特表 2023-533162 哺乳動物における疾患の予防及び／又は治療に有用な組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-02

(54)【発明の名称】哺乳動物における疾患の予防及び／又は治療に有用な組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/17 20060101AFI20230726BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230726BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230726BHJP

   A61P 37/00 20060101ALI20230726BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230726BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20230726BHJP

   A61K 31/16 20060101ALI20230726BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20230726BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230726BHJP

   A61P 15/08 20060101ALI20230726BHJP

【ＦＩ】

A61K38/17

A61K48/00

A61K45/00

A61P37/00

A61P35/00

A61P31/12

A61K31/16

A61P31/18

A61P35/02

A61P15/08

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022575231

(86)(22)【出願日】2021-07-09

(85)【翻訳文提出日】2023-01-26

(86)【国際出願番号】 IB2021056179

(87)【国際公開番号】W WO2022009165

(87)【国際公開日】2022-01-13

(31)【優先権主張番号】2020/03850

(32)【優先日】2020-07-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】ZA

(31)【優先権主張番号】2020/04008

(32)【優先日】2020-07-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】ZA

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522473678

【氏名又は名称】ヴィロ－ゲン（ピーティーワイ）エルティディー

【氏名又は名称原語表記】ＶＩＲＯ－ＧＥＮ （ＰＴＹ） ＬＴＤ

【住所又は居所原語表記】３１３ Ｃｌｉｆｆ Ａｖｅｎｕｅ， Ｗａｔｅｒｋｌｏｏｆ Ｒｉｄｇｅ Ｘ２ ０１８１， Ｐｒｅｔｏｒｉａ， Ｇａｕｔｅｎｇ （ＺＡ）

(74)【代理人】

【識別番号】100105131

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 満

(74)【代理人】

【識別番号】100105795

【弁理士】

【氏名又は名称】名塚 聡

(72)【発明者】

【氏名】スミット，ミシェル オルガ パトリシア ジエステイラ ダ シルバ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA13

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA22

4C084CA26

4C084MA02

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA59

4C084MA60

4C084MA63

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB07

4C084ZB09

4C084ZB26

4C084ZB27

4C084ZB33

4C206AA01

4C206AA02

4C206GA01

4C206GA22

4C206MA02

4C206MA04

4C206MA72

4C206MA75

4C206MA76

4C206MA79

4C206MA80

4C206MA83

4C206NA05

4C206NA14

4C206ZB07

4C206ZB09

4C206ZB26

4C206ZB27

4C206ZB33

(57)【要約】

免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患により特徴づけられる疾患から、被験体を保護するための、又は同疾患を患う被験体を処置するための、新規な方法及び医薬物質又は医薬が記載される。本発明によれば、臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質、及び／又は、Ｋｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質に翻訳されるＫＳＰ３７遺伝子でコードされるベクター及び／又は極性化合物のうち、治療的に有効な量の１つ又は複数が被験体に投与される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患に対する被験体の免疫応答を増強するのに使用するための治療的に有効な量の臨床的に改変された又は遺伝子操作された、Ｋｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質、及び／又は、Ｋｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質に翻訳されるＫＳＰ３７遺伝子でコードされるベクター、及び／又は、極性化合物の１つ又は複数を含む医薬物質。

【請求項2】

前記物質が、適切な期間にわたって前記被験体に１回又は複数回投与された場合に、前記被験体のＫｓｐ３７血漿濃度レベルを４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬに上昇させるように製剤化される、請求項１に記載の医薬物質。

【請求項3】

前記物質が、薬学的に許容される賦形剤を含む、請求項１又は２に記載の医薬物質。

【請求項4】

免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患と戦うのに有用であるＫＳＰ３７遺伝子でコードされる前記ベクターが、天然に存在するＫｓｐ３７タンパク質と同一のタンパク質に翻訳する核酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬物質。

【請求項5】

Ｋｓｐ３７タンパク質に翻訳される前記ＫＳＰ３７遺伝子でコードされた前記ベクターが、ｐＧＥＭ－Ｔベクター又はｐＣＭＶ３－Ｃ－ＧＦＰスパークを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬物質。

【請求項6】

前記ベクターが、ｐＧＥＭ－Ｔベクター、ＫＳＰ３７／ＦＧＦＢＰ２ ｃＤＮＡ ＯＲＦ ＣＬＯＮＥ（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ社）である、請求項５に記載の医薬物質。

【請求項7】

前記極性化合物がＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）である、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬物質。

【請求項8】

Ｋｓｐ３７産生を活性化するためのＤＭＦの量が、２ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌ、より好ましくは１００ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌ、及び最も好ましくは１００ｍｇ／ｌ～１５０ｍｇ／ｌ又は１５０ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌのＤＭＦのピーク血漿レベルを生じる用量である、請求項７に記載の医薬物質。

【請求項9】

免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患から被験体を保護すること、及び／又は、免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患を患う被験体を処置することにおける使用のための、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬物質。

【請求項10】

免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患から被験体を保護するための、及び／又は、免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患を患う被験体を処置するための、医薬の製造における、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬物質の治療的に有効な量の使用。

【請求項11】

前記医薬が、適切な期間にわたって１回又は複数回投与された場合に、前記被験体のＫｓｐ３７血漿濃度レベルを４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬに上昇させる量で投与するために製剤化される、請求項１０に記載の使用。

【請求項12】

前記臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７が、哺乳動物の体重１ｋｇ当たり０．００１μｇから哺乳動物の体重１ｋｇ当たり２０μｇの間の用量で投与するために製剤化される、請求項１０又は１１に記載の使用。

【請求項13】

前記医薬が、前記臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７を哺乳動物にゆっくりと放出することができる制御放出組成物を含む、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項14】

前記臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質が、血液成分及び／又は組織から抽出され、次いで精製され、アセチル化され、遺伝子操作され、クローン化され、そして免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患に対する治療用及び／又は予防用ワクチンとして哺乳動物宿主に戻される、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の使用。

【請求項15】

前記医薬が、経鼻、経口、局所、吸入、経皮、直腸又は非経口投与を含む許容可能な投与経路を介して前記被験体に投与するために製剤化される、請求項１０～１４のいずれか一項に記載の使用。

【請求項16】

前記ウイルスがレトロウイルス、具体的にはＨＩＶである、請求項１０～１５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項17】

前記ウイルス癌が卵巣癌又は白血病である、請求項１０～１６のいずれか一項に記載の使用。

【請求項18】

前記被験体が哺乳動物である、請求項１０～１７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項19】

免疫系障害及びウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患から被験体を保護する方法、及び／又は、免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患を患う被験体を処置する方法であって、前記被験体に、請求項１～８のいずれか一項に記載の物質の治療的に有効な量を投与して、前記被験体におけるＫｓｐ３７タンパク質の血漿レベルを４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬの間に増加させるステップを含む、方法。

【請求項20】

前記治療的に有効な量の、臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質が、哺乳動物の体重１ｋｇ当たり０．００１μｇ～哺乳動物の体重１ｋｇ当たり２０μｇである、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記医薬物質が、経鼻、経口、局所、吸入、経皮、直腸又は非経口投与を含む許容可能な投与経路を介して前記被験体に投与される、請求項１９又は２０に記載の方法。

【請求項22】

前記Ｋｓｐ３７タンパク質が、血液成分及び／又は組織から抽出され、次いで精製され、アセチル化され、遺伝子操作され、クローン化され、そして免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患に対する治療用及び／又は予防用ワクチンとして哺乳動物宿主に戻される、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

Ｋｓｐ３７産生を活性化するためのＤＭＦの治療的に有効な量が、２ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌ、好ましくは１００ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌ、及び最も好ましくは１００ｍｇ／ｌ～１５０ｍｇ／ｌ又は１５０ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌのＤＭＦのピーク血漿レベルを生じる用量である、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

ＤＭＦが経皮投与される、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記ウイルスがレトロウイルス、具体的にはＨＩＶである、請求項１９に記載の方法。

【請求項26】

ウイルス癌が卵巣癌又は白血病である、請求項１９に記載の方法。

【請求項27】

前記被験体が哺乳動物である、請求項１９に記載の方法。

【請求項28】

免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患に対する治療用及び／又は予防用ワクチンであって、前記ワクチンは、臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質、及び／又は、Ｋｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質に翻訳されるＫＳＰ３７遺伝子でコードされるベクターを含む、ワクチン。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする、哺乳動物における疾患の処置に有用な組成物及び方法に関する。

【背景技術】

【0002】

レトロウイルスに分類されるヒト免疫不全ウイルス（”ＨＩＶ”）として知られるウイルスは、世界中の何百万人もの人々の生活に影響を与えている。このウイルスは、治療が施されない場合、数年以内に後天性免疫不全症候群（「ＡＩＤＳ」）を発症するまで進行する健康な個体に感染する（Mann, J. et al. (2016) ’The latest science from the IAS Towards an HIV Cure Symposium 16-17 July 2016, Durban, South Africa’, (7月), pp. 235-241）。

【0003】

ＨＩＶは、レトロウイルスのレンチウイルスファミリーのメンバーである（Teichet. al., 1984, RNA Tumor Viruses, Weisset. al., 編, CSH-press, pp. 949-956）。レトロウイルスは、一本鎖ＲＮＡゲノムを含有する小エンベロープウイルスであり、ウイルスによりコードされた逆転写酵素、ＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ（Varmus, H., 1988, Science 240:1427-1439）により産生されるＤＮＡ中間体を介して複製する。

【0004】

他のレトロウイルスには、例えば、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ－１、－ＩＩ、－ＩＩＩ）、及びネコ白血病ウイルスのような発癌性ウイルスが含まれる。

【0005】

ＨＩＶの構造とゲノム機構
成熟したＨＩＶビリオンは直径１００ｎｍ～１２０ｎｍの球状構造で、密に切断された円錐形のヌクレオカプシド（「コア」）を取り囲む脂質二重層膜からなる。コアは、２つの９．８ｋｂの長さのポジティブセンス、一本鎖、線状ＲＮＡ分子、ｃＤＮＡ合成を開始する分子、細胞ｔＲＮＡ、Ｇａｇポリタンパク質、ウイルスエンベロープ（Ｅｎｖ）タンパク質、及び３つの酵素：逆転写酵素（ＲＴ）、ウイルスプロテアーゼ（ＰＲ）、インテグラーゼ（ＩＮ）、及びいくつかの他の細胞因子を含む（S Sierra, et al.,2005）。

【0006】

ＨＩＶゲノムは、長い末端反復配列（”ＬＴＲ”）に挟まれたアクセサリー遺伝子及び調節遺伝子を含む。ウイルスゲノムには、３つの機能グループに分けられる合計９つの遺伝子がある：
● 構造遺伝子Ｇａｇ、Ｐｏｌ、Ｅｎｖ
● 調節遺伝子ＴａｔとＲｅｖ
● アクセサリー遺伝子、Ｖｐｕ、Ｖｐｒ、Ｖｉｆ、Ｎｅｆ （ＪＭ Ｃｏｓｔｉｎ， ２００７）

【0007】

Ｇａｇ遺伝子はコアタンパク質をコードし、Ｐｏｌ遺伝子はＲＴ、プロテアーゼ、インテグラーゼ、Ｅｎｖ遺伝子はエンベロープタンパク質（ｇｐ１６０）をコードする。Ｔａｔ遺伝子はＴａｔタンパク質をコードし、Ｒｅｖ遺伝子はＲｅｖタンパク質をコードする。ＴａｔとＲｅｖ調節タンパクはＲＮＡ結合タンパク質として機能する。ＲＮＡの結合に加えて、Ｔａｔタンパク質は転写のアクチベーターとしても働き、ＨＩＶの完全長ゲノムが確実に形成されるようにしている。Ｒｅｖタンパク質はまた、ＨＩＶの遺伝子発現を初期から後期に移行させるのに役立つ。一方、アクセサリー遺伝子によってコードされるアクセサリータンパク質は多機能である。Ｎｅｆ又は負の因子は、Ｔ細胞の活性化、既存の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）Ｉのダウンレギュレーション、及びリソソームにおける脱顆粒による細胞表面のＣＤ４に関与し、ビリオン感染能も刺激する。Ｖｐｒは核－細胞質輸送因子として働き、ＨＩＶが非分裂細胞に感染するのを可能にする。Ｖｐｕはイオンチャネルの発生を介してビリオンの放出を増強し、またユビキチンを介した分解を介してＣＤ４の発現をダウンモジュレートする。リンパ球、単球、マクロファージにおけるＨＩＶの複製はＶｉｆによって調節される。

【0008】

ビリオンのエンベロープには膜貫通タンパク質ｇｐ１２０とｇｐ４１があり、スパイク（最大７２）の形でビリオンから外側に突き出ている。高度に免疫原性のタンパク質であるので、ＣＤ４レセプターに結合するｇｐ１２０は、大部分の宿主抗体のための適切な標的である。これらの株特異的抗体の大部分は、これらの受容体に結合することによって、ＣＤ４受容体とｇｐ１２０タンパク質との相互作用を遮断する。脂質二重層の下にあるマトリックスは、Ｇａｇタンパク質１７（ウイルスｇａｇタンパク質切断産物）からなる。コア又はカプシドは、ｐ２４タンパク質（Ｇａｇ遺伝子の産物）の被覆、及び第３のＧａｇタンパク質ｐ７を含む（Lampejo T et al., 2013）。

【0009】

ＨＩＶの生活環
ヒト免疫不全ウイルスの侵入は、基本的に３つの段階に分けられる：
（１） 結合
（２） 活性化及び
（３） 融合。

【0010】

主要なＨＩＶ－１とＨＩＶ－２受容体と補助受容体は、それぞれＣＤ４とＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４である。サイクルは、ＭＨＣクラスＩＩ分子の主要補助レセプターであるＣＤ４レセプター（５８ｋＤａの単量体糖タンパク質）を細胞表面にもつＨＩＶエンベロープ三量体複合体、ｇｐ１２０及びｇｐ４１の認識から始まる。ＣＤ４がｇｐ１２０と結合すると、コンホメーション変化が起こり、その結果、ＣＣＲ５ケモカイン補助レセプターが結合するｇｐ１２０ドメインが露出される。これまで、１７のケモカイン受容体リガンドがこのプロセスにおいて同定されている（Fanales-Belasioet. al., 2010）。

【0011】

ｇｐ１２０の二重結合に続いて、安定な付着複合体が形成され、これは、原形質膜におけるｇｐ１２０ペプチド浸透のＮ末端側を可能にする。ｇｐ４１タンパク質において、ＨＲ１及びＨＲ２配列は、一緒に作用し、ｇｐ４１のヘアピン構造を形成し、これは、ウイルス及び細胞膜の融合を引き起こす（Ｓ Ｓｉｅｒｒａet. al.,２００５）。

【0012】

融合ウイルスコアが細胞質内で放出された後、ウイルスカプシドの脱外皮は、ウイルスのＭＡ、Ｎｅｆ、Ｖｉｆタンパク質因子を介して起こる（Lampejo T et al., 2013）。

【0013】

ウイルスのＲＴリボヌクレアーゼＨ部位によって、ウイルスＲＮＡはプライマー結合部位から始まってＤＮＡに転写される。転写の完了後、リボヌクレアーゼＨは、ｄｓＲＮ／ＤＮＡハイブリッドを切断し、ＲＴ重合によって、ｄｓＤＮＡに変換された活性部位を切断する（Fanales-Belasioet. al., 2010）。プロウイルスの状態は、このｄｓＤＮＡをインテグラーゼ酵素によって宿主細胞ゲノムに組み込むことによって得られる。インテグラーゼタンパク質は、各ＤＮＡ鎖の３’末端に粘着性末端を生成する。今や修飾されたウイルスＤＮＡは核膜孔を通って核に運ばれ、ウイルスのＶｐｒによって指令され、このインテグラーゼによって組み込み機能が遂行される（Sierra S）。

【0014】

ウイルスゲノムが発現するためには、宿主ゲノム組込み部位は活性状態にあるべきである（Fanales-Belasio）。

【0015】

プロウイルス状態では、ウイルスＤＮＡは宿主ゲノム中に数年間留まることがあり、活性化シグナルを受け取ると、宿主ポリメラーゼ酵素を用いてｍＲＮＡを発現する（Yousaf MZ et al., 2011）。

【0016】

潜伏感染したＴ細胞、マクロファージ、単球、ミクログリア細胞は、ＨＩＶゲノムの主要な保有宿主である。活性細胞状態では、ＨＩＶゲノムの転写は、ウイルスＬＴＲと結合することによって、宿主ＲＮＡポリメラーゼＩＩ及び他の転写因子によって開始される。転写に続いて、翻訳はタンパク質（Ｔａｔ、Ｒｅｖ及びＮｅｆ）の基礎量をもたらす。Ｔａｔが十分に産生されると、ＬＴＲ及び他の転写細胞活性化因子上のＴＡＲエレメントとＴａｔが結合することによって、さらなる転写が制御される（Sierra S）。初期の段階では、多重スプライシングを受けたｍＲＮＡがＲｅｖ、Ｔａｔ、Ｎｅｆをつくる。十分な量のＲｅｖを達成すると、非スプライシングｍＲＮＡ及びより長いｍＲＮＡが産生され、これはポリソームと呼ばれ、その結果、他のウイルスタンパク質及びゲノムＲＮＡが産生される。スプライシングを受けていないＲＮＡ ＲＲＥには、Ｒｅｖが結合し、スプライシングを受けずに細胞質に安全に輸送されて翻訳されるというＲｅｖ応答配列が存在する（Lampejo T）。

【0017】

ＲＥＶはまた、酵素及び構造タンパク質の発現及び調節タンパク質の阻害を引き起こすため、成熟ビリオンの産生に役割を果たす。細胞質では、ＥＮＶ遺伝子はＥＲでグリコシル化されたｇｐ１６０に翻訳され、ＨＩＶ‐１プロテアーゼにより成熟ｇｐ１２０とｇｐ１４０になった（Fanales-Belasio）。

【0018】

翻訳中、Ｇａｇ ｐｏｌタンパク質を生じるリボソーム－１フレームシフトには、ＰＲ、ＲＴ及びＩＮが含まれる。成熟ビリオンの核はＧａｇ及びＰｏｌ遺伝子タンパク質によって形成される。大きな１６０ｋＤａ前駆体Ｇａｇ及びＰｏｌタンパク質から、ウイルスプロテアーゼによってｐ２４、ｐ９、ｐ７、ｐ１７ Ｇａｇ最終産物及びＰｏｌ産物に切断される。この切断は、感染性ウイルス粒子ＥＮＶタンパク質に必要であり、翻訳後、膜に向かって移動し、それに挿入される。Ｇａｇ及びＧａｇ－Ｐｏｌポリタンパク質はまた、細胞膜に向かって移動し、Ｇａｇポリタンパク質によって媒介されて集合を始める。フルサイズのゲノムＲＮＡ、細胞ｔＲＮＡｌｙｓ－３－プライマー、酵素、及びすべての細胞化合物は、未成熟ウイルスコアと連結される（Sierra S）。

【0019】

未成熟ウイルスの出芽は細胞膜を介して行われる。ウイルスの集合と出芽が起こるときには、細胞表面のＣＤ４分子の数を減らす必要がある。この過程にはＮｅｆ、ＥＮＶ及びＶｐｕが関与している。初期段階のＮｅｆはＭＨＣクラスＩ及びＩＩ分子のエンドサイトーシス及び死滅を媒介する。後期の段階では、ＮｐｕはＣＤ４分子の分解を誘導する。出芽の間に、Ｇａｇ及びＧａｇ－Ｐｏｌポリタンパク質を自己触媒的に切断するタンパク質プロテアーゼの活性化が起こり、構造タンパク質及びウイルス酵素をもたらした。個々のタンパク質とカプシド、ヌクレオカプシドタンパク質とのさらなる相互作用は、円錐ヌクレオカプシドをもたらし、ＭＡはウイルスエンベロープに結合したままである（Sierra S）。

【0020】

現在のＨＩＶ感染症治療
現在のＨＩＶ感染症の治療には、以下の組み合わせが含まれる：
・非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害薬
・ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤
・プロテアーゼ阻害薬。

【0021】

この薬剤の組み合わせは、一般的に高活性抗レトロウイルス治療（”ＨＡＡＲＴ”）と呼ばれている。ＨＡＡＲＴは、ウイルスＤＮＡが宿主ＤＮＡに取り込まれるのを阻害することにより、また、ウイルスＲＮＡからのウイルスＤＮＡの形成を阻害することにより、ＡＩＤＳの発生を遅らせることを目的として、患者に提供される（Chupradit K et. al., 2017 ’Current peptide and protein candidates challeng HIV therapy of the vaccine Era’, Viruses, 9(10), pp. 1-14. doi:10.3390/v9100281）。

【0022】

これらは、ＨＩＶ陽性の患者に投与される薬物とその作用機序のごく一部である。

【0023】

これまでのところ、ＨＩＶ感染に対するワクチンの開発、又はＨＩＶ感染症の治療法の開発の試みは成功していない。

【0024】

ワクチン開発の典型的なアプローチは、ウイルスの一部に体内を感染させ、抗体反応を誘発することである。ワクチン接種した宿主が将来、本当のウイルスに感染すると、免疫系はワクチンに含まれていたウイルスの抗原を認識し、即座に圧倒的な免疫応答が引き起こされることになる。このワクチン開発戦略は一部のウイルスには効くが、ＨＩＶ感染の原因となるＨＩ－Ｖｉｒｕｓとその後のＡＩＤＳには効かない。なぜなら、ＨＩ－Ｖｉｒｕｓが変異する能力があるからである。ＨＩ－Ｖｉｒｕｓの変異の結果、ウイルス抗原の検出が遅れ、ウイルス感染細胞の増殖が可能となる。

【0025】

ヒトにおいて、ＨＩＶ複製はＣＤ４^＋ Ｔリンパ球集団において顕著に起こり、そしてＨＩＶ感染はこの細胞型の枯渇をもたらし、最終的には免疫不全、日和見感染、神経学的機能不全、腫瘍性増殖、そして最終的には死に至る。

【0026】

「Drug Delivery Devices and Methods for Treatment of Viral and Microbial Infections and Wasting Syndromes」と題する南アフリカ特許第１９９８／０４６４９号は、極性化合物Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）を含む治療組成物を含有するか又はその上に吸収されたリザーバを含む、治療剤の経皮投与のための薬物送達デバイスを教示している。

【0027】

ＨＩＶに感染しているにもかかわらず、ＺＡ１９９８／０６４６４９の教示を作成した研究者は、抗レトロウイルス治療を受けずに３５０を超えるＣＤ４^＋ Ｔ細胞数を２０年間以上維持している。これらの個体は、本明細書では長期非進行者（「ＬＴＮＰ」）と呼ばれる。

【0028】

そのような個体の１人は、１９９６年１２月に、６３．２９８ ＨＩＶ－１ ＲＮＡコピー／ｍｌの血漿を検出するＨＩＶ ＰＣＲを最初に提示した。２００６年３月に実施された追跡ＨＩＶ ＰＣＲは、経皮的ＤＭＦ試験に参加してから数年後に、＜４０ ＨＩＶ－１ ＲＮＡコピー／ｍｌの血漿を検出し、２０１１年には、さらなる追跡ＨＩＶ ＰＣＲは、ＨＩＶ－１ ＲＮＡコピー／ｍｌの血漿を検出せず９２０／μＬのＣＤ４カウントを検出した。

【0029】

ＤＭＦの作用様式は完全には理解されなかったが、この群のＬＴＮＰ個体についてのさらなる研究は、それらのＣＤ８^＋細胞が、Ｋｓｐ３７として知られるタンパク質の上昇した水準を産生することを明らかにした。

【0030】

Ｋｓｐ３７を産生するＣＤ８^＋細胞の特徴は、以下を含む：
・これらの細胞のフェノタイプマーカーは、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＯ及びＣＤ５７であり、
・これらの細胞のシグナル分子は、ＭＩＰ－１βであることが確認されている（Bennett, Salter and Smith, 2018年「新しいクラスの抗レトロウィルス免疫をＨＩＶ Ｖｉｆ依存性分解から保護することにより可能にする」, Elsevier Ltd. 24(5), p. 507-520. doi:10.1016/j.molmed.2018.03.004）。

【0031】

Ｋｓｐ３７は、すべてのヒト及び多くの他の動物に存在するが、通常、４００ｎｇ／ｍＬ未満の量で存在する。ＬＴＮＰ個体におけるＫｓｐ３７のレベルが、これらの個体においてＨＩＶが進行できない重要な理由である可能性があると仮定される。

【0032】

タンパク質Ｋｓｐ３７の特徴
ＫＳＰ３７遺伝子（ＦＧＢＰ２としても知られる）は、ＮＫ、ＣＤ８^＋ Ｔ、ｃｄ Ｔ及びＣＤ４^＋ Ｔ細胞によって一般に発現され、２２３個のアミノ酸から構成される（Ogawaet. al., 2001,「細胞傷害性リンパ球によって選択的に産生される新規血清タンパク質」、The Journal of Immunology, 166(10), 6404～6412頁， doi:10.4049/jimmunol.166.10.6404）。

【0033】

Ｋｓｐ３７又は３７ｋＤａのキラー特異的分泌タンパク質、又は線維芽細胞成長因子結合タンパク質２（ＦＧＦ‐ＢＰ２）として知られるタンパク質が単離され、次のように配列決定された。

【0034】

起源

【0035】

配列は、ＢＬＡＳＴ同定のために、アクセッション番号ＡＢ０２１１２３の下で保存される。このタンパク質は、ヒト線維芽細胞結合タンパク質２と９９％の類似性を有する（Ogawa et. al., 2001)。そのようなものとして、ＦＧＦＢＰ２は、キラー特異的分泌タンパク質３７の同義語として一般に使用される。ＦＧＦＢＰ２遺伝子はチンパンジー、アカゲザル、ニワトリ、ゼブラフィッシュ及びカエルで保存されている。１３７の生物はヒト遺伝子ＦＧＦＢＰ２のオーソログをもつ。

【0036】

本発明の時点では、ＬＴＮＰ中のＫｓｐ３７のレベル、又はＬＴＮＰ、ＨＩＶ陰性者、ＨＡＡＲＴ上のＨＩＶ陽性者及び治療を開始していないＨＩＶ陽性者間のＫｓｐ３７のレベルの差に関する適切な研究は実施されていなかった。

【0037】

上記に照らして、長期非進行者の活性化ＣＤ８^＋ Ｔリンパ球によって分泌されるタンパク質又はペプチドを同定し、特徴付け、これらの長期非進行者によって産生されるＫｓｐ３７の量を決定し、そしてこれらの成果をウイルス感染及び／又はウイルス癌の処置又は予防のための治療用ワクチンの開発に利用する必要がある。

【0038】

したがって、本発明の実施形態は、少なくともある程度、上記で特定された問題に対処することを目的とする。

【発明の開示】

【発明が解決しようとする課題】

【0039】

本発明は、ヒトを含む哺乳動物における、ウイルス感染及び／又は免疫系障害に関連する疾患及び／又はウイルス癌を特徴とする疾患の処置に有用な組成物及び方法に関する。

【課題を解決するための手段】

【0040】

本発明は、２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有する、Ｋｓｐ３７として同定されたタンパク質が、免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患に対する被験体（又は、被験者／患者）の免疫応答を増強し、この同定された濃度範囲のタンパク質を、免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患の処置のための、ならびにウイルス感染及び／又は免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連する疾患の処置のための医薬及び医薬の調製に利用する最適濃度範囲を同定することに基づく。

【0041】

本発明によれば、Ｋｓｐ３７タンパク質が免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患に対する被験体の免疫応答を増強する最適濃度範囲は、血漿１ｍＬ当たり４００ｎｇ Ｋｓｐ３７～血漿１ｍＬ当たり７００ｎｇ Ｋｓｐ３７である。

【0042】

したがって、本発明は、被験体を、ウイルス感染及び／又は免疫系障害及びウイルス癌に関連する疾患を特徴とする疾患から保護し、又は被験体の血漿中のＫｓｐ３７のレベルを治療有効濃度レベルまで上昇させることによって、ウイルス感染及び／又は免疫系障害及びウイルス癌に関連する疾患を特徴とする疾患を罹患する被験体を処置する方法を提供し、ここで、Ｋｓｐ３７の治療有効レベルは、４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬである。

【0043】

被験体におけるＫｓｐ３７のレベルは、以下の経路の１つ以上によって増加され得る：
ａ） 治療有効量の臨床的に改変又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質を含む医薬を被験体に投与することによって；及び／又は
ｂ） 被験体に、免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患と戦うのに有用な、２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するＫｓｐ３７タンパク質及び／又はタンパク質に翻訳されるＫＳＰ３７遺伝子でコードされるベクターを投与することによって、治療有効レベルまで被験体におけるＫｓｐ３７の産生を刺激することによって；及び／又は
ｃ） 極性化合物で被験体を化学的に処理することによって、被験体におけるＫｓｐ３７の産生を治療有効レベルまで刺激して、増加したＫｓｐ３７産生を活性化することによって。
Ｋｓｐ３７の治療有効レベルは、好ましくは４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬの血漿濃度レベルであり、２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有する、臨床的に改変又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質及び／又はタンパク質の治療有効量は、４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬのＫｓｐ３７血漿濃度レベルを生じる量である。

【0044】

本発明はまた、免疫系障害及びウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患から被験体を保護する方法において使用するための、臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質、及び／又はＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質に翻訳されるＫＳＰ３７遺伝子でコードされるベクターを提供する。

【0045】

本発明はさらに、免疫系障害及びウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患から被験体を処置及び／又は保護するための医薬の製造における、臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するＫｓｐ３７タンパク質及び／又はタンパク質に翻訳されるＫＳＰ３７遺伝子でコードされるベクターの使用を提供し、ここで該医薬は、被験体におけるＫｓｐ３７タンパク質のレベルを４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬの間に増加させる。

【0046】

本発明はさらに、治療有効量の１つ以上の臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質、及び／又はＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質に翻訳されるＫＳＰ３７遺伝子でコードされたベクター、及び／又は極性化合物を含む、免疫系障害及びウイルスに関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患から被験体を保護する方法において使用するための医薬組成物を提供する。

【0047】

Ｋｓｐ３７タンパク質又は修飾タンパク質の治療有効量は、適切な期間にわたって１回又は複数回投与した場合に、被験体におけるＫｓｐ３７タンパク質のレベルを４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬに増加させることができる量を含み、哺乳動物１ｋｇ当たり０．００１μｇ～哺乳動物１ｋｇ当たり２０μｇである。

【0048】

薬学的組成物又は医薬は、水、生理食塩水、リン酸緩衝溶液、リンガー溶液、デキストロース溶液、ハンクス溶液、生理学的平衡塩類溶液及び他の水性生理学的平衡塩類溶液を含有するポリエチレングリコールならびに非水性ビヒクル（例えば、固定油、ゴマ種子油、エチレンオレエートトリグリセリド）を含むが、これらに限定されない、薬学的に許容される賦形剤をさらに含み得る。

【0049】

医薬組成物又は医薬はまた、Ｋｓｐ３７を哺乳動物にゆっくりと放出することができる制御放出組成物を含み得る。

【0050】

医薬組成物又は医薬は、鼻、経口、局所、吸入、経皮、直腸又は非経口投与を含む許容可能な投与経路を介して被験体に投与され得る。

【0051】

ウイルス感染を特徴とする疾患から哺乳動物を保護するＫｓｐ３７の能力を増強することができる追加の化合物は、医薬組成物又は医薬に含まれてもよく、化合物としては、細胞媒介免疫応答を調節することができる、Ｔヘルパー細胞活性を調節することができる、肥満細胞の脱顆粒を調節することができる、感覚神経終末を保護することができる、好酸球及び／又は芽細胞活性を調節することができる、及び／又は平滑筋収縮を予防又は弛緩させることができる化合物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0052】

Ｋｓｐ３７タンパク質は、血液成分及び／又は組織から抽出され、次いで精製され、アセチル化され、遺伝子操作され、クローン化され、そしてウイルス感染及び／又は免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連する疾患に対する治療的及び／又は予防的ワクチンとして哺乳動物宿主に戻され得る。

【0053】

ウイルス感染及び／又は免疫系障害及び／又はウイルス性癌に関連する疾患と戦うのに有用であるＫＳＰ３７遺伝子でコードされるベクターは、天然に存在するＫｓｐ３７タンパク質と同一のタンパク質に翻訳する核酸配列を含む。

【0054】

適切なベクターは、ｐＧＥＭ－Ｔベクター又はｐＣＭＶ３－Ｃ－ＧＦＰスパークを含む。

【0055】

宿主細胞は、Ｋｓｐ３７の産生のための主要な位置として同定される、宿主免疫系に関連する全ての血液成分及び哺乳動物組織細胞を含み得る。

【0056】

本発明はさらに、治療有効量の極性化合物を含む医薬組成物を提供し、ここで、治療有効量の極性化合物は、被験体において４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬのレベルまで増加したＫｓｐ３７産生を活性化するのに十分な量である。

【0057】

極性化合物は、好ましくはＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）である。

【0058】

Ｋｓｐ３７産生を活性化するためのＤＭＦの治療有効用量は、約２ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌ、より好ましくは約１００ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌ、さらにより好ましくは約１５０ｍｇ／ｌのＤＭＦのピーク血漿レベルをもたらす用量であり得る。特に好ましいのは、１００ｍｇ／ｌ～１５０ｍｇ／ｌ又は１５０ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌのＤＭＦのピーク血漿レベルである。

【0059】

ウイルスはレトロウイルスである可能性があり、ウイルス性癌には卵巣癌、白血病、バーキットリンパ腫、上咽頭癌、及びある種のホジキン病が含まれる。

【0060】

被験体は哺乳動物である。

【0061】

本発明はまた、免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患に対する治療及び／又は予防ワクチンを提供し、このワクチンは、治療有効量の臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質、及び／又は免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患と戦うのに有用であるＫＳＰ３７遺伝子でコードされたベクターを含む。

【発明を実施するための形態】

【0062】

以下の説明は、本発明の実施可能な教示として提供され、本発明に関連する原理の例示であり、本発明の範囲を限定することを意図しない。本発明の結果を達成しながら、及び／又は本発明の範囲から逸脱することなく、図示及び説明された実施形態（複数可）に変更を加えることができる。さらに、本発明のいくつかの結果又は利点は、他の特徴を利用することなく、本発明の特徴のいくつかを選択することによって達成され得ることが理解される。従って、当業者は、本発明に対する改変及び適応が可能であり得、特定の状況において望ましくさえあり得、本発明の一部を形成し得ることを認識する。

【0063】

１． 異なるサンプル群間でのＫｓｐ３７のレベルの比較
５人の既知のＬＴＮＰ個体（ＬＴＮＰ１－ＬＴＮＰ５）のサンプルならびに１５人のボランティアの無作為サンプルを、ジョージ・ムカリアカデミー病院から選択した。１５人の無作為ボランティアをさらに以下のクラスに分けた：
‐ＨＩＶ陽性かつＨＡＡＲＴを受けているボランティア５名（ＨＡＡＲＴ１－ＨＡＡＲＴ５）
‐ＨＩＶと診断されたばかりで、まだＨＡＡＲＴを開始していないボランティア５名（ＮＡＩＶＥ１－ＮＡＩＶＥ５）
‐ＨＩＶ陰性のボランティア５名（ＮＥＧ１－ＮＥＧ５）

【0064】

５人のＬＴＮＰ個体のサンプルサイズは、既知のＬＴＮＰ個体の不足によって決定された。

【0065】

これら２０名から血液サンプルを採取した。

【0066】

ａ． 細胞単離
全血からの全ＲＮＡの単離は、ＲＮＡ抽出キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｔｅｍｐｕｓ Ｓｐｉｎ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ）を用いて、製造業者の指示に従って行った。細胞を、２５０×ｇで５分間（ｍｉｎ／ｓ）の遠心分離によって全血から分離した。次に、細胞ペレットを氷冷ＰＢＳ、ｐＨ７．４で２回洗浄し、β－メルカプトエタノールを補充した６００μｌの溶解緩衝液に再懸濁し、続いて１０秒間（ｓｅｃ／ｓ）ボルテックス混合（又は、渦巻混合／vortex mixing）した。３６０μｌのエタノールを細胞溶解物に添加し、吸引によって混合した。次いで、７００μｌの溶解物を、収集チューブに挿入されたＲＮＡ精製カラム上に移した。カラム内容物を、１２０００×ｇで１分間の遠心分離に供した。フロースルーを廃棄した。精製カラムを洗浄緩衝液１及び２で洗浄し、続いて１２０００×ｇで１分間遠心分離し、フロースルーを廃棄した。ＲＮＡを５０μｌのヌクレアーゼを含まない滅菌脱イオン水で溶出し、続いて１２０００×ｇで１分間遠心分離した。溶出ＲＮＡを－７０℃で保存した。

【0067】

ｂ． ＲＮＡのｃＤＮＡへの変換
ｃＤＮＡ合成キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＶＩＬＯ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ）を用いて、製造業者の指示に従って、抽出ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。ｃＤＮＡ反応混合物は、１０μｌの鋳型ＲＮＡ、２μｌのオリゴｄ（Ｔ）プライマー、１２μｌのヌクレアーゼを含まない脱イオン水、４μｌの５ｘ反応緩衝液、１μｌのＲｉｂｏｂＬｏｃｋ ＲＮａｓｅ阻害剤及び１μｌのＭｕＬＶ逆転写酵素を含有した。得られたｃＤＮＡを、使用するまで－７０℃で保存した。

【0068】

ｃ． 得られたｃＤＮＡの増幅及び定量
製造業者の指示に従って、ポリメラーゼ連鎖反応キット（Ｋａｐａ Ｂｉｏ ｓｙｓｔｅｍｓ社、米国）を用いてｃＤＮＡを増幅した。ＰＣＲ反応混合物は、２μｌの順方向５’－ＣＴＴＣＣＧＡＧＧＧＴＧＡＣＡＧＧＴＧＡ－３’及び逆方向５’－ＴＣＣＡＧＴＧＴＧＡＧＡＡＣＧＴＴＧＧＡＴＴＧ－３’プライマー（それぞれ０．４μＭ）、５μｌの鋳型ｃＤＮＡ、１６μｌのヌクレアーゼを含まない脱イオン水、及び２５μｌの２ｘ Ｒｅａｄｙ Ｍｉｘを含有した。ＰＣＲ反応は、９５℃での９０秒間の変性、５９℃での３０秒間のプライマーアニーリング、及び７分間で７２℃での１分間のエロンゲーション（又は伸長／elongation）からなった。ＰＣＲ産物を、室温で少なくとも６０分間、７５ボルト（Ｖ）で２パーセント（％）アガロースゲル電気泳動で分析した。ゲルを観察し、Ｃｈｅｍｏ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）を用いてバンド強度を推定した。次いで、制限断片長多型を用いてタンパク質多型を決定した。

【0069】

ｄ． 異なる群におけるサイトカイン定量
選択されたサイトカイン（ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ－５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－ａＩＬ－２、ＩＬ－１３、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ１２ｐ７０）の量を、健康なドナーの新鮮な末梢血由来の単一ヒトＣＤ８リンパ球中のサイトカインタンパク質の直接的、定量的測定を用いて、異なる群間で測定した（Saxena et. al., 2018,「ｅｘ－ｖｉｖｏ刺激前線に続くヒト血液由来の単一リンパ球中のサイトカイン蛋白質の超高感度定量」 Front. Immunol., 9:2462. doi:10.3389/fimmu.2018.02462.eCollection2018）。

【0070】

結果
リアルタイムＰＣＲ分析は、以下の表に示されるようなＫｓｐ３７レベルを示した。

【0071】

リアルタイムＰＣＲ結果は、以下のグラフに反映されるように、他の研究群の血清と比較した場合、ＬＴＮＰ血清中のＫｓｐ３７の検出のためのより少ないサイクル（平均２６サイクル）によって観察されたＨＰＬＣのピークを確認する。

【0072】

グラフ１：リアルタイムＰＣＲ結果
結果は、Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ Ｎｏｎ－Ｐｒｏｇｒｅｓｓｏｒ Ｇｒｏｕｐの血清が、タンパク質Ｋｓｐ３７の有意に高いレベルを有することを示す。

【0073】

このタンパク質は、次の表２に示すように、より高いレベルの他のサイトカイン及びタンパク質、すなわちＩＬ－１２ｐ７０、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－４とも関連していることが見られた。レベルはｎｇ／ｍＬで測定した。

【0074】

使用されたサンプルは培養細胞由来であり、したがって上表の値はヒト宿主から直接採取されたサンプルから予想されるサイトカイン値を代表するものではないことに留意すべきであるが、この値は、高レベルのＫｓｐ３７に関連する免疫の経路に関する観察結果を導くものである。

【0075】

ＩＦＮ－γとＩＰ－１２ｐ７０の産生は一部正のフィードバックループによって調節されており、ＩＦＮ－γとＧＭ－ＣＳＦはＩＬ－１２ｐ７０の産生を促進し、ＩＬ－１２ｐ７０は次にＩＦＮ－γとＧＭ－ＣＳＦの分泌を刺激する。ＩＬ－１２ｐ７０及びＩＦＮ－γはＴｈ１の分化を促進し、細胞性免疫に有利であり、Ｔｈ２応答を阻害する。

【0076】

上記のＩＦＮ－ｙの結果を考慮すると、ＬＴＮＰの平均値は他の研究群の値よりもかなり高い。ＩＦＮ－γは自然免疫と適応免疫の両方に重要なサイトカインであり、ナチュラルキラー細胞と好中球の刺激に加えて、マクロファージの一次活性化因子として機能する。

【0077】

ＩＦＮ－γは、ＨＩＶ感染におけるより良好な疾患予後の相関因子として同定されており、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞及び活性化ＮＫ細胞数と正に関連している（Lopez M et. al., 2011,「ＨＩＶ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の質ではなく、拡大能は、長期非進行者における防御的ヒト白血球抗原クラスＩ対立遺伝子と関連している」、Immunology, 134(3), pp. 305-313. doi:10.1111/j.1365-2567.2011.03490.x.）。

【0078】

同様に、ＩＬ－１２ｐ７０の値を考慮すると、ＬＴＮＰにおける平均値は他の研究群からの値よりもかなり高い。ＩＬ－１２ｐ７０はＴ細胞の増殖と機能、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からのインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）の産生を刺激し、ＩＬ－４を介したＩＦＮ－γの抑制を低下させる。

【0079】

ＳＩＶ感染マカク（macaque）では、急性感染中のＩＬ－１２ｐ７０の処置は、ウイルス負荷の減少、ＣＤ８^＋ ＮＫ及びＴ細胞の増加、ホーミングマーカーを発現するナイーブなＣＤ４^＋ Ｔ細胞の減少、ＨＩＶ特異的ＣＴＬの滞留及び生残の延長と関連していた。

【0080】

上記の結果はまた、他の研究群と比較した場合、ＬＴＮＰ群においてより高いレベルのＩＬ－４を指摘している。ＩＬ－４は、活性化されたＢ細胞及びＴ細胞の増殖の刺激、ならびにＢ細胞の形質細胞への分化を含む多くの生物学的役割を有する。液性免疫及び適応免疫における重要な調節因子である。ＩＬ－４はＢ細胞のＩｇＥへのクラススイッチを誘導し、ＭＨＣクラスＩＩ産生をアップレギュレートする。ＩＬ－４とＩＬ－１２ｐ７０は相補的な役割をもつ。ＩＬ－４の主な機能は、適応免疫系及びＣＤ８^＋細胞傷害性細胞を刺激することである。全ＩＬ－１２ｐ７０はＩＬ－４の抑制を妨げる。

【0081】

最近の研究でも、ＩＬ－１０が単球／マクロファージにおけるＨＩＶ－１の複製を有意に阻害できることが示された。単球／マクロファージにおけるＨＩＶ－１の産生に対するＩＬ－１０の阻害作用は、これらの細胞におけるＨＩＶ－１の発現をアップレギュレートすることができる、腫瘍壊死因子α及びＩＬ－６等の他のサイトカインの合成のＩＬ－１０誘導阻害の結果である。

【0082】

２． Ｋｓｐ３７の作用様式
Ｋｓｐ３７の作用様式の研究が進行中であるが、Ｋｓｐ３７のレベルの増加は、多くの異なる機構によってＨＩＶのＡＩＤＳへの進行を阻害するようである。これらは以下を含む。

【0083】

ａ． ＣＤ８^＋の考慮
Ｋｓｐ３７レベルの増加がＨＩＶのＡＩＤＳへの進行を阻害する１つの可能な機構は、ＨＩＶ ＧＡＧ特異的細胞であるＫｓｐ３７の産生部位に関連している。ＧＡＧ特異的ＣＤ８^＋細胞は、ＣＤ１０７ａ、ＩＦＮ－γ、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－２、ＴＮＦ－αの産生レベルによって特徴付けられる（T, H. C. D. et. al., (2006), IMMUNOBIOLOGY,「ＨＩＶ非進行因子は、高機能性を優先的に維持する」， Blood, 107(12), pp. 4781-4789. doi:10.1182/blood-2005-12-4818）。

【0084】

これらの成分の産生は、ＨＩＶの免疫抑制能力を否定すると考えられる。Ｋｓｐ３７は、これらのＨＩＶ特異的ＣＤ８^＋細胞の寿命を増加させる原因である。Ｋｓｐ３７は、ＣＤ８^＋細胞からのパーフォリン、ＴＮＦ－α及びＩＬ－２等の成分の放出も制御することによって、ＨＩＶの免疫抑制作用を制御すると仮定される。ＬＴＮＰ個体におけるＨＩＶ感染に対する初期反応は、他の研究群でみられるものと同じである。ＨＩＶ特異的ＣＤ８^＋細胞がＬＴＮＰ個体において活性化されると、いくつかの結果が観察される。ＴＮＦ－αのレベルは上昇するが、以下の表３に示すように、Ｋｓｐ３７のレベルが増加するにつれて減少する。

【0085】

体内におけるＴＮＦ－αの主な役割は、人体における炎症と結びついている。ＴＮＦ－αの減少した濃度は、活性化部位での炎症を減少させ、従って、ＣＤ４^＋細胞からの反応を低下させる。これは、ウイルスを血流中に露出させたままにし、ＣＤ４^＋宿主細胞に感染することができない。これは、ＨＩＶ特異的ＣＤ８^＋細胞がウイルスを直接的に攻撃することを可能にする。ウイルスは、典型的には、ウイルス特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞によって排除され、これは、感染細胞の表面にＨＬＡクラスＩ分子との複合体として現れるプロセシングされたウイルスタンパク質を認識する。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介する認識は、活性化事象のカスケードを開始させ、最終的にグランザイム及びパーフォリンの放出及び感染細胞の殺傷につながり、感染性の子孫ウイルス粒子が産生される前に起こりうる（R. Brad Jones et al., 2016）。

【0086】

高いＩＬ－２レベルは、中心記憶Ｔ細胞の減少及びエフェクターの増加の両方によって、早期記憶Ｔ細胞の全体的な生成の減少をもたらす（Ｔ． Ｋａａｒｔｉｎｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１７）。従って、ＩＬ－２のレベルとＣＤ８^＋ Ｔ細胞の生成及び／又は寿命との間には逆相関がある。Ｋｓｐ３７を発現するＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞は、ＩＬ－２を産生する能力を欠く（Ogawa et. al., 2001）。したがって、高レベルのＫｓｐ３７は、活性化時のＩＬ－２産生のより低いレベルと関連する。従って、Ｋｓｐ３７のレベルはＩＬ－２のレベルに反比例する。

【0087】

従って、Ｋｓｐ３７レベルが高い場合、ＩＬ－２は低く、ＣＤ８^＋記憶細胞の生成は、より長い寿命と共に増大する。これは、ウイルスを殺すより大きな能力を支持する。免疫系の最初の活性化はＩＬ－２の結果であり、一旦ＩＬ－２が除去されると、大量の感染細胞死が生じる。ＨＩＶ特異的ＣＤ８^＋細胞は、ＩＬ－２を産生する能力を欠くので（Ogawa et. al., 2001）、これらは、ＩＬ－２レベルによって大きく影響されない。

【0088】

上述したように、サンプル研究では、実験室内及び宿主免疫系外で増殖させた細胞を利用し、その結果、記録されたＩＬ－２レベルは、ＬＴＮＰ宿主中に通常見出されるものを完全には代表していない。

【0089】

発がん性発現に対する極性物質の作用は、がん細胞がより良性になる誘導であると仮定されている。悪性細胞を良性型に転換するには、そもそも悪性腫瘍を引き起こす遺伝子発現の何らかの調節があるはずであるというのが理にかなっていると思われる。

【0090】

２００１年にＯｇａｗａらが行った研究は、Ｋｓｐ３７がＥｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒウイルス患者における細胞傷害性リンパ球媒介性免疫の必須過程に関与している可能性があり、Ｋｓｐ３７はｉｎ ｖｉｖｏで細胞傷害性リンパ球をモニタリングするための新しいタイプの血清指標としても臨床的価値がある可能性があることを示唆している。ＥＢＶはバーキットリンパ腫、上咽頭癌、及び一部の型のホジキン病と関連している。ＥＢＶはヒトＢ細胞の遺伝暗号に容易に感染し、変化させることができ、免疫抑制状態の患者を悪性腫瘍に罹患しやすくする可能性がある。

【0091】

ｂ． Ｖｉｆ阻害剤としてのＫｓｐ３７
Ｋｓｐ３７はまた、Ｖｉｆ阻害剤として作用すると考えられる。

【0092】

レトロウイルスに対する体の自然免疫応答は、ＡＰＯＢＥＣ３タンパク質の機能に基づいている。ヒトＡＰＯＢＥＣ３（Ａ３）タンパク質は細胞性シチジンデアミナーゼであり、ウイルスｃＤＮＡの超変異及び／又は逆転写の阻害によりレトロウイルスの複製を強力に制限する。このファミリーにはＡ３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨを含む７つのメンバーがあり、すべてヒト２２番染色体上の縦列にコードされている。Ａ３Ｆ及びＡ３Ｇは、ＨＩＶ－１の最も強力な阻害剤であるが、ウイルスによりコードされるタンパク質Ｖｉｆの非存在下でのみ存在する（Shingo K, et al., 2011）。

【0093】

シチジンデアミナーゼＡＰＯＢＥＣ３Ｇ（Ａ３Ｇ）はＨＩＶ‐１の感染に対して多面的抗ウイルス効果を発揮する。まず、Ａ３Ｇは、逆転写の際にウイルスＤＮＡのマイナス鎖のシトシン残基をウラシルに脱アミノ化することによってＨＩＶの感染を終結させることができることが示された（Sadler H et al., 2010「ＡＰＯＢＥＣ３Ｇは亜致死的変異誘発を介してＨＩＶ－１の変異に寄与する」， Journal of Virology, 84(14), pp. 7396-7404. doi:10.1128/jvi.00056-10）。また、多くの研究が、Ａ３Ｇが編集を介さない機構によってＨＩＶ－１逆転写を阻害することを示している。

【0094】

ＨＩＶ Ｖｉｆは、ヒトのエロンギンＢ／Ｃ（ＥｌｏＢＣ）－クリン－ＳＯＣＳボックス（ＥＣＳ）型Ｅ３ユビキチンリガーゼをハイジャックすることにより、ヒト抗ウイルスタンパク質ＡＰＯＢＥＣ３Ｇに拮抗し、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇのポリユビキチン化及びその後のそのプロテアソーム分解をもたらす（Matsui Y et. al., 2016,「Ｃｏｒｅ結合因子βは、ＨＩＶ、ＭＤＭ２媒介分解から１型アクセサリー蛋白質ウイルス感染能因子を保護する」, Journal of Biological Chemistry, 291(48), pp. 24892-24899. doi:10.1074/jbc.M116.734673）。

【0095】

ＨＩＶ Ｖｉｆタンパク質は、Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒウイルス（ＥＢＶ）上に見出されるｐ２３抗原と類似の機能を有する（その中でも、Ｈｓｐ９０／７０シャペロンタンパク質とのそれぞれの相互作用において）。抗原ｐ２３は、//Ｖｉｆ ＨＩＶタンパク質のアイソフォームである。タンパク質アイソフォーム、すなわち「タンパク質変異体」は、単一の遺伝子又は遺伝子ファミリーに由来し、かつ遺伝的差異の結果である高度に類似したタンパク質のファミリーの一員である。タンパク質アイソフォームは、同じ又は類似の生物学的機能を有する傾向がある。Ｏｇａｗａらは、ＥＢＶの存在下で、Ｋｓｐ３７のより大きな産生があることを見出した。これは、Ｋｓｐ３７の抗ウイルス特性を示す。

【0096】

ＥＢＶとの戦いにおけるＡＰＯＢＥＣ３Ｇタンパク質の機能を支持するＫｓｐ３７の機構は、ＨＩＶ ＶｉｆとＥＢＶ ｐ２３抗原の類似性を考慮すると、ＨＩＶとの戦いにおけるＡＰＯＢＥＣ３Ｇタンパク質の機能を支持するＫｓｐ３７の機構と類似していると考えられる。

【0097】

したがって、Ｋｓｐ３７の作用機序は、Ｅ３リガーゼ複合体の形成を阻害するＶｉｆ阻害剤のサブ分類をそれに与え得る。Ｖｉｆタンパク質の阻害の可能性は、Ａ３Ｇタンパク質がウイルスＤＮＡの翻訳を破壊することを可能にするであろう。

【0098】

３． Ｋｓｐ３７が最も有効である濃度レベル
上記の表１～３の結果は、Ｋｓｐ３７が４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬの血清濃度レベルで機能的であることを示す。

【0099】

Ｋｓｐ３７は４００ｎｇ／ｍＬ未満の濃度で正常な健常者に存在する。このレベルでは、ＨＩＶウイルス及びおそらく他のレトロウイルスの免疫無力化複製を阻害するのに効果的ではない。逆に、７５０ｎｇ／ｍＬを超えるＫｓｐ３７の濃度レベルは、免疫系の活性増加に関連するＩＬ－５及びＴＮＦ－αのようなサイトカインに対してＫｓｐ３７が有する正の効果のため、喘息及びダウン症候群を含む自己免疫疾患につながる可能性がある。

【0100】

これに照らして、本発明は、被験体中のＫｓｐ３７のレベルを４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍｌに増加させることによって、被験体を、免疫系障害及びウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患から保護する方法を提供する。

【0101】

被験体におけるＫｓｐ３７のレベルは、以下の経路の１つ又は複数によって増加され得る。
（ａ） 治療的に有効な量の臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質及び／又は２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質を被験体に投与することによって、
（ｂ） Ｋｓｐ３７タンパク質に翻訳されるＫＳＰ３７遺伝子でコードされたベクターを被験体に投与することによって、４００ｎｇ／ｍＬ～７００ｎｇ／ｍＬの濃度レベルまで被験体中のＫｓｐ３７の産生を刺激することによって、
（ｃ） 極性化合物で被験体を処置することによって４００～７００ｎｇ／ｍＬの濃度レベルに被験体におけるＫｓｐ３７の産生を刺激して、増加したＫｓｐ３７の産生を活性化することによって。

【0102】

被験者にはすべての哺乳類が含まれる可能性があり、ヒトのみに限定されるものではない。

【0103】

４． 臨床的に改変された又は遺伝子操作されたＫｓｐ３７タンパク質を被験体に投与すること
本発明の一実施形態では、Ｋｓｐ３７タンパク質及び／又は臨床的に改変／クローン化又は遺伝子操作されている２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲のタンパク質、及び／又は、Ｋｓｐ３７タンパク質及び／又は臨床的に改変／クローン化又は遺伝子操作されている２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲のタンパク質を含む製剤を、被験体に投与して、免疫系障害及びウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患を特徴とする疾患を処置又は予防することができる。

【0104】

被験体は哺乳動物である。

【0105】

このタンパク質は、Ｋｓｐタンパク質のグループ及びそれのすべての種から選択され、ここで、このタンパク質は哺乳動物タンパク質である。

【0106】

このタンパク質は、２２３個のアミノ酸鎖を有する約３７ｋＤａの分子量を有し、Ｎ末端シグナル配列、短いＣ末端疎水性領域、ならびに潜在的なＯ－グリコシル化部位及びシステイン側鎖を含む。

【0107】

該タンパク質は、血液成分及び／又は組織から抽出され、次いで、精製され、アセチル化され、遺伝子操作され、クローン化され、そして免疫系障害及びウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患に対する治療用及び／又は予防用ワクチンとして哺乳動物宿主に戻すことができる。

【0108】

１つ又は複数の組換え分子を使用して、エクスビボでＫｓｐ３７タンパク質を産生することができる。１つの実施形態において、コードされた産物は、タンパク質を産生するのに有効な条件下で核酸分子を発現することによって産生される。

【0109】

コードされたタンパク質を産生するための好ましい方法は、Ｋｓｐ３７タンパク質をコードする核酸配列を有する１つ又は複数の組換え分子で宿主細胞をトランスフェクトして、組換え細胞を形成することを含む。トランスフェクションに適切な細胞は、トランスフェクトされ得る任意の細胞である。宿主細胞は、トランスフェクト細胞、又は少なくとも１つの核酸分子で既に形質転換されている細胞のいずれかであり得る。

【0110】

本発明において有用な宿主細胞は、細菌、真菌、哺乳動物及び昆虫の細胞を含む、Ｋｓｐ３７タンパク質を産生することができる任意の細胞であり得る。

【0111】

核酸分子の宿主細胞へのトランスフェクションは、核酸分子を細胞に挿入することができる任意の方法によって達成することができる。トランスフェクション技術としては、トランスフェクション、電気泳動、マイクロインジェクション、リポフェクション、吸着及びプロトプラズム融合が挙げられるが、これらに限定されない。組換えＤＮＡ技術の使用において、発現は、宿主細胞内のトランスフェクトされた核酸分子Ｋｓｐ３７をコードする核酸分子がそれによって転写され得る効率、得られた転写物が翻訳される効率、及び核酸分子の発現を増加させるために有用な翻訳後修飾組換え技術の効率によって改善されることができる。

【0112】

Ｋｓｐ３７タンパク質のｅｘ ｖｉｖｏ産生には、これらに限定されないが、宿主細胞のコダム（codum）の使用及び転写産物を不安定化するシーケンスの欠失に対応する、核酸分子を高コピー数プラスミドに作動可能に連結すること、核酸分子を１つ又は複数の宿主細胞染色体に組み込むこと、ベクター安定性配列をプラスミドに添加すること、転写制御シグナル（プロモーター、オペレーター、エンハンサー）のサブセクション化又は修飾、翻訳制御シグナル（例えば、リボソーム結合部位、Ｓｈｅｒｅ－Ｄａｌｏｇａｎｓシグナル）、核酸分子を修飾することを含む。発現された組換えＫｓｐ３７タンパク質の活性は、このようなタンパク質をコードする核酸分子を断片化、修飾又は誘導体化することによって改善され得る。

【0113】

哺乳動物における標的細胞へのＫｓｐ３７タンパク質を含む製剤の送達。
「標的部位」は、治療製剤を送達することを所望する哺乳動物中の部位を指す。例えば、標的部位は、リンパ球、幹細胞、全ての血液成分、ならびに細胞及び細胞膜を含む天然脂質含有送達ビヒクル、ならびにリポソーム及びミセルを含む人工脂質含有送達ビヒクルを含むが、これらに限定されない他の送達ビヒクルであり得る。

【0114】

送達ビヒクルは、哺乳動物における特定の部位を標的化し、それによってその部位における核酸分子を標的化し、利用するために、公知の技術によって修飾され得る。

【0115】

適切な修飾は、送達ビヒクルの脂質位置の化学式を操作すること、及び／又は好ましい部位、例えば、好ましい細胞型に送達ビヒクルを特異的に標的化し得る化合物をビヒクルに導入することを含む。特別なターゲティングとは、ビヒクル中の化合物と細胞の表面上の分子との相互作用によって送達ビヒクルを特定の細胞に結合させることをいう。適切な標的化化合物は、特定の部位で別の分子に選択的に結合することができるリガンドを含む。このようなリガンドの例には、抗体、抗原、受容体及び受容体リガンドが含まれる。

【0116】

送達ビヒクルの脂質位置の化学式を操作することにより、送達ビヒクルの細胞外又は細胞内標的化を調節することができる。例えば、リポソームが特定の電荷特性を有する特定の細胞と融合するように、リポソームの脂質二重層の電荷を変化させる化学物質をリポソームの脂質式に添加することができる。

【0117】

賦形剤
被験体に投与されるＫｓｐ３７タンパク質を含む製剤はまた、薬学的に受容可能な賦形剤などの他の成分を含み得る。例えば、本発明の製剤は、被験体が耐えることができる賦形剤中に製剤化することができ、このような賦形剤の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝溶液、リンゲル溶液、デキストロース溶液、ハンクス溶液、生理学的平衡塩類溶液を含有するポリエチレングリコール及び他の水性生理学的平衡塩類溶液が挙げられる。不揮発性油、ゴマ種子油及びエチレンオレエートトリグリセリド等の非水性ビヒクルも使用することができる。

【0118】

他の有用な製剤には、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール又はデキストリン等の粘度増強剤を含有する懸濁液が含まれる。賦形剤はまた、等張性及び化学的安定性又は緩衝剤を増強する物質などの少量の添加剤を含有することができる。緩衝液の例としては、リン酸緩衝液、重炭酸緩衝液、トレス緩衝液が挙げられ、防腐剤の例としては、トリメレサール、ｍ－オロ－クレゾール、ホルマリン及びベンジルアルコールが挙げられる。

【0119】

標準的な製剤は、液体又は注射可能物又又は注射用の懸濁液又は溶液として適切な液体に取り込むことができる固体のいずれかであり得る。したがって、非液体製剤では、賦形剤は、投与前に滅菌水又は生理食塩水を添加することができるデキストリル、ヒト血清アルブミン、防腐剤等を含むことができる。

【0120】

Ｋｓｐ３７タンパク質は、経口、経鼻、局所、吸入、経皮、直腸及び非経口（皮下／筋肉内）投与からなる群から選択される少なくとも１つの経路によって投与され得る。

【0121】

制御放出
哺乳動物に投与されるＫｓｐ３７タンパク質又は修飾タンパク質を含む製剤は、Ｋｓｐ３７を哺乳動物にゆっくりと放出することができる制御放出組成物を含み得る。本明細書中で使用されるように、制御放出組成物は、Ｋｓｐ３７タンパク質を含むか、又は制御放出ビヒクル中にある。

【0122】

適切な制御放出ビヒクルとしては、生体適合性ポリマー、他のポリマーマトリックスカプセル、マイクロカプセル、マイクロ粒子、ボーラス調製物、浸透圧ポンプ、拡散デバイス、リポソーム、リポスフェア、乾燥粉末及び経皮送達システムが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の他の制御放出は、哺乳動物に投与すると、ｉｎ－ｓｉｔｕで固体又はゲルを形成する液体を含む。

【0123】

追加の化合物
ウイルス感染によって特徴付けられる疾患から哺乳動物を保護するＫｓｐ３７の能力を増強することができる追加の化合物を、連続的に又は同時に投与することができる。そのような化合物には、細胞媒介性免疫応答を調節することができる化合物、ヘルパーＴ細胞活性を調節することができる化合物、肥満細胞の脱顆粒を調節することができる化合物、知覚神経末端を保護することができる化合物、好酸球及び又は芽球細胞活性を調節することができる化合物、及び／又は平滑筋収縮を予防又は弛緩させることができる化合物が含まれる。このような化合物は、微小血管透過性をさらに誘導するか、又はＴｈ１及び／又はＴｈ２細胞サブセット分化を調節する。

【0124】

Ｋｓｐ３７タンパク質と組み合わせて投与される化合物の選択は、哺乳動物の種々の特徴に基づいて当業者によってなされ得る。特に、哺乳動物の遺伝的背景、健康歴、身体的徴候、レスキュー薬の使用及び血液ガス、ならびに血液分析である。

【0125】

用量
哺乳動物に投与されるＫｓｐ３７タンパク質又は修飾タンパク質の治療用量は、適切な期間にわたって１回又は複数回投与される場合、感染及び／又はＴｈ－１型免疫応答によって特徴付けられる疾患から哺乳動物を保護し、及び／又は同疾患を処置することができる用量を含む。

【0126】

あるいは、Ｋｓｐ３７タンパク質又は修飾タンパク質の治療用量は、哺乳動物の免疫系を改善する用量を含む。さらに別法として、Ｋｓｐ３７タンパク質又は修飾タンパク質の治療用量は、ウイルス感染を減少させる及び／又はＴｈ－１型サイトカインを増加させる用量を含む。

【0127】

治療的又は予防的結果を生じると仮定される好ましいＫｓｐ３７タンパク質又は修飾タンパク質の単回用量は、哺乳動物の体重１ｋｇ当たり０．００１μｇ／～哺乳動物の体重１ｋｇ当たり２０μｇであることが同定されている。

【0128】

４． 細胞内でＫＳＰ３７の発現を刺激する方法
遺伝子治療は、様々な遺伝性及び後天性疾患の治療のために考慮されている新しい治療様式である。それは、治療目的に向けて遺伝子発現を操作するという前提で働く。バイオテクノロジーの最近の進歩は、インビボでの細胞への治療遺伝子の直接送達に基づくインビボ遺伝子治療アプローチの開発を刺激した。遺伝子治療は、タンパク質の機能を回復、増加又は修飾するために、問題の遺伝子の正常なコピーを導入することを目的とする。

【0129】

Ｋｓｐ３７タンパク質をコードする核酸分子は、その天然供給源から、（完全である）遺伝子全体又はその一部のいずれかとして得ることができる。あるいは、核酸分子は、組換えＤＮＡ技術（ポリメラーゼ連鎖反応増幅クローニング）又は化学合成を使用して産生され得る。

【0130】

核酸分子としては、天然の核酸分子及びその相同体が挙げられ、相同体はこれらに限定されないが、天然の対立遺伝子変異体、及びヌクレオチドが、そのような修飾が、本発明の方法において有用なＫｓｐ３７タンパク質をコードする核酸能力を実質的に妨害しないような様式で、挿入、欠失、置換及び／又は反転されている修飾核酸分子、を含む。

【0131】

一実施形態では、ＨＩＶ及びウイルス癌などのウイルス免疫系関連感染と戦うのに有用なＫｓｐ３７タンパク質をコードする核酸分子は、天然に存在するＫｓｐ３７タンパク質と同一であるタンパク質に翻訳する核酸配列である。

【0132】

単離された、又は生物学的に純粋な核酸分子は、その天然環境から除去された核酸分子である。

【0133】

Ｋｓｐ３７タンパク質をコードする核酸分子は、当業者に公知の多くの方法のいずれかを使用して産生することができ、これには、部位特異的変異導入、突然変異を誘導するための極性化合物による核酸分子の化学処理、核酸断片の制限酵素切断、核酸断片の洗浄、核酸配列の選択された領域のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）及び／又は変異導入、オリゴヌクレオチド混合物の合成、核酸分子の混合物を構築するための混合物群の連結、及びそれらの組合せ等の組換えＤＮＡ技術が含まれる。核酸分子エンベロープは、核酸によってコードされる機能のスクリーニングによって修飾核酸の混合物から選択することができる。

【0134】

本発明の方法において有用なＫｓｐ３７タンパク質をコードするために使用される核酸分子は、１つ又は複数の転写制御配列に作動可能に連結されて、組換え分子を形成することができる。「作動可能に連結された」という語句は、トランスフェクト、形質導入又は全細胞への形質転換の際に分子が発現され得るような様式で、核酸分子を転写制御配列に連結することを指す。転写制御配列は転写の開始、伸長、終結を制御する配列である。特に重要なのは、制御された転写開始、プロモーター、エンハンサー、オペレーター及びリプレッサー配列である。

【0135】

適切な転写制御配列には、Ｋｓｐ３７タンパク質の発現に有用な、及び／又は本発明の方法において哺乳動物に投与するのに有用な組換え細胞において転写することができる任意の転写制御配列が含まれ、好ましい転写制御配列には、哺乳動物、細菌、又は昆虫の細胞において機能するものが含まれる。

【0136】

本発明の転写制御配列はまた、本発明の方法において有用なＫＳＰ３７タンパク質をコードする遺伝子と天然に関連する天然に存在する転写制御配列を含むことができる。

【0137】

ＤＮＡ又はＲＮＡのいずれかであり得る本発明の組換え分子はまた、翻訳調節配列、オリジン又は複製、及び組換え細胞と適合性のある他の調節配列等のさらなる調節配列を含み得る。１つの実施形態において、本発明の組換え分子は、発現されたＫｓｐ３７タンパク質が、タンパク質を産生する細胞から分泌されることを可能にするために、分泌シグナル（シグナルセグメント核酸配列）を含有する。

【0138】

適切なシグナルセグメントとしては、限定されるものではないが、本明細書において前述したＫｓｐ３７タンパク質のいずれかと天然に関連するシグナルセグメント、ならびにＫｓｐ３７タンパク質のすべての関連種及びヌクレオチドが挙げられる。

【0139】

遺伝子治療の律速技術は、遺伝子導入を達成するために使用される、ベクターとして知られる遺伝子送達ビヒクルである。ベクターはまた、特定のタンパク質の遺伝子産生を増加させるために使用され得る。

【0140】

適切なベクター
Ｋｓｐ３７タンパク質をコードする核酸分子の投与に特に有用な医薬品グレードの許容されるベクターの例は
● ｐＧＥＭ－Ｔベクター
● ｐＣＭＶ３－Ｃ－ＧＦＰスパーク
である。

【0141】

これらは、ＫＳＰ３７配列のベクターとして現在市販されているベクターのいくつかである。

【0142】

発現ベクターは、別名、発現構築物として知られており、通常、細胞における遺伝子発現のために設計されたプラスミド又はウイルスである。ベクターは特定の遺伝子を標的細胞に導入するのに用いられ、細胞のタンパク質合成機構を指揮して、その遺伝子にコードされているタンパク質をつくることができる。

【0143】

このケースで対象となる遺伝子はＫＳＰ３７であり、これは通常、ヒト宿主における適応免疫のＣＤ８^＋細胞部分によって産生される（Lopezet. al., 2011）。

【0144】

ｐＣＭＶ３－Ｃ－ＤＤＫ（Ｆｌａｇ）は、哺乳動物細胞におけるＫＳＰ３７の発現のために使用される発現ベクターである。ベクターは、発現を可能にする特定のセグメントを含むべきであり、これらは、プロモーター、リボソーム結合部位及び開始コドンのような正しい翻訳開始配列、終止コドン及び転写終結配列を含む。遺伝子産物の発現後に、発現されたタンパク質を精製することが必要であり得る。しかしながら、宿主細胞の大多数のタンパク質から目的のタンパク質を分離することは、長引くプロセスであり得る。この精製処理を容易にするために、精製タグをクローンされた遺伝子に追加することができる。

【0145】

ベクターを細胞にトランスフェクトし、安定したトランスフェクションの場合には相同組換えによってＤＮＡをゲノムに組み込むこともできるし、細胞を一時的にトランスフェクトすることもできる。哺乳動物発現ベクターの例には、アデノウイルスベクター、ｐＳＶ及びｐＣＭＶシリーズのプラスミドベクター、ワクシニア及びレトロウイルスベクター、ならびにバキュロウイルスが含まれる。サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）及びＳＶ４０のプロモーターは、遺伝子発現を駆動するために哺乳動物発現ベクターにおいて一般的に使用される。

【0146】

特に、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ社から供給されたｐＧＥＭ－Ｔベクター、ＫＳＰ３７／ＦＧＦＢＰ２ ｃＤＮＡ ＯＲＦ ＣＬＯＮＥは、哺乳類におけるレトロウイルス感染、ウイルス癌及びプリオンに対する遺伝子治療に使用するための、ヒト線維芽細胞成長因子結合タンパク質２．２単位～１０単位の全長クローンＤＮＡの適当なクローニングベクターとして同定されている。

【0147】

賦形剤／送達ビヒクル
本発明によれば、Ｋｓｐ３７タンパク質をコードする核酸分子は、薬学的に許容される賦形剤と共に投与され得る。薬学的に許容される賦形剤としては、天然脂質含有基質、油、エステル、グリコール、ウイルス、金属粒子又はカチオン性分子が挙げられ得るが、これらに限定されない。

【0148】

ターゲティングすることができる薬学的に許容される賦形剤は、本明細書では「送達ビヒクル」と呼ばれる。本発明の薬学的に許容される賦形剤は、Ｋｓｐ３７タンパク質及び／又はＫｓｐ３７タンパク質をコードする核酸分子を含む製剤を、哺乳動物の標的細胞に送達することができる。「標的部位」は、治療製剤を送達することを所望する哺乳動物中の部位を指す。例えば、標的部位は、リンパ球、幹細胞、全ての血液成分であり得る。

【0149】

送達ビヒクルとしては、細胞及び細胞膜を含む天然脂質含有送達ビヒクルと、リポソーム及びミセルを含む人工脂質含有送達ビヒクルを含むが、これらに限定されない。

【0150】

本発明の送達ビヒクルは、哺乳動物における特定の部位を標的化し、それによってその部位における核酸分子を標的化し、利用するために修飾され得る。

【0151】

適切な修飾は、送達ビヒクルの脂質位置の化学式を操作すること、及び／又は好ましい部位、例えば、好ましい細胞型に送達ビヒクルを特異的に標的化することができる化合物をビヒクルに導入することを含む。

【0152】

特別なターゲティングとは、ビヒクル中の化合物と細胞の表面上の分子との相互作用によって、送達ビヒクルを特定の細胞に結合させることを指す。適切な標的化化合物は、特定の部位で別の分子に選択的に結合することができるリガンドを含む。このようなリガンドの例には、抗体、抗原、受容体及び受容体リガンドが含まれる。

【0153】

送達ビヒクルの脂質位置の化学式を操作することにより、送達ビヒクルの細胞外又は細胞内標的化を調節することができる。例えば、リポソームが特定の電荷特性を有する特定の細胞と融合するように、リポソームの脂質二重層の電荷を変化させる化学物質をリポソームの脂質式に添加することができる。

【0154】

ベクターの投与
ベクターは、経鼻、経口、局所、吸入、経皮又は非経口投与を含む許容可能な投与経路を介して被験体に投与される。

【0155】

追加の化合物
ウイルス感染によって特徴付けられる疾患から哺乳動物を保護するＫｓｐ３７の能力を増強することができる追加の化合物を、連続的に又は同時に投与することができる。そのような化合物には、細胞媒介性免疫応答を調節することができる化合物、ヘルパーＴ細胞活性を調節することができる化合物、肥満細胞の脱顆粒を調節することができる化合物、知覚神経末端を保護することができる化合物、好酸球及び又は芽球細胞活性を調節することができる化合物、及び／又は平滑筋収縮を予防又は弛緩させることができる化合物が含まれる。このような化合物は、微小血管透過性をさらに誘導するか、又はＴｈ１及び／又はＴｈ２細胞サブセット分化を調節する。

【0156】

Ｋｓｐ３７タンパク質をコードする核酸分子と組み合わせて投与される化合物の選択は、哺乳動物の種々の特徴に基づいて当業者によってなされ得る。特に、哺乳動物の遺伝的背景、健康歴、身体的徴候、レスキュー薬の使用及び血液ガス、ならびに血液分析である。

【0157】

７． Ｋｓｐ３７産生を活性化するための極性化合物による化学処理
上記で開示されたように、極性化合物ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）及びＤＭＳＯは、ＨＩＶ産生の強力な阻害剤であることが示されている。ＨＩＶ‐１に感染した患者のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を含有する経皮パッチによる治療は有望な結果を示した。

【0158】

発がん性発現に対する極性物質の作用は、がん細胞がより良性になる誘導であると仮定されている。悪性細胞を良性型に転換するには、そもそも悪性腫瘍を引き起こす遺伝子発現の何らかの調節があるはずであるというのが理にかなっていると思われる。ＨＬ－６０ヒト前骨髄球性白血病細胞において、ジメチルスルホキシド［ＤＭＳＯ］は、ｃ－筋癌遺伝子（c-myoncogenes）の発現を８０～９０％減少させた［５］。

【0159】

細胞分化の化学的誘導物質は、宿主細胞の細胞機構に影響を与えることにより、ウイルス複製に重要な役割を果たすことが示唆される。

【0160】

ＤＭＦを含む極性化合物は、ＣＤ８細胞の活性化で始まり、次いでＫｓｐ３７の産生を活性化する事象のカスケードを通して、ウイルス感染及び疾患の臨床管理において使用され得る。

【0161】

ジメチルホルムアミド［ＤＭＦ］のような極性化合物は、ＫＳＰ３７タンパク質の活性化剤として使用され得る。

【0162】

ＤＭＦは一般に極性溶媒として用いられ、経皮、吸入、経口摂取により容易に吸収される。ＤＭＦは主に肝臓で速やかに代謝され、主に尿中に排泄される。

【0163】

化学物質の経皮及び坐薬送達は、患者のホルモン特性を変化させる一般的な方法である。

【0164】

ＤＭＦは、任意の適切な薬物送達デバイスを使用して、例えば、１つ又は複数の皮膚パッチを適用することによって、又はＫｓｐ３７産生を活性化するための直腸適用のための坐薬を使用して、経皮適用を介して患者に投与され得る。Ｋｓｐ３７産生を活性化するための皮膚パッチでの処置は、約８時間の期間、１週間に１回、皮膚へのパッチの適用を含み、一方、Ｋｓｐ３７産生を活性化するためのＤＭＦの直腸適用による処置は、理想的には、１週間に１回、坐薬の使用を含む。

【0165】

Ｋｓｐ３７産生を活性化するためのＤＭＦの治療的に有効な用量は、約２ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌ、好ましくは約１００ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌ、さらにより好ましくは約１５０ｍｇ／ｌのＤＭＦのピーク血漿レベルをもたらす用量である。特に好ましいのは、１００ｍｇ／ｌ～１５０ｍｇ／ｌ又は１５０ｍｇ／ｌ～２００ｍｇ／ｌのＤＭＦのピーク血漿レベルである。

【0166】

極性化合物の経皮投与の場合、吸収速度は、被験体の皮膚によって決定される。ヒトの皮膚に曝露すると、液体のＤＭＦは定常状態で約９．４ｍｇ／ｃｍ^２／時の速度で吸収される（Mraz and Nohova, 1992, Occup. Env. Health 64:85-92参照）。

【0167】

従って、所望の吸収速度は、各パッチの面積及び皮膚に適用されるパッチの数を決定することによって、薬物に曝露される皮膚の表面積を制御することによって達成され得る。例えば、径９ｃｍの２枚のパッチは、１２７ｃｍ^２の総皮膚表面積を極性化合物に曝露する。ＤＭＦについては、これは、１時間当たり約１．２ｇのＤＭＦの吸収速度を生じる。

【0168】

約１５ｍｇ／ｋｇのＤＭＴの初期用量が特に好ましい。

【0169】

Ｋｓｐ３７タンパク質の産生が少なくとも２０年間必要とされる治療範囲まで十分に遺伝子改変される前に、ＤＭＦによる約２年間の長期処置が必要とされることが予想される。

【0170】

したがって、本発明は、２４ｋＤａ～４５ｋＤａの範囲の分子量を有するＫｓｐ３７が、免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患に対する被験体の免疫応答を増強する最適濃度範囲を同定し、免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患の処置のための医薬及び医薬の調製、ならびに免疫系障害及び／又はウイルス癌に関連するウイルス感染及び／又は疾患に対する処置及び／又は保護の方法を提供する。

【0171】

本明細書に引用される全ての刊行物は、その全体が参照により組み込まれる。本明細書における参考文献の引用又は議論は、そのようなものが本発明の先行技術であることの承認として解釈されるべきではない。

【国際調査報告】