特表 2023-534241 Ｇ１２Ｄ変異を有するＲＡＳに対するＨＬＡクラスＩＩ拘束性ＤＲＢ Ｔ細胞受容体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-08

(54)【発明の名称】Ｇ１２Ｄ変異を有するＲＡＳに対するＨＬＡクラスＩＩ拘束性ＤＲＢ Ｔ細胞受容体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20230801BHJP

   C07K 14/725 20060101ALI20230801BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20230801BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20230801BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230801BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20230801BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20230801BHJP

   C12Q 1/04 20060101ALI20230801BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20230801BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230801BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230801BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20230801BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230801BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230801BHJP

   G01N 33/68 20060101ALI20230801BHJP

   G01N 33/50 20060101ALI20230801BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12

C07K14/725 ZNA

C12N15/867 Z

C12N15/86 Z

C12N5/10

C12N5/0783

C12P21/02 C

C12Q1/04

C12N15/62 Z

C07K19/00

A61K35/76

A61K35/17

A61P37/04

A61P35/00

G01N33/68

G01N33/50 P

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023502572

(86)(22)【出願日】2021-07-13

(85)【翻訳文提出日】2023-03-10

(86)【国際出願番号】 US2021041375

(87)【国際公開番号】W WO2022015694

(87)【国際公開日】2022-01-20

(31)【優先権主張番号】63/050,931

(32)【優先日】2020-07-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】510002280

【氏名又は名称】アメリカ合衆国

(74)【代理人】

【識別番号】100136629

【弁理士】

【氏名又は名称】鎌田 光宜

(74)【代理人】

【識別番号】100080791

【弁理士】

【氏名又は名称】高島 一

(74)【代理人】

【識別番号】100125070

【弁理士】

【氏名又は名称】土井 京子

(74)【代理人】

【識別番号】100121212

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 弥栄子

(74)【代理人】

【識別番号】100174296

【弁理士】

【氏名又は名称】當麻 博文

(74)【代理人】

【識別番号】100137729

【弁理士】

【氏名又は名称】赤井 厚子

(74)【代理人】

【識別番号】100151301

【弁理士】

【氏名又は名称】戸崎 富哉

(74)【代理人】

【識別番号】100152308

【弁理士】

【氏名又は名称】中 正道

(74)【代理人】

【識別番号】100201558

【弁理士】

【氏名又は名称】亀井 恵二郎

(72)【発明者】

【氏名】レヴィン、ノーム

(72)【発明者】

【氏名】ヨセフ、ラミ

(72)【発明者】

【氏名】カフリ、ガル

(72)【発明者】

【氏名】ローゼンバーグ、スティーヴン エー．

【テーマコード（参考）】

2G045

4B063

4B064

4B065

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA26

2G045CB02

2G045DA13

2G045DA14

2G045DA36

2G045FB02

2G045FB03

4B063QA01

4B063QA19

4B063QQ08

4B063QX01

4B064AG20

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B064DA05

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087BC83

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZB09

4C087ZB26

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA42

4H045DA50

4H045EA20

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

１２位のグリシンがアスパラギン酸で置換されている変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が開示される。ＴＣＲは、ＨＬＡ－ＤＲヘテロ二量体によって提示されたＧ１２Ｄ ＲＡＳを認識し得る。関連するポリペプチド及びタンパク質、並びに関連する核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、及び医薬組成物も提供される。また、哺乳類におけるがんの存在を検出する方法及び哺乳類におけるがんを治療又は予防する方法も開示される。
【選択図】図２Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）配列番号１～３の全て、
（ｂ）配列番号４～６の全て、
（ｃ）配列番号１～６の全て、
（ｄ）配列番号１１～１３の全て、
（ｅ）配列番号１４～１６の全て、
（ｆ）配列番号１１～１６の全て、
（ｇ）配列番号２１～２３の全て、
（ｈ）配列番号２４～２６の全て、
（ｉ）配列番号２１～２６の全て、
（ｊ）配列番号３１～３３の全て、
（ｋ）配列番号３４～３６の全て、又は
（ｌ）配列番号３１～３６の全て
のアミノ酸配列を含む、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、
前記ＴＣＲが、１２位のグリシンがアスパラギン酸で置換されている変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有し、
前記変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、変異型ヒトＫｉｒｓｔｅｎラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、変異型ヒトＨａｒｖｅｙラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＨＲＡＳ）、又は変異型ヒト神経芽細胞腫ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＮＲＡＳ）のアミノ酸配列であり、
１２位が、それぞれ、野生型ヒトＫＲＡＳ、野生型ヒトＨＲＡＳ、又は野生型ヒトＮＲＡＳのタンパク質を参照することによって定義されるＴＣＲ。

【請求項2】

前記変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ（配列番号８８）である、請求項１に記載のＴＣＲ。

【請求項3】

ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ（配列番号８９）の野生型ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有しない、請求項１又は２に記載のＴＣＲ。

【請求項4】

前記変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ分子によって提示される、請求項１～３のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項5】

前記ＨＬＡクラスＩＩ分子が、ＨＬＡ－ＤＲヘテロ二量体である、請求項４に記載のＴＣＲ。

【請求項6】

前記ＨＬＡクラスＩＩ分子が、ＨＬＡ－ＤＲα鎖を、ＨＬＡ－ＤＲＢ１遺伝子、ＨＬＡ－ＤＲＢ３遺伝子、又はＨＬＡ－ＤＲＢ４遺伝子のうちのいずれか１つによってコードされているＨＬＡ－ＤＲβ鎖と組み合わせて含む、請求項４に記載のＴＣＲ。

【請求項7】

前記ＨＬＡクラスＩＩ分子が、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０３：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１１：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０１：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０３：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体、ＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０３：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体、又はＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０１：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体である、請求項４に記載のＴＣＲ。

【請求項8】

（ｉ）配列番号７、
（ｉｉ）配列番号８、
（ｉｉｉ）配列番号９、
（ｉｖ）配列番号１０、
（ｖ）配列番号１７、
（ｖｉ）配列番号１８、
（ｖｉｉ）配列番号１９、
（ｖｉｉｉ）配列番号２０、
（ｉｘ）配列番号２７、
（ｘ）配列番号２８、
（ｘｉ）配列番号２９、
（ｘｉｉ）配列番号３０、
（ｘｉｉｉ）配列番号３７、
（ｘｉｖ）配列番号３８、
（ｘｖ）配列番号３９、
（ｘｖｉ）配列番号４０、
（ｘｖｉｉ）配列番号７及び８の両方、
（ｘｖｉｉｉ）配列番号９及び１０の両方、
（ｘｉｘ）配列番号１７及び１８の両方、
（ｘｘ）配列番号１９及び２０の両方、
（ｘｘｉ）配列番号２７及び２８の両方、
（ｘｘｉｉ）配列番号２９及び３０の両方、
（ｘｘｉｉｉ）配列番号３７及び３８の両方、又は
（ｘｘｉｖ）配列番号３９及び４０の両方
のアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項9】

（ａ）
（ｉ）配列番号４９の４８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号４９の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号４９の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号４９の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号４９のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域；
（ｂ）配列番号５０の５７位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５０のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域；又は
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方
を更に含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項10】

（ａ）
（ｉ）配列番号５５の１８４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号５５の２４８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号５５の２５０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号５５の２５１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５５のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｂ）配列番号５６の１９９位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５６のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方；
（ｄ）
（ｉ）配列番号５７の１６５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号５７の２２９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号５７の２３１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号５７の２３２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５７のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｅ）配列番号５８の１７５位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５８のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｆ）（ｄ）及び（ｅ）の両方；
（ｇ）配列番号５９；
（ｈ）配列番号６０；
（ｉ）配列番号６１；
（ｊ）配列番号６２；
（ｋ）（ｇ）及び（ｈ）の両方；
（ｌ）（ｉ）及び（ｊ）の両方；
（ｍ）
（ｉ）配列番号６３の１８２位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号６３の２４６位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号６３の２４８位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号６３の２４９位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６３のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｎ）配列番号６４の１９７位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号６４のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｏ）（ｍ）及び（ｎ）の両方；
（ｐ）
（ｉ）配列番号６５の１６４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号６５の２２８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号６５の２３０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号６５の２３１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６５のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｑ）配列番号６６の１７３位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号６６のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｒ）（ｐ）及び（ｑ）の両方；
（ｓ）配列番号６７；
（ｔ）配列番号６８；
（ｕ）配列番号６９；
（ｖ）配列番号７０；
（ｗ）（ｓ）及び（ｔ）の両方；
（ｘ）（ｕ）及び（ｖ）の両方；
（ｙ）
（ｉ）配列番号７１の１８７位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号７１の２５１位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号７１の２５３位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号７１の２５４位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７１のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｚ）配列番号７２の１９１位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号７２のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ａａ）（ｙ）及び（ｚ）の両方；
（ｂｂ）
（ｉ）配列番号７３の１６８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号７３の２３２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号７３の２３４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号７３の２３５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７３のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｃｃ）配列番号７４の１７３位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号７４のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｄｄ）（ｂｂ）及び（ｃｃ）の両方；
（ｅｅ）配列番号７５；
（ｆｆ）配列番号７６；
（ｇｇ）配列番号７７；
（ｈｈ）配列番号７８；
（ｉｉ）（ｅｅ）及び（ｆｆ）の両方；
（ｊｊ）（ｇｇ）及び（ｈｈ）の両方；
（ｋｋ）
（ｉ）配列番号７９の１７５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号７９の２３９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号７９の２４１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号７９の２４２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７９のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｌｌ）配列番号８０の１９０位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号８０のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｍｍ）（ｋｋ）及び（ｌｌ）の両方；
（ｎｎ）
（ｉ）配列番号８１の１５９位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号８１の２２３位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号８１の２２５位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号８１の２２６位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号８１のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｏｏ）配列番号８２の１７２位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号８２のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｐｐ）（ｎｎ）及び（ｏｏ）の両方；
（ｑｑ）配列番号８３；
（ｒｒ）配列番号８４；
（ｓｓ）配列番号８５；
（ｔｔ）配列番号８６；
（ｕｕ）（ｑｑ）及び（ｒｒ）の両方；又は
（ｖｖ）（ｓｓ）及び（ｔｔ）の両方
を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離又は精製されたＴＣＲ。

【請求項11】

請求項１～１０のいずれか一項に記載のＴＣＲの機能的部分を含む、単離又は精製されたポリペプチドであって、前記機能的部分が、
（ａ）配列番号１～３の全て、
（ｂ）配列番号４～６の全て、
（ｃ）配列番号１～６の全て、
（ｄ）配列番号１１～１３の全て、
（ｅ）配列番号１４～１６の全て、
（ｆ）配列番号１１～１６の全て、
（ｇ）配列番号２１～２３の全て、
（ｈ）配列番号２４～２６の全て、
（ｉ）配列番号２１～２６の全て、
（ｊ）配列番号３１～３３の全て、
（ｋ）配列番号３４～３６の全て、又は
（ｌ）配列番号３１～３６の全て
のアミノ酸配列を含むポリペプチド。

【請求項12】

前記機能的部分が、
（ｉ）配列番号７、
（ｉｉ）配列番号８、
（ｉｉｉ）配列番号９、
（ｉｖ）配列番号１０、
（ｖ）配列番号１７、
（ｖｉ）配列番号１８、
（ｖｉｉ）配列番号１９、
（ｖｉｉｉ）配列番号２０、
（ｉｘ）配列番号２７、
（ｘ）配列番号２８、
（ｘｉ）配列番号２９、
（ｘｉｉ）配列番号３０、
（ｘｉｉｉ）配列番号３７、
（ｘｉｖ）配列番号３８、
（ｘｖ）配列番号３９、
（ｘｖｉ）配列番号４０、
（ｘｖｉｉ）配列番号７及び８の両方、
（ｘｖｉｉｉ）配列番号９及び１０の両方、
（ｘｉｘ）配列番号１７及び１８の両方、
（ｘｘ）配列番号１９及び２０の両方、
（ｘｘｉ）配列番号２７及び２８の両方、
（ｘｘｉｉ）配列番号２９及び３０の両方、
（ｘｘｉｉｉ）配列番号３７及び３８の両方、又は
（ｘｘｉｖ）配列番号３９及び４０の両方
のアミノ酸配列（複数可）を含む、請求項１１に記載の単離又は精製されたポリペプチド。

【請求項13】

（ａ）
（ｉ）配列番号４９の４８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号４９の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号４９の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号４９の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号４９のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号５０の５７位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５０のアミノ酸配列；又は
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方
を更に含む、請求項１１又は１２に記載の単離又は精製されたポリペプチド。

【請求項14】

（ａ）
（ｉ）配列番号５５の１８４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号５５の２４８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号５５の２５０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号５５の２５１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５５のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｂ）配列番号５６の１９９位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５６のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方；
（ｄ）
（ｉ）配列番号５７の１６５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号５７の２２９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号５７の２３１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号５７の２３２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５７のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｅ）配列番号５８の１７５位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５８のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｆ）（ｄ）及び（ｅ）の両方；
（ｇ）配列番号５９；
（ｈ）配列番号６０；
（ｉ）配列番号６１；
（ｊ）配列番号６２；
（ｋ）（ｇ）及び（ｈ）の両方；
（ｌ）（ｉ）及び（ｊ）の両方；
（ｍ）
（ｉ）配列番号６３の１８２位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号６３の２４６位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号６３の２４８位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号６３の２４９位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６３のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｎ）配列番号６４の１９７位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号６４のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｏ）（ｍ）及び（ｎ）の両方；
（ｐ）
（ｉ）配列番号６５の１６４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号６５の２２８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号６５の２３０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号６５の２３１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６５のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｑ）配列番号６６の１７３位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号６６のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｒ）（ｐ）及び（ｑ）の両方；
（ｓ）配列番号６７；
（ｔ）配列番号６８；
（ｕ）配列番号６９；
（ｖ）配列番号７０；
（ｗ）（ｓ）及び（ｔ）の両方；
（ｘ）（ｕ）及び（ｖ）の両方；
（ｙ）
（ｉ）配列番号７１の１８７位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号７１の２５１位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号７１の２５３位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号７１の２５４位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７１のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｚ）配列番号７２の１９１位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号７２のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ａａ）（ｙ）及び（ｚ）の両方；
（ｂｂ）
（ｉ）配列番号７３の１６８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号７３の２３２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号７３の２３４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号７３の２３５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７３のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｃｃ）配列番号７４の１７３位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号７４のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｄｄ）（ｂｂ）及び（ｃｃ）の両方；
（ｅｅ）配列番号７５；
（ｆｆ）配列番号７６；
（ｇｇ）配列番号７７；
（ｈｈ）配列番号７８；
（ｉｉ）（ｅｅ）及び（ｆｆ）の両方；
（ｊｊ）（ｇｇ）及び（ｈｈ）の両方；
（ｋｋ）
（ｉ）配列番号７９の１７５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号７９の２３９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号７９の２４１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号７９の２４２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７９のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｌｌ）配列番号８０の１９０位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号８０のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｍｍ）（ｋｋ）及び（ｌｌ）の両方；
（ｎｎ）
（ｉ）配列番号８１の１５９位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号８１の２２３位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号８１の２２５位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号８１の２２６位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号８１のアミノ酸配列を含むα鎖；
（ｏｏ）配列番号８２の１７２位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号８２のアミノ酸配列を含むβ鎖；
（ｐｐ）（ｎｎ）及び（ｏｏ）の両方；
（ｑｑ）配列番号８３；
（ｒｒ）配列番号８４；
（ｓｓ）配列番号８５；
（ｔｔ）配列番号８６；
（ｕｕ）（ｑｑ）及び（ｒｒ）の両方；又は
（ｖｖ）（ｓｓ）及び（ｔｔ）の両方
を含む、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の単離又は精製されたポリペプチド。

【請求項15】

（ａ）配列番号１～３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号４～６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
（ｂ）配列番号１１～１３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１４～１６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖
（ｃ）配列番号２１～２３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号２４～２６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；又は
（ｄ）配列番号３１～３３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３４～３６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
を含む、単離又は精製されたタンパク質。

【請求項16】

（ｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含む；
（ｉｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む；
（ｉｉｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１８のアミノ酸配列を含む；
（ｉｖ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号２０のアミノ酸配列を含む；
（ｖ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む；
（ｖｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む；
（ｖｉｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む；又は
（ｖｉｉｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４０のアミノ酸配列を含む
請求項１５に記載の単離又は精製されたタンパク質。

【請求項17】

（ａ）第１のポリペプチド鎖が、
（ｉ）配列番号４９の４８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号４９の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号４９の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号４９の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号４９のアミノ酸配列を更に含む；
（ｂ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号５０の５７位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５０のアミノ酸配列を更に含む；又は
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方である、請求項１５又は１６に記載の単離又は精製されたタンパク質。

【請求項18】

（ａ）第１のポリペプチド鎖が、
（ｉ）配列番号５５の１８４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号５５の２４８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号５５の２５０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号５５の２５１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５５のアミノ酸配列を含む；
（ｂ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号５６の１９９位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである配列番号５６のアミノ酸配列を含む；
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方である；
（ｄ）第１のポリペプチド鎖が、
（ｉ）配列番号５７の１６５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号５７の２２９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号５７の２３１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号５７の２３２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５７のアミノ酸配列を含む；
（ｅ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号５８の１７５位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである配列番号５８のアミノ酸配列を含む；
（ｆ）（ｄ）及び（ｅ）の両方である；
（ｇ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５９のアミノ酸配列を含む；
（ｈ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含む；
（ｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６１のアミノ酸配列を含む；
（ｊ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６２のアミノ酸配列を含む；
（ｋ）（ｇ）及び（ｈ）の両方である；
（ｌ）（ｉ）及び（ｊ）の両方である；
（ｍ）第１のポリペプチド鎖が、
（ｉ）配列番号６３の１８２位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号６３の２４６位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号６３の２４８位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号６３の２４９位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６３のアミノ酸配列を含む；
（ｎ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６４の１９７位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである配列番号６４のアミノ酸配列を含む；
（ｏ）（ｍ）及び（ｎ）の両方である；
（ｐ）第１のポリペプチド鎖が、
（ｉ）配列番号６５の１６４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号６５の２２８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号６５の２３０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号６５の２３１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６５のアミノ酸配列を含む；
（ｑ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６６の１７３位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである配列番号６６のアミノ酸配列を含む；
（ｒ）（ｐ）及び（ｑ）の両方である；
（ｓ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６７のアミノ酸配列を含む；
（ｔ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６８のアミノ酸配列を含む；
（ｕ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６９のアミノ酸配列を含む；
（ｖ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号７０のアミノ酸配列を含む；
（ｗ）（ｓ）及び（ｔ）の両方；
（ｘ）（ｕ）及び（ｖ）の両方；
（ｙ）第１のポリペプチド鎖が、
（ｉ）配列番号７１の１８７位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号７１の２５１位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号７１の２５３位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号７１の２５４位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７１のアミノ酸配列を含む；
（ｚ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号７２の１９１位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである配列番号７２のアミノ酸配列を含む；
（ａａ）（ｙ）及び（ｚ）の両方である；
（ｂｂ）第１のポリペプチド鎖が、
（ｉ）配列番号７３の１６８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号７３の２３２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号７３の２３４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号７３の２３５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７３のアミノ酸配列を含む；
（ｃｃ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号７４の１７３位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである配列番号７４のアミノ酸配列を含む；
（ｄｄ）（ｂｂ）及び（ｃｃ）の両方である；
（ｅｅ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む；
（ｆｆ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号７６のアミノ酸配列を含む；
（ｇｇ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７７のアミノ酸配列を含む；
（ｈｈ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号７８のアミノ酸配列を含む；
（ｉｉ）（ｅｅ）及び（ｆｆ）の両方である；
（ｊｊ）（ｇｇ）及び（ｈｈ）の両方である；
（ｋｋ）第１のポリペプチド鎖が、
（ｉ）配列番号７９の１７５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号７９の２３９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号７９の２４１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号７９の２４２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７９のアミノ酸配列を含む；
（ｌｌ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号８０の１９０位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである配列番号８０のアミノ酸配列を含む；
（ｍｍ）（ｋｋ）及び（ｌｌ）の両方である；
（ｎｎ）第１のポリペプチド鎖が、
（ｉ）配列番号８１の１５９位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉ）配列番号８１の２２３位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）配列番号８１の２２５位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ
（ｉｖ）配列番号８１の２２６位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号８１のアミノ酸配列を含む；
（ｏｏ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号８２の１７２位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである配列番号８２のアミノ酸配列を含む；
（ｐｐ）（ｎｎ）及び（ｏｏ）の両方である；
（ｑｑ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８３のアミノ酸配列を含む；
（ｒｒ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号８４のアミノ酸配列を含む；
（ｓｓ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８５のアミノ酸配列を含む；
（ｔｔ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号８６のアミノ酸配列を含む；
（ｕｕ）（ｑｑ）及び（ｒｒ）の両方である；又は
（ｖｖ）（ｓｓ）及び（ｔｔ）の両方である、請求項１５～１７のいずれか一項に記載の単離又は精製されたタンパク質。

【請求項19】

請求項１～１０のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１１～１４のいずれか一項に記載のポリペプチド、又は請求項１５～１８のいずれか一項に記載のタンパク質をコードしているヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸。

【請求項20】

５’から３’に向かって、第１の核酸配列及び第２のヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸であって、前記第１及び第２のヌクレオチド配列が、それぞれ、配列番号７及び８；８及び７；９及び１０；１０及び９；１７及び１８；１８及び１７；１９及び２０；２０及び１９；２７及び２８；２８及び２７；２９及び３０；３０及び２９；３７及び３８；３８及び３７；３９及び４０；４０及び３９；５５及び５６；５６及び５５；５７及び５８；５８及び５７；５９及び６０；６０及び５９；６１及び６２；６２及び６１；６３及び６４；６４及び６３；６５及び６６；６６及び６５；６７及び６８；６８及び６７；６９及び７０；７０及び６９；７１及び７２；７２及び７１；７３及び７４；７４及び７３；７５及び７６；７６及び７５；７７及び７８；７８及び７７；７９及び８０；８０及び７９；８１及び８２；８２及び８１；８３及び８４；８４及び８３；８５及び８６；又は８６及び８５のアミノ配列をコードしている核酸。

【請求項21】

第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列との間に介在する第３のヌクレオチド配列を更に含み、前記第３のヌクレオチド配列が、切断可能なリンカーペプチドをコードしている、請求項２０に記載の単離又は精製された核酸。

【請求項22】

前記切断可能なリンカーペプチドが、ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の単離又は精製された核酸。

【請求項23】

請求項１９～２２のいずれか一項に記載の核酸を含む、組み換え発現ベクター。

【請求項24】

トランスポゾン又はレンチウイルスベクターである、請求項２３に記載の組換え発現ベクター。

【請求項25】

請求項１９～２２のいずれか一項に記載の核酸又は請求項２３若しくは２４に記載のベクターによってコードされている、単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質。

【請求項26】

請求項１９～２２のいずれか一項に記載の核酸又は請求項２３若しくは２４に記載のベクターが細胞内で発現した結果得られる、単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質。

【請求項27】

ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ（配列番号８８）のペプチドに対して抗原特異性を有するＴＣＲを発現する宿主細胞を生成する方法であって、請求項２３又は２４に記載のベクターの細胞への導入を可能にする条件下で前記細胞を前記ベクターと接触させることを含む方法。

【請求項28】

請求項１９～２２のいずれか一項に記載の核酸又は請求項２３若しくは２４に記載の組換え発現ベクターを含む、単離又は精製された宿主細胞。

【請求項29】

前記細胞が、ヒトリンパ球である、請求項２８記載の宿主細胞。

【請求項30】

Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される、請求項２８又は２９に記載の宿主細胞。

【請求項31】

請求項２８～３０のいずれか一項に記載の宿主細胞を含む、単離又は精製された細胞の集団。

【請求項32】

請求項１～１０、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１１～１４、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のポリペプチド、又は請求項１５～１８、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のタンパク質を生成する方法であって、前記ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質が生成されるように、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の宿主細胞又は請求項３１に記載の宿主細胞の集団を培養することを含む方法。

【請求項33】

（ａ）請求項１～１０、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１１～１４、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１５～１８、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の核酸、請求項２３若しくは２４に記載の組み換え発現ベクター、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の宿主細胞、又は請求項３１に記載の細胞の集団と、（ｂ）薬学的に許容し得る担体と、を含む医薬組成物。

【請求項34】

哺乳類におけるがんの存在を検出する方法であって、
（ａ）前記がんの細胞を含むサンプルを、請求項１～１０、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１１～１４、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１５～１８、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の核酸、請求項２３若しくは２４に記載の組み換え発現ベクター、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の宿主細胞、請求項３１に記載の細胞の集団、又は請求項３３に記載の医薬組成物と接触させ、それによって、複合体を形成させることと；
（ｂ）前記複合体を検出することと、
を含み、
前記複合体の検出が、前記哺乳類におけるがんの存在を示す方法。

【請求項35】

哺乳類におけるがんに対する免疫応答の誘導において使用するための、請求項１～１０、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１１～１４、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１５～１８、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の核酸、請求項２３若しくは２４に記載の組み換え発現ベクター、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の宿主細胞、請求項３１に記載の細胞の集団、又は請求項３３に記載の医薬組成物。

【請求項36】

哺乳類におけるがんの治療又は予防において使用するための、請求項１～１０、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１１～１４、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１５～１８、２５、若しくは２６のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の核酸、請求項２３若しくは２４に記載の組み換え発現ベクター、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の宿主細胞、請求項３１に記載の細胞の集団、又は請求項３３に記載の医薬組成物。

【請求項37】

前記がんが、１２位のグリシンがアスパラギン酸で置換されている変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列を発現し、
前記変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、変異型ヒトＫｉｒｓｔｅｎラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、変異型ヒトＨａｒｖｅｙラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＨＲＡＳ）、又は変異型ヒト神経芽細胞腫ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＮＲＡＳ）のアミノ酸配列であり、
１２位が、それぞれ、野生型ヒトＫＲＡＳ、野生型ヒトＨＲＡＳ、又は野生型ヒトＮＲＡＳのタンパク質を参照することによって定義される、請求項３４に記載の方法、又は請求項３５若しくは３６に記載の使用のためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、若しくは医薬組成物。

【請求項38】

前記変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、変異型ヒトＫｉｒｓｔｅｎラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）アミノ酸配列である、請求項３７に記載の方法、又は請求項３７に従って使用するためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、若しくは医薬組成物。

【請求項39】

前記変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、変異型ヒト神経芽細胞腫ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＮＲＡＳ）アミノ酸配列である、請求項３７に記載の方法、又は請求項３７に従って使用するためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、若しくは医薬組成物。

【請求項40】

前記変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、変異型ヒトＨａｒｖｅｙラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＨＲＡＳ）アミノ酸配列である、請求項３７に記載の方法、又は請求項３７に従って使用するためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、若しくは医薬組成物。

【請求項41】

前記がんが、膵臓、結腸直腸、肺、子宮内膜、卵巣、又は前立腺のがんである、請求項３４及び３７～４０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項３５～４０のいずれか一項に従って使用するためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、若しくは医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
この特許出願は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、２０２０年７月１３日出願の米国仮特許出願第６３／０５０，９３１号の利益を主張する。

【0002】

連邦支援の研究又は開発に関する記述
本発明は、米国国立衛生研究所、国立がん研究所によって、プロジェクト番号ＺＩＡＢＣ０１０９８４の下、政府の支援を受けて成された。政府は、本発明において一定の権利を有する。

【0003】

電子的に提出された文献の参照による援用
本明細書と同時に提出され、以下の通り特定されるコンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列表は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる：２０２１年７月１３日付の「７５４３９５＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名称の１６０，７８８バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル。

【背景技術】

【0004】

幾つかのがんは、特に該がんが転移性かつ切除不能になったとき、非常に限られた治療法の選択肢しか有しない場合がある。例えば、外科手術、化学療法、及び放射線療法等の治療法の進歩にもかかわらず、多くのがん、例えば、膵臓、結腸直腸、肺、子宮内膜、卵巣、及び前立腺のがんの予後は不良である場合がある。従って、がんの更なる治療法に対するアンメットニーズが存在する。

【発明の概要】

【0005】

本発明の実施形態は、（ａ）配列番号１～３の全て、（ｂ）配列番号４～６の全て、（ｃ）配列番号１～６の全て、（ｄ）配列番号１１～１３の全て、（ｅ）配列番号１４～１６の全て、（ｆ）配列番号１１～１６の全て、（ｇ）配列番号２１～２３の全て、（ｈ）配列番号２４～２６の全て、（ｉ）配列番号２１～２６の全て、（ｊ）配列番号３１～３３の全て、（ｋ）配列３４～３６の全て、又は（ｌ）配列３１～３６の全てのアミノ酸配列を含む単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、該ＴＣＲが、１２位のグリシンがアスパラギン酸で置換されている変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有し、該変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、変異型ヒトＫｉｒｓｔｅｎラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、変異型ヒトＨａｒｖｅｙラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＨＲＡＳ）、又は変異型ヒト神経芽細胞腫ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＮＲＡＳ）のアミノ酸配列であり、１２位が、それぞれ、野生型ヒトＫＲＡＳ、野生型ヒトＨＲＡＳ、又は野生型ヒトＮＲＡＳのタンパク質を参照することによって定義されるＴＣＲを提供する。

【0006】

本発明の別の実施形態は、本発明のＴＣＲの機能的部分を含む単離又は精製されたポリペプチドであって、該機能的部分が、（ａ）配列番号１～３の全て、（ｂ）配列番号４～６の全て、（ｃ）配列番号１～６の全て、（ｄ）配列番号１１～１３の全て、（ｅ）配列番号１４～１６の全て、（ｆ）配列番号１１～１６の全て、（ｇ）配列番号２１～２３の全て、（ｈ）配列番号２４～２６の全て、（ｉ）配列番号２１～２６の全て、（ｊ）配列番号３１～３３の全て、（ｋ）配列３４～３６の全て、又は（ｌ）配列３１～３６の全てのアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。

【0007】

本発明の更に別の実施形態は、（ａ）配列番号１～３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号４～６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（ｂ）配列番号１１～１３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１４～１６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（ｃ）配列番号２１～２３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号２４～２６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；又は（ｄ）配列番号３１～３３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３４～３６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、単離又は精製されたタンパク質を提供する。

【0008】

本発明の実施形態は、更に、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質に関連する核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、及び医薬組成物を提供する。

【0009】

本発明の実施形態は、５’から３’に向かって、第１の核酸配列及び第２のヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸であって、該第１及び第２のヌクレオチド配列が、それぞれ、配列番号７及び８；８及び７；９及び１０；１０及び９；１７及び１８；１８及び１７；１９及び２０；２０及び１９；２７及び２８；２８及び２７；２９及び３０；３０及び２９；３７及び３８；３８及び３７；３９及び４０；４０及び３９；５５及び５６；５６及び５５；５７及び５８；５８及び５７；５９及び６０；６０及び５９；６１及び６２；６２及び６１；６３及び６４；６４及び６３；６５及び６６；６６及び６５；６７及び６８；６８及び６７；６９及び７０；７０及び６９；７１及び７２；７２及び７１；７３及び７４；７４及び７３；７５及び７６；７６及び７５；７７及び７８；７８及び７７；７９及び８０；８０及び７９；８１及び８２；８２及び８１；８３及び８４；８４及び８３；８５及び８６；又は８６及び８５のアミノ配列をコードしている核酸を提供する。

【0010】

哺乳類におけるがんの存在を検出する方法、哺乳類におけるがんを治療又は予防する方法、哺乳類においてがんに対する免疫応答を誘導する方法、ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ（配列番号８８）のペプチドに対して抗原特異性を有するＴＣＲを発現する宿主細胞を生成する方法、並びに本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質を生成する方法が、本発明の実施形態によって更に提供される。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1A-1B】図１Ａ～１Ｂは、Ｇ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチド（Ｇ１２Ｄ ＬＰ）をパルスしたＤＣでインビトロ刺激（ＩＶＳ）した後の結腸直腸がん患者４２７１由来のＰＢＬの反応性の結果を示す。Ｇ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチド（星形）又は対応するＷＴ ２４－ｍｅｒペプチド（菱形）をパルスしたＤＣと共培養することによって、これら細胞を試験した。ＤＭＳＯで処理したＤＣとの共培養（四角）及びＤＣ単独との共培養（▲）を、ネガティブコントロールとした。ＰＭＡの存在下で培養したＰＢＬ（▼）を、ポジティブコントロールとした。図１Ａは、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定したときの反応性を示すグラフである（スポット／２．５ｅ４細胞）。図１Ｂは、フローサイトメトリーアッセイ（ＦＡＣＳ）において検出された４－１ＢＢ^＋及び／又はＯＸ４０^＋細胞の割合によって測定したときの反応性を示すグラフである。

【図1C】図１Ｃは、Ｇ１２Ｄ ２４ｍｅｒペプチド又は対応するＷＴ ２４ｍｅｒペプチドをパルスした自己ＤＣと共培養することによって試験した、Ｇ１２Ｄ ２４ｍｅｒペプチドをパルスしたＤＣで結腸直腸がん患者４２７１由来のＰＢＬをＩＶＳした後の４－１ＢＢ及び／又はＯＸ４０の発現についてのＦＡＣＳ分析の結果を示す。矢印は、Ｇ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチドでＩＶＳし、Ｇ１２Ｄ ２４－ｍｅｒで再刺激した後に４－１ＢＢ及び／又はＯＸ４０の発現がアップレギュレートされた細胞が、ＴＣＲ配列を決定するための単一細胞ポリメラーゼ連鎖反応（ｓｃＰＣＲ）を受けたことを示す。

【図2A-2D】図２Ａ～２Ｄは、エフェクター細胞を標的細胞と共培養した後に測定した４－１ＢＢ^＋及び／又はＯＸ４０^＋細胞の割合を示すグラフである。エフェクター細胞は、独立して４２７１ ＴＣＲ１（２Ａ）、４２７１ ＴＣＲ２（２Ｂ）、４２７１ ＴＣＲ３（２Ｃ）、又は４２７１ ＴＣＲ４（２Ｄ）で形質導入された自己ＰＢＬであった。標的細胞は、指定濃度（ｎｇ／ｍＬ）のＧ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチド（星形）又は対応するＷＴ ２４－ｍｅｒペプチド（円形）をパルスした自己ＤＣであった。

【図3A】図３Ａは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した後に測定したＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ（スポット数／３ｅ４細胞）によって測定したときの反応性を示すグラフである。エフェクター細胞は、独立して４２７１ ＴＣＲ１、４２７１ ＴＣＲ２、４２７１ ＴＣＲ３、又は４２７１ ＴＣＲ４で形質導入されたＴ細胞であった。エフェクター細胞は、抗ＨＬＡ ＤＰ（四角）、抗ＨＬＡ ＤＱ（▲）、若しくは抗ＨＬＡ ＤＲ（星形）のブロッキング抗体で、又は抗体なしで（円形）ＭＨＣブロッキングした後にＧ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチドをパルスした自己のＤＣと共培養した。ＤＭＳＯ処理したＤＣと共培養したエフェクター導入細胞（菱形）をネガティブコントロールとした。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓの存在下で培養したエフェクター細胞（▼）をポジティブコントロールとした。

【図3B】図３Ｂは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した後に測定したＣＤ３^＋／ＣＤ４^＋集団における４－１ＢＢ^＋及び／又はＯＸ４０^＋細胞の割合を示すグラフである。エフェクター細胞は、独立して４２７１ ＴＣＲ１、４２７１ ＴＣＲ２、４２７１ ＴＣＲ３、又は４２７１ ＴＣＲ４で形質導入されたＴ細胞であった。エフェクター細胞は、抗ＨＬＡ ＤＰ（四角）、抗ＨＬＡ ＤＱ（▲）、若しくは抗ＨＬＡ ＤＲ（星形）のブロッキング抗体で、又はブロッキング抗体なしで（円形）ＭＨＣブロッキングした後にＧ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチドをパルスした自己のＤＣと共培養した。ＤＭＳＯ処理したＤＣ（菱形）と共培養したエフェクター細胞をネガティブコントロールとした。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓの存在下で培養したエフェクター細胞（▼）をポジティブコントロールとした。

【発明を実施するための形態】

【0012】

ＲＡＳファミリーのタンパク質は、低分子ＧＴＰａｓｅの大きなファミリーに属する。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、変異したとき、ＲＡＳタンパク質は、多くのヒトのがんの発がん初期におけるシグナル伝達に関与する可能性があると考えられる。単一のアミノ酸置換によって、タンパク質が活性化され得る。変異型ＲＡＳタンパク質産物は、構成的に活性化され得る。変異型ＲＡＳタンパク質は、例えば、膵臓がん（例えば、膵がん）、結腸直腸がん、肺がん（例えば、肺腺がん）、子宮内膜がん、卵巣がん（例えば、上皮性卵巣がん）、及び前立腺がん等の様々なヒトのがんのいずれかで発現し得る。ヒトＲＡＳファミリーのタンパク質としては、ＫＲＡＳ、ＨＲＡＳ、及びＮＲＡＳが挙げられる。

【0013】

ＫＲＡＳは、ＧＴＰａｓｅ ＫＲａｓ、Ｖ－Ｋｉ－Ｒａｓ２ Ｋｉｒｓｔｅｎラット肉腫ウイルスがん遺伝子、又はＫＲＡＳ２とも称される。ＫＲＡＳには、ＫＲＡＳバリアントＡ及びＫＲＡＳバリアントＢの２つの転写物バリアントが存在する。野生型（ＷＴ）ＫＲＡＳバリアントＡは、配列番号４１のアミノ酸配列を有する。ＷＴ ＫＲＡＳバリアントＢは、配列番号４２のアミノ酸配列を有する。以後、「ＫＲＡＳ」（変異型又は非変異型（ＷＴ））に対する言及は、特に規定のない限り、バリアントＡ及びバリアントＢの両方を指す。活性化されたとき、変異型ＫＲＡＳは、グアノシン－５’－三リン酸（ＧＴＰ）に結合し、そして、ＧＴＰをグアノシン５’－二リン酸（ＧＤＰ）に変換する。

【0014】

ＨＲＡＳは、ＲＡＳタンパク質ファミリーの別のメンバーである。ＨＲＡＳは、Ｈａｒｖｅｙラット肉腫ウイルスがんタンパク質、Ｖ－Ｈａ－Ｒａｓ Ｈａｒｖｅｙラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ、又はＲａｓファミリー低分子ＧＴＰ結合タンパク質Ｈ－Ｒａｓとも称される。ＷＴ ＨＲＡＳは、配列番号４３のアミノ酸配列を有する。

【0015】

ＮＲＡＳは、ＲＡＳタンパク質ファミリーの更に別のメンバーである。ＮＲＡＳは、ＧＴＰａｓｅ ＮＲａｓ、Ｖ－Ｒａｓ神経芽細胞腫ＲＡＳウイルスがん遺伝子ホモログ、又はＮＲＡＳ１とも称される。ＷＴ ＮＲＡＳは、配列番号４４のアミノ酸配列を有する。

【0016】

本発明の実施形態は、１２位のグリシンがアスパラギン酸で置換されている変異型ヒトＲＡＳのアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴＣＲであって、該変異型ヒトＲＡＳのアミノ酸配列が、変異型ヒトＫＲＡＳ、変異型ヒトＨＲＡＳ、又は変異型ヒトＮＲＡＳのアミノ酸配列であり、１２位が、それぞれ、ＷＴヒトＫＲＡＳ、ＷＴヒトＨＲＡＳ、又はＷＴヒトＮＲＡＳのタンパク質を参照することによって定義されるＴＣＲを提供する。以後、「ＴＣＲ」に対する言及は、特に規定のない限り、ＴＣＲの機能的部分及び機能的バリアントも指す。

【0017】

変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列は、変異型ヒトＫＲＡＳアミノ酸配列、変異型ヒトＨＲＡＳアミノ酸配列、又は変異型ヒトＮＲＡＳアミノ酸配列であり得る。ＷＴヒトのＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、及びＨＲＡＳのタンパク質のアミノ酸配列は、それぞれ、１８８～１８９アミノ酸残基長を有し、互いに対して高度の同一性を有する。例えば、ＷＴヒトＮＲＡＳタンパク質のアミノ酸配列は、ＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸配列と８６．８％同一である。ＷＴヒトＮＲＡＳタンパク質及びＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸残基１～８６は、１００％同一である。ＷＴヒトＨＲＡＳタンパク質のアミノ酸配列は、ＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸配列と８６．３％同一である。ＷＴヒトＨＲＡＳタンパク質及びＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸残基１～９４は、１００％同一である。以後、「ＲＡＳ」（変異型又は非変異型（ＷＴ））に対する言及は、特に規定のない限り、まとめてＫＲＡＳ、ＨＲＡＳ、及びＮＲＡＳを指す。

【0018】

本発明の実施形態では、変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列は、１２位のグリシンがアスパラギン酸で置換されているヒトＲＡＳアミノ酸配列を含み、１２位は、対応するＷＴ ＲＡＳタンパク質を参照して定義される。ＷＴ ＲＡＳタンパク質は、ＷＴ ＫＲＡＳタンパク質（配列番号４１又は４２）、ＷＴ ＨＲＡＳタンパク質（配列番号４３）、又はＷＴ ＮＲＡＳタンパク質（配列番号４４）のいずれか１つであってよいが、その理由は、上に説明した通り、ＷＴヒトＮＲＡＳタンパク質及びＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸残基１～８６が１００％同一であり、ＷＴヒトＨＲＡＳタンパク質及びＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸残基１～９４も１００％同一であるためである。従って、ＷＴ ＫＲＡＳ、ＷＴ ＨＲＡＳ、及びＷＴ ＮＲＡＳのタンパク質のそれぞれの１２位におけるアミノ酸残基は同じである、すなわち、グリシンである。

【0019】

変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列は、１２位のグリシンのアスパラギン酸による置換を有する。これに関して、本発明の実施形態は、Ｇ１２Ｄ変異を有する任意のヒトＲＡＳのタンパク質、ポリペプチド、又はペプチドのアミノ酸配列に対して抗原特異性を有するＴＣＲを提供する。

【0020】

ＲＡＳの変異及び置換は、本明細書では、対応するＷＴ ＲＡＳタンパク質のアミノ酸配列を参照して定義される。従って、ＲＡＳの変異及び置換は、本明細書では、ＷＴ ＲＡＳタンパク質の特定の位置に存在するアミノ酸残基（すなわち、１２位）、続いて、位置番号、続いて、検討中の特定の変異又は置換においてその残基に置き換わったアミノ酸残基を参照して記載される。ＲＡＳアミノ酸配列（例えば、ＲＡＳペプチド）は、完全長のＷＴ ＲＡＳタンパク質の全アミノ酸残基よりも少ないアミノ酸残基を含む場合がある。従って、ＲＡＳアミノ酸配列の特定の例では対応する残基の実際の位置が異なる場合もあるという理解の下、本明細書では、１２位は、ＷＴ完全長ＲＡＳタンパク質（すなわち、配列番号４１～４４のいずれか１つ）を参照して定義される。位置が配列番号４１～４４のいずれか１つによって定義される通りである場合、用語「Ｇ１２」とは、配列番号４１～４４のいずれか１つの１２位には通常グリシンが存在することを指し、「Ｇ１２Ｄ」は、配列番号４１～４４のいずれか１つの１２位に通常存在するグリシンがアスパラギン酸に置き換わっていることを示す。例えば、ＲＡＳアミノ酸配列の特定の例が、例えばＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ（配列番号９０）（配列番号４１の連続アミノ酸残基２～２４に対応する例示的なＷＴ ＫＲＡＳペプチド）である場合、「Ｇ１２Ｖ」とは、たとえ配列番号９０における下線付きグリシンの実際の位置が１１であったとしても、配列番号９０における下線付きグリシンのアスパラギン酸による置換を指す。以下、Ｇ１２Ｄ変異を有するヒトＲＡＳアミノ酸配列を「Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ」と称する。

【0021】

Ｇ１２Ｄ変異を有する完全長ＲＡＳタンパク質の例を、以下の表１に記載する。

【0022】

【表1】

【0023】

本発明の実施形態では、ＴＣＲは、上記Ｇ１２Ｄ変異を有するＲＡＳペプチドに対して抗原特異性を有し、該Ｇ１２Ｄ ＲＡＳペプチドは、任意の長さを有する。本発明の実施形態では、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳペプチドは、本明細書に記載のＨＬＡクラスＩＩ分子のいずれかに結合するのに好適な任意の長さを有する。例えば、ＴＣＲは、Ｇ１２Ｄ変異を有するＲＡＳペプチドであって、約１１～約３０アミノ酸残基、約１２～約２４アミノ酸残基、又は約１８～約２０アミノ酸残基の長さを有するＲＡＳペプチドに対して抗原特異性を有し得る。Ｇ１２Ｄ ＲＡＳペプチドは、Ｇ１２Ｄ変異を含む変異型ＲＡＳタンパク質の任意の連続アミノ酸残基を含み得る。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、Ｇ１２Ｄ変異を有するＲＡＳペプチドであって、約３０アミノ酸残基、約２９アミノ酸残基、約２８アミノ酸残基、約２７アミノ酸残基、約２６アミノ酸残基、約２５アミノ酸残基、約２４アミノ酸残基、約２３アミノ酸残基、約２２アミノ酸残基、約２１アミノ酸残基、約２０アミノ酸残基、約１９アミノ酸残基、約１８アミノ酸残基、約１７アミノ酸残基、約１６アミノ酸残基、約１５アミノ酸残基、約１４アミノ酸残基、約１３アミノ酸残基、約１２アミノ酸残基、約１１アミノ酸残基、又は上記値のうちのいずれか２つの範囲の長さを有する変異型ＲＡＳペプチドに対して抗原特異性を有し得る。本発明のＴＣＲによって認識され得る、Ｇ１２Ｄ変異を有する特異的ペプチドの例は、ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ（配列番号８８）である。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８８の変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対する抗原特異性を有する。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ（配列番号８９）の野生型ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有しない。

【0024】

本発明の実施形態では、本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子によって提示されるＧ１２Ｄ ＲＡＳを認識することができる。これに関して、ＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子の枠内でＧ１２Ｄ ＲＡＳに結合した際に免疫応答を惹起し得る。本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子によって提示されるＧ１２Ｄ ＲＡＳを認識することができ、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳに加えてＨＬＡクラスＩＩ分子にも結合することができる。

【0025】

本発明の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲヘテロ二量体である。ＨＬＡ－ＤＲヘテロ二量体は、α鎖及びβ鎖を含む細胞表面受容体である。ＨＬＡ－ＤＲのα鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＡ遺伝子によってコードされている。ＨＬＡ－ＤＲのβ鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＢ１遺伝子、ＨＬＡ－ＤＲＢ３遺伝子、ＨＬＡ－ＤＲＢ４遺伝子、又はＨＬＡ－ＤＲＢ５遺伝子によってコードされている。ＨＬＡ－ＤＲＢ１によってコードされている分子の例としては、ＨＬＡ－ＤＲ１、ＨＬＡ－ＤＲ２、ＨＬＡ－ＤＲ３、ＨＬＡ－ＤＲ４、ＨＬＡ－ＤＲ５、ＨＬＡ－ＤＲ６、ＨＬＡ－ＤＲ７、ＨＬＡ－ＤＲ８、ＨＬＡ－ＤＲ９、ＨＬＡ－ＤＲ１０、ＨＬＡ－ＤＲ１１、ＨＬＡ－ＤＲ１２、ＨＬＡ－ＤＲ１３、ＨＬＡ－ＤＲ１４、ＨＬＡ－ＤＲ１５、ＨＬＡ－ＤＲ１６、及びＨＬＡ－ＤＲ１７を挙げることができるが、これらに限定されない。ＨＬＡ－ＤＲＢ３遺伝子は、ＨＬＡ－ＤＲ５２をコードしている。ＨＬＡ－ＤＲＢ４遺伝子は、ＨＬＡ－ＤＲ５３をコードしている。ＨＬＡ－ＤＲＢ５遺伝子は、ＨＬＡ－ＤＲ５１をコードしている。本発明の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲα鎖を、ＨＬＡ－ＤＲＢ１遺伝子、ＨＬＡ－ＤＲＢ３遺伝子、又はＨＬＡ－ＤＲＢ４遺伝子のうちのいずれか１つによってコードされているＨＬＡ－ＤＲβ鎖と組み合わせて含む。特に好ましい実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０３：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１１：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０１：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０３：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体、ＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０３：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体、又はＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０１：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１ヘテロ二量体である（すなわち、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０３：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１１：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０１：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０３：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０３：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１、又はＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０１：ＨＬＡ－ＤＲＡ＊０１のアレルによって発現される）。実施形態では、ＨＬＡ－ＤＲのβ鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０３：０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１１：０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０１：０１：０２、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０３：０１：０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０１：０１、又はＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０３：０１のアレルによってコードされている。

【0026】

本発明のＴＣＲは、養子細胞移入に使用される細胞によって発現された場合を含む、様々な利点のうちのいずれか１つ以上を提供し得る。Ｇ１２Ｄ ＲＡＳは、がん細胞で発現し、正常な非がん細胞では発現しない。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、本発明のＴＣＲは、有利なことに、がん細胞の破壊を標的とするが、一方、例えば毒性を最小化又は排除することによって、正常な非がん細胞の破壊を最小化又は排除し、それによって、低減すると考えられる。更に、Ｇ１２Ｄ変異は、腫瘍形成の初期段階で発生する可能性が高いため、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ変異は、患者のがん細胞の実質的に全てで発現している可能性がある。本発明のＴＣＲは、有利なことに、例えば化学療法、外科手術、又は放射線照射等の他の種類の治療には応答しないＧ１２Ｄ ＲＡＳ陽性がんを成功裏に治療又は予防することができる。更に、本発明のＴＣＲは、操作されていない腫瘍細胞（例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）－γで処理されていない、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ及び本明細書に記載のＨＬＡ－ＤＲヘテロ二量体のいずれかのうちの一方又は両方をコードしているベクターでトランスフェクトされていない、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳペプチドをパルスしていない、又はこれらの組み合わせの腫瘍細胞）を認識する能力を提供し得る、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳの高い結合活性での（ｈｉｇｈｌｙ ａｖｉｄ）認識を提供することができる。ＫＲＡＳの変異は、膵臓がんの約７０％、結腸直腸がんの約３６％、及び肺がんの約２０％でみられる。最も一般的には、コドン１２（グリシン、Ｇをコードしている）に変異が生じる。Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ変異は、膵臓及び結腸直腸のがんの患者のそれぞれ約４０％及び約１２％でみられる。更に、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０３、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１１、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０３、ＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０１、及びＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０３のアリルが一般的である。これらのアリルは、米国における白人の民族性を有するヒトの１０％超で発現しており、他の民族のヒトでも一般的に発現している。従って、本発明のＴＣＲは、他のＭＨＣ分子によって提示されるＲＡＳを認識するＴＣＲを使用する免疫療法に適格ではない場合があるＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０３、ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１１、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ３＊０３、ＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０１、又はＨＬＡ－ＤＲＢ４＊０３のアリルを発現する患者が含まれるように、免疫療法適格がん患者の数を増加させることができる。更に、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、ヒトのＣＤＲ及び可変領域のアミノ酸配列を含み、これによって、例えばマウスのＣＤＲ及び可変領域のアミノ酸配列を含むＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質と比べてヒト免疫系によって拒絶されるリスクを低減することができる。

【0027】

語句「抗原特異性」とは、本明細書で使用するとき、ＴＣＲが、高い結合活性でＧ１２Ｄ ＲＡＳに特異的に結合し、免疫学的に認識できることを意味する。例えば、ＴＣＲは、（ａ）低濃度のＧ１２Ｄ ＲＡＳペプチド（例えば、約０．０５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、２ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、８ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、又は上記値のうちのいずれか２つによって規定される範囲）をパルスした抗原陰性ＨＬＡクラスＩＩ分子陽性標的細胞又は（ｂ）標的細胞がＧ１２Ｄ ＲＡＳを発現するようにＧ１２Ｄ ＲＡＳをコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性ＨＬＡクラスＩＩ分子陽性標的細胞と共培養した際に、該ＴＣＲを発現している約１×１０^４～約１×１０^５個のＴ細胞が少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ以上（例えば、２００ｐｇ／ｍＬ以上、３００ｐｇ／ｍＬ以上、４００ｐｇ／ｍＬ以上、５００ｐｇ／ｍＬ以上、６００ｐｇ／ｍＬ以上、７００ｐｇ／ｍＬ以上、１０００ｐｇ／ｍＬ以上、５，０００ｐｇ／ｍＬ以上、７，０００ｐｇ／ｍＬ以上、１０，０００ｐｇ／ｍＬ以上、２０，０００ｐｇ／ｍＬ以上、又は上記値のうちのいずれか２つによって規定される範囲）のＩＦＮ－γを分泌した場合、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳについて「抗原特異性」を有するとみなしてよい。本発明のＴＣＲを発現している細胞は、より高濃度のＧ１２Ｄ ＲＡＳペプチドをパルスした抗原陰性ＨＬＡクラスＩＩ分子陽性標的細胞と共培養した際にもＩＦＮ－γを分泌することができる。ＨＬＡクラスＩＩ分子は、本明細書に記載のＨＬＡクラスＩＩ分子のいずれかであってよい。

【0028】

あるいは又は更に、ＴＣＲは、ネガティブコントロールが発現するＩＦＮ－γの量と比較して、（ａ）低濃度のＧ１２Ｄ ＲＡＳペプチドをパルスした抗原陰性ＨＬＡクラスＩＩ分子陽性標的細胞又は（ｂ）標的細胞がＧ１２Ｄ ＲＡＳを発現するようにＧ１２Ｄ ＲＡＳをコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性ＨＬＡクラスＩＩ分子陽性標的細胞と共培養した際に、該ＴＣＲを発現しているＴ細胞が少なくとも２倍（例えば、５倍）多いＩＦＮ－γを分泌した場合、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳについて「抗原特異性」を有するとみなしてよい。ネガティブコントロールは、例えば、（ｉ）（ａ）同濃度の無関係のペプチド（例えば、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳペプチドとは異なる配列を有する幾つかの他のペプチド）若しくは（ｂ）標的細胞が無関係のペプチドを発現するように該無関係のペプチドをコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性ＨＬＡクラスＩＩ分子陽性標的細胞と共培養した、該ＴＣＲを発現しているＴ細胞、又は（ｉｉ）（ａ）同濃度のＧ１２Ｄ ＲＡＳペプチドをパルスした抗原陰性ＨＬＡクラスＩＩ分子陽性標的細胞若しくは（ｂ）標的細胞がＧ１２Ｄ ＲＡＳを発現するようにＧ１２Ｄ ＲＡＳをコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性ＨＬＡクラスＩＩ分子陽性標的細胞と共培養した、形質導入されていないＴＣＲ細胞（例えば、該ＴＣＲを発現しないＰＢＭＣ由来）であってよい。ネガティブコントロールの標的細胞が発現するＨＬＡクラスＩＩ分子は、試験するＴ細胞と共培養した標的細胞が発現するのと同じＨＬＡクラスＩＩ分子である。ＨＬＡクラスＩＩ分子は、本明細書に記載のＨＬＡクラスＩＩ分子のいずれかであってよい。ＩＦＮ－γ分泌は、当技術分野において公知の方法、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって測定することができる。

【0029】

あるいは又は更に、ＴＣＲは、ＩＦＮ－γを分泌するネガティブコントロールＴ細胞の数と比較して、（ａ）低濃度のＧ１２Ｄ ＲＡＳペプチドをパルスした抗原陰性ＨＬＡクラスＩＩ分子陽性標的細胞又は（ｂ）標的細胞がＧ１２Ｄ ＲＡＳを発現するようにＧ１２Ｄ ＲＡＳをコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性ＨＬＡクラスＩＩ分子陽性標的細胞と共培養した際に、少なくとも２倍（例えば、５倍）多い数の該ＴＣＲを発現しているＴ細胞がＩＦＮ－γを分泌した場合、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳについて「抗原特異性」を有するとみなしてよい。ＨＬＡクラスＩＩ分子、ペプチドの濃度、及びネガティブコントロールは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する通りであってよい。ＩＦＮ－γを分泌する細胞の数は、当技術分野において公知の方法、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴによって測定することができる。

【0030】

あるいは又は更に、ＴＣＲは、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳを発現している標的細胞で刺激した後に例えばフローサイトメトリーによって測定したとき、該ＴＣＲを発現しているＴ細胞が１つ以上のＴ細胞活性化マーカーの発現をアップレギュレートした場合、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳについて「抗原特異性」を有するとみなしてよい。Ｔ細胞活性化マーカーの例としては、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ６９、及び抗原刺激した際にアップレギュレートされるサイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン（ＩＬ）－２等）が挙げられる。

【0031】

本発明の実施形態は、例えば、ＴＣＲのアルファ（α）鎖、ＴＣＲのベータ（β）鎖、ＴＣＲのガンマ（γ）鎖、ＴＣＲのデルタ（δ）鎖、又はこれらの組み合わせ等の２つのポリペプチド（すなわち、ポリペプチド鎖）を含むＴＣＲを提供する。本発明のＴＣＲのポリペプチドは、ＴＣＲがＧ１２Ｄ ＲＡＳに対して抗原特異性を有する限り、任意のアミノ酸配列を含んでいてよい。幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、天然には存在しない。

【0032】

本発明の実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲの相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む可変領域をそれぞれ含む、２本のポリペプチド鎖を含む。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（４２７１ ＴＣＲ１のα鎖のＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（４２７１ ＴＣＲ１のα鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（４２７１ ＴＣＲ１のα鎖のＣＤＲ３）を含む第１のポリペプチド鎖と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖のＣＤＲ１）、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖のＣＤＲ３）を含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。

【0033】

本発明の別の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（４２７１ ＴＣＲ２のα鎖のＣＤＲ１）、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（４２７１ ＴＣＲ２のα鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（４２７１ ＴＣＲ２のα鎖のＣＤＲ３）を含む第１のポリペプチド鎖と、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖のＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖のＣＤＲ３）を含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。

【0034】

本発明の別の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（４２７１ ＴＣＲ３のα鎖のＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（４２７１ ＴＣＲ３のα鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（４２７１ ＴＣＲ３のα鎖のＣＤＲ３）を含む第１のポリペプチド鎖と、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖のＣＤＲ１）、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖のＣＤＲ３）を含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。

【0035】

本発明の別の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（４２７１ ＴＣＲ４のα鎖のＣＤＲ１）、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（４２７１ ＴＣＲ４のα鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（４２７１ ＴＣＲ４のα鎖のＣＤＲ３）を含む第１のポリペプチド鎖と、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖のＣＤＲ１）、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖のＣＤＲ３）を含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。

【0036】

これに関して、本発明のＴＣＲは、配列番号１～６、１１～１６、２１～２６、及び３１～３６からなる群から選択されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上を含み得る。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、（ａ）配列番号１～３の全て、（ｂ）配列番号４～６の全て、（ｃ）配列番号１～６の全て、（ｄ）配列番号１１～１３の全て、（ｅ）配列番号１４～１６の全て、（ｆ）配列番号１１～１６の全て、（ｇ）配列番号２１～２３の全て、（ｈ）配列番号２４～２６の全て、（ｉ）配列番号２１～２６の全て、（ｊ）配列番号３１～３３の全て、（ｋ）配列３４～３６の全て、又は（ｌ）配列３１～３６の全てのアミノ酸配列を含む。特に好ましい実施形態では、ＴＣＲは、（ａ）配列番号１～６の全て、（ｂ）配列番号１１～１６の全て、（ｃ）配列番号２１～２６の全て、又は（ｄ）配列３１～３６の全てのアミノ酸配列を含む。

【0037】

本発明の実施形態では、ＴＣＲは、上記ＣＤＲを含むＴＣＲの可変領域のアミノ酸配列を含む。これに関して、ＴＣＲは、（ｉ）配列番号７（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ１のα鎖の可変領域の予測配列）；（ｉｉ）配列番号８（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖の可変領域の予測配列）；（ｉｉｉ）配列番号９（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ１のα鎖の可変領域）；（ｉｖ）配列番号１０（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖の可変領域）；（ｖ）配列番号１７（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ２のα鎖の可変領域の予測配列）；（ｖｉ）配列番号１８（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖の可変領域の予測配列）；（ｖｉｉ）配列番号１９（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ２のα鎖の可変領域）；（ｖｉｉｉ）配列番号２０（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖の可変領域）；（ｉｘ）配列番号２７（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ３のα鎖の可変領域の予測配列）；（ｘ）配列番号２８（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖の可変領域の予測配列）；（ｘｉ）配列番号２９（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ３のα鎖の可変領域）；（ｘｉｉ）配列番号３０（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖の可変領域）；（ｘｉｉｉ）配列番号３７（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ４のα鎖の可変領域の予測配列）；（ｘｉｖ）配列番号３８（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖の可変領域の予測配列）；（ｘｖ）配列番号３９（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ４のα鎖の可変領域）；（ｘｖｉ）配列番号４０（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖の可変領域）；（ｘｖｉｉ）配列番号７及び８の両方；（ｘｖｉｉｉ）配列番号９及び１０の両方；（ｘｉｘ）配列番号１７及び１８の両方；（ｘｘ）配列番号１９及び２０の両方；（ｘｘｉ）配列番号２７及び２８の両方；（ｘｘｉｉ）配列番号２９及び３０の両方；（ｘｘｉｉｉ）配列番号３７及び３８の両方；又は（ｘｘｉｖ）配列番号３９及び４０の両方のアミノ酸配列を含む。好ましくは、ＴＣＲは、（ｉ）配列番号７及び８の両方、（ｉｉ）配列番号９及び１０の両方、（ｉｉｉ）配列番号１７及び１８の両方、（ｉｖ）配列番号１９及び２０の両方、（ｖ）配列番号２７及び２８の両方、（ｖｉ）配列番号２９及び３０の両方、（ｖｉｉ）配列番号３７及び３８の両方、又は（ｖｉｉｉ）配列番号３９及び４０の両方のアミノ酸配列を含む。

【0038】

本発明のＴＣＲは、α鎖定常領域及びβ鎖定常領域を更に含み得る。定常領域は、例えばヒト又はマウス等の任意の好適な種に由来していてよい。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、マウスのα及びβ鎖の定常領域又はヒトのα及びβ鎖の定常領域を更に含む。本明細書で使用するとき、用語「マウス」又は「ヒト」は、本明細書に記載のＴＣＲ又はＴＣＲの任意の構成要素（例えば、ＣＤＲ、可変領域、定常領域、α鎖、及び／又はβ鎖）に言及するとき、それぞれマウス又はヒト由来のＴＣＲ（又はその構成要素）、すなわち、それぞれマウスＴ細胞又はヒトＴ細胞を起源とするか又は該細胞によってかつて発現されたＴＣＲ（又はその構成要素）を意味する。

【0039】

本発明の実施形態は、ヒト可変領域及びマウス定常領域を含むキメラＴＣＲであって、１２位のグリシンがアスパラギン酸で置換されている変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有するＴＣＲを提供する。マウス定常領域は、任意の１つ以上の利点を提供し得る。例えば、マウス定常領域は、本発明のＴＣＲが導入される宿主細胞の内因性ＴＣＲと本発明のＴＣＲとの誤対合を減少させることができる。あるいは又は更に、マウス定常領域は、ヒト定常領域を有する同じＴＣＲと比較して、本発明のＴＣＲの発現を増加させることができる。キメラＴＣＲは、配列番号５３（ＷＴマウスα鎖定常領域）、配列番号５４（ＷＴマウスβ鎖定常領域）、又は配列番号５３及び５４の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、本発明のＴＣＲは、配列番号５３及び５４の両方のアミノ酸配列を含む。キメラＴＣＲは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載するＣＤＲ領域のいずれかと組み合わせて、本明細書に記載のマウス定常領域のいずれかを含み得る。これに関して、ＴＣＲは、（ａ）配列番号１～３及び５３の全て、（ｂ）配列番号４～６及び５４の全て、（ｃ）配列番号１～６及び５３～５４の全て、（ｄ）配列番号１１～１３及び５３の全て、（ｅ）配列番号１４～１６及び５４の全て、（ｆ）配列番号１１～１６及び５３～５４の全て、（ｇ）配列番号２１～２３及び５３の全て、（ｈ）配列番号２４～２６及び５４の全て、（ｉ）配列番号２１～２６及び５３～５４の全て、（ｊ）配列番号３１～３３及び５３の全て、（ｋ）配列番号３４～３６及び５４の全て、又は（ｌ）配列番号３１～３６及び５３～５４の全てのアミノ酸配列を含み得る。本発明の別の実施形態では、キメラＴＣＲは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する可変領域のいずれかと組み合わせて、本明細書に記載のマウス定常領域のいずれかを含み得る。これに関して、ＴＣＲは、（ｉ）配列番号７及び５３の両方、（ｉｉ）配列番号８及び５４の両方、（ｉｉｉ）配列番号９及び５３の両方、（ｉｖ）配列番号１０及び５４の両方、（ｖ）配列番号１７及び５３の両方、（ｖｉ）配列番号１８及び５４の両方、（ｖｉｉ）配列番号１９及び５３の両方、（ｖｉｉｉ）配列番号２０及び５４の両方、（ｉｘ）配列番号２７及び５３の両方、（ｘ）配列番号２８及び５４の両方、（ｘｉ）配列番号２９及び５３の両方、（ｘｉｉ）配列番号３０及び５４の両方、（ｘｉｉｉ）配列番号３７及び５３の両方、（ｘｉｖ）配列番号３８及び５４の両方、（ｘｖ）配列番号３９及び５３の両方、（ｘｖｉ）配列番号４０及び５４の両方、（ｘｖｉｉ）配列番号７～８及び５３～５４の全て、（ｘｖｉｉｉ）配列番号９～１０及び５３～５４の全て、（ｘｉｘ）配列番号１７～１８及び５３～５４の全て、（ｘｘ）配列番号１９～２０及び５３～５４の全て、（ｘｘｉ）配列番号２７～２８及び５３～５４の全て、（ｘｘｉｉ）配列番号２９～３０及び５３～５４の全て、（ｘｘｉｉｉ）配列番号３７～３８及び５３～５４の全て、又は（ｘｘｉｖ）配列番号３９～４０及び５３～５４の全てのアミノ酸配列を含み得る。

【0040】

本発明の実施形態では、ＴＣＲは、置換定常領域を含む。これに関して、ＴＣＲは、α鎖及びβ鎖の一方又は両方の定常領域に１つ、２つ、３つ、又は４つのアミノ酸置換（複数可）を有する、本明細書に記載のＴＣＲのいずれかのアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ＴＣＲは、α鎖及びβ鎖の一方又は両方のマウス定常領域に１つ、２つ、３つ、又は４つのアミノ酸置換（複数可）を有するマウス定常領域を含む。特に好ましい実施形態では、ＴＣＲは、α鎖のマウス定常領域に１つ、２つ、３つ、又は４つのアミノ酸置換（複数可）を有し、β鎖のマウス定常領域に１つのアミノ酸置換を有するマウス定常領域を含む。幾つかの実施形態では、置換定常領域を含むＴＣＲは、有利なことに、非置換（野生型）定常領域を含む親ＴＣＲと比較して、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ^＋標的の認識の増大、宿主細胞による発現の増加、内因性ＴＣＲとの誤対合の減少、及び抗腫瘍活性の増大のうちの１つ以上を提供する。一般に、ＴＣＲのα鎖及びβ鎖のマウス定常領域の置換アミノ酸配列、それぞれ配列番号４９及び５０は、非置換マウス定常領域アミノ酸配列、それぞれ配列番号５３及び５４の全部又は一部に対応し、配列番号４９は、配列番号５３と比較して１つ、２つ、３つ、又は４つのアミノ酸置換（複数可）を有し、配列番号５０は、配列番号５４と比較して１つのアミノ酸置換を有する。これに関して、本発明の実施形態は、（ａ）（ｉ）４８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである配列番号４９（α鎖の定常領域）；（ｂ）５７位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである配列番号５０（β鎖の定常領域）；又は（ｃ）配列番号４９及び５０の両方のアミノ酸配列を含むＴＣＲを提供する。本発明の実施形態では、配列番号４９を含むＴＣＲは、配列番号５３（α鎖の非置換マウス定常領域）を含まない。本発明の実施形態では、配列番号５０を含むＴＣＲは、配列番号５４（β鎖の非置換マウス定常領域）を含まない。

【0041】

本発明の実施形態では、ＴＣＲは、可変領域及び定常領域を含むα鎖と、可変領域及び定常領域を含むβ鎖とを含む。これに関して、ＴＣＲは、（ａ）（ｉ）配列番号５５の１８４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号５５の２４８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号５５の２５０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号５５の２５１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５５のアミノ酸配列を含むα鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ１のα鎖）；（ｂ）配列番号５６の１９９位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５６のアミノ酸配列を含むβ鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖）；（ｃ）配列番号５５及び５６の両方；（ｄ）（ｉ）配列番号５７の１６５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号５７の２２９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号５７の２３１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号５７の２３２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５７のアミノ酸配列を含むα鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ１のα鎖の予測配列）；（ｅ）配列番号５８の１７５位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５８のアミノ酸配列を含むβ鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖の予測配列）；（ｆ）配列番号５７及び５８の両方；（ｇ）配列番号５９（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ１のα鎖）；（ｈ）配列番号６０（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖）；（ｉ）配列番号６１（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ１のα鎖の予測配列）；（ｊ）配列番号６２（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖の予測配列）；（ｋ）配列番号５９及び６０の両方；（ｌ）配列番号６１及び６２の両方；（ｍ）（ｉ）配列番号６３の１８２位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号６３の２４６位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号６３の２４８位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号６３の２４９位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６３のアミノ酸配列を含むα鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ２のα鎖）；（ｎ）配列番号６４の１９７位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号６４のアミノ酸配列を含むβ鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖）；（ｏ）配列番号６３及び６４の両方；（ｐ）（ｉ）配列番号６５の１６４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号６５の２２８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号６５の２３０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号６５の２３１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６５のアミノ酸配列を含むα鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ２のα鎖の予測配列）；（ｑ）配列番号６６の１７３位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号６６のアミノ酸配列を含むβ鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖の予測配列）；（ｒ）配列番号６５及び６６の両方；（ｓ）配列番号６７（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ２のα鎖）；（ｔ）配列番号６８（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖）；（ｕ）配列番号６９（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ２のα鎖の予測配列）；（ｖ）配列番号７０（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖の予測配列）；（ｗ）配列番号６７及び６８の両方；（ｘ）配列番号６９及び７０の両方；（ｙ）（ｉ）配列番号７１の１８７位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号７１の２５１位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号７１の２５３位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号７１の２５４位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７１のアミノ酸配列を含むα鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ３のα鎖）；（ｚ）配列番号７２の１９１位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号７２のアミノ酸配列を含むβ鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖）；（ａａ）配列番号７１及び７２の両方；（ｂｂ）（ｉ）配列番号７３の１６８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号７３の２３２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号７３の２３４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号７３の２３５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７３のアミノ酸配列を含むα鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ３のα鎖の予測配列）；（ｃｃ）配列番号７４の１７３位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号７４のアミノ酸配列を含むβ鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖の予測配列）；（ｄｄ）配列番号７３及び７４の両方；（ｅｅ）配列番号７５（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ３のα鎖）；（ｆｆ）配列番号７６（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖）；（ｇｇ）配列番号７７（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ３のα鎖の予測配列）；（ｈｈ）配列番号７８（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖の予測配列）；（ｉｉ）配列番号７５及び７６の両方；（ｊｊ）配列番号７７及び７８の両方；（ｋｋ）（ｉ）配列番号７９の１７５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号７９の２３９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号７９の２４１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号７９の２４２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７９のアミノ酸配列を含むα鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ４のα鎖）；（ｌｌ）配列番号８０の１９０位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号８０のアミノ酸配列を含むβ鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖）；（ｍｍ）配列番号７９及び８０の両方；（ｎｎ）（ｉ）配列番号８１の１５９位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号８１の２２３位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号８１の２２５位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号８１の２２６位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号８１のアミノ酸配列を含むα鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ４のα鎖の予測配列）；（ｏｏ）配列番号８２の１７２位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号８２のアミノ酸配列を含むβ鎖（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖の予測配列）；（ｐｐ）配列番号８１及び８２の両方；（ｑｑ）配列番号８３（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ４のα鎖）；（ｒｒ）配列番号８４（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖）；（ｓｓ）配列番号８５（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ４のα鎖の予測配列）；（ｔｔ）配列番号８６（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖の予測配列）；（ｕｕ）配列番号８３及び８４の両方；又は（ｖｖ）配列番号８５及び８６の両方を含む。

【0042】

本発明の実施形態では、置換定常領域は、システイン置換ＴＣＲを提供するために、α鎖及びβ鎖の一方又は両方の定常領域にシステイン置換を含む。α鎖及びβ鎖における対向するシステインは、置換されたＴＣＲのα鎖及びβ鎖の定常領域を互いに連結させ、かつ非置換マウス定常領域を含むＴＣＲには存在しないジスルフィド結合を提供する。これに関して、ＴＣＲは、配列番号５３の４８位のネイティブなＴｈｒ（Ｔｈｒ４８）及び配列番号５４の５７位のネイティブなＳｅｒ（Ｓｅｒ５７）の一方又は両方がＣｙｓで置換されていてよいシステイン置換ＴＣＲであり得る。好ましくは、配列番号５３のネイティブなＴｈｒ４８及び配列番号５４のネイティブなＳｅｒ５７の両方がＣｙｓで置換される。システイン置換ＴＣＲの定常領域配列の例を表２に記載する。本発明の実施形態では、システイン置換ＴＣＲは、（ｉ）配列番号４９、（ｉｉ）配列番号５０、又は（ｉｉｉ）配列番号４９及び５０の両方を含み、配列番号４９及び５０はいずれも表２に定義される通りである。本発明のシステイン置換ＴＣＲは、本明細書に記載のＣＤＲ又は可変領域のいずれかに加えて、置換定常領域を含み得る。

【0043】

本発明の実施形態では、システイン置換キメラＴＣＲは、完全長α鎖及び完全長β鎖を含む。システイン置換キメラＴＣＲのα鎖及びβ鎖の配列の例を表２に記載する。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、（ｉ）配列番号４９、（ｉｉ）配列番号５０、（ｉｉｉ）配列番号５５、（ｉｖ）配列番号５６、（ｖ）配列番号５７、（ｖｉ）配列番号５８、（ｖｉｉ）配列番号６３、（ｖｉｉｉ）配列番号６４、（ｉｘ）配列番号６５、（ｘ）配列番号６６、（ｘｉ）配列番号７１、（ｘｉｉ）配列番号７２、（ｘｉｉｉ）配列番号７３、（ｘｉｖ）配列番号７４、（ｘｖ）配列番号７９、（ｘｖｉ）配列番号８０、（ｘｖｉｉ）配列番号８１、（ｘｖｉｉｉ）配列番号８２、（ｘｉｘ）配列番号４９及び５０の両方、（ｘｘ）配列番号５５及び５６の両方、（ｘｘｉ）配列番号５７及び５８の両方、（ｘｘｉｉ）配列番号６３及び６４の両方、（ｘｘｉｉｉ）配列番号６５及び６６の両方、（ｘｘｉｖ）配列番号７１及び７２の両方、（ｘｘｖ）配列番号７３及び７４の両方、（ｘｘｖｉ）配列番号７９及び８０の両方、又は（ｘｘｖｉｉ）配列番号８１及び８２の両方を含み、配列番号４９～５０、５５～５８、６３～６６、７１～７４、及び７９～８２は全て表２に定義される通りである。

【0044】

【表2-1】

【0045】

【表2-2】

【0046】

本発明の実施形態では、置換アミノ酸配列は、疎水性アミノ酸で置換されたＴＣＲ（本明細書では「ＬＶＬ修飾ＴＣＲ」とも称される）を提供するために、α鎖の定常領域の膜貫通（ＴＭ）ドメインにおける１つ、２つ、又は３つのアミノ酸の疎水性アミノ酸による置換を含む。ＴＣＲのＴＭドメインにおける疎水性アミノ酸置換（複数可）は、ＴＭドメインに疎水性アミノ酸置換（複数可）を有しないＴＣＲと比較して、ＴＣＲのＴＭドメインの疎水性を増大させることができる。これに関して、ＴＣＲは、配列番号５３のネイティブなＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５のうちの１つ、２つ、又は３つが、独立して、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐ；好ましくはＬｅｕ、Ｉｌｅ、又はＶａｌで置換されていてよい、ＬＶＬ修飾ＴＣＲである。好ましくは、配列番号５３のネイティブなＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５の３つ全てが、独立して、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐ；好ましくはＬｅｕ、Ｉｌｅ、又はＶａｌで置換されていてよい。本発明の実施形態では、ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、（ｉ）配列番号４９、（ｉｉ）配列番号５０、又は（ｉｉｉ）配列番号４９及び５０の両方を含み、配列番号４９及び５０はいずれも表３に定義される通りである。本発明のＬＶＬ修飾ＴＣＲは、本明細書に記載のＣＤＲ又は可変領域のいずれかに加えて、置換定常領域を含み得る。

【0047】

本発明の実施形態では、ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、完全長α鎖及び完全長β鎖を含む。ＬＶＬ修飾ＴＣＲのα鎖及びβ鎖の配列の例を表３に記載する。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、（ｉ）配列番号４９、（ｉｉ）配列番号５０、（ｉｉｉ）配列番号５５、（ｉｖ）配列番号５６、（ｖ）配列番号５７、（ｖｉ）配列番号５８、（ｖｉｉ）配列番号６３、（ｖｉｉｉ）配列番号６４、（ｉｘ）配列番号６５、（ｘ）配列番号６６、（ｘｉ）配列番号７１、（ｘｉｉ）配列番号７２、（ｘｉｉｉ）配列番号７３、（ｘｉｖ）配列番号７４、（ｘｖ）配列番号７９、（ｘｖｉ）配列番号８０、（ｘｖｉｉ）配列番号８１、（ｘｖｉｉｉ）配列番号８２、（ｘｉｘ）配列番号４９及び５０の両方、（ｘｘ）配列番号５５及び５６の両方、（ｘｘｉ）配列番号５７及び５８の両方、（ｘｘｉｉ）配列番号６３及び６４の両方、（ｘｘｉｉｉ）配列番号６５及び６６の両方、（ｘｘｉｖ）配列番号７１及び７２の両方、（ｘｘｖ）配列番号７３及び７４の両方、（ｘｘｖｉ）配列番号７９及び８０の両方、（ｘｘｖｉｉ）配列番号８１及び８２の両方を含み、配列番号４９～５０、５５～５８、６３～６６、７１～７４、及び７９～８２は全て表３で定義される通りである。

【0048】

【表3-1】

【0049】

【表3-2】

【0050】

【表3-3】

【0051】

【表3-4】

【0052】

本発明の実施形態では、置換アミノ酸配列は、α鎖の定常領域の膜貫通（ＴＭ）ドメインにおける１つ、２つ、又は３つのアミノ酸の疎水性アミノ酸による置換（複数可）と組み合わせて、α鎖及びβ鎖の一方又は両方の定常領域にシステイン置換を含む（本明細書では、「システイン置換ＬＶＬ修飾ＴＣＲ」とも称される）。これに関して、ＴＣＲは、配列番号５３のネイティブなＴｈｒ４８がＣｙｓで置換されており；配列番号５３のネイティブなＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５のうちの１つ、２つ、又は３つが、独立して、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐ；好ましくはＬｅｕ、Ｉｌｅ、又はＶａｌで置換されており；配列番号５４のネイティブなＳｅｒ５７がＣｙｓで置換されている、システイン置換ＬＶＬ修飾キメラＴＣＲである。好ましくは、配列番号５３のネイティブなＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５の３つ全てが、独立して、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐ；好ましくはＬｅｕ、Ｉｌｅ、又はＶａｌで置換されていてよい。本発明の実施形態では、システイン置換ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、（ｉ）配列番号４９、（ｉｉ）配列番号５０、又は（ｉｉｉ）配列番号４９及び５０の両方を含み、配列番号４９及び５０はいずれも表４に定義される通りである。本発明のシステイン置換ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、本明細書に記載のＣＤＲ又は可変領域のいずれかに加えて、置換定常領域を含み得る。

【0053】

実施形態では、システイン置換ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、完全長α鎖及び完全長β鎖を含む。システイン置換ＬＶＬ修飾ＴＣＲのα鎖及びβ鎖の配列の例を表４及び７に記載する。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、（１）配列番号４９、（２）配列番号５０、（３）配列番号５５、（４）配列番号５６、（５）配列番号５７、（６）配列番号５８、（７）配列番号６３、（８）配列番号６４、（９）配列番号６５、（１０）配列番号６６、（１１）配列番号７１、（１２）配列番号７２、（１３）配列番号７３、（１４）配列番号７４、（１５）配列番号７９、（１６）配列番号８０、（１７）配列番号８１、（１８）配列番号８２、（１９）配列番号４９及び５０の両方、（２０）配列番号５５及び５６の両方、（２１）配列番号５７及び５８の両方、（２２）配列番号６３及び６４の両方、（２３）配列番号６５及び６６の両方、（２４）配列番号７１及び７２の両方、（２５）配列番号７３及び７４の両方、（２６）配列番号７９及び８０の両方、（２７）配列番号８１及び８２の両方、（２８）配列番号５９；（２９）配列番号６０；（３０）配列番号５９及び６０の両方；（３１）配列番号６１；（３２）配列番号６２；（３３）配列番号６１及び６２の両方；（３４）配列番号６７；（３５）配列番号６８；（３６）配列番号６７及び６８の両方；（３７）配列番号６９；（３８）配列番号７０；（３９）配列番号６９及び７０の両方；（４０）配列番号７５；（４１）配列番号７６；（４２）配列番号７５及び７６の両方；（４３）配列番号７７；（４４）配列番号７８；（４５）配列番号７７及び７８の両方；（４６）配列番号８３；（４７）配列番号８４；（４８）配列番号８３及び８４の両方；（４９）配列番号８５；（５０）配列番号８６；又は（５１）配列番号８５及び８６の両方を含み、配列番号４９～５０、５５～５８、６３～６６、７１～７４、及び７９～８２は全て表４に定義される通りである。

【0054】

【表4-1】

【0055】

【表4-2】

【0056】

【表4-3】

【0057】

【表4-4】

【0058】

本発明の実施形態では、システイン置換ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、（ａ）配列番号５１（システイン置換ＬＶＬ修飾ＴＣＲのα鎖定常領域）；（ｂ）配列番号５２（システイン置換ＬＶＬ修飾ＴＣＲのβ鎖定常領域）；又は（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方を含む。

【0059】

また、本明細書に記載のＴＣＲのいずれかの機能的部分を含むポリペプチドが本発明によって提供される。用語「ポリペプチド」は、本明細書で使用するとき、オリゴペプチドを含み、そして、１つ以上のペプチド結合によって連結された一本鎖のアミノ酸を指す。

【0060】

本発明のポリペプチドに関して、機能的部分は、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳに特異的に結合する限り、該機能的部分がその一部であるＴＣＲの連続アミノ酸を含む任意の部分であってよい。用語「機能的部分」は、ＴＣＲに関して使用されるとき、本発明のＴＣＲの任意の部分又は断片であって、該部分又は断片がその一部であるＴＣＲ（親ＴＣＲ）の生物活性を保持している部分又は断片を指す。機能的部分は、例えば、親ＴＣＲと同様の程度、同一程度、又はより高程度、（例えば、本明細書に記載のＨＬＡクラスＩＩ分子のいずれかの枠内で）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳに特異的に結合するか又はがんを検出、治療、若しくは予防する能力を保持しているＴＣＲの部分を包含する。親ＴＣＲに関して、機能的部分は、例えば、親ＴＣＲの約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、又はそれ以上を構成し得る。

【0061】

機能的部分は、該部分のアミノ若しくはカルボキシ末端又は両末端に、親ＴＣＲのアミノ酸配列にはみられない追加のアミノ酸を含んでいてもよい。望ましくは、追加のアミノ酸は、例えば、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳに特異的に結合する及び／又はがんを検出する、がんを治療若しくは予防する能力を有する等の機能的部分の生物学的機能に干渉しない。より望ましくは、追加のアミノ酸は、親ＴＣＲの生物活性と比較して、生物活性を増強する。

【0062】

ポリペプチドは、本発明のＴＣＲのα鎖及びβ鎖のいずれか又は両方の機能的部分、例えば、本発明のＴＣＲのα鎖及び／又はβ鎖の可変領域（複数可）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む機能的部分を含み得る。本発明の実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１（４２７１ ＴＣＲ１のα鎖のＣＤＲ１）、配列番号２（４２７１ ＴＣＲ１のα鎖のＣＤＲ２）、配列番号３（４２７１ ＴＣＲ１のα鎖のＣＤＲ３）、配列番号４（４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖のＣＤＲ１）、配列番号５（４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖のＣＤＲ２）、配列番号６（４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖のＣＤＲ３）、配列番号１１（４２７１ ＴＣＲ２のα鎖のＣＤＲ１）、配列番号１２（４２７１ ＴＣＲ２のα鎖のＣＤＲ２）、配列番号１３（４２７１ ＴＣＲ２のα鎖のＣＤＲ３）、配列番号１４（４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖のＣＤＲ１）、配列番号１５（４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖のＣＤＲ２）、配列番号１６（４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖のＣＤＲ３）、配列番号２１（４２７１ ＴＣＲ３のα鎖のＣＤＲ１）、配列番号２２（４２７１ ＴＣＲ３のα鎖のＣＤＲ２）、配列番号２３（４２７１ ＴＣＲ３のα鎖のＣＤＲ３）、配列番号２４（４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖のＣＤＲ１）、配列番号２５（４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖のＣＤＲ２）、配列番号２６（４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖のＣＤＲ３）、配列番号３１（４２７１ ＴＣＲ４のα鎖のＣＤＲ１）、配列番号３２（４２７１ ＴＣＲ４のα鎖のＣＤＲ２）、配列番号３３（４２７１ ＴＣＲ４のα鎖のＣＤＲ３）、配列番号３４（４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖のＣＤＲ１）、配列番号３５（４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖のＣＤＲ２）、配列番号３６（４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖のＣＤＲ３）、又はそれらの組み合わせのアミノ酸配列を含み得る。これに関して、本発明のポリペプチドは、配列番号１～６、１１～１６、２１～２６、及び３１～３６からなる群から選択されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上を含み得る。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、（ａ）配列番号１～３の全て、（ｂ）配列番号４～６の全て、（ｃ）配列番号１～６の全て、（ｄ）配列番号１１～１３の全て、（ｅ）配列番号１４～１６の全て、（ｆ）配列番号１１～１６の全て、（ｇ）配列番号２１～２３の全て、（ｈ）配列番号２４～２６の全て、（ｉ）配列番号２１～２６の全て、（ｊ）配列番号３１～３３の全て、（ｋ）配列３４～３６の全て、又は（ｌ）配列３１～３６の全てのアミノ酸配列を含む。好ましくは、ポリペプチドは、（ｉ）配列番号１～６、（ｉｉ）配列番号１１～１６、（ｉｉｉ）配列番号２１～２６、又は（ｉｖ）配列番号３１～３６の全てのアミノ酸配列を含む。

【0063】

本発明の実施形態では、本発明のポリペプチドは、例えば、上記ＣＤＲ領域の組み合わせを含む本発明のＴＣＲの可変領域を含み得る。これに関して、ポリペプチドは、（ｉ）配列番号７（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ１のα鎖の可変領域の予測配列）；（ｉｉ）配列番号８（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖の可変領域の予測配列）；（ｉｉｉ）配列番号９（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ１のα鎖の可変領域）；（ｉｖ）配列番号１０（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖の可変領域）；（ｖ）配列番号１７（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ２のα鎖の可変領域の予測配列）；（ｖｉ）配列番号１８（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖の可変領域の予測配列）；（ｖｉｉ）配列番号１９（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ２のα鎖の可変領域）；（ｖｉｉｉ）配列番号２０（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖の可変領域）；（ｉｘ）配列番号２７（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ３のα鎖の可変領域の予測配列）；（ｘ）配列番号２８（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖の可変領域の予測配列）；（ｘｉ）配列番号２９（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ３のα鎖の可変領域）；（ｘｉｉ）配列番号３０（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖の可変領域）；（ｘｉｉｉ）配列番号３７（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ４のα鎖の可変領域の予測配列）；（ｘｉｖ）配列番号３８（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖の可変領域の予測配列）；（ｘｖ）配列番号３９（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ４のα鎖の可変領域）；（ｘｖｉ）配列番号４０（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖の可変領域）；（ｘｖｉｉ）配列番号７及び８の両方；（ｘｖｉｉｉ）配列番号９及び１０の両方；（ｘｉｘ）配列番号１７及び１８の両方；（ｘｘ）配列番号１９及び２０の両方；（ｘｘｉ）配列番号２７及び２８の両方；（ｘｘｉｉ）配列番号２９及び３０の両方；（ｘｘｉｉｉ）配列番号３７及び３８の両方；又は（ｘｘｉｖ）配列番号３９及び４０の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ポリペプチドは、（ｉ）配列番号７及び８の両方、（ｉｉ）配列番号９及び１０の両方、（ｉｉｉ）配列番号１７及び１８の両方、（ｉｖ）配列番号１９及び２０の両方、（ｖ）配列番号２７及び２８の両方、（ｖｉ）配列番号２９及び３０の両方、（ｖｉｉ）配列番号３７及び３８の両方、又は（ｖｉｉｉ）配列番号３９及び４０の両方のアミノ酸配列を含む。

【0064】

本発明の実施形態では、本発明のポリペプチドは、上記本発明のＴＣＲの定常領域を更に含み得る。これに関して、ポリペプチドは、配列番号５３（α鎖のＷＴマウス定常領域）、配列番号５４（β鎖のＷＴマウス定常領域）、配列番号４９（α鎖の置換マウス定常領域）、配列番号５０（β鎖の置換マウス定常領域）、配列番号５１（システイン置換ＬＶＬ修飾ＴＣＲのα鎖定常領域）、配列番号５２（システイン置換ＬＶＬ修飾ＴＣＲのβ鎖定常領域）、配列番号４９及び５０の両方、配列番号５１及び５２の両方、又は配列番号５３及び５４の両方のアミノ酸配列を更に含み得る。好ましくは、ポリペプチドは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載するＣＤＲ領域又は可変領域のいずれかと組み合わせて、配列番号４９及び５０の両方、配列番号５１及び５２の両方、又は配列番号５３及び５４の両方のアミノ酸配列を更に含む。本発明の実施形態では、ポリペプチドの配列番号４９及び５０の一方又は両方は、表２～４のいずれか１つに定義される通りである。

【0065】

本発明の実施形態では、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖又はβ鎖の全長を含み得る。これに関して、本発明のポリペプチドは、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、又は配列番号８６のアミノ酸配列を含み得る。あるいは、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載のＴＣＲの両鎖を含んでいてもよい。例えば、ポリペプチドは、配列番号５５～５６の両方、配列番号５７～５８の両方、配列番号５９～６０、配列番号６１～６２の両方、配列番号６３～６４の両方、配列番号６５～６６の両方、配列番号６７～６８の両方、配列番号６９～７０の両方、配列番号７１～７２の両方、配列番号７３～７４の両方、配列番号７５～７６の両方、配列番号７７～７８の両方、配列番号７９～８０の両方、配列番号８１～８２の両方、配列番号８３～８４の両方、又は配列番号８５～８６の両方を含み得る。

【0066】

例えば、本発明のポリペプチドは、（ａ）（ｉ）配列番号５５の１８４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号５５の２４８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号５５の２５０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号５５の２５１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５５のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ１のα鎖）；（ｂ）配列番号５６の１９９位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５６のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖）；（ｃ）配列番号５５及び５６の両方；（ｄ）（ｉ）配列番号５７の１６５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号５７の２２９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号５７の２３１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号５７の２３２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５７のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ１のα鎖の予測配列）；（ｅ）配列番号５８の１７５位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５８のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖の予測配列）；（ｆ）配列番号５７及び５８の両方；（ｇ）配列番号５９（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ１のα鎖）；（ｈ）配列番号６０（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖）；（ｉ）配列番号６１（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ１のα鎖の予測配列）；（ｊ）配列番号６２（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ１のβ鎖の予測配列）；（ｋ）配列番号５９及び６０の両方；（ｌ）配列番号６１及び６２の両方；（ｍ）（ｉ）配列番号６３の１８２位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号６３の２４６位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号６３の２４８位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号６３の２４９位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６３のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ２のα鎖）；（ｎ）配列番号６４の１９７位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号６４のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖）；（ｏ）配列番号６３及び６４の両方；（ｐ）（ｉ）配列番号６５の１６４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号６５の２２８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号６５の２３０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号６５の２３１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６５のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ２のα鎖の予測配列）；（ｑ）配列番号６６の１７３位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号６６のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖の予測配列）；（ｒ）配列番号６５及び６６の両方；（ｓ）配列番号６７（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ２のα鎖）；（ｔ）配列番号６８（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖）；（ｕ）配列番号６９（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ２のα鎖の予測配列）；（ｖ）配列番号７０（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ２のβ鎖の予測配列）；（ｗ）配列番号６７及び６８の両方；（ｘ）配列番号６９及び７０の両方；（ｙ）（ｉ）配列番号７１の１８７位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号７１の２５１位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号７１の２５３位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号７１の２５４位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７１のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ３のα鎖）；（ｚ）配列番号７２の１９１位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号７２のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖）；（ａａ）配列番号７１及び７２の両方；（ｂｂ）（ｉ）配列番号７３の１６８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号７３の２３２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号７３の２３４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号７３の２３５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７３のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ３のα鎖の予測配列）；（ｃｃ）配列番号７４の１７３位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号７４のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖の予測配列）；（ｄｄ）配列番号７３及び７４の両方；（ｅｅ）配列番号７５（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ３のα鎖）；（ｆｆ）配列番号７６（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖）；（ｇｇ）配列番号７７（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ３のα鎖の予測配列）；（ｈｈ）配列番号７８（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ３のβ鎖の予測配列）；（ｉｉ）配列番号７５及び７６の両方；（ｊｊ）配列番号７７及び７８の両方；（ｋｋ）（ｉ）配列番号７９の１７５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号７９の２３９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号７９の２４１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号７９の２４２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７９のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ４のα鎖）；（ｌｌ）配列番号８０の１９０位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号８０のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有する４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖）；（ｍｍ）配列番号７９及び８０の両方；（ｎｎ）（ｉ）配列番号８１の１５９位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号８１の２２３位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号８１の２２５位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号８１の２２６位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号８１のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ４のα鎖の予測配列）；（ｏｏ）配列番号８２の１７２位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号８２のアミノ酸配列（Ｎ末端シグナルペプチドを有しない４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖の予測配列）；（ｐｐ）配列番号８１及び８２の両方；（ｑｑ）配列番号８３（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ４のα鎖）；（ｒｒ）配列番号８４（Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖）；（ｓｓ）配列番号８５（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ４のα鎖の予測配列）；（ｔｔ）配列番号８６（Ｎ末端シグナル配列を有しないシステイン置換ＬＶＬ修飾４２７１ ＴＣＲ４のβ鎖の予測配列）；（ｕｕ）配列番号８３及び８４の両方；又は（ｖｖ）配列番号８５及び８６の両方のアミノ酸配列を含み得る。本発明の実施形態では、ポリペプチドの配列番号５５～５８、６３～６６、７１～７４、及び７９～８２のうちのいずれか１つ以上は、表２～４のいずれか１つに定義される通りである。

【0067】

本発明は更に、本明細書に記載のポリペプチドのうちの少なくとも１つを含むタンパク質を提供する。「タンパク質」とは、１本以上のポリペプチド鎖を含む分子を意味する。

【0068】

実施形態では、本発明のタンパク質は、（ａ）配列番号１～３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号４～６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（ｂ）配列番号１１～１３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１４～１６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（ｃ）配列番号２１～２３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号２４～２６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；又は（ｄ）配列番号３１～３３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３４～３６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含み得る。

【0069】

本発明の別の実施形態では、（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号８のアミノ酸配列を含む；（ｉｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む；（ｉｉｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む；（ｉｖ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む；（ｖ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む；（ｖｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む；（ｖｉｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む；又は（ｖｉｉｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。

【0070】

本発明のタンパク質は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する定常領域のいずれかを更に含み得る。これに関して、本発明の実施形態では、（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を更に含み得、第２のポリペプチド鎖は、配列番号５０のアミノ酸配列を更に含み得る；（ｉｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５１のアミノ酸配列を更に含み得、第２のポリペプチド鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列を更に含み得る；又は（ｉｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を更に含み得、第２のポリペプチド鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列を更に含み得る。本発明の実施形態では、タンパク質の配列番号４９及び５０の一方又は両方は、表２～４のいずれか１つに定義される通りである。

【0071】

本発明のタンパク質は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する完全長のα又はβ鎖を含み得る。これに関して、本発明の実施形態では、（ａ）第１のポリペプチド鎖は、（ｉ）配列番号５５の１８４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号５５の２４８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号５５の２５０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号５５の２５１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５５のアミノ酸配列を含む；（ｂ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５６の１９９位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５６のアミノ酸配列を含む；（ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、５６のアミノ酸配列を含む；（ｄ）第１のポリペプチド鎖は、（ｉ）配列番号５７の１６５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号５７の２２９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号５７の２３１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号５７の２３２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号５７のアミノ酸配列を含む；（ｅ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５８の１７５位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号５８のアミノ酸配列を含む；（ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、５８のアミノ酸配列を含む；（ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む；（ｈ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む；（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む；（ｊ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む；（ｋ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、６０のアミノ酸配列を含む；（ｌ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、６２のアミノ酸配列を含む；（ｍ）第１のポリペプチド鎖は、（ｉ）配列番号６３の１８２位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号６３の２４６位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号６３の２４８位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号６３の２４９位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６３のアミノ酸配列を含む；（ｎ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６４の１９７位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号６４のアミノ酸配列を含む；（ｏ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、６４のアミノ酸配列を含む；（ｐ）第１のポリペプチド鎖は、（ｉ）配列番号６５の１６４位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号６５の２２８位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号６５の２３０位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号６５の２３１位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号６５のアミノ酸配列を含む；（ｑ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６６の１７３位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号６６のアミノ酸配列を含む；（ｒ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、６６のアミノ酸配列を含む；（ｓ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６７のアミノ酸配列を含む；（ｔ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む；（ｕ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列を含む；（ｖ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む；（ｗ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、６８のアミノ酸配列を含む；（ｘ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、７０のアミノ酸配列を含む；（ｙ）第１のポリペプチド鎖は、（ｉ）配列番号７１の１８７位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号７１の２５１位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号７１の２５３位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号７１の２５４位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７１のアミノ酸配列を含む；（ｚ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号７２の１９１位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号７２のアミノ酸配列を含む；（ａａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、７２のアミノ酸配列を含む；（ｂｂ）第１のポリペプチド鎖は、（ｉ）配列番号７３の１６８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号７３の２３２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号７３の２３４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号７３の２３５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７３のアミノ酸配列を含む；（ｃｃ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号７４の１７３位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号７４のアミノ酸配列を含む；（ｄｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、７４のアミノ酸配列を含む；（ｅｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む；（ｆｆ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む；（ｇｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む；（ｈｈ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む；（ｉｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、７６のアミノ酸配列を含む；（ｊｊ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、７８のアミノ酸配列を含む；（ｋｋ）第１のポリペプチド鎖は、（ｉ）配列番号７９の１７５位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号７９の２３９位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号７９の２４１位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号７９の２４２位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号７９のアミノ酸配列を含む；（ｌｌ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号８０の１９０位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号８０のアミノ酸配列を含む；（ｍｍ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、８０のアミノ酸配列を含む；（ｎｎ）第１のポリペプチド鎖は、（ｉ）配列番号８１の１５９位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号８１の２２３位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号８１の２２５位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；かつ（ｉｖ）配列番号８１の２２６位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、配列番号８１のアミノ酸配列を含む；（ｏｏ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号８２の１７２位のＸがＳｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号８２のアミノ酸配列を含む；（ｐｐ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、８２のアミノ酸配列を含む；（ｑｑ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む；（ｒｒ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む；（ｓｓ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む；（ｔｔ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む；（ｕｕ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、８４のアミノ酸配列を含む；又は（ｖｖ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、８６のアミノ酸配列を含む。本発明の実施形態では、配列番号５５～５８、６３～６６、７１～７４、及び７９～８２のうちの１つ以上は、表２～４のいずれか１つに定義される通りである。

【0072】

本発明のタンパク質は、ＴＣＲであってよい。あるいは、例えばタンパク質がＴＣＲのα鎖及びβ鎖の両方のアミノ酸配列を含む１本のポリペプチド鎖を含む場合、又はタンパク質の第１の及び／若しくは第２のポリペプチド鎖（複数可）が他のアミノ酸配列、例えば免疫グロブリン若しくはその一部をコードしているアミノ酸配列を更に含む場合、本発明のタンパク質は、融合タンパク質であってもよい。これに関して、本発明はまた、少なくとも１つの他のポリペプチドと共に、本明細書に記載の本発明のポリペプチドのうちの少なくとも１つを含む融合タンパク質を提供する。他のポリペプチドは、融合タンパク質の別々のタンパク質として存在してもよく、又は本明細書に記載の本発明のポリペプチドのうちの１つとインフレームで（タンデムに）発現するポリペプチドとして存在してもよい。他のポリペプチドは、免疫グロブリン、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＭＨＣ分子、ＣＤ１分子、例えば、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ等が挙げられるがこれらに限定されない任意のペプチド性若しくはタンパク質性の分子又はこれらの一部をコードしていてよい。

【0073】

融合タンパク質は、１コピー以上の本発明のポリペプチド及び／又は１コピー以上の他のポリペプチドを含み得る。例えば、融合タンパク質は、１、２、３、４、５、又はそれ以上のコピーの本発明のポリペプチド及び／又は他のポリペプチドを含み得る。融合タンパク質を作製する好適な方法は、当技術分野において公知であり、例えば、組み換え法が挙げられる。

【0074】

本発明の幾つかの実施形態では、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、α鎖及びβ鎖を連結するリンカーペプチドを含む単一のタンパク質として発現し得る。これに関して、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、リンカーペプチドを更に含み得る。リンカーペプチドは、有利なことに、宿主細胞における組み換え体のＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質の発現を促進し得る。リンカーペプチドは、任意の好適なアミノ酸配列を含み得る。リンカーペプチドは、切断可能なリンカーペプチドであってもよい。例えば、リンカーペプチドは、ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むフリン－ＳＧＳＧ－Ｐ２Ａリンカーペプチドであってよい。リンカーペプチドを含むコンストラクトが宿主細胞によって発現されたら、リンカーペプチドを切断してもよく、その結果、分離されたα鎖及びβ鎖が得られる。本発明の実施形態では、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、完全長α鎖、完全長β鎖、及びα鎖とβ鎖との間に位置するリンカーペプチドを含むアミノ酸配列を含み得る。

【0075】

本発明のタンパク質は、本明細書に記載の本発明のポリペプチドのうちの少なくとも１つを含む、組み換え抗体又はその抗原結合部分であってよい。本明細書で使用するとき、「組み換え抗体」とは、本発明のポリペプチドのうちの少なくとも１つ、及び抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分を含む組み換え（例えば、遺伝的に操作された）タンパク質を指す。抗体のポリペプチド又はその抗原結合部分は、抗体の重鎖、軽鎖、重鎖若しくは軽鎖の可変領域若しくは定常領域、単鎖可変領域（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ、Ｆａｂ、若しくはＦ（ａｂ）２’の断片等であってよい。抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分は、組み換え抗体の別々のポリペプチドとして存在してよい。あるいは、抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分は、本発明のポリペプチドとインフレームで（タンデムに）発現するポリペプチドとして存在してもよい。抗体のポリペプチド又はその抗原結合部分は、本明細書に記載の抗体及び抗体断片のいずれかを含む、任意の抗体又は任意の抗体断片のポリペプチドであってよい。

【0076】

本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の機能的バリアントは、本発明の範囲に含まれる。用語「機能的バリアント」とは、本明細書で使用するとき、親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に対して実質的な又は著しい配列の同一性又は類似性を有するＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を指し、該機能的バリアントは、該機能的バリアントがそのバリアントであるＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の生物活性を保持している。機能的バリアントは、例えば、親のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質と同様の程度、同一程度、又はより高程度、親ＴＣＲが抗原特異性を有するか又は親のポリペプチド若しくはタンパク質が特異的に結合するＧ１２Ｄ ＲＡＳに特異的に結合する能力を保持している、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質）のバリアントを包含する。親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に関して、機能的バリアントは、例えば、それぞれ親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に対してアミノ酸配列が少なくとも約３０％、約５０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又はそれ以上同一であってよい。

【0077】

機能的バリアントは、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。保存的アミノ酸置換は、当技術分野において公知であり、特定の物理的及び／又は化学的特性を有するあるアミノ酸が、同じ化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸に交換されるアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸（例えば、Ａｓｐ又はＧｌｕ）による置換、非極性側鎖を有するアミノ酸の、非極性側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌ等）による置換、塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ等）による置換、極性側鎖を有するアミノ酸の、極性側鎖を有する別のアミノ酸（Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ等）による置換等であってよい。

【0078】

あるいは又は更に、機能的バリアントは、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換が機能的バリアントの生物活性に干渉もせず、阻害もしないことが好ましい。好ましくは、非保存的アミノ酸置換は機能的バリアントの生物活性を増強し、その結果、機能的バリアントの生物活性は、親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質と比べて増大する。

【0079】

ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、本明細書に記載の指定のアミノ酸配列（複数可）から本質的になっていてよく、その結果、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の他の構成要素、例えば他のアミノ酸が、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の生物活性を実質的に変化させることがない。この点に関して、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、例えば、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号５５及び５６の両方、配列番号５７及び５８の両方、配列番号５９及び６０の両方、配列番号６１及び６２の両方、配列番号６３及び６４の両方、配列番号６５及び６６の両方、配列番号６７及び６８の両方、配列番号６９及び７０の両方、配列番号７１及び７２の両方、配列番号７３及び７４の両方、配列番号７５及び７６の両方、配列番号７７及び７８の両方、配列番号７９及び８０の両方、配列番号８１及び８２の両方、配列番号８３及び８４の両方、又は配列番号８５及び８６の両方のアミノ酸配列から本質的になっていてよい。また、例えば、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、（ｉ）配列番号７、（ｉｉ）配列番号８、（ｉｉｉ）配列番号９、（ｉｖ）配列番号１０、（ｖ）配列番号１７、（ｖｉ）配列番号１８、（ｖｉｉ）配列番号１９、（ｖｉｉｉ）配列番号２０、（ｉｘ）配列番号２７、（ｘ）配列番号２８、（ｘｉ）配列番号２９、（ｘｉｉ）配列番号３０、（ｘｉｉｉ）配列番号３７、（ｘｉｖ）配列番号３８、（ｘｖ）配列番号３９、（ｘｖｉ）配列番号４０、（ｘｖｉｉ）配列番号７及び８の両方、（ｘｖｉｉｉ）配列番号９及び１０の両方、（ｘｉｘ）配列番号１７及び１８の両方、（ｘｘ）配列番号１９及び２０の両方、（ｘｘｉ）配列番号２７及び２８の両方、（ｘｘｉｉ）配列番号２９及び３０の両方、（ｘｘｉｉｉ）配列番号３７及び３８の両方、又は（ｘｘｉｖ）配列番号３９及び４０の両方のアミノ酸配列（複数可）から本質的になっていてよい。更に、発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、（ａ）配列番号１～３の全て、（ｂ）配列番号４～６の全て、（ｃ）配列番号１～６の全て、（ｄ）配列番号１１～１３の全て、（ｅ）配列番号１４～１６の全て、（ｆ）配列番号１１～１６の全て、（ｇ）配列番号２１～２３の全て、（ｈ）配列番号２４～２６の全て、（ｉ）配列番号２１～２６の全て、（ｊ）配列番号３１～３３の全て、（ｋ）配列３４～３６の全て、又は（ｌ）配列３１～３６の全てのアミノ酸配列から本質的になっていてよい。

【0080】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、任意の長さであってよい、すなわち、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質が、その生物活性、例えば、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳに特異的に結合する；哺乳類におけるがんを検出する；又は哺乳類におけるがんを治療若しくは予防する能力等を保持している限り、任意の数のアミノ酸を含んでいてよい。例えば、ポリペプチドは、約５０～約５０００アミノ酸長の範囲、例えば、約５０、約７０、約７５、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００又はそれ以上のアミノ酸長であってよい。これに関して、本発明のポリペプチドは、オリゴペプチドも含む。

【0081】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、１つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含んでいてもよい。このような合成アミノ酸は、当技術分野において公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－及びトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリンβ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、及びα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンが挙げられる。

【0082】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質を、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ－アシル化、例えばジスルフィド架橋を介して環化、又は酸付加塩に変換、及び／又は任意で二量体化若しくは多量体化、又はコンジュゲートしてもよい。

【0083】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質は、当技術分野において公知の方法、例えば、デノボ合成によって得ることができる。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組み換え法を使用し、本明細書に記載の核酸を使用して組み換え的に生成することができる。例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（２０１２）を参照。あるいは、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質は、様々な商業実体のいずれかによって合成されてもよい。これに関して、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、合成であってもよく、組み換え体であってもよく、単離されていてもよく、及び／又は精製されていてもよい。本発明の実施形態は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する核酸又はベクターのいずれかによってコードされている単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を提供する。本発明の別の実施形態は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する核酸又はベクターのいずれかが細胞内で発現した結果得られる、単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を提供する。本発明の更に別の実施形態は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかを生成する方法であって、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質が生成されるように、本明細書に記載の宿主細胞又は宿主細胞の集団のいずれかを培養することを含む方法を提供する。

【0084】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（これらの機能的部分又はバリアントのいずれかを含む）、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、宿主細胞の集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分のいずれかを含むコンジュゲート、例えばバイオコンジュゲートも本発明の範囲に含まれる。コンジュゲート、及び一般にコンジュゲートを合成する方法は、当技術分野において公知である。

【0085】

本発明の実施形態は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。「核酸」は、本明細書で使用するとき、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、及び「核酸分子」を含み、一般的に、ＤＮＡ又はＲＮＡのポリマーを意味し、これらは、一本鎖であっても二本鎖であってもよく、天然の、非天然の、又は改変されたヌクレオチドを含有していてもよく、そして、改変されていないオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間にみられるホスホジエステルの代わりに天然の、非天然の、又は改変されたヌクレオチド間結合、例えばホスホロアミデート結合又はホスホロチオエート結合を含有していてもよい。実施形態では、核酸は、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を含む。核酸は、任意の挿入、欠失、逆位、及び／又は置換を含まないことが一般に好ましい。しかし、幾つかの例では、本明細書で論じた通り、核酸が１つ以上の挿入、欠失、逆位、及び／又は置換を含むことが好適である場合もある。

【0086】

好ましくは、本発明の核酸は、組み換え体である。本明細書で使用するとき、用語「組み換え体」とは、（ｉ）天然若しくは合成の核酸セグメントを生細胞で複製可能な核酸分子に連結させることによって生細胞の外部で構築される分子、又は（ｉｉ）上記（ｉ）に記載されているものの複製によって得られる分子を指す。本明細書における目的のために、複製は、インビトロ複製であってもインビボ複製であってもよい。

【0087】

本発明の実施形態では、核酸は、配列番号９５（切断可能なリンカーペプチドによって分離された４２７１ ＴＣＲ１のα鎖及びβ鎖の両方をコードしている）、配列番号９６（切断可能なリンカーペプチドによって分離された４２７１ ＴＣＲ２のα鎖及びβ鎖の両方をコードしている）、配列番号９７（切断可能なリンカーペプチドによって分離された４２７１ ＴＣＲ３のα鎖及びβ鎖の両方をコードしている）、又は配列番号９８（切断可能なリンカーペプチドによって分離された４２７１ ＴＣＲ４のα鎖及びβ鎖の両方をコードしている）のヌクレオチド配列を含む。

【0088】

核酸は、当技術分野において公知の手順を使用して、化学合成及び／又は酵素ライゲーション反応に基づいて構築され得る。例えば、Ｇｒｅｅｎ及びＳａｍｂｒｏｏｋら、上掲を参照。例えば、核酸は、天然に存在するヌクレオチド、又は分子の生物学的安定性を増大させるか若しくはハイブリダイゼーションの際に形成される二本鎖の物理的安定性を増大させるために設計された様々に改変されたヌクレオチド（例えば、ホスホロチオエート誘導体及びアクリジン置換ヌクレオチド）を使用して、化学的に合成することができる。核酸を作製するために使用することができる改変ヌクレオチドの例としては、５－フルオロウラシル、５－ブロモウラシル、５－クロロウラシル、５－ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４－アセチルシトシン、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β－Ｄ－ガラクトシルキュェオシン、イノシン、Ｎ^６－イソペンテニルアデニン、１－メチルグアニン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアニン、２－メチルアデニン、２－メチルグアニン、３－メチルシトシン、５－メチルシトシン、Ｎ^６－置換アデニン、７－メチルグアニン、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メトキシアミノメチル－２－チオウラシル、β－Ｄ－マンノシルキュェオシン、５’－メトキシカルボキシメチルウラシル、５－メトキシウラシル、２－メチルチオ－Ｎ^６－イソペンテニルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、プソイドウラシル、キュェオシン、２－チオシトシン、５－メチル－２－チオウラシル、２－チオウラシル、４－チオウラシル、５－メチルウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、３－（３－アミノ－３－Ｎ－２－カルボキシプロピル）ウラシル、及び２，６－ジアミノプリンが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、本発明の核酸のうちの１つ以上は、様々な商業実体のいずれかから購入することもできる。

【0089】

核酸は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかをコードしている任意のヌクレオチド配列を含み得る。本発明の実施形態では、核酸は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかをコードしている、コドン最適化されたヌクレオチド配列を含む。任意の特定の理論又は機序に縛られるものではないが、ヌクレオチド配列のコドン最適化は、ｍＲＮＡ転写物の翻訳効率を増大させると考えられる。ヌクレオチド配列のコドン最適化は、ネイティブなコドンを、同じアミノ酸をコードしているが細胞内でより容易に利用可能なｔＲＮＡによって翻訳され得る別のコドンで置換し、それによって、翻訳効率を増大させることを伴い得る。また、ヌクレオチド配列の最適化は、翻訳に干渉するｍＲＮＡの二次構造を低減し、それによって、翻訳効率を増大させることもできる。

【0090】

また、本発明は、本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列、又は本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。

【0091】

ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、好ましくは、高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。「高ストリンジェントな条件」とは、ヌクレオチド配列が、非特異的ハイブリダイゼーションよりも検出可能に多い量で標的配列（本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列）に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェントな条件は、正確な相補的配列を有するポリヌクレオチド又は幾つかの散在している不一致しか含有していないものを、該ヌクレオチド配列に一致している幾つかの小さな領域（例えば、３～１０塩基）を偶然有するランダム配列と識別する条件を含む。このような相補的な小さな領域は、１４～１７塩基又はそれ以上の完全長相補体よりも容易に融解するので、高ストリンジェントなハイブリダイゼーションによって容易に識別可能になる。比較的高ストリンジェントな条件は、例えば、約０．０２～０．１Ｍ ＮａＣｌ又は等価物、約５０～７０℃の温度によって提供されるもの等の低塩及び／又は高温条件を含む。このような高ストリンジェントな条件は、ヌクレオチド配列とテンプレート又は標的鎖との間の（もし存在するとしても）わずかな不一致しか許容せず、本発明のＴＣＲのいずれかの発現を検出するのに特に好適である。一般的に、漸増量のホルムアミドを添加することによって、条件をよりストリンジェントにすることができると理解される。

【0092】

本発明の実施形態は、本明細書に記載の核酸のいずれかと少なくとも約７０％以上、例えば、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。これに関して、核酸は、本明細書に記載のヌクレオチド配列のいずれかから本質的になっていてよい。

【0093】

本発明の実施形態はまた、５’から３’に向かって、第１の核酸配列及び第２のヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸であって、該第１及び第２のヌクレオチド配列が、それぞれ、配列番号７及び８；８及び７；９及び１０；１０及び９；１７及び１８；１８及び１７；１９及び２０；２０及び１９；２７及び２８；２８及び２７；２９及び３０；３０及び２９；３７及び３８；３８及び３７；３９及び４０；４０及び３９；５５及び５６；５６及び５５；５７及び５８；５８及び５７；５９及び６０；６０及び５９；６１及び６２；６２及び６１；６３及び６４；６４及び６３；６５及び６６；６６及び６５；６７及び６８；６８及び６７；６９及び７０；７０及び６９；７１及び７２；７２及び７１；７３及び７４；７４及び７３；７５及び７６；７６及び７５；７７及び７８；７８及び７７；７９及び８０；８０及び７９；８１及び８２；８２及び８１；８３及び８４；８４及び８３；８５及び８６；又は８６及び８５のアミノ配列をコードしている核酸を提供する。

【0094】

本発明の実施形態では、単離又は精製された核酸は、第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列との間に介在する第３のヌクレオチド配列を更に含み、該第３のヌクレオチド配列は、切断可能なリンカーペプチドをコードしている。本発明の実施形態では、切断可能なリンカーペプチドは、ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含む。

【0095】

本発明の核酸は、組み換え発現ベクターに組み込むことができる。これに関して、本発明は、本発明の核酸のいずれかを含む組み換え発現ベクターを提供する。本発明の実施形態では、組み換え発現ベクターは、α鎖、β鎖、及びリンカーペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含む。

【0096】

本明細書における目的のために、用語「組み換え発現ベクター」は、ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含み、宿主細胞内で該ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを発現させるのに十分な条件下でベクターを該細胞と接触させたときに該細胞が該ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを発現できるようになる、遺伝的に改変されたオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドのコンストラクトを意味する。本発明のベクターは、全体としては天然には存在しない。しかし、ベクターの一部が天然に存在していてもよい。本発明の組み換え発現ベクターは、ＤＮＡ及びＲＮＡが挙げられるがこれらに限定されない任意の種類のヌクレオチドを含んでいてよく、該ＤＮＡ及びＲＮＡは、一本鎖であっても二本鎖であってもよく、合成されても天然源から部分的に入手されてもよく、天然の、非天然の、又は改変されたヌクレオチドを含有していてもよい。組み換え発現ベクターは、天然に存在するヌクレオチド間結合、天然には存在しないヌクレオチド間結合、又は両方の種類の結合を含んでいてよい。好ましくは、天然には存在しないか又は改変されたヌクレオチド又はヌクレオチド間結合は、ベクターの転写も複製も妨げない。

【0097】

本発明の組み換え発現ベクターは、任意の好適な組み換え発現ベクターであってよく、任意の好適な宿主細胞を形質転換又はトランスフェクトするために使用することができる。好適なベクターとしては、プラスミド及びウイルス等、伝播及び増殖用、若しくは発現用、又は両方のために設計されたものが挙げられる。ベクターは、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、及びｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）からなる群から選択され得る。λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、λＥＭＢＬ４、及びλＮＭ１１４９等のバクテリオファージベクターを使用してもよい。植物発現ベクターの例としては、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１、及びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。動物発現ベクターの例としては、ｐＥＵＫ－Ｃｌ、ｐＭＡＭ、及びｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。好ましくは、組み換え発現ベクターは、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクターである。特に好ましい実施形態では、組み換え発現ベクターは、ＭＳＧＶ１ベクターである。本発明の実施形態では、組換え発現ベクターは、トランスポゾン又はレンチウイルスベクターである。

【0098】

本発明の組み換え発現ベクターは、例えば、Ｇｒｅｅｎ及びＳａｍｂｒｏｏｋら、上掲に記載されている標準的な組み換えＤＮＡ技術を使用して調製することができる。環状又は線状である発現ベクターのコンストラクトは、原核又は真核の宿主細胞において機能する複製系を含有するように調製することができる。複製系は、例えば、ＣｏｌＥｌ、２μプラスミド、λ、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス等に由来していてよい。

【0099】

望ましくは、組み換え発現ベクターは、調節配列、例えば、必要に応じて、そして、ベクターがＤＮＡベースであるかＲＮＡベースであるかを考慮して、ベクターが導入される宿主細胞の種類（例えば、細菌、真菌、植物、又は動物）に特異的な転写及び翻訳の開始及び終止のコドンを含む。

【0100】

組み換え発現ベクターは、形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞の選別を可能にする１つ以上のマーカー遺伝子を含んでいてよい。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性、例えば抗生物質、重金属等に対する耐性、原栄養性を与えるための栄養要求性宿主における補完等を含む。本発明の発現ベクターに好適なマーカー遺伝子は、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、及びアンピシリン耐性遺伝子を含む。

【0101】

組み換え発現ベクターは、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードしているヌクレオチド配列に、又はＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードしているヌクレオチド配列に相補的であるか若しくはハイブリダイズするヌクレオチド配列に動作可能に連結しているネイティブ又は非ネイティブのプロモータを含んでいてよい。例えば、強い、弱い、誘導性、組織特異的、及び発生段階特異的なプロモータの選別は、当業者の技能の範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列とプロモータとの組み合わせも当業者の技能の範囲内である。プロモータは、非ウイルスプロモータであってもよく、ウイルスプロモータ、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモータ、ＳＶ４０プロモータ、ＲＳＶプロモータ、及びマウス幹細胞ウイルスの末端反復配列にみられるプロモータであってもよい。

【0102】

本発明の組み換え発現ベクターは、一過的発現用、安定的発現用、又は両方のために設計することができる。また、組み換え発現ベクターは、構成的発現用又は誘導性発現用に作製することができる。

【0103】

更に、組み換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製してもよい。本明細書で使用するとき、用語「自殺遺伝子」とは、自殺遺伝子を発現している細胞を死に至らしめる遺伝子を指す。自殺遺伝子は、該遺伝子が発現する細胞に対して剤、例えば薬物に対する感受性を付与し、そして、該細胞が該剤と接触したとき又は該剤に曝露されたときに該細胞を死に至らしめる遺伝子であってよい。自殺遺伝子は、当技術分野において公知であり、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ニトロレダクターゼ、及び誘導性カスパーゼ９遺伝子系を含む。

【0104】

本発明の別の実施形態は、更に、本明細書に記載の核酸又は組み換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を提供する。本明細書で使用するとき、用語「宿主細胞」とは、本発明の組み換え発現ベクターを含有し得る任意の種類の細胞を指す。宿主細胞は、真核細胞、例えば、植物、動物、真菌、又は藻類であってもよく、原核細胞、例えば、細菌又は原生動物であってもよい。宿主細胞は、培養細胞であってもよく、初代細胞、すなわち、生物、例えばヒトから直接単離された細胞であってもよい。宿主細胞は、接着細胞であってもよく、懸濁細胞、すなわち、懸濁液中で成長する細胞であってもよい。好適な宿主細胞は、当技術分野において公知であり、例えば、ＤＨ５α大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルＶＥＲＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞等が挙げられる。組み換え発現ベクターを増幅又は複製する目的のために、宿主細胞は、好ましくは、原核細胞、例えばＤＨ５α細胞である。組み換え体のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を生成する目的のために、宿主細胞は、好ましくは、哺乳類細胞である。最も好ましくは、宿主細胞は、ヒト細胞である。宿主細胞は、任意の細胞型であってよく、任意の種類の組織を起源としていてよく、任意の発生段階であってよいが、宿主細胞は、好ましくは、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）又は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。より好ましくは、宿主細胞は、Ｔ細胞である。本発明の実施形態では、宿主細胞は、ヒトリンパ球である。本発明の別の実施形態では、宿主細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される。本発明の更に別の実施形態は、ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ（配列番号８８）のペプチドに対して抗原特異性を有するＴＣＲを発現する宿主細胞を生成する方法であって、本明細書に記載のベクターのいずれかの該細胞への導入を可能にする条件下で、該細胞を該ベクターと接触させることを含む方法を提供する。

【0105】

本明細書における目的のために、Ｔ細胞は、培養Ｔ細胞、例えば初代Ｔ細胞、又は培養Ｔ細胞株由来のＴ細胞、例えばＪｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１等、又は哺乳類から得られたＴ細胞等の任意のＴ細胞であってよい。哺乳類から得られる場合、Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、又は他の組織若しくは流体を含むがこれらに限定されない多数の供給源から得ることができる。また、Ｔ細胞は、濃縮又は精製されていてもよい。好ましくは、Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。Ｔ細胞は、任意の種類のＴ細胞であってよく、任意の発生段階であってよく、ＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋二重陽性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞、例えばＴｈ_１及びＴｈ_２細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、メモリＴ細胞（例えば、セントラルメモリＴ細胞及びエフェクタメモリＴ細胞）、ナイーブＴ細胞等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0106】

また、本明細書に記載の少なくとも１つの宿主細胞を含む細胞の集団が本発明によって提供される。細胞の集団は、組み換え発現ベクターのいずれも含まない少なくとも１つの他の細胞、例えば宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）、又はＴ細胞以外の細胞、例えばＢ細胞、マクロファージ、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋肉細胞、脳細胞等に加えて、記載される組み換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を含む不均質な集団であってよい。あるいは、細胞の集団は、組み換え発現ベクターを含む（例えば、から本質的になる）宿主細胞を主に含む、実質的に均質な集団であってもよい。また、集団は、該集団の全ての細胞が、組み換え発現ベクターを含む１つの宿主細胞のクローンであり、その結果、該集団の全ての細胞が組み換え発現ベクターを含む、細胞のクローン集団であってもよい。本発明の一実施形態では、細胞の集団は、本明細書に記載の組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。

【0107】

本発明の実施形態では、集団内の細胞数を急速に拡大させることができる。Ｔ細胞数の拡大は、例えば、米国特許第８，０３４，３３４号、同第８，３８３，０９９号、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３号、Ｄｕｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２６：３３２－４２（２００３）、及びＲｉｄｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１２８：１８９－２０１（１９９０）に記載されている通り、当技術分野において公知の多数の方法のいずれかによって実現することができる。実施形態では、Ｔ細胞数の拡大は、該Ｔ細胞をＯＫＴ３抗体、ＩＬ－２、及びフィーダーＰＢＭＣ（例えば、放射線照射された同種ＰＢＭＣ）と共に培養することによって実行される。

【0108】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）は、単離及び／又は精製されてもよい。用語「単離された」は、本明細書で使用するとき、その天然環境から取り出されていることを意味する。用語「精製された」は、本明細書で使用するとき、純度が増大していることを意味し、「純度」は相対的な用語であり、必ずしも絶対純度と解釈される訳ではない。例えば、純度は、少なくとも約５０％であってよく、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９５％超であってもよく、約１００％であってもよい。

【0109】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）（以後、これらを全てまとめて「本発明のＴＣＲ材料」と称する）は、医薬組成物等の組成物に製剤化してもよい。これに関して、本発明は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）のいずれかと、薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明のＴＣＲ材料のいずれかを含有する本発明の医薬組成物は、１つを超える本発明のＴＣＲ材料、例えば、ポリペプチド及び核酸又は２つ以上の異なるＴＣＲを含んでいてもよい。あるいは、医薬組成物は、別の薬学的活性剤（複数可）又は薬物（複数可）、例えば、化学療法剤、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン等と組み合わせて、本発明のＴＣＲ材料を含み得る。

【0110】

好ましくは、担体は、薬学的に許容し得る担体である。医薬組成物に関して、担体は、検討中の特定の本発明のＴＣＲ材料に従来使用されているもののいずれかであってよい。投与可能な組成物を調製する方法は、当業者に公知であるか又は明らかであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２^ｎｄ Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０１２）により詳細に記載されている。薬学的に許容し得る担体は、使用条件下で有害な副作用も毒性も有しないものであることが好ましい。

【0111】

担体の選択は、具体的な本発明のＴＣＲ材料によって、並びに本発明のＴＣＲ材料を投与するために使用される具体的な方法によって部分的に決定される。従って、本発明の医薬組成物の様々な好適な製剤が存在する。好適な製剤は、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、腫瘍内、又は腹腔内に投与するもののいずれかを含み得る。１つを超える経路を使用して本発明のＴＣＲ材料を投与してよく、特定の例では、特定の経路が別の経路よりも即時かつより有効な応答を提供し得る。

【0112】

好ましくは、本発明のＴＣＲ材料は、例えば静脈内に注射することによって投与される。本発明のＴＣＲ材料が、本発明のＴＣＲを発現している宿主細胞（又はその集団）である場合、注射用の細胞のための薬学的に許容し得る担体は、任意の等張担体、例えば、通常生理食塩水（水中約０．９０％ｗ／ｖ ＮａＣｌ、水中約３００ｍＯｓｍ／Ｌ ＮａＣｌ、又は水１リットルあたり約９．０ｇ ＮａＣｌ）、ＮＯＲＭＯＳＯＬ Ｒ電解質溶液（Ａｂｂｏｔｔ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）、ＰＬＡＳＭＡ－ＬＹＴＥ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、水中約５％デキストロース、又は乳酸リンゲル液等を含んでいてよい。実施形態では、薬学的に許容し得る担体にヒト血清アルブメン（ａｌｂｕｍｅｎ）を補給する。

【0113】

本発明の目的のために、投与される本発明のＴＣＲ材料の量又は用量（例えば、本発明のＴＣＲ材料が１つ以上の細胞である場合は細胞数）は、適切な時間枠にわたって対象又は動物において効果、例えば治療的又は予防的応答をもたらすのに十分でなければならない。例えば、本発明のＴＣＲ材料の用量は、投与時点から約２時間以上、例えば、１２～２４時間又はそれ以上の期間、がん抗原（例えば、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ）に結合するか又はがんを検出、治療、若しくは予防するのに十分でなければならない。特定の実施形態では、期間は更に長くてもよい。用量は、具体的な本発明のＴＣＲ材料の有効性及び動物（例えば、ヒト）の状態、並びに治療される動物（例えば、ヒト）の体重によって決定される。

【0114】

投与される用量を決定するための多くのアッセイが、当技術分野において公知である。本発明の目的のために、例えば、それぞれ異なる用量のＴ細胞を与えた哺乳類のセットの中で、所与の用量の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を発現しているＴ細胞を哺乳類に投与した際にこのようなＴ細胞によって標的細胞が溶解する又はＩＦＮ－γが分泌される程度を比較することを含むアッセイを使用して、哺乳類に投与する開始用量を決定することができる。特定の用量を投与した際に標的細胞が溶解する又はＩＦＮ－γが分泌される程度は、当技術分野において公知の方法によってアッセイすることができる。

【0115】

本発明のＴＣＲ材料の用量は、具体的な本発明のＴＣＲ材料の投与に付随し得る任意の有害な副作用の存在、性質、及び程度によっても決定される。典型的には、主治医は、様々な要因、例えば、年齢、体重、全体的な健康状態、食生活、性別、投与される本発明のＴＣＲ材料、投与経路、及び治療されるがんの重症度を考慮して、各個々の患者を治療するための本発明のＴＣＲ材料の投与量を決定する。本発明のＴＣＲ材料が細胞の集団である実施形態では、注入１回あたりの投与される細胞数は、例えば、約１×１０^６～約１×１０^１２個又はそれ以上の細胞で変動し得る。特定の実施形態では、１×１０^６個未満の細胞を投与してもよい。

【0116】

当業者であれば、本発明のＴＣＲ材料を任意の数の方法で修飾してよく、その結果、該修飾を通して本発明のＴＣＲ材料の治療又は予防の有効性が増大することを容易に理解するであろう。例えば、本発明のＴＣＲ材料を、直接又は架橋を介して間接的に化学療法剤にコンジュゲートしてもよい。化合物の化学療法剤へのコンジュゲートの実施は、当技術分野において公知である。当業者は、架橋及び／又は化学療法剤が本発明のＴＣＲ材料に結合しても本発明のＴＣＲ材料の機能、すなわち、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳに結合する能力にもがんを検出、治療、若しくは予防する能力にも干渉しない限り、本発明のＴＣＲ材料の機能に必須ではない本発明のＴＣＲ材料の部位が、架橋及び／又は化学療法剤を結合させるのに好適な部位であることを認識する。

【0117】

本発明の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、及び細胞の集団は、がんを治療又は予防する方法において使用できることが企図される。特定の理論に縛られるものではないが、本発明のＴＣＲは、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳに特異的に結合し、その結果、ＴＣＲ（又は関連する本発明のポリペプチド若しくはタンパク質）は、細胞によって発現されたとき、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳを発現している標的細胞に対する免疫応答を媒介することができると考えられる。これに関して、本発明の実施形態は、哺乳類におけるがんを治療又は予防する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしている組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団を、哺乳類におけるがんを治療又は予防するのに有効な量、該哺乳類に投与することを含む方法を提供する。

【0118】

本発明の実施形態は、哺乳類においてがんに対する免疫応答を誘導する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしている組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団のいずれかを、哺乳類においてがんに対する免疫応答を誘導するのに有効な量、該哺乳類に投与することを含む方法を提供する。

【0119】

本発明の実施形態は、哺乳類におけるがんの治療又は予防において使用するための、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしている組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団のいずれかを提供する。

【0120】

本発明の実施形態は、哺乳類におけるがんに対する免疫応答の誘導において使用するための、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしている組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団のいずれかを提供する。

【0121】

用語「治療する」及び「予防する」、並びにそれから派生する語は、本明細書で使用するとき、必ずしも１００％、すなわち、完全な治療又は予防を意味するものではない。どちらかといえば、当業者が潜在的な利点又は治療効果を有すると認識する、様々な程度の治療又は予防が存在する。これに関して、本発明の方法は、哺乳類におけるがんの任意の量の任意のレベルの治療又は予防を提供することができる。更に、本発明の方法によって提供される治療又は予防は、治療又は予防されるがんの１つ以上の病態又は症状の治療又は予防を含み得る。例えば、治療又は予防は、腫瘍の退縮を促進することを含み得る。また、本明細書における目的のために、「予防」は、がん又はその症状若しくは病態の発生を遅らせることを包含し得る。あるいは又は更に、「予防」は、がん又はその症状若しくは病態の再発を防ぐ又は遅らせることを包含し得る。

【0122】

また、哺乳類におけるがんの存在を検出する方法も提供される。方法は、（ｉ）本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、又は医薬組成物のいずれかを、哺乳類由来の１つ以上の細胞を含むサンプルと接触させ、それによって、複合体を形成させることと、（ｉｉ）該複合体を検出することとを含み、該複合体の検出が、哺乳類におけるがんの存在を示す。

【0123】

哺乳類におけるがんを検出する本発明の方法に関して、細胞のサンプルは、全細胞、その溶解物、又は全細胞溶解物の画分、例えば、核若しくは細胞質の画分、全タンパク質画分、又は核酸画分を含むサンプルであってよい。

【0124】

がんを検出する本発明の方法の目的のために、接触は、哺乳類に対してインビトロ又はインビボで行ってよい。好ましくは、インビトロで接触させる。

【0125】

また、複合体の検出は、当技術分野において公知の任意の数の方法を通して行うことができる。例えば、本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、又は細胞の集団を、検出可能な標識、例えば、放射性同位体、フルオロフォア（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、及び元素粒子（例えば、金粒子）等で標識してよい。

【0126】

宿主細胞又は細胞の集団が投与される本発明の方法の目的のために、細胞は、哺乳類に対して同種又は自己である細胞であってよい。好ましくは、細胞は、哺乳類に対して自己である。

【0127】

本発明の方法に関して、がんは、急性リンパ球性がん、急性骨髄性白血病、胞巣状横紋筋肉腫、骨がん、脳がん、乳がん、肛門、肛門管、又は肛門直腸のがん、眼のがん、肝内胆管のがん、関節のがん、頸部、胆嚢、又は胸膜のがん、鼻、鼻腔、又は中耳のがん、口腔のがん、膣のがん、外陰部のがん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、子宮頸がん、消化管カルチノイド腫瘍、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、腎臓がん、喉頭がん、肝臓がん、肺がん、悪性中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、中咽頭のがん、卵巣がん、陰茎のがん、膵臓がん、腹膜、網、及び腸間膜のがん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、腎がん、皮膚がん、小腸がん、軟組織がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮のがん、尿管がん、及び膀胱がんのいずれかを含む任意のがんであってよい。好ましいがんは、膵臓、結腸直腸、肺、子宮内膜、卵巣、又は前立腺のがんである。好ましくは、肺がんは肺腺がんであり、卵巣がんは上皮性卵巣がんであり、膵臓がんは膵臓腺がんである。本発明の実施形態では、がんは、１２位のグリシンがアスパラギン酸で置換されている変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列を発現し、該変異型ヒトＲＡＳアミノ酸配列は、変異型ヒトＫＲＡＳ、変異型ヒトＨＲＡＳ、又は変異型ヒトＮＲＡＳのアミノ酸配列であり、１２位は、それぞれＷＴヒトＫＲＡＳ、ＷＴヒトＨＲＡＳ、又はＷＴヒトＮＲＡＳタンパク質を参照することによって定義される。がんが発現する変異型ヒトＫＲＡＳ、変異型ヒトＨＲＡＳ、及び変異型ヒトＮＲＡＳは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する通りであってよい。

【0128】

本発明の方法において言及される哺乳類は、任意の哺乳類であってよい。本明細書で使用するとき、用語「哺乳類」とは、げっ歯目の哺乳類、例えばマウス及びハムスター、並びにウサギ目の哺乳類、例えばウサギを含むがこれらに限定されない任意の哺乳類を指す。哺乳類は、ネコ及びイヌを含む食肉目の哺乳類であることが好ましい。哺乳類は、ウシ及びブタを含む偶蹄目、又はウマを含む奇蹄目の哺乳類であることがより好ましい。哺乳類は、霊長目、サル目（Ｃｅｂｏｉｄｓ又はＳｉｍｏｉｄｓ）（サル）、又は真猿亜目（ヒト及び類人猿）の哺乳類であることが最も好ましい。特に好ましい哺乳類は、ヒトである。

【実施例】

【0129】

以下の実施例は本発明を更に説明するが、無論、いかなる方法でもその範囲を限定すると解釈されるべきではない。

【0130】

実施例１
この実施例は、結腸直腸がん患者４２７１の末梢血リンパ球（ＰＢＬ）からの抗Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ ＴＣＲの単離を示す。

【0131】

結腸直腸がん患者４２７１由来のＰＢＬを自己樹状細胞（ＤＣ）でインビトロ（ＩＶＳ）刺激した。ＤＣに、Ｇ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチドＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ（配列番号８８）をパルスした。Ｇ１２Ｄ ２４ｍｅｒペプチド又は対応するＷＴ ２４ｍｅｒペプチドＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ（配列番号８９）をパルスした自己ＤＣと共培養することによって、細胞を試験した。ＤＭＳＯで処理したＤＣとの共培養及びＤＣ単独との共培養をネガティブコントロールとした。ＰＭＡの存在下で培養したＰＢＬをポジティブコントロールとした。酵素結合免疫スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイを用いて、ＩＦＮγの分泌によって反応性を試験した。結果を図１Ａに示す。図１Ａに示すように、Ｇ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチドをパルスしたＤＣと共培養した後に反応性細胞が観察された。

【0132】

フローサイトメトリーアッセイによる４－１ＢＢ及び／又はＯＸ４０の発現のアップレギュレーションを測定することによっても、反応性を試験した。結果を図１Ｂ～１Ｃに示す。図１Ｂ～１Ｃに示すように、Ｇ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチドをパルスしたＤＣと共培養した後に反応性細胞が観察された。

【0133】

陽性細胞を再刺激し、単一細胞Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シーケンシングのために４－１ＢＢのアップレギュレーションによってソートして９６ウェルプレートに入れた。４つのＴＣＲ、すなわち、４２７１ ＴＣＲ１、４２７１ ＴＣＲ２、４２７１ ＴＣＲ３、及び４２７１ ＴＣＲ４がみられた（表５）。

【0134】

【表5】

【0135】

ＴＣＲのアルファ鎖及びベータ鎖の可変領域の配列を、単一細胞ＴＣＲシーケンシングによって同定した。アルファ鎖及びベータ鎖の可変領域のアミノ酸配列を表６に示す。ＣＤＲには下線を引いてある。Ｎ末端シグナルペプチドは太字フォントである。

【0136】

【表6-1】

【0137】

【表6-2】

【0138】

実施例２
この実施例は、実施例１のそれぞれのＴＣＲをコードしているレトロウイルスベクターの構築を示す。

【0139】

表６の４２７１ ＴＣＲ１、４２７１ ＴＣＲ２、４２７１ ＴＣＲ３、又は４２７１ ＴＣＲ４のα鎖及びβ鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を取得し、コドンを最適化した。ＴＣＲβのＶＤＪ領域をマウスＴＣＲβ定常鎖に融合させた。ＴＣＲαのＶＪ領域をマウスＴＣＲα定常鎖に融合させた。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、ヒトのＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖の定常領域を対応するマウス定常領域で置換すると、ＴＣＲの発現及び機能性が改善すると考えられる（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６６（１７）：８８７８－８６（２００６））。

【0140】

更に、マウスのＴＣＲα及びＴＣＲβの定常鎖をシステインで修飾した。マウスＴＣＲα定常鎖に膜貫通型疎水性変異を導入した。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、これら修飾は、導入されたＴＣＲ鎖を優先的に対合させ、ＴＣＲの表面発現及び機能性を高めると考えられる（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６７（８）：３８９８－９０３（２００７）；Ｈａｇａ－Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕ．，１８８：５５３８－５５４６（２０１２））。定常領域へのこれら修飾を含む、４つのＴＣＲのそれぞれの完全長のα鎖及びβ鎖を表７に示す。表７中、ＣＤＲには下線を引き、定常領域の修飾アミノ酸残基には下線を引き、かつ太字で示す。

【0141】

【表7-1】

【0142】

【表7-2】

【0143】

表７の４２７１ ＴＣＲ１、４２７１ ＴＣＲ２、４２７１ ＴＣＲ３、又は４２７１ ＴＣＲ４のα鎖及びβ鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を、独立して、以下の発現カセット構成を有するＭＳＧＶ１ベースのレトロウイルスベクターにクローニングした：５’ＮｃｏＩ－ＶＤＪβ－ｍＣβ－フリン／ＳｅｒＧｌｙ／Ｐ２Ａ－ＶＪα－ｍＣα－ＥｃｏＲＩ３’。ＭＳＧＶ１ベクターの５’ＮｃｏＩサイトへのＴＣＲ発現カセットのクローニングを促進するために、ＴＣＲＶβ鎖のＮ末端シグナルペプチドにおける２番目のアミノ酸をアラニン（Ａ）に変更した。

【0144】

ＴＣＲβ鎖及びＴＣＲα鎖は、フリンＳｅｒ／Ｇｌｙ Ｐ２Ａリンカーペプチド（配列番号８７）によって分離されていた。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、リンカーペプチドは、２本の鎖の発現効率を同等にすると考えられる（Ｓｚｙｍｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２２（５）：５８９－９４（２００４））。

【0145】

レトロウイルスベクターのＴＣＲ発現カセットは、５’から３’に向かって、リンカーペプチドによって分離されたＴＣＲβ鎖及びＴＣＲα鎖をコードしていた。各それぞれのＴＣＲについてのＴＣＲ発現カセットがコードしているアミノ酸配列を表８に示す。表８中、ＣＤＲには下線を引き、定常領域はイタリック体で表記し、リンカーペプチドは太字で示す。

【0146】

【表8】

【0147】

実施例３
この実施例は、実施例２のレトロウイルスベクターによって発現されるＴＣＲの結合活性を示す。

【0148】

自己ＰＢＬに、独立して、実施例２の４２７１ ＴＣＲ１、４２７１ ＴＣＲ２、４２７１ ＴＣＲ３、又は４２７１ ＴＣＲ４をコードしているレトロウイルスベクターを形質導入した。

【0149】

自己ＤＣに、図２Ａ～２Ｄに示す種々の濃度のうちの１つの実施例１のＧ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチド又は対応するＷＴ ２４－ｍｅｒペプチドを負荷した。この細胞を２回洗浄し、６ｅ４ ＤＣ：５ｅ４ Ｔ細胞の比で形質導入されたＴ細胞と一晩共培養した。蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって、４－１ＢＢ及び／又はＯＸ４０のアップレギュレーションを評価した。結果を図２Ａ～２Ｄに示す。

【0150】

実施例４
この実施例は、実施例２のレトロウイルスベクターによって発現されたＴＣＲが、ＨＬＡ－ＤＲ分子によって提示されるＧ１２Ｄ ＲＡＳを認識することを示す。

【0151】

エクソーム及びｍＲＮＡシーケンシングを用いて、患者４２７１が発現したＭＨＣクラスＩＩ分子を決定した。発現したＭＨＣクラスＩＩ分子を表９に示す。

【0152】

【表9】

【0153】

自己ＤＣ（標的細胞）を抗ＨＬＡ ＤＰ、抗ＨＬＡ ＤＱ、若しくは抗ＨＬＡ ＤＲの抗体で又はブロッキング抗体なしで処理した後、標的細胞にＧ１２Ｄ ２４－ｍｅｒペプチドをパルスした。次いで、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した。エフェクター細胞は、独立して、実施例２の４２７１ ＴＣＲ１、４２７１ ＴＣＲ２、４２７１ ＴＣＲ３、又は４２７１ ＴＣＲ４をコードしているレトロウイルスベクターを形質導入した自己Ｔ細胞であった。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓの存在下で培養したエフェクター細胞をポジティブコントロールとした。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓは、エフェクター細胞を非特異的に刺激する。ＤＭＳＯの存在下で培養したエフェクター細胞をネガティブコントロールとした。

【0154】

ＥＬＩＳＰＯＴによってＩＦＮ－γ分泌を測定した。ＦＡＣＳによってＯＸ４０及び／又は４－１ＢＢのアップレギュレーションを測定した。結果を図３Ａ～３Ｂに示す。

【0155】

図３Ａ～３Ｂに示すように、ＯＸ４０及び／又は４－１ＢＢのアップレギュレーション並びにＩＦＮ－γの分泌は、抗ＨＬＡ ＤＲ抗体の存在下でブロックされた。

【0156】

本明細書に引用した刊行物、特許出願、及び特許を含む全ての参照文献は、各参照文献が個々にかつ具体的に参照によって組み入れられると示されており、その全体が本明細書に記載されているかのように、参照によって本明細書に組み入れられる。

【0157】

本発明の説明に関連して（特に以下の特許請求の範囲に関連して）用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び「少なくとも１つ」、並びに類似の参照対象の使用は、本明細書において他の指定がない限り又は文脈から明らかに矛盾していない限り、単数形及び複数形の両方を網羅すると解釈されるべきである。１つ以上の項目のリストの後の用語「少なくとも１つ」の使用（例えば、「Ａ及びＢのうちの少なくとも１つ」）は、本明細書において他の指定がない限り又は文脈から明らかに矛盾していない限り、列挙される項目から選択される１つの項目（Ａ又はＢ）又は列挙される項目のうちの２つ以上の任意の組み合わせ（Ａ及びＢ）を意味すると解釈されるべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、特に断らない限り、オープンエンドな用語である（すなわち、「含むがこれらに限定されない」を意味する）と解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書において他の指定がない限り、単に、範囲内の各別個の値を個々に参照する省略法として機能することを意図し、各別個の値が、本明細書に個々に列挙されているかのように明細書に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書において他の指定がない限り又は文脈から明らかに矛盾していない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書に提供される任意の及び全ての例又は例示的な表現（例えば、「等」）の使用は、特に主張しない限り、単に本発明をより深く解明することを意図し、本発明の範囲の限定を提起するものではない。明細書中の表現はいずれも、任意の請求されていない要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されるべきではない。

【0158】

本発明を実施するための本発明者らに公知の最良の形態を含む、本発明の好ましい実施形態が、本明細書に記載される。好ましい実施形態の変形は、前述の記載を読んだときに当業者に明らかになり得る。本発明者らは、当業者がこのような変形を適宜使用すると予想し、そして、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されているのとは別の方法で本発明が実施されることを意図している。従って、本発明は、準拠法によって認められている通り、本明細書に添付される特許請求の範囲に列挙される発明主題の全ての変形及び等価物を含む。更に、その全ての可能な変形における上記要素の任意の組み合わせは、本明細書において他の指定がない限り又は文脈から明らかに矛盾していない限り、本発明によって包含される。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【配列表】

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【国際調査報告】