特表 2023-534588 抗ＴＩＧＩＴ抗体、その調製方法と応用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-10

(54)【発明の名称】抗ＴＩＧＩＴ抗体、その調製方法と応用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230803BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230803BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230803BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230803BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230803BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230803BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230803BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230803BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230803BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230803BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230803BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20230803BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230803BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C12P21/08

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61K48/00

A61K31/7088

A61K35/12

A61K38/16

A61P35/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022567570

(86)(22)【出願日】2021-05-07

(85)【翻訳文提出日】2022-11-04

(86)【国際出願番号】 CN2021092043

(87)【国際公開番号】W WO2021227940

(87)【国際公開日】2021-11-18

(31)【優先権主張番号】202010387630.4

(32)【優先日】2020-05-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522432619

【氏名又は名称】華博生物医藥技術（上海）有限公司

(71)【出願人】

【識別番号】522432620

【氏名又は名称】上海華奥泰生物藥業股▲フン▼有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】于 海佳

(72)【発明者】

【氏名】蔡 明清

(72)【発明者】

【氏名】韋 小越

(72)【発明者】

【氏名】陳 時

(72)【発明者】

【氏名】謝 剣梅

(72)【発明者】

【氏名】朱 向陽

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA02

4B064CA10

4B064CA20

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA05

4B065AA26X

4B065AA90X

4B065AA91X

4B065AA91Y

4B065AA93Y

4B065AB01

4B065AB05

4B065AC14

4B065BA02

4B065BA21

4B065BC11

4B065BD14

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA13

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA23

4C084CA53

4C084NA05

4C084ZB26

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB11

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC23

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA05

4C086ZB26

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087CA12

4C087NA05

4C087ZB26

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

単離抗原結合タンパク質を提供し、前記抗原結合タンパク質は重鎖可変領域VHに少なくとも1つのCDRを含み、前記VHはSEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列を含む。また、抗TIGIT抗体、その調製方法と応用をも提供する。前記抗原結合蛋白はTIGIT抗原に特異的に結合でき、TIGITとそのリガンドの結合を阻害し、かつTIGIT関連疾患を予防または治療する薬物の調製に用いることができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

重鎖可変領域VHに少なくとも1つのCDRを含む、単離抗原結合タンパク質であって、前記VHは、SEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項2】

請求項1に記載の単離抗原結合タンパク質であって、軽鎖可変領域VLに少なくとも1つのCDRを含み、前記VLは、SEQ ID NO：64に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項3】

以下の特性の1つ以上を有する、請求項1～2のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質。
1）TIGITタンパク質を1×10^-10M以下のKD値で結合することができ、前記KD値は表面プラズモン共鳴によって決定される、
2）FACS解析においてCD155のTIGITへの結合をブロックすることができる、および
3）腫瘍の成長および／または腫瘍細胞の増殖を抑制することができる。

【請求項4】

前記TIGITタンパク質との結合について参照抗体と競合する、請求項1～3のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記参照抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み得、前記参照抗体の前記重鎖可変領域がHCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み得、前記HCDR1がSEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR2は、SEQ ID NO：56に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR3は、SEQ ID NO：57に示すアミノ酸配列を含み得、前記参照抗体の前記軽鎖可変領域は、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含み得、前記LCDR1は、SEQ ID NO：65に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR2は、SEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR3は、SEQ ID NO：66に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項5】

請求項1～4のいずれかの一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。

【請求項6】

請求項5に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記抗原結合フラグメントは、Fab、Fab'、F（ab）2、Fvフラグメント、F（ab'）2、scFv、di-scFvおよび／またはdAbを含み得る。

【請求項7】

請求項5～7のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体からなる群より選択される。

【請求項8】

請求項1～7のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VHを含み、前記VHは、HCDR1を含み、前記HCDR1は、SEQ ID NO.： 3に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項9】

請求項1～8のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VHを含み、前記VHは、HCDR2を含み、前記HCDR2は、SEQ ID NO： 56に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項10】

請求項9に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記HCDR2は、SEQ ID NO： 4および42のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項11】

請求項1-10のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VHを含み、前記VHは、HCDR3を含み、前記HCDR3は、SEQ ID NO： 57に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項12】

請求項11に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記HCDR3は、SEQ ID NO：5および43に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項13】

請求項1～13のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、前記単離抗原結合タンパク質は、以下の任意の一組のアミノ酸配列から選択される。
(1) HCDR1：SEQ ID NO：3、HCDR2：SEQ ID NO：4、およびHCDR3：SEQ ID NO：5、および
(2) HCDR1：SEQ ID NO：3、HCDR2：SEQ ID NO：42、およびHCDR3：SEQ ID NO：43。

【請求項14】

請求項1～13のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VLを含み、前記VLは、LCDR1を含み、前記LCDR1は、SEQ ID NO：65に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項15】

請求項14に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記LCDR1は、SEQ ID NO：6および52のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項16】

請求項1～15のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VLを含み、前記VLは、LCDR2を含み、前記LCDR２は、SEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項17】

請求項1～16のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VLを含み、前記VLは、LCDR3を含み、前記LCDR3は、SEQ ID NO：66に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項18】

請求項17に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記LCDR3は、SEQ ID NO：8および53のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項19】

請求項1～18いずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含み、前記単離抗原結合タンパク質は、以下の任意の一組のアミノ酸配列から選択される。
(1) LCDR1：SEQ ID NO：6、LCDR2：SEQ ID NO：7、および、LCDR3：SEQ ID NO：8、および
(2) LCDR1：SEQ ID NO：52、LCDR2：SEQ ID NO：7、および、LCDR3：SEQ ID NO：53。

【請求項20】

請求項1～19のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VLを含み、前記VLはLーFR1を含み、前記LCDR1のN末端と直接または間接的に連結され、前記LーFR1は、SEQ ID NO：68に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項21】

請求項20に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記L-FR1は、SEQ ID NO：15、16、44および45のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項22】

請求項1～21のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VLを含み、前記VLは、フレームワーク領域L-FR2を含み、前記L-FR2が前記LCDR1と前記LCDR2の間に位置し、前記L-FR2は、SEQ ID NO：70に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項23】

請求項22に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記L-FR2は、SEQ ID NO：17、18、46および47のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項24】

請求項1～23に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VLを含み、前記VLは、フレームワーク領域L-FR3を含み、前記L-FR3が前記LCDR2と前記LCDR3との間に位置し、前記LーFR3は、SEQ ID NO：72に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項25】

請求項24に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記L-FR3は、SEQ ID NO：19、20、21、48、49および50のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項26】

請求項1～25のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VLを含み、前記VLは、フレームワーク領域L-FR4を含み、前記L-FR4のN末端が前記LCDR3のC末端に連結され、前記L-FR4は、SEQ ID NO：73に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項27】

請求項26に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記L-FR4は、SEQ ID NO：22および51のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項28】

請求項1～27のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VLを含み、前記VLは、SEQ ID NO：64に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項29】

請求項28に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記VLは、SEQ ID NO：2、10、11、13、33および34のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項30】

請求項1～29のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質は、抗体軽鎖定常領域を含み、前記抗体軽鎖定常領域は、ヒトκ軽鎖定常領域に由来する。

【請求項31】

請求項30に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記ヒトκ軽鎖定数領域は、SEQ ID NO：31に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項32】

請求項1～31のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VHを含み、前記VHは、H-FR1を含み、前記H-FR1の前記C末端が前記HCDR1のN末端に直接または間接的に連結され、前記H-FR1は、SEQ ID NO：58に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項33】

請求項32に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記H-FR1は、SEQ ID NO：23および35のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項34】

請求項1～33のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VHを含み、前記VHは、フレームワーク領域H-FR2を含み、前記H-FR2が前記HCDR1と前記HCDR2の間に位置し、前記H-FR2は、SEQ ID NO：60に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項35】

請求項34に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記H-FR2は、SEQ ID NO：24～26、36および37のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項36】

請求項1～35のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VHを含み、前記VHは、フレームワーク領域H-FR3を含み、前記H-FR3が前記HCDR2と前記HCDR3との間に位置し、前記H-FR3は、SEQ ID NO：61に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項37】

請求項36に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記H-FR3は、SEQ ID NO：27、38および39のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項38】

請求項1～37のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VHを含み、前記VHは、フレームワーク領域H-FR4を含み、前記H-FR4のN末端が前記HCDR3のC末端と連結され、前記H-FR4は、SEQ ID NO：62に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項39】

請求項38に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記H-FR4は、SEQ ID NO：28、40および41のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項40】

請求項1～39のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、VHを含み、前記VHは、SEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項41】

請求項40に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記VHは、SEQ ID NO：1、9、12、14および32のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項42】

請求項1～41のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、抗体重鎖定常領域を含み、前記抗体重鎖定常領域は、ヒトIgG定常領域を含む。

【請求項43】

請求項1～42のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記抗体重鎖定数領域は、ヒトIgG1定数領域を含み得、ヒトIgG1定数領域は、SEQ ID NO：29～30のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【請求項44】

請求項1～43のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含み得る、以下の任意の一組のアミノ酸配列から選択される。
（1） VH：SEQ ID NO：9、およびVL：SEQ ID NO：10、
（2） VH：SEQ ID NO：9、およびVL：SEQ ID NO：11、
（3） VH：SEQ ID NO：12、およびVL：SEQ ID NO：13、
（4） VH：SEQ ID NO：14、およびVL：SEQ ID NO：11、
（5） VH：SEQ ID NO：1、およびVL：SEQ ID NO：2、
（6） VH：SEQ ID NO：32、およびVL：SEQ ID NO：34、および
（7） VH：SEQ ID NO：32、およびVL：SEQ ID NO：33。

【請求項45】

請求項1～44のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質をコードする単離された1種または複数の核酸分子。

【請求項46】

請求項45に記載の核酸分子を含むベクター。

【請求項47】

請求項45に記載の核酸分子または請求項46に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項48】

請求項1～44のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質を含む、ポリペプチド。

【請求項49】

請求項1～44のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質または請求項48に記載のポリペプチドを含む、免疫複合体。

【請求項50】

請求項1～44のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質を調製する方法であって、請求項1～44のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質の発現させる条件で、請求項47に記載の細胞を培養することを含む、前記方法。

【請求項51】

請求項1～44のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、請求項45に記載の核酸分子、請求項46に記載のベクター、請求項47に記載の細胞、請求項48に記載のポリペプチドおよび／または請求項49に記載の免疫複合体、ならびに任意に薬学的に許容されるアジュバントを含む、医薬組成物。

【請求項52】

請求項1～44いずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質、請求項45に記載の核酸分子、請求項46に記載のベクター、請求項47に記載の細胞、請求項48に記載のポリペプチド、請求項49に記載の免疫複合体、および/または請求項51に記載の医薬組成物の医薬品の調製における利用であって、前記医薬品は、TIGIT関連疾患の予防、緩和および/または治療のために用いられる。

【請求項53】

前記TIGIT関連疾患は、T細胞機能障害性疾患である、請求項52に記載の使用。

【請求項54】

前記TIGIT関連疾患は、腫瘍である、請求項52～53のいずれか一項に記載の使用。

【請求項55】

前記腫瘍は、固形腫瘍である、請求項54に記載の使用。

【請求項56】

前記腫瘍は、大腸癌である、請求項54～55のいずれか一項に記載の使用。

【請求項57】

請求項1～44のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質を投与することを含む、TIGITへのCD155の結合を阻害する方法。

【請求項58】

請求項1～44のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質、請求項45に記載の核酸分子、請求項46に記載のベクター、請求項47に記載の細胞、請求項48に記載のポリペプチド、請求項49に記載の免疫複合体、および/または請求項51に記載の医薬組成物を、必要とされる被験者に投与することを含む、TIGIT関連疾患を予防、緩和または治療する方法。

【請求項59】

前記TIGIT関連疾患は、T細胞機能障害性疾患である、請求項58に記載の方法。

【請求項60】

前記TIGIT関連疾患は、腫瘍である、請求項58～59のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

前記腫瘍は、固形腫瘍である、請求項60に記載の方法。

【請求項62】

前記腫瘍は、大腸癌である、請求項60～61のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

請求項1～44のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質、請求項45に記載の核酸分子、請求項46に記載のベクター、請求項47に記載の細胞、請求項48に記載のポリペプチド、請求項49に記載の免疫抱合体、および/またはTIGIT関連疾患の予防、緩和または治療のための請求項51に記載の医薬組成物。

【請求項64】

前記TIGIT関連疾患は、T細胞機能障害性疾患である、請求項63に記載の単離抗原結合タンパク質、核酸分子、ベクター、細胞、ポリペプチド、免疫複合体および/または医薬組成物。

【請求項65】

前記TIGIT関連疾患は、腫瘍である、請求項64に記載の単離抗原結合タンパク質、核酸分子、ベクター、細胞、ポリペプチド、免疫複合体および/または医薬組成物。

【請求項66】

前記腫瘍は、固形腫瘍である、請求項64～65に記載の単離抗原結合タンパク質、核酸分子、ベクター、細胞、ポリペプチド、免疫複合体および/または医薬組成物。

【請求項67】

前記腫瘍は、結腸癌である、請求項66に記載の単離抗原結合タンパク質、核酸分子、ベクター、細胞、ポリペプチド、免疫複合体および/または医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願発明は、バイオ医薬品分野に関し、具体的にはTIGITを標的とする抗原結合タンパク質、その調製方法と用途に関するものである。

【背景技術】

【0002】

通常、T細胞は抗原提示細胞 (Antigen-presenting cells、APCs) によって、提示された外因性または内因性抗原-MHC-I/II複合物とT細胞 (CD 4⁺、CD 8⁺) 表面受容体 (T Cell Receptor、TCR) に結合し、追加の共刺激 (Costimulatory) シグナルを介して十分に活性化された後、他のエフェクター細胞により関連抗原を発現する細胞を殺傷する。逆に、T細胞はまた共抑制(Coinhibitory)シグナル調節を受け、後者はT細胞の活性、増殖、生存などに対するマイナスの調節作用があり、免疫寛容を維持でき、過度の自己免疫反応を防止し、免疫応答による組織損傷を減少する。腫瘍細胞微小環境では、T細胞の活性化と抑制は異常パターンにあり、現在、その正常化は腫瘍治療の重要な手段と広く認識されている。

【0003】

TIGIT (T cell Ig and ITIM domain、WUCAM、Vstm3、VSIG9とも呼ばれる)は、ポリオウイルス受容体(PVR) /Nectinファミリーのメンバーである。細胞外免疫グロブリン可変領域 (IgV) ドメイン、1型膜貫通ドメイン、そして古典的な免疫受容体チロシン抑制モチーフ (ITIM) と免疫グロブリンチロシンテール (ITT) モチーフを持つ細胞内ドメインで構成されている。TIGITはリンパ球に発現し、特にエフェクターおよび制御性CD4⁺T細胞、濾胞性ヘルパーCD4⁺T細胞、エフェクターCD8⁺ T細胞およびナチュラルキラー（NK）細胞で高発現している。TIGIT遺伝子はヒト第16染色体に位置し、244個のアミノ酸からなるI型膜貫通タンパク質をコードしている。ヒトTIGIT分子の細胞膜外領域の長さは141個のアミノ酸であり、免疫グロブリンV様ドメインが1個ある。膜貫通領域には23個のアミノ酸がある。細胞質領域は短く、 80個のアミノ酸を有し、 1個のPDZ結合ドメインと1個のITIMモチーフを有している。

【0004】

CD155（PVR、Necl5またはTage4とも呼ばれる）は、TIGITの高親和性リガンドである。腫瘍表面に高発現するCD155はNKとT細胞表面のTIGITと結合すると、腫瘍細胞に対する殺傷作用が抑制される。TIGITは、腫瘍細胞の初期死滅と腫瘍抗原の放出を妨げることにより、NK細胞の効果を阻害することができる。樹状細胞の共刺激能力を阻害することにより、癌抗原提示の減少とIL-10などの抗炎症サイトカインの増加をもたらす。また、TIGITは、腫瘍細胞のような他の細胞におけるPVRシグナル伝達も誘導できる。TIGITはCD8⁺T細胞の効果を直接阻害することもあれば、TIGIT⁺TregはCD8⁺T細胞を阻害し、がん細胞の排除を阻止することもある（Manieri et al.、 Inhibition of Cancer Immunity Cycle by TIGIT. 2016）。

【0005】

数多くの前臨床試験の結果から、TIGITは癌やその他の疾患の患者にとって適切な標的となることが示唆されており、したがって、様々な関連疾患におけるTIGITの役割と機能を考えると、患者の治療に適した改良型抗TIGIT特異的抗体の開発に対するニーズが、この分野では依然強いと見られる。

【発明の開示】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本願は、重鎖可変領域VHに少なくとも1つのCDRを含み得る単離された抗原結合タンパク質を提供し、前記VHは、SEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列を含み得る。前記単離抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域VLに少なくとも1つのCDRを含んでいてもよく、前記VLは、SEQ ID NO：64に示すアミノ酸配列をを含み得る。前記単離抗原結合タンパク質は、以下の特性の1つ以上を有する：1）1×10^-10M以下（例えば、8×10^-11M、5×10^-11M、2×10^-11M、1×10^-11M以下）のKD値でTIGITタンパク質と結合でき、前記KD値は表面プラズモン共鳴によって決定される、2）FACS解析においてCD155とTIGITの結合をプロックすることができる、3）腫瘍の成長および／または腫瘍細胞の増殖を抑制することができる。

【課題を解決するための手段】

【0007】

一方、本願は、重鎖可変領域VHに少なくとも1つのCDRを含む単離抗原結合タンパク質を提供し、前記VHはSEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0008】

いくつかの実施形態では、前記単離抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域VLに少なくとも1つのCDRを含み、前記VLは、SEQ ID NO：64に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0009】

いくつかの実施形態では、前記単離抗原結合タンパク質は、以下の特性の1つ以上を有する：1）1×10^-10M以下のKD値でTIGITタンパク質と結合する能力、ここで前記KD値は表面プラズモン共鳴によって決定される、2）FACSアッセイにおいてCD155のTIGITへの結合をブロックする能力、および3）腫瘍の成長および／または腫瘍細胞の増殖を抑制することができる。

【0010】

いくつかの実施形態では、前記単離抗原結合タンパク質は、前記TIGITタンパク質との結合について参照抗体と競合し、前記参照抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み得、前記参照抗体の前記重鎖可変領域がHCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み得、前記HCDR1がSEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR2は、SEQ ID NO：56に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR3は、SEQ ID NO：57に示すアミノ酸配列を含み得、前記参照抗体の前記軽鎖可変領域は、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含み得、前記LCDR1は、SEQ ID NO：65に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR2は、SEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR3は、SEQ ID NO：66に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0011】

いくつかの実施形態では、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。

【0012】

いくつかの実施形態では、前記抗原結合フラグメントは、Fab、Fab’、F(ab) 2、Fvフラグメント、F(ab.) 2、scFv、di-scFv、および/またはdAbを含み得る。

【0013】

いくつかの実施形態では、前記抗体は、以下からなる群から選択される：モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト化抗体。

【0014】

いくつかの実施形態では、前記VHは、HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、前記HCDR1は、SEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0015】

いくつかの実施形態では、前記HCDR2は、SEQ ID NO：56に示すアミノ酸配列をを含み得る。

【0016】

いくつかの実施形態では、前記HCDR2は、SEQ ID NO：4および42に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0017】

いくつかの実施形態では、前記HCDR3は、SEQ ID NO：57に示すアミノ酸配列をを含み得る。

【0018】

いくつかの実施形態では、前記HCDR3は、SEQ ID NO：5および43のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0019】

いくつかの実施形態では、前記単離抗原結合タンパク質は、HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、前記単離抗原結合タンパク質は、以下の任意の一組のアミノ酸配列から選択される。

【0020】

(1) HCDR1：SEQ ID NO：3、HCDR2：SEQ ID NO：4、およびHCDR3：SEQ ID NO：5、および
(2) HCDR1：SEQ ID NO：3、HCDR2：SEQ ID NO：42、およびHCDR3：SEQ ID NO：43。

【0021】

いくつかの実施形態では、前記VLは、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含み、前記LCDR1は、SEQ ID NO：65に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0022】

いくつかの実施形態では、前記LCDR1は、SEQ ID NO：6および52のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0023】

いくつかの実施形態では、前記LCDR2は、SEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0024】

いくつかの実施形態では、前記LCDR3は、SEQ ID NO：66に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0025】

いくつかの実施形態では、前記LCDR3は、SEQ ID NO：8および53のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0026】

いくつかの実施形態では、前記単離抗原結合タンパク質は、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含み、前記単離抗原結合タンパク質は、以下の任意の一組のアミノ酸配列から選択される。

【0027】

(1) LCDR1：SEQ ID NO：6、LCDR2：SEQ ID NO：7、および、LCDR3：SEQ ID NO：8、および
(2) LCDR1：SEQ ID NO：52、LCDR2：SEQ ID NO：7、および、LCDR3：SEQ ID NO：53。いくつかの実施形態では、前記VLは、フレームワーク領域L-FR1、L-FR2、L-FR3、およびL-FR4を含み得る。

【0028】

いくつかの実施形態では、前記L-FR1のC末端は、直接または間接的にLCDR1のN末端に連結され、前記L-FR1は、SEQ ID NO：68に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0029】

いくつかの実施形態では、前記L-FR1は、SEQ ID NO：15、16、44および45のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0030】

いくつかの実施形態では、前記L-FR2は、LCDR1とLCDR2との間に位置し、前記L-FR2はSEQ ID NO：70に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0031】

いくつかの実施形態では、前記L-FR2は、SEQ ID NO：17、18、46および47のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0032】

いくつかの実施形態では、前記L-FR3は、LCDR2とLCDR3との間に位置し、前記L-FR3はSEQ ID NO：72に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0033】

いくつかの実施形態では、前記L-FR3は、SEQ ID NO：19、20、21、48、49および50のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0034】

いくつかの実施形態では、前記L-FR4のN末端は、LCDR3のC末端と連結され、前記L-FR4は、SEQ ID NO：73に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0035】

いくつかの実施形態では、前記L-FR4は、SEQ ID NO：22および51のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0036】

いくつかの実施形態では、前記VLは、SEQ ID NO：64に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0037】

いくつかの実施形態では、前記VLは、SEQ ID NO：2、10、11、13、33および34のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0038】

いくつかの実施形態では、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体軽鎖定常領域を含み、前記抗体軽鎖定常領域は、ヒトκ軽鎖定常領域に由来し、前記ヒトκ軽鎖定常領域は、SEQ ID NO：31に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0039】

いくつかの実施形態では、前記VHは、フレームワーク領域H-FR1、H-FR2、H-FR3、およびH-FR4を含み得る。

【0040】

いくつかの実施形態では、前記H-FR1のC末端は、直接または間接的にHCDR1のN末端に連結され、前記H-FR1は、SEQ ID NO：58に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0041】

いくつかの実施形態では、前記H-FR1のC末端は、直接または間接的にHCDR1のN末端に連結され、前記H-FR1は、SEQ ID NO：23および35のいずれか一項に示すアミノ酸配列をを含み得る。

【0042】

いくつかの実施形態では、前記H-FR2は、HCDR1とHCDR2との間に位置し、前記H-FR2はSEQ ID NO：60に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0043】

いくつかの実施形態では、前記H-FR2は、HCDR1とHCDR2との間に位置し、前記H-FR2は、SEQ ID NO：24、25、26、36および37のいずれか一項に示すアミノ酸配列をを含み得る。

【0044】

いくつかの実施形態では、前記H-FR3は、HCDR2とHCDR3との間に位置し、前記H-FR3は、SEQ ID NO：61に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0045】

いくつかの実施形態では、前記H-FR3は、HCDR2とHCDR3との間に位置し、前記H-FR3は、SEQ ID NO：27、38および39のいずれか一項に示すアミノ酸配列をを含み得る。

【0046】

いくつかの実施形態では、前記H-FR4のN末端は、HCDR3のC末端と連結され、前記H-FR4は、SEQ ID NO：62に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0047】

いくつかの実施形態では、前記H-FR4のN末端は、HCDR3のC末端と連結され、前記H-FR4は、SEQ ID NO： 28、40および41のいずれか一項に示すアミノ酸配列をを含み得る。

【0048】

いくつかの実施形態では、前記VHは、SEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0049】

いくつかの実施形態では、前記VHは、SEQ ID NO：1、9、12、14および32のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0050】

いくつかの実施形態では、前記単離抗原結合タンパク質は抗体重鎖定常領域を含み、かつ前記抗体定常領域はヒトIgG定常領域から由来する。

【0051】

いくつかの実施形態では、前記抗体重鎖定常領域は、ヒトIgG1定常領域を含み、ヒトIgG1定常領域は、SEQ ID NO：29～30のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0052】

いくつかの実施形態では、前記抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含み、前記単離抗原結合タンパク質は、以下の任意の一組のアミノ酸配列から選択される。（1）VH：SEQ ID NO：9、VL：SEQ ID NO：10、（2）VH：SEQ ID NO：9、VL：SEQ ID NO：11、（3）VH： SEQ ID NO：12、VL：SEQ ID NO：13、（4）VH：SEQ ID NO：14、VL：SEQ ID NO：11、（5）VH：SEQ ID NO：1、VL：SEQ ID NO：2、（6）VH：SEQ ID NO：32、VL：SEQ ID NO：34 および（7）VH：SEQ ID NO：32、VL： SEQ ID NO：33。

【0053】

一方、本願は、前記単離抗原結合タンパク質をコードする単離された1種または複数の核酸分子を提供する。

【0054】

一方、本願は、ベクターを提供し、前記ベクターは、前記核酸分子を含み得る。

【0055】

一方、本願は、細胞を提供し、前記細胞は、前記核酸分子または前記ベクターを含み得る。

【0056】

一方、本願は、ポリペプチドを提供し、前記ポリペプチドは、前記単離抗原結合タンパク質を含み得る。

【0057】

一方、本願は、免疫複合体を提供し、前記免疫複合体は、前記単離抗原結合タンパク質または前記ポリペプチドを含み得る。

【0058】

一方、本願は、前記単離抗原結合タンパク質を調製する方法を提供し、前記方法は、前記単離抗原結合タンパク質の発現が可能な条件下で、前記細胞を培養することを含み得る。

【0059】

一方、本願は、医薬組成物を提供し、前記医薬組成物は、前記単離抗原結合タンパク質、前記核酸分子、前記ベクター、前記ポリペプチド、前記免疫複合体および/または前記細胞、および任意選択的に、薬学的に受け入れ可能なアジュバントを含みうる。

【0060】

一方、本願は、前記単離抗原結合タンパク質、前記核酸分子、前記ベクター、前記細胞、前記ポリペプチド、前記免疫複合体および／または前記医薬組成物の医薬品の調製における利用を提供し、前記薬剤はTIGIT関連疾患の予防、緩和および／または治療に用いられる。

【0061】

いくつかの実施形態では、前記TIGIT関連疾患は、T細胞機能障害性疾患である。

【0062】

いくつかの実施形態では、前記TIGIT関連疾患は、腫瘍である。いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、固形腫瘍および／または非固形腫瘍を含み得る。

【0063】

いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、以下からなる群から選択される：乳癌、結腸癌、肝臓癌、リンパ腫、軟骨肉腫、多発性骨髄腫、肺癌、腎癌、メラノーマ、Tリンパ腫および膵臓癌。

【0064】

一方、本願は、CD155のTIGITへの結合を阻害する方法を提供し、前記方法は、前記単離抗原結合タンパク質、前記核酸分子、前記ベクター、前記細胞、前記ポリペプチド、前記免疫複合体および／または前記医薬組成物を投与することを含み得る。

【0065】

一方、本願は、TIGIT関連疾患を予防、緩和または治療するための、前記単離抗原結合タンパク質、前記核酸分子、前記ベクター、前記細胞、前記ポリペプチド、前記免疫複合体および／または前記医薬組成物を提供するものである。

【0066】

一方、本願は、TIGIT関連疾患を予防、緩和または治療するための方法を提供し、前記方法は、それを必要とする対象に、前記単離抗原結合タンパク質、前記核酸分子、前記ベクター、前記細胞、前記ポリペプチド、前記免疫複合体および／または前記医薬組成物を投与することを含み得る。

【0067】

いくつかの実施形態では、前記TIGIT関連疾患は、T細胞機能障害性疾患である。

【0068】

いくつかの実施形態では、前記TIGIT関連疾患は、腫瘍である。いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、固形腫瘍および／または非固形腫瘍を含み得る。

【0069】

いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、以下からなる群から選択される：乳癌、結腸癌、肝臓癌、リンパ腫、軟骨肉腫、多発性骨髄腫、肺癌、腎癌、メラノーマ、Tリンパ腫および膵臓癌。

【発明の効果】

【0070】

当業者は、本願の他の態様および利点について、以下の詳細な説明から容易に洞察することができる。以下の詳細な説明では、本願の例示的な実施形態のみを示し、説明する。当業者が認識するであろうように、本願の内容は、当業者が、本願に係る発明の精神および範囲を逸脱することなく、開示された特定の実施形態に変更を加えることを可能にするものである。したがって、本願の添付図面および明細書の記載は単なる例示であり、限定的なものではない。

【図面の簡単な説明】

【0071】

本願に係る発明の具体的な特徴は、特許請求の範囲に記載のとおりである。本願で詳細に説明される例示的な実施形態および添付図面を参照することによって、本願に係る発明の特徴および利点をよりよく理解することができる。添付図面の概略説明は以下のとおりである。

【0072】

【図1】は、TIGITキメラ抗体のヒトTIGITを発現する細胞に対する結合活性を示したものである。

【図2】は、TIGITヒト化抗体のヒトTIGITを発現する細胞に対する結合活性を示したものである。

【図3】は、ヒトTIGITとそのリガンドCD155との結合に対するTIGITキメラ抗体のブロッキング活性を示したものである。

【図4】は、TIGITヒト化抗体の、ヒトTIGITとそのリガンドCD155の結合に対するブロッキング活性を示したものである。

【図5】は、TIGIT抗体の動物におけるin vivo有効性試験を示した図である。

【図6】は、TIGIT抗体と対照抗体Tiragolumabの動物における有効性試験を比較した図である。

【図7】は、TIGIT抗体の動物における有効性試験の結果を示したものである。

【発明を実施するための形態】

【0073】

以下では、特定の具体的な実施形態を用いて本願の実施形態を説明するが、この技術に精通している者は、本願で開示されることにより、本願の他の利点および効果を容易に理解され得る。

【0074】

用語定義

【0075】

本願では、「TIGIT」という用語は、「IgおよびITIMドメイン含有T細胞免疫受容体」を意味し、通常、PVR（ポリオウイルス受容体）ファミリーのメンバーである免疫グロブリンがPVR/CD155およびNectin-2/CD112に結合することを意味している。本願におけるTIGITは、霊長類（例えば、ヒト、アカゲザルおよびカニクイザル）およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物由来のTIGITタンパク質を指すことができる。この用語は、完全長TIGITまたはそのフラグメント（シグナルペプチドを欠いた成熟フラグメントなど）、未処理のTIGIT、細胞内での処理によるあらゆる形態のTIGIT、および合成TIGITを含む。また、スプライシング変異体や対立遺伝子変異体など、TIGITの変異体をも含む。特定の実施形態では、TIGITはヒトTIGITであり、ヒトTIGITのアミノ酸配列は、UniProtアクセッション番号Q495A1に示すアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、TIGITはカニクイザルTIGITであり、カニクイザルTIGITのアミノ酸配列は、UniProtアクセッション番号G7NXM4に示すアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、TIGITはマウスTIGITであり、マウスTIGITのアミノ酸配列は、UniProtアクセッション番号P86176に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0076】

本願では、「抗原結合タンパク質」という用語は、一般に、抗原と結合する部分と任意に、抗原結合タンパク質と抗原との結合を促進するコンフォーメーションを採用することを可能にする足場またはフレームワーク部分とを指す。抗原結合タンパク質の例としては、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体、抗原結合フラグメント（Fab、Fab'、F（ab）₂、Fvフラグメント、F（ab'）₂、scFv、ジscFvおよび／またはdAb）、免疫複合体、多重特異性抗体（例えば二特異性抗体）、抗体フラグメント、抗体誘導体、抗体アナログまたは融合タンパク質があるが、これらに限定されない。

【0077】

本願では、「Fab」という用語は、一般に、重鎖可変構造ドメインおよび軽鎖可変構造ドメインを含み、さらに軽鎖の定常構造ドメインおよび重鎖の第1の定常構造ドメイン（CH1）を含むフラグメントを指し、用語「Fab'」は、一般に、重鎖CH1構造ドメインのカルボキシル末端に少数の残基（抗体のヒンジ領域からの1以上のシステインを含む）を付加することによってFabと異なるフラグメントを指す。「F（ab'）₂」という用語は、一般に、Fabのダイマー、ヒンジ領域でジスルフィド橋により連結した2つのFabフラグメントを含む抗体フラグメントを指す。「Fv」という用語は、一般に、完全な抗原認識、結合部位を含む最小の抗体フラグメントを指す。特定の実施形態では、重鎖可変領域と軽鎖可変領域が強固に非共有結合した二量体からなることもある。「dsFv」という用語は、一般に、単一軽鎖可変領域と単一の重鎖可変領域との結合がジスルフィド結合であるジスルフィド安定化Fvフラグメントを指す。「dAbフラグメント」という用語は、一般に、VH構造ドメインからなる抗体フラグメントを指す。本願では、「scFv」という用語は、一般に、柔軟なペプチドリンカーを介した抗体の重鎖可変構造ドメインと軽鎖可変構造ドメインとの共有結合によって形成される一価分子を指す。ここで、scFv分子は、一般構造： NH₂-VL-linker-VH-COOH または NH₂-VH-linker VL-COOH を有していてもよい。

【0078】

本願では、「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（2本の軽鎖と2本の重鎖からなる全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、キメラ抗体およびカメリア化モノ構造ドメイン抗体は対象となるが、それらに限定されるものではない。「抗体」という用語は、一般に、少なくとも2本の重鎖（HC）と2本の軽鎖（LC）がジスルフィド結合で連結されたタンパク質、またはその抗原結合性フラグメントを含み得る。各重鎖には、重鎖可変領域（VH）と重鎖定常領域がある。自然に存在するIgG、IgDおよびIgA抗体の一部では、重鎖定常領域に3つの構造ドメイン、CH1、CH2およびCH3が存在する。自然に存在するいくつかの抗体では、各軽鎖は軽鎖可変領域（VL）と軽鎖定常領域を含み得る。軽鎖定常領域には、構造ドメインであるCLが存在する。VHおよびVL領域は、さらに補完決定領域（CDR）と呼ばれる超可変領域に細分化され、フレーム領域（FR）と呼ばれるより保守的な領域と交互に配置されている。各VHおよびVL3つのCDRと4つのフレーム領域（FR）を持ち、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、FR1、 CDR1、 FR2、 CDR2、 FR3、 CDR3、 FR4の順で配列されている。自然重鎖と軽鎖の可変ドメインは、それぞれ4つのFR領域（H-FR1、 H-FR2、 H-FR3、 H-FR4、 L-FR1、 L-FR2、 L-FR3、 L-FR4）を含み得、大部分はβ-フォールディング構造をとり、3つのCDRによってループ結合を形成し、場合によってはβ-フォールディング構造の一部を形成する。各鎖のCDRはFR領域を介して互いに近接して保持され、もう一方の鎖のCDRとともに、抗体の抗原結合部位を形成する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）や古典的補体系の第一成分（Clq）を含む宿主組織や因子への免疫グロブリンの結合を媒介する。

【0079】

本願では、「可変」という用語は、一般に、抗体の可変構造ドメインの配列の一部が強く可変であることを指し、これにより、様々な特異的抗体のその特定の抗原に対する結合性や特異性が形成される。しかし、変動性は抗体の可変領域全体に均一に分布しているわけではない。補完決定領域（CDR）または高可変性領域（HVR）として知られる、軽鎖および重鎖可変領域の3つのセグメントに集中して存在する。可変領域のより保存性の高い部分をフレーム（FR）と呼ぶ。当技術分野では、抗体のCDRは、様々な方法、例えば、配列変動に基づくKabat定義ルール（Kabatら、Protein Sequences in Immunology、第5版、National Institutes of Health, Bethesda, Maryland（1991）を参照）、構造ループ領域の位置に基づくChothia定義ルール（A1- Lazikani et al., JMol Biol 273:927-48,1997を参照）およびIMGTオントロジー（IMGT-ONTOLOGY）の概念に基づくIMGT科学チャートルールとIMGT定義ルールなどが挙げられる。

【0080】

IMGTは国際ImMunoGeneTics情報システムを指し、免疫遺伝学と免疫情報学の世界的な参照データベース(http：//www.imgt.org)である。IMGTは、ヒトやその他の脊椎動物の免疫グロブリン（IG）や抗体、T細胞受容体（TR）、主要組織適合性（MH）、および脊椎動物や非脊椎動物の免疫グロブリンスーパーファミリー（Igsf）、MHスーパーファミリー（MhSf）、免疫系関連タンパク質（RPI）を専門としている。

【0081】

本願では、「単離された」抗原結合タンパク質という用語は、一般に、それが生成された環境の成分（例えば、天然または組換え）から同定、単離および／または回収された抗原結合タンパク質を指す。それらが発生する環境の汚染成分は、通常、研究、診断または治療の使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、その他のタンパク質または非タンパク質の溶質が含まれることがある。単離抗原結合タンパク質または抗体は、通常、少なくとも1回の精製工程を経て調製される。

【0082】

本願では、「モノクローナル抗体」という用語は、一般に、実質的に均質な抗体群から得られた抗体、すなわち、存在し得る少数の自然変異を除いて、クラスタ内の個々の抗体は同一であることを指す。モノクローナル抗体は、通常、単一の抗原部位に対して高度に特異的である。さらに、従来のポリクローナル抗体製剤は、通常、異なる決定基に対して異なる抗体を持つが、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基クラスタに対して指向性を持つ。モノクローナル抗体は、その特異性に加え、ハイブリドーマ培養により合成することができ、他の免疫グロブリンに汚染されないという利点がある。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体の特性を示すものであり、特定の抗体製造方法を必要とするものではないと解釈される。例えば、本願で使用するモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ細胞で調製してもよいし、組換えDNA法により調製してもよい。

【0083】

本願では、「キメラ抗体」という用語は、一般に、可変領域がある種に由来し、定常領域が他の種に由来する抗体を指す。一般に、可変領域はげっ歯類などの実験動物の抗体（「親抗体」）に由来し、定常領域はヒトの抗体に由来するため、得られるキメラ抗体は親（例えばマウス由来）抗体よりもヒト個体に有害な免疫反応を引き起こす可能性が低くなる。

【0084】

本願では、「ヒト化抗体」という用語は、一般に、非ヒト抗体（例えば、マウス抗体）のCDRドメイン外のアミノ酸の一部または全部がヒト免疫グロブリンからの対応するアミノ酸で置換されている抗体を指す。また、CDR領域におけるアミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換または修飾も、抗体が特定の抗原と結合する能力を依然として保持している限り、許容される場合がある。ヒト化抗体は、任意に、ヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含み得る。「ヒト化抗体」は、元の抗体と同様の抗原特異性を保持している。非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンの配列に由来するキメラ抗体から最小限の構成とすることができる。特定の実施形態では、ヒト免疫グロブリン（アクセプター抗体）のCDRドメインの残基を、所望の特性、親和性および／または能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）（例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類）のCDRドメインの残基と置換されてもよい。特定の実施形態では、ヒト免疫グロブリンのFRドメインの残基は、対応する非ヒト残基と置換されてもよい。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体やドナー抗体には存在しないアミノ酸修飾を含んでいてもよい。ここれらの修飾は、結合親和性などの抗体の性能をさらに改善するために行われることができる。

【0085】

本願では、「完全ヒト抗体」とは、一般に、抗体をコードする遺伝子をヒトから遺伝子操作により抗体遺伝子欠損動物に導入することにより、動物で発現させた抗体を指す。抗体のすべての部分（抗体の可変領域と定常領域を含む）は、ヒト由来の遺伝子によってコード化されている。免疫上の副作用を大幅に軽減することができる。本分野で完全ヒト抗体を取得する方法としては、ファージディスプレイディープLs法、トランスジェニックマウス法、リボソームディスプレイディープLs法、RNA-ポリペプチド法などが考えられる。

【0086】

本願では、「結合」、「特異的結合」または「～に特異的」という用語は、一般に、測定可能で再現可能な相互作用を指し、例えば、 抗原と抗体の結合など、異種分子（生体分子を含む）の存在下で標的の存在を判定することができる。例えば、抗体は抗原結合ドメインを介してエピトープに結合するが、その結合には抗原結合ドメインとエピトープとの間に何らかの相補性が必要である。例えば、標的（エピトープであってもよい）と特異的に結合する抗体とは、他の標的と結合するよりも高い親和性、親和性、より容易に、および／またはより長い期間、この標的と結合するものである。抗体が抗原と「特異的に結合する」と言われるのは、その抗原結合ドメインを介して、ランダムに結合する無関係なエピトープよりも容易にエピトープと結合する場合である。「エピトープ」とは、抗原結合タンパク質（抗体など）と結合する抗原上の特定の原子団（糖側鎖、リン酸基、スルホニル基など）またはアミノ酸のことである。

【0087】

本願では、「K_D」および「KD」という用語は、互換的に用いられ、一般に、平衡解離定数を指し、「KD」は、解離速度定数（kdis、「解離速度（off-rate）（koff）」または「kd」としても知られる）と結合速度定数（kon、「結合速度（kon）」または「ka」としても知られる）の比を指す。抗原結合タンパク質（抗体など）の抗原に対する結合親和性は、結合速度定数（kon）、解離速度定数（kdis）、平衡解離定数（KD）を用いて表すことができる。結合・解離速度定数を決定する方法は当該分野でよく知られており、バイオフィルム干渉法（Bliophilm Interferometry：BLI）、ラジオイムノアッセイ（RIA）、平衡透析、表面プラズモン共鳴（SPR）、蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）、共免疫沈降（Co-IP）、タンパク質チップ技術などがあるが、それだけにとどまらない。異なる条件下(例えば、塩分濃度、pH)で測定した場合、測定したある特定のタンパク質-タンパク質相互作用の親和性は異なる可能性がある。

【0088】

本願では、「参照抗体」という用語は、一般に、本願に記載の抗原結合タンパク質が抗原TIGITとの結合を競合する抗体を指す。

【0089】

本願では、「ADCC」または「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」という用語は、一般に、多数の分泌型免疫グロブリンが特定の細胞傷害性エフェクター細胞（例えば、NK細胞、好中球およびマクロファージ）上のFc受容体（FcR）と結合し、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞と特異的に結合し、続いて標的細胞を細胞傷害性薬剤で殺傷できる細胞傷害の一形態を指す。ADCCを媒介する主要な細胞（例えばNK細胞）はFcγRIIIのみを発現しているが、単球はFcγRI、FcγRII、FeγRIIIを発現している（Ravetch and Kinet、 Annu.Rev.Immunol.9：457-92 (1991)) の464ページの表3を参照）。標的分子のADCC活性を評価するために、in vitroおよび／またはin vivo細胞毒性アッセイを行うことができ、例えば、in vitro ADCCアッセイは、米国特許第5，500，362号または第5，821，337号または米国特許第6，737，056号（Presta）に記載されているように実施することができる。このようなアッセイに使用できるエフェクター細胞には、PBMCやNK細胞などがある。代替的／付加的に、標的分子のADCC活性は、例えば、Clynesら、PNAS（USA）95：652-656（1998）に開示すような動物モデルにおいて、in vivoで評価され得る。例えば、Fc受容体（FcR）結合アッセイを実施して、抗体がFcγR結合を欠き（したがって潜在的にADCC活性を欠く）、FcRn結合能を保持していることを確認することができる。

【0090】

ADCC活性は、Fc領域を修飾することで低下させることができる。特定の実施形態では、Fcレセプターとの結合に影響を与える部位を、例えば、救済的なレセプター結合部位でない部位を除去することができる。特定の実施形態では、Fc領域は、ADCC部位を除去するように修飾されてもよい。ADCC部位は当技術分野で知られており、IgG1のADCC部位については、例えば、Sarmayら(1992) Molec. Immunol. 29 (5):633-9 を参照できる。

【0091】

本願では、「...の間」とは、一般に、アミノ酸フラグメントのC末端が第1のアミノ酸フラグメントのN末端と直接的または間接的に結合しており、そのN末端が第2のアミノ酸フラグメントのC末端と直接的または間接的に結合していることを指す。軽鎖においては、例えば、前記L-FR2のN末端が前記LCDR1のC末端に直接または間接的に連結され、前記L-FR2のC末端が前記LCDR2のN末端に直接または間接的に連結されている。例えば、L-FR3の前記N-末端は前記LCDR2のC-末端に直接または間接的に連結され、L-FR3の前記C-末端は前記LCDR3のN-末端に直接または間接的に連結されている。重鎖では、例えば、前記H-FR2のN末端が前記HCDR1のC末端に直接または間接的に連結され、前記H-FR2のC末端が前記HCDR2のN末端に直接または間接的に連結されている。例えば、前記H-FR3のN末端は、前記HCDR2のC末端に直接または間接的に連結され、前記H-FR3のC末端は、前記HCDR3のN末端に直接または間接的に連結されている。本願では、「第1のアミノ酸フラグメント」および「第2のアミノ酸フラグメント」は、同一または異なるアミノ酸フラグメントの何れであってもよい。

【0092】

本願では、「単離された」抗原結合タンパク質という用語は、一般に、それが生成された環境の構成要素（例えば、天然または組換え）から同定、単離および／または回収された抗原結合タンパク質を指す。それらが発生する環境の汚染成分は、通常、研究、診断または治療の使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、その他のタンパク質または非タンパク質の溶質が含まれることがある。単離抗原結合タンパク質または抗体は、通常、少なくとも1回の精製工程を経て調製される。本願に記載の単離抗原結合タンパク質は、一般に、TIGIT抗原でない抗原とは結合しない。

【0093】

本願では、「単離された核酸分子」または「単離されたポリヌクレオチド」という用語は、ゲノム、mRNA、cDNAまたは合成由来のDNAまたはRNA、あるいはそれらの何らかの組み合わせであって、自然界に存在するポリヌクレオチドの全てまたは一部に連結されていないものを指す。

【0094】

本願では、「ベクター」という用語は、一般に、適切な宿主細胞内で自己複製することができる核酸分子であって、挿入された核酸分子を宿主細胞内および／または宿主細胞間に移すものを指す。前記ベクターは主にDNAまたはRNAを細胞に挿入するために使用されるベクター、主にDNAまたはRNAを複製するために使用されるベクター、および主にDNAまたはRNAの転写および／または翻訳の発現に使用されるベクターが含まれていてもよい。前記ベクターはまた、前記の様々な機能を有するベクターを含む。前記ベクターは、適切な宿主細胞に導入されたときに、ポリペプチドに転写または翻訳されるポリヌクレオチドである場合もある。通常、前記ベクターを含む適切な宿主細胞を培養することにより、前記ベクターは、所望の発現産物を産生することができる。

【0095】

本願では、「細胞」という用語は、一般に、本願に記載される核酸分子からなるプラスミドまたはベクターを含むことができるかまたは含んでいた、あるいは本願に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントを発現することができる個々の細胞、細胞株または細胞培養物を指す。前記細胞は、単一の宿主細胞の子孫で構成されていてもよい。自然変異、偶発的変異または故意の変異により、娘細胞は必ずしも元の親細胞と形態的またはゲノム的に同一でなくてもよいが、本願に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現できるものであれば十分と考える。細胞は、本願に記載のベクターを用いてin vitroでトランスフェクトされた細胞を含み得る。前記細胞は、原核細胞（例えば大腸菌）または真核細胞（例えば酵母細胞、例えばCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞、HeLa細胞、HEK293細胞、COS-1細胞、NS0細胞またはミエローマ細胞）であってもよい。特定の実施形態では、前記細胞は、哺乳類細胞であってもよい。例えば、前記哺乳類細胞は、CHO-K1細胞であってもよい。本願では、「組換え細胞」という用語は、一般に、組換え発現ベクターが導入された細胞を指す。前記組換え宿主細胞には、特定の細胞だけでなく、これらの細胞の子孫も含まれる。

【0096】

本願では、「薬学的に許容されるアジュバント」という用語は、一般に、使用される用量および濃度において曝露された細胞または哺乳動物に対して無毒である薬学的に許容されるベクター、賦形剤または安定化剤を含み得る。通常、生理学的に許容されるベクターは、pH緩衝化された水溶液である。生理学的に許容されるベクターの例としては、リン酸塩、クエン酸塩、その他の有機酸などの緩衝剤、アスコルビン酸などの抗酸化剤、低分子量（約10残基未満）ペプチド、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジンなどのアミノ酸、 グルコース、マンノース、デキストリンなどの単糖類、二糖類などの糖質、EDTAなどのキレート剤、マンニトール、ソルビトールなどの糖アルコール、ナトリウムなどの塩形成対イオン、および／またはTWEEN（商標）、ポリエチレングリコール（PEG）やPLURONICS（商標）などの非イオン系界面活性剤などが挙げられる。

【0097】

本願では、「投与」および「治療」という用語は、動物、ヒト、被験者、細胞、組織、器官または生体液への外来性薬物、治療剤、診断剤または組成物の適用を意味する。「投与」および「処理」という用語は、治療法、薬物動態法、診断法、研究法および実験法を指す場合がある。細胞の処理には、試薬と細胞との接触、試薬と液体との接触、液体と細胞との接触が含まれる。「投与」および「処理」という用語は、試薬、診断薬、組成物結合によって、または他のin vitroおよび離体での細胞の処理によってという意味もある。「治療」とは、ヒト、動物または研究対象に適用される場合、治療処置、予防処置、研究および診断を意味し、TIGITコンジュゲートのヒトまたは動物、対象、細胞、組織、生理学的区画または生理学的液体への接触を含む。

【0098】

本願では、「治療」という用語は、本願のTIGIT抗原結合タンパク質およびその組成物のいずれかを含む治療剤を、当該治療剤が治療効果を有することが知られている疾患の1つまたは複数の症状を有する患者に、内服または外用として投与することを指す。患者には、通常、疾患の1つ以上の症状を緩和するのに有効な量（治療有効量）の治療薬が投与される。治療効果としては、疾患進行速度の低下、疾患状態の改善または軽減、寛解または予後の改善などが望まれる。例えば、癌に関連する症状の1つ以上が減少または除去された場合、個体は正常に「治療」される。これには、癌細胞の増殖の減少（または破壊）、疾患に由来する症状の減少、疾患を有する個体の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬物の投与量の減少、疾患の進行の遅延、および／または個体の生存の延長が含まれるが、これらに限定されるわけではない。

【0099】

本願では、「腫瘍」という用語は、悪性か良性かを問わず、すべての冗長（腫瘍性）細胞の成長および増殖、ならびにすべての前がんおよびがん性の細胞および組織を指す。

【0100】

本願では、「任意に」または「任意的に」という用語は、その後に説明する事象または状況が発生してもよいが、必ず発生するものではないことを指す。

【0101】

本願では、「含む」という用語は、一般に、含む、包含する、含有する、対象とすることを指す。場合によっては、「～のための」、「～からなる」という意味もある 。

【0102】

本願では、「約」という用語は、一般に、指定された数値以上または以下の0.5%-10%範囲内で変動することを指す。例えば、指定常値以上または以下の0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%、または10%範囲内で変動する。

【0103】

発明の詳細な説明

【0104】

抗原結合タンパク質

【0105】

一方、本願は、重鎖可変領域VHに少なくとも1つのCDRを含み得る単離抗原結合タンパク質を提供し、前記VHは、SEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0106】

一方、本願は、重鎖可変領域VHに少なくとも1つのCDRを含み得る単離抗原結合タンパク質を提供し、前記VHは、SEQ ID NO：54に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0107】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHに少なくとも1つのCDRを含んでいてもよく、前記VHは、SEQ ID NO：1、9、12、14および32のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0108】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質の前記VHは、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含み得る。

【0109】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、HCDR1を含んでいてもよく、前記HCDR1は、SEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列： GYSITSDYAを含み得る。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0110】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、HCDR2を含んでいてもよく、前記HCDR2は、SEQ ID NO：56に示すアミノ酸配列： IX₂X₃SGX₆X₇を含み得る。ここで、X₂はSまたはT、X₃はSまたはY、X₆はAまたはS、およびX₇はPまたはTであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0111】

例えば、前記HCDR2は、SEQ ID NO：4および42のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0112】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、HCDR2を含んでいてもよく、前記HCDR2は、SEQ ID NO：4に示すアミノ酸配列： ITSSGSTを含み得る。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0113】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、HCDR3を含んでいてもよく、ここで、前記HCDR3は、SEQ ID NO：57に示すアミノ酸配列： AX₂LX₄X₅X₆X₇YX₉X₁₀AMDYを含み得る。ここで、X₂ はRまたはS、X₄はDまたはG、X₅はFまたはT、X₆はDまたはG、X₇はNまたはY、X₉はGまたは存在せず、X₁₀はGまたは存在しない。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0114】

例えば、前記HCDR3はSEQ ID NO：5および43のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0115】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、HCDR3を含んでいてもよく、前記HCDR3は、SEQ ID NO：5に示すアミノ酸配列： ARLDFGNYGGAMDYを含み得る。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0116】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域H-FR1、H-FR2、H-FR3およびH-FR4を含み得る。

【0117】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域H-FR1を含んでいてもよく、前記H-FR1は、SEQ ID NO：58に示すアミノ酸配列： X₁VQLQESGPGLVKPSX₁₆X₁₇LSLTCTVX₂₅を含み得る。ここで、X₁はDまたはQ、X₁₆はEまたはQ、X₁₇はSまたはT、およびX₂₅はSまたはTであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0118】

例えば、前記H-FR1は、SEQ ID NO：23および35のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0119】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域H-FR1を含んでいてもよく、前記H-FR1は、SEQ ID NO：23に示すアミノ酸配列： QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSを含み得る。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0120】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域H-FR2を含んでいてもよく、前記H-FR2は、SEQ ID NO：60に示すアミノ酸配列： WX₂WIRQX₇PGX₁₀X₁₁X₁₂EWX₁₅GYを含み得る。ここで、 X₂はIまたはN、X7はFまたはP、X₁₀はKまたはN、X₁₁はG、RまたはK、X₁₂はLまたはV、X₁₅はIまたはMであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0121】

例えば、前記H-FR2はSEQ ID NO：24~26および36~37のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0122】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域H-FR2を含んでいてもよく、前記H-FR2は、SEQ ID NO：59に示すアミノ酸配列： WIWIRQPPGX₁₀X₁₁LEWIGYを含み得る。ここで、 X₁₀はKまたはN、X₁₁はGまたはKであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0123】

例えば、前記H-FR2はSEQ ID NO：2426のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0124】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域H-FR3を含んでいてもよく、前記H-FR3は、SEQ ID NO：61に示すアミノ酸配列： X₁YNPSLKSRX₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄DTSKNQFX₂₂LX₂₄LX₂₆X₂₇VTX₃₀X₃₁DTATYYCを含み得る。ここで、X₁はR、SまたはY、 X₁₀はIまたはV、X₁₁はSまたはT、X₁₂はFまたはI、X₁₃はSまたはT、X₁₄はRまたはV、X₂₂はFまたはS、X₂₄はKまたはQ、X₂₆はSまたはT、X₂₇はFまたはS、X₃₀はAまたはT、および、X₃₁はAまたはEであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0125】

例えば、前記H-FR3はSEQ ID NO：27、38および39のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0126】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域H-FR3を含んでいてもよく、前記H-FR3は、SEQ ID NO：27に示すアミノ酸配列： YNPSLKSRVTFSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYYCを含み得る。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0127】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域H-FR4を含んでいてもよく、前記H-FR4は、SEQ ID NO：62に示すアミノ酸配列： WGQGTX₆VX₈VSSを含み得る。ここで、X₆がLまたはS、X₈がIまたはTであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0128】

例えば、前記H-FR4はSEQ ID NO：28、40および41のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0129】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域H-FR4を含んでいてもよく、前記H-FR4は、SEQ ID NO：28に示すアミノ酸配列： WGQGTLVTVSSを含み得る。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0130】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域VHを含んでいてもよく、前記VHは、SEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列：X₁VQLQESGPGLVKPSX₁₆X₁₇LSLTCTVX₂₅GYSITSDYAWX₃₆WIRQX₄₁PGX₄₄X₄₅X₄₆EWX₄₉GYIX₅₃X₅₄SGX₅₇X₅₈X₅₉YNPSLKSRX₆₈X₆₉X₇₀X₇₁X₇₂DTSKNQFX₈₀LX₈₂LX₈₄X₈₅VTX₈₈X₈₉DTATYYCAX₉₈LX100X₁₀₁X₁₀₂X₁₀₃YX₁₀₅X₁₀₆AMDYWGQGTX₁₁₆VX₁₁₈VSSを含み得る。ここで、X1はDまたはQ、X₁₆はEまたはQ、X₁₇はSまたはT、X₂₅はSまたはT、X₃₆はIまたはN、X₄₁はFまたはP、X₄₄はNまたはK、X₄₅はG、KまたはR、X₄₆はLまたはV、X₄₉はIまたはM、X₅₃はSまたはT、X₅₄はSまたはY、X₅₇はAまたはS、X₅₈はPまたはT、X₅₉はR、SまたはY、X₆₈はIまたはV、X₆₉はSまたはT、X₇₀はFまたはI、X₇₁はSまたはT、X₇₂はRまたはV、X₈₀はFまたはS、X₈₂はKまたはQ、X₈₄はSまたはT、X₈₅はFまたはS、X₈₈はAまたはT、X₈₉はAまたはE、X₉₈はRまたはS、X₁₀₀はDまたはG、X₁₀₁はFまたはT、X₁₀₂はDまたはG、X₁₀₃はNまたはYである。 X₁₀₅はGまたは存在せず、X₁₀₆はGまたは存在せず、X₁₁₆はLまたはSであり、X₁₁₈はIまたはTであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0131】

例えば、前記抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHを含んでいてもよく、前記VHは、SEQ ID NO：1、9、12、14および32のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0132】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域VHを含んでいてもよく、前記VHは、SEQ ID NO：54に示すアミノ酸配列： QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSITSDYAWIWIRQPPGX₄₄X₄₅LEWIGYITSSGSTYNPSLKSRVTFSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYYCARLDFGNYGGAMDYWGQTLVTVSSを含み得る。ここで、以下 X₄₄はKまたはN、X₄₅はGまたはKであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0133】

例えば、前記抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHを含んでいてもよく、前記VHは、SEQ ID NO：9、12および14のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0134】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、重鎖定常領域を含んでいてもよく、当該重鎖定常領域は、ヒトIgG、例えば、ヒトIgG1由来であってもよい。特定の実施形態では、ヒトIgG1のFcドメインを修飾して、所望の特性（例えば、ADCC KO）を達成することができる。前記修飾は、アミノ酸の変異であってもよい。特定の実施形態では、IgG 1の修飾がL234A/L235Aとなることがある。すなわち、EU番号に従って, 234番および235番のアミノ酸がそれぞれロイシン (L) からアラニン (A) に変異する。特定の実施形態では、本願に記載の抗原結合タンパク質の重鎖定常領域は、野生型ヒトIgG1由来であってもよい。

【0135】

例えば、本願に記載の抗原結合タンパク質は、重鎖定常領域を含んでいてもよく、前記重鎖定常領域は、SEQ ID NO：35～36のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0136】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質、軽鎖可変領域VLに少なくとも1つのCDRを含んでいてもよく、前記VLは、SEQ ID NO：64に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0137】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質、軽鎖可変領域VLに少なくとも1つのCDRを含んでいてもよく、前記VLは、SEQ ID NO：63に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0138】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域VLに少なくとも1つのCDRを含んでいてもよく、前記VLは、SEQ ID NO：2、10、11、13、33および34のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0139】

本願では、前記抗原結合タンパク質のVLは、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含み得る。

【0140】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、LCDR1を含んでいてもよく、前記LCDR1は、SEQ ID NO：65に示すアミノ酸配列： QHVSX₅A を含み得る。ここで、X₅はNまたはTであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0141】

例えば、前記LCDR1は、SEQ ID NO：6および52のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0142】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、LCDR1を含んでいてもよく、前記LCDR1は、SEQ ID NO：6に示すアミノ酸配列： QHVSTAを含み得る。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0143】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、LCDR2を含んでいてもよく、前記LCDR2は、SEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列： SASを含み得る。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0144】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、LCDR3を含んでいてもよく、前記LCDR3は、SEQ ID NO：66に示すアミノ酸配列： QQX₃YX₅X₆PX₈Tを含み得る。ここで、X₃はHまたはY、X₅はIまたはS、X₆はLまたはT、およびX₈はWまたはYであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0145】

例えば、前記LCDR3はSEQ ID NO：8および53のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0146】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、LCDR3を含んでいてもよく、前記LCDR3は、SEQ ID NO：8に示すアミノ酸配列： QQHYITPYTを含み得る。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0147】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域L-FR1、L-FR2、L-FR3およびL-FR4を含み得る。

【0148】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域L-FR1を含んでいてもよく、ここで、前記L-FR1は、SEQ ID NO：68に示すアミノ酸配列： DIX₃MTQSX₈X₉X₁₀X₁₁X₁₂X₁₃SX₁₅GDRVX₂₀ITCX₂₄ASを含み得る。ここで、X₃はQまたはV、X₈はHまたはP、X₉はKまたはS、X₁₀はF、または S、X₁₁はLまたはM、X₁₂はFまたはS、X₁₃はAまたはT、X₁₅はIまたはV、X₂₀はSまたはT、X₂₄はKまたはRであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0149】

例えば、前記L-FR1はSEQ ID NO：15、16、 44および45のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0150】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域L-FR1を含んでいてもよく、前記L-FR1は、SEQ ID NO：67に示すアミノ酸配列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCX₂₄ASを含み得る。ここで、X₂₄はKまたはRであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0151】

例えば、前記L-FR1はSEQ ID NO：15および16のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0152】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域L-FR2を含んでいてもよく、前記L-FR2は、SEQ ID NO：70に示すアミノ酸配列： X₁X₂WYQQKPGX₁₀X11PKLIX₁₇を含み得る。ここで、X₁はLまたはV、X₂はAまたはN、X₁₀はKまたはQ、X₁₁はAまたはS、および、X₁₇は、HまたはYであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0153】

例えば、前記L-FR2はSEQ ID NO：17、18、46および47のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0154】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域L-FR2を含んでいてもよく、前記L-FR2は、SEQ ID NO：69に示すアミノ酸配列： X₁X₂WYQKPGKAPKLLIYを含み得る。ここで、X₁はLまたはV、X₂はAまたはNであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0155】

例えば、前記L-FR2はSEQ ID NO：17および18のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0156】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域L-FR3を含んでいてもよく、前記L-FR3は、SEQ ID NO：72に示すアミノ酸配列： YX₂X₃X4GVPX8RFX₁₁GX₁₃X₁₄SGTDFTX₂₁TIX₂₄SX₂₆QX₂₈EDX₃₁AX₃₃YYCを含み得る。ここで、X₂はLまたはR、X₃はQ、または Y、X4はSまたはT、X8はDまたはS、X₁₁はI、SまたはT、X₁₃はRまたはS、X₁₄はGまたはR、X₂₁はFまたはL、X₂₄はNまたはS、X₂₆はLまたはV、X₂₈はAまたはP、X₃₃はFまたはL、X₁₄はTまたはVであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0157】

例えば、前記L-FR3はSEQ ID NO：19-21と48-50のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0158】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域L-FR3を含んでいてもよく、前記L-FR3は、SEQ ID NO：71に示すアミノ酸配列： YX₂X₃SGVPSRFSGSX₁₄SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCを含み得る。ここで、X₂はLまたはR、X₃はQまたはY、X₁₄はGまたはRであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0159】

例えば、前記L-FR3はSEQ ID NO：19-21のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0160】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域L-FR4を含んでいてもよく、前記L-FR4は、SEQ ID NO：73に示すアミノ酸配列：FGX₃GTKLEIKを含み得る。ここで、X₃はGまたはQであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0161】

例えば、前記L-FR4はSEQ ID NO：22および51のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0162】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、フレーム領域L-FR4を含んでいてもよく、前記L-FR4は、SEQ ID NO：22に示すアミノ酸配列：FGQGTKLEIKを含み得る。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0163】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VLは、SEQ ID NO：64に示すアミノ酸配列：DIX₃MTQSX₈X₉X₁₀X₁₁X₁₂X1₃SX₁₅GDRVX₂₀ITCX₂₄ASQHVSX₃₁AX₃₃X₃₄WYQQKPGX₄₂X₄₃PKLLIX₄₉SASYX₅₄X₅₅X₅₆GVPX₆₀RFX₆₃GX₆₅X₆₆SGTDFTX₇₃TIX₇₆SX₇₈QX₈₀EDX₈₃AX₈₅YYCQQX₉₁YX₉₃X₉₄PX₉₆TFGX₁₀₀GTKLEIKを含み得る。ここで、 X₃はQまたはV、X₈はHまたはP、X₉はKまたはS、X₁₀はFまたはS、および、X₁₁はLまたはM、X₁₂はFまたはS、X₁₃はAまたはT、X₁₅はIまたはV、X₂₀はSまたはT、X₂₄はKまたはR、X₃₁はNまたはT、X₃₃はLまたはV、X₃₄はAまたはN、X₄₂はKまたはQ、X₄₃はAまたはS、X₄₉はHまたはY、X₅₄LまたはR、X₅₅ QまたはY、X₅₆SまたはT、X₆₀ DまたはS、X₆₃I、SまたはT、X₆₅ SまたはR、X₆₆GまたはR、X₇₃ LまたはF、X₇₆SまたはN、X₇₈ LまたはV、X₈₀AまたはP、X₈₃ FまたはL、X₈₅TまたはV、X₉₁ HまたはY、X₉₃IまたはS、X₉₄LまたはT X₉₆はWまたはY、X₁₀₀はQまたはGであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0164】

例えば、前記抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VLは、SEQ ID NO：2、10、11、13、33および34のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0165】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VLは、SEQ ID NO：63に示すアミノ酸配列：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCX₂₄ASQHVSTAX₃₃X₃₄WYQKPGKAPKLLIYSASYX₅₄X₅₅SGVPSRFSGSX₆₆SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHYITPYTFGQTKLEIKを含み得る。ここで、X₂₄はKまたはR、X₃₃はLまたはV、X₃₄はAまたはN、X₅₄はLまたはR、X₅₅はQまたはY、X₆₆はGまたはRであってもよい。例えば、IMGT定義規則に従って決定された配列であってもよい。

【0166】

例えば、前記抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VLは、SEQ ID NO：10、11および13のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0167】

本願に記載の抗原結合タンパク質は、軽鎖定常領域を含んでいてもよく、前記軽鎖定常領域は、ヒト軽鎖定常領域配列を含み得る。例えば、ヒトκ軽鎖定常領域を含み得る。例えば、本願に記載の単離抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域は、SEQ ID NO：31に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0168】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体重鎖可変領域CDR-HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含んでいてもよく、前記HCDR1はSEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR2はSEQ ID NO：56に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR3は、SEQ ID NO：57に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0169】

例えば、本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体重鎖可変領域CDR-HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含んでいてもよく、前記HCDR1はSEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR2はSEQ ID NO：4および42のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR3はSEQ ID NO：5および43のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0170】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体重鎖可変領域CDR-HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含んでいてもよく、前記HCDR1、前記HCDR2および前記HCDR3はそれぞれSEQ ID NO：3、4 および5に示すアミノ酸配列を順に含み得る。

【0171】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体重鎖可変領域CDR-HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含んでいてもよく、前記HCDR1、前記HCDR2および前記HCDR3はそれぞれSEQ ID NO：3、42 および43に示すアミノ酸配列を順に含み得る。

【0172】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体軽鎖可変領域CDR-LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含んでいてもよく、前記LCDR1はSEQ ID NO：65に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR2はSEQ ID NO：7 に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR3は、SEQ ID NO：66に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0173】

例えば、本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体軽鎖可変領域CDR-LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含んでいてもよく、前記LCDR1はSEQ ID NO：6および52のいずれかに示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR2はSEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR3は、SEQ ID NO：8および53のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0174】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体軽鎖可変領域CDR-LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含んでいてもよく、前記LCDR1、前記LCDR2および前記LCDR3はそれぞれSEQ ID NO：6、 7および8に示すアミノ酸配列を順に含み得る。

【0175】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体軽鎖可変領域CDR-LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含んでいてもよく、前記LCDR1、前記LCDR2および前記LCDR3はそれぞれSEQ ID NO：52、 7および53に示すアミノ酸配列を順に含み得る。

【0176】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含んでいてもよく、前記HCDR1はSEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR2はSEQ ID NO：56に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR3はSEQ ID NO：57に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR1はSEQ ID NO：65に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR2はSEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR3はSEQ ID NO：66に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0177】

例えば、本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含んでいてもよく、前記HCDR1はSEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列を含んでいてもよく、前記HCDR2はSEQ ID NO：4と42のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR3は、SEQ ID NO：5および43のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR1は、SEQ ID NO：6および52のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR2は、SEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR3は、SEQ ID NO：8および53のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0178】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含んでいてもよく、前記HCDR1、前記HCDR2、前記HCDR3、前記LCDR1、前記LCDR2および前記LCDR3はそれぞれ、SEQ ID NO：3、4、5、6、7、8に示すアミノ酸配列を順に含み得る。

【0179】

特定の実施形態では、本願に記載の単離抗原結合タンパク質は、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含んでいてもよく、前記HCDR1、前記HCDR2、前記HCDR3、前記LCDR1、前記LCDR2および前記LCDR3はそれぞれ、SEQ ID NO：3、42、43、52、７、53に示すアミノ酸配列を順に含み得る。

【0180】

本願では、前記単離された抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：64に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0181】

特定の実施形態では、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHは、SEQ ID NO：1、9、12、32 および14 のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：2、10、11、33、34および13のいずれか一項に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0182】

本願では、前記単離された抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：54に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：63に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0183】

特定の実施形態では、前記単離された抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHは、SEQ ID NO：9、12 および14 のいずれか一つに示すアミノ酸配列をを含み得、前記VLはSEQ ID NO：10、11 および13 のいずれか一つに示すアミノ酸配列をを含み得る。

【0184】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：9に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：10に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0185】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：9に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：11に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0186】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：12に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：13に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0187】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：14に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：11に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0188】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：1に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：2に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0189】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：32に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：34に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0190】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：32に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：33に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0191】

本願に記載の単離抗原結合タンパク質は、重鎖定常領域および軽鎖定常領域をさらに含んでいてもよく、前記重鎖定常領域はヒトIgG1の定常領域に由来していてもよく、前記軽鎖定常領域はヒトκ軽鎖定常領域に由来していてもよい。

【0192】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：9に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：10に示すアミノ酸配列を含み得、および、前記単離抗原結合タンパク質は重鎖定常領域と軽鎖可変領域を含んでいてもよく、前記重鎖定常領域はSEQ ID NO：29に示すアミノ酸配列を含み得、前記軽鎖定常領域は、SEQ ID NO：31に示すアミノ酸配列を含み得る。前記単離抗原結合タンパク質は、HB0030とも呼ばれる。

【0193】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：9に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：11に示すアミノ酸配列を含み得、および、前記単離抗原結合タンパク質は重鎖定常領域と軽鎖定常領域を含んでいてもよく、前記重鎖定常領域はSEQ ID NO：29に示すアミノ酸配列を含み得、前記軽鎖定常領域は、SEQ ID NO：31に示すアミノ酸配列を含み得る。前記単離抗原結合タンパク質は、HB0031とも呼ばれる。

【0194】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：12に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：13に示すアミノ酸配列を含み得、および、前記単離抗原結合タンパク質は重鎖定常領域と軽鎖定常領域を含んでいてもよく、前記重鎖定常領域は、SEQ ID NO：29に示すアミノ酸配列を含み得、前記軽鎖定常領域は、SEQ ID NO：31に示すアミノ酸配列を含み得る。前記単離抗原結合タンパク質は、HB0032とも呼ばれる。

【0195】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：14に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：11に示すアミノ酸配列を含み得、および、前記単離抗原結合タンパク質は重鎖定常領域と軽鎖定常領域を含んでいてもよく、前記重鎖定常領域は、SEQ ID NO：29に示すアミノ酸配列を含み得、前記軽鎖定常領域は、SEQ ID NO：31に示すアミノ酸配列を含み得る。前記単離抗原結合タンパク質は、HB0033とも呼ばれる。

【0196】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHはSEQ ID NO：1に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLはSEQ ID NO：2に示すアミノ酸配列を含み得、および、前記単離抗原結合タンパク質は重鎖定常領域と軽鎖定常領域を含んでいてもよく、前記重鎖定常領域はSEQ ID NO：30に示すアミノ酸配列を含み得、前記軽鎖定常領域は、SEQ ID NO：31に示すアミノ酸配列を含み得る。前記単離抗原結合タンパク質は、900424とも呼ばれる。

【0197】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHは、SEQ ID NO：32に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLは、SEQ ID NO：34に示すアミノ酸配列を含み得、および、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖定常領域と軽鎖定常領域を含んでいてもよく、前記重鎖定常領域は、SEQ ID NO：30に示すアミノ酸配列を含み得、前記軽鎖定常領域がSEQ ID NO：31に示すアミノ酸配列を含み得る。前記単離抗原結合タンパク質は、900423とも呼ばれる。

【0198】

例えば、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含んでいてもよく、前記VHは、SEQ ID NO：32に示すアミノ酸配列を含み得、前記VLは、SEQ ID NO：33に示すアミノ酸配列を含み得、および、前記単離抗原結合タンパク質は、重鎖定常領域と軽鎖定常領域を含んでいてもよく、前記重鎖定常領域は、SEQ ID NO：30に示すアミノ酸配列を含み得、前記軽鎖定常領域がSEQ ID NO：31に示すアミノ酸配列を含み得る。前記単離抗原結合タンパク質は、900428とも呼ばれる。

【0199】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、前記TIGITタンパク質との結合について参照抗体と競合することができ、前記参照抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み得、前記参照抗体の前記重鎖可変領域がHCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み得、前記HCDR1がSEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR2は、SEQ ID NO：56に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR3は、SEQ ID NO：57に示すアミノ酸配列を含み得、前記参照抗体の前記軽鎖可変領域は、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含み得、前記LCDR1は、SEQ ID NO：65に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR2は、SEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR3は、SEQ ID NO：66に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0200】

本願では、前記単離抗原結合タンパク質は、前記TIGITタンパク質との結合について参照抗体と競合することができ、前記参照抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み得、前記参照抗体の前記重鎖可変領域がHCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み得、前記HCDR1がSEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR2は、SEQ ID NO：4に示すアミノ酸配列を含み得、前記HCDR3は、SEQ ID NO：5に示すアミノ酸配列を含み得、前記参照抗体の前記軽鎖可変領域は、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含み得、前記LCDR1は、SEQ ID NO：6に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR2は、SEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み得、前記LCDR3は、SEQ ID NO：8に示すアミノ酸配列を含み得る。

【0201】

本願に係るタンパク質、ポリペプチドおよび/またはアミノ酸配列はまた、少なくとも以下の範囲を含むものと理解されるべきである：前記タンパク質またはポリペプチドと同一または類似の機能を有する変異体または同族体。

【0202】

本願では、前記変異体は、前記タンパク質および/または前記ポリペプチド(例えば、本願に記載されている抗原結合タンパク質)のアミノ酸配列において1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、）または追加されたタンパク質またはポリペプチドであってもよい。例えば、前記機能的変異体は、少なくとも1個、例えば1～30個、1～20個または1～10個、例えば1、2、3、4または5個のアミノ酸置換、欠失および／または挿入によるアミノ酸変化を既に有するタンパク質またはポリペプチドからなるものであってもよい。前記機能的変異体は、実質的に、変化する(置換、欠落、追加など)前の前記タンパク質または前記ポリペプチドの生物学的特性を保持することができる。例えば、前記機能的変異体は、改変前の前記タンパク質または前記ポリペプチドの生物学的活性の少なくとも60%、70%、80%、90%、または100% を維持していてもよい (例えば、に抗原結合する能力)。例えば、前記置換は、保守的な置換であってもよい。

【0203】

本願では、前記抗原結合タンパク質のアミノ酸配列の一部は、特定種の抗体における対応するアミノ酸配列と相同であってもよいし、特定のクラスに属するものであってもよい。例えば、抗体の可変領域と定常領域の両方は、動物種（例えば、ヒト）の抗体の可変領域と定常領域の両方に由来してもよい。本願では、前記同族体は、前記タンパク質および/または前記ポリペプチド(例えば、本願に記載その単離抗原結合フラグメント)のアミノ酸配列と少なくとも約85% (例えば、少なくとも約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%以上の)の配列相同性を有するタンパク質またはポリペプチドであってもよい。

【0204】

本願では、相同性は一般的に2つ以上の配列間の類似性、類似性または関連性と定義される。「配列相同性率」は、マッチングする2つの配列を比較ウィンドウで比較し、両配列に同じ核酸塩基（例えばA、T、C、G、）または同じアミノ酸残基（例えばAla、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Glyn、CysおよびMet）がある位置数を求め、一致した数の数を算出することができる。 Leu、 Ile、 Phe、 Tyr、 Trp、 Lys、 Arg、 His、 Asp、 Glu、 Asn、 Gln、 Cys、 Met）より、一致した位置の数を求め、その数を比較ウィンドウ内の全位置数（ウィンドウサイズ）で割り、100を乗じたものを配列相同率として算出した。配列相同性率を決定するための比較は、例えば、BLAST、BLAST-2、ALIGNまたはMegalign (DNASTAR)ソフトウェアのような、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当技術分野で知られている様々な方法で実施され得る。当業者は、比較される全長配列範囲内または標的配列領域内で最大の比較を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を比較するための適切なパラメータを決定することができる。これらの相同性は、FASTAおよびBLASTの方法で測定することもできる。FASTAアルゴリズムの説明は、以下を参照されたい。R．PearsonおよびD．J．Lipman.「Improved tools for biological sequence comparison」、Proc.Natl．Acad．Sci．）、 85：2444-2448、 1988、およびD.J．LipmanおよびW.R．Pearson 「Rapid and sensitive protein similarity searches」、Science、227：1435--1441、1989。BLASTアルゴリズムの説明は、以下を参照されたい。S.Altschul、W．Gish、W．Miller、E．W．MyersおよびDLipman.「Basic local alignment search tool」、 Journal of Molecular Biology、 215：403-410、 1990。

【0205】

本願に記載の抗原結合タンパク質（例えば、TIGIT抗体）は、TIGIT抗原を特異的に結合することが可能である。「特異的結合」 TIGIT抗原の抗原結合タンパク質 (例えば、抗体) は、通常、約1nMのKD値またはより高い親和性 (例えば、1 nM、100 pM、10 pM、2 pMまたは1 pM) でTIGITに結合することができるが、TIGIT配列を欠く他のタンパク質には結合しない。例えば、「特異的結合」 TIGITに対する抗体は、ヒトCD226、ヒトCD155、およびヒトCD112に結合しない。本願に記載の抗原結合タンパク質（例えば、抗体）は、TIGIT抗原またはその標識体（例えば、蛍光標識TIGIT抗原）に特異的に結合し、TIGITエピトープを欠く他のタンパク質には結合しない。抗原結合タンパク質（例えば、抗体）がTIGIT抗原と結合するかどうかは、当該技術分野で知られている任意のアッセイを使用して決定することができる。結合親和性を決定するための当技術分野で既知のアッセイの例には、表面プラズモン共鳴（例えば、BIACORE）または類似の技術（例えば、KinExaまたはOCTET）が含まれる。特定の実施形態では、本願に記載のTIGIT抗体は、サルおよび／またはマウスのTIGITとも交差反応することができる。例えば、フロー分析技術や酵素結合免疫測定法などで検出される。本願では、「交差反応性」とは、抗体が他の生物種由来の相同タンパク質と反応する能力を指す。

【0206】

本願に記載の抗原結合タンパク質（例えば、TIGIT抗体）は、TIGITのCD155リガンドへの結合を阻害するものである。ブロッキング試験は、例えば、前記抗原結合タンパク質（例えば、TIGIT抗体）と抗原（または、抗原を発現し得る細胞）および抗原のリガンド（または、リガンドを発現する細胞）とを混合し、抗原結合タンパク質が抗原のリガンドと競合的に結合する能力を検出マーカーの強度（例えば、蛍光強度または濃度）に基づき反応させる競合アッセイを用いて実施可能である。例えば、本願に記載の抗原結合タンパク質（例えば、TIGIT抗体）によるTIGIT抗原とCD155リガンドの結合をブロックするためのIC50は、フローサイトメトリーを用いて検出した場合、約0.1μg/ml-0.05μg/mlである。

【0207】

核酸、ベクター、細胞

【0208】

一方、本願はまた、単離された1種または複数の核酸分子を提供する。前記1種または複数の核酸分子は、本願に記載の抗原結合タンパク質をコードしていてもよい。例えば、前記1つ以上の核酸分子の各々は、完全な前記抗原結合タンパク質またはその一部（例えば、HCDR1-3、LCDR1-3、VL、VH、軽鎖または重鎖の1つ以上）をコードしていてもよい。

【0209】

本願に記載の核酸分子は、単離され得る。例えば、（i）in vitro、例えばポリメラーゼ連鎖反応（PCR）増幅によって、（ii）クローン組み換えによって、（iii）精製、例えば酵素消化およびゲル電気泳動による段階的分離によって、または（iv）合成、例えば化学合成によって製造または合成され得る。いくつかの実施形態では、前記単離された核酸は、組換えDNA技術によって調製された核酸分子である。

【0210】

本願では、前記抗体をコードする核酸、その抗原結合フラグメントは、当技術分野で公知の様々な方法によって調製することができるが、これらに限定されず、制限フラグメント操作を用いたオーバーラップ伸長PCR、または合成オリゴヌクレオチドを用いて、調製することができる。（詳細は、Sambrookら、Molecular Cloning、 A Laboratory、Manual、 Cold Spring Harbor Laboratory Press、 Cold Spring Harbor、 N.Y.、 1989、 および Ausube et al. Current Protocols in Molecular Biology、 Greene Publishing and Inc. Wiley-Interscience、 New York N.Y.、 1993を参照されたい）。

【0211】

一方、本願は、本願に記載の1種また複数の核酸分子を含む、1種また複数のベクターを提供する。各ベクターは、前記核酸分子を1種また複数を含み得る。また、前記ベクターは適切な宿主細胞において、適切な条件下で当該ベクターを選ぶマーカー遺伝子などの他の遺伝子を含み得る。また、前記ベクターはコード領域が適切な宿主において正しく発現されることを可能にする発現制御要素を含み得る。そのような制御要素は本分野の技術者に周知であり、例えば、それらは、プロモーター、リボソーム結合部位、エンハンサー、および遺伝子転写またはmRNA翻訳を調節する他の制御要素を含み得る。いくつかの実施形態では、前記発現制御配列は、調整可能な要素である。前記発現制御配列の特定の構造は、種または細胞タイプの機能によって異なり得るが、通常、TATA、キャッピング配列、CAAT配列などの転写および翻訳開始に関与する5 '非転写配列と5'および3 '非翻訳配列を含み得る。例えば、5’非転写発現制御配列はプロモータ領域を含み得、プロモータ領域は転写制御のための核酸に機能的に連結するプロモータ配列を含み得る。前記発現制御配列は、エンハンサー配列または上流アクチベーター配列をさらに含み得る。本願では、好適なプロモーターは、例えば、SP6、T3及びT7ポリメラーゼのプロモーター、ヒトU6RNAプロモーター、CMVプロモーター及びその人工異種プロモーター（例えばCMV）であって、そのプロモーターの一部が他の細胞タンパク質（例えばヒトGAPDH、グリセルアルデヒド3-リン酸脱水素酵素）遺伝子のプロモーターの一部に融合してもよく、これらはさらにイントロンを含んでも含まなくてもよい。本願に記載の１種または複数の核酸分子は、発現制御要素に作動可能に連結することができる。前記ベクターは、例えば、プラスミド、粘菌、ウイルス、ファージ、または、例えば、遺伝子工学において通常使用される他のベクターから構成され得る。例えば、前記ベクターは、発現ベクトルである。

【0212】

一方、本願は、本願は宿主細胞を提供し、前記宿主細胞は、本願に記載の1つ以上の核酸分子および／または本願に記載の1つ以上のベクターを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、各種または各宿主細胞は本出願に記載の1種または1つの核酸分子またはベクターを含み得る。いくつかの実施形態では、各種または各宿主細胞は本出願に記載の複数（例えば、2つ以上）または複数種類（例えば、2種類以上）の核酸分子またはベクターを含み得る。例えば、本願に記載のベクターは、前記宿主細胞、例えば、植物、菌類または酵母の細胞等の真核生物細胞に導入することができる。本願に記載のベクターは、電気穿孔、lipofectineトランスフェクション、lipofectaminトランスフェクションなどの当分野で知られている方法によって、前記宿主細胞に導入されてもよい。

【0213】

調製方法

【0214】

一方、本願は、前記抗原結合タンパク質を調製するための方法を提供する。前記方法は、本願に記載の前記宿主細胞を、前記抗原結合タンパク質の発現が可能な条件下で培養する、ことを含んでいてもよい。これは、例えば、適切な培地、適切な温度およびインキュベーション時間などを用いることにより行うことができ、当業者には公知の方法である。

【0215】

本願の抗原結合タンパク質（例えば、抗TIGIT抗体）の製造には、モノクローナル抗体の製造に適した任意の方法を使用することができる。例えば、動物は、結合または天然に存在するTIGITホモ二量体またはそのフラグメントで免疫されてもよい。アジュバント、免疫賦活剤、ブースター免疫接種など、適切な免疫方法を用いることができ、1つまたは複数の経路を用いてもよい。

【0216】

TIGITの任意の適切な形態は、TIGITに特異的な非ヒト抗体を産生するための免疫原（抗原）として使用することができ、当該抗体の生物学的活性をスクリーニングすることが可能である。刺激免疫原は、天然のホモダイマーを含む全長成熟ヒトTIGIT、または単一／複数のエピトープを含むペプチドであってもよい。免疫原は単独で、または当技術分野で知られている1つ以上の免疫原性増強剤と組み合わせて使用することができる。免疫原は、自然由来で精製される場合もあれば、遺伝子修飾された細胞で作られる場合もある。免疫原をコードするDNAは、ゲノム由来でも非ゲノム由来であってもよい（例えば、cDNA）。免疫原をコードするDNAは、適切な遺伝子ベクターを用いて発現させることができ、前記ベクターとしては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、プラスミドおよび非ウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0217】

本願の抗ヒトTIGIT抗体を製造するための例示的な方法を実施例1に記載する。

【0218】

ヒト化抗体は、IgM、IgD、IgG、IgAおよびIgEを含む任意のタイプの免疫グロブリンから選択され得る。本願では、抗体はIgG抗体であり、IgG1アイソタイプを使用する。必要な定数構造ドメインの配列の最適化は、以下の実施例に記載の生物学的アッセイで抗体をスクリーニングし、所望の生物学的活性を得ることによって達成することができる。ここでも、どちらのクラスの軽鎖も、本明細書の化合物および方法に使用することができる。具体的には、κ、λ鎖またはその変異体が、本願の化合物および方法において利用可能である。

【0219】

本願の抗ヒトTIGIT抗体をヒト化するための例示的な方法を、実施例2に記載する。

【0220】

本願の抗原結合タンパク質またはそのフラグメントのDNA分子の配列は、PCRを用いた増幅やゲノムライブラリースクリーニングなどの従来技術によって、得ることができる。さらに、軽鎖と重鎖のコード配列を融合して、単鎖抗体を形成することもできる。

【0221】

目的の配列が得られれば、組換え法によって大量に入手することができる。これは通常、ベクターにクローニングして細胞に移植し、増殖した宿主細胞から目的の配列を常法により単離することで行われる。

【0222】

また、特にフラグメントの長さが短い場合には、人工合成により配列を合成することも可能である。多くの場合、非常に長いフラグメントは、いくつかの小さなフラグメントを合成し、それらをライゲーションすることで得ることができる。そして、この核酸分子は、当技術分野で知られている様々な既存のDNA分子（またはベクターなど）や細胞に導入することができる。

【0223】

本願はまた、上記のような適当な核酸分子と適当なプロモーターまたは制御配列とを含むベクターにも関する。これらのベクターは、タンパク質を発現できるように適切な宿主細胞を形質転換するために使用できる。宿主細胞は、細菌細胞などの原核細胞、あるいは酵母細胞などの下等真核細胞、あるいは哺乳類細胞などの高等真核細胞であってもよい例えば、動物細胞としては、CHO-S、CHO-K1、HEK-293細胞などを挙げることができる（ただし、これらに限定されるものではない）。

【0224】

宿主細胞を組換えDNAで形質転換するための本願に記載のステップは、当技術分野でよく知られた技術で実施することができる。得られた形質転換体は、常法により培養することができ、その形質転換体は本願核酸分子によりコードされるポリペプチドを発現する。使用する宿主細胞によっては、通常の培地を用いて適切な条件下で培養される。典型的には、形質転換された宿主細胞は、本願の抗原結合タンパク質の発現に適した条件下で培養される。次に、本願の抗原結合タンパク質は、プロテインA-セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、分子篩クロマトグラフィーまたはアフィニティクロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製ステップ、および当業者に知られている従来の分離および精製手段を使って精製することができる。

【0225】

得られたモノクローナル抗体は、通常の方法で同定することができる。例えば、モノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降法またはin vitro結合アッセイ（例えば、フローサイトメトリーソーティング（FACS）、ラジオイムノアッセイ（RIA）または酵素結合免疫吸着測定法（ELISA））により決定することができる。

【0226】

医薬組成物

【0227】

さらに、本願は組成物を提供する。特定の実施形態では、前記組成物は、本願の抗原結合タンパク質若しくはその融合タンパク質若しくはそのADCまたは対応するCAR-T細胞、および薬学的に許容されるベクターを含む医薬組成物であってよい。典型的には、これらの物質は、非毒性で不活性かつ薬学的に許容される水性ベクター媒体に配合されてもよく、この場合、pHは典型的には約5～8であってもよく、例えば、pHは約6～8であってもよく、pHは配合される物質の性質および治療されるべき状態に応じて変化してもよい。製剤化された医薬組成物は、従来の経路によって投与することができ、これには次のものが含まれる（ただし、これらに限定されない）：腫瘍内投与、腹腔内投与、静脈内投与、または局所的投与。

【0228】

また、本願に記載の抗原結合タンパク質は、例えば、キメラ抗原受容体T細胞免疫療法（CAR-T）用の前記抗体等のためのヌクレオチド配列によって細胞内に発現する細胞治療薬であってもよい。

【0229】

本願に記載の医薬組成物は、TIGITタンパク質分子に直接結合することができるため、TIGIT関連疾患の予防および治療に使用することができる。また、他の治療薬を併用することもできる。

【0230】

本願の医薬組成物は、本願に記載の抗原結合タンパク質の安全かつ有効な量（例えば、0.001～99wt％、0.01～90wt％、または0.1～80wt％）、および薬学的に許容できるアジュバンド（キャリアまたは賦形剤を含む場合がある）を含み得る。このようなベクターは、食塩、緩衝液、グルコース、水、グリセリン、エタノール、およびこれらの組み合わせを含むことができるが、これらに限定されるものではない。製剤は、投与形態に合わせる必要がある。本願に記載の医薬組成物は、例えば、生理食塩水またはグルコースおよび他の賦形剤を含む水溶液を常法により調製し、注射剤の形態とすることができる。注射剤、溶液などの医薬組成物は、無菌状態で製造することが望ましい。有効成分は、治療上有効な量、例えば、1日当たり約1μg/kg体重から約5mg/kg体重で投与される。さらに、本願に記載の抗原結合タンパク質は、他の治療薬と併用することも可能である。

【0231】

本明細書に記載された抗原結合タンパク質または医薬組成物は、良好な医療行為に合致した方法で製剤化、投与、および管理することができる。この文脈で考慮すべきことは、治療される特定の状態、治療される特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、状態の病因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および開業医に知られている他の要因が含まれることである。治療薬（例えば、抗TIGIT抗体）は、必要ではないが、任意に、検討中の状態を予防または治療するために現在使用されている1つまたは複数の薬剤と同時に処方および／または投与される。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する治療薬（例えば、抗TIGIT抗体）の量、状態または治療の種類、および上述した他の要因に依存する。これらの薬剤は、一般に経験的/臨床的に適切と判断される任意の用量および経験的/臨床的に適切と判断される任意の経路で投与することができる。併用療法で投与される抗体の用量は、個別の治療と比較して減少させることができる。この治療法は、従来の技術で容易に経過を観察することができる。

【0232】

方法と用途

【0233】

一方、本願は、薬剤の調製における前記抗原結合タンパク質、前記核酸分子、前記ベクター、前記細胞および／または前記医薬組成物の使用について提供するものである。当該医薬品は、TIGIT関連疾患の予防、緩和および/または治療に用いられる。特定の実施形態では、記載されたTIGIT関連疾患は、T細胞機能障害性疾患であってもよい。T細胞の機能不全はT細胞の枯渇に反映され、NK細胞の増強とT細胞の活性化により、身体の免疫活性を高めて病気の治療や遅延、寛解を実現できる。例えば、前記TIGIT関連疾患は、腫瘍、癌または感染症であってもよい。例えば、前記TIGIT関連疾患は、CD155陽性またはPVR陽性の腫瘍、癌、免疫疾患または感染症であってもよく、中でも、腫瘍、癌、免疫疾患または感染症が挙げられる。特定の実施形態では、前記腫瘍は、以下からなる群から選択され得る：乳癌、結腸癌、肝臓癌、リンパ腫、軟骨肉腫、多発性骨髄腫、肺癌、腎臓癌、メラノーマ、Tリンパ腫、膵臓癌。例えば、前記腫瘍は、大腸癌である。例えば、本願に記載の抗原結合タンパク質は、以下の群から選択される腫瘍の動物モデルにおいて腫瘍の増殖を阻害する：乳癌、大腸癌、肝臓癌、リンパ腫、軟骨肉腫、多発性骨髄腫、肺癌、腎癌、メラノーマ、Tリンパ腫および膵臓癌。

【0234】

本願の抗原結合タンパク質は、腫瘍の成長を抑制し、および／または腫瘍細胞の増殖を抑制することができる。いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、大腸癌を含む。いくつかの実施形態では、前記腫瘍または癌は、TIGITの発現が異常な腫瘍または癌である。また、本願は、後述する生体試料におけるTIGITの発現を検出する方法を提供する。特定の実施形態では、前記方法は、生体試料を、前記抗原結合タンパク質がTIGITと結合できる条件下で本願に記載の抗原結合タンパク質と接触させること、および前記抗原結合タンパク質とTIGITとの間に複合体が形成されているか否かを検出することを含む。例えば、前記腫瘍または癌は、非腫瘍または癌の試料と比較してTIGITの発現が上昇した腫瘍または癌である。このような方法はin vitro法であっても、体内法であってもよい。本願に記載の抗原結合タンパク質は、例えば、イムノアッセイにおいて使用することができ、前記イムノアッセイは、例えば、免疫組織化学（IHC）、免疫蛍光（IF）、免疫ブロッティング（例えば、タンパク質ブロッティング）、フローサイトメトリ（例えば、FAGS）および酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）等を含む。特定の実施形態では、例えばTIGITが患者選択のためのバイオマーカーである場合、前記抗原結合タンパク質は、本願に記載の抗原結合タンパク質および／または融合タンパク質による治療に適した被験者を選択するために使用される。本願はまた、医学的状態（例えば、癌または免疫機能不全）に罹患している対象を診断するための方法における前記抗原結合タンパク質の使用を提供し、前記方法は、対象から得られた試料を本願の前記抗原結合タンパク質と接触させて、結合した前記抗原結合タンパク質および／または融合タンパク質の存在を検出することにより、試料中のTIGITの存在または発現レベルを決定することを含む。

【0235】

例えば、大腸癌のマウスモデルにおいて、本願に記載の抗原結合タンパク質（例えば、TIGIT抗体）は、腫瘍の成長を遅らせることができる。

【0236】

本願の抗原結合タンパク質は、例えば、試料を検査し、それによって診断情報を提供するようなアッセイ用途に使用することができる。

【0237】

本願では、使用される試料（サンプル）には、細胞、組織試料、生検試料が含まれる。本願では、「生検」という用語は、当業者に知られているあらゆる種類の生検を含むものとする。したがって、本願で使用する生検は、例えば、内視鏡的方法、または臓器の穿刺もしくは針生検によって調製された組織サンプルで構成することができる。

【0238】

本願で使用される試料には、固定または保存された細胞または組織試料が含まれる。

【0239】

本願は、本願の抗原結合タンパク質を含有するキットを提供するものである。特定の実施形態では、前記キットは、容器、使用説明書、緩衝剤などを含んでいてもよい。例えば、本願のプロト結合タンパク質は、アッセイプレートに固定化されていてもよい。

【0240】

以下の実施例は、理論に限定されることを意図するものではなく、本出願のタンパク質、調製方法、用途等を説明するためにのみ使用され、本願の範囲を限定するために使用されるものではない。以下の実施例では具体的な条件が示されていない実験方法は、通常、Sambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989) に記載されているような従来の条件、あるいはメーカーが推奨する条件に従っている。特に明記しない限り、割合と部数は重量割合と重量部数である。

【0241】

実施例

【0242】

実施例1 ヒトTIGITに対するマウスモノクローナル抗体-一次抗体の作製

【0243】

1.1 マウス由来モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞の作製

【0244】

マウス由来のモノクローナル抗体の作製方法は、1975年にKohlerとMilsteinによって発明されたハイブリドーマ作製技術を用いた（Nature、 1975、 256： 495-497）。ヒトTIGITのマウスFcタグタンパク質(ACRO、 # tit-h5253)とフロイントアジュバントを乳化した後、BALB/c、CD1、C57BL/6の各系統に5匹ずつ皮下免疫を行った。3回の免疫後、血清を採取し、ELISAによる効力、FACSによる結合活性と機能活性を検査し、脾臓細胞とSP2/0骨髄腫細胞との融合に最適なマウスを選択した。ハイブリドーマポリクローナル細胞をHATでスクリーニングした後、ヒトTIGITと特異的に結合し、TIGIT-CD155結合をブロックできるポリクローナル細胞株をELISA法、FACS法で単クローン性をスクリーニングし、特異的に結合するモノクローン細胞株を再度ELISA、FACS法でスクリーニングして、サル、マウスTIGITとの結合性をテストしたところ TIGIT-CD155とTIGIT-CD122の結合をブロックするモノクローナル抗体のFACSスクリーニングを行い、その後、スクリーニングしたモノクローナル細胞株の細胞機能活性測定とアフィニティ（Biacore）スクリーニングを行って、配列解析用のヒトTIGIT抗体発現モノクローナルハイブリドーマ細胞株を得、スクリーニングデータを表1に示した。

【表1】

【0245】

ハイスループット・スクリーニングの結果、ヒトとサル両方の結合活性に高い親和性を持ち、TIGITの2つのリガンドであるCD155とCD122を同時に遮断し、生物活性を持つ最終モノクローナルハイブリドーマ細胞株を得ることに成功した。上記表1のハイブリドーマ細胞株は、ヒト化されたものである。

【0246】

実施例2 抗TIGIT抗体の可変領域遺伝子配列のクローニングとヒト化

【0247】

2.1 ハイブリドーマ細胞における抗体可変領域遺伝子のクローニング

【0248】

ハイブリドーマ細胞株が発現するマウス抗体の可変領域のcDNA配列は、TAKARAの5'RACE技術の原理に基づいてクローニングされた。簡単に説明すると、SMARTer 5' RACE合成実験キット(TAKARA、#634859) を用いて、説明書に従って、重鎖および軽鎖の可変領域遺伝子特異的cDNAを合成した。cDNA配列の5'および3'末端をPCRプライマーで修飾した。前記プライマーは、重鎖および軽鎖可変領域cDNAにそれぞれ適切なリード配列を付加するように設計されており、得られたPCR産物を既存の組み換え抗体発現重鎖ベクターpHB-Fcおよび軽鎖ベクターpHB-Cκにシームレスにクローニングすることを可能にするものである。pHB-Fc 発現ベクターは、抗体ADCCノックアウト（KO）効果を有する CH₂上の L234A および L235A（Eu エンコード）変異を有するヒト IgG1 重鎖定常領域の遺伝子配列を含み、 pHB-Cκ ベクターは、ヒト κ 軽鎖定常領域の遺伝子配列を含む。重鎖および軽鎖可変領域PCR増幅産物をIn-fusionクローニング試薬(TAKARA、 #639650) により発現ベクターにクローニングし、大腸菌DH5α受容体細胞 (YB Biotech、 # FYE607-80VL) に形質転換させた。モノクローナルコロニーはサンガーシークエンス用に選択され、抗体可変領域配列を得るために分析された。B3/29F6が発現する抗TIGIT抗体の可変領域の配列は以下の通りであった。

【0249】

B3/29F6 VH SEQ ID NO:1
DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWIWIRQFPGNKVEWMGYITSSGSTSYNPSLKSRISFTRDTSKNQFFLQLTSVTTEDTATYYCARLDFGNYGGAMDYWGQGTSVTVSS

【0250】

B3/29F6 VL SEQ ID NO:2
DIVMTQSHKFMSTSIGDRVSITCKASQHVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSASYRYTGVPDRFTGSRSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYITPYTFGGGTKLEIK

【0251】

下線部がCDR（IMGTで定義されたもの、配列はそれぞれ以下の通り）：

【表2】

【0252】

2.2 IgG1 野生型キメラ発現ベクターの構築

【0253】

IgG1野生型キメラ抗体とADCC KOキメラ抗体は同じ軽鎖ベクターを共有しており、違いはヒト重鎖定常領域配列を含むベクター上の重鎖CH₂のアミノ酸234と235で、ADCC KO型はA234/A235、野生型はL234/L235である。IgG1野生型キメラ重鎖発現ベクターは、2.1に記載した方法と同様にして構築した。すなわち、重鎖可変領域遺伝子リード配列を含むプライマーでPCRにより増幅し、ヒト重鎖定常領域配列（CH2 L234/L235）を含むベクターにシームレスライゲーション法によりクローニングし、IgG1野生型キメラ発現ベクターの構築を完成させた。

【0254】

2.3 キメラ抗体の発現

【0255】

2.1および2.2で得られた発現ベクターを大腸菌で増幅し、エンドトキシン除去プラスミド抽出キット（TianJian Biotech、＃DP117）を用いて、キメラ抗体の一過性トランスフェクションに十分なプラスミドを調製した。発現に用いた宿主細胞は、CHO-S細胞（Thermo Fisher、 # R80007）である。CHO-S細胞は、別々に調製した2種類の重鎖ベクターと軽鎖ベクターを、ポリエーテルイミド（PEI、ポリサイエンス、# 24765-1）と混合してリポソーム複合体を形成し、インキュベーター内で5～7日間培養してトランスフェクションを行った。細胞培養上清を遠心分離で回収し、プロテインAアフィニティクロマトカラムで精製し、ADCC KO型ヒトマウスキメラ抗体（番号900424）とIgG1野生型ヒトマウスキメラ抗体（タンパク質番号900445）を取得した。

【0256】

上記方法に従って、得られたキメラ抗体VHおよびVHのそれぞれの配列は以下の通りである：

【0257】

900423および900428 VH SEQ ID NO：32
DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGAPRYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLSFVTTEDTATYYCASLGTDYYAMDYWGQGTSVIVSS

【0258】

900424 VH SEQ ID NO:1
DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWIWIRQFPGNKVEWMGYITSSGSTSYNPSLKSRISFTRDTSKNQFFLQLTSVTTEDTATYYCARLDFGNYGGAMDYWGQGTSVTVSS

【0259】

900424 VL SEQ ID NO:2
DIVMTQSHKFMSTSIGDRVSITCKASQHVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSASYRYTGVPDRFTGSRSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYITPYTFGGGTKLEIK

【0260】

900423 VL SEQ ID NO:34
DIVMTQSHKFMFTSVGDRVSITCKASQHVSNAVAWYQQKPGQSPKLLIHSASYRYTGVPDRFIGRGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQYYSLPWTFGGGTKLEIK

【0261】

900428 VL SEQ ID NO:33
DIVMTQSHKFMFTSVGDRVSITCKASQHVSNAVAWYQQKPGQSPKLLIHSASYRYTGVPDRFTGRGSGTDFTFTINSVQAEDLAVYYCQQYYSLPWTFGGGTKLEIK

【0262】

ここで、900424の重鎖定常領域のアミノ酸配列はSEQ ID NO：30に示され、900423の重鎖定常領域のアミノ酸配列はSEQ ID NO：30に示され、900428の重鎖定常領域のアミノ酸はSEQ ID NO：30に示された。軽鎖定常領域は、すべてヒトκ軽鎖定常領域（SEQ ID NO：31）である。

【0263】

2.4 マウス由来抗ヒト TIGIT 抗体のヒト化 - ヒト化抗体の調製法

【0264】

抗体のヒト化には、以下の方法を用いた。抗体の可変領域の配列をNCBI IgBlastデータベースの利用可能な配列と比較し、その上にCDRグラフト重・軽鎖を構築するのに適したヒト由来のコンフォメーション領域（FR領域）を同定・解析することでようやく同定することができた。

【0265】

修飾は、ヒト抗体のFR領域の保存アミノ酸残基と重要アミノ酸残基に従って修飾部位を設計し、キメラ抗体の重鎖と軽鎖の可変領域に対してそれぞれヒト化変異を設計し、PCR技術を用いてヒト化点変異抗体発現プラスミドを増幅して構築した。このヒト化点変異型抗体発現プラスミドをCHO-S細胞で発現させ、精製してヒト化抗体タンパク質を得た。ELISA、Biacoreおよびフローサイトメトリーアッセイを用いて、受容体結合能、機能阻害活性およびADCC効果をスクリーニングし、優れた性能を有する4種類のヒト化抗TIGIT抗体を得た。得られたヒト化抗 TIGIT 抗体の VH および VL 配列を以下に示す：

【0266】

900461および900464 VH SEQ ID NO：9
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSITSDYAWIWIRQPPGKGLEWIGYITSSGSTYYNPSLKSRVTFSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYYCARLDFGNYGGAMDYWGQGTLVTVSS

【0267】

900461 VL SEQ ID NO:10
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQHVSTAVNWYQQKPGKAPKLLIYSASYLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYITPYTFGQGTKLEIK

【0268】

900464および900476 VL SEQ ID NO：11
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQHVSTALAWYQQKPGKAPKLLIYSASYLQSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYITPYTFGQGTKLEIK

【0269】

900466 VH SEQ ID NO:12
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSITSDYAWIWIRQPPGKKLEWIGYITSSGSTYYNPSLKSRVTFSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYYCARLDFGNYGGAMDYWGQGTLVTVSS

【0270】

900466 VL SEQ ID NO:13
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQHVSTAVNWYQQKPGKAPKLLIYSASYRQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYITPYTFGQGTKLEIK

【0271】

900476VH SEQ ID NO:14
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSITSDYAWIWIRQPPGNKLEWIGYITSSGSTYYNPSLKSRVTFSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYYCARLDFGNYGGAMDYWGQGTLVTVSS

【0272】

ここで、下線部はCDR（IMGTで定義）、900461、900464、900466、900476はそれぞれ品番HB0030、HB0031、HB0032、HB0033に対応する4つのヒト化抗体タンパク質番号である。

【0273】

ここで、HB0030の重鎖定常領域のアミノ酸配列をSEQ ID NO：29に示され、HB0031の重鎖定常領域のアミノ酸配列をSEQ ID NO：29に示され、HB0032の重鎖定常領域のアミノ酸配列をSEQ ID NO：29に、HB0033の重鎖定常領域のアミノ酸配列をSEQ ID NO：29に示された。軽鎖定常領域は、すべてヒトκ軽鎖定常領域（SEQ ID NO：31）である。

【0274】

実施例3 キメラ抗体とヒト化抗体のアッセイ

【0275】

3.1 ヒトTIGITを発現している細胞に対するTIGIT抗体の結合活性のテスト

【0276】

キメラ抗体900324、900423、900424、900428、ヒト化抗体HB0030、HB0031、HB0032、HB0033をヒトTIGIT（CHOK1-huTIGIT-2A3、Haber Bio）を発現する細胞に対する結合活性についてアッセイした。

【0277】

全てのキメラ抗体とヒト化抗体を1％BSAを含むPBS溶液（1％BSA/PBS）で20μg/mlに希釈し、96ウェルUプレートに1ウェルあたり20μL添加し、陰性対照（1％BSA/PBSのみ）を同時に設定した。対数増殖期のヒトTIGIT発現細胞（CHOK1-huTIGIT-2A3、 Huabo Bio）の懸濁液を採取し、遠心分離（1000rpm×5min）により培養液を捨て、1％BSA/PBSで生細胞密度1×10⁶/mLに再懸濁し、96ウェルUプレートに抗TIGIT抗体とともに1ウェル当たり20μL（2×10⁴細胞）、30分間室温にて添加した。96-ウェルU-プレートを1% BSA/PBSで再懸濁し、遠心分離（300g×3min）して上層を捨て、1回洗浄後、PE-シープアンチヒト-Fc (Jackson ImmunoResearch、#109-115-098) 1：200 希釈を加え、遮光し室温で15分反応させた。 96-ウェルUプレートを1% BSA/PBSで再懸濁し、遠心分離（300g×3min）して上層を捨て、この方法で3回洗浄し、最後に1ウェルあたり100μLの1% BSA/PBSで再懸濁し、PEチャンネルの蛍光強度をフローサイトメーターで測定した（BD、#Canto II）。

【0278】

キメラ抗体結合生存率の結果を図1および表3に、ヒト化抗体結合生存率の結果を図2および表4に示すが、900324は特許出願WO2015009856A2における抗体10A7と軽鎖および重鎖の可変領域の配列が同じであるGenentech社の抗ヒトTIGIT抗体チラゴルマブをCHO細胞に一過的に発現させたものである。その結果、キメラ抗体、ヒト化抗体ともに、ヒトTIGIT（CHOK1-huTIGIT-2A3、Haber Bio社）を発現する細胞に対して良好で同等の親和性を有していることが確認された。

【表3】

【表4】

【0279】

3.2 TIGIT抗体がTIGIT抗原とTIGIT分子の結合を阻害する試験（競合法）

【0280】

抗原huCD155-moFc（ACROBiosystems、#CD5-H5254）を1%BSAを含むPBS溶液で40μg/mlに希釈し、96ウェルUプレートに各ウェル10μLを加え、容量比1：1で連続希釈した抗TIGIT抗体とよく混ぜ、陽性対照も同時に設定した（CD155-moFcを加えたのみ）。対数増殖期のヒトTIGIT発現細胞（CHOK1-huTIGIT-2A3、 Huabo Bio）の懸濁液を遠心分離（1000rpm×5min）で除去し、培養液を1％BSA/PBSで生細胞密度1×10⁶/mLに再懸濁し、96ウェルUプレートに20μL（2×10⁴細胞）/ウェル加え、室温で30分CD155-moFcと抗TIGIT抗体と混合し、培養を継続した。96-ウェルUプレートを1% BSA/PBSで再懸濁し、遠心分離（300g×3min）して上層を捨て、1回洗浄後、Alexa488-gat anti-mouse-Fc (Jackson ImmunoResearch、#115-545-071) 1：300 希釈品を加え、遮光し室温で15分反応させた。 U-well プレートに 1% BSA/PBS を加えて再懸濁し、遠心分離（300g×3min）で上層を捨て、この方法で 3 回洗浄し、最後に 1 well あたり 100μL の 1% BSA/PBS を加えて再懸濁し、FITC チャンネルの蛍光強度をフローサイトメトリー（BD、#Canto II）により測定を行った。

【0281】

キメラ抗体結合活性の結果を図3および表5に、ヒト化抗体結合活性の結果を図4および表6に示す。その結果、キメラ抗体とヒト化抗体は、ヒトCD155に対して同等の遮断力を持ち、有意な遮断効果を示すことが明らかになった。

【表5】

【表6】

【0282】

3.3 ヒト化モノクローナル抗体の親和性試験

【0283】

この試験では、SPR法を用いて抗原抗体結合の動態と親和性を測定した。BIOCORE（GE社製、#Biacore 8K）を使用した。Sereis S Sensor Chip ProteinA chip (GE, #29-1275-56) を室温で20～30分平衡化し、チップを装置にセットした。抗体試料を平衡化バッファーで実験作業濃度に希釈し、2～8℃で密封保存した。抗原は平衡化バッファーHBS-EP（10x）（GE、#BR-1006-69）で希釈し、ヒスチジンタグ（His-Tag）ヒトTIGITタンパク質（huTIGIT、アクロバイオシステムズ、#TIT-H52H3）、希釈抗原20nMを5回の濃度勾配で2.5x希釈から始めて2回のゼロ濃度に設定しました（※1）。 の平衡化バッファ）および最低濃度の複製を作成した。チップの再生にはpH1.5のグリシン溶液（GE、#BR100354）を使用した。サンプルは捕獲法マルチサイクルキネティックプログラムを用いて解析し、有意な参照結合がないことを確認した上で、対応する解析プログラムを選択し、1：1結合モデルであるKineticsを選択して解析に適合させ、サンプルのキネティックパラメータを求めた。

【0284】

試験の結果は、図7に示す通りである。huTIGITによる親和定数（KD（M））の結果より、本願のヒト化モノクローナル抗体HB0030は10^-11桁に近い親和性を有し、極めて強い親和性を有することが示された。

【表7】

【0285】

実施例4 動物におけるin vivo有効性試験

【0286】

この試験では、CT26.WT結腸癌モデルを皮下接種した免疫検出部位ヒト化マウスBALB/c-hPD1/hTIGITにおいて、抗ヒトTIGIT抗体HB0030、HB0031、HB0032、HB0033の効果を調べた。

【0287】

この試験では、マウスの結腸がん細胞CT26.WT細胞を採取し、対数成長期のCT26.WT細胞を集め、培養液を除去してPBSで2回洗浄した後に接種した(CT26.WT細胞生存率は、腫瘍前、腫瘍後それぞれ98.57%および98.28%)。接種量は、5×10⁵/100 μL/匹。接種後11日目に平均腫瘍体積が94.02 mm³に達した時点で、腫瘍体積に応じてマウスをランダムにグループ分けし、各グループに8匹のマウスを配置した。グルーピングはその日をD0日と定義し、D0、D3、D7、D10、D14、D17に投与し、投与開始後、D0、D2、D4、D6、D8、D10、D13、D15、D17、D20、D23で腫瘍の大きさを観測し、マウスの体重を量った。腫瘍体積計算方法：腫瘍体積（mm³）= 0.5×腫瘍長径×腫瘍短径²）。結果を図5に示す通りである。

【0288】

図5の実験結果を観察すると、本願の抗TIGITヒト化モノクローナル抗体HB0030、HB0031、HB0032およびHB0033は、10mg／kgを単独投与した場合、有意な腫瘍抑制効果を有することが明らかである。

【0289】

さらに、CT26.WT大腸がんモデルを皮下接種した免疫検出部位ヒト化マウスBALB/c-hPD1/hTIGITにおいて、HB0030と対照抗体チラゴルマブの10 mg/kg投与時の有効性を検討した。

【0290】

この試験では、対数増殖期のマウス大腸がん細胞からCT26細胞を採取し、培養液を除去してPBSで2回洗浄した後、5×10⁵/100μL/個で接種した（接種前後のCT26細胞の生存率はそれぞれ98.51%、97.250%である）。 接種後12目に平均腫瘍体積が80.33 mm³に達した時点で、腫瘍の体積に応じてランダムにグループ分けし、各グループに6匹のマウスを配置した。グルーピングはその日をD0日と定義し、D0、D3、D7、D10、D14、D17に投与し、投与開始後、D0、D2、D4、D6、D8、D10、D13、D15、D17、D20、D23で腫瘍の大きさを観測し、マウスの体重を量った。腫瘍体積計算方法：腫瘍体積（mm³）= 0.5×腫瘍長径×腫瘍短径²）。結果を図6に示す通りである。

【0291】

図6の結果を観察すると、本願の抗TIGIT抗体HB0030は、対照抗体チラゴルマブと比較して、より優れた腫瘍抑制効果が示された。

【0292】

この試験では、接種後24日目に投与したマウスの全群で、体重に大きな変化は見られなかった。

【0293】

実施例5 抗TIGIT抗体HB0030の動物におけるin vivo有効性試験

【0294】

HB0030分子の生体内におけるADCC効果の役割を評価するため、900541はFc領域にL234A/L235A変異を有するADCC効果のないHB0030、他の2つはHB0030の異なるバッチの試料である。本実験では、生理食塩水をネガティブコントロールとして、ヒト化マウスBALB/c-hPD1/hTIGITに移植したマウス大腸がん細胞CT26.WTにおいて、上記3薬剤の抗腫瘍効果を評価した。

【0295】

BALB/c-hPD1/hTIGIT マウス（CT26.WT 細胞を接種）に試験薬3 mg/kgを週2回、計6回腹腔内投与した。コントロールG1（生理食塩水）との比較：腫瘍体積結果（TIGtv）および重量結果（TIGtw）解析による900541（G2：抗TIGIT-1、3mPK）の腫瘍抑制率はTGItvで40.26%、TGItwで32.60%、抗TIGIT抗体HB0030（G3：抗TIGIT-2、3mPK）は腫瘍抑制率はTGItvで90.68%、TGItwで86.85%。 抗TIGIT抗体HB0030（G4：抗TIGIT-3、3mPK）は、TGItvで82.38%、TGItwで77.85%であり、腫瘍の成長を有意に抑制した（G3 vs. G1、 ***Ptv<0.001、***Ptw<0.001）、 抗TIGIT抗体HB0030はTGItwで82％と腫瘍成長を有意に抑制した（G4vs. G1、 ***Ptv<0.001、***Ptw<0.001）。また、(G 3:anti-TIGIT-2、3 mpk)とHB0030 (G 4:anti-TIGIT-3、3 mpk)との間で腫瘍抑制効果に有意差は認められなかった。（G4 VS G2，Ptv>0.263，Ptv>0.346）

【0296】

以上より、BALB/c-hPD1/hTIGITマウス（CT26.WT細胞を接種）に今回の試験系で試験薬3 mg/kgを週2回、計6回腹腔内投与したところ、生理食塩水対照組と比べ、G2の900541、G3とG4のHB0030 (3 mpk)は明らかな腫瘍抑制作用を示した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

2023534588000001.app

【手続補正書】

【提出日】2023-05-16

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

重鎖可変領域VHに少なくとも1つのCDRを含み、及び軽鎖可変領域VLに少なくとも1つのCDRを含む単離抗原結合タンパク質であって、前記VHは、SEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列を含み、前記VLは、SEQ ID NO：64に示すアミノ酸配列を含み、以下の特性の1つ以上を有する、単離抗原結合タンパク質：
1）TIGITタンパク質と結合することができる；
2）FACS解析においてCD155のTIGITへの結合をブロックすることができる；及び
3）腫瘍の成長及び／又は腫瘍細胞の増殖を抑制することができる。

【請求項2】

前記TIGITタンパク質との結合について参照抗体と競合する、請求項1に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記参照抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記参照抗体の前記重鎖可変領域がHCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、前記HCDR1がSEQ ID NO：3に示すアミノ酸配列を含み、前記HCDR2は、SEQ ID NO：56に示すアミノ酸配列を含み、前記HCDR3は、SEQ ID NO：57に示すアミノ酸配列を含み、前記参照抗体の前記軽鎖可変領域は、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含み、前記LCDR1は、SEQ ID NO：65に示すアミノ酸配列を含み、前記LCDR2は、SEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み、前記LCDR3は、SEQ ID NO：66に示すアミノ酸配列を含む、単離抗原結合タンパク質。

【請求項3】

請求項1又は２に記載の単離抗原結合タンパク質であって、抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、単離抗原結合タンパク質。

【請求項4】

請求項1～３のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記単離抗原結合タンパク質は、VHを含み、前記VHは、HCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、前記HCDR1は、SEQ ID NO.: 3に示すアミノ酸配列を含み、前記HCDR２は、SEQ ID NO.: 56に示すアミノ酸配列を含み、及び前記HCDR３は、SEQ ID NO.: 57に示すアミノ酸配列を含む、単離離抗原結合タンパク質。

【請求項5】

請求項1～4のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、以下のいずれか一組のアミノ酸配列を有する単離抗原結合タンパク質；
(1) HCDR1：SEQ ID NO：3、HCDR2：SEQ ID NO：4、およびHCDR3：SEQ ID NO：5、および
(2) HCDR1：SEQ ID NO：3、HCDR2：SEQ ID NO：42、およびHCDR3：SEQ ID NO：43。

【請求項6】

請求項1～5のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記単離抗原結合タンパク質は、VLを含み、前記VLは、LCDR1、CDR2及びCDR3を含み、前記LCDR1は、SEQ ID NO：65に示すアミノ酸配列を含み、前記LCDR2は、SEQ ID NO：7に示すアミノ酸配列を含み、及び前記LCDR3は、SEQ ID NO：66に示すアミノ酸配列を含む、単離離抗原結合タンパク質。

【請求項7】

請求項1～6いずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記単離抗原結合タンパク質は、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含み、以下のいずれか一組のアミノ酸配列を有する単離抗原結合タンパク質；
(1) LCDR1：SEQ ID NO：6、LCDR2：SEQ ID NO：7、および、LCDR3：SEQ ID NO：8、および
(2) LCDR1：SEQ ID NO：52、LCDR2：SEQ ID NO：7、および、LCDR3：SEQ ID NO：53。

【請求項8】

請求項1～7のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記単離抗原結合タンパク質は、VHを含み、前記VHは、SEQ ID NO：55に示すアミノ酸配列を含む、単離抗原結合タンパク質。

【請求項9】

請求項8に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記VHは、SEQ ID NO：1、9、12、14および32のいずれか一つに示すアミノ酸配列を含む、単離抗原結合タンパク質。

【請求項10】

請求項1～9のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記単離抗原結合タンパク質は、抗体重鎖定常領域を含み、前記抗体重鎖定常領域は、ヒトIgG定常領域を含む、単離離抗原結合タンパク質。

【請求項11】

請求項10に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記抗体重鎖定数領域は、ヒトIgG1定数領域を含み、前記ヒトIgG1定数領域は、SEQ ID NO：29又は30に示すアミノ酸配列を含む、単離離抗原結合タンパク質。

【請求項12】

請求項1～11のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質であって、前記単離抗原結合タンパク質は重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含み、以下のいずれか一組のアミノ酸配列を含む、単離抗原結合タンパク質：
（1） VH：SEQ ID NO：9、およびVL：SEQ ID NO：10、
（2） VH：SEQ ID NO：9、およびVL：SEQ ID NO：11、
（3） VH：SEQ ID NO：12、およびVL：SEQ ID NO：13、
（4） VH：SEQ ID NO：14、およびVL：SEQ ID NO：11、
（5） VH：SEQ ID NO：1、およびVL：SEQ ID NO：2、
（6） VH：SEQ ID NO：32、およびVL：SEQ ID NO：34、および
（7） VH：SEQ ID NO：32、およびVL：SEQ ID NO：33。

【請求項13】

請求項1～12のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質をコードする単離された1種または複数の核酸分子。

【請求項14】

請求項13に記載の核酸分子を含むベクター。

【請求項15】

請求項13に記載の核酸分子または請求項14に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項16】

請求項1～12のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質を含む、ポリペプチド。

【請求項17】

請求項1～12のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質または請求項16に記載のポリペプチドを含む、免疫複合体。

【請求項18】

請求項1～12のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質を調製する方法であって、請求項1～12のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質の発現させる条件で、請求項15に記載の細胞を培養することを含む、前記方法。

【請求項19】

請求項1～12のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質、請求項13に記載の核酸分子、請求項14に記載のベクター、請求項15に記載の細胞、請求項16に記載のポリペプチドおよび／または請求項17に記載の免疫複合体、ならびに任意に薬学的に許容されるアジュバントを含む、医薬組成物。

【請求項20】

請求項1～12のいずれか一項に記載の単離抗原結合タンパク質、請求項13に記載の核酸分子、請求項14に記載のベクター、請求項15に記載の細胞、請求項16に記載のポリペプチド、及び／又は請求項17に記載の免疫抱合体を含有するTIGIT関連疾患の予防、緩和または治療のための医薬組成物。

【請求項21】

前記TIGIT関連疾患は、T細胞機能障害性疾患である、請求項20に記載の医薬組成物。

【請求項22】

前記TIGIT関連疾患は、腫瘍である、請求項20に記載の医薬組成物。

【請求項23】

前記腫瘍は、固形腫瘍である、請求項22に記載の医薬組成物。

【請求項24】

前記腫瘍は、結腸癌である、請求項22に記載の医薬組成物。

【国際調査報告】