親抗体フレームワーク配列を含むほとんどのヒト配列を含む（ヒト化ＨＣ１、ＬＣ１と命名）。各親鎖の第２のヒト化鎖は、前と同じフレームワークを使用するが、追加の親配列を含む（ヒト化ＨＣ２、ＬＣ２と命名）。それぞれの第３のヒト化鎖は、それぞれの第２のフレームワークを利用し、ＨＣ２／ＬＣ２と同様に、ヒトフレームワークと融合した追加の親配列も含む（ヒト化ＨＣ３、ＬＣ３と命名）。

【0235】

次に、軽鎖及び重鎖のヒト化鎖を組み合わせて、バリアントの完全ヒト化抗体を作成する準備を整えた。以下の実施例に記載するように、ヒト化軽鎖及び重鎖の全ての可能な組み合わせについて、それらの発現レベル及び結合アフィニティーの試験を実施した。

【0236】

完全長抗体遺伝子は、最初に可変領域配列を合成することによって構築した。その配列を、哺乳類細胞での発現のために最適化した。次に、これらの可変領域配列を、すでにヒトＦｃドメインを含む発現ベクターにクローニングした。重鎖については、要求に応じてＩｇＧ１定常領域を利用した。さらに、比較のために、親抗体の重鎖及び軽鎖を、同じ主鎖Ｆｃ配列を使用して、完全長キメラ鎖として構築した。抗体を、以下の表１に示すように同定した。

【表1】

【0237】

実施例２：小規模生産におけるヒト化抗体の評価
９つのヒト化抗体は全て、０．０１リットルの小規模生産を経たものである。Ｂ１０Ｇ５抗体もまた、直接比較するためにスケールアップした。血清の非存在下で化学的に定義された培地を用いて懸濁培養したＨＥＫ２９３細胞に、指定の重鎖及び軽鎖のプラスミドをトランスフェクトした。トランスフェクションの５日後、各生産ランからの馴化培地を収集し、清澄化した。馴化培地中の抗体は、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）プロテインＡ培地（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製した。最終的な収量を以下に示す（表２）。

【表2】

【0238】

ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて還元条件下で抗体にＣＥ－ＳＤＳ解析を行い、得られたエレクトロフェログラムを解析した。精製されたヒト化抗体では、重鎖と軽鎖の別個のピークが観察された。ピークの高さ（または重鎖及び軽鎖の曲線下面積）は同様であった。抗体Ｃ（ＨＣ２／ＬＣ２）及びＫ（ＨＣ２／ＬＣ３）が最大の抗体収量を生み出した。

【0239】

実施例３：ヒト化抗体の結合アフィニティー試験
実施例２からの精製抗体を、ヒト前立腺腫瘍細胞株Ｍ１２に対するＦＡＣＳによって、結合アフィニティーについて分析した。３つの異なる抗体濃度を試験した（０．１ｕｇ／ｍＬ、０．０５ｕｇ／ｍＬ及び０．０１ｕｇ／ｍＬ）。結合アフィニティーを比較するために、各濃度での各抗体のＭＦＩを決定し、結果を図１に示すようにプロットした。０．１ｕｇ／ｍＬ濃度で上から下へ、抗体は、Ａｂ－Ｇ、Ａｂ－Ｋ、Ａｂ－Ｅ、Ａｂ－Ｊ、Ａｂ－Ｉ及びＡｂ－Ｈ（重複）、Ａｂ－Ｄ、Ａｂ－Ｂ、Ａｂ－Ａ及びＡｂ－Ｃである。驚くべきことに、２つの抗体、Ａｂ－Ｇ及びＡｂ－Ｋは、抗体Ｊ（ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を有するキメラＢ１０Ｇ５）よりも高いＭＦＩを有していた。

【0240】

実施例４：ＢＬＩによる抗体ＫのＢＬＩ解析
Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して、一般にＫａｍａｔ ａｎｄ Ｒａｆｉｑｕｅ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５３６：１６－３１（２０１７）に記載されているように、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を実行した。抗体サンプル、Ａｂ－Ｋ及びＡｂ－Ｊ（キメラＢ１０Ｇ５）を、キネティックグレードのバイオセンサーでキャプチャした。次に、０．１％ＢＳＡ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．２のＰＢＳバッファーで連続希釈した抗原（ＭＩＣＢ）を含むサンプルの希釈系列に、ロードしたバイオセンサーを浸漬させた。会合が１５０秒間観察され、続いて２００秒間の解離が観察された。同じ抗原濃度の繰り返しの注入は、良好な重複を示した。キネティック解析は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒソフトウェアを用い、１：１結合モデル、及び質量輸送制限を伴うグローバルフィッティングを使用して行った。図２Ａ～図２Ｂを参照すると、Ａｂ－Ｋ（図２Ｂ）は、キメラ抗体Ｂ１０Ｇ５（Ａｂ－Ｊ、Ｋｄ＝１２．１ｎＭ）（図２Ａ）よりも高いアフィニティー（Ｋｄ＝７．２ｎＭ）を有していた。

【0241】

実施例５：ＮＫ細胞細胞毒性アッセイ
抗体ＫがＮＫ細胞の細胞毒性を刺激する能力を測定した。Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）の単離キットを使用して、健常なドナーＰＢＭＣからＮＫ細胞をネガティブ選択した。ＵＣ１腫瘍細胞またはＰＬ－１２細胞を、１０ｕｇ／ｍｌの対照ヒトＩｇＧ、抗体Ａｂ－Ｊ（ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を有するキメラＢ１０Ｇ５）、または抗体Ｋ（Ａｂ－Ｋ）とともに３７℃で３０分間プレインキュベートした。精製ＮＫ細胞を、ＵＣ１腫瘍細胞またはＰＬ－１２細胞に対する細胞毒性アッセイに使用する前に、ＩＬ－２（１０００Ｕ／ｍＬ）で１８時間活性化させた。ＮＫ細胞媒介性細胞毒性は、標準的な４時間の^５１Ｃｒ放出アッセイ（Ｊｅｗｅｔｔ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３；６４：５０５－５２０）を用いて決定した。具体的には、ＮＫ細胞を^５１Ｃｒ標識ＵＣ１またはＰＬ１２細胞とともに、１０：１の割合で、細胞培養インキュベーター内で、４時間、共培養した。４時間のインキュベーション後、各サンプルから上清を採取し、ガンマカウンターで計数した。特定の細胞毒性のパーセンテージを、式：％細胞毒性＝（実験ｃｐｍ－自然発生ｃｐｍ）／（合計ｃｐｍ－自然発生ｃｐｍ）を使用して算出した。ＮＫ細胞殺傷活性は、標的細胞の３０％を溶解するのに必要なＮＫ細胞数の逆数×１００を使用して求めた溶解単位３０／１０^６細胞として表した。各条件の５つの複製を実験に含めた。

【0242】

図３Ａ～図３Ｂを参照すると、抗体Ｋ（Ａｂ－Ｋ）は、ＭＩＣ^＋甲状腺オンコサイトーマＵＣ１腫瘍細胞（図３Ａ）、及び膵臓ＰＬ１２細胞（Ｐａｎｃ １０．０５とも呼ばれる、図３Ｂ）のＩＬ－２活性化一次ＮＫ細胞殺傷を増強する上で、キメラ抗体Ｂ１０Ｇ５よりも高い活性を示す。

【0243】

実施例６：凝集アッセイ
マウス抗体Ｂ１０Ｇ５、キメラＡｂ－Ｋ抗体（ｃｈ－Ａｂ－Ｋ、ヒト化可変領域及びマウスＦｃ）、及び抗体Ｋ（Ａｂ－Ｋ、ヒト化）のサンプルを、準弾性光散乱装置とともに動的光散乱（ＤＬＳ）を使用してアッセイした。Ｂ１０Ｇ５、ｃｈ－Ａｂ－Ｋ、またはＡｂ－ＫをそれぞれＰＢＳバッファーで１．０ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈し、５０μＬの容量とした。全てのサンプルは、スピンフィルター（ＳｐｉｎＸ（登録商標）Ｃａｔ．＃８１６０）によって濾過し、不要な大きな粒子を除去し、アッセイの前に脱気した。Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂ ｎａｎｏＤＬＳ ｐＵＮＫマシンを使用したＤＬＳアッセイのために、５μＬのサンプルをそれぞれの使い捨てキュベットにロードするために使用した。アッセイの詳細は、例えば、Ｂｅｒｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｄｙｎａｍｉｃ Ｌｉｇｈｔ Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｗｉｔｈ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，Ｃｏｕｒｉｅｒ Ｄｏｖｅｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＩＳＢＮ０－４８６－４１１５５－９（２０００）に記載されている。このアッセイでは、ＤＬＳにより、拡散粒子による散乱光強度の変動が測定される。粒子は、時間の経過とともに凝集し、流体力学的直径（ｘ軸）の増加として見られる。ピーク面積は、抗体の総量のパーセンテージとして、異なる抗体種（例えば、抗体モノマーまたは凝集体）のそれぞれのレベルを表す。

【0244】

図４Ａ～図４Ｃは、それぞれ、マウス抗体Ｂ１０Ｇ５（マウスＩｇＧ１、図４Ａ）、キメラＡｂ－Ｋ抗体（ｃｈ－Ａｂ－Ｋ、マウスＩｇＧ１－ＦｃとともにＡｂ－Ｋヒト化可変領域で構成される）（図４Ｂ）、及びＡｂ－Ｋ（ヒト化）（図４Ｃ）についての抗体モノマー及び凝集体のレベルを示す。抗体キメラＡｂ－Ｋ（図４Ｂ、９９．５％）及び完全ヒト化抗体Ａｂ－Ｋ（図４Ｃ、９９．９５％）の高いモノマーレベルが示すように、キメラ抗体ｃｈ－Ａｂ－Ｋと完全ヒト化抗体Ａｂ－Ｋとはどちらもマウス抗体Ｂ１０Ｇ５よりも溶液中で安定である。

【0245】

実施例７：免疫療法の臨床試験
第Ｉ相臨床試験は、ＭＩＣ＋腫瘍サンプルを有するか、または血清ｓＭＩＣ＋である、がん患者に実施される。ＭＩＣ抗体の安全性、最大耐用量（ＭＴＤ）及び主要有効性を、適応的用量漸増３＋３デザインまたはＴｉｍｅ－ｔｏ－Ｅｖｅｎｔ Ｂａｙｅｓｉａｎ Ｏｐｔｉｍａｌ Ｉｎｔｅｒｖａｌデザインを用いて決定する。患者集団には、標準治療に失敗したが、化学療法を受けていない患者が含まれている。ＭＩＣ抗体の試験用量範囲は、０．０１ｍｇ／Ｋｇから１００ｍｇ／Ｋｇまで、２～４週間ごとに最長９０日間、静脈内注入し、ＭＴＤまたは推奨される第２相用量（ＲＰ２Ｄ）を決定するために、最大１年間の経過観察を行うことができる。重大な副作用を示さない患者については、主要な有効性を判断するために、最大２年間の臨床的追跡調査を伴う、長期間の注入が行われることになる。

【0246】

本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、本明細書に記載されたものだけでなく、本発明の様々な修正が、上記の説明及び添付の図面から当業者に明らかになるであろう。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。

【0247】

特許、特許出願公開、及び科学文献を含む様々な出版物が本明細書で引用されており、その開示は全ての目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
配列表
配列番号1 － HC2のVHアミノ酸配列
EVQLQESGPG LVKPSQTLSL TCTVSGYSIT SDYAWNWIRQ PPGKGLEWIG YISYSGSTNY NPSLKSRVTI SRDTSKNQFS LKLSSVTAAD TAVYYCARGG TYFDYWGQGT LVTVSS
配列番号2 － LC3のVLアミノ酸配列
DVVMTQSPST LSASVGDRVT ITCRASAHIN NWLAWYQQKP GKAPKLLISD ATSLESGVPS RFSGSGSGKE YTLTISSLQP DDFATYYCQH YWSTPWTFGQ GTKVEIK
配列番号3 － VH-IgG1アミノ酸配列
EVQLQESGPG LVKPSQTLSL TCTVSGYSIT SDYAWNWIRQ PPGKGLEWIG YISYSGSTNY NPSLKSRVTI SRDTSKNQFS LKLSSVTAAD TAVYYCARGG TYFDYWGQGT LVTVSSASTK GPSVFPLAPS SKSTSGGTAA LGCLVKDYFP EPVTVSWNSG ALTSGVHTFP AVLQSSGLYS LSSVVTVPSS SLGTQTYICN VNHKPSNTKV DKKVEPKSCD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPG
配列番号4 － VL-Igカッパアミノ酸配列
DVVMTQSPST LSASVGDRVT ITCRASAHIN NWLAWYQQKP GKAPKLLISD ATSLESGVPS RFSGSGSGKE YTLTISSLQP DDFATYYCQH YWSTPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
配列番号5 シグナル配列
MDPKGSLSWR ILLFLSLAFE LSYG
配列番号6 シグナル配列
METDTLLLWV LLLWVPGSTG
配列番号7 シグナル配列付きVH-IgG1アミノ酸配列
MDPKGSLSWR ILLFLSLAFE LSYGEVQLQE SGPGLVKPSQ TLSLTCTVSG YSITSDYAWN WIRQPPGKGL EWIGYISYSG STNYNPSLKS RVTISRDTSK NQFSLKLSSV TAADTAVYYC ARGGTYFDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
配列番号8 シグナル配列付きVL-Igカッパアミノ酸配列
METDTLLLWV LLLWVPGSTG DVVMTQSPST LSASVGDRVT ITCRASAHIN NWLAWYQQKP GKAPKLLISD ATSLESGVPS RFSGSGSGKE YTLTISSLQP DDFATYYCQH YWSTPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
配列番号9 ヒトMICA,アイソフォーム1_
MGLGPVFLLL AGIFPFAPPG AAAEPHSLRY NLTVLSWDGS VQSGFLTEVH LDGQPFLRCD RQKCRAKPQG QWAEDVLGNK TWDRETRDLT GNGKDLRMTL AHIKDQKEGL HSLQEIRVCE IHEDNSTRSS QHFYYDGELF LSQNLETKEW TMPQSSRAQT LAMNVRNFLK EDAMKTKTHY HAMHADCLQE LRRYLKSGVV LRRTVPPMVN VTRSEASEGN ITVTCRASGF YPWNITLSWR QDGVSLSHDT QQWGDVLPDG NGTYQTWVAT RICQGEEQRF TCYMEHSGNH STHPVPSGKV LVLQSHWQTF HVSAVAAAAI FVIIIFYVRC CKKKTSAAEG PELVSLQVLD QHPVGTSDHR DATQLGFQPL MSDLGSTGST EGA
配列番号10 ヒトMICB,アイソフォーム1
MGLGRVLLFL AVAFPFAPPA AAAEPHSLRY NLMVLSQDGS VQSGFLAEGH LDGQPFLRYD RQKRRAKPQG QWAENVLGAK TWDTETEDLT ENGQDLRRTL THIKDQKGGL HSLQEIRVCE IHEDSSTRGS RHFYYDGELF LSQNLETQES TVPQSSRAQT LAMNVTNFWK EDAMKTKTHY RAMQADCLQK LQRYLKSGVA IRRTVPPMVN VTCSEVSEGN ITVTCRASSF YPRNITLTWR QDGVSLSHNT QQWGDVLPDG NGTYQTWVAT RIRQGEEQRF TCYMEHSGNH GTHPVPSGKA LVLQSQRTDF PYVSAAMPCF VIIIILCVPC CKKKTSAAEG PELVSLQVLD QHPVGTGDHR DAAQLGFQPL MSATGSTGST EGT
配列番号11 VH CDR1
GYSITSDYA
配列番号12 VH CDR2
GYISYSGST
配列番号13 VH CDR3
ARGGTYFDY
配列番号14 VL CDR1
RASAHINNW
配列番号15 VL CDR2
DATSLES
配列番号16 VL CDR3
QHYWSTPWT
配列番号17
(Gly Gly Gly Gly Ser)n,ここでn=1～5
配列番号18
His His His His His His
配列番号19 HC2のコード配列
ATG GAC CCC AAG GGC AGC CTG AGC TGG AGA ATC CTG CTG TTC CTG AGC CTG GCC TTC GAG CTG AGC TAC GGC GAA GTG CAG CTG CAG GAA TCT GGC CCT GGC CTC GTG AAG CCT TCC CAG ACC CTG TCT CTG ACC TGC ACC GTG TCC GGC TAC TCC ATC ACC TCC GAC TAC GCC TGG AAC TGG ATC CGG CAG CCT CCT GGC AAG GGA CTG GAA TGG ATC GGC TAC ATC TCC TAC TCC GGC TCC ACC AAC TAC AAC CCC AGC CTG AAG TCC AGA GTG ACC ATC TCC CGG GAC ACC TCC AAG AAC CAG TTC TCC CTG AAG CTG TCC TCC GTG ACC GCC GCT GAT ACC GCC GTG TAC TAC TGT GCT AGA GGC GGC ACC TAC TTC GAC TAC TGG GGC CAG GGC ACC CTC GTG ACC GTG TCA TCT GCT AGC ACC AAG GGC CCC AGC GTG TTC CCT CTG GCC CCC AGC AGC AAG AGC ACC AGC GGC GGA ACC GCC GCC CTG GGC TGC CTG GTG AAG GAC TAC TTC CCC GAG CCC GTG ACC GTG TCC TGG AAC AGC GGC GCT CTG ACC AGC GGA GTG CAC ACC TTC CCT GCC GTG CTG CAG AGC AGC GGC CTG TAC TCC CTG AGC AGC GTG GTG ACC GTG CCC AGC AGC AGC CTG GGC ACC CAG ACC TAC ATC TGC AAC GTG AAC CAC AAG CCC TCC AAC ACC AAG GTG GAC AAG AAG GTG GAG CCT AAG AGC TGC GAC AAG ACC CAC ACC TGC CCT CCC TGC CCC GCC CCC GAG CTG CTG GGC GGA CCC AGC GTG TTC CTG TTC CCT CCC AAG CCC AAG GAC ACC CTG ATG ATC AGC CGC ACC CCC GAG GTG ACC TGC GTG GTG GTG GAC GTG AGC CAC GAG GAC CCC GAG GTG AAG TTC AAC TGG TAC GTG GAC GGC GTG GAG GTG CAC AAC GCC AAG ACC AAG CCT CGG GAG GAG CAG TAC AAC TCC ACC TAC CGC GTG GTG AGC GTG CTG ACC GTG CTG CAC CAG GAC TGG CTG AAC GGC AAG GAG TAC AAG TGC AAG GTG AGC AAC AAG GCC CTG CCC GCT CCC ATC GAG AAG ACC ATC AGC AAG GCC AAG GGC CAG CCC CGG GAG CCT CAG GTG TAC ACC CTG CCC CCC AGC CGC GAC GAG CTG ACC AAG AAC CAG GTG AGC CTG ACC TGC CTG GTG AAG GGC TTC TAC CCC TCC GAC ATC GCC GTG GAG TGG GAG AGC AAC GGC CAG CCT GAG AAC AAC TAC AAG ACC ACC CCT CCC GTG CTG GAC AGC GAC GGC AGC TTC TTC CTG TAC AGC AAG CTG ACC GTG GAC AAG TCC CGG TGG CAG CAG GGC AAC GTG TTC AGC TGC AGC GTG ATG CAC GAG GCC CTG CAC AAC CAC TAC ACC CAG AAG AGC CTG AGC CTG AGC CCC GGA TAG TAA
配列番号20 LC3のコード配列
ATG GAG ACC GAC ACC CTG CTG CTC TGG GTG CTG CTG CTC TGG GTG CCC GGC TCC ACC GGA GAC GTC GTG ATG ACC CAG TCC CCC TCC ACA CTG TCT GCC TCT GTG GGC GAC AGA GTG ACC ATC ACC TGT CGG GCC TCC GCC CAC ATC AAC AAC TGG CTG GCC TGG TAT CAG CAG AAG CCC GGC AAG GCC CCT AAG CTG CTG ATC TCT GAT GCC ACC TCC CTG GAA TCC GGC GTG CCC TCC AGA TTC TCC GGC TCT GGC TCT GGC AAG GAG TAT ACC CTG ACC ATC AGC TCC CTG CAG CCC GAT GAC TTC GCC ACC TAC TAC TGC CAG CAC TAC TGG TCC ACC CCC TGG ACC TTT GGC CAA GGC ACC AAG GTG GAA ATC AAG CGG ACC GTG GCC GCC CCC AGC GTG TTC ATC TTC CCT CCC AGC GAC GAG CAG CTG AAG TCT GGC ACC GCC AGC GTG GTG TGC CTG CTG AAC AAC TTC TAC CCC CGC GAG GCC AAG GTG CAG TGG AAG GTG GAC AAC GCC CTG CAG AGC GGC AAC AGC CAG GAG AGC GTG ACC GAG CAG GAC TCC AAG GAC AGC ACC TAC AGC CTG AGC AGC ACC CTG ACC CTG AGC AAG GCC GAC TAC GAG AAG CAC AAG GTG TAC GCC TGC GAG GTG ACC CAC CAG GGA CTG TCT AGC CCC GTG ACC AAG AGC TTC AAC CGG GGC GAG TGC TAA
配列番号21 VHコード領域
GAA GTG CAG CTG CAG GAA TCT GGC CCT GGC CTC GTG AAG CCT TCC CAG ACC CTG TCT CTG ACC TGC ACC GTG TCC GGC TAC TCC ATC ACC TCC GAC TAC GCC TGG AAC TGG ATC CGG CAG CCT CCT GGC AAG GGA CTG GAA TGG ATC GGC TAC ATC TCC TAC TCC GGC TCC ACC AAC TAC AAC CCC AGC CTG AAG TCC AGA GTG ACC ATC TCC CGG GAC ACC TCC AAG AAC CAG TTC TCC CTG AAG CTG TCC TCC GTG ACC GCC GCT GAT ACC GCC GTG TAC TAC TGT GCT AGA GGC GGC ACC TAC TTC GAC TAC TGG GGC CAG GGC ACC CTC GTG ACC GTG TCA TCT
配列番号22 VLコード領域
GAC GTC GTG ATG ACC CAG TCC CCC TCC ACA CTG TCT GCC TCT GTG GGC GAC AGA GTG ACC ATC ACC TGT CGG GCC TCC GCC CAC ATC AAC AAC TGG CTG GCC TGG TAT CAG CAG AAG CCC GGC AAG GCC CCT AAG CTG CTG ATC TCT GAT GCC ACC TCC CTG GAA TCC GGC GTG CCC TCC AGA TTC TCC GGC TCT GGC TCT GGC AAG GAG TAT ACC CTG ACC ATC AGC TCC CTG CAG CCC GAT GAC TTC GCC ACC TAC TAC TGC CAG CAC TAC TGG TCC ACC CCC TGG ACC TTT GGC CAA GGC ACC AAG GTG GAA ATC AAG
配列番号23 HC1のVHアミノ酸配列
QVQLQESGPG LVKPSQTLSL TCTVSGYSIT SDYAWNWIRQ PPGKGLEWIG YISYSGSTNY NPSLKSRVTI SVDTSKNQFS LKLSSVTAAD TAVYYCARGG TYFDYWGQGT LVTVSS
配列番号24 HC3のVHアミノ酸配列
EVQLVESGPG LVKPSETLSL TCTVSGYSIT SDYAWNWIRQ PPGKGLEWIG YISYSGSTNY NPSLKSRVTI SRDTSKNQFS LKLSSVTAAD TAVYYCARGG TYFDYWGQGT TVTVSS
配列番号25 LC1のVLアミノ酸配列
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASAHIN NWLAWYQQKP GKAPKLLLSD ATSLESGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDFATYYCQH YWSTPWTFGG GTKVEIK
配列番号26 LC2のVLアミノ酸配列
DIVMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASAHIN NWLAWYQQKP GKAPKLLLSD ATSLESGVPS RFSGSGSGKD YTLTISSLQP EDFATYYCQH YWSTPWTFGG GTKVEIK
配列番号27 可溶型MICA
EPHSLRYNLT VLSWDGSVQS GFLAEVHLDG QPFLRCDRQK CRAKPQGQWA EDVLGNKTWD RETRDLTGNG KDLRMTLAHI KDQKEGLHSL QEIRVCEIHE DNSTRSSQHF YYDGELFLSQ NLETEEWTMP QSSRAQTLAM NIRNFLKEDA MKTKTHYHAM HADCLQELRR YLKSGVVLRR TVPPMVNVTR SEASEGNITV TCRASGFYPW NITLSWRQDG VSLSHDTQQW GDVLPDGNGT YQTWVATRIC QGEEQRFTCY MEHSGNHSTH PVPS
配列番号28 可溶型MICB
EPHSLRYNLM VLSQDGSVQS GFLAEGHLDG QPFLRYDRQK RRAKPQGQWA EDVLGAKTWD TETEDLTENG QDLRRTLTHI KDQKGGLHSL QEIRVCEIHE DSSTRGSRHF YYDGELFLSQ NLETQESTVP QSSRAQTLAM NVTNFWKEDA MKTKTHYRAM QADCLQKLQR YLKSGVAIRR TVPPMVNVTC SEVSEGNITV TCRASSFYPR NITLTWRQDG VSLSHNTQQW GDVLPDGNGT YQTWVATRIR QGEEQRFTCY MEHSGNHGTH PVPS
配列番号29 IGHV4-59*11 (MK471385)
QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSIS SHYWSWIRQP PGKGLEWIGY IYYSGSTNYN PSLKSRVTIS VDTSKNQFSL KLSSVTAADT AVYYCAR
配列番号30 IGHJ4*01
YFDYWGQGTL VTVSS
配列番号31 IGHV4-30-4*01 (Z14238)
QVQLQESGPG LVKPSQTLSL TCTVSGGSIS SGDYYWSWIR QPPGKGLEWI GYIYYSGSTYY NPSLKSRVTI VDTSKNQFSL KLSSVTAADT AVYYCAR
配列番号32 IGKV1-NL1-4*01 (Y14865)
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIS NSLAWYQQKP GKAPKLLLYA ASRLESGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDFATYYCQQ YYSTP
配列番号33 IGKJ1*01 (J00242)
WTFGQGTKVE IK
配列番号34 IGKV1-33*01 (M64856)
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKLLIYD ASNLETGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYYCQQ YDNLP
配列番号35 IGKV1-5*01 (Z00001)
DIQMTQSPST LSASVGDRVT ITCRASQSIS SWLAWYQQKP GKAPKLLIYD ASSLESGVPS RFSGSGSGTE FTLTISSLQP DDFATYYCQQ YNSYS
配列番号36 B10G5 VH
EVQLEESGPG LVKPSQSLSL TCTVTGYSIT SDYAWNWIRQ FPGNKLEWMG YISYSGSTNY NPSLKSRISI TRDTSKNQFF LQLNSVITED TATYYCARGG TYFDYWGQGT TLTVSS
配列番号37 B10G5 VL
DIVLTQTTSY LSVSLGGRVT IACKASAHIN NWLAWYQQKP GNAPRLLISD ATSLETGVPS RFSGSGSGKD YTLSITSLQT EDVATYYCQH YWSTPWTFGG GTKLEIK

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【配列表】

2023532852000001.app

【国際調査報告】