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特表2023-534619真菌感染症の治療のための組成物及び方法

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-10

(54)【発明の名称】真菌感染症の治療のための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

C07K 7/64 20060101AFI20230803BHJP

C07K 7/54 20060101ALI20230803BHJP

A61K 38/12 20060101ALI20230803BHJP

A61P 31/04 20060101ALI20230803BHJP

A61P 31/10 20060101ALI20230803BHJP

【ＦＩ】

C07K7/64 ZNA

C07K7/54

A61K38/12

A61P31/04

A61P31/10

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022580112

(86)(22)【出願日】2021-06-25

(85)【翻訳文提出日】2023-02-10

(86)【国際出願番号】 US2021039129

(87)【国際公開番号】W WO2021263126

(87)【国際公開日】2021-12-30

(31)【優先権主張番号】63/044,943

(32)【優先日】2020-06-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522188026

【氏名又は名称】ザユニバーシティオブサザンカリフォルニア

【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＳＯＵＴＨＥＲＮＣＡＬＩＦＯＲＮＩＡ

(74)【代理人】

【識別番号】100105957

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田誠

(74)【代理人】

【識別番号】100068755

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田博宣

(74)【代理人】

【識別番号】100142907

【弁理士】

【氏名又は名称】本田淳

(74)【代理人】

【識別番号】100152489

【弁理士】

【氏名又は名称】中村美樹

(72)【発明者】

【氏名】セルステッド、マイケルイー．

(72)【発明者】

【氏名】トラン、ダットキュー．

(72)【発明者】

【氏名】シャール、ジャスティンビー．

(72)【発明者】

【氏名】バッソ、ヴィルジニア

【テーマコード（参考）】

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA07

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA18

4C084BA24

4C084BA26

4C084CA59

4C084DA43

4C084NA14

4C084ZB351

4C084ZB352

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA16

4H045BA32

4H045BA35

4H045CA40

4H045EA20

(57)【要約】

播種性真菌疾患及び／又は関連する敗血症ショックを治療する際に、２相効果をもたらすθディフェンシンのペプチドアナログが開発されてきている。これらのアナログは、殺菌効果をもたらすために必要とされる濃度より低い濃度において活性であり、最初に免疫系のエフェクタ細胞を動員することによって感染病原体を対処し、次に免疫系を調節し、炎症反応を下方調節することにより機能する。これらのθディフェンシンアナログは、天然に存在するθディフェンシンが効果を示さない濃度において保護的であり、天然のθディフェンシンに見られない構造的及び配列的特徴のコアセットを含む。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

１４個のアミノ酸からなり、以下の構造を有する環状ペプチドであって、

【化1】

ＡＡ３及びＡＡ１２はジスルフィド結合により結合されるシステインであり、ＡＡ５及びＡＡ１０はジスルフィド結合により結合されるシステインであり、ＡＡ４はアルギニンであり、ＡＡ１１はアルギニンであり、ＡＡ６、ＡＡ７、及びＡＡ８の内二つはアルギニンであり、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９によって規定される前記環状ペプチドのβターン部分は、二つより多くの隣接するアルギニンを含まず、前記環状ペプチドは、生理的ｐＨにおいて少なくとも約３６％の正電荷含有量をもたらす五つ以上のアルギニン残基を備える、環状ペプチド。

【請求項2】

ＡＡ１がグリシンである、請求項１に記載の環状ペプチド。

【請求項3】

ＡＡ２が第１の疎水性アミノ酸である、請求項１又は請求項２に記載の環状ペプチド。

【請求項4】

前記第１の疎水性アミノ酸はバリンである、請求項３に記載の環状ペプチド。

【請求項5】

ＡＡ９は第２の疎水性アミノ酸である、請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項6】

前記第２の疎水性アミノ酸はバリンである、請求項５に記載の環状ペプチド。

【請求項7】

ＡＡ１３はアルギニンである、請求項１から請求項６のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項8】

ＡＡ１４はアルギニンである、請求項１から請求項７のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項9】

前記環状ペプチドは、θディフェンシンのアナログであり、前記環状ペプチドが、マウス播種性カンジダ症モデルにおいて全身に適用されたとき、θディフェンシンと比較して向上した生存率を提供する、請求項１から請求項８のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項10】

前記環状ペプチドは、播種性カンジダ症のマウスモデルへの適用で２相反応を提供し、前記２相反応は、抗真菌活性を有する宿主エフェクタ細胞の動員である第１段階及び宿主炎症反応の緩和である第２段階を備える、請求項１から請求項９のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項11】

前記環状ペプチドは、ＴＡＣＥ阻害活性を有する、請求項１から請求項１０のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項12】

前記環状ペプチドは、炎症誘発性サイトカインの発現、プロセシング、及び放出の内少なくとも一つを抑制する、請求項１から請求項１１のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項13】

前記環状ペプチドは、極限環境温度、低いｐＨ、凍結及び／又は解凍への暴露、及び生体マトリックスへの溶解後も活性を保持する、請求項１から請求項１２のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項14】

前記生体マトリックスは、血液、血漿、及び血清からなる群から選択される、請求項１３に記載の環状ペプチド。

【請求項15】

前記環状ペプチドは、播種性真菌感染症を治療するための有効量において免疫反応を起こさない、請求項１から請求項１４のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項16】

前記環状ペプチドは、宿主の病原体クリアランスを強化するように宿主免疫系を活性化させる、請求項１から請求項１５のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項17】

前記環状ペプチドは、播種性真菌感染症を治療するための有効量において疾患消散及び生存率を強化するように炎症を調節するという活性によって特徴付けられる、請求項１から請求項１６のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項18】

播種性真菌感染症及び関連する敗血症ショックを治療又は予防する方法であって、
播種性真菌感染症の治療が必要な個人を識別することと、
敗血症ショックのリスクがある動物の環状ペプチドであって、前記環状ペプチドは、以下の構造を有し、

【化2】

【請求項19】

ＡＡ１はグリシンである、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

ＡＡ２は第１の疎水性アミノ酸である、請求項１８又は請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記第１の疎水性アミノ酸はバリンである、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

ＡＡ９は第２の疎水性アミノ酸である、請求項１８から請求項２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記第２の疎水性アミノ酸はバリンである、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

ＡＡ１３はアルギニンである、請求項１８から請求項２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

ＡＡ１４はアルギニンである、請求項１８から請求項２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記環状ペプチドは、θディフェンシンのアナログであり、前記環状ペプチドが、播種性カンジダ症のマウスモデルにおいて全身に適用されたとき、θディフェンシンと比較して向上した生存率を提供する、請求項１８から請求項２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記方法は、播種性カンジダ症のマウスモデルへの適用で２相反応を提供し、前記２相反応は、抗真菌活性を有する宿主エフェクタ細胞の動員である第１段階及び宿主炎症反応の緩和である第２段階を備える、請求項１８から請求項２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記方法は、ＴＡＣＥ活性を阻害する、請求項１８から請求項２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記方法は、炎症誘発性サイトカインの発現、プロセシング、及び放出の内少なくとも一つを抑制する、請求項１８から請求項２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記環状ペプチドは、極限環境温度、低いｐＨ、凍結及び／又は解凍への暴露、及び生体マトリックスへの溶解後も活性を保持する、請求項１８から請求項２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記生体マトリックスは、血液、血漿、及び血清からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記環状ペプチドは、播種性真菌感染症を治療又は予防するための有効量において免疫反応を起こさない、請求項１８から請求項３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記環状ペプチドは、宿主の病原体クリアランスを強化するように宿主免疫系を活性化させる、請求項１８から請求項３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

播種性真菌疾患及び関連する敗血症又は敗血症ショックを治療又は予防する際の環状ペプチドの使用方法であって、前記環状ペプチドは、以下の共通構造図を有し、

【化3】

【請求項35】

ＡＡ１はグリシンである、請求項３４に記載の使用方法。

【請求項36】

ＡＡ２は第１の疎水性アミノ酸である、請求項３４又は請求項３５に記載の使用方法。

【請求項37】

前記第１の疎水性アミノ酸はバリンである、請求項３６に記載の使用方法。

【請求項38】

ＡＡ９は第２の疎水性アミノ酸である、請求項３４から請求項３７のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項39】

前記第２の疎水性アミノ酸はバリンである、請求項３８に記載の使用方法。

【請求項40】

ＡＡ１３はアルギニンである、請求項３４から請求項３９のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項41】

ＡＡ１４はアルギニンである、請求項３４から請求項４０のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項42】

前記環状ペプチドは、θディフェンシンのアナログであり、前記環状ペプチドが、マウス敗血症モデルにおいて全身に適用されたとき、θディフェンシンと比較して向上した生存率を提供する、請求項３４から請求項４１のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項43】

前記環状ペプチドは、敗血症のマウスモデルへの適用で２相反応を提供し、前記２相反応は、抗真菌活性を有する宿主エフェクタ細胞の動員である第１段階及び宿主炎症反応の緩和である第２段階を備える、請求項３４から請求項４２のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項44】

前記環状ペプチドは、ＴＡＣＥ阻害活性を有する、請求項３４から請求項４３のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項45】

前記環状ペプチドは、炎症誘発性サイトカインの発現、プロセシング、及び放出の内少なくとも一つを抑制する、請求項３４から請求項４４のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項46】

前記環状ペプチドは、極限環境温度、低いｐＨ、凍結及び／又は解凍への暴露、及び生体マトリックスへの溶解後も活性を保持する、請求項３４から請求項４５のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項47】

前記生体マトリックスは、血液、血漿、及び血清からなる群から選択される、請求項４６に記載の使用方法。

【請求項48】

前記環状ペプチドは、播種性真菌疾患を治療又は予防するための有効量において免疫反応を起こさない、請求項３４から請求項４７のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項49】

前記環状ペプチドは、宿主の病原体クリアランスを強化するように宿主免疫系を活性化させる、請求項３４から請求項４８のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項50】

前記環状ペプチドは、播種性真菌疾患を治療又は予防するための有効量において疾患消散及び生存率を強化するように炎症を調節するという活性によって特徴付けられる、請求項３４から請求項４９のいずれか一項に記載の環状ペプチド。

【請求項51】

播種性真菌疾患及び関連する敗血症又は敗血症ショックを治療又は予防する際に有効である薬剤の調製における環状ペプチドの使用方法であって、前記環状ペプチドは以下の共通構造図を有し、

【化4】

【請求項52】

ＡＡ１はグリシンである、請求項５１に記載の使用方法。

【請求項53】

ＡＡ２は第１の疎水性アミノ酸である、請求項５１又は請求項５２に記載の使用方法。

【請求項54】

前記第１の疎水性アミノ酸はバリンである、請求項５３に記載の使用方法。

【請求項55】

ＡＡ９は第２の疎水性アミノ酸である、請求項５１から請求項５４のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項56】

前記第２の疎水性アミノ酸はバリンである、請求項５５に記載の使用方法。

【請求項57】

ＡＡ１３はアルギニンである、請求項５１から請求項５６のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項58】

ＡＡ１４はアルギニンである、請求項５１から請求項５７のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項59】

前記環状ペプチドは、θディフェンシンのアナログであり、前記環状ペプチドが、播種性カンジダ症のマウスモデルにおいて全身に適用されたとき、θディフェンシンと比較して向上した生存率を提供する、請求項５１から請求項５８のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項60】

前記環状ペプチドは、播種性カンジダ症のマウスモデルへの適用で２相反応を提供し、前記２相反応は、抗真菌活性を有する宿主エフェクタ細胞の動員である第１段階及び宿主炎症反応の緩和である第２段階を備える、請求項５１から請求項５９のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項61】

前記環状ペプチドは、ＴＡＣＥ阻害活性を有する、請求項５１から請求項６０のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項62】

前記環状ペプチドは、炎症誘発性サイトカインの発現、プロセシング、及び放出の内少なくとも一つを抑制する、請求項５１から請求項６１のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項63】

前記環状ペプチドは、極限環境温度、低いｐＨ、凍結及び／又は解凍への暴露、及び生体マトリックスへの溶解後も活性を保持する、請求項５１から請求項６２のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項64】

前記生体マトリックスは、血液、血漿、及び血清からなる群から選択される、請求項６３に記載の使用方法。

【請求項65】

前記環状ペプチドは、播種性真菌疾患を治療又は予防するための有効量において免疫反応を起こさない、請求項５１から請求項６４のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項66】

前記環状ペプチドは、宿主の病原体クリアランスを強化するように宿主免疫系を活性化させる、請求項５１から請求項６５のいずれか一項に記載の使用方法。

【請求項67】

前記環状ペプチドは、播種性真菌疾患を治療又は予防するための有効量において疾患消散及び生存率を強化するように炎症を調節するという活性によって特徴付けられる、請求項５１から請求項６６のいずれか一項に記載の使用方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明の技術分野は生物医学、特にペプチド医薬品である。

【背景技術】

【0002】

背景説明は本発明の理解に役立ち得る情報を含む。本明細書に提供される情報が先行技術である又は現在の請求項記載の発明に関連すること、又は具体的に又は暗黙的に参照される出版物が先行技術であることを認めるものではない。

【0003】

表在性真菌感染症（例えば、口及び生殖器の粘膜など）は、比較的一般的であり、ほとんど命を脅かさない。しかし、全身性又は播種性の真菌感染症は、３０％から５０％までの範囲の死亡率を有し得る。真菌病原体は、特に外科手術患者の間及びカテーテル留置患者の間での院内感染の主要な原因である。全身性真菌感染症のリスク増加はまた、免疫機能の低下、好中球減少、及び糖尿病に関連する。全身性又は播種性真菌感染症のリスク増加はまた、炎症性又は自己免疫疾患の治療のための生物学的療法の使用に関連し、この療法は、免疫反応の構成要素を選択的に抑制する。

【0004】

全身性真菌感染症は、典型的にカンジダ属菌（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）など）によって引き起こされるが、これは本来至る所に存在するため、簡単には回避されない。抗真菌薬が利用可能である一方で、耐性菌又は多剤耐性菌がますます蔓延している。不運なことに、多剤耐性真菌によって引き起こされる全身性感染は、世界的な健康懸念事項となっている。約１５０万の播種性真菌症の事例が毎年発生しており、高い死亡率に関連している。

【0005】

多剤耐性カンジダ属菌感染症の増加は、全身性カンジダ症の高い死亡率に寄与する。全身性カンジダ症の主要なリスク因子は、バイオフィルムの存在であり、これは静脈カテーテルのような埋め込み型医療デバイスで頻繁に発生する。このようなバイオフィルムは抗真菌治療に対して抵抗性を示すことが知られており、真菌病原体の血液感染性の拡散の一般的な原因である。

【0006】

効果的かつ比較的毒性のない抗真菌薬の開発は、困難であることが分かっている。侵襲的な真菌感染症の治療に用いられる抗真菌薬は、ポリエン系、アゾール系及びエキノカンジン系の３種類のみが現在存在している。これらの内エキノカンジン系が一番最近承認された抗真菌薬の種類であり、３０年近く前に初めて導入された。現在利用可能な抗真菌薬の使用に関する制限は、分子標的の範囲の制限、深刻な悪い副作用、及びバイオフィルムに対する活性の欠如を含む。多剤耐性真菌病原体の出現は、真菌感染症の治療に対する新しいアプローチの開発の緊急の必要性を浮き彫りにする。

【0007】

ディフェンシンは感染に対する生体の非特異的防御部分である小さい抗菌性タンパク質の多様なファミリーである。α、β、及びθディフェンシンという、３種類の互いに異なりかつ構造的に区別されるクラスのディフェンシンタンパク質がある。α及びβディフェンシンは線状であり、それぞれ約２．６ｋＤａ又は４．５ｋＤａの分子量を有するペプチドを含有するトリ－ジスルフィドである。対照的に、θディフェンシンは、１８個のアミノ酸からなる環状ペプチド（すなわち、骨格がアミノ末端又はカルボキシル末端の両方が遊離しない一連のペプチド結合により形成された環状のペプチド）である。

【0008】

θディフェンシンは、アカゲザル、ヒヒ、及び他の旧世界のサルの組織に発現している。それらは、人間及び他のヒト科の動物には存在しない。天然に存在するθディフェンシンは、三つのジスルフィド結合により安定化された１８個の骨格環化（すなわち、側鎖ではなくαアミン基を介して）ペプチドからなる。これらの三つのジスルフィド結合は、全ての既知のθディフェンシンに保存されている。θディフェンシンは、もともとペプチドの抗菌特性に基づいて発見され、ディフェンシンとして分類された。最近では、θディフェンシンは、強力な免疫調整効果を有し得ることが見出されてきている。

【0009】

国際特許出願公開第ＷＯ２００７／０４４９９８号（特許文献１）（Ｌｅｈｒｅｒｅｔａｌ）は、構造／活性の関係を導くための試みとしてエナンチオマー含有量の程度を変化させることを含むレトロサイクリンペプチド及びそのペプチドのアナログについて構造と生物活性との間の関係性を記載する。しかし、これらのアナログは、天然のレトロサイクリンの長さ及び構造を保持する。加えて、参照文献は抗菌活性についての説明のみである。

【0010】

様々なディフェンシンのペプチドアナログが調査される。例えば、欧州特許出願第ＥＰ２９９０４１５号（特許文献２）（Ｃｏｌａｖｉｔａｅｔａｌ）は、親タンパク質と比較して向上した抗生物質効果を示すβディフェンシンの環状アナログを記載する。しかし、このようなβディフェンシンは、炎症誘発性サイトカインの放出を刺激することが示され、これは安全性に問題があるため、その実用性は限定的である。

【0011】

米国特許出願公開第ＵＳ２００３／００２２８２９号（特許文献３）（Ｍａｕｒｙｅｔａｌ）は、キメラθディフェンシンの合成及び生物学的活性を記載し、保存されたアミノ酸置換の可能性について推測するが、これらは天然のθディフェンシンの長さ及び構造を保持するようである。米国特許第１０，５１２，６６９号（特許文献４）（Ｓｅｌｓｔｅｄｅｔａｌ）は、ＲＴＤ－１由来の様々なテトラデカペプチドθディフェンシンアナログ及びこれらの生物学的特性を記載する。

【0012】

従って、特に播種性真菌感染症のような、真菌感染症の管理及び／又は治療のための安全かつ有効な化合物の必要性が残っている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0013】

【特許文献1】国際公開第２００７／０４４９９８号明細書

【特許文献2】欧州特許出願第２９９０４１５号明細書

【特許文献3】米国特許出願公開第２００３／００２２８２９号明細書

【特許文献4】米国特許第１０，５１２，６６９号明細書

【発明の概要】

【0014】

本発明の主題は、天然のθディフェンシンと比較して、真菌感染症（特に、播種性又は全身性真菌感染症）の治療において向上した活性を有するθディフェンシンの合成アナログを提供する。これらのペプチドは、宿主指向性メカニズムで作用し、生体外で同じ病原体に対して直接殺菌効果及び／又は静真菌効果（複数）を有するアナログの濃度を下回る濃度において有効である。

【0015】

本発明の概念の一つの実施形態は、１４個のアミノ酸からなり、図７Ａに示す構造を有する環状ペプチドであり、これは２対のシステインの間に二つのジスルフィド結合を含み、ＡＡ３及びＡＡ１２はジスルフィド結合により結合されるシステインであり、ＡＡ５及びＡＡ１０はジスルフィド結合により結合されるシステインであり、ＡＡ４はセリン又は第１の疎水性アミノ酸であり、ＡＡ１１はセリン又は第２の疎水性の酸であり、ＡＡ６はアルギニンであり、ＡＡ７はアルギニンであり、ＡＡ８はアルギニンであり、前記環状ペプチドは生理的ｐＨにおいて少なくとも約３６％の正電荷含有量をもたらす五つのアルギニン残基を備える。いくつかの実施形態では、前記第１の疎水性アミノ酸及び前記第２の疎水性アミノ酸はロイシン又はイソロイシンである。いくつかの実施形態では、ＡＡ１はグリシンである。いくつかの実施形態では、ＡＡ２は第３の疎水性アミノ酸である（例えば、バリン又はロイシン）。いくつかの実施形態では、ＡＡ９は第４の疎水性アミノ酸である（例えば、バリン又はフェニルアラニン）。いくつかの実施形態では、ＡＡ１３及びＡＡ１４はアルギニンである。いくつかの実施形態では、ＡＡ４はアラニン又はセリンであり得ない。いくつかの実施形態では、ＡＡ１１はアラニンであり得ない。

【0016】

別の実施形態では、１４個のアミノ酸からなり、図７Ａに示す構造を有する環状ペプチドであり、これは２対のシステインの間に二つのジスルフィド結合を含み、ＡＡ３及びＡＡ１２はジスルフィド結合により結合されるシステインであり、ＡＡ５及びＡＡ１０はジスルフィド結合により結合されるシステインであり、ＡＡ４はアルギニンであり、ＡＡ１１はアルギニンであり、ＡＡ６、ＡＡ７及びＡＡ８の内二つはアルギニンであり、前記環状ペプチドは生理的ｐＨにおいて少なくとも約３６％の正電荷含有量をもたらす五つ以上のアルギニン残基を備える。

【0017】

このような環状ペプチドは、播種性真菌感染症のマウスモデルにおいて全身に適用されるときに、θディフェンシン自体と比較して向上した生存を提供するθディフェンシンのアナログであり得る。いくつかの実施形態では、前記環状ペプチドは敗血症のマウスモデルへの適用に２相反応を提供する。このような２相反応は、抗真菌活性を有する宿主エフェクタ細胞の動員の第１段階及び宿主炎症反応の緩和の第２段階を含む。いくつかの実施形態では、前記環状ペプチドはＴＡＣＥ阻害活性を有し、及び／又はＴＮＦの発現、プロセシング及び放出の内少なくとも一つを抑制する。

【0018】

このような環状ペプチドは、極限環境温度、低いｐＨ、凍結及び／又は解凍への暴露、及び例えば、血液、血漿、又は血清などの生体マトリックスへの溶解後も活性を保持する。いくつかの実施形態では、このような環状ペプチドは、播種性真菌疾患及び関連する敗血症ショックを治療又は予防するための有効量において免疫反応を起こさない。このような環状ペプチドは、宿主の病原体クリアランスを強化するように宿主免疫系を活性化させてもよく、敗血症ショックを治療又は予防するための有効量において疾患消散及び生存率を強化するように炎症を調節するという活性を有してもよい。

【0019】

本発明の概念の別の実施形態は、播種性真菌疾患のリスクがある動物へ上述の環状ペプチドを投与することにより、敗血症ショック及び／又は深刻な敗血症を治療又は予防する方法である。

【0020】

本発明の概念の別の実施形態は、播種性真菌疾患及び／又は関連する敗血症ショック及び／又は深刻な敗血症を治療又は予防する際の上述の環状ペプチドの使用方法、又は播種性真菌疾患及び／又は敗血症ショックを治療又は予防する際に有効な薬剤の調製におけるこのような環状ペプチドの使用方法である。

【0021】

本発明の主題の様々な目的、特徴、態様及び利点は、類似の番号が類似の構成要素を示す添付の図面と共に、以下の好適な実施形態の詳細な説明により、明らかとなるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】図１は、天然に存在するθディフェンシンＲＴＤ－１（配列番号１）の略図を示す。

【図2】図２は、合成θディフェンシンアナログ環状ペプチド１（配列番号２）の略図を示す。

【図3】図３は、合成θディフェンシンアナログ環状ペプチド２（配列番号３）の略図を示す。

【図4】図４は、合成θディフェンシンアナログ環状ペプチド３（配列番号４）の略図を示す。

【図5】図５は、合成θディフェンシンアナログ環状ペプチド４（配列番号５）の略図を示す。

【図6】図６は、合成θディフェンシンアナログ環状ペプチド５（配列番号６）の略図を示す。

【図7A】図７Ａは、従来の線状ペプチドに見られる個別のアミン及びカルボキシ末端が無い場合に、本明細書に記載される環状テトラデカペプチド内の特定のアミノ酸の指定に用いられる番号付けシステムを示す。

【図7B】図７Ｂは、環状ペプチド５（配列番号６）に適用されたこの番号付けシステムを示す。

【図8】図８は、合成θディフェンシンアナログ環状ペプチド６（配列番号７）の略図を示す。

【図9】図９は、播種性カンジダ症の生体内モデルにおけるＲＴＤ－１、合成環状テトラデカペプチド環状ペプチド５及び二つの抗真菌薬の効果の研究の代表的な結果を示す。マウスにカンジダ・アルビカンス遺伝子学的参考株ＳＣ５３１４の３×１０^５芽胞をＴ＝０で静脈注射により感染させた。Ｔ＝２４ｈにおいて、マウスに１日１回で７日間、生理食塩水、５ｍｇ／ｋｇカスポファンギン（Ｃａｓｐｏ）、５ｍｇ／ｋｇフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏ）、５ｍｇ／ｋｇＲＴＤ－１、又は０．２５ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド５を腹腔内投与により治療した。マウスを２６日間（ｐ．ｉ）観察し、治療したマウスの生存率をログランク検定によって生理食塩水対照に対して比較を行った：ＲＴＤ－１、Ｃａｓｐｏ、及びＦｌｕｃｏ、Ｐ＝３．４×１０^－６；０．２５ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド５、Ｐ＝２．３×１０^－７。

【図10】図１０は、播種性カンジダ症の生体内モデルにおいて０．２５ｍｇ／ｋｇ及び０．１ｍｇ／ｋｇの合成環状テトラデカペプチド環状ペプチド５及び５ｍｇ／ｋｇのフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏ）の効果の研究の代表的な結果を示す。マウスにカンジダ・アルビカンスＳＣ５３１４の３×１０^５芽胞をＴ＝０において静脈注射により感染させた。Ｔ＝２４ｈにおいて、マウスに１日１回で７日間、腹腔内投与により治療した。マウスを３０日間（ｐ．ｉ）観察し、生存率強化をログランク検定により分析した。

【図11】図１１は、図１０に示す研究と同様に、播種性カンジダ症の生体内モデルにおいて、０．２５ｍｇ／ｋｇの合成環状テトラデカペプチド環状ペプチド５及び０．１ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド３及び５ｍｇ／ｋｇのフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏ）の効果の研究の代表的な結果を示す。

【図12】図１２は、図１０に示す研究と同様に、播種性カンジダ症の生体内モデルにおいて、０．２５ｍｇ／ｋｇの合成環状テトラデカペプチド環状ペプチド５及び０．１ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド４及び５ｍｇ／ｋｇのフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏ）の効果の研究の代表的な結果を示す。

【図13】図１３は、図１０に示す研究と同様に、播種性カンジダ症の生体内モデルにおいて、０．２５ｍｇ／ｋｇの合成環状テトラデカペプチド環状ペプチド５及び０．１ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド１及び５ｍｇ／ｋｇのフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏ）の効果の研究の代表的な結果を示す。

【図14】図１４は、図１０に示す研究と同様に、播種性カンジダ症の生体内モデルにおいて、０．２５ｍｇ／ｋｇの合成環状テトラデカペプチド環状ペプチド５及び０．１ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド２及び５ｍｇ／ｋｇのフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏ）の効果の研究の代表的な結果を示す。

【図15】図１５は、図１０に示す研究と同様に、播種性カンジダ症の生体内モデルにおいて、０．２５ｍｇ／ｋｇの合成環状テトラデカペプチド環状ペプチド５及び０．１ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド６及び５ｍｇ／ｋｇのフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏ）の効果の研究の代表的な結果を示す。

【図16】図１６は、播種性カンジダ症のマウスモデルにおいて、フルコナゾール（Ｆｌｕｃｏ）及び本発明の概念の合成環状テトラデカペプチドを用いた治療における真菌クリアランスの研究の結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0023】

本発明の主題は、宿主媒介プロセスを用いた真菌感染症（例えば、播種性真菌感染症）の治療における２相効果を誘導する新しいペプチドを提供する。このようなペプチドは、まず、感染性真菌生物を対処するために免疫系のエフェクタ細胞を動員し、次に、炎症反応を調節するために免疫系を調節することによって作用し得る。新しいペプチドは、宿主免疫系のエフェクタ細胞の動員を介する間接的な抗真菌効果を提供し、敗血症／敗血症ショックを予防及び／又は治療するために修飾された配列を有する天然に存在するθディフェンシンのアナログである。これらの新しいθディフェンシンアナログは、宿主固有の免疫エフェクタの存在しない場合において、直接的抗真菌効果を提供しない（すなわち、生体外でそのような濃度において適用されるときに殺菌効果又は静真菌効果を生じない）抗真菌未満の血漿濃度において有効である。このようなθディフェンシンアナログは、天然のθディフェンシンが効果を示さない濃度において保護的でもよく、天然のθディフェンシンにおいて見られない構造的及び配列的特徴のコアセットを含んでもよい。

【0024】

本出願の文脈では、真菌病原体に関する「抗真菌未満の濃度」は、例えば、宿主免疫エフェクタの非存在下において生体外（例えば、液体培養培地中）で真菌病原体に適用されたときに、そのように記載された化合物が抗真菌効果を有さない濃度であることは理解されるべきである。例えば、カンジダ・アルビカンスに関する化合物の抗真菌未満の濃度は、生体外環境（例えば、宿主免疫エフェクタの非存在下）において菌に対して抗真菌効果を示す濃度未満の濃度である。

【0025】

Ｂａｓｓｏｅｔａｌ．（Ｂａｓｓｏｅｔａｌ．，“アカゲサルθディフェンシン１は、宿主指向性メカニズムにより全身性カンジダ症において長期の生存を促進する”ＮａｔｕｒｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｐｏｒｔｓ（２０１９）９：１６９０５）は、カンジダ・アルビカンスの異種菌株に関する天然のθディフェンシンＲＴＤ－１の抗真菌未満の濃度の測定の一例を提供する。カンジダ・アルビカンスの異種菌株の培養はＲＰＭＩ培地又は５０％血清を含有するＲＰＭＩ培地で確立した。異なる量のフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏ）、カスポファンギン（Ｃａｓｐｏ）、又はＲＴＤ－１を適用し、真菌増殖のモニタリングを行った。ＭＦＣは、加えた種菌に対して９９％の殺傷力を発揮する最低濃度として測定された。ＭＩＣは、増殖を抑制する最低濃度として測定された。結果は表１に示す。

【表1-1】

【表1-2】

このようなデータに基づいて、カンジダ・アルビカンスについての血清の存在下におけるＲＴＤ－１の抗真菌未満の濃度は１００μｇ／ｍＬ未満である。このような抗真菌未満の濃度は実験的に（例えば、患者サンプルからの培養によって）又は、好適には過去のデータから測定され得る。

【0026】

以下の説明は本発明の理解に役立ち得る情報を含む。本明細書に提供される情報が先行技術である又は現在の請求項記載の発明に関連すること、又は具体的に又は暗黙的に参照される出版物が先行技術であることを認めるものではない。

【0027】

いくつかの実施形態では、本発明の特定の実施形態を記載し、請求するために使用される、成分量、濃度などの特性、反応条件、及びその他を表す数は、用語「約」によって修飾される場合があることは理解されるべきである。従って、いくつかの実施形態では、本明細書及び添付の特許請求の範囲に記載される数値パラメータは、特定の実施形態によって得ようとする所望の特性に応じて変わり得る近似値である。いくつかの実施形態では、数値パラメータは、報告された有効数字に照らして、通常の丸め技術を適用することにより解釈されるべきである。本発明のいくつかの実施形態の広い範囲を記載する数値範囲及びパラメータは近似値であるにも関わらず、特定の例に記載される数値は実行できるほど正確に報告される。本発明のいくつかの実施形態に示される数値は、それらのそれぞれの試験測定に見出される標準偏差から必然的にもたらされる特定の誤差を含み得る。

【0028】

本明細書の記載及び以下の特許請求の範囲の全体において用いられるように、「一つの」、「一つの」、及び「その」の意味は、文脈が明確に他を指示しない限り、複数の指示対象を含む。また、本明細書の記載に用いられるように、「中に」の意味は、文脈が明確に他を指示しない限り、「中に」及び「上に」を含む。

【0029】

本明細書に開示される本発明の代替要素又は実施形態のグループ化は、限定として解釈されるべきではない。各グループメンバーは個別に、又はグループの他のメンバー又は本明細書に見出される他の要素と任意に組み合わせて参照及び請求され得る。グループの一つ以上のメンバーは、利便性及び／又は特許性の理由で、グループに含まれ、又はグループから消され得る。任意のこのような包含又は削除が発生するとき、本明細書は、添付の特許請求の範囲において用いられる全てのマーカッシュグループの記載を満たすように修正されたグループを含有すると見なされる。

【0030】

本明細書の値の範囲の列挙は、範囲内に収まる各個別の値を個々に示す省略方法として役立つことを意図しているに過ぎない。本明細書において別段の指示がない限り、それぞれの個別の値は、それが本明細書に個別に列挙されているかのように本明細書内に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書に別段の指示がない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、任意の適切な順序で実行され得る。本明細書の特定の実施形態に関してもたらされる任意の及び全ての例、又は例示的な言語（例えば、「など」）の使用は、単に本発明をより明らかにすることを意図し、他に請求される本発明の範囲に限定をもたらさない。本明細書のいかなる言語も本発明の実施に不可欠な任意の請求されていない要素を示すものとして解釈されるべきではない。

【0031】

以下の議論は本発明の主題の多くの例示的な実施形態を提供する。各実施形態は本発明の単一の組み合わせを示すが、本発明の主題は開示された要素の全ての可能な組み合わせを含むことが考慮される。従って、一つの実施形態が要素Ａ、Ｂ、及びＣを備え、第２の実施形態が要素Ｂ及びＤを備える場合、明示的に開示されなくても、本発明の主題は、Ａ、Ｂ、Ｃ、又はＤの他の残りの組み合わせを含むことも考慮される。

【0032】

開示されたペプチドは、抗真菌未満の量である低量で投与されたとき、播種性又は全身性真菌感染症及び関連する敗血症又はショックによる死亡率を減少させるのに有効である２相反応の提供を含む、多くの有利な技術効果を提供することを理解されたい。

【0033】

最近、Ｂａｓｓｏｅｔａｌ．（Ｂａｓｓｏｅｔａｌ．，“アカゲザルθディフェンシン１は、宿主指向性メカニズムによる全身性カンジダ症における長期の生存を促進する”ＮａｔｕｒｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｐｏｒｔｓ（２０１９）９：１６９０５）は、天然に存在するθディフェンシンＲＴＤ－１（配列番号１）がカンジダ・アルビカンスの感受性株及び多剤耐性株の両方の全身性カンジダ症の動物モデルにおいて有効であることを示している。この論文は参照により本明細書に組み込まれる。ＲＴＤ－１が生体外研究において有効であったが、抗真菌活性は、血清の存在によって無効になり、マウス動物モデル研究における生体内で有効であると見出された濃度より５０倍以上高い濃度が必要である。このような生体内での研究は、ＲＴＤ－１を用いた治療において抗真菌活性及び炎症誘発性サイトカインの長期的な生産の低減の両方を示し、その両方が播種性真菌感染症からの回復及びこのような感染症の潜在的な有害後遺症の低減に寄与することを示した。以下に示すように、θディフェンシンの新しい合成アナログは、同様の又は向上した活性を提供し得る。

【0034】

発明者は、サイズが小さく、ジスルフィド結合の数が少ないにも関わらず、親ペプチドの抗真菌活性の少なくとも一部を示すθディフェンシンＲＴＤ－１の合成環状テトラデカペプチドアナログを開発している。ＲＴＤ－１の構造は図１に示す。示すように、ＲＴＤ－１（アカゲザルに天然に発現している）は、ペプチドの環状一次構造を通過するジスルフィド結合により結合される３対のシステインを含む環状オクタデカペプチドである。

【0035】

ＲＴＤ－１の合成（すなわち、天然に存在しない）アナログの多くの例は、図２から図６及び図８に示す。図２はθディフェンシンアナログ環状ペプチド１（配列番号２）の環状構造を示す。図３はθディフェンシンアナログ環状ペプチド２（配列番号３）の環状構造を示す。図４はθディフェンシンアナログ環状ペプチド３（配列番号４）の環状構造を示す。図５はθディフェンシンアナログ環状ペプチド４（配列番号５）の環状構造を示す。図６はθディフェンシンアナログ環状ペプチド５（配列番号６）の環状構造を示し、これらの研究におけるモデル化合物として使用される。図８はθディフェンシンアナログ環状ペプチド６（配列番号７）の環状構造を示す。例示的な合成アナログの各々は、ジスルフィド結合により結合される２対のシステインを含むテトラデカペプチドである。これらのジスルフィド結合は、合成ペプチドの環状一次構造を通過し、追加のアミノ酸を組み込む「箱型」構造を形成する。これらの例示的なアナログは、ＲＴＤ－１との様々な程度の配列同一性を示し、かつ場合によって合成ペプチドアナログのシステインによって規定された「箱型」の近く及び間において保存されたアミノ酸置換を示すことを理解されるべきである。

【0036】

発明者は、実質的な生体内抗真菌活性を有し、播種性カンジダ症のモデルにおいてマウスの長期生存をもたらす一連のθディフェンシンアナログを調製し、スクリーニングした。これらの効果は、直接性抗真菌活性が生体外モデル病原体で見出された濃度をはるかに下回る驚くべき低濃度である。理論に縛られることなく、発明者は、観測された抗真菌効果が宿主免疫エフェクタの調節に起因すると考える。播種性真菌感染症の長期生存には、感染生物の管理及び感染症への宿主応答により誘導されるショックの管理の両方が必要であり、そのいずれもが死をもたらし得ることは理解されるべきである。

【0037】

播種性真菌感染症に対する活性の例が提供されるが、発明者は、本明細書に記載されるθディフェンシンアナログが、局所真菌感染症（例えば、鵞口瘡）のような他の真菌感染症の治療に有効であり得ると考える。加えて、発明者は、本明細書に記載されたθディフェンシンアナログが、免疫又は炎症反応の異常調節に起因する様々な状態（慢性状態を含む）の治療に用いられ得ると考える。このような慢性状態の例は関節リウマチ及び炎症性腸疾患を含む。

【0038】

発明者は、θディフェンシンが抗ウイルス活性を有することが見出されていることに注目し、本発明の概念のθディフェンシンアナログが、同様に抗ウイルス性活性をもたらすことが可能であり、ウイルス性疾患及びウイルス感染症の炎症性後遺症の治療に有用であることを証明できると考える。このような治療は予防及び／又は進行中の疾患を含む。いくつかの実施形態では、そのように治療される進行中の疾患は症候性である。他の実施形態では、そのように治療される進行中の疾患は無症候性である。

【0039】

驚くべきことに、θディフェンシンアナログは、全身性真菌感染症に反応して免疫系を調節する際に２相反応をもたらすことが明らかにされた。初期の効果は好中球の動員であり、真菌病原体のクリアランスをもたらす。これは感染症に対して有効に働き、驚くべきことに、生体外モデル病原体に対して抗真菌効果を示さないθディフェンシンアナログの濃度において起きることが見出された。この初期の動員効果に続いて、これらの合成θディフェンシンアナログは、長期生存及び播種性真菌感染症に起因する敗血症ショックの予防に寄与する長期免疫調節効果（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－６及び他の炎症性サイトカインを低減する）を示す。

【0040】

上述のように、天然に存在するθディフェンシン及び例示的なθディフェンシンアナログの例を図１から図６及び図８に示す。これらの環状ペプチドは、ペプチド骨格を介して環化され、それにより従来のアミノ末端及びカルボキシル末端を欠くことは理解されるべきである。従って、添付のアミノ酸配列表に提供されるアミノ酸配列情報は、これらのθディフェンシンアナログの個別のＮ末端又はＣ末端の記述として解釈されるべきではない。本出願の文脈内で、アミノ酸位置は、図７Ａに示すように、θディフェンシンアナログの共通構造特徴に基づいた数字指定を用いて同定される。示すように、環状テトラデカペプチド鎖に沿ったそれぞれの位置は数字指定を有する。モデル合成環状テトラデカペプチドの環状ペプチド５（図６に示す）へのこの番号付けスキームの適用は図７Ｂに示す。このような１４アミノ酸アナログについて、図７Ａ及び図７Ｂに示すように、それらの三次元構造は、環状θディフェンシン及びそれらのアナログに使用するために適合された番号付けシステムを用いて指定され、アミノ酸６から９によって形成される第１のβターン及びアミノ酸１３、１４、１、及び２によって形成される第２のβターンを含むことが理解されるべきである。

【0041】

適切な環状テトラデカペプチドは、播種性カンジダ症のマウスモデルに対してスクリーニングすることにより同定され得る。ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手したカンジダ・アルビカンスＳＣ５３１４は適切な参照株として用いられ得る。好適な実施形態では、耐性カンジダ・アルビカンス及び／又は二つ以上の抗真菌薬に対して耐性を示すカンジダ・アルビカンスの一つ以上の株が用いられ得る。代表的な抗真菌薬は、カスポファンギン及びフルコナゾールを含む。試験される環状のテトラデカペプチド及び抗真菌薬は、水又は等張生理食塩水において懸濁され又は溶解され、皮下、筋肉内、静脈内及び／又は腹腔内注射によって投与され得る。

【0042】

合成環状テトラデカペプチド及び抗真菌化合物の生体外活性は、ＲＴＤ－１に関して上述される当技術分野において知られている従来の培養技術を用いて測定されてもよく、抗真菌未満の濃度を測定するために用いてもよい。全身性又は播種性カンジダ症は、例えば、近交系のＢＡＬＢ／ｃ又は非近交系のＣＤ－１雌マウスに、０．１５ｍＬから２ｍＬまでのカンジダ・アルビカンス（参照株又は耐性株）を約２×１０^５から約２×１０^７ＣＦＵ／ｍＬまでの菌で投与することによって生体内でモデル化され得る。動物は、病原体投与前、病原体投与時、又は病原体投与後に、合成環状テトラデカペプチドの候補により治療され得る。抗真菌薬及び／又は合成環状テトラデカペプチドの候補は、このような全身性又は播種性カンジダ症の生体内モデルにおいて、皮下、筋肉内、静脈内及び／又は腹腔内に投与され得る。

【0043】

発明者は、生体内でかなりの抗真菌活性を示す多くの新しいθディフェンシンアナログを同定している。例示的な環状ペプチドのアミノ酸配列は表２に示す。アミノ酸の同一性が、図７Ａに確立された環状構造内の対応する位置の数字指定を用いて示されることは理解されるべきである。

【表2】

ペプチド環状ペプチド１、環状ペプチド２、環状ペプチド３、及び環状ペプチド４は、環状ペプチド５と共通構造特徴を示し、発明者は、これが播種性真菌疾患の生体内モデルにおいて抗真菌及び抗炎症活性を示す他の合成環状テトラデカペプチドに共通して見出されると考える。

【0044】

環状ペプチド６は、ペプチドのジスルフィド結合に関わるシステインの間にアルギニンを挟むこと（すなわち、「Ｃ－Ｘ－Ｃボックス」内）、及び表２におけるアミノ酸６、７、８、及び９によって規定される第１のβターン内に連続した（すなわち、隣接した）アルギニンのトリプレットを含まないことにおいて、モデルペプチド環状ペプチド５とは顕著に異なる。発明者は、環状ペプチド６が、環状ペプチド１、環状ペプチド２、環状ペプチド３、及び環状ペプチド４によって示されるものとは異なるファミリーの合成環状テトラデカペプチドθディフェンシンアナログを示すと考える。発明者は、２対のジスルフィド結合されたシステインによって区切られたＣ－Ｘ－Ｃボックス構造内に複数のアルギニンを含み、及び／又は位置６、７、及び８において連続／隣接するアルギニンの特徴的トリプレットを欠く合成環状テトラデカペプチドが、播種性真菌感染症の生体内モデルにおいて顕著な抗真菌活性を有し得ることをさらに考える。

【0045】

活性研究では、顕著な抗真菌活性を有することが初期に同定された合成環状テトラデカペプチド環状ペプチド５（配列番号６）を、モデルペプチドとして用いた。簡潔に、７から８週齢の免疫能力を有する雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに３×１０^５ＣＦＵのカンジダ・アルビカンスＳＣ５３１４をＴ＝０において静脈内に投与した。感染の２４時間後、マウスに生理食塩水、フルコナゾール（Ｆｌｕｃｏ）、カスポファンギン（Ｃａｓｐｏ）、又は合成環状テトラデカペプチドを１日１回、７日間腹腔内に投与した。発明者は、０．２５ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド５が５ｍｇ／ｋｇのＲＴＤ－１よりも効果的であるように、モデルペプチド環状ペプチド５が、この生体内モデルにおいて天然のθディフェンシンＲＴＤ－１よりも実質的に強力であることを以前に測定していた。両方のペプチドが、５ｍｇ／ｋｇのフルコナゾール（図９参照）よりも効果的であった。しかし、環状ペプチド５ペプチドの用量を０．１ｍｇ／ｋｇまで減少すると、生存率の向上をもたらさなかった（図１０参照）。

【0046】

合成環状テトラデカペプチドの候補に対して、５ｍｇ／ｋｇを超える濃度で投与されたときに、毒性の欠如を測定することにより、耐性について事前スクリーニングを行った。合成環状テトラデカペプチドの候補に対して、環状ペプチド５参照ペプチド及びフルコナゾールと各候補を比較して、各ペプチドの１日の用量（０．１及び０．５ｍｇ／ｋｇ）、７日間、感染の２４時間後に始まる条件で、上述のカンジダ症モデルにおける効果についてスクリーニングを行った。

【0047】

これらの試験プロトコル下で、生理食塩水投与カンジダ・アルビカンス感染マウスは、毛の乱れ及び有意な体重減少を示し、５から１０日以内に瀕死になり、その時点までに３０％を超える体重減少があった。対照的に、長期生存している環状ペプチド５投与カンジダ敗血症マウスは、一時的に体重が平均１５％減少したが、１０日目までに頭打ちになり、このコホートの９０％が３日目までに初期体重を回復した）。

【0048】

カンジダ敗血症モデル及び有効性の指標として生存率を用いることで、環状ペプチド５と同等以上である多くの合成環状テトラデカペプチドを同定した。これらの中には環状ペプチド３、環状ペプチド４、環状ペプチド１、環状ペプチド２、及び環状ペプチド６があった。これらについての生体内播種性カンジダ症モデルの結果は、図１０から図１５に示す。

【0049】

図１０は、０．２５ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド５を用いた試験による代表的な結果を示す。環状ペプチド５は、生理食塩水投与と同様の結果であり、比較的に効果が低いことが分かった。図１１は、０．２５ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド５投与と０．１ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド３投与との間の代表的な比較結果を示す。環状ペプチド３は、この比較的低用量で効果を発揮することを見出した。図１２は、環状ペプチド５及び環状ペプチド４の比較研究の代表的な結果を示し、両方のペプチドを０．２５ｍｇ／ｋｇで用いた。環状ペプチド４は、この用量において有効である。図１３は、環状ペプチド５投与と環状ペプチド１投与との間の代表的な比較結果を示し、両方のペプチドを０．２５ｍｇ／ｋｇで適用した。環状ペプチド１は、この用量において有効である。図１４は、０．２５ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド５及び０．１ｍｇ／ｋｇの環状ペプチド１の比較研究による代表的な結果を示す。環状ペプチド１は、この比較的低用量において有効である。

【0050】

上述のように、環状ペプチド６は、ペプチドの特徴的なβターン部分（ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９によって規定される）内の連続する（すなわち、隣接する）アルギニン残基のトリプレットが欠如していること、及び環状ペプチドのこのファミリーの特徴的なＣ－Ｘ－Ｃボックス内に疎水性のアミノ酸ではなく、強塩基性のアルギニン残基を有することにおいて本明細書に引用される他のペプチドと異なる。図１５は、環状ペプチド５と環状ペプチド６との間の比較研究からの代表的なデータを示し、ペプチドを０．２５ｍｇ／ｋｇで用いた。環状ペプチド６は、両方の先行技術（抗真菌薬（フルコナゾール）及び環状ペプチド５）の結果を超える生存率をもたらすことを見出した。

【0051】

それぞれの場合において、特定の合成環状テトラデカペプチドが生存率を強化し、その効果は非常に有意であった（Ｐ＜１×１０^－５、ログランク検定）。環状ペプチド３、環状ペプチド４、環状ペプチド１、及び環状ペプチド６はエンドポイント分析（３０日（ｐ．ｉ．）におけるχ^２検定）により生存率を強化することにおいてフルコナゾールより効果的であった。同定された全ての合成テトラデカペプチドは、この生体内モデルにおいて有意に体重減少を抑制した。

【0052】

腎真菌負荷は、瀕死の生理食塩水投与対照（５から１０日（ｐ．ｉ．））及び合成環状テトラデカペプチド又はフルコナゾール投与長期生存（３０日（ｐ．ｉ．））の腎ホモジネートにおいて測定した。図１６に示すように、合成環状テトラデカペプチド（０．１又は０．２５ｍｇ／ｋｇ）及び５ｍｇ／ｋｇのフルコナゾールは真菌負荷を低減した。環状ペプチド５、環状ペプチド３、環状ペプチド４、及び環状ペプチド１は、フルコナゾールよりも大きく真菌負荷を低減した（図１６のアスタリスク；フィッシャーのＬＳＤ検定により分析：環状ペプチド５（Ｐ＝３×１０^－３）、環状ペプチド３（Ｐ＝７．４×１０^－３）、環状ペプチド４（Ｐ＝０．０２）、及び環状ペプチド１（Ｐ＝３．５×１０^－５）。

【0053】

多くの配列特徴が、これらの参照ペプチドと比較して、ＲＴＤ－１及び環状ペプチド５由来のアナログへ優れた活性を与えることを確認した。上述のように、環状ペプチド３、環状ペプチド４、環状ペプチド１、及び環状ペプチド２は、明確な構造類似性を示す合成環状テトラデカペプチドθディフェンシンアナログのグループを示す。発明者は、顕著な抗真菌活性及び／又は抗炎症活性を有し、このファミリー内であるθディフェンシンアナログが、少なくとも以下を有し得ると考える。
・二つのジスルフィド結合（それぞれ、システイン３とシステイン１２との間、及びシステイン５とシステイン１０との間）。
・セリン又はθディフェンシンアナログの一次構造におけるシステイン３とシステイン５との間に位置する疎水性アミノ酸及びシステイン１０とシステイン１２との間に位置する疎水性アミノ酸（すなわち、位置４及び位置１１）であり、疎水性アミノ酸は、好適にはロイシン又はイソロイシンである。上述のジスルフィド結合と組み合わせて、ペプチドの環状一次構造内に「Ｃ－Ｘ－Ｃボックス」として特徴を規定し、ここで「Ｃ」はシステインであり、「Ｘ」はセリン、ロイシン、又はイソロイシンである。
・生理的ｐＨにおいて＋５の電荷を有するペプチドをもたらす合計五つのアルギニン残基。
・位置６、７、及び８（すなわち、第１βターン内）に存在する、隣接するアルギニンのトリプレット。
いくつかの実施形態では、活性θディフェンシンアナログはまた、一つ以上の以下の特徴を含み得る。
・位置１に存在するグリシン。
・位置２及び位置９に存在する疎水性アミノ酸であり、好適にはバリン又はロイシンである。
・第２のβターン（例えば、位置１３及び１４）内のアルギニン対。

【0054】

候補ペプチドの毒性は、活性θディフェンシンアナログが以下の一つ以上を含むべきではないことを示唆する。
・位置４におけるアラニン。
・位置１１におけるアラニン。

【0055】

従って、発明者は、上述の「Ｃ－Ｘ－Ｃボックス」構造、位置６、７、及び８における隣接するアルギニン残基のトリプレット、位置９における疎水性アミノ酸（例えば、バリン又はフェニルアラニン）を含み、アルギニン含有量に起因する＋５の正味の正電荷（合計アミノ酸含有量の約３６％）を有する合成環状テトラデカペプチドθディフェンシンアナログが、播種性真菌感染症において死亡率の減少及び／又は長期生存率の向上の点で有効であり、炎症反応又は免疫反応の異常調節によって特徴付けられる他の状態を治療する点で有効であり得ると考える。

【0056】

発明者は、環状ペプチド６が、以下を除いて上記特徴の全て又はいくつかを有するθディフェンシンの合成環状テトラデカペプチドアナログの異なるファミリーの代表であると考える。
・Ｃ－Ｘ－Ｃボックス内の二つ以上の正電荷を有するアミノ酸（例えば、アルギニン、リジン）の複数の存在。
・ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９に規定される第２のβターン内の連続する（すなわち、隣接する）アルギニントリプレットの欠如。

【0057】

本明細書に記載するように、θディフェンシンの合成環状テトラデカペプチドアナログは、任意の適切な方法を用いて適用され得る。例えば、そのようなアナログは、注射又は注入によって提供され得る。いくつかのθディフェンシンアナログについて観測される高度な有効性は、これらが単純な皮下、皮内、皮下、及び／又は筋肉内注射によって有効量の投与を必要とする個人に提供され得ることを示す。

【0058】

代わりに、環状構造及びジスルフィド結合の存在によってもたらされる低い分子量及び高度な安定性は、本発明の概念のθディフェンシンアナログの経口投与を可能にし得る。このような経口投与は、経口投与に適した液体薬剤担体中のθディフェンシンアナログの溶液又は懸濁液の投与を含み得る。いくつかの実施形態では、θディフェンシンアナログは、経口投与の前に液体媒体中で再構成される乾燥又は凍結乾燥形態において提供され得る。このような乾燥又は凍結乾燥製剤は、安定剤を含み得る。このような安定剤は、糖類（例えば、マンニトール、スクロース、トレハロース）及び／又はタンパク質（例えば、アルブミン）を含む。

【0059】

代わりに、θディフェンシンのアナログは、錠剤、カプセル、丸薬、又は経口投与のために他の適切な固体及び小型の形態で提供され得る。このような製剤は、θディフェンシンアナログの放出を遅らせる（例えば、小腸に到達するまで放出を遅らせる）ためにもたらすコーティング、殻、又は類似の構成要素を含み得る。このような製剤は、同封物又はコーティング内の液体形態中にθディフェンシンを含み得る。代わりに、このような製剤は、乾燥又は凍結乾燥形態中にθディフェンシンアナログを含み得る。適切な乾燥又は凍結乾燥形態は、粉末、顆粒、及び圧縮固体を含む。このような乾燥又は凍結乾燥製剤は、安定剤を含み得る。適切な安定剤は、糖類（例えば、マンニトール、スクロース、トレハロース）及び／又はタンパク質（例えばアルブミン）を含む。

【0060】

上述のように、本発明の概念のθディフェンシンアナログは、播種性真菌感染症及び関連する敗血症及び／又は敗血症ショックを有効に治療し得る。いくつかの実施形態では、このような治療が、進行中の急性状態に反応する。他の実施形態では、このような治療は予防であり、例えば、個人が播種性真菌感染症を有していると疑われるとき、又はこの状態を発症する可能性が高いときに、播種性真菌感染症の発症を抑制するために用いられる。治療は、任意の適切なスケジュールにおいて、本発明の概念のθディフェンシンアナログの投与によって提供され得る。例えば、θディフェンシンアナログは、一回投与、定期的投与、又は継続的注入として提供され得る。定期的投与は、任意の適切な間隔で投与され得る。定期的な間隔は１時間毎、２時間毎、４時間毎、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、２日毎、３日毎、１週間２回、１週間毎、２週間毎、４週間毎、２ヶ月毎、３ヶ月毎、４ヶ月毎、１年３回、１年２回、１年毎であり得る。

【0061】

いくつかの実施形態では、θディフェンシンアナログの投与方法は、治療中に変更され得る。例えば、本発明の概念のθディフェンシンアナログは、最初は静脈注射又は注入（例えば、急性播種性真菌感染症における有効濃度を急速に提供する）によって投与されてもよく、後に治療の残り期間にわたって有効濃度を維持するために、皮内注射、筋肉内注射、及び／又は経口投与により投与されてもよい。

【0062】

予防的な使用のため、θディフェンシンアナログは、観測可能な症状が発生する前に投与され得る。進行中の疾患又は状態の治療のために、θディフェンシンアナログは、疾患又は状態を有効的に治療するのに適切な期間に投与され得る。このような期間は、制御された期間にわたってもよく、又は長期間（例えば、慢性的な状態の治療のため）であってもよい。

【0063】

本発明の概念のいくつかの実施形態では、θディフェンシンアナログは、他の医薬活性化合物と組み合わせて用いられ得る。適切な化合物は、θディフェンシン、異なるθディフェンシンアナログ、抗真菌抗生物質、抗菌性抗生物質、抗ウイルス薬、抗炎症薬（例えば、ステロイド、非ステロイド性抗炎症薬）、昇圧剤、及び／又は生物製剤（例えば、抗体又は抗体断片）を含む。このような追加の医薬化合物は、θディフェンシンアナログと同じスケジュール又は独立したスケジュールで提供され得る。いくつかの実施形態では、θディフェンシンアナログ含有製剤は、このような追加の医薬活性化合物の一つ以上を組み込んで提供され得る。発明者は、このような連携療法は、追加の医薬活性化合物と組み合わせたθディフェンシンアナログ投与の累積効果が、連携療法のために用いられる量に対応する量のθディフェンシンアナログ及び追加の医薬活性化合物を用いた治療において観測される個々の効果の合計を超える相乗効果を提供し得ると考える。

【0064】

本明細書における本発明の概念から逸脱することなく、既に記載された以外にも多くの変更が可能であることは、当業者にとって明らかであるべきである。従って、本発明の主題は、添付の特許請求の範囲の趣旨を除いて制限されるべきではない。加えて、本明細書及び特許請求の範囲の両方を解釈する際に、全ての用語は、文脈と矛盾しない可能な限り最も広い方法で解釈されるべきである。特に、用語「備える」及び「備えている」は、要素、構成要素、又は工程を非排他的方法で示すものとして解釈されるべきであり、参照された要素、構成要素、又は工程は、明確に参照されていない他の要素、構成要素、又は工程と共に存在してもよく、又は用いられてもよく、又は組み合わされてもよいことを示す。本明細書、特許請求の範囲が、Ａ、Ｂ、Ｃ．．．及びＮからなる群から選択されたものの内少なくとも一つを示す場合、この文言は、Ａ＋Ｎ、又はＢ＋Ｎ等ではなく、その群からの単に一つの要素を必須とすることと解釈されるべきである。

【図1】