特表 2023-534458 抗Ｎｏｔｃｈ２抗体及び使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-09

(54)【発明の名称】抗Ｎｏｔｃｈ２抗体及び使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230802BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230802BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230802BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230802BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230802BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230802BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230802BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230802BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230802BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230802BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20230802BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230802BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230802BHJP

   A61K 31/047 20060101ALI20230802BHJP

   A61K 31/198 20060101ALI20230802BHJP

   A61K 31/145 20060101ALI20230802BHJP

   A61K 38/46 20060101ALI20230802BHJP

   A61K 33/14 20060101ALI20230802BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20230802BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61P43/00 121

A61K45/00

A61P11/00

A61P43/00 105

A61P29/00

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K31/047

A61K31/198

A61K31/145

A61K38/46

A61K33/14

C12N15/12

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023502689

(86)(22)【出願日】2021-07-16

(85)【翻訳文提出日】2023-03-09

(86)【国際出願番号】 US2021041935

(87)【国際公開番号】W WO2022016037

(87)【国際公開日】2022-01-20

(31)【優先権主張番号】63/053,034

(32)【優先日】2020-07-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】509012625

【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】チウ， セシリア プイ チー

(72)【発明者】

【氏名】ウー， ヤン

(72)【発明者】

【氏名】エルソーリー， アデル マハムード

(72)【発明者】

【氏名】ラフカス， ダニエル ジョージ

(72)【発明者】

【氏名】パヤンデ， ジャン メヘル－ディーン

(72)【発明者】

【氏名】ツァイ， シャオ－ピン

(72)【発明者】

【氏名】ホー， ホアンドゥン ダン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4C086

4C206

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA01

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA19

4C084BA44

4C084CA18

4C084CA53

4C084DC22

4C084MA02

4C084NA05

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZA612

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB211

4C084ZB212

4C084ZC192

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB36

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG06

4C086AA01

4C086AA02

4C086HA02

4C086HA24

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA17

4C086NA05

4C086ZA59

4C086ZB11

4C086ZB21

4C086ZC75

4C206AA01

4C206AA02

4C206CA05

4C206JA52

4C206JA59

4C206MA03

4C206MA05

4C206NA05

4C206ZA59

4C206ZB11

4C206ZB21

4C206ZC75

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体及びその使用方法を提供する。
【選択図】図５Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＮｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体であって、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害するが、ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達を阻害しない、抗体。

【請求項2】

ヒトＮｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体であって、ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達よりも大きい程度でＪａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害する、抗体。

【請求項3】

１００％のＪａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達の最大阻害、及び８０％未満、又は７０％未満、又は６０％未満のＤＬＬ１媒介性シグナル伝達の最大阻害を達成することができる、請求項２に記載の単離された抗体。

【請求項4】

前記抗体がＦａｂ断片である、請求項２又は請求項３に記載の単離された抗体。

【請求項5】

２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む二価ＩｇＧ抗体としてフォーマットされた場合、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害するが、ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達を阻害しない、請求項４に記載の単離された抗体。

【請求項6】

Ｊａｇｇｅｄ１のＮｏｔｃｈ２への結合を阻害しない、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項7】

ＤＬＬ１のＮｏｔｃｈ２への結合を阻害しない、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項8】

Ｎｏｔｃｈ２のＥＧＦ７リピート内のエピトープに結合する、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項9】

Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６内のエピトープに結合する、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項10】

Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６内の不連続エピトープに結合する、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項11】

Ｎｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体であって、Ｎｏｔｃｈ２のＥＧＦ７リピート内のエピトープに結合する、抗体。

【請求項12】

Ｎｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体であって、Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６内のエピトープに結合する、抗体。

【請求項13】

Ｎｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体であって、Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６内の不連続エピトープに結合する、抗体。

【請求項14】

ヒトＮｏｔｃｈ２のアルギニン２６８（Ｒ２６８）と接触する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項15】

リジン２６８（Ｋ２６８）を含むＮｏｔｃｈ２に結合しない、請求項１４に記載の単離された抗体。

【請求項16】

配列番号７４のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合し、配列番号７７のアミノ酸配列を含むポリペプチドには結合しない、請求項１～１５のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項17】

ヒトＮｏｔｃｈ２及びカニクイザルＮｏｔｃｈ２に結合する、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項18】

マウスＮｏｔｃｈ２に結合しない、請求項１～１７のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項19】

モルモットＮｏｔｃｈ２に結合する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項20】

ヒトＮｏｔｃｈ１又はヒトＮｏｔｃｈ３に結合しない、請求項１～１９のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項21】

表面プラズモン共鳴によって決定される場合、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満又は５ｎＭ未満の親和性（Ｋ_Ｄ）でヒトＮｏｔｃｈ２に結合する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項22】

２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、又は５ｎＭ未満のＩＣ５０でＪａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項23】

Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達の阻害が、ハイコンテントスクリーニング（ＨＣＳ）アッセイを使用して決定される、請求項２２に記載の単離された抗体。

【請求項24】

ａ）（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６又は７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｂ）（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｃ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｄ）（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；又は
ｅ）（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項25】

ヒトＮｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体であって、
ａ）（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６又は７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｂ）（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｃ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｄ）（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；又は
ｅ）（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、抗体。

【請求項26】

ａ）配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列及び（ｂ）に記載のＶＬ配列；
ｄ）配列番号１７～２４、２６、２８、３０及び３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｅ）配列番号１５、１６、２５、２７、２９及び３１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｆ）（ｄ）に記載のＶＨ配列及び（ｅ）に記載のＶＬ配列；
ｇ）配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｈ）配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｉ）（ｇ）に記載のＶＨ配列及び（ｈ）に記載のＶＬ配列；
ｊ）配列番号１０２～１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｋ）配列番号９８～１００から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｌ）（ｊ）に記載のＶＨ配列及び（ｋ）に記載のＶＬ配列；
ｍ）配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｎ）配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｏ）（ｍ）に記載のＶＨ配列及び（ｎ）に記載のＶＬ配列；
ｐ）配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｑ）配列番号５６又は５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｒ）（ｐ）に記載のＶＨ配列及び（ｑ）に記載のＶＬ配列；
ｓ）配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｔ）配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は
ｕ）（ｓ）に記載のＶＨ配列及び（ｔ）に記載のＶＬ配列
を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項27】

ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列及び（ｂ）に記載のＶＬ配列；
ｄ）配列番号１７～２４、２６、２８、３０及び３２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号１５、１６、２５、２７、２９及び３１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｆ）（ｄ）に記載のＶＨ配列及び（ｅ）に記載のＶＬ配列；
ｇ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｈ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｉ）（ｇ）に記載のＶＨ配列及び（ｈ）に記載のＶＬ配列；
ｊ）配列番号１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｋ）配列番号９８～１００から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｌ）（ｊ）に記載のＶＨ配列及び（ｋ）に記載のＶＬ配列；
ｍ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｎ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｏ）（ｍ）に記載のＶＨ配列及び（ｎ）に記載のＶＬ配列；
ｐ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｑ）配列番号５６又は５７のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｒ）（ｐ）に記載のＶＨ配列及び（ｑ）に記載のＶＬ配列；
ｓ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｔ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；又は
ｕ）（ｓ）に記載のＶＨ配列及び（ｔ）に記載のＶＬ配列
を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項28】

ヒトＮｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体であって、
ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列及び（ｂ）に記載のＶＬ配列；
ｄ）配列番号１７～２４、２６、２８、３０及び３２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号１５、１６、２５、２７、２９及び３１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｆ）（ｄ）に記載のＶＨ配列及び（ｅ）に記載のＶＬ配列；
ｇ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｈ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｉ）（ｇ）に記載のＶＨ配列及び（ｈ）に記載のＶＬ配列；
ｊ）配列番号１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｋ）配列番号９８～１００から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｌ）（ｊ）に記載のＶＨ配列及び（ｋ）に記載のＶＬ配列；
ｍ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｎ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｏ）（ｍ）に記載のＶＨ配列及び（ｎ）に記載のＶＬ配列；
ｐ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｑ）配列番号５６又は５７のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｒ）（ｐ）に記載のＶＨ配列及び（ｑ）に記載のＶＬ配列；
ｓ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｔ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；又は
ｕ）（ｓ）に記載のＶＨ配列及び（ｔ）に記載のＶＬ配列
を含む、抗体。

【請求項29】

ａ）配列番号１７～２４、２６、２８、３０及び３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号１５、１６、２５、２７、２９及び３１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列及び（ｂ）に記載のＶＬ配列；
ｄ）配列番号１０２～１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｅ）配列番号９８～１００から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は
ｆ）（ｄ）に記載のＶＨ配列及び（ｅ）に記載のＶＬ配列
を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項30】

ａ）配列番号１７～２４、２６、２８、３０、及び３２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号１５、１６、２５、２７、２９、及び３１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列及び（ｂ）に記載のＶＬ配列；
ｄ）配列番号１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号９８～１００から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；又は
ｆ）（ｄ）に記載のＶＨ配列及び（ｅ）に記載のＶＬ配列
を含む、請求項１～２５及び２９のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項31】

ａ）配列番号２６のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む；
ｂ）配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む；
ｃ）配列番号３０のＶＨ配列及び配列番号２９のＶＬ配列を含む；又は
ｄ）配列番号３２のＶＨ配列及び配列番号３１のＶＬ配列を含む、
請求項１～２５のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項32】

ヒトＮｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体であって、
ａ）配列番号２６のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む；
ｂ）配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む；
ｃ）配列番号３０のＶＨ配列及び配列番号２９のＶＬ配列を含む；又は
ｄ）配列番号３２のＶＨ配列及び配列番号３１のＶＬ配列を含む、抗体。

【請求項33】

モノクローナル抗体である、請求項１～３２のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項34】

ヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、請求項１～３３のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項35】

Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体断片である、請求項１～３４のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項36】

前記抗体断片が、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ及びＦ（ａｂ’）_２から選択される、請求項３５に記載の単離された抗体。

【請求項37】

前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’又はＦａｂ’－ＳＨである、請求項３６に記載の単離された抗体。

【請求項38】

完全長抗体である、請求項１～３及び６～３７のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項39】

完全長ＩｇＧ抗体である、請求項３８に記載の単離された抗体。

【請求項40】

ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体又はＩｇＧ４抗体である、請求項３９に記載の単離された抗体。

【請求項41】

ヒトＮｏｔｃｈ２に対する結合について請求項１～４０のいずれか一項に記載される抗体と競合する単離された抗体。

【請求項42】

請求項１～４１のいずれか一項に記載の抗体をコードする、単離された核酸。

【請求項43】

請求項４２に記載の核酸を含む、宿主細胞。

【請求項44】

請求項１～４１のいずれか一項に記載の抗体を発現する、宿主細胞。

【請求項45】

ヒトＮｏｔｃｈ２に結合する抗体を産生する方法であって、請求項４３又は請求項４４に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現に適した条件下で培養することを含む、方法。

【請求項46】

前記抗体を前記宿主細胞から回収することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

請求項４５又は請求項４６に記載の方法によって産生される、抗体。

【請求項48】

請求項１～４１のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む、医薬組成物。

【請求項49】

追加の治療剤をさらに含む、請求項４８に記載の医薬組成物。

【請求項50】

前記追加の治療剤が、高張性生理食塩水、マンニトール、プルモザイム、Ｎ－アセチルシステイン、システアミン、及び気管支拡張薬から選択される、請求項４９に記載の医薬組成物。

【請求項51】

医薬としての使用のための、請求項１～４１のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４８～５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項52】

粘膜閉塞性肺疾患の治療における使用のための、請求項１～４１のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４８～５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項53】

前記粘膜閉塞性肺疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、原発性毛様体ジスキネジア、非嚢胞性線維症、気管支拡張症及び細気管支炎から選択される、請求項５２に記載の使用のための抗体。

【請求項54】

粘膜閉塞性肺疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１～４１のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４８～５０のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。

【請求項55】

前記粘膜閉塞性肺疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、原発性毛様体ジスキネジア、非嚢胞性線維症、気管支拡張症及び細気管支炎から選択される、請求項５４に記載の使用。

【請求項56】

対象における分泌細胞の数を減少させるための医薬の製造における、請求項１～４１のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４８～５０のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。

【請求項57】

前記医薬が分泌細胞を線毛細胞に変換する、請求項５６に記載の使用。

【請求項58】

前記分泌細胞が前記対象の肺にある、請求項５６又は請求項５７に記載の使用。

【請求項59】

前記分泌細胞が杯細胞である、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項60】

粘膜閉塞性肺疾患を有する対象を治療する方法であって、有効量の、請求項１～４１のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４８～５０のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項61】

前記粘膜閉塞性肺疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、原発性毛様体ジスキネジア、非嚢胞性線維症、気管支拡張症及び細気管支炎から選択される、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

対象における分泌細胞の数を減少させる方法であって、有効量の、請求項１～４１のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４８～５０のいずれか一項に記載の医薬組成物を個体に投与して、前記対象における分泌細胞を枯渇させることを含む、方法。

【請求項63】

分泌細胞を線毛細胞に変換することを含む、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記分泌細胞が前記対象の肺にある、請求項６２又は請求項６３に記載の方法。

【請求項65】

前記分泌細胞が杯細胞である、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

追加の治療剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項６０～６５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項67】

前記追加の治療剤が、高張性生理食塩水、マンニトール、プルモザイム、Ｎ－アセチルシステイン、システアミン、及び気管支拡張薬から選択される、請求項６６に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年７月１７日に出願された米国仮出願第６３／０５３，０３４号の優先権の利益を主張し、その全体が任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

発明の分野
本発明は、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体及びその使用方法に関する。

【背景技術】

【0003】

背景
Ｎｏｔｃｈ受容体ファミリーは、進化的に保存された膜貫通受容体のクラスであり、これは、ウニ及びヒトなどの多様な生物の発生に影響を及ぼすシグナルを伝達する。Ｎｏｔｃｈ受容体及びそれらのリガンドであるＤｅｌｔａ及びＳｅｒｒａｔｅ（哺乳動物ではＪａｇｇｅｄとして知られている）は、上皮成長因子（ＥＧＦ）様反復を含有する大きな細胞外ドメインを有する膜貫通タンパク質である。Ｎｏｔｃｈパラログの数は種によって異なる。例えば、哺乳動物には４つのＮｏｔｃｈ受容体（Ｎｏｔｃｈ１～Ｎｏｔｃｈ４）があり、線虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ）には２つ（ＬＩＮ－１２及びＧＬＰ－１）があり、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）には１つ（Ｎｏｔｃｈ）がある。Ｎｏｔｃｈ受容体は、膜貫通ドメインのＮ末端側の部位Ｓ１でフューリン様プロテアーゼによって細胞表面への輸送中にタンパク質分解的にプロセシングされ、細胞外Ｎｏｔｃｈ（ＥＣＮ）サブユニット及びＮｏｔｃｈ膜貫通サブユニット（ＮＴＭ）を生成する。これらの２つのサブユニットは、非共有結合的に会合したままであり、成熟ヘテロ二量体細胞表面受容体を構成する。Ｎｏｔｃｈ受容体及びＮｏｔｃｈシグナル伝達経路は、例えば、Ａｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｍｅｃｈ．Ｄｉｓ．３：５８７－６１３，２００８、及びＢｏｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２８：３３９－３６３，２００７で概説されている。

【0004】

Ｎｏｔｃｈ２ ＥＣＮサブユニットは、３６個のＮ末端ＥＧＦ様リピートと、それに続く、Ｓ１部位に先行する３個のタンデムリピートＬｉｎ １２／Ｎｏｔｃｈリピート（ＬＮＲ）モジュールとを含む。各ＬＮＲモジュールは、３つのジスルフィド結合と、カルシウムイオンを配位すると予測される保存された酸性及び極性残基の群とを含む。ＥＧＦリピート領域内には、活性化リガンドに対する結合部位が存在する。

【0005】

ＥＣＮサブユニットへのＮｏｔｃｈリガンドの結合は、調節された膜内タンパク質分解によって起こる２つの連続したタンパク質分解切断を開始する。部位Ｓ２でのメタロプロテアーゼ（ＡＤＡＭ１０又はＡＤＡＭ１７）による第１の切断により、Ｎｏｔｃｈ膜貫通サブユニットは、原形質膜の内弁尖に近い部位Ｓ３での第２の切断を受けやすくなる。プレセニリン及びニカストリンを含有し、γ－セクレターゼ活性を促進する多タンパク質複合体によって触媒される部位Ｓ３切断は、Ｎｏｔｃｈ膜貫通サブユニットの細胞内部分を遊離させ、それを核に転位させ、標的遺伝子の転写を活性化する。（Ｎｏｔｃｈのタンパク質分解的切断の総説については、例えば、Ｓｉｓｏｄｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３：２８１－２９０，２００２を参照のこと。）

【0006】

Ｊａｇｇｅｄ及びＤｅｌｔａ様クラスの５つのＮｏｔｃｈリガンドがヒトにおいて同定されている（Ｊａｇｇｅｄ１（Ｓｅｒｒａｔｅ１とも呼ばれる）、Ｊａｇｇｅｄ２（Ｓｅｒｒａｔｅ２とも呼ばれる）、Ｄｅｌｔａ様１（ＤＬＬ１とも呼ばれる）、Ｄｅｌｔａ様３（ＤＬＬ３とも呼ばれる）、及びＤｅｌｔａ様４（ＤＬＬ４とも呼ばれる））。リガンドの各々は、Ｎｏｔｃｈの結合に必須の保存されたＮ末端Ｄｅｌｔａ、Ｓｅｒｒａｔｅ、ＬＡＧ－２（ＤＳＬ）モチーフを有するシングルパス膜貫通タンパク質である。ＤＳＬモチーフに対してＣ末端の一連のＥＧＦ様モジュールは、膜貫通セグメントの前にある。Ｎｏｔｃｈ受容体とは異なり、リガンドは、Ｃ末端に７０～２１５アミノ酸の短い細胞質尾部を有する。さらに、他のタイプのリガンドが報告されている（例えば、ＤＮＥＲ、ＮＢ３及びＦ３／Ｃｏｎｔａｃｔｉｎ）。（Ｎｏｔｃｈリガンド及びリガンド媒介性Ｎｏｔｃｈ活性化の総説については、例えば、Ｄ’Ｓｏｕｚａ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２７：５１４８－５１６７，２００８を参照のこと。）

【0007】

Ｎｏｔｃｈ経路は、ハエ及び脊椎動物における神経発生に影響を及ぼすものを含む多様な発達過程及び生理学的過程の間に機能する。一般に、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達は、側方阻害、系統決定、及び細胞群間の境界の確立に関与する（例えば、Ｂｒａｙ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ７：６７８－６７９，２００６を参照のこと）。Ｊａｇｇｅｄ－Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の阻害は、哺乳動物の気道において分泌球桿細胞の急速な喪失及び線毛細胞の増加を誘導することが示されている。Ｊａｇｇｅｄの遮断はまた、前臨床喘息モデルにおいて杯細胞の化生を逆転させることが示された。Ｌａｆｋａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５２８：１２７－１３１（２０１５）を参照のこと。

【0008】

粘膜閉塞性肺疾患は、咳、痰の産生、びまん性粘液閉塞、慢性炎症、気道壁拡張症、及び頻繁な細菌感染症を特徴とする。健康な個体では、肺の粘液層は、遠位気道から気管に向かって急速に輸送される。粘膜閉塞性疾患を有する個体では、イオン液体輸送若しくはムチン分泌、又はその両方における上皮欠陥が、高濃度の粘液及び粘液輸送の失敗、並びに気道表面への粘液接着をもたらす。これは、咳によって除去することができない細い気道における粘液蓄積をもたらし、気道閉塞、感染及び炎症をもたらす。

【0009】

粘膜閉塞性肺疾患の治療が依然として必要とされている。本明細書に記載される本発明は、この必要性を満たし、他の利益を提供する。

【発明の概要】

【0010】

概要
本発明は、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体及びその使用方法を提供する。

【0011】

いくつかの実施形態では、ヒトＮｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体であって、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害するが、ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達を阻害しない抗体が提供される。いくつかの実施形態では、ヒトＮｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体であって、ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達よりも大きい程度でＪａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、１００％のＪａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達の最大阻害、及び８０％未満、又は７０％未満、又は６０％未満のＤＬＬ１媒介性シグナル伝達の最大阻害を達成することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｎｏｔｃｈ２へのＪａｇｇｅｄ１の結合を阻害しない。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｎｏｔｃｈ２へのＤＬＬ１の結合を阻害しない。いくつかの実施形態では、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む二価ＩｇＧ抗体としてフォーマットされた場合、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害するが、ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達を阻害しない、単離された抗体が提供される。

【0012】

いくつかの実施形態では、抗体はＮｏｔｃｈ２のＥＧＦ７リピート内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６内の不連続なエピトープに結合する。

【0013】

いくつかの実施形態では、Ｎｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体が提供され、ここで、その抗体は、Ｎｏｔｃｈ２のＥＧＦ７リピート内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６内の不連続なエピトープに結合する。

【0014】

いくつかの実施形態では、Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体は、ヒトＮｏｔｃｈ２のアルギニン２６８（Ｒ２６８）と接触する。いくつかの実施形態では、抗体は、リジン２６８（Ｋ２６８）を含むＮｏｔｃｈ２に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合し、配列番号７７のアミノ酸配列を含むポリペプチドには結合しない。いくつかの実施形態では、抗体はヒトＮｏｔｃｈ２及びカニクイザルＮｏｔｃｈ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はマウスＮｏｔｃｈ２には結合しない。いくつかの実施形態では、抗体はモルモットＮｏｔｃｈ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はヒトＮｏｔｃｈ１又はヒトＮｏｔｃｈ３には結合しない。

【0015】

いくつかの実施形態では、抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される場合、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満又は５ｎＭ未満の親和性（Ｋ_Ｄ）でヒトＮｏｔｃｈ２に結合する。

【0016】

いくつかの実施形態では、抗体は、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、又は５ｎＭ未満のＩＣ５０でＪａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達の阻害を、ハイコンテントスクリーニング（ＨＣＳ）アッセイを使用して決定する。

【0017】

いくつかの実施形態では、Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体は、以下を含む：
ａ）（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６又は７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｂ）（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｃ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
ｄ）（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；又は
ｅ）（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）。

【0018】

いくつかの実施形態では、抗体は以下を含む：
ａ）配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列及び（ｂ）に記載のＶＬ配列；
ｄ）配列番号１７～２４、２６、２８、３０及び３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｅ）配列番号１５、１６、２５、２７、２９及び３１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｆ）（ｄ）に記載のＶＨ配列及び（ｅ）に記載のＶＬ配列；
ｇ）配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｈ）配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｉ）（ｇ）に記載のＶＨ配列及び（ｈ）に記載のＶＬ配列；
ｊ）配列番号１０２～１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｋ）ｋ）配列番号９８～１００から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｌ）（ｊ）に記載のＶＨ配列及び（ｋ）に記載のＶＬ配列；
ｍ）配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｎ）配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｏ）（ｍ）に記載のＶＨ配列及び（ｎ）に記載のＶＬ配列；
ｐ）配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｑ）配列番号５６又は５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｒ）（ｐ）に記載のＶＨ配列及び（ｑ）に記載のＶＬ配列；
ｓ）配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｔ）配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は
ｕ）（ｓ）に記載のＶＨ配列及び（ｔ）に記載のＶＬ配列。

【0019】

いくつかの実施形態では、抗体は以下を含む：
ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列及び（ｂ）に記載のＶＬ配列；
ｄ）配列番号１７～２４、２６、２８、３０、及び３２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号１５、１６、２５、２７、２９及び３１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｆ）（ｄ）に記載のＶＨ配列及び（ｅ）に記載のＶＬ配列；
ｇ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｈ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｉ）（ｇ）に記載のＶＨ配列及び（ｈ）に記載のＶＬ配列；
ｊ）配列番号１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｋ）配列番号９８～１００から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｌ）（ｊ）に記載のＶＨ配列及び（ｋ）に記載のＶＬ配列；
ｍ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｎ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｏ）（ｍ）に記載のＶＨ配列及び（ｎ）に記載のＶＬ配列；
ｐ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｑ）配列番号５６又は５７のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｒ）（ｐ）に記載のＶＨ配列及び（ｑ）に記載のＶＬ配列；
ｓ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｔ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；又は
ｕ）（ｓ）に記載のＶＨ配列及び（ｔ）に記載のＶＬ配列。

【0020】

いくつかの実施形態では、抗体は以下を含む：
ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列及び（ｂ）に記載のＶＬ配列；
ｄ）配列番号１７～２４、２６、２８、３０、及び３２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号１５、１６、２５、２７、２９及び３１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｆ）（ｄ）に記載のＶＨ配列及び（ｅ）に記載のＶＬ配列；
ｇ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｈ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｉ）（ｇ）に記載のＶＨ配列及び（ｈ）に記載のＶＬ配列；
ｊ）配列番号１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｋ）配列番号９８～１００から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｌ）（ｊ）に記載のＶＨ配列及び（ｋ）に記載のＶＬ配列；
ｍ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｎ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｏ）（ｍ）に記載のＶＨ配列及び（ｎ）に記載のＶＬ配列；
ｐ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｑ）配列番号５６又は５７のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；
ｒ）（ｐ）に記載のＶＨ配列及び（ｑ）に記載のＶＬ配列；
ｓ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｔ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ配列；又は
ｕ）（ｓ）に記載のＶＨ配列及び（ｔ）に記載のＶＬ配列。

【0021】

いくつかの実施形態では、抗体は以下を含む：
ａ）配列番号１７～２４、２６、２８、３０及び３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号１５、１６、２５、２７、２９及び３１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列及び（ｂ）に記載のＶＬ配列。

【0022】

いくつかの実施形態では、抗体は以下を含む：
ａ）配列番号１７～２４、２６、２８、３０、及び３２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号１５、１６、２５、２７、２９及び３１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；又は
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列及び（ｂ）に記載のＶＬ配列。

【0023】

いくつかの実施形態では、抗体は：
ａ）配列番号２６のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む；
ｂ）配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む；
ｃ）配列番号３０のＶＨ配列及び配列番号２９のＶＬ配列を含む；又は
ｄ）配列番号３２のＶＨ配列及び配列番号３１のＶＬ配列を含む。

【0024】

いくつかの実施形態では、Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体又はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ及びＦ（ａｂ’）_２から選択される。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦａｂ’－ＳＨである。いくつかの実施形態では、抗体は完全長抗体である。

【0025】

いくつかの実施形態では、ヒトＮｏｔｃｈ２に対する結合について、本明細書中に提供される抗体と競合する抗体が提供される。

【0026】

いくつかの実施形態では、本明細書中に提供されるＮｏｔｃｈ２に結合する抗体をコードする単離された核酸が提供される。いくつかの実施形態では、核酸を含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体を発現する宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ヒトＮｏｔｃｈ２に結合する抗体を産生する方法であって、抗体の発現に適した条件下で宿主細胞を培養することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、抗体を宿主細胞から回収することをさらに含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞によって産生される抗体が提供される。

【0027】

いくつかの実施形態では、本明細書中に提供されるＮｏｔｃｈ２に結合する抗体及び薬学的に許容され得るキャリアを含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、追加の治療剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、高張性生理食塩水、マンニトール、プルモザイム、Ｎ－アセチルシステイン、システアミン、及び気管支拡張薬から選択される。

【0028】

いくつかの実施形態では、Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体又は医薬組成物が、医薬として使用するために本明細書中に提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体又は医薬組成物が、粘膜閉塞性肺疾患の治療における使用のために本明細書中に提供される。いくつかの実施形態では、粘膜閉塞性肺疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、原発性毛様体ジスキネジア、非嚢胞性線維症、気管支拡張症及び細気管支炎から選択される。

【0029】

いくつかの実施形態では、粘膜閉塞性肺疾患を治療するための医薬の製造におけるＮｏｔｃｈ２に結合する抗体又は医薬組成物の使用が提供される。いくつかの実施形態では、粘膜閉塞性肺疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、原発性毛様体ジスキネジア、非嚢胞性線維症、気管支拡張症及び細気管支炎から選択される。いくつかの実施形態では、対象における分泌細胞の数を減少させるための医薬の製造におけるＮｏｔｃｈ２に結合する抗体又は医薬組成物の使用が提供される。いくつかの実施形態では、医薬は分泌細胞を線毛細胞に変換する。いくつかの実施形態では、分泌細胞は対象の肺にある。いくつかの実施形態では、分泌細胞は杯細胞である。

【0030】

いくつかの実施形態では、粘膜閉塞性肺疾患を有する対象を治療する方法であって、有効量の、本明細書中に提供されるＮｏｔｃｈ２に結合する抗体又は本明細書中に提供される医薬組成物を対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、粘膜閉塞性肺疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、原発性毛様体ジスキネジア、非嚢胞性線維症、気管支拡張症及び細気管支炎から選択される。いくつかの実施形態では、対象における分泌細胞の数を減少させる方法であって、対象における分泌細胞を枯渇させるために、有効量の、本明細書中に提供されるＮｏｔｃｈ２に結合する抗体又は本明細書中に提供される医薬組成物を対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、分泌細胞を線毛細胞に変換することを含む。いくつかの実施形態では、分泌細胞は対象の肺にある。いくつかの実施形態では、分泌細胞は杯細胞である。いくつかの実施形態において、方法は、追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、高張性生理食塩水、マンニトール、プルモザイム、Ｎ－アセチルシステイン、システアミン、及び気管支拡張薬から選択される。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1】図１Ａ～１Ｂは、ラット抗Ｎｏｔｃｈ２抗体１Ｂ２及びその特定のヒト化バージョンの軽鎖可変領域（１Ａ）及び重鎖可変領域（１Ｂ）のアラインメントを示す。

【0032】

【図2】図２Ａ～２Ｂは、ラット抗Ｎｏｔｃｈ２抗体３１０７の軽鎖可変領域（２Ａ）及び重鎖可変領域（２Ｂ）を示す。

【0033】

【図3】図３Ａ～図３Ｂは、ウサギ抗Ｎｏｔｃｈ２抗体２３３８、２４３０、２４３０（軽鎖にＣ９５ｄＳ置換を有する）、及び２６２１の軽鎖可変領域（３Ａ）及び重鎖可変領域（３Ｂ）のアラインメントを示す。

【0034】

【図4】図４は、ｒａｔ．１Ｂ２、ｒａｔ．３１０７、ｒｂ．２３３８、ｒｂ．２４３０、ｒｂ．２６２１、及び抗Ｎｏｔｃｈ ２／３抗体ＯＭＰ－５９Ｒ５（タレクスツマブ、米国特許第８，２２６，９４３号を参照）のエピトープビニングを示す。

【0035】

【図5】図５Ａ～５Ｆは、Ｎｏｔｃｈ２受容体を発現する細胞及びＪａｇｇｅｄ１リガンド（５Ａ、５Ｃ、５Ｅ）又はＤＬＬ１リガンド（５Ｂ、５Ｄ、５Ｆ）を発現する細胞を含む共培養アッセイにおける、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性Ｎｏｔｃｈ２活性（５Ａ、５Ｃ、５Ｅ）の遮断及びＤＬＬ１媒介性Ｎｏｔｃｈ２活性（５Ｂ、５Ｄ、５Ｆ）の保存を示す。図５Ａ及び図５Ｂは、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体キメラ１Ｂ２及びヒト化バージョンｈｕ１Ｂ２．ｖ１．ＤＦＳ、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０１、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０２、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０３、及びｈｕ１Ｂ２．ｖ１０４についての抗体濃度の増加に伴う、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達及びＤＬＬ１媒介性シグナル伝達の活性パーセントの変化をそれぞれ示す。図５Ｃ及び図５Ｄは、ラット抗Ｎｏｔｃｈ２抗体３１０７についての抗体濃度の増加に伴う、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達及びＤＬＬ１媒介性シグナル伝達の活性パーセントの変化をそれぞれ示す。図５Ｅ及び図５Ｆは、ウサギ抗Ｎｏｔｃｈ２抗体２３３８、２６２１、及び２４３０についての抗体濃度の増加に伴う、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達及びＤＬＬ１媒介性シグナル伝達の活性パーセントの変化をそれぞれ示す。

【0036】

【図6】図６Ａ～６Ｄは、抗ｇＤコントロール抗体又はラット／ヒトキメラ抗Ｎｏｔｃｈ２抗体１Ｂ２と接触させた初代ヒト気管支上皮細胞の気液界面（ＡＬＩ）培養物における（６Ａ）Ｍｕｃ５ｂ、（６Ｂ）Ｍｕｃ５ａｃ及び（６Ｃ）Ｓｃｇｂ１ａ１のｍＲＮＡ発現；及び（６Ｄ）抗ｇＤコントロール抗体処理ＡＬＩ培養物（左）及び抗Ｎｏｔｃｈ２抗体１Ｂ２処理ＡＬＩ培養物（右）の免疫蛍光分析を示す。切片を、杯細胞については抗Ｍｕｃ５ｂ（緑色）、線毛細胞については抗アセチル化ａチューブリン（赤色）、及び核染色についてはＤＡＰＩ（青色）で染色した。抗Ｎｏｔｃｈ２抗体１Ｂ２処理ＡＬＩ培養物において、杯細胞の実質的な減少が観察された。

【0037】

【図7】図７Ａ～７Ｂは、ラット抗Ｎｏｔｃｈ２抗体３１０７及びその特定のヒト化バージョンの軽鎖可変領域（７Ａ）及び重鎖可変領域（７Ｂ）のアラインメントを示す。

【発明を実施するための形態】

【0038】

発明の詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書の目的において「受容体ヒトフレームワーク」とは、以下に定義するように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、又はアミノ酸配列の変更を含んでいてもよい。いくつかの態様では、アミノ酸変更の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。

【0039】

「親和性」は、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単一の結合部位の間の非共有性相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表し得る。親和性は、本明細書に記載するものを含め、当技術分野で一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例証的及び例示的な方法が以下に説明される。

【0040】

「親和性成熟」抗体とは、変化を有しない親抗体と比較して、１つ又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）において１つ又は複数の変化を有し、かかる改変によって抗原に対する抗体の親和性を改善する、抗体を指す。

【0041】

「抗Ｎｏｔｃｈ２抗体」及び「Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体」という用語は、抗体がＮｏｔｃｈ２の標的化において診断及び／又は治療剤として有用であるように十分な親和性を有して、Ｎｏｔｃｈ２に結合することができる抗体を指す。いくつかの態様では、無関係な非Ｎｏｔｃｈ２タンパク質に対する抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の結合度は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定されるように、Ｎｏｔｃｈ２に対する抗体の結合の約１０％未満である。特定の態様では、Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。抗体が１μＭ以下のＫ_Ｄを有する場合、抗体はＮｏｔｃｈ２に「特異的に結合」すると言われる。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、異なる種由来のＮｏｔｃｈ２の中で保存されているＮｏｔｃｈ２のエピトープに結合する。

【0042】

「抗体」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、限定されるものではないが、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含めた、様々な抗体構造を包含する。

【0043】

「抗体断片」は、インタクト抗体が結合する抗原を結合するインタクト抗体の一部を含むインタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ及びｓｃＦａｂ）；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）；並びに、抗体断片から形成した多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。特定の抗体断片の総説としては、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６（２００５）を参照されたい。

【0044】

「エピトープ」という用語は、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が結合する相手である、タンパク質性又は非タンパク質性のいずれかの、抗原上の部位を示す。エピトープは、連続したアミノ酸ストレッチ部位から形成される場合（線状エピトープ）、又は非連続のアミノ酸を含む場合（すなわち、不連続なエピトープ又は立体構造エピトープ）の両方があり、例えば、抗原の折り畳みに起因して（すなわち、タンパク質性抗原の三次折り畳みによって）空間的に近接して形成される。線状エピトープは、タンパク質性抗原が変性剤にさらされた後もなお、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体と結合しているのが一般的であるが、一方、立体構造エピトープは、変性剤で処理されると破壊されるのが一般的である。エピトープは、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、又は８～１０個のアミノ酸を、独特な空間的構造で含む。

【0045】

特定のエピトープに結合する抗体（すなわち、同じエピトープに結合する抗体）のスクリーニングは、例えば、限定されないが、アラニン・スキャニング、ペプチドブロット（Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８（２００４）４４３－４６３）、ペプチド切断分析、エピトープ切除、エピトープ抽出、抗原の化学的修飾（Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９（２０００）４８７－４９６を参照）、及びクロスブロッキング（「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．，ＮＹを参照）などの、当該技術分野で慣用の方法を用いて行われ得る。

【0046】

抗原構造系抗体プロファイリング（Ａｎｔｉｇｅｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｂａｓｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ：ＡＳＡＰ）は、変性促進型プロファイリング（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ－Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ：ＭＡＰ）としても知られ、Ｎｏｔｃｈ２に特異的に結合する多数のモノクローナル抗体を、化学的又は酵素的に修飾された抗原表面に対する多数の抗体のそれぞれの結合プロファイルに基づいて区分けすることができる（例えばＵＳ ２００４／０１０１９２０参照）。区分けされた各抗体は同じエピトープに結合するが、このエピトープは、他の区分けで表されるエピトープとは明確に異なることがあるか、又は部分的に重なっている独特なエピトープであり得る。

【0047】

また、競合結合は、抗体が参照抗体と同じＮｏｔｃｈ２のエピトープに結合するか、又は参照抗Ｎｏｔｃｈ２抗体との結合について競合するかを容易に決定するために使用することができる。例えば、参照抗Ｎｏｔｃｈ２抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて参照抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の抗原への結合を５０％以上阻害する抗体を指し、逆に参照抗体は、競合アッセイにおいて抗体の抗原への結合を５０％以上阻害する。また例えば、抗体が参照抗Ｎｏｔｃｈ２抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体を飽和状態でＮｏｔｃｈ２に結合させることができる。過剰な参照抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を除去した後、当該抗Ｎｏｔｃｈ２抗体のＮｏｔｃｈ２への結合能力を評価する。参照抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の飽和結合後に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体がＮｏｔｃｈ２に結合できる場合、この抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、参照抗Ｎｏｔｃｈ２抗体とは異なるエピトープに結合すると結論づけることができる。しかし、参照抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の飽和結合後に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体がＮｏｔｃｈ２に結合できない場合、この抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、参照抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合している可能性がある。問題の抗体が同じエピトープに結合しているのか、又は立体的な理由で結合が妨害されているだけなのかを確認するためには、慣用的な実験を用いることができる（例えばペプチド突然変異や、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、又は当技術分野で利用可能なその他の定量的又は定性的な抗体結合アッセイを用いた結合分析など）。このアッセイは、２つのセットアップ、すなわち、両方の抗体が飽和抗体である状態で実施されるべきである。両方のセットアップにおいて、第１の（飽和）抗体のみがＮｏｔｃｈ２に結合可能な場合、この抗Ｎｏｔｃｈ２抗体と参照抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２への結合について競合していると結論づけることができる。

【0048】

いくつかの態様では、競合結合アッセイで測定して、一方の抗体の１、５、１０、２０又は１００倍過剰が他方の結合を少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、さらには９９％以上阻害する場合、２つの抗体は同じ又は重複するエピトープに結合するとみなされる。（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０（１９９０）１４９５－１５０２を参照）。

【0049】

いくつかの態様では、一方の抗体の結合を低下又は排除する抗原中の実質的に全てのアミノ酸突然変異が他方の抗体の結合も低下又は排除する場合、２つの抗体は同じエピトープに結合するとみなされる。２つの抗体は、一方の抗体の結合を減少又は排除するアミノ酸突然変異のサブセットのみが、他方の抗体の結合を減少又は排除する場合、「重複エピトープ」を有するとみなされる。

【0050】

「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来し、重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分が異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。

【0051】

抗体の「クラス」とは、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域の型を指す。抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、下位クラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２に更に分けることができる。特定の態様では、抗体はＩｇＧ_１アイソタイプである。特定の態様では、抗体は、Ｆｃ領域エフェクター機能を低下させるためのＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異を有するＩｇＧ_１アイソタイプのものである。他の態様では、抗体はＩｇＧ_２アイソタイプのものである。特定の態様では、抗体は、ＩｇＧ_４抗体の安定性を改善するためにヒンジ領域にＳ２２８Ｐ突然変異を有するＩｇＧ_４アイソタイプのものである。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の１つに割り当てられ得る。

【0052】

「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性のことで、抗体のアイソタイプによって異なる。抗体エフェクター機能の例としては、以下のものが挙げられる：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞活性化。

【0053】

薬剤、例えば、医薬組成物の「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な投薬量及び所要期間で有効な量を指す。

【0054】

用語「Ｆｃ領域」とは、本明細書では定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域とバリアントＦｃ領域とを含む。いくつかの態様では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、宿主細胞によって産生される抗体は、重鎖のＣ末端から１つ又は複数、特に１つ又は２つのアミノ酸の翻訳後開裂を受けてもよい。したがって、完全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現によって、宿主細胞によって産生する抗体は、完全長重鎖を含んでいてもよく、又は完全長重鎖の開裂したバリアントを含んでいてもよい。これは、重鎖の最終的な２つのＣ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ４４６）及びリジン（Ｋ４４７、ＥＵインデックスによるナンバリング）である場合であってもよい。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、又はＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）及びリジン（Ｌｙｓ４４７）が存在してもよい、又は存在していなくてもよい。いくつかの態様では、本発明の抗体に含まれる、本明細書で明記したＦｃ領域を含む重鎖は、さらなるＣ末端のグリシン－リシンジペプチド（Ｇ４４６及びＫ４４７、ＥＵインデックスに従ったナンバリング）を含む。いくつかの態様では、本発明に従った抗体に含まれる、本明細書で明記したＦｃ領域を含む重鎖は、更なるＣ末端グリシン残基（Ｇ４４６、ＥＵインデックスに従ったナンバリング）を含む。本明細書で特に明記されない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されるような、ＥＵナンバリングシステム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。

【0055】

「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＣＤＲ及びＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）中において以下の配列で現れる：ＦＲ１－ＣＤＲ－Ｈ１（ＣＤＲ－Ｌ１）－ＦＲ２－ＣＤＲ－Ｈ２（ＣＤＲ－Ｌ２）－ＦＲ３－ＣＤＲ－Ｈ３（ＣＤＲ－Ｌ３）－ＦＲ４。

【0056】

用語「全長抗体」、「インタクト抗体」及び「全抗体」とは、本明細書では相互に交換可能に使用され、天然抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。

【0057】

「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養」という用語は、互換可能に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫も含まれる。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらは、継代数によらず、一次形質転換細胞及びそれに由来する子孫を含む。子孫は、親細胞と完全に同一の核酸含量でない場合があるが、突然変異を含んでもよい。本明細書では、最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物学的活性を有する変異体の子孫が、含まれる。

【0058】

「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞により産生された抗体、又はヒト抗体レパートリーなどのヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト由来の抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。

【0059】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１－３におけるようなサブグループである。いくつかの態様では、ＶＬの場合、サブグループは、上述のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に記載のように、サブグループカッパＩ又はＩＩである。いくつかの態様では、ＶＨの場合、サブグループは、上述のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に記載のように、サブグループＩ又はＩＩＩである。

【0060】

「ヒト化」抗体とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、そのドメイン中ではＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のＣＤＲに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のＦＲに対応することになる。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。ある抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。

【0061】

本明細書で使用する場合、用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」とは、配列内で超可変可能であり、抗原結合特異性を決定する、抗体可変ドメインの領域、例えば「相補性決定領域」（ＣＤＲ）のそれぞれを意味する。

【0062】

一般に、抗体は６つのＣＤＲを含み、３つがＶＨにあり（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）、３つがＶＬにある（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）。本明細書における例示的なＣＤＲとしては、以下が挙げられる：
（ａ）アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）及び９５－１０２（Ｈ３）に存在するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ～３６（Ｌ１）、４６～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３０～３５ｂ（Ｈ１）、４７～５８（Ｈ２）、及び９３～１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６））；並びに、
（ｄ）Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔの組み合わせによって定義されるＣＤＲ：ＶＬドメインの２４～３４位（Ｌ１）、５０～５６位（Ｌ２）及び８９～９７位（Ｌ３）、並びにＶＨドメインの２６～３５位（Ｈ１）、５０～６５位（Ｈ２）及び９５～１０２位（Ｈ３）。

【0063】

特に指示がない限り、ＣＤＲは、上記Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従い決定される。当業者は、ＣＤＲの表記は、上記Ｃｈｏｔｈｉａ、上記ＭｃＣａｌｌｕｍ、又は、任意の他の、科学的に認可された命名システムに従い決定することができることを理解するであろう。いくつかの態様では、ＣＤＲ残基は、図１～３及び／又は本明細書の特定の配列の表で特定されたものを含む。

【0064】

「免疫コンジュゲート」とは、細胞傷害性剤を含むがそれに限定されない、１つ又は複数の異種分子にコンジュゲートされた抗体である。

【0065】

「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。特定の態様では、個体又は対象は、ヒトである。

【0066】

「単離された」抗体とは、その自然環境の構成要素から分離されているものである。いくつかの態様では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）法によって決定される場合、純度が９５％又は９９％より高くなるまで精製される。抗体純度の評価のための方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。

【0067】

「核酸分子」又は「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／又は物質を含む。各ヌクレオチドは、塩基で構成され、具体的には、プリン塩基又はピリミジン塩基（すなわち、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）又はウラシル（Ｕ））、糖（すなわち、デオキシリボース又はリボース）、及びリン酸基で構成される。多くの場合、核酸分子は塩基配列によって記載され、それにより、塩基は、核酸分子の一次構造（線状構造）を表す。塩基の配列は、典型的には、５’から３’へと表される。本明細書において、核酸分子という用語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、例えば、相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）及びゲノムＤＮＡ、リボ核酸（ＲＮＡ）、特に、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡ又はＲＮＡの合成形態、及びこれらの分子の２つ以上を含む混合ポリマーを包含する。核酸分子は、線状又は環状であってもよい。これに加え、核酸分子という用語は、センス鎖及びアンチセンス鎖、並びに一本鎖形態及び二本鎖形態の両方を含む。さらに、本明細書で記載される核酸分子は、天然に存在するヌクレオチド又は天然に存在しないヌクレオチドを含むことができる。誘導体化された糖又はホスフェート骨格結合又は化学修飾された残基を含む、天然に存在しないヌクレオチドの例として、修飾されたヌクレオチド塩基が挙げられる。核酸分子は、例えば、宿主又は患者において、インビトロ及び／又はインビボで本発明の抗体の直接的な発現のためのベクターとして適したＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子も包含する。そのようなＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）又はＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ベクターは、改変されていなくてもよく、又は改変されていてもよい。例えば、ｍＲＮＡは、インビボで抗体を産生するために対象にｍＲＮＡを注入することができるように、ＲＮＡベクターの安定性及び／又はコードされた分子の発現を高めるように化学改変されてもよい（例えば、Ｓｔａｄｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１７、２０１７年６月１２日にオンラインで公開、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．４３５６又は欧州特許第２１０１８２３Ｂ１号明細書を参照）。

【0068】

「単離された」核酸とは、自然環境の構成要素から切り離されている核酸分子のことである。単離された核酸には、通常核酸分子を含む細胞内に含まれる核酸分子が含まれるが、核酸分子は、染色体外、又は天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。

【0069】

「抗Ｎｏｔｃｈ２抗体をコードする単離された核酸」とは、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の重鎖及び軽鎖（又はそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子（複数可）を含み、そのような核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。

【0070】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体が同一であり、及び／又は同一のエピトープと結合しているが、例えば、自然に生じる突然変異を含むか、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能性のあるバリアント抗体を除いて、そのようなバリアントは、一般的に微量で存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤のそれぞれのモノクローナル抗体は、１つの抗原上の単一の決定基に対して指向する。したがって、改変詞「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集合から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするように解釈すべきではない。例えば、本発明に従うモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができ、そのような方法及び本明細書に記載されているモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法を含むがこれらに限定されない。

【0071】

「粘膜閉塞性肺疾患」という用語は、びまん性粘液閉塞、慢性炎症、気道壁拡張症、及び頻繁な細菌感染症を特徴とする疾患群を指す。粘膜閉塞性肺疾患では、高濃度の粘液は遠位気道から気管に向かって効果的に輸送することができず、粘液が気道表面に付着し、気流閉塞、感染、及び炎症を引き起こす。非限定的な例示的な粘膜閉塞性肺疾患としては、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、原発性毛様体ジスキネジア、非嚢胞性線維症、気管支拡張症及び細気管支炎が挙げられる。

【0072】

「ネイキッド抗体」とは、異種部位（例えば、細胞毒性部位）又は放射性標識に結合していない抗体を指す。ネイキッド抗体は、薬学的組成物中に存在していてもよい。

【0073】

「天然抗体」とは、様々な構造を持つ天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、２本の同一の軽鎖と２本の同一の重鎖がジスルフィド結合したものを含む、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラメリック糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン又は重鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに続いて３つの定常重ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン又は軽鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＬ）を有し、それに続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。

【0074】

本明細書で使用される用語「Ｎｏｔｃｈ２」は、特に断らない限り、霊長類（例えばヒト）並びに齧歯類（例えばマウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源の任意の天然Ｎｏｔｃｈ２を指す。この用語は、「完全長」の未処理のＮｏｔｃｈ２、及び細胞内での処理によりもたらされる任意の形態のＮｏｔｃｈ２も包含する。この用語はまた、Ｎｏｔｃｈ２の自然発生的な天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントをも包含する。例示的なヒトＮｏｔｃｈ２のアミノ酸配列を、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ０４７２１．３及び本明細書の配列番号７０に示す。例示的なカニクイザルＮｏｔｃｈ２のアミノ酸配列をＵｎｉＰｒｏｔ：Ａ０Ａ２Ｋ５Ｕ７Ｎ０＿ＭＡＣＦＡに示す。別の例示的なカニクイザルＮｏｔｃｈ２を本明細書の配列番号７１に示す。例示的なモルモットＮｏｔｃｈ２のアミノ酸配列を、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｈ０ＶＵ２１及び本明細書中の配列番号７２に示す。例示的なモルモットＮｏｔｃｈ２のアミノ酸配列を、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｏ３５５１６及び本明細書中の配列番号７３に示す。例示的なラットＮｏｔｃｈ２のアミノ酸を、本明細書中のＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ９ＱＷ３０及び配列番号８１に示す。

【0075】

「パッケージ添付文書」という用語は、そのような治療製品の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症、及び／又はその使用に関する警告についての情報を含有する、治療製品の商業用パッケージに通例含まれる指示書を指すために使用される。

【0076】

参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列の同一性率（％）」は、アラインメントの目的で、配列をアラインメントし、最大の配列同一性率を達成するために、必要ならばギャップを導入した後、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合であると定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術の範囲内にある種々の様式で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア又はＦＡＳＴＡプログラムパッケージを用いて達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。あるいは、同一性率の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成することができる。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成されており、ソースコードは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）のユーザドキュメンテーションにファイルされており、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｎｏ．ＴＸＵ５１００８７の下に登録されており、かつ、国際公開第２００１／００７６１１号に記載されている。

【0077】

特に断りのない限り、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性率の値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを使用するか、又はその後にＢＬＯＳＵＭ５０比較マトリクスを使用して生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｄ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ」ＰＮＡＳ ８５：２４４４－２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９６）「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ」Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８；及び、Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４－３６により記載されており、ｗｗｗ．ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌ ｏｒ ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｓｓ／ｆａｓｔａから公に利用可能である。あるいは、ｇｇｓｅａｒｃｈ（グローバルタンパク質：タンパク質）プログラム及びデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；ｏｐｅｎ：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を使用して、ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉでアクセス可能な公共サーバを使用して配列を比較し、ローカルではなくグローバルなアライメントを確実に実行することができる。アミノ酸同一性率は、アウトプットアラインメントヘッダーで与えられる。

【0078】

「医薬組成物」又は「医薬製剤」という用語は、調製物に含まれる有効成分の生物活性が有効になるような形態をしており、かつ、医薬組成物が投与されるであろう対象に対して容認できないほど毒性のある追加の成分を含まない、調製物を指す。

【0079】

「薬学的に許容され得る担体」は、有効成分以外の医薬組成物又は製剤中の成分であって、対象にとって非毒性である成分を指す。薬学的に許容され得る担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。

【0080】

本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及びその文法的な変化形、例えば、「治療（ｔｒｅａｔ）する」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」）は、治療される個体において疾患の本来の経過を変える試行における臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の経過の間に行うことができる。治療の所望の効果としては、疾患の発症又は再発を予防すること、症候の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減弱、転移を予防すること、疾患進行率を低下させること、病状の寛解又は緩和、及び回復又は改良された予後が挙げられる。いくつかの態様では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるために、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。

【0081】

「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗原に対する抗体の結合に関与する抗体重鎖又は抗体軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般的に、類似の構造を有し、それぞれのドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６^ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照。）単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために充分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体のＶＨ又はＶＬドメインを使用し、それぞれ、相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照のこと。

【0082】

「ベクター」という用語は、本明細書では、連結している別の核酸を増殖可能な核酸分子を指す。この用語には、自己複製する核酸構造としてのベクターだけでなく、ベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターも含まれる。特定のベクターは、作動可能に連結された核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターを本明細書では、「発現ベクター」と呼ぶ。

【0083】

ＩＩ．組成物及び方法
いくつかの態様では、本発明は、Ｎｏｔｃｈ２に結合し、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害するが、ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達を阻害しない抗体に部分的に基づく。本発明の抗体は、例えば、粘膜閉塞性肺疾患の診断又は治療に有用である。

【0084】

Ａ．例示的な抗Ｎｏｔｃｈ２抗体
いくつかの態様では、本発明は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する抗体を提供する。いくつかの態様では、Ｎｏｔｃｈ２に結合する単離された抗体が提供される。いくつかの態様では、本発明は、Ｎｏｔｃｈ２に特異的に結合する抗体を提供する。特定の態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は：
● Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害する；
● ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達を阻害しない；
● Ｎｏｔｃｈ２へのＪａｇｇｅｄ１の結合を阻害しない；
● Ｎｏｔｃｈ２へのＤＬＬ１の結合を阻害しない；
● Ｎｏｔｃｈ２のＥＧＦ７リピート内のエピトープに結合する；
● Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６内のエピトープに結合する；
● Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６内の不連続エピトープに結合する；
● ヒトＮｏｔｃｈ２の接触アルギニン２６８（Ｒ２６８）；
● リジン２６８（２６８Ｋ）を含むＮｏｔｃｈ２に結合しない；
● 配列番号７４のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合し、配列番号７７のアミノ酸配列を含むポリペプチドには結合しない；及び／又は
● 例えば、表面プラズモン共鳴によって決定される場合、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満又は５ｎＭ未満の親和性（Ｋ_Ｄ）でヒトＮｏｔｃｈ２に結合する。

【0085】

抗体１Ｂ２又はそのヒト化バージョンの１つ又は複数のＣＤＲを含む抗体
いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６又は７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を提供する。

【0086】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６又は７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの態様では、抗体は、配列番号８、９、１０、１１又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号８、９、１０、１１又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0087】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。いくつかの態様では、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0088】

いくつかの態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６又は７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。

【0089】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号６又は７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、を含む抗体を提供する。

【0090】

特定の態様では、本明細書において提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の任意の１つ以上のアミノ酸は、以下のＣＤＲ位置：
ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号６）：位置２
ＣＤＲ－Ｈ３（配列番号８）：位置２、４、５、及び／又は６
特定の態様では、置換は、本明細書で提供される、保存的置換である。特定の態様では、以下の置換のうちの任意の１つ以上は、任意の組み合わせ：
ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号６）：Ｓ２Ｑ（ＫａｂａｔナンバリングによるＳ５１Ｑ）
ＣＤＲ－Ｈ３（配列番号８）：Ｓ２Ｇ（ＫａｂａｔナンバリングによるＳ９６Ｇ）；Ｒ４Ｋ（ＫａｂａｔナンバリングによるＲ９８Ｋ）；Ｗ５Ｌ（ＫａｂａｔナンバリングによるＷ９９Ｌ）；及び／又はＧ６Ａ（ＫａｂａｔナンバリングによるＧ１００Ａ）。

【0091】

本明細書中に提供される任意の態様において、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体はヒト化される。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９２のＦＲ１配列；配列番号９３若しくは９４のＦＲ２配列；配列番号９５、９６若しくは１０７のＦＲ３配列、及び／又は配列番号９７のＦＲ４配列を含むＶＨを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号８７のＦＲ１配列；配列番号８８のＦＲ２配列；配列番号８９若しくは９０のＦＲ３配列、及び／又は配列番号９１のＦＲ４配列を含むＶＬを含む。

【0092】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号９２の重鎖フレームワーク領域１（ＨＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号９３又は９４の重鎖フレームワーク領域２（ＨＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号９５、９６、又は１０７の重鎖フレームワーク領域３（ＨＣ－ＦＲ３）、及び（ｄ）配列番号９７の重鎖フレームワーク領域４（ＨＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の重鎖フレームワーク配列を含む、ＶＨドメインを含む。

【0093】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９２のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９３又は９４のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９５、９６、又は１０７のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９７のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。

【0094】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号９２と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号９２と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含む。

【0095】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９３又は９４に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号９３又は９４と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号９３又は９４と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含む。

【0096】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９５、９６、又は１０７に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号９５、９６、又は１０７と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号９５、９６、又は１０７と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含む。

【0097】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９７に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号９７と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号９７と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含む。

【0098】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号８７の軽鎖フレームワーク領域１（ＬＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号８８の軽鎖フレームワーク領域２（ＬＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号８９又は９０の軽鎖フレームワーク領域３（ＬＣ－ＦＲ３）、及び（ｄ）配列番号９１の軽鎖フレームワーク領域４（ＬＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の軽鎖フレームワーク配列を含む、ＶＬドメインを含む。

【0099】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号８７のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号８８のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号８９又は９０のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９１のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。

【0100】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号８７に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号８７と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号８７と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含む。

【0101】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号８８に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号８８と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号８８と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含む。

【0102】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号８９又は９０に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号８９又は９０と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号８９又は９０と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含む。

【0103】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号９１に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号９１と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号９１と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含む。

【0104】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨのＣＤＲ配列及び配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬのＣＤＲ配列を含む。

【0105】

さらなる態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。

【0106】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。

【0107】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。

【0108】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６又は７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0109】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６又は７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み；該抗体はＮｏｔｃｈ２に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨ配列及び配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（Ｋ_Ｄ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（Ｋ_Ｄ）を有するＮｏｔｃｈ２に結合する。

【0110】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後改変が含まれる。特定の態様では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６又は７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供され、該抗体は、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後改変が含まれる。特定の態様では、ＶＬは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0111】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供され、該抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。いくつかの態様では、本抗体は、それぞれ、配列番号１４、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、又は３２及び配列番号１３、１５、１６、２５、２７、２９、又は３１におけるＶＨ配列及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。

【0112】

抗体３１０７の１つ又は複数のＣＤＲを含む抗体
いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を提供する。

【0113】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの態様では、抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0114】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。いくつかの態様では、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0115】

いくつかの態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。

【0116】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、を含む抗体を提供する。

【0117】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４０のＶＨのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号３９のＶＬのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４０のＶＨのＣＤＲ配列及び配列番号３９のＶＬのＣＤＲ配列を含む。

【0118】

さらなる態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４０のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号３９のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。

【0119】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４０のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４０のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４０のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４０のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。

【0120】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号３９のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号３９及び９８～１００から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号３９のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号３９及び９８～１００から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号３９のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号３９及び９８～１００から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号３９のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号３９及び９８～１００から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。

【0121】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号３９及び９８～１００から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号３９及び９８～１００から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0122】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号３９及び９８～１００から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み；該抗体はＮｏｔｃｈ２に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号３９及び９８～１００から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号４０のＶＨ配列及び配列番号３９のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（Ｋ_Ｄ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（Ｋ_Ｄ）を有するＮｏｔｃｈ２に結合する。

【0123】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する能力を保持する。特定の態様では、合計で１～１０個のアミノ酸が、配列番号４０及び１０１～１０６のいずれか１つにおいて、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４０及び１０１～１０６から選択されるＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後改変が含まれる。特定の態様では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0124】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供され、該抗体は、配列番号３９及び９８～１００から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号３９及び９８～１００から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する能力を保持する。特定の態様では、合計で１～１０個のアミノ酸が、配列番号３９及び９８～１００のいずれか１つにおいて、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号３９及び９８～１００から選択されるＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後改変が含まれる。特定の態様では、ＶＬは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0125】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供され、該抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。いくつかの態様では、抗体は、それぞれ配列番号４０及び配列番号３９のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。いくつかの態様では、抗体は、配列番号１０１～１０６から選択されるＶＨ配列及び９８～１００から選択されるＶＬ配列を含み、これにはそれら配列の翻訳後改変が含まれる。

【0126】

抗体２３３８の１つ又は複数のＣＤＲを含む抗体
いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を提供する。

【0127】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの態様では、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0128】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。いくつかの態様では、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0129】

いくつかの態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。

【0130】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、を含む抗体を提供する。

【0131】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４８のＶＨのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４７のＶＬのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４８のＶＨのＣＤＲ配列及び配列番号４７のＶＬのＣＤＲ配列を含む。

【0132】

さらなる態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４８のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号４７のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。

【0133】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４８のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号４８のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４８のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４８のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４８のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４８のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４８のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４８のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。

【0134】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４７のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号４７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４７のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４７のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４７のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。

【0135】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0136】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み；該抗体はＮｏｔｃｈ２に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号４８のＶＨ配列及び配列番号４７のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（Ｋ_Ｄ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（Ｋ_Ｄ）を有するＮｏｔｃｈ２に結合する。

【0137】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号４８において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４８のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後改変が含まれる。特定の態様では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供され、該抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号４７において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号４７のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後改変が含まれる。特定の態様では、ＶＬは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0138】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供され、該抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。いくつかの態様では、抗体は、それぞれ配列番号４８及び配列番号４７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。

【0139】

抗体２４３０の１つ又は複数のＣＤＲを含む抗体
いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を提供する。

【0140】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの態様では、抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0141】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。いくつかの態様では、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0142】

いくつかの態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。

【0143】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、を含む抗体を提供する。

【0144】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５８のＶＨのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５６又は５７のＶＬのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５８のＶＨのＣＤＲ配列及び配列番号５６又は５７のＶＬのＣＤＲ配列を含む。

【0145】

さらなる態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５８のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号５６又は５７のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。

【0146】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５８のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号５８のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５８のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５８のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５８のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５８のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５８のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５８のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。

【0147】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５６又は５７のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号５６又は５７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５６又は５７のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５６又は５７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５６又は５７のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５６又は５７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５６又は５７のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５６又は５７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。

【0148】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号５６又は５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号５６又は５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0149】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号５６又は５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み；該抗体はＮｏｔｃｈ２に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号５６又は５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号５８のＶＨ配列及び配列番号５６又は５７のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（Ｋ_Ｄ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（Ｋ_Ｄ）を有するＮｏｔｃｈ２に結合する。

【0150】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号５８において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５８のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後改変が含まれる。特定の態様では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供され、該抗体は、配列番号５６又は５７のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５６又は５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号５６又は５７において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号５６又は５７のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後改変が含まれる。特定の態様では、ＶＬは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0151】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供され、該抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。いくつかの態様では、抗体は、それぞれ配列番号５８及び配列番号５６又は５７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。

【0152】

抗体２６２１の１つ又は複数のＣＤＲを含む抗体
いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を提供する。

【0153】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの態様では、抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0154】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。いくつかの態様では、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0155】

いくつかの態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。

【0156】

いくつかの態様では、本発明は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、を含む抗体を提供する。

【0157】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６６のＶＨのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６５のＶＬのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６６のＶＨのＣＤＲ配列及び配列番号６５のＶＬのＣＤＲ配列を含む。

【0158】

さらなる態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６６のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号６５のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。

【0159】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６６のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号６６のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６６のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号６６のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６６のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号６６のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６６のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号６６のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。

【0160】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６５のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号６５のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６５のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号６５のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６５のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号６５のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６５のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号６５のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。

【0161】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0162】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み；該抗体はＮｏｔｃｈ２に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号６６のＶＨ配列及び配列番号６５のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（Ｋ_Ｄ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（Ｋ_Ｄ）を有するＮｏｔｃｈ２に結合する。

【0163】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号６６において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６６のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後改変が含まれる。特定の態様では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供され、該抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、Ｎｏｔｃｈ２に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号６５において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、配列番号６５のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後改変が含まれる。特定の態様では、ＶＬは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。

【0164】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供され、該抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。いくつかの態様では、抗体は、それぞれ配列番号６６及び配列番号６５のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。

【0165】

さらなる態様では、本発明は、本明細書で提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体と同一エピトープに結合する抗体を提供する。例えば、特定の態様では、配列番号３２のＶＨ配列及び配列番号３１のＶＬ配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。特定の態様では、Ｎｏｔｃｈ２のＥＧＦ７リピート内のエピトープに結合する抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６（配列番号７０）内のエピトープに結合する抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｏｔｃｈ２のアミノ酸２６０～２９６（配列番号７０）内のエピトープに結合する抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供される。

【0166】

更なる態様では、本発明は、本明細書中に提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体とＮｏｔｃｈ２への結合について競合する抗体を提供する。例えば、特定の態様では、Ｎｏｔｃｈ２に対する結合について、配列番号３２のＶＨ配列及び配列番号３１のＶＬ配列を含む抗Ｎｏｔｃｈ２抗体と競合する抗体が提供される。

【0167】

本発明のさらなる態様において、上記の態様のいずれかによる抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）_２断片である。いくつかの態様では、本抗体は、全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、若しくはＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。

【0168】

さらなる一態様では、上記の態様のいずれかに従う抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、以下のセクション１～８に記載される特徴のいずれかを、単独又は組合せで組み込み得る：

【0169】

１．抗体親和性
特定の態様では、本明細書において提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。

【0170】

いくつかの態様では、Ｋ_Ｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いたアッセイは、固定化抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で約１０応答単位（ＲＵ）で実施する。いくつかの態様では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給業者の指示に従って、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化される。抗原を、ｐＨ４．８の１０ｍＭの酢酸ナトリウムによって、５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈した後、５μｌ／分の流速でインジェクトし、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答ユニット（ＲＵ）を達成する。抗原のインジェクション後、１Ｍのエタノールアミンをインジェクトして、未反応基をブロックする。速度論的測定のため、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ～５００ｎＭ）を、およそ２５μＬ／分の流量にて２５℃で０．０５％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中に注射する。会合速度（ｋ_ｏｎ）及び解離速度（ｋ_ｏｆｆ）を、会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時に適合することによって、単純１対１（１：１）Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して計算する。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ比として計算される。例えば、ＣｈｅｎらＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照されたい。

【0171】

ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００マシンを使用する別の例示的なアッセイでは、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域を有する抗体をプロテインＡチップ上に捕捉して、約３００ＲＵを達成する。いくつかのこのような実施形態では、精製抗原の連続希釈液を、追加の３ｍＭ ＣａＣｌ_２を含むＨＢＳ－Ｐ緩衝液中に３７℃で１００μＬ／分の流速で注入する。結合率（ｋａ）及び解離率（ｋｄ）は、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン２．０）を用いて計算する。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、比率ｋｄ／ｋａとして計算され得る。

【0172】

オン速度が上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって１０^６Ｍ^－１ ｓ^－１を超える場合、このオン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃でのＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ抗－抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加又は減少を測定する、蛍光クエンチ技法を使用することによって、判定することができる。

【0173】

別の方法では、Ｋ_Ｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。いくつかの態様では、ＲＩＡは、目的の抗体及びその抗原のＦａｂバージョンを用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、標識されていない抗原の滴定系列の存在下で、最小濃度の（^１２５Ｉ）標識された抗原でＦａｂを平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートで結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」第２９３巻第８６５～８８１頁（１９９９年）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍＬの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで２～５時間にわたって室温（およそ２３℃）で遮断する。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［^１２５Ｉ］－抗原を、関心のあるＦａｂの連続希釈物と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」第５７巻第４５９３～４５９９頁（１９９７年）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ－１２の評価と一致する）。その後、目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションをより長い期間（例えば、約６５時間）続けて、平衡に達することを確実にすることができる。その後、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために混合物を捕捉プレートに移す。次に、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を付加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間、計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイでの使用のために選択する。

【0174】

２．抗体断片
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。

【0175】

いくつかの態様では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、又はＦ（ａｂ’）_２断片、特にＦａｂ断片である。無傷の抗体をパパイン消化すると、重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ順にＶＨ及びＶＬ）に加えて、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）もそれぞれが含む、２つの同一の抗原結合断片（いわゆる「Ｆａｂ」断片）が得られる。よって「Ｆａｂ断片」とは、ＶＬドメイン及びＣＬドメインを含む軽鎖と、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを含む重鎖断片を有する抗体断片のことである。「Ｆａｂ’断片」は、抗体ヒンジ領域から１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にて、残基を添加することによって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数価）が遊離チオール基を保持するＦａｂ’断片である。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位（２つのＦａｂ断片）と、Ｆｃ領域の一部とを有するＦ（ａｂ’）_２断片が得られる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が長くなったＦａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。

【0176】

いくつかの態様では、抗体断片は、ダイアボディ、トリアボディ、又はテトラボディである。ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）にも記載されている。

【0177】

更なる態様では、抗体断片は一本鎖Ｆａｂ断片である。「一本鎖Ｆａｂ断片」又は「ｓｃＦａｂ」は、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）、及びリンカーからなるポリペプチドであり、上記抗体ドメイン及び上記リンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向に、以下の順序：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１、又はｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬのうちの１つを有する。特に、上記リンカーは、少なくとも３０個のアミノ酸、好ましくは３２～５０個のアミノ酸のポリペプチドである。当該一本鎖Ｆａｂ断片は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合によって安定化される。加えて、これらの一本鎖Ｆａｂ断片は、システイン残基の挿入（例えば、Ｋａｂａｔナンバリングによると、可変重鎖の位置４４及び可変軽鎖の位置１００）を介した鎖間ジスルフィド結合の生成によって、さらに安定化し得る。

【0178】

いくつかの態様では、抗体断片は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。「一本鎖可変断片」又は「ｓｃＦｖ」は、リンカーにより接続された、抗体の重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインの融合タンパク質である。特に、リンカーは、１０～２５個のアミノ酸の短いポリペプチドであり、通常、柔軟性のためにグリシンが、かつ、溶解性のためにセリン又はスレオニンが豊富であり、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端と、又はこの逆のいずれかで、接続させることができる。このタンパク質は、定常領域が取り除かれ、リンカーが導入されているにもかかわらず、元の抗体の特異性を保持することができる。ｓｃＦｖ断片の総説としては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。また、国際公開第９３／１６１８５号及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。

【0179】

いくつかの態様では、抗体断片は単一ドメイン抗体である。「単一ドメイン抗体」は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。特定の態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号Ｂ１を参照されたい）。

【0180】

抗体断片は、限定されないが、本明細書に記載される、インタクト抗体のタンパク質分解による消化、及び組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌）による組換え産生を含む種々の技術によって作製することができる。

【0181】

３．キメラ抗体及びヒト化抗体
特定の態様では、本明細書で提供される抗体はキメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又は非ヒト霊長類、例えば、サル由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれらから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

【0182】

特定の態様において、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体が、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化される。通常、ヒト化抗体は、ＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来する１つ以上の可変ドメインを含み、ＦＲ（又はその一部）はヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体はまた、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部を含む。いくつかの態様では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。

【0183】

ヒト化された抗体及びその作製方法については、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）で総説され、更に以下に記載されている：Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフトを記載する）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（リサーフェシングを記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載する）；並びにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフルの「ガイド付き選択アプローチを記載する）。

【0184】

ヒト化に用い得るヒトフレームワーク領域としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：「ベストフィット」法を用いて選択したフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；重鎖又は軽鎖可変領域の特定の亜型のヒト抗体コンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞突然変異）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）；並びにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）。

【0185】

４．ヒト抗体
特定の態様では、本明細書で提供される抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技法を使用して作製され得る。ヒト抗体は一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。

【0186】

ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含むか、又は染色体外に存在するか、又は動物の染色体にランダムに統合されている。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号；及び、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。かかる動物によって産生されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、更に修飾されてもよい。

【0187】

ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載する）が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記載されている。

【0188】

ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージ・ディスプレイ・ライブラリから選択される可変ドメイン配列を単離することによって生成することができる。その後、そのような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。

【0189】

５．ライブラリ由来の抗体
特定の態様では、本明細書に提供される抗体はライブラリから得られる。本発明の抗体は、１つ以上の所望の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。コンビナトリアルライブラリをスクリーニングするための方法は、例えば、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ １６：４９８－５０８（２０１６）におけるＬｅｒｎｅｒらにおいて総説されている。例えば、ファージ・ディスプレイ・ライブラリを産生し、所望の結合特性を有する抗体についてかかるライブラリをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、ＦｒｅｎｚｅｌらのｍＡｂｓ ８：１１７７－１１９４（２０１６）；Ｂａｚａｎ ｅｔ ａｌ．のＨｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８：１８１７－１８２８（２０１２）、及びＺｈａｏらのＣｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３６：２７６－２８９（２０１６）、並びに、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍらのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）、及びＭａｒｋｓ ａｎｄ ＢｒａｄｂｕｒｙのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）に見られる。

【0190】

特定のファージディスプレイ法において、ＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって個別にクローニングされ、ファージライブラリにおいて無作為に組み換えられており、次いで、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２：４３３－４５５（１９９４）におけるＷｉｎｔｅｒらにおいて説明されたように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、又はＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫化源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対する高親和性抗体を与える。あるいはまた、ナイーブなレパートリーをクローン化し（例えば、ヒトから）、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．のＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ １２：７２５－７３４（１９９３）に記載されるように、免疫化することなく、非自己から自己抗原までの広範囲に対する単一の抗体源を得ることができる。最終的に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ ｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２２７：３８１－３８８（１９９２）により記載されるように、再整列していないＶ遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングすること、及びランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再整列を達成することによって、合成により作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリを説明する特許刊行物には、例えば、以下が含まれる：米国特許第５，７５０，３７３号、同第７，９８５，８４０号、同第７，７８５，９０３号及び同第８，６７９，４９０号、並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０２３７７６４号及び同第２００７／０２９２９３６号。

【0191】

所望の活性又は複数の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングするための当該技術分野で知られている方法の更なる例には、リボソーム及びｍＲＮＡディスプレイ、並びに細菌、哺乳動物細胞、昆虫細胞又は酵母細胞における抗体ディスプレイ及び選択のための方法が含まれる。酵母表面ディスプレイのための方法は、例えば、Ｓｃｈｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５０３：１３５－５６（２０１２）及びＣｈｅｒｆ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ １３１９：１５５－１７５（２０１５）並びにＺｈａｏ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ８８９：７３－８４（２０１２）に概説がある。リボソームディスプレイのための方法は、例えば、ＨｅらのＮｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２５：５１３２－５１３４（１９９７）及びＨａｎｅｓらのＰＮＡＳ ９４：４９３７－４９４２（１９９７）に記載されている。

【0192】

ヒト抗体ライブラリから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書ではヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。

【0193】

６．多重特異性抗体
特定の態様では、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位、すなわち、異なる抗原上の異なるエピトープ又は同じ抗原上の異なるエピトープに対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の態様では、多重特異性抗体は、３つ又はそれより多くの結合特異性を有する。特定の態様では、結合特異性の一方はＮｏｔｃｈ２に対するものであり、他方は任意の他の抗原に対するものである。ある特定の態様において、二重特異性抗体は、Ｎｏｔｃｈ２の２つ（又はそれ以上）の異なるエピトープに結合し得る。多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、細胞傷害剤又は細胞を、Ｎｏｔｃｈ２を発現する細胞に局在化するために使用することもできる。多重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製され得る。

【0194】

多重特異性抗体を作製するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）参照）及び「ノブ・イン・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号及びＡｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６（１９９７）参照）が含まれるが、これらに限定されない。多重特異性抗体は、また、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果の操作（例えば、国際公開第２００９／０８９００４号参照）；２つ以上の抗体若しくは断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）参照）；ロイシンジッパーを使用した二重特異性抗体の生成（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）及び国際公開第２０１１／０３４６０５号参照）；軽鎖の誤対合問題を回避するための一般的な軽鎖技術の使用（例えば、国際公開第９８／５０４３１号参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）参照）；及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）参照）；並びに例えばＴｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されている三重特異性抗体の調製によって作製することができる。

【0195】

例えば、「オクトパス抗体」を含め、３つ以上の抗原結合部位を有する操作抗体、又はＤＶＤ－Ｉｇもまたここに含まれる（例えば、国際公開第２００１／７７３４２号及び国際公開第２００８／０２４７１５号を参照されたい）。３つ以上の抗原結合部位を有する多重特異性抗体の他の例は、国際公開第２０１０／１１５５８９号、国際公開第２０１０／１１２１９３号、国際公開第２０１０／１３６１７２号、国際公開第２０１０／１４５７９２号、及び国際公開第２０１３／０２６８３１号に見出すことができる。二重特異性抗体又はその抗原結合断片には、Ｎｏｔｃｈ２と別の異なる抗原、又はＮｏｔｃｈ２の２つの異なるエピトープに結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号明細書及び国際公開第２０１５／０９５５３９号を参照）。

【0196】

多重特異性抗体はまた、同じ抗原特異性の１つ又は複数の結合アームにドメインクロスオーバーを持つ非対称の形で、すなわちＶＨ／ＶＬドメイン（例えば、国際公開第２００９／０８０２５２号及び国際公開第２０１５／１５０４４７号を参照）、ＣＨ１／ＣＬドメイン（国際公開第２００９／０８０２５３号を参照）又は完全なＦａｂアーム（国際公開第２００９／０８０２５１号、国際公開第２０１６／０１６２９９号を参照、Ｓｃｈａｅｆｅｒ等のＰＮＡＳ，１０８（２０１１）１１８７－１１９１、及びＫｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ８（２０１６）１０１０－２０も参照）を交換することによっても提供され得る。いくつかの態様では、多重特異性抗体はクロス－Ｆａｂ断片を含む。「クロスＦａｂ断片」又は「ｘＦａｂ断片」又は「クロスオーバーＦａｂ断片」という用語は、重鎖及び軽鎖の可変領域又は定常領域のいずれかが交換されたＦａｂ断片を指す。クロスＦａｂ断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖定常領域１（ＣＨ１）で構成されるポリペプチド鎖、並びに重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）で構成されるポリペプチド鎖を含む。非対称Ｆａｂアームは、荷電又は非荷電アミノ酸突然変異をドメインインターフェースに導入して正しいＦａｂペアリングを指示することによって操作することもできる。例えば、国際公開第２０１６／１７２４８５号を参照。

【0197】

多重特異性抗体の様々なさらなる分子フォーマットが当該技術分野で知られており、本明細書に含まれる（例えば、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６７（２０１５）９５－１０６参照）。

【0198】

本明細書に同様に含まれる特定の種類の多重特異性抗体は、標的細胞、例えば腫瘍細胞上の表面抗原、及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の活性化インバリアント構成成分、例えばＴ細胞を再標的化して標的細胞を死滅させるためのＣＤ３に同時に結合するように設計された二重特異性抗体である。したがって、ある特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、結合特異性のうちの一方がＮｏｔｃｈ２に対するものであり、他方がＣＤ３に対するものである多重特異性抗体、特に二重特異性抗体である。

【0199】

この目的のために有用でありうる二重特異性抗体フォーマットの例には、２つのｓｃＦｖ分子が柔軟なリンカーによって融合されている、いわゆる「ＢｉＴＥ」（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ｅｎｇａｇｅｒ））分子（例えば、国際公開第２００４／１０６３８１号、国際公開第２００５／０６１５４７号、国際公開第２００７／０４２２６１号及び国際公開第２００８／１１９５６７号、Ｎａｇｏｒｓｅｎ及びＢａｅｕｅｒｌｅ，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ３１７，１２５５－１２６０（２０１１）参照）、ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ９，２９９－３０５（１９９６））及びその誘導体、例えばタンデムダイアボディ（「ＴａｎｄＡｂ」Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９３，４１－５６（１９９９））、ダイアボディフォーマットに基づくが、安定化付加のためのＣ末端ジスルフィド架橋を特徴とする「ＤＡＲＴ」（二重親和性再標的化）分子（Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９９，４３６－４４９（２０１０））、なびに全ハイブリッドマウス／ラットＩｇＧ分子であるいわゆるトリオマブ（ｔｒｉｏｍａｂ）（Ｓｅｉｍｅｔｚら、Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｖ ３６，４５８－４６７（２０１０）に概説）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に含まれる、具体的なＴ細胞二重特異性抗体形式は、国際公開第２０１３／０２６８３３号、国際公開第２０１３／０２６８３９号、国際公開第２０１６／０２０３０９号；Ｂａｃａｃ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（８）（２０１６）ｅ１２０３４９８に記載されている。

【0200】

７．抗体バリアント
特定の態様では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的性質を変化させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適正な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって調製されてもよい。このような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基への挿入、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせは、最終構築物が、所望の特徴（例えば、抗原結合）を有する限り、最終構築物に到達するように行うことができる。

【0201】

ａ）置換、挿入、及び欠失バリアント
特定の態様では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発に関心のある部位には、ＣＤＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下に更に記載されるとおりである。目的の抗体中にアミノ酸置換を導入することができ、その産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングする。

【表1】

【0202】

アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って分類され得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0203】

非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを伴うことになる。

【0204】

ある種の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる試験ために選択される結果として生じるバリアント（複数可）は、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の修正（例えば、改善）を有し、かつ／又は実質的に保持された親抗体の特定の生物学的特性を有する。例示的な置換バリアントは、親和性成熟した抗体であり、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用い、簡便に作製され得る。簡潔には、１つ又は複数。ＣＤＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージにディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。

【0205】

抗体親和性を向上させるために、例えば、ＣＤＲにおいて改変（例えば、置換）を行ってもよい。そのような改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照されたい）、及び／又は抗原と接触する残基内で行われ得、結果として得られるバリアントＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリの構築及びそこからの再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの態様では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択される可変遺伝子に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリが作製される。次いで、このライブラリをスクリーニングして、所望の親和性を有する抗体バリアントを同定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４～６残基）がランダム化されるＣＤＲ指向手法を含む。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニン・スキャニング突然変異誘発又はモデル化を用いて、特異的に同定され得る。特に、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３が、標的にされることが多い。

【0206】

特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗体の抗原に結合する能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＣＤＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的な変更（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）は、ＣＤＲにおいて行われてもよい。そのような改変は、例えば、ＣＤＲ中の抗原接触残基の外側であってもよい。上述の特定のバリアントＶＨ及びＶＬ配列において、各ＣＤＲは、改変されていないか、又は１つ、２つ、又は３つ以下のアミノ酸置換を有するかのいずれかである。

【0207】

変異導入の標的となり得る抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載されているように「アラニン・スキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）の残基又はグループを同定し、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）で置換して、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入されてもよい。代替的に、又は追加的に、抗原－抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点が特定され得る。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされるか、又は除去されてもよい。バリアントは、所望の特性を有するか否かを判定するためにスクリーニングされてもよい。

【0208】

アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに１個以上のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ（抗体指向性酵素プロドラッグ治療法のための）又はポリペプチドへの抗体のＮ末端若しくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増大させる。

【0209】

ｂ）グリコシル化バリアント
特定の態様では、本明細書において提供する抗体を変えて、抗体のグリコシル化の程度を増減させる。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、又は除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。

【0210】

抗体がＦｃ領域を含む場合、抗体に付着しているオリゴ糖を変更してもよい。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに二分岐型オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの態様では、本発明の抗体中のオリゴ糖の修飾が、特定の改良された特性を有する抗体バリアントを生成するために行われてもよい。

【0211】

いくつかの態様では、非フコシル化オリゴ糖、即ち、Ｆｃ領域へのフコース結合（直接又は間接）が欠落した、オリゴ糖構造を有する抗体バリアントを提供する。このような非フコシル化オリゴ糖（「アフコシル化」オリゴ糖とも呼ばれる）は特に、二分岐オリゴ糖構造の幹に第１のＧｌｃＮＡｃが結合したフコース残基を欠く、Ｎ結合オリゴ糖である。いくつかの態様では、天然又は親抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の比率が増加した抗体バリアントを提供する。例えば、非フコシル化オリゴ糖の割合は、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、又は場合によっては約１００％（すなわち、フコシル化オリゴ糖が存在しない）であってもよい。非フコシル化オリゴ糖の割合は、例えば、国際公開第２００６／０８２５１５号に記載のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法により測定した、Ａｓｎ２９７に結合した全てのオリゴ糖の合計（例えば、複合体、ハイブリッド、及びハイマンノース構造）に対する、フコース残基を欠くオリゴ糖の（平均）量である。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）；しかしながら、Ａｓｎ２９７は、抗体のマイナーな配列変化のために、位置２９７の上流又は下流、すなわち位置２９４と３００の間の約±３個のアミノ酸に位置していてもよい。Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合が増加したこのような抗体は、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ受容体結合、及び／又は改善されたエフェクター機能、特に改善されたＡＤＣＣ機能を有することができる。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；同第２００４／００９３６２１号を参照のこと。

【0212】

フコシル化が低下した抗体を産生可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が不足しているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；及び国際公開第２００４／０５６３１２号、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子のＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４－６２２（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照されたい）、又はＧＤＰ－フコース合成若しくはトランスポータータンパク質の活性が低下若しくは消滅した細胞（例えば、米国特許出願公開第２００４２５９１５０号、同第２００５０３１６１３号、同第２００４１３２１４０号、同第２００４１１０２８２号を参照されたい）が挙げられる。

【0213】

さらなる態様では、抗体バリアントは、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されている二分されたオリゴ糖と共に提供される。このような抗体バリアントは、上述のとおり、低下したフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有しうる。このような抗体バリアントの例は、例えばＵｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７，１７６－１８０（１９９９）；Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｅｎｇ ９３，８５１－８６１（２００６）；国際公開第９９／５４３４２号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００３／０１１８７８号に記載されている。

【0214】

Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体バリアントも提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号；同第１９９８／５８９６４号；及び同第１９９９／２２７６４号に記載されている。

【0215】

ｃ）Ｆｃ領域バリアント
特定の態様では、１つ以上のアミノ酸改変は、本明細書で提示される抗体のＦｃ領域に導入されてもよく、それにより、Ｆｃ領域バリアントを作製する。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、又はＩｇＧ_４Ｆｃ領域）を含み得る。

【0216】

特定の態様では、本発明は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を有することで、抗体のインビボ半減期が重要でありながら、特定のエフェクター機能（例えば補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ））が不必要、又は有害である用途に対して望ましい候補となる、抗体バリアントを想到する。ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／消失を確認するために、インビトロ及び／又はインビボの細胞毒性アッセイを実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（そのため、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現については、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９－１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照）に記載されている。代替としては、非放射性アッセイ法を採用してもよい（例えば、ＡＣＴＩ（商標）フローサイトメトリー用非放射性細胞毒性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）、及び ＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性試験法（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照されたい）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ：ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ）及びナチュラルキラー（Ｎａｔｕｒａｌ Ｋｉｌｌｅｒ：ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、又は加えて、目的のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて、インビトロで評価され得る。また、抗体がＣ１ｑに結合することができず、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び同第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照）、ＦｃＲｎ結合及びインビトロクリアランス／半減期の決定は、当該技術分野に既知の方法を使用して実施することもできる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）；ＷＯ２０１３／１２０９２９Ａｌを参照されたい）。

【0217】

エフェクター機能が低下した抗体としては、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ以上の置換を有する抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ突然変異体としては、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうち２つ以上での置換を有するＦｃ突然変異体が挙げられ、残基２６５及び２９７がアラニンに置換されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。

【0218】

ＦｃＲへの結合が改善又は減少した特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号，及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい。）

【0219】

特定の態様では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／又は３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃ領域を含む。

【0220】

特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃγＲ結合を減少さあせる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２３４及び２３５（ＥＵナンバリングの残基）を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、置換はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）である。特定の態様では、抗体バリアントは、ヒトＩｇＧ_１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域に、Ｄ２６５Ａ及び／又はＰ３２９Ｇをさらに含む。いくつかの態様では、置換は、ヒトＩｇＧ_１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ－ＰＧ）である。（例えば、国際公開第２０１２／１３０８３１号を参照されたい。）いくつかの態様において、置換は、ヒトＩｇＧ_１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａ（ＬＡＬＡ－ＤＡ）である。

【0221】

いくつかの態様では、例えば米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されているように、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変化（すなわち向上又は低下のいずれか）をもたらすＦｃ領域内で変化が起こる。

【0222】

半減期が増大し、胎生Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が向上した、母体ＩｇＧを胎児に移行する役割を果たす抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改善する１つ以上の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃバリアントには、Ｆｃ領域残基：２３８、２５２、２５４、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４のうちの１つ又は複数に置換、例えばＦｃ領域残基４３４の置換を有するものが含まれる（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（２００６）２３５１４－２３５２４を参照のこと）。

【0223】

マウスＦｃマウスＦｃＲｎ相互作用に決定的なＦｃ領域残基は、部位特異的突然変異誘発により識別されている（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９（２００２）５１７１－５１８０を参照のこと）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、Ｈ４３３、Ｎ４３４、及びＨ４３５（ＥＵインデックスナンバリング）が、相互作用に関与する（Ｍｅｄｅｓａｎ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１９９６）２５３３；Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３；Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（１９９４）５４２）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、及びＨ４３５が、ヒトＦｃとマウスＦｃＲｎの相互作用に決定的であることが発見された（Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１９９９）２８１９）。ヒトＦｃ－ヒトＦｃＲｎ複合体の研究により、残基Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｈ４３５、及びＹ４３６が相互作用に決定的であることが示されている（Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４）。Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２（２００９）７６６７－７６７１）において、残基２４８～２５９、及び３０１～３１７、及び３７６～３８２、及び４２４～４３７の様々な変異が報告され、調査されている。

【0224】

特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃの領域位置２５３、及び／又は３１０、及び／又は４３５（ＥＵナンバリングの残基）における変異を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、位置２５３、３１０、及び４３５におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａである。例えば、Ｇｒｅｖｙｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４（２０１５）５４９７－５５０８を参照のこと。

【0225】

特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置３１０、及び／又は４３３、及び／又は４３６（ＥＵナンバリングの残基）における変異を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、位置３１０、４３３、及び４３６におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ、及びＹ４３６Ａである。（例えば、国際公開第２０１４／１７７４６０号を参照されたい。）

【0226】

特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を増加させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃの領域位置２５２、及び／又は２５４、及び／又は２５６（ＥＵナンバリングの残基）における変異を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、位置２５２、２５４、及び２５６におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、置換は、ヒトＩｇＧ_１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域におけるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅである。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及び国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。

【0227】

本明細書に報告されるような抗体の重鎖のＣ末端は、アミノ酸残基ＰＧＫで終わる完全なＣ末端であってもよい。重鎖のＣ末端は、Ｃ末端アミノ酸残基のうち１つ又は２つが除去された、短くなったＣ末端であってもよい。１つの好ましい態様では、重鎖のＣ末端は短縮Ｃ末端末端ＰＧである。本明細書に報告される全ての態様のうちのいくつかの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン－リシンジペプチドを含む（Ｇ４４６及びＫ４４７、ＥＵインデックス・ナンバリングのアミノ酸位置）。本明細書に報告される全ての態様のうちのいくつかの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン残基を含む（Ｇ４４６、ＥＵインデックス・ナンバリングのアミノ酸位置）。

【0228】

ｄ）システイン操作抗体バリアント
特定の態様では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を生成することが望ましい場合がある。特定の態様では、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書に更に記載されるように、抗体を薬物部位又はリンカー薬物部位等のような他の部位に複合して免疫コンジュゲートを作成するために使用することができる。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号、同第８，３０，９３０号、同第７，８５５，２７５号、同第９，０００，１３０号、又は国際公開第２０１６０４０８５６号に記載のように生成することができる。

【0229】

８．免疫コンジュゲート
本発明はまた、細胞傷害性薬剤、化学療法剤若しくは化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌真菌、植物、若しくは動物起源の酵素活性毒素、又はそれらの断片）、又は放射性同位体などの１つ又は複数の治療剤と複合された本明細書における抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を含む、免疫コンジュゲートを提供する。

【0230】

いくつかの態様では、免疫コンジュゲートは、抗体が、前述の治療剤の１種又は複数にコンジュゲートされている、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。抗体は典型的には、リンカーを使用して、治療剤の１種又は複数に接続される。治療剤及び治療薬及びリンカーの例を含む、ＡＤＣ技術の概説は、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖｉｅｗ ６８：３－１９（２０１６）に記載されている。

【0231】

いくつかの態様では、免疫コンジュゲートは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（シュードモナス・アエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、アレウリテス・フォーディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンシンタンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、モモルディカ・チャランチア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サポナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むがこれらに限定されない、酵素活性毒素又はその断片にコンジュゲートされた本明細書に記載の抗体を含む。

【0232】

いくつかの態様では、免疫コンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされ、放射性コンジュゲートを形成する、本明細書に記載の抗体を含む。放射性コンジュゲートの生産には、様々な放射性同位体が利用可能である。例としては、Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２、Ｐ^３２、Ｐｂ^２１２、及びＬｕの放射性同位元素が挙げられる。検出のために用いられる場合、放射性コンジュゲートは、シンチグラフ検査用の放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、あるいは核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共鳴イメージング、ｍｒｉとしても知られる）のためのスピン標識（ここでもヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄等）を含みうる。

【0233】

抗体と細胞傷害剤とのコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えばジメチルアジピミダートＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えばビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えばビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン２，６－ジイソシアネート）、及び二活性フッ素化合物（例えば１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）を使用して作製することができる。例えば、リシンイムノトキシンは、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているようにして調製することができる。炭素－１４－標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのための例示的キレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。リンカーは、細胞内において細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」第５２巻第１２７～１３１頁（１９９２年）；米国特許第５，２０８，０２０号）を使用することができる。

【0234】

本明細書における免疫コンジュゲート又はＡＤＣは、限定されないが、市販（例：米国イリノイ州ロックフォードのＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から）されている、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ及びスルホ－ＳＭＰＢ、並びにＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むがこれらに限定されない架橋試薬を用いて調製されたコンジュゲートを明確に意図している。

【0235】

Ｂ．組換え方法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように、組換え方法及び組成物を使用して産生することができる。これらの方法のために、抗体をコードする１つ又は複数の単離された核酸が提供される。

【0236】

２つの核酸が必要とされる天然抗体又は天然抗体断片の場合、１つは軽鎖又はその断片のためのものであり、１つは重鎖又はその断片のためのものである。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又はＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖（複数可））をコードする。これらの核酸は、同じ発現ベクター上、又は異なる発現ベクター上にあってもよい。

【0237】

４つの核酸が必要とされるヘテロ二量体の重鎖を有する二重特異性抗体の場合、１つは第１の軽鎖のため、１つは第１のヘテロモノマーＦｃ領域ポリペプチドを含む第１の重鎖のため、１つは第２の軽鎖のため、及び１つは第２のヘテロモノマーＦｃ領域ポリペプチドを含む第２の重鎖のためのものである。４つの核酸は、１つ以上の核酸分子又は発現ベクターに含まれ得る。このような核酸は、第１のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は第１のヘテロモノマーＦｃ領域を含む第１のＶＨを含むアミノ酸配列及び／又は第２のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体の第２のヘテロモノマーＦｃ領域を含む第２のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の第１及び／若しくは第２の軽鎖並びに／又は第１及び／若しくは第２の重鎖）をコードする。これらの核酸は、同じ発現ベクター又は異なる発現ベクター上にあってもよく、通常、これらの核酸は、２つ又は３つの発現ベクター上に位置しており、すなわち、１つのベクターは、これらの核酸のうち、２つ以上を含んでいてもよい。これらの二重特異性抗体の例は、クロス（Ｃｒｏｓｓ）Ｍａｂである（例えば、Ｓｃｈａｅｆｅｒ，Ｗ．ら、ＰＮＡＳ、１０８（２０１１）１１１８７～１１９１を参照されたい）。例えば、ヘテロモノマー重鎖の１つは、いわゆる「ノブ突然変異」（Ｔ３６６Ｗと、任意に、Ｓ３５４Ｃ又はＹ３４９Ｃのうち１つ）を含み、他方は、いわゆる「ホール突然変異」（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖと、任意に、Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃ）を含む（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．２（１９９６）７３を参照）（ＥＵナンバリングによる））。

【0238】

いくつかの態様では、本明細書で報告される方法で使用される抗体をコードする単離された核酸が提供される。

【0239】

いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を作製する方法であって、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養物）から回収することとを含む、方法が提供される。

【0240】

抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の組換え産生に関しては、例えば、上述の抗体をコードする核酸が単離され、さらなるクローニング及び／又は宿主細胞内での発現のために、１つ以上のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離することができ、一般的な手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。

【0241】

抗体コード化ベクターのクローニング又は発現のための好適な宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に糖鎖修飾やＦｃエフェクター機能を必要としない場合には、細菌中で産生されてもよい。細菌中の抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、米国特許第５，７８９，１９９号、及び米国特許第５，８４０，５２３号を参照されたい。（大腸菌における抗体断片の発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｋ．Ａ．，Ｉｎ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照。）発現後、抗体は、適切なフラクション中の細菌細胞ペーストから単離されてもよく、更に精製されてもよい。

【0242】

原核生物に加えて、糸状菌や酵母等の真核生物は、抗体をコードするベクターのクローニング又は発現宿主として適しており、その中には、グリコシル化経路が「ヒト化」された菌株や酵母株が含まれ、その結果、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｔ．Ｕ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（２００４）１４０９－１４１４；及びＬｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４（２００６）２１０－２１５を参照。

【0243】

また、（グリコシル化）抗体を発現させるのに適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。多くのバキュロウイルス株が同定されており、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、これを昆虫細胞と組み合わせて使用してもよい。

【0244】

植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、米国特許第６，０４０，４９８号、米国特許第６，４２０，５４８号、米国特許第７，１２５，９７８号及び米国特許第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）を参照。

【0245】

脊椎動物細胞も、宿主として使用され得る。例えば、懸濁物中で成長するように適合した哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（例えばＧｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６（１９７７）５９－７４に記載されるような２９３細胞又は２９３Ｔ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３（１９８０）２４３－２５２に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト頸部癌腫細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３（１９８２）４４－６８に記載）、ＭＲＣ５細胞及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７（１９８０）４２１６－４２２０）、及び、骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ，Ｐ．及びＷｕ，Ａ．Ｍ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２４８巻、Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（編．）、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ（２００４）、２５５－２６８頁を参照されたい。

【0246】

いくつかの態様では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。

【0247】

Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、それらの物理的／化学的特性及び／又は生物学的活性について、当該技術分野において既知である様々なアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、又は特性評価されてもよい。

【0248】

１．結合アッセイ及び他のアッセイ
いくつかの態様では、本発明の抗体を、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット等の公知の方法によって、その抗原結合活性について試験する。

【0249】

いくつかの態様では、競合アッセイは、Ｎｏｔｃｈ２に対する結合について、本明細書で提供される抗体ｒａｔ．１Ｂ２若しくはそのヒト化バージョン、ｒａｔ．３１０７、ｒｂ．２３３８、ｒｂ．２４３０、及び／又はｒｂ．２６２１のうちの１つ又は複数と競合する抗体を同定するために使用され得る。特定の態様では、そのような競合抗体は、ｒａｔ．１Ｂ２若しくはそのヒト化バージョン、ｒａｔ．３１０７、ｒｂ．２３３８、ｒｂ．２４３０、及び／又はｒｂ．２６２１によって結合される同じエピトープ（例えば、線状又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示の方法が、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。

【0250】

例示的な競合アッセイでは、固定化されたＮｏｔｃｈ２が、Ｎｏｔｃｈ２に結合する第１の標識抗体（例えば、ｒａｔ．１Ｂ２若しくはそのヒト化バージョン、ｒａｔ．３１０７、ｒｂ．２３３８、ｒｂ．２４３０、又はｒｂ．２６２１）と、Ｎｏｔｃｈ２への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体とを含む溶液中で、インキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在していてもよい。対照として、固定化されたＮｏｔｃｈ２は、第１の標識抗体を含む溶液中でインキュベートされるが、第２の非標識抗体を含む溶液中ではインキュベートされない。第１の抗体のＮｏｔｃｈ２への結合を許容する条件下でインキュベーションした後、過剰の未結合抗体を除去し、固定化されたＮｏｔｃｈ２に関連する標識の量を測定する。固定化されたＮｏｔｃｈ２に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に減少している場合、それは、第２の抗体がＮｏｔｃｈ２への結合について第１の抗体と競合していることを示している。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。

【0251】

例示的なエピトープビニングアッセイでは、表面プラズモン共鳴を使用して抗体間の競合を決定する。例えば、第１の抗体（例えば、ｒａｔ．１Ｂ２若しくはそのヒト化バージョン、ｒａｔ．３１０７、ｒｂ．２３３８、ｒｂ．２４３０、又はｒｂ．２６２１）を、アミノカップリングを使用してＳＰＲセンサープリズムＣＭＤ ２００Ｍチップに固定化する。分析物を４分間、例えば５０ｎＭで注射し、次いで第２の抗体を４分間、例えば１０μｇ／ｍｌで注射する。アッセイは、ＨＢＳ－Ｔ緩衝液（０．０１ＭでｐＨ７．４のＨＥＰＥＳ、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．０５％の界面活性剤Ｐ２０、５ｍＭ ＣａＣｌ_２）のランニング緩衝液中で２５℃で行われ得る。ビニングデータは、ＷａｓａｔｃｈビニングソフトウェアツールＥｐｉｔｏｐｅ（Ｃａｒｔｅｒｒａ ＵＳＡ）を使用して処理することができる。

【0252】

２．活性アッセイ
いくつかの態様では、特定の生物学的活性を有する抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を同定するためのアッセイが提供される。例えば、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害するが、ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達を実質的にインタクトのままにする抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を同定するためのアッセイが提供される。インビトロ及び／又はインビボで分泌細胞の数を減少させる抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を同定するためのアッセイも提供される。

【0253】

Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害するが、ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達を実質的にインタクトのままにする抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を同定するための非限定的な例示的アッセイを実施例５に記載する。一般に、いくつかの実施形態では、試験抗体が、ヒトＮｏｔｃｈ２を発現するヒト細胞（例えば、細胞株Ｕ８７－ＭＧなど）の培養物に加えられる。次いで、培養物を、Ｊａｇｇｅｄ１又はＤＬＬ１を発現する細胞と接触させる。リガンド依存性Ｎｏｔｃｈ２活性化は、Ｎｏｔｃｈ２発現細胞におけるＮｏｔｃｈ２－ＩＣＤ転座をもたらす。インキュベーション後、共培養した細胞を固定し、透過処理し、次いで、抗Ｎｏｔｃｈ２ ＩＣＤ抗体と接触させる。未結合の抗Ｎｏｔｃｈ２ ＩＣＤ抗体を除去した後、結合した抗体を、例えば、標識抗Ｉｇ抗体を用いて検出する。抗Ｎｏｔｃｈ２試験抗体がＪａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害するが、ＤＬＬ１媒介性シグナル伝達を阻害しない場合、ＤＬＬ１を発現する細胞との共培養は、Ｊａｇｇｅｄ１を発現する細胞との共培養がそうでないよりも実質的に大きなシグナルを生じる。

【0254】

いくつかの実施形態では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体は、分泌細胞の数を減少させるかどうかを明らかにするためにアッセイされる。この活性を有する抗体を選択するための非限定的な例示的アッセイを実施例８に記載する。一般に、いくつかの実施形態では、初代ヒト気管支上皮細胞（ＨＢＥＣ）の気液界面（ＡＬＩ）培養物を確立し、例えば線毛が視覚的に拍動しているときに示されるように、それらが完全に分化するまで数週間培養する。試験抗Ｎｏｔｃｈ２抗体をＡＬＩ培養物の下側チャンバー中の培地に添加する。約７日後、ＡＬＩ培養物を分析する。ＲＮＡを培養物の試料から抽出し、分泌細胞を示す遺伝子、例えばＭｕｃ５ｂ、Ｍｕｃ５ａｃ及びＳｃｇｂ１ａ１の発現についてアッセイする。培養物を固定し、パラフィンに包埋することによって、培養物を組織学によって分析することもできる。切片を、分泌細胞（Ｍｕｃ５ｂなど）及び線毛細胞（チューブリンなど）のマーカーに対する抗体で染色する。試験抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を用いて及び用いずにインキュベートした培養物を比較して、分泌細胞、例えば杯細胞の数を減少させる抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を同定する。

【0255】

Ｄ．診断及び検出のための方法及び組成物
特定の態様では、本明細書で提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体のいずれも、生物学的試料中のＮｏｔｃｈ２の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される場合、「検出」という用語は、定量的又は定性的な検出を包含する。特定の態様では、生物学的試料は、痰、分泌細胞、気道上皮細胞、免疫細胞、肺細胞若しくは組織、又は気管支細胞若しくは組織などの生物学的流体、細胞、又は組織を含む。

【0256】

いくつかの態様では、診断又は検出方法に使用するための抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供される。さらなる態様では、生物学的試料中のＮｏｔｃｈ２の存在を検出する方法が提供される。特定の態様では、本方法は、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体とＮｏｔｃｈ２との結合を許容する条件下で、生物学的試料を本明細書に記載の抗Ｎｏｔｃｈ２抗体と接触させ、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体とＮｏｔｃｈ２との間に複合体が形成されているかどうかを検出することを含む。このような方法は、インビトロ法又はインビボ法であってもよい。いくつかの態様では、例えば、Ｎｏｔｃｈ２が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を使用して、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体での療法に適格な対象を選択する。

【0257】

特定の態様では、標識された抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供される。標識としては、限定されないが、直接的に検出される標識又は部分（例えば、蛍光、色素体、電子密度の高い、化学発光及び放射性標識）、及び例えば酵素反応又は分子相互作用によって、間接的に検出される部分（例えば、酵素又はリガンド）が挙げられる。例示的な標識としては、限定されないが、放射性同位体^３２Ｐ、^１４Ｃ、^１２５Ｉ、^３Ｈ及び^１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリ性ホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ及びグルコース－６－ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ヘテロ環オキシダーゼ、例えば、ウリカーゼ及び過酸化水素を使用する酵素と連結し、染料前駆体を酸化するキサンチンオキシダーゼ、例えば、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はミクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定な遊離ラジカル等が挙げられる。

【0258】

Ｅ．医薬組成物
さらなる態様において、例えば、以下の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗体のいずれかを含む、医薬組成物が提供される。いくつかの態様では、医薬組成物は、本明細書に提供される抗体のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とを含む。いくつかの態様では、医薬組成物は、本明細書で提供される抗体のいずれかと、少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、以下に記載するものとを含む。

【0259】

本明細書に記載される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の医薬組成物は、所望の程度の純度を有するかかる抗体と、１つ以上の任意の薬学的に許容され得る担体（「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０年））とを混合することによって、凍結乾燥組成物又は水溶液の形態で調製される。薬学的に許容され得る担体は、一般的に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、ヒスチジン、ホスファート、シトラート、アセタート及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容され得る担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｈａｌｏｚｙｍｅ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の介在性薬物分散剤を更に含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載される。いくつかの態様では、ｓＨＡＳＥＧＰを、１つ以上の更なるグリコサミノグリカナーゼ（例えば、コンドロイチナーゼ）と組み合わせる。

【0260】

例示の凍結乾燥抗体組成物は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体組成物としては、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載のものが挙げられ、後者の組成物は、ヒスチジン－酢酸緩衝液を含む。

【0261】

本明細書の医薬組成物はまた、治療されている特定の徴候に必要とされる複数の有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するものも含みうる。例えば、粘液の粘弾性を低下させることができる薬剤をさらに提供することが望ましい場合がある。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、高張性生理食塩水、マンニトール、プルモザイム、Ｎ－アセチルシステイン、システアミン、及び気管支拡張薬から選択される。そのような有効成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。

【0262】

有効成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル中に封入されてもよく（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミン微小球、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションに封入されてもよい。そのような技術が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。

【0263】

徐放性の医薬組成物を調製することができる。徐放性調製物の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、これらのマトリクスは、成形物品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態である。

【0264】

インビボ投与に使用される医薬組成物は、一般に無菌である。滅菌は、例えば滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成され得る。

【0265】

Ｆ．治療方法及び投与経路
本明細書に提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体のいずれも、治療方法において使用することができる。

【0266】

いくつかの態様では、医薬としての使用のための抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供される。さらなる態様では、粘膜閉塞性肺疾患の治療に使用するための抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供される。特定の態様では、治療方法に使用するための抗Ｎｏｔｃｈ２抗体が提供される。特定の態様では、本発明は、有効量の抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を個体に投与することを含む、粘膜閉塞性肺疾患を有する個体を治療する方法に使用するための抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を提供する。そのような一態様では、本方法は、例えば以下に記載されるように、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの追加の治療剤）を個体に投与することをさらに含む。さらなる態様では、本発明は、個体における、例えば個体の肺における、分泌細胞、例えば杯細胞の数を減少させるのに使用するための抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を提供する。特定の態様では、本発明は、個体における、例えば個体の肺における、分泌細胞、例えば杯細胞の数を減少させるための有効量の抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を個体に投与することを含む、個体における、例えば個体の肺における、分泌細胞、例えば杯細胞の数を減少させる方法において使用するための抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を提供する。肺における分泌細胞、例えば杯細胞の数を減少させることによって、肺における粘液の産生が減少し、及び／又はクリアランス若しくは粘液が増加し、それによって、例えば、粘膜閉塞性肺疾患の１つ又は複数の症候が緩和される。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体による治療は、粘膜閉塞性肺疾患を有する対象における、ＦＥＶ１（１秒間の強制呼気量）を改善し、息切れを軽減し、及び／又は咳を軽減する。

【0267】

さらなる態様では、本発明は、医薬の製造又は調製における抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の使用を提供する。いくつかの態様では、医薬は粘膜閉塞性肺疾患の治療のためのものである。さらなる態様では、医薬は、粘膜閉塞性肺疾患を有する個体に対し、有効量の医薬を投与することを含む、粘膜閉塞性肺疾患を治療する方法における使用のためのものである。そのような一つの態様では、該方法は、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、以下に記載されるものを個体に投与することを更に含む。さらなる態様では、医薬は、個体における、例えば個体の肺における、分泌細胞、例えば杯細胞の数を減少させるためのものである。さらなる態様では、医薬は、個体における、例えば個体の肺における、分泌細胞、例えば杯細胞の数を減少させるための有効量の医薬を個体に投与することを含む、個体における、例えば個体の肺における、分泌細胞、例えば杯細胞の数を減少させる方法において使用するためのものである。

【0268】

さらなる態様では、本発明は、粘膜閉塞性肺疾患を治療するための方法を提供する。いくつかの態様では、本方法は、そのような粘膜閉塞性肺疾患を有する個体に有効量の抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を投与することを含む。そのような一つの態様では、該方法は、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤、以下に記載されるものを個体に投与することを更に含む。

【0269】

さらなる態様では、本発明は、個体における、例えば個体の肺における、分泌細胞、例えば杯細胞の数を減少させるため方法を提供する。いくつかの態様では、本方法は、個体における、例えば個体の肺における、分泌細胞、例えば杯細胞の数を減少させるために有効量の抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を個体に投与することを含む。いくつかの態様では、「個体」はヒトである。

【0270】

本明細書で提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体によって治療され得る非限定的な例示的な粘膜閉塞性肺疾患としては、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、原発性毛様体ジスキネジア、非嚢胞性線維症、気管支拡張症及び細気管支炎が挙げられる。

【0271】

上記の態様のいずれかによる「個体」又は「対象」は、ヒトであってもよい。

【0272】

さらなる態様では、本発明は、例えば上記の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体のうちのいずれかを含む医薬組成物を提供する。いくつかの態様では、医薬組成物は、本明細書に提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とを含む。いくつかの態様では、医薬組成物は、本明細書で提供される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体のいずれかと、少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、以下に記載するものとを含む。

【0273】

本発明の抗体は、単独で投与され得るか、又は併用療法において使用され得る。例えば、該併用療法には、本発明の抗体を投与することと、少なくとも１の追加の治療剤（例えば、１、２、３、４、５、又は６の追加の治療剤）を投与することとが含まれる。特定の態様では、併用療法は、本発明の抗体を投与すること、及び粘液粘弾性を低下させる薬剤などの少なくとも１つの追加の治療剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、高張性生理食塩水、マンニトール、プルモザイム、Ｎ－アセチルシステイン、システアミン、及び気管支拡張薬から選択される。

【0274】

上述したそのような併用療法は、併用投与（ここでは、２つ以上の治療剤が同一又は別個の医薬組成物中に含まれる）及び別個の投与を包含し、この場合、本発明の抗体の投与は、追加の治療剤又は薬剤の投与に先立って、同時に、及び／又はそれに続いて、行われ得る。いくつかの態様では、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、互いの約１ヶ月以内、又は約１週間、２週間若しくは３週間以内、又は約１、２、３、４、５、若しくは６日以内に生じる。いくつかの態様では、抗体及び追加の治療剤は、治療の１日目に患者に投与される。

【0275】

本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、並びに局所治療のために望まれる場合、病変内投与を含む、任意の適切な手段によって投与することができる。非経口輸液には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、又は皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短期又は長期であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば、静脈内又は皮下注射等の注射、又は肺内（例えば吸入）若しくは鼻腔内送達によるものであり得る。単回又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス輸注を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書では企図される。

【0276】

本発明の抗体は、良好な医療行為と一致した方法で製剤化され、投与され、投与されるであろう。これに関連して考慮すべき要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的症状、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の要因が挙げられる。抗体は、必ずしもそうである必要はないが、任意に、問題の障害を予防又は治療するために現在使用されている１つ以上の薬剤とともに製剤化される。このような他の薬剤の有効量は、医薬組成物中に存在する抗体の量、疾患又は治療の種類、及び上述した他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載のものと同じ投薬量及び投与経路によって、又は本明細書に記載の投薬量の約１～９９％、又は適切であると経験的／臨床的に判断される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。

【0277】

疾患の予防又は治療について、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、又は１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的又は治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴及び抗体への応答、並びに主治医の裁量に依存するだろう。抗体は、適切には、患者に一度に又は一連の治療にわたって投与される。かかる用量は、断続的に、例えば毎週又は３週間毎（例えば、患者が約２～約２０回、又は例えば約６回の用量の抗体を受容するように）投与されてもよい。最初の多めの投与量、それに続く１回以上の量の少ない用量を投与してよい。しかしながら、他の投薬レジメンが有用であってもよい。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。

【0278】

Ｇ．製造物品
本発明のいくつかの態様では、上述した障害の治療、予防及び／又は診断に有用な物質を含有する製造物品が提供される。製造物品は、容器と、容器に挿入されるか、又は容器に付随するラベル又はパッケージ添付文書とを備えている。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、症状を治療、予防、及び／又は診断するのに有効な別の組成物と単独で又は組み合わせて使用される組成物を保持し、無菌アクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択される症状を治療するために使用されることを示す。更に、製造物品は、（ａ）組成物を含む第１の容器を含み、この組成物は本発明の抗体を含み、（ｂ）組成物を含む第２の容器を含み、この組成物は細胞疾患性又は他の治療剤をさらに含む。本発明のこの態様における製造物品は、組成物が特定の症状を治療するために使用され得ることを示すパッケージ添付文書をさらに含んでいてもよい。これに代えて、又はこれに加えて、製造物品は、薬学的に許容され得る緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液及びデキストロース溶液を含む第２の（又は第３の）容器を更に備えていてもよい。他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、注射器等、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。

【実施例】

【0279】

ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。先に提供した一般的な説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施されてもよいことが理解される。

【0280】

実施例１：ウサギ及びラット抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の作製
ニュージーランドホワイトウサギを、Ｎｏｔｃｈ２のＥＧＦリピート６～１０を含むヒト及びマウスの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）構築物（ｈｕＮｏｔｃｈ２－ＥＧＦ６－１０及びｍｕＮｏｔｃｈ２－ＥＧＦ６－１０）で共免疫化し、Ｏｆｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ９（２），２０１４に基づく修正プロトコルを使用して単一Ｂ細胞を単離した。修正されたワークフローは、ＩｇＧ＋ｈｕＮｏｔｃｈ２＋Ｂ細胞の単一ウェルへの直接ＦＡＣＳソーティングを含んだ。Ｂ細胞培養上清を、ヒトＮｏｔｃｈ２及び無関係な対照タンパク質との結合についてＥＬＩＳＡでアッセイを行った。Ｎｏｔｃｈ２特異的Ｂ細胞を溶解し、直ちに－８０℃で凍結し、分子クローニングまで保存した。ウサギＢ細胞由来の各モノクローナル抗体の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）を、先に記載したように（Ｏｆｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ９（２），２０１４）抽出されたｍＲＮＡから、Ｎ２９７Ｇ突然変異を有するヒト定常領域を有する発現ベクターにクローニングした。個々の組換えキメラウサギ／ヒト抗体をＥｘｐｉ２９３細胞で発現させた後、プロテインＡで精製した。精製した抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を、本明細書に記載のように、機能活性アッセイと速度論的スクリーニングに供した。

【0281】

ラットを、ＭＢＰ－ｈｕＮｏｔｃｈ２ ＥＧＦ６－１０＋ＭＢＰ－ｈｕＮｏｔｃｈ２ ＥＧＦ７－９の組み合わせで免疫化するか、又はＭＢＰ－ｈｕＮｏｔｃｈ２ ＥＧＦ６－１０でプライミングし、ｈｕＮｏｔｃｈ２－ＥＧＦ６－１０でブーストし、改変された融合パートナーを用いてハイブリドーマを作製した（Ｐｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２００９）。種々の条件を最適化して、個々のＩｇＧ＋ｈｕＮｏｔｃｈ２＋ハイブリドーマを単一のウェルへのソーティングを可能にし、次いで、ソーティング後にさらなる培養を行った。得られたハイブリドーマ上清をＥＬＩＳＡによりアッセイし、陽性試料をタンパク質Ａを用いて精製し、その後、機能的及び速度論的特徴付けを行った。特定のラットモノクローナル抗体を配列決定し、Ｎ２９７Ｇ突然変異を有する定常領域にクローニングした。個々の組換えキメララット／ヒト抗体をＥｘｐｉ２９３細胞で発現させ、続いてプロテインＡで精製した。次いで、精製された抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を、本明細書中に記載されるように、機能的活性アッセイ及び速度論的スクリーニングに供した。

【0282】

実施例２：アレイベースの表面プラズモン共鳴を使用した速度論的分析及びエピトープビニング
アレイベースのＳＰＲイメージングシステム（Ｃａｒｔｅｒｒａ ＵＳＡ）を使用して、実施例１で作製した５つのモノクローナル抗体のパネル（ｒａｔ．１Ｂ２、ｒａｔ．３１０７、ｒｂ．２３３８、ｒｂ．２４３０、及びｒｂ．２６２１）並びに抗Ｎｏｔｃｈ ２／３抗体ＯＭＰ－５９Ｒ５（タレクスツマブ、米国特許第８，２２６，９４３号参照）をエピトープビニングした。精製した抗体を１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）で１０μｇ／ｍｌに希釈した。アミンカップリングを用いて、ＳＰＲセンサープリズムＣＭＤ２００Ｍチップ（ＸａｎＴｅｃ Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、ドイツ）上にＣｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ（Ｃａｒｔｅｒｒａ，ＵＳＡ）を用いて抗体を直接固定化し、６つの抗体のアレイを作製した。分析には、ＩＢＩＳ ＭＸ９６ ＳＰＲｉ（Ｃａｒｔｅｒｒａ，ＵＳＡ）を使用し、固定化リガンドとの結合を評価した。速度論的解析のために、ヒトＮｏｔｃｈ２を０～３００ｎＭの３倍希釈で３分間注入し、その後、１０分間の解離期間を経た。エピトープビニングのために、ヒトＮｏｔｃｈ２を最初に５０ｎＭで４分間注入し、続いて第２に、１０μｇ／ｍｌで個々のモノクローナル抗体を４分間注入した。サイクル間に１０ｍＭグリシンｐＨ１．５で表面を再生した。実験は、ＨＢＳ－Ｔ緩衝液（０．０１ＭでｐＨ７．４のＨＥＰＥＳ、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．０５％の界面活性剤Ｐ２０、５ｍＭ ＣａＣｌ_２）のランニング緩衝液中で２５℃にて行った。ビニングデータは、ＷａｓａｔｃｈビニングソフトウェアツールＥｐｉｔｏｐｅ（Ｃａｒｔｅｒｒａ ＵＳＡ）を使用して処理した。

【0283】

結果を図４に示す。抗体ｒａｔ．１Ｂ２、ｒａｔ．３１０７、ｒｂ．２３３８、ｒｂ．２４３０、及びｒｂ．２６２１は、抗Ｎｏｔｃｈ ２／３抗体ＯＭＰ－５９Ｒ５とは異なるエピトープビンにあると決定された。

【0284】

実施例３：ラット抗Ｎｏｔｃｈ２抗体のヒト化
ラットモノクローナル抗体１Ｂ２及び３１０７を、以下に記載されるようにヒト化した。残基番号は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）による。

【0285】

１Ｂ２及び３１０７のヒト化中に構築されたバリアントを、ヒトＩｇＧの形態で評価した。抗体の各々からの超可変領域（ＶＬドメインにおける２４～３４位（Ｌ１）、５０～５６位（Ｌ２）、及び８９～９７位（Ｌ３）、並びにＶＨドメインにおける２６～３５位（Ｈ１）、５０～６５位（Ｈ２）、及び９５～１０２位（Ｈ３））を、種々の受容体フレームワークに移植した。ラット１Ｂ２については、ＶＬ ＣＤＲをＫＶ１－１２＊０１に移植し、ＶＨ ＣＤＲをＨＶ３－７３＊０１に移植した。さらに、ＣＤＲ－Ｈ２ Ａｓｎ５４－Ｐｈｅ５５－Ｓｅｒ５６のグリコシル化部位をＡｓｐ５４－Ｐｈｅ５５－Ｓｅｒ５６に変異させた。ラット３１０７については、ＶＬ ＣＤＲをＫＶ２－３０＊０２に移植し、ＶＨ ＣＤＲをＨＶ１－２＊０１に移植した。親抗体からの全てのＶＬ及びＶＨ Ｖｅｒｎｉｅｒ位置もまた、それぞれのヒト生殖細胞系フレームワークに移植した。全てのラットアミノ酸がＶｅｒｎｉｅｒ位にあるグラフトは、Ｌ１Ｈ１（ｈｕ．１Ｂ２．Ｌ１Ｈ１及びｈｕ．３１０７．Ｌ１Ｈ１）と呼ばれる

【0286】

ｈｕ．１Ｂ２．Ｌ１Ｈ１抗体の結合親和性を、そのキメラ親クローンと比較した。バージョンＬ１Ｈ１抗体のラットＶｅｒｎｉｅｒ位置をヒト残基に戻して、ｈｕＮＯＴＣＨ２への結合親和性に対する各ラットＶｅｒｎｉｅｒ位置の寄与を評価した。４つのさらなる軽鎖ＶｅｒｎｉｅｒバリアントＬ２～Ｌ５及び８つのさらなる重鎖ＶｅｒｎｉｅｒバリアントＨ２～Ｈ９を作製した。軽鎖（Ｌ７）上のＳｅｒ４３及びＴｙｒ７１並びに重鎖（Ｈ１４）上のＶａｌ２４、Ａｌａ４９、Ｓｅｒ７６、及びＬｅｕ７８は、上記バリアント抗体（データ示さず）の結合親和性評価に基づいて、鍵となるラットＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定した。結合親和性を、以下の実施例６で論じられるように決定した。キメラ１Ｂ２は５．２１Ｅ－９ ＭのＫ_Ｄで結合し、ｈｕ１Ｂ２．Ｌ７Ｈ１４は６．１３Ｅ－９ ＭのＫ_Ｄで結合した。

【0287】

ｈｕ．３１０７．Ｌ１Ｈ１抗体の結合親和性を、そのキメラ親クローンと比較した。バージョンＬ１Ｈ１抗体のラットＶｅｒｎｉｅｒ位置をヒト残基に戻して、ｈｕＮＯＴＣＨ２への結合親和性に対する各ラットＶｅｒｎｉｅｒ位置の寄与を評価した。１個のさらなる軽鎖バリアント（Ｌ２）及び１０個のさらなる重鎖バリアントＨ２～Ｈ１１を作製した。

【0288】

３１０７に基づく抗Ｎｏｔｃｈ２ヒト化抗体の親和性を増加させるために、結合親和性評価及びヒト化抗体のＨＣＳ効力に基づいて４つの重鎖配列バリアントを作製した（データは示さず）：Ｐ４５、Ｔ４８、Ａ６７、Ｖ７１、Ｓ７５及びＴ７６を有するＨＶ１－２＊０１中のＨ１２；Ｐ４５、Ｔ４８、Ａ６７、Ｖ７１、Ｔ７６を有するＨＶ１－２＊０１中のＨ１３；Ｈ１４及びＨ１５は、それぞれＨ１２及びＨ１３と同じＶｅｒｎｉｅｒ残基を有するＨＶ５－５１＊０１中にある。軽鎖については、生殖系列ＫＶ４－１＊１をＣＤＲグラフト（Ｌ７）に使用した。さらに、軽鎖上のＶ２及びＦ３６は、ＨＣＳアッセイにおいて効力を維持するラットＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定され、Ｇｅｒｍｌｉｎｅ ＫＶ４－１＊０１（Ｌ６）に移植された。ＨＣＳアッセイは、実質的に実施例５に記載のように行った。

【0289】

実施例４：ヒト化１Ｂ２抗体の親和性改善
１Ｂ２に基づく抗Ｎｏｔｃｈ２ヒト化抗体の効力を増大させるために、Ｌ７Ｈ１０を鋳型として使用して５６０個の単一の点突然変異バリアントを作製した。得られた抗体を表面プラズモン共鳴によってスクリーニングし、解離速度に従ってランク付けした。重鎖に５つの突然変異（Ａ５０Ｇ、Ｓ５１Ｑ、Ｉ５７Ｒ、Ｓ９６Ｈ及びＲ９８Ｆ）及び軽鎖に３つの突然変異（Ｓ３１Ｖ、Ｑ５５Ｈ、及びＬ９６Ｉ）があり、より遅い解離速度をもたらした。突然変異の良好な組み合わせを特定するために、突然変異の個々のセット及び組み合わせセットを用いて８０個のバリアントを生成し、表面プラズモン共鳴特性評価によって評価した。Ｓ５１Ｑは、解離速度を改善する突然変異として同定された。

【0290】

１Ｂ２の親和性をさらに改善するために、Ｓ５１Ｑ及びＮ５４Ｄ突然変異を有するＬ１Ｈ１をファージディスプレイ親和性成熟の鋳型として使用した。簡潔には、合計４つのファージライブラリを構築し、Ｍ１３バクテリオファージの表面に一価Ｆａｂとして提示した。ライブラリの第１のセットは、２つのＣＤＲ ＮＮＫウォークからなり（１つはＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３のためのものであり、１つはＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のためのものである）、３つのＣＤＲのそれぞれの１つの位置を同時にランダム化した。第２のセットは、ＣＤＲ－Ｌ３又はＣＤＲ－Ｈ３全体を変異させた２つのハードランダム化ライブラリからなっていた。

【0291】

親和性改善選択のために、ファージライブラリを、ストリンジェンシーを増加させ、競合物質として冷ヒトＮｏｔｃｈ２ ＥＧＦ６－１０を用いて、４ラウンドの溶液選別に供した。ＣＤＲ－Ｈ３ハードランダム化ライブラリについて濃縮が観察された。親配列を濃縮クローンと比較した後、いくつかのＣＤＲ－Ｈ３突然変異を同定した。抗体産生並びにさらなるＢＩＡｃｏｒｅ結合速度論的分析及びＨＣＳアッセイのために、合計５４個の組み合わせバリアントをヒトＩｇＧ１に再フォーマットした。ＨＣＳアッセイは、実質的に実施例５に記載のように行った。ｈｕ１Ｂ２．ｖ２、ｈｕ１Ｂ２．ｖ４、ｈｕ１Ｂ２．ｖ９、及びｈｕ１Ｂ２．ｖ８は、ＨＣＳアッセイにおいて親和性及び効力の両方が最も改善されたと同定された。これら４つのバリアントのＣＤＲ－Ｈ３をＶｅｒｎｉｅｒポリッシュド・ヒト化バリアントＬ７Ｈ１４に移植し、それぞれｈｕ１Ｂ２．ｖ１０１、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０２、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０３、及びｈｕ１Ｂ２．ｖ１０４を作製した。結合親和性を、以下の実施例６で論じられるように決定した。ｈｕ１Ｂ２．Ｌ７Ｈ１４は、ｈｕ．Ｎｏｔｃｈ２に対して６．１３Ｅ－９Ｍの親和性を有するが、一方、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０１、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０２、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０３、及びｈｕ１Ｂ２．ｖ０１４は、それぞれ２．８４Ｅ－０９、３．３７Ｅ－０９、３．０８Ｅ－０９、及び３．０９Ｅ－０９の親和性を有する。どのバリアントも、表面プラズモン共鳴によって、ヒトＮｏｔｃｈ１、ヒトＮｏｔｃｈ３又はヒトＮｏｔｃｈ４への結合を示さなかった。各抗Ｎｏｔｃｈ２バリアントの非特異的結合を、バキュロウイルス粒子を用いたＥＬＩＳＡ（Ｈｏｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．ＭＡｂｓ ２０１２）で測定した。Ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０２及びｈｕ１Ｂ２．ｖ１０４を、熱ストレス及びＡＡＰＨ酸化ストレス試験（Ｄｉｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ ２０１８，１０７（２），５５０を参照）を用いて分子評価傾向（ｌｉａｂｉｌｉｔｉｅｓ）についてアッセイした。傾向は特定されなかった。

【0292】

実施例５：Ｊａｇｇｅｄ１シグナル伝達を遮断するがＤＬＬ１シグナル伝達を遮断しない抗体を同定するためのハイコンテントスクリーニング（ＨＣＳ）アッセイ
高レベルのｈｕＮｏｔｃｈ２（Ｎ２）を内因的に発現するヒト細胞株Ｕ８７－ＭＧを回収し、４，０００細胞／ウェルをＣｅｌｌ Ｃａｒｒｉｅｒ ｕｌｔｒａ ３８４ウェルプレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）に播種した。プレートを３７℃のＣＯ_２インキュベーターで２～５時間培養し、このインキュベーション時間の間に、抗体（Ａｂ）試験試料を、初期希釈を用いて手動で調製し、その後、Ｂｒａｖｏ自動化液体ハンドラー（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）によって３倍又は３．５倍連続希釈の１０ポイントのセットを行った。希釈したＡｂ試料を、Ｕ－８７－ＭＧ細胞を含むプレートの二重セットに移した。希釈したＡｂを添加した後、３Ｔ３－Ｊａｇ１又はＯＰ９－ＤＬＬ１細胞を回収し、各リガンド細胞株を、Ａｂで処理したＵ－８７－ＭＧ細胞の上部にウェルあたり４，０００細胞で播種し、インキュベートして、Ｕ－８７－ＭＧ細胞においてリガンド依存性Ｎｏｔｃｈ－２活性化及びＮ２－ＩＣＤ転座を生じさせた。

【0293】

１６～２２時間のインキュベーション後、受容体及びリガンド発現細胞の各共培養物を４％パラホルムアルデヒドで１０分間固定し、プレートをＰＢＳで洗浄し、次いで、細胞をＰＢＳ＋０．０５％ ＢＳＡ緩衝液中０．０５％サポニン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓａｎ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）によって１時間透過処理した。透過処理後、プレートを洗浄し、ウサギ抗Ｎ２－ＩＣＤ ｍＡｂ Ｄ７６Ａ６（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を０．０５％サポニン含有ＰＢＳ／ＢＳＡ緩衝液で希釈し、プレートに添加し、４℃で一晩インキュベートした。

【0294】

翌日、プレートを洗浄し、検出ＡＦ－６４７コンジュゲート抗ウサギ検出Ａｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ－Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）及びＨｏｅｃｈｓｔ－３３３４２色素（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を含有する緩衝液で染色し、次いで、穏やかに振盪しながら室温で２時間インキュベートした。細胞を染色した後、プレートを洗浄緩衝液で洗浄し、次いでＰＢＳを各ウェルに添加し、次いでプレートを画像化した。

【0295】

ＯｐｅｒａＰｈｅｎｉｘ Ｈｉｇｈ Ｃｏｎｔｅｎｔイメージングシステム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で２０倍の水浸対物レンズを使用して、各ウェルから６つの画像を撮影した。Ｃｏｌｕｍｂｕｓソフトウェア画像分析ツール（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して分析を行い、核領域及び核を取り囲む環領域を同定し、シグナル強度を計算した。最大阻害対照試料からＮ２－ＩＣＤ核転座陽性集団を計算するために閾値を得た。Ｃｏｌｕｍｂｕｓソフトウェア分析からの結果をＧｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒアプリケーション（Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）にアップロードし、そこで、最大阻害対照によって減算した中性対照から得た転座パーセンテージを用いて正規化プロセスを設定し、ＩＣ５０値を計算した。

【0296】

３Ｔ３－Ｊａｇ１及びＯＰ９－ＤＬＬ１共培養セットからのデータ分析結果を比較し、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性活性化を遮断するがＤＬＬ１媒介性活性化を遮断しないＮｏｔｃｈ２抗体の発見、及び抗体のヒト化バージョンの最適化に使用した。例示的な結果を図５Ａ～図５Ｆに示す。試験した抗体はすべて、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性活性化を遮断したが、ＤＬＬ１媒介性活性化は遮断しなかった。表２は、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達の遮断について各抗体のＩＣ５０をまとめたものである。

【表2】

【0297】

別の実験では、ラット抗体３１０７及びヒト化バージョン３１０７を実質的に上記のようにＨＣＳアッセイで試験した。この実験で試験した全ての抗体は、Ｎ２９７Ｇ突然変異を有するヒトＩｇＧ１を含んでいた。３１０７及びヒト化バリアントは全て、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性活性化を遮断したが、ＤＬＬ１媒介性活性化は遮断しなかった（データは示さず）。表３は、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達の遮断について各抗体のＩＣ５０をまとめたものである。

【表3】

【0298】

実施例６：ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）を用いた速度論的分析
抗体の結合親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００マシンによって決定した。ウサギ抗体は、ウサギ可変ドメインとヒト定常ドメインを有するキメラ抗体として発現させた。ラット抗体は、ラット可変ドメインとヒト定常領域を有するキメラ抗体として発現させた。ヒト化抗体をヒトＩｇＧ１骨格で発現させた。速度論的測定のために、抗体を研究グレードのプロテインＡチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で捕捉して、約３００ＲＵを達成した。ｈｕＮｏｔｃｈ２－ＥＧＦ６－１０の１０倍連続希釈液を、追加の３ｍＭ ＣａＣｌ_２を含むＨＢＳ－Ｐ緩衝液中に３７℃で１００μＬ／分の流速で注入するした。結合率（ｋａ）及び解離率（ｋｄ）は、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン２．０）を用いて計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、比率ｋｄ／ｋａとして計算した。結果を表４に示す。

【表4】

【0299】

別の実験では、実質的に上記のように、ラット３１０７抗体のヒト化バージョンの結合親和性を決定した。結果を表５に示す。

【表5】

【0300】

さらなる種由来のＮｏｔｃｈ２及び異なるＥＧＦリピート領域を含む構築物に対する抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の結合をＢＩＡｃｏｒｅ（商標）によって評価した。この実験のために、ヒト定常領域を有する抗体をプロテインＡチップ上に捕捉して、約２００ＲＵを達成した。様々な抗原の１０倍連続希釈液を、追加の３ｍＭ ＣａＣｌ_２を含むＨＢＳ－Ｐ緩衝液中に３７℃で１００μＬ／分の流速で注入した。実験の結果を表６に要約する。

【表6】

【0301】

１Ｂ２の他のヒト化バージョン（ｈｕ１Ｂ２．Ｌ１Ｈ１．ＤＦＳ、ｈｕ１Ｂ２．ｖ４Ｌ７、ｈｕ１Ｂ２．ｖ８Ｌ７、ｈｕ１Ｂ２．ｖ９Ｌ７、ｈｕ．１Ｂ２．ＤＦＳ．Ｈ１４Ｌ７）は、上記の表４のｈｕ．１Ｂ２．ｖ１０２及びｈｕ．１Ｂ２．ｖ１０４と同様の結合プロファイルを示した。表４に示される抗Ｎｏｔｃｈ２抗体の結合特性に基づいて、ｒａｔ．３１０７、ｒａｔ．１Ｂ２のヒト化バージョン、ｒｂ．２３３８、ｒｂ．２４３０、及びｒｂ．２６２１は、ヒトＮｏｔｃｈ２ ＥＧＦ７内のエピトープに結合する。さらに、試験された抗体のすべてが、ｈｕＮｏｔｃｈ２－ＥＧＦ６－１２．Ｒ２６８Ｋ又はｍｕＮｏｔｃｈ２－ＥＧＦ６－１０に対する結合をほとんど又は全く示さないが、ｈｕＮｏｔｃｈ２－ＥＧＦ６－１０及びｍｕＮｏｔｃｈ２－ＥＧＦ６－１２．Ｋ２６８Ｒに結合し、このことは、抗体がヒトＮｏｔｃｈ２の位置２６８においてアルギニンと接触することを示唆している。

【0302】

実施例７：抗Ｎｏｔｃｈ２ ＦａｂによるＪａｇｇｅｄ１及びＤＬＬ１シグナル伝達の阻害
特定の抗Ｎｏｔｃｈ２抗体を一価Ｆａｂとして再フォーマットし、実施例５に記載のＨＣＳアッセイを使用してＪａｇｇｅｄ１及びＤＬＬ１シグナル伝達阻害についてアッセイした。

【0303】

３Ｔ３－Ｊａｇ１及びＯＰ９－ＤＬＬ１共培養セットからのデータ分析結果を使用して、Ｊａｇｇｅｄ１ ＩＣ５０を計算し、ＦａｂによるＪａｇｇｅｄ１及びＤＬＬ１シグナル伝達の最大阻害パーセントを決定した。表７は、各Ｆａｂについて観察された最大Ｊａｇｇｅｄ１及びＤＬＬ１シグナル伝達阻害を示す。

【表7】

【0304】

驚くべきことに、ｈｕ１Ｂ２．ｖ８及びｈｕ１Ｂ２．ｖ１０４の両方とも、二価抗体フォーマットにおけるＪａｇｇｅｄ１シグナル伝達の阻害に対して選択的であったが、一価Ｆａｂとして再フォーマットされた場合、ｈｕ１Ｂ２．ｖ８及びｈｕ１Ｂ２．ｖ１０４の両方とも、ＤＬＬ１シグナル伝達を阻害したが、Ｊａｇｇｅｄ１シグナル伝達の阻害と比較して最大阻害は減少した。対照的に、一価Ｆａｂフォーマットｈｕ１Ｂ２．ｖ１．ＤＦＳ、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０１、及びｈｕ１Ｂ２．ｖ１０３は、Ｊａｇｇｅｄ１特異的シグナル伝達阻害活性を保持し、ＤＬＬ１を阻害しなかった（データは示さず）。いかなる特定の理論にも束縛されることを意図するものではないが、Ｆａｂ－フォーマットｈｕ１Ｂ２．ｖ８及びｈｕ１Ｂ２．ｖ１０４と、Ｆａｂフォーマットｈｕ１Ｂ２．ｖ１．ＤＦＳ、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０１、及びｈｕ１Ｂ２．ｖ１０３との間の選択性の違いは、ＣＤＲ－Ｈ３配列の違いに起因し得る。Ｈｕ１Ｂ２．ｖ８及びｈｕ１Ｂ２．ｖ１０４は、ＣＤＲ－Ｈ３配列ＤＧＧＫＬＡＬＤＡ（配列番号１１）を共有し、一方、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１．ＤＦＳ、ｈｕ１Ｂ２．ｖ１０１、及びｈｕ１Ｂ２．ｖ１０３は、ＣＤＲ－Ｈ３配列ＤＳＧＲＷＧＬＤＡ（配列番号８）、ＤＧＧＲＷＧＬＤＡ（配列番号９）及びＤＧＧＫＷＧＬＤＡ（配列番号１２）をそれぞれ有する。

【0305】

実施例８：抗Ｎｏｔｃｈ２抗体による分泌細胞の減少
気液界面（ＡＬＩ）培養：初代ヒト気管支上皮細胞（ＨＢＥＣ）を０．４μｍ細孔ＰＥＴトランスウェル（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃７３６９）に蒔き、Ｐｎｅｕｍａｃｕｌｔ Ｅｘ－Ｐｌｕｓ培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃０５０４０）中でコンフルエントになるまで浸漬条件下で培養する。コンフルエントになったら、上部チャンバーから培地を除去してＨＢＥＣを空気に曝露し、下部チャンバー中の培地をＰｎｅｕｍａｃｕｌｔ ＡＬＩ基礎培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃０５００１）と交換する。細胞を３～４週間培養し、繊毛が明らかに拍動しているときに完全に分化させる。

【0306】

抗体処理及び試料分析：抗体を５０ｍｇ／ｍｌの濃度で基礎培地に添加した。培地を下側チャンバーで交換しながら（週に３回）、抗体を補充した。７日目に、ＡＬＩ培養物をＲＮＡ分析及び組織学のために収集した。ＲＮＡ分析のために、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮＡ抽出キット（＃７４１０６）を使用してＲＮＡを抽出した。ｉＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ合成（Ｂｉｏｒａｄ＃１７０８８９１）を使用したｃＤＮＡ合成後、遺伝子Ｍｕｃ５ｂ、Ｍｕｃ５ａｃ及びＳｃｇｂ１ａ１（Ｔａｑｍａｎ Ａｓｓａｙｓ）について遺伝子発現分析を行った。組織学的分析のために、トランスウェルをホルマリン固定し、パラフィン包埋した。試料を切片化し、抗Ｍｕｃ５ｂ（杯細胞）、抗アセチル化ａ－チューブリン（線毛細胞）及びＤＡＰＩ（核染色）について染色した。

【0307】

図６Ａ～図６Ｄに示されるように、抗Ｎｏｔｃｈ２抗体１Ｂ２による治療は、ＨＢＥＣのＡＬＩ培養物におけるＭｕｃ５ｂ、Ｍｕｃ５ａｃ及びＳｃｇｂ１ａ１のｍＲＮＡ発現を低下させた。抗Ｎｏｔｃｈ２抗体１Ｂ２による処理はまた、抗Ｍｕｃ５ｂ抗体を使用した免疫蛍光によって検出されるように、杯細胞の出現を減少させた。これらの結果は、Ｊａｇｇｅｄ－Ｎｏｔｃｈ２シグナル伝達の阻害が、培養物中の分泌杯細胞を有意に減少させるのに十分であることを示す。

【0308】

上述の発明を、理解を明確にする目的で、説明及び実施例によって、ある程度詳細に説明してきたが、説明及び実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本明細書に引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に組み込まれる。
ＩＶ．特定の配列の表

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図5F】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7A】

【図7B】

【配列表】

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【国際調査報告】