特表 2023-534636 治療薬のネコにおける半減期を増加させるための組成物及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-10

(54)【発明の名称】治療薬のネコにおける半減期を増加させるための組成物及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230803BHJP

   C12N 15/10 20060101ALI20230803BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230803BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230803BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230803BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230803BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230803BHJP

   C07K 16/24 20060101ALI20230803BHJP

   C07K 16/22 20060101ALI20230803BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230803BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20230803BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 5/00 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20230803BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20230803BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20230803BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230803BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/10 200Z

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C07K16/24

C07K16/22

C07K16/28

C07K16/18

C12P21/08

A61P35/00

A61P29/00

A61P37/06

A61P1/00 171

A61P9/10

A61P13/12

A61P17/00 171

A61P3/04

A61P5/00

A61P15/00 171

A61P19/02

A61P7/06

A61P31/00 171

A61P37/08

A61K38/17 100

A61K39/395 Y

A61K39/395 N

A61K39/395 W

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023501003

(86)(22)【出願日】2021-06-23

(85)【翻訳文提出日】2023-02-27

(86)【国際出願番号】 US2021038714

(87)【国際公開番号】W WO2022010652

(87)【国際公開日】2022-01-13

(31)【優先権主張番号】63/050,535

(32)【優先日】2020-07-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/143,720

(32)【優先日】2021-01-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522439847

【氏名又は名称】インベテックス インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＶＥＴＸ，ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100105957

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100068755

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 博宣

(74)【代理人】

【識別番号】100142907

【弁理士】

【氏名又は名称】本田 淳

(74)【代理人】

【識別番号】100152489

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 美樹

(72)【発明者】

【氏名】ブロンディク、ウィリアム

(72)【発明者】

【氏名】シュヴァリエ、ブレット

(72)【発明者】

【氏名】ホーン、ユルゲン

(72)【発明者】

【氏名】ナタラジャン、マドゥズーダン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065CA43

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA44

4C084DA39

4C084MA66

4C084NA03

4C084ZA081

4C084ZA082

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA551

4C084ZA552

4C084ZA661

4C084ZA662

4C084ZA701

4C084ZA702

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZA961

4C084ZA962

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB131

4C084ZB132

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB321

4C084ZB322

4C084ZC611

4C084ZC612

4C085AA13

4C085BB11

4C085BB36

4C085BB42

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

１つまたは複数のポリペプチドのネコにおける半減期を増加させるための組成物及びその使用方法が提供される。組成物は、バリアントネコＩｇＧ Ｆｃ領域を含む。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのネコＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、前記ポリペプチドは、アミノ酸置換を、以下からなる群から選択される少なくとも１つの位置：
（ｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応する位置であって、前記アミノ酸置換はＳ２５２Ｗである、前記位置；
（ｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応する位置であって、前記アミノ酸置換はＳ２５４Ｒ及びＳ２５４Ｋからなる群から選択される、前記位置；
（ｉｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応する位置であって、前記アミノ酸置換はＬ３０９ＶまたはＬ３０９Ｙである、前記位置；
（ｉｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応する位置であって、前記アミノ酸置換はＱ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｖ、Ｑ３１１Ｌ及びＱ３１１Ｋからなる群から選択される、前記位置；
（ｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応する位置であって、前記アミノ酸置換はＳ４２８Ｍ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｈ及びＳ４２８Ｒからなる群から選択される、前記位置；ならびに
（ｖｉ）野生型ネコＩｇＧの２６２、２８６、２８９、２９０、２９３、３０１、３１２、３２６、３３４、３４７、３５５、３７７、３８０、３８３、３８９ｃ、３９２、４２６及び４３７からなる群から選択されるアミノ酸位置に対応する１つ以上の位置
に含み、
ここで、前記アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、前記ポリペプチドは、前記野生型ネコＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、ネコＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、前記ポリペプチド。

【請求項2】

前記ポリペプチドが、前記アミノ酸置換を、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応する位置に含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項3】

前記ポリペプチドがアミノ酸置換Ｓ２５２Ｗを含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項4】

前記ポリペプチドが、前記アミノ酸置換を、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応する位置に含む、請求項１～３のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項5】

前記野生型ネコＩｇＧの位置２５４における前記アミノ酸置換がＳ２５４Ｒである、請求項４に記載のポリペプチド。

【請求項6】

前記野生型ネコＩｇＧの位置２５４における前記アミノ酸置換がＳ２５４Ｋである、請求項４に記載のポリペプチド。

【請求項7】

前記ポリペプチドが、前記アミノ酸置換を、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応する位置に含む、請求項１～６のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項8】

前記野生型ネコＩｇＧの位置３０９における前記アミノ酸置換がＬ３０９Ｖである、請求項７に記載のポリペプチド。

【請求項9】

前記野生型ネコＩｇＧの位置３０９における前記アミノ酸置換がＬ３０９Ｙである、請求項７に記載のポリペプチド。

【請求項10】

前記ポリペプチドが、前記アミノ酸置換を、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応する位置に含む、請求項１～９のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項11】

前記野生型ネコＩｇＧの位置３１１における前記アミノ酸置換がＱ３１１Ｒである、請求項１０に記載のポリペプチド。

【請求項12】

前記野生型ネコＩｇＧの位置３１１における前記アミノ酸置換がＱ３１１Ｖである、請求項１０に記載のポリペプチド。

【請求項13】

前記野生型ネコＩｇＧの位置３１１における前記アミノ酸置換がＱ３１１Ｋである、請求項１０に記載のポリペプチド。

【請求項14】

前記野生型ネコＩｇＧの位置３１１における前記アミノ酸置換がＱ３１１Ｌである、請求項１０に記載のポリペプチド。

【請求項15】

前記ポリペプチドが、前記アミノ酸置換を、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応する位置に含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項16】

前記野生型ネコＩｇＧの位置４２８における前記アミノ酸置換がＳ４２８Ｍである、請求項１５に記載のポリペプチド。

【請求項17】

前記野生型ネコＩｇＧの位置４２８における前記アミノ酸置換がＳ４２８Ｙである、請求項１５に記載のポリペプチド。

【請求項18】

前記野生型ネコＩｇＧの位置４２８における前記アミノ酸置換がＳ４２８Ｒである、請求項１５に記載のポリペプチド。

【請求項19】

前記野生型ネコＩｇＧの位置４２８における前記アミノ酸置換がＳ４２８Ｈである、請求項１５に記載のポリペプチド。

【請求項20】

前記ポリペプチドが、野生型ネコＩｇＧの２６２、２８６、２８９、２９０、２９３、３０１、３１２、３２６、３３４、３４７、３５５、３７７、３８０、３８３、３８９ｃ、３９２、４２６及び４３７からなる群から選択されるアミノ酸位置に対応する１つ以上の位置にアミノ酸置換を含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項21】

前記アミノ酸置換が、Ｌ２６２Ｑ、Ｌ２６２Ｅ、Ｔ２８６Ｅ、Ｔ２８６Ｄ、Ｔ２８９Ｋ、Ｓ２９０Ｖ、Ｓ２９０Ｙ、Ｅ２９３Ｄ、Ｅ２９３Ｋ、Ｅ２９３Ｈ、Ｒ３０１Ｌ、Ｄ３１２Ｔ、Ｋ３２６Ｄ、Ｒ３３４Ｄ、Ｑ３４７Ｌ、Ｑ３５５Ｌ、Ｉ３７７Ｖ、Ｉ３７７Ｙ、Ｅ３８０Ｄ、Ｅ３８０Ｖ、Ｅ３８０Ｔ、Ｉ３８３Ｌ、Ｎ３８９ｃ－Ｒ、Ｒ３９２Ｅ、Ｓ４２６Ｌ、Ｓ４２６Ｈ及びＴ４３７Ｌ、ならびに前述のいずれかの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される、請求項２０に記載のポリペプチド。

【請求項22】

前記アミノ酸置換が、Ｌ２６２Ｑ、Ｌ２６２Ｅ、Ｔ２８６Ｅ、Ｔ２８６Ｄ、Ｔ２８９Ｋ、Ｓ２９０Ｖ、Ｓ２９０Ｙ、Ｅ２９３Ｄ、Ｅ２９３Ｋ、Ｅ２９３Ｈ、Ｒ３０１Ｌ、Ｄ３１２Ｔ、Ｋ３２６Ｄ、Ｒ３３４Ｄ、Ｑ３４７Ｌ、Ｑ３５５Ｌ、Ｉ３７７Ｖ、Ｉ３７７Ｙ、Ｅ３８０Ｄ、Ｅ３８０Ｖ、Ｅ３８０Ｔ、Ｉ３８３Ｌ、Ｎ３８９ｃ－Ｒ、Ｒ３９２Ｅ、Ｓ４２６Ｌ、Ｓ４２６Ｈ及びＴ４３７Ｌからなる群から選択される、請求項２１に記載のポリペプチド。

【請求項23】

ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのネコＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、前記ポリペプチドは、２つ以上のアミノ酸置換を含み、前記２つ以上のアミノ酸置換は、以下からなる群：
（ｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ２５２Ｗ、Ｓ２５２Ｙ、Ｓ２５２Ｆ及びＳ２５２Ｒからなる群から選択される、前記アミノ酸置換；
（ｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ２５４Ｒ及びＳ２５４Ｋからなる群から選択される、前記アミノ酸置換；
（ｉｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｌ３０９Ｖ、Ｌ３０９Ｙ及びＬ３０９Ｅからなる群から選択される、前記アミノ酸置換；
（ｉｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｖ、Ｑ３１１Ｌ及びＱ３１１Ｋからなる群から選択される、前記アミノ酸置換；
（ｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ４２８Ｌ、Ｓ４２８Ｍ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｈ及びＳ４２８Ｒからなる群から選択される、前記アミノ酸置換；
（ｖｉ）野生型ネコＩｇＧの２６２、２８６、２８９、２９０、２９３、３０１、３１２、３２６、３３４、３４７、３５５、３７７、３８０、３８３、３８９ｃ、３９２、４２６及び４３７からなる群から選択されるアミノ酸位置に対応する１つ以上の位置におけるアミノ酸置換；ならびに
（ｖｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ４３４Ｆ、Ｓ４３４Ｗ、Ｓ４３４Ｈ、Ｓ４３４Ｒ、及びＳ４３４Ｙからなる群から選択される、前記アミノ酸置換
から選択され、
ここで、前記アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、前記２つ以上のアミノ酸置換は、異なる位置にあり、前記ポリペプチドは、（ａ）前記野生型ネコＩｇＧのＦｃドメイン、及び（ｂ）前記２つ以上のアミノ酸置換のうちの１つのみを含むポリペプチドと比較した場合、ネコＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、前記ポリペプチド。

【請求項24】

前記２つ以上のアミノ酸置換が、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換は、Ｔ２８６Ｅ及びＴ２８６Ｄからなる群から選択される、請求項２３に記載のポリペプチド。

【請求項25】

前記２つ以上のアミノ酸置換が、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２８９に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換は、Ｔ２８９Ｋ及びＴ２８９Ｈからなる群から選択される、請求項２３または請求項２４に記載のポリペプチド。

【請求項26】

前記２つ以上のアミノ酸置換が、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０１に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換は、Ｒ３０１Ｌである、請求項２３～２５のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項27】

前記２つ以上のアミノ酸置換が、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３３４に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換は、Ｒ３３４Ｄである、請求項２３～２６のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項28】

前記２つ以上のアミノ酸置換が、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換は、Ｓ４２６Ｌ及びＳ４２６Ｈからなる群から選択される、請求項２３～２７のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項29】

前記２つ以上のアミノ酸置換が、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４３７に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換は、Ｔ４３７Ｌである、請求項２３～２８のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項30】

前記２つ以上のアミノ酸置換が、以下からなる群：
（ｉ）Ｓ２５２Ｙと、Ｑ３１１Ｒ及び／またはＱ３１１Ｌとの組み合わせ；
（ｉｉ）Ｓ４３４Ｙと、Ｓ２５４Ｒ、Ｓ２５４Ｋ、Ｌ２６２Ｅ、Ｔ２８６Ｄ、Ｔ２８６Ｅ、Ｔ２８９Ｋ、Ｅ２９３Ｄ、Ｅ２９３Ｋ、Ｌ３０９Ｖ、Ｌ３０９Ｅ、Ｋ３２６Ｄ及びＱ３４７Ｌのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｉｉｉ）Ｓ４３４Ｆと、Ｅ３８０Ｄとの組み合わせ；
（ｉｖ）Ｓ４２８Ｌと、Ｓ２５２Ｒ、Ｔ２８６Ｅ、Ｑ３１１Ｖ、Ｑ３１１Ｋ、Ｄ３１２Ｔ、Ｉ３７７Ｖ、Ｉ３８３Ｌ、及びＮ３８９ｃＲのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｖ）Ｓ４２８Ｌ、Ｅ３８０Ｄ及びＳ４３４Ｒ；
（ｖｉ）Ｓ４２８Ｌ、Ｅ３８０Ｔ及びＳ４３４Ｒ；
（ｖｉｉ）Ｓ２５２Ｒと、Ｌ２６２Ｑとの組み合わせ；
（ｖｉｉｉ）Ｔ２６０Ｅ、Ｌ３０９Ｅ及びＱ３５５Ｌ；
（ｉｘ）Ｓ２９０Ｖと、Ｒ３４４Ｄとの組み合わせ；
（ｘ）Ｒ３０１Ｌ、Ｅ３８０Ｖ及びＴ４３７Ｌ；
（ｘｉ）Ｔ２８６Ｅと、Ｓ４２８Ｈとの組み合わせ；
（ｘｉｉ）Ｒ３３４Ｄと、Ｓ４２８Ｒ、Ｔ４３７Ｌ及びＲ３０１Ｌのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｘｉｉｉ）Ｓ４２６Ｌと、Ｔ２８９Ｈ及び／またはＳ４２８Ｈとの組み合わせ；
（ｘｉｖ）Ｓ４２８Ｙと、Ｑ３１１Ｖ、Ｓ２５４Ｒ、Ｌ３０９Ｖ、Ｔ２８６Ｅ、及びＥ３８０Ｔのうちの１つ以上との組み合わせ；ならびに
（ｘｖ）Ｓ４２８Ｈと、Ｔ２８９Ｈとの組み合わせ
から選択される、請求項２３に記載のポリペプチド。

【請求項31】

前記ポリペプチドが、配列番号１～３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項32】

前記野生型ネコＩｇＧが、配列番号１のアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むネコＩｇＧ１ａである、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項33】

前記野生型ネコＩｇＧが、配列番号２のアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むネコＩｇＧ１ｂである、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項34】

前記野生型ネコＩｇＧが、配列番号３のアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むネコＩｇＧ２である、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項35】

結合ドメインを更に含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項36】

前記結合ドメインが、（ｉ）免疫グロブリン分子の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）；（ｉｉ）ネコ受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、（ｉｉｉ）ナノボディ、または（ｉｖ）ネコ受容体タンパク質の細胞外ドメインを含む、請求項３５に記載のポリペプチド。

【請求項37】

前記結合ドメインが、ＮＧＦ、ＴｒＫＡ、ＡＤＡＭＴＳ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、アンジオテンシン１型（ＡＴ１）受容体、アンジオテンシン２型（ＡＴ２）受容体、ＩＬ－５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、ＣＤ３、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＣＤ５２、及び補体系複合体からなる群から選択される抗原に特異的に結合する、請求項３５または請求項３６に記載のポリペプチド。

【請求項38】

ＥＰＯ、ＣＴＬＡ４、ＬＦＡ３、ＶＥＧＦＲ１／ＶＥＧＦＲ３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、及びトロンボポエチン結合ペプチドからなる群から選択されるタンパク質を更に含む、請求項１～３７のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項39】

前記ポリペプチドが、中性ｐＨよりも酸性ｐＨでより高いレベルでネコＦｃＲｎに結合する、請求項１～３８のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項40】

前記ポリペプチドが、ｐＨ７．４よりもｐＨ５．５でより高いレベルでネコＦｃＲｎに結合する、請求項３９に記載のポリペプチド。

【請求項41】

前記ポリペプチドが、ｐＨ７．４よりもｐＨ６．０でより高いレベルでネコＦｃＲｎに結合する、請求項３９に記載のポリペプチド。

【請求項42】

（ｉ）請求項１～４１のいずれか１項に記載のポリペプチドと、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項43】

請求項１～４１のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸。

【請求項44】

請求項４３に記載の１つまたは複数の核酸を含む、１つまたは複数の発現ベクター。

【請求項45】

請求項４３に記載の１つもしくは複数の核酸または請求項４４に記載の１つもしくは複数の発現ベクターを含む、宿主細胞。

【請求項46】

ポリペプチドを作製する方法であって、
（ａ）請求項４３に記載の１つまたは複数の核酸を提供すること；
（ｂ）宿主細胞培養物中で前記１つまたは複数の核酸を発現させ、それにより、前記ポリペプチドを産生すること；及び
（ｃ）（ｂ）で産生された前記ポリペプチドを前記宿主細胞培養物から回収すること
を含む、前記方法。

【請求項47】

前記ポリペプチドを医薬製剤として製剤化することを更に含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

ネコの疾患または障害を治療することを、それを必要とするネコに行う方法であって、請求項４２に記載の医薬組成物を含む組成物の有効量を前記ネコに投与することを含む、前記方法。

【請求項49】

ネコの疾患または障害を予防することを、それを必要とするネコに行う方法であって、請求項４２に記載の医薬組成物を含む組成物の有効量を前記ネコに投与することを含む、前記方法。

【請求項50】

前記ネコの疾患または障害が、アレルギー、慢性疼痛、急性疼痛、炎症性疾患、自己免疫疾患、内分泌疾患、胃腸疾患、心血管疾患、腎臓疾患、生殖機能関連障害、感染症またはがんである、請求項４８または請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記ネコの疾患または障害が、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、骨関節炎痛、関節炎、貧血、または肥満である、請求項４８または請求項４９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年７月１０日に出願された米国特許仮出願第６３／０５０，５３５号、及び２０２１年１月２９日に出願された米国特許仮出願第６３／１４３，７２０号の優先権を主張するものであり、そのそれぞれの内容は、それらの全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

配列表
本出願は、電子的に提出されたＡＳＣＩＩ形式の配列表を含み、その全体は、参照により本明細書に援用される。当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年６月２３日に作成され、名称は、「４７４０６－００１６ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔ」であり、サイズは、２５ＫＢである。

【0003】

本開示は、概して、ネコにおける半減期が野生型同等物と比較して増加したポリペプチド（例えば、ポリペプチド－Ｆｃ領域融合体などの融合ポリペプチド；または抗体もしくは受容体－Ｆｃ融合体のリガンド結合部分などの結合分子）に関する。

【背景技術】

【0004】

抗体のＦｃ領域は、多くの機能的役割を担っており、限定するものではないが、リソソーム経路を介した分解から抗体を保護すること、抗体のエフェクター機能を媒介することなどが挙げられる。ネコ抗体の治療薬としての使用が増えるにつれ、最適なＦａｂを選択することだけでなく、望ましい半減期及びエフェクター機能を得るのに適切なＦｃと組み合わせることにも重点が置かれてきている。

【0005】

当該技術分野において、ネコに使用するポリペプチド治療薬（例えば、抗体）の半減期を増加させることに関する指針はほとんどない。本開示は、ネコにおけるポリペプチド（例えば、抗体）の血清中持続性を改善するＦｃ領域バリアントを提供することによってその欠落を解消するものである。

【発明の概要】

【0006】

本明細書で提供されるのは、治療用ポリペプチドに有用なネコＦｃ（例えば、ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアント）またはそのネコＦｃＲｎ結合断片である。本開示は、対照ポリペプチド（例えば、野生型同等物であるＩｇＧのネコＦｃ領域）よりもネコＦｃＲｎに対する結合が増加したポリペプチドを特徴とする。いくつかの場合において、これらのポリペプチドは、ｐＨ５．５、ｐＨ６．０及び／またはｐＨ６．５において、対照ポリペプチドよりもネコＦｃＲｎに対する結合が増加する。いくつかの場合において、これらのポリペプチドは、例えば、中性ｐＨ（例えば、ｐＨ７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、または７．５）よりも酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ５．５、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５）で、より高いレベルでネコＦｃＲｎに結合することができる。いくつかの場合において、これらのポリペプチドは、ｐＨ７．４よりもｐＨ５．５及び／または６．０でより高いレベルでネコＦｃＲｎに結合する。本開示は、部分的には、ネコにおける半減期が野生型同等物よりも増加したポリペプチドに関する。例えば、本明細書で開示されるＦｃ領域またはそのネコＦｃＲｎ結合領域に結合していない結合分子のバージョンと比べて半減期が増加した結合分子（例えば、抗体または受容体のリガンド結合部分）が提供される。また、酵素－Ｆｃ領域融合体、リガンド－Ｆｃ領域融合体、ナノボディ－Ｆｃ融合体、及びペプチド－Ｆｃ領域融合体も提供され、融合体は、野生型同等物と比較して半減期が増加している。Ｆｃ領域は、半減期を増加させる１つまたは複数の置換（野生型ネコＦｃ領域と比べて）を有することに加えて、例えば、エフェクター機能の増加、エフェクター機能の減少、プロテインＡに対する結合の増加及び／またはポリペプチドの不均一性の減少（例えば、Ｆｃ領域における１つ以上の翻訳後修飾を取り除くことによる）をもたらす他の置換も含み得る。ネコＦｃ領域配列は、任意のネコ抗体に由来し得る。いくつかの場合において、ネコＦｃ領域配列は、ネコＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂ、ＩｇＧ２）に由来する。

【0007】

本開示は、（１）リガンドまたはタンパク質のエピトープに特異的に結合する結合ドメインまたはその断片を含み、ここで、結合ドメインは、（２）本明細書で開示されるＦｃ領域（ＣＨ２＋ＣＨ３領域）またはそのネコＦｃＲｎ結合領域を含むドメインに結合している、組み換えタンパク質を特徴とする。いくつかの場合において、結合ドメインは、（ｉ）６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えば、ネコまたはヒト／ヒト化抗体のもの；（ｉｉ）ナノボディ；（ｉｉｉ］リガンドに結合する可溶性受容体結合ドメインまたはそのリガンド結合断片、及び（ｉｖ）ネコ受容体タンパク質の細胞外ドメインを含む。

【0008】

本開示はまた、（１）本明細書に記載されるネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントを含む第１のＦｃ領域（例えば、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、ＣＨ２＋ＣＨ３領域）を含む第１のポリペプチドと、（２）本明細書に記載されるネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントを含む第２のＦｃ領域を含む第２のポリペプチドとを含む、組成物を提供する。第１及び第２のポリペプチドは、第１及び第２のＦｃ領域を介して会合することができる。いくつかの場合において、第１及び第２のＦｃ領域のアミノ酸配列は、同じである。他の場合において、第１及び第２のＦｃ領域のアミノ酸配列は、異なる（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸）。いくつかの場合において、Ｆｃ領域バリアントは、ネコＩｇＧ１ａ抗体のＦｃ領域のバリアントである。いくつかの場合において、Ｆｃ領域バリアントは、ネコＩｇＧ１ｂ抗体のＦｃ領域のバリアントである。いくつかの場合において、Ｆｃ領域バリアントは、ネコＩｇＧ２抗体のＦｃ領域のバリアントである。

【0009】

本明細書で開示されるネコＩｇＧのＦｃ領域バリアント及びポリペプチドを含む、融合分子も開示される。いくつかの場合において、ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントは、ポリペプチドに共有結合的に結合される（例えば、ヒンジ領域またはリンカーを介して）。いくつかの場合において、ポリペプチドは、ネコ受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、ネコ受容体タンパク質の細胞外ドメイン、または抗原結合ドメインである。いくつかの場合において、ポリペプチドは、ネコＩＬ－１３Ｒα１またはＩＬ－１３Ｒα２のリガンド結合ドメインまたは細胞外ドメイン、ネコＥＰＯ、ネコＣＴＬＡ４、ネコＬＦＡ３、ネコＶＥＧＦＲ１／ＶＥＧＦＲ３、ネコＩＬ－１Ｒ、ネコＧＬＰ－１受容体アゴニスト、及びネコトロンボポエチン結合ペプチドから選択される。いくつかの場合において、ポリペプチドは、ｓｃＦｖ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体である。いくつかの場合において、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントは、バリアントは、ネコＩｇＧ１ａ抗体のＦｃ領域のバリアントである。いくつかの場合において、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントは、ネコＩｇＧ１ｂ抗体のＦｃ領域のバリアントである。いくつかの場合において、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントは、ネコＩｇＧ２抗体のＦｃ領域のバリアントである。

【0010】

いくつかの態様において、本開示は、ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのネコＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、ポリペプチドは、アミノ酸置換を、以下からなる群から選択される少なくとも１つの位置：
（ｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応する位置であって、アミノ酸置換はＳ２５２Ｗである、位置；
（ｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応する位置であって、アミノ酸置換はＳ２５４Ｒ及びＳ２５４Ｋからなる群から選択される、位置；
（ｉｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応する位置であって、アミノ酸置換はＬ３０９ＶまたはＬ３０９Ｙである、位置；
（ｉｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応する位置であって、アミノ酸置換はＱ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｖ、Ｑ３１１Ｌ及びＱ３１１Ｋからなる群から選択される、位置；
（ｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応する位置であって、アミノ酸置換はＳ４２８Ｍ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｈ及びＳ４２８Ｒからなる群から選択される、位置；ならびに
（ｖｉ）野生型ネコＩｇＧの２６２、２８６、２８９、２９０、２９３、３０１、３１２、３２６、３３４、３４７、３５５、３７７、３８０、３８３、３８９ｃ、３９２、４２６及び４３７からなる群から選択されるアミノ酸位置に対応する１つ以上の位置に含み、
ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、ネコＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、ポリペプチドを提供する。

【0011】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置２５２におけるアミノ酸置換は、Ｓ２５２Ｗである。

【0012】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置２５４におけるアミノ酸置換は、Ｓ２５４Ｒである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置２５４におけるアミノ酸置換は、Ｓ２５４Ｋである。

【0013】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置３０９におけるアミノ酸置換は、Ｌ３０９Ｖである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置３０９におけるアミノ酸置換は、Ｌ３０９Ｙである。

【0014】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置３１１におけるアミノ酸置換は、Ｑ３１１Ｒである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置３１１におけるアミノ酸置換は、Ｑ３１１Ｖである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置３１１におけるアミノ酸置換は、Ｑ３１１Ｋである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置３１１におけるアミノ酸置換は、Ｑ３１１Ｌである。

【0015】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置４２８におけるアミノ酸置換は、Ｓ４２８Ｍである。

【0016】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、少なくとも、アミノ酸置換Ｓ４２８Ｙを含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置４２８におけるアミノ酸置換は、Ｓ４２８Ｙである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置４２８におけるアミノ酸置換は、Ｓ４２８Ｒである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置４２８におけるアミノ酸置換は、Ｓ４２８Ｈである。

【0017】

別の実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧの２６２、２８６、２８９、２９０、２９３、３０１、３１２、３２６、３３４、３４７、３５５、３７７、３８０、３８３、３８９ｃ、３９２、４２６及び４３７からなる群から選択されるアミノ酸位置に対応する１つ以上の位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、Ｌ２６２Ｑ、Ｌ２６２Ｅ、Ｔ２８６Ｅ、Ｔ２８６Ｄ、Ｔ２８９Ｋ、Ｓ２９０Ｖ、Ｓ２９０Ｙ、Ｅ２９３Ｄ、Ｅ２９３Ｈ、Ｅ２９３Ｋ、Ｒ３０１Ｌ、Ｄ３１２Ｔ、Ｋ３２６Ｄ、Ｒ３３４Ｄ、Ｑ３４７Ｌ、Ｑ３５５Ｌ、Ｉ３７７Ｖ、Ｉ３７７Ｙ、Ｅ３８０Ｄ、Ｅ３８０Ｖ，Ｅ３８０Ｔ、Ｉ３８３Ｌ、Ｎ３８９ｃ－Ｒ、Ｒ３９２Ｅ、Ｓ４２６Ｌ、Ｓ４２６Ｈ及びＴ４３７Ｌ、ならびに前述のいずれかの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、Ｌ２６２Ｑ、Ｌ２６２Ｅ、Ｔ２８６Ｅ、Ｔ２８６Ｄ、Ｔ２８９Ｋ、Ｓ２９０Ｖ、Ｓ２９０Ｙ、Ｅ２９３Ｄ、Ｅ２９３Ｈ、Ｅ２９３Ｋ、Ｒ３０１Ｌ、Ｄ３１２Ｔ、Ｋ３２６Ｄ、Ｒ３３４Ｄ、Ｑ３４７Ｌ、Ｑ３５５Ｌ、Ｉ３７７Ｖ、Ｉ３７７Ｙ、Ｅ３８０Ｄ、Ｅ３８０Ｖ、Ｅ３８０Ｔ、Ｉ３８３Ｌ、Ｎ３８９ｃ－Ｒ、Ｒ３９２Ｅ、Ｓ４２６Ｌ、Ｓ４２６Ｈ及びＴ４３７Ｌからなる群から選択される。

【0018】

別の態様において、本開示は、ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのネコＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、ポリペプチドは、２つ以上のアミノ酸置換を含み、２つ以上のアミノ酸置換は、以下からなる群：
（ｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ２５２Ｗ、Ｓ２５２Ｙ、Ｓ２５２Ｆ及びＳ２５２Ｒからなる群から選択される、アミノ酸置換；
（ｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ２５４Ｒ及びＳ２５４Ｋからなる群から選択される、アミノ酸置換；
（ｉｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｌ３０９Ｖ、Ｌ３０９Ｙ及びＬ３０９Ｅからなる群から選択される、アミノ酸置換；
（ｉｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｖ、Ｑ３１１Ｌ及びＱ３１１Ｋからなる群から選択される、アミノ酸置換；
（ｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ４２８Ｌ、Ｓ４２８Ｍ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｈ及びＳ４２８Ｒからなる群から選択される、アミノ酸置換；
（ｖｉ）野生型ネコＩｇＧの２６２、２８６、２８９、２９０、２９３、３０１、３１２、３２６、３３４、３４７、３５５、３７７、３８０、３８３、３８９ｃ、３９２、４２６及び４３７からなる群から選択されるアミノ酸位置に対応する１つ以上の位置におけるアミノ酸置換；ならびに
（ｖｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ４３４Ｆ、Ｓ４３４Ｗ、Ｓ４３４Ｈ、Ｓ４３４Ｒ、及びＳ４３４Ｙからなる群から選択される、アミノ酸置換から選択され、
ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、２つ以上のアミノ酸置換は、異なる位置にあり、ポリペプチドは、（ａ）野生型ネコＩｇＧのＦｃドメイン、及び（ｂ）２つ以上のアミノ酸置換のうちの１つのみを含むポリペプチドと比較した場合、ネコＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、ポリペプチドを提供する。

【0019】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、Ｔ２８６Ｅ及びＴ２８６Ｄからなる群から選択される。

【0020】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２８９に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、Ｔ２８９Ｋ及びＴ２８９Ｈからなる群から選択される。

【0021】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０１に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、Ｒ３０１Ｌである。

【0022】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３３４に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、Ｒ３３４Ｄである。

【0023】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ４２６Ｌ及びＳ４２６Ｈからなる群から選択される。

【0024】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４３７に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、Ｔ４３７Ｌである。

【0025】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、以下からなる群：
（ｉ）Ｓ２５２Ｙと、Ｑ３１１Ｒ及び／またはＱ３１１Ｌとの組み合わせ；
（ｉｉ）Ｓ４３４Ｙと、Ｓ２５４Ｒ、Ｓ２５４Ｋ、Ｌ２６２Ｅ、Ｔ２８６Ｄ、Ｔ２８６Ｅ、Ｔ２８９Ｋ、Ｅ２９３Ｄ、Ｅ２９３Ｋ、Ｌ３０９Ｖ、Ｌ３０９Ｅ、Ｋ３２６Ｄ及びＱ３４７Ｌのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｉｉｉ）Ｓ４３４Ｆと、Ｅ３８０Ｄとの組み合わせ；
（ｉｖ）Ｓ４２８Ｌと、Ｓ２５２Ｒ、Ｔ２８６Ｅ、Ｑ３１１Ｖ、Ｑ３１１Ｋ、Ｄ３１２Ｔ、Ｉ３７７Ｖ、Ｉ３８３Ｌ、及びＮ３８９ｃＲのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｖ）Ｓ４２８Ｌ、Ｅ３８０Ｄ及びＳ４３４Ｒ；
（ｖｉ）Ｓ４２８Ｌ、Ｅ３８０Ｔ及びＳ４３４Ｒ；
（ｖｉｉ）Ｓ２５２Ｒと、Ｌ２６２Ｑとの組み合わせ；
（ｖｉｉｉ）Ｔ２６０Ｅ、Ｌ３０９Ｅ及びＱ３５５Ｌ；
（ｉｘ）Ｓ２９０Ｖと、Ｒ３４４Ｄとの組み合わせ；
（ｘ）Ｒ３０１Ｌ、Ｅ３８０Ｖ及びＴ４３７Ｌ；
（ｘｉ）Ｔ２８６Ｅと、Ｓ４２８Ｈとの組み合わせ；
（ｘｉｉ）Ｒ３３４Ｄと、Ｓ４２８Ｒ、Ｔ４３７Ｌ及びＲ３０１Ｌのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｘｉｉｉ）Ｓ４２６Ｌと、Ｔ２８９Ｈ及び／またはＳ４２８Ｈとの組み合わせ；
（ｘｉｖ）Ｓ４２８Ｙと、Ｑ３１１Ｖ、Ｓ２５４Ｒ、Ｌ３０９Ｖ、Ｔ２８６Ｅ、及びＥ３８０Ｔのうちの１つ以上との組み合わせ；ならびに
（ｘｖ）Ｓ４２８Ｈと、Ｔ２８９Ｈとの組み合わせから選択される。

【0026】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１～３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0027】

いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧは、配列番号１に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むネコＩｇＧ１ａ、配列番号２に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むネコＩｇＧ１ｂ、または配列番号３に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むネコＩｇＧ２である。

【0028】

他の実施形態において、野生型ネコＩｇＧは、配列番号１のアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むネコＩｇＧ１ａである。他の実施形態において、野生型ネコＩｇＧは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むネコＩｇＧ１ｂである。他の実施形態において、野生型ネコＩｇＧは、配列番号３のアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むネコＩｇＧ２である。

【0029】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、（ｉ）免疫グロブリン分子の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）；（ｉｉ）ネコ受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、（ｉｉｉ）ナノボディ、または（ｉｖ）ネコ受容体タンパク質の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、ＮＧＦ、ＴｒＫＡ、ＡＤＡＭＴＳ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、アンジオテンシン１型（ＡＴ１）受容体、アンジオテンシン２型（ＡＴ２）受容体、ＩＬ－５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、ＣＤ３、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＣＤ５２、及び補体系複合体からなる群から選択される抗原に特異的に結合する。

【0030】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ＥＰＯ、ＣＴＬＡ４、ＬＦＡ３、ＶＥＧＦＲ１／ＶＥＧＦＲ３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、及びトロンボポエチン結合ペプチドからなる群から選択されるタンパク質を更に含む。

【0031】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、中性ｐＨよりも酸性ｐＨでより高いレベルでネコＦｃＲｎに結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ｐＨ７．４よりもｐＨ５．５でより高いレベルでネコＦｃＲｎに結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ｐＨ７．４よりもｐＨ６．０でより高いレベルでネコＦｃＲｎに結合する。

【0032】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、（１）１つもしくは複数の対照ポリペプチドよりもネコにおける半減期が増加しており、ここで、１つもしくは複数の対照ポリペプチドは、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントの代わりに、対応する野生型ネコＩｇＧのＦｃ領域を有する以外は１つもしくは複数のポリペプチドと同一であり、及び／または（２）対照ポリペプチドよりもネコＦｃＲｎに対する結合が増加しており、ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づくものである。

【0033】

いくつかの態様において、本開示は、（ｉ）本明細書に記載されるポリペプチド、及び（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。

【0034】

いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載されるポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を提供する。

【0035】

いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載される１つまたは複数の核酸を含む、１つまたは複数の発現ベクターを提供する。

【0036】

いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載される１つもしくは複数の核酸または本明細書に記載される１つもしくは複数の発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。

【0037】

いくつかの態様において、本開示は、１つまたは複数のポリペプチドを作製する方法を提供し、方法は、以下を含む：
（ａ）本明細書に記載される１つまたは複数の核酸を提供すること；
（ｂ）宿主細胞培養物中で１つまたは複数の核酸を発現させ、それにより、ポリペプチドを産生すること；
（ｃ）（ｂ）で産生されたポリペプチドを宿主細胞培養物から回収すること。

【0038】

いくつかの実施形態において、方法は、ポリペプチドを医薬製剤として製剤化することを更に含む。

【0039】

いくつかの態様において、本開示は、ネコの疾患または障害を治療することを、それを必要とするネコに行う方法であって、本明細書に記載される医薬組成物を含む組成物の有効量をネコに投与することを含む、方法を提供する。

【0040】

いくつかの態様において、本開示は、ネコの疾患または障害を予防することを、それを必要とするネコに行う方法であって、本明細書に記載される医薬組成物を含む組成物の有効量をネコに投与することを含む、方法を提供する。

【0041】

いくつかの実施形態において、疾患または障害は、アレルギー性疾患、慢性疼痛、急性疼痛、炎症性疾患、自己免疫疾患、内分泌疾患、胃腸疾患、心血管疾患、腎臓疾患、生殖機能関連障害、感染症またはがんである。

【0042】

いくつかの実施形態において、疾患または障害は、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、骨関節炎痛、関節炎、貧血、または肥満である。

【0043】

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。本発明の実施または検証には、本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料を使用することができるが、例示的な方法及び材料について以下に記載する。本明細書で言及される全ての公開物、特許出願、特許及び他の参考文献は、その全体が参照により援用される。矛盾が生じる場合には、定義を含め、本出願が優先される。材料、方法及び例は、例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。

【0044】

本発明の他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び特許請求の範囲から明らかとなろう。

【図面の簡単な説明】

【0045】

【図1】ＮＮＫライブラリーのＳ４２８Ｌ、Ｓ４２８Ｍ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４３４Ｆ、Ｓ４３４Ｗ及びＳ４３４ＨのネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図2】ＮＮＫライブラリーのＳ２５２Ｗ、Ｓ２５２Ｙ及びＳ２５２ＦのネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。野生型（ＷＴ）のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムも示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図3】野生型ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ領域（配列番号１）及び野生型ネコＩｇＧ１ｂ Ｆｃ領域（配列番号２）と、推定の野生型ネコＩｇＧ２ Ｆｃ領域（配列番号３）のアミノ酸配列アライメントを示す。三角形の間にあるのがヒンジ領域である。矢印は、２つの重鎖間のジスルフィド架橋に関与すると思われるヒンジ領域内のシステイン残基を示す（Ｓｔｒｉｅｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．，１５８：２１４－２２３）。

【図4】野生型ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ領域（配列番号１）及びヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列アライメントをＥＵナンバリングに基づいて示す。実施例２に記載されるファージライブラリーの生成に使用した５５のアミノ酸位置に強調及び下線を施した。

【図5A】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２ＹネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図5B】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２ＹネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図6A】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｙ＋Ｑ３１１ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図6B】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｙ＋Ｑ３１１ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図7A】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｙ＋Ｑ３１１ＫネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図7B】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｙ＋Ｑ３１１ＫネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図8A】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｙ＋Ｑ３１１ＶネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図8B】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｙ＋Ｑ３１１ＶネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図9A】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｙ＋Ｑ３１１ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図9B】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｙ＋Ｑ３１１ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図10A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４ＹネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図10B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４ＹネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図11A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｓ２５４ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図11B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｓ２５４ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図12A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｓ２５４ＫネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図12B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｓ２５４ＫネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図13A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｌ２６２ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図13B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｌ２６２ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図14A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｔ２８６ＤネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図14B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｔ２８６ＤネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図15A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｔ２８６ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図15B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｔ２８６ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図16A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｔ２８９ＫネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図16B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｔ２８９ＫネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図17A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｅ２９３ＤネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図17B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｅ２９３ＤネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図18A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｅ２９３ＫネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図18B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｅ２９３ＫネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図19A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｌ３０９ＶネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図19B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｌ３０９ＶネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図20A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｌ３０９ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図20B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｌ３０９ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図21A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｋ３２６ＤネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図21B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｋ３２６ＤネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図22A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｑ３４７ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図22B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｑ３４７ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図23A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｓ４２６ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図23B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｙ＋Ｓ４２６ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図24A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４ＦネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図24B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４ＦネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図25A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｆ＋Ｅ３８０ＤネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図25B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４３４Ｆ＋Ｅ３８０ＤネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図26A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｔ２８６ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図26B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｔ２８６ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図27A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｑ３１１ＶネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図27B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｑ３１１ＶネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図28A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｑ３１１ＫネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図28B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｑ３１１ＫネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図29A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｄ３１２ＴネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図29B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｄ３１２ＴネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図30A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｉ３７７ＶネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図30B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｉ３７７ＶネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図31A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｉ３８３ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図31B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｉ３８３ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図32A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｎ３８９ｃＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図32B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｎ３８９ｃＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図33A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｅ３８０Ｄ＋Ｓ４３４ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図33B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｅ３８０Ｄ＋Ｓ４３４ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図34A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｅ３８０Ｔ＋Ｓ４３４ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図34B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｅ３８０Ｔ＋Ｓ４３４ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図35A】ファージディスプレイライブラリーのＱ３１１ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図35B】ファージディスプレイライブラリーのＱ３１１ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図36A】ファージディスプレイライブラリーのＲ３９２ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図36B】ファージディスプレイライブラリーのＲ３９２ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図37A】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｒ＋Ｌ２６２ＱネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図37B】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｒ＋Ｌ２６２ＱネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図38A】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｒ＋Ａ３７８ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図38B】ファージディスプレイライブラリーのＳ２５２Ｒ＋Ａ３７８ＥネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図39A】ファージディスプレイライブラリーのＴ２６０Ｅ＋Ｌ３０９Ｅ＋Ｑ３５５ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図39B】ファージディスプレイライブラリーのＴ２６０Ｅ＋Ｌ３０９Ｅ＋Ｑ３５５ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図40A】ファージディスプレイライブラリーのＴ２８６Ｅ＋Ｓ４２８ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図40B】ファージディスプレイライブラリーのＴ２８６Ｅ＋Ｓ４２８ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図41A】ファージディスプレイライブラリーのＳ２９０Ｖ＋Ｒ３３４ＤネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図41B】ファージディスプレイライブラリーのＳ２９０Ｖ＋Ｒ３３４ＤネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図42A】ファージディスプレイライブラリーのＲ３０１Ｌ＋Ｅ３８０Ｖ＋Ｔ４３７ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図42B】ファージディスプレイライブラリーのＲ３０１Ｌ＋Ｅ３８０Ｖ＋Ｔ４３７ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図43A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図43B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８ＬネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図44A】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｓ２５２ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図44B】ファージディスプレイライブラリーのＳ４２８Ｌ＋Ｓ２５２ＲネコＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントとネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図45A】野生型ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃバリアント（配列番号１）とネコＦｃＲＮとのｐＨ６．０における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図45B】野生型ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃバリアント（配列番号１）とネコＦｃＲＮとのｐＨ７．４における相互作用のＣａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡセンサーグラムを示す。不規則な線は測定データを表し、滑らかな線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図46】抗ＮＧＦモノクローナル抗体（ｍＡｂ）バリアントの血清中濃度を記述するために使用された非線形混合効果（ＮＬＭＥ）モデルを用いた線形クリアランスを有する２コンパートメント薬物動態（ＰＫ）モデルのフロー図を示す。

【図47】野生型（ＷＴ）抗体ならびに抗体バリアントＳ２５２Ｗ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ、及びＳ４２８Ｙ＋Ｓ２５４Ｒの個々に観察された血清中濃度を示す（抗体／バリアントにつき２匹の動物からの結果）。

【図48】２ｍｇ／ｋｇの抗体／バリアントの単回ＩＶ投与を受ける典型的な２ｋｇのネコにおける、野生型（ＷＴ）抗体ならびに抗体バリアントＳ２５２Ｗ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ、及びＳ４２８Ｙ＋Ｓ２５４Ｒの予測血清中濃度プロファイルを示す。

【図49A】野生型ネコＩｇＧ１ａの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49B】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49C】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49D】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49E】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49F】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49G】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49H】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49I】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49J】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49K】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図49L】ネコＩｇＧ１ａバリアントの結合を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は近似曲線を表す。Ｙ軸：レゾナンスユニット（ＲＵ）；Ｘ軸：時間（秒）。

【図50】バリアントにつき２匹の動物を用いて個々に観察された野生型及びＦｃバリアントの血清中濃度を示す。

【図51】野生型（ＷＴ）ＩｇＧ１ａ ＦｃまたはＩｇＧ１ａ Ｆｃバリアントを保持するモノクローナル抗体の予測血清中濃度プロファイルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0046】

多種多様なネコ疾患の予防及び治療のための治療薬としてポリペプチド（例えば、抗体、受容体のリガンド結合ドメイン、酵素、リガンド、ペプチド）の使用が増えているが、特に、ポリペプチドを繰り返し投与しなければならない慢性疾患の予防または治療には、半減期の長いポリペプチドを開発することが重要である。

【0047】

したがって、本開示は、ネコ免疫グロブリンＦｃ領域またはそのネコＦｃＲｎ結合領域であって、これらの配列を含む１つまたは複数のポリペプチドの半減期を向上させる変異を含むものを特徴とする。また、これらのドメインを含むポリペプチド及びその使用方法も開示される。これらのペプチドは、様々な治療用途及び診断用途に使用することができる。

【0048】

値が範囲で記載されている場合、その記載は、特定の数値または特定の下位範囲が明示されているかどうかにかかわらず、かかる範囲内の全ての可能な下位範囲及びかかる範囲内に入る特定の数値の開示を含むことが理解されるべきである。全ての数の表記、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、及び分子量は、範囲を含め、近似値であり、１．０または０．１の増分で適宜（＋）または（－）に変動し、あるいは＋／－１５％、あるいは１０％、あるいは５％、あるいは２％の変動がある。必ずしも常に明示されているわけではないが、全ての数の表記は、「約」という語が先行することが理解される。また、必ずしも常に明示されているわけではないが、本明細書に記載される試薬は単なる例示であり、その等価物は当該技術分野において知られていることも理解される。

【0049】

「約」という用語は、量または濃度などの測定可能な値に言及する際に本明細書で使用される場合、明記される量の２０％、１０％、５％、１％、０．５％、または０．１％の変動を包含することを意味している。

【0050】

ネコ抗体
ネコは、典型的に、ＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂ及びＩｇＧ２と呼ばれる３つのＩｇＧ重鎖を有する。これらの重鎖は、３つの異なるネコＩｇＧのサブクラスを表している。これらの重鎖アミノ酸及びＤＮＡ配列は、Ｓｔｒｉｅｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．，１５８：２１４－２２３及びＧＥＮＢＡＮＫデータベースから入手可能である。例えば、ネコＩｇＧ１ａ重鎖のアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＢＡＡ３２２２９．１であり、ネコＩｇＧ１ｂ重鎖は、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＢＡＡ３２２３０．１であり、ネコＩｇＧ２重鎖は、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＫＦ８１１１７５．１である。ネコ抗体はまた、カッパ及びラムダの２つの種類の軽鎖を含む。これらの軽鎖のＤＮＡ及びアミノ酸配列もまた、ＧＥＮＢＡＮＫデータベースから得ることができる。例えば、ネコカッパ軽鎖アミノ酸配列は、アクセッション番号ＡＦ１９８２５７．１であり、ネコラムダ軽鎖は、アクセッション番号Ｅ０７３３９．１である。

【0051】

ネコＦｃ領域のＣＨ２領域：
ネコ抗体のＣＨ２領域は、ネコＩｇＧ抗体のアミノ酸２３１～３４０（ＥＵナンバリングに従う）を含むか、またはそれらからなる。ＣＨ２領域は、そのＮ末端及び／またはＣ末端に、１～６個（例えば、１、２、３、４、５、６個）の追加のアミノ酸または欠失を含み得ることが理解される。

【0052】

ネコＩｇＧ１ａのＣＨ２領域のアミノ酸配列は、以下に提供される：ＰＰＥＭＬＧＧＰＳＩＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＳＩＳＲＴＰＥＶＴＣＬＶＶＤＬＧＰＤＤＳＤＶＱＩＴＷＦＶＤＮＴＱＶＹＴＡＫＴＳＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＬＨＱＤＷＬＫＧＫＥＦＫＣＫＶＮＳＫＳＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＫ（配列番号４）

【0053】

ネコＩｇＧ１ｂのＣＨ２ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＰＰＥＭＬＧＧＰＳＩＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＳＩＳＲＴＰＥＶＴＣＬＶＶＤＬＧＰＤＤＳＤＶＱＩＴＷＦＶＤＮＴＱＶＹＴＡＫＴＳＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＬＨＱＤＷＬＫＧＫＥＦＫＣＫＶＮＳＫＳＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＤＫ（配列番号５）

【0054】

ネコＩｇＧ２のＣＨ２ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＶＰＥＩＰＧＡＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＳＩＳＲＴＰＥＶＴＣＬＶＶＤＬＧＰＤＤＳＮＶＱＩＴＷＦＶＤＮＴＥＭＨＴＡＫＴＲＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＬＨＱＤＷＬＫＧＫＥＦＫＣＫＶＮＳＫＳＬＰＳＡＭＥＲＴＩＳＫＡＫ（配列番号６）

【0055】

ネコＦｃ領域のＣＨ３領域：
ネコ抗体のＣＨ３領域は、ネコＩｇＧ抗体のアミノ酸３４１～４４７（ＥＵナンバリングに従う）を含むか、またはそれらからなる。ＣＨ３領域は、そのＮ末端及び／またはＣ末端に、１～６個（例えば、１、２、３、４、５、６個）の追加のアミノ酸または欠失を含み得ることが理解される。

【0056】

ネコＩｇＧ１ａのＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＧＱＰＨＥＰＱＶＹＶＬＰＰＡＱＥＥＬＳＲＮＫＶＳＶＴＣＬＩＫＳＦＨＰＰＤＩＡＶＥＷＥＩＴＧＱＰＥＰＥＮＮＹＲＴＴＰＰＱＬＤＳＤＧＴＹＦＶＹＳＫＬＳＶＤＲＳＨＷＱＲＧＮＴＹＴＣＳＶＳＨＥＡＬＨＳＨＨＴＱＫＳＬＴＱＳＰＧＫ（配列番号７）

【0057】

ネコＩｇＧ１ｂのＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＧＱＰＨＥＰＱＶＹＶＬＰＰＡＱＥＥＬＳＲＮＫＶＳＶＴＣＬＩＥＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＩＴＧＱＰＥＰＥＮＮＹＲＴＴＰＰＱＬＤＳＤＧＴＹＦＬＹＳＲＬＳＶＤＲＳＲＷＱＲＧＮＴＹＴＣＳＶＳＨＥＡＬＨＳＨＨＴＱＫＳＬＴＱＳＰＧＫ（配列番号８）

【0058】

ネコＩｇＧ２のＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＧＱＰＨＥＰＱＶＹＶＬＰＰＴＱＥＥＬＳＥＮＫＶＳＶＴＣＬＩＫＧＦＨＰＰＤＩＡＶＥＷＥＩＴＧＱＰＥＰＥＮＮＹＱＴＴＰＰＱＬＤＳＤＧＴＹＦＬＹＳＲＬＳＶＤＲＳＨＷＱＲＧＮＴＹＴＣＳＶＳＨＥＡＬＨＳＨＨＴＱＫＳＬＴＱＳＰＧＫ（配列番号９）

【0059】

ネコＦｃ領域のＦｃ領域：
ネコＩｇＧ抗体のＦｃ領域は、ネコＩｇＧ抗体のアミノ酸２３１～４４７（ＥＵナンバリングに従う）を含むか、またはそれらからなる。

【0060】

ネコＩｇＧ１ａのＦｃドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＰＰＥＭＬＧＧＰＳＩＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＳＩＳＲＴＰＥＶＴＣＬＶＶＤＬＧＰＤＤＳＤＶＱＩＴＷＦＶＤＮＴＱＶＹＴＡＫＴＳＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＬＨＱＤＷＬＫＧＫＥＦＫＣＫＶＮＳＫＳＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＫＧＱＰＨＥＰＱＶＹＶＬＰＰＡＱＥＥＬＳＲＮＫＶＳＶＴＣＬＩＫＳＦＨＰＰＤＩＡＶＥＷＥＩＴＧＱＰＥＰＥＮＮＹＲＴＴＰＰＱＬＤＳＤＧＴＹＦＶＹＳＫＬＳＶＤＲＳＨＷＱＲＧＮＴＹＴＣＳＶＳＨＥＡＬＨＳＨＨＴＱＫＳＬＴＱＳＰＧＫ
（配列番号１）

【0061】

ネコＩｇＧ１ｂのＦｃドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＰＰＥＭＬＧＧＰＳＩＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＳＩＳＲＴＰＥＶＴＣＬＶＶＤＬＧＰＤＤＳＤＶＱＩＴＷＦＶＤＮＴＱＶＹＴＡＫＴＳＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＬＨＱＤＷＬＫＧＫＥＦＫＣＫＶＮＳＫＳＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＤＫＧＱＰＨＥＰＱＶＹＶＬＰＰＡＱＥＥＬＳＲＮＫＶＳＶＴＣＬＩＥＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＩＴＧＱＰＥＰＥＮＮＹＲＴＴＰＰＱＬＤＳＤＧＴＹＦＬＹＳＲＬＳＶＤＲＳＲＷＱＲＧＮＴＹＴＣＳＶＳＨＥＡＬＨＳＨＨＴＱＫＳＬＴＱＳＰＧＫ
（配列番号２）

【0062】

ネコＩｇＧ２のＦｃドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＶＰＥＩＰＧＡＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＳＩＳＲＴＰＥＶＴＣＬＶＶＤＬＧＰＤＤＳＮＶＱＩＴＷＦＶＤＮＴＥＭＨＴＡＫＴＲＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＬＨＱＤＷＬＫＧＫＥＦＫＣＫＶＮＳＫＳＬＰＳＡＭＥＲＴＩＳＫＡＫＧＱＰＨＥＰＱＶＹＶＬＰＰＴＱＥＥＬＳＥＮＫＶＳＶＴＣＬＩＫＧＦＨＰＰＤＩＡＶＥＷＥＩＴＧＱＰＥＰＥＮＮＹＱＴＴＰＰＱＬＤＳＤＧＴＹＦＬＹＳＲＬＳＶＤＲＳＨＷＱＲＧＮＴＹＴＣＳＶＳＨＥＡＬＨＳＨＨＴＱＫＳＬＴＱＳＰＧＫ （配列番号３）

【0063】

以下の表１は、ヒトＩｇＧ１、ネコＩｇＧ１ａ、ネコＩｇＧ１ｂ、及びネコＩｇＧ２のＣＨ２及びＣＨ３ドメインのアミノ酸配列をＥＵナンバリングに基づき比較するものである。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【0064】

半減期を改善するネコＩｇＧ Ｆｃの置換
血清中持続性の増加は、治療用ポリペプチドにとって有益な特性である。本開示は、野生型ネコＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂ及びＩｇＧ２のＦｃ領域の置換を特徴とし、置換は、１つまたは複数の対照ポリペプチドと比べて、これらのＦｃ領域を含む１つまたは複数のポリペプチドのネコにおける半減期を向上させるものであり、ここで、１つまたは複数の対照ポリペプチドは、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントの代わりに、対応する野生型ネコＩｇＧのＦｃ領域を有する以外は１つまたは複数のポリペプチドと同一であるものである。半減期を増加させる置換は、ネコＣＨ２領域、ネコＣＨ３領域のうちの１つ以上において、またはネコＦｃ（例えば、ＣＨ２＋ＣＨ３）領域との関連でなされ得る。

【0065】

本開示は、ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのネコＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、ポリペプチドは、アミノ酸置換を、以下からなる群から選択される少なくとも１つの位置：
（ｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応する位置であって、アミノ酸置換はＳ２５２Ｗである、位置；
（ｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応する位置であって、アミノ酸置換はＳ２５４Ｒ及びＳ２５４Ｋからなる群から選択される、位置；
（ｉｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応する位置であって、前記アミノ酸置換はＬ３０９ＶまたはＬ３０９Ｙである、位置；
（ｉｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応する位置であって、アミノ酸置換はＱ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｖ、Ｑ３１１Ｌ及びＱ３１１Ｋからなる群から選択される、位置；
（ｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応する位置であって、アミノ酸置換はＳ４２８Ｍ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｈ及びＳ４２８Ｒからなる群から選択される、位置；ならびに
（ｖｉ）野生型ネコＩｇＧの２６２、２８６、２８９、２９０、２９３、３０１、３１２、３２６、３３４、３４７、３５５、３７７、３８０、３８３、３８９ｃ、３９２、４２６及び４３７からなる群から選択されるアミノ酸位置に対応する１つ以上の位置に含み、
ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、ネコＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、ポリペプチドを提供する。

【0066】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、約５．０～約６．５（例えば、約５．５または約６．０）のｐＨにおいて、ネコＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している。

【0067】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置２５２におけるアミノ酸置換は、Ｓ２５２Ｗである。

【0068】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置２５４におけるアミノ酸置換は、Ｓ２５４Ｒである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置２５４におけるアミノ酸置換は、Ｓ２５４Ｋである。

【0069】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｌ３０９ＶまたはＬ３０９Ｙを含む。

【0070】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置３１１におけるアミノ酸置換は、Ｑ３１１Ｒである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置３１１におけるアミノ酸置換は、Ｑ３１１Ｖである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置３１１におけるアミノ酸置換は、Ｑ３１１Ｋである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置３１１におけるアミノ酸置換は、Ｑ３１１Ｌである。

【0071】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置４２８におけるアミノ酸置換は、Ｓ４２８Ｍである。

【0072】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、少なくとも、アミノ酸置換Ｓ４２８Ｙを含む。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置４２８におけるアミノ酸置換は、Ｓ４２８Ｙである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置４２８におけるアミノ酸置換は、Ｓ４２８Ｒである。いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧの位置４２８におけるアミノ酸置換は、Ｓ４２８Ｈである。

【0073】

別の実施形態において、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧの２６２、２８６、２８９、２９０、２９３、３０１、３１２、３２６、３３４、３４７、３５５、３７７、３８０、３８３、３８９ｃ、３９２、４２６及び４３７からなる群から選択されるアミノ酸位置に対応する１つ以上の位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、Ｌ２６２Ｑ、Ｌ２６２Ｅ、Ｔ２８６Ｅ、Ｔ２８６Ｄ、Ｔ２８９Ｋ、Ｓ２９０Ｖ、Ｓ２９０Ｙ、Ｅ２９３Ｄ、Ｅ２９３Ｈ、Ｅ２９３Ｋ、Ｒ３０１Ｌ、Ｄ３１２Ｔ、Ｋ３２６Ｄ、Ｒ３３４Ｄ、Ｑ３４７Ｌ、Ｑ３５５Ｌ、Ｉ３７７Ｖ、Ｉ３７７Ｙ、Ｅ３８０Ｄ、Ｅ３８０Ｖ、Ｅ３８０Ｔ、Ｉ３８３Ｌ、Ｎ３８９ｃ－Ｒ、Ｒ３９２Ｅ、Ｓ４２６Ｌ、Ｓ４２６Ｈ及びＴ４３７Ｌ、ならびに前述のいずれかの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、Ｌ２６２Ｑ、Ｌ２６２Ｅ、Ｔ２８６Ｅ、Ｔ２８６Ｄ、Ｔ２８９Ｋ、Ｓ２９０Ｖ、Ｓ２９０Ｙ、Ｅ２９３Ｄ、Ｅ２９３Ｈ、Ｅ２９３Ｋ、Ｒ３０１Ｌ、Ｄ３１２Ｔ、Ｋ３２６Ｄ、Ｒ３３４Ｄ、Ｑ３４７Ｌ、Ｑ３５５Ｌ、Ｉ３７７Ｖ、Ｉ３７７Ｙ、Ｅ３８０Ｄ、Ｅ３８０Ｖ、Ｅ３８０Ｔ、Ｉ３８３Ｌ、Ｎ３８９ｃ－Ｒ、Ｒ３９２Ｅ、Ｓ４２６Ｌ、Ｓ４２６Ｈ及びＴ４３７Ｌからなる群から選択される。

【0074】

別の態様において、本開示は、ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのネコＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、ポリペプチドは、２つ以上のアミノ酸置換を含み、２つ以上のアミノ酸置換は、以下からなる群：
（ｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ２５２Ｗ、Ｓ２５２Ｙ、Ｓ２５２Ｆ及びＳ２５２Ｒからなる群から選択される、アミノ酸置換；
（ｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ２５４Ｒ及びＳ２５４Ｋからなる群から選択される、アミノ酸置換；
（ｉｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｌ３０９Ｖ、Ｌ３０９Ｙ及びＬ３０９Ｅからなる群から選択される、アミノ酸置換；
（ｉｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｖ、Ｑ３１１Ｌ及びＱ３１１Ｋからなる群から選択される、アミノ酸置換；
（ｖ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ４２８Ｌ、Ｓ４２８Ｍ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｈ及びＳ４２８Ｒからなる群から選択される、アミノ酸置換；
（ｖｉ）野生型ネコＩｇＧの２６２、２８６、２８９、２９０、２９３、３０１、３１２、３２６、３３４、３４７、３５５、３７７、３８０、３８３、３８９ｃ、３９２、４２６及び４３７からなる群から選択されるアミノ酸位置に対応する１つ以上の位置におけるアミノ酸置換；ならびに
（ｖｉｉ）野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応する位置におけるアミノ酸置換であって、Ｓ４３４Ｆ、Ｓ４３４Ｗ、Ｓ４３４Ｈ、Ｓ４３４Ｒ、及びＳ４３４Ｙからなる群から選択される、アミノ酸置換から選択され、
ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、２つ以上のアミノ酸置換は、異なる位置にあり、ポリペプチドは、（ａ）野生型ネコＩｇＧのＦｃドメイン、及び（ｂ）２つ以上のアミノ酸置換のうちの１つのみを含むポリペプチドと比較した場合、ネコＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、ポリペプチドを提供する。

【0075】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ２８６Ｅ及びＴ２８６Ｄからなる群から選択される。

【0076】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２８９に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ２８９Ｋ及びＴ２８９Ｈからなる群から選択される。

【0077】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３０１に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｒ３０１Ｌである。

【0078】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置３３４に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｒ３３４Ｄである。

【0079】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ４２６Ｌ及びＳ４２６Ｈからなる群から選択される。

【0080】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置４３７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ４３７Ｌである。

【0081】

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、以下からなる群：
（ｉ）Ｓ２５２Ｙと、Ｑ３１１Ｒ及び／またはＱ３１１Ｌとの組み合わせ；
（ｉｉ）Ｓ４３４Ｙと、Ｓ２５４Ｒ、Ｓ２５４Ｋ、Ｌ２６２Ｅ、Ｔ２８６Ｄ、Ｔ２８６Ｅ、Ｔ２８９Ｋ、Ｅ２９３Ｄ、Ｅ２９３Ｋ、Ｌ３０９Ｖ、Ｌ３０９Ｅ、Ｋ３２６Ｄ及びＱ３４７Ｌのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｉｉｉ）Ｓ４３４Ｆ及びＥ３８０Ｄ；
（ｉｖ）Ｓ４２８Ｌと、Ｓ２５２Ｒ、Ｔ２８６Ｅ、Ｑ３１１Ｖ、Ｑ３１１Ｋ、Ｄ３１２Ｔ、Ｉ３７７Ｖ、Ｉ３８３Ｌ、Ｎ３８９ｃＲのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｖ）Ｓ４２８Ｌ、Ｅ３８０Ｄ及びＳ４３４Ｒ；
（ｖｉ）Ｓ４２８Ｌ、Ｅ３８０Ｔ及びＳ４３４Ｒ；
（ｖｉｉ）Ｓ２５２Ｒと、Ｌ２６２Ｑとの組み合わせ；
（ｖｉｉｉ）Ｔ２６０Ｅ、Ｌ３０９Ｅ及びＱ３５５Ｌ；
（ｉｘ）Ｓ２９０Ｖ及びＲ３４４Ｄ；ならびに
（ｘ）Ｒ３０１Ｌ、Ｅ３８０Ｖ及びＴ４３７Ｌから選択される。

【0082】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１～３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。

【0083】

いくつかの場合において、本開示は、配列番号４～６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ネコＩｇＧのＣＨ２領域バリアントを提供する。また、配列番号４～６のいずれか１つとは１～１５個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個）のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含む、ネコＩｇＧのＣＨ２領域バリアントも提供される。

【0084】

他の場合において、本開示は、配列番号７～９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％または少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ネコＩｇＧのＣＨ３領域バリアントを特徴とする。また、配列番号７～９のいずれか１つとは１～１５個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個）のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含む、ネコＩｇＧのＣＨ３領域バリアントも特徴とする。

【0085】

ある特定の場合において、本開示は、配列番号１～３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントを特徴とする。また、配列番号１～３のいずれか１つとは１～２０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個）のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含む、ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントが開示される。

【0086】

いくつかの実施形態において、ネコＩｇＧのＦｃ ＣＨ２領域バリアントを含む１つまたは複数のポリペプチドが提供され、ＣＨ２領域バリアントは、配列番号４～６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0087】

いくつかの実施形態において、ネコＩｇＧのＦｃ ＣＨ３領域バリアントを含む１つまたは複数のポリペプチドを特徴とし、ＣＨ３領域バリアントは、配列番号７～９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0088】

いくつかの実施形態において、ネコＩｇＧのＦｃ領域バリアントを含む１つまたは複数のポリペプチドを特徴とし、Ｆｃ領域バリアントは、配列番号１～３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0089】

別途指摘されるように、ポリペプチドは、いくつかの実施形態において、野生型ネコＩｇＧのアミノ酸位置２５０～２５６、アミノ酸位置２８５～２８８；アミノ酸位置３０７～３１５；アミノ酸位置３７６～３８０；アミノ酸位置３８３～３９２；またはアミノ酸位置４２８～４３７に対応する領域中に少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を更に含み、ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、ポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧのＦｃドメインと比較して、ネコＦｃＲｎに対する結合が増加している。

【0090】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、以下の表２に開示されるものから選択される少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個）の追加のアミノ酸置換を含む。

【表2】

【0091】

置換は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはＦｃドメインの片方または両方の鎖になされてもよい。いくつかの場合において、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはＦｃドメインの両方の鎖上の置換は、同一である。いくつかの場合において、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはＦｃドメインの両方の鎖上の置換は、同一ではない。いくつかの場合において、Ｆｃ領域は、エフェクター機能の増加もしくは減少及び／または産物の不均一性の改善をもたらす１つ以上の追加の置換を含む。

【0092】

半減期を向上させる置換と組み合わせることができる他の置換
治療用ポリペプチド／タンパク質（例えば、モノクローナル抗体）の開発は、所望のポリペプチド／タンパク質を生成するために、一連の複雑な作業の調整を必要とする複雑なプロセスである。これらには、特異性、親和性、機能活性、人工細胞株における発現レベルの最適化、長期安定性、エフェクター機能の除去または向上、ならびに商業的に利用可能な製造法及び精製法の開発が含まれる。本開示は、上記の目標のいずれか１つ以上を促進する任意の追加の置換を包含する。

【0093】

いくつかの実施形態において、置換は、ネコＦｃ領域のエフェクター機能を減少させるために導入される。そのような置換は、当業者に知られており、ネコＩｇＧの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、または７個）の位置にあり得る。例示的な例としては、ＷＯ２０１９／０３５０１０Ａ１が挙げられる。

【0094】

いくつかの実施形態において、プロテインＡクロマトグラフィーによる精製を容易にするために、置換を野生型ネコＩｇＧ Ｆｃ領域に導入して、プロテインＡへの結合を高める。そのような置換は、当業者に知られており、ネコＩｇＧの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、または７個）の位置にあり得る。例示的な例としては、ＷＯ２０１９／０３５０１０Ａ１が挙げられる。

【0095】

いくつかの実施形態において、追加のアミノ酸置換は、親ポリペプチドまたは野生型ポリペプチドと比較して、ＦｃＲｎに対する結合親和性を変更するためになされる（例えば、ＦｃＲｎとの結合親和性を増加または減少させる）。

【0096】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ネコ抗体のヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態において、修飾は、半減期を増加させるために、ネコ抗体のヒンジ領域に行うことができる。

【0097】

ネコＩｇＧ Ｆｃバリアントを含むポリペプチド
本開示は、ネコにおける半減期を増加させることから利益を得ることができる任意のポリペプチドを包含する。半減期を増加させるために、これらのポリペプチドは、上に開示されるＦｃ領域バリアント（例えば、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、ＣＨ２＋ＣＨ３領域）を含むように設計される。

【0098】

例示的なポリペプチドとしては、限定するものではないが、全抗体、ｓｃＦｖ、ナノボディ、受容体のリガンド結合部分、サイトカイン、成長因子、酵素、及びペプチドが挙げられる。例えば、上で開示されるＣＨ３ドメインバリアントは、ｓｃＦｖナノボディ、受容体のリガンド結合部分（例えば、ネコＩＬ－１３Ｒα１またはＩＬ－１３Ｒα２のリガンド結合部分）、サイトカイン、成長因子、酵素、またはペプチドに結合されてもよい。本明細書で使用される場合、「ナノボディ」、「ＶＨＨ」、「ＶＨＨ抗体断片」及び「単一ドメイン抗体」という用語は、ラクダ科動物で見られる種類の抗体の単一重鎖の可変ドメインを示すために、本明細書中で区別なく使用され、典型的に天然で軽鎖を欠いている。好適なナノボディは、当業者によく知られているが、その実例としては、ラクダ、ヒトコブラクダ、ラマ及びアルパカのナノボディが挙げられる。あるいは、上に開示されるＦｃ領域バリアントは、これらのポリペプチドに結合され得る。別の実施形態において、ネコまたはネコ化抗体は、本明細書で開示されるＦｃ領域バリアントを含むように改変される。

【0099】

いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドは、抗体ヒンジ領域を含む。ヒンジ領域は、抗原またはポリペプチドのリガンド結合ドメインとＦｃ領域バリアントとの間に配置され得る。いくつかの場合において、ヒンジ領域は、サイトカイン、成長因子、酵素、またはペプチドのＣ末端に結合され、ヒンジ領域は、Ｆｃ領域バリアントのＮ末端に結合される。例示的なヒンジ領域配列は、以下に提供される。
ＩｇＧ１ａ：ＫＴＤＨＰＰＧＰＫＰＣＤＣＰＫＣＰ（配列番号１０）；
ＩｇＧ１ｂ：ＫＴＤＨＰＰＧＰＫＰＣＤＣＰＫＣＰ（配列番号１１）；
ＩｇＧ２：ＫＴＡＳＴＩＥＳＫＴＧＥＧＰＫＣＰ（配列番号１２）；

【0100】

本開示の組み換えタンパク質におけるヒンジ領域は、使用される場合、配列番号１０～１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と比べて、０～６個（すなわち、０、１、２、３、４、５、または６個）のアミノ酸置換を含み得る。いくつかの場合において、本開示の組み換えタンパク質に使用されるヒンジ領域は、配列番号１０～１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である。

【0101】

本開示の１つまたは複数のポリペプチドは、結合ドメインを含み得る。結合ドメインは、本明細書に記載される選択標的のタンパク質、サブユニット、ドメイン、モチーフ、及び／またはエピトープに特異的に結合することができる。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、タンパク質を含み得、ここで、タンパク質は、本明細書に記載される治療用タンパク質である。いくつかの実施形態において、標的（例えば、結合ドメインの標的）または治療用タンパク質（例えば、融合ポリペプチド）は、以下からなる群から選択される：１７－ＩＡ、４－１ＢＢ、４Ｄｃ、６－ケト－ＰＧＦ１ａ、８－イソ－ＰＧＦ２ａ、８－オキソ－ｄＧ、Ａ１アデノシン受容体、Ａ３３、ＡＣＥ、ＡＣＥ－２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡ ＡＬＫ－２、アクチビンＲＩＢ ＡＬＫ－４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＩＩＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＳ、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、アドレシン、ａＦＧＦ、ＡＬＣＡＭ、ＡＬＫ、ＡＬＫ－１、ＡＬＫ－７、アルファ－１－抗トリプシン、アルファ－Ｖ／ベータ－１アンタゴニスト、ＡＮＧ、Ａｎｇ、ＡＰＡＦ－１、ＡＰＥ、ＡＰＪ、ＡＰＰ、ＡＰＲＩＬ、ＡＲ、ＩｇＥ、アンジオテンシン１型（ＡＴ１）受容体、アンジオテンシン２型（ＡＴ２）受容体、ＡＲＣ、ＡＲＴ、アルテミン、抗Ｉｄ、ＡＳＰＡＲＴＩＣ、心房性ナトリウム利尿因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、Ａｘｌ、ｂ２Ｍ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ、Ｂリンパ球刺激因子（ＢｌｙＳ）、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ－１、Ｂａｄ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦ－Ｒ、Ｂａｇ－１、ＢＡＫ、Ｂａｘ、ＢＣＡ－１、ＢＣＡＭ、Ｂｃｌ、ＢＣＭＡ、ＢＤＮＦ、ｂ－ＥＣＧＦ、ｂＦＧＦ、ＢＩＤ、Ｂｉｋ、ＢＩＭ、ＢＬＣ、ＢＬ－ＣＡＭ、ＢＬＫ、ＢＭＰ、ＢＭＰ－２ ＢＭＰ－２ａ、ＢＭＰ－３オステオゲニン、ＢＭＰ－４ ＢＭＰ－２ｂ、ＢＭＰ－５、ＢＭＰ－６ Ｖｇｒ－１、ＢＭＰ－７（ＯＰ－１）、ＢＭＰ－８（ＢＭＰ－８ａ、ＯＰ－２）、ＢＭＰＲ、ＢＭＰＲ－ＩＡ（ＡＬＫ－３）、ＢＭＰＲ－ＩＢ（ＡＬＫ－６）、ＢＲＫ－２、ＲＰＫ－１、ＢＭＰＲ－ＩＩ（ＢＲＫ－３）、ＢＭＰｓ、ｂ－ＮＧＦ、ＢＯＫ、ボンベシン、骨由来神経栄養因子、ＢＰＤＥ、ＢＰＤＥ－ＤＮＡ、ＢＴＣ、補体因子３（Ｃ３）、Ｃ３ａ、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ１０、ＣＡ１２５、ＣＡＤ－８、カルシトニン、ｃＡＭＰ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、癌腫関連抗原、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＣ／ＤＰＰＩ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＨ、カテプシンＬ、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カテプシンＶ、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、ＣＢＬ、ＣＣ１、ＣＣＫ２、ＣＣＬ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９／１０、ＣＣＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ３２、ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ６４、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７４、ＣＤ８０（Ｂ７－１）、ＣＤ８９、ＣＤ９５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５２、ＣＤ１６４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、ｃＧＭＰ、ＣＩＮＣ、ボツリヌス菌毒素、ウェルシュ菌毒素、ＣＫｂ８－１、ＣＬＣ、ＣＭＶ、ＣＭＶ ＵＬ、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＮ－１、ＣＯＸ、Ｃ－Ｒｅｔ、ＣＲＧ－２、ＣＴ－１、ＣＴＡＣＫ、ＣＴＧＦ、ＣＴＬＡ－４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、サイトケラチン腫瘍関連抗原、ＤＡＮ、ＤＣＣ、ＤｃＲ３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、崩壊促進因子、ｄｅｓ（１－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－１）、Ｄｈｈ、ジゴキシン、ＤＮＡＭ－１、Ｄｎａｓｅ、Ｄｐｐ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、Ｄｔｋ、ＥＣＡＤ、ＥＤＡ、ＥＤＡ－Ａ１、ＥＤＡ－Ａ２、ＥＤＡＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＥＭＡ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥＮＡ、エンドセリン受容体、エンケファリナーゼ、ｅＮＯＳ、Ｅｏｔ、エオタキシン１、ＥｐＣＡＭ、エフリンＢ２／ＥｐｈＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＣＣ、Ｅ－セレクチン、ＥＴ－１、第ＩＩａ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩｃ因子、第ＩＸ因子、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆａｓ、ＦｃＲ１、ＦＥＮ－１、フェリチン、ＦＧＦ、ＦＧＦ－１９、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ－８、ＦＧＦＲ、ＦＧＦＲ－３、フィブリン、ＦＬ、ＦＬＩＰ、Ｆｌｔ－３、Ｆｌｔ－４、卵胞刺激ホルモン、フラクタルカイン、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＦＺＤ１０、Ｇ２５０、Ｇａｓ６、ＧＣＰ－２、ＧＣＳＦ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＤＦ、ＧＤＦ－１、ＧＤＦ－３（Ｖｇｒ－２）、ＧＤＦ－５（ＢＭＰ－１４、ＣＤＭＰ－１）、ＧＤＦ－６（ＢＭＰ－１３、ＣＤＭＰ－２）、ＧＤＦ－７（ＢＭＰ－１２、ＣＤＭＰ－３）、ＧＤＦ－８（ミオスタチン）、ＧＤＦ－９、ＧＤＦ－１５（ＭＩＣ－１）、ＧＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＧＦＡＰ、ＧＦＲａ－１、ＧＦＲ－アルファ１、ＧＦＲ－アルファ２、ＧＦＲ－アルファ３、ＧＩＴＲ、ＧＬＰ１、ＧＬＰ２、グルカゴン、Ｇｌｕｔ４、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ（ＧＰ ＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＧＭ－ＣＳＦ、ｇｐ１３０、ｇｐ７２、ＧＲＯ、ＧｎＲＨ、成長ホルモン放出因子、ハプテン（ＮＰ－ｃａｐまたはＮＩＰ－ｃａｐ）、ＨＢ－ＥＧＦ、ＨＣＣ、ＨＣＭＶ ｇＢエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ）ｇＨエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ ＵＬ、造血成長因子（ＨＧＦ）、Ｈｅｐ Ｂ ｇｐ１２０、ヘパラナーゼ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ－２）、Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ－３）、Ｈｅｒ４（ＥｒｂＢ－４）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ｇＢ糖タンパク質、ＨＳＶ ｇＤ糖タンパク質、ＨＧＦＡ、高分子メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、ＨＩＶ ｇｐ１２０、ＨＩＶ ＩＩＩＢ ｇｐ１２０ Ｖ３ループ、ＨＬＡ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＭＦＧ ＰＥＭ、ＨＲＧ、Ｈｒｋ、心臓ミオシン、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、成長ホルモン（ＧＨ）、ＨＶＥＭ、１－３０９、ＩＡＰ、ＩＣＡＭ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－３、ＩＣＥ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮｇ、Ｉｇ、ＩｇＡ受容体、ＩｇＥ、ＩＧＦ、ＩＧＦ結合タンパク質、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＧＦＢＰ、ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、インターロイキン受容体（例えば、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８Ｒ、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－１２Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＬ－２２Ｒ、ＩＬ－２３Ｒ、ＩＬ－２５Ｒ、ＩＬ－３１Ｒ、ＩＬ－３３Ｒ）、インターフェロン（ＩＮＦ）－アルファ、ＩＮＦ－ベータ、ＩＮＦ－ガンマ、インヒビン、ｉＮＯＳ、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、インスリン様成長因子１、インテグリンアルファ２、インテグリンアルファ３、インテグリンアルファ４、インテグリンアルファ４／ベータ１、インテグリンアルファ４／ベータ７、インテグリンアルファ５（アルファＶ）、インテグリンアルファ５／ベータ１、インテグリンアルファ５／ベータ３、インテグリンアルファ６、インテグリンベータ１、インテグリンベータ２、インターフェロンガンマ、ＩＰ－１０、Ｉ－ＴＡＣ、ＪＥ、カリクレイン２、カリクレイン５、カリクレイン６、カリクレイン１１、カリクレイン１２、カリクレイン１４、カリクレイン１５、カリクレインＬ１、カリクレインＬ２、カリクレインＬ３、カリクレインＬ４、ＫＣ、ＫＤＲ、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、ラミニン５、ＬＡＭＰ、ＬＡＰ、ＬＡＰ（ＴＧＦ－１）、潜在型ＴＧＦ－１、潜在型ＴＧＦ－１ ｂｐ１、ＬＢＰ、ＬＤＧＦ、ＬＥＣＴ２、Ｌｅｆｔｙ、ルイスＹ抗原、ルイスＹ関連抗原、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－３、Ｌｆｏ、ＬＩＦ、ＬＩＧＨＴ、リポタンパク質、ＬＩＸ、ＬＫＮ、Ｌｐｔｎ、Ｌ－セレクチン、ＬＴ－ａ、ＬＴ－ｂ、ＬＴＢ４、ＬＴＢＰ－１、肺サーファクタント、黄体形成ホルモン、リンホトキシンベータ受容体、Ｍａｃ－１、ＭＡｄＣＡＭ、ＭＡＧ、ＭＡＰ２、ＭＡＲＣ、ＭＣＡＭ、ＭＣＡＭ、ＭＣＫ－２、ＭＣＰ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＤＣ、Ｍｅｒ、メタロプロテアーゼ、ＭＧＤＦ受容体、ＭＧＭＴ、ＭＨＣ（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＩＦ、ＭＩＧ、ＭＩＰ、ＭＩＰ－１－アルファ、ＭＫ、ＭＭＡＣ１、ＭＭＰ、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－１０、ＭＭＰ－１１、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－２４、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－８、ＭＭＰ－９、ＭＰＩＦ、Ｍｐｏ、ＭＳＫ、ＭＳＰ、ムチン（Ｍｕｃ１）、ＭＵＣ１８、ミュラー管阻害因子、Ｍｕｇ、ＭｕＳＫ、ＮＡＩＰ、ＮＡＰ、ＮＡＶ１．７、ＮＣＡＤ、Ｎ－カドヘリン、ＮＣＡ９０、ＮＣＡＭ、ＮＣＡＭ、ネプリライシン、ニューロトロフィン－３、－４、または－６、ニュールツリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦ－ベータ、ｎＮＯＳ、ＮＯ、ＮＯＳ、Ｎｐｎ、ＮＲＧ－３、ＮＴ、ＮＴＮ、ＯＢ、ＯＧＧ１、ＯＰＧ、ＯＰＮ、ＯＳＭ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ｐ１５０、ｐ９５、ＰＡＤＰｒ、副甲状腺ホルモン、ＰＡＲＣ、ＰＡＲＰ、ＰＢＲ、ＰＢＳＦ、ＰＣＡＤ、Ｐ－カドヘリン、ＰＣＮＡ、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ、ＰＤＫ－１、ＰＥＣＡＭ、ＰＥＭ、ＰＦ４、ＰＧＥ、ＰＧＦ、ＰＧＩ２、ＰＧＪ２、ＰＩＮ、ＰＬＡ２、胎盤性アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ）、Ｐ１ＧＦ、ＰＬＰ、ＰＰ１４、プロインスリン、プロレラキシン、プロテインＣ、ＰＳ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＴＥＮ、ＰＴＨｒｐ、Ｐｔｋ、ＰＴＮ、Ｒ５１、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＴＥＳ、レラキシンＡ鎖、レラキシンＢ鎖、レニン、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆ、ＲＳＶ Ｆｇｐ、Ｒｅｔ、リウマトイド因子、ＲＬＩＰ７６、ＲＰＡ２、ＲＳＫ、Ｓ１００、ＳＣＦ／ＫＬ、ＳＤＦ－１、ＳＥＲＩＮＥ、血清アルブミン、ｓＦＲＰ－３、Ｓｈｈ、ＳＩＧＩＲＲ、ＳＫ－１、ＳＬＡＭ、ＳＬＰＩ、ＳＭＡＣ、ＳＭＤＦ、ＳＭＯＨ、ＳＯＤ、ＳＰＡＲＣ、Ｓｔａｔ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ－ＩＩ、ＴＡＣＥ、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質－７２）、ＴＡＲＣ、ＴＣＡ－３、Ｔ細胞受容体（例えば、Ｔ細胞受容体アルファ／ベータ）、ＴｄＴ、ＴＥＣＫ、ＴＥＭ１、ＴＥＭ５、ＴＥＭ７、ＴＥＭ８、ＴＥＲＴ、精巣ＰＬＡＰ様アルカリホスファターゼ、ＴｆＲ、ＴＧＦ、ＴＧＦ－アルファ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＧＦ－ベータＰａｎ特
異的、ＴＧＦ－ベータＲ１（ＡＬＫ－５）、ＴＧＦ－ベータＲ１１、ＴＧＦ－ベータＲＩＩｂ、ＴＧＦ－ベータＲＩＩＩ、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ４、ＴＧＦ－ベータ５、トロンビン、胸腺Ｃｋ－１、甲状腺刺激ホルモン、Ｔｉｅ、ＴＩＭＰ、ＴＩＱ、組織因子、ＴＭＥＦＦ２、Ｔｍｐｏ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＦ、ＴＮＦ－アルファ、ＴＮＦ－アルファベータ、ＴＮＦ－ベータ２、ＴＮＦｃ、ＴＮＦ－ＲＩ、ＴＮＦ－ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＲＡＩＬ Ｒ１Ａｐｏ－２、ＤＲ４）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ（ＴＲＡＩＬ Ｒ２ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＩＣＫ－２Ａ、ＴＲＩＣＫ－Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＲＡＩＬ Ｒ３ＤｃＲ１、ＬＩＴ、ＴＲＩＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＲＡＩＬ Ｒ４ ＤｃＲ２、ＴＲＵＮＤＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ（ＲＡＮＫ ＯＤＦ Ｒ、ＴＲＡＮＣＥ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ（ＯＰＧ ＯＣＩＦ、ＴＲ１）、ＴＮＦＲＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ Ｒ ＦＮ１４）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＡＣＩ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＢＡＦＦ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ ＡＴＡＲ、ＨｖｅＡ、ＬＩＧＨＴ Ｒ、ＴＲ２）、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲ ｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＢＣＭＡ）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲ ＡＩＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＲＯＹ ＴＡＪ、ＴＲＡＤＥ）、ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ（ＲＥＬＴ）、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ（ＴＮＦ Ｒ１ＣＤ１２０ａ、ｐ５５－６０）、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ ＲＩＩ ＣＤ１２０ｂ、ｐ７５－８０）、ＴＮＦＲＳＦ２６（ＴＮＦＲＨ３）、ＴＮＦＲＳＦ３（ＬＴｂＲ ＴＮＦ ＲＩＩＩ、ＴＮＦＣ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０ ＡＣＴ３５、ＴＸＧＰ１ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ５（ＣＤ４０ ｐ５０）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ Ａｐｏ－１、ＡＰＴ１、ＣＤ９５）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＤｃＲ３Ｍ６８、ＴＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢ ＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＤＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ２２（ＤＣＴＲＡＩＬ Ｒ２ ＴＮＦＲＨ２）、ＴＮＦＲＳＴ２３（ＤＣＴＲＡＩＬ Ｒ１ＴＮＦＲＨ１）、ＴＮＦＲＳＦ２５（ＤＲ３Ａｐｏ－３、ＬＡＲＤ、ＴＲ－３、ＴＲＡＭＰ、ＷＳＬ－１）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ Ａｐｏ－２リガンド、ＴＬ２）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫリガンドＯＤＦ、ＯＰＧリガンド）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ Ａｐｏ－３リガンド、ＤＲ３リガンド）、ＴＮＦＳＦ１３（ＡＰＲＩＬ ＴＡＬＬ２）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ（ＢＡＦＦ ＢＬＹＳ、ＴＡＬＬ１、ＴＨＡＮＫ、ＴＮＦＳＦ２０）、ＴＮＦＳＦ１４（ＬＩＧＨＴ ＨＶＥＭリガンド、ＬＴｇ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＴＬ１Ａ／ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８（ＧＩＴＲリガンドＡＩＴＲリガンド、ＴＬ６）、ＴＮＦＳＦ１Ａ（ＴＮＦ－ａ Ｃｏｎｅｃｔｉｎ、ＤＩＦ、ＴＮＦＳＦ２）、ＴＮＦＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ－ｂ ＬＴａ、ＴＮＦＳＦ１）、ＴＮＦＳＦ３（ＬＴｂ ＴＮＦＣ、ｐ３３）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンドｇｐ３４、ＴＸＧＰ１）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンドＣＤ１５４、ｇｐ３９、ＨＩＧＭ１、ＩＭＤ３、ＴＲＡＰ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓリガンドＡｐｏ－１リガンド、ＡＰＴ１リガンド）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンドＣＤ７０）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンドＣＤ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンドＣＤ１３７リガンド）、ＴＰ－１、ｔ－ＰＡ、Ｔｐｏ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ Ｒ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＡＮＣＥ、トランスフェリング受容体、ＴＲＦ、Ｔｒｋ（例えば、ＴｒｋＡ）、ＴＲＯＰ－２、ＴＳＧ、ＴＳＬＰ、腫瘍関連抗原ＣＡ１２５、ルイスＹ関連炭水化物を発現する腫瘍関連抗原、ＴＷＥＡＫ、ＴＸＢ２、Ｕｎｇ、ＵＰＡＲ、ｕＰＡＲ－１、ウロキナーゼ、ＶＣＡＭ、ＶＣＡＭ－１、ＶＥＣＡＤ、ＶＥ－カドヘリン、ＶＥ－カドヘリン－２、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｉｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）、ＶＥＧＩ、ＶＩＭ、ウイルス抗原、ＶＬＡ、ＶＬＡ－１、ＶＬＡ－４、ＶＮＲインテグリン、フォン・ヴィレブランド因子、ＷＩＦ－１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ／１３、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＸＣＲ１、ＸＥＤＡＲ、ＸＩＡＰ、ＸＰＤ、ならびにホルモン及び成長因子の受容体。

【0102】

いくつかの実施形態において、結合ドメインは、ネコにおいて、１つ以上の治療標的または抗原に特異的に結合し、例えば、限定するものではないが、ＡＣＥ、ＡＣＥ－２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡ ＡＬＫ－２、アクチビンＲＩＢ ＡＬＫ－４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＩＩＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＳ、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、ＡＮＧ、Ａｎｇ、アンジオテンシン１型（ＡＴ１）受容体、アンジオテンシン２型（ＡＴ２）受容体、心房性ナトリウム利尿因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、ｂ－ＥＣＧＦ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４７、ＣＯＸ、ＣＴＬＡ－４、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＥＰＯ、卵胞刺激ホルモン、ＧＤＦ－８（ミオスタチン）、ＧＬＰ１、ＧＬＰ２、ＧｎＲＨ、成長ホルモン放出因子、ＩｇＥ、ＩＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、インターロイキン受容体（例えば、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８Ｒ、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－１２Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＬ－２２Ｒ、ＩＬ－２３Ｒ、ＩＬ－２５Ｒ、ＩＬ－３１Ｒ、ＩＬ－３３Ｒ）、ＬＡＰ（ＴＧＦ－１）、潜在型ＴＧＦ－１、潜在型ＴＧＦ－１ ｂｐ１、ＬＦＡ－１、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦ－ベータ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＴＧＦ、ＴＧＦ－アルファ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＧＦ－ベータＰａｎ特異的、ＴＧＦ－ベータＲ１（ＡＬＫ－５）、ＴＧＦ－ベータＲ１１、ＴＧＦ－ベータＲＩＩｂ、ＴＧＦ－ベータＲＩＩＩ、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ４、ＴＧＦ－ベータ５、ＴＮＦ、ＴＮＦ－アルファ、ＴＮＦ－アルファベータ、ＴＮＦ－ベータ２、ＴＮＦｃ、ＴＮＦ－ＲＩ、ＴＮＦ－ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲ ｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢ ＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｉｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、及びＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）などが挙げられる。

【0103】

いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、タンパク質を含むことができ、ここで、タンパク質は、治療用タンパク質、例えば、ＥＰＯ、ＣＴＬＡ４、ＬＦＡ３、ＶＥＧＦＲ１／ＶＥＧＦＲ３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、またはトロンボポエチン結合ペプチドである。いくつかの実施形態において、治療用タンパク質は、ＡＣＥ、ＡＣＥ－２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡＡＬＫ－２、アクチビンＲＩＢ ＡＬＫ－４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＩＩＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＳ、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、ＡＮＧ、Ａｎｇ、アンジオテンシン１型（ＡＴ１）受容体、アンジオテンシン２型（ＡＴ２）受容体、心房性ナトリウム利尿因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、ｂ－ＥＣＧＦ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４７、ＣＯＸ、ＣＴＬＡ－４、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＥＰＯ、卵胞刺激ホルモン、ＧＤＦ－８（ミオスタチン）、ＧＬＰ１、ＧＬＰ２、ＧｎＲＨ、成長ホルモン放出因子、ＩｇＥ、ＩＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、インターロイキン受容体（例えば、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８Ｒ、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－１２Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＬ－２２Ｒ、ＩＬ－２３Ｒ、ＩＬ－２５Ｒ、ＩＬ－３１Ｒ、ＩＬ－３３Ｒ）、ＬＡＰ（ＴＧＦ－１）、潜在型ＴＧＦ－１、潜在型ＴＧＦ－１ ｂｐ１、ＬＦＡ－１、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦ－ベータ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＴＧＦ、ＴＧＦ－アルファ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＧＦ－ベータＰａｎ特異的、ＴＧＦ－ベータＲ１（ＡＬＫ－５）、ＴＧＦ－ベータＲ１１、ＴＧＦ－ベータＲＩＩｂ、ＴＧＦ－ベータＲＩＩＩ、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ４、ＴＧＦ－ベータ５、ＴＮＦ、ＴＮＦ－アルファ、ＴＮＦ－アルファベータ、ＴＮＦ－ベータ２、ＴＮＦｃ、ＴＮＦ－ＲＩ、ＴＮＦ－ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲ ｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢ ＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｉｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、またはＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）である。

【0104】

医薬組成物
本明細書に記載される１つまたは複数のポリペプチドの医薬組成物または無菌組成物を調製するために、１つまたは複数のポリペプチドは、薬学的に許容される担体または賦形剤とともに混合され得る。（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８４）参照）。

【0105】

治療薬及び診断薬の製剤は、許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液または懸濁液の形態に調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ａｖｉｓ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ ａｎｄ Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．参照）。一実施形態において、本発明の１つまたは複数のポリペプチドは、ｐＨ５～６の酢酸ナトリウム溶液で適切な濃度に希釈され、張性のためにＮａＣｌまたはスクロースが添加される。安定性を高めるために、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０などの追加の剤が添加されてもよい。

【0106】

単独または別の薬剤と組み合わせて投与されるポリペプチド組成物の毒性及び治療有効性は、細胞培養または実験動物における標準的な製薬手順、例えば、ＬＤ_５０（集団の５０％にとって致死的な用量）及びＥＤ_５０（集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するための手順によって決定することができる。毒性と治療効果との間の用量の比が治療指数である（ＬＤ_５０／ＥＤ_５０）。特定の態様において、高い治療指数を呈する１つまたは複数のポリペプチドが望ましい。これらの細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータは、ネコに使用するための投与量の範囲を導き出すのに使用することができる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ_５０に入る循環濃度の範囲内である。投与量は、採用される剤形及び投与経路に応じて、この範囲内で変動し得る。

【0107】

投与の様式は、様々であり得る。好適な投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口；筋肉内、皮下、皮内、髄内、髄腔内、直接脳（心）室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、吹送、局所、皮膚、経皮、または動脈内が含まれる。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、注射などの侵襲性経路によって投与することができる。更なる実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、腫瘍内、または吸入、エアロゾル送達によって投与される。

【0108】

本明細書で開示される医薬組成物は、注入によって投与されてもよい。医薬組成物を投与するよく知られているインプラント及びモジュールの形態の例としては、制御された速度で薬剤を分注するための埋め込み可能な微量注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号；正確な注入速度で薬物を送達するための薬剤注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号；連続的な薬物送達のための埋め込み可能な可変流量の注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号；マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透性薬物送達系を開示する米国特許第４，４３９，１９６号が挙げられる。他の多くのそのようなインプラント、送達系、及びモジュールは、当業者によく知られている。

【0109】

あるいは、１つまたは複数のポリペプチドは、全身的ではなく局所的に投与されてもよく、例えば、免疫病理学によって特徴付けられる関節炎の関節または病原体誘発病変に、多くの場合、デポーまたは持続放出性製剤で、抗体を直接注射することによりなされてもよい。更に、１つまたは複数のポリペプチドは、標的化された薬物送達系で投与されてもよく、例えば、免疫病理学によって特徴付けられる関節炎の関節または病原体誘発病変を標的とする、例えば、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームで投与されてもよい。リポソームは、患部組織に対して標的化され、患部組織によって選択的に取り込まれる。

【0110】

投与レジメンは、限定するものではないが、治療されるネコの年齢、体重、及び体調、治療用抗体の血清または組織回転率、症状のレベル、１つまたは複数の治療用ポリペプチドの免疫原性、ならびに生物学的マトリックスにおける標的細胞のアクセス容易性を含む、いくつかの因子に依存する。いくつかの実施において投与レジメンは、標的とする疾患状態の改善をもたらすのに十分な１つまたは複数の治療用ポリペプチドを送達し、同時に望ましくない副作用を最小化するものである。したがって、送達される生物学的製剤の量は、１つまたは複数の特定の治療用ポリペプチド及び治療される状態の重症度に部分的に依存する。治療用抗体の適切な用量を選択する際のガイダンスは、入手可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ（１９９６）；Ｍｉｌｇｒｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３（１９９９）；Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２（２００１）；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９（２０００）；Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２（２００３）；Ｌｉｐｓｋｙ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２（２０００）参照）。

【0111】

１つまたは複数のポリペプチドの適切な用量の決定は、例えば、当該技術分野において治療に影響することが知られているまたは推定されているパラメーターまたは因子を使用して、当業者によってなされる。一般に、投与は、至適用量よりもいくらか少ない量から開始され、その後、あらゆる負の副作用に対して望ましいまたは最適な効果が達成されるまで、少量ずつ増量される。重要な診断指標には、例えば、炎症の症状または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。

【0112】

核酸、ベクター、宿主細胞、及び作製方法
本開示はまた、本明細書に記載される１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸、１つまたは複数の核酸を含む１つまたは複数のベクター、及び１つもしくは複数の核酸または１つもしくは複数のベクターを含む宿主細胞を包含する。

【0113】

本明細書に記載される１つまたは複数のポリペプチドは、細菌細胞または真核細胞で産生され得る。いくつかのポリペプチド、例えば、Ｆａｂ’は、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞で産生することができる。ポリペプチドはまた、形質転換細胞株（例えば、ＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ、２９３Ｔ、Ｈｅｌａ）などの真核細胞で産生することもできる。加えて、ポリペプチド（例えば、ｓｃＦｖ）は、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３－３５（２００１）参照）、Ｈａｎｓｅｕｌａ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓなどの酵母菌細胞で発現させることができる。目的の抗体を産生させるために、１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを構築し、１つまたは複数の発現ベクターに導入し、次いで、好適な宿主細胞で発現させる。発現を改善するために、遺伝子のヌクレオチド配列は、アミノ酸配列を変えることなく（または最小限の変更、例えば、重鎖または軽鎖のＣ末端残基の除去）、再コード化することができる。再コード化の対象となり得る領域には、翻訳開始、コドン使用頻度、及び意図されないｍＲＮＡスプライシング候補に関連するものが含まれる。本明細書に記載されるＦｃ領域バリアントをコードするポリヌクレオチドは、当業者には容易に想定されるであろう。

【0114】

標準的な分子生物学技術を使用して、組み換え発現ベクター（複数可）を調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、ポリペプチド（例えば、抗体）を回収することができる。

【0115】

１つまたは複数のポリペプチドが細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現される場合、発現ベクターは、細菌細胞におけるベクターの増幅を可能にする特徴を有していなければならない。更に、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、またはＸＬ１－ＢｌｕｅなどのＥ．ｃｏｌｉが宿主として使用される場合、ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉでの十分な発現を可能にし得るプロモーター、例えば、ｌａｃＺプロモーター（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，３４１：５４４－５４６（１９８９）、ａｒａＢプロモーター（Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１－１０４３（１９８８））、またはＴ７プロモーターを有している必要がある。そのようなベクターの例としては、例えば、Ｍ１３ベクター、ｐＵＣシリーズベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ－Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ－５Ｘ－１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ ｓｙｓｔｅｍ」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、及びｐＥＴ（この発現ベクターが使用される場合は、宿主は、好ましくは、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼを発現するＢＬ２１である）が挙げられる。発現ベクターは、抗体分泌のためのシグナル配列を含有し得る。Ｅ．ｃｏｌｉのペリプラズムへの産生の場合、ｐｅｌＢシグナル配列（Ｌｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６９：４３７９（１９８７））が抗体分泌のためのシグナル配列として使用され得る。細菌発現の場合、塩化カルシウム法またはエレクトロポレーション法を使用して、細菌細胞に発現ベクターを導入することができる。

【0116】

１つまたは複数のポリペプチドがＣＨＯ、ＣＯＳ、及びＮＩＨ３Ｔ３細胞などの動物細胞で発現される場合、発現ベクターは、これらの細胞での発現に必要なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７７：１０８（１９７９））（例えば、初期シミアンウイルス４０プロモーター）、ＭＭＬＶ－ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１８：５３２２（１９９０））、またはＣＭＶプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス前初期プロモーター）を含む。Ｆｃ領域バリアントをコードする核酸配列に加えて、組み換え発現ベクターは、宿主細胞でベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び選択マーカー遺伝子などの追加の配列を保有し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号及び同第５，１７９，０１７号）。例えば、典型的に、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。選択マーカーを含むベクターの例としては、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ－ＲＳＶ、ｐＢＫ－ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶ、及びｐＯＰ１３が挙げられる。

【0117】

いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、哺乳動物細胞で産生される。１つまたは複数のポリペプチドを発現させるための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０に記載されているｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含み、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１６２１に記載されているようにＤＨＦＲ選択マーカーとともに使用される）、ヒト胎児腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、及びトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物に由来する細胞が挙げられる。例えば、細胞は、乳腺上皮細胞である。

【0118】

抗体発現のための例示的な系において、抗体の抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組み換え発現ベクターがリン酸カルシウムを介したトランスフェクションによってｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞に導入される。組み換え発現ベクター内において、抗体の重鎖及び軽鎖遺伝子は、高い遺伝子転写レベルを駆動するために、エンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来するもの、例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントまたはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメント）に作動可能にそれぞれ連結される。また、組み換え発現ベクターは、ＤＨＦＲ遺伝子を保有しており、これにより、ベクターをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を、メトトレキサート選択／増幅を使用して選択することが可能となる。選択された形質転換宿主細胞は、抗体の重鎖及び軽鎖が発現するように培養され、培養培地から抗体が回収される。

【0119】

治療方法
本明細書で開示される１つまたは複数のポリペプチドは、任意の疾患または障害の治療または予防を、それを必要とするネコにおいて行うために使用することができる。本発明は、繰り返し投与が必要な慢性状態の治療に特に有用である。タンパク質治療薬の半減期が増加するため、投与頻度の減少及び／または用量レベルの減少が可能となり得る。

【0120】

いくつかの実施形態において、治療または予防される疾患、障害、状態または症状は、アレルギー性疾患、慢性疼痛、急性疼痛、炎症性疾患、自己免疫疾患、内分泌疾患、胃腸疾患、骨格／筋骨格疾患、心血管疾患、神経系疾患、腎臓疾患、代謝疾患、免疫疾患、遺伝／遺伝性疾患、生殖機能関連障害、感染症またはがんである。ある特定の実施形態において、治療または予防される疾患または障害は、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、食物アレルギー、骨関節炎痛、周術期の疼痛、歯痛、がん疼痛、関節炎、貧血、肥満、または糖尿病である。

【0121】

抗体は、疾患の治療または予防だけでなく、正常な生物学的機能を調節するため、例えば、生殖能力または行動を管理するためにも使用され得る。

【0122】

診断
本明細書で開示される１つまたは複数のポリペプチドはまた、様々な診断用途、例えば、ネコが任意の特定の疾患または障害を有するかどうかを決定するために使用することができる。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、結合ドメインを含み得る。結合ドメインは、本明細書に記載されるタンパク質、サブユニット、ドメイン、モチーフ、及び／またはエピトープ（例えば、がん細胞のマーカー）に特異的に結合することができる。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、標識基を更に含む。一般に、標識基は、それらが検出されるアッセイに応じて、様々な種類に分けられる：ａ）放射性同位体または重元素同位体であり得る同位体標識；ｂ）磁気標識（例えば、磁気粒子）；ｃ）酸素還元活性部分；ｄ）光学色素；酵素基（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；ｅ）ビオチン化基；及びｆ）二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体用の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグなど）。いくつかの実施形態において、標識基は、潜在的な立体障害を減少させるために、様々な長さのスペーサーアームを介して抗体に結合される。タンパク質を標識するための様々な方法が当該技術分野において知られており、本発明を実施する際に使用され得る。

【0123】

いくつかの実施形態において、標識基は、プローブ、色素（例えば、蛍光色素）、または放射性同位体（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^２２Ｎａ、^３６Ｃｌ、^３５Ｓ、^３３Ｐ、または^１２５Ｉ）である。

【0124】

特定の標識にはまた、光学色素も含まれ、限定するものではないが、発色団、蛍光体及びフルオロフォアが含まれ、後者は、多くの場合、特異的である。フルオロフォアは、「小分子」の蛍光体、またはタンパク質性の蛍光体のいずれかであり得る。

【0125】

蛍光標識は、その固有の蛍光特性を介して検出され得る任意の分子であり得る。好適な蛍光標識には、フルオレセイン、ローダミン、テトラメチルローダミン、エオシン、エリスロシン、クマリン、メチル－クマリン、ピレン、Ｍａｌａｃｉｔｅ ｇｒｅｅｎ、スチルベン、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、Ｃａｓｃａｄｅ ＢｌｕｅＪ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＩＡＥＤＡＮＳ、ＥＤＡＮＳ、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ、ＬＣ Ｒｅｄ ６４０、Ｃｙ ５、Ｃｙ ５．５、ＬＣ Ｒｅｄ ７０５、Ｏｒｅｇｏｎ ｇｒｅｅｎ、Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ色素（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０）、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｙｅｌｌｏｗ及びＲ－フィコエリトリン（ＰＥ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）、ＦＩＴＣ、ローダミン、及びＴｅｘａｓ Ｒｅｄ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｐａ．）が含まれるが、これらに限定されない。好適な光学色素は、フルオロフォアを含め、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｂｙ Ｒｉｃｈａｒｄ Ｐ．Ｈａｕｇｌａｎｄに記載されており、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0126】

好適なタンパク質性蛍光標識にはまた、緑色蛍光タンパク質（Ｒｅｎｉｌｌａ、Ｐｔｉｌｏｓａｒｃｕｓ、またはＡｅｑｕｏｒｅａ種のＧＦＰを含む）（Ｃｈａｌｆｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：８０２－８０５）、ＥＧＦＰ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｕ５５７６２）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．１８０１ ｄｅ Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ Ｂｌｖｄ．Ｗｅｓｔ，８ｔｈ Ｆｌｏｏｒ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ Ｈ３Ｈ１Ｊ９；Ｓｔａｕｂｅｒ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４：４６２－４７１；Ｈｅｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．６：１７８－１８２）、改良型黄色蛍光タンパク質（ＥＹＦＰ，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、ルシフェラーゼ（Ｉｃｈｉｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５４０８－５４１７）、βガラクトシダーゼ（Ｎｏｌａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２６０３－２６０７）及びＲｅｎｉｌｌａ（ＷＯ９２／１５６７３、ＷＯ９５／０７４６３、ＷＯ９８／１４６０５、ＷＯ９８／２６２７７、ＷＯ９９／４９０１９、米国特許第５，２９２，６５８号、同第５，４１８，１５５号、同第５，６８３，８８８号、同第５，７４１，６６８号、同第５，７７７，０７９号、同第５，８０４，３８７号、同第５，８７４，３０４号、同第５，８７６，９９５号、同第５，９２５，５５８号）が含まれるが、これらに限定されない。本段落中において上で引用される参考文献は全て、その全体が参照により本明細書に明示的に援用される。

【0127】

アッセイ
Ｆｃ_γＲＩ及びＦｃγＲＩＩＩ結合：
ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩＩへの結合は、ＡＤＣＣを媒介する抗体の能力の指標である。抗体のこの特性を評価するために、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩＩに対する抗体の結合を測定するアッセイが当該技術分野において知られている方法を使用して実施され得る。

【0128】

Ｃ１ｑ結合：
補体の第１成分であるＣ１ｑへの結合は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介する抗体の能力の指標である。抗体のこの特性を評価するために、Ｃ１ｑに対する抗体の結合を測定するアッセイが当該技術分野において知られている方法を使用して実施され得る。

【0129】

半減期：
抗体の半減期を測定する方法は、当該技術分野においてよく知られている。例えば、Ｂｏｏｔｈ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ，１０（７）：１０９８－１１１０（２０１８）を参照されたい。一例として、抗体（例えば、ネコ抗体）の半減期は、動物モデル（例えば、ネコモデル）に抗体を注射し、ある一定期間にわたって血清中の抗体レベルを測定することによって測定することができる。例示的な動物モデルとしては、非ヒト霊長類モデル及びトランスジェニックマウスモデルが挙げられる。トランスジェニックマウスモデル（例えば、Ｔｇ３２またはＴｇ２７６トランスジェニックマウス）は、マウスＦｃＲｎアルファ鎖が欠損しており、ヒトＦｃＲｎアルファ導入遺伝子を発現することができる（例えば、構成性プロモーターの制御下で）。ヒトＦｃＲｎアルファ鎖は、マウスβ２－ミクログロブリンタンパク質とｉｎ ｖｉｖｏで対合し、機能的なキメラＦｃＲｎヘテロ二量体を形成することができる。

【実施例】

【0130】

実施例１：選択された位置でのＮＮＫ飽和変異導入ライブラリーの生成及び個々のバリアントの解析
ネコＩｇＧ１ａ（配列番号１）のＣＨ２及びＣＨ３ドメインの野生型（ｗｔ）配列を合成し、ＮＮＫ変異導入の鋳型として使用した。ＮＮＫ飽和変異導入法は、所望の位置に２０個の可能な全てのアミノ酸を生成するのに効果的な戦略である（Ｈｏｇｒｅｆｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．３３：１１５８－１１６５［２００２］）。位置２５２、４２８及び４３４（ＥＵナンバリング）の個々のＮＮＫライブラリーを生成した。特定位置のＮＮＫ（Ｎ＝Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｔ、Ｋ＝Ｇ／Ｔ）プライマーをＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｓｉｔｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ）で使用した。ＰＣＲ産物をＧｅｎＳｃｒｉｐｔ ＦＡＳＥＢＡプラスミドにサブクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換し、バリアントの存在について配列を確認した。ＣＨ３ドメインの下流は、アルブミンに対してｐＭの親和性を有するＳＡＳＡ（血清アルブミンに対する単一ドメイン抗体）タグである（Ｚｈａｎｇ，Ｊ．；Ｗｕ，Ｓ．；Ｌｉｕ，Ｊ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ．特許出願番号ＵＳ２０１３／０１２９７２７Ａ１）。ＳＡＳＡ抗体は、以下に記載されるセンサーチップ表面へのＦｃの捕捉を可能にするものである。ＰｅｌＢ（ペクチン酸リアーゼＢ）シグナルペプチドは、Ｎ末端にあり、Ｆｃの培地への分泌を促進する。ＣＨ２－ＣＨ３タンパク質の発現は、Ｌａｃプロモーターによって制御した。馴化培地からの上清を、ｐＨ６．０におけるネコＦｃＲｎ（ＧｅｎＢａｎｋ ＫＦ７７３７８６［ＩｇＧ受容体ＦｃＲｎ大型サブユニットｐ５１］及びＥｕｒｏｐｅａｎ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ａｒｃｈｉｖｅ ＡＹ８２９２６６．１［ネコベータ－２－ミクログロブリン］）へのバリアントの結合について、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して解析した。

【0131】

各ライブラリーから得た９０個の個々の形質転換体の上清を、以下に記載されるようにＢｉａｃｏｒｅ法を使用して、ｐＨ６．０でネコＦｃＲｎへの結合についてアッセイした。

【0132】

Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋを使用したＳＰＲ解析では、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）をＣＭ５センサーチップに固定した。フローセル１及び２のセンサーチップ表面を、新たに混合した５０ｍｍｏｌ／ＬのＮ－ヒドロキシスクシンイミド及び２００ｍｍｏｌ／Ｌの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩によって、４２０秒（１０μＬ／分）かけて活性化させた。その後、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で希釈したＢＳＡをフローセル２に注入してコンジュゲーションを達成し、フローセル１をブランクとした。アミンカップリング反応後、チップ表面上に残存する活性カップリング部位を、１ｍＭ エタノールアミン塩酸塩を４２０秒注入してブロックした。結合実験のためのランニング緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＰ（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５００ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ５．５）であり、２５℃で実施した。バリアントの上清をチップ表面に注入し、固定したＢＳＡにＳＡＳＡタグを介して６０秒かけて捕捉させた。２００ｎＭのネコＦｃＲｎを１２０秒間注入し、解離をランニング緩衝液で１２０秒間行った。ＢＳＡの固定化フェーズの流量は、１０μｌ／分であり、会合及び解離フェーズの流量は、３０μｌ／分であった。データは全て、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ評価ソフトウェアバージョン１．１を使用して処理した。Ｂｉａｃｏｒｅセンサーグラムについては、図１及び図２を参照されたい。

【0133】

試験したバリアントは、野生型ネコＩｇＧ１ａのＦｃ（配列番号１）と比較した場合、ｐＨ６．０において、ネコＦｃＲｎに対して増加した結合親和性を示した。

【0134】

アミノ酸位置２５２、４２８及び４３４におけるＮＮＫ変異導入は、ｐＨ６．０でＦｃＲｎへの結合が増加する変異体をもたらすことがわかった。この３つの位置で生成された全９０個のクローンのシーケンシングを行うと、次の６個のクローン、すなわち、Ｓ２５２Ｈ、Ｓ４２８Ｅ、Ｓ４２８Ｃ、Ｓ４２８Ｆ、Ｓ４２８Ｗ及びＳ４３４Ｙは生成されていないことが示された。これらの位置における他の全てのアミノ酸置換は、試験上の利益をもたらさなかった。結果を以下の表３にまとめる。

【表3】

【0135】

実施例２：ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃのスキャニング変異導入
ファージディスプレイライブラリーアプローチを使用して、ｐＨ６．０において、ネコＦｃＲｎに対する親和性が増加するネコＩｇＧ１ａ Ｆｃバリアントを同定した。５５個の異なる位置にバリアントを有するように、ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ（Ｋａｎａｉ ｅｔ ａｌ．， ２０００． Ｖｅｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ． ７３：５３）をＴｗｉｓｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅによって合成した（図４）。変異させた位置のそれぞれに、８つの可能なアミノ酸の置換を行った。これらのアミノ酸は、アルギニン及びリシン（正電荷側鎖）、アスパラギン酸及びグルタミン酸（負電荷側鎖）、トレオニン及びグルタミン（極性非電荷側鎖）、ならびにロイシン及びバリン（疎水性側鎖）であった。Ｆｃ分子ごとに平均２つのバリアントを有するようにＦｃ ＤＮＡライブラリーを設計した。このライブラリーの複雑さは、式：ｎＣｒ＝ｎ！／ｒ！^＊（ｎ－ｒ）！（式中、ｎは、部位数を表し、ｒは、分子あたりのバリアント数を表す）を使用すると、９５，０４０とおりの組み合わせであった。所望の部位特異的変異を含むＦｃバリアントを、変異原性オリゴヌクレオチドとしてＴｗｉｓｔのシリコンベースプラットフォームでプリントした。

【0136】

次いで、アセンブリＰＣＲを使用して、オリゴヌクレオチドを連結し、全長Ｆｃ遺伝子断片プールを生成した。次いで、連結したＦｃ遺伝子断片プールを、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ社のｐＡＤＬ－２２ｃファージミドベクターのＳｆｉ切断部位にクローニングした。クローニングしたＤＮＡライブラリーをＴＧ１ Ｅ．ｃｏｌｉエレクトロコンピテントセルに形質転換し、８×１０^１０のバリアントの実験的多様性を創出した。次いで、ファージミドで形質転換したＥ．ｃｏｌｉ細胞をＭ１３Ｋ０７ヘルパーファージとコトランスフェクトして、タンパク質に基づくパニングに使用するファージプールを作製した。ライブラリーを２０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０及び３％ミルク中に再懸濁した。

【0137】

ライブラリーの品質は、９６個のランダムファージクローンを選択することによって決定し、サンガー法によって配列決定を行った。ファージあたりの変異体の数を以下の表４に示す。

【表4】

【0138】

最初のファージ選択では、プロテインＡ結合を失ったあらゆるＦｃバリアントを除去するために、プロテインＡ捕捉ステップを使用した。この選択のために、ファージライブラリーをプロテインＡビーズ上に捕捉し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄した。ファージを０．１Ｍ グリシン（ｐＨ２．７）で溶出し、ｐＨを１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）で直ちに中和した。中和したファージをポリエチレングリコール／ＮａＣｌで沈殿させ、遠心分離にかけた。ペレット化したファージを２０ｍＭ ＭＥＳ（ｐＨ６．０）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、３％ミルク中に再懸濁した。

【0139】

次のファージ選択は、Ｂｏｒｒｏｋ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２９０：４２８２に記載されているプロトコルに基づいた。簡潔に述べると、Ｎｕｎｃ ９６マルチウェルプレートをニュートロアビジンでコーティングし、次いで、５％ウシ血清アルブミンＰＢＳ（ｐＨ７．４）でブロッキングした。ビオチン化したネコＦｃＲｎ（ＦＣＮ－Ｆ８２Ｗ３、Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）をＰＢＳ（ｐＨ６．０）中、０．３１μｇ／ｍｌの濃度でウェルに固定化した。ＰＢＳ（ｐＨ６．０）中のファージライブラリーを、固定化したネコＦｃＲｎとインキュベートし、次いで、ＰＢＳ（ｐＨ６．０）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．３Ｍ ＮａＣｌで洗浄した。ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いてファージを３７℃で３０分間インキュベートすることによって溶出した。溶出したファージを、ｐＨ７．４で、０．３１μｇ／ｍｌのネコＦｃＲｎで枯渇させた。結合していないファージをＴＧ１細胞中で増殖させた。各ラウンドの正確な条件及び結果を以下の表５に示す。

【表5】

【0140】

第３選択ラウンドの結果として合計７６８個のファージクローンが単離され、第４選択ラウンドでは７６８個のファージクローンが単離された。Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑを使用する次世代シーケンシングによって、クローンの配列決定を行った。

【0141】

配列決定の結果、位置２５２に置換チロシン、位置４３４に置換チロシンまたはフェニルアラニンを含有するクローンが多数存在することが明らかになり（以下の表参照）、置換のいくつかは、意図した８個のアミノ酸置換以外の残基を含有することが示された。Ｇｅａｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１６，Ｊ Ｖｅｔ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ，３０：１１２９）によって先に記載された可変ドメインを使用して、ユニークなバリアントをＩｇＧに再フォーマットした。ミニプレッププラスミドＤＮＡを、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ２９３トランスフェクション試薬を用いて、Ｅｘｐｉ２９３細胞にトランスフェクトした。馴化培地からＩｇＧバリアントをプロテインＡクロマトグラフィーで精製し、４３ｍＭ クエン酸ナトリウム、１３０ｍＭ 炭酸水素ナトリウム、ｐＨ６．０に調整した。

【0142】

ＩｇＧバリアントのネコＦｃＲｎに対する親和性を決定するために、Ｃａｒｔｅｒｒａ機器を使用して結合カイネティクスを決定した。抗体（約５μｇ／ｍｌ）を、ＥＤＣ／ＮＨＳ活性化、続くエタノールアミンＨＣｌでのクエンチによって、ＨＣ３０Ｍセンサーチップにアミンカップリングさせた。

【0143】

ある濃度（３３３ｎＭ、１１１ｎＭ、３７ｎＭ、１２．３ｎＭ、４．１ｎＭ、１．３７ｎＭ、０．４５ｎＭ）のネコＦｃＲｎ（ＦＣＮ－Ｆ８２Ｗ３、Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を、ＨＢＳＴＥ（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０）、０．５％ウシ血清アルブミン、ｐＨ６．０中でセンサーチップ上に流して、ｐＨ６．０におけるカイネティクスを決定した。ＨＢＳＴＥ緩衝液のｐＨを７．４に調整した以外はこれと同じ戦略を使用して、ｐＨ７．４におけるネコＦｃＲｎへの結合カイネティクスを決定した。

【0144】

ＩｇＧバリアントのネコＦｃＲｎ結合カイネティクスを以下の表６に示す。

【表6】

【0145】

実施例３：ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃのスキャニング変異導入
Ｇｅａｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１６，Ｊ Ｖｅｔ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ，３０：１１２９）によって先に記載された可変ドメインを使用して、更なる抗神経成長因子（ＮＧＦ）ネコＩｇＧ１ａ抗体バリアントセットをＴｗｉｓｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅによって合成した。これらの抗体のＦｃ領域に対する修飾は、Ｋａｎａｉ ｅｔ ａｌ．（２０００，Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．７３：５３）によって記載されている野生型ネコＩｇＧ１ａのＦｃドメインのリファレンス配列と比較して、以下の表８及び表９に記載される。ネコＩｇＧ１ａコンストラクトを哺乳動物発現ベクターにサブクローニングし、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ２９３トランスフェクション試薬を用いて、Ｅｘｐｉ２９３細胞にトランスフェクトした。馴化培地からＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントをプロテインＡクロマトグラフィーで精製し、４３ｍＭ クエン酸ナトリウム、１３０ｍＭ 炭酸水素ナトリウム、ｐＨ６．０で調整した。次いで、Ｃａｒｔｅｒｒａ機器を使用して、ＩｇＧ ＦｃバリアントのネコＦｃＲｎに対する結合親和性を決定した。抗体バリアント（約５μｇ／ｍｌ）を、ＥＤＣ／ＮＨＳ活性化、続くエタノールアミンＨＣｌでのクエンチによって、ＨＣ３０Ｍセンサーチップにアミンカップリングさせた。３３３ｎＭ、１１１ｎＭ、３７ｎＭ、１２．３ｎＭ、４．１ｎＭ、１．３７ｎＭまたは０．４５ｎＭのネコＦｃＲｎ（ＦＣＮ－Ｆ８２Ｗ３、Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を、ＨＢＳＴＥ（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０）、０．５％ウシ血清アルブミン中、ｐＨ６．０でセンサーチップ上に流して、ｐＨ６．０におけるカイネティクスを決定した。これと同じ戦略を採用して、ｐＨ７．４におけるＦｃバリアントのネコＦｃＲｎに対する結合親和性を決定した。ただし、ＨＢＳＴＥ緩衝液のｐＨを７．４に調整した。

【0146】

ＩｇＧバリアントのネコＦｃＲｎ結合カイネティクスを以下の表７に示す。

【0147】

【表7】

【0148】

ネコＦｃＲＮに対するネコＩｇＧ１ａ Ｆｃバリアントの結合を増加させることが特定されたアミノ酸置換の一覧を以下の表８に提供する：

【表8】

【0149】

実施例４：ＦｃＲｎ結合が増加したネコＩｇＧ１ａ Ｆｃバリアント及び野生型ネコＩｇＧ１ａの薬物動態試験。
１２匹のオス及びメスのネコを用いて、薬物動態（ＰＫ）試験を行った。Ｇｅａｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１６，Ｊ Ｖｅｔ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ，３０：１１２９）によって先に記載された抗ＮＧＦ可変ドメインを使用して、野生型ネコＩｇＧ１ａのＦｃドメインを保持する抗体を含め、ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃバリアントを調製した。

【0150】

動物を６つの群に無作為に分け、各群にオスとメスを配置した。各動物に２ｍｇ／ｋｇの抗体を単回静脈投与で投与した。およそ０．５ｍｌの全血を次の時点：０（投与前）、注射後４時間、及び１、２、４、６、１０、１４、１８、２２、３０、３４、３８、４２日に採取した。全血から血清を分離し、抗ＮＧＦ抗体に特異的なＥＬＩＳＡによって抗体の存在をアッセイした。非線形混合効果（ＮＬＭＥ）モデルを使用して、線形クリアランスを有する２コンパートメント薬物動態（ＰＫ）モデルで６つの抗ＮＧＦモノクローナル抗体（ｍＡｂ）バリアントの血清中濃度を記述した（図４６）。母集団パラメーターを、Ｍｏｎｏｌｉｘ Ｓｕｉｔｅ ２０１９Ｒ１（Ｍｏｎｏｌｉｘ ｖｅｒｓｉｏｎ ２０１９Ｒ１．Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ：Ｌｉｘｏｆｔ ＳＡＳ，２０１９）に実装されている確率的期待値最大化法（ＳＡＥＭ）アルゴリズムを使用して、推定した。個々のパラメーターを対数正規分布の確率変数としてモデル化した。ＰＫパラメーターは体重（ＢＷ）に依存し、ｍＡｂ特有の係数（β_{ＢＷ，Ｃｌ}＝０．７５、β_{ＢＷ，Ｖ１}＝β_{ＢＷ，Ｖ２}＝１、β_ＢＷ，Ｑ＝２／３）を使用した。個々のパラメーターφ_ｉについての式は、以下のとおりである（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１１．Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ，５０：１３１）。

【数1】

φ_ｐｏｐは母集団の典型的なパラメーターであり、ηは平均０及び標準偏差ωを含む確率変数、ＢＷ_ｉは動物ｉの体重であり、ＢＷ_ｒｅｆはリファレンス体重２ｋｇであった。

【0151】

抗体バリアントは、次式に従って、クリアランス、コンパートメント間移動係数、及び末梢容積に関するカテゴリ型共変量を使用して識別した。

【数2】

式中、個々のバリアントの共変量がそのカテゴリに該当する場合はΩ_ｉ＝１であり、そうでない場合はΩ_ｉ＝０である。野生型（ＷＴ）ｍＡｂバリアントをリファレンスとして使用した。

【0152】

バリアントにつき２匹の動物を用いて個々に観察されたバリアントＷＴ、Ｓ２５２Ｗ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ、及びＳ４２８Ｙ＋Ｓ２５４Ｒの血清中濃度を図４７に示す。

【0153】

推定ＰＫパラメーターを以下の表９に示す。２ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶ投与を受ける典型的な２ｋｇのネコにおける、野生型（ＷＴ）ＩｇＧ１ａ ＦｃまたはＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントＳ２５２Ｗ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ、及びＳ４２８Ｙ＋Ｓ２５４Ｒを保持するモノクローナル抗体の予測血清中濃度プロファイルを図４８に示す。これらの薬物動態学試験は、２つ以上のアミノ酸位置における置換の利点を確認するだけでなく、より重要なのは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＦｃＲｎ結合向上を付与するネコＩｇＧ Ｆｃドメインへのアミノ酸修飾が、これらのＩｇＧ Ｆｃバリアントのｉｎ ｖｉｖｏ半減期を延長することにも十分であったことを示している。

【表9】

【0154】

実施例５：Ｃ１バイオセンサーを使用したネコＩｇＧ１ａバリアントのネコＦｃＲｎに対する結合カイネティクス
いくつかのネコＩｇＧ１ａバリアント（Ｓ２５２Ｗ、Ｌ３０９Ｖ、Ｑ３１１Ｖ、Ｓ４２８Ｙ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋２５４Ｒ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ＋Ｔ２８６Ｅ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ＋Ｅ３８０Ｔ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ＋Ｔ２８６Ｅ、及びＳ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ＋Ｅ３８０Ｔ）について、ｐＨ５．９におけるネコＦｃＲｎ（ＧｅｎＢａｎｋ ＫＦ７７３７８６［ネコＦｃＲｎ大型サブユニットｐ５１］及びＥｕｒｏｐｅａｎ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ａｒｃｈｉｖｅ ＡＹ８２９２６６．１［ネコベータ－２－ミクログルリン］）に対する結合カイネティクスを評価した。位置の特定には、ＥＵナンバリングを使用した（図４）。この試験において、単一のアミノ酸置換またはアミノ酸置換の組み合わせを保有するネコＦｃバリアントを、Ｇｅａｒｉｎｇ ＤＰ ｅｔ ａｌ．（２０１６，Ｊ Ｖｅｔ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ，３０：１１２９）によって記載される可変ドメインを使用して、ネコＩｇＧ１ａ（Ｋａｎａｉ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．７３：５３）に合成した。合成したネコＩｇＧａのバリアントＤＮＡを哺乳動物発現ベクターにサブクローニングし、ＣＨＯ細胞に一過性にトランスフェクトした。プロテインＡクロマトグラフィーを使用して馴化培地を精製した。

【0155】

ネコＦｃＲｎ結合実験について、全てのアッセイをＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋ＋システムで２５℃で実施した。この実験セットにおいて、抗体を標準的なアミンカップリング試薬を使用してＳｅｒｉｅｓ Ｓ Ｃ１センサーチップに固定した。２００ｍｍｏｌ／Ｌの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及び５０ｍｍｏｌ／ＬのＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の混合物を４２０秒間注入して表面を活性化させた。次いで、抗体を、１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中０．５～２μｇ／ｍｌの濃度で、１２０秒間注入した。最後に、１Ｍのエタノールアミンを４２０秒間注入した。ランニング緩衝液は、ｐＨ５．９に調節した１Ｘ ＰＢＳ－Ｐ＋（Ｃｙｔｉｖａ、Ｃａｔ＃２８９９５０８４）であった。

【0156】

ｐＨ５．９におけるネコＩｇＧ１ａバリアントのネコＦｃＲｎに対する結合親和性を評価するために、１．５６～２０００ｎＭの濃度範囲のネコＦｃＲｎを選択し、シングルサイクルモードで注入した。各バリアントについて試験したネコＦｃＲｎの濃度を以下の表１０に示す。

【表10】

【0157】

抗体につき４つの濃度を５μｌ／分で９０秒間注入し、続いて、１８０秒間解離させた。各濃度系列をこのフォーマットで３回注入し、適切なリファレンスの差し引きのために少なくとも３回の緩衝液のみのサイクルを行った。１Ｘ ＰＢＳ－Ｐ＋（ｐＨ７．４）を３０秒間２回注入し、続いて、６０秒間の待機コマンドで、表面を再生した。解析前に表面を安定化させるため、３回のスタートアップサイクルを含めた。

【0158】

Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用し、１：１カイネティクス相互作用モデルへのフィッティングまたは定常状態の親和性へのフィッティングによって、データを評価した。Ｕ値及びＴ値を含む品質指標を使用して、許容されるパラメーターを選択した。１５未満のＵ値を反応速度定数として許容できるものとみなし、１００より大きいＴ値を反応速度定数として許容できるものとみなした。これらの値がその範囲外である場合、定常状態の親和性パラメーターを許容できるものとみなした。

【0159】

ネコＩｇＧ１ａバリアントのカイネティクスデータを以下の表１１に示し、センサーグラムを図４９Ａ～４９Ｌに示す。

【表11】

【0160】

実施例６：２つまたは３つのＦｃ置換を含むネコＩｇＧ１ａ Ｆｃバリアント及び野生型ネコＩｇＧ１ａの薬物動態試験。
１４匹のオス及びメスのネコを用いて、薬物動態（ＰＫ）試験を行った。Ｇｅａｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１６，Ｊ Ｖｅｔ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ，３０：１１２９）によって先に記載された抗ＮＧＦ可変ドメインを使用して、野生型ネコＩｇＧ１ａのＦｃドメインを保持する抗体を含め、ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃバリアントを調製した。この試験で試験したネコＩｇＧ１ａバリアントには、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ＋Ｔ２８６Ｅ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ＋Ｅ３８０Ｔ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ＋Ｅ３８０Ｔ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ＋Ｔ２８６Ｅ、野生型が含まれた。

【0161】

動物を７つの群に無作為に分け、各群にオスとメスを配置した。各動物に２ｍｇ／ｋｇの抗体を単回静脈投与で投与した。およそ０．５ｍｌの全血を次の時点：０（投与前）、注射後４時間、及び１、２、４、６、１０、１４、１８、２２、３０、３４、３８、４２日に採取した。全血から血清を分離し、ネコ抗ＮＧＦ抗体に特異的なＥＬＩＳＡによって抗体の存在をアッセイした。非線形混合効果（ＮＬＭＥ）モデルを使用して、線形クリアランスを有する２コンパートメント薬物動態（ＰＫ）モデルで７つの抗ＮＧＦモノクローナル抗体（ｍＡｂ）バリアントの血清中濃度を記述した（母集団パラメーターを、Ｍｏｎｏｌｉｘ Ｓｕｉｔｅ ２０１９Ｒ１（Ｍｏｎｏｌｉｘ ｖｅｒｓｉｏｎ ２０１９Ｒ１．Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ：Ｌｉｘｏｆｔ ＳＡＳ，２０１９）に実装されている確率的期待値最大化法（ＳＡＥＭ）アルゴリズムを使用して、推定した）。実施例４に記載されるＰＫ試験のＳ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ及び野生型の血清中濃度を上記のとおりにモデル化し、これらの算出に含めた。個々のパラメーターを対数正規分布の確率変数としてモデル化した。ＰＫパラメーターは体重（ＢＷ）に依存し、ｍＡｂ特有の係数（β_{ＢＷ，Ｃｌ}＝０．７５、β_{ＢＷ，Ｖ１}＝β_{ＢＷ，Ｖ２}＝１、β_ＢＷ，Ｑ＝２／３）を使用した。個々のパラメーターφ_ｉについての式は、以下のとおりである（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１１．Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ，５０：１３１）。

【数3】

【0162】

φ_ｐｏｐは母集団の典型的なパラメーターであり、ηは平均０及び標準偏差ωを含む確率変数、ＢＷ_ｉは動物ｉの体重であり、ＢＷ_ｒｅｆはリファレンス体重２ｋｇであった。

【0163】

抗体バリアントは、次式に従って、クリアランス、コンパートメント間移動係数、及び末梢容積に関するカテゴリ型共変量を使用して識別した。

【数4】

【0164】

式中、個々のバリアントの共変量がそのカテゴリに該当する場合はΩ_ｉ＝１であり、そうでない場合はΩ_ｉ＝０である。野生型（ＷＴ）ｍＡｂをリファレンスとして使用した。

【0165】

推定ＰＫパラメーターを以下の表１２に示す。

【表12】

【0166】

バリアントにつき２匹の動物を用いて個々に観察された野生型及びＦｃバリアントＳ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ＋Ｔ２８６Ｅ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ＋Ｅ３８０Ｔ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ＋Ｔ２８６Ｅ、及びＳ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ＋Ｅ３８０Ｔの血清中濃度を図５０に示す。

【0167】

２ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶ投与を受ける典型的な２ｋｇのネコにおける、野生型（ＷＴ）ＩｇＧ１ａ ＦｃまたはｔｈｅＩｇＧ１ａ ＦｃバリアントＳ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ＋Ｔ２８６Ｅ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｑ３１１Ｖ＋Ｅ３８０Ｔ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ、Ｓ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ＋Ｔ２８６Ｅ、及びＳ４２８Ｙ＋Ｌ３０９Ｖ＋Ｅ３８０Ｔを保持するモノクローナル抗体の予測血清中濃度プロファイルを図５１に示す。これらの薬物動態学試験は、２つ以上のアミノ酸位置における置換の利点を確認するだけでなく、より重要なのは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＦｃＲｎ結合向上を付与するネコＩｇＧ Ｆｃドメインへのアミノ酸修飾が、これらのＩｇＧ Ｆｃバリアントのｉｎ ｖｉｖｏ半減期を延長することにも十分であったことを示している。

【0168】

他の実施形態
本発明について、その詳細な説明とともに記載してきたが、前述の説明は、本発明の範囲を例示するものであり、これを限定する意図はなく、本発明は、添付する特許請求の範囲によって定義される。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内である。

【図1-1】

【図1-2】

【図2-1】

【図2-2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図13A】

【図13B】

【図14A】

【図14B】

【図15A】

【図15B】

【図16A】

【図16B】

【図17A】

【図17B】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図20A】

【図20B】

【図21A】

【図21B】

【図22A】

【図22B】

【図23A】

【図23B】

【図24A】

【図24B】

【図25A】

【図25B】

【図26A】

【図26B】

【図27A】

【図27B】

【図28A】

【図28B】

【図29A】

【図29B】

【図30A】

【図30B】

【図31A】

【図31B】

【図32A】

【図32B】

【図33A】

【図33B】

【図34A】

【図34B】

【図35A】

【図35B】

【図36A】

【図36B】

【図37A】

【図37B】

【図38A】

【図38B】

【図39A】

【図39B】

【図40A】

【図40B】

【図41A】

【図41B】

【図42A】

【図42B】

【図43A】

【図43B】

【図44A】

【図44B】

【図45A】

【図45B】

【図46】

【図47】

【図48】

【図49A】

【図49B】

【図49C】

【図49D】

【図49E】

【図49F】

【図49G】

【図49H】

【図49I】

【図49J】

【図49K】

【図49L】

【図50】

【図51】

【配列表】

2023534636000001.app

【国際調査報告】