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特表2023-534422Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原に結合する抗体及びその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-08-09
(54)【発明の名称】Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原に結合する抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230802BHJP
C07K 16/08 20060101ALI20230802BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20230802BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230802BHJP
C12N 15/86 20060101ALI20230802BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230802BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230802BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230802BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230802BHJP
C12N 7/01 20060101ALI20230802BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230802BHJP
A61P 31/20 20060101ALI20230802BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/08 ZNA
C07K16/46
C12N15/63 Z
C12N15/86 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12N7/01
A61K39/395 S
A61P31/20
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023501215
(86)(22)【出願日】2021-07-09
(85)【翻訳文提出日】2023-01-23
(86)【国際出願番号】 CN2021105523
(87)【国際公開番号】W WO2022007955
(87)【国際公開日】2022-01-13
(31)【優先権主張番号】202010659026.2
(32)【優先日】2020-07-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202010659828.3
(32)【優先日】2020-07-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】513123920
【氏名又は名称】ベイジン カイン テクノロジー シェア－ホールディング シーオー．， エルティーディー．
(74)【代理人】
【識別番号】110000578
【氏名又は名称】名古屋国際弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】許▲ソウ▼
(72)【発明者】
【氏名】常▲紅▼▲艶▼
(72)【発明者】
【氏名】李▲響▼
(72)【発明者】
【氏名】宋瑞
(72)【発明者】
【氏名】▲劉▼影
(72)【発明者】
【氏名】李峰
【テーマコード（参考）】
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AA93Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C085AA14
4C085BA90
4C085BB36
4C085BB41
4C085BB43
4C085CC23
4C085DD23
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG02
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、当該抗体または抗原結合フラグメントを含む医薬組成物、及びその使用が提供される。また、当該抗体をコードする核酸分子、当該核酸分子を含むベクター及び宿主細胞、ならびに当該抗体を調製する方法も提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域は、以下に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：
ＨＣＤＲ１：Ｘ１ＹＸ３ＦＸ５Ｘ６Ｘ７Ｙ（配列番号３３）、
ＨＣＤＲ２：Ｘ１１ＮＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号３４）、
ＨＣＤＲ３：ＡＲＤＸ２１ＷＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６ＤＸ２８ＹＧＭＤＸ３３（配列番号３５）を含み、
前記軽鎖可変領域は、以下に示すＣＤＲアミノ酸配列：
ＬＣＤＲ１：Ｘ３４Ｘ３５Ｘ３６ＳＸ３８Ｘ３９（配列番号３６）、
ＬＣＤＲ２：Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２（配列番号３７）、
ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＹＳＴＰＬＸ５１（配列番号３８）を含み、
Ｘ１はＧまたはＡから選択され、Ｘ３はＴ、ＡまたはＳから選択され、Ｘ５はＴ、ＡまたはＩから選択され、Ｘ６はＧ、Ａ、ＹまたはＤから選択され、Ｘ７はＹまたはＡから選択され、Ｘ１１はＩまたはＡから選択され、Ｘ１３はＰまたはＡから選択され、Ｘ１４はＮ、ＡまたはＹから選択され、Ｘ１５はＳ、ＡまたはＮから選択され、Ｘ１６はＧまたはＡから選択され、Ｘ１７はＧまたはＡから選択され、Ｘ１８はＴまたはＡから選択され、Ｘ２１はＬ、ＶまたはＡから選択され、Ｘ２３はＮ、ＱまたはＡから選択され、Ｘ２４はＤ、ＱまたはＡから選択され、Ｘ２５はＤ、ＧまたはＡから選択され、Ｘ２６はＶ、ＧまたはＡから選択され、Ｘ２８はＹまたはＡから選択され、Ｘ３３はＶまたはＡから選択され、Ｘ３４はＱまたはＡから選択され、Ｘ３５はＳまたはＡから選択され、Ｘ３６はＩ、ＡまたはＶから選択され、Ｘ３８はＴ、ＡまたはＳから選択され、Ｘ３９はＹまたはＡから選択され、Ｘ４０はＡ、Ｇ、Ｄ、ＴまたはＳから選択され、Ｘ４１はＡまたはＳから選択され、Ｘ４２はＡまたはＳから選択され、Ｘ５１はＴまたはＡから選択される、前記ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項2】
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号２０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１８に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２２に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２９に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３１に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む、
請求項１に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項3】
ヒト共通フレームワーク領域（ＦＲ）を含む、請求項１または２に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項4】
前記ＶＨは、以下に示すＦＲアミノ酸配列：ＨＦＲ１：Ｚ１Ｚ２Ｚ３ＬＺ４Ｚ５ＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＺ６ＫＶＳＣＫＡＳ（配列番号３９）
ＨＦＲ２：Ｚ７ＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＺ８ＥＷＭＧＷ（配列番号４０）
ＨＦＲ３：ＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＺ９ＴＺ１０ＤＺ１１ＳＺ１２ＳＴＡＹＭＥＬＳＺ１３ＬＲＳＺ１４ＤＴＡＶＹＹＣ（配列番号４１）
ＨＦＲ４：ＷＧＺ１５ＧＴＺ１６ＶＴＶＳＳ（配列番号４２）を含み、
前記ＶＬは、以下に示すＦＲアミノ酸配列：
ＬＦＲ１：Ｚ１７Ｚ１８Ｚ１９ＬＴＱＳＰＺ２０Ｚ２１ＬＳＺ２２ＳＺ２３ＧＺ２４ＲＺ２５ＴＺ２６Ｚ２７ＣＲＡＳ（配列番号４３）
ＬＦＲ２：ＬＺ２８ＷＹＱＱＫＰＧＺ２９ＡＰＺ３０ＬＬＩＺ３１（配列番号４４）
ＬＦＲ３：Ｚ３２Ｚ３３Ｚ３４Ｚ３５ＧＺ３６ＰＺ３７ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＺ３８ＦＴＬＴＩＺ３９ＳＬＺ４０Ｚ４１Ｚ４２ＤＺ４３ＡＴＹＹＣ（配列番号４５）
ＬＦＲ４：ＦＧＺ４４ＧＴＺ４５Ｚ４６Ｚ４７ＩＫＲ（配列番号４６）を含み、
Ｚ１はＱまたはＥから選択され、Ｚ２はＶまたはＩから選択され、Ｚ３はＱまたはＴから選択され、Ｚ４はＶまたはＫから選択され、Ｚ５はＥまたはＱから選択され、Ｚ６はＶまたはＭから選択され、Ｚ７はＭ、ＩまたはＬから選択され、Ｚ８はＬまたはＰから選択され、Ｚ９はＭまたはＩであり、Ｚ１０はＲまたはＡであり、Ｚ１１はＴまたはＫであり、Ｚ１２はＩまたはＴであり、Ｚ１３はＲまたはＳであり、Ｚ１４はＤまたはＥであり、Ｚ１５はＫまたはＱから選択され、Ｚ１６はＬまたはＭから選択され、Ｚ１７はＤまたはＥから選択され、Ｚ１８はＩまたはＴから選択され、Ｚ１９はＱ、ＴまたはＶから選択され、Ｚ２０はＳ、ＡまたはＧから選択され、Ｚ２１はＳまたはＴから選択され、Ｚ２２はＡまたはＬから選択され、Ｚ２３はＶまたはＰから選択され、Ｚ２４はＤまたはＥから選択され、Ｚ２５はＶまたはＡから選択され、Ｚ２６はＩまたはＬから選択され、Ｚ２７はＴまたはＳから選択され、Ｚ２８はＮまたはＡから選択され、Ｚ２９はＫまたはＱから選択され、Ｚ３０はＫ、ＱまたはＲから選択され、Ｚ３１はＹまたはＳから選択され、Ｚ３２はＳまたはＮ、Ｚ３３はＬまたはＲから選択され、Ｚ３４はＱまたはＡから選択され、Ｚ３５はＳまたはＴから選択され、Ｚ３６はＶまたはＩから選択され、Ｚ３７はＳまたはＡから選択され、Ｚ３８はＤまたはＥから選択され、Ｚ３９はＳまたはＲであり、Ｚ４０はＱまたはＥから選択され、Ｚ４１はＰまたはＳから選択され、Ｚ４２はＥまたはＧから選択され、Ｚ４３はＦまたはＬから選択され、Ｚ４４はＧ、ＱまたはＰから選択され、Ｚ４５はＫまたはＲから選択、Ｚ４６はＶまたはＬから選択、Ｚ４７はＤまたはＥから選択される、
請求項１～３のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項5】
前記ＶＨ配列が、配列番号１～６から選択されるいずれか１つの配列であるか、または配列番号１～６のいずれか１つの配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列である、請求項１～４のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項6】
前記ＶＬ配列が、配列番号７～１３から選択されるいずれか１つの配列であるか、または配列番号７～１３のいずれか１つの配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列である、請求項１～５のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項7】
前記ＶＨ配列及びＶＬ配列は、以下の配列の群：配列番号１及び配列番号７、配列番号１及び配列番号８、配列番号２及び配列番号８、配列番号２及び配列番号１２、配列番号２及び配列番号１３、配列番号３及び配列番号８、配列番号４及び配列番号８、配列番号５及び配列番号９、配列番号５及び配列番号１０、配列番号５及び配列番号１１、配列番号６及び配列番号７、ならびに上記ＶＨ配列またはＶＬ配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列から選択されるいずれかである、請求項１～６のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項8】
Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、またはマルチボディ（ｍｕｌｔｉｂｏｄｙ）から選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項9】
前記抗体が完全ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ抗体、またはナノボディである、請求項１～８のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項10】
単一特異性抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である、請求項１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項11】
ＩｇＧの重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域と、κ鎖またはλ鎖から選択される軽鎖定常領域とをさらに含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項12】
請求項１～１１のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項13】
請求項１２に記載の核酸分子を含む構築物。
【請求項14】
プラスミド、ファージミド、ウイルスベクター、または線状核酸から選択される、請求項１３に記載の構築物。
【請求項15】
請求項１～１１のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを発現する、あるいは請求項１２に記載の核酸または請求項１３もしくは１４に記載の構築物を含む、ウイルス、ファージ、または細胞。
【請求項16】
請求項１～１１のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項１２に記載の核酸、請求項１３もしくは１４に記載の構築物、または請求項１５に記載のウイルス、ファージ、もしくは細胞を含む、医薬組成物。
【請求項17】
請求項１～１１のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項１２に記載の核酸、請求項１３もしくは１４に記載の構築物、または請求項１５に記載のウイルス、ファージ、もしくは細胞を含む、キット。
【請求項18】
有効量の請求項１６に記載の医薬組成物を患者に投与することを含む、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を治療もしくは予防する、またはＢ型肝炎の症状を緩和する方法。
【請求項19】
請求項１～１１のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項１２に記載の核酸、請求項１３もしくは１４に記載の構築物、または請求項１５に記載のウイルス、ファージ、もしくは細胞を、被験者からの体液と接触させることを含む、ＨＢＶを検出する方法。
【請求項20】
前記被験者からの前記体液が、前記被検者の血漿または血清である、請求項１９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
［技術分野］
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０２０年７月９日に出願された中国出願２０２０１０６５９０２６．２及び２０２０年７月１０日に出願された中国出願２０２０１０６５９８２８．３の優先権を主張し、それらの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０２０年７月９日に出願された中国出願２０２０１０６５９０２６．２及び２０２０年７月１０日に出願された中国出願２０２０１０６５９８２８．３の優先権を主張し、それらの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本発明は、抗体の技術分野に属し、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原に結合する抗体、及びＢ型肝炎ウイルス感染に関連する疾患の治療におけるその抗体の使用に関する。
［背景技術］
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症は世界中で蔓延しているが、ＨＢＶ感染症の有病率は地域によって大きく異なる。世界保健機関の報告によると、世界で約２０億人がＨＢＶに感染したことがあり、そのうち２．４億人が慢性的にＨＢＶに感染しており、毎年約６５万人がＨＢＶ感染による肝不全、肝硬変、及び肝細胞癌（ＨＣＣ）で死亡している。世界の肝硬変及びＨＣＣ患者の中で、ＨＢＶ感染による割合はそれぞれ３０％及び４５％である。中国では、肝硬変及びＨＣＣ患者の中で、ＨＢＶ感染による割合はそれぞれ６０％及び８０％である。中国はＢ型慢性肝炎の人口が多い国である。疫学的調査によると、７％を超える人々がＢ型肝炎ウイルスに感染しており、その総数は１億人に近い。２０１５年末までに、ＨＢＶ感染者の９％のみが検査を受けて診断されていた。Ｂ型肝炎ウイルス感染症と診断された患者の８％だけが治療を受けていた（中国肝炎防止・治療基金会のデータ）。それらの患者は、長期、あるいは生涯にわたる治療が必要であり、家族や社会に大きな負担をかけるだけではなく、肝硬変や肝癌を発症するリスクもある。推定によると、中国には２，８００万人の慢性Ｂ型肝炎患者がおり、毎年１００万人近くの肝硬変患者及び約３０万人の肝臓癌患者が新たに追加されている。慢性肝炎患者の５％、肝硬変と肝癌患者の９５％の受診率から推算すると、中国のＢ型肝炎治療に関連する直接医療費は年間８００億元から１２００億元に達する。
［背景技術］
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症は世界中で蔓延しているが、ＨＢＶ感染症の有病率は地域によって大きく異なる。世界保健機関の報告によると、世界で約２０億人がＨＢＶに感染したことがあり、そのうち２．４億人が慢性的にＨＢＶに感染しており、毎年約６５万人がＨＢＶ感染による肝不全、肝硬変、及び肝細胞癌（ＨＣＣ）で死亡している。世界の肝硬変及びＨＣＣ患者の中で、ＨＢＶ感染による割合はそれぞれ３０％及び４５％である。中国では、肝硬変及びＨＣＣ患者の中で、ＨＢＶ感染による割合はそれぞれ６０％及び８０％である。中国はＢ型慢性肝炎の人口が多い国である。疫学的調査によると、７％を超える人々がＢ型肝炎ウイルスに感染しており、その総数は１億人に近い。２０１５年末までに、ＨＢＶ感染者の９％のみが検査を受けて診断されていた。Ｂ型肝炎ウイルス感染症と診断された患者の８％だけが治療を受けていた（中国肝炎防止・治療基金会のデータ）。それらの患者は、長期、あるいは生涯にわたる治療が必要であり、家族や社会に大きな負担をかけるだけではなく、肝硬変や肝癌を発症するリスクもある。推定によると、中国には２，８００万人の慢性Ｂ型肝炎患者がおり、毎年１００万人近くの肝硬変患者及び約３０万人の肝臓癌患者が新たに追加されている。慢性肝炎患者の５％、肝硬変と肝癌患者の９５％の受診率から推算すると、中国のＢ型肝炎治療に関連する直接医療費は年間８００億元から１２００億元に達する。
【0003】
Ｂ型肝炎患者の抗ウイルス治療後、体内のウイルス量を減らし、重篤な疾患の進行を遅らせることができるが、多くの人はＢ型肝炎ウイルスを完全に排除することはできない。Ｂ型肝炎の患者は、長期間にわたって薬を服用する必要があり、患者の経済的負担は重い。中国ＣＤＣ（中国疾病予防管理センター）が発表したデータによると、慢性肝炎患者の平均年間診断及び治療費は、平均年間世帯収入の５６．２４％を占め、代償性肝硬変は８１．５３％を占め、非代償性肝硬変は１５７．２１％を占め、肝臓癌は９６．７６％を占めている。重い経済的負担により、多くの患者が治療を断念したり、家族が病気のために貧困に陥ったりした。また、過去１０数年間の肝疾患の診断・治療費の推移から見て、肝疾患の診断・治療費は年々増加傾向にあり、毎年１０％～２０％程度の増加があり、それに伴い個人の負担分も増加している。
【0004】
研究によると、Ｂ型肝炎患者の血液中のＨＢｓＡｇで構成される大量のサブウイルス粒子が、免疫系の抑制及び感染肝細胞の除去不能の主な原因である。特定の技術に頼って血液中のＨＢｓＡｇのレベルを１０～１００分の１に減らすと、ヒトの体自身のＴ細胞免疫が活性化され、体自身の免疫系が感染した肝細胞を効果的に殺し始めることができる。したがって、血液中のＨＢｓＡｇのレベルを効果的に下げることは、Ｂ型肝炎の治癒の重要な基準の１つであるだけではなく、Ｂ型肝炎を治療して感染細胞を除去するための前提条件でもある。
【0005】
最新の臨床研究結果によると、ウイルスＤＮＡを除去するためにヌクレオチド類似体で治療された患者では、ＨＢｓＡｇが特定のレベル（ＨＢｓＡｇ＜１５００ ＩＵ／ｍＬなど）よりも低い場合、インターフェロンによるＨＢｓＡｇ除去の確率が５０％を超え得、通常考えられている５～１０％のみのインターフェロン治癒率よりもはるかに高い。
【0006】
しかし、ＨＢｓＡｇを効果的に低下させる薬剤がないため、ほとんどの患者（９０％を超える）のＨＢｓＡｇレベルはこの指標を超えており、インターフェロンではこれらの患者を治すことができない（これが、インターフェロンの治癒率がわずか５～１０％である理由である）。これらの新しい臨床的証拠により、ＨＢｓＡｇ低下治療がより現実的かつ緊急に必要とされている。
【0007】
現在の研究では、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原を減少させる主な方法が、ＨＢｓＡｇの発現の抑制（ｓｉＲＮＡ）、細胞からのＨＢｓＡｇの放出の防止（ＮＡＰｓ）、及びＨＢｓＡｇ抗体の３つである。
【0008】
ＨＢｓＡｇレベルを下げるために抗体技術を使用する研究の方向性が決定され、スクリーニング後、発明者らは複数の抗体株を取得した。インビトロ研究は、本発明の抗体がＨＢｓＡｇに特異的に結合できることを示しており、動物モデル研究の結果は、ＨＢｓＡｇレベルを効果的に下げることができることを示している。
【0009】
［発明の開示］
本願の目的の１つは、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供することである。インビトロ抗原親和性試験は、本願の抗体がＨＢｓＡｇに特異的に結合する能力を有することを証明している。インビボ試験は、本願の抗体がＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の中和抗体として使用でき、ＨＢｓＡｇのレベルを効果的に低下させ、ＨＢＶの増殖を阻害できることをさらに証明している。
本願の目的の１つは、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供することである。インビトロ抗原親和性試験は、本願の抗体がＨＢｓＡｇに特異的に結合する能力を有することを証明している。インビボ試験は、本願の抗体がＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の中和抗体として使用でき、ＨＢｓＡｇのレベルを効果的に低下させ、ＨＢＶの増殖を阻害できることをさらに証明している。
【0010】
具体的には、本願は以下に関する。
１、重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
前記重鎖可変領域は、以下に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：
ＨＣＤＲ１：Ｘ１ＹＸ３ＦＸ５Ｘ６Ｘ７Ｙ（配列番号３３）、
ＨＣＤＲ２：Ｘ１１ＮＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号３４）、
ＨＣＤＲ３：ＡＲＤＸ２１ＷＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６ＤＸ２８ＹＧＭＤＸ３３（配列番号３５）を含み、
前記軽鎖可変領域は、以下に示すＣＤＲアミノ酸配列：
ＬＣＤＲ１：Ｘ３４Ｘ３５Ｘ３６ＳＸ３８Ｘ３９（配列番号３６）、
ＬＣＤＲ２：Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２（配列番号３７）、
ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＹＳＴＰＬＸ５１（配列番号３８）を含み、
ここで、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ２１、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２８、Ｘ３３、Ｘ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２、及びＸ５１はそれぞれ、任意のアミノ酸から選択される、前記ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
１、重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
前記重鎖可変領域は、以下に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：
ＨＣＤＲ１：Ｘ１ＹＸ３ＦＸ５Ｘ６Ｘ７Ｙ（配列番号３３）、
ＨＣＤＲ２：Ｘ１１ＮＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号３４）、
ＨＣＤＲ３：ＡＲＤＸ２１ＷＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６ＤＸ２８ＹＧＭＤＸ３３（配列番号３５）を含み、
前記軽鎖可変領域は、以下に示すＣＤＲアミノ酸配列：
ＬＣＤＲ１：Ｘ３４Ｘ３５Ｘ３６ＳＸ３８Ｘ３９（配列番号３６）、
ＬＣＤＲ２：Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２（配列番号３７）、
ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＹＳＴＰＬＸ５１（配列番号３８）を含み、
ここで、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ２１、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２８、Ｘ３３、Ｘ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２、及びＸ５１はそれぞれ、任意のアミノ酸から選択される、前記ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0011】
２、Ｘ１はＧまたはＡから選択され、Ｘ３はＴ、ＡまたはＳから選択され、Ｘ５はＴ、ＡまたはＩから選択され、Ｘ６はＧ、Ａ、ＹまたはＤから選択され、Ｘ７はＹまたはＡから選択され、Ｘ１１はＩまたはＡから選択され、Ｘ１３はＰまたはＡから選択され、Ｘ１４はＮ、ＡまたはＹから選択され、Ｘ１５はＳ、ＡまたはＮから選択され、Ｘ１６はＧまたはＡから選択され、Ｘ１７はＧまたはＡから選択され、Ｘ１８はＴまたはＡから選択され、Ｘ２１はＬ、ＶまたはＡから選択され、Ｘ２３はＮ、ＱまたはＡから選択され、Ｘ２４はＤ、ＱまたはＡから選択され、Ｘ２５はＤ、ＧまたはＡから選択され、Ｘ２６はＶ、ＧまたはＡから選択され、Ｘ２８はＹまたはＡから選択され、Ｘ３３はＶまたはＡから選択され、Ｘ３４はＱまたはＡから選択され、Ｘ３５はＳまたはＡから選択され、Ｘ３６はＩ、ＡまたはＶから選択され、Ｘ３８はＴ、ＡまたはＳから選択され、Ｘ３９はＹまたはＡから選択され、Ｘ４０はＡ、Ｇ、Ｄ、ＴまたはＳから選択され、Ｘ４１はＡまたはＳから選択され、Ｘ４２はＡまたはＳから選択され、Ｘ５１はＴまたはＡから選択される、項１に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0012】
３、ＨＣＤＲ１中のＸ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ６、及びＸ７は順番に、次の組み合わせ：
Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ｙ；Ａ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ａ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ａ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ａ；Ｇ、Ｓ、Ｉ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｄ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｙ、Ｙのいずれかから選択され、
ＨＣＤＲ２中のＸ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、及びＸ１８は順番に、次の組み合わせ：Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ａ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ａ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ａ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ａ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ａ；Ｉ、Ｐ、Ｙ、Ｎ、Ｇ、Ｇ、Ｔのいずれかから選択され、
ＨＣＤＲ３中のＸ２１、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２８、及びＸ３３は順番に、次の組み合わせ：Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ａ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ａ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ａ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ａ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ａ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ａ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ａ；Ｖ、Ｑ、Ｑ、Ｇ、Ｇ、Ｙ、Ｖのいずれかから選択され、
ＬＣＤＲ１のＸ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３８、及びＸ３９は順番に、次の組み合わせ：
Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ｔ、Ｙ；Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｔ、Ｙ；Ｑ、Ａ、Ｉ、Ｔ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ａ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ｔ、Ａ；Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ｓ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｙのいずれかから選択され、
ＬＣＤＲ２中のＸ４０、Ｘ４１、及びＸ４２は順番に、次の組み合わせ：
Ａ、Ａ、Ｓ；Ｓ、Ａ、Ｓ；Ａ、Ｓ、Ｓ；Ａ、Ａ、Ａ；Ｇ、Ａ、Ｓ；Ｄ、Ａ、Ｓ；Ｔ、Ａ、Ｓのいずれかから選択され、及び
ＬＣＤＲ３中のＸ５１は、ＴまたはＡから選択される、
項２に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ｙ；Ａ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ａ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ａ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ａ；Ｇ、Ｓ、Ｉ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｄ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｙ、Ｙのいずれかから選択され、
ＨＣＤＲ２中のＸ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、及びＸ１８は順番に、次の組み合わせ：Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ａ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ａ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ａ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ａ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ａ；Ｉ、Ｐ、Ｙ、Ｎ、Ｇ、Ｇ、Ｔのいずれかから選択され、
ＨＣＤＲ３中のＸ２１、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２８、及びＸ３３は順番に、次の組み合わせ：Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ａ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ａ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ａ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ａ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ａ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ａ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ａ；Ｖ、Ｑ、Ｑ、Ｇ、Ｇ、Ｙ、Ｖのいずれかから選択され、
ＬＣＤＲ１のＸ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３８、及びＸ３９は順番に、次の組み合わせ：
Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ｔ、Ｙ；Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｔ、Ｙ；Ｑ、Ａ、Ｉ、Ｔ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ａ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ｔ、Ａ；Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ｓ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｙのいずれかから選択され、
ＬＣＤＲ２中のＸ４０、Ｘ４１、及びＸ４２は順番に、次の組み合わせ：
Ａ、Ａ、Ｓ；Ｓ、Ａ、Ｓ；Ａ、Ｓ、Ｓ；Ａ、Ａ、Ａ；Ｇ、Ａ、Ｓ；Ｄ、Ａ、Ｓ；Ｔ、Ａ、Ｓのいずれかから選択され、及び
ＬＣＤＲ３中のＸ５１は、ＴまたはＡから選択される、
項２に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0013】
４、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ２１、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２８、及びＸ３３は順番に、下記表１の組み合わせのいずれかから選択される、項３に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0014】
【表1】
【0015】
５、Ｘ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２、及びＸ５１は順番に、下記表２の組み合わせのいずれかから選択される、項３または４に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0016】
【表2】
【0017】
６、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ２１、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２８、Ｘ３３、Ｘ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２、及びＸ５１は順番に、下記表３の組み合わせのいずれかから選択される、項３に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0018】
【表3】
【0019】
いくつかの実施形態では、前記ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントでは、前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号２０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１８に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２２に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２９に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３１に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む。
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号２０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１８に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２２に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２９に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３１に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む。
【0020】
７、ヒト共通フレームワーク領域（ＦＲ）を含む、項１～６のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。いくつかの実施形態では、前記ＶＨは、ヒトサブグループＩＩＩ共通フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの実施形態では、前記ＶＬは、ヒトサブグループκＩ共通フレームワークを含む。いくつかの実施形態では、ヒト共通フレームワーク領域（ＦＲ）、及びヒト共通フレームワーク領域（ＦＲ）に基づく１つまたは複数のアミノ酸置換が含まれる。
【0021】
いくつかの実施形態では、前記フレームワーク領域は、ヒト共通フレームワーク領域であり、１つ以上（例えば、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、前記フレームワーク領域は、ヒト共通フレームワーク領域であるか、またはヒト共通フレームワーク領域と７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する。本発明のいくつかの例示的な実施形態では、前記ＶＨは、以下に示すＦＲアミノ酸配列：
ＨＦＲ１：Ｚ１Ｚ２Ｚ３ＬＺ４Ｚ５ＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＺ６ＫＶＳＣＫＡＳ（配列番号３９）
ＨＦＲ２：Ｚ７ＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＺ８ＥＷＭＧＷ（配列番号４０）
ＨＦＲ３：ＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＺ９ＴＺ１０ＤＺ１１ＳＺ１２ＳＴＡＹＭＥＬＳＺ１３ＬＲＳＺ１４ＤＴＡＶＹＹＣ（配列番号４１）
ＨＦＲ４：ＷＧＺ１５ＧＴＺ１６ＶＴＶＳＳ（配列番号４２）を含み、
前記ＶＬは、以下に示すＦＲアミノ酸配列：
ＬＦＲ１：Ｚ１７Ｚ１８Ｚ１９ＬＴＱＳＰＺ２０Ｚ２１ＬＳＺ２２ＳＺ２３ＧＺ２４ＲＺ２５ＴＺ２６Ｚ２７ＣＲＡＳ（配列番号４３）
ＬＦＲ２：ＬＺ２８ＷＹＱＱＫＰＧＺ２９ＡＰＺ３０ＬＬＩＺ３１（配列番号４４）
ＬＦＲ３：Ｚ３２Ｚ３３Ｚ３４Ｚ３５ＧＺ３６ＰＺ３７ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＺ３８ＦＴＬＴＩＺ３９ＳＬＺ４０Ｚ４１Ｚ４２ＤＺ４３ＡＴＹＹＣ（配列番号４５）
ＬＦＲ４：ＦＧＺ４４ＧＴＺ４５Ｚ４６Ｚ４７ＩＫＲ（配列番号４６）を含み、
ここで、Ｚ１～Ｚ４７はそれぞれいずれかのアミノ酸から選択される。
ＨＦＲ１：Ｚ１Ｚ２Ｚ３ＬＺ４Ｚ５ＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＺ６ＫＶＳＣＫＡＳ（配列番号３９）
ＨＦＲ２：Ｚ７ＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＺ８ＥＷＭＧＷ（配列番号４０）
ＨＦＲ３：ＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＺ９ＴＺ１０ＤＺ１１ＳＺ１２ＳＴＡＹＭＥＬＳＺ１３ＬＲＳＺ１４ＤＴＡＶＹＹＣ（配列番号４１）
ＨＦＲ４：ＷＧＺ１５ＧＴＺ１６ＶＴＶＳＳ（配列番号４２）を含み、
前記ＶＬは、以下に示すＦＲアミノ酸配列：
ＬＦＲ１：Ｚ１７Ｚ１８Ｚ１９ＬＴＱＳＰＺ２０Ｚ２１ＬＳＺ２２ＳＺ２３ＧＺ２４ＲＺ２５ＴＺ２６Ｚ２７ＣＲＡＳ（配列番号４３）
ＬＦＲ２：ＬＺ２８ＷＹＱＱＫＰＧＺ２９ＡＰＺ３０ＬＬＩＺ３１（配列番号４４）
ＬＦＲ３：Ｚ３２Ｚ３３Ｚ３４Ｚ３５ＧＺ３６ＰＺ３７ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＺ３８ＦＴＬＴＩＺ３９ＳＬＺ４０Ｚ４１Ｚ４２ＤＺ４３ＡＴＹＹＣ（配列番号４５）
ＬＦＲ４：ＦＧＺ４４ＧＴＺ４５Ｚ４６Ｚ４７ＩＫＲ（配列番号４６）を含み、
ここで、Ｚ１～Ｚ４７はそれぞれいずれかのアミノ酸から選択される。
【0022】
８、Ｚ１はＱまたはＥから選択され、Ｚ２はＶまたはＩから選択され、Ｚ３はＱまたはＴから選択され、Ｚ４はＶまたはＫから選択され、Ｚ５はＥまたはＱから選択され、Ｚ６はＶまたはＭから選択され、Ｚ７はＭ、ＩまたはＬから選択され、Ｚ８はＬまたはＰから選択され、Ｚ９はＭまたはＩであり、Ｚ１０はＲまたはＡであり、Ｚ１１はＴまたはＫであり、Ｚ１２はＩまたはＴであり、Ｚ１３はＲまたはＳであり、Ｚ１４はＤまたはＥであり、Ｚ１５はＫまたはＱから選択され、Ｚ１６はＬまたはＭから選択され、Ｚ１７はＤまたはＥから選択され、Ｚ１８はＩまたはＴから選択され、Ｚ１９はＱ、ＴまたはＶから選択され、Ｚ２０はＳ、ＡまたはＧから選択され、Ｚ２１はＳまたはＴから選択され、Ｚ２２はＡまたはＬから選択され、Ｚ２３はＶまたはＰから選択され、Ｚ２４はＤまたはＥから選択され、Ｚ２５はＶまたはＡから選択され、Ｚ２６はＩまたはＬから選択され、Ｚ２７はＴまたはＳから選択され、Ｚ２８はＮまたはＡから選択され、Ｚ２９はＫまたはＱから選択され、Ｚ３０はＫ、ＱまたはＲから選択され、Ｚ３１はＹまたはＳから選択され、Ｚ３２はＳまたはＮ、Ｚ３３はＬまたはＲから選択され、Ｚ３４はＱまたはＡから選択され、Ｚ３５はＳまたはＴから選択され、Ｚ３６はＶまたはＩから選択され、Ｚ３７はＳまたはＡから選択され、Ｚ３８はＤまたはＥから選択され、Ｚ３９はＳまたはＲであり、Ｚ４０はＱまたはＥから選択され、Ｚ４１はＰまたはＳから選択され、Ｚ４２はＥまたはＧから選択され、Ｚ４３はＦまたはＬから選択され、Ｚ４４はＧ、ＱまたはＰから選択され、Ｚ４５はＫまたはＲから選択、Ｚ４６はＶまたはＬから選択、Ｚ４７はＤまたはＥから選択される、項７に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0023】
９、ＨＦＲ１中のＺ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６は順番に、次の組み合わせ：Ｑ、Ｖ、Ｑ、Ｖ、Ｅ、Ｖ；Ｅ、Ｖ、Ｑ、Ｖ、Ｑ、Ｖ；Ｅ、Ｖ、Ｑ、Ｖ、Ｅ、Ｖ；Ｑ、Ｉ、Ｔ、Ｋ、Ｅ、Ｖ；Ｅ、Ｖ、Ｑ、Ｖ、Ｑ、Ｍのいずれかから選択され、
ＨＦＲ２中のＺ７及びＺ８は順番に、次の組み合わせ：Ｍ、Ｌ；Ｌ、Ｌ；Ｉ、Ｐのいずれかから選択され、
ＨＦＲ３中のＺ９、Ｚ１０、Ｚ１１、Ｚ１２、Ｚ１３、及びＺ１４の組み合わせは、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｉ、Ｒ、Ｄ、またはＩ、Ａ、Ｋ、Ｔ、Ｓ、Ｅであり、
ＨＦＲ４中のＺ１５及びＺ１６は順番に、次の組み合わせ：Ｋ、Ｌ；Ｑ、Ｍ；Ｑ、Ｌ；またはＫ、Ｍのいずれかから選択される、項８に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
ＨＦＲ２中のＺ７及びＺ８は順番に、次の組み合わせ：Ｍ、Ｌ；Ｌ、Ｌ；Ｉ、Ｐのいずれかから選択され、
ＨＦＲ３中のＺ９、Ｚ１０、Ｚ１１、Ｚ１２、Ｚ１３、及びＺ１４の組み合わせは、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｉ、Ｒ、Ｄ、またはＩ、Ａ、Ｋ、Ｔ、Ｓ、Ｅであり、
ＨＦＲ４中のＺ１５及びＺ１６は順番に、次の組み合わせ：Ｋ、Ｌ；Ｑ、Ｍ；Ｑ、Ｌ；またはＫ、Ｍのいずれかから選択される、項８に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0024】
１０、ＬＦＲ１中のＺ１７、Ｚ１８、Ｚ１９、Ｚ２０、Ｚ２１、Ｚ２２、Ｚ２３、Ｚ２４、Ｚ２５、Ｚ２６、及びＺ２７は順番に、次の組み合わせ：Ｄ、Ｉ、Ｑ、Ｓ、Ｓ、Ａ、Ｖ、Ｄ、Ｖ、Ｉ、Ｔ；Ｅ、Ｉ、Ｖ、Ｇ、Ｔ、Ｌ、Ｐ、Ｅ、Ａ、Ｌ、Ｓ；Ｅ、Ｉ、Ｖ、Ａ、Ｔ、Ｌ、Ｐ、Ｅ、Ａ、Ｌ、Ｓ；Ｅ、Ｔ、Ｔ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｄ、Ｖ、Ｉ、Ｔのいずれかから選択され、
ＬＦＲ２中のＺ２８、Ｚ２９、Ｚ３０、及びＺ３１は順番に、次の組み合わせ：Ｎ、Ｋ、Ｋ、Ｙ；Ａ、Ｑ、Ｒ、Ｙ；Ｎ、Ｋ、Ｋ、Ｓ；Ｎ、Ｋ、Ｑ、Ｙのいずれかから選択され、
ＬＦＲ３中のＺ３２、Ｚ３３、Ｚ３４、Ｚ３５、Ｚ３６、Ｚ３７、Ｚ３８、Ｚ３９、Ｚ４０、Ｚ４１、Ｚ４２、及びＺ４３は順番に、次の組み合わせ：Ｓ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｄ、Ｓ、Ｑ、Ｐ、Ｅ、Ｆ；Ｓ、Ｒ、Ａ、Ｔ、Ｉ、Ａ、Ｅ、Ｓ、Ｑ、Ｓ、Ｅ、Ｆ；Ｎ、Ｒ、Ａ、Ｔ、Ｉ、Ａ、Ｄ、Ｓ、Ｅ、Ｐ、Ｅ、Ｆ；Ｓ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｑ、Ｐ、Ｅ、Ｆ；Ｓ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｄ、Ｓ、Ｑ、Ｐ、Ｇ、Ｌのいずれかから選択され、
ＬＦＲ４中のＺ４４、Ｚ４５、Ｚ４６、及びＺ４７は順番に、次の組み合わせ：Ｇ、Ｋ、Ｖ、Ｄ；Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｅ；Ｐ、Ｋ、Ｖ、Ｅ；Ｇ、Ｋ、Ｖ、Ｅ；Ｑ、Ｒ、Ｌ、Ｅのいずれかから選択される、
項８または９に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
ＬＦＲ２中のＺ２８、Ｚ２９、Ｚ３０、及びＺ３１は順番に、次の組み合わせ：Ｎ、Ｋ、Ｋ、Ｙ；Ａ、Ｑ、Ｒ、Ｙ；Ｎ、Ｋ、Ｋ、Ｓ；Ｎ、Ｋ、Ｑ、Ｙのいずれかから選択され、
ＬＦＲ３中のＺ３２、Ｚ３３、Ｚ３４、Ｚ３５、Ｚ３６、Ｚ３７、Ｚ３８、Ｚ３９、Ｚ４０、Ｚ４１、Ｚ４２、及びＺ４３は順番に、次の組み合わせ：Ｓ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｄ、Ｓ、Ｑ、Ｐ、Ｅ、Ｆ；Ｓ、Ｒ、Ａ、Ｔ、Ｉ、Ａ、Ｅ、Ｓ、Ｑ、Ｓ、Ｅ、Ｆ；Ｎ、Ｒ、Ａ、Ｔ、Ｉ、Ａ、Ｄ、Ｓ、Ｅ、Ｐ、Ｅ、Ｆ；Ｓ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｑ、Ｐ、Ｅ、Ｆ；Ｓ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｄ、Ｓ、Ｑ、Ｐ、Ｇ、Ｌのいずれかから選択され、
ＬＦＲ４中のＺ４４、Ｚ４５、Ｚ４６、及びＺ４７は順番に、次の組み合わせ：Ｇ、Ｋ、Ｖ、Ｄ；Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｅ；Ｐ、Ｋ、Ｖ、Ｅ；Ｇ、Ｋ、Ｖ、Ｅ；Ｑ、Ｒ、Ｌ、Ｅのいずれかから選択される、
項８または９に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0025】
１１、Ｚ１～Ｚ１６は順番に、下記表４の組み合わせのいずれかから選択される、項１０に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0026】
【表4】
【0027】
１２、Ｚ１７～Ｚ４７は順番に、下記表５の組み合わせのいずれかから選択される、項８～１１のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0028】
【表5】
【0029】
１３、Ｚ１～Ｚ４７は順番に、下記表６の組み合わせのいずれかから選択される、項８に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0030】
【表6】
【0031】
１４、前記ＶＨ配列が、配列番号１～６から選択されるいずれか１つの配列であるか、または配列番号１～６のいずれか１つの配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列である、項１に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0032】
１５、前記ＶＬ配列が、配列番号７～１３から選択されるいずれか１つの配列であるか、または配列番号７～１３のいずれか１つの配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列である、項１または１４に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0033】
１６、前記ＶＨ配列及びＶＬ配列は、以下の配列の群：
配列番号１及び配列番号７、配列番号１及び配列番号８、配列番号２及び配列番号８、配列番号２及び配列番号１２、配列番号２及び配列番号１３、配列番号３及び配列番号８、配列番号４及び配列番号８、配列番号５及び配列番号９、配列番号５及び配列番号１０、配列番号５及び配列番号１１、配列番号６及び配列番号７、ならびに上記ＶＨ配列またはＶＬ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列から選択されるいずれかである、項１～１５のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
配列番号１及び配列番号７、配列番号１及び配列番号８、配列番号２及び配列番号８、配列番号２及び配列番号１２、配列番号２及び配列番号１３、配列番号３及び配列番号８、配列番号４及び配列番号８、配列番号５及び配列番号９、配列番号５及び配列番号１０、配列番号５及び配列番号１１、配列番号６及び配列番号７、ならびに上記ＶＨ配列またはＶＬ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列から選択されるいずれかである、項１～１５のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0034】
１７、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、またはマルチボディ（ｍｕｌｔｉｂｏｄｙ）から選択される、項１～１６のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0035】
１８、前記抗体が完全ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ抗体、またはナノボディである、項１～１７のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0036】
１９、ＩｇＧの重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域と、κ鎖またはλ鎖から選択される軽鎖定常領域とをさらに含む、項１～１８のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0037】
２０、前記重鎖定常領域がヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域である、項１９に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。いくつかの実施形態では、前記重鎖定常領域は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含むか、または配列番号１４と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列（例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列）を含む。
【0038】
２１、前記軽鎖定常領域がヒトκ鎖由来である、項１９または２０に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。いくつかの実施形態では、前記軽鎖定常領域は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むか、または配列番号１５と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列（例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列）を含む。
【0039】
２２、単一特異性抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である、項１～２１のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【0040】
２３、項１～２２のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
２４、プラスミド、ファージミド、ウイルスベクター、または線状核酸から選択される、項２３に記載の核酸分子を含む、構築物。
２４、プラスミド、ファージミド、ウイルスベクター、または線状核酸から選択される、項２３に記載の核酸分子を含む、構築物。
【0041】
２５、項１～２２のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを発現する、あるいは項２３に記載の核酸または項２４に記載の構築物を含む、ウイルス、ファージ、または細胞。
【0042】
２６、項１～２２のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、項２３に記載の核酸、項２４に記載の構築物、または項２５に記載のウイルス、ファージ、もしくは細胞を含む、医薬組成物。
【0043】
２７、項１～２２のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、項２３に記載の核酸、項２４に記載の構築物、または項２５に記載のウイルス、ファージ、もしくは細胞を含む、キット。
【0044】
２８、有効量の項２６に記載の医薬組成物を患者に投与することを含む、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を治療もしくは予防する、またはＢ型肝炎の症状を緩和する方法。
２９、項１～２２のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、項２３に記載の核酸、項２４に記載の構築物、または項２５に記載のウイルス、ファージ、もしくは細胞を、被験者からの体液と接触させることを含む、ＨＢＶを検出する方法。
２９、項１～２２のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、項２３に記載の核酸、項２４に記載の構築物、または項２５に記載のウイルス、ファージ、もしくは細胞を、被験者からの体液と接触させることを含む、ＨＢＶを検出する方法。
【0045】
３０、前記体液が、前記被検者の血漿または血清である、項２９記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【0046】
【図5】図５は、ヒトＩｇＧ１定常領域の０２１、０９０、０９１、及び０９３抗体を尾静脈注射した後、及びヒトＩｇＧ１定常領域の０２１を腹腔内注射した後の、ＡＡＶ／ＨＢＶマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡに対するそれぞれの効果を示す図である。
【図6】図６は、ヒトＩｇＧ１定常領域の０２１、０９０、０９１、及び０９３抗体を尾静脈注射した後、及びヒトＩｇＧ１定常領域の０２１を腹腔内注射した後の、ＡＡＶ／ＨＢＶマウスの血漿ＨＢｓＡｇに対するそれぞれの効果を示す図である。
【図7】図７は、ヒトＩｇＧ１定常領域の０２１、０９５、及び０９６抗体を尾静脈注射した後、及びヒトＩｇＧ１定常領域の０２１を腹腔内注射した後の、ＡＡＶ／ＨＢＶマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡに対するそれぞれの効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0047】
［発明の詳細］
００５２ 本願の目的は、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合することができる真新しい抗体またはその抗原結合フラグメントを提供することであり、前記結合により患者の血液中のＨＢｓＡｇの発現レベルを低下させ、ヒトの体自身のＴ細胞を活性化し、体自身の免疫系が感染した肝細胞を効果的に殺し始めることができ、ＨＢＶの増殖を阻害することができる。前記特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントにより、本出願は、ＨＢＶの予防及び治療のための新しい選択肢及びアイデアを提供すると同時に、ＨＢＶの検出及び診断のための新しいツールを提供する。
００５２ 本願の目的は、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合することができる真新しい抗体またはその抗原結合フラグメントを提供することであり、前記結合により患者の血液中のＨＢｓＡｇの発現レベルを低下させ、ヒトの体自身のＴ細胞を活性化し、体自身の免疫系が感染した肝細胞を効果的に殺し始めることができ、ＨＢＶの増殖を阻害することができる。前記特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントにより、本出願は、ＨＢＶの予防及び治療のための新しい選択肢及びアイデアを提供すると同時に、ＨＢＶの検出及び診断のための新しいツールを提供する。
【0048】
定義
本発明で使用されているように、用語の「抗体」は、「免疫グロブリン」とも呼ばれ、天然抗体の構造的特徴を有する抗体、及び天然抗体とは異なる構造的特徴を有するが抗原分子に対して結合特異性を示す抗体様分子を包含する。用語の抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学活性フラグメント、すなわち、抗原結合部位を含む分子を包含することを意図している。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）であってもよい。
本発明で使用されているように、用語の「抗体」は、「免疫グロブリン」とも呼ばれ、天然抗体の構造的特徴を有する抗体、及び天然抗体とは異なる構造的特徴を有するが抗原分子に対して結合特異性を示す抗体様分子を包含する。用語の抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学活性フラグメント、すなわち、抗原結合部位を含む分子を包含することを意図している。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）であってもよい。
【0049】
本明細書において、抗体の「抗原結合フラグメント」は、組換えＤＮＡ技術によって、または完全な抗体の酵素的または化学的切断によって得られる。抗原結合フラグメントは特に、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｄＡｂ及び相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、キメラ抗体、ダイアボディ、及び特異的な抗原結合の部分を付与するのに十分な免疫グロブリンを少なくとも含むポリペプチドを含む。本明細書に記載の抗原抗体フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＣＬ、ＶＨ及びＣＨ１ドメインを有するＦａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆａｂ’フラグメント、すなわち、ＣＨ１ドメインのＣ末端に１つ以上のシステイン残基を有するＦａｂフラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインを有するＦｄフラグメント；（ｉｖ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインを有し、かつＣＨ１ドメインのＣ末端に１つ以上のシステイン残基を有するＦｄ’フラグメント；（ｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインを有するＦｖフラグメント；（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１，５４４－５４６（１９８９））；（ｖｉｉ）単離されたＣＤＲ領域；（ｖｉｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントであって、ヒンジ領域でジスルフィド結合によって架橋された２つのＦａｂ’フラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｘ）一本鎖抗体分子（例えば、一本鎖Ｆｖ；ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６（１９８８）；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８５：５８７９－５８８３（１９８８））；（ｘ）同じポリペプチド鎖内の軽鎖可変領域（ＶＬ）に連結された重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、２つの抗原結合部位を有する「ダイアボディ」（例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒ Ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照）；（ｘｉ）一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む「線状抗体」であって、前記Ｆｄセグメントは相補的な軽鎖ポリペプチドと共に一対の抗原結合領域を形成するもの（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）；及び米国特許第５，６４１，８７０号）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0050】
用語の「重鎖」（「ＣＨ」）、「軽鎖」（「ＣＬ」）、「軽鎖可変領域」（「ＶＬ」）、「重鎖可変領域」（「ＶＨ」）、「フレームワーク」（「ＦＲ」）とは、天然に存在する免疫グロブリンのドメイン、及び合成（例えば、組換え）結合タンパク質（例えば、ヒト化抗体）の対応するドメインを指す。天然に存在する免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）の基本の構造単位は、２つの軽鎖と２つの重鎖を持つ四量体である。各鎖のアミノ末端（「Ｎ」）部分は、主に抗原認識を担当する約１００～１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。カルボキシ末端（各鎖の「Ｃ」）部分は定常領域を定義し、軽鎖は単一の定常領域を有し、重鎖は通常３つの定常領域と１つのヒンジ領域を有する。したがって、天然に存在する軽鎖構造ＩｇＧ分子はＮ’－ＶＬ－ＣＬ－Ｃ’であり、ＩｇＧ重鎖の構造はＮ’－ＶＨ－ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｃ’（Ｈはヒンジ領域）である。ＩｇＧ分子の可変領域は、抗原の認識と接触に関与する相補性決定領域（ＣＤＲ）と、可変領域の構造を維持し、ＣＤＲループの位置を決定するフレームワーク領域（ＦＲ）、すなわち非ＣＤＲセグメントとを含む。したがって、ＶＬ及びＶＨドメインは、Ｎ’－ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－Ｃ’という構造を有する。本願において、ＶＨの３つのＣＤＲはそれぞれＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と呼ばれ、ＶＨの４つのフレームワーク領域はそれぞれＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４と呼ばれ、ＶＬの３つのＣＤＲはそれぞれＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３と呼ばれ、ＶＬの４つのフレームワーク領域はそれぞれＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、ＬＦＲ４と呼ばれる。
【0051】
本願では、前記ＣＤＲ及びＦＲは、ＩｍｍｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ナンバリングシステム（例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．Ｐ．Ｔｈｅ ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ａｎｄ Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ．Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ ７，１３２－１３６，１９９９（１９９９）を参照）に従って識別される。
【0052】
本明細書で使用される「ナノボディ」という用語は、抗体重鎖の可変領域のみからなる単一ドメイン抗体を意味する。その相対的な分子サイズがナノスケールであるため、ナノボディと呼ばれる。ナノボディは、通常の抗体のように抗原にしっかりと結合できるが、一本鎖抗体のように互いにくっついて凝集することは容易ではない。「単一ドメイン抗体」という用語は、１つの可変領域、または標的結合のみを促進する操作された定常ドメインからなる独立した抗原結合単位である。「ダイアボディ」という用語は、ｓｃＦｖの二量体であり、２つのｓｃＦｖフラグメントが、ＶＨ及びＶＬドメインの鎖間対形成（交差対形成）によって共発現されてダイアボディを形成する。同様に、複数のｓｃＦｖによって形成される多量体は、マルチボディと呼ばれる。例えば、３つのｓｃＦｖからなるトリアボディ、４つのｓｃＦｖからなるテトラボディなどが挙げられる。ここで、各ｓｃＦｖは、同じ抗原特異性または異なる抗原特異性を有し得る。
【0053】
本明細書で使用される場合、「単一特異性抗体」、「二重特異性抗体」及び「多重特異性抗体」は、それぞれ、１つ、２つまたはそれ以上の異なる抗原、あるいは同じ抗原の１つ、２つまたはそれ以上の異なる抗原エピトープに結合する単一の抗体分子を指す。
【0054】
本明細書で使用されているように、用語の「キメラ抗体」とは、異なる種からの抗体フラグメントを組み合わせた抗体を指す。具体的には、例えば、組換えＤＮＡ技術を使用して、ある種（例えば、マウス）からのモノクローナル抗体のＦｃ定常領域を別の種（例えば、ヒト）のＦｃ定常領域に置き換えた抗体を指す。例えば、特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；ＥＰ／１７３，４９４を参照されたい。
【0055】
本明細書で使用されているように、用語の「ヒト化抗体」とは、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域及び非ヒト（例えば、マウス、ラット、ウサギ、または合成）免疫グロブリンからの１つまたは複数のＣＤＲを含む抗体を指す。ＣＤＲを除いて、ヒト化抗体の他のすべての部分は、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同じである。遺伝子工学によってヒト化抗体を構築する方法について、例えば、特許出願ＵＳ／５，５８５，０８９を参照されたい。
【0056】
本明細書で使用されているように、用語の「完全ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意図している。本技術の完全ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含んでもよい（例えば、ランダムまたは部位特異的インビトロ突然変異誘発、またはインビボ体細胞の突然変異によって導入される突然変異）。しかしながら、本明細書で使用されているように、用語の「完全ヒト抗体」は、別の哺乳動物種（例えば、ウサギ）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図しない。したがって、本明細書で使用されているように、用語の「完全ヒト抗体」とは、ヒトの天然免疫グロブリンと比べてわずかな配列変化または変異のみで、タンパク質分子の実質的にすべての部分（例えば、ＣＤＲ、ＦＲ、ＣＬ、ＨＣドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ、ＶＬ、ＶＨ）がヒトにおいて実質的に非免疫原性である抗体を指す。したがって、完全ヒト抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体とは異なる。なお、完全ヒト抗体は、機能的に再構成されたヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖及び／または軽鎖）遺伝子を発現することができる非ヒト動物または原核生物または真核生物細胞によって産生され得る。
【0057】
本明細書で使用される「特異的結合」という用語は、抗原決定基及び抗体分子の可変領域の空間コンフォメーションによって決定される高い親和性を有する相補的結合の特性を指す。この高い親和性は、前記抗体分子が前記抗原に結合すると、その対応する生理学的機能（例えば、本願のいくつかの実施形態では、前記抗体の前記抗原への結合及び除去に寄与する機能）を発揮できることを決定する。
【0058】
「ヒト共通フレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最もよく見いだされるアミノ酸残基を表すフレームワークのことである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列は、可変領域配列のサブグループから選択される。一般に、配列サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１）、第１～３巻のサブグループのようなものである。一部の実施形態では、ＶＬについて、前記サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（同上）によって記載されているサブグループκIである。一部の実施形態では、ＶＨについて、前記サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（同上）によって記載されているサブグループＩＩＩである。
【0059】
２つのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列間の「相同性」または「同一性」とは、２つの配列間の同一のアミノ酸残基またはヌクレオチド残基のパーセンテージを指す。互いに比較される２つの配列の長さが異なる場合、配列「相同性」または「同一性」は、好ましくは、より長い配列のアミノ酸残基またはヌクレオチド残基と同一である短い配列のヌクレオチド残基のパーセンテージを指す。配列同一性は、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ配列分析パッケージなど、当技術分野で一般的に使用される配列解析ソフトウェアを使用することによって通常に決定することができる。
【0060】
本出願において、「ポリヌクレオチド」または「核酸」及び「核酸分子」という用語は、交換可能に使用され、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ（相補的ＤＮＡ）、ｍＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）、ｒＲＮＡ（リボソームＲＮＡ）、ｓｈＲＮＡ（ショートヘアピンＲＮＡ）、ｓｎＲＮＡ（核内低分子ＲＮＡ）、ｓｎｏＲＮＡ（核小体低分子ＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ（マイクロＲＮＡ）、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、合成ＲＮＡ及び／またはｔＲＮＡを含むがこれらに限定されない。
【0061】
本明細書で使用される場合、「構築物」とは、宿主を形質転換し、導入された配列の発現（転写及び翻訳など）を促進するために、それを介してポリヌクレオチド配列（外来遺伝子など）を宿主細胞に導入することができるベクターを指し、プラスミド、ファージミド、ウイルスベクターなどを含む。
【0062】
本明細書で使用する場合、「ファージミド」という用語は、繊維状ファージ由来のベクターであり、その基本的な構成要素は主にプラスミド複製起点、選択マーカー、遺伝子間領域（ＩＧ領域）を含み、通常、ネガティブ鎖及びポジティブ鎖のパッケージング配列と複製起点、ファージコートタンパク質遺伝子、制限エンドヌクレアーゼ認識部位、プロモーター、及びシグナルペプチドをコードするＤＮＡフラグメントも含む。さらに、ファージミドは、ファージミドベースのライブラリーのスクリーニングを容易にするために分子タグを含むこともできる。ファージミドは、子孫ファージ粒子のアセンブリ（組み立て）を独立して完了することはできず、ライフサイクルを完了するために必要な他の構造的及び機能的タンパク質は、ヘルパーファージによって提供される。ヘルパーファージはＤＮＡ複製効率が極めて低い繊維状ファージの変異体であるため、ヘルパーファージとファージミドがパッケージングにより形成されたファージは宿主菌に共感染すると、ファージミドを含むファージを大量にパッケージングできるが、少量のヘルパーファージのみをパッケージングする。
【0063】
本明細書において「プラスミド」とは、細菌、酵母、放線菌などの生物の染色体（またはヌクレオイド（核様体））以外のＤＮＡ分子であり、細胞質や核に存在し、自律的に複製する能力を有し、それによって子孫細胞で一定のコピー数を維持し、持っている遺伝情報を表現することもできる。
【0064】
本明細書で使用される場合、「ウイルスベクター」とは、外来遺伝子及び関連する遺伝要素を運ぶことができ、ウイルス粒子にパッケージ化され、ウイルス侵入によって持っている外来遺伝子を細胞に導入する、遺伝子操作されたウイルスゲノムである、ウイルスベースの遺伝子ベクターを指す。
【0065】
本明細書で特に定義しない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
抗体またはその抗原結合フラグメント
一態様では、本願は、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一般に、本願の抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含み、ここで：
前記重鎖可変領域は、以下に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列の一般式：
ＨＣＤＲ１：Ｘ１ＹＸ３ＦＸ５Ｘ６Ｘ７Ｙ（配列番号３３）、
ＨＣＤＲ２：Ｘ１１ＮＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号３４）、
ＨＣＤＲ３：ＡＲＤＸ２１ＷＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６ＤＸ２８ＹＧＭＤＸ３３（配列番号３５）を含み、
前記軽鎖可変領域は、以下に示すＣＤＲアミノ酸配列：
ＬＣＤＲ１：Ｘ３４Ｘ３５Ｘ３６ＳＸ３８Ｘ３９（配列番号３６）、
ＬＣＤＲ２：Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２（配列番号３７）、
ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＹＳＴＰＬＸ５１（配列番号３８）を含み、
ここで、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ２１、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２８、Ｘ３３、Ｘ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２、及びＸ５１はすべて、いずれかのアミノ酸から選択できる。前記いずれかのアミノ酸は、２０種類の天然アミノ酸のいずれであってもよく、人工的に合成または改変されたアミノ酸であってもよい。
抗体またはその抗原結合フラグメント
一態様では、本願は、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一般に、本願の抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含み、ここで：
前記重鎖可変領域は、以下に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列の一般式：
ＨＣＤＲ１：Ｘ１ＹＸ３ＦＸ５Ｘ６Ｘ７Ｙ（配列番号３３）、
ＨＣＤＲ２：Ｘ１１ＮＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号３４）、
ＨＣＤＲ３：ＡＲＤＸ２１ＷＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６ＤＸ２８ＹＧＭＤＸ３３（配列番号３５）を含み、
前記軽鎖可変領域は、以下に示すＣＤＲアミノ酸配列：
ＬＣＤＲ１：Ｘ３４Ｘ３５Ｘ３６ＳＸ３８Ｘ３９（配列番号３６）、
ＬＣＤＲ２：Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２（配列番号３７）、
ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＹＳＴＰＬＸ５１（配列番号３８）を含み、
ここで、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ２１、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２８、Ｘ３３、Ｘ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２、及びＸ５１はすべて、いずれかのアミノ酸から選択できる。前記いずれかのアミノ酸は、２０種類の天然アミノ酸のいずれであってもよく、人工的に合成または改変されたアミノ酸であってもよい。
【0066】
ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３は、重鎖可変領域の３つのＣＤＲを表し、重鎖可変領域のＮ’末端からＣ’末端まで順に配置されている。同様に、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３は、軽鎖可変領域の３つのＣＤＲを表し、軽鎖可変領域のＮ’末端からＣ’末端まで順に配置されている。
【0067】
本願の実施例では、前記一般式によって提供されるＣＤＲを検出するためにいくつかのアミノ酸が選択され、それは、Ｘ１がＧまたはＡである場合、Ｘ３がＴ、ＡまたはＳである場合、Ｘ５がＴ、ＡまたはＩである場合、Ｘ６がＧ、Ａ、ＹまたはＤの場合、Ｘ７がＹまたはＡの場合、Ｘ１１がＩまたはＡの場合、Ｘ１３がＰまたはＡの場合、Ｘ１４がＮ、ＡまたはＹの場合、Ｘ１５がＳ、ＡまたはＮの場合、Ｘ１６がＧまたはＡの場合、Ｘ１７がＧまたはＡの場合、Ｘ１８がＴまたはＡの場合、Ｘ２１がＬ、Ａ、またはＶの場合、Ｘ２３がＮ、Ｑ、またはＡの場合、Ｘ２４がＤ、Ｑ、またはＡの場合、Ｘ２５がＤ、ＧまたはＡの場合、Ｘ２６がＶ、ＧまたはＡの場合、Ｘ２８がＹまたはＡの場合、Ｘ３３がＶまたはＡの場合、Ｘ３４がＱまたはＡの場合、Ｘ３５がＳまたはＡの場合、Ｘ３６がＩ、ＡまたはＶの場合、Ｘ３８がＴ、ＡまたはＳの場合、Ｘ３９がＹまたはＡの場合、Ｘ４０がＡ、Ｇ、Ｄ、ＴまたはＳの場合、Ｘ４１がＡまたはＳの場合、Ｘ４２がＡまたはＳの場合、Ｘ５１がＴまたはＡの場合を含む。検出結果は、前記一般式を含む本願の抗体がＨＢｓＡｇに特異的に結合できることを確認した。
【0068】
当業者は、前記一般式中の各Ｘｎ（ここで、ｎは一般式中の各Ｘの整数の下付き文字を表す）の各値を互いに組み合わせることができることを知っているであろう。例えば、いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１中のＸ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７は順番に、以下の組み合わせ：Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ｙ；Ａ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ａ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ａ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ａ；Ｇ、Ｓ、Ｉ、Ｇ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｄ、Ｙ；Ｇ、Ｔ、Ｔ、Ｙ、Ｙのいずれかから選択される。いくつかの特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＴＧＹＹ（配列番号１７）；ＧＹＳＦＩＧＹＹ（配列番号１８）；ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号１９）；ＧＹＴＦＴＹＹＹ（配列番号２０）から選択される。
【0069】
ＨＣＤＲ２では、Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、及びＸ１８は順番に、以下の組み合わせ：Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ａ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ａ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ａ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ａ、Ｇ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｔ；Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｇ、Ａ；Ｉ、Ｐ、Ｙ、Ｎ、Ｇ、Ｇ、Ｔのいずれかから選択される。いくつかの特定の実施形態では、ＨＣＤＲ２は、ＩＮＰＮＳＧＧＴ（配列番号２１）；ＩＮＰＹＮＧＧＴ（配列番号２２）から選択される。
【0070】
ＨＣＤＲ３では、Ｘ２１、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２８、Ｘ３３は順番に、次の組み合わせ：Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ａ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ａ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ａ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ａ、Ｖ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ａ、Ｙ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ａ、Ｖ；Ｌ、Ｎ、Ｄ、Ｄ、Ｖ、Ｙ、Ａ；Ｖ、Ｑ、Ｑ、Ｇ、Ｇ、Ｙ、Ｖのいずれかから選択される。いくつかの特定の実施形態では、ＨＣＤＲ３は、ＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶ（配列番号２３）またはＡＲＤＶＷＱＱＧＧＹＹＹＹＭＤＶ（配列番号２４）である。
【0071】
ＬＣＤＲ１では、Ｘ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３８、及びＸ３９は順番に、次の組み合わせ：Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ｔ、Ｙ；Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｔ、Ｙ；Ｑ、Ａ、Ｉ、Ｔ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ａ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ｔ、Ａ；Ｑ、Ｓ、Ｉ、Ｓ、Ｙ；Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｙのいずれかから選択される。いくつかの特定の実施形態では、ＬＣＤＲ１は、ＱＳＩＳＴＹ（配列番号２５）；ＱＳＩＳＳＹ（配列番号２６）；ＱＳＶＳＳＹ（配列番号２７）から選択される。
【0072】
ＬＣＤＲ２では、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２が順番に、次の組み合わせ：Ａ、Ａ、Ｓ；Ｓ、Ａ、Ｓ；Ａ、Ｓ、Ｓ；Ａ、Ａ、Ａ；Ｇ、Ａ、Ｓ；Ｄ、Ａ、Ｓ；Ｔ、Ａ、Ｓのいずれかから選択される。いくつかの特定の実施形態では、ＬＣＤＲ２は、ＡＡＳ（配列番号２８）；ＧＡＳ（配列番号２９）；ＤＡＳ（配列番号３０）；ＴＡＳ（配列番号３１）から選択される。
【0073】
ＬＣＤＲ３のＸ５１は、ＴまたはＡから選択される。いくつかの特定の実施形態では、ＬＣＤＲ３はＱＱＳＹＳＴＰＬＴ（配列番号３２）である。
いくつかの実施形態では、前記ＶＨは、
配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３；または
配列番号２０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるＨＣＤＲ３；または
配列番号１８に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２２に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３；または
配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、前記ＶＨは、
配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３；または
配列番号２０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるＨＣＤＲ３；または
配列番号１８に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２２に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３；または
配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含む。
【0074】
いくつかの実施形態では、前記ＶＬは、
配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１；配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３；または
配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１；配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３；または
配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１；配列番号２９に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３；または
配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１；配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３；または
配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１；配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３；または
配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１；配列番号３１に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む。
配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１；配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３；または
配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１；配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３；または
配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１；配列番号２９に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３；または
配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１；配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３；または
配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１；配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３；または
配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１；配列番号３１に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む。
【0075】
いくつかの実施形態では、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含み、
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号２０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１８に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２２に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２９に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３１に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む。
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号２０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１８に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２２に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２９に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３１に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む。
【0076】
ここで、いずれかの組み合わせを選択した後、ＣＤＲの群の特定の配列を、上記の一般式に従って決定し得る。ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の特定の配列は、上記の表１の組み合わせなど、特定の重鎖ＣＤＲの組み合わせをさらに形成することができる。同様に、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３の特定の配列は、上記の表２の組み合わせなど、軽鎖ＣＤＲの特定の組み合わせをさらに形成することができる。ＨＣＤＲの群とＬＣＤＲの群をランダムに組み合わせることもできる。例えば、いくつかの特定の実施形態では、軽鎖及び重鎖のＣＤＲの組み合わせは、上の表３に示される通りである。
【0077】
さらに、いくつかの実施形態では、前記ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体は、各ＣＤＲ領域の両側にフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含み、前記フレームワーク領域は、ヒト共通フレームワーク領域であるか、または少なくとも１つのアミノ酸の置換、欠失もしくは挿入を含むヒト共通フレームワーク領域である。１つの例示的な実施形態では、ＶＨは、以下に示すＦＲアミノ酸配列：
ＨＦＲ１：Ｚ１Ｚ２Ｚ３ＬＺ４Ｚ５ＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＺ６ＫＶＳＣＫＡＳ（配列番号３９）
ＨＦＲ２：Ｚ７ＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＺ８ＥＷＭＧＷ（配列番号４０）
ＨＦＲ３：ＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＺ９ＴＺ１０ＤＺ１１ＳＺ１２ＳＴＡＹＭＥＬＳＺ１３ＬＲＳＺ１４ＤＴＡＶＹＹＣ（配列番号４１）
ＨＦＲ４：ＷＧＺ１５ＧＴＺ１６ＶＴＶＳＳ（配列番号４２）を含み、
ＶＬは、以下に示すＦＲアミノ酸配列：
ＬＦＲ１：Ｚ１７Ｚ１８Ｚ１９ＬＴＱＳＰＺ２０Ｚ２１ＬＳＺ２２ＳＺ２３ＧＺ２４ＲＺ２５ＴＺ２６Ｚ２７ＣＲＡＳ（配列番号４３）
ＬＦＲ２：ＬＺ２８ＷＹＱＱＫＰＧＺ２９ＡＰＺ３０ＬＬＩＺ３１（配列番号４４）
ＬＦＲ３：Ｚ３２Ｚ３３Ｚ３４Ｚ３５ＧＺ３６ＰＺ３７ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＺ３８ＦＴＬＴＩＺ３９ＳＬＺ４０Ｚ４１Ｚ４２ＤＺ４３ＡＴＹＹＣ（配列番号４５）
ＬＦＲ４：ＦＧＺ４４ＧＴＺ４５Ｚ４６Ｚ４７ＩＫＲ（配列番号４６）を含み、ここで、Ｚ１～Ｚ４７はそれぞれいずれかのアミノ酸から選択される。前記いずれのアミノ酸は、２０種類の天然アミノ酸のいずれであってもよく、人工的に合成または改変されたアミノ酸であってもよい。
ＨＦＲ１：Ｚ１Ｚ２Ｚ３ＬＺ４Ｚ５ＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＺ６ＫＶＳＣＫＡＳ（配列番号３９）
ＨＦＲ２：Ｚ７ＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＺ８ＥＷＭＧＷ（配列番号４０）
ＨＦＲ３：ＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＺ９ＴＺ１０ＤＺ１１ＳＺ１２ＳＴＡＹＭＥＬＳＺ１３ＬＲＳＺ１４ＤＴＡＶＹＹＣ（配列番号４１）
ＨＦＲ４：ＷＧＺ１５ＧＴＺ１６ＶＴＶＳＳ（配列番号４２）を含み、
ＶＬは、以下に示すＦＲアミノ酸配列：
ＬＦＲ１：Ｚ１７Ｚ１８Ｚ１９ＬＴＱＳＰＺ２０Ｚ２１ＬＳＺ２２ＳＺ２３ＧＺ２４ＲＺ２５ＴＺ２６Ｚ２７ＣＲＡＳ（配列番号４３）
ＬＦＲ２：ＬＺ２８ＷＹＱＱＫＰＧＺ２９ＡＰＺ３０ＬＬＩＺ３１（配列番号４４）
ＬＦＲ３：Ｚ３２Ｚ３３Ｚ３４Ｚ３５ＧＺ３６ＰＺ３７ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＺ３８ＦＴＬＴＩＺ３９ＳＬＺ４０Ｚ４１Ｚ４２ＤＺ４３ＡＴＹＹＣ（配列番号４５）
ＬＦＲ４：ＦＧＺ４４ＧＴＺ４５Ｚ４６Ｚ４７ＩＫＲ（配列番号４６）を含み、ここで、Ｚ１～Ｚ４７はそれぞれいずれかのアミノ酸から選択される。前記いずれのアミノ酸は、２０種類の天然アミノ酸のいずれであってもよく、人工的に合成または改変されたアミノ酸であってもよい。
【0078】
ここで、ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４は、重鎖可変領域の４つのＦＲを表し、重鎖可変領域のＮ’末端からＣ’末端まで順に配置されている。同様に、ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦ４は、軽鎖可変領域の４つのＦＲを表し、軽鎖可変領域のＮ’末端からＣ’末端まで順に配置されている。
【0079】
本願の実施例では、特定のＦＲ配列を形成するためにいくつかのアミノ酸が選択され、前述のＣＤＲとのランダムなマッチングによって、ＣＤＲコンフォメーションに対する前記ＦＲアミノ酸配列の一般式の支持効果が検出された。選択されたアミノ酸は、例えば、以下を含む：
Ｚ１はＱまたはＥから選択され、Ｚ２はＶまたはＩから選択され、Ｚ３はＱまたはＴから選択され、Ｚ４はＶまたはＫから選択され、Ｚ５はＥまたはＱから選択され、Ｚ６はＶまたはＭから選択され、Ｚ７はＭ、ＩまたはＬから選択され、Ｚ８はＬまたはＰから選択され、Ｚ９はＭまたはＩであり、Ｚ１０はＲまたはＡであり、Ｚ１１はＴまたはＫであり、Ｚ１２はＩまたはＴであり、Ｚ１３はＲまたはＳであり、Ｚ１４はＤまたはＥであり、Ｚ１５はＫまたはＱから選択され、Ｚ１６はＬまたはＭから選択され、Ｚ１７はＤまたはＥから選択され、Ｚ１８はＩまたはＴから選択され、Ｚ１９はＱ、ＴまたはＶから選択され、Ｚ２０はＳ、ＡまたはＧから選択され、Ｚ２１はＳまたはＴから選択され、Ｚ２２はＡまたはＬから選択され、Ｚ２３はＶまたはＰから選択され、Ｚ２４はＤまたはＥから選択され、Ｚ２５はＶまたはＡから選択され、Ｚ２６はＩまたはＬから選択され、Ｚ２７はＴまたはＳから選択され、Ｚ２８はＮまたはＡから選択され、Ｚ２９はＫまたはＱから選択され、Ｚ３０はＫ、ＱまたはＲから選択され、Ｚ３１はＹまたはＳから選択され、Ｚ３２はＳまたはＮから選択され、Ｚ３３はＬまたはＲから選択され、Ｚ３４はＱまたはＡから選択され、Ｚ３５はＳまたはＴから選択され、Ｚ３６はＶまたはＩから選択され、Ｚ３７はＳまたはＡから選択され、Ｚ３８はＤまたはＥから選択され、Ｚ３９はＳまたはＲであり、Ｚ４０はＱまたはＥから選択され、Ｚ４１はＰまたはＳから選択され、Ｚ４２はＥまたはＧから選択され、Ｚ４３はＦまたはＬから選択され、Ｚ４４はＧ、ＱまたはＰから選択され、Ｚ４５はＫまたはＲから選択、Ｚ４６はＶまたはＬから選択、Ｚ４７はＤまたはＥから選択される。
Ｚ１はＱまたはＥから選択され、Ｚ２はＶまたはＩから選択され、Ｚ３はＱまたはＴから選択され、Ｚ４はＶまたはＫから選択され、Ｚ５はＥまたはＱから選択され、Ｚ６はＶまたはＭから選択され、Ｚ７はＭ、ＩまたはＬから選択され、Ｚ８はＬまたはＰから選択され、Ｚ９はＭまたはＩであり、Ｚ１０はＲまたはＡであり、Ｚ１１はＴまたはＫであり、Ｚ１２はＩまたはＴであり、Ｚ１３はＲまたはＳであり、Ｚ１４はＤまたはＥであり、Ｚ１５はＫまたはＱから選択され、Ｚ１６はＬまたはＭから選択され、Ｚ１７はＤまたはＥから選択され、Ｚ１８はＩまたはＴから選択され、Ｚ１９はＱ、ＴまたはＶから選択され、Ｚ２０はＳ、ＡまたはＧから選択され、Ｚ２１はＳまたはＴから選択され、Ｚ２２はＡまたはＬから選択され、Ｚ２３はＶまたはＰから選択され、Ｚ２４はＤまたはＥから選択され、Ｚ２５はＶまたはＡから選択され、Ｚ２６はＩまたはＬから選択され、Ｚ２７はＴまたはＳから選択され、Ｚ２８はＮまたはＡから選択され、Ｚ２９はＫまたはＱから選択され、Ｚ３０はＫ、ＱまたはＲから選択され、Ｚ３１はＹまたはＳから選択され、Ｚ３２はＳまたはＮから選択され、Ｚ３３はＬまたはＲから選択され、Ｚ３４はＱまたはＡから選択され、Ｚ３５はＳまたはＴから選択され、Ｚ３６はＶまたはＩから選択され、Ｚ３７はＳまたはＡから選択され、Ｚ３８はＤまたはＥから選択され、Ｚ３９はＳまたはＲであり、Ｚ４０はＱまたはＥから選択され、Ｚ４１はＰまたはＳから選択され、Ｚ４２はＥまたはＧから選択され、Ｚ４３はＦまたはＬから選択され、Ｚ４４はＧ、ＱまたはＰから選択され、Ｚ４５はＫまたはＲから選択、Ｚ４６はＶまたはＬから選択、Ｚ４７はＤまたはＥから選択される。
【0080】
いくつかの実施形態では、ＨＦＲ１中のＺ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６は順番に、以下の組み合わせ：Ｑ、Ｖ、Ｑ、Ｖ、Ｅ、Ｖ；Ｅ、Ｖ、Ｑ、Ｖ、Ｑ、Ｖ；Ｅ、Ｖ、Ｑ、Ｖ、Ｅ、Ｖ；Ｑ、Ｉ、Ｔ、Ｋ、Ｅ、Ｖ；Ｅ、Ｖ、Ｑ、Ｖ、Ｑ、Ｍのいずれかから選択される；ＨＦＲ２のＺ７、Ｚ８は順番に、次の組み合わせ：Ｍ、Ｌ；Ｌ、Ｌ；Ｉ、Ｐのいずれかから選択される；ＨＦＲ３のＺ９、Ｚ１０、Ｚ１１、Ｚ１２、Ｚ１３、Ｚ１４の組み合わせは、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｉ、Ｒ、Ｄ；またはＩ、Ａ、Ｋ、Ｔ、Ｓ、Ｅである；ＨＦＲ４のＺ１５とＺ１６の組み合わせは、Ｋ、Ｌ；Ｑ、Ｍ；Ｑ、Ｌ、またはＫ、Ｍである。いくつかの実施形態では、前記ＬＦＲ１中のＺ１７、Ｚ１８、Ｚ１９、Ｚ２０、Ｚ２１、Ｚ２２、Ｚ２３、Ｚ２４、Ｚ２５、Ｚ２６、及びＺ２７は順番に、以下の組み合わせ：Ｄ、Ｉ、Ｑ、Ｓ、Ｓ、Ａ、Ｖ、Ｄ、Ｖ、Ｉ、Ｔ；Ｅ、Ｉ、Ｖ、Ｇ、Ｔ、Ｌ、Ｐ、Ｅ、Ａ、Ｌ、Ｓ；Ｅ、Ｉ、Ｖ、Ａ、Ｔ、Ｌ、Ｐ、Ｅ、Ａ、Ｌ、Ｓ；Ｅ、Ｔ、Ｔ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｄ、Ｖ、Ｉ、Ｔのいずれかから選択される。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ２中のＺ２８、Ｚ２９、Ｚ３０、及びＺ３１は順番に、以下の組み合わせ：Ｎ、Ｋ、Ｋ、Ｙ；Ａ、Ｑ、Ｒ、Ｙ；Ｎ、Ｋ、Ｋ、Ｓ；Ｎ、Ｋ、Ｑ、Ｙのいずれかから選択される。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ３中のＺ３２、Ｚ３３、Ｚ３４、Ｚ３５、Ｚ３６、Ｚ３７、Ｚ３８、Ｚ３９、Ｚ４０、Ｚ４１、Ｚ４２、Ｚ４３は順番に、以下の組み合わせ：Ｓ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｄ、Ｓ、Ｑ、Ｐ、Ｅ、Ｆ；Ｓ、Ｒ、Ａ、Ｔ、Ｉ、Ａ、Ｅ、Ｓ、Ｑ、Ｓ、Ｅ、Ｆ；Ｎ、Ｒ、Ａ、Ｔ、Ｉ、Ａ、Ｄ、Ｓ、Ｅ、Ｐ、Ｅ、Ｆ；Ｓ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｑ、Ｐ、Ｅ、Ｆ；Ｓ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｓ、Ｄ、Ｓ、Ｑ、Ｐ、Ｇ、Ｌのいずれかから選択される。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ４中のＺ４４、Ｚ４５、Ｚ４６、及びＺ４７は順番に、以下の組み合わせ：Ｇ、Ｋ、Ｖ、Ｄ；Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｅ；Ｐ、Ｋ、Ｖ、Ｅ；Ｇ、Ｋ、Ｖ、Ｅ；Ｑ、Ｒ、Ｌ、Ｅのいずれかから選択される。
【0081】
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域におけるＦＲの可変パラメーターＺｎ（ここで、ｎは、一般式における各Ｚの整数の下付き文字を表す）は、前述の表４の任意の組み合わせから順に選択することができる。同様に、軽鎖可変領域のＦＲの可変パラメーターＺｎは、上記表５の任意の組み合わせから順次選択することができる。いくつかの実施形態において、軽鎖及び重鎖のＣＤＲの組み合わせは、上記の表６に示される通りである。
【0082】
ここで明確されたいのは、表１から表６などの本願のすべての表は、各行の枠におけるすべてのパラメーター値（例えばＺｎのパラメーター値またはＸｎのパラメーター値）が１つまたは一種類の組み合わせを形成することである。
【0083】
いくつかの特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号１～６から選択される。いくつかの特定の実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号７～１３から選択される。いくつかの特定の実施形態では、前記抗体のＶＨ配列は配列番号１～６から選択され、前記ＶＬ配列は配列番号７～１３から選択される。いくつかの特定の実施形態では、ＶＨ配列及びＶＬ配列は、配列番号１及び配列番号７、配列番号１及び配列番号８、配列番号２及び配列番号８、配列番号２及び配列番号１２、配列番号２及び配列番号１３、配列番号３及び配列番号８、配列番号４及び配列番号配列番号８、配列番号５及び配列番号９、配列番号５及び配列番号１０、配列番号５及び配列番号１１、配列番号６及び配列番号７のいずれかの群から選択される。
【0084】
しかし、当業者は、すべての抗体またはその抗原結合フラグメントが完全な重鎖及び軽鎖可変領域を含むわけではないことを理解するであろう。さらに、多くの場合、抗体抗原結合フラグメントのみを含むタンパク質分子は、抗原に特異的に結合及び／または中和する能力を依然として持っている。いくつかの実施形態では、前記抗体は、抗体のＶＨ及び／またはＶＬのみを含んでもよく、例えばｄＡｂ、軽鎖可変領域のみを含む単一ドメイン抗体、ナノボディなどである。いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは定常領域を含まなくてもよく、例えば前述のＨＣＤＲ及びＬＣＤＲを含むｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆｄ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、またはマルチボディ（ｍｕｌｔｉｂｏｄｙ）から選択される。ここで、前記ダイアボディ及びマルチボディは、１つ、２つ、またはそれ以上の前述のｓｃＦｖを含み、ＨＢｓＡｇまたは他の抗原に特異的に結合する他のｓｃＦｖを含み得る。いくつかの実施形態では、前記抗体は、単一特異性抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。また、本願に記載の抗体の抗原結合フラグメントとして、本願に開示される各種ＣＤＲ、前記ＣＤＲの組み合わせ、及び前記ＣＤＲ（ＨＣＤＲ３及び／またはＬＣＤＲ３など）を含みながらＨＢｓＡｇを特異的に認識する能力を保持する抗体または抗体結合フラグメントも本出願の保護範囲内に含まれる。
【0085】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ抗体またはナノボディである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記重鎖定常領域及び／または軽鎖定常領域は、天然の免疫グロブリンに由来し、例えば、前記重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ、またはサブタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に由来し得る。軽鎖定常領域は、κ鎖またはλ鎖から選択され得る。いくつかの特定の実施形態では、前記重鎖定常領域は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む、または配列番号１４と７０％以上の配列同一性を有する、例えば、配列番号１４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域である。いくつかの特定の実施形態では、前記軽鎖定常領域はκ鎖に由来し、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む、または配列番号１５と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、例えば、配列番号１５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記重鎖定常領域及び／または軽鎖定常領域は、天然の免疫グロブリンに由来し、例えば、前記重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ、またはサブタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に由来し得る。軽鎖定常領域は、κ鎖またはλ鎖から選択され得る。いくつかの特定の実施形態では、前記重鎖定常領域は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む、または配列番号１４と７０％以上の配列同一性を有する、例えば、配列番号１４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域である。いくつかの特定の実施形態では、前記軽鎖定常領域はκ鎖に由来し、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む、または配列番号１５と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、例えば、配列番号１５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0086】
核酸、構築物、ウイルス、ファージまたは細胞
一態様では、本願はまた、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前述の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、前記核酸分子はＲＮＡまたはＤＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、前記核酸は一本鎖または二本鎖である。いくつかの実施形態では、前記核酸は線状または環状である。前記核酸は、細胞によって、または化学的に合成することができる。いくつかの実施形態では、前記核酸は化学的に修飾された核酸分子である。
一態様では、本願はまた、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前述の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、前記核酸分子はＲＮＡまたはＤＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、前記核酸は一本鎖または二本鎖である。いくつかの実施形態では、前記核酸は線状または環状である。前記核酸は、細胞によって、または化学的に合成することができる。いくつかの実施形態では、前記核酸は化学的に修飾された核酸分子である。
【0087】
一態様では、本出願は、前述の核酸分子を含む構築物も提供し、前記構築物は、プラスミド、ファージミド、ウイルスベクター、または線状核酸から選択される。本願は、上述の構築物を含む構築物の組成物も提供し、組成物中の各構築物はそれぞれ、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する上述の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子の一部を含み得る。例えば、構築物の組成物であって、該構築物はプラスミドであり、該構築物の組成物はそれぞれ、前述の抗体分子の重鎖及び軽鎖をコードするものを含むプラスミドを含む。
【0088】
一態様では、本願はまた、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前述の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現または含有する、あるいは前述の核酸、前述の構築物、または前述の構築物の組成物を含むウイルス、ファージまたは細胞を提供する。前記ウイルスは、例えば、ＡＡＶ、レンチウイルスなどから選択される。前記ファージは、例えばλファージ、Ｔファージ、Ｍ１３ファージ、ｆ１ファージ、ｆｄファージなどから選択される。前記細胞は、例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、細菌、真菌などから選択され得る。
【0089】
さらに、本願はまた、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するための核酸、構築物、ウイルス、ファージまたは細胞の使用を含む。
医薬組成物及び治療法
本願はまた、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する上記抗体またはその抗原結合フラグメント、上記核酸、上記構築物、または上記ウイルス、ファージもしくは細胞を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、適切な量の薬学的に許容される添加剤（補助物質）をさらに含む。これらの添加剤は、とりわけ、送達及び許容性などを改善するために処方に組み込まれる。すべての製薬化学者によく知られている薬局方、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）には、大量の適切な処方が記載されている。本明細書において、薬学的に許容される添加剤とは、非毒性の充填剤、安定剤、希釈剤、担体、溶媒または他の製剤添加剤を指す。これらのうち、微結晶セルロース、マンニトールなどの希釈剤、賦形剤；デンプン、スクロースなどの充填剤；デンプン、セルロース誘導体、アルギン酸塩、ゼラチン及び／またはポリエチレンピロリドンなどの結合剤；炭酸カルシウム及び/または重炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；セチルアルコールなどの界面活性剤；水、生理食塩水、カオリン、ベントナイトなどの担体、溶媒；タルク、ステアリン酸カルシウム／マグネシウム、ポリエチレングリコールなどの潤滑剤が挙げられる。また、本発明の医薬組成物は注射剤であることが好ましい。
医薬組成物及び治療法
本願はまた、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する上記抗体またはその抗原結合フラグメント、上記核酸、上記構築物、または上記ウイルス、ファージもしくは細胞を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、適切な量の薬学的に許容される添加剤（補助物質）をさらに含む。これらの添加剤は、とりわけ、送達及び許容性などを改善するために処方に組み込まれる。すべての製薬化学者によく知られている薬局方、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）には、大量の適切な処方が記載されている。本明細書において、薬学的に許容される添加剤とは、非毒性の充填剤、安定剤、希釈剤、担体、溶媒または他の製剤添加剤を指す。これらのうち、微結晶セルロース、マンニトールなどの希釈剤、賦形剤；デンプン、スクロースなどの充填剤；デンプン、セルロース誘導体、アルギン酸塩、ゼラチン及び／またはポリエチレンピロリドンなどの結合剤；炭酸カルシウム及び/または重炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；セチルアルコールなどの界面活性剤；水、生理食塩水、カオリン、ベントナイトなどの担体、溶媒；タルク、ステアリン酸カルシウム／マグネシウム、ポリエチレングリコールなどの潤滑剤が挙げられる。また、本発明の医薬組成物は注射剤であることが好ましい。
【0090】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントは、１ｍｇ／ｍｌから１０００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌから１０００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し、より好ましくは５０ｍｇ／ｍｌから５００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し、さらにより好ましくは１００ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【0091】
本発明の医薬組成物は、ｐＨが３．０～９．０であることが好ましい。ここで、緩衝系、防腐剤、表面張力剤、キレート剤、安定剤、及び界面活性剤をさらに含むことができる。本発明の一実施形態では、本発明の医薬組成物は水性製剤である。このような製剤は、通常、溶液または懸濁液である。本発明の特定の実施形態では、該医薬組成物は安定な水性溶液である。本発明の別の特定の実施形態では、該医薬組成物は凍結乾燥製剤であり、使用前に医師または患者は溶媒及び／または希釈剤を加えて前記凍結乾燥製剤を溶解する。
【0092】
一態様では、本出願は、適切な用量の前述の医薬組成物を患者に投与することを含む、ＨＢＶ感染を治療する方法も提供する。その適切な用量は、被検者の年齢、体格、対象疾患、症状、投与経路等により適宜増減される。本発明の医薬組成物が、成人のＢ型肝炎ウイルス感染に関連するさまざまな症状及び疾患の治療のために、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する上記抗体またはその抗原結合フラグメントを含む場合、前記医薬組成物は、静脈内投与することができ、典型的には、体重１キログラムあたり約０．０１から約２０ｍｇの抗体の単回用量、例えば、約０．１から約１５、約１から約１０、約３から約１０ｍｇ／ｋｇ体重（ｍｐｋ）、約１２ｍｐｋ体重で投与する。治療の頻度と期間は、病気の重症度に応じて調整することができる。例えば、患者に週に一度投与する。
【0093】
本発明の医薬組成物を投与するために使用できる様々な薬剤送達システムが知られている。例えば、リポソーム、マイクロ粒子、マイクロカプセルへのカプセル化、突然変異ウイルスを発現できる組換え細胞、受容体介在エンドサイトーシス効果（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，（１９８７），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照）などが挙げられる。薬剤の投与方法には、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口などの経路が含まれるが、これらに限定されない。当該医薬組成物は、注入またはボーラス注射、上皮層及び粘膜層（例えば、口腔粘膜、直腸及び小腸粘膜）を介した吸収などの任意の便利な経路によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与方法は、全身投与または局所投与であり得る。
【0094】
該医薬組成物はまた、ベシクル、特にリポソームによって送達することもできる（Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３；Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３－３６５；Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，ｓｕｐｒａ，ｐｐ．３１７－３２７を参照）。
【0095】
場合によっては、医薬組成物は放出制御システムによって送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ，ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ（１９８７）ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１を参照）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）を参照）。他の放出制御系の議論については、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３を参照されたい。
【0096】
前記医薬組成物は、単独でまたは組み合わせて投与することができ、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原の負荷を減少させることによって患者の症状を改善することができる。いくつかの実施形態において、前記投与は併用投与であり、ここで、ＨＢｓＡｇ抗体またはその抗原結合フラグメントが１つ以上の治療剤（または第２の治療剤）と組み合わせて投与される。共投与及び併用療法は、同時投与に限定されず、抗ＨＢｓＡｇ抗体またはその抗原結合フラグメントが、患者の少なくとも１つの他の治療剤の投与を含む治療過程において少なくとも１回投与されるレジメンも含む。第２の治療剤は、別の抗体／抗体フラグメント、または可溶性サイトカイン受容体（例えば、インターフェロン、インターロイキン、チモファシンなど）、ヌクレオシド類似体（テノホビル、エンテカビル、アデホビルなど）などの別のＨＢＶ治療薬であり得る。
【0097】
本発明はまた、疾患または状態を治療するための薬剤の調製における、本明細書に記載の任意の抗ＨＢｓＡｇ抗体または抗原結合フラグメントの使用を含み、ここで、疾患または状態は、人体におけるＨＢｓＡｇのレベルを低下させることによって改善される。
【0098】
試薬、キット、検出方法
一態様では、本願は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前記の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、前述の核酸の相補鎖もしくは前述相補鎖のフラグメント、または前述の構築物、ウイルス、ファージもしくは細胞を含む試薬を提供する。いくつかの実施形態では、前記試薬は、標識分子をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記標識分子は、西洋ワサビペルオキシダーゼ及びアルカリホスファターゼなどの酵素標識分子、蛍光タンパク質分子、フルオレセイン分子、ビオチン分子、同位体などの造影剤から選択することができる。いくつかの実施形態では、前記標識分子は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前記の抗体またはその抗原結合フラグメント、前述の核酸の相補鎖または前記相補鎖のフラグメント、あるいは前述の構築物、ウイルス、ファージまたは細胞に結合して複合体を形成する。
一態様では、本願は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前記の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、前述の核酸の相補鎖もしくは前述相補鎖のフラグメント、または前述の構築物、ウイルス、ファージもしくは細胞を含む試薬を提供する。いくつかの実施形態では、前記試薬は、標識分子をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記標識分子は、西洋ワサビペルオキシダーゼ及びアルカリホスファターゼなどの酵素標識分子、蛍光タンパク質分子、フルオレセイン分子、ビオチン分子、同位体などの造影剤から選択することができる。いくつかの実施形態では、前記標識分子は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前記の抗体またはその抗原結合フラグメント、前述の核酸の相補鎖または前記相補鎖のフラグメント、あるいは前述の構築物、ウイルス、ファージまたは細胞に結合して複合体を形成する。
【0099】
一方、本願はキットも提供する。いくつかの実施形態では、前記キットは、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前述の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、前記キットは、前述の核酸、該核酸のフラグメント、または該核酸の相補鎖もしくは該相補鎖のフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、前記キットは、前述の構築物、ウイルス、ファージ、または細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記キットは前述の試薬を含む。いくつかの実施形態では、前記キットはインビトロ検出キットである。いくつかの実施形態では、前記キットは、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前述の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、ＥＬＩＳＡキットまたは免疫組織化学キットなどの免疫検出キットである。いくつかの実施形態では、前記キットは、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前述の抗体またはその抗原結合フラグメントを含むインビボ非侵襲的診断キットであり、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する前述の抗体またはその抗原結合フラグメントは、標識分子と一緒に複合体を形成する。いくつかの実施形態では、前記インビボ非侵襲的診断キットは、ラジオイムノイメージングまたは標的超音波造影から選択されるイメージング方法に使用することができる。ラジオイムノイメージングで使用される場合、前記標識分子は放射性核種である。標的超音波造影に使用する場合、前記標識分子は超音波造影剤である。
【0100】
また、本願は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する上記抗体またはその抗原結合性フラグメント、上記試薬またはキットを用いた、ＨＢＶの検出方法、ＨＢＶ感染の診断方法またはＨＢＶ関連疾患の進行状況の判定方法も提供する。
【0101】
以上、本発明の好適な実施形態について詳細に説明したが、本発明はこれに限定されるものではない。本発明の技術構想の範囲内で、本発明の技術案に対して、様々な技術的特徴を他の適切な方法で組み合わせることを含め、様々な単純な変更を加えることができ、これらの単純な変更及び組み合わせも、本発明によって開示される内容とみなされるべきであり、すべて本発明の保護範囲に属する。
【0102】
前述の説明及び以下の実施例は、本発明の範囲を限定するのではなく、説明することを意図していることを理解されたい。本発明の範囲内の他の態様、利点、及び修正は、本発明が属する分野の技術者には明らかであろう。本発明の実施形態に基づいて、創造的な努力をすることなく当業者によって得られる他のすべての実施形態は、本発明の保護範囲内に入る。
【実施例】
【0103】
実施例１：ＨＢｓＡｇ抗体発現ベクターの構築
ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、Ｋｏｚａｋ配列、分泌シグナルペプチド遺伝子及びＨＢｓＡｇ抗体重鎖コード遺伝子（ＶＨアミノ酸配列のコード遺伝子及びヒトＩｇＧ１の定常領域コード遺伝子を含む）、終止コドン及びＥｃｏＲＩコード遺伝子を順次、直列に融合し、化学合成を使用して遺伝子断片を取得した。上記断片をＥｃｏＲＩとＨｉｎｄＩＩＩ部位を介して真核発現プラスミドｐＣＤＮＡ３．１（＋）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社より購入、カタログ番号Ｖ７９０－２０）に挿入し、配列決定により確認して、ＨＢｓＡｇ抗体重鎖に使用するための発現プラスミドｐＣＤＮＡ３．１（＋）－ＤＨを得た。
ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、Ｋｏｚａｋ配列、分泌シグナルペプチド遺伝子及びＨＢｓＡｇ抗体重鎖コード遺伝子（ＶＨアミノ酸配列のコード遺伝子及びヒトＩｇＧ１の定常領域コード遺伝子を含む）、終止コドン及びＥｃｏＲＩコード遺伝子を順次、直列に融合し、化学合成を使用して遺伝子断片を取得した。上記断片をＥｃｏＲＩとＨｉｎｄＩＩＩ部位を介して真核発現プラスミドｐＣＤＮＡ３．１（＋）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社より購入、カタログ番号Ｖ７９０－２０）に挿入し、配列決定により確認して、ＨＢｓＡｇ抗体重鎖に使用するための発現プラスミドｐＣＤＮＡ３．１（＋）－ＤＨを得た。
【0104】
ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、Ｋｏｚａｋ配列、分泌シグナルペプチド遺伝子及びＨＢｓＡｇ軽鎖コード遺伝子（ＶＬアミノ酸配列のコード遺伝子及びκ鎖定常領域のコード遺伝子を含む）、終止コドン及びＥｃｏＲＩコード遺伝子を順次、直列に融合し、化学合成を使用して遺伝子断片を取得した。上記断片をＥｃｏＲＩとＨｉｎｄＩＩＩ部位を介して真核発現プラスミドｐＣＤＮＡ３．１（＋）に挿入し、配列決定により確認して、抗体軽鎖に使用するための発現プラスミドｐＣＤＮＡ３．１（＋）－ＤＬを得た。
【0105】
ここで、ＶＨのアミノ酸配列は、Ｚ1Ｚ2Ｚ3ＬＺ4Ｚ5ＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＺ6ＫＶＳＣＫＡＳＸ
1
ＹＸ
3
ＦＸ
5
Ｘ
6
Ｘ
7
ＹＺ7ＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＺ8ＥＷＭＧＷＸ
11
ＮＸ
13
Ｘ
14
Ｘ
15
Ｘ
16
Ｘ
17
Ｘ
18
ＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＺ9ＴＺ10ＤＺ11ＳＺ12ＳＴＡＹＭＥＬＳＺ13ＬＲＳＺ14ＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＸ
21
ＷＸ
23
Ｘ
24
Ｘ
25
Ｘ
26
ＤＸ
28
ＹＧＭＤＸ
33
ＷＧＺ15ＧＴＺ16ＶＴＶＳＳ（配列番号４７）であり、
ＶＬのアミノ酸配列は、Ｚ17Ｚ18Ｚ19ＬＴＱＳＰＺ20Ｚ21ＬＳＺ22ＳＺ23ＧＺ24ＲＺ25ＴＺ26Ｚ27ＣＲＡＳＸ 34 Ｘ 35 Ｘ 36 ＳＸ 38 Ｘ 39 ＬＺ28ＷＹＱＱＫＰＧＺ29ＡＰＺ30ＬＬＩＺ31 Ｘ 40 Ｘ 41 Ｘ 42 Ｚ32Ｚ33Ｚ34Ｚ35ＧＺ36ＰＺ37ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＺ38ＦＴＬＴＩＺ39ＳＬＺ40Ｚ41Ｚ42ＤＺ43ＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＸ 51 ＦＧＺ44ＧＴＺ45Ｚ46Ｚ47ＩＫＲ（配列番号４８）である。
ＶＬのアミノ酸配列は、Ｚ17Ｚ18Ｚ19ＬＴＱＳＰＺ20Ｚ21ＬＳＺ22ＳＺ23ＧＺ24ＲＺ25ＴＺ26Ｚ27ＣＲＡＳＸ 34 Ｘ 35 Ｘ 36 ＳＸ 38 Ｘ 39 ＬＺ28ＷＹＱＱＫＰＧＺ29ＡＰＺ30ＬＬＩＺ31 Ｘ 40 Ｘ 41 Ｘ 42 Ｚ32Ｚ33Ｚ34Ｚ35ＧＺ36ＰＺ37ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＺ38ＦＴＬＴＩＺ39ＳＬＺ40Ｚ41Ｚ42ＤＺ43ＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＸ 51 ＦＧＺ44ＧＴＺ45Ｚ46Ｚ47ＩＫＲ（配列番号４８）である。
【0106】
ここで、下線部分はＣＤＲであり、下線のない部分はＦＲであり、Ｘｎ及びＺｎ（ｎは任意の整数の下付き文字を指す）は、任意のアミノ酸から選択することができる。
本出願の実施例でテストされたＨＢｓＡｇ抗体のうち、番号がそれぞれ０２１、０２１－Ｍ１、０２１－Ｍ３、０２１－Ｍ５、０２１－Ｍ６、０２１－Ｍ７、０２１－Ｍ１１、０２１－Ｍ１３、０２１－Ｍ１４、０２１－Ｍ１５、０２１－Ｍ１６、０２１－Ｍ１７、０２１－Ｍ１８、０２１－Ｍ２１、０２１－Ｍ２３、０２１－Ｍ２４、０２１－Ｍ２５、０２１－Ｍ２６、０２１－Ｍ２８、０２１－Ｍ３３、０２１－Ｍ３４、０２１－Ｍ３５、０２１－Ｍ３６、０２１－Ｍ３８、０２１－Ｍ３９、０２１－Ｍ４０、０２１－Ｍ４１、０２１－Ｍ４２、及び０２１－Ｍ５１の抗体について、そのＺｎ及びＸｎの値はそれぞれ、下記表７（Ｚｎ）及び発明の開示の表３（Ｘｎ）に示されるとおりである。
本出願の実施例でテストされたＨＢｓＡｇ抗体のうち、番号がそれぞれ０２１、０２１－Ｍ１、０２１－Ｍ３、０２１－Ｍ５、０２１－Ｍ６、０２１－Ｍ７、０２１－Ｍ１１、０２１－Ｍ１３、０２１－Ｍ１４、０２１－Ｍ１５、０２１－Ｍ１６、０２１－Ｍ１７、０２１－Ｍ１８、０２１－Ｍ２１、０２１－Ｍ２３、０２１－Ｍ２４、０２１－Ｍ２５、０２１－Ｍ２６、０２１－Ｍ２８、０２１－Ｍ３３、０２１－Ｍ３４、０２１－Ｍ３５、０２１－Ｍ３６、０２１－Ｍ３８、０２１－Ｍ３９、０２１－Ｍ４０、０２１－Ｍ４１、０２１－Ｍ４２、及び０２１－Ｍ５１の抗体について、そのＺｎ及びＸｎの値はそれぞれ、下記表７（Ｚｎ）及び発明の開示の表３（Ｘｎ）に示されるとおりである。
【0107】
【表7】
【0108】
番号がそれぞれ００５、０６２、０７９、０８３、０８８、０９０、０９１、０９３、０９５、０９６の抗体のＸｎ及びＺｎの値は、それぞれ発明の開示の表３（Ｘｎ）及び表６（Ｚｎ）のとおりである。具体的なＶＨ及びＶＬ配列は次のとおりである。
【0109】
ＶＨ配列：
０２１及び０７９：ＱＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶＷＧＫＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）
００５、０９５、０９６：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号２）
０６２：ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３）
０８８：ＱＩＴＬＫＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＩＧＹＹＬＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＮＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶＷＧＫＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４）
０９０、０９１、０９３：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＭＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＰＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶＷＧＫＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号５）
０８３：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＹＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＶＷＱＱＧＧＹＹＹＹＭＤＶＷＧＫＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６）
ＶＬ配列：
０２１、０８３：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＤＩＫＲ（配列番号７）
００５、０６２、０７９、０８８：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号８）
０９０：ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９）
０９１：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＤＩＫＲ（配列番号１０）
０９３：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＲＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１）
０９５：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＳＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＧＤＬＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１２）
０９６：ＥＴＴＬＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＱＬＬＩＹＴＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号１３）
０２１及び０７９：ＱＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶＷＧＫＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）
００５、０９５、０９６：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号２）
０６２：ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３）
０８８：ＱＩＴＬＫＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＩＧＹＹＬＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＮＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶＷＧＫＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４）
０９０、０９１、０９３：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＭＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＰＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＷＮＤＤＶＤＹＹＧＭＤＶＷＧＫＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号５）
０８３：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＹＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＶＷＱＱＧＧＹＹＹＹＭＤＶＷＧＫＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６）
ＶＬ配列：
０２１、０８３：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＤＩＫＲ（配列番号７）
００５、０６２、０７９、０８８：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号８）
０９０：ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９）
０９１：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＤＩＫＲ（配列番号１０）
０９３：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＲＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１）
０９５：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＳＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＧＤＬＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１２）
０９６：ＥＴＴＬＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＱＬＬＩＹＴＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号１３）
【0110】
ここで、上記の抗体ＶＨ及びＶＬとＣＤＲ配列との対応関係は下記表８に示す通りである。
【0111】
【表8】
【0112】
実施例２：抗ＨＢｓＡｇ抗体の発現及び精製
実施例１に記載の発現プラスミドｐＣＤＮＡ３．１（＋）－ＤＨ及びｐＣＤＮＡ３．１（＋）－ＤＬを用いて、標的抗体を真核発現細胞ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３－Ｆ Ｃｅｌｌｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｒ７９０－０７）によって発現させた。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＳｙｓｔｅｍのマニュアルに従って、プラスミドトランスフェクションの１日前に細胞密度を１ｘ１０6細胞／ｍｌに調整した。プラスミドトランスフェクションの当日、重鎖と軽鎖の対応関係に従ってプラスミドを組み合わせ（すなわち、同番号の抗体の軽鎖と抗体の重鎖を組み合わせ）た後、トランスフェクション試薬と混合し、細胞培養培地に加えた。３７℃、８％ＣＯ2で５～７日間連続培養した後、細胞培養上清を回収して抗体精製を行った。
実施例１に記載の発現プラスミドｐＣＤＮＡ３．１（＋）－ＤＨ及びｐＣＤＮＡ３．１（＋）－ＤＬを用いて、標的抗体を真核発現細胞ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３－Ｆ Ｃｅｌｌｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｒ７９０－０７）によって発現させた。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＳｙｓｔｅｍのマニュアルに従って、プラスミドトランスフェクションの１日前に細胞密度を１ｘ１０6細胞／ｍｌに調整した。プラスミドトランスフェクションの当日、重鎖と軽鎖の対応関係に従ってプラスミドを組み合わせ（すなわち、同番号の抗体の軽鎖と抗体の重鎖を組み合わせ）た後、トランスフェクション試薬と混合し、細胞培養培地に加えた。３７℃、８％ＣＯ2で５～７日間連続培養した後、細胞培養上清を回収して抗体精製を行った。
【0113】
発現上清を０．２２μＭのフィルターメンブレンでろ過し、発現上清からＭａｂｐｕｒｉｘアフィニティークロマトグラフィーカラム（Ｓｅｐａｘ社より購入、６５００８）を用いて発現抗体を捕捉し、クロマトグラフィーカラムを平衡化緩衝液（１２０ｍＭ Ｔｒｉｓ＋１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．５）で平衡化した後、アフィニティークロマトグラフィーカラムを通過させ、溶出緩衝液（０．１５Ｍ 氷酢酸、ｐＨ２．８）で溶出した。精製された抗体は、ＳＤＳ ＰＡＧＥ及びＳＥＣによって検出され、純度は９５％以上であった。
【0114】
これから見ると、実施例で使用した抗体の各Ｘｎ及び各Ｚｎに対して選択されたアミノ酸が異なるため、これらの抗体を使用して、上記のＶＨ及びＶＬ配列の一般式のＸｎ及び／またはＺｎパラメーターの値が変更されることによって引き起こされる、抗原に特異的に結合する抗体の親和性の変化をテストすることができる。
【0115】
実施例３：抗原結合親和性の測定
ＨＢｓＡｇタンパク質（２０μｇ／ｍｌ、出願人が単離したもの、配列番号１６に示すアミノ酸配列を含む）をマイクロタイタープレートに１００μｌ／ウェルでコーティングし、プレートメンブレンで密封し、４℃で一晩置き、プレートを洗浄液ＰＢＳＴ（０．５‰Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）で３回洗浄し、１０％ウシ血清アルブミン溶液（洗浄液ＰＢＳＴにより調製された）でブロッキングし、マイクロタイタープレートに２００μｌ／ウェルで加え、３７℃で２分間インキュベートした。プレートを洗浄液ＰＢＳＴ（０．５‰Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）で３回洗浄し、被験抗体を１００μｌ／ウェルで段階希釈して加え（２０、４、０．８、０．１６、０．０３２、０．０６４、０．００１２８、０．００２５６ｍｇ／ｍＬ、合計８勾配）、システムのブランク対照を設定し、３７℃で２時間インキュベートした。プレートを洗浄液ＰＢＳＴ（０．５‰Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）で３回洗浄し、二次抗体（１：１００００希釈、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を加え、マイクロタイタープレートに１００μｌ／ウェルで加え、３７℃で１時間インキュベートした。最後に、プレートを洗浄液ＰＢＳＴ（０．５‰Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）で５回洗浄し、ＴＭＢ発色液を１００μｌ／ウェルで加え、暗所で室温で２０～４０分間反応させ、等量の反応停止液を加えて発色反応を停止させ、マイクロプレートリーダーを用いて波長４５０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ値）を測定した。抗原結合のＯＤ値が０．１を超える場合、一般的に抗体はその濃度で結合を検出できると考えられる。
ＨＢｓＡｇタンパク質（２０μｇ／ｍｌ、出願人が単離したもの、配列番号１６に示すアミノ酸配列を含む）をマイクロタイタープレートに１００μｌ／ウェルでコーティングし、プレートメンブレンで密封し、４℃で一晩置き、プレートを洗浄液ＰＢＳＴ（０．５‰Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）で３回洗浄し、１０％ウシ血清アルブミン溶液（洗浄液ＰＢＳＴにより調製された）でブロッキングし、マイクロタイタープレートに２００μｌ／ウェルで加え、３７℃で２分間インキュベートした。プレートを洗浄液ＰＢＳＴ（０．５‰Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）で３回洗浄し、被験抗体を１００μｌ／ウェルで段階希釈して加え（２０、４、０．８、０．１６、０．０３２、０．０６４、０．００１２８、０．００２５６ｍｇ／ｍＬ、合計８勾配）、システムのブランク対照を設定し、３７℃で２時間インキュベートした。プレートを洗浄液ＰＢＳＴ（０．５‰Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）で３回洗浄し、二次抗体（１：１００００希釈、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を加え、マイクロタイタープレートに１００μｌ／ウェルで加え、３７℃で１時間インキュベートした。最後に、プレートを洗浄液ＰＢＳＴ（０．５‰Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）で５回洗浄し、ＴＭＢ発色液を１００μｌ／ウェルで加え、暗所で室温で２０～４０分間反応させ、等量の反応停止液を加えて発色反応を停止させ、マイクロプレートリーダーを用いて波長４５０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ値）を測定した。抗原結合のＯＤ値が０．１を超える場合、一般的に抗体はその濃度で結合を検出できると考えられる。
【0116】
ＭＥＮＴＴＳＧＦＬＧＰＬＬＶＬＱＡＧＦＦＬＬＴＲＩＬＴＩＰＱＳＬＤＳＷＷＴＳＬＮＦＬＧＧＡＰＴＣＰＧＱＮＳＱＳＰＴＳＮＨＳＰＴＳＣＰＰＩＣＰＧＹＲＷＭＣＬＲＲＦＩＩＦＬＦＩＬＬＬＣＬＩＦＬＬＶＬＬＤＹＱＧＭＬＰＶＣＰＬＬＰＧＴＳＴＴＳＴＧＰＣＫＴＣＴＩＰＡＱＧＴＳＭＦＰＳＣＣＣＴＫＰＳＤＧＮＣＴＣＩＰＩＰＳＳＷＡＦＡＲＦＬＷＥＷＡＳＶＲＦＳＷＬＳＬＬＶＰＦＶＱＷＦＶＧＬＳＰＴＶＷＬＳＶＩＷＭＭＷＹＷＧＰＳＬＹＮＩＬＳＰＦＬＰＬＬＰＩＦＦＣＬＷＶＹＩＨＨＨＨＨＨ（配列番号１６）
【0117】
テスターのＨＢｓＡｇ抗原結合活性は、マイクロプレートリーダーにより波長４５０ｎｍで測定された吸光度（ＯＤ値）で表し、各抗体の希釈濃度はいずれも２０、４、０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、０．０００２５６μｇ／ｍＬの合計８濃度勾配であり、各抗体で検出されたＯＤ値が０．０５未満（通常、結合活性のないブランクプレートと同等と見なされる）であり、抗体－抗原結合のＯＤ値が０．１より大きい場合、抗体はその濃度で結合を検出できると一般的に考えられている。抗体０２１は、０．１６μｇ／ｍＬの濃度で抗原に結合したＯＤ値が０．１より大きく、抗体０２１に基づき、その活性を「＋＋＋＋」グレードと定義し、他の抗体の希釈濃度が４μｇ／ｍＬである場合の対応ＯＤ値と０２１抗体の４μｇ／ｍＬにおける対応ＯＤ値との比が１．１より大きい場合、その活性を「＋＋＋＋＋」グレードと定義し、比が０．８～１．１の場合、その活性を「＋＋＋＋」グレードと定義し、比が０．６～０．８の場合、その活性を「＋＋＋」グレードと定義し、比が０．４～０．６の場合、その活性を「＋＋」グレードと定義し、比が０．２～０．４の場合、その活性を「＋」グレードと定義し、比が０．２未満の場合、結合活性がないと考えられる。
【0118】
試験後、各試験抗体の親和性を以下の表９に示す。
【0119】
【表9】
【0120】
この結果は、本願の抗体が良好なＨＢｓＡｇ特異的結合能を有することを示している。
０２１、０２１－Ｍ１、０２１－Ｍ３、０２１－Ｍ５、０２１－Ｍ６、０２１－Ｍ７、０２１－Ｍ１１、０２１－Ｍ１３、０２１－Ｍ１４、０２１－Ｍ１５、０２１－Ｍ１６、０２１－Ｍ１７、０２１－Ｍ１８、０２１－Ｍ２１、０２１－Ｍ２３、０２１－Ｍ２４、０２１－Ｍ２５、０２１－Ｍ２６、０２１－Ｍ２８、０２１－Ｍ３３、０２１－Ｍ３４、０２１－Ｍ３５、０２１－Ｍ３６、０２１－Ｍ３８、０２１－Ｍ３９、０２１－Ｍ４０、０２１－Ｍ４１、０２１－Ｍ４２、及び０２１－Ｍ５１は同じＦＲ領域を持つが、各ＣＤＲのＸｎ位置で選択されたアミノ酸が異なる。これは、本願によって提供される抗体のＣＤＲ領域の特定の位置におけるアミノ酸置換が、依然として抗体にＨＢｓＡｇを特異的に認識する能力を維持させることができることを示している。
０２１、０２１－Ｍ１、０２１－Ｍ３、０２１－Ｍ５、０２１－Ｍ６、０２１－Ｍ７、０２１－Ｍ１１、０２１－Ｍ１３、０２１－Ｍ１４、０２１－Ｍ１５、０２１－Ｍ１６、０２１－Ｍ１７、０２１－Ｍ１８、０２１－Ｍ２１、０２１－Ｍ２３、０２１－Ｍ２４、０２１－Ｍ２５、０２１－Ｍ２６、０２１－Ｍ２８、０２１－Ｍ３３、０２１－Ｍ３４、０２１－Ｍ３５、０２１－Ｍ３６、０２１－Ｍ３８、０２１－Ｍ３９、０２１－Ｍ４０、０２１－Ｍ４１、０２１－Ｍ４２、及び０２１－Ｍ５１は同じＦＲ領域を持つが、各ＣＤＲのＸｎ位置で選択されたアミノ酸が異なる。これは、本願によって提供される抗体のＣＤＲ領域の特定の位置におけるアミノ酸置換が、依然として抗体にＨＢｓＡｇを特異的に認識する能力を維持させることができることを示している。
【0121】
番号００５、０６２、０７９、０８３、０８８、０９０、０９１、０９３、０９５、０９６の抗体は、本願に記載のＣＤＲと、異なるＦＲ領域とを有する場合にＨＢｓＡｇを特異的に認識することができる。これは、本出願に記載のＣＤＲがＨＢｓＡｇ抗原を特異的に認識して結合する能力をさらに証明している。また、前記ＣＤＲ領域に適切なＦＲもマッチングさせた。異なるＺｎ値の場合でも、前記ＦＲは依然として本願の抗体のＣＤＲコンフォメーションを維持できるため、前記抗体はＨＢｓＡｇを特異的に認識できる。
【0122】
実施例４：インビボ薬効試験
本実験では、抗体の定常領域としてはマウスＩｇＧ１を選択した。
動物：
特定の病原体を含まない５週齢のオスＣ５７ＢＬ／６マウスを、ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＳＬＡＣ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＡＮＩＭＡＬ ＣＯ．ＬＴＤ．から購入し、独立した換気ケージで飼育した。マウスの給餌とＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃ ＩＡＣＵＣによって承認された実験プロトコル（ＩＡＣＵＣ＃：ＩＤ０１－０１３－２０２０ｖ１．０）を使用した。マウスに４日間の環境適応期間の後にＡＡＶ／ＨＢＶウイルスを注射した（つまり、Ｄ型ＨＢＶの完全なゲノムを含むＡＡＶ組換えウイルスｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶであり、本明細書では「ＡＡＶ／ＨＢＶウイルス」と「ｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶ」は置き換えて使用可能である）。
本実験では、抗体の定常領域としてはマウスＩｇＧ１を選択した。
動物：
特定の病原体を含まない５週齢のオスＣ５７ＢＬ／６マウスを、ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＳＬＡＣ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＡＮＩＭＡＬ ＣＯ．ＬＴＤ．から購入し、独立した換気ケージで飼育した。マウスの給餌とＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃ ＩＡＣＵＣによって承認された実験プロトコル（ＩＡＣＵＣ＃：ＩＤ０１－０１３－２０２０ｖ１．０）を使用した。マウスに４日間の環境適応期間の後にＡＡＶ／ＨＢＶウイルスを注射した（つまり、Ｄ型ＨＢＶの完全なゲノムを含むＡＡＶ組換えウイルスｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶであり、本明細書では「ＡＡＶ／ＨＢＶウイルス」と「ｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶ」は置き換えて使用可能である）。
【0123】
溶媒：ＰＢＳ。
試験した化合物：抗体００５、抗体０６２、抗体０７９、抗体０８３、用量：１２ｍｐｋ。
試験した化合物：抗体００５、抗体０６２、抗体０７９、抗体０８３、用量：１２ｍｐｋ。
【0124】
組換えｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶ：ｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶ（タイプＤ、ａｙｗ）はＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃから提供され、バッチ番号はａｗｙ１－Ｐ４－２００１０２であり、１×１０12ウイルスゲノム（ｖ．ｇ．）／ｍＬであった。実験前に滅菌ＰＢＳで５×１０11ｖ．ｇ．／ｍＬに希釈した。各マウスに２００μＬを注射した。つまり、各マウスに１ｘ１０11ｖ．ｇを注射した。
【0125】
試験方法：
ＡＡＶ／ＨＢＶマウスモデルの確立
ＡＡＶ／ＨＢＶ注入。ｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶは、注入前に滅菌ＰＢＳで１×１０11ｖ．ｇ．／２００μＬ溶液の濃度に調製されておいた。３２匹のマウスに、２００μＬのｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶ溶液を尾静脈注射により投与した。
ＡＡＶ／ＨＢＶマウスモデルの確立
ＡＡＶ／ＨＢＶ注入。ｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶは、注入前に滅菌ＰＢＳで１×１０11ｖ．ｇ．／２００μＬ溶液の濃度に調製されておいた。３２匹のマウスに、２００μＬのｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶ溶液を尾静脈注射により投与した。
【0126】
群分け前の採血。ウイルス注射後１４、２１、及び３５日目に、血漿採取のために顎下静脈を介してすべての感染マウスから約１００μＬを採血した。採取した静脈血は、Ｋ２－ＥＤＴＡで抗凝固処理を行い、４℃、７０００ｇ／分で１０分間遠心分離し、血漿を収集した。血漿は、ｑＰＣＲによってＨＢＶ ＤＮＡを検出し、ＥＬＩＳＡによってＨＢｓＡｇを検出した。血漿サンプルは、関連項目をテストするためにＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔのｉｎｖｉｔｒｏ実験室に送られるまで、－８０℃で保存された。
【0127】
最初の投与を０日として記録し、感染後４５日目は０日とした。マウスは、ウイルス注射後１４、２１、３５日目に採取した血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇのレベルに従って群分けし、２０匹のマウスから正式な実験用の１６匹のマウスを選択し、ランダムに５つの群に分け、第１群から第５群までと記し、第１群のマウスの数は４匹であり、残りの群のマウスの数は３匹であった。すべてのマウスに、ＰＢＳまたは試験抗体１２ｍｐｋを尾静脈注射により１回投与した。投与前にすべてのマウスの体重を測定した。
【0128】
採血：
投与後の－１、１、３、５、７、１０、１４及び１７日目に、ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇを検出するために、すべてのマウスから顎下静脈から採血し、血漿を採取した。
投与後の－１、１、３、５、７、１０、１４及び１７日目に、ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇを検出するために、すべてのマウスから顎下静脈から採血し、血漿を採取した。
【0129】
実験的終点：試験部分：試験群のすべてのマウスは、投与後２２日目に安楽死させた。
体重記録：インビボ実験中、マウスの状態を毎日観察し、感染、投与、及び採血の当日にマウスの体重を記録した。
体重記録：インビボ実験中、マウスの状態を毎日観察し、感染、投与、及び採血の当日にマウスの体重を記録した。
【0130】
サンプルの保管及び移送。すべての血漿サンプルを－８０℃で保管し、対応する試験のためにドライアイスとともにＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔのｉｎｖｉｔｒｏ実験室に移送した。
【0131】
マウス血漿中のＨＢＶ ＤＮＡ含有量の定量的ＰＣＲ検出。血漿中のＤＮＡを抽出し、実験手順はＱＩＡａｍｐ ９６ ＤＮＡ Ｂｌｏｏｄ Ｋｉｔの説明書を参照した。定量的ＰＣＲを使用して、マウス血漿中のＨＢＶ ＤＮＡの含有量を検出した。方法を以下に簡単に説明する。
【0132】
ｑＰＣＲ反応混合液（Ｔａｑｍａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（２Ｘ））を調製し、サンプル及び標準品を添加して、ＰＣＲ反応を実行した。反応条件：９５℃、１０分間；９５℃、１５秒、６０℃、１分間、４０サイクル。
【0133】
ＥＬＩＳＡを使用して、マウスの血漿中のＨＢｓＡｇの含有量を検出した。実験手順は、ＨＢｓＡｇ ＥＬＩＳＡ（ＡｕｔｏＢｉｏ、ＣＬ０３１０）キットの説明書を参照した。この方法を次のように簡単に説明する：血漿サンプルを２、１０、２０、または６００倍に希釈し、コーティングされたプレートに加え、酵素複合体（enzyme conjugate）と共にインキュベートし（３７℃、６０分間）、プレートを５回繰り返し洗浄し、発光基質を加え、室温、暗所で１０分間反応させ、マイクロプレートリーダーで発光強度を検出した。
【0134】
（抗体００５、０７２、０７９、及び０８３、用量１２ｍｐｋ）ＡＡＶ／ＨＢＶマウスモデルにおけるＨＢＶ複製の阻害活性は、マウス血漿中のＨＢＶ ＤＮＡ含有量及びＨＢｓＡｇ発現を検出することによって評価された。結果を図１及び図２に示す。
【0135】
結果は次のとおりである。
１）ＡＡＶ／ＨＢＶマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡに対する試験化合物の効果
溶媒群（群１ ＰＢＳ）のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ含有量は、実験で比較的に安定しており、５．３１～５．７４ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬの間で変動した（変動は０．４３ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ以下であった）。溶媒群と比較して、治療群２（抗体００５、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．６９ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．６５ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群３（抗体０６２、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均して２．８１ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．４５ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群４（抗体０７９、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．６８ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．５９ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群５（抗体０８３、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均０．７８ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ減少し（ｐ＜０．０１）、３日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．３６ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった。
１）ＡＡＶ／ＨＢＶマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡに対する試験化合物の効果
溶媒群（群１ ＰＢＳ）のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ含有量は、実験で比較的に安定しており、５．３１～５．７４ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬの間で変動した（変動は０．４３ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ以下であった）。溶媒群と比較して、治療群２（抗体００５、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．６９ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．６５ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群３（抗体０６２、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均して２．８１ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．４５ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群４（抗体０７９、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．６８ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．５９ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群５（抗体０８３、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均０．７８ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ減少し（ｐ＜０．０１）、３日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．３６ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった。
【0136】
２）ＡＡＶ／ＨＢＶマウスの血漿ＨＢｓＡｇに対する試験化合物の効果
溶媒群（群１）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇ含有量は実験で比較的に安定しており、４．６５～５．２７ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬの間で変動した（変動は０．６２ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ以下であった）；溶媒群と比較して、治療群２（抗体００５、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．７３ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．８７ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった；治療群３（抗体０６２、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．９５ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．７８ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。治療群４（抗体０７９、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．８０ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．７９ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。治療群５（抗体０８３、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは投与１日目に有意に低下し、平均で１．１０ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、３日目に溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．９３ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。
溶媒群（群１）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇ含有量は実験で比較的に安定しており、４．６５～５．２７ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬの間で変動した（変動は０．６２ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ以下であった）；溶媒群と比較して、治療群２（抗体００５、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．７３ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．８７ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった；治療群３（抗体０６２、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．９５ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．７８ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。治療群４（抗体０７９、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．８０ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．７９ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。治療群５（抗体０８３、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは投与１日目に有意に低下し、平均で１．１０ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、３日目に溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．９３ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。
【0137】
実施例５：抗体００５、０２１、０６２及び０８８のインビボ活性測定
実験スキームは実施例４と同様であり、マウスを５つの群に分け、各群で４匹とし、使用したＩｇＧ１はマウスＩｇＧ１であった。試験結果を図３及び図４に示す。具体的な結果は次のとおりである。
実験スキームは実施例４と同様であり、マウスを５つの群に分け、各群で４匹とし、使用したＩｇＧ１はマウスＩｇＧ１であった。試験結果を図３及び図４に示す。具体的な結果は次のとおりである。
【0138】
１）各群のマウスの血漿中のＨＢＶ ＤＮＡ含量。
溶媒群（群１）のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ含有量は、実験で比較的に安定しており、５．２１～６．０６ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬの間で変動した（変動は０．８５ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ以下であった）。溶媒群と比較して、治療群２（抗体００５、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．４３ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．４９ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群３（抗体０２１、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均して２．４４ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１４日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．８１ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群４（抗体０６２、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．５１ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．５５ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群５（抗体０８８、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均２.１７ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ減少し（ｐ＜０．０１）、７日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．５９ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった。
溶媒群（群１）のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ含有量は、実験で比較的に安定しており、５．２１～６．０６ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬの間で変動した（変動は０．８５ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ以下であった）。溶媒群と比較して、治療群２（抗体００５、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．４３ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．４９ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群３（抗体０２１、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均して２．４４ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１４日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．８１ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群４（抗体０６２、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．５１ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．５５ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった；治療群５（抗体０８８、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは、投与後１日目に有意に減少し、平均２.１７ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ減少し（ｐ＜０．０１）、７日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは５．５９ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった。
【0139】
２）各群のマウスの血漿ＨＢｓＡｇ含有量。
溶媒群（群１）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇ含有量は実験で比較的に安定しており、４．７４～５．１１ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬの間で変動した（変動は０．３７ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ以下であった）；溶媒群と比較して、治療群２（抗体００５ｍ、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．７４ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．７５ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった；治療群３（抗体０２１、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．３８ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１７日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．９８ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。治療群４（抗体０６２、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目にいずれも有意に減少し、平均でそれぞれ２．４１及び２．６０ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１４日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．９５ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。治療群５（抗体０８８、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは投与１日目に有意に低下し、平均で２.１９ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、５日目に溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは５.１４ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。
溶媒群（群１）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇ含有量は実験で比較的に安定しており、４．７４～５．１１ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬの間で変動した（変動は０．３７ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ以下であった）；溶媒群と比較して、治療群２（抗体００５ｍ、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．７４ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後徐々に上昇傾向を示し、１０日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．７５ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった；治療群３（抗体０２１、１２ｍｐｋ）マウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で２．３８ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１７日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．９８ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。治療群４（抗体０６２、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目にいずれも有意に減少し、平均でそれぞれ２．４１及び２．６０ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、１４日目には溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．９５ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。治療群５（抗体０８８、１２ｍｐｋ）のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは投与１日目に有意に低下し、平均で２.１９ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し（ｐ＜０．０１）、その後徐々に上昇傾向を示し、５日目に溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは５.１４ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。
【0140】
実施例６：抗体０２１ ０９０－０９７のインビボ実験
実験方法は実施例４と同様であり、モデルマウスを８つの群に分け、各群で４匹ずつとし、ＩｇＧ１は全てヒトＩｇＧ１を用いた。つまり、前記抗体の重鎖及び軽鎖の定常領域は次のとおりである。
実験方法は実施例４と同様であり、モデルマウスを８つの群に分け、各群で４匹ずつとし、ＩｇＧ１は全てヒトＩｇＧ１を用いた。つまり、前記抗体の重鎖及び軽鎖の定常領域は次のとおりである。
【0141】
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４）
及び
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１５）
及び
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１５）
【0142】
群８では抗体０２１（用量１２ｍｐｋ）を腹腔内注射した以外、他の群のマウスには、ＰＢＳまたは試験抗体（抗体０２１、抗体０９０、抗体０９１、抗体０９３、抗体０９５、抗体０９６、１２ｍｐｋ）を尾静脈注射により各群に１回投与し、溶媒群には同量のＰＢＳを注射した。試験結果を図５及び図６に示す。詳細は次のとおりである。
【0143】
溶媒群（群１）のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇ含有量は、実験中比較的に安定したままであり、それぞれ４．３６～４．８０ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ及び４．４４～４．７０ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬの間で変動した（変動は０．４４ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ及び０．２６ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ以下である）；溶媒群と比較して、治療群２（抗体０９０、１２ｍｐｋ、ＩＶ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、それぞれ平均１．３３ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）及び０．８１ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後どちらも徐々に上昇傾向を示し、それぞれ１１日目及び１４日目に溶媒群のレベルまで上昇し、この時のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、それぞれ４．８０ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ及び４．６６ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった；治療群３（抗体０９１、１２ｍｐｋ、ＩＶ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均でそれぞれ１．１２ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）及び０．９３ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後いずれも徐々に上昇傾向を示し、それぞれ７日目及び１１日目には溶媒群のレベルまで上昇した。この時点で、マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、それぞれ４．５７ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ及び４．８８ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった；治療群４（抗体０９３、１２ｍｐｋ、ＩＶ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均でそれぞれ１．１９ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）及び１．４６ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後いずれも徐々に回復傾向を示し、それぞれ７日目及び１１日目に溶媒群のレベルまで上昇した。この時点で、マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、それぞれ４．５２ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ及び４．９０ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった；治療群５（抗体０２１、１２ｍｐｋ、ＩＶ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、それぞれ投与後１日目に有意に減少し、平均でそれぞれ１．９３ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）及び１．２３ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後どちらも徐々に上昇傾向を示し、それぞれ１８日目及び１１日目に溶媒群のレベルまで上昇した。このとき、マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、それぞれ４．２０ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ及び４．５９ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった；治療群６（抗体０９５、１２ｍｐｋ、ＩＶ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、投与後１日目にそれぞれ有意に減少し、平均でそれぞれ２．０４ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）及び１．７６ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後いずれも徐々に回復傾向を示し、１１日目には溶媒群のレベルまで上昇した。この時点のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、それぞれ４．６６ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ及び４．５９ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった；治療群７（抗体０９６、１２ｍｐｋ、ＩＶ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは、それぞれ投与後１日目に有意に減少し、平均でそれぞれ１．６４ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ（ｐ＜０．０１）及び１．２２ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、その後どちらも徐々に上昇傾向を示し、マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡは７日目に溶媒群のレベル近くまで上昇し、その後わずかに変動し、実験終了まで維持した。このとき、実験の終点、すなわち、投与１８日目のマウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡが３．８３ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬであった。マウスの血漿ＨＢｓＡｇは１１日目に溶媒群のレベルまで上昇し、その時点でマウスの血漿ＨＢｓＡｇは４．６２ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった；－３日と比較して、治療群８（抗体０２１、１２ｍｐｋ、ＩＰ）マウスの血漿ＨＢＶ ＤＮＡ量は、投与後１日目に０．６０ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ減少し、５日目にはＬＬＯＱ（定量下限）レベルまで低下し、１１日目には－３日目のレベルに回復し、１１～１８日目の間で、２．７３～３．１４ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬの間で変動した（変動は０．４１ ｌｏｇ１０ ｃｏｐｙ／μＬ以下であった）。マウスの血漿ＨＢｓＡｇは、投与後１日目に有意に減少し、平均で０．８２ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し、５日目に最大の減少が起こり、平均で１．２２ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ減少し、その後１１日目には－３日目のレベルに回復した。この時のマウスの血漿ＨＢｓＡｇは３．９４ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬであった。
【0144】
要約すると、実施例４～６の結果は、＋＋のみの親和性を有する０６２を含む本出願のすべての抗体が、ＨＢＶに対する中和抗体として使用でき、ＨＢＶの増殖を有意に阻害し、ＨＢｓＡｇの発現を減少させることができることを示している。
【0145】
実施例７：複数回投与実験
ＡＡＶ／ＨＢＶマウスモデルは、実施例４と同様に確立した。
モデルマウスを陽性対照群と抗体００５群（マウスＩｇＧ１使用）の２つの群に分け、各群で４匹ずつとした。初回投与を０日目とし、以降７日ごとに１回投与し、合計７回投与し、１２ｍｐｋの用量で尾静脈注射により投与し、陽性対照群には１０ｍＬ／ｋｇのＰＢＳ溶液を投与した。
ＡＡＶ／ＨＢＶマウスモデルは、実施例４と同様に確立した。
モデルマウスを陽性対照群と抗体００５群（マウスＩｇＧ１使用）の２つの群に分け、各群で４匹ずつとした。初回投与を０日目とし、以降７日ごとに１回投与し、合計７回投与し、１２ｍｐｋの用量で尾静脈注射により投与し、陽性対照群には１０ｍＬ／ｋｇのＰＢＳ溶液を投与した。
【0146】
投与後－２５、－１８、－１１、－４、１、３、５、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８、３１、３５、３８、４２、４５、４９、５２日目に、すべてのマウスは顎下静脈から採血され、ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇの検出のために血漿が採集された。
【0147】
その結果、マウスの血漿ＨＢｓＡｇは投与後１日目に有意に減少し、平均で１．６１ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、３日目に最低レベルに達し、平均で約１．７３ ｌｏｇ１０ ＩＵ／ｍＬ（ｐ＜０．０１）減少し、０日目から５２日目までの連続投与期間中、マウスの血漿ＨＢｓＡｇ濃度は常に低レベルに維持された。この結果は、本願の抗体が、長期間使用しても、ＨＢＶに対する良好な耐性及び治療効果を維持でき、さらに、週に１回以下の注射でウイルスの増殖を長期間阻害することができることを証明している。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-07-31
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域は、以下に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：
ＨＣＤＲ１：Ｘ１ＹＸ３ＦＸ５Ｘ６Ｘ７Ｙ（配列番号３３）、
ＨＣＤＲ２：Ｘ１１ＮＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号３４）、
ＨＣＤＲ３：ＡＲＤＸ２１ＷＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６ＤＸ２８ＹＧＭＤＸ３３（配列番号３５）を含み、
前記軽鎖可変領域は、以下に示すＣＤＲアミノ酸配列：
ＬＣＤＲ１：Ｘ３４Ｘ３５Ｘ３６ＳＸ３８Ｘ３９（配列番号３６）、
ＬＣＤＲ２：Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２（配列番号３７）、
ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＹＳＴＰＬＸ５１（配列番号３８）を含み、
Ｘ１はＧまたはＡから選択され、Ｘ３はＴ、ＡまたはＳから選択され、Ｘ５はＴ、ＡまたはＩから選択され、Ｘ６はＧ、Ａ、ＹまたはＤから選択され、Ｘ７はＹまたはＡから選択され、Ｘ１１はＩまたはＡから選択され、Ｘ１３はＰまたはＡから選択され、Ｘ１４はＮ、ＡまたはＹから選択され、Ｘ１５はＳ、ＡまたはＮから選択され、Ｘ１６はＧまたはＡから選択され、Ｘ１７はＧまたはＡから選択され、Ｘ１８はＴまたはＡから選択され、Ｘ２１はＬ、ＶまたはＡから選択され、Ｘ２３はＮ、ＱまたはＡから選択され、Ｘ２４はＤ、ＱまたはＡから選択され、Ｘ２５はＤ、ＧまたはＡから選択され、Ｘ２６はＶ、ＧまたはＡから選択され、Ｘ２８はＹまたはＡから選択され、Ｘ３３はＶまたはＡから選択され、Ｘ３４はＱまたはＡから選択され、Ｘ３５はＳまたはＡから選択され、Ｘ３６はＩ、ＡまたはＶから選択され、Ｘ３８はＴ、ＡまたはＳから選択され、Ｘ３９はＹまたはＡから選択され、Ｘ４０はＡ、Ｇ、Ｄ、ＴまたはＳから選択され、Ｘ４１はＡまたはＳから選択され、Ｘ４２はＡまたはＳから選択され、Ｘ５１はＴまたはＡから選択される、前記ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項2】
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号２０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１８に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２２に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２９に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１９に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む；または
前記ＶＨは、以下に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列：配列番号１７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＨＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬは、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ１、配列番号３１に示されるＬＣＤＲ２、配列番号３２に示されるＬＣＤＲ３を含む、
請求項１に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項3】
ヒト共通フレームワーク領域（ＦＲ）を含み、好ましくは、
前記ＶＨは、以下に示すＦＲアミノ酸配列：
ＨＦＲ１：Ｚ１Ｚ２Ｚ３ＬＺ４Ｚ５ＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＺ６ＫＶＳＣＫＡＳ（配列番号３９）
ＨＦＲ２：Ｚ７ＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＺ８ＥＷＭＧＷ（配列番号４０）
ＨＦＲ３：ＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＺ９ＴＺ１０ＤＺ１１ＳＺ１２ＳＴＡＹＭＥＬＳＺ１３ＬＲＳＺ１４ＤＴＡＶＹＹＣ（配列番号４１）
ＨＦＲ４：ＷＧＺ１５ＧＴＺ１６ＶＴＶＳＳ（配列番号４２）を含み、
前記ＶＬは、以下に示すＦＲアミノ酸配列：
ＬＦＲ１：Ｚ１７Ｚ１８Ｚ１９ＬＴＱＳＰＺ２０Ｚ２１ＬＳＺ２２ＳＺ２３ＧＺ２４ＲＺ２５ＴＺ２６Ｚ２７ＣＲＡＳ（配列番号４３）
ＬＦＲ２：ＬＺ２８ＷＹＱＱＫＰＧＺ２９ＡＰＺ３０ＬＬＩＺ３１（配列番号４４）
ＬＦＲ３：Ｚ３２Ｚ３３Ｚ３４Ｚ３５ＧＺ３６ＰＺ３７ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＺ３８ＦＴＬＴＩＺ３９ＳＬＺ４０Ｚ４１Ｚ４２ＤＺ４３ＡＴＹＹＣ（配列番号４５）
ＬＦＲ４：ＦＧＺ４４ＧＴＺ４５Ｚ４６Ｚ４７ＩＫＲ（配列番号４６）を含み、
Ｚ１はＱまたはＥから選択され、Ｚ２はＶまたはＩから選択され、Ｚ３はＱまたはＴから選択され、Ｚ４はＶまたはＫから選択され、Ｚ５はＥまたはＱから選択され、Ｚ６はＶまたはＭから選択され、Ｚ７はＭ、ＩまたはＬから選択され、Ｚ８はＬまたはＰから選択され、Ｚ９はＭまたはＩであり、Ｚ１０はＲまたはＡであり、Ｚ１１はＴまたはＫであり、Ｚ１２はＩまたはＴであり、Ｚ１３はＲまたはＳであり、Ｚ１４はＤまたはＥであり、Ｚ１５はＫまたはＱから選択され、Ｚ１６はＬまたはＭから選択され、Ｚ１７はＤまたはＥから選択され、Ｚ１８はＩまたはＴから選択され、Ｚ１９はＱ、ＴまたはＶから選択され、Ｚ２０はＳ、ＡまたはＧから選択され、Ｚ２１はＳまたはＴから選択され、Ｚ２２はＡまたはＬから選択され、Ｚ２３はＶまたはＰから選択され、Ｚ２４はＤまたはＥから選択され、Ｚ２５はＶまたはＡから選択され、Ｚ２６はＩまたはＬから選択され、Ｚ２７はＴまたはＳから選択され、Ｚ２８はＮまたはＡから選択され、Ｚ２９はＫまたはＱから選択され、Ｚ３０はＫ、ＱまたはＲから選択され、Ｚ３１はＹまたはＳから選択され、Ｚ３２はＳまたはＮ、Ｚ３３はＬまたはＲから選択され、Ｚ３４はＱまたはＡから選択され、Ｚ３５はＳまたはＴから選択され、Ｚ３６はＶまたはＩから選択され、Ｚ３７はＳまたはＡから選択され、Ｚ３８はＤまたはＥから選択され、Ｚ３９はＳまたはＲであり、Ｚ４０はＱまたはＥから選択され、Ｚ４１はＰまたはＳから選択され、Ｚ４２はＥまたはＧから選択され、Ｚ４３はＦまたはＬから選択され、Ｚ４４はＧ、ＱまたはＰから選択され、Ｚ４５はＫまたはＲから選択、Ｚ４６はＶまたはＬから選択、Ｚ４７はＤまたはＥから選択される、
請求項１または２に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項4】
前記ＶＨ配列が、配列番号１～６から選択されるいずれか１つの配列であるか、または配列番号１～６のいずれか１つの配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列であり、及び／または
前記ＶＬ配列が、配列番号７～１３から選択されるいずれか１つの配列であるか、または配列番号７～１３のいずれか１つの配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列である、
請求項１～３のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項5】
前記ＶＨ配列及びＶＬ配列は、以下の配列の群：配列番号１及び配列番号７、配列番号１及び配列番号８、配列番号２及び配列番号８、配列番号２及び配列番号１２、配列番号２及び配列番号１３、配列番号３及び配列番号８、配列番号４及び配列番号８、配列番号５及び配列番号９、配列番号５及び配列番号１０、配列番号５及び配列番号１１、配列番号６及び配列番号７、ならびに上記ＶＨ配列またはＶＬ配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列から選択されるいずれかである、請求項１～４のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項6】
Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、またはマルチボディ（ｍｕｌｔｉｂｏｄｙ）から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項7】
前記抗体が完全ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ抗体、またはナノボディである、請求項１～６のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項8】
単一特異性抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である、請求項１～７のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項9】
ＩｇＧの重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域と、κ鎖またはλ鎖から選択される軽鎖定常領域とをさらに含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項11】
請求項１０に記載の核酸分子を含む構築物であって、好ましくは、前記構築物は、プラスミド、ファージミド、ウイルスベクター、または線状核酸から選択される、構築物。
【請求項12】
請求項１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを発現する、あるいは請求項１０に記載の核酸または請求項１１に記載の構築物を含む、ウイルス、ファージ、または細胞。
【請求項13】
請求項１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項１０に記載の核酸、請求項１１に記載の構築物、または請求項１２に記載のウイルス、ファージ、もしくは細胞を含む、医薬組成物またはキット。
【請求項14】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を治療もしくは予防する、またはＢ型肝炎の症状を緩和するための請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
請求項１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項１０に記載の核酸、請求項１１に記載の構築物、または請求項１２に記載のウイルス、ファージ、もしくは細胞を、被験者からの体液と接触させることを含み、好ましくは、前記被験者からの前記体液が、前記被検者の血漿または血清である、ＨＢＶを検出する方法への請求項１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項１０に記載の核酸、請求項１１に記載の構築物、または請求項１２に記載のウイルス、ファージ、もしくは細胞の使用。
【国際調査報告】