特表 2023-533693 ＧａｌＮＡｃ－オリゴヌクレオチドコンジュゲート及びサポニンの治療用配合物、及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-04

(54)【発明の名称】ＧａｌＮＡｃ－オリゴヌクレオチドコンジュゲート及びサポニンの治療用配合物、及びその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/704 20060101AFI20230728BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230728BHJP

   A61K 47/61 20170101ALI20230728BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20230728BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20230728BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20230728BHJP

   A61K 31/712 20060101ALI20230728BHJP

   A61K 31/7115 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20230728BHJP

【ＦＩ】

A61K31/704

A61K45/00

A61K47/61

A61K31/7105

A61K31/713

A61K31/711

A61K31/712

A61K31/7115

A61P35/00

A61P31/00

A61P31/12

A61P3/06

A61P3/00

A61P7/04

A61P13/02

A61P43/00 105

A61P43/00 111

A61P37/02

A61P37/06

A61P31/14

A61P43/00 121

【審査請求】未請求

【予備審査請求】有

(21)【出願番号】P 2022580238

(86)(22)【出願日】2021-06-23

(85)【翻訳文提出日】2023-02-24

(86)【国際出願番号】 NL2021050394

(87)【国際公開番号】W WO2021261998

(87)【国際公開日】2021-12-30

(31)【優先権主張番号】2025902

(32)【優先日】2020-06-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(31)【優先権主張番号】PCT/NL2021/050384

(32)【優先日】2021-06-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521271727

【氏名又は名称】サプリーム テクノロジーズ，ベー．フェー．

【氏名又は名称原語表記】ＳＡＰＲＥＭＥ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ Ｂ．Ｖ．

【住所又は居所原語表記】Ａｎｔｏｎｉｅ ｖａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋｌａａｎ ９， Ｂｕｉｌｄｉｎｇ Ａ１２－１， ３７２１ ＭＡ Ｂｉｌｔｈｏｖｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ

(74)【代理人】

【識別番号】110002000

【氏名又は名称】弁理士法人栄光事務所

(72)【発明者】

【氏名】ポステル，ルーベン

(72)【発明者】

【氏名】ヘアマンス，ガイ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076DD67

4C076EE59

4C076FF34

4C084AA19

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA531

4C084ZA751

4C084ZB071

4C084ZB081

4C084ZB211

4C084ZB261

4C084ZB321

4C084ZB331

4C084ZC211

4C084ZC351

4C084ZC411

4C084ZC751

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA10

4C086EA16

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA53

4C086ZA75

4C086ZB07

4C086ZB08

4C086ZB21

4C086ZB26

4C086ZB32

4C086ZB33

4C086ZC21

4C086ZC35

4C086ZC41

4C086ZC75

(57)【要約】

本発明は、ＡＳＧＰＲのリガンドが少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を含む、エフェクター分子とＡＳＧＰＲのリガンドとのコンジュゲート、及びモノデスモシド又はビデスモシドトリテルペン配糖体型のサポニンを含む医薬配合物に関する。本発明はまた、コンジュゲート及びサポニンを含む医薬組成物に関する。加えて、本発明は、薬剤としての使用のための、又は、発現産物が以下の遺伝子：アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴＳ、ＧＯ、ＣＣＳ、ＨＢＶのＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つ以上に関連する疾患若しくは健康問題の治療若しくは予防における使用のための、並びに／又は、癌、感染症疾患、ウイルス感染症、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、ＡＡＴ関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、ＴＴＲ媒介性アミロイドーシス、遺伝性ＴＴＲアミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）、補体媒介性疾患、Ｂ型肝炎感染症、若しくは自己免疫疾患の治療若しくは予防における使用のための、本明細書の医薬配合物又は医薬組成物に関する。さらに、本発明は、本発明のエフェクター分子を細胞外から前記細胞内に、好ましくは前記細胞の細胞質ゾルに移行させるためのインビトロ又はエクスビボ方法に関する。本発明はまた、本発明のコンジュゲートを細胞外から前記細胞内に移行させるためのインビトロ又はエクスビボ方法に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

医薬配合物であって、
－ エフェクター分子とアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のリガンドとのコンジュゲートであって、前記ＡＳＧＰＲのリガンドが、少なくとも１つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分、好ましくは３つ又は４つのＧａｌＮＡｃ部分を含み、より好ましくは（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスを含むか又はそれからなるコンジュゲートと；
－ モノデスモシドトリテルペン配糖体又はビデスモシドトリテルペン配糖体であるサポニンとを含み、
任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、医薬配合物。

【請求項2】

少なくとも２種の医薬組成物の形態の請求項１に記載の医薬配合物であって、
－ 前記コンジュゲートを含み、任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、第１の医薬組成物と；
－ 前記サポニンを含み、任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、第２の医薬組成物とを含む医薬配合物。

【請求項3】

前記コンジュゲート、前記サポニン、並びに任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、単一の医薬組成物の形態の請求項１に記載の医薬配合物。

【請求項4】

前記エフェクター分子が、薬物分子などの小分子、タンパク毒素などの毒素、ＢＮＡ、異種核酸若しくはｓｉＲＮＡなどのオリゴヌクレオチド、酵素、ペプチド、タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせの少なくとも１つを含むか又はそれからなり、好ましくは毒素、酵素又はオリゴヌクレオチドである、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項5】

前記ＡＳＧＰＲのリガンドと、前記エフェクター分子、好ましくは毒素又はオリゴヌクレオチドとが、共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つのリンカーを介してコンジュゲートされている、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項6】

前記エフェクター分子が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチヘアピン型マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ、アプタマーＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、アンチマイクロＲＮＡ、（アンチｍｉＲＮＡ、アンチｍｉＲ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ロックド核酸（ＬＮＡ）、架橋型核酸（ＢＮＡ）、２’－Ｏ，４’－アミノエチレン架橋型核酸（ＢＮＡ^ＮＣ）、ＢＮＡベースのｓｉＲＮＡ、及びＢＮＡベースのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＢＮＡ－ＡＯＮ）のいずれか１つ以上から選択されるオリゴヌクレオチドである、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項7】

前記エフェクター分子が、アンチｍｉＲＮＡ、ＢＮＡ－ＡＯＮ又はｓｉＲＮＡ、例えば、好ましくは化学的に修飾されたｓｉＲＮＡ、代謝的に安定したｓｉＲＮＡ、及び化学的に修飾され、代謝的に安定したｓｉＲＮＡから選択されるＢＮＡベースのｓｉＲＮＡのいずれか１つから選択されるオリゴヌクレオチドである、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項8】

前記エフェクター分子が、以下の遺伝子：ＨＳＰ２７、アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、プロタンパク質転換酵素であるサブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、δ－アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ１）、アンチトロンビン３（ＡＴ３）、グリコール酸オキシダーゼ（ＧＯ）、補体成分Ｃ５（ＣＣ５）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のいずれか１つをサイレンシングすることができ、並びに／又は異常なｍｉＲＮＡを標的化することができるオリゴヌクレオチドである、請求項１～７のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項9】

前記エフェクター分子が、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、以下のタンパク質：ＨＳＰ２７、アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子の発現産物、ＨＢＶのＳ遺伝子の発現産物、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つの発現に関与するｍＲＮＡを標的化することができるか、又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、発癌性ｍｉＲＮＡ（ｏｎｃｏ－ｍｉＲ）の阻害若しくはｏｎｃｏ－ｍｉＲの発現の抑制などのｍｉＲＮＡ機能を弱めるか若しくは回復させることができるオリゴヌクレオチドである、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項10】

前記エフェクター分子が、好ましくはペプチド、タンパク質、ウレアーゼ及びＣｒｅ－リコンビナーゼなどの酵素、タンパク性毒素、リボソーム不活性化タンパク質、表Ａ５から選択されるタンパク毒素、並びに／又は、細菌毒素、より好ましくはアポプチンなどのウイルス毒素のいずれか１つ以上から選択される植物毒素；志賀毒素、志賀様毒素、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素（ＰＥ）若しくはＰＥの外毒素Ａなどの細菌毒素、完全長若しくはトランケートされたジフテリア毒素（ＤＴ）、コレラ毒素；αサルシンなどの真菌毒素；リボソーム不活性化タンパク質を含む植物毒素及び２型リボソーム不活性化タンパク質のＡ鎖、例えば、ダイアンシン（例えば、ダイアンシン－３０若しくはダイアンシン－３２）、サポリン（例えば、サポリン－Ｓ３若しくはサポリン－Ｓ６）、ブーガニン若しくはブーガニンの脱免疫化誘導体であるデブーガニング、志賀様毒素Ａ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、リシン、リシンＡ鎖、モデシン、モデシンＡ鎖、アブリン、アブリンＡ鎖、ボルケンシン、ボルケンシンＡ鎖、ビスキュミン、ビスキュミンＡ鎖；又はカエルＲＮａｓｅなどの動物若しくはヒト毒素、又はヒト由来のグランザイムＢ若しくはアンギオゲニン、又はこれらの任意のフラグメント若しくは誘導体のいずれか１つ以上から選択される少なくとも１つのタンパク性分子を含むか又はそれからなる毒素であり；好ましくは、前記タンパク毒素は、ダイアンシン及び／若しくはサポリンであり、並びに／又は毒素標的化リボソーム、毒素標的化延長因子、毒素標的化チューブリン、毒素標的化ＤＮＡ及び毒素標的化ＲＮＡの少なくとも１つ、より好ましくは、エムタンシン、パスドトクス、マイタンシノイド誘導体ＤＭ１、マイタンシノイド誘導体ＤＭ４、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ、ベドチン）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ、マホドチン）、カリケアマイシン、Ｎ－アセチル－γ－カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体、ベンゾジアゼピン、ＣＣ－１０６５類似体、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、シクロホスファミド、エトポシド、ドセタキセル、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ミトキサントロン、ツブリシン、インドリノベンゾジアゼピン、ＡＺ１３５９９１８５、クリプトフィシン、リゾキシン、メトトレキセート、アントラサイクリン、カンプトセシン類似体、ＳＮ－３８、ＤＸ－８９５１ｆ、メシル酸エキサテカン、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素（ＰＥ３８）のトランケート形態、デュオカルマイシン誘導体、アマニチン、α－アマニチン、スプライソスタチン、タイランスタチン、オゾガマイシン、テシリン、アンバースタチン２６９及びソラブタンシン、若しくはこれらの誘導体のいずれか少なくとも１つを含むか若しくはそれからなる、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項11】

前記サポニンが、
２α－ヒドロキシオレアノール酸；
１６α－ヒドロキシオレアノール酸；
ヘデラゲニン（２３－ヒドロキシオレアノール酸）；
１６α，２３－ヒドロキシオレアノール酸；
ギプソゲニン；
キラ酸；
プロトエシゲニン－２１（２－メチルブタ－２－エノアート）－２２－アセテート；
２３－オキソ－バリングトゲノールＣ－２１，２２－ビス（２－メチルブタ－２－エノアート）；
２３－オキソ－バリングトゲノールＣ－２１（２－メチルブタ－２－エノアート）－１６，２２－ジアセテート；
ジギトゲニン；
３，１６，２８－トリヒドロキシオレアナン－１２－エン；
ギプソゲン酸；
及び
これらの誘導体から選択されるアグリコンコア構造を含み、
好ましくは、前記サポニンが、キラ酸及びギプソゲニン又はこれらの誘導体から選択されるアグリコンコア構造を含み、より好ましくは、前記サポニンアグリコンコア構造は、キラ酸又はその誘導体である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項12】

請求項１～１１のいずれか一項に記載の医薬配合物であって、
前記サポニンが、群Ａ：
ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－、
Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－Ａｒａ－、
Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→２）－［Ｇｌｃ－（１→４）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→２）－Ａｒａ－（１→３）－［Ｇａｌ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→２）－Ａｒａ－（１→３）－［Ｇａｌ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－Ｇｌｃ－（１→４）－Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→３）－［Ｇｌｃ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、及び
これらの誘導体
から選択される、前記アグリコン構造に結合された糖鎖を含むか、
又は
前記サポニンが、群Ｂ：
Ｇｌｃ－、
Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－、
Ｒｈａ－（１→２）－［Ａｒａ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－、
Ａｒａ－、
Ｘｙｌ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１は４Ｅ－メトキシケイ皮酸である）、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ２－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ２は４Ｚ－メトキシケイ皮酸である）、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇａｌ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－３、４－ジ－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ３－（→４）］－３－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ３は４Ｅ－メトキシケイ皮酸である）、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
（Ａｒａ－若しくはＸｙｌ－）（１→３）－（Ａｒａ－若しくはＸｙｌ－）（１→４）－（Ｒｈａ－若しくはＦｕｃ－）（１→２）－［４－ＯＡｃ－（Ｒｈａ－若しくはＦｕｃ－）（１→４）］－（Ｒｈａ－若しくはＦｕｃ－）、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇａｌ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ａｒａ／Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ／Ｆｕｃ－（１→４）－［Ｇｌｃ／Ｇａｌ－（１→２）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ４－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ４は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ５－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ５は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
６－ＯＡｃ－Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３－ＯＡｃ－Ｒｈａ－（１→３）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３－ＯＡｃ－－Ｒｈａ－（１→３）］－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３、４－ジ－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
６－ＯＡｃ－Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ６－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ６は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ｒｈａ－（１→２）－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ７－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ７は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ８－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ８は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ９－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ９は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１０－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１０は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１１－（→３）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１１は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１２－（→３）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１２は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｇｌｃ－（１→６）］－Ｇａｌ－、及び
これらの誘導体
から選択される、前記アグリコン構造に結合された糖鎖を含むか、
又は
前記サポニンが、前記アグリコンコア構造に結合された前記群Ａから選択される第１の糖鎖を含み、前記アグリコンコア構造に結合された前記群Ｂから選択される第２の糖鎖を含むビデスモシドトリテルペン配糖体である、医薬配合物。

【請求項13】

前記サポニンが、キラヤ樹皮サポニン、ディプサコシドＢ、サイコサポニンＡ、サイコサポニンＤ、マクラントイジンＡ、エスクレントシドＡ（ｅｓｃｕｌｅｎｔｏｓｉｄｅ Ａ）、フィトラッカゲニン、エシネート、ＡＳ６．２、ＮＰ－００５２３６、ＡＭＡ－１、ＡＭＲ、α－ヘデリン、ＮＰ－０１２６７２、ＮＰ－０１７７７７、ＮＰ－０１７７７８、ＮＰ－０１７７７４、ＮＰ－０１８１１０、ＮＰ－０１７７７２、ＮＰ－０１８１０９、ＮＰ－０１７８８８、ＮＰ－０１７８８９、ＮＰ－０１８１０８、ＳＡ１６４１、ＡＥ Ｘ５５、ＮＰ－０１７６７４、ＮＰ－０１７８１０、ＡＧ１、ＮＰ－００３８８１、ＮＰ－０１７６７６、ＮＰ－０１７６７７、ＮＰ－０１７７０６、ＮＰ－０１７７０５、ＮＰ－０１７７７３、ＮＰ－０１７７７５、ＳＡ１６５７、ＡＧ２、ＳＯ１８６１、ＧＥ１７４１、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２、ＳＯ１９０４、ＱＳ－７、ＱＳ１８６１、ＱＳ－７ ａｐｉ、ＱＳ１８６２、ＱＳ－１７、ＱＳ－１８、ＱＳ－２１ Ａ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ａ－ｘｙｌｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ｘｙｌｏ、β－エスシン、エスシンＩａ、茶種子サポニンＩ、茶種子サポニンＪ、アッサムサポニンＦ、ジギトニン、プリムラ酸１及びＡＳ６４Ｒ、これらの立体異性体、これらの誘導体、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくはＱＳ－２１、ＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６１誘導体、ＳＡ１６４１、ＳＡ１６４１誘導体、ＧＥ１７４１、ＧＥ１７４１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、より好ましくはＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、最も好ましくはＳＯ１８６１誘導体である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項14】

前記サポニンがサポニン誘導体であり、
ｉ．前記サポニン誘導体が、誘導体化されたアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．前記サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは請求項１２に記載の群Ａから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、誘導体化されているカルボキシル基を含むか；又は
ｉｉｉ．前記サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは請求項１２に記載の群Ｂから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、誘導体化されているアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、任意選択により誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．のうちの２つの誘導体化の任意の組み合わせが存在する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項15】

前記サポニンが、ＳＯ１８６１、ＳＡ１６５７、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１、ＱＳ－２１、ＱＳ－２１Ａ、ＱＳ－２１ Ａ－ａｐｉ、ＱＳ－２１ Ａ－ｘｙｌ、ＱＳ－２１Ｂ、ＱＳ－２１ Ｂ－ａｐｉ、ＱＳ－２１ Ｂ－ｘｙｌ、ＱＳ－７－ｘｙｌ、ＱＳ－７－ａｐｉ、ＱＳ－１７－ａｐｉ、ＱＳ－１７－ｘｙｌ、ＱＳ１８６１、ＱＳ１８６２、キラヤサポニン、サポニナム・アルブム（Ｓａｐｏｎｉｎｕｍ ａｌｂｕｍ）、ＱＳ－１８、Ｑｕｉｌ－Ａ、Ｇｙｐ１、ジプソシドＡ、ＡＧ１、ＡＧ２、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１９０４、これらの立体異性体、これらの誘導体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくはＱＳ－２１、ＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６１誘導体、ＳＡ１６４１、ＳＡ１６４１誘導体、ＧＥ１７４１、ＧＥ１７４１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、より好ましくはＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、最も好ましくはＳＯ１８６１誘導体である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項16】

前記サポニンが、請求項１１に記載のキラ酸サポニン又はギプソゲニンサポニンのサポニン誘導体であり、分子１：

【化1】

［式中、
Ａ_１は水素、単糖又は直鎖若しくは分岐オリゴ糖を表し、好ましくは請求項１２に記載の群Ａから選択される糖鎖を表し、より好ましくは請求項１２に記載の群Ａから選択される糖鎖を表し、及びグルクロン酸部分を含むか又はそれからなり；
Ａ_２は水素、単糖又は直鎖若しくは分岐オリゴ糖を表し、好ましくは請求項１２に記載の群Ｂから選択される糖鎖を表し、より好ましくは請求項１２に記載の群Ｂから選択される糖鎖を表し、及び少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基、例えば１、２、３、又は４つのアセトキシ基を含み、Ａ_１及びＡ_２の少なくとも１つは水素でなく、好ましくはＡ_１及びＡ_２の両方がオリゴ糖鎖であり；
並びに、Ｒはギプソゲニン内の水素又はキラ酸内のヒドロキシルである］で表され；
前記サポニン誘導体は、分子１で表される前記サポニンに対応するものであり、以下の誘導体化：
ｉ．前記キラ酸又はギプソゲニンのＣ_２３位のアルデヒド基が誘導体化されている；
ｉｉ．Ａ_１が請求項１２に記載の群Ａから選択される糖鎖を表し、及びグルクロン酸部分を含むか又はそれからなる場合、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が誘導体化されている；及び
ｉｉｉ．Ａ_２が請求項１２に記載の群Ｂから選択される糖鎖を表し、及び少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ_２の１つの糖部分又は２つ以上の糖部分のうち１つ以上、好ましくは全てのアセトキシ基が誘導体化されている、の少なくとも１つが存在する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項17】

Ａ_１が請求項１２に記載の群Ａから選択される糖鎖を表し、及びグルクロン酸部分を含むか若しくはそれからなり、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が誘導体化されているか、並びに／又は、Ａ_２が請求項１２に記載の群Ｂから選択される糖鎖を表し、及びＡ_２が少なくとも１つのアセトキシ基を含み、Ａ_２の少なくとも１つのアセトキシ基が誘導体化されている、請求項１６に記載の医薬配合物。

【請求項18】

分子１で表される前記サポニンが、ビデスモシドトリテルペンサポニンである、請求項１６又は１７に記載の医薬配合物。

【請求項19】

前記サポニン誘導体が、分子１で表される前記サポニンに対応するものであり、以下の誘導体化：
ｉ．前記キラ酸又はギプソゲニンのＣ_２３位のアルデヒド基が、
－ アルコールへの還元；又は
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされ、前記ＥＭＣＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＢＭＰＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＫＭＵＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換によって誘導体化されており；
ｉｉ．Ａ_１が請求項１２に記載の群Ａから選択される糖鎖を表し、及びＡ_１がグルクロン酸部分を含むか又はそれからなる場合、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）又はＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されており、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、又はＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされ；
ｉｉｉ．Ａ_２が請求項１２に記載の群Ｂから選択される糖鎖を表し、及びＡ_２が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ_２の１つの糖部分又は２つ以上の糖部分のうち１つ以上、好ましくは全てのアセトキシ基が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への転換によって誘導体化されている、の少なくとも１つが存在する、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項20】

Ａ_１が、Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡであり、及び／又は、Ａ_２が、Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃであり、好ましくは、分子１で示される前記サポニンが、３－Ｏ－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）］－β－Ｄ－グルクロノピラノシルキラ酸２８－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→３）－β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→４）－α－Ｌ－ラムノピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）－４ＯＡｃ－β－Ｄ－キノボピラノシル－（１→４）］－β－Ｄ－フコピラノシドであり、より好ましくはＳＯ１８６１、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１及び／若しくはＱＳ－２１又はそれらの誘導体、最も好ましくはＳＯ１８６１又はそれらの誘導体である、請求項１６～１９のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項21】

前記サポニンがサポニン誘導体であり、
ｉ．前記サポニン誘導体が、
－ アルコールへの還元；又は
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされ、前記ＥＭＣＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＢＭＰＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＫＭＵＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換
によって誘導体化されているアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造
を含むか；又は
ｉｉ．前記サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは請求項１２に記載の群Ａから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）又はＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含み、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、又はＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされるか；又は
ｉｉｉ．前記サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは請求項１２に記載の群Ｂから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への変換によって誘導体化されているアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．前記サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、任意選択により誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．のうちの２つの誘導体化の任意の組み合わせを含み；
好ましくは、前記サポニン誘導体が、ＥＭＣＨとの反応によるヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基から構成される前記アグリコンコア構造を含み、前記ＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項22】

前記サポニンがサポニン誘導体であり、
ｉ．前記サポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応によるヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされるか；又は
ｉｉ．前記サポニンが、糖鎖、好ましくは請求項１２に記載の群Ａから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、カルボキシル基、好ましくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含み、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされるか；又は
ｉｉｉ．前記サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．及びｉｉ．の組み合わせを含む、請求項２１に記載の医薬配合物。

【請求項23】

前記サポニン誘導体が、アルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み、前記サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは請求項１２に記載の群Ａから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、カルボキシル基、好ましくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含む、請求項２１に記載の医薬配合物。

【請求項24】

前記サポニンが、分子２：

【化2】

で表されるサポニン誘導体であるか、
又は、前記サポニン誘導体が、分子３：

【化3】

で表されるサポニン誘導体である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項25】

薬剤としての使用のための、請求項１～２４のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項26】

発現産物が、以下の遺伝子：アポＢ、ＨＳＰ２７、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つ以上に関与する、疾患又は健康問題の治療又は予防における使用のための、請求項１～９のいずれか一項に記載の、又は請求項１～９のいずれか一項に従属する範囲の請求項１１～２４のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項27】

癌、感染症疾患、ウイルス感染症、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、ＡＡＴ関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、ＴＴＲ媒介性アミロイドーシス、遺伝性ＴＴＲアミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）、補体媒介性疾患、Ｂ型肝炎感染症、ＨＳＰ２７発現に関連する疾患若しくは障害、又は自己免疫疾患の治療又は予防に使用するための、請求項１～９のいずれか一項に記載の、又は請求項１～９のいずれか一項に従属する範囲の請求項１１～２４のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項28】

請求項２５～２７のいずれか一項に記載の使用のための医薬配合物であって、前記医薬配合物が、請求項１９～２４のいずれか一項に記載される通りである、医薬配合物。

【請求項29】

請求項１及び５～１０のいずれか一項に記載のエフェクター分子を、細胞外から前記細胞内に、好ましくは前記細胞の細胞質ゾル内に移行させるための、インビトロ又はエクスビボ方法であって、
ａ）好ましくは肝臓細胞、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞から選択される、ＡＳＧＰＲ、好ましくはＡＳＧＰＲ１をその表面に発現する細胞を提供する工程；
ｂ）移行される前記エフェクター分子を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲートを提供する工程；
ｃ）請求項１～２４のいずれか一項に記載のサポニンを提供する工程；
ｄ）工程ａ）の前記細胞を、工程ｂ）の前記コンジュゲート及び工程ｃ）の前記サポニンとインビトロ又はエクスビボで接触させる工程であって、それによって前記細胞外から前記細胞内への前記エフェクター分子を含む前記コンジュゲートの移行を生じさせ、前記コンジュゲートの移行を生じさせることによって、前記細胞外から前記細胞内、好ましくは前記細胞の細胞質ゾルへの前記エフェクター分子の移行を生じさせる、接触させる工程を含む方法。

【請求項30】

請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲートを、細胞外から前記細胞内に、好ましくは前記細胞の細胞質ゾル内に移行させるためのインビトロ又はエクスビボ方法であって、
ａ）好ましくは肝臓細胞、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞から選択される、ＡＳＧＰＲ、好ましくはＡＳＧＰＲ１をその表面に発現する細胞を提供する工程；
ｂ）請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲートを提供する工程；
ｃ）請求項１～２４のいずれか一項に記載のサポニンを提供する工程；
ｄ）工程ａ）の前記細胞を、工程ｂ）の前記コンジュゲート及び工程ｃ）の前記サポニンとインビトロ又はエクスビボで接触させる工程であって、それによって前記細胞外から前記細胞内への前記コンジュゲートの移行を生じさせる、接触させる工程を含む方法。

【請求項31】

前記ＡＳＧＰＲのリガンドが、少なくとも１つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分、好ましくは３つ若しくは４つのＧａｌＮＡｃ部分を含み、より好ましくは（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスを含むか若しくはそれからなり、並びに／又は、前記エフェクター分子が、アンチｍｉＲＮＡ、ＢＮＡ－ＡＯＮ若しくはｓｉＲＮＡ、例えば、好ましくは化学的に修飾されたｓｉＲＮＡ、代謝的に安定したｓｉＲＮＡ、及び化学的に修飾され、代謝的に安定したｓｉＲＮＡから選択されるＢＮＡベースのｓｉＲＮＡのいずれか１つから選択されるオリゴヌクレオチドである、請求項２９又は３０に記載の方法。

【請求項32】

前記エフェクター分子が、薬物分子などの小分子、タンパク毒素などの毒素、ＢＮＡ、異種核酸若しくはｓｉＲＮＡなどのオリゴヌクレオチド、酵素、ペプチド、タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせの少なくとも１つを含むか又はそれからなり、好ましくは前記エフェクター分子は毒素、酵素又はオリゴヌクレオチドであり、好ましくは前記毒素はサポリン又はダイアンシンである、請求項２９又は３０に記載の方法。

【請求項33】

前記サポニンが、誘導体化ＳＯ１８６１及び／又は誘導体化ＱＳ－２１であり、好ましくは、請求項１９に記載のＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ又はＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ又はＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨである、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記エフェクター分子が、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、以下の遺伝子：アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）、ＨＳＰ２７、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、プロタンパク質転換酵素であるサブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、δ－アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ１）、アンチトロンビン３（ＡＴ３）、グリコール酸オキシダーゼ（ＧＯ）、補体成分Ｃ５（ＣＣ５）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のいずれか１つをサイレンシングすることができ、並びに／又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、異常なｍｉＲＮＡを標的化することができ、並びに／又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、以下のタンパク質：ＨＳＰ２７、アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子の発現産物、ＨＢＶのＳ遺伝子の発現産物、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つの発現に関与するｍＲＮＡを標的化することができるか、又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、ｍｉＲＮＡ（ｏｎｃｏ－ｍｉＲ）の阻害若しくはｏｎｃｏ－ｍｉＲの発現の抑制などのｍｉＲＮＡ機能を弱めるか若しくは回復させることができるオリゴヌクレオチドである、請求項２９～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

請求項１～２４のいずれか一項に記載の医薬配合物又は請求項２、４～２４のいずれか一項に記載の第２の医薬組成物を含むキットオブパーツ、及び請求項２５～２８のいずれか一項に記載の医薬配合物若しくは第２の医薬組成物を使用するための、又は請求項２９～３４のいずれか一項に記載の方法に使用するための指示書。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＡＳＧＰＲのリガンドが少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を含む、エフェクター分子とＡＳＧＰＲのリガンドとのコンジュゲート、及びモノデスモシド又はビデスモシドトリテルペン配糖体型のサポニンを含む医薬配合物に関する。本発明はまた、コンジュゲート及びサポニンを含む医薬組成物に関する。加えて、本発明は、薬剤としての使用のための、又は、発現産物が以下の遺伝子：アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つ以上に関連する疾患若しくは健康問題の治療若しくは予防における使用のための、並びに／又は、癌、感染症疾患、ウイルス感染症、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、ＡＡＴ関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、ＴＴＲ媒介性アミロイドーシス、遺伝性ＴＴＲアミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）、補体媒介性疾患、Ｂ型肝炎感染症、若しくは自己免疫疾患の治療若しくは予防における使用のための、本発明の医薬配合物又は組成物に関する。さらに、本発明は、本発明のエフェクター分子を細胞外から前記細胞内に、好ましくは前記細胞の細胞質ゾルに移行させるためのインビトロ又はエクスビボ方法に関する。本発明はまた、本発明のコンジュゲートを細胞外から前記細胞内に移行させるためのインビトロ又はエクスビボ方法に関する。

【背景技術】

【0002】

ヒトであれ、又は病原体であれ、タンパク質の機能を阻害する能力は、新薬を発見するのに不可欠なものである。従来の小分子薬物及び抗体は、利用可能な標的のサブセットに強く限定されている。小分子は、主に補助因子部位又は伝達物質部位に結合し、小分子を収容するように設計された部位に効果的に結合する。抗体は、さらに多くの種類のタンパク質に結合することができるが、一般的に、細胞外の標的に限定されている。

【0003】

オリゴヌクレオチド療法は、遺伝子転写及び翻訳経路を直接操作することによって、小分子薬物又は抗体薬物に直面する問題の多くを克服することを目的とした、比較的新しく、急速に発展している分野である。オリゴヌクレオチドの効力及び多用途性は、特に「アンドラッガブル」なタンパク質をコードする遺伝子を古典的な小分子薬物によって抑制することが見込まれるため、魅力的な薬物候補となっている。最初のオリゴヌクレオチド薬物は、一本鎖核酸分子がそれらと相補的なｍＲＮＡ標的に特異的な配列と結合することにより、ＲＮアーゼＨ系によって二重鎖の分解を引き起こすアンチセンス技法に基づくものであった。

【0004】

１９９８年に、Ａｎｄｒｅｗ Ｆｉｒｅ及びＣｒａｉｇ Ｍｅｌｌｏによって、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）の原因物質として同定する、影響力の大きい論文がＣａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓに公開され、この現象をＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）と称した。ＲＮＡｉの発見は、植物及び菌類における遺伝子サイレンシングの不可解な知見を説明するものであり、生物学に革命を巻き起こすきっかけとなり、最終的に非コードＲＮＡが多細胞生物における遺伝子発現の中心的調節因子であることが示された。その後ほどなくして、小分子ｄｓＲＮＡ（典型的には１５～３０ｂｐ）が、非特異的なインターフェロン応答を誘発することなく、哺乳類細胞にＲＮＡｉサイレンシングを触媒的に誘導することができることが発見された。低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）及び低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）などの小分子ｄｓＲＮＡによるＲＮＡｉ経路の標的化には、著しくより効率的（触媒的）であり、且つ遺伝子発現をより長く阻害するという、アンチセンスに勝るいくつかの理論上の利点がある。このことは、投与頻度がより少なくなると共に、用量がより少なく、コストがより低くなると言い換えることができよう。曝露が低ければ低いほど、ｓｉＲＮＡの毒性問題が低くなることも意味し得る。

【0005】

しかしながら、ｓｉＲＮＡがインビボにおいてその標的に到達する前に、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）機構に対する経路を遮断するという、多数の大きな障壁に直面する。血流に入ると、ｓｉＲＮＡは、そのサイズの小ささや高いアニオン特性によって、内因性ヌクレアーゼによって分解しやすくなり、腎排泄を受けやすくなる。加えて、ｓｉＲＮＡは、その標的細胞に到達する前に、血管のタイトな内皮結合を移動し、細胞外マトリックスを通じて拡散されなければならない。ｓｉＲＮＡは、その多くの負電荷により、細胞膜に容易に結合したり、又は細胞膜を通過したりすることがなく、また、一度細胞の内部に入ると、エンドソームから脱出してその細胞内のタンパク質標的と相互作用する必要がある。

【0006】

従って、オリゴヌクレオチド（ｓｉＲＮＡなど）療法がうまくいくかどうかは、細胞外から細胞質ゾルに薬物を効果的に送達することに強く依存する。従って、オリゴヌクレオチド（ｓｉＲＮＡなど）送達を改善する送達システムを開発することに、かなりの注目が集まっている。ウイルス送達の他に、細胞へのｓｉＲＮＡ（又は他のオリゴヌクレオチド）送達を向上させるために利用される主な方法は、リポソーム、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）及びそれらの模倣体、又はナノ粒子を利用するものである（Ｇｏｏｄｉｎｇ，Ｍａｔｔ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｂｉｏｌｏｇｙ ＆ ｄｒｕｇ ｄｅｓｉｇｎ ８０．６（２０１２）；７８７－８０９）。挿入突然変異誘発及び免疫発生の可能性などの安全性上の懸念は、ウイルス手法の将来性を限定するものと見なされる。

【0007】

リポソームは、ｓｉＲＮＡなどのオリゴヌクレオチドに最も一般的に使用されている送達ベクターであり、この場合、オリゴヌクレオチドは脂質二重層内に封入されている。リポソームによるオリゴヌクレオチド送達では、遺伝子調節及び炎症反応に影響する酸素ラジカル媒介毒性（カチオン性リポソームに典型的なもの）、細胞毒性などのいくつかの問題に直面する。さらに、脂質を使用したインビボ送達は、主に肝臓及び脾臓を標的化するものと思われている。

【0008】

細胞透過性ペプチド（ＣＣＰ）は、タンパク質形質導入ドメインとも呼ばれており、細胞膜を通過することができる珍しい性質を持った短いペプチド（通常＜３０アミノ酸残基長）である。ＣＰＰは、オリゴヌクレオチドと共有結合しているか、又はオリゴヌクレオチドと非共有結合複合体を形成することにより、オリゴヌクレオチドの細胞内取り込みを向上させることができる。ＣＰＰに媒介されるオリゴヌクレオチド送達の分野は、決して成熟しているとは言えない２つの分野である、オリゴヌクレオチド技術及びペプチド技術の両方によって引き起こされる問題が、単一の薬剤に組み合わされているため、極めて複雑である。オリゴヌクレオチドに関連する問題とは別に、ＣＰＰで直面する典型的な問題は、ペプチド鎖のインビボ安定性（の欠如）に関連するものであり、多くの場合、合成が複雑となる可能性があるか、及び／又は細胞透過活性の低減を示し得る、非天然ペプチド誘導体を使用することが必要となる。

【0009】

細胞送達の向上に関わらず、エンドソームによる捕捉を克服することは、効率的なＣＰＰ及び他の輸送システムを設計するのに主要な課題の１つである（Ｇｏｏｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ）。

【0010】

ナノ粒子及びナノ担体は、典型的にはポリマー、生物学的安定剤、及びオリゴヌクレオチドと複合体化した細胞標的リガンドから構成される、ナノスケールのオリゴヌクレオチド送達システムである。例示的なｓｉＲＮＡナノ担体システムは、ｓｉＲＮＡダイナミックポリコンジュゲート（Ｄｙｎａｍｉｃ Ｐｏｌｙ－Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）の名称で知られている。このシステムは、生物学的安定剤としてのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と肝細胞標的リガンドとに連結された両親媒性ポリマーに基づくものであり、ジスルフィド結合によってｓｉＲＮＡがポリマーに共有結合されている。標的部分及びＰＥＧ部分は、マレアマート結合を介してポリマーに結合され、血清タンパク質に結合しない、負に帯電したナノ粒子を形成する。マレアマート結合は、エンドサイトーシスにより内部移行した後に、エンドソームの酸性化を受けて速やかに加水分解し、ポリマーのカチオン性アミン基を露出させ、プロトンスポンジ効果によりエンドソーム脱出を誘導する。ナノ担体は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）（時にシクロデキストリンと組み合わされる）などのカチオン性ポリマーの形態でも知られており、これによって、ｓｉＲＮＡなどのオリゴヌクレオチドと静電複合体を形成し、分解からの保護と内部移行の促進を提供することができる。しかしながら、膜破壊及びアポトーシス誘導から生じるより高濃度での毒性は、治療用送達剤としてのカチオン性ポリマーの用途を限定してしまう可能性がある。ナノ粒子及びナノ担体の複雑な調製だけでなく、それらの長期間の安定性が、商業的に実現可能な用途に対して大きな障壁となっている。

【0011】

これらの送達システムのいくつかによって達成することのできる、細胞への改善されたオリゴヌクレオチド（ｓｉＲＮＡなど）送達とは裏腹に、エンドソーム脱出がオリゴヌクレオチドベースの治療薬、例えばＲＮＡｉベースの治療薬を適用するのに依然として大きな障壁となっている。エンドサイトーシスされたオリゴヌクレオチドのごく僅かな部分のみが細胞質空間に脱出し、そこで意図された機能を発揮するが、その大部分はエンドサイトーシスコンパートメントに捕捉されたままとなり、不活性化する。最近の文献では、受動的なｓｉＲＮＡの脱出率は＜０．０１％であることが示唆されている（Ｓｅｔｔｅｎ，Ｒｙａｎ Ｌ．，ｅｔ ａｌ．．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ １８．６（２０１９）；４２１－４４６）。さらに、オリゴヌクレオチドを機能的に内部移行して目的の効果を生じさせる（例えば、ノックダウン）細胞の能力は、細胞が大量のオリゴヌクレオチドを内部移行する程度とは無関係であるように見えることが示されている。これらの知見により、別の「生産的な」及び「非生産的な」自由取り込み経路があるという仮説が導き出されているが、これらの経路を識別する分子機構は依然として不明なままとなっている（Ｓｅｔｔｅｎ，Ｒｙａｎ Ｌ．，Ｊｏｈｎ Ｊ．Ｒｏｓｓｉ，ａｎｄ Ｓｉ－ｐｉｎｇ Ｈａｎ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ １８．６（２０１９）；４２１－４４６）。

【0012】

概して、根底にある機構（改善されたエンドソーム脱出、「生産的な」経路による取り込みの増大、又は別の機構）に関わらず、増大した効力（例えば、標的のノックダウン）、毒性の低下及び／又はオフターゲット効果の低下をもたらす改善されたオリゴヌクレオチドの送達システムに対する大きな必要性が依然として存在する。

【0013】

新たな戦略は、オリゴヌクレオチドの効力を増大させるために、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を受容体リガンドにコンジュゲートし、選択された組織に分布させることを必然的に伴うものである。例えば、３分岐型Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）をオリゴヌクレオチド治療薬にコンジュゲートすることで、単離肝細胞だけでなくインビボでの肝臓で１０～３０倍の効力の増大がもたらされる。ＧａｌＮＡｃは、糖タンパク質のペンダントオリゴ糖から末端のシアル酸残基が欠損した、損傷した糖タンパク質で見られるものである。肝臓は、肝細胞の表面上に非常に高いレベル（細胞当たり１０^５～１０^６のオーダー）の三量体アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）、好ましくはＡＳＧＰＲ１を発現することによって、体循環からこれらのタンパク質を除去するように機能する。ＡＳＧＰＲは、血液から循環中の巨大分子をエンドサイトーシスするために中性ｐＨでＧａｌＮＡｃに特異的に結合し、初期エンドソーム内にカーゴを下ろすために酸性ｐＨ（約５～６）でＧａｌＮＡｃを放出する。遊離したＡＳＧＰＲは、次いで再利用するために細胞表面に再度リサイクルされる。現在臨床治験中の約１／３のＲＮＡｉ薬物は、ＡＳＧＰＲを標的化する多価ＧａｌＮＡｃリガンドにコンジュゲートされた、単一分子の化学的に改変されたＲＮＡｉトリガーである。肝臓の好適な生理機能、ＡＳＧＰＲの特有の特性、ＧａｌＮＡｃリガンドの無毒性及びＧａｌＮＡｃ－ｓｉＲＮＡコンジュゲートの簡便さにより、このことが肝細胞への全身的なＲＮＡｉ送達のための魅力的な手法となっている。

【0014】

しかしながら、オリゴヌクレオチドシステム（例えば、ＧａｌＮＡｃ－オリゴヌクレオチドコンジュゲート）を標的化するＡＳＧＰＲの効力をさらに増大させ、毒性を減少させ、及び／又はオフターゲット効果を減少させた、改善された送達システムに対する必要性が依然として存在する。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0015】

本発明の第１の態様は、
－ エフェクター分子とアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のリガンドとのコンジュゲートであって、ＡＳＧＰＲのリガンドが、少なくとも１つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分、好ましくは３つ又は４つのＧａｌＮＡｃ部分を含み、より好ましくは（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスを含むか又はそれからなるコンジュゲートと；
－ モノデスモシドトリテルペン配糖体又はビデスモシドトリテルペン配糖体であるサポニンとを含み、
任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、医薬配合物に関する。

【0016】

一実施形態は、
－ コンジュゲートを含み、任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、第１の医薬組成物と；
－ サポニンを含み、任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、第２の医薬組成物とを含む、少なくとも２種の医薬組成物の形態の本発明の医薬配合物である。

【0017】

一実施形態は、コンジュゲート、サポニン、並びに任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、単一の医薬組成物の形態の本発明の医薬配合物である。

【0018】

本発明の第２の態様は、薬剤としての使用のための、本発明の医薬配合物に関する。

【0019】

本発明の第３の態様は、発現産物が、以下の遺伝子：アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つ以上に関与する、疾患又は健康問題の治療又は予防における使用のための本発明の医薬配合物に関する。一実施形態は、本発明による使用のための医薬配合物であり、前記使用が、癌、感染症疾患、ウイルス感染症、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、ＡＡＴ関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、ＴＴＲ媒介性アミロイドーシス、遺伝性ＴＴＲアミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）、補体媒介性疾患、Ｂ型肝炎感染症、又は自己免疫疾患の治療又は予防におけるものである。

【0020】

本発明の第４の態様は、本発明のエフェクター分子を細胞外から前記細胞内に、好ましくは前記細胞の細胞質ゾル内に移行させるための、インビトロ又はエクスビボ方法であって、
ａ）好ましくは肝臓細胞、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞から選択される、ＡＳＧＰＲ、好ましくはＡＳＧＰＲ１をその表面に発現する細胞を提供する工程；
ｂ）移行されるエフェクター分子を含む本発明のコンジュゲートを提供する工程；
ｃ）本発明のサポニンを提供する工程；
ｄ）工程ａ）の細胞を、工程ｂ）のコンジュゲート及び工程ｃ）のサポニンとインビトロ又はエクスビボで接触させる工程を含み、
それによって細胞外から前記細胞内へのエフェクター分子を含む前記コンジュゲートの移行を生じさせ、前記コンジュゲートの移行を生じさせることによって、細胞外から前記細胞内、好ましくは前記細胞の細胞質ゾルへのエフェクター分子の移行を生じさせる方法に関する。

【0021】

本発明の第５の態様は、本発明のコンジュゲートを細胞外から前記細胞内に、好ましくは前記細胞の細胞質ゾル内に移行させるためのインビトロ又はエクスビボ方法であって、
ａ）好ましくは肝臓細胞、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞から選択される、ＡＳＧＰＲ、好ましくはＡＳＧＰＲ１をその表面に発現する細胞を提供する工程；
ｂ）本発明のコンジュゲートを提供する工程；
ｃ）本発明のサポニンを提供する工程；
ｄ）工程ａ）の細胞を、工程ｂ）のコンジュゲート及び工程ｃ）のサポニンとインビトロ又はエクスビボで接触させる工程を含み、
それによってコンジュゲートを細胞外から前記細胞内への移行を生じさせる方法に関する。

【0022】

本発明の第６の態様は、本発明の医薬配合物又は本発明の第２の医薬組成物を含むキットオブパーツ、及び本発明による前記医薬配合物若しくは第２の医薬組成物を使用するための、又は本発明によるインビトロ若しくはエクスビボ方法を使用するための指示書に関する。

【0023】

定義
「ＧａｌＮＡｃ」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、Ｎ－アセチルガラクトサミン及びそのＩＵＰＡＣ名：２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトースを指す。

【0024】

「（ＧａｌＮＡｃ）_３トリス」という用語は、例えば、ｓｉＲＮＡベースの療法の分野におけるその通常の化学的意味を有し、本明細書では３つのＧａｌＮＡｃ単位を含む部分を指し、そのそれぞれが別々に、好ましくは少なくとも１つのリンカーを介してトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）（ＩＵＰＡＣ名：２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール）のヒドロキシル基に共有結合されている。（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスは、遊離アミンを含む分子として存在することができるか、又は、例えば本明細書に記載されるコンジュゲートを含む（ＧａｌＮＡｃ）_３トリス部分を形成するように、残存するアミン結合部位を介してさらに官能化してもよい。

【0025】

「オリゴヌクレオチド」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では一連の２つ以上のヌクレオチドを指し、即ち、オリゴヌクレオチドがリボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドで構成されている短いオリゴマーである。例としては、ＲＮＡ及びＤＮＡなどの核酸、並びにあらゆる改変ＲＮＡ又はＤＮＡ、例えばロックド核酸（ＬＮＡ）又は２’－Ｏ，４’－Ｃ－アミノエチレン若しくは２’－Ｏ，４’－Ｃ－アミノメチレン架橋型核酸（ＢＮＡ^ＮＣ）としても公知の架橋型核酸（ＢＮＡ）などのヌクレオチド類似体を含む一連の核酸があり、ここで、ヌクレオチドはリボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドである。

【0026】

「ＲＮＡｉ媒介遺伝子標的法」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、遺伝子の転写に関与するｍＲＮＡを標的化する小型の二本鎖ＲＮＡ分子などのオリゴヌクレオチドを細胞に移行することによって前記細胞内の遺伝子の機能に影響を与えるインビボ、エクスビボ又はインビトロ手法を指し、例えば、小型の二本鎖ＲＮＡ分子により、特定の遺伝子のＲＮＡｉサイレンシングを効率的に誘発することができる。

【0027】

「架橋型核酸」、即ち端的には「ＢＮＡ」、又は「ロックド核酸」、即ち端的には「ＬＮＡ」、又は２’－Ｏ，４’－Ｃ－アミノエチレン若しくは２’－Ｏ，４’－Ｃ－アミノメチレン架橋型核酸（ＢＮＡ^ＮＣ）という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では改変ＲＮＡヌクレオチドを指す。ＢＮＡは、「拘束ＲＮＡ分子」又は「インアクセシブル（ｉｎａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ）ＲＮＡ分子」とも称される。ＢＮＡ単量体は、「固定された」Ｃ_３’エンド型糖パッカリングによる５員、６員又はさらに７員の架橋構造を含み得る。合成によりリボースの２’，４’位に架橋を組み込むと、２’，４’－ＢＮＡ単量体が得られる。ＢＮＡ単量体は、当該技術分野において公知の標準的なホスホラミダイト化学特性を用いてオリゴヌクレオチド高分子構造体に組み込むことができる。ＢＮＡは、結合親和性及び安定性が増大した、構造的に強固なオリゴヌクレオチドである。

【0028】

アンチセンスオリゴヌクレオチドという用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では端的に「ＡＯＮ」又は「ＡＳＯ」として示される場合がある。

【0029】

「ＢＮＡベースのアンチセンスオリゴヌクレオチド」、又は端的には「ＢＮＡ－ＡＯＮ」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、前記ヌクレオチドの少なくとも１つがＢＮＡである、一連のアンチセンスヌクレオチドを指す。

【0030】

「タンパク性」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、タンパク質様（分子がある程度までタンパク質の物理化学的特性を有することを意味する）の、タンパク質の、タンパク質に関する、タンパク質を含む、タンパク質に属する、タンパク質からなる、タンパク質に似ている、又はタンパク質である分子を指す。「タンパク性」という用語は、例えば、「タンパク性分子」において用いられる場合、タンパク質に似ているか、又はタンパク質である分子の少なくとも一部が存在することを指し、「タンパク質」は、少なくとも２残基長のアミノ酸残基の鎖を含み、従って、ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質、並びにタンパク質又はタンパク質ドメインの会合体を含むものと理解すべきである。タンパク性分子では、少なくとも２アミノ酸残基が、例えばペプチド結合などのアミド結合を介して結合されている。タンパク性分子では、アミノ酸残基は、天然アミノ酸残基及び／又は改変された天然アミノ酸残基などの人工アミノ酸残基である。好ましい実施形態では、タンパク性分子は、少なくとも２アミノ酸残基、好ましくは２～約２．０００アミノ酸残基を含む分子である。一実施形態では、タンパク性分子は、２～２０（ペプチドに典型的な）アミノ酸を含む分子である。一実施形態では、タンパク性分子は、２１～１．０００アミノ酸（ポリペプチド、タンパク質、抗体などのタンパク質ドメイン、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ＥＧＦなどの受容体のリガンドに典型的な）を含む分子である。アミノ酸残基は、（典型的には）ペプチド結合を介して結合されていることが好ましい。本発明によれば、前記アミノ酸残基は、（改変された）（非）天然アミノ酸残基であるか、又はそれを含む。

【0031】

「エフェクター分子」、又は「エフェクター部分」という用語は、例えば、共有結合コンジュゲートの一部としてのエフェクター分子を言及する場合、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、例えば、標的分子：タンパク質、ペプチド、炭水化物、グリカンなどの糖、（リン）脂質、ＤＮＡ、ＲＮＡなどの核酸、酵素のいずれか１つ以上に選択的に結合し、そのような１つ以上の標的分子の生物活性を調節することのできる分子を指す。エフェクター分子は、例えば、薬物分子などの小分子、タンパク毒素などの毒素、ＢＮＡ、異種核酸若しくはｓｉＲＮＡなどのオリゴヌクレオチド、酵素、ペプチド、タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせのいずれか１つ以上から選択される分子である。従って、例えば、エフェクター分子又はエフェクター部分は、薬物分子などの小分子、タンパク毒素などの毒素、ＢＮＡ、異種核酸若しくはｓｉＲＮＡなどのオリゴヌクレオチド、酵素、ペプチド、タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせのいずれか１つ以上から選択される分子又は部分であり、標的分子：タンパク質、ペプチド、炭水化物、グリカンなどの糖、（リン）脂質、ＤＮＡ、ＲＮＡなどの核酸、酵素のいずれか１つ以上に選択的に結合し、標的分子に結合したときに、そのような１つ以上の標的分子の生物活性を調節することのできる分子又は部分である。典型的には、エフェクター分子は、哺乳類細胞、例えばヒト細胞などの細胞内に、例えば、前記細胞の細胞質ゾルに生物学的効果を及ぼすことができる。従って、典型的なエフェクター分子は、薬物分子、プラスミドＤＮＡ、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）によって構成される毒素などの毒素、ｓｉＲＮＡ、ＢＮＡ、抗体オリゴヌクレオチドコンジュゲート（ＡＯＣ）によって構成される核酸などのオリゴヌクレオチドである。例えば、エフェクター分子は、（細胞内）酵素活性、遺伝子発現、又は細胞シグナル伝達を増加又は減少させることのできるリガンドとして機能することができる分子である。

【0032】

「健康問題」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、健康なヒトの身体又はその一部の状態と比較した場合に最適以下となり、それによって対象の適切な機能及び／又は健康を妨げる、例えば、ヒトの身体の通常の機能を損なう、ヒト患者などの対象の身体、又はその一部、臓器、筋肉、静脈、動脈、皮膚、四肢、血液、細胞などのあらゆる状態を指す。

【0033】

「ＧａｌＮＡｃ修飾オリゴヌクレオチド薬物」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では遺伝子の転写に干渉するオリゴヌクレオチドを指し、１つ以上のＧａｌＮＡｃ単位が、例えば少なくとも１つのリンカーを介してオリゴヌクレオチドに結合されている。

【0034】

「ロックド核酸」、端的には「ＬＮＡ」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、当該技術分野において公知のように、Ｃ３’エンド型立体配座「β－Ｄ－ＬＮＡ」、又はＣ２’エンド型（α－Ｌ－ＬＮＡ）立体配座のいずれかで、追加のエチレン架橋によってリボース部分を固定する、１つ以上のヌクレオチドビルディングブロックを含有するオリゴヌクレオチドを指す。

【0035】

「架橋型核酸ＮＣ」、端的には「ＢＮＡ^ＮＣ」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、当該技術分野において公知のように、Ｎ原子における置換（メチル基がこれまでに最も一般的に使用されている）が異なる、追加の２’－Ｏ，４’－Ｃ－アミノエチレン架橋型核酸から構成される、１つ以上のヌクレオチドビルディングブロックを含有するオリゴヌクレオチドを指す。

【0036】

「化学的に修飾された、代謝的に安定したｓｉＲＮＡ」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、修飾ｓｉＲＮＡ分子が代謝分解、消化、酵素溶解などに対してより耐性のある、即ちより安定化するように、天然に存在するヌクレオチドからなるＲＮＡオリゴヌクレオチドと比較して化学修飾を含むｓｉＲＮＡ分子を指す。

【0037】

「サポニン」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、サポゲニンである親油性アグリコンコアと組み合わされた１つ以上の親水性グリコン部分を含む、両親媒性グリコシドの群を指す。サポニンは、天然に存在するものあっても、又は合成であってもよい（即ち、天然に存在しない）。「サポニン」という用語には、天然に存在するサポニン、天然に存在するサポニンの誘導体だけでなく、化学的及び／又は生物工学的合成経路によって新規に合成されたサポニンも含まれる。

【0038】

「サポニン誘導体」（「修飾サポニン」としても知られている）という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、官能基の酸化、官能基の還元、及び／又は別の分子との共有結合の形成（「コンジュゲーション」又は「共有コンジュゲーション」とも称する）などの１つ以上の化学修飾によって誘導体化されている、天然に存在するサポニンに相当する化合物を指す。好ましい修飾としては、アグリコンコアのアルデヒド基の誘導体化、糖鎖のカルボキシル基の誘導体化、又は糖鎖のアセトキシ基の誘導体化が挙げられる。典型的には、サポニン誘導体には天然の対応物がなく、即ち、サポニン誘導体は、例えば植物又は木から天然に生成されることがない。「サポニン誘導体」という用語には、天然に存在するサポニンを誘導体化することによって得られる誘導体だけでなく、１つ以上の化学修飾によって誘導体化された天然に存在するサポニンに相当する化合物を生じさせる、化学的及び／又は生物工学的合成経路によって新規に合成された誘導体も含まれる。

【0039】

「アグリコンコア構造」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、１個又は２個の炭水化物アンテナ又は糖鎖（グリカン、グリコン）がそこに結合されていないサポニンのアグリコンコア又はアグリコンを指す。例えば、キラ酸は、ＳＯ１８６１、ＱＳ－７、及びＱＳ－２１のアグリコンコア構造である。

【0040】

「糖鎖」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、グリカン、炭水化物アンテナ、グリコン、単一の糖部分（単糖）又は複数の糖部分を含む鎖（オリゴ糖、多糖）のいずれかを指す。糖鎖は、糖部分のみから構成されてもよく、又は、例えば、ＱＳ－２１に存在するような、４Ｅ－メトキシケイ皮酸、４Ｚ－メトキシケイ皮酸、及び５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）のいずれか１つなどのさらなる部分も含み得る。

【0041】

糖鎖の名称の文脈における「Ａｐｉ／Ｘｙｌ－」或いは「Ａｐｉ－又はＸｙｌ－」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、アピオース（Ａｐｉ）部分を含むか、又はキシロース（Ｘｙｌ）部分を含むかのいずれかの糖鎖を指す。

【0042】

「抗体薬物コンジュゲート」又は「ＡＤＣ」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、ＩｇＧ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、免疫グロブリン、免疫グロブリンフラグメント、１つ又は複数のＶｈドメインなどの抗体と、ヒト患者などの対象の細胞と接触させたときに治療効果を発揮することができるあらゆる分子（例えば、活性薬剤成分、毒素、オリゴヌクレオチド、酵素、小分子薬物化合物など）とのあらゆるコンジュゲートを指す。

【0043】

「抗体オリゴヌクレオチドコンジュゲート」又は「ＡＯＣ」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、ＩｇＧ、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体、ｓｃＦｖ、免疫グロブリン、免疫グロブリンフラグメント、１つ又は複数のＶｈドメインなどの抗体と、ヒト患者などの対象の細胞と接触させたときに治療効果を発揮することができるあらゆるオリゴヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ、改変ＤＮＡ、ＲＮＡ、改変ＲＮＡ、一本鎖分子又は二本鎖分子として存在する合成核酸、例えばＢＮＡ、アレル特異的オリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ：サイレンシングＲＮＡ）、アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡなどを包含する天然又は合成の一連の核酸から選択されるオリゴヌクレオチド）とのあらゆるコンジュゲートを指す。

【0044】

「コンジュゲート」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、少なくとも第２の分子に化学結合によって共有結合された少なくとも第１の分子を指し、それによって、第１の分子及び第２の分子を含むか又はそれからなる共有結合した会合体が形成される。典型的なコンジュゲートとしては、（ＧａｌＮＡｃ）_３トリス－ｓｉＲＮＡ、ＡＤＣ、ＡＯＣ、及びＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ（サポニンのアグリコンコア構造のアルデヒド基にＥＭＣＨが連結されている）がある。

【0045】

リンカーを含むＧａｌＮＡｃ－エフェクター分子コンジュゲート又は構築物などにおいて使用される「Ｓ」という用語は、エンドソーム及び細胞質ゾル内でインタクトに維持される「安定化リンカー」を表す。

【0046】

リンカーを含む抗体サポニンコンジュゲート又は構築物などにおいて使用される「Ｌ」という用語は、エンドソーム内の弱酸条件下で切断される「不安定リンカー」を表す。

【0047】

「部分」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、さらなる分子、リンカー、分子の会合体などに結合、連結、コンジュゲートされた分子を指し、それによって、より大きい分子、コンジュゲート、分子の会合体が形成される。典型的には、部分は、第２の分子に共有結合された第１の分子であり、最初に第１の分子上に存在し、第２の分子上に存在する１つ以上の化学基を含む。例えば、サポリンは典型的な分子であり、エフェクター分子の一例である。抗体薬物コンジュゲートの一部として、サポリンはＡＤＣにおける典型的なエフェクター部分である。抗体オリゴヌクレオチドコンジュゲートの一部として、ＢＮＡ又はｓｉＲＮＡはＡＯＣにおける典型的なエフェクター部分である。

【0048】

「ＤＡＲ」という用語は、通常、薬物抗体比を表すものであり、所与の抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）製剤の薬物と抗体の平均比率を指し、本明細書では、コンジュゲート分子に対して結合したＳＯ１８６１部分、若しくはＳＰＴ００１、又は結合したアポＢＢＮＡの量の比率を指す。

【0049】

本明細書及び特許請求の範囲における第１、第２、第３などの用語は、例えば、類似の要素、組成物、組成物中の構成成分、又は別々の方法工程を区別するために使用され、必ずしも連続した順序又は時系列的な順序について説明するものではない。この用語は適切な状況下で互換可能であり、本発明の実施形態は、特に明記されない限り、本明細書に記載又は例示されたもの以外の他の順序で操作することができる。

【0050】

本明細書に記載される発明の実施形態は、特に明記されない限り、組み合わせて、及び協働して操作することができる。

【0051】

さらに、様々な実施形態は、「好ましくは」又は「例えば（ｅ．ｇ．）」又は「例えば（ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）」又は「特に」などと言及されるが、本発明が本発明の範囲を限定するというよりはむしろ、例示的な方法として実現され得るものと解釈すべきである。

【0052】

特許請求の範囲に使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、例えば、これ以降に列挙される要素又は方法工程又は組成物の構成成分に限定されるものと解釈すべきではなく、他の要素又は方法工程又は特定の組成物の構成成分を除外するものではない。このことは、記載された特徴、整数、（方法）工程又は構成成分の存在を、言及されるように規定するものと解釈する必要があるが、１つ以上の他の特徴、整数、工程若しくは構成成分、又はそれらの群が存在又は追加されていることを排除するものではない。従って、「工程Ａ及びＢを含む方法」という表現の範囲は、工程Ａ及びＢのみからなる方法に限定されるべきではなく、むしろ、本発明に関しては、列挙された方法の工程のみがＡ及びＢであり、さらに、特許請求の範囲は、これらの方法工程の等価物を含むものと解釈すべきである。従って、「構成成分Ａ及びＢを含む組成物」という表現の範囲は、構成成分Ａ及びＢのみからなる組成物に限定されるべきではなく、むしろ、本発明に関しては、列挙された組成物の構成成分のみがＡ及びＢであり、さらに、特許請求の範囲は、これらの構成成分の等価物を含むものと解釈すべきである。

【0053】

加えて、不定冠詞「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」によって要素又は構成成分を言及することは、文脈によって明らかに要素又は構成成分の１つ及び１つだけが存在する必要がない限り、２つ以上の要素又は構成成分が存在する可能性を排除するものではない。従って、不定冠詞「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」は、通常「少なくとも１つの」を意味する。

【図面の簡単な説明】

【0054】

【図1】三価ＧａｌＮＡｃの合成。

【図2】ＳＯ１８６１－ＤＢＣＯの合成。

【図3】一価ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１の合成。

【図4】三価ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１の合成。

【図5】一価ＧａｌＮＡｃ－ＢＮＡの合成。

【図6】三価ＧａｌＮＡｃ－ＢＮＡの合成。

【図7】三価ＧａｌＮＡｃ－ＢＮＡの合成。

【図8A】三価ＧａｌＮＡｃの合成。

【図8B】三価ＧａｌＮＡｃの合成。

【図9A】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株におけるＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１及び三価ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１の細胞生存率（ＭＴＳ）。図９Ｂの隣に表示されている凡例は、図９Ａにも適用される。

【図9B】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株におけるＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１及び三価ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１の細胞生存率（ＭＴＳ）。図９Ｂの隣に表示されている凡例は、図９Ａにも適用される。

【図10A】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）。図１０Ｂの隣に表示されている凡例は、図１０Ａにも適用される。

【図10B】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）。図１０Ｂの隣に表示されている凡例は、図１０Ａにも適用される。

【図11A】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における遺伝子発現解析。

【図11B】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における遺伝子発現解析。

【図12A】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における遺伝子発現解析。図１２Ｂの隣に表示されている凡例は、図１２Ａにも適用される。

【図12B】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における遺伝子発現解析。図１２Ｂの隣に表示されている凡例は、図１２Ａにも適用される。

【図13A】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における細胞生存率アッセイ。図１３Ｂの隣に表示されている凡例は、図１３Ａにも適用される。

【図13B】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における細胞生存率アッセイ。図１３Ｂの隣に表示されている凡例は、図１３Ａにも適用される。

【図14A】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における遺伝子発現解析。図１４Ｂの隣に表示されている凡例は、図１４Ａにも適用される。

【図14B】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における遺伝子発現解析。図１４Ｂの隣に表示されている凡例は、図１４Ａにも適用される。

【図15A】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における細胞生存率アッセイ。図１５Ｂの隣に表示されている凡例は、図１５Ａにも適用される。

【図15B】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における細胞生存率アッセイ。図１５Ｂの隣に表示されている凡例は、図１５Ａにも適用される。

【図16A】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における遺伝子発現解析。図１６Ｂの隣に表示されている凡例は、図１６Ａにも適用される。

【図16B】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における遺伝子発現解析。図１６Ｂの隣に表示されている凡例は、図１６Ａにも適用される。

【図17A】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における遺伝子発現解析。図１７Ｂの隣に表示されている凡例は、図１７Ａにも適用される。

【図17B】ＨｅｐＧ２（Ａ）及びＨｕｈ７（Ｂ）細胞株における遺伝子発現解析。図１７Ｂの隣に表示されている凡例は、図１７Ａにも適用される。

【図18A】ヒト初代肝細胞におけるアポＢのＲＮＡ発現解析及び細胞生存率アッセイ。

【図18B】ヒト初代肝細胞におけるアポＢのＲＮＡ発現解析及び細胞生存率アッセイ。

【図19A】ヒト初代肝細胞におけるアポＢのＲＮＡ発現解析及び細胞生存率アッセイ。

【図19B】ヒト初代肝細胞におけるアポＢのＲＮＡ発現解析及び細胞生存率アッセイ。

【図20】マウス初代肝細胞におけるアポＢのＲＮＡ発現解析。

【図21】（ＧａｌＮＡｃ）３－Ｌｓ－ＳＯ１８６１の合成、中間体２２、２３。

【図22】（ＧａｌＮＡｃ）３－Ｌｓ－ＢＮＡの合成、中間体２５、２６。

【図23】（ＧａｌＮＡｃ）３－Ｌｓ－ＢＮＡの合成。

【発明を実施するための形態】

【0055】

本発明の第１の目標は、例えば、標的細胞外から前記細胞への送達を考慮する場合、又は、より詳細には前記標的細胞の細胞質ゾル内のエフェクター分子の送達を考慮する場合に、ＡＳＧＰＲ、詳細にはＡＳＧＰＲ１のリガンド、例えばＧａｌＮＡｃを含むリガンドに結合されたエフェクター分子を送達するための、改善された治療用配合物又は改善された医薬組成物を提供することである。本発明の第２の目標は、エフェクター分子及びＡＳＧＰＲのリガンドを含むコンジュゲートによって治療すべき疾患に罹患している（ヒト）患者の改善された治療方法を提供することである。

【0056】

本発明の目的は、エフェクター分子に対する分子標的を含む標的細胞内に送達された時点で、生物学的効果を発揮することができる、エフェクター分子に共有結合されたＡＳＧＰＲのリガンドのコンジュゲートを含み、標的細胞を保持するコンジュゲートを、それを必要とする（ヒト）患者に投与したときに、現在コンジュゲートに必要とされている用量よりも低用量で、改善された治療効果又は十分な効果を有する治療組成物、又は、例えば２種の治療組成物の治療用配合物を提供することである。この方法により、コンジュゲートの治療域の範囲が効果的に広くなる。

【0057】

上記の目的の少なくとも１つは、少なくとも２種の医薬組成物の治療用配合物、又は本発明の医薬組成物を提供することによって達成される。

【0058】

本発明は、特定の実施形態について説明しているが、本発明はそれに限定されるものではなく、特許請求の範囲によってのみ限定される。

【0059】

本発明の第１の態様は、
－ エフェクター分子とアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のリガンドとのコンジュゲートであって、ＡＳＧＰＲのリガンドが、少なくとも１つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分、好ましくは３つ又は４つのＧａｌＮＡｃ部分を含み、より好ましくは（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスを含むか又はそれからなるコンジュゲートと；
－ モノデスモシドトリテルペン配糖体又はビデスモシドトリテルペン配糖体であるサポニンとを含み、
任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、医薬配合物に関する。

【0060】

一実施形態は、
－ コンジュゲートを含み、任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、第１の医薬組成物と；
－ サポニンを含み、任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、第２の医薬組成物とを含む、少なくとも２種の医薬組成物の形態の本発明の医薬配合物である。

【0061】

一実施形態は、コンジュゲート、サポニン、並びに任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、単一の医薬組成物の形態の本発明の医薬配合物である。

【0062】

本発明者らは、驚くべきことに、ＡＳＧＰＲ、詳細にはＡＳＧＰＲ１をそれらの表面に発現する細胞が、コンジュゲートとトリテルペン配糖体型のサポニン、典型的にはビデスモシドテルペノイド型のサポニンとの両方と前記細胞を接触させたときに、ＡＳＧＰＲのリガンド及びエフェクター分子を含むコンジュゲートが改善された取り込みを示すことを見出した。例えば、ＧａｌＮＡｃをベースとしたＡＳＧＰＲ１のリガンド、例えば（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスコンジュゲートは、例えば、ＨＳＰ２７をサイレンシングするための遺伝子サイレンシングＢＮＡなどのオリゴヌクレオチドと共有結合し、サポニンの存在下でそのように改善された取り込みを示す。これにより、ここで、本発明者らによって、例えば、そのようなオリゴヌクレオチドによって治療すべき標的細胞外からの前記細胞内へのオリゴヌクレオチドの送達の有効性を改善するための、詳細には、その表面にＡＳＧＰＲ１を発現する標的細胞の細胞質ゾルへのＢＮＡ及び／又はｓｉＲＮＡなどのオリゴヌクレオチドの細胞内送達を改善するための、長年にわたる切実な要求に対する解決策が提供される。本発明に従って適用されるサポニンは、例えば、そのようなサポニン及び毒素（この毒素は、例えば抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の一部である）と標的細胞が接触した時点でタンパク毒素のエンドソーム脱出を促進するような、それらの能力が知られている。ここで、本発明者らはまた、そのようなサポニンの特定の誘導体が、サポニン及びエフェクター分子が細胞内、即ちエンドソーム内で共存している場合に、エンドソーム及びリソソームから細胞質ゾルへのエフェクター分子の脱出を促進する、それらの能力を維持していることを立証した。驚くべきことに、そのようなサポニン誘導体は、そのようなサポニン誘導体の細胞毒性及び溶血作用を（天然に存在する）非改変サポニンで観察されるものよりも低減させながら、標的細胞を保持するＡＳＧＰＲ１へのコンジュゲートによって構成されるエフェクター分子の送達を促進することができる。そのようなサポニン誘導体について、本明細書でより詳細に記載する。

【0063】

コンジュゲート － 序論
本発明の医薬配合物及び特定の医薬組成物は、エフェクター分子とＡＳＧＰＲ１などのアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）、好ましくはＡＳＧＰＲ１のリガンドとのコンジュゲートを含む。エフェクター分子がコンジュゲートの残部に結合されている場合、本明細書では「エフェクター部分」と称する。ＡＳＧＰＲリガンドは、少なくとも１つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む。本発明の実施形態によれば、各ＧａｌＮＡｃ部分は、式（Ｉ）：

【0064】

【化1】

【0065】

に示すように、「１」位の酸素への共有結合を介して、ＡＳＧＰＲリガンドの残部と結合されるか、又は、ＡＳＧＰＲリガンドが単一のＧａｌＮＡｃ部分からなる場合はエフェクター部分に結合される。

【0066】

式（ＩＩ）に示すように、ＡＳＧＰＲリガンドは、好ましくはエフェクター部分リンカーＬ_Ｅを介してエフェクター部分Ｅに結合された単一のＧａｌＮＡｃ部分からなる。

【0067】

【化2】

【0068】

ＡＳＧＰＲリガンドは、２つ以上のＧａｌＮＡｃ部分、例えば、２、３、４、５又は６つのＧａｌＮＡｃ部分、好ましくは３又は４つのＧａｌＮＡｃ部分、より好ましくは３つのＧａｌＮＡｃ部分を含み得る。そのような場合、ＧａｌＮＡｃ部分がそれぞれ別々に「１」位の酸素を介して中央の架橋部分Ｂに共有結合されていることが好ましく、これによって、好ましくはエフェクター部分リンカーＬ_Ｅを介してＧａｌＮＡｃ部分とエフェクター部分の間に架橋が効果的に形成される。ＧａｌＮＡｃ部分は、式（ＩＩＩ）：

【0069】

【化3】

【0070】

（式中、ｎは３又は４以上の整数であり、好ましくはｎは３であり、Ｌ_Ｅはエフェクター部分リンカーであり、Ｅはエフェクター部分である）に示されるように、架橋部分Ｂに直接結合されていてもよい。より好ましくは、ＧａｌＮＡｃ部分は、式（ＩＶ）：

【0071】

【化4】

【0072】

（式中、ｎは３又は４以上の整数であり、好ましくはｎは３であり、Ｌ_Ｅはエフェクター部分リンカーであり、Ｅはエフェクター部分である）に示されるように、ＧａｌＮＡｃリンカーＬ_ＧＡＬを介して架橋部分Ｂに結合されている。Ｌ_ＧＡＬは出現する度に独立して選択されてもよいが、当業者であれば、Ｌ_ＧＡＬのそれぞれの出現が同一部分を表す場合、コンジュゲートの合成が簡略化されることを理解するであろう。

【0073】

コンジュゲート－リンカーＬ_Ｅ
エフェクター部分リンカーＬ_Ｅは、式（ＩＩ）におけるようなＧａｌＮＡｃ、又は式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）におけるような架橋部分Ｂにエフェクター部分を共有結合するのに好適な、あらゆる化学的部分を表す。リンカーの同一性及びサイズに特に制限はなく、式（ＩＩ）におけるようなＧａｌＮＡｃ又は式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）におけるような架橋部分Ｂにエフェクター分子を共有結合することは、「通常の」化学官能基（例えば、エステル結合）により、並びに、典型的には長い鎖長を有する「クリックケミストリー」型のリンカーを介して実施してもよく、例えば、結果として１０個超又は２０個超の炭素原子を含むリンカーＥ_Ｌが生じる。好適なエフェクター部分リンカーＬ_Ｅ及び関連するカップリング反応は、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇｒｅｇ Ｔ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ，２０１３というハンドブックに記載されている。

【0074】

当業者に理解されるように、エフェクター部分リンカーＬ_Ｅは、典型的には、ＧａｌＮＡｃ又は架橋部分Ｂに共有結合された少なくとも第１の前駆体Ｌ_Ｅ１と、エフェクター部分に共有結合された第２の前駆体Ｌ_Ｅ２との間のカップリング反応（例えば、「クリックケミストリー」型）の結果生じるものである。この原理は、式（ＩＩ）の化合物の以下の反応スキームに例示される：

【0075】

【化5】

【0076】

式中、Ｌ_Ｅはエフェクター部分リンカーであり、Ｌ_Ｅ１はＧａｌＮＡｃに共有結合されたエフェクター部分リンカーＬ_Ｅの前駆体であり、Ｌ_Ｅ２はエフェクター部分に共有結合されたエフェクター部分リンカーＬ_Ｅの前駆体であり、Ｅはエフェクター部分である。

【0077】

式（ＩＩＩ）の化合物に対応する反応スキームは以下の通りである：

【0078】

【化6】

【0079】

式中、Ｌ_Ｅはエフェクター部分リンカーであり、Ｌ_Ｅ１はＧａｌＮＡｃに共有結合されたエフェクター部分リンカーＬ_Ｅの前駆体であり、Ｌ_Ｅ２はエフェクター部分に共有結合されたエフェクター部分リンカーＬ_Ｅの前駆体であり、ｎは３又は４以上の整数であり、好ましくはｎは３であり、Ｂは架橋部分であり、Ｅはエフェクター部分である。

【0080】

式（ＩＶ）の化合物に対応する反応スキームは以下の通りである：

【0081】

【化7】

【0082】

式中、Ｌ_Ｅはエフェクター部分リンカーであり、Ｌ_Ｅ１はＧａｌＮＡｃに共有結合されたエフェクター部分リンカーＬ_Ｅの前駆体であり、Ｌ_Ｅ２はエフェクター部分に共有結合されたエフェクター部分リンカーＬ_Ｅの前駆体であり、ｎは３又は４以上の整数であり、好ましくはｎは３であり、Ｅはエフェクター部分であり、Ｌ_ＧＡＬはＧａｌＮＡｃリンカーであり、Ｂは架橋部分である。

【0083】

エフェクター部分リンカーＬ_Ｅは、ＧａｌＮＡｃ又は架橋部分に共有結合された少なくとも第１の前駆体Ｌ_Ｅ１と、エフェクター部分に共有結合された第２の前駆体Ｌ_Ｅ２との間のカップリング反応の結果生じさせることができ、カップリング反応は、例えば、アジド－アルキン付加環化、チオールマレイミドカップリング、シュタウディンガー反応、ひずんだ複素環式求電子剤（アジリジン、エポキシド、環状硫酸エステル、アジリジニウムイオン、エピスルホニウムイオンなど）の求核性開環、非アルドール型のカルボニル反応（尿素、チオ尿素、ヒドラゾン、オキシムエーテル、アミド若しくは芳香族ヘテロ環形成など）又は炭素－炭素二重結合の付加（エポキシ化、アジリジン化、ジヒドロキシル化、ハロゲン化スルフェンチル（ｓｕｌｆｅｎｔｙｌ ｈａｌｉｄｅ）付加、ハロゲン化ニトロシル付加若しくはマイケル付加など）であり、好ましくはアジド－アルキン付加環化、チオールマレイミドカップリング、シュタウディンガー反応、ひずんだ複素環式求電子剤の求核性開環であり、より好ましくはアジド－アルキン付加環化又はチオールマレイミドカップリングである。

【0084】

本発明のいくつかの実施形態によれば、エフェクター部分リンカーＬ_Ｅは、スクシンイミドチオエーテル部分を含む。そのようなスクシンイミドチオエーテルは、例えば、Ｎ－置換マレイミドとチオール又はスルフヒドリル含有化合物との間のチオールマレイミドカップリングの結果生じるものである。このチオールマレイミドカップリングは、バイオコンジュゲーションの分野では「クリック」ケミストリーツールとして一般に知られており、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇｒｅｇ Ｔ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ，２０１３ ｐａｇｅ ２８９に記載されている。従って、エフェクター部分リンカーＬ_Ｅは、ＧａｌＮＡｃ又は架橋部分に共有結合され、Ｎ－置換マレイミドを含む第１の前駆体Ｌ_Ｅ１と、エフェクター部分に共有結合され、チオール又はその前駆体を含む第２の前駆体Ｌ_Ｅ２との間のカップリング反応の結果生じるものであることが好ましい。好適なチオール前駆体は、対応するチオールへの還元によって、（例えば、ｉｎ－ｓｉｔｕで）切断され得るジスルフィドである。

【0085】

式（Ｖ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）の化合物に存在する前駆体Ｌ_Ｅ１の好ましい構造は、以下の末端Ｎ－置換マレイミド：

【0086】

【化8】

【0087】

（式中、Ｘは末端Ｎ－置換マレイミドをＧａｌＮＡｃ又は架橋部分Ｂに共有結合させるのに好適なあらゆるリンカーを表す）である。当業者に理解されるように、Ｘは、ＧａｌＮＡｃ又は架橋部分に共有結合された第１の部分と、マレイミドに共有結合された第２の部分との間のカップリング反応の結果生じ得る。Ｘは、ヒドラゾン及び／又は１，２，３－トリアゾールを含むことができる。本出願のリンカーの文脈において１，２，３－トリアゾールに言及する場合は必ず、１Ｈ－１，２，３－トリアゾールを意味することが好ましい。

【0088】

式（Ｖ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）の化合物に存在する前駆体Ｌ_Ｅ１の構造の実施形態は、以下の末端Ｎ－置換マレイミド：

【0089】

【化9】

【0090】

（式中、ａ及びｂはそれぞれ独立して０以上の整数を表し、好ましくはａ及びｂはそれぞれ独立して０、１、２、及び３から選択される整数を表し、より好ましくはａ及びｂは２を表し、Ｌ_Ｅ１ａはヒドラゾン及び／又は１，２，３－トリアゾール、好ましくは１，２，３－トリアゾールを表し、Ｌ_Ｅ１ｂはヒドラゾン及び／又は１，２，３－トリアゾール、好ましくはヒドラゾンを表す）；

【0091】

【化10】

【0092】

（式中、ｂ及びｃはそれぞれ独立して０以上の整数を表し、好ましくはｂは０、１、２、及び３から選択される整数を表し、ｃは５～１５の範囲の整数を表し、より好ましくはｂは２を表し、及びｃは９を表し、Ｌ_Ｅ１ａはヒドラゾン及び／又は１，２，３－トリアゾール、好ましくは１，２，３－トリアゾールを表し、Ｌ_Ｅ１ｂはヒドラゾン及び／又は１，２，３－トリアゾール、好ましくはヒドラゾンを表す）；
並びに

【0093】

【化11】

【0094】

（式中、ｃは０以上の整数を表し、好ましくは５～１５の範囲の整数を表し、より好ましくは９を表し、Ｌ_Ｅ１ｃはヒドラゾン及び／又は１，２，３－トリアゾール、好ましくは１，２，３－トリアゾールを表す）である。

【0095】

Ｌ_Ｅ１ａ、Ｌ_Ｅ１ｂ及びＬ_Ｅ１ｃは、好ましくはそれぞれ２０個未満の炭素原子を含み、より好ましくはそれぞれ独立して式（ＸＩＩＩ）、（ＸＩＶ）又は（ＸＶ）に従う部分を表し、好ましくは、Ｌ_Ｅ１ａは式（ＸＩＩＩ）の１，２，３－トリアゾールであり、Ｌ_Ｅ１ｂは式（ＸＩＶ）のヒドラゾンであり、Ｌ_Ｅ１ｃは式（ＸＶ）の１，２，３－トリアゾールである：

【0096】

【化12】

【0097】

従って、いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、本明細書に記載されるような式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の化合物であり、エフェクター部分リンカーＬ_Ｅが式（Ｖ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）の化合物と式（ＶＩ）の化合物との間のカップリング反応の結果生じるものであり、第１の前駆体Ｌ_Ｅ１は式（Ｘ）、（ＸＩ）又は（ＸＩＩ）の末端Ｎ－置換マレイミドであり、Ｌ_Ｅ１ａは、例えば、式（ＸＩＩＩ）の１，２，３－トリアゾールであり、Ｌ_Ｅ１ｂは、例えば、式（ＸＩＶ）のヒドラゾンであり、Ｌ_Ｅ１ｃは、例えば、式（ＸＶ）の１，２，３－トリアゾールである。

【0098】

コンジュゲート－架橋部分Ｂ
式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の化合物に存在する架橋部分Ｂは、２つ以上のＧａｌＮＡｃ部分、好ましくは３つのＧａｌＮＡｃ部分と、エフェクター部分リンカーＬ_Ｅとを共有結合するのに好適なあらゆる部分を表す。

【0099】

好ましい実施形態によれば、架橋部分Ｂは、式（ＸＶ）の化合物：

【0100】

【化13】

【0101】

であり、式（ＸＶ）の化合物の酸素原子が、ＧａｌＮＡｃ（式（ＩＩＩ）の化合物に対応する）又はＧａｌＮＡｃリンカーＬ_ＧＡＬ（式（ＩＶ）の化合物に対応する）に結合され、式（ＸＶ）の化合物の窒素原子が、エフェクター部分リンカーＬ_Ｅに結合されている。

【0102】

当業者であれば、架橋部分Ｂが式（ＸＶ）の化合物である式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）のこれらの化合物が、ＡＳＧＰＲリガンドが（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスからなるコンジュゲートに対応することが理解されよう。

【0103】

コンジュゲート－リンカーＬ_ＧＡＬ
ＧａｌＮＡｃリンカーＬ_ＧＡＬは、式（ＩＶ）におけるような、ＧａｌＮＡｃを架橋部分に共有結合するのに好適なあらゆる化学的部分を表す。リンカーの同一性及びサイズには特に制限はない。

【0104】

実施形態によれば、ＧａｌＮＡｃリンカーＬ_ＧＡＬは、それぞれ２～２５個の炭素原子、好ましくは７～１５個の炭素原子、より好ましくは１１個の炭素原子を含む。好ましくは、ＧａｌＮＡｃリンカーＬ_ＧＡＬは、少なくとも１つ、好ましくは２つのアミド部分を含む。特に好ましいＧａｌＮＡｃリンカーＬ_ＧＡＬは、式（ＸＶＩ）に従った化合物：

【0105】

【化14】

【0106】

である。

【0107】

コンジュゲート－エフェクター部分
一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、エフェクター分子が、薬物分子などの小分子、タンパク毒素などの毒素、ＢＮＡ、異種核酸若しくはｓｉＲＮＡなどのオリゴヌクレオチド、酵素、ペプチド、タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせの少なくとも１つを含むか又はそれからなり、好ましくは毒素、酵素又はオリゴヌクレオチドである。本発明によれば、エフェクター分子は、ＡＳＧＰＲをその表面に発現し、細胞内、例えば、前記細胞の細胞質ゾル内にエフェクター分子の結合パートナーを含む細胞内で生物学的効果を発揮することができる分子であり、それによって、エフェクター分子が細胞内、好ましくは細胞質ゾル内、即ちエフェクター分子の標的が存在する細胞内位置に送達された時点で、その細胞内での生物学的効果を発揮することができる。

【0108】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、ＡＳＧＰＲのリガンド、詳細にはＡＳＧＰＲ１のリガンドと、エフェクター分子、好ましくは毒素又はオリゴヌクレオチドとが、共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つのリンカーを介してコンジュゲートされている。（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスなどのＡＳＧＰＲのリガンドをＢＮＡ若しくはｓｉＲＮＡ又はタンパク毒素などのエフェクター分子に結合させるのに好適な、そのようなリンカーは、上記に詳述されている。

【0109】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、エフェクター分子が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチヘアピン型マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ、アプタマーＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、アンチマイクロＲＮＡ、（アンチｍｉＲＮＡ、アンチｍｉＲ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ロックド核酸（ＬＮＡ）、架橋型核酸（ＢＮＡ）、２’－Ｏ，４’－アミノエチレン架橋型核酸（ＢＮＡ^ＮＣ）、ＢＮＡベースのｓｉＲＮＡ、及びＢＮＡベースのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＢＮＡ－ＡＯＮ）のいずれか１つ以上から選択されるオリゴヌクレオチドである。前述のように、本発明のコンジュゲートによって構成されるリガンドの受容体、即ちＡＳＧＰＲを発現する細胞内に標的結合パートナーが存在するあらゆるエフェクター分子が、本発明のコンジュゲートに組み込むために適切に選択される。従って、例えば、その表面にＡＳＧＰＲを晒している細胞に存在する遺伝子やｍＲＮＡなどを標的化することができるＡＳＯ、ｓｉＲＮＡ又はＢＮＡは、本発明のコンジュゲートに組み込むための好適な候補である。

【0110】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、エフェクター分子が、アンチｍｉＲＮＡ、ＢＮＡ－ＡＯＮ又はｓｉＲＮＡ、例えば、好ましくは化学的に修飾されたｓｉＲＮＡ、代謝的に安定したｓｉＲＮＡ、及び化学的に修飾され、代謝的に安定したｓｉＲＮＡから選択されるＢＮＡベースのｓｉＲＮＡのいずれか１つから選択されるオリゴヌクレオチドである。そのような化学的に修飾され、及び／又は代謝的に安定なｓｉＲＮＡ部分は、当技術分野において公知であり、ＡＳＧＰＲのリガンドに結合するのに好適である。

【0111】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、エフェクター分子が、以下の遺伝子：ＨＳＰ２７、アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、プロタンパク質転換酵素であるサブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、δ－アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ１）、アンチトロンビン３（ＡＴ３）、グリコール酸オキシダーゼ（ＧＯ）、補体成分Ｃ５（ＣＣ５）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のいずれか１つをサイレンシングすることができ、並びに／又は異常なｍｉＲＮＡを標的化することができるオリゴヌクレオチドである。一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、エフェクター分子が、細胞内に存在する場合、以下の遺伝子：アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、プロタンパク質転換酵素であるサブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、δ－アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ１）、アンチトロンビン３（ＡＴ３）、グリコール酸オキシダーゼ（ＧＯ）、補体成分Ｃ５（ＣＣ５）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のいずれか１つをサイレンシングすることができるオリゴヌクレオチドであり、並びに／又は、エフェクター分子は、細胞内に存在する場合、異常なｍｉＲＮＡを標的化することができる。本発明によれば、例えば、本発明によるサポニンと共に、例えば遺伝子、ｍＲＮＡ発現（レベル）の改変、遺伝子のサイレンシングなどを必要とする対象に同時投与した場合に、本発明のコンジュゲートによって構成される（例えば、ＢＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ＡＳＯである）エフェクター分子によって、その細胞表面にＡＳＧＰＲを発現する細胞に存在する任意の遺伝子又はｍＲＮＡを効果的に標的化することができる。サポニンの影響下でエフェクター分子及びＡＳＧＰＲのリガンドを含むコンジュゲートの治療域の範囲が広がり、これによって標的細胞内でより強力なエフェクター分子の生物学的効果がもたらされるか、及び／又は、サポニン若しくはサポニン誘導体の不在下で標的細胞がコンジュゲートに晒されたときに達成されるものよりも低い有効量でエフェクター分子の生物学的効果がもたらされる。本発明によれば、ＡＳＧＰＲを発現する標的細胞を、サポニン又はサポニン誘導体と共に、ＡＳＧＰＲのリガンド及びエフェクター分子を含むコンジュゲートと接触させることにより、エフェクター分子の細胞内活性に関する閾値を克服する結果が生じ得る。例えば、サポニンの不在下、標的細胞の細胞質ゾル内で十分な高濃度のエフェクター分子を到達するのに必要となるコンジュゲートの用量は、エフェクター分子によるそのような治療を必要とする患者に安全に投与するには高すぎてしまう可能性がある。サポニンの存在下でのエフェクター分子は、すでにサポニンの不在下で標的細胞がより低用量に晒される場合に細胞内で効果を発揮することのない、そのようなより低用量で、ＡＳＧＰＲを発現する標的細胞の細胞質ゾルにおいてその生物学的効果を発揮することができる。例えば、（肝臓）細胞のＨＳＰ２７をサイレンシングするＢＮＡは、ＡＳＧＰＲのＧａｌＮＡｃリガンドとＢＮＡとのコンジュゲートをＡＳＧＰＲ保持細胞と接触させた場合に、ＡＳＧＰＲ保持細胞内でＨＳＰ２７をサイレンシングすることはなかったが、一方で、サポニン又はサポニン誘導体、例えば、サポニンのアグリコン内のアルデヒド基にコンジュゲートしたリンカーＥＭＣＨを有するサポニンの存在下で同一細胞を同一用量又はより低用量のコンジュゲートと接触させた場合に、ＨＳＰ２７は標的細胞内で効果的にサイレンシングされた（添付の実施例２及び図１１に示される）。従って、ここで、本発明者らは、それを必要とする患者に、より低用量でエフェクター分子を投与することができるような、又は改善された治療域を有するエフェクター分子を投与し、エフェクター分子がその細胞内標的に到達した時点で本発明によるコンジュゲートの標的細胞内で改善された治療効果を生じさせることができるような分子、医薬配合物、医薬組成物、並びに、そのような分子、配合物、及び組成物によって（ヒト）対象を治療するための方法を提供する。

【0112】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、エフェクター分子が、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、以下のタンパク質：ＨＳＰ２７、アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子の発現産物、ＨＢＶのＳ遺伝子の発現産物、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つの発現に関与するｍＲＮＡを標的化することができるか、又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、発癌性ｍｉＲＮＡ（ｏｎｃｏ－ｍｉＲ）の阻害若しくはｏｎｃｏ－ｍｉＲの発現の抑制などのｍｉＲＮＡ機能を弱めるか若しくは回復させることができるオリゴヌクレオチドである。そのようなタンパク質は、典型的に疾患に関与するものであり、例えば、そのようなタンパク質の発現に関与する遺伝子をサイレンシングすることにより、疾患又は病症が緩和され、サポニン及びＡＳＧＰＲのリガンドとこれらのタンパク質のいずれか１つの発現に関与するｍＲＮＡを標的化することができるエフェクター分子とを含むコンジュゲートの配合物によって治療された患者に利益がもたらされる。従って、本発明の一部は、サポニンを含む本発明の配合物及び組成物が、ＲＮＡｉベースの治療レジメンに含まれることが好適である。ＲＮＡｉを用いると、ｍＲＮＡを切断するか、又はｍＲＮＡ翻訳を抑制することによって、標的遺伝子をサイレンシングすることが可能になる。サポニンは、本明細書に記載されるように、ＲＮＡｉ療法のために選択され、ＡＳＧＰＲを発現する標的細胞を、サポニン及びコンジュゲートの両方と接触させたときに、エフェクター分子の細胞質ゾル送達が改善されることにより、遺伝子をサイレンシングするエフェクター分子を増強する手助けをする。

【0113】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、エフェクター分子は、好ましくはペプチド、タンパク質、ウレアーゼ及びＣｒｅ－リコンビナーゼなどの酵素、タンパク性毒素、リボソーム不活性化タンパク質、表Ａ５から選択されるタンパク毒素、並びに／又は、細菌毒素、より好ましくはアポプチンなどのウイルス毒素のいずれか１つ以上から選択される植物毒素；志賀毒素、志賀様毒素、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素（ＰＥ）若しくはＰＥの外毒素Ａなどの細菌毒素、完全長若しくはトランケートされたジフテリア毒素（ＤＴ）、コレラ毒素；αサルシンなどの真菌毒素；リボソーム不活性化タンパク質を含む植物毒素及び２型リボソーム不活性化タンパク質のＡ鎖、例えば、ダイアンシン（例えば、ダイアンシン－３０若しくはダイアンシン－３２）、サポリン（例えば、サポリン－Ｓ３若しくはサポリン－Ｓ６）、ブーガニン若しくはブーガニンの脱免疫化誘導体であるデブーガニング、志賀様毒素Ａ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、リシン、リシンＡ鎖、モデシン、モデシンＡ鎖、アブリン、アブリンＡ鎖、ボルケンシン、ボルケンシンＡ鎖、ビスキュミン、ビスキュミンＡ鎖；又はカエルＲＮａｓｅなどの動物若しくはヒト毒素、又はヒト由来のグランザイムＢ若しくはアンギオゲニン、又はこれらの任意のフラグメント若しくは誘導体のいずれか１つ以上から選択される少なくとも１つのタンパク性分子を含むか又はそれからなる毒素であり；好ましくは、タンパク毒素は、ダイアンシン及び／若しくはサポリンであり、並びに／又は毒素標的化リボソーム、毒素標的化延長因子、毒素標的化チューブリン、毒素標的化ＤＮＡ及び毒素標的化ＲＮＡの少なくとも１つ、より好ましくは、エムタンシン、パスドトクス、マイタンシノイド誘導体ＤＭ１、マイタンシノイド誘導体ＤＭ４、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ、ベドチン）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ、マホドチン）、カリケアマイシン、Ｎ－アセチル－γ－カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体、ベンゾジアゼピン、ＣＣ－１０６５類似体、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、シクロホスファミド、エトポシド、ドセタキセル、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ミトキサントロン、ツブリシン、インドリノベンゾジアゼピン、ＡＺ１３５９９１８５、クリプトフィシン、リゾキシン、メトトレキセート、アントラサイクリン、カンプトセシン類似体、ＳＮ－３８、ＤＸ－８９５１ｆ、メシル酸エキサテカン、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素（ＰＥ３８）のトランケート形態、デュオカルマイシン誘導体、アマニチン、α－アマニチン、スプライソスタチン、タイランスタチン、オゾガマイシン、テシリン、アンバースタチン２６９及びソラブタンシン、若しくはこれらの誘導体のいずれか少なくとも１つを含むか若しくはそれからなる。本発明者らは、本発明の配合物及び本発明の組成物がＡＳＧＰＲリガンドとエフェクター分子とのコンジュゲートによって構成されている場合に、ペプチド及びタンパク質などのエフェクター分子を細胞質ゾルに送達することに関して、コンジュゲートの一部としてこのようなエフェクター分子をサポニン又はサポニン誘導体の存在下でＡＳＧＰＲを発現する標的細胞と接触させたときに、核酸塩基ベースのエフェクター分子の送達を改善するのに等しく好適であることを立証した。例えば、本発明に従って、標的細胞をエフェクター分子（即ち、タンパク毒素）及びＡＳＧＰＲのリガンドを含むコンジュゲート、並びにサポニンと接触させた場合に、タンパク毒素の治療域の範囲が広くなる。標的細胞をサポニン及び毒素を含むコンジュゲートに晒した場合、毒素は、サポニン又はサポニン誘導体の不在下で同一の毒素用量又は同一の低い毒素用量で達成される細胞内効果と比較して、より高い程度又はより低用量でその細胞内効果を発揮する。

【0114】

サポニン
一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、サポニンが、
２α－ヒドロキシオレアノール酸；
１６α－ヒドロキシオレアノール酸；
ヘデラゲニン（２３－ヒドロキシオレアノール酸）；
１６α，２３－ヒドロキシオレアノール酸；
ギプソゲニン；
キラ酸；
プロトエシゲニン－２１（２－メチルブタ－２－エノアート）－２２－アセテート；
２３－オキソ－バリングトゲノールＣ－２１，２２－ビス（２－メチルブタ－２－エノアート）；
２３－オキソ－バリングトゲノールＣ－２１（２－メチルブタ－２－エノアート）－１６，２２－ジアセテート；
ジギトゲニン；
３，１６，２８－トリヒドロキシオレアナン－１２－エン；
ギプソゲン酸；
並びに
これらの誘導体
からなる群（本明細書では「群Ｃ」と称する）から選択されるアグリコンコア構造を含み、
好ましくは、サポニンは、キラ酸及びギプソゲニン又はこれらの誘導体から選択されるアグリコンコア構造を含み、より好ましくは、サポニンアグリコンコア構造は、キラ酸又はその誘導体である。そのような好ましいアグリコンは、Ｃ４原子にアルデヒド基を含む。任意の論理に束縛されるものではないが、このようなアルデヒド基、又は本明細書の他の個所に記載されるようなそれらの誘導体は、群Ｃから選択されるアグリコン、特にキラヤ酸及びギプソゲニンを含むトリテルペン配糖体型のサポニンのエンドソーム脱出を促進する活性に寄与する。

【0115】

一実施形態は、本発明のサポニンコンジュゲートであって、少なくとも１つのサポニンが、Ｃ４位にアルデヒド基を含む１２，１３－デヒドロオレアナンの種類に属し、任意選択によりサポニンのＣ－３β－ＯＨ基の炭水化物置換基にグルクロン酸基を含む、モノデスモシド又はビデスモシドトリテルペンサポニンであり、好ましくはＣ４位にアルデヒド基を含む１２，１３－デヒドロオレアナンの種類に属し、サポニンのＣ－３β－ＯＨ基の炭水化物置換基にグルクロン酸基を含む、ビデスモシドトリテルペンサポニンである。

【0116】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、
・サポニンが、群Ａ：
ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－、
Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－Ａｒａ－、
Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→２）－［Ｇｌｃ－（１→４）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→２）－Ａｒａ－（１→３）－［Ｇａｌ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→２）－Ａｒａ－（１→３）－［Ｇａｌ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－Ｇｌｃ－（１→４）－Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→３）－［Ｇｌｃ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、及び
これらの誘導体から選択されるアグリコンコア構造に結合された糖鎖を含むか、
又は
・サポニンが、群Ｂ：
Ｇｌｃ－、
Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－、
Ｒｈａ－（１→２）－［Ａｒａ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－、
Ａｒａ－、
Ｘｙｌ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１は４Ｅ－メトキシケイ皮酸である）、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ２－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ２は４Ｚ－メトキシケイ皮酸である）、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇａｌ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－３、４－ジ－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ３－（→４）］－３－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ３は４Ｅ－メトキシケイ皮酸である）、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
（Ａｒａ－若しくはＸｙｌ－）（１→３）－（Ａｒａ－若しくはＸｙｌ－）（１→４）－（Ｒｈａ－若しくはＦｕｃ－）（１→２）－［４－ＯＡｃ－（Ｒｈａ－若しくはＦｕｃ－）（１→４）］－（Ｒｈａ－若しくはＦｕｃ－）、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇａｌ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ａｒａ／Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ／Ｆｕｃ－（１→４）－［Ｇｌｃ／Ｇａｌ－（１→２）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ４－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ４は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ５－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ５は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
６－ＯＡｃ－Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３－ＯＡｃ－Ｒｈａ－（１→３）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３－ＯＡｃ－－Ｒｈａ－（１→３）］－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３、４－ジ－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
６－ＯＡｃ－Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ６－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ６は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ｒｈａ－（１→２）－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ７－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ７は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ８－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ８は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ９－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ９は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１０－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１０は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１１－（→３）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１１は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１２－（→３）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１２は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｇｌｃ－（１→６）］－Ｇａｌ－、及び
これらの誘導体
から選択されるアグリコンコア構造に結合された糖鎖を含むか、
又は
・サポニンが、アグリコンコア構造に結合された群Ａから選択される第１の糖鎖を含み、アグリコンコア構造に結合された群Ｂから選択される第２の糖鎖を含むビデスモシドトリテルペン配糖体である。

【0117】

そのようなサポニンは、サポニン及びエフェクター分子（エフェクター分子及びＡＳＧＰＲ１のリガンドを含む本発明によるコンジュゲートの一部、例えば（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスなど）と標的細胞を接触させたときに、典型的なエンドソーム脱出促進効果を示す。群Ｃから選択される１つ又は２つの糖を含むそのような選択されたサポニンの影響下で、コンジュゲート内のエフェクター分子が、標的細胞内のエフェクター分子の生物活性が確認されるか若しくは増加するような、又は、エフェクター分子の活性がサポニンの不在下における同一の活性レベルで必要とされる用量よりも低用量で確認することができるような細胞内の閾値レベルに到達する。表１には、そのようなエンドソーム脱出促進活性を有するサポニンがまとめられている。これらのサポニンは、列挙された群Ｃのアグリコンコア構造を含み、群Ａ及び／又は群Ｂの単糖又は多糖体を含み、標的細胞がエフェクター分子及びサポニンの両方に晒される場合にエフェクター分子を増強するか、又はそのようなエンドソーム脱出促進活性が確認されているサポニンと高い構造的類似性を有することが示されている。

【0118】

従って、一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、サポニンが、キラヤ樹皮サポニン、ディプサコシドＢ、サイコサポニンＡ、サイコサポニンＤ、マクラントイジンＡ、エスクレントシドＡ（ｅｓｃｕｌｅｎｔｏｓｉｄｅ Ａ）、フィトラッカゲニン、エシネート、ＡＳ６．２、ＮＰ－００５２３６、ＡＭＡ－１、ＡＭＲ、α－ヘデリン、ＮＰ－０１２６７２、ＮＰ－０１７７７７、ＮＰ－０１７７７８、ＮＰ－０１７７７４、ＮＰ－０１８１１０、ＮＰ－０１７７７２、ＮＰ－０１８１０９、ＮＰ－０１７８８８、ＮＰ－０１７８８９、ＮＰ－０１８１０８、ＳＡ１６４１、ＡＥ Ｘ５５、ＮＰ－０１７６７４、ＮＰ－０１７８１０、ＡＧ１、ＮＰ－００３８８１、ＮＰ－０１７６７６、ＮＰ－０１７６７７、ＮＰ－０１７７０６、ＮＰ－０１７７０５、ＮＰ－０１７７７３、ＮＰ－０１７７７５、ＳＡ１６５７、ＡＧ２、ＳＯ１８６１、ＧＥ１７４１、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２、ＳＯ１９０４、ＱＳ－７、ＱＳ１８６１、ＱＳ－７ ａｐｉ、ＱＳ１８６２、ＱＳ－１７、ＱＳ－１８、ＱＳ－２１ Ａ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ａ－ｘｙｌｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ｘｙｌｏ、β－エスシン、エスシンＩａ、茶種子サポニンＩ、茶種子サポニンＪ、アッサムサポニンＦ、ジギトニン、プリムラ酸１及びＡＳ６４Ｒ、これらの立体異性体、これらの誘導体、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくはＱＳ－２１、ＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６１誘導体、ＳＡ１６４１、ＳＡ１６４１誘導体、ＧＥ１７４１、ＧＥ１７４１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、より好ましくはＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、最も好ましくはＳＯ１８６１誘導体である。本発明者らは、これらの誘導体が、本明細書に記載されるようなエフェクター分子から構成されるコンジュゲートと組み合わせて使用する場合に、改善された増強効果を有することを見出した。即ち、この誘導体によって、より低い細胞毒性と、より低い溶血作用とを示しながら、非誘導体化サポニンに匹敵するエンドソーム脱出促進効果がもたらされる。本発明の文脈に好適なサポニン誘導体のより構造的な詳細を以下に示す。

【0119】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、サポニンがサポニン誘導体であり、
ｉ．前記サポニン誘導体が、誘導体化されたアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．サポニン誘導体が、誘導体化されたカルボキシル基を含む糖鎖、好ましくは上記に定義される群Ａから選択される糖鎖を含むか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、誘導体化されたアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む糖鎖、好ましくは上記に定義される群Ｂから選択される糖鎖を含むか；又は
ｉｖ．誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、任意選択により誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．のうちの２つの誘導体化の任意の組み合わせが存在する。

【0120】

本発明者らは、詳細には、天然に存在するサポニンに存在する単一の化学基に対して、又はそのような化学基の２つに対して誘導体化されているサポニンが、そのようなサポニン誘導体の天然に存在する非修飾対応物の細胞毒性及び溶血作用と比較して、そのようなモノ誘導体化及びビ誘導体化（ｂｉ－ｄｅｒｉｖａｔｉｓｅｄ）サポニンの細胞毒性及び溶血作用の両方を強力に低減させながら、十分なエフェクター分子増強活性を維持していることを立証した。また、本発明に従って好適なのは、サポニンと、エフェクター分子を含むコンジュゲートとの両方を、ＡＳＧＰＲ１をその表面に晒している標的細胞と接触させたときに、エフェクター分子増強効果が確認されるような天然に存在するサポニンである。

【0121】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、サポニンが、ＳＯ１８６１、ＳＡ１６５７、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１、ＱＳ－２１、ＱＳ－２１Ａ、ＱＳ－２１ Ａ－ａｐｉ、ＱＳ－２１ Ａ－ｘｙｌ、ＱＳ－２１Ｂ、ＱＳ－２１ Ｂ－ａｐｉ、ＱＳ－２１ Ｂ－ｘｙｌ、ＱＳ－７－ｘｙｌ、ＱＳ－７－ａｐｉ、ＱＳ－１７－ａｐｉ、ＱＳ－１７－ｘｙｌ、ＱＳ１８６１、ＱＳ１８６２、キラヤサポニン、サポニナム・アルブム（Ｓａｐｏｎｉｎｕｍ ａｌｂｕｍ）、ＱＳ－１８、Ｑｕｉｌ－Ａ、Ｇｙｐ１、ジプソシドＡ、ＡＧ１、ＡＧ２、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１９０４、これらの立体異性体、これらの誘導体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくはＱＳ－２１、ＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６１誘導体、ＳＡ１６４１、ＳＡ１６４１誘導体、ＧＥ１７４１、ＧＥ１７４１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、より好ましくはＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、最も好ましくはＳＯ１８６１誘導体である。

【0122】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、サポニンが、上記に列記されるような群Ｃのキラ酸又はギプソゲニンサポニンのサポニン誘導体であり、分子１：

【0123】

【化15】

【0124】

［式中、
Ａ_１は水素、単糖又は直鎖若しくは分岐オリゴ糖を表し、好ましくは上記に定義される群Ａから選択される糖鎖を表し、より好ましくは上記に定義される群Ａから選択される糖鎖を表し、及びグルクロン酸部分を含むか又はそれからなり；
Ａ_２は水素、単糖又は直鎖若しくは分岐オリゴ糖を表し、好ましくは上記に定義される群Ｂから選択される糖鎖を表し、より好ましくは上記に定義される群Ｂから選択される糖鎖を表し、及び少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基、例えば１、２、３、又は４つのアセトキシ基を含み、Ａ_１及びＡ_２の少なくとも１つは水素でなく、好ましくはＡ_１及びＡ_２の両方がオリゴ糖鎖であり；
並びに、Ｒはギプソゲニン内の水素又はキラ酸内のヒドロキシルである］で表され：
サポニン誘導体は、分子１で表されるサポニンに対応するものであり、以下の誘導体化：
ｉ．キラ酸又はギプソゲニンのＣ_２３位のアルデヒド基が誘導体化されている；
ｉｉ．Ａ_１が上記に定義される群Ａから選択される糖鎖を表し、及びＡ_１がグルクロン酸部分を含むか又はそれからなる場合、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が誘導体化されている；及び
ｉｉｉ．Ａ_２が上記に定義される群Ｂから選択される糖鎖を表し、及び少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ_２の１つの糖部分又は２つ以上の糖部分のうち１つ以上、好ましくは全てのアセトキシ基が誘導体化されている、の少なくとも１つが存在する。

【0125】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、Ａ_１が上記に定義される群Ａから選択される糖鎖を表し、及びグルクロン酸部分を含むか若しくはそれからなり、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が誘導体化されているか、並びに／又は、Ａ_２が上記に定義される群Ｂから選択される糖鎖を表し、及びＡ_２が少なくとも１つのアセトキシ基を含み、Ａ_２の少なくとも１つのアセトキシ基が誘導体化されている。

【0126】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、分子１で表されるサポニンが、ビデスモシドトリテルペンサポニン、即ち、ビデスモシドトリテルペン配糖体型のサポニンである。

【0127】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、サポニン誘導体が、分子１で表されるサポニンに対応するものであり、以下の誘導体化：
ｉ．キラ酸又はギプソゲニンのＣ_２３位のアルデヒド基が、
－ アルコールへの還元；又は
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされ、前記ＥＭＣＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＢＭＰＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＫＭＵＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換によって誘導体化されており；
ｉｉ．Ａ_１が上記に定義される群Ａから選択される糖鎖を表し、及びＡ_１がグルクロン酸部分を含むか又はそれからなる場合、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）又はＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されており、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、又はＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされ；
ｉｉｉ．Ａ_２が上記に定義される群Ｂから選択される糖鎖を表し、及びＡ_２が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ_２の１つの糖部分又は２つ以上の糖部分のうち１つ以上、好ましくは全てのアセトキシ基が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への転換によって誘導体化されている、の少なくとも１つが存在する。

【0128】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、Ａ_１が、Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡであり、及び／又は、Ａ_２が、Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃであり、好ましくは、分子１で示されるサポニンが、３－Ｏ－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）］－β－Ｄ－グルクロノピラノシルキラ酸２８－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→３）－β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→４）－α－Ｌ－ラムノピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）－４ＯＡｃ－β－Ｄ－キノボピラノシル－（１→４）］－β－Ｄ－フコピラノシドであり、より好ましくはＳＯ１８６１、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１及び／若しくはＱＳ－２１又はそれらの誘導体、最も好ましくはＳＯ１８６１又はそれらの誘導体である。

【0129】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、サポニンがサポニン誘導体であり、
ｉ．サポニン誘導体が、
－ アルコールへの還元；又は
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされ、前記ＥＭＣＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、ＢＭＰＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、ＫＭＵＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換
によって誘導体化されているアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは上記に定義される群Ａから選択される糖鎖を含み、糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）又はＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含み、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、又はＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされるか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、好ましくは上記に定義される群Ｂから選択され、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への変換によって誘導体化されているアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む糖鎖を含むか；又は
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、任意選択により誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．のうちの２つの誘導体化の任意の組み合わせを含み；
好ましくは、サポニン誘導体が、ＥＭＣＨとの反応によるヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み、ＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される。

【0130】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、サポニンがサポニン誘導体であり、
ｉ．サポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応によるヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされるか；又は
ｉｉ．サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは上記に定義される群Ａから選択される糖鎖を含み、糖鎖が、カルボキシル基、好ましくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含み、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされるか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．及びｉｉ．の組み合わせを含む。

【0131】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、サポニン誘導体が、アルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み、サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは上記に定義される群Ａから選択される糖鎖を含み、糖鎖が、カルボキシル基、好ましくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含む。

【0132】

一実施形態は、本発明の医薬配合物であって、サポニンが、分子２：

【0133】

【化16】

【0134】

で表されるサポニン誘導体であるか、
又は、サポニン誘導体が、分子３：

【0135】

【化17】

【0136】

で表されるサポニン誘導体である。

【0137】

【表1】

【0138】

【表2】

【0139】

【表3】

【0140】

【表4】

【0141】

【表5】

【0142】

本発明の第２の態様は、薬剤としての使用のための、本発明の医薬配合物に関する。本発明者らの知る限りにおいて、例えば、ｓｉＲＮＡ又はＢＮＡベースの療法の有効性を改善するための本発明の医薬配合物を最初に提供するのは本発明者らである。本発明の医薬配合物を使用することによって、ＡＳＧＰＲ１のリガンドを含むコンジュゲートによって構成されるエフェクター分子の細胞内効果が増強される。この薬剤は、ＡＳＧＰＲ１を発現する異常な肝臓細胞に関与する疾患又は異常を治療するのに特に好適である。異常な肝臓細胞とは、例えば、発現産物が以下の遺伝子：ＨＳＰ２７、アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つ以上に関与するあらゆる疾患又は健康問題に悩まされている患者の細胞である。そのような疾患は、例えば、癌、感染症疾患、ウイルス感染症、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、ＡＡＴ関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、ＴＴＲ媒介性アミロイドーシス、遺伝性ＴＴＲアミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）、補体媒介性疾患、Ｂ型肝炎感染症、ＨＳＰ２７発現に関連する疾患若しくは障害、又は自己免疫疾患のいずれかである。

【0143】

本発明の第３の態様は、発現産物が、以下の遺伝子：ＨＳＰ２７、アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つ以上に関与する疾患又は健康問題の治療又は予防における使用のための本発明の医薬配合物に関する。

【0144】

一実施形態は、本発明の医薬配合物、又は本発明における使用のための、癌、感染症疾患、ウイルス感染症、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、ＡＡＴ関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、ＴＴＲ媒介性アミロイドーシス、遺伝性ＴＴＲアミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）、補体媒介性疾患、Ｂ型肝炎感染症、ＨＳＰ２７発現に関連する疾患若しくは障害、若しくは自己免疫疾患の治療若しくは予防における使用のための医薬配合物である。

【0145】

一実施形態は、本発明による使用のための医薬配合物であって、医薬配合物が、
・サポニン誘導体を含み、サポニン誘導体が、分子１で表されるサポニンに対応するものであり、以下の誘導体化：
ｉ．キラ酸又はギプソゲニンのＣ_２３位のアルデヒド基が、
－ アルコールへの還元；又は
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされ、ＥＭＣＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＢＭＰＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、ＫＭＵＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換によって誘導体化されており；
ｉｉ．Ａ_１が群Ａから選択される糖鎖を表し、及びＡ_１がグルクロン酸部分を含むか若しくはそれからなる場合、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）若しくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されており、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、若しくはＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされ；
ｉｉｉ．Ａ_２が群Ｂから選択される糖鎖を表し、及びＡ_２が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ_２の１つの糖部分若しくは２つ以上の糖部分のうち１つ以上、任意選択により全てのアセトキシ基が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への転換によって誘導体化されている、の少なくとも１つが存在し；又は
・分子１によるサポニンであって、Ａ_１が、Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡであり、及び／若しくは、Ａ_２が、Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃであり、好ましくは、分子１で示されるサポニンが、３－Ｏ－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）］－β－Ｄ－グルクロノピラノシルキラ酸２８－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→３）－β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→４）－α－Ｌ－ラムノピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）－４ＯＡｃ－β－Ｄ－キノボピラノシル－（１→４）］－β－Ｄ－フコピラノシドであり、より好ましくはＳＯ１８６１、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１及び／若しくはＱＳ－２１若しくはそれらの誘導体、最も好ましくはＳＯ１８６１若しくはそれらの誘導体であるか；又は
・サポニン誘導体であって、
ｉ．サポニン誘導体が、
－ アルコールへの還元；又は
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされ、ＥＭＣＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、ＢＭＰＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、ＫＭＵＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換
によって誘導体化されているアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み；
ｉｉ．サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは群Ａから選択される糖鎖を含み、糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）若しくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含み、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、若しくはＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされ；
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への変換によって誘導体化されているアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む、好ましくは群Ｂから選択される糖鎖を含むか；又は
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、任意選択により誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．のうちの２つの誘導体化の任意の組み合わせを含み；
好ましくは、サポニン誘導体が、ＥＭＣＨとの反応によるヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み、ＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化されるか；又は
・サポニン誘導体であって、
ｉ．サポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応によるヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされ；
ｉｉ．サポニンが、糖鎖、好ましくは群Ａから選択される糖鎖を含み、糖鎖が、カルボキシル基、好ましくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含み、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされるか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．及びｉｉ．の組み合わせを含むか；又は
・サポニン誘導体が、アルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み、サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは群Ａから選択される糖鎖を含み、この糖鎖が、カルボキシル基、好ましくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含むか；又は
・サポニン誘導体が、分子２：

【0146】

【化18】

【0147】

で表されるか、
又は、サポニン誘導体が、分子３：

【0148】

【化19】

【0149】

で表される。

【0150】

本発明の第４の態様は、本発明によるＡＳＧＰＲのリガンドを含むコンジュゲートによって構成されるエフェクター分子を、細胞外から前記細胞内に、好ましくは前記細胞の細胞質ゾル内に移行させるためのインビトロ又はエクスビボ方法であって、
ａ）好ましくは肝臓細胞、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞から選択される、ＡＳＧＰＲ、好ましくはＡＳＧＰＲ１をその表面に発現する細胞を提供する工程；
ｂ）移行されるエフェクター分子を含む本発明のコンジュゲートを提供する工程；
ｃ）本発明によるサポニンを提供する工程；
ｄ）工程ａ）の細胞を、工程ｂ）のコンジュゲート及び工程ｃ）のサポニンとインビトロ又はエクスビボで接触させる工程であって、それによって細胞外から前記細胞内へのエフェクター分子を含む前記コンジュゲートの移行を生じさせ、前記コンジュゲートの移行を生じさせることによって、細胞外から前記細胞内、好ましくは前記細胞の細胞質ゾルへのエフェクター分子の移行を生じさせる、接触させる工程
を含む方法に関する。

【0151】

本発明の第５の態様は、本発明のコンジュゲートを細胞外から前記細胞内に移行させるためのインビトロ又はエクスビボ方法であって、
ａ）好ましくは肝臓細胞、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞から選択される、ＡＳＧＰＲ、好ましくはＡＳＧＰＲ１をその表面に発現する細胞を提供する工程；
ｂ）本発明のコンジュゲートを提供する工程；
ｃ）本発明のサポニンを提供する工程；
ｄ）工程ａ）の細胞を、工程ｂ）のコンジュゲート及び工程ｃ）のサポニンとインビトロ又はエクスビボで接触させる工程であって、それによって細胞外から前記細胞内へのコンジュゲートの移行を生じさせる、接触させる工程
を含む方法に関する。

【0152】

一実施形態は、本発明の２つの方法のいずれかであって、ＡＳＧＰＲのリガンドが、少なくとも１つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分、好ましくは３つ若しくは４つのＧａｌＮＡｃ部分を含み、より好ましくは（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスを含むか若しくはそれからなり、並びに／又は、エフェクター分子が、アンチｍｉＲＮＡ、ＢＮＡ－ＡＯＮ若しくはｓｉＲＮＡ、例えば、好ましくは化学的に修飾されたｓｉＲＮＡ、代謝的に安定したｓｉＲＮＡ、及び化学的に修飾され、代謝的に安定したｓｉＲＮＡから選択されるＢＮＡベースのｓｉＲＮＡのいずれか１つから選択されるオリゴヌクレオチドである。

【0153】

一実施形態は、本発明の２つの方法のいずれかであって、エフェクター分子が、薬物分子などの小分子、タンパク毒素などの毒素、ＢＮＡ、異種核酸若しくはｓｉＲＮＡなどのオリゴヌクレオチド、酵素、ペプチド、タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせの少なくとも１つを含むか又はそれからなり、好ましくはエフェクター分子は毒素、酵素又はオリゴヌクレオチドであり、好ましくは毒素はサポリン又はダイアンシンである。

【0154】

一実施形態は、本発明の２つの方法のいずれかであって、サポニンは、誘導体化ＳＯ１８６１及び／又は誘導体化ＱＳ－２１であり、好ましくは、本発明の前述の実施形態によるＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ又はＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ又はＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨである。

【0155】

一実施形態は、本発明の２つの方法のいずれかであって、サポニンは、分子１で表されるサポニンに対応するサポニン誘導体であり、以下の誘導体化：
ｉ．キラ酸又はギプソゲニンのＣ_２３位のアルデヒド基が、
－ アルコールへの還元；又は
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされ、ＥＭＣＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＢＭＰＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、ＫＭＵＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換によって誘導体化されており；
ｉｉ．Ａ_１が群Ａから選択される糖鎖を表し、及びＡ_１がグルクロン酸部分を含むか又はそれからなる場合、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）又はＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されており、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、又はＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされ；
ｉｉｉ．Ａ_２が群Ｂから選択される糖鎖を表し、及びＡ_２が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ_２の１つの糖部分又は２つ以上の糖部分のうち１つ以上、好ましくは全てのアセトキシ基が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への転換によって誘導体化されている、の少なくとも１つが存在する。

【0156】

一実施形態は、本発明の２つの方法のいずれかであって、エフェクター分子が、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、以下の遺伝子：アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、プロタンパク質転換酵素であるサブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、δ－アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ１）、アンチトロンビン３（ＡＴ３）、グリコール酸オキシダーゼ（ＧＯ）、補体成分Ｃ５（ＣＣ５）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のいずれか１つをサイレンシングすることができ、並びに／又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、異常なｍｉＲＮＡを標的化することができ、並びに／又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、以下のタンパク質：アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子の発現産物、ＨＢＶのＳ遺伝子の発現産物、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つの発現に関与するｍＲＮＡを標的化することができるか、又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、ｍｉＲＮＡ（ｏｎｃｏ－ｍｉＲ）の阻害若しくはｏｎｃｏ－ｍｉＲの発現の抑制などのｍｉＲＮＡ機能を弱めるか若しくは回復させることができる、オリゴヌクレオチドである。

【0157】

本発明の第６の態様は、本発明の医薬配合物又は本発明の第２の医薬組成物を含むキットオブパーツ、及び本発明による前記医薬配合物若しくは第２の医薬組成物を使用するための、又は本発明による方法を使用するための指示書に関する。

【0158】

いくつかの実施形態の観点から本発明を説明してきたが、明細書を読み、図面を精査すれば、それらの代替、変更、並べ替え、及び均等物が当業者に明らかになることが意図される。本発明は、例示された実施形態にいかなる形であっても限定されるものではない。変更は、添付の特許請求の範囲によって規定される範囲を逸脱することなく行うことができる。

【0159】

多数の例示的な実施形態を参照しながら、本発明を上記で説明してきた。変更は、添付の特許請求の範囲に規定されるような保護の範囲内で可能であり、この範囲に包含される。本発明をさらに以下の実施例で説明するが、本発明をいかなる形であっても限定するものと解釈すべきでない。

【実施例】

【0160】

実施例及び例示的な実施形態
実施例１．ＣＤ７１－サポリン＋４０００ｎＭの三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＳＯ１８６１
三価ＧａｌＮＡｃは、肝細胞上のＡＳＧＰＲ１受容体を認識し、結合する標的リガンドである。三価ＧａｌＮＡＣを生成し（図１及び図８）、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨを、結合したＳＯ１８６１に対してＤＡＲ＝１で三価ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートした（不安定、未誘導体化ＳＯ１８６１について図２及び図４に記載されるものと同様の方法でコンジュゲートするが、ここでＳＰＴ００１はＳＯ１８６１と同義である）（三価ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１、（ＧａｌＮＡｃ）３－ＳＯ１８６１とも称する）。ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨはＳＯ１８６１を指し、アルデヒド基がＮ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）と反応することによってヒドラゾン結合に変換することで誘導体化され、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされる。図１及び８に示すような「三価ＧａｌＮＡｃ」は、エフェクター分子又はサポニンに結合するのに好適な、典型的な（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスコンジュゲートである。対照として、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨを、結合したＳＯ１８６１に対してＤＡＲ＝１で一価ＧａｌＮＡｃ（図３）ともコンジュゲートした（不安定）（ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１）。ＨｅｐＧ２（ＡＳＧＰＲ１^＋；ＣＤ７１^＋、表Ａ３）細胞及びＨｕｈ７（ＡＳＧＰＲ１^＋／－；ＣＤ７１^＋、表Ａ３）細胞を、１０ｐＭのＣＤ７１－サポリン（タンパク毒素サポリンにコンジュゲートされたＣＤ７１を標的化するモノクローナル抗体ＯＫＴ－９）の存在下及び不在下で、三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＳＯ１８６１及びＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＳＯ１８６１の濃度範囲で処置した。ＣＤ７１－サポリンの不在下で細胞を処置すると、単一化合物としての三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＳＯ１８６１（又は三価ＧａｌＮＡｃであり、（ＧａｌＮＡｃ）３とも称する）は有毒でなく、最大で１５０００ｎＭであることが示されている（図９）。

【0161】

また、ＨｅｐＧ２細胞及びＨｕｈ７細胞を、１０００ｎＭ又は４０００ｎＭの三価ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１（結合したＳＯ１８６１に対してＤＡＲ＝１）（（ＧａｌＮＡｃ）３－ＳＰＴとも称する）の固定濃度と組み合わせて、ＣＤ７１－サポリン（ＣＤ７１－ＳＰＲＮとも称する）の濃度範囲で処置した。ＡＳＧＰＲ１／ＣＤ７１発現細胞（ＨｅｐＧ２及びＨｕｈ７）の、標的タンパク毒素によって媒介される細胞死滅を測定した。これにより、両細胞株で低濃度のＣＤ７１－サポリンにおいて強力な細胞死滅が明らかとなった（ＩＣ５０＝１ｐＭ）一方で、同等濃度のＣＤ７１－サポリン、ＣＤ７１－サポリン＋１０００ｎＭの三価ＧａｌＮＡｃ又はＣＤ７１－サポリン＋４０００ｎＭの三価ＧａｌＮＡｃは、両細胞株で高濃度のＣＤ７１－サポリンでしか細胞死滅を誘発することができなかった（ＩＣ５０＝１００ｐＭ）（図１０）。

【0162】

このことは全て、低濃度のＣＤ７１－サポリンと組み合わせた三価ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１が、ＡＳＧＰＲ１／ＣＤ７１発現細胞の細胞死滅を効果的に誘導することを示している。従って、三価ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１によって、ＡＳＧＰＲ１発現細胞のタンパク毒素のエンドソーム脱出が効果的に誘導される。

【0163】

実施例２ 三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ／Ｓ－ＢＮＡ＋ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ
ＨＳＰ２７ＢＮＡを三価ＧａｌＮＡｃにコンジュゲートし（図６～７）、ＨｅｐＧ２（ＡＳＧＰＲ１^＋）細胞又はＨｕｈ７（ＡＳＰＧＲ１^＋／－）を、４０００ｎＭのＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ（ＳＰＴ－ＥＭＣＨとも称する）の固定濃度と組み合わせて、三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ（不安定なコンジュゲーション、図６）又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ（安定なコンジュゲーション、図７）の濃度範囲で処置した。ＨｅｐＧ２及びＨｕｈ７細胞におけるＨＳＰ２７の遺伝子サイレンシングを測定した。４０００ｎＭのＳＯ１８６１－ＥＭＣＨとの組み合わせにおいてのみ、ＨＥＰＧ２及びＨｕｈ７細胞の両方で低濃度の三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＨｅｐＧ２：ＩＣ５０＝０，１ｎＭ；Ｈｕｈ７：ＩＣ５０＝３ｎＭ）又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＨｅｐＧ２：ＩＣ５０＝０，１ｎＭ；Ｈｕｈ７：ＩＣ５０＝３ｎＭ）で効果的な遺伝子サイレンシングが観察された一方で、同等濃度の三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＨｅｐＧ２／Ｈｕｈ７：ＩＣ５０＞２０００ｎＭ）又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＨｅｐＧ２／Ｈｕｈ７：ＩＣ５０＞２０００ｎＭ）は、ＨｅｐＧ２及びＨｕｈ７細胞株で遺伝子サイレンシング活性を示さなかった（図１１）。

【0164】

次に、アポＢＢＮＡを同様の方法（図６～７）で三価ＧａｌＮＡｃにコンジュゲートし、ＨｅｐＧ２（ＡＳＧＰＲ１^＋）細胞又はＨｕｈ７（ＡＳＰＧＲ１^＋／－）を、４０００ｎＭのＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの固定濃度と組み合わせて、三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢＢＮＡ（不安定なコンジュゲーション、図６、図１２、図１３）又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢＢＮＡ（安定なコンジュゲーション、図７、図１４、図１５）、又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢ_{ｓｃｒａｍｂｌｅｄ}ＢＮＡ若しくは三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢ_{ｓｃｒａｍｂｌｅｄ}ＢＮＡ（この場合、スクランブルアポＢＢＮＡはアポＢｍのＲＮＡに結合しない、オリゴ配列をスクランブルしたアンチセンス、つまり非特異的対照ＢＮＡである）の濃度範囲で処置した。ＨｅｐＧ２（ＡＳＧＰＲ１^＋）細胞又はＨｕｈ７（ＡＳＰＧＲ１^＋／－）におけるアポＢの遺伝子サイレンシングを測定した。４０００ｎＭのＳＯ１８６１－ＥＭＣＨとの組み合わせにおいてのみ、ＨｅｐＧ２細胞で低濃度の三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢＢＮＡ（ＩＣ５０＝１０ｎＭ）又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢＢＮＡ（ＩＣ５０＝１０ｎＭ）で効果的な遺伝子サイレンシングが観察された一方で、同等濃度の三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢＢＮＡ（ＩＣ５０＞２０００ｎＭ）又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢＢＮＡ（ＩＣ５０＞２０００ｎＭ）は、ＨｅｐＧ２細胞では遺伝子サイレンシング活性を示さなかった（図１２、図１４）。処置は細胞株の生存率に影響しなかった（図１３、図１５）。「Ｌ」は、「不安定」リンカーを指し、リンカーが細胞内、即ち、エンドソーム及びリソソーム内に存在するようなｐＨで切断されることを示す。対照的に、「Ｓ」は、「安定リンカー」を指し、リンカーが細胞内、即ち、エンドソーム及びリソソーム内に存在するようなｐＨでは切断されないことを示す。従って、コンジュゲートを形成するか、又はコンジュゲートによって構成される任意の２つの分子間に不安定な結合を含むコンジュゲートは、不安定リンカー内の位置で切断され、それによって２つの連結又は結合された分子が分離する。一例としては、ヒト細胞などの哺乳類細胞のエンドソーム及びリソソーム内で顕著な、酸性条件下におけるヒドラゾン結合の切断がある。

【0165】

このことは全て、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨが、２つの独立した遺伝子標的に対して、三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＢＮＡ又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－ＢＮＡのエンドソーム脱出及び標的遺伝子のサイレンシングを促進することができることを示している。遺伝子サイレンシングは、Ｈｕｈ７細胞と比較すると、ＨｅｐＧ２細胞の方が効率的であり、このことは、ＡＳＧＰＲ１が細胞の原形質膜により高レベルで発現することによって、ＧａｌＮＡｃ－ＢＮＡコンジュゲートの取り込みの増加が促進されることを示唆している。

【0166】

実施例３ 三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ／Ｓ－ＢＮＡ＋三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＳＯ１８６１
ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨを、結合したＳＯ１８６１に対してＤＡＲ＝１で三価ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートした（不安定な、未誘導体化ＳＯ１８６１について図２及び図４に記載されるものと同様の方法でコンジュゲートした）（三価ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１）。ＨｅｐＧ２（ＡＳＧＰＲ１^＋）細胞又はＨｕｈ７（ＡＳＰＧＲ１^＋／－）細胞を、４０００ｎＭの三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＳＯ１８６１（結合したＳＯ１８６１に対してＤＡＲ＝１）の固定濃度と組み合わせて、三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢＢＮＡ（不安定なコンジュゲーション、図１６）、三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢＢＮＡ（安定なコンジュゲーション（図１７）、又はスクランブルした非特異対照のコンジュゲート（三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢ_{ｓｃｒａｍｂｌｅｄ}ＢＮＡ又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢ_{ｓｃｒａｍｂｌｅｄ}ＢＮＡ）の濃度範囲で処置した。ＨｅｐＧ２（ＡＳＧＰＲ１^＋）細胞及びＨｕｈ７（ＡＳＰＧＲ１^＋／－）のアポＢの遺伝子サイレンシングを測定した。４０００ｎＭの三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＳＯ１８６１との組み合わせにおいてのみ、低濃度の三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢＢＮＡ（ＩＣ５０＝５０ｎＭ）又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢＢＮＡ（ＩＣ５０＝５０ｎＭ）で効果的な遺伝子サイレンシングがＨｅｐＧ２細胞（ＡＳＧＰＲ１^＋）において観察された。Ｈｕｈ７細胞（ＡＳＧＰＲ１^＋／－）では、いずれの組み合わせの処置も効果に乏しい遺伝子サイレンシングが示された（三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢＢＮＡ：ＩＣ５０＝７００ｎＭ；三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢＢＮＡ：ＩＣ５０＝７００ｎＭ）。同等濃度の三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢＢＮＡ（ＨｅｐＧ２／Ｈｕｈ７：ＩＣ５０＞１０００ｎＭ）又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢＢＮＡ（ＨｅｐＧ２／Ｈｕｈ７：ＩＣ５０＞１０００ｎＭ）は、ＨｅｐＧ２及びＨｕｈ７細胞株で遺伝子サイレンシング活性を示さず、４０００ｎＭの三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＳＯ１８６１も、スクランブル三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢ_{ｓｃｒａｍｂｌｅｄ}ＢＮＡ（ＨｅｐＧ２／Ｈｕｈ７：ＩＣ５０＞１０００ｎＭ）又はスクランブル三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢ_{ｓｃｒａｍｂｌｅｄ}ＢＮＡ（ＨｅｐＧ２／Ｈｕｈ７：ＩＣ５０＞１０００ｎＭ）の遺伝子サイレンシングを誘導／促進しなかった（図１６）。処置は両細胞株の生存率に影響しなかった（図１７）。

【0167】

このことは全て、三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＳＯ１８６１と組み合わせた、非常に低濃度の三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ又は三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－ＨＳＰ２７ＢＮＡが、ＡＳＧＰＲ１発現細胞の遺伝子サイレンシングを効果的に誘導し、またこの場合も、ＡＳＧＰＲ１がより高発現した細胞でより強力な効果が見られることを示している。

【0168】

実施例４ ヒト初代肝細胞における（ＧａｌＮＡｃ）３－ＢＮＡ＋ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ
アポＢＢＮＡ（アポＢＢＮＡ＃０１、標的となるヒトアポＢのｍＲＮＡ）を三価ＧａｌＮＡｃ（（ＧａｌＮＡｃ）３）にコンジュゲートし（図６）、初代肝細胞（ＡＳＧＰＲ１^＋）細胞を、２０００ｎＭのＳＯ１８６１の添加の有り無しの両方で（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢＢＮＡ＃０１の濃度範囲で処置した。初代肝細胞（ＡＳＧＰＲ１^＋）細胞におけるアポＢの遺伝子サイレンシングを測定した。２０００ｎＭのＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの組み合わせにおいてのみ、初代肝細胞において低濃度の（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢＢＮＡ＃０１（ＩＣ５０＝８ｎＭ）で効果的な遺伝子サイレンシングが観察された一方で、（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢＢＮＡ＃０１単独ではＩＣ５０＞１０００ｎＭであることが明らかとなった（図１８Ａ）。次に、これらの処置が細胞生存率に及ぼす影響を測定し、これによって、（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢＢＮＡ＃０１がＩＣ５０＞１００００ｎＭであり、（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢＢＮＡ＋ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨが約５００ｎＭのＩＣ５０であったことが明らかとなった（図１８Ｂ）。このことは全て、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨが、ヒト初代肝細胞においてオリゴヌクレオチドペイロードの（ＧａｌＮＡｃ）３標的化送達を強力に促進することができることを示している。

【0169】

実施例５ ヒト初代肝細胞における（ＧａｌＮＡｃ）３－ＢＮＡ＋ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ
アポＢ配列（マウス及びヒトアポＢのＲＮＡの両方を標的化する）ＢＮＡ、より具体的にはアポＢ＃０２ ＢＮＡ^ＮＣ、又はアポＢ＃０２又はアポＢＢＮＡＢ＃０２又はチオール１３－アポＢＢＮＡを、結合されたアポＢ＃０２に対してＤＡＲ＝１でリンカー（「Ｌｓ」）にコンジュゲートすると、（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢ＃０２が現れた（図２１～２３）。

【0170】

ヒト初代肝細胞（ＡＳＧＰＲ１^＋）を、２０００ｎＭのＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの有り無し両方で（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢ＃０２ ＢＮＡの濃度範囲で処置した。初代肝細胞（ＡＳＧＰＲ１^＋）におけるアポＢの遺伝子サイレンシングを測定した。２０００ｎＭのＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの組み合わせにおいてのみ、非常に低濃度の（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢＢＮＡ＃０２（ＩＣ５０＜０．０１ｎＭ）で効果的な遺伝子サイレンシングが観察された一方で、同等濃度のアポＢＢＮＡ＃０２（ＩＣ５０＝２００ｎＭ）、（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢＢＮＡ＃０２（ＩＣ５０＝５ｎＭ）、又はアポＢＢＮＡ＃０２ ＲＮＡｉＭＡＸトランスフェクション（ＩＣ５０＝５ｎＭ）の場合、効力が劣るものであった（図１９Ａ）。アポＢＢＮＡ＃０２ ＲＮＡｉＭＡＸにおける点線は、毒性及び細胞死が生じる濃度を示している。次に、これらの処置が細胞生存率に及ぼす影響を測定し、これによって、アポＢＢＮＡ＃０２がＩＣ５０＞１００００であり、（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢＢＮＡ＃０２がＩＣ５０＞１００００ｎＭであり、（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢＢＮＡ＃０２＋ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨがＩＣ５０＝５０００ｎＭであり、アポＢＢＮＡ＃０２＋ＲＮＡｉＭＡＸがＩＣ５０＝１００ｎＭであったことが明らかとなった（図１９Ｂ）。このことは全て、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨが、ヒト初代肝細胞においてオリゴヌクレオチドペイロードの（ＧａｌＮＡｃ）３標的化送達を強力に促進することができることを示している。

【0171】

実施例６ 初代マウス肝細胞における（ＧａｌＮＡｃ）３－ＢＮＡ＋ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ
マウスアポＢ配列標的化ＢＮＡ、より具体的にはアポＢ＃０２ ＢＮＡ^ＮＣ、又はアポＢ＃０２又はアポＢＢＮＡ＃０２又はチオール１３－アポＢ ＢＮＡを、結合したアポＢ＃０２に対してＤＡＲ＝１でリンカー（「Ｌｓ」）にコンジュゲートすると、（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢ＃０２が現れた（図２１～２３）。

【0172】

初代マウス肝細胞を、アポＢ＃０２ ＢＮＡ、（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢ＃０２、又は（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢ＃０２＋２０００ｎＭのＳＯ１８６１－ＥＭＣＨのいずれかの濃度範囲で処置し、アポＢのＲＮＡ発現を７２時間インキュベートした後にｑＰＣＲで測定した。遺伝子発現阻害は、２０００ｎＭのＳＯ１８６１－ＥＭＣＨと組み合わせた低濃度の（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢ＃０２ ＢＮＡ（約０．０３ｎＭのＩＣ５０）で観察された（図２０）。アポＢ＃０２単独で処置すると、アポＢのＲＮＡの抑制的調節における効力は約１００～６６７倍低かった（アポＢ＃０２：ＩＣ５０＝２０ｎＭ）が、ＩＣ５０が約２ｎＭのアポＢ＃０２を含む（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢ＃０２の効力は、約１０～６７倍低いものであった（図２０）。

【0173】

このことは、（ＧａｌＮＡｃ）３－ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－ＥＭＣＨとの組み合わせにおいてのみ、非常に低濃度の（ＧａｌＮＡｃ）３－アポＢ＃０２ ＢＮＡによって、アポＢのＲＮＡの抑制的調節、即ち遺伝子サイレンシングがマウス初代肝細胞において効果的に誘導されることを示している。

【0174】

材料及び方法
略語
ＡＥＭ Ｎ－（２－アミノエチル）マレイミドトリフルオロ酢酸塩
ＡＭＰＤ ２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール
ＢＯＰ（ベンゾトリアゾル－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＥＤＣＩ．ＨＣｌ ３－（（エチルイミノ）メチレンアミノ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミニウムクロリド
ＥＭＣＨ．ＴＦＡ Ｎ－（ε－マレイミドカプロン酸）ヒドラジド、トリフルオロ酢酸塩
ＨＡＴＵ １－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート
ｍｉｎ 分
ＮＭＭ ４－メチルモルホリン
ｒ．ｔ． 保持時間
ＴＣＥＰ トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンハイドロクロライド
Ｔｅｍｐ 温度
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸

【0175】

分析方法
ＬＣ－ＭＳ方法１
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＩＣｌａｓｓ；Ｂｉｎ．ポンプ：ＵＰＩＢＳＭ、ＳＭ：ＳＯを含むＵＰＩＳＭＦＴＮ；ＵＰＣＭＡ、ＰＤＡ：ＵＰＰＤＡＴＣ、２１０～３２０ｎｍ、ＳＱＤ：ＡＣＱ－ＳＱＤ２ ＥＳＩ、生成物の分子量に応じた質量範囲：
ｎｅｇ又はｎｅｇ／ｐｏｓ １５００～２４００又は２０００～３０００の範囲内；ＥＬＳＤ：ガス圧力 ４０ｐｓｉ、ドリフトチューブ温度：５０℃；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ 温度：６０℃、流量：０．６ｍＬ／ｍｉｎ、ｌｉｎ．生成物の極性に応じた勾配：
^Ａｔ_０＝２％Ａ、ｔ_{５．０ｍｉｎ}＝５０％Ａ、ｔ_{６．０ｍｉｎ}＝９８％Ａ
^Ｂｔ_０＝２％Ａ、ｔ_{５．０ｍｉｎ}＝９８％Ａ、ｔ_{６．０ｍｉｎ}＝９８％Ａ
ポスト時間：１．０分、溶出液Ａ：アセトニトリル、溶出液Ｂ：水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ＝９．５）。

【0176】

ＬＣ－ＭＳ方法２
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＩＣｌａｓｓ；Ｂｉｎ．ポンプ：ＵＰＩＢＳＭ、ＳＭ：ＳＯを含むＵＰＩＳＭＦＴＮ；ＵＰＣＭＡ、ＰＤＡ：ＵＰＰＤＡＴＣ、２１０～３２０ｎｍ、ＳＱＤ：ＡＣＱ－ＳＱＤ２ ＥＳＩ、生成物の分子量に応じた質量範囲：ｐｏｓ／ｎｅｇ １００～８００又はｎｅｇ ２０００～３０００；ＥＬＳＤ：ガス圧力 ４０ｐｓｉ、ドリフトチューブ温度：５０℃；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、２．５μｍ、温度：２５℃；流量：０．５ｍＬ／ｍｉｎ、勾配：ｔ_０ｍｉｎ＝５％Ａ、ｔ_{２．０ｍｉｎ}＝９８％Ａ、ｔ_{２．７ｍｉｎ}＝９８％Ａ、ポスト時間：０．３分、溶出液Ａ：アセトニトリル、溶出液Ｂ：水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ＝９．５）。

【0177】

ＬＣ－ＭＳ方法３
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＩＣｌａｓｓ；Ｂｉｎ．ポンプ：ＵＰＩＢＳＭ、ＳＭ：ＳＯを含むＵＰＩＳＭＦＴＮ；ＵＰＣＭＡ、ＰＤＡ：ＵＰＰＤＡＴＣ、２１０～３２０ｎｍ、ＳＱＤ：ＡＣＱ－ＳＱＤ２ ＥＳＩ、生成物の分子量に応じた質量範囲 ｐｏｓ／ｎｅｇ １０５～８００、５００～１２００又は１５００～２５００；ＥＬＳＤ：ガス圧力 ４０ｐｓｉ、ドリフトチューブ温度：５０℃；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、２．５μｍ、温度：４０℃；流量：０．５ｍＬ／ｍｉｎ、勾配：ｔ_０ｍｉｎ＝５％Ａ、ｔ_{２．０ｍｉｎ}＝９８％Ａ、ｔ_{２．７ｍｉｎ}＝９８％Ａ、ポスト時間：０．３分、溶出液Ａ：アセトニトリル中０．１％ギ酸、溶出液Ｂ：水中０．１％ギ酸。

【0178】

ＬＣ－ＭＳ方法４
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＩＣｌａｓｓ；Ｂｉｎ．ポンプ：ＵＰＩＢＳＭ、ＳＭ：ＳＯを含むＵＰＩＳＭＦＴＮ；ＵＰＣＭＡ、ＰＤＡ：ＵＰＰＤＡＴＣ、２１０～３２０ｎｍ、ＳＱＤ：ＡＣＱ－ＳＱＤ２ ＥＳＩ、生成物の分子量に応じた質量範囲：ｐｏｓ／ｎｅｇ １００～８００又はｎｅｇ ２０００～３０００；ＥＬＳＤ：ガス圧力 ４０ｐｓｉ、ドリフトチューブ温度：５０℃カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８、５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ、温度：２５℃、流量：０．５ｍＬ／ｍｉｎ、勾配：ｔ_０ｍｉｎ＝５％Ａ、ｔ_{２．０ｍｉｎ}＝９８％Ａ、ｔ_{２．７ｍｉｎ}＝９８％Ａ、ポスト時間：０．３分、溶出液Ａ：アセトニトリル、溶出液Ｂ：水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ＝９．５）。

【0179】

分取方法
分取ＭＰ－ＬＣ方法１
機器型式：Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（商標）分取ＭＰＬＣ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ Ｃ１８（１４５×２５ｍｍ、１０μｍ）；流量：４０ｍＬ／ｍｉｎ；カラム温度：室温；溶出液Ａ：水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム ｐＨ＝９．０）；溶出液Ｂ：９９％アセトニトリル＋水中１％ １０ｍＭ重炭酸アンモニウム；勾配：
^Ａｔ_０ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_１ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_２ｍｉｎ＝１０％Ｂ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝５０％Ｂ、ｔ_{１８ｍｉｎ}＝１００％Ｂ、ｔ_{２３ｍｉｎ}＝１００％Ｂ
^Ａｔ_０ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_１ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_２ｍｉｎ＝２０％Ｂ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝６０％Ｂ、ｔ_{１８ｍｉｎ}＝１００％Ｂ、ｔ_{２３ｍｉｎ}＝１００％Ｂ
；検出ＵＶ：２１０、２３５、２５４ｎｍ及びＥＬＳＤ。

【0180】

分取ＭＰ－ＬＣ方法２
機器型式：Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（商標）分取ＭＰＬＣ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＬＵＮＡ Ｃ１８（３）（１５０×２５ｍｍ、１０μｍ）；流量：４０ｍＬ／ｍｉｎ；カラム温度：室温；溶出液Ａ：水中０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸、溶出液Ｂ：アセトニトリル中０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸；勾配：
^Ａｔ_０ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_１ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_２ｍｉｎ＝２０％Ｂ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝６０％Ｂ、ｔ_{１８ｍｉｎ}＝１００％Ｂ、ｔ_{２３ｍｉｎ}＝１００％Ｂ
^Ｂｔ_０ｍｉｎ＝２％Ｂ、ｔ_１ｍｉｎ＝２％Ｂ、ｔ_２ｍｉｎ＝２％Ｂ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝３０％Ｂ、ｔ_{１８ｍｉｎ}＝１００％Ｂ、ｔ_{２３ｍｉｎ}＝１００％Ｂ
^Ｃｔ_０ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_１ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_２ｍｉｎ＝１０％Ｂ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝５０％Ｂ、ｔ_{１８ｍｉｎ}＝１００％Ｂ、ｔ_{２３ｍｉｎ}＝１００％Ｂ
^Ｄｔ_０ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_１ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_２ｍｉｎ＝５％Ｂ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝４０％Ｂ、ｔ_{１８ｍｉｎ}＝１００％Ｂ、ｔ_{２３ｍｉｎ}＝１００％Ｂ
；検出ＵＶ：２１０、２３５、２５４ｎｍ及びＥＬＳＤ。

【0181】

分取ＬＣ－ＭＳ方法３
ＭＳ機器型式：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｇ６１３０Ｂ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ；ＨＰＬＣ機器型式：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２９０ 分取ＬＣ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ（Ｃ１８、１５０×１９ｍｍ、１０μｍ）；流量：２５ｍｌ／ｍｉｎ；カラム温度：室温；溶出液Ａ：１００％アセトニトリル；溶出液Ｂ：水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム ｐＨ＝９．０；勾配：
^Ａｔ_０＝２０％Ａ、ｔ_{２．５ｍｉｎ}＝２０％Ａ、ｔ_{１１ｍｉｎ}＝６０％Ａ、ｔ_{１３ｍｉｎ}＝１００％Ａ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝１００％Ａ
^Ｂｔ_０＝５％Ａ、ｔ_{２．５ｍｉｎ}＝５％Ａ、ｔ_{１１ｍｉｎ}＝４０％Ａ、ｔ_{１３ｍｉｎ}＝１００％Ａ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝１００％Ａ
；検出：ＤＡＤ（２１０ｎｍ）；検出：ＭＳＤ（ＥＳＩ ｐｏｓ／ｎｅｇ）質量範囲：１００～８００；ＤＡＤに基づいた分画収集。

【0182】

分取ＬＣ－ＭＳ方法４
ＭＳ機器型式：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｇ６１３０Ｂ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ；ＨＰＬＣ機器型式：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２９０ 分取ＬＣ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｃ４、１５０×１９ｍｍ、１０μｍ）；流量：２５ｍｌ／ｍｉｎ；カラム温度：室温；溶出液Ａ：１００％アセトニトリル；溶出液Ｂ：水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム ｐＨ＝９．０；勾配：
^Ａｔ_０＝２％Ａ、ｔ_{２．５ｍｉｎ}＝２％Ａ、ｔ_{１１ｍｉｎ}＝３０％Ａ、ｔ_{１３ｍｉｎ}＝１００％Ａ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝１００％Ａ
^Ｂｔ０＝１０％Ａ、ｔ_{２．５ｍｉｎ}＝１０％Ａ、ｔ_{１１ｍｉｎ}＝５０％Ａ、ｔ_{１３ｍｉｎ}＝１００％Ａ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝１００％Ａ
^Ｃｔ_０＝５％Ａ、ｔ_{２．５ｍｉｎ}＝５％Ａ、ｔ_{１１ｍｉｎ}＝４０％Ａ、ｔ_{１３ｍｉｎ}＝１００％Ａ、ｔ_{１７ｍｉｎ}＝１００％Ａ
；検出：ＤＡＤ（２１０ｎｍ）；検出：ＭＳＤ（ＥＳＩ ｐｏｓ／ｎｅｇ）質量範囲：１００～８００；ＤＡＤに基づいた分画収集

【0183】

フラッシュクロマトグラフィー
Ｇｒａｃｅ Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ Ｘ２（登録商標）Ｃ－８１５ Ｆｌａｓｈ；溶媒送達システム：自吸式３ピストンポンプ、単一ランで最大４種の溶媒を含む４つの独立チャネル、溶媒が空になった場合の自動切替ライン；最大ポンプ流量 ２５０ｍＬ／ｍｉｎ；最大圧力 ５０バール（７２５ｐｓｉ）；検出；ＵＶ ２００～４００ｎｍ、最大４種のＵＶ信号の組み合わせ及び全ＵＶ範囲の走査、ＥＬＳＤ；カラムサイズ：機器上で４～３３０ｇ、ルアー型、７５０ｇ～オプションのホルダーを含めて最大３０００ｇ。

【0184】

ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの合成（ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨはＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨとも称される）
ＳＯ１８６１（１２１ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）及びＥＭＣＨ．ＴＦＡ（１１０ｍｇ、０．３２５ｍｍｏｌ）に、メタノール（超無水（ｅｘｔｒａ ｄｒｙ）、３．００ｍＬ）及びＴＦＡ（０．０２０ｍＬ、０．２６０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で撹拌した。１．５時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣにかけた。生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（１２０ｍｇ、９０％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９６％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２０６９［Ｍ－１］^１－
ＬＣ－ＭＳｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．０８^４

【0185】

ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール（ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ（ブロック化））
ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ（０．１ｍｇ、４８ｎｍｏｌ）に２００μＬのメルカプトエタノール（１８ｍｇ、２３０μｍｏｌ）を添加し、この溶液をＴｈｅｒｍｏＭｉｘｅｒ Ｃ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）上で８００ｒｐｍで１時間、室温で振盪した。１時間振盪させた後、溶液をメタノールで希釈し、１ｋＤａのＭＷＣＯを含む再生セルロース膜チューブ（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ ７）を用いて、メタノールに対して４時間広範に透析した。透析後、アリコートを取り出し、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳで分析した。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ（ＲＰモード）：ｍ／ｚ ２１９３Ｄａ（［Ｍ＋Ｋ］^＋、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール）、ｍ／ｚ ２１８５Ｄａ（［Ｍ＋Ｋ］^＋、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール）、ｍ／ｚ ２１７０Ｄａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール）。

【0186】

三価ＧａｌＮＡｃ－アジドの合成
中間体１：
ｔｅｒｔ－ブチル１－アジド－１７，１７－ビス（（３－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－３－オキソプロポキシ）メチル）－１５－オキソ－３，６，９，１２，１９－ペンタオキサ－１６－アザドコサン－２２－オエート
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル３，３’－（（２－アミノ－２－（（３－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－３－オキソプロポキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイル）ビス（オキシ））ジプロピオネート（１．２７ｇ、２．５１ｍｍｏｌ）に、３－アジド（ｐｅｇ４）プロピオン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（９７７ｍｇ、２．５１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を添加した。次に、ＤＩＰＥＡ（６５７μＬ、３．７７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空で蒸発させ、残渣を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解させた。得られた溶液を０．５Ｎの硫酸水素カリウム溶液（２×１００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、真空で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ－ＤＣＭ中１０％メタノール（ｖ／ｖ）勾配を１００：０から０：１００に上昇）で精製し、表題化合物（１．２７ｇ、６５％）を無色の油状物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 １００％（ＥＬＳＤ）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：７８０［Ｍ＋１］^１＋
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．１０^２

【0187】

中間体２：
１－アジド－１７，１７－ビス（（２－カルボキシエトキシ）メチル）－１５－オキソ－３，６，９，１２，１９－ペンタオキサ－１６－アザドコサン－２２－オイック酸
ｔｅｒｔ－ブチル１－アジド－１７，１７－ビス（（３－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－３－オキソプロポキシ）メチル）－１５－オキソ－３，６，９，１２，１９－ペンタオキサ－１６－アザドコサン－２２－オエート（１．２７ｇ、１．６３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５．０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（５．０ｍＬ、６５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で撹拌した。１．５時間後、反応混合物を真空で蒸発させ、トルエン（３×１０ｍＬ）及びＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で同時蒸発させて、粗製の表題生成物を無色の油状物として得た。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：６１１［Ｍ＋１］^１＋

【0188】

中間体３：
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１０－（１－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド）－１０－（１３，１３－ジメチル－５，１１－ジオキソ－２，１２－ジオキサ－６，１０－ジアザテトラデシル）－５，１５－ジオキソ－８，１２－ジオキサ－４，１６－ジアザノナデカン－１，１９－ジイル）ジカルバメート
１－アジド－１７，１７－ビス（（２－カルボキシエトキシ）メチル）－１５－オキソ－３，６，９，１２，１９－ペンタオキサ－１６－アザドコサン－２２－オイック酸（９９７ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）、Ｏｘｙｍａ Ｐｕｒｅ（１．０４ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ．ＨＣｌ（１．１７ｇ、６．１２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０．０ｍＬ）に溶解させた。次に、ＤＩＰＥＡ（１．９９ｍＬ、１１．４ｍｍｏｌ）を添加した後、そのままＮ－ＢＯＣ－１，３－プロパンジアミン（１．０７ｇ、６．１２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０．０ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空で蒸発させ、残渣を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解させた。得られた溶液を０．５Ｎの硫酸水素カリウム溶液（１００ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２×１００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、真空で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ－ＤＣＭ中１０％メタノール（ｖ／ｖ）勾配を０：１００から１００：０に上昇、生成物が溶出するまで１００：０で維持）で精製し、表題化合物（１．１６ｇ、６６％）を黄色がかった粘性油状物として得た。ＬＣ－ＭＳ ９９％（ＥＬＳＤ）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１０８０［Ｍ＋１］^１＋
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．５１^３

【0189】

中間体４：
３，３’－（（２－（（３－（（３－アミノプロピル）アミノ）－３－オキソプロポキシ）メチル）－２－（１－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド）プロパン－１，３－ジイル）ビス（オキシ））ビス（Ｎ－（３－アミノプロピル）プロパンアミド）トリス（２，２，２－トリフルオロアセテート）の合成
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１０－（１－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド）－１０－（１３，１３－ジメチル－５，１１－ジオキソ－２，１２－ジオキサ－６，１０－ジアザテトラデシル）－５，１５－ジオキソ－８，１２－ジオキサ－４，１６－ジアザノナデカン－１，１９－ジイル）ジカルバメート（１．１６ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１０ｍＬ、１３１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で撹拌した。２時間後、反応混合物を真空で蒸発させ、トルエン（３×１０ｍＬ）及びＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で同時蒸発させて、粗製の表題生成物を黄色がかった粘性油状物として得た。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２６０［Ｍ＋３］^３＋、３９０［Ｍ＋２］^２＋、７８０［Ｍ＋１］^１＋、

【0190】

中間体５：
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（５－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－５－オキソペンチル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート
５－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）ペンタン酸（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．，２０１４，１３６，１６９５８－１６９６１に従って得られる、３．００ｇ、６．７０ｍｍｏｌ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（９２６ｍｇ、８．０５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解させた。次に、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（１．５４ｇ、８．０５ｍｍｏｌ）及び４－（ジメチルアミノ）ピリジン（８２ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、得られた溶液を０．５Ｎの硫酸水素カリウム溶液（１５０ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム溶液（１５０ｍＬ）及びブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、真空で蒸発させて、表題化合物（３．６０ｇ、９９％）を白色の泡状物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９９％（ＥＬＳＤ）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：５４５［Ｍ＋１］^１＋
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．０７^３

【0191】

中間体６：
［（３Ｒ，６Ｒ）－３，４－ビス（アセチルオキシ）－６－｛４－［（３－｛３－［２－（１－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド）－３－（２－｛［３－（５－｛［（２Ｒ，５Ｒ）－４，５－ビス（アセチルオキシ）－６－［（アセチルオキシ）メチル］－３－アセトアミドオキサン－２－イル］オキシ｝ペンタンアミド）プロピル］カルバモイル｝エトキシ）－２－［（２－｛［３－（５－｛［（２Ｒ，５Ｒ）－４，５－ビス（アセチルオキシ）－６－［（アセチルオキシ）メチル］－３－アセトアミドオキサン－２－イル］オキシ｝ペンタンアミド）プロピル］カルバモイル｝エトキシ）メチル］プロポキシ］プロパンアミド｝プロピル）カルバモイル］ブトキシ｝－５－アセトアミドオキサン－２－イル］メチルアセテート
３，３’－（（２－（（３－（（３－アミノプロピル）アミノ）－３－オキソプロポキシ）メチル）－２－（１－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド）プロパン－１，３－ジイル）ビス（オキシ））ビス（Ｎ－（３－アミノプロピル）プロパンアミド）トリス（２，２，２－トリフルオロアセテート）（１．２１ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（１．６９ｍＬ、９．７０ｍｍｏｌ）の混合物に溶解させた。次に、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（５－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－５－オキソペンチル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（２．２０ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で週末にかけて撹拌した。次に、反応混合物を真空で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ－ＤＣＭ中３０％メタノール（ｖ／ｖ）勾配を０：１００から１００：０に上昇）で精製し、表題化合物（１．８４ｇ、８３％）を黄色がかった泡状物として得た。ＬＣ－ＭＳ ９５％（ＥＬＳＤ）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２０６８［Ｍ＋１］^１＋
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．１８^３

【0192】

中間体７：
三価ＧａｌＮＡｃ－アジド
［（３Ｒ，６Ｒ）－３，４－ビス（アセチルオキシ）－６－｛４－［（３－｛３－［２－（１－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド）－３－（２－｛［３－（５－｛［（２Ｒ，５Ｒ）－４，５－ビス（アセチルオキシ）－６－［（アセチルオキシ）メチル］－３－アセトアミドオキサン－２－イル］オキシ｝ペンタンアミド）プロピル］カルバモイル｝エトキシ）－２－［（２－｛［３－（５－｛［（２Ｒ，５Ｒ）－４，５－ビス（アセチルオキシ）－６－［（アセチルオキシ）メチル］－３－アセトアミドオキサン－２－イル］オキシ｝ペンタンアミド）プロピル］カルバモイル｝エトキシ）メチル］プロポキシ］プロパンアミド｝プロピル）カルバモイル］ブトキシ｝－５－アセトアミドオキサン－２－イル］メチルアセテート（３００ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（２．００ｍＬ、１４．４ｍｍｏｌ）、メタノール（２．００ｍＬ）及び水（２．００ｍＬ）の混合物に溶解させ、反応混合物を室温で撹拌した。２時間後、反応混合物を真空で蒸発させた。残渣を分取ＭＰ－ＬＣで精製した。^２Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（１６４ｍｇ、６７％）を白色の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９７％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１６８８［Ｍ－１］^１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．９９^１Ａ

【0193】

三価ＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１及びＧａｌＮＡｃ－ＳＯ１８６１の合成（図２、４）
中間体８：
ＳＯ１８６１－ＮＨ_２
ＳＯ１８６１－アジド（６．８９ｍｇ、３．２０μｍｏｌ）を、３２ｍＭの炭酸カリウム（１５０μＬ、４．８０μｍｏｌ）及びアセトニトリル（１５０μＬ）の混合物に溶解させた。その直後に、ＴＨＦ（３２μＬ、３２μｍｏｌ）中の１．０Ｍのトリメチルホスフィン溶液を添加し、得られた混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。３０分後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣにかけた。生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（５．３０ｍｇ、７８％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９４％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１０６２［Ｍ－２］^２－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．５１^１Ｂ

【0194】

中間体９：
ＳＯ１８６１－ＤＢＣＯ
ＳＯ１８６１－アミン（４８．６ｍｇ、２２．９μｍｏｌ）及びＤＢＣＯ－ＮＨＳ（１３．０ｍｇ、３２．４μｍｏｌ）に、ＤＩＰＥＡ（５．９８μＬ、３４．３μｍｏｌ）及びＤＭＦ（２．０ｍＬ）の溶液を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。４時間後、反応混合物を５０ｍＭの重炭酸ナトリウム（１．００ｍＬ、５０μｍｏｌ）溶液で希釈した。得られた混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。３０分後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣにかけた。^１Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（１６．９ｍｇ、３１％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９４％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２４１２［Ｍ－１］^１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．４５^１Ｂ

【0195】

ＳＯ１８６１－Ｌ－三価ＧａｌＮＡｃの合成
ＳＯ１８６１－ＤＢＣＯ（７．５０ｍｇ、３．１１μｍｏｌ）及び三価ＧａｌＮＡｃ－アジド（５．３１ｍｇ、３．１４μｍｏｌ）を、水／アセトニトリル（２：１、ｖ／ｖ、０．９０ｍＬ）の混合物に溶解させた。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^３Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（９．６０ｍｇ、７５％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９９％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２０５０［Ｍ－２］^２－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．０４^１Ｂ

【0196】

ＳＯ１８６１－Ｌ－ＧａｌＮＡｃの合成
ＳＯ１８６１－ＤＢＣＯ（１．７５ｍｇ、０．７３μｍｏｌ）及びＧａｌＮＡｃ－ＰＥＧ３－アジド（０．８２ｍｇ、２．１８μｍｏｌ）を、水／アセトニトリル（１：１、ｖ／ｖ、１．００ｍＬ）の混合物に溶解させた。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^３Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（１．６３ｍｇ、８１％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 １００％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２７９０［Ｍ－１］^１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．１５^１Ｂ

【0197】

三価ＧａｌＮＡｃ－ＢＮＡオリゴ合成（図６、７）
中間体１０：
４－｛２－アザトリシクロ［１０．４．０．０^４，９］ヘキサデカ－１（１２），４（９），５，７，１３，１５－ヘキサエン－１０－イン－２－イル｝－Ｎ－［２－（２－｛２－［２－（｛４－［（Ｅ）－｛［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド］イミノ｝メチル］フェニル｝ホルムアミド）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エチル］－４－オキソブタンアミド
４－｛２－アザトリシクロ［１０．４．０．０^４，９］ヘキサデカ－１（１２），４（９），５，７，１３，１５－ヘキサエン－１０－イン－２－イル｝－Ｎ－｛２－［２－（２－｛２－［（４－ホルミルフェニル）ホルムアミド］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝－４－オキソブタンアミド（２５．０ｍｇ、４０．９μｍｏｌ）及びＥＭＣＨ．ＴＦＡ（２０．８ｍｇ、６１．３μｍｏｌ）を、メタノール（超無水（ｅｘｔｒａ ｄｒｙ）、２．００ｍＬ）に溶解させた。次に、ＴＦＡ（９．３９μＬ、１２３μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室内で一晩静置した。反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣにかけた。^１Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（１６．２ｍｇ、４８％）を白色固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９１％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：４１０．２［Ｍ＋２］^２＋
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．４１^２

【0198】

中間体１１：
三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－マレイミド
三価ＧａｌＮＡｃ－アジド（２０．３ｍｇ、１２．０μｍｏｌ）及び４－｛２－アザトリシクロ［１０．４．０．０^４，９］ヘキサデカ－１（１２），４（９），５，７，１３，１５－ヘキサエン－１０－イン－２－イル｝－Ｎ－［２－（２－｛２－［２－（｛４－［（Ｅ）－｛［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド］イミノ｝メチル］フェニル｝ホルムアミド）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エチル］－４－オキソブタンアミド（１１．８ｍｇ、１４．４μｍｏｌ）を、水／アセトニトリル（２：１、ｖ／ｖ、０．９０ｍＬ）の混合物に溶解させた。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣにかけた。^２Ｃ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（２５．６ｍｇ、８５％）を白色固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ８８％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２１０１［Ｍ－４０５］^１－、２３０４［Ｍ－２０２］^１－、２５０７［Ｍ－１］^１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．９０^１Ｂ（異性体に起因する二重ピーク）

【0199】

中間体１２：
三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－マレイミド
三価ＧａｌＮＡｃ－アジド（２０．３ｍｇ、１２．０μｍｏｌ）及びＤＢＣＯ－マレイミド（１０．３ｍｇ、２４．０μｍｏｌ）を、水／アセトニトリル（２：１、ｖ／ｖ、０．９０ｍＬ）の混合物に溶解させた。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣにかけた。^２Ｄ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（２２．２ｍｇ、８７％）を白色固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ８５％。１０％の加水分解マレイミドを含有する。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２１１５［Ｍ－１］^１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．６０^１Ｂ（異性体に起因する二重ピーク）

【0200】

三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢ（又はＨＳＰ２７）ＢＮＡオリゴ合成
アポＢ ＢＮＡオリゴジスルフィド（５．００ｍｇ、０．６８６μｍｏｌ）に、２．５ｍＭのＴＣＥＰ（１．００ｍＬ、２．５μｍｏｌ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１時間後、３０００Ｄａの分画分子量で遠心濾過機を使用することによって（３０分間で５０００×ｇ、２×０．５０ｍＬ）、反応混合物を濾過した。次に、残渣溶液を２．５ｍＭのＴＣＥＰ（０．５０ｍＬ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液で２回洗浄し、その度に上記に記載した同一条件下で濾過した。次に、残渣溶液を２０ｍＭの重炭酸アンモニウム／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、１．００ｍＬ）で希釈し、得られた溶液をそのまま三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－マレイミド（３．０２ｍｇ、１．４３μｍｏｌ）に添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１．５時間後、反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^４Ａ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（６．７５ｍｇ、定量）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９４％（極めてブロードなピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２３１８［Ｍ－４］^４－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．６５^１Ａ

【0201】

三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－アポＢ（又はＨＳＰ２７）スクランブルＢＮＡオリゴ合成
アポＢスクランブルＢＮＡオリゴジスルフィド（５．００ｍｇ、０．６８８μｍｏｌ）に、２．５ｍＭのＴＣＥＰ（１．００ｍＬ、２．５μｍｏｌ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１時間後、３０００Ｄａの分画分子量で遠心濾過機を使用することによって（３０分間で５０００×ｇ、２×０．５０ｍＬ）、反応混合物を濾過した。次に、残渣溶液を２．５ｍＭのＴＣＥＰ（０．５０ｍＬ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液で２回洗浄し、その度に上記に記載した同一条件下で濾過した。次に、残渣溶液を２０ｍＭの重炭酸アンモニウム／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、１．００ｍＬ）で希釈し、得られた溶液をそのまま三価ＧａｌＮＡｃ－Ｓ－マレイミド（３．０９ｍｇ、１．４６μｍｏｌ）に添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１．５時間後、反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^４Ａ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（５．９１ｍｇ、９３％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ８８％（極めてブロードなピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２３１１［Ｍ－４］^４－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．６０^１Ａ

【0202】

三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢ（又はＨＳＰ２７）ＢＮＡオリゴ合成
アポＢ ＢＮＡオリゴジスルフィド（５．００ｍｇ、０．６８６μｍｏｌ）に、２．５ｍＭのＴＣＥＰ（１．００ｍＬ、２．５μｍｏｌ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１時間後、３０００Ｄａの分画分子量で遠心濾過機を使用することによって（３０分間で５０００×ｇ、２×０．５０ｍＬ）、反応混合物を濾過した。次に、残渣溶液を２．５ｍＭのＴＣＥＰ（０．５０ｍＬ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液で２回洗浄し、その度に上記に記載した同一条件下で濾過した。次に、残渣溶液を２０ｍＭの重炭酸アンモニウム／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、１．００ｍＬ）で希釈し、得られた溶液をそのまま三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－マレイミド（３．６３ｍｇ、１．４５μｍｏｌ）に添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１．５時間後、反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^４Ａ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（６．６８ｍｇ、定量）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９９％（極めてブロードなピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２４１６［Ｍ－４］^４－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．９７^１Ａ

【0203】

三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－アポＢ（又はＨＳＰ２７）スクランブルＢＮＡオリゴ合成
アポＢスクランブルＢＮＡオリゴジスルフィド（５．００ｍｇ、０．６８８μｍｏｌ）に、２．５ｍＭのＴＣＥＰ（１．００ｍＬ、２．５μｍｏｌ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１時間後、３０００Ｄａの分画分子量で遠心濾過機を使用することによって（３０分間で５０００×ｇ、２×０．５０ｍＬ）、反応混合物を濾過した。次に、残渣溶液を２．５ｍＭのＴＣＥＰ（０．５０ｍＬ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液で２回洗浄し、その度に上記に記載した同一条件下で濾過した。次に、残渣溶液を２０ｍＭの重炭酸アンモニウム／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、１．００ｍＬ）で希釈し、得られた溶液をそのまま三価ＧａｌＮＡｃ－Ｌ－マレイミド（３．６８ｍｇ、１．４７μｍｏｌ）に添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１．５時間後、反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^４Ａ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（４．７１ｍｇ、７１％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９６％（極めてブロードなピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２４０９［Ｍ－４］^４－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．９３^１Ａ

【0204】

デンドロン（－Ｌ－ＳＯ１８６１）_４－三価ＧａｌＮＡｃ及びデンドロン（－Ｌ－ＳＯ１８６１）_８－三価ＧａｌＮＡｃの合成
中間体１３：
三価ＧａｌＮＡｃ－アミンホルメート
三価ＧａｌＮＡｃ－アジド（３６．５ｍｇ、２１．６μｍｏｌ）を、炭酸カリウム（５．９７ｍｇ、４３．２μｍｏｌ）の水（１．００ｍＬ）及びアセトニトリル（１．００ｍＬ）溶液に溶解させた。次に、ＴＨＦ（２１６μＬ、２１６μｍｏｌ）中１．０Ｍのトリメチルホスフィン溶液を添加し、得られた混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。４５分後、反応混合物を真空で蒸発させ、残渣を水／アセトニトリル（９：１、ｖ／ｖ、１ｍＬ）に溶解させた。得られた溶液をそのまま分取ＭＰ－ＬＣにかけた。^２Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（３６．１ｍｇ、９８％）を白色固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 １００％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１６６２［Ｍ－１］^１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．６２^１Ａ

【0205】

中間体１４：
三価ＧａｌＮＡｃ－ＤＢＣＯ
三価ＧａｌＮＡｃ－アミンホルメート（１７．４ｍｇ、１０．２μｍｏｌ）及びＤＢＣＯ－ＮＨＳ（６．１４ｍｇ、１５．３μｍｏｌ）を、ＮＭＭ（２．２４μＬ、２０．３μｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５０ｍＬ）溶液に溶解させた。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を真空で蒸発させ、残渣を水／アセトニトリル（８：２、ｖ／ｖ、１ｍＬ）に溶解させた。得られた溶液をそのまま分取ＭＰ－ＬＣにかけた。^２Ｃ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（１４．２ｍｇ、７２％）を白色固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９６％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１９５０［Ｍ－１］^１
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．８６^１Ｂ

【0206】

中間体１５：
デンドロン（－Ｌ－ＳＯ１８６１）_８－アジド
デンドロン（－Ｌ－ＳＯ１８６１）_８－アミン（１９．６ｍｇ、１．０８μｍｏｌ）及び２，５－ジオキソピロリジン－１－イル１－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－オエート（４．１７ｍｇ、１０．８μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．５０ｍＬ）に溶解させた。次に、ＤＩＰＥＡ（１．８７μＬ、１０．８μｍｏｌ）を添加し、混合物を１分間振盪させ、室温で一晩静置した。反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^４Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（１１．７ｍｇ、５９％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９２％（極めてブロードなピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２３１６［Ｍ－８］^８－）：２６４７［Ｍ－７］^７－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：４．２９^１Ａ

【0207】

デンドロン（－Ｌ－ＳＯ１８６１）_４－三価ＧａｌＮＡｃの合成
デンドロン（－Ｌ－ＳＯ１８６１）_４－アジド（２．５０ｍｇ、０．２６６μｍｏｌ）、及び三価ＧａｌＮＡｃ－ＤＢＣＯ（１．５６ｍｇ、０．７９９μｍｏｌ）を、水／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、１．００ｍＬ）の混合物に溶解させた。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^４Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（２．７４ｍｇ、９１％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ８６％（極めてブロードなピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２８３２［Ｍ－４］^４－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：４．０７^１Ａ

【0208】

デンドロン（－Ｌ－ＳＯ１８６１）_８－三価ＧａｌＮＡｃの合成
デンドロン（－Ｌ－ＳＯ１８６１）_８－アジド（２．５０ｍｇ、０．１３５μｍｏｌ）、及び三価ＧａｌＮＡｃ－ＤＢＣＯ（０．７９ｍｇ、０．４０５μｍｏｌ）を、水／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、１．００ｍＬ）の混合物に溶解させた。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^４Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（２．０３ｍｇ、７４％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 １００％（極めてブロードなピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２５５９［Ｍ－８］^８－、２９２５［Ｍ－７］^７－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：４．１８^１Ａ

【0209】

中間体１６：
三価ＧａｌＮＡｃ－チオアセテート
三価ＧａｌＮＡｃ－アミンホルメート（１８．７ｍｇ、１１．０μｍｏｌ）及び４－ニトロフェニル３－（アセチルチオ）プロパノエート（５．９０ｍｇ、２１．９μｍｏｌ）を、ＮＭＭ（２．４１μＬ、２１．９μｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５０ｍＬ）溶液に溶解させた。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を真空で蒸発させ、残渣を水中０．１％ギ酸及びアセトニトリル中０．１％ギ酸（９：１、ｖ／ｖ、１ｍＬ）の混合物に溶解させた。得られた溶液をそのまま分取ＭＰ－ＬＣにかけた。^２Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（１３．０ｍｇ、６６％）を白色固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 １００％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１７４９［Ｍ－４３］^１－、１７９２［Ｍ－１］^１
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．２４^１Ｂ

【0210】

中間体１７：
ＤＢＣＯ－ＴＣＯ－三価ＧａｌＮＡｃ
三価ＧａｌＮＡｃ－チオアセテート（１３．０ｍｇ、７．２５μｍｏｌ）をメタノール（０．５０ｍＬ）に溶解させた。次に、１Ｍの水酸化ナトリウム溶液（７．９８μＬ、７．９８μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。３０分後、新たに調製した三官能基リンカー（Ｌｓ－ｔ）（即ち、サポニン部分リンカーＬ_Ｓの一実施例である）の２０ｍＭ重炭酸アンモニウム／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、２．００ｍＬ）溶液（７．３９ｍｇ、６．１３μｍｏｌ）に、反応混合物を添加した。

【0211】

三官能性リンカーのＩＵＰＡＣ名は、５，８，１１，１８，２１，２４，２７－ヘプタオキサ－２，１４，３０－トリアザトリトリアコンタン酸、１４－［１６－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－１３，１６－ジオキソ－３，６，９－トリオキサ－１２－アザヘキサデス－１－イル］－３３－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１５，３１－ジオキソ－、（１Ｒ，４Ｅ）－４－シクロオクテン－１－イルエステルである。三官能性リンカーは、以下の式（ＸＶＩＩ）：

【0212】

【化20】

【0213】

を有する。

【0214】

得られた混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣにかけた。^２Ａ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（３．８３ｍｇ、２１％）を白色固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ８９％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２４０９［Ｍ－５４６］^１－、２９５５［Ｍ－１］^１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．６６^１Ｂ

【0215】

中間体１８：
メチルテトラジン－Ｌ－アポＢ ＢＮＡオリゴ
アポＢ ＢＮＡオリゴジスルフィド（５．００ｍｇ、０．６８６μｍｏｌ）に、２．５ｍＭのＴＣＥＰ（１．００ｍＬ、２．５μｍｏｌ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１時間後、３０００Ｄａの分画分子量で遠心濾過機を使用することによって（３０分間で５０００×ｇ、２×０．５０ｍＬ）、反応混合物を濾過した。次に、残渣溶液を２．５ｍＭのＴＣＥＰ（０．５０ｍＬ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液で２回洗浄し、その度に上記に記載した同一条件下で濾過した。次に、残渣溶液を２０ｍＭの重炭酸アンモニウム（１．５０ｍＬ）で希釈し、得られた溶液を、そのまま（Ｅ）－１－（４－（（２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル）ヒドラジンイリデン）メチル）ベンズアミド）－Ｎ－（４－（６－メチル－１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（１．３６ｍｇ、１．７３μｍｏｌ）のアセトニトリル（０．５ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。３０分後、反応混合物を冷凍して一晩凍結乾燥させ、粗製の表題生成物をピンク色の綿毛状の固形物として得た。粗生成物に２０ｍＭの重炭酸アンモニウム（１．５０ｍＬ）溶液を添加し、得られた懸濁液を０．４５μｍのシリンジフィルターを通して濾過した。濾液を一晩凍結乾燥させ、表題生成物（５．４４ｍｇ、定量）をピンク色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９０％（極めてブロードなピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２６４８［Ｍ－３］^３－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：０．６２^４

【0216】

中間体１９：
メチルテトラジン－Ｌ－アポＢスクランブルＢＮＡオリゴ
アポＢスクランブルＢＮＡオリゴジスルフィド（５．００ｍｇ、０．６８８μｍｏｌ）に、２．５ｍＭのＴＣＥＰ（１．００ｍＬ、２．５μｍｏｌ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１時間後、３０００Ｄａの分画分子量で遠心濾過機を使用することによって（３０分間で５０００×ｇ、２×０．５０ｍＬ）、反応混合物を濾過した。次に、残渣溶液を２．５ｍＭのＴＣＥＰ（０．５０ｍＬ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液で２回洗浄し、その度に上記に記載した同一条件下で濾過した。次に、残渣溶液を２０ｍＭの重炭酸アンモニウム（１．５０ｍＬ）で希釈し、得られた溶液を、そのまま（Ｅ）－１－（４－（（２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル）ヒドラジンイリデン）メチル）ベンズアミド）－Ｎ－（４－（６－メチル－１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（１．３４ｍｇ、１．７０μｍｏｌ）のアセトニトリル（０．５ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。３０分後、反応混合物を冷凍して一晩凍結乾燥させ、粗製の表題生成物をピンク色の綿毛状の固形物として得た。粗生成物に２０ｍＭの重炭酸アンモニウム（１．５０ｍＬ）溶液を添加し、得られた懸濁液を０．４５μｍのシリンジフィルターを通して濾過した。濾液を一晩凍結乾燥させ、表題生成物（５．４８ｍｇ、定量）をピンク色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ８４％（極めてブロードなピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２６３９［Ｍ－３］^３－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：０．５８^４

【0217】

中間体２０：
ＤＢＣＯ－Ｌ－アポＢ ＢＮＡオリゴ－三価ＧａｌＮＡｃ
メチルテトラジン－Ｌ－アポＢ ＢＮＡオリゴ（５．４４ｍｇ、０．６８４μｍｏｌ）及びＤＢＣＯ－ＴＣＯ－三価ＧａｌＮＡｃ（２．０３ｍｇ、０．６８７μｍｏｌ）を、２０ｍＭの重炭酸アンモニウム／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、１．００ｍＬ）に添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^４Ｃ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（２．８７ｍｇ、３９％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳは、正確なｍ／ｚ値で複数のブロードピークを示している。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２１７５［Ｍ－５］^５－、２７１８［Ｍ－６］^４－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．６０～３．００^１Ａ

【0218】

中間体２１：
ＤＢＣＯ－Ｌ－アポＢスクランブルＢＮＡオリゴ－三価ＧａｌＮＡｃ
メチルテトラジン－Ｌ－アポＢスクランブルＢＮＡオリゴ（５．４８ｍｇ、０．６９２μｍｏｌ）及びＤＢＣＯ－ＴＣＯ－三価ＧａｌＮＡｃ（１．８０ｍｇ、０．６０９μｍｏｌ）に、２０ｍＭの重炭酸アンモニウム／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、１．００ｍＬ）を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^４Ｃ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（２．１５ｍｇ、３３％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳは、正確なｍ／ｚ値で複数のブロードピークを示している。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２１６９［Ｍ－５］^５－、２７１１［Ｍ－６］^４－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．５８～３．２０^１Ａ

【0219】

中間体２２（図２１）
三価ＧａｌＮＡｃ－チオール
三価ＧａｌＮＡｃ－チオアセテート（１６．２ｍｇ、９．０２μｍｏｌ）をメタノール（５００μＬ）に溶解させた。次に、１．００Ｍの水酸化ナトリウム溶液（１１．０μＬ、１１．０μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。３０分後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣにかけた。^１Ａ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（１３．１ｍｇ、８３％）を白色固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９８％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１７４８［Ｍ－Ｈ］^１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：１．７８^１Ａ

【0220】

中間体２３：（図２１）
ＤＢＣＯ－ＴＣＯ－三価ＧａｌＮＡｃ
三官能性リンカー（Ｌｓ）（１５．０ｍｇ、１２．４μｍｏｌ）をアセトニトリル（０．５０ｍＬ）に溶解させた。次に、２０ｍＭの重炭酸アンモニウム（１．５０ｍＬ）溶液を添加し、得られた溶液を、そのまま三価ＧａｌＮＡｃ－チオール（２２．７ｍｇ、１３．０μｍｏｌ）に移した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１時間後、反応混合物を冷凍して一晩凍結乾燥させ、粗製の表題生成物を白色固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ８４％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２４０９［Ｍ－５４６］^１－、２９５５［Ｍ－１］^１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．６３^１Ｂ

【0221】

中間体２５（図２２）：
メチルテトラジン－ＢＮＡオリゴ
チオール－１３－アポＢ ＢＮＡオリゴジスルフィド（２０ｍｇ、４．１７μｍｏｌ）に、５．０ｍＭのＴＣＥＰ（２．００ｍＬ、１０．０μｍｏｌ）を含有する２０ｍＭの重炭酸アンモニウム溶液に添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１時間後、３０００Ｄａの分画分子量で遠心濾過機を使用することによって（３０分間で５０００×ｇ、４×０．５０ｍＬ）、反応混合物を濾過した。次に、残渣溶液を２０ｍＭの重炭酸アンモニウム（３．００ｍＬ）で希釈し、得られた溶液を、そのまま（Ｅ）－１－（４－（（２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル）ヒドラジンイリデン）メチル）ベンズアミド）－Ｎ－（４－（６－メチル－１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（７．２２ｍｇ、９．１６μｍｏｌ）のアセトニトリル（１．０ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。１時間後、反応混合物を冷凍して一晩凍結乾燥させ、粗製の表題生成物をピンク色の綿毛状の固形物として得た。粗生成物に２０ｍＭの重炭酸アンモニウム／アセトニトリル（２：１、ｖ／ｖ、２．００ｍＬ）を添加し、得られた溶液を分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^１Ａ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（２０．３ｍｇ、８９％）をピンク色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９３％（ブロードピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１８１７［Ｍ－３］^３－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：０．５９^３

【0222】

中間体２６（図２２）：
（ブロック化ＤＢＣＯ）－ＴＣＯ－三価ＧａｌＮＡｃ
１－アジド－３，６，９－トリオキサウンデカン－１１－オール（２．１７ｍｇ、９．８８μｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５０ｍＬ）溶液を、ＤＢＣＯ－ＴＣＯ－三価ＧａｌＮＡｃ（１４．６ｍｇ、４．９４μｍｏｌ）に添加した。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣにかけた。^１Ｃ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（１０．００ｍｇ、６４％）を白色固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９８％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１７５０［フラグメント］
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．３３^１Ｂ

【0223】

Ｌｓ－（ブロック化ＤＢＣＯ）－ＢＮＡオリゴ－三価ＧａｌＮＡｃ（図２３）
（ブロック化ＤＢＣＯ）－ＴＣＯ－三価ＧａｌＮＡｃ（１０．０ｍｇ、３．１５μｍｏｌ）及びメチルテトラジン－ＢＮＡオリゴ（１０．０ｍｇ、１．８３μｍｏｌ）を、２０ｍＭの重炭酸アンモニウム／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、１．００ｍＬ）溶液に溶解させた。反応混合物を１分間振盪させ、室温で静置した。３時間後、反応混合物を冷凍して一晩凍結乾燥させた。粗組成物を２０ｍＭの重炭酸アンモニウム（１ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液をそのまま分取ＬＣ－ＭＳにかけた。^１Ｂ 生成物に相当する分画を直ちに共にプールし、冷凍して一晩凍結乾燥させ、表題化合物（ＧａｌＮＡｃ）３－Ｌｓ－ＢＮＡ）（１１．３ｍｇ、７２％）を白色の綿毛状の固形物として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ９５％（位置異性体に起因する複数の（ブロード）ピーク）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２１４９ ［Ｍ－４］^４－、２８６６ ［Ｍ－３］^３－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（ｍｉｎ）：２．９２^１Ａ

【0224】

抗ＣＤ７１－サポリンの合成
Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から、カスタムＣＤ７１ ｍａｂ－サポリンコンジュゲートを生成させ、これを購入した。ＣＤ７１抗体（抗ＣＤ７１のクローンＯＫＴ－９、ＩｎＶｉｖｏＭａｂ）は、ＢｉｏＸＣｅｌｌから購入した。

【0225】

ＨＳＰ２７ＢＮＡ、アポＢ及びアポＢ_{ｓｃｒａｍｂｌｅｄ}オリゴ配列
ＨＳＰ２７（５’－ＧＧＣａｃａｇｃｃａｇｔｇＧＣＧ－３’）［配列番号１］（アンチセンスＢＮＡ（ＨＳＰ２７）は、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１１）［Ｙ Ｚｈａｎｇ，Ｚ Ｑｕ，Ｓ Ｋｉｍ，Ｖ Ｓｈｉ，Ｂ Ｌｉａｏ１，Ｐ Ｋｒａｆｔ，Ｒ Ｂａｎｄａｒｕ，Ｙ Ｗｕ，ＬＭ Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ ＩＤ Ｈｏｒａｋ，Ｄｏｗｎ－ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｔａｒｇｅｔｓ ｕｓｉｎｇ ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ（ＬＮＡ）－ｂａｓｅｄ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１１）１８，３２６－３３３］によるオリゴ核酸配列５’－ＧＧＣａｃａｇｃｃａｇｔｇＧＣＧ－３’を有するＢＮＡ、より具体的にはＢＮＡ^ＮＣであった）、アポＢ（アポＢ＃０１とも称する）（５’－ＧＣＣＴＣａｇｔｃｔｇｃｔｔｃＧＣＡＣＣ－３’）［配列番号２］及びアポＢ_{ｓｃｒａｍｂｌｅｄ}（５’－ＧＧＣＣＴｃｔｃｔａｃａｃｃｇＣＴＣＧＴ－３’）［配列番号３］ＢＮＡオリゴ、並びにマウス及びヒト配列と適合性のあるアポＢ＃０２（５’－ＧＣａｔｔｇｇｔａｔＴＣＡ－３’）［配列番号１２］ＢＮＡ^ＮＣオリゴヌクレオチドを、５’チオールＣ６リンカーと共に、ＢＮＡ塩基を大文字で示し、完全なホスホロチオエート主鎖を有するものをＢｉｏ－Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｉｎｃ．で注文した（Ｌｅｗｉｓｖｉｌｌｅ、Ｔｅｘａｓ）。

【0226】

細胞株のＲＮＡ単離及び遺伝子発現解析
細胞からＲＮＡを単離し、標準的な手順（Ｂｉｏｒａｄ）に従って分析した。使用したｑＰＣＲプライマーを表Ａ２に示す。

【0227】

【表6】

【0228】

細胞生存率アッセイ
処置後に細胞を３７℃で７２時間インキュベートし、その後、細胞生存率をＭＴＳアッセイで測定し、製造業者の指示書（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ）に従って実行した。要約すると、１０％ＦＢＳを補充した、フェノールレッド不含ＤＭＥＭ（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）で、ＭＴＳ溶液を２０倍に希釈した。細胞を２００μＬ／ＰＢＳウェルで一度洗浄し、その後１００μＬの希釈したＭＴＳ溶液をウェル毎に添加した。プレートを３７℃で約２０～３０分間インキュベートした。続いて、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＦＣプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で４９２ｎｍのＯＤを測定した。定量化のため、「培地のみ」のウェルのバックグラウンドシグナルを全ての他のウェルから差し引き、その後、処置ウェルのバックグラウンド補正シグナルを未処置ウェルのバックグラウンド補正シグナルに対して除算する（×１００）ことによって処置細胞／未処置細胞の細胞生存率の百分率を算出した。

【0229】

ＦＡＣＳ分析
Ｔ７５フラスコ中の１０％ウシ胎児血清（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）を補充したＤＭＥＭ（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）に、細胞をそれぞれの細胞株に適切な密度で播種し、コンフルエンシーが９０％に到達するまで７２～９６時間インキュベートした（５％ ＣＯ_２、３７℃）。次に、細胞をトリプシン処理（ＴｒｙｐｌＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ、Ｇｉｂｃｏ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）して単一細胞とし、１５ｍＬのｆａｌｃｏｎチューブに移して遠心分離した（１，４００ｒｐｍ、３分）。細胞ペレットを浸したままで上清を捨てた。５００．０００個の細胞を丸底ＦＡＣＳチューブに移し、３ｍＬの冷ＤＰＢＳ（Ｍｇ^２＋及びＣａ^２＋フリー、２％ＦＢＳ）で洗浄した。細胞を１８００ｒｐｍで３分間、４℃で遠心分離し、２００μＬの冷ＤＰＢＳ（Ｍｇ^２＋及びＣａ^２＋フリー、２％ＦＢＳ）又は１９５μＬの冷ＤＰＢＳ（Ｍｇ^２＋及びＣａ^２＋フリー、２％ＦＢＳ）中に５μＬの抗体を含有する２００μＬの抗体溶液に再懸濁した。トランスフェリン受容体を染色するためにＰＥ抗ヒトＣＤ７１（＃３３４１０６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用し、それに一致するアイソタイプ対照として、ＰＥマウスＩｇＧ２ａ、κアイソタイプ対照ＦＣ（＃４００２１２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用した。ＡＳＧＰＲ１受容体を染色するためにＰＥ抗ヒトＡＳＧＰＲ１（＃１３０－１２２－９６３、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用し、それに一致するアイソタイプ対照としてＰＥマウスＩｇＧ１、アイソタイプ対照（＃１３０－１１３－７６２、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用した。試料を４℃で３０分間インキュベートした。その後、細胞を冷ＤＰＢＳ（Ｍｇ^２＋及びＣａ^２＋フリー、２％ＦＢＳ）で２回洗浄し、ＤＰＢＳ（Ｍｇ^２＋及びＣａ^２＋フリー、２％ＦＢＳ）中２％ＰＦＡ溶液を使用して室温で２０分間固定化した。細胞を冷ＤＰＢＳで１回洗浄し、ＦＡＣＳ分析のために１０００μＬの冷ＤＰＢＳ中に再懸濁した。Ｓｙｓｍｅｘ Ｃｕｂｅ ８フローサイトメトリーシステム（Ｓｙｓｍｅｘ）及びＦＣＳ Ｅｘｐｒｅｓｓ ７ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｅｄｉｔｉｏｎソフトウェアで試料を分析した。ＦＡＣＳ分析の結果は、表Ａ３にまとめられている。

【0230】

【表7】

【0231】

初代マウス及びヒト肝細胞からのＲＮＡ単離及び遺伝子発現解析
ＴＲＩ Ｒｅａｇｅｎｔ（登録商標）溶液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造業者の指示書に従って使用して、細胞からＲＮＡを単離した。標準的な手順を用いて、ｉＳｃｒｉｐｔ（商標）ｃＤＮＡ合成キット（Ｂｉｏｒａｄ）を使用してｃＤＮＡへの変換を行った。アポＢ発現レベルと特異的肝細胞ハウスキーピング遺伝子のレベルを、表Ａ４（マウス）及び表Ａ２（ヒト）に列挙した特異的ＤＮＡプライマーを含む、ｉＴａｑ（商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）及びＬｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ ４８０（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｒｏｔｋｒｅｕｚ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用する、定量的リアルタイムＰＣＲアッセイ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）を使用して測定した。アポＢの発現を２つの肝細胞特異的ハウスキーピング対照ｍＲＮＡと比較して測定するため、ΔＣｔ法によって分析を行った。各分析反応を３回実施した。

【0232】

【表8】

【0233】

マウス初代肝細胞の処置
凍結保存した初代マウス肝細胞（ＰＲＩＭＡＣＹＴ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、肝細胞解凍培地（ＨＴＭ、ＰＲＩＭＡＣＹＴ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中で解凍し、肝細胞洗浄培地（ＨＷＭ、ＰＲＩＭＡＣＹＴ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で１回洗浄した。肝細胞プレーティング培地（ＨＰＭ Ｃｒｙｏ、ＰＲＩＭＡＣＹＴ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中に、細胞を約０．２７５×１０^６細胞／ｍｌの密度で再懸濁した。Ｉ型コラーゲンコートプレートに、４８又は９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ＢｉｏＯｎｅ）に対して８８．０００細胞／ウェル又は２６．４００細胞／ウェルの密度で細胞を播種した。処置を開始する前に、細胞培養プレートに細胞接着させるため、細胞を３７℃で４～６時間前培養した。プレーティング培地を３１５μｌ又は１０８μｌのアッセイ培地（ＭＨＭ、ＰＲＩＭＡＣＹＴ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に置き換え、その後、ＰＢＳ中１０倍の濃度のストック溶液からコンジュゲートを添加した。プレートを３７℃で７２時間インキュベートし、遺伝子発現及び細胞生存を分析するために採取した。

【0234】

ヒト初代肝細胞の処置
凍結保存した初代ヒト肝細胞（Ｃｙｔｅｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｓ．Ｌ．、Ｓｐａｉｎ）を肝細胞解凍培地（Ｃｙｔｅｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｓ．Ｌ．、Ｓｐａｉｎ）中で解凍した。細胞を肝細胞プレーティング培地（Ｃｙｔｅｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｓ．Ｌ．、Ｓｐａｉｎ）中に再懸濁した。Ｉ型コラーゲンコートプレートに、４８又は９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ＢｉｏＯｎｅ）に対して２１５．６００細胞／ウェル又は６６．６００細胞／ウェルの密度で細胞を播種した。処置を開始する前に、細胞培養プレートに細胞接着させるため、細胞を３７℃で４～６時間前培養した。プレーティング培地を３１５μｌ又は１０８μｌの維持培地（Ｃｙｔｅｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｓ．Ｌ．、Ｓｐａｉｎ）に置き換え、その後、ＰＢＳ中１０倍の濃度のストック溶液からコンジュゲートを添加した。プレートを３７℃で７２時間インキュベートし、遺伝子発現及び細胞生存を分析するために採取した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図13A】

【図13B】

【図14A】

【図14B】

【図15A】

【図15B】

【図16A】

【図16B】

【図17A】

【図17B】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【配列表】

2023533693000001.app

【手続補正書】

【提出日】2023-05-19

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

医薬配合物であって、
－ エフェクター分子とアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のリガンドとのコンジュゲートであって、前記ＡＳＧＰＲのリガンドが、少なくとも１つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分、好ましくは３つ又は４つのＧａｌＮＡｃ部分を含み、より好ましくは（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスを含むか又はそれからなり、前記エフェクター分子が、オリゴヌクレオチドを含むか又はそれからなるコンジュゲートと；
－ キラ酸及びギプソゲニンから選択されるアグリコンコア構造から構成されるモノデスモシドトリテルペン配糖体又はビデスモシドトリテルペン配糖体であるサポニンであって、任意選択により、前記キラ酸又はギプソゲニンのＣ _２３ 位のアルデヒド基が誘導体化されており、任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含むサポニンと
を含む、医薬配合物。

【請求項2】

少なくとも２種の医薬組成物の形態の請求項１に記載の医薬配合物であって、
－ 前記コンジュゲートを含み、任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、第１の医薬組成物と；
－ 前記サポニンを含み、任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、第２の医薬組成物とを含む医薬配合物。

【請求項3】

前記コンジュゲート、前記サポニン、並びに任意選択により薬学的に許容される賦形剤及び／又は薬学的に許容される希釈剤を含む、単一の医薬組成物の形態の請求項１に記載の医薬配合物。

【請求項4】

前記ＡＳＧＰＲのリガンドと前記エフェクター分子とが、共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つのリンカーを介してコンジュゲートされている、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項5】

前記エフェクター分子が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチヘアピン型マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ、アプタマーＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、アンチマイクロＲＮＡ、（アンチｍｉＲＮＡ、アンチｍｉＲ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ロックド核酸（ＬＮＡ）、架橋型核酸（ＢＮＡ）、２’－Ｏ，４’－アミノエチレン架橋型核酸（ＢＮＡ^ＮＣ）、ＢＮＡベースのｓｉＲＮＡ、及びＢＮＡベースのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＢＮＡ－ＡＯＮ）のいずれか１つ以上から選択されるオリゴヌクレオチドである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項6】

前記エフェクター分子が、アンチｍｉＲＮＡ、ＢＮＡ－ＡＯＮ又はｓｉＲＮＡ、例えば、好ましくは化学的に修飾されたｓｉＲＮＡ、代謝的に安定したｓｉＲＮＡ、及び化学的に修飾され、代謝的に安定したｓｉＲＮＡから選択されるＢＮＡベースのｓｉＲＮＡのいずれか１つから選択されるオリゴヌクレオチドである、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項7】

前記エフェクター分子が、以下の遺伝子：ＨＳＰ２７、アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、プロタンパク質転換酵素であるサブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、δ－アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ１）、アンチトロンビン３（ＡＴ３）、グリコール酸オキシダーゼ（ＧＯ）、補体成分Ｃ５（ＣＣ５）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のいずれか１つをサイレンシングすることができ、並びに／又は異常なｍｉＲＮＡを標的化することができるオリゴヌクレオチドである、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項8】

前記エフェクター分子が、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、以下のタンパク質：ＨＳＰ２７、アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子の発現産物、ＨＢＶのＳ遺伝子の発現産物、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つの発現に関与するｍＲＮＡを標的化することができるか、又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、発癌性ｍｉＲＮＡ（ｏｎｃｏ－ｍｉＲ）の阻害若しくはｏｎｃｏ－ｍｉＲの発現の抑制などのｍｉＲＮＡ機能を弱めるか若しくは回復させることができるオリゴヌクレオチドである、請求項１～７のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項9】

前記サポニンのアグリコンコア構造は、前記キラ酸又はその誘導体である、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項10】

請求項１～９のいずれか一項に記載の医薬配合物であって、
－ 前記サポニンが、群Ａ：
ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－、
Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－Ａｒａ－、
Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→２）－［Ｇｌｃ－（１→４）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→２）－Ａｒａ－（１→３）－［Ｇａｌ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→２）－Ａｒａ－（１→３）－［Ｇａｌ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－Ｇｌｃ－（１→４）－Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→３）－［Ｇｌｃ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
及び
これらの誘導体
から選択される、前記アグリコンコア構造に結合された糖鎖を含むか、
又は
－ 前記サポニンが、群Ｂ：
Ｇｌｃ－、
Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－、
Ｒｈａ－（１→２）－［Ａｒａ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－、
Ａｒａ－、
Ｘｙｌ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１は４Ｅ－メトキシケイ皮酸である）、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ２－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ２は４Ｚ－メトキシケイ皮酸である）、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇａｌ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－３、４－ジ－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ３－（→４）］－３－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ３は４Ｅ－メトキシケイ皮酸である）、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
（Ａｒａ－若しくはＸｙｌ－）（１→３）－（Ａｒａ－若しくはＸｙｌ－）（１→４）－（Ｒｈａ－若しくはＦｕｃ－）（１→２）－［４－ＯＡｃ－（Ｒｈａ－若しくはＦｕｃ－）（１→４）］－（Ｒｈａ－若しくはＦｕｃ－）、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇａｌ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ａｒａ／Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ／Ｆｕｃ－（１→４）－［Ｇｌｃ／Ｇａｌ－（１→２）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ４－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ４は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ５－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ５は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
６－ＯＡｃ－Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３－ＯＡｃ－Ｒｈａ－（１→３）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３－ＯＡｃ－－Ｒｈａ－（１→３）］－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３、４－ジ－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
６－ＯＡｃ－Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ６－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ６は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ｒｈａ－（１→２）－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ７－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ７は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ８－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ８は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ９－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ９は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１０－（→４）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１０は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１１－（→３）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１１は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１２－（→３）］－Ｆｕｃ－（式中、Ｒ１２は５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸である）、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｇｌｃ－（１→６）］－Ｇａｌ－、及び
これらの誘導体
から選択される、前記アグリコンコア構造に結合された糖鎖を含むか、
又は
－ 前記サポニンが、前記アグリコンコア構造に結合された前記群Ａから選択される第１の糖鎖を含み、前記アグリコンコア構造に結合された前記群Ｂから選択される第２の糖鎖を含む、ビデスモシドトリテルペン配糖体である、医薬配合物。

【請求項11】

前記サポニンが、キラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）樹皮サポニン、ＮＰ－０１７７７７、ＮＰ－０１７７７８、ＮＰ－０１７７７４、ＮＰ－０１８１１０、ＮＰ－０１７７７２、ＮＰ－０１８１０９、ＮＰ－０１７８８８、ＮＰ－０１７８８９、ＮＰ－０１８１０８、ＳＡ１６４１、ＡＥ Ｘ５５、ＮＰ－０１７６７４、ＮＰ－０１７８１０、ＡＧ１、ＮＰ－００３８８１、ＮＰ－０１７６７６、ＮＰ－０１７６７７、ＮＰ－０１７７０６、ＮＰ－０１７７０５、ＮＰ－０１７７７３、ＮＰ－０１７７７５、ＳＡ１６５７、ＡＧ２、ＳＯ１８６１、ＧＥ１７４１、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２、ＳＯ１９０４、ＱＳ－７、ＱＳ１８６１、ＱＳ－７ ａｐｉ、ＱＳ１８６２、ＱＳ－１７、ＱＳ－１８、ＱＳ－２１ Ａ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ａ－ｘｙｌｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ｘｙｌｏ、これらの立体異性体、これらの誘導体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくはＱＳ－２１、ＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６１誘導体、ＳＡ１６４１、ＳＡ１６４１誘導体、ＧＥ１７４１、ＧＥ１７４１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、より好ましくはＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、最も好ましくはＳＯ１８６１誘導体である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項12】

前記サポニンがサポニン誘導体であり、
ｉ．前記サポニン誘導体が、誘導体化されたアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．前記サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは請求項１０に記載の群Ａから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、誘導体化されているカルボキシル基を含むか；又は
ｉｉｉ．前記サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは請求項１０に記載の群Ｂから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、誘導体化されているアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、任意選択により誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．のうちの２つの誘導体化の任意の組み合わせが存在する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項13】

前記サポニンが、ＳＯ１８６１、ＳＡ１６５７、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１、ＱＳ－２１、ＱＳ－２１Ａ、ＱＳ－２１ Ａ－ａｐｉ、ＱＳ－２１ Ａ－ｘｙｌ、ＱＳ－２１Ｂ、ＱＳ－２１ Ｂ－ａｐｉ、ＱＳ－２１ Ｂ－ｘｙｌ、ＱＳ－７－ｘｙｌ、ＱＳ－７－ａｐｉ、ＱＳ－１７－ａｐｉ、ＱＳ－１７－ｘｙｌ、ＱＳ１８６１、ＱＳ１８６２、キラヤサポニン、サポニナム・アルブム（Ｓａｐｏｎｉｎｕｍ ａｌｂｕｍ）、ＱＳ－１８、Ｑｕｉｌ－Ａ、Ｇｙｐ１、ジプソシドＡ、ＡＧ１、ＡＧ２、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１９０４、これらの立体異性体、これらの誘導体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくはＱＳ－２１、ＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６１誘導体、ＳＡ１６４１、ＳＡ１６４１誘導体、ＧＥ１７４１、ＧＥ１７４１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、より好ましくはＱＳ－２１誘導体、ＳＯ１８６１誘導体及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、最も好ましくはＳＯ１８６１誘導体である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項14】

前記サポニンが、分子１：

【化1】

［式中、
Ａ_１は水素、単糖又は直鎖若しくは分岐オリゴ糖を表し、好ましくはＡ _１ が請求項１０に記載の群Ａから選択される糖鎖を表し、より好ましくはＡ _１ が請求項１０に記載の群Ａから選択される糖鎖を表し、及びグルクロン酸部分を含むか又はそれからなり；
Ａ_２は水素、単糖又は直鎖若しくは分岐オリゴ糖を表し、好ましくはＡ _２ が請求項１０に記載の群Ｂから選択される糖鎖を表し、より好ましくはＡ _２ が請求項１０に記載の群Ｂから選択される糖鎖を表し、及び少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基、例えば１、２、３、又は４つのアセトキシ基を含み、Ａ_１及びＡ_２の少なくとも１つは水素でなく、好ましくはＡ_１及びＡ_２の両方がオリゴ糖鎖であり；
並びに、Ｒはギプソゲニン内の水素又はキラ酸内のヒドロキシルである］で表され；
前記サポニンの誘導体は、分子１で表される前記サポニンに対応するものであり、以下の誘導体化：
ｉ．前記キラ酸又はギプソゲニンのＣ_２３位のアルデヒド基が誘導体化されている；
ｉｉ．Ａ_１が請求項１０に記載の群Ａから選択される糖鎖を表し、及びＡ _１ がグルクロン酸部分を含むか又はそれからなる場合、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が誘導体化されている；及び
ｉｉｉ．Ａ_２が請求項１０に記載の群Ｂから選択される糖鎖を表し、及びＡ _２ が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ_２の１つの糖部分又は２つ以上の糖部分のうち１つ以上、好ましくは全てのアセトキシ基が誘導体化されている、の少なくとも１つが存在する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項15】

Ａ_１が請求項１０に記載の群Ａから選択される糖鎖を表し、及びグルクロン酸部分を含むか若しくはそれからなり、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が誘導体化されているか、及び／又は、Ａ_２が請求項１０に記載の群Ｂから選択される糖鎖を表し、及びＡ_２が少なくとも１つのアセトキシ基を含み、Ａ_２の少なくとも１つのアセトキシ基が誘導体化されている、請求項１４に記載の医薬配合物。

【請求項16】

分子１で表される前記サポニンが、ビデスモシドトリテルペンサポニンである、請求項１４又は１５に記載の医薬配合物。

【請求項17】

前記サポニン誘導体が、分子１で表される前記サポニンに対応するものであり、以下の誘導体化：
ｉ．前記キラ酸又はギプソゲニンのＣ_２３位のアルデヒド基が、
－ アルコールへの還元；又は
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされ、前記ＥＭＣＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＢＭＰＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＫＭＵＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換によって誘導体化されており；
ｉｉ．Ａ_１が請求項１０に記載の群Ａから選択される糖鎖を表し、及びＡ_１がグルクロン酸部分を含むか又はそれからなる場合、Ａ_１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）又はＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されており、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、又はＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされ；
ｉｉｉ．Ａ_２が請求項１０に記載の群Ｂから選択される糖鎖を表し、及びＡ_２が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ_２の１つの糖部分又は２つ以上の糖部分のうち１つ以上、好ましくは全てのアセトキシ基が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への転換によって誘導体化されている、
の少なくとも１つが存在する、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項18】

Ａ_１が、Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡであり、及び／又は、Ａ_２が、Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃであり、好ましくは、分子１で示される前記サポニンが、３－Ｏ－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）］－β－Ｄ－グルクロノピラノシルキラ酸２８－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→３）－β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→４）－α－Ｌ－ラムノピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）－４ＯＡｃ－β－Ｄ－キノボピラノシル－（１→４）］－β－Ｄ－フコピラノシドであり、より好ましくはＳＯ１８６１、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１及び／若しくはＱＳ－２１又はそれらの誘導体、最も好ましくはＳＯ１８６１又はそれらの誘導体である、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項19】

前記サポニンがサポニン誘導体であり、
ｉ．前記サポニン誘導体が、
－ アルコールへの還元；又は
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされ、前記ＥＭＣＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＢＭＰＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換；又は
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応による、ヒドラゾン結合への転換であって、前記ＫＭＵＨのマレイミド基が、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、ヒドラゾン結合への転換
によって誘導体化されているアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．前記サポニン誘導体が、好ましくは請求項１０に記載の群Ａから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）又はＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含み、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、又はＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされるか；又は
ｉｉｉ．前記サポニン誘導体が、好ましくは請求項１０に記載の群Ｂから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への変換によって誘導体化されているアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．前記サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、任意選択により誘導体化ｉ．、ｉｉ．及びｉｉｉ．のうちの２つの誘導体化の任意の組み合わせを含み；
好ましくは、前記サポニン誘導体が、ＥＭＣＨとの反応によるヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基から構成される前記アグリコンコア構造を含み、前記ＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択によりメルカプトエタノールとチオエーテル結合を形成することによって誘導体化される、請求項１２～１８のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項20】

前記サポニンがサポニン誘導体であり、
ｉ．前記サポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応によるヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み、それによってＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ若しくはＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨなどのサポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがもたらされるか；又は
ｉｉ．前記サポニンが、好ましくは請求項１０に記載の群Ａから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、カルボキシル基、好ましくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含み、それによってＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭなどのサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭがもたらされるか；又は
ｉｉｉ．前記サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．及びｉｉ．の組み合わせを含む、請求項１９に記載の医薬配合物。

【請求項21】

前記サポニン誘導体が、アルデヒド基から構成されるアグリコンコア構造を含み、前記サポニン誘導体が、糖鎖、好ましくは請求項１０に記載の群Ａから選択される糖鎖を含み、前記糖鎖が、カルボキシル基、好ましくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応によるアミド結合への変換によって誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含む、請求項１９に記載の医薬配合物。

【請求項22】

前記サポニンが、分子２：

【化2】

で表されるサポニン誘導体であり、
又は、前記サポニン誘導体が、分子３：

【化3】

で表されるサポニン誘導体である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項23】

薬剤としての使用のための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項24】

発現産物が、以下の遺伝子：アポＢ、ＨＳＰ２７、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つ以上に関与する、疾患又は健康問題の治療又は予防における使用のための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の医薬配合物。

【請求項25】

癌、感染症疾患、ウイルス感染症、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、ＡＡＴ関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、ＴＴＲ媒介性アミロイドーシス、遺伝性ＴＴＲアミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）、補体媒介性疾患、Ｂ型肝炎感染症、ＨＳＰ２７発現に関連する疾患若しくは障害、又は自己免疫疾患の治療又は予防に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の医薬配合物、又は請求項２４に記載の使用のための医薬配合物。

【請求項26】

請求項２３～２５のいずれか一項に記載の使用のための医薬配合物であって、前記医薬配合物が、請求項１７～２２のいずれか一項に記載される通りである、医薬配合物。

【請求項27】

請求項１～８のいずれか一項に記載のエフェクター分子を、細胞の外から前記細胞の内に、好ましくは前記細胞の細胞質ゾル内に移行させるための、インビトロ又はエクスビボ方法であって、
ａ）好ましくは肝臓細胞、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞から選択される、ＡＳＧＰＲ、好ましくはＡＳＧＰＲ１をその表面に発現する細胞を提供する工程；
ｂ）移行される前記エフェクター分子を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載のコンジュゲートを提供する工程；
ｃ）請求項１～２２のいずれか一項に記載のサポニンを提供する工程；
ｄ）工程ａ）の前記細胞を、工程ｂ）の前記コンジュゲート及び工程ｃ）の前記サポニンとインビトロ又はエクスビボで接触させる工程であって、それによって前記細胞外から前記細胞内への前記エフェクター分子を含む前記コンジュゲートの移行を生じさせ、前記コンジュゲートの移行を生じさせることによって、前記細胞外から前記細胞内、好ましくは前記細胞の細胞質ゾルへの前記エフェクター分子の移行を生じさせる、接触させる工程を含む方法。

【請求項28】

請求項１～２２のいずれか一項に記載のコンジュゲートを、細胞の外から前記細胞の内に、好ましくは前記細胞の細胞質ゾル内に移行させるためのインビトロ又はエクスビボ方法であって、
ａ）好ましくは肝臓細胞、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞から選択される、ＡＳＧＰＲ、好ましくはＡＳＧＰＲ１をその表面に発現する細胞を提供する工程；
ｂ）請求項１～２２のいずれか一項に記載のコンジュゲートを提供する工程；
ｃ）請求項１～２２のいずれか一項に記載のサポニンを提供する工程；
ｄ）工程ａ）の前記細胞を、工程ｂ）の前記コンジュゲート及び工程ｃ）の前記サポニンとインビトロ又はエクスビボで接触させる工程であって、それによって前記細胞外から前記細胞内への前記コンジュゲートの移行を生じさせる、接触させる工程を含む方法。

【請求項29】

前記ＡＳＧＰＲのリガンドが、少なくとも１つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分、好ましくは３つ若しくは４つのＧａｌＮＡｃ部分を含み、より好ましくは（ＧａｌＮＡｃ）_３トリスを含むか若しくはそれからなり、並びに／又は、前記エフェクター分子が、アンチｍｉＲＮＡ、ＢＮＡ－ＡＯＮ若しくはｓｉＲＮＡ、例えば、好ましくは化学的に修飾されたｓｉＲＮＡ、代謝的に安定したｓｉＲＮＡ、及び化学的に修飾され、代謝的に安定したｓｉＲＮＡから選択されるＢＮＡベースのｓｉＲＮＡのいずれか１つから選択されるオリゴヌクレオチドである、請求項２７又は２８に記載の方法。

【請求項30】

前記サポニンが、誘導体化ＳＯ１８６１及び／又は誘導体化ＱＳ－２１であり、好ましくは、請求項１９に記載のＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ又はＱＳ－２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ又はＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨである、請求項２７～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記エフェクター分子が、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、以下の遺伝子：アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）、ＨＳＰ２７、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、プロタンパク質転換酵素であるサブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、δ－アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ１）、アンチトロンビン３（ＡＴ３）、グリコール酸オキシダーゼ（ＧＯ）、補体成分Ｃ５（ＣＣ５）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のＸ遺伝子、ＨＢＶのＳ遺伝子、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のいずれか１つをサイレンシングすることができ、並びに／又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、異常なｍｉＲＮＡを標的化することができ、並びに／又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、以下のタンパク質：ＨＳＰ２７、アポＢ、ＴＴＲ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、ＡＴ３、ＧＯ、ＣＣ５、ＨＢＶのＸ遺伝子の発現産物、ＨＢＶのＳ遺伝子の発現産物、ＡＡＴ及びＬＤＨのいずれか１つの発現に関与するｍＲＮＡを標的化することができるか、又は、例えば、哺乳類細胞の内部に存在する場合、ｍｉＲＮＡ（ｏｎｃｏ－ｍｉＲ）の阻害若しくはｏｎｃｏ－ｍｉＲの発現の抑制などのｍｉＲＮＡ機能を弱めるか若しくは回復させることができるオリゴヌクレオチドである、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

請求項１～２２のいずれか一項に記載の医薬配合物又は請求項２に記載の第２の医薬組成物を含むキットオブパーツ、及び請求項２３～２６のいずれか一項に記載の医薬配合物若しくは第２の医薬組成物を使用するための、又は請求項２７～３１のいずれか一項に記載の方法に使用するための指示書。

【国際調査報告】