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特表2023-533028微生物感染を消毒、処置および予防するための組成物および方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-08-01
(54)【発明の名称】微生物感染を消毒、処置および予防するための組成物および方法
(51)【国際特許分類】
A61K 33/20 20060101AFI20230725BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20230725BHJP
A61P 31/02 20060101ALI20230725BHJP
A61K 47/32 20060101ALI20230725BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20230725BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20230725BHJP
A61K 9/06 20060101ALI20230725BHJP
A61K 9/107 20060101ALI20230725BHJP
A61K 9/72 20060101ALI20230725BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20230725BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20230725BHJP
【ＦＩ】
A61K33/20
A61K47/12
A61P31/02
A61K47/32
A61K47/10
A61K9/08
A61K9/06
A61K9/107
A61K9/72
A61P31/04
A61P31/12
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023501076
(86)(22)【出願日】2021-07-07
(85)【翻訳文提出日】2023-03-01
(86)【国際出願番号】 IB2021000462
(87)【国際公開番号】W WO2022008972
(87)【国際公開日】2022-01-13
(31)【優先権主張番号】63/048,815
(32)【優先日】2020-07-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518421924
【氏名又は名称】ダブリューアイエービー ウォーター イノベーション エービー
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】アルモス， ゲール ヘルモード
(72)【発明者】
【氏名】ロングヴェード， ポール
(72)【発明者】
【氏名】ビャルンスホルト， トマス
【テーマコード（参考）】
4C076
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA06
4C076AA09
4C076AA12
4C076AA14
4C076AA17
4C076AA93
4C076BB27
4C076BB31
4C076CC31
4C076DD23
4C076DD30Z
4C076DD41
4C076DD43Z
4C076DD51Z
4C076DD61U
4C076EE09P
4C076EE13P
4C076EE14P
4C076EE23P
4C076FF17
4C076FF61
4C086AA01
4C086AA02
4C086HA09
4C086HA24
4C086MA02
4C086MA03
4C086MA05
4C086MA13
4C086MA17
4C086MA28
4C086MA56
4C086MA63
4C086NA14
4C086ZA89
4C086ZA90
4C086ZB33
4C086ZB35
(57)【要約】
本発明は、塩素の酸化された状態の固体前駆体の使用を含む安定な抗菌および消毒組成物を提供する。本発明はまた、オンデマンド貯蔵および混合容器ならびにオンデマンド製剤を調製および送達するための方法を提供する。さらに、本発明は、インビボでの、表面でのおよびスプレー適用を介した抗ウイルス、抗生物質および一般的な抗菌使用を提供する。上記組成物は、薬学的に許容され得る希釈剤、補助剤または担体中に溶解され、活性化剤と組み合わされた塩素の酸化された状態の前駆体を含む消毒組成物であり得、インビボでの使用および表面消毒のための改善された抗菌剤を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗菌製剤であって、以下の式の固体の酸化塩素塩：
Ｍｎ＋［Ｃｌ（Ｏ）ｘ］ｎ ｎ－
式中、Ｍはアルカリ金属、アルカリ土類金属および遷移金属イオンの１つであり、ｎは１または２であり、ｘは１、２、３または４である；
以下の式の活性化剤：
Ｒ１ＸＯｎ（Ｒ２，）ｍ
式中、Ｒ１は、アミノ、アミド、カルボン酸、スルホン酸またはヒドロキシ基で必要に応じて置換された１～１０個の水素化された炭素原子を含み、Ｘは、炭素、リンおよび硫黄の１つであり、ｎおよびｍはそれぞれ２または３であり、Ｒ２は、Ｈ、アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属イオン塩またはアンモニウム塩の１つである；ならびに
薬学的に許容され得る希釈剤、補助剤または担体：
を含む、抗菌製剤。
【請求項2】
前記酸化塩素塩が次亜塩素酸のアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である、請求項１に記載の製剤。
【請求項3】
前記活性化剤が酢酸である、請求項２に記載の製剤。
【請求項4】
前記酸化塩素塩が亜塩素酸のアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である、請求項１に記載の製剤。
【請求項5】
前記活性化剤が酢酸である、請求項４に記載の製剤。
【請求項6】
前記活性化剤が酢酸である、請求項１に記載の製剤。
【請求項7】
約０．１ｍＯｓｍ～約５００ｍＯｓｍの範囲のオスモル濃度を有する、請求項１に記載の製剤。
【請求項8】
約４～約８のｐＨを有する、請求項６に記載の製剤。
【請求項9】
増粘剤をさらに含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項10】
前記増粘剤が前記酸化塩素塩による酸化に耐性である、請求項９に記載の製剤。
【請求項11】
前記増粘剤が水溶性ゲル化剤を含む、請求項９に記載の製剤。
【請求項12】
前記水溶性ゲル化剤が、ポリアクリル酸、ポリエチレングリコール、ポリ（アクリル酸）－アクリルアミドアルキルプロパンスルホン酸共重合体、ホスフィノポリカルボン酸、アポリ（アクリル酸）－アクリルアミドアルキルプロパンおよびスルホン酸－スルホン化スチレン三元重合体からなる群から選択される、請求項１１に記載の製剤。
【請求項13】
比色色素をさらに含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項14】
前記色素が酸化還元色素である、請求項１３に記載の製剤。
【請求項15】
前記色素の色および色の強度が、前記酸化塩素化合物の酸化状態に依存する、請求項１４に記載の製剤。
【請求項16】
水溶液、ゲル、クリーム、軟膏または油中に製剤化された、請求項１に記載の製剤。
【請求項17】
多区画容器中に製造および保存された、請求項１に記載の製剤。
【請求項18】
流体および固体成分が、組成物を製造するために前記流体および固体成分を組み合わせるより前に、別々のそれぞれの区画内に収容される、請求項１７に記載の製剤。
【請求項19】
約２５ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの次亜塩素酸および約５．５のｐＨの約０．２５％の酢酸を含む吸入製剤。
【請求項20】
前記製剤が血液に対して等張である、請求１９に記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願への相互参照
本出願は、その内容の全体が参照により本明細書に組み入れられる、２０２０年７月７日に出願された米国仮出願第６３／０４８，８１５号の優先権および恩典を主張する。
技術分野
本出願は、その内容の全体が参照により本明細書に組み入れられる、２０２０年７月７日に出願された米国仮出願第６３／０４８，８１５号の優先権および恩典を主張する。
技術分野
【0002】
本発明は、一般的には、塩素の酸化された状態の固体または液体前駆体と酢酸またはその塩との組み合わせを含む新規な組成物に関し、このような組成物は、広範囲の細菌および／またはウイルス、真菌および寄生虫の病原体、ならびに本明細書で総称される微生物を処置するための有用な消毒剤である。
【背景技術】
【0003】
背景
感染性疾患は、世界中で主要な死因であり、全小児死亡率のほぼ２／３を含む、毎年１３００万人を超える死亡の原因である。さらに、抗生物質耐性が増加しており、肺炎、結核およびコレラを含む広範囲のヒト疾患の罹患率に寄与している。特に懸念されるのは、多くのヒト病原体が従来の抗生物質に対する耐性を生じていることである。既存の耐性機構が新しい誘導体に対応するように素早く適応するので、既存の抗生物質の新しいより強力な誘導体を導入することは、一時的な解決策を提供するにすぎない。耐性グラム陽性菌は重大な脅威をもたらすが、大腸菌などの一般的なグラム陰性病原体の多剤耐性（ＭＤＲ）株の出現が特に懸念される。さらに、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉおよび腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）の分離株は、実質的にすべての抗生物質に耐性であることが示されている。
感染性疾患は、世界中で主要な死因であり、全小児死亡率のほぼ２／３を含む、毎年１３００万人を超える死亡の原因である。さらに、抗生物質耐性が増加しており、肺炎、結核およびコレラを含む広範囲のヒト疾患の罹患率に寄与している。特に懸念されるのは、多くのヒト病原体が従来の抗生物質に対する耐性を生じていることである。既存の耐性機構が新しい誘導体に対応するように素早く適応するので、既存の抗生物質の新しいより強力な誘導体を導入することは、一時的な解決策を提供するにすぎない。耐性グラム陽性菌は重大な脅威をもたらすが、大腸菌などの一般的なグラム陰性病原体の多剤耐性（ＭＤＲ）株の出現が特に懸念される。さらに、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉおよび腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）の分離株は、実質的にすべての抗生物質に耐性であることが示されている。
【0004】
ウイルスも、感染症疫学において重要な懸念事項である。多くが人畜共通感染症起源である深刻なウイルスの大流行がますます一般的になってきている。例えば、２０００年初頭から中頃にかけてのＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）およびＭＥＲＳ（中東呼吸器症候群）の大流行、２００９年のＨ１Ｎ１パンデミック、およびその後の２０２０年のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２パンデミックは、これらのウイルス病原体の処置および拡散の予防の両方に関して注目を集めた。
【0005】
気道に感染する多くのウイルスは、飛沫感染を介して伝達される。その場合、ウイルスを含有する呼吸器飛沫が感染者によって排出され、直接接触または飛沫が付着した表面との接触によって、他者によって捕捉される。典型的には、感染は、鼻、目、耳または口への侵入の結果として、粘膜または上皮細胞上の受容体へのウイルスの結合を介して進行する。さらに、いくつかのウイルスは、ウイルスを含有するエアロゾル粒子を介して伝達されるか、または空気感染する。いずれの場合も、ウイルスは、感染個体からの発現後、数時間から数日間生存し得る。
【0006】
表面または汚染された上皮の消毒のための従来の組成物および方法は、すべての感染因子の不活化には十分ではない。伝統的な消毒組成物の現在の形態は、長い非実用的な曝露時間を必要とする場合があり、または敏感な器具もしくは生体組織に対して使用することができない有害なもしくは腐食性の溶液もしくは蒸気を使用する場合があり、したがって、耐性病原体からの増大する健康リスクに対する実用的な解決策を提供することができない。
【0007】
塩素酸化物または酸化塩素（本明細書では、「ＯＣ］とも称される）は、化学種の大きなクラスを構成し、自然界のみならず、哺乳動物中の生物系においてもよく見られる。塩素酸化物はまた、中性化合物またはイオン、いわゆるオキシアニオンとして存在し得る。塩素にはいくつかのオキシアニオンが存在し、オキシアニオンは、対応する次亜塩素酸アニオン（ＣｌＯ－）、亜塩素酸アニオン（ＣｌＯ２
－）、塩素酸アニオン（ＣｌＯ３
－）または過塩素酸アニオン（ＣｌＯ４
－）によって＋１、＋３、＋５または＋７の酸化状態をとることができる。次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）の低ｐＨでの標準還元電位は＋１．６３であり、亜塩素酸（ＨＣｌＯ２）については標準還元電位は１．６４であるが、塩基性ｐＨではそれぞれ＋０．８９および＋０．７８である。５～７のｐＨでは、還元電位は＋１より高い。
【0008】
その結果、次亜塩素酸塩および亜塩素酸塩は、一般に、微生物および寄生生物を死滅させる可能性を有する最も有用な酸化状態である。特に、塩化物イオンＣｌ－は、最も安定した酸化状態にあり、反応性ではなく、消毒剤としても有効ではない。酸化状態＋５および＋７の塩素酸塩および過塩素酸塩は、より低い酸化状態よりも反応性が高く、取り扱いがより困難な場合がある。
【0009】
次亜塩素酸イオンは化学式ＣｌＯ－を有し、塩素（Ｃｌ）は酸化状態＋１にあり、Ｃｌの低エネルギー酸化状態は－１であるため、これは潜在的に不安定な酸化状態である。次亜塩素酸イオンと亜塩素酸イオンはいずれもいくつかのカチオンと結合して、これらの酸化塩素の塩として次亜塩素酸塩および亜塩素酸塩を形成する。一般的な例には、一般に水処理（例えば、水泳用プールなど）のために使用される、漂白粉、塩素粉末または塩素化石灰を含む市販製品の主要活性成分である、次亜塩素酸ナトリウム（家庭用漂白剤）および次亜塩素酸カルシウムが含まれる。本明細書で「主要塩素酸化物」とも呼ばれる亜塩素酸イオンおよび次亜塩素酸イオンは、様々な状況において有用である。亜塩素酸ナトリウムおよび次亜塩素酸ナトリウムは強力な酸化剤であり、浄水、消毒、ならびに動物性製品の漂白および消臭に使用されている。
【0010】
次亜塩素酸ナトリウムは酸性条件下で非常に毒性の高い塩素ガスを生成するので、家庭用に市販されている水溶液は強塩基性溶液であり、水酸化ナトリウムを使用してｐＨが調整されている。
【0011】
次亜塩素酸は、細菌、藻類、真菌および他の有機物を急速に不活性化することが知られている弱酸であり、広範囲の微生物にわたって有効な作用物質となっている。さらに、次亜塩素酸は、弱酸であり、人々は次亜塩素酸に耐えることを可能にするある種の化合物を天然に産生するので、一般にヒトに対して非毒性である。その殺生物特性とその安全性プロファイルの組み合わせのため、次亜塩素酸は、医療、食品サービス、食品小売、農業、創傷ケア、実験室、ホスピタリティ、歯科、または花卉産業などの多くの異なる産業にわたって多くの有益な用途を有することが明らかとなっている。
【0012】
塩素が水に溶解すると次亜塩素酸が形成される。特に、次亜塩素酸塩の酸性化は、塩素原子が酸化状態＋１にある次亜塩素酸を生成する。次亜塩素酸は、溶液から漏出することができる塩素ガスと平衡状態で存在する。平衡は、以下の式（式１）に示すように、ｐＨ依存性である。
Ｃｌ２＋Ｈ２Ｏ ⇔ ＨＯＣｌ＋Ｃｌ－＋Ｈ＋⇔ ＣｌＯ－＋Ｃｌ－＋２ Ｈ＋（１）
ｐＨ上昇→
Ｃｌ２＋Ｈ２Ｏ ⇔ ＨＯＣｌ＋Ｃｌ－＋Ｈ＋⇔ ＣｌＯ－＋Ｃｌ－＋２ Ｈ＋（１）
ｐＨ上昇→
【0013】
上記の式（式１）を参照すると、高いｐＨは反応を右に動かし、塩素の塩化物および次亜塩素酸塩への不均化を促進するのに対して、低いｐＨは反応を左に動かし、有毒であり得る塩素ガス（Ｃｌ２）の放出を促進する。
【0014】
塩素、特に－１よりも高い酸化状態の塩素の溶液の従来の医学的使用における重要な課題は、これらの化学種がより高いエネルギー状態にあり、塩化物イオンＣｌ－に戻る傾向があり、周囲温度で溶液中で分解するため、その安定性である。これは、塩素酸化物の薬学的製剤および医療機器の周囲条件で必要とされる貯蔵寿命安定性の妨げとなる。したがって、医療機器および薬物に要求されるような適切な貯蔵寿命を、塩素酸化物の溶液に対して達成することは困難である。塩素のすべての酸化物に内在するこの制限は、特に温度、光湿度および大気気体が変化する領域におけるより高温での輸送および貯蔵の妨げとなる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0015】
したがって、塩素酸化物を含有する製剤は有効な抗菌剤であり得るが、従来の製剤は重大な欠点を有する。例えば、弱酸であるＨＯＣｌは、従来の条件下で製造された場合に不安定であり、純粋でない。その結果、意図される短期間の使用を可能にする安定性を有する塩素酸化物を現場で供給することができる、より制御された即時の調製方法が必要とされている。一般に、耐性微生物およびウイルスを処置するための新規治療薬に対する多大な満たされていない医学的要求が存在する。
要旨
要旨
【0016】
本発明は、薬学的に許容され得る希釈剤、補助剤または担体中に溶解され、活性化剤と組み合わされた塩素の酸化された状態の前駆体を含む消毒組成物を提供する。得られた組成物は、インビボでの使用および表面消毒のための改善された抗菌剤を提供する。好ましい製剤において、本発明の組成物は、次亜塩素酸塩の形態と組み合わせて酢酸活性化剤を含む。必要に応じて、本発明の製剤は、増粘剤および／または色素と組み合わされ得る。例えば、本発明の製剤の粘度は、増粘剤を使用してゲルを形成するように調整することができる。本発明の製剤は、好ましくは、使用前に多区画装置の一部として分離したチャンバーを備える容器内で混合される。本発明の組成物は、経口、静脈内、皮膚または吸入に基づく投与のために製剤化され得る。さらに、本発明の製剤は、患者の呼吸器系への迅速な導入のためにネブライザーまたは同様の装置を介した吸入のために調製することができる。したがって、本発明の組成物は、インビボおよび表面上の両方で、広範囲の細菌および／またはウイルス性病原体を処置するための有用な消毒剤である。
【0017】
特定の局面において、本発明は、ウイルス感染症および細菌感染症の両方を含む呼吸器感染症を処置および予防する安全かつ有効な手段を提供する抗菌製剤に関する。好ましい組成物は、次亜塩素酸ベースの広域スペクトル抗ウイルス性および／または抗菌性吸入溶液を含む。本発明の溶液は、好ましくは、吸入送達のために噴霧される。より具体的には、好ましい製剤は、酢酸（約０．２５％）で安定化され、顕著な抗菌効果を有するＨＯＣｌの持続可能な濃度をもたらす次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）（約２５ｐｐｍ～約２００ｐｐｍ）を含む。酢酸の添加はＨＯＣｌ安定性を増加させ、したがって延長した貯蔵寿命を有する処置を開発することを可能にする。さらに、組成物は、好ましくはｐＨ５．５で製剤化され、生理学的に等張であり、それによって気道内での忍容性を増大させる。
【0018】
本発明の組成物は、特有の抗病原性特性を有する。一局面において、本発明の組成物は、エンベロープを有するウイルスに対して作用し、コロナ型ウイルスに対して優れた抗ウイルス効果を提供する。したがって、このような組成物は、ＳＡＲＳ感染症（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９）の処置および拡大の防止に特に有用である。より具体的には、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２および多くの他のウイルスは、呼吸器系の細胞内への侵入点である表面タンパク質（すなわち、スパイクタンパク質）を有する。これらのスパイクタンパク質は、ＨＯＣｌによる酸化に対して脆弱な－ＳＨ基を含む。比較的低濃度のＨＯＣｌでさえ、正常な組織および細胞内酵素に対して無害でありながら、細胞外－ＳＨ基（例えば、ウイルスのスパイクタンパク質上）を酸化する。したがって、本発明の組成物の抗ウイルス効果は、最初の曝露時、感染中、およびビリオンが細胞内にあり、その後気道内の細胞によって放出されるときに、気道内のウイルス粒子を破壊する。
【0019】
したがって、特にエンベロープを有するウイルスに対する、本発明の組成物の特有の殺ウイルス特性によって、このような組成物は、コロナウイルスの拡散を防止するための継続的な努力において強力なツールとなる。このような組成物は、広範な患者集団で疾患の持続時間および症候の重症度を低下させる。
【0020】
別の局面において、本発明は、固体の酸化塩素種塩、酢酸などの活性化剤、および薬学的に許容され得る希釈剤、補助剤または担体を含む消毒組成物を提供する。固体の酸化塩素種塩は、式Ｍｎ＋［Ｃｌ（Ｏ）ｘ］ｎ
ｎ－に基づき、式中、Ｍはアルカリ金属、アルカリ土類金属または遷移金属イオンであり、ｎは１または２であり、ｘは１～４の整数であり、両端を含む。活性化剤は、式Ｒ１ＸＯｎ（Ｒ２，）ｍに基づき、式中、Ｒ１基は、アミノ、アミド、カルボン酸、スルホン酸またはヒドロキシ基で必要に応じて置換された１～１０個の水素化された炭素原子を含み、基Ｘは、炭素、リンおよび硫黄から選択され；ｎおよびｍは、それぞれ独立して、２または３であり、Ｒ２は、Ｈ、アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属イオン塩およびアンモニウム塩から選択される。
【0021】
好ましい態様において、酸化塩素塩は、次亜塩素酸ＨＯＣｌのアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩を含む。このような態様において、活性化剤は酢酸である。他の態様において、酸化塩素塩は、亜塩素酸ＨＯＣｌＯのアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩を含む。同じく、このような態様において、活性化剤は酢酸である。
【0022】
いくつかの態様において、組成物は、約０．１ｍＯｓｍ～約５００ｍＯｓｍの範囲のオスモル濃度を有する。
【0023】
いくつかの態様において、ある量の酸化塩素種塩、酢酸またはその金属もしくはアンモニウム塩は、４～８のｐＨを生じる。
【0024】
いくつかの態様において、組成物は、増粘剤をさらに含む。いくつかの局面において、増粘剤は、酸化塩素種によって酸化され得ない。
【0025】
いくつかの態様において、増粘剤は水溶性ゲル化剤を含む。水溶性ゲル化剤としては、ポリアクリル酸、ポリエチレングリコール、ポリ（アクリル酸）－アクリルアミドアルキルプロパンスルホン酸共重合体、ホスフィノポリカルボン酸、ならびにポリ（アクリル酸）－アクリルアミドアルキルプロパン、およびスルホン酸－スルホン化スチレン三元重合体が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【0026】
いくつかの態様において、組成物は色素を含む。色素は、好ましくは、製剤中の酸化塩素化合物の存在の比色指示薬を生成する。色素は、酸化還元色素であり得る。好ましい態様において、色素の色および強度は、酸化塩素化合物の酸化状態に依存する。
【0027】
本発明の製剤は、水溶液、ゲル、クリーム、軟膏または油として構成され得る。本発明の製剤は製造され、多区画容器中に保存され得る。いくつかの局面において、水性および固体成分は、組み合わせの前に別々のそれぞれの区画内に収容される。
【0028】
本発明の製剤は、表面上の抗菌剤として、および疾患処置への適用に有用である。したがって、本発明の製剤は、例えば、ネブライザー、吸入器、噴霧器または他の適切な送達手段と共に使用するための吸入製品として有用である。さらに、本発明の組成物は、動物または農業育種における皮膚、創傷乳腺炎または任意の他の感染性疾患への適用ならびに抗ウイルス用途のために製剤化することができる。
【図面の簡単な説明】
【0029】
【0030】
【0031】
【発明を実施するための形態】
【0032】
詳細な説明
本発明は、一般に、塩素の酸化された状態の固体および液体前駆体と活性化剤、例えば酢酸またはその塩との組み合わせ、ならびに１またはそれを超える追加の成分を含む組成物に関する。このような組成物の使用は、様々な生物学的および非生物学的表面および環境上の広範囲の細菌性および／またはウイルス性病原体の処置のための消毒剤として作用する。
本発明は、一般に、塩素の酸化された状態の固体および液体前駆体と活性化剤、例えば酢酸またはその塩との組み合わせ、ならびに１またはそれを超える追加の成分を含む組成物に関する。このような組成物の使用は、様々な生物学的および非生物学的表面および環境上の広範囲の細菌性および／またはウイルス性病原体の処置のための消毒剤として作用する。
【0033】
本発明のいくつかの好ましい製剤は、長期安定性を有する組成物を即座に生成する固体形態の多成分（すなわち、２成分、３成分、４成分など）製剤である。これは、先行技術に記載されている次亜塩素酸または二酸化塩素の従来の溶液で通例観察される貯蔵寿命に関連する制限を低減する。より具体的には、固体前駆体（ＡＰＩ－Ｐ）からの酸化塩素種の直ちに使用可能な製剤の即時生成は、使用場所において多区画装置または容器内で実行され得る。多区画装置または容器は、本発明と一致する調製された組成物の調製、分配および長期安定貯蔵のために使用される。特に、本明細書に記載されるこのような多区画容器は、本発明の組成物を製造するために必要とされる成分を別々に含有するいくつかの区画またはチャンバーを有し得る。一例では、製剤は、塩素の酸化された状態の固体前駆体および酢酸またはその塩、増粘剤、および色素を含み、その後、所望の使用時および現場で抗菌組成物を調製するために組み合わされる。
【0034】
抗菌製剤中のＡＰＩとして有用な別の塩素酸化物は二酸化塩素であり、塩素原子は酸化状態＋３である。亜塩素酸ナトリウムの主な反応は、以下の式（式２）に示されるように、二酸化塩素の生成である。
５ ＮａＣｌＯ２＋４ ＨＯＲ ⇔ ５ ＮａＯＲ＋４ ＣｌＯ２＋２Ｈ２Ｏ（２）
５ ＮａＣｌＯ２＋４ ＨＯＲ ⇔ ５ ＮａＯＲ＋４ ＣｌＯ２＋２Ｈ２Ｏ（２）
【0035】
上記の式（式２）を参照すると、まず亜塩素酸ナトリウムを亜塩素酸に変換し、次いで室温で高度に水溶性の気体である二酸化塩素に変換するためにプロトン源が必要とされるので、ＨＯＲは通常、ＨＣｌまたはクエン酸などの鉱酸である。
【0036】
二酸化塩素の利点は、有毒な環境汚染物質である塩素化炭化水素、例えばトリハロメタンと反応することが知られている塩素ガスＣｌ２を発生させることができないことである。二酸化塩素の別の利点は、消毒剤としての活性またはその水溶液の安定性がｐＨ依存性ではないことである。
【0037】
本発明は、塩素酸化物を使用する従来技術の組成物に伴う課題に対処する。特に、本発明は、塩素の酸化された状態（ＯＣ）の固体前駆体とプロトン源を提供する活性化剤との組み合わせを含む組成物を提供する。活性化剤の好ましい例は、酢酸またはその塩であり、本発明の消毒組成物は、意図される短期間の使用を可能にする安定性を有して、使用部位で、制御された即時の過程において即座に形成される。このような組成物は、広範囲の微生物の処理に有用な消毒剤である。特に、活性医薬成分が、以下で「ＡＰＩ－Ｐ」と称される、塩素酸化物の安定な固体前駆体から使用部位で生成される場合、溶液またはゲルを生体適合性のｐＨ値に同時に緩衝する活性化剤として例えば酢酸を含めると、従来技術における安定性の問題はもはや存在しない。
【0038】
前述のように、先行技術における技術的解決策は、生物学的流体と生体適合性を有する最終的な抗菌溶液のイオン強度またはオスモル濃度をどのように確保するかに対処していない。さらに、先行技術は、例えばレオロジーおよび流動性を調節することによって、治療的に関心のある領域におけるＡＰＩの接触時間および持続性をどのように調節および増加させるかを示していない。さらに、従来技術は、ＡＰＩの酸化状態を監視する比較的単純であるが効果的な手段、および消毒組成物の混合中にＡＰＩが適用された場所の視覚的表示を提供していない。
【0039】
さらに、いくつかの態様において、本発明の組成物は、増粘剤（本明細書では、「ＶＥ」とも称される。）の使用をさらに含み得る、および／または塩素の酸化された状態の固体前駆体と活性化剤、例えば酢酸またはその塩との組み合わせを含み得る。
【0040】
本発明の別の態様は、塩素原子の酸化状態とともに変化する色を有する色素、好ましくは例えば酸化還元感受性色素を製剤に含めることである。
【0041】
特に、本発明のいくつかの好ましい組成物は、長期安定性を有する組成物を即座に生成する、破壊可能な壁または障壁によって隔てられた固体形態の多成分（すなわち、２成分、３成分、４成分など）製剤である。これにより、先行技術に記載されている次亜塩素酸または二酸化塩素の溶液で見られる貯蔵寿命に関連する一切の問題が取り除かれる。
【0042】
より具体的には、固体前駆体ＡＰＩ－Ｐからの酸化塩素種の直ちに使用可能な製剤の即時生成は、使用場所において多区画装置または容器内で実行され得る。多区画装置または容器は、本発明と一致する調製された組成物の調製、分配および長期安定貯蔵のために使用され得る。特に、本明細書に記載されるこのような多区画容器は、本発明の組成物を製造するために必要とされる成分を別々に含有するいくつかの区画またはチャンバーを有し得る。例では、塩素の酸化された状態の固体前駆体および活性化剤、例えば酢酸またはその塩、増粘剤、および色素が混合され、その後、組成物は、所望の時間および使用の場所で、消毒剤の所望される製剤で生成する。
【0043】
酢酸は、様々な哺乳動物組織に見られる豊富な天然化合物である。酢酸は、炭水化物の細菌発酵の副生成物でもある。
【0044】
酢酸ナトリウムは非毒性であり、経口および非経口（ｐａｒｅｎｔａｌ）使用のための薬物製剤において許容される。酢酸の殺菌効果は周知である。酢酸は、Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａおよびＡ．Ｂａｕｍａｎｎｉｉなどの問題のあるグラム陰性菌に対して確認された効果を有する。酢酸の微生物学的スペクトルは、０．５～３％の低濃度で試験した場合でも広い。予め形成されたバイオフィルムを根絶した酢酸の濃度は、０．１０％～２．５の範囲であった。したがって、酢酸およびその金属塩は、ｐＨの安定化のためにその金属塩と共に緩衝剤として作用する能力の故に、抗菌製剤において使用するのに極めて魅力的な化合物である。
【0045】
さらに、その抗菌特性に加えて、酢酸はＯＣなどの酸化剤によってさらに酸化することができないので、および生体組織中において濃度が高いその内因性の性質が故に、酢酸は魅力的である。
【0046】
したがって、多区画容器は、即座に、使用の場所でＡＰＩの活性溶液を生成するために必要な成分を混合する上で実用的な使用を可能にする。医療用途の場合には、使用領域でのオスモル濃度に適合するように最終抗菌溶液のイオン強度またはオスモル濃度を確保するために、計画された使用に応じて、予め計算された量のＮａＣｌを多区画装置中に含めることができることに留意されたい。
【0047】
本発明の好ましい態様は、呼吸器投与のための吸入製剤である。したがって、液体をエアロゾルに変換する、嚢胞性線維症、喘息、ＣＯＰＤおよび他の呼吸器疾患または障害の処置のために一般的に使用されるネブライザーまたは吸入器は、本発明において有用である。吸入投与のための装置は、本発明の製剤の微粒化を生成するために、圧縮空気または超音波エネルギーを使用し得る。任意の種類の加圧定量吸入器（ｐＭＤＩ）、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、低速ミスト吸入器（ＳＭＩ）も有用である。任意の静電または非静電吸入器、例えば、ＶＯＲＴＥＸまたはＰａｒｉまたはＳｙｍｐｏｔｅｃもまた、本発明を実施するのに有用である。
【0048】
本明細書に記載される予め装填された多区画容器は、成分の混合時に安定な広域抗菌溶液を生成し、生体適合性の不活性化学種のみを自然に残す。
【0049】
上記のように、本発明のＡＰＩの活性化は、微生物に対して酸化塩素と相乗的に作用し、４～８のｐＨ範囲に酸性度をさらに維持する活性化剤、例えば酢酸を使用して生成される。消毒組成物を水溶液として保存する必要がないので、本発明の方法およびその製剤は、溶液中での酸化塩素ＯＣの長期安定性の本質的欠如を回避する。
【0050】
本発明の別の利点は、適用を補助する他の化合物を添加する選択肢である。例えば、創傷治癒用途では、接触時間を延長するために皮膚上での製品の粘度（μ）を増加させる必要がある。本発明は、ＡＰＩによって化学的に酸化され得ない水溶性または溶解性増粘剤（ＶＥ）の使用によってこの問題を解決し、それによって治療関心領域におけるＡＰＩの接触時間および持続性の改善された制御を提供する。ＶＥは、完全な流動性を有する溶液またはゲルを生成するために、レオロジーおよび流動性がそれぞれの方法および消毒領域に適合されることを確実にする。ＶＥは、例えば、ポリアクリル酸、ポリエチレングリコール、またはＡＰＩによって酸化され得ない任意の他のオリゴマーもしくはポリマーなどの水溶性ゲル化剤を含み得る。
【0051】
さらに、本発明の組成物は、色および強度が酸化塩素の酸化状態に依存する酸化還元色素（本明細書において、「ＲＯＤ」または「ＲＯＤｓ」とも称される。）の群から好ましくは選択される１またはそれを超える色素を含み得る。塩素原子の酸化状態の視覚的表示（すなわち、色によって）を提供することに加えて、ＲＯＤｓはそれ自体の抗菌効果をさらに提供することに留意されたい。これは、製剤中の成分間の相乗作用を新規な様式で増強する。ＲＯＤは、ＡＰＩである酸化塩素の酸化活性を監視し、さらに製剤が適用された領域の視覚的表示を提供するのに十分な期間、その色を維持することができる。
【0052】
本発明のさらなる利点およびさらなる発明的特徴は、以下に提供される本発明の説明から明らかになるであろう。
【0053】
好ましい態様において、酸化塩素種（ＯＣ）は、以下に示される一般式を有する。
Ｍｎ＋［Ｃｌ（Ｏ）ｘ］ｎ ｎ－
式中、Ｍは任意のアルカリ金属、アルカリ土類金属または遷移金属イオンであり、ｎは整数１～５であり、ｘは整数１～４である
Ｍｎ＋［Ｃｌ（Ｏ）ｘ］ｎ ｎ－
式中、Ｍは任意のアルカリ金属、アルカリ土類金属または遷移金属イオンであり、ｎは整数１～５であり、ｘは整数１～４である
【0054】
Ｍ＝Ｎａ、ｎ＝１、ｘ＝１の場合、ＡＰＩ－Ｐは固体ＮａＯＣｌである。Ｍ＝Ｃａ、ｎ＝２、ｘ＝１の場合、ＡＰＩ－Ｐは固体Ｃａ（ＯＣｌ）２である。Ｍ＝Ｎａ、ｎ＝１、ｘ＝２の場合、ＡＰＩ－Ｐは固体ＮａＣｌＯ２である。Ｍ＝Ｃａ、ｎ＝２、ｘ＝２の場合、ＡＰＩ－Ｐは固体Ｃａ（ＣｌＯ２）２である。ｘ＝３または４の場合、ＡＰＩ－Ｐは、より反応性の高い塩素酸塩および過塩素酸塩種を生成する。
【0055】
１つの非限定的な例は、図１によるキャップ２内での次亜塩素酸ナトリウムまたは次亜塩素酸カルシウムからの次亜塩素酸の即時の生成であり、区画４内の酢酸ナトリウム緩衝液の溶液は、必要に応じて着色剤および増粘剤を含むｐＨ５～６のＡＰＩ次亜塩素酸の即時使用可能な溶液を区画９内に提供する。
【0056】
別の非限定的な例は、ＨＯＣｌのための安定で水溶性のＡＰＩ－Ｐである二次亜塩素酸カルシウムＣａ（ＯＣｌ）２である。次亜塩素酸カルシウムは直ちに水に可溶であり、水酸化カルシウムのみを残し、水酸化カルシウムは自然界に存在し、本発明における２つの活性成分のうちの１つであるＨＯＣｌを生成し、ＨＯＣｌはＣｌ－ならびに水素および酸素を含有する生体適合性種に分解する。
【0057】
本発明の別の好ましい態様は、参照により本明細書に組み入れられるＭｅｕｅｒらのカナダ特許第２６１６００８号によって記載されているように調製された、ＷＦ１０またはＯＸＯ－Ｋ９９３の安定化された溶液として知られている、酸化塩素の固体前駆体テトラクロロ－デカオキシド（ＴＣＤＯ）、ＣＡＳ番号９２０４７－７６－２である。テトラクロロ－デカオキシド（ＴＣＤＯ）は、亜塩素酸イオンＣｌＯ２
－のアルカリ塩またはアルカリ土類塩を水中で過剰な酸素と組み合わせることによって調製することができる。
【0058】
したがって、本発明の１つの利点は、乾燥した、水を含まない品質での固体形態の前駆体ＡＰＩ－Ｐには薬学的安定性の問題が存在しないことであり、したがって、本発明は、先行技術における主要な技術的問題の１つを解決する。
【0059】
本発明の一局面は、それぞれが製剤中でＡＰＩ－Ｐの活性化剤として機能するカルボン酸官能性－ＣＯＯＨ、スルホン酸官能性－ＳＯ３Ｈ、リン酸官能性－ＰＯ３Ｈまたはホウ酸官能性－Ｂ（ＯＨ）２を含む分子とのＡＰＩ－Ｐの組み合わせである。一般に、活性化剤は、一般式Ｒ１ＸＯｎ（Ｒ２，）ｍを有し、式中、基Ｒ１は、アミノ、アミド、カルボン酸またはヒドロキシ基で必要に応じて置換された、約１～約１０個の水素化された炭素原子を含む基であり得る。基Ｘは、炭素、リンまたは硫黄原子であり得、ｎおよびｍは２または３であり、Ｒ２はプロトン（Ｈ）、または任意のアルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷移金属イオンである。式中の置換基の性質は、用途および塩素種によって異なり、アミノ基を含む任意の化合物、例えばアンモニア、アミノ酸、例えばタウリンまたは製剤の相乗的潜在能力を増大させる治療薬であり得る。活性化剤は、一般式Ｒ１ＸＯｎＲ２によって定義される２またはそれを超える化合物の任意の組み合わせまたは混合物であり得る。
【0060】
好ましい非限定的な例は、Ｒ３がＨであるか、またはヒドロキシル基で必要に応じて置換された約１～約２４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐飽和もしくは不飽和炭化水素鎖であるカルボン酸Ｒ３ＣＯＯＨである。活性化剤の非限定的な例は、酢酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、馬尿酸、マレイン酸、ホウ酸、硫酸、リン酸、ホウ酸、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２－（カルバモイルメチルアミノ）エタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、２－（カルバモイルメチルアミノ）エタンスルホン酸（ＡＤＡ）、２－（カルバモイルメチルアミノ）エタンスルホン酸（ビシン）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸、ＰＩＰＥＳ）、または任意のアミノ酸であり得る。
【0061】
タウリンは、通常、体内でＯＣの効果を加減する内因性アミノ酸であり、それ自体が抗菌特性を有するＣｌＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－ＳＯ３Ｈのような内因性Ｎ－クロロ－アミノ酸を形成するためにＯＣと組み合わされ得るので、特に好ましい。
【0062】
酢酸は、ヒトにおいて内因性であり、抗菌特性を有し、非常に低い毒性を有し、その金属塩と混合して緩衝液を形成するので好ましく、本発明のさらなる説明において非限定的な例として使用される。
【0063】
本発明の利点は、ＡＰＩ－Ｐが固体であり、大規模に市販されているので、温度、空気、湿度、光、酸素またはその他の周囲条件にかかわらず、本発明による固体多成分製品は、医薬品または医療機器の環境における安定性の問題によって妨げられないことである。
【0064】
本明細書に開示されるＡＰＩ－Ｐは、水に可溶性であり得、酢酸および／またはその塩と組み合わされた最終溶液中でほぼ即座に生理学的ｐＨおよびイオン強度に達することができる。
【0065】
インサイチュで即座に抗菌ＡＰＩを生成する能力は、製品の使いやすさおよび汎用性を増大させる。さらに、成分の包装は、個別であり得、要求に応じて合わせることができ、貯蔵安定性および現場での使用にさらに大きな影響を与える。
【0066】
小型で安定した使い捨ての２または３構成要素の装置が本発明によって想定され、旅行、惨事対応、軍関係者または微生物のパンデミックに理想的に適している。さらに、活性抗菌剤の前駆体（本明細書ではＡＰＩ－Ｐと称されることがある）を含有する大型フォーマット（例えば、タンク）のデザインは、農業環境、水産養殖産業または軍事活動において有用であり、より大きな領域を消毒するのに適している。
粘性溶液およびゲルの調製物のための増粘剤
粘性溶液およびゲルの調製物のための増粘剤
【0067】
本発明のいくつかの態様において、ＡＰＩ以外の成分を含めることができる。例えば、増粘剤は、創傷治癒または皮膚消毒にとって好ましい。好ましい増粘剤は、ＡＰＩを酸化しない水溶性ゲル化剤である。ゲル化剤は、関心対象の領域、例えば皮膚においてＡＰＩの長期持続性を提供する。
【0068】
本発明によるゲル化剤の例としては、ポリアクリル酸（ＣＡＲＢＯＭＥＲ）、ポリエチレングリコールまたは任意の他のオリゴマー、ポリマーもしくはそれらのブロックコポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、増粘剤は、ポリ（アクリル酸）－アクリルアミドアルキルプロパンスルホン酸コポリマー、ホスフィノポリカルボン酸ならびにポリ（アクリル酸）－アクリルアミドアルキルプロパンおよびスルホン酸スルホン化スチレン三元重合体から選択され得る。
【0069】
アクリラートコポリマーなどのポリマーは、本発明の製剤中で、約０．０１～約５％の濃度範囲で良好に機能する。アクリラートコポリマーは、ポリアルケニルポリエーテルで架橋されたアクリル酸のホモポリマーおよびコポリマーである。アクリラートコポリマーは、様々なグラフト密度で存在する。１つの例示的な架橋剤は、非常に安定であるペンタエリトリトールである。Ｈ２Ｏ２の製剤を安定化することが知られているポリアクリル酸（ＰＡＡ）ポリマーを本発明と共に使用することができる。
【0070】
本発明によるＯＣのポリマー安定化された溶液は、多くの状況において、例えば創傷処置、無菌包装、エレクトロニクス製造、ならびにパルプおよび紙の漂白において用途を有する。ＡＰＩは、ゲルまたは粘性流体として製剤化することができ、必要なレベルのＡＰＩとの長期間の密接な接触を確実にするために、無生物の表面または感染した上皮粘膜もしくは皮膚表面の代表のいずれかである標的表面に適用され得る。ＡＰＩの非粘性製剤も、環境の消毒を達成するために、または呼吸器疾患の処置のための吸入目的のために、ミストとして、限定された空間内の空気中に分散され得る。例えば、ポリアクリル酸ＣＡＲＢＯＭＥＲの濃度は、０．０１～０．１％の濃度において増加した粘度を有する。所望であれば、ポリアクリル酸ＣＡＲＢＯＭＥＲの濃度は、０．１～１％の濃度範囲で規則的なゲルを形成する。
指示薬としての抗菌酸化還元感受性抗菌色素
指示薬としての抗菌酸化還元感受性抗菌色素
【0071】
本発明の製剤へのさらなる添加剤は、酸化還元色素（以下、ＲＯＤ）であり、色素の色および強度はＯＣの酸化状態に依存する。さらにより有利には、ＲＯＤ自体が抗菌効果を有し、本明細書に提示される製剤の構成成分間の抗菌相乗効果を増加させる。ＲＯＤの標準的な半電池電位がＯＣよりも低い正の値を有する場合、ＯＣが活性である限り、製剤の色は維持される。それにより、色は、製剤が適用された領域および活性なＯＣが存在する領域において視覚的な手がかりを提供する。これは、例えば、ウシの大きな集団を乳腺炎のために処置する必要がある乳腺炎の処置において本発明による製剤が使用される場合に特に有利であり、着色された本発明による製剤は、どの動物が処置されたかを視覚化した。さらに、ＯＣの酸化力が消失しているときに色が現れる反対のタイプの指示薬の使用も有用である。
【0072】
本発明において有用な適切な色素の非限定的な例は、ＯＣの存在下で可視的なｐＨ非依存性色素である。好ましい例は、Ｎ－フェニルアントラニル酸（紫－赤）、Ｎ－エトキシクリソイジン（シアン）、ｏ－ジアニシジン（赤）、ジフェニルアミンスルホン酸ナトリウム（赤－紫）、ジフェニルベンジジン（紫）、ジフェニルアミン（紫）およびＯＣの存在下では無色であるが、ＯＣの非存在下では濃い青色であるビオロゲンである。
【0073】
活性なＯＣの存在下では濃い青色であるが、ＯＤの非存在下では無色であるｐＨ依存性色素の例は、ナトリウム２，６－ジブロモフェノール－インドフェノールまたはナトリウム２，６－ジクロロフェノール－インドフェノール、ナトリウムｏ－クレゾールインドフェノール、チオニン（同義語ラウスバイオレット）、メチレンブルー、Ｇｅｎｔｉａｎ Ｖｉｏｌｅｔ、インジゴテトラスルホン酸、インジゴカルミン（同義語インジゴジスルホン酸）、インジゴモノスルホン酸である。ＯＣの存在下で赤色または赤紫色である色素の例は、フェノサフラニン、サフラニンＴ、ニュートラルレッドおよびジアルキル－ｐ－フェニレンジアミン（ＳＰＤ、赤紫色）である。
【0074】
これらの色素の多くは、それら自体に抗菌効果を有している、すなわちメチレンブルー（ＭＢ）およびＧｅｎｔｉａｎ Ｖｉｏｌｅｔ（ＧＶ）およびそれらの組み合わせは、例えば、ＥｄｗａｒｄｓによってＡｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｗｏｕｎｄ Ｃａｒｅ（２０１６），５，ｐｐ１１－１９に記載されているように、ポリビニルアルコールまたはポリウレタンのようなポリマーと組み合わせて創傷被覆材中の発泡体中で抗菌色素として使用されている。
【0075】
本発明において有用な色素の特に有用なクラスは、代謝的、生態学的および進化的な重要性を有する着色された、酸化還元活性な窒素含有芳香族化合物である微生物のフェナジンである。
【0076】
さらなるクラスのフェナジンとしては、親フェナジンよりもさらに強い抗菌特性を有するビス－Ｎ－オキシドフェナジンが挙げられる。これらの化合物の大部分は、細菌によって産生される天然化合物であり、ヘテロ芳香族Ｎ酸化化合物であり、以下、ＨＡＮＯＸと表記される。酸化還元色素、ＲＯＤＳであることに加えて、それらの色がＯＣの酸化状態に依存するので、ＨＡＮＯＸ化合物は本発明において有用である。
【0077】
さらに、ある種のフェナジン誘導体。特に、ある種のフェナジン誘導体は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、黄色ブドウ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、大腸菌、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｂｏｖｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓおよびＭｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｃａｎｉｓなどの多種多様な細菌、酵母および真菌に対して高い活性を示した。したがって、フェナジン誘導体は、農業における微生物起源の動物性疾患の処置において特に有用である。
【0078】
これらの誘導体に関する驚くべき知見は、使用条件下で組織に対する有害作用がないことであり、これらの誘導体を局所適用に特に適するものとしており、好ましくは組成物の０．０５重量％～１．０重量％の範囲の量で使用される。
【0079】
これらの誘導体は、局所適用において、例えば微粉化された粉末および粒状材料を含む固体またはゲル製剤において、ならびに溶液、懸濁液、濃縮物、チンキ剤、スラリーおよびエアロゾル、クリーム、ゲル、ゼリー、軟膏およびペーストを含む液体製剤において特に価値がある。
【0080】
ＦＤＡがメチレンブルーを薬物製剤中の賦形剤として承認しており、メチレンブルーは抗菌特性を有し、治療剤としてのその効果が光線力学的療法を使用して増強され得るので、メチレンブルーは、本発明において有用な別の特に好ましい色素である。
本発明において有用な多区画装置
本発明において有用な多区画装置
【0081】
図１は、本発明による製剤の即時生成のための例示的な多区画装置を示す概略図である。
【0082】
区画の数を含む装置の設計は、使用の仕様に適合させることができる。装置８は、ＡＰＩの固体前駆体を含有する第１の区画を伴うスクリューキャップ１からなり、ＡＰＩ－Ｐは乾燥形態（２）で表されている。スクリューキャップ１は、シールまたはポート３を一方向に回転させることによって、シールまたはポート３を開く能力を有し、活性化剤の水溶液を含み、溶液の最終オスモル濃度を体液と等オスモル濃度にするための予め計算された量の塩化ナトリウムも含む第２の区画４にＡＰＩ－Ｐを入れる。
所望の最終ｐＨを得るために、水中の活性化剤および必要に応じて、予め計算された量のその金属塩またはアミノ酸塩が、必要に応じて区画４、５または１０に予め充填され得る。４中のより小さな粒子は、ＡＰＩ－Ｐが活性化剤溶液中に急速に溶解してＡＰＩを生成していることを示している。第３の区画５は、それぞれの装置の技術的用途に応じて、酸化還元色素（ＲＯＤ）の溶液を含有するために、必要に応じて設けられる。区画４および５は、壁６によって隔てられている。区画４および５は、破壊可能な隔壁または壁７によって区画１０からも分離されている。必要に応じて、４および５と同じ高さの第４の区画は、ＡＰＩの安定化のために、アミノ酸、例えば必須もしくは非必須アミノ酸またはタウリンを含有することができる。簡単にするために、この図では、第４の区画１０は、必要に応じて純水、活性化剤溶液であってもよい。スクリューキャップ２を反対方向に回転させると、直ちに使用できる消毒剤溶液が装置から放出され、消毒のために関心対象の領域に適用され得る。本発明の一局面は、酸化塩素種である、スクリューキャップ２内の固体前駆体ＡＰＩ－Ｐである。多区画装置からの得られた溶液は、最終的に、水溶液中の増粘剤（ＶＥ）の溶液を生成するために使用され得る。前駆体成分と添加剤の混合を可能にするように機能する任意の多チャンバー装置が、瓶、袋、シリンジ、吸入器、手消毒装置、噴霧瓶、フラスコまたはタンクを含む本発明の文脈において有用である。上述したように、複雑な混合手順なしにベッドサイドまたは現場で容易に作動させることができ、周囲温度で保管することができる装置が好ましい。
所望の最終ｐＨを得るために、水中の活性化剤および必要に応じて、予め計算された量のその金属塩またはアミノ酸塩が、必要に応じて区画４、５または１０に予め充填され得る。４中のより小さな粒子は、ＡＰＩ－Ｐが活性化剤溶液中に急速に溶解してＡＰＩを生成していることを示している。第３の区画５は、それぞれの装置の技術的用途に応じて、酸化還元色素（ＲＯＤ）の溶液を含有するために、必要に応じて設けられる。区画４および５は、壁６によって隔てられている。区画４および５は、破壊可能な隔壁または壁７によって区画１０からも分離されている。必要に応じて、４および５と同じ高さの第４の区画は、ＡＰＩの安定化のために、アミノ酸、例えば必須もしくは非必須アミノ酸またはタウリンを含有することができる。簡単にするために、この図では、第４の区画１０は、必要に応じて純水、活性化剤溶液であってもよい。スクリューキャップ２を反対方向に回転させると、直ちに使用できる消毒剤溶液が装置から放出され、消毒のために関心対象の領域に適用され得る。本発明の一局面は、酸化塩素種である、スクリューキャップ２内の固体前駆体ＡＰＩ－Ｐである。多区画装置からの得られた溶液は、最終的に、水溶液中の増粘剤（ＶＥ）の溶液を生成するために使用され得る。前駆体成分と添加剤の混合を可能にするように機能する任意の多チャンバー装置が、瓶、袋、シリンジ、吸入器、手消毒装置、噴霧瓶、フラスコまたはタンクを含む本発明の文脈において有用である。上述したように、複雑な混合手順なしにベッドサイドまたは現場で容易に作動させることができ、周囲温度で保管することができる装置が好ましい。
【0083】
本発明による多区画装置は閉鎖された系であり、混合エラーを排除し、患者および職員への望ましくない曝露を回避するように設計することができ、Ｊｏｉｎｔ ＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎおよびＵＳＯ７９７ガイドラインを満たす。
【0084】
本発明において有用な設計の非限定的な例は、Ｂ ＢｒａｕｎのＤｕｐｌｅｘ Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ、Ｃｒｅｄｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ Ｓａｆｅｔｙ Ｓｙｒｉｎｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｄｕａｌ－Ｍｉｘマルチチャンバーバッグ、またはＡＰＩの直ちに使用できる製剤を生成するために１またはそれを超える液相中に混合するために固体または固体の混合物を放出するスクリューキャップを備えるＥａｓｙｒｅｃキットである。
光線力学的療法との抗菌目的のための本発明の使用
光線力学的療法との抗菌目的のための本発明の使用
【0085】
抗菌光線力学的療法（ａＰＤＴ）を使用した細菌の除去が、インプラント周囲炎処置において代替的治療様式を使用して示されている。したがって、ＯＣ、酢酸またはその塩、必要に応じて増粘剤を含む本製剤の別の好ましい態様は、例えば哺乳動物における創傷治癒または細菌感染症を改善するために、光線力学的療法を使用するためにメチレンブルーによって例示されるＲＯＤを含めることである。この場合には、本発明による生成物の投与部位に、色素の光線力学的効果の生成に適合した波長を有する光を照射することができる。
【0086】
Ｐｈｏｔｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ Ｐｈｏｔｏｄｙｎ．Ｔｈｅｒ．（２０１８），２３，ｐｐ３４７－３５２において、Ｓｏｕｚａらは、ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓに感染した歯根管に対する光線力学的療法に関連した次亜塩素酸塩溶液および反転回転器具の抗菌活性を示すために、光線力学的療法を使用した。しかしながら、試験溶液は抗菌性色素を欠いていた。これらの技術は、参照により本発明に含まれる。
ＡＰＩ製造のための段階的方法
ＡＰＩ製造のための段階的方法
【0087】
本発明は、活性化剤、例えば酢酸またはその塩と組み合わされた、塩素化された種の固体前駆体ＡＰＩ－Ｐの組成物および使用方法、ならびにその使用方法を提供する。例示的な方法は、以下の６つの工程を含む。
【0088】
１．以下に示される一般式Ｍｎ＋［Ｃｌ（Ｏ）ｘ］ｎ
ｎ－を有するＡＰＩ－Ｐの予め計算された量、式中、Ｍは任意のアルカリ金属、アルカリ土類金属または遷移金属イオンであり得、式中、ｎは整数１～５であり、ｘは整数１～４であり、ｙは整数１～２である。固体状態（ＡＰＩ－Ｐ）は、０．０１～１０００ｐｐｍの区間、好ましくは０．１～１００ｐｐｍの範囲で、ＯＣの形態で最終溶液中にＡＰＩの濃度を生成し、多区画装置の区画１中に装填される。ＡＰＩ－Ｐは、区間０．１～５００ｍＯｓｍ内の最終オスモル濃度を生成するための予め計算された量のＮａＣｌおよび必要に応じて任意の他の安定化固体と混合される。
【0089】
２．予め計算された量の、一般式Ｒ１ＸＯｎ（Ｒ２，）ｍを有する活性化剤、活性化剤は、好ましくは酢酸であり、必要に応じてその金属塩またはアンモニウム塩との混合物である。活性化剤を薬学的に許容され得る希釈剤、補助剤または担体に溶解して、０．０５～１０％の区間、好ましくは０．０８～０．５％の範囲、さらにより好ましくは０，１０～０，２％の範囲の活性化剤の濃度を生成する。ＡＰＩ－ＰがＮａＣｌと予め混合されていない場合、工程２における溶液は、工程からのＮａＣｌの量を含むことができ、いずれにしろ、０．１～５００ｍＯｓｍの区間、好ましくは１５０ｍＭのＮａＣｌに対応する約３００ｍＯｓｍの最終オスモル濃度を生成する。溶液の一定分量が、多区画装置の第２の区画中に装填される。
【0090】
３．本発明による主生成物を生成するために、区画１および２は、これらの区画中の内容物を混合するために、ポートを開くか、または第１の区画と第２の区画との間のシール、膜バリアを破壊した後、消毒剤溶液を生成するために周囲を圧迫するか、または振盪することによって混合される。得られた溶液は、使用前に多区画装置上のキャップを通して取り出すことができる。溶液は等張性であり、４～９、好ましくは５～６の区間のｐＨを有し、一般的には、抗菌目的のために、例えば、哺乳動物中の上気道のウイルス感染症と戦うために例えば喘息吸入器またはネブライザーを使用する吸入療法のために使用される。
【0091】
４．工程４における色指示薬が治療手順において、例えば乳腺炎の処置において情報を追加することができる用途のために、またはＡＰＩの酸化活性の指標のために、０．０１～１０００ｐｐｍの濃度範囲で色素の濃度を生成するために予め計算された量で、ＡＰＩの酸化状態によって変化する色を有する色素（ＲＯＤ）が、多区画装置の必要に応じて設けられる区画中に必要に応じて装填される。
【0092】
５．意図される用途に応じて、予め計算された量の、ＡＰＩの安定剤としてのアミノ酸、好ましくはＡＰＩと同じ濃度のタウリンが、多区画装置の必要に応じて設けられる区画中に必要に応じて、必要に応じて装填される。工程４は、生体表面への酸化ストレスを軽減するために行われる。
【0093】
６．意図する用途に応じて、０．０１～２５％の濃度範囲、好ましくは０．１～１０％の範囲、さらにより好ましくは０．２～１％の範囲で、ＡＰＩによって酸化され得ない水溶性増粘剤（ＶＥ）のある量を、工程４～５のうちの任意の工程と必要に応じて組み合わされた工程１～３の選択された順序から得られた溶液と混合する。０．０１～０．１％のＶＥ濃度は粘性であるが流動性の溶液を生成するのに対して、０．３～１％はゲルを生成する。皮膚または創傷用途では、粘性またはゲル形成生成物を生成するために、ＶＥを含む工程３における第３の区画を混合手順に含めることができる。
農業における本発明の使用
農業における本発明の使用
【0094】
農業では特に畜産農場では、細菌、ウイルスおよび真菌によって引き起こされる多くの種類の感染性疾患が農場の日常業務に影響を及ぼし、施設を運営する際のコストに影響を及ぼす。これらの状況では、本発明による設計された製剤は、治療的または予防的に作用し、皮膚感染症において特に有用である。
【0095】
重要な一例はウシの乳腺炎であり、これは米国の酪農産業に毎年約１７～２０億米ドルの負担をかけている。長期に抗生物質を与えられた雌牛からの乳は、残留薬物が系を出るまで市場性がないので、乳腺炎の効果的で環境に優しい処置は困難であることが判明している。牛の乳房および乳首内の感染は動物の主要な血流から離れているので、ワクチンは効果的ではない。処置を受けた雌牛に印を付けるために、酪農従事者はテープ片を貼り付けて警告し、処置された牛に印を付ける。
【0096】
したがって、本発明の好ましい局面は、ＯＣ、酢酸またはその塩、増粘剤ＶＥおよびメチレンブルーによって例示されるＲＯＤを含むゲルまたは粘性溶液を使用する乳腺炎の処置である。色の付いたゲルは、乳房および乳首の領域に留まり、酢酸は、乳首の皮膚内に浸透する能力を有し、色はテープ片の使用を不要にする。さらに、適用されたゲルは、ゲルの治療効果を増大させるために、適切な波長を有する光を使用して照射することができる。この場合には、有用な本製剤を与えるために、工程１～４および工程６を実施する。
水産養殖における本発明の使用
水産養殖における本発明の使用
【0097】
水質は、魚、カキ、小エビおよびエビによって例示される水産動物の養殖が成功するための必要条件である。開放水系は、ウイルス、細菌、シラミ、原生動物、真菌病原体、藻類および寄生虫のような生物をもたらすことが多い。食物生産にとって魅力的な水生生物種において高い死亡率をもたらす一般的なウイルス感染症は、コイヘルペスウイルス病、膵臓疾患（ＰＤ）および感染性サケ貧血症（ＩＳＡ）である。適切な水質または十分な量のきれいな水は、ほとんどの場合入手できない。従来技術における繁殖設備は、これらの感染種が繁殖種に接近し、影響を与えることを妨げる手段を有していないことが多い。さらに、一旦感染すると、これらの疾患に対して効率的な療法を提供するための効率的な治療法は存在しない。
【0098】
本発明による酸化塩素種ＯＣの好ましい態様は、これらすべての感染症および有害生物および細胞の効果的な処置である。本ＯＣの製剤は、これらの水媒介性病原体を抑制する上で高度に効果的である。例において、二酸化塩素は、先行技術における明確な問題を解決するのに有効な広域スペクトル殺生物剤である。本発明の製剤は、疾患を引き起こす微生物に対して破壊的な効果を有しながら、魚のえらまたは飼育種の任意の他の部分に害を与えることなく、例えば飼育されたサケを繰り返し処置するための特別なタンク中で使用されさえする。これらの用途では、工程１～３において、ＡＰＩ－ＰがＮａＯＣｌＯ２またはＣａ（ＯＣｌＯ２）２である調製物の列が区画１中に装填され、予め計算された量の酢酸と混合される。
本発明の抗ウイルス使用
本発明の抗ウイルス使用
【0099】
汚染された表面、機器、例えば医療機器、家具表面、ドアノブ、装置、衣類または人員の処置のための本明細書に開示される方法。本発明の製剤は、ゲル、水溶液として、または表面もしくは限定された空間中へのＡＰＩのミスト化もしくは気化によって適用することができる。製剤が要求に応じて調製されるという事実は、貯蔵分解の懸念なしに高効力の抗菌剤で領域を処置することを可能にする。
【0100】
本発明の方法は、感染性組織または体液によって汚染されたことが疑われる人員上にさえ、隙間および微小環境中への活性剤の分散を想定する。これらの製剤の気化は、耐性ウイルス性、細菌性または真菌性感染症に対する有益な治療的または予防的影響を可能にし得る。
【0101】
本発明の製剤は、実質的な毒性リスクなしに適用することができる。好ましい態様は、上気道におけるウイルス感染の処置である。したがって、本発明の系および方法は、気道におけるウイルス感染を処置する手段として酸化塩素ＯＣを提供する。本発明の組成物は、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳおよびＳＡＲＳ ＣｏＶ－２感染症を含むがこれに限定されない他の感染症を処置するのに有用である。周囲条件で保存されていた溶液の活性の欠如を評価する必要がないので、これは、本発明による多区画装置と組み合わされたＡＰＩの本前駆体を通じて初めて促進された。
【0102】
特に、ＯＣ、活性化剤、例えば酢酸、最終溶液のレオロジーを調節する賦形剤、オスモル濃度調節剤、例えば塩化ナトリウムの吸入可能な次亜塩素酸製剤。このような本製剤は、今では、ソフトミスト吸入器、ジェット式ネブライザー、超音波ネブライザーおよび振動メッシュネブライザーなどのネブライザーを介した送達方法と共に、現場で調製することができる。使用時に、吸入器およびネブライザーは、吸入による送達のために本発明の組成物をエアロゾル化する。
【0103】
エアロゾル化のための製剤は、乾燥粉末形態、溶液または懸濁液形態で提供され得る。微細な液滴、スプレーおよびエアロゾルは、鼻腔内または肺内ポンプディスペンサまたはスクイーズボトルによって送達することができる。組成物は、定量吸入器または乾燥粉末吸入器などの吸入器を介して吸入することもできる。組成物はまた、超音波ネブライザーなどのネブライザーを介して吸入することができ、吸入可能な製剤を介してＯＣおよび酢酸の組成物を直接気道に提供する。これは、ウイルスおよび他の微生物によって引き起こされる呼吸器系の感染症を予防および処置する。本発明によれば、本明細書に記載される製剤は、ウイルス感染の予防および処置に安全で、有効である。
【0104】
本発明の組成物はまた、呼吸器粘膜への送達を容易にするために、希釈剤などの薬学的に許容され得る担体を含み得る。担体は、生理食塩水などの水性担体であり得る。組成物は等張性であり得、血液および涙液と同じ浸透圧を有する。適切な非毒性の薬学的に許容され得る担体は当業者に公知である。様々な担体は、例えば、それが点滴剤として、またはスプレー、懸濁液、または肺送達のための別の形態として使用されるかどうかにかかわらず、組成物の異なる製剤に特に適し得る。
【0105】
吸入のための製剤は、乾燥粉末形態、溶液または懸濁液形態で提供され得る。組成物は、点滴剤、液滴およびスプレーを投与するための当技術分野で公知の様々な装置によって送達することができる。組成物は、滴下器、ピペットまたはディスペンサによって送達することができる。微細な液滴、スプレーおよびエアロゾルは、鼻腔内または肺内ポンプディスペンサまたはスクイーズボトルによって送達することができる。
【0106】
鼻腔内送達は、鼻腔スプレー装置を介して提供され得る。したがって、本発明による製剤は、経鼻スプレーとして設計され得る。鼻腔スプレーは、鼻の中に吹き込まれ、気道に送達される。
【0107】
ソフトミスト吸入器は、ばねに蓄えられた力学的エネルギーをユーザによる駆動によって使用して液体容器に圧力をかけ、ソフトミストの形態での吸入のために、含有される液体をノズルから噴霧させる。ソフトミスト吸入器は、動作のためにガス噴霧剤または電力に依存しない。ソフトミスト吸入器における平均液滴サイズは約５．８マイクロメートルである。
【0108】
ジェット式ネブライザーが最も一般的に使用されており、アトマイザーと呼ばれることもある。ジェット式ネブライザーは、圧縮ガス（例えば、空気または酸素）を使用して、そこから高速で放出されたときに液剤をエアロゾル化する。次いで、治療用溶液または懸濁液の得られたエアロゾル化された液滴は、処置のために使用者によって吸入される。圧縮ガスは、貯蔵容器内で予め圧縮され得るか、またはネブライザー内の圧縮機によって要望に応じて圧縮され得る。
【0109】
超音波ネブライザーは、溶液の治療用懸濁液のリザーバを通じて導かれたときに、吸入のために薬剤をエアロゾル化する高周波超音波を生成するために電子発振器に依存する。
【0110】
振動メッシュネブライザーは、吸入用の微細液滴ミストをエアロゾル化するために、液体リザーバの上部に数千の孔を有する膜の振動を使用する。振動メッシュネブライザーは、超音波ネブライザーの欠点のいくつかを回避し、処置時間が短縮され、噴霧されている液体の加熱がより少なくなったより効率的なエアロゾル化を提供する。
【0111】
ウイルス感染の処置は、酢酸と次亜塩素酸の相乗的組成物を使用して達成される。酢酸成分は、組織中に浸透するのに特に効果的であり、一方、次亜塩素酸は、組織の外面上の感染を処置するのに特に効果的である。上述のように、これらの組成物は、気道を処置するのに、および呼吸器感染を予防するのに有効である。
【0112】
ＮａＣｌで次亜塩素酸と酢酸の濃度のバランスをとることがウイルスの安全な処理を可能にするので、開示された組成物は特に効果的である。正確なバランスは、製剤、処置部位、さらには所望される表面浸透量に依存する。次亜塩素酸は、約５ｐｐｍ～最大約１０００ｐｐｍまたはそれを超えて存在することができる。異なる用途、異なる送達方法および組織の種類は、より高いまたはより低い濃度を必要とし得る。酢酸は、約０．１％～最大約５．０％またはそれを超えて、好ましくは約１．０％で存在し得る。２つの成分のバランスをとることにより、組成物は、それが適用される組織の表面および表面の下で処置するという二重の効果を有することができる。
【0113】
ＯＣが次亜塩素酸ＨＯＣｌである場合には、約１５～６０ｐｐｍの濃度のＯＣを有する本組成物が、通常、感染した肺の処置に十分である。ＯＣが二酸化塩素ＯＣｌ２である場合には、０、１～５ｐｐｍの濃度が通常十分である。
【0114】
いくつかの事例では、ウイルスを完全に破壊するために、またはウイルスが気道に入るのを防ぐために、組成物は、数秒～数分、１時間またはそれを超える範囲の長期間、ウイルスと接触すべきである。したがって、ある態様においては、組成物は、感染部位とのより長い接触時間を可能にするゲルの形態である。
【0115】
公知の抗ウイルス処置と組み合わせた組成物の使用は、組成物の有効性を増加させ得る。いくつかの態様において、本発明の方法は、１またはそれを超える用量の抗ウイルス物質の投与（本発明の組成物と同時にまたは逐次に）をさらに含む。これらには、アシクロビル、アデホビル、アダマンチン、ボセプレビル、ブリブジン（ｂｒｉｖｕｄｉｎ）、シドホビル、エムトリシタビン、エンテカビル、ファムシクロビル、ホミビルセン、ホスカルネット、ガンシクロビル、ラミブジン、ペンシクロビル、テラプレビル、テルビブジン、テノホビル、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビダラビン、ｍ２阻害剤、ノイラミニダーゼ阻害剤、インターフェロン、リバビリン、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非構造タンパク質５ａ（ｎｓ５ａ）阻害剤、ケモカイン受容体拮抗薬、インテグラーゼストランド転移阻害剤、プロテアーゼ阻害剤およびプリンヌクレオシドが含まれ得るが、これらに限定されない。
【0116】
本発明の組成物はまた、公知の抗菌処置と組み合わせて有用である。いくつかの態様において、本発明の方法は、シプロフロキサシン、アンピシリンまたはカルバペネム系などのベータラクタム抗生物質、アジスロマイシン、セファロスポリン、ドキシサイクリン、フシジン酸、ゲンタマイシン、リネゾリド、レボフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、リファンピン、テトラサイクリン、トブラマイシン、バンコマイシン、アミカシン、デフタジジム（ｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅ）、セフェピム、トリメトプリム／スルファメトキサゾール、ピペラシリン／タゾバクタム、アズトレアナム、メロペネム、コリスチンまたはクロラムフェニコールを含むがこれらに限定されない抗生物質の１またはそれを超える用量の投与（本発明の組成物と同時にまたは逐次に）をさらに含む。
【0117】
いくつかの態様において、本発明の方法は、アミノグリコシド、カルバセフェム、カルバペネム、第１世代セファロスポリン、第２世代セファロスポリン、第３世代セファロスポリン、第４世代セファロスポリン、グリコペプチド、マクロライド、モノバクタム、ペニシリン、ポリペプチド、キノロン、スルホンアミド、テトラサイクリン、リンコサミドおよびオキサゾリジノンを含むがこれらに限定されない抗生物質クラスからの抗生物質の１またはそれを超える用量の投与をさらに含む。いくつかの態様において、本発明の方法は、セルトラリン、ラセミ体および立体異性体形態のチオリダジン、過酸化ベンゾイル、タウロリジンおよびヘキシチジン（ｈｅｘｉｔｉｄｉｎｅ）を含むがこれらに限定されない非抗生性抗菌物質の投与を含む。
【0118】
組成物の投与計画は、組成物への曝露の量、頻度および期間を含み得る。投与計画は、感染の重症度、またはウイルス感染の処置もしくは予防のために処方される計画に依存し得る。
【0119】
組成物は、１日１回用量でまたは複数回の用量、例えば１日当たり２、３、４またはそれを超える用量で投与され得る。組成物を受ける対象は、数時間または数分間、組成物に曝露され得る。曝露の期間は、頻度、量または感染の重症度に依存し得る。
【0120】
固体前駆体から本溶液中に形成されるＡＰＩの１日の総量は、ＯＣの性質に応じて、０．０１～１０００ｍｇの範囲内であり得る。実際の投与量は、投与される具体的な組成物、投与様式、および当技術分野で公知の他の要因に応じて変化し得る。
【0121】
組成物は、呼吸上皮、鼻腔、鼻上皮、咽頭、食道、喉頭、喉頭蓋、気管、気管分岐部、気管支、細気管支または肺など、気道の任意のメンバーに投与され得る。組成物を気道に投与することにより、ウイルスによって伝播される任意の疾患または障害が処置予防される。
【0122】
ある特定の他の態様において、本発明の組成物は、例えば、部屋全体、施設医療機器および手術器具を消毒するために使用することができる。医療機器の供給品は、最初は無菌であることが多いが、追加のまたはその後の洗浄および消毒または滅菌を必要とし得る。特に、任意の公知の技術を使用して、再使用のる前に、再使用可能な医療機器を滅菌または消毒することは特に重要である。組成物は、を使用して医療機器に適用することができる。例えば、機器の表面上に組成物を拭くかもしくは広げることによって、機器上に組成物のエアロゾルもしくはミスト形態を噴霧することによって、ある量の組成物を含有する容器内に機器を浸漬することによって、または蛇口などからの組成物の流れの中に機器を配置することによって、組成物を適用することができる。これに加えてまたはこれに代えて、医療機器および手術器具はまた、組成物中に沈めて保存され、使用時に取り出され得る。
【0123】
開示される組成物のいくつかは、２％またはそれを超える酢酸を含有し、ＯＣと組み合わせた場合、皮膚および他の組織を処置するのに安全かつ有効であることが証明されている。これらの組成物中のＯＣは、酢酸の調節効果を有することが見出された。これにより、組成物は、組織に害を引き起こすことなく酢酸の消毒特性を利用することが可能となる。
ＣＯＶＩＤ－１９処置および他の呼吸器感染性疾患のための本発明の使用
ＣＯＶＩＤ－１９処置および他の呼吸器感染性疾患のための本発明の使用
【0124】
前述のように、一局面において、本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む呼吸器感染症を処置し、その拡散の予防する安全で効果的な手段を提供するために開発された消毒組成物に関する。
【0125】
ＳＡＲＳ感染症を処置する上で使用するための組成物は、次亜塩素酸をベースとする、噴霧される広域抗ウイルスおよび抗菌吸入溶液を含む。より具体的には、製剤は、酢酸（約０．２５％）で安定化され、好ましい抗菌効果を有するＨＯＣｌの持続可能な濃度をもたらす次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）（２５ｐｐｍ～２００ｐｐｍ）を含む。酢酸の添加はＨＯＣｌ安定性を増加させ、したがって延長した貯蔵寿命を有する処置を開発することを可能にする。さらに、組成物は、５．５の増加したｐＨおよび等張性で製剤化され、それによって気道内での忍容性を増加させる。
【0126】
本発明の組成物は、特にエンベロープを有するウイルスに対して特有の殺ウイルス特性を有し、優れた抗ウイルス活性を提供する。したがって、このような組成物は、例えばＣＯＶＩＤ－１９の処置および予防に特に有用であり得る。より具体的には、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２および多くの他のウイルスは、呼吸器系中のヒト細胞への 「ドアオープナー」 と呼ばれる表面タンパク質（すなわち、スパイクタンパク質）を有する。これらのスパイクタンパク質は、ＨＯＣｌによる酸化に対して脆弱な－ＳＨ基を含む。低濃度のＨＯＣｌは、正常な組織および細胞内酵素に対して無害でありながら、細胞外－ＳＨ基（例えば、ウイルスのスパイクタンパク質）を酸化する可能性が高い。したがって、本発明の組成物の抗ウイルス効果は、最初の曝露時、感染中、およびビリオンが細胞内にあり、その後ヒト気道細胞によって放出されるときに、気道内のウイルス粒子を破壊することができる。したがって、特にエンベロープを有するウイルスに対する、本発明の組成物の特有の殺ウイルス特性によって、本発明の組成物は、コロナウイルスの拡散を防止するための継続的な努力において強力なツールとなり得る。世界中でのコロナウイルスの病原性を考慮すると、このような組成物は、特に前例のない必要時に、ＣＯＶＩＤ－１９患者の広範な集団の間で疾患の期間および症候の重症度を軽減することができる。
【0127】
表１（下記）は、２５ｐｐｍ～２００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％酢酸からなる本発明の組成物の成分のリストを提供する。
不活性ガス：アルゴン（１００％）
＊次亜塩素酸ナトリウム溶液は、別のＧＭＰ産生剤に変更され得る。
【表1】
＊次亜塩素酸ナトリウム溶液は、別のＧＭＰ産生剤に変更され得る。
【0128】
本発明の好ましい組成物中の活性成分は、次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）である。この活性成分は、アルカリｐＨでの、気体状Ｃｌ２の水との反応から水溶液として生産される次亜塩素酸ナトリウムに由来する。３％ＮａＯＣｌが生産され、最大２００ｐｐｍ（０．０１％ｗ／ｗ）のＨＯＣｌに達するように、最終ＩＳに添加される。組成物の他の成分には、以下が含まれる：水酸化ナトリウム、Ｐｈ．Ｅｕｒ．／ＵＳＰ－ＮＦグレード、必要とされるｐＨ（５．５）になるように０．１Ｍ溶液を添加；ｐＨ安定剤 酢酸、Ｐｈ．Ｅｕｒ．／ＵＳＰ－ＮＦグレードの氷酢酸、０．２５％；オスモル濃度調整剤 塩化ナトリウム、Ｐｈ．Ｅｕｒ．／ＵＳＰ－ＮＦグレード、等張製剤（３０３ｍＯｓｍ）に達するように添加；精製水、逆浸透によって精製され、イオン交換過程によってまたはＰｈ．Ｅｕｒ．／ＵＳＰ－ＮＦモノグラフに従って脱イオンされた水。
【0129】
組成物の好ましい臨床投与量は、５ｍＬの２５～１００ｐｐｍの次亜塩素酸である。最終生成物は、０．２５％酢酸緩衝液も含有する。したがって、溶液は、９９．１％を超えるＨＯＣｌおよび０．９％未満のＯＣｌ－を含有する。ＨＯＣｌはＩＳ中の活性物質であり、同等濃度のＯＣｌ－と比較して、殺菌剤として８０倍効果的であることが明らかとなっている。したがって、ＨＯＣｌは、ＡＰＩであり、かつ最終生成物中で微生物の増殖を阻害するための抗菌剤として作用するという二重の効果をＩＳ中で果たす。組成物は、プラスチックＰＥＴバイアル／瓶に入れて提供され得る。患者への投与前に、組成物は、ネブライザー／吸入装置リザーバに移される。この移動は診療所で行われる。ネブライザーに移された後、溶液は、液体エアロゾル送達を通じて、患者に直ちに（１～２時間以内に）投与される。患者は、５ｍＬの噴霧された組成物を受けるべきである。
【0130】
ウイルス投与のための組成物は、典型的には単回投与であり、例えば、ＰＡＲＩ ＢＯＹを使用して、噴霧によって気道に送達される。ネブライザーＰＡＲＩ ＢＯＹ Ｃｌａｓｓｉｃ Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍは、ＰＡＲＩ ＢＯＹ Ｃｌａｓｓｉｃ Ｃｏｍｐｒｅｓｓｏｒ、ＰＡＲＩ ＬＣ ＳＰＲＩＮＴネブライザーを含む。下気道および上気道における試験溶液の適切な堆積を得るために、ネブライザーにはＰＡＲＩ ＳＭＡＲＴＭＡＳＫが装備される。他のネブライザーおよび吸入器を使用し得ることに留意されたい。
【0131】
ＨＯＣｌは、身体自体の免疫細胞、すなわち好中球および単球／マクロファージによって産生される。ＨＯＣｌは、分子構造、特にチオール、チオール－エーテル、およびアミノ基を有する分子構造（例えば、タンパク質、脂肪酸）を塩素化および酸化し、広範囲の微生物の変性および正常な機能の喪失をもたらす強力な酸化剤である。ＨＯＣｌは、ＦＤＡによって、「広範囲の微生物に対して最も高い殺菌活性を有する遊離の利用可能な塩素の形態」であると考えられている。ＨＯＣｌは強力な酸化剤であるが、低濃度（≦０．１％）では、創傷ケア用途において極めて良好に忍容され、安全である。
参照による組み入れ
参照による組み入れ
【0132】
本開示を通じてなされた、特許、特許出願、特許公報、雑誌、書籍、論文、ウェブコンテンツなどの他の文書に対する一切の参照および引用は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
均等物
均等物
【0133】
本発明は、その精神または本質的な特徴から逸脱することなく、他の具体的な形態で具体化されてもよい。したがって、前述の態様は、本明細書に記載されている発明を限定するものではなく、あらゆる点で例示的であると見なされるべきである。
【実施例】
【0134】
実施例
［実施例１］
実施例１：多区画装置中に装填するためのＡＰＩ－ＰとＮａＣｌの乾燥した、空気を含まない固体混合物の調製のための一般的手順。
１ａ．塩化ナトリウム中に５０ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
８．９５ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、５０ｍｇの乾燥した次亜塩素酸ナトリウム（分子量：７４．４４ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｂ．塩化ナトリウム中に１００ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
［実施例１］
実施例１：多区画装置中に装填するためのＡＰＩ－ＰとＮａＣｌの乾燥した、空気を含まない固体混合物の調製のための一般的手順。
１ａ．塩化ナトリウム中に５０ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
８．９５ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、５０ｍｇの乾燥した次亜塩素酸ナトリウム（分子量：７４．４４ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｂ．塩化ナトリウム中に１００ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
【0135】
８．９０ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、１００ｍｇの乾燥した次亜塩素酸ナトリウム（分子量：７４．４４ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｃ．塩化ナトリウム中に２００ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
１ｃ．塩化ナトリウム中に２００ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
【0136】
８．８ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、２００ｍｇの乾燥した次亜塩素酸ナトリウム（分子量：７４．４４ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｄ．塩化ナトリウム中に５００ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
１ｄ．塩化ナトリウム中に５００ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
【0137】
８．５ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、５００ｍｇの乾燥した次亜塩素酸ナトリウム（分子量：７４．４４ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｅ．塩化ナトリウム中に２５ｐｐｍの二次亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
１ｅ．塩化ナトリウム中に２５ｐｐｍの二次亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
【0138】
８．９７５ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、２５ｍｇの乾燥した次亜塩素酸カルシウム（ｃａｌｉｕｍ）（分子量：１４２．９８ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｆ．塩化ナトリウム中に５０ｐｐｍの二次亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
１ｆ．塩化ナトリウム中に５０ｐｐｍの二次亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
【0139】
８．９７５ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、５０ｍｇの乾燥した次亜塩素酸カルシウム（ｃａｌｉｕｍ）（分子量：１４２．９８ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｇ．塩化ナトリウム中に１００ｐｐｍの二次亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
１ｇ．塩化ナトリウム中に１００ｐｐｍの二次亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
【0140】
８．９ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、１００ｍｇの乾燥した次亜塩素酸カルシウム（ｃａｌｉｕｍ）（分子量：１４２．９８ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｈ．塩化ナトリウム中に１００ｐｐｍの二次亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
１ｈ．塩化ナトリウム中に１００ｐｐｍの二次亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
【0141】
８．９ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、１００ｍｇの乾燥した次亜塩素酸カルシウム（ｃａｌｉｕｍ）（分子量：１４２．９８ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｉ．塩化ナトリウム中に１００ｐｐｍの二次亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
１ｉ．塩化ナトリウム中に１００ｐｐｍの二次亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
【0142】
８．９ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、１００ｍｇの乾燥した次亜塩素酸カルシウム（分子量：１４２．９８ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｊ．塩化ナトリウム中に１ｐｐｍの亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
１ｊ．塩化ナトリウム中に１ｐｐｍの亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
【0143】
８９．９９ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、１０ｍｇの乾燥した亜塩素酸ナトリウム（分子量：９０．４４ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｋ．塩化ナトリウム中に５ｐｐｍの亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
１ｋ．塩化ナトリウム中に５ｐｐｍの亜塩素酸ナトリウムを含む乾燥粉末の製造
【0144】
８９．９９ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、５０ｍｇの乾燥した亜塩素酸ナトリウム（分子量：９０．４４ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
１ｌ．塩化ナトリウム中に１０ｐｐｍの亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
１ｌ．塩化ナトリウム中に１０ｐｐｍの亜塩素酸カルシウムを含む乾燥粉末の製造
【0145】
８９．９９ｇの乾燥したＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）中に、１００ｍｇの乾燥した亜塩素酸カルシウム（分子量：１５７．８９ｇ／ｍｏｌ）を均質な混合された粉末になるように混合し、遮光された容器内で、空気を含まない乾燥した条件下で保存した。９０ｍｇの粉末の一定分量を多区画装置の区画１中に装填する。
【0146】
［実施例２］
実施例２：多区画装置中への少量の一定分量装填のための活性化剤の１Ｌ原液の調製のための一般的手順
２ａ．酢酸活性化剤原液（０．１２５％、ｐＨ２．９５）
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、１．２５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）を溶解した。
２ｂ．酢酸活性化剤原液（０．１２５％、ｐＨ４．３）
実施例２：多区画装置中への少量の一定分量装填のための活性化剤の１Ｌ原液の調製のための一般的手順
２ａ．酢酸活性化剤原液（０．１２５％、ｐＨ２．９５）
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、１．２５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）を溶解した。
２ｂ．酢酸活性化剤原液（０．１２５％、ｐＨ４．３）
【0147】
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、１．２５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）を溶解した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを４．３に調整した。
２ｃ．酢酸活性化剤原液（０．２５％、ｐＨ４．３）
２ｃ．酢酸活性化剤原液（０．２５％、ｐＨ４．３）
【0148】
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、２．５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）を溶解した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを４．３に調整した。
２ｄ．酢酸活性化剤原液（０．２５％、ｐＨ５．０）
２ｄ．酢酸活性化剤原液（０．２５％、ｐＨ５．０）
【0149】
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、２．５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）を溶解した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを５．０に調整した。
２ｅ．酢酸活性化剤原液（１％、ｐＨ４．３）
２ｅ．酢酸活性化剤原液（１％、ｐＨ４．３）
【0150】
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、１０ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）を溶解した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを４．３に調整した。
２ｆ．酢酸活性化剤原液（２％、ｐＨ４．３）
２ｆ．酢酸活性化剤原液（２％、ｐＨ４．３）
【0151】
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、２０ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）を溶解した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを４．３に調整した。
２ｇ．酢酸／酢酸ナトリウム活性化剤原液（０．１Ｍ、ｐＨ５．０）
２ｇ．酢酸／酢酸ナトリウム活性化剤原液（０．１Ｍ、ｐＨ５．０）
【0152】
８００ｍＬの蒸留水中で、５．７７２ｇの酢酸ナトリウム（分子量：８２ｇ／ｍｏｌ）、１．７７８ｇの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）を溶液に加えた。１０Ｎ ＨＣｌまたは１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを５．０に調整し、体積が１Ｌになるまで蒸留水を添加した。
２ｈ．等張酢酸活性化剤原液（０．１２５％、ｐＨ２．９５）
２ｈ．等張酢酸活性化剤原液（０．１２５％、ｐＨ２．９５）
【0153】
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、１．２５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）および８．４ｇのＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）を添加した。
２ｉ．等張酢酸活性化剤原液（０．１２５％、ｐＨ４．３）
２ｉ．等張酢酸活性化剤原液（０．１２５％、ｐＨ４．３）
【0154】
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、１．２５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）および８．４ｇのＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）を添加した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを４．３に調整した。
２ｊ．等張酢酸活性化剤原液（０．２５％、ｐＨ４．３）
２ｊ．等張酢酸活性化剤原液（０．２５％、ｐＨ４．３）
【0155】
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、２．５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）および８．４ｇのＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）を添加した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを４．３に調整した。
２ｋ．等張酢酸活性化剤原液（０．１２５％、ｐＨ５．０）
２ｋ．等張酢酸活性化剤原液（０．１２５％、ｐＨ５．０）
【0156】
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、１．２５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）および８．４ｇのＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）を添加した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを５．０に調整した。
２ｌ．等張酢酸活性化剤原液（０．２５％、ｐＨ５．０）
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、２．５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）および８．４ｇのＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）を添加した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを５．０に調整した。
２ｍ．等張酢酸／酢酸ナトリウム活性化剤原液（０．１Ｍ、ｐＨ５．０）
２ｌ．等張酢酸活性化剤原液（０．２５％、ｐＨ５．０）
９９８．７５ｍＬの無菌水中に、２．５ｍＬの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）および８．４ｇのＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）を添加した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを５．０に調整した。
２ｍ．等張酢酸／酢酸ナトリウム活性化剤原液（０．１Ｍ、ｐＨ５．０）
【0157】
８００ｍＬの蒸留水中で、５．７７２ｇの酢酸ナトリウム（分子量：８２ｇ／ｍｏｌ）、１．７７８ｇの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）および８．４ｇのＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）を溶液に加えた。１０Ｎ ＨＣｌまたは１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを５．０に調整し、体積が１Ｌになるまで蒸留水を添加した。
２ｎ．酢酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ５．０）
２ｎ．酢酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ５．０）
【0158】
８００ｍＬの無菌水中で、５．７７２ｇの酢酸ナトリウム（分子量：８２ｇ／ｍｏｌ）、１．７７８ｇの酢酸（分子量：６０．０５ｇ／ｍｏｌ）を溶液に加えた。１０Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨを５．０に調整し、体積が１Ｌになるまで蒸留水を添加した。
２ｏ．ＡＣＥＳ緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．７）
２ｏ．ＡＣＥＳ緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．７）
【0159】
８００ｍＬの無菌水中で、１８．２２ｇのＮ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（分子量：１８２．２ｇ／ｍｏｌ）を溶液に添加した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いて、ｐＨを用いて６．７にｐＨを調整し、体積が１Ｌになるまで蒸留水を添加した。
２ｐ．クエン酸溶液（０．１Ｍ、ｐＨ２．２）
２ｐ．クエン酸溶液（０．１Ｍ、ｐＨ２．２）
【0160】
１９．２ｇの量のクエン酸（分子量：１９２．１ｇ／ｍｏｌ）を１Ｌの無菌水中に溶解した。
２ｑ．クエン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．０）
２ｑ．クエン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．０）
【0161】
８００ｍＬの無菌水中で、１２．０４４ｇのクエン酸ナトリウム（分子量：２９４．１ｇ／ｍｏｌ）および１１．３４１ｇのクエン酸（分子量：１９２．１ｇ／ｍｏｌ）を溶液に添加した。０．１Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを６．０に調整し、体積が１Ｌになるまで蒸留水を添加した。
２ｒ．ＡＤＡ緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．６）
２ｒ．ＡＤＡ緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．６）
【0162】
８００ｍＬの無菌水中で、９５．１１ｇの２－［（２－アミノ－２－オキソエチル）－（カルボキシメチル）アミノ］酢酸（ＡＤＡ、分子量：１９０．２２ｇ／ｍｏｌ）を溶液に添加した。１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨを用いてｐＨを６．６に調整するとＡＤＡが溶解し、体積が１Ｌになるまで蒸留水を加えた。
２ｓ．色素フェノールレッド（ｐＨ７．０）を含むＥＢＢＳ緩衝液
２ｓ．色素フェノールレッド（ｐＨ７．０）を含むＥＢＢＳ緩衝液
【0163】
８００ｍＬの無菌水中で、２００ｍｇのＣａＣｌ２（分子量：１１０．９８ｇ／ｍｏｌ）、２００ｍｇのＭｇＳＯ４－７Ｈ２Ｏ（分子量：２４６．４７ｇ／ｍｏｌ）、４００ｍｇのＫＣｌ（分子量：７５ｇ／ｍｏｌ）、２．２ｇのＮａＨＣＯ３（分子量：８４．０１ｇ／ｍｏｌ）、６．８ｇのＮａＣｌ（分子量：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）、１４０ｍｇのＮａＨ２ＰＯ４Ｈ２Ｏ（分子量：１３８ｇ／ｍｏｌ）、１ｇのＤ－グルコース（デキストロース）（分子量：１８０．１６ｇ／ｍｏｌ）および１０ｍｇのフェノールレッドＰｈｅｎｏｌ Ｒｅｄ（分子量：３５４．３８ｇ／ｍｏｌ）を溶液に添加した。ＨＣｌまたはＮａＯＨを使用して、溶液のｐＨを７．０または別の所望のｐＨに調整した。
２ｔ．無菌等張酸素化水
２ｔ．無菌等張酸素化水
【0164】
酸素で飽和された１Ｌの無菌水のストック体積に９ｇのＮａＣｌを添加し、遮光した密閉ボトル内において室温で保存する。
【0165】
［実施例３］
実施例３：実施例１からの溶液と組み合わせた酸化塩素の固体塩からの即時使用可能な消毒製剤の即時調製。
実施例３．１：一般的手順の非限定的な工程
１．実施例１からの粉末のいずれかの９０ｍｇの一定分量を、多区画装置の区画４中に装填する。
実施例３：実施例１からの溶液と組み合わせた酸化塩素の固体塩からの即時使用可能な消毒製剤の即時調製。
実施例３．１：一般的手順の非限定的な工程
１．実施例１からの粉末のいずれかの９０ｍｇの一定分量を、多区画装置の区画４中に装填する。
【0166】
２．実施例２からの活性化剤溶液のいずれかの１０ｍＬの一定分量を、多区画装置の区画４中に装填する。
【0167】
３．本発明による主生成物を生成するために、スクリューキャップと区画４の間の図１によるシール、バリアまたはポート３を破壊または開放して、区画１中の内容物を区画４中の溶液と混合した後、穏やかに絞るか、または振盪して消毒剤溶液を生成する。得られた溶液は、多区画装置上のスクリューキャップを取り外した後に開口部を通して取り出すことができ、直ちに使用することができる。等張溶液は、４～９、好ましくは５～６の区間のｐＨを有し、一般に抗菌目的で使用される。
【0168】
４．必要に応じて、意図される用途に応じて、０．０１～１０００ｐｐｍの濃度範囲の色素の濃度を生成するために、予め計算された量の、ＡＰＩの酸化状態によって変化する色を有する固体形態の水溶性染料（ＲＯＤ）が、必要に応じて多区画装置の区画９内に装填され、区画１、４および９の混合物を含めて３．の手順が繰り返される。
【0169】
５．必要に応じて、意図される用途に応じて、ＡＰＩの安定剤としてのアミノ酸、好ましくはＡＰＩと同じ濃度のタウリンの予め計算された量が、必要に応じて多区画装置の区画５内に装填され、区画１、４および５の混合物を含めて３．の手順が繰り返される。
【0170】
６．必要に応じて、意図される用途、例えば皮膚または創傷への適用に応じて、０．０１～２５％の濃度範囲の最終溶液中のＶＥの濃度を得るために、予め計算された、ＡＰＩによって酸化され得ない水溶性増粘剤（ＶＥ）の量が、多区画装置の区画５に装填される。０．０１～０．１％のＶＥ濃度は粘性であるが流動性の溶液を生成するのに対して、０．３～１％はゲルを生成する。工程３、４および／または５からの溶液中のＶＥの分散液は、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ ＭｉｘｅｒまたはＹｓｔｒａｌ Ｍｉｘｅｒを使用して粘性溶液またはゲルに変換され、皮膚または創傷適用のために現場で使用される。粘性溶液またはゲルは、分子の動きがより遅いために増大した安定性を有し、後に使用するために溶液またはゲルを空気および光から保護する柔らかい袋、瓶に詰められ得る。
【0171】
［実施例４］
実施例４：ＨＯＣｌおよび酢酸の実施例３の試験溶液のインビトロ抗バイオフィルム効果。
実施例４：ＨＯＣｌおよび酢酸の実施例３の試験溶液のインビトロ抗バイオフィルム効果。
【0172】
３つの異なる試験溶液を多区画装置から生成した。３つの試験溶液はすべて、実施例３．１に記載されているように、塩化ナトリウム中に２００ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む９０ｍｇの乾燥粉末（実施例１ｃ）を区画１中に装填された多区画装置から生成される。３つの異なる多区画装置中の区画４中のからの１０ｍＬの酢酸溶液（０．１２５％、ｐＨ４．３、実施例２ｂ）の３つの一定分量。溶液１：（０．２５％、ｐＨ４．３、実施例２ｃ）、溶液２：（１％、ｐＨ４．３、実施例２ｅ）、溶液３：（２％、ｐＨ４．３、実施例２ｆ）。
実験の設定
実験の設定
【0173】
試験生物：緑膿菌または黄色ブドウ球菌野生株 バイオフィルムの型：０．５％グルコースを補充した固化培地上に配置された半透膜上で増殖させた４８時間または２４時間齢のバイオフィルム。４８時間齢のバイオフィルムの場合、バイオフィルムを有する膜を２４時間後に新しいプレート上に移した。
最初の生細胞量：５×１０９コロニー形成単位（ＣＦＵ）
最初の生細胞量：５×１０９コロニー形成単位（ＣＦＵ）
【0174】
処理方法：バイオフィルムを含む膜を新しいプレートに移した。８～１０層の無菌ガーゼを第２の膜上に置き、１ｍｌの抗菌溶液をガーゼ層上にピペットで添加した。処理は、室温で２～３時間、または４～６時間行った。４～６時間の処理の場合、処理を開始した２または３時間後に、ガーゼ層を、１ｍｌの試料溶液を含む新しいガーゼ層と交換した。
【0175】
評価方法：ガーゼ層を廃棄し、バイオフィルムを有する各膜を、５ｍｌの０．９％ＮａＣｌを含有する１５ｍｌチューブ中に移し、１０秒間ボルテックス撹拌し、超音波浴中で１０分間超音波処理し、再び１０秒間ボルテックス撹拌した。１０倍段階希釈を行い、生存ＣＦＵ計数のために１０ｕｌの各希釈物をＬＢプレートにスポットプレートした。
結果および結論
結果および結論
【0176】
図２は、試料溶液を用いて得られた結果を示す。２００ｐｐｍＨＯＣｌ溶液中のＨＡｃ濃度を０．２５％から１％および２％に増加させると、黄色ブドウ球菌バイオフィルムの死滅が徐々に増加した。１％酢酸単独の効果は、バイオフィルムにわずかな効果しか及ぼさなかった。３つの試験溶液を市場で販売されている４つの異なる競合する創傷治癒製品と比較したが、これらの製品はすべて、黄色ブドウ球菌バイオフィルムに対してわずかな効果しか示さなかった。緑膿菌由来のバイオフィルムに対してはさらに強い効果が示された。ｐＨ４．３の次亜塩素酸および酢酸は、他の研究で安全であることが示されている濃度で相乗的かつ効率的に作用すると結論付けられる。
【0177】
［実施例５］
実施例５：インビボ毒性研究
実施例５．１：ラットにおける７日間の吸入毒性研究。
Ｋｏｇｅｌらによって、２９１３年に、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｐｍｉｓｃｉｅｎｃｅ．ｃｏｍ／ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ｄｏｃｓ／ｄｅｆａｕｌｔ－ｓｏｕｒｃｅ／ｄｅｆａｕｌｔ－ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｌｉｂｒａｒｙ／２０１３＿ｕｋｏｇｅｌ＿ｉｃｔ＿ｐｏｓｔｅｒ．ｐｄｆ？ｓｆｖｒｓｎ＝ｄ６ａ９ｆ６０６＿０に記載されたように、ラットにおける７日間の吸入毒性研究を行う。ラット吸入研究は、経済協力開発機構（ＯＥＣＤ）に従って実施する。試験溶液は、実施例３．１に記載されているように、塩化ナトリウム中に１００ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む９０ｍｇの乾燥粉末（実施例１ｂ）が区画１中におよび１０ｍＬの酢酸溶液（０．１２５％、ｐＨ４．３、実施例２ｂ）の一定分量が区画４中に装填された多区画装置から生成される。試験ガイドライン４１２、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを、参照としての濾過された新鮮な空気（シャム）または試験溶液に曝露する。動物の管理および使用は、米国実験動物科学協会規約（１９９６）に従う。すべての動物実験は、動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されている。組織病理学的評価は、定義された等級付けシステムに従って、鼻および左肺の定義された解剖学的部位で行われる。フローサイトメトリーによって遊離の肺細胞を気管支肺胞洗浄液中で決定し、炎症メディエータを多重分析物プロファイリング（ＭＡＰ）によって測定する。Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙアプローチのために、気道中の特定の部位、すなわち呼吸鼻上皮（ＲＮＥ）および肺からＲＮＡ試料を得る。肺ＲＮＡ単離のために、主気管支および肺実質の呼吸上皮をＬａｓｅｒ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ（ＬＣＭ）によって分離し、さらに処理し、全ゲノムＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘマイクロアレイ（ＧｅｎｅＣｈｉｐ（登録商標）Ｒａｔ Ｇｅｎｏｍｅ ２３０ ２．０ Ａｒｒａｙ）上で分析する。気管支または肺実質における炎症、細胞ストレス、細胞増殖に関連する大きな撹乱は見られない。
［実施例６］
実施例６：乳腺炎の処置
実施例５：インビボ毒性研究
実施例５．１：ラットにおける７日間の吸入毒性研究。
Ｋｏｇｅｌらによって、２９１３年に、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｐｍｉｓｃｉｅｎｃｅ．ｃｏｍ／ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ｄｏｃｓ／ｄｅｆａｕｌｔ－ｓｏｕｒｃｅ／ｄｅｆａｕｌｔ－ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｌｉｂｒａｒｙ／２０１３＿ｕｋｏｇｅｌ＿ｉｃｔ＿ｐｏｓｔｅｒ．ｐｄｆ？ｓｆｖｒｓｎ＝ｄ６ａ９ｆ６０６＿０に記載されたように、ラットにおける７日間の吸入毒性研究を行う。ラット吸入研究は、経済協力開発機構（ＯＥＣＤ）に従って実施する。試験溶液は、実施例３．１に記載されているように、塩化ナトリウム中に１００ｐｐｍの次亜塩素酸ナトリウムを含む９０ｍｇの乾燥粉末（実施例１ｂ）が区画１中におよび１０ｍＬの酢酸溶液（０．１２５％、ｐＨ４．３、実施例２ｂ）の一定分量が区画４中に装填された多区画装置から生成される。試験ガイドライン４１２、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを、参照としての濾過された新鮮な空気（シャム）または試験溶液に曝露する。動物の管理および使用は、米国実験動物科学協会規約（１９９６）に従う。すべての動物実験は、動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されている。組織病理学的評価は、定義された等級付けシステムに従って、鼻および左肺の定義された解剖学的部位で行われる。フローサイトメトリーによって遊離の肺細胞を気管支肺胞洗浄液中で決定し、炎症メディエータを多重分析物プロファイリング（ＭＡＰ）によって測定する。Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙアプローチのために、気道中の特定の部位、すなわち呼吸鼻上皮（ＲＮＥ）および肺からＲＮＡ試料を得る。肺ＲＮＡ単離のために、主気管支および肺実質の呼吸上皮をＬａｓｅｒ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ（ＬＣＭ）によって分離し、さらに処理し、全ゲノムＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘマイクロアレイ（ＧｅｎｅＣｈｉｐ（登録商標）Ｒａｔ Ｇｅｎｏｍｅ ２３０ ２．０ Ａｒｒａｙ）上で分析する。気管支または肺実質における炎症、細胞ストレス、細胞増殖に関連する大きな撹乱は見られない。
［実施例６］
実施例６：乳腺炎の処置
【0178】
工程４における色指示薬が治療手順において情報を追加することができる用途のために、例えばＡＰＩの酸化活性の指標においてまたは指標のために、ＲＯＤを含む区画が手順中に含められる。
［実施例７］
実施例７：臨床的抗ウイルス療法
［実施例７］
実施例７：臨床的抗ウイルス療法
【0179】
実施例３．１に記載されているように、塩化ナトリウム中に１ｐｐｍの亜塩素酸ナトリウムを含む９０ｍｇの乾燥粉末（実施例１ｊ）が区画１中におよび１０ｍＬのクエン酸溶液（０．１Ｍ、ｐＨ２．２、実施例２ｐ）の一定分量が区画４中に装填された多区画装置から生成された５ｍＬの試験溶液を、Ｇｉｍａ Ａｅｒｏｓｏｌ Ｃｏｒｓｉａ Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒのメディシンカップに装填した。コロナウイルス肺感染症を有する患者の口をネブライザーに取り付けられたホースおよびフェイスマスクに取り付け、ネブライザーを始動する。１０～１５分の呼吸の後、流体は使い尽くされ、ネブライザーを停止させる。処置の副作用が生じていないことを確実にするために、患者は数時間監視される。潜在的な副作用について、患者の粘膜および繊毛を調べる。
［実施例８］
実施例８：吸入溶液（ＩＳ）の薬理学
［実施例８］
実施例８：吸入溶液（ＩＳ）の薬理学
【0180】
改変ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）に対する組成物の吸入溶液（ＩＳ）のウイルス不活性化特性を調べた。５０、１００および２００ｐｐｍのＨＯＣｌ（ｐＨ５．５）のＩＳ生成物（および希釈された５０％溶液）はウイルス不活化特性を示し、ウイルス不活化を示すＩＳ生成物の最低濃度が２５ｐｐｍ ＨＯＣｌであることを示唆した。さらなる希釈物を試験し、５、１０および２０ｐｐｍの濃度の希釈溶液はウイルス不活化および効果を示さず、活性がないより低い範囲が実証されたことを示唆した。５０、１００および２００ｐｐｍのＨＯＣｌ（ｐＨ５．５）を含むＩＳ生成物は、全ての試験したＨＯＣｌ濃度について、エンベロープを有するＤＮＡワクシニアウイルスに対して抗ウイルス活性を示した。ワクシニアウイルスに対する抗ウイルス活性を有する生成物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含むすべてのエンベロープを有するウイルスに対して活性であると考えられる。別の研究において、ＩＳは１０～２００ｐｐｍのＨＯＣｌでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を不活性化することが示された。
【0181】
抗菌活性に関しては、黄色ブドウ球菌および緑膿菌の一晩培養物をそれぞれ２時間および２４時間増殖させて、浮遊性細菌およびバイオフィルム増殖細菌の両方に対してＩＳを試験した。緑膿菌および黄色ブドウ球菌については、５０ｐｐｍのＨＯＣｌ ＩＳ（但し、黄色ブドウ球菌バイオフィルムについては、１００ｐｐｍのＨＯＣｌ ＩＳ）で完全な効果が見られた
【0182】
要約すると、５０～２００ｐｐｍのＨＯＣｌ濃度を有するＩＳ生成物は、インビトロ試験で、２つの異なるＭＶＡにおいてウイルス不活性化を示す。試験生成物の希釈後、抗ウイルス活性を示す最低濃度は２５ｐｐｍのＨＯＣｌであり、抗ウイルス活性を示さない試験した最低希釈濃度は５、１０および２０ｐｐｍのＨＯＣｌであった。これらの実験から、抗ウイルス有効濃度範囲は２５～２００ｐｐｍのＨＯＣｌであった。ＩＳは、様々な濃度でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を不活性化することが示された。
実施例８．１：抗ウイルス効果
ワクシニアウイルスに対するＨＯＣｌの抗ウイルス有効性
実施例８．１：抗ウイルス効果
ワクシニアウイルスに対するＨＯＣｌの抗ウイルス有効性
【0183】
改変ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）に対するＨＯＣｌの殺ウイルス活性を評価するために、抗ウイルスアッセイを実施した。使用した生成物は、以下の濃度で、５０、１００および２００ｐｐｍのＨＯＣｌを含有するＩＳであった：
・非希釈（８０．０％）
・ａｑｕａ ｂｉｄｅｓｔで希釈（５０．０％）
・ａｑｕａ ｂｉｄｅｓｔで希釈（１０．０％）
・ａｑｕａ ｂｉｄｅｓｔで希釈（１．０％）－２００ｐｐｍのＨＯＣｌのみ
・非希釈（８０．０％）
・ａｑｕａ ｂｉｄｅｓｔで希釈（５０．０％）
・ａｑｕａ ｂｉｄｅｓｔで希釈（１０．０％）
・ａｑｕａ ｂｉｄｅｓｔで希釈（１．０％）－２００ｐｐｍのＨＯＣｌのみ
【0184】
試験方法は、感染力アッセイによって確認された、ＭＶＡに感染したＢＨＫ２１細胞に１～８０％の希釈で試験生成物（５０、１００および２００ｐｐｍのＨＯＣｌ）を曝露させることを含んだ。生成物をＭＶＡ感染細胞と１分間または２分間接触させ、次いで不活性化アッセイを実施して殺ウイルス活性を決定した。生成物接触後に細胞傷害性の測定も行った。
方法
方法
【0185】
試験ウイルス懸濁液を調製するために、ＢＨＫ２１細胞をＭＥＭおよび１０％または２％ウシ胎児血清と共に培養した。細胞を０．１の感染効率で感染させた。試験生成物を希釈せずに試験した。妨害物質および試験ウイルス懸濁液の添加により、８０．０％溶液が得られた。
【0186】
ＥＮ５．５に従って、最高希釈から始めて、０．１ｍＬの新たに分割した細胞（ウェルあたり１０～１５×１０３細胞）に、マイクロタイタープレートの８つのウェル中に０．１ｍＬの各希釈物を移す終点滴定として感染力を決定した。マイクロタイタープレートを５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃でインキュベートした。倒立顕微鏡を使用することによって、細胞傷害性効果を読み取った。感染量ＴＣＩＤ５０／ｍＬの計算は、ＳｐｅａｒｍａｎおよびＫａｒｂｅｒの方法を用いて計算した。
【0187】
消毒剤なしの対照滴定と比較して力価の減少を計算することによって、試験消毒剤の殺ウイルス活性を評価した。この差は、減少係数（ＲＦ）として与えられる。ＥＮ１４４７６によれば、ある濃度の消毒剤または消毒剤溶液は、推奨される曝露期間内に力価が少なくとも４ｌｏｇ１０段階低下した場合に、ウイルス不活化効果を有する。これは、９９．９９％以上の不活性化に相当する。
【0188】
殺ウイルス活性の決定は、ＥＮ５．５に従って実施した。不活性化試験は、２０℃±１．０℃の水浴中において、密封された試験管内で実施した。適切な曝露時間後に一定分量を保持し、残存する感染力を決定した。細胞傷害性の測定は、ＥＮ５．５．４．１に従って行った。試験検証のための参照として、ＥＮ５．５．６に従って０．７％ホルムアルデヒド溶液を含めた。接触時間は、５、１５、３０および６０分であった。さらに、ホルムアルデヒド試験溶液の細胞傷害性を、ＥＮ５．５．６．２に従って１０－５までの希釈物で測定した。
【0189】
結果
８０．０％アッセイにおける全ての希釈されていない試験生成物（すなわち、５０、１００、２００ｐｐｍのＨＯＣｌ）は、１分の曝露時間後にＭＶＡを不活性化することができた。減少係数は以下の通りであった：
・５０ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧５．２５±０．３３
・１００ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧５．１３±０．２５
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧５．２５±０．３３
８０．０％アッセイにおける全ての希釈されていない試験生成物（すなわち、５０、１００、２００ｐｐｍのＨＯＣｌ）は、１分の曝露時間後にＭＶＡを不活性化することができた。減少係数は以下の通りであった：
・５０ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧５．２５±０．３３
・１００ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧５．１３±０．２５
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧５．２５±０．３３
【0190】
これらは、９９．９９９％以上の不活性化に相当した。
５０．０％溶液も、１分の曝露時間後にＭＶＡを不活性化することができた。減少係数は以下の通りであった：
・５０ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧４．２５±０．３３
・１００ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧４．１３±０．２５
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧４．２５±０．３３
５０．０％溶液も、１分の曝露時間後にＭＶＡを不活性化することができた。減少係数は以下の通りであった：
・５０ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧４．２５±０．３３
・１００ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧４．１３±０．２５
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ：≧４．２５±０．３３
【0191】
これらは、９９．９９％以上の不活性化に相当した。
【0192】
１０．０％溶液は、１分の曝露時間以内にＭＶＡを不活性化することができなかった。１．０％溶液（２００ｐｐｍのＨＯＣｌ）も、１分以内にＭＶＡを不活性化することができなかった。
【0193】
結論として、希釈せずに試験した５０、１００および２００ｐｐｍのＨＯＣｌでの吸入用生成物ＩＳは、１分の曝露時間（０．３ｇ／ＬＢＳＡ）後にＭＶＡに対して活性を示した。
実施例８．２：抗菌および抗バイオフィルム有効性
実施例８．２．１．ＩＳの抗菌および抗バイオフィルム有効性
実施例８．２：抗菌および抗バイオフィルム有効性
実施例８．２．１．ＩＳの抗菌および抗バイオフィルム有効性
【0194】
浮遊性細菌およびバイオフィルム細菌をそれぞれ代表するために、２時間または２４時間のいずれかで増殖させた緑膿菌および黄色ブドウ球菌に対するＩＳの殺菌活性を評価するために抗菌アッセイを行った。使用した生成物は、以下の濃度のＩＳ（すなわち、０．２５％酢酸あり、ｐＨ５．５、等張）であった：
・ １０ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ５０ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ １００ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ２００ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ５００ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ １０ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ５０ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ １００ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ２００ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ５００ｐｐｍのＨＯＣｌ
【0195】
生成物を緑膿菌または黄色ブドウ球菌のいずれかと１時間接触させ、次いで一定分量を播種し、一晩インキュベートした。翌日、プレートを増殖について評価し、部分増殖の場合には対数減少を定量した。
方法
方法
【0196】
培養チューブで一晩（１７時間）、３７℃で、１８０ｒｐｍで振盪しながら、ＭＨ３４０（緑膿菌ＰＡＯ１）を５ｍＬのＬＢ中で、ＮＣＴＣ－８３２５－４（黄色ブドウ球菌）を５ｍＬのＴＳＢ中で増殖させた。
【0197】
その後、一晩培養物を５０倍希釈し、ウェル当たり２００μＬの希釈された細菌懸濁液を９６円形ウェルマイクロタイタープレート（８個の技術的反復）中に堆積させた。細菌当たり、条件および処理当たり１つのマイクロタイタープレート。２時間の増殖（「浮遊性」細菌）＋１時間の処理および２４時間の増殖（「バイオフィルム」細菌）＋１時間の処理。３７℃でそれぞれ２時間および２４時間、細菌をインキュベートした。
【0198】
その後、細菌を０．９％ＮａＣｌ（対照）、１０ｐｐｍのＨＯＣｌ、５０ｐｐｍのＨＯＣｌ、１００ｐｐｍのＨＯＣｌ、２００ｐｐｍのＨＯＣｌおよび５００ｐｐｍのＨＯＣｌ ＩＳで、３７℃で１時間処理した。
【0199】
処理期間（１時間）後、ウェルあたり２０μＬをＬＢプレート上にスポットし、３７℃で一晩培養した。翌日、増殖（生理食塩水が対照である）または無増殖についてプレート確認した。
結果
結果
【0200】
以下の表２に見られるように、緑膿菌浮遊性細菌およびバイオフィルムは、黄色ブドウ球菌よりも低い生成物濃度で根絶された。代表的な浮遊性およびバイオフィルム黄色ブドウ球菌および緑膿菌では、全体にわたって最終ＩＳ生成物（１００ｐｐｍのＨＯＣｌ）の完全な抗菌効果が存在する。
【表2】
【0201】
結論として、１０または５０ｐｐｍのＨＯＣｌ濃度でのＩＳは、それぞれ一般的な浮遊性細菌病原体である緑膿菌および黄色ブドウ球菌を死滅させる。５０または１００ｐｐｍのＨＯＣｌを含むＩＳは、それぞれ緑膿菌および黄色ブドウ球菌のバイオフィルム形態を死滅させる。
実施例８．２．２．ＩＳおよび酢酸の抗菌および抗バイオフィルム有効性
実施例８．２．２．ＩＳおよび酢酸の抗菌および抗バイオフィルム有効性
【0202】
浮遊性細菌を代表するために、２時間増殖させた緑膿菌および黄色ブドウ球菌に対するＩＳおよび酢酸の殺菌活性を評価するために別の抗菌アッセイを行った。使用した生成物は、以下の濃度のＩＳ（すなわち、０．２５％酢酸あり、ｐＨ５．５、等張）または酢酸のみであった：
・ ２５ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ５０ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ １００ｐｐｍのＨＯＣｌ
・０．２５％酢酸、ｐＨ５．５、等張
・ ２５ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ５０ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ １００ｐｐｍのＨＯＣｌ
・０．２５％酢酸、ｐＨ５．５、等張
【0203】
生成物を緑膿菌または黄色ブドウ球菌のいずれかと１時間接触させ、次いで一定分量を播種し、一晩インキュベートした。翌日、プレートを増殖について評価し、部分増殖の場合には対数減少を定量した。
方法
方法
【0204】
浮遊性グラム陽性菌およびグラム陰性菌に対する抗菌特性を試験するために、黄色ブドウ球菌（ＮＣＴＣ－８３２５－４）および緑膿菌ＰＡＯ１（ＭＨ３４０）の希釈した一晩培養物（０．５のＯＤ、黄色ブドウ球菌では約１０７、緑膿菌では約１０８）を９６ウェルマイクロタイタープレート中で２時間増殖した。その後、採取前に１時間、様々な濃度のＨＯＣｌ（２５、５０および１００ｐｐｍのＨＯＣｌ、０．２５％酢酸、ｐＨ５．５、等張）のＩＳ、等張０．２５％酢酸（ｐＨ５．５）および０．９％生理食塩水（対照）でウェルを処理した。
【0205】
１時間後、ＩＳを不活性化するために、Ｄｅｙ－Ｅｎｇｌｅｙ中和ブロス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｄ３４３５）をすべてのウェルに添加し、ウェルの内容物を１０倍系列で希釈し、関連する寒天プレート上にプレーティングした（１０－８まで）。プレートを３７℃で１８時間好気的に増殖させた。対数減少を計算するために、計数可能な希釈物中のコロニー数からＣＦＵカウントを計算した。試験は、各細菌の３つの技術的反復を用いて行った。
結果
結果
【0206】
以下の表３に見られるように、２５、５０および１００ｐｐｍのＨＯＣｌ ＩＳは、グラム陽性（黄色ブドウ球菌）およびグラム陰性（緑膿菌）細菌の両方を根絶した。等張の０．２５％酢酸（ｐＨ５．５）は細菌を根絶しなかった。
【表3】
【0207】
結論として、ＩＳは、それぞれ２５ｐｐｍおよび１０ｐｐｍのＨＯＣｌ濃度で、浮遊性グラム陽性菌（黄色ブドウ球菌）およびグラム陰性菌（緑膿菌）を効率的に根絶する。酢酸はグラム陽性（黄色ブドウ球菌）菌を根絶せず、グラム陰性菌（緑膿菌）には最小限の減少を示す。
【0208】
実施例８．３：抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２有効性
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染したＶｅｒｏ Ｅ６細胞に対するＩＳの殺ウイルス活性を評価するために、ウイルス不活化および細胞傷害性アッセイを実施した。使用した生成物は以下の濃度のＩＳであった：
・ １０ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ５０ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ １００ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ２００ｐｐｍのＨＯＣｌ
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染したＶｅｒｏ Ｅ６細胞に対するＩＳの殺ウイルス活性を評価するために、ウイルス不活化および細胞傷害性アッセイを実施した。使用した生成物は以下の濃度のＩＳであった：
・ １０ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ５０ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ １００ｐｐｍのＨＯＣｌ
・ ２００ｐｐｍのＨＯＣｌ
【0209】
試験方法は、１０～２００ｐｐｍのＨＯＣｌ濃度の試験生成物を、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２を感染させたＶｅｒｏ Ｅ６細胞に、４８時間曝露することを含んだ。次いで、細胞を染色し、ウイルス抗原陽性細胞の数を数えた。細胞傷害性を評価するために細胞増殖アッセイを実施した。
方法
方法
【0210】
Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞／ウェルを９６ウェルプレートに播種し、ウイルス（感染効率０．００２）を添加し、または非処理対照および細胞傷害性アッセイについては培地のみとし、３７℃で１時間インキュベートした。ウイルスを除去し、希釈せずまたは半分に希釈したＩＳ１０ｐｐｍＨＯＣｌ、５０，１００または２００ｐｐｍＨＯＣｌを１５分間添加し、その後、アッセイを４８時間インキュベートした。
【0211】
インキュベートした細胞を固定し、一次抗体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクキメラモノクローナル抗体および二次抗体Ｆ（ａｂ’）２－ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦｃＣｒｏｓｓ－Ａｄｓｏｒｂｅｄ Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ Ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＨＲＰで染色した。単一の感染細胞をＤＡＢ基質で可視化し、ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔシリーズ５ＵＶ分析器によって自動的に計数した。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを使用して、細胞傷害性アッセイを行った。
結果
結果
【0212】
本研究では、対照と比較した、ウイルスを含まないＶＥＲＯ細胞の量によって、試験化合物の抗ウイルス効果を評価した。結果に基づくと、ＩＳは、ウイルス陽性ＶＥＲＯ細胞の量を低下させ、したがって、ＩＳは、ＶＥＲＯ細胞を死滅させることなく１０ｐｐｍ～１００ｐｐｍのＨＯＣｌ濃度でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２をＩＳ不活性化した。ＶＥＲＯ細胞は非常に脆弱であり、ＩＳの研究にあまり適していないことが報告されているので、より強固な細胞を用いればさらに良好な抗ウイルス活性が得られたかもしれない。しかしながら、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２はクラス３微生物として分類されるため、これらの実験を他の細胞型で行うことはできなかった。ウイルス不活化および細胞傷害性の結果を図３に示す。
【0213】
図３を参照すると、各バーは、平均の標準誤差（エラーバー）とともに平均を表している。左軸は、非処理対照に対して正規化されたウイルス抗原陽性細胞の数を（百分率で）示す。右軸は、非処理対照に対して正規化された細胞生存率（吸光度）を（百分率で）示す。ＭＯＩ＝感染効率。
【0214】
５０、１００および２００ｐｐｍでの希釈されていない実験は、未知の機構のためにＶＥＲＯ細胞を死滅させたので、上の図には報告されていないことに留意されたい。しかしながら、１０ｐｐｍの非希釈および５０、１００および２００ｐｐｍの５０：５０希釈はＶＥＲＯ細胞を死滅させず、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２不活性化が観察された。結論として、様々な濃度で、ＩＳはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を不活性化する。
［実施例９］
実施例９：吸入溶液（ＩＳ）の毒性
［実施例９］
実施例９：吸入溶液（ＩＳ）の毒性
【0215】
いくつかのインビボ研究が行われており、ＩＳの毒性学を特性評価することが進行中である。
【0216】
ゲッティンゲンミニブタにおける非ＧＬＰインビボ吸入毒性研究が、デンマークにおいてＥｌｌｅｇａａｒｄ Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ Ｍｉｎｉｐｉｇで行われている。これらの研究には、選択された動物に対する２または４週間の回復期間を含む、噴霧されるＩＳでの挿管によるミニブタにおける５日間の反復投与研究が含まれる。さらに、その後の研究のための用量レベルの選択を助けるために、挿管による小規模なパイロット研究を行った。肺に到達するＩＳの量を最大化するために、これらの研究では投与経路として挿管を選択した。
【0217】
これらの研究に続いて、提案された臨床試験において研究される予定の意図されたヒト曝露を模倣するために、噴霧されたＩＳをマスクによって投与する、５日間のさらなる研究もＥｌｌｅｇａａｒｄ Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ ｍｉｎｉｐｉｇｓで行った。
【0218】
ミニブタにおけるさらなる非ＧＬＰ最大耐容用量研究を、ミニブタにおける１４日間反復投与ＧＬＰ吸入毒性研究への予備研究として行った。両研究（予備研究および主研究）は、同じく、ヒト投与を可能な限り厳密に模倣するために、マスクを介した投与を有する。動物福祉上の制約のために、ミニブタは１日に１回しか投薬され得ず、したがって、１日に複数回の５ｍＬ投薬とは異なり、臨床研究で意図される１日の投薬（すなわち、１００ｐｐｍで１８ｍＬ）を送達するために、噴霧されたＩＳに６０分間曝露される。
実施例９．１：反復投与毒性
実施例９．１：反復投与毒性
【0219】
初期毒性研究（非ＧＬＰ）は、デンマークのＥｌｌｅｇａａｒｄ Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ Ｍｉｎｉｐｉｇｓにおいて行った。さらなる予備的非ＧＬＰ研究が英国のＣｏｖａｎｃｅで行われ、ＧＬＰ研究が英国のＣｏｖａｎｃｅで進行中である。全ての完了したおよび計画された反復投与毒性研究を以下のサブセクションに要約する。
実施例９．１．１：インビボ吸入試験－挿管
実施例９．１．１：インビボ吸入試験－挿管
【0220】
６～８月齢の４２匹の健康な若齢成体ゲッティンゲンミニブタ、２１匹の雄および２１匹の雌をこの実験で使用した。ミニブタの体重は約１２ｋｇであった。ミニブタは、Ｅｌｌｅｇａａｒｄ Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ Ｍｉｎｉｐｉｇｓにおいて、ＡＡＡＬＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌが承認したバリア施設ハウジング内で、局所環境、摂食およびケアに関する施設の基準に従って、飼育し、収容した。実験プロトコルはＤａｎｉｓｈ Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ Ｉｎｓｐｅｃｔｏｒａｔｅ（ライセンス番号２０２０－１５－０２０１－００５３０）によって承認され、すべての手順はＤａｎｉｓｈ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ａｃｔに従って実施した。本研究はＧＬＰに従って実施されなかったが、データは記録され、文書化された研究計画および現地の標準操作手順（Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）に従って報告された。
【0221】
本研究は、２つの別個の段階で実施した。第１段階では、３２匹の動物（１群あたり雄４匹および雌４匹）を５日間処置し、終了させた。第２段階では、さらに１０匹の動物（雄５匹および雌５匹）を最高用量で処置した。最後の処置の５日後に雄１匹および雌１匹を殺し、１４または２８日間の回復期間後に雄２匹および雌２匹をそれぞれ殺した。便宜上、ここでは両段階をまとめて単一の研究として報告する。
【0222】
動物を以下のように投与群に割り当てた：
主段階
・対照としての０．９％ＮａＣｌ（雄４匹および雌４匹）
・５０ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（雄４匹および雌４匹）
・１００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（雄４匹および雌４匹）
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（雄４匹および雌４匹）
回復段階
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（最終投与後に雄１匹および雌１匹を屠殺）
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（２週間の回復後に雄２匹および雌２匹を屠殺）
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（４週間の回復後に雄２匹および雌２匹を屠殺）
主段階
・対照としての０．９％ＮａＣｌ（雄４匹および雌４匹）
・５０ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（雄４匹および雌４匹）
・１００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（雄４匹および雌４匹）
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（雄４匹および雌４匹）
回復段階
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（最終投与後に雄１匹および雌１匹を屠殺）
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（２週間の回復後に雄２匹および雌２匹を屠殺）
・２００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５、等張（４週間の回復後に雄２匹および雌２匹を屠殺）
【0223】
さらに、パイロット研究では４匹のミニブタを使用し、３匹には５００ｐｐｍ＋０．２５％ＨＡｃ、ｐＨ５．５の等張ＩＳを投与し、一方、１匹には生理食塩水を与え、対照として機能させた。
【0224】
（静脈内カテーテルによってブトルファノールによって強化されたプロポフォールで）すべてのミニブタを５日間毎日麻酔し、気管内チューブを通して５ｍＬの噴霧生成物（対照群には生理食塩水）を与えた。ＧＥ麻酔機を使用して、体積制御された換気で、２Ｌ／分（５０％酸素）の総流量および１０ｍＬ／ｋｇの一回換気量でミニブタを換気した。Ｐピーク（潜在的な気管支収縮を評価するための、本発明者らの主要な結果パラメータ）を含む肺活量測定、ならびにカプノメトリ、非侵襲的血圧、心拍数（ＥＣＧ）および温度を２分ごとに記録した。
【0225】
換気装置システムで動物を少なくとも１０分間安定化させた後、Ｐピークを含む観察を記録した。ベースライン測定値として動物を１０分間モニターし、その後、５ｍＬ生成物の噴霧を開始した（Ａｅｒｏｇｅｎ Ｓｏｌｏネブライザー、ＴｉｍｉｋＡｐｓ、Ｋｏｌｄｉｎｇ、Ｄｅｎｍａｒｋ）。噴霧化は１１～２０分継続した（製造業者に従って、２～５分／ｍＬ）。全ての生成物を噴霧した後、意識を回復する前に動物をさらに１５分間（吸入後）監視した。
【0226】
麻酔／吸入前に毎朝および麻酔／吸入後すべての午後に、すべての動物をスコア化して、全身状態、食欲、行動、咳、肺機能および運動性を評価した。最初の投与前におよび再度最後の投与後に血液試料を採取し、臨床病理パラメータについて評価した。回復動物については、投与中止期間中の臨床病理についても血液を評価した。
【0227】
２または４週間の投与中止後に屠殺した回復群の動物を除いて、投与終了後５日目に、全ての動物を屠殺した。インサイチュでの毒性の潜在的な肉眼的徴候を観察するために、安楽死の後に、経験豊富な獣医病理学者によって、呼吸器系に特別な注意を払った通例の剖検が行われた。肺および縦隔リンパ節を秤量した。全ての動物（に加えて、動物施設からの２匹の歩哨非処置動物）の７つ全ての肺葉から、気管、気管分岐部、縦隔リンパ節、心臓（右心室筋および左心室筋）、腎臓および肝臓から、組織病理学のための試料を近位方向（主気管支を含む）および遠位方向に収集した。
【0228】
５００ｐｐｍのＨＯＣｌを用いたパイロット研究では、呼吸上皮中に、主に近位肺試料中に中程度の繊毛の喪失が存在した。この知見に基づいて、２００ｐｐｍのＨＯＣｌが主研究に適した高用量レベルであることが決定された。
【0229】
主研究では、全てのミニブタが１日２回の臨床評価において正常であることが明らかとなった。
【0230】
血液学的および生化学的パラメータは、ベースライン（吸入前１日目）および実験の終了時（吸入後５日目）にすべての群で顕著ではなかった。処置の影響を示す所見は存在しなかった。
【0231】
肺活量測定では、主要な結果パラメータであるＰピークは、吸入に関しておよび吸入後に、異なる処置群または対照間で異ならなかった。さらに、実験あたりミニブタあたりに見られたＰピークの最大差は１ｃｍＨ２Ｏであり、これは機械の検出の限界内であり、臨床的重要性はないが、２匹のブタ（対照群に１匹および２００ｐｐｍのＨＯＣｌ群に１匹）については、Ｐピークの差は２ｃｍＨ２Ｏであった。これは、噴霧された生成物の吸入が気管支収縮を誘発しなかったことを明確に示している。他のすべてのパラメータは、処置による影響を受けなかった。
【0232】
剖検時、処置に対する反応の明らかな肉眼的徴候は観察されなかった。
【0233】
本研究の第１の部分（０、５０、１００または２００ｐｐｍでの１群あたり４＋４匹の動物の処置に加えて、５００ｐｐｍのＨＯＣｌで投与された３匹の動物のパイロット群）では、薬物曝露に関連する病理学的所見は、局所リンパ節過形成、気管分岐部領域（気管分岐部）および主気管支における上皮性繊毛の喪失であった。主気管支については、主に肺葉中に近位に繊毛の喪失が存在し、すべての葉が等しく影響を受けた。好中球顆粒球浸潤は、気管、気管分岐部および主気管支の粘膜および粘膜下層中に見られ、発生頻度は、繊毛喪失のパターンに従っていた。５００および２００ｐｐｍのＨＯＣｌが投与された場合、薬物曝露に関連する病理学的所見が存在した。しかしながら、５００ｐｐｍが最も顕著な所見をもたらした。１００ｐｐｍのＨＯＣｌを与えられた単一の動物では、最小限の繊毛喪失のみが観察された。他のすべての軽微な肉眼的および顕微鏡的所見は、毎日の麻酔処置に関連するか、または偶発的な所見であると考えられる。雄の動物と雌の動物の間で差は観察されなかった。
【0234】
本研究の第２の部分（２００ｐｐｍで投与され、最後の投与直後（１＋１）、または２週間の回復後（２＋２）もしくは４週間の回復後（２＋２）に屠殺された動物）では、回復なしの２００ｐｐｍのＨＯＣｌ群における組織病理学的所見は、主研究における２００ｐｐｍ群と同等であることが明らかとなった。したがって、２００ｐｐｍのＨＯＣｌを５日間毎日吸入すると、気管、気管分岐部領域および主気管支中の繊毛の喪失がもたらされることが確認された。２週間および４週間の回復後の両方で、繊毛喪失の回復が見られた。細胞の再生の徴候を現す、回復群における気管支および細気管支上皮中に過形成が見られた。回復後、気管、気管分岐部および主気管支の粘膜および粘膜下層中に好中球顆粒球浸潤は見られなかった。回復群は、肺胞内マクロファージの量の増加を示した。しかしながら、各群の動物数が少ないことに加えて、大きな変動が見られたことが、試験した薬物に所見を明確に関連付けることを困難にする。さらに、第１の研究における２００ｐｐｍのＨＯＣｌ群での肺胞内マクロファージの推定数は、第２の研究におけるよりはるかに高かった。さらに、時折ミネラル化を伴う肺胞マクロファージの限局性浸潤が、ゲッティンゲンミニブタにおける一般的な所見として報告されている。雌の動物と雄の動物の間で差は観察されなかった。
【0235】
１００ｐｐｍのＨＯＣｌ（５．０ｍＬ）でのＳＩＳは、挿管によるミニブタの投与後に無毒性量であると考えられた。
実施例９．１．２：インビボ吸入研究－マスクされる
実施例９．１．２：インビボ吸入研究－マスクされる
【0236】
本研究では、鼻を覆うマスクによって、１０ｍＬ（１０ｍＬがネブライザーに加えられるが、残存体積が１．２ｍＬであるので、予想される送達は８．８ｍＬであった。）の噴霧ＩＳまたは噴霧生理食塩水（０．９％ｗ／ｖのＮａＣｌ、対照として）で、健康なミニブタを５日間毎日処置した。前に見出された１００ｐｐｍの無毒性量の他、５０ｐｐｍを試験し、生理食塩水対照と比較した。
【0237】
１２匹の健康な若齢成体ゲッティンゲンミニブタ（６～８月齢）をこの実験（３１３５５）で使用した。ミニブタ（雄６匹および雌６匹）の体重は約１２ｋｇであった。ミニブタは、Ｅｌｌｅｇａａｒｄ Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ Ｍｉｎｉｐｉｇｓにおいて、ＡＡＡＬＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌが承認したバリア施設ハウジング内で、局所環境、摂食およびケアに関する施設の基準に従って、飼育し、収容した。実験プロトコルはＤａｎｉｓｈ Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ Ｉｎｓｐｅｃｔｏｒａｔｅ（ライセンス番号２０２０－１５－０２０１－００５３０）によって承認され、すべての手順はＤａｎｉｓｈ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ａｃｔに従って実施した。
【0238】
動物を無作為に４匹の動物（雄２匹および雌２匹）の以下の投与群に分けた：
・対照としての０．９％ＮａＣｌ（ｎ＝４）
・５０ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％酢酸、ｐＨ５．５、等張（ｎ＝４）
・１００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％酢酸、ｐＨ５．５、等張（ｎ＝４）
・対照としての０．９％ＮａＣｌ（ｎ＝４）
・５０ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％酢酸、ｐＨ５．５、等張（ｎ＝４）
・１００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％酢酸、ｐＨ５．５、等張（ｎ＝４）
【0239】
ミニブタは、研究前の週に２回吊り紐による拘束を受け入れるように訓練された。研究中、一度に２匹のミニブタを静かで薄暗い処置室中で吊り紐に入れた。低用量のミダゾラム（０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ－各動物を穏やかに保つために必要に応じて５日の間に増加させた）で動物を軽く鎮静させ、動物の眼を覆って穏やかに保った。その後、マスクを鼻の上に置き、マスクをＰａｒｉ Ｂｏｙ（登録商標）クラシックネブライザーに接続した。ネブライザーのチャンバーを最初に４ｍＬのＩＳまたは生理食塩水で満たし、およそ３０分後に１０ｍＬが投与されるまで連続して補充した（２ｍＬで３回）。製造業者によれば、残存体積は約１．２ｍＬであり、したがって、投与された用量は約８．８ｍＬであった。各動物の尾にパルスオキシメータを接続し、脈拍および酸素飽和度を測定した。呼吸数のカウントを含む測定値を、５、１０、１５および２０分の吸入後に記録した。処置後、動物を回復箱の中に入れ、完全に回復するまで観察し、その後豚房に戻るように誘導した。この手順を５日間毎日繰り返した。５日目に、最後の吸入後に動物を安楽死させた。
【0240】
手順前に毎朝および手順後午後に、すべての動物をスコア化して、全身状態、食欲、行動、咳、肺機能および運動性を評価した。
【0241】
吸入の１日前（ベースライン）に、および吸入後、吸入の最終日に血液試料を採取した。白血球百分率を含む標準的な生化学および血液学を実施した。
【0242】
インサイチュでの毒性の潜在的な肉眼的徴候を観察するために、安楽死の後に、経験豊富な獣医病理学者によって、呼吸器系に特別な注意を払った通例の剖検が行われた。肺および縦隔リンパ節を秤量した。右頭側および左鼻側肺葉から、気管、気管分岐部、縦隔リンパ節、心臓（右心室筋および左心室筋）、腎臓および肝臓から、組織病理学のための試料を近位方向（主気管支を含む）および遠位方向に収集した。３つの鼻のレベルを調べるための標準化されたアプローチを使用することによって、組織病理学のために鼻腔を収集した。
【0243】
肺（気管、気管分岐部、気管支および細気管支を含む）、リンパ節（気管分岐部）、鼻腔（鼻口を覆う扁平上皮、移行上皮、呼吸上皮および嗅上皮、鼻甲介、上顎甲介（ｍａｘｉｌｏｔｕｒｂｉｎａｔｅ）、鋤鼻器官（ｖｏｍｅｒｎａｓａｌ）、篩骨甲介および鼻咽頭）、肝臓、腎臓および心臓を組織学的に検査した。
【0244】
数回、吸引に関連して、または鼻からマスクを取り外した後に、数回の咳またはくしゃみが聞こえた。これは、対照群の動物１匹、５０ｐｐｍ群の動物２匹および１００ｐｐｍ群の動物１匹について認められた。これは、マスクが鼻の周りに作り出す湿気のある局所環境に対する反応である可能性があり得る。発生率は群間で類似していたため、ＩＳに起因するとは考えられない。呼吸数、脈拍および酸素飽和度は群間で同様であった。動物は、投与後最大１０分で軽度の鎮静から回復した。
【0245】
定期的な毎日のチェックでは臨床徴候は見られなかった。ベースライン（吸入前１日目）から実験後（吸入後５日目）までの血液学的および生化学的パラメータの発生は、全ての群で顕著ではなかった。すべての群で見られたクレアチンキナーゼの上昇は、取り扱いおよび採血に関連したもがき反応のためである可能性が最も高いと考えられる。
【0246】
剖検では、毒性の明らかな肉眼的徴候は観察されなかった。
【0247】
薬物曝露に関連する病理学的所見は、気管、気管分岐部領域および肺では観察されなかった。気管、気管分岐部領域および肺に見られる全ての軽微な肉眼的および顕微鏡的所見は、毎日の鎮静処置、頸静脈から血液を採取する試みの失敗、安楽死に関連するか、または偶発的な所見であると考えられた。例えば、時折ミネラル化を伴う肺胞マクロファージの限局性浸潤が全ての群の一部の動物で見られ、ゲッティンゲンミニブタにおける共通の所見として報告されている。ラット、マウス、ウサギ、モルモット、ヒツジ、非ヒト霊長類、イヌおよびネコにおける研究に基づいて、ペントバルビタールによる安楽死は、鬱血、浮腫、出血、気腫および壊死を含む肺組織損傷を誘発することができ、種間で一貫性が見られることも報告されている。
【0248】
鼻および鼻咽頭内では、充血、上皮剥離、繊毛の喪失およびリンパ過形成が３つの群内すべてで見られた。変化は、病巣領域において最も頻繁に見られた。鼻咽頭については、生理食塩水群と比較した場合、１００ｐｐｍおよび５０ｐｐｍのＨＯＣｌ群内の両方でより多くの動物が変化を登録された。しかし、病変の記載は群間で同様であり、動物の数が少ないことに基づけば、３つの研究群間に明確な差を認めることができないと結論付けられた。上皮剥離は、組織サンプリングの人為的結果として見ることができることに留意されたい。１００および５０ｐｐｍのＨＯＣｌのマスク吸入は、生理食塩水対照群と比較して重大な所見の増加と関連付けることができないと結論付けられる。
【0249】
結論として、生理食塩水対照を含む全ての群で所見が見られたが、ＩＳに起因すると考えられる所見は、ＩＳ処置動物には存在しなかった。本研究に基づけば、マスクによる投与では、ＩＳの無毒性量は１００ｐｐｍ（８．８ｍＬ）であった。
実施例９．１．３：インビボ複数回投与安全性研究
実施例９．１．３：インビボ複数回投与安全性研究
【0250】
最大耐用量を評価して、その後のＧＬＰ研究における用量の選択を補助するために、ミニブタでのインビボ吸入モデルでＩＳを試験した。鼻を覆うマスクによって、１．２、２．３または５．４μｇ／Ｌのエアロゾル濃度で（５０、１００または２００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％酢酸、ｐＨ５．５、等張を使用）、健康なミニブタ（ｎ＝６；群あたり雄１匹および雌１匹の３つの群）を７日間毎日処置した。毎日の処置期間は６０分であり、各動物は、５０、１００および２００ｐｐｍのＩＳを毎日投与された群において、それぞれ１９．９、１９．１または２２．２ｍＬを受けた。ＩＳの７日間の吸入後、８日目に動物を安楽死させた。研究の間、臨床状態、体重、餌消費、血液学（末梢血）、血液化学、臓器重量、肉眼的病理および組織病理調査を行った。達成されたエアロゾル濃度および製剤の名目上の次亜塩素酸塩濃度から計算されたＨＯＣｌ濃度は、それぞれ第１、２および３群についての目標の９９％、９２％および１１０％であった。臨床状態、体重、餌消費、血液学もしくは血液化学パラメータ、または臓器重量に対する試験項目に関連した影響は存在せず、項目に関連した肉眼的病理または組織病理所見は存在しなかった。フェイスマスクを介して１日当たり６０分間、７日間連続してゲッティンゲンミニブタに投与された場合、ＩＳは十分に忍容されると結論付けられ、５０、１００または２００ｐｐｍの濃度は、ゲッティンゲンミニブタにおけるより長期の毒性研究での６０分間の毎日の曝露に適していると考えられた。
［実施例１０］
実施例１０：創傷洗浄溶液（ＷＩＳ）の細胞傷害性
［実施例１０］
実施例１０：創傷洗浄溶液（ＷＩＳ）の細胞傷害性
【0251】
２００ｐｐｍのＨＯＣｌでの創傷洗浄溶液（ＷＩＳ）のインビトロ細胞傷害性を、２つの細胞傷害性研究において評価した。研究の目的は、インビトロで培養された哺乳動物Ｌ９２９細胞に対してＷＩＳが毒性であるかどうかを決定することであった。試験は、ＩＳＯ１０９９３－５に記載される方法に準拠し、試験品の製剤は、ＩＳＯ１０９９３－１２に準拠して調製した。以下のサブセクションは、インビトロ細胞傷害性研究を要約する。
実施例１０．１：ＷＩＳ（２００ｐｐｍのＨＯＣｌ）のインビトロ細胞傷害性
実施例１０．１：ＷＩＳ（２００ｐｐｍのＨＯＣｌ）のインビトロ細胞傷害性
【0252】
培養された哺乳動物細胞（マウス線維芽細胞）に対する潜在的な細胞傷害活性を決定するために、０．２５％酢酸および２００ｐｐｍのＨＯＣｌ、ｐＨ：４．３を含有する試験品ＷＩＳ（ＳＯＦ０００１／０５－０１）を調べた。試験は、米国薬局方、方法＜８７＞およびＩＳＯ１０９９３－５ガイドラインに従って実施した。
【0253】
完全細胞培養培地（１０％ウシ胎児血清および５０μｇ／ｍＬゲンタマイシンを補充したＨａｍのＦ１２培地）を用いて、ＷＩＳ（ＳＯＦ０００１／０５－０１）の製剤を調製した。０．２ｇの試験品／ｍＬ希釈剤媒体の希釈剤比を使用した。希釈せずに、また製剤１部＋新鮮な細胞培養培地３部で希釈してこの製剤を試験した。
【0254】
陽性対照（ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、０．２ｍｇ／ｍＬ）および非処理対照培養物（陰性対照としても機能し、完全細胞培養培地で処理した）を本研究に含めた。３つ組の細胞培養物を各試験点で４８時間処理した。対照処理は適切な応答をもたらし、試験系の正しい機能および感度を実証した。希釈された製剤は傷害性を示さなかった（すべての場合において細胞傷害性グレード０）が、希釈されていない製剤は細胞傷害性を示した（すべての場合において細胞傷害性グレード４）。
【0255】
本研究の試験条件下（長時間の曝露、４８時間）では、希釈されていないＷＩＳ（０．２５％酢酸および２００ｐｐｍの次亜塩素酸、ｐＨ：４．３）は、培養されたＬ９２９細胞に対して細胞傷害性効果を示した。これらの結果に基づいて、ＷＩＳ０．２５％酢酸および２００ｐｐｍ次亜塩素酸、ｐＨ：４．３は、細胞傷害性グレードが＞２であったので、ＩＳＯ１０９９３－５およびＵＳＰ＜８７＞の要件を満たさなかったと結論付けられる。しかしながら、ＷＩＳの希釈された製剤（ＳＯＦ０００１／０５－０１）は毒性を示さなかった（全ての場合において細胞傷害性グレード０）。
実施例１０．２：ＷＩＳ（２００および４４８ｐｐｍのＨＯＣｌ）のインビトロ細胞傷害性
実施例１０．２：ＷＩＳ（２００および４４８ｐｐｍのＨＯＣｌ）のインビトロ細胞傷害性
【0256】
本研究では、ＷＩＳ（２００ｐｐｍのＨＯＣｌ、０．２５％酢酸）、ＳＯＦ００３／５３（４４８ｐｐｍのＨＯＣｌ、１％酢酸）およびＳＯＦ００３／５１（２００ｐｐｍのＨＯＣｌ、１％酢酸）製剤のインビトロ細胞傷害性を評価した。適用されたインビトロアッセイは、製剤への１、４、２４および４８時間の曝露後に、破裂した細胞膜からの乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出および細胞株ＮＣＴＣクローン９２９（Ｌ－９２９）における代謝活性（ＭＴＴ）を測定する。アッセイは、ＥＵＮＣＬ ＳＯＰ（ＥＵＮＣＬ－ＧＴＡ－０３）に従って実施した。
【0257】
試験した全ての製剤について、試験した濃度（１０～０．００５％）および曝露期間（１、４、２４および４８時間）で有意な膜破裂は測定されなかった。
【0258】
ＩＳＯ－１０９９３－５国際規格のガイドラインによれば、２つの最も短い曝露期間（１および４時間）において、いずれのＷＩＳ製剤もＮＣＴＣクローン９２９（Ｌ－９２９）細胞で細胞傷害効果（すなわち、細胞生存率の３０％を超える低下）を引き起こさなかった。
【0259】
曝露の２４時間および４８時間後、ＷＩＳは細胞に対して細胞傷害効果を有さなかった（すなわち、細胞生存率の３０％未満の低下）のに対して、ＳＯＦ００３／５３およびＳＯＦ００３／５１製剤はこれらの時点で細胞傷害性を誘導した（すなわち、それぞれ２４時間の曝露後に生存率を４０～４５％および４８時間後に５５～６０％低下させた。）。
［実施例１１］
実施例１１：吸入溶液（ＩＳ）の遺伝毒性
［実施例１１］
実施例１１：吸入溶液（ＩＳ）の遺伝毒性
【0260】
ＩＳを用いたＧＬＰインビトロ研究は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｕｎｇａｒｙで行われている。
実施例１１．１：インビトロ細菌復帰変異アッセイ
実施例１１．１：インビトロ細菌復帰変異アッセイ
【0261】
Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを使用して、潜在的突然変異誘発活性について本発明の吸入溶液を試験した。本研究は、ＧＬＰに従って実施した。
【0262】
フェノバルビタール／β－ナフトフラボンで誘導されたラットの肝臓から調製したミトコンドリア後上清（Ｓ９画分）の存在下および非存在下で、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）（ネズミチフス菌ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１５３５およびＴＡ１５３７）のヒスチジン要求性栄養要求性株および大腸菌（大腸菌ＷＰ２ ｕｖｒＡ）のトリプトファン要求性栄養要求性株を用いて実験を行った。本研究には、Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ Ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ＴｅｓｔおよびＡｓｓａｙ １（Ｐｌａｔｅ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄ）が含まれた。以下の濃度が選択され、以下のように適切な書類とともに、スポンサーによって提供された：５０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ、２００ｐｐｍおよび５００ｐｐｍ、これらは０．０５、０．１、０．２および０．５ｍｇ／ｍＬに相当する。最も高い処理体積（５００μＬ）では、これらは２５、５０、１００および２５０μｇ／プレートに相当し、これらの濃度をＡｓｓａｙ １において使用した。細胞傷害性のために、それぞれ、６．３μＬ、２０μＬ、６３．２μＬおよび２００μＬで供給される材料の処理体積を使用して、５０ｐｐｍ試験品濃度のプレート当たりのより少ない処理体積：０．３１６２、１．０、３．１６２および１０μｇ／プレートで、追加の処理プレート濃度も使用した。最大試験濃度は２５０μｇであり、最小は０．３１６２μｇの試験品／プレートであった（合計８つの濃度）。２５０、１００および５０μｇ／プレート濃度で代謝活性化なし、および２５０μｇ／プレート濃度で代謝活性化ありで、試験品の阻害的、細胞傷害効果（非存在／わずかに低下したバックグラウンド菌叢発達）が調べた全ての細菌株で観察された。
【0263】
アッセイでは、溶媒対照と比較して、復帰突然変異体コロニーの数は生物学的に関連する増加を示さなかった。再現性のある用量関連の傾向は存在せず、処置に関連する影響は認められなかった。
【0264】
この変異原性アッセイの報告されたデータは、適用された実験条件下で、試験品が、使用された株のゲノムにおいて塩基対変化またはフレームシフトによって遺伝子変異を誘導しなかったことを示し、したがって、結論として、ＩＳは、本研究において使用された試験条件下で変異原性活性を有していなかった。
実施例１１．２：インビトロ哺乳動物細胞小核アッセイ
実施例１１．２：インビトロ哺乳動物細胞小核アッセイ
【0265】
マウスリンパ腫Ｌ５１７８Ｙ ＴＫ＋／－３．７．２Ｃ細胞を使用して、インビトロ小核試験において本発明の吸入溶液を試験した。本研究は、ＧＬＰに従って実施した。２つのアッセイを行った（アッセイ１およびアッセイ２）。両アッセイにおいて、代謝活性化を伴う３時間の処理（Ｓ９－ミックスの存在下）ならびに代謝活性化を伴わない３時間および２４時間の処理（Ｓ９－ミックスの非存在下）を行った。処理開始から２４時間後にサンプリングを行った。
【0266】
アッセイ１（代謝活性化ありおよびなし）における試験品の調査された濃度は、スポンサーによって、以下のように選択および提供され：５０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ、２００ｐｐｍおよび５００ｐｐｍ、これらは、ＯＥＣＤ Ｎｏ．４８７ガイドライン（１０％（ｖ／ｖ））で決定された場合に１ｍＬであった処理値を考慮すると、最終処理培地中での０．０５、０．１、０．２および０．５ｍｇ／ｍＬに相当する。アッセイ１では、試験品の過剰な細胞傷害性が観察されたため、研究を終了した。選択された濃度間隔は、少なくとも３つの試験濃度が許容性基準を満たす（適切な細胞傷害性範囲内にある）ことを評価するのに十分に精密化されていなかった。本アッセイにおいては、約４０％未満の細胞数の相対的増加（ＲＩＣＣ）を有する任意の結果は許容され得ず、使用した濃度がガイドライン基準を満たすのに十分であったことを実証するために、目標は、本アッセイにおいて達成された約４０％～５０％の細胞傷害性を有することであるべきである。したがって、細胞傷害性効果に関するさらなる情報を与えるために、および規制上の許容性基準を満たすために、改変された、より近接して間隔を置いた濃度で、さらなる実験（アッセイ２）を行った。
【0267】
アッセイ２（代謝活性化ありおよびなし）における試験品の調査された濃度はアッセイ１と同じであったが、さらなるより低い処理濃度が適用された。したがって、代謝活性化ありでの短い処理の場合の評価については、１０、５および２μｇ／ｍＬ（合計３つ）の許容され得る濃度が選択され、代謝活性化なしでの短い処理の場合の評価については、６、２および１μｇ／ｍＬ（合計３つ）の濃度が選択され、代謝活性化なしでの長い処理の場合の評価については、７、６、２および１ｐｐｍ（合計４つ）の濃度が選択された。代謝活性化ありおよびなしの実験における適切な陰性（ビヒクル）対照値と比較した場合、いずれの処理濃度も、小核化された細胞の数の生物学的または統計学的に有意な増加を引き起こさなかった。
【0268】
結論として、ＩＳは、代謝活性化ありおよびなしで行われた実験において、小核化されたマウスリンパ腫Ｌ５１７８Ｙ ＴＫ＋／－３．７．２Ｃ細胞の頻度の統計的にまたは生物学的に有意な再現性のある増加を引き起こさなかった。したがって、ＩＳは、本研究の条件下で、この試験系において遺伝毒性ではないと考えられた。
［実施例１２］
実施例１２：他の毒性研究
実施例１２．１：インビトロ肺サーファクタント機能性
［実施例１２］
実施例１２：他の毒性研究
実施例１２．１：インビトロ肺サーファクタント機能性
【0269】
肺サーファクタント機能に対する本発明の吸入溶液の影響を評価するために、本発明の吸入溶液をシミュレートされた肺胞モデルにおいて試験した。肺サーファクタントは肺の表面張力を低下させ、呼吸中の正常な拡張および収縮を可能にする。肺サーファクタントを妨害するエアロゾルの吸入は、毒性応答を誘発し得る。
【0270】
試験方法は、肺サーファクタント表面張力を定量化しながら、シミュレートされた呼吸サイクル中に少量の肺サーファクタントを噴霧されたＩＳに曝露することを含んでいた。表面張力の変化を評価した。
方法
方法
【0271】
肺サーファクタント機能に対する生成物の効果を試験するために、拘束液滴表面張力計の機構を通した、以前に十分に記載された定流量を使用した。この方法は、インビボ研究と比較した場合、有害物質の検出において１００％の感度を示した。
【0272】
（肺胞を模倣するために）肺サーファクタントのシミュレートされた呼吸サイクル中に、一滴の肺サーファクタント（１０μｇ）を噴霧された５００ｐｐｍのＨＯＣｌ ＩＳ（５分間にわたって５ｍＬ）に曝露した。インビボで無気肺を誘発するような潜在的な非常に低い表面張力（１０ｍＮ／ｍ未満）を検出するために、軸対称液滴振盪（ｓｈａｋｅ）分析によって表面張力を連続的に評価した。
結果
結果
【0273】
肺サーファクタントが最高濃度（５００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％酢酸、ｐＨ５．５、等張）の噴霧された吸入生成物に曝露された場合、肺サーファクタント機能の阻害は測定されなかった。０．９％ＮａＣｌ（対照）についても同様の結果が得られた。
実施例１２．２：単離ニワトリ眼球法を用いた眼刺激試験
実施例１２．２：単離ニワトリ眼球法を用いた眼刺激試験
【0274】
溶液は口および鼻に送達されるので、眼に対して起こり得る刺激特性を調べるための研究を行った。ガイドラインＯＥＣＤ ４３８に記載されている方法に従って、ＧＬＰ研究、Ｔｅｓｔ ｆｏｒ Ｏｃｕｌａｒ Ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ：Ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｃｈｉｃｋｅｎ Ｅｙｅ Ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＳＩＳ）を実施した。４つの濃度のＩＳ、それぞれ５００、２００、１００または５０ｐｐｍの次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）がスポンサーによって提供された。研究は２日間にわたって行われ、それぞれの日を実験（すなわち、実験１および実験２）と称した。各実験では、３つの眼を３０μＬの試験品（実験１では５００ｐｐｍまたは２００ｐｐｍおよび実験２では１００ｐｐｍまたは５０ｐｐｍ）で処理した。各実験では、３０μＬの５％（ｗ／ｖ）塩化ベンザルコニウム溶液を用いて、３つの陽性対照眼球を同様に処理した。陰性対照の眼球は、３０μＬの生理食塩水（０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ溶液）で処理した。角膜厚、角膜混濁およびフルオレセイン保持を測定し、任意の形態学的影響（例えば、上皮の陥凹または緩み）を評価した。
【0275】
本研究に使用された全ての眼球から得られた結果は、品質管理基準を満たした。陰性対照および陽性対照の結果は、本実験における過去の対照データ範囲内であった。したがって、本研究は妥当であると考えられた。
【0276】
ガイドラインによれば、本研究の結果は、非刺激性または著しい刺激性またはさらなる情報が必要とされるもののいずれかという３つのカテゴリーの１つに試験物質が割り当てられることである。異なる濃度の吸入溶液（ＳＩＳ）を用いた単離ニワトリ眼球におけるこのインビトロ眼球刺激アッセイに基づいて、５００ｐｐｍ、２００ｐｐｍおよび１００ｐｐｍの試験品濃度は、さらなる情報を必要とすると分類された。これらの濃度でのインビボ研究が示唆される。５０ｐｐｍの試験品濃度は、非刺激性として分類された。
［実施例１３］
実施例１３：吸入溶液（ＩＳ）を用いた抗菌試験
［実施例１３］
実施例１３：吸入溶液（ＩＳ）を用いた抗菌試験
【0277】
浮遊性に増殖したグラム陽性菌（黄色ブドウ球菌）およびグラム陰性菌（緑膿菌）に対する抗菌アッセイにおいて本発明の吸入溶液を試験したところ、１０～２５ｐｐｍのＨＯＣｌの濃度で両方の細菌の効率的な死滅を示した。試験は、コペンハーゲン大学Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ Ｂｉｏｆｉｌｍ Ｃｅｎｔｅｒで行った。このような試験の結果を以下の４に示す。
【表4】
【0278】
結果：表４に見られるように、緑膿菌に対して１０ｐｐｍのＨＯＣｌで既に抗菌効果が見られ、いずれの細菌も２５ｐｐｍのＨＯＣｌで増殖しなかった。
【0279】
要約：本発明の吸入溶液は、それぞれ２５ｐｐｍおよび１０ｐｐｍ、ならびにそれらより上のＨＯＣｌ濃度で、グラム陽性菌（黄色ブドウ球菌）およびグラム陰性菌（緑膿菌）を効率的に根絶する。ＩＳ２５ｐｐｍのＨＯＣｌでは、すべての細菌に対して完全な効果が見られた。
【0280】
これらの観察に基づいて、ＩＳの製造中の任意の潜在的な細菌汚染は、ＨＯＣｌの広域スペクトル抗菌活性によって生成物中で直ちに根絶されることは明らかである。したがって、エンドトキシンを産生するには細菌を要するので、エンドトキシンが産生される可能性は極めて低い。
［実施例１４］
実施例１４：ワクシニアウイルスに対するＩＳの規格ＥＮ１４４７６（２５ｐｐｍのＨＯＣｌで開始）による抗ウイルス活性
［実施例１４］
実施例１４：ワクシニアウイルスに対するＩＳの規格ＥＮ１４４７６（２５ｐｐｍのＨＯＣｌで開始）による抗ウイルス活性
【0281】
一般的な殺ウイルス活性に関するＥＮ１４４７６は、化学消毒剤および消毒薬に対して行われる。これは、医療分野において殺ウイルス活性を評価するための定量的懸濁試験であり、認定された研究室によって行われる。
ｎ．ｄ．＝実施せず
【表5】
【0282】
ＩＳの結果：ＩＳの試験生成物、５０％希釈として５０ｐｐｍ、２５ｐｐｍのＨＯＣｌは、きれいな条件下で１分間の曝露時間後にワクシナ（ｖａｃｃｉｎａ）ウイルスを不活化することができた（表５参照）。したがって、３０分後または６０分後には、活性は測定しなかった。減少係数は、≧４．２５＋０．３３（１分）であった。ＥＮ１４４７６規格によれば、ワクシニアウイルスに対する抗ウイルス活性を有する生成物は、すべてのエンベロープを有するウイルスに対して活性であると考えられる。
【0283】
手指および表面消毒剤の結果：手指消毒剤および表面消毒剤溶液（ＨＯＣｌ、２００＋３０ｐｐｍ、ＨＡｃ０．２５％、ｐＨ４．３）に対しても、殺生物性製品規制に従うＥＮ試験を実施した。結果は、大腸菌、真菌、酵母およびワクシナ（ｖａｃｃｉｎａ）ウイルスに対する抗菌効率を示す（データは示さず）。
【0284】
要約：全てのＥＮ試験は、手指消毒剤および表面消毒剤に対する規格に従って、１分から３０秒までの酵母、真菌、細菌およびウイルスの迅速かつ効果的な不活性化を示す。ＩＳの結果は、手指消毒剤溶液と著しく異ならず、２５ｐｐｍのＨＯＣｌでも同様の消毒特性を示す。
［実施例１５］
実施例１５：抗菌効果試験
［実施例１５］
実施例１５：抗菌効果試験
【0285】
保存効力試験は、ＵＳＰ４２－ＮＦ３７ ２Ｓの＜５１＞章有効性またはＰｈ．Ｅｕｒ．５．１．３抗菌保存に従って実施され得る。溶液バッチ（ｐＨ４．３、ＩＳに対する代表的なＨＯＣｌバッチに様々な微生物および以下を混入させ、ＵＳＰ４２－ＮＦ３７ ２Ｓの＜５１＞章による試験を以下の表６に示す：
【表6】
【0286】
結果および要約：ＵＳＰ４２－ＮＦ３７ ２Ｓの＜５１＞章に記載されている抗菌効果試験の合格基準は、１４日目と２８日目の両方ですべての試験微生物について満たされた。さらに、ＩＳの最低濃度は、抗菌効果についてＵＳＰ４２－ＮＦ３７ ２Ｓの＜５１＞章に従って試験され得る。
［実施例１６］
実施例１６：最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）試験
［実施例１６］
実施例１６：最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）試験
【0287】
ＩＳに代表的な微量液体希釈法（試験物質、ＨＯＣｌ溶液、ｐＨ４．３の最高濃度の希釈物、１００ｐｐｍのＨＯＣｌ＋１％酢酸および希釈物）によって、５つの病原性細菌株に対する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の決定を行った。マイクロタイタートレイ中での処理後２４時間のインキュベーションの後、光学密度を測定して増殖を評価した。さらに、翌日、懸濁液を寒天上に撒き、増殖に関して制御した。全ての試験は、Ｂｉｏｆｉｌｍ Ｔｅｓｔ Ｆａｃｉｌｉｔｙ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｆａｃｕｌｔｙ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙで行った。
【表7】
【0288】
結果：試験した全ての微生物について、ＭＩＣは２５ｐｐｍのＨＯＣｌ＋０．２５％酢酸であった。増殖は、光学密度（プレートリーダー）およびＭｕｅｌｌｅｒ Ｈｉｎｔｏｎ寒天プレート上での増殖の両方によって決定した。
ＩＳの微生物学的属性に関する結論
ＩＳの微生物学的属性に関する結論
【0289】
１０ｐｐｍのＨＯＣｌから始まる本発明の吸入溶液（ＩＳ）生成物および他の代表的なＨＯＣｌ製剤を用いて行われた抗菌試験の結果は、ＩＳ生成物が優れた抗菌活性を有することを明確に支持し、したがって、本発明者らは、他の代表的な生成物については、ＩＳも微生物を一切含まずに送達されるはずであると確信している。これは、ｐＨ４．３およびｐＨ５．５の両方で生成物（ＳＩＳ）中のＨＯＣｌの抗菌活性が広域であるためであり、溶液中のＨＯＣｌの酸形態が非常に優勢（＞９９．１％）である。これは、ＨＯＣｌ（酸形態）の抗菌活性に関する文献報告によって、および既に承認され、市場で販売されている様々なヘルスケア製品（例えば、創傷洗浄／リンス溶液）中で微生物の増殖を阻害するための防腐剤としてＨＯＣｌが使用されてきたことによっても裏付けられる。したがって、ＩＳは、非無菌、非滅菌設備で製造される。
【図1】
【図2】
【図3】
【国際調査報告】